(57)【要約】  ＬＲＩＧ１に特異的に結合する抗体及びその使用方法が本明細書に開示される。いくつかの実施形態において、また、免疫活性を誘導し、又はＬＲＩＧ１に特異的に結合する抗体で、Ｂ細胞又はナチュラルキラー細胞の増殖を促進する方法が本明細書に記載される。
2021514002.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＬＲＩＧ１発現細胞、ＶＩＳＴＡ発現細胞、又はその組み合わせを含む複数の細胞をＬＲＩＧ１に特異的に結合する抗体と接触させることを含む、ＶＩＳＴＡとＬＲＩＧ１との間の相互作用を破壊する方法。
【請求項２】
前記ＬＲＩＧ１−ＶＩＳＴＡ相互作用が、８０％未満、７８％未満、７０％未満、７２％未満、６６％未満、６０％未満、５６％未満、５４％未満、５２％未満、５０％未満、４４％未満、４３％未満、４０％未満、３０％未満、２９％未満、２７％未満、２１％未満、２０％未満、１９％未満、１７％未満、１０％未満、５％又は１％未満に減少する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記相互作用が、領域２４５−２６０から選択されるＬＲＩＧ１の１つ以上の残基に生じ、前記残基の位置が、配列番号２の位置２４５−２６０に対応する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記相互作用が、領域７８−９０又は６８−９２から選択されるＶＩＳＴＡの１つ以上の残基に生じ、前記残基の位置が、配列番号４の位置７８−９０又は６８−９２に対応する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記抗体が、ペプチド５４又はペプチド６１の少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記抗体が、１ｎＭ、１．２ｎＭ、２ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭ、１３．５ｎＭ、１５ｎＭ、２０ｎＭ、２５ｎＭ、又は３０ｎＭ未満のｋＤを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記抗体がヒト化抗体を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記抗体が全長の抗体又はその結合断片を含む、請求項１〜７の何れか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記抗体が二重特異性抗体又はその結合断片を含む、請求項１〜８の何れか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗体が、一価Ｆａｂ’、二価Ｆａｂ２、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、ミニボディ、ナノボディ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、又はラクダ抗体若しくはその結合断片を含む、請求項１〜９の何れか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗体が、６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）配列番号８１〜８６を含むヒト化抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記ヒト化抗体が、配列番号８７及び８８から選択される重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ヒト化抗体が、配列番号８９及び９０から選択される軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記抗体がｍａｂ２、ｍａｂ４、ｍａｂ５、又はｍａｂ６である、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記抗体がＩｇＧフレームワークを含む、請求項１〜１０の何れか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記抗体がＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４フレームワークを含む、請求項１〜１５の何れか１項に記載の方法。
【請求項１７】
サイトカインの産生に影響する条件下で、ＬＲＩＧ１発現細胞を含む複数の細胞を抗体と接触させ、それによって免疫活性化を誘導し、前記抗体がＬＲＩＧ１に特異的に結合する、免疫活性を誘導する方法。
【請求項１８】
前記複数の細胞が、さらにＶＩＳＴＡ発現細胞を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗ＬＲＩＧ１抗体が、さらにＬＲＩＧ１及びＶＩＳＴＡの相互作用を阻害又は破壊する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＬＲＩＧ１−ＶＩＳＴＡ相互作用が、８０％未満、７８％未満、７０％未満、７２％未満、６６％未満、６０％未満、５６％未満、５４％未満、５２％未満、５０％未満、４４％未満、４３％未満、４０％未満、３０％未満、２９％未満、２７％未満、２１％未満、２０％未満、１９％未満、１７％未満、１０％未満、５％又は１％未満に減少する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記相互作用が、領域２４５−２６０から選択されるＬＲＩＧ１の１つ以上の残基に生じ、前記残基の位置が、配列番号２の位置２４５−２６０に対応する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記相互作用が、領域７８−９０又は６８−９２から選択されるＶＩＳＴＡの１つ以上の残基に生じ、前記残基の位置が、配列番号４の位置７８−９０又は６８−９２に対応する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
前記抗体が、ペプチド５４又はペプチド６１の少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する、請求項１７〜２２の何れか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記抗体が、１ｎＭ、１．２ｎＭ、２ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭ、１３．５ｎＭ、１５ｎＭ、２０ｎＭ、２５ｎＭ、又は３０ｎＭ未満のｋＤを含む、請求項１７〜２３の何れか１項に記載の方法。
【請求項２５】
前記抗体がヒト化抗体を含む、請求項１７〜２４の何れか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記抗体が全長の抗体又はその結合断片を含む、請求項１７〜２５の何れか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記抗体が二重特異性抗体又はその結合断片を含む、請求項１７〜２６の何れか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記抗体が、一価Ｆａｂ’、二価Ｆａｂ２、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、ミニボディ、ナノボディ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、又はラクダ抗体若しくはその結合断片を含む、請求項１７〜２７の何れか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記抗体が、６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）配列番号８１〜８６を含むヒト化抗体である、請求項１７〜２８の何れか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記ヒト化抗体が、配列番号８７及び８８から選択される重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、請求項１７〜２９の何れか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記ヒト化抗体が、配列番号８９及び９０から選択される軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、請求項１７〜３０の何れか１項に記載の方法。
【請求項３２】
前記抗体がｍａｂ２、ｍａｂ４、ｍａｂ５、又はｍａｂ６である、請求項１７〜３１の何れか１項に記載の方法。
【請求項３３】
前記抗体がＩｇＧフレームワークを含む、請求項１７〜３２の何れか１項に記載の方法。
【請求項３４】
前記抗体がＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４フレームワークを含む、請求項１７〜３３の何れか１項に記載の方法。
【請求項３５】
前記サイトカインがインターフェロンである、請求項１７〜３４の何れか１項に記載の方法。
【請求項３６】
前記インターフェロンがＩＦＮγである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記抗体が、アイソタイプ抗体よりも高くＩＦＮγを産生する、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記免疫活性が、ＣＤ３＋Ｔリンパ球、ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞、ＣＤ８＋細胞毒性Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、又はその組み合わせの増殖を含む、請求項１７〜３７の何れか１項に記載の方法。
【請求項３９】
前記免疫活性が、前記複数の細胞におけるＭ１マクロファージ集団の増加を含む、請求項１７〜３８の何れか１項に記載の方法。
【請求項４０】
前記免疫活性が、前記複数の細胞におけるＭ２マクロファージ集団の減少を含む、請求項１７〜３９の何れか１項に記載の方法。
【請求項４１】
腫瘍微小環境（ＴＭＥ）に位置する複数の細胞をＬＲＩＧ１に特異的に結合する抗体と接触させることを含む、対象のＴＭＥ内の腫瘍細胞を減少する方法。
【請求項４２】
前記腫瘍細胞が、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％減少する、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記対象が癌であると診断される、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
前記癌が固形腫瘍である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記癌が、乳癌、結腸直腸癌、腎臓癌、肝臓癌、又は肺癌である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記癌が血液系腫瘍である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４７】
前記癌が転移癌である、請求項４３〜４６の何れか１項に記載の方法。
【請求項４８】
前記癌が再発性又は難治性癌である、請求項４３〜４６の何れか１項に記載の方法。
【請求項４９】
前記抗体が全身投与のために製剤化される、請求項４１〜４８の何れか１項に記載の方法。
【請求項５０】
前記抗体が非経口投与のために製剤化される、請求項４１〜４８の何れか１項に記載の方法。
【請求項５１】
前記抗体が、追加の治療薬と組み合わせて投与される、請求項４１〜５０の何れか１項に記載の方法。
【請求項５２】
前記抗体及び前記追加の治療薬が同時に投与される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記抗体及び前記追加の治療薬が連続して投与される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５４】
前記抗体が、前記追加の治療薬を投与する前に投与される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記抗体が、前記追加の治療薬を投与した後に投与される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５６】
前記追加の治療薬が、免疫チェックポイント調節因子を含む、請求項５１〜５５の何れか１項に記載の方法。
【請求項５７】
前記追加の治療薬が、化学療法薬、標的治療薬、ホルモン治療薬又は幹細胞に基づく治療薬を含む、請求項５１〜５５の何れか１項に記載の方法。
【請求項５８】
前記抗体が、外科手術の前又は後に投与される、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記抗体が、放射線治療と合わせて、前、又は後に投与される、請求項５７に記載の方法。
【請求項６０】
前記抗ＬＲＩＧ１抗体が、さらにＬＲＩＧ１及びＶＩＳＴＡの相互作用を阻害又は破壊する、請求項４３〜５９の何れか１項に記載の方法。
【請求項６１】
前記ＬＲＩＧ１−ＶＩＳＴＡ相互作用が、８０％未満、７８％未満、７０％未満、７２％未満、６６％未満、６０％未満、５６％未満、５４％未満、５２％未満、５０％未満、４４％未満、４３％未満、４０％未満、３０％未満、２９％未満、２７％未満、２１％未満、２０％未満、１９％未満、１７％未満、１０％未満、５％又は１％未満に減少する、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記相互作用が、領域２４５−２６０から選択されるＬＲＩＧ１の１つ以上の残基に生じ、前記残基の位置が、配列番号２の位置２４５−２６０に対応する、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
前記相互作用が、領域７８−９０又は６８−９２から選択されるＶＩＳＴＡの１つ以上の残基に生じ、前記残基の位置が、配列番号４の位置７８−９０又は６８−９２に対応する、請求項６０に記載の方法。
【請求項６４】
前記抗体が、ペプチド５４又はペプチド６１の少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する、請求項４１〜６３の何れか１項に記載の方法。
【請求項６５】
前記抗体が、１ｎＭ、１．２ｎＭ、２ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭ、１３．５ｎＭ、１５ｎＭ、２０ｎＭ、２５ｎＭ、又は３０ｎＭ未満のｋＤを含む、請求項４１〜６４の何れか１項に記載の方法。
【請求項６６】
前記抗体がヒト化抗体を含む、請求項４１〜６５の何れか１項に記載の方法。
【請求項６７】
前記抗体が全長の抗体又はその結合断片を含む、請求項４１〜６６の何れか１項に記載の方法。
【請求項６８】
前記抗体が二重特異性抗体又はその結合断片を含む、請求項４１〜６７の何れか１項に記載の方法。
【請求項６９】
前記抗体が、一価Ｆａｂ’、二価Ｆａｂ２、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、ミニボディ、ナノボディ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、又はラクダ抗体若しくはその結合断片を含む、請求項４１〜６８の何れか１項に記載の方法。
【請求項７０】
前記抗体が、６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）配列番号８１〜８６を含むヒト化抗体である、請求項４１〜６９の何れか１項に記載の方法。
【請求項７１】
前記ヒト化抗体が、配列番号８７及び８８から選択される重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、請求項４１〜７０の何れか１項に記載の方法。
【請求項７２】
前記ヒト化抗体が、配列番号８９及び９０から選択される軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、請求項４１〜７１の何れか１項に記載の方法。
【請求項７３】
前記抗体がｍａｂ２、ｍａｂ４、ｍａｂ５、又はｍａｂ６である、請求項４１〜７２の何れか１項に記載の方法。
【請求項７４】
前記抗体がＩｇＧフレームワークを含む、請求項４１〜７３の何れか１項に記載の方法。
【請求項７５】
前記抗体がＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４フレームワークを含む、請求項４１〜７４の何れか１項に記載の方法。
【請求項７６】
免疫活性を誘導することをさらに含む、請求項４１〜７５の何れか１項に記載の方法。
【請求項７７】
前記免疫活性が、サイトカインの産生を含む、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記サイトカインがインターフェロン、任意にＩＦＮγである、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記免疫活性が、ＣＤ３＋Ｔリンパ球、ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞、ＣＤ８＋細胞毒性Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、又はその組み合わせの増殖を含む、請求項７６〜７８の何れか１項に記載の方法。
【請求項８０】
前記免疫活性が、前記複数の細胞におけるＭ１マクロファージ集団の増加を含む、請求項７６〜７９の何れか１項に記載の方法。
【請求項８１】
前記免疫活性が、前記複数の細胞におけるＭ２マクロファージ集団の減少を含む、請求
項７６〜８０の何れか１項に記載の方法。
【請求項８２】
前記対象がヒトである、請求項４１〜８１の何れか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年２月２３日に出願された米国特許仮出願第６２／６３４，６４９号明細書の利益を主張し、参照によりその全体が組み込まれる。
【発明の概要】
【０００２】
いくつかの実施形態において、抗ＬＲＩＧ１抗体を使用して、免疫活性を誘導する方法が本明細書に開示される。さらに、いくつかの実施形態において、抗ＬＲＩＧ１抗体を使用して、Ｂ細胞、Ｔ細胞及び／又はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増殖を促進する方法が本明細書に開示される。
【０００３】
特定の実施形態において、ＶＩＳＴＡとＬＲＩＧ１との相互作用を破壊する方法が本明細書に開示され、ＬＲＩＧ１発現細胞、ＶＩＳＴＡ発現細胞、又はその組み合わせを含む複数の細胞を、ＬＲＩＧ１に特異的に結合する抗体と接触させることを含む。いくつかの実施形態において、ＬＲＩＧ１−ＶＩＳＴＡ相互作用は、８０％未満、７８％未満、７０％未満、７２％未満、６６％未満、６０％未満、５６％未満、５４％未満、５２％未満、５０％未満、４４％未満、４３％未満、４０％未満、３０％未満、２９％未満、２７％未満、２１％未満、２０％未満、１９％未満、１７％未満、１０％未満、５％又は１％未満に減少する。いくつかの実施形態において、相互作用は、領域２４５−２６０から選択されるＬＲＩＧ１の１つ以上の残基に生じ、残基の位置は、配列番号２の位置２４５−２６０に対応する。いくつかの実施形態において、相互作用は、領域７８−９０又は６８−９２から選択されるＶＩＳＴＡの１つ以上の残基に生じ、残基の位置は、配列番号４の位置７８−９０又は６８−９２に対応する。いくつかの実施形態において、抗体は、ペプチド５４又はペプチド６１の少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、１ｎＭ、１．２ｎＭ、２ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭ、１３．５ｎＭ、１５ｎＭ、２０ｎＭ、２５ｎＭ、又は３０ｎＭ未満のｋＤを含む。いくつかの実施形態において、抗体はヒト化抗体を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、全長の抗体又はその結合断片を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、二重特異性抗体又はその結合断片を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、一価Ｆａｂ’、二価Ｆａｂ２、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、ミニボディ、ナノボディ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、又はラクダ抗体若しくはその結合断片を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）配列番号８１〜８６を含むヒト化抗体である。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、配列番号８７及び８８から選択される重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、配列番号８９及び９０から選択される軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｍａｂ２、ｍａｂ４、ｍａｂ５、又はｍａｂ６である。いくつかの実施形態において、抗体はＩｇＧフレームワークを含む。いくつかの実施形態において、抗体はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４フレームワークを含む。
【０００４】
特定の実施形態において、免疫活性を誘導する方法が本明細書に開示され、サイトカインの産生に影響する条件下で、ＬＲＩＧ１発現細胞を含む複数の細胞を抗体と接触させ、それにより免疫活性を誘導することを含み、抗体はＬＲＩＧ１に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、複数の細胞は、さらにＶＩＳＴＡ発現細胞を含む。いくつかの実施形態において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、さらにＬＲＩＧ１及びＶＩＳＴＡの相互作用を阻害又は破壊する。いくつかの実施形態において、ＬＲＩＧ１−ＶＩＳＴＡ相互作用は、８０％未満、７８％未満、７０％未満、７２％未満、６６％未満、６０％未満、５６％未
満、５４％未満、５２％未満、５０％未満、４４％未満、４３％未満、４０％未満、３０％未満、２９％未満、２７％未満、２１％未満、２０％未満、１９％未満、１７％未満、１０％未満、５％又は１％未満に減少する。いくつかの実施形態において、相互作用は、領域２４５−２６０から選択されるＬＲＩＧ１の１つ以上の残基に生じ、残基の位置は、配列番号２の位置２４５−２６０に対応する。いくつかの実施形態において、相互作用は、領域７８−９０又は６８−９２から選択されるＶＩＳＴＡの１つ以上の残基に生じ、残基の位置は、配列番号４の位置７８−９０又は６８−９２に対応する。いくつかの実施形態において、抗体は、ペプチド５４又はペプチド６１の少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、１ｎＭ、１．２ｎＭ、２ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭ、１３．５ｎＭ、１５ｎＭ、２０ｎＭ、２５ｎＭ、又は３０ｎＭ未満のｋＤを含む。いくつかの実施形態において、抗体はヒト化抗体を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、全長の抗体又はその結合断片を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、二重特異性抗体又はその結合断片を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、一価Ｆａｂ’、二価Ｆａｂ２、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、ミニボディ、ナノボディ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、又はラクダ抗体若しくはその結合断片を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）配列番号８１〜８６を含むヒト化抗体である。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、配列番号８７及び８８から選択される重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、配列番号８９及び９０から選択される軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｍａｂ２、ｍａｂ４、ｍａｂ５、又はｍａｂ６である。いくつかの実施形態において、抗体はＩｇＧフレームワークを含む。いくつかの実施形態において、抗体はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４フレームワークを含む。いくつかの実施形態において、サイトカインはインターフェロンである。いくつかの実施形態において、インターフェロンはＩＦＮγである。いくつかの実施形態において、抗体は、アイソタイプ抗体よりも高くＩＦＮγを産生する。いくつかの実施形態において、免疫活性は、ＣＤ３＋Ｔリンパ球、ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞、ＣＤ８＋細胞毒性Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、又はその組み合わせの増殖を含む。いくつかの実施形態において、免疫活性は、複数の細胞におけるＭ１マクロファージ集団の増加を含む。いくつかの実施形態において、免疫活性は、複数の細胞におけるＭ２マクロファージ集団の減少を含む。
【０００５】
特定の実施形態において、対象における腫瘍微小環境（ＴＭＥ）において腫瘍細胞を減少する方法が本明細書に開示され、ＴＭＥに位置する複数の細胞をＬＲＩＧ１に特異的に結合する抗体と接触させることを含む。いくつかの実施形態において、腫瘍細胞は、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％減少する。いくつかの実施形態において、対象は癌であると診断されている。いくつかの実施形態において、癌は固形腫瘍である。いくつかの実施形態において、癌は、乳癌、結腸直腸癌、腎臓癌、肝臓癌、又は肺癌である。いくつかの実施形態において、癌は血液系腫瘍である。いくつかの実施形態において、癌は転移癌である。いくつかの実施形態において、癌は再発性又は難治性癌である。いくつかの実施形態において、抗体は、全身投与のために製剤化される。いくつかの実施形態において、抗体は、非経口投与のために製剤化される。いくつかの実施形態において、抗体は、追加の治療薬と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、抗体及び追加の治療薬は同時に投与される。いくつかの実施形態において、抗体及び追加の治療薬は、連続して投与される。いくつかの実施形態において、抗体は、追加の治療薬を投与する前に投与される。いくつかの実施形態において、抗体は、追加の治療薬を投与された後に投与される。いくつかの実施形態において、追加の治療薬は、免疫チェックポイント調節因子を含む。いくつかの実施形態において、追加の治療薬は、化学療法薬、標的治療薬、ホルモン治療薬又は幹細胞に基づく治療薬を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、外科手術の前又は後に投与される。いくつかの実施形態において、抗体は、放射線治療
と合わせて、前、又は後に投与される。いくつかの実施形態において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、さらにＬＲＩＧ１及びＶＩＳＴＡの相互作用を阻害又は破壊する。いくつかの実施形態において、ＬＲＩＧ１−ＶＩＳＴＡ相互作用は、８０％未満、７８％未満、７０％未満、７２％未満、６６％未満、６０％未満、５６％未満、５４％未満、５２％未満、５０％未満、４４％未満、４３％未満、４０％未満、３０％未満、２９％未満、２７％未満、２１％未満、２０％未満、１９％未満、１７％未満、１０％未満、５％又は１％未満に減少する。いくつかの実施形態において、相互作用は、領域２４５−２６０から選択されるＬＲＩＧ１の１つ以上の残基に生じ、残基の位置は、配列番号２の位置２４５−２６０に対応する。いくつかの実施形態において、相互作用は、領域７８−９０又は６８−９２から選択されるＶＩＳＴＡの１つ以上の残基に生じ、残基の位置は、配列番号４の位置７８−９０又は６８−９２に対応する。いくつかの実施形態において、抗体は、ペプチド５４又はペプチド６１の少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、１ｎＭ、１．２ｎＭ、２ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭ、１３．５ｎＭ、１５ｎＭ、２０ｎＭ、２５ｎＭ、又は３０ｎＭ未満のｋＤを含む。いくつかの実施形態において、抗体はヒト化抗体を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、全長の抗体又はその結合断片を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、二重特異性抗体又はその結合断片を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、一価Ｆａｂ’、二価Ｆａｂ２、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、ミニボディ、ナノボディ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、又はラクダ抗体若しくはその結合断片を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）配列番号８１〜８６を含むヒト化抗体である。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、配列番号８７及び８８から選択される重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、配列番号８９及び９０から選択される軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ｍａｂ２、ｍａｂ４、ｍａｂ５、又はｍａｂ６である。いくつかの実施形態において、抗体はＩｇＧフレームワークを含む。いくつかの実施形態において、抗体はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４フレームワークを含む。いくつかの実施形態において、方法はさらに、免疫活性を誘導することを含む。いくつかの実施形態において、免疫活性は、サイトカインの産生を含む。いくつかの実施形態において、サイトカインはインターフェロンであり、任意にＩＦＮγである。いくつかの実施形態において、免疫活性は、ＣＤ３＋Ｔリンパ球、ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞、ＣＤ８＋細胞毒性Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、又はその組み合わせの増殖を含む。いくつかの実施形態において、免疫活性は、複数の細胞におけるＭ１マクロファージ集団の増加を含む。いくつかの実施形態において、免疫活性は、複数の細胞におけるＭ２マクロファージ集団の減少を含む。いくつかの実施形態において、対象はヒトである。
【０００６】
本開示の様々な態様は、添付の請求項に特に記載される。本開示の特徴及び利点のより良い理解は、本開示の原理が使用される、説明的実施形態を記載する以下の詳細な記述、及び以下の添付の図面を参照することにより得られる。本発明の出願書類は、カラーの少なくとも１つの図面を含む。カラーの図面を有する本発明の出願公開のコピーは、要求し、手数料を支払うことで特許庁によって提供される。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１Ａ】図１Ａ〜図１Ｃは、ヒトＬＲＩＧ１（ｈＬＲＩＧ１）がヒトＶＩＳＴＡを特異的に引き落とすことを示す免疫共沈降アッセイの結果を示す。図１Ａは、ＨＡタグを付けたｈＶＩＳＴＡをコードするプラスミド及びＦｌａｇタグを付けたｈＬＲＩＧ１をコードするプラスミドで同時導入された２９３Ｔ細胞において、それぞれ、ＬＲＩＧ１及びＶＩＳＴＡの発現を示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、ＨＡタグを付けたｈＶＩＳＴＡをコードするプラスミド及びＦｌａｇタグを付けたｈＬＲＩＧ１をコードするプラスミドで同時導入された２９３Ｔ細胞において、それぞれ、ＬＲＩＧ１及びＶＩＳＴＡの発現を示す。
【図１Ｃ】図１ＣはＬＲＩＧ１が同時導入された２９３Ｔ細胞においてＶＩＳＴＡを引き落とすことを示す。
【図２】図２は、抗ＬＲＩＧ１  ｍＡｂ（ＩＭＴ−３００）の存在下又は非存在下におけるｈＬＲＩＧ１のＶＩＳＴＡとの結合を評価するために実施されたＥＬＩＳＡアッセイの結果を示す。
【図３Ａ】図３Ａは、不活性化ＰＢＭＣ（図３Ａ）に対するＬＲＩＧ１発現のフローサイトメトリー分析の結果を示す。
【図３Ｂ】図３Ｂは、活性化ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）（図３Ｂ）に対するＬＲＩＧ１発現のフローサイトメトリー分析の結果を示す。
【図４】図４は、混合リンパ球反応アッセイのＩＮＦ−γの産生の測定値を示し、１名のドナーのヒトＭ２マクロファージは、別のドナーのヒトＣＤ４Ｔ細胞と混合され、１０ｕｇ／ｍｌのコントロールＩｇＧ、ｈＰＤ１遮断抗体ＥＨ１２（（ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ｈＬＲＩＧ１  ｍＡｂ  ＩＭＴ３００（ｍａｂ４としても本明細書に参照される）、又はｈＰＤ１及びＬＲＩＧ１抗体の組み合わせと、８日間、処理された。
【図５】図５は、ＬＲＩＧ１結合抗体によるＬＲＩＧ１−ＶＩＳＴＡ相互作用遮断のＥＬＩＳＡ評価を示す。抗体の非存在下におけるＬＲＩＧ１−ＶＩＳＴＡ結合の割合が示される。
【図６】図６は、ＬＲＩＧ１のペプチド断片に結合する抗ＬＲＩＧ１抗体のＥＬＩＳＡ評価を示す。
【図７Ａ】図７Ａ〜７Ｃは、ＬＲＩＧ１とＶＩＳＴＡとの間の相互作用を媒介するＬＲＩＧ１及びＶＩＳＴＡ領域のＭＡＬＤＩ−ＭＳ識別を示す。図７Ａは、部位における相互作用部位及び残基を図示する。
【図７Ｂ】図７Ｂは、相互作用を媒介する領域を強調するＬＲＩＧ１の結晶構造を図示する。
【図７Ｃ】図７Ｃは、部位における相互作用部位及び残基を図示する。
【図８】図８は、ヒト免疫系を移植されたマウスのＳＣＬＣ異種移植片腫瘍における抗腫瘍活性に対する抗ＬＲＩＧ１抗体を評価するグラフを示す。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
腫瘍は、マクロファージに富む反応性ストローマの部分として免疫浸潤物と関連することが多い。腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）は、血管新生及びマトリクス分解を促進することによって、腫瘍増殖を容易にする重要な役割を担う。腫瘍に関連する場合、マクロファージは、マクロファージ：Ｍ１マクロファージ又はＭ２マクロファージの２つの表現型が異なるサブセットの１つに対して機能的分極化を示す。Ｍ１マクロファージは、炎症促進性サイトカインを産生することが知られ、細胞破壊の活動的役割を担い、Ｍ２マクロファージは、主にデブリを除去し、血管新生及び創傷の修復を促進する。結果として、大きい数のＴＡＭを有する多くの腫瘍は、腫瘍増殖率の増加、局所的増殖及び遠隔転移を有する。Ｍ２マクロファージ集団は、腫瘍増殖及び発現を促進するＴＡＭ集団と表現型的に類似している。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡを発現する他に、Ｍ２マクロファージは、ＣＤ２０６、ＩＬ−４ｒ、ＩＬ−１ｒａ、デコイＩＬ−１ｒｌｌ、ＩＬ−１０ｒ、ＣＤ２３、マクロファージスカベンジャー受容体Ａ及びＢ、Ｙｍ−１、Ｙｍ−２、低密度受容体関連タンパク質１（ＬＲＰ１）、ＩＬ−６ｒ、ＣＸＣＲ１／２、ＣＤ１３６、ＣＤ１４、ＣＤ１ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ９３、ＣＤ２２６、（ＦｃｙＲ）及びＰＤ−Ｌ１から成る群から選択される１つ以上の細胞表面マーカーも発現する。
【０００９】
ＶＩＳＴＡ（Ｔ細胞活性のＶドメインＩｇ抑制因子）は、単球、マクロファージ、好中球、好塩基球、好酸球、赤血球、樹状細胞、巨核球及び血小板を含む骨髄系細胞において高いレベルで発現される。ＶＩＳＴＡレベルは、腫瘍微小環境において高められる。
【００１０】
ＬＲＩＧ１（ロイシンリッチリピート及び免疫グロブリン様ドメインタンパク質１）は
、ＥＧＦＲ−ファミリー、ＭＥＴ及びＲＥＴの受容体チロシンキナーゼと相互作用することが示された膜貫通タンパク質である。いくつかの例において、ＬＲＩＧ１は、腫瘍抑制因子及び受容体チロシンキナーゼの負の制御因子であることが分かっている。
【００１１】
いくつかの実施形態において、ＶＩＳＴＡとＬＲＩＧ１との相互作用に干渉し、免疫反応を活性化する抗ＬＲＩＧ１抗体が本明細書に開示される。いくつかの例において、これらの抗ＬＲＩＧ１抗体は、癌治療又は免疫反応の活性化から利益を得ると思われるその他の疾患の治療に使用される。
【００１２】
使用方法
特定の実施形態において、免疫活性を誘導する方法が本明細書に開示され、抗ＬＲＩＧ１抗体をＶＩＳＴＡ発現細胞、ＬＲＩＧ１発現細胞、又はその組み合わせを含む複数の細胞に接触させることを含む。
【００１３】
いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体に結合するときに、ＬＲＩＧ１発現細胞は、免疫活性を誘導するサイトカインを発現する。いくつかの場合において、サイトカインはインターフェロンである。いくつかの場合において、インターフェロンはＩＦＮγである。いくつかの場合において、ＩＦＮγの産生は、アイソタイプ抗体による、１１０％、１２０％、１３０％、１４０％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％、２００％、３００％、４００％、５００％、６００％以上のＩＦＮγの産生である。いくつかの場合において、ＩＦＮγの産生は、アイソタイプ抗体による、１５０％のＩＦＮγの産生である。いくつかの場合において、ＩＦＮγの産生は、アイソタイプ抗体による、１６０％のＩＦＮγの産生である。いくつかの場合において、ＩＦＮγの産生は、アイソタイプ抗体による、１７０％のＩＦＮγの産生である。いくつかの場合において、ＩＦＮγの産生は、アイソタイプ抗体による、１８０％のＩＦＮγの産生である。いくつかの場合において、ＩＦＮγの産生は、アイソタイプ抗体による、１９０％のＩＦＮγの産生である。いくつかの場合において、ＩＦＮγの産生は、アイソタイプ抗体による、２００％のＩＦＮγの産生である。いくつかの場合において、ＩＦＮγの産生は、アイソタイプ抗体による、２００％超のＩＦＮγの産生である。いくつかの場合において、ＩＦＮγの産生は、アイソタイプ抗体による、３００％超のＩＦＮγの産生である。いくつかの場合において、ＩＦＮγの産生は、アイソタイプ抗体による、４００％超のＩＦＮγの産生である。いくつかの場合において、ＩＦＮγの産生は、アイソタイプ抗体による、５００％超のＩＦＮγの産生である。いくつかの場合において、サイトカインはインターロイキンである。いくつかの例において、インターフェロンはＩＬ−２である。
【００１４】
いくつかの場合において、免疫活性は、ＣＤ３＋Ｔリンパ球、ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞、ＣＤ８＋細胞毒性Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、又はその組み合わせの増殖を含む。いくつかの例において、免疫活性は、ＣＤ３＋Ｔリンパ球の増殖を含む。いくつかの例において、免疫活性は、ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞の増殖を含む。いくつかの例において、免疫活性は、ＣＤ８＋細胞毒性Ｔ細胞の増殖を含む。いくつかの例において、免疫活性は、Ｂ細胞の増殖を含む。いくつかの例において、免疫活性は、ＮＫ細胞の増殖を含む。いくつかの例において、免疫活性は、Ｂ細胞及びＮＫ細胞の増殖を含む。
【００１５】
いくつかの場合において、免疫活性は、複数の細胞におけるＭ１マクロファージ集団の増加を含む。いくつかの場合において、免疫活性は、複数の細胞におけるＭ２マクロファージ集団の減少を含む。いくつかの場合において、免疫活性は、複数の細胞におけるＭ１マクロファージ集団の増加及び複数の細胞におけるＭ２マクロファージ集団の減少を含む。
【００１６】
いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、ＬＲＩＧ１に結合し、ＶＩＳＴＡとＬ
ＲＩＧ１との間の相互作用を破壊する。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡとＬＲＩＧ１との間の相互作用の破壊は、ＶＩＳＴＡとＬＲＩＧ１との間の相互作用の部分的阻害を含む。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡとＬＲＩＧ１との間の相互作用の破壊は、ＶＩＳＴＡとＬＲＩＧ１との間の相互作用の完全な阻害を含む。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、ＬＲＩＧ１に結合し、ＶＩＳＴＡとＬＲＩＧ１との間の相互作用を減少させる。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡ−ＬＲＩＧ１相互作用は、８０％未満、７８％未満、７０％未満、７２％未満、６６％未満、６０％未満、５６％未満、５４％未満、５２％未満、５０％未満、４４％未満、４３％未満、４０％未満、３０％未満、２９％未満、２７％未満、２１％未満、２０％未満、１９％未満、１７％未満、１０％未満、５％又は１％未満に減少する。いくつかの場合において、ＬＲＩＧ１−ＶＩＳＴＡ相互作用は、７０％未満に減少する。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡ−ＬＲＩＧ１相互作用は、６０％未満に減少する。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡ−ＬＲＩＧ１相互作用は、５９％未満に減少する。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡ−ＬＲＩＧ１相互作用は、５０％未満に減少する。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡ−ＬＲＩＧ１相互作用は、４４％未満に減少する。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡ−ＬＲＩＧ１相互作用は、４３％未満に減少する。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡ−ＬＲＩＧ１相互作用は、４０％未満に減少する。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡ−ＬＲＩＧ１相互作用は、３４％未満に減少する。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡ−ＬＲＩＧ１相互作用は、３０％未満に減少する。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡ−ＬＲＩＧ１相互作用は、２１％未満に減少する。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡ−ＬＲＩＧ１相互作用は、２０％未満に減少する。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡ−ＬＲＩＧ１相互作用は、１４％未満に減少する。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡ−ＬＲＩＧ１相互作用は、１０％未満に減少する。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡ−ＬＲＩＧ１相互作用は、７％未満に減少する。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡ−ＬＲＩＧ１相互作用は、５％未満に減少する。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡ−ＬＲＩＧ１相互作用は、４％未満に減少する。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡ−ＬＲＩＧ１相互作用は、１％未満に減少する。
【００１７】
いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡとＬＲＩＧ１との間の相互作用は、領域２４５−２６０から選択されるＬＲＩＧ１の１つ以上の残基に生じ、残基の位置は、配列番号２の位置２４５−２６０に対応する。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡとＬＲＩＧ１との間の相互作用は、残基２４５で生じ、残基の位置は、配列番号２の位置２４５に対応する。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡとＬＲＩＧ１との間の相互作用は、残基２４６で生じ、残基の位置は、配列番号２の位置２４６に対応する。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡとＬＲＩＧ１との間の相互作用は、残基２４７で生じ、残基の位置は、配列番号２の位置２４７に対応する。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡとＬＲＩＧ１との間の相互作用は、残基２４８で生じ、残基の位置は、配列番号２の位置２４８に対応する。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡとＬＲＩＧ１との間の相互作用は、残基２４９で生じ、残基の位置は、配列番号２の位置２４９に対応する。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡとＬＲＩＧ１との間の相互作用は、残基２５０で生じ、残基の位置は、配列番号２の位置２５０に対応する。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡとＬＲＩＧ１との間の相互作用は、残基２５１で生じ、残基の位置は、配列番号２の位置２５１に対応する。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡとＬＲＩＧ１との間の相互作用は、残基２５２で生じ、残基の位置は、配列番号２の位置２５２に対応する。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡとＬＲＩＧ１との間の相互作用は、残基２５３で生じ、残基の位置は、配列番号２の位置２５３に対応する。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡとＬＲＩＧ１との間の相互作用は、残基２５４で生じ、残基の位置は、配列番号２の位置２５４に対応する。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡとＬＲＩＧ１との間の相互作用は、残基２５５で生じ、残基の位置は、配列番号２の位置２５５に対応する。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡとＬＲＩＧ１との間の相互作用は、残基２５６で生じ、残基の位置は、配列番号２の位置２５
６に対応する。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡとＬＲＩＧ１との間の相互作用は、残基２５７で生じ、残基の位置は、配列番号２の位置２５７に対応する。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡとＬＲＩＧ１との間の相互作用は、残基２５８で生じ、残基の位置は、配列番号２の位置２５８に対応する。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡとＬＲＩＧ１との間の相互作用は、残基２５９で生じ、残基の位置は、配列番号２の位置２５９に対応する。いくつかの場合において、ＶＩＳＴＡとＬＲＩＧ１との間の相互作用は、残基２６０で生じ、残基の位置は、配列番号２の位置２６０に対応する。いくつかの場合において、ＬＲＩＧ１はヒトＬＲＩＧ１である。
【００１８】
いくつかの例において、ＬＲＩＧ１とＶＩＳＴＡとの間の相互作用は、領域７８−９０又は６８−９２から選択されるＶＩＳＴＡの１つ以上の残基に生じ、残基の位置は、配列番号４の位置７８−９０又は６８−９２に対応する。いくつかの例において、ＬＲＩＧ１とＶＩＳＴＡとの間の相互作用は、領域７８−９０からのＶＩＳＴＡの１つ以上の残基に生じ、残基の位置は、配列番号４の位置７８−９０に対応する。いくつかの例において、ＬＲＩＧ１とＶＩＳＴＡとの間の相互作用は、領域６８−９２からのＶＩＳＴＡの１つ以上の残基に生じ、残基の位置は、配列番号４の位置６８−９２に対応する。いくつかの例において、ＬＲＩＧ１とＶＩＳＴＡとの間の相互作用は、残基６８で生じ、残基の位置は、配列番号４の位置６８に対応する。いくつかの例において、ＬＲＩＧ１とＶＩＳＴＡとの間の相互作用は、残基６９で生じ、残基の位置は、配列番号４の位置６９に対応する。いくつかの例において、ＬＲＩＧ１とＶＩＳＴＡとの間の相互作用は、残基７０で生じ、残基の位置は、配列番号４の位置７０に対応する。いくつかの例において、ＬＲＩＧ１とＶＩＳＴＡとの間の相互作用は、残基７１で生じ、残基の位置は、配列番号４の位置７１に対応する。いくつかの例において、ＬＲＩＧ１とＶＩＳＴＡとの間の相互作用は、残基７２で生じ、残基の位置は、配列番号４の位置７２に対応する。いくつかの例において、ＬＲＩＧ１とＶＩＳＴＡとの間の相互作用は、残基７３で生じ、残基の位置は、配列番号４の位置７３に対応する。いくつかの例において、ＬＲＩＧ１とＶＩＳＴＡとの間の相互作用は、残基７４で生じ、残基の位置は、配列番号４の位置７４に対応する。いくつかの例において、ＬＲＩＧ１とＶＩＳＴＡとの間の相互作用は、残基７５で生じ、残基の位置は、配列番号４の位置７５に対応する。いくつかの例において、ＬＲＩＧ１とＶＩＳＴＡとの間の相互作用は、残基７６で生じ、残基の位置は、配列番号４の位置７６に対応する。いくつかの例において、ＬＲＩＧ１とＶＩＳＴＡとの間の相互作用は、残基７７で生じ、残基の位置は、配列番号４の位置７７に対応する。いくつかの例において、ＬＲＩＧ１とＶＩＳＴＡとの間の相互作用は、残基７８で生じ、残基の位置は、配列番号４の位置７８に対応する。いくつかの例において、ＬＲＩＧ１とＶＩＳＴＡとの間の相互作用は、残基７９で生じ、残基の位置は、配列番号４の位置７９に対応する。いくつかの例において、ＬＲＩＧ１とＶＩＳＴＡとの間の相互作用は、残基８０で生じ、残基の位置は、配列番号４の位置８０に対応する。いくつかの例において、ＬＲＩＧ１とＶＩＳＴＡとの間の相互作用は、残基８１で生じ、残基の位置は、配列番号４の位置８１に対応する。いくつかの例において、ＬＲＩＧ１とＶＩＳＴＡとの間の相互作用は、残基８２で生じ、残基の位置は、配列番号４の位置８２に対応する。いくつかの例において、ＬＲＩＧ１とＶＩＳＴＡとの間の相互作用は、残基８３で生じ、残基の位置は、配列番号４の位置８３に対応する。いくつかの例において、ＬＲＩＧ１とＶＩＳＴＡとの間の相互作用は、残基８４で生じ、残基の位置は、配列番号４の位置８４に対応する。いくつかの例において、ＬＲＩＧ１とＶＩＳＴＡとの間の相互作用は、残基８５で生じ、残基の位置は、配列番号４の位置８５に対応する。いくつかの例において、ＬＲＩＧ１とＶＩＳＴＡとの間の相互作用は、残基８６で生じ、残基の位置は、配列番号４の位置８６に対応する。いくつかの例において、ＬＲＩＧ１とＶＩＳＴＡとの間の相互作用は、残基８７で生じ、残基の位置は、配列番号４の位置８７に対応する。いくつかの例において、ＬＲＩＧ１とＶＩＳＴＡとの間の相互作用は、残基８８で生じ、残基の位置は、配列番号４の位置８８に対応する。いくつかの例において、ＬＲＩＧ１とＶＩＳＴＡとの間の相互作用は、残基８９で生じ、残基の
位置は、配列番号４の位置８９に対応する。いくつかの例において、ＬＲＩＧ１とＶＩＳＴＡとの間の相互作用は、残基９０で生じ、残基の位置は、配列番号４の位置９０に対応する。いくつかの例において、ＶＩＳＴＡは、ヒトＶＩＳＴＡである。
【００１９】
さらなる実施形態において、Ｂ細胞又はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増殖を促進する方法が本明細書に開示され、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＶＩＳＴＡ発現細胞、及びＬＲＩＧ１発現細胞を含む複数の細胞を抗ＬＲＩＧ１抗体に、複数の細胞においてＢ細胞又はＮＫ細胞の増殖を促進するのに充分な時間、接触させることを含む。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増殖を促進する方法が本明細書に開示され、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＬＲＩＧ１発現細胞、及びＶＩＳＴＡ発現細胞を含む複数の細胞を抗ＬＲＩＧ１抗体に、複数の細胞においてＢ細胞及びＮＫ細胞の増殖を促進するのに充分な時間、接触させることを含む。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞又はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増殖を促進する方法が本明細書に開示され、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＬＲＩＧ１発現細胞、及びＶＩＳＴＡ発現細胞から成る群から選択される１つ以上の細胞を含む複数の細胞を抗ＬＲＩＧ１抗体に、複数の細胞においてＢ細胞又はＮＫ細胞の増殖を促進するのに充分な時間、接触させることを含む。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増殖を促進する方法が本明細書に開示され、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＬＲＩＧ１発現細胞、及びＶＩＳＴＡ発現細胞から成る群から選択される１つ以上の細胞を含む複数の細胞を抗ＬＲＩＧ１抗体に、複数の細胞においてＢ細胞及びＮＫ細胞の増殖を促進するのに充分な時間、接触させることを含む。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、ＬＲＩＧ１に結合し、ＬＲＩＧ１とＶＩＳＴＡとの間の相互作用を破壊する。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、ＬＲＩＧ１に結合し、ＬＲＩＧ１とＶＩＳＴＡとの間の相互作用を阻害する。
【００２０】
いくつかの例において、ＬＲＩＧ１発現細胞は、腫瘍細胞又は免疫細胞である。いくつかの場合において、免疫細胞は、マクロファージ、樹状細胞、及びＩＦＮγ産生Ｔｈ１細胞を含む。いくつかの場合において、ＬＲＩＧ１は、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）に位置する複数の細胞に発現される。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、ＴＭＥにおいて腫瘍細胞の減少を誘導する。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、腫瘍細胞の減少を少なくとも又は約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％減少する。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、約５％〜約９５％、約１０％〜約９０％、約１５％〜約８０％、約２０％〜約７０％、又は約３０％〜約６０％の範囲で腫瘍細胞の減少を誘導する。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、少なくとも３０％腫瘍細胞の減少を誘導する。
【００２１】
いくつかの例において、複数の細胞は、さらに腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を含む。いくつかの場合において、複数の細胞は、さらにＣＤ３＋Ｔリンパ球、ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞、ＣＤ８＋細胞毒性Ｔ細胞、又はその組み合わせを含む。いくつかの場合において、複数の細胞は、さらにＣＤ３＋Ｔリンパ球を含む。いくつかの場合において、複数の細胞は、さらにＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞を含む。いくつかの場合において、複数の細胞は、さらにＣＤ８＋細胞毒性Ｔ細胞を含む。いくつかの場合において、複数の細胞は、さらにＣＤ３＋Ｔリンパ球及びＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞を含む。いくつかの場合において、複数の細胞は、さらにＣＤ３＋Ｔリンパ球及びＣＤ８＋細胞毒性Ｔ細胞を含む。いくつかの場合において、複数の細胞は、さらにＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞、ＣＤ８＋細胞毒性Ｔ細胞を含む。いくつかの場合において、複数の細胞は、さらにＣＤ３＋Ｔリンパ球、ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞、及びＣＤ８＋細胞毒性Ｔ細胞を含む。
【００２２】
いくつかの例において、接触はさらにＴＩＬの増殖を誘導する。いくつかの場合において、接触は、さらにＣＤ３＋Ｔリンパ球、ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞、ＣＤ８＋細胞毒性Ｔ
細胞、又はその組み合わせの増殖を誘導する。いくつかの場合において、接触は、さらにＣＤ３＋Ｔリンパ球の増殖を誘導する。いくつかの場合において、接触は、さらにＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞の増殖を誘導する。いくつかの場合において、接触は、さらにＣＤ８＋細胞毒性Ｔ細胞の増殖を誘導する。いくつかの場合において、接触は、さらにＣＤ３＋Ｔリンパ球及びＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞の増殖を誘導する。いくつかの場合において、接触は、さらにＣＤ３＋Ｔリンパ球及びＣＤ８＋細胞毒性Ｔ細胞の増殖を誘導する。いくつかの場合において、接触は、さらにＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞及びＣＤ８＋細胞毒性Ｔ細胞の増殖を誘導する。いくつかの場合において、接触は、さらにＣＤ３＋Ｔリンパ球、ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞及びＣＤ８＋細胞毒性Ｔ細胞の増殖を誘導する。
【００２３】
いくつかの例において、接触は、さらにＭ１マクロファージの増殖の増加を含む。いくつかの例において、接触は、さらにＴＭＥにおけるＭ２マクロファージ集団の減少を含む。いくつかの例において、接触は、さらにＴＭＥにおけるＭ１マクロファージの増殖の増加及びＭ２マクロファージ集団の減少を含む。
【００２４】
いくつかの例において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、配列番号２の残基２４５−２６０に対応するＬＲＩＧ１領域における少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、配列番号２の残基２４５に対応するＬＲＩＧ１領域における少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、配列番号２の残基２４６に対応するＬＲＩＧ１領域における少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、配列番号２の残基２４７に対応するＬＲＩＧ１領域における少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、配列番号２の残基２４８に対応するＬＲＩＧ１領域における少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、配列番号２の残基２４９に対応するＬＲＩＧ１領域における少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、配列番号２の残基２５０に対応するＬＲＩＧ１領域における少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、配列番号２の残基２５１に対応するＬＲＩＧ１領域における少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、配列番号２の残基２５２に対応するＬＲＩＧ１領域における少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、配列番号２の残基２５３に対応するＬＲＩＧ１領域における少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、配列番号２の残基２５４に対応するＬＲＩＧ１領域における少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、配列番号２の残基２５５に対応するＬＲＩＧ１領域における少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、配列番号２の残基２５６に対応するＬＲＩＧ１領域における少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、配列番号２の残基２５７に対応するＬＲＩＧ１領域における少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、配列番号２の残基２５８に対応するＬＲＩＧ１領域における少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、配列番号２の残基２５９に対応するＬＲＩＧ１領域における少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、配列番号２の残基２６０に対応するＬＲＩＧ１領域における少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する。
【００２５】
いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、ペプチド１、ペプチド２、ペプチド３、ペプチド４、ペプチド５、ペプチド６、ペプチド７、ペプチド８、ペプチド９、ペプチド１０、ペプチド１１、ペプチド１２、ペプチド１３、ペプチド１４、ペプチド１５、ペプチド１６、ペプチド１７、ペプチド１８、ペプチド１９、ペプチド２０、ペプチド２１
、ペプチド２２、ペプチド２３、ペプチド２４、ペプチド２５、ペプチド２６、ペプチド２７、ペプチド２８、ペプチド２９、ペプチド３０、ペプチド３１、ペプチド３２、ペプチド３３、ペプチド３４、ペプチド３５、ペプチド３６、ペプチド３７、ペプチド３８、ペプチド３９、ペプチド４０、ペプチド４１、ペプチド４２、ペプチド４３、ペプチド４４、ペプチド４５、ペプチド４６、ペプチド４７、ペプチド４８、ペプチド４９、ペプチド５０、ペプチド５１、ペプチド５２、ペプチド５３、ペプチド５４、ペプチド５５、ペプチド５６、ペプチド５７、ペプチド５８、ペプチド５９、ペプチド６０、ペプチド６１、ペプチド６２、ペプチド６３、ペプチド６４、ペプチド６５、ペプチド６６、ペプチド６７、ペプチド６８、ペプチド６９、ペプチド７０、ペプチド７１、ペプチド７２、ペプチド７３、ペプチド７４、ペプチド７５、又はペプチド７６における少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、ペプチド５４の少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、ペプチド６１の少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する。
【００２６】
いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、ペプチドの少なくとも１つのアミノ酸残基に結合し、ペプチドは、配列番号５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、又は８０に記載される配列を有する。
【００２７】
いくつかの例において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、１ｎＭ未満、１．２ｎＭ未満、２ｎＭ未満、５ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、１３．５ｎＭ未満、１５ｎＭ未満、２０ｎＭ未満、２５ｎＭ未満、又は３０ｎＭ未満のＬＲＩＧ１に対する結合親和性（例えば、ｋＤ）を含む。いくつかの例において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、１ｎＭ未満のｋＤを含む。いくつかの例において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、１．２ｎＭ未満のｋＤを含む。いくつかの例において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、２ｎＭ未満のｋＤを含む。いくつかの例において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、５ｎＭ未満のｋＤを含む。いくつかの例において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、１０ｎＭ未満のｋＤを含む。いくつかの例において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、１３．５ｎＭ未満のｋＤを含む。いくつかの例において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、１５ｎＭ未満のｋＤを含む。いくつかの例において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、２０ｎＭ未満のｋＤを含む。いくつかの例において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、２５ｎＭ未満のｋＤを含む。いくつかの例において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、３０ｎＭ未満のｋＤを含む。
【００２８】
いくつかの例において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、ヒト化抗体を含む。その他の例において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、キメラ抗体を含む。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、全長の抗体又はその結合断片を含む。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、二重特異性抗体又はその結合断片を含む。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、一価Ｆａｂ’、二価Ｆａｂ２、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、ミニボディ、ナノボディ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、又はラクダ抗体若しくはその結合断片を含む。
【００２９】
いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、二重特異性抗体又はその結合断片を含む。例示的な二重特異性抗体のフォーマットとして、限定されないが、Ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−Ｈｏｌｅｓ（ＫｉＨ）、Ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃ  Ｒｅ−ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ−ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ（ＡＲＴ−Ｉｇ）、Ｔｒｉｏｍａｂ  ｑｕａｄｒｏｍａ、二重特異性モノクローナル抗体（ＢｉＭＡｂ、ＢｓｍＡｂ、ＢｓＡｂ、ｂｓＭａｂ、ＢＳ−Ｍａｂ、又はＢｉ−ＭＡｂ）、Ａｚｙｍｅｔｒｉｃ、Ｂｉｓｐ
ｅｃｉｆｉｃ  Ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ  ｂｙ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ
ｔｈｅ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＢＥＡＴ）、Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ−ｃｅｌｌ  Ｅｎｇａｇｅｒ（ＢｉＴＥ）、Ｂｉｃｌｏｎｉｃｓ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｔｗｏ−ｉｎ−ｏｎｅ／Ｄｕａｌ  Ａｃｔｉｏｎ  Ｆａｂ（ＤＡＦ）、ＦｉｎｏｍＡｂ、ｓｃＦｖ−Ｆｃ−（Ｆａｂ）−ｆｕｓｉｏｎ、Ｄｏｃｋ−ａＮｄ−Ｌｏｃｋ（ＤＮＬ）、Ａｄａｐｔｉｒ（以前はＳＣＯＲＰＩＯＮ）、Ｔａｎｄｅｍ  ｄｉＡｂｏｄｙ（ＴａｎｄＡｂ）、Ｄｕａｌ−ａｆｆｉｎｉｔｙ−ＲｅＴａｒｇｅｔｉｎｇ（ＤＡＲＴ）、ナノボディ、トリプルボディ、ｔａｎｄｅｍ型ｓｃＦｖ（ｔａＦｖ）、三頭（ｔｒｉｐｌｅ  ｈｅａｄｓ）、ｔａｎｄｅｍ型ｄＡｂ／ＶＨＨ、トリプルｄＡｂ／ＶＨＨ、又は四価ｄＡｂ／ＶＨＨが挙げられる。いくつかの場合において、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＬＲＩＧ１抗体、又はその組み合わせは、Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ、“Ｔｈｅ  ｍａｋｉｎｇ  ｏｆ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，”ＭＡＢＳ９（２）：１８２−２１２（２０１７）の図２に記載される二重特異性抗体フォーマットを含む二重特異性抗体又はその結合断片である。
【００３０】
いくつかの実施形態において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、以下の表１に記載される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むヒト化抗体である。
【表１】
2021514002.tif 000003
【００３１】
いくつかの例において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、以下の表２に記載される重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含むヒト化抗体である。
【表２】
2021514002.tif 000004
【００３２】
いくつかの場合において、ヒト化抗ＬＲＩＧ１抗体は、以下の表３に記載されるＶＨ配列及びＶＬ配列を含む。
【表３】
2021514002.tif 000005
【００３３】
いくつかの場合において、ヒト化抗ＬＲＩＧ１抗体は、ｍａｂ２、ｍａｂ４、ｍａｂ５、又はｍａｂ６である。
【００３４】
いくつかの実施形態において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）、ＩｇＡ、又はＩｇＥから選択されるフレームワーク領域を含む。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、ＩｇＭフレームワークを含む。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）フレームワークを含む。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、ＩｇＧ１フレームワークを含む。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、ＩｇＧ２フレームワークを含む。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、ＩｇＧ４フレームワークを含む。
【００３５】
いくつかの実施形態において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、フレームワーク領域、例えば、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ヒンジ領域、又はその組み合わせに、１つ以上の変異を含む。いくつかの場合において、１つ以上の変異は、Ｆｃ受容体相互作用を調節して、例えば、ＡＤＣＣ及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）等のＦｃエフェクタ機能を増加させる。いくつかの場合において、１つ以上の変異は、抗体を安定にし、及び／又は抗体の半減期を増加する。さらなる場合において、１つ以上の変異は、グリコシル化を調節する。
【００３６】
治療方法
いくつかの実施形態において、治療を必要とする対象に、前述の抗ＬＲＩＧ１抗体を投与する方法も本明細書に開示される。いくつかの例において、対象は癌であると診断されている。いくつかの場合において、癌は固形腫瘍である。その他の例において、癌は血液系腫瘍である。追加の例において、癌は転移性、再発性又は難治性癌である。
【００３７】
いくつかの例において、癌は固形腫瘍である。いくつかの場合において、癌は乳癌である。いくつかの場合において、癌は結腸直腸癌である。いくつかの場合において、癌は腎臓癌である。いくつかの場合において、癌は肝臓癌である。いくつかの場合において、癌は肺癌である。いくつかの場合において、肺癌は、肺腺癌、扁平上皮癌、又は大細胞癌等の非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、又は小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）を含む。
【００３８】
いくつかの場合において、癌は、血液系腫瘍、例えば、転移性、再発性、又は難治性悪性腫瘍である。
【００３９】
いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、全身投与のために製剤化される。いくつかの例において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、非経口投与のために製剤化される。
【００４０】
いくつかの実施形態において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、追加の治療薬と組み合わせて対象に投与される。いくつかの例において、追加の治療薬は、免疫治療薬を含む。いくつかの例において、追加の治療薬は、免疫チェックポイント調節因子を含む。いくつかの例において、追加の治療薬は、化学療法薬、標的治療薬、ホルモン治療薬又は幹細胞に基づく治療薬を含む。
【００４１】
いくつかの例において、追加の治療薬は、免疫治療薬を含む。いくつかの例において、免疫療法は、養子細胞療法である。例示的な養子細胞療法として、ＡＦＰ  ＴＣＲ、ＭＡＧＥ−Ａ１０  ＴＣＲ、又はＡｄａｐｔｉｍｍｕｎｅ由来のＮＹ−ＥＳＯ−ＴＣＲ；  Ｕｎｕｍ  ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓのＡＣＴＲ０８７／リツキシマブ；抗−ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｔ細胞療法、抗ＣＤ１９「装甲」ＣＡＲ−Ｔ細胞療法、Ｊｕｎｏ  ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓのＪＣＡＲ０１４、ＪＣＡＲ０１８、ＪＣＡＲ０２０、ＪＣＡＲ０２３、ＪＣ
ＡＲ０２４、又はＪＴＣＲ０１６；Ｃｅｌｇｅｎｅ／Ｊｕｎｏ  ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓのＪＣＡＲ０１７；Ｉｎｔｒｅｘｏｎの抗−ＣＤ１９  ＣＡＲ−Ｔ細胞療法；抗−ＣＤ１９  ＣＡＲ−Ｔ細胞療法、ａｘｉｃａｂｔａｇｅｎｅ  ｃｉｌｏｌｅｕｃｅｌ、Ｋｉｔｅ  ＰｈａｒｍａのＫＩＴＥ−７１８、ＫＩＴＥ−４３９、又は  ＮＹ−ＥＳＯ−１  Ｔ細胞受容体療法；Ｓｏｒｒｅｎｔｏ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓの抗ＣＥＡ  ＣＡＲ−Ｔ細胞療法；ＴＮＫ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ／Ｓｏｒｒｅｎｔｏ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓの抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ−Ｔ細胞療法；Ａｔａｒａ  ＢｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓのＡＴＡ５２０；Ａｕｒｏｒａ  ＢｉｏＰｈａｒｍａのＡＵ１０１及びＡＵ１０５；Ｃｅｌｌ  Ｍｅｄｉｃａの  ｂａｌｔａｌｅｕｃｅｌ−Ｔ（ＣＭＤ−００３）；ｂｌｕｅｂｉｒｄ  ｂｉｏのｂｂ２１２１；Ｂｅｌｌｉｃｕｍ  ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓのＢＰＸ−５０１、ＢＰＸ−６０１、又はＢＰＸ−７０１；ＫｉｒｏｍｉｃのＢＳＫ０１；ＩｍｍｕｎｏｃｏｒｅのＩＭＣｇｐ１００；Ｊｏｕｎｃｅ  ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓのＪＴＸ−２０１１；Ｌｉｏｎ  ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓのＬＮ−１４４又はＬＮ−１４５；Ｍｕｓｔａｎｇ  ＢｉｏのＭＢ−１０１又はＭＢ−１０２；ＣｅｌｙａｄのＮＫＲ−２；ＣｅｌｇｅｎｅのＰＮＫ−００７；Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓのｔｉｓａｇｅｎｌｅｃｌｅｕｃｅｌ−Ｔ；又はＴｅｓｓａ  ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓのＴＴ１２が挙げられる。
【００４２】
いくつかの例において、免疫療法は樹状細胞に基づく療法である。
【００４３】
いくつかの例において、免疫療法は、例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、又はＩＬ−２１等のインターロイキン（ＩＬ）、インターフェロン（ＩＦＮ）−α、又は顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）を含むサイトカインに基づく療法を含む。
【００４４】
いくつかの例において、免疫療法は、免疫チェックポイント調節因子を含む。例示的な免疫チェックポイント調節因子として、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂのニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ）等のＰＤ−１調節因子、Ｍｅｒｃｋのペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ）、ＡｇｅｎｕｓのＡＧＥＮ  ２０３４、ＢｅｉＧｅｎｅのＢＧＢ−Ａ３１７、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ  ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓのＢｌ−７５４０９１、ＣＢＴ  ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓのＣＢＴ−５０１（ゲノリムズマブ）、ＩｎｃｙｔｅのＩＮＣＳＨＲ１２１０、Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ＆ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔのＪＮＪ−６３７２３２８３、ＭｅｄＩｍｍｕｎｅのＭＥＤＩ０６８０、ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓのＭＧＡ  ０１２、Ｎｏｖａｒｔｉｓ  ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓのＰＤＲ００１、ＰｆｉｚｅｒのＰＦ−０６８０１５９１、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ／ＳａｎｏｆｉのＲＥＧＮ２８１０（ＳＡＲ４３９６８４）、ＴＥＳＡＲＯのＴＳＲ−０４２、イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ）等のＣＴＬＡ−４調節因子、又はＡｇｅｎｕｓのＡＧＥＮ  １８８４、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａのデュルバルマブ（Ｉｍｆｉｎｚｉ）等のＰＤ−Ｌ１調節因子、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈのアテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、ＥＭＤ  Ｓｅｒｏｎｏ／Ｐｆｉｚｅｒのアベルマブ、ＣｙｔｏｍＸ  ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓのＣＸ−０７２、Ｎｏｖａｒｔｉｓ  ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓＦＡＺ０５３、３Ｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ／ＡｌｐｈａｍａｂのＫＮ０３５、Ｅｌｉ  ＬｉｌｌｙのＬＹ３３０００５４、又はＥＭＤ  ＳｅｒｏｎｏのＭ７８２４（抗−ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦベータトラップ）；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ
ＳｑｕｉｂｂのＢＭＳ−９８６０１６等のＬＡＧ３調節因子、Ｎｏｖａｒｔｉｓ  ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓのＩＭＰ７０１、Ｎｏｖａｒｔｉｓ  ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓのＬＡＧ５２５、又はＲｅｇｅｎｅｒｏｎ  ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓのＲＥＧＮ３７６７；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  ＳｑｕｉｂｂのＢＭＳ−９８６１７８等のＯＸ４０調節因子、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅのＧＳＫ３１７４９９８、Ａｇｅｎｕｓ／ＩｎｃｙｔｅのＩＮＣＡＧＮ１９４９、ＭｅｄＩｍｍｕｎｅのＭＥＤＩ０５６２、ＰｆｉｚｅｒのＰＦ−０４５１８６００、又はＧｅｎｅｎｔｅｃｈｐのＲＧ７８８
８；Ｎｏｖａｒｔｉｓ  ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓのＧＷＮ３２３等のＧＩＴＲ調節因子、Ａｇｅｎｕｓ／ＩｎｃｙｔｅのＩＮＣＡＧＮ１８７６、ＭｅｄＩｍｍｕｎｅのＭＥＤＩ１８７３、ＭｅｒｃｋのＭＫ−４１６６、又はＬｅａｐ  ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓのＴＲＸ５１８；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂのリリルマブ等のＫＩＲ調節因子；又はＮｏｖａｒｔｉｓ  ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓのＭＢＧ４５３又はＴｅｓａｒｏのＴＳＲ−０２２等のＴＩＭ調節因子が挙げられる。
【００４５】
いくつかの例において、追加の治療薬は化学療法薬を含む。例示的な化学療法薬として、限定されないが、シクロホスファミド、メクロレタミン、クロラムブシル、メルファラン、ダカルバジン、又はニトロソウレア等のアルキル化剤；ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ミトキサントロン、又はバルルビシン等のアントラサイクリン；パクリタキセル、ドセタキセル、アブラキサン、又はタキソテール等の細胞骨格かく乱物質；エポチロン；ボリノスタット又はロミデプシン等のヒストン脱アセチル化酵素阻害剤；イリノテカン又はトポテカン等のトポイソメラーゼＩ阻害剤；エトポシド、テニポシド、又はタフルポシド等のトポイソメラーゼＩＩ阻害剤；ボルテゾミブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ベムラフェニブ、又はビスモデギブ等のキナーゼ阻害剤；アザシチジン、アザチオプリン、カペシタビン、シタラビン、ドキシフルリジン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、メルカプトプリン、メトトレキサート、又はチオグアニン等のヌクレオチド類似体及び前駆体類似体；カルボプラチン、シスプラチン、又はオキサリプラチン等の白金に基づく薬剤；トレチノイン、アリトレチノイン、又はベキサロテン等のレチノイド；又はビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデニシン、又はビノレルビン等のビンカアルカロイド及び誘導体が挙げられる。
【００４６】
いくつかの例において、追加の治療薬はホルモンに基づく療法薬を含む。例示的なホルモンに基づく療法薬として、限定されないが、レトロゾール、アナストロゾール、エキセメスタン、又はアミノグルテチミド等のアロマターゼ阻害剤；リュープロレリン又はゴセレリン等のゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）類似体；タモキシフェン、ラロキシフェン、トレミフェン、又はフルベストラント等の選択的エストロゲン受容体調節因子（ＳＥＲＭ）；フルタミド又はビカルタミド等の抗アンドロゲン；メゲストロール酢酸エステル又はメドロキシプロゲステロン酢酸エステル等のプロゲストーゲン；フルオキシメステロン等のアンドロゲン；エストロゲンジエチルスチルベストロール（ＤＥＳ）、Ｅｓｔｒａｃｅ、又はリン酸ポリエストラジオール等のエストロゲン；又はオクトレオチド等のソマトスタチン類似体が挙げられる。
【００４７】
いくつかの例において、追加の治療薬は第一線の治療薬である。
【００４８】
いくつかの実施形態において、抗ＬＲＩＧ１抗体及び追加の治療薬は同時に投与される。いくつかの例において、抗ＬＲＩＧ１抗体及び追加の治療薬は連続して投与される。そのような例において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、追加の治療薬を投与する前に対象に投与される。他の例において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、追加の治療薬が投与された後に対象に投与される。
【００４９】
いくつかの例において、追加の治療薬及び抗ＬＲＩＧ１抗体は、別々の剤形として製剤化される。
【００５０】
いくつかの例において、対象は、外科手術を受けたことがある。いくつかの例において、抗ＬＲＩＧ１抗体及び任意に追加の治療薬は、外科手術の前に対象に投与される。いくつかの例において、抗ＬＲＩＧ１抗体及び任意に追加の治療薬は、外科手術の後に対象に投与される。
【００５１】
いくつかの例において、対象は、放射線治療を受けたことがある。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体及び任意に追加の治療薬は、放射線治療の間又は後に対象に投与される。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体及び任意に追加の治療薬は、放射線治療を実施する前に対象に投与される。
【００５２】
いくつかの実施形態において、対象はヒトである。
【００５３】
抗体の産生
いくつかの実施形態において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、抗原性組成物を生産動物に注入することによって、標準プロトコルによって産生される。例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、１９８８を参照のこと。タンパク質全体、又はタンパク質のより大きなセクションを使用する場合、抗体は、生産動物をタンパク質及び適切なアジュバント（例えば、フロイント、フロイント完全、水中油型エマルジョン等）で免疫化することによって、産生することができる。より小さなペプチドが使用される場合、ペプチドをより大きい分子と結合して、免疫刺激結合を作製することが利点である。多く使用される結合タンパク質は、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）及びキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）を含むこのような使用について、市販されている。特定のエピトープに対して抗体を産生するために、全配列に由来するペプチドを使用することができる。あるいは、タンパク質標的の比較的に短いペプチド部分に対して抗体を生成するために、ポリペプチドが卵白アルブミン、ＢＳＡ又はＫＬＨ等の担体タンパク質に結合される場合、優れた免疫反応が誘発され得る。
【００５４】
ポリクローナル又はモノクローナル抗ＬＲＩＧ１抗体は、ヒト免疫グロブリンを産生するように遺伝子改変された動物から産生することができる。トランスジェニック動物は、最初に、動物の自然な抗体を産生しない「ノックアウト」動物を作製し、動物をヒト抗体遺伝子座（例えば、ヒト人工染色体の使用によって）で安定的に形質転換することによって、作製することができる。このような例において、ヒト抗体だけが動物によって作製される。このような動物の生成技術、及びそこから由来する抗体は、米国特許出願第６，１６２，９６３号明細書及び６，１５０，５８４号明細書に記載され、参照により本明細書に完全に組み込まれる。このような抗体は、ヒト異種移植片抗体として呼ぶことができる。
【００５５】
あるいは、抗ＬＲＩＧ１抗体は、ヒト可変領域を含むファージライブラリから産生することができる。参照による本明細書に完全に組み込まれる、米国特許出願第６，１７４，７０８号明細書を参照されたい。
【００５６】
本明細書に開示されるいくつかの実施形態のいくつかの態様において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、ハイブリドーマによって産生される。
【００５７】
モノクローナル抗ＬＲＩＧ１抗体について、ハイブリドーマは、播種された動物の膵臓から刺激免疫細胞を単離することによって、形成することができる。これらの細胞は、その後、骨髄腫細胞又は形質転換細胞等の不死化細胞に融合することができ、細胞培地において無制限に複製することができ、それにより不死の、免疫グロブリン分泌細胞株を産生することができる。使用される不死の細胞株は、特定の栄養素を使用するために必要な酵素が欠乏しているように選択することができる。多くのこのような細胞株（骨髄腫等）は、当業者に知られており、例えば、チミジンキナーゼ（ＴＫ）又はヒポキサンチン−グアニンホスホリボキシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ）を含む。これらの欠乏は、例えば、ヒポキサンチンアミノプテリンチミジン培地（ＨＡＴ）で増殖する能力に従って、融合細胞について選択することができる。
【００５８】
さらに、抗ＬＲＩＧ１抗体は、遺伝子編集によって産生することができる。
【００５９】
本明細書に開示される抗ＬＲＩＧ１抗体は、例えばアナフィラキシーショックといったヒトに望ましくない免疫反応を誘導する傾向を減少させることができ、抗体治療薬又はイメージング剤の繰り返される投与を防ぐ免疫反応（例えば、ヒト−抗−マウス―抗体「ＨＡＭＡ」反応）をプライミングする傾向を減少させることもできる。このような抗ＬＲＩＧ１抗体として、限定されないが、ヒト化、キメラ、又は異種間ヒト抗ＬＲＩＧ１抗体が挙げられる。
【００６０】
キメラ抗ＬＲＩＧ１抗体は、優勢にヒトドメインを有する抗体を産生するために、例えば、マウスの（又はその他の動物由来の）ハイブリドーマクローンから得られるマウス可変軽鎖及び重鎖領域（ＶＫ及びＶＨ）を、ヒト定常軽鎖及び重鎖領域と合わせることによって作製することができる。このようなキメラ抗体の産生は、当該技術分野で周知であり、及び標準的な手段（米国特許出願第５，６２４，６５９号明細書、参照により本面最初に完全に組み込まれる）によって達成することができる。
【００６１】
非ヒト（例えば、げっ歯類又は霊長類）抗体に適用する場合の「ヒト化」という用語は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小の配列を含むハイブリッド免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖又はその断片である。大部分について、ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が、所望の特異性、親和性及び能力を有するマウス、ウサギ又は霊長類等の非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基に置換されるヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの例において、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）の残基は、対応する非ヒト残基に置換される。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、移入されたＣＤＲ若しくはフレームワーク配列にも見られない残基を含み得る。これらの修飾は、抗体の性能をさらに洗練し、最適化し、及びヒトの身体に導入される場合、免疫原性を最小にするようになされる。いくつかの例において、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、通常は２つの可変ドメインの全てを実質的に含み、ＣＤＲ領域の全て又は実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域と対応し、ＦＲ領域の全て又は実質的に全ては、ヒト免疫グロブリン配列のＦＲ領域である。ヒト化抗体は、また、通常はヒト免疫グロブリンの定常領域である免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分を含む。
【００６２】
ヒト化抗体は、ヒト様免疫グロブリンドメインを含み、及び動物由来の抗体の相補性決定領域のみを組み込むように設計することができる。これは、モノクローナル抗原結合単位又はモノクローナル抗体の可変領域の高可変ループの配列を注意深く調査し、ヒト抗原結合単位又はヒト抗体鎖の構造に適合することによって達成することができる。例えば、参照により本明細書に完全に組み込まれる、米国特許出願第Ｎｏ．６，１８７，２８７号明細書を参照されたい。
【００６３】
非ヒト抗体をヒト化する方法は、当該技術分野で知られている。「ヒト化」抗体は、配列の少なくとも部分がその最初の形態から変化して、よりヒト免疫グロブリンのようにする。いくつかのバージョンにおいて、重鎖（Ｈ）及び軽鎖（Ｌ）定常（Ｃ）領域は、ヒト配列に置換される。これは、可変（Ｖ）領域及び異種免疫グロブリンＣ領域を含む融合ポリペプチドであってもよい。いくつかのバージョンにおいて、相補性決定領域（ＣＤＲ）は、非ヒト抗体配列を含み、Ｖフレームワーク領域もヒト配列に変換される。例えば、欧州特許出願第０３２９４００号明細書を参照されたい。いくつかのバージョンにおいて、Ｖ領域は、ヒト及びマウスＶ領域の共通配列を設計し、及び共通配列間で異なるＣＤＲの外側の残基を変換することによってヒト化される。
【００６４】
原則において、ヒト化抗体のフレームワーク配列は、ＣＤＲ移植のためのテンプレートとして提供することができるが、しかしながら、このようなフレームワークへの真っ直ぐなＣＤＲ置換は、抗原に対する結合親和性の著しい損失になる可能性があることが実証されている。Ｇｌａｓｅｒ等（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：２６０６；Ｔｅｍｐｅｓｔ等（１９９２）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ９：２６６；及びＳｈａｌａｂｙ等（１９９２）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７：２１７。ヒト抗体（ＨｕＡｂ）がオリジナルのマウス抗体（ｍｕＡｂ）に相同するほど、ヒトフレームワークは、親和性を減少させると思われるマウスＣＤＲに歪みを導入する見込みが少なくなる。抗体配列データベースに対する配列相同性の調査に基づいて、その他のかなり相同性のＨｕＡｂも同様に、特にヒトサブグループＩのカッパＬ鎖又はヒトサブグループＩＩＩのＨ鎖に適切であると思われるが、ＨｕＡｂ  ＩＣ４は、ｍｕＭ４ＴＳ．２２に対して良好なフレームワーク相同性を提供する。Ｋａｂａｔ等（１９８７）。ＥＮＣＡＤ（Ｌｅｖｉｔｔ等（１９８３）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１６８：５９５）等の様々なコンピュータプログラムは、Ｖ領域の理想的な配列を予測するのに利用することができる。本発明は、したがって、異なる可変（Ｖ）領域を有するＨｕＡｂを含む。適切なＶ領域配列を決定し、これらの配列を最適化することは当該技術分野の範囲にある。減少した免疫原性を有する抗体を得る方法は、また、米国特許出願第５，２７０，２０２号明細書及び欧州特許出願第６９９，７５５号明細書に記載される。
【００６５】
ヒト化抗体は、親及びヒト化配列の３次元モデルを使用して、親配列及び様々な概念的なヒト化産物の分析工程によって調製することができる。３次元免疫グロブリンモデルは、当業者に知られている。選択される候補の免疫グロブリン配列のありそうな３次元立体構造を図示し、表示するコンピュータプログラムが利用可能である。これらの表示を検査することによって、候補の免疫グロブリン配列の機能の残基のありそうな役割の分析、すなわち、抗原に結合する候補の免疫グロブリンの能力に影響する残基の分析が可能になる。このように、ＦＲ残基は、標的抗原との増加した親和異性等の所望の抗体の特徴が達成されるように共通配列及び移入配列から選択し、合わせることができる。
【００６６】
対象の抗原結合単位のヒト化工程は、以下のようにすることができる。最適な生殖細胞系アクセプター重鎖及び軽鎖可変領域は、移植についてのヒト抗体生殖細胞系の相同性、基準の構造及び物理特性に基づいて選択される。ｍＶＨ／ＶＬ対移植されたｈＶＨ／ＶＬのコンピュータモデルが実施され、プロトタイプのヒト化抗体配列が生成される。モデリングがフレームワークの逆突然変異の必要性を示した場合、示されたＦＷの変化を有する第２のバリアントが生成される。選択された生殖細胞系フレームワーク及びマウスＣＤＲをコードするＤＮＡ断片が合成される。合成されたＤＮＡ断片はＩｇＧ発現ベクターにサブクローンされ、配列は、ＤＮＡシークエンシングによって確認される。ヒト化抗体は２９３Ｆ等の細胞に発現され、タンパク質は、例えば、ＭＤＭ食作用アッセイ及び抗原結合アッセイにおいて試験される。ヒト化抗原結合単位は、例えば、標的抗原を発現する細胞におけるＦＡＣＳによって、抗原結合親和性において親抗原結合単位と比較される。親和性が２倍より大きく、親抗原結合単位より小さい場合、ヒト化バリアントの第２ラウンドが生成され、前述のように試験がなされる。
【００６７】
前述のように、抗ＬＲＩＧ１抗体は、「一価」又は「多価」の何れかであってもよい。一価の抗ＬＲＩＧ１抗体が抗原結合単位につき１つの結合部位を有する一方、多価の抗ＬＲＩＧ１抗体は、同じ又は異なる種類の１つ以上の抗原に結合することができる複数の結合部位を含む。結合部位の数に依存して、抗原結合単位は、（２つの抗原結合部位を有する）二価、（３つの抗原結合部位を有する）三価、（４つの抗原結合部位を有する）四価等であってもよい。
【００６８】
多価抗ＬＲＩＧ１抗体は、さらに結合特異性に基づいて分類することができる。「単一
特異性」抗ＬＲＩＧ１抗体は、同じ種類の１つ以上の抗原に結合することができる分子である。「多重特異性」抗ＬＲＩＧ１抗体は、少なくとも２つの異なる抗原に結合特異性を有する分子である。このような分子は、通常、２つの固有の抗原（すなわち二重特異性抗ＬＲＩＧ１抗体）にのみ結合し、三重特異性抗体等の追加の特異性を有する抗体は、本明細書に使用される場合、この発現によって含まれる。本開示は、さらに多重特異性抗ＬＲＩＧ１抗体を提供する。多重特異性抗ＬＲＩＧ１抗体は、少なくとも２つの固有の抗原に結合することができる多価分子、例えば、２つの抗原に結合特異性を示す二重特異性分子及び３つの抗原に結合特異性を示す三重特異性分子である。
【００６９】
ポリヌクレオチド及びベクター
いくつかの実施形態において、本開示は、本明細書に開示される任意の抗ＬＲＩＧ１抗体をコードする単離された核酸を提供する。別の実施形態において、本開示は、本明細書に開示される任意の抗ＬＲＩＧ１抗体をコードする核酸配列を含むベクターを提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、本明細書に開示される抗ＬＲＩＧ１抗体の軽鎖ＣＤＲ及び重鎖ＣＤＲをコードする単離された核酸を提供する。
【００７０】
対象の抗ＬＲＩＧ１抗体は、組み換えＤＮＡ技術、合成化学技術、又はその組み合わせによって調製することができる。例えば、抗ＬＲＩＧ１抗体の所望の成分をコードする配列は、軽鎖ＣＤＲ及び重鎖ＣＤＲを含み、通常、当該技術分野で知られている標準的な分子技術を使用して発現ベクターに構築クローンされる。これらの配列は、個別のテンプレート核酸を使用するＰＣＲ生成断片から、又は所望の配列をコードする合成オリゴヌクレオチドを構築することによって、所望のタンパク質配列をコードするその他のベクターから構築することができる。発現システムは、適切な細胞に目的の抗ＬＲＩＧ１抗体を含む発現ベクターをトランスフェクトすることによって作製することができる。
【００７１】
既存の抗体の軽鎖及び重鎖の可変領域に対応するヌクレオチド配列は、限定されないが、ハイブリダイゼーション、ＰＣＲ、及びＤＮＡシークエンシングを含む通常の技術を使用して、容易に得ることができ、及び配列決定することができる。モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞は、抗体ヌクレオチド配列の好ましい源として役に立つ。モノクローナル抗体のアレイを生成する膨大な数のハイブリドーマ細胞は、公的又は私的リポジトリから得ることができる。最大の寄託機関は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ａｔｃｃ．ｏｒｇ）であり、良く特徴付けられたハイブリドーマ細胞株の多様なコレクションを提供する。あるいは、抗体ヌクレオチドは、免疫化若しくは非免疫化げっ歯類又はヒトから、並びに脾臓及び末梢血リンパ球等の臓器から得ることができる。抗体ヌクレオチドを抽出し、合成するために適用可能な特定の技術は、Ｏｒｌａｎｄｉ等（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ８６：３８３３−３８３７；Ｌａｒｒｉｃｋ等（１９８９）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１６０：１２５０−１２５５；Ｓａｓｔｒｙ等（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：５７２８−５７３２；及び米国特許出願第５，９６９，１０８号明細書に記載される。
【００７２】
抗ＬＲＩＧ１抗体をコードするポリヌクレオチドも、例えば、相同性非ヒト配列の代わりにヒト重鎖及び軽鎖定常領域についてのコード配列を置換することによって、修飾することができる。このように、元来の抗ＬＲＩＧ１抗体の結合特異性を保持するキメラ抗体が調製される。
【００７３】
宿主細胞
いくつかの実施形態において、本開示は、本明細書に開示される抗ＬＲＩＧ１抗体の何れか１つを発現する宿主細胞を提供する。対象の宿主細胞は、通常、本明細書に開示される抗ＬＲＩＧ１抗体の何れか１つをコードする核酸を含む。
【００７４】
本発明は、ポリヌクレオチド、ベクター又は前述のベクターのライブラリでトランスフェクトされた宿主細胞を提供する。ベクターは、エレクトロポレーション、微粒子銃、リポフェクション、（ベクターが感染病原体に結合される場合の）感染、塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ−デキストラン、又はその他の物質を使用するトランスフェクションを含むいくつかの適切な手段の何れかによって適切な原核生物又は真核生物細胞に導入することができる。ベクターを導入するための手段の選択は、宿主細胞の特徴に依存することが多い。
【００７５】
多くの動物細胞について、前述の手段の何れかがベクター送達に適している。好ましい動物細胞は、大量、例えば、ミリグラムのレベルで、外因性に導入される遺伝子産物を発現することができる脊椎動物の細胞、好ましくは哺乳動物の細胞である。好ましい細胞の非限定的な例は、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、ＣＯＳ、ＨｅＬａ及びＣＨＯ細胞である。
【００７６】
適切な宿主細胞に導入されると、抗ＬＲＩＧ１抗体の発現は、当該技術分野で知られている任意の核酸又はタンパク質アッセイを使用して決定することができる。例えば、軽鎖ＣＤＲ若しくは重鎖ＣＤＲの転写されたｍＲＮＡ又は抗ＬＲＩＧ１抗体の存在は、通常のハイブリダイゼーションアッセイ（例えば、ノーザンブロット分析）、増幅手順（例えば、ＲＴ−ＰＣＲ）、ＳＡＧＥ（米国特許出願第５，６９５，９３７号明細書）、及びアレイに基づく技術（例えば、米国特許出願第５，４０５，７８３号明細書、第５，４１２，０８７号明細書、及び第５，４４５，９３４号明細書）、抗ＬＲＩＧ１抗体をコードするポリヌクレオチドの任意の領域に相補的なプローブを使用することによって、検出及び／又は定量化することができる。
【００７７】
ベクターの発現は、発現された抗ＬＲＩＧ１抗体を調査することによって決定することもできる。タンパク質の分析技術において様々な技術を使用することができる。その技術として、限定されないが、ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素免疫測定法）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫放射定量測定法、（例えば、コロイド金、酵素又はラジオアイソトープ標識を使用する）ｉｎ  ｓｉｔｕ  イムノアッセイ、ウエスタンブロット分析、免疫沈降アッセイ、免疫蛍光染色アッセイ、及びＳＤＳ−ＰＡＧＥが挙げられる。
【００７８】
ペイロード
いくつかの実施形態において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、さらにペイロードを含む。いくつかの場合において、ペイロードは、小分子、タンパク質若しくはその機能的断片、ペプチド、又は核酸ポリマーを含む。
【００７９】
いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体に結合されるペイロードの数（例えば、薬剤−抗体比又はＤＡＲ）は、約１：１であり、１つの抗ＬＲＩＧ１抗体に対して１つのペイロードである。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体に対するペイロードの比は、約２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１１：１、１２：１、１３：１、１４：１、１５：１、１６：１、１７：１、１８：１、１９：１又は２０：１である。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体に対するペイロードの比は約２：１である。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体に対するペイロードの比は約３：１である。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体に対するペイロードの比は約４：１である。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体に対するペイロードの比は約６：１である。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体に対するペイロードの比は約８：１である。いくつかの場合において、抗ＬＲＩＧ１抗体に対するペイロードの比は約１２：１である。
【００８０】
いくつかの実施形態において、ペイロードは小分子である。いくつかの例において、小分子は細胞毒性ペイロードである。例示的な細胞毒性ペイロードとして、限定されないが、微小管破壊剤、ＤＮＡ修飾剤、又はＡｋｔ阻害剤が挙げられる。
【００８１】
いくつかの実施形態において、ペイロードは、微小管破壊剤を含む。例示的な微小管破壊剤として、限定されないが、２−メトキシエストラジオール、オーリスタチン、カルコン、コルヒチン、コンブレタスタチン、クリプトフィシン、ジクチオスタチン、ディスコデルモリド、ドラスタチン、エリュテロビン、エポチロン、ハリコンドリン、ラウリマライド、マイタンシン、ノスカピノイド、パクリタキセル、ペロルシド、ホモプシン、ポドフィロトキシン、リゾキシン、スポンジスタチン、タキサン、チューブリシン、ビンカアルカロイド、ビノレルビン又はその誘導体若しくは類似体が挙げられる。
【００８２】
いくつかの実施形態において、マイタンシンはマイタンシノイドである。いくつかの実施形態において、マイタンシノイドは、ＤＭ１、ＤＭ４、又はアンサミトシンである。いくつかの実施形態において、マイタンシノイドは、ＤＭ１である。いくつかの実施形態において、マイタンシノイドは、ＤＭ４である。いくつかの実施形態において、マイタンシノイドは、アンサミトシンである。いくつかの実施形態において、米国特許第５２０８０２０号明細書、第５４１６０６４号明細書、第７２７６４９７号明細書、及び第６７１６８２１号明細書、又は米国特許出願公開第２０１３０２９９００号明細書、及びＵＳ２０１３０３２３２６８に記載されるマイタンシノイド誘導体又は類似体である。
【００８３】
いくつかの実施形態において、ペイロードは、ドラスタチン、又はその誘導体若しくは類似体である。いくつかの実施形態において、ドラスタチンはドラスタチン１０又はドラスタチン１５又はその誘導体若しくは類似体である。いくつかの実施形態において、ドラスタチン１０類似体は、アウリスタチン、ソブリドチン、シンプロスタチン１又はシンプロスタチン３である。いくつかの実施形態において、ドラスタチン１５類似体は、セマドチン又はタシドチンである。
【００８４】
いくつかの実施形態において、ドラスタチン１０類似体は、オーリスタチン又はオーリスタチン誘導体である。いくつかの実施形態において、オーリスタチン又はオーリスタチン誘導体は、オーリスタチンＥ（ＡＥ）、オーリスタチンＦ（ＡＦ）、オーリスタチンＥ５−ベンゾイル吉草酸エステル（ＡＥＶＢ）、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、又はモノメチルオーリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）、オーリスタチンＰＥ、又はオーリスタチンＰＹＥである。いくつかの実施形態において、オーリスタチン誘導体は、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）である。いくつかの実施形態において、オーリスタチン誘導体は、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）である。いくつかの実施形態において、オーリスタチンは、米国特許第６８８４８６９号明細書、第７６５９２４１号明細書、第７４９８２９８号明細書、第７９６４５６６号明細書、第７７５０１１６号明細書、第８２８８３５２号明細書、第８７０３７１４号明細書、及び第８８７１７２０号明細書に記載されるオーリスタチン誘導体又は類似体である。
【００８５】
いくつかの実施形態において、ペイロードはＤＮＡ修飾剤を含む。いくつかの実施形態において、ＤＮＡ修飾剤は、ＤＮＡクリーバー（ＤＮＡ  ｃｌｅａｖｅｒ）、ＤＮＡ介入物、ＤＮＡ転写阻害剤、又はＤＮＡ架橋剤を含む。いくつかの例において、ＤＮＡクリーバーは、ブレオマイシンＡ２、カリチアマイシン、又はその誘導体若しくは類似体を含む。いくつかの例において、ＤＮＡ介入物は、ドキソルビシン、エピルビシン、ＰＮＵ−１５９６８２、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、オリゴマイシンＣ、ダウノルビシン、バルルビシン、トポテカン又はその誘導体若しくは類似体を含む。いくつかの例において、ＤＮＡ転写阻害剤は、ダクチノマイシンを含む。いくつかの例において、Ｄ
ＮＡ架橋剤は、マイトマイシンＣを含む。
【００８６】
いくつかの実施形態において、ＤＮＡ修飾剤は、アムサクリン、アントラサイクリン、カンプトテシン、ドキソルビシン、デュオカルマイシン、エンジイン、エトポシド、インドリノベンゾジアゼピン、ネトロプシン、テニポシド、又はその誘導体若しくは類似体を含む。
【００８７】
いくつかの実施形態において、アントラサイクリンは、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、マイトマイシンＣ、ダクチノマイシン、ミスラマイシン、ネモルビシン、ピクサントロン、サバルビシン、又はバルルビシンである。
【００８８】
いくつかの実施形態において、カンプトテシンの類似体は、トポテカン、イリノテカン、シラテカン、コシテカン、エキサテカン、ラルトテカン、ジャイマテカン、ベロテカン、ルビテカン、又はＳＮ−３８である。
【００８９】
いくつかの実施形態において、デュオカルマイシンは、デュオカルマイシンＡ、デュオカルマイシンＢ１、デュオカルマイシンＢ２、デュオカルマイシンＣ１、デュオカルマイシンＣ２、デュオカルマイシンＤ、デュオカルマイシンＳＡ、又はＣＣ−１０６５である。いくつかの実施形態において、エンジインは、カリチアマイシン、エスペラミシン、又はダイネミシンＡである。
【００９０】
いくつかの実施形態において、ピロロベンゾジアゼピンは、アントラマイシン、アベイマイシン、チカマイシン、ＤＣ−８１、マゼトラマイシン、ネオトラマイシンＡ、ネオトラマイシンＢ、ポロトラマイシン、プロトラカルシン、シバノマイシン（ＤＣ−１０２）、シビロマイシン又はトメイマイシンである。いくつかの実施形態において、ピロロベンゾジアゼピンは、米国特許第８４０４６７８号明細書及び第８１６３７３６号明細書に記載されるように、トメイマイシン誘導体である。いくつかの実施形態において、ピロロベンゾジアゼピンは、米国特許第８４２６４０２号明細書、第８８０２６６７号明細書、第８８０９３２０号明細書、第６５６２８０６号明細書、第６６０８１９２号明細書、第７７０４９２４号明細書、第７０６７５１１号明細書、米国特許第７６１２０６２号明細書、第７２４４７２４号明細書、第７５２８１２６号明細書、第７０４９３１１号明細書、第８６３３１８５号明細書、第８５０１９３４号、及び第８６９７６８８号明細書並びに米国特許公開第２０１４０２９４８６８号明細書に記載される。
【００９１】
いくつかの例において、ピロロベンゾジアゼピンは、ピロロベンゾジアゼピン二量体である。いくつかの実施形態において、ＰＢＤ二量体は対称二量体である。対称ＰＢＤ二量体の例として、限定されないが、ＳＪＧ−１３６（ＳＧ−２０００）、ＺＣ−４２３（ＳＧ２２８５）、ＳＪＧ−７２０、ＳＪＧ−７３８、ＺＣ−２０７（ＳＧ２２０２）、及びＤＳＢ−１２０（表２）が挙げられる。いくつかの実施形態において、ＰＢＤ二量体は非対称二量体である。非対称ＰＢＤ二量体の例として、限定されないが、米国特許第８６９７６８８号明細書及び第９２４２０１３号明細書及び米国特許公開第２０１４０２８６９７０号明細書に記載されるＳＪＧ−１３６誘導体が挙げられる。
【００９２】
いくつかの実施形態において、ペイロードはＡｋｔ阻害剤を含む。いくつかの例において、Ａｋｔ阻害剤は、イパタセルチブ（ＧＤＣ−００６８）又はその誘導体を含む。
【００９３】
いくつかの実施形態において、ペイロードは、限定されないが、ａ−アマニチン等のポリメラーゼＩＩ阻害剤及びポリ（ＡＤＰ−リボーゼ）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤を含むポリメラーゼ阻害剤を含む。例示的なＰＡＲＰ阻害剤として、限定されないが、イニパリブ（ＢＳＩ  ２０１）、タラゾパリブ（ＢＭＮ−６７３）、オラパリブ（ＡＺＤ−２
２８１）、オラパリブ、ルカパリブ（ＡＧ０１４６９９、ＰＦ−０１３６７３３８）、ベリパリブ（ＡＢＴ−８８８）、ＣＥＰ９７２２、ＭＫ４８２７、ＢＧＢ−２９０又は３−アミノベンズアミドが挙げられる。
【００９４】
いくつかの実施形態において、ペイロードは、検出可能部分を含む。例示的な検出可能な部分として、蛍光染料、酵素、基質、化学発光部分、ストレプトアビジン、アビジン、又はビオチン等の特異的結合部分、又は放射性同位体を含む。
【００９５】
いくつかの実施形態において、ペイロードは、免疫調節剤を含む。有用な免疫調節剤として、腫瘍に対するホルモン作用を遮断する抗ホルモン剤、及びサイトカインの産生を抑制し、自己抗原発現を下方制御し、又はＭＨＣ抗原をマスクする免疫抑制剤を含む。代表的な抗ホルモンは、例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、４（５）−イミダゾールを阻害ずるアロマターゼ、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、及びトレミフェン、並びにフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、リュープロリド及びゴセレリン等の抗アンドロゲン、並びに抗副腎剤が挙げられる。例示的な免疫抑制剤として、限定されないが、２−アミノ−６−アリール−５−置換ピリミジン、アザチオプリン、シクロホスファミド、ブロモクリプチン、ダナゾール、ダプソン、グルタルアルデヒド、ＭＨＣ抗原及びＭＨＣ断片についての抗イディオタイプ抗体、シクロスポリンＡ、グルココルチコイド、ストレプトキナーゼ又はラパマイシン等のステロイドが挙げられる。
【００９６】
いくつかの実施形態において、ペイロードは免疫調節剤を含む。例示的な免疫調節剤として、限定されないが、ガンシクロビエル、エタネルセプト、タクロリムス、シロリムス、ボクロスポリン、シクロスポリン、ラパマイシン、シクロホスファミド、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキストル酸、グルココルチコイド及びその類似体、キサンチン、幹細胞増殖因子、リンホトキシン、造血因子、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）（例えば、ＴＮＦα）、インターロイキン（例えば、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、及びＩＬ−２１）、コロニー刺激因子（例えば、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）及び顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ））、インターフェロン（例えば、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ）、「Ｓ１因子」として示される幹細胞増殖因子、エリスロポエチン及びトロンボポエチン、又はその組み合わせが挙げられる。
【００９７】
いくつかの実施形態において、ペイロードは免疫毒素を含む。免疫毒素として、限定されないが、リシン、放射性核種、ヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、シュードモナス属外毒素Ａ、ジフテリア毒素、リシンＡ鎖、レストリクトシン等の真菌毒及びホスホリパーゼ酵素が挙げられる。概して、“Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ｔｏｘｉｎｓ、”Ｏｌｓｎｅｓ  ａｎｄ  Ｐｉｈｌ、Ｐｈａｒｍａｃ．Ｔｈｅｒ．１５：３５５−３８１（１９８１）；及び“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，”ｅｄｓ．Ｂａｌｄｗｉｎ  ａｎｄ  Ｂｙｅｒｓ、ｐｐ．１５９−１７９、２２４−２６６、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９８５）を参照のこと。
【００９８】
いくつかの例において、ペイロードは核酸ポリマーを含む。このような例において、核酸ポリマーは、短干渉核酸（ｓｉＮＡ）、短干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。その他の例において、核酸ポリマーは、例えば、細胞毒性タンパク質若しくはペプチド又はアポトーシストリガータンパク質若しくはペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。例示的な細胞毒性タンパク質又はペプチドとして、α孔
形成毒素（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉからの細胞溶解素Ａ）、β孔形成毒素（例えば、α溶血素、Ｐａｎｔｏｎ−Ｖａｌｅｎｔｉｎｅロイコシジン（ＰＶＬ）、アエロリジン、クロストリジウムエプシロン毒素、クロストリジウム・ウェルシュエンテロトキシン）、二成分毒素（炭疽毒素、浮腫毒素、クロストリジウム・ボツリヌムＣ２毒素、クロストリジウム・スピロフォルム毒素、クロストリジウム・ウエルシュイオタ毒素、クロストリジウム・ディフィシル細胞致死性毒素（Ａ及びＢ））、プリオン、パラスポリン、コレステロール依存性細胞溶解素（例えばニューモリシン）、小孔形成毒素（例えば、グラミシジンＡ）、シアノトキシン（例えば、ミクロシスチン、ノジュラリン）、ヘモトキシン、神経毒（例えば、ボツリヌム神経毒）、細胞毒素、コレラ毒素、ジフテリア毒素、シュードモナス属外毒素Ａ、破傷風毒素、又は免疫毒素（イダルビシン、リシンＡ、ＣＲＭ９、ヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ＤＴ）が挙げられる。例示的なアポトーシストリガータンパク質又はペプチドとして、アポトーシスプロテーゼ活性因子−１（Ａｐａｆ−１）、チトクロム−ｃ、カスパーゼ開始タンパク質（ＣＡＳＰ２、ＣＡＳＰ８、ＣＡＳＰ９、ＣＡＳＰ１０）、アポトーシス誘導因子（ＡＩＦ）、ｐ５３、ｐ７３、ｐ６３、Ｂｃｌ−２、Ｂａｘ、グランザイムＢ、ポリ−ＡＤＰリボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）、及びＰ  ２１−活性化キナーゼ２（ＰＡＫ２）が挙げられる。さらなる例において、核酸ポリマーは核酸デコイを含む。いくつかの例において、核酸デコイは、ＲＮＡに基づくタンパク質結合模倣物等のタンパク質結合核酸の模倣物である。例示的な核酸デコイとして、トランス活性化領域（ＴＡＲ）デコイ及びＲｅｖ反応要素（ＲＲＥ）デコイが挙げられる。
【００９９】
いくつかの例において、ペイロードはアプタマーである。アプタマーは、特異的標的分子に結合する小オリゴヌクレオチド又はペプチド分子である。例示的な核酸アプタマーとして、ＤＮＡアプタマー、ＲＮＡアプタマー、又は１つ以上の非天然ヌクレオチドを含むＲＮＡ及び／若しくはＤＮＡアプタマーであるＸＮＡアプタマーが挙げられる。例示的な核酸アプタマーの例として、ＡＲＣ１９４９９（Ａｒｃｈｅｍｉｘ  Ｃｏｒｐ．）、ＲＥＧ１（Ｒｅｇａｄｏ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、及びＡＲＣ１９０５（Ｏｐｈｔｈｏｔｅｃｈ）が挙げられる。
【０１００】
本明細書に記載の実施形態に記載の核酸は、任意に、天然核酸、若しくは１つ以上のヌクレオチド類似体を含み、又はさもなければ天然核酸の構造と異なる構造を有する。例えば、２’−修飾はハロ、アルコキシ、及びアリルオキシ基を含む。いくつかの実施形態において、２’−ＯＨ基は、Ｈ、ＯＲ、Ｒ、ハロ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲ２又はＣＮから選択される基によって置換され、ＲはＣ１−Ｃ６アルキル、アルケニル又はアルキニルであり、ハロはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩである。修飾された結合の例として、ホスホロチオエート及び５’−ホスホラミダイト結合が挙げられる。
【０１０１】
様々な異なるヌクレオチド類似体、修飾された骨格、又は非天然のヌクレオチド間結合を有する核酸は、本明細書に記載の実施形態に従って使用される。いくつかの場合において、核酸として、天然ヌクレオシド（すなわち、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシン及びデオキシシチジン）又は修飾ヌクレオシドが挙げられる。修飾ヌクレオチドの例として、塩基修飾ヌクレオシド（例えば、アラシチジン、イノシン、イソグアノシン、ネブラリン、シュードウリジン、２，６−ジアミノプリン、２−アミノプリン、２−チオチミジン、３−デアザ−５−アザシチジン、２’−デオキシウリジン、３−ニトルピロール、４−メチルインドール、４−チオウリジン、４−チオチミジン、２−アミノアデノシン、２−チオチミジン、２−チオウリジン、５−ブロモシチジン、５−ヨードウリジン、イノシン、６−アザウリジン、６−クロロプリン、７−デアザアデノシン、７−デアザグアノシン、８−アザアデノシン、８−アジドアデノシン、ベンゾイミダゾール、Ｍ１−メチルアデノシン、ピロロ−ピリミジン、２−アミノ−６−クロロプリン、３−メチルアデノシン、５−プロピニルシチジン、５−プロピニルウリジン、５−ブロモウリジン、５−フルオロウリ
ジン、５−メチルシチジン、７−デアザアデノシン、７−デアザグアノシン、８−オキソアデノシン、８−オキソグアノシン、Ｏ（６）−メチルグアニン、及び２−チオシチジン）、化学又は生物学的に修飾された塩基（例えば、メチル化塩基）、修飾糖類（例えば、２’−フルオロリボース、２’−アミノリボース、２’−アジドリボース、２’−Ｏ−メチルリボース、Ｌ−エナンチオマーヌクレオシドアラビノース、及びヘキソース）、修飾リン酸基（例えば、ホスホロチオエート及び５’−Ｎ−ホスホラミダイト結合）、及びその組み合わせが挙げられる。核酸の化学合成のための天然及び修飾ヌクレオチドモノマーは、容易に入手できる。いくつかの場合において、このような修飾を含む核酸は、天然ヌクレオチドのみから成る核酸に対して改善された特性を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の核酸修飾は、ヌクレアーゼ（例えば、エキソヌクレアーゼ、エンドヌクレアーゼ等）による消化を減少及び／又は防ぐために使用される。例えば、核酸の構造は、消化を減少させるために、１つ又は両方の鎖の３’末端にヌクレオチド類似体を含むことによって、安定化することができる。
【０１０２】
異なるヌクレオチド修飾及び／又は骨格構造は、核酸の様々な位置に存在し得る。このような修飾として、モルホリノ、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、メチルホスホン酸ヌクレオチド、チオールホスホン酸ヌクレオチド、２’−フルオロＮ３−Ｐ５’−ホスホラミダイト、１’，５’−アンヒドロヘキシトール核酸（ＨＮＡ）又はその組み合わせが挙げられる。
【０１０３】
結合化学
いくつかの例において、ペイロードは、天然型ライゲーションによって本明細書に記載される抗ＬＲＩＧ１抗体に結合される。いくつかの例において、結合は、以下に記載される。Ｄａｗｓｏｎ等“Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｂｙ  ｎａｔｉｖｅ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｌｉｇａｔｉｏｎ，”Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９４、２６６、７７６−７７９；Ｄａｗｓｏｎ等“Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  Ｎａｔｉｖｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｌｉｇａｔｉｏｎ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｔｈｉｏｌ  Ａｄｄｉｔｉｖｅｓ，”Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９７、１１９、４３２５−４３２９；  Ｈａｃｋｅｎｇ等“Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｂｙ  ｎａｔｉｖｅ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｌｉｇａｔｉｏｎ：Ｅｘｐａｎｄｅｄ
ｓｃｏｐｅ  ｂｙ  ｕｓｉｎｇ  ｓｔｒａｉｇｈｔｆｏｒｗａｒｄ  ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ．，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １９９９、９６、１００６８−１００７３；又はＷｕ等“Ｂｕｉｌｄｉｎｇ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｇｌｙｃｏｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａ  ｃｙｓｔｅｉｎｅ−ｆｒｅｅ  ｎａｔｉｖｅ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｌｉｇａｔｉｏｎ  ｐｒｏｔｏｃｏｌ，”Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２００６、４５、４１１６−４１２５。いくつかの例において、結合は、米国特許第８，９３６，９１０号明細書に記載される。
【０１０４】
いくつかの例において、ペイロードは、「トレースレス」カップリング技術（Ｐｈｉｌｏｃｈｅｍ）を使用する部位特異的方法によって、本明細書に記載される抗ＬＲＩＧ１抗体に結合される。いくつかの例において、「トレースレス」カップリング技術は、結合部分にＮ末端１，２−アミノチオール基を使用し、その後、アルデヒド基を含む多核酸分子と結合される。（Ｃａｓｉ等、“Ｓｉｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｔｒａｃｅｌｅｓｓ  ｃｏｕｐｌｉｎｇ  ｏｆ  ｐｏｔｅｎｔ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ｄｒｕｇｓ  ｔｏ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  ｐｈａｒｍａｃｏｄｅｌｉｖｅｒｙ，”ＪＡＣＳ１３４（１３）：５８８７−５８９２（２０１２）を参照のこと）。
【０１０５】
いくつかの例において、ペイロードは、結合部分に組み込まれる非天然アミノ酸を使用する部位特異的方法によって、本明細書に記載される抗ＬＲＩＧ１抗体に結合される。いくつかの例において、非天然アミノ酸は、ｐ−アセチルフェニルアラニン（ｐＡｃＰｈｅ
）を含む。いくつかの例において、ｐＡｃＰｈｅのケト基は、アルコキシ−アミン誘導体化結合部分に選択的に結合されて、オキシム結合を形成する。（Ａｘｕｐ等、“Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｓｉｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ｕｓｉｎｇ  ｕｎｎａｔｕｒａｌ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄｓ，”ＰＮＡＳ１０９（４０）：１６１０１−１６１０６（２０１２）を参照のこと）。
【０１０６】
いくつかの例において、ペイロードは、酵素触媒工程を使用する部位特異的方法によって、本明細書に記載される抗ＬＲＩＧ１抗体に結合される。いくつかの例において、部位特異的方法は、ＳＭＡＲＴａｇ（商標）技術（Ｒｅｄｗｏｏｄ）を使用する。いくつかの例において、ＳＭＡＲＴａｇ（商標）技術は、アルデヒドタグの存在下における酸化工程及び続くｈｙｄｒａｚｉｎｏ−Ｐｉｃｔｅｔ−Ｓｐｅｎｇｌｅｒ（ＨＩＰＳ）ライゲーションを介したＦＧｌｙのアルキルヒドライン機能化多核酸分子への結合によって、ホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）によって、システインからホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）残基を生成することを含む。（Ｗｕ等、“Ｓｉｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｐｒｏｄｕｃｅｄ  ｉｎ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｕｓｉｎｇ  ｔｈｅ  ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ  ｅｎｃｏｄｅｄ  ａｌｄｅｈｙｄｅ  ｔａｇ，”ＰＮＡＳ１０６（９）：３０００−３００５（２００９）；Ａｇａｒｗａｌ等、“Ａ  Ｐｉｃｔｅｔ−Ｓｐｅｎｇｌｅｒ  ｌｉｇａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ，”ＰＮＡＳ１１０（１）：４６−５１（２０１３）を参照のこと）。
【０１０７】
いくつかの例において、酵素触媒工程は、微生物トランスグルタミナーゼ（ｍＴＧ）を含む。いくつかの例において、ペイロードは、微生物トランスグルタミナーゼ酵素触媒工を使用して、抗ＬＲＩＧ１抗体に結合される。いくつかの例において、ｍＴＧは、認識配列のグルタミンのアミド側鎖と機能化多核酸分子の一級アミンとの間の共有結合の形成を触媒する。いくつかの例において、ｍＴＧは、ストレプトマイセス‐モバラエンシスから産生される。（Ｓｔｒｏｐ等、“Ｌｏｃａｔｉｏｎ  ｍａｔｔｅｒｓ：ｓｉｔｅ  ｏｆ  ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  ｍｏｄｕｌａｔｅｓ  ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ，”Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２０（２）１６１−１６７（２０１３）を参照のこと）。
【０１０８】
いくつかの例において、ペイロードは、配列特異的トランスペプチダーゼを使用する、国際公開第２０１４／１４０３１７号明細書に記載される方法によって抗ＬＲＩＧ１抗体に結合される。
【０１０９】
いくつかの例において、ペイロードは米国特許出願第２０１５／０１０５５３９号及び第２０１５／０１０５５４０号明細書に記載される方法によって、本明細書に記載の抗ＬＲＩＧ１抗体に結合される。
【０１１０】
リンカー
いくつかの例において、前述のリンカーは、分岐若しくは非分岐モノマー、及び／又は２次元若しくは３次元のモノマーの架橋ネットワークから成る、天然又は合成ポリマーを含む。いくつかの例において、リンカーとして、多糖、リグニン、ゴム、又はポリアルキレンオキシド（例えば、ポリエチレングリコール）が挙げられる。
【０１１１】
いくつかの例において、リンカーとして、限定されないが、α−、ω−ジヒドロキシルポリエチレングリコール、生分解性ラクトンに基づくポリマー、例えば、ポリアクリル酸、ポリラクチド酸（ＰＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ポリプロピレン、ポリ
スチレン、ポリオレフィン、ポリアミド、ポリシアノアクリル酸塩、ポリイミド、ポリエチレンテレフタラート（ＰＥＴ、ＰＥＴＧ）、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴＥ）、ポリテトラメチレングリコール（ＰＴＧ）、又はポリウレタン及びその混合物が挙げられる。本明細書で使用される場合、混合物は、同化合物の異なるポリマーの使用を指し、ブロックコポリマーに関連する。いくつかの場合において、ブロックコポリマーは、ポリマーの少なくとも１つのセクションが別のポリマーのモノマーから構築される。いくつかの例において、リンカーはポリアルキレンオキシドを含む。いくつかの例において、リンカーはＰＥＧを含む。いくつかの例において、リンカーは、ポリエチレンイミド（ＰＥＩ）又はヒドロキシエチルスターチ（ＨＥＳ）を含む。
【０１１２】
いくつかの場合において、ポリアルキレンオキシド（例えば、ＰＥＧ）は多分散又は単一分散化合物である。いくつかの例において、多分散材料は、平均重量（重量平均）サイズ及び分散度を特徴とする異なる分子量の材料の分散分布を含む。いくつかの例において、単分散ＰＥＧは１つの大きさの分子を含む。いくつかの実施形態において、リンカーは多分散又は単分散ポリアルキレンオキシド（例えば、ＰＥＧ）であり、及び指示される分子量がポリアルキレンオキシド、例えば、ＰＥＧ分子の分子量の平均を示す。
【０１１３】
いくつかの実施形態において、リンカーは、ポリアルキレンオキシド（例えば、ＰＥＧ）を含み、ポリアルキレンオキシド（例えば、ＰＥＧ）の分子量は、約２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１４５０、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３２５０、３３５０、３５００、３７５０、４０００、４２５０、４５００、４６００、４７５０、５０００、５５００、６０００、６５００、７０００、７５００、８０００、１０，０００、１２，０００、２０，０００、３５，０００、４０，０００、５０，０００、６０，０００、又は１００，０００Ｄａである。
【０１１４】
いくつかの実施形態において、ポリアルキレンオキシド（例えば、ＰＥＧ）は分散ＰＥＧであり、分散ＰＥＧは、１つ以上の反復エチレンオキシド単位を含む高分子ＰＥＧである。いくつかの例において、分散ＰＥＧ（ｄＰＥＧ）は、２〜６０、２〜５０、又は２〜４８個の反復エチレンオキシド単位を含む。いくつかの例において、ｄＰＥＧは、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３５、４０、４２、４８、５０個以上の反復エチレンオキシド単位を含む。いくつかの例において、ｄＰＥＧは、約２個以上の反復エチレンオキシド単位を含む。いくつかの場合において、ｄＰＥＧは、純粋（例えば、約９５％、９８％、９９％又は９９．５％）な原材料から段階的に単一の分子量の化合物として合成される。いくつかの場合において、ｄＰＥＧは、平均分子量よりも特定の分子量を有する。いくつかの場合において、本明細書に記載のｄＰＥＧは、Ｑｕａｎｔａ  Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ、ＬＭＤのｄＰＥＧである。
【０１１５】
いくつかの場合において、リンカーは分散ＰＥＧであり、任意に２〜６０、２〜５０、又は２〜４８個の反復エチレンオキシド単位を含む。いくつかの場合において、リンカーは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３５、４０、４２、４８、５０個以上の反復エチレンオキシド単位を含むｄＰＥＧを含む。いくつかの場合において、リンカーは、Ｑｕａｎｔａ  Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ、ＬＭＤのｄＰＥＧである。
【０１１６】
いくつかの実施形態において、リンカーはポリペプチドリンカーである。いくつかの例において、ポリペプチドリンカーは、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００個以
上のアミノ酸残基を含む。いくつかの例において、ポリペプチドリンカーは少なくとも２、３、４、５、６、７、８個以上のアミノ酸残基を含む。いくつかの場合において、ポリペプチドリンカーは最大で２、３、４、５、６、７、８以下のアミノ酸残基を含む。いくつかの場合において、ポリペプチドリンカーは（例えば、酵素的又は化学的の何れかで）切断可能なポリペプチドリンカーである。いくつかの場合において、ポリペプチドリンカーは、切断することができないポリペプチドリンカーである。いくつかの例において、ポリペプチドリンカーは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ（バリン−シトルリン）、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ａｒｇ、Ｌｅｕ−Ｃｉｔ、Ｉｌｅ−Ｃｉｔ、Ｔｒｐ−Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、又はＧｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙを含む。いくつかの例において、ポリペプチドリンカーは、いくつかの例において、ポリペプチドリンカーは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ（バリン−シトルリン）、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ａｒｇ、Ｌｅｕ−Ｃｉｔ、Ｉｌｅ−Ｃｉｔ、Ｔｒｐ−Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、又はＧｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ等のペプチドを含む。いくつかの場合において、ポリペプチドリンカーは、Ｌ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸、又はＬ−及びＤ−アミノ酸の両方の混合物を含む。
【０１１７】
いくつかの例において、リンカーはホモ二官能性（ｈｏｍｏｂｉｆｕｃｔｉｏｎａｌ）リンカーを含む。例示的なホモ二官能性リンカーとして、限定されないが、Ｌｏｍａｎｔ試薬ジチオビス（スクシンイミジルプロピオン酸）ＤＳＰ、３’３’−ジチオビス（スルホスクシンイミジルプロプリオン酸）（ＤＴＳＳＰ）、スベリン酸ジスクシンイミジル（ＤＳＳ）、ビス（スルホスクシンイミジル）スベリン酸（ＢＳ）、酒石酸ジスクシンイミジル（ＤＳＴ）、酒石酸ジスルホスクシンイミジル（スルホＤＳＴ）、エチレングリコビス（スクシンイミジルコハク酸）（ＥＧＳ）、グルタル酸ジスクシンイミジル（ＤＳＧ）、炭酸Ｎ，Ｎ’−ジスクシンイミジル（ＤＳＣ）、アジプイミド酸ジメチル（ＤＭＡ）、ピメルイミド酸ジメチル（ＤＭＰ）、スベルイミド酸ジメチル（ＤＭＳ）、ジメチル−３，３’−ジチオビスプロピオンイミド酸（ＤＴＢＰ）、１，４−ジ−３’−（２’−ピリジルジチオ）プロピオンアミド）ブタン（ＤＰＤＰＢ）、ビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、ハロゲン化アリール含有化合物（ＤＦＤＮＢ）、例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン又は１，３−ジフルオロ−４，６−ジニトロベンゼン、４，４’−ジフルオロ−３，３’−ジニトロフェニルスルホン（ＤＦＤＮＰＳ）、ビス−［β−（４−アジドサリチルアミド）エチル］二硫化物（ＢＡＳＥＤ）、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテル、アジピン酸ジヒドラジド、カルボヒドラジド、ｏ−トルイジン、３，３’−ジメチルベンジジン、ベンジジン、α，α’−ｐ−ジアミノジフェニル、ジヨード−ｐ−キシレンスルホン酸、Ｎ，Ｎ’−エチレン−ビス（ヨードアセトアミド）、又はＮ，Ｎ’−ヘキサメチレン−ビス（ヨードアセトアミド）が挙げられる。
【０１１８】
いくつかの実施形態において、リンカーはヘテロ二官能性リンカーを含む。例示的なヘテロ二官能性リンカーとして、限定されないが、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸（ｓＰＤＰ）等のアミン反応性及びスルフヒドリル架橋リンカー、長鎖Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸（ＬＣ−ｓＰＤＰ）、水溶性長鎖Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオナート（スルホ−ＬＣ−ｓＰＤＰ）、スクシンイミジルオキシカルボニル−α−メチル−α−（２−ピリジルジチオ）トルエン（ｓＭＰＴ）、スルホスクシンイミジル−６−［α−メチル−α−（２−ピリジルジチオ）トルアミド］ヘキサン酸（スルホ−ＬＣ−ｓＭＰＴ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸（ｓＭＣＣ）、スルホスクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カル
ボン酸（スルホ−ｓＭＣＣ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢｓ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル（スルホ−ＭＢｓ）、Ｎ−スクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノ安息香酸（ｓＩＡＢ）、スルホスクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノ安息香酸（スルホ−ｓＩＡＢ）、スクシンイミジル−４−（ｐ−マレイミドフェニル）酪酸（ｓＭＰＢ）、スルホスクシンイミジル−４−（ｐ−マレイミドフェニル）酪酸（スルホ−ｓＭＰＢ）、Ｎ−（γ−マレイミドブチリルオキシ）スクシンイミドエステル（ＧＭＢｓ）、Ｎ−（γ−マレイミドブチリルオキシ）スルホスクシンイミドエステル（スルホ−ＧＭＢｓ）、スクシンイミジル６−（（ヨードアセチル）アミノ）ヘキサン酸（ｓＩＡＸ）、スクシンイミジル６−［６−（（（ヨードアセチル）アミノ）ヘキサノイル）アミノ］ヘキサン酸（ｓＩＡＸＸ）、スクシンイミジル４−（（（ヨードアセチル）アミノ）メチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸（ｓＩＡＣ）、スクシンイミジル６−（（（（４−ヨードアセチル）アミノ）メチル）シクロヘキサン−１−カルボニル）アミノ）ヘキサン酸（ｓＩＡＣＸ）、ｐ−ニトロフェニルヨード酢酸塩（ＮＰＩＡ）、カルボニル反応性及びスルフヒドリル反応性架橋剤、例えば４−（４−Ｎ−マレイミドフェニル）酪酸ヒドラジド（ＭＰＢＨ）、４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシル−ヒドラジド−８（Ｍ２Ｃ２Ｈ）、３−（２−ピリジルジチオ）プロピオニルヒドラジド（ＰＤＰＨ）、アミン反応性及び光反応性架橋剤、例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル−４−アジドサリチル酸（ＮＨｓ−ＡｓＡ）、Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミジル−４−アジドサリチル酸（スルホ−ＮＨｓ−ＡｓＡ）、スルホスクシンイミジル−（４−アジドサリチルアミド）ヘキサン酸（スルホ−ＮＨｓ−ＬＣ−ＡｓＡ）、スルホスクシンイミジル−２−（ρ−アジドサリチルアミド）エチル−１，３’−ジチオプロピオン酸（ｓＡｓＤ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル−４−アジド安息香酸（ＨｓＡＢ）、Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミジル−４−アジド安息香酸（スルホ−ＨｓＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジル−６−（４’−アジド−２’−ニトロフェニルアミノ）ヘキサン酸（ｓＡＮＰＡＨ）、スルホスクシンイミジル−６−（４’−アジド−２’−ニトロフェニルアミノ）ヘキサン酸（スルホ−ｓＡＮＰＡＨ）、Ｎ−５−アジド−２−ニトロベンゾイルオキシスクシンイミド（ＡＮＢ−ＮＯｓ）、スルホスクシンイミジル−２−（ｍ−アジド−ｏ−ニトロベンズアミド）−エチル−１，３’−ジチオプロピオン酸（ｓＡＮＤ）、Ｎ−スクシンイミジル−４（４−アジドフェニル）１，３’−ジチオプロピオン酸（ｓＡＤＰ）、Ｎ−スルホスクシンイミジル（４−アジドフェニル）−１，３’−ジチオプロピオン酸（スルホ−ｓＡＤＰ）、スルホスクシンイミジル４−（ρ−アジドフェニル）酪酸（スルホ−ｓＡＰＢ）、スルホスクシンイミジル２−（７−アジド−４−メチルクマリン−３−アセトアミド）エチル−１，３’−ジチオプロピオン酸（ｓＡＥＤ）、スルホスクシンイミジル７−アジド−���−メチルクマイン−３−アセテート（スルホ−ｓＡＭＣＡ）、ρ−ニトロフェニルジアゾピルビン酸（ρＮＰＤＰ）、ρ−ニトロフェニル−２−ジアゾ−３，３，３−トリフルオロプロピオン酸（ＰＮＰ−ＤＴＰ）、スルフヒドリル反応性及び光反応性架橋剤、例えば、１−（ρ−アジドサリチルアミド）−４−（ヨードアセトアミド）ブタン（ＡｓＩＢ）、Ｎ−［４−（ρ−アジドサリチルアミド）ブチル］−３’−（２’−ピリジルジチオ）プロピオンアミド（ＡＰＤＰ）、ベンゾフェノン−４−ヨードアセトアミド、ベンゾフェノン−４−マレイミドカルボニル反応性及び光反応性架橋剤、例えばρ−アジドベンゾイルヒドラジド（ＡＢＨ）、カルボン酸反応性及び光反応性架橋剤、例えば、４−（ρ−アジドサリチルアミド）ブチルアミン（ＡｓＢＡ）、及びアルギニン反応性及び光反応性架橋剤、例えばρ−アジドフェニルグリオキサール（ＡＰＧ）が挙げられる。
【０１１９】
いくつかの実施形態において、リンカーは、安息香酸基、又はその誘導体を含む。いくつかの例において、安息香酸基又はその誘導体は、パラアミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）を含む。いくつかの例において、安息香酸基又はその誘導体は、ガンマアミノ酪酸（ＧＡＢＡ）を含む。
【０１２０】
いくつかの実施形態において、リンカーは、任意の組み合わせで、マレイミド基、ペプチド部分及び／又は安息香酸基の１つ以上を含む。いくつかの実施形態において、リンカーは、マレイミド基、ペプチド部分及び／又は安息香酸基の組み合わせを含む。いくつかの例において、マレイミド基は、マレイミドカプロイル（ｍｃ）である。いくつかの例において、ペプチド基は、ｖａｌ−ｃｉｔである。いくつかの例において、安息香酸基はＰＡＢＡである。いくつかの例において、リンカーはｍｃ−ｖａｌ−ｃｉｔ基を含む。いくつかの場合において、リンカーは、ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢＡ基を含む。追加の場合において、リンカーは、ｍｃ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢＡ基を含む。
【０１２１】
いくつかの実施形態において、リンカーは、自壊性リンカー又は自己消去（ｓｅｌｆ−ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ）リンカーである。いくつかの場合において、リンカーは、自壊性リンカーである。その他の場合において、リンカーは自己消去リンカー（例えば、環化自己消去リンカー）である。いくつかの例において、リンカーは米国特許第９，０８９，６１４号明細書又は国際公開第２０１５０３８４２６号明細書に記載されるリンカーを含む。
【０１２２】
いくつかの実施形態において、リンカーは樹状タイプのリンカーである。いくつかの例において、樹状タイプのリンカーは、分岐、多機能性リンカー部分を含む。いくつかの例において樹状タイプのリンカーは、ＰＡＭＡＭデンドリマーを含む。
【０１２３】
いくつかの実施形態において、リンカーはトレースレスリンカー又は切断後に、抗体又はペイロードに対するリンカー部分（例えば、原子又はリンカー基）に残らないリンカーである。例示的なトレースレスリンカーとして、限定されないが、ゲルマニウムリンカー、ケイ質リンカー、硫黄リンカー、セレニウムリンカー、窒素リンカー、リン酸リンカー、ホウ素リンカー、クロムリンカー又はフェニルヒドラジドリンカーが挙げられる。いくつかの場合において、リンカーは、Ｈｅｊｅｓｅｎ等、“Ａ  ｔｒａｃｅｌｅｓｓ  ａｒｙｌ−ｔｒｉａｚｅｎｅ  ｌｉｎｋｅｒ  ｆｏｒ  ＤＮＡ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，”Ｏｒｇ  Ｂｉｏｍｏｌ  Ｃｈｅｍ  １１（１５）：２４９３−２４９７（２０１３）に記載されるトレースレスアリールトリアゼンリンカーである。いくつかの例において、リンカーは、Ｂｌａｎｅｙ等、“Ｔｒａｃｅｌｅｓｓ  ｓｏｌｉｄ−ｐｈａｓｅ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，”Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１０２：２６０７−２０２４（２００２）に記載されるトレースレスリンカーである。いくつかの場合において、リンカーは、米国特許第６，８２１，７８３号明細書に記載のトレースレスリンカーである。
【０１２４】
医薬組成物
いくつかの実施形態において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、医薬組成物としてさらに製剤化される。いくつかの例において、医薬組成物は、限定されないが、非経口（例えば、静脈内、皮下、筋肉内、動脈内、皮膚内、腹腔内、硝子体内、脳内、又は脳室内）、経口、鼻腔内、頬側、直腸、又は経皮的投与経路を含む複数の投与経路によって、対象に投与するために製剤化される。いくつかの例において、本明細書に記載される医薬組成物は、非経口（例えば、静脈内、皮下、筋肉内、動脈内、皮膚内、腹腔内、硝子体内、脳内、又は脳室内）投与のために製剤化される。その他の例において、本明細書に記載される医薬組成物は、経口投与のために製剤化される。さらにその他の例において、本明細書に記載される医薬組成物は、鼻腔内投与のために製剤化される。
【０１２５】
いくつかの実施形態において、医薬組成物は、限定されないが、水性液体分散液、自己乳化性分散液、固形溶液、リポソーム分散液、エアロゾル、固形剤形、粉末、即放性製剤、制御放出製剤、早く融解する製剤、錠剤、カプセル、丸剤、遅延放出製剤、持続放出製
剤、パルス放出製剤、多粒状製剤（例えば、ナノ粒子製剤）、並びに混合された即放性及び制御放出製剤が挙げられる。
【０１２６】
いくつかの例において、医薬組成物は、さらに、ｐＨ調節剤又は緩衝剤を含み、酢酸、ホウ酸、クエン酸、乳酸、リン酸及び塩酸等の酸を含み、水酸化ナトリウム、リン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、トリス−ヒドロキシメチルアミノメタン等の塩基、並びにクエン酸／ブドウ糖、炭酸水素ナトリウム及び塩化アンモニウム等の緩衝液を含む。このような酸、塩基及び緩衝液は、許容される範囲の組成物のｐＨを維持するために必要とされる量で含まれる。
【０１２７】
いくつかの例において、医薬組成物は、組成物の浸透圧を許容範囲にするために必要とされる量で１つ以上の塩を含む。このような塩として、ナトリウム、カリウム又はアンモニウムカチオン及び塩化物、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、ホウ酸塩、リン酸塩、炭酸水素塩、硫酸塩、チオ硫酸塩又は亜硫酸水素塩アニオンを有する塩を含み、適切な塩は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、チオ硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム及び硫酸アンモニウムを含む。
【０１２８】
いくつかの例において、医薬組成物は、より安定した環境を提供することができるため、化合物を安定にするために使用される希釈剤をさらに含む。緩衝液に溶解される塩（ｐＨ調整又はｐＨ維持を提供することもできる）は、限定されないが、当該技術分野の希釈剤として使用され、リン酸塩緩衝生理食塩水溶液を含む。特定の例において、希釈剤は、圧縮を容易にするために組成物のバルクを増加し、又はカプセル充填について均一なブレンドのための充分なバルクを作製する。このような成分として、例えば、ラクトース、スターチ、マンニトール、ソルビトール、ブドウ糖、Ａｖｉｃｅｌ（登録商標）等の結晶セルロース、リン酸水素カルシウム、リン酸二カルシウム二水和物、リン酸三カルシウム、リン酸カルシウム、無水ラクトース、噴霧乾燥されたラクトース、アルファ化デンプン、Ｄｉ−Ｐａｃ（登録商標）（Ａｍｓｔａｒ）等の圧縮可能な糖、マンニトール、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース酢酸ステアリン酸塩、ショ糖に基づく希釈剤、粉砂糖、一塩基硫酸カルシウム一水和物、硫酸カルシウム二水和物、乳酸カルシウム三水和物、デキストル酸塩、加水分解された穀類固形物、アミロース、粉末セルロース、炭酸カルシウム、グリセリン、カオリン、マンニトール、塩化ナトリウム、イノシトール、ベントナイト等を挙げることができる。
【０１２９】
治療レジメン
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される抗ＬＲＩＧ１抗体は、治療的適用のために投与される。いくつかの実施形態において、抗ＬＲＩＧ１抗体は、１日１回、１日２回、１日３回以上投与される。抗ＬＲＩＧ１抗体は、毎日、毎隔日、１週間に５日、１週間に１回、隔週、１か月に２週間、１か月に３週間、１か月に１回、１か月に２回、１か月に３回以上投与される。抗ＬＲＩＧ１抗体は、少なくとも１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、７か月、８か月、９か月、１０か月、１１か月、１２か月、１８か月、２年、３年以上の間投与される。
【０１３０】
医師の裁量で患者の状態が正に改善する場合、抗ＬＲＩＧ１抗体の投与は連続的に与えられ、あるいは、抗ＬＲＩＧ１抗体の用量は、測定の期間（すなわち、「休薬日」）、一時的に減少又は維持的に中止される。いくつかの例において、休薬日の長さは、２日〜１年の間で変化し、例示に過ぎないが、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１０日、１２日、１５日、２０日、２８日、３５日、５０日、７０日、１００日、１２０日、１５０日、１８０日、２００日、２５０日、２８０日、３００日、３２０日、３５０日又は３６５日を含む。休薬日の間の用量の減少は、１０％〜１００％であり、例示に過ぎないが、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、
６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％を含む。
【０１３１】
患者の病態の改善が生じた場合、必要な場合維持用量が投与される。続いて、投与量又は投与頻度、又はその両方は、症状を関数として、改善された疾患、障害又は病態が維持されるレベルまで減少することができる。
【０１３２】
いくつかの実施形態において、量等に対応する所与の薬剤の量は、特定の化合物、治療を必要とする対象又は宿主の疾患の重症度、独自性（例えば、重量）等の要因に依存して変化するが、例えば、投与される特定の薬剤、投与経路、及び治療を受ける対象又は宿主を含む症例を取り囲む特定の状況に従って、当該技術分野で知られているように、ルーチン的に決定される。いくつかの例において、所望の用量は、単回用量に、又は同時に（又は短期間に渡って）、又は例えば、１日つき２、３、４回以上のサブ用量として適切な間隔で、投与される分割量として便利に示される。
【０１３３】
個別の治療レジメンについて変数の数が大きいため、前述の範囲は示唆に過ぎず、これらの推奨される値からの相当な可動域はまれではない。この用量は、変数の数、限定されないが、使用される化合物の作用、治療を受ける疾患又は病態、投与様式、個別の対象の必要条件、治療対象の疾患又は病態の重症度、及び実施者の判断に依存して変化する。
【０１３４】
いくつかの実施形態において、このような治療レジメンの毒性及び治療有効性は、細胞培養物又は実験動物の標準的な製剤手順によって決定され、限定されないが、ＬＤ５０（集団の５０％を死亡させる用量）及びＥＤ５０（集団の５０％に治療効果的な用量）の決定を含む。毒性と治療効果との間の用量比は、治療指数であり、ＬＤ５０とＥＤ５０との間の比として表される。高い治療指数を示す化合物が好まれる。細胞培養アッセイ及び動物試験から得られるデータは、ヒトに使用される用量範囲を公式化するときに使用される。このような化合物の用量は、好ましくは、最小毒性でＥＤ５０を含む濃度を循環する範囲にある。用量は、使用される剤形及び使用される投与経路に依存して、この範囲で変化する。
【０１３５】
製造のキット／物品
特定の実施形態において、本明細書に記載される１つ以上の組成物及び方法で使用するための製造のキット及び物品が本明細書に開示される。このようなキットは、担体、パッケージ、又はバイアル、管等の１つ以上の容器を受け取るように区画される容器を含み、容器のそれぞれは、本明細書に記載される方法に使用される個別の要素の１つを含む。適切な容器として、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、及び試験管が挙げられる。一実施形態において、容器は、ガラス又はプラスチック等の様々な材料から形成される。
【０１３６】
本明細書に提供される製造の物品は、包装材料を含む。医薬的包装材料の例として、限定されないが、ブリスターパック、ボトル、管、バッグ、容器、ボトル及び選択される製剤並びに意図された投与及び治療様式に適する包装材料が挙げられる。
【０１３７】
例えば、容器は、本明細書に開示される抗ＬＲＩＧ１抗体、本明細書に記載される１つ以上の抗体を産生する宿主細胞、及び／又は本明細書に記載される抗体をコードする核酸分子を含むベクターを含む。このようなキットは、任意に、本明細書に記載される方法に使用に関係する識別の記述又はラベル又は説明書を含む。
【０１３８】
キットは、通常、内容物及び／又は使用説明書を挙げるラベル、使用説明書を有する包装挿入物を含む。一組の説明書も通常含まれる。
【０１３９】
一実施形態において、ラベルは、容器の上にある又は容器に関連する。一実施形態において、ラベルを形成する文字、数字又はその他の文字が容器それ自体に貼られる、作られる又はエッチングされる場合、ラベルは容器の上にあり、例えば、パッケージ挿入物として、ラベルが容器又は容器を保持もする担体に存在する場合、ラベルは容器に関連する。一実施形態において、ラベルは、内容物が、特定の治療的適用に使用されることを示すために使用される。ラベルは、また、本明細書に記載される方法において、内容物を使用するための説明書を示す。
【０１４０】
特定の実施形態において、医薬組成物は、本明細書に提供される化合物を含む１つ以上の剤形を含むパック又はディスペンサ装置に存在する。パックは、例えば、ブリスターパック等の金属又はプラスチックホイルを含む。一実施形態において、パック又はディスペンサ装置は投与についての説明書を伴う。一実施形態において、パック又はディスペンサ装置は、また、医薬品の製造、使用又は販売を管理する政府機関によって規定される形態の容器に関連する通知を伴い、通知は、ヒト又は動物への投与のための薬剤の形態の機関の承認を反映している。このような通知は、例えば、処方薬又は承認された製品挿入物について、米国食品医薬品局によって承認されたラベリングである。一実施形態において、適合する医薬担体に製剤化される本明細書で提供される化合物を含む組成物は、また、指示される条件の治療について調製され、適切な容器に置かれ、及び標識される。
【０１４１】
特定の用語
他に断りの無い限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、請求の主題が属する技術分野の当業者によって、共通して理解される意味と同じ意味を有する。前述の一般的な記述及び以下の詳細な記述は、例示であり、説明に過ぎず、請求の任意の主題に制約されないことが理解される。
【０１４２】
この出願において、単数は、他に断りの無い限り、複数を含む。明細書及び添付の請求項に使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、その内容が明白にそうではないと記載していない限り、複数の参照対象を含む。この出願において、他に断りのない限り、「又は」の使用は、「及び／又は」を意味する。さらに、「含む」（「ｉｎｃｌｕｄｅ」、「ｉｎｃｌｕｄｅｓ」及び「ｉｎｃｌｕｄｅｄ」等）という用語の使用は、その他の形態と同じく、限定しない。
【０１４３】
本明細書で使用される場合、範囲及び量は、「約」として、特定の値又は範囲として表すことができる。約は、また、厳密な量を含む。したがって、「約５μＬ」は、「おおよそ５μＬ」を意味し、「５μＬ」も意味する。概して、「約」という用語は、実験誤差の範囲内、例えば、１５％、１０％、又は５％以内にあることが予想される量を含む。
【０１４４】
本明細書に使用される見出しは、組織立てるためにだけにあり、記載の主題を限定するものとして考えられない。
【０１４５】
本明細書で使用される場合、用語「個体」、「対象」及び「患者」は任意の哺乳動物を意味する。いくつかの実施形態において、哺乳動物はヒトである。いくつかの実施形態において、哺乳動物は非ヒトである。いかなる用語も医療従事者（例えば、医師、正看護師、上級看護師、臨床医のアシスタント、又は用務員若しくはホスピスワーカー）の監督（例えば、常に又は断続の）によって特徴付けされる状況に必要とされない又は限定されない。
【０１４６】
「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」という用語は、本明細書では同義に使用されて、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。ポリマーは、線形、環状、又は分岐鎖であってもよく、修飾アミノ酸を含み得、非アミノ酸によって中断されてもよい。
この用語は、例えば、硫酸化、グリコシル化、脂質付加、アセチル化、リン酸化、ヨウ素化、メチル化、酸化、タンパク質プロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、  セレン化（ｓｅｌｅｎｏｙｌａｔｉｏｎ）、アルギニル化、ユビキチン化、又はラベリング成分との結合等の任意のその他の操作等の、転移ＲＮＡを媒介するタンパク質へのアミノ酸の付加によって、修飾されるアミノ酸ポリマーも含む。
【０１４７】
本明細書で使用される場合、「アミノ酸」という用語は、天然及び／又は非天然若しくは合成アミノ酸を指し、グリシン及びＤ又はＬ光学異性体の両方、並びにアミノ酸類似体及びペプチド模倣物を含む。
【０１４８】
示されるタンパク質「に由来する」ポリペプチド又はアミノ酸配列は、ポリペプチドの起源を指す。好ましくは、ポリペプチドは、本質的に、配列又はその部分にコードされるポリペプチドと本質的に同一であるアミノ酸配列を有し、この部分は、少なくとも１０〜２０個のアミノ酸、又は少なくとも２０〜３０個のアミノ酸、又は少なくとも３０〜５０個のアミノ酸から成り、又は配列にコードされるポリペプチドと免疫学的に同定可能である。この用語は、また、示される核酸配列から表されるポリペプチドを含む。
【０１４９】
非ヒト（例えば、げっ歯類又は霊長類）抗体に適用する場合の「ヒト化」という用語は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小の配列を含むハイブリッド免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖又はその断片である。
【実施例】
【０１５０】
これらの実施例は、例示目的のために提供されるに過ぎず、本明細書に提供される請求項の範囲を限定しない。
【０１５１】
実施例１  ＶＩＳＴＡへのＬＲＩＧ１結合
この実施例は、ＬＲＩＧ１とＶＩＳＴＡとの間の相互作用を評価するために実施されるアッセイを記載する。
【０１５２】
結合アッセイ−免疫共沈降
【０１５３】
免疫共沈降実験は、ＶＩＳＴＡが特異的にＬＲＩＧ１と相互作用するかどうかを試験するために実施された。２９３Ｔ細胞は、ＨＡタグ付けされたＶＩＳＴＡをコードするプラスミド及びＦｌａｇタグ付けされたＬＲＩＧ１をコードするプラスミドを同時導入された。トランスフェクションは、製造者のプロトコルに従ってリポフェクタミン３０００（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して実施された。トランスフェクトされた細胞は、一晩で増殖され、その後、洗浄され、溶解された。溶解された細胞は、遠心分離にかけられ、上清（溶解物）が回収された。溶解物は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ試料バッファと混合して調製され、ＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離された。ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルは、その後、抗Ｆｌａｇ抗体（図１Ａ）及び抗ＨＡ抗体（図１Ｂ）でそれぞれプローブされた。抗Ｆｌａｇと抗ＨＡ抗体の両方は、Ｓｉｇｍａから購入された。図１Ａ及び図１Ｂの矢印は、それぞれ、ＬＲＩＧ１及びＶＩＳＴＡの存在を示す。
【０１５４】
免疫沈降のために、抗ＨＡ抗体及びタンパク質Ｇビーズ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  ｂｉｏｔｅｃｈ）は、前述で生成された上清（溶解物）に加えられた。ビーズ及び溶解物は、４℃で一晩回転することによってインキュベートされて、ＨＡタグ付けされたタンパク質を付着させることができた。ビーズは、その後、溶解バッファで３回洗浄され、１倍のＳＤＳ  ＰＡＧＥ試料バッファと混合され、煮沸され、ＳＤＳ  ＰＡＧＥで分離された。ＳＤＳ  ＰＡＧＥゲルは、メンブレンに移され、その後、抗Ｆｌａｇ抗体（図１Ｃ）でプローブされた。図１Ｃの矢印は、ＬＲＩＧ１の存在を指し、ヒトＶＩＳＴＡがヒトＬＲＩＧ
１を特異的に引き落とすことを示す。
【０１５５】
遮断アッセイ−ＥＬＩＳＡ
【０１５６】
ＥＬＩＳＡアッセイも実施されて、ＶＩＳＴＡとＬＲＩＧ１との間の相互作用を評価した。９６ウェルＥＬＩＳＡプレート（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）は、ＰＢＳにおいてｈＬＲＩＧ１タンパク質（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）で被覆され、４℃で一晩インキュベートされた。プレートは、ＴＢＳＴで３回洗浄され、その後、室温で１時間、２％のＢＳＡを含むＰＢＳバッファで遮断された。図２において、抗ｈＬＲＩＧ１  ｍＡｂ（ＩＭＴ−３００）がｈＬＲＩＧ１で被覆されたウェルに加えられた。抗体は、１０分間インキュベートされ、その後、ｈＶＩＳＴＡ  Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）がプレートに加えられ、さらに１時間インキュベートされた。プレートは、その後、３回洗浄され、次に、抗ヒトＩｇＧ−ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）で、室温で１時間インキュベーションされた。ＴＢＳＴによる３回の洗浄後、ＴＭＢ  ｓｕｂｔｒａｃｔ（ＧｅｎｅＴｅｘ）で色が発生し、反応は、１ＮのＨＣｌで中断された。光学濃度（ＯＤ）は４５０ｎｍで読まれた。二重の±ＳＤの平均ＯＤとして、結果が表された。図２の結果は、ｈＬＲＩＧ１に対するモノクローナル抗体ＩＭＴ３００（ｍａｂ４）は、ＶＩＳＴＡとＬＲＩＧ１（図２）との間の相互作用を遮断したことを示した。
【０１５７】
実施例２  ＬＲＩＧ１発現アッセイ
フローサイトメトリーを使用して、ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）におけるＬＲＩＧ１の発現を検出した。活性化のために、ｈＣＤ３及びｈＣＤ２８（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で５日間被覆されたプレートにヒトＰＢＭＣが播種された。活性化され、又は新鮮なＰＢＭＣは、氷上で２００μｇ／ｍｌのｈＩｇＧで１０分間遮断され、続いて、氷上で、ヒツジ抗ｈＬＲＩＧ１ポリクローナル抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）又はアイソタイプのコントロール抗体で２０分間インキュベートされ、続いて、氷上で、抗ヒツジＩｇＧ  ＡＰＣ抗体（ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）で２０分間インキュベートされた。洗浄後、染色された細胞は、ＭＡＣＳｑｕａｎｔ  Ａｎａｌｙｚｅｒ１０（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｓｃｉ）を使用して分析された。図３Ａ−３Ｂの結果は、ＬＲＩＧ１の発現が、活性化（図３Ｂ）では検出されたが、アイソタイプのコントロール染色された試料（暗灰色の線）に対してナイーブＰＢＭＣ（淡灰色の線）（図３Ａ）では検出されなかったことを示した。
【０１５８】
実施例３  ＬＲＩＧ１機能混合リンパ球反応（ＭＬＲ）
あるドナーのヒトＭ２マクロファージは、別のドナーのヒトＣＤ４  Ｔ細胞と混合され、１０ｕｇ／ｍｌのコントロールＩｇＧ、ｈＰＤ１遮断抗体ＥＨ１２（ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ｈＬＲＩＧ１  ｍＡｂ  ＩＭＴ３００（ｍａｂ４）、又はｈＰＤ１及びＬＲＩＧ１抗体の組み合わせと、８日間、処理された。分泌されたＩＦＮガンマ（ＩＦＮγ）は、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅのＥＬＩＳＡキットで検出された。図４の結果は、ＰＤ１抗体と組み合わせたｈＬＲＩＧ１  ｍＡｂ  ＩＭＴ３００がＩＦＮγの分泌をかなり増加させたことを示した。
【０１５９】
実施例４  ＬＲＩＧ１−ＶＩＳＴＡ遮断作用のある場合とない場合のＬＲＩＧ１結合抗体の識別
ＬＲＩＧ１とＶＩＳＴＡとの相互作用を遮断する能力を有するＬＲＩＧ１標的抗体を識別するために、精製ＬＲＩＧ１及びＶＩＳＴＡタンパク質は、様々なＬＲＩＧ１標的抗体又はコントロール抗体の存在下、又は抗体の無い場合に、インキュベートされ、タンパク質の相互作用がＥＬＩＳＡによって評価された。ＨＩＳタグ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）に融合された精製ヒトＬＲＩＧ１細胞外ドメインは、３μｇ／ｍｌの濃度まで、リン酸緩
衝食塩水（ＰＢＳ）（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に希釈され、９６ウェルＥＬＩＳＡプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ、４４−２４０４−２１）のそれぞれのウェルに１００ｕｌ加えられた。プレートを４℃で一晩インキュベートした後に、プレートは、ウェルにつき、０．０５％のＴＷＥＥＮ(登録商標)（ＶＷＲ）（ＰＢＳＴ）を有する３００μｌのＰＢＳＴで３回洗浄された。プレートは、その後、室温で穏やかに振動しながら、ウェルにつきＰＢＳＴにおける２００μｌの２％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）（Ｓｉｇｍａ）で１時間遮断された。その後、ＰＢＳＴにおける２％のＢＳＡが除去され、ＰＢＳＴの２％のＢＳＡに３．３ｕｇ／ｍｌで５０ｕｌの抗体がウェルに加えられた。プレートは、室温で穏やかに振動しながら１０分間インキュベートされた。その後、１００ｕｌのＰＢＳ緩衝液の５０ｎＭのオリゴマー化されたＶＩＳＴＡがウェルにつき加えられた。ＶＩＳＴＡオリゴマー化はＫｌｉｃｋｍｅｒ形成によって実施された。端的には、５ｎＭのＫｌｉｃｋｍｅｒ（Ｉｍｍｕｄｅｘ）がＰＢＳの２００ｎＭのｈＶＩＳＴＡ−Ｆｃ−Ａｖｉ−ビオチンでインキュベートされ、１時間インキュベートされた。プレートは、室温で穏やかに振動しながら１時間インキュベートされた。その後、プレートは、ウェルにつき３００μｌのＰＢＳＴで３回洗浄され、１００ｕｌのアビジン−ＨＲＰ（１：１０００）（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）が各ウェルに加えられ、プレートは室温で３０分間穏やかに振動しながらインキュベートされた。その後、プレートは、ウェルにつき３００μｌのＰＢＳＴで３回洗浄された。１００ｕｌのＴＭＢ基質（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、３４０２９）がその後各ウェルに加えられた。反応は、ウェルにつき５０ｕｌの１ＭのＨＣｌ（ＶＷＲ）で停止された。プレートは４５０ｎｍの吸光度でプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して読まれた。ＬＲＩＧ１−ＶＩＳＴＡ相互作用の遮断率は、各実験試料で得られたシグナルのうち、抗体の無い試料のシグナルからバックグラウンドシグナルを差し引いた割合として、計算された。
【０１６０】
図５に示されるように、ＬＲＩＧ１結合抗体は、ＬＲＩＧ１及びＶＩＳＴＡの相互作用を遮断する差示的能力を示した。ＬＲＩＧ１標的ｍａｂ２は、強力に結合を阻害し、任意の抗体のない状態で観察されるＶＩＳＴＡ及びＬＲＩＧ１の結合を、２１％まで減少した。ｍａｂ４、ｍａｂ５、及びｍａ６も遮断されていない試料に対して、それぞれ、４４％、６０％、及び４３％までＬＲＩＧ１及びＶＩＳＴＡの結合を減少した。対照的に、ＬＲＩＧ１結合抗体ｍａｂ１及びｍａｂ３は、それほどＬＲＩＧ１のＶＩＳＴＡとの結合を減少しなかった。
【０１６１】
実施例５  ＶＩＳＴＡ−ＬＲＩＧ１遮断活性のある場合及びない場合のＬＲＩＧ１標的抗体は、ＬＲＩＧ１の固有のエピトープに結合する
ＶＩＳＴＡ−ＬＲＩＧ１遮断活性のある場合及びない場合のＬＲＩＧ１抗体が結合されるエピトープを識別するために、ＬＲＩＧ１の部分を表す２０個のアミノ酸ペプチドのライブラリが作製され、ＬＲＩＧ１抗体を結合する能力がＥＬＩＳＡによって評価された。少なくとも５０ｕｌのＰＢＳにおける少なくとも２ｕｇ／ｍｌのｈＬＲＩＧ１ペプチド又は１００ｕｌのＰＢＳにおける０．１ｕｇ／ｍｌの全長ヒトＬＲＩＧ１タンパク質（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）が９６ウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ、４４−２４０４−２１）のウェルに加えられた。プレートを４℃で一晩インキュベートした後に、プレートは、ウェルにつき、３００μｌのＰＢＳＴで３回洗浄された。プレートは、その後、室温で穏やかに振動しながら、ウェルにつき２００μｌのＰＢＳＴの２％ＢＳＡで１時間遮断された。その後、ＰＢＳＴの２％ＢＳＡが除去され、ＰＢＳＴの２％ＢＳＡにおける０．１ｕｇ／ｍｌの１００ｕｌの抗体がウェルに加えられた。プレートは、穏やかに振動しながら室温で１時間インキュベートされ、その後ウェルにつき、３００μｌのＰＢＳＴで３回洗浄された。その後、１００ｕｌの抗マウス  ＩｇＧ−ＨＲＰ（１：４０００）（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）又は抗ラットＩｇＧ  ＨＲＰ（１：４０００）（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）がウェルに加えられた。プレートは、穏やかに振動しながら室温で３０分間インキュベートされ、その後ウェルに
つき、３００μｌのＰＢＳＴで３回洗浄された。１００ｕｌのＴＭＢ基質（Ｆｉｓｈｅｒ
Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、３４０２９）がその後各ウェルに加えられた。反応は、ウェルにつき５０ｕｌの１Ｍ  ＨＣｌ（ＶＷＲ）で停止された。プレートは４５０ｎｍの吸光度でプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して読まれた。
【０１６２】
ペプチド配列は、表４に列挙される。
【表４−１】
2021514002.tif 000006
【表４−２】
2021514002.tif 000007
【０１６３】
図６に示されるように、ＶＩＳＴＡ−ＬＲＩＧ１遮断活性ｍａｂ２、ｍａｂ４、及びｍａｂ６を有するＬＲＩＧ１標的化抗体は、配列番号２のアミノ酸５６５−５８４に対応するペプチド５４に結合した。別々に、ｍａｂ３は、配列番号２のアミノ酸６３５−６５４に対応するペプチド６１に結合されるＶＩＳＴＡ−ＬＲＩＧ１遮断活性を示さなかった。ｍａｂ１は、ＶＩＳＴＡ−ＬＲＩＧ１遮断活性も欠いており、どのＬＲＩＧ１ペプチドにも結合せず、この抗体について乏しい親和性又は非線形エピトープを示唆する。同様に、ｍａｂ５は、ＬＲＩＧ１及びＶＩＳＴＡ結合を最も弱く遮断し、どのＬＲＩＧ１ペプチドにも結合することができず、乏しい親和性又は非線形エピトープを示唆する。ペプチド５４は、ＶＩＳＴＡ−ＬＲＩＧ１遮断活性を有する抗体を決定するために、ＬＲＩＧ１のエピトープを示す。
【０１６４】
実施例６  遮断活性を有するＬＲＩＧ１−ＶＩＳＴＡ抗体は、ＬＲＩＧ１への結合に競合する
ＬＲＩＧ１−ＶＩＳＴＡ遮断活性を有するＬＲＩＧ１結合抗体がＬＲＩＧ１分子の同じ又は重なる領域に結合するかどうかを決定するために、抗体ビニングアッセイが実施されて、ＬＲＩＧ１に同時に結合する抗体の能力を評価した。アミン反応性プローブは、Ｇａｔｏｒバイオセンサー（Ｐｒｏｂｅ  Ｌｉｆｅ、Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、ＣＡ）に装填され、ｄＨ２０に６０秒間平衡化され、１００ｕｌのＥＤＣ  ０．２Ｍ／ＮＨＳ  ０．０５Ｍの活性バッファに３０秒間浸され、その後、結合が飽和され、１ＭのエタノールアミンｐＨ８．５に３００秒間クエンチされるまで、１０ｍＭのＮａＯＡｃバッファ、ｐＨ５の２０ｕｇ／ｕｌのヒトＬＲＩＧ１−Ｈｉｓの溶液に浸された。ＬＲＩＧ１−Ｈｉｓの充填後、先端が２０ｕｇ／ｍＬの飽和抗体に浸され、その後、引き続いて５ｕｇ／ｍＬの競合抗体に浸された。
【０１６５】
表５〜６に記載されるように、任意の個別の抗体によるｈＬＲＩＧ１−Ｈｉｓの先端の飽和は、競合試験において、同抗体との結合を防いだ。別個の抗体の対の間の競合は競合ビンの１つのクラスを明らかにした。ｍａｂ２、ｍａｂ４、ｍａｂ５、及びｍａｂ６は、ｈＬＲＩＧ１−Ｈｉｓについて相互の競合結合を示したが、ｍａｂ１またはｍａｂ３に競合せず、そのためビンＡを規定する。ｍａｂ５のｍａｂ２、ｍａｂ４及びｍａｂ６との競合の観察は、ペプチド５４にそれほど結合することができないという観点で予想されず、一方で、ｍａｂ２、ｍａｂ４、及びｍａｂ６はまさにペプチド５４に結合した。対照的に、ｍａｂ１及びｍａｂ３は、互いに、又は任意のその他の抗体とビニングすることができなかった。重要なこととして、ビンＡにおける抗体の結合は、図５に記載されるように、ＬＲＩＧ１及びＶＩＳＴＡの結合を遮断する能力と相関し、一方で、ビニングされない抗体ｍａｂ１及びｍａｂ３は、この相互作用を遮断することができなかった。したがって、ビンＡを規定するｍａｂ２、ｍａｂ４、ｍａｂ５、及びｍａｂ６との結合について競合する抗体の能力は、ＶＩＳＴＡ及びＬＲＩＧ１の相互作用を破壊する同抗体の能力を予測する。
【表５】
2021514002.tif 000008
【表６】
2021514002.tif 000009
【０１６６】
実施例７  ＶＩＳＴＡ−ＬＲＩＧ１の結合表面の識別
ＬＲＩＧ１とＶＩＳＴＡとの間の相互作用を媒介する残基を識別するために、架橋された質量分析方法が使用された。５ｕｌの精製３．２ｕＭ  ＬＲＩＧ１及び５ｕｌの精製０．６ｕＭ  ＶＩＳＴＡは混合され、Ｋ２００  ＭＡＬＤＩ  ＭＳ分析キット（ＣｏｖａｌＸ）との架橋に供された。９μｌの混合物は、１μｌのＫ２００安定化試薬（２ｍｇ／ｍｌ）と混合され、室温でインキュベートされた。インキュベーション時間（１８０分）の後、試料は、コントロール実験についてＭＡＬＤＩ分析のために調製された。試料は、結晶化の直ぐ後に高質量ＭＡＬＤＩ分析によって分析された。分析について、以下のパラメーターが適用された：質量分析計：線形及びポジティブモード、イオン源１：２０ｋＶ、イオン源２：１７ｋＶ、レンズ：１２ｋＶ、パルスイオン抽出：４００ｎｓのＨＭ４：ゲイン電圧：３．１４ｋＶ、加速電圧：２０ｋＶ。架橋ＬＲＩＧ１−ＶＩＳＴＡ産物がＭＨ＋＝２０７．１５４ｋＤａと識別された。試料は、トリプシン、キモトリプシン、ＡＳＰＮ−Ｎ、エラスターゼ又はサーモリシンで消化され、ＬＲＩＧ１及びＶＩＳＴＡアミノ酸配列の両方で架橋されたペプチドが決定された。
【０１６７】
図７Ａ〜７Ｃに記載されるように、ＬＲＩＧ１アミノ酸２４５〜２６０の近傍の残基がＶＩＳＴＡアミノ酸６８〜９２の近傍の残基に架橋結合されることが分かった。これらのアミノ酸は、それぞれの分子の露出領域に置かれ、これらの領域は、ＬＲＩＧ１及びＶＩＳＴＡのタンパク質間相互作用に関与することを示唆する。ＭＡＬＤＩ−ＭＳによって決定されるアミノ酸２４６〜２６０のＬＲＩＧ１結合インターフェースが、ＬＲＩＧ１−ＶＩＳＴＡ遮断抗体ｍａｂ２、ｍａｂ４、及びｍａｂ６によって結合されるエピトープと異なることは注目すべきである。これらの抗体の結合は、構造的再配置を生じる立体構造の変化を誘導し、それによって結合に影響を与える可能性がある。ＬＲＩＧ１アミノ酸２４５〜２６０によって媒介される異なる結合インターフェースの識別は、ペプチド５２によって規定される領域以外の領域に結合する抗体がＬＲＩＧ１及びＶＩＳＴＡの相互作用を破壊することもできることを示唆する。
【０１６８】
実施例８  ＬＲＩＧ１−ＶＩＳＴＡ遮断は、ヒト化マウス腫瘍モデルにおける腫瘍増殖を減少する
癌の環境におけるＬＲＩＧ１−ＶＩＳＴＡ遮断の有用性を評価するために、ヒト免疫システムを移植され、ヒトＳＣＬＣ腫瘍を有するマウスが使用された。全ての動物実験は、適用可能な米国農務省の動物福祉法（Ａｎｉｍａｌ  Ｗｅｌｆａｒｅ  Ａｃｔ）（９  ＣＦＲ  Ｐａｒｔｓ  １、２及び３）を遵守して実施され、ＩＡＣＵＣ承認動物プロトコルによって対象とされた。端的には、ＮＯＤ．Ｃｇ−ＰｒｋｄｃｓｃｉｄＩｌ２ｒｇｔｍ１ＳｕｇＴｇ（ＳＶ４０／ＨＴＬＶ−ＩＬ３，ＣＳＦ２）１０−７Ｊｉｃ／ＪｉｃＴａｃマウスは、ＮＯＧ−ＥＸＬマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ）としても知られ、ヒトＣＤ３４＋造血幹細胞を移植され、１００ｕｌの合計量に５０，０００のＣｕｌｔｒｅｘ  ＥＣＭ（Ｔｒｅｖｉｇｅｎ）と混合された等量のヒト小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）患者由来異種移植片（ＰＤＸ）モデルＬＵ５１７３腫瘍細胞が２６Ｇ７／８（０．５ｍｍ×２２ｍｍ）針に適合される凍結された１ｍｌのＬｕｅｒ−ｌｏｋシリンジで、後側に経皮的に注入された。動物の触知できる腫瘍又は見た目若しくは振る舞いの任意の変化は毎週モニタリングされ、病的状態又は死亡の任意の徴候を示すマウスについて毎日のモニタリングが実施された。腫瘍量は、以下の等式：（最長の直径＊最短の直径２）／２を使用して計算された。平均の
腫瘍量が６０〜１００ｍｍ３に達した場合、１２頭のマウスは、Ａ）ＨｕＩｇＧ４コントロール抗体、１０ｍｇ／ｋｇのＢＩＷ×３週間、Ｂ）抗ＰＤ１オプジーボ（ＯＰＤＩＶＯ）抗体、１０ｍｇ／ｋｇのＢＩＷｘ３週間、Ｃ）１０ｍｇ／ｋｇの抗ＬＲＩＧ１抗体ＩＭＴ３００（ｍａｂ４）ＢＩＷ×３週間の何れかを投与されるそれぞれの治療群にランダムに割り当てられた。
【０１６９】
図８及び表７に示されるように、ｈｕＩｇＧ４コントロール抗体で治療を受けた動物の腫瘍増殖は、治療から２５日後に、１７６０ｍｍ３の平均腫瘍量にまで増殖し、オプジーボで治療を受けた動物の腫瘍は、２０６８ｍｍ３の平均腫瘍量にまで増殖し、−１６％の腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）を反映する。対照的に、ＩＭＴ３００で治療を受けた動物の腫瘍は、同じ期間で１１８８ｍｍ３しか増殖せず、３４％のＴＧＩを反映する。さらに、頂端成長キネティックがコントロール治療された動物は７２ｍｍ３／日減少したのに対し、ＩＭＴ３００処理された動物は３２ｍｍ３／日減少した。まとめると、これらのデータは、ＬＲＩＧ１結合抗体ＩＭＴ３００によるＬＲＩＧ１−ＶＩＳＴＡの遮断がＰＤ１−ＰＤＬ１遮断抗体オプジーボ（ＯＰＤＩＶＯ）よりも効果的に、ヒト腫瘍増殖を阻害することを示す。
【表７】
2021514002.tif 000010
【０１７０】
実施例９  使用される抗体
以下の表８は、本明細書に記載される試験について抗体の情報を挙げる。
【表８】
2021514002.tif 000011
【０１７１】
実施例１０  配列
以下の表９は、前述の配列を示す。
【表９−１】
2021514002.tif 000012
【表９−２】
2021514002.tif 000013
【表９−３】
2021514002.tif 000014
【表９−４】
2021514002.tif 000015
【０１７２】
本発明の好ましい実施形態が示され、本明細書に記載されるが、このような実施形態が単なる例示として提供されることは当業者に明らかである。多数の変化例、変化及び置き換えが本発明から逸脱することなく当業者に思い浮かぶだろう。本明細書に記載の実施形態に対する様々な代替物が本発明の実施に使用され得ることが理解されるはずである。以下の請求項は本発明の範囲を規定し、これらの請求項及びその等価物の範囲内の方法及び構造がそれによって網羅される。
【図１Ａ】
2021514002.tif 000016
【図１Ｂ】
2021514002.tif 000017
【図１Ｃ】
2021514002.tif 000018
【図２】
2021514002.tif 000019
【図３Ａ】
2021514002.tif 000020
【図３Ｂ】
2021514002.tif 000021
【図４】
2021514002.tif 000022
【図５】
2021514002.tif 000023
【図６】
2021514002.tif 000024
【図７Ａ】
2021514002.tif 000025
【図７Ｂ】
2021514002.tif 000026
【図７Ｃ】
2021514002.tif 000027
【図８】
2021514002.tif 000028
【手続補正書】
【提出日】令和2年11月9日(2020.11.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＬＲＩＧ１と特異的に結合し、ＬＲＩＧ１とＶＩＳＴＡの相互作用を破壊する抗体。
【請求項２】
前記ＬＲＩＧ１−ＶＩＳＴＡ相互作用が、８０％未満、７８％未満、７０％未満、７２％未満、６６％未満、６０％未満、５６％未満、５４％未満、５２％未満、５０％未満、４４％未満、４３％未満、４０％未満、３０％未満、２９％未満、２７％未満、２１％未満、２０％未満、１９％未満、１７％未満、１０％未満、５％又は１％未満に減少する、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
前記相互作用が、領域２４５−２６０から選択されるＬＲＩＧ１の１つ以上の残基に生じ、前記残基の位置が、配列番号２の位置２４５−２６０に対応する、請求項１に記載の抗体。
【請求項４】
前記相互作用が、領域７８−９０又は６８−９２から選択されるＶＩＳＴＡの１つ以上の残基に生じ、前記残基の位置が、配列番号４の位置７８−９０又は６８−９２に対応する、請求項１に記載の抗体。
【請求項５】
配列番号５８のペプチド５４又は配列番号６５のペプチド６１の少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する、請求項１に記載の抗体。
【請求項６】
（ａ）ヒト化抗体、（ｂ）全長の抗体又はその結合断片、（ｃ）二重特異性抗体又はその結合断片、又は（ｄ）一価Ｆａｂ’、二価Ｆａｂ２、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、ミニボディ、ナノボディ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、又はラクダ抗体若しくはその結合断片、を含む、請求項１〜５の何れか１項に記載の抗体。
【請求項７】
配列番号８１〜８６の６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むヒト化抗体である、請求項１〜６の何れか１項に記載の抗体。
【請求項８】
配列番号８７及び８８から選択される重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、請求項１〜７の何れか１項に記載の抗体。
【請求項９】
配列番号８９及び９０から選択される軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、請求項１〜８の何れか１項に記載の抗体。
【請求項１０】
ｍａｂ２、ｍａｂ４、ｍａｂ５、又はｍａｂ６である、請求項１に記載の抗体。
【請求項１１】
治療を必要とする対象における癌の治療に使用するための、請求項１〜１０の何れか１項に記載の抗体を含む医薬組成物。
【請求項１２】
前記癌が固形腫瘍である、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記癌が、乳癌、結腸直腸癌、腎臓癌、肝臓癌、又は肺癌である、請求項１１又は１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記癌が血液系腫瘍である、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記抗体が非経口投与のために製剤化される、請求項１１〜１４の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記抗体が、追加の治療薬と組み合わせて投与される、請求項１１〜１５の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記抗体及び前記追加の治療薬が同時に又は連続して投与される、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記追加の治療薬が、免疫チェックポイント調節因子、化学療法薬、標的治療薬、ホルモン治療薬又は幹細胞に基づく治療薬を含む、請求項１６又は１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記抗体が、外科手術又は放射線治療の前又は後に投与される、請求項１１〜１８の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記対象の腫瘍微小環境（ＴＭＥ）の腫瘍細胞を減少させるための、請求項１〜１０に記載の抗体を含む医薬組成物。
【請求項２１】
前記腫瘍細胞が、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％減少する、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
前記対象が癌を含む、請求項２０又は２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
前記癌が固形腫瘍である、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
前記癌が、乳癌、結腸直腸癌、腎臓癌、肝臓癌、又は肺癌である、請求項２２又は２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
前記癌が血液系腫瘍である、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
前記抗体が非経口投与のために製剤化される、請求項２０〜２５の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
前記抗体が、追加の治療薬と組み合わせて投与される、請求項２０〜２６の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
前記抗体及び前記追加の治療薬が同時に又は連続して投与される、請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
前記追加の治療薬が、免疫チェックポイント調節因子、化学療法薬、標的治療薬、ホルモン治療薬又は幹細胞に基づく治療薬を含む、請求項２８に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
前記抗体が、外科手術又は放射線治療の前又は後に投与される、請求項２０〜２９の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
ＬＲＩＧ１と特異的に結合する抗体を含む、免疫活性を誘導するための医薬組成物であって、サイトカインの産生に影響する条件下で、前記抗体がＬＲＩＧ１発現細胞を含む複数の細胞と接触し、それによって免疫活性を誘導する、医薬組成物。
【請求項３２】
前記複数の細胞が、さらにＶＩＳＴＡ発現細胞を含む、請求項３１に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
前記抗ＬＲＩＧ１抗体が、さらにＬＲＩＧ１及びＶＩＳＴＡの相互作用を阻害又は破壊する、請求項３２に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
前記ＬＲＩＧ１−ＶＩＳＴＡ相互作用が、８０％未満、７８％未満、７０％未満、７２％未満、６６％未満、６０％未満、５６％未満、５４％未満、５２％未満、５０％未満、４４％未満、４３％未満、４０％未満、３０％未満、２９％未満、２７％未満、２１％未満、２０％未満、１９％未満、１７％未満、１０％未満、５％又は１％未満に減少する、請求項３３に記載の医薬組成物。
【請求項３５】
前記相互作用が、領域２４５−２６０から選択されるＬＲＩＧ１の１つ以上の残基に生じ、前記残基の位置が、配列番号２の位置２４５−２６０に対応する、請求項３４に記載の医薬組成物。
【請求項３６】
前記相互作用が、領域７８−９０又は６８−９２から選択されるＶＩＳＴＡの１つ以上の残基に生じ、前記残基の位置が、配列番号４の位置７８−９０又は６８−９２に対応する、請求項３４に記載の医薬組成物。
【請求項３７】
配列番号５８のペプチド５４又は配列番号６５のペプチド６１の少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する、請求項３１〜３６の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３８】
前記抗体が、（ａ）ヒト化抗体、（ｂ）全長の抗体又はその結合断片、（ｃ）二重特異性抗体又はその結合断片、又は（ｄ）一価Ｆａｂ’、二価Ｆａｂ２、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、ミニボディ、ナノボディ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、又はラクダ抗体若しくはその結合断片、を含む、請求項３１〜３７の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３９】
前記抗体が、配列番号８１〜８６の６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むヒト化抗体である、請求項３１〜３８の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項４０】
前記抗体が、配列番号８７及び８８から選択される重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、請求項３１〜３９の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項４１】
前記抗体が、配列番号８９及び９０から選択される軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、請求項３１〜４０の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項４２】
前記抗体がｍａｂ２、ｍａｂ４、ｍａｂ５、又はｍａｂ６である、請求項３１に記載の医薬組成物。
【請求項４３】
前記サイトカインがインターフェロンである、請求項３１〜４２の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項４４】
前記インターフェロンがＩＦＮγである、請求項４３に記載の医薬組成物。
【請求項４５】
前記抗体が、アイソタイプ抗体よりも高くＩＦＮγを産生する、請求項４４に記載の医薬組成物。
【請求項４６】
前記免疫活性が、ＣＤ３＋Ｔリンパ球、ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞、ＣＤ８＋細胞毒性Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、又はその組み合わせの増殖を含む、請求項３１〜４５の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項４７】
前記免疫活性が、前記複数の細胞におけるＭ１マクロファージ集団の増加及び／又は減少を含む、請求項３１〜４６の何れか１項に記載の医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2021514002000001.app
【国際調査報告】
2021514002.tif 000029
2021514002.tif 000030
2021514002.tif 000031