(57)【要約】  本発明は、ＣＤ４７とＳＩＲＰａの相互作用を遮断できる抗体及びその応用に関する。【選択図】図１
2021527110.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２〜４、１２〜１４、２２〜２４、３２〜３４、４２〜４４、５２〜５４、６２〜６４、７２〜７４、８２〜８４、９２〜９４、１０２〜１０４、１０７〜１０９、１１２〜１１４、１１７〜１１９、１２２〜１２４、１３２〜１３４、１３７〜１３９、１４２〜１４４、１４７〜１４９、１５２〜１５４又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖ＣＤＲ、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７〜９、１７〜１９、２７〜２９、３７〜３９、４７〜４９、５７〜５９、６７〜６９、７７〜７９、８７〜８９、９７〜９９、１５７〜１５９、１６２〜１６４、１６７〜１６９、１７２〜１７４、１７７〜１７９又はそれらの任意の変異体から選択された軽鎖ＣＤＲを含む、抗体又はその機能的断片。
【請求項２】
アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、１２、２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、１０７、１１２、１１７、１２２、１２７、１３２、１３７、１４２、１４７、１５２又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３、１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、１０８、１１３、１１８、１２３、１２８、１３３、１３８、１４３、１４８、１５３又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４、１４、２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１１９、１２４、１２９、１３４、１３９、１４４、１４９、１５４又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖ＣＤＲ３、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７、１７、２７、３７、４７、５７、６７、７７、８７、９７、１５７、１６２、１６７、１７２、１７７又はそれらの任意の変異体から選択された軽鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、１８、２８、３８、４８、５８、６８、７８、８８、９８、１５８、１６３、１６８、１７３、１７８又はそれらの任意の変異体から選択された軽鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９、１９、２９、３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１５９、１６４、１６９、１７４、１７９又はそれらの任意の変異体から選択された軽鎖ＣＤＲ３を含む、請求項１に記載の抗体又はその機能的断片。
【請求項３】
アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、１１、２１、３１、４１、５１、６１、７１、８１、９１、１０１、１０６、１１１、１１６、１２１、１２６、１３１、１３６、１４１、１４６、１５１又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６、１６、２６、３６、４６、５６、６６、７６、８６、９６、１５６、１６１、１６６、１７１、１７６又はそれらの任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、請求項１又は２に記載の抗体又はその機能的断片。
【請求項４】
アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８２から選択された重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８３から選択された重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８４から選択された重鎖ＣＤＲ３、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８７から選択された軽鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８８から選択された軽鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８９から選択された軽鎖ＣＤＲ３を含む、請求項１又は２に記載の抗体又はその機能的断片。
【請求項５】
アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０２から選択された重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０３から選択された重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０４から選択された重鎖ＣＤＲ３、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５７から選択された軽鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５８から選択された軽鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５９から選択された軽鎖ＣＤＲ３を含む、請求項１又は２に記載の抗体又はその機能的断片。
【請求項６】
アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、請求項４に記載の抗体又はその機能的断片。
【請求項７】
アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、請求項５に記載の抗体又はその機能的断片。
【請求項８】
前記抗体又はその機能的断片が、ＣＤ４７とＳＩＲＰαの相互作用を遮断し、好ましくは、前記抗体又はその機能的断片が、顕著な血球凝集活性を有さず、任意選択で、前記抗体又はその機能的断片は、ヒト化され、任意選択で、前記抗体又はその機能的断片は、ＩｇＧ１型又はＩｇＧ４型である、前記請求項のいずれか一項に記載の抗体又はその機能的断片。
【請求項９】
前記請求項のいずれか一項に記載の抗体又はその機能的断片をコードする核酸分子、及び／又は前記いずれかの態様の核酸を含むベクター、及び／又は前記いずれかの態様のベクターを含む細胞、及び／又は前記請求項のいずれか一項に記載の抗体又はその機能的断片又はそのコード核酸及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項１０】
前記請求項のいずれか一項に記載の抗体又はその機能的断片又は核酸分子又はベクター又は細胞又は医薬組成物の、癌又はアテローム性動脈硬化症を治療するための薬物の製造における用途。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、ＣＤ４７を標的とする特異的抗体の製造方法及び応用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＣＤ４７（ＵｎｉＰｒｏｔ  Ｑ０８７２２）は、膜貫通糖タンパク質であり、Ｎ末端のＩｇＶ様細胞外領域、５回膜貫通領域及び短い細胞内領域からなる。ＣＤ４７は、最初期は卵巣癌組織のクローンから得られたものであったため、かつては、腫瘍抗原であって、その発現レベルも腫瘍の進行に関連すると考えられていた。その後、ＣＤ４７は、ほとんどの正常細胞の表面にも発現するが、通常、腫瘍細胞に高度に発現することが見出された。
【０００３】
ＣＤ４７は、リガンドとの相互作用により生物学的機能を発揮する。阻害受容体シグナル制御タンパクＳＩＲＰα（ＣＤ１７２ａ、ＵｎｉＰｒｏｔ７８３２４）は、ＣＤ４７の最も重要なリガンドの１つであり、ＣＤ４７とＳＩＲＰαの相互作用は、先天性免疫系において、マクロファージが自己と非自己を認識する重要なメカニズムであると考えられる。Ｏｌｄｅｎｂｏｒｇらは、ＣＤ４７の不足しているマウス赤血球が脾臓マクロファージにより血液から速やかに除去され、正常な赤血球のＣＤ４７がＳＩＲＰαとの結合によりこのような貪食を阻害することを見出した。Ｈａｎらは、抗ＣＤ４７モノクローナル抗体又はＣＤ４７融合タンパク質がマクロファージの融合を遮断することができることを証明した。
【０００４】
腫瘍細胞も同様のメカニズムでマクロファージの殺傷から逃れており、腫瘍細胞は、通常、細胞膜の表面に高レベルのＣＤ４７分子を発現させることにより、生体に「自己」と認識される。Ｊａｉｓｗａｌらは、ヒト白血病細胞株にマウスＣＤ４７分子を高度に発現させ、担癌マウス体内で、ヒト白血病細胞がマウスマクロファージの貪食から効果的に逃れ得ることを見出した。Ｍａｊｅｔｉらは、急性骨髄性白血病マウスモデルにおいて、ＣＤ４７とＳＩＲＰαの相互作用を遮断するＣＤ４７モノクローナル抗体を利用すると、治療群においてマウスの骨髄及び末梢血中の白血病細胞が著しく減少し、長期生存率が大幅に向上することを見出した。Ｃｈａｏらは、ＣＤ４７モノクローナル抗体とリツキシマブの併用が顕著な相乗効果を有することを見出した。Ｗｅｉｓｋｏｐｆらは、高親和性のヒトＳＩＲＰαを利用して、癌細胞のＣＤ４７を効果的に阻害することができ、腫瘍特異的モノクローナル抗体との相乗効果を同様に示すことを見出した。
【０００５】
ＣＤ４７抗体は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、頭頸部癌、膀胱癌、黒色腫、結腸直腸癌、膵臓癌、肺癌、食道癌、肝臓癌、腎臓癌、平滑筋癌、平滑筋肉腫、神経膠腫、神経膠芽腫等を含めて複数種のＣＤ４７陽性の血液腫瘍及び固形腫瘍を治療するために用いられる。
【０００６】
アテローム性動脈硬化症の発生は、ＣＤ４７のアップレギュレーションに関連する可能性があり、アポトーシス細胞は、ＣＤ４７をアップレギュレートして発現させることにより、マクロファージの除去に抵抗する。Ｋｏｊｉｍａらは、ＣＤ４７遮断抗体が複数種のマウスモデルにおいて、病的な血管組織の除去を正常化し、アテローム性動脈硬化症を改善することができることを見出した。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
ＣＤ４７の様々な関連疾患における作用及び機能に鑑み、本分野では、患者の治療に適した改良された抗ＣＤ４７特異的抗体の開発が依然として求められている。本願で提供される抗体は、ヒトＣＤ４７の細胞外領域に特異的に結合することができる一方、抗ＣＤ４７抗体は、ＣＤ４７とＳＩＲＰαの結合を阻害し、マクロファージの貪食作用を促進し、赤血球凝集反応を引き起こさず、ヒト化トランスジェニックマウス体内で顕著な毒性作用がない。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
一態様において、本開示は、ＣＤ４７に特異的に結合する抗体又はその機能的断片に関する。
【０００９】
上記態様に係る抗体又はその機能的断片は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２〜４、１２〜１４、２２〜２４、３２〜３４、４２〜４４、５２〜５４、６２〜６４、７２〜７４、８２〜８４、９２〜９４、１０２〜１０４、１０７〜１０９、１１２〜１１４、１１７〜１１９、１２２〜１２４、１３２〜１３４、１３７〜１３９、１４２〜１４４、１４７〜１４９、１５２〜１５４又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖ＣＤＲ、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７〜９、１７〜１９、２７〜２９、３７〜３９、４７〜４９、５７〜５９、６７〜６９、７７〜７９、８７〜８９、９７〜９９、１５７〜１５９、１６２〜１６４、１６７〜１６９、１７２〜１７４、１７７〜１７９又はそれらの任意の変異体から選択された軽鎖ＣＤＲを含む。
【００１０】
上記態様に係る抗体又はその機能的断片は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、１２、２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、１０７、１１２、１１７、１２２、１２７、１３２、１３７、１４２、１４７、１５２又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３、１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、１０８、１１３、１１８、１２３、１２８、１３３、１３８、１４３、１４８、１５３又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４、１４、２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１１９、１２４、１２９、１３４、１３９、１４４、１４９、１５４又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖ＣＤＲ３、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７、１７、２７、３７、４７、５７、６７、７７、８７、９７、１５７、１６２、１６７、１７２、１７７又はそれらの任意の変異体から選択された軽鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、１８、２８、３８、４８、５８、６８、７８、８８、９８、１５８、１６３、１６８、１７３、１７８又はそれらの任意の変異体から選択された軽鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９、１９、２９、３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１５９、１６４、１６９、１７４、１７９又はそれらの任意の変異体から選択された軽鎖ＣＤＲ３を含む。
【００１１】
上記いずれかの態様に係る抗体又はその機能的断片は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、１１、２１、３１、４１、５１、６１、７１、８１、９１、１０１、１０６、１１１、１１６、１２１、１２６、１３１、１３６、１４１、１４６、１５１又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６、１６、２６、３６、４６、５６、６６、７６、８６、９６、１５６、１６１、１６６、１７１、１７６又はそれらの任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む。
【００１２】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【００１３】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【００１４】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【００１５】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【００１６】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【００１７】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【００１８】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【００１９】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【００２０】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【００２１】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【００２２】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【００２３】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【００２４】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【００２５】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【００２６】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【００２７】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【００２８】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【００２９】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３１又はその変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【００３０】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３６又はその変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【００３１】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【００３２】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【００３３】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【００３４】
上記いずれかの態様に係る抗体又はその機能的断片によれば、前記抗体は、抗体断片である。
【００３５】
上記いずれかの態様に係る抗体又はその機能的断片によれば、前記抗体又はその機能的断片は、ＣＤ４７とＳＩＲＰαの相互作用を遮断する。
【００３６】
上記いずれかの態様に係る抗体又はその機能的断片によれば、前記抗体又はその機能的断片は、ヒト化される。
【００３７】
一態様に係る抗体又はその機能的断片は、上記いずれかの態様に係る抗体又はその機能的断片に対して、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性を有する。
【００３８】
一態様に係る核酸分子は、上記いずれかの態様に係る抗体又はその機能的断片をコードする核酸分子、又はそれに対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性を有する核酸分子である。
【００３９】
一態様に係るベクターは、上記いずれかの態様に係る核酸を含む。
【００４０】
一態様に係る細胞は、上記いずれかの態様に係るベクターを含む。
【００４１】
一態様に係る医薬組成物は、上記いずれかの態様に係る抗体又はその機能的断片又はそのコード核酸及び薬学的に許容される担体を含む。
【００４２】
癌を治療する方法は、上記いずれかの態様に係る抗体又はその機能的断片又は核酸分子又はベクター又は細胞又は医薬組成物の治療有効量を前記哺乳動物に投与するステップを含む。
【００４３】
ＣＤ４７の異常発生に関連する哺乳動物の疾患を治療する方法は、上記いずれかの態様に係る抗体又はその機能的断片又は核酸分子又はベクター又は細胞又は医薬組成物の治療有効量を前記哺乳動物に投与するステップを含む。
【００４４】
一態様に係る用途は、上記いずれかの態様に係る抗体又はその機能的断片又は核酸分子又はベクター又は細胞又は医薬組成物の、ＣＤ４７の異常発生に関連する哺乳動物の疾患を治療するための薬物の製造における用途である。
【００４５】
一態様に係る用途は、上記いずれかの態様に係る抗体又はその機能的断片又は核酸分子又はベクター又は細胞又は医薬組成物の、哺乳動物の癌を治療するための薬物の製造における用途である。
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１】組換えヒトＣＤ４７分子のＮ末端の細胞外ドメインタンパク質の大きさが、グリコシル化のため、還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥで３５ＫＤａ程度として示され、ヒトＳＩＲＰα−Ｆｃ融合タンパク質の還元後の大きさが８０ＫＤａ程度であることを示す図である。
【図２】非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥにおいて、ビオチン化ＳＩＲＰα−Ｆｃ融合タンパク質がｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎに結合した後、全体的に上方に移動し、ビオチン化効率が１００％であることを示す図である。
【図３】ヒトＣＤ４７−ＣＨＯ安定形質転換細胞株とトランスフェクトされないＣＨＯブランク細胞である。
【図４】それぞれ組換えヒトＣＤ４７抗原（左）とＣＤ４７陽性細胞（右）を使用して検証スクリーニングした陽性ハイブリドーマクローンである。
【図５】ＣＤ４７−ＳＩＲＰα遮断実験において、陽性ハイブリドーマクローン１Ｈ１、２Ｅ４、７Ａ１１、７Ｇ５、７Ｈ５、９Ｃ４、９Ｇ１１、１０Ｂ８、１２Ｇ８、１４Ｇ６、１５Ａ７及び１５Ｇ６がＣＤ４７陽性細胞の表面に結合した後、いずれもＳＩＲＰαとＣＤ４７の結合を効果的に阻止できることを示す図である。
【図６−１】抗原レベルでのＣＤ４７キメラ抗体とｈＣＤ４７の結合をＥＬＩＳＡ法により検出した図である。
【図６−２】抗原レベルでのＣＤ４７キメラ抗体のＣＤ４７−ＳＩＲＰαに対する遮断をＥＬＩＳＡ法により検出した図である。
【図６−３】細胞レベルでのＣＤ４７キメラ抗体と細胞表面ＣＤ４７受容体の結合をＦＡＣＳ法により検出した図である。
【図６−４】細胞レベルでのＣＤ４７キメラ抗体のＣＤ４７−ＳＩＲＰαに対する遮断をＦＡＣＳ法により検出した図である。
【図７】ＣＤ４７抗体がカニクイザルリンパ球を認識することを示す図である。
【図８】抗ＣＤ４７キメラ抗体が濃度依存性抗体によって媒介される細胞貪食作用を有することを示す図である。
【図９】上の図は、異なる濃度の抗ＣＤ４７モノクローナル抗体の作用下での赤血球の凝集状況であり、陽性ハイブリドーマクローン７Ｇ５、７Ａ１１、９Ｇ１１及び１４Ｇ６のサブクローン株が赤血球の凝集を引き起こす可能性がある。下の図は、抗ＣＤ４７モノクローナル抗体による顕微鏡下での赤血球の凝集状況であり、陽性ハイブリドーマクローン２Ｅ４、１０Ｂ８、１２Ｇ８、１５Ａ７、１５Ｇ６はいずれも赤血球の凝集を引き起こしていない。
【図１０】ヒト化抗体の細胞上の親和性とＣＤ４７−ＳＩＲＰα結合に対する遮断作用である。
【図１１】上の図は、それぞれｂｉｏｔｉｎ被覆抗原を使用して検出したｈ１５Ｇ６  ＶＨ−ｖ１／ＶＫ−ｖ１、ＶＨ−ｖ５／ＶＫ−ｖ１、ＶＨ−ｖ７／ＶＫ−ｖ１、ＶＨ−ｖ７／ＶＫ−ｖ２の親和性（ａｖｉｄｉｔｙ）であり、下の図は、それぞれｂｉｏｔｉｎ被覆抗体を使用して検出したｈ１５Ｇ６  ＶＨ−ｖ１／ＶＫ−ｖ１、ＶＨ−ｖ５／ＶＫ−ｖ１、ＶＨ−ｖ７／ＶＫ−ｖ１、ＶＨ−ｖ７／ＶＫ−ｖ２の親和性（ａｆｆｉｎｉｔｙ）である。
【図１２−１】ＥＬＩＳＡの結果から、抗原レベルでヒト化ＣＤ４７抗体とｈＣＤ４７が結合していることを示す図である。
【図１２−２】ＥＬＩＳＡの結果から、抗原レベルでヒト化ＣＤ４７抗体がＣＤ４７−ＳＩＲＰαを遮断する生物学的活性を有することを示す図である。
【図１２−３】ＦＡＣＳの結果から、細胞レベルでヒト化ＣＤ４７抗体と細胞によって発現したＣＤ４７が結合していることを示す図である。
【図１２−４】ＦＡＣＳの結果から、細胞レベルでヒト化ＣＤ４７抗体がＣＤ４７−ＳＩＲＰαを遮断する生物学的活性を有することを示す図である。
【図１３】上の図の結果から、ヒト化ｈ１５Ｇ６抗体がＡＤＣＰ生物学的活性を有することを示す図である。
【図１４】結果として、ｈ１５Ｇ６抗体とリツキシマブを併用してマクロファージの貪食作用を顕著に向上させたことを示す図である。
【図１５】抗体のＦｃ機能の検出であり、ヒト化ｈ１５Ｇ６−ＩｇＧ１抗体が強いＡＤＣＣ作用を有し、ｈ１５Ｇ６−ＩｇＧ４のＡＤＣＣ作用が喪失する。
【図１６】抗体のＦｃ機能の検出であり、ヒト化ｈ１５Ｇ６−ＩｇＧ１抗体が強いＣＤＣ作用を有し、ｈ１５Ｇ６−ＩｇＧ４のＣＤＣ作用が喪失する。
【図１７】ヒト化マウスにＣＤ４７抗体を二回投与した後の体重の変化状況である。
【図１８】ヒト化マウスにＣＤ４７抗体を二回投与した後の末梢血赤血球の変化状況である。
【図１９】ヒトＢｕｒｋｉｔｔリンパ腫Ｒａｊｉ細胞株皮下異種移植ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスモデルにおけるヒト化ＣＤ４７モノクローナル抗体６の抗腫瘍作用である。
【図２０】ヒト卵巣癌ＳＫＯＶ−３細胞皮下異種移植ＮＰＧマウスモデルにおけるヒト化ＣＤ４７モノクローナル抗体６の抗腫瘍作用である。
【図２１】ヒト前骨髄球性白血病細胞ＨＬ−６０皮下異種移植ＮＰＧマウスモデルにおけるヒト化ＣＤ４７モノクローナル抗体の抗腫瘍作用である。
【図２２】ＣＤ４７が高度に発現した肺癌ＰＤＸマウスモデルにおけるヒト化ＣＤ４７モノクローナル抗体の抗腫瘍作用である。
【発明を実施するための形態】
【００４７】
Ｉ．定義
本発明において、特に断りのない限り、本明細書で使用される科学用語及び技術用語は、当業者が一般的に理解する意味を有する。また、本明細書において使用されるタンパク質及び核酸化学、分子生物学、細胞及び組織培養、微生物学、免疫学の関連用語および実験室の操作ステップは、いずれも対応する分野で広く使用されている用語および一般的なステップである。また、本発明をよりよく理解するために、以下、関連する用語の定義及び解釈を提供する。
【００４８】
一態様において、本明細書は、ＣＤ４７（例えば、ヒトＣＤ４７）に特異的に結合する抗体（例えば、モノクローナル抗体）及びその抗原結合断片を提供する。具体的な態様において、このような抗ＣＤ４７抗体は、ＣＤ４７とＳＩＲＰαの結合を遮断し、貪食作用を促進し、Ｆｃエフェクター機能（例えば、ＦｃγＲへの結合、ＡＤＣＣ又はＣＤＣ）が低下しているか又は有さず、及び／又は、凝集（例えば、血球凝集）活性をほとんど又は全く有さない。
【００４９】
具体的な態様において、本明細書は、ヒトＣＤ４７に特異的に結合する抗ＣＤ４７モノクローナル抗体を提供し、上記抗ＣＤ４７抗体は、親抗体の変異体である。特定の態様において、本明細書に係る、ＣＦ系で発現される抗ＣＤ４７抗体は、グリコシル化されない。具体的な態様において、本明細書は、ＣＤ４７（例えば、ヒトＣＤ４７）に特異的に結合する抗体を提供する。特定の態様において、本明細書は、１つ以上のアミノ酸残基の修飾を含み、上記修飾のない親抗体と比べて、抗原との親和性を維持する抗ＣＤ４７抗体（例えば、重鎖可変領域のフレームワーク領域における５〜１３個のアミノ酸置換）を提供する。いくつかの態様において、このような抗ＣＤ４７抗体は、インビボ若しくはインビトロのいずれか又は両方において、ＳＩＲＰαとＣＤ４７の相互作用を阻害し、グリコシル化されず、貪食作用を促進し、抗腫瘍活性を有する（例えば、血球凝集などの凝集を促進することなく）、及び／又は、Ｆｃエフェクター機能（例えば、ＦｃγＲへの結合、ＡＤＣＣ又はＣＤＣ）が低いか又は有さない。
【００５０】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体又は抗原結合断片は、インビボにおいて動物又は哺乳動物（例えば、ヒト）の抗体生殖系列レパトア内に天然に存在しない配列を含むことができる。
【００５１】
本明細書において使用される用語「約」又は「およそ」は、特に断りのない限り、所定の値又は範囲のプラス又はマイナス１０％以内を意味する。整数が必要とされる場合、これらの用語は、最も近い整数に切り上げられるか又は切り下げられるかのいずれかの、所定の値又は範囲のプラス又はマイナス１０％以内を意味する。
【００５２】
本明細書において使用されるとき、用語「ＣＤ４７」又は「インテグリン結合タンパク質」又は「ＩＡＰ」又は「卵巣癌抗原」又は「ＯＡ３」又は「Ｒｈ関連抗原」又は「ＭＥＲ６」は、互換的に使用され、かつ免疫グロブリンスーパーファミリーに属する複数回膜貫通型受容体を指す。
【００５３】
用語「赤色血液細胞」及び「赤血球」は、同義語であり、かつ本明細書において互換的に使用される。
【００５４】
用語「凝集」は、細胞のクラスタリングを指すのに対し、用語「血球凝集」は、細胞の特定のサブセット、すなわち赤色血液細胞のクラスタリングを指す。したがって、血球凝集は、凝集の１つの型である。
【００５５】
抗体鎖のポリペプチド配列に関して、語句「実質的に同一」は、参照ポリペプチド配列に対して、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性を示す抗体鎖として解釈され得る。核酸配列に関して、該用語は、参照核酸配列に対して、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の配列同一性を示すヌクレオチド配列として解釈され得る。
【００５６】
用語「同一性」又は「相同性」は、配列同一性の一部としていずれの保存的置換を考慮せず、必要に応じて、配列全体について最大のパーセント同一性を達成するために配列をアラインしギャップを導入した後の、比較対象の対応する配列の残基と同一である候補配列中のヌクレオチド塩基又はアミノ酸残基のパーセントを指す。Ｎ末端又はＣ末端の伸長や挿入は、いずれも同一性又は相同性を低下させると解釈されるべきではない。アラインのための方法とコンピュータプログラムはいずれも容易に入手可能であり、本分野で周知である。配列分析ソフトウェアを使用して、配列同一性を測定することができる。
【００５７】
抗体又は抗原の、語句及び用語「機能的断片、変異体、誘導体又は類似体」等及びそれらの複数の形態等は、目的の全長抗体又は抗原と共通する質的な生物学的活性を有する化合物又は分子である。例えば、抗ＣＤ４７抗体の機能的断片又は類似体は、ＣＤ４７分子に結合し得るもの、又は、リガンド若しくはアゴニスト抗体若しくはアンタゴニスト抗体がＣＤ４７に結合する能力を抑止し得るか又は実質的に低下させ得るものである。
【００５８】
「置換」変異体は、天然配列中の少なくとも１つのアミノ酸残基が除去され、同じ位置に異なるアミノ酸が挿入された変異体である。上記置換は、単一とすることができ、ここでは分子における１つのアミノ酸のみが置換されており、或いは、上記置換は、複数とすることができ、ここでは同じ分子における２つ以上のアミノ酸が置換されている。複数の置換は、連続した部位に存在することができる。同様に、１つのアミノ酸は、複数の残基で置換されてよく、その場合、このような変異体は、置換と挿入の両方を含む。「挿入」変異体は、１つ以上のアミノ酸が天然配列中の特定の位置におけるあるアミノ酸に直接隣接して挿入された変異体である。あるアミノ酸に直接隣接するとは、該アミノ酸のα−カルボキシル官能基又はα−アミノ官能基に連結することを意味する。「欠失」変異体は、天然アミノ酸配列中の１つ以上のアミノ酸が除去された変異体である。通常、欠失変異体では、分子の特定の領域中の１つ又は２つのアミノ酸が欠失される。
【００５９】
本明細書において使用されるとき、用語「抗体」は、最も広い意味で使用され、具体的には、モノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体が含まれる）、ポリクローナル抗体、多重特異的抗体（例えば、二重特異的抗体）、１つ以上のＣＤＲ配列又はＣＤＲ由来配列を保有する抗体断片又は合成ポリペプチド（このポリペプチドが所望の生物学的活性を示す限り）をカバーする。抗体（Ａｂｓ）及び免疫グロブリン（Ｉｇｓ）は、同じ構造的特徴を有する糖タンパク質である。「抗体」は、天然に産生されたか、部分的に若しくは全体的に合成的に（例えば、組換え）産生されたかにかかわらず、全長免疫グロブリンの結合特異性を保持する、免疫グロブリン分子の可変領域の一部を少なくとも含有する任意の断片を含めて免疫グロブリン及び免疫グロブリン断片も指す。したがって、抗体は、免疫グロブリン抗原結合ドメイン（抗体結合部位）に対して相同又は実質的に相同である結合ドメインを有する任意のタンパク質を含む。抗体は、抗腫瘍幹細胞抗体断片などの抗体断片を含む。したがって、本明細書において使用されるとき、用語「抗体」は、合成抗体、組換えによって産生された抗体、多重特異的抗体（例えば、二重特異的抗体）、ヒト抗体、非ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、細胞内抗体及び抗体断片、例えば、それだけには限らないが、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｄｓＦｖ）、Ｆｄ断片、Ｆｄ’断片、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、一本鎖Ｆａｂ（ｓｃＦａｂ）、ダイアボディ、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体又は上記いずれかの抗体の抗原結合断片を含む。本明細書に係る抗体は、任意の免疫グロブリンの型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）のメンバー、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）又はサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ）のメンバーを含む。
【００６０】
本発明に係る抗体は、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡなど）、又はサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２など）の抗体とすることができる（「型」及び「クラス」、並びに「亜型」及び「サブクラス」は、本明細書において互換的に使用されてよい）。天然又は野生型（すなわち、集団の人工的に操作されていないメンバーから得られた）抗体及び免疫グロブリンは、通常、２つの同一の軽鎖（Ｌ）及び２つの同一の重鎖（Ｈ）からなる、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体の糖タンパク質である。各重鎖は、一方の端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、その後ろに複数の定常ドメインが続く。各軽鎖は、一方の端に可変ドメイン（ＶＬ）を有し、他方の端に定常ドメインを有する。「人工的に操作されていない」とは、外来性抗原結合分子を含有するか又は発現させるように処置されていないことを意味する。野生型は、抗原結合分子のアミノ酸を変化させるために、突然変異誘発、組換え方法の使用などの操作の形によって得られた対立遺伝子若しくは多型、又は変異体若しくは誘導体と比べて、集団において見出された最も広く認められる対立遺伝子若しくは種、又は操作されていない動物から得られた抗体を指す。
【００６１】
本明細書において使用されるとき、「抗ＣＤ４７抗体」は、本明細書で定義されたＣＤ４７に特異的に結合する抗体又はこれらの抗体に由来するポリペプチド（誘導体）を指し、ＣＤ４７とその受容体の結合を阻害するか又は実質的に低下させる分子、又はＣＤ４７活性を阻害する分子が含まれるが、これらに限定されない。
【００６２】
抗体の可変ドメインの文脈における用語「可変」は、抗体間で配列が大きく異なり、その特定の標的に対する特定の抗体の特異的認識及び結合において使用される、関連する分子のいくつかの部分を指す。しかしながら、可変性は、抗体の可変ドメインにわたって均等に分布していない。可変性は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインの両方における、相補性決定領域（ＣＤＲｓ、すなわち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）又は超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク（ＦＲ）領域又はフレームワーク配列と呼ばれる。天然重鎖及び軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、３つのＣＤＲｓによって連結し、β−シート配置を主に取る４つのＦＲ領域を含み、ＣＤＲｓは、β−シート構造に連結するループを形成し、ある場合にはβ−シート構造の一部を形成する。各鎖におけるＣＤＲは、ＦＲ領域によって接近して連結することが多く、他の鎖由来のＣＤＲと共に、抗体の標的結合部位（エピトープ又は決定基）の形成に寄与する（Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ  （１９８７）を参照）。本明細書において使用されるとき、免疫グロブリンアミノ酸残基の番号付けは、特に断りのない限り、Ｋａｂａｔらの免疫グロブリンアミノ酸残基の番号付けシステムに従って行われる。１つのＣＤＲは、同族のエピトープに特異的に結合する能力を有することができる。
【００６３】
本発明で使用される用語「ヒンジ」又は「ヒンジ領域」は、抗体の第１の定常ドメインと第２の定常ドメインとの間のアミノ酸を含むフレキシブルなポリペプチドを指す。
【００６４】
本明細書において使用されるとき、抗体の「抗体断片」又は「抗原結合断片」は、全長未満であるが、抗原に結合する抗体の可変領域の一部（例えば、１つ以上のＣＤＲ及び／又は１つ以上の抗体結合部位）を少なくとも含有し、したがって、結合特異性及び全長抗体の特異的結合能の少なくとも一部を保持する全長抗体の任意の部分を指す。したがって、抗原結合断片は、抗体断片が由来する抗体と同一の抗原に結合する抗原結合部分を含有する抗体断片を指す。抗体断片は、全長抗体の酵素的処理によって産生された抗体誘導体と、合成的に、例えば、組換えによって産生された誘導体とを含む。抗体は、抗体断片を含む。抗体断片の例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ダイアボディ、Ｆｄ、及びＦｄ’断片、並びに修飾断片を含めたその他の断片を含むが、これらに限定されない（例えば、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ  ２０７：Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  （２００３）；Ｃｈａｐｔｅｒ  １；ｐ３−２５，Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖを参照）。上記断片は、例えば、ジスルフィド結合によって、及び／又はペプチドリンカーによって一緒に連結している複数の鎖を含むことができる。抗体断片は、一般的に、少なくとも又は約５０個のアミノ酸、通常、少なくとも又は約２００個のアミノ酸を含有する。抗原結合断片は、抗体フレームワーク中に挿入された場合に（対応する領域を置換することなどによって）、抗原に免疫特異的に結合する（すなわち、少なくとも又は少なくとも約１０７〜１０８Ｍ−１のＫａを示す）抗体をもたらす任意の抗体断片を含む。「機能的断片」又は「抗ＣＤ４７抗体の類似体」は、リガンドに結合するか又はシグナル伝達を開始する上記受容体の能力を抑制するか又は実質的に低下させることができる断片又は類似体である。本明細書において使用されるとき、機能的断片は、一般的に「抗体断片」と同義であり、そして抗体に関しては、リガンドに結合するか又はシグナル伝達を開始する上記受容体の能力を抑止するか又は実質的に低下させることができる、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ′）２などの断片を指すことができる。「Ｆｖ」断片は、非共有結合において、１つの重鎖可変ドメイン及び１つの軽鎖可変ドメインの二量体（ＶＨ−ＶＬ二量体）からなる。該立体配置では、各可変ドメインの３つのＣＤＲｓが相互作用して、インタクト抗体中のようにＶＨ−ＶＬ二量体の表面上で標的結合部位を決定する。全体として、上記６つのＣＤＲｓは、インタクト抗体に標的結合特異性を与える。しかしながら、単一の可変ドメイン（又は標的に特異的な３つのＣＤＲｓのみを含むＦｖの半分）でさえ、標的を認識し、結合する能力を有することができる。
【００６５】
「一本鎖Ｆｖ」、「ｓＦｖ」又は「ｓｃａｂ」抗体断片は、抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含み、これらのドメインが単一ポリペプチド鎖に存在する。一般的に、上記Ｆｖポリペプチドは、ＶＨ及びＶＬドメイン間の、しばしばフレキシブルな分子であるポリペプチドリンカーをさらに含み、これは、ｓＦｖが標的結合のための所望の構造を形成することを可能にする。
【００６６】
用語「ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）」は、同じポリペプチド鎖において軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に結合している重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含むことができる、２つの抗原結合部位を有する抗体断片を指す。同じ鎖上の２つの可変ドメイン間で対になれないほど短いリンカーを使用することにより、上記ダイアボディドメインは別の鎖の結合ドメインと対にさせられ、２つの抗原結合部位を生成する。
【００６７】
Ｆａｂ断片は、軽鎖の可変及び定常ドメイン、並びに重鎖の可変及び第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を含有する。Ｆａｂ′断片は、抗体ヒンジ領域から１つ以上のシステインを含むために、ＣＨ１ドメインのカルボキシル末端で数個の残基が付加されている点でＦａｂ断片と異なる。Ｆａｂ′断片は、Ｆ（ａｂ′）２ペプシン消化産物のヒンジシステインにおけるジスルフィド結合の切断により生成することができる。抗体に別途酵素処理及び化学的処理を行うことによって、目的の他の機能的断片を生成することができる。
【００６８】
用語「直鎖状Ｆａｂ」は、Ｍｉｌｌｅｒら（Ｍｉｌｌｅｒら，（２００３），ＪＩｍｍｕｎｏｌ．１７０：４８５４−４８６１）によって報告された四価の抗体を指す。「直鎖状Ｆａｂ」は、各ＣＨ１−ＶＨ位置で同一軽鎖と対になった、同じＣＨ１−ＶＨドメインのタンデムからなる。これらの分子は、抗体の結合価を増加させ、アビディティー効果によるその機能的親和性を向上させるために開発されたが、それらは、単一特異性である。
【００６９】
本明細書において使用されるとき、「モノクローナル抗体」は、同一抗体の集団を指し、これは、モノクローナル抗体の集団中の個々の抗体分子各々が、他の抗体分子に対して同一であることを意味する。このような特性は、複数の異なる配列を有する抗体を含有する抗体のポリクローナル集団の特性とは対照的である。モノクローナル抗体は、いくつかの周知の方法によって製造できる（Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｐａｔｈｏｌ．  ５７，９１２−９１７；及びＮｅｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐａｔｈｏｌ（２０００），５３，１１１−１１７）。例えば、モノクローナル抗体は、例えば、骨髄腫細胞と融合して、ハイブリドーマ細胞株を産生することによるＢ細胞の不死化によって、又はＥＢＶなどのウイルスによるＢ細胞の感染によって製造できる。組換え技術は、インビトロで、抗体をコードするヌクレオチドの人工配列を保有するプラスミドを用いて、宿主細胞を形質転換することによって、宿主細胞のクローン集団から抗体を製造することもできる。
【００７０】
本明細書において使用されるとき、用語「ハイブリドーマ」又は「ハイブリドーマ細胞」は、抗体を産生するリンパ球と抗体を産生しない癌細胞を融合することにより産生される細胞又は細胞株（通常、骨髄腫又はリンパ腫細胞）を指す。当業者に知られているように、ハイブリドーマは、特定のモノクローナル抗体を産生し、持続的に供給することができる。ハイブリドーマを産生するための方法は、本分野の周知のものである（例えば、Ｈａｒｌｏｗ＆Ｌａｎｅ，１９８８）。用語「ハイブリドーマ」又は「ハイブリドーマ細胞」に言及する場合、それは、ハイブリドーマのサブクローン及び子孫細胞をさらに含む。
【００７１】
本明細書において使用されるとき、「従来の抗体」は、２つの重鎖（Ｈ及びＨ′と表され得る）と、２つの軽鎖（Ｌ及びＬ′と表され得る）と、２つの抗体結合部位とを含有する抗体を指し、各重鎖は、全長免疫グロブリン重鎖又は抗原結合能を保持するその任意の機能領域であってよく（例えば、重鎖は、ＶＨ鎖、ＶＨ−ＣＨ１鎖及びＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３鎖を含むが、これらに限定されない）、各軽鎖は、全長軽鎖又はその任意の機能領域であってよい（例えば、軽鎖は、ＶＬ鎖及びＶＬ−ＣＬ鎖を含むが、これらに限定されない）。各重鎖（Ｈ及びＨ′）は、１つの軽鎖（それぞれ、Ｌ及びＬ′）と対になる。
【００７２】
本明細書において使用されるとき、全長抗体は、２つの全長重鎖（例えば、ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３又はＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３）と、２つの全長軽鎖（ＶＬ−ＣＬ）と、ヒンジ領域とを有する抗体、例えば、抗体を分泌するＢ細胞によって天然に産生される抗体と合成的に産生される同一ドメインを有する抗体である。
【００７３】
本明細書において使用されるとき、ｄｓＦｖは、ＶＨ−ＶＬ対を安定化させる、操作された分子間ジスルフィド結合を有するＦｖを指す。
【００７４】
本明細書において使用されるとき、Ｆａｂ断片は、パパインを用いて全長免疫グロブリンを消化することによって得られる抗体断片、又は組換え法などの方法によって合成的に産生される同一構造を有する断片である。Ｆａｂ断片は、軽鎖（ＶＬ及びＣＬを含有する）と、重鎖（ＶＨ）の可変ドメイン及び重鎖の１つの定常領域ドメイン（ＣＨ１）を含有する別の鎖とを含有する。
【００７５】
本明細書において使用されるとき、Ｆ（ａｂ’）２断片は、ｐＨ４．０〜４．５でペプシンを用いて免疫グロブリンを消化することによって得られる抗体断片、又は組換え法などの方法によって合成的に産生される同一構造を有する断片である。Ｆ（ａｂ’）２断片は、２つのＦａｂ断片を実質的に含有し、各重鎖部分は、２つの断片を連結させるジスルフィド結合を形成するシステインを含むさらなる数個のアミノ酸を含有する。
【００７６】
本明細書において使用されるとき、Ｆａｂ’断片は、Ｆ（ａｂ’）２断片の半分（１つの重鎖及び１つの軽鎖）を含有する断片である。
【００７７】
本明細書において使用されるとき、ｓｃＦｖ断片は、任意の順序でポリペプチドリンカーによって共有結合している可変軽鎖（ＶＬ）及び可変重鎖（ＶＬ）を含有する抗体断片を指す。リンカーは、２つの可変ドメインが、実質的に妨害されずに架橋される長さである。例示的リンカーは、溶解度を高めるために、いくつかのＧｌｕ又はＬｙｓ残基が分散されている（Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）ｎ残基である。
【００７８】
用語「キメラ抗体」は、可変領域配列が１つの種に由来し定常領域配列が別の種に由来する抗体、例えば、可変領域配列がマウス抗体に由来し定常領域配列がヒト抗体に由来する抗体を指す。
【００７９】
「ヒト化」抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有する、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、又はその断片（例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又は抗体の他の抗原結合サブ配列）である、非ヒト（例えばマウス）抗体の形態を指す。好ましくは、ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）の残基が、所望の特異性、親和性及び能力を有するマウス、ラット又はウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲの残基によって置き換えられている、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。
【００８０】
また、ヒト化において、ＶＨ及び／又はＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３内のアミノ酸残基を突然変異させることにより、抗体の１つ以上の結合特性（例えば親和性）を改善することも可能である。突然変異は、例えば、ＰＣＲによって媒介される突然変異を行うことにより導入することができ、抗体の結合又は他の機能特性への影響は、本明細書に記載のインビトロ又はインビボ試験により評価することができる。一般的には、保存的突然変異が導入される。このような突然変異は、アミノ酸置換、添加又は欠失であってよい。また、ＣＤＲ内の突然変異は、通常、１つ又は２つを超えない。したがって、本発明に係るヒト化抗体は、ＣＤＲ内に１又は２個のアミノ酸変異を含有する抗体をさらにカバーする。
【００８１】
本明細書において使用されるとき、用語「エピトープ」は、抗体のパラトープが結合する、抗原上の任意の抗原決定基を指す。エピトープ決定基は、通常、アミノ酸又は糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面群を含有し、通常、特定の三次元構造的特徴及び特定の荷電特徴を有する。
【００８２】
本明細書において使用されるとき、可変ドメイン又は可変領域は、異なる抗体間で変わるアミノ酸の配列を含有する、抗体の重鎖又は軽鎖の特定のＩｇドメインである。各軽鎖及び各重鎖は、１つの可変領域ドメイン（ＶＬ及びＶＨ）をそれぞれ有する。可変ドメインは、抗原特異性を提供し、したがって、抗原認識を担う。各可変領域は、ＣＤＲ及びフレームワーク領域（ＦＲ）を含有し、ＣＤＲは、抗原結合部位ドメインの一部である。
【００８３】
本明細書において使用されるとき、「抗原結合ドメイン」及び「抗原結合部位（ａｎｔｉｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ）」は、同族（ｃｏｇｎａｔｅ）抗原を認識し、物理的に相互作用する抗体内のドメインを示すために交換可能に使用される。天然の従来の全長抗体分子は、２つの従来の抗原結合部位を有し、各々が、重鎖可変領域の部分と、軽鎖可変領域の部分とを含有する。従来の抗原結合部位は、可変領域ドメイン内の逆平行β鎖に連結するループを含有する。抗原結合部位は、可変領域ドメインの他の部分を含有することができる。各従来の抗原結合部位は、重鎖に由来する３つの超可変領域と、軽鎖に由来する３つの超可変領域とを含有する。超可変領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）とも呼ばれる。
【００８４】
本明細書において使用されるとき、「超可変領域」、「ＨＶ」、「相補性決定領域」、「ＣＤＲ」及び「抗体ＣＤＲ」は、抗体の抗原結合部位を共に形成する各可変領域内の複数の部分のうち１つを示すために交換可能に使用される。各可変領域ドメインは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３と名づけられた３つのＣＤＲを含有する。例えば、軽鎖可変領域ドメインは、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２及びＶＬＣＤＲ３と名づけられた３つのＣＤＲを含有し、重鎖可変領域ドメインは、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２及びＶＨＣＤＲ３と名づけられた３つのＣＤＲを含有する。可変領域の３つのＣＤＲは、直鎖状アミノ酸配列に沿って不連続であるが、フォールディングされたポリペプチド中で近接する。ＣＤＲは、可変ドメインのβシートの平行な鎖に連結するループ内に位置する。本明細書において記載されるように、当業者であれば、ＣＤＲを知っており、かつＣＤＲをＫａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａ番号付けに基づいて同定できる（例えば、Ｋａｂａｔ，  Ｅ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．  ９１−３２４２及びＣｈｏｔｈｉａ，  Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９８７）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １９６：９０１−９１７を参照）。
【００８５】
本明細書において使用されるとき、フレームワーク領域（ＦＲ）は、βシート内に位置する、抗体可変領域ドメイン内のドメインであり、ＦＲ領域は、そのアミノ酸配列に関して、超可変領域よりも比較的保存されている。
【００８６】
本明細書において使用されるとき、「定常領域」ドメインは、可変領域ドメインのアミノ酸配列よりも比較的保存されているアミノ酸配列を含有する抗体重鎖又は軽鎖中のドメインである。従来の全長抗体分子では、各軽鎖は、単一の軽鎖定常領域（ＣＬ）ドメインを有し、各重鎖は、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３及びＣＨ４を含む、１つ以上の重鎖定常領域（ＣＨ）ドメインを含有する。全長ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＧアイソタイプは、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３及びヒンジ領域を含有するが、ＩｇＥ及びＩｇＭは、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３及びＣＨ４を含有する。ＣＨ１及びＣＬドメインは、抗体分子のＦａｂアームを延長し、したがって、抗原との相互作用及び抗体アームの回転に役立つ。抗体定常領域は、それだけには限らないが、例えば、種々の細胞、生体分子及び組織との相互作用による、該抗体が特異的に結合する抗原、病原体及び毒素のクリアランスなどのエフェクター機能を果たすことができる。
【００８７】
本明細書において使用されるとき、抗体の機能領域は、該抗体の少なくともＶＨ、ＶＬ、ＣＨ（例えば、ＣＨ１、ＣＨ２又はＣＨ３）、ＣＬ若しくはヒンジ領域ドメイン、又は少なくともその機能領域を含有する抗体の部分である。
【００８８】
本明細書において使用されるとき、ＶＨドメインの機能領域は、全長ＶＨドメインの結合特異性の少なくとも一部を保持する（例えば、全長ＶＨドメインの１つ以上のＣＤＲを保持することによって）全長ＶＨドメインの少なくとも一部であり、その結果、上記ＶＨドメインの機能領域は、単独又は、別の抗体ドメイン（例えば、ＶＬドメイン）若しくはその領域と組み合わせて、抗原に結合する。例示的なＶＨドメインの機能領域は、ＶＨドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３を含有する領域である。
【００８９】
本明細書において使用されるとき、ＶＬドメインの機能領域は、全長ＶＬドメインの結合特異性の少なくとも一部を保持する（例えば、全長ＶＬドメインの１つ以上のＣＤＲを保持することによって）全長ＶＬドメインの少なくとも一部であり、その結果、上記ＶＬドメインの機能領域は、単独又は、別の抗体ドメイン（例えば、ＶＨドメイン）若しくはその領域と組み合わせて、抗原に結合する。例示的なＶＬドメインの機能領域は、ＶＬドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３を含有する領域である。
【００９０】
本明細書において使用されるとき、抗体又はその抗原結合断片に関して、用語「特異的に結合する」又は用語「免疫特異的に結合する」は、本明細書において交換可能に使用され、抗体又は抗原結合断片の、抗体と抗原の抗体結合部位との間の非共有結合相互作用によって、同族抗原と１つ以上の非共有結合を形成する能力を指す。上記抗原は、単離された抗原であってもよく、腫瘍細胞中で存在してもよい。通常、抗原に免疫特異的に結合する（又は特異的に結合する）抗体は、約１×１０７Ｍ−１若しくは１ｘ１０８Ｍ−１若しくはそれ以上の親和性定数Ｋａ（又は１ｘ１０−７Ｍ若しくは１×１０−８Ｍ若しくはそれ以下の解離定数（Ｋｄ））で上記抗原に結合する。親和性定数は、抗体反応の標準的動力学的方法、例えば、免疫測定、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）（Ｒｉｃｈ  ａｎｄ  Ｍｙｓｚｋａ  （２０００）  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １１：５４；Ｅｎｇｌｅｂｉｅｎｎｅ  （１９９８）  Ａｎａｌｙｓｔ．  １２３：１５９９）、等温滴定熱量測定法（ＩＴＣ）又は本分野で周知のその他の動力学的相互作用測定によって測定することができる（例えば、Ｐａｕｌ，  ｅｄ．，  Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  ２ｎｄ  ｅｄ．，  Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ｐａｇｅｓ  ３３２−３３６  （１９８９）を参照。さらに、抗体の結合親和性を算出するための例示的ＳＰＲ及びＩＴＣ法の説明については、米国特許第７，２２９，６１９号を参照）。結合速度のリアルタイム検出及びモニタリングのための装置及び方法は周知であり、市販されている（例えば、ＢｉａＣｏｒｅ  ２０００，Ｂｉａｃｏｒｅ  ＡＢ，Ｕｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ  ａｎｄ  ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ；  Ｍａｌｍｑｖｉｓｔ  （２０００）  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  Ｔｒａｎｓ．  ２７：３３５を参照）。
【００９１】
本明細書において使用されるとき、抗体に関する用語「競合」は、第１の抗体又はその抗原結合断片が、第２の抗体又はその抗原結合断片の結合と十分に類似した方式でエピトープに結合し、それによって、第１の抗体とその同族エピトープの結合の結果が、第２の抗体の非存在下よりも、第２の抗体の存在下で、検出可能に低下することを意味する。或いは、第２の抗体とそのエピトープの結合も第１の抗体の存在下で検出可能に低下する場合もありうるが、そうである必要はない。すなわち、第１の抗体によって第２の抗体とそのエピトープとの結合を阻害することができ、第２の抗体によって第１の抗体とその各自のエピトープとの結合を阻害する必要はない。しかしながら、それぞれの抗体が、同レベルか、より高いレベルか、より低いレベルかにかかわらず、他の抗体とその同族エピトープ又はリガンドとの結合を検出可能に阻害する場合、上記抗体は、その各自のエピトープの結合について互いに「交差競合する」と言われる。競合及び交差競合抗体はどちらも本発明に含まれる。このような競合又は交差競合がどのようなメカニズムで発生するかにかかわらず（例えば、立体障害、立体配位変化、又は共通エピトープ若しくはその断片との結合）、当業者であれば、本発明の教示に基づいて、このような競合及び／又は交差競合抗体が本発明に含まれ、本発明に開示された方法に適用可能であることを認識することができる。
【００９２】
本明細書において使用されるとき、「ポリペプチド」は、共有結合している２つ以上のアミノ酸を指す。用語「ポリペプチド」及び「タンパク質」は、本明細書において交換可能に使用される。
【００９３】
用語「単離されたタンパク質」、「単離されたポリペプチド」又は「単離された抗体」は、（１）その天然状態において付随する天然結合成分に関連しない、（２）同じ種に由来する他のタンパク質を含まない、（３）異なる種からの細胞によって発現されている、又は（４）天然に存在しないタンパク質、ポリペプチド又は抗体を指す。したがって、化学的に合成されたポリペプチド、又は天然に由来する細胞とは異なる細胞系において合成されたポリペプチドは、その天然結合成分から「単離される」。タンパク質は、本分野において周知のタンパク質精製技術を用いて、単離により天然結合成分を実質的に含まなくてもよい。
【００９４】
ペプチド又はタンパク質において、好適な保存的アミノ酸置換は、当業者に周知であり、得られた分子の生物学的活性を変化させることなく一般的に行うことができる。一般的に、当業者であれば、ポリペプチド内の重要でない領域における単一アミノ酸置換が生物学的活性を実質的に変化させないことを認識することができる（例えば、Ｗａｔｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅ，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８７，Ｔｈｅ  Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ  Ｐｕｂ．ｃｏ．，ｐ．２２４を参照）。
【００９５】
本明細書において使用されるとき、用語「ポリヌクレオチド」及び「核酸分子」は、少なくとも２つの連結しているヌクレオチド又はヌクレオチド誘導体を含有するオリゴマー又はポリマーであり、通常、リン酸ジエステル結合を介して連結するデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）及びリボ核酸を含む（ＲＮＡ）。
【００９６】
本明細書において使用されるとき、単離された核酸分子は、核酸分子の天然供給源中に存在するその他の核酸分子から分離される核酸分子である。ｃＤＮＡ分子などの「単離された」核酸分子は、組換え技術によって製造される場合に、その他の細胞性物質若しくは培地を実質的に含まないもの、又は化学的に合成される場合に、化学前駆体若しくはその他の化学物質を実質的に含まないものであってよい。本明細書に係る例示的な単離された核酸分子は、提供される抗体又は抗原結合断片をコードする単離された核酸分子を含む。
【００９７】
配列「相同性」又は「同一性」は、本分野で一致して認められている意味であり、開示された技術を用いて、２つの核酸又はポリペプチド分子又は領域間の配列同一性のパーセンテージを算出することができる。配列相同性は、ポリヌクレオチド又はポリペプチドの全長に沿って、又は該分子の領域に沿って測定することができる。（例えば、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８８；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９３；  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ  Ｉ，  Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ  Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ，１９９４；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８７；  ａｎｄ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ  Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．，Ｍ  Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９１を参照）。２つのポリヌクレオチド又はポリペプチド間の相同性を測定するための方法が多く存在するが、用語「相同性」は、当業者に周知である（Ｃａｒｒｉｌｌｏ，  Ｈ．  ＆  Ｌｉｐｍａｎ，  Ｄ．，  ＳＩＡＭ  Ｊ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ  ４８：  １０７３  （１９８８））。
【００９８】
本明細書において使用されるとき、核酸配列、領域、エレメント又はドメインに関して、用語「作動可能に連結する」は、核酸領域が互いに機能的に関連していることを示す。例えば、プロモーターは、ポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結することができ、それによって、上記プロモーターは、上記核酸の転写を調節又は媒介する。
【００９９】
本明細書において使用されるとき、「発現」は、ポリヌクレオチドの転写及び翻訳によってポリペプチドを産生するプロセスを指す。ポリペプチドの発現レベルは、例えば、宿主細胞から産生されたポリペプチドの量を測定する方法を含む、本分野で公知の任意の方法を使用して評価することができる。このような方法は、ＥＬＩＳＡによる細胞溶解物中のポリペプチドの定量、ゲル電気泳動法後のクーマシーブルー染色、Ｌｏｗｒｙタンパク質アッセイ及びＢｒａｄｆｏｒｄタンパク質アッセイを含むことができるが、これらに限定されない。
【０１００】
本明細書において使用されるとき、「宿主細胞」は、ベクターを受け取り、維持し、複製し、増幅するための細胞である。宿主細胞は、さらに、ベクターによってコードされるポリペプチドを発現するために使用することができる。宿主細胞が分裂するとき、ベクターに含有される核酸が複製されて、核酸を増幅する。宿主細胞は、真核細胞であってもよく、原核細胞であってもよい。好適な宿主細胞は、ＣＨＯ細胞、様々なＣＯＳ細胞、ＨｅＬａ細胞、ＨＥＫ細胞、例えば、ＨＥＫ２９３細胞を含むが、これらに限定されない。
【０１０１】
「コドン最適化」は、核酸配列を修飾して目的の宿主細胞における発現を向上させるために、天然アミノ酸配列を維持しながら、天然配列の少なくとも１つのコドン（例えば、約１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、５０個若しくはそれ以上の、又はそれよりもさらに多いコドン）を、宿主細胞の遺伝子においてより頻繁に、又は最も頻繁に使用されるコドンで置換する方法を指す。異なる種は、特定のアミノ酸のある特定のコドンについて特定のバイアスを示す。コドンバイアス（生物間のコドン利用の差異）は、多くの場合、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の翻訳効率と関連付けられ、該翻訳効率は、翻訳されるコドンの性質及び特定のトランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）分子の利用可能性に依存すると考えられている。細胞内で選択されるｔＲＮＡの利点は、一般的に、ペプチド合成に最も頻繁に使用されるコドンを反映する。したがって、遺伝子は、コドン最適化に基づいて所与の生物において最も良く遺伝子発現するようにカスタマイズすることができる。コドン利用表は、例えば、ｗｗｗ．ｋａｚｕｓａ．ｏｒｊｐ／ｃｏｄｏｎ／に利用可能なコドン利用データベース（“Ｃｏｄｏｎ  Ｕｓａｇｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ”）において容易に入手可能であり、かつこれらの表は、様々な方法で調整することができる。（ＮａｋａｍｕｒａＹ．ら，“Ｃｏｄｏｎｕｓａｇｅ  ｔａｂｕｌａｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＤＮＡ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｄａｔａｂａｓｅｓ：ｓｔａｔｕｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｙｅａｒ  ２０００．Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．，２８：２９２（２０００）を参照する。
【０１０２】
本明細書において使用されるとき、「ベクター」は、複製可能な核酸であり、ベクターを適切な宿主細胞に形質転換するとき、該ベクターから１つ以上の異種のタンパク質を発現させることができる。ベクターについての言及は、一般的に制限消化及び連結によって、ポリペプチド又はその断片をコードする核酸を導入できるベクターを含む。ベクターについての言及は、ポリペプチドをコードする核酸を含有するベクターをさらに含む。ベクターは、核酸の増幅のために、又は核酸によってコードされるポリペプチドの発現／提示のために、ポリペプチドをコードする核酸を宿主細胞に導入するために使用される。ベクターは、一般的にエピソームのままであるが、遺伝子又はその部分をゲノム染色体に組み込むことを引き起こすように設計されてもよい。また、酵母人工染色体及び哺乳動物人工染色体などの人工染色体であるベクターも考慮される。このような媒体の選択及び用途は、当業者に周知である。
【０１０３】
本明細書において使用されるとき、ベクターは、「ウイルスベクター」又は「ウイルスのベクター」をさらに含む。ウイルスのベクターは、外因性遺伝子を細胞に（媒体又はシャトル（ｓｈｕｔｔｌｅ）として）移行するように外因性遺伝子に作動可能に連結した、操作されたウイルスである。
【０１０４】
本明細書において使用されるとき、「発現ベクター」は、ＤＮＡを発現することができるベクターを含み、上記ＤＮＡは、例えば、プロモーター領域の、ＤＮＡ断片の発現に影響を与える調節配列に作動可能に連結する。このような追加の断片は、プロモーター及びターミネーター配列を含むことがあり、任意選択で、１つ以上の複製起点、１つ以上の選択可能マーカー、エンハンサー、ポリアデニル化シグナル等を含むことができる。発現ベクターは、一般的に、プラスミド又はウイルスＤＮＡに由来するか、又は両方のエレメントを含有することができる。したがって、発現ベクターは、組換えＤＮＡ又はＲＮＡ構築物、例えば、プラスミド、ファージ、組換えウイルス、又は適切な宿主細胞への導入に際してクローニングされたＤＮＡの発現をもたらす他のベクターを指す。適切な発現ベクターは、当業者に周知であり、真核細胞及び／又は原核細胞において複製可能な発現ベクター、及びエピソームのままである発現ベクター又は宿主細胞ゲノムに組み込まれる発現ベクターを含む。
【０１０５】
本明細書において使用されるとき、疾患を有する又は疾患状態にある個体を「治療する」ことは、上記個体の症状が、部分的又は全体的に寛解するか、又は治療後そのまま変化しないことを意味する。したがって、治療は、予防、治療及び／又は治癒を含む。予防は、潜在的な疾患の防止及び／又は症状の悪化若しくは疾患の進行の防止を指す。治療は、提供される任意の抗体若しくはその抗原結合断片、及び本明細書において提供される組成物の任意の薬学的用途をさらに含む。
【０１０６】
本明細書において使用されるとき、「治療効果」は、個体の治療によって得られる効果を意味し、疾患若しくは疾患状態の症状の変化、通常は改良若しくは改善、又は疾患若しくは疾患状態の治癒である。
【０１０７】
本明細書において使用されるとき、「治療有効量」又は「治療有効用量」は、対象への投与後に治療効果を達成するのに少なくとも十分な、薬剤、化合物、物質又は化合物を含有する組成物の量を指す。したがって、それは、疾患又は病症の症状を防止、治癒、改善、抑制又は部分的に抑制するために必要な量である。
【０１０８】
本明細書において使用されるとき、「予防有効量」又は「予防有効用量」は、対象への投与時に、例えば疾患又は症状の発生又は再発の防止又は遅延、疾患又は症状の発生又は再発の可能性の低減など、意図される予防効果を有する薬剤、化合物、物質又は化合物を含有する組成物の量を指す。完全な予防有効用量は、１用量の投与で達成する必要はなく、一連の用量が投与されたときのみ達成されてもよい。したがって、予防有効量は、１回又は複数回の投与において投与し得る。
【０１０９】
本明細書において使用されるとき、用語「患者」は、哺乳動物、例えばヒトを指す。
【０１１０】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２〜４、１２〜１４、２２〜２４、３２〜３４、４２〜４４、５２〜５４、６２〜６４、７２〜７４、８２〜８４、９２〜９４、１０２〜１０４、１０７〜１０９、１１２〜１１４、１１７〜１１９、１２２〜１２４、１３２〜１３４、１３７〜１３９、１４２〜１４４、１４７〜１４９、１５２〜１５４又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖ＣＤＲ、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７〜９、１７〜１９、２７〜２９、３７〜３９、４７〜４９、５７〜５９、６７〜６９、７７〜７９、８７〜８９、９７〜９９、１５７〜１５９、１６２〜１６４、１６７〜１６９、１７２〜１７４、１７７〜１７９又はそれらの任意の変異体から選択された軽鎖ＣＤＲを含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１１１】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、１２、２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、１０７、１１２、１１７、１２２、１２７、１３２、１３７、１４２、１４７、１５２又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３、１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、１０８、１１３、１１８、１２３、１２８、１３３、１３８、１４３、１４８、１５３又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４、１４、２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１１９、１２４、１２９、１３４、１３９、１４４、１４９、１５４又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖ＣＤＲ３、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７、１７、２７、３７、４７、５７、６７、７７、８７、９７、１５７、１６２、１６７、１７２、１７７又はそれらの任意の変異体から選択された軽鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、１８、２８、３８、４８、５８、６８、７８、８８、９８、１５８、１６３、１６８、１７３、１７８又はそれらの任意の変異体から選択された軽鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９、１９、２９、３９、４９、５９、６９、７９、８９、９９、１５９、１６４、１６９、１７４、１７９又はそれらの任意の変異体から選択された軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１１２】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、１１、２１、３１、４１、５１、６１、７１、８１、９１、１０１、１０６、１１１、１１６、１２１、１２６、１３１、１３６、１４１、１４６、１５１又はそれらの任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６、１６、２６、３６、４６、５６、６６、７６、８６、９６、１５６、１６１、１６６、１７１、１７６又はそれらの任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１１３】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２から選択された重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３から選択された重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４から選択された重鎖ＣＤＲ３、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７から選択された軽鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８から選択された軽鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９から選択された軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１１４】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２から選択された重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３から選択された重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４から選択された重鎖ＣＤＲ３、及び／又はアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７から選択された軽鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８から選択された軽鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９から選択された軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１１５】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２から選択された重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３から選択された重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４から選択された重鎖ＣＤＲ３、及び／又はアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７から選択された軽鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８から選択された軽鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９から選択された軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１１６】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２から選択された重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３から選択された重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４から選択された重鎖ＣＤＲ３、及び／又はアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７から選択された軽鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８から選択された軽鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９から選択された軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１１７】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２から選択された重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３から選択された重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４から選択された重鎖ＣＤＲ３、及び／又はアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７から選択された軽鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８から選択された軽鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９から選択された軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１１８】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２から選択された重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３から選択された重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４から選択された重鎖ＣＤＲ３、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５７から選択された軽鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８から選択された軽鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９から選択された軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１１９】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６２から選択された重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６３から選択された重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６４から選択された重鎖ＣＤＲ３、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７から選択された軽鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８から選択された軽鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６９から選択された軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１２０】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７２から選択された重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３から選択された重鎖ＣＤＲ７３、及びアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７４から選択された重鎖ＣＤＲ３、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７７から選択された軽鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７８から選択された軽鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７９から選択された軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１２１】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８２から選択された重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８３から選択された重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８４から選択された重鎖ＣＤＲ３、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８７から選択された軽鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８８から選択された軽鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８９から選択された軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１２２】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９２から選択された重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９３から選択された重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９４から選択された重鎖ＣＤＲ３、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９７から選択された軽鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９８から選択された軽鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９９から選択された軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１２３】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０２から選択された重鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０３から選択された重鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０４から選択された重鎖ＣＤＲ３、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５７から選択された軽鎖ＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５８から選択された軽鎖ＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５９から選択された軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１２４】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１２５】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１２６】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１２７】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１２８】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１２９】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１３０】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１３１】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１３２】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１３３】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１３４】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１３５】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１３６】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１３７】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１３８】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１３９】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１４０】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１４１】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１４２】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１４３】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１４４】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１４５】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１４６】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１４７】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１４８】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１４９】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１５０】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１５１】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３１又はその変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１５２】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３６又はその変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１５３】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１５４】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１５５】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１５６】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１５７】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１５８】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１５９】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１６０】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１６１】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１６２】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１６３】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１６４】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１６５】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１６６】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１６７】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１６８】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１６９】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１７０】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１７１】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１７２】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１７３】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１７４】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１７５】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１７６】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１７７】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７１又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１７８】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１７９】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１８０】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１８１】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１８２】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１８３】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１８４】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１８５】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１８６】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１８７】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４６又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１８８】
一態様において、本開示は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５１又はその任意の変異体から選択された重鎖可変領域、及び／又は、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７６又はその任意の変異体から選択された軽鎖可変領域を含む、抗体又はその機能的断片に関する。
【０１８９】
一態様において、本開示は、本明細書に開示される抗体又はその機能的断片又は変異体をコードする単離された核酸配列、本発明に係る抗体又はその機能的断片をコードするＣＤ４７結合部位のヌクレオチド配列を含有するベクター構築物、このようなベクターを含有する宿主細胞、及びポリペプチドを生産する組換え技術に関する。
【０１９０】
一態様において、本明細書に開示される抗体又はその機能的断片又は変異体をコードする単離された核酸配列は、核酸配列ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０から選択される。
【０１９１】
一態様において、本開示は、抗体、その断片、相同体、その誘導体等、例えば、標識化接合体又は細胞毒性接合体、並びに抗体、特定の細胞型を死滅させる接合体などの使用についての使用説明書を含むキットをさらに含む。該説明書は、インビトロ、インビボ又はエキソビボでの抗体、接合体などを使用するための指示を含むことができる。抗体は、液体形態であってもよく、一般的に凍結乾燥された固体であってもよい。該キットは、適切な他の試薬、例えば、緩衝液、再構成溶液及び所定の用途に必要な他の成分を含むことができる。その用途のための、例えば、治療上の用途又は診断アッセイの実施のための説明書と共に、所定量の包装された試薬の組み合わせが検討される。抗体が標識され、例えば酵素で標識される場合、該キットは、基質と酵素に必要な補因子（例えば、検出可能な発色団又は発蛍光団を提供する基質前駆体）とを含むことができる。また、他の添加剤、例えば、安定剤、緩衝液（例えば、ブロッキング用緩衝液又は溶解用緩衝液）などを含むこともできる。様々な試薬の相対量は、試薬溶液の濃縮物を提供するように変更されてよく、それは使用者に柔軟性、空間の節約、試薬の節約等を提供する。これらの試薬は、一般的に凍結乾燥された乾燥粉末として提供され、溶解時に適切な濃度を有する試薬溶液を提供する賦形剤を含む。
【０１９２】
本発明に係る抗体は、哺乳動物を治療するために使用することができる。１つの実施形態において、例えば、前臨床データを得る目的のために、目的の抗体又は等価物は、非ヒト哺乳動物に投与される。治療される例示的な非ヒト哺乳動物は、非ヒト霊長類動物、イヌ、ネコ、齧歯類動物、及び前臨床試験が行われる他の哺乳動物を含む。このような哺乳動物は、抗体で治療する疾患の確立した動物モデルであってもよく、目的の抗体の毒性を研究するために使用されてもよい。これらの実施形態のそれぞれにおいて、哺乳動物を対象に用量漸増試験を行ってよい。
【０１９３】
第２の成分、（例えば、抗体に接合された治療薬部分）を有するか有さないかに関わらず、単独で投与されるか又は細胞毒性因子と組み合わせて投与されるかに関わらず、抗体は、いずれも治療薬として使用することができる。本発明は、抗体ベースの治療方法に関し、この方法としては、ＣＤ４７によって媒介される疾患、障害又は状態を治療するために、本発明に係る抗体を動物、哺乳動物又はヒトに投与することを含む。
【０１９４】
本発明において使用される用語「治療」は、治療的治療及び予防的治療又は予防措置を指す。それは、疾患状態、疾患の進行、疾患の原因物質（例えば、細菌若しくはウイルス）又は他の異常状態の有害効果を予防、治癒、逆転、軽減、改善、最小化、阻害又は停止することを意味する。
【０１９５】
したがって、本発明は、二重特異的抗ＣＤ４７抗体を含む多価抗体をさらに含み、この抗体は、該抗体に連結し、診断又は治療の機能を有するエフェクター分子、原子又は他の物質を有する。例えば、抗体は、該抗体に連結し、癌をインビボで診断又は治療するために使用される放射性診断標識、又は放射性細胞毒性原子若しくは金属、又は細胞毒性物質（例えば、リシン鎖）を有することができる。
【０１９６】
また、本発明に係る抗体は、免疫測定法、精製方法、及び免疫グロブリン又はその断片を使用する他の方法において使用されてもよい。このような用途は、本分野で周知である。
【０１９７】
したがって、本発明は、本発明に係る抗ＣＤ４７抗体又はその断片を含む組成物をさらに提供し、上記抗体は、薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤と都合良く組み合わせられ、これは、本分野の一般的な手法である。
【０１９８】
本発明において使用される用語「医薬組成物」は、様々な調製物の製剤を指す。治療有効量の多価抗体を含む製剤は、滅菌液体溶液、液体懸濁液又は凍結乾燥形態であり、任意選択で安定剤又は賦形剤を含有する。
【０１９９】
本発明において使用される用語「障害」は、本発明の抗体を用いる治療で効果が得られる任意の状態を指す。これは、哺乳動物、特にヒトを上記障害にかかりやすくする病的状態を含む慢性及び急性の障害又は疾患を含む。本明細書において治療される障害の非限定的な例は、癌、炎症、自己免疫疾患、感染、心血管疾患、呼吸器疾患、神経疾患及び代謝性疾患を含む。
【０２００】
本発明において使用される用語「癌」は、哺乳動物、特にヒトの生理的状態を指すか又は説明しており、その典型的な特徴は、細胞が無秩序に増殖することである。癌の例は、癌腫（ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫及び白血病を含むが、これらに限定されない。
【０２０１】
本発明に係る抗体は、単独で投与される組成物として使用されてもよく、他の活性剤と併用されてもよい。
【０２０２】
上記いずれかの態様に係る抗体又はその機能的断片をコードする、核酸。
【０２０３】
上記いずれかの態様に係る核酸を含む、ベクター。
【０２０４】
上記いずれかの態様に係るベクターを含む、細胞。
【０２０５】
上記いずれかの態様に係る抗体又はその機能的断片又はそのコード核酸及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【０２０６】
癌を治療する方法は、上記いずれかの態様に係る抗体又はその機能的断片又はコード核酸の治療有効量を上記哺乳動物に投与するステップを含む。
【０２０７】
ＣＤ４７の異常発生に関連する哺乳動物の疾患を治療する方法は、上記いずれかの態様に係る抗体又はその機能的断片又はコード核酸の治療有効量を上記哺乳動物に投与するステップを含む。
【０２０８】
なお、上記実施形態に係る治療薬は、適切な担体、賦形剤、及び製剤中に組み込まれて改善された移動、送達、耐性などをもたらす他の試薬とともに投与されることを理解されたい。多数の適切な製剤は、すべての医薬品化学者にとって周知の薬局方であるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１５版，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９７５））、特にその中のＢｌａｕｇ、Ｓｅｙｍｏｕｒによる第８７章に見出すことができる。これらの製剤は、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー剤、ワックス、オイル、脂質、脂質（カチオン性又はアニオン性）含有担体（例えば、ＬｉｐｏｆｅｃｔｉｎＴＭ）、ＤＮＡ接合体、無水吸収性ペースト、水中油型及び油中水型エマルション、エマルションカーボワックス（異なる分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、及びカーボワックスを含む半固体混合物を含む。製剤中の有効成分が製剤によって不活性化されず、製剤が投与経路において生理学的に適合性及び忍容性を示すものである限り、上記いずれかの混合物は、いずれも本発明に係る治療及び治療方法に適用可能である。
【０２０９】
１つの実施形態において、上記抗体を治療薬として使用することができる。このような試薬は一般的に、被験体の異常なＣＤ４７の発現、活性及び／又はシグナル伝達に関連する疾患又は病態を治療、緩和及び／又は予防するために使用される。治療レジメンは、標準的な方法を用いて、例えば異常なＣＤ４７の発現、活性及び／又はシグナル伝達に関連する疾患又は障害、例えば癌又は他の腫瘍性障害に罹患した（又はそれらを発症するリスクを有するか又はそれらが進行している）ヒト患者などの被験体を特定することによって、実施することができる。抗体製剤、好ましくはその標的抗原に対して高い特異性及び高い親和性を有する抗体製剤は、被験体に投与されると、標的との結合による作用を一般的に示す。抗体の投与によって、標的（例えばＣＤ４７）の発現、活性及び／又はシグナル伝達機能を除去又は抑制又は阻止することができる。抗体の投与によって、標的（例えばＣＤ４７）とそれが天然に結合する内因性リガンド（例えばＳＩＲＰα）との結合を除去又は抑制又は阻止することができる。例えば、抗体は標的に結合して、ＣＤ４７の発現、活性及び／又はシグナル伝達を調節、遮断、抑制、減少、阻害、中和するか、又は他の形で妨げる。いくつかの実施形態において、異常なＣＤ４７の発現に関連する疾患又は障害を治療するために、（表２に記載されるアミノ酸配列を有する）重鎖及び軽鎖のＣＤＲを有する抗体を被験体に投与することができる。１つの実施形態において、異常なＣＤ４７の発現に関連する疾患又は障害は、癌であってもよい。
【０２１０】
非限定的な例として、異常なＣＤ４７の発現、活性及び／又はシグナル伝達に関連した疾患又は障害は、血液癌及び／又は固形腫瘍を含む。血液癌は、例えば、白血病、リンパ腫及び骨髄腫を含む。非限定的な例として、いくつかの形態の白血病は、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄増殖性疾患／腫瘍（ＭＰＤＳ）、及び骨髄異形成症候群を含む。非限定的な例として、いくつかの形態のリンパ腫は、ホジキンリンパ腫、低悪性度及び侵襲性非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、及び濾胞性リンパ腫（小細胞型及び大細胞型）を含む。非限定的な例として、いくつかの形態の骨髄腫は、多発性骨髄腫（ＭＭ）、巨細胞骨髄腫、重鎖骨髄腫、及び軽鎖又はＢｅｎｃｅ−Ｊｏｎｅｓ骨髄腫を含む。固形腫瘍は、例えば、乳房腫瘍、卵巣腫瘍、肺腫瘍、膵臓腫瘍、前立腺腫瘍、黒色腫、結腸直腸腫瘍、肺腫瘍、頭頸部腫瘍、膀胱腫瘍、食道腫瘍、肝臓腫瘍、及び腎臓腫瘍を含む。
【０２１１】
癌及び他の腫瘍性障害に関連する症状は、例えば、炎症、熱、全身倦怠感、熱、疼痛、しばしば局所炎症、食欲減退、体重減少、浮腫、頭痛、疲労、発疹、貧血、筋力低下、筋疲労、及び腹痛、下痢又は便秘などの腹部症状を含む。
【０２１２】
本明細書に記載の抗体の治療有効量は、一般的に、治療目的を達成するために必要とされる量に関する。上記に述べたように、それは、抗体とその標的抗原との結合に相互作用し、場合によっては標的の機能を妨げることができる。また、投与に必要な量は、特異的抗原に対する抗体の結合親和性に依存し、投与された抗体が身体から除去される速度にも依存する。非限定的な例として、本明細書に記載の抗体又は抗体断片の治療有効用量の一般的な範囲は、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重であってよい。１つの実施形態において、本明細書に記載の抗体の治療有効用量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．３ｍｇ／ｋｇ体重である。１つの実施形態において、本明細書に記載の抗体の治療有効用量は、約０．４ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．６ｍｇ／ｋｇ体重である。１つの実施形態において、本明細書に記載の抗体の治療有効用量は、約０．７ｍｇ／ｋｇ体重〜約０．９ｍｇ／ｋｇ体重である。１つの実施形態において、本明細書に記載の抗体の治療有効用量は、約１．０ｍｇ／ｋｇ体重〜約２．０ｍｇ／ｋｇ体重である。１つの実施形態において、本明細書に記載の抗体の治療有効用量は、約２．０ｍｇ／ｋｇ体重〜約３．０ｍｇ／ｋｇ体重である。１つの実施形態において、本明細書に記載の抗体の治療有効用量は、約３．０ｍｇ／ｋｇ体重〜約４．０ｍｇ／ｋｇ体重である。１つの実施形態において、本明細書に記載の抗体の治療有効用量は、約４．０ｍｇ／ｋｇ体重〜約５．０ｍｇ／ｋｇ体重である。１つの実施形態において、本明細書に記載の抗体の治療有効用量は、約５．０ｍｇ／ｋｇ体重〜約６．０ｍｇ／ｋｇ体重である。１つの実施形態において、本明細書に記載の抗体の治療有効用量は、約６．０ｍｇ／ｋｇ体重〜約７．０ｍｇ／ｋｇ体重である。１つの実施形態において、本明細書に記載の抗体の治療有効用量は、約７．０ｍｇ／ｋｇ体重〜約８．０ｍｇ／ｋｇ体重である。１つの実施形態において、本明細書に記載の抗体の治療有効用量は、約８．０ｍｇ／ｋｇ体重〜約９．０ｍｇ／ｋｇ体重である。１つの実施形態において、本明細書に記載の抗体の治療有効用量は、約９．０ｍｇ／ｋｇ体重〜約１０．０ｍｇ／ｋｇ体重である。１つの実施形態において、本明細書に記載の抗体の治療有効用量は、約１０．０ｍｇ／ｋｇ体重〜約１５．０ｍｇ／ｋｇ体重である。１つの実施形態において、本明細書に記載の抗体の治療有効用量は、約１５．０ｍｇ／ｋｇ体重〜約２０．０ｍｇ／ｋｇ体重である。一般的な投与頻度は、例えば、１日１回、１日２回、１日おきに１回、１週間に１回の範囲である。
【０２１３】
特定の炎症関連障害を診断又は治療するための任意の公知の方法を組み合わせて、治療の有効性を決定することができる。炎症関連障害の１つ以上の症状の軽減は、抗体が臨床効果を与えることを示す。
【０２１４】
別の実施形態において、ＣＤ４７を標的とする抗体は、ＣＤ４７の局在化及び／又は定量に関連した、本分野で周知の方法により使用することができる（例えば、適切な生理学的試料中のＣＤ４７及び／又はＣＤ４７とＳＩＲＰαの両方のレベルを測定するための使用、診断方法における使用、タンパク質のイメージングにおける使用など）。１つの特定の実施形態において、ＣＤ４７又はその誘導体、断片、類似体若しくは相同体に対して特異的であり、抗体由来の抗原結合ドメインを含む抗体は、薬理学的に活性な化合物（以下、「治療薬」と呼ばれる）として使用される。
【０２１５】
別の実施形態において、免疫アフィニティー、クロマトグラフィー又は免疫沈降法などの標準的な方法によって、ＣＤ４７に対して特異的な抗体を使用してＣＤ４７ポリペプチドを単離することができる。ＣＤ４７タンパク質を標的とする抗体（又はその断片）を使用して、生物学的試料中のタンパク質を検出することができる。いくつかの実施形態において、例えば所定の治療レジメンの効果を判定するという目的で、臨床試験手順の一環として生物学的試料中のＣＤ４７を検出することができる。抗体を検出可能な物質と結合する（すなわち物理的に連結する）ことによって、検出を促進することができる。検出可能な物質の例は、様々な酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質及び放射性物質を含む。適切な酵素の例は、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ又はアセチルコリンエステラーゼを含み、適切な補欠分子族複合体の例は、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチンを含み、適切な蛍光物質の例は、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシル又はフィコエリトリンを含み、発光物質の１つの例は、ルミノールを含み、生物発光物質の例は、ルシフェラーゼ、フルオレセイン及びイクオリンを含み、適切な放射性物質の例は、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ又は３Ｈを含む。
【０２１６】
別の実施形態において、本開示に係る抗体は、試料中のＣＤ４７及び／又はＣＤ４７とＳＩＲＰαタンパク質（又はそのタンパク質断片）の両方を検出するための試薬として使用することができる。いくつかの実施形態において、抗体は、検出可能な標識を含む。抗体は、ポリクローナル抗体であるか、又はより好ましくはモノクローナル抗体である。完全な抗体又はその断片（例えば、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、又はＦ（ａｂ’）２）が使用される。抗体に関して用語「標識」は、検出可能な物質を該抗体と結合する（すなわち物理的に連結する）ことによる該抗体の直接的標識と、直接標識された別の試薬との反応による該抗体の間接的標識とを含むことを意図している。間接的標識の例は、蛍光標識された第２の抗体を用いて第１の抗体を検出することと、蛍光標識されたストレプトアビジンによって検出されるようにビオチンで抗体を末端標識することとを含む。用語「生物学的試料」は、被験体から単離された組織、細胞及び生物学的液体、並びに被験体の体内に存在する組織、細胞及び液体を含むことを意図している。したがって、使用される用語「生物学的試料」は、血液、及び血清、血漿又はリンパ液を含む血液の画分又は成分を含む。換言すれば、上記実施形態の検出方法を用いて、生物学的試料中の分析物ｍＲＮＡ、タンパク質又はゲノムＤＮＡをインビトロ及びインビボで検出することができる。例えば、分析物ｍＲＮＡをインビトロで検出する技術は、Ｎｏｒｈｔｅｒｎハイブリダイゼーション及びインサイチューハイブリダイゼーションを含む。分析物タンパク質をインビトロで検出する技術は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、Ｗｅｓｔｅｒｎブロット、免疫沈降法及び免疫蛍光法を含む。分析物ゲノムＤＮＡをインビトロで検出する技術は、Ｓｏｕｔｈｅｒｎハイブリダイゼーションを含む。免疫測定を行うための手順は、例えば、「ＥＬＩＳＡ：Ｔｈｅｏｒｙａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ：Ｍｅｔｈｏｄｓｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」，第４２巻，Ｊ．Ｒ．Ｃｒｏｗｔｈｅｒ（編集）Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．，１９９５；「Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ」，Ｅ．Ｄｉａｍａｎｄｉｓ及びＴ．Ｃｈｒｉｓｔｏｐｏｕｌｕｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．，１９９６；以及「Ｐｒａｃｔｉｃｅａｎｄ  Ｔｈｅｏｒｙ  ｏｆ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ」，Ｐ．Ｔｉｊｓｓｅｎ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，１９８５に説明されている。また、分析物タンパク質をインビボで検出する技術は、標識した抗分析物タンパク質抗体を被験体の体内に導入することを含む。例えば、放射性マーカーで抗体を標識し、次に標準的なイメージング法によって被験体の体内における該放射性マーカーの存在又は位置を検出することができる。
【０２１７】
本明細書に記載の抗体及びその誘導体、断片、類似体及び相同体を、投与に適した医薬組成物中に添加することができる。このような組成物の製造に関連する原理及び考慮事項、並びに成分の選択のガイダンスは、本分野で周知のものであり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  Ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ第１９版（Ａｌｆｏｎｓｏ  Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏら編集）Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．：１９９５；Ｄｒｕｇ  Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ  Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ：Ｃｏｎｃｅｐｔｓ，Ｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｉｅｓ，Ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｓ，Ａｎｄ  Ｔｒｅｎｄｓ，Ｈａｒｗｏｏｄ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｌａｎｇｈｏｒｎｅ，Ｐａ．，１９９４；及びＰｅｐｔｉｄｅ  Ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（Ａｄｖａｎｃｅｓ  Ｉｎ  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第４巻），１９９１，Ｍ．Ｄｅｋｋｅｒ，ＮｅｗＹｏｒｋを参照されたい。
【０２１８】
このような組成物は、一般的に、抗体及び薬学的に許容される担体を含む。抗体断片を使用するとき、標的タンパク質の結合ドメインに特異的に結合する最も小さい阻害性断片が好ましい。例えば、抗体の可変領域配列に基づいて、標的タンパク質配列に結合する能力を維持したペプチド分子を設計することができる。このようなペプチドは、化学的に合成されるか、及び／又は組換えＤＮＡ技術によって産生される（例えば、Ｍａｒａｓｃｏら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：７８８９−７８９３（１９９３）を参照）。
【０２１９】
本明細書において使用されるとき、用語「薬学的に許容される担体」は、薬剤投与に適合する任意及びすべての溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などを含むことを意図している。適切な担体について、本分野では標準的な参考書であるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓの最新版に述べられており、該書籍は、参照によって本明細書に組み込まれる。このような担体又は希釈剤の好ましい例は、水、生理食塩水、リンゲル液、グルコース溶液及び５％ヒト血清アルブミンを含むが、これらに限定されない。リポソーム、及び固定油などの非水性担体を使用することもできる。このような媒体及び試薬を薬学的活性物質において使用することは、本分野で周知である。任意の従来の媒体又は試薬が抗体と不適合でない限り、組成物におけるその使用が考えられる。
【０２２０】
体内に投与するための製剤は、無菌でなくてはならない。無菌濾過膜で濾過することによって容易に実現することができる。
【０２２１】
上記実施形態の医薬組成物は、その意図される投与経路に適合するように配合される。投与経路の例は、非経口投与、例えば静脈内投与、皮内投与、皮下投与、経口投与（例えば吸入）、経皮投与（例えば局所投与）、経粘膜投与及び直腸内投与を含む。非経口投与、皮内投与又は皮下投与に使用される溶液又は懸濁液は、水、生理食塩水、固定油、ポリエチレングリコール系、グリセリン、プロピレングリコール、又は他の合成溶媒などの注射用滅菌希釈剤と、ベンジルアルコール又はメチルパラベンなどの抗細菌剤と、アスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウムなどの酸化防止剤と、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などのキレート剤と、酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩などの緩衝剤と、塩化ナトリウム又はデキストロースなどの浸透圧調節用試薬とを含むことができる。ｐＨは、塩酸又は水酸化ナトリウムなどの酸又は塩基で調整することができる。非経口製剤は、アンプル、使い捨て注射器、又はガラスやプラスチックで作られた多数回投与バイアルに封入することができる。
【０２２２】
注射用途に適した医薬組成物は、滅菌水溶液（本明細書において水溶性である）又は分散液と、滅菌注射溶液又は分散液の即時調製用の滅菌粉末とを含む。静脈内投与について、適切な担体は、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬＴＭ（ＢＡＳＦ社、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．）又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を含む。すべての場合に、組成物は無菌でなければならず、かつ容易に注射可能である程度に流動性を有さなければならない。組成物は、製造及び保存条件下で安定でなければならず、かつ細菌及び真菌などの微生物の汚染作用を防止しなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール及び液体ポリエチレングリコールなど）を含有する溶媒又は分散媒、及びそれらの適切な混合物であってよい。例えば、レシチンなどのコーティングを使用することにより、分散液の場合に必要な粒径を維持することにより、また、界面活性剤を使用することにより、適正な流動性を保つことができる。微生物の作用に対する防止は、様々な抗細菌剤及び抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールによって実現することができる。多くの場合に、組成物中に等張剤、例えば糖類、多価アルコール（例えば、マンニトール、ソルビトール）、塩化ナトリウムを含むことが好ましい。上記組成物中に、吸収を遅延させる試薬、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを含有することによって、注射用組成物の持続的吸収を実現することができる。
【０２２３】
必要に応じて、必要量の抗体を、上記に列挙した成分の１つ又は組み合わせ（必要に応じて）を有する適切な溶媒に添加した後、濾過滅菌を行うことにより、滅菌注射溶液を調製することができる。一般的に、塩基性分散媒と上記に列挙したものから選ばれた他の必要な成分とを含む滅菌担体に抗体を添加することにより、分散液を調製する。滅菌注射溶液の調製用の滅菌粉末の場合、調製方法は、有効成分及び任意の更なる所望の成分を含む粉末が得られる真空乾燥及び凍結乾燥であり、それらの成分は上記成分の滅菌濾過溶液由来である。
【０２２４】
吸入投与について、二酸化炭素などの気体などの適切な推進剤を含む加圧容器、ディスペンサー又は噴霧器からエアロゾルスプレーの形で化合物を投与する。
【０２２５】
経粘膜的又は経皮的手段によって全身投与を行うこともできる。経粘膜投与又は経皮投与については、製剤中に、浸透すべきバリアに適した浸透剤を使用する。このような浸透剤は、本分野で周知のものであり、例えば、経粘膜投与のための洗浄剤、胆汁酸塩及びフシジン酸誘導体を含む。経粘膜投与は、鼻スプレー又は坐剤を使用することによって行うことができる。経皮投与については、１つ以上の上記抗体を本分野で周知の膏薬、軟膏、ゲル又はクリームに配合することができる。
【０２２６】
さらに、直腸投与のために、化合物を坐剤（例えばココアバター又は他のグリセリドなど、従来の坐剤基剤を有するもの）又は停留性浣腸剤の形で製造することができる。
【０２２７】
１つの実施形態において、上記抗体は、インプラント及びマイクロカプセル化送達システムを含む持続／制御放出製剤などの、身体からの速やかな排出を防ぐ担体を用いて製造することができる。エチレン−酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル及びポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを使用することができる。このような製剤を製造する方法は、当業者にとって自明である。
【０２２８】
例えば、これらの有効成分は、例えばコアセルベーション技術によって、又は界面重合法によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれコロイド状薬剤送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル）又はマクロエマルション中のヒドロキシメチルセルロース又はゼラチンマイクロカプセル及びポリ（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中にカプセル化することができる。
【０２２９】
持続放出製剤を調製することができる。持続放出製剤の適切な例は、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスを含み、該マトリクスは、フィルム又はマイクロカプセルなどの成形物品の形である。持続放出マトリクスの例は、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）又はポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とγエチル−Ｌ−グルタメートとのコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴＴＭ（乳酸−グリコール酸コポリマーと酢酸ロイプロリドとからなる注射用マイクロスフェア）などの分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、及びポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸を含む。エチレン−酢酸ビニル及び乳酸−グリコール酸などのポリマーは、１００日間以上にわたって分子を放出することができるが、いくつかのヒドロゲルがタンパク質を放出する期間は比較的短い。
【０２３０】
リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体により感染細胞を標的とするリポソームを含む）は、薬学的に許容される担体として使用されてよい。これらは、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載されたような当業者に周知の方法に従って調製することができる。
【０２３１】
投与を容易にし、用量を均一にするために、非経口組成物を単位剤形として調製することが特に有利である。本明細書で使用されるとき、単位剤形は、治療される被験体に用いられ、単位用量として適した物理的に別個の単位を指し、各単位は、必要な医薬担体とともに所望の治療効果を達成するように計算された所定量の１つ以上の上記抗体を含むものである。上記実施形態の単位剤形の仕様は、抗体の固有の特性及び達成されるべき具体的な治療効果と、個体を治療するためのこのような抗体を配合する技術分野に固有の制限とによって決定され、且つこれらに直接依存する。
【０２３２】
上記医薬組成物は、投与のための取扱説明書とともに容器、パック又はディスペンサーに入れることができる。
【０２３３】
本明細書に記載の製剤は、治療される具体的な疾患に応じて複数の上記抗体、好ましくは相補的活性を有するが互いに悪影響を及ぼさないものを含んでもよい。代替的に又はそれに加えて、組成物は、細胞毒性剤、サイトカイン、化学療法剤又は増殖阻害剤などの、その機能を高める試薬を含むことができる。このような分子は、意図する目的に対して有効な量で適切に組み合わせて存在する。
【０２３４】
１つの実施形態では、１つ以上の上記抗体を併用療法において投与することができる。すなわち、治療薬（様々な形態の癌、自己免疫疾患及び炎症性疾患などの病理学的症状又は障害を治療するために使用される）などの他の試薬と併用して投与することができる。用語「併用」は、本明細書において、試薬をほぼ同じ時点で、同時に又は順次投与することを意味する。順次投与する場合、第２の化合物の投与を開始するとき、２つの化合物のうち第１の化合物が治療部位において依然として有効濃度で検出可能であることが好ましい。
【０２３５】
例えば、併用療法は、本明細書に記載の１つ以上の抗体と、１つ以上の追加の治療薬（例えば、下記に詳細に述べるような、１つ以上のサイトカイン及び増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、及び／又は細胞毒性剤若しくは細胞増殖抑制剤）との同時配合及び／又は同時投与を含むことができる。このような併用療法は、投与される治療薬を低用量で有利に使用することができ、それにより単独療法に関連する様々な潜在的な毒性又は合併症が回避される。
【０２３６】
本明細書に記載の抗体と併用される好ましい治療薬は、炎症反応の異なる段階を妨害する試薬である。１つの実施形態において、本明細書に記載の１つ以上の抗体を、他のサイトカイン若しくは増殖因子アンタゴニストなどの１つ以上の追加の試薬（例えば、可溶性受容体、ペプチド阻害剤、小分子、リガンド融合体）、又は他の標的に結合する抗体若しくは抗原結合断片（例えば、他のサイトカイン若しくは増殖因子、その受容体、又は他の細胞表面分子に結合する抗体）、及び抗炎症性サイトカイン又はそのアゴニストと同時配合及び／又は同時投与することができる。
【０２３７】
他の実施形態において、本明細書に記載の抗体は、自己免疫障害、炎症性疾患などに対するワクチンアジュバントとして使用される。これらのタイプの障害を治療するためのアジュバントの組み合わせは様々な抗原との併用に適し、上記抗原は標的とする自己抗原、すなわち、自己免疫に関与する自己抗原（例えばミエリン塩基性タンパク質）、炎症性自己抗原（例えばアミロイドペプチドタンパク質）、又は移植抗原（例えば同族抗原）由来である。抗原は、タンパク質から誘導されるペプチド又はポリペプチドと、糖類、タンパク質、ポリヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチド、自己抗原、アミロイドペプチドタンパク質、移植抗原、アレルゲン、又は他の巨大分子成分のいずれかの断片とを含むことができる。いくつかの例には、複数の抗原が抗原性組成物に含まれる。
【０２３８】
明確かつ簡潔な説明の目的のために、本明細書では、同じ又は別個の実施形態の一部として特徴を説明しているが、本発明の範囲は、説明される特徴の全部又は一部を組み合わせたいくつかの実施形態を含み得ることが理解されるであろう。
【実施例】
【０２３９】
１．ＣＤ４７及びＳＩＲＰα融合タンパク質の真核細胞での発現
ヒトＣＤ４７のｃＤＮＡプラスミド（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ，品番：ＨＧ１２２８３−Ｇ）をテンプレートとし、ヒトＣＤ４７分子のＮ末端の細胞外領域断片（１９−１３５）をＰＣＲで増幅し、ここでＣｙｓ３３はＧｌｙに突然変異し、ＰＣＲプライマーは以下のとおりである：
上流プライマー５’ＣＴＧＡＧＡＧＧＴＧＣＣＡＧＡＴＧＴＣＡＧＣＴＡＣＴＡＴＴＴＡＡＴＡＡＡＡＣＡＡＡＡＴＣＴＧＴＡＧＡＡＴＴＣＡＣＧＴＴＴＧＧＴＡＡＴＧＡＣＡＣＴＧＴＣＧＴ３’
下流プライマー５’ＴＣＣＧＣＣＴＣＣＧＣＣＧＣＴＡＧＣＴＧＡＡＡＣＡＡＣＡＣＧＡＴＡ３’
【０２４０】
増幅産物を、自己構築された真核発現プラスミドシステム（Ｃ末端Ｈｉｓ６ｔａｇを含み、精製を容易にする）にクローニングした。ＨＥＫ２９３．６Ｅ細胞を５〜７日間トランスフェクトした後、培地上清を収集し、Ｎｉアフィニティーカラムにより精製して、組換えヒトＣＤ４７分子のＮ末端の細胞外領域タンパク質（ｈＣＤ４７）を得た。
【０２４１】
ヒトＳＩＲＰαｃＤＮＡプラスミド（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ，品番：ＨＧ１１６１２−Ｍ）をテンプレートとし、自己構築された、マウスＩｇＧ２ａＦｃ断片を有する真核発現プラスミドシステムにクローニングし、このプラスミドでＨＥＫ２９３．６Ｅ細胞を５〜７日間トランスフェクトした後、培地上清を収集し、ＰｒｏｔｅｉｎＡアフィニティーカラムにより精製して、組換えヒトＳＩＲＰα−Ｆｃ融合タンパク質を得た。１ｍｇのＳＩＲＰα−Ｆｃ融合タンパク質をＰＢＳで濃度１ｍｇ／ｍｌに調節し、ＥＺ−ＬｉｎｋＳｕｌｆｏ−ＮＨＳ−ＬＣ−ＬＣ−Ｂｉｏｔｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ，品番：２１３３８）試薬を１ｍｇ秤量し、１５０μＬのｄｄＨ２Ｏで速やかに溶解し、溶解したＳｕｌｆｏ−ＮＨＳ−ＬＣ−ＬＣ−Ｂｉｏｔｉｎ試薬１３．２μＬをタンパク質溶液に加え、上下を反転させて均一に混合した。氷上で２時間インキュベートし、反応終了後、タンパク質を１００００ダルトン（Ｄａ）の限外濾過管に移し、濃縮してＰＢＳに液交換し、ＯＤ２８０を測定して、ｒ−ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ（ＰｒｉｍｅＧｅｎｅ社，品番：１００５−０１）を用いてタンパク質のビオチン化効率を検出し、その後にタンパク質を分注して保存した。結果をそれぞれ図１と図２に示す。
【０２４２】
２．ヒトＣＤ４７遺伝子安定形質転換細胞株の構築
ヒトＣＤ４７全長配列を含有するレンチウイルスベクターを構築し、レンチウイルスパッケージングキットの使用説明書（Ｌｅｎｔｉ−Ｐａｃ  ＨＩＶ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｐａｃｋａｇｉｎｇ  Ｋｉｔ，ＧｅｎｅＣｏｐｏｅｉａ，品番：ＨＰＫ−ＬｖＴＲ−２０）に従って、構築されたレンチウイルスと包装プラスミドによりＨＥＫ２９３Ｔ細胞をコトランスフェクトし、レンチウイルスのパッケージングを行った。４８時間トランスフェクトした後に、培地を収集し、５００＊ｇで１０分間遠心分離して細胞の破片を除去し、レンチウイルスを含有する培養上清を得て、０．４５μｍのＰＥＳ濾過膜で濾過した後、１．５ｍｌのＥＰ管（管あたり２００μｌ）に分注し、１０μｌの上清を用いて１ｘ１０６個のＣＨＯ細胞を感染させ、残りの上清を−８０℃で保存した。感染後、培地に１０μｇ／ｍｌのｐｕｒｏｍｙｃｉｎを加えてスクリーニングし、陽性クローンの限界希釈後、ヒト全長ＣＤ４７分子を安定して発現させる細胞株ｈＣＤ４７−ＣＨＯ−１Ｂ１０を得た。結果を図３に示す。
【０２４３】
３．ハイブリドーマの製造
ヒトＣＤ４７組換えタンパク質又はｈＣＤ４７−ＣＨＯ−１Ｂ１０細胞を抗原として等量の免疫アジュバント（フロイントアジュバント）と混合し、群ごとに６匹の６〜８週齢の雌性Ｂａｌｂ／ｃマウスを免疫した。初回免疫の２週間後、追加免役を行った。３回の免疫後、眼窩から採血して血清の力価を検出した。融合する前に、１ｘ１０６個のｈＣＤ４７−ＣＨＯ安定形質転換細胞をショック免疫のために尾静脈注射した。３日後、頸椎脱臼によってマウスを殺し、マウスの脾臓と一部の末梢リンパ節をＤＭＥＭ培地で粉砕して遠心分離し、上清を捨て、脾臓細胞塊を軽く崩し、５ｍｌの赤血球溶解液を加え、５０ｓ溶解した後、ＤＭＥＭを４０ｍｌ加えて遠心分離し、赤血球を含まない脾臓細胞懸濁液を得た。適量のリンパ節及び脾臓細胞の懸濁液とＳＰ２／０を混合して、ＢＴＸエレクトロフュージョン装置を用いて細胞融合を行った。融合細胞を９６ウェルプレートに播種し、ＨＡＴを含むＤＭＥＭ完全培地中に、５％ＣＯ２、３７℃の条件下で培養した。約１週間でハイブリドーマ細胞の増殖状況を観察し、６０％以上に増殖したとき、抗体検査のために上清を取り出した。
【０２４４】
４．ハイブリドーマ上清のスクリーニング
０．０５Ｍの重炭酸塩緩衝液（ｐＨ９．０）を用いて１μｇ／ｍｌのｈＣＤ４７抗原（ｈＣＤ４７Ｒ−ＥＣＤｃｈｉｓ）を調製し、９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｃｏｓｔａｒ，品番：９０１８）にウェルあたり１００μｌ加え、４℃で一晩インキュベートした。翌日ＰＢＳで３回洗浄し、２００μｌの２％脱脂粉乳／ＰＢＳで室温で２時間ブロッキングし、ＰＢＳで３回洗浄し、ハイブリドーマ上清を５０μｌ加え、室温で１時間インキュベートした後に、ＰＢＳＴとＰＢＳで３回洗浄した。第２の抗体（抗ｍｏｕｓｅ  ＩｇＧ−Ｆｃ−ＨＲＰ，Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，品番：１１５−０３５−０７１）を加えて１時間インキュベートし、３回繰り返して洗浄し、発色液（ＴＭＢ溶液、Ｓｉｇｍａ，品番：Ｔ２８８５）を５０μｌ加えて３７℃で５分間放置した後に、２Ｍ濃硫酸溶液を５０μｌ加えて反応を終了させ、直ちにマイクロプレートリーダーに入れてＯＤ４５０値を読み取った。
【０２４５】
ＥＬＩＳＡで検出した、ＣＤ４７抗体に結合する陽性クローン上清に対して、ＣＤ４７陽性細胞との結合をさらに検証した。ＣＣＲＦ−ＣＥＭ細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＭ−ＣＣＬ−１１９ＴＭ）を５×１０４／ウェルで９６ウェルプレートに入れ、各ウェルにハイブリドーマ上清を５０μｌ加え、４℃で６０分間インキュベートし、上清を遠心分離して吸引除去し、０．５％ＢＳＡ／ＰＢＳで洗浄した。次に、第２の抗体溶液（抗ｍｏｕｓｅ  ＩｇＧ−Ｆｃ−ＡＦ６４７，Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，品番：１１５−６０６−０７１）を５０μｌ加え、４℃で４５分間インキュベートした後、０．５％ＢＳＡ／ＰＢＳで洗浄して余分な第２の抗体を除去した。最後に、１μｇ／ｍｌの蛍光色素（ヨウ化プロピジウム，ＰＩ，Ｓｉｇｍａ，品番：Ｐ４１７０）を含有するＰＢＳ溶液６０μｌを用いて細胞を再懸濁させ、フローサイトメーターで検出した。結果を図４に示す。
【０２４６】
５．ＣＤ４７−ＳＩＲＰα遮断実験
ＣＣＲＦ−ＣＥＭ細胞を５×１０４個／ウェルで９６ウェルプレートに加え、各ウェルにハイブリドーマ上清を５０μｌ加え、４℃で３０分間インキュベートした。１μｇ／ｍｌのビオチン化ＳＩＲＰα−Ｆｃ融合タンパク質を５０μｌ加え、４℃で３０分間インキュベートし、０．５％ＢＳＡ／ＰＢＳで洗浄した後、第２の抗体溶液（ＳＡ−ＰＥ，Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，品番：０１６−１１０−０８４）を５０μｌ加えた。最後に、１μｇ／ｍｌの蛍光色素（ヨウ化プロピジウム，ＰＩ，Ｓｉｇｍａ，品番：Ｐ４１７０）を含有するＰＢＳ溶液６０μｌを用いて細胞を再懸濁させ、フローサイトメーターで検出した。結果を図５に示す。ハイブリドーマ陽性クローン１Ｈ１、２Ｅ４、７Ａ１１、７Ｇ５、７Ｈ５、９Ｃ４、９Ｇ１１、１０Ｂ８、１２Ｇ８、１４Ｇ６、１５Ａ７及び１５Ｇ６は、ＣＤ４７陽性細胞の表面に結合すると、ＳＩＲＰαとＣＤ４７の結合を効果的に防ぐことができる。
【０２４７】
６．クローン候補抗体遺伝子
前期スクリーニングの結果から、ハイブリドーマ細胞のＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡに逆転写した。ｃＤＮＡをテンプレートとしてＰＣＲ増幅を行い、配列を決定して、以下の候補陽性クローンの重鎖及び軽鎖の可変領域配列を得た。
【０２４８】
クローン２Ｅ４−Ｃ７：
重鎖
2021527110.tif 000003
核酸配列
ＣＡＧＡＴＣＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＴＧＡＧＧＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＡＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＴＧＡＣＧＡＣＴＡＴＡＴＡＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＡＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＡＴＧＧＡＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＡＡＧＣＧＧＴＡＡＴＧＣＴＡＡＧＴＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＴＴＧＡＴＴＧＴＡＧＡＣＡＣＡＴＣＣＴＣＣＡＣＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＴＣＡＡＧＡＡＧＧＡＧＧＧＡＧＧＡＴＴＣＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
軽鎖
2021527110.tif 000004
核酸配列
ＧＡＣＴＴＴＧＴＧＡＴＧＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＡＧＣＴＧＴＧＴＣＡＧＴＣＧＧＡＧＡＧＡＡＡＧＴＴＡＣＴＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＣＣＴＴＴＴＡＴＡＴＡＧＴＡＧＣＡＡＴＣＡＡＡＡＧＡＡＴＴＡＣＴＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＴＣＴＣＣＴＡＡＡＣＴＧＣＴＧＡＴＴＴＡＣＴＧＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＡＧＧＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＣＣＴＧＧＣＡＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＡＴＴＴＴＡＴＡＧＧＴＡＣＣＣＧＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＡ
クローン７Ａ１１−Ｃ２：
重鎖
2021527110.tif 000005
核酸配列
ＣＡＧＡＴＣＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＡＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＴＧＡＣＴＡＣＴＡＴＣＴＡＣＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＡＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＡＴＧＧＡＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＡＡＧＣＧＧＴＡＡＴＡＣＴＡＡＧＴＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＴＴＧＡＣＴＧＴＡＧＡＣＡＣＡＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＡＧＧＡＧＧＧＡＧＧＡＴＴＣＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
軽鎖
2021527110.tif 000006
核酸配列
ＧＡＣＡＴＴＧＴＧＡＴＧＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＡＧＣＴＧＴＧＴＣＡＧＴＴＧＧＡＧＡＧＡＡＧＧＴＴＡＣＴＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＣＣＴＴＴＴＡＴＡＴＡＧＴＡＧＣＡＡＴＣＡＡＡＡＧＡＡＣＴＡＣＴＴＧＡＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＴＣＴＣＣＴＡＡＡＣＴＧＣＴＧＡＴＴＴＡＣＴＧＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＡＧＧＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＧＴＧＡＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＣＣＴＧＧＣＡＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＡＴＡＴＴＡＴＡＧＣＴＡＴＣＣＧＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＡ
クローン７Ｇ５−Ｄ１０：
重鎖
2021527110.tif 000007
核酸配列
ＣＡＧＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＧＡＣＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＡＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＡＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＴＧＡＣＴＡＣＴＡＴＡＴＡＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＡＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＡＴＧＧＡＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＡＡＧＣＧＧＴＡＡＴＡＣＴＡＡＧＴＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＴＴＧＡＣＴＧＴＡＧＡＣＡＣＡＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＡＧＧＡＧＧＧＡＧＧＡＴＴＣＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
軽鎖
2021527110.tif 000008
核酸配列
ＧＡＣＡＴＴＧＴＧＡＴＧＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＡＧＣＴＧＴＧＴＣＡＧＴＴＧＧＡＧＡＧＡＡＧＧＴＴＧＣＴＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＣＣＴＴＴＴＡＴＡＴＡＧＴＡＧＣＡＡＴＣＡＡＡＡＧＡＡＣＴＡＣＴＴＧＡＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＴＣＴＣＣＴＡＡＡＣＴＧＣＴＧＡＴＴＴＡＣＴＧＧＧＣＴＴＣＣＡＣＴＡＧＧＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＧＴＧＡＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＣＣＴＧＧＣＡＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＡＴＡＴＴＡＴＡＧＣＴＡＴＣＣＧＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＡ
クローン７Ｈ５−Ｂ１２：
重鎖
2021527110.tif 000009
核酸配列
ＣＡＧＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＡＴＴＴＡＣＣＡＡＴＴＡＣＡＡＴＴＴＴＣＡＣＴＧＧＧＴＡＡＡＧＣＡＧＡＣＡＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＴＧＧＡＡＣＡＴＴＴＴＡＴＣＣＡＧＴＡＡＡＴＧＧＴＧＡＴＡＣＴＴＣＣＴＡＣＡＡＴＣＡＧＡＡＧＴＴＣＧＡＴＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＧＴＧＡＣＴＧＣＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴＧＣＧＧＴＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＧＧＧＧＧＴＡＣＧＡＧＧＧＣＴＡＴＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴＣＡＡＧＧＧＡＣＣＴＣＡＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
軽鎖
2021527110.tif 000010
核酸配列
ＧＡＴＧＴＴＴＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＡＡＣＴＣＣＡＣＴＣＴＣＣＣＴＧＣＣＴＧＴＣＡＧＴＣＴＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧＣＣＴＣＣＡＴＣＴＣＴＴＧＣＡＧＡＴＣＴＡＧＴＣＡＧＧＧＣＡＴＴＧＴＡＣＡＴＡＧＴＡＡＴＧＧＡＡＡＣＡＣＣＴＡＴＴＴＡＧＣＡＴＧＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＡＡＡＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＡＡＧＴＴＴＣＣＡＡＣＣＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＡＣＴＣＡＡＧＡＴＣＡＧＣＡＧＡＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＴＴＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＣＡＴＧＴＴＣＣＧＴＡＣＡＣＧＴＴＣＧＧＡＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＡ
クローン９Ｇ１１−Ｄ２：
重鎖
2021527110.tif 000011
核酸配列
ＣＡＧＡＴＣＣＴＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＴＧＡＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＴＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＡＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＴＧＡＣＴＡＣＴＡＴＡＴＡＣＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＡＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＡＴＧＧＡＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＡＡＧＣＧＧＴＡＡＴＡＣＴＡＡＧＴＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＡＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＴＴＧＡＣＴＧＴＡＧＡＣＡＣＡＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＡＣＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＡＣＡＡＧＡＡＧＧＡＧＧＧＡＧＧＡＴＴＣＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
軽鎖
2021527110.tif 000012
核酸配列
ＧＡＣＡＴＴＧＴＧＡＴＧＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＡＧＣＴＧＴＧＴＣＡＧＴＴＧＧＡＧＡＧＡＡＧＧＴＴＡＣＴＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＣＣＴＴＴＴＡＴＡＴＡＧＴＡＧＣＡＡＴＣＡＡＡＡＧＡＡＣＴＡＣＴＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＴＣＴＣＣＴＡＡＡＣＴＧＣＴＧＡＴＴＴＡＣＴＧＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＡＧＧＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＧＴＧＡＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＣＣＴＧＧＣＡＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＡＴＴＴＴＡＴＡＧＣＴＡＴＣＣＧＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＡ
クローン１０Ｂ８−Ｂ８：
重鎖
2021527110.tif 000013
核酸配列
ＣＡＧＡＴＣＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＴＧＡＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＴＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＡＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＴＧＡＣＴＡＣＴＡＴＡＴＡＣＡＣＴＧＧＡＴＧＡＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＡＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＡＴＧＧＡＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＡＡＧＣＧＧＴＡＡＴＡＣＴＡＡＧＴＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＴＴＧＡＣＴＧＴＡＧＡＣＡＣＡＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＡＣＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＡＧＧＡＧＧＧＡＡＧＡＴＴＣＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＴＣＡＣＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
軽鎖
2021527110.tif 000014
核酸配列
ＧＡＣＡＴＴＧＴＧＡＴＧＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＡＧＣＴＧＴＧＴＣＡＧＴＴＧＧＡＧＡＧＣＡＧＧＴＴＡＣＴＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＣＣＴＴＴＴＡＴＡＴＡＧＴＡＧＣＡＡＴＣＡＡＡＡＧＡＡＣＴＡＣＴＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＴＣＴＣＣＴＡＡＡＴＴＧＴＴＧＡＴＴＴＡＣＴＧＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＡＧＧＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＧＴＧＡＧＧＧＣＴＧＡＡＧＡＣＣＴＧＧＣＡＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＡＴＴＴＴＡＴＡＧＣＴＡＴＣＣＧＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＡ
クローン１２Ｇ８−Ａ９：
重鎖
2021527110.tif 000015
核酸配列
ＣＡＧＡＴＣＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＡＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＴＣＴＴＣＡＣＴＧＡＣＴＡＣＴＡＴＡＴＡＣＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＡＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＡＴＧＧＡＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＡＡＧＣＧＧＴＡＡＴＡＣＴＡＡＧＴＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＴＴＧＡＣＴＧＴＡＧＡＣＡＣＡＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＡＧＧＡＧＧＧＡＧＧＡＴＴＣＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＴＧＧＣＡＣＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
軽鎖
2021527110.tif 000016
核酸配列
ＧＡＣＡＴＴＧＴＧＡＴＧＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＡＧＣＴＧＴＧＴＣＡＧＴＴＧＧＡＧＡＧＡＡＧＧＴＴＡＣＴＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＣＣＴＴＴＴＡＴＡＴＡＧＴＡＧＣＡＡＴＣＡＡＡＡＧＡＡＣＴＡＣＴＴＧＡＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＴＣＴＣＣＴＡＡＡＣＴＧＣＴＧＡＴＴＴＡＣＴＧＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＡＧＧＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＧＴＧＡＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＣＣＴＧＧＣＡＧＴＴＴＡＴＣＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＡＴＡＴＴＡＴＡＧＣＴＡＴＣＣＧＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＡ
クローン１４Ｇ６−Ｃ１：
重鎖
2021527110.tif 000017
核酸配列
ＣＡＡＡＴＣＣＡＧＣＴＡＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＡＧＡＣＴＧＧＧＧＣＴＴＣＡＧＴＧＡＧＧＡＴＡＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＣＴＧＡＣＴＣＣＴＡＴＡＴＡＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＡＣＴＴＣＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＡＴＧＧＡＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＡＡＧＣＧＧＴＡＡＴＡＣＴＡＡＧＴＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＡＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＴＴＧＡＣＴＧＴＡＧＡＣＡＣＡＴＣＴＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＴＣＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＴＴＴＴＴＣＴＧＴＡＣＡＡＧＡＡＧＧＡＧＧＧＡＧＧＡＴＴＣＴＴＴＴＧＡＣＴＡＴＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
軽鎖
2021527110.tif 000018
核酸配列
ＧＡＣＡＴＴＧＴＧＡＴＧＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＡＧＣＴＧＴＧＴＣＡＧＴＴＧＧＡＧＡＧＡＡＧＧＴＴＡＣＴＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＣＣＴＴＴＴＡＴＡＴＡＧＴＡＧＣＡＡＴＣＡＡＡＡＧＡＡＣＴＡＣＴＴＧＡＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＴＣＴＣＣＴＡＡＡＣＴＧＣＴＧＡＴＴＴＡＣＴＧＧＧＣＡＴＣＣＡＴＴＡＧＧＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＧＴＧＡＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＣＣＴＧＧＣＡＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＡＴＡＴＴＡＴＡＧＣＴＡＴＣＣＧＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＡ
クローン１５Ｇ６−Ｅ８：
重鎖
2021527110.tif 000019
核酸配列
ＣＡＧＡＴＣＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＡＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＴＧＡＣＴＡＣＴＡＴＡＴＡＣＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＡＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＡＴＧＧＡＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＡＡＧＣＧＧＴＡＡＴＡＣＴＡＡＧＴＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＴＴＧＡＣＴＧＴＡＧＡＣＡＣＡＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＡＧＴＣＴＡＣＡＴＧＣＡＧＣＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＡＴＴＧＣＴＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＡＡＧＡＡＧＧＡＧＧＧＡＧＧＡＴＴＣＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
軽鎖
2021527110.tif 000020
核酸配列
ＧＡＣＡＴＴＧＴＧＡＴＧＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＡＡＣＴＧＴＧＴＣＡＧＴＴＧＧＡＧＡＧＡＡＧＧＴＴＡＣＴＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＣＣＴＴＴＴＡＴＡＴＡＧＴＡＧＣＡＡＴＣＡＡＡＡＧＡＡＣＴＡＴＴＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＧＧＡＡＧＣＣＡＧＧＧＣＡＧＴＣＴＣＣＴＡＡＡＣＴＧＴＴＧＡＴＴＴＡＣＴＧＧＧＣＡＴＣＣＡＡＴＡＧＧＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＣＧＡＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＧＴＧＡＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＣＣＴＧＧＣＡＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＡＴＴＴＴＡＴＡＧＧＴＡＴＣＣＧＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＡ
クローン１５Ａ７−Ａ１０：
重鎖
2021527110.tif 000021
核酸配列
ＣＡＧＡＴＣＣＴＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＴＧＡＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＴＴＣＡＧＴＧＡＡＧＡＴＴＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＧＧＧＡＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＴＧＡＣＡＡＣＴＡＴＡＴＡＣＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＡＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＡＴＧＧＡＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＡＡＧＴＧＧＴＡＡＴＧＣＴＡＡＧＴＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＡＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＴＴＧＡＣＴＧＴＡＧＡＣＡＧＡＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＡＣＣＣＴＡＣＡＴＧＣＡＡＣＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＡＣＡＡＧＡＡＧＧＡＧＧＧＡＧＧＡＴＴＣＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
軽鎖
2021527110.tif 000022
核酸配列
ＧＡＣＡＴＴＧＴＧＡＴＧＴＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＡＧＣＴＧＴＧＴＣＡＧＴＴＧＧＡＧＡＧＡＡＧＧＴＴＡＣＴＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＣＣＴＴＴＴＡＴＡＴＡＧＴＡＧＣＡＡＴＣＡＡＡＡＧＡＡＣＴＡＣＴＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＴＣＴＣＣＴＡＡＡＣＴＧＣＴＧＡＴＴＴＡＣＴＧＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＡＧＧＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＣＡＣＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＧＴＧＡＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＣＣＴＧＧＣＡＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＡＴＴＴＴＡＴＡＧＧＴＡＴＣＣＧＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＡ
【０２４９】
７．キメラ抗体の構築と発現
重鎖及び軽鎖の可変領域配列断片を増幅し、ＧｉｂｓｏｎＡｓｓｅｍｂｌｙを介して、完全な抗体の重鎖及び軽鎖を発現させる対応するプラスミドベクターに挿入し、ここで、ヒト重鎖定常領域を含むベクターに重鎖可変領域をクローニングすることにより、哺乳動物細胞に完全なＩｇＧ１重鎖を発現させることができる。同様に、ヒト軽鎖定常領域を含むベクターに軽鎖可変領域をクローニングすることにより、哺乳動物細胞に完全なＩｇＧｋａｐｐａ軽鎖を発現させることができる。配列が正しかったプラスミドは、哺乳動物細胞ＨＥＫ２９３．６ＥにＣＤ４７候補抗体を瞬時に発現させ、５〜７日後に細胞上清を収集し、濾過して精製した。ＰｒｏｔｅｉｎＡクロマトグラフィーを用いてＩｇＧを精製し、５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）と２５０ｍＭのＮａＣｌで洗浄し、結合したＩｇＧを０．１ＭのＧｌｙｃｉｎｅ−ＨＣｌ（ｐＨ３．０）で溶出した。濃縮管（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いてタンパク質を限外濾過により濃縮し、ＰＢＳに液交換し、ＩｇＧの濃度を測定した。
【０２５０】
キメラ抗体のＣＤ４７への結合及び遮断
組換えで発現されるキメラ抗体に対して、ＥＬＩＳＡ及びＦＡＣＳによりそれぞれ抗原と細胞レベルでヒトＣＤ４７分子結合及びＣＤ４７−ＳＩＲＰα遮断実験を行った。
【０２５１】
組換えＣＤ４７抗原を用いてキメラ抗体のＣＤ４７への結合を検出
０．０５Ｍの重炭酸塩緩衝液（ｐＨ９．０）を用いて１μｇ／ｍｌのｈＣＤ４７抗原を調製し、９６ウェルマイクロタイタープレートにウェルあたり１００μｌ加え、４℃で一晩インキュベートした。翌日ＰＢＳで３回洗浄し、２００μｌの２％脱脂粉乳／ＰＢＳを用いて室温で２時間ブロッキングし、ＰＢＳで３回洗浄し、等比希釈された抗体を５０μｌ加え、室温で１時間インキュベートした後に、ＰＢＳＴとＰＢＳで３回洗浄した。第２の抗体抗ｍｏｕｓｅ  ＩｇＧ−Ｆｃ−ＨＲＰを加えて１時間インキュベートし、３回繰り返し洗浄して、発色液（ＴＭＢ溶液，Ｓｉｇｍａ，品番：Ｔ２８８５）を５０μｌ加え、３７℃で５分間放置した後、直ちに２Ｍの濃硫酸溶液を５０μｌ加えて反応を終了させ、直ちにマイクロプレートリーダーに入れてＯＤ４５０値を読み取った（図６−１）。
【０２５２】
組換えＣＤ４７抗原を用いてＣＤ４７−ＳＩＲＰα結合に対するキメラ抗体の阻害作用を検出
１μｇ／ｍｌの組換えタンパク質ｈＣＤ４７を一晩被覆し、翌日ＰＢＳで３回洗浄して、２％脱脂粉乳／ＰＢＳ２００μｌを用いて室温で２時間ブロッキングし、ＰＢＳで３回洗浄し、先に等比希釈された異なる濃度のＣＤ４７キメラ抗体を５０μｌ加えた。次にビオチン化ＳＩＲＰα−Ｆｃ融合タンパク質を５０μｌ加え、それぞれ室温で１時間インキュベートした後にＰＢＳＴとＰＢＳで３回繰り返し洗浄して、第２の抗体（ＳＡ−ＨＲＰ，Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，品番：０１６−０３０−０８４）を加え、１時間インキュベートした。３回繰り返し洗浄して、発色液を５０μｌ加え、３７℃で５分間放置した後、直ちに２Ｍの濃硫酸溶液を５０μｌ加えて反応を終了させ、直ちにマイクロプレートリーダーに入れてＯＤ４５０値を読み取った（図６−２）。
【０２５３】
細胞レベルでのＣＤ４７に結合するキメラ抗体の生物学的活性を検出
ｈＣＤ４７を発現させる腫瘍細胞ＣＣＲＦ−ＣＥＭを選択し、９６ウェルＵ底プレートにウェルあたり５×１０４個の細胞を播き、等比希釈された異なる濃度のＣＤ４７キメラ抗体を５０μｌ加えた。４℃で６０分間インキュベートした後に、０．５％ＢＳＡ／ＰＢＳで余分な第１の抗体を洗い流し、次に第２の抗体抗ｍｏｕｓｅ  ＩｇＧＦｃ−ＡＦ６４７溶液を５０μｌ加えた。４℃で４５分間インキュベートした後に、０．５％ＢＳＡ／ＰＢＳで余分な第２の抗体を洗い流し、最後に１μｇ／ｍｌの蛍光色素ＰＩを含有するＰＢＳ溶液６０μｌを用いて細胞を再懸濁させ、直ちにフローサイトメーターにより検出した（図６−３）。
【０２５４】
細胞レベルでのＣＤ４７−ＳＩＲＰα結合に対するキメラ抗体の阻害効果の検出
ＣＣＲＦ−ＣＥＭを９６ウェルＵ底プレートにウェルあたり５×１０４個の細胞を播き、等比希釈された異なる濃度のＣＤ４７キメラ抗体を５０μｌ加え、４℃で３０分間インキュベートした後に、１μｇ／ｍｌのビオチン化ＳＩＲＰα−Ｆｃ融合タンパク質溶液を５０μｌ加え、４℃で３０分間インキュベートした後に、０．５％ＢＳＡ／ＰＢＳで余分な第１の抗体を洗い流し、次に第２の抗体ＳＡ−ＰＥ溶液を５０μｌ加え、最後に１μｇ／ｍｌの蛍光色素ＰＩを含有するＰＢＳ溶液６０μｌを用いて細胞を再懸濁させ、直ちにフローサイトメーターにより検出した（図６−４）。実験結果は、構築されたヒト−マウスキメラ抗体が抗原と細胞の両方のＣＤ４７に結合できるとともに、ＣＤ４７−ＳＩＲＰα受容体及びリガンドの結合を競合的に阻害する生物学的活性を有することを示している。
【０２５５】
８．抗ＣＤ４７モノクローナル抗体によるカニクイザルリンパ球の認識
新鮮なサルの血液を４ｍｌ収集して５０ｍｌの遠心管に入れ、赤血球溶解液を１０ｍｌ加え、室温で１０分間静置し、１２００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。ＰＢＳを２０ｍｌ加えて２回洗浄し、２回目の洗浄前に細胞を数え、２ｘ１０５個の細胞／管で細胞の染色を準備した。１２００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、１００μｇ／ｍｌのマウスＩｇＧで５〜１０分間ブロッキングし、異なる濃度の抗体を加え、氷上で６０分間インキュベートした。２回洗浄して余分な第１の抗体を洗い流し、第２の抗体（抗ｈｕｍａｎ  ＩｇＧＦｃ−ＡＦ６４７，Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，品番：１０９−６０６−１７０）を加え、氷上で４５分間インキュベートし、２回洗浄して余分な第２の抗体を洗い流し、最後に１μｇ／ｍｌのＰＩ／ＰＢＳで細胞を再懸濁させ、フローサイトメーターにより検出した。結果を図７に示す。
【０２５６】
９．抗ＣＤ４７抗体によって媒介される細胞貪食作用
Ｆｉｃｏｌｌ（ＧＥ  ｈｅａｌｔｈｅａｒｅ，品番：１７−１４４０−０３）を用いて新鮮なヒト血液からＰＢＭＣ細胞を分離し、ヒトの洗浄されたＰＢＭＣ細胞の上清を捨て、ＭＡＣＳ  Ｂｕｆｆｅｒを用いて細胞（１ｘ１０７個の細胞／８０μＬ）を再懸濁させ、ＣＤ１４  ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ  ｈｕｍａｎ−ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ（１０＾７個の細胞／２０μＬ）（ＭＡＣＳ，品番：１３００９７０５２）を加え、選別磁気スタンドにより非単核細胞を溶出してから、最後にＭＡＣＳ  Ｂｕｆｆｅｒで単核細胞を溶出し、ＲＰＭＩ１６４０培地（４０ｎｇ／ｍｌのＣＳＦ−１を含有する）で培養して誘導しマクロファージとした。
【０２５７】
１μＭのＣＦＳＥで標識されたＣＣＲＦ−ＣＥＭ細胞をＣＤ４７陽性標的細胞として使用し、１×１０５個／ウェルで９６ウェルプレートに５０μｌ接種し、次に最終濃度の４倍に希釈した抗体を５０μｌ加えた。そして密度が２．５×１０５個／ｍｌであり、ＣＳＦ１で７日間誘導され成熟したマクロファージを１００μｌ加え、マクロファージ：ＣＣＲＦ−ＣＥＭ＝１：４とした。３７℃のインキュベーターで４時間インキュベートし、最後にフローサイトメーターにより収集された細胞を検出した。結果を図８に示す。
【０２５８】
貪食率％＝貪食された細胞の数/(貪食された細胞の数＋貪食されなかった細胞の数)×１００％
【０２５９】
１０．赤血球凝集試験
被験抗体をＰＢＳ溶液で倍加希釈して、濃度を１０μｇ／ｍｌとし、９６ウェルプレートに異なる希釈倍率の抗体を５０μｌ加え、更に密度が１ｘ１０８個／ｍｌの新鮮な赤血球を５０μｌ加え、室温で数分間静置した後、肉眼で見える凝集粒子が一部の反応ウェルに現れた。顕著な凝集現象が現れていない反応ウェルを２時間放置した後、顕微鏡で赤血球の凝集があるかどうかを確認した。結果を図９に示す。
【０２６０】
１１．抗体のヒト化
マウスモノクローナル抗体１５Ｇ６のヒト化は、典型的なＣＤＲ移植ポリシーを参照して行った。すなわち、マウス抗１５Ｇ６の軽、重鎖可変領域ＣＤＲ配列を、相同性の高いヒト生殖系配列ＩＧＫＶ４−１＊０１とＩＧＨＶ１−３＊０１に移植し、フレームワーク領域４は、マウス抗体との相同性が最も高いＩＧＫＪ１＊０１とＩＧＨＪ４＊０１を選択し、その後、同時にコンピュータを用いて相同性モデリングを行い、逆突然変異部位を設計した。
【０２６１】
軽、重鎖誘導体に対してそれぞれ遺伝子合成を行い（蘇州泓迅生物科技公司、蘇州金唯智生物科技公司）、抗体ｋａｐｐａ鎖定常領域又はヒトＩｇＧ１定常領域を含有するベクターにクローニングし、プラスミドをペアリングした後にＨＥＫ２９３．６Ｅ細胞をトランスフェクトし、５〜７日間発現させ、上清を取ってＰｒｏｔｅｉｎＡカラム精製を行った。
【０２６２】
ヒト化抗体の重鎖／軽鎖可変領域配列は以下のとおりである。
【０２６３】
ＶＨ−ｖ１：
2021527110.tif 000023
核酸配列
ＣＡＧＡＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＣＧＣＣＧＡＡＧＴＧＡＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＧＣＣＴＣＴＧＴＧＡＡＧＧＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＡＧＣＧＧＣＴＡＣＡＣＡＴＴＣＡＣＣＧＡＣＴＡＣＴＡＣＡＴＣＣＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＡＣＴＴＧＡＡＴＧＧＡＴＧＧＧＣＴＧＧＡＴＣＴＡＣＣＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＴＡＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＣＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＣＡＡＧＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＧＴＧＴＡＣＡＴＧＧＡＡＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＡＧＣＧＡＣＧＡＴＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＣＡＧＣＴＴＣＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＡＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＴＡＧＣＴＣＴ
ＶＨ−ｖ２：
2021527110.tif 000024
核酸配列
ＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＴＣＡＧＴＣＴＧＧＣＧＣＣＧＡＡＧＴＧＡＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＧＣＣＴＣＴＧＴＧＡＡＧＧＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＡＧＣＧＧＣＴＡＣＡＣＡＴＴＣＡＣＣＧＡＣＴＡＣＴＡＣＡＴＣＣＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＡＣＴＴＧＡＡＴＧＧＡＴＧＧＧＣＴＧＧＡＴＣＴＡＣＣＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＴＡＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＣＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＣＡＡＧＣＡＣＣＧＴＧＴＡＣＡＴＧＧＡＡＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＡＧＣＧＡＣＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＣＡＧＣＴＴＣＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＡＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＴＡＧＣＴＣＴ
ＶＨ−ｖ３：
2021527110.tif 000025
核酸配列
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ＶＨ−ｖ４：
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核酸配列
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ＶＨ−ｖ５：
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核酸配列
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ＶＨ−ｖ６：
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核酸配列
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ＶＨ−ｖ７：
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核酸配列
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ＶＨ−ｖ８：
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核酸配列
ＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＴＣＡＧＴＣＴＧＧＣＧＣＣＧＡＡＧＴＧＡＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＧＣＣＴＣＴＧＴＧＡＡＧＧＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＡＧＣＧＧＣＴＡＣＡＣＡＴＴＣＡＣＣＧＡＣＴＡＣＴＡＣＡＴＣＣＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＡＣＴＴＧＡＡＴＧＧＡＴＧＧＧＣＴＧＧＡＴＣＴＡＣＣＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＴＡＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＣＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＣＡＡＧＣＡＣＣＧＴＧＴＡＣＡＴＧＧＡＡＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＡＧＣＧＡＣＧＡＣＡＴＴＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＣＡＧＣＴＴＣＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＡＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＴＡＧＣＴＣＴ
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核酸配列
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ＶＨ−ｖ１０：
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核酸配列
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ＶＨ−ｖ１１：
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核酸配列
ＣＡＧＡＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＣＧＣＣＧＡＡＣＴＧＡＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＧＣＣＴＣＴＧＴＧＡＡＧＧＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＡＧＣＧＧＣＴＡＣＡＣＡＴＴＣＡＣＣＧＡＣＴＡＣＴＡＣＡＴＣＣＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＡＣＴＴＧＡＡＴＧＧＡＴＧＧＧＣＴＧＧＡＴＣＴＡＣＣＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＴＡＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＣＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＣＡＡＧＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＧＴＧＴＡＣＡＴＧＧＡＡＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＡＧＣＧＡＣＧＡＴＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＣＡＧＣＴＴＣＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＡＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＴＡＧＣＴＣＴ
Ｖｋ−ｖ１：
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核酸配列
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核酸配列
ＧＡＣＡＴＣＧＴＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＴＧＡＴＡＧＣＣＴＧＧＣＣＧＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＡＧＡＧＡＧＡＧＣＣＡＣＣＡＴＣＡＡＣＴＧＣＡＡＧＡＧＣＡＧＣＣＡＧＡＧＣＣＴＧＣＴＧＴＡＣＴＣＣＡＧＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＡＡＣＴＡＣＣＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＣＣＡＧＣＣＴＣＣＴＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＴＧＧＧＣＣＡＧＣＡＡＣＡＧＡＧＡＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＧＡＴＡＧＡＴＴＣＡＧＣＧＧＣＴＣＴＧＧＡＴＣＴＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＡＴＣＡＧＣＴＣＣＣＴＧＣＡＧＧＣＣＧＡＧＧＡＴＧＴＧＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＴＣＴＡＣＡＧＡＴＡＣＣＣＴＣＴＧＡＣＣＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧ
Ｖｋ−ｖ３：
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核酸配列
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Ｖｋ−ｖ４：
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核酸配列
ＧＡＣＡＴＣＧＴＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＴＧＡＴＡＧＣＣＴＧＧＣＣＧＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＡＧＡＧＡＧＡＧＣＣＡＣＣＡＴＣＡＡＣＴＧＣＡＡＧＡＧＣＡＧＣＣＡＧＡＧＣＣＴＧＣＴＧＴＡＣＴＣＣＡＧＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＡＡＣＴＡＣＣＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＣＣＡＧＣＣＴＣＣＴＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＴＧＧＧＣＣＡＧＣＡＡＣＡＧＡＧＡＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＧＡＴＡＧＡＴＴＣＡＧＣＧＧＣＴＣＴＧＧＡＴＣＴＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＡＴＣＡＧＣＴＣＣＣＴＧＣＡＧＧＣＣＧＡＧＧＡＴＧＴＧＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＴＣＴＡＣＡＧＡＴＡＣＣＣＴＣＴＧＡＣＣＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧ
Ｖｋ−ｖ５：
2021527110.tif 000038
核酸配列
ＧＡＣＡＴＣＧＴＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＴＧＡＴＡＧＣＣＴＧＧＣＣＧＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＡＧＡＧＡＧＡＧＣＣＡＣＣＡＴＣＡＡＣＴＧＣＡＡＧＡＧＣＡＧＣＣＡＧＡＧＣＣＴＧＣＴＧＴＡＣＴＣＣＡＧＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＡＡＣＴＡＣＣＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＣＣＡＧＣＣＴＣＣＴＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＴＧＧＧＣＣＡＧＣＡＡＣＡＧＡＧＡＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＧＡＴＡＧＡＴＴＣＡＧＣＧＧＣＴＣＴＧＧＡＴＣＴＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＡＴＣＡＧＣＴＣＣＣＴＧＣＡＧＧＣＣＧＡＧＧＡＴＧＴＧＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＴＣＴＡＣＡＧＡＴＡＣＣＣＴＣＴＧＡＣＣＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＣＴＧＡＡＧ
【０２６４】
１２．ヒト化ｈ１５Ｇ６抗体のＣＤ４７への結合及びＣＤ４７−ＳＩＲＰαへの遮断作用
全ての重鎖と軽鎖を真核発現ベクターに構築し、全ての重鎖と軽鎖を互いにペアリングし、瞬時に発現した抗体を用いて親和性検出、受容体リガンド遮断実験を行った結果、ヒト化した抗体のＣＤ４７に対する親和性と受容体リガンドに対する遮断能は顕著に変化していないことが示された。さらに赤血球凝集試験を行った結果、図１０に示すとおり、凝血現象が現れなかった。
【０２６５】
１３．ヒト化ｈ１５Ｇ６抗体の親和性測定
Ｆｏｒｔｂｉｏ、ＥＬＩＳＡ及びＦＡＣＳにより抗ＣＤ４７モノクローナル抗体とヒトＣＤ４７分子の親和性を測定した。
【０２６６】
Ｆｏｒｔｂｉｏによる親和性測定
ＰｒｏｔｅｉｎＡプローブをそれぞれ５μｇ／ｍｌの被検抗体で被覆し、組換えタンパク質ｈＣＤ４７を段階希釈し、５μｇ／ｍｌ、２．５μｇ／ｍｌ、１．２５μｇ／ｍｌ、０．６２５μｇ／ｍｌ、０μｇ／ｍｌの５つの濃度に設定して、Ｆｏｒｔｂｉｏ機器により試料検出を行った。結果を図１１に示す。
【０２６７】
さらに、ＥＬＩＳＡ及びＦＡＣＳ法を用いて、抗原レベル及び細胞レベルで、ヒト化抗体がヒトＣＤ４７分子に結合できるとともに、受容体リガンドＣＤ４７−ＳＩＲＰαが互いに結合することを阻害する活性を有することを検出した。結果を図１２に示す。
【０２６８】
１４．ヒト化ｈ１５Ｇ６−ＩｇＧ４抗体によって媒介される細胞貪食（ＡＤＣＰ）
Ｆｉｃｏｌｌ（ＧＥ  ｈｅａｌｔｈｅａｒｅ，品番：１７−１４４０−０３）を用いて新鮮なヒト血液からＰＢＭＣ細胞を分離し、ヒトの洗浄されたＰＢＭＣ細胞の上清を捨て、ＭＡＣＳ  Ｂｕｆｆｅｒを用いて細胞（１０＾７個の細胞／８０μＬ）を再懸濁させ、ＣＤ１４  ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ  ｈｕｍａｎ−ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ（１０＾７個の細胞／２０μＬ）（ＭＡＣＳ，品番：１３００９７０５２）を加え、選別磁気スタンドにより非単核細胞を溶出してから、最後にＭＡＣＳ  Ｂｕｆｆｅｒで単核細胞を溶出し、ＲＰＭＩ１６４０培地（４０ｎｇ／ｍｌのＣＳＦ−１を含有する）で培養して誘導し、マクロファージとした。
【０２６９】
ヒト化ｈ１５Ｇ６の可変領域を、完全なヒトＩｇＧ４抗体の重鎖を発現させるプラスミドベクターに挿入することにより、哺乳動物細胞に発現させてｈ１５Ｇ６−ＩｇＧ４を得た。配列が正しかったプラスミドは、哺乳動物細胞ＨＥＫ２９３．６ＥにＣＤ４７候補抗体を瞬時に発現させ、５〜７日後に細胞上清を収集し、濾過して精製した。ＰｒｏｔｅｉｎＡクロマトグラフィーを用いてＩｇＧを精製し、５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）と２５０ｍＭのＮａＣｌで洗浄し、結合したＩｇＧを０．１ＭのＧｌｙｃｉｎｅ−ＨＣｌ（ｐＨ３．０）で溶出した。濃縮管（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いてタンパク質を限外濾過により濃縮し、ＰＢＳ溶液に液交換し、ＩｇＧの濃度を測定した。
【０２７０】
１μＭのＣＦＳＥで標識されたＣＣＲＦ−ＣＥＭ細胞を、ＣＤ４７陽性標的細胞として使用し、１×１０５個／ウェルで９６ウェルプレートに５０μｌ接種し、次に最終濃度の４倍に希釈したヒト化ｈ１５Ｇ６抗体（ＩｇＧ４）を５０μｌ加えた。そして密度が２．５×１０５個／ｍｌであり、ＣＳＦ−１で７日間誘導して成熟したマクロファージを１００μｌ加え、マクロファージ：ＣＣＲＦ−ＣＥＭ＝１：４とした。３７℃のインキュベーターで４時間インキュベートし、最後にフローサイトメーターにより収集された細胞を検出した。結果を図１３に示す。
【０２７１】
１５．ヒト化ｈ１５Ｇ６抗体とリツキシマブとの相乗効果
１μＭのＣＦＳＥで標識されたＤａｕｄｉ細胞を、ＣＤ４７＋標的細胞として使用し、１×１０５個／ウェルで９６ウェルプレートに５０μｌ接種し、次に最終濃度の４倍に希釈したヒト化ｈ１５Ｇ６−ＩｇＧ４抗体を５０μｌ加えた。そして密度が２．５×１０５個／ｍｌであり、ＣＳＦ−１で７日間誘導して成熟したマクロファージを１００μｌ加え、マクロファージ：Ｄａｕｄｉ＝１：４とした。３７℃のインキュベーターで４時間インキュベートし、最後にフローサイトメーターにより収集された細胞を検出した。結果を図１４に示す。
【０２７２】
貪食率％＝貪食された細胞の数/(貪食された細胞の数＋貪食されなかった細胞の数)×１００％
【０２７３】
１６．ヒト化ｈ１５Ｇ６抗体のＦｃ機能試験
抗体依存性細胞によって媒介される細胞毒性作用（ＡＤＣＣ）
適量のエフェクター細胞（ＮＫ−９２ＭＩ−ＣＤ１６）を用意し、２．５％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ１６４０培地を用いて細胞を密度４×１０６個／ｍｌに再懸濁させ、同様に、標的細胞（ＣＣＲＦ−ＣＥＭ）を密度４×１０５個／ｍｌに再懸濁させた。抗体の初期濃度を４０μｇ／ｍｌに設定し、次に１０倍等比希釈した。エフェクター細胞５０μｌ（２×１０５個／ウェル）を９６ウェルＵ底プレートに入れ、異なる希釈比率の抗体を２５μｌ加え、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターで３０分間インキュベートした。インキュベート完了後、標的細胞を２５μｌ（１×１０４個／ウェル）加え、１０００ｒｐｍで１分間遠心分離し、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターで４ｈインキュベートした。検出の３０分前に、ウェルの最も大きい標的細胞に溶解液（１０×）を２μｌ加え、そのまま培養し続けた。３０分後に、１０００ｒｐｍで３分間遠心分離し、細胞上清５０μｌを黒色のマイクロタイタープレートに入れ、等量のＬＤＨを用いて基質（ＣｙｔｏＴｏｘ−ＯＮＥ  Ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ  Ａｓｓａｙ，Ｐｒｏｍｅｇａ，品番：Ｇ７８９２）を検出し、軽く振とうして均一に混合した。１０分後に、２５μｌの停止溶液で停止し、１０ｓ振とうし、ｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ５６０ｎｍ、ｅｍｉｓｓｉｏｎ５９０ｎｍのＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ波長を選択して、化学発光を検出した。結果を図１５に示す。
【０２７４】
補体によって媒介される細胞毒性作用（ＣＤＣ）
標的細胞（ＣＣＲＦ−ＣＥＭ）を密度２×１０６個／ｍｌに再懸濁させた。抗体の初期濃度を３０μｇ／ｍｌに設定し、ＲＰＭＩ１６４０培地で抗体を１：３で等比希釈した。ＲＰＭＩ１６４０培地で３０％補体を調製した。細胞懸濁液５０μｌ（１×１０５個／ウェル）を９６ウェルプレートに入れ、異なる希釈濃度の抗体を５０μｌ加え、次に３０％に希釈した補体を５０μｌ加え、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターで２時間インキュベートした。ＲＰＭＩ培地（０．１％ＢＳＡを含有する）で４０％ＣＣＫ８を含有する検出溶液を調製し、細胞−抗体−補体を２時間インキュベートした後、各ウェルにＣＣＫ８溶液を５０μｌ加えて染色し、１０秒間振とうし、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターで４時間インキュベートした。インキュベート完了後、１０秒間振とうし、マイクロプレートリーダーを使用して、４５０ｎｍを検出波長とし、６３０ｎｍを基準波長としてＯＤ値を読み取った。結果を図１６に示す。
【０２７５】
１７．抗ＣＤ４７モノクローナル抗体の、ＣＤ４７ヒト化マウスにおける毒性試験
ＣＤ４７ヒト化マウスＣ５７ＢＬ／６−Ｃｄ４７ｔｍ１（ｈＣＤ４７）／Ｂｃｇｅｎ（バイオサイトジェン社，品番：Ｂ−ＣＭ−０２１）を用意し、抗体の腹腔内注射法（１０ｍｇ／ｋｇ体重）を用いて２回投与し、群ごとに３匹の被験マウスを設定した。１回目の投与後２、６、９、１３日目に被験マウスの血液を採取し、一般的血液検査を行い、７日目に２回目の投与を行い、９、１３、１８日目に被験マウスに一般的血液検査を行った。結果を図１７に示す。
【０２７６】
被験マウスの体重結果によると、１回目の投与後は３日目にマウスの体重が減少し始め、６日目にマウスの体重が回復したが、翌日２回目の投与を行ったところ、２回目の投与後３日目にはマウスの体重に明らかに変化はなく、その後１１日間にわたってマウスの体重は正常範囲内で安定していた。陽性対照群ｃｏｎｔｒｏｌ２では、ＣＤ４７抗体の１回目の注射後、３群のマウスはいずれも３日目に死亡し、残りのマウスは正常であった。
【０２７７】
一般的血液検査及び血液生化学検査結果は図１８に示すとおり、抗ＣＤ４７モノクローナル抗体の１回目の投与後、ブランク対照群と比較して被験群のマウスは末梢血赤血球数が減少したが、２回目の投与後、赤血球数はほぼ安定し、１週間内にほぼ正常に回復した。
【０２７８】
１８．ヒト化ＣＤ４７モノクローナル抗体の、ヒトＢｕｒｋｉｔｔリンパ腫Ｒａｊｉ細胞株皮下異種移植ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスモデルにおける抗腫瘍作用
１０％ウシ胎児血清を含有するＲＰＭＩ１６４０培養液にＲａｊｉ細胞を培養した。対数増殖期のＲａｊｉ細胞を収集し、ＰＢＳで適切な濃度に再懸濁させ、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス皮下腫瘍接種のためにｍａｔｒｉｇｅｌと１：１で混合した。雌マウスの右側に１×１０７個のＲａｊｉ細胞を皮下接種し、腫瘍の平均体積が８９．３９ｍｍ３になったとき、腫瘍の大きさに応じてランダムに群分けした。群ごとに６匹のマウスを設定し、治療群のマウスに対して１０ｍｇ／ｋｇの用量で毎週２回尾静脈注射し、計２週間投与して、腫瘍体積をモニタリングした。腫瘍体積の計算方法は、腫瘍体積（ｍｍ３）＝１／２×（ａ×ｂ２）（ただしａは長径、ｂは短径）である。
【０２７９】
その結果は図１９に示すとおり、投与後９日目に溶媒対照群のマウスは平均腫瘍体積が６４９．６７ｍｍ３に成長したが、治療群は腫瘍がいずれも完全に消失し、腫瘍体積が０ｍｍ３になり、相対腫瘍阻害率は１００％に達した。
【０２８０】
１９．ヒト化ＣＤ４７モノクローナル抗体の、ヒト卵巣癌ＳＫＯＶ−３細胞皮下異種移植ＮＰＧマウスモデルにおける抗腫瘍作用
１０％ウシ胎児血清を含有するＭｃＣｏｙ’ｓ５ａ培養液にＳＫＯＶ−３細胞を培養した。対数増殖期のＳＫ−ＯＶ−３細胞を収集し、ＰＢＳで適切な濃度に再懸濁させ、ＮＰＧマウス皮下腫瘍接種のためにｍａｔｒｉｇｅｌと１：１で混合した。雌マウスの右側に１×１０７個のＳＫＯＶ−３細胞を皮下接種した。腫瘍の平均体積が９３．７６ｍｍ３になったとき、腫瘍の大きさに応じてランダムに群分けした。群ごとに６匹のマウスを設定し、治療群のマウスに対して１０ｍｇ／ｋｇの用量で毎週３回尾静脈注射し、計４週間投与して、腫瘍体積をモニタリングした。腫瘍体積の計算方法は、腫瘍体積（ｍｍ３）＝１／２×（ａ×ｂ２）（ただしａは長径、ｂは短径）である。
【０２８１】
その結果は図２０に示すとおり、最終投与後２日目に、溶媒対照群のマウスは平均腫瘍体積が１９０．５３ｍｍ３になったが、治療群の腫瘍体積は１２０９．７４ｍｍ３であった。溶媒対照群と比較して、相対腫瘍抑制率は３６．５１％であり、顕著な腫瘍抑制効果を示した（ｐ値は０．０２１１）。
【０２８２】
２０．ヒト化ＣＤ４７モノクローナル抗体の、ヒト前骨髄球性白血病細胞ＨＬ−６０皮下異種移植ＮＰＧマウスモデルにおける抗腫瘍作用
１０％ウシ胎児血清を含有するＲＰＭＩ１６４０培養液にＨＬ−６０細胞を培養した。対数増殖期のＨＬ−６０細胞を収集し、ＰＢＳで適切な濃度に再懸濁させ、ＮＰＧマウス皮下腫瘍接種のためにｍａｔｒｉｇｅｌと１：１で混合した。雌マウスの右側に１×１０７個のＨＬ−６０細胞を皮下接種した。腫瘍の平均体積が１０７．９ｍｍ３になったとき、腫瘍の大きさに応じてランダムに群分けした。群ごとに６匹のマウスを設定し、治療群のマウスに対して３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇの用量で２週間投与した。１週目は３回、２週目は２回投与して、腫瘍体積をモニタリングした。腫瘍体積の計算方法は、腫瘍体積（ｍｍ３）＝１／２×（ａ×ｂ２）（ただしａは長径、ｂは短径）である。
【０２８３】
その結果は図２１に示すとおり、投与後１４日目に、溶媒対照群のマウスは平均腫瘍体積が１７３４．２２ｍｍ３になり、１０ｍｇ／ｋｇと３ｍｇ／ｋｇの治療群の平均腫瘍体積はそれぞれ０ｍｍ３と１０７．１３ｍｍ３であった。治療群は、１０ｍｇ／ｋｇと３ｍｇ／ｋｇの２つの用量でいずれも顕著な腫瘍阻害効果を示し、相対腫瘍阻害率ＴＧＩ（％）はそれぞれ１００％と９６．７８％であった。
【０２８４】
２１．ヒト化ＣＤ４７モノクローナル抗体の、ＣＤ４７が高度に発現した肺癌ＰＤＸマウスモデルにおける抗腫瘍作用
肺癌患者の腫瘍組織の異種移植担癌マウスモデルから腫瘍組織を取り、直径２〜３ｍｍの腫瘍塊に切り分け、ＮＰＧマウスの右前肩甲骨に皮下接種した。平均腫瘍体積が１０２．９７ｍｍ３になったとき、腫瘍の大きさに応じてランダムに群分けした。群ごとに６匹のマウスを設定し、治療群のマウスに対して１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇの用量で毎週２回尾静脈注射し、計３週間投与して、腫瘍体積をモニタリングした。腫瘍体積の計算方法は、腫瘍体積（ｍｍ３）＝１／２×（ａ×ｂ２）（ただし、ａは長径、ｂは短径）である。
【０２８５】
その結果は図２２に示すとおり、３ｍｇ／ｋｇの治療群は顕著な腫瘍阻害作用を示し、終点での相対腫瘍阻害率ＴＧＩ（％）が８８．６２％であった。１ｍｇ／ｋｇの治療群は、投与終了後も顕著な腫瘍阻害作用を示さず、終点での相対腫瘍阻害率ＴＧＩ（％）は１０．７１％であった。
【０２８６】
２２．繰り返し静脈注射することによりカニクイザルに投与されたヒト化ＣＤ４７モノクローナル抗体の毒性探索試験
本試験は、４匹のカニクイザル（雌雄半分ずつ）をランダムに２群に分け、それぞれ高用量群、低用量群とした。毎週１回投与し、計５回、すなわち、Ｄ１、Ｄ８、Ｄ１５、Ｄ２２及びＤ２９にそれぞれ投与した。各群の動物の投与量と濃度は以下の表に示すとおりである。静脈注射により、投与量は１０ｍｌ／ｋｇであった。
【０２８７】
【表１】
2021527110.tif 000039
【０２８８】
試験期間中、すべての動物に死亡や瀕死状態は見られなかった。２群の動物の臨床観察、体重、体温、心電図、凝血機能等は、いずれも投与に関連する指標に変化を示さなかった。試験期間中、２群の動物の血球数指標をそれぞれの薬物投与前の値と比較すると、主な変化は赤血球関連指標（ＲＢＣ、ＨＧＢ、ＨＣＴ）の減少であった。具体的には、初回投与（Ｄ１）の２〜４ｈ後、各治療群の動物はＲＢＣ、ＨＧＢ及びＨＣＴが顕著に減少し、その後Ｄ２〜Ｄ７は減少し続けた。２回目の投与（Ｄ８）の２〜４ｈ後、上記指標は低下し続け、最も低いレベルまで下がったが、その後回復し、それ以降は投与するたびに（３〜５回）いずれも上記指数の低下とその後の回復が見られた。試験期間中、ＨＧＢは、いずれも９０ｇ／Ｌ以下までは低下しなかった。投薬停止後、各群の動物のＲＢＣ、ＨＧＢ、ＨＣＴは顕著な回復傾向を示し、最終投与（Ｄ６０）の３１日後、試験品の低用量群と高用量群の動物のＲＢＣ、ＨＧＢ、ＨＣＴは、ほぼ回復した。
【０２８９】
２３．毒物動態試験
カニクイザルの後肢の静脈から約１ｍｌの血液を採取し、血液試料に抗凝血剤を加えず、採取後２ｈ以内に血清を分離した。血中濃度検出は、ヒトＣＤ４７抗原を被覆するＥＬＩＳＡ法を用い、二次検出抗体をＡｎｔｉ−Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ（Ｆｃ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ）−Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｐｒｏｄｕｃｅｄ  ｉｎ  ｇｏａｔとした。Ｗｉｎｎｏｎｌｉｎソフトウェアを使用して薬物動態パラメータを算出し、以下の表に示す。
【０２９０】
【表２】
2021527110.tif 000040
【図１Ａ】
2021527110.tif 000041
【図１Ｂ】
2021527110.tif 000042
【図２】
2021527110.tif 000043
【図３】
2021527110.tif 000044
【図４Ａ】
2021527110.tif 000045
【図４Ｂ】
2021527110.tif 000046
【図５】
2021527110.tif 000047
【図６Ａ】
2021527110.tif 000048
【図６Ｂ】
2021527110.tif 000049
【図６Ｃ】
2021527110.tif 000050
【図６Ｄ】
2021527110.tif 000051
【図７Ａ】
2021527110.tif 000052
【図７Ｂ】
2021527110.tif 000053
【図８】
2021527110.tif 000054
【図９Ａ】
2021527110.tif 000055
【図９Ｂ】
2021527110.tif 000056
【図１０Ａ】
2021527110.tif 000057
【図１０Ｂ】
2021527110.tif 000058
【図１１Ａ】
2021527110.tif 000059
【図１１Ｂ】
2021527110.tif 000060
【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１２Ｄ】
2021527110.tif 000064
【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
2021527110.tif 000067
【図１６】
2021527110.tif 000068
【図１７】
2021527110.tif 000069
【図１８】
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【図１９】
2021527110.tif 000071
【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和3年2月8日(2021.2.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６４】
本明細書において使用されるとき、抗体の「抗体断片」又は「抗原結合断片」は、全長未満であるが、抗原に結合する抗体の可変領域の一部（例えば、１つ以上のＣＤＲ及び／又は１つ以上の抗体結合部位）を少なくとも含有し、したがって、結合特異性及び全長抗体の特異的結合能の少なくとも一部を保持する全長抗体の任意の部分を指す。したがって、抗原結合断片は、抗体断片が由来する抗体と同一の抗原に結合する抗原結合部分を含有する抗体断片を指す。抗体断片は、全長抗体の酵素的処理によって産生された抗体誘導体と、合成的に、例えば、組換えによって産生された誘導体とを含む。抗体は、抗体断片を含む。抗体断片の例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ダイアボディ、Ｆｄ、及びＦｄ’断片、並びに修飾断片を含めたその他の断片を含むが、これらに限定されない（例えば、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ  ２０７：Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  （２００３）；Ｃｈａｐｔｅｒ  １；ｐ３−２５，Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖを参照）。上記断片は、例えば、ジスルフィド結合によって、及び／又はペプチドリンカーによって一緒に連結している複数の鎖を含むことができる。抗体断片は、一般的に、少なくとも又は約５０個のアミノ酸、通常、少なくとも又は約２００個のアミノ酸を含有する。抗原結合断片は、抗体フレームワーク中に挿入された場合に（対応する領域を置換することなどによって）、抗原に免疫特異的に結合する（すなわち、少なくとも又は少なくとも約１０７〜１０８Ｍ−１のＫａを示す）抗体をもたらす任意の抗体断片を含む。「機能的断片」又は「抗ＣＤ４７抗体の類似体」は、リガンドに結合するか又はシグナル伝達を開始する上記受容体の能力を抑制するか又は実質的に低下させることができる断片又は類似体である。本明細書において使用されるとき、機能的断片は、一般的に「抗体断片」と同義であり、そして抗体に関しては、リガンドに結合するか又はシグナル伝達を開始する上記受容体の能力を抑止するか又は実質的に低下させることができる、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ′）２などの断片を指すことができる。「Ｆｖ」断片は、非共有結合において、１つの重鎖可変ドメイン及び１つの軽鎖可変ドメインの二量体（ＶＨ−ＶＬ二量体）からなる。該立体配置では、各可変ドメインの３つのＣＤＲｓが相互作用して、インタクト抗体中のようにＶＨ−ＶＬ二量体の表面上で標的結合部位を決定する。全体として、上記６つのＣＤＲｓは、インタクト抗体に標的結合特異性を与える。しかしながら、単一の可変ドメイン（又は標的に特異的な３つのＣＤＲｓのみを含むＦｖの半分）でさえ、標的を認識し、結合する能力を有することができる。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９０】
本明細書において使用されるとき、抗体又はその抗原結合断片に関して、用語「特異的に結合する」又は用語「免疫特異的に結合する」は、本明細書において交換可能に使用され、抗体又は抗原結合断片の、抗体と抗原の抗体結合部位との間の非共有結合相互作用によって、同族抗原と１つ以上の非共有結合を形成する能力を指す。上記抗原は、単離された抗原であってもよく、腫瘍細胞中で存在してもよい。通常、抗原に免疫特異的に結合する（又は特異的に結合する）抗体は、約１×１０７Ｍ−１若しくは１ｘ１０８Ｍ−１若しくはそれ以上の親和性定数Ｋａ（又は１ｘ１０−７Ｍ若しくは１×１０−８Ｍ若しくはそれ以下の解離定数（Ｋｄ））で上記抗原に結合する。親和性定数は、抗体反応の標準的動力学的方法、例えば、免疫測定、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）（Ｒｉｃｈ  ａｎｄ  Ｍｙｓｚｋａ  （２０００）  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １１：５４；Ｅｎｇｌｅｂｉｅｎｎｅ  （１９９８）  Ａｎａｌｙｓｔ．  １２３：１５９９）、等温滴定熱量測定法（ＩＴＣ）又は本分野で周知のその他の動力学的相互作用測定によって測定することができる（例えば、Ｐａｕｌ，  ｅｄ．，  Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  ２ｎｄ  ｅｄ．，  Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ｐａｇｅｓ  ３３２−３３６  （１９８９）を参照。さらに、抗体の結合親和性を算出するための例示的ＳＰＲ及びＩＴＣ法の説明については、米国特許第７，２２９，６１９号を参照）。結合速度のリアルタイム検出及びモニタリングのための装置及び方法は周知であり、市販されている（例えば、ＢｉａＣｏｒｅ  ２０００，Ｂｉａｃｏｒｅ  ＡＢ，Ｕｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ  ａｎｄ  ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ；  Ｍａｌｍｑｖｉｓｔ  （２０００）  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  Ｔｒａｎｓ．  ２７：３３５を参照）。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２４１】
ヒトＳＩＲＰαｃＤＮＡプラスミド（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ，品番：ＨＧ１１６１２−Ｍ）をテンプレートとし、自己構築された、マウスＩｇＧ２ａＦｃ断片を有する真核発現プラスミドシステムにクローニングし、このプラスミドでＨＥＫ２９３．６Ｅ細胞を５〜７日間トランスフェクトした後、培地上清を収集し、ＰｒｏｔｅｉｎＡアフィニティーカラムにより精製して、組換えヒトＳＩＲＰα−Ｆｃ融合タンパク質を得た。１ｍｇのＳＩＲＰα−Ｆｃ融合タンパク質をＰＢＳで濃度１ｍｇ／ｍｌに調節し、ＥＺ−ＬｉｎｋＳｕｌｆｏ−ＮＨＳ−ＬＣ−ＬＣ−Ｂｉｏｔｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ，品番：２１３３８）試薬を１ｍｇ秤量し、１５０μＬのｄｄＨ２Ｏで速やかに溶解し、溶解したＳｕｌｆｏ−ＮＨＳ−ＬＣ−ＬＣ−Ｂｉｏｔｉｎ試薬１３．２μＬをタンパク質溶液に加え、上下を反転させて均一に混合した。氷上で２時間インキュベートし、反応終了後、タンパク質を１００００ダルトン（Ｄａ）の限外濾過管に移し、濃縮してＰＢＳに液交換し、ＯＤ２８０を測定して、ｒ−ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ（ＰｒｉｍｅＧｅｎｅ社，品番：１００５−０１）を用いてタンパク質のビオチン化効率を検出し、その後にタンパク質を分注して保存した。結果をそれぞれ図１と図２に示す。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２４３】
３．ハイブリドーマの製造
ヒトＣＤ４７組換えタンパク質又はｈＣＤ４７−ＣＨＯ−１Ｂ１０細胞を抗原として等量の免疫アジュバント（フロイントアジュバント）と混合し、群ごとに６匹の６〜８週齢の雌性Ｂａｌｂ／ｃマウスを免疫した。初回免疫の２週間後、追加免役を行った。３回の免疫後、眼窩から採血して血清の力価を検出した。融合する前に、１ｘ１０６個のｈＣＤ４７−ＣＨＯ安定形質転換細胞をショック免疫のために尾静脈注射した。３日後、頸椎脱臼によってマウスを殺し、マウスの脾臓と一部の末梢リンパ節をＤＭＥＭ培地で粉砕して遠心分離し、上清を捨て、脾臓細胞塊を軽く崩し、５ｍｌの赤血球溶解液を加え、５０ｓ溶解した後、ＤＭＥＭを４０ｍｌ加えて遠心分離し、赤血球を含まない脾臓細胞懸濁液を得た。適量のリンパ節及び脾臓細胞の懸濁液とＳＰ２／０を混合して、ＢＴＸエレクトロフュージョン装置を用いて細胞融合を行った。融合細胞を９６ウェルプレートに播種し、ＨＡＴを含むＤＭＥＭ完全培地中に、５％ＣＯ２、３７℃の条件下で培養した。約１週間でハイブリドーマ細胞の増殖状況を観察し、６０％以上に増殖したとき、抗体検査のために上清を取り出した。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２７３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２７３】
１６．ヒト化ｈ１５Ｇ６抗体のＦｃ機能試験
抗体依存性細胞によって媒介される細胞毒性作用（ＡＤＣＣ）
適量のエフェクター細胞（ＮＫ−９２ＭＩ−ＣＤ１６）を用意し、２．５％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ１６４０培地を用いて細胞を密度４×１０６個／ｍｌに再懸濁させ、同様に、標的細胞（ＣＣＲＦ−ＣＥＭ）を密度４×１０５個／ｍｌに再懸濁させた。抗体の初期濃度を４０μｇ／ｍｌに設定し、次に１０倍等比希釈した。エフェクター細胞５０μｌ（２×１０５個／ウェル）を９６ウェルＵ底プレートに入れ、異なる希釈比率の抗体を２５μｌ加え、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターで３０分間インキュベートした。インキュベート完了後、標的細胞を２５μｌ（１×１０４個／ウェル）加え、１０００ｒｐｍで１分間遠心分離し、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターで４ｈインキュベートした。検出の３０分前に、ウェルの最も大きい標的細胞に溶解液（１０×）を２μｌ加え、そのまま培養し続けた。３０分後に、１０００ｒｐｍで３分間遠心分離し、細胞上清５０μｌを黒色のマイクロタイタープレートに入れ、等量のＬＤＨを用いて基質（ＣｙｔｏＴｏｘ−ＯＮＥ  Ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ  Ａｓｓａｙ，Ｐｒｏｍｅｇａ，品番：Ｇ７８９２）を検出し、軽く振とうして均一に混合した。１０分後に、２５μｌの停止溶液で停止し、１０ｓ振とうし、ｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ５６０ｎｍ、ｅｍｉｓｓｉｏｎ５９０ｎｍのＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ波長を選択して、化学発光を検出した。結果を図１５に示す。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２７４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２７４】
補体によって媒介される細胞毒性作用（ＣＤＣ）
標的細胞（ＣＣＲＦ−ＣＥＭ）を密度２×１０６個／ｍｌに再懸濁させた。抗体の初期濃度を３０μｇ／ｍｌに設定し、ＲＰＭＩ１６４０培地で抗体を１：３で等比希釈した。ＲＰＭＩ１６４０培地で３０％補体を調製した。細胞懸濁液５０μｌ（１×１０５個／ウェル）を９６ウェルプレートに入れ、異なる希釈濃度の抗体を５０μｌ加え、次に３０％に希釈した補体を５０μｌ加え、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターで２時間インキュベートした。ＲＰＭＩ培地（０．１％ＢＳＡを含有する）で４０％ＣＣＫ８を含有する検出溶液を調製し、細胞−抗体−補体を２時間インキュベートした後、各ウェルにＣＣＫ８溶液を５０μｌ加えて染色し、１０秒間振とうし、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターで４時間インキュベートした。インキュベート完了後、１０秒間振とうし、マイクロプレートリーダーを使用して、４５０ｎｍを検出波長とし、６３０ｎｍを基準波長としてＯＤ値を読み取った。結果を図１６に示す。
【国際調査報告】
2021527110.tif 000075
2021527110.tif 000076
2021527110.tif 000077
2021527110.tif 000078
2021527110.tif 000079
2021527110.tif 000080
2021527110.tif 000081
2021527110.tif 000082