(57)【要約】  Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体、例えば、ＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）生物発光性複合体を選択的に阻害し得る化合物、ならびにその化合物を含む組成物及びキット、ならびに当該化合物を使用する方法が開示される。当該化合物は、式（Ｉ）（式中、Ｒ1〜Ｒ4ならびにｐ及びｑは、特許請求の範囲に定義されたとおりである）のものである。2021526530.tif 000200【選択図】なし
2021526530.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物、またはその塩：
2021526530.tif 000189
（式中：
Ｒ1は、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、もしくは複素環、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリールアルキル、またはヘテロシクリルアルキルであり、前記アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、及び複素環は、１つ以上のＲWで任意に置換されており、それぞれのＲWは、独立して、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＲA、−Ｃ1-10アルキレン−ＯＲA、−ＣＯ−ＲA、−Ｃ1-10アルキレン−ＣＯ−ＲA、−ＣＯ−ＯＲA、−Ｃ1-10アルキレン−ＣＯ−ＯＲA、−ＣＯ−ＮＨＲA、−Ｃ1-10アルキレン−ＣＯ−ＮＨＲA、−ＮＲBＲC、−Ｃ1-10アルキレン−ＮＲBＲC、−ＮＨ−ＣＯ−Ｃ1-4アルキル、−Ｃ1-10アルキレン−ＮＨ−ＣＯ−Ｃ1-4アルキル、フェニル、及び１、２、３、または４個のＲD基で置換されたフェニルからなる群から選択され；
Ｒ2は、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＲA、−Ｃ1-4アルキレン−ＯＲA、−ＣＯ−ＲA、−Ｃ1-4アルキレン−ＣＯ−ＲA、−ＣＯ−ＯＲA、−Ｃ1-4アルキレン−ＣＯ−ＯＲA、−ＣＯ−ＮＨＲA、−Ｃ1-4アルキレン−ＣＯ−ＮＨＲA、−ＮＲBＲC、−Ｃ1-4アルキレン−ＮＲBＲC、−ＮＨ−ＣＯ−Ｃ1-4アルキル、−Ｃ1-4アルキレン−ＮＨ−ＣＯ−Ｃ1-4アルキル、フェニル、１、２、３、または４個のＲD基で置換されたフェニル、−Ｃ≡Ｃ−ＲA、または−Ｃ≡Ｃ−Ｃ1-4アルキレン−ＯＲAであり、または２個のＲ2が、それらが結合している前記
2021526530.tif 000190
部分の前記炭素原子と一緒になって５または６員縮合環を形成し；
Ｒ3は、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＲA、−Ｃ1-4アルキレン−ＯＲA、−ＣＯ−ＲA、−ＣＯ−ＯＲA、または−ＣＯ−ＮＨＲAであり、または２個のＲ3が、それらが結合している前記
2021526530.tif 000191
部分の前記炭素原子と一緒になって５または６員縮合環を形成し；
Ｒ4は、ＨまたはＣ1-4アルキルであり；
ｐは、０、１、２、３、または４であり；
ｑは、０、１、２、３、または４であり；
それぞれの出現におけるＲAは、独立して、Ｈ、Ｃ1-4アルキル、またはＣ1-4ハロアルキルであり；
それぞれの出現におけるＲB及びＲCは、独立して、ＨまたはＣ1-4アルキルであり、またはＲB及びＲCは、それらが結合している前記Ｎ原子と一緒になって５または６員複素環を形成し；
それぞれの出現におけるＲDは、独立して、Ｃ1-4アルキル、−ＯＣ1-4アルキル、−ＣＮ、またはハロゲンであり、
前記化合物は、Ｎ−フェニル−２−（フェニルスルホンアミド）ベンズアミドではない）。
【請求項２】
Ｒ1は、アリールまたはヘテロアリールであり、前記アリール及びヘテロアリールは、１つ以上のＲWで任意に置換されている、請求項１に記載の化合物、またはその塩。
【請求項３】
Ｒ1は、１つ以上のＲWで任意に置換されたＣ6-20アリールである、請求項１〜２のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項４】
Ｒ1は、１つ以上のＲWで任意に置換された５〜１２員ヘテロアリールである、請求項１〜２のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項５】
ｐは、０、１、または２である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項６】
ｐは、１であり、Ｒ2は、Ｃ1-4アルキル、ハロゲン、Ｃ1-4ハロアルキル、−ＯＨ、−Ｃ1-4アルキレン−ＯＨ、−ＯＣ1-4アルキル、または−ＮＨ2である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項７】
ｑは、０または１である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項８】
ｑは、１であり、Ｒ3は、Ｃ1-4アルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＨ、または−ＯＣ1-4アルキルである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項９】
前記化合物は、式（Ｉ−ａ）：
2021526530.tif 000192
（式中：
Ｒ1は、Ｃ6-20アリールまたは５〜１２員ヘテロアリールであり、前記アリール及びヘテロアリールは、１つ以上のＲWで任意に置換されており；
ｐは、０、１、または２であり；
ｑは、０または１であり；
Ｒ3は、Ｃ1-4アルキル、ハロゲン、−ＣＮまたは−ＯＲAであり；
ＲAは、ＨまたはＣ1-4アルキルであり；
Ｒ2及びＲWは、請求項１で定義されたとおりである）
を有する、請求項１に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１０】
Ｒ1は、
2021526530.tif 000193
であり、それぞれが、１つ以上のＲWで任意に置換されている、請求項９に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１１】
Ｒ1は、非置換であり、またはＲ1は、１、２、または３個のＲWで置換されており、それぞれのＲWは、独立して、ハロゲン、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4ハロアルキル、またはフェニルである、請求項９〜１０のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１２】
Ｒ1は、
2021526530.tif 000194
である、請求項９のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１３】
ｐは、１または２であり、それぞれのＲ2は、独立して、Ｃ1-4アルキル、ハロゲン、Ｃ1-4ハロアルキル、−ＯＨ、−Ｃ1-4アルキレン−ＯＨ、−ＯＣ1-4アルキル、−ＮＨ2、フェニル、または−ＣＯ−ＯＣ1-4アルキルであり、または２つのＲ2が、それらが結合している前記
2021526530.tif 000195
部分と一緒になって
2021526530.tif 000196
を形成する、請求項９〜１２のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１４】
前記化合物は、式（Ｉ−ａ−１）：
2021526530.tif 000197
（式中：
Ｒ1は、
2021526530.tif 000198
であり、それぞれが、ハロゲン、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4ハロアルキル、またはフェニルで任意に置換されており；またはＲ1は、
2021526530.tif 000199
であり；
Ｒ2は、ハロゲン、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4ハロアルキル、−ＯＨ、−Ｃ1-4アルキレン−ＯＨ、−ＯＣ1-4アルキル、または−ＮＨ2である）
を有する、請求項９に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１５】
Ｎ−（３−シアノ−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（３−シアノチオフェン−２−イル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（２−シアノフェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−フェニルベンズアミド；
Ｎ−（３−シアノ−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（フェニルスルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（４−ホルミルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
メチル３−（４−（Ｎ−（２−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イルカルバモイル）フェニル）スルファモイル）フェニル）プロパノエート；
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（３−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（４−（３−ヒドロキシプロピル）フェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
２−（［１，１’−ビフェニル］−３−スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
メチル３−（Ｎ−（２−（ｐ−トリルカルバモイル）フェニル）スルファモイル）ベンゾエート；
３−（Ｎ−（２−（ｐ−トリルカルバモイル）フェニル）スルファモイル）安息香酸；
２−（（３−アセトアミドフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
２−（（３−アミノフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
２−（（３−（ヒドロキシメチル）フェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
２−（（３−（ブチルカルバモイル）フェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
２−（（３−ブロモフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
２−（（３−（ブチルアミノ）フェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
２−（（３−（ヘキシ−１−イン−１−イル）フェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
２−（（３−ヘキシルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
２−（（３−（３−ヒドロキシプロプ−１−イン−１−イル）フェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
２−（（３−（３−ヒドロキシプロピル）フェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
Ｎ−（ｐ−トリル）−２−（（４−（トリフルオロメチル）フェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
２−（（４−メトキシフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
２−（（４−ブロモフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
２−（［１，１’−ビフェニル］−４−スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
Ｎ−（ｐ−トリル）−２−（（３−（トリフルオロメチル）フェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（ｐ−トリル）−２−（（３−（トリフルオロメトキシ）フェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−シクロヘキシル−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ナフタレン−２−イル）ベンズアミド；
２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イル）ベンズアミド；
メチルトランス−４−（２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）シクロヘキサン−１−カルボキシレート；
トランス−４−（２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）シクロヘキサン−１−カルボン酸；
２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
エチル２−（４−（２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）フェニル）アセテート；
Ｎ−（３−イソプロピルフェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
エチル３−（２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）ベンゾエート；
２−（４−（２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）フェニル）酢酸；
３−（２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）安息香酸；
２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｍ−トリル）ベンズアミド；
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−３−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−２−ナフタミド；
２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（２−プロピルフェニル）ベンズアミド；
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−５−メチル−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（３−ブチルフェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−５−シアノ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（４−ブチルフェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン）−２−スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（４−ヘキシルフェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（４−オクチルフェニル）ベンズアミド；
メチル６−（４−（２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）フェニル）ヘキサノエート；
６−（４−（２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）フェニル）ヘキサン酸；
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（４−ブチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（４−（６−ヒドロキシヘキシル）フェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（４−ペンチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−５−ブチル−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（４−（４−ヒドロキシブチル）フェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（４−（４−ブロモブチル）フェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
５−メトキシ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−５−メトキシ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
４−メトキシ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−４−メトキシ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
２−（（３−メトキシフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（３−メトキシフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
５−ヒドロキシ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
２−（（３−ヒドロキシフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
２−（（３−ブトキシフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
Ｎ−（２−ブロモフェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（３−ブロモフェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（［１，１’−ビフェニル］−４−イル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（２−メトキシフェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（［１，１’−ビフェニル］−３−イル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（３−メトキシフェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（４−メトキシフェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
２−（（Ｎ−エチル−４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（４−メトキシフェニル）ベンズアミド；
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−４−フルオロ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−５−フルオロ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−ベンジル−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（４−メトキシベンジル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；及び
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物、またはその塩。
【請求項１６】
Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体を阻害する方法であって、前記方法は、前記生物発光性複合体を請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物と接触させることを含む、前記方法。
【請求項１７】
前記生物発光性複合体は、２つ以上の実質的に非発光性のペプチド及び／またはポリペプチド単位を含み、前記２つ以上の非発光性のペプチド及び／またはポリペプチド単位の会合は、セレンテラジン基質の存在下で検出可能な生物発光シグナルを生成する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記２つ以上の実質的に非発光性のペプチド及び／またはポリペプチド単位の会合は、前記セレンテラジン基質を結合させることが可能な生物発光性複合体を生成する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記生物発光性複合体は、
ａ）配列番号２に対して１００％未満かつ４０％を超える同一性を有するアミノ酸配列を含むペプチド；及び
ｂ）配列番号３と１００％未満かつ４０％を超える同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド
を含み、
前記生物発光性複合体は、セレンテラジン基質の存在下で検出可能な発光を呈する、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
前記生物発光性複合体は、配列番号５のアミノ酸配列を有するポリペプチド及び配列番号４または配列番号６のアミノ酸配列を有するペプチドを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
サンプル中のＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体の発光を調節するための方法であって、前記方法は、
（ａ）前記サンプルをセレンテラジン基質及び請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物と接触させることと、
（ｂ）前記サンプル中の発光を検出することと、
を含み、
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物は、前記生物発光性複合体からの前記発光の減少を引き起こす、前記方法。
【請求項２２】
サンプル中の第１の分子と第２の分子との間の相互作用または共局在化を検出するための方法であって、前記方法は、
（ａ）サンプルをセレンテラジン基質及び請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物と接触させることであって、前記サンプルは、
（ｉ）第１の融合物であって、前記第１の融合物は、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ペプチド及び第１の分子を含む、前記第１の融合物と、
（ｉｉ）第２の融合物であって、前記第２の融合物は、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ポリペプチド及び第２の分子を含み、前記非発光性ポリペプチドは、前記非発光性ペプチドと生物発光性複合体を形成することが可能である、前記第２の融合物と、
を含む、前記接触させることと、
（ｂ）前記サンプル中の発光を検出することと、
を含み、
前記発光の検出は、前記第１のタンパク質と前記第２のタンパク質との間の相互作用または共局在化を示す、前記方法。
【請求項２３】
サンプル中の第１の分子と第２の分子との間の相互作用または共局在化を検出するための方法であって、前記方法は、
（ａ）サンプルをセレンテラジン基質及び請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物と接触させることであって、前記サンプルは、
（ｉ）第１の融合物をコードする第１のポリヌクレオチドであって、前記第１の融合物は、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ペプチド及び第１の分子を含む、前記第１のポリヌクレオチドと、
（ｉｉ）第２の融合物をコードする第２のポリヌクレオチドであって、前記第２の融合物は、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ポリペプチド及び第２の分子を含み、前記非発光性ポリペプチドは、前記非発光性ペプチドと生物発光性複合体を形成することが可能である、前記第２のポリヌクレオチドと、
を含む、前記接触させることと、
（ｂ）前記サンプル中の発光を検出することと、
を含み、
前記発光の検出は、前記第１の分子と前記第２の分子との間の相互作用または共局在化を示す、前記方法。
【請求項２４】
サンプル中の第１の分子及び第２の分子の相互作用または共局在化を検出するための方法であって、前記方法は、
（ａ）サンプルをＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ポリペプチド、セレンテラジン基質、及び請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物と接触させることであって、前記サンプルは、
（ｉ）第１の融合物をコードする第１のポリヌクレオチドであって、前記第１の融合物は、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ペプチド及び第１の分子を含み、前記非発光性ペプチドは、前記非発光性ポリペプチドと生物発光性複合体を形成することが可能である、前記第１のポリヌクレオチドと、
（ｉｉ）第２の融合物をコードする第２のポリヌクレオチドであって、前記第２の融合物は、蛍光受容体分子及び第２の分子を含む、前記第２のポリヌクレオチドと、
を含む、前記接触させることと、
（ｂ）前記第１の分子及び前記第２の分子の相互作用または共局在化を示す前記サンプル中の生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）を検出することと、
を含む、前記方法。
【請求項２５】
サンプル中の第１の分子及び第２の分子の相互作用または共局在化を検出するための方法であって、前記方法は、
（ａ）サンプルをＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ペプチド、セレンテラジン基質、及び請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物と接触させることであって、前記サンプルは、
（ｉ）第１の融合物をコードする第１のポリヌクレオチドであって、前記第１の融合物は、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ポリペプチド及び第１の分子を含み、前記非発光性ポリペプチドは、前記非発光性ペプチドと生物発光性複合体を形成することが可能である、前記第１のポリヌクレオチドと、
（ｉｉ）第２の融合物をコードする第２のポリヌクレオチドであって、前記第２の融合物は、蛍光受容体分子及び第２の分子を含む、前記第２のポリヌクレオチドと、
を含む、前記接触させることと、
（ｂ）前記第１の分子及び前記第２の分子の相互作用または共局在化を示す前記サンプル中の生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）を検出することと、
を含む、前記方法。
【請求項２６】
サンプル中の分子の相互作用または共局在化を検出するための方法であって、前記方法は、
（ａ）サンプルをセレンテラジン基質及び請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物と接触させることであって、前記サンプルは、
（ｉ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ポリペプチド及び第１の分子を含む第１の融合物と、
（ｉｉ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ペプチド及び第２の分子を含む第２の融合物であって、前記非発光性ペプチドは、前記非発光性ポリペプチドと生物発光性複合体を形成することが可能である、前記第２の融合物と、
（ｉｉｉ）蛍光受容体分子及び第３の分子を含む第３の融合物と、
を含む、前記接触させることと、
（ｂ）前記サンプル中の前記第１の分子、第２の分子、及び第３の分子の間の相互作用または共局在化を示す前記サンプル中の生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）を検出することと、
を含む、前記方法。
【請求項２７】
サンプル中の対象となる分子を検出するための方法であって、前記方法は、
（ａ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ペプチドに融合した前記対象となる分子を含むサンプルを、
（ｉ）セレンテラジン基質；
（ｉｉ）請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物；及び
（ｉｉｉ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ポリペプチドであって、前記非発光性ポリペプチドは、前記非発光性ペプチドと生物発光性複合体を形成することが可能である、前記非発光性ポリペプチド；
と接触させることと、
（ｂ）前記サンプル中の発光を検出することと、
を含み、
発光の検出は、前記非発光性ペプチドと前記非発光性ポリペプチドとの間の生物発光性複合体の形成を示す、前記方法。
【請求項２８】
サンプル中の対象となる分子を検出するための方法であって、前記方法は、
（ａ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ポリペプチドに融合した前記対象となる分子を含むサンプルを、
（ｉ）セレンテラジン基質；
（ｉｉ）請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物；及び
（ｉｉｉ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ペプチドであって、前記非発光性ペプチドは、前記非発光性ポリペプチドと生物発光性複合体を形成することが可能である、前記非発光性ペプチド；
と接触させることと、
（ｂ）前記サンプル中の発光を検出することと、
を含み、
発光の検出は、前記非発光性ペプチドと前記非発光性ポリペプチドとの間の生物発光性複合体の形成を示す、前記方法。
【請求項２９】
サンプル中の対象となる分子を検出するための方法であって、前記方法は、
（ａ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ペプチドに融合した前記対象となる分子を含むサンプルを、
（ｉ）セレンテラジン基質；
（ｉｉ）請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物；及び
（ｉｉｉ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ポリペプチド及び蛍光部分を含む融合物であって、前記非発光性ポリペプチドは、前記非発光性ペプチドと生物発光性複合体を形成することが可能である、前記融合物；
と接触させることと、
（ｂ）前記分子の検出を示す前記サンプル中の生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）を検出することと、
を含む、前記方法。
【請求項３０】
サンプル中の対象となる分子を検出するための方法であって、前記方法は、
（ａ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ポリペプチドに融合した前記対象となる分子を含むサンプルを、
（ｉ）セレンテラジン基質；
（ｉｉ）請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物；及び
（ｉｉｉ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ペプチド及び蛍光部分を含む融合物であって、前記非発光性ペプチドは、前記非発光性ポリペプチドと生物発光性複合体を形成することが可能である、前記融合物；
と接触させることと、
（ｂ）前記分子の検出を示す前記サンプル中の生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）を検出することと、
を含む、前記方法。
【請求項３１】
前記サンプルを請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物と接触させる前に前記サンプルを前記セレンテラジン基質と接触させることを含む、請求項２１〜３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
前記第１の分子及び前記第２の分子が相互作用または共局在化するときに、前記非発光性ペプチド及び前記非発光性ポリペプチドは会合して、セレンテラジン基質の存在下で生物発光シグナルを生成することが可能な生物発光性複合体を形成する、請求項２１〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
前記サンプルは、細胞を含む、請求項２１〜３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
前記セレンテラジン基質は、セレンテラジン、セレンテラジン誘導体、セレンテラジンアナログ、プロ−セレンテラジン、またはキノリンマスクされたセレンテラジンである、請求項２１〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
ａ）前記非発光性ペプチドは、配列番号２と１００％未満かつ４０％を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
ｂ）前記非発光性ポリペプチドは、配列番号３と１００％未満かつ４０％を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２１〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）システムであって、
（ａ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ペプチド及び第１の分子を含む第１の融合物と、
（ｂ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ポリペプチド及び蛍光部分を含む第２の融合物であって、前記非発光性ポリペプチドは、前記非発光性ペプチドと生物発光性複合体を形成することが可能である、前記第２の融合物と、
（ｃ）セレンテラジン基質と、
（ｄ）請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物と、
を含む、前記生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）システム。
【請求項３７】
生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）システムであって、
（ａ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ポリペプチド及び第１の分子を含む第１の融合物と、
（ｂ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ペプチド及び蛍光部分を含む第２の融合物であって、前記非発光性ペプチドは、前記非発光性ポリペプチドと生物発光性複合体を形成することが可能である、前記第２の融合物と、
（ｃ）セレンテラジン基質と、
（ｄ）請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物と、
を含む、前記生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）システム。
【請求項３８】
生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）システムであって、
（ａ）第１の分子及びＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ペプチドを含む第１の融合物と、
（ｂ）第２の分子及び蛍光受容体分子を含む第２の融合物と、
（ｃ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの前記非発光性ペプチドと生物発光性複合体を形成することが可能なＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ポリペプチドと、
（ｄ）セレンテラジン基質と、
（ｅ）請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物と、
を含む、前記生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）システム。
【請求項３９】
生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）システムであって、
（ａ）第１の分子及びＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ポリペプチドを含む第１の融合物と、
（ｂ）第２の分子及び蛍光受容体分子を含む第２の融合物と、
（ｃ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの前記非発光性ポリペプチドと生物発光性複合体を形成することが可能なＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ペプチドと、
（ｄ）セレンテラジン基質と、
（ｅ）請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物と、
を含む、前記生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）システム。
【請求項４０】
ａ）前記非発光性ペプチドは、配列番号２と１００％未満かつ４０％を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
ｂ）前記非発光性ポリペプチドは、配列番号３と１００％未満かつ４０％を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
請求項３６〜３９のいずれか１項に記載の生物発光性共鳴エネルギー移動システム。
【請求項４１】
（ａ）請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物と、
（ｂ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体と、
を含む、キット。
【請求項４２】
前記Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体は、
（ａ）配列番号２と１００％未満かつ４０％を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含む非発光性ペプチドと、
（ｂ）配列番号３と１００％未満かつ４０％を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含む非発光性ポリペプチドと、
を含む、請求項４１に記載のキット。
【請求項４３】
（ａ）請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物と、
（ｂ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ペプチドをコードする第１のポリヌクレオチドと、
（ｃ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ポリペプチドをコードする第２のポリヌクレオチドであって、前記非発光性ポリペプチドは、前記非発光性ペプチドと生物発光性複合体を形成することが可能である、前記第２のポリヌクレオチドと、
を含む、キット。
【請求項４４】
前記非発光性ペプチドは、配列番号２と１００％未満かつ４０％を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記非発光性ポリペプチドは、配列番号３と１００％未満かつ４０％を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項４３に記載のキット。
【請求項４５】
セレンテラジン基質をさらに含む、請求項４１〜４４のいずれか１項に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年６月１日に出願された米国仮特許出願番号６２／６７９，２０５の優先権の利益を主張し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる
【０００２】
本開示は、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体、特にＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼからの２つ以上の非発光性ペプチド及び／またはポリペプチド単位の生物発光性複合体を阻害し得る化合物を対象とする。
【背景技術】
【０００３】
タンパク質断片相補（ＰＦＣ）または酵素断片相補（ＥＦＣ）システムは、共局在化及び／または分子間相互作用をモニターするための貴重なツールである。そのようなシステムでは、レポーター分子、例えば、生物発光性タンパク質または酵素からの相補性アミノ酸鎖、例えば、ペプチドまたはポリペプチドが、共局在化及び／または相互作用する分子に融合される。レポーター分子は、生物学、生化学、免疫学、細胞生物学、及び分子生物学の分野で分子事象をモニターするために慣用的に使用される。深海エビであるＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓ  ｇｒａｃｉｌｉｒｏｓｔｒｉｓから分泌されるルシフェラーゼをベースとするルシフェラーゼは、レポーター分子として使用され得、広い基質特異性、高い活性、及び高い量子収率を含む有利な特徴を有することが示されている。例えば、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼバリアントの非発光性ペプチド及び／またはポリペプチド単位は、共局在化／相互作用分子（例えば、タンパク質）に融合され得る。分子が共局在化及び／または相互作用した場合、非発光性ペプチド及び／またはポリペプチド単位は会合して生物発光性複合体を形成し、これは基質（例えば、セレンテラジンまたはセレンテラジン誘導体基質）の存在下で分子の共局在化／相互作用を示す発光シグナルを生成し得る。所定の用途では、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体からの発光シグナルを制御することがさらに有利であり得る。そのような生物発光性複合体のための選択的阻害剤は、発光アッセイで有用である。ルシフェラーゼ阻害剤は、酵素活性及び細胞性プロセスを研究するのに有用な所望の特性を提供するためにさらに誘導体化され得る。
【発明の概要】
【０００４】
一態様では、本開示は、式（Ｉ）の化合物、またはその塩：
2021526530.tif 000003
（式中：
Ｒ1は、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、複素環、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリールアルキル、またはヘテロシクリルアルキルであり、そのアリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、及び複素環は、１つ以上のＲWで任意に置換されており、それぞれのＲWは、独立して、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＲA、−Ｃ1-10アルキレン−ＯＲA、−ＣＯ−ＲA、−Ｃ1-10アルキレン−ＣＯ−ＲA、−ＣＯ−ＯＲA、−Ｃ1-10アルキレン−ＣＯ−ＯＲA、−ＣＯ−ＮＨＲA、−Ｃ1-10アルキレン−ＣＯ−ＮＨＲA、−ＮＲBＲC、−Ｃ1-10アルキレン−ＮＲBＲC、−ＮＨ−ＣＯ−Ｃ1-4アルキル、−Ｃ1-10アルキレン−ＮＨ−ＣＯ−Ｃ1-4アルキル、フェニル、及び１、２、３、または４個のＲD基で置換されたフェニルからなる群から選択され；
それぞれのＲ2は、独立して、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＲA、−Ｃ1-4アルキレン−ＯＲA、−ＣＯ−ＲA、−Ｃ1-4アルキレン−ＣＯ−ＲA、−ＣＯ−ＯＲA、−Ｃ1-4アルキレン−ＣＯ−ＯＲA、−ＣＯ−ＮＨＲA、−Ｃ1-4アルキレン−ＣＯ−ＮＨＲA、−ＮＲBＲC、−Ｃ1-4アルキレン−ＮＲBＲC、−ＮＨ−ＣＯ−Ｃ1-4アルキル、−Ｃ1-4アルキレン−ＮＨ−ＣＯ−Ｃ1-4アルキル、フェニル、１、２、３、または４個のＲD基で置換されたフェニル、−Ｃ≡Ｃ−ＲA、または−Ｃ≡Ｃ−Ｃ1-4アルキレン−ＯＲAであり、または２個のＲ2が、それらが結合している
2021526530.tif 000004
部分の炭素原子と一緒になって５または６員縮合環を形成し；
それぞれのＲ3は、独立して、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＲA、−Ｃ1-4アルキレン−ＯＲA、−ＣＯ−ＲA、−ＣＯ−ＯＲA、または−ＣＯ−ＮＨＲAであり、または２個のＲ3が、それらが結合している
2021526530.tif 000005
部分の炭素原子と一緒になって５または６員縮合環を形成し；
Ｒ4は、ＨまたはＣ1-4アルキルであり；
ｐは、０、１、２、３、または４であり；
ｑは、０、１、２、３、または４であり；
それぞれの出現におけるＲAは、独立して、Ｈ、Ｃ1-4アルキル、またはＣ1-4ハロアルキルであり；
それぞれの出現におけるＲB及びＲCは、独立して、ＨまたはＣ1-4アルキルであり、またはＲB及びＲCは、それらが結合しているＮ原子と一緒になって５または６員複素環を形成し；
それぞれの出現におけるＲDは、独立して、Ｃ1-4アルキル、−ＯＣ1-4アルキル、−ＣＮ、またはハロゲンである）
を提供する。
【０００５】
一態様では、本開示は、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体を阻害する方法であって、その方法は、生物発光性複合体を本明細書に記載の化合物と接触させることを含む、方法を提供する。
【０００６】
一態様では、本開示は、サンプル中のＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体の発光を調節するための方法であって、その方法は、
（ａ）サンプルをセレンテラジン基質及び本明細書に記載の化合物と接触させることと、
（ｂ）サンプル中の発光を検出することと、
を含み、
その化合物は、生物発光性複合体からの発光の減少を引き起こす、方法を提供する。
【０００７】
一態様では、本開示は、サンプル中の第１の分子と第２の分子との間の相互作用または共局在化（co-localization）を検出するための方法であって、その方法は、
（ａ）サンプルをセレンテラジン基質及び本明細書に記載の化合物と接触させることであって、そのサンプルは、
（ｉ）第１の融合物であって、その第１の融合物は、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ペプチド及び第１の分子を含む、第１の融合物と、
（ｉｉ）第２の融合物であって、その第２の融合物は、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ポリペプチド及び第２の分子を含み、非発光性ポリペプチドは、非発光性ペプチドと生物発光性複合体を形成することが可能である、第２の融合物と、
を含む、接触させることと、
（ｂ）サンプル中の発光を検出することと、
を含み、
発光の検出は、第１の分子と第２の分子との間の相互作用または共局在化を示す、方法を提供する。
【０００８】
一態様では、本開示は、サンプル中の第１の分子と第２の分子との間の相互作用または共局在化を検出するための方法であって、その方法は、
（ａ）サンプルをセレンテラジン基質及び本明細書に記載の化合物と接触させることであって、そのサンプルは、
（ｉ）第１の融合物をコードする第１のポリヌクレオチドであって、第１の融合物は、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ペプチド及び第１の分子を含む、第１のポリヌクレオチドと、
（ｉｉ）第２の融合物をコードする第２のポリヌクレオチドであって、第２の融合物は、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ポリペプチド及び第２の分子を含み、非発光性ポリペプチドは、非発光性ペプチドと生物発光性複合体を形成することが可能である、第２のポリヌクレオチドと、
を含む、接触させることと、
（ｂ）サンプル中の発光を検出することと、
を含み、
発光の検出は、第１の分子と第２の分子との間の相互作用または共局在化を示す、方法を提供する。
【０００９】
一態様では、本開示は、サンプル中の第１の分子及び第２の分子の相互作用または共局在化を検出するための方法であって、その方法は、
（ａ）サンプルをＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ポリペプチド、セレンテラジン基質、及び本明細書に記載の化合物と接触させることであって、そのサンプルは、
（ｉ）第１の融合物をコードする第１のポリヌクレオチドであって、第１の融合物は、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ペプチド及び第１の分子を含み、非発光性ペプチドは、非発光性ポリペプチドと生物発光性複合体を形成することが可能である、第１のポリヌクレオチドと、
（ｉｉ）第２の融合物をコードする第２のポリヌクレオチドであって、第２の融合物は、蛍光受容体分子及び第２の分子を含む、第２のポリヌクレオチドと、
を含む、接触させることと、
（ｂ）第１の分子及び第２の分子の相互作用または共局在化を示すサンプル中の生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）を検出することと、
を含む、方法を提供する。
【００１０】
一態様では、本開示は、サンプル中の第１の分子及び第２の分子の相互作用または共局在化を検出するための方法であって、その方法は、
（ａ）サンプルをＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ペプチド、セレンテラジン基質、及び本明細書に記載の化合物と接触させることであって、そのサンプルは、
（ｉ）第１の融合物をコードする第１のポリヌクレオチドであって、第１の融合物は、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ポリペプチド及び第１の分子を含み、非発光性ポリペプチドは、非発光性ペプチドと生物発光性複合体を形成することが可能である、第１のポリヌクレオチドと、
（ｉｉ）第２の融合物をコードする第２のポリヌクレオチドであって、第２の融合物は、蛍光受容体分子及び第２の分子を含む、第２のポリヌクレオチドと、
を含む、接触させることと、
（ｂ）第１の分子及び第２の分子の相互作用または共局在化を示すサンプル中の生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）を検出することと、
を含む、方法を提供する。
【００１１】
一態様では、本開示は、サンプル中の分子の相互作用または共局在化を検出するための方法であって、その方法は、
（ａ）サンプルをセレンテラジン基質及び本明細書に記載の化合物と接触させることであって、そのサンプルは、
（ｉ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ポリペプチド及び第１の分子を含む第１の融合物と、
（ｉｉ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ペプチド及び第２の分子を含む第２の融合物であって、非発光性ペプチドは、非発光性ポリペプチドと生物発光性複合体を形成することが可能である、第２の融合物と、
（ｉｉｉ）蛍光受容体分子及び第３の分子を含む第３の融合物と、
を含む、接触させることと、
（ｂ）サンプル中の第１の分子、第２の分子、及び第３の分子の間の相互作用または共局在化を示すサンプル中の生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）を検出することと、
を含む、方法を提供する。
【００１２】
一態様では、本開示は、サンプル中の対象となる分子を検出するための方法であって、その方法は、
（ａ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ペプチドに融合した対象となる分子を含むサンプルを、
（ｉ）セレンテラジン基質；
（ｉｉ）本明細書に記載の化合物；及び
（ｉｉｉ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ポリペプチドであって、その非発光性ポリペプチドは、非発光性ペプチドと生物発光性複合体を形成することが可能である、非発光性ポリペプチド；
と接触させることと、
（ｂ）サンプル中の発光を検出することと、
を含み、
発光の検出は、非発光性ペプチドと非発光性ポリペプチドとの間の生物発光性複合体の形成を示す、方法を提供する。
【００１３】
一態様では、本開示は、サンプル中の対象となる分子を検出するための方法であって、その方法は、
（ａ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ポリペプチドに融合した対象となる分子を含むサンプルを、
（ｉ）セレンテラジン基質；
（ｉｉ）本明細書に開示される化合物；及び
（ｉｉｉ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ペプチドであって、その非発光性ペプチドは、非発光性ポリペプチドと生物発光性複合体を形成することが可能である、非発光性ペプチド；
と接触させることと、
（ｂ）サンプル中の発光を検出することと、
を含み、
発光の検出は、非発光性ペプチドと非発光性ポリペプチドとの間の生物発光性複合体の形成を示す、方法を提供する。
【００１４】
一態様では、本開示は、サンプル中の対象となる分子を検出するための方法であって、その方法は、
（ａ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ペプチドに融合した対象となる分子を含むサンプルを、
（ｉ）セレンテラジン基質；
（ｉｉ）本明細書に記載の化合物；及び
（ｉｉｉ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ポリペプチド及び蛍光部分を含む融合物であって、非発光性ポリペプチドは、非発光性ペプチドと生物発光性複合体を形成することが可能である、融合物；
と接触させることと、
（ｂ）分子の検出を示すサンプル中の生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）を検出することと、
を含む、方法を提供する。
【００１５】
一態様では、本開示は、サンプル中の対象となる分子を検出するための方法であって、その方法は、
（ａ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ポリペプチドに融合した対象となる分子を含むサンプルを、
（ｉ）セレンテラジン基質；
（ｉｉ）本明細書に開示される化合物；及び
（ｉｉｉ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ペプチド及び蛍光部分を含む融合物であって、非発光性ペプチドは、非発光性ポリペプチドと生物発光性複合体を形成することが可能である、融合物；
と接触させることと、
【００１６】
（ｂ）分子の検出を示すサンプル中の生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）を検出することと、
を含む、方法を提供する。
【００１７】
一態様では、本開示は、生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）システムであって、
（ａ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ペプチド及び第１の分子を含む第１の融合物と、
（ｂ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ポリペプチド及び蛍光部分を含む第２の融合物であって、非発光性ポリペプチドは、非発光性ペプチドと生物発光性複合体を形成することが可能である、第２の融合物と、
（ｃ）セレンテラジン基質と、
（ｄ）本明細書に記載の化合物と、
を含む、生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）システムを提供する。
【００１８】
一態様では、本開示は、生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）システムであって、
（ａ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ポリペプチド及び第１の分子を含む第１の融合物と、
（ｂ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ペプチド及び蛍光部分を含む第２の融合物であって、非発光性ペプチドは、非発光性ポリペプチドと生物発光性複合体を形成することが可能である、第２の融合物と、
（ｃ）セレンテラジン基質と、
（ｄ）本明細書に記載の化合物と、
を含む、生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）システムを提供する。
【００１９】
一態様では、本開示は、生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）システムであって、
（ａ）第１の分子及びＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ペプチドを含む第１の融合物と、
（ｂ）第２の分子及び蛍光受容体分子を含む第２の融合物と、
（ｃ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ポリペプチドと生物発光性複合体を形成することが可能なＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ポリペプチドと、
（ｄ）セレンテラジン基質と、
（ｅ）本明細書に記載の化合物と、
を含む、生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）システムを提供する。
【００２０】
一態様では、本開示は、生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）システムであって、
（ａ）第１の分子及びＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ポリペプチドを含む第１の融合物と、
（ｂ）第２の分子及び蛍光受容体分子を含む第２の融合物と、
（ｃ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ポリペプチドと生物発光性複合体を形成することが可能なＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ペプチドと、
（ｄ）セレンテラジン基質と、
（ｅ）本明細書に記載の化合物と、
を含む、生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）システムを提供する。
【００２１】
一態様では、本開示は、
（ａ）本明細書に記載の化合物と、
（ｂ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ペプチドをコードする第１のポリヌクレオチドと、
（ｃ）Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼの非発光性ポリペプチドをコードする第２のポリヌクレオチドであって、非発光性ポリペプチドは、非発光性ペプチドと生物発光性複合体を形成することが可能である、第２のポリヌクレオチドと、
を含む、キットを提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】本発明の例示的な化合物による生物発光性複合体の阻害を示している。Ａは、ＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＨｉＢｉＴ／ＬｇＢｉＴ生物発光性複合体の阻害を示している。Ｂは、ＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＳｍＢｉＴ／ＬｇＢｉＴ生物発光性複合体の阻害を示している。Ｃは、図１Ａ及び１Ｂに示された例示的な化合物の計算されたＩＣ50値を示す棒グラフである。
【図２】本発明の例示的な化合物のＮＡＮＯＬＵＣ（登録商標）（Ｎｌｕｃ）阻害活性をＮｌｕｃ阻害剤として知られるＰＢＩ−６０９６と比較している。ＪＲＷ−１００４、ＨＬ−０００５、及びＨＬ−００１０は、ＮａｎｏＬｕｃに対する感知可能な阻害を示さず、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体に対する選択的阻害を示している。
【図３】本発明の例示的な化合物による細胞内の生物発光性複合体の阻害を示している。Ａは、細胞状況におけるＨＬ−０００５でのＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＨｉＢｉｔ／ＬｇＢｉｔ生物発光性複合体の阻害を示している。Ｂは、溶解及び非溶解条件におけるＩＣ50値を比較しており、ＨＬ−０００５は概ね、細胞透過性であることを示している。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
開示される化合物は、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体を選択的に阻害し得る。例えば、開示される化合物は、（ａ）配列番号２と１００％未満（例えば、＞９９％、＜９５％、＜９０％、＜８０％、＜７０％、＜６０％、＜５０％など）かつ４０％を超える（例えば、＞４０％、＞４５％、＞５０％、＞５５％、＞６０％、＞６５％、＞７０％、＞７５％、＞８０％、＞８５％、＞９０％、＞９５％、＞９８％、＞９９％）配列同一性を有するペプチドアミノ酸配列を含むペプチド；及び（ｂ）配列番号３と１００％未満（例えば、＞９９％、＜９５％、＜９０％、＜８０％、＜７０％、＜６０％、＜５０％など）かつ４０％を超える（例えば、＞４０％、＞４５％、＞５０％、＞５５％、＞６０％、＞６５％、＞７０％、＞７５％、＞８０％、＞８５％、＞９０％、＞９５％、＞９８％、＞９９％）配列同一性を有するポリペプチドアミノ酸配列を含むポリペプチドを含むＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体であって、その生物発光性複合体は、セレンテラジン基質の存在下で検出可能な発光を呈する、生物発光性複合体を選択的に阻害し得る。所定の実施形態では、開示される化合物は、（ａ）ペプチドアミノ酸配列配列番号４または配列番号６を含むペプチド；及び（ｂ）配列番号５を有するポリペプチドアミノ酸配列を含むポリペプチドを含むＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体であって、その生物発光性複合体は、セレンテラジン基質の存在下で検出可能な発光を呈する、生物発光性複合体を選択的に阻害し得る。開示される化合物を使用して阻害され得る例示的な生物発光性複合体は、米国特許第９，７９７，８８９号及び第９，７９７，８９０号に記載されており、その内容全体が、参照によりそれらの全体が組み込まれる。例えば、開示される化合物は、ＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＨｉＢｉＴ／ＬｇＢｉＴ生物発光性複合体を選択的に阻害し得る。別の例として、開示される化合物は、ＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＬｇＢｉＴ／ＳｍＢｉＴ生物発光性複合体を選択的に阻害し得る。
【００２４】
それらの安定性、細胞から排出される潜在性、及び培養細胞から生じる細胞残屑の存在のため、所定の用途では、本発明の選択的阻害剤を使用して、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体からの発光を抑制することが有利であり得る。例えば、複数の発光システムの時間的多重化を含む用途では、一度で１つのみの発光シグナルの測定及び／または検出を可能にするために、それぞれのシステムに対する選択的阻害剤を有することが有益であり得る。また、いくつかのプレートベースのアッセイでは、所定量のルシフェラーゼは、細胞から排出され得るか、または細胞残屑から培地中に存在し得る。細胞外阻害剤化合物は、培地中のルシフェラーゼからの発光を選択的に抑制することを可能にするであろう。そのため、所定のアッセイにおけるシグナル対バックグラウンド比を改善するのに役立ち得る。
【００２５】
特定の実施形態では、ＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）生物発光性複合体から生成される光は、本明細書に開示される化合物によって選択的に抑制され得る。有利には、そのような選択的阻害は、ＮａｎｏＢｉＴ及びＮａｎｏＬｕｃなどの複数の生物発光性システムの時間的多重化を可能にするために使用され得る。さらに、開示される化合物は、所定のプレートベースの発光アッセイを可能にするために選択的生物発光抑制（例えば、細胞内または細胞外選択性）を提供する。化合物は、ルシフェラーゼのセレンテラジン基質の結合に競合し得、細胞透過性及び細胞不透過性阻害剤を生成するために改変され得る。
【００２６】
１．定義
別段定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術的及び科学的用語は、当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。矛盾する場合は、定義を含む本書類が優先する。好ましい方法及び物質は以下に記載されているが、本明細書に記載のものと類似または均等の方法及び材料が、本発明の実施または試験において使用され得る。本明細書で挙げられたすべての刊行物、特許出願、特許及び他の参考文献は、それらの全体が参照により組み込まれる。本明細書に開示される物質、方法、及び例は、例示的なものにすぎず、限定することは意図されていない。
【００２７】
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ（ｓ））」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ（ｓ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「し得る（ｃａｎ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ（ｓ）」、及びそれらの変化形は、本明細書で使用される場合、追加の作用または構造の可能性を排除しないオープンエンドの移行句、用語、または単語であることが意図されている。単数形態「ａ」、「及び（ａｎｄ）」、「ｔｈｅ」には、文脈が別段明確に指示していない限り、複数の参照が含まれる。本開示はまた、明示的に示されているか否かにかかわらず、本明細書に提示された実施形態または要素を「含む」、「からなる」、及び「本質的にからなる」他の実施形態を企図している。
【００２８】
本明細書で使用される場合、用語「置換基」または「好適な置換基」は、化学的に許容可能な官能基、例えば、本発明の化合物の活性を無効化しない部分を意味することが意図されている。好適な置換基の例示的な例には、ハロ基、パーフルオロアルキル基、パーフルオロアルコキシ基、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、ヒドロキシ基、ハロ基、オキソ基、メルカプト基、アルキルチオ基、アルコキシ基、ニトロ基、アジドアルキル基、スルホン酸基、アリールもしくはヘテロアリール基、アリールオキシもしくはヘテロアリールオキシ基、アラルキルもしくはヘテロアラルキル基、アラルコキシもしくはヘテロアラルコキシ基、ＨＯ−（Ｃ＝Ｏ）−基、複素環基、シクロアルキル基、アミノ基、アルキル−及びジアルキル−アミノ基、カルバモイル基、アルキルカルボニル基、アルキルカルボニルオキシ基、アルコキシカルボニル基、アルキルアミノカルボニル基、ジアルキルアミノカルボニル基、アリールカルボニル基、アリールオキシカルボニル基、アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基などが含まれるがこれらに限定されない。置換基は、追加の置換基によって置換されていてもよい。置換基はまた、塩の形態であり得る（例えば、スルホン酸基は、スルホネート基の形態であり得る）。
【００２９】
特定の官能基及び化学用語の定義は、以下に詳細に記載されている。本開示の目的のため、化学元素は、ｔｈｅ  Ｐｅｒｉｏｄｉｃ  Ｔａｂｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ，ＣＡＳ  ｖｅｒｓｉｏｎ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｓ，７５th  Ｅｄ．の裏表紙に従って特定され、特定の官能基は一般に、そこに記載されているように定義される。また、有機化学の一般原理、及び特定の官能性部分及び反応性は、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｔｈｏｍａｓ  Ｓｏｒｒｅｌｌ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｂｏｏｋｓ，Ｓａｕｓａｌｉｔｏ，１９９９；Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｍａｒｃｈ  Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５th  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２００１；Ｌａｒｏｃｋ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８９；Ｃａｒｒｕｔｈｅｒｓ，Ｓｏｍｅ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３rd  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，１９８７に記載されており、これらのそれぞれの内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００３０】
本明細書で使用される場合、用語「アルケニル」は、２〜１０個の炭素を含有し、かつ２個の水素の除去によって形成される少なくとも１個の炭素−炭素二重結合を含有する直鎖状または分岐状の炭化水素鎖を指す。アルケニルの代表的な例には、エテニル、２−プロペニル、２−メチル−２−プロペニル、３−ブテニル、４−ペンテニル、５−ヘキセニル、２−ヘプテニル、２−メチル−１−ヘプテニル、及び３−デセニルが含まれるがこれらに限定されない。本発明のアルケニル基は、非置換であってもよく、または上記で定義されたような１個以上の好適な置換基、好ましくは１〜３個の好適な置換基によって置換されていてもよい。
【００３１】
本明細書で使用される場合、用語「アルコキシ」は、酸素原子を介して親分子部分に付加された本明細書で定義されるようなアルキル基を指す。アルコキシの代表的な例には、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、２−プロポキシ、ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ペンチルオキシ、及びヘキシルオキシが含まれるがこれらに限定されない。
【００３２】
本明細書で使用される場合、用語「アルコキシアルコキシ」は、本明細書で定義されるような別のアルコキシ基を介して親分子部分に付加された本明細書で定義されるようなアルコキシ基を指す。アルコキシアルコキシの代表的な例には、ｔｅｒｔ−ブトキシメトキシ、２−エトキシエトキシ、２−メトキシエトキシ、及びメトキシメトキシが含まれるがこれらに限定されない。
【００３３】
用語「アルコキシアルコキシアルキル」は、本明細書で使用される場合、本明細書で定義されるようなアルキレン基を介して親分子部分に付加された本明細書で定義されるようなアルコキシアルコキシ基を意味する。アルコキシアルコキシアルキルの代表的な例には、ｔｅｒｔ−ブトキシメトキシメチル、エトキシメトキシメチル、（２−メトキシエトキシ）メチル、及び２−（２−メトキシエトキシ）エチルが含まれるがこれらに限定されない。
【００３４】
本明細書で使用される場合、用語「アルコキシアルキル」は、本明細書で定義されるようなアルキル基を介して親分子部分に付加された本明細書で定義されるようなアルコキシ基を指す。アルコキシアルキルの代表的な例には、ｔｅｒｔ−ブトキシメチル、２−エトキシエチル、２−メトキシエチル、及びメトキシメチルが含まれるがこれらに限定されない。
【００３５】
本明細書で使用される場合、用語「アルコキシカルボニル」は、本明細書で定義されるようなカルボニル基を介して親分子部分に付加された本明細書で定義されるようなアルコキシ基を指す。アルコキシカルボニルの代表的な例には、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、及びｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルが含まれるがこれらに限定されない。
【００３６】
用語「アルコキシカルボニルアルキル」は、本明細書で使用される場合、本明細書で定義されるようなアルキレン基を介して親分子部分に付加された本明細書で定義されるようなアルコキシカルボニル基を指す。アルコキシカルボニルアルキルの代表的な例には、エトキシカルボニルメチル、３−メトキシカルボニルプロピル、４−エトキシカルボニルブチル、及び２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルエチルが含まれるがこれらに限定されない。
【００３７】
本明細書で使用される場合、用語「アルキル」は、１〜３０個の炭素原子、１〜１２個の炭素原子、１〜１０個の炭素原子、１〜８個の炭素原子、１〜６個の炭素原子、または１〜４個の炭素原子を好適に有する線状または分岐状炭化水素基を指す。用語「Ｃ1−Ｃ8−アルキル」は、線状または分岐状配列において１、２、３、４、５、６、７または８個の炭素を有するアルキル基を含むことが定義される。例えば、「Ｃ1−Ｃ8−アルキル」には特に、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉｓｏ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｉｓｏ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル（例えば、ｎ−ペンチル）、ヘキシル（例えば、ｎ−ヘキシル）、ヘプチル（例えば、ｎ−ヘプチル）及びオクチル（例えば、ｎ−オクチル）が含まれる。用語「Ｃ1−Ｃ6−アルキル」は、線状または分岐状配列において１、２、３、４、５、または６個の炭素を有するアルキル基を含むことが定義される。例えば、「Ｃ1−Ｃ6−アルキル」には特に、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉｓｏ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｉｓｏ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル（例えば、ｎ−ペンチル）、及びヘキシル（例えば、ｎ−ヘキシル）が含まれる。用語「Ｃ1−Ｃ4−アルキル」は、線状または分岐状配列において１、２、３、または４個の炭素を有するアルキル基を含むことが定義される。例えば、「Ｃ1−Ｃ4−アルキル」には特に、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｉｓｏ−ブチル及びｔｅｒｔ−ブチルが含まれる。本発明のアルキル基は、非置換であってもよく、または上記で定義されたような１個以上の好適な置換基、例えば１〜３個の好適な置換基によって置換されていてもよい。例えば、アルキル基は、ハロアルキル基を形成するための１個以上のハロ置換基、またはヒドロキシアルキル基を形成するための１個以上のヒドロキシ置換基、またはアルコキシアルキル基を形成するための１個以上のアルコキシ基で置換されていてもよい。
【００３８】
本明細書で使用される場合、用語「アルキルアミノ」は、本明細書で定義されるようなアミノ基を介して親分子部分に付加された本明細書で定義されるようなアルキル基を指す。アルキルアミノの代表的な例には、メチルアミノ、エチルアミノ、ｉｓｏ−プロピルアミノ、ブチル−アミノ及びｓｅｃ−ブチルアミノが含まれるがこれらに限定されない。
【００３９】
本明細書で使用される場合、用語「アルキルアミノアルキル」は、本明細書で定義されるようなアミノアルキル基を介して親分子部分に付加された本明細書で定義されるようなアルキル基を指す。アルキルアミノアルキル基の代表的な例には、メチルアミノエチル及びメチルアミノ−２−プロピルが含まれるがこれらに限定されない。
【００４０】
本明細書で使用される場合、用語「アルキルカルボニル」は、本明細書で定義されるようなカルボニル基を介して親分子部分に付加された本明細書で定義されるようなアルキル基を指す。アルキルカルボニルの代表的な例には、アセチル、１−オキソプロピル、２，２−ジメチル−１−オキソプロピル、１−オキソブチル、及び１−オキソペンチルが含まれるがこれらに限定されない。
【００４１】
本明細書で使用される場合、用語「アルキルカルボニルアルキル」は、本明細書で定義されるようなアルキル基を介して親分子部分に付加された本明細書で定義されるようなアルキルカルボニル基を指す。
【００４２】
本明細書で使用される場合、用語「アルキルカルボニルアルキルアミド」は、本明細書で定義されるようなアルキルアミド基を介して親分子部分に付加された本明細書で定義されるようなアルキルカルボニル基を指す。
【００４３】
用語「アルキレン」は、１〜１０個の炭素原子の飽和、直鎖状または分岐状鎖の炭化水素に由来する二価基を意味する。アルキレンの代表的な例には、−ＣＨ2−、−ＣＨ（ＣＨ3）−、−Ｃ（ＣＨ3）2−、−ＣＨ2ＣＨ2−、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−、−ＣＨ2Ｃ（ＣＨ3）2−、及び−ＣＨ2ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2−が含まれるがこれらに限定されない。
【００４４】
本明細書で使用される場合、用語「アルキニル」は、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の炭素を有し、かつ１個以上の炭素−炭素三重結合を有する直鎖状または分岐状炭化水素基を指す。本発明のアルキニル基には、エチニル、プロピニル、及びブチニルが含まれるがこれらに限定されない。本発明のアルキニル基は、非置換であってもよく、または上記で定義されたような１個以上の好適な置換基、好ましくは１〜３個の好適な置換基によって置換されていてもよい。
【００４５】
本明細書で使用される場合、用語「アミド」は、本明細書で定義されるようなカルボニル基を介して親分子部分に付加されたアミノ基（すなわち、−ＣＯＮＨ2）を指す。用語「アルキルアミド」は、本明細書で使用される場合、本明細書で定義されるようなカルボニル基を介して親分子部分に付加されたアルキルアミノ基またはジアルキルアミノ基を指す。アルキルアミドの代表的な例には、メチルアミノカルボニル、ジメチルアミノカルボニル、エチルメチルアミノカルボニル、及びｎ−ヘキシルアミノカルボニルが含まれるがこれらに限定されない。
【００４６】
本明細書で使用される場合、用語「アミノ」は、−ＮＨ2基を指す。
【００４７】
本明細書で使用される場合、用語「アミノアルキル」は、本明細書で定義されるようなアルキル基を介して親分子部分に付加された本明細書で定義されるような少なくとも１個のアミノ基を指す。アミノアルキルの代表的な例には、アミノメチル、２−アミノエチル、３−アミノプロピル、４−アミノブチル、５−アミノペンチル、及び６−アミノヘキシルが含まれるがこれらに限定されない。
【００４８】
本明細書で使用される場合、用語「アミノアルキルアミド」は、本明細書で定義されるようなアルキルアミド基を介して親分子部分に付加された本明細書で定義されるような少なくとも１個のアミノ基を指す。
【００４９】
本明細書で使用される場合、用語「アミノ保護基」は、保護基が結合した窒素原子上で化学反応が生じることを防止する部分を指す。アミノ保護基はまた、化学反応によって除去可能でなければならない。そのような基は、当該技術分野でよく知られており、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，３rd ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９９（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に詳細に記載されているものを含む。好適なアミノ保護基には、カルボベンジルオキシ（−ＮＨＣＯ−ＯＣＨ2Ｃ6Ｈ5または−ＮＨ−Ｃｂｚ）；ｔ−ブチルオキシカルボニル（−ＮＨＣＯ−ＯＣ（ＣＨ3）3または−ＮＨ−Ｂｏｃ）；９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（−ＮＨ−Ｆｍｏｃ）、２，２，２−トリクロロエチルオキシカルボニル（−ＮＨ−Ｔｒｏｃ）、及びアリルオキシカルボニル（−ＮＨ−Ａｌｌｏｃ）が含まれるがこれらに限定されない。上記のそれぞれにおいて、−ＮＨ−は、保護されているアミノ基からの窒素を表す。
【００５０】
本明細書で使用される場合、用語「アミノルシフェリン」は、（４Ｓ）−２−（６−アミノ−１，３−ベンゾチアゾール−２−イル）−４，５−ジヒドロチアゾール−４−カルボン酸、またはこの分子の置換アナログを指す。
【００５１】
本明細書で使用される場合、用語「アリール」は、単環式、二環式、または三環式芳香族基を意味する。アリール基の代表的な例には、フェニル、ジヒドロインデニル、インデニル、ナフチル、ジヒドロナフタレニル、及びテトラヒドロナフタレニルが含まれるがこれらに限定されない。本発明のアリール基は、上記で定義されたような１個以上の好適な置換基、好ましくは１〜５個の好適な置換基によって任意に置換されていてもよい。アリールには、本明細書で使用される場合、親分子部分に付加され、かつシクロアルキル基に縮合したフェニル（例えば、インダニルまたは５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イル）、フェニル基に縮合したフェニル（すなわち、ナフチル）、または非芳香族複素環に縮合したフェニル（例えば、ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）が含まれる。
【００５２】
本明細書で使用される場合、用語「アリールアルキル」は、本明細書で定義されるようなアルキル基を介して親分子部分に付加された本明細書で定義されるようなアリール基を指す。アリールアルキルの代表的な例には、フェニルメチル（すなわち、ベンジル）及びフェニルエチルが含まれるがこれらに限定されない。
【００５３】
本明細書で使用される場合、用語「アリールカルボニル」は、本明細書で定義されるようなカルボニル基を介して親分子部分に付加された本明細書で定義されるようなアリール基を指す。
【００５４】
本明細書で使用される場合、用語「カルボニル」または「（Ｃ＝Ｏ）」（アルキルカルボニル、アルキル−（Ｃ＝Ｏ）−またはアルコキシカルボニルなどの語句で使用される場合）は、＞Ｃ＝Ｏ部分の、第２の部分、例えば、アルキルまたはアミノ基（すなわち、アミド基）への接続体を指す。アルコキシカルボニルアミノ（すなわち、アルコキシ（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−）は、アルキルカルバメート基を指す。カルボニル基はまた、本明細書では（Ｃ＝Ｏ）と同等に定義される。アルキルカルボニルアミノは、アセトアミドなどの基を指す。
【００５５】
本明細書で使用される場合、用語「カルボキシ」は、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ基を指す。
【００５６】
本明細書で使用される場合、用語「カルボキシアルキル」は、本明細書で定義されるようなアルキル基を介して親分子部分に付加された本明細書で定義されるようなカルボキシ基を指す。
【００５７】
本明細書で使用される場合、用語「カルボキシアルキルアミド」は、本明細書で定義されるようなアミド基を介して親分子部分に付加された本明細書で定義されるようなカルボキシアルキル基を指す。
【００５８】
本明細書で使用される場合、用語「シクロアルキル」は、単環式、二環式または三環式炭素環式基（例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、ビシクロ［２．２．１］ヘプタニル、ビシクロ［３．２．１］オクタニル及びビシクロ［５．２．０］ノナニルなど）であって、任意に１または２個の二重結合を含有するものを指す。本発明のシクロアルキニル基は、非置換であってもよく、または上記で定義されたような１個以上の好適な置換基、好ましくは１〜５個の好適な置換基によって置換されていてもよい。
【００５９】
本明細書で使用される場合、用語「シクロアルキルアルキル」は、本明細書で定義されるようなアルキル基を介して親分子部分に付加された本明細書で定義されるようなシクロアルキル基を指す。シクロアルキルアルキルの代表的な例には、シクロヘキシルメチルが含まれるがこれらに限定されない。
【００６０】
本明細書で使用される場合、用語「シクロアルキルアミド」は、本明細書で定義されるようなアミド基を介して親分子部分に付加された本明細書で定義されるようなシクロアルキル基を指す。
【００６１】
本明細書で使用される場合、用語「ジアルキルアミノ」は、本明細書で定義されるようなアミノ基を介して親分子部分に付加された本明細書で定義されるような２個の独立して選択されたアルキル基を指す。ジアルキルアミノの代表的な例には、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ、Ｎ−エチル−Ｎ−メチルアミノ、及びＮ−イソプロピル−Ｎ−メチルアミノが含まれるがこれらに限定されない。
【００６２】
本明細書で使用される場合、用語「ジアルキルアミノアルキル」は、本明細書で定義されるようなアルキル基を介して親分子部分に付加された本明細書で定義されるようなジアルキルアミノ基を指す。ジアルキルアミノアルキルの代表的な例には、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチル及びＮ，Ｎ−メチル（２−プロピル）アミノエチルが含まれるがこれらに限定されない。
【００６３】
本明細書で使用される場合、用語「ジアルキルアミノアルキルアミド」は、本明細書で定義されるようなアルキルアミド基を介して親分子部分に付加された本明細書で定義されるようなジアルキルアミノ基を指す。
【００６４】
本明細書で使用される場合、用語「ハロゲン」または「ハロ」は、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨード基を指す。
【００６５】
本明細書で使用される場合、用語「ハロアルコキシ」は、１、２、３または４個のハロゲン原子によって置換された本明細書で定義されるようなアルコキシ基を指す。ハロアルコキシの代表的な例には、クロロメトキシ、２−フルオロエトキシ、トリフルオロメトキシ、及びペンタフルオロエトキシが含まれるがこれらに限定されない。
【００６６】
本明細書で使用される場合、用語「ハロアルキル」は、１、２、３または４個のハロゲン原子によって置換された本明細書で定義されるようなアルキル基を指す。ハロアルキルの代表的な例には、クロロメチル、２−フルオロエチル、トリフルオロメチル、ペンタフルオロエチル、２−クロロ−３−フルオロペンチル、及び４，４，４，−トリフルオロブチルが含まれるがこれらに限定されない。
【００６７】
本明細書で使用される場合、用語「ヘテロアリール」は、単環式ヘテロアリールまたは二環式ヘテロアリール指す。単環式ヘテロアリールは、５または６員環である。５員環は、２個の二重結合を含有する。５員環は、ＯまたはＳから選択される１個のヘテロ原子；または１、２、３または４個の窒素原子及び任意に１個の酸素または硫黄原子を含有し得る。６員環は、３個の二重結合及び１、２、３または４個の窒素原子を含有し得る。単環式ヘテロアリールの代表的な例には、フラニル、イミダゾリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、１，３−オキサゾリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピラゾリル、ピロリル、テトラゾリル、チアジアゾリル、１，３−チアゾリル、チエニル、トリアゾリル、及びトリアジニルが含まれるがこれらに限定されない。二環式ヘテロアリールには、フェニルに縮合した単環式ヘテロアリール、または単環式シクロアルキルに縮合した単環式ヘテロアリール、または単環式シクロアルケニルに縮合した単環式ヘテロアリール、または単環式ヘテロアリールに縮合した単環式ヘテロアリール、または単環式複素環に縮合した単環式ヘテロアリールが含まれる。二環式ヘテロアリール基の代表的な例には、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、ベンズオキサゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンズオキサジアゾリル、６，７−ジヒドロ−１，３−ベンゾチアゾリル、イミダゾ［１，２−ａ］ピリジニル、インダゾリル、インドリル、イソインドリル、イソキノリニル、ナフチリジニル、ピリドイミダゾリル、キナゾリニル、キノリニル、チアゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イル、チアゾロ［５，４−ｄ］ピリミジン−２−イル、５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−５−イル、シクロペンタ［ｂ］チオフェン−２−イル、及び４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イルが含まれるがこれらに限定されない。本発明のヘテロアリール基は、非置換であってもよく、または上記で定義されたような１個以上の好適な置換基、好ましくは１〜５個の好適な置換基によって置換されていてもよい。
【００６８】
本明細書で使用される場合、用語「ヘテロアリールアルキル」は、本明細書で定義されるようなアルキル基を介して親分子部分に付加された本明細書で定義されるようなヘテロアリール基を指す。ヘテロアリールアルキルの代表的な例には、フル−３−イルメチル、１Ｈ−イミダゾール−２−イルメチル、１Ｈ−イミダゾール−４−イルメチル、１−（ピリジン−４−イル）エチル、ピリジン−３−イルメチル、６−クロロピリジン−３−イルメチル、ピリジン−４−イルメチル、（６−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）メチル、（６−（シアノ）ピリジン−３−イル）メチル、（２−（シアノ）ピリジン−４−イル）メチル、（５−（シアノ）ピリジン−２−イル）メチル、（２−（クロロ）ピリジン−４−イル）メチル、ピリミジン−５−イルメチル、２−（ピリミジン−２−イル）プロピル、チエン−２−イルメチル、及びチエン−３−イルメチルが含まれるがこれらに限定されない。
【００６９】
本明細書で使用される場合、用語「複素環」または「ヘテロシクリル」は、単環式複素環、二環式複素環、または三環式複素環を指す。単環式複素環は、酸素、窒素、リン及び硫黄からなる群から独立して選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含有する３、４、５、６、７、または８員環である。３または４員環は、０または１個の二重結合、ならびに酸素、窒素、リン及び硫黄からなる群から選択される１個のヘテロ原子を含有する。５員環は、０または１個の二重結合ならびに酸素、窒素、リン及び硫黄からなる群から選択される１、２または３個のヘテロ原子を含有する。６員環は、０、１または２個の二重結合ならびに酸素、窒素、リン及び硫黄からなる群から選択される１、２、または３個のヘテロ原子を含有する。７及び８員環は、０、１、２、または３個の二重結合ならびに酸素、窒素、リン及び硫黄からなる群から選択される１、２、または３個のヘテロ原子を含有する。単環式複素環の代表的な例には、アゼチジニル、アゼパニル、アジリジニル、ジアゼパニル、１，３−ジオキサニル、１，３−ジオキソラニル、１，３−ジチオラニル、１，３−ジチアニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、イソチアゾリニル、イソチアゾリジニル、イソオキサゾリニル、イソオキサゾリジニル、モルホリニル、オキサジアゾリニル、オキサジアゾリジニル、オキサゾリニル、オキサゾリジニル、ホスフィナン、ピペラジニル、ピペリジニル、ピラニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、ピロリニル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロピリジニル、テトラヒドロピリミジニル、テトラヒドロチエニル、チアジアゾリニル、チアジアゾリジニル、チアゾリニル、チアゾリジニル、チオモルホリニル、１，１−ジオキシドチオモルホリニル（チオモルホリンスルホン）、チオピラニル、トリチアニル、及び２，５−ジオキソ−ピロリジニルが含まれるがこれらに限定されない。二環式複素環は、フェニル基に縮合した単環式複素環、または単環式シクロアルキルに縮合した単環式複素環、または単環式シクロアルケニルに縮合した単環式複素環、または単環式複素環に縮合した単環式複素環、または架橋単環式複素環式環系であって、環の２個の非隣接原子が、１、２、３、または４個の炭素原子のアルキレン架橋、または２、３、または４個の炭素原子のアルケニレン架橋によって連結されているものである。二環式複素環の代表的な例には、ベンゾピラニル、ベンゾチオピラニル、クロマニル、２，３−ジヒドロベンゾフラニル、２，３−ジヒドロベンゾチエニル、アザビシクロ［２．２．１］ヘプチル（２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−イルを含む）、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドリル、イソインドリニル、オクタヒドロシクロペンタ［ｃ］ピロリル、オクタヒドロピロロピリジニル、９−ホスファビシクロ［３．３．１］ノナン、８−ホスファビシクロ［３．２．１］オクタン、及びテトラヒドロイソキノリニルが含まれるがこれらに限定されない。三環式複素環は、フェニル基に縮合した二環式複素環、または単環式シクロアルキルに縮合した二環式複素環、または単環式シクロアルケニルに縮合した二環式複素環、または単環式複素環に縮合した二環式複素環、または二環式複素環であって、二環式環の２個の非隣接原子が、１、２、３、または４個の炭素原子のアルキレン架橋、または２、３、または４個の炭素原子のアルケニレン架橋によって連結されているものによって例示される。三環式複素環の例には、オクタヒドロ−２，５−エポキシペンタレン、ヘキサヒドロ−２Ｈ−２，５−メタノシクロペンタ［ｂ］フラン、ヘキサヒドロ−１Ｈ−１，４−メタノシクロペンタ［ｃ］フラン、アザ−アドマンタン（１−アザトリシクロ［３．３．１．１3,7］デカン）、オキサ−アダマンタン（２−オキサトリシクロ［３．３．１．１3,7］デカン）、及び２，４，６−トリオキサ−８−ホスファトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカンが含まれるがこれらに限定されない。本発明の複素環基は、非置換であってもよく、または上記で定義されたような１個以上の好適な置換基、好ましくは１〜３個の好適な置換基によって置換されていてもよい。本発明の複素環基は、環に結合した１個以上のオキソ基（＝Ｏ）またはチオキソ基（＝Ｓ）を含有し得る。
【００７０】
本明細書で使用される場合、用語「ヘテロシクリルアルキル」は、本明細書で定義されるようなアルキル基を介して親分子部分に付加された本明細書で定義されるようなヘテロシクリル基を指す。ヘテロシクリルアルキルの代表的な例には、ピペリジン−４−イルメチル、ピペラジン−１−イルメチル、３−メチル−１−ピロリジン−１−イルブチル、（１Ｒ）−３−メチル−１−ピロリジン−１−イルブチル、（１Ｓ）−３−メチル−１−ピロリジン−１−イルブチル、及び３−モルホリノプロピルが含まれるがこれらに限定されない。
【００７１】
本明細書で使用される場合、用語「ヘテロシクリルアミド」は、本明細書で定義されるようなアミド基を介して親分子部分に付加された本明細書で定義されるようなヘテロシクリル基を指す。
【００７２】
本明細書で使用される場合、用語「ヒドロキシ」は、−ＯＨ基を指す。
【００７３】
本明細書で使用される場合、用語「ヒドロキシアルコキシ」は、少なくとも１個のヒドロキシ基によって置換された本明細書で定義されるようなアルコキシ基を指す。ヒドロキシアルコキシの代表的な例には、ヒドロキシエトキシ、及び２−ヒドロキシプロポキシが含まれるがこれらに限定されない。
【００７４】
本明細書で使用される場合、用語「ヒドロキシアルキル」は、少なくとも１個のヒドロキシ基によって置換された本明細書で定義されるようなアルキル基を指す。ヒドロキシアルキルの代表的な例には、ヒドロキシメチル、２−ヒドロキシエチル、３−ヒドロキシプロピル、２，３−ジヒドロキシプロピル、２，３−ジヒドロキシペンチル、４−ヒドロキシブチル、２−エチル−４−ヒドロキシヘプチル、３，４−ジヒドロキシブチル、及び５−ヒドロキシペンチルが含まれるがこれらに限定されない。
【００７５】
用語「ヒドロキシアルキルアミド」は、本明細書で使用される場合、アミド基に結合したヒドロキシアルキル基、例えば、−アミド−アルキル−ＯＨを指す。
【００７６】
本明細書で使用される場合、用語「ヒドロキシカルボニル」は、本明細書で定義されるようなカルボニル基を介して親分子部分に付加された本明細書で定義されるようなヒドロキシ基を指す。
【００７７】
本明細書で使用される場合、用語「メチレンジオキシ」は、−ＯＣＨ2Ｏ−基であって、メチレンジオキシの酸素原子が、２個の隣接炭素原子を介して親分子部分に結合しているものを指す。
【００７８】
本明細書で使用される場合、用語「オキソ」は、二重結合化した酸素（＝Ｏ）基であって、結合パートナーが炭素原子であるものを指す。そのような基はまた、カルボニル基と考えられ得る。
【００７９】
本明細書で使用される場合、別段特定しない限り、用語「ペプチド」及び「ポリペプチド」は、ペプチドアミド結合（−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−）によって主鎖を介して結合した２個以上のアミノ酸の高分子化合物を指す。用語「ペプチド」は典型的には、短いアミノ酸ポリマー（例えば、２５個未満のアミノ酸を有する鎖）を指す一方で、用語「ポリペプチド」は典型的には、より長いアミノ酸ポリマー（例えば、２５個を超えるアミノ酸を有する鎖）を指す。
【００８０】
多成分置換基に付される接頭辞は、それが先行する最初の成分にのみ適用される。例示するため、用語「シクロアルキルアルキル」は、２つの成分：アルキル及びシクロアルキルを含有する。よって、Ｃ1−10シクロアルキルアルキルのＣ1−10接頭辞は、シクロアルキルアルキルのアルキル成分が１〜６個の炭素原子を含有することを意味し；Ｃ1−Ｃ6−接頭辞は、シクロアルキル成分を記載しているのではない。さらに例示するため、Ｃ1−10ハロアルキルという用語は、ハロメチル、ハロエチル、ハロプロピル、ハロブチル、ハロペンチル、及びハロヘキシルを指す。さらに例示するため、ハロアルコキシアルキルの接頭辞「ハロ」は、アルコキシアルキル置換基のアルコキシ成分のみが１個以上のハロゲン基で置換されていることを示す。ハロゲン置換がアルキル成分上でのみ生じ得る場合、置換基は代わりに「アルコキシハロアルキル」と記述されるであろう。
【００８１】
置換基は、１個以上の水素原子に結合している少なくとも１個の炭素または窒素原子を含む場合、「置換可能」である。よって、例えば、水素、ハロゲン、及びシアノは、この定義に入らない。また、そのような原子を含有するヘテロシクリル中の硫黄原子は、１または２個のオキソ置換基で置換可能である。
【００８２】
置換基が「置換されている」と記載されている場合、置換基の炭素または窒素上の水素基の代わりに非水素基が存在する。よって、例えば、置換アルキル置換基は、少なくとも１個の非水素基がアルキル置換基上で水素基の代わりに存在するアルキル置換基である。例示するため、モノフルオロアルキルは、フルオロ基で置換されたアルキルであり、ジフルオロアルキルは、２個のフルオロ基で置換されたアルキルである。置換基上に複数の置換が存在する場合、それぞれの非水素基は、（別段記述されない限り）同一または異なり得ることが認識されるべきである。
【００８３】
置換基が「非置換」と称され、「置換された」または「任意に置換された」と称されない場合、それは置換基がいかなる置換基も有しないことを意味する。置換基が「任意に置換された」と記載されている場合、置換基は、（１）非置換であってもよく、または（２）置換されていてもよい。置換基が最大で特定数の非水素基で任意に置換されたと記載されている場合、その置換基は、（１）非置換であってもよく、または（２）最大でその特定数の非水素基もしくは置換基上の最大数までの置換可能な位置のうち少ない方によって置換されていてもよい。よって、例えば、置換基が最大で３個の非水素基で任意に置換されたヘテロアリールとして記載されている場合、そのときは３個未満の置換可能な位置を有する任意のヘテロアリールは、最大でそのヘテロアリールが置換可能な位置を有するものと同じ数の非水素基のみによって任意に置換されるであろう。例示するため、テトラゾリル（１個のみの置換可能な位置を有する）は、最大で１個の非水素基で任意に置換されるであろう。さらに例示するため、アミノ窒素が最大で２個の非水素基で任意に置換されたと記載されている場合、そのときは第１級アミノ窒素は、最大で２個の非水素基で任意に置換される一方で、第２級アミノ窒素は、最大で１個のみの非水素基で任意に置換される。
【００８４】
置換基が群から「独立して選択される」と記載されている場合、それぞれの置換基は、他のものから独立して選択される。そのため、それぞれの置換基は、他の置換基（複数可）と同一または異なり得る。
【００８５】
本明細書で使用される場合、用語「生物発光」または「発光」は、光を生成する酵素と基質との間の反応の結果として生成される光を指し得る。そのような酵素（生物発光性酵素）の例には、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ、例えば、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｏｕｓ  ｇｒａｃｉｌｉｒｏｓｔｒｉｓ、ホタルルシフェラーゼ、例えば、Ｐｈｏｔｉｎｕｓ  ｐｙｒａｌｉｓまたはＰｈｏｔｕｒｉｓ  ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉｃａ、コメツキムシルシフェラーゼ、Ｒｅｎｉｌｌａルシフェラーゼ、ウミホタルルシフェラーゼ、エクオリンフォトタンパク質、オベリンフォトタンパク質などが含まれる。
【００８６】
本明細書で使用される場合、用語「複合体」は、互いに直接的及び／または間接的に接触している分子（例えば、ペプチド、ポリペプチドなど）の集団または凝集体を指す。一態様では、「接触」またはより具体的には、「直接的接触」は、ファンデルワールス力、水素結合、イオン性及び疎水性相互作用などのような引力非共有結合的相互作用が分子の相互作用を支配するのに十分なほど２つ以上の分子が近接していることを意味する。そのような態様では、分子（例えば、ペプチド及びポリペプチド）の複合体は、複合体が熱力学的に有利なように（例えば、その成分分子の非凝集、または非複合体化状態と比較して）アッセイ条件下で形成される。本明細書で使用される場合、用語「複合体」は、別段記載されない限り、２つ以上の分子（例えば、ペプチド、ポリペプチド、またはそれらの組み合わせ）の集団を指す。
【００８７】
本明細書で互換的に使用される用語「生物発光性複合体」または「Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体」は、２つ以上の非発光性ペプチド及び／または非発光性ポリペプチドの集合した複合体を指す。生物発光性複合体は、生物発光性複合体の基質が不安定な形態に変換することを触媒しまたは可能にし；基質はその後、光を放出する。複合体化していない場合、生物発光性複合体を形成する２つの非発光性要素は、「非発光性対」と称され得る。生物発光性複合体が３つ以上の非発光性ペプチド及び／または非発光性ポリペプチドによって形成される場合、生物発光性複合体の非複合体化構成要素は、「非発光性群」と称され得る。Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体は、（ａ）配列番号２と１００％未満（例えば、＞９９％、＜９５％、＜９０％、＜８０％、＜７０％、＜６０％、＜５０％など）かつ４０％を超える（例えば、＞４０％、＞４５％、＞５０％、＞５５％、＞６０％、＞６５％、＞７０％、＞７５％、＞８０％、＞８５％、＞９０％、＞９５％、＞９８％、＞９９％）配列同一性を有するペプチドアミノ酸配列を含むペプチド；及び（ｂ）配列番号３と１００％未満の同一性（例えば、＞９９％、＜９５％、＜９０％、＜８０％、＜７０％、＜６０％、＜５０％など）かつ４０％を超える（例えば、＞４０％、＞４５％、＞５０％、＞５５％、＞６０％、＞６５％、＞７０％、＞７５％、＞８０％、＞８５％、＞９０％、＞９５％、＞９８％、＞９９％）配列同一性を有するポリペプチドアミノ酸配列を含むポリペプチドを含み得、生物発光性複合体は、検出可能な発光を呈する。所定の実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号４または６を有するペプチドアミノ酸配列を含むペプチド；及び（ｂ）配列番号５を有するポリペプチドアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む生物発光性複合体であって、その生物発光性複合体は、検出可能な発光を呈する、生物発光性複合体を提供する。例示的なＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体は、ＳｍＢｉＴ非発光性ペプチド（配列番号６）、ＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＨｉＢｉＴ非発光性ペプチド（配列番号４）、及び／またはＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＬｇＢｉＴ非発光性ポリペプチド（配列番号５）を含むＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）技術を含む。
【００８８】
本明細書で使用される場合、用語「非発光性」は、（例えば、基質の存在下で）検出可能な量の可視スペクトルの光を放出しない特徴を呈する実体（例えば、ペプチド、ポリペプチド、複合体、タンパク質など）を指す。例えば、実体は、所与のアッセイで検出可能な発光を呈しない場合、非発光性と称され得る。本明細書で使用される場合、用語「非発光性」は、用語「実質的に非発光性と同義である。例えば、非発光性ポリペプチド（ＮＬｐｏｌｙ）は、実質的に非発光性であり、その非発光性相補性ペプチドを有するＮＬｐｏｌｙの複合体と比較して、発光が、例えば、１０倍以上（例えば、１００倍、２００倍、５００倍、１×１０3倍、１×１０4倍、１×１０5倍、１×１０6倍、１×１０7倍など）の減少を呈する。いくつかの実施形態では、任意の光放出が、特定のアッセイにとって干渉バックグラウンドを生成しないように十分に最小である場合、実体は「非発光性」である。
【００８９】
本明細書で使用される場合、用語「非発光性ペプチド」（例えば、ＮＬｐｅｐ）及び「非発光性ポリペプチド」（例えば、ＮＬｐｏｌｙ）は、（例えば、基質の存在下で）実質的に無発光、またはノイズを下回る、もしくは標準的条件下（例えば、生理的条件、アッセイ条件など）で典型的な機器（例えば、ルミノメーターなど）を用いて有意なシグナル（例えば、発光性複合体）と比較した場合に１０倍以上（例えば、１００倍、２００倍、５００倍、１×１０3倍、１×１０4倍、１×１０5倍、１×１０6倍、１×１０7倍など）下回る量を呈するペプチド及びポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、そのような非発光性ペプチド及びポリペプチドは、本明細書に記載の基準に従って集合して、生物発光性複合体を形成する。本明細書で使用される場合、「非発光性要素」は、非発光性ペプチドまたは非発光性ポリペプチドである。
【００９０】
本明細書で使用される場合、用語「相互作用要素」または「相互作用分子」は、生物発光性複合体を形成するために一対の非発光性要素または非発光性群を一緒にすることを補助する部分を指す。典型的な実施形態では、一対の相互作用要素（「相互作用対」としても知られる）は、一対の非発光性要素（例えば、非発光性ペプチド／ポリペプチド対）に結合し、その２つの相互作用要素間の引力相互作用が生物発光性複合体の形成を促進するが、本発明は、そのようなメカニズムに限定されず、メカニズムの理解は本発明の実施には必要とされない。相互作用要素は、任意の好適なメカニズム（例えば、非発光性対／群を近接させること、安定な相互作用のために非発光性対／群を適切なコンフォメーションで配置すること、複合体形成のための活性化エネルギーを減少させること、それらの組み合わせなど）によって生物発光性複合体の形成を促進し得る。相互作用要素は、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、小分子、補因子、核酸、脂質、炭水化物、抗体などであり得る。相互作用対は、同じ相互作用要素のうちの２つ（すなわち、ホモ対）または２つの異なる相互作用要素（すなわち、ヘテロ対）から構成され得る。ヘテロ対の場合、相互作用要素は、同じ種類の部分（例えば、ポリペプチド）であり得るか、または２つの異なる種類の部分（例えば、ポリペプチド及び小分子）であり得る。相互作用対による複合体形成が研究されるいくつかの実施形態では、相互作用対は、「標的対」または「対象となる対」と称され得、個々の相互作用要素は、「標的要素」（例えば、「標的ペプチド」、「標的ポリペプチド」など）または「対象となる要素」（例えば、「対象となるペプチド」、「対象となるポリペプチド」など）と称される。
【００９１】
本明細書で使用される場合、用語「融合」、「融合ポリペプチド」、及び「融合タンパク質」は、第２の異なるペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質（例えば、検出可能な配列、単離可能な配列、タグなど）に結合した対象となる第１のタンパク質またはポリペプチド（例えば、標的配列など）を含有するキメラタンパク質を指す。用語「従来の融合」は、第１のポリペプチドまたはタンパク質及び第２のペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質が端から端へ（例えば、Ｃ末端からＮ末端へ、またはＮ末端からＣ末端へ）融合した融合を指す。
【００９２】
本明細書で使用される場合、用語「セレンテラジン」、「セレンテラジン基質」、「セレンテラジン誘導体」、または「セレンテラジン誘導体基質」は、ルシフェラーゼ（例えば、海洋ルシフェラーゼ）などの多様な生物発光性タンパク質が作用したときに発光するレポーター分子の分類を指す。本明細書で使用される場合、用語「セレンテラジン」、「セレンテラジン基質」、「セレンテラジン誘導体」、または「セレンテラジン誘導体基質」は、天然に存在する（「ネイティブ」）セレンテラジンを指す。本明細書で使用される場合、用語「セレンテラジン」、「セレンテラジン基質」、「セレンテラジン誘導体」、または「セレンテラジン誘導体基質」は、ネイティブセレンテラジンならびに合成、例えば、誘導体またはバリアント、及びその天然アナログを指し、それには、ＷＯ２００３／０４０１００；米国出願番号１２／０５６，０７３（段落［００８６］）；及び米国特許第８，６６９，１０３号（これらの開示は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているものに加えて、フリマジン、セレンテラジン−ｎ、セレンテラジン−ｆ、セレンテラジン−ｈ、セレンテラジン−ｈｃｐ、セレンテラジン−ｃｐ、セレンテラジン−ｃ、セレンテラジン−ｅ、セレンテラジン−ｆｃｐ、ビス−デオキシセレンテラジン（「セレンテラジン−ｈｈ」）、セレンテラジン−ｉ、セレンテラジン−ｉｃｐ、セレンテラジン−ｖ、及び２−メチルセレンテラジンが含まれる。
【００９３】
本明細書で使用される場合、用語「サンプル」は、その最も広い意味で使用される。ある意味では、生物学的サンプル及び環境サンプルだけでなく、あらゆる源から得られた試料または培養物を含むことを意味する。生物学的サンプルは、動物（ヒトを含む）から得られ、流体、固体、組織、及び気体を包含し得る。生物学的サンプルには、血漿、血清などの血液産物が含まれ得る。サンプルはまた、本明細書に記載のペプチド及び／またはポリペプチドの細胞溶解物または精製形態を指し得る。細胞溶解物には、溶解剤で溶解された細胞またはウサギ網状赤血球もしくはコムギ胚芽溶解物などの溶解物が含まれ得る。サンプルはまた、無細胞発現系を含み得る。環境サンプルには、表面物質、土壌、水、結晶及び工業用サンプルなどの環境物質が含まれる。しかしながら、そのような例は、本発明に適用可能なサンプルの種類を限定するものとして解釈されるものではない。
【００９４】
用語「エネルギー受容体」または「受容体分子」は、エネルギー吸収（例えば、共鳴エネルギー移動）に反応して容易に検出可能なシグナルを生成する任意の小分子（例えば、発色団）、巨大分子（例えば、自己蛍光性タンパク質、フィコビリタンパク質、ナノ粒子、表面など）、または分子複合体を指す。所定の実施形態では、エネルギー受容体は、フルオロフォアまたは他の検出可能な発色団である。好適なフルオロフォアには、キサンテン誘導体（例えば、フルオレセイン、ローダミン、オレゴングリーン、エオシン、テキサスレッドなど）、シアニン誘導体（例えば、シアニン、インドカルボシアニン、オキサカルボシアニン、チアカルボシアニン、メロシアニンなど）、ナフタレン誘導体（例えば、ダンシル及びプロダン誘導体）、オキサジアゾール誘導体（例えば、ピリジルオキサゾール、ニトロベンズオキサジアゾール、ベンズオキサジアゾールなど）、プレン誘導体（例えば、カスケードブルー）、オキサジン誘導体（例えば、ナイルレッド、ナイルブルー、クレシルバイオレット、オキサジン１７０など）、アクリジン誘導体（例えば、プロフラビン、アクリジンオレンジ、アクリジンイエローなど）、アリールメチン誘導体（例えば、オーラミン、クリスタルバイオレット、マラカイトグリーンなど）、テトラピロール誘導体（例えば、ポルフィン、フタロシアン、ビリルビンなど）、ＣＦ色素（Ｂｉｏｔｉｕｍ）、ＢＯＤＩＰＹ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ＡＬＥＸＡ  ＦＬｕｏＲ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ＤＹＬＩＧＨＴ  ＦＬＵＯＲ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｐｉｅｒｃｅ）、ＡＴＴＯ及びＴＲＡＣＹ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）、ＦｌｕｏＰｒｏｂｅｓ（Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ）、ＤＹ及びＭＥＧＡＳＴＯＫＥＳ（Ｄｙｏｍｉｃｓ）、ＳＵＬＦＯ  ＣＹ色素（ＣＹＡＮＤＹＥ、ＬＬＣ）、ＳＥＴＡＵ  ＡＮＤ  ＳＱＵＡＲＥ  ＤＹＥＳ（ＳＥＴＡ  ＢｉｏＭｅｄｉｃａｌｓ）、ＱＵＡＳＡＲ及びＣＡＬ  ＦＬＵＯＲ色素（Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＳＵＲＥＬＩＧＨＴ  ＤＹＥＳ（ＡＰＣ、ＲＰＥ、ＰｅｒＣＰ、フィコビリソーム）（Ｃｏｌｕｍｂｉａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＡＰＣ、ＡＰＣＸＬ、ＲＰＥ、ＢＰＥ（Ｐｈｙｃｏ−Ｂｉｏｔｅｃｈ）、自己蛍光性タンパク質（例えば、ＹＦＰ、ＲＦＰ、ｍＣｈｅｒｒｙ、ｍＫａｔｅ）、量子ドットナノ結晶などが含まれるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、フルオロフォアは、ローダミンアナログ（例えば、カルボキシローダミンアナログ）である。所定の実施形態では、エネルギー受容体には、ＮＣＴなどの小分子蛍光色素、クエンチャー、量子ドットなどの蛍光粒子、発光性金属複合体、及び任意の他の既知のエネルギー受容体が含まれるがこれらに限定されない。
【００９５】
本明細書で互換的に使用される用語「発光性酵素」、「生物発光性酵素」、または「ルシフェラーゼ」は、酵素が基質を与えられたときに光を生成し、放出する生物発光において使用される酸化性酵素の分類を指す。ルシフェラーゼは、ルシフェラーゼ基質を使用する天然に存在するルシフェラーゼ、組換えルシフェラーゼ、または変異型ルシフェラーゼであり得る。ルシフェラーゼ基質は、ルシフェリン、ルシフェリン誘導体もしくはアナログ、プレ−ルシフェリン誘導体もしくはアナログ、セレンテラジン、またはセレンテラジン誘導体もしくはアナログであり得る。発光性酵素は、天然に存在する場合、当業者によって生物から容易に得られ得る。発光性酵素が天然に存在するものであるか、組換えもしくは変異型発光性酵素であるもの、例えば、天然に存在する発光性酵素のルシフェラーゼ−セレンテラジンまたはルシフェラーゼ−ルシフェリン反応で活性を保持するものである場合、それは、発光性酵素をコードする核酸を発現するように形質転換された細菌、酵母、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞などの培養物から容易に得られ得る。さらに、組換えまたは変異型発光性酵素は、ルシフェラーゼをコードする核酸を使用して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ無細胞系から誘導され得る。好適な発光性酵素には、生物発光性十脚甲殻類、例えば、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｏｉｄｅａに由来するルシフェラーゼ（例えば、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼ）、カブトムシルシフェラーゼ（例えば、Ｐｈｏｔｉｎｕｓ  ｐｙｒａｌｉｓ、Ｐｈｏｔｕｒｉｓ  ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉｃａなど）、刺胞動物などの海洋生物（例えば、Ｒｅｎｉｌｌａルシフェラーゼ）、Ａｒｉｓｔｅｉｄａｅ、Ｓｏｌｅｎｏｃｅｒｉｄａｅ、Ｌｕｃｉｆｅｒｉｄａｅ、Ｓｅｒｇｅｓｔｉｄａｅ、Ｐａｓｉｐｈｅｉｄａｅ及びＴｈａｌａｓｓｏｃａｒｉｄｉｄａｅ十脚目科、カイアシルシフェラーゼ、例えば、Ｇａｕｓｓｉａルシフェラーゼ、例えば、Ｇａｕｓｓｉａ  ｐｒｉｎｃｅｐｓルシフェラーゼ、Ｍｅｔｒｉｄｉａルシフェラーゼ、例えば、Ｍｅｔｒｉｄｉａ  ｌｏｎｇａ及びＭｅｔｒｉｄｉａ  ｐａｃｉｆｉｃａルシフェラーゼ、Ｖａｒｇｕｌａルシフェラーゼ、例えば、Ｖａｒｇｕｌａ  ｈｉｌｇｅｎｄｏｒｆｉｉルシフェラーゼ、Ｐｌｅｕｒｏｍａｍｍａ  ｘｉｐｈｉａｓルシフェラーゼ、及びフォトタンパク質、例えば、エクオリン、ならびにそれらのバリアント、組換え体、及び変異体が含まれる。
【００９６】
「発光性反応混合物」は、発光性酵素が光シグナル、すなわち、発光を生成することを可能にする物質を含有する。その混合物はまた、酵素、例えば、ルシフェラーゼ酵素またはルシフェラーゼを含有し得る。発光シグナルを生成するために必要な物質、ならびに特定の濃度及び／または量は、使用される発光性酵素及び実施されているアッセイの種類に応じて異なる。しばしば、適切なｐＨで反応を維持するための緩衝液、酵素活性を維持するのを補助するためのＰＲＩＯＮＥＸまたはウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）などの添加剤、還元剤、洗浄剤などを含む他の物質が溶液に添加される。
【００９７】
本明細書で使用される場合、用語「Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ」及び「Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓ由来ルシフェラーゼ」は、互換的に使用され、深海エビＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓ  ｇｒａｃｉｌｉｒｏｓｔｒｉｓから分泌されたルシフェラーゼ（例えば、配列番号１）（その野生型、バリアント、及び変異型を含む）を指す。例えば、好適なＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼバリアントは、米国特許第８，５５７，９７０号及び第８，６６９，１０３号に記載されており、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００９８】
本明細書で使用される場合、用語「配列同一性」は、２つのポリマー配列（例えば、ペプチド、ポリペプチド、核酸など）が、モノマーサブユニットの同一の配列組成を有する程度を指す。用語「配列類似性」は、２つのポリマー配列（例えば、ペプチド、ポリペプチド、核酸など）が、類似のポリマー配列を有する程度を指す。例えば、類似のアミノ酸は、同一の生物物理学的特徴を共有するものであり、ファミリー、例えば、酸性（例えば、アスパラギン酸塩、グルタミン酸）、塩基性（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、非極性（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）及び非荷電極性（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシン）に分類され得る。「配列同一率」（または「配列類似率」）は、（１）２つの最適にアライメントされた配列を比較窓（例えば、長い方の配列の長さ、短い方の配列の長さ、特定の窓）にわたって比較すること、（２）同一の（または類似の）モノマー（例えば、同一のアミノ酸が両方の配列に存在する、類似のアミノ酸が両方の配列に存在する）を含有する位置の数を決定して一致した位置の数を得ること、（３）一致した位置の数を比較窓（例えば、長い方の配列の長さ、短い方の配列の長さ、特定の窓）における位置の総数によって除算すること、及び（４）その結果を１００倍して、配列同一率または配列類似率を得ることによって計算される。例えば、ペプチドＡ及びＢが両方とも長さが２０アミノ酸であり、１つの位置を除くすべてにおいて同一のアミノ酸を有する場合、そのときはペプチドＡ及びペプチドＢは、９５％の配列同一性を有する。非同一位置におけるアミノ酸が同一の生物物理学的特徴を共有している（例えば、両方とも酸性である）場合、そのときはペプチドＡ及びペプチドＢは、１００％の配列類似性を有するであろう。別の例として、ペプチドＣが２０アミノ酸長であり、ペプチドＤが１５アミノ酸長であり、ペプチドＤにおける１５個のアミノ酸のうち１４個がペプチドＣの部分のものと同一である場合、そのときはペプチドＣ及びＤは、７０％の配列同一性を有するが、ペプチドＤは、ペプチドＣの最適比較窓に対して９３．３％の配列同一性を有する。本明細書において「配列同一率」（または「配列類似率」）を計算する目的のため、アライメントされた配列における任意のギャップは、その位置におけるミスマッチとして処理される。
【００９９】
本明細書で使用される場合、用語「レポーター部分」は、適切な条件下で、検出可能なシグナルを直接的または間接的に生成する部分を指し得る。例示的なレポーター部分には、フルオロフォア、発光性分子、色素、放射性標識及びルシフェラーゼなどの酵素の基質が含まれるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、レポーター部分は、例えば、レポーター部分が酵素の基質である場合、検出可能なシグナルを間接的に生成し得る。次いで酵素と基質との反応により、蛍光または発光などの検出可能なシグナルが生成される。本明細書で使用される場合、用語「生物発光性レポーター部分」は、ルシフェラーゼの基質である部分を指し得る。例えば、生物発光性レポーター部分は、ルシフェリン、ルシフェリン誘導体、例えば、プレ−ルシフェリン、アミノルシフェリン、キオノリルルシフェリン、ナプチルルシフェリン、フルオロルシフェリン、クロロルシフェリン、ルシフェリン誘導体の前駆体、セレンテラジンまたはセレンテラジン誘導体もしくはアナログ、例えば、フリマジンであり得る。生成される発光シグナルは、ルミノメーターを使用して検出され得る。本明細書で使用される場合、用語「蛍光レポーター部分」は、蛍光を発する部分を指し得る。例えば、蛍光レポーター部分は、クマリン、Ｒ１１０、フルオロセイン、ＤＤＡＯ、レゾルフィン、クレシルバイオレット、シリキサンテン、またはカルボピロニンなどのフルオフォアであり得る。蛍光は、蛍光計を使用して検出され得る。
【０１００】
本明細書における数値範囲の記述について、同程度の精度を有するその間のそれぞれの介在数が明示的に企図される。例えば、６〜９の範囲の場合、数値７及び８が、６及び９に加えて企図され、６．０〜７．０の範囲の場合、数値６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、及び７．０が明示的に企図される。
【０１０１】
２．化合物
本明細書では、選択的にＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体を阻害し得る、例えば、生物発光性複合体のルシフェラーゼ活性を阻害し得る化合物が提供される。一態様では、式（Ｉ）の化合物、またはその塩：
2021526530.tif 000006
（式中：
Ｒ1は、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、複素環、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリールアルキル、またはヘテロシクリルアルキルであり、そのアリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、及び複素環は、１つ以上のＲWで任意に置換されており、それぞれのＲWは、独立して、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＲA、−Ｃ1-10アルキレン−ＯＲA、−ＣＯ−ＲA、−Ｃ1-10アルキレン−ＣＯ−ＲA、−ＣＯ−ＯＲA、−Ｃ1-10アルキレン−ＣＯ−ＯＲA、−ＣＯ−ＮＨＲA、−Ｃ1-10アルキレン−ＣＯ−ＮＨＲA、−ＮＲBＲC、−Ｃ1-10アルキレン−ＮＲBＲC、−ＮＨ−ＣＯ−Ｃ1-4アルキル、−Ｃ1-10アルキレン−ＮＨ−ＣＯ−Ｃ1-4アルキル、フェニル、及び１、２、３、または４個のＲD基で置換されたフェニルからなる群から選択され；
それぞれのＲ2は、独立して、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＲA、−Ｃ1-4アルキレン−ＯＲA、−ＣＯ−ＲA、−Ｃ1-4アルキレン−ＣＯ−ＲA、−ＣＯ−ＯＲA、−Ｃ1-4アルキレン−ＣＯ−ＯＲA、−ＣＯ−ＮＨＲA、−Ｃ1-4アルキレン−ＣＯ−ＮＨＲA、−ＮＲBＲC、−Ｃ1-4アルキレン−ＮＲBＲC、−ＮＨ−ＣＯ−Ｃ1-4アルキル、−Ｃ1-4アルキレン−ＮＨ−ＣＯ−Ｃ1-4アルキル、フェニル、１、２、３、または４個のＲD基で置換されたフェニル、−Ｃ≡Ｃ−ＲA、または−Ｃ≡Ｃ−Ｃ1-4アルキレン−ＯＲAであり、または２個のＲ2が、それらが結合している
2021526530.tif 000007
部分の炭素原子と一緒になって５または６員縮合環を形成し；
それぞれのＲ3は、独立して、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＲA、−Ｃ1-4アルキレン−ＯＲA、−ＣＯ−ＲA、−ＣＯ−ＯＲA、または−ＣＯ−ＮＨＲAであり、または２個のＲ3が、それらが結合している
2021526530.tif 000008
部分の炭素原子と一緒になって５または６員縮合環を形成し；
Ｒ4は、ＨまたはＣ1-4アルキルであり；
ｐは、０、１、２、３、または４であり；
ｑは、０、１、２、３、または４であり；
それぞれの出現におけるＲAは、独立して、Ｈ、Ｃ1-4アルキル、またはＣ1-4ハロアルキルであり；
それぞれの出現におけるＲB及びＲCは、独立して、ＨまたはＣ1-4アルキルであり、またはＲB及びＲCは、それらが結合しているＮ原子と一緒になって５または６員複素環を形成し；
それぞれの出現におけるＲDは、独立して、Ｃ1-4アルキル、−ＯＣ1-4アルキル、−ＣＮ、またはハロゲンである）
が開示される。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物において：
Ｒ1は、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、または複素環であり、そのアリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、及び複素環は、１つ以上のＲWで任意に置換されており、それぞれのＲWは、独立して、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＲA、−Ｃ1-10アルキレン−ＯＲA、−ＣＯ−ＲA、−Ｃ1-10アルキレン−ＣＯ−ＲA、−ＣＯ−ＯＲA、−Ｃ1-10アルキレン−ＣＯ−ＯＲA、−ＣＯ−ＮＨＲA、−Ｃ1-10アルキレン−ＣＯ−ＮＨＲA、−ＮＲBＲC、−Ｃ1-10アルキレン−ＮＲBＲC、−ＮＨ−ＣＯ−Ｃ1-4アルキル、−Ｃ1-10アルキレン−ＮＨ−ＣＯ−Ｃ1-4アルキル、フェニル、及び１、２、３、または４個のＲD基で置換されたフェニルからなる群から選択され；
それぞれのＲ2は、独立して、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＲA、−Ｃ1-4アルキレン−ＯＲA、−ＣＯ−ＲA、−Ｃ1-4アルキレン−ＣＯ−ＲA、−ＣＯ−ＯＲA、−Ｃ1-4アルキレン−ＣＯ−ＯＲA、−ＣＯ−ＮＨＲA、−Ｃ1-4アルキレン−ＣＯ−ＮＨＲA、−ＮＲBＲC、−Ｃ1-4アルキレン−ＮＲBＲC、−ＮＨ−ＣＯ−Ｃ1-4アルキル、−Ｃ1-4アルキレン−ＮＨ−ＣＯ−Ｃ1-4アルキル、フェニル、１、２、３、または４個のＲD基で置換されたフェニル、−Ｃ≡Ｃ−ＲA、または−Ｃ≡Ｃ−Ｃ1-4アルキレン−ＯＲAであり、または２個のＲ2が、それらが結合している
2021526530.tif 000009
部分の炭素原子と一緒になって５または６員縮合環を形成し；
それぞれのＲ3は、独立して、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＲA、−Ｃ1-4アルキレン−ＯＲA、−ＣＯ−ＲA、−ＣＯ−ＯＲA、または−ＣＯ−ＮＨＲAであり、または２個のＲ3が、それらが結合している
2021526530.tif 000010
部分の炭素原子と一緒になって５または６員縮合環を形成し；
Ｒ4は、ＨまたはＣ1-4アルキルであり；
ｐは、０、１、２、３、または４であり；
ｑは、０、１、２、３、または４であり；
それぞれの出現におけるＲAは、独立して、Ｈ、Ｃ1-4アルキル、またはＣ1-4ハロアルキルであり；
それぞれの出現におけるＲB及びＲCは、独立して、ＨまたはＣ1-4アルキルであり、またはＲB及びＲCは、それらが結合しているＮ原子と一緒になって５または６員複素環を形成し；
それぞれの出現におけるＲDは、独立して、Ｃ1-4アルキル、−ＯＣ1-4アルキル、−ＣＮ、またはハロゲンである。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、Ｒ1は、非置換アリール、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロアリール、非置換複素環、または非置換アリールアルキルである。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、Ｒ1は、非置換アリール、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロアリール、または非置換複素環である。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、Ｒ1は、アリール（Ｃ6-20アリールなど）またはヘテロアリール（５〜１２員ヘテロアリールなど）であり、アリール及びヘテロアリールは、１つ以上のＲWで任意に置換されている。いくつかの実施形態では、Ｒ1は、Ｃ6-20アリールであり、そのアリールは、１つ以上のＲWで任意に置換されている。いくつかの実施形態では、Ｒ1は、１つ以上のＲWで任意に置換された５〜１２員ヘテロアリールである。いくつかの実施形態では、Ｒ1は、１つ以上のＲWで任意に置換されたＣ5-10シクロアルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ1は、１つ以上のＲWで任意に置換された５〜１２員複素環である。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、Ｒ1は、
2021526530.tif 000011
であり、それぞれが１つ以上のＲWで任意に置換されている。いくつかの実施形態では、Ｒ1は、
2021526530.tif 000012
であり、これらのそれぞれが非置換である。いくつかの実施形態では、Ｒ1は、
2021526530.tif 000013
であり、これらのそれぞれが、Ｃ1-4アルキルまたはＣ1-4ハロアルキルで置換されている。
【０１０７】
いくつかの実施形態では、Ｒ1は、
2021526530.tif 000014
であり、これらのそれぞれが、１つ以上のＲWで任意に置換されている。いくつかの実施形態では、Ｒ1は、
2021526530.tif 000015
である。いくつかの実施形態では、それぞれのＲWは、独立して、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、ハロゲン、または−ＣＮからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＲWは、−ＯＲA、−Ｃ1-4アルキレン−ＯＲA、−ＣＯ−ＲA、−Ｃ1-4アルキレン−ＣＯ−ＲA、−ＣＯ−ＯＲA、−Ｃ1-4アルキレン−ＣＯ−ＯＲA、−ＣＯ−ＮＨＲA、または−Ｃ1-4アルキレン−ＣＯ−ＮＨＲAである。いくつかの実施形態では、ＲWは、−ＮＲBＲC、−Ｃ1-4アルキレン−ＮＲBＲC、−ＮＨ−ＣＯ−Ｃ1-4アルキル、または−Ｃ1-4アルキレン−ＮＨ−ＣＯ−Ｃ1-4アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲWは、フェニルまたは１、２、３、または４個のＲD基で置換されフェニルである。いくつかの実施形態では、ＲWは、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、ハロゲン、または−ＣＮである。いくつかの実施形態では、ＲWは、メチル、エチル、プロピル、またはブチルなどのＣ1-4アルキルである。
【０１０８】
いくつかの実施形態では、ＲWは、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＲA、−Ｃ1-10アルキレン−ＯＲA、−ＣＯ−ＯＲA、−Ｃ1-10アルキレン−ＣＯ−ＯＲA、及びフェニルからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、それぞれのＲAは、独立して、水素、メチル、及びエチルから選択される。
【０１０９】
いくつかの実施形態では、Ｒ1は、１つ以上のＲWで任意に置換されたアリールアルキル（ベンジルなど）である。
【０１１０】
いくつかの実施形態では、Ｒ1は、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、複素環、またはアリールアルキルであり、そのアリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、及び複素環は、１つのＲWで置換されており、ＲWは、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＲA、−Ｃ1-10アルキレン−ＯＲA、−ＣＯ−ＯＲA、−Ｃ1-10アルキレン−ＣＯ−ＯＲA、及びフェニルからなる群から選択され、それぞれのＲAは、独立して、水素、メチル、及びエチルから選択される。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、Ｒ1は、
2021526530.tif 000016
であり、これらのそれぞれが非置換であり、または１つのＲWで置換されており、ＲWは、Ｃ1-10アルキル（例えば、メチル、エチル、イソプロピル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、またはｎ−オクチル）、Ｃ1-10ハロアルキル（例えば、−（ＣＨ2）4Ｂｒ）、ハロゲン（例えば、フルオロ、クロロ、またはブロモ）、−ＣＮ、−ＯＲA（例えば、−ＯＣＨ3）、−Ｃ1-10アルキレン−ＯＲA（例えば、−（ＣＨ2）4−ＯＨまたは−（ＣＨ2）6−ＯＨ）、−ＣＯ−ＯＲA（例えば、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＣＨ3、または−ＣＯＯＣＨ2ＣＨ3）、−Ｃ1-10アルキレン−ＣＯ−ＯＲA（例えば、−ＣＨ2ＣＯＯＨ、−ＣＨ2ＣＯＯＣＨ2ＣＨ3、−（ＣＨ2）5−ＣＯＯＨ、または−（ＣＨ2）5−ＣＯＯＣＨ3）、及びフェニルからなる群から選択される。
【０１１２】
いくつかの実施形態では、ｐは、０、１、または２である。いくつかの実施形態では、ｐは、０である。いくつかの実施形態では、ｐは、１である。
【０１１３】
いくつかの実施形態では、Ｒ2は、Ｃ1-10アルキル、ハロゲン、Ｃ1-4ハロアルキル、−ＯＨ、Ｃ1-4アルキレン−ＯＨ、−ＯＣ1-4アルキル、−ＮＨ2、フェニル、または−ＣＯ−ＯＣ1-4アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ2は、Ｃ1-10アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ2は、メチル、エチル、プロピル、またはブチルなどのＣ1-4アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ2は、メチルである。いくつかの実施形態では、Ｒ2は、ハロゲン、Ｃ1-4ハロアルキル、−ＯＨ、Ｃ1-4アルキレン−ＯＨ、−ＯＣ1-4アルキル、または−ＮＨ2である。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、Ｒ2は、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、ハロゲン、−ＯＲA、−Ｃ1-4アルキレン−ＯＲA、−ＣＯ−ＲA、−ＣＯ−ＯＲA、−Ｃ1-4アルキレン−ＣＯ−ＯＲA、−ＣＯ−ＮＨＲA、−ＮＲBＲC、−ＮＨ−ＣＯ−Ｃ1-4アルキル、フェニル、及び−Ｃ≡Ｃ−Ｃ1-4アルキレン−ＯＲAから選択され、それぞれのＲAは、独立して、水素、メチル、エチル、及びトリフルオロメチルから選択される。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、Ｒ2は、Ｃ1-10アルキル（例えば、メチル、エチル、イソプロピル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、またはｎ−ヘキシルなどのＣ1-6アルキル）、Ｃ1-10ハロアルキル（例えば、トリフルオロメチルなどのＣ1-4ハロアルキル）、ハロゲン（例えば、フルオロ、クロロ、またはブロモ）、−ＯＲA（例えば、−ＯＨ、−ＯＣＨ3、−Ｏ（ＣＨ2）3ＣＨ3、または−ＯＣＦ3）、−Ｃ1-4アルキレン−ＯＲA（例えば、−ＣＨ2ＯＨまたは−（ＣＨ2）3−ＯＨ）、−ＣＯ−ＲA（例えば、−ＣＯＨ）、−ＣＯ−ＯＲA（例えば、−ＣＯＯＨまたは−ＣＯＯＣＨ3）、−Ｃ1-4アルキレン−ＣＯ−ＯＲA（例えば、−（ＣＨ2）2ＣＯＯＣＨ3、−ＣＯ−ＮＨＲA（例えば、−ＣＯＮＨ（ＣＨ2）3ＣＨ3、−ＮＲBＲC（例えば、−ＮＨ2または−ＮＨ（ＣＨ2）3ＣＨ3、−ＮＨ−ＣＯ−Ｃ1-4アルキル（例えば、−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ3）、フェニル、−Ｃ≡Ｃ−ＲA（例えば、−Ｃ≡Ｃ−（ＣＨ2）3ＣＨ3）及び−Ｃ≡Ｃ−Ｃ1-4アルキレン−ＯＲA（例えば、−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ2−ＯＨ）から選択される。いくつかの実施形態では、それぞれのＲAは、独立して、水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、及びｎ−ブチルから選択される。
【０１１６】
いくつかの実施形態では、ｐは、２である。いくつかの実施形態では、２個のＲ2は、それらが結合している
2021526530.tif 000017
部分の炭素原子と一緒になって５または６員縮合環を形成する。例えば、２個のＲ2は、それらが結合している
2021526530.tif 000018
部分と一緒になって
2021526530.tif 000019
を形成し得る。
【０１１７】
いくつかの実施形態では、ｑは、０、１、または２である。いくつかの実施形態では、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、ｑは、１である。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、Ｒ3は、Ｃ1-10アルキル、Ｃ1-10ハロアルキル、ハロゲン、−ＣＮ、及び−ＯＲAから選択され、ＲAは、水素及びＣ1-4アルキルから選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ3は、Ｃ1-10アルキル（例えば、メチル、エチル、イソプロピル、ｎ−プロピル、またはｎ−ブチルなどのＣ1-4アルキル）、Ｃ1-10ハロアルキル（例えば、トリフルオロメチルなどのＣ1-4ハロアルキル）、ハロゲン（例えば、フルオロ、クロロ、またはブロモ）、−ＣＮ、及び−ＯＲA（例えば、−ＯＨまたは−ＯＣＨ3）から選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ3は、Ｃ1-4アルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＨ、または−ＯＣ1-4アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ3は、ハロゲンである。いくつかの実施形態では、Ｒ2は、Ｃ1-4アルキル（メチルなど）であり、Ｒ3は、Ｃ1-4アルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＨ、または−ＯＣ1-4アルキルである。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、ｑは、２である。いくつかの実施形態では、２個のＲ3は、それらが結合している
2021526530.tif 000020
部分の炭素原子と一緒になって５または６員縮合環を形成する。例えば、２個のＲ3は、それらが結合している
2021526530.tif 000021
部分と一緒になって
2021526530.tif 000022
を形成し得る。
【０１２０】
いくつかの実施形態では、ｐは、１であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、ｐは、１であり、ｑは、１である。いくつかの実施形態では、Ｒ2は、Ｃ1-4アルキル（メチルなど）であり、ｐは、１であり、ｑは、０である。いくつかの実施形態では、Ｒ2は、Ｃ1-4アルキル（メチルなど）であり、Ｒ3は、Ｃ1-4アルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＨ、または−ＯＣ1-4アルキルであり、ｐは、１であり、ｑは、１である。いくつかの実施形態では、Ｒ2は、メチルであり、Ｒ3は、−ＣＨ3、ハロゲン（Ｆなど）、−ＯＣＨ3、または−ＣＮであり、ｐは、１であり、ｑは、１である。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、Ｒ4は、Ｈである。いくつかの実施形態では、Ｒ4は、Ｃ1-4アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ4は、エチルである。
【０１２２】
それぞれの出現におけるＲA（Ｒ1、Ｒ2、またはＲ3における置換基として）は、独立して、Ｈ、Ｃ1-4アルキル、またはＣ1-4ハロアルキルである。いくつかの実施形態では、ＲAは、Ｈである。いくつかの実施形態では、ＲAは、Ｃ1-4アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲAは、メチルである。いくつかの実施形態では、ＲAは、−ＣＦ3などのＣ1-4ハロアルキルである。
【０１２３】
それぞれの出現におけるＲB及びＲC（Ｒ1またはＲ2における置換基として）は、独立して、ＨまたはＣ1-4アルキルであり、またはＲB及びＲCは、それらが結合しているＮ原子と一緒になって５または６員複素環を形成する。いくつかの実施形態では、ＲB及びＲCは、両方ともＨである。いくつかの実施形態では、ＲBは、Ｈであり、ＲCは、Ｃ1-4アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲBは、Ｃ1-4アルキルであり、ＲCは、Ｃ1-4アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲB及びＲCは、それらが結合しているＮ原子と一緒になって５または６員複素環を形成する。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、ＲDは、メチルなどのＣ1-4アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲDは、−ＯＣＨ3などの−ＯＣ1-4アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲDは、−ＣＮまたはハロゲンである。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、Ｒ1は、
2021526530.tif 000023
であり、これらのそれぞれがＣ1-4アルキルまたはＣ1-4ハロアルキルで置換されており、またはＲ1は
2021526530.tif 000024
であり、Ｒ2は、Ｃ1-4アルキル、ハロゲン、Ｃ1-4ハロアルキル、−ＯＨ、Ｃ1-4アルキレン−ＯＨ、−ＯＣ1-4アルキル、または−ＮＨ2であり、Ｒ3は、Ｃ1-4アルキル、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＨ、または−ＯＣ1-4アルキルであり、ｐは、１であり、ｑは、０または１である。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、ｐが０である場合、そのときはＲ1は、１つ以上のＲWで（例えば、１つのＲW）で置換されている。いくつかの実施形態では、ｐが０であり、Ｒ1がフェニルである場合、そのときはＲ1は、１つ以上のＲW（例えば、１つのＲW）で置換されている。いくつかの実施形態では、Ｒ1が非置換である場合、そのときはｐは、１、２、３、または４である（例えば、ｐは、１または２であり、またはｐは、１である）。いくつかの実施形態では、Ｒ1が非置換フェニルである場合、そのときはｐは、１、２、３、または４である（例えば、ｐは、１または２であり、またはｐは、１である）。いくつかの実施形態では、化合物は、Ｎ−フェニル−２−（フェニルスルホンアミド）ベンズアミドではない。
【０１２７】
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ−ａ）の化合物、またはその塩、
2021526530.tif 000025
（式中、
Ｒ1は、Ｃ6-20アリールまたは５〜１２員ヘテロアリールであり、そのアリール及びヘテロアリールは、１つ以上のＲWで任意に置換されており；
ｐは、０、１、または２であり；
ｑは、０または１であり；
Ｒ3は、Ｃ1-4アルキル、ハロゲン、−ＣＮまたは−ＯＲAであり；
ＲAは、ＨまたはＣ1-4アルキルであり；
Ｒ2及びＲWは、本明細書で定義されたとおりである）
である。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、式（Ｉ−ａ）の化合物、またはその塩（式中、Ｒ1は、非置換Ｃ6-20アリールまたは非置換５〜１２員ヘテロアリールである）が開示される。
【０１２９】
いくつかの実施形態では、式（Ｉ−ａ）の化合物、またはその塩（式中、Ｒ1は、
2021526530.tif 000026
であり、それぞれが１つ以上のＲWで任意に置換されている）が開示される。いくつかの実施形態では、式（Ｉ−ａ）のＲ1は、
2021526530.tif 000027
である。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、式（Ｉ−ａ）の化合物、またはその塩（式中、Ｒ1は、Ｃ1-4アルキルまたはＣ1-4ハロアルキルである）が開示される。例えば、式（Ｉ−ａ）のＲ1は、
2021526530.tif 000028
であり得、それぞれがＣ1-4アルキルまたはＣ1-4ハロアルキルで置換されている。
【０１３１】
いくつかの実施形態では、式（Ｉ−ａ）の化合物、またはその塩（式中、Ｒ1は、
2021526530.tif 000029
であり、これらのそれぞれが１つ以上のＲWで任意に置換されている）が開示される。いくつかの実施形態では、Ｒ1は、
2021526530.tif 000030
である。
【０１３２】
いくつかの実施形態では、式（Ｉ−ａ）の化合物、またはその塩（式中、Ｒ1は、
2021526530.tif 000031
であり、これらのそれぞれが非置換であり、または１つのＲWで置換されており、ＲWは、Ｃ1-10アルキル（例えば、メチル、エチル、イソプロピル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、またはｎ−オクチル）、Ｃ1-10ハロアルキル（例えば、−（ＣＨ2）4Ｂｒ）、ハロゲン（例えば、フルオロ、クロロ、またはブロモ）、−ＣＮ、−ＯＲA（例えば、−ＯＣＨ3）、−Ｃ1-10アルキレン−ＯＲA（例えば、−（ＣＨ2）4−ＯＨまたは−（ＣＨ2）6−ＯＨ）、−ＣＯ−ＯＲA（例えば、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＣＨ3、または−ＣＯＯＣＨ2ＣＨ3）、−Ｃ1-10アルキレン−ＣＯ−ＯＲA（例えば、−ＣＨ2ＣＯＯＨ、−ＣＨ2ＣＯＯＣＨ2ＣＨ3、−（ＣＨ2）5−ＣＯＯＨ、または−（ＣＨ2）5−ＣＯＯＣＨ3）、及びフェニルからなる群から選択される）が開示される。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、式（Ｉ−ａ）の化合物、またはその塩（式中、Ｒ2は、Ｃ1-4アルキル（メチル、エチル、プロピル、またはブチルなど）、ハロゲン、Ｃ1-4ハロアルキル、−ＯＨ、Ｃ1-4アルキレン−ＯＨ、−ＯＣ1-4アルキル、−ＮＨ2、フェニル、または−ＣＯ−ＯＣ1-4アルキルであり、またはＲ2は、それらが結合している
2021526530.tif 000032
部分の炭素原子と一緒になって５または６員縮合環を形成する）が開示される。例えば、式（Ｉ−ａ）の２個のＲ2は、それが結合している
2021526530.tif 000033
部分と一緒になって
2021526530.tif 000034
を形成し得る。いくつかの実施形態では、式（Ｉ−ａ）の化合物、またはその塩（式中、Ｒ2は、Ｃ1-4アルキル（メチルなど）である）が開示される。いくつかの実施形態では、式（Ｉ−ａ）の化合物、またはその塩（式中、Ｒ2は、−ＯＨ、−Ｃ1-4アルキレン−ＯＨ（−ＣＨ2ＯＨなど）、−ＯＣ1-4アルキル（−ＯＣＨ3など）、または−ＮＨ2である）が開示される。いくつかの実施形態では、式（Ｉ−ａ）の化合物、またはその塩（式中、ｐは、１であり、ｑは、０である）が開示される。いくつかの実施形態では、式（Ｉ−ａ）の化合物、またはその塩（式中、Ｒ2は、Ｃ1-4アルキル（メチルなど）、−ＯＨ、−Ｃ1-4アルキレン−ＯＨ（−ＣＨ2ＯＨなど）、−ＯＣ1-4アルキル（−ＯＣＨ3など）、または−ＮＨ2であり、ｐは、１であり、ｑは、０である）が開示される。いくつかの実施形態では、式（Ｉ−ａ）の化合物、またはその塩（式中、ｐは、１であり、ｑは、１である）が開示される。いくつかの実施形態では、式（Ｉ−ａ）の化合物、またはその塩（式中、Ｒ2は、メチルであり、Ｒ3は、−ＣＨ3、ハロゲン（Ｆなど）、−ＯＣＨ3、または−ＣＮであり、ｐは、１であり、ｑは、１である）が開示される。
【０１３４】
いくつかの実施形態では、式（Ｉ−ａ）の化合物、またはその塩（式中、ｐが０であり、Ｒ1がフェニルである場合、そのときはＲ1は、１つ以上のＲWで置換されている）が開示される。いくつかの実施形態では、式（Ｉ−ａ）の化合物、またはその塩（式中、Ｒ1が非置換フェニルである場合、そのときはｐは、１、２、３、または４である（例えば、ｐは、１または２であり、またはｐは、１である））が開示される。いくつかの実施形態では、式（Ｉ−ａ）の化合物、またはその塩（式中、ｐが０である場合、そのときはＲ1は、１つ以上のＲWで（例えば、１つのＲWで）置換されている）が開示される。いくつかの実施形態では、式（Ｉ−ａ）の化合物、またはその塩（式中、ｐが０であり、Ｒ1がフェニルである場合、そのときはＲ1は、１つ以上のＲWで（例えば、１つのＲWで）置換されている）が開示される。いくつかの実施形態では、式（Ｉ−ａ）の化合物、またはその塩（式中、Ｒ1が非置換である場合、そのときはｐは、１、２、３、または４である（例えば、ｐは、１または２であり、またはｐは、１である））が開示される。いくつかの実施形態では、式（Ｉ−ａ）の化合物、またはその塩（式中、Ｒ1が非置換フェニルである場合、そのときはｐは、１、２、３、または４である（例えば、ｐは、１または２であり、またはｐは、１である））が開示される。いくつかの実施形態では、式（Ｉ−ａ）の化合物、またはその塩であって、その化合物がＮ−フェニル−２−（フェニルスルホンアミド）ベンズアミドではないものが開示される。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、式（Ｉ−ａ）の化合物は、式（Ｉ−ａ−１）の化合物、またはその塩、
2021526530.tif 000035
（式中：
Ｒ1は、
2021526530.tif 000036
であり、それぞれが、ハロゲン、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4ハロアルキル、またはフェニルで任意に置換されており；またはＲ1は、
2021526530.tif 000037
であり；
Ｒ2は、ハロゲン、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4ハロアルキル、−ＯＨ、−Ｃ1-4アルキレン−ＯＨ、−ＯＣ1-4アルキル、または−ＮＨ2であり；
Ｒ3及びｑは、式（Ｉ−ａ）で定義されたとおりである）
である。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、式（Ｉ−ａ−１）の化合物、またはその塩（式中、Ｒ1は、
2021526530.tif 000038
である）が開示される。いくつかの実施形態では、式（Ｉ−ａ−１）の化合物、またはその塩（式中、Ｒ1は、
2021526530.tif 000039
であり、これらのそれぞれがハロゲン、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4ハロアルキル、またはフェニルで置換されている）が開示される。いくつかの実施形態では、式（Ｉ−ａ−１）の化合物、またはその塩（式中、Ｒ1は、
2021526530.tif 000040
である）が開示される。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、式（Ｉ−ａ−１）の化合物、またはその塩（式中、Ｒ2は、Ｃ1-4アルキル（メチルなど）、ハロゲン（Ｂｒなど）、またはＣ1-4ハロアルキル（−ＣＦ３など）である）が開示される。いくつかの実施形態では、式（Ｉ−ａ−１）の化合物、またはその塩（式中、Ｒ2は、Ｃ1-4アルキル（メチルなど）である）が開示される。いくつかの実施形態では、式（Ｉ−ａ−１）の化合物、またはその塩（式中、Ｒ2は、−ＯＨ、−Ｃ1-4アルキレン−ＯＨ（−ＣＨ2ＯＨなど）、−ＯＣ1-4アルキル（−ＯＣＨ3など）、または−ＮＨ2である）が開示される。いくつかの実施形態では、式（Ｉ−ａ−１）の化合物、またはその塩（式中、Ｒ2は、Ｃ1-4アルキル（メチルなど）、ハロゲン（Ｂｒなど）、−ＯＨ、Ｃ1-4アルキレン−ＯＨ（−ＣＨ2−ＯＨなど）、−ＯＣ1-4アルキル（−ＯＣＨ3など）、または−ＮＨ2であり、ｑは、０である）が開示される。いくつかの実施形態では、式（Ｉ−ａ−１）の化合物、またはその塩（式中、Ｒ2は、Ｃ1-4アルキル（メチルなど）であり、ｑは、０である）が開示される。いくつかの実施形態では、式（Ｉ−ａ−１）の化合物、またはその塩（式中、Ｒ2は、Ｃ1-4アルキル（メチルなど）であり、Ｒ3は、−ＣＨ3、ハロゲン（Ｆなど）、−ＯＣＨ3、または−ＣＮであり、ｑは、１である）が開示される。
【０１３８】
好適な化合物には：
Ｎ−（３−シアノ−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（３−シアノチオフェン−２−イル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（２−シアノフェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−フェニルベンズアミド；
Ｎ−（３−シアノ−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（フェニルスルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（４−ホルミルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
メチル３−（４−（Ｎ−（２−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イルカルバモイル）フェニル）スルファモイル）フェニル）プロパノエート；
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（３−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（４−（３−ヒドロキシプロピル）フェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
２−（［１，１’−ビフェニル］−３−スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
メチル３−（Ｎ−（２−（ｐ−トリルカルバモイル）フェニル）スルファモイル）ベンゾエート；
３−（Ｎ−（２−（ｐ−トリルカルバモイル）フェニル）スルファモイル）安息香酸；
２−（（３−アセトアミドフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
２−（（３−アミノフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
２−（（３−（ヒドロキシメチル）フェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
２−（（３−（ブチルカルバモイル）フェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
２−（（３−ブロモフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
２−（（３−（ブチルアミノ）フェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
２−（（３−（ヘキシ−１−イン−１−イル）フェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
２−（（３−ヘキシルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
２−（（３−（３−ヒドロキシプロプ−１−イン−１−イル）フェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
２−（（３−（３−ヒドロキシプロピル）フェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
Ｎ−（ｐ−トリル）−２−（（４−（トリフルオロメチル）フェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
２−（（４−メトキシフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
２−（（４−ブロモフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
２−（［１，１’−ビフェニル］−４−スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
Ｎ−（ｐ−トリル）−２−（（３−（トリフルオロメチル）フェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（ｐ−トリル）−２−（（３−（トリフルオロメトキシ）フェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−シクロヘキシル−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ナフタレン−２−イル）ベンズアミド；
２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イル）ベンズアミド；
メチルトランス−４−（２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）シクロヘキサン−１−カルボキシレート；
トランス−４−（２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）シクロヘキサン−１−カルボン酸；
２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
エチル２−（４−（２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）フェニル）アセテート；
Ｎ−（３−イソプロピルフェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
エチル３−（２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）ベンゾエート；
２−（４−（２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）フェニル）酢酸；
３−（２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）安息香酸；
２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｍ−トリル）ベンズアミド；
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−３−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−２−ナフタミド；
２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（２−プロピルフェニル）ベンズアミド；
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−５−メチル−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（３−ブチルフェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−５−シアノ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（４−ブチルフェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン）−２−スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（４−ヘキシルフェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（４−オクチルフェニル）ベンズアミド；
メチル６−（４−（２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）フェニル）ヘキサノエート；
６−（４−（２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）フェニル）ヘキサン酸；
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（４−ブチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（４−（６−ヒドロキシヘキシル）フェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（４−ペンチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−５−ブチル−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（４−（４−ヒドロキシブチル）フェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（４−（４−ブロモブチル）フェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
５−メトキシ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−５−メトキシ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
４−メトキシ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−４−メトキシ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
２−（（３−メトキシフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（３−メトキシフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
５−ヒドロキシ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
２−（（３−ヒドロキシフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
２−（（３−ブトキシフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド；
Ｎ−（２−ブロモフェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（３−ブロモフェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（［１，１’−ビフェニル］−４−イル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（２−メトキシフェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（［１，１’−ビフェニル］−３−イル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（３−メトキシフェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（４−メトキシフェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
２−（（Ｎ−エチル−４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（４−メトキシフェニル）ベンズアミド；
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−４−フルオロ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−５−フルオロ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−ベンジル−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；
Ｎ−（４−メトキシベンジル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド；及び
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド、
またはその塩が含まれる。
【０１３９】
（１）塩形態
本明細書に記載のチエノピロール化合物は、塩形態であり得る。化合物の中性形態は、塩を塩基または酸と接触させ、親化合物を従来の手法で単離することによって再生され得る。化合物の親形態は、極性溶媒への溶解性などの所定の物理的特性において様々な塩形態とは異なるが、それ以外の点では、塩は、本開示の目的のための化合物の親形態と同等である。
【０１４０】
例えば、化合物がアニオン性であるか、またはアニオン性となり得る官能基を有する場合（例えば、−ＣＯＯＨは−ＣＯＯ-となり得る）、そのときは塩は、好適なカチオンと共に形成され得る。好適な無機カチオンの例には、Ｎａ+及びＫ+などのアルカリ金属イオン、Ｃａ2+及びＭｇ2+などのアルカリ土類カチオン、ならびに他のカチオンが含まれるがこれらに限定されない。好適な有機カチオンの例には、アンモニウムイオン（すなわち、ＮＨ4+）及び置換アンモニウムイオン（例えば、ＮＨ3Ｒ1+、ＮＨ2Ｒ2+、ＮＨＲ3+、ＮＲ4+）が含まれるがこれらに限定されない。いくつかの好適な置換アンモニウムイオンの例は、エチルアミン、ジエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、トリエチルアミン、ブチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン、ベンジルアミン、フェニルベンジルアミン、コリン、メグルミン、及びトロメタミン、ならびにリジン及びアルギニンなどのアミノ酸に由来するものである。
【０１４１】
化合物がカチオン性であるか、またはカチオン性となり得る官能基を有する場合（例えば、−ＮＨ2は−ＮＨ3+となり得る）、そのときは塩は、好適なアニオンと共に形成され得る。好適な無機アニオンの例には、次の無機酸：塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、亜硫酸、硝酸、亜硝酸、リン酸、及び亜リン酸に由来するものが含まれるがこれらに限定されない。
【０１４２】
好適な有機アニオンの例には、次の有機酸：２−アセチオキシ安息香酸、酢酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、桂皮酸、クエン酸、エデト酸、エタンジスルホン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、ヒドロキシマレイン酸、ヒドロキシナフタレンカルボン酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリン酸、マレイン酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ムチン酸、オレイン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、パントテン酸、フェニル酢酸、フェニルスルホン酸、プロピオン酸、ピルビン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、スルファニル酸、酒石酸、トルエンスルホン酸、及び吉草酸に由来するものが含まれるがこれらに限定されない。好適なポリマー性有機アニオンの例には、次のポリマー性酸：タンニン酸、カルボキシメチルセルロースに由来するものが含まれるがこれらに限定されない。
【０１４３】
別段特定されない限り、本明細書の特定のチエノピロール化合物への言及は、その塩形態も含む。
【０１４４】
（２）異性体
所定のチエノピロール化合物は、１つ以上の特定の幾何、光学、エナンチオマー、ジアステレオマー、エピマー、アトロピック（ａｔｒｏｐｉｃ）、立体異性体、互変異性、配座、またはアノマー形態で存在し得、これには、限定されないが、シス及びトランス形態、Ｅ及びＺ形態、ｃ、ｔ、及びｒ形態；エンド及びエキソ形態；Ｒ、Ｓ及びメソ形態；Ｄ及びＬ形態；ｄよび１形態；（＋）及び（−）形態；ケト、エノール、及びエノレート形態；ｓｙｎ及びａｎｔｉ形態；シンクリナル形及びアンチクリナル形態；ａ及びβ形態；アキシャル及びエクアトリアル形態；ボート、チェア、ツイスト、エンベロープ、及びハーフチェア形態；ならびにそれらの組み合わせであって、以下でまとめて「異性体」（または「異性体形態」）と称されるものが含まれる。
【０１４５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の化合物は、本明細書に記載される立体異性体のエナンチオマー的に濃縮された異性体であり得る。例えば、化合物は、少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のエナンチオマー過剰を有し得る。エナンチオマーは、本明細書で使用される場合、分子構造が互いに鏡像関係を有する一対の化学的化合物のいずれかを指す。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される化合物の調製物は、選択された立体中心に対応する選択された立体化学、例えば、ＲまたはＳを有する化合物の異性体について濃縮される。例えば、化合物は、少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の選択された立体中心の選択された立体化学を有する化合物に相当する純度を有する。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、選択された立体中心における選択された立体化学、例えば、ＲまたはＳを有する１つの構造または複数の構造について濃縮された本明細書に開示される化合物の調製物を含む。例示的なＲ／Ｓ配置は、本明細書に記載の例で提供されるものであり得る。
【０１４８】
「濃縮された調製物」は、本明細書で使用される場合、対象化合物内の１つ、２つ、３つまたはそれを超える選択された立体中心の選択された立体配置について濃縮されている。例示的な選択された立体中心及びその例示的な立体配置は、本明細書で、例えば、本明細書に記載の例で提供されるものから選択され得る。濃縮されたとは、調製物中の化合物の分子の、例えば、少なくとも６０％が、選択された立体中心の選択された立体化学を有することを意味する。実施形態では、それは、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％である。濃縮されたとは、対象分子（複数可）のレベルを指し、別段特定さない限り、プロセスの制限を含意しない。
【０１４９】
本化合物は、ラセミ形態で、または立体特異的合成もしくは分割のいずれかによる個々のエナンチオマーもしくはジアステレオマーとして調製され得る。化合物は、例えば、光学活性塩基を用いた塩形成による立体異性体対の形成と、それに続く分別結晶及び遊離酸の再生などの標準的な技術によってそれらの成分のエナンチオマーまたはジアステレオマーに分割され得る。化合物はまた、立体異性体のエステルまたはアミドの形成と、それに続くクロマトグラフィー分離及び不斉補助剤の除去によって分割され得る。代替的に、化合物は、キラルＨＰＬＣカラムを使用して分割され得る。エナンチオマーはまた、リパーゼ酵素を使用して、対応するエステルのラセミ化合物の速度論的分割から得られ得る。
【０１５０】
以下に論述されるように互変異性形態を除き、構造的（または構造）異性体（すなわち、単に空間における原子の位置によってではなく、原子間の結合が異なる異性体）は、本明細書で使用される用語「異性体」から特に除外される。例えば、メトキシ基、すなわち、−ＯＣＨ3に対する言及は、その構造的異性体であるヒドロキシメチル基、すなわち、−ＣＨ2ＯＨに対する言及として解釈されるべきではない。これに類似して、オルト−クロロフェニルに対する言及は、その構造的異性体であるメタ−クロロフェニルに対する言及として解釈されるべきではない。しかしながら、構造の分類に対する言及には、その分類に入る構造異性体形態が十分に含まれ得る（例えば、Ｃ3−アルキルまたはプロピルには、ｎ−プロピル及びｉｓｏ−プロピルが含まれ；Ｃ4−アルキルまたはブチルには、ｎ−、ｉｓｏ−、ｓｅｃ−、及びｔｅｒｔ−ブチルが含まれ；メトキシフェニルには、オルト−、メタ−、及びパラ−メトキシフェニルが含まれる）。
【０１５１】
上記の除外は、互変異性形態、例えば、次の互変異性対：ケト／エノール、イミン／エナミン、アミド／イミノアルコール、アミジン／アミジン、ニトロソ／オキシム、チオケトン／エネチオール、Ｎ−ニトロソ／ヒドロキシアゾ、及びニトロ／アシ−ニトロのようなケト−、エノール−、及びエノレート−形態には関係しない。
【０１５２】
特に、用語「異性体」には、１つ以上の同位体置換を有する化合物が含まれることに留意されたい。例えば、Ｈは、1Ｈ、2Ｈ（Ｄ）、及び3Ｈ（Ｔ）を含む任意の同位体形態であり得；Ｃは、12Ｃ、13Ｃ、及び14Ｃを含む任意の同位体形態であり得；Ｏは、16Ｏ及び18Ｏを含む任意の同位体形態であり得るなどである。
【０１５３】
３．Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体
開示される化合物は、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体を阻害するために使用され得る。開示される化合物は、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体のルシフェラーゼ活性を阻害し得る。Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼは、野生型ＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼまたはＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼのバリアントであり得る。Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼは、配列番号７のルシフェラーゼのバリアントであり得る。Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼのバリアントは、米国特許第８，５５７，９７０号及び第８，６６９，１０３号に記載されており、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１５４】
Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体は、２つ以上の非発光性ペプチド及び／またはポリペプチド単位の集合体（例えば、非発光性対）であり得る。Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体は、（ａ）配列番号２と１００％未満（例えば、＞９９％、＜９５％、＜９０％、＜８０％、＜７０％、＜６０％、＜５０％など）で４０％を超える（例えば、＞４０％、＞４５％、＞５０％、＞５５％、＞６０％、＞６５％、＞７０％、＞７５％、＞８０％、＞８５％、＞９０％、＞９５％、＞９８％、＞９９％）配列同一性を有するペプチドアミノ酸配列を含むペプチド；及び（ｂ）配列番号３と１００％未満（例えば、＞９９％、＜９５％、＜９０％、＜８０％、＜７０％、＜６０％、＜５０％など）かつ４０％を超える（例えば、＞４０％、＞４５％、＞５０％、＞５５％、＞６０％、＞６５％、＞７０％、＞７５％、＞８０％、＞８５％、＞９０％、＞９５％、＞９８％、＞９９％）配列同一性を有するポリペプチドアミノ酸配列を含むポリペプチドを含み得、その生物発光性複合体は、セレンテラジン基質の存在下で検出可能な発光を呈する。所定の実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号４または配列番号６を有するペプチドアミノ酸配列を含むペプチド；及び（ｂ）配列番号５を有するポリペプチドアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む生物発光性複合体であって、その生物発光性複合体は、セレンテラジン基質の存在下で検出可能な発光を呈する、生物発光性複合体を提供する。例示的なＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体は、ＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＳｍＢｉＴ非発光性ペプチド（配列番号６）、ＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＨｉＢｉＴ非発光性ペプチド（配列番号４）、及び／またはＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＬｇＢｉＴ非発光性ポリペプチド（配列番号５）を含むＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）技術を含む。Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体は、米国特許第９，７９７，８８９号及び第９，７９７，８９０号に記載されており、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１５５】
４．セレンテラジン基質
本発明の開示される化合物は、ルシフェラーゼに結合することからセレンテラジンまたはセレンテラジン誘導体基質と競合し、またはそれに干渉することによってルシフェラーゼ活性を阻害するために使用され得る。セレンテラジン基質は、ルシフェラーゼ及び他の生物発光性タンパク質が作用すると発光するレポーター分子の分類である。セレンテラジン基質の例には、セレンテラジン；ＷＯ２００３／０４０１００、米国特許公開第２００８／０２４８５１１号、及び米国特許公開第ＵＳ２０１２／０１１７６６７号に開示されているものに加えて、セレンテラジン誘導体及び／またはアナログ、例えば、２−フラニルメチル−デオキシ−セレンテラジン（フリマジン）、セレンテラジン−ｎ、セレンテラジン−ｆ、セレンテラジン−ｈ、セレンテラジン−ｈｃｐ、セレンテラジン−ｃｐ、セレンテラジン−ｃ、セレンテラジン−ｅ、セレンテラジン−ｆｃｐ、ビス−デオキシセレンテラジン（「セレンテラジン−ｈｈ」）、セレンテラジン−ｉ、セレンテラジン−ｉｃｐ、セレンテラジン−ｖ、及び２−メチル−セレンテラジン；プロ−セレンテラジン（すなわち、化合物をルシフェラーゼの基質に変換する非発光性酵素の基質ではない化合物）、キノリンマスクされたセレンテラジンなどが含まれるがこれらに限定されない。セレンテラジン基質のさらなる例は、例えば、米国公開第２０１２／０１０７８４９号、米国公開第２０１３／０１３０２８９号、米国特許出願第１４／６０８，９１０号、及び米国特許出願第１４／６０９，３７２号に記載されており、これらのそれぞれは、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１５６】
５．Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体活性を阻害する方法
開示される化合物は、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体を阻害する、例えば、生物発光性複合体のルシフェラーゼ活性を阻害するための方法で使用され得る。その方法は、本明細書に開示される化合物を、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体を発現または含有する細胞またはＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体の非発光性ペプチド及び／またはポリペプチドと接触させることを含み得、開示される化合物は、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体を選択的に阻害し得る。その方法は、本明細書に開示される化合物を、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体の非発光性ペプチド及び／またはポリペプチドと接触させることを含み得、開示される化合物は、複合体が集合したときにＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体を阻害する。開示される化合物は、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体を使用する酵素の存在または活性を検出するために使用されるアッセイにおいてＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体からのシグナルを選択的に阻害するために使用され得る。例えば、開示される化合物は、サンプル中の１つ以上の分子、例えば、対象となるタンパク質（例えば、酵素、結合パートナー、リガンドなど）、酵素反応の補因子、酵素基質、酵素阻害剤、酵素活性化因子、もしくはＯＨ基、または１つ以上の条件、例えば、酸化還元条件を検出するためにＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体及びセレンテラジンまたはセレンテラジン誘導体基質を採用する生物発光方法で使用され得る。セレンテラジン基質がＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体の基質として作用するのに対し、開示される化合物は、ルシフェラーゼ由来生物発光性複合体を阻害して、実施形態において発光シグナルを選択的に抑制するために作用し得、その実施形態では、そのような抑制は、例えば、複数の生物発光システムの時間的多重化を含む用途においてまたはいくつかのプレートベースの発光アッセイにおいて所望とされ得る。例えば、開示される化合物は、細胞内及び／または細胞外Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体の活性を阻害するために使用され得る。
【０１５７】
（１）タンパク質相補アッセイ
上記に従って、開示される化合物は、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体が、リガンド−タンパク質及びタンパク質−タンパク質相互作用または近接または共局在化を検出するための他の方法、例えば、タンパク質相補アッセイ（ＰＣＡ）または酵素断片相補（ＥＦＣ）アッセイで使用される場合、そのような生物発光性複合体を阻害するために使用され得る。ＰＣＡ及びＥＦＣアッセイは、２つの相互作用要素、例えば、生物分子、ポリペプチドの相互作用を検出するための手段を提供する。ＰＣＡは、同じタンパク質の２つの断片が、それらの融合パートナー、例えば、対象となるポリペプチドの結合相互作用を介して互いに近接し、機能的活性タンパク質、例えば、酵素に再集合した場合にのみ光を生成する対象となるポリペプチドに融合した同じタンパク質、例えば、酵素の２つの断片を利用する。例えば、ＮＡＮＯＢＩＴ（登録商標）技術（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）は、酵素単位の結合相互作用を介する発光性酵素の再集合による分子近接を検出するために使用され得る。ＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）システムは、対象となる標的分子との融合物として発現され得る２つ以上の非発光性ペプチド及び／またはポリペプチド単位を含み得る。いくつかの実施形態では、２つの単位は、ＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＬｇＢｉＴ非発光性ポリペプチド（ＮＬｐｏｌｙ）及びＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＳｍＢｉＴ非発光性ペプチド（ＮＬｐｅｐ）を含み得る。いくつかの実施形態では、２つの単位は、ＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＬｇＢｉＴ非発光性ポリペプチド（ＮＬｐｏｌｙ）及びＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＨｉＢｉＴ非発光性ペプチド（ＮＬｐｅｐ）を含み得る。Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体は、米国特許第９，７９７，８８９号及び第９，７９７，８９０号に記載されており、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１５８】
例えば、ＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼまたはＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼのバリアントは、例えば、分離に対して寛容な部分（複数可）において、２つの単位、例えば、非発光性ペプチドまたはポリペプチドに分離され得、それぞれの単位、例えば、非発光性ペプチドまたはポリペプチドは、相互作用すると考えられる対象となる一対のポリペプチド、例えば、ＦＫＢＰ及びＦＲＢのうちの一方に融合され得る。対象となる２つのポリペプチドが相互作用する場合、非発光性単位は、例えば、次いで互いに近接して生物発光性複合体へと再集合する。いくつかの実施形態では、次いで生物発光性複合体の活性が検出され、測定され得る。いくつかの実施形態では、生物発光性複合体は、ｌａｃ−Ｚ（Ｌａｎｇｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ７２：１２５４−１２５７（１９７５））またはリボヌクレアーゼＳ（Ｌｅｖｉｔ  ａｎｄ  Ｂｅｒｇｅｒ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５１：１３３３−１３３９（１９７６））と類似するより一般的な相補システムで使用され得る。いくつかの実施形態では、別の発光性酵素単位（「Ｂ」）と相補的であることが知られている発光性酵素単位（「Ａ」と指定される）は、標的タンパク質に融合され得、得られた融合物は、断片Ｂを含有する細胞または細胞溶解物中の発光を介してモニターされ得る。いくつかの実施形態では、単位Ｂの源は、同じ細胞であり得（例えば、単位Ｂの遺伝子が細胞のゲノムに統合されているか、または細胞内の別のプラスミドに含有されている場合）、またはそれは別の細胞に由来する溶解物または精製タンパク質であり得る。いくつかの実施形態では、この同じ融合タンパク質（単位Ａ）は、単位Ｂと、固体担体への結合が可能なＨａｌｏＴａｇなどのポリペプチドとの間の融合物を使用して捕捉または固定化され得る。いくつかの実施形態では、発光は、成功した捕捉を実証するために、または捕捉された物質の量を定量するために使用され得る。
【０１５９】
（２）分子検出アッセイ
上記に従って、開示される化合物は、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体が、対象となる分子を検出するための他の方法で使用される場合に、そのような生物発光性複合体を阻害するために使用され得る。例えば、ＮＡＮＯＢＩＴ（登録商標）技術（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）は、対象となる分子を検出するために使用され得る。ＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）システムは、２つ以上の非発光性ペプチド及び／またはポリペプチド単位を含み得る。非発光性ペプチド及び／またはポリペプチド単位の１つ以上は、対象となる分子に融合され得る。２つの単位は、ＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＬｇＢｉＴ非発光性ポリペプチド（ＮＬｐｏｌｙ）及びＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＨｉＢｉＴ非発光性ペプチド（ＮＬｐｅｐ）を含み得る。いくつかの実施形態では、ＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＨｉＢｉＴ  ＮＬｐｅｐは、対象となる分子に融合され得る。対象となる分子に融合したＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＨｉＢｉＴ  ＮＬｐｅｐを含むサンプルは、ＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＬｇＢｉＴ  ＮＬｐｏｌｙと接触され得る。例えば、ＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＬｇＢｉＴ  ＮＬｐｏｌｙは、セレンテラジン基質を含有する検出試薬に添加され得る。得られた生物発光は、検出され、測定され、本明細書に開示される化合物で阻害され得る。いくつかの実施形態では、ＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＬｇＢｉＴ  ＮＬｐｏｌｙは、対象となる分子に融合され得る。対象となる分子に融合したＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＬｇＢｉＴ  ＮＬｐｏｌｙを含むサンプルは、ＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＨｉＢｉＴ  ＮＬｐｅｐと接触され得る。例えば、ＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＨｉＢｉＴ  ＮＬｐｅｐは、セレンテラジン基質を含有する検出試薬に添加され得る。
【０１６０】
（３）細胞不透過性化合物の使用
所定の実施形態では、本明細書に開示される方法は、サンプル（例えば、細胞）を、細胞透過性セレンテラジン基質及び細胞不透過性となるように改変された本明細書に記載の化合物の混合物と接触することを含む。そのような実施形態では、開示される化合物及び方法は、ハイスループットのスクリーニング操作アッセイ形式の初期光度を構築し、次いで細胞から排出され得る任意のＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体を選択的に阻害して、細胞の外で生じ得る発光を選択的に阻害するために使用され得る。そのような方法は、細胞内のより選択的なシグナルを提供し得る。
【０１６１】
（４）細胞透過性化合物の使用
所定の実施形態では、本明細書に開示される方法は、サンプル（例えば、細胞）を、細胞透過性セレンテラジン基質及び細胞透過性の本明細書に記載の化合物の混合物と接触させることを含む。そのような実施形態では、開示される化合物は、細胞内に侵入し、その中のＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体を選択的に阻害し得る。そのような方法は、２つ以上のルシフェラーゼの使用を含む多重化アッセイで有利であり得、細胞内の別のルシフェラーゼからの発光を選択的に見ることができるようにＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体からの発光の阻害を可能にし得る。
【０１６２】
（５）転写レポーターとの使用
開示される化合物は、遺伝子転写レポーターシステムと共に使用され得る。所定の実施形態では、サンプルにおけるプロモーターの活性を測定するための方法であって、そのプロモーターは、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体の非発光性単位、例えば、非発光性ポリペプチドをコードする遺伝子と機能可能に連結されている、方法が提供される。その方法は、（ａ）プロモーターに融合したＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体の非発光性ペプチドと生物発光性複合体を形成することが可能なＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体の非発光性ポリペプチドを発現するサンプルを、セレンテラジン基質及びＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体の非発光性ポリペプチドと生物発光性複合体を形成することが可能なＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体の非発光性ペプチドと接触させることと、（ｂ）サンプルの発光を測定することによってプロモーターの活性を決定することと、を含む。その方法は、サンプルを本明細書に記載の化合物と接触させて、生物発光性複合体から生成される発光を選択的に阻害する工程をさらに含み得る。プロモーターは、翻訳または転写融合を介して遺伝子に機能可能に連結され得る。対象となる生物学的経路は、例えば、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体の非発光性単位、例えば、非発光性ポリペプチドをコードする遺伝子に機能可能に連結されたプロモーターを含む細胞を、経路の誘導因子剤で処理することによって調べられ得る。次いでこのプロモーターの活性が測定及びモニターされて、プロモーターの活性と対象となる経路との間の任意の相関関係が研究され、また、遺伝子発現（例えば、誘導性、抑制及び活性化）に関連する速度論的測定結果が得得られ得る。本明細書に記載の化合物は、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体からの発光を選択的に阻害するために使用され得る。
【０１６３】
（６）多重化
開示される化合物は、他のルシフェラーゼ及びアッセイとの時間的多重化に適用される場合、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体を阻害するために使用され得る。いくつかの実施形態では、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体は、異なる波長で光を放出する別の酵素（例えば、ルシフェラーゼ）、例えば、緑色ホタルルシフェラーゼ、例えば、Ｐｈｏｔｉｎｕｓ  ｐｙｒａｌｉｓ（例えば、Ｌｕｃ２；Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ）または赤色コメツキムシルシフェラーゼ（ＣＨＲＯＭＡ−ＬＵＣ（商標）ルシフェラーゼ；Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．）と多重化され得る。例えば、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体が機能性レポーターとして使用される場合、そのときは緑色ホタルルシフェラーゼまたは赤色ＣＨＲＯＭＡ−ＬＵＣ（商標）ルシフェラーゼは、遺伝子制御に対する非特異的作用について制御するため、またはトランスフェクション効率について正規化するために使用され得る。いくつかの実施形態では、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体から生成される発光（およそ４６０ｎｍ）及び赤色ＣＨＲＯＭＡ−ＬＵＣ（およそ６１０ｎｍ）は、同じサンプルからの両方のシグナルの測定を可能にする波長識別フィルターを有するルミノメーターを使用して容易に分解され得る。そのような実施形態では、本明細書に記載の化合物は、他のルシフェラーゼからのシグナルを選択的に見ることができるように、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体を選択的に阻害するために使用され得る。
【０１６４】
別の例では、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体は、転写レポーターとして使用され、アッセイ試薬に含有される、異なる波長で光を放出するルシフェラーゼと対にされ得る。別の例では、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体は、１つ以上の追加のルシフェラーゼと共に使用され得、それぞれのルシフェラーゼ及び生物発光性複合体の発光は、選択的酵素阻害剤の使用により別々に測定され得る。例えば、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体の発光は、適切な基質及び緩衝液の添加により測定され得、続いて第２のルシフェラーゼは、適切な基質及び緩衝液ならびにＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体に選択的な１つ以上の本明細書に記載の化合物のその後の添加により測定される。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、そのＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体は、同じ波長で光を放出する別の酵素（例えばルシフェラーゼ）と多重化され得る。例えば、ＮＡＮＯＢＩＴ（登録商標）技術（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）は、ＮＡＮＯＬＵＣと多重化され得る。ＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）システムは、２つ以上の非発光性ペプチド及び／またはポリペプチド単位を含み得る。非発光性ペプチド及び／またはポリペプチド単位の１つ以上は、対象となる分子に融合され得る。いくつかの実施形態では、ＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＬｇＢｉＴ非発光性ポリペプチド及び／またはＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＨｉＢｉＴ非発光性ペプチドは、対象となる分子に融合され得る。例えば、ＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＬｇＢｉＴ非発光性ポリペプチドは、ＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＨｉＢｉＴ非発光性ペプチドに融合した対象となるタンパク質を検出及び定量するための手段としてのフリマジンを含有する検出試薬に添加され得る。別の例として、ＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＨｉＢｉＴ非発光性ペプチドは、ＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＬｇＢｉＴ非発光性ポリペプチドに融合した対象となるタンパク質を検出及び定量するための手段としてのフリマジンを含有する検出試薬に添加され得る。開示される化合物は、ＮａｎｏＬｕｃからの発光を阻害することなく、得られた生物発光性複合体（例えば、ＨｉＢｉＴ／ＬｇＢｉＴ複合体）の発光を阻害するために使用され得る。
【０１６６】
（７）生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）
開示される化合物は、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体がリガンド−タンパク質及び／またはタンパク質−タンパク質相互作用を検出するために使用される任意の方法で使用され得る。様々な実施形態では、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体は、エネルギーをエネルギー受容体に移動させるために使用され得る。１つのそのような方法は、生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）である。ＢＲＥＴに関しては、生物発光性ドナーから蛍光受容体へのエネルギー移動は、光の放出のスペクトル分布のシフトをもたらす。このエネルギー移動は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏでのタンパク質−タンパク質またはリガンド−タンパク質相互作用のリアルタイムのモニタリングを可能にし得る。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、ＢＲＥＴ分析で使用されるＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体は、２つの分子が互いに結合することが可能であるか、または細胞内で共局在化するかどうかを決定するために使用され得る。例えば、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体は、生物発光ドナー分子として使用され得、その場合、非発光性単位の一方は、対象となる分子またはタンパク質と組み合されて第１の融合タンパク質を生成する。いくつかの実施形態では、非発光性ペプチドは、対象となる分子またはタンパク質と組み合されて第１の融合タンパク質を生成し得る。他の実施形態では、非発光性ポリペプチドは、対象となる分子またはタンパク質と組み合されて第１の融合タンパク質を生成し得る。様々な実施形態では、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体の非発光性単位（例えば、非発光性ペプチドまたは非発光性ポリペプチド）を含有する第１の融合タンパク質は、細胞溶解物、インタクト細胞、及び生存動物を含むがこれらに限定されないシステムにおけるタンパク質／タンパク質相互作用を検出するためのＢＲＥＴ分析において使用され得る。様々な実施形態では、ＨＡＬＯＴＡＧは、蛍光受容体分子として使用され得る。いくつかの実施形態では、ＨＡＬＯＴＡＧは、第２の対象となるタンパク質または生物発光性複合体の相補性非発光性単位（例えば、非発光性ポリペプチドまたは非発光性ペプチド）に融合され得る。例えば、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体の非発光性ポリペプチドは、ＨＡＬＯＴＡＧに融合され、細胞または動物で発現され、ＨＡＬＯＴＡＧ（登録商標）ＴＭＲリガンドなどの蛍光ＨＡＬＯＴＡＧ（登録商標）リガンドで標識され得る。融合物は、その後、細胞透過性発光性酵素基質の存在下で蛍光を発するように励起され得る。別の例として、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体の非発光性ペプチドは、ＨａｌｏＴａｇに融合され、細胞または動物で発現され、ＨａｌｏＴａｇ（登録商標）ＴＭＲリガンドなどの蛍光ＨａｌｏＴａｇ（登録商標）リガンドで標識され得る。融合物は、その後、細胞透過性発光性酵素基質の存在下で蛍光を発するように励起され得る。いくつかの実施形態では、ＨＡＬＯＴＡＧは、第２の対象となるタンパク質、及び検出試薬を介して添加されたＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体の相補性非発光性単位（例えば、非発光性ポリペプチドまたは非発光性ペプチド）に融合され得る。いくつかの実施形態では、ＢＲＥＴは、非限定的な例をいくつか挙げると、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）もしくは赤色蛍光タンパク質（ＲＦＰ）またはフルオレセイン、ローダミングリーン、オレゴングリーン、またはＡｌｅｘａ４８８を含む蛍光標識を含むがこれらに限定されない蛍光タンパク質と組み合わせてＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体を使用して実施され得る。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体からのシグナルをクエンチすることは、ＢＲＥＴベースのプレートアッセイを使用した場合にバックグラウンドに対するシグナルの比を改善し得る。
【０１６９】
所定の実施形態では、細胞透過性化合物は、細胞内ＢＲＥＴを阻害するために使用され得る。所定の実施形態では、細胞不透過性化合物は、細胞外ＢＲＥＴを阻害するために使用され得る。所定の実施形態では、細胞不透過性化合物は、標的係合モデルにおいて使用され得る。
【０１７０】
６．サンプル
開示される化合物は、生物学的成分を含有するサンプルと共に使用され得る。サンプルは、細胞を含み得る。サンプルは、成分の不均一な混合物（インタクト細胞、細胞抽出物、細胞溶解物、細菌、ウイルス、オルガネラ、エクソソーム、及びそれらの混合物を含む）または単一成分もしくは成分の均質な群（例えば、天然もしくは合成アミノ酸、核酸もしくは炭水化物ポリマー、または脂質膜複合体）を含み得る。開示される化合物は一般に、使用濃度の範囲内で生存細胞及び他の生物学的成分に対して非毒性であり得る。
【０１７１】
サンプルには、動物（例えば、脊椎動物）、植物、真菌、生理学的流体（例えば、血液、血漿、尿、粘液分泌物など）、細胞、細胞溶解物、細胞上清、または精製された細胞画分（例えば、細胞内画分）が含まれ得る。所定の実施形態では、サンプルは、細胞であり得る。いくつかの実施形態では、サンプルは、生存細胞であり得る。細胞は、真核細胞、例えば、酵母、鳥類、植物、昆虫または哺乳動物の細胞であり得、これには、ヒト、類人猿、マウス、イヌ、ウシ、ウマ、ネコ、ヒツジ、ヤギもしくはブタの細胞、もしくは原核細胞、もしくは２つ以上の異なる生物からの細胞、またはそれらの細胞溶解物もしくは上清が含まれるがこれらに限定されない。細胞は、組換え技術により遺伝子改変されていないものであり得（非組換え細胞）、または組換えＤＮＡで一過性にトランスフェクションされた組換え細胞、及び／またはゲノムが組換えＤＮＡで安定的に増大された組換え細胞、もしくは遺伝子を破壊するように、例えば、プロモーター、イントロンもしくはオープンリーディングフレームを破壊するように、またはあるＤＮＡ断片を別のものに置き換えるようにゲノムが改変された組換え細胞であり得る。組換えＤＮＡまたは置換ＤＮＡ断片は、本発明の方法によって検出される分子、検出される分子のレベルまたは活性を変化させる部分、及び／または分子のレベルまたは活性を変化させる分子または部分とは無関係の遺伝子産物をコードし得る。細胞は、ルシフェラーゼを発現する場合があるか、または発現しない場合がある。細胞は、組換え技術により遺伝子改変されたものであり得る。
【０１７２】
７．キット
Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体の存在または活性を決定するためのキットが開示される。キットは、以下のうちの１つ以上を含み得る：Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体を阻害し得る本発明の化合物または組成物、セレンテラジンまたはセレンテラジン誘導体基質、及びＯｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体、例えば、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体の非発光性ペプチド及び／またはポリペプチドの発現のためのポリヌクレオチド、発光アッセイを行うための指示書、及び反応緩衝液（複数可）。反応緩衝液は、非ルシフェラーゼ酵素反応及び発光性酵素反応のための個々の製剤中に、または単一工程アッセイのための単一製剤中に存在し得る。反応緩衝液は、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体の非発光性単位、例えば、非発光性ペプチドを含有し得る。キットはまた、非ルシフェラーゼ酵素（複数可）のための他の阻害剤、活性化剤及び／または増進剤を含有し得る。キットはまた、アッセイのための陽性及び／または陰性対照を含有し得る。
【実施例】
【０１７３】
８．実施例
実施例１
化合物の合成
一般手順Ａ：スルホンアミド結合の形成．
【０１７４】
ピリジン中のアニリン誘導体（１当量）の溶液に置換ベンゼンスルホニルクロリド（１．１当量）を添加した。溶液を室温で４〜１８時間撹拌した。混合物をジクロロメタンで希釈し、ＨＣｌ（２Ｍ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィで精製した。
【０１７５】
一般手順Ｂ：けん化．
【０１７６】
ジオキサン中のメチルまたはエチルエステル（１当量）の溶液に、水酸化ナトリウム（２Ｍ、２当量）を添加した。溶液を６０℃で２〜１８時間撹拌した。溶液をＨＣｌ（２Ｍ）で酸性化し、酢酸エチル及び水で希釈し、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を組み合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、次の工程で粗生成物として使用した。
【０１７７】
一般手順Ｃ１：酸塩化物を介したアミド結合の形成．
【０１７８】
ジクロロエタン中の酸塩化物誘導体（１当量）の溶液にピリジン（３〜５当量）及びアミン（１当量）を添加した。反応物を室温で２〜１８時間撹拌した。混合物をＤＣＭで希釈し、水及びＨＣｌ（２Ｍ）で洗浄した。有機層を組み合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィで精製した。
【０１７９】
一般手順Ｃ２：カルボキシレートを介したアミド結合の形成．
【０１８０】
ＤＭＦ中のカルボン酸誘導体（１当量）の溶液にアミン（１．２当量）、ＨＢＴＵ（２当量）、及びジイソプロピルエチルアミン（３当量）を添加した。反応物を６０〜８５℃に２〜１８時間加熱した。混合物を酢酸エチルで希釈し、水及びブラインで洗浄した。有機層を組み合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィで精製した。
【０１８１】
一般手順Ｄ：ニトロ還元．
【０１８２】
酢酸エチル中のニトロ誘導体（１当量）の溶液に塩化スズ水和物（３〜５当量）を添加した。混合物を２４〜４８時間加熱還流した。飽和炭酸カリウムを添加し、室温で１時間撹拌した。層を分離し、有機層を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィで精製した。
【０１８３】
例示的な化合物は、スキーム１またはスキーム２の代表的な合成方法に従って調製され得る。
スキーム１．酸塩化物を介したアミドアナログの代表的合成
2021526530.tif 000041
【０１８４】
実施例２
Ｎ−（３−シアノ−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−０９９８）
2021526530.tif 000042
工程１．Ｎ−（３−シアノ−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−ニトロベンズアミド（ＪＲＷ−０９９４）
2021526530.tif 000043
【０１８５】
一般手順Ｃ１の後、２−ニトロベンゾイルクロリド（１１３ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）を２−アミノ−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタ［ｂ］チオフェン−３−カルボニトリル（１００ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（１６０ｍｇ、８４％）を黄色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３１４［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１８６】
工程２．２−アミノ−Ｎ−（３−シアノ−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタ［ｂ］チオフェン−２−イル）ベンズアミド（ＪＲＷ−０９９６）
2021526530.tif 000044
【０１８７】
一般手順Ｄの後、Ｎ−（３−シアノ−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−ニトロベンズアミド（１６０ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）を塩化スズ水和物（３１８ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（８０ｍｇ、５５％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ２８４［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１８８】
工程３．Ｎ−（３−シアノ−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−０９９８）
2021526530.tif 000045
【０１８９】
一般手順Ａの後、２−アミノ−Ｎ−（３−シアノ−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタ［ｂ］チオフェン−２−イル）ベンズアミド（８０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を４−メチルベンゼンスルホニルクロリド（５４ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（７５ｍｇ、６１％）を淡黄色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４３８［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１９０】
実施例３
Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１００４）
2021526530.tif 000046
工程１．Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−ニトロベンズアミド（ＪＲＷ−１０００）
2021526530.tif 000047
【０１９１】
一般手順Ｃ１の後、２−ニトロベンゾイルクロリド（１８７ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を２−アミノ−４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン−３−カルボニトリル（１８０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（２９０ｍｇ、８７％）を黄色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３２８［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１９２】
工程２．２−アミノ−Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）ベンズアミド（ＪＲＷ−１００２）
2021526530.tif 000048
【０１９３】
エタノール／水（８／２ｍＬ）中のＮ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−ニトロベンズアミド（２９０ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）の溶液に塩化アンモニウム（４７４ｍｇ、８．８ｍｍｏｌ）及び鉄屑（１００ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）を添加した。懸濁液を６０℃に１８時間加熱した。反応物を濾過し、濾液をセライトに添加し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィで精製して所望の生成物（５７ｍｇ、２１％）を淡茶色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ２９８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１９４】
工程３．Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１００４）
2021526530.tif 000049
【０１９５】
一般手順Ａの後、２−アミノ−Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）ベンズアミド（５７ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を４−メチルベンゼンスルホニルクロリド（３６ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（３５ｍｇ、４０％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４５２［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１９６】
実施例４
Ｎ−（３−シアノチオフェン−２−イル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１００６）
2021526530.tif 000050
工程１．Ｎ−（３−シアノチオフェン−２−イル）−２−ニトロベンズアミド（ＪＲＷ−１００１）．
2021526530.tif 000051
【０１９７】
一般手順Ｃ１の後、２−ニトロベンゾイルクロリド（１７１ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）を２−アミノチオフェン−３−カルボニトリル（１１５ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（１９０ｍｇ、７５％）を淡茶色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ２７４［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１９８】
工程２．２−アミノ−Ｎ−（３−シアノチオフェン−２−イル）ベンズアミド（ＪＲＷ−１００３）．
2021526530.tif 000052
【０１９９】
一般手順Ｄの後、Ｎ−（３−シアノチオフェン−２−イル）−２−ニトロベンズアミド（１９０ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ）を塩化スズ水和物（４３３ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（９０ｍｇ、５３％）を淡茶色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ２４４［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２００】
工程３．Ｎ−（３−シアノチオフェン−２−イル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１００６）．
2021526530.tif 000053
【０２０１】
一般手順Ａの後、２−アミノ−Ｎ−（３−シアノチオフェン−２−イル）ベンズアミド（９０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）を４−メチルベンゼンスルホニルクロリド（８５ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（９７ｍｇ、６６％）を淡茶色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３９８［Ｍ＋Ｈ］+
【０２０２】
実施例５
Ｎ−（２−シアノフェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１００８）
2021526530.tif 000054
工程１．Ｎ−（２−シアノフェニル）−２−ニトロベンズアミド（ＪＲＷ−１００５）．
2021526530.tif 000055
【０２０３】
一般手順Ｃ１の後、２−ニトロベンゾイルクロリド（１８９ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を２−アミノベンゾニトリル（１２０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（２０８ｍｇ、７７％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ２６８［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２０４】
工程２．２−アミノ−Ｎ−（２−シアノフェニル）ベンズアミド（ＪＲＷ−１００７）．
2021526530.tif 000056
【０２０５】
一般手順Ｄの後、Ｎ−（２−シアノフェニル）−２−ニトロベンズアミド（２００ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）を塩化スズ水和物（４６６ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（８０ｍｇ、４５％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ２３８［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２０６】
工程３．Ｎ−（２−シアノフェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１００８）．
2021526530.tif 000057
【０２０７】
一般手順Ａの後、２−アミノ−Ｎ−（２−シアノフェニル）ベンズアミド（８０ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を４−メチルベンゼンスルホニルクロリド（１２８ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（９１ｍｇ、６８％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３９２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２０８】
実施例６
２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−フェニルベンズアミド（ＪＲＷ−１０１１）
2021526530.tif 000058
工程１．２−ニトロ−Ｎ−フェニルベンズアミド（ＪＲＷ−１００９）
2021526530.tif 000059
【０２０９】
一般手順Ｃ１の後、２−ニトロベンゾイルクロリド（２３９ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）をアニリン（１２０ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）と反応させて粗生成物（３５０ｍｇ）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ２４３［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２１０】
工程２．２−アミノ−Ｎ−フェニルベンズアミド（ＪＲＷ−１０１０）．
2021526530.tif 000060
【０２１１】
一般手順Ｄの後、２−ニトロ−Ｎ−フェニルベンズアミド（１．３ｍｍｏｌ）を塩化スズ水和物（８０３ｍｇ、３．９ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（２工程にわたって２００ｍｇ、７３％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ２１３［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２１２】
工程３．２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−フェニルベンズアミド（ＪＲＷ−１０１１）．
2021526530.tif 000061
【０２１３】
一般手順Ａの後、２−アミノ−Ｎ−フェニルベンズアミド（２００ｍｇ、０．９４ｍｍｏｌ）を４−メチルベンゼンスルホニルクロリド（３５９ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（３４０ｍｇ、９８％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３６７［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２１４】
実施例７
Ｎ−（３−シアノ−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（フェニルスルホンアミド）ベンズアミド（ＨＬ−００１０）
2021526530.tif 000062
一般手順Ａの後、２−アミノ−Ｎ−（３−シアノ−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−シクロペンタ［ｂ］チオフェン−２−イル）ベンズアミド（４０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）をベンゼンスルホニルクロリド（３０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（１７ｍｇ、２６％）を淡茶色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４２４［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２１５】
実施例８
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（４−ホルミルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＨＬ−００３８）
2021526530.tif 000063
工程１．Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−ニトロベンズアミド（ＨＬ−００２８）．
2021526530.tif 000064
【０２１６】
一般手順Ｃ１の後、２−ニトロベンゾイルクロリド（３７３ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）をベンゾ［ｂ］チオフェン−２−アミン（３００ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（５０ｍｇ、８％）を固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ２９９［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２１７】
工程２．２−アミノ−Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）ベンズアミド（ＨＬ−００３６）．
2021526530.tif 000065
【０２１８】
一般手順Ｄの後、Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−ニトロベンズアミド（１００ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を塩化スズ水和物（２０９ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（２７ｍｇ、３０％）を固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ２６９［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２１９】
工程３．Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（４−ホルミルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＨＬ−００３８）．
2021526530.tif 000066
【０２２０】
一般手順Ａの後、２−アミノ−Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）ベンズアミド（１０ｍｇ、０．０３６ｍｍｏｌ）を４−ホルミルベンゼンスルホニルクロリド（７ｍｇ、０．０３７ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（５ｍｇ、３１％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４３７［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２２１】
実施例９
メチル３−（４−（Ｎ−（２−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イルカルバモイル）フェニル）スルファモイル）フェニル）プロパノエート（ＨＬ−００４０）
2021526530.tif 000067
一般手順Ａの後、２−アミノ−Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）ベンズアミド（１０ｍｇ、０．０３７ｍｍｏｌ）をメチル３−（４−（クロロスルホニル）フェニル）プロパノエート（１０ｍｇ、０．０３７ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（１２ｍｇ、６３％）を淡茶色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４９５［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２２２】
実施例１０
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（３−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＨＬ−００４１）
2021526530.tif 000068
一般手順Ａの後、２−アミノ−Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）ベンズアミド（１０ｍｇ、０．０３２ｍｍｏｌ）を３−メチルベンゼンスルホニルクロリド（６ｍｇ、０．０３２ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（７ｍｇ、５４％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４２３［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２２３】
実施例１１
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（４−（３−ヒドロキシプロピル）フェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＨＬ−００６２）
2021526530.tif 000069
０℃のＤＭＦ（２ｍＬ）中のメチル３−（４−（Ｎ−（２−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イルカルバモイル）フェニル）スルファモイル）フェニル）プロパノエート（３１ｍｇ、０．０６３ｍｍｏｌ）の溶液に水素化ホウ素リチウム（４ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温に温め、一晩撹拌した。混合物を酢酸エチル及び水で希釈し、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を組み合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィで精製して所望の生成物（１７ｍｇ、６０％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４６７［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２２４】
実施例１２
２−（［１，１’−ビフェニル］−３−スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（ＪＲＷ−１２４８）
2021526530.tif 000070
工程１．２−ニトロ−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（ＪＲＷ−１２４３）．
2021526530.tif 000071
【０２２５】
一般手順Ｃ１の後、２−ニトロベンゾイルクロリド（３．４６ｇ、１８．６ｍｍｏｌ）をｐ−トルイジン（２．０ｇ、１８．６ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（４．６ｇ、９６％）を淡茶色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ２５７［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２２６】
工程２．２−アミノ−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（ＪＲＷ−１２４７）．
2021526530.tif 000072
【０２２７】
一般手順Ｄの後、２−ニトロ−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（４．６ｇ、１８．０ｍｍｏｌ）を塩化スズ水和物（１１．２ｍｇ、５４．０ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（３．３ｇ、８１％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ２２７［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２２８】
工程３．２−（［１，１’−ビフェニル］−３−スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（ＪＲＷ−１２４８）．
2021526530.tif 000073
【０２２９】
一般手順Ａの後、２−アミノ−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（７５ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を［１，１’−ビフェニル］−３−スルホニルクロリド（９２ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（８５ｍｇ、５８％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４４３［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２３０】
実施例１３
メチル３−（Ｎ−（２−（ｐ−トリルカルバモイル）フェニル）スルファモイル）ベンゾエート（ＪＲＷ−１２５０）
2021526530.tif 000074
一般手順Ａの後、２−アミノ−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（４００ｍｇ、１．７８ｍｍｏｌ）をメチル３−（クロロスルホニル）ベンゾエート（４９８ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（６７０ｍｇ、８９％）を白色のフォームとして得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４２５［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２３１】
実施例１４
３−（Ｎ−（２−（ｐ−トリルカルバモイル）フェニル）スルファモイル）安息香酸（ＪＲＷ−１２５１）
2021526530.tif 000075
一般手順Ｂの後、メチル３−（Ｎ−（２−（ｐ−トリルカルバモイル）フェニル）スルファモイル）ベンゾエート（６５０ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）をＬｉＯＨ（１１０ｍｇ、４．６ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（５８０ｍｇ、９２％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４１１［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２３２】
実施例１５
２−（（３−アセトアミドフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（ＪＲＷ−１２５３）
2021526530.tif 000076
一般手順Ａの後、２−アミノ−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（４００ｍｇ、１．７８ｍｍｏｌ）を３−アセトアミドベンゼンスルホニルクロリド（４９５ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（６９０ｍｇ、９２％）を白色のフォームとして得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４２４［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２３３】
実施例１６
２−（（３−アミノフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（ＪＲＷ−１２５５）
2021526530.tif 000077
メタノール（２０ｍＬ）中の２−（（３−アセトアミドフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（６９０ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）の溶液に水酸化ナトリウム（５ｍＬ、２Ｍ）を添加した。混合物を８５℃に５時間加熱した。反応物を冷却し、ｐＨ５に酸性化し、ＤＣＭ及び水で希釈し、水層をＤＣＭで抽出した。有機層を組み合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィで精製して所望の生成物（６２ｍｇ、１０％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３８２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２３４】
実施例１７
２−（（３−（ヒドロキシメチル）フェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（ＪＲＷ−１２６１）
2021526530.tif 000078
ＤＣＭ（５ｍＬ）中の３−（Ｎ−（２−（ｐ−トリルカルバモイル）フェニル）スルファモイル）安息香酸（５４ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）の混合物にＨＯＢｔ（２０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（２５ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で３０分間撹拌した。溶液を濃縮して白色のフォームとし、その後固体をＴＨＦ（１０ｍＬ）及び水（０．５ｍＬ）に溶解した。溶液を冷却し、水素化ホウ素ナトリウム（１０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で１８時間撹拌し、ＨＣｌでクエンチし、酢酸エチル及び水で希釈した。有機層を組み合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィで精製して所望の生成物（２９ｍｇ、５５％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３９７［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２３５】
実施例１８
２−（（３−（ブチルカルバモイル）フェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（ＪＲＷ−１２６３）
2021526530.tif 000079
一般手順Ｃ２の後、３−（Ｎ−（２−（ｐ−トリルカルバモイル）フェニル）スルファモイル）安息香酸（５０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）をブチルアミン（１７ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（４３ｍｇ、７６％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４６６［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２３６】
実施例１９
２−（（３−ブロモフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（ＪＲＷ−１２６７）
2021526530.tif 000080
一般手順Ａの後、２−アミノ−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（３５０ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を３−ブロモベンゼンスルホニルクロリド（４７４ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（６２０ｍｇ、９０％）を淡茶色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４４６［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２３７】
実施例２０
２−（（３−（ブチルアミノ）フェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（ＪＲＷ−１２６９）
2021526530.tif 000081
ＴＨＦ（５ｍＬ）中の２−（（３−アミノフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（５０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）の溶液にブチルアルデヒド（１４ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で３０分間撹拌し、その後トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（５５ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で５時間撹拌し、ＮａＨＣＯ3の飽和溶液でクエンチし、酢酸エチル及び水で希釈した。有機層を組み合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィで精製して所望の生成物（２７ｍｇ、４７％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４３８［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２３８】
実施例２１
２−（（３−（ヘキシ−１−イン−１−イル）フェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（ＪＲＷ−１２７０）
2021526530.tif 000082
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の２−（（３−ブロモフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（１００ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）の溶液に１−ヘキシン（３６ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（６８ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（６ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）、及びＰｄＣｌ2（ＰＰｈ3）2（８ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）を添加した。懸濁液を窒素でパージした。ヨウ化銅（４ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を６０℃で１８時間撹拌した。反応物を酢酸エチル及び水で希釈し、酢酸エチルで抽出し、有機層を組み合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィで精製して所望の生成物（５０ｍｇ、５０％）を橙色の油として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４４７［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２３９】
実施例２２
２−（（３−ヘキシルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（ＪＲＷ−１２７１）
2021526530.tif 000083
エタノール（１０ｍＬ）中の２−（（３−（ヘキシ−１−イン−１−イル）フェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（４０ｍｇ、０．０９０ｍｍｏｌ）の溶液にパラジウム担持炭素（５ｍｇ）を添加した。反応物を室温で２時間４０ｐｓｉの水素で撹拌した。混合物をセライトを通して濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィで精製して所望の生成物（２５ｍｇ、６２％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４５１［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２４０】
実施例２３
２−（（３−（３−ヒドロキシプロプ−１−イン−１−イル）フェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（ＪＲＷ−１２７２）
2021526530.tif 000084
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の２−（（３−ブロモフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（１００ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）の溶液にプロパルギルアルコール（２５ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（６８ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（６ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）、及びＰｄＣｌ2（ＰＰｈ3）2（８ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）を添加した。懸濁液を窒素でパージした。ヨウ化銅（４ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を８５℃で４８時間撹拌した。反応物を酢酸エチル及び水で希釈し、酢酸エチルで抽出し、有機層を組み合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィで精製して所望の生成物（３０ｍｇ、３１％）を淡黄色のガム状物として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４２１［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２４１】
実施例２４
２−（（３−（３−ヒドロキシプロピル）フェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（ＪＲＷ−１２７５）
2021526530.tif 000085
エタノール（１０ｍＬ）中の２−（（３−（３−ヒドロキシプロプ−１−イン−１−イル）フェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（２３ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）の溶液にパラジウム担持炭素（５ｍｇ）を添加した。反応物を室温で１時間４０ｐｓｉの水素で撹拌した。混合物をセライトを通して濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィで精製して所望の生成物（１７ｍｇ、７４％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４２５［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２４２】
実施例２５
Ｎ−（ｐ−トリル）−２−（（４−（トリフルオロメチル）フェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１２８４）
2021526530.tif 000086
一般手順Ａの後、２−アミノ−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（５０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を４−（トリフルオロメチル）ベンゼンスルホニルクロリド（６４ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（８６ｍｇ、８９％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４３４［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２４３】
実施例２６
２−（（４−メトキシフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（ＪＲＷ−１２８５）
2021526530.tif 000087
一般手順Ａの後、２−アミノ−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（５０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を４−メトキシベンゼンスルホニルクロリド（５５ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（８２ｍｇ、９４％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３９７［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２４４】
実施例２７
２−（（４−ブロモフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（ＪＲＷ−１２８７）
2021526530.tif 000088
一般手順Ａの後、２−アミノ−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（１９０ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）を４−ブロモベンゼンスルホニルクロリド（２５７ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（３１０ｍｇ、８３％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４４６［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２４５】
実施例２８
２−（［１，１’−ビフェニル］−４−スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（ＪＲＷ−１２９３）
2021526530.tif 000089
ジオキサン（５ｍＬ）中の２−（（４−ブロモフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（１００ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）の溶液にフェニルボロン酸（３２ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ2（１８ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を窒素でパージし、その後水性Ｃｓ２ＣＯ３（０．６７ｍＬ、１Ｍ）を添加した。反応物を８０℃に２時間加熱した。混合物を酢酸エチルで希釈し、水及びブラインで洗浄した。有機層を組み合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィで精製して所望の生成物（６４ｍｇ、６４％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４４３［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２４６】
実施例２９
Ｎ−（ｐ−トリル）−２−（（３−（トリフルオロメチル）フェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１３２７）
2021526530.tif 000090
一般手順Ａの後、２−アミノ−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（５５ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を３−（トリフルオロメチル）ベンゼンスルホニルクロリド（７１ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（１３ｍｇ、１２％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４３５［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２４７】
実施例３０
Ｎ−（ｐ−トリル）−２−（（３−（トリフルオロメトキシ）フェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１３２８）
2021526530.tif 000091
一般手順Ａの後、２−アミノ−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（５５ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を３−（トリフルオロメトキシ）ベンゼンスルホニルクロリド（７６ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（４２ｍｇ、３８％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４５１［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２４８】
スキーム２．カルボキシレートを介したアミドアナログの代表的合成
2021526530.tif 000092
実施例３１
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＨＬ−０００５）
2021526530.tif 000093
工程１．メチル２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンゾエート（ＨＬ−０００１）．
2021526530.tif 000094
【０２４９】
一般手順Ａの後、メチル２−アミノベンゾエート（１．０ｇ、６．６ｍｍｏｌ）を４−メチルベンゼンスルホニルクロリド（１．５ｇ、７．９ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（１．２５ｇ、６２％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３０６［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２５０】
工程２．２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（ＨＬ−０００３）．
2021526530.tif 000095
【０２５１】
一般手順Ｂの後、メチル２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンゾエート（１．２ｇ、４．１ｍｍｏｌ）をＬｉＯＨ（２９４ｍｇ、１２．３ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（１．０ｇ、８６％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ２９２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２５２】
工程３．Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＨＬ−０００５）．
2021526530.tif 000096
【０２５３】
一般手順Ｃ２の後、２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（５０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）をベンゾ［ｂ］チオフェン−２−アミン（３１ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（４４ｍｇ、９６％）を茶色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４２３［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２５４】
実施例３２
Ｎ−シクロヘキシル−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＨＬ−０００６）
2021526530.tif 000097
一般手順Ｃ２の後、２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（５０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）をシクロヘキシルアミン（２０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（１４ｍｇ、２２％）を淡黄色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３７３［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２５５】
実施例３３
２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ナフタレン−２−イル）ベンズアミド（ＨＬ−０００７）
2021526530.tif 000098
一般手順Ｃ２の後、２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（５０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）をナフタレン−２−アミン（２９ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（４０ｍｇ、５４％）を淡茶色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４１７［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２５６】
実施例３４
２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−イル）ベンズアミド（ＨＬ−０００８）
2021526530.tif 000099
一般手順Ｃ２の後、２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（５０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−アミン（３０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（３３ｍｇ、４４％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４２１［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２５７】
実施例３５
メチルトランス−４−（２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＨＬ−０００９）
2021526530.tif 000100
一般手順Ｃ２の後、２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（５０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）をメチルトランス−４−アミノシクロヘキサン−１−カルボキシレートＨＣｌ（４０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（４１ｍｇ、５５％）を固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４３１［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２５８】
実施例３６
トランス−４−（２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）シクロヘキサン−１−カルボン酸（ＨＬ−００１２）
2021526530.tif 000101
一般手順Ｂの後、メチルトランス−４−（２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（３３ｍｇ、０．０７７ｍｍｏｌ）をＬｉＯＨ（４ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（２９ｍｇ、８４％）を淡茶色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４１７［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２５９】
実施例３７
２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（ＨＬ−００１９）
2021526530.tif 000102
一般手順Ｃ２の後、２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（５０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を４−メチル−アニリン（２２ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（３４ｍｇ、５２％）を淡茶色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３８１［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２６０】
実施例３８
エチル２−（４−（２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）フェニル）アセテート（ＨＬ−００２３）
2021526530.tif 000103
一般手順Ｃ２の後、２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（５０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）をエチル２−（４−アミノフェニル）アセテート（３７ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（３２ｍｇ、４２％）を固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４５３［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２６１】
実施例３９
Ｎ−（３−イソプロピルフェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＨＬ−００２５）
2021526530.tif 000104
一般手順Ｃ２の後、２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（５０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を３−イソプロピルアニリン（２８ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（４９ｍｇ、７１％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４０９［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２６２】
実施例４０
エチル３−（２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）ベンゾエート（ＨＬ−００２６）
2021526530.tif 000105
一般手順Ｃ２の後、２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（５０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）をエチル３−アミノベンゾエート（３４ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（５０ｍｇ、６７％）を固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４３９［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２６３】
実施例４１
２−（４−（２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）フェニル）酢酸（ＨＬ−００３０）
2021526530.tif 000106
一般手順Ｂの後、エチル２−（４−（２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）フェニル）アセテート（２３ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）をＬｉＯＨ（３ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（１７ｍｇ、７９％）を茶色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４２５［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２６４】
実施例４２
３−（２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）安息香酸（ＨＬ−００３１）
2021526530.tif 000107
一般手順Ｂの後、エチル３−（２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）ベンゾエート（２３ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ）をＬｉＯＨ（３ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（１２ｍｇ、５４％）を淡黄色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４１１［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２６５】
実施例４３
２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｍ−トリル）ベンズアミド（ＨＬ−００４４）
2021526530.tif 000108
一般手順Ｃ２の後、２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（５０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）をｍ−トルイジン（２２ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（５７ｍｇ、８７％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３８１［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２６６】
実施例４４
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−３−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−２−ナフタミド（ＨＬ−００５７）
2021526530.tif 000109
工程１．メチル３−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−２−ナフトエート（ＨＬ−００４９）．
2021526530.tif 000110
【０２６７】
一般手順Ａの後、メチル３−アミノ−２−ナフトエート（３００ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を４−メチルベンゼンスルホニルクロリド（３４１ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（３４０ｍｇ、６４％）を固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３５６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２６８】
工程２．３−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−２−ナフトエ酸（ＨＬ−００５２）．
2021526530.tif 000111
【０２６９】
一般手順Ｂの後、メチル３−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−２−ナフトエート（３４０ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）をＬｉＯＨ（６９ｍｇ、２．９ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（２３１ｍｇ、７１％）を固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３４２［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２７０】
工程３．Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−３−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−２−ナフタミド（ＨＬ−００５７）．
2021526530.tif 000112
【０２７１】
一般手順Ｃ２の後、３−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−２−ナフトエ酸（５０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）をベンゾ［ｂ］チオフェン−２−アミン（２２ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（２８ｍｇ、４０％）を淡茶色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４７３［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２７２】
実施例４５
２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（２−プロピルフェニル）ベンズアミド（ＨＬ−００５９）
2021526530.tif 000113
一般手順Ｃ２の後、２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（５０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を２−プロピルアニリン（２３ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（２８ｍｇ、４０％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４０９［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２７３】
実施例４６
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−５−メチル−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＨＬ−００６１）
2021526530.tif 000114
工程１．エチル５−メチル−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンゾエート（ＨＬ−００５３）．
2021526530.tif 000115
【０２７４】
一般手順Ａの後、エチル２−アミノ−５−メチルベンゾエート（３００ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）を４−メチルベンゼンスルホニルクロリド（６３８ｍｇ、３．４ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（４０４ｍｇ、７２％）を固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３３４［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２７５】
工程２．５−メチル−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（ＨＬ−００５８）．
2021526530.tif 000116
【０２７６】
一般手順Ｂの後、エチル５−メチル−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンゾエート（４０４ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）をＬｉＯＨ（８７ｍｇ、３．６ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（２６２ｍｇ、７１％）を固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３０６［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２７７】
工程３．Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−５−メチル−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＨＬ−００６１）．
2021526530.tif 000117
【０２７８】
一般手順Ｃ２の後、５−メチル−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（５０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）をベンゾ［ｂ］チオフェン−２−アミン（２４ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（６８ｍｇ、９５％）を淡黄色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４３７［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２７９】
実施例４７
Ｎ−（３−ブチルフェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＨＬ−００７０）
2021526530.tif 000118
一般手順Ｃ２の後、２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（５０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を３−ブチルアニリン（２５ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（１８ｍｇ、２５％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４２３［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２８０】
実施例４８
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−５−シアノ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＨＬ−００７１）
2021526530.tif 000119
工程１．メチル５−シアノ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンゾエート（ＨＬ−００５６）．
2021526530.tif 000120
【０２８１】
一般手順Ａの後、メチル２−アミノ−５−シアノベンゾエート（３００ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）を４−メチルベンゼンスルホニルクロリド（６４９ｍｇ、３．４ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（３６０ｍｇ、６４％）を固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３３１［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２８２】
工程２．５−シアノ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（ＨＬ−００６０）．
2021526530.tif 000121
【０２８３】
一般手順Ｂの後、メチル５−シアノ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンゾエート（３６０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）をＬｉＯＨ（７８ｍｇ、３．３ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（１４０ｍｇ、４１％）を固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３１７［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２８４】
工程３．Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−５−シアノ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＨＬ−００７１）．
2021526530.tif 000122
【０２８５】
一般手順Ｃ２の後、５−シアノ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（９２ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）をベンゾ［ｂ］チオフェン−２−アミン（４３ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（４７ｍｇ、３６％）を淡茶色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４４８［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２８６】
実施例４９
Ｎ−（４−ブチルフェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１０７６）
2021526530.tif 000123
一般手順Ｃ２の後、２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（５５ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を４−ブチルアニリン（４２ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（６８ｍｇ、８６％）を淡茶色の油として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４２３［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２８７】
実施例５０
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン）−２−スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１０７７）
2021526530.tif 000124
工程１．メチル２−（（５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン）−２−スルホンアミド）ベンゾエート（ＨＬ−００６８）．
2021526530.tif 000125
【０２８８】
一般手順Ａの後、メチル２−アミノベンゾエート（２００ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）を５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−スルホニルクロリド（３６６ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（２８９ｍｇ、６３％）を固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３４６［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２８９】
工程２．２−（（５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン）−２−スルホンアミド）安息香酸（ＨＬ−００７２）
2021526530.tif 000126
【０２９０】
一般手順Ｂの後、メチル２−（（５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン）−２−スルホンアミド）ベンゾエート（２８９ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）をＬｉＯＨ（６０ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（２６４ｍｇ、９５％）を固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３３２［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２９１】
工程３．Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン）−２−スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１０７７）．
2021526530.tif 000127
【０２９２】
一般手順Ｃ２の後、２−（（５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン）−２−スルホンアミド）安息香酸（５０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）をベンゾ［ｂ］チオフェン−２−アミン（２７ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（１８ｍｇ、２６％）を茶色の油として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４６３［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２９３】
実施例５１
Ｎ−（４−ヘキシルフェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１０９０）
2021526530.tif 000128
一般手順Ｃ２の後、２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（５０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を４−ヘキシルアニリン（３６ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（６１ｍｇ、７９％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４５１［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２９４】
実施例５２
２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（４−オクチルフェニル）ベンズアミド（ＪＲＷ−１０９１）
2021526530.tif 000129
一般手順Ｃ２の後、２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（５０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を４−オクチルアニリン（４２ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（６７ｍｇ、８１％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４７９［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２９５】
実施例５３
メチル６−（４−（２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）フェニル）ヘキサノエート（ＪＲＷ−１１０７）
2021526530.tif 000130
一般手順Ｃ２の後、２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（５０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）をメチル６−（４−アミノフェニル）ヘキサノエート（４５ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（６５ｍｇ、７６％）を橙色の油として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４７９［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２９６】
実施例５４
６−（４−（２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）フェニル）ヘキサン酸（ＪＲＷ−１１１０）
2021526530.tif 000131
一般手順Ｂの後、メチル６−（４−（２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド）フェニル）ヘキサノエート（５５ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）をＬｉＯＨ（８ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（５０ｍｇ、９４％）を淡茶色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４８１［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２９７】
実施例５５
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（４−ブチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１１１４）
2021526530.tif 000132
工程１．メチル２−（（４−ブチルフェニル）スルホンアミド）ベンゾエート（ＪＲＷ−１１１１）
2021526530.tif 000133
【０２９８】
一般手順Ａの後、メチル２−アミノベンゾエート（１．０ｇ、６．６ｍｍｏｌ）を４−ブチルベンゼンスルホニルクロリド（１．７ｇ、７．３ｍｍｏｌ）と反応させて粗生成物を淡茶色の油として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３４８［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２９９】
工程２．２−（（４−ブチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（ＪＲＷ−１１１２）
2021526530.tif 000134
【０３００】
工程３．Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（４−ブチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１１１４）
2021526530.tif 000135
【０３０１】
一般手順Ｃ２の後、２−（（４−ブチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（１２０ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）をベンゾ［ｂ］チオフェン−２−アミン（５４ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（２５ｍｇ、１５％）をオフホワイト色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４６５［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３０２】
実施例５６
Ｎ−（４−（６−ヒドロキシヘキシル）フェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１１２０）
2021526530.tif 000136
一般手順Ｃ２の後、２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（１５０ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）を６−（４−アミノフェニル）ヘキサン−１−オール（１００ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（６０ｍｇ、２５％）を白色のフォームとして得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４６７［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３０３】
実施例５７
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（４−ペンチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１１２１）
2021526530.tif 000137
工程１．メチル２−（（４−ペンチルフェニル）スルホンアミド）ベンゾエート（ＪＲＷ−１１１５）
2021526530.tif 000138
【０３０４】
一般手順Ａの後、メチル２−アミノベンゾエート（１．０ｇ、６．６ｍｍｏｌ）を４−ペンチルベンゼンスルホニルクロリド（１．８ｇ、７．３ｍｍｏｌ）と反応させて粗生成物（２．３ｇ）を橙色の油として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３６２［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３０５】
工程２．２−（（４−ペンチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（ＪＲＷ−１１１６）
2021526530.tif 000139
【０３０６】
一般手順Ｂの後、メチル２−（（４−ペンチルフェニル）スルホンアミド）ベンゾエート（２．３ｇ、６．４ｍｍｏｌ）をＮａＯＨ（６．４ｍＬ、２Ｍ、１２．７ｍｍｏｌ）と反応させて粗生成物（２．２ｇ）を淡桃色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３４８［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３０７】
工程３．Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（４−ペンチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１１２１）
2021526530.tif 000140
【０３０８】
一般手順Ｃ２の後、２−（（４−ペンチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（１００ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）をベンゾ［ｂ］チオフェン−２−アミン（３４ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（５７ｍｇ、４１％）を橙色のフォームとして得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４７９［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３０９】
実施例５８
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−５−ブチル−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１１４６）
2021526530.tif 000141
工程１．５−ブチル−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（ＪＲＷ−１１４２）
2021526530.tif 000142
【０３１０】
一般手順Ａの後、２−アミノ−５−ブチル安息香酸（２２０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を４−メチルベンゼンスルホニルクロリド（３２５ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（２７５ｍｇ、６９％）を茶色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３４８［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３１１】
工程２．Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−５−ブチル−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１１４６）
2021526530.tif 000143
【０３１２】
一般手順Ｃ２の後、５−ブチル−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（２７５ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）をベンゾ［ｂ］チオフェン−２−アミン（１１８ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（３０ｍｇ、８％）を茶色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４７９［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３１３】
実施例５９
Ｎ−（４−（４−ヒドロキシブチル）フェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１１５０）
2021526530.tif 000144
一般手順Ｃ２の後、２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（２５０ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）を４−（４−アミノフェニル）ブタン−１−オール（１７０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（１４０ｍｇ、３７％）を油として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４３９［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３１４】
実施例６０
Ｎ−（４−（４−ブロモブチル）フェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１１５２）
2021526530.tif 000145
ＤＣＭ（５ｍＬ）中のＮ−（４−（４−ヒドロキシブチル）フェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（４０ｍｇ、０．０９１ｍｍｏｌ）の溶液に四臭化炭素（６０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）及びトリフェニルホスフィン（４７ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で一晩撹拌した。混合物を酢酸エチル及び水で希釈し、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を組み合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィで精製して所望の生成物（１８ｍｇ、４０％）を透明な油として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ５０２［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３１５】
実施例６１
５−メトキシ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（ＪＲＷ−１１６６）
2021526530.tif 000146
工程１．メチル５−メトキシ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンゾエート（ＪＲＷ−１１５９）
2021526530.tif 000147
【０３１６】
一般手順Ａの後、メチル２−アミノ−５−メトキシベンゾエート（５．０ｇ、２７．６ｍｍｏｌ）を４−メチルベンゼンスルホニルクロリド（５．８ｇ、３０．３ｍｍｏｌ）と反応させて粗生成物を紫色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３３６［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３１７】
工程２．５−メトキシ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（ＪＲＷ−１１６１）
2021526530.tif 000148
【０３１８】
一般手順Ｂの後、メチル５−メトキシ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンゾエート（２７．６ｍｍｏｌ）をＮａＯＨ（２７．６ｍＬ、２Ｍ、５５．２ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（８．４ｇ、９４％）を淡紫色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３２２［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３１９】
工程３．５−メトキシ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（ＪＲＷ−１１６６）
2021526530.tif 000149
【０３２０】
一般手順Ｃ２の後、５−メトキシ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（５００ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）をｐ−トルイジン（２００ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（３４８ｍｇ、５４％）を白色のフォームとして得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４１１［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３２１】
実施例６２
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−５−メトキシ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１１６７）
2021526530.tif 000150
一般手順Ｃ２の後、５−メトキシ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（１００ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）をベンゾ［ｂ］チオフェン−２−アミン（５１ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（３４ｍｇ、２４％）を淡茶色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４５３［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３２２】
実施例６３
４−メトキシ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（ＪＲＷ−１２０２）
2021526530.tif 000151
工程１．メチル４−メトキシ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンゾエート（ＪＲＷ−１１９５）
2021526530.tif 000152
【０３２３】
一般手順Ａの後、メチル２−アミノ−４−メトキシベンゾエート（１．０ｇ、５．５ｍｍｏｌ）を４−メチルベンゼンスルホニルクロリド（１．２ｇ、６．１ｍｍｏｌ）と反応させて粗生成物（１．９ｇ）を白色のフォームとして得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３３６［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３２４】
工程２．４−メトキシ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（ＪＲＷ−１１９８）
2021526530.tif 000153
【０３２５】
一般手順Ｂの後、メチル４−メトキシ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンゾエート（５．５ｍｍｏｌ）をＮａＯＨ（５．６ｍＬ、２Ｍ、１１．３ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（１．７ｇ、９４％）を淡黄色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３２２［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３２６】
工程３．４−メトキシ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（ＪＲＷ−１２０２）
2021526530.tif 000154
【０３２７】
一般手順Ｃ２の後、４−メトキシ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（５１０ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）をｐ−トルイジン（２００ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（４６０ｍｇ、７０％）を白色のフォームとして得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４１１［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３２８】
実施例６４
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−４−メトキシ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１２０３）
2021526530.tif 000155
一般手順Ｃ２の後、４−メトキシ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（５０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）をベンゾ［ｂ］チオフェン−２−アミン（２７ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（３０ｍｇ、４２％）を橙色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４５３［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３２９】
実施例６５
２−（（３−メトキシフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（ＪＲＷ−１２０５）
2021526530.tif 000156
工程１．メチル２−（（３−メトキシフェニル）スルホンアミド）ベンゾエート（ＪＲＷ−１１９６）
2021526530.tif 000157
【０３３０】
一般手順Ａの後、メチル２−アミノベンゾエート（７００ｍｇ、４．６ｍｍｏｌ）を３−メトキシベンゼンスルホニルクロリド（１．０５ｇ、５．１ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（１．３ｇ、８７％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３２２［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３３１】
工程２．２−（（３−メトキシフェニル）スルホンアミド）安息香酸（ＪＲＷ−１１９９）
2021526530.tif 000158
【０３３２】
一般手順Ｂの後、メチル２−（（３−メトキシフェニル）スルホンアミド）ベンゾエート（１．３ｇ、４．１ｍｍｏｌ）をＮａＯＨ（４．０ｍＬ、２Ｍ、８．０ｍｍｏｌ）と反応させて粗生成物（１．５ｇ）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３０８［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３３３】
工程３．２−（（３−メトキシフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（ＪＲＷ−１２０５）
2021526530.tif 000159
【０３３４】
一般手順Ｃ２の後、２−（（３−メトキシフェニル）スルホンアミド）安息香酸（４５５ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）をｐ−トルイジン（１９０ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（３３５ｍｇ、５７％）を淡茶色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３９７［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３３５】
実施例６６
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（３−メトキシフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１２３０）
2021526530.tif 000160
一般手順Ｃ２の後、２−（（３−メトキシフェニル）スルホンアミド）安息香酸（６０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）をベンゾ［ｂ］チオフェン−２−アミン（３５ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（３０ｍｇ、３５％）を赤茶色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４３９［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３３６】
実施例６７
５−ヒドロキシ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（ＪＲＷ−１２３２）
2021526530.tif 000161
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の５−メトキシ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（２６０ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）の溶液に０℃の三臭化ホウ素（１．６ｍＬ、１．０Ｍ、１．６ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温に温め、１８時間撹拌し、ＮａＨＣＯ3の飽和溶液でクエンチした。混合物をＤＣＭ及び水で希釈し、水層をＤＣＭで抽出した。有機層を組み合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィで精製して所望の生成物（２９ｍｇ、１１％）を茶色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３９７［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３３７】
実施例６８
２−（（３−ヒドロキシフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（ＪＲＷ−１２３６）
2021526530.tif 000162
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の２−（（３−メトキシフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（１９０ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）の溶液に０℃の三臭化ホウ素（０．９６ｍＬ、１．０Ｍ、０．９６ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温に温め、１８時間撹拌し、ＮａＨＣＯ3の飽和溶液でクエンチした。混合物をＤＣＭ及び水で希釈し、水層をＤＣＭで抽出した。有機層を組み合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィで精製して所望の生成物（１４０ｍｇ、７６％）を淡茶色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３８３［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３３８】
実施例６９
２−（（３−ブトキシフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（ＪＲＷ−１２６６）
2021526530.tif 000163
ＴＨＦ（３ｍＬ）中の２−（（３−ヒドロキシフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（ｐ−トリル）ベンズアミド（４０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）の溶液にｎ−ブタノール（１５ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（３０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）及びＤＩＡＤ（４６ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で１８時間撹拌した。混合物を酢酸エチル及び水で希釈し、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を組み合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィで精製して所望の生成物（３０ｍｇ、６５％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４３９［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３３９】
実施例７０
Ｎ−（２−ブロモフェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１２８２）
2021526530.tif 000164
一般手順Ｃ２の後、２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（２００ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）を２−ブロモアニリン（１４１ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（４８ｍｇ、１５％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４４６［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３４０】
実施例７１
Ｎ−（３−ブロモフェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１２８３）
2021526530.tif 000165
一般手順Ｃ２の後、２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（２００ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）を３−ブロモアニリン（１４１ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（１２２ｍｇ、４０％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４４６［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３４１】
実施例７２
Ｎ−（［１，１’−ビフェニル］−４−イル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１２８８）
2021526530.tif 000166
一般手順Ｃ２の後、２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（５０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を［１，１’−ビフェニル］−４−アミン（３４ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（４２ｍｇ、５５％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４４３［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３４２】
実施例７３
Ｎ−（２−メトキシフェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１２９２）
2021526530.tif 000167
一般手順Ｃ２の後、２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（１９０ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を２−メトキシアニリン（９６ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（１５５ｍｇ、６０％）を淡茶色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３９７［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３４３】
実施例７４
Ｎ−（［１，１’−ビフェニル］−３−イル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１２９７）
2021526530.tif 000168
ジオキサン（５ｍＬ）中のＮ−（３−ブロモフェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（１１０ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）の溶液にフェニルボロン酸（３６ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ2（２０ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を窒素でパージし、その後水性Ｃｓ2ＣＯ3（０．７４ｍＬ、１Ｍ）を添加した。反応物を８０℃に２時間加熱した。混合物を酢酸エチルで希釈し、水及びブラインで洗浄した。有機層を組み合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィで精製して所望の生成物（１０５ｍｇ、９６％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４４３［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３４４】
実施例７５
Ｎ−（３−メトキシフェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１２９９）
2021526530.tif 000169
一般手順Ｃ２の後、２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（１９０ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を３−メトキシアニリン（９６ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（１６５ｍｇ、６４％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３９７［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３４５】
実施例７６
Ｎ−（４−メトキシフェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１３００）
2021526530.tif 000170
一般手順Ｃ２の後、２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（１９０ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を４−メトキシアニリン（９６ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（１５６ｍｇ、６０％）を淡茶色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３９７［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３４６】
実施例７７
２−（（Ｎ−エチル−４−メチルフェニル）スルホンアミド）−Ｎ−（４−メトキシフェニル）ベンズアミド（ＪＲＷ−１３２５）
2021526530.tif 000171
ＤＭＦ（３ｍＬ）中のＮ−（４−メトキシフェニル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（５０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）の溶液にジイソプロピルエチルアミン（４９ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）及びヨウ化エチル（０．５ｍＬ）を添加した。溶液を１８時間６０℃で撹拌した。混合物を酢酸エチルで希釈し、水及びブラインで洗浄した。有機層を組み合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィで精製して所望の生成物（５０ｍｇ、９４％）を淡黄色のフォームとして得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４２５［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３４７】
実施例７８
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−４−フルオロ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１３４６）
2021526530.tif 000172
工程１．メチル４−フルオロ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンゾエート（ＪＲＷ−１３４２）．
2021526530.tif 000173
【０３４８】
一般手順Ａの後、メチル２−アミノ−４−フルオロベンゾエート（１．０ｇ、５．９ｍｍｏｌ）を４−メチルベンゼンスルホニルクロリド（１．２ｇ、６．５ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（１．５２ｇ、７９％）を淡黄色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３２４［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３４９】
工程２．４−フルオロ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（ＪＲＷ−１３４４）．
2021526530.tif 000174
【０３５０】
一般手順Ｂの後、メチル４−フルオロ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンゾエート（１．５ｇ、４．６ｍｍｏｌ）をＮａＯＨ（７ｍＬ、２Ｍ、１４ｍｍｏｌ）と反応させて粗生成物（１．６ｇ）を淡黄色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３１０［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３５１】
工程３．Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−４−フルオロ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１３４６）．
2021526530.tif 000175
【０３５２】
一般手順Ｃ２の後、４−フルオロ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（１００ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）をベンゾ［ｂ］チオフェン−２−アミン（５８ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（９３ｍｇ、６５％）を淡桃色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４４１［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３５３】
実施例７９
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−５−フルオロ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１３４７）
2021526530.tif 000176
工程１．メチル５−フルオロ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンゾエート（ＪＲＷ−１３４３）．
2021526530.tif 000177
【０３５４】
一般手順Ａの後、メチル２−アミノ−５−フルオロベンゾエート（１．０ｇ、５．９ｍｍｏｌ）を４−メチルベンゼンスルホニルクロリド（１．２ｇ、６．５ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（１．９ｇ、９９％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３２４［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３５５】
工程２．５−フルオロ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（ＪＲＷ−１３４５）．
2021526530.tif 000178
【０３５６】
一般手順Ｂの後、メチル５−フルオロ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンゾエート（１．９ｇ、５．９ｍｍｏｌ）をＮａＯＨ（９ｍＬ、２Ｍ、１８ｍｍｏｌ）と反応させて粗生成物（１．８ｇ）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３１０［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３５７】
工程３．Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−５−フルオロ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１３４７）．
2021526530.tif 000179
【０３５８】
一般手順Ｃ２の後、５−フルオロ−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（１００ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）をベンゾ［ｂ］チオフェン−２−アミン（５８ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（３８ｍｇ、２６％）を淡茶色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４４１［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３５９】
実施例８０
Ｎ−ベンジル−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１３８３）
2021526530.tif 000180
一般手順Ｃ２の後、２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（５０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）をベンジルアミン（３１ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（６ｍｇ、９％）を淡茶色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３８１［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３６０】
実施例８１
Ｎ−（４−メトキシベンジル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）ベンズアミド（ＪＲＷ−１３８４）
2021526530.tif 000181
一般手順Ｃ２の後、２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）安息香酸（５０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を４−メトキシ−ベンジルアミン（３１ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（２５ｍｇ、３５％）を淡茶色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４１１［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３６１】
実施例８２
Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（ＪＲＷ−１３８８）
2021526530.tif 000182
工程１．メチル２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−５−（トリフルオロメチル）ベンゾエート（ＪＲＷ−１３８２）
2021526530.tif 000183
【０３６２】
一般手順Ａの後、メチル２−アミノ−５−（トリフルオロメチル）ベンゾエート（１．０ｇ、４．６ｍｍｏｌ）を４−メチルベンゼンスルホニルクロリド（０．９６ｇ、５．０ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（１．４ｇ、８１％）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３７４［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３６３】
工程２．２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−５−（トリフルオロメチル）安息香酸（ＪＲＷ−１３８６）
2021526530.tif 000184
【０３６４】
一般手順Ｂの後、メチル２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−５−（トリフルオロメチル）ベンゾエート（１．４ｇ、３．７ｍｍｏｌ）をＮａＯＨ（３．７ｍＬ、２Ｍ、７．４ｍｍｏｌ）と反応させて粗生成物（１．３ｇ）を白色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ３６０［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３６５】
工程３．Ｎ−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（ＪＲＷ−１３８８）
2021526530.tif 000185
【０３６６】
一般手順Ｃ２の後、２−（（４−メチルフェニル）スルホンアミド）−５−（トリフルオロメチル）安息香酸（１１０ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）をベンゾ［ｂ］チオフェン−２−アミン（５５ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）と反応させて所望の生成物（１４０ｍｇ、９３％）を淡茶色の固体として得た。ＥＳＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４９１［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３６７】
実施例８３
生物発光性複合体の選択的阻害
以下の実施例は、ＮａｎｏＬｕｃ（登録商標）ルシフェラーゼを阻害することなく、様々な生物発光性複合体、例えば、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体を選択的に阻害するための開示される阻害剤の使用を提供する。図１Ａは、例示的な化合物によるＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＨｉＢｉＴ／ＬｇＢｉＴ生物発光性複合体の阻害を示している。ＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＨｉＢｉＴ非発光性ペプチド及びＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＬｇＢｉＴ非発光性ポリペプチドをそれぞれＰＢＳ＋０．０１％ＢＳＡに希釈し（それぞれ０．１ｎＭ及び１００ｎＭの最終濃度）、ＲＰＭＩ培地（２．５％ＦＢＳ最終）の存在下で順次希釈された濃度の示された化合物と共に室温で２時間インキュベートした。サンプルをＧｌｏＭａｘ（登録商標）−Ｍｕｌｔｉ＋プレートリーダーを使用してフリマジン（１０μＭの最終濃度）の添加後に分析した。それぞれのサンプルを「阻害剤なし」対照に対して正規化した。次いでＩＣ50値をＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍを使用して決定した（ｌｏｇ［阻害剤］対正規化された反応）。図１Ｂは、本発明の例示的な化合物によるＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＳｍＢｉＴ／ＬｇＢｉＴ生物発光性複合体の阻害を示している。ＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＳｍＢｉＴ−アネキシン融合物及びＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＬｇＢｉＴ−アネキシン融合物をＰＢＳ／０．０１％ＢＳＡにそれぞれ６０ｎＭ及び３０ｎＭの最終濃度まで希釈し、ＲＰＭＩ培地（２．５％ＦＢＳ最終）に希釈されたＫ５６２細胞溶解物の存在下で順次希釈された濃度の示された化合物と共に室温で２時間インキュベートした。サンプルをＧｌｏＭａｘ（登録商標）−Ｍｕｌｔｉ＋プレートリーダーを使用してフリマジン（１０μＭの最終濃度）の添加後に分析した。それぞれのサンプルを「阻害剤なし」対照に対して正規化した。次いでＩＣ50値をＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍを使用して決定した（ｌｏｇ［阻害剤］対正規化された反応）。図１Ｃは、図１Ａ及び１Ｂに示された例示的な化合物のＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＨｉＢｉＴ／ＬｇＢｉＴ及びＳｍＢｉＴ／ＬｇＢｉＴ複合体間の計算されたＩＣ50値を比較する棒グラフである。
【０３６８】
図２は、本発明の例示的な化合物のＮＡＮＯＬＵＣ（登録商標）（Ｎｌｕｃ）阻害活性をＮｌｕｃ阻害剤として知られるＰＢＩ−６０９６と比較している。阻害剤を１０％ＦＢＳを有するＣＯ2非依存性培地に希釈した。Ｎｌｕｃを１００μＭのフリマジンを有するＮａｎｏＧｌｏ（登録商標）緩衝液に２ｎｇ／ｍｌまで希釈した。阻害剤の一連の希釈物をＮａｎｏＬｕｃ／フリマジン／ＮａｎｏＧｌｏ（登録商標）溶液に添加し、サンプルをＧｌｏＭａｘ（登録商標）−Ｍｕｌｔｉ＋プレートリーダーを使用して直ちに分析した。図２に示されるように、ＪＲＷ−１００４、ＨＬ−０００５、及びＨＬ−００１０は、ＮａｎｏＬｕｃに対する感知可能な阻害を示さず、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼ由来生物発光性複合体に対する化合物の選択性を実証している。
【０３６９】
実施例８４
細胞における生物発光性複合体の阻害
図３Ａ〜３Ｂは、細胞における生物発光性複合体の阻害を示している。図３Ａにおいて、ＨＥＫ２９３細胞を細胞内ＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＨｉＢｉＴ融合タンパク質をコードするＤＮＡでトランスフェクションし、２０，０００細胞／１００μＬ成長培地でプレーティングし、２４時間インキュベートした。２４時間の発現後、細胞をＯｐｔｉＭＥＭ中５０ｕｇ／ｍＬ（最終）のジギトニンで溶解し、精製したＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＬｇＢｉＴ非発光性ポリペプチド及びＨＬ−０００５の一連の希釈物で処理した。室温で２時間インキュベートした後、フリマジンを添加し（１０μＭの最終濃度）、発光をＧｌｏＭａｘ（登録商標）−Ｍｕｌｔｉ＋プレートリーダーで測定した。
【０３７０】
図３Ｂにおいて、ＨＥＫ２９３細胞に細胞内ＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＨｉＢｉＴ融合タンパク質をコードするＤＮＡ及び細胞内ＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＬｇＢｉＴ融合タンパク質をコードするＤＮＡを、融合タンパク質が細胞内で共発現するようにトランスフェクションした。トランスフェクションされた細胞を２０，０００細胞／１００μＬ成長培地でプレーティングし、２４時間インキュベートした。２４時間の発現後、細胞をＯｐｔｉＭＥＭ中５０ｕｇ／ｍＬのジギトニンで任意に溶解し、ＨＬ−０００５の一連の希釈物で処理した。室温で２時間インキュベートした後、フリマジンを添加し（１０μＭの最終濃度）、発光をＧｌｏＭａｘ（登録商標）Ｍｕｌｔｉ＋プレートリーダーで測定した。図３Ａは、細胞状況におけるＨＬ−０００５でのＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＨｉＢｉｔ／ＬｇＢｉｔ生物発光性複合体の阻害を示している。図３Ｂは、溶解及び非溶解条件でのＩＣ50値を比較しており、ＨＬ−０００５が概ね、細胞透過性であることを示している。
【０３７１】
実施例８５
阻害剤のＩＣ50の決定
以下の実施例は、本明細書で開示される化合物のＩＣ50値を提供する。結果は表１に示されている。ＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）ＨｉＢｉＴ非発光性ペプチド及びＬｇＢｉＴ非発光性非ポリペプチドを、０．０１％ＢＳＡを有するＴＢＳ緩衝液にそれぞれ０．１ｎＭ及び１ｎＭまで希釈して、検出試薬を作製した。次いで各阻害剤の３倍希釈系列を検出試薬中で作製した。各サンプルについて「阻害剤なし」対照も作製した。５０ｕｌの各阻害剤の希釈物を６μＭ（最終）のフリマジンと混合し、発光を測定した。それぞれのサンプルを「阻害剤なし」対照に対して正規化した。次いでＩＣ50値をＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍを使用して決定した（ｌｏｇ［阻害剤］対正規化された反応）。
表１
2021526530.tif 000186
2021526530.tif 000187
2021526530.tif 000188
ＮＡ−活性なし
ＮＴ−試験せず
【０３７２】
前述の詳細な説明及び付属の実施例は、例示的なものにすぎず、添付の特許請求の範囲及びそれらの均等物によってのみ定義される本発明の範囲に対する制限として解釈されるべきではないことが理解される。
【０３７３】
開示された実施形態に対する様々な変更及び改変が当業者に明らかである。本発明の化学構造、置換基、誘導体、中間体、合成、組成物、製剤、または使用方法に関するものを含むがこれらに限定されないそのような変更及び改変は、その趣旨及び範囲から逸脱することなくなされ得る。
付属書
【０３７４】
配列番号１−天然成長Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼのアミノ酸配列
ＦＴＬＡＤＦＶＧＤＷＱＱＴＡＧＹＮＱＤＱＶＬＥＱＧＧＬＳＳＬＦＱＡＬＧＶＳＶＴＰＩＱＫＶＶＬＳＧＥＮＧＬＫＡＤＩＨＶＩＩＰＹＥＧＬＳＧＦＱＭＧＬＩＥＭＩＦＫＶＶＹＰＶＤＤＨＨＦＫＩＩＬＨＹＧＴＬＶＩＤＧＶＴＰＮＭＩＤＹＦＧＲＰＹＰＧＩＡＶＦＤＧＫＱＩＴＶＴＧＴＬＷＮＧＮＫＩＹＤＥＲＬＩＮＰＤＧＳＬＬＦＲＶＴＩＮＧＶＴＧＷＲＬＣＥＮＩＬＡ
【０３７５】
配列番号２−野生型ＮＬｐｅｐ
ＭＧＶＴＧＷＲＬＣＥＲＩＬＡ
【０３７６】
配列番号３−野生型ＮＬｐｏｌｙ
ＭＶＦＴＬＥＤＦＶＧＤＷＲＱＴＡＧＹＮＬＤＱＶＬＥＱＧＧＶＳＳＬＦＱＮＬＧＶＳＶＴＰＩＱＲＩＶＬＳＧＥＮＧＬＫＩＤＩＨＶＩＩＰＹＥＧＬＳＧＤＱＭＧＱＩＥＫＩＦＫＶＶＹＰＶＤＤＨＨＦＫＶＩＬＨＹＧＴＬＶＩＤＧＶＴＰＮＭＩＤＹＦＧＲＰＹＥＧＩＡＶＦＤＧＫＫＩＴＶＴＧＴＬＷＮＧＮＫＩＩＤＥＲＬＩＮＰＤＧＳＬＬＦＲＶＴＩＮＶ
【０３７７】
配列番号４−ＨｉＢｉＴのアミノ酸配列
ＶＳＧＷＲＬＦＫＫＩＳ
【０３７８】
配列番号５−ＬｇＢｉＴのアミノ酸配列
ＭＶＦＴＬＥＤＦＶＧＤＷＥＱＴＡＡＹＮＬＤＱＶＬＥＱＧＧＶＳＳＬＬＱＮＬＡＶＳＶＴＰＩＱＲＩＶＲＳＧＥＮＡＬＫＩＤＩＨＶＩＩＰＹＥＧＬＳＡＤＱＭＡＱＩＥＥＶＦＫＶＶＹＰＶＤＤＨＨＦＫＶＩＬＰＹＧＴＬＶＩＤＧＶＴＰＮＭＬＮＹＦＧＲＰＹＥＧＩＡＶＦＤＧＫＫＩＴＶＴＧＴＬＷＮＧＮＫＩＩＤＥＲＬＩＴＰＤＧＳＭＬＦＲＶＴＩＮＳ
【０３７９】
配列番号６−ＳｍＢｉＴのアミノ酸配列
ＶＴＧＹＲＬＦＥＥＩＬ
【０３８０】
配列番号７−ＮａｎｏＬｕｃ
ＭＶＦＴＬＥＤＦＶＧＤＷＲＱＴＡＧＹＮＬＤＱＶＬＥＱＧＧＶＳＳＬＦＱＮＬＧＶＳＶＴＰＩＱＲＩＶＬＳＧＥＮＧＬＫＩＤＩＨＶＩＩＰＹＥＧＬＳＧＤＱＭＧＱＩＥＫＩＦＫＶＶＹＰＶＤＤＨＨＦＫＶＩＬＨＹＧＴＬＶＩＤＧＶＴＰＮＭＩＤＹＦＧＲＰＹＥＧＩＡＶＦＤＧＫＫＩＴＶＴＧＴＬＷＮＧＮＫＩＩＤＥＲＬＩＮＰＤＧＳＬＬＦＲＶＴＩＮＧＶＴＧＷＲＬＣＥＲＩＬＡ
【図１】
2021526530.tif 000201
【図２】
2021526530.tif 000202
【図３】
2021526530.tif 000203
【国際調査報告】
2021526530.tif 000204
2021526530.tif 000205
2021526530.tif 000206
2021526530.tif 000207
2021526530.tif 000208