(57)【要約】本発明は、さまざまな疾患や障害（例えば、過形成、固形腫瘍、または造血器悪性腫瘍）を処置する際に有用な、インターロイキン１２とプロドラッグの新規な融合タンパク質、および組成物、ならびにその調製方法を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
融合タンパク質であって：
第１の構造単位：Ｐ３５とＰ４０のサブユニットから選択されたインターロイキン（ＩＬ１２）の１つまたは２つのサブユニットであって、ここで、第１の構造単位が融合タンパク質のＮ末端に位置する、サブユニット；
第２の構造単位：抗体Ｆｃフラグメントであって、第２の構造単位が融合タンパク質のＣ末端に位置する、抗体Ｆｃフラグメント；および、
第１の構造単位および第２の構造単位と共有結合するか、あるいは、第１の構造単位の２つのサブユニットと共有結合する第１のリンカーセグメント、
を含む、融合タンパク質。
【請求項２】
Ｐ３５とＰ４０サブユニットは、ヒト、サル、マウス、イヌ、ラット、ウシ、ブタ、およびヒツジからなる群から選択された哺乳動物に由来する、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３】
哺乳動物はマウスである、請求項２に記載の融合タンパク質。
【請求項４】
哺乳動物はヒトである、請求項２に記載の融合タンパク質。
【請求項５】
抗体ＦｃフラグメントはヒトＦｃフラグメントを含む、請求項１−４のいずれか１つに記載の融合タンパク質。
【請求項６】
抗体ＦｃフラグメントはヒトＩｇＧ１を含む、請求項１−５のいずれか１つに記載の融合タンパク質。
【請求項７】
ヒトＩｇＧ１はヒトＦｃ−ノブまたはヒトＦｃ−ホールである、請求項１−６のいずれか１つに記載の融合タンパク質。
【請求項８】
Ｐ３５サブユニットは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３で記載されるアミノ酸配列を有する、請求項１−３および５−７のいずれか１つに記載の融合タンパク質。
【請求項９】
Ｐ３５サブユニットは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４で記載されるアミノ酸配列を有する、請求項１、２、および４−７のいずれか１つに記載の融合タンパク質。
【請求項１０】
Ｐ４０サブユニットは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１で記載されるアミノ酸配列を有する、請求項１−３および５−８のいずれか１つに記載の融合タンパク質。
【請求項１１】
Ｐ４０サブユニットは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２で記載されるアミノ酸配列を有する、請求項１、２、および４−９のいずれか１つに記載の融合タンパク質。
【請求項１２】
第１のリンカーセグメント（Ｌ１）は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１２で記載されるアミノ酸配列を有する、請求項１−１１のいずれか１つに記載の融合タンパク質。
【請求項１３】
第１の構造単位のＮ末端で修飾されたシグナルペプチドをさらに含む、請求項１−１２のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項１４】
Ｐ３５サブユニットのＮ末端で修飾されたシグナルペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２７で記載されるアミノ酸配列を含む第１のシグナルペプチド（ＳＰ１）である、請求項１３に記載の融合タンパク質。
【請求項１５】
Ｐ３５サブユニットのＮ末端で修飾されたシグナルペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２８で記載されるアミノ酸配列を含む第１のシグナルペプチド（ＳＰ１）である、請求項１３に記載の融合タンパク質。
【請求項１６】
Ｐ４０サブユニットのＮ末端で修飾されたシグナルペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２９で記載されるアミノ酸配列を含む第２のシグナルペプチド（ＳＰ２）である、請求項１３に記載の融合タンパク質。
【請求項１７】
Ｐ４０サブユニットのＮ末端で修飾されたシグナルペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３０で記載されるアミノ酸配列を含む第２のシグナルペプチド（ＳＰ２）である、請求項１３に記載の融合タンパク質。
【請求項１８】
第１の構造単位のＮ末端に結合されたインターロイキン１２受容体（ＩＬ１２Ｒ）のサブ配列；および、
ＩＬ１２Ｒを第１の構造単位に共有結合する第２のリンカーセグメント（Ｌ２）、
をさらに含む、請求項１−１７のいずれか１つに記載の融合タンパク質。
【請求項１９】
ＩＬ１２Ｒは、ＩＬ１２Ｒβ１（Ｒβ１）とＩＬ１２Ｒβ２（Ｒβ２）から選択される、請求項１８に記載の融合タンパク質。
【請求項２０】
第２のリンカーセグメントＬ２は、腫瘍微小環境で特異的に発現されたタンパク分解酵素によって認識および加水分解可能である、請求項１８または１９に記載の融合タンパク質。
【請求項２１】
Ｒβ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．８で記載されるアミノ酸配列を含み、および、Ｒβ２はＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１０で記載されるアミノ酸配列を含む、請求項１９または２０に記載の融合タンパク質。
【請求項２２】
Ｒβ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．９で記載されるアミノ酸配列を含み、および、Ｒβ２はＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１１で記載されるアミノ酸配列を含む、請求項１９または２０に記載の融合タンパク質。
【請求項２３】
腫瘍微小環境で特異的に発現されたタンパク分解酵素は、マトリックスメタロプロテイナーゼである、請求項２０−２２のいずれか１つに記載の融合タンパク質。
【請求項２４】
マトリックスメタロプロテイナーゼは、マトリックスメタロプロテイナーゼ１４（ＭＭＰ１４）である、請求項２３に記載の融合タンパク質。
【請求項２５】
リンカーセグメントＬ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１３−２６で記載されるアミノ酸配列を含む、請求項１８−２４のいずれか１つに記載の融合タンパク質。
【請求項２６】
ＩＬ１２ＲのＣ末端は、リンカーセグメントＬ２を介して第１の構造単位のＮ末端に結合され；および、
第１の構造単位のＣ末端と第２の構造単位のＮ末端は、リンカーセグメントＬ１を介して結合され；
第１の構造単位が２つのサブユニットを含む場合、第１のサブユニットのＣ末端と第２のサブユニットのＮ末端は、リンカーセグメントＬ１によって結合される、
請求項１８−２５のいずれか１つに記載の融合タンパク質。
【請求項２７】
請求項１−２６のいずれか１つの融合タンパク質を含む、ホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質。
【請求項２８】
Ｐ４０サブユニット、リンカーセグメントＬ１、Ｐ３５サブユニット、リンカーセグメントＬ１、ヒトＩｇＧ１の融合タンパク質を含む単量体のホモ二量体であり、およびＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３１で記載されるアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載のホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質。
【請求項２９】
Ｐ４０サブユニット、リンカーセグメントＬ１、Ｐ３５サブユニット、リンカーセグメントＬ１、ヒトＩｇＧ１の融合タンパク質を含む単量体のホモ二量体であり、およびＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３２で記載されるアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載のホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質。
【請求項３０】
第１の単量体：Ｐ４０サブユニット、リンカーセグメントＬ１、およびヒトＦｃ−ノブを含み、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１８で記載されるアミノ酸配列を有する、融合タンパク質と、
第２の単量体：リンカーセグメントＬ１、およびヒトＦｃ−ホールを含むＰ３５サブユニットを含み、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３５で記載されるアミノ酸配列構造を有する、融合タンパク質と、
のヘテロ二量体である、請求項２７に記載のホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質。
【請求項３１】
第１の単量体：Ｐ４０サブユニット、リンカーセグメントＬ１、およびヒトＦｃ−ノブを含み、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１８で記載されるアミノ酸配列を有する、融合タンパク質と、
第２の単量体：リンカーセグメントＬ１、およびヒトＦｃ−ホールを含むＰ３５サブユニットを含み、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３６で記載されるアミノ酸配列構造を有する、融合タンパク質と、
のヘテロ二量体である、請求項２７に記載のホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質。
【請求項３２】
ＩＬ１２Ｒβ１、リンカーセグメントＬ２、Ｐ４０サブユニット、リンカーセグメントＬ１、Ｐ３５サブユニット、リンカーセグメントＬ１、およびヒトＩｇＧ１であり、ならびに、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３７で記載されるアミノ酸配列を有する単量体のホモ二量体である、請求項２７に記載のホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質。
【請求項３３】
ＩＬ１２Ｒβ１、リンカーセグメントＬ２、Ｐ４０サブユニット、リンカーセグメントＬ１、Ｐ３５サブユニット、リンカーセグメントＬ１、およびヒトＩｇＧ１であり、ならびに、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３８で記載されるアミノ酸配列を有する単量体のホモ二量体である、請求項２７に記載のホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質。
【請求項３４】
ＩＬ１２Ｒβ１、リンカーセグメントＬ２、Ｐ４０サブユニット、リンカーセグメントＬ１、Ｐ３５サブユニット、リンカーセグメントＬ１、およびヒトＩｇＧ１であり、ならびに、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３９で記載されるアミノ酸配列を有する単量体のホモ二量体である、請求項２７に記載のホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質。
【請求項３５】
ＩＬ１２Ｒβ１、リンカーセグメントＬ２、Ｐ４０サブユニット、リンカーセグメントＬ１、Ｐ３５サブユニット、リンカーセグメントＬ１、およびヒトＩｇＧ１であり、ならびに、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４０で記載されるアミノ酸配列を有する単量体のホモ二量体である、請求項２７に記載のホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質。
【請求項３６】
Ｒβ１、リンカーセグメントＬ２、Ｐ４０サブユニット、リンカーセグメントＬ１、ヒトＦｃ−ノブの融合タンパク質であり、および、ＳＥＱ  ＩＤ  ４１で記載されるアミノ酸配列を有する、第１の単量体と、
Ｒβ２の融合タンパク質、リンカーセグメントＬ２、Ｐ３５サブユニット、リンカーセグメントＬ１、およびＩＬ１２のヒトＦｃ−ホールであり、ならびにＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４３で記載されるアミノ酸配列を有する、第２の単量体と、
のヘテロ二量体である、請求項２７に記載のホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質。
【請求項３７】
Ｒβ１、リンカーセグメントＬ２、Ｐ４０サブユニット、リンカーセグメントＬ１、ヒトＦｃ−ノブの融合タンパク質であり、および、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４２で記載されるアミノ酸配列を有する、第１の単量体と、
Ｒβ２の融合タンパク質、リンカーセグメントＬ２、Ｐ３５サブユニット、リンカーセグメントＬ１、および、ＩＬ１２のヒトＦｃ−ホールであり、ならびにＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４４で記載されるアミノ酸配列を有する、第２の単量体と、
のヘテロ二量体である、請求項２７に記載のホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質。
【請求項３８】
Ｒβ１、リンカーセグメントＬ２、Ｐ４０サブユニット、リンカーセグメントＬ１、ヒトＦｃ−ノブの融合タンパク質であり、および、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４５で記載されるアミノ酸配列を有する、第１の単量体と、
シグナルペプチドＳＰ１を含むＰ３５サブユニット、リンカーセグメントＬ１、ヒトＦｃ−ホールを含み、およびＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４７で記載されるアミノ酸配列を有する、融合タンパク質、である第２の単量体と、
のヘテロ二量体である、請求項２７に記載のホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質。
【請求項３９】
Ｒβ１、リンカーセグメントＬ２、Ｐ４０サブユニット、リンカーセグメントＬ１、ヒトＦｃ−ノブの融合タンパク質であり、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４６で記載されるアミノ酸配列を有する、第１の単量体と、
シグナルペプチドＳＰ１を含むＰ３５サブユニット、リンカーセグメントＬ１、ヒトＦｃ−ホールを含み、およびＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４８で記載されるアミノ酸配列を有する、融合タンパク質である、第２の単量体と、
のヘテロ二量体である、請求項２７に記載のホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質。
【請求項４０】
第１の単量体：Ｐ４０サブユニット、リンカーセグメントＬ１、およびヒトＦｃ−ノブを含み、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４９で記載されるアミノ酸配列を有する、融合タンパク質と、
第２の単量体：Ｒβ２、リンカーセグメントＬ２、Ｐ３５サブユニット、リンカーセグメントＬ１、および、ヒトＦｃ−ホールを含み、ならびにＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．５１で記載されるアミノ酸配列を有する、融合タンパク質と、
のヘテロ二量体である、請求項２７に記載のホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質。
【請求項４１】
第１の単量体：Ｐ４０サブユニット、リンカーセグメントＬ１、およびヒトＦｃ−ノブを含み、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．５０で記載されるアミノ酸配列を有する、融合タンパク質と、
第２の単量体：Ｒβ２、リンカーセグメントＬ２、Ｐ３５サブユニット、リンカーセグメントＬ１、および、ヒトＦｃ−ホールを含み、ならびにＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．５２で記載されるアミノ酸配列を有する、融合タンパク質と、
のヘテロ二量体である、請求項２７に記載のホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質。
【請求項４２】
腫瘍微小環境で特異的に発現されたタンパク分解酵素によって加水分解される、請求項２７−４１のいずれか１つに記載のホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質。
【請求項４３】
請求項１−４２のいずれかの実質的に精製されたタンパク質。
【請求項４４】
請求項１−４３のいずれか１つのタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
【請求項４５】
請求項４４のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項４６】
請求項１−４３のいずれか１つのタンパク質、および、薬学的に許容可能な賦形剤、担体、または希釈剤を含む、医薬組成物。
【請求項４７】
疾患または状態を処置するための方法であって、
治療上有効な量の請求項１−４３のいずれか１つのタンパク質、または請求項４６の医薬組成物を、それを必要としている患者に投与する工程を含み、
ここで、疾患または状態は、過形成、固形腫瘍、または造血器悪性腫瘍から選択される、
方法。
【請求項４８】
化学療法、放射線療法、標的療法、または免疫療法の１つ以上を前記被験体に施す工程を含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
化学療法剤を投与する工程を含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
放射線療法を施す工程を含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５１】
疾患または障害を処置または軽減するための請求項１−４３のいずれか１つのタンパク質の使用。
【請求項５２】
疾患または障害を処置または軽減するための薬剤の調製における、請求項１−４３のいずれか１つのタンパク質、および薬学的に許容可能な賦形剤、担体、または希釈剤の使用。
【請求項５３】
疾患または障害は、頭頚部癌、子宮内膜癌、大腸癌、卵巣癌、乳癌、黒色腫、肺癌、腎臓癌、肝臓癌、肛門癌、肉腫、リンパ腫、白血病、脳腫瘍、胃癌、精巣癌、膵臓癌、甲状腺癌から選択される、請求項５１または５２に記載の使用。
【請求項５４】
薬剤の調製のための請求項１〜４３のいずれか１つのタンパク質の使用。
【請求項５５】
薬剤が抗腫瘍薬である、請求項５４に記載の使用。
【請求項５６】
抗腫瘍薬はＢ細胞リンパ腫を処置するために、または抗大腸癌に有効である、請求項５５に記載の使用。
【請求項５７】
請求項１−４３のいずれか１つのタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む細胞株。
【請求項５８】
請求項５７の細胞株を培養する工程を含む、タンパク質を製造するための方法。
【請求項５９】
生成されたタンパク質を精製または単離する工程を含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
タンパク質を製造するための方法であって、
請求項１−４３のいずれか１つのタンパク質をコードする発現ベクターを提供する工程；
宿主細胞へ発現ベクターを導入する工程；
タンパク質を発現するのに十分な条件下において培地中で宿主細胞を培養する工程；および、
宿主細胞または培地からタンパク質を精製する工程、を含む、方法。
【請求項６１】
宿主細胞は２９３Ｆである、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
宿主細胞はＣＨＯである、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
発現ベクターの導入は一過性トランスフェクションまたは安定した細胞株によるものである、請求項６０−６２のいずれかに記載の方法。
【請求項６４】
タンパク質の精製は、プロテインＡ／Ｇのアフィニティークロマトグラフィー、またはサイズ除去法によるものである、請求項６０−６３のいずれか１つに記載の方法。
【請求項６５】
請求項６０−６４のいずれか１つの方法によって生成される、単離されたタンパク質。
【請求項６６】
実質的に純粋である、請求項６５に記載の単離されたタンパク質。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
優先権主張および関連出願
本出願は、２０１８年４月２５日に出願された中国出願第２０１８１０３７６９２０．１号に対する利益を主張し、その全内容は、すべての目的のために参照により本明細書に引用される。
【０００２】
技術分野
本発明は一般に、新規な融合タンパク質と治療的使用に関する。具体的には、本発明は、さまざまな疾患や障害（例えば、過形成、固形腫瘍、または造血器悪性腫瘍）を処置する際に有用な、インターロイキン１２とプロドラッグの新規な融合タンパク質および組成物、ならびにその調製方法を提供する。
【背景技術】
【０００３】
細胞障害性リンパ球成熟因子（ＣＬＭＦ）としても知られているインターロイキン１２（ＩＬ１２）は、末梢血リンパ球に対する複数の生物学的活性を備えたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞刺激因子として１９８９年に初めて同定された。Ｌ１２は、食細胞、Ｂ細胞、および活性化樹状細胞を含む免疫系のさまざまな細胞による感染に応答して産生される（Ｃｏｌｏｍｂｏ  ｅｔ  ａｌ．２００２  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ＆  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １３：  １５５−１６８）。ＩＬ１２は、免疫系の先天的な武器と適応的な武器（ｉｎｎａｔｅ  ａｎｄ  ａｄａｐｔｉｖｅ  ａｒｍｓ）との相互作用を媒介する上で重要な役割を果たし、Ｔ細胞とナチュラルキラー（ＮＫ）細胞に作用し、細胞傷害性リンパ球の増殖と活性を増強し、他の炎症性サイトカイン、特にインターフェロン−γの産生を促進する。
【０００４】
ＩＬ１２は、生物学的に活性な７４ｋＤａのヘテロ二量体を形成するために、ジスルフィド架橋によって共有結合されたα鎖（ｐ３５サブユニット）とβ鎖（ｐ４０サブユニット）から構成されるヘテロ二量体分子である。ヒトおよびマウスにおいて、ＩＬ１２は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性の強力なアクチベーターであり（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，ｅｔ  ａｌ．１９８９  Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７０：８２７−８４５）、および重要な免疫細胞活性化能力を有するサイトカインである、ＮＫおよびＴリンパ球からのＩＦＮ−γの主要な誘導剤である（Ｃｈａｎ，ｅｔ  ａｌ．１９９１  Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：８６９−８７９）ことが示されている。ＩＦＮ−γは、ＩＬ１２に起因する血管新生作用の必須のメディエーターである（Ｖｏｅｓｔ，ｅｔ  ａｌ．１９９５  Ｊ．Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．８７：５８１−５８６；  Ｍａｊｅｗｓｋｉ，ｅｔ  ａｌ．１９９６  Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１０６：１１１４−１１１８）。
【０００５】
複数の研究は、ＩＬ１２が、抗腫瘍抗体によって腫瘍標的に特異的に向けられた免疫細胞によって媒介される腫瘍細胞の殺傷を増強することを示した（Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．１９９１  Ｊ．Ｓｕｒｇ．Ｒｅｓ．５０：４１０−４１５）。ＩＬ１２は、インビボでの一酸化窒素産生を刺激し、これがマウスにおける腫瘍の進行を遅らせる（Ｗｉｇｇｉｎｔｏｎ，ｅｔ  ａｌ．１９９６  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５６：１１３１−１１３６）。内因性のＩＬ１２産生も、腫瘍負荷が増加するにつれて徐々に減少することが報告されており（Ｈａｎｄｅｌ−Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ，ｅｔ  ａｌ．１９９７  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８：２８０−２８６）、細胞媒介性抗腫瘍応答を再構成するためにＩＬ１２を癌患者に提供することの合理的根拠を形成している。
【０００６】
ＩＬ１２は、腫瘍により引き起こされる血管新生の強力な阻害剤であることが報告されており（Ｖｏｅｓｔ，ｅｔ  ａｌ．１９９５  ｓｕｐｒａ；  Ｍａｊｅｗｓｋｉ，ｅｔ  ａｌ．１９９６  ｓｕｐｒａ）、増殖している腫瘍の脈管構造に対する強力な血管新生抑制作用を有するケモカインである、ＩＦＮγ誘導性タンパク質−１０（ＩＰ−１０；  Ｓｇａｄａｒｉ，ｅｔ  ａｌ．１９９６  Ｂｌｏｏｄ  ８７：３８７７−３８８２）を介して媒介されるマウスの腫瘍血管形成のインビボでの有意な阻害を実証している（Ａｎｇｉｏｌｉｌｌｏ，ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉ．７９５：１５８−１６７；  Ａｒｅｎｂｅｒｇ，ｅｔ  ａｌ．１９９６  Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８４：９８１−９９２）。インビトロでは、それは内皮細胞による管状構造の形成を阻害する（Ａｎｇｉｏｌｉｌｌｏ，ｅｔ  ａｌ．１９９５  Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８２：１５５−１６２）。インビボでは、ＩＬ１２によるＩＰ−１０の誘導は、内膜の肥厚、内皮細胞アポトーシス、および血栓症による血管内腔の部分的から完全な閉塞を示す周囲の血管を伴う中心的な腫瘍壊死をもたらす（Ａｎｇｉｏｌｉｌｌｏ，ｅｔ  ａｌ．１９９６  ｓｕｐｒａ；  Ｄｉａｓ，ｅｔ  ａｌ．１９９８  Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ７５：１５１−１５７）。ＩＬ１２は、ＶＥＧＦとマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）産生の調節因子としての役割を通じて、血管新生作用を発揮することも示されている（Ｄｉａｓ，ｅｔ  ａｌ．１９９８  Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ７８：３６１−３６５）。
【０００７】
ＩＬ１２は前臨床モデルでは強力な抗腫瘍効果を示しているが、しかしながら、臨床試験では、組換え体ＩＬ１２の全身投与により、発熱、胃腸管反応、リンパ球減少、肝機能異常などの重篤な副作用が引き起こされ、その重篤な毒性により患者の死はＩＬ１２の投与に起因している（Ｌａｓｅｋ，ｅｔ  ａｌ．２０１４  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．６３（５）：  ４１９−４３５）。
【０００８】
過形成、固形腫瘍、または造血器悪性腫瘍に現在利用可能な処置および方法は不適切である。このような疾患や状態を効果的に処置する新規かつ改良された治療法に対する緊急かつ継続的なニーズが依然として存在している。
【発明の概要】
【０００９】
本発明は、新規な融合タンパク質およびその治療的用途の驚くべき発見に部分的に基づいている。ＩＬ１２の新規な融合タンパク質およびそのプロドラッグ、組成物、およびその調製方法が本明細書で開示されるおり、これらは、副作用および標的外毒性を減少させて、さまざまな疾患および障害、例えば、過形成、固形腫瘍、または造血器悪性腫瘍を処置するのに有用である。
【００１０】
１つの態様では、本発明は一般に、融合タンパク質に関する。融合タンパク質は：第１の構造単位：Ｐ３５とＰ４０のサブユニットから選択されたＩＬ１２の１つあるいは２つのサブユニットであって、ここで、第１の構造単位が融合タンパク質のＮ末端に位置する、サブユニット；第２の構造単位：抗体Ｆｃフラグメントであって、第２の構造単位が融合タンパク質のＣ末端に位置する、抗体Ｆｃフラグメント；および、第１の構造単位および第２の構造単位と共有結合するか、あるいは、第１の構造単位の２つのサブユニットと共有結合する第１のリンカーセグメント、を含む。
【００１１】
他の態様では、本発明は一般に、本明細書で開示される融合タンパク質を含む、ホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質に関する。
【００１２】
さらに別の態様では、本発明は一般に、本明細書で開示される融合タンパク質またはフラグメントなどの実質的に精製されたタンパク質に関する。
【００１３】
さらに別の態様では、本発明は一般に、本明細書で開示される融合タンパク質またはそのフラグメントなどのタンパク質をコードするポリヌクレオチドに関する。
【００１４】
さらに別の態様では、本発明は一般に、本明細書で開示される融合タンパク質またはそのフラグメントなどのタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターに関する。
【００１５】
さらに別の態様では、本発明は一般に、本明細書で開示される融合タンパク質またはそのフラグメントなどのタンパク質、および薬学的に許容可能な賦形剤、担体、または希釈剤を含む医薬組成物に関する。
【００１６】
さらに別の態様では、本発明は一般に、本明細書で開示される融合タンパク質またはそのフラグメントなどのタンパク質をコードするポリヌクレオチド、および薬学的に許容可能な賦形剤、担体、または希釈剤を含む医薬組成物に関する。
【００１７】
さらに別の態様では、本発明は一般に、疾患または状態を処置する方法に関する。上記方法は、本明細書で開示される融合タンパク質またはそのフラグメントなどのタンパク質をコードする治療上有効な量のポリヌクレオチドを、それを必要としている患者に投与する工程を含み、ここで、疾患または状態は、過形成、固形腫瘍、または造血器悪性腫瘍から選択される。
【００１８】
さらに別の態様では、本発明は一般に、疾患または障害（例えば、過形成、固形腫瘍、または造血器悪性腫瘍）を処置するか、または減少させるための、本明細書で開示される融合タンパク質またはそのフラグメントなどのタンパク質の使用に関する。
【００１９】
さらに別の態様では、本発明は一般に、疾患または障害（例えば、過形成、固形腫瘍、または造血器悪性腫瘍）を処置するか、または減少させるための、本明細書で開示される融合タンパク質またはそのフラグメントなどのタンパク質をコードするポリヌクレオチドの使用に関する。
【００２０】
さらに別の態様では、本発明は一般に、疾患または障害（例えば、過形成、固形腫瘍、または造血器悪性腫瘍）を処置するか、または減少させるための薬剤の製造における、本明細書で開示される融合タンパク質またはそのフラグメントなどのタンパク質、および、薬学的に許容可能な賦形剤、担体、または希釈剤の使用に関する。
【００２１】
さらに別の態様では、本発明は一般に、疾患または障害（例えば、過形成、固形腫瘍、または造血器悪性腫瘍）を処置するか、または減少させるための薬剤の製造における、本明細書で開示される融合タンパク質またはそのフラグメントなどのタンパク質をコードするポリヌクレオチド、および、薬学的に許容可能な賦形剤、担体、または希釈剤の使用に関する。
【００２２】
さらに別の態様では、本発明は一般に、本明細書で開示される融合タンパク質またはそのフラグメントなどのタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む細胞株に関する。
【００２３】
さらに別の態様では、本発明は一般に、細胞株を培養する工程を含む、タンパク質を作る方法に関する。特定の実施形態では、上記方法はさらに、本明細書で開示される融合タンパク質またはそのフラグメントなどの生成されたタンパク質を精製または単離する工程を含む。
【００２４】
さらに別の態様では、本発明は一般に、タンパク質を作る方法に関する。上記方法は、本明細書で開示される融合タンパク質またはそのフラグメントなどのタンパク質をコードする発現ベクターを提供する工程；宿主細胞へ発現ベクターを導入する工程；タンパク質を発現するのに十分な条件下において培地中で宿主細胞を培養する工程；および、宿主細胞または培地からタンパク質を精製する工程、を含む。
【００２５】
さらに別の態様では、本発明は一般に、本明細書で開示される方法によって生成された単離されたタンパク質に関する。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】ＩＬ１２−Ｆｃ二量体プロドラッグ：直列形態のホモ二量体ＩＬ１２−Ｆｃ（Ｈｏｍｏ  ＩＬ１２）の構造の概略図を示す。
【図２】ＩＬ１２−Ｆｃ二量体プロドラッグ：並列形態のヘテロ二量体ＩＬ１２−Ｆｃ（Ｈｅｔ  ＩＬ１２）の構造の概略図を示し、Ｆｃ−ｋはＦｃ−ノブ（Ｆｃ−ｋｎｏｂ）の短縮形であり、Ｆｃ−ｈはＦｃ−ホール（Ｆｃ−ｈｏｌｅ）の短縮形である。
【図３】ホモ二量体ＩＬ１２−Ｒβ１二量体プロドラッグ（Ｈｏｍｏ−Ｒ１）の構造の概略図を示す。
【図４】ホモ二量体ＩＬ１２−Ｒβ２二量体プロドラッグ（Ｈｏｍｏ−Ｒ２）の構造の概略図を示す。
【図５】ヘテロ二量体ＩＬ１２−Ｒβ１／Ｒβ２二量体プロドラッグ（Ｈｅｔｏ−Ｒ１／Ｒ２）の構造の概略図を示し、Ｆｃ−ｋはＦｃ−ノブ（Ｆｃ−ｋｎｏｂ）の短縮形であり、Ｆｃ−ｈはＦｃ−ホール（Ｆｃ−ｈｏｌｅ）の短縮形である。
【図６】ヘテロ二量体ＩＬ１２−Ｒβ１二量体プロドラッグ（Ｈｅｔｅｒｏ−Ｒ１）の構造の概略図を示し、Ｆｃ−ｋはＦｃ−ノブ（Ｆｃ−ｋｎｏｂ）の短縮形であり、Ｆｃ−ｈはＦｃ−ホール（Ｆｃ−ｈｏｌｅ）の短縮形である。
【図７】ヘテロ二量体ＩＬ１２−Ｒβ２二量体プロドラッグ（Ｈｅｔｅｒｏ−Ｒ２）の構造の概略図を示し、Ｆｃ−ｋはＦｃ−ノブ（Ｆｃ−ｋｎｏｂ）の短縮形であり、Ｆｃ−ｈはＦｃ−ホール（Ｆｃ−ｈｏｌｅ）の短縮形である。
【図８Ａ】図１−７の７つの融合タンパク質の発現のＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動結果の例示的なデータを示す。
【図８Ｂ】図１−７の７つの融合タンパク質の発現のＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動結果の例示的なデータを示す。
【図９】ＩＬ１２受容体に結合されていないＩＬ１２−Ｆｃの注入がＭＣ３８腫瘍を完全に除去し、Ｈｅｔ  ＩＬ１２がＨｏｍｏ  ＩＬ１２よりも強い排除効果を有するという例示的なデータを示している。
【図１０】Ｈｅｔ  ＩＬ１２がＨｏｍｏ  ＩＬ１２よりも高い細胞毒性を持っているという例示的なデータを示す。
【図１１】Ｈｅｔ  Ｒ１、Ｈｅｔ  Ｒ２、およびＨｅｔ−Ｒ１／Ｒ２がすべて、ＭＣ３８腫瘍を有効に除去するという例示的なデータを示す。
【図１２Ａ】ＩＬ１２受容体に結合されたＨｅｔ  ＩＬ１２プロドラッグが、全身投与時に副作用が少ないという例示的なデータを示す。
【図１２Ｂ】ＩＬ１２受容体に結合されたＨｅｔ  ＩＬ１２プロドラッグが、全身投与時に副作用が少ないという例示的なデータを示す。
【図１２Ｃ】ＩＬ１２受容体に結合されたＨｅｔ  ＩＬ１２プロドラッグが、全身投与時に副作用が少ないという例示的なデータを示す。
【図１２Ｄ】ＩＬ１２受容体に結合されたＨｅｔ  ＩＬ１２プロドラッグが、全身投与時に副作用が少ないという例示的なデータを示す。
【図１２Ｅ】ＩＬ１２受容体に結合されたＨｅｔ  ＩＬ１２プロドラッグが、全身投与時に副作用が少ないという例示的なデータを示す。
【図１２Ｆ】ＩＬ１２受容体に結合されたＨｅｔ  ＩＬ１２プロドラッグが、全身投与時に副作用が少ないという例示的なデータを示す。
【図１２Ｇ】ＩＬ１２受容体に結合されたＨｅｔ  ＩＬ１２プロドラッグが、全身投与時に副作用が少ないという例示的なデータを示す。
【図１３】ＭＭＰ１４による消化を伴う場合と伴わない場合のヒトＨｅｔ−Ｒ１とＨｅｔ−Ｒ１／Ｒ２の発現のＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動結果の例示的なデータを示す。
【図１４】（Ａ）ＭＭＰ１４消化後のヒトＨｅｔ−Ｒ１が、インビトロでＨｅｔ  ＩＬ１２と組換えＩＬ１２と同様の活性を呈し、（Ｂ）  ｚＭＭＰ１４消化後のヒトＨｅｔ−Ｒ１／Ｒ２が、ＨＥＫ  Ｂｌｕｅ−ＩＬ１２レポーター細胞株を用いてＨｅｔ  ＩＬ１２と組換えＩＬ１２と同様の活性を呈するという例示的なデータを示す。
【００２７】
定義
別段の定めのない限り、本明細書で使用されるすべての技術的および科学的な用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。以下の用語は、別段の定めのない限り、用語がある文脈に従って、以下の意味を持つように意図されている。
【００２８】
商品名が本明細書で使用される場合、商品名は、別段の定めのない限り、商品名製品の製剤、ジェネリック医薬品、および商品名製品の有効な医薬成分を含む。
【００２９】
本明細書で提供される範囲は、範囲内の値について簡潔にした表現であると理解される。例えば、１〜５０の範囲は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０からなる群からの任意の数、数の組み合わせ、または部分的な範囲を含むと理解される。
【００３０】
本明細書で使用されるように、「少なくとも」特定の値とは、その値、および、その値よりも大きいなすべての値であると理解される。
【００３１】
本明細書で使用されるように、「２以上」とは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、４０、５０、１００など、またはその間の任意の値として理解される。
【００３２】
明細書と添付の請求項において、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が他に明確に指示していない限り、複数の参照を含む。
【００３３】
本明細書で使用されるように、具体的に記載されていない限り、または、文脈から明らかでない限り、「約」という用語は、当該技術分野における通常の許容範囲内、例えば、平均値の２標準偏差内であると理解される。「約」とは、記載された値の１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％、または０．０１％の範囲内であると理解され得る。文脈から明らかでない限り、本明細書で提供されるすべての数値は、「約」という用語によって修正され得る。
【００３４】
本明細書で使用されるように、具体的に記載されていない限り、または、文脈から明らかでない限り、「または」という用語は、包括的に理解される。
【００３５】
組成物および方法を定義するために使用される場合、「含むこと」という用語は、組成物および方法が記載された要素を含むが、他の要素を除外しないことを意味するものとする。組成物および方法を定義するために使用される場合、「本質的に〜からなる」という用語は、組成物および方法が記載された要素を含み、組成物および方法にとって本質的に重要な他の要素を除外することを意味するものとする。例えば、「本質的に〜からなる」という用語は、明示的に記載された薬理学的に活性な薬剤の投与を指し、明示的に記載されていない薬理学的に活性な薬剤を除外する。「本質的に〜からなる」という用語は、薬学的に不活性または非活性な薬剤、例えば、薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤を除外するものではない。「からなる」という用語は、組成物および方法を定義するために使用される場合、他の成分の微量要素および実質的な方法工程を除外することを意味するものとする。こうした移り変わる用語（ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ  ｔｅｒｍ）の各々により定められる実施形態は、本発明の範囲内である。
【００３６】
本明細書で使用されるように、「アゴニスト」という用語は、受容体と組み合わせて、細胞応答を生じさせることができる化合物を指す。アゴニストは、受容体に直接結合するリガンドであってもよい。代替的に、アゴニストは、例えば、（ａ）受容体に直接結合する他の分子と複合体を形成すること、または（ｂ）別の方法で、他の化合物が受容体に直接結合するように別の化合物の修飾をもたらすことによって、間接的に受容体と結合してもよい。
【００３７】
本明細書で使用されるように、「アンタゴニスト」という用語は、受容体への結合のためにアゴニストまたは逆アゴニストと競合し、それによって受容体に対するアゴニストまたは逆アゴニストの作用を遮断する化合物を指す。しかしながら、アンタゴニストは構成的な受容体の活性には影響を与えない。
【００３８】
本明細書で使用されるように、「抗体」という用語は、エピトープまたは抗原決定基と結合することができる分子を指す。この用語は、全抗体およびその抗原結合フラグメントを含むように意図している。この用語は、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、Ｆａｂ、Ｆｖｓ、単鎖抗体および単数または複数の免疫グロブリン可変鎖、あるいは、ＣＤＲドメイン設計、さらに、二重特異性および多特異性の抗体を包含する。抗体は任意の動物由来のものであり得る。好ましくは、抗体は哺乳動物、例えば、ヒト、ネズミ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマなど、または他の適切な動物である。抗体はポリペプチドまたはポリヌクレオチドの抗原を認識することがある。この用語は、例えば、免疫グロブリンの抗原結合性フラグメント、重鎖の可変および／または定常領域、軽鎖の可変および／または定常領域、相補性決定領域（ｃｄｒ）、ならびにフレームワーク領域を含む活性フラグメントを含んでいる。この用語は、ポリクローナルとモノクローナル抗体の調製物、さらに、ハイブリッド抗体、修飾された抗体、キメラ抗体、ハイブリッド抗体分子、Ｆ（ａｂ）２とＦ（ａｂ）フラグメントを含む調製物；Ｆｖ分子（例えば、非共有結合ヘテロ二量体）、二量体および三量体抗体フラグメント構築物；ミニボディ、ヒト化抗体分子、ならびにそのような分子から得られた機能的フラグメントを含み、ここで、こうしたフラグメントは特異的な結合を保持する。
【００３９】
本明細書で使用されるように、「抗原」という用語は、免疫系がそれに対する抗体または特異的な細胞媒介性の免疫応答を生成する原因となる任意の物質を意味する。疾患関連抗原とは、免疫系に抗体またはそれに対する特異的な細胞媒介性の免疫応答を生成させる任意の疾患に関連する任意の物質を意味する。抗原は、免疫系によって認識され、および／またはＢリンパ球ならびに／あるいはＴリンパ球の活性化につながる体液性免疫応答および／または細胞性免疫応答を誘導することができる。抗原は、１つ以上のエピトープ（Ｂ−および／またはＴ細胞エピトープ）を有することができる。抗原は、好ましくは、典型的には高度に選択的な方法で、その対応する抗体またはＴＣＲと反応し、他の抗原によって誘発され得る多数の他の抗体またはＴＣＲとは反応しない。本明細書で使用される抗原はさらに、複数の個々の抗原の混合物であってもよい。
【００４０】
本明細書で使用されるように、「生物学的に活性な」実体、または「生物学的活性」を有する実体という用語は、自然発生する分子の構造的、調節的、または生化学的な機能を有するもの、または代謝もしくは生理学的プロセスに関連するか、または関連付けられるあらゆる機能を有するものを意味する。生物学的に活性なポリペプチドまたはそのフラグメントは、生物学的プロセスまたは反応に関与することができ、および／または所望の効果をもたらすことができるものを含む。生物学的活性は、改善された所望の活性、または減少した望ましくない活性を含み得る。例えば、実体は、それが他の分子との分子相互作用に関与する場合、疾患状態を緩和する際に治療的価値を有する場合、免疫応答を誘導する際に予防的価値を有する場合、または分子の存在を決定する際に診断的価値および／または予後的価値を有する場合に、生物学的活性を発揮する。生物学的に活性なタンパク質またはポリペプチドは、自然発生するものであってもよく、または、例えば、組換えまたは化学合成によって既知の成分から合成されたものであってもよく、異種成分を含むものであってもよい。
【００４１】
本明細書で使用されるように、「癌（ｃａｎｃｅｒ）」および「癌性の（ｃａｎｃｅｒｏｕｓ）」という用語は、典型的に未制御の細胞増殖を特徴とする哺乳動物の生理的状態を指すか、記載する。癌の例は、限定されないが、癌腫、リンパ腫、肉腫、芽細胞腫、および白血病を含む。そのような癌の具体的な例としては、扁平上皮癌、肺癌、膵臓癌、子宮頚癌、膀胱癌、肝臓癌、乳癌、結腸癌、および頭頚部癌が挙げられる。
【００４２】
本明細書で使用されるように、「細胞」という用語は、任意の原核生物、真核生物、初代細胞または不死化細胞株、組織または器官のようなこうした細胞の任意の群を指す。好ましくは、細胞は哺乳動物（例えば、ヒト）由来であり、１つ以上の病原体に感染し得る。
【００４３】
本明細書で使用されるように、「共投与」という用語は、同時に血中に２つの薬理学的薬剤が存在することを意味する。２つの薬理学的薬剤は、同時にまたは順次投与することができる。
【００４４】
本明細書で使用されるように、「共発現」という用語は、２つの異なるポリペプチドが宿主細胞中または宿主細胞培養液中のいずれかで相互作用または結合し、複合体を形成することができるように、２つのポリペプチドが宿主細胞中で同時に発現されることを意味するように意図される。
【００４５】
本明細書で使用されるように、「疾患」または「障害」という用語は、病理学的状態、例えば、症状または他の識別因子によって健康な状態または正常な状態から逸脱していると識別され得るものを指す。「疾患」という用語には、障害、症候群、状態、および傷害が挙げられる。疾患には、限定されないが、増殖性疾患、炎症性疾患、免疫性疾患、代謝性疾患、感染性疾患、および虚血性疾患が挙げられる。
【００４６】
本明細書で使用されるように、活性薬剤の「有効量」という用語は、所望の生物学的応答を引き出すのに十分な量を指す。当業者によって理解されるように、本発明の化合物の有効量は、所望の生物学的エンドポイント、化合物の薬物動態、処置されている疾患、投与形態、および患者などのこうした要因に依存して変化することがある。
【００４７】
本明細書で使用されるように、「核酸分子の発現」という用語は、核酸分子に含まれる情報を遺伝子産物に変換することを指す。遺伝子産物は、遺伝子の直接転写産物（例えば、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、構造ＲＮＡ、または任意の他のタイプのＲＮＡ）、あるいは、ｍＲＮＡの翻訳によって産生されるペプチドまたはポリペプチドであり得る。遺伝子産物はさらに、キャッピング、ポリアデニル化、メチル化、および編集などのプロセスによって修飾されたＲＮＡ；ならびに、例えば、メチル化、アセチル化、リン酸化、ユビキチン化、ＡＤＰリボシル化、ミリスチル化、およびグリコシル化によって修飾されたタンパク質を含む。
【００４８】
本明細書で使用されるように、「宿主細胞」という用語は、任意の組換えベクターまたは単離されたポリヌクレオチドのレシピエントであり得るか、またはレシピエントであったことがある個々の細胞または細胞培養物を指す。宿主細胞は、原核細胞、真核細胞、哺乳動物細胞、鳥類細胞、昆虫細胞、植物細胞、または細菌細胞を含む、任意の起源のトランスフェクト細胞、形質転換細胞、形質導入細胞、または感染細胞であり得、あるいは、本明細書に記載される核酸を伝播させるために使用され得る任意の起源の細胞であり得る。宿主細胞は、単一の宿主細胞の子孫を含み、その子孫は、自然の、偶発的、または意図的な突然変異および／または変化によって、（形態学的または総ＤＮＡ相補体において）必ずしも元の親細胞と完全に同一であるとは限らない。宿主細胞は、本発明の組換えベクターまたはポリヌクレオチドをインビトロまたはインビトロでトランスフェクトまたは感染させた細胞を含む。本発明の組換えベクターを含む宿主細胞は、「組換え宿主細胞」と呼ばれることもある。
【００４９】
宿主細胞としては、限定されないが、哺乳動物、植物、昆虫、真菌、および細菌が挙げられる。細菌細胞としては、好ましくは、限定されないが、バチルス属（ｇｅｎｕｓ  Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、ストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、およびスタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）などのグラム陽性菌の細胞、ならびに、エシェリヒア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）およびシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）の細胞などのグラム陰性菌の細胞が挙げられる。真菌細胞としては、好ましくは、サッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）、ハンセヌラポリモーファ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）などの酵母細胞が挙げられる。昆虫細胞としては、限定されないが、ショウジョウバエの細胞、およびＳｆ９細胞が挙げられる。植物細胞としては、とりわけ、穀類、薬用植物または観賞用植物、あるいは球根などの作物植物からの細胞が挙げられる。本発明に好適な哺乳動物細胞としては、上皮細胞株（ブタなど）、骨肉腫細胞株（ヒトなど）、神経芽腫細胞株（ヒトなど）、上皮癌細胞株（ヒトなど）、グリア細胞株（マウスなど）、肝臓細胞株（サルなど）、ＣＨＯ細胞（チャイニーズハムスター卵巣）、ＣＯＳ細胞、ＢＨＫ細胞、細胞ＨｅＬａ、９１１、ＡＴ１０８０、Ａ５４９、２９３またはＰＥＲ．Ｃ６、ヒトＥＣＣｓ  ＮＴＥＲＡ−２細胞、ｍＥＳＣｓの株のＤ３細胞、ＨＳ２９３およびＢＧＶ０１、ＳＨＥＦ１、ＳＨＥＦ２およびＨＳ１８１などのヒト胚性幹細胞、細胞ＮＩＨ３Ｔ３、２９３Ｔ、ＲＥＨ、およびＭＣＦ−７ならびにｈＭＳＣｓ細胞が挙げられる。
【００５０】
本明細書で使用されるように、「Ｆｃ」という用語は、単量体または多量体の形態であるか否かにかかわらず、全抗体の非抗原結合フラグメントの配列からなる分子または配列を指す。天然Ｆｃの元の免疫グロブリン源は、好ましくはヒト由来であり、免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２）のいずれであってもよい。天然Ｆｃは、共有結合（すなわち、ジスルフィド結合）および非共有結合によって二量体または多量体の形態に連結され得る単量体ポリペプチドから構成される。天然Ｆｃ分子の単量体サブユニット間の分子間ジスルフィド結合の数は、クラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ）またはサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＡ１、ＩｇＧＡ２）に応じて、１から４までの範囲である。
【００５１】
本明細書で使用されるように、「Ｆｃドメイン」または「Ｆｃ領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖「結晶化可能なフラグメント」領域を指すことを意味する。一般に、Ｆｃドメインは、二量体複合体を形成するために第２のＦｃドメインと相互作用することができる。Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体と呼ばれる細胞表面受容体および／または補体系のタンパク質を結合することができるか、またはこれらの結合活性を低減または増強するように修飾されていてもよい。Ｆｃドメインは、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＭ、またはＩｇＥ抗体のアイソタイプに由来するものであってもよく、オクソン化、細胞溶解、肥満細胞、好塩基球、好酸球の脱顆粒、および他のＦｃ受容体依存性プロセスを含む免疫活性；補体経路の活性化；およびインビボでのタンパク質の安定性に影響を与える。
【００５２】
「Ｆｃドメイン」は、本明細書で定義されるように、天然ＦｃおよびＦｃ変異体分子および配列を包含する。Ｆｃ変異体および天然Ｆｃの場合と同様に、「Ｆｃドメイン」という用語は、抗体全体から消化されたか、または組換え遺伝子発現または他の手段によって産生されたかどうかにかかわらず、単量体または多量体の形態の分子を包含する。
【００５３】
Ｆｃ融合タンパク質は、ＩｇＧのＦｃ領域を、様々なサイトカインおよび可溶性受容体などの別のタンパク質のドメインと結合させることが報告されている。（例えば、Ｃａｐｏｎ  ｅｔ  ａｌ．１９８９  Ｎａｔｕｒｅ  ３３７：５２５−５３１；  Ｃｈａｍｏｗ  ｅｔ  ａｌ．１９９６  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：５２−６０；  Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏｓ．５，１１６，９６４  ａｎｄ  ５，５４１，０８７）。
【００５４】
Ｆｃ融合の使用は、当該技術分野で知られている（例えば、米国特許第７，７５４，８５５号；第５，４８０，９８１号；第５，８０８，０２９号；ＷＯ７／２３６１４号；ＷＯ９８／２８４２７号、および本明細書に引用された文献）。Ｆｃ融合タンパク質は、（例えば、米国特許第７，７３２，５７０号に記載されるような）変異体Ｆｃ分子を含むことができる。Ｆｃ融合タンパク質は血漿において溶解可能であるか、または特定のＦｃ受容体を有する細胞の細胞表面に結合することができる。
【００５５】
本明細書で使用されるように、「Ｆｃ変異体」という用語は、天然Ｆｃから修飾されているが、サルベージ受容体ＦｃＲｎの結合部位を含む分子または配列を指す。国際出願ＷＯ  ９７／３４６３１号（１９９７年９月２５日公開）とＷＯ  ９６／３２４７８号は、例示的なＦｃ変異体、およびサルベージ受容体との相互作用について記載しており、参照により本明細書に組み込まれる。したがって、「Ｆｃ変異体」という用語は、非ヒト天然Ｆｃからヒト化された分子または配列を含む。さらに、天然Ｆｃは、本発明の融合分子に必要とされない構造的特徴または生物学的活性を提供することから、除去され得る部位を含む。したがって、特定の実施形態では、「Ｆｃ変異体」という用語は、（１）ジスルフィド結合形成、（２）選択された宿主細胞との不適合性、（３）選択された宿主細胞での発現時のＮ末端不均一性、（４）グリコシル化、（５）補体との相互作用、（６）サルベージ受容体以外のＦｃ受容体への結合、または、（７）抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）に影響を与えるか、または関与する１つ以上の天然Ｆｃ部位または残基を欠いた分子または配列を含む。Ｆｃ変異体についてさらに以下で詳細に説明する。
【００５６】
本明細書で使用されるように、「融合タンパク質」という用語は、組換え、化学的または他の適切な方法により共有結合された（すなわち、「融合」された）異なるまたは異種のタンパク質からの２つ以上の領域を含むポリペプチドを指す。望ましい場合に、融合分子を、ペプチドまたは他のリンカーセグメントまたは配列を介して、１つ以上の部位で融合させることができる。例えば、融合タンパク質の構築を補助するために、１つ以上のペプチドリンカーを使用することができる。
【００５７】
本明細書で使用されるように、「ＧＣ含有量」という用語は、デオキシグアノシン（Ｇ）および／またはデオキシシチジン（Ｃ）デオキシリボヌクレオシド、あるいはグアノシン（Ｇ）および／またはシチジン（Ｃ）リボヌクレオシド残基から構成される核酸配列の割合を指す。
【００５８】
本明細書で使用されるように、「高用量」という用語は、任意のヒトの疾患または状態の処置のための特定の化合物の最高標準推奨用量よりも少なくとも５％（例えば、少なくとも１０％、２０％、５０％、１００％、２００％、またはさらには３００％）多いことを意味する。
【００５９】
本明細書で使用されるように、「免疫応答」という用語は、免疫細胞が刺激され、および／または、明確な接着および／または活性化工程を含む多因子プロセスを介して、血液からリンパ系組織と非リンパ系組織まで補充されるプロセスを指す。活性化条件は、サイトカイン、成長因子、ケモカイン、およびその他の因子の放出を引き起こし、免疫細胞上の接着およびその他の活性化分子の発現をアップレギュレートし、組織を介した走化性と同時に接着、形態学的変化、および／または溢出を促し、細胞増殖および細胞毒性活性を増加させ、抗原提示を刺激し、および記憶細胞型の生成を含むその他の表現型の変化を引き起こす。免疫応答は、他の免疫細胞の炎症性または細胞毒性活性を抑制または調節するための免疫細胞の活性を指すことも意味する。免疫応答は、インビボまたはインビトロでの免疫細胞の活性を指す。
【００６０】
２つ以上の核酸またはポリペプチド配列の文脈において、「同一性」またはパーセント「同一性」という用語は、以下に記載されるデフォルトのパラメーターを有するＢＬＡＳＴまたはＢＬＡＳＴ  ２．０配列比較アルゴリズムを使用して、あるいは、手動での位置合わせと目視検査によって測定されるように、同じである（すなわち、比較ウィンドウまたは指定された領域での最大対応関係について比較して位置合わせした際に、指定された領域（例えば、ＩＬ１２配列またはＩＬ１２Ｒ配列の）にわたって約７０％同一であり、好ましくは７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上同一である）アミノ酸残基またはヌクレオチドの所定の割合を有する２つ以上の配列または部分配列を指す。こうした配列は「実質的に同一である」と言われる。この定義はさらに、試験配列の補足物を指すこともあれば、試験配列の補足物に当てはめられることもある。本定義はさらに、欠失および／または付加を有する配列と、置換を有する配列を含む。以下に記載されるように、好ましいアルゴリズムはギャップなどを説明することができる。好ましくは、同一性は、少なくとも約２５、５０、７５、１００、１５０、２００アミノ酸またはヌクレオチド長さである部位に、しばしば、２２５、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００アミノ酸またはヌクレオチド長さである部位に、あるいは完全長のアミノ酸または核酸配列に存在する。
【００６１】
配列比較のために、典型的には、１つの配列は基準配列として作用し、それに対して試験配列が比較される。配列比較アルゴリズムを使用して、試験配列と基準配列をコンピューターに入力し、その後の座標が必要に応じて指定され、配列アルゴリズムプログラムのパラメーターが指定される。好ましくは、デフォルトプログラムパラメーターが使用可能であるか、または、代替的なパラメーターが指定可能である。その後、配列比較アルゴリズムは、プログラムパラメーターに基づいて、基準配列に対する試験配列のパーセント配列同一性を計算する。
【００６２】
パーセント配列同一性および配列類似性を決定するのに適したアルゴリズムの好ましい例は、ＢＬＡＳＴアルゴリズムであり、これは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２およびＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．１９９０  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０にそれぞれ記載されている。ＢＬＡＳＴソフトウェアは、ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／にあるワールドワイドウェブ上のＮａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎを通じて一般に入手可能である。デフォルトパラメータまたは他の非デフォルトパラメータの両方を使用することができる。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列用）は、デフォルトとして、ワード長（Ｗ）１１、期待値（Ｅ）１０、Ｍ＝５、Ｎ＝−４、および両方の鎖の比較を使用する。アミノ酸配列については、ＢＬＡＳＴＰプログラムはデフォルトとして、ワード長３、期待値（Ｅ）１０、ＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ＆  Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：１０９１５（１９８９）を参照）のアラインメント（Ｂ）５０、期待値（Ｅ）１０、Ｍ＝５、Ｎ＝−４、両方の鎖の比較を用いる。
【００６３】
本明細書で使用されるように、「阻害する」という用語は、生物学的活性の任意の測定可能な減少を指す。したがって、本明細書で使用されるように、「阻害する」または「阻害」は、正常な活性レベルの割合と呼ばれることがある。
【００６４】
本明細書で使用されるように、「インターロイキン１２」または「ＩＬ１２」という用語は、生物学的に活性な哺乳動物の天然ＩＬ１２アミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するポリペプチドを指し、これは、変異したタンパク質（「ムテイン」）が、少なくとも１つの機能アッセイにおいて天然ＩＬ１２タンパク質と同様の機能性（７５％以上）を有することを意味する。
【００６５】
ＩＬ１２ポリペプチドの例示的な機能アッセイは、例えば、Ｔ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞によるインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）の産生を誘導すること、およびＴヘルパー−１（Ｔｈ１）細胞の分化を促進することを含む。Ｔｈ１細胞へ分化したヘルパーＴ細胞は、ＩＦＮ−γの分泌によって同定することができる。例えば、ＩＬ−１２で刺激されたＴ細胞またはＮＫ細胞によって分泌されたＩＦＮ−γは好都合なことに、ＥＬＩＳＡを使用して、例えば、血清または細胞培養上清中で検出することができる。ＥＬＩＳＡ法と技術は当該技術分野で周知であり、ＩＦＮ−γを検出するためのキットは市販されている（例えば、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，Ｍｉｎｎ．；  Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ，Ｒｏｃｋｙ  Ｈｉｌｌ，Ｎ．Ｊ．；および、Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ  Ｉｎｔｌ．，Ｃａｍａｒｉｌｌｏ，Ｃａｌｉｆ．）。さらに、Ｃｏｌｉｇａｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９１−２００６，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ；  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，１９９８，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ；および、Ｔｈｅ  ＥＬＩＳＡ  Ｇｕｉｄｅｂｏｏｋ，Ｃｒｏｗｔｈｅｒ，ｅｄ．，２０００，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓを参照。
【００６６】
本明細書で使用されるように、「単離された」分子（ポリペプチドまたはポリヌクレオチドなど）という用語は、自然界よりも高い濃度で存在するように操作されたか、またはその本来の環境から取り除かれたものである。例えば、被験体抗体は、自然界で関連付けられる非被験体抗体材料の少なくとも１０％、または２０％、または４０％、または５０％、または７０％、または９０％が除去されたときに、単離され、精製され、実質的に単離され、または実質的に精製される。例えば、生きた動物に自然に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは「単離」されていないが、その自然の状態の共存物質から分離された同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは「単離」されている。さらに、ベクターに含まれる組換えＤＮＡ分子は、本発明の目的のために単離されたものとみなされる。単離されたＲＮＡ分子は、ＤＮＡ分子およびＲＮＡ分子のインビボまたはインビトロのＲＮＡ複製産物を含む。単離された核酸分子はさらに、合成的に生成された分子を含む。加えて、組換え宿主細胞に含まれるベクター分子も単離される。したがって、すべての「単離された」分子が「精製」される必要はない。
【００６７】
本明細書で使用されるように、「リンカー」または「連結セグメント」は、２つの他の分子または群を接続する分子または群を指す。ペプチドリンカーは、接続された分子または群が官能的な構成を獲得することを可能にし得る。リンカーペプチドは好ましくは、少なくとも２つのアミノ酸、少なくとも３つのアミノ酸、少なくとも５つのアミノ酸、少なくとも１０のアミノ酸、少なくとも１５のアミノ酸、少なくとも２０のアミノ酸、少なくとも３０のアミノ酸、少なくとも４０のアミノ酸、少なくとも５０のアミノ酸、少なくとも６０のアミノ酸、少なくとも７０のアミノ酸、少なくとも８０のアミノ酸、少なくとも９０のアミノ酸、またはおよそ１００のアミノ酸を含む。
【００６８】
サイトカインまたは他の生理活性分子および任意のペプチドリンカーなどの融合タンパク質の構成要素は、融合タンパク質が意図された機能を有することを条件として、ほぼあらゆる方法で組織化することができる。特に、融合タンパク質の各構成要素は、望ましい場合に、少なくとも１つの適切なペプチドリンカーセグメントまたは配列によって、別の構成要素から間隔をあけて配置することができる。さらに、融合タンパク質は、融合タンパク質の修飾、同定、および／または精製を容易にするために、例えば、タグを含むことができる。具体的な融合タンパク質は以下に記載される例にある。
【００６９】
本明細書で使用されるように、「低用量」という用語は、任意のヒトの疾患または状態の処置のための所定の投与経路のために製剤化された特定の化合物の最低標準推奨用量よりも少なくとも５％（例えば、少なくとも１０％、２０％、５０％、８０％、９０％、またはさらには９５％）少ないことを意味する。  例えば、吸入による投与のために製剤化された薬剤の低用量は、経口投与のために製剤化された同じ薬剤の低用量とは異なるであろう。例えば、吸入によって投与のための製剤される剤の低投与量は、経口投与のための製剤された同じ剤の低投与量と異なる。
【００７０】
本明細書で使用されるように、「培地（ｍｅｄｉｕｍ）」または「培地（ｍｅｄｉａ）」という用語は、細菌宿主細胞、酵母宿主細胞、昆虫宿主細胞、植物宿主細胞、真核生物宿主細胞、哺乳動物宿主細胞、ＣＨＯ細胞、原核生物宿主細胞、大腸菌宿主細胞、またはシュードモナス宿主細胞、および細胞含有物を含む、任意の宿主細胞を支持するか、または含むことができる任意の培地、溶液、固体、半固体、または剛体の支持体を含む。したがって、この用語は、宿主細胞が増殖した培地、例えば、増殖工程の前後のいずれかの培地を含む、ポリペプチドが分泌された培地を包含することができる。この用語はさらに、ポリペプチドが細胞内で産生され、ポリペプチドを放出するために宿主細胞が溶解または破壊される場合など、宿主細胞の溶解物を含む緩衝液または試薬を包含してもよい。
【００７１】
本明細書で使用されるように、「調節する」という用語は、適切な対照と比較した場合に、測定された活性の増加または減少、刺激、阻害、干渉、または遮断を直接的または間接的にもたらすことを指す。ポリペプチドまたはポリヌクレオチドの「モジュレーター」とは、適切な対照と比較した場合に、例えば、ポリペプチドまたはポリヌクレオチドの測定された活性に影響を与える、例えば、増加させ、減少させ、刺激し、阻害し、干渉し、または遮断する物質を指す。例えば、「モジュレーター」は、測定可能な親和性を有する標的に結合し、および／または上記標的を活性化もしくは阻害するか、あるいは受容体活性の正常な調節に直接的または間接的に影響を与えることができる。
【００７２】
「動作可能に連結された」という用語は、第１の核酸配列と第２の核酸配列が単一の核酸配列に転写されるような、第１の核酸配列と第２の核酸配列との間の機能的な連結を指す。動作可能に連結された核酸配列は、互いに物理的に隣接している必要はない。「動作に連結された」という用語はさらに、核酸発現制御配列（プロモーター、または転写因子結合部位のアレイなど）と転写可能な核酸配列との間の機能的連結を意味し、ここで、発現制御配列は、転写可能な配列に対応する核酸の転写を指示する。
【００７３】
本明細書で使用されるように、「薬学的に許容可能な」賦形剤、担体、または希釈剤という用語は、主題の医薬品を１つの臓器または身体部分から、別の臓器または身体部分へと運ぶまたは輸送することに関与する、液体または固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒、または封入物質などの、薬学的に許容可能な物質、組成物、またはビヒクルを指す。担体はそれぞれ、製剤の他の成分に適合可能であり、かつ患者に有害ではないという意味で、「許容可能」でなければならない。薬学的に許容可能な担体として機能することができる物質のいくつかの例としては、以下が挙げられる：ラクトース、グルコース、およびスクロースなどの糖類；トウモロコシデンプンとジャガイモデンプンなどのデンプン；カルボキシルメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、および酢酸セルロースなどのセルロースとその誘導体；トラガカント粉末；麦芽；ゼラチン；タルク；ココアバターと座剤用ワックスなどの賦形剤；落花生油、綿実油、ひまわり油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、およびダイズ油などの油；プロピレングリコールなどのグリコール；グリセリン、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコールなどのポリオール；オレイン酸エチルとラウリン酸エチルなどのエステル；寒天；水酸化マグネシウムと水酸化アルミニウムなどの緩衝剤；アルギン酸；発熱物質を含まない水；等張食塩水；リンゲル溶液；エチルアルコール；リン酸緩衝液；および、医薬製剤中で利用される他の非毒性の適合物質。ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、およびポリエチレンオキシド−ポリプロピレンオキシドのコポリマーなどの湿潤剤、乳化剤、および潤滑剤と、着色料、剥離剤、コーティング剤、甘味料、香味料および芳香剤、防腐剤、および抗酸化剤も組成物中に存在し得る。
【００７４】
本明細書で使用されるように、「ポリヌクレオチド」、「核酸分子」、「ヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」、および「核酸」という用語は、任意の長さのリボヌクレオチドおよびデオキシリボヌクレオチドを含むヌクレオチドの重合体形態を指すために、本明細書で互換的に使用される。それらは、二本鎖、一本鎖の両方、または三重らせん配列を含むことができ、限定されないが、ウイルス、原核生物、および真核生物源からのｃＤＮＡ：ｍＲＮＡ；ウイルス（例えば、ＤＮＡウイルスとレトロウイルス）または原核生物源からのゲノムＤＮＡ配列；ＲＮＡｉ；ｃＲＮＡ；アンチセンス分子；組換えポリヌクレオチド；リボザイム；および、合成ＤＮＡ配列を含む。この用語はさらに、ＤＮＡとＲＮＡの知られている塩基アナログのいずれかを含む配列を捉える。ヌクレオチドも、その一般に容認された１文字のコードによって呼ばれることがある。
【００７５】
ポリヌクレオチドは、自然界に現れるポリヌクレオチドに限定されるものではなく、不自然なヌクレオチドアナログやヌクレオチド間結合が現れるポリヌクレオチドも含む。核酸分子は、修飾された核酸分子（例えば、修飾された塩基、糖、および／またはヌクレオチド間リンカー）を含み得る。この種の不自然な構造の非限定的な例としては、糖がリボースとは異なるポリヌクレオチド、ホスホジエステル結合３’−５’と２’−５’が現れるポリヌクレオチド、逆結合（３’−３’と５’−５’）が現れるポリヌクレオチド、および分岐構造が挙げられる。同様に、本発明のポリヌクレオチドは、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）、メチルホスホネートのＣ１−Ｃ４アルキルホスホネート結合、ホスホルアミデート、Ｃ１−Ｃ６アルキルホスホトリエステル、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートのタイプなどの不自然なヌクレオチド間結合を含む。いずれの場合でも、本発明のポリヌクレオチドは、天然ポリヌクレオチドと同様の方法で標的核酸とハイブリダイズする能力を維持する。
【００７６】
別段の定めのない限り、または、または、文脈から明らかでない限り、特定の核酸配列は、保存的に修飾されたその変異体（例えば、縮重コドン置換）、および、相補的な配列と明示された配列も暗に含んでいる。縮重コドン置換は、１つ以上の選択された（またはすべての）コドンの第３位が、混合塩基および／またはデオキシイノシン残基と置換された配列を生成することにより達成することができる。（Ｂａｔｚｅｒ  ｅｔ  ａｌ．１９９１  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．１９：５０８１；  Ｏｈｔｓｕｋａ  ｅｔ  ａｌ．１９８５  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５−２６０８；  Ｒｏｓｓｏｌｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．１９９４  Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ  ８：９１−９８．）
【００７７】
本明細書で使用されるように、「予防する」、「予防すること」、または「予防」という用語は、疾患または状態の発症、発生率、重症度、または再発を予防、遅延、回避、または停止するための方法を指す。例えば、ある方法は、その方法を受けていない被験体と比較して、疾患または状態にかかりやすい被験体において、その疾患または状態の発症、発生率、重症度、または再発、あるいは、その１つ以上の症状の減少または遅延がある場合に、予防であると考えられる。開示された方法は、処置を受ける前の被験者の進行と比較して、上記方法を受けた後の疾患または状態に罹患しやすい被験者における疾患または状態の１つ以上の症状の発症、発生率、重症度、または再発の減少または遅延がある場合には、予防であると考えられる。骨粗鬆症の発症、発生率、重症度、または再発の減少または遅延は、約５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００％、またはその間の任意の量の減少であり得る。
【００７８】
予防などは、被験体が特定の疾患や障害に罹患しないようにすることを意味するものではない。予防は複数回の投与が必要な場合がある。予防は、すべての疾患症状が除去された被験体における疾患の再発の予防、または再発性疾患における再発の予防を含むことができる。
【００７９】
本明細書で使用されるように、「プロモーター」という用語は、哺乳動作細胞においてＲＮＡポリメラーゼと結合し、動作可能に連結された下流（３’方向）のコード配列の転写を開始することができるＤＮＡ調節領域を指す。プロモーター配列は、従来よりも検出可能なレベルで関心のある遺伝子の転写を開始するために必要な最小数の塩基または要素を含む。プロモーター配列内には、転写開始部位、およびＲＮＡポリメラーゼの結合に関与するタンパク質結合ドメイン（コンセンサス配列）が含まれ得る。真核生物のプロモーターはしばしば、いつもではないが、「ＴＡＴＡ」ボックスおよび「ＣＡＴ」ボックスを含む。プロモーターは、核酸分子に自然に連続するものと、核酸分子に自然に連続しないものとを含む。加えて、「プロモーター」という用語は、誘導性プロモーター、ｃｒｅ−ｌｏｘプロモーターなどの条件付きで活性なプロモーター、構成的なプロモーター、および組織特異的なプロモーターを含む。
【００８０】
本明細書で使用されるように、「タンパク質」および「ポリペプチド」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すために交換可能に使用され、最小限の長さに限定されない。したがって、ペプチド、オリゴペプチド、二量体、多量体などは、定義に含まれている。完全長のタンパク質およびそのフラグメントの両方が、定義に包含される。この用語は、ポリペプチドの発現後修飾、例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化などを含む。さらに、ポリペプチドとは、タンパク質が所望の活性を維持する限り、固有の配列に対する（自然界で一般に保存的な）欠失、追加、および置換などの修飾を含むタンパク質を指すこともある。こうした修飾は意図的なこともあれば、偶発的なこともある。アミノ酸は、一般に知られている３文字記号、またはＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ生化学命名法委員会（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ）に推奨される１文字記号のいずれかによって、本明細書で引用され得る。
【００８１】
本明細書で使用されるように、「精製された」という用語は、自然発生環境、すなわち天然細胞、または組換え産生されたタンパク質の場合には宿主細胞で見られるような、タンパク質に通常付随するか相互作用する成分を実質的にまたは本質的に含まないことがあるタンパク質を指す。細胞物質を実質的に含まないこともあるタンパク質は、約３０％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、または約１％未満（乾燥重量比）の汚染タンパク質を有するタンパク質の調製物を含む。タンパク質またはその変異体が宿主細胞によって組換え産生されるとき、タンパク質は、細胞の乾燥重量の約３０％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％、約４％、約３％、約２％、または約１％以下で存在し得る。タンパク質またはその変異体が宿主細胞によって組換え産生される場合、タンパク質は、細胞の乾燥重量の約５ｇ／Ｌ、約４ｇ／Ｌ、約３ｇ／Ｌ、約２ｇ／Ｌ、約１ｇ／Ｌ、約７５０ｍｇ／Ｌ、約５００ｍｇ／Ｌ、約２５０ｍｇ／Ｌ、約１００ｍｇ／Ｌ、約５０ｍｇ／Ｌ、約１０ｍｇ／Ｌ、または約１ｍｇ／Ｌ以下で培養液中に存在してもよい。したがって、「実質的に精製された」タンパク質は、ＳＤＳ／ＰＡＧＥ分析、ＲＰ−ＨＰＬＣ、ＳＥＣ、およびキャピラリー電気泳動などの適切な方法によって決定されるように、少なくとも約８０％の純度レベル、具体的には、少なくとも約８５％の純度レベル、より具体的には、少なくとも約９０％の純度レベル、少なくとも約９５％の純度レベル、少なくとも約９９％以上の純度レベルを有することもある。
【００８２】
本発明のタンパク質とプロドラッグは、それらの調製後、好ましくは８０％以上（「実質的に純粋」）の重量を含む組成物を得るために単離および／または精製され、その後、本明細書で記載されるように使用または製剤化される。特定の実施形態において、本発明の化合物は９５％を超えて純粋である。
【００８３】
本明細書で使用されるように、「受容体」という用語は、リガンドと呼ばれる別の分子と相互作用することができる、糖タンパク質またはそのフラグメントを含むタンパク質を指す。リガンドは、生化学的または化学的な化合物の任意のクラスに属することがある。リガンドは通常、受容体に結合すると、シグナル伝達経路の開始などの細胞応答を通常、開始する細胞外分子である。受容体は、必ずしも膜結合タンパク質である必要はない。
【００８４】
本明細書で使用されるように、核酸分子に対する「組換え」という用語は、ゲノム、ｃＤＮＡ、ウイルス、半合成、および／または合成由来のポリヌクレオチドを意味し、このポリヌクレオチドは、その由来または操作によって、自然界でそれが関連するポリヌクレオチドのすべてまたは一部に関連付けられないことを意味する。タンパク質またはポリペプチドに関して使用される「組換え」という用語は、組換えポリヌクレオチドの発現によって産生されるポリペプチドを意味する。宿主細胞に関して使用される「組換え」という用語は、組換えポリヌクレオチドが導入された宿主細胞を意味する。
【００８５】
本明細書で使用されるように、「組換えウイルス」という用語は、人の手によって遺伝子組換えされたウイルスを指す。この語句は、当該技術分野で知られている任意のウイルスをカバーする。
【００８６】
本明細書で使用されるように、「試料」という用語は、ヒト、動物、または研究用試料、例えば、細胞、組織、器官、流体、気体、エアロゾル、スラリー、コロイド、または凝固物からの試料を指す。「試料」は、例えば、ヒトまたは動物から除去することなく、インビボで試験されることもあれば、あるいは、インビトロで試験されることもある。  「試料」は、処理後、例えば、組織学的方法によって試験されてもよい。「試料」はさらに、例えば、流体または組織試料を含む細胞、あるいは、流体または組織試料から分離された細胞を指す。「試料」はさらに、ヒトまたは動物から新鮮に採取される細胞、組織、器官、または流体、あるいは加工または保存された細胞、組織、器官、または流体を指すこともある。
【００８７】
本明細書で使用されるように、「可溶性」という用語は、水性緩衝液、例えば、細胞培地からの低Ｇフォース遠心分離（例えば、標準的な遠心分離器で毎分約３０，０００回転未満）では容易に沈降しない融合分子、特に融合タンパク質を指す。融合分子は、アニオン性または非イオン性界面活性剤の低濃度または無濃度の存在下で、約５−３７°Ｃよりも大きい温度で、中性またはそれに近いｐＨで水溶液中に残存する場合に、可溶性である。このような条件下では、可溶性タンパク質はしばしば、低い沈降値、例えば、約１０−約５０未満のスベドベリ単位を有する。
【００８８】
本明細書で参照される水溶液は典型的には、約５−９のｐＨ範囲内であり、かつ、約２ｍＭ−５００ｍＭの間のイオン強度範囲にある、典型的にはｐＨを確立するための緩衝化合物を有する。場合によっては、プロテアーゼ阻害剤またはマイルドな非イオン性界面活性剤が添加される。さらに、必要に応じて、担体タンパク質（例えば、ウシ血清アルブミン）が添加され得る。例示的な水性緩衝剤は、標準的なリン酸緩衝生理食塩水、トリス緩衝生理食塩水、または他の周知の緩衝剤および細胞培地製剤を含む。
【００８９】
本明細書では、「刺激する」または「刺激すること」という用語は、生理活性、例えば免疫応答を増大し、増幅し、増強し、押し上げることを指す。刺激は肯定的性質変化である場合がある。例えば、５％、１０％、２５％、５０％、７５％、またはさらに９０〜１００％増大する場合がある。他の例示的な増加として、２倍、５倍、１０倍、２０倍、４０倍、またはさらに１００倍が挙げられる。
【００９０】
本明細書では、「被験体」および「患者」という用語は、生きた動物（ヒトまたはヒト以外）を指すように互換的に使用される。この被験体は哺乳動物でもよい。「哺乳動物」または「哺乳類」という用語は、分類学的分類哺乳網内の任意の動物を指す。哺乳動物は、ヒトまたはヒト以外の哺乳動物、例えばイヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ラット、およびマウスでもよい。「被験体」という用語は、疾患あるいは状態に関して完全に正常である、または全ての点で正常である個体を除外するものではない。
【００９１】
本明細書では、「抑制する」または「抑制すること」という用語は、生理活性、例えば免疫応答を低下させる、減衰させる、減少させる、停止させる、または安定化させることを指す。抑制は否定的性質変化である場合がある。例えば、５％、１０％、２５％、５０％、７５％、またはさらに９０〜１００％低下する場合がある。例示的な低下として、２倍、５倍、１０倍、２０倍、４０倍、またはさらに１００倍が挙げられる。
【００９２】
本明細書では、「治療上有効な量」という用語は、望ましくない副作用が最小限であるか、または全くない意図した治療効果を達成するのに十分な治療薬の投与量を指す。治療上有効な量は、当業者により、例えば、先ず低用量の薬理学的薬剤を投与し、次に望ましくない副作用が最小限または全くない状態で所望の治療効果が達成されるまで投与量を徐々に増やすことにより、容易に決定することができる。
【００９３】
本明細書では、「トランスフェクトした」という用語は、リポフェクタミンなどの付随する促進剤の使用の有無にかかわらず、導入されたＤＮＡまたはＲＮＡを持つことを意味する。当該技術分野で既知のトランスフェクションの方法としては、例えば、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥデキストラントランスフェクション、原形質体融合、電気穿孔、およびリポフェクションが挙げられる。
【００９４】
本明細書では、疾患もしくは障害を「処置」または「処置すること」という用語は、発生の前もしくは後に、このような状態、または、このような疾患または状態の１つ以上の症状を減らし、遅延し、または改善する方法を指す。処置は、疾患および／または基礎的な病態の１つ以上の作用または症状を対象としてもよい。前記処置は任意の軽減であってもよく、疾患またはその症状の完全な消失が挙げられるが、これに限定されない。同等の未処置の対照と比較して、このような軽減、または予防の程度は、任意の標準技術により測定されるように少なくとも５％、１０％、２０％、４０％、５０％、６０％、８０％、９０％、９５％、または１００％である。
【００９５】
本明細書では、「腫瘍」という用語は、任意の悪性細胞または腫瘍性細胞を指す。
【００９６】
本明細書では、「ベクター」という用語は、遺伝物質を宿主細胞または生物に伝達可能な核酸分子を指す。ベクターは、ＤＮＡまたはＲＮＡのいずれかで構成されてもよい。ベクターは、その独自の複製起源、外来ＤＮＡの挿入に使用可能な制限エンドヌクレアーゼに対する１つ以上の固有認識部位、抗生物質耐性をコードする遺伝子などの通常選択可能なマーカー、ならびに多くの場合は挿入ＤＮＡの発現のための認識配列（例えばプロモーター）を保因する。一般的なベクターは、プラスミドベクターおよびファージベクターを含む。
【００９７】
本明細書に開示される任意の組成物または方法は、本明細書で提供される他の組成物および方法のいずれか１つ以上と組み合わせることができる。
【発明を実施するための形態】
【００９８】
本発明は、新規の融合タンパク質およびその治療用途を提供する。より具体的に本発明は、ＩＬ１２の新規融合タンパク質およびそのプロドラッグ、組成物、およびその調製方法を提供する。これらは、処置中に標的外毒性および副作用の低下が伴う様々な疾患および障害、例えば、過形成、固形腫瘍、または造血器悪性腫瘍を処置するのに有用である。
【００９９】
一態様では、本発明は全体として、融合タンパク質に関する。前記融合タンパク質は、Ｐ３５およびＰ４０サブユニットから選択されるＩＬ１２の１つ以上のサブユニットである第１の構造単位であって、前記融合タンパク質のＮ末端に位置する、第１の構造単位と、抗体Ｆｃフラグメントである第２の構造単位であって、前記融合タンパク質のＣ末端に位置する、第２の構造単位と、前記第１の構造単位と前記第２の構造単位とを共有結合する、または前記第１の構造単位のうち２つのサブユニットを共有結合する第１のリンカーセグメントとを含む。
【０１００】
融合タンパク質のある実施形態では、Ｐ３５およびＰ４０サブユニットは、ヒト、サル、マウス、イヌ、ラット、ウシ、ブタ、およびヒツジからなる群から選択される哺乳動物に由来する。
【０１０１】
融合タンパク質のある実施形態では、Ｐ３５およびＰ４０サブユニットはヒト由来である。融合タンパク質のある実施形態では、Ｐ３５およびＰ４０サブユニットはサル由来である。融合タンパク質のある実施形態では、Ｐ３５およびＰ４０サブユニットはマウス由来である。融合タンパク質のある実施形態では、Ｐ３５およびＰ４０サブユニットはイヌ由来である。融合タンパク質のある実施形態では、Ｐ３５およびＰ４０サブユニットは、ラットから選択される哺乳動物由来である。融合タンパク質のある実施形態では、Ｐ３５およびＰ４０サブユニットはウシ由来である。融合タンパク質のある実施形態では、Ｐ３５およびＰ４０サブユニットはブタ由来である。融合タンパク質のある実施形態では、Ｐ３５およびＰ４０サブユニットはヒツジ由来である。
【０１０２】
任意の適切な抗体Ｆｃ断片を利用してもよい。
【０１０３】
融合タンパク質のある実施形態では、抗体Ｆｃ断片はヒトＦｃ断片を含む。ある実施形態では、抗体Ｆｃ断片は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．５に記載のアミノ酸配列を含む。
【０１０４】
ある実施形態では、抗体Ｆｃ断片はヒトＩｇＧ１を含む。ある実施形態では、抗体Ｆｃ断片は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．６に記載のアミノ酸配列を含む。
【０１０５】
ある実施形態では、ヒトＩｇＧ１は、ヒトＦｃ−ノブまたはヒトＦｃ−ホールである。
【０１０６】
ある実施形態では、ヒトＩｇＧ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．７に記載のアミノ酸配列を含む。
【０１０７】
融合タンパク質のある実施形態では、マウスＰ３５サブユニットは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３に記載のアミノ酸配列を有する。
【０１０８】
融合タンパク質のある実施形態では、ヒトＰ３５サブユニットは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４に記載のアミノ酸配列を有する。
【０１０９】
融合タンパク質のある実施形態では、マウスＰ４０サブユニットは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１に記載のアミノ酸配列を有する。
【０１１０】
融合タンパク質のある実施形態では、ヒトＰ４０サブユニットは、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２に記載のアミノ酸配列を有する。
【０１１１】
融合タンパク質のある実施形態では、第１のリンカーセグメントＬ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１２に記載のアミノ酸配列を有する。
【０１１２】
ある実施形態では、融合タンパク質は、例えば第１の構造単位のＮ末端で修飾されたシグナルペプチドをさらに含む。
【０１１３】
ある実施形態では、マウスＰ３５サブユニットのＮ末端で修飾されたシグナルペプチドＳＰ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２７に記載のアミノ酸配列を含む。
【０１１４】
ある実施形態では、マウスＰ３５サブユニットのＮ末端で修飾されたシグナルペプチドＳＰ１は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２８に記載のアミノ酸配列を含む。
【０１１５】
ある実施形態では、マウスＰ４０サブユニットのＮ末端で修飾されたシグナルペプチドＳＰ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２９に記載のアミノ酸配列を含む。
【０１１６】
ある実施形態では、ヒトＰ４０サブユニットのＮ末端で修飾されたシグナルペプチドＳＰ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３０に記載のアミノ酸配列を含む。
【０１１７】
ある実施形態では、融合タンパク質はさらに、第２のリンカーセグメント（Ｌ２）により第１の構造単位のＮ末端に共有結合されるインターロイキン１２受容体（ＩＬ１２Ｒ）の部分を含む。ある実施態様では、ＩＬ１２Ｒは、Ｒβ１およびＲβ２から選択される。
【０１１８】
ある実施形態では、マウスＲβ１はＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．８に記載のアミノ酸配列を含み、マウスＲβ２はＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１０に記載のアミノ酸配列を含む。
【０１１９】
ある実施形態では、ヒトＲβ１はＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．９に記載のアミノ酸配列を含み、ヒトＲβ２はＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１１に記載のアミノ酸配列を含む。
【０１２０】
融合タンパク質のある実施形態では、第２のリンカーセグメントＬ２は、腫瘍微小環境に特異的に発現されるタンパク質分解酵素により認識され、かつ加水分解される場合がある。
【０１２１】
ある実施形態では、腫瘍微小環境に特異的に発現されるタンパク質分解酵素は、マトリクスメタロプロテアーゼ、例えばマトリクスメタロプロテアーゼ１４（ＭＭＰ１４）である。
【０１２２】
融合タンパク質のある実施形態では、第２のリンカーセグメントＬ２は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１３〜２６に記載のアミノ酸配列を含む。
【０１２３】
融合タンパク質のある実施形態では、ＩＬ１２ＲのＣ末端はＬ２を介して第１の構造単位のＮ末端に結合され、第１の構造単位のＣ末端と第２の構造単位のＮ末端はＬ１により結合される。第１の構造単位が２つのサブユニットを含む場合、第１のサブユニットのＣ末端と第２のサブユニットのＮ末端は、リンカーセグメントＬ１により結合される。
【０１２４】
別の態様では、本発明は全体として、本明細書に開示される融合タンパク質を含む、ホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質に関する。
【０１２５】
ある実施形態では、ホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質は、マウスＰ４０サブユニット、Ｌ１リンカー、マウスＰ３５サブユニット、Ｌ１リンカー、およびヒトＩｇＧ１の融合タンパク質を含む、例えばＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３１に記載のアミノ酸配列を有する単量体のホモ二量体である。
【０１２６】
ある実施形態では、ホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質は、ヒトＰ４０サブユニット、Ｌ１リンカー、ヒトＰ３５サブユニット、Ｌ１リンカー、およびヒトＩｇＧ１の融合タンパク質を含む、例えばＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３２に記載のアミノ酸配列を有する単量体のホモ二量体である。
【０１２７】
ある実施形態では、ホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質は、第１の単量体：マウスＰ４０サブユニット、Ｌ１リンカー、およびヒトＦｃ−ノブを含み、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３３に記載のアミノ酸配列を有する融合タンパク質、ならびに第２の単量体：マウスＰ３５サブユニット、Ｌ１リンカー、およびヒトＦｃ−ホールを含む、例えばＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３５に記載のアミノ酸配列構造を有する融合タンパク質の、ヘテロ二量体である。
【０１２８】
ある実施形態では、ホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質は、第１の単量体：ヒトＰ４０サブユニット、Ｌ１リンカー、およびヒトＦｃ−ノブを含み、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３４に記載のアミノ酸配列を有する融合タンパク質、ならびに第２の単量体：ヒトＰ３５サブユニット、Ｌ１リンカー、およびヒトＦｃ−ホールを含む、例えばＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３６に記載のアミノ酸配列構造を有する融合タンパク質の、ヘテロ二量体である。
【０１２９】
ある実施形態では、ホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質は、マウスＩＬ１２Ｒβ１、マウスＰ４０サブユニット、Ｌ１リンカー、マウスＰ３５サブユニット、Ｌ１リンカー、およびヒトＩｇＧ１であり、例えばＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３７に記載のアミノ酸配列を有する単量体のホモ二量体である。
【０１３０】
ある実施形態では、ホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質は、ヒトＩＬ１２Ｒβ１、ヒトＰ４０サブユニット、Ｌ１リンカー、ヒトＰ３５サブユニット、Ｌ１リンカー、およびヒトＩｇＧ１であり、例えばＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３８に記載のアミノ酸配列を有する単量体のホモ二量体である。
【０１３１】
ある実施形態では、ホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質は、マウスＩＬ１２Ｒβ２、マウスＰ４０サブユニット、Ｌ１リンカー、マウスＰ３５サブユニット、Ｌ１リンカー、およびヒトＩｇＧ１であり、例えばＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３９に記載のアミノ酸配列を有する単量体のホモ二量体である。
【０１３２】
ある実施形態では、ホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質は、ヒトＩＬ１２Ｒβ２、ヒトＰ４０サブユニット、Ｌ１リンカー、ヒトＰ３５サブユニット、Ｌ１リンカー、およびヒトＩｇＧ１であり、例えばＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４０に記載のアミノ酸配列を有する単量体のホモ二量体である。
【０１３３】
ある実施形態では、ホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質は、マウスＩＬ１２Ｒβ１、Ｌ２リンカー、マウスＰ４０サブユニット、Ｌ１リンカー、ヒトＦｃ−ノブの融合タンパク質であり、例えばＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４１に記載のアミノ酸配列を有する第１の単量体、ならびに、マウスＩＬ１２Ｒβ２、Ｌ２リンカー、マウスＰ３５サブユニット、Ｌ１リンカー、およびＩＬ１２のヒトＦｃ−ホールの融合タンパク質であり、例えばＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４３に記載のアミノ酸配列を有する第２の単量体の、ヘテロ二量体である。
【０１３４】
ある実施形態では、ホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質は、ヒトＩＬ１２Ｒβ１、Ｌ２リンカー、ヒトＰ４０サブユニット、Ｌ１リンカー、ヒトＦｃ−ノブの融合タンパク質であり、例えばＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４２に記載のアミノ酸配列を有する第１の単量体、ならびに、ヒトＩＬ１２Ｒβ２、Ｌ２リンカー、ヒトＰ３５サブユニット、Ｌ１リンカー、およびＩＬ１２のヒトＦｃ−ホールの融合タンパク質であり、例えばＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４４に記載のアミノ酸配列を有する第２の単量体の、ヘテロ二量体である。
【０１３５】
ある実施形態では、ホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質は、マウスＩＬ１２Ｒβ１、Ｌ２リンカー、マウスＰ４０サブユニット、Ｌ１リンカー、ヒトＦｃ−ノブの融合タンパク質であり、例えばＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４５に記載のアミノ酸配列を有する第１の単量体、ならびに、ＳＰ１シグナルペプチドを含むマウスＰ３５サブユニット、Ｌ１リンカー、およびヒトＦｃ−ホールを含む融合タンパク質であり、例えばＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４７に記載のアミノ酸配列を有する第２の単量体の、ヘテロ二量体である。
【０１３６】
ある実施形態では、ホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質は、ヒトＩＬ１２Ｒβ１、Ｌ２リンカー、ヒトＰ４０サブユニット、Ｌ１リンカー、ヒトＦｃ−ノブの融合タンパク質であり、例えばＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４６に記載のアミノ酸配列を有する第１の単量体、ならびに、ＳＰ１シグナルペプチドを含むヒトＰ３５サブユニット、Ｌ１リンカー、およびヒトＦｃ−ホールを含む融合タンパク質であり、例えばＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４８に記載のアミノ酸配列を有する第２の単量体の、ヘテロ二量体である。
【０１３７】
ある実施形態では、ホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質は、第１の単量体：マウスＰ４０サブユニット、Ｌ１リンカー、およびヒトＦｃ−ノブを含む、例えばＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４９に記載のアミノ酸配列を有する融合タンパク質、ならびに第２の単量体：マウスＩＬ１２Ｒβ２、Ｌ２リンカー、マウスＰ３５サブユニット、Ｌ１リンカー、およびヒトＦｃ−ホールを含む、例えばＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．５１に記載のアミノ酸配列構造を有する融合タンパク質の、ヘテロ二量体である。
【０１３８】
ある実施形態では、ホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質は、第１の単量体：ヒトＰ４０サブユニット、Ｌ１リンカー、およびヒトＦｃ−ノブを含む、例えばＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．５０に記載のアミノ酸配列を有する融合タンパク質、ならびに第２の単量体：ヒトＩＬ１２Ｒβ２、Ｌ２リンカー、ヒトＰ３５サブユニット、Ｌ１リンカー、およびヒトＦｃ−ホールを含む、例えばＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．５２に記載のアミノ酸配列構造を有する融合タンパク質の、ヘテロ二量体である。
【０１３９】
ある実施形態では、ホモ二量体またはヘテロ二量体タンパク質は、腫瘍微小環境に特異的に発現されるタンパク質分解酵素により加水分解される。
【０１４０】
また別の態様では、本発明は全体として、本明細書に開示される融合タンパク質または断片などの、実質的に精製されたタンパク質に関する。
【０１４１】
また別の態様では、本発明は全体として、本明細書に開示される融合タンパク質またはその断片などのタンパク質をコードするポリヌクレオチドに関する。
【０１４２】
また別の態様では、本発明は全体として、本明細書に開示される融合タンパク質または断片などのタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む、発現ベクターに関する。
【０１４３】
また別の態様では、本発明は全体として、本明細書に開示される融合タンパク質またはその断片などのタンパク質と、薬学的に許容可能な賦形剤、担体、または希釈剤とを含む医薬組成物に関する。
【０１４４】
また別の態様では、本発明は全体として、本明細書に開示される融合タンパク質またはその断片などのタンパク質をコードするポリヌクレオチドと、薬学的に許容可能な賦形剤、担体、または希釈剤とを含む医薬組成物に関する。
【０１４５】
また別の態様では、本発明は全体として、疾患または状態を処置するための方法に関する。該方法は、本明細書に開示される融合タンパク質またはその断片などのタンパク質をコードするポリヌクレオチドを治療上有効な量で患者に投与する工程を含み、前記疾患または状態は、過形成、固形腫瘍、または造血器悪性腫瘍から選択される。
【０１４６】
ある実施形態では、処置される疾患または状態は過形成である。
【０１４７】
ある実施形態では、処置される疾患または状態は固形腫瘍である。
【０１４８】
ある実施形態では、処置される疾患または状態は造血器悪性腫瘍である。
【０１４９】
ある実施形態では、処置される被験体はさらに、化学療法、放射線療法、標的療法、免疫療法、またはホルモン療法のうち１つ以上を施される。
【０１５０】
ある実施形態では、前記方法は、化学療法剤を被験体に投与する工程をさらに含む。
【０１５１】
ある実施形態では、前記方法は、被験体に放射線療法を施す工程をさらに含む。
【０１５２】
ある実施形態では、前記方法は、被験体に標的療法を施す工程をさらに含む。
【０１５３】
ある実施形態では、前記方法は、被験体に免疫療法を施す工程をさらに含む。
【０１５４】
ある実施形態では、前記方法は、被験体にホルモン療法を施す工程をさらに含む。
【０１５５】
本明細書では、「化学療法剤」という用語は、癌の処置に有用な化合物を指す。化学療法剤の例として、エルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍ．）、ボルテゾミブ（ＶＥＲＣＡＤＥ（登録商標）、Ｍｒｅｍｉｎｅｉｕｍ  Ｐｈａｒｍ．）、フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ステント（ＳＵ１１２４８、Ｐｆｉｚｅｒ）、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、メシル酸イマチニブ（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＰＴＫ７８７／ＺＫ  ２２２５８４（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、オキサリプラチン（Ｅｌｏｘａｔｉｎ（登録商標）、Ｓａｎｏｆｉ）、５−ＦＵ（５−フルオロウラシル）、ロイコボリン、ラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ）、ラパチニブ（ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＧＳＫ５７２０１６、Ｇｌａｘｏ  Ｓｍｉｔｈ  ｋｌｉｎｅ）、ロナファルニブ（ＳＣＨ６６３３６）、ソラフェニブ（ＢＡＹ４３−９００６、Ｂａｙｅｒ  Ｌａｂｓ）、およびゲフィチニブ（ＩＲＥＳＡ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＡＧ１４７８、ＡＧ１５７１（ＳＵ５２７１；Ｓｕｇｅｎ）、チオテパおよびＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）シクロスホスファミドなどのアルキル化剤、ブスルファン、イムプロスルファン、およびピポスルファンなどのスルホン酸アルキル、ベンゾドパ、カルボクオン、メトレドパ、およびウレドパなどのアジリジン、アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド、およびトリメチロメラミンを含むエチレンイミンおよびメチルアメラミン、アセトゲニン（特にブラタシンおよびブラタシノン）、カンプトテシン（合成アナログトポテカンを含む）、ブリオスタチン、カリスタチン、ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼルシン、およびビゼレシン合成アナログを含む）、クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）、ドラスタチン、デュオカルマイシン（合成アナログ、ＫＷ−２１８９、およびＣＢ１−ＴＭ１を含む）、エリュテロビン、パンクラチスタチン、サルコジクチイン、スポンジスタチン、ナイトロジェンマスタード、例えばクロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロフォスファミド、およびウラシルマスタード、ニトロソウレア、例えばカルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムヌスチン、エンジイン系抗生物質などの抗生物質（例えばカリチェアミシン、特にカリケアマイシンガンマール（ｇａｍｍａｌｌ）およびカリケアマイシンオメガール（ｏｍｅｇａｌｌ）（例えば、Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３−１８６（１９９４）を参照）、ジネマイシンＡを含むジネマイシン、クロドロネートなどのビスホスホネート、エスペラミシン、ネオカルジノスタチン発色団および関連の色素タンパクエンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、ア���チノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン、カルジノフィリン（ｃａｒｚｉｎｏｐｈｉｌｉｎ）、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（ｄｅｔｏｒｕｂｉｃｉｎ）、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）（ドキソルビシン）、モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソニビシン（ｅｓｏｎｉｂｉｃｉｎ）、イダルビシン、マルセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン（ｏｌｉｖｏｍｙｃｉｎｓ）、ペプロマイシン、ポポルフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン、メトトレキサートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）などの抗代謝物、葉酸類似体、例えばデノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、およびトリメトレキサート、プリン類似体、例えばフルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、およびチオグアニン、ピリミジン類似体、例えばアンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、およびフロクスウリジン、アンドロゲン、例えばカルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、およびテストラクトン、抗アドレナリン、例えばアミノグルテチミド、ミトタン、およびトリロスタン、フォリン（ｆｒｏｌｉｎｉｃ）酸などの葉酸補液、アセグラトン、アルドホスファミドグリコシド、アミノレブリン酸、エニルウラシル、アムサクリン、ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）、ビサントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）、エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）、デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）、デメコルシン（ｄｅｍｅｃｏｌｃｉｎｅ）、ジアジコン（ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）、エルフォルニチン（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）、酢酸エリプチニウム、エポチロン、エトグルシド（ｅｔｏｇｌｕｃｉｄ）、硝酸ガリウム、ヒドロキシウレア、レンチナン、ロニダイニン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）、メイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）およびアンサミトシンなどのメイタンシノイド、ミトグアゾン、ミトキサントロン、モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）、ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）、ペントスタチン、フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）、ピラルビシン、ロソキサントロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ）、２−エチルヒドラジド、プロカルバジン、ＰＳＫ（登録商標）多糖類複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）、ラゾキサン、リゾキシン、シゾフィラン（ｓｉｚｏｆｉｒａｎ）、スピロゲルマニウム、テヌアゾン酸、トリアジクオン、２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン、トリコテセン（特にＴ−２トキシン、ベラクリンＡ、ロリジンＡ、およびアングイジン）、ウレタン、ビンデシン、ダカルバジン、マンノムスチン、ミトブロニトール、ミトラクトール、ピポブロマン、ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）、アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）、シクロホスファミド、チオテパ、タキソイド、例えばＴＡＸＯＬ（登録商標）（パクリタキセル、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）（クレモフォールフリー）、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，１１１．）、およびＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）ドキセタキセル、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）、クロランブシル（ｃｈｌｏｒａｎｂｕｃｉｌ）、ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）（ゲムシタビン）、６−チオグアニン、メルカプトプリン、メトトレキサート、シスプラチンおよびカルボプラチンなどの白金類似体、ビンブラスチン、エトポシド（ＶＰ−１６）、イホスファミド、ミトキサントロン、ビンクリスチン、ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標）（ビノレルビン）、ノバントロン、テニポシド、エダトレキサート、ダウノマイシン、アミノプテリン、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、イバンドロネート、ＣＰＴ−１１、トポイソメラーゼ阻害剤、ＲＦＳ２０００、ジフルオロメチロミチン（ｄｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌｏｍｉｔｈｉｎｅ）（ＤＭＦＯ）、レチノイン酸などのレチノイド、ならびに、上述のいずれかの薬学的に許容可能な塩、酸、誘導体が挙げられる
【０１５６】
第２の（またはさらなる）薬剤または治療薬の例として、免疫療法薬（例えばＰＤ−１阻害剤（ペンブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブ）、ＰＤ−Ｌ１阻害剤（アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ）、ＣＴＬＡ４アンタゴニスト（イピリムマブ）、細胞シグナル伝達阻害剤（例えばイマチニブ、ゲフィチニブ、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、ダサチニブ、ボリノスタット、ラパチニブ、テムシロリムス、ニロチニブ、エベロリムス、パゾパニブ、トラスツズマブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、ラニビズマブ、ペガプタニブ、パニツムマブなど）、有糸分裂阻害剤（例えばパクリタキセル、ビンクリスチン、ビンブラスチンなど）、アルキル化剤（例えばシスプラチン、シクロホスファミド、クロマブシル、カルムスチンなど）、抗代謝物（例えばメトトレキサート、５−ＦＵなど）、挿入抗癌剤（例えばアクチノマイシン、アントラサイクリン、ブレオマイシン、マイトマイシン−Ｃなど）、トポイソメラーゼ阻害剤（例えばイリノテカン、トポテカン、テニポシドなど）、免疫療法剤（例えばインターロイキン、インターフェロンなど）、ならびに抗ホルモン剤（例えばタモキシフェン、ラロキシフェンなど）が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【０１５７】
また別の態様では、本発明は全体として、疾患または障害（例えば過形成、固形腫瘍、または造血器悪性腫瘍）を処置または軽減するための、本明細書に開示される融合タンパク質またはその断片などのタンパク質の使用に関する。
【０１５８】
また別の態様では、本発明は全体として、疾患または障害（例えば過形成、固形腫瘍、または造血器悪性腫瘍）を処置または軽減するための、本明細書に開示される融合タンパク質またはその断片などのタンパク質をコードするポリヌクレオチドの使用に関する。
【０１５９】
また別の態様では、本発明は全体として、疾患または障害（例えば過形成、固形腫瘍、または造血器悪性腫瘍）を処置または軽減するための薬剤の調製における、本明細書に開示される融合タンパク質またはその断片などのタンパク質、および薬学的に許容可能な賦形剤、担体、または希釈剤の使用に関する。
【０１６０】
また別の態様では、本発明は全体として、疾患または障害（例えば過形成、固形腫瘍、または造血器悪性腫瘍）を処置または軽減するための薬剤の調製における、本明細書に開示される融合タンパク質またはその断片などのタンパク質をコードするポリヌクレオチド、および薬学的に許容可能な賦形剤、担体、または希釈剤の使用に関する。
【０１６１】
ある実施形態では、前記薬剤は抗癌剤である。
【０１６２】
ある実施形態では、前記疾患または障害は、頭頸部癌、子宮内膜癌、大腸癌、卵巣癌、乳癌、黒色腫、肺癌、腎癌、肝癌、肛門癌、肉腫、リンパ腫、白血病、脳腫瘍、胃癌、精巣癌、膵臓癌、および甲状腺癌から選択される１つ以上である。
【０１６３】
ある実施形態では、抗癌剤は、Ｂ細胞リンパ腫の処置または抗大腸癌に有効である。
【０１６４】
また別の態様では、本発明は全体として、本明細書に開示される融合タンパク質または断片などのタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む、細胞株に関する。
【０１６５】
また別の態様では、本発明は全体としてタンパク質を製造する方法に関し、該方法は前記細胞株を培養する工程を含む。ある実施形態では、前記方法は、本明細書に開示される融合タンパク質またはその断片などの生成タンパク質を精製または単離する工程をさらに含む。
【０１６６】
また別の態様では、本発明は全体として、タンパク質を製造する方法に関する。該方法は、本明細書に開示される融合タンパク質またはその断片などのタンパク質をコードする発現ベクターを提供する工程と、該発現ベクターを宿主細胞に導入する工程と、タンパク質を発現するのに十分な条件にて培地中で前記宿主細胞を培養する工程と、前記宿主細胞または培地から前記タンパク質を精製する工程とを含む。
【０１６７】
任意の適切な発現ベクターを利用してもよい。例示的な発現ベクターはｐＥＥ１２．４発現ベクターである。
【０１６８】
任意の適切な宿主細胞、例えば２９３Ｆ細胞やＣＨＯ細胞を利用してもよい。
【０１６９】
発現ベクターの導入は、任意の適切なトランスフェクション方法により達成することができ、かつ、一過的なトランスフェクションまたは安定した細胞株を介して行うことができる。
【０１７０】
任意の適切な精製方法を利用してもよい。例示的な精製方法は、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ／Ｇのアフィニティークロマトグラフィー、またはサイズ除去方法により行われる。
【０１７１】
また別の態様では、本発明は全体として、本明細書に開示される方法により生成される単離タンパク質に関する。
【０１７２】
ある実施形態では、この単離タンパク質は実質的に純粋である。
【０１７３】
本明細書に開示されるように、生物学的に活性なポリペプチドの２つ以上のポリペプチドを結合させて所望の機能的活性を持つ単鎖分子を生成するために、リンカー配列を使用することができる。
【０１７４】
任意の適切なリンカーを利用してもよい。例示的なペプチドリンカー配列として、約７〜２０のアミノ酸、例えば約８〜１６のアミノ酸を有する配列が挙げられる。前記リンカー配列は、生物学的に活性なポリペプチドまたはエフェクター分子を望ましくない１つの立体構造に保持しないように可動性であることが好ましい。例えば認識部位と融合分子との間隔を空けるために、このリンカー配列を使用することができる。具体的に、ペプチドリンカー配列は、分子の可動性を提供するように位置決めすることができる。リンカーは、可動性を提供するために、グリシン、アラニン、およびセリンなどの、小さな側鎖を持つアミノ酸を主に含むことが好ましい。
【０１７５】
通常、本発明の融合タンパク質複合体の調製は、本明細書に開示される手順により、および、例えばポリメラーゼ連鎖増幅反応（ＰＣＲ）、プラスミドＤＮＡの調製、制限酵素によるＤＮＡの切断、オリゴヌクレオチドの調製、ＤＮＡのライゲーション、ｍＲＮＡの単離、ＤＮＡの適切な細胞への導入、宿主の形質転換またはトランスフェクション、宿主の培養を含む、認知されている組み換えＤＮＡ技術により達成することができる。さらに前記融合分子は、カオトロピック剤、ならびに周知の電気泳動、遠心分離、およびクロマトグラフィー法を使用して単離および精製することができる（これら方法に関する開示については、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ  ｅｄ．（１９８９）、およびＡｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８９）を参照）。
【０１７６】
本発明はさらに、本融合タンパク質をコードする核酸配列およびＤＮＡ配列を提供する。このＤＮＡ配列は、ファージ、ウイルス、プラスミド、ファーゲミド、コスミド、ＹＡＣ、またはエピソームなど、染色体外複製に適したベクターにより保因されてもよい。例えば、所望の融合タンパク質をコードするＤＮＡベクターは、本明細書に記載の調製方法を容易にする、かつ相当量の融合タンパク質またはその成分を得るために使用されてもよい。ＤＮＡ配列は、適切な発現ベクター、すなわち、挿入されたタンパク質コード配列の転写および翻訳に必要な要素を含むベクターに挿入することができる。様々な宿主−ベクター系を利用して、タンパク質コード配列を発現させてもよい。これらの系として、ウイルス（例えばワクシニアウイルス、アデノウイルスなど）に感染した哺乳動物細胞系、ウイルス（例えばバキュロウイルス）に感染した昆虫細胞系、酵母ベクターを含む酵母などの微生物、またはバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、もしくはコスミドＤＮＡで形質転換された細菌が挙げられる。利用される宿主−ベクター系に応じて、多くの適切な転写および翻訳要素のいずれか１つを使用してもよい（これら方法に関する開示については、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ  ｅｄ．（１９８９）、およびＡｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８９）を参照）。
【０１７７】
ＤＮＡベクターによりコードされる融合タンパク質成分は、カセット形式で提供することができる。「カセット」という用語は、標準の組み換え方法により各成分が別の成分へと容易に置換可能であることを意味する。具体的に、カセット形式で構成されるＤＮＡベクターは、血清型を発生させる能力を持つ、またはその可能性がある病原体に対してコード化された融合複合体が使用される場合に特に望ましい。
【０１７８】
融合タンパク質複合体をコードするベクターを作るために、生物学的に活性なポリペプチドをコードする配列は、適切なリガーゼを使用してエフェクターペプチドに結合される。存在するペプチドをコードするＤＮＡは、適切な細胞株などの天然供給源からＤＮＡを単離することにより、または既知の合成法、例えばリン酸トリエステル法により得ることができる（Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）。合成オリゴヌクレオチドは、市販の自動オリゴヌクレオチド合成装置を用いて調製されてもよい。一旦単離されると、生物学的に活性なポリペプチドをコードする遺伝子は、ＰＣＲ、または当技術分野で既知の他の手段により増幅することができる。生物学的に活性なポリペプチド遺伝子を増幅するのに適したＰＣＲプライマーは、ＰＣＲ産物に制限部位を付加することができる。ＰＣＲ産物は、生物学的に活性なポリペプチドーエフェクター融合複合体の適切な発現と分泌に必要な、エフェクターペプチドとリーダー配列に対するスプライス部位を含むのが好ましい。ＰＣＲ産物は、リンカー配列をコードする配列、またはそのような配列のライゲーションのための制限酵素部位を含むことも好ましい。
【０１７９】
本明細書に記載される融合タンパク質は、標準の組み換えＤＮＡ技術により生成されてもよい。例えば、生物学的に活性なポリペプチドをコードするＤＮＡ分子が単離されると、配列は、エフェクターポリペプチドをコードする別のＤＮＡ分子に結合される場合がある。生物学的に活性なポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、エフェクターペプチドをコードするＤＮＡ配列に直接結合することができるか、またはより一般的には、本明細書で議論されるようなリンカー配列をコードするＤＮＡ配列は、生物学的に活性なポリペプチドをコードする配列とエフェクターペプチドをコードする配列との間に挿入され、かつ適切なリガーゼを用いて結合されてもよい。結果として生じるハイブリッドＤＮＡ分子を適切な宿主細胞に発現させて、融合タンパク質複合体を生成することができる。ＤＮＡ分子は５’〜３’配向で互いにライゲートされ、そうすることで、ライゲーション後、コードされたポリペプチドの翻訳フレームは改質されない（すなわち、ＤＮＡ分子はフレーム内で互いにライゲートされる）。結果として生じるＤＮＡ分子は、フレーム内融合タンパク質をコードする。
【０１８０】
他のヌクレオチド配列も遺伝子構築物に含めることができる。例えば、エフェクターペプチドに融合した生物学的に活性なポリペプチドをコードする配列の発現を調節するプロモーター配列、または融合タンパク質を細胞表面もしくは培養培地に誘導するリーダー配列は、構築物中に含まれるか、または該構築物が挿入される発現ベクター中に存在する場合がある。
【０１８１】
変異体の生物学的に活性なポリペプチド、ＩＬ１２、ＩＬ１２Ｒ、またはＦｃドメインコード配列を得る際に、生物学的活性の損失または減少を伴うことなく、ポリペプチドがある種のアミノ酸置換、付加、欠失、および翻訳後修飾により修飾されてもよいことが、当業者に認識されるであろう。具体的に、保存的アミノ酸置換、すなわち同様のサイズ、電荷、極性、および立体配座を持つ別のアミノ酸に対する１つのアミノ酸の置換は、タンパク質機能を有意に改質する可能性が低いことが、よく知られている。タンパク質の構成成分である２０の標準アミノ酸は、次のように保存的アミノ酸の４つの群へと広く分類することができる。非極性（疎水性）群はアラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、およびバリンを含み、極性（非荷電、中性）群はアスパラギン、システイン、グルタミン、グリシン、セリン、トレオニン、およびチロシンを含み、正帯電（塩基性）群はアルギニン、ヒスチジン、およびリジンを含み、負帯電（酸性）群はアスパラギン酸とグルタミン酸を含む。同群内での１つのアミノ酸のタンパク質における別のタンパク質に対する置換は、タンパク質の生物学的活性に悪影響を及ぼす可能性が低い。他の例では、アミノ酸位置への修飾は、タンパク質の生物学的活性を低下または増強するために行うことができる。このような変化は、標的残基の既知もしくは推定される構造的特性か機能的特性に基づいて、無作為に、または部位特異的変異を介して導入することができる。変異体タンパク質の発現後、修飾による生物学的活性の変化は、結合アッセイまたは機能的アッセイを用いて容易に評価することができる。
【０１８２】
ヌクレオチド配列間の相同性はＤＮＡハイブリダイゼーション分析により決定することができ、その中で二本鎖ＤＮＡハイブリッドの安定性は生じる塩基対の程度に左右される。高温および／または低塩含有量の条件によりこのハイブリッドの安定性は低下し、この条件は、選択された相同性未満の相同性を持つ配列のアニーリングを妨げるように変動する場合がある。例えば、Ｇ−Ｃ含有量が約５５％の配列では、４０〜５０Ｃ、６×ＳＳＣ（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウムバッファー）、および０．１％ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）のハイブリダイゼーション・洗浄条件により、約６０〜７０％の相同性が示され、５０〜６５Ｃのハイブリダイゼーション・洗浄条件では約８２〜９７％の相同性が、５２Ｃ、０．１×ＳＳＣ、および０．１％ＳＤＳのハイブリダイゼーション・洗浄条件では約９９〜１００％の相同性が示される。ヌクレオチドをアミノ酸配列と比較する（および相同性の程度を測定する）ための多種多様なコンピュータプログラムも利用可能である。容易に利用可能な配列比較および複数配列アライメントアルゴリズムはそれぞれ、Ｂａｓｉｃ  Ｌｏｃａｌ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｓｅａｒｃｈ  Ｔｏｏｌ（ＢＬＡＳＴ）およびＣｌｕｓｔａｌＷプログラムである。
【０１８３】
本発明のタンパク質融合複合体を発現させるために多くの戦略を利用することができる。例えば、上述の融合タンパク質構築物は、制限酵素の使用など既知の手段により適切なベクターへと組み込まれることで、構築物の挿入、続いてライゲーションのためにベクターを切断することができる。次いで遺伝子構築物を含むベクターは、融合タンパク質を発現するのに適切な宿主に導入される（これら方法に関する開示については、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ  ｅｄ．（１９８９）を参照）。
【０１８４】
適切なベクターの選択は、クローニングプロトコルに関連する因子に基づき経験的に行うことができる。例えば、前記ベクターは、利用される宿主に対して適切なレプリコンに適合し、かつ該レプリコンを有していなければならない。さらに前記ベクターは、発現される融合タンパク質複合体をコードするＤＮＡ配列に適応可能でなければならない。適切な宿主細胞としては、真核生物細胞および原核生物細胞、好ましくは、容易に形質転換可能でありかつ培養培地中で急速な増殖を示す細胞が挙げられる。具体的には、好ましい宿主細胞として、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｌｕｓなどの原核生物、および動物細胞や酵母株などの真核生物、例えばＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅが挙げられる。全体として哺乳動物細胞、特にＪ５５８、ＮＳＯ、ＳＰ２−Ｏ、またはＣＨＯが好ましい。他の適切な宿主として、例えばＳｆ９などの昆虫細胞が挙げられる。従来の培養条件が利用される。上述のＳａｍｂｒｏｏｋを参照。次いで、形質転換またはトランスフェクトされた安定した細胞株を選択することができる。本発明の融合タンパク質複合体を発現する細胞は、既知の手順により決定することができる。例えば、免疫グロブリンに結合した融合タンパク質複合体の発現は、結合した免疫グロブリンに特異的なＥＬＩＳＡ、および／または免疫ブロッティングにより決定することができる。ＩＬ１２またはＩＬ１２Ｒドメインに結合した生物学的に活性なポリペプチドを含む融合タンパク質の発現を検出する他の方法が、実施例に開示される。
【０１８５】
宿主細胞は、所望の融合タンパク質またはその成分をコードする核酸を増殖させるため調製目的に使用することができる。宿主細胞は、融合タンパク質の生成が特異的に意図される原核生物細胞または真核生物細胞を含む場合がある。ゆえに宿主細胞としては具体的に、酵母、ハエ、虫、植物、カエル、哺乳動物の細胞、および、融合をコードする核酸を増殖可能な器官が挙げられる。使用可能な哺乳動物細胞株の非限定的な例として、ＣＨＯ  ｄｈｆｒ細胞（Ｕｒｌａｕｂ  ａｎｄ  Ｃｈａｓｍ，１９８０Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４２１６）、２９３細胞（Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．１９７７  Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．，３６：５９（））、またはＳＰ２かＮＳＯのような骨髄腫細胞（Ｇａｌｆｒｅ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，１９８１Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，７３（Ｂ）：３）が挙げられる。
【０１８６】
所望の融合タンパク質複合体をコードする核酸を増殖可能な宿主細胞は、昆虫（例えばＳｐ．ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）、酵母（例えば、通常はＦｌｅｅｒ，Ｒ．，１９９２  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，３（５）：４８６４９６に概説されるようなＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓ．ｐｏｍｂｅ、Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｋ．ｌａｃｔｉｓ、Ｈ．ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）、真菌、および植物細胞を含む、非哺乳動物真核生物細胞も包含する。また、Ｅ．ｃｏｌｉやＢａｃｉｌｌｕｓなどの特定の原核生物も企図される。
【０１８７】
所望の融合タンパク質をコードする核酸は、細胞をトランスフェクトする標準技法により宿主細胞に導入させることができる。「トランスフェクトすること」または「トランスフェクション」という用語は、リン酸カルシウム共沈、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介性トランスフェクション、リポフェクション、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、ウイルス形質導入、および／または組み込みを包含するように意図されている。
【０１８８】
様々なプロモーター（転写開始調節領域）を本発明に従って使用してもよい。適切なプロモーターの選択は、提案された発現宿主に左右される。異種性供給源由来のプロモーターは、選択された宿主において機能的である限り使用されてもよい。
【０１８９】
プロモーターの選択は、ペプチドまたはタンパク質の生成の所望の効率とレベルにも左右される。ｔａｃなどの誘導性プロモーターは、Ｅ．ｃｏｌｉでのタンパク質発現レベルを劇的に上昇させるために利用されることが多い。タンパク質の過剰発現は宿主細胞に有害な場合もある。その結果、宿主細胞の成長は制限される場合がある。誘導性プロモーター系の使用により、宿主細胞を許容可能な密度まで培養してから遺伝子発現を誘導することができ、これによってさらに多くの産出が容易になる。
【０１９０】
様々なシグナル配列が本発明に従って使用されてもよい。生物学的に活性なポリペプチドコード配列と相同であるシグナル配列を使用してもよい。あるいは、発現宿主での効率的な分泌と処理のために選択または設計されたシグナル配列も使用してもよい。シグナル配列は、シグナルペプチダーゼ切断部位をコードする配列を介してタンパク質コード配列に直接結合され、または短いヌクレオチド架橋により結合されてもよい。
【０１９１】
発現構築物は、既知の組み換えＤＮＡ技法を利用することで組み立てることができる。制限酵素の消化とライゲーションは、ＤＮＡの２つの断片を結合するために用いられる基本工程である。選択された断片の結合を容易にするために、ポリリンカーとアダプターを利用してもよい。前記発現構築物は通常、Ｅ．ｃｏｌｉの制限、ライゲーション、および形質転換を複数回用いて段階的に組み立てることができる。発現構築物の構築に適した多数のクローニングベクターは当該技術分野で公知である（λＺＡＰ  ａｎｄ  ｐＢＬＵＥＳＣＲＩＰＴ  ＳＫ−１，Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，Ｃａｌｉｆ．，ｐＥＴ，Ｎｏｖａｇｅｎ  Ｉｎｃ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）。
【０１９２】
前記発現構築物は、線形または円形いずれかのクローニングベクター構築物として宿主に形質転換されるか、またはクローニングベクターから除去された後、そのまま使用されるか、もしくは送達ベクターに導入されてもよい。この送達ベクターは、選択された宿主細胞型での発現構築物の導入と維持を容易にする。前記発現構築物は、多数の既知の遺伝子導入系のうちいずれか（例えば、自然能力、化学的に媒介された形質転換、プロトプラスト形質転換、電気穿孔、生物学的形質転換、トランスフェクション、または抱合）により宿主細胞に導入される。選択される遺伝子導入系は、使用される宿主細胞およびベクター系に左右される。
【０１９３】
本発明はさらに、対象の融合タンパク質を単離するための製造プロセスを提供する。このプロセスでは、調節配列に動作可能に結合された対象のタンパク質をコードする核酸に導入されている宿主細胞（例えば酵母、真菌、昆虫、細菌、または動物細胞）は、対象の融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列の転写を刺激するために培養培地にて生産規模で成長させられる。その後、対象の融合タンパク質は、採取された宿主細胞から、または培養培地から単離される。標準のタンパク質精製技法を使用して、培地または採取された細胞から対象のタンパク質を単離することができる。特に、ローラーボトル、スピナーフラスコ、組織培養プレート、バイオリアクター、または発酵槽を含む様々な実施形態から所望の融合タンパク質を大規模（すなわち、少なくともミリグラムの量）で発現かつ精製するための精製技法を、使用することができる。
【０１９４】
発現されたタンパク融合複合体は、既知の方法により単離かつ精製することができる。通常、培養培地は遠心分離または濾過され、次いで上清は、アフィニティーまたはイムノアフィニティークロマトグラフィー、例えばＰｒｏｔｅｉｎ−ＡもしくはＰｒｏｔｅｉｎ−Ｇアフィニティークロマトグラフィー、あるいは、結合したＴＣＲまたはその免疫グロブリン領域などの発現された融合複合体に結合するモノクローナル抗体の使用を含むイムノアフィニティープロトコルにより精製される。本発明の融合タンパク質は、既知の技術を適切に組み合わせたものにより分離かつ精製することができる。これらの方法として、例えば、塩沈殿および溶媒沈殿などの溶解度を利用する方法、透析、限外濾過、ゲル濾過、およびＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動などの分子量差を利用する方法、イオン交換カラムクロマトグラフィーなどの電荷差を利用する方法、アフィニティークロマトグラフィーなどの特定の親和性を利用する方法、逆相高速液体クロマトグラフィーなどの疎水性差を利用する方法、等電点電気泳動などの等電点の差を利用する方法、Ｎｉ−ＮＴＡなどの金属親和性カラムが挙げられる（これら方法に関する開示については、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ  ｅｄ．（１９８９）、およびＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８９）を参照）。
【０１９５】
本発明の融合タンパク質はほぼ純粋であることが好ましい。すなわち、前記融合タンパク質は、通常それに付随する細胞置換基から単離され、それにより融合タンパク質は、好ましくは少なくとも８０％または９０％〜９５％の均一性（ｗ／ｗ）で存在する。少なくとも９８〜９９％の均一性（ｗ／ｗ）を持つ融合タンパク質が、多くの製薬、臨床、および研究の用途に最も好ましい。一旦実質的に精製されると、前記融合タンパク質は、治療用途のために汚染物質がほとんどない状態にされねばならない。一旦実質的な純度にまで部分的に精製されると、可溶性融合タンパク質は、治療に、または本明細書に開示されるインビトロかインビボのアッセイの実行に使用することができる。クロマトグラフィーおよびゲル電気泳動などの様々な標準技法により実質的な純度を求めることができる。
【０１９６】
本発明はまた、本発明に係る治療上有効な量の組成物、融合タンパク質、ポリヌクレオチド、遺伝子構築物、ベクター、または宿主細胞と、薬学的に許容可能な賦形剤またはビヒクルとを含む医薬調製物を提供する。
【０１９７】
本発明での使用に好ましい賦形剤は、糖類、デンプン、セルロース、ガム、およびタンパク質を含む。好ましい実施形態では、本発明の医薬組成物は、固体（例えば、錠剤、カプセル剤、トローチ剤、顆粒剤、坐剤、再構成により液体形態を呈することが可能な結晶性か非晶質性の滅菌固体など）、液体（例えば溶液、懸濁液、乳剤、エリキシル剤、ローション剤、軟膏（ｕｎｇｕｅｎｔｓ）など）、または半固体（ゲル、軟膏、クリームなど）として投与するための医薬形態で製剤される。本発明の医薬組成物は、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、髄腔内、脳室内、経皮、腹腔内、鼻腔内、腸管内、局所、舌下、または直腸経路を含むがこれらに限定されない任意の経路により投与することができる。活性原理の投与の異なる形態、使用される賦形剤、およびその製造手順についての改訂は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．），２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  ＰＡ，ＵＳＡ（２０００）に見出すことができる。薬学的に許容可能なビヒクルの例は当該技術分野で既知であり、リン酸塩で緩衝された生理食塩水、水、油／水乳剤などの乳剤、異なるタイプの加湿剤、滅菌溶液などが挙げられる。前記ビヒクルを含む組成物は、当該技術分野で既知の従来手順により製剤することができる。
【０１９８】
核酸（本発明のポリヌクレオチド、ベクター、または遺伝子構築物）を含む本発明の医薬組成物の場合、本発明は、前記核酸を投与するために特別に調製された医薬組成物を企図する。この医薬組成物は、裸の形態、要するに、生物のヌクレアーゼによる分解から核酸を保護する化合物がない状態で前記核酸を含むことができる。このことには、トランスフェクションに使用される試薬に関連する毒性を除去するという利点が伴う。裸の化合物に適切な投与経路として、血管内、腫瘍内、頭蓋内、腹腔内、脾内、筋肉内、網膜下、皮下、粘液、局所、および経口経路が挙げられる（Ｔｅｍｐｌｅｔｏｎ，２００２  ＤＮＡ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，２１：８５７−８６７）。あるいは前記核酸は、リポソームの形成部分として投与され、コレステロールに抱合され、または、ＨＩＶ−１のＴＡＴタンパク質由来のＴａｔペプチド、Ｄ．ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒのアンテナペディアタンパク質のホメオドメインの第３ヘリックス、単純ヘルペスウイルスのＶＰ２２タンパク質、アルギニンのオリゴマー、およびＷＯ０７０６９０９０記載されるものなどのペプチドといった、細胞膜を介した転座の促進を可能にする化合物に抱合されてもよい（Ｌｉｎｄｇｒｅｎ，ｅｔ  ａｌ．２０００  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ  ２１：９９−１０３；  Ｓｃｈｗａｒｚｅ，ｅｔ  ａｌ．２０００  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．２１：４５−４８；  Ｌｕｎｄｂｅｒｇ，ｅｔ  ａｌ．２００３  Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒａｐｙ  ８：１４３−１５０、およびＳｎｙｄｅｒ，ｅｔ  ａｌ．２００４  Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．２１：３８９−３９３）。あるいは、プラスミドベクターまたはウイルスベクター、好ましくは、アデノウイルスに基づくベクター、アデノ関連ウイルスもしくはレトロウイルスにおけるベクター、例えばマウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）もしくはレンチウイルス（ＨＩＶ、ＦＩＶ、ＥＩＡＶ）に基づくウイルスにおけるベクターの一部を形成するポリヌクレオチドを投与することができる。
【０１９９】
本発明の組成物は、体重１ｋｇ当たり１０ｍｇ未満、好ましくは体重１ｋｇ当たり５、２、１、０．５、０．１、０．０５、０．０１、０．００５、０．００１、０．０００５、０．０００１、０．００００５、または０．００００１ｍｇ未満、および２００ｎｍｏｌ未満の薬剤、すなわち体重１ｋｇ当たり約４．４×１０１６コピー、または体重１ｋｇ当たり１５００、７５０、３００、１５０、７５、１５、７．５、１．５、０．７５、０．１５、または０．０７５ｎｍｏｌの投与量で投与することができる。単一用量は、注射、吸入、または局所投与により投与することができる。本発明の二官能性ポリヌクレオチドおよび組成物は、器官に直接投与することができる。この器官内では、標的ｍＲＮＡが発現され、その場合、投与量は、器官当たり０．００００１ｍｇ〜３ｍｇ、好ましくは器官当たり０．０００１〜０．００１ｍｇ、器官当たり約０．０３〜３．０ｍｇ、器官当たり約０．１〜３．０ｍｇ、または器官当たり０．３〜３．０ｍｇで投与されることになる。
【０２００】
この投与量は、処置される状態の重症度とそれに対する反応に左右されるものであり、数日から数か月まで、または状態の寛解を確認するまで変動する場合がある。最適投与量は、患者の生体中の薬剤濃度を定期的に測定することにより決定することができる。この最適投与量は、動物モデルに対する以前のインビトロかインビボ検査により得たＥＣ５０値から決定することができる。単位投与量は、１日１回、または１日１回未満、好ましくは２、４、８、もしくは３０日ごとに１回未満で投与することができる。あるいは、最初に投与を１回行い、その後に、通常は最初の投与量よりも少ない量で１回以上の維持投与量を投与することができる。この維持管理体制は、１日に体重１ｋｇ当たり０．０１μｇ〜１．４ｍｇ、例えば１日に体重１ｋｇ当たり１、０．１、０．０１、０．００１、または０．００００１ｍｇ／ｋｇの投与量で患者を処置することを必要とする場合がある。維持投与量は、５日、１０日、または３０日ごとに多くとも１回投与されるのが好ましい。この処置は、患者が受ける変化の種類、その重症度、および患者の状態に応じて変化する時間にわたって継続しなければならない。処置後，疾患が処置に応答しない場合に投与量を増やすべきかどうか、または疾患あるいは望ましくない二次作用の改善を観察した場合に投与量を減らすべきかどうかを決定するために、患者の発展（ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ）を監視しなければならない。
【０２０１】
特定の状況に応じて、１回の投与、または２回以上の投与で一日投与量を投与することができる。反復投与または頻繁な投与が必要な場合、ポンプ、長期的カテーテル（静脈内、腹腔内、胸腔内、もしくは嚢内）、またはリザーバーなどの投与デバイスを移植することが推奨される。
【０２０２】
本発明の組成物は、静脈内、経口、経鼻、非経口、局所、経皮、直腸などを含むがこれらに限定されない当業者に既知の方法に従って投与される。
【０２０３】
以下の実施例は、本発明の実施を例示するものであり、あらゆる方法でそれを制限するものではないことを意味する。
【実施例】
【０２０４】
下記の実施例は、開示された発明に従って調製された化合物のある例示的な実施形態を説明する。以下の一般的な方法、および、当業者に既知の他の方法は、本明細書に開示される化合物およびそのサブクラスならびに種に適用可能であることが理解されよう。
【０２０５】
実施例１．７つのＩＬ１２−Ｆｃプロドラッグの設計
ＩＬ１２には、２つのサブユニットであるｐ３５およびｐ４０がある。ヒトＩｇＧ１のＦｃセグメント、ヒトＦｃ−ｋｎｏｂ、およびヒトＦｃ−ｈｏｌｅを使用して、対応するプロドラッグを構築した。プロドラッグ設計は、直列または並列にＩＬ１２の２つのサブユニットを結合する。特定の形態は以下の通りである：
【０２０６】
図１は、ホモ二量体ＩＬ１２−Ｆｃ（Ｈｏｍｏ  ＩＬ１２）の構造を示す概要であり、２つのサブユニットが直列に結合され、二量体の分子量は１７５のＫＤ（ＭＷ＝１７５ＫＤ）である。
【０２０７】
図２は、ヘテロ二量体ＩＬ１２−Ｆｃ（Ｈｅｔ  ＩＬ１２）の構造を示す概略図であり、２つのサブユニットが並列に結合される。二量体の分子量は１１５ＫＤ（ＭＷ＝１１５ＫＤ）であり、Ｐ３５シグナルペプチドおよびＰ４０シグナルペプチドを、Ｐ３５ならびにＰ４０のサブユニットのＮ末端にそれぞれ加えた。
【０２０８】
プロドラッグの形態は、ＩＬ１２がその受容体のいずれかに結合することを阻止するか、または両方の受容体（ＩＬ１２Ｒβ１とＩＬ１２Ｒβ２）に同時に結合することを阻止する。ＩＬ１２Ｒβ１のＮ末端で２つのフィブロネクチン型−ＩＩＩドメイン（Ｉ＋ＩＩ）で構成され、Ｒβ１と呼ばれるＩＬ１２Ｒβ１の細胞外ドメインの一部は、Ｐ４０のＮ末端に融合される。Ｒβ１は、Ｐ４０との内因性ＩＬ１２Ｒβ１相互作用を競合的に防ぐデコイとして機能する。Ｐ３５は、Ｒβ２と呼ばれる、ＩＬ１２Ｒβ２のＮ末端で２つのフィブロネクチン型−ＩＩＩドメイン（Ｉ＋ＩＩ）を使用して遮断され、それにより、内因性ＩＬ１２Ｒβ２とのＰ３５相互作用を防ぐ。
【０２０９】
ホモ二量体−ＩＬ１２のためのプロドラッグ構築物は図３に示される。
【０２１０】
図３は、ホモ二量体ＩＬ１２Ｒβ１（Ｈｏｍｏ−Ｒ１と呼ばれる）のプロドラッグ構造の概略図であり、二量体ＭＷ＝２３２ＫＤである。
【０２１１】
図４は、ホモ二量体ＩＬ１２Ｒβ２（Ｈｏｍｏ−Ｒ２と呼ばれる）のプロドラッグ構造の概略図であり、二量体ＭＷ＝２５０ＫＤである。
【０２１２】
図５は、ヘテロ二量体ＩＬ１２Ｒβ１／Ｒβ２（Ｈｅｔ−Ｒ１／Ｒ２と呼ばれる）のプロドラッグ構造の概略図であり、二量体ＭＷ＝１８２ＫＤである。
【０２１３】
図６は、ヘテロ二量体ＩＬ１２Ｒβ１（Ｈｅｔ−Ｒ１と呼ばれる）のプロドラッグ構造の概略図であり、二量体ＭＷ＝１４４ＫＤであり、この二量体中のＰ３５−Ｆｃ−ｈｏｌｅ単量体の融合セグメントＰ３５のＣ末端に、Ｐ３５シグナルペプチドを加えた。
【０２１４】
図７は、ヘテロ二量体ＩＬ１２Ｒβ２（Ｈｅｔ−Ｒ２と呼ばれる）のプロドラッグ構造の概略図であり、二量体ＭＷ＝１５３ＫＤであり、この二量体中のＰ４０−Ｆｃ−ｋｎｏｂ単量体の融合セグメントＰ４０のＣ末端に、Ｐ４０シグナルペプチドを加えた。
【０２１５】
実施例２．ＩＬ１２プロドラッグの構造、精製、および産生
実施例１に記載される７つのタンパク質を発現させ、産生した。初めに、発現ベクターｐＥＥ１２．４上に構築された各融合タンパク質の組換えＤＮＡを、２９３ＦまたはＣＨＯ細胞にトランスフェクトした。宿主細胞を培養し、細胞上清を集めた。その後、プロテインＡ／Ｇの親和性クロマトグラフィーカラムによって、上清からタンパク質を精製した。
【０２１６】
ホモ二量体タンパク質の発現のために、構築された発現ベクタープラスミドを２９３またはＣＨＯ細胞宿主に移した。細胞のプラスミド発現産物は、自発的にホモ二量体タンパク質を形成することができる。ヘテロ二量体タンパク質の発現のためには、同じモル比を有する２つの発現ベクタープラスミドでトランスフェクトすることが必要であり、細胞中で発現された単量体も、ヘテロ二量体を自発的に形成することができる。
【０２１７】
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動の結果を図８Ａと図８Ｂに示す。
【０２１８】
ベクターの構築、宿主細胞のトランスフェクション、および発現の誘導に使用された手順を、以下に説明する。
【０２１９】
様々な融合タンパク質の発現プラスミドをＰＥＥ１２．４のベクター上で構築し、２９３ＦまたはＣＨＯ細胞にトランスフェクトした。培養液上清中で発現されたタンパク質を、プロテインＡ親和性クロマトグラフィーカラムによって精製した。
【０２２０】
発現ベクターを以下のように構築した：
（１）ＰＥＥ１２．４−ＨｉｎｄＩＩＩ−ｐ４０（シグナル）−ＮｒｕＩ−ｐ３５（シグナルなし）−ＢｓｉＷＩ−ｈＩｇＧ１−ＥｃｏＲＩ
（２）ＰＥＥ１２．４−ＨｉｎｄＩＩＩ−Ｐ３５（シグナル）−ＢｓｉＷＩ−Ｆｃｈ−ＥｃｏＲＩ
（３）ＰＥＥ１２．４−ＨｉｎｄＩＩＩ−Ｐ４０（シグナル）−ＮｒｕＩ−Ｆｃｋ−ＥｃｏＲＩ
（４）ＰＥＥ１２．４−ＨｉｎｄＩＩＩ−ＩＬ１２Ｒｂ１  −ＢｓｉＷＩ−ｐ４０（シグナルなし）−ＮｒｕＩ−ｐ３５（シグナルなし）−ＢｓｉＷＩ−ｈＩｇＧ１−ＥｃｏＲＩ
（５）ＰＥＥ１２．４−ＨｉｎｄＩＩＩ−  ＩＬ１２Ｒｂ２−ＢｓｉＷＩ−ｐ４０（シグナルなし）−ＮｒｕＩ−ｐ３５（シグナルなし）−ＢｓｉＷＩ−ｈＩｇＧ１−ＥｃｏＲＩ
（６）ＰＥＥ１２．４−ＨｉｎｄＩＩＩ−ＩＬ１２Ｒｂ１−ＢｓｉＷＩ−ｐ４０（シグナルなし）−ＮｒｕＩ−Ｆｃｋ−ＥｃｏＲＩ
（７）ＰＥＥ１２．４−ＨｉｎｄＩＩＩ−ＩＬ１２Ｒｂ２−ＢｓｔＢＩ−ｐ３５（シグナルなし）−ＢｓｉＷＩ−Ｆｃｈ−ＥｃｏＲＩ。
【０２２１】
ＨｉｎｄＩＩＩ、ＮｒｕＩ、ＢｓｉＷＩ、およびＥｃｏＲＩは酵素切断部位である。
【０２２２】
各融合タンパク質セグメント間の結合配列は以下のとおりである：
（１）Ｈｏｍｏ  ＩＬ１２：Ｐ４０とＰ３５との間のリンカーＬ１、Ｐ３５とＦｃとの間のリンカーＬ１。
（２）Ｈｅｔ  ＩＬ１２：Ｐ４０とＦｃとの間のリンカーＬ１、Ｐ３５とＦｃとの間のリンカーＬ１。
（３）Ｒβ１とＰ４０との間のリンカーＬ２；プロテアーゼの対応する標的配列はＳＧＲＳＥＮＩＲＴＡである。
（４）Ｒβ２とＰ４０との間のリンカーＬ２；対応するプロテアーゼの標的配列はＳＧＲＳＥＮＩＲＴＡである。
（５）Ｒβ２とＰ３５との間のリンカーＬ２；プロテアーゼの対応する標的配列はＳＧＲＳＥＮＩＲＴＡである。
【０２２３】
トランスフェクションは安定的に、または一過性に行うことができ、一過性トランスフェクションのプロトコルは以下のとおりである：
（１）細胞の蘇生：自由型２９３Ｆ細胞を、３×１０７細胞／ｍＬの濃度で、ＣＤ  ＯｐｔｉＣＨＯ（商標）培地（１０％のＤＭＳＯを含有する）中で凍結保存した。液体窒素から取り出した後に、それを３７°Ｃの水浴に迅速に溶解させ、１０ｍＬのＯｐｔｉＣＨＯ（商標）培地を含有している１５ｍＬの遠心分離管に添加し、１，０００ｒｐｍで５分間遠心分離機にかけた。上清を廃棄し、細胞ペレットを懸濁し、３０ｍｌのＯｐｔｉＣＨＯ（商標）培地において、３７°Ｃ、８％のＣＯ２、１３５ｒｐｍで培養した。４日後に、細胞を増やして培養し、増やした時の濃度は３×１０６細胞／ｍＬ以下であった。
（２）トランスフェクションの２日前に、懸濁培養のために調製された２９３Ｆ細胞を使用して、０．６−０．８ｘ１０６細胞／ｍＬの播種密度で、一過性トランスフェクション（２００ｍｌ）を行った。
（３）２日後に、トランスフェクトされた細胞懸濁液を計数し（２．５−３．５×１０６細胞／ｍＬと予想される細胞密度）、細胞懸濁液を１，０００ｒｐｍで５分間遠心分離機にかけ、上清を廃棄した。
（４）細胞を５０ｍＬの新しい自由型２９３培地において再撹拌し、１，０００ｒｐｍで５分間再び遠心分離機にかけ、上清を廃棄した。
（５）２９３Ｆ細胞を２００ｍＬの自由型２９３培地で再撹拌した。
（６）６００μｇのプラスミドを５ｍＬの自由型２９３培地で希釈し、０．２２μＭフィルターを使用した濾過によって滅菌した。
（７）１．８ｍｇのＰＥＩを、５ｍＬの自由型２９３培地で希釈し、０．２２μＭのフィルターを使用した濾過によって滅菌した。直ちに、５ｍＬのプラスミドおよび５ｍＬのＰＥＩを混合し、室温で５分間静置した。
（８）プラスミド／ＰＥＩ混合物を細胞懸濁液に添加し、３７°Ｃ、８％のＣＯ２、８５ｒｐｍのインキュベーターに入れ、５０μｇ／ＬのＬＯＮＧ（商標）Ｒ３  ＩＧＦ−１の成長因子で補足した。
（９）４時間後、２００ｍｌのＥＸ−ＣＥＬＬ（商標）２９３培地および２ｍＭのグルタミンを添加し、速度を１３５ｒｐｍに調節して培養を続けた。
（１０）２４時間後、細胞増殖阻害剤３．８ｍＭのＶＰＡを添加した。上清をトランスフェクション後４〜８日の間に集めた（最適なタンパク質の品質のため、集めた時に細胞生存率が７０％を超えていることを確認する）。
【０２２４】
融合タンパク質の採取、精製、および電気泳動の検証：
（１）サンプル調製：懸濁細胞培養溶液を５００ｍＬの遠心分離バレルに移し、８，０００ｒｐｍで２０分間遠心分離機にかけた。上清を廃棄し、０．４５μＭフィルターを使用して不純物を除去した。精製工程中の細菌増殖を防ぐために、０．０５％のＮａＮ３を添加した。
（２）カラムアセンブリ：適切な量のプロテインＡアガロースをカラムに添加し（１ｍＬのプロテインＡ当たり２０ｍｇのヒトＦｃ融合タンパク質）、２０％のエタノール溶液で、室温で約１０分間インキュベートした。カラムの出口を開けて、エタノール溶液を重力によりゆっくり放出した。
（３）上記カラムを洗浄し、１０のカラム容量の蒸留水および結合緩衝液（２０ｍＭのリン酸ナトリウム＋０．１５ＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．０）をそれぞれ平衡化した。
（４）サンプルを、１時間当たり１０のカラム容量の流量で、カラムを通して絶えずポンプで送り込んだ。
（５）カラムを結合緩衝液の１０倍のカラム容量で洗浄し、流出液中にタンパク質が検出されなくなるまですすいだ。
（６）溶出緩衝液（０．１Ｍのグリシン、ｐＨ２．７）を溶出に使用し、１ｍＬを一単位として溶出液を集めた。適切な量の１ＭのＴｒｉｓ（ｐＨ９．０）を添加して中和した（ｐＨを６−８に調節し、精製されたタンパク質の等電点は０．５以上であるべきである）。
（７）Ｚｅｂａ脱塩回転カラムあるいは濃縮回転カラムを使用して、標的タンパク質溶液を所望の緩衝液と取り替えた（タンパク質の等電点を回避するために、緩衝液のｐＨを調節する）。基準としてＢＳＡを使用して、タンパク濃度を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動（１つのサンプル当たり２．５μｇのタンパク質負荷）およびＮａｎｏＤｒｏｐ２０００によって決定した。
【０２２５】
溶出後、カラムを２０のカラム容量の蒸留水で連続的に洗浄し、その後、そのカラムを１０のカラム容量の２０％のエタノールで洗浄した。最後に、エタノール溶液をゲル培地に浸し（ｉｍｍｅｒｓｅｄ）、４°Ｃで保存した。
【０２２６】
実施例３．融合タンパク質のインビボの抗腫瘍活性
ＩＬ１２−Ｆｃの全身注射がＭＣ３８腫瘍を完全に排除し、Ｈｅｔ  ＩＬ１２はＨｏｍｏ  ＩＬ１２よりも有力である。
ＩＬ１２−Ｆｃが、全身投与の間に腫瘍を効果的に除去することができるか否かを決定するために、および、ＩＬ１２−Ｆｃの両方の形態の治療効果を比較するために、ＭＣ３８マウスモデルをマウスに使用し、コホートを全身投与によって様々な投与で処置した。試験の結果を図９に示す。
【０２２７】
図９のＡ：０日目に、ＷＴ  Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝５／群）に、５×１０５のＭＣ３８細胞を皮下接種した。１３、１６、および２０日目に、ＰＢＳ、０．５μｇ、１μｇ、５μｇ、１０μｇのＨｏｍｏ  ＩＬ１２の腹腔内注入によって、癌を有するマウスの腫瘍体積を記録した。
【０２２８】
図９のＢ：０日目に、ＷＴ  Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝５／群）に、５×１０５のＭＣ３８細胞を皮下接種した。１３、１６、および２０日目に、ＰＢＳ、０．５μｇ、１μｇ、５μｇ、１０μｇのＨｏｍｏ  ＩＬ１２の腹腔内注入によって、癌を有するマウスの腫瘍体積を記録した。
【０２２９】
これらの結果は、ＩＬ１２−Ｆｃが腫瘍を除去するのに効果的であり、Ｈｅｔ  ＩＬ１２がＨｏｍｏ  ＩＬ１２より有力であることを示す。ＩＬ１２−Ｆｃの全身的な使用は深刻な副作用を引き起こし、Ｈｅｔ  ＩＬ１２はＨｏｍｏ  ＩＬ１２よりも毒性がある。
【０２３０】
ＩＬ１２受容体がＴ、Ｂ、およびＮＫ細胞中に広く存在するため、ＩＬ１２の使用には、しばしば強力な毒性の副作用が伴う。臨床的に、患者は、主として、様々な血液疾患および肝臓毒性によって特徴付けられる。マウス血清中の様々な炎症性サイトカインを、ＩＬ１２−Ｆｃによって引き起こされた毒性の主要な指標として実験的に測定した。
【０２３１】
０日目に、５ｘ１０５のＭＣ３８細胞をＷＴ  Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝５／群）に皮下接種した；１３、１６、および２０日目にＰＢＳ、５μｇのＨｏｍｏ  ＩＬ１２またはＨｅｔ  ＩＬ１２の腹腔内注入を行った。２０日目の投与の６時間後、血液を眼の血管から集めて、血清中の炎症性因子ＩＬ１２ｐ７０、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ、ＭＣＰ−１、ＩＬ−１０、およびＩＬ−６のレベルを検出した。
【０２３２】
その結果、図１０に示されるように、Ｈｏｍｏ  ＩＬ１２およびＨｅｔ  ＩＬ１２の両方は、強力な細胞毒性を引き起こし、Ｈｅｔ  ＩＬ１２はＨｏｍｏ  ＩＬ１２より細胞毒性があった。Ｈｅｔ  ＩＬ１２受容体プロドラッグは、ＭＣ３８腫瘍を効果的に除去する。
【０２３３】
腫瘍微小環境中のＩＬ１２のデコイの力を弱めるために、ＩＬ１２プロドラッグを、特定のタンパク質分解酵素に感受性のある基質配列を使用して、ＩＬ１２デコイ受容体を結合することによって構築した。基質を切断することができるタンパク質分解酵素は、正常組織と比較して、特定の腫瘍型でより高度に発現され、したがって、腫瘍部位で活性なＩＬ１２の局在化が増大する一方、ＩＬ１２の全身毒性は減少する。インビボでの実験では、５μｇ／マウス未満の量が使用される場合、Ｈｅｔ  ＩＬ１２は、Ｈｏｍｏ  ＩＬ１２と比べてＭＣ３８腫瘍に対してより強力な抗腫瘍効果をもたらし、より毒性でもあった。インビボでのＩＬ１２治療の毒性を減少させる手段としてのプロドラッグの概念を試験するために、Ｈｅｔ  ＩＬ１２（実施例１に記載される）を、いくつかの構成（例えば、Ｈｅｔ−Ｒ１、Ｈｅｔ−Ｒ２、Ｈｅｔ−Ｒ１／Ｒ２）中のデコイＩＬ１２受容体に結合させた。デコイＩＬ１２受容体（例えば、Ｈｏｍｏ−Ｒ１、Ｈｏｍｏ−Ｒ２）に結合されたＨｏｍｏ  ＩＬ１２も試験した。
【０２３４】
図１１のＡ：０日目に５ｘ１０５のＭＣ３８細胞をＷＴ  Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝５／群）の皮下に接種し、および１０、１３、ならびに１６日目に、５μｇのＨｅｔ  ＩＬ１２、Ｈｅｔ−Ｒ１、Ｈｅｔ−Ｒ２、またはＨｅｔ−Ｒ１／Ｒ２を、ＷＴ  Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝５／群）の皮下に接種し、対照群をＰＢＳで処置した。
【０２３５】
図１１のＢ：０日目に、５ｘ１０５のＭＣ３８細胞を、ＷＴ  Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝５／群）の皮下に接種した。１０、１３、および１６日目に、２．５μｇのＨｅｔ  ＩＬ１２、Ｈｅｔ−Ｒ１、Ｈｅｔ−Ｒ２、あるいはＨｅｔ−Ｒ１／Ｒ２を腹腔内注入し、対照群をＰＢＳで処置した。
【０２３６】
結果は、Ｈｅｔ  ＩＬ１２のプロドラッグの３つの形態が腫瘍を除去するのに効果的であったことを示した。５μｇ／マウスの用量では、Ｈｅｔ  ＩＬ１２プロドラッグの３つの形態は、Ｈｏｍｏ  ＩＬ１２と比べて、ＭＣ３８に対してより良い抗腫瘍効果があり、上記用量を２．５μｇ／マウスに減らした場合でも、Ｈｅｔ  ＩＬ１２プロドラッグ（Ｈｅｔ  Ｒ１、Ｈｅｔ  Ｒ２、あるいはＨｅｔ  Ｒ１／Ｒ２）は、依然として有効に腫瘍を制御することができる。ＩＬ１２受容体に結合されたＨｅｔ  ＩＬ１２プロドラッグは、全身投与された場合、より少ない副作用を有していた。
【０２３７】
マウスの体重変化を、異なる薬物／プロドラッグの全身投与後に記録し、および、血清中の炎症性サイトカインの発現レベルをマウスの眼の血管から採取した。
【０２３８】
図１２Ａ：０日目に５ｘ１０５のＭＣ３８細胞を、および１０、１３、ならびに１６日目に５μｇのＨｅｔ  ＩＬ１２、Ｈｅｔ−Ｒ１、Ｈｅｔ−Ｒ２、またはＨｅｔ−Ｒ１／Ｒ２を、ＷＴ  Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝５／群）の皮下に接種し、対照群をＰＢＳで処置した。マウスの重量を処置中に測定した。
【０２３９】
図１２Ｂ−Ｇ：処置中に、マウスの眼の血管から血液を得た。炎症性サイトカインであるＩＬ１２ｐ７０、ＴＮＦ、ＩＦＮ−γ、ＭＣＰ−１、ＩＬ−１０、およびＩＬ−６の血清レベルを測定した。
【０２４０】
その結果は、ＩＬ１２受容体プロドラッグ（Ｈｅｔ−Ｒ１、Ｈｅｔ−Ｒ２）に結合されたＨｅｔ  ＩＬ１２が、２．５μｇ／マウスの用量でＩＬ１２受容体に結合されていないＨｅｔ  ＩＬ１２と比べて、より少ない毒性の副作用を有することを示し、Ｈｅｔ−Ｒ２は、他のタイプのプロドラッグより毒性が少なかった。
【０２４１】
まとめると、マウスＭＣ３８モデルでは、ＩＬ１２受容体に結合されたＩＬ１２−Ｆｃのプロドラッグは、抗腫瘍効果を維持し、ＩＬ１２−Ｆｃの安全性を高める。ＩＬ１２受容体に結合された低用量（２．５μｇ）のＨｅｔ  ＩＬ１２プロドラッグは、１３０−１５０ｍｍ３の腫瘍体積を有するＭＣ３８腫瘍を完全に除去し、腫瘍は再発しなかった。ＩＬ１２受容体に結合されなかったＩＬ１２−Ｆｃの同じ用量と比較して、前者（ＩＬ１２受容体に結合したＨｅｔ  ＩＬ１２−Ｆｃプロドラッグ）は、全身注射の間により少ない毒性を生成し、このことは、体重減少の有意な低減、および血液中のより低い炎症性サイトカインレベルに反映された。Ｈｅｔ−Ｒ２は、とりわけ、最も安全な構築物であった。
【０２４２】
本明細書に開示される様々なＩＬ１５融合タンパク質およびプロドラッグの類似したヒトバージョンも、インビトロで産生し試験した。ヒトタンパク質の産生は、上に記載された同じクローニング、トランスフェクション、および精製プロトコルに従った。
【０２４３】
ＭＭＰ１４を用いて、あるいはＭＭＰ１４なしで、３７°Ｃで２４時間インキュベートされた、精製されたヒト融合タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動の結果を図１３に示す。
【０２４４】
ヒトＨｅｔ−Ｒ１およびＨｅｔ−Ｒ１／Ｒ２の機能を、ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ＩＬ１２レポーター細胞株アッセイ（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）を使用して測定した。ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ＩＬ−１２細胞を、ＳＴＡＴ４誘導性ＳＥＡＰレポーター遺伝子を発現させることによって、生理活性のヒトＩＬ−１２を検出するように設計した。ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ＩＬ−１２細胞の表面上でＩＬ−１２がＩＬ−１２Ｒに結合することにより、シグナル伝達カスケードを引き起こし、ＳＥＡＰのその後の産生を伴うＳＴＡＴ−４の活性化をもたらす。ＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅ（商標）を使用して、ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ＩＬ−１２細胞活性化を測定し、細胞上清中のＳＥＡＰを検出した。
【０２４５】
以下のＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ＩＬ−１２細胞レポーター細胞株アッセイを使用した：
（１）ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ＩＬ−１２細胞をＰＢＳにおいて優しくすすぎ、あらかじめ温められた新しい試験液（ＤＭＥＭ、４．５ｇ／ｌのグルコース、２ｍＭのＬ−グルタミン、１０％（ｖ／ｖ）の熱失活したＰＢＳ（３０分、５６°Ｃ、〜１ｘ１０６細胞／ｍｌ））において懸濁した。
（２）サンプルを平底９６ウェルプレート中で段階希釈し、１つのウェル当たり５０μｌの細胞懸濁液（〜５０，０００細胞）を有するＣＯ２インキュベーターにおいて、３７°Ｃで２０−２４時間インキュベートした。
（３）１００μＬの再撹拌されたＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅ（商標）溶液を有する平底９６ウェルプレートの１つのウェル当たり２０μＬの誘導されたＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ＩＬ−１２細胞上清を、３７°Ｃのインキュベーターにおいて１５分〜１時間インキュベートする。
（４）６５０ｎｍで分光光度計を使用して、ＳＥＡＰレベルを決定する。
【０２４６】
結果：図１４のＡは、ＭＭＰ１４消化後のＨｅｔ−Ｒ１のプロドラッグのＩＬ１２活性が、Ｈｅｔ  ＩＬ１２に匹敵するか、またはＨｅｔ  ＩＬ１２よりも大きいことを示す。これに対して、ＭＭＰ１４消化がないＨｅｔ−Ｒ１はそれほど活性ではなく、このことは、プロドラッグの遮断メカニズムが予想通りに機能することを示している。図１４のＢは、ＭＭＰ１４消化後のＨｅｔ−Ｒ１／Ｒ２プロドラッグの活性化が、Ｈｅｔ  ＩＬ１２および組換えＩＬ１２に匹敵することを示す。これに対して、ＭＭＰ１４消化がないＨｅｔ−Ｒ１／Ｒ２はそれほど活性ではなく、このことは、プロドラッグ遮断メカニズムが予想通りに機能することを示している。
＜ＳＥＱリスト＞
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１：マウスＰ４０サブユニット（シグナルペプチドなし）
ＭＷＥＬＥＫＤＶＹＶ  ＶＥＶＤＷＴＰＤＡＰ  ＧＥＴＶＮＬＴＣＤＴ  ＰＥＥＤＤＩＴＷＴＳ  ＤＱＲＨＧＶＩＧＳＧ  ＫＴＬＴＩＴＶＫＥＦ  
ＬＤＡＧＱＹＴＣＨＫ  ＧＧＥＴＬＳＨＳＨＬ  ＬＬＨＫＫＥＮＧＩＷ  ＳＴＥＩＬＫＮＦＫＮ  ＫＴＦＬＫＣＥＡＰＮ  ＹＳＧＲＦＴＣＳＷＬ  
ＶＱＲＮＭＤＬＫＦＮ  ＩＫＳＳＳＳＳＰＤＳ  ＲＡＶＴＣＧＭＡＳＬ  ＳＡＥＫＶＴＬＤＱＲ  ＤＹＥＫＹＳＶＳＣＱ  ＥＤＶＴＣＰＴＡＥＥ  
ＴＬＰＩＥＬＡＬＥＡ  ＲＱＱＮＫＹＥＮＹＳ  ＴＳＦＦＩＲＤＩＩＫ  ＰＤＰＰＫＮＬＱＭＫ  ＰＬＫＮＳＱＶＥＶＳ  ＷＥＹＰＤＳＷＳＴＰ  
ＨＳＹＦＳＬＫＦＦＶ  ＲＩＱＲＫＫＥＫＭＫ  ＥＴＥＥＧＣＮＱＫＧ  ＡＦＬＶＥＫＴＳＴＥ  ＶＱＣＫＧＧＮＶＣＶ  ＱＡＱＤＲＹＹＮＳＳ  
ＣＳＫＷＡＣＶＰＣＲ  ＶＲＳ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２：ヒトＰ４０サブユニット（シグナルペプチドなし）    
ＷＥＬＫＫＤＶＹＶＶＥＬＤＷＹＰＤＡＰＧＥＭＶＶＬＴＣＤＴＰＥＥＤＧＩＴＷＴＬＤＱＳＳＥＶＬＧＳＧＫＴＬＴＩＱＶＫＥＦＧＤＡＧＱＹＴＣＨＫＧＧＥＶＬＳＨＳＬＬＬＬＨＫＫＥＤＧＩＷＳＴＤＩＬＫＤＱＫＥＰＫＮＫＴＦＬＲＣＥＡＫＮＹＳＧＲＦＴＣＷＷＬＴＴＩＳＴＤＬＴＦＳＶＫＳＳＲＧＳＳＤＰＱＧＶＴＣＧＡＡＴＬＳＡＥＲＶＲＧＤＮＫＥＹＥＹＳＶＥＣＱＥＤＳＡＣＰＡＡＥＥＳＬＰＩＥＶＭＶＤＡＶＨＫＬＫＹＥＮＹＴＳＳＦＦＩＲＤＩＩＫＰＤＰＰＫＮＬＱＬＫＰＬＫＮＳＲＱＶＥＶＳＷＥＹＰＤＴＷＳＴＰＨＳＹＦＳＬＴＦＣＶＱＶＱＧＫＳＫＲＥＫＫＤＲＶＦＴＤＫＴＳＡＴＶＩＣＲＫＮＡＳＩＳＶＲＡＱＤＲＹＹＳＳＳＷＳＥＷＡＳＶＰＣＳ
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３：マウスＰ３５サブユニット（シグナルペプチドなし）
ＲＶＩＰＶＳＧＰＡＲ  ＣＬＳＱＳＲＮＬＬＫ  ＴＴＤＤＭＶＫＴＡＲ  ＥＫＬＫＨＹＳＣＴＡ  ＥＤＩＤＨＥＤＩＴＲ  ＤＱＴＳＴＬＫＴＣＬ  
ＰＬＥＬＨＫＮＥＳＣ  ＬＡＴＲＥＴＳＳＴＴ  ＲＧＳＣＬＰＰＱＫＴ  ＳＬＭＭＴＬＣＬＧＳ  ＩＹＥＤＬＫＭＹＱＴ  ＥＦＱＡＩＮＡＡＬＱ  
ＮＨＮＨＱＱＩＩＬＤ  ＫＧＭＬＶＡＩＤＥＬ  ＭＱＳＬＮＨＮＧＥＴ  ＬＲＱＫＰＰＶＧＥＡ  ＤＰＹＲＶＫＭＫＬＣ  ＩＬＬＨＡＦＳＴＲＶ  
ＶＴＩＮＲＶＭＧＹＬ  ＳＳＡ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４：ヒトＰ３５サブユニット（シグナルペプチドなし）  
ＲＮＬＰＶＡＴＰＤＰＧＭＦＰＣＬＨＨＳＱＮＬＬＲＡＶＳＮＭＬＱＫＡＲＱＴＬＥＦＹＰＣＴＳＥＥＩＤＨＥＤＩＴＫＤＫＴＳＴＶＥＡＣＬＰＬＥＬＴＫＮＥＳＣＬＮＳＲＥＴＳＦＩＴＮＧＳＣＬＡＳＲＫＴＳＦＭＭＡＬＣＬＳＳＩＹＥＤＬＫＭＹＱＶＥＦＫＴＭＮＡＫＬＬＭＤＰＫＲＱＩＦＬＤＱＮＭＬＡＶＩＤＥＬＭＱＡＬＮＦＮＳＥＴＶＰＱＫＳＳＬＥＥＰＤＦＹＫＴＫＩＫＬＣＩＬＬＨＡＦＲＩＲＡＶＴＩＤＲＶＭＳＹＬＮＡＳ
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．５：ヒトＦｃ−ｈｏｌｅ
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ  ＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶ  ＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴ  ＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴ  ＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤ  ＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤ  
ＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫ  ＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹ  ＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨ  ＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫ  ＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡ  ＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫ  
ＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴ  ＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫ  ＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫ  ＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥ  ＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮ  ＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳ  
ＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬ  ＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧ  ＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥ  ＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳ  ＬＳＬＳＰＧＫ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．６：ヒトＦｃ−ｋｎｏｂ
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ  ＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶ  ＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴ  ＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴ  ＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤ  ＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤ  
ＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫ  ＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹ  ＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨ  ＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫ  ＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡ  ＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫ  
ＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴ  ＬＰＰＣＲＤＥＬＴＫ  ＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫ  ＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥ  ＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮ  ＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳ  
ＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬ  ＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧ  ＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥ  ＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳ  ＬＳＬＳＰＧＫ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．７：ＩｇＧ１のヒトＦｃ  
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ  ＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶ  ＦＬＦＰＰＫＰＫＤＱ  ＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴ  ＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤ  ＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤ  
ＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫ  ＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹ  ＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨ  ＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫ  ＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡ  ＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫ  
ＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴ  ＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫ  ＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫ  ＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥ  ＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮ  ＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳ  
ＤＧＳＦＬＹＳＫＬＴ  ＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮ  ＶＦＳＣＳＶＬＨＥＡ  ＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬ  ＳＬＳＰＧＫ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．８：マウスＲβ１
ＭＤＭＭＧＬＡＧＴＳ  ＫＨＩＴＦＬＬＬＣＱ  ＬＧＡＳＧＰＧＤＧＣ  ＣＶＥＫＴＳＦＰＥＧ  ＡＳＧＳＰＬＧＰＲＮ  ＬＳＣＹＲＶＳＫＴＤ  
ＹＥＣＳＷＱＹＤＧＰ  ＥＤＮＶＳＨＶＬＷＣ  ＣＦＶＰＰＮＨＴＨＴ  ＧＱＥＲＣＲＹＦＳＳ  ＧＰＤＲＴＶＱＦＷＥ  ＱＤＧＩＰＶＬＳＫＶ  
ＮＦＷＶＥＳＲＬＧＮ  ＲＴＭＫＳＱＫＩＳＱ  ＹＬＹＮＷＴＫＴＴＰ  ＰＬＧＨＩＫＶＳＱＳ  ＨＲＱＬＲＭＤＷＮＶ  ＳＥＥＡＧＡＥＶＱＦ  
ＲＲＲＭＰＴＴＮＷＴ  ＬＧＤＣＧＰＱＶＮＳ  ＧＳＧＶＬＧＤＩＲＧ  ＳＭＳＥＳＣＬＣＰＳ  ＥＮＭＡＱＥＩＱＩＲ  ＲＲＲＲＬＳＳＧＡＰ  
ＧＧＰＷＳＤＷＳＭＰ  ＶＣＶＰＰＥＶＬＰ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．９：ヒトＲβ１            
ＭＥＰＬＶＴＷＶＶＰＬＬＦＬＦＬＬＳＲＱＧＡＡＣＲＴＳＥＣＣＦＱＤＰＰＹＰＤＡＤＳＧＳＡＳＧＰＲＤＬＲＣＹＲＩＳＳＤＲＹＥＣＳＷＱＹＥＧＰＴＡＧＶＳＨＦＬＲＣＣＬＳＳＧＲＣＣＹＦＡＡＧＳＡＴＲＬＱＦＳＤＱＡＧＶＳＶＬＹＴＶＴＬＷＶＥＳＷＡＲＮＱＴＥＫＳＰＥＶＴＬＱＬＹＮＳＶＫＹＥＰＰＬＧＤＩＫＶＳＫＬＡＧＱＬＲＭＥＷＥＴＰＤＮＱＶＧＡＥＶＱＦＲＨＲＴＰＳＳＰＷＫＬＧＤＣＧＰＱＤＤＤＴＥＳＣＬＣＰＬＥＭＮＶＡＱＥＦＱＬＲＲＲＲＬＧＳＱＧＳＳＷＳＫＷＳＳＰＶＣＶＰＰＥＮ    
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１０：マウスＲβ２
ＭＡＱＴＶＲＥＣＳＬ  ＡＬＬＦＬＦＭＷＬＬ  ＩＫＡＮＩＤＶＣＫＬ  ＧＴＶＴＶＱＰＡＰＶ  ＩＰＬＧＳＡＡＮＩＳ  ＣＳＬＮＰＫＱＧＣＳ  
ＨＹＰＳＳＮＥＬＩＬ  ＬＫＦＶＮＤＶＬＶＥ  ＮＬＨＧＫＫＶＨＤＨ  ＴＧＨＳＳＴＦＱＶＴ  ＮＬＳＬＧＭＴＬＦＶ  ＣＫＬＮＣＳＮＳＱＫ  
ＫＰＰＶＰＶＣＧＶＥ  ＩＳＶＧＶＡＰＥＰＰ  ＱＮＩＳＣＶＱＥＧＥ  ＮＧＴＶＡＣＳＷＮＳ  ＧＫＶＴＹＬＫＴＮＹ  ＴＬＱＬＳＧＰＮＮＬ  
ＴＣＱＫＱＣＦＳＤＮ  ＲＱＮＣＮＲＬＤＬＧ  ＩＮＬＳＰＤＬＡＥＳ  ＲＦＩＶＲＶＴＡＩＮ  ＤＬＧＮＳＳＳＬＰＨ  ＴＦＴＦＬＤＩＶＩＰ  
ＬＰＰＷＤＩＲＩＮＦ  ＬＮＡＳＧＳＲＧＴＬ  ＱＷＥＤＥＧＱＶＶＬ  ＮＱＬＲＹＱＰＬＮＳ  ＴＳＷＮＭＶＮＡＴＮ  ＡＫＧＫＹＤＬＲＤＬ  
ＲＰＦＴＥＹＥＦＱＩ  ＳＳＫＬＨＬＳＧＧＳ  ＷＳＮＷＳＥＳＬＲＴ  ＲＴＰＥＥＥＰ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１１：ヒトＲβ２  
ＭＡＨＴＦＲＧＣＳＬＡＦＭＦＩＩＴＷＬＬＩＫＡＫＩＤＡＣＫＲＧＤＶＴＶＫＰＳＨＶＩＬＬＧＳＴＶＮＩＴＣＳＬＫＰＲＱＧＣＦＨＹＳＲＲＮＫＬＩＬＹＫＦＤＲＲＩＮＦＨＨＧＨＳＬＮＳＱＶＴＧＬＰＬＧＴＴＬＦＶＣＫＬＡＣＩＮＳＤＥＩＱＩＣＧＡＥＩＦＶＧＶＡＰＥＱＰＱＮＬＳＣＩＱＫＧＥＱＧＴＶＡＣＴＷＥＲＧＲＤＴＨＬＹＴＥＹＴＬＱＬＳＧＰＫＮＬＴＷＱＫＱＣＫＤＩＹＣＤＹＬＤＦＧＩＮＬＴＰＥＳＰＥＳＮＦＴＡＫＶＴＡＶＮＳＬＧＳＳＳＳＬＰＳＴＦＴＦＬＤＩＶＲＰＬＰＰＷＤＩＲＩＫＦＱＫＡＳＶＳＲＣＴＬＹＷＲＤＥＧＬＶＬＬＮＲＬＲＹＲＰＳＮＳＲＬＷＮＭＶＮＶＴＫＡＫＧＲＨＤＬＬＤＬＫＰＦＴＥＹＥＦＱＩＳＳＫＬＨＬＹＫＧＳＷＳＤＷＳＥＳＬＲＡＱＴＰＥＥＥＰ
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１２：リンカーセグメントＬ１
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１３：リンカーセグメントＬ２（ＭＭＰ１４）    
ＧＧＧＧＳＳＧＡＲＹＲＷＬＴＡＧＧＧＧＳ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１４：リンカーセグメントＬ２
ＧＧＧＧＳＳＧＲＳＥＮＩＲＴＡＧＧＧＧＳ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１５：リンカーセグメントＬ２（ＭＭＰ１４）
ＧＧＧＧＳＳＧＲＡＭＨＭＹＴＡＧＧＧＧＳ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１６：リンカーセグメントＬ２（ＭＭＰ１４）
ＧＧＧＧＳＳＧＡＡＭＨＭＹＴＡＧＧＧＧＳ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１７：リンカーセグメントＬ２（ＭＭＰ１４）
ＧＧＧＧＳＳＧＡＩＧＦＬＲＴＡＧＧＧＧＳ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１８：リンカーセグメントＬ２（ＭＭＰ１４）
ＧＧＧＧＳＳＧＡＳＥＮＩＲＴＡＧＧＧＧＳ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１９：リンカーセグメントＬ２（ＭＭＰ１４）
ＧＧＧＧＳＳＧＲＰＥＮＩＲＴＡＧＧＧＧＳ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２０：リンカーセグメントＬ２（ＭＭＰ１４）
ＧＧＧＧＳＳＧＡＰＥＮＩＲＴＡＧＧＧＧＳ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２１：リンカーセグメントＬ２（ＭＭＰ１４）
ＧＧＧＧＳＳＧＬＩＳＨＳＩＴＡＧＧＧＧＳ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２２：リンカーセグメントＬ２（ＭＭＰ１４）
ＧＧＧＧＳＳＧＮＬＲＳＫＬＴＡＧＧＧＧＳ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２３：リンカーセグメントＬ２（ＭＭＰ１４）
ＧＧＧＧＳＳＧＶＦＳＩＰＬＴＡＧＧＧＧＳ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２４：リンカーセグメントＬ２（ＭＭＰ１４）
ＧＧＧＧＳＳＧＩＫＹＨＳＬＴＡＧＧＧＧＳ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２５：リンカーセグメントＬ２（ＭＭＰ１４）
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２６：リンカーセグメントＬ２（ＭＭＰ１４）
ＧＧＧＧＳＳＧＲＩＧＦＬＲＴＡＧＧＧＧＳ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２７：マウスＰ３５シグナルペプチドＳＰ１
ＭＣＱＳＲＹＬＬＦＬ  ＡＴＬＡＬＬＮＨＬＳ  ＬＡ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２８：ヒトＰ３５シグナルペプチドＳＰ１
ＭＣＰＡＲＳＬＬＬＶＡＴＬＶＬＬＤＨＬＳＬＡ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２９：マウスＰ４０シグナルペプチドＳＰ２
ＭＣＰＱＫＬＴＩＳＷ  ＦＡＩＶＬＬＶＳＰＬ  ＭＡ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３０：ヒトＰ４０シグナルペプチドＳＰ２
ＭＣＨＱＱＬＶＩＳＷＦＳＬＶＦＬＡＳＰＬＶＡＩ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３１：マウスＨｏｍｏ  ＩＬ−１２
ＭＣＰＱＫＬＴＩＳＷ  ＦＡＩＶＬＬＶＳＰＬ  ＭＡＭＷＥＬＥＫＤＶ  ＹＶＶＥＶＤＷＴＰＤ  ＡＰＧＥＴＶＮＬＴＣ  ＤＴＰＥＥＤＤＩＴＷ  
ＴＳＤＱＲＨＧＶＩＧ  ＳＧＫＴＬＴＩＴＶＫ  ＥＦＬＤＡＧＱＹＴＣ  ＨＫＧＧＥＴＬＳＨＳ  ＨＬＬＬＨＫＫＥＮＧ  ＩＷＳＴＥＩＬＫＮＦ  
ＫＮＫＴＦＬＫＣＥＡ  ＰＮＹＳＧＲＦＴＣＳ  ＷＬＶＱＲＮＭＤＬＫ  ＦＮＩＫＳＳＳＳＳＰ  ＤＳＲＡＶＴＣＧＭＡ  ＳＬＳＡＥＫＶＴＬＤ  
ＱＲＤＹＥＫＹＳＶＳ  ＣＱＥＤＶＴＣＰＴＡ  ＥＥＴＬＰＩＥＬＡＬ  ＥＡＲＱＱＮＫＹＥＮ  ＹＳＴＳＦＦＩＲＤＩ  ＩＫＰＤＰＰＫＮＬＱ  
ＭＫＰＬＫＮＳＱＶＥ  ＶＳＷＥＹＰＤＳＷＳ  ＴＰＨＳＹＦＳＬＫＦ  ＦＶＲＩＱＲＫＫＥＫ  ＭＫＥＴＥＥＧＣＮＱ  ＫＧＡＦＬＶＥＫＴＳ  
ＴＥＶＱＣＫＧＧＮＶ  ＣＶＱＡＱＤＲＹＹＮ  ＳＳＣＳＫＷＡＣＶＰ  ＣＲＶＲＳＧＧＧＧＳ  ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ  ＲＶＩＰＶＳＧＰＡＲ  
ＣＬＳＱＳＲＮＬＬＫ  ＴＴＤＤＭＶＫＴＡＲ  ＥＫＬＫＨＹＳＣＴＡ  ＥＤＩＤＨＥＤＩＴＲ  ＤＱＴＳＴＬＫＴＣＬ  ＰＬＥＬＨＫＮＥＳＣ  
ＬＡＴＲＥＴＳＳＴＴ  ＲＧＳＣＬＰＰＱＫＴ  ＳＬＭＭＴＬＣＬＧＳ  ＩＹＥＤＬＫＭＹＱＴ  ＥＦＱＡＩＮＡＡＬＱ  ＮＨＮＨＱＱＩＩＬＤ  
ＫＧＭＬＶＡＩＤＥＬ  ＭＱＳＬＮＨＮＧＥＴ  ＬＲＱＫＰＰＶＧＥＡ  ＤＰＹＲＶＫＭＫＬＣ  ＩＬＬＨＡＦＳＴＲＶ  ＶＴＩＮＲＶＭＧＹＬ  
ＳＳＡＧＧＧＧＳＧＧ  ＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫ  ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰ  ＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬ  ＦＰＰＫＰＫＤＱＬＭ  ＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶ  
ＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥ  ＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶ  ＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲ  ＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶ  ＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤ  ＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫ  
ＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩ  ＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱ  ＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰ  ＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱ  ＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦ  ＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥ  
ＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫ  ＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧ  ＳＦＬＹＳＫＬＴＶＤ  ＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦ  ＳＣＳＶＬＨＥＡＬＨ  ＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬ  
ＳＰＧＫ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３２：ヒトＨｏｍｏ  ＩＬ１２
ＭＣＨＱＱＬＶＩＳＷＦＳＬＶＦＬＡＳＰＬＶＡＩＷＥＬＫＫＤＶＹＶＶＥＬＤＷＹＰＤＡＰＧＥＭＶＶＬＴＣＤＴＰＥＥＤＧＩＴＷＴＬＤＱＳＳＥＶＬＧＳＧＫＴＬＴＩＱＶＫＥＦＧＤＡＧＱＹＴＣＨＫＧＧＥＶＬＳＨＳＬＬＬＬＨＫＫＥＤＧＩＷＳＴＤＩＬＫＤＱＫＥＰＫＮＫＴＦＬＲＣＥＡＫＮＹＳＧＲＦＴＣＷＷＬＴＴＩＳＴＤＬＴＦＳＶＫＳＳＲＧＳＳＤＰＱＧＶＴＣＧＡＡＴＬＳＡＥＲＶＲＧＤＮＫＥＹＥＹＳＶＥＣＱＥＤＳＡＣＰＡＡＥＥＳＬＰＩＥＶＭＶＤＡＶＨＫＬＫＹＥＮＹＴＳＳＦＦＩＲＤＩＩＫＰＤＰＰＫＮＬＱＬＫＰＬＫＮＳＲＱＶＥＶＳＷＥＹＰＤＴＷＳＴＰＨＳＹＦＳＬＴＦＣＶＱＶＱＧＫＳＫＲＥＫＫＤＲＶＦＴＤＫＴＳＡＴＶＩＣＲＫＮＡＳＩＳＶＲＡＱＤＲＹＹＳＳＳＷＳＥＷＡＳＶＰＣＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＮＬＰＶＡＴＰＤＰＧＭＦＰＣＬＨＨＳＱＮＬＬＲＡＶＳＮＭＬＱＫＡＲＱＴＬＥＦＹＰＣＴＳＥＥＩＤＨＥＤＩＴＫＤＫＴＳＴＶＥＡＣＬＰＬＥＬＴＫＮＥＳＣＬＮＳＲＥＴＳＦＩＴＮＧＳＣＬＡＳＲＫＴＳＦＭＭＡＬＣＬＳＳＩＹＥＤＬＫＭＹＱＶＥＦＫＴＭＮＡＫＬＬＭＤＰＫＲＱＩＦＬＤＱＮＭＬＡＶＩＤＥＬＭＱＡＬＮＦＮＳＥＴＶＰＱＫＳＳＬＥＥＰＤＦＹＫＴＫＩＫＬＣＩＬＬＨＡＦＲＩＲＡＶＴＩＤＲＶＭＳＹＬＮＡＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＱＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＬＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３３：マウスＨｅｔ  ＩＬ−１２サブユニット１
ＭＣＰＱＫＬＴＩＳＷ  ＦＡＩＶＬＬＶＳＰＬ  ＭＡＭＷＥＬＥＫＤＶ  ＹＶＶＥＶＤＷＴＰＤ  ＡＰＧＥＴＶＮＬＴＣ  ＤＴＰＥＥＤＤＩＴＷ  
ＴＳＤＱＲＨＧＶＩＧ  ＳＧＫＴＬＴＩＴＶＫ  ＥＦＬＤＡＧＱＹＴＣ  ＨＫＧＧＥＴＬＳＨＳ  ＨＬＬＬＨＫＫＥＮＧ  ＩＷＳＴＥＩＬＫＮＦ  
ＫＮＫＴＦＬＫＣＥＡ  ＰＮＹＳＧＲＦＴＣＳ  ＷＬＶＱＲＮＭＤＬＫ  ＦＮＩＫＳＳＳＳＳＰ  ＤＳＲＡＶＴＣＧＭＡ  ＳＬＳＡＥＫＶＴＬＤ  
ＱＲＤＹＥＫＹＳＶＳ  ＣＱＥＤＶＴＣＰＴＡ  ＥＥＴＬＰＩＥＬＡＬ  ＥＡＲＱＱＮＫＹＥＮ  ＹＳＴＳＦＦＩＲＤＩ  ＩＫＰＤＰＰＫＮＬＱ  
ＭＫＰＬＫＮＳＱＶＥ  ＶＳＷＥＹＰＤＳＷＳ  ＴＰＨＳＹＦＳＬＫＦ  ＦＶＲＩＱＲＫＫＥＫ  ＭＫＥＴＥＥＧＣＮＱ  ＫＧＡＦＬＶＥＫＴＳ  
ＴＥＶＱＣＫＧＧＮＶ  ＣＶＱＡＱＤＲＹＹＮ  ＳＳＣＳＫＷＡＣＶＰ  ＣＲＶＲＳＧＧＧＧＳ  ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ  ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ  
ＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶ  ＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴ  ＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴ  ＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤ  ＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤ  ＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫ  
ＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹ  ＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨ  ＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫ  ＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡ  ＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫ  ＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴ  
ＬＰＰＣＲＤＥＬＴＫ  ＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫ  ＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥ  ＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮ  ＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳ  ＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬ  
ＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧ  ＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥ  ＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳ  ＬＳＬＳＰＧＫ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３４：ヒトＨｅｔ  ＩＬ１２サブユニット１
ＭＣＨＱＱＬＶＩＳＷＦＳＬＶＦＬＡＳＰＬＶＡＩＷＥＬＫＫＤＶＹＶＶＥＬＤＷＹＰＤＡＰＧＥＭＶＶＬＴＣＤＴＰＥＥＤＧＩＴＷＴＬＤＱＳＳＥＶＬＧＳＧＫＴＬＴＩＱＶＫＥＦＧＤＡＧＱＹＴＣＨＫＧＧＥＶＬＳＨＳＬＬＬＬＨＫＫＥＤＧＩＷＳＴＤＩＬＫＤＱＫＥＰＫＮＫＴＦＬＲＣＥＡＫＮＹＳＧＲＦＴＣＷＷＬＴＴＩＳＴＤＬＴＦＳＶＫＳＳＲＧＳＳＤＰＱＧＶＴＣＧＡＡＴＬＳＡＥＲＶＲＧＤＮＫＥＹＥＹＳＶＥＣＱＥＤＳＡＣＰＡＡＥＥＳＬＰＩＥＶＭＶＤＡＶＨＫＬＫＹＥＮＹＴＳＳＦＦＩＲＤＩＩＫＰＤＰＰＫＮＬＱＬＫＰＬＫＮＳＲＱＶＥＶＳＷＥＹＰＤＴＷＳＴＰＨＳＹＦＳＬＴＦＣＶＱＶＱＧＫＳＫＲＥＫＫＤＲＶＦＴＤＫＴＳＡＴＶＩＣＲＫＮＡＳＩＳＶＲＡＱＤＲＹＹＳＳＳＷＳＥＷＡＳＶＰＣＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３５：マウスＨｅｔ  ＩＬ１２サブユニット２
ＭＣＱＳＲＹＬＬＦＬ  ＡＴＬＡＬＬＮＨＬＳ  ＬＡＲＶＩＰＶＳＧＰ  ＡＲＣＬＳＱＳＲＮＬ  ＬＫＴＴＤＤＭＶＫＴ  ＡＲＥＫＬＫＨＹＳＣ  
ＴＡＥＤＩＤＨＥＤＩ  ＴＲＤＱＴＳＴＬＫＴ  ＣＬＰＬＥＬＨＫＮＥ  ＳＣＬＡＴＲＥＴＳＳ  ＴＴＲＧＳＣＬＰＰＱ  ＫＴＳＬＭＭＴＬＣＬ  
ＧＳＩＹＥＤＬＫＭＹ  ＱＴＥＦＱＡＩＮＡＡ  ＬＱＮＨＮＨＱＱＩＩ  ＬＤＫＧＭＬＶＡＩＤ  ＥＬＭＱＳＬＮＨＮＧ  ＥＴＬＲＱＫＰＰＶＧ  
ＥＡＤＰＹＲＶＫＭＫ  ＬＣＩＬＬＨＡＦＳＴ  ＲＶＶＴＩＮＲＶＭＧ  ＹＬＳＳＡＧＧＧＧＳ  ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ  ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ  
ＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶ  ＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴ  ＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴ  ＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤ  ＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤ  ＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫ  
ＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹ  ＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨ  ＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫ  ＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡ  ＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫ  ＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴ  
ＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫ  ＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫ  ＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥ  ＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮ  ＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳ  ＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬ  
ＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧ  ＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥ  ＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳ  ＬＳＬＳＰＧＫ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３６：ヒトＨｅｔ  ＩＬ１２サブユニット２
ＭＣＰＡＲＳＬＬＬＶＡＴＬＶＬＬＤＨＬＳＬＡＲＮＬＰＶＡＴＰＤＰＧＭＦＰＣＬＨＨＳＱＮＬＬＲＡＶＳＮＭＬＱＫＡＲＱＴＬＥＦＹＰＣＴＳＥＥＩＤＨＥＤＩＴＫＤＫＴＳＴＶＥＡＣＬＰＬＥＬＴＫＮＥＳＣＬＮＳＲＥＴＳＦＩＴＮＧＳＣＬＡＳＲＫＴＳＦＭＭＡＬＣＬＳＳＩＹＥＤＬＫＭＹＱＶＥＦＫＴＭＮＡＫＬＬＭＤＰＫＲＱＩＦＬＤＱＮＭＬＡＶＩＤＥＬＭＱＡＬＮＦＮＳＥＴＶＰＱＫＳＳＬＥＥＰＤＦＹＫＴＫＩＫＬＣＩＬＬＨＡＦＲＩＲＡＶＴＩＤＲＶＭＳＹＬＮＡＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３７：マウスＨｏｍｏ−Ｒ１
ＭＤＭＭＧＬＡＧＴＳ  ＫＨＩＴＦＬＬＬＣＱ  ＬＧＡＳＧＰＧＤＧＣ  ＣＶＥＫＴＳＦＰＥＧ  ＡＳＧＳＰＬＧＰＲＮ  ＬＳＣＹＲＶＳＫＴＤ  
ＹＥＣＳＷＱＹＤＧＰ  ＥＤＮＶＳＨＶＬＷＣ  ＣＦＶＰＰＮＨＴＨＴ  ＧＱＥＲＣＲＹＦＳＳ  ＧＰＤＲＴＶＱＦＷＥ  ＱＤＧＩＰＶＬＳＫＶ  
ＮＦＷＶＥＳＲＬＧＮ  ＲＴＭＫＳＱＫＩＳＱ  ＹＬＹＮＷＴＫＴＴＰ  ＰＬＧＨＩＫＶＳＱＳ  ＨＲＱＬＲＭＤＷＮＶ  ＳＥＥＡＧＡＥＶＱＦ  
ＲＲＲＭＰＴＴＮＷＴ  ＬＧＤＣＧＰＱＶＮＳ  ＧＳＧＶＬＧＤＩＲＧ  ＳＭＳＥＳＣＬＣＰＳ  ＥＮＭＡＱＥＩＱＩＲ  ＲＲＲＲＬＳＳＧＡＰ  
ＧＧＰＷＳＤＷＳＭＰ  ＶＣＶＰＰＥＶＬＰＧ  ＧＧＧＳＳＧＲＳＥＮ  ＩＲＴＡＧＧＧＧＳＭ  ＷＥＬＥＫＤＶＹＶＶ  ＥＶＤＷＴＰＤＡＰＧ  
ＥＴＶＮＬＴＣＤＴＰ  ＥＥＤＤＩＴＷＴＳＤ  ＱＲＨＧＶＩＧＳＧＫ  ＴＬＴＩＴＶＫＥＦＬ  ＤＡＧＱＹＴＣＨＫＧ  ＧＥＴＬＳＨＳＨＬＬ  
ＬＨＫＫＥＮＧＩＷＳ  ＴＥＩＬＫＮＦＫＮＫ  ＴＦＬＫＣＥＡＰＮＹ  ＳＧＲＦＴＣＳＷＬＶ  ＱＲＮＭＤＬＫＦＮＩ  ＫＳＳＳＳＳＰＤＳＲ  
ＡＶＴＣＧＭＡＳＬＳ  ＡＥＫＶＴＬＤＱＲＤ  ＹＥＫＹＳＶＳＣＱＥ  ＤＶＴＣＰＴＡＥＥＴ  ＬＰＩＥＬＡＬＥＡＲ  ＱＱＮＫＹＥＮＹＳＴ  
ＳＦＦＩＲＤＩＩＫＰ  ＤＰＰＫＮＬＱＭＫＰ  ＬＫＮＳＱＶＥＶＳＷ  ＥＹＰＤＳＷＳＴＰＨ  ＳＹＦＳＬＫＦＦＶＲ  ＩＱＲＫＫＥＫＭＫＥ  
ＴＥＥＧＣＮＱＫＧＡ  ＦＬＶＥＫＴＳＴＥＶ  ＱＣＫＧＧＮＶＣＶＱ  ＡＱＤＲＹＹＮＳＳＣ  ＳＫＷＡＣＶＰＣＲＶ  ＲＳＧＧＧＧＳＧＧＧ  
ＧＳＧＧＧＧＳＲＶＩ  ＰＶＳＧＰＡＲＣＬＳ  ＱＳＲＮＬＬＫＴＴＤ  ＤＭＶＫＴＡＲＥＫＬ  ＫＨＹＳＣＴＡＥＤＩ  ＤＨＥＤＩＴＲＤＱＴ  
ＳＴＬＫＴＣＬＰＬＥ  ＬＨＫＮＥＳＣＬＡＴ  ＲＥＴＳＳＴＴＲＧＳ  ＣＬＰＰＱＫＴＳＬＭ  ＭＴＬＣＬＧＳＩＹＥ  ＤＬＫＭＹＱＴＥＦＱ  
ＡＩＮＡＡＬＱＮＨＮ  ＨＱＱＩＩＬＤＫＧＭ  ＬＶＡＩＤＥＬＭＱＳ  ＬＮＨＮＧＥＴＬＲＱ  ＫＰＰＶＧＥＡＤＰＹ  ＲＶＫＭＫＬＣＩＬＬ  
ＨＡＦＳＴＲＶＶＴＩ  ＮＲＶＭＧＹＬＳＳＡ  ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ  ＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴ  ＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬ  ＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰ  
ＫＰＫＤＱＬＭＩＳＲ  ＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤ  ＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦ  ＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨ  ＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱ  ＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶ  
ＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮ  ＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮ  ＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴ  ＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥ  ＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲ  ＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬ  
ＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳ  ＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧ  ＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰ  ＰＶＬＤＳＤＧＳＦＬ  ＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲ  ＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳ  
ＶＬＨＥＡＬＨＮＨＹ  ＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ  Ｋ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３８：ヒトＨｏｍｏ−Ｒ１  
ＭＥＰＬＶＴＷＶＶＰＬＬＦＬＦＬＬＳＲＱＧＡＡＣＲＴＳＥＣＣＦＱＤＰＰＹＰＤＡＤＳＧＳＡＳＧＰＲＤＬＲＣＹＲＩＳＳＤＲＹＥＣＳＷＱＹＥＧＰＴＡＧＶＳＨＦＬＲＣＣＬＳＳＧＲＣＣＹＦＡＡＧＳＡＴＲＬＱＦＳＤＱＡＧＶＳＶＬＹＴＶＴＬＷＶＥＳＷＡＲＮＱＴＥＫＳＰＥＶＴＬＱＬＹＮＳＶＫＹＥＰＰＬＧＤＩＫＶＳＫＬＡＧＱＬＲＭＥＷＥＴＰＤＮＱＶＧＡＥＶＱＦＲＨＲＴＰＳＳＰＷＫＬＧＤＣＧＰＱＤＤＤＴＥＳＣＬＣＰＬＥＭＮＶＡＱＥＦＱＬＲＲＲＲＬＧＳＱＧＳＳＷＳＫＷＳＳＰＶＣＶＰＰＥＮＧＧＧＧＳＳＧＲＳＥＮＩＲＴＡＧＧＧＧＳＷＥＬＫＫＤＶＹＶＶＥＬＤＷＹＰＤＡＰＧＥＭＶＶＬＴＣＤＴＰＥＥＤＧＩＴＷＴＬＤＱＳＳＥＶＬＧＳＧＫＴＬＴＩＱＶＫＥＦＧＤＡＧＱＹＴＣＨＫＧＧＥＶＬＳＨＳＬＬＬＬＨＫＫＥＤＧＩＷＳＴＤＩＬＫＤＱＫＥＰＫＮＫＴＦＬＲＣＥＡＫＮＹＳＧＲＦＴＣＷＷＬＴＴＩＳＴＤＬＴＦＳＶＫＳＳＲＧＳＳＤＰＱＧＶＴＣＧＡＡＴＬＳＡＥＲＶＲＧＤＮＫＥＹＥＹＳＶＥＣＱＥＤＳＡＣＰＡＡＥＥＳＬＰＩＥＶＭＶＤＡＶＨＫＬＫＹＥＮＹＴＳＳＦＦＩＲＤＩＩＫＰＤＰＰＫＮＬＱＬＫＰＬＫＮＳＲＱＶＥＶＳＷＥＹＰＤＴＷＳＴＰＨＳＹＦＳＬＴＦＣＶＱＶＱＧＫＳＫＲＥＫＫＤＲＶＦＴＤＫＴＳＡＴＶＩＣＲＫＮＡＳＩＳＶＲＡＱＤＲＹＹＳＳＳＷＳＥＷＡＳＶＰＣＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＮＬＰＶＡＴＰＤＰＧＭＦＰＣＬＨＨＳＱＮＬＬＲＡＶＳＮＭＬＱＫＡＲＱＴＬＥＦＹＰＣＴＳＥＥＩＤＨＥＤＩＴＫＤＫＴＳＴＶＥＡＣＬＰＬＥＬＴＫＮＥＳＣＬＮＳＲＥＴＳＦＩＴＮＧＳＣＬＡＳＲＫＴＳＦＭＭＡＬＣＬＳＳＩＹＥＤＬＫＭＹＱＶＥＦＫＴＭＮＡＫＬＬＭＤＰＫＲＱＩＦＬＤＱＮＭＬＡＶＩＤＥＬＭＱＡＬＮＦＮＳＥＴＶＰＱＫＳＳＬＥＥＰＤＦＹＫＴＫＩＫＬＣＩＬＬＨＡＦＲＩＲＡＶＴＩＤＲＶＭＳＹＬＮＡＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＱＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＬＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３９：マウスＨｏｍｏ−Ｒ２  
ＭＡＱＴＶＲＥＣＳＬ  ＡＬＬＦＬＦＭＷＬＬ  ＩＫＡＮＩＤＶＣＫＬ  ＧＴＶＴＶＱＰＡＰＶ  ＩＰＬＧＳＡＡＮＩＳ  ＣＳＬＮＰＫＱＧＣＳ  
ＨＹＰＳＳＮＥＬＩＬ  ＬＫＦＶＮＤＶＬＶＥ  ＮＬＨＧＫＫＶＨＤＨ  ＴＧＨＳＳＴＦＱＶＴ  ＮＬＳＬＧＭＴＬＦＶ  ＣＫＬＮＣＳＮＳＱＫ  
ＫＰＰＶＰＶＣＧＶＥ  ＩＳＶＧＶＡＰＥＰＰ  ＱＮＩＳＣＶＱＥＧＥ  ＮＧＴＶＡＣＳＷＮＳ  ＧＫＶＴＹＬＫＴＮＹ  ＴＬＱＬＳＧＰＮＮＬ  
ＴＣＱＫＱＣＦＳＤＮ  ＲＱＮＣＮＲＬＤＬＧ  ＩＮＬＳＰＤＬＡＥＳ  ＲＦＩＶＲＶＴＡＩＮ  ＤＬＧＮＳＳＳＬＰＨ  ＴＦＴＦＬＤＩＶＩＰ  
ＬＰＰＷＤＩＲＩＮＦ  ＬＮＡＳＧＳＲＧＴＬ  ＱＷＥＤＥＧＱＶＶＬ  ＮＱＬＲＹＱＰＬＮＳ  ＴＳＷＮＭＶＮＡＴＮ  ＡＫＧＫＹＤＬＲＤＬ  
ＲＰＦＴＥＹＥＦＱＩ  ＳＳＫＬＨＬＳＧＧＳ  ＷＳＮＷＳＥＳＬＲＴ  ＲＴＰＥＥＥＰＧＧＧ  ＧＳＳＧＲＳＥＮＩＲ  ＴＡＧＧＧＧＳＭＷＥ  
ＬＥＫＤＶＹＶＶＥＶ  ＤＷＴＰＤＡＰＧＥＴ  ＶＮＬＴＣＤＴＰＥＥ  ＤＤＩＴＷＴＳＤＱＲ  ＨＧＶＩＧＳＧＫＴＬ  ＴＩＴＶＫＥＦＬＤＡ  
ＧＱＹＴＣＨＫＧＧＥ  ＴＬＳＨＳＨＬＬＬＨ  ＫＫＥＮＧＩＷＳＴＥ  ＩＬＫＮＦＫＮＫＴＦ  ＬＫＣＥＡＰＮＹＳＧ  ＲＦＴＣＳＷＬＶＱＲ  
ＮＭＤＬＫＦＮＩＫＳ  ＳＳＳＳＰＤＳＲＡＶ  ＴＣＧＭＡＳＬＳＡＥ  ＫＶＴＬＤＱＲＤＹＥ  ＫＹＳＶＳＣＱＥＤＶ  ＴＣＰＴＡＥＥＴＬＰ  
ＩＥＬＡＬＥＡＲＱＱ  ＮＫＹＥＮＹＳＴＳＦ  ＦＩＲＤＩＩＫＰＤＰ  ＰＫＮＬＱＭＫＰＬＫ  ＮＳＱＶＥＶＳＷＥＹ  ＰＤＳＷＳＴＰＨＳＹ  
ＦＳＬＫＦＦＶＲＩＱ  ＲＫＫＥＫＭＫＥＴＥ  ＥＧＣＮＱＫＧＡＦＬ  ＶＥＫＴＳＴＥＶＱＣ  ＫＧＧＮＶＣＶＱＡＱ  ＤＲＹＹＮＳＳＣＳＫ  
ＷＡＣＶＰＣＲＶＲＳ  ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ  ＧＧＧＧＳＲＶＩＰＶ  ＳＧＰＡＲＣＬＳＱＳ  ＲＮＬＬＫＴＴＤＤＭ  ＶＫＴＡＲＥＫＬＫＨ  
ＹＳＣＴＡＥＤＩＤＨ  ＥＤＩＴＲＤＱＴＳＴ  ＬＫＴＣＬＰＬＥＬＨ  ＫＮＥＳＣＬＡＴＲＥ  ＴＳＳＴＴＲＧＳＣＬ  ＰＰＱＫＴＳＬＭＭＴ  
ＬＣＬＧＳＩＹＥＤＬ  ＫＭＹＱＴＥＦＱＡＩ  ＮＡＡＬＱＮＨＮＨＱ  ＱＩＩＬＤＫＧＭＬＶ  ＡＩＤＥＬＭＱＳＬＮ  ＨＮＧＥＴＬＲＱＫＰ  
ＰＶＧＥＡＤＰＹＲＶ  ＫＭＫＬＣＩＬＬＨＡ  ＦＳＴＲＶＶＴＩＮＲ  ＶＭＧＹＬＳＳＡＧＧ  ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ  ＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰ  
ＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ  ＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰ  ＫＤＱＬＭＩＳＲＴＰ  ＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳ  ＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷ  ＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡ  
ＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮ  ＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴ  ＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫ  ＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡ  ＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳ  ＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱ  
ＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥ  ＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣ  ＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩ  ＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰ  ＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶ  ＬＤＳＤＧＳＦＬＹＳ  
ＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱ  ＱＧＮＶＦＳＣＳＶＬ  ＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱ  ＫＳＬＳＬＳＰＧＫ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４０：ヒトＨｏｍｏ−Ｒ２  
ＭＡＨＴＦＲＧＣＳＬＡＦＭＦＩＩＴＷＬＬＩＫＡＫＩＤＡＣＫＲＧＤＶＴＶＫＰＳＨＶＩＬＬＧＳＴＶＮＩＴＣＳＬＫＰＲＱＧＣＦＨＹＳＲＲＮＫＬＩＬＹＫＦＤＲＲＩＮＦＨＨＧＨＳＬＮＳＱＶＴＧＬＰＬＧＴＴＬＦＶＣＫＬＡＣＩＮＳＤＥＩＱＩＣＧＡＥＩＦＶＧＶＡＰＥＱＰＱＮＬＳＣＩＱＫＧＥＱＧＴＶＡＣＴＷＥＲＧＲＤＴＨＬＹＴＥＹＴＬＱＬＳＧＰＫＮＬＴＷＱＫＱＣＫＤＩＹＣＤＹＬＤＦＧＩＮＬＴＰＥＳＰＥＳＮＦＴＡＫＶＴＡＶＮＳＬＧＳＳＳＳＬＰＳＴＦＴＦＬＤＩＶＲＰＬＰＰＷＤＩＲＩＫＦＱＫＡＳＶＳＲＣＴＬＹＷＲＤＥＧＬＶＬＬＮＲＬＲＹＲＰＳＮＳＲＬＷＮＭＶＮＶＴＫＡＫＧＲＨＤＬＬＤＬＫＰＦＴＥＹＥＦＱＩＳＳＫＬＨＬＹＫＧＳＷＳＤＷＳＥＳＬＲＡＱＴＰＥＥＥＰＧＧＧＧＳＳＧＲＳＥＮＩＲＴＡＧＧＧＧＳＷＥＬＫＫＤＶＹＶＶＥＬＤＷＹＰＤＡＰＧＥＭＶＶＬＴＣＤＴＰＥＥＤＧＩＴＷＴＬＤＱＳＳＥＶＬＧＳＧＫＴＬＴＩＱＶＫＥＦＧＤＡＧＱＹＴＣＨＫＧＧＥＶＬＳＨＳＬＬＬＬＨＫＫＥＤＧＩＷＳＴＤＩＬＫＤＱＫＥＰＫＮＫＴＦＬＲＣＥＡＫＮＹＳＧＲＦＴＣＷＷＬＴＴＩＳＴＤＬＴＦＳＶＫＳＳＲＧＳＳＤＰＱＧＶＴＣＧＡＡＴＬＳＡＥＲＶＲＧＤＮＫＥＹＥＹＳＶＥＣＱＥＤＳＡＣＰＡＡＥＥＳＬＰＩＥＶＭＶＤＡＶＨＫＬＫＹＥＮＹＴＳＳＦＦＩＲＤＩＩＫＰＤＰＰＫＮＬＱＬＫＰＬＫＮＳＲＱＶＥＶＳＷＥＹＰＤＴＷＳＴＰＨＳＹＦＳＬＴＦＣＶＱＶＱＧＫＳＫＲＥＫＫＤＲＶＦＴＤＫＴＳＡＴＶＩＣＲＫＮＡＳＩＳＶＲＡＱＤＲＹＹＳＳＳＷＳＥＷＡＳＶＰＣＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＮＬＰＶＡＴＰＤＰＧＭＦＰＣＬＨＨＳＱＮＬＬＲＡＶＳＮＭＬＱＫＡＲＱＴＬＥＦＹＰＣＴＳＥＥＩＤＨＥＤＩＴＫＤＫＴＳＴＶＥＡＣＬＰＬＥＬＴＫＮＥＳＣＬＮＳＲＥＴＳＦＩＴＮＧＳＣＬＡＳＲＫＴＳＦＭＭＡＬＣＬＳＳＩＹＥＤＬＫＭＹＱＶＥＦＫＴＭＮＡＫＬＬＭＤＰＫＲＱＩＦＬＤＱＮＭＬＡＶＩＤＥＬＭＱＡＬＮＦＮＳＥＴＶＰＱＫＳＳＬＥＥＰＤＦＹＫＴＫＩＫＬＣＩＬＬＨＡＦＲＩＲＡＶＴＩＤＲＶＭＳＹＬＮＡＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＱＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＬＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４１：マウスＨｅｔ−Ｒ１／Ｒ２サブユニット１
ＭＤＭＭＧＬＡＧＴＳ  ＫＨＩＴＦＬＬＬＣＱ  ＬＧＡＳＧＰＧＤＧＣ  ＣＶＥＫＴＳＦＰＥＧ  ＡＳＧＳＰＬＧＰＲＮ  ＬＳＣＹＲＶＳＫＴＤ  
ＹＥＣＳＷＱＹＤＧＰ  ＥＤＮＶＳＨＶＬＷＣ  ＣＦＶＰＰＮＨＴＨＴ  ＧＱＥＲＣＲＹＦＳＳ  ＧＰＤＲＴＶＱＦＷＥ  ＱＤＧＩＰＶＬＳＫＶ  
ＮＦＷＶＥＳＲＬＧＮ  ＲＴＭＫＳＱＫＩＳＱ  ＹＬＹＮＷＴＫＴＴＰ  ＰＬＧＨＩＫＶＳＱＳ  ＨＲＱＬＲＭＤＷＮＶ  ＳＥＥＡＧＡＥＶＱＦ  
ＲＲＲＭＰＴＴＮＷＴ  ＬＧＤＣＧＰＱＶＮＳ  ＧＳＧＶＬＧＤＩＲＧ  ＳＭＳＥＳＣＬＣＰＳ  ＥＮＭＡＱＥＩＱＩＲ  ＲＲＲＲＬＳＳＧＡＰ  
ＧＧＰＷＳＤＷＳＭＰ  ＶＣＶＰＰＥＶＬＰＧ  ＧＧＧＳＳＧＲＳＥＮ  ＩＲＴＡＧＧＧＧＳＭ  ＷＥＬＥＫＤＶＹＶＶ  ＥＶＤＷＴＰＤＡＰＧ  
ＥＴＶＮＬＴＣＤＴＰ  ＥＥＤＤＩＴＷＴＳＤ  ＱＲＨＧＶＩＧＳＧＫ  ＴＬＴＩＴＶＫＥＦＬ  ＤＡＧＱＹＴＣＨＫＧ  ＧＥＴＬＳＨＳＨＬＬ  
ＬＨＫＫＥＮＧＩＷＳ  ＴＥＩＬＫＮＦＫＮＫ  ＴＦＬＫＣＥＡＰＮＹ  ＳＧＲＦＴＣＳＷＬＶ  ＱＲＮＭＤＬＫＦＮＩ  ＫＳＳＳＳＳＰＤＳＲ  
ＡＶＴＣＧＭＡＳＬＳ  ＡＥＫＶＴＬＤＱＲＤ  ＹＥＫＹＳＶＳＣＱＥ  ＤＶＴＣＰＴＡＥＥＴ  ＬＰＩＥＬＡＬＥＡＲ  ＱＱＮＫＹＥＮＹＳＴ  
ＳＦＦＩＲＤＩＩＫＰ  ＤＰＰＫＮＬＱＭＫＰ  ＬＫＮＳＱＶＥＶＳＷ  ＥＹＰＤＳＷＳＴＰＨ  ＳＹＦＳＬＫＦＦＶＲ  ＩＱＲＫＫＥＫＭＫＥ  
ＴＥＥＧＣＮＱＫＧＡ  ＦＬＶＥＫＴＳＴＥＶ  ＱＣＫＧＧＮＶＣＶＱ  ＡＱＤＲＹＹＮＳＳＣ  ＳＫＷＡＣＶＰＣＲＶ  ＲＳＧＧＧＧＳＧＧＧ  
ＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴ  ＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥ  ＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦ  ＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩ  ＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶ  ＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶ  
ＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥ  ＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥ  ＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶ  ＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷ  ＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶ  ＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥ  
ＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰ  ＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰ  ＣＲＤＥＬＴＫＮＱＶ  ＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹ  ＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳ  ＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴ  
ＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳ  ＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤ  ＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦ  ＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨ  ＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬ  ＳＰＧＫ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４２：ヒトＨｅｔ−Ｒ１／Ｒ２サブユニット１
ＭＥＰＬＶＴＷＶＶＰＬＬＦＬＦＬＬＳＲＱＧＡＡＣＲＴＳＥＣＣＦＱＤＰＰＹＰＤＡＤＳＧＳＡＳＧＰＲＤＬＲＣＹＲＩＳＳＤＲＹＥＣＳＷＱＹＥＧＰＴＡＧＶＳＨＦＬＲＣＣＬＳＳＧＲＣＣＹＦＡＡＧＳＡＴＲＬＱＦＳＤＱＡＧＶＳＶＬＹＴＶＴＬＷＶＥＳＷＡＲＮＱＴＥＫＳＰＥＶＴＬＱＬＹＮＳＶＫＹＥＰＰＬＧＤＩＫＶＳＫＬＡＧＱＬＲＭＥＷＥＴＰＤＮＱＶＧＡＥＶＱＦＲＨＲＴＰＳＳＰＷＫＬＧＤＣＧＰＱＤＤＤＴＥＳＣＬＣＰＬＥＭＮＶＡＱＥＦＱＬＲＲＲＲＬＧＳＱＧＳＳＷＳＫＷＳＳＰＶＣＶＰＰＥＮＧＧＧＧＳＳＧＲＳＥＮＩＲＴＡＧＧＧＧＳＷＥＬＫＫＤＶＹＶＶＥＬＤＷＹＰＤＡＰＧＥＭＶＶＬＴＣＤＴＰＥＥＤＧＩＴＷＴＬＤＱＳＳＥＶＬＧＳＧＫＴＬＴＩＱＶＫＥＦＧＤＡＧＱＹＴＣＨＫＧＧＥＶＬＳＨＳＬＬＬＬＨＫＫＥＤＧＩＷＳＴＤＩＬＫＤＱＫＥＰＫＮＫＴＦＬＲＣＥＡＫＮＹＳＧＲＦＴＣＷＷＬＴＴＩＳＴＤＬＴＦＳＶＫＳＳＲＧＳＳＤＰＱＧＶＴＣＧＡＡＴＬＳＡＥＲＶＲＧＤＮＫＥＹＥＹＳＶＥＣＱＥＤＳＡＣＰＡＡＥＥＳＬＰＩＥＶＭＶＤＡＶＨＫＬＫＹＥＮＹＴＳＳＦＦＩＲＤＩＩＫＰＤＰＰＫＮＬＱＬＫＰＬＫＮＳＲＱＶＥＶＳＷＥＹＰＤＴＷＳＴＰＨＳＹＦＳＬＴＦＣＶＱＶＱＧＫＳＫＲＥＫＫＤＲＶＦＴＤＫＴＳＡＴＶＩＣＲＫＮＡＳＩＳＶＲＡＱＤＲＹＹＳＳＳＷＳＥＷＡＳＶＰＣＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４３：マウスＨｅｔ−Ｒ１／Ｒ２サブユニット２
ＭＡＱＴＶＲＥＣＳＬ  ＡＬＬＦＬＦＭＷＬＬ  ＩＫＡＮＩＤＶＣＫＬ  ＧＴＶＴＶＱＰＡＰＶ  ＩＰＬＧＳＡＡＮＩＳ  ＣＳＬＮＰＫＱＧＣＳ  
ＨＹＰＳＳＮＥＬＩＬ  ＬＫＦＶＮＤＶＬＶＥ  ＮＬＨＧＫＫＶＨＤＨ  ＴＧＨＳＳＴＦＱＶＴ  ＮＬＳＬＧＭＴＬＦＶ  ＣＫＬＮＣＳＮＳＱＫ  
ＫＰＰＶＰＶＣＧＶＥ  ＩＳＶＧＶＡＰＥＰＰ  ＱＮＩＳＣＶＱＥＧＥ  ＮＧＴＶＡＣＳＷＮＳ  ＧＫＶＴＹＬＫＴＮＹ  ＴＬＱＬＳＧＰＮＮＬ  
ＴＣＱＫＱＣＦＳＤＮ  ＲＱＮＣＮＲＬＤＬＧ  ＩＮＬＳＰＤＬＡＥＳ  ＲＦＩＶＲＶＴＡＩＮ  ＤＬＧＮＳＳＳＬＰＨ  ＴＦＴＦＬＤＩＶＩＰ  
ＬＰＰＷＤＩＲＩＮＦ  ＬＮＡＳＧＳＲＧＴＬ  ＱＷＥＤＥＧＱＶＶＬ  ＮＱＬＲＹＱＰＬＮＳ  ＴＳＷＮＭＶＮＡＴＮ  ＡＫＧＫＹＤＬＲＤＬ  
ＲＰＦＴＥＹＥＦＱＩ  ＳＳＫＬＨＬＳＧＧＳ  ＷＳＮＷＳＥＳＬＲＴ  ＲＴＰＥＥＥＰＧＧＧ  ＧＳＳＧＲＳＥＮＩＲ  ＴＡＧＧＧＧＳＲＶＩ  
ＰＶＳＧＰＡＲＣＬＳ  ＱＳＲＮＬＬＫＴＴＤ  ＤＭＶＫＴＡＲＥＫＬ  ＫＨＹＳＣＴＡＥＤＩ  ＤＨＥＤＩＴＲＤＱＴ  ＳＴＬＫＴＣＬＰＬＥ  
ＬＨＫＮＥＳＣＬＡＴ  ＲＥＴＳＳＴＴＲＧＳ  ＣＬＰＰＱＫＴＳＬＭ  ＭＴＬＣＬＧＳＩＹＥ  ＤＬＫＭＹＱＴＥＦＱ  ＡＩＮＡＡＬＱＮＨＮ  
ＨＱＱＩＩＬＤＫＧＭ  ＬＶＡＩＤＥＬＭＱＳ  ＬＮＨＮＧＥＴＬＲＱ  ＫＰＰＶＧＥＡＤＰＹ  ＲＶＫＭＫＬＣＩＬＬ  ＨＡＦＳＴＲＶＶＴＩ  
ＮＲＶＭＧＹＬＳＳＡ  ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ  ＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴ  ＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬ  ＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰ  ＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ  
ＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤ  ＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦ  ＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨ  ＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱ  ＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶ  ＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮ  
ＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮ  ＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴ  ＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥ  ＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲ  ＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬ  ＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳ  
ＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧ  ＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰ  ＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦ  ＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳ  ＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣ  ＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨ  
ＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰ  ＧＫ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４４：ヒトＨｅｔ−Ｒ１／Ｒ２サブユニット２
ｍａｈｔｆｒｇｃｓｌａｆｍｆｉｉｔｗｌｌｉｋａＫＩＤＡＣＫＲＧＤＶＴＶＫＰＳＨＶＩＬＬＧＳＴＶＮＩＴＣＳＬＫＰＲＱＧＣＦＨＹＳＲＲＮＫＬＩＬＹＫＦＤＲＲＩＮＦＨＨＧＨＳＬＮＳＱＶＴＧＬＰＬＧＴＴＬＦＶＣＫＬＡＣＩＮＳＤＥＩＱＩＣＧＡＥＩＦＶＧＶＡＰＥＱＰＱＮＬＳＣＩＱＫＧＥＱＧＴＶＡＣＴＷＥＲＧＲＤＴＨＬＹＴＥＹＴＬＱＬＳＧＰＫＮＬＴＷＱＫＱＣＫＤＩＹＣＤＹＬＤＦＧＩＮＬＴＰＥＳＰＥＳＮＦＴＡＫＶＴＡＶＮＳＬＧＳＳＳＳＬＰＳＴＦＴＦＬＤＩＶＲＰＬＰＰＷＤＩＲＩＫＦＱＫＡＳＶＳＲＣＴＬＹＷＲＤＥＧＬＶＬＬＮＲＬＲＹＲＰＳＮＳＲＬＷＮＭＶＮＶＴＫＡＫＧＲＨＤＬＬＤＬＫＰＦＴＥＹＥＦＱＩＳＳＫＬＨＬＹＫＧＳＷＳＤＷＳＥＳＬＲＡＱＴＰＥＥＥＰＧＧＧＧＳＳＧＲＳＥＮＩＲＴＡＧＧＧＧＳＲＮＬＰＶＡＴＰＤＰＧＭＦＰＣＬＨＨＳＱＮＬＬＲＡＶＳＮＭＬＱＫＡＲＱＴＬＥＦＹＰＣＴＳＥＥＩＤＨＥＤＩＴＫＤＫＴＳＴＶＥＡＣＬＰＬＥＬＴＫＮＥＳＣＬＮＳＲＥＴＳＦＩＴＮＧＳＣＬＡＳＲＫＴＳＦＭＭＡＬＣＬＳＳＩＹＥＤＬＫＭＹＱＶＥＦＫＴＭＮＡＫＬＬＭＤＰＫＲＱＩＦＬＤＱＮＭＬＡＶＩＤＥＬＭＱＡＬＮＦＮＳＥＴＶＰＱＫＳＳＬＥＥＰＤＦＹＫＴＫＩＫＬＣＩＬＬＨＡＦＲＩＲＡＶＴＩＤＲＶＭＳＹＬＮＡＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４５：マウスＨｅｔ−Ｒ１サブユニット１
ＭＤＭＭＧＬＡＧＴＳ  ＫＨＩＴＦＬＬＬＣＱ  ＬＧＡＳＧＰＧＤＧＣ  ＣＶＥＫＴＳＦＰＥＧ  ＡＳＧＳＰＬＧＰＲＮ  ＬＳＣＹＲＶＳＫＴＤ  
ＹＥＣＳＷＱＹＤＧＰ  ＥＤＮＶＳＨＶＬＷＣ  ＣＦＶＰＰＮＨＴＨＴ  ＧＱＥＲＣＲＹＦＳＳ  ＧＰＤＲＴＶＱＦＷＥ  ＱＤＧＩＰＶＬＳＫＶ  
ＮＦＷＶＥＳＲＬＧＮ  ＲＴＭＫＳＱＫＩＳＱ  ＹＬＹＮＷＴＫＴＴＰ  ＰＬＧＨＩＫＶＳＱＳ  ＨＲＱＬＲＭＤＷＮＶ  ＳＥＥＡＧＡＥＶＱＦ  
ＲＲＲＭＰＴＴＮＷＴ  ＬＧＤＣＧＰＱＶＮＳ  ＧＳＧＶＬＧＤＩＲＧ  ＳＭＳＥＳＣＬＣＰＳ  ＥＮＭＡＱＥＩＱＩＲ  ＲＲＲＲＬＳＳＧＡＰ  
ＧＧＰＷＳＤＷＳＭＰ  ＶＣＶＰＰＥＶＬＰＧ  ＧＧＧＳＳＧＲＳＥＮ  ＩＲＴＡＧＧＧＧＳＭ  ＷＥＬＥＫＤＶＹＶＶ  ＥＶＤＷＴＰＤＡＰＧ  
ＥＴＶＮＬＴＣＤＴＰ  ＥＥＤＤＩＴＷＴＳＤ  ＱＲＨＧＶＩＧＳＧＫ  ＴＬＴＩＴＶＫＥＦＬ  ＤＡＧＱＹＴＣＨＫＧ  ＧＥＴＬＳＨＳＨＬＬ  
ＬＨＫＫＥＮＧＩＷＳ  ＴＥＩＬＫＮＦＫＮＫ  ＴＦＬＫＣＥＡＰＮＹ  ＳＧＲＦＴＣＳＷＬＶ  ＱＲＮＭＤＬＫＦＮＩ  ＫＳＳＳＳＳＰＤＳＲ  
ＡＶＴＣＧＭＡＳＬＳ  ＡＥＫＶＴＬＤＱＲＤ  ＹＥＫＹＳＶＳＣＱＥ  ＤＶＴＣＰＴＡＥＥＴ  ＬＰＩＥＬＡＬＥＡＲ  ＱＱＮＫＹＥＮＹＳＴ  
ＳＦＦＩＲＤＩＩＫＰ  ＤＰＰＫＮＬＱＭＫＰ  ＬＫＮＳＱＶＥＶＳＷ  ＥＹＰＤＳＷＳＴＰＨ  ＳＹＦＳＬＫＦＦＶＲ  ＩＱＲＫＫＥＫＭＫＥ  
ＴＥＥＧＣＮＱＫＧＡ  ＦＬＶＥＫＴＳＴＥＶ  ＱＣＫＧＧＮＶＣＶＱ  ＡＱＤＲＹＹＮＳＳＣ  ＳＫＷＡＣＶＰＣＲＶ  ＲＳＧＧＧＧＳＧＧＧ  
ＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴ  ＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥ  ＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦ  ＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩ  ＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶ  ＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶ  
ＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥ  ＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥ  ＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶ  ＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷ  ＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶ  ＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥ  
ＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰ  ＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰ  ＣＲＤＥＬＴＫＮＱＶ  ＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹ  ＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳ  ＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴ  
ＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳ  ＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤ  ＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦ  ＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨ  ＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬ  ＳＰＧＫ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４６：ヒトＨｅｔ−Ｒ１サブユニット１
ＭＥＰＬＶＴＷＶＶＰＬＬＦＬＦＬＬＳＲＱＧＡＡＣＲＴＳＥＣＣＦＱＤＰＰＹＰＤＡＤＳＧＳＡＳＧＰＲＤＬＲＣＹＲＩＳＳＤＲＹＥＣＳＷＱＹＥＧＰＴＡＧＶＳＨＦＬＲＣＣＬＳＳＧＲＣＣＹＦＡＡＧＳＡＴＲＬＱＦＳＤＱＡＧＶＳＶＬＹＴＶＴＬＷＶＥＳＷＡＲＮＱＴＥＫＳＰＥＶＴＬＱＬＹＮＳＶＫＹＥＰＰＬＧＤＩＫＶＳＫＬＡＧＱＬＲＭＥＷＥＴＰＤＮＱＶＧＡＥＶＱＦＲＨＲＴＰＳＳＰＷＫＬＧＤＣＧＰＱＤＤＤＴＥＳＣＬＣＰＬＥＭＮＶＡＱＥＦＱＬＲＲＲＲＬＧＳＱＧＳＳＷＳＫＷＳＳＰＶＣＶＰＰＥＮＧＧＧＧＳＳＧＲＳＥＮＩＲＴＡＧＧＧＧＳＷＥＬＫＫＤＶＹＶＶＥＬＤＷＹＰＤＡＰＧＥＭＶＶＬＴＣＤＴＰＥＥＤＧＩＴＷＴＬＤＱＳＳＥＶＬＧＳＧＫＴＬＴＩＱＶＫＥＦＧＤＡＧＱＹＴＣＨＫＧＧＥＶＬＳＨＳＬＬＬＬＨＫＫＥＤＧＩＷＳＴＤＩＬＫＤＱＫＥＰＫＮＫＴＦＬＲＣＥＡＫＮＹＳＧＲＦＴＣＷＷＬＴＴＩＳＴＤＬＴＦＳＶＫＳＳＲＧＳＳＤＰＱＧＶＴＣＧＡＡＴＬＳＡＥＲＶＲＧＤＮＫＥＹＥＹＳＶＥＣＱＥＤＳＡＣＰＡＡＥＥＳＬＰＩＥＶＭＶＤＡＶＨＫＬＫＹＥＮＹＴＳＳＦＦＩＲＤＩＩＫＰＤＰＰＫＮＬＱＬＫＰＬＫＮＳＲＱＶＥＶＳＷＥＹＰＤＴＷＳＴＰＨＳＹＦＳＬＴＦＣＶＱＶＱＧＫＳＫＲＥＫＫＤＲＶＦＴＤＫＴＳＡＴＶＩＣＲＫＮＡＳＩＳＶＲＡＱＤＲＹＹＳＳＳＷＳＥＷＡＳＶＰＣＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４７：マウスＨｅｔ−Ｒ１サブユニット２
ＭＣＱＳＲＹＬＬＦＬ  ＡＴＬＡＬＬＮＨＬＳ  ＬＡＲＶＩＰＶＳＧＰ  ＡＲＣＬＳＱＳＲＮＬ  ＬＫＴＴＤＤＭＶＫＴ  ＡＲＥＫＬＫＨＹＳＣ  
ＴＡＥＤＩＤＨＥＤＩ  ＴＲＤＱＴＳＴＬＫＴ  ＣＬＰＬＥＬＨＫＮＥ  ＳＣＬＡＴＲＥＴＳＳ  ＴＴＲＧＳＣＬＰＰＱ  ＫＴＳＬＭＭＴＬＣＬ  
ＧＳＩＹＥＤＬＫＭＹ  ＱＴＥＦＱＡＩＮＡＡ  ＬＱＮＨＮＨＱＱＩＩ  ＬＤＫＧＭＬＶＡＩＤ  ＥＬＭＱＳＬＮＨＮＧ  ＥＴＬＲＱＫＰＰＶＧ  
ＥＡＤＰＹＲＶＫＭＫ  ＬＣＩＬＬＨＡＦＳＴ  ＲＶＶＴＩＮＲＶＭＧ  ＹＬＳＳＡＧＧＧＧＳ  ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ  ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ  
ＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶ  ＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴ  ＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴ  ＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤ  ＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤ  ＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫ  
ＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹ  ＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨ  ＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫ  ＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡ  ＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫ  ＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴ  
ＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫ  ＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫ  ＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥ  ＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮ  ＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳ  ＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬ  
ＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧ  ＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥ  ＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳ  ＬＳＬＳＰＧＫ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４８：ヒトＨｅｔ−Ｒ１サブユニット２
ＭＣＰＡＲＳＬＬＬＶＡＴＬＶＬＬＤＨＬＳＬＡＲＮＬＰＶＡＴＰＤＰＧＭＦＰＣＬＨＨＳＱＮＬＬＲＡＶＳＮＭＬＱＫＡＲＱＴＬＥＦＹＰＣＴＳＥＥＩＤＨＥＤＩＴＫＤＫＴＳＴＶＥＡＣＬＰＬＥＬＴＫＮＥＳＣＬＮＳＲＥＴＳＦＩＴＮＧＳＣＬＡＳＲＫＴＳＦＭＭＡＬＣＬＳＳＩＹＥＤＬＫＭＹＱＶＥＦＫＴＭＮＡＫＬＬＭＤＰＫＲＱＩＦＬＤＱＮＭＬＡＶＩＤＥＬＭＱＡＬＮＦＮＳＥＴＶＰＱＫＳＳＬＥＥＰＤＦＹＫＴＫＩＫＬＣＩＬＬＨＡＦＲＩＲＡＶＴＩＤＲＶＭＳＹＬＮＡＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４９：マウスＨｅｔ−Ｒ２サブユニット１
ＭＣＰＱＫＬＴＩＳＷ  ＦＡＩＶＬＬＶＳＰＬ  ＭＡＭＷＥＬＥＫＤＶ  ＹＶＶＥＶＤＷＴＰＤ  ＡＰＧＥＴＶＮＬＴＣ  ＤＴＰＥＥＤＤＩＴＷ  
ＴＳＤＱＲＨＧＶＩＧ  ＳＧＫＴＬＴＩＴＶＫ  ＥＦＬＤＡＧＱＹＴＣ  ＨＫＧＧＥＴＬＳＨＳ  ＨＬＬＬＨＫＫＥＮＧ  ＩＷＳＴＥＩＬＫＮＦ  
ＫＮＫＴＦＬＫＣＥＡ  ＰＮＹＳＧＲＦＴＣＳ  ＷＬＶＱＲＮＭＤＬＫ  ＦＮＩＫＳＳＳＳＳＰ  ＤＳＲＡＶＴＣＧＭＡ  ＳＬＳＡＥＫＶＴＬＤ  
ＱＲＤＹＥＫＹＳＶＳ  ＣＱＥＤＶＴＣＰＴＡ  ＥＥＴＬＰＩＥＬＡＬ  ＥＡＲＱＱＮＫＹＥＮ  ＹＳＴＳＦＦＩＲＤＩ  ＩＫＰＤＰＰＫＮＬＱ  
ＭＫＰＬＫＮＳＱＶＥ  ＶＳＷＥＹＰＤＳＷＳ  ＴＰＨＳＹＦＳＬＫＦ  ＦＶＲＩＱＲＫＫＥＫ  ＭＫＥＴＥＥＧＣＮＱ  ＫＧＡＦＬＶＥＫＴＳ  
ＴＥＶＱＣＫＧＧＮＶ  ＣＶＱＡＱＤＲＹＹＮ  ＳＳＣＳＫＷＡＣＶＰ  ＣＲＶＲＳＧＧＧＧＳ  ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ  ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ  
ＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶ  ＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴ  ＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴ  ＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤ  ＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤ  ＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫ  
ＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹ  ＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨ  ＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫ  ＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡ  ＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫ  ＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴ  
ＬＰＰＣＲＤＥＬＴＫ  ＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫ  ＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥ  ＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮ  ＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳ  ＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬ  
ＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧ  ＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥ  ＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳ  ＬＳＬＳＰＧＫ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．５０：ヒトＨｅｔ−Ｒ２サブユニット１
ＭＣＨＱＱＬＶＩＳＷＦＳＬＶＦＬＡＳＰＬＶＡＩＷＥＬＫＫＤＶＹＶＶＥＬＤＷＹＰＤＡＰＧＥＭＶＶＬＴＣＤＴＰＥＥＤＧＩＴＷＴＬＤＱＳＳＥＶＬＧＳＧＫＴＬＴＩＱＶＫＥＦＧＤＡＧＱＹＴＣＨＫＧＧＥＶＬＳＨＳＬＬＬＬＨＫＫＥＤＧＩＷＳＴＤＩＬＫＤＱＫＥＰＫＮＫＴＦＬＲＣＥＡＫＮＹＳＧＲＦＴＣＷＷＬＴＴＩＳＴＤＬＴＦＳＶＫＳＳＲＧＳＳＤＰＱＧＶＴＣＧＡＡＴＬＳＡＥＲＶＲＧＤＮＫＥＹＥＹＳＶＥＣＱＥＤＳＡＣＰＡＡＥＥＳＬＰＩＥＶＭＶＤＡＶＨＫＬＫＹＥＮＹＴＳＳＦＦＩＲＤＩＩＫＰＤＰＰＫＮＬＱＬＫＰＬＫＮＳＲＱＶＥＶＳＷＥＹＰＤＴＷＳＴＰＨＳＹＦＳＬＴＦＣＶＱＶＱＧＫＳＫＲＥＫＫＤＲＶＦＴＤＫＴＳＡＴＶＩＣＲＫＮＡＳＩＳＶＲＡＱＤＲＹＹＳＳＳＷＳＥＷＡＳＶＰＣＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＣＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．５１：マウスＨｅｔ−Ｒ２サブユニット２
ＭＡＱＴＶＲＥＣＳＬ  ＡＬＬＦＬＦＭＷＬＬ  ＩＫＡＮＩＤＶＣＫＬ  ＧＴＶＴＶＱＰＡＰＶ  ＩＰＬＧＳＡＡＮＩＳ  ＣＳＬＮＰＫＱＧＣＳ  
ＨＹＰＳＳＮＥＬＩＬ  ＬＫＦＶＮＤＶＬＶＥ  ＮＬＨＧＫＫＶＨＤＨ  ＴＧＨＳＳＴＦＱＶＴ  ＮＬＳＬＧＭＴＬＦＶ  ＣＫＬＮＣＳＮＳＱＫ  
ＫＰＰＶＰＶＣＧＶＥ  ＩＳＶＧＶＡＰＥＰＰ  ＱＮＩＳＣＶＱＥＧＥ  ＮＧＴＶＡＣＳＷＮＳ  ＧＫＶＴＹＬＫＴＮＹ  ＴＬＱＬＳＧＰＮＮＬ  
ＴＣＱＫＱＣＦＳＤＮ  ＲＱＮＣＮＲＬＤＬＧ  ＩＮＬＳＰＤＬＡＥＳ  ＲＦＩＶＲＶＴＡＩＮ  ＤＬＧＮＳＳＳＬＰＨ  ＴＦＴＦＬＤＩＶＩＰ  
ＬＰＰＷＤＩＲＩＮＦ  ＬＮＡＳＧＳＲＧＴＬ  ＱＷＥＤＥＧＱＶＶＬ  ＮＱＬＲＹＱＰＬＮＳ  ＴＳＷＮＭＶＮＡＴＮ  ＡＫＧＫＹＤＬＲＤＬ  
ＲＰＦＴＥＹＥＦＱＩ  ＳＳＫＬＨＬＳＧＧＳ  ＷＳＮＷＳＥＳＬＲＴ  ＲＴＰＥＥＥＰＧＧＧ  ＧＳＳＧＲＳＥＮＩＲ  ＴＡＧＧＧＧＳＲＶＩ  
ＰＶＳＧＰＡＲＣＬＳ  ＱＳＲＮＬＬＫＴＴＤ  ＤＭＶＫＴＡＲＥＫＬ  ＫＨＹＳＣＴＡＥＤＩ  ＤＨＥＤＩＴＲＤＱＴ  ＳＴＬＫＴＣＬＰＬＥ  
ＬＨＫＮＥＳＣＬＡＴ  ＲＥＴＳＳＴＴＲＧＳ  ＣＬＰＰＱＫＴＳＬＭ  ＭＴＬＣＬＧＳＩＹＥ  ＤＬＫＭＹＱＴＥＦＱ  ＡＩＮＡＡＬＱＮＨＮ  
ＨＱＱＩＩＬＤＫＧＭ  ＬＶＡＩＤＥＬＭＱＳ  ＬＮＨＮＧＥＴＬＲＱ  ＫＰＰＶＧＥＡＤＰＹ  ＲＶＫＭＫＬＣＩＬＬ  ＨＡＦＳＴＲＶＶＴＩ  
ＮＲＶＭＧＹＬＳＳＡ  ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ  ＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴ  ＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬ  ＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰ  ＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲ  
ＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤ  ＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦ  ＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨ  ＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱ  ＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶ  ＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮ  
ＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮ  ＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴ  ＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥ  ＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲ  ＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬ  ＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳ  
ＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧ  ＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰ  ＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦ  ＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳ  ＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣ  ＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨ  
ＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰ  ＧＫ  
ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．５２：ヒトＨｅｔ−Ｒ２サブユニット２
ＭＡＨＴＦＲＧＣＳＬＡＦＭＦＩＩＴＷＬＬＩＫＡＫＩＤＡＣＫＲＧＤＶＴＶＫＰＳＨＶＩＬＬＧＳＴＶＮＩＴＣＳＬＫＰＲＱＧＣＦＨＹＳＲＲＮＫＬＩＬＹＫＦＤＲＲＩＮＦＨＨＧＨＳＬＮＳＱＶＴＧＬＰＬＧＴＴＬＦＶＣＫＬＡＣＩＮＳＤＥＩＱＩＣＧＡＥＩＦＶＧＶＡＰＥＱＰＱＮＬＳＣＩＱＫＧＥＱＧＴＶＡＣＴＷＥＲＧＲＤＴＨＬＹＴＥＹＴＬＱＬＳＧＰＫＮＬＴＷＱＫＱＣＫＤＩＹＣＤＹＬＤＦＧＩＮＬＴＰＥＳＰＥＳＮＦＴＡＫＶＴＡＶＮＳＬＧＳＳＳＳＬＰＳＴＦＴＦＬＤＩＶＲＰＬＰＰＷＤＩＲＩＫＦＱＫＡＳＶＳＲＣＴＬＹＷＲＤＥＧＬＶＬＬＮＲＬＲＹＲＰＳＮＳＲＬＷＮＭＶＮＶＴＫＡＫＧＲＨＤＬＬＤＬＫＰＦＴＥＹＥＦＱＩＳＳＫＬＨＬＹＫＧＳＷＳＤＷＳＥＳＬＲＡＱＴＰＥＥＥＰＧＧＧＧＳＳＧＲＳＥＮＩＲＴＡＧＧＧＧＳＲＮＬＰＶＡＴＰＤＰＧＭＦＰＣＬＨＨＳＱＮＬＬＲＡＶＳＮＭＬＱＫＡＲＱＴＬＥＦＹＰＣＴＳＥＥＩＤＨＥＤＩＴＫＤＫＴＳＴＶＥＡＣＬＰＬＥＬＴＫＮＥＳＣＬＮＳＲＥＴＳＦＩＴＮＧＳＣＬＡＳＲＫＴＳＦＭＭＡＬＣＬＳＳＩＹＥＤＬＫＭＹＱＶＥＦＫＴＭＮＡＫＬＬＭＤＰＫＲＱＩＦＬＤＱＮＭＬＡＶＩＤＥＬＭＱＡＬＮＦＮＳＥＴＶＰＱＫＳＳＬＥＥＰＤＦＹＫＴＫＩＫＬＣＩＬＬＨＡＦＲＩＲＡＶＴＩＤＲＶＭＳＹＬＮＡＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＣＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
【０２４７】
出願人の開示は、図を参照して好ましい実施形態において本明細書に記載されており、同様の数字は同一または類似の要素を表す。本明細書を通じて「一実施形態（ｏｎｅ  ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」「実施形態（ａｎ  ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」、あるいは同様の用語への言及は、実施形態に関連して記載される特定の特徴、構造、または特性が、本発明の少なくとも１つの実施形態に含まれることを意味する。したがって、本明細書の全体にわたる「一実施形態では（ｉｎ  ｏｎｅ  ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」、「一実施形態では（ｉｎ  ａｎ  ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」、および、同様の用語のフレーズの出現は、必ずしもそうではないが、すべて同じ実施形態を指す場合がある。
【０２４８】
本出願の開示の記載される機能、構造、または特徴は、１つ以上の実施形態における任意の適切な様式で組み合わせられてもよい。本明細書の説明では、本発明の実施形態の完全な理解を提供するために、多数の特定の詳細が記載されている。しかし、当業者ならば、特定の詳細の１つ以上なしに、あるいは他の方法、構成要素、物質などを用いて、出願人の組成物および／または方法が実施され得ることを認識するだろう。他の例では、本開示の態様を不明瞭にするのを避けるために、周知の構造、物質、または操作は示されていないか、あるいは詳細に記載されていない。
【０２４９】
他に定義されない限り、本明細書で用いる全ての技術的および科学的用語は、当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものに類似する、ならびに同等である任意の方法および材料も、本開示の実施または試験において使用され得るが、好ましい方法と材料が本明細書に記載される。本明細書に詳述される方法は、開示される特定の順序に加えて、論理上可能な任意の順序で実施されてもよい。
【０２５０】
引用による組み込み
特許、特許出願、特許公報、雑誌、本、論文、ウェブコンテンツなどの他の文献への言及あるいは引用が本開示で行われる。これらの全ての文献は、あらゆる目的のために、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。参照によって本明細書に組み込まれると述べられているが、明示的に本明細書に記載される既存の定義、陳述、または他の開示材料と矛盾が生じる任意の材料あるいはその一部は、その組み込まれた材料と本開示の材料との間に矛盾が生じない範囲でのみ組み込まれる。矛盾が生じる場合、その矛盾は、本開示を好ましい開示として支持し、解決されることとなっている。
【０２５１】
同等物
代表的な実施例は、本発明を例示するのを助けるように意図されるものであって、本発明の範囲を限定するように意図されるものではなく、そのように解釈されるべきではない。実際に、本明細書に示され記載されるものに加えて、本発明の様々な変更ならびにその多くのさらなる実施形態は、実施例および本明細書に含まれる科学的文献および特許文献への参照を含む本明細書の全内容から、当業者に明らかになるだろう。その実施例は、その様々な実施形態ならびにその同等物における、本発明の実施に適合し得る重要な付加的情報、例証、およびガイダンスを含んでいる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９】
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【図１０−１】
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【図１０−２】
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【図１１】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１２Ｄ】
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【図１２Ｅ】
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【図１２Ｆ】
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【図１２Ｇ】
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【図１３】
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【図１４】
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【国際調査報告】
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