(57)【要約】  本発明は、ペプチドボロン酸エステル類化合物又はその薬学的に許容される塩、その調製方法及び薬学的使用である。前記ペプチドボロン酸エステル類化合物又はその薬学的に許容される塩は構造が式（Ｉ）に示される。前記化合物は、プロテアソーム阻害剤を調製するために用いることができ、固形腫瘍及び血腫の治療に使用することができる。
2021526159.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造が次の式に示される、ペプチドボロン酸エステル類化合物又はその薬学的に許容される塩。
【化１】
2021526159.tif 000077
ただし、
Ｒ１はＣ１〜１０アルキル、Ｃ１〜１０アルコキシ、Ｃ１〜１０アルコキシＣ１〜１０アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキル、フェニル、ナフチル、テトラリニル、２，５−ジクロロフェニル又は複素環基から選択され、或いは、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ１〜４シクロアルキル、ハロゲン又はハロＣ１〜４アルキルで任意に置換され、
Ｒ２はＨ、フェニル、メトキシ、メチルチオ、シクロヘキシル、２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキサンから選択され、或いは、一つ又は複数のＣ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、ニトロ、ハロゲン又はトリフルオロメチルで任意に置換され、
Ｂ、Ｚ１及びＺ２は一緒にＮ、Ｓ又はＯを含む複素環基を形成し、或いは、Ｂ、Ｚ１及びＺ２は一緒にＯを含む複素環基を形成し、ホウ素原子に酸素原子が接続されている。
【請求項２】
前記Ｒ１は、Ｃ１〜１０アルキル、Ｃ１〜１０アルコキシ、Ｃ１〜１０アルコキシメチル、Ｃ１〜１０アルコキシエチル、Ｃ３〜６シクロアルキル、フェニル、２，５−ジクロロフェニル、ピラジニル、ピリジル、ナフチル、テトラリニル、オキサゾリル又はイソキサゾリルから選択される、或いは、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、ハロゲン又はハロＣ１〜４アルキルで任意に置換されることを特徴とする、請求項１に記載のペプチドボロン酸エステル類化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
前記Ｒ１は、下記式から選択されることを特徴とする、請求項１に記載のペプチドボロン酸エステル類化合物又はその薬学的に許容される塩。
【化２】
2021526159.tif 000078
ただし、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は独立して水素、メチル、メトキシ、エチル、エトキシ、塩素、臭素、フッ素又はトリフルオロメチルから選択される。
【請求項４】
前記Ｒ２はフェニル、メトキシ、メチルメルカプト、シクロヘキシル、２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキサンから選択される、或いは、一つ又は複数のＣ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、ハロゲン又はトリフルオロメチルで任意に置換されることを特徴とする、請求項１に記載のペプチドボロン酸エステル類化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項５】
前記Ｂ、Ｚ１及びＺ２は一緒にボロン酸−α−ピナンジオールエステルを形成し、或いは、Ｂ、Ｚ１及びＺ２は一緒にボレートを形成し、ホウ素原子に酸素原子が接続されていることを特徴とする、請求項１に記載のペプチドボロン酸エステル類化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項６】
前記Ｂ、Ｚ１及びＺ２は一緒にボロン酸−α−ピナンジオールエステルを形成し、或いは、Ｂ、Ｚ１及びＺ２は一緒にジエタノールアミンボレート、クエン酸ボレート、酒石酸ボレート、リンゴ酸ボレート、α−ヒドロキシ−グルタル酸ボレートを形成し、或いは、グルコースのｏ−ヒドロキシ構造とともにグルコースボレートを形成していることを特徴とする請求項１に記載のペプチドボロン酸エステル類化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項７】
下記から選択される化合物又はその薬学的に許容される塩。
【化３】
2021526159.tif 000079
【化４】
2021526159.tif 000080
【請求項８】
薬学的に許容される担体及び請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物を含み、任意に、一種又は複数種の他の治療剤と同時、別個又は順次に組み合わせる、薬物組成物。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物のプロテアソーム阻害剤の調製における使用。
【請求項１０】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物の疾患の治療用薬物の調製における使用であって、前記疾患は固形腫瘍及び血腫から選択され、固形腫瘍は非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮細胞癌、膵臓癌、乳癌、前立腺癌、肝臓癌、皮膚癌、上皮細胞癌、消化管間質腫瘍又は鼻咽頭癌から選択され、血腫は白血病、多発性骨髄腫、マントル細胞リンパ腫又は組織球性リンパ腫から選択されることを特徴とする使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は薬物合成分野に属し、具体的には、一連の新規なペプチドボロン酸エステル類化合物の調製方法及びその薬力学的応用に関している。
【背景技術】
【０００２】
現在、癌はヒトの健康を脅かす主な疾患の一つである。現在、癌の治療は手術療法、化学療法、放射線療法などの分野で大きな進歩を遂げたが、癌を根本的に治療することはできない。現在市販されている抗癌薬物は一定の治療効果があるが、ひどい毒性や副作用がある。したがって、如何にして効果的な腫瘍標的から標的する新規な抗癌薬物を研究するかを深く検討し研究することは、医療従事者にとって当面の急務となっている。
【０００３】
ユビキチン−プロテアソーム経路（Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ−Ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ  Ｐａｔｈｗａｙ、ＵＰＰと略称する）は、細胞内タンパク質分解の主な経路であり、シグナル伝達、免疫応答、アンフォールドタンパク応答、細胞周期進行を含めて、生理学的に重要な多くの細胞プロセスに関与している。この経路は、心・脳血管疾患、癌、神経変性疾患の発症などに大きく関わっている。いくつかの効果的な阻害剤を使用してこの経路で重要なタンパク質の過剰分解を阻害することは、上記疾患の治療に新しいアイデアを提供する。この新しい標的に対し、最初のプロテアソーム阻害剤であるボルテゾミブ（ＰＳ−３４１）は、２００３年にＦＤＡによって市販が承認され、再発性骨髄腫を治療するために用いられている。この薬は、また、２００４年に欧州連合での市販が承認され、多発性骨髄腫に用いられている。２００５年９月に、この薬は西安ヤンセンによって導入され、中国の広州で最初に市販された。２００５年に、この薬は同時にフランス、オランダ、ベルギーで製薬業界のノーベル賞である「ＰｒｉｘＧａｌｉｅｎ」賞を受賞した。また、２００７年７月１１日に、米国ＦＤＡによって承認され、再発または難治性のマントル細胞リンパ腫（Ｍａｎｔｌｅ  Ｃｅｌｌ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ、ＭＣＬと略称する）を治療するために用いられ、現在ＦＤＡによって承認された、ＭＣＬを治療する唯一の薬物となった。ＦＤＡは、ベルケイドの皮下投与を承認した。これにより、ベルケイドの吸収が容易になるだけでなく、ベルケイドに対する患者の耐性が大幅に向上し、副作用が軽減された。
【０００４】
２０１４年に、ベルケイドの売上高は３０．６９億米ドルに達し、世界で最も売れている腫瘍薬物のトップ２０の一つになった。ベルケイドは中国市場において３．５ミリグラムあたり約１３０００元であり、１周期の治療費用が約４万元であり、このような高額な費用は、多くの患者にとって非常に大きな経済的負担となっている。また、現在の臨床データにより、このような薬物が疲労、吐き気、下痢及び神経障害などの多くの副作用も持っていることを示した。したがって、価格が低く、毒性や副作用が少なく、治療効果が高いプロテアソーム阻害剤薬物を如何に開発するかは、現在私たちが解決しなければならない主な問題となっている。
【０００５】
治療効果が確かに証明されたこの標的に対し、新規な構造である一連のペプチドボロン酸エステル化合物によるプロテアソーム阻害剤を設計した。
【発明の概要】
【０００６】
本発明の目的は、新規な構造で、プロテアソーム阻害機能を有する経口摂取可能な一連の新規なペプチドボロン酸エステル類化合物を合成することである。２０Ｓプロテアソーム阻害剤としては、腫瘍細胞の増殖を効果的に阻止し、腫瘍細胞のアポトーシスを誘導することができるため、悪性腫瘍などのヒト及び動物の様々な疾患の予防及び治療に用いられている。
【０００７】
本発明の目的は、薬学的に許容される担体及び本発明のペプチドボロン酸エステル類化合物を含み、任意に、一種又は複数種の他の治療剤と同時、別個又は順次に組み合わせる薬物組成物を提供することである。
【０００８】
本発明のもう一つの目的は、ペプチドボロン酸エステル類化合物のプロテアソーム阻害剤の調製における使用を提供することである。
【０００９】
本発明のもう一つの目的は、ペプチドボロン酸エステル類化合物の抗腫瘍薬物の調製における使用を提供することである。本発明において、前記腫瘍は固形腫瘍及び血腫を含み、固形腫瘍は非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮細胞癌、膵臓癌、乳癌、前立腺癌、肝臓癌、皮膚癌、上皮細胞癌、消化管間質腫瘍又は鼻咽頭癌から選択され、血腫は白血病、多発性骨髄腫、マントル細胞リンパ腫又は組織球性リンパ腫から選択される。
【００１０】
本発明の別の目的は、上記ペプチドボロン酸エステル類化合物の調製方法を提供することである。
【００１１】
本発明の目的は、具体的に以下の手段により達成することができる。
【００１２】
構造が式Ｉに示される、ペプチドボロン酸エステル類化合物又はその薬学的に許容される塩。
【００１３】
【化１】
2021526159.tif 000003
ただし、
Ｒ１は、Ｃ１〜１０アルキル、Ｃ１〜１０アルコキシ、Ｃ１〜１０アルコキシＣ１〜１０アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキル、フェニル、ナフチル、テトラリニル、２，５−ジクロロフェニル又は複素環基から選択される、或いは、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｃ１〜４シクロアルキル、ハロゲン又はハロＣ１〜４アルキルで任意に置換され、Ｒ１としては、好ましくはＣ１〜１０アルキル、Ｃ１〜１０アルコキシ、Ｃ１〜１０アルコキシメチル、Ｃ１〜１０アルコキシエチル、Ｃ３〜６シクロアルキル、フェニル、２，５−ジクロロフェニル、ピラジニル、ピリジル、ナフチル、テトラリニル、オキサゾリル又はイソキサゾリルである、或いは、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、ハロゲン又はハロＣ１〜４アルキルで任意に置換される。
【００１４】
さらに、Ｒ１としては、好ましくは下記の構造である。
【００１５】
【化２】
2021526159.tif 000004
【００１６】
ここで、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は独立して水素、メチル、メトキシ、エチル、エトキシ、塩素、臭素、フッ素又はトリフルオロメチルから選択される。
【００１７】
Ｒ２はＨ、フェニル、メトキシ、メチルチオ、シクロヘキシル、２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキサンから選択され、或いは、一つ又は複数のＣ１〜４アルキル、Ｃ１〜４アルコキシ、ニトロ、ハロゲン又はトリフルオロメチルで任意に置換される。
【００１８】
Ｂ、Ｚ１及びＺ２は一緒にＮ、Ｓ又はＯを含む複素環基を形成し、或いは、Ｂ、Ｚ１及びＺ２は一緒にＯを含む複素環基を形成し、ホウ素原子に酸素原子が接続されている。好ましくは、Ｂ、Ｚ１及びＺ２は一緒にボロン酸−α−ピナンジオールエステルを形成し、或いは、Ｂ、Ｚ１及びＺ２は一緒にボレートを形成し、ホウ素原子に酸素原子が接続されている。さらに好ましくは、Ｂ、Ｚ１及びＺ２は一緒にボロン酸−α−ピナンジオールエステルを形成し、或いは、Ｂ、Ｚ１及びＺ２は一緒にジエタノールアミンボレート、クエン酸ボレート、酒石酸ボレート、リンゴ酸ボレート、α−ヒドロキシ−グルタル酸ボレートを形成し、グルコースのｏ−ヒドロキシ構造とともにグルコースボレートなどの他のプロドラッグを形成する。
【００１９】
本発明において、Ｒ１、Ｒ２基での「．．．で任意に置換される」とは、Ｒ１、Ｒ２基がこれらの基で置換されてもよく、これらの基で置換されていなくてもよいことであり、即ち、挙げられたこれらの基で置換されることのみに限られず、挙げられたこれらの基で置換されていないことも含む。このような表現は、「Ｒ１は置換又は無置換のＣ１〜１０のアルキル、Ｃ３〜６のシクロアルキル又はヘテロシクロアルキル、フェニル、ナフチル又はインドリルであり、ここで置換基はＣ１〜４のアルキル、Ｃ１〜４のアルコキシ、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、アミノ又はハロゲンである」という表現と同じであるが、置換又は無置換は、Ｃ１〜１０のアルキルのみに狭義に限定されておらず、全ての前記基まで拡大し、即ち、置換又は無置換のＣ３〜６のシクロアルキル又はヘテロシクロアルキル、置換又は無置換のベンジル、置換又は無置換のナフチルメチル、置換又は無置換のインドリルメチルなどを含み、ここで置換基はＣ１〜４のアルキル、Ｃ１〜４のアルコキシ、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、アミノ又はハロゲンである。
【００２０】
用語「アルキル」は飽和炭化水素基を示し、Ｃ１〜１０のアルキルとは１〜１０個の炭素原子を含む飽和炭化水素基であり、Ｃ１〜４のアルキルとは１〜４個の炭素原子を含む飽和炭化水素基である。
【００２１】
用語「シクロアルキル」とは非芳香族炭素環基であり、環化したアルキルを含む。シクロアルキルは二環又は多環系を含んでもよい。シクロアルキルの例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルを含み、Ｃ３〜６のシクロアルキルとは３〜６個の炭素原子を含むシクロアルキルである。
【００２２】
用語「ベンジル」とはフェニルメチルであり、置換されたベンジルとは、ベンジルのベンゼン環において少なくとも一つの水素原子が非水素部分で置換されたものであり、ベンジルの置換基はハロゲン、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＨ２、１〜６個の炭素の直鎖又は分岐鎖アルキル、１〜６個の炭素の置換の直鎖又は分岐鎖アルキルであってもよい。
【００２３】
用語「ヘテロシクロアルキル」とは非芳香族ヘテロ炭素環基であり、環化したアルキルを含み、一つ又は複数の環形成炭素原子はＯ、Ｎ又はＳ原子のようなヘテロ原子で置換される。ヘテロシクロアルキルは３、４、５、６又は７個の環形成原子を有することが好ましい。
【００２４】
用語「複素環基」とは、Ｏ、Ｎ又はＳというヘテロ原子を含む環状基であり、フリル、チエニル、ピロリル、チアゾリル、イミダゾリル、ピリジル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、キノリル、イソキノリル、インドリル、ベンゾフリル、プリニル、アクリジニル、オキサゾリル、イソキサゾリルなどの芳香族複素環基又は非芳香族複素環基を含む。
【００２５】
「１−ナフチルメチル」とは、下記の構造である。
【化３】
2021526159.tif 000005
【００２６】
「２−ナフチルメチル」とは、下記の構造である。
【化４】
2021526159.tif 000006
【００２７】
「インドリルメチル」とは、下記の構造である。
【化５】
2021526159.tif 000007
【００２８】
「２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキサン」とは、下記の構造である。
【化６】
2021526159.tif 000008
【００２９】
「テトラリニル」とは、下記の構造である。
【化７】
2021526159.tif 000009
【００３０】
「オキサゾリル」とは、下記の構造である。
【化８】
2021526159.tif 000010
【００３１】
「イソキサゾリル」とは、下記の構造である。
【化９】
2021526159.tif 000011
【００３２】
「ジエタノールアミンボレート」とは、下記の構造である。
【化１０】
2021526159.tif 000012
【００３３】
「クエン酸ボレート」とは、下記の構造である。
【化１１】
2021526159.tif 000013
【００３４】
「酒石酸ボレート」とは、下記の構造である。
【化１２】
2021526159.tif 000014
【００３５】
「リンゴ酸ボレート」とは、下記の構造である。
【化１３】
2021526159.tif 000015
【００３６】
「α−ヒドロキシ−グルタル酸ボレート」とは、下記の構造である。
【化１４】
2021526159.tif 000016
【００３７】
「グルコースボレート」とは、下記の構造である。
【化１５】
2021526159.tif 000017
【００３８】
「アルコキシ」とは−Ｏ−アルキル基であり、その炭素原子数が一般的に１〜１０個である。アルコキシの例は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ（例えばｎ−プロポキシ及びイソプロポキシ）、ｔ−ブトキシなどを含む。
【００３９】
「アリール」とは芳香族炭素環基であり、フェニル、ナフチル、アントリル、フェナントリルなどの単環又は多環芳香族炭化水素基を含む。
【００４０】
「アリールオキシ」とは−Ｏ−アリールであり、アリールの概念は上記したとおりであり、アリールオキシの最も好ましい例はフェノキシである。
【００４１】
「ハロゲン」はフッ素、塩素、臭素及びヨウ素を含む。
【００４２】
本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩は、下記の構造から選択される。
【００４３】
【化１６】
2021526159.tif 000018
【００４４】
【化１７】
2021526159.tif 000019
【００４５】
本発明の化合物は抗腫瘍薬物を調製するために用いることができ、その一般的な調製経路は以下のとおりである。
【００４６】
【化１８】
2021526159.tif 000020
【００４７】
この反応式において、各基Ｒ１、Ｒ２、Ｚ１及びＺ２の定義は前記したとおりである。第１の経路では、フタルイミドとクロロ酢酸エチルを反応させて式（ＩＩ−１）の化合物を生成し、式（ＩＩ−１）の化合物とアラニンを反応させて式（ＩＩ−２）の化合物を生成し、式（ＩＩ−２）の化合物と８−アミノキノリンを反応させて式（ＩＩ−３）の化合物を生成し、式（ＩＩ−３）の化合物とヨウ化アリールを反応させて式（ＩＩ−４）の化合物を生成し、式（ＩＩ−４）の化合物を三フッ化ホウ素エーテラートの存在下で反応させて式（ＩＩ−５）の化合物を生成し、式（ＩＩ−５）の化合物をエチレンジアミンの存在下で反応させて式（ＩＩ）の化合物を生成する。第２の経路では、式（ＩＩＩ−１）の化合物をＳＯＣｌ２の作用下でメタノールと反応させて式（ＩＩＩ）の化合物を得る。第１の経路における式（ＩＩ）又は第２の経路における式（ＩＩＩ）の化合物はペプチド縮合剤の存在下でそれぞれＲ１−ＣＯＯＨと式（Ｉ−１）の化合物を生成し、式（Ｉ−１）の化合物をケン化して酸化し、式（Ｉ−２）の化合物を生成し、式（Ｉ−２）の化合物をペプチド縮合剤の存在下でボレートのアミノ塩酸塩又はトリフルオロ酢酸塩と縮合し、式（Ｉ−３）の化合物を生成し、式（Ｉ−３）の化合物を酸性条件で反応させて式（ＩＶ）の化合物を生成し、最後に式（ＩＶ）の化合物を加熱酢酸エチルの存在下で反応させて式（Ｉ）の化合物を生成する。
【００４８】
Ｒ１、Ｒ２、Ｚ１及びＺ２の定義は上記したとおりである。
【００４９】
以下に本発明の化合物の調製方法をより具体的に詳述する。
【００５０】
１、化合物ＩＩの調製方法は以下の工程を含む。
【００５１】
【化１９】
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【００５２】
１）フタルイミドとクロロ酢酸エチルをトリエチルアミンの作用下で反応させ、構造が式（ＩＩ−１）である化合物を得る。
【００５３】
２）構造が式（ＩＩ−１）である化合物とアラニンをＮａ２ＣＯ３及びＨ２Ｏの存在下で反応させ、構造が式（ＩＩ−２）である化合物を生成する。
【００５４】
３）構造が式（ＩＩ−２）である化合物をＳＯＣｌ２の作用下で反応させて酸クロリドを生成した後、アルカリ条件で８−アミノキノリンと反応させて式（ＩＩ−３）の化合物を生成する。
【００５５】
４）構造が式（ＩＩ−３）である化合物とヨウ化アリールをパラジウム及びテトラフルオロホウ酸銀の存在下で反応させて式（ＩＩ−４）の化合物を生成する。
【００５６】
５）構造が式（ＩＩ−４）である化合物を三フッ化ホウ素エーテラートの存在下でメタノールと反応させて式（ＩＩ−５）の化合物を生成する。
【００５７】
６）構造が式（ＩＩ−５）である化合物をエチレンジアミンの存在下でメタノールと反応させて式（ＩＩ）の化合物を生成する。
【００５８】
２、化合物（ＩＩＩ）の調製方法は以下の工程を含む。
【００５９】
【化２０】
2021526159.tif 000022
【００６０】
構造が式（ＩＩＩ−１）であるアミノ酸をＳＯＣｌ２の作用下でメタノールと反応させ、構造が式（ＩＩＩ）である化合物を得る。
【００６１】
３、化合物（Ｉ）の調製方法は以下の工程を含む。
【００６２】
【化２１】
2021526159.tif 000023
【００６３】
１）式（ＩＩ）又は式（ＩＩＩ）に示される化合物をペプチド縮合剤の存在下でＲ１−ＣＯＯＨと反応させて式（Ｉ−１）の化合物を生成する。
【００６４】
２）構造が式（Ｉ−１）である化合物をアルカリ条件でケン化反応させ、そのナトリウム塩を生成し、続いて酸性条件で化合物（Ｉ−２）を生成する。
【００６５】
３）式（Ｉ−２）の化合物をペプチド縮合剤の存在下でボレートのアミノ塩酸塩又はトリフルオロ酢酸塩と縮合し、式（Ｉ−３）の化合物を生成する。
【００６６】
４）式（Ｉ−３）の化合物をイソブチルボロン酸の存在下で反応させて式（ＩＶ）の化合物を生成する。
【００６７】
５）式（ＩＶ）の化合物を、沸騰した酢酸エチルの存在下で反応させて式（Ｉ）の化合物を生成する。
【００６８】
上記反応において、ペプチド縮合剤は通常Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシル−カルボジイミド（ＤＣＣと略称する）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ・ＨＣｌと略称する）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔと略称する）又はクロロギ酸イソブチルである。
【００６９】
Ｒ１、Ｒ２、Ｚ１及びＺ２の定義は上記したとおりである。
【００７０】
実験により、本発明の化合物は、優れたプロテアソーム阻害活性及び抗腫瘍活性を有し、一部の化合物はナノモルレベルで優れたプロテアソーム阻害活性及び抗腫瘍作用を示し、プロテアソーム阻害剤または抗腫瘍薬物の調製に応用価値を有していることが示される。本発明におけるペプチドボロン酸エステル化合物は、ペプチドボロン酸化合物よりも優れた薬物動態性質を有している。
【００７１】
同時に、本発明で設計された化合物の調製方法は、収率が高く、プロセスが簡単であり、工業的生産に適している。
【図面の簡単な説明】
【００７２】
【図１】異なる化合物を投与した後ＡＲＨ−７７異種移植腫瘍の成長傾向である。
【図２】血球におけるプロテアソームの活性の検出結果である。
【発明を実施するための形態】
【００７３】
第一部分  化合物の合成
本発明の化合物の調製は以下の過程により実施することができる。
【００７４】
一、化合物（ＩＩ）の調製
【化２２】
2021526159.tif 000024
【００７５】
１、Ｎ−フタルイミドエチルアセテートＩＩ−１の調製：
フタルイミドをＤＭＦに溶解し、トリエチルアミンを添加し、０℃で反応系にクロロ酢酸エチルを滴下し、ゆっくりと室温まで上昇させた後、２時間反応させ、反応液を氷水に注ぎ、濾過し、濾過ケーキを氷水で洗浄し、真空乾燥して純粋な（式ＩＩ−１）の化合物を得た。
【００７６】
２、Ｎ−フタロイルで保護されたアラニンＩＩ−２の調製：
化合物ＩＩ−１及びＬ−アラニンをＨ２Ｏに溶解し、Ｎａ２ＣＯ３を添加して２時間反応させ、１ＮのＨＣｌを添加してｐＨを２に調節し、濾過し、真空乾燥して純粋な（式ＩＩ−２）の化合物を得た。
【００７７】
３、化合物ＩＩ−３の調製：
化合物ＩＩ−２をＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、ＳＯＣｌ２を添加して６時間凝縮還流させ、溶媒を減圧留去した。８−アミノキノリン及びＤＩＰＥＡをＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、−２０℃でＣＨ２Ｃｌ２に溶解した酸クロリドを滴下し、ゆっくりと室温まで上昇させ、一晩反応させた。溶媒を減圧留去し、カラムクロマトグラフィーにより分離して化合物ＩＩ−３を得た。
【００７８】
４、化合物ＩＩ−４の調製：
化合物ＩＩ−３をｔ−ブチルアルコールに溶解し、酢酸パラジウム、テトラフルオロホウ酸銀及びヨウ化アルキルを添加し、２４時間凝縮還流させ、室温に戻した後、ＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、トリエチルアミンを添加して３時間反応させ、珪藻土を通過させ、溶媒を減圧留去し、カラムクロマトグラフィーにより分離して化合物ＩＩ−４を得た。
【００７９】
５、化合物ＩＩ−５の調製：
厚肉耐圧フラスコに、化合物ＩＩ−４をＭｅＯＨに溶解し、三フッ化ホウ素エーテラート溶液を滴下し、１００℃で一晩反応させ、トリエチルアミンを添加して撹拌し、溶媒を減圧留去し、ＣＨ２Ｃｌ２に溶解した後、それぞれ酸洗浄（１０％塩酸）、アルカリ洗浄（５％炭酸水素ナトリウム）及び飽和食塩水洗浄を行い、乾燥剤（無水硫酸ナトリウム及び無水硫酸マグネシウム）で乾燥させた。乾燥剤を濾過除去し、溶媒を減圧下で蒸発乾燥し、カラムクロマトグラフィーにより分離して化合物ＩＩ−５を得た。
【００８０】
６、化合物ＩＩの調製：
化合物ＩＩ−５をＭｅＯＨに溶解し、エチレンジアミンを添加し、７０℃で５時間凝縮還流させて反応させ、濾過し、濾液から溶媒を減圧下で蒸発乾燥し、カラムクロマトグラフィーにより分離して化合物ＩＩを得た。
【００８１】
二、化合物（ＩＩＩ）の調製
【化２３】
2021526159.tif 000025
【００８２】
化合物ＩＩＩ−１をＭｅＯＨに溶解し、氷塩浴にてＳＯＣｌ２を滴下し、滴下終了後、室温まで上昇させ、一晩静置し、溶媒を減圧下で蒸発乾燥し、化合物ＩＩＩを得た。
【００８３】
三、化合物（Ｉ）の調製
【化２４】
2021526159.tif 000026
【００８４】
１、化合物Ｉ−１の調製：
Ｒ１−ＣＯＯＨをＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）を添加し、−５℃で１０分間反応させた後、ペプチド縮合剤（ＥＤＣ・ＨＣｌ）を添加し、２０分間反応させ、化合物ＩＩ又はＩＩＩを添加し、１０分間後、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）を添加し、３０分間反応させた後、室温で一晩撹拌した。反応液に対してそれぞれ酸洗浄（１０％塩酸）、アルカリ洗浄（５％炭酸水素ナトリウム）及び飽和食塩水洗浄を行い、乾燥剤（無水硫酸ナトリウム及び無水硫酸マグネシウム）で乾燥させた。乾燥剤を濾過除去し、溶媒を減圧下で蒸発乾燥し、カラムクロマトグラフィーにより分離して化合物Ｉ−１を得た。
【００８５】
２、化合物Ｉ−２の調製：
化合物Ｉ−１をＭｅＯＨに溶解し、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ及びＨ２Ｏを添加し、３時間反応させた後、ＭｅＯＨを減圧留去し、１ＮのＨＣｌを添加してｐＨを２に調節し、酢酸エチルで抽出して分液し、溶媒を減圧下で蒸発乾燥し、化合物Ｉ−２を得た。
【００８６】
３、化合物Ｉ−３の調製：
化合物Ｉ−２をＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）を添加し、−５℃で１０分間反応させた後、ペプチド縮合剤（ＥＤＣ・ＨＣｌ）を添加し、２０分間反応させ、ボレートの塩酸塩又はトリフルオロ酢酸塩を添加し、１０分間後、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）を添加し、３０分間反応させた後、室温で一晩撹拌した。反応液に対してそれぞれ酸洗浄（１０％塩酸）、アルカリ洗浄（５％炭酸水素ナトリウム）及び飽和食塩水洗浄を行い、乾燥剤（無水硫酸ナトリウム及び無水硫酸マグネシウム）で乾燥させた。乾燥剤を濾過除去し、溶媒を減圧下で蒸発乾燥し、カラムクロマトグラフィーにより分離して化合物Ｉ−３を得た。
【００８７】
４、化合物ＩＶの調製
化合物Ｉ−３をＭｅＯＨに溶解し、イソブチルボロン酸、ｎ−ヘキサン及び１ＮのＨＣｌを添加し、一晩反応させた。分液し、ＭｅＯＨでｎ−ヘキサン相を２回抽出し、更にｎ−ヘキサンでメタノール相を１回洗浄し、メタノールを減圧留去し、ＣＨ２Ｃｌ２で水相を２回抽出し、水相が中性になるまで飽和食塩水で有機相を洗浄した。溶媒を減圧下で蒸発乾燥し、カラムクロマトグラフィーにより分離して化合物ＩＶを得た。
【００８８】
５、化合物Ｉの調製
７４℃でグリコールを含むアミン又は酸を酢酸エチルに溶解し、化合物ＩＶを添加し、６０℃まで降下させ、３時間反応させ、更に２５℃まで降下させて一晩反応させた。濾過し、真空乾燥して純粋な（式Ｉ）化合物を得た。
【００８９】
以下に具体的な化合物の合成により本発明の化合物の調製過程を説明した。
【００９０】
一、式（ＩＩ）の化合物の調製：
【化２５】
2021526159.tif 000027
【００９１】
１、Ｎ−フタルイミドエチルアセテート（化合物ＩＩ−１）の調製
フタルイミド（７．３６ｇ、５０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２５ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（９ｍＬ、６５ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で反応系にクロロ酢酸エチル（５．７ｍＬ、６０ｍｍｏｌ）を滴下し、ゆっくりと室温まで上昇させた後、ＴＬＣで反応を確認し、２ｈ後に反応が終了した後、反応液を氷水に注ぎ、濾過し、濾過ケーキを氷水で洗浄し、真空乾燥して純粋なＮ−フタルイミドエチルアセテート８．６７ｇを得た。収率７９．１％，  ｍｐ  ８１．４〜８３．６℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １．４４  （−ＣＨ３，  ｔ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ，  ３Ｈ），  ４．４８  （−ＣＨ２，  ｑ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ７．８０  −  ７．８５  （−Ｐｈ，  ｍ，  ２Ｈ），  ７．９３  −  ７．９９  （−Ｐｈ，  ｍ，  ２Ｈ）。ＭＳ  （ＥＳＩ）：  ｍ／ｚ  ２２０．１  ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００９２】
２、Ｎ−フタロイルで保護されたアラニン（化合物ＩＩ−２）の調製：
化合物ＩＩ−１（２１．９ｇ、１００ｍｍｏｌ）及びＬ−アラニン（８．９ｇ、１０ｍｍｏｌ）をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）に溶解し、Ｎａ２ＣＯ３（１０．６ｇ、１００ｍｍｏｌ）を添加し、ＴＬＣで反応を確認し、２ｈ後に反応が終了した後、１ＮのＨＣｌを添加してｐＨを２に調節し、濾過し、真空乾燥して純粋な（式ＩＩ−２）化合物１７．４ｇを得た。収率７９．３％，  ｍｐ  １４５．８〜１４６．６℃。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １．７１  （−ＣＨ３，  ｄ，  Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ，  ３Ｈ），  ５．０２  （−ＣＨ，  ｑ，  Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．６９  −  ７．７５  （−Ｐｈ，  ｍ，  ２Ｈ），  ７．８２  −  ７．８８  （−Ｐｈ，  ｍ，  ２Ｈ）。ＭＳ  （ＥＳＩ）：  ｍ／ｚ２１８．２  ［Ｍ−Ｈ］−。
【００９３】
３、（Ｓ）−２−（フタルイミド）−Ｎ−（８−キノリル）プロピオンアミド（化合物ＩＩ−３）の調製：
化合物ＩＩ−２（１７．３７ｇ、７９．２５ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（８０ｍＬ）に溶解し、ＳＯＣｌ２（２９ｍＬ、３９６．２５ｍｍｏｌ）を添加して６時間凝縮還流させ、溶媒を減圧留去した。８−アミノキノリン（１１．４ｇ、７９．２５ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（２０．５ｇ、１５８．５ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（１０３ｍＬ）に溶解し、−２０℃でＣＨ２Ｃｌ２（３１ｍＬ）に溶解した酸クロリドを滴下し、滴下終了後、ゆっくりと室温まで上昇させ、一晩反応させた。ＴＬＣで反応を確認し、溶媒を減圧留去し、カラムクロマトグラフィーにより分離してＩＩ−３化合物２１．２ｇを得た。収率７７．４２％，  ｍｐ  １８０．０〜１８１．９℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １．９８  （−ＣＨ３，  ｄ，  Ｊ  ＝  ７．３  Ｈｚ，  ３Ｈ），  ５．２７  （−ＣＨ，  ｑ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．４２  （−Ｐｈ，  ｄｄ，  Ｊ１  ＝  ４．２  Ｈｚ，  Ｊ２  ＝  ８．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．５１  （−Ｐｈ，  ｓ，  １Ｈ），  ７．５３  （−Ｐｙ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ９．０  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．６５  −  ７．８５  （−Ｐｈ，  ｍ，  ２Ｈ），  ７．９０  （−Ｐｈ，  ｄｔ，  Ｊ１  ＝  ３．６  Ｈｚ，  Ｊ２  ＝  ７．１  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ８．１５  （−Ｐｙ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ８．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ８．６９  （−Ｐｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ４．２  Ｈｚ，  １Ｈ），  ８．７３  （−Ｐｙ，  ｄｄ，  Ｊ１  ＝  ４．７  Ｈｚ，  Ｊ２  ＝  ８．９  Ｈｚ，  １Ｈ），  １０．３３  （−ＣＯＮＨ，  ｓ，  １Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：  ｍ／ｚ３４６．０  ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００９４】
４、（Ｓ）−２−アミノ−３−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）プロピオン酸メチル（ＩＩ−４ａ）の調製
（１）（Ｓ）−２−（フタルイミド）−Ｎ−（８−キノリル）−３−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）プロピオンアミド（ＩＩ−４ａ）の調製
【化２６】
2021526159.tif 000028
【００９５】
化合物ＩＩ−３（５．２ｇ、１５ｍｏｌ）をｔ−ブチルアルコール（１０５ｍＬ）に溶解し、酢酸パラジウム（３３１ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）、テトラフルオロホウ酸銀（３．６５ｇ、１８．７５ｍｍｏｌ）及び４−ヨードベンゾトリフルオリド（６．１２ｇ、２２．５ｍｍｏｌ）を添加し、８５℃で２４ｈ凝縮還流させ、ＴＬＣで反応を確認し、室温まで上昇させた後、ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、トリエチルアミン（１０ｍＬ）を添加して３ｈ撹拌し、反応液を珪藻土に通過させ、溶媒を減圧留去し、カラムクロマトグラフィーにより分離して固体生成物５．３ｇを得た。収率７２．１％，  ｍｐ  １２４．０〜１２５．５℃。  １Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ３．７７  −  ３．９５  （−ＣＨ２，  ｍ，  ２Ｈ）  ，  ５．４７  （−ＣＨ，  ｄｄ，  Ｊ１  ＝  ６．９  Ｈｚ，  Ｊ２  ＝  ９．７  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．３９  （−Ｐｈ，  ｄｄ，  Ｊ１  ＝  ４．３  Ｈｚ，  Ｊ２  ＝  ８．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．４２  （−Ｐｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ８．１  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ７．４９  （−Ｐｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ８．２  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ７．５１  （−Ｐｈ，  ｓ，  １Ｈ），  ７．５３  （−Ｐｙ，  ｔ，  Ｊ  ＝  ５．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．６８  −  ７．７８  （−Ｐｈ，  ｍ，  ２Ｈ），  ７．７８  −  ７．９１  （−Ｐｈ，  ｍ，  ２Ｈ），  ８．１２  （−Ｐｙ，  ｄｔ，  Ｊ１  ＝  ７．１  Ｈｚ，  Ｊ２  ＝  １４．１  Ｈｚ，  １Ｈ），  ８．５８  （−Ｐｈ，  ｄｄ，  Ｊ１  ＝  １．５  Ｈｚ，  Ｊ２  ＝  ４．２  Ｈｚ，  １Ｈ），  ８．６７  −  ８．７９  （−Ｐｙ，  ｍ，  １Ｈ），  １０．２８  （−ＣＯＮＨ，  ｓ，  １Ｈ）。ＭＳ  （ＥＳＩ）：  ｍ／ｚ４８７．１  ［Ｍ−Ｈ］−。
【００９６】
他の類似の化合物はいずれも上記工程により調製することができる。
【００９７】
ＩＩ−４ｂ：ＩＩ−３及び１−ヨード−３，５−ビス（トリフルオロメチル）ベンゼンを実施例（１）の方法により合成した。ＩＩ−４ｃ：ＩＩ−３及び６−ヨード−１，４−ベンゾジオキサンを実施例（１）の方法により合成した。ＩＩ−４ｄ：ＩＩ−３及び２，４−ジメトキシヨードベンゼンを実施例（１）の方法により合成した。
【００９８】
合成された具体的な化合物及びその性質は以下の表に示される。
【００９９】
【表１】
2021526159.tif 000029
【０１００】
（２）（Ｓ）−２−（フタルイミド）−３−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）プロピオン酸メチル（ＩＩ−５ａ）の調製
【化２７】
2021526159.tif 000030
【０１０１】
厚肉耐圧フラスコに、化合物ＩＩ−５ａ（２ｇ、４．１ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（９４ｍＬ）に溶解し、ゆっくりと三フッ化ホウ素エーテラート溶液（５．２ｍＬ、４０．９ｍｍｏｌ）を滴下し、１００℃で一晩反応させ、ＴＬＣで反応を確認し、トリエチルアミン（８．６ｍＬ、６１．３ｍｍｏｌ）を添加して一定の時間撹拌し、溶媒を減圧留去し、ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）で溶解し、それぞれ酸洗浄（１０％塩酸）、アルカリ洗浄（５％炭酸水素ナトリウム）及び飽和食塩水洗浄を行い、乾燥剤（無水硫酸ナトリウム及び無水硫酸マグネシウム）で乾燥させた。乾燥剤を濾過除去し、溶媒を減圧下で蒸発乾燥し、カラムクロマトグラフィーにより分離して油状生成物１．３ｇを得た。収率８３．２％。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ３．５５  −  ３．７１  （−ＣＨ２，  ｍ，  ２Ｈ），  ３．７８  （−ＣＨ３，  ｓ，  ３Ｈ），  ５．１８  （−ＣＨ，  ｄｄ，  Ｊ１  ＝  ５．８  Ｈｚ，  Ｊ２  ＝  １０．７  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．３０  （−Ｐｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ７．４６  （−Ｐｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ７．６７  −  ７．７５  （−Ｐｈ，  ｍ，  ２Ｈ），  ７．７９  （−Ｐｈ，  ｄｔ，  Ｊ１  ＝  ３．６  Ｈｚ，  Ｊ２  ＝  ７．１  Ｈｚ，  ２Ｈ）。  ＭＳ  （ＥＳＩ）：  ｍ／ｚ  ３７８．３  ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１０２】
他の類似の化合物はいずれも上記工程により調製することができる。
【０１０３】
ＩＩ−５ｂ：ＩＩ−４ｂを実施例（２）の方法により合成した。ＩＩ−５ｃ：ＩＩ−４ｃを実施例（２）の方法により合成した。ＩＩ−５ｄ：ＩＩ−４ｄを実施例（２）の方法により合成した。
【０１０４】
合成された具体的な化合物及びその性質は以下の表に示される。
【０１０５】
【表２】
2021526159.tif 000031
【０１０６】
（３）（Ｓ）−２−アミノ−３−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）プロピオン酸メチル（ＩＩａ）の調製
【化２８】
2021526159.tif 000032
【０１０７】
化合物ＩＩ−５ａ（７４５ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１９ｍＬ）に溶解し、エチレンジアミン（２９７ｍｇ、４．９ｍｍｏｌ）を添加し、７０℃で凝縮還流させ、ＴＬＣで反応を確認し、５ｈで反応終了した後、濾過し、濾液溶媒を減圧下で蒸発乾燥し、カラムクロマトグラフィーにより分離して油状の目的化合物３１１ｍｇを得た。収率６２．４％。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ）  δ  ２．８４  （−ＣＨ２，  ｄｄ，  Ｊ１  ＝  ７．７  Ｈｚ，  Ｊ２  ＝  １３．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ２．９５  （−ＣＨ２，  ｄｔ，  Ｊ１  ＝  ９．５  Ｈｚ，  Ｊ２  ＝  １９．０  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．５９  （−ＣＨ３，  ｓ，  ３Ｈ），  ３．６１  （−ＣＨ，  ｄ，  Ｊ  ＝６．９  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．４０  （−Ｐｈ，  ｔ，  Ｊ  ＝１１．９  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ７．５９  （−Ｐｈ，  ｔ，  Ｊ  ＝２１．６  Ｈｚ，  ２Ｈ）。ＭＳ  （ＥＳＩ）：  ｍ／ｚ  ２４８．１  ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１０８】
他の類似の化合物はいずれも上記工程により調製することができる。
【０１０９】
ＩＩｂ：ＩＩ−５ｂを実施例（３）の方法により合成した。ＩＩｃ：Ｉ−５ｃを実施例（３）の方法により合成した。ＩＩｄ：ＩＩ−５ｄを実施例（３）の方法により合成した。
【０１１０】
合成された具体的な化合物及びその性質は以下の表に示される。
【０１１１】
【表３】
2021526159.tif 000033
【０１１２】
二、式（ＩＩＩ）の化合物の調製：
【化２９】
2021526159.tif 000034
【０１１３】
１、グリシンメチルエステル塩酸塩（ＩＩＩａ）の調製
【化３０】
2021526159.tif 000035
【０１１４】
化合物ＩＩＩａ（３ｇ、４０ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（３０ｍＬ）に溶解し、氷塩浴にて−１０℃まで冷却し、撹拌しながらゆっくりとＳＯＣｌ２（２９ｍＬ、４００ｍｍｏｌ）を滴下し、滴下終了後、１０ｍｉｎ反応させ、氷塩浴を取り除き、室温で一晩反応させ、ＴＬＣで反応を確認し、減圧濃縮し、更に２０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２を添加し、減圧濃縮を二回繰り返し、溶媒をスピン乾燥させ、生成物５ｇを得た（収率９９．５％）。製品は精製されず、そのまま次の反応に用いられた。
【０１１５】
本発明で用いられた他のアミノ酸メチルエステルの塩酸塩はいずれも上記工程により調製することができる。化合物ＩＩＩｂ：化合物ＩＩＩａの合成方法によりＤ−シクロヘキシルグリシンを用いて合成した。化合物ＩＩＩｃ：化合物ＩＩＩａの合成方法によりＬ−シクロヘキシルグリシンを用いて合成した。化合物ＩＩＩｄ：化合物ＩＩＩａの合成方法によりフェニルアラニンを用いて合成した。
【０１１６】
合成された具体的な化合物及びその性質は以下の表に示される。
【０１１７】
【表４】
2021526159.tif 000036
【０１１８】
２、Ｌ−Ｏ−メチルセリンメチルエステル塩酸塩（ＩＩＩｅ）の調製
【化３１】
2021526159.tif 000037
【０１１９】
（１）ＢＯＣ−Ｌ−Ｏ−メチルセリンメチルエステル（ＩＩＩｅ−１）の調製
ＢＯＣ−Ｌ−セリンメチルエステル（５ｇ、２２．８ｍｍｏｌ）をアセトン（１１０ｍＬ）に溶解し、ヨウ化メチル（３２ｍＬ、５２４ｍｍｏｌ）及び酸化銀（８．２ｇ、３５．４ｍｍｏｌ）を添加し、５９℃で暗所で一晩凝縮還流させた。ＴＬＣで反応を確認し、濾過し、溶媒を減圧留去し、カラムクロマトグラフィーにより分離して油状の目的化合物１．８ｇを得た。収率３４．５％。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １．４３  （−ＣＨ３，  ｓ，  ９Ｈ），  ３．３２  （−ＣＨ３，  ｓ，  ３Ｈ），  ３．５７  （−ＣＨ２，  ｄｄ，  Ｊ１  ＝  ３．４  Ｈｚ，  Ｊ２  ＝  ９．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．７４  （−ＣＨ３，  ｄ，  Ｊ  ＝  ６．３  Ｈｚ，  ３Ｈ），  ３．７８  （−ＣＨ２，  ｄｄ，  Ｊ１  ＝  ３．１  Ｈｚ，  Ｊ２  ＝  ９．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．３５  −  ４．４４  （−ＣＨ，  ｍ，  １Ｈ），  ５．２８  −  ５．４４  （−ＣＯＮＨ，  ｍ，  １Ｈ）。ＭＳ  （ＥＳＩ）：  ｍ／ｚ  ２３４．２  ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１２０】
（２）Ｌ−Ｏ−メチルセリンメチルエステル塩酸塩（ＩＩＩｅ）の調製
化合物ＩＩＩｅ−１（４９６ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（２．５ｍＬ）に溶解し、氷浴にてＨＣｌの酢酸エチル溶液（５．２ｍＬ、２１．２ｍｍｏｌ）を滴下し、室温で反応させ、ＴＬＣで反応を確認し、２ｈ後に反応が終了した後、濾過し、濾過ケーキを真空乾燥して純粋な生成物３５１ｍｇを得た。収率９７．５％。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ３．４１  （−ＣＨ３，  ｓ，  ３Ｈ），  ３．８３  （−ＣＨ３，  ｓ，  ３Ｈ），  ３．９５  （−ＣＨ２，  ｄｄ，  Ｊ１  ＝  ３．６  Ｈｚ，  Ｊ２  ＝  １０．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．０３  （−ＣＨ２，  ｄｄ，  Ｊ１  ＝  ２．６  Ｈｚ，  Ｊ２  ＝  １０．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．４５  （−ＣＨ，  ｓ，  １Ｈ），  ８．７０  （−ＮＨ３＋，  ｓ，  ３Ｈ）。
【０１２１】
３、Ｓ−メチル−Ｌ−システインメチルエステル塩酸塩（ＩＩＩｆ）の調製
【化３２】
2021526159.tif 000038
【０１２２】
（１）Ｓ−メチル−Ｌ−システイン（ＩＩＩｆ−１）の調製
Ｌ−システイン塩酸塩一水和物（３．１ｇ、１７．５ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（４５ｍＬ）に溶解し、氷浴にて３０％のナトリウムメトキシドのメタノール溶液（１１．２ｇ、６２ｍｍｏｌ）を滴下し、１ｈ反応させた後、ヨウ化メチル（０．９ｍＬ、１３ｍｍｏｌ）を滴下し、室温まで上昇させて反応させ、ＴＬＣで反応を確認し、２ｈ後に反応が終了した後、１０ＮのＨＣｌでｐＨを５に調節し、４０ｍＬのエチルエーテルを添加して１０ｍｉｎ撹拌し、濾過し、濾過ケーキを６０ｍＬのエチルエーテルで洗浄し、真空乾燥し、粗製品４．７１５ｇを得た。
【０１２３】
（２）Ｓ−メチル−Ｌ−システインメチルエステル塩酸塩（ＩＩＩｆ）の調製
Ｓ−メチル−Ｌ−システイン（４．７１５ｇ、３４．９ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（２５ｍＬ）に溶解し、氷塩浴にて−１０℃まで冷却し、撹拌しながらゆっくりとＳＯＣｌ２（２５ｍＬ、３４８．８ｍｍｏｌ）を滴下し、滴下終了後、１０ｍｉｎ反応させ、氷塩浴を取り除き、室温で一晩反応させ、ＴＬＣで反応を確認し、濾過し、濾過ケーキをＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、真空乾燥して純粋なＳ−メチル−Ｌ−システインメチルエステル塩酸塩３．１ｇを得た。収率９５．４％。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，  Ｄ２Ｏ）  δ  ４．４４（−ＣＨ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝７．７，  ４．６  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．９０  （−ＣＨ３，  ｓ，  ３Ｈ），  ３．２３  （−ＣＨ２，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  １５．１  Ｈｚ，  ４．６  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．１４  −  ３．０７  （−ＣＨ２，  ｍ，  １Ｈ），  ２．１８  （−ＣＨ３，  ｓ，  ３Ｈ）。
【０１２４】
三、式（Ｉ）の化合物の調製：
【化３３】
2021526159.tif 000039
【０１２５】
１、（Ｓ）−Ｎ−（２，５−ジクロロベンゾイル）−３−（４−トリフルオロメチルフェニル）アラニンメチルエステル（Ｉ−１ａ）の調製
【化３４】
2021526159.tif 000040
【０１２６】
２，５−ジクロロ安息香酸（９０ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）及びＨＯＢｔ（９２ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（８ｍＬ）に溶解し、−１０℃で１０ｍｉｎ反応させ、ＥＤＣ・ＨＣｌ（１３５ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）を添加して３０ｍｉｎ反応させ、化合物ＩＩａ（１１６ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）を添加し、１０ｍｉｎ反応させた後、ＤＩＰＥＡ（１５１ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ）を添加し、２０ｍｉｎ反応させた後、室温まで上昇させ、一晩反応させた。ＴＬＣで反応を確認し、それぞれ１０％の塩酸溶液（１０ｍＬ）、５％のＮａＨＣＯ３溶液（１０ｍＬ）及び飽和食塩水（２×１０ｍＬ）で洗浄し、ＣＨ２Ｃｌ２層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧留去し、油状化合物１６６ｍｇを得た（収率８４．３％）。製品は精製されず、そのまま次の反応に用いられた。
【０１２７】
ＥＤＣ・ＨＣｌ縮合法により得られた製品は収率が高いため、本発明で用いられた、アミノ基が保護されていない他のアミノ酸メチルエステルは実施例１に記載のＥＤＣ・ＨＣｌ縮合法により調製することができ、メチルエステルは全て精製されず、そのまま次の反応に用いられた。
【０１２８】
化合物Ｉ−１ｂ：ＥＤＣ・ＨＣｌ縮合法により２，５−ジクロロ安息香酸及びＩＩｂを用いて合成した。化合物Ｉ−１ｃ：ＥＤＣ・ＨＣｌ縮合法により２，５−ジクロロ安息香酸及びＩＩｃを用いて合成した。化合物Ｉ−１ｄ：ＥＤＣ・ＨＣｌ縮合法により２，５−ジクロロ安息香酸及びＩＩｄを用いて合成した。
【０１２９】
（１）、（Ｓ）−Ｎ−（２，５−ジクロロベンゾイル）グリシンメチルエステル（Ｉ−１ｅ）の調製
【化３５】
2021526159.tif 000041
【０１３０】
２，５−ジクロロ安息香酸（７．６ｇ、４０ｍｍｏｌ）及びＨＯＢｔ（８．１ｇ、４０ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍＬ）に溶解し、−１０℃で１０ｍｉｎ反応させ、ＥＤＣ・ＨＣｌ（１１．５ｇ、６０ｍｍｏｌ）を添加して３０ｍｉｎ反応させ、化合物ＩＩＩａ（５ｇ、４０ｍｍｏｌ）を添加し、１０ｍｉｎ反応させた後、ＤＩＰＥＡ（１８．１ｇ、１４０ｍｍｏｌ）を添加し、２０ｍｉｎ反応させた後、室温まで上昇させ、一晩反応させた。ＴＬＣで反応を確認し、それぞれ１０％の塩酸溶液（２００ｍＬ）、５％のＮａＨＣＯ３溶液（２００ｍＬ）及び飽和食塩水（２×２００ｍＬ）で洗浄し、ＣＨ２Ｃｌ２層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧留去し、油状化合物９．３２ｇを得た（収率８８．９％）。製品は精製されず、そのまま次の反応に用いられた。
【０１３１】
化合物Ｉ−１ｆ：ＥＤＣ・ＨＣｌ縮合法により２，５−ジクロロ安息香酸及びＩＩＩｂを用いて合成した。化合物Ｉ−１ｇ：ＥＤＣ・ＨＣｌ縮合法により２，５−ジクロロ安息香酸及びＩＩＩｃを用いて合成した。化合物Ｉ−１ｈ：ＥＤＣ・ＨＣｌ縮合法により２，５−ジクロロ安息香酸及びＩＩＩｅを用いて合成した。化合物Ｉ−１ｉ：ＥＤＣ・ＨＣｌ縮合法により２，５−ジクロロ安息香酸及びＩＩＩｆを用いて合成した。化合物Ｉ−１ｊ：ＥＤＣ・ＨＣｌ縮合法により２−ピラジンカルボン酸及びＩＩａを用いて合成した。化合物Ｉ−１ｋ：ＥＤＣ・ＨＣｌ縮合法により２−ピラジンカルボン酸及びＩＩｃを用いて合成した。化合物Ｉ−１ｌ：ＥＤＣ・ＨＣｌ縮合法により５，６，７，８−テトラヒドロ−１−ナフトエ酸及びＩＩｃを用いて合成した。化合物Ｉ−１ｍ：ＥＤＣ・ＨＣｌ縮合法により５−メチルイソキサゾール−３−カルボン酸及びＩＩＩａを用いて合成した。化合物Ｉ−１ｎ：ＥＤＣ・ＨＣｌ縮合法により５−メチル−２−ピラジンカルボン酸及びＩＩＩｄを用いて合成した。
【０１３２】
本発明で用いられた、アミノ基が保護された他のアミノ酸メチルエステルは実施例（１）に記載のＥＤＣ・ＨＣｌ縮合法により調製することができ、メチルエステルは全て精製されず、そのまま次の反応に用いられた。
【０１３３】
（２）、（Ｓ）−Ｎ−（メトキシアセチル）フェニルアラニンメチルエステル（１−１ｏ）の調製
【化３６】
2021526159.tif 000042
【０１３４】
メトキシ酢酸（２８０ｍｇ、３．１３ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（６ｍＬ）に溶解し、−１０℃でＳＯＣｌ２（０．２５ｍＬ、３．４５ｍｍｏｌ）を滴下した。滴下終了後、室温まで上昇させて２ｈ反応させた。メトキシアセチルクロリド溶液をそのまま次の工程に用いた。ＩＩＩｄ（０．６７ｇ、３．１３ｍｍｏｌ）を３ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、トリエチルアミン（１．５８ｇ、１５．６５ｍｍｏｌ）を添加し、メトキシアセチルクロリド溶液を滴下し、一晩反応させた。ＴＬＣで反応を確認し、水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、カラムクロマトグラフィーにより分離して油状の目的化合物０．６９ｇを得た（収率８７．３％）。
【０１３５】
化合物Ｉ−１ｐ：酸クロリド縮合法により３−メトキシプロピオン酸及びＩＩＩｄを用いて合成した。化合物Ｉ−１ｑ：酸クロリド縮合法により酪酸及びＩＩＩｄを用いて合成した。化合物Ｉ−１ｒ：酸クロリド縮合法によりシクロプロピルカルボン酸及びＩＩＩｄを用いて合成した。化合物Ｉ−１ｓ：酸クロリド縮合法によりシクロペンチルカルボン酸及びＩＩＩｄを用いて合成した。
【０１３６】
本発明で用いられた、アミノ基が保護された他のアミノ酸メチルエステルとアルキル酸は実施例（２）に記載の縮合法により調製することができ、メチルエステルは全て精製されず、そのまま次の反応に用いられた。
【０１３７】
合成された具体的な化合物及びその性質は以下の表に示される。
【０１３８】
【表５−１】
2021526159.tif 000043
【０１３９】
【表５−２】
2021526159.tif 000044
【０１４０】
【表５−３】
2021526159.tif 000045
【０１４１】
２、（Ｓ）−Ｎ−（２，５−ジクロロベンゾイル）−３−（４−トリフルオロメチルフェニル）アラニン（Ｉ−２ａ）の調製
【化３７】
2021526159.tif 000046
【０１４２】
化合物Ｉ−１ａ（１２９ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を２．５ｍＬのＭｅＯＨで溶解し、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（３９ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ）及びＨ２Ｏ（０．８ｍＬ）を添加し、ＴＬＣで確認し、２ｈ後に反応が終了した。有機相をスピン乾燥させ、エチルエーテル（２×１ｍＬ）で水相を抽出し、ｐＨが２〜３になるまで水相に塩酸を滴下し、大量の白色固体を生成し、酢酸エチルで抽出し、溶媒を減圧留去し、白色製品１０６ｍｇを得た。収率８６．０％，  ｍｐ  １８５．１〜１８６．９℃。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ）  δ  ３．０２  （−ＣＨ２，  ｄｄ，  Ｊ１  ＝  １０．６  Ｈｚ，  Ｊ２  ＝  １３．８  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．３０  （−ＣＨ２，  ｄｄ，  Ｊ１  ＝  ４．６  Ｈｚ，  Ｊ２  ＝  １３．９  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．６８  （−ＣＨ，  ｄｄｄ，  Ｊ１  ＝  ４．７  Ｈｚ，  Ｊ２  ＝  ８．４  Ｈｚ，  Ｊ３  ＝  １０．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．１５  （−Ｐｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  １．８  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．４９  （−Ｐｈ，  ｔ，  Ｊ  ＝  ４．９  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ７．５２  （−Ｐｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ６．０  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ７．６６  （−Ｐｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ８．１  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ８．９０  （−ＣＯＮＨ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ８．２  Ｈｚ，  １Ｈ），  １３．１２  （−ＣＯＯＨ，  ｓ，  １Ｈ）。  ＭＳ  （ＥＳＩ）：  ｍ／ｚ  ４０３．９  ［Ｍ−Ｈ］−。
【０１４３】
本発明で用いられた、アミノ基が保護された他のアミノ酸は実施例２に記載の方法により調製することができる。
【０１４４】
化合物Ｉ−２ｂ：Ｉ−１ｂを実施例２の方法により合成した。化合物Ｉ−２ｃ：Ｉ−１ｃを実施例２の方法により合成した。化合物Ｉ−２ｄ：Ｉ−１ｄを実施例２の方法により合成した。化合物Ｉ−２ｅ：Ｉ−１ｅを実施例２の方法により合成した。化合物Ｉ−２ｆ：Ｉ−１ｆを実施例２の方法により合成した。化合物Ｉ−２ｇ：Ｉ−１ｇを実施例２の方法により合成した。化合物Ｉ−２ｈ：Ｉ−１ｈを実施例２の方法により合成した。化合物Ｉ−２ｉ：Ｉ−１ｉを実施例２の方法により合成した。化合物Ｉ−２ｊ：Ｉ−１ｊを実施例２の方法により合成した。化合物Ｉ−２ｋ：Ｉ−１ｋを実施例２の方法により合成した。化合物Ｉ−２ｌ：Ｉ−１ｌを実施例２の方法により合成した。化合物Ｉ−２ｍ：Ｉ−１ｍを実施例２の方法により合成した。化合物Ｉ−２ｎ：Ｉ−１ｎを実施例２の方法により合成した。化合物Ｉ−２ｏ：Ｉ−１ｏを実施例２の方法により合成した。化合物Ｉ−２ｐ：Ｉ−１ｐを実施例２の方法により合成した。化合物Ｉ−２ｑ：Ｉ−１ｑを実施例２の方法により合成した。化合物Ｉ−２ｒ：Ｉ−１ｒを実施例２の方法により合成した。化合物Ｉ−２ｓ：Ｉ−１ｓを実施例２の方法により合成した。
【０１４５】
合成された具体的な化合物及びその性質は以下の表に示される。
【０１４６】
【表６−１】
2021526159.tif 000047
【０１４７】
【表６−２】
2021526159.tif 000048
【０１４８】
【表６−３】
2021526159.tif 000049
【０１４９】
３、（Ｓ）−Ｎ−（２，５−ジクロロベンゾイル）−３−（４−トリフルオロメチルフェニル）プロピオンアミド−Ｄ−ロイシンボロン酸−（＋）−α−ピナンジオールエステル（Ｉ−３ａ）の調製
【化３８】
2021526159.tif 000050
【０１５０】
化合物Ｉ−２ａ（３４０ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）及びＨＯＢｔ（２１８ｇ、１．６７ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（１８ｍＬ）に溶解し、−１０℃で１０ｍｉｎ反応させ、ＥＤＣ・ＨＣｌ（３２１ｍｇ、１．６７ｍｍｏｌ）を添加して３０ｍｉｎ反応させ、（ａＲ，３ａＳ，４Ｓ，６Ｓ，７ａＲ）−ヘキサヒドロ−３ａ，８，８−トリメチル−ａｌｐｈａ−（２−メチルプロピル）−４，６−メタノ−１，３，２−ベンゾジオキサボロラン−２−メチルアミン２，２，２−トリフルオロアセテート（３１７ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）を添加し、１０ｍｉｎ反応させた後、ＤＩＰＥＡ（４３３ｍｇ、３．３５ｍｍｏｌ）を添加し、２０ｍｉｎ反応させた後、室温まで上昇させ、一晩反応させた。ＴＬＣで反応を確認し、それぞれ１０％の塩酸溶液（２０ｍＬ）、５％のＮａＨＣＯ３溶液（２０ｍＬ）及び飽和食塩水（２×２０ｍＬ）で洗浄し、ＣＨ２Ｃｌ２層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧留去し、カラムクロマトグラフィーにより分離して油状の目的化合物４８０ｍｇを得た。収率８７．６％。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ０．８２  （−ＣＨ３，  ｓ，  ３Ｈ），  ０．８５  （−ＣＨ３，  ｓ，  ６Ｈ），  １．１６  （−ＣＨ２，  ｄｄ，  Ｊ１  ＝  ７．８  Ｈｚ，  Ｊ２  ＝  １０．８  Ｈｚ，  １Ｈ），  １．２８  （−ＣＨ３，  ｓ，  ３Ｈ），  １．３２  （−ＣＨ２，  ｄ，  Ｊ  ＝  １４．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  １．３９  （−ＣＨ３，  ｓ，  ３Ｈ），  １．４１  −  １．５２  （−ＣＨ，  ｍ，  １Ｈ），  １．６３  （−ＣＨ，  ｓ，  １Ｈ），  １．８１  （−ＣＨ２，  ｄｄ，  Ｊ１  ＝  ２．８  Ｈｚ，  Ｊ２  ＝  １４．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  １．９０  （−ＣＨ２，  ｄ，  Ｊ  ＝  ２．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  １．９８  −  ２．０５  （−ＣＨ，  ｍ，  １Ｈ），  ２．１２  −  ２．２３  （−ＣＨ２，  ｍ，  １Ｈ），  ２．２５  −  ２．３８  （−ＣＨ２，  ｍ，  １Ｈ），  ３．１９  （−ＣＨ，  ｄｄ，  Ｊ１  ＝８．５  Ｈｚ，  Ｊ２  ＝  １３．７  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．２３  −  ３．３１  （−ＣＨ２，  ｍ，  ２Ｈ），  ４．２１  −  ４．３４  （−ＣＨ，  ｍ，  １Ｈ），  ４．７５  −  ４．９４  （−ＣＨ，  ｍ，  １Ｈ），  ５．９０  （−ＣＯＮＨ，  ｄｄ，  Ｊ１  ＝  ５．６  Ｈｚ，  Ｊ２  ＝  ２２．２  Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．９４  （−ＣＯＮＨ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ７．７  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．２９  −  ７．３６  （−Ｐｈ，  ｍ，  ２Ｈ），  ７．４１  （−Ｐｈ，  ｄｄ，  Ｊ１  ＝  ４．２  Ｈｚ，  Ｊ２  ＝  ７．８  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ７．５１  （−Ｐｈ，  ｓ，  １Ｈ），  ７．５５  （−Ｐｈ，  ｄｄ，  Ｊ１  ＝  ３．７  Ｈｚ，  Ｊ２  ＝  ８．０  Ｈｚ，  ２Ｈ）。  ＭＳ  （ＥＳＩ）：  ｍ／ｚ  ６５３．２  ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１５１】
本発明で用いられた、アミノ基が保護された他のアミノ酸は実施例３に記載の方法により調製することができる。
【０１５２】
化合物Ｉ−３ｂ：ＥＤＣ・ＨＣｌ縮合法により（ａＲ，３ａＳ，４Ｓ，６Ｓ，７ａＲ）−ヘキサヒドロ−３ａ，８，８−トリメチル−ａｌｐｈａ−（２−メチルプロピル）−４，６−メタノ−１，３，２−ベンゾジオキサボロラン−２−メチルアミン２，２，２−トリフルオロアセテート及びＩ−２ｂを用いて合成した。化合物Ｉ−３ｃ：ＥＤＣ・ＨＣｌ縮合法により（ａＲ，３ａＳ，４Ｓ，６Ｓ，７ａＲ）−ヘキサヒドロ−３ａ，８，８−トリメチル−ａｌｐｈａ−（２−メチルプロピル）−４，６−メタノ−  １，３，２−ベンゾジオキサボロラン−２−メチルアミン２，２，２−トリフルオロアセテート及びＩ−２ｃを用いて合成した。化合物Ｉ−３ｄ：ＥＤＣ・ＨＣｌ縮合法により（ａＲ，３ａＳ，４Ｓ，６Ｓ，７ａＲ）−ヘキサヒドロ−３ａ，８，８−トリメチル−ａｌｐｈａ−（２−メチルプロピル）−４，６−メタノ−１，３，２−ベンゾジオキサボロラン−２−メチルアミン２，２，２−トリフルオロアセテート及びＩ−２ｄを用いて合成した。化合物Ｉ−３ｅ：ＥＤＣ・ＨＣｌ縮合法により（ａＲ，３ａＳ，４Ｓ，６Ｓ，７ａＲ）−ヘキサヒドロ−３ａ，８，８−トリメチル−ａｌｐｈａ−（２−メチルプロピル）−４，６−メタノ−１，３，２−ベンゾジオキサボロラン−２−メチルアミン２，２，２−トリフルオロアセテート及びＩ−２ｅを用いて合成した。化合物Ｉ−３ｆ：ＥＤＣ・ＨＣｌ縮合法により（ａＲ，３ａＳ，４Ｓ，６Ｓ，７ａＲ）−ヘキサヒドロ−３ａ，８，８−トリメチル−ａｌｐｈａ−（２−メチルプロピル）−４，６−メタノ−１，３，２−ベンゾジオキサボロラン−２−メチルアミン２，２，２−トリフルオロアセテート及びＩ−２ｆを用いて合成した。化合物Ｉ−３ｇ：ＥＤＣ・ＨＣｌ縮合法により（ａＲ，３ａＳ，４Ｓ，６Ｓ，７ａＲ）−ヘキサヒドロ−３ａ，８，８−トリメチル−ａｌｐｈａ−（２−メチルプロピル）−４，６−メタノ−１，３，２−ベンゾジオキサボロラン−２−メチルアミン２，２，２−トリフルオロアセテート及びＩ−２ｇを用いて合成した。化合物Ｉ−３ｈ：ＥＤＣ・ＨＣｌ縮合法により（ａＲ，３ａＳ，４Ｓ，６Ｓ，７ａＲ）−ヘキサヒドロ−３ａ，８，８−トリメチル−ａｌｐｈａ−（２−メチルプロピル）−４，６−メタノ−１，３，２−ベンゾジオキサボロラン−２−メチルアミン２，２，２−トリフルオロアセテート及びＩ−２ｈを用いて合成した。化合物Ｉ−３ｉ：ＥＤＣ・ＨＣｌ縮合法により（ａＲ，３ａＳ，４Ｓ，６Ｓ，７ａＲ）−ヘキサヒドロ−３ａ，８，８−トリメチル−ａｌｐｈａ−（２−メチルプロピル）−４，６−メタノ−１，３，２−ベンゾジオキサボロラン−２−メチルアミン２，２，２−トリフルオロアセテート及びＩ−２ｉを用いて合成した。化合物Ｉ−３ｊ：ＥＤＣ・ＨＣｌ縮合法により（ａＲ，３ａＳ，４Ｓ，６Ｓ，７ａＲ）−ヘキサヒドロ−３ａ，８，８−トリメチル−ａｌｐｈａ−（２−メチルプロピル）−４，６−メタノ−１，３，２−ベンゾジオキサボロラン−２−メチルアミン２，２，２−トリフルオロアセテート及びＩ−２ｊを用いて合成した。化合物Ｉ−３ｋ：ＥＤＣ・ＨＣｌ縮合法により（ａＲ，３ａＳ，４Ｓ，６Ｓ，７ａＲ）−ヘキサヒドロ−３ａ，８，８−トリメチル−ａｌｐｈａ−（２���メチルプロピル）−４，６−メタノ−１，３，２−ベンゾジオキサボロラン−２−メチルアミン２，２，２−トリフルオロアセテート及びＩ−２ｋを用いて合成した。化合物Ｉ−３ｌ：ＥＤＣ・ＨＣｌ縮合法により（ａＲ，３ａＳ，４Ｓ，６Ｓ，７ａＲ）−ヘキサヒドロ−３ａ，８，８−トリメチル−ａｌｐｈａ−（２−メチルプロピル）−４，６−メタノ−１，３，２−ベンゾジオキサボロラン−２−メチルアミン２，２，２−トリフルオロアセテート及びＩ−２ｌを用いて合成した。化合物Ｉ−３ｍ：ＥＤＣ・ＨＣｌ縮合法により（ａＲ，３ａＳ，４Ｓ，６Ｓ，７ａＲ）−ヘキサヒドロ−３ａ，８，８−トリメチル−ａｌｐｈａ−（２−メチルプロピル）−４，６−メタノ−１，３，２−ベンゾジオキサボロラン−２−メチルアミン２，２，２−トリフルオロアセテート及びＩ−２ｍを用いて合成した。化合物Ｉ−３ｎ：ＥＤＣ・ＨＣｌ縮合法により（ａＲ，３ａＳ，４Ｓ，６Ｓ，７ａＲ）−ヘキサヒドロ−３ａ，８，８−トリメチル−ａｌｐｈａ−（２−メチルプロピル）−４，６−メタノ−１，３，２−ベンゾジオキサボロラン−２−メチルアミン２，２，２−トリフルオロアセテート及びＩ−２ｎを用いて合成した。化合物Ｉ−３ｏ：ＥＤＣ・ＨＣｌ縮合法により（ａＲ，３ａＳ，４Ｓ，６Ｓ，７ａＲ）−ヘキサヒドロ−３ａ，８，８−トリメチル−ａｌｐｈａ−（２−メチルプロピル）−４，６−メタノ−１，３，２−ベンゾジオキサボロラン−２−メチルアミン２，２，２−トリフルオロアセテート及びＩ−２ｏを用いて合成した。化合物Ｉ−３ｐ：ＥＤＣ・ＨＣｌ縮合法により（ａＲ，３ａＳ，４Ｓ，６Ｓ，７ａＲ）−ヘキサヒドロ−３ａ，８，８−トリメチル−ａｌｐｈａ−（２−メチルプロピル）−４，６−メタノ−１，３，２−ベンゾジオキサボロラン−２−メチルアミン２，２，２−トリフルオロアセテート及びＩ−２ｐを用いて合成した。化合物Ｉ−３ｑ：ＥＤＣ・ＨＣｌ縮合法により（ａＲ，３ａＳ，４Ｓ，６Ｓ，７ａＲ）−ヘキサヒドロ−３ａ，８，８−トリメチル−ａｌｐｈａ−（２−メチルプロピル）−４，６−メタノ−１，３，２−ベンゾジオキサボロラン−２−メチルアミン２，２，２−トリフルオロアセテート及びＩ−２ｑを用いて合成した。
【０１５３】
合成された具体的な化合物及びその性質は以下の表に示される。
【０１５４】
【表７−１】
2021526159.tif 000051
【０１５５】
【表７−２】
2021526159.tif 000052
【０１５６】
【表７−３】
2021526159.tif 000053
【０１５７】
【表７−４】
2021526159.tif 000054
【０１５８】
【表７−５】
2021526159.tif 000055
【０１５９】
【表７−６】
2021526159.tif 000056
【０１６０】
【表７−７】
2021526159.tif 000057
【０１６１】
【表７−８】
2021526159.tif 000058
【０１６２】
４、（Ｓ）−Ｎ−（２，５−ジクロロベンゾイル）−３−（４−トリフルオロメチルフェニル）プロピオンアミド−Ｄ−ロイシンボロン酸（ＩＶ−１）の調製
化合物Ｉ−３ａ（３１７ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）を３ｍＬのＭｅＯＨに溶解し、イソブチルボロン酸（２４７ｍｇ、２．４３ｍｍｏｌ）、ｎ−ヘキサン（３ｍＬ）及び１ＮのＨＣｌ（１．２ｍＬ、１．２ｍｍｏｌ）を順次添加し、一晩反応させて撹拌した。ＴＬＣで反応を確認し、ｎ−ヘキサン相をＭｅＯＨ（２×３ｍＬ）で２回抽出し、ｎ−ヘキサン（３ｍＬ）でメタノール相を１回洗浄し、メタノールを減圧留去し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×２ｍＬ）で水相を２回抽出し、水相が中性になるまで飽和食塩水（３×５ｍＬ）で有機相を洗浄した。溶媒を減圧留去し、カラムクロマトグラフィーにより分離して純粋な生成物１９３ｍｇを得た。収率７６．５％。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １．１８  （−ＣＨ３，  ｓ，  ３Ｈ），  １．２５  （−ＣＨ３，  ｓ，  ３Ｈ），  ２．１３  −  ２．４１  （−ＣＨ２，  ｍ，  ２Ｈ），  ２．４５  −  ２．６１  （−ＣＨ，  ｍ，  １Ｈ），  ３．２０  −  ３．５８  （−ＣＨ２，  ｍ，  ２Ｈ），  ３．５８  −  ３．７１  （−ＣＨ，  ｍ，  １Ｈ），  ５．２１  −  ５．６２  （−ＣＨ，  ｍ，  １Ｈ），  ７．６２  −  ７．７５  （−Ｐｈ，  ｍ，  ４Ｈ），  ７．８４  （−Ｐｈ，  ｔ，  Ｊ  ＝  １３．５  Ｈｚ，  ３Ｈ）。  １３Ｃ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  １００ＭＨｚ）  δ  ２２．６７，  ２７．２１，  ３１．９０，  ３５．６０，  ５１．２８，  ５４．８０，  １２５．３７，  １２５．５５，  １２８．９２，  １２９．０５，  １２９．４７，  １２９．７６，  １２９．８５，  １３１．３４，  １３１．６０，  １３３．１２，  １３３．１７，  １３９．９２，  １６５．１８，  １７０．９８。ＭＳ  （ＥＳＩ）：  ｍ／ｚ  ５１７．１  ［Ｍ−Ｈ］−，  ｃａｌｃｄ：  ５１８．１。  ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：  Ｃ２２Ｈ２４ＢＣｌ２Ｆ３Ｎ２ＮａＯ４  ［Ｍ＋Ｎａ］＋  計算値  ５４１．１０５４，  実験値  ５４１．１１１８．
本発明の他のボロン酸類化合物は、上記方法により合成することができる。
【０１６３】
具体的な化合物は以下の表に示される。
【０１６４】
【表８−１】
2021526159.tif 000059
【０１６５】
【表８−２】
2021526159.tif 000060
【０１６６】
【表８−３】
2021526159.tif 000061
【０１６７】
【表８−４】
2021526159.tif 000062
【０１６８】
【表８−５】
2021526159.tif 000063
【０１６９】
【表８−６】
2021526159.tif 000064
【０１７０】
以上に記載のボロン酸類化合物はクエン酸などと反応してボレート類化合物を生成してプロドラッグとして用いることができ、調製方法は以下のとおりであるが、この例に限定されなかった。
【０１７１】
５、（Ｓ）−Ｎ−（２，５−ジクロロベンゾイル）−３−メトキシプロピオンアミド−Ｄ−ロイシンボロン酸ジエタノールアミンエステル（Ｖ−８Ａ）の調製
【化３９】
2021526159.tif 000065
【０１７２】
ジエタノールアミン（１６０ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）を８ｍＬの酢酸エチルに溶解し、７４℃まで上昇させ、１．５ｍＬの酢酸エチルに溶解したＩＶ−１（５００ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ）を添加し、ゆっくりと６０℃まで降下させ、３ｈ反応させ、更にゆっくりと２５℃まで降下させ、一晩静置した。ＴＬＣで反応を確認し、濾過し、濾過ケーキを真空乾燥して純粋な生成物５５７ｍｇを得た。収率８５．４％。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ）  δ  ０．８０  （−ＣＨ３，  ｄｄ，  Ｊ１  ＝  ６．７  Ｈｚ，  Ｊ２  ＝  ９．７  Ｈｚ，  ６Ｈ），  １．１２−１．３９  （−ＣＨ２，  ｍ，  ２Ｈ），１．５９  （−ＣＨ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ５．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ２．７５  （−ＣＨ２，  ｄｄ，  Ｊ１  ＝  ６．４  Ｈｚ，  Ｊ２  ＝  ２６．３  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ２．８５−３．０４  （−ＣＨ２，  ｍ，  ２Ｈ），  ３．０８−３．２０  （−ＣＨ，  ｍ，  １Ｈ），  ３．２６  （−ＣＨ３，  ｓ，  ３Ｈ），  ３．５９  （−ＣＨ２，  ｄｔ，  Ｊ１  ＝  ８．１  Ｈｚ，  Ｊ２  ＝  ２２．２  Ｈｚ，  ４Ｈ），  ３．６９  （−ＣＨ２，  ｄ，  Ｊ  ＝  ５．３  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ４．５９  （−ＣＨ，  ｄｄ，  Ｊ１  ＝  ６．７  Ｈｚ，  Ｊ２  ＝  １２．９  Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．５６  （−ＮＨ，  ｓ，  １Ｈ），  ６．９９  （−ＣＯＮＨ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ８．２  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．４５  （−Ｐｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  １３．７  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．５４  （−Ｐｈ，  ｓ，  ２Ｈ），  ８．６９−８．８２  （−ＣＯＮＨ，  ｍ，  Ｊ  ＝  ７．９  Ｈｚ，  １Ｈ）。  ＨＲＭＳ  （ＥＳＩ）：  Ｃ２０Ｈ３０ＢＣｌ２Ｎ３Ｏ５  ［Ｍ＋Ｎａ］＋  計算値  ４９６．１５４８，  実験値  ４９７．１５４６。
【０１７３】
６、（Ｓ）−Ｎ−（２，５−ジクロロベンゾイル）−３−メトキシプロピオンアミド−Ｄ−ロイシンボロン酸クエン酸エステル（Ｖ−８Ｂ）の調製
【化４０】
2021526159.tif 000066
【０１７４】
クエン酸（１９２．１２ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）を２ｍＬの酢酸エチルに溶解し、７４℃まで上昇させ、クエン酸が完全に溶解した後、１ｍＬの酢酸エチルに溶解した化合物ＩＶ−１（３６３．０３ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を添加し、ゆっくりと６０℃まで降下させ、３ｈ反応させ、更にゆっくりと２５℃まで降下させ、一晩静置した。ＴＬＣで反応を確認し、濾過し、濾過ケーキを真空乾燥して純粋な生成物９０．０ｍｇを得た。収率４８．６％。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ）  δ  ０．８６  （−ＣＨ３，  ｄ，  Ｊ  ＝  ６．３  Ｈｚ，  ６Ｈ），  １．３９−１．２１  （−ＣＨ２，  ｍ，２Ｈ），  １．７０  （−ＣＨ，  ｄ，  Ｊ  ＝２６．１  Ｈｚ，  １Ｈ），２．８１−２．５２  （−ＣＨ２，  ｍ，  ４Ｈ），  ２．８８  （−ＣＨ，  ｓ，  １Ｈ），  ３．１５  （−ＣＨ３，  ｓ，  ３Ｈ）  ３．３０−３．５５（−ＣＨ２，  ｍ，  ２Ｈ），  ４．４６（−ＣＨ，  ｍ，  １Ｈ），  ７．７８−７．４４  （−Ｐｈ，  ｍ，  ３Ｈ），  ９．１２  （−ＮＨ，  ｓ，  １Ｈ），  １０．７３  （−ＮＨ，  ｓ，  １Ｈ），  １２．１５  （−ＣＯＯＨ，  ｓ，  ２Ｈ）。  ＨＲＭＳ  （ＥＳＩ）：  Ｃ２０Ｈ３０ＢＣｌ２Ｎ３Ｏ５  ［Ｍ＋Ｎａ］＋  計算値  ５８３．１０２８，  実験値  ５８３．１０３０。
【０１７５】
本発明の他のジエタノールアミンボレート、クエン酸ボレートプロドラッグ化合物はいずれも実施例５と実施例６の方法を用いて合成することができる。具体的な化合物は以下の表に示される。
【０１７６】
【表９−１】
2021526159.tif 000067
【０１７７】
【表９−２】
2021526159.tif 000068
【０１７８】
【表９−３】
2021526159.tif 000069
【０１７９】
【表９−４】
2021526159.tif 000070
【０１８０】
第二部分  プロテアソーム阻害活性の測定
プロテアソーム阻害活性
本発明は、蛍光ポリペプチド基質Ｓｕｃ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−ＡＭＣ（Ｓｕｃ−ＬＬＶＹ−ＡＭＣと略称し、Ｓｕｅはスクシニルを表し、ＡＭＣは７−アミド−４−メチルクマリンを表す）によりプロテアソームのキモトリプシン様酵素活性を測定した。
【０１８１】
本発明に用いられるプロテアソームはヒト赤血球２０Ｓプロテアソームであり、酵素、蛍光基質及び試験緩衝液はいずれもＥｎｚｏ社から購入された。実験系は１６μＬであり、そのうち基質が８μＬであり、プロテアソームが４μＬ（０．８ｎｇ）であり、最終濃度が５０μＭであり、薬物（阻害剤）が４μＬであり、最終濃度が２×１０−６Ｍ〜４．８８×１０−１０Ｍであり、最後の濃度が０Ｍであり、実際の配合濃度が８×１０−６Ｍ〜１．９５×１０−９Ｍであり、最後の濃度が０Ｍであった。具体的な実験過程は以下のとおりである。
【０１８２】
１、薬物の配合：
薬物を量り、ＤＭＳＯを添加して濃度が１０−２Ｍになるまで溶解した。ピペットで２μＬを吸い取り、濃度が２×１０−４Ｍになるように９８μＬのＤＭＳＯに添加し、続いて濃度が２×１０−４Ｍである薬物から８μＬを吸い取り、濃度が８×１０−６Ｍになるように１９８μＬのＨ２Ｏに添加した。同じ方法により濃度が２×１０−６Ｍ、５×１０−７Ｍ、１．２５×１０−７Ｍ、３．１２×１０−８Ｍ、７．８×１０−９Ｍ、１．９５×１０−９Ｍである薬物を得、最後の濃度が０Ｍであり、薬物を添加しなかったものである。
【０１８３】
２、基質の調製：
２５ｍｇの蛍光ペプチド基質を６５４μＬのＤＭＳＯに溶解し、５０ｍＭの貯蔵液を得、−２０℃で貯蔵し、使用時に５００倍希釈し、各サンプルに８μＬずつを添加し、反応系における最終基質濃度を５０μＭにした。
【０１８４】
３、反応系の調製：
緩衝溶液で２０Ｓプロテアソーム（２ｎｇ／μＬ）を溶液の濃度が８ｎｇ／μＬになるまで希釈し、３８４ウェルの蛍光マイクロプレートに添加し、各ウェルに４μＬずつを添加し、更に各ウェルに試験サンプルを４μＬずつ添加した。市販の薬物であるベルケイドを陽性対照薬とし、３７℃で１５ｍｉｎ反応させた。反応終了後、各ウェルに蛍光基質を８μＬずつ添加し、３７℃で暗所で１時間反応させた。３６０ｎｍ／４６０ｎｍの蛍光マイクロプレートリーダー（ＢＭＧ  ＬＡＢＴＥＣＨ  ＰＯＬＡＲｓｔａｒ  ＯＰＴＩＭＡ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ）により蛍光値を測定した。
【０１８５】
４、データ処理
背景値を除去した後濃度の異なる薬物で得られた生成物の蛍光値を算出し、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアによりプロテアソーム阻害に対する薬物のＩＣ５０濃度を算出した。
【０１８６】
一部の化合物の結果は以下の表に示される。
【０１８７】
【表１０】
2021526159.tif 000071
【０１８８】
ここでベルケイド及びＭＬＮ９７０８の化学構造式は以下のとおりである。
【化４１】
2021526159.tif 000072
【０１８９】
細胞株阻害活性
本発明に用いられる検出液はＰｒｏｍｅｇａ社製の単一溶液細胞増殖検出キットであった。用いられる細胞はＵ２６６、ＲＰＭＩ８２２６、ＡＲＨ７７であった。実験系は１１０μＬであり、そのうち細胞懸濁液９０μＬ、検出液１０μＬ、薬物（阻害剤）１０μＬが含まれ、その最終濃度が４．５４×１０−８Ｍ〜１．７７×１０−９Ｍであり、最後の濃度が０Ｍであり、実際の配合濃度が５×１０−７Ｍ〜１．９５×１０−８Ｍであり、最後の濃度が０Ｍであった。具体的な実験過程は以下のとおりである。
【０１９０】
１、薬物の配合：
薬物を正確に量り、ＤＭＳＯを添加して濃度が１０−２Ｍになるまで溶解した。ピペットで１μＬを吸い取り、濃度が５×１０−５Ｍになるように１９９μＬのＤＭＳＯに添加し、続いて濃度が５×１０−５Ｍである薬物から３．３μＬを吸い取り、濃度が５×１０−７Ｍになるように３２６．７μＬの無血清ＲＰＭＩ１６４０培地を添加し、１．５倍の勾配で希釈し、濃度が３．３×１０−７Ｍ、２．２×１０−７Ｍ、１．４８×１０−７Ｍ、９．８７×１０−８Ｍ、６．５８×１０−８Ｍ、４．３８×１０−８Ｍ、２．９２×１０−８Ｍ、１．９５×１０−８Ｍである薬物を得、最後の濃度が０Ｍであり、薬物を添加しなかったものである。
【０１９１】
２、細胞懸濁液の配合：
細胞をそれぞれカウントした後、Ｕ２６６を希釈して１×１０４個／ウェルとなるように接種し、ＲＰＭＩ８２２６とＡＲＨ７７をともに１×１０４個／ウェルとなるように播種した。
【０１９２】
３、反応系の調製：
９６ウェル蛍光マイクロプレートの各ウェルに細胞懸濁液を９０μＬずつ添加し、２４ｈインキュベートし、続いて各ウェルに試験サンプルを１０μＬずつ添加し、市販の薬物であるベルケイドを陽性対照薬とし、２４ｈインキュベートし、反応終了後、各ウェルに検出液を１０μＬずつ添加し、２〜３ｈインキュベートし、４９０ｎｍの蛍光マイクロプレートリーダー（ＢＭＧ  ＬＡＢＴＥＣＨ  ＰＯＬＡＲｓｔａｒ  ＯＰＴＩＭＡ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ）により吸光度を検出した。
【０１９３】
４、データ処理
基質を除去した後濃度の異なる薬物で得られた生成物の吸光度を算出し、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアにより細胞毒性に対する薬物のＩＣ５０濃度を算出した。
【０１９４】
一部の化合物の結果は以下の表に示される。
【０１９５】
【表１１】
2021526159.tif 000073
【０１９６】
インビトロ酵素活性及び細胞毒性の結果から分かるように、本発明における化合物及びそのプロドラッグは、現在市販されているプロテアソーム薬物と比較し、インビトロ酵素活性及び複数種の細胞においてより優れた活性を示した。
【０１９７】
インビボ薬物動態評価
体重２２０±２０ｇの１２匹のＳＤ雄ラットを四つの群にランダムに分けた。
【０１９８】
二つの群では、以下の表に示す用量でＩＶ−９及びＶ−９Ａをそれぞれ尾静脈注射投与し、投与前及び投与後１０ｍｉｎ、２０ｍｉｎ、３０ｍｉｎ、１ｈ、２ｈ、４ｈ、８ｈ、１２ｈ、２４ｈ及び３６ｈに、頸静脈から約０．２００ｍＬの血液を採取し、ＥＤＴＡ−Ｋ２の入った試験管に入れ、１５ｍｉｎ高速遠心分離した（７８００×ｇ）後、血漿を分離し、−１５℃〜−３５℃で貯蔵した。ＩＶ−９とＶ−９Ａの静脈注射投与による薬物動態差異を比較した。
【０１９９】
他の二つの群では、以下の表に示す用量でＩＶ−９及びＶ−９Ａをそれぞれ胃内投与し、投与前及び投与後５ｍｉｎ、１０ｍｉｎ、２０ｍｉｎ、３０ｍｉｎ、１ｈ、２ｈ、４ｈ、８ｈ、１２ｈ、２４ｈ及び３６ｈに、頸静脈から約０．２００ｍＬの血液を採取し、ＥＤＴＡ−Ｋ２の入った試験管に入れ、１５ｍｉｎ高速遠心分離した（７８００×ｇ）後、血漿を分離し、−１５℃〜−３５℃で貯蔵した。ＩＶ−９とＶ−９Ａの経口投与による薬物動態差異を比較した。
【０２００】
【表１２】
2021526159.tif 000074
【０２０１】
以上の薬物動態データから分かるように、化合物ＩＶ−９をジエタノールアミンボレートプロドラッグ（Ｖ−９Ａ）にした後、化合物の薬物動態性質は明らかに向上し、半減期（Ｔ１／２）は延長し、また、経口バイオアベイラビリティは１１％（ＩＶ−９）から２４．９％（Ｖ−９Ａ）まで向上した。それから分かるように、本発明における好ましい一連のペプチドボロン酸エステル化合物は、ペプチドボロン酸化合物よりも優れた薬物動態性質を有している。
【０２０２】
動物異種移植モデルの評価
ヒト多発性骨髄腫細胞系ＡＲＨ−７７を用い、Ｂａｌｂ／ｃｎｕｄｅマウスに腫瘍を皮下移植し、移植腫瘍モデルを構築した。具体的な実験過程は以下のとおりである。
【０２０３】
１、上海必凱実験動物有限公司から４〜６週齢のＢａｌｂ／ｃｎｕｄｅマウスを購入し、バリアシステムに移して一週間環境に適応させて飼育した。
【０２０４】
２、細胞を対数成長期になるまで培養し、細胞を消化して遠心分離した後、密度１×１０７個／ｍｌでマトリゲルに再懸濁させ、使用するために氷に放置した。バリアシステムに入れ、マウス１匹あたり１×１０６個の細胞を接種し、腫瘍細胞を動物の右前肢のわきに接種した。動物１匹あたりの接種体積は１００マイクロリットルであった。
【０２０５】
３、動物を飼育し続け、ノギスで腫瘍体積を測定した。平均体積が１００〜１５０ｍｍ３まで増加した時、動物を１群／６匹でブランク対照群、陽性薬物群（化合物ＭＬＮ−９７０８）及び実験群（化合物Ｖ−２Ａ）の三つの群にランダムに分けた。
【０２０６】
腫瘍体積の計算式は以下のとおりである。
【数１】
2021526159.tif 000075
【０２０７】
４、用いられた化合物を、５％のβ−スルホブチルシクロデキストリンナトリウム水溶液により適切な濃度に配合し、清澄になるまで超音波処理した後、使用するために４℃の冷蔵庫に入れて貯蔵した。
【０２０８】
５、投与方法は経口投与であり、陽性薬物群では、投与頻度は毎週二回であり、投与量は５ｍｇ／ｋｇであり、実験群では、毎日投与し、投与量は１ｍｇ／ｋｇであり、三週間連続して投与した後、マウスを死亡させ、実験を終了した。この間、腫瘍体積を毎週二回測定して記録した。また、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアにより、腫瘍の成長に対する薬物の阻害効果を算出した。具体的な実験結果は図１に示される。
【０２０９】
【表１３】
2021526159.tif 000076
【０２１０】
以上の結果から分かるように、化合物Ｖ−９Ａは、１ｍｇ／ｋｇの用量で腫瘍抑制率が６３．４８％であり、５ｍｇ／ｋｇの用量で市販の経口プロテアソーム阻害剤ＭＬＮ−９７０８による腫瘍への抑制率（２５．２８％）よりも顕著に高かった。上記研究結果により、市販の製品と比較し、Ｖ−９Ａが低用量でより高いインビボ薬力を示したことが証明される。
【０２１１】
インビボでの血球の薬物動態研究
本発明で設計された化合物は、血液系の悪性腫瘍を治療するために用いることができるため、単回投与後の血中プロテアソーム活性を検出することにより化合物の薬力を評価し、異なる時点で採血して検出することによりインビボ薬力学的研究を行うことができる。
【０２１２】
具体的な実験過程は以下のとおりである：
１、上海必凱実験動物有限公司から試験に用いられた８週齢の雌ＩＣＲマウスを購入し、バリアシステムに移して一週間環境に適応させて飼育した。
【０２１３】
２、動物を１群／３匹で陽性対照群（ＭＬＮ９７０８）と二つの実験群（ＩＶ−９、Ｖ−９Ａ）の三つの群に分けた。
【０２１４】
３、投与前、各動物に対し、それぞれブランク対照として眼窩静脈叢から１００μＬの血液を採取し、このサンプルにおいて血球で測定されたプロテアソーム活性を１００％とした。投与後、それぞれ１時間、２４時間に眼窩静脈叢から血液を採取し、血球におけるプロテアソームの活性を検出し、０時間のデータと比較し、血中プロテアソーム活性に対する薬物の阻害効果及び回復状況が分かった。
【０２１５】
４、投与方法は経口投与であり、ＭＬＮ９７０８の投与量は５ｍｇ／ｋｇであり、ＩＶ−９群、Ｖ−９Ａ群の投与量はいずれも２ｍｇ／ｋｇであった。
【０２１６】
５、血球におけるプロテアソームの活性を検出するためのキットはＰｒｏｍｅｇａ社から購入され、具体的な実験工程は以下のとおりである。１００μＬの全血を吸い取り、５００μＬのＰＢＳを添加して洗浄して赤血球を回収し、再度洗浄し、その後、１００μＬのＰＢＳを添加して再懸濁させ、懸濁液から５０μＬを吸い取り、細胞分解液を添加してタンパク質定量を行うことで検出値を補正し、さらに２０μＬを吸い取り、ＰＢＳで１００μＬに５倍希釈し、更にこの希釈液を蛍光ペプチド基質と反応させ、マイクロプレートリーダーでプロテアソーム活性を検出した。
【０２１７】
実験で得られた具体的なデータは、図２に示される。研究結果から分かるように、投与後１時間後、化合物ＩＶ−９は、ＭＬＮ９７０８と略同等の阻害活性を示し、Ｖ−９Ａはより優れた阻害活性を有し、投与後２４時間後、ＭＬＮ９７０８群のプロテアソーム活性は対照群の活性の８０％に回復したが、ＩＶ−９群は対照群の活性の約６０％だけに回復し、Ｖ−９Ａ群は対照群の活性の約４０％だけに回復した。以上の研究データにより、本発明の化合物がより優れた薬力学的性質を有し、インビボでより優れた薬力を有し、また薬力持続時間がより長かったことが示される。
【０２１８】
本発明で設計された化合物の治療用量は、投与方法、治療目的、患者の健康状況及び医師の処方により決定される。薬物組成物における本発明で設計された化合物の濃度及び割合は、投与経路、投与量及び化学的特性を含む様々な要因により変化する。例えば、本発明で設計された化合物は、約０．１〜１０％ｗ／ｖで非腸内投与する水性生理緩衝液に用いられる。通常、用量範囲は、一日あたり約１μｇ／ｋｇ〜１ｇ／ｋｇである。具体的な実施形態では、用量範囲は、一日あたり約１０μｇ／ｋｇ体重〜１００ｍｇ／ｋｇ体重である。用量は、投与経路、患者の健康状態、疾患または障害の種類と進行程度、化合物の相対的な生物学的効力、及び賦形剤の処方により変化する。有効量は、インビトロまたは動物モデル試験システムの用量反応曲線から推算することができる。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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