(57)【要約】  本発明は、移植片対宿主病及び粘膜炎を予防又は治療するためのＣＤ２４タンパク質の使用に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の治療又は予防を必要とする対象における移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を治療又は予防する方法であって、
前記対象にＣＤ２４タンパク質を投与することを含む、前記方法。
【請求項２】
グレードＩＩＩ〜ＩＶの急性ＧＶＨＤの対象のリスクを低下させる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
粘膜炎の治療又は予防を必要とする対象における粘膜炎を治療又は予防する方法であって、
前記対象にＣＤ２４タンパク質を投与することを含む、前記方法。
【請求項４】
前記対象ががんに罹患している、請求項１〜請求項３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記がんが、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）又は慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記ＣＤ２４タンパク質が、２４０ｍｇ又は４８０ｍｇの用量で投与される、請求項１〜請求項５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記対象が、造血幹細胞移植（ＨＣＴ）をこれから受けるか、又は造血幹細胞移植（ＨＣＴ）を既に受けた対象である、請求項１〜請求項６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記ＣＤ２４タンパク質が、ＨＣＴの前又は後に投与される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ＣＤ２４タンパク質が、ＨＣＴの１日前に投与される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＣＤ２４タンパク質が２回以上投与される、請求項８又は請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＣＤ２４タンパク質が隔週で３回量で投与され、前記３回量には、ＨＣＴの前日分の量、ＨＣＴの後の１４日目分の量、及びＨＣＴの後の２８日目分の量が含まれる、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＣＤ２４タンパク質の前記量が、それぞれ、４８０ｍｇ、２４０ｍｇ及び２４０ｍｇである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＣＤ２４タンパク質が、Ｎ末端又はＣ末端が哺乳類イムノグロブリン（Ｉｇ）タンパク質のＦｃ領域と融合している成熟ヒトＣＤ２４ポリペプチドを含む、請求項１〜請求項１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記成熟ヒトＣＤ２４ポリペプチドが、配列番号１又は配列番号２に示される配列を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記Ｉｇタンパク質がヒトであり、前記Ｆｃ領域がＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４又はＩｇＡのヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記Ｉｇタンパク質がヒトであり、前記Ｆｃ領域がＩｇＭのヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン及びＣＨ４ドメインを含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＣＤ２４タンパク質が、配列番号６、配列番号１１又は配列番号１２に示される配列を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＣＤ２４タンパク質のアミノ酸配列が、配列番号６、配列番号１１又は配列番号１２に示される配列からなる、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＣＤ２４タンパク質が可溶性である、請求項１〜請求項１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＣＤ２４タンパク質がグリコシル化されている、請求項１〜請求項１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＣＤ２４タンパク質が、真核生物発現系を用いて調製されたものである、請求項１〜請求項２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記真核生物発現系が、哺乳類細胞におけるベクターからの発現を含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記哺乳類細胞がチャイニーズハムスター卵巣細胞である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
対象における移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を治療又は予防するための薬物の製造におけるＣＤ２４タンパク質の使用。
【請求項２５】
グレードＩＩＩ〜ＩＶの急性ＧＶＨＤの対象のリスクを低下させる、請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
対象における粘膜炎を治療又は予防するための薬物の製造におけるＣＤ２４タンパク質の使用。
【請求項２７】
前記対象ががんに罹患している、請求項２４〜請求項２６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２８】
前記がんが、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）又は慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）である、請求項２７に記載の使用。
【請求項２９】
前記ＣＤ２４タンパク質が、２４０ｍｇ又は４８０ｍｇの用量で投与される、請求項２４〜請求項２８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３０】
前記対象が、造血幹細胞移植（ＨＣＴ）をこれらか受けるか、又は造血幹細胞移植（ＨＣＴ）を既に受けた対象である、請求項２４〜請求項２９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３１】
前記ＣＤ２４タンパク質が、ＨＣＴの前又は後に投与される、請求項３０に記載の使用。
【請求項３２】
前記ＣＤ２４タンパク質が、ＨＣＴの１日前に投与される、請求項３１に記載の使用。
【請求項３３】
前記ＣＤ２４タンパク質が２回以上投与される、請求項３１又は請求項３２に記載の使用。
【請求項３４】
前記ＣＤ２４タンパク質が隔週で３回量で投与され、前記３回量には、ＨＣＴの前日分の量、ＨＣＴの後の１４日目分の量、及びＨＣＴの後の２８日目分の量が含まれる、請求項３３に記載の使用。
【請求項３５】
前記ＣＤ２４タンパク質の前記量が、それぞれ、４８０ｍｇ、２４０ｍｇ及び２４０ｍｇである、請求項３４に記載の使用。
【請求項３６】
前記ＣＤ２４タンパク質が、Ｎ末端又はＣ末端が哺乳類イムノグロブリン（Ｉｇ）タンパク質のＦｃ領域と融合している成熟ヒトＣＤ２４ポリペプチドを含む、請求項２４〜請求項３５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３７】
前記成熟ヒトＣＤ２４ポリペプチドが、配列番号１又は配列番号２に示される配列を含む、請求項３６に記載の使用。
【請求項３８】
前記Ｉｇタンパク質がヒトであり、前記Ｆｃ領域がＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４又はＩｇＡのヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む、請求項３７に記載の使用。
【請求項３９】
前記Ｉｇタンパク質がヒトであり、前記Ｆｃ領域がＩｇＭのヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン及びＣＨ４ドメインを含む、請求項３７に記載の使用。
【請求項４０】
前記ＣＤ２４タンパク質が、配列番号６、配列番号１１又は配列番号１２に示される配列を含む、請求項３８に記載の使用。
【請求項４１】
前記ＣＤ２４タンパク質のアミノ酸配列が、配列番号６、配列番号１１又は配列番号１２に示される配列からなる、請求項４０に記載の使用。
【請求項４２】
前記ＣＤ２４タンパク質が可溶性である、請求項２４〜請求項４１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４３】
前記ＣＤ２４タンパク質がグリコシル化されている、請求項２４〜請求項４２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４４】
前記ＣＤ２４タンパク質が、真核生物発現系を用いて調製されたものである、請求項２４〜請求項４３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４５】
前記真核生物発現系が、哺乳類細胞におけるベクターからの発現を含む、請求項４４に記載の使用。
【請求項４６】
前記哺乳類細胞がチャイニーズハムスター卵巣細胞である、請求項４５に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、移植片対宿主病及び粘膜炎を予防及び治療するための組成物及び方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
同種造血幹細胞移植（ＨＣＴ）は、成人における広域スペクトルの高リスクの白血病及び脊髄形成異常のための唯一の確立された治癒的治療である。同種移植の重要な機能は、ドナーＴ細胞を用いて同種白血病細胞を消滅させることであり、この効果はＧＶＬと呼ばれている。しかし、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）は、ドナー幹細胞移植片の免疫担当細胞が宿主への免疫攻撃を開始する際に発現する生命を脅かす合併症である。活性化ドナーＴ細胞は、前処置療法から開始する炎症カスケードの後で宿主上皮細胞に損傷を与える。正確なリスクは、幹細胞源、患者の年齢、前処置及び用いられるＧＶＨＤ予防法に依存する。発現率は、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）の不同性の程度に直接関連する。急性ＧＶＨＤの発症の中央値は、典型的には、移植の２１〜２５日後である。発現率は、完全に組織適合性の血縁ドナー移植のレシピエントにおける３０〜６５％から、不適合造血細胞又は非血縁ドナーに由来する造血細胞のレシピエントにおける６０％〜８０％までの範囲に及ぶ。臍帯血移植は、急性ＧＶＨＤのより低い発現率及びより遅い発症を伴う、より遅い好中球回復を伴ってきた。発現率を増加させる因子としては、造血細胞の源として骨髄ではなく末梢血を用いることや、レシピエントの年齢がより高いことが挙げられる。慢性ＧＶＨＤの診断の時間の中央値は、ＨＬＡ一致同胞移植の４．５ヵ月後、及び非血縁ドナー移植の４ヵ月後である。新規の慢性ＧＶＨＤは、同種ＨＣＴの２年後にはほとんど発現しない。
【０００３】
２０年にわたって、カルシニューリン阻害剤（例えばシクロスポリン及びタクロリムス）とメトトレキセートとの併用が、依然としてＧＶＨＤの予防のための標準治療であった。免疫予防の日常投与にもかかわらず、臨床的に重要なＧＶＨＤ（グレードＩＩ〜ＩＶ）が、ＨＬＡ適合血縁ＨＣＴを受けている患者の約３０〜６５％、及び非血縁ドナーＨＣＴを受けている患者の６０〜８０％において発現する。急性ＧＶＨＤは、ＨＣＴの後の初期事象であり、その発症までの時間の中央値は約２５〜３０日である。非常に重度のＧＶＨＤの患者において、死亡率は９０％を超える。このことについての１つの説明は、一旦確立された場合、高用量のコルチコステロイドによる最先端の治療に対して無効な応答が患者の５０％超に生じるということである。ステロイド不応性を示す患者、又は長期にわたる治療を必要とする患者について、生存期間は有意に減少する。成功した場合であっても、高用量のコルチコステロイドは、感染症の増加、及びＴＲＭに対する患者のリスクを著しいものにする体調不良による罹患率の主要な原因となる。
【０００４】
高用量化学療法及び／又は全身照射（ＴＢＩ）を含むＨＣＴ前処置レジメンによって引き起こされる宿主組織傷害は、急性ＧＶＨＤの発症における最初の段階であると考えられる。前処置レジメンによって引き起こされる宿主組織傷害は、炎症誘発性サイトカイン（例えば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β及びＩＬ−６）の放出を招き、損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）や病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）の放出も招く。ＤＡＭＰ及びＰＡＭＰの両方は、パターン認識受容体（ＰＲＲ）に結合することによって樹状細胞（ＤＣ）などの抗原提示細胞（ＡＰＣ）を活性化させることができる。続いて、宿主ＡＰＣは、ドナーＴ細胞を活性化させ、炎症誘発性サイトカインの放出と宿主組織を標的とする抗原特異的アロ反応性Ｔ細胞の膨張とを引き起こす免疫性カスケードを活性化させて、ＧＶＨＤを発症させる。ゆえに、組織傷害に対する宿主応答を標的とし、ＧＶＨＤの開始の主要プロセスであるＡＰＣの活性化を阻止することによってＧＶＨＤを弱めることができるのかどうかを探究することには、大きな関心がある。
【０００５】
現在まで、ＧＶＨＤの治療及び予防は、主に、組織傷害を媒介するアロ反応性Ｔ細胞の膨張を限定するためのインビボ又はエクスビボにおけるアプローチによるＴ細胞の薬理学的な阻害又は欠失のいずれかに重点が置かれてきた。非選択的Ｔ細胞欠失戦略（例えば、抗胸腺細胞グロブリン）はＧＶＨＤを予防する際に有効であるが、それらは、再発、感染及び移植片拒絶のリスクを相殺するので生存期間を向上させない。反対に、単一炎症誘発性サイトカインを標的とすることによる、より選択的な阻害は、ＧＶＨＤの治療において臨床的有益性を示さなかった。その結果、Ｔ細胞を欠失させる抗体のほかに、ＧＶＨＤのための生物製剤は承認されず、タクロリムスとメトトレキセートとの併用が依然としてＧＶＨＤの予防のための標準治療であった。医療上の要求が著しく満たされていないため、ＧＶＨＤの予防及び治療のためのより選択的な生物学的製剤が必要とされている。
【０００６】
粘膜炎は、がんの化学療法及び放射線療法の治療における一般的且つ痛みを伴う副作用であり、消化管に沿って発症する粘膜の炎症及び潰瘍をもたらす。粘膜炎は、放射線／放射線療法（ＲＴ）又は化学療法によって引き起こされる組織傷害の結果である。粘膜炎は、消化（ＧＩ）管に沿ってどこでも発現し得るが、口腔粘膜炎は、口腔内で発現する特定の炎症及び潰瘍を指す。口腔粘膜炎及び消化管（ＧＩ）粘膜炎は、シタラビン並びに高用量の５−フルオロウラシル、アルキル化剤及び白金系化合物による高用量化学療法を受けているほとんど全ての患者に影響を及ぼし、頭部及び頸部の悪性腫瘍の大半の患者は放射線療法を受けている。放射線誘発口腔粘膜炎（ＲＩＯＭ）は、頭頚部がん患者の改変分割放射線療法（ａｌｔｅｒｅｄ  ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ  ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ）の１００％で発現する。口腔粘膜炎を罹患している患者は、嚥下する患者の能力を著しく妨げる可能性がある重度の疼痛、炎症、潰瘍及び出血を発症し、それによって、がん治療の中断のために腫瘍管理も制限される可能性もある。したがって、口腔粘膜炎は、頭部及び頸部のための化学療法及び／又は放射線療法を受けるがん患者において認められる重要な有害作用である。消化管粘膜炎は、死亡率及び罹患率を増加させ、健康管理費用の増加に寄与する。米国では、ＲＩＯＭの経済的費用は、頭頚部がんの患者１人につき１７，０００．００米ドルに達すると推定された。
【０００７】
最も重大な粘膜炎の苦しみは、造血幹細胞移植（ＨＣＴ）のために用いられる前処置レジメンの結果として発現する。ＨＣＴのための治療レジメンは、移植の前にレシピエントのがん性造血細胞を死滅させるために必要な全身照射（ＴＢＩ）の有無にかかわらず、高い粘膜毒性の化学療法を含むプレコンディショニングレジメンを含む。このプレコンディショニング治療は、消化管全体にわたって重篤な傷害を招く。軽度の粘膜炎には、粘膜の紅斑、及び斑状潰瘍又は偽膜が含まれる。重度の粘膜炎（グレード３以上）は、組織壊死、著しい特発出血及び生命を脅かす転帰に進行する可能性がある融合性の潰瘍又は偽膜、及び軽度の外傷を伴う出血を伴う。ＨＣＴを受けている患者の粘膜炎に関連する別の徴候は、慢性ＧＶＨＤの一形態である口腔内の移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）である。化学療法及び放射線によって誘発された粘膜炎と同様に、口腔内ＧＶＨＤには、粘膜紅斑、潰瘍及び痛みを伴う剥離性口腔内病変が含まれる。しかし、いくつかの因子（特に、併用する放射線の有無にかかわらない前処置化学療法）が、ＨＣＴ後の最初の２８日間における口腔内の病変の発症に寄与するので、口腔内急性ＧＶＨＤの真の臨床的な症例の定義は存在しない。
【０００８】
上記のように、ＧＶＨＤ、粘膜炎及び関連する徴候は全て、組織損傷の要素を含む。これらの課題を解決するために、本技術分野において、ＧＶＨＤ及び粘膜炎を効果的に治療及び予防する方法が求められている。
【発明の概要】
【０００９】
本明細書において、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）又は粘膜炎の予防又は治療を必要とする対象における移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）又は粘膜炎を予防又は治療する方法が提供され、上記方法は、上記対象にＣＤ２４タンパク質を投与することを含み得る。本明細書において、対象におけるＧｖＨＤ又は粘膜炎を予防又は治療するための薬物の製造におけるＣＤ２４タンパク質の使用も提供される。上記の方法又は使用により、対象のグレードＩＩＩ〜ＩＶの急性ＧｖＨＤのリスクを低下させることが可能である。対象はヒトであってもよい。対象は、造血幹細胞移植（ＨＣＴ）をこれから受けてもよいか、又は造血幹細胞移植（ＨＣＴ）を既に受けていてもよい。対象は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）又は慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）であってもよいがんを有してもよい。
【００１０】
ＣＤ２４タンパク質は、２４０ｍｇ又は４８０ｍｇの用量で投与されてもよい。ＣＤ２４タンパク質は、ＨＣＴの前又は後に投与されてもよく、ＨＣＴの１日前に投与されてもよい。ＣＤ２４タンパク質は、２回以上投与されてもよく、隔週の用量で投与されてもよい。この用量は、ＨＣＴの前日分の量、ＨＴＣの後の１４日目分の量、及びＨＣＴの後の２８日目分の量を含んでもよく、これらの量は、それぞれ、４８０ｍｇ、２４０ｍｇ及び２４０ｍｇであってもよい。
【００１１】
ＣＤ２４タンパク質は、Ｎ末端又はＣ末端が哺乳類イムノグロブリン（Ｉｇ）タンパク質のＦｃ領域と融合している成熟ヒトＣＤ２４ポリペプチドを含んでもよい。成熟ヒトＣＤ２４ポリペプチドは、配列番号１又は配列番号２で示される配列を含んでもよい。Ｉｇタンパク質はヒトあってもよい。Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４又はＩｇＡのヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含んでもよい。Ｆｃ領域は、ＩｇＭのヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン及びＣＨ４ドメインを含んでもよい。ＣＤ２４タンパク質は、配列番号６、配列番号１１又は配列番号１２に示される配列を含んでもよい。ＣＤ２４タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号６、配列番号１１又は配列番号１２に示される配列からなってもよい。ＣＤ２４タンパク質は可溶性であってもよく、グリコシル化されていてもよい。ＣＤ２４タンパク質は、哺乳類細胞におけるベクターからの発現を含んでもよい真核生物発現系を用いて調製されてもよい。細胞はチャイニーズハムスター卵巣細胞であってもよい。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１Ａ】図１Ａは、全長ＣＤ２４融合タンパク質であるＣＤ２４Ｆｃ（本明細書において、ＣＤ２４Ｉｇとも称される）（配列番号５）のアミノ酸組成を示す。下線を引かれた２６個のアミノ酸は、ＣＤ２４のシグナルペプチド（配列番号４）であり、上記タンパク質を発現している細胞からの分泌中に切断されることによって上記タンパク質の処理後バージョン（配列番号６）が欠失している。配列の太字部分は、融合タンパク質（配列番号２）において用いられる成熟ＣＤ２４タンパク質の細胞外ドメインである。成熟ＣＤ２４タンパク質に通常存在する最後のアミノ酸（Ａ又はＶ）を構築体から欠失させて免疫原性を回避した。下線無しの太字でない文字は、ヒンジ領域、ＣＨ１及びＣＨ２ドメインを含むＩｇＧ１  Ｆｃの配列（配列番号７）である。図１Ｂは、成熟ヒトＣＤ２４タンパク質（太字）が配列番号１のバリン多型変異体であるＣＤ２４ＶＦｃの配列（配列番号８）を示す。図１Ｃは、成熟ヒトＣＤ２４タンパク質（太字）が配列番号１のアラニン多型変異体であるＣＤ２４ＡＦｃの配列（配列番号９）を示す。図１Ｂ及び図１Ｃにおける融合タンパク質の各種部分は、図１Ａにおけるものとしてマークされ、変異体バリン／アラニンアミノ酸には二重下線が引かれている。
【図１Ｂ】図１Ａは、全長ＣＤ２４融合タンパク質であるＣＤ２４Ｆｃ（本明細書において、ＣＤ２４Ｉｇとも称される）（配列番号５）のアミノ酸組成を示す。下線を引かれた２６個のアミノ酸は、ＣＤ２４のシグナルペプチド（配列番号４）であり、上記タンパク質を発現している細胞からの分泌中に切断されることによって上記タンパク質の処理後バージョン（配列番号６）が欠失している。配列の太字部分は、融合タンパク質（配列番号２）において用いられる成熟ＣＤ２４タンパク質の細胞外ドメインである。成熟ＣＤ２４タンパク質に通常存在する最後のアミノ酸（Ａ又はＶ）を構築体から欠失させて免疫原性を回避した。下線無しの太字でない文字は、ヒンジ領域、ＣＨ１及びＣＨ２ドメインを含むＩｇＧ１  Ｆｃの配列（配列番号７）である。図１Ｂは、成熟ヒトＣＤ２４タンパク質（太字）が配列番号１のバリン多型変異体であるＣＤ２４ＶＦｃの配列（配列番号８）を示す。図１Ｃは、成熟ヒトＣＤ２４タンパク質（太字）が配列番号１のアラニン多型変異体であるＣＤ２４ＡＦｃの配列（配列番号９）を示す。図１Ｂ及び図１Ｃにおける融合タンパク質の各種部分は、図１Ａにおけるものとしてマークされ、変異体バリン／アラニンアミノ酸には二重下線が引かれている。
【図１Ｃ】図１Ａは、全長ＣＤ２４融合タンパク質であるＣＤ２４Ｆｃ（本明細書において、ＣＤ２４Ｉｇとも称される）（配列番号５）のアミノ酸組成を示す。下線を引かれた２６個のアミノ酸は、ＣＤ２４のシグナルペプチド（配列番号４）であり、上記タンパク質を発現している細胞からの分泌中に切断されることによって上記タンパク質の処理後バージョン（配列番号６）が欠失している。配列の太字部分は、融合タンパク質（配列番号２）において用いられる成熟ＣＤ２４タンパク質の細胞外ドメインである。成熟ＣＤ２４タンパク質に通常存在する最後のアミノ酸（Ａ又はＶ）を構築体から欠失させて免疫原性を回避した。下線無しの太字でない文字は、ヒンジ領域、ＣＨ１及びＣＨ２ドメインを含むＩｇＧ１  Ｆｃの配列（配列番号７）である。図１Ｂは、成熟ヒトＣＤ２４タンパク質（太字）が配列番号１のバリン多型変異体であるＣＤ２４ＶＦｃの配列（配列番号８）を示す。図１Ｃは、成熟ヒトＣＤ２４タンパク質（太字）が配列番号１のアラニン多型変異体であるＣＤ２４ＡＦｃの配列（配列番号９）を示す。図１Ｂ及び図１Ｃにおける融合タンパク質の各種部分は、図１Ａにおけるものとしてマークされ、変異体バリン／アラニンアミノ酸には二重下線が引かれている。
【図２】図２は、マウスに由来する成熟ＣＤ２４タンパク質（配列番号３）とヒトに由来する成熟ＣＤ２４タンパク質（配列番号２）との間のアミノ酸配列の差異を示す。潜在的Ｏ−グリコシル化部位は太字であり、Ｎ−グリコシル化部位には下線が引かれている。
【図３】図３Ａ〜図３Ｃは、ＣＤ２４ＩｇＧ１（ＣＤ２４Ｆｃ）の薬物動態（ｐｈａｒｍａｃｏｋｅｎｉｔｉｃｓ）のＷｉｎＮｏｎｌｉｎコンパートメントモデル化分析である。白丸は３匹のマウスの平均を表し、線は予測された薬物動態学的曲線である。図３Ａ：１ｍｇのＣＤ２４ＩｇＧ１のｉ．ｖ．注射。図３Ｂ：１ｍｇのＣＤ２４ＩｇＧ１（ＣＤ２４Ｆｃ）のｓ．ｃ．注射。図３Ｃ：曲線下面積（ＡＵＣ）、半減期及び最大血中濃度によって測定される通りの血液中の抗体の総量の比較。なお、全体的に、ｓ．ｃ．注射のＡＵＣ及びＣｍａｘは、ｉ．ｖ．注射の約８０％であるが、差は統計学的に有意ではない。
【図４Ａ】図４Ａ〜図４Ｂ：ＣＤ２４−Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇ（１０）相互作用は、ＰＡＭＰとＤＡＭＰとを識別する。図４Ａ：ＰＡＭＰに対する宿主応答は、ＣＤ２４−Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇ（１０）相互作用に影響を受けなかった。図４Ｂ：ＣＤ２４−Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇ（１０）相互作用は、おそらくＳｉｇｌｅｃ  Ｇ／１０関連ＳＨＰ−１によってＤＡＭＰに対する宿主応答を抑止する。
【図４Ｂ】図４Ａ〜図４Ｂ：ＣＤ２４−Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇ（１０）相互作用は、ＰＡＭＰとＤＡＭＰとを識別する。図４Ａ：ＰＡＭＰに対する宿主応答は、ＣＤ２４−Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇ（１０）相互作用に影響を受けなかった。図４Ｂ：ＣＤ２４−Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇ（１０）相互作用は、おそらくＳｉｇｌｅｃ  Ｇ／１０関連ＳＨＰ−１によってＤＡＭＰに対する宿主応答を抑止する。
【図５】図５Ａ〜図５Ｃ。ＣＤ２４Ｆｃは、Ｓｉｇｌｅｃ１０及びＨＭＧＢ１に結合し、Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇ（ヒトＳｉｇｌｅｃ１０のマウス相同体）を活性化する。図５Ａ：ＣＤ２４Ｆｃ−Ｓｉｇｌｅｃ１０相互作用の親和性測定。図５Ｂ：ＣＤ２４Ｆｃは、カチオン依存性様式でＨＭＧＢ−１と特異的に相互作用する。カチオンキレート剤ＥＤＴＡの存在下又は非存在下において、０．１ｍＭのＣａＣｌ２及びＭｇＣｌ２においてＨＭＧＢ１と共にＣＤ２４Ｆｃをインキュベートした。タンパク質Ｇ−ビーズでＣＤ２４Ｆｃをプルダウンし、ＨＭＧＢ１、ＣＤ２４Ｆｃ又は対照Ｆｃの量をウェスタンブロットによって決定する。図５Ｃ：ＣＤ２４Ｆｃは、チロシンリン酸化（中央のパネル）及びＳＨＰ−１との会合（上のパネル）を誘導することによってマウスＳｉｇｌｅｃ  Ｇを活性化する。Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇの量は、下のパネルに示される。１μｇ／ｍＬのＣＤ２４Ｆｃ、対照Ｆｃ又はビヒクル（ＰＢＳ）対照によって、３０分間、ＣＤ２４−／−脾臓細胞を刺激した。次いで、Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇを免疫沈降し、抗ホスホ−チロシン又は抗−ＳＨＰ−１によって精査した。
【図６】図６Ａ〜図６Ｂ：ＣＤ２４Ｆｃは、抗ＣＤ３活性化ヒトＴ細胞によるＴＮＦ−α及びＩＦＮ−γの産生を阻害する。ＣＤ２４Ｆｃの存在下又は非存在下で、４日間、抗ＣＤ３によってヒトＰＢＭＬを刺激し、細胞培養物の上清中で放出されたＩＦＮ−γ及びＴＮＦ−αの量をＥＬＩＳＡで測定した。示されたデータは、３つの平均である。エラーバー、ＳＥＭ。
【図７】図７Ａ〜図７Ｂ：ＣＤ２４は、ヒトマクロファージによる炎症性サイトカイン産生を阻害する。図７Ａ：ＣＤ２４のＳｈＲＮＡサイレンシングによって、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β及びＩＬ−６の自然産生が生じる。スクランブルされた又は２つの独立したＣＤ２４ｓｈＲＮＡ分子をコードするレンチウイルスベクターをＴＨＰ１細胞に形質導入した。形質導入された細胞をＰＭＡ（１５ｎｇ／ｍＬ）と共に４日間の培養することよってマクロファージに分化させた。ＰＭＡ及び非接着細胞を洗浄した後、細胞を、サイトカインビーズアレイによって、炎症性サイトカインの測定のために、さらに２４時間培養した。図７Ｂ：最後の２４時間に所定の濃度のＣＤ２４Ｆｃ又は対照ＩｇＧ  Ｆｃをマクロファージに加えたことを除いて、図７Ａと同様である。図４Ａに示されるデータは、３つの独立した実験からの平均及び標準偏差であり、図４Ｂにおけるデータは少なくとも３つの独立した実験を示す。
【図８】図８は、ヒト対象におけるＰＫ評価可能集団のための治療による平均血漿ＣＤ２４Ｆｃ濃度（±ＳＤ）のプロットを示す。ＰＫ＝薬物動態；ＳＤ＝標準偏差。
【図９】図９は、ＰＫ評価可能集団のための用量に対するＣＤ２４Ｆｃ  Ｃｍａｘの用量比例性プロットを示す。
【図１０】図１０は、ＰＫ評価可能集団のための用量に対するＣＤ２４Ｆｃ  ＡＵＣ０−４２ｄの用量比例性プロットを示す。
【図１１】図１１は、ＰＫ評価可能集団のための用量に対するＣＤ２４Ｆｃ  ＡＵＣ０−ｉｎｆの用量比例性プロットを示す。
【図１２】図１２は、同種骨髄破壊的造血幹細胞移植（ＨＣＴ）を受けているがん患者における標準治療の急性ＧＶＨＤ予防に対してＣＤ２４Ｆｃを加えることを評価するために実施された無作為化プラセボ対照フェーズＩＩａ用量漸増試験についての治験デザインを示す。
【図１３】図１３は、フェーズＩＩａ試験における単回投与及び複数回投与のコホートについての投与計画を示す。
【図１４】図１４は、上記試験に組入れられた患者についての生着までの時間の中央値を示す。
【図１５】図１５は、上記試験に組入れられた患者についての骨髄性ドナーキメラ現象を示す。
【図１６】図１６は、治療（ＣＤ２４Ｆｃ）コホートにおけるグレードＩＩ〜ＩＶ及びグレードＩＩＩ〜ＩＶの急性ＧＶＨＤの発現率を示す。
【図１７】図１７は、メトトレキセート／タクロリムスの投与を受けている同時対照患者と比較した、メトトレキセート／タクロリムス＋ＣＤ２４Ｆｃの投与を受けている患者におけるＨＣＴの１８０日後のグレードＩＩＩ〜ＩＶのａＧＶＨＤの累積発現率を示す。
【図１８】図１８は、ＣＤ２４Ｆｃ又はプラセボ対照のいずれかの投与を受けている患者における、１８０日間にわたるグレードＩＩＩ〜ＩＶのａＧＶＨＤ、無再発生存率を比較するカプラン−マイヤー生存分析を示す。
【図１９】図１９は、同時対照と共にＣＤ２４Ｆｃの投与を受けている患者における、１８０日間にわたるグレードＩＩＩ〜ＩＶのａＧＶＨＤ、無再発生存率を比較するカプラン−マイヤー生存分析を示す。
【図２０】図２０は、移植から８００日後におけるＣＤ２４Ｆｃ又はプラセボ対照のいずれかの投与を受けている患者の全生存率を比較するカプラン−マイヤー生存分析を示す。
【図２１】図２１は、移植から８００日後におけるＣＤ２４Ｆｃ又は同時対照の投与を受けている患者の全生存率を比較するカプラン−マイヤー生存分析を示す。
【図２２Ａ】図２２Ａ〜図２２Ｂ：２４０ｍｇ及び４８０ｍｇの単回投与コホートから得られたＰＫデータを示す。図２２Ａ：線形目盛における時間に対する血漿中ＣＤ２４Ｆｃ濃度（ｎｇ／ｍＬ）の平均値（標準偏差）のプロット。図２２Ｂ：片対数目盛における時間に対する血漿中ＣＤ２４Ｆｃ濃度（ｎｇ／ｍＬ）の平均値（標準偏差）のプロット。
【図２２Ｂ】図２２Ａ〜図２２Ｂ：２４０ｍｇ及び４８０ｍｇの単回投与コホートから得られたＰＫデータを示す。図２２Ａ：線形目盛における時間に対する血漿中ＣＤ２４Ｆｃ濃度（ｎｇ／ｍＬ）の平均値（標準偏差）のプロット。図２２Ｂ：片対数目盛における時間に対する血漿中ＣＤ２４Ｆｃ濃度（ｎｇ／ｍＬ）の平均値（標準偏差）のプロット。
【図２３Ａ】図２３Ａ〜図２３Ｂ：複数回投与コホートから得られたＰＫデータを示す。図２３Ａ：線形目盛における時間に対する血漿中ＣＤ２４Ｆｃ濃度（ｎｇ／ｍＬ）の平均値（±標準偏差）のプロット。図２３Ｂ：片対数目盛における時間に対する血漿中ＣＤ２４Ｆｃ濃度（ｎｇ／ｍＬ）の平均値（±標準偏差）のプロット。
【図２３Ｂ】図２３Ａ〜図２３Ｂ：複数回投与コホートから得られたＰＫデータを示す。図２３Ａ：線形目盛における時間に対する血漿中ＣＤ２４Ｆｃ濃度（ｎｇ／ｍＬ）の平均値（±標準偏差）のプロット。図２３Ｂ：片対数目盛における時間に対する血漿中ＣＤ２４Ｆｃ濃度（ｎｇ／ｍＬ）の平均値（±標準偏差）のプロット。
【図２４Ａ】図２４Ａ〜図２４Ｂ：口腔粘膜炎に対するＣＤ２４Ｆｃ治療の効果を示す。図２４Ａ：組み合わされた粘膜炎スコア。粘膜炎に対する上記効果の測度として、我々は、患者が重篤な（グレード３又は４）粘膜炎に罹患した日数の倍数を生成し、これは、括弧内において粘膜炎を有したｐｔの数と共に、棒で提供される。図２４Ｂ：ＣＤ２４Ｆｃによる粘膜炎スコアの用量依存的低減。個別の粘膜炎スコアの平均値及び標準誤差が示される。患者の薬物用量と粘膜炎スコアと間の相関係数及びＰ値は、ピアソン法を用いて決定された。Ｒ＝−０．９９８３、Ｐ＝０．０００９。
【図２４Ｂ】図２４Ａ〜図２４Ｂ：口腔粘膜炎に対するＣＤ２４Ｆｃ治療の効果を示す。図２４Ａ：組み合わされた粘膜炎スコア。粘膜炎に対する上記効果の測度として、我々は、患者が重篤な（グレード３又は４）粘膜炎に罹患した日数の倍数を生成し、これは、括弧内において粘膜炎を有したｐｔの数と共に、棒で提供される。図２４Ｂ：ＣＤ２４Ｆｃによる粘膜炎スコアの用量依存的低減。個別の粘膜炎スコアの平均値及び標準誤差が示される。患者の薬物用量と粘膜炎スコアと間の相関係数及びＰ値は、ピアソン法を用いて決定された。Ｒ＝−０．９９８３、Ｐ＝０．０００９。
【図２５Ａ】図２５Ａ〜図２５Ｂ：プラセボ対照群（図２５Ａ）及び同時対照群（図２５Ｂ）と比較したＣＤ２４Ｆｃ群における１８０日間にわたるグレードＩＩＩ〜ＩＶのＧＶＨＤ無病生存率を示す。
【図２５Ｂ】図２５Ａ〜図２５Ｂ：プラセボ対照群（図２５Ａ）及び同時対照群（図２５Ｂ）と比較したＣＤ２４Ｆｃ群における１８０日間にわたるグレードＩＩＩ〜ＩＶのＧＶＨＤ無病生存率を示す。
【図２６Ａ】図２６Ａ〜図２６Ｂ：プラセボ対照群（図２６Ａ）及び同時対照群（図２６Ｂ）と比較したＣＤ２４Ｆｃ群における無再発生存率を示す。
【図２６Ｂ】図２６Ａ〜図２６Ｂ：プラセボ対照群（図２６Ａ）及び同時対照群（図２６Ｂ）と比較したＣＤ２４Ｆｃ群における無再発生存率を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
組織損傷は、炎症誘発性サイトカイン（例えば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β及びＩＬ−６）の放出を招く場合があり、損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）及び病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）の放出も招く場合がある。ＤＡＭＰ及びＰＡＭＰの両方とも、パターン認識受容体（ＰＲＲ）への結合によって樹状細胞（ＤＣ）などの抗原提示細胞（ＡＰＣ）を活性化し得る。続いて宿主ＡＰＣは、ドナーＴ細胞、並びに、炎症誘発性サイトカインの放出と宿主組織を標的とする抗原特異的アロ反応性Ｔ細胞の膨張とを生じさせる免疫性カスケードを活性化させる。これらの事象により、ＧＶＨＤが発症し、粘膜炎の影響を悪化させる。例えば、ＲＩＯＭは、放射線療法後の口腔粘膜、舌及び咽頭の急性炎症として始まり、これにより各種炎症細胞の補充と、炎症性サイトカイン、走化性メディエータ及び増殖因子の放出とが同時に生じる。
【００１４】
粘膜炎及びＧＶＨＤにおける組織損傷の関与によって、ＧＶＨＤ治療のためにＣＤ２４ＦｃによるＤＡＭＰに対する宿主応答の負の調節を探究することが可能であるという見通しが浮上した。本発明者の前臨床試験によって、ＣＤ２４ＦｃがＤＡＭＰ媒介炎症を特異的に標的とし、ヒト化マウスモデルを含むマウスモデルにおけるＧＶＨＤを予防することが示された。重要なことに、上記薬物は、全身的免疫抑制を引き起こさず、高用量のＣＤ２４Ｆｃの使用が非ヒト霊長類における抗体応答を阻止しないので、従来の免疫抑制剤を超える利点がある。データは、ＣＤ２４ＦｃがＧＶＨＤを予防するが、それを白血病患者におけるＧＶＨＤの予防のための理想的薬物とする移植片対白血病（ＧＶＬ）に対する効果を保つことも示す。最終的に、非ヒト霊長類における本発明者の試験は、ＣＤ２４Ｆｃが抗原特異性免疫応答を抑制しないことを示し、そのことは、ＣＤ２４Ｆｃが感染のリスクを増加させる可能性がないことを示唆する。
【００１５】
本発明者らは、可溶形態のＣＤ２４が移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）及び関連する状態（粘膜炎など）を予防し、ＨＣＴの後の白血病再発を予防するために非常に有効であることを発見した。本発明者らは、ＣＤ２４Ｆｃによって、ＨＣＴ治療を受けている患者における重度の粘膜炎（グレード３以上）の用量依存的な低減が生じたということも発見した。これらの効果は、ＤＡＭＰによって媒介される可能性がある。パターン認識は、ＰＡＭＰ及びＤＡＭＰの両方によって誘発される炎症応答に関与する。本発明者らは、最近の試験によってＤＡＭＰに対する宿主応答の悪化が炎症性疾患及び自己免疫性疾患の病原性における役割を果たす可能性があることが示されたことを実現した。ＤＡＭＰは、動物モデルにおいて炎症性サイトカイン及び自己免疫性疾患を生じさせることを促進することが分かり、ＨＭＧＢ１及びＨＳＰ９０などのＤＡＭＰの阻害剤は、結果的に、関節リウマチ（ＲＡ）を寛解させることが分かった。ＴＬＲ、ＲＡＧＥ−Ｒ、ＤＮＧＲ（Ｃｌｅｃ９Ａによってコードされる）及びＭｉｎｃｌｅは、様々なＤＡＭＰによって開始される炎症の媒介の原因となる受容体であることが示された。
【００１６】
本発明者らの最近の仕事によって、ＣＤ２４−Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇ相互作用がＤＡＭＰに対する先天性免疫をＰＡＭＰから識別することが示された。Ｓｉｇｌｅｃタンパク質は、様々なシアル酸含有構造を認識する膜関連イムノグロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーメンバーである。ほとんどのＳｉｇｌｅｃは、炎症応答の主要な調節因子を制御するためにＳＨＰ−１、ＳＨＰ−２及びＣｂｌ−ｂと関連する細胞内免疫チロシン阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を有する。本発明者らは、Ｓｉｇｌｅｃ（マウスにおけるＳｉｇｌｅｃ  Ｇ及びヒトにおけるＳｉｇｌｅｃ１０）に対する第１の天然リガンドとしてＣＤ２４を報告した。Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇは、シアル酸付加ＣＤ２４と相互作用して、ＳＨＰ−１／２シグナル伝達機序を介してＨＭＧＢ１などのＤＡＭＰに対するＴＬＲ媒介宿主応答を抑制する。
【００１７】
ヒトＣＤ２４は、ＣＤ２４遺伝子内の２４０塩基対のオープンリーディングフレームによってコードされるＧＰＩアンカー型小分子である。８０個アミノ酸の中で、最初の２６個はシグナルペプチドを構成するが、最後の２３個は、ＧＰＩ尾部の付着を可能にする切断のためのシグナルの役割を果たす。その結果、成熟ヒトＣＤ２４分子は、３１個のアミノ酸だけを有する。この３１個のアミノ酸のうちの１つは、ヒト集団の中において多形である。オープンリーディングフレームのヌクレオチド１７０におけるＣ→Ｔトランジションによって、成熟タンパク質の残基３１においてアラニン（Ａ）がバリン（Ｖ）に置換される。この残基が切断部位に隣接してＮ末端であり、且つ置換が非保存的であるので、これらの２つの対立遺伝子は、細胞表面上に異なる効率性で発現され得る。実際、ｃＤＮＡによるトランスフェクション試験によって、ＣＤ２４ｖ対立遺伝子が、細胞表面上に、より効率的に発現されることが示された。これに合わせて、ＣＤ２４ｖ／ｖＰＢＬは、とりわけＴ細胞上に、より高いレベルのＣＤ２４を発現した。
【００１８】
本発明者らは、ＣＤ２４が組織損傷又は器官損傷の結果として放出される細胞ＤＡＭＰに対する宿主応答を負に調節し、少なくとも２つの重複機序がこの活性を説明することができることを示した。第１に、ＣＤ２４は、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０、ＨＭＧＢ１及びヌクレオリンを含むいくつかのＤＡＭＰに結合し、これらのＤＡＭＰへの宿主応答を抑止する。これを行うために、ＣＤ２４が炎症性刺激を阻止して、それらの受容体、ＴＬＲ又はＲＡＧＥとの相互作用を防止し得ると推定される。第２に、本発明者らは、肝壊死のアセトアミノフェン誘導マウスモデルを用いて、炎症を確認して、その受容体（Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇ）との相互作用によって、ＣＤ２４が、組織傷害に対する宿主応答のための強力な負の調節を提供することを示した。この活性を達成するために、ＣＤ２４は結合し、Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇによるシグナル伝達を刺激することが可能であり、Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇ関連ＳＨＰ１が負の調節を誘発する。いずれかの遺伝子の標的化突然変異を有するマウスが非常により強い炎症応答を開始した場合、両機序が協力して作用する可能性がある。実際、ＣＤ２４−／−マウス又はＳｉｇｌｅｃ  Ｇ−／−マウスのいずれかに由来する骨髄から培養されたＤＣは、いずれのＨＭＧＢ１、ＨＳＰ７０又はＨＳＰ９０のいずれかで刺激された際により高いレベルの炎症性サイトカインを産生した。本発明者の知る限り、ＣＤ２４は、ＤＡＭＰによって誘発される炎症を阻止し得る唯一の阻害性ＤＡＭＰ受容体であり、組織傷害に対する宿主炎症応答を特異的に標的とする薬物は現在利用可能ではない。さらに、本発明者らは、ＲＡ、ＭＳ及びＧｖＨＤのマウスモデルを用いて、外因性可溶性ＣＤ２４タンパク質がＤＡＭＰ媒介自己免疫性疾患を緩和する能力を有することを示した。
【００１９】
１．定義
本明細書において用いられる用語は、特定の実施形態のみを記載する目的のためにあり、限定することを意図するものではない。本明細書及び添付の特許請求の範囲に用いられる場合、「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」及び「上記／前記（ｔｈｅ）」という単数形は、文脈が明確に規定しない限り、複数の指示物を含む。
【００２０】
本明細書における数値範囲の説明について、同一の精度でその間にある数は、明示的に考慮される。例えば、６〜９の範囲については、６及び９に加えて７及び８の数が考慮され、６．０〜７．０の範囲については、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９及び７．０の数が明示的に考慮される。
【００２１】
「ペプチド」又は「ポリペプチド」は、アミノ酸の連結配列であり、天然物、合成物又は天然物若しくは合成物の修飾物若しくは組み合わせであってもよい。
【００２２】
「実質的に同一」とは、１つ目と２つ目のアミノ酸配列が、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個、１００個、１１０個、１２０個、１３０個、１４０個、１５０個、１６０個、１７０個、１８０個、１９０個、２００個、２１０個、２２０個、２３０個、２４０個、２５０個、２６０個、２７０個、２８０個、２９０個又は３００個のアミノ酸の領域にわたって、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上又は９９％以上であることを意味することができる。
【００２３】
「治療」又は「治療すること」は、疾患からの動物の保護を指す場合、上記疾患を予防すること、抑制すること、抑止すること、又は完全に排除することを意味する。疾患を予防することは、疾患の発症前に動物に本発明の組成物を投与することを含む。疾患を抑制することは、疾患の誘発後で、その臨床的所見の前に、動物に本発明の組成物を投与することを含む。疾患を抑止することは、疾患の臨床的所見の後に動物に本発明の組成物を投与することを含む。
【００２４】
「変異体」とは、アミノ酸の挿入、欠失又は保存的置換によってアミノ酸配列が異なるが、少なくとも１つの生物学的活性を保持するペプチド又はポリペプチドを意味し得る。「生物学的活性」の代表的例としては、トール様受容体に結合する能力や、特異的抗体によって結合される能力が挙げられる。変異体は、少なくとも１つの生物学的活性を保持するアミノ酸配列を有する参照されたタンパク質に実質的に同一であるアミノ酸配列を有するタンパク質を意味してもよい。アミノ酸の保存的置換、すなわち、アミノ酸を同様の特性（例えば、荷電領域の親水性、程度及び分布）の異なるアミノ酸に置き換えることは、本技術分野において、典型的には小さな変更を含むものと認識される。これらの小さな変更は、本技術分野において理解されるように、アミノ酸の疎水性親水性指標を考慮することによって、部分的に同定され得る。Ｋｙｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５−１３２（１９８２）。アミノ酸の疎水性親水性指標は、その疎水性及び電荷の考慮に基づく。同様の疎水性親水性指標のアミノ酸が置換され得、依然としてタンパク質機能を保持することが本技術分野において知られている。一態様において、疎水性親水性指標が±２であるアミノ酸が置換される。アミノ酸の親水性は、生物学的機能を保持するタンパク質をもたらす置換を明らかにするために用いられてもよい。ペプチドの文脈におけるアミノ酸の親水性を考慮することによって、抗原性及び免疫原性とよく相関することが報告されている有用な測度である、そのペプチドの最大局所平均親水性の算出が可能になる。参照により本明細書に完全に組み込まれる米国特許第４，５５４，１０１号。同様の親水性値を有するアミノ酸の置換によって、本技術分野において理解されるように、生物学的活性、例えば免疫原性を保持するペプチドが生じる可能性がある。置換は、親水性値が互いに±２以内であるアミノ酸で行われてもよい。アミノ酸の疎水性（ｈｙｒｏｐｈｏｂｉｃｉｔｙ）指標及び親水性値の両方は、そのアミノ酸の特定の側鎖によって影響される。その観察に合わせて、生物学的機能に適合性があるアミノ酸置換は、疎水性、親水性、電荷、大きさ及び他の性質によって示されるように、上記アミノ酸及び特にそれらのアミノ酸の側鎖の相対的類似性に依存すると理解される。
【００２５】
２．ＣＤ２４
本明細書において、ＣＤ２４タンパク質が提供され、このＣＤ２４タンパク質には成熟ＣＤ２４又はその変異体が含まれ得る。成熟ＣＤ２４は、ＣＤ２４の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に相当する。成熟ＣＤ２４は、ヒト又は他の哺乳動物に由来してもよい。上記のように、成熟ヒトＣＤ２４タンパク質は、３１アミノ酸長であり、そのＣ末端において変異型アラニン（Ａ）残基又は変異型バリン（Ｖ）残基を有する。成熟ＣＤ２４タンパク質は、以下の配列を含んでもよい。
【００２６】
ＳＥＴＴＴＧＴＳＳＮＳＳＱＳＴＳＮＳＧＬＡＰＮＰＴＮＡＴＴＫ（Ｖ／Ａ）（配列番号１）
【００２７】
Ｃ末端バリン又はＣ末端アラニンは免疫原性であってもよく、その免疫原性を低下させる可能性があるＣＤ２４タンパク質から除かれてもよい。ゆえに、ＣＤ２４タンパク質は、Ｃ末端アミノ酸を欠いている成熟ヒトＣＤ２４のアミノ酸配列を含んでもよい：
【００２８】
ＳＥＴＴＴＧＴＳＳＮＳＳＱＳＴＳＮＳＧＬＡＰＮＰＴＮＡＴＴＫ（配列番号２）
【００２９】
マウス及びヒトに由来する成熟ＣＤ２４タンパク質のアミノ酸配列におけるかなりの配列変異にもかかわらず、ヒトＣＤ２４Ｆｃがマウスにおいて活性であることが示された場合、それらは機能的に同等である。ヒトＣＤ２４  ＥＣＤのアミノ酸配列は、マウスタンパク質（３９％同一性；Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＮＰ＿０３３９７６）との多少の配列保存を示す。しかし、ＣＤ２４  ＥＣＤが種に応じて長さが２７〜３１個のアミノ酸だけであり、且つＳｉｇｌｅｃ１０／Ｇなどのその（１又は複数の）受容体の一部への結合が、そのシアル酸及び／又は糖タンパク質のガラクトース糖によって媒介される場合、パーセント同一性がより高くないことは驚くことではない。ヒトＳｉｇｌｅｃ−１０（ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＦ３１０２３３）の細胞外ドメイン及びそのマウス相同体Ｓｉｇｌｅｃ−Ｇ（ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＰ＿７６６４８８）受容体タンパク質の間のアミノ酸配列同一性は６３％である（図２）。主にＣ末端に存在し、グリコシル化部位が豊富に存在するマウスＣＤ２４とヒトＣＤ２４との間の配列保存の結果として、成熟ＣＤ２４タンパク質の著しい変異は、とりわけそれらの変異がＣ末端における保存残基に影響を及ぼさない場合、又はマウスＣＤ２４若しくはヒトＣＤ２４のいずれかに由来するグリコシル化部位に影響を及ぼさない場合、ＣＤ２４タンパク質の使用において許容され得る。ゆえに、ＣＤ２４タンパク質は、以下の成熟マウスＣＤ２４のアミノ酸配列を含んでもよい。
【００３０】
ＮＱＴＳＶＡＰＦＰＧＮＱＮＩＳＡＳＰＮＰＴＮＡＴＴＲＧ（配列番号３）。
【００３１】
ヒトＣＤ２４  ＥＣＤのアミノ酸配列は、マウスよりもカニクイザルタンパク質（５２％同一性；ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ―Ｉ７ＧＫＫ１）との間で多くの配列保存を示す。また、ＥＣＤが、これらの種において長さが２９〜３１個のアミノ酸だけであり、その（１又は複数の）受容体への結合における糖残基の役割である場合、パーセント同一性がより高くないことを考慮すると、このことは驚くことではない。カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｏｕｓ）Ｓｉｇｌｅｃ−１０受容体のアミノ酸配列は決定されなかったが、ヒト及びアカゲザルのＳｉｇｌｅｃ−１０（ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＸＰ＿００１１１６３５２）タンパク質の間のアミノ酸配列同一性は８９％である。ゆえに、ＣＤ２４タンパク質は、以下の成熟カニクイザル（又はアカゲザル）サルＣＤ２４のアミノ酸配列を含んでもよい。
【００３２】
ＴＶＴＴＳＡＰＬＳＳＮＳＰＱＮＴＳＴＴＰＮＰＡＮＴＴＴＫＡ（配列番号１０）
【００３３】
ＣＤ２４タンパク質は可溶性であってもよい。ＣＤ２４タンパク質は、上記タンパク質を発現する細胞からの当該タンパク質の分泌を可能にすることができるＮ末端シグナルペプチドをさらに含んでもよい。シグナルペプチド配列は、アミノ酸配列ＭＧＲＡＭＶＡＲＬＧＬＧＬＬＬＬＡＬＬＬＰＴＱＩＹＳ（配列番号４）を含んでもよい。別の場合、上記シグナル配列は、他の膜貫通タンパク質若しくは分泌タンパク質上で見出されるもの、又は本技術分野で知られている、既存のシグナルペプチドから修飾されたもののうちのいずれかを含んでもよい。
【００３４】
ａ．融合
ＣＤ２４タンパク質は、そのＮ末端又はＣ末端において、ヒト若しくはマウスであってもよいか又は他の種に由来してもよい哺乳類Ｉｇタンパク質の一部を含んでもよいタンパク質標識に融合されてもよい。上記一部は、Ｉｇタンパク質のＦｃ領域を含んでもよい。Ｆｃ領域は、Ｉｇタンパク質のヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン及びＣＨ４ドメインの少なくとも１つを含んでもよい。Ｉｇタンパク質は、ヒトのＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４又はＩｇＡであってもよく、Ｆｃ領域は、Ｉｇのヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含んでもよい。Ｆｃ領域は、ヒト免疫グロブリンＧ１（ＩｇＧ１）アイソタイプ配列番号７を含んでもよい。Ｉｇタンパク質はＩｇＭであってもよく、Ｆｃ領域は、ＩｇＭのヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン及びＣＨ４ドメインを含んでもよい。タンパク質標識は、タンパク質の精製を促進する親和性標識、並びに／又は機能タンパク質の溶融度及び回収率を増強する溶融度強化標識であってもよい。タンパク質標識は、ＣＤ２４タンパク質の原子価を増加させてもよい。タンパク質標識は、ＧＳＴ、Ｈｉｓ、ＦＬＡＧ、Ｍｙｃ、ＭＢＰ、ＮｕｓＡ、チオレドキシン（ＴＲＸ）、低分子ユビキチン様修飾因子（ＳＵＭＯ）、ユビキチン（Ｕｂ）、アルブミン又はラクダ科動物Ｉｇを含んでもよい。融合タンパク質を作製し、融合タンパク質を精製する方法は、本技術分野においてよく知られている。
【００３５】
前臨床研究に基づいて、上記の例において同定された融合タンパク質ＣＤ２４Ｆｃの構築のために、ＧＰＩシグナル切断部位（すなわち、配列番号２を有する成熟ＣＤ２４タンパク質）の前に最後の多形性アミノ酸を欠いている３０個のアミノ酸の切断型の天然ＣＤ２４分子を用いた。成熟ヒトＣＤ２４配列は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃドメイン（配列番号７）に融合される。全長ＣＤ２４Ｆｃ融合タンパク質の配列は、配列番号５（図１Ａ）において提供され、上記細胞から分泌されたＣＤ２４Ｆｃ融合タンパク質の処理バージョンの配列（すなわち、切断されたシグナル配列を欠く）は、配列番号６において提供される。ＩｇＧ１  Ｆｃに融合された成熟ＣＤ２４の処理された多形性変異体（すなわち、配列番号１を有する成熟ＣＤ２４タンパク質）は、配列番号１１又は配列番号１２に記載されるアミノ酸配列を含んでもよい。
【００３６】
ｂ．産生
ＣＤ２４タンパク質は、高度にグリコシル化されてもよく、免疫細胞の同時刺激や、損傷関連分子パターン分子（ＤＡＭＰ）との相互作用などのＣＤ２４の機能に関与する場合がある。ＣＤ２４タンパク質は、真核生物発現系を用いて調製されてもよい。上記発現系は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞などの哺乳類細胞におけるベクターからの発現を伴ってもよい。上記系は、真核生物細胞に感染させるために使用され得る複製欠損レトロウイルスベクターなどのウイルスベクターであってもよい。ＣＤ２４タンパク質は、細胞ゲノムに組み込まれたベクター又はベクターの一部からＣＤ２４タンパク質を発現する安定細胞系から産生されてもよい。安定細胞系は、組み込まれた複製欠損レトロウイルスベクターからＣＤ２４タンパク質を発現することができる。発現系は、ＧＰＥｘ（商標）でもあってもよい。
【００３７】
ｃ．医薬組成物
ＣＤ２４タンパク質は、医薬的に許容し得る量のＣＤ２４タンパク質を含み得る医薬組成物に含まれてもよい。医薬組成物は、医薬的に許容し得る担体を含んでもよい。医薬組成物は、ＣＤ２４タンパク質を長期間にわたって安定なままとし得る溶剤を含んでもよい。溶媒は、ＣＤ２４タンパク質を−２０℃（−１５〜−２５℃）で少なくとも６６ヵ月間安定なままとし得るＰＢＳであってもよい。溶媒は、他の薬物と併用してＣＤ２４タンパク質を収容することが可能であってもよい。
【００３８】
医薬組成物は、非経口投与（注射又は持続注入が挙げられるがこれらに限定されない）用に製剤化されてもよい。注射用製剤は、油性ビヒクル又は水性ビヒクルにおける懸濁液、溶液又はエマルジョンの形態であってもよく、製剤化剤（懸濁化剤、安定化剤及び分散剤が挙げられるがこれらに限定されるものではない）を含んでもよい。組成物は、適切なビヒクル（滅菌した発熱性物質を含まない水が挙げられるがこれらに限定されるものではない）による再構成のための粉末形態で提供されてもよい。
【００３９】
医薬組成物は、埋め込み（ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）によって又は筋肉内投与によって投与され得るデポ製剤として製剤化されてもよい。組成物は、適切なポリマー材料若しくは疎水性材料と共に（例えば、許容し得る油におけるエマルジョンとして）、イオン交換樹脂と共に、又はやや難溶の誘導体として（例えば、やや難溶の塩として）製剤化されてもよい。皮下注射用の製剤は、狼蒼などの徴候並びにその関連する症状及び合併症のために特に適切であることができる。
【００４０】
３．治療方法
ａ．ＧＶＨＤ
移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の予防、軽減又は治療を必要とする対象における移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を予防、軽減又は治療する方法が本明細書において提供され、上記方法は、上記対象にＣＤ２４タンパク質を投与することを含む。対象は、ＧＶＨＤであってもよいか、又はＧＶＨＤを発症するリスクがあってもよい。対象は、造血幹細胞移植（ＨＣＴ）を受けてもよいか、又は受けている最中であってもよい。ＨＣＴを受けている対象におけるＧＶＨＤを予防するために、ＣＤ２４タンパク質を予防的に用いてもよい。ＧＶＨＤは、急性ＧＶＨＤであってもよい。ＣＤ２４タンパク質は、対象のグレードＩＩＩ〜ＩＶの急性ＧＶＨＤのリスクを低下させることが可能である。ＧＶＨＤは、口腔内ＧＶＨＤを含む慢性ＧＶＨＤであってもよい。
【００４１】
対象はがんを有してもよい。がんは、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）又は慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）であってもよい。
【００４２】
ｂ．粘膜炎
粘膜炎の予防、軽減又は治療を必要とする対象における粘膜炎を予防、軽減又は治療する方法が本明細書において提供され、上記方法は、上記対象にＣＤ２４タンパク質を投与することを含む。ＧＶＨＤ又はＨＣＴに関連した他の状態の予防、軽減又は治療を必要とする対象におけるＧＶＨＤ又はＨＣＴに関連した他の状態を予防、軽減又は治療する方法も本明細書において記載され、上記方法は、上記対象にＣＤ２４タンパク質を投与することを含む。関連状態は、口腔粘膜炎であり得る粘膜炎であってもよい。粘膜炎は、通常、ＨＣＴのためのプレコンディショニング化学療法レジメン及び／又は放射線療法レジメンの有害作用としての、消化管に沿って並ぶ粘膜の疼痛性炎症及び潰瘍である。粘膜炎は、消化（ＧＩ）管に沿ってどこにでも発現する可能性がある。口腔粘膜炎は、口腔内で発現する特定の炎症及び潰瘍を指す。口腔粘膜炎は、がん治療の、よく起こり且つ多くの場合消耗性の合併症である。多くの造血幹細胞移植レシピエントは粘膜炎を発症するが、その内で口腔粘膜炎が最もよく起こり、最も消耗性である。
【００４３】
対象は、粘膜炎であってもよいか、又は粘膜炎を発症するリスクがあってもよく、粘膜炎は口腔粘膜炎であってもよい。対象は、化学療法及び放射線療法のうちの少なくとも１つを受けてもよいか、又は受けている最中であってもよい。対象における粘膜炎を予防するために、ＣＤ２４タンパク質を予防的に用いてもよい。ＣＤ２４タンパク質は、対象の重度の粘膜炎のリスクを低下させることが可能である。
【００４４】
ｃ．薬物
本明細書に記載されている使用のための薬物の製造におけるＣＤ２４タンパク質の使用も提供される。
【００４５】
ｄ．用量レジメン
投与されるＣＤ２４タンパク質の用量は、ＧＶＨＤ又は粘膜炎に対する所望の効果と投与経路とに応じて、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１０００ｍｇ／ｋｇであってもよく、１〜５００ｍｇ／ｋｇであってもよい。ＣＤ２４タンパク質は、静脈内（ＩＶ）注入によって、又は皮下注射、壁内（すなわち、腔又は器官の壁内）注射若しくは腹腔内注射によって投与されてもよい。用量は、１０〜１０００ｍｇ、１０〜５００ｍｇ、２４０ｍｇ又は４８０ｍｇであってもよく、これは特に対象がヒトである場合に適切であり得る。
【００４６】
ＣＤ２４タンパク質は、幹細胞移植の前又は後に投与されてもよい。ＣＤ２４タンパク質は、幹細胞移植の１〜４日前、特に１日前に投与されてもよい。ＣＤ２４タンパク質は、幹細胞移植の前又は後に複数の投与回数で投与されてもよい。ＣＤ２４タンパク質は、隔週で２回、３回、４回、５回又は６回の投与回数で投与されてもよい。ＣＤ２４タンパク質の各用量は、２４０ｍｇ又は４８０ｍｇであってもよい。初回用量は、幹細胞移植（Ｄａｙ０）の日に対してＤａｙ−４〜Ｄａｙ０に投与されてもよく、特にＤａｙ−１に投与されてもよい。次の各用量は、その後９〜１９日毎又は１１〜１７日毎に投与されてもよい。２回目の用量は、幹細胞移植の日に対してＤａｙ＋９〜Ｄａｙ＋１９又はＤａｙ＋１１〜Ｄａｙ＋１７、特にＤａｙ＋１４に投与されてもよい。３回目の用量は、幹細胞移植の日に対してＤａｙ＋１８〜Ｄａｙ＋３８、Ｄａｙ＋２３〜Ｄａｙ＋３３、又はＤａｙ＋２２〜Ｄａｙ＋３４、特にＤａｙ＋２８に投与されてもよい。特に、ＣＤ２４タンパク質は、幹細胞移植の日に対してＤａｙ−１、Ｄａｙ＋１４及びＤａｙ＋２８に、それぞれ４８０ｍｇ、２４０ｍｇ及び２４０ｍｇの、隔週に３回の投与で投与されてもよい。ＣＤ２４タンパク質は、特にＣＤ２４Ｆｃであってもよい。
【００４７】
ＣＤ２４タンパク質は、対象に化学療法及び放射線療法のうちの少なくとも１つが行われる前又は間に投与されてもよい。ＣＤ２４タンパク質は、ＤＡＭＰが放出される際にＣＤ２４タンパク質が存在するように投与されてもよい。
【００４８】
ｅ．併用治療
ＣＤ２４タンパク質は、標準治療のＧＶＨＤ予防と併用して対象に投与されてもよい。標準治療のＧＶＨＤ予防は、メトトレキセート＋カルシニューリン阻害剤、例えばタクロリムス（Ｐｒｏｇｒａｆ、ＦＫ５０６）又はシクロスポリン（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ、Ｎｅｏｒａｌ）の投与を含んでもよい。タクロリムスは、幹細胞移植の日に対してＤａｙ−３に投与されてもよく、ＩＶ又はＰＯ（経口）で投与されてもよい。持続注入としてのＩＶ投与について、開始用量は、調整された体重に基づいて０．０３ｍｇ／ｋｇ／日であってもよい。口腔内投与について、開始用量は、１日２回で、０．０４５ｍｇ／ｋｇ／回であってもよい。対象がタクロリムスに対して忍容性を示すことができない場合、シクロスポリンを、ＩＶタクロリムス用量の１００倍の用量（例えば、３ｍｇ／ｋｇ／日の開始用量）で、ＩＶによって対象に投与してもよい。シクロスポリンは、ＩＶ用量の３倍の用量で経口投与されてもよい。Ｎｅｏｒａｌブランドを用いる場合、より大きな生物学的利用能のため、シクロスポリンは、ＩＶ用量の２倍で経口投与されてもよい。
【００４９】
ＧＶＨＤがない場合、移植後の最初の１００日間のみ、治療的投与についてタクロリムスレベルをモニタしてもよい。タクロリムスについての治療標的トラフレベルは、５〜１５ｎｇ／ｍＬであってもよい。ＣＤ２４タンパク質注入後の最初の週（Ｄａｙ０〜Ｄａｙ７）に、最低３回（例えば、４８〜７２時間毎に）タクロリムスレベルをモニタしてもよい。ＧＶＨＤ又は再発がない場合、タクロリムスの漸減を移植後のＤａｙ＋１００から開始してもよい。ＧＶＨＤがある場合、タクロリムスを治療的投与で継続してもよい。
【００５０】
メトトレキセートを標準的ＧＶＨＤ予防のためにタクロリムスと併用して用いてもよい。ＨＣＴ後のＤａｙ１に１日１回１５ｍｇ／ｍ２／回の用量で、並びにＨＣＴ後のＤａｙ３、Ｄａｙ６及びＤａｙ１１に１０ｍｇ／ｍ２／回の用量で、メトトレキセートを静脈内投与してもよい。
【００５１】
粘膜炎については、増悪炎症性成分を最小限に抑えるために、ＣＤ２４タンパク質を少なくとも１つの免疫調節性剤（すなわち、ＣＤ２４タンパク質以外）と共に投与してもよい。５−フルオロウラシルで治療された対象のために、アロプリノールと併用してＣＤ２４タンパク質を投与してもよい。
【００５２】
ＣＤ２４タンパク質を、以下の骨髄破壊的前処置レジメンのうちの１又は複数と併用して投与してもよく、前処置レジメンの前又は間に投与してもよい。ＣＤ２４タンパク質は、骨髄破壊的前処置レジメン及びＨＣＴのうちの少なくとも１つに応じてＤＡＭＰが放出される際にＣＤ２４タンパク質が存在するように投与されてもよい。
【００５３】
ブスルファン及びフルダラビン
幹細胞移植の日に対してＤａｙ−５〜Ｄａｙ−２に、ブスルファンを投与してもよい。用量は、３．２ｍｇ／ｋｇ／日又は１３０ｍｇ／ｍ２／日であってもよく、静脈内投与されてもよい。総用量は、１２．８ｍｇ／ｋｇ又は５２０ｍｇ／ｍ２であってもよい。幹細胞移植の日に対してＤａｙ−５〜Ｄａｙ−２に、フルダラビンを投与してもよい。用量は、３０〜４５ｍｇ／ｍ２／日であってもよく、総用量は、１２０〜１８０ｍｇ／ｍ２であってもよい。ブスルファン及びフルダラビンの順序及びタイミングは、本技術分野で知られている骨髄破壊的（ｍｙｅｏａｂｌａｔｉｖｅ）前処置についての施設内基準に従って為されてもよい。
【００５４】
ブスルファン及びシクロホスファミド
幹細胞移植の日に対してＤａｙ−７〜Ｄａｙ−４に、ブスルファン（ｂｕｌｓｕｌｆａｎ）を投与してもよい。用量は、３．２ｍｇ／ｋｇ／日又は１３０ｍｇ／ｍ２／日であってもよく、静脈内投与されてもよい。総用量は、１２．８ｍｇ／ｋｇ又は５２０ｍｇ／ｍ２であってもよい。幹細胞移植の日に対してＤａｙ−３〜Ｄａｙ−２に、シクロホスファミドを投与してもよい。用量は、６０ｍｇ／ｋｇ／日であってもよく、総用量は、１２０ｍｇ／ｋｇであってもよい。
【００５５】
シクロホスファミド及び全身照射
幹細胞移植に対してＤａｙ−７〜Ｄａｙ−４に、全身照射（ＴＢＩ）を行ってもよい。幹細胞移植の日に対してＤａｙ−３〜Ｄａｙ−２に、シクロホスファミドを投与してもよい。用量は、６０ｍｇ／ｋｇ／日であってもよく、総用量は、１２０ｍｇ／ｋｇであってもよい。骨髄破壊的レジメンのためのシクロホスファミド、ＴＢＩ及びＴＢＩの投与の実施の順序は、本技術分野で知られている骨髄破壊的（ｍｙｅｏａｂｌａｔｉｖｅ）前処置についての施設内基準に従って為されてもよい。
【００５６】
上記の個別の骨髄破壊的治療又はそれらの併用と共にＣＤ２４タンパク質を投与してもよい。
【実施例】
【００５７】
実施例１
マウスにおけるＣＤ２４薬物動態
１ｍｇのＣＤ２４Ｆｃ（ＣＤ２４Ｆｃ）を未処置Ｃ５７ＢＬ／６マウスに注射し、異なる時点（５分、１時間、４時間、２４時間、４８時間、７日、１４日及び２１日）において、各時点で３匹のマウスから血液試料を回収した。血清を１：１００で希釈し、捕捉抗体として精製抗ヒトＣＤ２４（３．３μｇ／ｍＬ）と検出抗体としてペルオキシダーゼ共役ヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ（５μｇ／ｍＬ）とを用いたサンドイッチＥＬＩＳＡを用いて、ＣＤ２４Ｆｃのレベルを検出した。図３ａに示される通り、ＣＤ２４Ｆｃの減衰曲線は、タンパク質の典型的な二相減衰を示した。第１の体内分布フェーズは、半減期が１２．４時間であった。第２のフェーズは、中央区画からの第１次除去のモデルに従う。第２のフェーズについての半減期は、インビボにおける抗体と同様である９．５４日であった。これらのデータは、融合タンパク質が血流内で非常に安定していることを示唆する。融合タンパク質を皮下注射した別の試験において、９．５２日のほとんど同じ半減期が観察された（図３ｂ）。さらに重要なことに、ＣＤ２４Ｆｃが血液中においてピークレベルを達するのに約４８時間かかったが、ＡＵＣで測定された血液中の融合タンパク質の総量は、いずれの注射経路でも実質的に同じだった。したがって、治療的観点から、異なる注射経路を用いても薬物の治療的効果に影響を及ぼさない。この観察によって、霊長類の毒性試験及び臨床試験のための実験計画が大きく単純化された。
【００５８】
実施例２
組織傷害に対する宿主応答におけるＣＤ２４−Ｓｉｇｌｅｃ１０の相互作用
約２０年前、Ｍａｔｚｉｎｇｅｒは、一般に危険理論と呼ばれるものを提唱した。本質において、彼女は、免疫系が宿主の危険を検知する際に免疫系にスイッチが入ると論じた。危険の性質は、その時に充分に定義されなかったが、壊死は、危険関連分子パターンについての細胞内成分（ＤＡＭＰと呼ばれるＨＭＧＢ１及び熱ショックタンパク質など）の放出と関連していることが分かった。ＤＡＭＰは、炎症性サイトカイン及び自己免疫性疾患の発現を促進することが分かった。動物モデルにおいて、ＨＭＧＢ１及びＨＳＰ９０の阻害剤は、ＲＡを寛解させることが分かった。ＤＡＭＰの併発によって、ＲＡ治療のためにＤＡＭＰに対する宿主応答のための負の調節を探究することが可能であるという見通しが浮上した。
【００５９】
アセトアミノフェン誘導された肝壊死を用いて、炎症を確認することにより、相互作用Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇを介して、ＣＤ２４が、組織傷害に対する宿主応答のための強力な負の調節を提供することが観察された。ＣＤ２４は、造血細胞及び他の組織幹細胞に広範に発現されたＧＰＩアンカー型分子である。多発性硬化症、全身性エリテマトーデス（ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｒｏｍａｔｏｓｕｓ）、ＲＡ及び巨細胞動脈炎を含む、ヒトにおける様々な自己免疫性疾患の遺伝子解析は、ＣＤ２４多型と自己免疫性疾患のリスクとの間における有意な関係性を示した。Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇは、シアル酸含有構造を認識する能力によって規定されるＩ−レクチンファミリーのメンバーである。Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇは、ＣＤ２４上のシアル酸含有構造を認識したが、樹状細胞による炎症性サイトカインの産生を負に調節する。ＣＤ２４と相互作用するその能力に関して、ヒトＳｉｇｌｅｃ１０及びマウスＳｉｇｌｅｃ  Ｇは、機能的に同等である。しかし、マウス相同体とヒト相同体と間に１対１の相関があるのかについては不明である。完全に説明しなければならない機序が残されているが、ＳｉｇｌｅｃＧ関連ＳＨＰ１が負の調節に関与する可能性があることは妥当と思われる。これらのデータは、ＣＤ２４−Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇ／１０の相互作用がＤＡＭＰから病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を識別する際に重要な役割を果たす可能性がある新しいモデルをもたらす（図４）。
【００６０】
少なくとも２つの重複機序が、ＣＤ２４の機能を説明し得る。第１に、様々なＤＡＭＰに結合することによって、ＣＤ２４は、炎症性刺激を阻止して、それらのＴＬＲ又はＲＡＧＥとの相互作用を防止し得る。この見解は、ＣＤ２４が、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０、ＨＭＧＢ１及びヌクレオリンを含むいくつかのＤＡＭＰ分子に会合するという観察によって支持される。第２に、おそらくＤＡＭＰに会合した後、ＣＤ２４は、Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇによるシグナル伝達を刺激し得る。いずれかの遺伝子の標的化突然変異を有するマウスが非常により強い炎症応答を開始した場合、両機序が協力して作用する可能性がある。実際、ＣＤ２４−／−マウス又はＳｉｇｌｅｃ  Ｇ−／−マウスのいずれかに由来する骨髄から培養されたＤＣは、ＨＭＧＢ１、ＨＳＰ７０又はＨＳＰ９０のいずれかで刺激された際に非常により高い炎症性サイトカインを産生した。対照的に、ＬＰＳ及びＰｏｌｙＩ：ＣなどのＰＡＭＰに対するそれらの応答において、効果は見出されなかった。これらのデータは、病原体を組織傷害から区別するための先天性免疫系のための機序を提供しただけでなく、組織傷害に関連する疾患に対する潜在的治療標的としてのＣＤ２４及びＳｉｇｌｅｃ  Ｇを示唆する。
【００６１】
実施例３
ＣＤ２４Ｆｃは、ＨＭＧＢ１、Ｓｉｇｌｅｃ１０と相互作用し、Ｓｉｇｌｅｃ  ＧとＳＨＰ−１との会合を誘導する
ＣＤ２４ＦｃとＳｉｇｌｅｃ１０との間の相互作用を測定するために、我々は、ＣＨＩＰ上にＣＤ２４Ｆｃを固定し、Ｂｉａｃｏｒｅを用いて異なる濃度のＳｉｇｌｅｃ−１０Ｆｃの結合性を測定した。図５ａに示されるように、ＣＤ２４Ｆｃは、Ｋｄが１．６×１０−７ＭであるＳｉｇｌｅｃ１０に結合する。これは、対照Ｆｃよりも１００倍高い親和性である。ＣＤ２４ＦｃとＨＭＧＢ１との間の相互作用は、ＣＤ２４Ｆｃ結合型タンパク質Ｇビーズを用いた後、抗ＩｇＧ又は抗ＨＭＧＢ１のいずれかによるウェスタンブロットを行うプルダウン実験によって確認された。これらのデータは、ＦｃではなくＣＤ２４ＦｃがＨＭＧＢ１に結合し、この結合がカチオン依存性であることを示す（図５ｂ）。ＣＤ２４ＦｃがＳｉｇｌｅｃ  Ｇ（ヒトＳｉｇｌｅｃ  １０のマウス対応物）の作動薬であるのかどうかを決定するために、我々は、ＣＤ２４Ｆｃ、対照Ｆｃ又はビヒクル（ＰＢＳ）対照によってＣＤ２４−／−脾臓細胞を３０分間刺激した。次いで、Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇを免疫沈降させ、抗ホスホ−チロシン又は抗ＳＨＰ−１によって精査した。図５ｃに示されるように、ＣＤ２４Ｆｃは、Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇの実質的リン酸化と、ＳＨＰ−１（適応免疫及び先天性免疫の両方のためのよく知られた阻害剤）の会合とを誘導した。
【００６２】
ＣＤ２４Ｆｃのインビトロ有効性試験
ヒトＴ細胞による炎症性サイトカインの産生に対するＣＤ２４Ｆｃの影響を試験するために、異なる濃度のＣＤ２４Ｆｃ又はヒトＩｇＧ１  Ｆｃの存在下において、一般に使用されるＴ細胞受容体の作動薬である抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）によって、ヒトＰＢＭＬにおける成熟Ｔ細胞を活性化した。４日後、上清を回収し、活性化を確認するために酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によってＩＦＮ−γ及びＴＮＦ−αの産生を測定した。図６における結果は、２つの異なる製造ロットからのＣＤ２４Ｆｃが、対照ＩｇＧ  Ｆｃ対照と比較して活性化ヒトＰＢＭＬに由来するＩＦＮ−γ及びＴＮＦ−αの産生を有意に低下させたことを示した。また、ＣＤ２４Ｆｃを加えた場合、サイトカイン産生は用量依存的に阻害された。したがって、ＣＤ２４Ｆｃは、インビトロで抗ＣＤ３誘導ヒトＰＢＭＬ活性化を阻害する可能性がある。この試験は、ＣＤ２４Ｆｃの作用機序がＴ細胞活性化の阻害によるものである可能性があることを示しただけでなく、薬物の効力及び安定性の試験のための信頼性のあるバイオアッセイも確立した。
【００６３】
ＣＤ２４Ｆｃがヒト細胞系における炎症性サイトカインの産生を調節するのかどうかを決定するために、我々は、まず、ＲＮＡｉを用いてヒト急性単球性白血病ＴＨＰ１細胞系におけるＣＤ２４を非発現化し、次いでそれらをＰＭＡで治療することによってマクロファージへの分化を誘導した。図７ａに示されるように、実質的に非発現化しているＣＤ２４は、ＴＮＦα、ＩＬ−１β及びＩＬ−６の産生を増加させた。これらのデータは、炎症性サイトカインの産生を限定する際の内因性ヒトＣＤ２４の必須の役割を示す。重要なことに、ＣＤ２４Ｆｃは、ＣＤ２４非発現化細胞系（図７ｂ）におけるＴＮＦα、並びにＩＬ−１β及びＩＬ−６の阻害を回復させた。これらのデータは、ヒト細胞の炎症応答におけるＣＤ２４の関連性を示すだけでなく、ＣＤ２４Ｆｃの生物学的活性を評価するために簡便なアッセイも提供する。
【００６４】
まとめると、これらのデータは、ＣＤ２４Ｆｃが適応刺激及び先天性刺激によって誘発されたサイトカイン産生を阻害することが可能であることを示す。しかし、上記薬物は、先天性エフェクターによるサイトカイン産生を低下させる際にさらにより有効であるので、我々は、その予防的機能のための一次機序が、移植の初期における組織傷害によって誘発された炎症を予防することであると考える。
【００６５】
実施例４
ヒトにおけるＣＤ２４の薬物動態
本実施例は、ヒトにおけるＣＤ２４タンパク質の薬物動態の解析を示す。これは、健康な男性及び女性の成人対象におけるＣＤ２４Ｆｃの安全性、忍容性及びＰＫを評価するためのフェーズＩ無作為化二重盲検プラセボ対照単回漸増用量試験から導かれた。各々８人の対象の５コホートにおける合計４０人の対象が本試験に組入れられた。各コホートにおける８人の対象のうちの６人は治験薬の投与を受け、２人の対象はプラセボ（０．９％の塩化ナトリウム、生理食塩水）の投与を受けた。第１のコホートに対して１０ｍｇを投与した。次のコホートに対して、３０ｍｇ、６０ｍｇ、１２０ｍｇ及び２４０ｍｇのＣＤ２４Ｆｃ又は対応するプラセボの投与を行い、３週間以上の間隔で投与して、前の各コホートについての安全性及び忍容性のデータの再検討を可能にした。適切な安全性及び忍容性が示された場合のみ、対象の新しいコホートに対する次のより高い用量の投与を可能にした。
【００６６】
各コホートにおいて、最初の２人の対象は、１日目（Ｄａｙ１）において１人の治験薬レシピエント及び１人のプラセボレシピエントであった。７日目（Ｄａｙ７）の後、３番目〜５番目及び６番目〜８番目の対象に投与した（部分群の間では最低でも２４時間の間隔を空けた）。同一部分群において、各対象に１時間以上の間隔で投与した。必要に応じて、残りの対象の投与は、そのコホートにおける第１又は第２の部分群を含む投与後期間の間に起こり得たあらゆる重要な安全性の問題の再検討まで延期された。後続のコホートに対しては、前のコホートの少なくとも３週間後に投与した。
【００６７】
（スクリーニング期間）：
活動的治療期間（ａｃｔｉｖｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｐｅｒｉｏｄ）の最高で２１日前に、スクリーニング時の来院（１回目の来院）を行った。インフォームドコンセントの提供後、対象に対して適格性に関するスクリーニング手続きを行った。
【００６８】
（治療期間）：
対象は、Ｄａｙ−１（２回目の来院）に臨床薬理部（ＣＰＵ）に承認され、１０時間以上の夜間絶食の後、無作為化治療期間がＤａｙ１から開始した。対象は、単回投与としてのＣＤ２４Ｆｃ又はプラセボによる治療に無作為に割り付けられる。対象の拘束は、Ｄａｙ４の朝まで継続された。
【００６９】
（追跡調査）：
全ての対象は、追跡調査のための来院（３回目の来院、４回目の来院、５回目の来院、６回目の来院及び７回目の来院）のために、Ｄａｙ７、Ｄａｙ１４、Ｄａｙ２１、Ｄａｙ２８及びＤａｙ４２（±１日）にＣＰＵに戻った。７回目の来院は、全ての対象のための最終的な来院であった。
【００７０】
（治療期間）：各対象についての総試験期間は、最高６３日間であった。単回投与は、Ｄａｙ１に行われた。
【００７１】
対象の数：
計画段階：４０人の対象
スクリーニング：２２４人の対象
無作為化：４０人の対象
完了：３９人の対象
中止：１人の対象
【００７２】
（診断及び主要な組入れ基準）：
本試験のための集団は、年齢が１８〜５５歳（始めと終わりを含む）で、ボディマスインデックスが１８ｋｇ／ｍ２〜３０ｋｇ／ｍ２（始めと終わりを含む）である健康な男性及び女性であった。
【００７３】
（治験薬及び対照薬の情報）：
ＣＤ２４Ｆｃ：ＩＶ注入により投与される１０ｍｇ、３０ｍｇ、６０ｍｇ、１２０ｍｇ又は２４０ｍｇの単一用量；ロット番号：０９ＭＭ−０３６。ＣＤ２４Ｆｃは、ヒトＣＤ２４の成熟配列とヒト免疫グロブリンＧ１（ＩｇＧ１Ｆｃ）の結晶化可能フラグメント領域とからなる完全ヒト化融合タンパク質であった。ＣＤ２４Ｆｃは、ＩＶ投与のための、滅菌で、透明で、無色の、保存剤を含まない水溶液として供給された。ＣＤ２４Ｆｃは、濃度が１０ｍｇ／ｍＬで、ｐＨが７．２である単回投与注射溶液として製剤化された。各ＣＤ２４Ｆｃバイアルは、１６ｍＬ±０．２ｍＬのＣＤ２４Ｆｃ中において、１６０ｍｇのＣＤ２４Ｆｃ、５．３ｍｇの塩化ナトリウム、３２．６ｍｇの二塩基性リン酸ナトリウム七水和物、及び１４０ｍｇの一塩基性リン酸ナトリウム一水和物を含んだ。ＣＤ２４Ｆｃは、クロロブチルゴム栓と、アルミニウムの、指先で引張っただけで開けられるシールとを有する透明なホウケイ酸ガラスバイアル内において供給された。
【００７４】
ＩＶ注入によって投与された、対応するプラセボ（０．９％の塩化ナトリウム、生理食塩水）；ロット番号：Ｐ２９６８５５、Ｐ３１１８５２、Ｐ３００７１５、Ｐ３１５９５２。
【００７５】
ｉｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ（ＩＴＴ）集団は、治験薬の１回以上の投与を受けた全ての対象からなった。ＩＴＴ母集団は、対象情報及び安全性評価のための一次解析集団であった。
【００７６】
臨床検査値の評価（化学検査、血球計数検査及び尿検査）を治療及び来院によってまとめた。ベースライン時からの変化もまとめた。バイタルサイン（血圧、心拍数、呼吸数及び体温）を治療及び時点によってまとめた。ベースライン時からの変化もまとめた。全ての理学的検査データを示した。心電図パラメータ及びベースライン時からの変化をまとめた。全体的な解釈を示した。
【００７７】
（血漿ＣＤ２４Ｆｃ濃度）
図８に示されるように、ＣＤ２４Ｆｃの平均血漿濃度は、投与されるＣＤ２４Ｆｃの用量に比例して増加した。１２０ｍｇ以外の全ての用量群について、投与の１時間後にＣＤ２４Ｆｃの最大平均血漿濃度に達した。１２０ｍｇ群については、投与の２時間後にＣＤ２４Ｆｃの最大平均血漿濃度に達した。Ｄａｙ４２（９８４時間）まで、全ての群についてのＣＤ２４Ｆｃの平均血漿濃度は、最大平均血漿濃度の２％〜４％に低下した。
【００７８】
表１に、ＰＫ評価可能集団についての治療による血漿ＣＤ２４Ｆｃ  ＰＫパラメータをまとめた。
【表１−１】
2021527056.tif 000002
【表１−２】
2021527056.tif 000003
【表１−３】
2021527056.tif 000004
【表１−４】
2021527056.tif 000005
【００７９】
（血漿中ＣＤ２４Ｆｃ用量比例性解析）
図９は、ＰＫ評価可能集団のための用量に対するＣＤ２４Ｆｃ  Ｃｍａｘの用量比例性プロットを示す。図１０は、ＰＫ評価可能集団のための用量に対するＣＤ２４Ｆｃ  ＡＵＣ０−４２ｄの用量比例性プロットを示す。図１１は、ＰＫ評価可能集団のための用量に対するＣＤ２４Ｆｃ  ＡＵＣ０−ｉｎｆの用量比例性プロットを示す。表２は、用量比例性の検出力解析を示す。
【表２】
2021527056.tif 000006
【００８０】
Ｃｍａｘ傾き推定は、９０％ＣＩが１．１０５〜１．２４０で１．１７２であった。ＡＵＣ０−４２ｄの傾き推定は、９０％ＣＩが１．０２７〜１．１４８で１．０８８であった。ＡＵＣ０−ｉｎｆ傾き推定は、９０％ＣＩが１．０２６〜１．１で１．０８７であった。
【００８１】
（薬物動態の結論）
血漿中ＣＤ２４ＦｃのＣｍａｘ及びＡＵＣは、マウス、サル及びヒトにおいて投与される用量に比例して増加した。血漿中ＣＤ２４Ｆｃは、１．０１〜１．３４時間においてＴｍａｘに達した。血漿中ＣＤ２４Ｆｃのｔ１／２は、２８０．８３〜３２７．１０時間の範囲であった。
【００８２】
実施例５
ＣＤ２４は、ヒト対象における移植片対宿主病を治療するために使用可能である
同種骨髄破壊的造血幹細胞移植（ＨＣＴ）を受けているがん患者における標準治療の急性ＧＶＨＤ予防に対するＣＤ２４タンパク質（ＣＤ２４Ｆｃ）の添加を評価するために、多施設共同前向き二重盲検無作為化プラセボ対照フェーズＩＩａ用量漸増試験を実施した。治験デザインは、図１２に示される。
【００８３】
フェーズＩＩａ試験の主要目的は、推奨フェーズ２用量（ＲＰ２Ｄ）又は最大耐用量（ＭＴＤ）を規定するために、骨髄破壊前処置の後で適合非血縁ドナーＨＣＴを受けた患者におけるメトトレキセート及びタクロリムス予防との併用におけるＣＤ２４Ｆｃの安全性及び忍容性を評価することを含む。また、フェーズＩＩａ試験における副次有効性目的は、以下のものを含む。
【００８４】
・標準的なＧＶＨＤ予防のメトトレキセート及びタクロリムスへのＣＤ２４Ｆｃの添加が、ＨＣＴの１００日後においてグレードＩＩ〜ＩＶのａＧＶＨＤの累積発現率を低下させるのかどうかを決定すること
【００８５】
・ＨＣＴの１８０日後におけるグレードＩＩ〜ＩＶのａＧＶＨＤ無病生存率（ＧＦＳ）を推定すること、
【００８６】
・１年目におけるｃＧＶＨＤの発現率（ｃＧＶＨＤ）を記載すること
【００８７】
・ＨＣＴの１年後における再発の発現率を記載すること
【００８８】
・ＨＣＴの１年後における移植関連死（ＴＲＭ）の発現率を記載すること
【００８９】
・ＨＣＴの１００日後における感染率を記載すること
【００９０】
・全生存率（ＯＳ）、グレードＩＩＩ〜ＩＶのＧＶＨＤの非存在、及びＨＣＴの１年後における無再発生存率を評価すること
【００９１】
・口腔粘膜炎及び臓器不全を含む前処置毒性を評価すること
【００９２】
他の目的としては、ＣＤ２４Ｆｃの薬物動態（ＰＫ）プロファイルを評価すること、ＣＤ２４Ｆｃ群及びプラセボ群におけるＨＣＴ後のＡＰＣ及びＴ細胞の免疫細胞プロファイル及び機能的応答を検討すること、並びにＣＤ２４Ｆｃ群及びプラセボ群における炎症誘発性サイトカイン、ＤＡＭＰ、脂質及びＧＶＨＤバイオマーカの血漿中濃度などの薬力学（ＰＤ）バイオマーカを評価すること、が挙げられる。
【００９３】
医療機関診療に従って同種ＨＣＴを受けている適合非血縁ドナーからの移植を受けている患者が上記試験に組入れられた。カルノフスキーパーフォーマンススコアが７０％以上の、悪性血液学的状態のための適合非血縁ドナー同種ＨＣＴを受けている、年齢が１８〜７０歳の患者が、上記試験のために適格だった。ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ及びＨＬＡ−ＤＲＢ１における非血縁ドナーとレシピエントと間の８／８のＨＬＡ対立遺伝子適合性が必要であった。非血縁ドナーからＨＣＴを受けている患者に上記試験を制限することは、この集団におけるグレードＩＩ〜ＩＶのａＧＶＨＤの発現率（６０〜８０％）及びグレードＩＩＩ〜ＩＶのａＧＶＨＤの発現率（２０〜３５％）がより大きい場合、異質性を限定し、後続の有効性の評価のためのａＧＶＨＤ発現率の統計的推定を容易にするものと期待される。
【００９４】
これらの患者は、最も重度の組織傷害を発症したが、上記薬物は、おそらくこの設定で最も強い生物学的効果を有するので、本試験は、もっぱら骨髄破壊的前処置レジメン並びにタクロリムス及びメトトレキセートを含む標準治療（ＳＯＣ）予防を利用した。フェーズＩＩａのプロトコルにつき、全ての患者は、骨髄破壊的前処置並びにメトトレキセート及びタクロリムスによる標準治療ＧＶＨＤ予防を受けた。患者は、治療医によって決定されたように、フルダラビン及びブスルファン（Ｆｌｕ／Ｂｕ４）又はシクロホスファミド及び全身照射（Ｃｙ／ＴＢＩ）のいずれかからなる骨髄破壊的前処置レジメンを受けた後、Ｄａｙ０に幹細胞の注入を行った。ＧＶＨＤ予防は、全ての患者に投与され、投与群におけるＣＤ２４Ｆｃ又はプラセボ群における生理食塩水と併用したタクロリムス（移植前のＤａｙ−３に開始した）及びメトトレキセート（移植後のＤａｙ＋１に開始した）からなった。ＧＶＨＤがない場合、タクロリムスの漸減は、Ｄａｙ＋１００に開始した。ドナー幹細胞の源は、末梢血幹細胞（ＰＢＳＣ）又は骨髄（ＢＭ）のいずれかであった。
【００９５】
フェーズＩＩａ試験は、以下の表３で概説されるように、ＳＯＣ  ＧＶＨＤ予防に加えて、ＣＤ２４Ｆｃの２つの単回漸増用量コホート（２４０ｍｇ及び４８０ｍｇ）及び単一の複数回投与コホートを含んだ。図１３に示されるように、単回投与コホートにおいて、幹細胞移植の日に対してＤａｙ−１に治験剤（ＣＤ２４Ｆｃ）を静脈内投与した。複数回投与コホートにおいて、患者は、４８０ｍｇ（Ｄａｙ−１）、２４０ｍｇ（Ｄａｙ＋１４）及び２４０ｍｇ（Ｄａｙ＋２８）におけるＣＤ２４Ｆｃの３回の隔週投与を受けた。ＣＤ２４ＦｃについてのＰＫデータに基づいて、この隔週投与期間によって、３つ以上の半減期の経過が可能になる。投与は、固定量に基づき、重量又はＢＳＡに基づかない。各投与コホートは、合計組入れ人数が２４人の患者についての無作為化された３：１の比（６人のＣＤ２４Ｆｃ対象及び２人のプラセボ）のデザインを用いて８人の対象を組入れた。
【表３】
2021527056.tif 000007
【００９６】
表４は、年齢、悪性疾患及び併存疾患などのリスク因子にわたって比較的バランスが保たれたＣＤ２４Ｆｃコホート及びプラセボコホートにおける患者についての人口統計学情報及び臨床的特性を示す。ＣＤ２４Ｆｃコホート及びプラセボコホートにおいて最もよくみられる悪性疾患は、ＡＭＬ／ＭＤＳ（６６．７％及び８３．３％）であった。ＣＤ２４Ｆｃコホートにおける患者の７２％及びプラセボ群における５０％は、併存疾患指標が中間又は高かった。両コホートにおいて、骨髄と比較して、ＰＢＳＣが移植片源としてより頻回に用いられ、Ｆｌｕ／Ｂｕ４は、両コホートにわたって最もよくみられる前処置レジメンであった。４人の患者（ＣＤ２４Ｆｃコホートにおける全員）がＣｙ／ＴＢＩ前処置を受けた。
【表４】
2021527056.tif 000008
【００９７】
上記試験の主要目的は、骨髄破壊的同種造血細胞移植（ＨＣＴ）を受けている対象におけるＣＤ２４Ｆｃの安全性及び忍容性を評価すること、並びにＨＣＴを受けている患者におけるＣＤ２４Ｆｃの推奨フェーズＩＩ用量（ＲＰ２Ｄ）又は最大耐量（ＭＴＤ）を決定することである。
【００９８】
上記試験に組入れられた全ての患者は、単一投与コホートについてはＨＣＴの３０日後までの、又は複数回投与コホートについてはＨＣＴの６０日後までのＣＤ２４Ｆｃによる治療の最初の日であり（正確な日数は、逸脱を構成することなく治験薬の投与の最終日に依存して変化してもよい）、治験薬に潜在的に関連する毒性を限定する用量を含む有害事象（ＡＥ）についての評価及び報告期間である治療期間を完了した。表５は、フェーズ２ａ試験において観察された毒性の概要を提供するものである。全体として、本試験によって、最高で４８０ｍｇのＣＤ２４ＦｃのＩＶ投与はｉｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ（ＩＴＴ）集団において概して忍容性が良好であることが示された。治験薬に起因し得るか又は起因し得る可能性がある注入毒性、用量制限毒性（ＤＬＴ）又はＳＡＥは認められず、一人の患者も上記試験から除外されなかった。
【００９９】
組入れられた全ての２４人の対象は、図１４に示されるように、移植後に生着した。好中球は、ＣＤ２４Ｆｃ曝露患者及びプラセボ患者において、それぞれＨＣＴの１３．０日後及び１５．５日後の中央値において生着した。血小板は、血小板が生着せず、Ｄａｙ４９に死亡したプラセボ群の１人の患者を除いて、ＣＤ２４Ｆｃ曝露患者及びプラセボ患者において、それぞれＨＣＴの１３．０日後及び１５．０日後の中央値で生着した。生着不全の症例はなかった。Ｄａｙ＋３０におけるＣＤ３キメラ現象の中央値は、ＣＤ２４Ｆｃ曝露患者において８２．５％（３８〜１００％の範囲）であり、プラセボ群において８２．０％（６２％〜９１％の範囲）であった（図１５）。ドナーＣＤ３キメラ現象の中央値は、ＣＤ２４Ｆｃ曝露患者においてＤａｙ１００に８６％（４２％〜１００％の範囲）に増加し、プラセボ群において８４％（１７％〜１００％の範囲）に増加した。Ｄａｙ３０及びＤａｙ１００におけるドナーＣＤ３３キメラ現象は、ＣＤ２４Ｆｃ群及びプラセボ群の両方において１００％であった。
【表５】
2021527056.tif 000009
【０１００】
フェーズ２ａ試験のための有効性解析は、副次的であると考えられ、以下のもの：ＨＣＴ後のＤａｙ１８０（１８０日目）におけるグレードＩＩＩ〜ＩＶの急性ＧＶＨＤの無病生存率（ＧＦＳ）を記載すること；ＨＣＴ後のＤａｙ１００（１００日目）におけるグレードＩＩ〜ＩＶの急性ＧＶＨＤの累積発現率を記載すること；ＨＣＴ後のＤａｙ１８０におけるグレードＩＩＩ〜ＩＶのＧＶＨＤの無再発生存率を記載すること；ＨＣＴ後のＤａｙ１８０におけるグレードＩＩ〜ＩＶの急性ＧＦＳを記載すること；ＨＣＴの１年後における慢性ＧＶＨＤの発現率を記載すること；ＨＣＴの１年後における再発の発現率を記載すること；ＨＣＴの１年後における移植関連死（ＴＲＭ）の発現率を記載すること；ＨＣＴ後のＤａｙ１００における感染率を記載すること；ＨＣＴの１年後における全生存率（ＯＳ）及び無病生存率（ＤＦＳ）を評価すること、を含む。
【０１０１】
フェーズＩＩａ試験におけるプラセボ群を含めることに加えて、２０１２年１月〜２０１７年１１月の期間から同じ骨髄破壊的前処置及びＧＶＨＤ予防レジメン（実験的治療ＣＤ２４Ｆｃがない）の後で適合非血縁ドナーＨＣＴを行う同一施設から同時対照（Ｎ＝９２）におけるデータを集めた。プラセボ対照群のおける患者が少数である場合、同時対照コホートが含まれた。同時対照コホートにおける９２人の成人患者の人口統計学データを表６にまとめる。
【表６】
2021527056.tif 000010
【０１０２】
表７及び表８は、フェーズ２ａ試験の臨床的転帰の概要を提供するものである。急性ＧＶＨＤは、国際ＣＩＢＭＴＲレジストリ並びに血液及び骨髄移植臨床試験ネットワークによって利用されるコンセンサスガイドラインに従って等級分けされ、毎週記録された。Ｄａｙ０においてＨＣＴを受けた後、ＨＣＴ後のＤａｙ１００まで、ａＧＶＨＤについて患者を評価した。
【表７−１】
2021527056.tif 000011
【表７−２】
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【表８】
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【０１０３】
Ｄａｙ１００までのグレードＩＩ〜ＩＶの急性移植片対宿主病の発現率
表９は、ｍＩＴＴ集団についてのＤａｙ１００までのグレードＩＩ〜ＩＶの急性ＧＶＨＤの累積発現率をまとめたものである。合計で、ＣＤ２４Ｆｃの投与を受けた７人（３８．９％）の患者（２４０ｍｇのＣＤ２４Ｆｃの単回投与コホートにおいて２人［３３．３％］の患者、４８０ｍｇのＣＤ２４Ｆｃの単回投与コホートにおいて３人［５０．０％］の患者、及び９６０ｍｇのＣＤ２４Ｆｃの複数回投与コホートにおいて２人［３３．３％］の患者）及びプラセボの投与を受けた１人の患者（１６．７％）が、Ｄａｙ１００までにグレードＩＩ〜ＩＶの急性ＧＶＨＤとなった。さらに、プラセボの投与を受けた１人（１６．７％）の患者が、Ｄａｙ１００までにグレードＩＩ〜ＩＶの急性ＧＶＨＤなしで死亡した。Ｄａｙ１００にかけてグレードＩＩ〜ＩＶの急性ＧＶＨＤを発症することなく生存した患者は、Ｄａｙ１００までにおける急性ＧＶＨＤについての上記患者の最後の評価において除外された。各治療群における患者の５０．０％以上が除外された。
【表９】
2021527056.tif 000014
【０１０４】
全体的に、（９５％ＣＩと共に）Ｄａｙ１００までのグレードＩＩ〜ＩＶの急性ＧＶＨＤの累積発現率は、ＣＤ２４Ｆｃ治療群については３８．９％（１６．８％、６０．７％）、プラセボ群については１６．７％（０．５％、５４．９％）であった。プラセボに対するＣＤ２４Ｆｃについてのハザード比（９０％ＣＩと共に）は、２．６（０．５、１４．７）であった。グレードＩＩ〜ＩＶのａＧＶＨＤの累積発現率は、同時対照において５０％であった。ＣＤ２４Ｆｃ治療群において、グレードＩＩのａＧＶＨＤの４つの症例は皮膚だけを含み、２つの症例は皮膚及び上部消化（ＧＩ）管を含んだ。プラセボ群においてグレードＩＩのａＧＶＨＤの症例はなかった。
【０１０５】
Ｄａｙ１８０にかけてのグレードＩＩ〜ＩＶの急性移植片対宿主病無病生存率
表１０は、ｍＩＴＴ集団についてのＤａｙ１８０にかけてのグレードＩＩ〜ＩＶの急性ＧＦＳをまとめたものである。グレードＩＩ〜ＩＶの急性ＧＦＳのカプラン−マイヤー推定の中央値には、いかなる治療群においても達しなかった。全体的に、（９５％ＣＩと共に）Ｄａｙ１８０におけるグレードＩＩ〜ＩＶの急性ＧＦＳの割合は、ＣＤ２４Ｆｃ治療群については６１．１％（３５．３％、７９．２％）、プラセボ群については５０．０％（１１．１％、８０．４％）であった。プラセボに対するＣＤ２４Ｆｃについてのハザード比（９０％ＣＩと共に）は、０．８（０．３、２．５）であった。データカットオフ日において生存しており、且つグレードＩＩ〜ＩＶの急性ＧＶＨＤの確定した発現がなかった患者は、Ｄａｙ１８０までの急性ＧＶＨＤの評価の最終日に除外された。標本サイズが小さいことに加えて、各治療群における患者の５０．０％以上が除外された。
【表１０−１】
2021527056.tif 000015
【表１０−２】
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【０１０６】
ｍＩＴＴ集団についてのＤａｙ１８０にかけてのグレードＩＩＩ〜ＩＶの急性ＧＦＳ
表１１に示されるように、合計で、ＣＤ２４Ｆｃの投与を受けた１人（５．６％）の患者（４８０ｍｇのＣＤ２４Ｆｃの単回投与コホートにおける１人［１６．７％］の患者）及びプラセボの投与を受けた２人（３３．３％）の患者が、Ｄａｙ１８０までにグレードＩＩＩ〜ＩＶの急性ＧＶＨＤになった。全体的に、（９５％ＣＩと共に）Ｄａｙ１８０におけるグレードＩＩＩ〜ＩＶの急性ＧＦＳの割合は、ＣＤ２４Ｆｃ治療群については９４．４％（６６．６％、９９．２％）、プラセボ群については５０．０％（１１．１％、８０．４％）であった。プラセボに対するＣＤ２４Ｆｃについてのハザード比（９０％ＣＩと共に）は、０．１（０．０、０．７）であった。データカットオフ日において生存しており、且つグレードＩＩＩ〜ＩＶの急性ＧＶＨＤの確定した発現がなかった患者は、Ｄａｙ１８０までの急性ＧＶＨＤの評価の最終日に除外された。各治療群における患者の５０．０％以上が除外された。Ｄａｙ１８０におけるグレードＩＩＩ〜ＩＶの急性ＧＦＳの割合は、同時対照コホートにおいて２４％であった。図２５は、プラセボ対照群（図２５Ａ）及び同時対照群（図２５Ｂ）と比較したＣＤ２４Ｆｃ群における１８０日間にわたるグレードＩＩＩ〜ＩＶのＧＶＨＤ無病生存率を示す。
【表１１−１】
2021527056.tif 000017
【表１１−２】
2021527056.tif 000018
【０１０７】
データカットオフ時に上記試験においてａＧＶＨＤを発症した全ての患者は、同時コホート対照において認められた５０％の奏功率と比較して、ステロイド治療の効果が見られた。ＨＣＴ後の最初の１００日後、遅発性ａＧＶＨＤ（Ｄａｙ１００の後の急性ＧＶＨＤの発症と定義される）、又はＨＣＴの１年後までのｃＧＶＨＤについて年４回患者を評価した。移植後のＤａｙ１００の後、ＣＤ２４Ｆｃコホートにおいて、さらなるａＧＶＨＤ事象は認められなかった。
【０１０８】
図１６は、治療（ＣＤ２４Ｆｃ）コホートにおけるグレードＩＩ〜ＩＶ及びグレードＩＩＩ〜ＩＶの急性ＧＶＨＤの累積発現率を示す。特に、１人の患者だけに下部ＧＩを含んだグレードＩＩＩのＧＶＨＤがあり、肝臓ＧＶＨＤは認められなかった。ＣＤ２４ＦｃコホートにおけるＨＣＴ後のＤａｙ１８０におけるグレードＩＩＩ〜ＩＶのａＧＶＨＤの累積発現率は、同時対照におけるＤａｙ１８０におけるグレードＩＩＩ〜ＩＶのａＧＶＨＤよりも低い傾向があった（Ｐ＝０．０９７）。プラセボ群の患者において、Ｄａｙ１８４に死亡に至ったＤａｙ１８２におけるグレードＩＩＩのａＧＶＨＤのさらなる症例があった。この患者は、Ｄａｙ１４５において白血病再発となった。これらの結果は、メトトレキセート及びタクロリムス予防に加えて、ＣＤ２４Ｆｃが、骨髄破壊的前処置を受けた後にＨＣＴを受けている患者における、より重篤なグレードＩＩＩ及びＩＶのａＧＶＨＤを発症するリスクを低下させることを示唆する。
【０１０９】
造血幹細胞移植の１年後における無病生存率
表１２は、ｍＩＴＴ集団についてのＨＣＴの１年後の無病生存率（ＤＦＳ）をまとめたものである。いかなる治療群についても、ＤＦＳカプラン−マイヤー推定の中央値に達しなかった。全体的に、ＨＣＴの１年後のＤＦＳ率（９５％ＣＩと共に）は、ＣＤ２４Ｆｃ治療群については８３．３％（５６．８％、９４．３％）、プラセボ群については５０．０％（１１．１％、８０．４％）であった。プラセボに対するＣＤ２４Ｆｃについてのハザード比（９０％ＣＩと共に）は、０．２（０．１、０．９）であった。追跡調査期間の終了時に生存しており、且つ疾患の再発がなかった患者は、評価の最終日に除外された。各治療群における患者の５０．０％以上が除外された。図２６は、プラセボ対照群（図２６Ａ）及び同時対照群（図２６Ｂ）と比較したＣＤ２４Ｆｃ群における無再発生存率を示す。
【表１２−１】
2021527056.tif 000019
【表１２−２】
2021527056.tif 000020
【０１１０】
造血幹細胞移植の１年後における全生存率
表１３は、ｍＩＴＴ集団についてのＨＣＴの１年後における全生存率（ＯＳ）をまとめたものである。いかなる治療群についても、ＯＳ時間カプラン−マイヤー推定の中央値に達しなかった。全体的に、１年におけるＯＳ率（９５％ＣＩと共に）は、ＣＤ２４Ｆｃ治療群については８３．３％（５６．８％、９４．３％）、プラセボ群については５０．０％（１１．１％、８０．４％）であった。プラセボに対するＣＤ２４Ｆｃについてのハザード比（９０％ＣＩと共に）は、０．２（０．１、１．０）であった。追跡調査期間の終了時に生存していた患者は、上記患者が生存していることが知られた最終日に除外された。各治療群における患者の５０．０％以上が除外された。
【表１３】
2021527056.tif 000021
【０１１１】
フェーズＩＩａ試験における患者についてのＨＣＴの約８００日後の全生存率（ＯＳ）の推定も期待が持てるものとなっている。全生存率（ＯＳ）は、ＣＤ２４Ｆｃコホートにおける患者については約８０％、プラセボコホートにおける患者については５０％（ｐ＝０．０６）（図２０）、及び同時対照における患者については５０％（ｐ＝０．０５）であった（図２１）。プラセボ患者及び同時対照患者と比較した場合におけるＣＤ２４Ｆｃ曝露患者におけるＯＳの向上は、メトトレキセート及びタクロリムスと併用してＣＤ２４Ｆｃを投与することによって骨髄破壊的前処置後にＨＣＴを受けている患者の転帰に対する実質的な改善が生じる可能性があることを示す上記の他の知見を支持する。
【０１１２】
Ｄａｙ１８０にかけての急性移植片対宿主病無病生存率及び無再発生存率（ａＧＲＦＳ）
ＧＶＨＤを予防するように設計された治療的戦略は、移植片対白血病（ＧＶＬ）効果の低減のために白血病再発の増加をもたらす可能性がある。表７に示されるように、ＨＣＴ後のＤａｙ１８０におけるＣＤ２４Ｆｃに曝露された患者における白血病再発の発現率（１１％）は、プラセボ群における患者（３３％）及び同時対照における患者（２３％）と比較して、より低かった。４８０ｍｇのＣＤ２４Ｆｃコホートにおける１人の対象は、Ｄａｙ１４６にＣＭＭＬの再発を起こし、複数回投与の９６０ｍｇのＣＤ２４Ｆｃコホートにおける１人の対象は、ＨＣＴ後のＤａｙ１００にＡＬＬの再発を起こした。ＣＭＭＬの患者は、白血病によりＤａｙ１９６に死亡した。ＡＬＬ再発の患者は、ブリナツモマブで治療され、完全寛解に達し、２０１８年８月８日のデータカットオフの時点で生存していた。プラセボコホートにおいて、１人の患者がＤａｙ９４にＣＭＭＬの再発を起こし、ＭＤＳの１人の患者がＤａｙ１４６に再発した（ＣＭＭＬの患者はＤａｙ３１６に死亡し、ＭＤＳの患者はＤａｙ１８４に死亡した）。これらの結果は、ＣＤ２４Ｆｃが、有益な移植片対腫瘍（ＧＶＴ）プロセスに干渉せず、白血病再発のリスクを低下させる可能性もあることを示唆する。
【０１１３】
移植後のＤａｙ１８０におけるＣＤ２４Ｆｃコホートの死亡数は、プラセボコホート及び同時対照コホートよりも少ない（表７）。ＨＣＴ後のＤａｙ１８０において、ＣＤ２４Ｆｃコホートのいずれにも死亡はなかったが、プラセボコホートでは肺炎による１人の死亡（１６．７％）があり、同時対照では２２人の死亡（２３．９％）があった。ＨＣＴ後のＤａｙ１８０におけるプラセボ群（３３％）（Ｐ＝０．０１１、図１８参照）及びＨＣＴ後のＤａｙ１８０における同時対照（５３％）（Ｐ＝０．０１７、図１９参照）と比較した場合、ＣＤ２４Ｆｃコホート（８３％）において、ａＧＶＨＤのグレードＩＩＩ〜ＩＶの無再発生存率（ＲＦＳ）の複合評価項目の統計学的に有意な改善が認められる。この種の評価項目は、理論的に、ＧＶＨＤ抑制だけでなく潜在的な衝撃毒性、感染及び再発に対する介入の効果を要約するので、ますます一般的になってきた。上記の観測を支持して、グレードＩＩＩ〜ＩＶのａＧＶＨＤのＲＦＳの改善は、骨髄破壊的前処置レジメンの後に標準医療のメトトレキセート及びタクロリムスと併用してＣＤ２４Ｆｃを投与することが、移植片のＧＶＬ効果に影響を及ぼすことなくａＧＶＨＤの発現を予防する際に患者にとって有益であることを示す。
【０１１４】
ＨＣＴ後のＤａｙ１８０にかけてのａＧＲＦＳは、事象がグレードＩＩＩ〜ＩＶの急性ＧＶＨＤ、再発又は何らかの原因による死亡を含んだ事後の複合評価項目である。表１４は、ｍＩＴＴ集団についてのＤａｙ１８０にかけてのグレードＩＩＩ〜ＩＶの急性ＧＲＦＳをまとめたものである。
【０１１５】
ＣＤ２４Ｆｃ治療群について、グレードＩＩＩ〜ＩＶの急性ＧＲＦＳの中央値のカプラン−マイヤー推定に達しなかった。プラセボ群について、グレードＩＩＩ〜ＩＶの急性ＧＲＦＳの中央値のカプラン−マイヤー推定（９５％ＣＩと共に）は、１２０．０（４６．０、推定不可能）であった。全体的に、Ｄａｙ１８０におけるグレードＩＩＩ〜ＩＶの急性ＧＲＦＳ率（９５％ＣＩと共に）は、ＣＤ２４Ｆｃ治療群については８３．３％（５６．８％、９４．３％）、プラセボ群については３３．３％（４．６％、６７．６％）であった。プラセボに対するＣＤ２４Ｆｃについてのハザード比（９０％ＣＩと共に）は、０．２（０．０、０．６）であった。データカットオフ日において生存しており、且つグレードＩＩＩ〜ＩＶの急性ＧＶＨＤ、全身免疫抑制療法を必要とする慢性ＧＶＨＤ又は再発の確定した発現がなかった患者は、最終評価日に除外された。
【表１４−１】
2021527056.tif 000022
【表１４−２】
2021527056.tif 000023
【０１１６】
造血幹細胞移植の１年後における再発の発現率
表１５は、ｍＩＴＴ集団についてのＨＣＴの１年後における再発の累積発現率をまとめたものである。全体的に、ＨＣＴの１年後における再発の累積発現率（９５％ＣＩと共に）は、ＣＤ２４Ｆｃ治療群については１１．１％（１．７％、３０．４％）、プラセボ群については３３．３％（２．９％、７１．１％）であった。プラセボに対するＣＤ２４Ｆｃについてのハザード比（９０％ＣＩと共に）は、０．３（０．１、１．４）であった。追跡調査期間の終了時（Ｄａｙ３６５［１年］）に生存しており、且つ再発がなかった患者は、評価の最終日に除外された。各治療群における患者の５０．０％以上が除外された。
【表１５】
2021527056.tif 000024
【０１１７】
造血幹細胞移植の１年後における移植片対宿主病無病生存率及び無再発生存率（ＧＲＦＳ）
ＨＣＴの１年後にかけてのこのＧＲＦＳは、事象がグレードＩＩＩ〜ＩＶの急性ＧＶＨＤ、全身免疫抑制療法を必要とする慢性ＧＶＨＤ、再発又は何らかの原因による死亡を含んだ複合評価項目である。表１６は、ｍＩＴＴ母集団についてのＨＣＴの１年後におけるグレードＩＩＩ〜ＩＶの急性ＧＲＦＳをまとめたものである。
【０１１８】
ＧＲＦＳの中央値のカプラン−マイヤー推定（９５％ＣＩと共に）は、全体的なＣＤ２４Ｆｃ治療群については２２９．０日（１４１．０、推定不可能）であり：２４０ｍｇのＣＤ２４Ｆｃの単回投与コホートについては２４７．０日（１２９．０、推定不可能）であり、４８０ｍｇのＣＤ２４Ｆｃの単回投与コホートについては２８７．０（２４．０、推定不可能）であり、９６０ｍｇのＣＤ２４Ｆｃの複数回投与コホートについては１９３．５（１００．０（推定不可能）である。ＧＲＦＳの中央値のカプラン−マイヤー推定（９５％ＣＩと共に）は、プラセボ群については１２０．０日（４６．０、推定不可能）であった。全体的には、ＨＣＴの１年後におけるＧＲＦＳ率は（９５％ＣＩと共に）、ＣＤ２４Ｆｃ治療群については３２．４％（１２．７％、５４．０％）、プラセボ群については３３．３％（４．６％、６７．６％）であった。プラセボに対するＣＤ２４Ｆｃについてのハザード比（９０％ＣＩと共に）は、０．７（０．３、１．７）であった。データカットオフ日において生存しており、且つグレードＩＩＩ〜ＩＶの急性ＧＶＨＤ、全身免疫抑制療法を必要とする慢性ＧＶＨＤ又は再発の確定した発現がなかった患者は、最終評価日に除外された。
【表１６−１】
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【表１６−２】
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【０１１９】
造血幹細胞移植の１年後における非再発死の発現率
表１７は、ｍＩＴＴ集団についてのＨＣＴの１年後におけるＮＲＭの累積発現率をまとめたものである。全体的に、１年目におけるＮＲＭの累積発現率（９５％ＣＩと共に）は、ＣＤ２４Ｆｃ治療群については５．６％（０．３％、２３．１％）、プラセボ群については１６．７％（０．５％、５４．９％）であった。プラセボに対するＣＤ２４Ｆｃについてのハザード比（９０％ＣＩと共に）は、０．３（０．０、２．８）であった。再発なしで追跡調査期間の終了時（Ｄａｙ３６５［１年］）に生存していた患者は、当該患者が生存していることが知られた最終日に除外された。各治療群における患者の５０．０％以上が除外された。Ｄａｙ１８０におけるＮＲＭの累積発現率（９５％ＣＩと共に）は、ＣＤ２４Ｆｃ治療群については０．０％、プラセボ群については１６．７％（０．５％、５４．９％）であった。
【表１７】
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【０１２０】
造血幹細胞の１年後における慢性移植片対宿主病の発現率
表１８は、ｍＩＴＴ集団についてのＨＣＴの１年後における慢性ＧＶＨＤの累積発現率をまとめたものである。全体的に、ＨＣＴの１年後における慢性ＧＶＨＤの累積発現率（９５％ＣＩと共に）は、ＣＤ２４Ｆｃ治療群については６３．３％（３４．１％、８２．４％）、プラセボ群については３３．３％（２．５％、７２．０％）であった。プラセボに対するＣＤ２４Ｆｃについてのハザード比（９０％ＣＩと共に）は、２．１（０．６、７．４）であった。２４０ｍｇのＣＤ２４Ｆｃの単回投与コホートにおいて３人の中等度の慢性ＧＶＨＤがあり、４８０ｍｇのＣＤ２４Ｆｃの単回投与コホートにおいて３人の軽度及び１人の中等度の慢性ＧＶＨＤがあり、９６０ｍｇのＣＤ２４Ｆｃの複数回投与コホートにおいて２人の軽度及び３人の中等度の慢性ＧＶＨＤがあった。プラセボ群において、２人の患者が軽度の慢性ＧＶＨＤに罹患した。全体的に、重度の慢性ＧＶＨＤの例はなかった。追跡調査期間の終了時（Ｄａｙ３６５［１年］）に生存しており、且つ慢性ＧＶＨＤを発現しなかった患者は、評価の最終日に除外された。
【表１８】
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【０１２１】
Ｄａｙ１００における感染率
ＧＶＬに対する効果と同様に、全般的免疫抑制によってＧＶＨＤを予防するように設計された治療的戦略は、細菌感染及びＣＭＶ再活性化を含む感染率の増加をもたらす可能性がある。
【０１２２】
表１９は、ｍＩＴＴ集団についてのＤａｙ１００にかけての感染症の発現率をまとめたものである。合計で、ＣＤ２４Ｆｃの投与を受けた１３人（７２．２％）の患者（２４０ｍｇのＣＤ２４Ｆｃの単回投与コホートにおける５人［８３．３％］の患者、４８０ｍｇのＣＤ２４Ｆｃの単回投与コホートにおける２人［３３．３％］の患者、及び９６０ｍｇのＣＤ２４Ｆｃの複数回投与コホートにおける６人の［１００．０％］患者）及びプラセボの投与を受けた２人（３３．３％）の患者が、Ｄａｙ１００にかけて感染症に罹患した。
【０１２３】
ほとんどの感染症はコントロールされ、消失したと考えられた。プラセボ群の患者１０３−００１は、肺炎で死亡した。プラセボ群の患者１０２−００２は、回復／消失と報告された結膜炎に罹患した。４８０ｍｇのＣＤ２４Ｆｃの単回投与コホートの患者１０１−０１０及び４８０ｍｇのＣＤ２４Ｆｃの単回投与コホートの患者１０１−０１１は、両方とも、回復せず／消失せずと報告された膿疱性皮疹に罹患した。９６０ｍｇのＣＤ２４Ｆｃの複数回投与コホートの患者１０２−００６は、介入継続と報告された上気道感染及びクロストリジウム・ディフィシレ大腸炎に罹患した。
【０１２４】
大部分の感染症は、細菌性（ＣＤ２４Ｆｃの投与を受けた９人［５０．０％］の患者及びプラセボの投与を受けた２人［３３．３％］の患者）又はウイルス性（ＣＤ２４Ｆｃの投与を受けた７人［３８．９％］の患者及びプラセボの投与を受けた１人［１６．７％］の患者）であった。大部分の感染症は、血液（ＣＤ２４Ｆｃの投与を受けた８人［４４．４％］の患者及びプラセボの投与を受けた１人［１６．７％］の患者）、尿（ＣＤ２４Ｆｃの投与を受けた４人［２２．２％］の患者、しかしプラセボの投与を受けた患者には発現しなかった）又は糞便（ＣＤ２４Ｆｃの投与を受けた２人［１１．１％］の患者及びプラセボの投与を受けた２人［３３．３％］の患者）に発現した。血液培養から回収された大部分の細菌は、一般的な皮膚常在性のもの及び低毒性病原体（すなわち、コアグラーゼ陰性ブドウ球菌）であった。
【表１９−１】
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【０１２５】
表２０に示されるように、ＣＭＶ再活性化のリスクが高かったＣＤ２４Ｆｃ群における９人の患者がいた（ＨＣＴ前のドナー／レシピエントのＣＭＶ状態：Ｄ＋／Ｒ＋、５人；Ｄ−／Ｒ＋、３人；不明なＤ／Ｒ＋、１人）。Ｄ＋／Ｒ−のＣＤ２４Ｆｃ群における１人の患者には、ＣＭＶ再活性化の中程度のリスクがあった。ＣＤ２４Ｆｃ群における８人の患者は、低リスクであると考えられたＤ−／Ｒ−の状態を有した。２人のＤ−／Ｒ＋患者が、高リスク群においてＤａｙ１００でＣＭＶ再活性化の２２．２％の累積発現率を示すＤａｙ４２及びＤａｙ４８におけるＣＭＶ再活性化を有した。両患者は、ＣＭＶ再活性化の検出の前に全身性ステロイド治療を行った。比較的、プラセボ群における２人の患者が、ＣＭＶ再活性化のリスクが高かった（Ｄ＋／Ｒ＋、１人；Ｄ／Ｒ＋、１人）。プラセボ群における１人の患者が、急性ＧＶＨＤに対する全身性ステロイド治療の前のＤａｙ４７にＣＭＶ再活性化を発現した（高リスク群において５０．０％）。
【０１２６】
移植前におけるドナー及びレシピエントＣＭＶ状態によって層別化されたＨＣＴ患者におけるＣＭＶ感染率。Ｄ＝ドナー、Ｒ＝レシピエント、＋は「陽性」、−は「陰性」、Ｕは「不明」である。
【表１９−２】
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【０１２７】
全体的に、ＣＤ２４Ｆｃは、フェーズＩＩａ試験において忍容性は良好だった。注入関連毒性はなかった。インスリンで管理された高血糖の４８０ｍｇ群におけるＣＤ２４Ｆｃに曝露された患者において、関連があるかもしれないグレードＩＩＩ以上の薬物関連ＴＥＡＥが１例あった。プラセボ群において用量制限毒性（ＤＬＴ）が１例認められたが、ＣＤ２４Ｆｃ群ではＤＬＴは認められなかった。１８０日以内（ＣＤ２４Ｆｃの最後の投与の少なくとも１５０日後）に、ＣＤ２４Ｆｃが投与された患者に死亡に至る有害事象はなかった。プラセボ群において、Ｄａｙ４８に対象の死亡に至った肺炎の有害事象が１例あった。ＣＤ２４Ｆｃ群における１人の患者がＨＣＴの７ヵ月後に死亡したが、この死亡は治験薬におそらく関連なしと決定された。抗薬物抗体（ＡＤＡ）は、ＨＣＴの１００日後までの任意の時点において、２４人の患者のいずれにも検出されなかった。
【０１２８】
グレードＩＩＩ以上の最もよくみられるＴＥＡＥ（＞１０％）は、血小板数減少（プラセボにおいて８３．３％及びＣＤ２４Ｆｃにおいて９４．４％）、白血球数減少（プラセボにおける６６．７％及びＣＤ２４Ｆｃにおける８８．９％）、好中球数減少（プラセボにおける５０％及びＣＤ２４Ｆｃにおける８３．３％）、リンパ球数減少（プラセボにおける５０％及びＣＤ２４Ｆｃにおける７７．８％）、貧血（プラセボにおける５０％及びＣＤ２４Ｆｃにおける６６．７％）、口内炎（プラセボにおける８３．３％及びＣＤ２４Ｆｃにおける５０％）及び悪心（プラセボにおける０％及びＣＤ２４Ｆｃにおける１１．１％）を含んだ。これらのＳＡＥは、ＨＣＴにおいて用いられる骨髄破壊的前処置レジメンの知られた安全性プロファイルに一致している。
【０１２９】
ＨＣＴのための骨髄破壊的前処置は、多くの場合、臓器不全を含む重度のレジメン関連毒性に関連する。臓器不全は、早期発症型移植関連死（ＴＲＭ）又は非再発死（ＮＲＭ）の最も頻度が高い原因である。１８人の患者のＣＤ２４Ｆｃ群において、ＨＣＴ後の最初の１００日以内に患者の誰も死亡しなかったが、プラセボ群において、６人中で１人が呼吸器不全によりＤａｙ４８に死亡した。
【０１３０】
薬物動態の結果
図２２〜図２３は、フェーズ２ａ試験の３つの漸増コホートから得られたＰＫデータを示す。２４０ｍｇ及び４８０ｍｇの単回投与コホートの半減期（図２２）は、約１４日であったが、それは健康対象において認められるデータに一致している。４８０ｍｇにおいて、より高いｃｍｘがあったが、ピークのＧＶＨＤの発現及び生着の時間である１４日後に曝露の実質的な増加はなかった。最終的複数回投与コホートにおいて、期待されるようにＤａｙ６０にかけて（患者が最もＧＶＨＤを発症しやすい期間）曝露が増加した（図２３）。
【０１３１】
表２１は、単回投与コホートにおけるＰＫ集団についてのＣＤ２４Ｆｃの血漿中ＰＫパラメータをまとめたものである。２４０ｍｇ及び４８０ｍｇのＣＤ２４Ｆｃ単回投与コホートについて、それぞれ、幾何平均Ｃｍａｘ，−１ｄ値は、５２，１４５．４１及び８４，１５５．０８ｎｇ／ｍＬであり、幾何平均ＡＵＣ０−ｌａｓｔ，−１ｄ値は、１０，１５６，５４９．９及び１５，５２２，６８６．２ｎｇ  ｈ／ｍＬであり、幾何平均ＡＵＣ０−４２ｄ値は、９，２７５，５６２．３及び１３，９０３，７１８．４ｎｇ  ｈ／ｍＬであり、幾何平均ＡＵＣ０−ｉｎｆ値は、１０，３８３，５０３．９及び１５，７１６，６１６．４ｎｇ  ｈ／ｍＬであった。２４０ｍｇ及び４８０ｍｇのＣＤ２４Ｆｃの単回投与コホートの両方について、ｔｍａｘ，−１ｄの中央値は、２．１０ｈであった。２４０ｍｇ及び４８０ｍｇのＣＤ２４Ｆｃの単回投与コホートについて、それぞれ、ｔ１／２の平均値は、４１４．７３９ｈ及び４０６．６４８ｈであり、λｚの平均値は、０．００１８ｈ−１及び０．００１７ｈ−１であった。２４０ｍｇ及び４８０ｍｇのＣＤ２４Ｆｃの単回投与コホートについて、それぞれ、平均Ｖｚ値は、１３．８３Ｌ及び１８．１８Ｌであり、平均ＣＬ値は、０．０２４Ｌ／ｈ及び０．０３１Ｌ／ｈであった。
【表２０】
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【０１３２】
表２２は、Ｄａｙ−１、Ｄａｙ２８、及びＤａｙ−１〜Ｄａｙ１００における複数回投与コホートにおけるＰＫ集団についてのＣＤ２４Ｆｃの血漿中ＰＫパラメータをまとめたものである。幾何平均Ｃｍａｘ，−１ｄ値及びＣｍａｘ，２８ｄ値は、９６０ｍｇのＣＤ２４Ｆｃ複数回投与コホートについて、それぞれ９６，９４２．７１ｎｇ／ｍＬ及び６２，５６３．０５ｎｇ／ｍＬであった。幾何平均ＡＵＣ０−ｌａｓｔ，−１ｄ、ＡＵＣ０−１４ｄ、ＡＵＣ０−１００ｄ及びＡＵＣ０−ｌａｓｔの全体的値は、９６０ｍｇのＣＤ２４Ｆｃの複数回投与コホートについて、それぞれ１２，３１７，９７１．２ｎｇ  ｈ／ｍＬ、９，６８８，９３３．９ｎｇ  ｈ／ｍＬ、３７，７３６，５５５．１ｎｇ  ｈ／ｍＬ及び３７，３６３，９５３．５ｎｇ  ｈ／ｍＬであった。ｔｍａｘ，−１ｄ及びｔｍａｘ，２８ｄの中央値は、９６０ｍｇのＣＤ２４Ｆｃの複数回投与コホートについて、それぞれ２．１３ｈ及び２．５２ｈであった。
【表２１−１】
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【表２１−２】
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【０１３３】
フェーズＩＩａ試験の臨床的エビデンスは、メトトレキセート及びタクロリムスと併用して投与されたＣＤ２４Ｆｃが、重度のａＧＶＨＤ（グレードＩＩＩ〜ＩＶ）の可能性及び白血病再発の可能性の両方を低下させることによって骨髄破壊的アロＨＣＴを受けている白血病患者の転帰を大きく向上させることを強く示唆する。上記のように、グレードＩＩＩ〜ＩＶのａＧＶＨＤの累積発現率は、プラセボコホート（生理食塩水＋メトトレキセート及びタクロリムス）における１６．７％及び同時対照コホート（メトトレキセート及びタクロリムス単独）における２４％と比較して、ＣＤ２４Ｆｃ曝露患者において５．６％である。これらのデータは、予防としてのメトトレキセート及びタクロリムスと併用したＣＤ２４Ｆｃの投与が、非再発死のリスクの増加に関連するａＧＶＨＤの最も重篤なグレードであるＨＣＴ患者におけるグレードＩＩＩ〜ＩＶのａＧＶＨＤのリスクを低下させることを示唆する。低下の傾向は、ＣＤ２４Ｆｃの投与を受けなかった患者と比較して（プラセボ群（３３．３％）及び同時対照（２３％）の両方と比較して）、ＣＤ２４Ｆｃ（１１．１％）の投与を受けた患者における再発の発現率で認められるが、このことは、ＣＤ２４Ｆｃが、移植片のＧＶＴ効果に影響を及ぼさず、白血病再発のリスクを低下させる可能性もあることを示す。標準的ＧＶＨＤ予防レジメンにおいてＣＤ２４Ｆｃを含むことの有益性は、プラセボ（１６．７％）と比較してＣＤ２４Ｆｃ曝露患者（５．６％）におけるより良好なＮＲＭ、より良好な１．５年全生存率（８９％対５０％（ＣＤ２４Ｆｃ対プラセボ対照））、グレードＩＩＩ〜ＩＶのａＧＶＨＤのＲＦＳの統計学的に有意な改善（８３％対３３％（それぞれＣＤ２４Ｆｃ対プラセボ対照））、重度の粘膜炎の用量依存的抑制、及び上記試験で認められた薬物関連ＴＥＡＥ（グレードＩＩＩ）が１例のみである良好な安全性プロファイル、によってさらに支持される。
【０１３４】
ａＧＶＨＤ及び白血病再発の両方のリスクを低下させる予防剤は新規であり、骨髄破壊的前処置の後でアロＨＣＴを受けている白血病患者にとって極めて有益である。上記のように、本出願における早期臨床データは、メトトレキセート及びタクロリムスと併用したＣＤ２４Ｆｃの投与が、グレードＩＩＩ〜ＩＶのａＧＶＨＤの予防及び白血病再発の臨床的に重要な評価項目における既存の予防レジメンを超えた実質的改善を提供し、したがって、画期的治療薬のために適格であることを強く示唆する。上記臨床試験のフェーズＩＩａ部分で認められたＣＤ２４Ｆｃの効果は、骨髄破壊的前処置の後でアロＨＣＴを受けている白血病患者におけるグレードＩＩＩ〜ＩＶのａＧＶＨＤ及び白血病再発を抑制する際の予防的ＣＤ２４Ｆｃ投与の有効性を確認するようにデザインされたフェーズＩＩｂ部分においてさらに検討されることになるであろう。
【０１３５】
実施例６
ＨＣＴを受けている対象における粘膜炎を抑制するためにＣＤ２４を用いることが可能である
ＨＣＴについての骨髄破壊的前処置は、多くの場合、グレード３〜４粘膜炎を含む重度のレジメン関連毒性に関連する。重度の口腔粘膜炎は、ＨＣＴ患者によって、上記ＨＣＴ患者が発現した最も苦しいな症候として報告された。実施例５に記載されたフェーズＩＩａＧＶＨＤ予防試験における対象における粘膜炎に対するＣＤ２４Ｆｃ治療の効果の測度として、我々は、組み合わされた粘膜炎スコア付けシステムを作成して転帰を研究した。このデータは、図２４Ａに示され、患者が重篤な（グレード３又は４）粘膜炎に罹患した日数の倍数を含む。スコアは、括弧内において粘膜炎を有したｐｔの数と共に、棒で提供される。口腔粘膜炎は、ＣＴＣＡＥ４．０１に従ってスコア付けされた。図２４Ｂに示されるように、粘膜炎グレード−日スコアの用量依存的低減が、プラセボと比較して全てのＣＤ２４Ｆｃコホートにわたって認められ（Ｒ＝−０．９９８３；Ｐ＝０．０００９）、複数回投与コホートにおいて統計学的に有意な低減が認められた（プラセボ対９６０ｍｇ複数回投与：Ｐ＝０．０３５、スチューデントのｔ検定）。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
2021527056.tif 000040
【図５】
2021527056.tif 000041
【図６】
2021527056.tif 000042
【図７】
2021527056.tif 000043
【図８】
2021527056.tif 000044
【図９】
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【図１０】
2021527056.tif 000046
【図１１】
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【図１２】
2021527056.tif 000048
【図１３】
2021527056.tif 000049
【図１４】
2021527056.tif 000050
【図１５】
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【図１６】
2021527056.tif 000052
【図１７】
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【図１８】
2021527056.tif 000054
【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２４Ａ】
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【図２４Ｂ】
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【図２５Ａ】
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【図２５Ｂ】
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【図２６Ａ】
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【図２６Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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