(57)【要約】モルホリン系化合物とアルコキシベンゼン系化合物とを組み合わせて、ポリスチレン樹脂および／またはＰＥＧ樹脂の両方と適合性があり得、ＤＭＦ、ＤＭＡ、および／またはＮＭＰなどの従来の溶媒に少なくとも匹敵する純度収率をもたらすことができる溶媒を形成する、固相ペプチド合成のための溶媒系を開示する。本開示は、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）のための溶媒系に関する。例示的実施形態では、溶媒系は、モルホリン系化合物、例えば、Ｎ−ホルミルモルホリン（本明細書ではＮＦＭとも呼ばれる）、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｎ−ホルミルモルホリンおよびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物を含む、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）溶媒系であって、前記溶媒混合物は、高いＳＰＰＳ温度での使用に好適な約１４０℃またはそれより高い沸点を有する、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）溶媒系。
【請求項２】
約２０重量％〜約５０重量％のＮ−ホルミルモルホリンおよび約５０重量％〜約８０重量％の前記アルコキシベンゼン系化合物を含む、請求項１に記載の溶媒系。
【請求項３】
前記溶媒混合物が、約９３℃またはそれより高い引火点を有する、請求項１に記載の溶媒系。
【請求項４】
前記アルコキシベンゼン系化合物が、式１：
【化１７】
2021526508.tif 000024
の化合物を含み、式中、
各Ｒ１は独立して−ＯＲであり、ＲはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、
各Ｒ２は独立して水素であるか、またはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、
ｍは、１または２であり、
ｎは４または５であり、
ｍ＋ｎは６である、
請求項１に記載の溶媒系。
【請求項５】
ｍが２である、請求項４に記載の溶媒系。
【請求項６】
各Ｒがメチルである、請求項５に記載の溶媒系。
【請求項７】
各Ｒ２が水素である、請求項５に記載の溶媒系。
【請求項８】
Ｒ２のうちの１つまたは複数がＣ１〜Ｃ４アルキルである、請求項５に記載の溶媒系。
【請求項９】
前記アルコキシベンゼン系化合物が、１，３−ジメトキシベンゼン：
【化１８】
2021526508.tif 000025
であり、前記溶媒混合物が、約９３℃またはそれより高い引火点を有する、請求項５に記載の溶媒系。
【請求項１０】
約２０重量％〜約５０重量％のＮ−ホルミルモルホリンおよび約５０重量％〜約８０重量％の１，３−ジメトキシベンゼンを含む、請求項９に記載の溶媒系。
【請求項１１】
約２５重量％〜約５０重量％のＮ−ホルミルモルホリンおよび約５０重量％〜約７５重量％の１，３−ジメトキシベンゼンを含む、請求項９に記載の溶媒系。
【請求項１２】
ｍが１である、請求項４に記載の溶媒系。
【請求項１３】
Ｒがメチルである、請求項１２に記載の溶媒系。
【請求項１４】
各Ｒ２がＨである、請求項１２に記載の溶媒系。
【請求項１５】
Ｒ２のうちの１つまたは複数がＣ１〜Ｃ４アルキルである、請求項１２に記載の溶媒系。
【請求項１６】
１つのＲ２がＣ１〜Ｃ４アルキルであり、残りのＲ２が水素である、請求項１２に記載の溶媒系。
【請求項１７】
１つのＲ２がメチルであり、残りのＲ２が水素である、請求項１６に記載の溶媒系。
【請求項１８】
前記アルコキシベンゼン系化合物が、式２：
【化１９】
2021526508.tif 000026
のアニソール化合物である、請求項１２に記載の溶媒系。
【請求項１９】
前記アルコキシベンゼン系化合物が、式３：
【化２０】
2021526508.tif 000027
のアニソール化合物である、請求項１２に記載の溶媒系。
【請求項２０】
前記溶媒混合物が、約７０℃〜約１１０℃のＳＰＰＳ温度での使用に好適な沸点を有する、請求項１に記載の溶媒系。
【請求項２１】
Ｎ−ホルミルモルホリンおよび前記アルコキシベンゼン系化合物がそれぞれ、約１４０℃またはそれより高い沸点を有する、請求項１に記載の溶媒系。
【請求項２２】
前記溶媒混合物が、ＳＰＰＳに好適な粘度を有し、ポリスチレン樹脂および／またはＰＥＧ樹脂と適合性がある、請求項１に記載の溶媒系。
【請求項２３】
前記溶媒混合物が、ＤＭＦ、ＤＭＡ、およびＮＭＰからなる群より選択される従来の溶媒に匹敵する純度収率をもたらす、請求項１に記載の溶媒系。
【請求項２４】
前記溶媒混合物が、≧０．２Ｍの濃度でＦｍｏｃアミノ酸を溶解する、請求項１に記載の溶媒系。
【請求項２５】
Ｎ−ホルミルモルホリンおよび前記アルコキシベンゼン系化合物がそれぞれ、約１５０℃またはそれより高い沸点を有する、請求項１に記載の溶媒系。
【請求項２６】
Ｎ−ホルミルモルホリンと式１ａ：
【化２１】
2021526508.tif 000028
のジアルコキシベンゼン化合物であって、式中、
各Ｒ１は独立して−ＯＲであり、ＲはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、
各Ｒ２は独立して水素であるか、またはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、
ｍは、２であり、
ｎは、４である、
ジアルコキシベンゼン化合物との溶媒混合物を含む、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）のための溶媒系であって、
前記溶媒混合物は、高いＳＰＰＳ温度での使用に好適な約１４０℃またはそれより高い沸点を有する、溶媒系。
【請求項２７】
各Ｒがメチルである、請求項２６に記載の溶媒系。
【請求項２８】
各Ｒ２が水素である、請求項２７に記載の溶媒系。
【請求項２９】
Ｒ２のうちの１つまたは複数がＣ１〜Ｃ４アルキルである、請求項２７に記載の溶媒系。
【請求項３０】
式１ａのジアルコキシベンゼン化合物が１，３−ジメトキシベンゼンであり、前記溶媒系が、約２０重量％〜約５０重量％のＮ−ホルミルモルホリンおよび約５０重量％〜約８０重量％の１，３−ジメトキシベンゼンを含み、前記溶媒混合物が、約９３℃またはそれより高い引火点を有する、請求項２６に記載の溶媒系。
【請求項３１】
Ｎ−ホルミルモルホリンおよび式１ｂ：
【化２２】
2021526508.tif 000029
のアルコキシベンゼン化合物であって、式中、
Ｒ１は−ＯＲであり、ＲはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、
各Ｒ２は独立して水素であるか、またはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、
ｍは１であり、
ｎは、５である、
アルコキシベンゼン化合物を含む溶媒混合物を含む、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）のための溶媒系であって、
前記溶媒混合物は、高いＳＰＰＳ温度での使用に好適な約１４０℃またはそれより高い沸点を有する、溶媒系。
【請求項３２】
Ｒがメチルである、請求項３１に記載の溶媒系。
【請求項３３】
各Ｒ２がＨである、請求項３２に記載の溶媒系。
【請求項３４】
Ｒ２のうちの１つまたは複数がＣ１〜Ｃ４アルキルである、請求項３２に記載の溶媒系。
【請求項３５】
１つのＲ２がＣ１〜Ｃ４アルキルであり、残りのＲ２が水素である、請求項３２に記載の溶媒系。
【請求項３６】
１つのＲ２がメチルであり、残りのＲ２が水素である、請求項３５に記載の溶媒系。
【請求項３７】
前記アルコキシベンゼン化合物が、式２：
【化２３】
2021526508.tif 000030
の化合物である、請求項３１に記載の溶媒系。
【請求項３８】
前記アルコキシベンゼン化合物が、式３：
【化２４】
2021526508.tif 000031
の化合物である、請求項３１に記載の溶媒系。
【請求項３９】
Ｎ−ブチルピロリジノン（ＮＢＰ）およびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物を含む、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）溶媒系であって、前記溶媒混合物は、高いＳＰＰＳ温度での使用に好適な約１４０℃またはそれより高い沸点を有する、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）溶媒系。
【請求項４０】
前記アルコキシベンゼン系化合物が、式１：
【化２５】
2021526508.tif 000032
の化合物を含み、式中、
各Ｒ１は独立して−ＯＲであり、ＲはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、
各Ｒ２は独立して水素であるか、またはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、
ｍは、１または２であり、
ｎは４または５であり、
ｍ＋ｎは６である、
請求項３９に記載の溶媒系。
【請求項４１】
固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）法であって、以下：
固相樹脂に連結した第１のアミノ酸を、保護化学基を除去することにより脱保護して、脱保護アミノ酸を形成するステップと、
前記脱保護アミノ酸を洗浄するステップと、
第２のアミノ酸を前記脱保護アミノ酸にカップリングして、前記第１のアミノ酸および前記第２のアミノ酸からペプチドを形成するステップと、
前記脱保護ステップ、前記洗浄ステップ、および前記カップリングステップを繰り返して、前記第１のアミノ酸、前記第２のアミノ酸、および引き続くアミノ酸を含むペプチドを形成するステップとを含み、
前記脱保護ステップ、前記洗浄ステップ、および／または前記カップリングステップは、Ｎ−ホルミルモルホリンおよびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物を含む溶媒系の存在下で実施され、前記溶媒混合物は、高いＳＰＰＳ温度での使用に好適な約１４０℃またはそれより高い沸点を有する、
固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）法。
【請求項４２】
前記脱保護ステップおよび／または前記カップリングステップ中に、マイクロ波エネルギーを適用するステップをさらに含む、請求項４１に記載のＳＰＰＳ法。
【請求項４３】
前記脱保護ステップおよび／または前記カップリングステップを、約７０℃〜約１１０℃の温度で実行することを含む、請求項４１に記載のＳＰＰＳ法。
【請求項４４】
前記洗浄ステップの前および／または前記洗浄ステップ中に前記溶媒混合物を希釈するステップをさらに含む、請求項４１に記載のＳＰＰＳ法。
【請求項４５】
前記脱保護ステップ、前記洗浄ステップ、および前記カップリングステップの後に、前記固相樹脂から前記ペプチドを切断するステップをさらに含む、請求項４１に記載のＳＰＰＳ法。
【請求項４６】
Ｎ−ホルミルモルホリンと前記アルコキシベンゼン系化合物との前記混合物を含む前記溶媒系の存在下で脱保護するステップを含む、請求項４１に記載のＳＰＰＳ法。
【請求項４７】
Ｎ−ホルミルモルホリンと前記アルコキシベンゼン系化合物との前記混合物を含む前記溶媒系の存在下で洗浄するステップを含む、請求項４１に記載のＳＰＰＳ法。
【請求項４８】
Ｎ−ホルミルモルホリンと前記アルコキシベンゼン系化合物との前記混合物を含む前記溶媒系の存在下でカップリングするステップを含む、請求項４１に記載のＳＰＰＳ法。
【請求項４９】
Ｎ−ホルミルモルホリンと前記アルコキシベンゼン系化合物との前記混合物を含む前記溶媒系の存在下で脱保護するステップ、洗浄するステップ、およびカップリングするステップを含む、請求項４１に記載のＳＰＰＳ法。
【請求項５０】
前記溶媒系が、約２０重量％〜約５０重量％のＮ−ホルミルモルホリンおよび約５０重量％〜約８０重量％の前記アルコキシベンゼン系化合物を含む、請求項４１に記載のＳＰＰＳ法。
【請求項５１】
前記溶媒混合物が、約９３℃またはそれより高い引火点を有する、請求項４１に記載のＳＰＰＳ法。
【請求項５２】
前記アルコキシベンゼン系化合物が、式１：
【化２６】
2021526508.tif 000033
の化合物を含み、式中、
各Ｒ１は独立して−ＯＲであり、ＲはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、
各Ｒ２は独立して水素であるか、またはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、
ｍは、１または２であり、
ｎは４または５であり、
ｍ＋ｎは６である、
請求項４１に記載のＳＰＰＳ法。
【請求項５３】
ｍが２である、請求項５２に記載のＳＰＰＳ法。
【請求項５４】
各Ｒがメチルである、請求項５３に記載のＳＰＰＳ法。
【請求項５５】
各Ｒ２が水素である、請求項５３に記載のＳＰＰＳ法。
【請求項５６】
Ｒ２のうちの１つまたは複数がＣ１〜Ｃ４アルキルである、請求項５３に記載のＳＰＰＳ法。
【請求項５７】
前記アルコキシベンゼン系化合物が、１，３−ジメトキシベンゼン：
【化２７】
2021526508.tif 000034
であり、前記溶媒混合物が、約９３℃またはそれより高い引火点を有する、請求項４１に記載のＳＰＰＳ法。
【請求項５８】
約２０重量％〜約５０重量％のＮ−ホルミルモルホリンおよび約５０重量％〜約８０重量％の１，３−ジメトキシベンゼンを含む、請求項５７に記載のＳＰＰＳ法。
【請求項５９】
約２５重量％〜約５０重量％のＮ−ホルミルモルホリンおよび約５０重量％〜約７５重量％の１，３−ジメトキシベンゼンを含む、請求項５８に記載のＳＰＰＳ法。
【請求項６０】
ｍが１である、請求項５２に記載のＳＰＰＳ法。
【請求項６１】
Ｒがメチルである、請求項６０に記載のＳＰＰＳ法。
【請求項６２】
各Ｒ２がＨである、請求項６１に記載のＳＰＰＳ法。
【請求項６３】
Ｒ２のうちの１つまたは複数がＣ１〜Ｃ４アルキルである、請求項６１に記載のＳＰＰＳ法。
【請求項６４】
１つのＲ２がＣ１〜Ｃ４アルキルであり、残りのＲ２が水素である、請求項６１に記載のＳＰＰＳ法。
【請求項６５】
１つのＲ２がメチルであり、残りのＲ２が水素である、請求項６４に記載のＳＰＰＳ法。
【請求項６６】
前記アルコキシベンゼン系化合物が、式２：
【化２８】
2021526508.tif 000035
のアニソール化合物である、請求項４１に記載のＳＰＰＳ法。
【請求項６７】
前記アルコキシベンゼン系化合物が、式３：
【化２９】
2021526508.tif 000036
のアニソール化合物である、請求項４１に記載のＳＰＰＳ法。
【請求項６８】
前記溶媒混合物が、ＳＰＰＳに好適な粘度を有し、ポリスチレン樹脂および／またはＰＥＧ樹脂と適合性がある、請求項４１に記載のＳＰＰＳ法。
【請求項６９】
前記溶媒混合物が、ＤＭＦ、ＤＭＡ、およびＮＭＰからなる群より選択される従来の溶媒に匹敵する純度収率をもたらす、請求項４１に記載のＳＰＰＳ法。
【請求項７０】
前記溶媒混合物が、≧０．２Ｍの濃度でＦｍｏｃアミノ酸を溶解する、請求項４１に記載のＳＰＰＳ法。
【請求項７１】
Ｎ−ホルミルモルホリンおよび前記アルコキシベンゼン系化合物がそれぞれ、約１５０℃またはそれより高い沸点を有する、請求項４１に記載のＳＰＰＳ法。
【請求項７２】
前記溶媒混合物が、ＳＰＰＳに好適な粘度を有し、ポリスチレン樹脂とＰＥＧ樹脂の両方と適合性があり、ＤＭＦ、ＤＭＡ、およびＮＭＰからなる群より選択される従来の溶媒に匹敵する純度収率をもたらす、請求項４１に記載のＳＰＰＳ法。
【請求項７３】
固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）のための組成物であって、前記組成物は、
固相樹脂に連結したアミノ酸と；
Ｎ−ホルミルモルホリンおよびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物を含む、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）のための溶媒系とを含み、
前記溶媒混合物は、高いＳＰＰＳ温度での使用に好適な約１４０℃またはそれより高い沸点を有する、
組成物。
【請求項７４】
前記溶媒系が、約２０重量％〜約５０重量％のＮ−ホルミルモルホリンおよび約５０重量％〜約８０重量％の前記アルコキシベンゼン系化合物を含む、請求項７３に記載の組成物。
【請求項７５】
前記溶媒混合物が、約９３℃またはそれより高い引火点を有する、請求項７３に記載の組成物。
【請求項７６】
前記アルコキシベンゼン系化合物が、式１：
【化３０】
2021526508.tif 000037
の化合物を含み、式中、
各Ｒ１は独立して−ＯＲであり、ＲはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、
各Ｒ２は独立して水素であるか、またはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、
ｍは、１または２であり、
ｎは４または５であり、
ｍ＋ｎは６である、
請求項７３に記載の組成物。
【請求項７７】
ｍが２である、請求項７６に記載の組成物。
【請求項７８】
各Ｒがメチルである、請求項７７に記載の組成物。
【請求項７９】
各Ｒ２が水素である、請求項７７に記載の組成物。
【請求項８０】
Ｒ２のうちの１つまたは複数がＣ１〜Ｃ４アルキルである、請求項７７に記載の組成物。
【請求項８１】
前記アルコキシベンゼン系化合物が、１，３−ジメトキシベンゼン：
【化３１】
2021526508.tif 000038
であり、
前記溶媒混合物が、約９３℃またはそれより高い引火点を有し、
前記溶媒系が、約２０重量％〜約５０重量％のＮ−ホルミルモルホリンおよび約５０重量％〜約８０重量％の１，３−ジメトキシベンゼンを含む、
請求項７３に記載の組成物。
【請求項８２】
約２０重量％〜約５０重量％のＮ−ホルミルモルホリンおよび約５０重量％〜約８０重量％の１，３−ジメトキシベンゼンを含む、請求項８１に記載の組成物。
【請求項８３】
約２５重量％〜約５０重量％のＮ−ホルミルモルホリンおよび約５０重量％〜約７５重量％の１，３−ジメトキシベンゼンを含む、請求項８２に記載の組成物。
【請求項８４】
ｍが１である、請求項７６に記載の組成物。
【請求項８５】
Ｒがメチルである、請求項８４に記載の組成物。
【請求項８６】
各Ｒ２がＨである、請求項８５に記載の組成物。
【請求項８７】
Ｒ２のうちの１つまたは複数がＣ１〜Ｃ４アルキルである、請求項８５に記載の組成物。
【請求項８８】
１つのＲ２がＣ１〜Ｃ４アルキルであり、残りのＲ２が水素である、請求項８５に記載の組成物。
【請求項８９】
１つのＲ２がメチルであり、残りのＲ２が水素である、請求項８８に記載の組成物。
【請求項９０】
前記アルコキシベンゼン系化合物が、式２：
【化３２】
2021526508.tif 000039
のアニソール化合物である、請求項７３に記載の組成物。
【請求項９１】
前記アルコキシベンゼン系化合物が、式３：
【化３３】
2021526508.tif 000040
のアニソール化合物である、請求項７３に記載の組成物。
【請求項９２】
前記溶媒混合物が、ＳＰＰＳに好適な粘度を有し、ポリスチレン樹脂とＰＥＧ樹脂の両方と適合性があり、ＤＭＦ、ＤＭＡ、およびＮＭＰからなる群より選択される従来の溶媒に匹敵する純度収率をもたらす、請求項７３に記載の組成物。
【請求項９３】
固相樹脂に連結したペプチド鎖と；
Ｎ−ホルミルモルホリンおよびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物を含む、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）のための溶媒系と
を含む、組成物。
【請求項９４】
前記溶媒系が、約２０重量％〜約５０重量％のＮ−ホルミルモルホリンおよび約５０重量％〜約８０重量％の前記アルコキシベンゼン系化合物を含む、請求項９３に記載の組成物。
【請求項９５】
前記溶媒混合物が、約９３℃またはそれより高い引火点を有する、請求項９３に記載の組成物。
【請求項９６】
前記アルコキシベンゼン系化合物が、式１：
【化３４】
2021526508.tif 000041
の化合物を含み、式中、
各Ｒ１は独立して−ＯＲであり、ＲはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、
各Ｒ２は独立して水素であるか、またはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、
ｍは、１または２であり、
ｎは４または５であり、
ｍ＋ｎは６である、
請求項９３に記載の組成物。
【請求項９７】
ｍが２である、請求項９６に記載の組成物。
【請求項９８】
各Ｒがメチルである、請求項９７に記載の組成物。
【請求項９９】
各Ｒ２が水素である、請求項９８に記載の組成物。
【請求項１００】
Ｒ２のうちの１つまたは複数がＣ１〜Ｃ４アルキルである、請求項９８に記載の組成物。
【請求項１０１】
前記アルコキシベンゼン系化合物が、１，３−ジメトキシベンゼン：
【化３５】
2021526508.tif 000042
である、請求項９３に記載の組成物。
【請求項１０２】
約２０重量％〜約５０重量％のＮ−ホルミルモルホリンおよび約５０重量％〜約８０重量％の１，３−ジメトキシベンゼンを含む、請求項１０１に記載の組成物。
【請求項１０３】
約２５重量％〜約５０重量％のＮ−ホルミルモルホリンおよび約５０重量％〜約７５重量％の１，３−ジメトキシベンゼンを含む、請求項１０２に記載の組成物。
【請求項１０４】
ｍが１である、請求項９６に記載の組成物。
【請求項１０５】
Ｒがメチルである、請求項１０４に記載の組成物。
【請求項１０６】
各Ｒ２がＨである、請求項１０５に記載の組成物。
【請求項１０７】
Ｒ２のうちの１つまたは複数がＣ１〜Ｃ４アルキルである、請求項１０５に記載の組成物。
【請求項１０８】
１つのＲ２がＣ１〜Ｃ４アルキルであり、残りのＲ２が水素である、請求項１０５に記載の組成物。
【請求項１０９】
１つのＲ２がメチルであり、残りのＲ２が水素である、請求項１０８に記載の組成物。
【請求項１１０】
前記アルコキシベンゼン系化合物が、式２：
【化３６】
2021526508.tif 000043
のアニソール化合物である、請求項９３に記載の組成物。
【請求項１１１】
前記アルコキシベンゼン系化合物が、式３：
【化３７】
2021526508.tif 000044
のアニソール化合物である、請求項９３に記載の組成物。
【請求項１１２】
前記溶媒混合物が、ＳＰＰＳに好適な粘度を有し、ポリスチレン樹脂とＰＥＧ樹脂の両方と適合性があり、ＤＭＦ、ＤＭＡ、およびＮＭＰからなる群より選択される従来の溶媒に匹敵する純度収率をもたらす、請求項９３に記載の組成物。
【請求項１１３】
固相樹脂と；
Ｎ−ホルミルモルホリンおよびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物を含む、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）のための溶媒系と
を含む、組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年６月１４日出願の固相ペプチド合成のための溶媒系（Ｓｏｌｖｅｎｔ  Ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）に関する米国仮特許出願第６２／６８５，０５２号の利益を主張し、その開示はこれにより参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
Ｂｒｕｃｅ  Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ博士による１９６３年の導入以来、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）は、合成ペプチドを生成するための強力な技術であった。固体樹脂上でペプチドを段階的に集合化させるプロセスにより、各反応ステップ間の単離および洗浄が大幅に簡素化される。この技術の使用により、かなり長く複雑なペプチドを大規模でも合成することが可能になった。
【０００３】
ＳＰＰＳで利用される主要な化学は、オルトゴナルな酸不安定側鎖保護基（トリチル、ｔ−ブチル、Ｐｂｆなど）を伴うＦｍｏｃ保護基に基づく。
【０００４】
標準的な樹脂は、ポリスチレン単位およびより少ない程度でポリエチレングリコール（ＰＥＧ）単位から構成される。
【０００５】
過去２０年間において、ＳＰＰＳは、温度を上昇させるためのマイクロ波ベースのシステムおよび他の技術の開発によって強化されてきた。これらの技術により、反応速度が改善し、かつ高温での洗浄が改善する。
【０００６】
ＳＰＰＳにおいて使用される主な溶媒は、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、およびＮ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）である。それらの使用は、Ｆｍｏｃアミノ酸および他の出発試薬を効果的に溶解し、使用される樹脂を適切に膨潤させ、集合化中の成長しているペプチド鎖の凝集を最小限に抑え、合成ステップ間において樹脂を効果的に洗浄してきれいにするする能力から発展している。これらの特徴それぞれは、ペプチドを高品質で適切に集合化させるために不可欠である。これは、プロセスがすべて効率的に進行しなければならない多くの反復ステップを必要とするという事実につきものである。
【０００７】
さらに、ＳＰＰＳのための良好な溶媒はまた、ある特定の物理的特性を有していなければならない。ある特定の物理的特性としては、低粘度および比較的高い沸点（＞１００℃）が挙げられる。ＳＰＰＳは大部分が自動化されており、多くの濾過ステップが必要であるため、低粘度が要求される。より高い粘度では、流速および排出が不十分になり、合成の中断および工学的課題につながる可能性がある。反応条件が日常的に９０〜１００℃に加熱される高温アプローチに系を適合させるには、より高い沸点が要求される。
【０００８】
従来のＳＰＰＳ溶媒（例えば、ＤＭＦ、ＤＭＡ、ＮＭＰ）は、欧州のＲＥＡＣＨ化学物質規則によって生殖毒性があるものとして分類されてきた。したがって、ＤＭＦ、ＤＭＡ、ＮＭＰは高懸念候補リスト（Ｃａｎｄｉｄａｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｉｇｈ  Ｃｏｎｃｅｒｎ  Ｌｉｓｔ）に掲載されており、したがって代替溶媒の必要性が高まっている。
【０００９】
今日まで、ＳＰＰＳの代替溶媒を開発するための多数の試みがあった。これらの取り組みのうちの一部は、水などの代替溶媒中でうまく作用する新しい保護基戦略および／または樹脂の開発に焦点を合わせている。しかし、Ｆｍｏｃアミノ酸およびポリスチレン樹脂の世界的な供給は、良好な供給、品質、低コストにより広範囲に発展してきた。したがって、Ｆｍｏｃアミノ酸およびポリスチレン樹脂と適合性がある溶媒系には大きな利点がある。
【００１０】
Ｆｍｏｃ誘導体および標準樹脂（ポリスチレンおよびＰＥＧ）を依然として使用しながら、代替溶媒が検討されてきた。トルエンとジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）との混合物は、高温でのＦｍｏｃ  ＳＰＰＳプロセスにおいて開示された。Ｌ．  Ｖａｒａｎｄａ  ａｎｄ  Ｍ．  Ｍｉｒａｎｄａ，  Ｊ．  Ｐｅｐｔ．  Ｒｅｓ．，  ｖｏｌ．  ５０，  ｎｏ．  ２，  ｐｐ．  １０２−１０８，  １９９７。しかし、この研究で得られた結果は、純度が低いことを示していた。さらに、トルエンはその毒性および潜在的な生殖毒性としての分類のため、あまり望ましくない溶媒である。
【００１１】
テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）およびアセトニトリル（ＡＣＮ）の使用は、同様に、ＳＰＰＳのためのより環境に優しい溶媒として開示されている。Ｙ．  Ｊａｄ，  Ｇ．  Ａｃｏｓｔａ，  Ｓ．  Ｋｈａｔｔａｂ，  Ｂ．  ｄｅ  ｌａ  Ｔｏｒｒｅ，  Ｔ．  Ｇｏｖｅｎｄｅｒ，  Ｈ．  Ｋｒｕｇｅｒ，  Ａ．  Ｅｌ−Ｆａｈａｍ  ａｎｄ  Ｆ．  Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ，  Ｏｒｇ．  Ｂｉｏｍｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，  ｖｏｌ．  １３，  ｎｏ．  ８，  ｐｐ．  ２３９３−２３９８，  ２０１５。しかし、これらの溶媒はどちらも、１００℃未満の沸点を有し、かついくつかの毒性の問題がある。
【００１２】
提案された改善として、ＳＰＰＳプロセスのための酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）洗浄ステップと組み合わせた溶媒としての２−メチルテトラヒドロフラン（２−Ｍｅ−ＴＨＦ）が後に発表された。Ｙ．  Ｊａｄ，  Ｇ．  Ａｃｏｓｔａ，  Ｔ．  Ｇｏｖｅｎｄｅｒ，  Ｈ．  Ｋｒｕｇｅｒ，  Ａ．  Ｅｌ−Ｆａｈａｍ，  Ｂ．  ｄｅ  ｌａ  Ｔｏｒｒｅ  ａｎｄ  Ｆ．  Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ，  ＡＣＳ  Ｓｕｓｔａｉｎａｂｌｅ  Ｃｈｅｍ．  Ｅｎｇ．，  ｖｏｌ．  ４，  ｎｏ．  １２，  ｐｐ．  ６８０９−６８１４，  ２０１６。しかし、２−Ｍｅ−ＴＨＦは、低沸点（８０℃）によって制限されており、ポリスチレン樹脂には不適であることが判明した。さらに、ＣｈｅｍＭａｔｒｉｘなどのＰＥＧ系樹脂を使用して高温にした場合でも、ＤＭＦを使用した場合よりも純度が低かった。
【００１３】
より最近では、γ−バレロラクトンおよびＮ−ホルミルモルホリン（ＮＦＭ）を含む、ＳＰＰＳのための追加の溶媒が検討された。Ａ．  Ｋｕｍａｒ，  Ｙ．  Ｊａｄ，  Ａ．  Ｅｌ−Ｆａｈａｍ，  Ｂ．  ｄｅ  ｌａ  Ｔｏｒｒｅ  ａｎｄ  Ａ．  Ｆ．，  Ｔｅｔｔ．  Ｌｅｔｔｅｒｓ，  ｖｏｌ．  ５８，  ｎｏ．  ３０，  ｐｐ．  ２９８６−２９８８，  ２０１７；  Ｙ．  Ｊａｄ，  Ｔ．  Ｇｏｖｅｎｄｅｒ，  Ｋ．  Ｈ．Ｇ．，  Ａ．  Ｅｌ−Ｆａｈａｍ，  Ｂ．  ｄｅ  ｌａ  Ｔｏｒｒｅ  ａｎｄ  Ｆ．  Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ，  Ｏｒｇ．  Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｒｅｓ．  Ｄｅｖ．，  ｖｏｌ．  ２１，  ｎｏ．  ３，  ｐｐ．  ３６５−３６９，  ２０１７。γ−バレロラクトンとＮＦＭはどちらも、動物実験で毒性が低く、一方でまた沸点が高いため、ＳＰＰＳの魅力的な代替的溶媒になる。これらの溶媒は、２−Ｍｅ−ＴＨＦを使用した場合よりも高い純度で、ポリスチレン樹脂上にて困難なペプチドを合成することが判明したが、ＤＭＦを使用した場合よりも依然として実質的に純度が低い。γ−バレロラクトンとＮＦＭはどちらも、ＤＭＦ中におけるよりも大幅に低い０．２Ｍ濃度でＦｍｏｃアミノ酸を溶解させることができない。また、ＮＦＭは、融点（２０〜２３℃）が室温に近く、したがって粘度が非常に高く、固化する可能性があるため、取り扱いが困難であるというさらなる望ましくない特性を有する。したがって、わずかにより涼しい環境では、溶媒として使用する前に加温ステップが必要になる。このような理由によって、著者らはγ−バレロラクトンを好ましい選択として推奨している。
【００１４】
別の報告では、炭酸プロピレンの使用が、ＳＰＰＳのためのグリーン（ｇｒｅｅｎ）溶媒として検討されてきた。Ｓ．  Ｌａｗｒｅｎｓｏｎ，  Ｒ．  Ａｒａｖ  ａｎｄ  Ｎ．  Ｍ．，  Ｇｒｅｅｎ  Ｃｈｅｍ．，  ｖｏｌ．  １９，  ｐ．  １６８５，  ２０１７。しかし、炭酸プロピレンはポリスチレン樹脂を十分に膨潤させないため、ＰＥＧ系樹脂を使用する必要がある。Ｓ．  Ｌａｗｒｅｎｓｏｎ，  Ｍ．  Ｎｏｒｔｈ，  Ｆ．  Ｐｅｉｇｎｅｇｕｙ  ａｎｄ  Ａ．  Ｒｏｕｔｌｅｄｇｅ，  Ｇｒｅｅｎ  Ｃｈｅｍ．，  ｖｏｌ．  １９，  ｐｐ．  ９５２−９６２，  ２０１７。さらに、Ｆｍｏｃアミノ酸は、炭酸プロピレンへの溶解度が低いため、溶解のために活性化溶液と予備混合する必要がある。
この溶媒（炭酸プロピレン）は、ある特定の場合にはＤＭＦに類似の結果を提供し、低毒性および高沸点および高引火点などの好ましい特性を有することが判明した。しかし、この溶媒にはエステル部分が含まれているため、特により高温で反応する可能性がある。さらに、Ｆｍｏｃアミノ酸の溶解度は、ＤＭＦと比較してγ−バレロラクトンではより低いように見える。
一般的な溶媒を、以下の表に評価した。
ＡＣＳ溶媒選択ガイド（１＝最良、１０＝最悪）
【表６】
2021526508.tif 000002
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】Ｓ．Ｌａｗｒｅｎｓｏｎら、Ｇｒｅｅｎ  Ｃｈｅｍ．（２０１７）１９巻、１６８５頁
【非特許文献２】Ｓ．Ｌａｗｒｅｎｓｏｎら、Ｇｒｅｅｎ  Ｃｈｅｍ．（２０１７）１９巻、９５２〜９６２頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本開示は、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）のための溶媒系に関する。例示的実施形態では、溶媒系は、モルホリン系化合物、例えば、Ｎ−ホルミルモルホリン（本明細書ではＮＦＭとも呼ばれる）、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物を含む。例えば、溶媒混合物は、Ｎ−ホルミルモルホリンおよび１，３−ジメトキシベンゼンを含むことができる。別の例として、溶媒混合物は、Ｎ−ホルミルモルホリンおよびアニソール系化合物を含むことができる。他の例示的実施形態では、溶媒混合物は、Ｎ−ブチルピロリジノン（本明細書ではＮＢＰとも呼ばれる）、ならびにアルコキシベンゼン系化合物、例として、１，３−ジメトキシベンゼン、および／またはアニソール系化合物を含むことができる。
【００１７】
本開示はまた、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）法に関する。例示的実施形態では、ＳＰＰＳ法は、固相樹脂に連結した第１のアミノ酸を、保護化学基を除去することにより脱保護して、脱保護アミノ酸を形成するステップと；脱保護アミノ酸を洗浄するステップと；第２のアミノ酸を脱保護アミノ酸にカップリングして、第１のアミノ酸および第２のアミノ酸からペプチドを形成するステップと；脱保護ステップ、洗浄ステップ、およびカップリングステップを繰り返して、第１のアミノ酸、第２のアミノ酸、および引き続くアミノ酸を含むペプチドを形成するステップとを含む。この方法において、脱保護ステップ、洗浄ステップ、および／またはカップリングステップは、モルホリン系化合物、例えばＮ−ホルミルモルホリン、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物を含む溶媒系の存在下で実施される。この方法の他の例示的実施形態では、脱保護ステップ、洗浄ステップ、および／またはカップリングステップは、ＮＢＰおよびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物を含む溶媒系の存在下で実施される。
【００１８】
本開示はまた、固相樹脂に連結したアミノ酸と；モルホリン系化合物、例えばＮ−ホルミルモルホリン、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物を含む、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）のための溶媒系とを含む、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）のための組成物に関する。他の例示的実施形態は、固相樹脂に連結したアミノ酸と；ＮＢＰおよびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物を含む、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）のための溶媒系とを含む、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）のための組成物に関する。
【００１９】
本開示はまた、固相樹脂に連結したペプチド鎖と；モルホリン系化合物、例えばＮ−ホルミルモルホリン、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物を含む、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）のための溶媒系とを含む組成物に関する。他の例示的実施形態は、固相樹脂に連結したペプチド鎖と；ＮＢＰおよびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物を含む、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）のための溶媒系とを含む組成物に関する。
【００２０】
本開示はまた、ＳＰＰＳに好適な粘度を有し、ポリスチレン樹脂とＰＥＧ樹脂の両方と適合性があり、ＤＭＦ、ＤＭＡ、およびＮＭＰからなる群より選択される従来の溶媒に少なくとも匹敵する純度収率（ｐｕｒｉｔｙ  ｙｉｅｌｄ）をもたらす、モルホリン系化合物、例としてＮ−ホルミルモルホリンと、アルコキシベンゼン系化合物、例としてジメトキシベンゼン化合物および／またはアニソール化合物との溶媒混合物を利用して、かつ／またはＮＢＰと、アルコキシベンゼン系化合物、例としてジメトキシベンゼン化合物および／またはアニソール化合物との溶媒混合物を利用して、３０℃より高い高温にて実施される、固相ペプチド合成法に関する。
【００２１】
本開示はまた、モルホリン系化合物、例としてＮ−ホルミルモルホリンと、アルコキシベンゼン系化合物、例としてジメトキシベンゼン化合物および／またはアニソール化合物と、を組み合わせて、かつ／またはＮＢＰと、アルコキシベンゼン系化合物、例としてジメトキシベンゼン化合物および／またはアニソール化合物と、を組み合わせて、脱保護に好適な溶媒を形成するステップと、カップリングステップと、洗浄ステップとを含む、高温で固相ペプチド合成反応を実施する方法に関する。
【００２２】
本開示はまた、モルホリン系化合物、例としてＮ−ホルミルモルホリンと、アルコキシベンゼン系化合物、例としてジメトキシベンゼン化合物および／またはアニソール化合物との組合せを含む、高温での固相ペプチド合成のための溶媒系、ならびに／または、ＮＢＰと、アルコキシベンゼン系化合物、例としてジメトキシベンゼン化合物および／またはアニソール化合物との組合せを含む、高温での固相ペプチド合成のための溶媒系に関し、溶媒系は、固相ペプチド合成に好適な粘度を有し、溶媒系は、ポリスチレン樹脂とＰＥＧ樹脂のどちらとも適合性があり、溶媒系は、ＤＭＦ、ＤＭＡ、およびＮＭＰからなる群より選択される従来の溶媒に少なくとも匹敵する純度収率をもたらすことができる。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】図１は、表１の項目１に記載の、溶媒としてＤＭＦおよびリンクアミドＰｒｏＴｉｄｅ樹脂を使用する、６５−７４ＡＣＰのＳＰＰＳ合成についての高速液体クロマトグラフである。
【００２４】
【図２】図２は、表１の項目２に記載の、溶媒として３５％ＮＦＭ／アニソールおよびリンクアミドＰｒｏＴｉｄｅ樹脂を用いた、６５−７４ＡＣＰのＳＰＰＳ合成についての高速液体クロマトグラフである。
【００２５】
【図３】図３は、表１の項目３に記載の、溶媒として２５％ＮＦＭ／１，２−ジメトキシベンゼン（１，２−ＤＭＢ）およびリンクアミドＭＢＨＡ  ＰＳ樹脂を用いた、６５−７４ＡＣＰのＳＰＰＳ合成についての高速液体クロマトグラフである。
【００２６】
【図４】図４は、表１の項目４に記載の、溶媒として２５％ＮＦＭ／１，３−ジメトキシベンゼン（１，３−ＤＭＢ）およびリンクアミドＭＢＨＡ  ＰＳ樹脂を用いた、６５−７４ＡＣＰのＳＰＰＳ合成についての高速液体クロマトグラフである。
【００２７】
【図５】図５は、表２の項目１に記載の、溶媒としてＤＭＦおよびリンクアミドＰｒｏＴｉｄｅ樹脂を用いた、ＪＲ  １０ｍｅｒのＳＰＰＳ合成についての高速液体クロマトグラフである。
【００２８】
【図６】図６は、表２の項目２に記載の、溶媒として２５％ＮＦＭ／１，３−ジメトキシベンゼン（１，３−ＤＭＢ）およびリンクアミドＰｒｏＴｉｄｅ樹脂を用いた、ＪＲ  １０ｍｅｒのＳＰＰＳ合成についての高速液体クロマトグラフである。
【００２９】
【図７】図７は、表３の項目１に記載の、溶媒としてＤＭＦおよびリンクアミドＭＢＨＡ  ＰＳ樹脂を用いた、チモシンのＳＰＰＳ合成についての高速液体クロマトグラフである。
【００３０】
【図８】図８は、表３の項目２に記載の、溶媒として２５％ＮＦＭ／アニソールおよびリンクアミドＭＢＨＡ  ＰＳ樹脂を用いた、チモシンのＳＰＰＳ合成についての高速液体クロマトグラフである。
【００３１】
【図９】図９は、表３の項目３に記載の、溶媒としてＤＭＦおよびリンクアミドＰｒｏＴｉｄｅ樹脂を用いた、チモシンのＳＰＰＳ合成についての高速液体クロマトグラフである。
【００３２】
【図１０】図１０は、表３の項目４に記載の、溶媒として２５％ＮＦＭ／アニソールおよびリンクアミドＰｒｏＴｉｄｅ樹脂を用いた、チモシンのＳＰＰＳ合成についての高速液体クロマトグラフである。
【００３３】
【図１１】図１１は、表３の項目５に記載の、溶媒として２５％ＮＦＭ／１，３−ジメトキシベンゼン（１，３−ＤＭＢ）およびリンクアミドＰｒｏＴｉｄｅ樹脂を用いた、チモシンのＳＰＰＳ合成についての高速液体クロマトグラフである。
【００３４】
【図１２】図１２は、表４の項目１に記載の、溶媒としてＤＭＦおよびリンクアミドＰｒｏＴｉｄｅ樹脂を用いた、ＡＢＣ−２０ｍｅｒのＳＰＰＳ合成についての高速液体クロマトグラフである。
【００３５】
【図１３】図１３は、表４の項目２に記載の、溶媒として２５％ＮＦＭ／アニソールおよびリンクアミドＰｒｏＴｉｄｅ樹脂を用いた、ＡＢＣ−２０ｍｅｒのＳＰＰＳ合成についての高速液体クロマトグラフである。
【００３６】
【図１４】図１４は、表４の項目３に記載の、溶媒として２５％ＮＦＭ／１，３−ジメトキシベンゼン（１，３−ＤＭＢ）およびリンクアミドＰｒｏＴｉｄｅ樹脂を用いた、ＡＢＣ−２０ｍｅｒのＳＰＰＳ合成についての高速液体クロマトグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
本発明の上記および他の態様、特質、および利点は、以下の実施形態の詳細な説明から明らかになるであろう。本発明は、以下の実施形態に限定されず、本発明の範囲から逸脱することなく、当業者によって異なる方法で具体化され得ることが理解されるべきである。むしろ、実施形態は、完全な開示のために、かつ当業者による本発明の完全な理解を提供するために提供される。本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によってのみ定義されるべきである。
【００３８】
本開示は、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）のための溶媒系に関する。例示的実施形態では、溶媒系は、モルホリン系化合物、例えば、Ｎ−ホルミルモルホリン（ＮＦＭ）、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物を含む。他の例示的実施形態では、溶媒系は、Ｎ−ブチルピロリジノン（ＮＢＰ）、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物を含む。
【００３９】
例えば、溶媒混合物は、Ｎ−ホルミルモルホリンおよび１，３−ジメトキシベンゼンを含むことができる。別の例として、溶媒混合物は、Ｎ−ホルミルモルホリンおよびアニソール系化合物を含むことができる。
【００４０】
他の例示的実施形態では、溶媒混合物は、Ｎ−ブチルピロリジノン（本明細書ではＮＢＰとも呼ばれる）、ならびに１，３−ジメトキシベンゼン、および／またはアニソール系化合物を含むことができる。
【００４１】
溶媒系は、独自の特性を呈することができ、ＤＭＦ、ＤＭＡ、および／またはＮＭＰなどの従来のＳＰＰＳ溶媒を置き換えることができる。溶媒系は、ポリスチレン系樹脂および／またはＰＥＧ系樹脂と適合性があり得る。溶媒系は、ポリスチレン系樹脂および／またはＰＥＧ系樹脂を用いたＳＰＰＳのステップ（個別にまたは組み合わせて、脱保護、カップリング、および／または洗浄など）に使用することができる。溶媒系は、マイクロ波エネルギーを使用する方法でも使用することができる。さらに、溶媒系は、標準的なＦｍｏｃアミノ酸を、例えば、これに限定されるものではないが、≧０．２Ｍの濃度で、効果的に溶解することができる。
【００４２】
加えて、溶媒系は、ＳＰＰＳ法における使用に好適な低粘度を有することができる。例えば、溶媒系および／または溶媒混合物は、ＮＦＭおよび／またはＮＢＰ単独の粘度よりも低い粘度を有することができ、ＳＰＰＳに関連するプロセスなどの自動化プロセスでの使用に好適であり得る。
【００４３】
溶媒系はまた、毒性がより低く（例えば、関連する政府の規制に従って非生殖毒性として分類することができる）、かつ／またはＤＭＦ、ＤＭＡ、および／またはＮＭＰなどの従来のＳＰＰＳ溶媒よりもグリーン（より環境に優しいもの）であり得る。
【００４４】
ＳＰＰＳ溶媒系は、ＳＰＰＳにおけるマイクロ波エネルギーの使用に関連する高温を含む、高いＳＰＰＳ温度で使用することができる。例えば、ＳＰＰＳ溶媒系は、これらに限定されるものではないが、約３０℃またはそれよりも高い、例えば、約３０℃〜約１２０℃、例えば約４０℃〜約１２０℃、例えば約７０℃〜約１２０℃、例えば約７０℃〜約１１０℃、例えば約９０℃〜約１２０℃、および例えば約９０℃〜約１１０℃の温度で使用することができる。
【００４５】
溶媒混合物は、本明細書に記載の高いＳＰＰＳ温度で、例えば、これらに限定されるものではないが、約３０℃またはそれよりも高い、例えば、約３０℃〜約１２０℃、例えば約４０℃〜約１２０℃、例えば約７０℃〜約１２０℃、例えば約７０℃〜約１１０℃、例えば約９０℃〜約１２０℃、および例えば約９０℃〜約１１０℃の温度で使用するのに好適であるような沸点などの特性を有する。
【００４６】
例えば、溶媒混合物は、ＳＰＰＳ反応ステップのうちの１つまたは複数のおよその反応温度とほぼ同じおよび／またはそれよりも高い沸点を有することができる。非限定的な例として、より高い温度は、例えば、約７０℃〜約１１０℃の、カルボジイミド系活性化化学と関連付けることができる。したがって、例示的実施形態では、溶媒混合物は、この範囲よりも高い沸点を有することができる。他の例示的実施形態では、溶媒混合物は、約１００℃より高い、例えば、約１０５℃より高い、および別の例として、約１１０℃より高い、またはそれより高い沸点を有することができる。
【００４７】
例示的実施形態では、溶媒混合物は、少なくとも約１４０℃またはそれより高い沸点、例えば、少なくとも約１５０℃またはそれより高い沸点を有することができる。溶媒混合物は、本開示はそれに限定されないが、最大約２５０℃またはそれより高い、例えば、最大約３００℃の沸点を有することができる。
【００４８】
また、例示的実施形態では、溶媒混合物の少なくとも１つの溶媒、および一部の実施形態では、溶媒混合物の各溶媒は、少なくとも約１４０℃またはそれより高い沸点、例えば、少なくとも約１５０℃またはそれより高い沸点を有することができる。溶媒混合物の少なくとも１つの溶媒、および一部の実施形態では、溶媒混合物の各溶媒は、本開示はそれに限定されないが、最大約２５０℃またはそれより高い、例えば、最大約３００℃の沸点を有することができる。
【００４９】
溶媒混合物は、ＤＭＦ、ＤＭＡ、および／またはＮＭＰなどの従来の溶媒と少なくとも同じくらい効果的であり得る。非限定的な例として、本開示の溶媒混合物は、ＤＭＦ、ＤＭＡ、および／またはＮＭＰなどの従来のＳＰＰＳ溶媒の収率に匹敵する、および／またはそれよりも優れた純度収率をもたらすことができる。本開示の溶媒混合物は、一般に、限定するものではないが、約７０％もしくはそれより高い、例えば、約７５％もしくそれより高い、約８０％もしくそれより高い、約８５％もしくそれより高い、および／または約９０％もしくそれより高い純度収率を提供することができる。当業者は、純度収率が、ＳＰＰＳ法で使用される条件、試薬、樹脂、ペプチド配列などに応じて変化する可能性があり、所与のＳＰＰＳ法の純度収率を、当技術分野で周知の技術を使用して決定することができることを理解するであろう。
【００５０】
例示的実施形態では、溶媒混合物は、例えば、政府の出荷および／または保管の、ならびにその他の、規制に準拠して、十分に高い引火点（揮発性材料の蒸気が発火源を与えられたときに発火する最低温度）を有することができる。非限定的な例では、溶媒混合物は、約９３℃またはそれより高い引火点を有することができる。引火点は、公知の試験方法を使用して、例えば、ＡＳＴＭ  Ｄ９３、Ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｔｅｓｔ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｆｌａｓｈ  Ｐｏｉｎｔ  ｂｙ  Ｐｅｎｓｋｙ−Ｍａｒｔｅｎｓ  Ｃｌｏｓｅｄ  Ｃｕｐ  Ｔｅｓｔｅｒ  （２０１３）に従って、決定することができる。
【００５１】
理論または説明に拘束されるものではないが、アルコキシベンゼン系化合物は、溶媒系において種々の利点を提供することができると考えられている。例えば、アルコキシベンゼン系化合物は、ポリスチレン系樹脂と適合性があり得、したがって、ポリスチレン系樹脂の良好な溶解度を提供し、ポリスチレン系樹脂を適切に膨潤させることができ、このことは、反応部位の接近可能性および利用可能性を高めるのに役立ち得る。アルコキシベンゼン系化合物はまた、非極性保護基（トリチル、ベンジル系保護基など）と適合性があり得、したがって、それらの良好な溶解度を提供することができる。アルコキシベンゼン系化合物はまた、ＳＰＰＳ温度が高くても比較的不活性でありかつ非反応性であり得る。アルコキシベンゼン系化合物はまた、比較的高い沸点、例えば約１４０℃およびそれより高い沸点、別の例として、約１５０℃およびそれより高い沸点を有することができ、したがって、高いＳＰＰＳ温度、例えば、これに限定されるものではないが、約７０℃〜約１１０℃の反応温度を使用するのに有用であり得る。加えて、アルコキシベンゼン系化合物は、例えば、ＮＦＭおよび／またはＮＢＰ単独と比較して比較的低い粘度を有することができ、ＳＰＰＳに関連するプロセスなどの自動化プロセスでの使用に好適であり得る。非限定的な例として、アニソールは毒性が低く、粘度が低い（２０℃で約０．９９ｍＰａ．ｓ）。また、アニソールは、比較的安価であり得、それによって費用上の利益を提供する。
【００５２】
対照的に、高温のＳＰＰＳでは、副反応のリスクが増加し、酢酸エチルなどのエステル系溶媒の存在は、エステルが成長中のペプチド鎖上の末端アミンと反応する可能性があるため、理想的ではない。例えば、末端アミンは溶液中の活性化アミノ酸（エステルとして活性化された）と反応する。また、沸点が比較的低い溶媒（沸点が約７７℃の酢酸エチルなど）は、高温でのＳＰＰＳには不適である。
【００５３】
溶媒混合物は、モルホリン系化合物、例えば、ＮＦＭを、モルホリン系化合物、例としてＮ−ホルミルモルホリン、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物１００重量％に対して、約２０重量％〜約５０重量％、例えば、約２５重量％〜約５０重量％の量で含むことができる。一部の実施形態では、溶媒混合物は、モルホリン系化合物、例えば、ＮＦＭを、溶媒混合物１００重量％に対して、約２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０重量％の量で含むことができる。さらに、一部の実施形態によれば、モルホリン系化合物、例えば、ＮＦＭは、前述の量のほぼいずれかの量から前述の量の他のほぼいずれかの量までで存在し得る。
【００５４】
溶媒混合物は、アルコキシベンゼン系化合物を、モルホリン系化合物、例えばＮＦＭ、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物１００重量％に対して、約５０重量％〜約８０重量％、例えば、約５０重量％〜約７５重量％の量で含むことができる。一部の実施形態では、溶媒混合物は、アルコキシベンゼン系化合物を、溶媒混合物１００重量％に対して、約５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、または８０重量％の量で含むことができる。さらに、一部の実施形態によれば、アルコキシベンゼン系化合物は、前述の量のほぼいずれかの量から前述の量の他のほぼいずれかの量までで存在し得る。
【００５５】
他の例示的実施形態では、溶媒混合物は、Ｎ−ブチルピロリジノン（ＮＢＰ）を、ＮＢＰおよびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物１００重量％に対して、約２０重量％〜約５０重量％、例えば、約２５重量％〜約５０重量％の量で含むことができる。一部の実施形態では、溶媒混合物は、ＮＢＰを、溶媒混合物１００重量％に対して、約２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０重量％の量で含むことができる。さらに、一部の実施形態によれば、ＮＢＰは、前述の量のほぼいずれかの量から前述の量の他のほぼいずれかの量までで存在し得る。
【００５６】
他の例示的実施形態では、溶媒混合物は、アルコキシベンゼン系化合物を、ＮＢＰおよびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物１００重量％に対して、約５０重量％〜約８０重量％、例えば、約５０重量％〜約７５重量％の量で含むことができる。一部の実施形態では、溶媒混合物は、アルコキシベンゼン系化合物を、溶媒混合物１００重量％に対して、約５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、または８０重量％の量で含むことができる。さらに、一部の実施形態によれば、アルコキシベンゼン系化合物は、前述の量のほぼいずれかの量から前述の量の他のほぼいずれかの量までで存在し得る。
【００５７】
アルコキシベンゼン系化合物は、式１：
【化１】
2021526508.tif 000003
（式中、
各Ｒ１は独立して−ＯＲであり、ＲはＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
各Ｒ２は独立して水素であるか、またはＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
ｍは、１または２であり；
ｎは４または５であり；
ｍ＋ｎは６である）
の化合物を含むことができる。
【００５８】
式１のアルコキシベンゼン系化合物は、当技術分野において公知であり、市販されており、かつ／または過度な実験をすることなく当業者が製造することができる。
【００５９】
例示的実施形態では、式１のアルコキシベンゼン系化合物は、ｍが２であるジアルコキシベンゼン系化合物であり得る。そのような実施形態では、アルコキシ置換基Ｒ１のそれぞれは、同じであっても異なっていてもよい。例えば、各Ｒ１は、独立して、メトキシ、エトキシ、プロポキシおよび／またはブトキシであり得、例えば、各Ｒは、メチルであり得る。また、ｍが２である場合、例示的実施形態では、各Ｒ２は水素であり得る。ｍが２である代替の実施形態において、１つまたは複数の、例えば、１、２、３、または４つのＲ２は、メチル、エチル、プロピルおよび／またはブチルなどのＣ１〜Ｃ４アルキルであり得、残りの任意のＲ２は、水素であり得る。
【００６０】
例示的なジアルコキシベンゼン系化合物は、以下の式：
【化２】
2021526508.tif 000004
の１，３−ジメトキシベンゼンを含む。
【００６１】
本発明者らは、ＮＦＭと１，３−ジメトキシベンゼンとを含む溶媒混合物は、約９３℃またはそれより高い引火点を有することができ、したがって、例えば、約９３℃またはそれより高い最低引火点を必要とする適用に有利であり得ることを見出した。
【００６２】
例示的実施形態では、溶媒混合物は、これらに限定されるものではないが、約２０重量％〜約５０重量％のＮＦＭおよび約５０重量％〜約８０重量％の１，３−ジメトキシベンゼン、例えば、約２５重量％〜約５０重量％のＮＦＭおよび約５０重量％〜約７５重量％の１，３−ジメトキシベンゼン、ならびに別の例として、約２５重量％のＮＦＭおよび約７５重量％の１，３−ジメトキシベンゼンを含み得る。
【００６３】
他の例示的実施形態では、式１のアルコキシベンゼン系化合物は、ｍが１であるアルコキシベンゼン系化合物であり得る。そのような実施形態では、アルコキシ置換基Ｒ１は、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシまたはブトキシであり得、例えば、Ｒは、メチルであり得る。また、ｍが１である場合、例示的実施形態では、各Ｒ２は水素であり得る。ｍが１である代替の実施形態において、１つまたは複数の、例えば、１、２、３、４、または５つのＲ２は、メチル、エチル、プロピルおよび／またはブチルなどのＣ１〜Ｃ４アルキルであり得、残りの任意のＲ２は、水素であり得る。
【００６４】
例示的なアルコキシベンゼン系化合物には、アニソール系化合物が含まれる。アルコキシベンゼン系化合物の非限定的な例は、以下の式２：
【化３】
2021526508.tif 000005
によって表されるアニソール化合物である。
【００６５】
別の非限定的な例として、アルコキシベンゼン系化合物は、１つのＲ２がＣ１〜Ｃ４アルキル、例えばメチルであり、残りのＲ２が水素であり、アルキル置換基Ｒ２が、アルコキシ置換基Ｒ１に対し、オルト、メタ、またはパラに位置する、アニソール化合物であり得る。アルキル置換アニソール化合物の非限定的な例は、以下の式３：
【化４】
2021526508.tif 000006
によって表される。
【００６６】
本開示はまた、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）法に関する。当業者は、固相ペプチド合成を行う方法を理解するであろう。固相ペプチド化学の基礎は、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄの先駆的な研究から始まって十分に確立されている。（Ｒ．  Ｂ．  Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ  （１９６３）  ”Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｉ，  Ｔｈｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ａ  Ｔｅｔｒａｐｅｐｔｉｄｅ，”  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  ８５  （１４），  ２１４９−２１５４）。頻繁に使用されるＦｍｏｃ（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）保護基アプローチはまた、当業者が容易に入手できる参考文献にも十分に記載されている（例えば、Ｃｈａｎ  ａｎｄ  Ｗｈｉｔｅ，  ”Ｆｍｏｃ  ｓｏｌｉｄ  ｐｈａｓｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ，  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ  （２０００））。したがって、ＳＰＰＳ法の詳細な説明は提供されていない。
【００６７】
実験で言及されたＬＩＢＥＲＴＹ  ＢＬＵＥ（商標）機器は、Ｍａｔｔｈｅｗｓ  Ｎ．ＣのＣＥＭ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手可能である。高温での固相ペプチド合成の主題を扱い、マイクロ波照射を使用する関連する米国特許としては、以下：米国特許第７，３９３，９２０号、同第７，５５０，５６０号、同第７，５６３，８６５号、同第７，９３９，６２８号、同第７，９０２，４８８号、同第７，５８２，７２８号、同第８，１５３，７６１号、同第８，０５８，３９３号、同第８，４２６，５６０号、同第８，８４６，８６２号、同第９，２１１，５２２号、が挙げられるが、必ずしもこれらに限定されない。これらの内容は、参照により全体が本明細書に組み込まれる。
【００６８】
当業者はまた、通常側鎖と共にアミン官能基およびカルボン酸官能基の両方を含む有機化合物を指すために、その最も広い意味で本明細書において使用される「アミノ酸」という用語の意味を、理解するであろう。当業者はまた、アミノ酸が天然アミノ酸（タンパク質原性アミノ酸）および／または非タンパク質原性アミノ酸を含むことを理解し、また、それらを識別するために使用される一文字表記を理解するであろう。当業者はまた、アミノ酸を固相樹脂に連結する方法、およびアミノ酸を結合またはカップリングして、短いポリマー鎖（典型的には、当技術分野ではペプチドと呼ばれる）および／またはより長い鎖（典型的には、当技術分野ではポリペプチドもしくはタンパク質と呼ばれる）などの鎖を形成する方法も理解するであろう。したがって、アミノ酸ならびにアミノ酸を固相樹脂に連結するための、および／またはアミノ酸を結合して鎖を形成するための、当技術分野で公知の方法の詳細な考察は提供されていない。ペプチド、ポリペプチド、およびタンパク質という用語も技術用語であり、その意味はまた当業者によって理解されている。
【００６９】
当技術分野において公知であるように、ＳＰＰＳ法は、アミノ酸の官能基（複数可）を脱保護するステップ、アミノ酸（複数可）をカップリングするステップ、ならびに／または洗浄、例えば、脱保護ステップおよび／またはカップリングステップ後に洗浄するステップ、を含むことができる。本開示において、この方法は、ＳＰＰＳの脱保護、カップリングおよび／または洗浄ステップのいずれかおよび／またはすべてにおいて（すなわち、個別にまたは組み合わせて）、ＮＦＭなどのモルホリン系化合物と本明細書に記載のアルコキシベンゼン系化合物との混合物を含む溶媒系を使用することができる。本開示の他の例示的実施形態では、この方法は、ＳＰＰＳの脱保護ステップ、カップリングステップおよび／または洗浄ステップのいずれかおよび／またはすべてにおいて（すなわち、個別にまたは組み合わせて）、ＮＢＰと本明細書に記載のアルコキシベンゼン系化合物との混合物を含む溶媒系を使用することができる。
【００７０】
例示的実施形態では、ＳＰＰＳ法は、固相樹脂に連結した第１のアミノ酸を、保護化学基を除去することにより脱保護して、脱保護アミノ酸を形成するステップと；必要に応じて、脱保護アミノ酸を洗浄するステップと；第２のアミノ酸を脱保護アミノ酸にカップリングして、第１のアミノ酸および第２のアミノ酸からペプチドを形成するステップと；脱保護ステップ、洗浄ステップ、およびカップリングステップを繰り返して、第１のアミノ酸、第２のアミノ酸、および引き続く複数のアミノ酸を含むペプチドを形成するステップとを含むことができ、脱保護ステップ、洗浄ステップ、および／またはカップリングステップは、モルホリン系化合物、例としてＮ−ホルミルモルホリン、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む混合物を含む、かつ／またはＮＢＰとアルコキシベンゼン系化合物を含む混合物を含む、本明細書に記載の溶媒系の存在下で実施される。
【００７１】
ＳＰＰＳ法は、カップリングの前に、当技術分野で公知の方法および作用物質を使用して、第２のアミノ酸（および引き続くアミノ酸（複数可））上の化学基（複数可）を活性化させて、第１の（および逐次的な）アミノ酸（複数可）とカップリングするための第２の（および引き続く）アミノ酸（複数可）を調製するステップをさらに含むことができる。
【００７２】
例えば、ＳＰＰＳ法は、モルホリン系化合物、例としてＮ−ホルミルモルホリン、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む混合物を含む溶媒系の存在下で脱保護するステップを含むことができる。
【００７３】
別の例として、ＳＰＰＳ法は、モルホリン系化合物、例としてＮ−ホルミルモルホリン、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む混合物を含む溶媒系の存在下で洗浄するステップを含むことができる。
【００７４】
別の例として、ＳＰＰＳ法は、モルホリン系化合物、例としてＮ−ホルミルモルホリン、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む混合物を含む溶媒系の存在下でカップリングするステップを含むことができる。
【００７５】
さらに別の例として、ＳＰＰＳ法は、モルホリン系化合物、例としてＮ−ホルミルモルホリン、およびアルコキシベンゼンを含む混合物を含む溶媒系の存在下でカップリングするステップおよび洗浄するステップを含むことができるが、脱保護するステップは含まない。
【００７６】
さらに別の例として、ＳＰＰＳ法は、モルホリン系化合物、例としてＮ−ホルミルモルホリン、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む混合物を含む溶媒系の存在下で脱保護するステップ、洗浄するステップ、およびカップリングするステップを含むことができる。
【００７７】
この方法はまた、本明細書に記載のモルホリン系化合物、例としてＮ−ホルミルモルホリン、およびアルコキシ系ベンゼン化合物を含む混合物を含む溶媒系を、ポリスチレン系樹脂および／またはＰＥＧ系樹脂とともに使用することができる。
【００７８】
他の例では、ＳＰＰＳ法は、ＮＢＰ、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む混合物を含む溶媒系の存在下で脱保護するステップを含むことができる。
【００７９】
別の例として、ＳＰＰＳ法は、ＮＢＰ、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む混合物を含む溶媒系の存在下で洗浄するステップを含むことができる。
【００８０】
別の例として、ＳＰＰＳ法は、ＮＢＰ、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む混合物を含む溶媒系の存在下でカップリングするステップを含むことができる。
【００８１】
さらに別の例として、ＳＰＰＳ法は、ＮＢＰ、およびアルコキシベンゼンを含む混合物を含む溶媒系の存在下でカップリングするステップおよび洗浄するステップを含むことができるが、脱保護するステップは含まない。
【００８２】
さらに別の例として、ＳＰＰＳ法は、ＮＢＰ、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む混合物を含む溶媒系の存在下で脱保護するステップ、洗浄するステップ、およびカップリングするステップを含むことができる。
【００８３】
この方法はまた、本明細書に記載のＮＢＰ、およびアルコキシ系ベンゼン化合物を含む混合物を含む溶媒系を、ポリスチレン系樹脂および／またはＰＥＧ系樹脂とともに使用することができる。
【００８４】
またさらに、例示的実施形態では、ＳＰＰＳ法は、ＳＰＰＳステップのうちの１つまたは複数中に、例えば、脱保護ステップおよび／またはカップリングステップ中に、マイクロ波エネルギーを適用するステップを含むことができる。
【００８５】
例示的実施形態では、ＳＰＰＳ法は、脱保護ステップ、洗浄ステップ、および／またはカップリングステップの後に、固相樹脂からペプチドを切断するステップをさらに含むことができる。固相樹脂からペプチドを切断するための方法および作用物質もまた、当技術分野において周知である。
【００８６】
例示的実施形態では、この方法は、当技術分野で公知であるように、Ｆｍｏｃ固相ペプチド化学を使用することができる。
【００８７】
例示的実施形態では、脱保護ステップ、洗浄ステップ、および／またはカップリングステップ、例えば、脱保護ステップおよび／またはカップリングステップは、高温で、例えば、これらに限定されるものではないが、約３０℃またはそれよりも高い、例えば、約３０℃〜約１２０℃、例えば約４０℃〜約１２０℃、例えば約７０℃〜約１２０℃、例えば約７０℃〜約１１０℃、例えば約９０℃〜約１２０℃、および例えば約９０℃〜約１１０℃の温度で実施することができる。
【００８８】
例示的実施形態では、ＳＰＰＳ法は、必要に応じて、洗浄ステップの前および／または洗浄ステップ中に、ＳＰＰＳ溶媒系に追加の溶媒を加えることによって、（モルホリン系化合物、例としてＮ−ホルミルモルホリン、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む、かつ／またはＮＢＰおよびアルコキシベンゼン系化合物を含む）本明細書に記載のＳＰＰＳ溶媒系を希釈するステップをさらに含むことができる。このことは、例えば、サイクルあたりの洗浄ステップの総数を減らすこと、各洗浄サイクルに必要な時間を短縮すること、などによって、ＳＰＰＳの効率を向上させるのに役立つことができる。
【００８９】
希釈溶媒は、例えば、ＳＰＰＳ溶媒系の粘度を低下させるように選択することができる。好適な追加の希釈溶媒の例としては、低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ４）アルコール、例として、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、および／またはｔｅｒｔ−ブタノールが含まれるが、これらに限定されない。別の例示的な追加の希釈溶媒は、酢酸エチルである。
【００９０】
希釈ステップは、追加の溶媒をＳＰＰＳ溶媒系に加えて、ＳＰＰＳ溶媒系および追加の希釈溶媒の総重量（１００重量％）に対して、０重量％より多い（すなわち、若干量の追加の希釈溶媒が存在する）〜約９０重量％、例えば、約５０重量％〜約８５重量％、および別の例として約８０重量％の量で、追加の溶媒を含む洗浄溶媒系を提供することを含むことができる。
【００９１】
例示的実施形態では、希釈洗浄溶媒系は、ＳＰＰＳ溶媒系および追加の希釈溶媒の総重量（１００重量％）に対して、約１００重量％未満（若干量の追加の希釈溶媒が存在する）〜約１０重量％、例えば、約５０重量％〜約１５重量％、および別の例として約２０重量％の量で、（モルホリン系化合物、例としてＮ−ホルミルモルホリン、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む、および／またはＮＢＰおよびアルコキシベンゼン系化合物を含む）ＳＰＰＳ溶媒系を含むことができる。
【００９２】
例示的実施形態では、本方法は、ＳＰＰＳの脱保護ステップ、カップリングステップおよび／または洗浄ステップのいずれかおよび／またはすべて（すなわち、個別にまたは組み合わせて）の前および／または最中に、例えば、モルホリン系化合物、例としてＮ−ホルミルモルホリンとアルコキシベンゼン系化合物とを組み合わせることにより、かつ／または、ＮＢＰとアルコキシベンゼン系化合物とを組み合わせることにより、溶媒系を調製するステップをさらに含むことができる。
【００９３】
例示的実施形態では、本方法は、モルホリン系化合物、例としてＮ−ホルミルモルホリン、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む混合物を含む、本明細書に記載の溶媒系を使用し、溶媒混合物は、政府の規制に準拠して、十分に高い引火点を有する。本方法の非限定的な例では、溶媒混合物は、約９３℃またはそれより高い引火点を有することができる。
【００９４】
例示的実施形態では、ＳＰＰＳ法は、モルホリン系化合物、例としてＮ−ホルミルモルホリン、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む混合物を含む、本明細書に記載の溶媒系を使用し、溶媒混合物は、モルホリン系化合物、例えば、ＮＦＭを、モルホリン系化合物、例としてＮＦＭおよびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物１００重量％に対して、約２０重量％〜約５０重量％、例えば、約２５重量％〜約５０重量％の量で含むことができる。一部の実施形態では、ＳＰＰＳ法は、モルホリン系化合物、例えば、ＮＦＭを、溶媒混合物１００重量％に対して、約２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０重量％の量で含む溶媒混合物を使用する。さらに、一部の実施形態によれば、モルホリン系化合物、例えば、ＮＦＭは、前述の量のほぼいずれかの量から前述の量の他のほぼいずれかの量までで存在し得る。
【００９５】
例示的実施形態では、ＳＰＰＳ法は、モルホリン系化合物、例としてＮ−ホルミルモルホリン、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む混合物を含む、本明細書に記載の溶媒系を使用し、溶媒混合物は、アルコキシベンゼン系化合物を、モルホリン系化合物、例えばＮＦＭ、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物１００重量％に対して、約５０重量％〜約８０重量％、例えば、約５０重量％〜約７５重量％の量で含むことができる。一部の実施形態では、ＳＰＰＳ法は、アルコキシベンゼン系化合物を、溶媒混合物１００重量％に対して、約５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、または８０重量％の量で含む溶媒混合物を使用する。さらに、一部の実施形態によれば、アルコキシベンゼン系化合物は、前述の量のほぼいずれかの量から前述の量の他のほぼいずれかの量までで存在し得る。
【００９６】
例示的実施形態では、ＳＰＰＳ法は、ＮＢＰ、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む混合物を含む、本明細書に記載の溶媒系を使用し、溶媒混合物は、ＮＢＰを、ＮＢＰおよびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物１００重量％に対して、約２０重量％〜約５０重量％、例えば、約２５重量％〜約５０重量％の量で含むことができる。一部の実施形態では、ＳＰＰＳ法は、ＮＢＰを、溶媒混合物１００重量％に対して、約２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０重量％の量で含む溶媒混合物を使用する。さらに、一部の実施形態によれば、ＮＢＰは、前述の量のほぼいずれかの量から前述の量の他のほぼいずれかの量までで存在し得る。
【００９７】
例示的実施形態では、ＳＰＰＳ法は、ＮＢＰ、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む混合物を含む、本明細書に記載の溶媒系を使用し、溶媒混合物は、アルコキシベンゼン系化合物を、ＮＢＰおよびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物１００重量％に対して、約５０重量％〜約８０重量％、例えば、約５０重量％〜約７５重量％の量で含むことができる。一部の実施形態では、ＳＰＰＳ法は、アルコキシベンゼン系化合物を、溶媒混合物１００重量％に対して、約５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、または８０重量％の量で含む溶媒混合物を使用する。さらに、一部の実施形態によれば、アルコキシベンゼン系化合物は、前述の量のほぼいずれかの量から前述の量の他のほぼいずれかの量までで存在し得る。
【００９８】
ＳＰＰＳ法の例示的実施形態では、アルコキシベンゼン系化合物は、式１：
【化５】
2021526508.tif 000007
（式中、
各Ｒ１は独立して−ＯＲであり、ＲはＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
各Ｒ２は独立して水素であるか、またはＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
ｍは、１または２であり；
ｎは４または５であり；
ｍ＋ｎは６である）
の化合物を含むことができる。
【００９９】
ここでもまた、そのような式１のアルコキシベンゼン系化合物は、当技術分野において公知であり、市販されており、かつ／または過度な実験をすることなく当業者が製造することができる。
【０１００】
ＳＰＰＳ法の例示的実施形態では、式１のアルコキシベンゼン系化合物は、ｍが２であるジアルコキシベンゼン系化合物であり得る。そのような実施形態では、アルコキシ置換基Ｒ１のそれぞれは、同じであっても異なっていてもよい。例えば、各Ｒ１は、独立して、メトキシ、エトキシ、プロポキシおよび／またはブトキシであり得、例えば、各Ｒは、メチルであり得る。また、ｍが２である場合、例示的実施形態では、各Ｒ２は水素であり得る。ｍが２である代替の実施形態において、１つまたは複数の、例えば、１、２、３、または４つのＲ２は、メチル、エチル、プロピルおよび／またはブチルなどのＣ１〜Ｃ４アルキルであり得、残りの任意のＲ２は、水素であり得る。
【０１０１】
ＳＰＰＳ法の例示的実施形態では、ジアルコキシベンゼン系化合物は、以下の式：
【化６】
2021526508.tif 000008
の１，３−ジメトキシベンゼンを含み得る。
【０１０２】
ＳＰＰＳ法の例示的実施形態では、ＮＦＭおよび１，３−ジメトキシベンゼンを含む溶媒混合物は、約９３℃またはそれより高い引火点を有することができる。
【０１０３】
ＳＰＰＳ法の例示的実施形態では、溶媒混合物は、これらに限定されるものではないが、約２０重量％〜約５０重量％のＮＦＭおよび約５０重量％〜約８０重量％の１，３−ジメトキシベンゼン、例えば、約２５重量％〜約５０重量％のＮＦＭおよび約５０重量％〜約７５重量％の１，３−ジメトキシベンゼン、ならびに別の例として、約２５重量％のＮＦＭおよび約７５重量％の１，３−ジメトキシベンゼンを含み得る。
【０１０４】
ＳＰＰＳ法の他の例示的実施形態では、式１のアルコキシベンゼン系化合物は、ｍが１であるアルコキシベンゼン系化合物であり得る。そのような実施形態では、アルコキシ置換基Ｒ１は、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシまたはブトキシであり得、例えば、Ｒは、メチルであり得る。また、ｍが１である場合、例示的実施形態では、各Ｒ２は水素であり得る。ｍが１である代替の実施形態において、１つまたは複数の、例えば、１、２、３、４、または５つのＲ２は、メチル、エチル、プロピルおよび／またはブチルなどのＣ１〜Ｃ４アルキルであり得、残りの任意のＲ２は、水素であり得る。
【０１０５】
ＳＰＰＳ法の例示的実施形態では、アルコキシベンゼン系化合物は、アニソール系化合物を含むことができる。非限定的な例として、アルコキシベンゼン系化合物は、以下の式２：
【化７】
2021526508.tif 000009
によって表されるアニソール化合物であり得る。
【０１０６】
別の非限定的な例として、アルコキシベンゼン系化合物は、１つのＲ２がＣ１〜Ｃ４アルキル、例えばメチルであり、残りのＲ２が水素であり、アルキル置換基Ｒ２が、アルコキシ置換基Ｒ１に対し、オルト、メタ、またはパラに位置する、アニソール化合物であり得る。アルキル置換アニソール化合物の非限定的な例は、以下の式３：
【化８】
2021526508.tif 000010
によって表される。
【０１０７】
ＳＰＰＳ法は、当技術分野で周知であり、過度な実験をすることなく当業者が容易に実施することができる。
【０１０８】
本開示はまた、例えば高温での固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）のための組成物に関する。組成物は、本明細書でより詳細に記載されている、固相樹脂に連結したアミノ酸と、モルホリン系化合物、例えばＮ−ホルミルモルホリン、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物を含む、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）のための溶媒系とを含むことができる。他の実施形態では、組成物は、本明細書でより詳細に記載されている、固相樹脂に連結したアミノ酸と、ＮＢＰ、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物を含む、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）のための溶媒系とを含むことができる。
【０１０９】
他の実施形態では、組成物は、本明細書でより詳細に記載されている、ＳＰＰＳのための固相樹脂と、モルホリン系化合物、例えばＮ−ホルミルモルホリン、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物を含む、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）のための溶媒系とを含むことができ、さらに必要に応じて、アミノ酸を含むことができる。他の実施形態では、組成物は、本明細書でより詳細に記載されている、ＳＰＰＳのための固相樹脂と、ＮＢＰ、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物を含む、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）のための溶媒系とを含むことができ、さらに必要に応じて、アミノ酸を含むことができる。
【０１１０】
ＳＰＰＳのための組成物は、当技術分野で公知の活性化添加剤（ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ａｄｄｉｔｉｖｅ）をさらに含むことができる。
【０１１１】
ＳＰＰＳのための組成物の例示的実施形態では、アミノ酸は、最初は、当技術分野でも公知である、Ｆｍｏｃ保護アミノ酸である。
【０１１２】
ＳＰＰＳのための組成物の例示的実施形態では、モルホリン系化合物、例としてＮ−ホルミルモルホリン、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物は、政府の規制に準拠して十分に高い引火点、例えば、約９３℃またはそれより高い引火点を有することができる。
【０１１３】
ＳＰＰＳのための組成物の例示的実施形態では、モルホリン系化合物、例としてＮ−ホルミルモルホリン、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物は、モルホリン系化合物、例えば、ＮＦＭを、モルホリン系化合物、例としてＮＦＭ、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物１００重量％に対して、約２０重量％〜約５０重量％、例えば、約２５重量％〜約５０重量％の量で含むことができる。一部の実施形態では、ＳＰＰＳのための組成物は、モルホリン系化合物、例えば、ＮＦＭを、溶媒混合物１００重量％に対して、約２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０重量％の量で含む溶媒混合物を含む。さらに、一部の実施形態によれば、モルホリン系化合物、例えば、ＮＦＭは、前述の量のほぼいずれかの量から前述の量の他のほぼいずれかの量までで存在し得る。
【０１１４】
ＳＰＰＳのための組成物の例示的実施形態では、モルホリン系化合物、例としてＮ−ホルミルモルホリン、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物は、アルコキシベンゼン系化合物を、モルホリン系化合物、例えばＮＦＭ、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物１００重量％に対して、約５０重量％〜約８０重量％、例えば、約５０重量％〜約７５重量％の量で含むことができる。一部の実施形態では、ＳＰＰＳのための組成物は、アルコキシベンゼン系化合物を、溶媒混合物１００重量％に対して、約５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、または８０重量％の量で含む溶媒混合物を含む。さらに、一部の実施形態によれば、アルコキシベンゼン系化合物は、前述の量のほぼいずれかの量から前述の量の他のほぼいずれかの量までで存在し得る。
【０１１５】
ＳＰＰＳのための組成物の例示的実施形態では、ＮＢＰおよびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物は、ＮＢＰを、ＮＢＰおよびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物１００重量％に対して、約２０重量％〜約５０重量％、例えば、約２５重量％〜約５０重量％の量で含むことができる。一部の実施形態では、ＳＰＰＳのための組成物は、ＮＢＰを、溶媒混合物１００重量％に対して、約２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０重量％の量で含む溶媒混合物を含む。さらに、一部の実施形態によれば、ＮＢＰは、前述の量のほぼいずれかの量から前述の量の他のほぼいずれかの量までで存在し得る。
【０１１６】
ＳＰＰＳのための組成物の例示的実施形態では、ＮＢＰおよびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物は、アルコキシベンゼン系化合物を、ＮＢＰおよびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物１００重量％に対して、約５０重量％〜約８０重量％、例えば、約５０重量％〜約７５重量％の量で含むことができる。一部の実施形態では、ＳＰＰＳのための組成物は、アルコキシベンゼン系化合物を、溶媒混合物１００重量％に対して、約５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、または８０重量％の量で含む溶媒混合物を含む。さらに、一部の実施形態によれば、アルコキシベンゼン系化合物は、前述の量のほぼいずれかの量から前述の量の他のほぼいずれかの量までで存在し得る。
【０１１７】
ＳＰＰＳのための組成物の例示的実施形態では、アルコキシベンゼン系化合物は、式１：
【化９】
2021526508.tif 000011
（式中、
各Ｒ１は独立して−ＯＲであり、ＲはＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
各Ｒ２は独立して水素であるか、またはＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
ｍは、１または２であり；
ｎは４または５であり；
ｍ＋ｎは６である）
の化合物を含むことができる。
【０１１８】
ここでもまた、そのような式１のアルコキシベンゼン系化合物は、当技術分野において公知であり、市販されており、かつ／または過度な実験をすることなく当業者が製造することができる。
【０１１９】
ＳＰＰＳのための組成物の例示的実施形態では、式１のアルコキシベンゼン系化合物は、ｍが２であるジアルコキシベンゼン系化合物であり得る。そのような実施形態では、アルコキシ置換基Ｒ１のそれぞれは、同じであっても異なっていてもよい。例えば、各Ｒ１は、独立して、メトキシ、エトキシ、プロポキシおよび／またはブトキシであり得、例えば、各Ｒは、メチルであり得る。また、ｍが２である場合、例示的実施形態では、各Ｒ２は水素であり得る。ｍが２である代替の実施形態において、１つまたは複数の、例えば、１、２、３、または４つのＲ２は、メチル、エチル、プロピルおよび／またはブチルなどのＣ１〜Ｃ４アルキルであり得、残りの任意のＲ２は、水素であり得る。
【０１２０】
ＳＰＰＳのための組成物の例示的実施形態では、ジアルコキシベンゼン系化合物は、以下の式：
【化１０】
2021526508.tif 000012
の１，３−ジメトキシベンゼンを含むことができる。
【０１２１】
ＳＰＰＳのための組成物の例示的実施形態では、ＮＦＭおよび１，３−ジメトキシベンゼンを含む溶媒混合物は、約９３℃またはそれより高い引火点を有することができる。
【０１２２】
ＳＰＰＳのための組成物の例示的実施形態では、溶媒混合物は、これらに限定されるものではないが、約２０重量％〜約５０重量％のＮＦＭおよび約５０重量％〜約８０重量％の１，３−ジメトキシベンゼン、例えば、約２５重量％〜約５０重量％のＮＦＭおよび約５０重量％〜約７５重量％の１，３−ジメトキシベンゼン、ならびに別の例として、約２５重量％のＮＦＭおよび約７５重量％の１，３−ジメトキシベンゼンを含み得る。
【０１２３】
ＳＰＰＳのための組成物の他の例示的実施形態では、式１のアルコキシベンゼン系化合物は、ｍが１であるアルコキシベンゼン系化合物であり得る。そのような実施形態では、アルコキシ置換基Ｒ１は、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシまたはブトキシであり得、例えば、Ｒは、メチルであり得る。また、ｍが１である場合、例示的実施形態では、各Ｒ２は水素であり得る。ｍが１である代替の実施形態において、１つまたは複数の、例えば、１、２、３、４、または５つのＲ２は、メチル、エチル、プロピルおよび／またはブチルなどのＣ１〜Ｃ４アルキルであり得、残りの任意のＲ２は、水素であり得る。
【０１２４】
ＳＰＰＳのための組成物の例示的実施形態では、アルコキシベンゼン系化合物は、アニソール系化合物を含むことができる。アルコキシベンゼン系化合物の非限定的な例は、以下の式２：
【化１１】
2021526508.tif 000013
によって表されるアニソール化合物である。
【０１２５】
別の非限定的な例として、アルコキシベンゼン系化合物は、１つのＲ２がＣ１〜Ｃ４アルキル、例えばメチルであり、残りのＲ２が水素であり、アルキル置換基Ｒ２が、アルコキシ置換基Ｒ１に対し、オルト、メタ、またはパラに位置する、アニソール化合物であり得る。アルキル置換アニソール化合物の非限定的な例は、以下の式３：
【化１２】
2021526508.tif 000014
によって表される。
【０１２６】
本開示はさらに、本明細書でより詳細に記載されている、固相樹脂に連結したペプチド鎖と、モルホリン系化合物、例えばＮ−ホルミルモルホリン、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物を含む、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）のための溶媒系とを含む組成物に関する。本開示はさらに、本明細書でより詳細に記載されている、固相樹脂に連結したペプチド鎖と、ＮＢＰ、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物を含む、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）のための溶媒系とを含む組成物に関する。
【０１２７】
固相樹脂に連結したペプチド鎖を含む組成物の例示的実施形態では、モルホリン系化合物、例としてＮ−ホルミルモルホリン、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物は、政府の規制に準拠して十分に高い引火点、例えば、約９３℃またはそれより高い引火点を有することができる。
【０１２８】
固相樹脂に連結したペプチド鎖を含む組成物の例示的実施形態では、モルホリン系化合物、例としてＮ−ホルミルモルホリン、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物は、モルホリン系化合物、例えば、ＮＦＭを、モルホリン系化合物、例としてＮＦＭ、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物１００重量％に対して、約２０重量％〜約５０重量％、例えば、約２５重量％〜約５０重量％の量で含むことができる。一部の実施形態では、組成物は、モルホリン系化合物、例えば、ＮＦＭを、溶媒混合物１００重量％に対して、約２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０重量％の量で含む溶媒混合物を含む。さらに、一部の実施形態によれば、モルホリン系化合物、例えば、ＮＦＭは、前述の量のほぼいずれかの量から前述の量の他のほぼいずれかの量までで存在し得る。
【０１２９】
固相樹脂に連結したペプチド鎖を含む組成物の例示的実施形態では、モルホリン系化合物、例としてＮ−ホルミルモルホリン、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物は、アルコキシベンゼン系化合物を、モルホリン系化合物、例えばＮＦＭ、およびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物１００重量％に対して、約５０重量％〜約８０重量％、例えば、約５０重量％〜約７５重量％の量で含むことができる。一部の実施形態では、組成物は、アルコキシベンゼン系化合物を、溶媒混合物１００重量％に対して、約５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、または８０重量％の量で含む溶媒混合物を含む。さらに、一部の実施形態によれば、アルコキシベンゼン系化合物は、前述の量のほぼいずれかの量から前述の量の他のほぼいずれかの量までで存在し得る。
【０１３０】
固相樹脂に連結したペプチド鎖を含む組成物の例示的実施形態では、ＮＢＰおよびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物は、ＮＢＰを、ＮＢＰおよびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物１００重量％に対して、約２０重量％〜約５０重量％、例えば、約２５重量％〜約５０重量％の量で含むことができる。一部の実施形態では、組成物は、ＮＢＰを、溶媒混合物１００重量％に対して、約２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０重量％の量で含む溶媒混合物を含む。さらに、一部の実施形態によれば、ＮＢＰは、前述の量のほぼいずれかの量から前述の量の他のほぼいずれかの量までで存在し得る。
【０１３１】
固相樹脂に連結したペプチド鎖を含む組成物の例示的実施形態では、ＮＢＰおよびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物は、アルコキシベンゼン系化合物を、ＮＢＰおよびアルコキシベンゼン系化合物を含む溶媒混合物１００重量％に対して、約５０重量％〜約８０重量％、例えば、約５０重量％〜約７５重量％の量で含むことができる。一部の実施形態では、組成物は、アルコキシベンゼン系化合物を、溶媒混合物１００重量％に対して、約５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、または８０重量％の量で含む溶媒混合物を含む。さらに、一部の実施形態によれば、アルコキシベンゼン系化合物は、前述の量のほぼいずれかの量から前述の量の他のほぼいずれかの量までで存在し得る。
【０１３２】
固相樹脂に連結したペプチド鎖を含む組成物の例示的実施形態では、アルコキシベンゼン系化合物は、式１：
【化１３】
2021526508.tif 000015
（式中、
各Ｒ１は独立して−ＯＲであり、ＲはＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
各Ｒ２は独立して水素であるか、またはＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
ｍは、１または２であり；
ｎは４または５であり；
ｍ＋ｎは６である）
の化合物を含むことができる。
【０１３３】
ここでもまた、そのような式１のアルコキシベンゼン系化合物は、当技術分野において公知であり、市販されており、かつ／または過度な実験をすることなく当業者が製造することができる。
【０１３４】
固相樹脂に連結したペプチド鎖を含む組成物の例示的実施形態では、式１のアルコキシベンゼン系化合物は、ｍが２であるジアルコキシベンゼン系化合物であり得る。そのような実施形態では、アルコキシ置換基Ｒ１のそれぞれは、同じであっても異なっていてもよい。例えば、各Ｒ１は、独立して、メトキシ、エトキシ、プロポキシおよび／またはブトキシであり得、例えば、各Ｒは、メチルであり得る。また、ｍが２である場合、例示的実施形態では、各Ｒ２は水素であり得る。ｍが２である代替の実施形態において、１つまたは複数の、例えば、１、２、３、または４つのＲ２は、メチル、エチル、プロピルおよび／またはブチルなどのＣ１〜Ｃ４アルキルであり得、残りの任意のＲ２は、水素であり得る。
【０１３５】
固相樹脂に連結したペプチド鎖を含む組成物の例示的実施形態では、ジアルコキシベンゼン系化合物は、以下の式：
【化１４】
2021526508.tif 000016
の１，３−ジメトキシベンゼンを含むことができる。
【０１３６】
固相樹脂に連結したペプチド鎖を含む組成物の例示的実施形態では、ＮＦＭおよび１，３−ジメトキシベンゼンを含む溶媒混合物は、約９３℃またはそれより高い引火点を有することができる。
【０１３７】
固相樹脂に連結したペプチド鎖を含む組成物の例示的実施形態では、溶媒混合物は、これらに限定されるものではないが、約２０重量％〜約５０重量％のＮＦＭおよび約５０重量％〜約８０重量％の１，３−ジメトキシベンゼン、例えば、約２５重量％〜約５０重量％のＮＦＭおよび約５０重量％〜約７５重量％の１，３−ジメトキシベンゼン、ならびに別の例として、約２５重量％のＮＦＭおよび約７５重量％の１，３−ジメトキシベンゼンを含み得る。
【０１３８】
固相樹脂に連結したペプチド鎖を含む組成物の他の例示的実施形態では、式１のアルコキシベンゼン系化合物は、ｍが１であるアルコキシベンゼン系化合物であり得る。そのような実施形態では、アルコキシ置換基Ｒ１は、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシまたはブトキシであり得、例えば、Ｒは、メチルであり得る。また、ｍが１である場合、例示的実施形態では、各Ｒ２は水素であり得る。ｍが１である代替の実施形態において、１つまたは複数の、例えば、１、２、３、４、または５つのＲ２は、メチル、エチル、プロピルおよび／またはブチルなどのＣ１〜Ｃ４アルキルであり得、残りの任意のＲ２は、水素であり得る。
【０１３９】
固相樹脂に連結したペプチド鎖を含む組成物の例示的実施形態では、アルコキシベンゼン系化合物は、アニソール化合物を含むことができる。アルコキシベンゼン系化合物の非限定的な例は、以下の式２：
【化１５】
2021526508.tif 000017
によって表されるアニソール化合物である。
【０１４０】
別の非限定的な例として、アルコキシベンゼン系化合物は、１つのＲ２がＣ１〜Ｃ４アルキル、例えばメチルであり、残りのＲ２が水素であり、アルキル置換基Ｒ２が、アルコキシ置換基Ｒ１に対し、オルト、メタ、またはパラに位置する、アニソール化合物であり得る。アルキル置換アニソール化合物の非限定的な例は、以下の式３：
【化１６】
2021526508.tif 000018
によって表される。
【０１４１】
いかなる説明または理論にも拘束されるものではないが、本発明者らは、ＳＰＰＳに現在使用されている望ましくない双極性非プロトン溶媒（ＤＭＦ、ＤＭＡ、およびＮＭＰ）の完全な代替物を開発する努力において、独自の溶媒の組合せを作製することを調査した。ＤＭＦ内に含まれるホルミル基を組み込むことは、アミド結合とのその類似性のため、ペプチド凝集を最小限に抑えるのに理想的であると考えられた。公知のホルミル溶媒を調査すると、Ｎ−ホルミルモルホリンは毒性が低いという点で独特である。しかし、高融点、低粘度、非極性基の限定的な膨潤、およびポリスチレン樹脂の低膨潤の観察に関連する課題に悩まされている。
【０１４２】
したがって、本発明者らは、これらの困難を克服するために、ＮＦＭと組み合わさって作用することができる溶媒を見出すことが、理想的な解決策を提供し得ると考えた。エステル基を含む溶媒は、特に高温での安定性が低いため、理想的ではないと見なされた。次に、フェニル基を含む溶媒を、トリチルなどの非極性保護基を溶媒和させ、またフェニル基を含むポリスチレン樹脂の膨潤を改善する潜在的な能力のために調査した。このクラス内の多くの溶媒、例としてベンゼン、トルエン、およびキシレンには、望ましくない毒性および安全性がある。しかし、アニソールは好ましい溶媒としてランク付けされており、非反応性であると見られる。アニソールはまた、高温でのＳＰＰＳに有用である有利に高めの沸点（＞１５０℃）を含む。喜ばしいことに、ＮＦＭとアニソールとの２５〜３５％の混合物は、２０個すべてのＦｍｏｃアミノ酸（≧０．２Ｍ）の溶媒和に有意な改善を示した。組合せ溶液の粘度も、ＮＦＭ単独よりもはるかに低く、自動化プロセスでの使用に好適であるように見えた。
【実施例】
【０１４３】
本発明者らは、Ｆｍｏｃ化学を用いて、ポリスチレンおよびＰＥＧ系樹脂（ＰｒｏＴｉｄｅ）の両方を使用してさまざまな困難なペプチドを合成することにより、ＤＭＦの一般的な代替物としての種々の混合溶媒系の使用をさらに調査した。
【０１４４】
例えば、ＤＭＦを、６５−７４ＡＣＰの合成において、以下の混合溶媒系と比較する：３５重量％のＮＦＭおよびアニソール；２５重量％のＮＦＭおよび１，２−ジメトキシベンゼン（１，２−ＤＭＢ）；２５重量％のＮＦＭおよび１，３−ジメトキシベンゼン（１，３−ＤＭＢ）。下表１に示すように、すべての試薬および洗浄にＤＭＦを使用した場合と比較して、すべての試薬および洗浄の溶媒としてのアニソール混合物中の３５％ＮＦＭおよび１，３−ＤＭＢ混合物中の２５重量％のＮＦＭは、同様の粗純度をもたらす。
【表１】
2021526508.tif 000019
【０１４５】
項目１〜３の実験条件：
【０１４６】
ペプチド配列（６５−７４ＡＣＰ）＝（配列番号１）ＶＱＡＡＩＤＹＩＮＧ−ＮＨ２
【０１４７】
合成スケール＝０．１ｍｍｏｌ
【０１４８】
機器＝Ｌｉｂｅｒｔｙ  Ｂｌｕｅマイクロ波ペプチド合成機（ＣＥＭ  Ｃｏｒｐ．、Ｍａｔｔｈｅｗｓ、ＮＣ）
【０１４９】
脱保護＝２０％ピペリジン
【０１５０】
マイクロ波脱保護方法＝１００℃で１分
【０１５１】
洗浄＝脱保護後（２ｍＬ、２ｍＬ、３ｍＬ）；カップリング後＝なし
【０１５２】
カップリング＝４ｍＬ溶液中５倍過剰のＡＡ／ＤＩＣ／オキシマ（１：２．１）
【０１５３】
マイクロ波カップリング方法＝１００℃で２分
【０１５４】
切断＝５ｍＬのＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ２Ｏ／ＤＯＤｔ（９２．５：２．５：２．５：２．５）で、ＲＡＺＯＲ切断システム（ＣＥＭ  Ｃｏｒｐ．、Ｍａｔｔｈｅｗｓ、ＮＣ）において３８℃で３０分間。
【０１５５】
分析＝ペプチドを、３１００シングル四重極ＭＳを備えたＷａｔｅｒｓ  ＵＰＬＣ  ＡＣＱＵＩＴＹ  Ｈ−Ｃｌａｓｓにて、溶媒系として０．１％ＴＦＡを含むアセトニトリル／水を使用して、Ｃ１８カラム（１．７ｍｍ、２．１×１００ｍｍ）で分析した。
【０１５６】
項目４の実験条件：
【０１５７】
ペプチド配列（６５−７４ＡＣＰ）＝（配列番号１）ＶＱＡＡＩＤＹＩＮＧ−ＮＨ２
【０１５８】
合成スケール＝０．１ｍｍｏｌ
【０１５９】
機器＝Ｌｉｂｅｒｔｙ  ＰＲＩＭＥマイクロ波ペプチド合成機（ＣＥＭ  Ｃｏｒｐ．、Ｍａｔｔｈｅｗｓ、ＮＣ）
【０１６０】
脱保護＝７５％ピロリジン
【０１６１】
マイクロ波脱保護方法＝１１０℃で６０秒
【０１６２】
洗浄＝脱保護後（３×４ｍＬ）；カップリング後＝なし
【０１６３】
カップリング＝４ｍＬ溶液中５倍過剰のＡＡ／ＤＩＣ／オキシマ（１：２．１）
【０１６４】
マイクロ波カップリング方法＝３０秒待機〜１０５℃で９０秒
【０１６５】
切断＝５ｍＬのＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ２Ｏ／ＤＯＤｔ（９２．５：２．５：２．５：２．５）で、ＲＡＺＯＲ切断システム（ＣＥＭ  Ｃｏｒｐ．、Ｍａｔｔｈｅｗｓ、ＮＣ）において３８℃で３０分間。
【０１６６】
分析＝ペプチドを、３１００シングル四重極ＭＳを備えたＷａｔｅｒｓ  ＵＰＬＣ  ＡＣＱＵＩＴＹ  Ｈ−Ｃｌａｓｓにて、溶媒系として０．１％ＴＦＡを含むアセトニトリル／水を使用して、Ｃ１８カラム（１．７ｍｍ、２．１×１００ｍｍ）で分析した。
【０１６７】
またＤＭＦを、ＪＲ  １０ｍｅｒの合成において、２５重量％のＮＦＭおよび１，３−ジメトキシベンゼン（１，３−ＤＭＢ）を含む混合溶媒系と比較する。下表２に示すように、すべての試薬および洗浄にＤＭＦを使用した場合と比較して、すべての試薬および洗浄の溶媒としての１，３−ＤＭＢ混合物中の２５重量％のＮＦＭにより、粗純度が改善する。
【０１６８】
【表２】
2021526508.tif 000020
【０１６９】
項目１の実験条件：
【０１７０】
ペプチド配列（ＪＲ  １０ｍｅｒ）＝（配列番号２）ＷＦＴＴＬＩＳＴＭ−ＮＨ２
【０１７１】
合成スケール＝０．１ｍｍｏｌ
【０１７２】
機器＝Ｌｉｂｅｒｔｙ  ＰＲＩＭＥマイクロ波ペプチド合成機（ＣＥＭ  Ｃｏｒｐ．、Ｍａｔｔｈｅｗｓ、ＮＣ）
【０１７３】
脱保護＝２５％ピロリジン
【０１７４】
マイクロ波脱保護方法＝１１０℃で４０秒
【０１７５】
洗浄＝脱保護後（２×４ｍＬ）；カップリング後＝なし
【０１７６】
カップリング＝３．５ｍＬ溶液中５倍過剰のＡＡ／ＤＩＣ／オキシマ（１：２．１）
【０１７７】
マイクロ波カップリング方法＝３０秒待機−１０５℃で６０秒
【０１７８】
切断＝５ｍＬのＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ２Ｏ／ＤＯＤｔ（９２．５：２．５：２．５：２．５）で、ＲＡＺＯＲ切断システム（ＣＥＭ  Ｃｏｒｐ．、Ｍａｔｔｈｅｗｓ、ＮＣ）において３８℃で３０分間。
【０１７９】
分析＝ペプチドを、３１００シングル四重極ＭＳを備えたＷａｔｅｒｓ  ＵＰＬＣ  ＡＣＱＵＩＴＹ  Ｈ−Ｃｌａｓｓにて、溶媒系として０．１％ＴＦＡを含むアセトニトリル／水を使用して、Ｃ１８カラム（１．７ｍｍ、２．１×１００ｍｍ）で分析した。
【０１８０】
項目２の実験条件：
【０１８１】
ペプチド配列（ＪＲ  １０ｍｅｒ）＝（配列番号２）ＷＦＴＴＬＩＳＴＭ−ＮＨ２
【０１８２】
合成スケール＝０．１ｍｍｏｌ
【０１８３】
機器＝Ｌｉｂｅｒｔｙ  ＰＲＩＭＥマイクロ波ペプチド合成機（ＣＥＭ  Ｃｏｒｐ．、Ｍａｔｔｈｅｗｓ、ＮＣ）
【０１８４】
脱保護＝７５％ピロリジン
【０１８５】
マイクロ波脱保護方法＝１１０℃で６０秒
【０１８６】
洗浄＝脱保護後（３×４ｍＬ）；カップリング後＝なし
【０１８７】
カップリング＝４ｍＬ溶液中５倍過剰のＡＡ／ＤＩＣ／オキシマ（１：２．１）
【０１８８】
マイクロ波カップリング方法＝３０秒待機〜１０５℃で９０秒
【０１８９】
切断＝５ｍＬのＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ２Ｏ／ＤＯＤｔ（９２．５：２．５：２．５：２．５）で、ＲＡＺＯＲ切断システム（ＣＥＭ  Ｃｏｒｐ．、Ｍａｔｔｈｅｗｓ、ＮＣ）において３８℃で３０分間。
【０１９０】
分析＝ペプチドを、３１００シングル四重極ＭＳを備えたＷａｔｅｒｓ  ＵＰＬＣ  ＡＣＱＵＩＴＹ  Ｈ−Ｃｌａｓｓにて、溶媒系として０．１％ＴＦＡを含むアセトニトリル／水を使用して、Ｃ１８カラム（１．７ｍｍ、２．１×１００ｍｍ）で分析した。
【０１９１】
またＤＭＦを、表３に示すように、より困難なチモシン配列の合成において、以下の混合溶媒系と比較する：２５重量％のＮＦＭおよびアニソール；ならびに２５重量％のＮＦＭおよび１，３−ジメトキシベンゼン（１，３−ＤＭＢ）。下表３に示すように、すべての試薬および洗浄にＤＭＦを使用した場合と比較して、すべての試薬および洗浄の溶媒としてのアニソール混合物中の２５％のＮＦＭおよび１，３−ＤＭＢ混合物中の２５重量％のＮＦＭにより、同様の粗純度および／または粗純度の改善がもたらされる。
【表３】
2021526508.tif 000021
【０１９２】
項目１〜４の実験条件：
【０１９３】
ペプチド配列（チモシン）＝（配列番号３）ＳＤＡＡＶＤＴＳＳＥＩＴＴＫＤＬＫＥＫＫＥＶＶＥＥＡＥＮ−ＮＨ２
【０１９４】
合成スケール＝０．１ｍｍｏｌ
【０１９５】
機器＝Ｌｉｂｅｒｔｙ  Ｂｌｕｅマイクロ波ペプチド合成機（ＣＥＭ  Ｃｏｒｐ．、Ｍａｔｔｈｅｗｓ、ＮＣ）
【０１９６】
脱保護＝２０％ピペリジン
【０１９７】
マイクロ波脱保護方法＝１００℃で１分
【０１９８】
洗浄＝脱保護後（２ｍＬ、２ｍＬ、３ｍＬ）；カップリング後＝なし
【０１９９】
カップリング＝４ｍＬ溶液中５倍過剰のＡＡ／ＤＩＣ／オキシマ（１：２．１）
【０２００】
マイクロ波カップリング方法＝１００℃で２分
【０２０１】
切断＝５ｍＬのＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ２Ｏ／ＤＯＤｔ（９２．５：２．５：２．５：２．５）で、ＲＡＺＯＲ切断システム（ＣＥＭ  Ｃｏｒｐ．、Ｍａｔｔｈｅｗｓ、ＮＣ）において３８℃で３０分間。
【０２０２】
分析＝ペプチドを、３１００シングル四重極ＭＳを備えたＷａｔｅｒｓ  ＵＰＬＣ  ＡＣＱＵＩＴＹ  Ｈ−Ｃｌａｓｓにて、溶媒系として０．１％ＴＦＡを含むアセトニトリル／水を使用して、Ｃ１８カラム（１．７ｍｍ、２．１×１００ｍｍ）で分析した。
【０２０３】
項目５の実験条件：
【０２０４】
ペプチド配列（チモシン）＝（配列番号３）ＳＤＡＡＶＤＴＳＳＥＩＴＴＫＤＬＫＥＫＫＥＶＶＥＥＡＥＮ−ＮＨ２
【０２０５】
合成スケール＝０．１ｍｍｏｌ
【０２０６】
機器＝Ｌｉｂｅｒｔｙ  ＰＲＩＭＥマイクロ波ペプチド合成機（ＣＥＭ  Ｃｏｒｐ．、Ｍａｔｔｈｅｗｓ、ＮＣ）
【０２０７】
脱保護＝７５％ピロリジン
【０２０８】
マイクロ波脱保護方法＝１１０℃で６０秒
【０２０９】
洗浄＝脱保護後（３×４ｍＬ）；カップリング後＝なし
【０２１０】
カップリング＝４ｍＬ溶液中５倍過剰のＡＡ／ＤＩＣ／オキシマ（１：２．１）
【０２１１】
マイクロ波カップリング方法＝３０秒待機〜１０５℃で９０秒
【０２１２】
切断＝５ｍＬのＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ２Ｏ／ＤＯＤｔ（９２．５：２．５：２．５：２．５）で、ＲＡＺＯＲ切断システム（ＣＥＭ  Ｃｏｒｐ．、Ｍａｔｔｈｅｗｓ、ＮＣ）において３８℃で３０分間。
【０２１３】
分析＝ペプチドを、３１００シングル四重極ＭＳを備えたＷａｔｅｒｓ  ＵＰＬＣ  ＡＣＱＵＩＴＹ  Ｈ−Ｃｌａｓｓにて、溶媒系として０．１％ＴＦＡを含むアセトニトリル／水を使用して、Ｃ１８カラム（１．７ｍｍ、２．１×１００ｍｍ）で分析した。
【０２１４】
またＤＭＦを、表４に示すように、ＰＥＧ（ＰｒｏＴｉｄｅ）樹脂を伴う２０個のすべての標準アミノ酸を包含するＡＢＣ−２０ｍｅｒペプチドの合成において、以下の混合溶媒系と比較する：２５重量％のＮＦＭおよびアニソール；ならびに２５重量％のＮＦＭおよび１，３−ジメトキシベンゼン（１，３−ＤＭＢ）。下表４に示すように、すべての試薬および洗浄にＤＭＦを使用した場合と比較して、すべての試薬および洗浄の溶媒としてのアニソール混合物中の２５％のＮＦＭおよび１，３−ＤＭＢ混合物中の２５重量％のＮＦＭにより、同様の粗純度がもたらされる。
【表４】
2021526508.tif 000022
【０２１５】
項目１〜２の実験条件：
【０２１６】
ペプチド配列（ＡＢＣ−２０ｍｅｒ）＝（配列番号４）ＶＹＷＴＳＰＦＭＫＬＩＨＥＱＣＮＲＡＤＧ−ＮＨ２
【０２１７】
合成スケール＝０．１ｍｍｏｌ
【０２１８】
機器＝Ｌｉｂｅｒｔｙ  Ｂｌｕｅマイクロ波ペプチド合成機（ＣＥＭ  Ｃｏｒｐ．、Ｍａｔｔｈｅｗｓ、ＮＣ）
【０２１９】
脱保護＝２０％ピペリジン
【０２２０】
マイクロ波脱保護方法＝９０℃で１分
【０２２１】
洗浄＝脱保護後（２ｍＬ、２ｍＬ、３ｍＬ）；カップリング後＝なし
【０２２２】
カップリング＝４ｍＬ溶液中５倍過剰のＡＡ／ＤＩＣ／オキシマ（１：２．１）
【０２２３】
マイクロ波カップリング方法＝９０℃で２分
【０２２４】
切断＝５ｍＬのＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ２Ｏ／ＤＯＤｔ（９２．５：２．５：２．５：２．５）で、ＲＡＺＯＲ切断システム（ＣＥＭ  Ｃｏｒｐ．、Ｍａｔｔｈｅｗｓ、ＮＣ）において３８℃で３０分間。
【０２２５】
分析＝ペプチドを、３１００シングル四重極ＭＳを備えたＷａｔｅｒｓ  ＵＰＬＣ  ＡＣＱＵＩＴＹ  Ｈ−Ｃｌａｓｓにて、溶媒系として０．１％ＴＦＡを含むアセトニトリル／水を使用して、Ｃ１８カラム（１．７ｍｍ、２．１×１００ｍｍ）で分析した。
【０２２６】
項目３の実験条件：
【０２２７】
ペプチド配列（ＡＢＣ−２０ｍｅｒ）＝（配列番号４）ＶＹＷＴＳＰＦＭＫＬＩＨＥＱＣＮＲＡＤＧ−ＮＨ２
【０２２８】
合成スケール＝０．１ｍｍｏｌ
【０２２９】
機器＝Ｌｉｂｅｒｔｙ  ＰＲＩＭＥマイクロ波ペプチド合成機（ＣＥＭ  Ｃｏｒｐ．、Ｍａｔｔｈｅｗｓ、ＮＣ）
【０２３０】
脱保護＝７５％ピロリジン
【０２３１】
マイクロ波脱保護方法＝１１０℃で６０秒
【０２３２】
洗浄＝脱保護後（３×４ｍＬ）；カップリング後＝なし
【０２３３】
カップリング＝４ｍＬ溶液中５倍過剰のＡＡ／ＤＩＣ／オキシマ（１：２．１）
【０２３４】
マイクロ波カップリング方法＝３０秒待機〜１０５℃で９０秒
【０２３５】
切断＝５ｍＬのＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ２Ｏ／ＤＯＤｔ（９２．５：２．５：２．５：２．５）で、ＲＡＺＯＲ切断システム（ＣＥＭ  Ｃｏｒｐ．、Ｍａｔｔｈｅｗｓ、ＮＣ）において３８℃で３０分間。
【０２３６】
分析＝ペプチドを、３１００シングル四重極ＭＳを備えたＷａｔｅｒｓ  ＵＰＬＣ  ＡＣＱＵＩＴＹ  Ｈ−Ｃｌａｓｓにて、溶媒系として０．１％ＴＦＡを含むアセトニトリル／水を使用して、Ｃ１８カラム（１．７ｍｍ、２．１×１００ｍｍ）で分析した。
【０２３７】
ＡＢＣ  ２０ｍｅｒは、２０個すべての天然アミノ酸およびアスパルチミド形成の副産物としてエピマー化することができるｃ末端に配置されたＡｓｐ−Ｇｌｙセグメントを包含するので、エピマー化を比較するための良好な配列である。新しいＮＦＭ／アニソール溶媒混合物中で合成されたペプチドあたりのＡＢＣ２０の分析は、一般に、ＤＭＦ中で合成された場合よりも低いレベルのエピマー化を示した。このことは、溶媒混合物が、この制御が難しい副反応を最小限に抑えるために、少なくともＤＭＦと同じくらい優れているように見えるという点で、重要である。
【表５】
2021526508.tif 000023
【０２３８】
「実質的に」、「約」、「およそ」、および／または類似のものの１つまたは複数の用語について、前述の開示の各形容詞および副詞を限定し、幅広い開示を提供することは、本開示の範囲内である。一例として、当業者は、本開示の特質の異なる実施において、合理的に異なる工学公差、精度、および／または正確度が、所望の結果を得るのに適用可能であり、かつ好適であり得ることを容易に理解すると考えられる。したがって、当業者は、本明細書における「実質的に」、「約」、「およそ」などの用語の使用法を容易に理解すると考えられる。
【０２３９】
「および／または」という用語の使用は、１つまたは複数の関連する列挙された項目のありとあらゆる組合せを含む。
【０２４０】
前述において、実施形態の例が開示された。本発明は、そのような例示的実施形態に限定されない。前述において、ステップまたは他の動作の順序の説明は、例を提供する目的で説明されており、本開示の範囲を限定する目的ではない（例えば、適切な場合：ステップまたは動作は、上記とは異なる順序で実行してもよく、ステップおよび動作は、省略および／または追加されてもよい）。別途注記のない限り、特定の用語は、限定の目的ではなく、一般的かつ説明的な意味で使用されている。
【図１】
2021526508.tif 000045
【図２】
2021526508.tif 000046
【図３】
2021526508.tif 000047
【図４】
2021526508.tif 000048
【図５】
2021526508.tif 000049
【図６】
2021526508.tif 000050
【図７】
2021526508.tif 000051
【図８】
2021526508.tif 000052
【図９】
2021526508.tif 000053
【図１０】
2021526508.tif 000054
【図１１】
2021526508.tif 000055
【図１２】
2021526508.tif 000056
【図１３】
2021526508.tif 000057
【図１４】
2021526508.tif 000058
【手続補正書】
【提出日】令和3年1月18日(2021.1.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2021526508000001.app
【国際調査報告】
2021526508.tif 000059