(57)【要約】  本出願は、ＰＳＭＡ（例えば、細胞の表面上に発現されるＰＳＭＡ）に特異的に結合する抗体部分を含む構築物を提供する。これらの構築物を作製及び使用する方法も提供される。【選択図】図６
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号４４に記載のアミノ酸配列を含む細胞表面結合ＰＳＭＡの細胞外ドメインを特異的に認識する抗体部分を含む抗前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）構築物。
【請求項２】
抗体部分が、
ｉ）配列番号１−２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、又は最大約５個のアミノ酸置換を含むその変異体、配列番号３−４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、又は最大約５個のアミノ酸置換を含むその変異体、及び配列番号５−６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、又は最大約５個のアミノ酸置換を含むその変異体を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）；並びに
ｉｉ）配列番号７−８のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、又は最大約５個のアミノ酸置換を含むその変異体、アミノ酸配列ＧＮＳ若しくはＳＳＮを含むＣＤＲ−Ｌ２、又は約２個のアミノ酸置換を含むその変異体、及び配列番号９−１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、又は最大約５個のアミノ酸置換を含むその変異体を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）
を含む、請求項１に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項３】
抗体部分が、ｉ）配列番号１−２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３−４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、及び配列番号５−６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；並びにｉｉ）配列番号７−８のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、ＧＮＳ又はＳＮＮのアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び配列番号９−１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含むＶＬを含む、請求項２に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項４】
抗体部分が、
ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、及び配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；並びに配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、アミノ酸配列ＧＮＳを含むＣＤＲ−Ｌ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；又は
ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；並びに配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、アミノ酸配列ＳＮＮを含むＣＤＲ−Ｌ２、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含むＶＬ
を含む、請求項２又は３に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項５】
抗体部分が、配列番号１６又は１７に記載の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３、並びに配列番号１８又は１９に記載の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３を含む、請求項１に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項６】
抗体部分が、
（ａ）配列番号１６に記載のＶＨのＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３、並びに配列番号１８に記載のＶＬのＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３；又は
（ｂ）配列番号１７に記載のＶＨのＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３、並びに配列番号１９に記載のＶＬのＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３
を含む、請求項５に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項７】
抗体部分が、
ｉ）配列番号１６、配列番号１７、又は配列番号１６若しくは１７に対して少なくとも約８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ；及び配列番号１８、配列番号１９、又は配列番号１８若しくは１９に対して少なくとも約８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
ｉｉ）配列番号１６、又は配列番号１６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ；及び配列番号１８又は配列番号１８に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
ｉｉｉ）配列番号１７、又は配列番号１６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ；及び配列番号１９又は配列番号１８に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ；
ｉｖ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＶＬ；又は
ｖ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＬ
を含む、請求項１−６のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項８】
抗体部分が、
ｉ）配列番号１、３、及び５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、並びに配列番号７、ＧＮＳ、及び配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；又は
ｉｉ）配列番号２、４、及び６のアミノ酸配列を含むＶＨ、並びに配列番号８、ＳＳＮ、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ
を含む、請求項１に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項９】
ＰＳＭＡを特異的に認識する抗体部分が、キメラである、ヒトである、部分的にヒト化されている、完全にヒト化されている、又は半合成である、請求項１−８のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項１０】
ＰＳＭＡを特異的に認識する抗体部分が、完全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である、請求項１−９のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項１１】
ＰＳＭＡを特異的に認識する抗体部分が、ｓｃＦｖである、請求項１０に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項１２】
ｓｃＦｖが、
ｉ）配列番号２０に記載のアミノ酸配列若しくは配列番号２０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列；又は
ｉｉ）配列番号２１に記載のアミノ酸配列若しくは配列番号２１に対して少なくとも８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列
を含む、請求項１１に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項１３】
抗ＰＳＭＡ構築物が完全長抗体であり、該完全長抗体が、
ｉ）配列番号３９若しくは配列番号３９に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号４０若しくは配列番号４０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖；又は
ｉｉ）配列番号４１若しくは配列番号４１に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号４２若しくは配列番号４２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸を含む軽鎖
を含む、請求項１０に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項１４】
構築物が単一特異性である、請求項１−１３のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項１５】
構築物が多重特異性である、請求項１−１３のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項１６】
構築物が二重特異性である、請求項１５に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項１７】
構築物が、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディ（Ｄｂ）、単鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、二重親和性リターゲティング（ｄｕａｌ−ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ）（ＤＡＲＴ）抗体、Ｆ（ａｂ’）２、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体、ノブイントゥホール（ＫｉＨ）抗体、ドックアンドロック（ＤＮＬ）抗体、化学的に架橋された抗体、ヘテロ多量体抗体、又はヘテロコンジュゲート抗体である、請求項１５又は１６に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項１８】
構築物が、第２の抗原を特異的に認識する第２の抗体部分をさらに含む、請求項１５−１７のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項１９】
第２の抗原が、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、マクロファージ、単球、好中球、又はＴ細胞の表面上の抗原であり、
任意選択で、Ｔ細胞の表面上の抗原が、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、及びＨＶＥＭからなる群から選択される、請求項１８に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項２０】
構築物が、
（ａ）抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む細胞外ドメイン；
（ｂ）膜貫通ドメイン；及び
（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメイン
を含むＣＡＲである、請求項１−１２のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項２１】
細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζ、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、又はＣＤ６６ｄに由来する一次免疫細胞シグナル伝達配列を含む、請求項２０に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項２２】
細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＩＣＯＳ、又はＯＸ４０に由来する共刺激シグナル伝達配列をさらに含む、請求項２１に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項２３】
細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζに由来する一次免疫細胞シグナル伝達配列及びＣＤ２８に由来する共刺激シグナル伝達配列を含む、請求項２０−２２のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項２４】
ｉ）配列番号２９若しくは配列番号２９に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列；又は
ｉｉ）ｉ）配列番号３０若しくは配列番号３０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列
を含む、請求項２０−２３のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項２５】
構築物が、
（ａ）抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む細胞外ドメイン；及び
（ｂ）第１のＴＣＲ膜貫通ドメイン（ＴＣＲ−ＴＭ）を含む第１のＴＣＲドメイン（ＴＣＲＤ）及び第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含むＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）、を含み、ここで、該ＴＣＲＭが少なくとも１つのＴＣＲ会合シグナル伝達分子の動員を促進する、ｃａＴＣＲである、請求項１−９のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項２６】
第１のＴＣＲ−ＴＭ及び第２のＴＣＲ−ＴＭが、γ／δＴＣＲに由来し、
任意選択で、第１のＴＣＲ−ＴＭがＴＣＲγ鎖に由来し、第２のＴＣＲ−ＴＭがＴＣＲδ鎖に由来し、又は
任意選択で、第１のＴＣＲ−ＴＭがＴＣＲδ鎖に由来し、第２のＴＣＲ−ＴＭがＴＣＲγ鎖に由来する、請求項２５に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項２７】
構築物が、
ｉ）配列番号３１又は配列番号３１に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号３２又は配列番号３２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；
ｉｉ）配列番号３４又は配列番号３４に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号３５又は配列番号３５に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；
ｉｉｉ）配列番号１６５又は配列番号１６５に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１６６又は配列番号１６６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；
ｉｖ）配列番号１６７又は配列番号１６７に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１６８又は配列番号１６８に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；
ｖ）配列番号１６９又は配列番号１６９に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１７０又は配列番号１７０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；
ｖｉ）配列番号１７１又は配列番号１７１に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１７２又は配列番号１７２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；
ｖｉｉ）配列番号７３又は配列番号１７３に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１７４又は配列番号１７４に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；
ｖｉｉｉ）配列番号１７５又は配列番号１７５に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１７６又は配列番号１７６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；
ｉｘ）配列番号１７７又は配列番号１７７に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１７８又は配列番号１７８に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖；又は
ｘ）配列番号１７９又は配列番号１７９に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１８０又は配列番号１８０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖
を含む、請求項２７に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項２８】
ＴＣＲ会合シグナル伝達分子が、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びＣＤ３ζζからなる群から選択される、請求項２５−２７のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項２９】
ｃａＴＣＲが、機能的な一次免疫細胞シグナル伝達ドメインを欠いている、請求項２５−２８のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項３０】
構築物が、
ｉ）ＰＳＭＡと結合又は相互作用することができるリガンド結合モジュール；
ｉｉ）膜貫通モジュール；及び
ｉｉｉ）共刺激シグナルをエフェクター細胞に提供することができる共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュール
を含み、
ここで、該リガンド結合モジュールと共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールが同じ分子に由来せず、該ＣＳＲが機能的な一次免疫細胞シグナル伝達ドメインを欠いている、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）である、請求項１−９のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項３１】
ＣＳＲが、任意の一次免疫細胞シグナル伝達配列を欠いている、請求項３０に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項３２】
リガンド結合モジュールが、請求項１−２４のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物を含む、請求項３０又は３１に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項３３】
ＣＳＲの膜貫通モジュールとＣＳＲの共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールが同じ分子に由来し、
任意選択で、分子が、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドからなる群から選択される、請求項３０から３２のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項３４】
ＣＳＲの膜貫通モジュールとＣＳＲの共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールが異なる分子に由来し、
任意選択で、ＣＳＲの膜貫通モジュールが、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、又はＴ細胞受容体のα、β、δ、γ、若しくはζ鎖、配列番号９４−９９のいずれか１つを含む配列、又は配列番号９４−９９のいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
任意選択で、共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールが、ＴＣＲの共刺激受容体の細胞内ドメインに由来し、任意選択で、共刺激受容体が、４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ４０、配列番号１００−１０３及び１８３のいずれか１つ、又は配列番号１００−１０３及び１８３のいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有する配列からなる群から選択される、請求項３０から３３のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項３５】
配列番号３７−３８、５５−８４、９３、及び１８４−１８６のいずれか１つのアミノ酸配列、又は、配列番号３７−３８、５５−８４、９３、及び１８４−１８６のいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；
任意選択で、抗ＰＳＭＡ構築物がシグナルペプチドをさらに含み、
任意選択で、該シグナルペプチドが、ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧ  配列番号１２８の配列を含む、請求項３１−３４のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項３６】
エフェクター分子が、検出可能な標識であるか、又は薬物、毒素、放射性同位元素、タンパク質、ペプチド、及び核酸からなる群から選択される治療剤である、該エフェクター分子にコンジュゲートされた、請求項１−１９のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
【請求項３７】
請求項２０−２４のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ又は請求項２５−２９のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードする１つ又は複数の核酸で遺伝子改変されているエフェクター細胞であって、
ここで、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ又は抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードする１つ又は複数の核酸がまた、標的抗原に結合するリガンド結合モジュールを含むＣＳＲ又は標的抗原に結合する第１のｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖをコードし；あるいは
ここで、エフェクター細胞が、標的抗原に結合するリガンド結合モジュールを含むＣＳＲ又は標的抗原に結合する第１のｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖをコードする１つ又は複数の追加の核酸で遺伝子改変されており、
任意選択で、エフェクター細胞が、免疫細胞であり、
任意選択で、免疫細胞が、Ｔ細胞であり、
任意選択で、Ｔ細胞が、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞である、エフェクター細胞。
【請求項３８】
請求項１７−１９のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡタンデムｓｃＦｖ又は請求項３０−３５のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲをコードする１つ又は複数の核酸で遺伝子改変されているエフェクター細胞であって、
任意選択で、エフェクター細胞が、免疫細胞であり、
任意選択で、免疫細胞が、Ｔ細胞であり、
任意選択で、Ｔ細胞が、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞である、エフェクター細胞。
【請求項３９】
請求項２０−２４のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ又は請求項２５−２９のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードする１つ又は複数の核酸で細胞を遺伝子改変することを含む、エフェクター細胞を生成する方法であって、
任意選択で、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ又は抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードする１つ又は複数の核酸がまた、標的抗原に結合するリガンド結合モジュールを含むＣＳＲ、又は標的抗原に結合する第１のｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖをコードし；あるいは
任意選択で、該方法が、標的抗原に結合するリガンド結合モジュールを含むＣＳＲ又は標的抗原に結合する第１のｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖをコードする１つ又は複数の追加の核酸で細胞をさらに遺伝子改変することをさらに含み；
任意選択で、エフェクター細胞が、免疫細胞であり、
任意選択で、免疫細胞が、Ｔ細胞であり、
任意選択で、Ｔ細胞が、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞である、方法。
【請求項４０】
請求項１７−１９のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡタンデムｓｃＦｖ又は請求項３０−３５のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲをコードする１つ又は複数の核酸で細胞を遺伝子改変することを含む、エフェクター細胞を生成する方法であって；
任意選択で、エフェクター細胞が、免疫細胞であり、
任意選択で、免疫細胞が、Ｔ細胞であり、
任意選択で、Ｔ細胞が、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞である、方法。
【請求項４１】
請求項１−３５のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物のポリペプチド部分をコードする核酸。
【請求項４２】
請求項４１に記載の核酸を含むベクター。
【請求項４３】
請求項４１に記載の核酸、又は４２に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項４４】
抗ＰＳＭＡ構築物が発現される条件下で請求項４３に記載の宿主細胞を培養すること、及び宿主細胞によって産生された抗ＰＳＭＡ構築物を回収することを含む、請求項１−１９のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物を産生する方法。
【請求項４５】
請求項１−１９及び３６のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物、請求項３７又は３８に記載のエフェクター細胞、請求項４１に記載の核酸、及び／又は請求項４２に記載のベクター及び薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物。
【請求項４６】
請求項１−１９及び３６のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物、請求項３７又は３８に記載のエフェクター細胞、請求項４１に記載の核酸、請求項４２に記載のベクター、及び／又は請求項４３に記載の宿主細胞を含むキット。
【請求項４７】
試料を請求項３６に記載の抗ＰＳＭＡ構築物と接触させることと、エフェクター分子が検出可能な標識である、該標識の存在を検出することとを含む、試料中のＰＳＭＡを検出する方法。
【請求項４８】
ＰＳＭＡ関連疾患又は障害を有する個体を治療する方法であって、
ｉ）請求項４５に記載の薬学的組成物の有効量を個体に投与すること；又は
ｉｉ）請求項３７又は３８に記載のエフェクター細胞を個体に投与すること
を含み；
任意選択で、該方法が、個体に追加の治療を投与することをさらに含み；
任意選択で、ＰＳＭＡ関連疾患又は障害が、がんであり；
任意選択で、哺乳動物が、ヒトである、方法。
【請求項４９】
ＰＳＭＡ関連疾患又は障害を有すると疑われる個体を診断する方法であって、
ａ）エフェクター分子が検出可能な標識である、請求項３６に記載の抗ＰＳＭＡ構築物の有効量を個体に投与すること；及び
ｂ）個体における標識のレベルを決定することであって、ここで、閾値レベルを上回る標識のレベルが、個体がＰＳＭＡ関連疾患又は障害を有することを示す、決定すること
を含み；
任意選択で、ＰＳＭＡ関連疾患又は障害が、がんであり；
任意選択で、哺乳動物が、ヒトである、方法。
【請求項５０】
ＰＳＭＡ関連疾患又は障害を有すると疑われる個体を診断する方法であって、
ａ）個体に由来する細胞を含む試料を、請求項１１４に記載の抗ＰＳＭＡ構築物と接触させること；及び
ｂ）抗ＰＳＭＡ構築物と結合した試料中の細胞の数を決定することであって、ここで、閾値レベルを上回る、抗ＰＳＭＡ構築物と結合した細胞の数の値が、個体がＰＳＭＡ関連疾患又は障害を有することを示す、決定すること
を含み；
任意選択で、ＰＳＭＡ関連疾患又は障害が、がんであり；
任意選択で、哺乳動物が、ヒトである、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年６月１８日に出願された米国特許仮出願第６２／６８６６０５号の優先権を主張するものであり、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
ＡＳＣＩＩテキストファイルの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出物の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる：コンピュータ読取可能形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：７５００４２００１５４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０１９年６月１４日、サイズ：４８７ＫＢ）。
【０００３】
発明の分野
本開示は、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）に特異的に結合するポリペプチド構築物、並びに疾患の治療及び診断を含むその使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
発明の背景
前立腺がんは、米国人男性で２番目に多いがんであり、がん関連の死亡の２番目に多い原因である。米国では、毎年２７，０００人以上の前立腺がんによる死亡がある（米国がん協会）。根治的前立腺切除術又は根治的放射線療法を受けている前立腺がん患者の３５−６１％が、最終的に再発する。これらの患者はアンドロゲン除去療法に一過性に反応し得るが、大多数はその後、治癒的全身療法が不足しているホルモン抵抗性疾患に進行するであろう（Perambakam S, et al., Clin. Dev. Immunol. 2010; Epub 2011 Jan 5）。
【０００５】
前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）は、全ての腫瘍段階で前立腺腫瘍細胞の表面に高度に発現する７５０アミノ酸のＩＩ型膜貫通糖タンパク質であり、去勢抵抗性前立腺がん及び転移性前立腺がんにおいて上方制御されることが知られている(Afshar-Oromieh, A. et al., J. Nucl. Med. 2016, 57: 79S）。結腸がん、卵巣がん、乳がん、及び腎臓がんを含む他の固形腫瘍では、ＰＳＭＡ発現の上昇が腫瘍新生血管系で観察されているが、正常血管系では観察されておらず、血管新生におけるＰＳＭＡの役割を示唆している。ほとんどのＰＳＭＡ発現は前立腺に限定されているように見えるが、低レベルの発現は脳、腎臓、唾液腺、及び小腸で見られる。
【０００６】
小分子ＰＳＭＡリガンドは、前立腺がんのリンパ節や骨への転移の検出における画像研究で使用されてきた。ＰＳＭＡの発現パターンを考えると、それは治療標的としても探求されてきた。ＰＳＭＡを標的とする現在の免疫療法アプローチには、ペプチド、細胞、ベクター又はＤＮＡベースのワクチン、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の投与又はＰＳＭＡに対するＤＮＡコード化ｍＡｂの発現（Muthumani, K. et al., Cancer Immunol. Immunother. 2017, 66: 1577）及びキメラ抗原受容体キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）修飾Ｔ細胞（Junghans, RP et al., Prostate. 2016, 76: 1257）が含まれる。正常組織におけるＰＳＭＡの発現が報告されているにもかかわらず、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞を使用した第Ｉ相臨床試験では、抗ＰＳＭＡ毒性は観察されなかった。
【０００７】
したがって、がんの診断及び／又は治療のためにＰＳＭＡを標的とする薬剤（ポリペプチド構築物など）に対する当技術分野における必要性が残されている。本出願は、これら及び他の必要性に対処する。
【０００８】
本明細書で言及される全ての刊行物、特許、特許出願、及び公開された特許出願の開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【発明の概要】
【０００９】
発明の概要
いくつかの実施態様では、配列番号４４に記載のアミノ酸配列を含む細胞表面結合ＰＳＭＡの細胞外ドメインを特異的に認識する抗体部分を含む抗前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）構築物が提供される。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ＰＳＭＡは、がん細胞の表面上に発現される。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、がん細胞は、前立腺がん細胞、腎細胞がん細胞、子宮がん細胞、又は肝臓がん細胞である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、がん細胞は前立腺がん細胞である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、前立腺がん細胞は、ホルモン抵抗性前立腺がん細胞又は転移性前立腺がん細胞である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、がん細胞は腎がん細胞である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、腎がん細胞は腎明細胞がん（ＣＣＲＣＣ）細胞である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ＰＳＭＡは、ＬＮＣａＰ、ＭＤＡ  ＰＣａ  ２ｂ、ＶＣａＰ、２２Ｒｖ１、Ｃａｋｉ−１；ＨＣＣ１４８２；及びＨｕＨ−７からなる群から選択される細胞の表面上に発現される。
【００１０】
上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗体部分は、ｉ）配列番号１−２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、又は最大約５個のアミノ酸置換を含むその変異体、配列番号３−４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、又は最大約５個のアミノ酸置換を含むその変異体、及び配列番号５−６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、又は最大約５個のアミノ酸置換を含むその変異体を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）；並びにｉｉ）配列番号７−８のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、又は最大約５個のアミノ酸置換を含むその変異体、アミノ酸配列ＧＮＳ若しくはＳＳＮを含むＣＤＲ−Ｌ２、又は約２個のアミノ酸置換を含むその変異体、及び配列番号９−１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、又は最大約５個のアミノ酸置換を含むその変異体を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗体部分は、ｉ）配列番号１−２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３−４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、及び配列番号５−６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；並びにｉｉ）配列番号７−８のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、ＧＮＳ又はＳＮＮのアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び配列番号９−１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含むＶＬを含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗体部分は、ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、及び配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；並びにｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、アミノ酸配列ＧＮＳを含むＣＤＲ−Ｌ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗体部分は、ｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；並びにｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、アミノ酸配列ＳＮＮを含むＣＤＲ−Ｌ２、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含むＶＬを含む。
【００１１】
上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗体部分は、配列番号１６又は１７に記載の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３、並びに配列番号１８又は１９に記載の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３を含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗体部分は、配列番号１６に記載のＶＨのＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３、並びに配列番号１８に記載のＶＬのＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３を含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗体部分は、配列番号１７に記載のＶＨのＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３、並びに配列番号１９に記載のＶＬのＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３を含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗体部分は、ｉ）配列番号１６又は１７に対して少なくとも約８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、及びｉｉ）配列番号１８又は１９に対して少なくとも約８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗体部分は、ｉ）配列番号１６又は１７に対して少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、及びｉｉ）配列番号１８又は１９に対して少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗体部分は、ｉ）配列番号１６又は１７に対して少なくとも約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、及びｉｉ）配列番号１８又は１９に対して少なくとも約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗体部分は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗体部分は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗体部分は、ｉ）配列番号１、３、及び５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、並びに配列番号７、ＧＮＳ、及び配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；又はｉｉ）配列番号２、４、及び６のアミノ酸配列を含むＶＨ、並びに配列番号８、ＳＳＮ、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【００１２】
上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ＰＳＭＡを特異的に認識する抗体部分は、キメラである、ヒトである、部分的にヒト化されている、完全にヒト化されている、又は半合成である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ＰＳＭＡを特異的に認識する抗体部分は、完全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ＰＳＭＡを特異的に認識する抗体部分は、ｓｃＦｖである。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ｓｃＦｖは、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ｓｃＦｖは、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ＰＳＭＡを特異的に認識する抗体部分は、Ｆａｂ又はＦａｂ’である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ＰＳＭＡを特異的に認識する抗体部分は、任意選択でリンカーを介してＦｃ断片に融合される。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、Ｆｃ断片はヒトＩｇＧ  Ｆｃ断片である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ヒトＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ抗体部分は、完全長抗体である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、完全長抗体は、配列番号３９に記載のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号４０に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、完全長抗体は、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号４２に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は単一特異性である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は多重特異性である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は二重特異性である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディ（Ｄｂ）、単鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、二重親和性リターゲティング（ｄｕａｌ−ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ）（ＤＡＲＴ）抗体、Ｆ（ａｂ’）２、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体、ノブイントゥホール（ＫｉＨ）抗体、ドックアンドロック（ＤＮＬ）抗体、化学的に架橋された抗体、ヘテロ多量体抗体、又はヘテロコンジュゲート抗体である。
【００１３】
上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、ペプチドリンカーによって連結された２つのｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖである。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、第２の抗原を特異的に認識する第２の抗体部分をさらに含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、第２の抗原は、Ｔ細胞の表面上の抗原である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞からなる群から選択される。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、第２の抗原は、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、及びＨＶＥＭからなる群から選択される。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、第２の抗原はＣＤ３εである。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、ＰＳＭＡを特異的に認識するＮ末端ｓｃＦｖ及びＣＤ３εを特異的に認識するＣ末端ｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖである。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、配列番号２５又は２６に記載のアミノ酸配列を含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、配列番号２７又は２８に記載のアミノ酸配列を含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物の発現は、操作されたＴ細胞の活性化によって誘導される。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、操作されたＴ細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含むＴ細胞である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ＣＡＲはＰＳＭＡに特異的に結合する。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ＣＡＲはＰＳＭＡ以外の抗原に結合する。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、操作されたＴ細胞は、キメラ抗体−Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）構築物（ｃａＴＣＲ）を含むＴ細胞である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ｃａＴＣＲはＰＳＭＡに特異的に結合する。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ｃａＴＣＲはＰＳＭＡ以外の抗原に結合する。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物の第２の抗体部分によって結合される第２の抗原は、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、マクロファージ、単球、又は好中球の表面上の抗原である。
【００１４】
上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、（ａ）抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む細胞外ドメイン；（ｂ）膜貫通ドメイン；及び（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲである。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、又はＣＤ６６ｄに由来する一次免疫細胞シグナル伝達配列を含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＩＣＯＳ、又はＯＸ４０に由来する共刺激シグナル伝達配列をさらに含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列及びＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列を含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含む。
【００１５】
上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、（ａ）抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む細胞外ドメイン；及び（ｂ）第１のＴＣＲ膜貫通ドメイン（ＴＣＲ−ＴＭ）を含む第１のＴＣＲドメイン（ＴＣＲＤ）及び第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含むＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）を含み、ここで、該ＴＣＲＭが少なくとも１つのＴＣＲ会合シグナル伝達分子の動員を促進する、ｃａＴＣＲである。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、第１のＴＣＲ−ＴＭは、第１の天然に存在するＴＣＲの膜貫通ドメインの１つに由来し、第２のＴＣＲ−ＴＭは、第１の天然に存在するＴＣＲの他の膜貫通ドメインに由来する。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ＴＣＲ−ＴＭの少なくとも１つは、天然には存在しない。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、少なくとも１つの天然には存在しないＴＣＲ−ＴＭを含むＴＣＲＭは、第１の天然に存在するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ会合シグナル伝達分子の増強された動員を可能にする。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、第１及び第２のＴＣＲ−ＴＭは、天然に存在する。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、第１の天然に存在するＴＣＲはγ／δＴＣＲである。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖と、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖とを含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖と、配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖とを含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、第１の天然に存在するＴＣＲはα／βＴＣＲである。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ＴＣＲ会合シグナル伝達分子は、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びＣＤ３ζζからなる群から選択される。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ｃａＴＣＲは機能的な一次免疫細胞シグナル伝達ドメインを欠いている。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ｃａＴＣＲは、任意の一次免疫細胞シグナル伝達配列を欠いている。
【００１６】
上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、ｉ）ＰＳＭＡと結合又は相互作用することができるリガンド結合モジュール；ｉｉ）膜貫通モジュール；及びｉｉｉ）共刺激シグナルをエフェクター細胞に提供することができる共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールを含むキメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）であり、ここで、リガンド結合モジュールと共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールは同じ分子に由来せず、ＣＳＲは機能的な一次免疫細胞シグナル伝達ドメインを欠いている。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ＣＳＲは、任意の一次免疫細胞シグナル伝達配列を欠いている。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、リガンド結合モジュールは、請求項１−２３のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物を含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ＣＳＲの膜貫通モジュールは、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、又はＣＤ１５４に由来する膜貫通ドメインを含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールは、ＴＣＲの共刺激受容体の細胞内ドメインに由来する。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、共刺激受容体は、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、及びＣＤ４０からなる群から選択される。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ＣＳＲの発現は、操作されたＴ細胞の活性化の際に誘導可能である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、操作されたＴ細胞は、ＣＡＲを含むＴ細胞である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ＣＡＲはＰＳＭＡに特異的に結合する。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ＣＡＲはＰＳＭＡ以外の抗原に結合する。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、操作されたＴ細胞は、ｃａＴＣＲを含むＴ細胞である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ｃａＴＣＲはＰＳＭＡに特異的に結合する。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ｃａＴＣＲはＰＳＭＡ以外の抗原に結合する。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、配列番号３７に記載のアミノ酸配列を含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、配列番号３８に記載のアミノ酸配列を含む。
【００１７】
上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、エフェクター分子にコンジュゲートされている。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、エフェクター分子は、薬物、毒素、放射性同位元素、タンパク質、ペプチド、及び核酸からなる群から選択される治療剤である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、治療剤は、薬物又は毒素である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、エフェクター分子は、検出可能な標識である。
【００１８】
本発明の別の態様では、上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ又は上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードする１つ又は複数の核酸で遺伝子改変されているエフェクター細胞が提供される。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ又は抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードする１つ又は複数の核酸はまた、標的抗原に結合するリガンド結合モジュールを含むＣＳＲをコードする。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、エフェクター細胞は、標的抗原に結合するリガンド結合モジュールを含むＣＳＲをコードする１つ又は複数の追加の核酸で遺伝子改変されている。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、標的抗原はＰＳＭＡである。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、標的抗原は、ＰＳＭＡ以外の抗原である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ又は抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードする１つ又は複数の核酸はまた、標的抗原に結合する第１のｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖをコードする。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、エフェクター細胞は、標的抗原に結合する第１のｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖをコードする１つ又は複数の追加の核酸で遺伝子改変されている。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、標的抗原はＰＳＭＡである。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、標的はＰＳＭＡ以外の抗原である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）抗ＰＳＭＡタンデムｓｃＦｖ又は上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲをコードする１つ又は複数の核酸で遺伝子改変されているエフェクター細胞が提供される。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡタンデムｓｃＦｖ又は抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲをコードする１つ又は複数の核酸はまた、ＣＡＲをコードする。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、エフェクター細胞は、ＣＡＲをコードする１つ又は複数の追加の核酸で遺伝子改変されている。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ＣＡＲはＰＳＭＡに特異的に結合する。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ＣＡＲはＰＳＭＡ以外の抗原に特異的に結合する。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡタンデムｓｃＦｖ又は抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲをコードする１つ又は複数の核酸はまた、ｃａＴＣＲをコードする。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、エフェクター細胞は、ｃａＴＣＲをコードする１つ又は複数の追加の核酸で遺伝子改変されている。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ｃａＴＣＲはＰＳＭＡに特異的に結合する。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ｃａＴＣＲはＰＳＭＡ以外の抗原に特異的に結合する。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、エフェクター細胞は免疫細胞である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、免疫細胞はＴ細胞である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞である。
【００１９】
本発明の別の態様では、上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ、又は上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードする１つ又は複数の核酸で細胞を遺伝子改変することを含む、エフェクター細胞を生成する方法が提供される。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ又は抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードする１つ又は複数の核酸はまた、標的抗原に結合するリガンド結合モジュールを含むＣＳＲをコードする。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、方法は、標的抗原に結合するリガンド結合モジュールを含むＣＳＲをコードする１つ又は複数の追加の核酸で細胞をさらに遺伝子改変することを含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、標的抗原はＰＳＭＡである。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、標的抗原はＰＳＭＡ以外の抗原である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ又は抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードする１つ又は複数の核酸はまた、標的抗原に結合する第１のｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖをコードする。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、方法は、標的抗原に結合する第１のｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖをコードする１つ又は複数の追加の核酸で細胞をさらに遺伝子改変することを含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、標的抗原はＰＳＭＡである。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、標的はＰＳＭＡ以外の抗原である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）抗ＰＳＭＡタンデムｓｃＦｖ又は上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲをコードする１つ又は複数の核酸で細胞を遺伝子改変することを含む、エフェクター細胞を生成する方法が提供される。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡタンデムｓｃＦｖ又は抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲをコードする１つ又は複数の核酸はまた、ＣＡＲをコードする。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、方法は、ＣＡＲをコードする１つ又は複数の追加の核酸で細胞をさらに遺伝子改変することを含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ＣＡＲはＰＳＭＡに特異的に結合する。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ＣＡＲはＰＳＭＡ以外の抗原に特異的に結合する。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ又は抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードする１つ又は複数の核酸はまた、ｃａＴＣＲをコードする。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、方法は、ｃａＴＣＲ���コードする１つ又は複数の追加の核酸で細胞をさらに遺伝子改変することを含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ｃａＴＣＲはＰＳＭＡに特異的に結合する。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ｃａＴＣＲはＰＳＭＡ以外の抗原に特異的に結合する。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、エフェクター細胞は免疫細胞である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、免疫細胞はＴ細胞である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞である。
【００２０】
本発明の別の態様では、上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）抗ＰＳＭＡ構築物のポリペプチド部分をコードする核酸が提供される。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）核酸を含むベクターも提供される。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）核酸又はベクターを含む宿主細胞も提供される。
【００２１】
抗ＰＳＭＡ構築物が発現される条件下で上記の実施態様のいずれかに従って（又は適用されるように）宿主細胞を培養すること、及び宿主細胞によって産生された抗ＰＳＭＡ構築物を回収することを含む、上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）抗ＰＳＭＡ構築物を産生する方法も提供される。
【００２２】
本発明の別の態様では、上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）抗ＰＳＭＡ構築物、上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）エフェクター細胞、上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）核酸、又は、上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）ベクター、及び薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物が提供される。
【００２３】
本発明の別の態様では、上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）抗ＰＳＭＡ構築物、上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）エフェクター細胞、上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）核酸、上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）ベクター及び／又は上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）宿主細胞を含むキットが提供される。
【００２４】
本発明の別の態様は、検出可能な標識にコンジュゲートされた上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）抗ＰＳＭＡ構築物と試料を接触させること、及び標識の存在を検出することを含む、試料中のＰＳＭＡを検出する方法を提供する。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ＰＳＭＡを発現する細胞を含む試料が提供される。
【００２５】
本発明の別の態様は、上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）薬学的組成物の有効量を個体に投与することを含む、ＰＳＭＡ関連疾患又は障害を有する個体を治療する方法を提供する。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ、又は上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードする１つ又は複数の核酸で遺伝子改変されているエフェクター細胞を個体に投与することを含む、ＰＳＭＡ関連疾患又は障害を有する個体を治療する方法が提供される。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、方法は、投与前にエフェクター細胞を１つ又は複数の核酸で遺伝子改変することを含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ又は抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードする１つ又は複数の核酸はまた、ＣＳＲ又はタンデムｓｃＦｖをコードする。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、方法は、ＣＳＲ又はタンデムｓｃＦｖをコードする１つ又は複数の追加の核酸でエフェクター細胞をさらに遺伝子改変することを含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、タンデムｓｃＦｖはＰＳＭＡに特異的に結合する。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、タンデムｓｃＦｖはＰＳＭＡ以外の抗原に特異的に結合する。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ＣＳＲはＰＳＭＡに特異的に結合する。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ＣＳＲはＰＳＭＡ以外の抗原に特異的に結合する。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）抗ＰＳＭＡタンデムｓｃＦｖ、又は上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲをコードする１つ又は複数の核酸で遺伝子改変されているエフェクター細胞を個体に投与することを含む、ＰＳＭＡ関連疾患又は障害を有する個体を治療する方法が提供される。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、方法は、投与前にエフェクター細胞を１つ又は複数の核酸で遺伝子改変することを含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ又は抗ＰＳＭＡタンデムｓｃＦｖをコードする１つ又は複数の核酸はまた、ＣＡＲ又はｃａＴＣＲをコードする。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、方法は、ＣＡＲ又はｃａＴＣＲをコードする１つ又は複数の追加の核酸でエフェクター細胞をさらに遺伝子改変することを含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ＣＡＲはＰＳＭＡに特異的に結合する。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ＣＡＲはＰＳＭＡ以外の抗原に特異的に結合する。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ｃａＴＣＲはＰＳＭＡに特異的に結合する。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ｃａＴＣＲはＰＳＭＡ以外の抗原に特異的に結合する。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、エフェクター細胞は免疫細胞である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、免疫細胞はＴ細胞である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、方法は、エフェクター細胞を遺伝子改変して投与する前に、個体からエフェクター細胞を得ることをさらに含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、エフェクター細胞が得られる個体は、遺伝子改変されたエフェクター細胞が投与される個体である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、エフェクター細胞が得られる個体は、遺伝子改変されたエフェクター細胞が投与される個体ではない。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、遺伝子改変されたエフェクター細胞は、遺伝子改変されたエフェクター細胞が投与される個体に関して同種異系である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、遺伝子改変されたエフェクター細胞は、遺伝子改変されたエフェクター細胞が投与される個体に関して同系である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、遺伝子改変されたエフェクター細胞は、遺伝子改変されたエフェクター細胞が投与される個体に関して異種である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ＰＳＭＡ関連疾患又は障害を有する個体を治療する方法は、個体に追加の治療を投与することを含む。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ＰＳＭＡ関連疾患又は障害はがんである。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、がんは、前立腺がん、腎がん細胞、子宮がん及び肝臓がんからなる群から選択される。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、がんは前立腺がんである。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、前立腺がんは、ホルモン抵抗性前立腺がん又は転移性前立腺がんである。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、がんは腎がんである。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、腎がんは腎明細胞がん（ＣＣＲＣＣ）である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ＰＳＭＡ関連疾患又は障害を有する個体は哺乳動物である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、哺乳動物はヒトである。
【００２６】
本発明の別の態様は、ＰＳＭＡ関連疾患又は障害を有すると疑われる個体を診断する方法であって、ａ）検出可能な標識にコンジュゲートされた上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）抗ＰＳＭＡ構築物の有効量を個体に投与すること；及びｂ）個体における標識のレベルを決定することであって、ここで、閾値レベルを上回る標識のレベルが、個体がＰＳＭＡ関連疾患又は障害を有することを示す、決定することを含む方法を提供する。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ＰＳＭＡ関連疾患又は障害を有すると疑われる個体を診断する方法であって、ａ）検出可能な標識にコンジュゲートされた上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）抗ＰＳＭＡ構築物と、個体に由来する試料とを接触させること；及びｂ）試料中の抗ＰＳＭＡ構築物と結合した細胞の数を決定することを含み、ここで、閾値レベルを超える抗ＰＳＭＡ構築物と結合した細胞の数の値が、個体がＰＳＭＡ関連疾患又は障害を有することを示す、方法を提供する。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ＰＳＭＡ関連疾患又は障害はがんである。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、がんは、前立腺がん、腎がん細胞、子宮がん及び肝臓がんからなる群から選択される。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、がんは前立腺がんである。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、前立腺がんは、ホルモン抵抗性前立腺がん又は転移性前立腺がんである。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、がんは腎がんである。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、腎がんは腎明細胞がん（ＣＣＲＣＣ）である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、ＰＳＭＡの発現、異常な発現、及び／又は異常な活性に関連する疾患又は障害を有すると疑われる個体は哺乳動物である。上記の実施態様のいずれかに従った（又は適用される）いくつかの実施態様では、哺乳動物はヒトである。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１−１】図１は、ＰＳＭＡ陽性及びＰＳＭＡ陰性細胞へのファージクローンＡ及びＢの結合を評価するために実施されたフローサイトメトリー実験の結果を示す。
【図１−２】図１は、ＰＳＭＡ陽性及びＰＳＭＡ陰性細胞へのファージクローンＡ及びＢの結合を評価するために実施されたフローサイトメトリー実験の結果を示す。
【図２】図２は、クローンＡ又はクローンＢに由来するｓｃＦｖ部分を含むＣＡＲを発現するＴ細胞による標的細胞の特異的死滅を評価するために実施された実験の結果を示す。
【図３】図３は、クローンＡ又はクローンＢに由来するｓｃＦｖ部分を含むＣＡＲを発現するＴ細胞による特異的ＩＦＮガンマ放出を評価するために実施された実験の結果を示す。
【図４】図４は、例示的なｃａＴＣＲの概略図を提供する。Ｆａｂ断片は、クローンＡ又はクローンＢに由来する。
【図５】図５は、クローンＡ及びクローンＢが、抗原に応答してＴ細胞増殖を刺激するために複数の受容体構成（例えば、ＣＡＲ又はｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ）において使用できることを確認するフローサイトメトリー実験の結果を示す。
【図６】図６は、異なる抗ＰＳＭＡ構築物の構成及び構築物の組み合わせにおいてクローンＡ及び／又はクローンＢを発現するＴ細胞による３つのＰＳＭＡ＋標的細胞株の特異的死滅を評価するために実施された実験の結果を示す。
【図７】図７は、異なる抗ＰＳＭＡ構築物の構成及び構築物の組み合わせにおいてクローンＡ及び／又はクローンＢを発現するＴ細胞による３つのＰＳＭＡ＋標的細胞株の特異的死滅を評価するために実施された追加実験の結果を示す。
【図８】図８は、異なる抗ＰＳＭＡ構築物の構成及び構築物の組み合わせにおいてクローンＡ及び／又はクローンＢを発現するＴ細胞による２つのＰＳＭＡ＋標的細胞株の特異的死滅を評価するために実施された実験の結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
発明の詳細な説明
本出願は、がん細胞などの細胞の表面上に発現される前立腺特異的膜抗原、又は「ＰＳＭＡ」（例えば、ヒトＰＳＭＡなどのＰＳＭＡ）に特異的に結合する抗体部分（本明細書では「抗ＰＳＭＡ抗体部分」と呼ばれる）を含む単離された構築物（本明細書では「抗ＰＳＭＡ構築物」と呼ばれる）を提供する。抗ＰＳＭＡ構築物は、ＰＳＭＡを発現する（又は過剰発現する）疾患細胞など、ＰＳＭＡを発現する細胞（例えば、それらの表面にＰＳＭＡを発現する細胞）の特異的標的化を可能にする。Ｔ細胞によって発現されるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はキメラ抗体−Ｔ細胞受容体構築物（ｃａＴＣＲ）に存在する場合、抗ＰＳＭＡ抗体部分は、ＰＳＭＡを発現する標的細胞（例えば、がん細胞）を死滅させるようにヒトＴ細胞を特異的にリダイレクトする。さらに、検出可能な標識に融合された場合、抗ＰＳＭＡ抗体部分は、ＰＳＭＡ発現細胞の数及び局在の変化を視覚化するために使用することができる。そのような情報は、次いで、ＰＳＭＡ関連疾患又は障害を診断及び／又は予知するために使用することができる。
【００２９】
本出願は、ＰＳＭＡ（例えば、がん細胞などの細胞の表面上に発現されるＰＳＭＡ）に特異的に結合する抗体部分を含む構築物（単離された構築物など）を提供する。例示的な構築物には、限定されないが、例えば、完全長抗ＰＳＭＡ抗体、多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物（二重特異性抗ＰＳＭＡ抗体など）、抗ＰＳＭＡキメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）、抗ＰＳＭＡキメラ抗体−Ｔ細胞受容体構築物（ｃａＴＣＲ）、抗ＰＳＭＡキメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲート、並びに以下でさらに詳細に説明されるように、他の構築物が挙げられる。本明細書に記載の構築物のそれぞれは、天然形態のヒトＰＳＭＡ（例えば、がん細胞などの細胞の表面上に発現される）に対して高い特異性を示す。
【００３０】
本出願はまた、本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ構築物（又はそのポリペプチド部分）をコードする核酸を提供する。
【００３１】
本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ構築物、又は本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ構築物を発現する又はそれと会合したエフェクター細胞（抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ、又は抗ＰＳＭＡキメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）を発現するＴ細胞など）を含む組成物（薬学的組成物又は製剤など）も本明細書に提供される。
【００３２】
本出願はまた、治療のために、診断目的のために、予後の目的のために、及びＰＳＭＡ関連疾患及び障害の治療、診断、及び／又は予後のために有用なキット及び製造品の中に含めるための、抗ＰＳＭＡ構築物（又は抗ＰＳＭＡ構築物を発現する又はそれと会合したエフェクター細胞）を作製及び使用する方法を提供する。
【００３３】
定義
開示された実施形態を詳細に説明する前に、本開示は、もちろん変化し得る特定の組成物又は生物学的システムに限定されないことを理解されたい。本明細書で使用される用語は、特定の実施態様を説明することのみを目的としており、限定することを意図するものではないことも理解されたい。
【００３４】
本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、内容が明確に別段の指示をしない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「分子（ａ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）」への言及は、任意選択で、２つ以上のかかる分子の組み合わせなどを含む。
【００３５】
本明細書で使用される場合、「前立腺特異的膜抗原」又は「ＰＳＭＡ」は、特に明記しない限り、霊長類（例えば、ヒト、非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル又はアカゲザル））及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源由来の任意の天然ＰＳＭＡを指す。用語は、「完全長」の、未処理のＰＳＭＡと、細胞内でのプロセシングから生じた任意の形態のＰＳＭＡとを包含する。この用語はまた、ＰＳＭＡの天然に存在する変異体、例えば、スプライス変異体、対立遺伝子変異体、及びアイソフォームを包含する。ＰＳＭＡは、もともとマウスモノクローナル抗体（ｍＡｂ）７Ｅ１１−Ｃ５．３によって特徴づけられたＩＩ型膜タンパク質であり、前立腺組織（がん腫を含む）の全ての形態で発現している。ＰＳＭＡタンパク質は、１９アミノ酸の内部部分、２４アミノ酸の膜貫通部分、及び７０７アミノ酸の外部部分（例えば、細胞外ドメイン）の３つの部分構造を有する。ヒトＰＳＭＡの例示的なアミノ酸配列は、ＭＷＮＬＬＨＥＴＤＳＡＶＡＴＡＲＲＰＲＷＬＣＡＧＡＬＶＬＡＧＧＦＦＬＬＧＦＬＦＧＷＦＩＫＳＳＮＥＡＴＮＩＴＰＫＨＮＭＫＡＦＬＤＥＬＫＡＥＮＩＫＫＦＬＹＮＦＴＱＩＰＨＬＡＧＴＥＱＮＦＱＬＡＫＱＩＱＳＱＷＫＥＦＧＬＤＳＶＥＬＡＨＹＤＶＬＬＳＹＰＮＫＴＨＰＮＹＩＳＩＩＮＥＤＧＮＥＩＦＮＴＳＬＦＥＰＰＰＰＧＹＥＮＶＳＤＩＶＰＰＦＳＡＦＳＰＱＧＭＰＥＧＤＬＶＹＶＮＹＡＲＴＥＤＦＦＫＬＥＲＤＭＫＩＮＣＳＧＫＩＶＩＡＲＹＧＫＶＦＲＧＮＫＶＫＮＡＱＬＡＧＡＫＧＶＩＬＹＳＤＰＡＤＹＦＡＰＧＶＫＳＹＰＤＧＷＮＬＰＧＧＧＶＱＲＧＮＩＬＮＬＮＧＡＧＤＰＬＴＰＧＹＰＡＮＥＹＡＹＲＲＧＩＡＥＡＶＧＬＰＳＩＰＶＨＰＩＧＹＹＤＡＱＫＬＬＥＫＭＧＧＳＡＰＰＤＳＳＷＲＧＳＬＫＶＰＹＮＶＧＰＧＦＴＧＮＦＳＴＱＫＶＫＭＨＩＨＳＴＮＥＶＴＲＩＹＮＶＩＧＴＬＲＧＡＶＥＰＤＲＹＶＩＬＧＧＨＲＤＳＷＶＦＧＧＩＤＰＱＳＧＡＡＶＶＨＥＩＶＲＳＦＧＴＬＫＫＥＧＷＲＰＲＲＴＩＬＦＡＳＷＤＡＥＥＦＧＬＬＧＳＴＥＷＡＥＥＮＳＲＬＬＱＥＲＧＶＡＹＩＮＡＤＳＳＩＥＧＮＹＴＬＲＶＤＣＴＰＬＭＹＳＬＶＨＮＬＴＫＥＬＫＳＰＤＥＧＦＥＧＫＳＬＹＥＳＷＴＫＫＳＰＳＰＥＦＳＧＭＰＲＩＳＫＬＧＳＧＮＤＦＥＶＦＦＱＲＬＧＩＡＳＧＲＡＲＹＴＫＮＷＥＴＮＫＦＳＧＹＰＬＹＨＳＶＹＥＴＹＥＬＶＥＫＦＹＤＰＭＦＫＹＨＬＴＶＡＱＶＲＧＧＭＶＦＥＬＡＮＳＩＶＬＰＦＤＣＲＤＹＡＶＶＬＲＫＹＡＤＫＩＹＳＩＳＭＫＨＰＱＥＭＫＴＹＳＶＳＦＤＳＬＦＳＡＶＫＮＦＴＥＩＡＳＫＦＳＥＲＬＱＤＦＤＫＳＮＰＩＶＬＲＭＭＮＤＱＬＭＦＬＥＲＡＦＩＤＰＬＧＬＰＤＲＰＦＹＲＨＶＩＹＡＰＳＳＨＮＫＹＡＧＥＳＦＰＧＩＹＤＡＬＦＤＩＥＳＫＶＤＰＳＫＡＷＧＥＶＫＲＱＩＹＶＡＡＦＴＶＱＡＡＡＥＴＬＳＥＶＡ（配列番号４３）である。
【００３６】
ヒトＰＳＭＡの細胞外ドメインの例示的なアミノ酸配列は、ＫＳＳＮＥＡＴＮＩＴＰＫＨＮＭＫＡＦＬＤＥＬＫＡＥＮＩＫＫＦＬＹＮＦＴＱＩＰＨＬＡＧＴＥＱＮＦＱＬＡＫＱＩＱＳＱＷＫＥＦＧＬＤＳＶＥＬＡＨＹＤＶＬＬＳＹＰＮＫＴＨＰＮＹＩＳＩＩＮＥＤＧＮＥＩＦＮＴＳＬＦＥＰＰＰＰＧＹＥＮＶＳＤＩＶＰＰＦＳＡＦＳＰＱＧＭＰＥＧＤＬＶＹＶＮＹＡＲＴＥＤＦＦＫＬＥＲＤＭＫＩＮＣＳＧＫＩＶＩＡＲＹＧＫＶＦＲＧＮＫＶＫＮＡＱＬＡＧＡＫＧＶＩＬＹＳＤＰＡＤＹＦＡＰＧＶＫＳＹＰＤＧＷＮＬＰＧＧＧＶＱＲＧＮＩＬＮＬＮＧＡＧＤＰＬＴＰＧＹＰＡＮＥＹＡＹＲＲＧＩＡＥＡＶＧＬＰＳＩＰＶＨＰＩＧＹＹＤＡＱＫＬＬＥＫＭＧＧＳＡＰＰＤＳＳＷＲＧＳＬＫＶＰＹＮＶＧＰＧＦＴＧＮＦＳＴＱＫＶＫＭＨＩＨＳＴＮＥＶＴＲＩＹＮＶＩＧＴＬＲＧＡＶＥＰＤＲＹＶＩＬＧＧＨＲＤＳＷＶＦＧＧＩＤＰＱＳＧＡＡＶＶＨＥＩＶＲＳＦＧＴＬＫＫＥＧＷＲＰＲＲＴＩＬＦＡＳＷＤＡＥＥＦＧＬＬＧＳＴＥＷＡＥＥＮＳＲＬＬＱＥＲＧＶＡＹＩＮＡＤＳＳＩＥＧＮＹＴＬＲＶＤＣＴＰＬＭＹＳＬＶＨＮＬＴＫＥＬＫＳＰＤＥＧＦＥＧＫＳＬＹＥＳＷＴＫＫＳＰＳＰＥＦＳＧＭＰＲＩＳＫＬＧＳＧＮＤＦＥＶＦＦＱＲＬＧＩＡＳＧＲＡＲＹＴＫＮＷＥＴＮＫＦＳＧＹＰＬＹＨＳＶＹＥＴＹＥＬＶＥＫＦＹＤＰＭＦＫＹＨＬＴＶＡＱＶＲＧＧＭＶＦＥＬＡＮＳＩＶＬＰＦＤＣＲＤＹＡＶＶＬＲＫＹＡＤＫＩＹＳＩＳＭＫＨＰＱＥＭＫＴＹＳＶＳＦＤＳＬＦＳＡＶＫＮＦＴＥＩＡＳＫＦＳＥＲＬＱＤＦＤＫＳＮＰＩＶＬＲＭＭＮＤＱＬＭＦＬＥＲＡＦＩＤＰＬＧＬＰＤＲＰＦＹＲＨＶＩＹＡＰＳＳＨＮＫＹＡＧＥＳＦＰＧＩＹＤＡＬＦＤＩＥＳＫＶＤＰＳＫＡＷＧＥＶＫＲＱＩＹＶＡＡＦＴＶＱＡＡＡＥＴＬＳＥＶＡ（配列番号４４）である。
【００３７】
本明細書で使用される場合、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」又は「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、臨床結果を含む有益な又は所望の結果を得るための手法である。本出願の目的のために、有益な又は所望の臨床結果には、以下のうちの１つ又は複数が含まれるが、これらに限定されない：疾患に起因する１つ若しくは複数の症状を緩和すること、疾患の程度を減弱すること、疾患を安定化すること（例えば、疾患の悪化を防止する若しくは遅延させること）、疾患の広がり（例えば、転移）を防止する若しくは遅延させること、疾患の再発を防止する若しくは遅延させること、疾患の進行を遅らせる若しくは減速させること、疾患状態を改善すること、疾患の寛解（部分若しくは完全）を提供すること、疾患の治療に必要な１つ若しくは複数の他の薬物の用量を減少させること、疾患の進行を遅延させること、生活の質を向上させる若しくは改善すること、体重増加を増加させること、及び／又は生存期間を延長させること。「治療」には、がんの病理学的帰結（例えば、腫瘍体積など）の低減も含まれる。本明細書で提供される方法は、治療のこれらの態様のいずれか１つ又は複数を企図している。
【００３８】
用語「再発（ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ）」、「再発する（ｒｅｌａｐｓｅ）」又は「再発した（ｒｅｌａｐｓｅｄ）」は、疾患の消失の臨床評価後のがん又は疾患の再発を指す。遠隔転移又は局所再発の診断は、再発と見なすことができる。
【００３９】
用語「抵抗性（ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ）」又は「抵抗性（ｒｅｓｉｓｔａｎｔ）」は、治療に応答しなかったがん又は疾患を指す。
【００４０】
Ｔ細胞に関して本明細書で使用される「活性化」は、検出可能な細胞増殖を誘導するために十分に刺激されたＴ細胞の状態を指す。活性化はまた、誘導されたサイトカイン産生、及び検出可能なエフェクター機能とも関連し得る。
【００４１】
用語「抗体部分」は、完全長抗体及びその抗原結合断片を含む。完全長抗体は、２つの重鎖及び２つの軽鎖を含む。軽鎖と重鎖の可変領域が抗原結合に関与している。各鎖の可変領域は、一般に、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる３つの高度に可変性のループを含む（ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３を含む重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ）。本明細書に開示される抗体及び抗原結合断片のＣＤＲ境界は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、又はＡｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉの慣例によって定義又は同定され得る（Al-Lazikani 1997; Chothia 1985; Chothia 1987; Chothia 1989; Kabat 1987; Kabat 1991）。重鎖又は軽鎖の３つのＣＤＲは、ＣＤＲよりも高度に保存されており、超可変ループをサポートするための足場を形成するフレームワーク領域（ＦＲ）として知られる隣接する伸長の間に挿入されている。重鎖と軽鎖の定常領域は抗原結合に関与していないが、様々なエフェクター機能を示す。抗体は、重鎖の定常領域のアミノ酸配列に基づいてクラスに割り当てられる。抗体の５つの主要なクラス又はアイソタイプは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭであり、それぞれα、δ、ε、γ、及びμ重鎖の存在を特徴としている。主要な抗体クラスのいくつかは、ＩｇＧ１（γＩ重鎖）、ＩｇＧ２（γ２重鎖）、ＩｇＧ３（γ３重鎖）、ＩｇＧ４（γ４重鎖）、ＩｇＡ１（α１重鎖）、又はＩｇＡ２（α２重鎖）などのサブクラスに分類される
【００４２】
本明細書で使用される用語「抗原結合断片」は、例えば、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ−ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、単鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ二量体（二価ダイアボディ）、１つ又は複数のＣＤＲを含む抗体の一部から形成される多重特異性抗体、ラクダ化単一ドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体、二価ドメイン抗体、又は抗原に結合するが完全な抗体構造を含まない任意の他の抗体断片を含むがこれらに限定されない抗体断片を指す。抗原結合断片は、親抗体又は親抗体断片（例えば、親ｓｃＦｖ）が結合するのと同じ抗原に結合することができる。いくつかの実施態様では、抗原結合断片は、１つ又は複数の異なるヒト抗体からのフレームワーク領域にグラフトされた特定のヒト抗体からの１つ又は複数のＣＤＲを含み得る。
【００４３】
本明細書で使用される用語「エピトープ」は、抗体又は抗体部分が結合する抗原上の原子又はアミノ酸の特定の群を指す。２つの抗体又は抗体部分は、それらが抗原に対して競合的結合を示す場合、抗原内の同じエピトープ（又は重複するエピトープ）に結合し得る。
【００４４】
本明細書で使用される場合、第１の抗体部分が第２の抗体部分のＰＳＭＡへの結合を、等モル濃度の第１の抗体部分の存在下で、少なくとも約５０％（少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％のいずれかなど）阻害する場合、第１の抗体部分は、第２の抗体部分とＰＳＭＡへの結合について「競合」し、逆もまた同様である。それらの交差競合に基づいて抗体を「ビニング」するためのハイスループットプロセスは、ＰＣＴ公開番号国際公開第０３／４８７３１号に記載されている。
【００４５】
本明細書で使用する場合、「特異的に結合する」又は「〜に特異的である」という用語は、生体分子を含む不均一な分子集団の存在下で標的の存在を判定する、測定可能かつ再現可能な相互作用（標的と抗体又は抗体部分との間の結合など）を指す。例えば、標的（エピトープであり得る）に特異的に結合する抗体又は抗体部分は、他の標的に結合するよりも、より高い親和性、結合活性、より容易に、及び／又はより長い持続時間でその標的に結合する抗体又は抗体部分である。いくつかの実施態様では、抗原に特異的に結合する抗体又は抗体部分は、他の標的に対する結合親和性の少なくとも約１０倍である結合親和性で、該抗原の１つ又は複数の抗原決定基（例えば、ＰＳＭＡの細胞外ドメイン上のエピトープ）と反応する。
【００４６】
本明細書で使用される「単離された」抗ＰＳＭＡ構築物は、以下の抗ＰＳＭＡ構築物を指す。（１）天然に見出されるタンパク質と会合していない、（２）同じ供給源からの他のタンパク質を含まない、（３）異なる種からの細胞によって発現される、又は（４）天然には存在しない。
【００４７】
本明細書で使用される用語「単離された核酸」は、ゲノム、ｃＤＮＡ、又は合成起源の核酸、又はそれらのいくつかの組み合わせを意味することを意図しており、その起源によって、「単離された核酸」は、（１）「単離された核酸」が天然に見出されるポリヌクレオチドの全て又は一部と会合していない、（２）天然では連結されていないポリヌクレオチドに作動可能に連結されている、あるいは（３）より大きな配列の一部として天然には存在しない。
【００４８】
本明細書で使用される場合、用語「ＣＤＲ」又は「相補性決定領域」は、重鎖及び軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内に見出される非連続抗原結合部位を意味することを意図している。これらの特定の領域は、Kabat et al., J. Biol. Chem. 252:6609-6616 (1977)；Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, “Sequences of proteins of immunological interest” (1991)；Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)；及びMacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996)に記載されており、その定義には、互いに比較した場合のアミノ酸残基の重複又はサブセットが含まれる。それにもかかわらず、抗体若しくはグラフトされた抗体又はその変異体のＣＤＲを指すいずれかの定義の適用は、本明細書で定義及び使用される用語の範囲内にあることが意図されている。上記引用文献の各々により定義されるＣＤＲを包含するアミノ酸残基を、比較として以下の表１に明記する。
【００４９】
2021526844.tif 000003
１残基の番号付けは、Kabat et al., J. Biol. Chem. 252:6609-6616 (1977)；Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, “Sequences of proteins of immunological interest” (1991)の命名法に従う。
２残基の番号付けは、Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)；Al-Lazikani B. et al., J. Mol. Biol., 273: 927-948 (1997)の命名法に従う。
３残基の番号付けは、MacCallum et al., J. Mol. Biol.262:732-745 (1996)；Abhinandan and Martin, Mol. Immunol., 45: 3832-3839 (2008)の命名法に従う。
４残基の番号付けは、Lefranc M.P. et al., Dev. Comp. Immunol., 27: 55-77 (2003)；及びHonegger and Pluckthun, J. Mol. Biol., 309:657-670 (2001)の命名法に従う。
５残基の番号付けは、Honegger and Pluckthun, J. Mol. Biol., 309:657-670 (2001)の命名法に従う。
【００５０】
用語「キメラ抗体」は、目的の生物学的活性を示す限り（例えば、がん細胞などの細胞の表面上で、ヒトＰＳＭＡなどのＰＳＭＡへの結合）、重鎖及び／又は軽鎖の一部は、特定の種に由来する、又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一又は相同であるが、鎖の残りの部分は、別の種に由来する、又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一又は相同である抗体、並びにそのような抗体の断片を指す（米国特許第４８１６５６７号；及びMorrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)を参照）。
【００５１】
抗体又は抗体部分に関する用語「半合成」は、抗体又は抗体部分が、１つ又は複数の天然に存在する配列及び１つ又は複数の天然には存在しない（すなわち、合成の）配列又はアミノ酸を有することを意味する。
【００５２】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識及び抗原結合部位を含む最小の抗体断片である。この断片は、１つの重鎖及び１つの軽鎖可変領域ドメインが、堅固な非共有結合をなした二量体からなる。これらの２つのドメインの折り畳みから、抗原結合のアミノ酸残基に寄与し、抗体に抗原結合特異性を付与する６つの超可変ループ（重鎖と軽鎖からそれぞれ３つのループ）が生じる。しかしながら、単一の可変ドメイン（又は抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）でさえ、結合部位全体よりも親和性は低いものの、抗原を認識して結合する能力を有している。
【００５３】
「単鎖Ｆｖ」は、「ｓＦｖ」又は「ｓｃＦｖ」とも略され、単一のポリペプチド鎖に連結されたＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。いくつかの実施態様では、ｓｃＦｖポリペプチドは、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にする、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間のポリペプチドリンカーをさらに含む。ｓｃＦｖの概説については、例えば、The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)のＰｌｕｃｋｔｈｕｅｎを参照のこと。
【００５４】
用語「ダイアボディ」は、Ｖドメインの鎖内対形成でなく鎖間対形成が達成され、その結果、二価の断片、すなわち、２つの抗原結合部位を有する断片を生じるように、ＶＨドメインとＶＬドメインの間に短いリンカー（約５から約１０残基など）を典型的に有するｓｃＦｖ断片（前のパラグラフを参照のこと）を構築することによって調製される小さな抗体断片を指す。二重特異性ダイアボディは、２つの抗体のＶＨドメインとＶＬドメインが異なるポリペプチド鎖上に存在する２つの「クロスオーバー」ｓｃＦｖ断片のヘテロ二量体である。ダイアボディは、例えば、欧州特許第４０４０９７号；国際公開第９３／０１１６１号；及びＥＰ４０４０９７；国際公開第９３／１１１６１号；及びHollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)にさらに詳細に記載されている。
【００５５】
非ヒト（例えば、げっ歯類）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト抗体に由来する最小限の配列を含むキメラ抗体である。ほとんどの場合、ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が、所望の抗体特異性、親和性及び能力を有するマウス、ラット、ウサギ、又は非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基で置き換えられている、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの例においては、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）の残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体又はドナー抗体には見られない残基を含み得る。これらの修飾は、抗体の性能（例えば、標的抗原に対する親和性）をさらに洗練させるために行われる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むことができ、ここで、超可変ループの全て又は実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のものである。また、ヒト化抗体は、場合によっては、免疫グロブリン、典型的にはヒト免疫グロブリンの、定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部を含むであろう。さらなる詳細については、Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988)；及びPresta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)を参照のこと。
【００５６】
本明細書で同定されるポリペプチド及び抗体配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」又は「相同性」は、配列同一性の一部として任意の保存的置換を考慮して配列をアラインメントした後の、比較されるポリペプチド中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアラインメントは、当技術分野における技術の範囲内にある種々の方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）又はＭＵＳＣＬＥソフトウェアのような公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書の目的のために、アミノ酸配列同一性％の値は、配列比較コンピュータプログラムＭＵＳＣＬＥを使用して生成される（Edgar, R.C., Nucleic Acids Research 32(5):1792-1797, 2004; Edgar, R.C., BMC Bioinformatics 5(1):113, 2004）。
【００５７】
用語「Ｆｃ受容体」又は「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を説明するために使用される。いくつかの実施態様では、ＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（γ受容体）に結合するものであり、対立遺伝子変異体及び選択的スプライシング形態のこれらの受容体を含む、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含む。ＦｃγＲＩＩ受容体は、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化型受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「抑制性受容体」）を含み、これらは、主にその細胞質ドメインが異なる、類似のアミノ酸配列を有する。活性化型受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメイン中に免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。抑制性受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメイン中に免疫受容抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）を含む（Daeron, Annu. Rev. Immunol.15:203-234 (1997)の概説のＭ．を参照のこと）。この用語には、ＦｃγＲＩＩＩＡアロタイプ：ＦｃγＲＩＩＩＡ−Ｐｈｅ１５８、ＦｃγＲＩＩＩＡ−Ｖａｌ１５８、ＦｃγＲＩＩＡ−Ｒ１３１及び／又ＦｃγＲＩＩＡ−Ｈ１３１などのアロタイプが含まれる。ＦｃＲは、Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991)； Capel et al., Immunomethods 4:25-34 (1994)；及びde Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995)に総説されている。将来的に同定されることになるものを含め、他のＦｃＲは、本明細書においては用語「ＦｃＲ」に包含される。この用語には、母体のＩｇＧの胎児への移行に関与する新生児受容体ＦｃＲｎも含まれる（Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) and Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)）。
【００５８】
用語「ＦｃＲｎ」は、新生児のＦｃ受容体（ＦｃＲｎ）を指す。ＦｃＲｎは、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）と構造的に類似しており、β２−ミクログロブリンに非共有結合したα鎖で構成される。新生児Ｆｃ受容体ＦｃＲｎの複数の機能については、Ghetie and Ward (2000) Annu. Rev. Immunol. 18, 739-766において総説される。ＦｃＲｎは、母親から子供への免疫グロブリンＩｇＧの受動的送達、及び血清ＩｇＧレベルの調節において役割を果たしている。ＦｃＲｎは、ピノサイトーシスされたＩｇＧを細胞内及び細胞間でインタクトな形態で結合及び輸送し、デフォルトの分解経路からそれらを救出するサルベージ受容体として機能することができる。
【００５９】
ヒトＩｇＧＦｃ領域の「ＣＨ１ドメイン」（「Ｈ１」ドメインの「Ｃ１」とも呼ばれる）は、通常、およそアミノ酸１１８からおよそアミノ酸２１５（ＥＵ番号付けシステム）に及ぶ。
【００６０】
「ヒンジ領域」は、一般に、ヒトＩｇＧ１のＧｌｕ２１６からＰｒｏ２３０までの伸長として定義される（Burton, Molec. Immunol.22:161-206 (1985)）。他のＩｇＧアイソタイプのヒンジ領域は、重鎖間Ｓ−Ｓ結合を形成する最初と最後のシステイン残基を同じ位置に配置することにより、ＩｇＧ１配列と整列させることができる。
【００６１】
ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域の「ＣＨ２ドメイン」（「Ｈ２」ドメインの「Ｃ２」とも呼ばれる）は、通常、およそアミノ酸２３１からおよそアミノ酸３４０に及ぶ。ＣＨ２ドメインは、別のドメインと密接に対合していないという点でユニークである。むしろ、２つのＮ結合型分枝状糖鎖が、インタクトな天然ＩｇＧ分子の２つのＣＨ２ドメイン間に挿入される。糖がドメイン−ドメイン対形成の代替を提供し、ＣＨ２ドメインの安定化に役立つ可能性があると推測されている。Burton, Molec Immunol. 22:161-206 (1985)。
【００６２】
「ＣＨ３ドメイン」（「Ｃ２」又は「Ｈ３」ドメインとも呼ばれる）は、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインに対してＣ末端の残基の伸長（すなわち、約アミノ酸残基３４１から抗体配列のＣ末端まで、典型的にはＩｇＧのアミノ酸残基４４６又は４４７まで）を含む。
【００６３】
「機能的Ｆｃ断片」は、天然配列Ｆｃ領域の「エフェクター機能」を有している。例示的な「エフェクター機能」には、Ｃ１ｑ結合；補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体；ＢＣＲ）の下方制御などが含まれる。そのようなエフェクター機能は、一般に、Ｆｃ領域が結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と組み合わされることを必要とし、当技術分野で知られている様々なアッセイを使用して評価することができる。
【００６４】
「改変された」ＦｃＲ結合親和性又はＡＤＣＣ活性を有する変異体ＩｇＧ  Ｆｃを有する抗体は、親ポリペプチド又は天然配列Ｆｃ領域を含むポリペプチドと比較して、ＦｃＲ結合活性（例えば、ＦｃγＲ又はＦｃＲｎ）及び／又はＡＤＣＣ活性が増強又は減少したものである。ＦｃＲへの「結合の増加を示す」変異体Ｆｃは、親ポリペプチド又は天然配列ＩｇＧ  Ｆｃよりも高い親和性（例えば、より低い見かけのＫｄ又はＩＣ５０値）で少なくとも１つのＦｃＲに結合する。いくつかの実施態様によれば、親ポリペプチドと比較した結合の改善は、約３倍、例えば、約５倍、１０倍、２５倍、５０倍、６０倍、１００倍、１５０倍、２００倍、若しくは最大５００倍のいずれかであり、又は約２５％から１０００％の結合の改善である。ＦｃＲへの「結合の減少を示す」ポリペプチド変異体は、親ポリペプチドよりも低い親和性（例えば、より高い見かけのＫｄ又はより高いＩＣ５０値）で少なくとも１つのＦｃＲに結合する。親ポリペプチドと比較した結合の減少は、結合の約４０％以上の減少であり得る。
【００６５】
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」又は「ＡＤＣＣ」は、特定の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ）に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合した分泌型Ｉｇが、これらの細胞傷害性エフェクター細胞を抗原保有標的細胞に特異的に結合させ、続いて細胞毒で標的細胞を死滅させることができる、細胞傷害性の一形態を指す。抗体は細胞傷害性細胞を「「武装」させ、そのような死滅のために絶対に必要である。ＡＤＣＣを媒介する主要な細胞であるＮＫ細胞がＦｃγＲＩＩＩのみを発現するのに対し、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞でのＦｃＲの発現は、Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991)の４６４頁の表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５５００３６２号又は同第５８２１３３７号に記載されているようなｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＡＤＣＣアッセイを実施してもよい。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞は、末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。あるいは、又はさらに、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、Clynes et al. PNAS (USA) 95:652-656 (1998)に開示されるように、例えば動物モデルにおいて、ｉｎ  ｖｉｖｏで評価することができる。
【００６６】
野生型ＩｇＧ  Ｆｃを有するポリペプチド又は親ポリペプチドよりも効果的にヒトエフェクター細胞の存在下で「増加したＡＤＣＣを示す」か又はＡＤＣＣを媒介する変異体Ｆｃ領域を含むポリペプチドは、アッセイにおける変異型Ｆｃ領域を有するポリペプチドの量と野生型Ｆｃ領域を有するポリペプチド（又は親ポリペプチド）の量とが本質的に同じである場合、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、ＡＤＣＣを媒介するのに実質的により効果的なものである。一般に、そのような変異体は、例えば動物モデルなどにおいてＡＤＣＣ活性を決定するためのアッセイ又は方法などの当技術分野で知られている任意のｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＡＤＣＣアッセイを使用して同定される。いくつかの実施態様では、変異体は、野生型Ｆｃ（又は親ポリペプチド）よりもＡＤＣＣの媒介において、約５倍から約１００倍、例えば約２５倍から約５０倍効果的である。
【００６７】
「補体依存性細胞傷害」又は「ＣＤＣ」は、補体の存在下での標的細胞の溶解を指す。古典的補体経路の活性化は、補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）が、同族の抗原に結合している（適切なサブクラスの）抗体に結合することによって開始される。補体活性化を評価するため、例えば、Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996)に記載のようなＣＤＣアッセイを実行することができる。Ｆｃ領域のアミノ酸配列が改変され、Ｃ１ｑ結合能力が増加したか又は減少したポリペプチド変異体が、米国特許第６１９４５５１号（Ｂ１）及び国際公開第９９／５１６４２号に記載されている。それらの特許公開の内容は、参照により本明細書に具体的に組み込まれる。また、Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)も参照のこと。
【００６８】
特に指定のない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」には、互いに縮重バージョンであり、同じアミノ酸配列をコードする全てのヌクレオチド配列が含まれる。また、タンパク質又はＲＮＡをコードするヌクレオチド配列という語句は、タンパク質をコードするヌクレオチド配列がいくつかのバージョンにおいてイントロンを含む得る程度までイントロンを含み得る。
【００６９】
用語「作動可能に連結された」とは、調節配列と異種核酸配列との間の機能的連結であって、その結果、後者の発現をもたらす連結を指す。例えば、第１の核酸配列が第２の核酸配列と機能的関係に配置される場合、第１の核酸配列は第２の核酸配列と作動可能に連結されている。例えば、プロモーターがコード配列の転写又は発現に影響を与える場合、プロモーターはコード配列に作動可能に連結されている。一般に、作動可能に連結されたＤＮＡ配列は隣接しており、２つのタンパク質コード領域を結合する必要がある場合、同じリーディングフレームである。
【００７０】
「相同」とは、２つのポリペプチド間、又は２つの核酸分子間の配列類似性又は配列同一性を指す。比較される２つの配列の両方の位置が同じ塩基又はアミノ酸単量体サブユニットによって占有されている場合、例えば、２つのＤＮＡ分子のそれぞれの位置がアデニンによって占有されている場合、その分子はその位置で相同性がある。２つの配列間の相同性のパーセントは、２つの配列によって共有される一致する又は相同な位置の数を、比較される位置の数で割ったものを１００倍した関数である。例えば、２つの配列の１０個の位置のうち６個が一致又は相同であれば、２つの配列は６０％相同である。例えば、ＤＮＡ配列ＡＴＴＧＣＣとＴＡＴＧＣＧＣは、５０％の相同性を共有している。一般に、２つの配列が最大の相同性を与えるように整列したときに比較が行われる。
【００７１】
本明細書に開示されるような抗ＰＳＭＡ構築物又は組成物の「有効量」は、具体的に記載された目的を遂行するのに十分な量である。「有効量」は、経験的に、また記載された目的に関連する既知の方法によって決定することができる。
【００７２】
用語「治療的有効量」とは、個体の疾患又は障害を「治療」するのに有効な、本明細書に開示される抗ＰＳＭＡ構築物又は組成物の量を指す。がんの場合、本明細書に開示される治療的有効量の抗ＰＳＭＡ構築物又は組成物は、がん細胞数を減少させることができる；腫瘍の大きさ又は重量を減少させることができる；末梢器官へのがん細胞浸潤を阻害することができる（すなわち、ある程度遅らせ、好ましくは停止させることができる）；腫瘍転移を阻害することができる（すなわち、ある程度遅らせ、好ましくは停止させることができる）；腫瘍増殖をある程度阻害することができる；及び／又はがんに関連する１つ又は複数の症候をある程度緩和することができる。本明細書に開示される抗ＰＳＭＡ構築物又は組成物が、増殖を防止し、かつ／又は既存のがん細胞を死滅させることができる範囲で、該抗ＰＳＭＡ構築物又は該組成物は、細胞増殖抑制性及び／又は細胞毒性であり得る。いくつかの実施態様では、治療的有効量は、増殖抑制量である。いくつかの実施態様では、治療的有効量は、患者の生存を延長する量である。いくつかの実施態様では、治療的有効量は、患者の無増悪生存期間を改善する量である。
【００７３】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」又は「薬理学的に適合性がある」とは、生物学的に又は非生物学的に望ましくないものではない物質を意味し、例えば、該材料は、重大な望ましくない生物学的効果を引き起こすことなく、あるいはそれが含まれる組成物の他の成分のいずれかと有害な様式で相互作用したりすることなく、患者に投与される薬学的組成物に組み込まれ得る。薬学的に許容される担体又は添加物は、好ましくは、毒性学的及び製造試験の要求される基準を満たしており、かつ／又は米国食品医薬品局によって作成された非活性成分ガイドに含まれている。
【００７４】
本明細書で使用される場合の用語「標識」は、抗ＰＳＭＡ抗体部分に直接的又は間接的にコンジュゲートすることができる検出可能な化合物又は組成物を指す。標識は、それ自体で検出可能であり得（例えば、放射性同位元素標識又は蛍光標識）、又は酵素標識の場合、検出可能な基質化合物又は組成物の化学的変化を触媒し得る。
【００７５】
用語「キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）」は、細胞外抗原結合ドメイン（細胞外抗原結合ドメインは膜貫通ドメイン（例えば、ＴＣＲ膜貫通ドメイン）に直接的又は間接的に連結され、次にこの膜貫通ドメインが、細胞内免疫細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）シグナル伝達ドメインに直接的又は間接的に連結されている）の一部として、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む人工的に構築されたハイブリッド単鎖タンパク質又は単鎖ポリペプチドを指す。細胞内シグナル伝達ドメイン（ＩＳＤ）は、抗原依存性のＴＣＲ会合Ｔ細胞活性化分子からの一次シグナル伝達配列又は一次免疫細胞シグナル伝達配列、例えば、ＣＤ３ζ、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、又はＣＤ６６ｄの細胞内ドメインの一部を含む。ＩＳＤは、共刺激シグナル伝達配列；例えば、抗原非依存性の共刺激分子、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどの細胞内ドメインの一部をさらに含むことができる。ＣＡＲの特徴には、モノクローナル抗体の抗原結合特性を利用し、ＭＨＣ制限（ＴＣＲ模倣抗体の場合）又は非ＭＨＣ制限（細胞表面タンパク質に対する抗体の場合）のいずれかの様式で、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及びＮＫ細胞）の特異性と反応性を、選択した標的にリダイレクトする能力が含まれる。非ＭＨＣ制限抗原認識は、ＣＡＲを発現する免疫細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）に、抗原プロセシングとは無関係に抗原を認識する能力を与え、このようにして腫瘍エスケープの主要なメカニズムを回避する。
【００７６】
現在、ＣＡＲには３世代がある。「第１世代」のＣＡＲは、典型的には、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体からの分子、すなわち、ＣＤ３ζ、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、又はＣＤ６６ｄなどの抗原依存性のＴＣＲ会合Ｔ細胞活性化分子の一次免疫細胞シグナル伝達配列を含む、細胞質／細胞内ドメインに融合した膜貫通ドメインに融合した抗原結合ドメインとしてのｓｃＦｖから構成される単鎖ポリペプチドである。「第１世代」のＣＡＲは、典型的には、内因性ＴＣＲからのシグナルの主な伝達分子である、ＣＤ３ζ鎖からの細胞内ドメインを有する。「第１世代」のＣＡＲは、ｄｅ  ｎｏｖｏ抗原認識を提供し、ＨＬＡ媒介抗原提示とは無関係に、単一融合分子内のそのＣＤ３ζ鎖シグナル伝達ドメインを介してＣＤ４＋及びＣＤ８＋  Ｔ細胞の両方の活性化を引き起こすことができる。「第２世代」のＣＡＲは、Ｔ細胞に追加のシグナルを提供するために、様々な共刺激分子（例えば、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０）からの細胞内ドメインを、ＣＡＲの一次免疫細胞シグナル伝達配列に追加する。「第２世代」のＣＡＲは、共刺激（例えば、ＣＤ２８又は４−ＩＢＢ）及び活性化（例えば、ＣＤ３ζ）を提供する断片を含む。前臨床試験では、「第２世代」のＣＡＲがＴ細胞の抗腫瘍活性を改善できることを示している。例えば、「第２世代」のＣＡＲ修飾Ｔ細胞の強力な有効性は、慢性リンパ芽球性白血病（ＣＬＬ）及び急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）の患者を対象としたＣＤ１９分子を標的とした臨床試験において実証された。「第３世代」のＣＡＲは、複数の共刺激（例えば、ＣＤ２８及び４−１ＢＢ）及び活性化（例えば、ＣＤ３ζ）を提供するものを含む。
【００７７】
本明細書で使用される場合、用語「キメラ抗体−Ｔ細胞受容体構築物」（又はｃａＴＣＲ）は、１つは抗体重鎖可変領域（ＶＨ）と抗体重鎖定常領域（ＣＨ）を含み、他方は抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）と抗体軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む、２つの別個のポリペプチド鎖を含む機能的ポリペプチド複合体を指す。したがって、本明細書で定義されるｃａＴＣＲは、２−サブユニット構築物であり、各サブユニットは、膜貫通ドメイン（例えば、ＴＣＲ膜貫通ドメイン）及び細胞内免疫細胞シグナル伝達ドメインに融合される細胞膜アンカー抗体重鎖又は軽鎖に実質的に類似している。いくつかの実施態様では、ｃａＴＣＲは、共刺激ドメイン（例えば、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、又はＣＤ３ζの細胞内ドメインの一部）を含まない。いくつかの実施態様では、ｃａＴＣＲは、ａ）抗体部分を含む細胞外ドメイン、及びｂ）少なくとも１つのＴＣＲ会合シグナル伝達モジュールを動員することができるＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、ａ）ＰＳＭＡの細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号４４又はその一部）に特異的に結合する抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む細胞外ドメイン、及びｂ）少なくとも１つのＴＣＲ会合シグナル伝達モジュールを動員することができるＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）を含む。
【００７８】
本明細書で定義されるｃａＴＣＲは、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖を含み、ここで、第１のポリペプチド鎖は、膜貫通ドメイン及び細胞内免疫細胞シグナル伝達ドメインに融合された抗体ＣＨに融合された抗体ＶＨを含み、第２のポリペプチドは、膜貫通ドメイン及び細胞内免疫細胞シグナル伝達ドメインに融合された抗体ＣＬに融合された抗体ＶＬを含む。いくつかの実施態様では、第１及び第２のポリペプチド鎖は、例えば、共有結合（例えば、ペプチド又は他の化学結合）又は非共有結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖を含むヘテロ二量体である。いくつかの実施態様では、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖は、少なくとも１つのジスルフィド結合によって連結されている。抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲの特異性は、ＰＳＭＡの細胞外領域又はその一部（例えば、配列番号４４又はその一部）への結合特異性を付与する抗体部分に由来する。
【００７９】
用語「キメラ抗体−Ｔ細胞受容体（ｃａＴＣＲ）」及び「抗体−ＴＣＲキメラ分子又は構築物（ａｂＴＣＲ又はＡｂＴＣＲ）」は、本明細書では交換可能に使用される。ｃａＴＣＲ及びａｂＴＣＲのさらなる説明及び例は、例えば、国際公開第２０１７／０７０６０８号及びＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０２９２１７（現在は国際公開第２０１８／２００５８２号として公開されている）に見出すことができ、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００８０】
本明細書に記載される発明の実施態様は、実施態様「からなる」及び／又は「から本質的になる」ことを含む。
【００８１】
本明細書における値又はパラメータについての「約（ａｂｏｕｔ）」への言及は、その値又はパラメータ自体に対する変動を含む（及び記載する）。例えば、「約Ｘ」との記載には「Ｘ」の記載が含まれる。
【００８２】
本明細書で使用される場合、値又はパラメータについての「ない（ｎｏｔ）」への言及は、一般に、値又はパラメータ「以外」を意味し、記載する。例えば、「本方法は、Ｘ型のがんを治療するために使用されない」とは、「本方法は、Ｘ型以外のがんを治療するために使用される」ことを意味する。
【００８３】
抗ＰＳＭＡ構築物
本明細書で提供されるのは、ＰＳＭＡ（例えば、がん細胞などの細胞の表面上に発現されるＰＳＭＡ）に特異的に結合する抗体部分を含む、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）に特異的に結合する構築物である。このような構築物は、本明細書では「抗ＰＳＭＡ構築物」とも呼ばれる。ＰＳＭＡに対する抗ＰＳＭＡ構築物の特異性は、細胞表面結合ＰＳＭＡに特異的に結合する抗ＰＳＭＡ抗体部分（完全長抗体又はその抗原結合断片など）に由来する。一実施態様では、ＰＳＭＡの細胞外ドメインは、配列番号４４に記載のアミノ酸配列を含む。
【００８４】
本出願の範囲内の抗ＰＳＭＡ構築物は、限定されないが、本明細書において記載されるように、例えば、完全長抗ＰＳＭＡ抗体、多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ、抗ＰＳＭＡキメラ抗体−Ｔ細胞受容体構築物（ｃａＴＣＲ）、抗ＰＳＭＡキメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートなどが含まれる。
【００８５】
例えば、いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物（単離された抗ＰＳＭＡ構築物など）は、ＰＳＭＡ（例えば、がん細胞などの細胞の表面上に発現されるＰＳＭＡ）に特異的に結合する抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む。いくつかの実施態様では、ＥＬＩＳＡ、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）分析、又は放射性免疫沈降（ＲＩＡ）などの当技術分野で知られている方法によって決定されるように、非標的ポリペプチドへの抗ＰＳＭＡ抗体の結合の程度は、ＰＳＭＡへの抗ＰＳＭＡ抗体部分の結合の約１０％未満である。特異的結合は、例えば、一般に結合活性を有しない類似構造の分子である対照分子の結合と比較して、分子の結合を決定することによって測定することができる。例えば、特異的結合は、標的に類似している対照分子、例えば、過剰の非標識標的との競合によって決定することができる。この場合、特異的結合は、プローブとの標識標的の結合が、過剰な非標識標的により競合的に阻害される場合に示される。本明細書で使用される特定のポリペプチド又は特定のポリペプチド標的上のエピトープに対する「特異的結合」又は「特異的に結合する」又は「特異的」という用語は、例えば、少なくとも約１０−４Ｍ、あるいは、少なくとも約１０−５Ｍ、あるいは、少なくとも約１０−６Ｍ、あるいは、少なくとも約１０−７Ｍ、あるいは、少なくとも約１０−８Ｍ、あるいは、少なくとも約１０−９Ｍ、あるいは、少なくとも約１０−１０Ｍ、あるいは、少なくとも約１０−１１Ｍ、あるいは、少なくとも約１０−１２Ｍ又はそれ以下の、標的に対するＫＤを有する分子によって示され得る。一実施態様では、用語「特異的結合」は、分子が特定のポリペプチド（例えば、ＰＳＭＡ）又は特定のポリペプチド（例えば、ＰＳＭＡ）上のエピトープに、他のポリペプチド若しくはポリペプチドエピトープに実質的に結合することなく結合する結合を指す。
【００８６】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、ＰＳＭＡ（例えば、がん細胞などの細胞の表面上に発現されるＰＳＭＡ）に特異的に結合し、ＰＳＭＡ（例えば、がん細胞などの細胞の表面上に発現されるＰＳＭＡ）に特異的に結合する第２の抗ＰＳＭＡ抗体（又は抗体部分）とＰＳＭＡへの結合を競合する抗ＰＳＭＡ抗体部分を含み、かつ、（ａ）配列番号１又は２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３又は４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号５又は６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号７又は８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；（ｅ）アミノ酸配列ＧＮＳ又はＳＮＮを含むＣＤＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号９又は１０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、ＰＳＭＡ（例えば、がん細胞などの細胞の表面上に発現されるＰＳＭＡ）に特異的に結合する第２の抗ＰＳＭＡ抗体（又は抗体部分）と、ＰＳＭＡ（例えば、がん細胞などの細胞の表面上に発現されるＰＳＭＡ）の同じエピトープに特異的に結合する抗ＰＳＭＡ抗体部分を含み、かつ、（ａ）配列番号１又は２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３又は４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号５又は６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号７又は８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；（ｅ）アミノ酸配列ＧＮＳ又はＳＮＮを含むＣＤＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号９又は１０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【００８７】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、（ａ）ＧＹＸ１ＦＸ２ＳＹＷ（配列番号１１）に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、［ここで、Ｘ１はＳ又はＮであり；Ｘ２はＴ又はＡである］；（ｂ）ＩＹＰＸ１ＤＳＤＴ（配列番号１２）に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、［ここで、Ｘ１はＧ又はＤである］；（ｃ）ＡＲＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＹＸ７Ｘ８Ｘ９ＤＶ（配列番号１３）に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、［ここで、Ｘ１はＳ又はアミノ酸なしであり；Ｘ２はＭ又はアミノ酸なしであり；Ｘ３はＧ又はアミノ酸なしであり；Ｘ４はＳ又はアミノ酸なしであり；Ｘ５はＳ又はＤであり；Ｘ６はＬ又はＳであり；Ｘ７はＡ又はＹであり；Ｘ８はＳ又はＧであり；Ｘ９はＳ又はＩである］；（ｄ）ＳＳＮＩＧＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４（配列番号１４）に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、［ここで、Ｘ１はＡ又はＳであり；Ｘ２はＧ又はＮであり；Ｘ３はＹ又はＴであり；Ｘ４はＤ又はアミノ酸なしである］；（ｅ）アミノ酸配列Ｘ１ＮＸ２を含むＣＤＲ−Ｌ２、［ここで、Ｘ１はＧ又はＳであり；Ｘ２はＳ又はＮである］；及び（ｆ）Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＤＸ４ＳＬＸ５ＧＹＶ（配列番号１５）に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、［ここで、Ｘ１はＱ又はＡであり；Ｘ２はＳ又はＡであり；Ｘ３はＹ又はＷであり；Ｘ４はＳ又はＤであり；Ｘ５はＳ又はＮである］からなる群から選択される１、２、３、４、５、又は６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を含む抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む。
【００８８】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、（ａ）配列番号１又は２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、又は最大約５つ（約１、２、３、４、又は５つのいずれかなど）のアミノ酸置換を含むその変異体；（ｂ）配列番号３又は４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、又は最大約５つ（約１、２、３、４、又は５つのいずれかなど）のアミノ酸置換を含むその変異体；（ｃ）配列番号５又は６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、又は最大約５つ（約１、２、３、４、又は５つのいずれかなど）のアミノ酸置換を含むその変異体；（ｄ）配列番号７又は８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、又は最大約５つ（約１、２、３、４、又は５つのいずれかなど）のアミノ酸置換を含むその変異体；（ｅ）アミノ酸配列ＧＮＳ又はＳＮＮを含むＣＤＲ−Ｌ２、又は最大約３つ（約１、２、又は３つのいずれかなど）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び（ｆ）配列番号９又は１０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、又は最大約５つ（約１、２、３、４、又は５つのいずれかなど）のアミノ酸置換を含むその変異体からなる群から選択される１、２、３、４、５、又は６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を含む抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む。
【００８９】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、（ａ）配列番号１又は２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、又は最大約５つ（約１、２、３、４、又は５つのいずれかなど）のアミノ酸置換を含むその変異体；（ｂ）配列番号３又は４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、又は最大約５つ（約１、２、３、４、又は５つのいずれかなど）のアミノ酸置換を含むその変異体；（ｃ）配列番号５又は６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、又は最大約５つ（約１、２、３、４、又は５つのいずれかなど）のアミノ酸置換を含むその変異体；（ｄ）配列番号７又は８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、又は最大約５つ（約１、２、３、４、又は５つのいずれかなど）のアミノ酸置換を含むその変異体；（ｅ）アミノ酸配列ＧＮＳ又はＳＮＮを含むＣＤＲ−Ｌ２、又は最大約３つ（約１、２、又は３つのいずれかなど）のアミノ酸置換を含むその変異体；及び（ｆ）配列番号９又は１０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、又は最大約５つ（約１、２、３、４、又は５つのいずれかなど）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む。
【００９０】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、（ａ）配列番号１又は２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３又は４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号５又は６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号７又は８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；（ｅ）アミノ酸配列ＧＮＳ又はＳＮＮを含むＣＤＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号９又は１０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３からなる群から選択される１、２、３、４、５、又は６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を含む抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む。
【００９１】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、（ａ）配列番号１又は２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３又は４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号５又は６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号７又は８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；（ｅ）アミノ酸配列ＧＮＳ又はＳＮＮを含むＣＤＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号９又は１０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む。いくつかの実施態様では、ＣＤＲはヒトＣＤＲである。
【００９２】
配列番号１−１０のアミノ酸配列が以下の表２に提供される。
2021526844.tif 000004
【００９３】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、配列番号１６又は１７に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変ドメイン（ＶＨ）の１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む。追加的又は代替的に、いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、配列番号１８又は１９に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）の１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む。
【００９４】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、配列番号１６又は１７に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び／又は配列番号１８又は１９に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む。配列番号１６−１９のアミノ酸配列が以下の表３に提供される。ＣＤＲの配列は下線付き太字で示される。
【００９５】
2021526844.tif 000005
【００９６】
重鎖及び軽鎖可変ドメインを対の組み合わせで組み合わせて、本開示の抗ＰＳＭＡ構築物に組み込むことができる、かつ／又は使用することができる追加の抗ＰＳＭＡ抗体部分を生成することができる。
【００９７】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、（ａ）ＧＹＳＦＴＳＹＷ（配列番号１）を含むＣＤＲ−Ｈ１又は最大約５つ（約１、２、３、４、又は５つのいずれかなど）のアミノ酸置換を含むその変異体、（ｂ）ＩＹＰＧＤＳＤＴ（配列番号３）を含むＣＤＲ−Ｈ２又は最大約５つ（約１、２、３、４、又は５つのいずれかなど）のアミノ酸置換を含むその変異体、（ｃ）ＡＲＳＭＧＳＳＬＹＡＳＳＤＶ（配列番号５）を含むＣＤＲ−Ｈ３又は最大約５つ（約１、２、３、４、又は５つのいずれかなど）のアミノ酸置換を含むその変異体、（ｄ）ＳＳＮＩＧＡＧＹＤ（配列番号７）を含むＣＤＲ−Ｌ１又は最大約５つ（約１、２、３、４、又は５つのいずれかなど）のアミノ酸置換を含むその変異体、（ｅ）ＧＮＳを含むＣＤＲ−Ｌ２又は最大約３つ（約１、２、又は３つのいずれかなど）のアミノ酸置換を含むその変異体、及び（ｆ）ＱＳＹＤＳＳＬＳＧＹＶ（配列番号９）を含むＣＤＲ−Ｌ３又は最大約５つ（約１、２、３、４、又は５つのいずれかなど）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む。特定の実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、（ａ）ＧＹＳＦＴＳＹＷ（配列番号１）を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）ＩＹＰＧＤＳＤＴ（配列番号３）を含むＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）ＡＲＳＭＧＳＳＬＹＡＳＳＤＶ（配列番号５）を含むＣＤＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＳＮＩＧＡＧＹＤ（配列番号７）を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）ＧＮＳを含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＳＹＤＳＳＬＳＧＹＶ（配列番号９）を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む。いくつかの実施態様では、ＣＤＲはヒトＣＤＲである。特定の実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、配列番号１６を含むＶＨドメインの１つ、２つ、又は３つのＣＤＲ、及び配列番号１８を含むＶＬドメインの１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む。特定の実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、配列番号１６に対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のいずれか１つ）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号１８に対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のいずれか１つ）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む。特定の実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、配列番号１６を含むＶＨドメイン及び配列番号１８を含むＶＬドメインを含む抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む。配列番号１６及び配列番号１８を含む抗ＰＳＭＡ抗体部分は、本明細書では「クローンＡ抗ＰＳＭＡ抗体部分」と代替的に呼ばれる。
【００９８】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、（ａ）ＧＹＮＦＡＳＹＷ（配列番号２）を含むＣＤＲ−Ｈ１又は最大約５つ（約１、２、３、４、又は５つのいずれかなど）のアミノ酸置換を含むその変異体、（ｂ）ＩＹＰＤＤＳＤＴ（配列番号４）を含むＣＤＲ−Ｈ２又は最大約５つ（約１、２、３、４、又は５つのいずれかなど）のアミノ酸置換を含むその変異体、（ｃ）ＡＲＤＳＹＹＧＩＤＶ（配列番号６）を含むＣＤＲ−Ｈ３又は最大約５つ（約１、２、３、４、又は５つのいずれかなど）のアミノ酸置換を含むその変異体、（ｄ）ＳＳＮＩＧＳＮＴ（配列番号８）を含むＣＤＲ−Ｌ１又は最大約５つ（約１、２、３、４、又は５つのいずれかなど）のアミノ酸置換を含むその変異体、（ｅ）ＳＮＮを含むＣＤＲ−Ｌ２又は最大約３つ（約１、２、又は３つのいずれかなど）のアミノ酸置換を含むその変異体、及び（ｆ）ＡＡＷＤＤＳＬＮＧＹＶ（配列番号１０）を含むＣＤＲ−Ｌ３又は最大約５つ（約１、２、３、４、又は５つのいずれかなど）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む。特定の実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、（ａ）ＧＹＮＦＡＳＹＷ（配列番号２）を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）ＩＹＰＤＤＳＤＴ（配列番号４）を含むＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）ＡＲＤＳＹＹＧＩＤＶ（配列番号６）を含むＣＤＲ−Ｈ３；（ｄ）ＳＳＮＩＧＳＮＴ（配列番号８）を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＮＮを含むＣＤＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＡＡＷＤＤＳＬＮＧＹＶ（配列番号１０）を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む。いくつかの実施態様では、ＣＤＲはヒトＣＤＲである。特定の実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、配列番号１７を含むＶＨドメインの１つ、２つ、又は３つのＣＤＲ、及び配列番号１９を含むＶＬドメインの１つ、２つ、又は３つのＣＤＲを含む抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む。特定の実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、配列番号１７に対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のいずれか１つ）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／又は配列番号１９に対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のいずれか１つ）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、配列番号１７を含むＶＨドメイン及び配列番号１９を含むＶＬドメインを含む抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む。配列番号１７及び配列番号１９を含む抗ＰＳＭＡ抗体部分は、本明細書では「クローンＢ抗ＰＳＭＡ抗体部分」と代替的に呼ばれる。
【００９９】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物の抗ＰＳＭＡ抗体部分は、完全長抗体である。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物の抗ＰＳＭＡ抗体部分は、抗ＰＳＭＡ抗体の抗原結合断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、及び単鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）からなる群から選択される抗原結合断片である。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物の抗ＰＳＭＡ抗体部分は、ｓｃＦｖである。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ抗体部分は、ヒトである、ヒト化されている、又は半合成である。
【０１００】
２つの例示的な抗ＰＳＭＡ  ｓｃＦｖのアミノ酸配列が以下の表４に提供される。各ｓｃＦｖのＶＬはプレーンテキスト（すなわち、下線なし）であり、各ｓｃＦｖのＶＨには下線が引かれ、リンカーはイタリック体である。ＣＤＲは太字で、下線付きの太字である。
【０１０１】
2021526844.tif 000006
【０１０２】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｓｃＦｖは、配列番号２０又は配列番号２１に対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１０３】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、ヒトＰＳＭＡ、マウスＰＳＭＡ、ラットＰＳＭＡ、カニクイザルＰＳＭＡ、及び／又はアカゲザルＰＳＭＡに結合する抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、ヒトＰＳＭＡに特異的に結合する抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、細胞の表面上に存在する、又は細胞の表面上に発現するＰＳＭＡに特異的に結合する抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む。いくつかの実施態様では、細胞はがん細胞である。いくつかの実施態様では、細胞は、参照細胞と比較して、異常に高レベルのＰＳＭＡを発現する。いくつかの実施態様では、参照細胞は、非罹患性（非がん性など）組織から得られた、又はそれに由来する細胞である。いくつかの実施態様では、異常に高レベルのＰＳＭＡを発現する細胞は、がん細胞である。いくつかの実施態様では、がん細胞は固形腫瘍にある。いくつかの実施態様では、がん細胞は、前立腺がん細胞、腎細胞がん細胞、子宮がん細胞、又は肝臓がん細胞である。いくつかの実施態様では、がん細胞は、転移性がん細胞である。
【０１０４】
抗ＰＳＭＡ抗体部分配列変異体を含む抗ＰＳＭＡ構築物
いくつかの実施態様では、本出願の抗ＰＳＭＡ構築物は、本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ抗体部分の変異体（アミノ酸配列変異体など）を含む。例えば、抗ＰＳＭＡ構築物の抗ＰＳＭＡ抗体部分の結合親和性及び／又は他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。抗ＰＳＭＡ抗体部分のアミノ酸配列変異体は、抗体部分をコードするヌクレオチド配列に適切な修飾を導入することによって、又はペプチド合成によって調製することができる。そのような修飾には、例えば、抗ＰＳＭＡ抗体部分のアミノ酸配列内の残基からの欠失、残基への挿入、及び／又は残基の置換が含まれる。最終抗体部分が所望の特性、例えば、ＰＳＭＡ（細胞、例えばがん細胞の表面上に発現するＰＳＭＡなど）への結合を有することを条件として、欠失（単数又は複数）、挿入（単数又は複数）、及び置換（単数又は複数）の任意の組み合わせを、最終的な抗ＰＳＭＡ抗体部分に到達させることができる。
【０１０５】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ抗体部分配列変異体は、１つ又は複数のアミノ酸置換を含む。置換突然変異誘発の対象となる部位には、ＣＤＲ及び／又はフレームワーク領域（ＦＲ）が含まれる。アミノ酸置換を目的の抗ＰＳＭＡ抗体部分に導入することができ、その産物は、所望の活性、例えば、ＰＳＭＡ（例えば、細胞表面結合ＰＳＭＡ）への結合の保持／改善、免疫原性の低下、又はＡＤＣＣ若しくはＣＤＣの改善などについてスクリーニングすることができる。アミノ酸配列の挿入には、１残基から１００以上の残基を含むポリペプチドまでの長さの範囲のアミノ末端及び／又はカルボキシル末端融合、並びに単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例には、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗ＰＳＭＡ抗体部分が含まれる。抗ＰＳＭＡ抗体部分の他の挿入変異体には、抗ＰＳＭＡ抗体部分の血清半減期を増加させる酵素（例えばＡＤＥＰＴのため）又はポリペプチドへの、抗体部分のＮ末端又はＣ末端への融合が含まれる。
【０１０６】
いくつかの実施態様では、以下の表５に示されるように、抗ＰＳＭＡ抗体部分配列変異体は、１つ又は複数の保存的アミノ酸置換を含む。
【０１０７】
2021526844.tif 000007
【０１０８】
アミノ酸は、共通の側鎖特性に応じて異なるクラスに分類することができる。
ａ）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
ｂ）中性の親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
ｃ）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
ｄ）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
ｅ）鎖の向きに影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
ｆ）芳香性：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ．
【０１０９】
非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーを別のクラスと交換することを必然的に伴う。
【０１１０】
例示的な置換変異体は、親和性成熟抗体部分であり、これは、例えば、ファージディスプレイに基づく親和性成熟技術を使用して簡便に作成することができる。簡潔には、１つ又は複数のＣＤＲ残基が変異され、変異体抗体部分がファージ上に提示され、特定の生物学的活性（例えば結合親和性）についてスクリーニングされる。改変（例えば、置換）は、例えば、抗体部分の親和性を改善するために、ＣＤＲにおいて行うことができる。このような改変は、ＣＤＲの「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟過程中に高頻度で変異を受けるコドンによりコードされた残基（例えば、Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)を参照）、及び／又は特異性決定残基（ＳＤＲ）において行うことができ、得られた変異体ＶＨ又はＶＬが結合親和性について試験される。二次ライブラリーを構築し、再選択することによる親和性成熟は、例えば、Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O’Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001)に記載されている。
【０１１１】
いくつかの実施態様では、本明細書で提供される１つ又は複数のＣＤＲ配列は、改変されていないか、あるいは１、２、３、４、又は５つ未満のアミノ酸置換を含むかのいずれかである。いくつかの実施態様では、本明細書で提供されるＶＨ及び／又はＶＬ配列は、改変されていないか、あるいは１、２、３、４、又は５つ未満のアミノ酸置換を含むかのいずれかである。いくつかの実施態様では、本明細書で提供されるＶＨ及び／又はＶＬ配列内の１つ又は複数のＣＤＲ配列は、改変されていないか、あるいは１、２、３、４、又は５つ未満のアミノ酸置換を含むかのいずれかである。
【０１１２】
多様性が、様々な方法（例えば、エラーが発生しやすいＰＣＲ、鎖シャッフリング、又はオリゴヌクレオチド指定突然変異誘発）のいずれかによって、成熟のために選択された可変遺伝子中に導入され得る。次いで、二次ライブラリーが作製される。次いで、このライブラリーは、所望の親和性を持つ任意の抗体部分変異体を同定するためにスクリーニングされる。多様性を導入する別の方法は、いくつかのＣＤＲ残基（例えば、一度に４−６残基）がランダム化されるＣＤＲを対象とするアプローチを含む。抗原結合に関与するＣＤＲ残基は、例えばアラニンスキャニング突然変異誘発又はモデリングを用いて、特異的に同定することができる。特に、ＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３が多くの場合標的とされる。
【０１１３】
抗ＰＳＭＡ抗体又は抗ＰＳＭＡ抗体部分はまた、所望の活性（１つ又は複数）を有する抗体について、コンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって同定することができる。例えば、ポリペプチドディスプレイライブラリーを生成し、所望の結合特性を有する抗体についてそのようなライブラリーをスクリーニングするための様々な方法が当技術分野で知られている。そのような方法は、例えば、Hoogenboom et al., Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O’Brien et al., ed., Human Press, Totowa, N.J., 2001)に総説され、さらに例えば、McCafferty et al., Nature348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury, Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, N.J., 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol.338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA101(34): 12467-12472 (2004)；及びLee et al., J. Immunol. Methods284(1-2): 119-132(2004)に記載される。
【０１１４】
特定のファージディスプレイ法では、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーが、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別々にクローニングされ、ファージライブラリーでランダムに再結合され、次いで、Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994)に記載されているように、抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは、典型的には、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片として、又はＦａｂ断片として、抗体断片を提示する。免疫化された供給源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要なしに、免疫原に対する高親和性抗体を提供する。あるいは、Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993)により記述されるように、ナイーブレパートリーをクローニングして（例えば、ヒトから）、免疫化することなく、広範囲の非自己及び自己抗原に対する抗体の単一の供給源を提供することができる。最後に、ナイーブライブラリーは、幹細胞由来の再配列されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含むＰＣＲプライマーを使用して非常に可変性の高いＣＤＲ３領域をコード化し、Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992)に記載されるように、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで再配列を達成することによって合成的に作成することもできる。ヒト抗体ファージライブラリーを記述する特許公報は、例えば、米国特許第５７５０３７３号、及び米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号及び同第２００９／０００２３６０号を含む。
【０１１５】
抗ＰＳＭＡ抗体部分配列変異体は、ＰＳＭＡ（例えば、細胞表面結合ＰＳＭＡ）に対して特異的な抗体についてライブラリーをスクリーニングするために、ファージディスプレイを使用して調製することができる。ライブラリーは、少なくとも１ｘ１０９（少なくとも１ｘ１０９、２．５ｘ１０９、５ｘ１０９、７．５ｘ１０９、１ｘ１０１０、２．５ｘ１０１０、５ｘ１０１０、７．５ｘ１０１０、又は１ｘ１０１１のいずれか１つなど）個の固有のヒト抗体断片の多様性を有するヒトｓｃＦｖファージディスプレイライブラリーであり得る。いくつかの実施態様では、ライブラリーは、健常ドナーからのヒトＰＭＢＣ及び脾臓から抽出されたＤＮＡから構築されたナイーブヒトライブラリーであり、全てのヒト重鎖及び軽鎖サブファミリーを包含する。いくつかの実施態様では、ライブラリーは、自己免疫疾患の患者、がん患者、及び感染症の患者などの様々な疾患の患者から単離されたＰＢＭＣから抽出されたＤＮＡから構築されたナイーブなヒトライブラリーである。いくつかの実施態様では、ライブラリーは半合成ヒトライブラリーであり、ここで、重鎖ＣＤＲ３は完全にランダム化されており、（システインを除く）全てのアミノ酸は、任意の所与の位置に等しく存在する可能性が高い（例えば、Hoet, R.M. et al., Nat. Biotechnol. 23(3):344-348, 2005を参照）。いくつかの実施態様では、半合成ヒトライブラリーの重鎖ＣＤＲ３は、約５から約２４アミノ酸（約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、又は２４アミノ酸のいずれかなど）の長さを有する。いくつかの実施態様では、ライブラリーは、非ヒトファージディスプレイライブラリーである。
【０１１６】
ＰＳＭＡ（例えば、細胞表面上に結合したヒトＰＳＭＡ）に高い親和性で結合するファージクローンは、固体支持体（例えば、溶液パニング用のビーズ又は細胞パニング用の哺乳動物細胞など）に結合しているＰＳＭＡへのファージの反復性の結合と、その後の非結合ファージの除去及び特異的に結合したファージの溶出とによって選択することができる。溶液パニングの例では、ＰＳＭＡは、固体支持体への固定化のためにビオチン化され得る。ビオチン化ＰＳＭＡは、ファージライブラリーと、ストレプトアビジンコンジュゲートＤｙｎａｂｅａｄｓ  Ｍ−２８０などの固体支持体と混合され、次いで、ＰＳＭＡ−ファージ−ビーズ複合体が単離される。次いで、結合したファージクローンが溶出され、発現及び精製のために、大腸菌ＸＬ１−Ｂｌｕｅなどの適切な宿主細胞に感染させるために使用される。
【０１１７】
細胞パニングの別の例では、細胞表面結合ＰＳＭＡを発現する哺乳動物細胞（ヒトＰＳＭＡを発現するＪｕｒｋａｔ細胞など）はファージライブラリーと混合され、その後、細胞が収集され、結合したクローンが溶出され、発現及び精製のために適切な宿主細胞を感染させるために使用される。パニングは、溶液パニング、細胞パニング、又は両方の組み合わせを用いて、複数の（約２、３、４、５、６又はそれ以上のいずれかなど）ラウンドで実行して、ＰＳＭＡに特異的に結合するファージクローンを濃縮することができる。濃縮されたファージクローンは、例えばＥＬＩＳＡ及びＦＡＣＳを含む、当技術分野で知られている任意の方法によって、ＰＳＭＡへの特異的結合について試験することができる。
【０１１８】
突然変異誘発の標的となり得る抗ＰＳＭＡ抗体部分の残基又は領域の同定の有用な方法は、Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085に記載されているように「アラニンスキャニング突然変異誘発」と呼ばれる。この方法では、標的残基の残基又はグループ（例えば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ及びＧｌｕなどの荷電残基）が同定されて、抗体部分と抗原との相互作用が影響を受けるかどうかを判断するために、中性又は負に帯電したアミノ酸（例えば、アラニン又はポリアラニン）により置換される。さらなる置換が、最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸の位置に導入され得る。あるいは、又はさらに、抗原−抗体部分複合体の結晶構造を決定して、抗体部分と抗原との間の接触点を同定することができる。そのような接触残基及び隣接残基は、置換の候補として標的とされてもよいし、又は排除されてもよい。変異体は、所望の特性を含むかどうかを判定するためにスクリーニングされ得る。
【０１１９】
本明細書で提供される抗ＰＳＭＡ抗体部分は、１つ又は複数のペプチドタグ配列、ペプチドリンカー配列（自己切断リンカーを含む）、切断部位、又は他のペプチド配列（例えば、シグナルペプチド）をさらに含み得る。例示的なシグナルペプチド配列は、ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧ（配列番号１２８）である。例示的なペプチドリンカー配列、切断部位、及びペプチドタグ配列を、以下の表６Ａ及び６Ｂに示す。
【０１２０】
2021526844.tif 000008
【０１２１】
2021526844.tif 000009
【０１２２】
完全長抗ＰＳＭＡ抗体
いくつかの実施態様では、本明細書で提供される抗ＰＳＭＡ構築物は、完全長抗体、例えば、本明細書で「完全長抗ＰＳＭＡ抗体」とも呼ばれる抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む完全長抗体であるか、又はそれを含む。いくつかの実施態様では、完全長抗体は、本明細書の他の場所でさらに詳細に記載されるように、モノクローナル抗体である。
【０１２３】
いくつかの実施態様では、完全長抗ＰＳＭＡ抗体は、免疫グロブリン、例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、又はＩｇＭなどのヒト免疫グロブリンからのＦｃ配列を含む。いくつかの実施態様では、完全長抗ＰＳＭＡ抗体は、ＩｇＧ、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４のいずれかなどのヒトＩｇＧのＦｃ配列を含む。いくつかの実施態様では、完全長抗ＰＳＭＡ抗体は、ウサギ、ラット、又はマウスの免疫グロブリンのＦｃ配列を含む。いくつかの実施態様では、完全長抗ＰＳＭＡ抗体は、非ヒト霊長類（例えば、アカゲザル又はカニクイザル）のＦｃ配列を含む。いくつかの実施態様では、完全長抗ＰＳＭＡ抗体は、本明細書の他の場所でさらに詳細に記載されるように、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）機能及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）エフェクター機能が増強されるように、改変された、又は他の方法で変更されたＦｃ配列を含む。
【０１２４】
ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域を含む例示的な完全長抗ＰＳＭＡ抗体のアミノ酸配列が以下の表７に提供される。各軽鎖のＶＬには下線が引かれ、各重鎖のＶＨには下線が引かれている。ＣＤＲは太字で示されている。
【０１２５】
2021526844.tif 000010
【０１２６】
いくつかの実施態様では、完全長抗ＰＳＭＡ  ＩｇＧ１抗体は、本明細書に記載のＶＨを含む重鎖と、本明細書に記載のＶＬを含む軽鎖とを含む。いくつかの実施態様では、完全長抗ＰＳＭＡ  ＩｇＧ１抗体は、配列番号３９に対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号４０に対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施態様では、完全長抗ＰＳＭＡ  ＩｇＧ１抗体は、配列番号４１に対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号４２に対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０１２７】
ヒト抗ＰＳＭＡ抗体及びヒト化抗ＰＳＭＡ抗体及び抗体部分
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、ヒト又はヒト化された抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む。非ヒト（例えば、マウス）抗体部分のヒト化形態は、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、又はそれらの断片（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、又は非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を通常含む完全長抗体の他の抗原結合サブ配列など）である。ヒト化抗体部分には、レシピエントの１つ又は複数のＣＤＲからの残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有する、マウス、ラット、又はウサギ抗体などの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基（移入残基）によって置換されているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）が含まれる。いくつかの例においては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられている。ヒト化抗体はまた、レシピエント抗体にも、移入されたＣＤＲ又はフレームワーク配列にも見出されない残基を含み得る。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むことができ、ここで、ＣＤＲ領域の全て又は実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域の全て又は実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のものである。いくつかの実施態様では、ヒト化抗体は、免疫グロブリン、典型的にはヒト免疫グロブリンの、定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部を含むであろう。例えば、Jones et al., Nature, 321: 522-525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332: 323-329 (1988); Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 2:593-596 (1992), Verhoeyen et al., Science, 239: 1534-1536 (1988)、及び米国特許第４８１６５６７号を参照。
【０１２８】
ヒト化の代替として、ヒト抗体を生成することができる。例えば、内因性免疫グロブリン産生の非存在下で、免疫化に際して、ヒト抗体の完全なレパートリーを産生することが可能なトランスジェニック動物（例えば、マウス）を生産することが現在は可能である。例えば、キメラマウス及び生殖系列変異マウスにおける抗体重鎖結合領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合性欠失は、内因性抗体産生の完全な阻害をもたらすことが記載されている。ヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイをそのような生殖系列変異マウスに移入すると、抗原チャレンジの際にヒト抗体が産生される。例えば、Jakobovits et al., PNAS USA, 90:2551 (1993); Jakobovits et al., Nature, 362:255-258 (1993); Bruggemann et al., Year in Immunol., 7:33 (1993)；米国特許第５５４５８０６号、第５５６９８２５号、第５５９１６６９号；第５５４５８０７号；及び国際公開第９７／１７８５２号を参照。あるいは、ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を、内因性免疫グロブリン遺伝子が部分的に又は完全に不活性化されているトランスジェニック動物、例えば、マウスに導入することによって作製することができる。チャレンジの際に、遺伝子再構成、組み立て、抗体レパートリーを含む全ての点において、ヒトで見られるものと非常によく似たヒト抗体の産生が観察される。このアプローチは、例えば、米国特許第５５４５８０７号；第５５４５８０６号；第５５６９８２５号；第５６２５１２６号；第５６３３４２５号；及び第５６６１０１６号、 Marks et al., Bio/Technology, 10: 779-783 (1992); Lonberg et al., Nature, 368: 856-859 (1994); Morrison, Nature, 368: 812-813 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnology, 14: 845-851 (1996); Neuberger, Nature Biotechnology, 14: 826 (1996); Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol., 13: 65-93 (1995)に記載される。
【０１２９】
ヒト抗体はまた、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで活性化されたＢ細胞（米国特許第５５６７６１０号及び第５２２９２７５号を参照）によって、又はファージディスプレイライブラリーを含む当技術分野で知られている様々な技術を使用することによって生成され得る。Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991)。Ｃｏｌｅら、及びＢｏｅｒｎｅｒらの技術も、ヒトモノクローナル抗体の調製のために利用可能である。Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985)及びBoerner et al., J. Immunol., 147(1): 86-95 (1991)。
【０１３０】
モノクローナル抗ＰＳＭＡ抗体及び抗体部分
いくつかの実施態様では、本開示の抗ＰＳＭＡ構築物は、モノクローナル抗ＰＳＭＡ抗体又はモノクローナル抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む。モノクローナル抗体は、例えば、Kohler and Milstein, Nature, 256:495 (1975)及びSergeeva et al., Blood, 117(16):4262-4272によって記載されているようなハイブリドーマ法を使用して、本明細書及び以下の実施例に記載のファージディスプレイ法を使用して、あるいは組換えＤＮＡ法を使用して（例えば、米国特許第４８１６５６７号を参照）調製することができる。
【０１３１】
ハイブリドーマ法において、ハムスター、マウス、又は他の適切な宿主動物は、典型的には、免疫化剤で免疫化され、免疫化剤に特異的に結合するであろう抗体を産生する、又は産生することができるリンパ球を誘発する。あるいは、リンパ球はｉｎ  ｖｉｔｒｏで免疫化することができる。免疫化剤は、目的のタンパク質のポリペプチド又は融合タンパク質、あるいは少なくとも２つの分子を含む複合体を含むことができる。一般に、末梢血リンパ球（「ＰＢＬ」）は、ヒト由来の細胞が望まれる場合に使用され、脾臓細胞又はリンパ節細胞は、非ヒト哺乳動物源が望まれる場合に使用される。次いで、リンパ球は、ポリエチレングリコールなどの適切な融剤を使用して不死化細胞株と融合され、ハイブリドーマ細胞を形成する。例えば、Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice (New York: Academic Press, 1986), pp. 59-103を参照。不死化細胞株は、通常、形質転換された哺乳動物細胞、特にげっ歯類、ウシ、及びヒト由来の骨髄腫細胞である。通常、ラット又はマウスの骨髄腫細胞株が使用される。ハイブリドーマ細胞は、好ましくは、融合していない不死化細胞の増殖又は生存を阻害する１つ又は複数の物質を含む適切な培地中で培養することができる。例えば、親細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ又はＨＰＲＴ）を欠いている場合、ハイブリドーマのための培地は、典型的には、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を防止するヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジン（「ＨＡＴ培地」）を含むであろう。
【０１３２】
いくつかの実施態様では、不死化細胞株は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定した高レベルの発現をサポートし、かつＨＡＴ培地のような培地に対して感受性を有する。いくつかの実施態様では、不死化細胞株は、例えば、カリフォルニア州サンディエゴのソーク研究所細胞流通センターとバージニア州マナッサスのアメリカンタイプカルチャーコレクションから入手ことができるマウス骨髄腫株である。ヒト骨髄腫及びマウス−ヒト異種骨髄腫細胞株もまた、ヒトモノクローナル抗体の産生について記載されている。Kozbor, J. Immunol., 133:3001 (1984); Brodeur et al. Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications (Marcel Dekker, Inc.: New York, 1987) pp. 51-63。
【０１３３】
次に、ハイブリドーマ細胞が培養された培地を、ポリペプチドに対するモノクローナル抗体の存在についてアッセイすることができる。ハイブリドーマ細胞によって産生されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降によって、又はラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）又は酵素結合免疫吸収アッセイ（ＥＬＩＳＡ）などのｉｎ  ｖｉｔｒｏ結合アッセイによって決定することができる。そのような技術及びアッセイは当技術分野で知られている。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、Munson and Pollard, Anal. Biochem., 107:220 (1980)のスキャッチャード分析によって決定することができる。
【０１３４】
所望のハイブリドーマ細胞が同定された後、そのクローンは、限界希釈手順によってサブクローニングされ、標準的な方法によって増殖させることができる。Ｇｏｄｉｎｇ、上記。この目的に適した培地には、例えば、ダルベッコ改変イーグル培地及びＲＰＭＩ−１６４０培地が含まれる。あるいは、ハイブリドーマ細胞は、哺乳動物の腹水としてｉｎ  ｖｉｖｏで増殖させることができる。
【０１３５】
サブクローンによって分泌されるモノクローナル抗体は、例えば、プロテインＡ−セファロース、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、又はアフィニティークロマトグラフィーなどの従来の免疫グロブリン精製手順によって、培地又は腹水から単離又は精製することができる。
【０１３６】
特定の実施態様では、抗ＰＳＭＡ抗体又は抗体部分は一価である。一価抗体を調製するための方法は当技術分野で知られている。１つの例示的な方法は、免疫グロブリン軽鎖及び修飾重鎖の組換え発現を含む。重鎖は、重鎖の架橋を防止するように、一般にＦｃ領域の任意の点で切断される。あるいは、関連するシステイン残基が別のアミノ酸残基で置換されるか、又は架橋を防止するために欠失される。
【０１３７】
一価抗体の調製には、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの方法も適している。抗体の断片、特にＦａｂ断片を生成するための抗体の消化は、当技術分野で知られている任意の方法を使用して達成することができる。
【０１３８】
所望の結合特異性を有する抗体可変ドメイン（抗体−抗原結合部位）を免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合させることができる。好ましくは、融合は、ヒンジ領域、ＣＨ２領域、及びＣＨ３領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとの融合である。いくつかの実施態様では、軽鎖結合に必要な部位を含む第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）は、融合体の少なくとも１つに存在する。免疫グロブリン重鎖融合体、及び所望により免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡは、別々の発現ベクターに挿入され、適切な宿主生物に同時導入される。二重特異性抗体の生成の詳細については、例えば、Suresh et al., Methods in Enzymology, 121: 210 (1986)を参照のこと。
【０１３９】
モノクローナル抗体はまた、米国特許第４８１６５６７号に記載されるものなど、組換えＤＮＡ法によって作製することができる。モノクローナル抗ＰＳＭＡ抗体をコードするＤＮＡは、容易に単離することができ、一般的な手順を使用して（例えば、マウス抗体の重鎖と軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）配列決定することができる。上記のようなハイブリドーマ細胞又はＰＳＭＡ特異的ファージクローンは、そのようなＤＮＡの供給源として機能し得る。分離されると、ＤＮＡは発現ベクター内に配置され、次いで、シミアンＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、又は免疫グロブリンタンパク質を産生しない骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクトされ、組換え宿主細胞におけるモノクローナル抗体の合成を得ることができる。ＤＮＡは、例えば、相同な非ヒト配列の代わりに、ヒト重鎖及び軽鎖定常ドメイン並びに／又はフレームワーク領域のコード配列を置換することによって（米国特許第４８１６５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、上記）、あるいは非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全部若しくは一部を免疫グロブリンコード配列に共有結合させることによって修飾することもできる。このような非免疫グロブリンポリペプチドは、抗ＰＳＭＡ抗体の定常ドメインと置換することができ、又はキメラ二価抗体を作製するために、抗ＰＳＭＡ抗体の一方の抗原結合部位の可変ドメインと置換することができる。
【０１４０】
多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、多重特異性である。本明細書で提供される多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物は、少なくとも２つの異なる抗原又は２つの異なるエピトープ（例えば、同じ抗原上の２つの異なるエピトープ）に対する結合特異性を示す。２価を超える原子価及び／又は抗原特異性を含む多重特異性構築物もまた企図される。例えば、三重特異性抗体を調製することができる。例えば、Tutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991)を参照。したがって、いくつかの実施態様では、多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物は、抗ＰＳＭＡ抗体部分と、抗原結合部分、例えば、抗体部分などの少なくとも１つの追加の結合部分とを含む。
【０１４１】
いくつかの実施態様では、多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＰＳＭＡ構築物は、ａ）ＰＳＭＡ（例えば、細胞表面結合ＰＳＭＡ）に特異的に結合する抗ＰＳＭＡ抗体部分（本明細書に記載されているものなど）、及びｂ）第２の結合部分（抗原結合部分など）を含む。いくつかの実施態様では、第２の結合部分は、抗ＰＳＭＡ抗体部分によって結合されるエピトープと重複しないＰＳＭＡ（例えば、がん細胞などの細胞の表面上に発現されるＰＳＭＡ）上のエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施態様では、第２の結合部分は、異なる抗原（すなわち、ＰＳＭＡ以外の抗原）に特異的に結合する。いくつかの実施態様では、第２の結合部分は、がん細胞又は免疫細胞などの細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施態様では、第２の結合部分は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、好中球、単球、マクロファージ、又は樹状細胞などのリンパ球の表面上の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施態様では、第２の結合部分は、細胞傷害性Ｔ細胞（細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）又はＴキラー細胞としても知られる）などのエフェクターＴ細胞に特異的に結合する。いくつかの実施態様では、第２の結合部分は抗体部分である。
【０１４２】
いくつかの実施態様では、多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物は、ａ）ＰＳＭＡ（例えば、がん細胞などの細胞の表面上に発現されるＰＳＭＡ）に特異的に結合する抗ＰＳＭＡ抗体部分（本明細書に記載されているものなど）、及びｂ）ＣＤ３に特異的に結合する第２の結合部分を含む。いくつかの実施態様では、第２の結合部分はＣＤ３に結合する抗体部分である。いくつかの実施態様では、第２の抗原結合部分は、ヒト、ヒト化、又は半合成抗体部分である。いくつかの実施態様では、第２の結合部分は、ＣＤ３εに特異的に結合する。いくつかの実施態様では、第２の結合部分は、ＣＤ３εのアゴニストエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施態様では、用語「アゴニストエピトープ」は、多重特異性分子の結合時に、任意選択で同じ細胞上での複数の多重特異性分子の結合時に、前記多重特異性分子がＴＣＲシグナル伝達を活性化し、Ｔ細胞活性化を誘導することを可能にするエピトープを指す。いくつかの実施態様では、用語「アゴニストエピトープ」は、ＣＤ３のイプシロン鎖のアミノ酸残基のみで構成され、Ｔ細胞上にその自然な状況で提示された場合（すなわち、ＴＣＲ、ＣＤ３γ鎖などに囲まれている場合）、多重特異性分子による結合のためにアクセス可能であるエピトープを指す。いくつかの実施態様では、用語「アゴニストエピトープ」は、多重特異性分子の結合時に、ＣＤ３γに対するＣＤ３εの空間的位置の安定化をもたらさないエピトープを指す。いくつかの実施態様では、多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物は、少なくとも１つ（少なくとも約２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上のいずれかなど）の追加の抗原結合部分をさらに含む。
【０１４３】
いくつかの実施態様では、多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物は、ａ）ＰＳＭＡ（例えば、がん細胞などの細胞の表面上に発現されるＰＳＭＡ）に特異的に結合する抗ＰＳＭＡ抗体部分（本明細書に記載されているものなど）、及びｂ）例えば、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＣＤ１６ａ、ＣＤ５６、ＣＤ６８、及びＧＤＳ２Ｄを含むエフェクター細胞の表面上の抗原に特異的に結合する第２の結合部分を含む。いくつかの実施態様では、第２の結合部分は抗体部分である。いくつかの実施態様では、第２の抗原結合部分は、ヒト、ヒト化、又は半合成抗体部分である。いくつかの実施態様では、多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物は、少なくとも１つ（少なくとも約２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上のいずれかなど）の追加の抗原結合部分をさらに含む。
【０１４４】
いくつかの実施態様では、多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物は、ａ）ＰＳＭＡ（例えば、がん細胞などの細胞の表面上に発現されるＰＳＭＡ）に特異的に結合する抗ＰＳＭＡ抗体部分（本明細書に記載されているものなど）、及びｂ）Ｃ１ｑなどの補体系の成分に特異的に結合する第２の結合部分を含む。Ｃ１ｑは、血清補体系を活性化するＣ１酵素複合体のサブユニットである。いくつかの実施態様では、第２の結合部分は抗体部分である。いくつかの実施態様では、第２の抗原結合部分は、ヒト、ヒト化、又は半合成抗体部分である。いくつかの実施態様では、多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物は、少なくとも１つ（少なくとも約２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上のいずれかなど）の追加の抗原結合部分をさらに含む。
【０１４５】
いくつかの実施態様では、多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物は、ａ）ＰＳＭＡ（例えば、がん細胞などの細胞の表面上に発現されるＰＳＭＡ）に特異的に結合する抗ＰＳＭＡ抗体部分（本明細書に記載されているものなど）、及びｂ）Ｆｃ受容体、例えばＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）に特異的に結合する第２の結合部分を含む。ＦｃγＲは、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の表面上に存在するＦｃγＲＩＩＩ、又は、マクロファージ、単球、好中球、及び／又は樹状細胞の表面上に存在するＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢＩ、ＦｃγＲＩＩＢ２、及びＦｃγＲＩＩＩＢのいずれかであり得る。いくつかの実施態様では、第２の結合部分は抗体部分である。いくつかの実施態様では、第２の抗原結合部分は、ヒト、ヒト化、又は半合成抗体部分である。いくつかの実施態様では、第２の結合部分は、Ｆｃ領域又はその機能的断片である。いくつかの実施態様では、「機能的断片」は、ＦｃγＲを有するエフェクター細胞、特に、マクロファージ、単球、好中球及び／又は樹状細胞が、細胞傷害性溶解又は食作用によって標的細胞を死滅させることを可能にするのに十分な特異性及び親和性で、ＦｃＲ、特にＦｃγＲに結合することが依然として可能である抗体Ｆｃ領域の断片を指す。機能的なＦｃ断片は、元の完全長Ｆｃ部分のＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢＩ、ＦｃγＲＩＩＢ２、又はＦｃγＲＩＩＩＢなどのＦｃＲへの結合を競合的に阻害することができる。いくつかの実施態様では、機能的Ｆｃ断片は、活性化ＦｃγＲなどのＦｃγＲに対するその親和性の少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は９５％を保持する。いくつかの実施態様では、Ｆｃ領域又はその機能的断片は、増強されたＦｃ領域又はその機能的断片である。本明細書で使用される場合、「増強されたＦｃ領域」とは、Ｆｃ受容体媒介エフェクター機能、特に抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、及び抗体媒介食作用を増強するように改変されたＦｃ領域を指す。例えば、Ｆｃ領域は、活性化受容体（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上で発現するＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６Ａ））に対する親和性の増加及び／又は抑制性受容体（例えば、ＦｃγＲＩＩＢ１／Ｂ２（ＣＤ３２Ｂ））への結合の減少につながるように改変することができる。いくつかの実施態様では、第２の抗原結合部分は、ＦｃγＲを有するエフェクター細胞、特に、マクロファージ、単球、好中球及び／又は樹状細胞が、細胞傷害性溶解又は食作用によって標的細胞を死滅させることを可能にするのに十分な特異性及び親和性で、ＦｃＲ、特にＦｃγＲに特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片である。いくつかの実施態様では、多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物は、少なくとも１つ（少なくとも約２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上のいずれかなど）の追加の抗原結合部分をさらに含む。
【０１４６】
いくつかの実施態様では、多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物は、表面上にＰＳＭＡを発現する標的細胞（がん細胞など）の死滅を可能にする。いくつかの実施態様では、多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物は、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）を効果的にリダイレクトして、表面上にＰＳＭＡを発現している（例えば過剰発現している）標的細胞（がん細胞など）を溶解する。いくつかの実施態様では、多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＰＳＭＡ構築物は、１０から５００ｎｇ／ｍｌの範囲のｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＥＣ５０値を有する。いくつかの実施態様では、多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＰＳＭＡ構築物は、ＣＴＬ：標的細胞の比率が約１：１から約５０：１（約１：１から約１５：１、又は約２：１から約１０：１など）で、ＣＴＬを通じて標的細胞の約５０％のリダイレクトされた溶解を誘導することができる。
【０１４７】
いくつかの実施態様では、多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＰＳＭＡ構築物は、標的細胞が溶解されるように、刺激された又は刺激されていないＣＴＬと標的細胞（がん細胞など）とを架橋することができる。これは、多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物がその所望の活性を発揮するために、標的特異的Ｔ細胞クローンの生成又は樹状細胞による共通の抗原提示を必要としないという利点を提供する。いくつかの実施態様では、本明細書で提供される多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物は、他の活性化シグナルの非存在下で、ＣＴＬをリダイレクトして標的細胞（がん細胞など）を溶解することができる。いくつかの実施態様では、多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物の第２の抗原結合部分は、ＣＤ３（例えば、ＣＤ３ε）に特異的に結合し、ＣＤ２８及び／又はＩＬ−２を介したシグナル伝達は、ＣＴＬをリダイレクトして標的細胞（例えば、がん細胞）を溶解するために必要ではない。
【０１４８】
２つの抗原（例えば、２つの異なる細胞上の２つの異なる抗原、あるいは同じ細胞の２つの異なる抗原）に同時に結合する多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物の優先度を測定するための方法は、当業者の能力の範囲内にある。例えば、多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物の第２の結合部分がＣＤ３に特異的に結合する場合、多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物は、ＣＤ３＋／ＰＳＭＡ−細胞及びＣＤ３−／ＰＳＭＡ＋細胞の混合物と接触され得る。次いで、多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物によって結合された単一細胞の数及び多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物によって結合された架橋細胞の数を、蛍光顕微鏡法、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）、及び／又は当技術分野で知られている他の方法によって評価することができる。
【０１４９】
いくつかの実施態様では、多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物は、例えば、二重特異性抗体、ダイアボディ（Ｄｂ）、単鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、タンデムｓｃＤｂ（Ｔａｎｄａｂ）、直鎖状二量体ｓｃＤｂ（ＬＤ−ｓｃＤｂ）、環状二量体ｓｃＤｂ（ＣＤ−ｓｃＤｂ）、ｄｉ−ダイアボディ、タンデムｓｃＦｖ、タンデムｄｉ−ｓｃＦｖ、タンデムｔｒｉ−ｓｃＦｖ、トリアボディ（ｔｒｉ（ａ）ｂｏｄｙ）、二重特異性Ｆａｂ２、ｄｉ−ミニ抗体、テトラボディ、ｓｃＦｖ−Ｆｃ−ｓｃＦｖ融合体、二重親和性リターゲティング（ＤＡＲＴ）抗体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体、ＩｇＧ−ｓｃＦａｂ、ｓｃＦａｂ−ｄｓ−ｓｃＦｖ、Ｆｖ２−Ｆｃ、ＩｇＧ−ｓｃＦｖ融合体、ドックアンドロック（ＤＮＬ）抗体、ノブイントゥホール（ＫｉＨ）抗体（ＫｉＨ技術によって調製された二重特異性ＩｇＧ）、ＤｕｏＢｏｄｙ（Ｄｕｏｂｏｄｙ技術によって調製された二重特異性ＩｇＧ）、ヘテロ多量体抗体、又はヘテロコンジュゲート抗体である。いくつかの実施態様では、多重特異性抗ＰＳＭＡ分子は、タンデムｓｃＦｖ（例えば、タンデムｄｉ−ｓｃＦｖ）である。当業者は、当業者が当技術分野で知られている様々な多重特異性構築物の適切な特徴を選択し、それらを互いに組み合わせて、本開示の範囲内でさらなる多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物を形成することができることを理解されたい。
【０１５０】
多重特異性構築物（例えば、二重特異性抗体）を作製するための適切な方法は、当技術分野で周知である。例えば、二重特異性抗体の産生は、２つの免疫グロブリン重鎖／軽鎖対の共発現に基づくことができ、ここでは２つの対はそれぞれ異なる特異性を有し、会合するとヘテロ二量体抗体をもたらす（例えば、Milstein and Cuello, Nature, 305: 537-539 (1983)；国際公開第９３／０８８２９号、及びTraunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991)を参照）。免疫グロブリン重鎖及び軽鎖のランダムな組み合わせのため、これらのハイブリドーマ（クアドロマ）は１０種類の抗体分子の潜在的な混合物を生成し、そのうち１つだけが正しい二重特異性構造を有する。正しい分子の精製は、通常、アフィニティークロマトグラフィー工程によって達成される。同様の手順が、国際公開第９３／０８８２９号、及びTraunecker et al., EMBO, 10: 3655-3659 (1991)に開示されている。あるいは、重鎖と軽鎖の組み合わせは、種の制限された対形成を利用して方向づけることができ（例えば、Lindhofer et al., J. Immunol., 155:219-225 (1995)を参照）、重鎖の対形成は、ＣＨ３ドメインの「ノブイントゥホール」工学を使用して方向づけることができる（例えば、米国特許第５７３１１６８号；Ridgway et al., Protein Eng., 9(7):617-621 (1996)を参照）。多重特異性抗体はまた、抗体Ｆｃ−ヘテロ二量体分子を作製するための静電ステアリング効果を操作することによって作製され得る（例えば、国際公開第２００９／０８９００４号（Ａ１）を参照のこと）。さらなる別の方法では、安定した二重特異性抗体は、制御されたＦａｂアーム交換によって生成することができ、ここでは、異なる抗原特異性を有しかつＣＨ３ドメインにおいて一致する点突然変異を有する２つの親抗体が、分離、再構築及び再酸化を可能にする還元状態で混合され、高純度の二重特異性抗体を形成する。Labrigin et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 110(13):5145-5150 (2013)。重鎖／軽鎖対の混合物を含むそのような抗体は、本明細書では「ヘテロ多量体抗体」とも呼ばれる。
【０１５１】
異なる特異性を有する抗体又はその抗原結合断片はまた、化学的に架橋されて、多重特異性ヘテロコンジュゲート抗体を生成することができる。例えば、それぞれが異なる抗原に対する特異性を有する２つのＦ（ａｂ’）２分子を化学的に連結することができる。Pullarkat et al., Trends Biotechnol., 48:9-21 (1999)。このような抗体は、例えば、免疫系細胞を不要な細胞に標的化するために（米国特許第４６７６９８０号）、及びＨＩＶ感染症の治療のために提案されている。国際公開第９１／００３６０号；国際公開第９２／２００３７３号；欧州特許第０３０８９号。抗体は、架橋剤を含むものを含む合成タンパク質化学における既知の方法を使用して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで調製することができることが企図される。例えば、免疫毒素は、ジスルフィド交換反応を使用して、又はチオエーテル結合を形成することによって構築することができる。この目的のための好適な試薬の例としては、イミノチオレート及びメチル−４−メルカプトブチリミデート、並びに例えば米国特許第４６７６９８０号に開示されているものが挙げられる。
【０１５２】
いくつかの実施態様では、多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物は、組換えＤＮＡ技術を使用して調製することができる。例えば、二重特異性抗体は、２つのｓｃＦｖを融合させることによって、例えば、ペプチドリンカーを介して２つのｓｃＦｖを融合させて、タンデムｓｃＦｖを生じさせることによって、操作され得る。用語「抗ＰＳＭＡタンデムｄｉ−ｓｃＦｖ」及び「二重特異性抗ＰＳＭＡ抗体」は、本明細書では交換可能に使用される。いくつかの実施態様では、タンデムｓｃＦｖは、本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ結合部分を含むｓｃＦｖに対する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み、ＰＳＭＡを発現する（例えば、過剰発現する）標的細胞へのＴ細胞のリダイレクションをもたらす。タンデムｓｃＦｖの構築及び発現に関するさらなる詳細は、例えば、 Mack et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 92:7021-7025 (1995); Brischwein et al., Mol. Immunol., 43(8):1129-1143 (2006)に提供される。本開示のタンデムｓｃＦｖに関するさらなる詳細は、本明細書の他の場所で提供される。
【０１５３】
２つの可変ドメイン間のペプチドリンカーの長さを短くすることによって、可変ドメインが自己会合するのを防ぎ、第２のポリペプチド上のドメインと強制的に対形成させることができ、その結果、ダイアボディ（Ｄｂ）と呼ばれるコンパクトな二重特異性抗体が得られる。Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 90:6444-6448 (1993)。Ｄｂの２つのポリペプチドはそれぞれ、同一鎖上の２つのドメイン間の対形成を可能にするには短すぎるリンカーによってＶＬに連結されたＶＨを含む。したがって、１つポリペプチドのＶＨ及びＶＬドメインは、別のポリペプチドの相補的なＶＬ及びＶＨドメインと強制的に対形成され、それによって２つの抗原結合部位を形成する。このフォーマットの改変では、２つのポリペプチドは、別のペプチドリンカーによって連結され、その結果単鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）が得られる。Ｄｂフォーマットのさらなる別の改変では、二重親和性リターゲティング（ＤＡＲＴ）二重特異的抗体は、任意選択で、所望のヘテロ二量体構造の組み立てを駆動するＣ末端システイン残基の前にドメインを含む、各ポリペプチドのＣ末端におけるシステイン残基間にジスルフィド結合を導入することによって生成され得る。Veri et al., Arthritis Rheum., 62(7):1933-1943 (2010)。四価の二重特異性抗体を得るために、２つのモノクローナル抗体の標的結合可変ドメインが、天然に存在するリンカーを介して組み合わされた、二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ−ＩｇＴＭ）もまた、当技術分野で知られている。Gu and Ghayur, Methods Enzymol., 502:25-41 (2012)。さらに別のフォーマットでは、ドックアンドロック（ＤＮＬ）、二重特異性抗体は、ヒトｃＡＭＰ依存性タンパク質キナーゼ（ＰＫＡ）の調節サブユニットに由来するペプチド（ＤＤＤ２）と、ヒトＡキナーゼアンカータンパク質（ＡＫＡＰ）のアンカリングドメインに由来するペプチド（ＡＤ２）との二量体化を利用することによって調製される。Rossi et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 103:6841-6846 (2006)。
【０１５４】
組換え細胞培養物から直接二重特異性抗体断片を作製及び単離するための様々な技術も記載されている。例えば、二重特異的抗体は、ロイシンジッパーを使用して産生されている。Veri et al., J. Immunol. 148(5):1547-1553 (1992)。この方法は、抗体ホモ二量体の作製にも利用することができる。
【０１５５】
タンデムｓｃＦｖ構築物
いくつかの実施態様では、多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物は、抗ＰＳＭＡ抗体部分（本明細書に記載されているものなど）を含む第１のｓｃＦｖ及び第２の標的に結合する第２のｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖ構築物（「抗ＰＳＭＡタンデムｓｃＦｖ」）である。いくつかの実施態様では、タンデムｓｃＦｖは、ｄｉ−ｓｃＦｖ（２つのｓｃＦｖを含む）又はタンデムｔｒｉ−ｓｃＦｖ（３つのｓｃＦｖを含む）である。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡタンデムｓｃＦｖは、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、又はそれ以上のｓｃＦｖをさらに含む。いくつかの実施態様では、第２のｓｃＦｖは、ＰＳＭＡ（第１のｓｃＦｖの抗ＰＳＭＡ抗体部分によって結合されるエピトープと重複しないエピトープなど）に特異的に結合する。いくつかの実施態様では、第２のｓｃＦｖは、別の抗原（すなわち、ＰＳＭＡ以外の抗原）に特異的に結合する。いくつかの実施態様では、第２のｓｃＦｖは、ＰＳＭＡを発現する細胞（例えば、がん細胞）などの細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施態様では、第２のｓｃＦｖは、ＰＳＭＡを発現しない細胞表面上の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施態様では、第２のｓｃＦｖは、細胞傷害性細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施態様では、第２のｓｃＦｖは、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、好中球、単球、マクロファージ、又は樹状細胞などのリンパ球の表面上の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施態様では、第２のｓｃＦｖは、細胞傷害性Ｔ細胞などのエフェクターＴ細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施態様では、第２のｓｃＦｖは、例えば、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＣＤ１６ａ、ＣＤ５６、ＣＤ６８、及びＧＤＳ２Ｄを含む、エフェクター細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施態様では、第１のｓｃＦｖ及び／又は第２のｓｃＦｖは、ヒトである、ヒト化されている、又は半合成である。
【０１５６】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡタンデムｓｃＦｖは、ａ）ＰＳＭＡ（例えば、細胞表面結合ＰＳＭＡ）に特異的に結合する抗ＰＳＭＡ抗体部分（本明細書に記載されているものなど）を含む第１のｓｃＦｖ、及びｂ）Ｔ細胞の表面上の抗原に特異的に結合する第２のｓｃＦｖを含む。いくつかの実施態様では、第２のｓｃＦｖは、細胞傷害性Ｔ細胞などのエフェクターＴ細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施態様では、第２のｓｃＦｖは、例えば、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、又はＨＶＥＭに特異的に結合する。いくつかの実施態様では、第２のｓｃＦｖは、Ｔ細胞の表面上の抗原上のアゴニストエピトープに特異的に結合し、ここで、アゴニストエピトープへの第２のｓｃＦｖの結合は、Ｔ細胞活性化を増強する。いくつかの実施態様では、第１のｓｃＦｖ及び／又は第２のｓｃＦｖは、ヒトである、ヒト化されている、又は半合成である。
【０１５７】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡタンデムｓｃＦｖは、ａ）ＰＳＭＡ（例えば、細胞表面結合ＰＳＭＡ）に特異的に結合する抗ＰＳＭＡ抗体部分（本明細書に記載されているものなど）を含む第１のｓｃＦｖ、及びｂ）ＣＤ３εに特異的に結合する第２のｓｃＦｖを含む。いくつかの実施態様では、第１のｓｃＦｖは、ペプチドリンカーを介して第２のｓｃＦｖに融合される。いくつかの実施態様では、ペプチドリンカーは、約５から約２０アミノ酸長である（約５、１０、１５、又は２０のいずれかなど、これらの値の間の任意の範囲を含む）。いくつかの実施態様では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳ（配列番号１４０）を含む（例えば、からなるか、又は本質的になる）が、代替のリンカー（表６Ａのものなど）を使用することができる。いくつかの実施態様では、第１のｓｃＦｖ及び／又は第２のｓｃＦｖは、ヒトである、ヒト化されている、又は半合成である。
【０１５８】
いくつかの実施態様では、本明細書で提供される抗ＰＳＭＡタンデムｓｃＦｖのＰＳＭＡ結合ｓｃＦｖは、約０．１ｐＭから約５００ｎＭの間のＫｄ（約０．１ｐＭ、２．５ｐＭ、１．０ｐＭ、５ｐＭ、１０ｐＭ、２５ｐＭ、５０ｐＭ、７５ｐＭ、１００ｐＭ、２５０ｐＭ、５００ｐＭ、７５０ｐＭ、１ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭ、２５ｎＭ、５０ｎＭ、７５ｎＭ、１００ｎＭ、２５０ｎＭ、又は５００ｎＭのいずれか１つなど、これらの値の間の任意の範囲を含む）でＰＳＭＡ（例えば、細胞表面結合ＰＳＭＡ）に結合する。いくつかの実施態様では、本明細書で提供される抗ＰＳＭＡタンデムｓｃＦｖのＰＳＭＡ結合ｓｃＦｖは、約１ｎＭから約５００ｎＭの間のＫｄ（約１、５、１０、２５、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、又は５００ｎＭのいずれかなど、これらの値の間の任意の範囲を含む）でＰＳＭＡ（例えば、細胞表面結合ＰＳＭＡ）に結合する。
【０１５９】
例示的な抗ＰＳＭＡ抗ＣＤ３タンデムｄｉ−ｓｃＦｖのアミノ酸配列が、以下の表８に提供される。各タンデムｄｉ−ｓｃＦｖの抗ＰＳＭＡｓｃＦｖはプレーンテキストである（つまり、下線は引かれていない）。各タンデムｄｉ−ｓｃＦｖの抗ＣＤ３  ｓｃＦｖには下線が引かれている。抗ＰＳＭＡｓｃＦｖと抗ＣＤ３ｓｃＦｖを連結するリンカーは太字のイタリック体である。
【０１６０】
2021526844.tif 000011
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【０１６１】
表８の配列は、特定のペプチドリンカー及びペプチドタグを含むが、任意のリンカー又はタグ（例えば、表６Ａ及び６Ｂを参照）を使用することができる。
【０１６２】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ抗ＣＤ３タンデムｄｉ−ｓｃＦｖは、配列番号２５、２６、２７、又は２８に対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１６３】
抗ＰＳＭＡキメラ抗原受容体（抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ）
いくつかの実施態様では、本明細書で提供される抗ＰＳＭＡ構築物は、抗ＰＳＭＡ抗体部分（本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ抗体部分など）を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）（本明細書では「抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ」とも呼ばれる）である。本明細書の他の場所でさらに詳細に記載されるように、本開示はまた、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲを含む、発現する、又はそれと会合したＣＡＲエフェクター細胞（Ｔ細胞など）を提供する。そのようなエフェクター細胞はまた、本明細書では「抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲエフェクター細胞」、例えば、「抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ免疫細胞」又は「抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞」とも呼ばれる。
【０１６４】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲは、ａ）ＰＳＭＡ（例えば、細胞表面結合ＰＳＭＡ）に特異的に結合する抗ＰＳＭＡ抗体部分（本明細書に記載されているものなど）を含む細胞外ドメイン、及びｂ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲは、細胞外ドメインと細胞内ドメインとの間に膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲは、スペーサーをさらに含む。いくつかの実施態様では、スペーサーは、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲの細胞外ドメインと膜貫通ドメインを連結する。いくつかの実施態様では、スペーサーは、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲの細胞内ドメインと膜貫通ドメインを連結する。いくつかの実施態様では、スペーサードメインは、ポリペプチド鎖の細胞外ドメイン又は細胞内ドメインに膜貫通ドメインを連結するように機能する任意のオリゴ又はポリペプチドである。例えば、スペーサードメインは、例えば、約１０から約１００アミノ酸の間、又は約２５から約５０アミノ酸の間を含む、最大約３００アミノ酸を含み得る。
【０１６５】
抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲの膜貫通ドメインは、天然の供給源するものであっても、合成の供給源に由来するものであってもよい。供給源が天然である場合、ドメインは、任意の膜結合タンパク質又は膜貫通タンパク質に由来し得る。例えば、いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲは、限定されないが、Ｔ細胞受容体のα、β、δ、又はγ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、又はＣＤ１５４から由来する膜貫通ドメイン（例えば、少なくとも１つの膜貫通ドメイン又は少なくとも１つの膜貫通領域）を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲは、合成膜貫通ドメインを含み、その場合、膜貫通ドメインは、ロイシン及びバリンなどの主に疎水性残基を含み得る。いくつかの実施態様では、フェニルアラニン、トリプトファン及びバリンの三つ組が、合成膜貫通ドメインの各末端に見出され得る。いくつかの実施態様では、例えば、約２から約１０アミノ酸長（長さが約２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０アミノ酸のいずれかなど）を有する短いオリゴ又はポリペプチドリンカーは、膜貫通ドメインと抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインとの間に結合を形成し得る。いくつかの実施態様では、リンカーは、グリシン−セリンダブレットである。
【０１６６】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲは、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲの細胞内ドメイン中の配列のうちの１つと天然に会合する膜貫通ドメインを含む。例えば、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ細胞内ドメインがＣＤ２８共刺激配列を含む場合、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインに由来する。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲは、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小限に抑えるため、及び／又は同じ若しくは異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインへの結合を回避するために、選択され、又はアミノ酸置換によって改変された膜貫通ドメインを含む。
【０１６７】
抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲが発現される免疫細胞の正常なエフェクター機能の少なくとも１つの活性化に関与している。例えば、Ｔ細胞のエフェクター機能は、サイトカインの分泌を含む細胞溶解活性又はヘルパー活性であり得る。したがって、いくつかの実施態様では、用語「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、エフェクター機能シグナルを伝達し、細胞に特殊機能を実行するように指示する抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲの部分を指す。通常、細胞内シグナル伝達ドメイン全体が使用され得るが、多くの場合、鎖全体を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインのトランケートされた部分が使用される範囲で、そのようなトランケートされた部分は、それがエフェクター機能シグナルを伝達する限り、インタクトな鎖の代わりに使用され得る。いくつかの実施態様では、用語「細胞内シグナル伝達配列」は、エフェクター機能シグナルを伝達するのに十分な、細胞内シグナル伝達ドメインの任意のトランケートされた部分を指す。
【０１６８】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲは、抗原受容体の会合に続くシグナル伝達を開始するために協働して作用するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）及び共受容体の細胞質配列を含む細胞内シグナル伝達を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）及び共受容体の誘導体又は変異体、及び／又は同じ機能的能力を有する任意の合成配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
【０１６９】
ＴＣＲ単独を介して生成されたシグナルは、Ｔ細胞の完全な活性化には不十分であること、及び二次又は共刺激シグナルも必要であることが知られている。したがって、Ｔ細胞活性化は、２つの異なるクラスの細胞内シグナル伝達配列：ＴＣＲを介して抗原依存性の一次活性化を開始させる配列（一次シグナル伝達配列又は一次免疫細胞シグナル伝達配列）及び二次又は共刺激シグナルを提供するように抗原非依存性の様式で作用する配列（共刺激シグナル伝達配列）によって媒介されると言うことができる。
【０１７０】
一次シグナル伝達配列、又は一次免疫細胞シグナル伝達配列は、刺激的様式で、又は抑制的様式で、ＴＣＲ複合体の一次活性化を調節する。刺激的様式で作用する一次シグナル伝達配列は、免疫受容活性化チロシンモチーフ（又はＩＴＡＭ）として知られているシグナル伝達モチーフを含み得る。したがって、いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲは、１つ又は複数のＩＴＡＭを含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲは、限定されないが、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、及びＣＤ６６ｄに由来する一次免疫細胞シグナル伝達配列を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲは、共刺激シグナル伝達配列をさらに含む。いくつかの実施態様では、共刺激シグナル伝達配列は、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む共刺激分子の細胞内ドメインの一部である。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲは、１つを超える共刺激シグナル伝達配列を含む。
【０１７１】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲは、ＣＤ３ζに由来する一次免疫細胞シグナル伝達配列を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲは、それ自体で、又は本明細書で提供される抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲの文脈で有用な他の任意の所望の細胞内シグナル伝達配列と組み合わせて、ＣＤ３ζに由来する一次免疫細胞シグナル伝達配列を含む。例えば、いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲは、ＣＤ３ζに由来する一次免疫細胞シグナル伝達配列及び共刺激シグナル伝達配列を含む細胞内ドメインを含む。いくつかの実施態様では、共刺激シグナル伝達配列は、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む共刺激分子の細胞内ドメインの一部である。いくつかの実施態様では、共刺激シグナル伝達配列は、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどから誘導される。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲは、１つを超える共刺激シグナル伝達配列を含む。
【０１７２】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲは、ＣＤ３ζに由来する一次免疫細胞シグナル伝達配列及びＣＤ２８に由来する共刺激シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲは、ＣＤ３ζに由来する一次免疫細胞シグナル伝達配列及び４−１ＢＢに由来する共刺激シグナル伝達配列を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζに由来する一次免疫細胞シグナル伝達配列と、ＣＤ２８及び４−１ＢＢに由来する共刺激シグナル伝達配列とを含む。
【０１７３】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲは、ａ）ＰＳＭＡ（例えば、細胞表面結合ＰＳＭＡ）に特異的に結合する抗ＰＳＭＡ抗体部分（本明細書に記載されているものなど）を含む細胞外ドメイン、ｂ）膜貫通ドメイン、及びｃ）免疫細胞を活性化することができる細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次免疫細胞シグナル伝達配列及び共刺激シグナル伝達配列を含む。いくつかの実施態様では、一次免疫細胞シグナル伝達配列は、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含む。いくつかの実施態様では、共刺激シグナル伝達配列は、ＣＤ２８又は４−１ＢＢ細胞内シグナル伝達配列を含む。いくつかの実施態様では、細胞内ドメインは、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列と、ＣＤ２８又は４−１ＢＢ細胞内シグナル伝達配列とを含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲは、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列とＣＤ２８細胞内シグナル伝達配列とを含む配列番号２２（以下を参照）のアミノ酸配列に融合された抗ＰＳＭＡ抗体部分（本明細書に記載されているものなど）を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲは、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列と４−１ＢＢ細胞内シグナル伝達配列とを含む配列番号２３（以下を参照）のアミノ酸配列に融合された抗ＰＳＭＡ抗体部分（本明細書に記載されているものなど）を含む。
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【０１７４】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ抗体部分は、ｓｃＦｖ（多重特異性抗ＰＳＭＡ  ｓｃＦｖなど、例えば、抗ＰＳＭＡタンデムｄｉ−ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施態様では、ｓｃＦｖは、ＳＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥＭＡ（配列番号２４）のアミノ酸配列を含むペプチドリンカーを含むがこれらに限定されない、ペプチドリンカーによって連結された重鎖及び軽鎖可変領域を含む。
【０１７５】
例示的な抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲのアミノ酸配列が以下の表９に提供される。各ＣＡＲは（順に、Ｎ末端からＣ末端まで）、抗ＰＳＭＡｓｃＦｖ（プレーンテキスト、すなわち下線なし）、ｍｙｃタグ（太い下線付き）、リンカー（太字のイタリック体）、ＣＤ２８に由来する配列（下線付き）、及びＣＤ３ζに由来する配列（太字で下線付き）を含む。
【０１７６】
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【０１７７】
表９の配列は、特定のペプチドリンカー及びペプチドタグを含むが、任意のリンカー又はタグ（例えば、表６Ａ及び６Ｂを参照）を使用することができる。
【０１７８】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲは、配列番号２９又は３０に対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１７９】
抗ＰＳＭＡキメラ抗体−Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）構築物（ｃａＴＣＲ）
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、抗ＰＳＭＡ抗体部分（本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ抗体部分など）を含むキメラ抗体−Ｔ細胞受容体構築物（ｃａＴＣＲ）である。そのような構築物は、本明細書では「抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ」とも呼ばれる。例示的なｃａＴＣＲは、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０５８３０５（現在は国際公開第２０１７／０７０６０８号として公開されている）で議論されており、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、ＰＳＭＡ（細胞、例えば、がん細胞の表面上に発現されるＰＳＭＡなど）に特異的に結合し、少なくとも１つのＴＣＲ会合シグナル伝達分子（ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及び／又はＣＤ３ζζなど）を動員することができる。
【０１８０】
以下でさらに詳細に説明するように、本開示はまた、抗ＰＳＭＡ−ｃａＴＣＲを含む、発現する、又はそれと会合したエフェクター細胞（Ｔ細胞など）を提供する。このようなエフェクター細胞は、本明細書では「抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲエフェクター細胞」、例えば「抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞」とも呼ばれる。
【０１８１】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、ａ）ＰＳＭＡ（例えば、細胞表面結合ヒトＰＳＭＡ）を特異的に認識する抗ＰＳＭＡ抗体部分（本明細書に記載されているものなど）を含む抗原結合モジュール、及びｂ）天然に存在するＴＣＲ（αβＴＣＲ又はγδＴＣＲなど）の膜貫通ドメインの１つに由来する第１のＴＣＲ膜貫通ドメイン（ＴＣＲ−ＴＭ）を含む第１のＴＣＲドメイン（ＴＣＲＤ）と、天然に存在するＴＣＲ（αβＴＣＲ又はγδＴＣＲなど）の他の膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤとを含むＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）を含み、ここで、ＴＣＲＭは、少なくとも１つのＴＣＲ会合シグナル伝達分子（ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及び／又はＣＤ３ζζなど）の動員を促進し、ここで、抗体部分は、第１及び／又は第２のＴＣＲＤに連結されている。いくつかの実施態様では、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び第２のＴＣＲ−ＴＭは、γ／δＴＣＲに由来する。いくつかの実施態様では、第１のＴＣＲ−ＴＭはＴＣＲγ鎖に由来し、第２のＴＣＲ−ＴＭはＴＣＲδ鎖に由来する。いくつかの実施態様では、第１のＴＣＲ−ＴＭはＴＣＲδ鎖に由来し、第２のＴＣＲ−ＴＭはＴＣＲγ鎖に由来する。いくつかの実施態様では、第１のＴＣＲ−ＴＭ及び第２のＴＣＲ−ＴＭは、α／βＴＣＲに由来する。いくつかの実施態様では、第１のＴＣＲ−ＴＭはＴＣＲα鎖に由来し、第２のＴＣＲ−ＴＭはＴＣＲβ鎖に由来する。いくつかの実施態様では、第１のＴＣＲ−ＴＭはＴＣＲβ鎖に由来し、第２のＴＣＲ−ＴＭはＴＣＲα鎖に由来する。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、天然に存在するＴＣＲドメインを含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、少なくとも１つの天然には存在しないＴＣＲドメインを含む。例えば、γ／δＴＣＲ、α／βＴＣＲ、ＴＣＲγ鎖、ＴＣＲδ鎖、ＴＣＲα鎖、及び／又はＴＣＲβ鎖は、天然に存在する場合もあれば、天然には存在しない場合もある。抗ＰＳＭＡｃａＴＣＲの抗原結合モジュールは、抗原特異性と、ＣＤ３の動員及びシグナル伝達を可能にするＴＣＲＭとを提供する。いくつかの実施態様では、抗原結合モジュールは、天然に存在するＴ細胞受容体抗原結合部分ではない。いくつかの実施態様では、抗原結合モジュールは、ＴＣＲＭ中のポリペプチド鎖のＮ末端に連結されている。いくつかの実施態様では、抗原結合モジュールは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、又はｓｃＦｖからなる群から選択される抗ＰＳＭＡ抗体部分である。ＴＣＲＭは、αβ及び／又はγδＴＣＲなどの１つ又は複数のＴＣＲ（ＴＣＲ−ＴＭ）の膜貫通ドメインに由来する膜貫通モジュールを含み、任意選択でＴＣＲの連結ペプチド又はその断片、及び／又は１つ又は複数のＴＣＲ細胞内ドメイン又はその断片のうちの１つ又は両方をさらに含む。いくつかの実施態様では、ＴＣＲＭは、２つのポリペプチド鎖を含み、各ポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端に、連結ペプチド、膜貫通ドメイン、及び任意選択でＴＣＲ細胞内ドメインを含む。いくつかの実施態様では、ＴＣＲＭは、１つ又は複数の天然には存在しないＴＣＲドメインを含む。例えば、いくつかの実施態様では、ＴＣＲＭは、１つ又は２つの天然には存在しない��ＣＲ膜貫通ドメインを含む。天然には存在しないＴＣＲドメインは、１つ又は複数のアミノ酸の置換によって、及び／又は対応するドメインの一部を別のＴＣＲからの類似のドメインの一部で置き換えることによって修飾された、天然に存在するＴＣＲの対応するドメインであり得る。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖を含み、ここで、第１及び第２のポリペプチド鎖は一緒になって抗原結合モジュール及びＴＣＲＭを形成する。いくつかの実施態様では、第１及び第２のポリペプチド鎖は別個のポリペプチド鎖であり、ｃａＴＣＲは二量体などの多量体である。いくつかの実施態様では、第１及び第２のポリペプチド鎖は、例えばペプチド結合によって、又はジスルフィド結合などの別の化学結合によって共有結合的に連結されている。いくつかの実施態様では、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖は、少なくとも１つのジスルフィド結合によって連結されている。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、１つ又は複数のＴ細胞共刺激シグナル伝達配列をさらに含む。１つ又は複数の共刺激シグナル配列は、個々に、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む共刺激分子の細胞内ドメインの全部又は一部であり得る。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の共刺激シグナル伝達配列は、第１のＴＣＲ−ＴＭと第１のＴＣＲ細胞内ドメインとの間、及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭと第２のＴＣＲ細胞内ドメインとの間に存在する。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の共刺激シグナル伝達配列は、第１のＴＣＲＤ及び／又は第２のＴＣＲＤに対してＣ末端側である。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、Ｔ細胞共刺激シグナル伝達配列を欠いている。いくつかの実施態様では、ｃａＴＣＲは、機能的な一次免疫細胞シグナル伝達ドメインを欠いている。いくつかの実施態様では、ｃａＴＣＲは、任意の一次免疫細胞シグナル伝達配列を欠いている。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、第１の安定化ドメイン及び第２の安定化ドメインを含む安定化モジュールをさらに含み、ここで、第１及び第２の安定化ドメインは、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲを安定化する互いに対する結合親和性を有する。いくつかの実施態様では、安定化モジュールは、抗原結合モジュールとＴＣＲＭとの間に配置される。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、任意の２つのｃａＴＣＲモジュール又はドメインの間にスペーサーモジュールをさらに含む。いくつかの実施態様では、スペーサーモジュールは、２つのｃａＴＣＲモジュール又はドメインを連結する１つ又は複数のペプチドリンカーを含む。
【０１８２】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、ａ）ＶＨ及びＣＨ１抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインと、第１のＴＣＲサブユニットの第１の膜貫通ドメインを含む第１のＴ細胞受容体ドメイン（ＴＣＲＤ）とを含む第１のポリペプチド鎖；及びｂ）ＶＬ及びＣＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインと、第２のＴＣＲサブユニットの第２の膜貫通ドメインを含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖を含み、ここで、第１の抗原結合ドメインのＶＨ及びＣＨ１ドメイン、並びに第２の抗原結合ドメインのＶＬ及びＣＬドメインは、ＰＳＭＡに特異的に結合する抗原結合モジュールを形成し、ここで、第１のＴＣＲＤ及び第２のＴＣＲＤは、少なくとも１つのＴＣＲ会合シグナル伝達モジュールを動員することができるＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）を形成する。いくつかの実施態様では、抗原結合モジュールは、ＣＨ１ドメイン内の残基とＣＬドメイン内の残基との間にジスルフィド結合を含む。
【０１８３】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、ａ）ＶＨ抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインと、第１のＴＣＲサブユニットの第１の膜貫通ドメインを含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖；及びｂ）ＶＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインと、第２のＴＣＲサブユニットの第２の膜貫通ドメインを含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖を含み、ここで、第１の抗原結合ドメインのＶＨドメイン、及び第２の抗原結合ドメインのＶＬドメインは、ＰＳＭＡに特異的に結合する抗原結合モジュールを形成し、ここで、第１のＴＣＲＤ及び第２のＴＣＲＤは、少なくとも１つのＴＣＲ会合シグナル伝達モジュールを動員することができるＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）を形成する。
【０１８４】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、ａ）第１のＴＣＲ膜貫通ドメイン（ＴＣＲ−ＴＭ）を含む第１のＴ細胞受容体ドメイン（ＴＣＲＤ）及びｂ）第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含むＴＣＲＭを含み、ここで、ＴＣＲＭは少なくとも１つのＴＣＲ会合シグナル伝達分子の動員を促進する。いくつかの実施態様では、ＴＣＲ−ＴＭの両方が天然に存在する。いくつかの実施態様では、ＴＣＲ−ＴＭの少なくとも一方は、天然には存在しない。いくつかの実施態様では、ＴＣＲ−ＴＭの両方が天然には存在しない。いくつかの実施態様では、第１のＴＣＲ−ＴＭはＴ細胞受容体の膜貫通ドメインの１つ（αβＴＣＲ又はγδＴＣＲなど）に由来し、第２のＴＣＲ−ＴＭはＴ細胞受容体の他方の膜貫通ドメインに由来する。いくつかの実施態様では、ＴＣＲＭは、Ｔ細胞受容体の膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ会合シグナル伝達分子の増強された動員を可能にする。ＴＣＲ会合シグナル伝達分子の動員は、ＴＣＲ−ＣＤ３複合体表面発現のためのＦＡＣＳ分析、又はＣＤ３サブユニットとｃａＴＣＲとの共免疫沈降法などの当技術分野で知られている方法によって決定することができる。
【０１８５】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、ＶＨ抗体ドメイン（例えば、本明細書に記載のＶＨ抗体ドメイン）を含む第１の抗原結合ドメイン及びＶＬ抗体ドメイン（例えば、本明細書に記載のＶＬ抗体ドメイン）を含む第２の抗原結合ドメインを含む抗原結合モジュールを含む。いくつかの実施態様では、ＶＨ抗体ドメイン及びＶＬ抗体ドメインのＣＤＲは、同じ抗ＰＳＭＡ抗体部分に由来する。いくつかの実施態様では、一部のＶＨ抗体ドメイン及びＶＬ抗体ドメインのＣＤＲは、異なる抗ＰＳＭＡ抗体部分に由来する。いくつかの実施態様では、ＶＨ抗体ドメイン及び／又はＶＬ抗体ドメインは、ヒトである、ヒト化されている、キメラである、半合成である、又は完全合成である。
【０１８６】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、任意選択で安定化モジュールを含む、本明細書に記載のＴＣＲＭに連結された本明細書に記載の抗原結合モジュールを含む。例えば、いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、一方又は両方のＴＣＲＤのＮ末端に連結された抗原結合モジュールを含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、ＴＣＲＭと抗原結合モジュールとの間に安定化モジュールを含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、任意の２つの抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲモジュール又はドメインの間にスペーサーモジュールをさらに含む。いくつかの実施態様では、スペーサーモジュールは、約５から約７０（約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、又は７０のいずれかなど、これらの値の間の任意の範囲を含む）アミノ酸長の１つ又は複数のペプチドリンカーを含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、１つ又は複数のアクセサリー細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの実施態様では、１つ又は複数のアクセサリー細胞内ドメインは、第１及び／又は第２のＴＣＲＤに対してカルボキシ末端側である。いくつかの実施態様では、１つ又は複数のアクセサリー細胞内ドメインは、第１のＴＣＲ−ＴＭと第１のＴＣＲ細胞内ドメインとの間、及び／又は第２のＴＣＲ−ＴＭと第２のＴＣＲ細胞内ドメインとの間に存在する。いくつかの実施態様では、１つ又は複数のアクセサリー細胞内ドメインは、個別に、ＴＣＲ共刺激ドメインを含む。いくつかの実施態様では、ＴＣＲ共刺激ドメインは、免疫共刺激分子（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなど）の細胞内ドメインの全部又は一部を含む。
【０１８７】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、ａ）細胞表面結合ＰＳＭＡを認識する抗体部分（本明細書に記載されているものなど）を含む抗原結合モジュール、及びｂ）天然に存在するＴＣＲ（αβＴＣＲ又はγδＴＣＲなど）の膜貫通ドメインの１つに由来する第１のＴＣＲ膜貫通ドメイン（ＴＣＲ−ＴＭ）を含む第１のＴＣＲドメイン（ＴＣＲＤ）と、天然に存在するＴＣＲ（αβＴＣＲ又はγδＴＣＲなど）の他の膜貫通ドメインに由来する第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤとを含むＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）を含み、ここで、ＴＣＲＭは、少なくとも１つのＴＣＲ会合シグナル伝達分子（ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及び／又はＣＤ３ζζなど）の動員を促進し、ここで、抗体部分は、第１及び／又は第２のＴＣＲＤに連結されている。
【０１８８】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、ａ）ＶＨ及びＣＨ１抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインと、第１のＴＣＲサブユニットの第１の膜貫通ドメインを含む第１のＴ細胞受容体ドメイン（ＴＣＲＤ）とを含む第１のポリペプチド鎖；及びｂ）ＶＬ及びＣＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインと、第２のＴＣＲサブユニットの第２の膜貫通ドメインを含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖を含み、ここで、第１の抗原結合ドメインのＶＨ及びＣＨ１ドメイン、並びに第２の抗原結合ドメインのＶＬ及びＣＬドメインは、ＰＳＭＡ（例えば、細胞表面結合ＰＳＭＡ）に特異的に結合する抗原結合モジュールを形成し、ここで、第１のＴＣＲＤ及び第２のＴＣＲＤは、少なくとも１つのＴＣＲ会合シグナル伝達モジュールを動員することができるＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）を形成する。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、ＣＨ１ドメイン内の残基とＣＬドメイン内の残基との間にジスルフィド結合を含む抗原結合モジュールを含む。
【０１８９】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、ａ）ＶＨ抗体ドメインを含む第１の抗原結合ドメインと、第１のＴＣＲサブユニットの第１の膜貫通ドメインを含む第１のＴＣＲＤとを含む第１のポリペプチド鎖；及びｂ）ＶＬ抗体ドメインを含む第２の抗原結合ドメインと、第２のＴＣＲサブユニットの第２の膜貫通ドメインを含む第２のＴＣＲＤとを含む第２のポリペプチド鎖を含み、ここで、第１の抗原結合ドメインのＶＨドメイン、及び第２の抗原結合ドメインのＶＬドメインは、ＰＳＭＡ（例えば、細胞表面結合ＰＳＭＡ）に特異的に結合する抗原結合モジュールを形成し、ここで、第１のＴＣＲＤ及び第２のＴＣＲＤは、少なくとも１つのＴＣＲ会合シグナル伝達モジュールを動員することができるＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）を形成する。
【０１９０】
例示的な抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲのアミノ酸配列が以下の表１０Ａに提供される。各鎖１において、抗ＰＳＭＡ  ＶＨ／ＣＨ配列は、プレーンテキスト（すなわち、下線なし）である。各鎖１において、ＴＣＲデルタ鎖の配列には下線が引かれている。各鎖２において、抗ＰＳＭＡ  ＶＬ／ＣＬ配列は、太い下線が引かれている。各鎖２において、ＴＣＲガンマ鎖の配列はイタリック体である。
【０１９１】
2021526844.tif 000015
【０１９２】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、配列番号３１に対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有する鎖１、及び配列番号３２に対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有する鎖２を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、配列番号３４に対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有する鎖１、及び配列番号３５に対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有する鎖２を含む。
【０１９３】
いくつかの実施態様では、例示的な抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲクローンＡをコードする核酸は、以下のアミノ酸配列（表９に示されるものに対応するマーキングを有する）を含むポリペプチドを発現する：
2021526844.tif 000016
【０１９４】
いくつかの実施態様では、例示的な抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲクローンＢをコードする核酸は、以下のアミノ酸配列（表９に示されるものに対応するマーキングを有する）を含むポリペプチドを発現する：
2021526844.tif 000017
【０１９５】
配列番号３３及び３６における太字の配列は、シグナルペプチド及び／又は自己切断ペプチドに対応する。配列番号３３及び３６は特定のペプチドリンカーを含むが、任意の切断可能なリンカー（例えば、表６Ａを参照）を使用することができる。
【０１９６】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードする核酸は、配列番号３３又は配列番号３６に対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するポリペプチドを発現する。
【０１９７】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、二価ｃａＴＣＲである。いくつかの実施態様では、二価抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、同一のＶＨ配列及び同一のＶＬ配列を含む２つの抗ＰＳＭＡ抗体部分を含むホモ二価抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲである。例示的なホモ二価抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲのアミノ酸配列が以下の表１０Ｂに提供される。配列番号１６５は、クローンＡ  ｓｃＦｖ及びクローンＡ  ＶＨ−ＣＨ１を含み、配列番号１６６は、クローンＡ  ＶＬ−ＣＬを含む。配列番号１６７は、クローンＡ  ＶＨ及びクローンＡ  ＶＨ−ＣＨ１を含み、配列番号１６８は、クローンＡ  ＶＬ及びクローンＡ  ＶＬ−ＣＬを含む。配列番号１６９は、クローンＢ  ｓｃＦｖ及びクローンＢ  ＶＨ−ＣＨ１を含み、配列番号１７０は、クローンＡ  ＶＬ−ＣＬを含む。配列番号１７１は、クローンＢ  ＶＨ及びクローンＢ  ＶＨ−ＣＨ１を含み、配列番号１６８は、クローンＢ  ＶＬ及びクローンＢ  ＶＬ−ＣＬを含む。
【０１９８】
2021526844.tif 000018
2021526844.tif 000019
【０１９９】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、配列番号１６５に対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有する鎖１、及び配列番号１６６に対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有する鎖２を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、配列番号１６７に対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有する鎖１、及び配列番号１６８に対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有する鎖２を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、配列番号１６９に対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有する鎖１、及び配列番号１７０に対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有する鎖２を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、配列番号１７１に対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有する鎖１、及び配列番号１７２に対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有する鎖２を含む。
【０２００】
いくつかの実施態様では、例示的なホモ二価クローンＡ  抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ  ＃１をコードする核酸は、配列番号４７を含むポリペプチドを発現する。
ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＱＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＧＡＰＧＱＲＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＧＮＳＮＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＴＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＳＳＬＳＧＹＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬＧＳＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥＭＡＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＳＹＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＳＭＧＳＳＬＹＡＳＳＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＳＹＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＳＭＧＳＳＬＹＡＳＳＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＥＶＫＴＤＳＴＤＨＶＫＰＫＥＴＥＮＴＫＱＰＳＫＳＣＨＫＰＫＡＩＶＨＴＥＫＶＮＭＭＳＬＴＶＬＧＬＲＭＬＦＡＫＴＶＡＶＮＦＬＬＴＡＫＬＦＦＬＲＡＫＲＳＧＳＧＡＰＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＱＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＧＡＰＧＱＲＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＧＮＳＮＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＴＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＳＳＬＳＧＹＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳＰＩＫＴＤＶＩＴＭＤＰＫＤＮＣＳＫＤＡＮＤＴＬＬＬＱＬＴＮＴＳＡＹＹＭＹＬＬＬＬＬＫＳＶＶＹＦＡＩＩＴＣＣＬＬＲＲＴＡＦＣＣＮＧＥＫＳ（配列番号４７）
【０２０１】
いくつかの実施態様では、例示的なホモ二価クローンＡ  抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ  ＃２をコードする核酸は、配列番号４８を含むポリペプチドを発現する。
ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＳＹＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＳＭＧＳＳＬＹＡＳＳＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＳＹＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＳＭＧＳＳＬＹＡＳＳＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＥＶＫＴＤＳＴＤＨＶＫＰＫＥＴＥＮＴＫＱＰＳＫＳＣＨＫＰＫＡＩＶＨＴＥＫＶＮＭＭＳＬＴＶＬＧＬＲＭＬＦＡＫＴＶＡＶＮＦＬＬＴＡＫＬＦＦＬＲＡＫＲＳＧＳＧＡＰＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＱＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＧＡＰＧＱＲＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＧＮＳＮＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＴＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＳＳＬＳＧＹＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＧＡＰＧＱＲＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＧＮＳＮＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＴＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＳＳＬＳＧＹＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳＰＩＫＴＤＶＩＴＭＤＰＫＤＮＣＳＫＤＡＮＤＴＬＬＬＱＬＴＮＴＳＡＹＹＭＹＬＬＬＬＬＫＳＶＶＹＦＡＩＩＴＣＣＬＬＲＲＴＡＦＣＣＮＧＥＫＳ（配列番号４８）
【０２０２】
いくつかの実施態様では、例示的なホモ二価クローンＢ  抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ  ＃１をコードする核酸は、配列番号４９を含むポリペプチドを発現する。
ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＱＡＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＭＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＧＹＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬＧＳＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥＭＡＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＭＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＮＦＡＳＹＷＶＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＴＩＹＰＤＤＳＤＴＲＹＧＰＡＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＤＳＹＹＧＩＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＭＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＮＦＡＳＹＷＶＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＴＩＹＰＤＤＳＤＴＲＹＧＰＡＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＤＳＹＹＧＩＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＥＶＫＴＤＳＴＤＨＶＫＰＫＥＴＥＮＴＫＱＰＳＫＳＣＨＫＰＫＡＩＶＨＴＥＫＶＮＭＭＳＬＴＶＬＧＬＲＭＬＦＡＫＴＶＡＶＮＦＬＬＴＡＫＬＦＦＬＲＡＫＲＳＧＳＧＡＰＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＱＡＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＭＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＧＹＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳＰＩＫＴＤＶＩＴＭＤＰＫＤＮＣＳＫＤＡＮＤＴＬＬＬＱＬＴＮＴＳＡＹＹＭＹＬＬＬＬＬＫＳＶＶＹＦＡＩＩＴＣＣＬＬＲＲＴＡＦＣＣＮＧＥＫＳ（配列番号４９）
【０２０３】
いくつかの実施態様では、例示的なホモ二価クローンＢ  抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ  ＃１をコードする核酸は、配列番号５０を含むポリペプチドを発現する。
ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＭＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＮＦＡＳＹＷＶＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＴＩＹＰＤＤＳＤＴＲＹＧＰＡＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＤＳＹＹＧＩＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＭＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＮＦＡＳＹＷＶＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＴＩＹＰＤＤＳＤＴＲＹＧＰＡＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＤＳＹＹＧＩＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＥＶＫＴＤＳＴＤＨＶＫＰＫＥＴＥＮＴＫＱＰＳＫＳＣＨＫＰＫＡＩＶＨＴＥＫＶＮＭＭＳＬＴＶＬＧＬＲＭＬＦＡＫＴＶＡＶＮＦＬＬＴＡＫＬＦＦＬＲＡＫＲＳＧＳＧＡＰＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＱＡＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＭＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＧＹＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＡＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＭＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＧＹＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳＰＩＫＴＤＶＩＴＭＤＰＫＤＮＣＳＫＤＡＮＤＴＬＬＬＱＬＴＮＴＳＡＹＹＭＹＬＬＬＬＬＫＳＶＶＹＦＡＩＩＴＣＣＬＬＲＲＴＡＦＣＣＮＧＥＫＳ（配列番号５０）
【０２０４】
配列番号４７−５０は特定のペプチドリンカーを含むが、任意のリンカー（例えば、表６Ａを参照）を使用することができる。
【０２０５】
いくつかの実施態様では、ホモ二価抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードする核酸は、配列番号４７−５０のいずれか１つに対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するポリペプチドを発現する。
【０２０６】
いくつかの実施態様では、二価抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、２つの抗ＰＳＭＡ抗体部分を含むヘテロ二価抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲであり、各抗ＰＳＭＡ抗体部分は、異なるＶＨ配列及び／又は異なるＶＬ配列を含む。例示的なヘテロ二価抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲのアミノ酸配列が以下の表１０Ｃに提供される。配列番号１７３は、クローンＡ  ｓｃＦｖ及びクローンＢ  ＶＨ−ＣＨ１を含み、配列番号１７４は、クローンＢ  ＶＬ−ＣＬを含む。配列番号１７５は、クローンＢ  ＶＬ−ＣＬを含み、配列番号１７６は、クローンＡ  ｓｃＦｖ及びクローンＢ  ＶＨ−ＣＨ１を含む。配列番号１７７は、クローンＡ  ＶＨ及びクローンＢ  ＶＨ−ＣＨ１を含み、配列番号１７８は、クローンＡ  ＶＬ及びクローンＢ  ＶＬ−ＣＬを含む。配列番号１７９は、クローンＡ  ＶＬ及びクローンＢ  ＶＬ−ＣＬを含み、配列番号１７８は、クローンＡ  ＶＨ及びクローンＢ  ＶＨ−ＣＨ１を含む。
【０２０７】
2021526844.tif 000020
2021526844.tif 000021
【０２０８】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、配列番号１７３に対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有する鎖１、及び配列番号１７４に対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有する鎖２を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、配列番号１７５に対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有する鎖１、及び配列番号１７６に対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有する鎖２を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、配列番号１７７に対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有する鎖１、及び配列番号１７８に対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有する鎖２を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、配列番号１７９に対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有する鎖１、及び配列番号１８０に対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有する鎖２を含む。
【０２０９】
いくつかの実施態様では、例示的なヘテロ二価クローンＡ／クローンＢ  抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ  ＃１をコードする核酸は、配列番号９１を含むポリペプチドを発現する。
ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＱＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＧＡＰＧＱＲＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＧＮＳＮＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＴＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＳＳＬＳＧＹＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬＧＳＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥＭＡＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＳＹＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＳＭＧＳＳＬＹＡＳＳＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＭＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＮＦＡＳＹＷＶＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＴＩＹＰＤＤＳＤＴＲＹＧＰＡＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＤＳＹＹＧＩＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＥＶＫＴＤＳＴＤＨＶＫＰＫＥＴＥＮＴＫＱＰＳＫＳＣＨＫＰＫＡＩＶＨＴＥＫＶＮＭＭＳＬＴＶＬＧＬＲＭＬＦＡＫＴＶＡＶＮＦＬＬＴＡＫＬＦＦＬＲＡＫＲＳＧＳＧＡＰＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＱＡＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＭＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＧＹＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳＰＩＫＴＤＶＩＴＭＤＰＫＤＮＣＳＫＤＡＮＤＴＬＬＬＱＬＴＮＴＳＡＹＹＭＹＬＬＬＬＬＫＳＶＶＹＦＡＩＩＴＣＣＬＬＲＲＴＡＦＣＣＮＧＥＫＳ（配列番号９１）
【０２１０】
いくつかの実施態様では、例示的なヘテロ二価クローンＢ／クローンＡ  抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ  ＃１をコードする核酸は、配列番号１８１を含むポリペプチドを発現する。
ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＱＡＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＭＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＧＹＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳＰＩＫＴＤＶＩＴＭＤＰＫＤＮＣＳＫＤＡＮＤＴＬＬＬＱＬＴＮＴＳＡＹＹＭＹＬＬＬＬＬＫＳＶＶＹＦＡＩＩＴＣＣＬＬＲＲＴＡＦＣＣＮＧＥＫＳＲＡＫＲＳＧＳＧＡＰＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＱＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＧＡＰＧＱＲＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＧＮＳＮＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＴＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＳＳＬＳＧＹＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬＧＳＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥＭＡＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＳＹＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＳＭＧＳＳＬＹＡＳＳＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＭＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＮＦＡＳＹＷＶＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＴＩＹＰＤＤＳＤＴＲＹＧＰＡＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＤＳＹＹＧＩＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＥＶＫＴＤＳＴＤＨＶＫＰＫＥＴＥＮＴＫＱＰＳＫＳＣＨＫＰＫＡＩＶＨＴＥＫＶＮＭＭＳＬＴＶＬＧＬＲＭＬＦＡＫＴＶＡＶＮＦＬＬＴＡＫＬＦＦＬ（配列番号１８１）
【０２１１】
いくつかの実施態様では、例示的なヘテロ二価クローンＡ／クローンＢ  抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ  ＃２をコードする核酸は、アミノ酸配列の配列番号９２を含むポリペプチドを発現する。
ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＳＹＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＳＭＧＳＳＬＹＡＳＳＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＭＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＮＦＡＳＹＷＶＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＴＩＹＰＤＤＳＤＴＲＹＧＰＡＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＤＳＹＹＧＩＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＥＶＫＴＤＳＴＤＨＶＫＰＫＥＴＥＮＴＫＱＰＳＫＳＣＨＫＰＫＡＩＶＨＴＥＫＶＮＭＭＳＬＴＶＬＧＬＲＭＬＦＡＫＴＶＡＶＮＦＬＬＴＡＫＬＦＦＬＲＡＫＲＳＧＳＧＡＰＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＱＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＧＡＰＧＱＲＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＧＮＳＮＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＴＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＳＳＬＳＧＹＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＡＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＭＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＧＹＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳＰＩＫＴＤＶＩＴＭＤＰＫＤＮＣＳＫＤＡＮＤＴＬＬＬＱＬＴＮＴＳＡＹＹＭＹＬＬＬＬＬＫＳＶＶＹＦＡＩＩＴＣＣＬＬＲＲＴＡＦＣＣＮＧＥＫＳ（配列番号９２）
【０２１２】
いくつかの実施態様では、例示的なヘテロ二価クローンＢ／クローンＡ  抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ  ＃２をコードする核酸は、アミノ酸配列の配列番号１８２を含むポリペプチドを発現する。
ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＱＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＧＡＰＧＱＲＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＧＮＳＮＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＴＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＳＳＬＳＧＹＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＡＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＭＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＧＹＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳＰＩＫＴＤＶＩＴＭＤＰＫＤＮＣＳＫＤＡＮＤＴＬＬＬＱＬＴＮＴＳＡＹＹＭＹＬＬＬＬＬＫＳＶＶＹＦＡＩＩＴＣＣＬＬＲＲＴＡＦＣＣＮＧＥＫＳＲＡＫＲＳＧＳＧＡＰＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＳＹＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＳＭＧＳＳＬＹＡＳＳＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＭＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＮＦＡＳＹＷＶＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＴＩＹＰＤＤＳＤＴＲＹＧＰＡＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＤＳＹＹＧＩＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＥＶＫＴＤＳＴＤＨＶＫＰＫＥＴＥＮＴＫＱＰＳＫＳＣＨＫＰＫＡＩＶＨＴＥＫＶＮＭＭＳＬＴＶＬＧＬＲＭＬＦＡＫＴＶＡＶＮＦＬＬＴＡＫＬＦＦＬ（配列番号１８２）
【０２１３】
配列番号９１−９２及び１８１−１８２は特定のペプチドリンカーを含むが、任意のリンカー（例えば、表６Ａを参照）を使用することができる。
【０２１４】
いくつかの実施態様では、ヘテロ二価抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードする核酸は、配列番号９１−９２及び１８１−１８２のいずれか１つに対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するポリペプチドを発現する。
【０２１５】
ＣＨ１配列を含む上記の例示的なｃａＴＣＲは、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣ（配列番号１２２）に記載のＣＨ１配列を含むが、代替のＣＨ１配列を使用することができる。例えば、Ｓ６４Ｅ及びＳ６６Ｖ変異（ＥＵ番号付け）を含むＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＥＬＶＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣ（配列番号１２３）を使用することができる。ＣＬ配列を含む上記の例示的なｃａＴＣＲは、ＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ（配列番号１２４）に記載のＣＬ配列、すなわち、λ軽鎖の定常領域を含むが、代替のＣＬ配列を使用することができる。例えば、ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１２５）、すなわち、κ軽鎖の定常領域、又はＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＬＳＳＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１２６）、Ｓ６９Ｌ及びＴ７１Ｓ変異（ＥＵ番号付け）を含むκ軽鎖の定常領域を使用することができる。
【０２１６】
抗ＰＳＭＡキメラ共刺激受容体構築物（ＣＳＲ）
また、本明細書に提供されるのは、ＰＳＭＡ特異的キメラ共刺激受容体構築物であり、これは、本明細書では代替的にキメラシグナル伝達受容体構築物（すなわち、「抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ」）と呼ばれる。例示的なＣＳＲは、ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０２９２１８（現在は国際公開第２０１８／２００５８３号として公開されている）で議論されており、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、免疫細胞（Ｔ細胞など）の表面上に発現される。抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、細胞（がん細胞など）の表面上に発現しているか、又は細胞の表面と会合しているＰＳＭＡに結合し、ＰＳＭＡに結合すると、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲが発現している免疫細胞を刺激することができる。抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、ＰＳＭＡ結合モジュール（例えば、本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む）、膜貫通（ＴＭ）モジュール、及び抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲが発現している免疫細胞を刺激することを可能にする共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールを含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、機能的な一次免疫細胞シグナル伝達配列を欠いている。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、一次免疫細胞シグナル伝達配列を欠いている。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、ＰＳＭＡ結合モジュール（例えば、本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む）、膜貫通モジュール、及び共刺激シグナル伝達モジュールを含む単一のポリペプチド鎖を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖を含み、ここで、第１及び第２のポリペプチド鎖は一緒になって、ＰＳＭＡ結合モジュール（例えば、本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む）、膜貫通モジュール、及び共刺激シグナル伝達モジュールを形成する。いくつかの実施態様では、第１及び第２のポリペプチド鎖は別個のポリペプチド鎖であり、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは二量体などの多量体である。いくつかの実施態様では、第１及び第２のポリペプチド鎖は、例えばペプチド結合によって、又はジスルフィド結合などの別の化学結合によって共有結合的に連結されている。いくつかの実施態様では、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖は、少なくとも１つのジスルフィド結合によって連結されている。
【０２１７】
本開示の抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲを発現するエフェクター細胞（Ｔ細胞など）も提供される。そのようなエフェクター細胞（Ｔ細胞など）は、本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲをコードする核酸（又はそのような核酸を含むベクター）をエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）に導入（例えば、形質導入又はトランスフェクト）することによって生成される。
【０２１８】
抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲにおける使用のための共刺激免疫細胞シグナル伝達ドメインの例には、限定されないが、ｃａＴＣＲと協調して機能し、ｃａＴＣＲの会合に続いてシグナル伝達を開始することができる、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の共受容体の細胞質配列、並びに、これらの配列の任意の誘導体又は変異体、及び同じ機能的能力を有する任意の合成配列が挙げられる。したがって、いくつかの実施態様では、ｃａＴＣＲ及び抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲを発現するエフェクター細胞（Ｔ細胞など）が提供される。ｃａＴＣＲ及び抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲを発現するエフェクター細胞（Ｔ細胞など）（すなわち、「ｃａＴＣＲプラス抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲエフェクター細胞」）について、以下にさらに詳細に記載する。
【０２１９】
ＴＣＲ単独を介して生成されたシグナルは、Ｔ細胞の完全な活性化には不十分であること、及び二次又は共刺激シグナルも必要であることが知られている。したがって、Ｔ細胞活性化は、２つの異なるクラスの細胞内（ＩＣ）シグナル伝達配列：ＴＣＲを介して抗原依存性の一次活性化を開始させる配列（本明細書では「一次Ｔ細胞シグナル伝達配列」と呼ばれる）及び二次又は共刺激シグナルを提供するために抗原非依存性の様式で作用する配列（本明細書では「共刺激Ｔ細胞シグナル伝達配列」と呼ばれる）によって媒介されると言うことができる。
【０２２０】
刺激的様式で作用する一次免疫細胞シグナル伝達配列は、免疫受容活性化チロシンモチーフ又はＩＴＡＭとして知られているシグナル伝達モチーフを含み得る。ＩＴＡＭを含む一次免疫細胞シグナル伝達配列の例としては、ＣＤ３ζ、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、及びＣＤ６６ｄに由来するものが挙げられる。「機能的」一次免疫細胞シグナル伝達配列は、適切な受容体に作動可能に結合されたときに、免疫細胞活性化シグナルを伝達することができる配列である。一次免疫細胞シグナル伝達配列の断片又は変異体を含み得る「非機能的」一次免疫細胞シグナル伝達配列は、免疫細胞活性化シグナルを伝達することができない。したがって、いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、ＩＴＡＭを含む機能的シグナル伝達配列などの機能的一次免疫細胞シグナル伝達配列を欠いている。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、任意の一次免疫細胞シグナル伝達配列を欠いている。
【０２２１】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどの細胞内（ＩＣ）ドメインの全部又は一部を含む（例えば、それからなる、又は本質的にそれからなる）共刺激シグナル伝達モジュールを含む。いくつかの実施態様では、ＣＳＲは、免疫細胞共刺激分子（ｆＣＳＭ）の断片を含み、ここで、ｆＣＳＭは、ＣＳＲ膜貫通（ＴＭ）ドメイン及びＣＳＲ細胞内（ＩＣ）共刺激シグナル伝達ドメインを含む。例示的なＩＣ共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュール配列を以下に提供する：
４−１ＢＢ  ＩＣシグナル伝達配列：
2021526844.tif 000022
ＣＤ２７  ＩＣシグナル伝達配列：
2021526844.tif 000023
ＣＤ２８  ＩＣシグナル伝達配列：
2021526844.tif 000024
ＣＤ３０  ＩＣシグナル伝達配列：
2021526844.tif 000025
ＯＸ４０  ＩＣシグナル伝達配列：
2021526844.tif 000026
ｍｙｃタグ＋トランケートされたＣＤ２８配列：
2021526844.tif 000027
トランケートされたＣＤ２８配列：
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ｍｙｃタグ＋トランケートされた４−１ＢＢ配列：
2021526844.tif 000029
トランケートされた４−１ＢＢ配列：
2021526844.tif 000030
ｍｙｃタグ＋トランケートされたＣＤ２７配列：
2021526844.tif 000031
トランケートされたＣＤ２７配列：
2021526844.tif 000032
ｍｙｃタグ＋トランケートされたＣＤ３０配列：
2021526844.tif 000033
トランケートされたＣＤ３０配列：
2021526844.tif 000034
ｍｙｃタグ＋トランケートされたＯＸ４０配列：
2021526844.tif 000035
トランケートされたＯＸ４０配列：
2021526844.tif 000036
ｍｙｃタグ＋ＣＤ８  ＴＭ配列及びＣＤ２７  ＩＣシグナル伝達配列：
2021526844.tif 000037
ＣＤ８  ＴＭ配列及びＣＤ２７  ＩＣシグナル伝達配列：
2021526844.tif 000038
ｍｙｃタグ＋ＣＤ８  ＴＭ配列及びＣＤ３０  ＩＣシグナル伝達配列：
2021526844.tif 000039
ＣＤ８  ＴＭ配列及びＣＤ３０  ＩＣシグナル伝達配列：
2021526844.tif 000040
ｍｙｃタグ＋ＣＤ８  ＴＭ配列及びＯＸ４０  ＩＣシグナル伝達配列：
2021526844.tif 000041
ＣＤ８  ＴＭ配列及びＯＸ４０  ＩＣシグナル伝達配列：
2021526844.tif 000042
ｍｙｃタグ＋ＣＤ８  ＴＭ配列及び４−１ＢＢ  ＩＣシグナル伝達配列：
2021526844.tif 000043
ＣＤ８  ＴＭ配列及び４−１ＢＢ  ＩＣシグナル伝達配列：
2021526844.tif 000044
【０２２２】
いくつかの実施態様では、本開示の抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲのＰＳＭＡ結合モジュールは、抗ＰＳＭＡ抗体部分である。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ抗体部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ抗体部分は、ＰＳＭＡ（例えば、細胞、例えば、がん細胞の表面上に発現しているか又はその表面と会合しているＰＳＭＡ）に特異的な抗体部分、例えば、本明細書の他の場所に記載されている抗ＰＳＭＡ抗体部分のうちのいずれかのＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む、
【０２２３】
いくつかの実施態様では、本開示の抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲの膜貫通モジュールは、例えば、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、又はＣＤ１５４に由来する１つ又は複数の膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施態様では、ＣＳＲは、膜貫通タンパク質（ｆＴＭＰ）の断片を含み、ここで、ｆＴＭＰは、ＣＳＲ膜貫通ドメインを含む。例示的な膜貫通ドメイン（ＴＭ）配列を以下に提供する：
ＣＤ８  ＴＭ配列：ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴ（配列番号９４）
４−１ＢＢ  ＴＭ配列：ＩＩＳＦＦＬＡＬＴＳＴＡＬＬＦＬＬＦＦＬＴＬＲＦＳＶＶ（配列番号９５）
ＣＤ２７  ＴＭ配列：ＩＬＶＩＦＳＧＭＦＬＶＦＴＬＡＧＡＬＦＬＨ（配列番号９６）
ＣＤ２８  ＴＭ配列：ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ（配列番号９７）
ＣＤ３０  ＴＭ配列：ＰＶＬＤＡＧＰＶＬＦＷＶＩＬＶＬＶＶＶＶＧＳＳＡＦＬＬＣ（配列番号９８）
ＯＸ４０  ＴＭ配列：ＶＡＡＩＬＧＬＧＬＶＬＧＬＬＧＰＬＡＩＬＬ（配列番号９９）
【０２２４】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、リガンド結合モジュール、膜貫通モジュール、及び共刺激シグナル伝達モジュールのいずれかの間にスペーサーモジュールをさらに含む。いくつかの実施態様では、スペーサーモジュールは、２つのＣＳＲモジュールを連結する１つ又は複数のペプチドリンカーを含む。いくつかの実施態様では、スペーサーモジュールは、約５から約７０（約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、又は７０のいずれかなど、これらの値の間の任意の範囲を含む）アミノ酸長の１つ又は複数のペプチドリンカーを含む。
【０２２５】
例示的な抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲのアミノ酸配列が以下の表１１に提供される。抗ＰＳＭＡ配列はプレーンテキスト（すなわち、下線なし）であり、ＣＤ２８（配列番号３７−３８、５１−５５、及び７０を参照）、４−１ＢＢ（配列番号５６、５７、７１、及び７２を参照）、ＣＤ２７（配列番号５８、５９、７３、及び７４を参照）、ＣＤ３０（配列番号６０、６１、７５、及び７６を参照）、ＯＸ４０（配列番号６２、６３、７７、及び７８を参照）、ＣＤ８及びＣＤ２７（配列番号６４、６５、７９、及び８０を参照）、ＣＤ８及びＣＤ３０（配列番号６６、６７、８１、及び８２を参照）、ＣＤ８及びＯＸ４０（配列番号６８、６９、８３、及び８４を参照）に由来する配列には下線が引かれている。
【０２２６】
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【０２２７】
表１１の太字の配列は、ｍｙｃタグＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ（配列番号１３６）に対応する。表１１の太字のイタリック体の配列は、シグナルペプチドＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧ（配列番号１２８）に対応する。
【０２２８】
いくつかの実施態様では、ＣＳＲは、２つの抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む二価抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲである。いくつかの実施態様では、二価抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、例えば、同一のＶＨ配列及び同一のＶＬ配列を含む２つの抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む、ホモ二価である。いくつかの実施態様では、二価抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、ヘテロ二価であり、例えば、２つの異なる抗ＰＳＭＡ抗体部分を含み、ここで、各抗ＰＳＭＡ抗体部分は、異なるＶＨ配列及び／又は異なるＶＬ配列を含む。４つの例示的なヘテロ二価抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲのアミノ酸配列を以下に示す（すなわち、配列番号９３及び配列番号１８３−１８５）。クローンＡ  抗ＰＳＭＡｓｃＦｖ配列はプレーンテキストであり（すなわち、下線なし）、クローンＢ  抗ＰＳＭＡｓｃＦｖには下線が引かれ、リンカー配列は太字であり、ｍｙｃタグ配列（存在する場合）は太字で下線が引かれ、ＣＤ２８に由来する配列はイタリック体である。
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【０２２９】
いくつかの実施態様では、配列番号３７−３８、５５−８４及び９３のいずれか１つは、Ｎ末端シグナルペプチド、例えば、配列番号１２８のシグナルペプチドをさらに含む。いくつかの実施態様では、配列番号３７−３８、５１−８４、及び９３のいずれか１つは、ペプチドリンカー及び／又はペプチドタグをさらに含む（例えば、表６Ａ及び６Ｂを参照のこと）。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、配列番号３７−３８、５１−８４、及び９３のいずれか１つに対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２３０】
本開示はまた、ｃａＴＣＲ又はＣＡＲを発現するエフェクター細胞（Ｔ細胞など）及び抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ（本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲなど）を提供する。そのようなエフェクター細胞は、本明細書では「ｃａＴＣＲプラス抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲエフェクター細胞」とも呼ばれる。いくつかの実施態様では、ｃａＴＣＲプラス抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲエフェクター細胞（Ｔ細胞など）は、本明細書に記載の誘導性プロモーターのいずれかを含む誘導性プロモーターに作動可能に連結された抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施態様では、ｃａＴＣＲプラス抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲエフェクター細胞（Ｔ細胞など）における抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲの発現は、ｃａＴＣＲを介したシグナル伝達時に誘導可能である。いくつかのそのような実施態様では、ｃａＴＣＲプラス抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲエフェクター細胞（Ｔ細胞など）は、ｃａＴＣＲを介したシグナル伝達に応答するプロモーター又は調節エレメントに作動可能に連結された抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲをコードする核酸配列は、活性化Ｔ細胞（ＮＦＡＴ）由来のプロモーターの核因子に作動可能に連結されている。いくつかの実施態様では、ＮＦＡＴ由来のプロモーターは、ＮＦＡＴ由来の最小プロモーターである（例えば、Durand, D. et. al., Molec. Cell. Biol. 8, 1715-1724 (1988); Clipstone, NA, Crabtree, GR. Nature. 1992 357(6380): 695-7; Chmielewski, M., et al. Cancer research71.17 (2011): 5697-5706；及びZhang, L., et al. Molecular therapy 19.4 (2011): 751-759を参照のこと）。いくつかの実施態様では、ｃａＴＣＲプラス抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲエフェクター細胞（Ｔ細胞など）によって発現されるｃａＴＣＲは、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲである。いくつかの実施態様では、ｃａＴＣＲプラス抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲエフェクター細胞（Ｔ細胞など）によって発現されるｃａＴＣＲは、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲではなく、異なる抗原を標的とする。ＣＳＲのさらなる記述は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる２０１７年４月２６日に出願された米国出願第６２／４９０５７８号に見出すことができる。
【０２３１】
構築物の組み合わせ
また、本明細書に記載の少なくとも２つの異なる抗ＰＳＭＡ構築物を含む構築物の組み合わせも提供される。いくつかの実施態様では、少なくとも２つの異なる抗ＰＳＭＡ構築物は、同じフォーマット、例えば、少なくとも２つの異なる抗体（例えば、２つの異なる完全長ＩｇＧ抗体又は２つの異なる二重特異性抗体）、少なくとも２つの異なるＣＡＲ、少なくとも２つの異なるｃａＴＣＲ、又は少なくとも２つの異なるＣＳＲである。いくつかの実施態様では、少なくとも２つの異なる抗ＰＳＭＡ構築物は、異なるフォーマット、例えば、抗体及びＣＡＲ；抗体及びｃａＴＣＲ；ＣＡＲ及びＣＳＲ；ｃａＴＣＲ及びＣＳＲなどである。
【０２３２】
いくつかの実施態様では、構築物の組み合わせは、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ及び抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ（すなわち、「抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ＋抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ構築物の組み合わせ」）を含み、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、
配列番号３１に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖１、及び配列番号３２に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖２；
配列番号３４に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖１、及び配列番号３５に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖２；
配列番号１６５に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖１、及び配列番号１６６に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖２；
配列番号１６７に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖１、及び配列番号１６８に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖２；
配列番号１６９に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖１、及び配列番号１７０に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖２；
配列番号１７１に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖１、及び配列番号１７２に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖２；
配列番号１７３に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖１、及び配列番号１７４に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖２；
配列番号１７５に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖１、及び配列番号１７６に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖２；
配列番号１７７に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖１、及び配列番号１７８に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖２；
配列番号１７９に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖１、及び配列番号１８０に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖２
を含み；
ここで、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、配列番号３７−３８、５５−８４、及び９３のいずれか１つに対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２３３】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、配列番号３１に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖１、及び配列番号３２に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖２を含み、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、配列番号５５に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、配列番号３１を含む鎖１及び配列番号３２を含む鎖２を含み、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、配列番号５５のアミノ酸配列を含む。
【０２３４】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、配列番号３１に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖１、及び配列番号３２に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖２を含み、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、配列番号７０に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、配列番号３１を含む鎖１及び配列番号３２を含む鎖２を含み、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、配列番号７０のアミノ酸配列を含む。
【０２３５】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、配列番号３４に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖１、及び配列番号３５に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖２を含み、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、配列番号５５に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、配列番号３４を含む鎖１及び配列番号３５を含む鎖２を含み、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、配列番号５５のアミノ酸配列を含む。
【０２３６】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、配列番号３４に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖１、及び配列番号３５に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖２を含み、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、配列番号７０に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、配列番号３４を含む鎖１及び配列番号３５を含む鎖２を含み、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、配列番号７０のアミノ酸配列を含む。
【０２３７】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、配列番号１６５に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖１、及び配列番号１６６に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖２を含むホモ二価抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲであり、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、配列番号７０に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、配列番号１６５を含む鎖１及び配列番号１６６を含む鎖２を含み、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、配列番号７０のアミノ酸配列を含む。
【０２３８】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、配列番号１６５に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖１、及び配列番号１６６に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖２を含むホモ二価抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲであり、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、配列番号３８及び７０−８４のいずれか１つに対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、配列番号１６５を含む鎖１及び配列番号１６６を含む鎖２を含み、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、配列番号３８及び７０−８４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。
【０２３９】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、配列番号１６９に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖１、及び配列番号１７０に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖２を含むホモ二価抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲであり、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、配列番号５５に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、配列番号１６９を含む鎖１及び配列番号１７０を含む鎖２を含み、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、配列番号５５のアミノ酸配列を含む。
【０２４０】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、配列番号１６９に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖１、及び配列番号１７０に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖２を含むホモ二価抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲであり、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、配列番号３７及び５５−６９のいずれか１つに対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、配列番号１６９を含む鎖１及び配列番号１７０を含む鎖２を含み、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、配列番号３７及び５５−６９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。
【０２４１】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、配列番号１６７に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖１、及び配列番号１６８に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖２を含むホモ二価抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲであり、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、配列番号３８及び７０−８４のいずれか１つに対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、配列番号１６７を含む鎖１及び配列番号１６８を含む鎖２を含み、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、配列番号３８及び７０−８４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。
【０２４２】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、配列番号１７１に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖１、及び配列番号１７２に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む鎖２を含むホモ二価抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲであり、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、配列番号３７及び５５−６９のいずれか１つに対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲは、配列番号１７１を含む鎖１及び配列番号１７２を含む鎖２を含み、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、配列番号３７及び５５−６９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。
【０２４３】
いくつかの実施態様では、本明細書で提供される構築物の組み合わせの抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ及び抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、別個の核酸にコードされている。いくつかの実施態様では、別個の核酸は、細胞（本明細書の他の場所でさらに詳細に記載される抗ＰＳＭＡエフェクター細胞など）においてそれぞれ発現され（例えば、別個に）、翻訳される（例えば、別個に）。いくつかの実施態様では、本明細書で提供される構築物の組み合わせの抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ及び抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲは、同じ核酸（例えば、単一の核酸）にコードされている。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ及び抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ構築物の組み合わせをコードする単一の核酸が発現され、翻訳されて、単一のポリペプチドを生成し、これは続いて、別個のポリペプチド、例えば、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲポリペプチド及び抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲポリペプチドにプロセシングされる（例えば、翻訳中又は翻訳後に切断されるなど）。
【０２４４】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ＋抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ構築物の組み合わせをコードする単一の核酸は、配列番号８５−９０のいずれか１つを含むポリペプチドを発現し、そのアミノ酸配列は以下に提供される：
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【０２４５】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ＋抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ構築物の組み合わせをコードする単一の核酸は、配列番号９１−９２及び１８１−１８２のいずれか１つに対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するポリペプチドを発現する。
【０２４６】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ＋抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ構築物の組み合わせをコードする単一の核酸は、（Ｎ末端からＣ末端まで）抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ構築物のアミノ酸配列（複数可）と、ペプチドリンカーと、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ構築物のアミノ酸配列とを含むポリペプチドを発現する。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ＋抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ構築物の組み合わせをコードする単一の核酸は、（Ｎ末端からＣ末端まで）抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ構築物のアミノ酸配列と、ペプチドリンカーと、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ構築物のアミノ酸配列（複数可）とを含むポリペプチドを発現する。いくつかの実施態様では、核酸は、例えば、１つ又は複数のペプチドリンカー、ペプチドスペーサー、ペプチドタグ、シグナルペプチド及び／又は他のアミノ酸配列をさらにコードする（例示的なリンカー配列及びタグ配列については、例えば、表６Ａ及び６Ｂを参照のこと）。
【０２４７】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ＋抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ構築物の組み合わせをコードする単一の核酸は、以下の表１２の行１−１２８のそれぞれに記載された配列を含むポリペプチドを発現する。
【０２４８】
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【０２４９】
いくつかの実施態様では、表１２の行１−１２８のいずれか１つの抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ＋抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲをコードする単一の核酸は、（例えば、ｃａＴＣＲの鎖１及び／又は鎖２をコードする配列の上流及び／又は抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲをコードする配列の上流に）シグナルペプチドをさらにコードする。一実施態様では、シグナルペプチドは、配列番号１２８のアミノ酸配列を含む。特定のリンカーは、表１２の行１−１２８に記載されているが、代替リンカーが使用されてもよい（例えば、表６Ａを参照）。いくつかの実施態様では、表１２の行１−１２８のいずれか１つの抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ＋抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲをコードする単一の核酸は、１つ又は複数のペプチドリンカー（例えば、切断可能なリンカー）及び／又はペプチドタグをさらにコードする（例えば、表６Ａ及び６Ｂを参照）。
【０２５０】
抗ＰＳＭＡエフェクター細胞
本明細書で提供されるのは、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ、抗ＰＳＭＡ多重特異性構築物（例えば、タンデムｄｉ−ｓｃＦｖなどのタンデムｓｃＦｖ）、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ、若しくは本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ構築物の組み合わせを含む、発現する、又はそれらと会合したエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞などの免疫細胞、例えば、αβＴ細胞、γδＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞）である。そのようなエフェクター細胞は、「抗ＰＳＭＡエフェクター細胞」とも呼ばれる。
【０２５１】
いくつかの実施態様では、ＰＳＭＡに関連する疾患（がん、例えば、前立腺がん（ホルモン抵抗性又は転移性前立腺がんなど）、腎細胞がん細胞（腎明細胞がんなど）、子宮がん、又は肝臓がんなど）の持続的な制御につながる可能性のある長期的な持続性をもたらす、本開示の抗ＰＳＭＡエフェクター細胞（本明細書では「抗ＰＳＭＡ免疫細胞」又は「抗ＰＳＭＡ  Ｔ細胞」とも呼ばれる）は、ｉｎ  ｖｉｖｏで複製することができる。
【０２５２】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡエフェクター細胞（リンパ球、例えば、Ｔ細胞など）は、本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲを含む、発現する、又はそれと会合した抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲエフェクター細胞である。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲエフェクター細胞は、多重特異性構築物をさらに含む（例えば、発現する）。そのようなエフェクター細胞は、本明細書では「抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲプラス多重特異性構築物エフェクター細胞」と呼ばれる。いくつかの実施態様では、多重特異性構築物の発現が誘導可能である。いくつかの実施態様では、多重特異性構築物の発現は、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲによるシグナル伝達時に誘導可能である。いくつかの実施態様では、多重特異性構築物は、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディ（Ｄｂ）、単鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、二重親和性リターゲティング（ＤＡＲＴ）抗体、及び二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体からなる群から選択される。いくつかの実施態様では、多重特異性構築物は、タンデムｓｃＦｖである。このようなエフェクター細胞は、本明細書では「抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲプラスタンデムｓｃＦｖエフェクター細胞」とも呼ばれる。いくつかの実施態様では、タンデムｓｃＦｖは、タンデムｄｉ−ｓｃＦｖ、例えば、ペプチドリンカーによって任意選択で連結された、第１のｓｃＦｖ及び第２のｓｃＦｖを含むタンデムｄｉ−ｓｃＦｖである。いくつかの実施態様では、第１のｓｃＦｖは、Ｔ細胞表面抗原（例えば、ＣＤ３又はＣＤ１６ａ）、可溶性免疫抑制剤（例えば、ＴＧＦ−β  １〜４、ＩＬ−４、又はＩＬ−１０）、又は免疫チェックポイント阻害剤を標的とする。いくつかの実施態様では、第２のｓｃＦｖは、疾患関連抗原を標的とする。いくつかの実施態様では、疾患関連抗原は、ＰＳＭＡ以外の抗原である。いくつかの実施態様では、疾患関連抗原は、ＰＳＭＡである。いくつかの実施態様では、タンデムｄｉ−ｓｃＦｖは、ＰＳＭＡ（がん細胞などの細胞の表面上に発現するＰＳＭＡなど）に特異的に結合する抗体部分（本明細書に記載されているものなど）及びＣＤ３に特異的に結合する第２の結合部分を含む抗ＰＳＭＡ抗ＣＤ３タンデムｄｉ−ｓｃＦｖである。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ抗ＣＤ３タンデムｄｉ−ｓｃＦｖは、配列番号２５−２８のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ抗ＣＤ３タンデムｄｉ−ｓｃＦｖは、ＮＦＡＴ由来のプロモーターに作動可能に連結された核酸によってコードされる。いくつかの実施態様では、ＮＦＡＴ由来のプロモーターは、ＮＦＡＴ由来の最小プロモーターである。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ抗ＣＤ３タンデムｄｉ−ｓｃＦｖは、ＩＬ−２プロモーターに作動可能に連結された核酸によってコードされる。
【０２５３】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲエフェクター細胞は、ＣＳＲをさらに含む（例えば、発現する）（例えば、２０１７年４月２６日に出願された米国特許出願第６２／４９０５７８号を参照のこと。これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。そのようなエフェクター細胞は、「抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲプラスＣＳＲエフェクター細胞」と呼ばれる。いくつかの実施態様では、ＣＳＲは、例えば、本明細書に記載されるような、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ（すなわち、ＰＳＭＡ結合モジュールを含むＣＳＲ）である。いくつかの実施態様では、ＣＳＲは、ＰＳＭＡ以外の標的リガンドに結合する。
【０２５４】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡエフェクター細胞（リンパ球、例えば、Ｔ細胞など）は、本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲを含む、発現する、又はそれと会合した抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲエフェクター細胞である。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲエフェクター細胞は、多重特異性構築物をさらに含む（例えば、発現する）。そのようなエフェクター細胞は、本明細書では「抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲプラス多重特異性構築物エフェクター細胞」と呼ばれる。いくつかの実施態様では、多重特異性構築物の発現が誘導可能である。いくつかの実施態様では、多重特異性構築物の発現は、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲによるシグナル伝達時に誘導可能である。いくつかの実施態様では、多重特異性構築物は、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディ（Ｄｂ）、単鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、二重親和性リターゲティング（ＤＡＲＴ）抗体、及び二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体からなる群から選択される。いくつかの実施態様では、多重特異性構築物は、タンデムｓｃＦｖである。このようなエフェクター細胞は、本明細書では「抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲプラスタンデムｓｃＦｖエフェクター細胞」とも呼ばれる。いくつかの実施態様では、タンデムｓｃＦｖは、タンデムｄｉ−ｓｃＦｖ、例えば、ペプチドリンカーによって任意選択で連結された、第１のｓｃＦｖ及び第２のｓｃＦｖを含むタンデムｄｉ−ｓｃＦｖである。いくつかの実施態様では、第１のｓｃＦｖは、Ｔ細胞表面抗原（例えば、ＣＤ３又はＣＤ１６ａ）、可溶性免疫抑制剤（例えば、ＴＧＦ−β  １〜４、ＩＬ−４、又はＩＬ−１０）、又は免疫チェックポイント阻害剤を標的とする。いくつかの実施態様では、第２のｓｃＦｖは、疾患関連抗原を標的とする。いくつかの実施態様では、疾患関連抗原は、ＰＳＭＡ以外の抗原である。いくつかの実施態様では、疾患関連抗原は、ＰＳＭＡである。いくつかの実施態様では、タンデムｄｉ−ｓｃＦｖは、ＰＳＭＡ（がん細胞などの細胞の表面上に発現するＰＳＭＡなど）に特異的に結合する抗体部分（本明細書に記載されているものなど）及びＣＤ３に特異的に結合する第２の結合部分を含む抗ＰＳＭＡ抗ＣＤ３タンデムｄｉ−ｓｃＦｖである。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ抗ＣＤ３タンデムｄｉ−ｓｃＦｖは、配列番号２５−２８のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ抗ＣＤ３タンデムｄｉ−ｓｃＦｖは、ＮＦＡＴ由来のプロモーターに作動可能に連結された核酸によってコードされる。いくつかの実施態様では、ＮＦＡＴ由来のプロモーターは、ＮＦＡＴ由来の最小プロモーターである。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ抗ＣＤ３タンデムｄｉ−ｓｃＦｖは、ＩＬ−２プロモーターに作動可能に連結された核酸によってコードされる。
【０２５５】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲエフェクター細胞は、ＣＳＲを含む（例えば、発現する）（例えば、２０１７年４月２６日に出願された米国特許出願第６２／４９０５７８号を参照のこと。これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。そのようなエフェクター細胞は、「抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲプラスＣＳＲエフェクター細胞」と呼ばれる。いくつかの実施態様では、ＣＳＲは、例えば、本明細書に記載されるような、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ（すなわち、ＰＳＭＡ結合モジュールを含むＣＳＲ）である。いくつかの実施態様では、ＣＳＲは、ＰＳＭＡ以外の標的リガンドに結合する。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲプラスＣＳＲエフェクター細胞は、本明細書の他の場所に記載される抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲプラス抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ構築物の組み合わせのいずれかを含む（例えば、発現する）。
【０２５６】
いくつかの実施態様では、エフェクター細胞（リンパ球、例えば、Ｔ細胞など）は、例えば、本明細書に記載されているような、ＰＳＭＡ及び抗ＰＳＭＡ多重特異性構築物（すなわち、抗ＰＳＭＡタンデムｓｃＦｖ、例えば、抗ＰＳＭＡタンデムｄｉ−ｓｃＦｖ）を標的としないＣＡＲ又はｃａＴＣＲを含む。いくつかの実施態様では、エフェクター細胞は、「ＣＡＲプラス抗ＰＳＭＡタンデムｓｃＦｖエフェクター細胞」又は「ｃａＴＣＲプラス抗ＰＳＭＡタンデムｓｃＦｖエフェクター細胞」と呼ばれる。
【０２５７】
いくつかの実施態様では、エフェクター細胞（リンパ球、例えば、Ｔ細胞など）は、例えば、本明細書に記載されているような、ＰＳＭＡ及び抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ（すなわち、ＰＳＭＡ結合モジュールを含むＣＳＲ）を標的としないＣＡＲ又はｃａＴＣＲを含む。いくつかの実施態様では、エフェクター細胞は、「ＣＡＲプラス抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲエフェクター細胞」又は「ｃａＴＣＲプラス抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲエフェクター細胞」と呼ばれる。
【０２５８】
本明細書に記載のエフェクター細胞を生成する方法も本明細書に提供される。
【０２５９】
例えば、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲエフェクター細胞、例えば、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ免疫細胞又は抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞を生成する方法であって、細胞（例えば、αβＴ細胞、γδＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞などのＴ細胞）を、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸、核酸のセット、ベクター、又はベクターのセットで遺伝子改変する（すなわち、形質導入又はトランスフェクトする）ことを含む方法が提供される。
【０２６０】
いくつかの実施態様では、本方法は、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲエフェクター細胞を、多重特異性構築物をコードするさらなる核酸、核酸のセット、ベクター、又はベクターのセットで遺伝子改変することを含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲプラス多重特異性構築物エフェクター細胞（「抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲプラスタンデムｓｃＦｖエフェクター細胞」など）を生成する方法は、細胞（例えば、αβＴ細胞、γδＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞などのＴ細胞）を、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ及び多重特異性構築物をコードする核酸、核酸のセット、ベクター、又はベクターのセットで遺伝子改変する（すなわち、形質導入又はトランスフェクトする）ことを含む。いくつかの実施態様では、多重特異性構築物の発現が誘導可能である。いくつかの実施態様では、多重特異性構築物の発現は、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲによるシグナル伝達時に誘導可能である。いくつかの実施態様では、多重特異性構築物は、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディ（Ｄｂ）、単鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、二重親和性リターゲティング（ＤＡＲＴ）抗体、及び二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体からなる群から選択される。いくつかの実施態様では、多重特異性構築物は、タンデムｓｃＦｖである。このようなエフェクター細胞は、本明細書では「抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲプラスタンデムｓｃＦｖエフェクター細胞」とも呼ばれる。いくつかの実施態様では、タンデムｓｃＦｖは、タンデムｄｉ−ｓｃＦｖ、例えば、ペプチドリンカーによって任意選択で連結された、第１のｓｃＦｖ及び第２のｓｃＦｖを含むタンデムｄｉ−ｓｃＦｖである。いくつかの実施態様では、第１のｓｃＦｖは、Ｔ細胞表面抗原（例えば、ＣＤ３又はＣＤ１６ａ）、可溶性免疫抑制剤（例えば、ＴＧＦ−β  １〜４、ＩＬ−４、又はＩＬ−１０）、又は免疫チェックポイント阻害剤を標的とする。いくつかの実施態様では、第２のｓｃＦｖは、疾患関連抗原を標的とする。いくつかの実施態様では、疾患関連抗原は、ＰＳＭＡ以外の抗原である。いくつかの実施態様では、疾患関連抗原は、ＰＳＭＡである。いくつかの実施態様では、タンデムｄｉ−ｓｃＦｖは、ＰＳＭＡ（がん細胞などの細胞の表面上に発現するＰＳＭＡなど）に特異的に結合する抗体部分（本明細書に記載されているものなど）及びＣＤ３に特異的に結合する第２の結合部分を含む抗ＰＳＭＡ抗ＣＤ３タンデムｄｉ−ｓｃＦｖである。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ抗ＣＤ３タンデムｄｉ−ｓｃＦｖは、配列番号２５−２８のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ抗ＣＤ３タンデムｄｉ−ｓｃＦｖは、ＮＦＡＴ由来のプロモーターに作動可能に連結された核酸によってコードされる。いくつかの実施態様では、ＮＦＡＴ由来のプロモーターは、ＮＦＡＴ由来の最小プロモーターである。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ抗ＣＤ３タンデムｄｉ−ｓｃＦｖは、ＩＬ−２プロモーターに作動可能に連結された核酸によってコードされる。
【０２６１】
いくつかの実施態様では、本方法は、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲエフェクター細胞を、標的リガンドに特異的に結合するリガンド結合ドメインと、免疫細胞に刺激シグナルを提供することができる共刺激シグナル伝達ドメインとを含むＣＳＲをコードするさらなる核酸、核酸のセット、ベクター、又はベクターのセットで遺伝子改変することを含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲプラスＣＳＲエフェクター細胞を生成する方法は、細胞（例えば、αβＴ細胞、γδＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞などのＴ細胞）を、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲとＣＳＲをコードする核酸、核酸のセット、ベクター、又はベクターのセットで遺伝子改変する（すなわち、形質導入又はトランスフェクトする）ことを含む。ＣＳＲに関するさらなる記述は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる２０１７年４月２６日に出願された米国出願第６２／４９０５７８号に記載されている。いくつかの実施態様では、ＣＳＲの発現は、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲを介したシグナル伝達時に誘導可能である。いくつかの実施態様では、ＣＳＲは、例えば、本明細書に記載されるような、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ（すなわち、ＰＳＭＡ結合モジュールを含むＣＳＲ）である。いくつかの実施態様では、ＣＳＲは、ＰＳＭＡ以外の標的リガンドに結合する。
【０２６２】
抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲエフェクター細胞、例えば、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ免疫細胞又は抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞を生成する方法であって、細胞（例えば、αβＴ細胞、γδＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞などのＴ細胞）を、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードする核酸、核酸のセット、ベクター、又はベクターのセットで遺伝子改変する（すなわち、形質導入又はトランスフェクトする）ことを含む方法も提供される。
【０２６３】
いくつかの実施態様では、本方法は、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲエフェクター細胞を、多重特異性構築物をコードするさらなる核酸、核酸のセット、ベクター、又はベクターのセットで遺伝子改変することを含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲプラス多重特異性構築物エフェクター細胞（「抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲプラスタンデムｓｃＦｖエフェクター細胞」など）を生成する方法は、細胞（例えば、αβＴ細胞、γδＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞などのＴ細胞）を、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ及び多重特異性構築物をコードする核酸、核酸のセット、ベクター、又はベクターのセットで遺伝子改変する（すなわち、形質導入又はトランスフェクトする）ことを含む。いくつかの実施態様では、多重特異性構築物の発現が誘導可能である。いくつかの実施態様では、多重特異性構築物の発現は、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲによるシグナル伝達時に誘導可能である。いくつかの実施態様では、多重特異性構築物は、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディ（Ｄｂ）、単鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、二重親和性リターゲティング（ＤＡＲＴ）抗体、及び二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体からなる群から選択される。いくつかの実施態様では、多重特異性構築物は、タンデムｓｃＦｖである。このようなエフェクター細胞は、本明細書では「抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲプラスタンデムｓｃＦｖエフェクター細胞」とも呼ばれる。いくつかの実施態様では、タンデムｓｃＦｖは、タンデムｄｉ−ｓｃＦｖ、例えば、ペプチドリンカーによって任意選択で連結された、第１のｓｃＦｖ及び第２のｓｃＦｖを含むタンデムｄｉ−ｓｃＦｖである。いくつかの実施態様では、第１のｓｃＦｖは、Ｔ細胞表面抗原（例えば、ＣＤ３又はＣＤ１６ａ）、可溶性免疫抑制剤（例えば、ＴＧＦ−β  １〜４、ＩＬ−４、又はＩＬ−１０）、又は免疫チェックポイント阻害剤を標的とする。いくつかの実施態様では、第２のｓｃＦｖは、疾患関連抗原を標的とする。いくつかの実施態様では、疾患関連抗原は、ＰＳＭＡ以外の抗原である。いくつかの実施態様では、疾患関連抗原は、ＰＳＭＡである。いくつかの実施態様では、タンデムｄｉ−ｓｃＦｖは、ＰＳＭＡ（がん細胞などの細胞の表面上に発現するＰＳＭＡなど）に特異的に結合する抗体部分（本明細書に記載されているものなど）及びＣＤ３に特異的に結合する第２の結合部分を含む抗ＰＳＭＡ抗ＣＤ３タンデムｄｉ−ｓｃＦｖである。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ抗ＣＤ３タンデムｄｉ−ｓｃＦｖは、配列番号２５−２８のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ抗ＣＤ３タンデムｄｉ−ｓｃＦｖは、ＮＦＡＴ由来のプロモーターに作動可能に連結された核酸によってコードされる。いくつかの実施態様では、ＮＦＡＴ由来のプロモーターは、ＮＦＡＴ由来の最小プロモーターである。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ抗ＣＤ３タンデムｄｉ−ｓｃＦｖは、ＩＬ−２プロモーターに作動可能に連結された核酸によってコードされる。
【０２６４】
いくつかの実施態様では、本方法は、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲエフェクター細胞を、標的リガンドに特異的に結合するリガンド結合ドメインと、免疫細胞に刺激シグナルを提供することができる共刺激シグナル伝達ドメインとを含むＣＳＲをコードするさらなる核酸、核酸のセット、ベクター、又はベクターのセットで遺伝子改変することを含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲプラスＣＳＲエフェクター細胞を生成する方法は、細胞（例えば、αβＴ細胞、γδＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞などのＴ細胞）を、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲとＣＳＲをコードする核酸、核酸のセット、ベクター、又はベクターのセットで遺伝子改変する（すなわち、形質導入又はトランスフェクトする）ことを含む。ＣＳＲに関するさらなる記述は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる２０１７年４月２６日に出願された米国出願第６２／４９０５７８号に記載されている。いくつかの実施態様では、ＣＳＲの発現は、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲを介したシグナル伝達時に誘導可能である。いくつかの実施態様では、ＣＳＲは、例えば、本明細書に記載されるような、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ（すなわち、ＰＳＭＡ結合モジュールを含むＣＳＲ）である。いくつかの実施態様では、ＣＳＲは、ＰＳＭＡ以外の標的リガンドに結合する。
【０２６５】
いくつかの実施態様では、本方法は、ＰＳＭＡを標的としないＣＡＲ若しくはｃａＴＣＲをコードする核酸、核酸のセット、ベクター、又はベクターのセットを含むエフェクター細胞（リンパ球、例えば、Ｔ細胞など）を、例えば、本明細書に記載されるような、抗ＰＳＭＡ多重特異性構築物（すなわち、抗ＰＳＭＡタンデムｓｃＦｖ、例えば、抗ＰＳＭＡタンデムｄｉ−ｓｃＦｖ）をコードする追加の核酸、核酸のセット、ベクター、又はベクターのセットで遺伝子改変することを含む。いくつかの実施態様では、本方法は、エフェクター細胞を、ＰＳＭＡ及び抗ＰＳＭＡ多重特異性構築物（すなわち、抗ＰＳＭＡタンデムｓｃＦｖ、例えば、抗ＰＳＭＡタンデムｄｉ−ｓｃＦｖ）を標的としないＣＡＲ又はｃａＴＣＲをコードする核酸、核酸のセット、ベクター、又はベクターのセットで遺伝子改変することを含む。
【０２６６】
いくつかの実施態様では、本方法は、ＰＳＭＡを標的としないＣＡＲ若しくはｃａＴＣＲをコードする核酸、核酸のセット、ベクター、又はベクターのセットを含むエフェクター細胞（リンパ球、例えば、Ｔ細胞など）を、例えば、本明細書に記載されるような、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ（すなわち、ＰＳＭＡ結合モジュールを含むＣＳＲ）をコードする追加の核酸、核酸のセット、ベクター、又はベクターのセットで遺伝子改変することを含む。いくつかの実施態様では、本方法は、エフェクター細胞を、ＰＳＭＡ及び抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲを標的としないＣＡＲ又はｃａＴＣＲをコードする核酸、核酸のセット、ベクター、又はベクターのセットで遺伝子改変することを含む。
【０２６７】
簡潔には、細胞（Ｔ細胞など）の増殖及び遺伝子改変の前に、細胞の供給源が対象から得られる。例えば、Ｔ細胞は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位の組織、腹水、胸水、脾臓組織、及び腫瘍を含む、多くの供給源から得ることができる。いくつかの実施態様では、当技術分野において利用可能な任意の数のＴ細胞株を使用することができる。いくつかの実施態様では、Ｔ細胞は、フィコールＴＭ分離などの当業者に知られている任意の数の技術を使用して、対象から採取された血液の単位から得ることができる。いくつかの実施態様では、個体の循環血液からの細胞は、アフェレーシスによって得られる。アフェレーシス産物は、典型的には、Ｔ細胞を含むリンパ球、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球、赤血球及び血小板を含有する。いくつかの実施態様では、アフェレーシスによって収集された細胞は、血漿画分を除去するため、及び後続の処理工程に適切な緩衝液又は培地中に細胞を配置するために、洗浄され得る。いくつかの実施態様では、細胞は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄される。いくつかの実施態様では、洗浄溶液は、カルシウムを欠いており、マグネシウムを欠いていてもよく、又は全てではないが、多くの二価のカチオンを欠いていてもよい。当業者は、製造業者の指示に従って、半自動化「フロースルー」遠心分離機（例えば、Ｃｏｂｅ  ２９９１細胞処理装置、Ｂａｘｔｅｒ  ＣｙｔｏＭａｔｅ、又はＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ  Ｃｅｌｌ  Ｓａｖｅｒ  ５）を使用するなどして、洗浄工程が当業者に知られている方法によって達成され得ることを容易に理解するであろう。洗浄後、細胞は、Ｃａ２＋フリー、Ｍｇ２＋フリーＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ  Ａ、又は緩衝液の有無にかかわらず他の生理食塩水などの様々な生体適合性緩衝液に再懸濁させてもよい。あるいは、アフェレーシス試料の望ましくない成分を除去し、細胞を培地に直接再懸濁させてもよい。
【０２６８】
いくつかの実施態様では、Ｔ細胞は、赤血球を溶解させ、例えば、ＰＥＲＣＯＬＬＴＭ勾配による遠心分離又は対向流遠心分離溶出によって単球を枯渇させることによって、末梢血リンパ球から単離される。ＣＤ３＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、及びＣＤ４５ＲＯ＋  Ｔ細胞などのＴ細胞の特定の亜集団を、正又は負の選択技術によってさらに分離することができる。例えば、いくつかの実施態様では、Ｔ細胞は、所望のＴ細胞の正の選択のために十分な期間にわたって、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ−４５０  ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｔなどの抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（すなわち、３×２８）コンジュゲートビーズとのインキュベーションによって単離される。いくつかの実施態様では、期間は約３０分である。いくつかの実施態様では、期間は３０分から３６時間以上の範囲、及びこれらの間の全ての整数値である。いくつかの実施態様では、期間は、少なくとも１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、又は６時間である。いくつかの実施態様では、期間は１０から２４時間である。いくつかの実施態様では、インキュベーション期間は２４時間である。白血病患者からのＴ細胞の単離については、２４時間など、より長いインキュベーション時間を使用することで、細胞収量を増加させることができる。例えば、腫瘍組織又は免疫不全の個体から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を単離する場合など、他の細胞型と比較してＴ細胞がわずかしか存在しない任意の状況でＴ細胞を単離するために、より長いインキュベーション時間を使用することができる。さらに、より長いインキュベーション時間の使用は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞の捕捉効率を高めることができる。このように、Ｔ細胞をＣＤ３／ＣＤ２８ビーズに結合させる時間を単純に短縮又は延長することにより、及び／又はＴ細胞に対するビーズの比率を増加又は減少させることにより、Ｔ細胞の亜集団を、培養開始時又はプロセス中の他の時点で優先的に選択することができる。さらに、ビーズ又は他の表面上の抗ＣＤ３抗体及び／又は抗ＣＤ２８抗体の比率を増加又は減少させることにより、Ｔ細胞の亜集団を、培養開始時又は他の所望の時点で優先的に選択することができる。当業者は、複数の選択ラウンドを使用することもできることを認識するであろう。いくつかの実施態様では、選択手順を実行し、活性化及び増殖プロセスにおいて「選択されていない」細胞を使用することが望ましい場合がある。「選択されていない」細胞は、さらに選択を行うこともできる。
【０２６９】
負の選択によるＴ細胞集団の濃縮は、負に選択された細胞に固有の表面マーカーに対する抗体の組み合わせを用いて達成することができる。１つの方法は、負に選択された細胞上に存在する細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体のカクテルを使用した、陰性磁気免疫付着（ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｍａｇｎｅｔｉｃ  ｉｍｍｕｎｏａｄｈｅｒｅｎｃｅ）又はフローサイトメトリーによる細胞選別及び／又は選択である。例えば、負の選択によってＣＤ４＋細胞を濃縮するために、モノクローナル抗体カクテルは、典型的には、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲ及びＣＤ８に対する抗体を含む。いくつかの実施態様では、典型的にはＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＧＩＴＲ＋、及びＦｏｘＰ３＋を発現する制御性Ｔ細胞を濃縮するか、又は正に選択することが望ましい場合がある。あるいは、いくつかの実施態様では、制御性Ｔ細胞は、抗ＣＤ２５コンジュゲートビーズ又は他の類似の選択方法によって枯渇される。
【０２７０】
正又は負の選択による所望の細胞集団の単離のために、細胞及び表面（例えば、ビーズなどの粒子）の濃度を変えることができる。いくつかの実施態様では、細胞とビーズとの最大の接触を確実にするために、ビーズと細胞が一緒に混合される体積を著しく減少させる（すなわち、細胞の濃度を増加させる）ことが望ましい場合がある。例えば、いくつかの実施態様では、約２０億細胞／ｍｌの濃度が使用される。いくつかの実施態様では、約１０億細胞／ｍｌの濃度が使用される。いくつかの実施態様では、約１億細胞／ｍｌ超が使用される。いくつかの実施態様では、約１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、又は５０００万細胞／ｍｌのいずれかの濃度の細胞が使用される。いくつかの実施態様では、約７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万、又は１億細胞／ｍｌのいずれかの細胞濃度が使用される。いくつかの実施態様では、約１億２５００万又は約１億５０００万細胞／ｍｌの濃度が使用される。高濃度を使用すると、細胞収量、細胞活性化、及び細胞増殖の増加をもたらすことができる。さらに、高濃度の細胞を使用することで、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞などの目的の標的抗原を弱く発現する可能性のある細胞、又は多くの腫瘍細胞が存在する試料（すなわち、白血病の血液、腫瘍組織など）からの細胞を、より効率的に捕捉することができる。このような細胞の集団は、治療的価値を有する可能性があり、得られることが望ましい。例えば、高濃度の細胞を用いることで、通常はＣＤ２８の発現が弱いＣＤ８＋  Ｔ細胞をより効率的に選択することができる。
【０２７１】
いくつかの実施態様では、Ｔ細胞は、治療直後に患者から得られる。これに関して、特定のがん治療後、特に免疫系を損傷する薬物による治療後、患者が通常治療から回復している期間中の治療の直後に、得られたＴ細胞の品質は、ｅｘ  ｖｉｖｏで増殖するそれらの能力に対して最適であり得るか又は改善され得ることが観察されている。同様に、本明細書に記載の方法を使用したｅｘ  ｖｉｖｏ操作の後、これらの細胞は、増強された生着及びｉｎ  ｖｉｖｏ増殖のための好ましい状態にあり得る。したがって、本開示の文脈内で、この回復期の間に、Ｔ細胞、樹状細胞、又は造血系統の他の細胞を含む血液細胞を収集することが企図される。さらに、いくつかの実施態様では、動員（例えば、ＧＭ−ＣＳＦによる動員）及びコンディショニングレジメンを使用して、対象において、特に治療後の規定の時間枠の間に、特定の細胞型の再増殖、再循環、再生、及び／又は増殖が好まれる状態を作り出すことができる。例示的な細胞型としては、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、及び免疫系の他の細胞が挙げられる。
【０２７２】
例えば、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ又は抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲを、必要に応じてＣＳＲ（抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲなど）又はタンデムｓｃＦｖ（抗ＰＳＭＡタンデムｓｃＦｖなど）とともに発現するＴ細胞の遺伝子改変の前であれ後であれ、Ｔ細胞は、例えば、米国特許第６３５２６９４号；６５３４０５５号；６９０５６８０号；６６９２９６４号；５８５８３５８号；６８８７４６６号；６９０５６８１号；７１４４５７５号；７０６７３１８号；７１７２８６９号；７２３２５６６号；７１７５８４３号；５８８３２２３号；６９０５８７４号；６７９７５１４号；６８６７０４１号；及び米国特許出願公開第２００６０１２１００５号に一般的に記載されている方法を使用して活性化及び増殖させることができる。
【０２７３】
一般に、本明細書に記載の遺伝子改変細胞（αβＴ細胞、γδＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞などのＴ細胞など）は、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体関連シグナルを刺激する薬剤と、Ｔ細胞の表面上の共刺激分子を刺激するリガンドとが結合している表面との接触によって増殖される。特に、Ｔ細胞集団は、例えば、抗ＣＤ３抗体、若しくはその抗原結合断片、又は表面に固定化された抗ＣＤ２抗体との接触によって、あるいはカルシウムイオノフォアと組み合わせたプロテインキナーゼＣ活性化因子（例えば、ブリオスタチン）との接触によって刺激され得る。Ｔ細胞表面のアクセサリー分子の共刺激については、アクセサリー分子に結合するリガンドが使用される。例えば、Ｔ細胞の集団は、Ｔ細胞の増殖を刺激するのに適切な条件下で、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体と接触させることができる。ＣＤ４＋  Ｔ細胞又はＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖を刺激するために、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体。抗ＣＤ２８抗体の例には、９．３、Ｂ−Ｔ３、ＸＲ−ＣＤ２８（Ｄｉａｃｌｏｎｅ，Ｂｅｓａｎｃｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ）が含まれ、当技術分野で一般に知られている他の方法と同様に使用することができる（Berg et al., Transplant Proc. 30(8):3975-3977, 1998; Haanen et al., J. Exp. Med. 190(9):13191328, 1999; Garland et al., J. Immunol. Meth. 227(1-2):53-63, 1999）。
【０２７４】
イムノコンジュゲート及びその調製
エフェクター分子に結合した抗ＰＳＭＡ構築物（本明細書に記載されているものなど）を含むイムノコンジュゲート（「抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲート」）も本明細書で提供される。いくつかの実施態様では、エフェクター分子は、がん治療剤（又は化学療法剤）などの治療剤、又は細胞毒性、細胞増殖抑制性、及び／又は他の方法で何らかの治療的利益を提供する毒素である。いくつかの実施態様では、エフェクター分子は、標識（例えば、直接又は間接的に検出可能なシグナルを生成する標識）である。
【０２７５】
治療剤を含む抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲート（「抗体薬物複合体」又は「ＡＤＣ」とも呼ばれる）は、細胞傷害性剤又は細胞増殖抑制剤、すなわち、がんの治療中に増殖腫瘍細胞を死滅させるか又は阻害する薬物の局所送達のために使用することができる。ＰＳＭＡを発現又は過剰発現する細胞（がん細胞など）への薬物部分の標的化された送達は、治療剤の細胞内蓄積を可能にする。例えば、Syrigos and Epenetos, Anticancer Research 19:605-614 (1999); Niculescu-Duvaz and Springer, Adv. Drg. Del. Rev. 26:151 -172 (1997)；米国特許第４９７５２７８号を参照。対照的に、非コンジュゲート治療剤の全身投与は、正常細胞並びに排除しようとする標的細胞に対して許容できないレベルの毒性をもたらし得る（Baldwin et al., Lancet (Mar. 15, 1986):603-605 (1986); Thorpe, (1985) “Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review,” in Monoclonal Antibodies ‘84: Biological And Clinical Applications, A. Pinchera et al.(eds.), pp. 475- 506）。それにより、最小の毒性で最大の有効性が求められる。
【０２７６】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートは、抗ＰＳＭＡ抗体部分（本明細書に記載されているものなど）及び、例えば、ダウノマイシン、ドキソルビシン、メトトレキサート、又はビンデシンなどの（ただしこれらに限定されない）化学療法剤を含む（Rowland et al., Cancer Immunol. Immunother. 21:183-187 (1986)）。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートには、細菌毒素（ジフテリア毒素など）、植物毒素（リシンなど）、小分子毒素（ゲルダナマイシンなど（Mandler et al., J.Nat. Cancer Inst. 92(19):1573-1581 (2000); Mandler et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters10:1025- 1028 (2000); Mandler et al., Bioconjugate Chem. 13:786-791 (2002))、メイタンシノイト゛(EP 1391213; Liu et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:8618-8623 (1996)）、カリケアマイシン（Lode et al., Cancer Res.58:2928 (1998); Hinman et al., Cancer Res. 53:3336-3342 (1993)）、ドラスタチン、アウリスタチン、トリコテセン、ＣＣ１０６５、又は毒素活性を示すその誘導体が含まれる。
【０２７７】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートは、抗ＰＳＭＡ抗体部分（本明細書に記載されているものなど）及び酵素的に活性な毒素（又は毒素活性を示すその断片）を含む。そのような酵素毒素には、限定されないが、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（緑膿菌由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、α−サルシン、シナアブラギリタンパク質、ジアンチンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓなど）、ツルレイシ阻害剤、クルシン、クロチン、サボンソウ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、又はトリコテセンが挙げられる。例えば、１９９３年１０月２８日公開の国際公開第９３／２１２３２号を参照のこと。
【０２７８】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートは、抗ＰＳＭＡ抗体部分（本明細書に記載されているものなど）及び細胞内活性を有する治療剤を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートは内部移行され、細胞内活性を有する治療剤は、細胞内のタンパク質合成を遮断し、したがって細胞死をもたらす細胞毒素である。（リボソームを不活性化することによるなど）タンパク質合成を遮断する例示的な毒素には、限定されないが、例えば、ゲロニン、ボウガニン（ｂｏｕｇａｎｉｎ）、サポリン、リシン、リシンＡ鎖、ブリオジン（ｂｒｙｏｄｉｎ）、ジフテリア毒素、リストリクトシン、シュードモナス外毒素Ａ及びそれらの変異体が挙げられる。いくつかの実施態様では、細胞におけるタンパク質合成を遮断する細胞毒素を含む抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートは、タンパク質が細胞に対して細胞毒性であるために、標的細胞への結合時に内部移行されなければならない。
【０２７９】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートは、抗ＰＳＭＡ抗体部分（本明細書に記載されているものなど）と、ＤＮＡの合成を阻害する治療剤とを含む。ＤＮＡ合成／ＤＮＡ複製を阻害する例示的な治療剤には、限定されないが、例えば、エンジイン（例えば、カリケアマイシン及びエスペラミシン）及び非エンジイン小分子剤（例えば、ブレオマイシン、メチジウムプロピル（ｍｅｔｈｉｄｉｕｍｐｒｏｐｙｌ）−ＥＤＴＡ−Ｆｅ（ＩＩ））が挙げられる。本出願に従って有用な他のがん治療剤には、限定されないが、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ジスタマイシンＡ、シスプラチン、マイトマイシンＣ、エクチナサイジン、デュオカルマイシン／ＣＣ−１０６５、及びブレオマイシン／ペプレオマイシンが挙げられる。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートは、本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ抗体部分、及び核酸分解活性を有する化合物（例えば、リボヌクレアーゼ、又はＤＮＡエンドヌクレアーゼ、例えばデオキシリボヌクレアーゼ；ＤＮａｓｅなど）を含む。
【０２８０】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートは、本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ抗体部分と、微小管又はチューブリンに結合する薬剤とを含む。いくつかの実施態様では、微小管又はチューブリンに結合する薬剤は、微小管細胞骨格を脱重合に対して安定化させる。あるいは、いくつかの実施態様では、微小管又はチューブリンに結合する薬剤は、チューブリン重合を阻害する。そのような治療剤には、限定されないが、例えば、リゾキシン／メイタンシン、パクリタキセル、ビンクリスチン及びビンブラスチン、コルヒチン、アウリスタチン、ドラスタチン１０、ＭＭＡＥ、及びペロルシド（ｐｅｌｏｒｕｓｉｄｅ）Ａが挙げられる。
【０２８１】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートは、抗ＰＳＭＡ抗体部分（本明細書に記載されているものなど）及びアルキル化剤、例えば、限定されないが、Ａｓａｌｅｙ  ＮＳＣ  １６７７８０、ＡＺＱ  ＮＳＣ  １８２９８６、ＢＣＮＵ  ＮＳＣ  ４０９９６２、ブスルファン  ＮＳＣ  ７５０、カルボキシフタラトプラチナ（ｃａｒｂｏｘｙｐｈｔｈａｌａｔｏｐｌａｔｉｎｕｍ）ＮＳＣ  ２７１６７４、ＣＢＤＣＡ  ＮＳＣ  ２４１２４０、ＣＣＮＵ  ＮＳＣ  ７９０３７、ＣＨＩＰ  ＮＳＣ  ２５６９２７、クロラムブシル  ＮＳＣ  ３０８８、クロロゾトシン  ＮＳＣ  １７８２４８、シスプラチン  ＮＳＣ  １１９８７５、クロメゾン  ＮＳＣ  ３３８９４７、シアノモルホリノドキソルビシン  ＮＳＣ  ３５７７０４、シクロジソン  ＮＳＣ  ３４８９４８、ジアンヒドロガラクチトール  ＮＳＣ  １３２３１３、フルオロドパン  ＮＳＣ  ７３７５４、ヘプスルファム  ＮＳＣ  ３２９６８０、ヒカントン  ＮＳＣ  １４２９８２、メルファラン  ＮＳＣ  ８８０６、メチル  ＣＣＮＵ  ＮＳＣ  ９５４４１、マイトマイシンＣ  ＮＳＣ  ２６９８０、ミトゾラミド  ＮＳＣ  ３５３４５１、ナイトロジェンマスタード  ＮＳＣ  ７６２、ＰＣＮＵ  ＮＳＣ  ９５４６６、ピペラジン  ＮＳＣ  ３４４００７、ピペラジンジオン  ＮＳＣ  １３５７５８、ピポブロマン  ＮＳＣ  ２５１５４、ポルフィロマイシン  ＮＳＣ  ５６４１０、スピロヒダントインマスタード  ＮＳＣ  １７２１１２、テロキシロン  ＮＳＣ  ２９６９３４、テトラプラチン  ＮＳＣ  ３６３８１２、チオテパ  ＮＳＣ  ６３９６、トリエチレンメラミン  ＮＳＣ  ９７０６、ウラシルナイトロジェンマスタード  ＮＳＣ  ３４４６２、及びＹｏｓｈｉ−８６４  ＮＳＣ  １０２６２７を含む。
【０２８２】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートは、本明細書に記載される抗ＰＳＭＡ抗体部分及び、有糸分裂阻害剤、例えば、限定されないが、アロコルヒチン  ＮＳＣ  ４０６０４２、ハリコンドリンＢ  ＮＳＣ  ６０９３９５、コルヒチン  ＮＳＣ  ７５７、コルヒチン誘導体  ＮＳＣ  ３３４１０、ドラスタチン１０  ＮＳＣ  ３７６１２８（ＮＧ−アウリスタチン由来）、メイタンシン  ＮＳＣ  １５３８５８、リゾキシン  ＮＳＣ  ３３２５９８、タキソール  ＮＳＣ  １２５９７３、タキソール誘導体  ＮＳＣ  ６０８８３２、チオコルヒチン  ＮＳＣ  ３６１７９２、トリチルシステイン  ＮＳＣ  ８３２６５、ビンブラスチン硫酸塩  ＮＳＣ  ４９８４２、及びビンクリスチン硫酸塩  ＮＳＣ  ６７５７４を含む。
【０２８３】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートは、抗ＰＳＭＡ抗体部分（本明細書に記載されているものなど）及びトポイソメラーゼＩ阻害剤、例えば、カンプトテシン  ＮＳＣ  ９４６００、カンプトテシン、Ｎａ塩  ＮＳＣ  １００８８０、アミノカンプトテシン  ＮＳＣ  ６０３０７１、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ９５３８２、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  １０７１２４、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ６４３８３３、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ６２９９７１、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ２９５５００、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ２４９９１０、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ６０６９８５、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ３７４０２８、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  １７６３２３、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ２９５５０１、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ６０６１７２、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ６０６１７３、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ６１０４５８、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ６１８９３９、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ６１０４５７、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ６１０４５９、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ６０６４９９、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ６１０４５６、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ３６４８３０、カンプトテシン誘導体  ＮＳＣ  ６０６４９７、及びモルホリノドキソルビシン  ＮＳＣ  ３５４６４６を含む。
【０２８４】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートは、抗ＰＳＭＡ抗体部分（本明細書に記載されているものなど）及びトポイソメラーゼＩＩ阻害剤、例えば、ただしこれらに限定されないが、ドキソルビシン  ＮＳＣ  １２３１２７、アモナフィド  ＮＳＣ  ３０８８４７、ｍ−ＡＭＳＡ  ＮＳＣ  ２４９９９２、アントラピラゾール誘導体  ＮＳＣ  ３５５６４４、ピラゾロアクリジン  ＮＳＣ  ３６６１４０、ビサントレンＨＣＬ  ＮＳＣ  ３３７７６６、ダウノルビシン  ＮＳＣ  ８２１５１、デオキシドキソルビシン  ＮＳＣ  ２６７４６９、ミトキサントロン  ＮＳＣ  ３０１７３９、メノガリル  ＮＳＣ  ２６９１４８、Ｎ、Ｎ−ジベンジルダウノマイシン  ＮＳＣ  ２６８２４２、オキサントラゾール  ＮＳＣ  ３４９１７４、ルビダゾン  ＮＳＣ  １６４０１１、ＶＭ−２６  ＮＳＣ  １２２８１９、及びＶＰ−１６ＮＳＣ１４１５４０を含む。
【０２８５】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートは、抗ＰＳＭＡ抗体部分（本明細書に記載されているものなど）及びＲＮＡ又はＤＮＡ代謝拮抗剤、例えば、ただしこれらに限定されないが、Ｌ−アラノシン  ＮＳＣ  １５３３５３、５−アザシチジン  ＮＳＣ  １０２８１６、５−フルオロウラシル  ＮＳＣ  １９８９３、アシビシン  ＮＳＣ  １６３５０１、アミノプテリン誘導体  ＮＳＣ  １３２４８３、アミノプテリン誘導体  ＮＳＣ  １８４６９２、アミノプテリン誘導体  ＮＳＣ  １３４０３３、アンチフォール  ＮＳＣ  ６３３７１３、アンチフォール  ＮＳＣ  ６２３０１７、ベーカーズ可溶性アンチフォール  ＮＳＣ  １３９１０５、ジクロロアリルローソン  ＮＳＣ  １２６７７１、ブレキナル  ＮＳＣ  ３６８３９０、フトラフール（プロドラッグ）  ＮＳＣ  １４８９５８、５，６−ジヒドロ−５−アザシチジン  ＮＳＣ  ２６４８８０、メトトレキサート  ＮＳＣ  ７４０、メトトレキサート誘導体  ＮＳＣ  １７４１２１、Ｎ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸（ＰＡＬＡ）  ＮＳＣ  ２２４１３１、ピラゾフリン  ＮＳＣ  １４３０９５、トリメトレキサート  ＮＳＣ  ３５２１２２、３−ＨＰ  ＮＳＣ  ９５６７８、２’−デオキシ−５−フルオロウリジン  ＮＳＣ  ２７６４０、５−ＨＰ  ＮＳＣ  １０７３９２、α−ＴＧＤＲ  ＮＳＣ  ７１８５１、アフィジコリングリシナート  ＮＳＣ  ３０３８１２、ａｒａ−Ｃ  ＮＳＣ  ６３８７８、５−アザ−２’−デオキシシチジン  ＮＳＣ  １２７７１６、β−ＴＧＤＲ  ＮＳＣ  ７１２６１、シクロシチジン  ＮＳＣ  １４５６６８、グアナゾール  ＮＳＣ  １８９５、ヒドロキシウレア  ＮＳＣ  ３２０６５、イノシングリコジアルデヒド  ＮＳＣ  １１８９９４、マクベシンＩｌ  ＮＳＣ  ３３０５００、ピラゾロイミダゾール  ＮＳＣ  ５１１４３、チオグアニン  ＮＳＣ  ７５２、及びチオプリン  ＮＳＣ  ７５５を含む。
【０２８６】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートは、抗ＰＳＭＡ抗体部分（本明細書に記載されているものなど）及び放射性同位体を含む。様々な放射性同位体が当技術分野でよく知られており、放射性コンジュゲートポリペプチドの生成のために使用されている。例には、例えば、２１１Ａｔ、１３１Ｉ、１２５Ｉ、９０Ｙ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３Ｓｍ、２１２Ｂｉ、３２Ｐ、２１２Ｐｂ、及びＬｕの放射性同位体が含まれるが、これらに限定されない。
【０２８７】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートは、腫瘍プレターゲティングにおいて利用するための抗ＰＳＭＡ抗体部分（本明細書に記載されているものなど）及び「受容体」（ストレプトアビジンなど）を含み、ここで、抗体−受容体コンジュゲートが患者に投与され、続いて、除去剤を使用して循環から非結合コンジュゲートが除去され、次いで、細胞傷害性剤（例えば、本明細書に記載されているか又は当技術分野で知られている細胞傷害性剤のいずれか１つ又は複数）にコンジュゲートされた「リガンド」（例えば、アビジン）の投与が行われる。
【０２８８】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートは、抗ＰＳＭＡ抗体部分（本明細書に記載されているものなど）及びプロドラッグ活性化酵素を含む。いくつかの実施態様では、プロドラッグ活性化酵素は、プロドラッグ（例えば、ペプチジル化学療法剤、国際公開第８１／０１１４５号を参照のこと）を、抗がん剤などの活性薬物に変換する。いくつかの実施態様では、プロドラッグ活性化酵素を含む抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートは、抗体依存性酵素媒介プロドラッグ療法（「ＡＤＥＰＴ」）において使用される。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートは、抗ＰＳＭＡ抗体部分（本明細書に記載されているものなど）、及びホスフェート含有プロドラッグを遊離薬物に変換するアルカリホスファターゼ；サルフェート含有プロドラッグを遊離薬物に変換するアリールスルファターゼ；非毒性５−フルオロシトシンを抗がん剤５−フルオロウラシルに変換するシトシンデアミナーゼ；ペプチド含有プロドラッグを遊離薬物に変換するプロテアーゼ（例えば、セラチアプロテアーゼ、サーモリシン、スブチリシン、カルボキシペプチダーゼ又はカテプシン（カテプシンＢ及びＬなど））；Ｄ−アミノ酸置換基を含むプロドラッグを変換するＤ−アラニルカルボキシペプチダーゼ；グリコシル化されたプロドラッグを遊離薬物に変換する、炭水化物切断酵素（β−ガラクトシダーゼ及びノイラミニダーゼなど）；β−ラクタムで誘導体化された薬物を遊離薬物に変換するβ−ラクタマーゼ；又はアミン窒素においてフェノキシアセチル基又はフェニルアセチル基でそれぞれ誘導体化された薬物を遊離薬物に変換するペニシリンアミダーゼ（ペニシリンＶアミダーゼ又はペニシリンＧアミダーゼなど）を含む。いくつかの実施態様では、プロドラッグ活性化酵素は、抗ＰＳＭＡ抗体部分に共有結合している。いくつかの実施態様では、提供されるのは、抗ＰＳＭＡ抗体部分（本明細書に記載されているものなど）と酵素（プロドラッグ活性化酵素など）とを含む抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートをコードする核酸である。例えば、Neuberger et al., Nature 312:604-608を参照のこと。そのようなイムノコンジュゲートを生成することは、宿主細胞を核酸で形質転換、トランスフェクト、又は形質導入し、イムノコンジュゲートが発現される条件下で宿主細胞を培養し、イムノコンジュゲートを回収することを伴う。
【０２８９】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートは、抗ＰＳＭＡ抗体部分（本明細書に記載されているものなど）及び核酸、例えば、限定されないが、アンチセンスＲＮＡ、遺伝子、又は他のポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ抗体部分にコンジュゲートされたポリヌクレオチドは、チオグアニン及びチオプリンなどの１つ又は複数の核酸類似体を含む。
【０２９０】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートは、抗ＰＳＭＡ抗体部分（本明細書に記載されているものなど）と、直接的又は間接的に検出可能なシグナルを生成する標識とを含む。そのような抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートは、例えば、がん細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ又はｉｎ  ｖｉｔｒｏ検出を含む研究又は診断用途に使用することができる（例えば、がんを有する又は有すると疑われる個体、あるいはそのような個体から得られた試料において）。いくつかの実施態様では、標識は放射線不透過性である。いくつかの実施態様では、標識は、放射性同位元素、例えば、限定されないが、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉである。いくつかの実施態様では、標識は、例えば、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン若しくはルシフェリンなどの蛍光化合物（フルオロフォア）又は化学発光化合物（発色団）である。いくつかの実施態様では、標識は、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ又は西洋ワサビペルオキシダーゼなどの酵素である。いくつかの実施態様では、標識は造影剤又は金属イオンである。いくつかの実施態様では、標識は、シンチグラフィー研究のための放射性原子、例えば、９９Ｔｃ若しくは１２３Ｉ、又は核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像法（磁気共鳴画像法、ＭＲＩとしても知られる）のためのスピンラベル、例えば、ジルコニウム−８９、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガン又は鉄などである。ジルコニウム−８９は、例えば、ＰＥＴ画像法のために、様々な金属キレート剤と錯体を形成し、抗体にコンジュゲートすることができる（国際公開第２０１１／０５６９８３号）。
【０２９１】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートは、抗ＰＳＭＡ抗体部分（本明細書に記載されているものなど）と、間接的に検出可能なシグナルを生成する標識とを含む。例えば、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートに対して特異的であり、かつ検出可能な標識を含む二次抗体を使用して、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートを検出することができる。
【０２９２】
抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートは、当技術分野で知られている任意の方法を使用して調製することができる。例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第２００９／０６７８００号、国際公開第２０１１／１３３８８６号、及び米国特許出願公開第２０１４３２１２２９号を参照のこと。
【０２９３】
抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートの抗ＰＳＭＡ抗体部分は、抗ＰＳＭＡ抗体部分がエフェクター分子と会合し得る、又はエフェクター分子に連結され得る任意の手段によって、エフェクター分子に「結合」され得る。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートは、本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ抗体部分と、標識又は治療剤とを含み、標識又は治療剤分子は、抗ＰＳＭＡ抗体部分に共有結合している。抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートの抗ＰＳＭＡ抗体部分は、化学的又は組換え的手段によってエフェクター分子に結合され得る。融合体又はコンジュゲートを調製するための化学的手段は当技術分野で知られており、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートを調製するために使用することができる。抗ＰＳＭＡ抗体部分とエフェクター分子（すなわち、標識又は治療剤）をコンジュゲートさせるために使用される方法は、標的細胞上に発現されたＰＳＭＡに結合する抗ＰＳＭＡ抗体部分の能力を妨げることなく、結合タンパク質をエフェクター分子に連結させることができるものでなければならない。
【０２９４】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートは、エフェクター分子（すなわち、標識又は治療剤）に間接的に連結されている抗ＰＳＭＡ抗体部分（本明細書に記載されているものなど）を含む。例えば、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートの抗ＰＳＭＡ抗体部分は、エフェクター分子（すなわち、標識又は治療剤）を含むリポソームに直接連結され得る。エフェクター分子及び／又は抗ＰＳＭＡ抗体部分もまた、固体表面に結合し得る。
【０２９５】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートの抗ＰＳＭＡ抗体部分及びエフェクター分子（すなわち、標識又は治療剤）は両方ともタンパク質であり、当技術分野でよく知られている技術を使用してコンジュゲートすることができる。２つのタンパク質をコンジュゲートすることができる様々な架橋剤は、当技術分野でよく知られている。（例えば、“Chemistry of Protein Conjugation and Crosslinking”. 1991, Shans Wong, CRC Press, Ann Arborを参照のこと）。架橋剤は、一般に、抗ＰＳＭＡ抗体部分及び／又はエフェクター分子（すなわち、標識又は治療剤）上において利用可能又は挿入された反応性官能基に基づいて選択される。さらに、反応性基がない場合は、光活性化可能な架橋剤を使用することができる。特定の例では、抗ＰＳＭＡ抗体部分とエフェクター分子との間にスペーサーを含めることが望ましい場合がある。当技術分野で知られている架橋剤には、ホモ二官能性剤：グルタルアルデヒド、アジプイミド酸ジメチル及びビス（ジアゾベンジジン）並びにヘテロ二官能性剤：ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド及びスルホ−ｍマレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドが含まれる。
【０２９６】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートの抗ＰＳＭＡ抗体部分は、エフェクター分子（すなわち、標識又は治療剤）の化学的結合のための特定の残基で操作され得る。当技術分野で知られている分子の化学的結合に使用される特定の残基としては、リジン及びシステインが挙げられる。架橋剤は、抗ＰＳＭＡ抗体部分上に挿入され、エフェクター分子上で利用可能な反応性官能基に基づいて選択される。
【０２９７】
抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートはまた、組換えＤＮＡ技術を使用して調製され得る。そのような場合、抗ＰＳＭＡ抗体部分をコードするＤＮＡ配列がエフェクター分子をコードするＤＮＡ配列に融合され、キメラＤＮＡ分子が得られる。キメラＤＮＡ配列は、融合タンパク質を発現する宿主細胞中にトランスフェクトされる。融合タンパク質は、当技術分野で知られている技術を使用して、細胞培養物から回収され、精製することができる。
【０２９８】
検出可能な標識を結合分子（抗ＰＳＭＡ抗体部分など）に結合させる例示的な方法は、Hunter, et al., Nature 144:945 (1962); David, et al., Biochemistry 13:1014 (1974); Pain, et al., J. Immunol. Meth.40:219 (1981); Nygren, J. Histochem. and Cytochem. 30:407 (1982); Wensel and Meares, Radioimmunoimaging And Radioimmunotherapy, Elsevier, N.Y. (1983)；及びColcher et al., “Use Of Monoclonal Antibodies As Radiopharmaceuticals For The Localization Of Human Carcinoma Xenografts In Athymic Mice”, Meth. Enzymol., 121:802-16 (1986)に記載されている。
【０２９９】
放射性標識（又は他の標識）は、既知の方法でイムノコンジュゲートに組み込むことができる。例えば、抗ＰＳＭＡ抗体部分は、生合成され得るか、又は例えば、水素の代わりにフッ素−１９を含む適切なアミノ酸前駆体を使用する化学的アミノ酸合成によって合成され得る。９９Ｔｃ又は１２３Ｉ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１１１Ｉｎなどの標識は、抗ＰＳＭＡ抗体部分中のシステイン残基を介して結合することができる。イットリウム−９０は、リジン残基を介して結合され得る。ＩＯＤＯＧＥＮ法（Fraker et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 80:49-57 (1978)）を使用して、ヨウ素−１２３を組み込むことができる。“Monoclonal Antibodies in Immunoscintigraphy” (Chatal, CRC Press 1989) は、他の方法を詳細に記述している。
【０３００】
抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートは、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（アジプイミド酸ジメチルＨＣｌなど）、活性エステル（スベリン酸ジサクシンイミジルなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（トルエン２，６−ジイソシアネートなど）、及びビス−活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンなど）などの様々な二官能性タンパク質カップリング剤を使用して作成され得る。例えば、リシンイムノトキシンは、Vitetta et al., Science 238:1098 (1987)に記載されているように調製することができる。炭素−１４標識１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（1-isothiocyanatobenzyl-3-methyldiethylene tnaminepentaacetic acid ）（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性核種を抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートの抗ＰＳＭＡ抗体部分にコンジュゲートさせるための例示的なキレート剤である。例えば、国際公開第９４／１１０２６号を参照のこと。リンカーは、細胞内での細胞傷害性薬物の放出を促進する「切断可能なリンカー」であり得る。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、光分解性リンカー、ジメチルリンカー又はジスルフィド含有リンカー（Chari et al., Cancer Research 52:127-131 (1992)；米国特許第５２０８０２０号）が使用され得る。
【０３０１】
本開示の抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲートには、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣ、及びスルホ−ＳＭＰＢ、並びにＳＶＳＢ  スクシンイミジル−（４−ビニルスルホン）ベンゾエート）、すなわち、（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，Ｕ．Ｓ．Ａから）市販されるクロスリンカー試薬を使用して調製されたものが含まれるが、これらに限定されない。２００３−２００４年のApplications Handbook and Catalogの４６７−４９８頁を参照のこと。
【０３０２】
核酸、ベクター、宿主細胞、及び抗ＰＳＭＡ構築物の作製方法
また、本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ構築物のポリペプチド部分をコードする核酸分子（核酸分子のセットを含む）も提供される。いくつかの実施態様では、核酸（又は核酸のセット）は、完全長抗ＰＳＭＡ抗体をコードする。いくつかの実施態様では、核酸（又は核酸のセット）は、多重特異性抗ＰＳＭＡ分子（例えば、多重特異性抗ＰＳＭＡ抗体、二重特異性抗ＰＳＭＡ抗体、又は抗ＰＳＭＡ抗体部分を含むタンデムｄｉ−ｓｃＦｖ）、又はそのポリペプチド部分をコードする。いくつかの実施態様では、核酸（又は核酸のセット）は、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲをコードする。いくつかの実施態様では、核酸（又は核酸のセット）は、完全長抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードする。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲの２つの鎖は、同じ核酸上にコードされている。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲの２つの鎖は、別々の核酸上にコードされている。いくつかの実施態様では、核酸は、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲをコードする。いくつかの実施態様では、核酸（又は核酸のセット）は、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲート、又はそのポリペプチド部分をコードする。
【０３０３】
本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ構築物のポリペプチド部分をコードする核酸配列変異体も提供される。例えば、変異体は、少なくとも中程度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ構築物又は抗ＰＳＭＡ抗体部分をコードする核酸配列にハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む。
【０３０４】
本明細書に記載の１つ又は複数の核酸を含むベクター（発現ベクターなど）も提供される。
【０３０５】
本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ構築物、又はそのポリペプチド部分、例えば、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲは、抗ＰＳＭＡ構築物又はそのポリペプチド部分をコードする天然又は合成の核酸から発現させることができる。簡潔には、核酸が、例えばプロモーター（例えば、リンパ球特異的プロモーター）及び３’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む５’及び３’調節エレメントに作動可能に連結されるように、核酸は適切な発現ベクターに挿入され得る。ベクターは、真核生物の宿主細胞における複製及び組込みに適していることが好ましい。典型的なクローニング及び発現ベクターは、転写及び翻訳ターミネーター、開始配列、並びに所望の核酸配列の発現の調節に有用なプロモーターを含む。
【０３０６】
本明細書に記載の核酸はまた、標準的な遺伝子送達プロトコルを使用して、核酸免疫化及び遺伝子治療のために使用することができる。遺伝子送達の方法は当技術分野で知られている。例えば、米国特許第５３９９３４６号；第５５８０８５９号；及び第５５８９４６６号を参照のこと。これらは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施態様では、遺伝子治療ベクターが提供される。
【０３０７】
本明細書に記載の核酸は、当技術分野で知られている様々なベクターのいずれかにクローニングすることができる。例えば、核酸（又は核酸のセット）は、例えば、プラスミド、ファージミド、ファージ誘導体、動物ウイルス、及び／又はコスミドにクローニングすることができる。特に関心のあるベクターには、発現ベクター、複製ベクター、プローブ生成ベクター、及び配列決定ベクターが含まれる。
【０３０８】
いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ構築物又は抗ＰＳＭＡ抗体部分をコードする核酸を含む発現ベクターは、ウイルスベクターである。ウイルスベクター技術は当技術分野でよく知られており、例えば、Sambrook et al. (2001, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York）、及び他のウイルス学及び分子生物学のマニュアルに記載されている。ベクターとして有用なウイルスには、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、及びレンチウイルスが含まれるが、これらに限定されない。一般に、適切なベクターは、少なくとも１つの生物において機能的な複製起点、プロモーター配列、便利な制限エンドヌクレアーゼ部位、及び１つ又は複数の選択可能なマーカーを含む（例えば、国際公開第０１／９６５８４号；国際公開第０１／２９０５８号；及び米国特許第６３２６１９３号を参照）。
【０３０９】
哺乳類細胞への遺伝子導入のために、多くのウイルスベースのシステムが開発されてきた。例えば、レトロウイルスは遺伝子送達システムのための便利なプラットフォームを提供する。選択された遺伝子は、当技術分野で知られている技術を使用して、ベクターに挿入され、レトロウイルス粒子にパッケージングされ得る。次いで、組換えウイルスを単離して、ｉｎ  ｖｉｖｏ又はｅｘ  ｖｉｖｏのいずれかで対象の細胞に送達することができる。多くのレトロウイルスシステムが当技術分野で知られている。いくつかの実施態様では、ウイルスベクターは、アデノウイルスベクターである。多くのアデノウイルスベクターが当技術分野で知られている。いくつかの実施態様では、ウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである。レンチウイルスなどのレトロウイルスに由来するベクターは、導入遺伝子の長期的で安定した組み込みと娘細胞におけるその伝播を可能にするため、長期的な遺伝子導入を達成するための適切なツールである。レンチウイルスベクターは、非増殖細胞を形質導入できるという点で、マウス白血病ウイルスなどの腫瘍レトロウイルスに由来するベクターに対してさらなる利点を有する。それらはまた、免疫原性が低いというさらなる利点を有する。
【０３１０】
追加のプロモーターエレメント、例えばエンハンサーは、転写開始の頻度を調節する。典型的には、これらは開始部位の３０−１１０ｂｐ上流の領域に位置しているが、最近では多くのプロモーターが開始部位の下流にも機能的エレメントを含むことが示されている。プロモーターエレメント間の間隔はしばしば柔軟であり、それにより、エレメントが互いに反転したり相対的に移動したときでもプロモーター機能が維持される。チミジンキナーゼ（ｔｋ）プロモーターでは、活性が低下し始める前に、プロモーターエレメント間の間隔を５０ｂｐ離れるまで増加させることができる。
【０３１１】
適切なプロモーターの一例は、前初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配列である。このプロモーター配列は、それに作動可能に連結された任意のポリヌクレオチド配列の高レベルの発現を駆動することができる強力な構成的プロモーター配列である。適切なプロモーターの別の例は、伸長成長因子−１α（ＥＦ−１α）である。しかしながら、サルウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、マウス乳房腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の長い末端反復（ＬＴＲ）プロモーター、ＭｏＭｕＬＶプロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、エプスタイン・バーウイルス最初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、並びに、アクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、ヘモグロビンプロモーター及びクレアチンキナーゼプロモーターなどのヒト遺伝子プロモーターが挙げられるがこれらに限定されない、他の構成的プロモーター配列もまた使用され得る。さらに、本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ構築物の発現は、構成的プロモーターの使用に限定されるべきではない。誘導性プロモーターも企図されている。誘導性プロモーターの使用は、そのような発現が望ましいときには連結したポリヌクレオチド配列の発現のスイッチをオンにし、又は発現が望ましくないときには発現のスイッチをオフにすることが可能な分子スイッチを提供する。誘導性プロモーターの例には、限定されないが、メタロチオネインプロモーター、グルココルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーター、及びテトラサイクリンプロモーターが含まれる。
【０３１２】
ポリペプチド又はその一部の発現を評価するために、細胞に導入される発現ベクターはまた、ウイルス性ベクターを通してトランスフェクト又は感染されることが求められる細胞の集団からの発現細胞の同定及び選択を容易にするために、選択マーカー遺伝子若しくはレポーター遺伝子のいずれか又はこれらの両方を含むことができる。他の態様では、選択マーカーは、ＤＮＡの別個の一片に保有されてもよく、共トランスフェクション手順において使用され得る。選択マーカー及びレポーター遺伝子の両方に、適切な調節配列を隣接させて、宿主細胞における発現を可能にすることができる。例示的な選択可能なマーカーには、例えば、ｎｅｏなどの抗生物質耐性遺伝子が含まれるが、これらに限定されない。
【０３１３】
レポーター遺伝子は、潜在的トランスフェクト細胞を同定するため、及び調節配列の機能性を評価するために使用される。一般に、レポーター遺伝子は、レシピエント生物体又は組織中に存在することも、それらによって発現されることもなく、何らかの容易に検出可能な特性、例えば、酵素活性によってその発現が明らかにされるポリペプチドをコードする遺伝子である。レポーター遺伝子の発現は、ＤＮＡがレシピエント細胞中に導入された後の適切な時にアッセイされる。適切なレポーター遺伝子は、ルシフェラーゼ、β−ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、分泌型アルカリホスファターゼ、又は緑色蛍光性タンパク質遺伝子をコードする遺伝子を含み得る（例えば、Ui-Tel et al., 2000 FEBS Letters 479: 79-82）。適切な発現系はよく知られており、既知の技術を使用して調製されるか、又は商業的に入手することができる。一般に、レポーター遺伝子の最高レベルの発現を示す最小の５’隣接領域を有する構築物が、プロモーターとして同定される。このようなプロモーター領域は、レポーター遺伝子に連結されていてもよく、プロモーター駆動転写を調節する能力について薬剤を評価するために使用され得る。
【０３１４】
遺伝子を細胞に導入して発現させる方法は、当技術分野で知られている。発現ベクターの文脈では、ベクターは、当技術分野の任意の方法によって、宿主細胞、例えば、哺乳動物、細菌、酵母、又は昆虫細胞に容易に導入することができる。例えば、発現ベクターは、物理的、化学的、又は生物学的手段により宿主細胞に移入することができる。
【０３１５】
ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための物理的方法には、リン酸カルシウム沈殿、リポフェクション、微粒子銃、マイクロインジェクション、エレクトロポレーションなどが含まれる。ベクター及び／又は外来性核酸を含む細胞を生成するための方法は、当技術分野でよく知られている。例えば、Sambrook et al. (2001, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York)を参照のこと。いくつかの実施態様では、宿主細胞へのポリヌクレオチドの導入は、リン酸カルシウムトランスフェクションによって実施される。
【０３１６】
目的のポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための生物学的方法には、ＤＮＡ及びＲＮＡベクターの使用が含まれる。ウイルスベクター、特にレトロウイルスベクターは、哺乳動物、例えば、ヒト細胞中に遺伝子を挿入するための最も広く使用される方法となっている。他のウイルスベクターは、レンチウイルス、ポックスウイルス、単純ヘルペスウイルス１、アデノウイルス及びアデノ随伴ウイルスなどに由来し得る。例えば、米国特許第５３５０６７４号；同第５５８５３６２号を参照のこと。
【０３１７】
核酸を宿主細胞中に導入するための化学的手段には、コロイド分散系、例えば巨大分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズ、並びに水中油型エマルジョン、ミセル、混合ミセル、及びリポソームを含む脂質に基づく系が含まれる。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏにおいて送達ビヒクルとして使用するための例示的コロイド系はリポソーム（例えば、人工膜小胞）である。
【０３１８】
別の例示的な送達ビヒクルはリポソームである。脂質製剤の使用が、宿主細胞への核酸の導入（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏ）のために企図されている。別の態様では、核酸は、脂質と会合し得る。脂質と会合した核酸は、リポソームの水性内部中に封入されていてもよく、リポソームの脂質二重層内に散在していてもよく、リポソーム及びオリゴヌクレオチドの両方と結合する連結分子を介してリポソームに結合していてもよく、リポソームに封入されていてもよく、リポソームと複合体形成していてもよく、脂質を含む溶液中に分散されていてもよく、脂質と混合されていてもよく、脂質と組み合わされていてもよく、脂質中に懸濁物として含まれていてもよく、ミセルに含まれあるいはミセルと複合体形成されていてもよく、又は脂質と他の方法で会合していてもよい。脂質、脂質／ＤＮＡ又は脂質／発現ベクター会合組成物は、溶液中の任意の特定の構造に限定されない。例えば、それらは、二重層構造中に、ミセルとして、又は「崩壊した」構造で存在し得る。それらはまた、単に溶液中に散在し、サイズ又は形状が均一ではない凝集体をおそらくは形成し得る。脂質は、天然に存在する脂質であり得るか又は合成脂質であり得る脂肪性物質である。例えば、脂質には、細胞質中に天然に存在する脂肪小滴、並びに長鎖脂肪族炭化水素及びその誘導体、例えば、脂肪酸、アルコール、アミン、アミノアルコール、及びアルデヒドなどを含む化合物のクラスが含まれる。
【０３１９】
外因性核酸を宿主細胞中に導入するために使用される方法に関係なく、宿主細胞中の組換えＤＮＡ配列の存在を確認するために、様々なアッセイが実施され得る。そのようなアッセイには、例えば、サザン及びノーザンブロッティング、ＲＴ−ＰＣＲ及びＰＣＲなどの、当業者によく知られた「分子生物学的」アッセイ；例えば、免疫学的手段（ＥＬＩＳＡ及びウエスタンブロット）によって、又は本開示の範囲内に入る薬剤を同定するための本明細書に記載されるアッセイによって、特定のペプチドの存在又は非存在を検出するなどの「生化学的」アッセイが含まれる
【０３２０】
Ｆｃ領域変異体を含む抗ＰＳＭＡ構築物
いくつかの実施態様では、１つ又は複数のアミノ酸修飾は、本明細書で提供される抗ＰＳＭＡ構築物（例えば、完全長抗ＰＳＭＡ抗体）のＦｃ領域に導入され得、それにより、Ｆｃ領域変異体を生成する。いくつかの実施態様では、Ｆｃ領域変異体は、しばしばＦｃ受容体（ＦｃＲ）への結合に関連する、増強された抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）エフェクター機能を有する。いくつかの実施態様では、Ｆｃ領域変異体は、減少したＡＤＣＣエフェクター機能を有する。エフェクター機能を変化させることができるＦｃ配列への変化又は変異の例は多数ある。例えば、国際公開第００／４２０７２号及びShields et al. J Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)は、ＦｃＲに対する結合が改善又は減少した抗体変異体を記載している。これらの出版物の内容は、参照により本明細書に具体的に組み込まれる。
【０３２１】
抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）は、腫瘍細胞に対する治療用抗体の作用機序である。ＡＤＣＣは、細胞媒介性免疫防御であり、それによって、膜表面抗原が特異的抗体（例えば、抗ＰＳＭＡ抗体）によって結合された標的細胞（例えば、がん細胞）を、免疫系のエフェクター細胞が能動的に溶解する。典型的なＡＤＣＣは、抗体によるＮＫ細胞の活性化を伴う。ＮＫ細胞はＦｃ受容体であるＣＤ１６を発現する。この受容体は、標的細胞の表面に結合した抗体のＦｃ部分を認識し、結合する。ＮＫ細胞の表面にある最も一般的なＦｃ受容体は、ＣＤ１６又はＦｃγＲＩＩＩと呼ばれる。抗体のＦｃ領域へのＦｃ受容体の結合は、ＮＫ細胞の活性化、細胞溶解性顆粒の放出、及びその結果としての標的細胞のアポトーシスをもたらす。腫瘍細胞死に対するＡＤＣＣの寄与は、高親和性ＦｃＲでトランスフェクトされているＮＫ−９２細胞を使用する特異的試験で測定することができる。結果は、ＦｃＲを発現しない野生型ＮＫ−９２細胞と比較される。
【０３２２】
いくつかの実施態様では、ｉｎ  ｖｉｖｏでの抗ＰＳＭＡ構築物の半減期が重要であるが、特定のエフェクター機能（ＣＤＣ及びＡＤＣＣなど）が不必要又は有害である用途のための望ましい候補とならしめる、全てではないがいくつかのエフェクター機能を有する変異体Ｆｃ領域を含む抗ＰＳＭＡ構築物が提供される。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ  ｖｉｖｏ細胞傷害性アッセイを実施して、ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣの活性の低下／枯渇を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実施して、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（したがって恐らくはＡＤＣＣ活性を欠く）が、ＦｃＲｎ結合能を保持していることを確認することができる。ＡＤＣＣを媒介する主要な細胞（すなわち、ＮＫ細胞）がＦｃγＲＩＩＩのみを発現するのに対し、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞でのＦｃＲの発現は、Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)の４６４頁の表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイの非限定的な例が、米国特許第５５００３６２号（例えば、Hellstrom, I. et al. Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)を参照）及びHellstrom, I et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985)；米国特許第５，８２１，３３７号（Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)を参照）に記載されている。代替的に、非放射性アッセイ法を用いてもよい（例えば、フローサイトメトリー用のＡＣＴＩＴＭ非放射性細胞傷害性アッセイ（カリフォルニア州マウンテンビューのＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．；及びＣｙｔｏＴｏｘ９６ＴＭ非放射性細胞傷害性アッセイ（ウィスコンシン州マディソンのＰｒｏｍｅｇａ）。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞は、末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。あるいは、又はさらに、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、Clynes et al. Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998)に開示されるように、例えば動物モデルにおいて、ｉｎ  ｖｉｖｏで評価することができる。抗体がＣ１ｑに結合できず、したがってＣＤＣ活性を欠いていることを確認するために、Ｃ１ｑ結合アッセイを実施することもできる。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号及び国際公開第２００５／１００４０２号のＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照のこと。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを実施してもよい（例えば、Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M. S. et al., Blood 101:1045-1052 (2003)；及びCragg, M. S. and M. J. Glennie, Blood103:2738-2743 (2004)を参照）。ＦｃＲｎ結合及びｉｎ  ｖｉｖｏクリアランス／半減期の決定はまた、当技術分野で知られている方法を使用して実施することができる（例えば、Petkova, S. B. et al., Int’l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)を参照）。
【０３２３】
エフェクター機能が低下した抗体には、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７及び３２９のうちの１つ又は複数の置換を伴うものが含まれる（米国特許第６７３７０５６号）。このようなＦｃ突然変異体には、残基２６５及び２９７のアラニンへの置換を有する、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ突然変異体を含め、アミノ酸２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７位のうちの２つ以上において置換を有するＦｃ突然変異体が含まれる（米国特許第７３３２５８１号）。
【０３２４】
ＦｃＲへの結合が改善又は減少した特定の抗体変異体が記載されている。（例えば、米国特許第６７３７０５６号、国際公開第２００４／０５６３１２号、及びShields et al., J. Biol. Chem.9(2): 65916604 (2001)を参照）。
【０３２５】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物（例えば、完全長抗ＰＳＭＡ抗体）は、ＡＤＣＣを改善する１つ又は複数のアミノ酸置換を含む変異体Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施態様では、変異体Ｆｃ領域は、ＡＤＣＣを改善する１つ又は複数のアミノ酸置換を含み、ここで、置換は、変異体Ｆｃ領域の位置２９８、３３３、及び／又は３３４（残基のＥＵ番号付け）においてである。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物（例えば、完全長抗ＰＳＭＡ抗体）は、その変異体Ｆｃ領域において以下のアミノ酸置換を含む：Ｓ２９８Ａ、Ｅ３３３Ａ、及びＫ３３４Ａ。
【０３２６】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物（例えば、完全長抗ＰＳＭＡ抗体）のＦｃ領域において、例えば米国特許第６１９４５５１号、国際公開第９９／５１６４２号、及びIdusogie et al., J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)に記載のように、改変された（すなわち改善されたか減少した）Ｃ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）をもたらす改変がなされる。
【０３２７】
いくつかの実施態様では、変異体Ｆｃ領域を含む抗ＰＳＭＡ構築物（例えば、完全長抗ＰＳＭＡ抗体）は、半減期を増加させ、かつ／又は新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合を改善する１つ又は複数のアミノ酸置換を含む。増加した半減期及びＦｃＲｎへの改善された結合を有する抗体は、米国特許出願公開第２００５／００１４９３４号（Ａ１）（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載されている。これらの抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する１つ又は複数の置換を伴うＦｃ領域を含む。そのようなＦｃ変異体には、Ｆｃ領域残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４又は４３４のうちの１つ又は複数における置換、例えば、Ｆｃ領域の残基４３４の置換（米国特許第７３７１８２６号）を有するものが含まれる。
【０３２８】
Ｆｃ領域変異体のその他の例に関しては、Duncan & Winter, Nature322:73840 (1988)、米国特許第５６４８２６０号、米国特許第５６２４８２１号、及び国際公開第９４／２９３５１号も参照のこと。
【０３２９】
本明細書に記載のＦｃ変異体のいずれか、又はそれらの組み合わせを含む抗ＰＳＭＡ構築物（完全長抗ＰＳＭＡ抗体など）が企図される。
【０３３０】
抗ＰＳＭＡ構築物のグリコシル化変異体
いくつかの実施態様では、本明細書で提供される抗ＰＳＭＡ構築物は、抗ＰＳＭＡ構築物がグリコシル化される程度を増加又は減少させるように改変される。抗ＰＳＭＡ構築物へのグリコシル化部位の付加又は欠失は、１つ又は複数のグリコシル化部位が作り出されるか又は除去されるように、抗ＰＳＭＡ構築物又はそのポリペプチド部分のアミノ酸配列を改変することによって簡便に達成され得る。
【０３３１】
抗ＰＳＭＡ構築物がＦｃ領域を含む場合、それに結合した炭水化物は改変され得る。哺乳動物細胞によって産生された天然抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７へのＮ結合によって通常結合している分岐状の二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Wright et al., TIBTECH 15:26-32 (1997)を参照。オリゴ糖には、様々な炭水化物、例えばマンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース及びシアル酸、並びに二分岐オリゴ糖構造の「幹」においてＧｌｃＮＡｃに結合したフコースが含まれ得る。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ構築物中のオリゴ糖の修飾が、特定の改善された特性を有する抗ＰＳＭＡ構築物のグリコシル化変異体を作製するために行われ得る。
【０３３２】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物（完全長抗ＰＳＭＡ抗体など）は、Ｆｃ領域に結合した糖鎖構造がフコースを減少させているか、又はフコースを欠いているＦｃ領域を含み、これはＡＤＣＣ機能を改善し得る。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物（完全長抗ＰＳＭＡ抗体など）は、野生型ＣＨＯ細胞（例えば、天然のＦＵＴ８遺伝子を含むＣＨＯ細胞などの天然のグリコシル化パターンを生成するＣＨＯ細胞）で産生された同じ抗ＰＳＭＡ構築物（例えば、完全長抗ＰＳＭＡ抗体）上のフコースの量と比較して、フコースが減少している。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、その上のＮ結合型グリカンの約５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、又は５％未満がフコースを含むものである。例えば、そのような抗ＰＳＭＡ構築物中のフコースの量は、１％から８０％、１％から６５％、５％から６５％、又は２０％から４０％であり得る。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、その上のＮ結合型グリカンのいずれもがフコースを含まないもの、すなわち、抗ＰＳＭＡ構築物が完全にフコースを含まないか、又はフコースを有しないか、又はアフコシル化されているものである。フコースの量は、例えば国際公開第２００８／０７７５４６号に記載されているように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって測定したとき、Ａｓｎ２９７に結合した全ての糖構造（例えば複合体、ハイブリッド、及び高マンノース構造）の合計に対する、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７とは、Ｆｃ領域内のおよそ２９７位（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号付け）に位置するアスパラギン残基を指す；しかしながら、Ａｓｎ２９７は、抗体におけるわずかな配列多様性に起因して、２９７位の約±３アミノ酸上流又は下流、すなわち、２９４位と３００位との間に位置していてもよい。このようなフコシル化変異体は、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）、米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号（協和発酵工業株式会社）を参照。「脱フコシル化」又は「フコース欠損」抗体変異体に関連する刊行物の例は、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号、国際公開第２０００／６１７３９号、国際公開第２００１／２９２４６号、米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号、米国特許出願公開第２００２／０１６４３２８号、米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号、米国特許出願公開第２００４／０１３２１４０号、米国特許出願公開第２００４／０１１０７０４号、米国特許出願公開第２００４／０１１０２８２号、米国特許出願公開第２００４／０１０９８６５号、国際公開第２００３／０８５１１９号、国際公開第２００３／０８４５７０号、国際公開第２００５／０３５５８６号、国際公開第２００５／０３５７７８号、国際公開第２００５／０５３７４２号、国際公開第２００２／０３１１４０号、Okazaki et al., J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004)、Yamane-Ohnuki et al., Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)を含む。脱フコシル化抗体を産生できる細胞株の例は、タンパク質のフコシル化を欠損しているＬｅｃ１３  ＣＨＯ細胞（Ripka et al., Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌの米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号、及びＡｄａｍｓらの国際公開第２００４／０５６３１２号（特に実施例１１））及びノックアウト細胞株、例えばα−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Yamane-Ohnuki et al., Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)、Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006)、及び国際公開第２００３／０８５１０７号を参照）を含む。
【０３３３】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物（完全長抗ＰＳＭＡ抗体など）は、二分されたオリゴ糖を含むグリコシル化変異体であり、例えば、抗ＰＳＭＡ構築物のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分されている。そのような抗ＰＳＭＡ構築物（例えば、完全長抗ＰＳＭＡ抗体）グリコシル化変異体は、減少したフコシル化及び／又は改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。そのような抗体変異体の例は、例えば、国際公開第２００３／０１１８７８号（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔｔら）；米国特許第６６０２６８４号（Ｕｍａｎａら）；米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６号（Ｕｍａｎａら）、及びFerrara et al., Biotechnology and Bioengineering, 93(5): 851861 (2006)に記載されている。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物（完全長抗ＰＳＭＡ抗体など）は、Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖に少なくとも１つのガラクトース残基を含むグリコシル化変異体である。このような抗ＰＳＭＡ構築物のグリコシル化変異体は、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。そのようなグリコシル化変異体は、例えば国際公開第１９９７／３００８７号（Ｐａｔｅｌら）、国際公開第１９９８／５８９６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）、及び国際公開第１９９９／２２７６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。
【０３３４】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物（完全長抗ＰＳＭＡ抗体など）グリコシル化変異体は、ＦｃγＲＩＩＩに結合することができるＦｃ領域を含む。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物（完全長抗ＰＳＭＡ抗体など）のグリコシル化変異体は、ヒトエフェクター細胞の存在下でＡＤＣＣ活性を有するＦｃ領域を含み、あるいはヒト野生型ＩｇＧ１  Ｆｃ領域を含む抗ＰＳＭＡ構築物（完全長抗ＰＳＭＡ抗体など）と比較して、ヒトエフェクター細胞の存在下で増加したＡＤＣＣ活性を有するＦｃ領域を含む。
【０３３５】
抗ＰＳＭＡ構築物のシステイン操作変異体
いくつかの実施態様では、１つ又は複数のアミノ酸残基がシステイン残基で置換されるように操作されている。いくつかの実施態様では、置換された残基は、抗ＰＳＭＡ構築物の表面及び／又は溶媒にアクセス可能な部位で生じる。これらの残基をシステインで置換することにより、反応性チオール基は、それによって抗ＰＳＭＡ構築物のアクセス可能な部位に配置され、薬物部分又はリンカー−薬物部分などの他の部分に抗ＰＳＭＡ構築物をコンジュゲートさせ、抗ＰＳＭＡ免疫コンジュゲート（これらは本明細書の他の場所でさらに詳細に記載されている）を作成するために使用することができる。システイン操作抗ＰＳＭＡ構築物（完全長抗ＰＳＭＡ抗体など）は、米国特許第７５２１５４１号に記載されているように生成され得る。
【０３３６】
誘導体化抗ＰＳＭＡ構築物
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、当技術分野で知られており、容易に入手可能である追加の非タンパク質性部分を含むようにさらに改変されている。本開示の抗ＰＳＭＡ構築物の誘導体化に適した部分には、水溶性ポリマーが含まれるが、これに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例は、限定されるものではないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダムコポリマー）及びデキストラン又はポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド（ｐｒｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｏｘｉｄｅ）／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えばグリセロール）、ポリビニルアルコール、並びにこれらの混合物が挙げられる。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドはその水中での安定性のために製造上の利点を有し得る。ポリマーは任意の分子量のものであってよく、分枝鎖又は非分枝鎖であってよい。誘導体化された抗ＰＳＭＡ構築物に結合するポリマーの数は変動する可能性があり、複数のポリマーが結合している場合、ポリマーは同じ分子でも又は異なる分子でもよい。一般的に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／又は種類は、改善されるべき抗ＰＳＭＡ構築物の特定の特性又は機能、その抗ＰＳＭＡ構築物誘導体が限定条件下での治療に使用されるかどうかなどが含まれるがこれらに限定されない考慮事項に基づいて決定することができる。
【０３３７】
いくつかの実施態様では、放射線への曝露によって選択的に加熱され得る抗ＰＳＭＡ構築物及び非タンパク質性部分のコンジュゲートが提供される。いくつかの実施態様では、非タンパク質性部分はカーボンナノチューブである（Kam et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605 (2005)）。放射線は任意の波長であってよく、通常の細胞に害を及ぼさないが、非タンパク質性部分を抗ＰＳＭＡ構築物−非タンパク質性部分の近位の細胞が死滅される温度まで加熱する波長が含まれるが、これらに限定されない。
【０３３８】
薬学的組成物
本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ構築物又は抗ＰＳＭＡ構築物の組み合わせを含む組成物（薬学的組成物など、本明細書では「薬学的製剤」又は「製剤」とも呼ばれる）も本明細書で提供される。いくつかの実施態様では、組成物は、抗ＰＳＭＡ構築物又は抗ＰＳＭＡ構築物の組み合わせと会合した細胞（エフェクター細胞など、例えば、Ｔ細胞）をさらに含む。いくつかの実施態様では、薬学的組成物は、抗ＰＳＭＡ構築物又は抗ＰＳＭＡ構築物の組み合わせと、薬学的に許容される担体とを含む。いくつかの実施態様では、薬学的組成物は、抗ＰＳＭＡ構築物又は抗ＰＳＭＡ構築物の組み合わせと会合した細胞（エフェクター細胞など、例えば、Ｔ細胞）をさらに含む。さらに他の実施態様では、薬学的組成物は、抗ＰＳＭＡ構築物又は抗ＰＳＭＡ構築物の組み合わせをコードする核酸を含む。
【０３３９】
抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせの適切な製剤は、所望の純度を有する抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせを、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で、任意の薬学的に許容される担体、賦形剤又は安定剤（Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)）と混合することによって得られる。許容される担体、賦形剤、又は安定剤は、用いられる用量及び濃度で受容者に対して非毒性であり、これには、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；防腐剤（オクタデシルジメチオルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；メチル又はプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン又はリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、又はデキストリンを含む、単糖類、二糖類、及び他の糖（炭水化物）；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えばＺｎ−タンパク質錯体）；及び／又はＴＷＥＥＮＴＭ、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳＴＭ、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤が含まれる。例示的な製剤は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる国際公開第９８／５６４８号に記載されている。皮下投与に適合した凍結乾燥製剤は、国際公開第９７／０４８０１号に記載されている。このような凍結乾燥製剤は、適切な希釈剤で高タンパク質濃度に再構成することができ、再構成された製剤は、本明細書において治療される個体に皮下投与され得る。リポフェクチン又はリポソームを使用して、本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせを細胞に送達させることができる。
【０３４０】
いくつかの実施態様では、薬学的組成物は、治療される特定の適応症に必要な抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせに加えて、１つ又は複数の活性化合物を含む。好ましくは、薬学的組成物中の活性化合物は、互いの活性に悪影響を及ぼさない。いくつかの実施態様では、１つ又は複数の活性化合物は、すなわち、抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせに加えて、抗腫瘍剤、成長阻害剤、細胞障害性剤、又は化学療法剤である。このような分子は、意図される目的に対して効果的な量で組み合わされて適切に存在する。このような他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせの量、疾患又は障害又は治療の種類、及び本明細書の他の場所で論じられる他の要因に依存する。これらは一般に、本明細書に記載されるのと同じ投与量及び投与経路で、又はこれまでに使用された投与量の約１から９９％で使用される。
【０３４１】
抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせは、例えば、コアセルベーション技術により又は界面重合により調製されるマイクロカプセルに、例えば、それぞれヒドロキシメチルセルロース又はゼラチンマイクロカプセル及びポリ（メタクリル酸メチル）マイクロカプセルに、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子、及びナノカプセル）に、又はマクロエマルションに封入されていてもよい。そのような技術は、Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)に開示されている。徐放性調製物を調製してもよい。
【０３４２】
抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせの徐放性調製物を調製することができる。徐放性調製物の好適な例としては、抗体（又はその断片）を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられる。このマトリックスは、成形品、例えばフィルム又はマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）又はポリ（ビニルアルコール））、ポリ乳酸（米国特許第３７７３９１９号）、Ｌ−グルタミン酸と−エチル−Ｌ−グルタメートとのコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴＴＭ（乳酸−グリコール酸コポリマー及び酢酸ロイプロリドからなる注射用ミクロスフェア）などの分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、及びポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。エチレン−酢酸ビニル及び乳酸−グリコール酸などのポリマーは１００日間以上の分子放出を可能にするが、特定のヒドロゲルはより短い期間にわたってタンパク質を放出する。封入された抗体が体内に長時間にわたって残留する場合、これらは３７℃での湿気への曝露の結果として、変性又は凝集して、生物学的活性が失われ、免疫原性が変化する可能性がある。関与する機構に応じて、抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせの安定化のための合理的な戦略を考案することができる。例えば、凝集機構が、チオジスルフィド交換による分子間Ｓ−Ｓ結合形成であることが発見された場合、安定化は、スルフヒドリル残基の修飾、酸性溶液からの凍結乾燥、含水量の制御、適切な添加剤の使用、及び特定のポリマーマトリックス組成物の開発によって達成することができる。
【０３４３】
いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせは、クエン酸塩、ＮａＣｌ、酢酸塩、コハク酸塩、グリシン、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）、又は前述の任意の組み合わせを含む緩衝液中に製剤化される。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせは、約１００ｍＭから約１５０ｍＭのグリシンを含む緩衝液中に製剤化される。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせは、約５０ｍＭから約１００ｍＭのＮａＣｌを含む緩衝液中に製剤化される。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせは、約１０ｍＭから約５０ｍＭの酢酸塩を含む緩衝液中に製剤化される。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物は、約１０ｍＭから約５０ｍＭのコハク酸塩を含む緩衝液中に製剤化される。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせは、約０．００５％から約０．０２％のポリソルベート８０を含む緩衝液中に製剤化される。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせは、約５．１から５．６の間のｐＨを有する緩衝液中に製剤化される。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせは、１０ｍＭのクエン酸塩、１００ｍＭのＮａＣｌ、１００ｍＭのグリシン、及び０．０１％ポリソルベート８０を含む緩衝液中に製剤化され、ここで、その製剤はｐＨ５．５である。
【０３４４】
ｉｎ  ｖｉｖｏ投与に使用される薬学的製剤は、無菌でなければならない。これは、例えば、滅菌濾過膜を通した濾過によって容易に達成される。
【０３４５】
抗ＰＳＭＡ構築物を使用する治療方法
本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ構築物、抗ＰＳＭＡ構築物の組み合わせ、及び／又は組成物は、ＰＳＭＡ関連疾患又は障害を治療するために、個体（例えば、ヒトなどの哺乳動物）に投与され得る。いくつかの実施態様では、ＰＭＳＡ関連疾患又は障害は、ＰＳＭＡ発現、ＰＳＭＡ過剰発現、及び／又は異常なＰＳＭＡ活性によって特徴づけられる。例えば、ＰＳＭＡ関連のがんを含むそのような疾患又は障害は、例えば、前立腺がん（ホルモン抵抗性又は転移性前立腺がんなど）、腎細胞がん細胞（腎明細胞がんなど）、子宮がん、又は肝臓がんを含む。
【０３４６】
したがって、本明細書で提供されるのは、個体におけるＰＳＭＡ関連疾患（がんなど）を治療する方法であり、この方法は、本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせを含む組成物（薬学的組成物など）の有効量を個体に投与することを含む。いくつかの実施態様では、組成物は、抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせと会合した細胞（エフェクター細胞など）（本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせを発現するエフェクター細胞など）をさらに含む。いくつかの実施態様では、がんは、例えば、前立腺がん（ホルモン抵抗性又は転移性前立腺がんなど）、腎細胞がん細胞（腎明細胞がんなど）、子宮がん、又は肝臓がんである。いくつかの実施態様では、個体はヒトである。
【０３４７】
いくつかの実施態様では、本方法において使用される抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせは、天然に存在しない。いくつかの実施態様では、本方法において使用される抗ＰＳＭＡ構築物は、完全長抗体、多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＰＳＭＡ構築物、抗ＰＳＭＡキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、抗ＰＳＭＡキメラ抗体−Ｔ細胞受容体構築物（ｃａＴＣＲ）、抗ＰＳＭＡキメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲート、又は本明細書の他の場所でさらに詳細に記載されている任意の他の抗ＰＳＭＡ構築物である。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ及び抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲを含む構築物の組み合わせ（例えば、本明細書の他の場所に記載される抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ＋抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ構築物の組み合わせ）が、本方法において使用される。本明細書に記載の構築物又は構築物の組み合わせのそれぞれは、天然形態のヒトＰＳＭＡ（例えば、がん細胞などの細胞の表面上に発現される）に対して高い特異性を示す。いくつかの実施態様では、本方法において使用される薬学的組成物は、抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせを発現する、又はそれと会合した細胞（エフェクター細胞など）をさらに含む。いくつかの実施態様では、ＰＳＭＡ関連疾患はがんである。いくつかの実施態様では、がんは、例えば、前立腺がん（ホルモン抵抗性又は転移性前立腺がんなど）、腎細胞がん細胞（腎明細胞がんなど）、子宮がん、又は肝臓がんである。いくつかの実施態様では、個体はヒトである。
【０３４８】
本明細書に記載のＰＳＭＡ関連疾患を治療するための方法のいずれかのいくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせは、個体に投与される前に、細胞（免疫細胞など、例えば、Ｔ細胞）にコンジュゲートされる。したがって、提供されるのは、ａ）本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせのいずれか１つを細胞（免疫細胞など、例えば、Ｔ細胞）にコンジュゲートさせて、抗ＰＳＭＡ構築物／細胞コンジュゲートを形成すること、及びｂ）抗ＰＳＭＡ構築物／細胞コンジュゲートを含む組成物の有効量を個体に投与することを含む、個体におけるＰＳＭＡ関連疾患を治療する方法である。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせがコンジュゲートされる細胞は、治療される個体に由来する。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせがコンジュゲートされる細胞は、治療される個体に由来しない。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせは、細胞の表面上の分子への共有結合によって細胞にコンジュゲートされる。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせは、細胞の表面上の分子への非共有結合によって細胞にコンジュゲートされる。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせは、抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせの一部を細胞の外膜に挿入することによって細胞にコンジュゲートされる。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせは、天然に存在しない。いくつかの実施態様では、本方法において使用される抗ＰＳＭＡ構築物は、完全長抗体、多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＰＳＭＡ構築物（タンデムｄｉ−ｓｃＦｖなど）、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲート、又は本明細書の他の場所でさらに詳細に記載されている任意の他の抗ＰＳＭＡ構築物である。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ及び抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲを含む構築物の組み合わせ（例えば、本明細書の他の場所に記載される抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ＋抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ構築物の組み合わせ）が、本方法において使用される。いくつかの実施態様では、ＰＳＭＡ関連疾患はがんである。いくつかの実施態様では、がんは、例えば、前立腺がん（ホルモン抵抗性又は転移性前立腺がんなど）、腎細胞がん細胞（腎明細胞がんなど）、子宮がん、又は肝臓がんである。いくつかの実施態様では、個体はヒトである。
【０３４９】
本明細書に記載のＰＳＭＡ関連疾患を治療するための方法のいずれかのいくつかの実施態様では、治療は、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ、抗ＰＳＭＡタンデム多重特異性ｓｃＦｖ（タンデムｄｉ−ｓｃＦｖなど）、又は本明細書に開示される抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ、又は本明細書に開示される抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ＋抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ構築物の組み合わせをコードする核酸、核酸のセット、ベクター、又はベクターのセットで遺伝子改変されている（すなわち、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏで形質導入又はトランスフェクトされている）細胞（例えば、αβＴ細胞、γδＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞などのＴ細胞）を、必要とするレシピエントに投与することを含む。いくつかの実施態様では、遺伝子改変細胞（例えば、αβＴ細胞、γδＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞などのＴ細胞）は、核酸、核酸のセット、ベクター、又はベクターのセットによってコードされる、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ、抗ＰＳＭＡタンデム多重特異性ｓｃＦｖ（タンデムｄｉ−ｓｃＦｖなど）、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ、又は抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ＋抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ構築物の組み合わせを発現する。いくつかの実施態様では、レシピエントは、ヒト、例えば、ＰＳＭＡ関連疾患を有するか又は有することが疑われるヒトなどの哺乳動物である。
【０３５０】
ＰＳＭＡ関連疾患を治療するための方法のいくつかの実施態様では、治療は、レシピエントへの投与の前に、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ、抗ＰＳＭＡタンデム多重特異性ｓｃＦｖ（タンデムｄｉ−ｓｃＦｖなど）、又は抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲをコードする核酸、核酸のセット、ベクター、又はベクターのセットで、細胞（例えば、αβＴ細胞、γδＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞などのＴ細胞）を遺伝子改変する（すなわち、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏで形質導入又はトランスフェクトする）工程をさらに含む。いくつかの実施態様では、細胞（例えば、αβＴ細胞、γδＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞などのＴ細胞）は、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ又は抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードする、核酸、核酸のセット、ベクター、又はベクターのセットで遺伝子改変されており（すなわち、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏで形質導入又はトランスフェクトされており）、さらに、多重特異性ｓｃＦｖ（タンデムｄｉ−ｓｃＦｖなど）又はＣＳＲをコードする、核酸、核酸のセット、ベクター、又はベクターのセットで遺伝子改変される（すなわち、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏで形質導入又はトランスフェクトされる）。いくつかの実施態様では、多重特異性ｓｃＦｖ（例えば、タンデムｄｉ−ｓｃＦｖ）はＰＳＭＡを標的とする。いくつかの実施態様では、多重特異性ｓｃＦｖ（例えば、タンデムｄｉ−ｓｃＦｖ）は、異なる抗原（例えば、ＰＳＭＡ以外の抗原）を標的とする。いくつかの実施態様では、ＣＳＲは、ＰＳＭＡを標的とする。いくつかの実施態様では、ＣＳＲは、異なる抗原（例えば、ＰＳＭＡ以外の抗原）を標的とする。いくつかの実施態様では、細胞（例えば、αβＴ細胞、γδＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞などのＴ細胞）は、抗ＰＳＭＡタンデム多重特異性ｓｃＦｖ（タンデムｄｉ−ｓｃＦｖなど）又は抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲをコードする、核酸、核酸のセット、ベクター、又はベクターのセットで遺伝子改変されており（すなわち、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏで形質導入又はトランスフェクトされており）、さらに、ＣＡＲ又はｃａＴＣＲをコードする、核酸、核酸のセット、ベクター、又はベクターのセットで遺伝子改変される（すなわち、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏで形質導入又はトランスフェクトされる）。いくつかの実施態様では、ＣＡＲは、ＰＳＭＡを標的とする。いくつかの実施態様では、ＣＡＲは、異なる抗原（例えば、ＰＳＭＡ以外の抗原）を標的とする。いくつかの実施態様では、ｃａＴＣＲは、ＰＳＭＡを標的とする。いくつかの実施態様では、ｃａＴＣＲは、異なる抗原（例えば、ＰＳＭＡ以外の抗原）を標的とする。いくつかの実施態様では、構築物の組み合わせは、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ及び抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ（例えば、本明細書の他の場所に記載される抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ＋抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ構築物の組み合わせ）を含む。
【０３５１】
ＰＳＭＡ関連疾患を治療するための方法のいくつかの実施態様では、治療は、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ、抗ＰＳＭＡタンデム多重特異性ｓｃＦｖ（タンデムｄｉ−ｓｃＦｖなど）、抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ、又は抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ＋抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ構築物の組み合わせ、例えば上記のようなものをコードする、核酸、核酸のセット、ベクター、又はベクターのセットで、細胞を遺伝子改変する（すなわち、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏで形質導入又はトランスフェクトする）工程の前に、個体（例えば、ヒトなどの哺乳動物、例えば、ＰＳＭＡ関連疾患を有するか又は有すると疑われるヒト）から、細胞（例えば、αβＴ細胞、γδＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞などのＴ細胞）を得る（例えば、単離する）工程をさらに含む。いくつかの実施態様では、遺伝子改変された細胞が投与されるレシピエントは、細胞が得られた個体である。このような遺伝子改変免疫細胞は、「自家抗ＰＳＭＡエフェクター細胞」と呼ばれる。いくつかの実施態様では、遺伝子改変された細胞が投与されるレシピエントは、細胞が得られた個体ではない。このような遺伝子改変免疫細胞は、「異種抗ＰＳＭＡエフェクター細胞」と呼ばれる。いくつかの実施態様では、異種抗ＰＳＭＡ細胞は、レシピエントに関して同種異系、同系、又は異種である。
【０３５２】
いくつかの実施態様では、個体は、哺乳動物（例えば、ヒト、非ヒト霊長類（アカゲザル又はカニクイザルなど）、ラット、マウス、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコなど）である。いくつかの実施態様では、個体はヒトである。いくつかの実施態様では、個体は、臨床患者、臨床試験ボランティア、実験動物などである。いくつかの実施態様では、個体は、約６０歳よりも若い（例えば、約５０歳、約４０歳、約３０歳、約２５歳、約２０歳、約１５歳、又は約１０歳のいずれかよりも若いものを含む）。いくつかの実施態様では、個体は、約６０歳よりも年上である（例えば、約７０歳、約７５歳、約８０歳、約８５歳、約９０歳、約９５歳、約１００歳、又は１００歳を超えるいずれか１つよりも年上であるものを含む）。いくつかの実施態様では、個体は、本明細書に記載のＰＳＭＡ関連疾患又は障害（例えば、前立腺がん（ホルモン抵抗性又は転移性前立腺がんなど）、腎細胞がん細胞（腎明細胞がんなど）、子宮がん、又は肝臓がん）のうちの１つ又は複数と診断されるか、あるいは遺伝的にその傾向がある。いくつかの実施態様では、個体は、本明細書に記載の１つ又は複数のＰＳＭＡ関連疾患又は障害に関連する１つ又は複数の危険因子を有する。
【０３５３】
抗ＰＳＭＡ構築物（本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ構築物のいずれか１つなど）又は抗ＰＳＭＡ構築物の組み合わせ（本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ構築物の組み合わせのいずれか１つなど）を、ＰＳＭＡ（細胞表面結合ＰＳＭＡなど）を発現する細胞に送達する方法であって、抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせを含む組成物を個体に投与することを含む方法も提供される。いくつかの実施態様では、送達される抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせは、細胞（エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞など）と会合している。
【０３５４】
ＰＳＭＡ関連のがん、例えば、前立腺がん（ホルモン抵抗性又は転移性前立腺がんなど）、腎細胞がん細胞（明細胞腎細胞がんなど）、子宮がん、又は肝臓がん又は他の任意のＰＳＭＡ関連疾患、例えば、ＰＳＭＡ発現を示す疾患の多くの診断方法及びそれらの疾患の臨床描写は当技術分野で知られている。そのような方法には、例えば、免疫組織化学、ＰＣＲ、及び蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）が含まれるが、これらに限定されない。
【０３５５】
いくつかの実施態様では、ＰＳＭＡ関連疾患又は障害、例えば、ＰＳＭＡ発現を伴う疾患を治療するために、本開示の抗ＰＳＭＡ構築物、抗ＰＳＭＡ構築物の組み合わせ、及び／又は組成物は、第２、第３、又は第４の薬剤（例えば、抗腫瘍剤、成長阻害剤、細胞障害性剤、又は化学療法剤を含む）と組み合わせて投与される。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせは、罹患細胞（がん細胞など）上でのＰＳＭＡの発現を増加させる薬剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施態様では、薬剤は、例えば、トポテカン、エトポシド、シスプラチン、パクリタキセル、及びビンブラスチンを含む化学療法剤である。
【０３５６】
がん治療の有効性は、例えば、限定されないが、例えば、腫瘍の退縮、腫瘍の重量又は大きさの縮小、進行までの時間、生存期間、無増悪生存期間、全奏効率、奏効期間、生活の質、ＰＳＭＡタンパク質発現及び／又はＰＳＭＡ活性を含む様々な周知の方法によって評価することができる。治療の有効性を決定するためのアプローチは、例えば、放射線画像による応答の測定を含め、採用することができる。
【０３５７】
いくつかの実施態様では、治療方法の有効性は、式１００−（Ｔ／Ｃｘ１００）を使用して計算された、腫瘍増殖阻害のパーセンテージ（％ＴＧＩ）として測定され、ここで、Ｔは治療された腫瘍の平均相対腫瘍体積であり、Ｃは未治療腫瘍の平均相対腫瘍体積である。いくつかの実施態様では、％ＴＧＩは、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、又は９５％超（例えば、最大１００％）のいずれか１つであり、これらの値の間の任意の範囲を含む。
【０３５８】
抗ＰＳＭＡ構築物の投薬及び投与
個体（ヒトなど）に投与される、本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせを含む薬学的組成物の用量は、特定の組成物、投与形式、及び治療される疾患の種類によって変動し得る。いくつかの実施態様では、薬学的組成物の量は、客観的応答（例えば、固形腫瘍の場合、部分奏効（ＰＲ）又は完全奏効（ＣＲ）、例えば、Eisenhauer et al. (2009) European Journal of Cancer, 45 (2): 228-247又はTherasse et al. (2000) J. Nat’l. Cancer Inst. 92(3): 205-216に記載されているＲＥＣＩＳＴ基準による）をもたらすのに効果的である。いくつかの実施態様では、それを必要とする個体に投与される抗ＰＳＭＡ構築物（又は構築物の組み合わせ）を含む組成物の量は（例えば、単剤として投与される場合）、本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ構築物（又は構築物の組み合わせ）を含む薬学的組成物で治療された個体の集団の中で、約２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６４％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、又は９０％のいずれか１つを超える全奏功率を生成するのに十分である。本明細書に記載の方法の治療に対する個体の応答は、例えば、ＲＥＣＩＳＴレベルに基づいて決定することができる。
【０３５９】
いくつかの実施態様では、それを必要とする個体に投与される薬学的組成物の量は、個体の無増悪生存期間を延長するのに十分である。いくつかの実施態様では、それを必要とする個体に投与される薬学的組成物の量は、個体の全生存期間を延長するのに十分である。いくつかの実施態様では、それを必要とする個体に投与される組成物の量は、抗ＰＳＭＡ構築物組成物で治療された個体の集団の中で、約５０％、６０％、７０％、又は７７％のいずれかよりも多い臨床的利益率を生み出すのに十分である。
【０３６０】
いくつかの実施態様では、それを必要とする個体に投与される組成物の量（例えば、単剤として、又は第２、第３、及び／若しくは第４の薬剤と組み合わせて）は、治療前の同じ対象における対応する腫瘍の大きさ、がん細胞の数、若しくは腫瘍増殖速度と比較した場合、又は治療を受けていない他の対象における対応する活性と比較した場合、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％（これらの値の間の任意の範囲を含む）のいずれかまで、腫瘍の大きさを減少させ、がん細胞の数を減少させ、又は腫瘍の増殖速度を減少させるのに十分である。精製された酵素を用いたｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ、細胞ベースのアッセイ、動物モデル、又はヒト試験などの標準的な方法を使用して、この効果の大きさを測定することができる。
【０３６１】
いくつかの実施態様では、薬学的組成物中の抗ＰＳＭＡ構築物（例えば、完全長抗ＰＳＭＡ抗体、多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ、抗ＰＳＭＡキメラ抗体−Ｔ細胞受容体構築物（ｃａＴＣＲ）、抗ＰＳＭＡキメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲート、又は本明細書の他の場所でさらに詳細に記載されている他の任意の抗ＰＳＭＡ構築物若しくは構築物の組み合わせ）の量は、毒性学的効果を誘導するレベル未満である。いくつかの実施態様では、薬学的組成物中の抗ＰＳＭＡ構築物（例えば、完全長抗ＰＳＭＡ抗体、多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ、抗ＰＳＭＡキメラ抗体−Ｔ細胞受容体構築物（ｃａＴＣＲ）、抗ＰＳＭＡキメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲート、又は本明細書の他の場所でさらに詳細に記載されている他の任意の抗ＰＳＭＡ構築物若しくは構築物の組み合わせ）の量は、組成物が個人に投与されるときに潜在的な副作用が制御され得るか又は許容され得るレベルにある。
【０３６２】
いくつかの実施態様では、それを必要とする個体に投与される薬学的組成物の量は、同じ投薬レジメンに従った組成物の最大耐量（ＭＴＤ）に近い。いくつかの実施態様では、組成物の量は、ＭＴＤの約８０％、９０％、９５％、又は９８％のいずれかよりも多い。
【０３６３】
いくつかの実施態様では、薬学的組成物中の抗ＰＳＭＡ構築物（例えば、完全長抗ＰＳＭＡ抗体、多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ、抗ＰＳＭＡキメラ抗体−Ｔ細胞受容体構築物（ｃａＴＣＲ）、抗ＰＳＭＡキメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲート、又は本明細書の他の場所でさらに詳細に記載されている他の任意の抗ＰＳＭＡ構築物若しくは構築物の組み合わせ）の量は、約０．００１μｇから約１０００μｇの範囲に含まれる。
【０３６４】
いくつかの実施態様では、組成物中の抗ＰＳＭＡ構築物（例えば、完全長抗ＰＳＭＡ抗体、多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲート、又は本明細書の他の場所でさらに詳細に記載されている任意の他の抗ＰＳＭＡ構築物若しくは構築物の組み合わせ）の有効量は、総体重の約０．１μｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇの範囲にある。
【０３６５】
本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせを含む薬学的組成物は、例えば、静脈内、門脈内、動脈内、腹腔内、肝内、肝動脈注入、肺内、経口、吸入、小胞内、筋肉内、気管内、皮下、眼内、髄腔内、経粘膜、及び経皮を含む、任意の既知の利用可能な経路を介して個体（ヒトなど）に投与され得る。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ構築物を含む薬学的組成物の持続連続放出製剤を使用することができる。
【０３６６】
抗ＰＳＭＡエフェクター細胞療法
いくつかの実施態様では、ＰＳＭＡ関連疾患又は障害を治療する方法は、抗ＰＳＭＡエフェクター細胞（例えば、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲエフェクター細胞、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲエフェクター細胞、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲプラスタンデムｄｉ−ｓｃＦｖエフェクター細胞、及び／又は抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲプラスＣＳＲエフェクター細胞）を使用して、エフェクター細胞（一次Ｔ細胞など）の特異性をＰＳＭＡ（例えば、がん細胞などの細胞の表面上に発現されるか、又は細胞の表面と会合したＰＳＭＡ）にリダイレクトすることを含む。したがって、本明細書で提供されるのは、個体における標的細胞集団及び／又は組織（例えば、ＰＳＭＡ発現細胞を含む標的細胞集団及び／又は組織）に対するエフェクター細胞媒介性応答（Ｔ細胞媒介性免疫応答など）を刺激する方法であり、該方法は、本明細書に記載の抗ＰＳＭＡエフェクター細胞（Ｔ細胞など）を個体に投与する工程を含む。
【０３６７】
抗ＰＳＭＡエフェクター細胞（Ｔ細胞など）、例えば、本明細書の他の場所でさらに詳細に記載されているようなものなどは、それを必要とする個体（例えば、がんなどのＰＳＭＡ関連疾患又は障害を有するか又は有すると疑われる個体）に注入することができる。注入された抗ＰＳＭＡエフェクター細胞は、個体におけるＰＳＭＡ発現細胞を死滅させることができる。治療用抗体とは異なり、抗ＰＳＭＡエフェクター細胞（Ｔ細胞など）はｉｎ  ｖｉｖｏで複製することができ、結果として持続的な腫瘍制御につながる可能性のある長期的な持続性が得られる。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡエフェクター細胞（Ｔ細胞など）は、任意のさらなる腫瘍形成又は増殖を阻害するために再活性化され得る特定のメモリーＴ細胞に発達する。
【０３６８】
本明細書に記載の抗ＰＳＭＡエフェクター細胞（Ｔ細胞など）はまた、個体におけるｅｘ  ｖｉｖｏ免疫化及び／又はｉｎ  ｖｉｖｏ療法のための一種のワクチンとしても機能し得る。いくつかの実施態様では、個体は哺乳動物である。いくつかの実施態様では、哺乳動物は、ヒト又は非ヒト霊長類（アカゲザル又はカニクイザルなど）である。
【０３６９】
ｅｘ  ｖｉｖｏ免疫化に関しては、細胞を個体に投与する前に、以下のうち少なくとも１つがｉｎ  ｖｉｔｒｏで行われる：ｉ）細胞の増殖、ｉｉ）抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ又は抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードする核酸を細胞に導入すること、及び／又はｉｉｉ）細胞の凍結保存。
【０３７０】
ｅｘ  ｖｉｖｏの手順は当技術分野でよく知られており、以下でより完全に議論される。簡潔には、細胞（例えば、αβＴ細胞、γδＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞などのＴ細胞）が、個体（例えば、哺乳動物、好ましくはヒト）から単離され、本明細書に開示される、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ、抗ＰＳＭＡタンデム多重特異性ｓｃＦｖ（抗ＰＳＭＡタンデムｄｉ−ｓｃＦｖなど）、及び／又は抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲをコードする、核酸、核酸のセット、ベクター、又はベクターのセットで遺伝子改変される（すなわち、例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで形質導入又はトランスフェクトされる）。
【０３７１】
いくつかの実施態様では、細胞（例えば、αβＴ細胞、γδＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞などのＴ細胞）は、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ又は抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードする、核酸、核酸のセット、ベクター、又はベクターのセットで遺伝子改変されており（すなわち、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏで形質導入又はトランスフェクトされており）、さらに、多重特異性ｓｃＦｖ（タンデムｄｉ−ｓｃＦｖなど）又はＣＳＲをコードする、核酸、核酸のセット、ベクター、又はベクターのセットで遺伝子改変される（すなわち、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏで形質導入又はトランスフェクトされる）。いくつかの実施態様では、細胞（例えば、αβＴ細胞、γδＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞などのＴ細胞）は、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ又は抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ及び多重特異性ｓｃＦｖ（タンデムｄｉ−ｓｃＦｖなど）をコードする、核酸、核酸のセット、ベクター、又はベクターのセットで遺伝子改変されている（すなわち、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏで形質導入又はトランスフェクトされている）。いくつかの実施態様では、細胞（例えば、αβＴ細胞、γδＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞などのＴ細胞）は、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ又は抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ及びＣＳＲをコードする、核酸、核酸のセット、ベクター、又はベクターのセットで遺伝子改変されている（すなわち、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏで形質導入又はトランスフェクトされている）。いくつかの実施態様では、多重特異性ｓｃＦｖ（例えば、タンデムｄｉ−ｓｃＦｖ）はＰＳＭＡを標的とする。いくつかの実施態様では、多重特異性ｓｃＦｖ（例えば、タンデムｄｉ−ｓｃＦｖ）は、異なる抗原（例えば、ＰＳＭＡ以外の抗原）を標的とする。いくつかの実施態様では、ＣＳＲは、ＰＳＭＡを標的とする。いくつかの実施態様では、ＣＳＲは、異なる抗原（例えば、ＰＳＭＡ以外の抗原）を標的とする。
【０３７２】
いくつかの実施態様では、細胞（例えば、αβＴ細胞、γδＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞などのＴ細胞）は、抗ＰＳＭＡタンデム多重特異性ｓｃＦｖ（タンデムｄｉ−ｓｃＦｖなど）又は抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲをコードする、核酸、核酸のセット、ベクター、又はベクターのセットで遺伝子改変されており（すなわち、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏで形質導入又はトランスフェクトされており）、さらに、ＣＡＲ又はｃａＴＣＲをコードする、核酸、核酸のセット、ベクター、又はベクターのセットで遺伝子改変される（すなわち、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏで形質導入又はトランスフェクトされる）。いくつかの実施態様では、細胞（例えば、αβＴ細胞、γδＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞などのＴ細胞）は、抗ＰＳＭＡタンデム多重特異性ｓｃＦｖ（タンデムｄｉ−ｓｃＦｖなど）又は抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ及びＣＡＲをコードする、核酸、核酸のセット、ベクター、又はベクターのセットで遺伝子改変されている（すなわち、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏで形質導入又はトランスフェクトされている）。いくつかの実施態様では、細胞（例えば、αβＴ細胞、γδＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞などのＴ細胞）は、抗ＰＳＭＡタンデム多重特異性ｓｃＦｖ（タンデムｄｉ−ｓｃＦｖなど）又は抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ及びｃａＴＣＲをコードする、核酸、核酸のセット、ベクター、又はベクターのセットで遺伝子改変されている（すなわち、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏで形質導入又はトランスフェクトされている）。いくつかの実施態様では、ＣＡＲは、ＰＳＭＡを標的とする。いくつかの実施態様では、ＣＡＲは、異なる抗原（例えば、ＰＳＭＡ以外の抗原）を標的とする。いくつかの実施態様では、ｃａＴＣＲは、ＰＳＭＡを標的とする。いくつかの実施態様では、ｃａＴＣＲは、異なる抗原（例えば、ＰＳＭＡ以外の抗原）を標的とする。
【０３７３】
いくつかの実施態様では、上記のように遺伝子改変されている（すなわち、例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで形質導入又はトランスフェクトされている）細胞（例えば、αβＴ細胞、γδＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞などのＴ細胞）は、レシピエントに投与される。いくつかの実施態様では、レシピエントは、ヒト、例えば、ＰＳＭＡ関連疾患を有するか又は有することが疑われるヒトなどの哺乳動物である。いくつかの実施態様では、遺伝子改変された細胞が投与されるレシピエントは、細胞が得られた個体である。このような遺伝子改変免疫細胞は、「自家抗ＰＳＭＡエフェクター細胞」と呼ばれる。いくつかの実施態様では、遺伝子改変された免疫細胞が投与されるレシピエントは、細胞が得られた個体ではない。このような遺伝子改変免疫細胞は、「異種抗ＰＳＭＡエフェクター細胞」と呼ばれる。いくつかの実施態様では、異種抗ＰＳＭＡエフェクター細胞は、レシピエントに関して同種異系、同系、又は異種である。
【０３７４】
造血幹細胞及び前駆細胞のｅｘ  ｖｉｖｏ増殖の手順は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第５１９９９４２号に記載されている。他の適切な方法も当技術分野で知られており、本開示は、細胞のｅｘ  ｖｉｖｏ増殖の特定の方法に限定されるものではない。簡潔には、Ｔ細胞のｅｘ  ｖｉｖｏ培養及び増殖は、（１）末梢血採取又は骨髄外植片からの個体（例えば、ヒトなどの哺乳動物）からのＣＤ３４＋造血幹細胞及び前駆細胞を収集すること；及び（２）そのような細胞をｅｘ  ｖｉｖｏで増殖させることを含む。米国特許第５，１９９，９４２号に記載されている細胞増殖因子に加えて、ｆｌｔ３−Ｌ、ＩＬ−１、ＩＬ−３及びｃ−ｋｉｔリガンドなどの他の因子を、細胞の培養及び増殖に使用することができる。
【０３７５】
ｅｘ  ｖｉｖｏ免疫化の観点から細胞ベースのワクチンを使用することに加えて、本開示はまた、それを必要とする個体（例えば、がんなどのＰＳＭＡ関連疾患又は障害を有するか又は有すると疑われる個体）において抗原に対する免疫応答を誘導するｉｎ  ｖｉｖｏ免疫化のための組成物及び方法を提供する。
【０３７６】
本開示の抗ＰＳＭＡエフェクター細胞（Ｔ細胞など）は、単独で、又は希釈剤及び／又はＩＬ−２若しくは他のサイトカイン若しくは細胞集団などの他の成分と組み合わせた薬学的組成物として投与され得る。そのような組成物は、中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水などの緩衝液；グルコース、マンノース、スクロース又はデキストラン、マンニトールなどの炭水化物；タンパク質；ポリペプチド又はグリシンなどのアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡ又はグルタチオンなどのキレート剤；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；及び防腐剤を含み得る。いくつかの実施態様では、エフェクター細胞（Ｔ細胞など）の組成物は、静脈内投与のために製剤化される。
【０３７７】
それを必要とする個体に投与される本開示の抗ＰＳＭＡエフェクター細胞（Ｔ細胞など）の正確な量は、個体の年齢、体重、腫瘍の大きさ、疾患の病期及び／又は重症度、転移の有無、個体の状態、並びにその他の要因を考慮して、医師によって判断され得る。いくつかの実施態様では、本開示の抗ＰＳＭＡエフェクター細胞（Ｔ細胞など）を含む薬学的組成物は、約１０４から約１０９細胞／ｋｇ体重の投与量で、例えば、約１０４から約１０５、約１０５から約１０６、約１０６から約１０７、約１０７から約１０８、又は約１０８から約１０９細胞／ｋｇ体重（これらの範囲内の全ての整数値を含む）のいずれかの投与量で投与される。抗ＰＳＭＡエフェクター細胞（Ｔ細胞など）組成物もまた、これらの投与量で複数回投与され得る。細胞は、免疫療法で一般的に知られている注入技術を使用して投与することができる（例えば、Rosenberg et al., New Eng. J. of Med. 319:1676, 1988を参照）。特定の患者のための最適な投与量及び治療レジメンは、疾患の兆候について患者を監視し、それに応じて治療を調整することにより、医学の当業者によって容易に決定することができる。
【０３７８】
いくつかの実施態様では、本明細書に記載の活性化抗ＰＳＭＡエフェクター細胞（Ｔ細胞など）を個体に投与し、その後、採血し（又はアフェレーシスを実施し）、再採取された血液から得られた本明細書に記載の抗ＰＳＭＡエフェクター細胞（例えば、抗ＰＳＭＡ  Ｔ細胞）を活性化し、活性化及び増殖された抗ＰＳＭＡエフェクター細胞（例えば、抗ＰＳＭＡ  Ｔ細胞）を個体に再注入することが望ましい場合がある。いくつかの実施態様では、このプロセスは、数週間ごとに複数回実施される。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡエフェクター細胞（例えば、抗ＰＳＭＡ  Ｔ細胞）は、１０ｃｃから４００ｃｃの採血から活性化される。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡエフェクター細胞（例えば、抗ＰＳＭＡ  Ｔ細胞）は、２０ｃｃ、３０ｃｃ、４０ｃｃ、５０ｃｃ、６０ｃｃ、７０ｃｃ、８０ｃｃ、９０ｃｃ、又は１００ｃｃの採血から活性化される。
【０３７９】
本明細書に記載の抗ＰＳＭＡエフェクター細胞（例えば、抗ＰＳＭＡ  Ｔ細胞）の投与は、エアロゾル吸入、注射、摂取、輸血、注入又は移植を含む任意の好都合な方法で実施され得る。本明細書に記載の抗ＰＳＭＡエフェクター細胞（例えば、抗ＰＳＭＡ  Ｔ細胞）を含む組成物は、患者に対して、皮下、皮内、皮下、腫瘍内、節内、髄内、筋肉内、静脈内（ｉ．ｖ．）注射によって、又は腹腔内に投与され得る。いくつかの実施態様では、本開示の抗ＰＳＭＡエフェクター細胞（例えば、抗ＰＳＭＡ  Ｔ細胞）を含む組成物は、腫瘍、リンパ節、又は疾患部位に直接静脈内注射によって投与される。
【０３８０】
提供されるのは、本開示の抗ＰＳＭＡエフェクター細胞（例えば、抗ＰＳＭＡ  Ｔ細胞）を含む組成物の有効量を個体に投与することを含む、個体のＰＳＭＡ関連疾患を治療する方法である。いくつかの実施態様では、ＰＳＭＡ関連疾患はがんである。いくつかの実施態様では、がんは、例えば、前立腺がん（ホルモン抵抗性又は転移性前立腺がんなど）、腎細胞がん細胞（腎明細胞がんなど）、子宮がん、又は肝臓がんである。いくつかの実施態様では、個体はヒトである。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡエフェクター細胞（例えば、抗ＰＳＭＡ  Ｔ細胞）を含む組成物が投与される個体は、ＰＳＭＡ関連疾患を有する（例えば、診断されている）か、又は有すると疑われる個体である。いくつかの実施態様では、ＰＳＭＡ関連疾患は、少なくとも１つの従来の治療に対して抵抗性である。いくつかの実施態様では、抗ＰＳＭＡエフェクター細胞（例えば、抗ＰＳＭＡ  Ｔ細胞）を含む組成物が投与される個体は、ＰＳＭＡ関連疾患を有し（例えば、診断されており）、かつＰＳＭＡ関連疾患の少なくとも１つの従来の治療後に再発した個体である。
【０３８１】
がん
本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ構築物及びエフェクター細胞は、がん、例えば、ＰＳＭＡ関連がんの治療において使用され得る。本明細書に記載の方法のいずれかを使用して治療することができるがんには、血管新生されていない、又はまだ実質的に血管新生されていない腫瘍、並びに血管新生された腫瘍が含まれる。がんは、非固形腫瘍（例えば、白血病及びリンパ腫などの血液腫瘍など）を含み得るか、又は固形腫瘍を含み得る。本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ構築物及びエフェクター細胞で治療されるがんの種類には、限定されないが、癌腫、芽細胞腫、及び肉腫、並びに白血病又はリンパ性悪性腫瘍、良性及び悪性腫瘍、並びに黒色腫などの悪性腫瘍が含まれる。成人の腫瘍／がん及び小児の腫瘍／がんも考慮される。
【０３８２】
血液がんは、血液又は骨髄のがんである。血液学的（又は血行性）がんの例には、白血病、例えば、急性白血病（急性リンパ性白血病、急性骨髄球性白血病、急性骨髄性白血病、並びに骨髄芽球性白血病、前骨髄球性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病及び赤白血病など）、慢性白血病（慢性骨髄性（顆粒球性）白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病など）、真性多血症、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫（無痛性及び高悪性度の形態）、多発性骨髄腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、重鎖病、骨髄異形成症候群、有毛細胞白血病、及び脊髄形成異常症が挙げられる。
【０３８３】
固形腫瘍は、通常、嚢胞又は液体領域を含まない組織の異常な塊である。固形腫瘍には良性のものもあれば、悪性のものもある。固形腫瘍の異なる種類は、それらを形成する細胞の種類（肉腫、癌腫、リンパ腫など）に対して命名される。肉腫及び癌などの固形腫瘍の例としては、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、及び他の肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、リンパ系腫瘍、肝臓がん、膵臓がん、子宮がん、乳がん、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、肝細胞癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、褐色細胞腫、皮脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、ヘパトーマ、胆管癌、絨毛癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸がん（例えば、子宮頸癌及び前浸潤性子宮頸部異形成）、肛門、肛門管、又は肛門直腸のがん、膣がん、外陰部がん（例えば、扁平上皮癌、上皮内癌、腺癌、及び線維肉腫）、陰茎がん、中咽頭がん、頭部がん（例えば、扁平上皮癌）、頸部がん（例えば、扁平上皮癌）、精巣がん（例えば、セミノーマ、奇形腫、胎児性癌、奇形癌、絨毛癌、肉腫、ライディッヒ細胞腫瘍、線維腫、線維腺腫、腺腫様腫瘍及び脂肪腫）、膀胱癌、黒色腫、子宮のがん（例えば、子宮内膜癌）、尿路上皮がん（例えば、扁平上皮癌、移行上皮癌、腺癌、尿管がん及び膀胱がん）、及びＣＮＳ腫瘍（例えば、神経膠腫（例えば、脳幹神経膠腫及び混合神経膠腫）、神経膠芽腫（多形神経膠芽腫としても知られる）、星状細胞腫、ＣＮＳリンパ腫、胚細胞腫、髄芽細胞腫、シュワン腫頭蓋咽頭腫（ｃｒａｎｉｏｐｈａｒｙｏｇｉｏｍａ）、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫（ｍｅｎａｎｇｉｏｍａ）、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫及び脳転移）が挙げられる。
【０３８４】
いくつかの実施態様では、ＰＳＭＡ過剰発現がんは前立腺がんである。いくつかの実施態様では、前立腺がんは腺癌である。いくつかの実施態様では、前立腺がんは、肉腫、神経内分泌腫瘍、小細胞がん、腺管がん、又はリンパ腫である。いくつかの実施態様では、前立腺がんは、Ｗｈｉｔｍｏｒｅ−Ｊｅｗｅｔｔ病期分類システム、ＴＮＭ（すなわち、腫瘍、リンパ節、転移）病期分類システム、又はＡＵＡ（Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｗｈｉｔｍｏｒｅ−Ｊｅｗｅｔｔ）病期分類システムに従って、Ａ、Ｂ、Ｃ、又はＤの４つの段階のいずれかにある。いくつかの実施態様では、前立腺がんはステージＡの前立腺がん（例えば、がんは直腸検査中に触知することができない）である。いくつかの実施態様では、前立腺がんはステージＢの前立腺がんである（例えば、腫瘍は前立腺内により多くの組織を含み、直腸検査中に触知することができるか、あるいはＰＳＡレベルが高いために行われる生検で発見される）。いくつかの実施態様では、前立腺がんはステージＣの前立腺がん（例えば、がんが前立腺の外に出て近くの組織に転移している）である。いくつかの実施態様では、前立腺がんはステージＤの前立腺がんである。いくつかの実施態様において、前立腺がんは、アンドロゲン非依存性前立腺がん（ＡＩＰＣ）である。いくつかの実施態様では、前立腺がんは、アンドロゲン依存性前立腺がんである。いくつかの実施態様では、前立腺がんは、ホルモン療法に抵抗性である。
【０３８５】
がん治療は、例えば、腫瘍の退縮、腫瘍の重量又は大きさの縮小、進行までの時間、生存期間、無増悪生存期間、全奏効率、奏効期間、生活の質、タンパク質発現及び／又は活性によって評価することができる。治療の有効性を決定するためのアプローチは、例えば、放射線画像による応答の測定を含め、採用することができる。
【０３８６】
診断及び画像化のための方法
本明細書に記載の標識された抗ＰＳＭＡ構築物（例えば、がん細胞などの細胞の表面上に発現されるＰＳＭＡに特異的に結合する構築物）は、診断目的のために、例えば、ＰＳＭＡ関連疾患又は障害、例えば、ＰＳＭＡの発現、異常な発現及び／又は活性に関連する疾患又は障害の進行を検出する、診断する、監視するために、かつ／あるいはＰＳＭＡ関連疾患の治療に対する患者の応答を監視するために使用され得る。例示的なＰＳＭＡ関連疾患又は障害には、本明細書に記載の疾患及び障害、例えば、前立腺がん（ホルモン抵抗性又は転移性前立腺がんなど）、腎細胞がん細胞（腎明細胞がんなど）、子宮がん、又は肝臓がんを含む）のいずれかが含まれる。例えば、本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ構築物は、ｉｎ  ｓｉｔｕ、ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、及びｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断アッセイ又は画像化アッセイにおいて使用することができる。
【０３８７】
いくつかの実施態様では、個体（例えば、ヒトなどの哺乳動物、又はアカゲザル若しくはカニクイザルなどの非ヒト霊長類）におけるＰＳＭＡの発現又は異常な発現に関連する疾患又は障害を診断する方法が提供される。本方法は、個体においてＰＳＭＡを異常に発現する細胞を検出することを含む。いくつかの実施態様では、（ａ）本明細書に記載の標識された抗ＰＳＭＡ構築物の有効量を個体に投与すること；（ｂ）閾値レベルを超える標識のレベルが、個体が疾患又は障害を有することを示すように、個体における標識のレベルを決定することを含む、個体（例えば、ヒトなどの哺乳動物又はアカゲザル若しくはカニクイザルなどの非ヒト霊長類）におけるＰＳＭＡ関連疾患又は障害を診断する方法が提供される。閾値レベルは、例えば、疾患又は障害を有する個体の第１のセット及び疾患又は障害を有しない個体の第２のセットにおいて、本明細書に記載の診断方法に従って標識を検出すること、及び閾値を、第１のセットと第２のセットとの間の識別を可能にするレベルに設定することを含む様々な方法によって決定することができる。いくつかの実施態様では、閾値レベルはゼロであり、本方法は、個体における標識の存在又は非存在を決定することを含む。いくつかの実施態様では、方法は、工程（ａ）の投与後、標識された抗ＰＳＭＡ構築物が、個体において、ＰＳＭＡが発現している部位に優先的に集結できるようにするために（かつ結合していない標識された抗ＰＳＭＡ構築物が除去されるように）、ある時間間隔を待つことをさらに含む。いくつかの実施態様では、本方法は、標識のバックグラウンドレベルを差し引くことをさらに含む。バックグラウンドレベルは、例えば、標識された抗ＰＳＭＡ構築物の投与前に、個体における標識を検出すること、又は、疾患又は障害を有しない個体において、本明細書に記載の診断方法に従って標識を検出することを含む、様々な方法によって決定することができる。いくつかの実施態様では、疾患又は障害はがんである。いくつかの実施態様では、がんは、例えば、前立腺がん（ホルモン抵抗性又は転移性前立腺がんなど）、腎細胞がん細胞（腎明細胞がんなど）、子宮がん、又は肝臓がんからなる群から選択される。いくつかの実施態様では、個体はヒトである。いくつかの実施態様では、個体は、ＰＳＭＡの発現、異常な発現、及び／又は活性に関連する疾患又は障害を有することが疑われる。
【０３８８】
いくつかの実施態様では、（ａ）本明細書に記載の実施態様のいずれかによる標識された抗ＰＳＭＡ構築物を、個体から得られた、又は由来する試料（均質化された組織など）と接触させること；及び（ｂ）閾値レベルを超える標識された抗ＰＳＭＡ構築物と結合した細胞の数の値が、個体が疾患又は障害を有することを示すように、試料中の標識された抗ＰＳＭＡ構築物と結合した細胞の数を決定することを含む、個体（例えば、ヒトなどの哺乳動物又はアカゲザル若しくはカニクイザルなどの非ヒト霊長類）におけるＰＳＭＡ関連疾患又は障害を診断する方法が提供される。閾値レベルは、例えば、疾患又は障害を有する個体の第１のセット及び疾患又は障害を有しない個体の第２のセットにおいて、本明細書に記載の診断方法に従って、標識された抗ＰＳＭＡ構築物と結合した細胞の数を決定すること、及び閾値を、第１のセットと第２のセットとの間の識別を可能にするレベルに設定することを含む様々な方法によって決定することができる。いくつかの実施態様では、閾値レベルはゼロであり、本方法は、試料中の標識された抗ＰＳＭＡ構築物と結合した細胞の存在又は非不在を決定することを含む。いくつかの実施態様では、本方法は、標識された抗ＰＳＭＡ構築物と結合した細胞の数のバックグラウンドレベルを差し引くことをさらに含む。バックグラウンドレベルは、例えば、標識された抗ＰＳＭＡ構築物の投与前に、個体における標識された抗ＰＳＭＡ構築物と結合した細胞の数を決定すること、又は、疾患又は障害を有しない個体において、本明細書に記載の診断方法に従って、標識された抗ＰＳＭＡ構築物と結合した細胞の数を決定することを含む、様々な方法によって決定することができる。いくつかの実施態様では、疾患又は障害はがんである。いくつかの実施態様では、がんは、例えば、前立腺がん（ホルモン抵抗性又は転移性前立腺がんなど）、腎細胞がん細胞（腎明細胞がんなど）、子宮がん、又は肝臓がんからなる群から選択される。いくつかの実施態様では、がんは転移性である。いくつかの実施態様では、個体はヒトである。いくつかの実施態様では、個体は、ＰＳＭＡ関連疾患又は障害を有することが疑われる。
【０３８９】
いくつかの実施態様では、（ａ）本明細書に記載の実施態様のいずれかによる標識された抗ＰＳＭＡ構築物を、個体に由来する組織試料と接触させること；及び（ｂ）閾値レベルを超える標識された抗ＰＳＭＡ構築物と結合した、組織試料中の細胞の数の値が、個体がＰＳＭＡ関連がんを有することを示すように、標識された抗ＰＳＭＡ構築物と結合した、組織試料中の細胞の数を決定することを含む、個体（例えば、ヒトなどの哺乳動物又はアカゲザル若しくはカニクイザルなどの非ヒト霊長類）におけるＰＳＭＡ関連がんを診断する方法が提供される。閾値レベルは、例えば、ＰＳＭＡ関連するがんを有する個体の第１のセットからの組織試料及びＰＳＭＡ関連がんを有しない個体の第２のセットからの組織試料において、本明細書に記載の診断方法に従って、標識された抗ＰＳＭＡ構築物と結合した細胞の数を決定すること、及び閾値を、第１のセットと第２のセットからの組織試料間の識別を可能にするレベルに設定することを含む様々な方法によって決定することができる。いくつかの実施態様では、閾値レベルはゼロであり、本方法は、標識された抗ＰＳＭＡ抗体部分と結合した、組織試料中の細胞の存在又は非不在を決定することを含む。いくつかの実施態様では、本方法は、標識された抗ＰＳＭＡ構築物と結合した細胞の数のバックグラウンドレベルを差し引くことをさらに含む。バックグラウンドレベルは、例えば、標識された抗ＰＳＭＡ構築物と接触させる前に、個体における標識された抗ＰＳＭＡ構築物と結合した、組織試料中の細胞の数を決定すること、又は、本明細書に記載の診断方法に従って、標識された抗ＰＳＭＡ構築物と結合した、組織試料（組織試料は、ＰＳＭＡ関連がんを有しない個体から得られたか又は由来する）中の細胞の数を決定することを含む、様々な方法によって決定することができる。いくつかの実施態様では、ＰＳＭＡ関連がんは、例えば、前立腺がん（ホルモン抵抗性又は転移性前立腺がんなど）、腎細胞がん細胞（腎明細胞がんなど）、子宮がん、又は肝臓がんからなる群から選択される。いくつかの実施態様では、個体はヒトである。いくつかの実施態様では、個体は、ＰＳＭＡ関連がんを有することが疑われる。
【０３９０】
本明細書で提供される抗ＰＳＭＡ構築物は、当業者に知られている方法を使用して、生物学的試料中のＰＳＭＡのレベルをアッセイするために使用され得る。適切な標識は当技術分野で知られており、グルコースオキシダーゼなどの酵素標識；放射性同位元素、例えば、ヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１５ｍＩｎ、１１３ｍＩｎ、１１２Ｉｎ、１１１Ｉｎ）、テクネチウム（９９Ｔｃ、９９ｍＴｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、ガリウム（６８Ｇａ、６７Ｇａ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、フッ素（１８Ｆ）、サマリウム（１５３Ｓｍ）、ルテチウム（１７７Ｌｕ）、ガドリニウム（１５９Ｇｄ）、プロメチウム（１４９Ｐｍ）、ランタン（１４０Ｌａ）、イッテルビウム（１７５Ｙｂ）、ホルミウム（１６６Ｈｏ）、イットリウム（９０Ｙ）、スカンジウム（４７Ｓｃ）、レニウム（１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ）、プラセオジム（１４２Ｐｒ）、ロジウム（１０５Ｒｈ）、及びルテニウム（９７Ｒｕ）など；ルミノール；フルオレセイン及びローダミンなどの蛍光標識；及びビオチンが挙げられる。
【０３９１】
当技術分野で知られている技術は、本明細書で提供される標識された抗ＰＳＭＡ構築物に適用され得る。そのような技術には、二官能性コンジュゲート剤の使用が含まれるが、これに限定されない（例えば、米国特許第５７５６０６５号；第５７１４６３１号；第５６９６２３９号；第５６５２３６１号；第５５０５９３１号；第５４８９４２５号；第５４３５９９０号；第５４２８１３９号；第５３４２６０４号；第５２７４１１９号；第４９９４５６０号；及び第５８０８００３号を参照）。上記のアッセイに加えて、様々なｉｎ  ｖｉｖｏアッセイ及びｅｘ  ｖｉｖｏ  アッセイが当業者には利用可能である。例えば、対象の体内の細胞を、検出可能な標識、例えば放射性同位体で任意選択で標識された抗ＰＳＭＡ構築物に曝露することができ、抗ＰＳＭＡ抗体部分の細胞への結合を、例えば、放射能についての外部スキャンによって、又は以前に抗ＰＳＭＡ構築物に曝露された対象に由来する試料（例えば、生検又は他の生物学的試料）を分析することによって、評価することができる。
【０３９２】
製造品及びキット
本明細書で提供されるのは、がん（例えば、前立腺がん（ホルモン抵抗性又は転移性前立腺がんなど）、腎細胞がん細胞（腎明細胞がんなど）、子宮がん、又は肝臓がん）などのＰＳＭＡ関連疾患の診断又は治療のため、抗ＰＳＭＡ構築物若しくは構築物の組み合わせを、細胞表面上にＰＳＭＡを発現する細胞に送達するため、又は個体におけるＰＳＭＡ発現細胞の単離又は検出のために有用な材料を含む製造品である。製造品は、容器と、容器上又は容器に不随するラベル又は添付文書を含むことができる。適切な容器は、例えばボトル、バイアル、シリンジなどを含む。容器はガラス又はプラスチックなどの様々な材料から形成され得る。一般に、容器は、本明細書に記載のＰＳＭＡ関連疾患又は障害を診断又は治療するために有効な組成物を収容し、滅菌のアクセスポートを有し得る（例えば、容器は皮下注射針で貫通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグ又はバイアルであってもよい）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本明細書で提供される抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせである。ラベル又は添付文書は、組成物が特定の状態を治療するために使用されることを示している。ラベル又は添付文書は、抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせ（又は、例えば、そのような構築物又は構築物の組み合わせを含む組成物）をそれを必要とする個体（例えば、ＰＳＭＡ関連疾患又は障害を有する又は有すると疑われる個体）に投与するための説明書をさらに含む。コンビナトリアル療法（例えば、本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせに加えて、１つ又は複数の治療剤）を含む製造品及びキットも企図される。
【０３９３】
添付文書は、治療製品の商品パッケージに通例含まれる、そのような治療製品の効能、用法、用量、投与、禁忌及び／又は使用上の注意事項についての情報を含む説明書を指す。いくつかの実施態様では、添付文書は、組成物が、ＰＳＭＡ関連がん（例えば、前立腺がん（ホルモン抵抗性又は転移性前立腺がんなど）、腎細胞がん細胞（腎明細胞がんなど）、子宮がん、又は肝臓がん）を治療するために使用されることを示す。
【０３９４】
追加的に、製造品は、薬学的に許容される緩衝液、例えば注射用制菌水（ＢＷＦＩ）、注射用滅菌水（ＳＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液及びデキストロース溶液を収容する第２の容器をさらに含んでもよい。それは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、及び注射器を含む、商業的及びユーザーの観点から望ましい他の材料をさらに含み得る。
【０３９５】
任意選択で製造品と組み合わせて、様々な目的のため、例えば、本明細書に記載のＰＳＭＡ関連疾患又は障害の治療のため、抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせを、細胞表面にＰＳＭＡを発現する細胞へ送達するため、あるいは個体のＰＳＭＡ結合細胞を単離又は検出するために有用であるキットも提供される。本明細書で提供されるキットは、抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせ（又はその単位剤形及び／若しくは製造品）を含む組成物を含む１つ又は複数の容器を含み、いくつかの実施態様では、別の薬剤（本明細書に記載される薬剤など）及び／又は本明細書に記載の方法のいずれかに従って使用するための説明書をさらに含む。キットは、治療に適した個体の選択説明をさらに含み得る。本明細書で提供される説明書は、典型的には、ラベル又は添付文書（例えば、キットに含まれる紙シート）に書かれているが、機械読み取り可能な説明書（例えば、磁気記憶ディスク又は光学式記憶ディスク上に記載された説明書）もまた許容される。
【０３９６】
例えば、いくつかの実施態様では、キットは、抗ＰＳＭＡ構築物（例えば、完全長抗ＰＳＭＡ抗体、単一特異性抗ＰＳＭＡ構築物、多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物（二重特異性抗ＰＳＭＡ抗体など）、若しくは抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲート）又は抗ＰＳＭＡ構築物の組み合わせ（例えば、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ＋抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ）を含む組成物を含む。いくつかの実施態様では、キットは、ａ）抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせを含む組成物、及びｂ）少なくとも１つの他の治療剤の有効量を含む。いくつかの実施態様では、キットは、ａ）抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせを含む組成物、及びｂ）例えば前立腺がん（ホルモン抵抗性又は転移性前立腺がんなど）、腎細胞がん細胞（腎明細胞がんなど）、子宮がん、又は肝臓がん）を含むＰＳＭＡ関連疾患の治療のために個体に組成物を投与するための説明書を含む。抗ＰＳＭＡ構築物（又は構築物の組み合わせ）及び他の薬剤は、別々の容器中に又は単一の容器中に存在することができる。例えば、キットは、１つの別個の組成物又は２つ以上の組成物を含んでもよく、ここで、１つの組成物は、抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせを含み、別の組成物は、別の薬剤を含む。
【０３９７】
いくつかの実施態様では、キットは、ａ）抗ＰＳＭＡ構築物（例えば、完全長抗ＰＳＭＡ抗体、単一特異性抗ＰＳＭＡ構築物、多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物（二重特異性抗ＰＳＭＡ抗体など）、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲート）、又は本明細書で記載される他の抗ＰＳＭＡ構築物）又は抗ＰＳＭＡ構築物の組み合わせ（例えば、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ＋抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ）を含む組成物と、ｂ）抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせを細胞（例えば、個体に由来する細胞、例えば、免疫細胞）と組み合わせて、抗ＰＳＭＡ構築物−細胞コンジュゲートを含む組成物を形成させて、ＰＳＭＡ関連疾患（例えば、前立腺がん（ホルモン抵抗性又は転移性前立腺がんなど）、腎細胞がん細胞（腎明細胞がんなど）、子宮がん、又は肝臓がんを含む）の治療のために、該抗ＰＳＭＡ構築物−細胞コンジュゲートを個体に投与するための説明書とを含む。いくつかの実施態様では、キットは、ａ）抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせ（本明細書に記載されているものなど）を含む組成物、及びｂ）細胞（細胞傷害性細胞など）を含む。いくつかの実施態様では、キットは、ａ）抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせ（本明細書に記載されているものなど）を含む組成物、ｂ）細胞（細胞傷害性細胞など）、及びｃ）抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせを細胞と組み合わせて、抗ＰＳＭＡ構築物−細胞コンジュゲートを含む組成物を形成させて、例えば、前立腺がん（ホルモン抵抗性又は転移性前立腺がんなど）、腎細胞がん細胞（腎明細胞がんなど）、子宮がん、又は肝臓がん）を含むＰＳＭＡ関連疾患の治療のために、該抗ＰＳＭＡ構築物−細胞コンジュゲート組成物を個体に投与するための説明書を含む。いくつかの実施態様では、キットは、細胞（細胞傷害性細胞など）と会合した抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせ（本明細書に記載されているものなど）を含む組成物を含む。いくつかの実施態様では、キットは、ａ）細胞（細胞傷害性細胞など）と会合した抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせ（本明細書に記載されているものなど）を含む組成物、及びｂ）例えば前立腺がん（ホルモン抵抗性又は転移性前立腺がんなど）、腎細胞がん細胞（腎明細胞がんなど）、子宮がん、又は肝臓がん）を含むＰＳＭＡ関連疾患の治療のために個体に組成物を投与するための説明書を含む。いくつかの実施態様では、会合は、細胞の表面上の分子への抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせのコンジュゲーションによるものである。いくつかの実施態様では、会合は、抗ＰＳＭＡ構築物又は構築物の組み合わせの一部を細胞の外膜に挿入することによるものである。
【０３９８】
いくつかの実施態様では、キットは、抗ＰＳＭＡ構築物（例えば、完全長抗ＰＳＭＡ抗体、単一特異性抗ＰＳＭＡ構築物、多重特異性抗ＰＳＭＡ構築物、例えば、二重特異性抗ＰＳＭＡ構築物（二重特異性抗ＰＳＭＡ抗体、例えば、抗ＰＳＭＡタンデムｄｉ−ｓｃＦｖなど）、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲート、又は本明細書に記載の他の抗ＰＳＭＡ構築物）、本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ構築物の組み合わせ、又はそのポリペプチド部分をコードする核酸（又は核酸のセット）を含む。いくつかの実施態様では、キットは、ａ）抗ＰＳＭＡ構築物（又は構築物の組み合わせ）又はそのポリペプチド部分をコードする核酸（又は核酸のセット）、及びｂ）核酸（又は核酸のセット）を発現するための宿主細胞（エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞など）を含む。いくつかの実施態様では、キットは、ａ）抗ＰＳＭＡ構築物（又は構築物の組み合わせ）又はそのポリペプチド部分をコードする核酸（又は核酸のセット）、及びｂ）ｉ）宿主細胞（エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞など）中で抗ＰＳＭＡ構築物（又は構築物の組み合わせ）を発現させ、ｉｉ）抗ＰＳＭＡ構築物（又は構築物の組み合わせ）又は抗ＰＳＭＡ構築物（又は構築物の組み合わせ）を発現する宿主細胞（例えば、エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞）を含む組成物を調製し、ｉｉｉ）抗ＰＳＭＡ構築物（又は構築物の組み合わせ）又は抗ＰＳＭＡ構築物（又は構築物の組み合わせ）を発現する宿主細胞を含む組成物を、例えば、前立腺がん（ホルモン抵抗性又は転移性前立腺がんなど）、腎細胞がん細胞（腎明細胞がんなど）、子宮がん、又は肝臓がん含む、ＰＳＭＡ関連疾患の治療のために、個体に投与するための説明書を含む。いくつかの実施態様では、宿主細胞（例えば、Ｔ細胞などのエフェクター細胞）は、個体に由来する。いくつかの実施態様では、キットは、ａ）抗ＰＳＭＡ構築物（又は構築物の組み合わせ）又はそのポリペプチド部分をコードする核酸（又は核酸のセット）、及びｂ）核酸（又は核酸のセット）を発現するための宿主細胞（エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞など）、及びｃ）ｉ）宿主細胞中で抗ＰＳＭＡ構築物（又は構築物の組み合わせ）を発現させ、ｉｉ）抗ＰＳＭＡ構築物（又は構築物の組み合わせ）又は抗ＰＳＭＡ構築物（又は構築物の組み合わせ）を発現する宿主細胞を含む組成物を調製し、ｉｉｉ）抗ＰＳＭＡ構築物（又は構築物の組み合わせ）又は抗ＰＳＭＡ構築物（又は構築物の組み合わせ）を発現する宿主細胞を含む組成物を、例えば、前立腺がん（ホルモン抵抗性又は転移性前立腺がんなど）、腎細胞がん細胞（腎明細胞がんなど）、子宮がん、又は肝臓がん含む、ＰＳＭＡ関連疾患の治療のために、個体に投与するための説明書を含む。
【０３９９】
いくつかの実施態様では、キットは、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸を含む。いくつかの実施態様では、キットは、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸を含むベクターを含む。いくつかの実施態様では、キットは、ａ）抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸を含むベクター、及びｂ）ｉ）個体由来のＴ細胞などのエフェクター細胞にベクターを導入する、ｉｉ）抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲエフェクター細胞を含む組成物を調製する、ｉｉｉ）例えば、前立腺がん（ホルモン抵抗性又は転移性前立腺がんなど）、腎細胞がん細胞（腎明細胞がんなど）、子宮がん、又は肝臓がん含む、ＰＳＭＡ関連疾患の治療のために、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲエフェクター細胞組成物を個体に投与するための説明書を含む。
【０４００】
いくつかの実施態様では、キットは、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードする核酸を含む。いくつかの実施態様では、キットは、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードする核酸を含むベクターを含む。いくつかの実施態様では、キットは、二重特異性構築物、例えば、タンデムｄｉ−ｓｃＦｖ（例えば、抗ＰＳＭＡタンデムｄｉ−ｓｃＦｖ）又はＣＳＲ（抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲなど）をコードする核酸をさらに含む。いくつかの実施態様では、キットは、ａ）抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードする核酸を含むベクター、及びｂ）ｉ）個体由来のＴ細胞などのエフェクター細胞にベクターを導入する、ｉｉ）抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲエフェクター細胞を含む組成物を調製する、ｉｉｉ）例えば、前立腺がん（ホルモン抵抗性又は転移性前立腺がんなど）、腎細胞がん細胞（腎明細胞がんなど）、子宮がん、又は肝臓がん含む、ＰＳＭＡ関連疾患の治療のために、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲエフェクター細胞組成物を個体に投与するための説明書を含む。いくつかの実施態様では、キットはさらに、ａ）二重特異性構築物、例えば、タンデムｄｉ−ｓｃＦｖ（抗ＰＳＭＡタンデムｓｃＦｖなど）をコードする核酸を含むベクター、及びｂ）ｉ）タンデムｄｉ−ｓｃＦｖをコードするベクターを、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードするベクターと同時に又は連続して宿主細胞に導入し、ｉｉ）抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲプラスタンデムｄｉ−ｓｃＦｖエフェクター細胞を含む組成物を調製し、ｉｉｉ）例えば、前立腺がん（ホルモン抵抗性又は転移性前立腺がんなど）、腎細胞がん細胞（腎明細胞がんなど）、子宮がん、又は肝臓がん含む、ＰＳＭＡ関連疾患の治療のために、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲプラスタンデムｄｉ−ｓｃＦｖエフェクター細胞組成物を個体に投与するための説明書を含む。いくつかの実施態様では、キットはさらに、ａ）ＣＳＲ（抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲなど）をコードする核酸を含むベクター、及びｂ）ｉ）抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードするベクターと同時に又は連続して、ＣＳＲをコードするベクターを宿主細胞に導入する、ｉｉ）抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲプラスＣＳＲエフェクター細胞を含む組成物を調製する、ｉｉｉ）例えば、前立腺がん（ホルモン抵抗性又は転移性前立腺がんなど）、腎細胞がん細胞（腎明細胞がんなど）、子宮がん、又は肝臓がん含む、ＰＳＭＡ関連疾患の治療のために、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲプラスＣＳＲエフェクター細胞組成物を個体に投与するための説明書を含む。
【０４０１】
本明細書に記載されたキットは、適切な包装に入っている。適切な包装には、限定されないが、バイアル、ボトル、ジャー、フレキシブル包装（例えば、密封されたマイラー又はビニール袋）などが含まれる。キットは、任意選択で、緩衝材及び解釈的情報などの追加の構成要素を提供してもよい。したがって、本出願はまた、バイアル（密封されたバイアルなど）、ボトル、ジャー、フレキシブル包装などを含む製造品を提供する。
【０４０２】
抗ＰＳＭＡ構築物（又は構築物の組み合わせ）を含む組成物の使用に関する説明書は、一般に、意図される治療のための投薬量、投薬スケジュール、及び投与経路に関する情報を含む。容器は、単位用量、バルク包装（例えば、複数用量包装）又は副次的単位用量であり得る。例えば、個体の効果的な治療を、１週間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、２週間、３週間、４週間、６週間、８週間、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９か月、又はそれ以上のいずれかなどの長期間にわたって提供するために、抗ＰＳＭＡ構築物（例えば、完全長抗ＰＳＭＡ抗体、多重特異性抗ＰＳＭＡ分子（二重特異性抗ＰＳＭＡ抗体など）、抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ、抗ＰＳＭＡイムノコンジュゲート、又は本明細書に記載の他の抗ＰＳＭＡ構築物若しくは構築物の組み合わせ）の十分な投与量を含むキットが提供され得る。キットはまた、複数の単位用量の抗ＰＳＭＡ構築物（又は構築物の組み合わせ）及び薬学的組成物並びに使用説明書を含み、薬局、例えば、病院薬局や調剤薬局での保管と使用のために十分な量で包装される。
【０４０３】
当業者であれば、本出願の範囲及び趣旨の範囲内で複数の実施態様が可能であることを理解するであろう。本実施態様を以下の非限定的な実施例を参照してより詳細に説明する。以下の実施例は、本開示の方法及び組成物をさらに説明するが、もちろん、いかなる方法でもその範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
【実施例】
【０４０４】
実施例１：材料及び方法
【０４０５】
以下に説明する試薬は、実施例２−９において使用される。
【０４０６】
細胞株には以下が含まれる：前立腺がん細胞株：ＬＮＣａＰ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１７４０、ＰＳＭＡ陽性）、ＰＣ−３（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１４３８、ＰＳＭＡ陰性）、ＰＣ−３−ＰＳＭＡ（レンチウイルス形質導入によってＰＳＭＡを発現するように操作されたＰＣ−３）、Ｔ細胞株：Ｊｕｒｋａｔ  Ｃｌｏｎｅ  Ｅ６１（ＡＴＣＣ  ＴＩＢ−１５２）及びＪｕｒｋａｔ−ＰＳＭＡ（レンチウイルス形質導入によってＰＳＭＡを発現するように操作されたＪｕｒｋａｔ）。細胞株は、１０％ＦＢＳ、２．０５ｍＭのＬ−グルタミンを補充したＲＰＭＩ  １６４０（Ｈｙｃｌｏｎｅ、ＳＨ３００２７．０２）中で３７℃／５％ＣＯ２で培養した。
【０４０７】
以下の例で使用される追加のＰＳＭＡ陽性ヒトがん細胞株には、ＭＤＡ  ＰＣａ  ２ｂ、ＶＣａＰ、２２Ｒｖ１、Ｃａｋｉ−１、ＨＣＣ１４８２、及びＨｕＨ−７が含まれる。次のＰＳＭＡ陰性ヒトがん細胞株も使用される：ＰｒＥＣ  ＬＨ、ＰＣ−３、ＮＣＩ−Ｈ６６０、及びＤＵ１４５。
【０４０８】
実施例２：ＰＳＭＡに特異的なｓｃＦｖの選択及び特徴づけ。
ＰＳＭＡ特異的抗体の同定
ＰＳＭＡに特異的なヒトｍＡｂの選択のために、Ｅｕｒｅｋａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓによって構築されたヒトｓｃＦｖ抗体ファージディスプレイライブラリー（多様性＝１０ｘ１０１０）のコレクション（すなわち、Ｅ−ＡＬＰＨＡ（登録商標）ファージディスプレイライブラリー）を使用した。具体的には、Ｅ−ＡＬＰＨＡ（登録商標）ファージディスプレイライブラリーを使用して、ＰＳＭＡを発現するように操作されているＪｕｒｋａｔ細胞株に対してパンを行った。親のＪｕｒｋａｔ細胞株を負の選択のために使用した。このスクリーニングで単離された２つのユニークなｓｃＦｖクローン、すなわち、クローンＡ及びクローンＢは、フローサイトメトリーアッセイによってＰＳＭＡに特異的であることが見出された。クローンＡ及びクローンＢの配列が以下の表１３に提供される。各ｓｃＦｖにおけるＶＬには下線が引かれ、各ｓｃＦｖにおけるＶＨには二重下線が引かれ、リンカーは太字のイタリック体である。ＣＤＲは、下線付きの太字及び二重下線付きの太字である。
【０４０９】
2021526844.tif 000076
【０４１０】
ＰＳＭＡ陽性細胞株及びＰＳＭＡ陰性細胞株に対するクローンＡ及びクローンＢの結合特異性をフローサイトメトリーによって評価した。ＰＳＭＡ陽性細胞株には、ＬＮＣａＰ、ＰＳＭＡ発現ヒト前立腺腺がん細胞株；ＰＣ３−ＰＳＭＡ、ｈＰＳＭＡを発現するように操作されたＰＳＭＡ陰性ヒト前立腺がん細胞株；及びＪｕｒｋａｔ−ＰＳＭＡ、すなわち、ｈＰＳＭＡを発現するように操作されたＰＳＭＡ陰性ヒトＴリンパ球細胞株が含まれる。ＰＳＭＡ天然細胞株には、ＰＣ３及びＪｕｒｋａｔが含まれていた。図１に示すように、クローンＡとＢの両方がＰＳＭＡ発現細胞株に対する特異的結合を示した。
【０４１１】
実施例３：細胞傷害性アッセイ及びインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）放出アッセイにおいて抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ構築物を発現するＴ細胞の特徴づけ。
クローンＡとクローンＢの、Ｔ細胞をリダイレクトし、細胞傷害性とＩＦＮγ放出を導く能力を評価するために、クローンＡ  ＳｃＦｖ及びクローンＢ  ＳｃＦｖをコードする核酸をＣＤ２８／ＣＤ３キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物にクローニングし、各ＣＡＲ（すなわち、クローンＡ−ＣＡＲ及びクローンＢ  ＣＡＲ）を一次ヒトＴ細胞に形質導入した。クローンＡ−ＣＡＲ及びクローンＢ−ＣＡＲのアミノ酸配列が以下の表１４に提供される。各ＣＡＲは（順に、Ｎ末端からＣ末端に）、抗ＰＳＭＡ  ｓｃＦｖ（下線付き）、ｍｙｃタグ（太い下線付き）、リンカー（太字のイタリック体）、ＣＤ２８に由来する配列（二重下線付き）、及びＣＤ３ζに由来する配列（太字二重下線付き）を含む。
【０４１２】
2021526844.tif 000077
【０４１３】
モックＴ細胞及びＣＡＲをコードする核酸を形質導入したＴ細胞を、１：１のエフェクター細胞対標的細胞（Ｅ：Ｔ）比で１６時間インキュベートした。これらのアッセイで使用された標的細胞には、ＬＮＣａＰ（ＰＳＭＡ＋）、ＰＣ３（ＰＳＭＡ−）、ＰＣ３−ＰＳＭＡ（ＰＳＭＡ＋）、Ｊｕｒｋａｔ（ＰＳＭＡ−）、及びＪｕｒｋａｔ−ＰＳＭＡ（ＰＳＭＡ＋）が含まれていた。
【０４１４】
細胞の細胞障害性は、ＬＤＨ細胞毒性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ１７８０）を使用して評価した。図２に示すように、クローンＡ−ＣＡＲ又はクローンＢ−ＣＡＲ構築物を発現するエフェクター細胞をＰＳＭＡ発現細胞とインキュベートしたときに、標的細胞の特異的な死滅が観察された。モックエフェクター細胞（すなわち、ＰＳＭＡを標的とするＣＡＲを発現しないモックＴ細胞）又はＰＳＭＡ陰性標的細胞では、特異的死滅は観察されなかった。
【０４１５】
クローンＡ−ＣＡＲ又はクローンＢ−ＣＡＲを発現するＴ細胞の標的依存性活性化は、ＩＦＮγ放出を測定することによって評価された。簡潔には、モックＴ細胞及び形質導入されたＴ細胞を、上記のように、１：１のエフェクター細胞対標的細胞（Ｅ：Ｔ）比で１６時間インキュベートした。培養上清中のＩＦＮ−γレベルは、Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ  Ｐｒｏヒトサイトカイン８プレックスアッセイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、Ｍ５００００００７Ａ）を使用して測定した。図３に示すように、クローンＡ−ＣＡＲ又はクローンＢ−ＣＡＲを発現するＴ細胞をＰＳＭＡ発現細胞とインキュベートしたときに、ＩＦＮ−γの特異的放出が検出された。モックエフェクター細胞（すなわち、ＰＳＭＡを標的とするＣＡＲを発現しないモックＴ細胞）又はＰＳＭＡ陰性標的細胞では、特異的放出は観察されなかった。
【０４１６】
実施例４：抗ＰＳＭＡ  ｓｃＦｖクローンの親和性成熟
クローンＡ及びクローンＢのｓｃＦｖをコードするＤＮＡが、例えばＧｅｎｅＭｏｒｐｈ  ＩＩランダム突然変異誘発キット（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してランダム突然変異誘発に供される。突然変異誘発後、ＤＮＡ配列をｓｃＦｖ発現ファージミドベクターにクローニングし、変異体抗体ファージライブラリーを構築する。クローンＡ及びクローンＢのために、別々の変異ライブラリーが構築される。濃縮されたファージパニングプールからの個々のファージクローン（例えば、変異体クローン）は、それらのそれぞれの親クローンと比較して、細胞表面ヒトＰＳＭＡへの増強された結合について試験される。さらに、競合細胞結合アッセイが、変異体クローンの結合親和性を親クローンの結合親和性と比較するために行われる。
【０４１７】
簡潔には、それぞれの親クローンと比較した変異体クローンの相対的な結合親和性が、例えば、ＬＮＣａＰ、ＰＣ３、ＰＣ３−ＰＳＭＡ、Ｊｕｒｋａｔ、及びＪｕｒｋａｔ−ＰＳＭＡ細胞を使用する抗体滴定フローサイトメトリーによって決定される。各変異体クローンのＥＣ５０及び見かけのＫＤは、フローサイトメトリーの結合シグナルに基づいて計算される。
【０４１８】
変異体クローンはまた、実施例３に記載されているように、Ｔ細胞をリダイレクトし、細胞傷害性及びＩＦＮγ放出をもたらすそれらの能力について評価される。親クローン、すなわちクローンＡ及びクローンＢを、変異体クローンによって示された細胞傷害性及びＩＦＮ−γ放出レベルの相対的変化を測定するための基礎として、並行して評価する。
【０４１９】
実施例５：ＰＳＭＡ特異的ｓｃＦｖクローンによって結合されたエピトープの特徴づけ
エピトープ結合
クローンＡ、クローンＢ、及びそれらの親和性成熟変異体によって結合されたＰＳＭＡのエピトープを評価するために、結合競合アッセイを以下のように実施する：クローンＡ及びＢを、それぞれ蛍光標識にコンジュゲートさせる。ＰＳＭＡを発現する細胞株を、１ｕｇ／ｍｌの非標識クローンＡとともにインキュベートする。プレインキュベーション後、標識クローンＢの濃度を上げて（例えば、０．００１μｇ／ｍＬ、０．０１μｇ／ｍＬ、０．１μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、及び１０μｇ／ｍＬ）、洗浄せずに試料に直接加えて、さらに３０分間インキュベートする。ブロッキング後、検出及び分析のためにＦＡＣＳが使用される。結合率は、ＭＦＩ（平均蛍光強度）から決定され、試料はアイソタイプ対照に対して正規化される。実験のパラレルセットは、ＰＳＭＡ発現細胞株を、漸増濃度（例えば、０．００１μｇ／ｍＬ、０．０１μｇ／ｍＬ、０．１μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、及び１０μｇ／ｍＬ）の標識クローンＡの存在下で、１ｕｇ／ｍｌの非標識クローンＢとともにインキュベートすることによって実施される。追加の実験は、ＰＳＭＡ発現細胞株を、漸増濃度の標識クローンＡの存在下で、そして実験の別のセットでは、漸増濃度の標識クローンＢの存在下で、１ｕｇ／ｍｌの非標識Ｊ５９１（すなわち、モノクローナルマウス抗ｈＰＳＭＡ抗体）とともにインキュベートすることによって実施される。
【０４２０】
エピトープマッピング
クローンＡ及びクローンＢ（並びにそれらの親和性成熟変異体）によって結合されるエピトープの構成成分であるＰＳＭＡの残基を同定するために、細胞外ドメインにおいて少なくとも１つのアラニン置換を含む異なるＰＳＭＡ変異体をそれぞれ発現する様々な哺乳動物細胞株が、標準的な組換えＤＮＡ技術を使用して生成される。哺乳類細胞株のそれぞれの表面上でのＰＳＭＡ変異体の発現が確認されている。クローンＡ及びＢ（及びそれらの親和性成熟変異体）は、それぞれ異なるＰＳＭＡ変異体を発現する細胞への結合についてフローサイトメトリーによって評価される。ＫＯ７ヘルパーファージは、陰性対照として並行して評価される。モノクローナルマウス抗ｈＰＳＭＡ抗体であるＪ５９１も、並行して評価される。
【０４２１】
実施例６：抗ＰＳＭＡ二重特異性抗体
ヒト抗ＰＳＭＡ抗体を使用した二重特異性抗体構築物の生成
【０４２２】
この実施例は、天然フォーマット（すなわち、細胞表面発現ＰＳＭＡ）においてヒトＰＳＭＡに結合する第１の抗体部分（例えば、ｓｃＦｖ）及びＴ細胞上のＣＤ３に結合する第２の抗体部分（例えば、ｓｃＦｖ）を有する、抗ＰＳＭＡ二重特異性抗体構築物（タンデムｄｉ−ｓｃＦｖ）の構築を記述する。本明細書に記載のタンデムｄｉ−ｓｃＦｖは、Ｔ細胞にヒトＰＳＭＡを発現する標的細胞を死滅させるように誘導するために使用することができる。
【０４２３】
タンデムｄｉ−ｓｃＦｖは、Ｎ末端にクローンＡ又はクローンＢのＶＬ−ＶＨ  ｓｃＦｖ配列及びＣ末端に抗ヒトＣＤ３εマウスモノクローナルｓｃＦｖを含む単鎖フォーマットを使用して構築される（抗ＰＳＭＡ抗ＣＤ３タンデムｄｉ−ｓｃＦｖ；例えば、Brischwein, K. et al., Mol. Immunol. 43:1129-1143, 2006を参照）。クローンＡ  ｓｃＦｖ、クローンＢ  ｓｃＦｖ、及び抗ヒトＣＤ３ε  ｓｃＦｖをコードするＤＮＡ断片は、例えば、Ｇｅｎｅｗｉｚ又はＧｅｎｓｃｒｉｐｔを使用して合成され、標準的な組換えＤＮＡ技術を使用して、ｐＱＤ−Ｔ（Ｅｕｒｅｋａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．）などの哺乳動物発現ベクターにサブクローニングされる。ヘキサヒスチジンタグＨＨＨＨＨＨ（配列番号１５８）が、精製及び検出のために各タンデムｄｉ−ｓｃＦｖのＣ末端に挿入される。
【０４２４】
ＨＥＫ２９３細胞を、クローンＡ−タンデムｄｉ−ｓｃＦｖ又はクローンＢ−タンデムｄｉ−ｓｃＦｖをコードする発現ベクターでトランスフェクトし、タンデムｄｉ−ｓｃＦｖを発現させるために、７日間培養する。各タンデムｄｉ−ｓｃＦｖは、例えば、ＦＰＬＣＡＫＴＡシステムによるＨｉｓＴｒａｐＨＰカラム（ＧＥ  ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）又は細胞培養量に基づくＨｉｓ  ＧｒａｖｉＴｒａｐカラム（ＧＥ  ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、ＨＥＫ２９３細胞上清から精製される。精製されたタンデムｄｉ−ｓｃＦｖの分子量は、非還元条件下でゲル電気泳動によって測定される。各構築物（クローンＡ抗ＰＳＭＡ抗ＣＤ３タンデムｄｉ−ｓｃＦｖ及びクローンＢ抗ＰＳＭＡ抗ＣＤ３タンデムｄｉ−ｓｃＦｖ）に対応するバンド（〜９８ｋＤ）がゲル上の主要な種として観察されることが予想される。
【０４２５】
クローンＡ抗ＰＳＭＡ抗ＣＤ３タンデムｄｉ−ｓｃＦｖ及びクローンＢ抗ＣＤ３タンデムｄｉ−ｓｃＦｖのアミノ酸配列が、以下の表１５に提供される。各タンデムｄｉ−ｓｃＦｖの抗ＰＳＭＡ  ｓｃＦｖには下線が引かれている。各タンデムｄｉ−ｓｃＦｖの抗ＣＤ３ｓｃＦｖには二重下線が引かれている。抗ＰＳＭＡｓｃＦｖと抗ＣＤ３ｓｃＦｖを連結するリンカーは太字のイタリック体である。
【０４２６】
2021526844.tif 000078
【０４２７】
タンデムｄｉ−ｓｃＦｖは、以下に記載されるように、さらに特徴づけられる。
抗ＰＳＭＡ二重特異性抗体構築物のヒトがん細胞株への結合の評価
クローンＡ抗ＰＳＭＡ抗ＣＤ３タンデムｄｉ−ｓｃＦｖ及びクローンＢ抗ＰＳＭＡ抗ＣＤ３タンデムｄｉ−ｓｃＦｖ構築物を、フローサイトメトリーによって、ヒトＰＳＭＡ発現がん細胞株（例えば、前立腺がん細胞株ＬＮＣａＰ、ＭＤＡ  ＰＣａ  ２ｂ、ＶＣａＰ、及び２２Ｒｖ１；腎がん細胞株Ｃａｋｉ−１；子宮がん細胞株ＨＣＣ１４８２；及び肝臓がん細胞株ＨｕＨ−７を含む）への結合について評価する。ＰＳＭＡを発現しないヒトがん細胞株（例えば、前立腺がん細胞株ＰｒＥＣ  ＬＨ、ＰＣ−３、ＮＣＩ−Ｈ６６０、ＤＵ  １４５）への結合を並行して評価する。追加の二重特異性抗体構築物（例えば、抗ヒトＣＤ３ε  ｓｃＦｖを有する非ＰＳＭＡ結合ｓｃＦｖ及び／又は、例えば、Ｊ５９１からのＰＳＭＡ結合部分及び抗ヒトＣＤ３ε  ｓｃＦｖを含むｓｃＦｖを含む）を並行して試験する。
【０４２８】
実施例７：キメラ抗体−Ｔ細胞受容体（ｃａＴＣＲ）構築物を発現するＴ細胞の生成及び特徴づけ
標準的な分子生物学的手法を使用して、クローンＡ抗ＰＳＭＡ  ｓｃＦｖ又はクローンＢ抗ＰＳＭＡ  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬドメインをコードする核酸が、それぞれＩｇ  ＣＨ１及びＣＬ定常領域及びγδＴＣＲの膜貫通ドメインをコードする核酸に融合され、クローンＡ−ｃａＴＣＲ及びクローンＢ−ｃａＴＣＲをコードする核酸を生成する。クローンＡ−ｃａＴＣＲ及びクローンＢ−ｃａＴＣＲ構築物の模式図が図４に提供される。クローンＡ−ｃａＴＣＲ及びクローンＢ−ｃａＴＣＲのアミノ酸配列が以下の表１６に提供される。各鎖１において、抗ＰＳＭＡ  ＶＨ／ＣＨ配列に下線が引かれている。各鎖１において、ＴＣＲデルタ鎖の配列に二重下線が引かれている。各鎖２において、抗ＰＳＭＡ  ＶＬ／ＣＬ配列は、太い下線が引かれている。各鎖２において、ＴＣＲガンマ鎖の配列はイタリック体である。
【０４２９】
2021526844.tif 000079
【０４３０】
クローンＡ−ｃａＴＣＲＴ細胞及びクローンＢ−ｃａＴＣＲＴ細胞は、国際公開第２０１７／０７０６０８号、ＰＣＴ／米国特許出願公開第２０１８／０２９２１７号（現在は国際公開第２０１８／２００５８２号として公開）、及びMilone, et al (Molecular Therapy, 17:1453-1464, 2009)に記載されている方法を使用して生成される。
【０４３１】
各抗ＰＳＭＡｃａＴＣＲを介した活性化から生じるＴ細胞表現型が特徴づけられる。クローンＡ−ｃａＴＣＲ−Ｔ細胞を、単独でインキュベートするか、ブレフェルジンの存在下で、エフェクター細胞：標的細胞の比が２：１で、ＰＳＭＡを発現するＬＮＣａＰ細胞と共インキュベートするか、又はＰＳＭＡがノックアウトされたＬＮＣａＰ細胞と共インキュベートする。パラレルセットインキュベーションは、クローンＢ−ｃａＴＣＲ−Ｔ細胞を使用して実施される。インキュベーション後、クローンＡ−ｃａＴＣＲ−Ｔ細胞及びクローンＢ−ｃａＴＣＲ−Ｔ細胞を、例えば、ＣＤ６９及びＣＤ２５を含む活性化マーカー、並びに例えば、ＣＤ１０７ａを含む細胞脱顆粒マーカーの発現について、フローサイトメトリーによってアッセイする。さらに、ＰＳＭＡ非発現細胞と比較して、ＰＳＭＡ発現細胞に応答したＣＤ４＋  ｃａＴＣＲ＋細胞及びＣＤ４−ＣＤ８＋  ｃａＴＣＲ＋細胞によって発現されるＴＮＦα、ＩＬ−２、及びＩＦＮγのレベルを測定するために、クローンＡ−ｃａＴＣＲ−Ｔ細胞及びクローンＢ−ｃａＴＣＲ−Ｔ細胞の細胞内フローサイトメトリー分析が実施される。
【０４３２】
クローンＡ−ｃａＴＣＲ−Ｔ細胞及びクローンＢ−ｃａＴＣＲ−Ｔ細胞の腫瘍死滅活性は、実施例３に記載されるように評価される。一定の割合のクローンＡ−ｃａＴＣＲ陽性−Ｔ細胞、クローンＢ−ｃａＴＣＲ陽性−Ｔ細胞、クローンＡ−ｃａＴＣＲ陰性−Ｔ細胞、及びクローンＢ−ｃａＴＣＲ陰性−Ｔ細胞が、それぞれ、例えば、ＬＮＣａＰ、ＰＣ３、ＰＣ３−ＰＳＭＡ、Ｊｕｒｋａｔ、及びＪｕｒｋａｔ−ＰＳＭＡを含む複数のＰＳＭＡ発現細胞株及びＰＳＭＡ非発現細胞株と共培養される。実施例３に記載されるように、エフェクター細胞：標的細胞の様々な比にわたって標的細胞の特異的溶解が測定される。
【０４３３】
蛍光ベースのアッセイが、抗原刺激時のクローンＡ−ｃａＴＣＲ−Ｔ細胞及びクローンＢ−ｃａＴＣＲ−Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ増殖を評価するために使用される。簡潔には、クローンＡ−ｃａＴＣＲ−Ｔ細胞又はクローンＢ−ｃａＴＣＲ−Ｔを一晩血清飢餓状態にし、次いで室温で５分間、例えば、１μＭのＣＦＳＥ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で標識する。標識細胞を無血清培地に再懸濁し、エフェクター細胞：標的細胞の比が２：１で、標的細胞（例えば、ＬＮＣａＰ細胞、ＰＣ３−ＰＳＭＡ細胞、又はＪｕｒｋａｔ−ＰＳＭＡ細胞）と共培養する。形質導入効率の違いを考慮するために、ドナー適合非形質導入Ｔ細胞を使用して、受容体陽性細胞の割合を正規化する。細胞分裂は、フローサイトメトリーによって監視される。
【０４３４】
実施例８：ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域を含む完全長抗ＰＳＭＡ抗体の生成及び特徴づけ。
クローンＡ及びクローンＢは、記載されるように（Tomimatsu K. et al., Biosci. Biotechnol. Biochem.73(7):1465-1469, 2009）、例えば、ＨＥＫ２９３及びチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株において、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域を含む完全長抗体として再フォーマットされる。簡潔には、抗体可変領域クローンＡ及びクローンＢが、それぞれ、適合するヒトラムダ又はカッパ軽鎖定常領域及びヒトＩｇＧ１定常領域配列を有する哺乳動物発現ベクターにサブクローニングされる。同じクローニング戦略を適用して、マウスＩｇＧ１重鎖及び軽鎖定常領域を有するキメラＰＳＭＡ完全長抗体が生成される。精製された完全長ＩｇＧ抗体の分子量は、抗体試料の純度を評価するために、電気泳動によって還元条件下と非還元条件下の両方で測定される。試料の純度は、以下のようにＳＤＳ−ＰＡＧＥを行うことによっても評価される：２μｇの各抗体を２．５μＬのＮｕＰＡＧＥ  ＬＤＳサンプルバッファー（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＮＰ０００８）と混合し、各試料の容量を脱イオン水で１０μＬに調整する。試料を７０℃で１０分間加熱した後、ゲル上にロードする。ゲル電気泳動を１８０Ｖで１時間行う。
【０４３５】
抗体可変領域クローンＡ又はクローンＢを含む抗ＰＳＭＡキメラＩｇＧ１抗体は、それぞれ、Ｊｕｒｋａｔ細胞、ＰＳＭＡを発現するＪｕｒｋａｔ細胞、ＰＣ３細胞、ＰＳＭＡを発現するＰＣ３細胞、及びＬＮＣａＰヒト前立腺腺癌細胞への結合についてＦＡＣＳによって評価される。１０μｇ／ｍＬの各抗体を各細胞株に添加し、氷上でインキュベートする。洗浄後、Ｒ−ＰＥコンジュゲート抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｓ＃ＥＩ−２００７）を添加し、抗体結合を検出する。抗ＰＳＭＡキメラＩｇＧ１抗体の結合親和性は、ＦｏｒｔｅＢｉｏ  ＯｃｔｅｔＱＫによって決定される。５μｇ／ｍＬのビオチン化ＰＳＭＡ（細胞外ドメイン）をストレプトアビジンバイオセンサー上にロードする。過剰な抗原を洗い流した後、各抗体の１０μｇ／ｍＬを、会合及び解離速度について試験する。結合パラメータは、１：１結合部位、部分適合モデルを使用して計算される。
【０４３６】
完全長クローンＡ−ＩｇＧ１及び完全長クローンＡ−ＩｇＧ１抗体のアミノ酸配列が以下の表１７に提供される。各軽鎖のＶＬには下線が引かれ、各重鎖のＶＨには二重下線が引かれている。ＣＤＲは太字で示されている。
【０４３７】
2021526844.tif 000080
【０４３８】
実施例９：ｉｎ  ｖｉｖｏ有効性試験
マウスにおけるＰＳＭＡ  ＣＡＲ−Ｔ細胞治療
ヒトＰＳＭＡ発現前立腺がん（ｓ．ｃ．）異種移植モデルは、ＳＣＩＤベージュ（機能的なＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞を持たない）マウスにおいて生成される。平均皮下腫瘍体積が２００ｍｍ３に達すると、動物は無作為化される。マウスを、以下のいずれかを受ける６つの群（ｎ＝８−１０マウス／群）に分ける：（ｉ）無治療、（ｉｉ）１０７個のモック形質導入ＣＡＲ  Ｔ細胞、１ｘ／週で４週間、（ｉｉｉ）１０７個のクローンＡ−ＣＡＲ  Ｔ細胞、１ｘ／週で４週間、（ｉｖ）２ｘ１０６個のクローンＡ−ＣＡＲ  Ｔ細胞、１ｘ／週で４週間、（ｖ）１０７個のクローンＢ−ＣＡＲ  Ｔ細胞、１ｘ／週で４週間、又は（ｉｖ）２ｘ１０６個のクローンＢ−ＣＡＲ  Ｔ細胞、１ｘ／週で４週間。各群における動物は、腫瘍体積、有害反応、ヒトサイトカインプロファイル、ＣＡＲ  Ｔ細胞浸潤のための腫瘍及び臓器におけるヒトＣＤ３＋細胞に対する腫瘍の組織病理学、腫瘍組織からの細胞上のＰＳＭＡ発現、体重及び一般的健康状態（食事、歩行、日常活動など）について監視される。クローンＡ−ＣＡＲ及びクローンＢ−ＣＡＲのアミノ酸配列が上の表１３に提供される。
【０４３９】
マウスにおけるＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ−Ｔ細胞治療
ヒトＰＳＭＡ発現前立腺がん（ｓ．ｃ．）異種移植モデルは、ＳＣＩＤベージュ（機能的なＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞を持たない）マウスにおいて生成される。平均皮下腫瘍体積が２００ｍｍ３に達すると、動物は無作為化される。マウスを、以下のいずれかを受ける４つの群（ｎ＝８−１０マウス／群）に分ける：（ｉ）無治療、（ｉｉ）１０７個のモック形質導入ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞、１ｘ／週で４週間、（ｉｉｉ）１０７個のクローンＡ−ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞、１ｘ／週で４週間、（ｉｖ）２ｘ１０６個のクローンＡ−ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞、１ｘ／週で４週間、（ｖ）１０７個のクローンＢ−ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞、１ｘ／週で４週間、又は（ｉｖ）２ｘ１０６個のクローンＢ−ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞、１ｘ／週で４週間。各群における動物は、腫瘍体積、有害反応、ヒトサイトカインプロファイル、ｃａＴＣＲ  Ｔ細胞浸潤のための腫瘍及び臓器におけるヒトＣＤ３＋細胞に対する腫瘍の組織病理学、腫瘍組織からの細胞上のＰＳＭＡ発現、体重及び一般的健康状態（食事、歩行、日常活動など）について監視される。クローンＡ−ｃａＴＣＲ及びクローンＢ−ｃａＴＣＲのアミノ酸配列が上の表１５に提供される。
【０４４０】
実施例１０：一価及び二価のｃａＴＣＲ構築物を発現するＴ細胞の生成及び特徴づけ
一価の抗ＰＳＭＡクローンＡ  ｃａＴＣＲ構築物及び一価の抗ＰＳＭＡクローンＢ  ｃａＴＣＲ構築物をコードする核酸は、実施例７の記載に従って生成された。配列番号３３は、抗ＰＳＭＡクローンＡ  ｃａＴＣＲ構築物の例示的なアミノ酸配列である。そのような構築物は、本明細書では、代替的に、クローンＡ  ｃａＴＣＲ、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ＃１、又はＡｘ１−ｃａＴＣＲと呼ばれる。配列番号３６は、抗ＰＳＭＡクローンＢ  ｃａＴＣＲ構築物の例示的なアミノ酸配列である。抗ＰＳＭＡクローンＢ  ｃａＴＣＲ構築物は、本明細書では、代替的に、クローンＢ  ｃａＴＣＲ、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ＃２、又はＢｘ１−ｃａＴＣＲと呼ばれる。
ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＳＹＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＳＭＧＳＳＬＹＡＳＳＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＥＶＫＴＤＳＴＤＨＶＫＰＫＥＴＥＮＴＫＱＰＳＫＳＣＨＫＰＫＡＩＶＨＴＥＫＶＮＭＭＳＬＴＶＬＧＬＲＭＬＦＡＫＴＶＡＶＮＦＬＬＴＡＫＬＦＦＬＲＡＫＲＳＧＳＧＡＰＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＱＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＧＡＰＧＱＲＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＧＮＳＮＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＴＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＳＳＬＳＧＹＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳＰＩＫＴＤＶＩＴＭＤＰＫＤＮＣＳＫＤＡＮＤＴＬＬＬＱＬＴＮＴＳＡＹＹＭＹＬＬＬＬＬＫＳＶＶＹＦＡＩＩＴＣＣＬＬＲＲＴＡＦＣＣＮＧＥＫＳ（配列番号３３）
ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＭＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＮＦＡＳＹＷＶＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＴＩＹＰＤＤＳＤＴＲＹＧＰＡＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＤＳＹＹＧＩＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＥＶＫＴＤＳＴＤＨＶＫＰＫＥＴＥＮＴＫＱＰＳＫＳＣＨＫＰＫＡＩＶＨＴＥＫＶＮＭＭＳＬＴＶＬＧＬＲＭＬＦＡＫＴＶＡＶＮＦＬＬＴＡＫＬＦＦＬＲＡＫＲＳＧＳＧＡＰＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＱＡＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＭＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＧＹＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳＰＩＫＴＤＶＩＴＭＤＰＫＤＮＣＳＫＤＡＮＤＴＬＬＬＱＬＴＮＴＳＡＹＹＭＹＬＬＬＬＬＫＳＶＶＹＦＡＩＩＴＣＣＬＬＲＲＴＡＦＣＣＮＧＥＫＳ（配列番号３６）
【０４４１】
抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲのＰＳＭＡへの結合を増加させるために、二価のｃａＴＣＲ構築物が設計された。特に、以下の「ホモ」二価ｃａＴＣＲ構築物をコードする核酸が生成された。
１．  Ａｘ２−ｃａＴＣＲ−１（本明細書において「Ａｘ２−ｃａＴＣＲ」又は「二価クローンＡ  ｃａＴＣＲ−１」と代替的に呼ばれる）は、１つのｓｃＦｖ及び１つのＦａｂを含む二価の抗ＰＳＭＡクローンＡ  ｃａＴＣＲである。例えば、以下の配列番号４７を参照。
ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＱＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＧＡＰＧＱＲＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＧＮＳＮＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＴＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＳＳＬＳＧＹＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬＧＳＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥＭＡＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＳＹＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＳＭＧＳＳＬＹＡＳＳＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＳＹＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＳＭＧＳＳＬＹＡＳＳＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＥＶＫＴＤＳＴＤＨＶＫＰＫＥＴＥＮＴＫＱＰＳＫＳＣＨＫＰＫＡＩＶＨＴＥＫＶＮＭＭＳＬＴＶＬＧＬＲＭＬＦＡＫＴＶＡＶＮＦＬＬＴＡＫＬＦＦＬＲＡＫＲＳＧＳＧＡＰＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＱＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＧＡＰＧＱＲＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＧＮＳＮＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＴＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＳＳＬＳＧＹＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳＰＩＫＴＤＶＩＴＭＤＰＫＤＮＣＳＫＤＡＮＤＴＬＬＬＱＬＴＮＴＳＡＹＹＭＹＬＬＬＬＬＫＳＶＶＹＦＡＩＩＴＣＣＬＬＲＲＴＡＦＣＣＮＧＥＫＳ（配列番号４７）
２．  Ａｘ２−ｃａＴＣＲ−２（本明細書において「二価クローンＡ  ｃａＴＣＲ−２」と代替的に呼ばれる）は、２つのＦａｂを含む二価の抗ＰＳＭＡクローンＡ  ｃａＴＣＲである。例えば、以下の配列番号４８を参照。
ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＳＹＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＳＭＧＳＳＬＹＡＳＳＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＳＹＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＳＭＧＳＳＬＹＡＳＳＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＥＶＫＴＤＳＴＤＨＶＫＰＫＥＴＥＮＴＫＱＰＳＫＳＣＨＫＰＫＡＩＶＨＴＥＫＶＮＭＭＳＬＴＶＬＧＬＲＭＬＦＡＫＴＶＡＶＮＦＬＬＴＡＫＬＦＦＬＲＡＫＲＳＧＳＧＡＰＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＱＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＧＡＰＧＱＲＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＧＮＳＮＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＴＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＳＳＬＳＧＹＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＧＡＰＧＱＲＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＧＮＳＮＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＴＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＳＳＬＳＧＹＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳＰＩＫＴＤＶＩＴＭＤＰＫＤＮＣＳＫＤＡＮＤＴＬＬＬＱＬＴＮＴＳＡＹＹＭＹＬＬＬＬＬＫＳＶＶＹＦＡＩＩＴＣＣＬＬＲＲＴＡＦＣＣＮＧＥＫＳ（配列番号４８）
３．  Ｂｘ２−ｃａＴＣＲ−１（本明細書において「Ｂｘ２−ｃａＴＣＲ」又は「二価クローンＢ  ｃａＴＣＲ−１」と代替的に呼ばれる）は、１つのｓｃＦｖ及び１つのＦａｂを含む二価の抗ＰＳＭＡクローンＢ  ｃａＴＣＲである。例えば、以下の配列番号４９を参照。
ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＱＡＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＭＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＧＹＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬＧＳＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥＭＡＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＭＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＮＦＡＳＹＷＶＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＴＩＹＰＤＤＳＤＴＲＹＧＰＡＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＤＳＹＹＧＩＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＭＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＮＦＡＳＹＷＶＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＴＩＹＰＤＤＳＤＴＲＹＧＰＡＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＤＳＹＹＧＩＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＥＶＫＴＤＳＴＤＨＶＫＰＫＥＴＥＮＴＫＱＰＳＫＳＣＨＫＰＫＡＩＶＨＴＥＫＶＮＭＭＳＬＴＶＬＧＬＲＭＬＦＡＫＴＶＡＶＮＦＬＬＴＡＫＬＦＦＬＲＡＫＲＳＧＳＧＡＰＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＱＡＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩ（配列番号４９）
４．  Ｂｘ２−ｃａＴＣＲ−２（本明細書において「二価クローンＢ  ｃａＴＣＲ−２」と代替的に呼ばれる）は、２つのＦａｂを含む二価の抗ＰＳＭＡクローンＢ  ｃａＴＣＲである。例えば、以下の配列番号５０を参照。
ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＭＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＮＦＡＳＹＷＶＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＴＩＹＰＤＤＳＤＴＲＹＧＰＡＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＤＳＹＹＧＩＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＭＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＮＦＡＳＹＷＶＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＴＩＹＰＤＤＳＤＴＲＹＧＰＡＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＤＳＹＹＧＩＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＥＶＫＴＤＳＴＤＨＶＫＰＫＥＴＥＮＴＫＱＰＳＫＳＣＨＫＰＫＡＩＶＨＴＥＫＶＮＭＭＳＬＴＶＬＧＬＲＭＬＦＡＫＴＶＡＶＮＦＬＬＴＡＫＬＦＦＬＲＡＫＲＳＧＳＧＡＰＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＱＡＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＭＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＧＹＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＡＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＭＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＧＹＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳＰＩＫＴＤＶＩＴＭＤＰＫＤＮＣＳＫＤＡＮＤＴＬＬＬＱＬＴＮＴＳＡＹＹＭＹＬＬＬＬＬＫＳＶＶＹＦＡＩＩＴＣＣＬＬＲＲＴＡＦＣＣＮＧＥＫＳ（配列番号５０）
【０４４２】
Ａｘ２−ｃａＴＣＲ−１、Ａｘ２−ｃａＴＣＲ−２、Ｂｘ２−ｃａＴＣＲ−１、又はＢｘ２−ｃａＴＣＲ−２を発現するＴ細胞は、一次ヒトＴ細胞にｃａＴＣＲ構築物をコードする核酸を含むウイルスを形質導入することによって生成された。形質転換されたＴ細胞の特徴及び機能は、実施例７に記載された方法を使用して評価された。このようなＴ細胞は、コード化されたｃａＴＣＲ構築物を発現し、良好に増殖し、Ｔ細胞の特異性をリダイレクトし、陽性のＰＳＭＡ特異的な細胞傷害性／腫瘍死滅活性を示した。
【０４４３】
２つの代表的な腫瘍細胞死滅実験では、Ｂｘ２−ｃａＴＣＲ（すなわち、Ｂｘ２−ｃａＴＣＲ−１）（図６を参照）；Ａｘ２−ｃａＴＣＲ（すなわち、Ａｘ２−ｃａＴＣＲ−１）（図６及び７を参照）；Ｂｘ２−ｃａＴＣＲ＋Ａ−ＣＳＲ（図６及び７を参照）；Ａ−ＣＡＲ（図６及び７を参照）；Ａｘ１−ｃａＴＣＲ＋Ｂ−ＣＳＲ（図６及び７を参照）；Ｂ−ＣＡＲ（図７を参照）；又はＢｘ１−ｃａＴＣＲ＋Ａ−ＣＳＲ（図７を参照）を発現するＴ細胞が生成され、受容体（ｃａＴＣＲ又はＣＡＲ）陽性Ｔ細胞の割合は、モック形質導入Ｔ細胞で６０％に正規化された。次に、モック形質導入Ｔ細胞、ｃａＴＣＲ発現Ｔ細胞、及び抗ＰＣＭＡ  ＣＡＲ発現Ｔ細胞を、２：１のエフェクター細胞対標的細胞（Ｅ：Ｔ）比（０．２Ｍ：０．１Ｍ、受容体陽性エフェクター：標的比１．２：１）で１６時間インキュベートした。以下の３つのＰＳＭＡ＋標的細胞株を使用した：ＬＮＣａＰ、２２ＲＶ１及びＰＣ３−ＰＭＳＡ。腫瘍細胞死滅実験の結果を図６及び７に示す。簡潔には、上記の構築物のいずれか１つを発現するＴ細胞は、ＰＳＭＡ特異的な標的細胞溶解を引き起こすことができたが、モック形質導入Ｔ細胞はそうではなかった。
【０４４４】
さらに、以下に記載する「ヘテロ」二価ｃａＴＣＲ構築物をコードする核酸が生成され、一次ヒトＴ細胞を形質導入するために使用される。形質導入されたｃａＴＣＲ−Ｔ細胞は、形質導入されたＴ細胞がコード化されたｃａＴＣＲ構築物を発現し、良好に増殖し、Ｔ細胞の特異性をリダイレクトし、ＰＳＭＡ特異的な細胞傷害性／腫瘍細胞死滅を誘導するかどうかを評価するために、実施例７及び本実施例に記載されている方法を使用して特徴づけられる。
５．  Ａｘ１−Ｂｘ１−ｃａＴＣＲ−１（本明細書では「クローンＡクローンＢ  ｃａＴＣＲ−１」とも呼ばれる）は、クローンＡ  ｓｃＦｖ及びクローンＢ  Ｆａｂを含む抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲである。例えば、以下の配列番号９１を参照。
ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＱＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＧＡＰＧＱＲＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＧＮＳＮＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＴＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＳＳＬＳＧＹＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬＧＳＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥＭＡＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＳＹＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＳＭＧＳＳＬＹＡＳＳＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＭＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＮＦＡＳＹＷＶＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＴＩＹＰＤＤＳＤＴＲＹＧＰＡＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＤＳＹＹＧＩＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＥＶＫＴＤＳＴＤＨＶＫＰＫＥＴＥＮＴＫＱＰＳＫＳＣＨＫＰＫＡＩＶＨＴＥＫＶＮＭＭＳＬＴＶＬＧＬＲＭＬＦＡＫＴＶＡＶＮＦＬＬＴＡＫＬＦＦＬＲＡＫＲＳＧＳＧＡＰＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＱＡＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＭＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＧＹＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳＰＩＫＴＤＶＩＴＭＤＰＫＤＮＣＳＫＤＡＮＤＴＬＬＬＱＬＴＮＴＳＡＹＹＭＹＬＬＬＬＬＫＳＶＶＹＦＡＩＩＴＣＣＬＬＲＲＴＡＦＣＣＮＧＥＫＳ（配列番号９１）
６．  Ａｘ１−Ｂｘ１−ｃａＴＣＲ−２（本明細書では「クローンＡクローンＢ  ｃａＴＣＲ−２」とも呼ばれる）は、クローンＡ  Ｆａｂ及びクローンＢ  Ｆａｂを含む抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲである。例えば、以下の配列番号９２を参照。
ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＳＹＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＳＭＧＳＳＬＹＡＳＳＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＭＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＮＦＡＳＹＷＶＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＴＩＹＰＤＤＳＤＴＲＹＧＰＡＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＤＳＹＹＧＩＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＥＶＫＴＤＳＴＤＨＶＫＰＫＥＴＥＮＴＫＱＰＳＫＳＣＨＫＰＫＡＩＶＨＴＥＫＶＮＭＭＳＬＴＶＬＧＬＲＭＬＦＡＫＴＶＡＶＮＦＬＬＴＡＫＬＦＦＬＲＡＫＲＳＧＳＧＡＰＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧＱＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＧＡＰＧＱＲＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＧＮＳＮＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＴＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＳＳＬＳＧＹＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＡＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＭＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＧＹＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳＰＩＫＴＤＶＩＴＭＤＰＫＤＮＣＳＫＤＡＮＤＴＬＬＬＱＬＴＮＴＳＡＹＹＭＹＬＬＬＬＬＫＳＶＶＹＦＡＩＩＴＣＣＬＬＲＲＴＡＦＣＣＮＧＥＫＳ（配列番号９２）
【０４４５】
実施例１１：ｃａＴＣＲ及びＣＳＲ受容体との構築物の組み合わせを発現するＴ細胞の生成及び特徴づけ
抗ＰＳＭＡクローンＡキメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）又は抗ＰＳＭＡクローンＢ  ＣＳＲをコードする核酸が、実施例１０に記載される一価又は二価の抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ構築物をコードする核酸に融合され、様々なｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ構築物の組み合わせをコードする完全長核酸を生成した。完全長核酸を含むウイルスを使用して一次ヒトＴ細胞を形質導入し、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ構築物の組み合わせをＴ細胞の表面上に発現させた。
【０４４６】
具体的には、以下に記載される抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ構築物をコードする核酸が設計されており、多くのものが生成されている。
クローンＡ−ＣＳＲ−１Ａ（Ｎ末端からＣ末端の順：抗ＰＳＭＡクローンＡ  ｓｃＦｖ＋ｍｙｃタグ（太字）＋ＣＤ２８由来の配列（下線））
2021526844.tif 000081
クローンＡ−ＣＳＲ−１Ｂ（Ｎ末端からＣ末端の順：抗ＰＳＭＡクローンＡ  ｓｃＦｖ＋ＣＤ２８由来の配列（下線））
2021526844.tif 000082
クローンＡ−ＣＳＲ−２Ａ（Ｎ末端からＣ末端の順：抗ＰＳＭＡクローンＡ  ｓｃＦｖ＋ｍｙｃタグ（太字）＋４−１ＢＢ由来の配列（下線））
2021526844.tif 000083
クローンＡ−ＣＳＲ−２Ｂ（Ｎ末端からＣ末端の順：抗ＰＳＭＡクローンＡ  ＳＣＦＶ＋４−１ＢＢ由来の配列（下線））
2021526844.tif 000084
クローンＡ−ＣＳＲ−３Ａ（Ｎ末端からＣ末端の順：抗ＰＳＭＡクローンＡ  ｓｃＦｖ＋ｍｙｃタグ（太字）＋ＣＤ２７由来の配列（下線））
2021526844.tif 000085
クローンＡ−ＣＳＲ−３Ｂ（Ｎ末端からＣ末端の順：抗ＰＳＭＡクローンＡ  ｓｃＦｖ＋ＣＤ２７由来の配列（下線））
2021526844.tif 000086
クローンＡ−ＣＳＲ−４Ａ（Ｎ末端からＣ末端の順：抗ＰＳＭＡクローンＡ  ｓｃＦｖ＋ｍｙｃタグ（太字）＋ＣＤ３０由来の配列（下線））
2021526844.tif 000087
クローンＡ−ＣＳＲ−４Ｂ（Ｎ末端からＣ末端の順：抗ＰＳＭＡクローンＡ  ＳＣＦＶ＋ＣＤ３０由来の配列（下線））
2021526844.tif 000088
クローンＡ−ＣＳＲ−５Ａ（Ｎ末端からＣ末端の順：抗ＰＳＭＡクローンＡ  ｓｃＦｖ＋ｍｙｃタグ（太字）＋ＯＸ４０由来の配列（下線））
2021526844.tif 000089
クローンＡ−ＣＳＲ−５Ｂ（Ｎ末端からＣ末端の順：抗ＰＳＭＡクローンＡ  ＳＣＦＶ＋ＯＸ４０由来の配列（下線））
2021526844.tif 000090
クローンＡ−ＣＳＲ−６Ａ（Ｎ末端からＣ末端の順：抗ＰＳＭＡクローンＡ  ｓｃＦｖ＋ｍｙｃタグ（太字）＋ＣＤ８  ＴＭ及びＣＤ２７  ＩＣ（下線））
2021526844.tif 000091
クローンＡ−ＣＳＲ−６Ｂ（Ｎ末端からＣ末端の順：抗ＰＳＭＡクローンＡ  ｓｃＦｖ＋ＣＤ８  ＴＭ及びＣＤ２７  ＩＣ（下線））
2021526844.tif 000092
クローンＡ−ＣＳＲ−７Ａ（Ｎ末端からＣ末端の順：抗ＰＳＭＡクローンＡ  ＳＣＦＶ＋ＭＹＣタグ（太字）＋ＣＤ８  ＴＭ及びＣＤ３０  ＩＣ（下線））
2021526844.tif 000093
クローンＡ−ＣＳＲ−７Ｂ（Ｎ末端からＣ末端の順：抗ＰＳＭＡクローンＡ  ＳＣＦＶ＋ＣＤ８  ＴＭ及びＣＤ３０  ＩＣ（下線））
2021526844.tif 000094
クローンＡ−ＣＳＲ−８Ａ（Ｎ末端からＣ末端の順：抗ＰＳＭＡクローンＡ  ＳＣＦＶ＋ＭＹＣタグ（太字）＋ＣＤ８  ＴＭ及びＯＸ４０  ＩＣ（下線））
2021526844.tif 000095
クローンＡ−ＣＳＲ−８Ｂ（Ｎ末端からＣ末端の順：抗ＰＳＭＡクローンＡ  ＳＣＦＶ＋ＣＤ８  ＴＭ及びＯＸ４０  ＩＣ（下線））
2021526844.tif 000096
クローンＢ−ＣＳＲ−１Ａ（Ｎ末端からＣ末端の順：抗ＰＳＭＡクローンＢ  ｓｃＦｖ＋ｍｙｃタグ（太字）＋ＣＤ２８由来の配列（下線））
2021526844.tif 000097
クローンＢ−ＣＳＲ−１Ｂ（Ｎ末端からＣ末端の順：抗ＰＳＭＡクローンＢ  ｓｃＦｖ＋ＣＤ２８由来の配列（下線））
2021526844.tif 000098
クローンＢ−ＣＳＲ−２Ａ（Ｎ末端からＣ末端の順：抗ＰＳＭＡクローンＢ  ｓｃＦｖ＋ｍｙｃタグ（太字）＋４−１ＢＢ由来の配列（下線））
2021526844.tif 000099
クローンＢ−ＣＳＲ−２Ｂ（Ｎ末端からＣ末端：抗ＰＳＭＡクローンＢ  ｓｃＦｖ＋４−１ＢＢ由来の配列（下線））
2021526844.tif 000100
クローンＢ−ＣＳＲ−３Ａ（Ｎ末端からＣ末端の順：抗ＰＳＭＡクローンＢ  ｓｃＦｖ＋ｍｙｃタグ（太字）＋ＣＤ２７由来の配列（下線））
2021526844.tif 000101
クローンＢ−ＣＳＲ−３Ｂ（Ｎ末端からＣ末端の順：抗ＰＳＭＡクローンＢ  ｓｃＦｖ＋ＣＤ２７由来の配列（下線））
2021526844.tif 000102
クローンＢ−ＣＳＲ−４Ａ（Ｎ末端からＣ末端の順：抗ＰＳＭＡクローンＢ  ＳＣＦＶ＋ＭＹＣタグ（太字）＋ＣＤ３０由来の配列（下線））
2021526844.tif 000103
クローンＢ−ＣＳＲ−４Ｂ（Ｎ末端からＣ末端の順：抗ＰＳＭＡクローンＢ  ＳＣＦＶ＋ＣＤ３０由来の配列（下線））
2021526844.tif 000104
クローンＢ−ＣＳＲ−５Ａ（Ｎ末端からＣ末端の順：抗ＰＳＭＡクローンＢ  ＳＣＦＶ＋ＭＹＣタグ（太字）＋ＯＸ４０由来の配列（下線））
2021526844.tif 000105
クローンＢ−ＣＳＲ−５Ｂ（Ｎ末端からＣ末端の順：抗ＰＳＭＡクローンＢ  ＳＣＦＶ＋ＯＸ４０由来の配列（下線））
2021526844.tif 000106
クローンＢ−ＣＳＲ−６Ａ（Ｎ末端からＣ末端の順：抗ＰＳＭＡクローンＢ  ＳＣＦＶ＋ＭＹＣタグ（太字）＋ＣＤ８  ＴＭ及びＣＤ２７  ＩＣ（下線））
2021526844.tif 000107
クローンＢ−ＣＳＲ−６Ｂ（Ｎ末端からＣ末端の順：抗ＰＳＭＡクローンＢ  ＳＣＦＶ＋ＣＤ８  ＴＭ及びＣＤ２７  ＩＣ（下線））
2021526844.tif 000108
クローンＢ−ＣＳＲ−７Ａ（Ｎ末端からＣ末端の順：抗ＰＳＭＡクローンＢ  ＳＣＦＶ＋ＭＹＣタグ（太字）＋ＣＤ８  ＴＭ及びＣＤ３０  ＩＣ（下線））
2021526844.tif 000109
クローンＢ−ＣＳＲ−７Ｂ（Ｎ末端からＣ末端の順：抗ＰＳＭＡクローンＢ  ＳＣＦＶ＋ＣＤ８  ＴＭ及びＣＤ３０  ＩＣ（下線））
2021526844.tif 000110
クローンＢ−ＣＳＲ−８Ａ（Ｎ末端からＣ末端の順：抗ＰＳＭＡクローンＢ  ＳＣＦＶ＋ＭＹＣタグ（太字）＋ＣＤ８  ＴＭ及びＯＸ４０  ＩＣ（下線））
2021526844.tif 000111
クローンＢ−ＣＳＲ−８Ｂ（Ｎ末端からＣ末端の順：抗ＰＳＭＡクローンＢ  ＳＣＦＶ＋ＣＤ８  ＴＭ及びＯＸ４０  ＩＣ（下線））
2021526844.tif 000112
【０４４７】
以下に列挙されるｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ構築物の組み合わせをコードする核酸が設計されており、これらの核酸の多くが生成されている。
Ａｘ１−ｃａＴＣＲ＋Ａ−ＣＳＲ−１Ａ（Ａｘ１−ｃａＴＣＲ＋Ｐ２Ａ自己切断ペプチド（太字）＋シグナル配列（イタリック体）＋クローンＡ−ＣＳＲ−１Ａ（下線））
2021526844.tif 000113
Ａ−ＣＳＲ−１Ａ＋Ａｘ１−ｃａＴＣＲ（シグナル配列（イタリック体）＋クローンＡ−ＣＳＲ−１Ａ（下線）＋Ｐ２Ａ自己切断ペプチド（イタリック体）＋Ａｘ１−ｃａＴＣＲ）
2021526844.tif 000114
Ａｘ１−ｃａＴＣＲ＋Ｂ−ＣＳＲ−１Ａ（Ａｘ１−ｃａＴＣＲ＋Ｐ２Ａ自己切断ペプチド（太字）＋シグナル配列（イタリック体）＋クローンＢ−ＣＳＲ−１Ａ（下線））
2021526844.tif 000115
Ｂ−ＣＳＲ−１Ａ＋Ａｘ１−ｃａＴＣＲ（シグナル配列（イタリック体）＋クローンＢ−ＣＳＲ−１Ａ（下線）＋Ｐ２Ａ自己切断ペプチド（イタリック体）＋Ａｘ１−ｃａＴＣＲ）
2021526844.tif 000116
Ｂｘ１−ｃａＴＣＲ＋Ａ−ＣＳＲ−１Ａ（Ｂｘ１−ｃａＴＣＲ＋Ｐ２Ａ自己切断ペプチド（太字）＋シグナル配列（イタリック体）＋クローンＡ−ＣＳＲ−１Ａ（下線））
2021526844.tif 000117
Ａ−ＣＳＲ−１Ａ＋Ｂｘ１−ｃａＴＣＲ（シグナル配列（イタリック体）＋クローンＡ−ＣＳＲ−１Ａ（下線）＋Ｐ２Ａ自己切断ペプチド（イタリック体）＋Ｂｘ１−ｃａＴＣＲ）
2021526844.tif 000118
Ｂｘ１−ｃａＴＣＲ＋Ｂ−ＣＳＲ−１Ａ（Ｂｘ１−ｃａＴＣＲ＋Ｐ２Ａ自己切断ペプチド（太字）＋シグナル配列（イタリック体）＋クローンＢ−ＣＳＲ−１Ａ（下線））
2021526844.tif 000119
Ｂ−ＣＳＲ−１Ａ＋Ｂｘ１−ｃａＴＣＲ（シグナル配列（イタリック体）＋クローンＡ−ＣＳＲ−１Ａ（下線）＋Ｐ２Ａ自己切断ペプチド（イタリック体）＋Ｂｘ１−ｃａＴＣＲ）
2021526844.tif 000120
Ａｘ２−ｃａＴＣＲ−１＋Ｂ−ＣＳＲ−１Ａ（Ｎ末端からＣ末端へ：Ａｘ２−ｃａＴＣＲ＋Ｐ２Ａ自己切断ペプチド（太字）＋シグナル配列（イタリック体）＋クローンＡ−ＣＳＲ−１Ａ（下線））
2021526844.tif 000121
【０４４８】
以下の太字及び表１２（以下に再現される）に記載されるｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ構築物の組み合わせをコードする核酸も設計される。
【０４４９】
Ｂ−ＣＳＲ−１Ａ＋Ａｘ２−ｃａＴＣＲ−１をコードする核酸は、（５’から３’まで）以下の主な構成成分：Ｂ−ＣＳＲ−１Ａ（配列番号７０）、配列番号１３３のＰ２Ａ自己切断ペプチド（すなわち、ＲＡＫＲＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ）に融合したフューリン切断部位、及び配列番号４７（Ａｘ２−ｃａＴＣＲ−１）を含むポリペプチドをコードする配列を含む。
【０４５０】
Ａｘ２−ｃａＴＣＲ−１＋Ｂ−ＣＳＲ−１Ｂをコードする核酸は、（５’から３’まで）配列番号４７（Ａｘ２−ｃａＴＣＲ−１）を含むポリペプチド、配列番号１３２のＰ２Ａ自己切断ペプチド（ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ）、及びＢ−ＣＳＲ−１Ｂ（配列番号３８）をコードする配列を含む。（以下に再現される表１２の行３も参照のこと）。
【０４５１】
Ｂ−ＣＳＲ−１Ｂ＋Ａｘ２−ｃａＴＣＲ−１をコードする核酸は、（５’から３’まで）Ｂ−ＣＳＲ−１Ｂ（配列番号３８）、配列番号１３３のＰ２Ａ自己切断ペプチドに融合したフューリン切断部位、及び配列番号４７（Ａｘ２−ｃａＴＣＲ−１）を含むポリペプチドをコードする配列を含む。（以下に再現される表１２の行４も参照のこと）。
【０４５２】
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【０４５３】
表１２の行１−１２８のいずれか１つの抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ＋抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲをコードする単一の核酸は、（例えば、ｃａＴＣＲの鎖１及び／又は鎖２をコードする配列の上流及び／又は抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲをコードする配列の上流に）１つ又は複数のシグナルペプチドをさらにコードし得る。特定のリンカーは、表１２の行１−１２８に記載されているが、代替リンカーが使用されてもよい（例えば、表６Ａを参照）。表１２の行１−１２８のいずれか１つの抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲ＋抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲをコードする単一の核酸は、１つ又は複数のペプチドリンカー（例えば、切断可能なリンカー）及び／又はペプチドタグをさらにコードし得る。例えば、表６Ａ及び６Ｂを参照のこと。
【０４５４】
この実施例に記載のｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ構築物の組み合わせのいくつかを発現するＴ細胞は、対応する核酸を含むウイルスを一次ヒトＴ細胞に形質導入することによって生成され、それらの特徴及び機能は、実施例３及び７に記載の方法を使用して評価された。このようなタグを保持するＣＳＲ構築物中のｍｙｃタグは、発現マーカーとして使用された。このようなＴ細胞は、コード化されたｃａＴＣＲ及びＣＳＲ構築物を発現し、良好に増殖し、Ｔ細胞の特異性をリダイレクトし、陽性のＰＳＭＡ特異的な細胞傷害性／腫瘍死滅活性を示した。
【０４５５】
実施例１０に記載の２つの代表的な腫瘍細胞死滅実験において、モック形質導入Ｔ細胞及びｃａＴＣＲをコードする核酸で形質導入されたＴ細胞とともに、いくつかの一次Ｔ細胞は、様々なｃａＴＣＲ＋ＣＳＲの組み合わせをコードする核酸で形質導入され、また、６０％の受容体陽性に正規化され、同じ３つの標的細胞株と２：１のＥ：Ｔ比（受容体陽性エフェクター：標的比１．２：１）で１６時間インキュベートされた。これらの実験の結果は、これらのＴ細胞の陽性のＰＳＭＡ特異的細胞傷害性を示した図６及び図７に示されている。ｃａＴＣＲを単独で発現するＴ細胞と比較して、抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲと抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲの両方を発現するＴ細胞は、ほとんどの場合、より高い割合でＰＳＭＡ＋腫瘍細胞を死滅させた。
【０４５６】
別の代表的な腫瘍細胞死滅実験では、Ａｘ２−ｃａＴＣＲ＋Ｂ−ＣＳＲ又はＢｘ２−ｃａＴＣＲ＋Ａ−ＣＳＲの組み合わせをコードする核酸で形質導入されたＴ細胞は、配列番号２９のアミノ酸配列を含む抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ構築物又は配列番号３０のアミノ酸配列を含む抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ構築物を発現するＴ細胞とともに、５３％受容体陽性に正規化され、標的細胞と２：１のＥ：Ｔ比（０．２Ｍ：０．１Ｍ、受容体陽性エフェクター：標的比１．０６：１）で１６時間インキュベートされた。２つのＰＳＭＡ＋標的細胞株：ＬＮＣａＰ及びＰＣ３−ＰＭＳＡを使用した。この腫瘍細胞死滅実験の結果を図８に示す。これは、これらのＴ細胞の陽性のＰＳＭＡ特異的細胞傷害性を示している。さらに、この１つの重複実験の細胞をスピンダウンし、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイのために上清を収集し、ＩＬ−６などのいくつかの炎症性サイトカインを含む様々なサイトカインの放出レベルを測定した。結果は、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲをコードする核酸で形質導入されたＴ細胞は、ＣＡＲをコードする核酸で形質導入されたＴ細胞よりも、ＩＬ−６を含む低レベルの炎症性サイトカインを分泌したことを示している（データは非表示）。
【０４５７】
腫瘍細胞死滅実験に加えて、実施例７に記載される蛍光ベースのフローサイトメトリーアッセイが、構築物の組み合わせのＡｘ１−ｃａＴＣＲ＋Ｂ−ＣＳＲ（別名Ａｘ１−ｃａＴＣＲ＋Ｂ−ＣＳＲ−１Ａ、配列番号８６）又はＢｘ１−ｃａＴＣＲ＋Ａ−ＣＳＲ（別名Ｂｘ１−ｃａＴＣＲ＋Ａ−ＣＳＲ−１Ａ、配列番号８７）を発現するＴ細胞を、Ｔ細胞の増殖を評価するために、５０％受容体陽性になるようにモック形質導入Ｔ細胞で全て正規化された、クローンＡ  ＣＡＲ（配列番号２９）又はクローンＢ  ＣＡＲ（配列番号３０）を発現するＴ細胞とともに用いて行われた。ＬＮＣａＰをＰＳＭＡ＋標的細胞株として使用した。Ｅ：Ｔ比は２：１（０．１Ｍ／０．０５Ｍ、受容体陽性エフェクター：標的比１：１）である。Ｔ細胞をＣＦＳＥで染色した。Ｔ細胞は、最大４サイクル（４回のエンゲージメント）まで７日ごとに０．１Ｍの標的細胞で再チャレンジされた。ＣＦＳＥシグナル伝達を、各エンゲージメント期間のＤ３、Ｄ５、及びＤ７においてフローサイトメトリーによって調べた。結果は図５に示されており、ｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ構築物の組み合わせとＣＡＲの両方が抗原認識を介してＴ細胞増殖を刺激することができたことを示している。
【０４５８】
上記の実験は、表１２に示されるｃａＴＣＲ＋ＣＳＲ構築物の組み合わせを発現するＴ細胞を使用して繰り返される。
【０４５９】
実施態様の一覧
１．  配列番号４４に記載のアミノ酸配列を含む細胞表面結合ＰＳＭＡの細胞外ドメインを特異的に認識する抗体部分を含む抗前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）構築物。
２．  ＰＳＭＡが、がん細胞の表面上に発現される、実施態様１に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
３．  がん細胞が、前立腺がん細胞、腎細胞がん細胞、子宮がん細胞、又は肝臓がん細胞である、実施態様３に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
４．  がん細胞が、前立腺がん細胞である、実施態様３に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
５．  前立腺がん細胞が、ホルモン抵抗性前立腺がん細胞又は転移性前立腺がん細胞である、実施態様４に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
６．  がん細胞が、腎がん細胞である、実施態様３に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
７．  腎がん細胞が、腎明細胞がん（ＣＣＲＣＣ）細胞である、実施態様６に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
８．  ＰＳＭＡが、ＬＮＣａＰ、ＭＤＡ  ＰＣａ  ２ｂ、ＶＣａＰ、２２Ｒｖ１、Ｃａｋｉ−１；ＨＣＣ１４８２；及びＨｕＨ−７からなる群から選択される細胞の表面上に発現される、実施態様１−７のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
９．  抗体部分が、
ｉ）配列番号１−２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、又は最大約５個のアミノ酸置換を含むその変異体、配列番号３−４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、又は最大約５個のアミノ酸置換を含むその変異体、及び配列番号５−６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３、又は最大約５個のアミノ酸置換を含むその変異体を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）；並びに
ｉｉ）配列番号７−８のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、又は最大約５個のアミノ酸置換を含むその変異体、アミノ酸配列ＧＮＳ若しくはＳＳＮを含むＣＤＲ−Ｌ２、又は約２個のアミノ酸置換を含むその変異体、及び配列番号９−１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３、又は最大約５個のアミノ酸置換を含むその変異体を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）
を含む、実施態様１−８のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
１０．  抗体部分が、ｉ）配列番号１−２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３−４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、及び配列番号５−６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；並びにｉｉ）配列番号７−８のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、ＧＮＳ又はＳＮＮのアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、及び配列番号９−１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含むＶＬを含む、実施態様９に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
１１．  抗体部分が、以下
ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、及び配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；並びに
ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、アミノ酸配列ＧＮＳを含むＣＤＲ−Ｌ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）
を含む、実施態様９又は１０に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
１２．  抗体部分が、
ｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；並びに
ｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、アミノ酸配列ＳＮＮを含むＣＤＲ−Ｌ２、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含むＶＬ
を含む、実施態様９又は１０に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
１３．  抗体部分が、配列番号１６又は１７に記載の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３、並びに配列番号１８又は１９に記載の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３を含む、実施態様１−８のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
１４．  抗体部分が、配列番号１６に記載のＶＨのＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３、並びに配列番号１８に記載のＶＬのＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３を含む、実施態様１３に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
１５．  抗体部分が、配列番号１７に記載のＶＨのＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３、並びに配列番号１９に記載のＶＬのＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３を含む、実施態様１３に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
１６．  抗体部分が、ｉ）配列番号１６又は１７に対して少なくとも約８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、及びｉｉ）配列番号１８又は１９に対して少なくとも約８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施態様１−８のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
１７．  抗体部分が、ｉ）配列番号１６又は１７に対して少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、及びｉｉ）配列番号１８又は１９に対して少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施態様１−１６のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
１８．  抗体部分が、ｉ）配列番号１６又は１７に対して少なくとも約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ、及びｉｉ）配列番号１８又は１９に対して少なくとも約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施態様１−１７のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
１９．  抗体部分が、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施態様１−８に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
２０．  抗体部分が、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施態様１−８に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
２１．  抗体部分が、
ｉ）配列番号１、３、及び５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、並びに配列番号７、ＧＮＳ、及び配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；又は
ｉｉ）配列番号２、４、及び６のアミノ酸配列を含むＶＨ、並びに配列番号８、ＳＳＮ、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ
を含む、実施態様１−８のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
２２．  ＰＳＭＡへの特異的結合について実施態様１９又は実施態様２０に記載の抗ＰＳＭＡ構築物と競合する抗体部分を含む抗ＰＳＭＡ構築物。
２３．  ＰＳＭＡを特異的に認識する抗体部分が、キメラである、ヒトである、部分的にヒト化されている、完全にヒト化されている、又は半合成である、実施態様１−２２のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
２４．  ＰＳＭＡを特異的に認識する抗体部分が、完全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である、実施態様１−２３のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
２５．  ＰＳＭＡを特異的に認識する抗体部分が、ｓｃＦｖである、実施態様２４に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
２６．  ｓｃＦｖが、配列番号２０に記載のアミノ酸配列、又は配列番号２０に対して少なくとも８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施態様２５に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
２７．  ｓｃＦｖが、配列番号２１に記載のアミノ酸配列、又は配列番号２１に対して少なくとも８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施態様２５に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
２８．  ＰＳＭＡを特異的に認識する抗体部分が、Ｆａｂ又はＦａｂ’である、実施態様２４に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
２９．  ＰＳＭＡを特異的に認識する抗体部分が、任意選択でリンカーを介してＦｃ断片に融合される、実施態様１−２８のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
３０．  Ｆｃ断片が、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ断片である、実施態様２９に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
３１．  ヒトＩｇＧが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４である、実施態様３０に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
３２．  抗ＰＳＭＡ抗体部分が、完全長抗体である、実施態様１−２３のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
３３．  完全長抗体が、配列番号３９のアミノ酸配列又は配列番号３９に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号４０のアミノ酸配列又は配列番号４０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、実施態様３０に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
３４．  完全長抗体が、配列番号３９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号４０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、実施態様３０に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
３５．  完全長抗体が、配列番号３９に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号４０に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、実施態様３０に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
３６．  完全長抗体が、配列番号４１に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号４２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸を含む軽鎖を含む、実施態様３０に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
３７．  完全長抗体が、配列番号４１に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号４２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸を含む軽鎖を含む、実施態様３０に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
３８．  完全長抗体が、配列番号４１に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号４２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸を含む軽鎖を含む、実施態様３０に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
３９．  構築物が単一特異性である、実施態様１−３８のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
４０．  構築物が多重特異性である、実施態様１−３８のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
４１．  構築物が二重特異性である、実施態様４０に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
４２．  構築物が、タンデムｓｃＦｖ、ダイアボディ（Ｄｂ）、単鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、二重親和性リターゲティング（ｄｕａｌ−ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ）（ＤＡＲＴ）抗体、Ｆ（ａｂ’）２、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体、ノブイントゥホール（ＫｉＨ）抗体、ドックアンドロック（ＤＮＬ）抗体、化学的に架橋された抗体、ヘテロ多量体抗体、又はヘテロコンジュゲート抗体である、実施態様４０又は４１に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
４３．  構築物が、ペプチドリンカーによって連結された２つのｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖである、実施態様４２に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
４４．  構築物が、第２の抗原を特異的に認識する第２の抗体部分をさらに含む、実施態様４０−４３のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
４５．  第２の抗原が、Ｔ細胞の表面上の抗原である、実施態様４４に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
４６．  第２の抗原が、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、及びＨＶＥＭからなる群から選択される、実施態様４５に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
４７．  第２の抗原がＣＤ３εである、実施態様４６に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
４８．  構築物が、ＰＳＭＡを特異的に認識するＮ末端ｓｃＦｖ及びＣＤ３εを特異的に認識するＣ末端ｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖである、実施態様４７に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
４９．  配列番号２５又は２６に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施態様４８に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
５０．  配列番号２７又は２８に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施態様４８に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
５１．  Ｔ細胞が、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、及びナチュラルキラーＴ細胞からなる群から選択される、実施態様４５に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
５２．  抗ＰＳＭＡ構築物の発現が、操作されたＴ細胞の活性化によって誘導される、実施態様４５−５１のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
５３．  操作されたＴ細胞が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含むＴ細胞である、実施態様５２に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
５４．  ＣＡＲがＰＳＭＡに特異的に結合する、実施態様５３に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
５５．  ＣＡＲがＰＳＭＡ以外の抗原に結合する、実施態様５３に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
５６．  操作されたＴ細胞が、キメラ抗体−Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）構築物（ｃａＴＣＲ）を含むＴ細胞である、実施態様５２に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
５７．  ｃａＴＣＲがＰＳＭＡに特異的に結合する、実施態様５６に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
５８．  ｃａＴＣＲがＰＳＭＡ以外の抗原に結合する、実施態様５６に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
５９．  第２の抗原が、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、マクロファージ、単球、又は好中球の表面上の抗原である、実施態様４４に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
６０．  構築物が、
（ａ）抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む細胞外ドメイン；
（ｂ）膜貫通ドメイン；及び
（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメイン
を含むＣＡＲである、実施態様１−２７のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
６１．  細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζ、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、又はＣＤ６６ｄに由来する一次免疫細胞シグナル伝達配列を含む、実施態様６０に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
６２．  細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＩＣＯＳ、又はＯＸ４０に由来する共刺激シグナル伝達配列をさらに含む、実施態様６１に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
６３．  細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζに由来する一次免疫細胞シグナル伝達配列及びＣＤ２８に由来する共刺激シグナル伝達配列を含む、実施態様６０、６１、又は６２に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
６４．  配列番号２９に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施態様６０−６３のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
６５．  配列番号３０に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施態様６０−６３のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
６６．  構築物が、
（ａ）抗ＰＳＭＡ抗体部分を含む細胞外ドメイン；及び
（ｂ）第１のＴＣＲ膜貫通ドメイン（ＴＣＲ−ＴＭ）を含む第１のＴＣＲドメイン（ＴＣＲＤ）及び第２のＴＣＲ−ＴＭを含む第２のＴＣＲＤを含むＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）、を含み、ここで、該ＴＣＲＭが少なくとも１つのＴＣＲ会合シグナル伝達分子の動員を促進する、ｃａＴＣＲである、実施態様１−２３のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
６７．  第１のＴＣＲ−ＴＭが、第１の天然に存在するＴＣＲの膜貫通ドメインの１つに由来し、第２のＴＣＲ−ＴＭが、第１の天然に存在するＴＣＲの他の膜貫通ドメインに由来する、実施態様６６に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
６８．  ＴＣＲ−ＴＭの少なくとも１つが、天然には存在しない、実施態様６７に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
６９．  少なくとも１つの天然には存在しないＴＣＲ−ＴＭを含むＴＣＲＭが、第１の天然に存在するＴ細胞受容体膜貫通ドメインを含むＴＣＲＭと比較して、少なくとも１つのＴＣＲ会合シグナル伝達分子の増強された動員を可能にする、実施態様６８に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
７０．  第１及び第２のＴＣＲ−ＴＭが、天然に存在する、実施態様６６又は６７に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
７１．  第１のＴＣＲ−ＴＭ及び第２のＴＣＲ−ＴＭが、γ／δＴＣＲに由来し、
任意選択で、第１のＴＣＲ−ＴＭがＴＣＲγ鎖に由来し、第２のＴＣＲ−ＴＭがＴＣＲδ鎖に由来し、又は
任意選択で、第１のＴＣＲ−ＴＭがＴＣＲδ鎖に由来し、第２のＴＣＲ−ＴＭがＴＣＲγ鎖に由来する、実施態様６６−７０のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
７２．  構築物が、配列番号３１に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号３２に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖を含む、実施態様７１に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
７３．  構築物が、配列番号３４に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号３５に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖を含む、実施態様７１に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
７４．  構築物が、配列番号１６５に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１６６に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖を含む、実施態様７１に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
７５．  構築物が、配列番号１６７に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１６８に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖を含む、実施態様７１に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
７６．  構築物が、配列番号１６９に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１７０に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖を含む、実施態様７１に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
７７．  構築物が、配列番号１７１に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１７２に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖を含む、実施態様７１に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
７８．  構築物が、配列番号１７３に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１７４に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖を含む、実施態様７１に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
７９．  構築物が、配列番号１７５に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１７６に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖を含む、実施態様７１に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
８０．  構築物が、配列番号１７７に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１７８に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖を含む、実施態様７１に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
８１．  構築物が、配列番号１７９に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖及び配列番号１８０に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖を含む、実施態様７１に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
８２．  第１のＴＣＲ−ＴＭ及び第２のＴＣＲ−ＴＭが、α／βＴＣＲに由来し、
任意選択で、第１のＴＣＲ−ＴＭがＴＣＲα鎖に由来し、第２のＴＣＲ−ＴＭがＴＣＲβ鎖に由来し、又は
任意選択で、第１のＴＣＲ−ＴＭがＴＣＲβ鎖に由来し、第２のＴＣＲ−ＴＭがＴＣＲα鎖に由来する、実施態様６６−７０のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
８３．  ＴＣＲ会合シグナル伝達分子が、ＣＤ３δε、ＣＤ３γε、及びＣＤ３ζζからなる群から選択される、実施態様６６−８２のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
８４．  ｃａＴＣＲが、機能的な一次免疫細胞シグナル伝達ドメインを欠いている、実施態様６６−８３のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
８５．  構築物が、
ｉ）ＰＳＭＡと結合又は相互作用することができるリガンド結合モジュール；
ｉｉ）膜貫通モジュール；及び
ｉｉｉ）共刺激シグナルをエフェクター細胞に提供することができる共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュール
を含み、
ここで、該リガンド結合モジュールと共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールが同じ分子に由来せず、該ＣＳＲが機能的な一次免疫細胞シグナル伝達ドメインを欠いている、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）である、実施態様１−２３のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
８６．  ＣＳＲが、任意の一次免疫細胞シグナル伝達配列を欠いている、実施態様８５に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
８７．  リガンド結合モジュールが、実施態様１−２５のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物を含む、実施態様８５又は８６に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
８８．  ＣＳＲの膜貫通モジュールとＣＳＲの共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールが同じ分子に由来する、実施態様８５から８７のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
８９．  分子が、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドからなる群から選択される、実施態様８８に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
９０．  分子が、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、及びＣＤ２７からなる群から選択される、実施態様８９に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
９１．  ＣＳＲの膜貫通モジュールとＣＳＲの共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールが異なる分子に由来する、実施態様８５から８７のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
９２．  ＣＳＲの膜貫通モジュールが、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、又はＴ細胞受容体のα、β、δ、γ、若しくはζ鎖に由来する膜貫通ドメインを含む、実施態様８５−９１のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
９３．  ＣＳＲの膜貫通モジュールが、ＣＤ８、４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、又はＯＸ４０に由来する膜貫通ドメインを含む、実施態様８５−９２のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
９４．  ＣＳＲの膜貫通モジュールが、配列番号９４−９９のいずれか１つに対して少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％の配列同一性を有する配列を含む、実施態様９３に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
９５．  共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールが、ＴＣＲの共刺激受容体の細胞内ドメインに由来する、実施態様８５−９４のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
９６．  共刺激受容体が、４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、及びＣＤ４０からなる群から選択される、実施態様９５に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
９７．  ＣＳＲの共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールが、配列番号１００−１０３及び１８３のいずれか１つに対して少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％の配列同一性を有する配列を含む、実施態様９６に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
９８．  ＣＳＲの発現が、操作されたＴ細胞の活性化の際に誘導可能である、実施態様８５−９７のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
９９．  操作されたＴ細胞が、ＣＡＲを含むＴ細胞である、実施態様９８に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
１００．  ＣＡＲがＰＳＭＡに特異的に結合する、実施態様９９に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
１０１．  ＣＡＲがＰＳＭＡ以外の抗原に結合する、実施態様９９に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
１０２．  操作されたＴ細胞が、ｃａＴＣＲを含むＴ細胞である、実施態様９８に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
１０３．  ｃａＴＣＲがＰＳＭＡに特異的に結合する、実施態様１０２に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
１０４．  ｃａＴＣＲがＰＳＭＡ以外の抗原に結合する、実施態様１０２に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
１０５．  配列番号３、５５−６９、９３、及び１８４−１８６のいずれか１つに対して少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施態様８５−１０４のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
１０６．  配列番号３７に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施態様１０５に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
１０７．  配列番号３８、７０−８４、９３、及び１８４−１８６のいずれか１つに対して少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施態様８５−１０４のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
１０８．  配列番号３８に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施態様１０７に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
１０９．  シグナルペプチドを含む、実施態様８５−１０８のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
１１０．  シグナルペプチドが、ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧ  配列番号１２８の配列を含む、実施態様１０９に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
１１１．  エフェクター分子にコンジュゲートされた、実施態様１−４２のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
１１２．  エフェクター分子が、薬物、毒素、放射性同位元素、タンパク質、ペプチド、及び核酸からなる群から選択される治療剤である、実施態様１１１に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
１１３．  治療剤が、薬物又は毒素である、実施態様１１２に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
１１４．  エフェクター分子が、検出可能な標識である、実施態様１１１に記載の抗ＰＳＭＡ構築物。
１１５．  実施態様６０−６５のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ、又は実施態様６６−８４のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードする１つ又は複数の核酸で遺伝子改変されているエフェクター細胞。
１１６．  抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ又は抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードする１つ又は複数の核酸がまた、標的抗原に結合するリガンド結合モジュールを含むＣＳＲをコードする、実施態様１１５に記載のエフェクター細胞。
１１７．  標的抗原に結合するリガンド結合モジュールを含むＣＳＲをコードする１つ又は複数の追加の核酸で遺伝子改変されている、実施態様１１５に記載のエフェクター細胞。
１１８．  標的抗原がＰＳＭＡである、実施態様１１６又は１１７に記載のエフェクター細胞。
１１９．  標的抗原が、ＰＳＭＡ以外の抗原である、実施態様１１６又は１１７に記載のエフェクター細胞。
１２０．  抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ又は抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードする１つ又は複数の核酸がまた、標的抗原に結合する第１のｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖをコードする、実施態様１１５に記載のエフェクター細胞。
１２１．  標的抗原に結合する第１のｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖをコードする１つ又は複数の追加の核酸で遺伝子改変されている、実施態様１１５に記載のエフェクター細胞。
１２２．  標的抗原がＰＳＭＡである、実施態様１２０又は１２１に記載のエフェクター細胞。
１２３．  標的が、ＰＳＭＡ以外の抗原である、実施態様１２０又は１２１に記載のエフェクター細胞。
１２４．  実施態様４３−５９のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ  タンデムｓｃＦｖ、又は実施態様８５−１１０のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲをコードする１つ又は複数の核酸で遺伝子改変されているエフェクター細胞
１２５．  抗ＰＳＭＡタンデムｓｃＦｖ又は抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲをコードする１つ又は複数の核酸はまた、ＣＡＲをコードする、実施態様１２４に記載のエフェクター細胞。
１２６．  ＣＡＲをコードする１つ又は複数の追加の核酸で遺伝子改変されている、実施態様１２４に記載のエフェクター細胞。
１２７．  ＣＡＲがＰＳＭＡに特異的に結合する、実施態様１２５又は１２６に記載のエフェクター細胞。
１２８．  ＣＡＲがＰＳＭＡ以外の抗原に特異的に結合する、実施態様１２５又は１２６に記載のエフェクター細胞。
１２９．  抗ＰＳＭＡタンデムｓｃＦｖ又は抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲをコードする１つ又は複数の核酸はまた、ｃａＴＣＲをコードする、実施態様１２４に記載のエフェクター細胞。
１３０．  ｃａＴＣＲをコードする１つ又は複数の追加の核酸で遺伝子改変されている、実施態様１２４に記載のエフェクター細胞。
１３１．  ｃａＴＣＲがＰＳＭＡに特異的に結合する、実施態様１２９又は１３０に記載のエフェクター細胞。
１３２．  ｃａＴＣＲがＰＳＭＡ以外の抗原に特異的に結合する、実施態様１２９又は１３０に記載のエフェクター細胞。
１３３．  エフェクター細胞が免疫細胞である、実施態様１１５−１３２のいずれか一項に記載のエフェクター細胞。
１３４．  免疫細胞が、Ｔ細胞である、実施態様１３３に記載のエフェクター細胞。
１３５．  Ｔ細胞が、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞である、実施態様１２２に記載のエフェクター細胞。
１３６．  実施態様６０−６５のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ、又は実施態様６６−８４のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードする１つ又は複数の核酸で遺伝子改変することを含む、エフェクター細胞を生成する方法。
１３７．  抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ又は抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードする１つ又は複数の核酸がまた、標的抗原に結合するリガンド結合モジュールを含むＣＳＲをコードする、実施態様１３６に記載の方法。
１３８．  標的抗原に結合するリガンド結合モジュールを含むＣＳＲをコードする１つ又は複数の追加の核酸で細胞をさらに遺伝子改変することを含む、実施態様１３６に記載の方法。
１３９．  標的抗原がＰＳＭＡである、実施態様１３７又は１３８に記載の方法。
１４０．  標的抗原が、ＰＳＭＡ以外の抗原である、実施態様１３７又は１３８に記載の方法。
１４１．  抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ又は抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードする１つ又は複数の核酸がまた、標的抗原に結合する第１のｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖをコードする、実施態様１３６に記載の方法。
１４２．  標的抗原に結合する第１のｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖをコードする１つ又は複数の追加の核酸で細胞をさらに遺伝子改変することを含む、実施態様１３６に記載の方法。
１４３．  標的抗原がＰＳＭＡである、実施態様１４１又は１４２に記載の方法。
１４４．  標的が、ＰＳＭＡ以外の抗原である、実施態様１４１又は１４２に記載の方法。
１４５．  実施態様３７−５３のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡタンデムｓｃＦｖ、又は実施態様８５−１１０のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲをコードする１つ又は複数の核酸で遺伝子改変することを含む、エフェクター細胞を生成する方法。
１４６．  抗ＰＳＭＡタンデムｓｃＦｖ又は抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲをコードする１つ又は複数の核酸はまた、ＣＡＲをコードする、実施態様１４５に記載の方法。
１４７．  ＣＡＲをコードする１つ又は複数の追加の核酸で細胞をさらに遺伝子改変することを含む、実施態様１４５に記載の方法。
１４８．  ＣＡＲがＰＳＭＡに特異的に結合する、実施態様１４６又は１４７に記載の方法。
１４９．  ＣＡＲがＰＳＭＡ以外の抗原に特異的に結合する、実施態様１４６又は１４７に記載の方法。
１５０．  抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ又は抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードする１つ又は複数の核酸はまた、ｃａＴＣＲをコードする、実施態様１４５に記載の方法。
１５１．  ｃａＴＣＲをコードする１つ又は複数の追加の核酸で細胞をさらに遺伝子改変することを含む、実施態様１４５に記載の方法。
１５２．  ｃａＴＣＲがＰＳＭＡに特異的に結合する、実施態様１５０又は１５１に記載の方法。
１５３．  ｃａＴＣＲがＰＳＭＡ以外の抗原に特異的に結合する、実施態様１５０又は１５１に記載の方法。
１５４．  エフェクター細胞が免疫細胞である、実施態様１３６−１５３のいずれか一項に記載の方法。
１５５．  免疫細胞が、Ｔ細胞である、実施態様１５４に記載の方法。
１５６．  Ｔ細胞が、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞である、実施態様１５５に記載の方法。
１５７．  実施態様１−１１０のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物のポリペプチド部分をコードする核酸。
１５８．  実施態様１５７に記載の核酸を含むベクター。
１５９．  実施態様１５７に記載の核酸、又は１５８に記載のベクターを含む宿主細胞。
１６０．  抗ＰＳＭＡ構築物が発現される条件下で実施態様１５９に記載の宿主細胞を培養すること、及び宿主細胞によって産生された抗ＰＳＭＡ構築物を回収することを含む、実施態様１−５９のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物を産生する方法。
１６１．  実施態様１−５９及び１１１−１１３のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物、実施態様１１５−１３５のいずれか一項に記載のエフェクター細胞、実施態様１５７に記載の核酸、又は実施態様１５８に記載のベクター及び薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物。
１６２．  実施態様１−５９及び１１１−１１３のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ構築物、実施態様１１５−１３５のいずれか一項に記載のエフェクター細胞、実施態様１５７に記載の核酸、実施態様１５８に記載のベクター及び／又は実施態様１５９に記載の宿主細胞を含むキット。
１６３．  試料を実施態様１１４に記載の抗ＰＳＭＡ構築物と接触させること、及び標識の存在を検出することを含む、試料中のＰＳＭＡを検出する方法。
１６４．  試料がＰＳＭＡを発現する細胞を含む、実施態様１６３に記載の方法。
１６５．  実施態様１６１に記載の薬学的組成物の有効量を個体に投与することを含む、ＰＳＭＡ関連疾患又は障害を有する個体を治療する方法。
１６６．  実施態様６０−６５のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ、又は実施態様６６−８４のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードする１つ又は複数の核酸で遺伝子改変されているエフェクター細胞を個体に投与することを含む、ＰＳＭＡ関連疾患又は障害を有する個体を治療する方法。
１６７．  投与前に１つ又は複数の核酸でエフェクター細胞を遺伝子改変することを含む、実施態様１６６に記載の方法。
１６８．  抗ＰＳＭＡ  ＣＡＲ又は抗ＰＳＭＡ  ｃａＴＣＲをコードする１つ又は複数の核酸がまた、ＣＳＲ又はタンデムｓｃＦｖをコードする、実施態様１６７に記載の方法。
１６９．  ＣＳＲ又はタンデムｓｃＦｖをコードする１つ又は複数の追加の核酸でエフェクター細胞をさらに遺伝子改変することを含む、実施態様１６７に記載の方法。
１７０．  タンデムｓｃＦｖがＰＳＭＡに特異的に結合する、実施態様１６８又は１６９に記載の方法。
１７１．  タンデムｓｃＦｖがＰＳＭＡ以外の抗原に特異的に結合する、実施態様１６８又は１６９に記載の方法。
１７２．  ＣＳＲがＰＳＭＡに特異的に結合する、実施態様１６８又は１６９に記載の方法。
１７３．  ＣＳＲがＰＳＭＡ以外の抗原に特異的に結合する、実施態様１６８又は１６９に記載の方法。
１７４．  実施態様４３−５９のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ  タンデムｓｃＦｖ、又は実施態様８５−１１０のいずれか一項に記載の抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲをコードする１つ又は複数の核酸で遺伝子改変されているエフェクター細胞を個体に投与することを含む、ＰＳＭＡ関連疾患又は障害を有する個体を治療する方法。
１７５．  投与前に１つ又は複数の核酸でエフェクター細胞を遺伝子改変することを含む、実施態様１７４に記載の方法。
１７６．  抗ＰＳＭＡ  ＣＳＲ又は抗ＰＳＭＡタンデムｓｃＦｖをコードする１つ又は複数の核酸がまた、ＣＡＲ又はｃａＴＣＲをコードする、実施態様１７５に記載の方法。
１７７．  ＣＡＲ又はｃａＴＣＲをコードする１つ又は複数の追加の核酸でエフェクター細胞をさらに遺伝子改変することを含む、実施態様１７５に記載の方法。
１７８．  ＣＡＲがＰＳＭＡに特異的に結合する、実施態様１７６又は１７７に記載の方法。
１７９．  ＣＡＲがＰＳＭＡ以外の抗原に特異的に結合する、実施態様１７６又は１７７に記載の方法。
１８０．  ｃａＴＣＲがＰＳＭＡに特異的に結合する、実施態様１７６又は１７７に記載の方法。
１８１．  ｃａＴＣＲがＰＳＭＡ以外の抗原に特異的に結合する、実施態様１７６又は１７７に記載の方法。
１８２．  エフェクター細胞が免疫細胞である、実施態様１６６−１８１のいずれか一項に記載の方法。
１８３．  免疫細胞が、Ｔ細胞である、実施態様１８２に記載の方法。
１８４．  Ｔ細胞が、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、又はナチュラルキラーＴ細胞である、実施態様１８３に記載の方法。
１８５．  方法が、エフェクター細胞を遺伝子改変して投与する前に、個体からエフェクター細胞を得ることをさらに含む、実施態様１６６−１８４のいずれか一項に記載の方法。
１８６．  エフェクター細胞が得られる個体が、遺伝子改変されたエフェクター細胞が投与される個体である、実施態様１８５に記載の方法。
１８７．  エフェクター細胞が得られる個体が、遺伝子改変されたエフェクター細胞が投与される個体ではない、実施態様１８６に記載の方法。
１８８．  遺伝子改変されたエフェクター細胞が、遺伝子改変されたエフェクター細胞が投与される個体に関して同種異系である、実施態様１８７に記載の方法。
１８９．  遺伝子改変されたエフェクター細胞が、遺伝子改変されたエフェクター細胞が投与される個体に関して同系である、実施態様１８８に記載の方法。
１９０．  遺伝子改変されたエフェクター細胞が、遺伝子改変されたエフェクター細胞が投与される個体に関して異種である、実施態様１８８に記載の方法。
１９１．  個体に追加の治療を投与することをさらに含む、実施態様１６５−１８４のいずれか一項に記載の方法。ｌ
１９２．  ＰＳＭＡ関連疾患又は障害ががんである、実施態様１６５−１９１のいずれか一項に記載の方法。
１９３．  がんが、前立腺がん、腎がん細胞、子宮がん及び肝臓がんからなる群から選択される、実施態様１９２に記載の方法。
１９４．  がんが、前立腺がんである、実施態様１９３に記載の方法。
１９５．  前立腺がんが、ホルモン抵抗性前立腺がん又は転移性前立腺がんである、実施態様１９４に記載の方法。
１９６．  がんが、腎がんである、実施態様１９３に記載の方法。
１９７．  腎がんが、腎明細胞がん（ＣＣＲＣＣ）である、実施態様１９６に記載の方法。
１９８．  ＰＳＭＡ関連疾患又は障害を有する個体が、哺乳動物である、実施態様１６５−１９７のいずれか一項に記載の方法。
１９９．  哺乳動物が、ヒトである、実施態様１９８に記載の方法。
２００．  ＰＳＭＡ関連疾患又は障害を有すると疑われる個体を診断する方法であって、
ａ）実施態様１１４に記載の抗ＰＳＭＡ構築物の有効量を個体に投与すること；及び
ｂ）個体における標識のレベルを決定することであって、ここで、閾値レベルを上回る標識のレベルが、個体がＰＳＭＡ関連疾患又は障害を有することを示す、決定すること
を含む方法。
２０１．  ＰＳＭＡ関連疾患又は障害を有すると疑われる個体を診断する方法であって、
（ａ）個体に由来する細胞を含む試料を、実施態様１１４に記載の抗ＰＳＭＡ構築物と接触させること；及び
ｂ）抗ＰＳＭＡ構築物と結合した試料中の細胞の数を決定することであって、ここで、閾値レベルを上回る、抗ＰＳＭＡ構築物と結合した細胞の数の値が、個体がＰＳＭＡ関連疾患又は障害を有することを示す、決定すること
を含む方法。
２０２．  ＰＳＭＡ関連疾患又は障害ががんである、実施態様２００又は２０１に記載の方法。
２０３．  がんが、前立腺がん、腎がん細胞、子宮がん及び肝臓がんからなる群から選択される、実施態様２０２に記載の方法。
２０４．  がんが、前立腺がんである、実施態様２０３に記載の方法。
２０５．  前立腺がんが、ホルモン抵抗性前立腺がん又は転移性前立腺がんである、実施態様２０４に記載の方法。
２０６．  がんが、腎がんである、実施態様２０３に記載の方法。
２０７．  腎がんが、腎明細胞がん（ＣＣＲＣＣ）である、実施態様２０６に記載の方法。
２０８．  ＰＳＭＡの発現、異常な発現、及び／又は異常な活性に関連する疾患又は障害を有すると疑われる個体が、哺乳動物である、実施態様２００−２０７のいずれか一項に記載の方法。
２０９．  哺乳動物が、ヒトである、実施態様２０８に記載の方法。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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