(57)【要約】本発明は、対象において、皮膚の色素沈着をモジュレートする、ならびにＵＶ誘発性皮膚損傷、紅斑、皮膚のエイジング、日焼けおよび色素沈着過度を処置または予防するための化合物、組成物および方法に関する。本発明の化合物、組成物および方法は、マラセジンおよびインジルビン、ならびに／またはそれらの化学アナログを含めた、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ由来の化合物を一般に含む。本明細書において開示されている化合物および組成物の他の用途には、以下に限定されないが、メラノサイトアポトーシスを含めた色素沈着過度障害により引き起こされる色素沈着過度の改善、ならびに芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）活性、メラニン形成、メラニン産生、メラノソーム生物発生、メラノソーム輸送、メラノサイト活性およびメラニン濃度のモジュレートが含まれる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式の構造を有する化合物：
【化２２４】
2021521195.tif 000248
［式中、
Ｘは、ＮＲ１４およびＯからなる群から選択され、
Ｙは、共有結合、ＣＲ５Ｒ６、ＯまたはＮＲ１５であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ＣＮ、ヒドロキシル、Ｒ１６またはＯＲ１６からなる群から独立して選択され、
Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素またはＲ１６であり、
Ｒ５およびＲ６は、水素、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成し、
Ｒ１２は、水素、−ＣＯＲａおよびＲ１６からなる群から選択され、
Ｒ１６はそれぞれ、独立して、ホルミル、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、
Ｒａは、水素、ヒドロキシルおよびＯＲ１６からなる群から選択され、
ここで、
Ｒａが水素であり、ＹがＣＲ５Ｒ６であり、Ｒ１３とＲ１４が、どちらも水素である場合、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１のうちの少なくとも１つは、Ｒ１６であるか、あるいは
Ｒ５は、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成する］
あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩。
【請求項２】
以下の構造：
【化２２５】
2021521195.tif 000249
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｙが、ＣＲ５Ｒ６であり、
Ｒ５が、水素であり、Ｒ６が、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成する、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１のうちの少なくとも１つが、Ｃ１〜４アルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１がそれぞれ、水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１２が、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒａが、水素またはＣ１〜４アルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
Ｘが、ＮＨであり、
Ｙが、ＣＲ５Ｒ６であり、
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１３がそれぞれ、水素であり、
Ｒ２が、水素またはＣ１〜４アルキルであり、
Ｒ５が、水素であり、Ｒ６が、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成し、
Ｒ１２が、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、
Ｒａが、水素またはＣ１〜４アルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
前記化合物が、
【化２２６】
2021521195.tif 000250
【化２２７】
2021521195.tif 000251
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
以下の構造を有する化合物：
【化２２８】
2021521195.tif 000252
［式中、
Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９およびＲ１０は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択され、
Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ２とＲ３は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、
Ｒ７およびＲ８は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ７とＲ８は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、
Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、水素またはＲ１３であり、
Ｒ１３はそれぞれ、独立して、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの少なくとも１つは、水素ではない］
あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩。
【請求項１０】
式（ＩＩ）による構造：
【化２２９】
2021521195.tif 000253
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０が、水素およびＣ１〜４アルキルからなる群から独立して選択される、請求項９に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ１１およびＲ１２がそれぞれ、水素であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの１つ、２つ、３つまたは４つが、メチルであり、残りの基が、水素である、請求項９に記載の化合物。
【請求項１３】
前記化合物が、
【化２３０】
2021521195.tif 000254
からなる群から選択される、請求項９に記載の化合物。
【請求項１４】
化合物を含む組成物であって、前記化合物が、以下の式の構造：
【化２３１】
2021521195.tif 000255
［式中、
Ｘは、ＮＲ１４およびＯからなる群から選択され、
Ｙは、共有結合、ＣＲ５Ｒ６、ＯまたはＮＲ１５であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ＣＮ、ヒドロキシル、Ｒ１６またはＯＲ１６からなる群から独立して選択され、
Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素またはＲ１６であり、
Ｒ５およびＲ６は、水素、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成し、
Ｒ１２は、水素、−ＣＯＲａおよびＲ１６からなる群から選択され、
Ｒ１６はそれぞれ、独立して、ホルミル、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、
Ｒａは、水素、ヒドロキシルおよびＯＲ１６からなる群から選択される］
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である組成物。
【請求項１５】
以下の構造：
【化２３２】
2021521195.tif 000256
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
Ｙが、ＣＲ５Ｒ６であり、
Ｒ５が、水素であり、Ｒ６が、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成する、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１７】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１のうちの少なくとも１つが、Ｃ１〜４アルキルである、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１８】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１がそれぞれ、水素である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１９】
Ｒ１２が、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒａが、水素またはＣ１〜４アルキルである、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２０】
Ｘが、ＮＨであり、
Ｙが、ＣＲ５Ｒ６であり、
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１３がそれぞれ、水素であり、
Ｒ２が、水素またはＣ１〜４アルキルであり、
Ｒ５が、水素であり、Ｒ６が、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成し、
Ｒ１２が、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、
Ｒａが、水素またはＣ１〜４アルキルである、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２１】
前記化合物が、
【化２３３】
2021521195.tif 000257
【化２３４】
2021521195.tif 000258
からなる群から選択される、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２２】
化合物を含む組成物であって、前記化合物が、以下の式の構造：
【化２３５】
2021521195.tif 000259
［式中、
Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９およびＲ１０は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択され、
Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ２とＲ３は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、
Ｒ７およびＲ８は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ７とＲ８は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、
Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、水素またはＲ１３であり、
Ｒ１３はそれぞれ、独立して、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルである］
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である組成物。
【請求項２３】
式（ＩＩ）による構造：
【化２３６】
2021521195.tif 000260
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０が、水素およびＣ１〜４アルキルからなる群から独立して選択される、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２５】
Ｒ１１およびＲ１２が、それぞれ水素であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの１つ、２つ、３つまたは４つがメチルであり、残りの基が、水素である、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２６】
前記化合物が、
【化２３７】
2021521195.tif 000261
【化２３８】
2021521195.tif 000262
からなる群から選択される、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２７】
化合物を含む組成物であって、前記化合物が、
【化２３９】
2021521195.tif 000263
からなる群から選択される、組成物。
【請求項２８】
対象において皮膚を美白する方法であって、前記対象に化合物を接触させるステップを含み、前記化合物が、以下の式の構造：
【化２４０】
2021521195.tif 000264
［式中、
Ｘは、ＮＲ１４およびＯからなる群から選択され、
Ｙは、共有結合、ＣＲ５Ｒ６、ＯまたはＮＲ１５であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ＣＮ、ヒドロキシル、Ｒ１６またはＯＲ１６からなる群から独立して選択され、
Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素またはＲ１６であり、
Ｒ５およびＲ６は、水素、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成し、
Ｒ１２は、水素、−ＣＯＲａおよびＲ１６からなる群から選択され、
Ｒ１６はそれぞれ、独立して、ホルミル、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、
Ｒａは、水素、ヒドロキシルおよびＯＲ１６からなる群から選択される］
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である、方法。
【請求項２９】
以下の構造：
【化２４１】
2021521195.tif 000265
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
Ｙが、ＣＲ５Ｒ６であり、
Ｒ５が、水素であり、Ｒ６が、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１のうちの少なくとも１つが、Ｃ１〜４アルキルである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３２】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１がそれぞれ、水素である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３３】
Ｒ１２が、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒａが、水素またはＣ１〜４アルキルである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３４】
Ｘが、ＮＨであり、
Ｙが、ＣＲ５Ｒ６であり、
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１３がそれぞれ、水素であり、
Ｒ２が、水素またはＣ１〜４アルキルであり、
Ｒ５が、水素であり、Ｒ６が、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成し、
Ｒ１２が、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、
Ｒａが、水素またはＣ１〜４アルキルである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３５】
前記化合物が、
【化２４２】
2021521195.tif 000266
【化２４３】
2021521195.tif 000267
からなる群から選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３６】
対象においてメラノサイトアポトーシスを誘導する方法であって、前記対象に化合物を接触させるステップを含み、前記化合物が、以下の式の構造：
【化２４４】
2021521195.tif 000268
［式中、
Ｘは、ＮＲ１４およびＯからなる群から選択され、
Ｙは、共有結合、ＣＲ５Ｒ６、ＯまたはＮＲ１５であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ＣＮ、ヒドロキシル、Ｒ１６またはＯＲ１６からなる群から独立して選択され、
Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素またはＲ１６であり、
Ｒ５およびＲ６は、水素、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成し、
Ｒ１２は、水素、−ＣＯＲａおよびＲ１６からなる群から選択され、
Ｒ１６はそれぞれ、独立して、ホルミル、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、
Ｒａは、水素、ヒドロキシルおよびＯＲ１６からなる群から選択される］
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である、方法。
【請求項３７】
以下の構造：
【化２４５】
2021521195.tif 000269
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
Ｙが、ＣＲ５Ｒ６であり、
Ｒ５が、水素であり、Ｒ６が、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成する、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１のうちの少なくとも１つが、Ｃ１〜４アルキルである、請求項３６に記載の方法。
【請求項４０】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１がそれぞれ、水素である、請求項３６に記載の方法。
【請求項４１】
Ｒ１２が、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒａが、水素またはＣ１〜４アルキルである、請求項３６に記載の方法。
【請求項４２】
Ｘが、ＮＨであり、
Ｙが、ＣＲ５Ｒ６であり、
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１３がそれぞれ、水素であり、
Ｒ２が、水素またはＣ１〜４アルキルであり、
Ｒ５が、水素であり、Ｒ６が、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成し、
Ｒ１２が、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、
Ｒａが、水素またはＣ１〜４アルキルである、請求項３６に記載の方法。
【請求項４３】
前記化合物が、
【化２４６】
2021521195.tif 000270
【化２４７】
2021521195.tif 000271
からなる群から選択される、請求項３６に記載の方法。
【請求項４４】
対象において芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）活性をモジュレートする方法であって、前記対象に化合物を接触させるステップを含み、前記化合物が、以下の式の構造：
【化２４８】
2021521195.tif 000272
［式中、
Ｘは、ＮＲ１４およびＯからなる群から選択され、
Ｙは、共有結合、ＣＲ５Ｒ６、ＯまたはＮＲ１５であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ＣＮ、ヒドロキシル、Ｒ１６またはＯＲ１６からなる群から独立して選択され、
Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素またはＲ１６であり、
Ｒ５およびＲ６は、水素、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成し、
Ｒ１２は、水素、−ＣＯＲａおよびＲ１６からなる群から選択され、
Ｒ１６はそれぞれ、独立して、ホルミル、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、
Ｒａは、水素、ヒドロキシルおよびＯＲ１６からなる群から選択される］
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である、方法。
【請求項４５】
以下の構造：
【化２４９】
2021521195.tif 000273
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
Ｙが、ＣＲ５Ｒ６であり、
Ｒ５が、水素であり、Ｒ６が、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成する、請求項４４に記載の方法。
【請求項４７】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１のうちの少なくとも１つが、Ｃ１〜４アルキルである、請求項４４に記載の方法。
【請求項４８】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１がそれぞれ、水素である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４９】
Ｒ１２が、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒａが、水素またはＣ１〜４アルキルである、請求項４４に記載の方法。
【請求項５０】
Ｘが、ＮＨであり、
Ｙが、ＣＲ５Ｒ６であり、
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１３がそれぞれ、水素であり、
Ｒ２が、水素またはＣ１〜４アルキルであり、
Ｒ５が、水素であり、Ｒ６が、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成し、
Ｒ１２が、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、
Ｒａが、水素またはＣ１〜４アルキルである、請求項４４に記載の方法。
【請求項５１】
前記化合物が、
【化２５０】
2021521195.tif 000274
【化２５１】
2021521195.tif 000275
からなる群から選択される、請求項４４に記載の方法。
【請求項５２】
対象においてメラニン形成をモジュレートする方法であって、前記対象に化合物を接触させるステップを含み、前記化合物が、以下の式の構造：
【化２５２】
2021521195.tif 000276
［式中、
Ｘは、ＮＲ１４およびＯからなる群から選択され、
Ｙは、共有結合、ＣＲ５Ｒ６、ＯまたはＮＲ１５であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ＣＮ、ヒドロキシル、Ｒ１６またはＯＲ１６からなる群から独立して選択され、
Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素またはＲ１６であり、
Ｒ５およびＲ６は、水素、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成し、
Ｒ１２は、水素、−ＣＯＲａおよびＲ１６からなる群から選択され、
Ｒ１６はそれぞれ、独立して、ホルミル、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、
Ｒａは、水素、ヒドロキシルおよびＯＲ１６からなる群から選択される］
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である、方法。
【請求項５３】
以下の構造：
【化２５３】
2021521195.tif 000277
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
Ｙが、ＣＲ５Ｒ６であり、
Ｒ５が、水素であり、Ｒ６が、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成する、請求項５２に記載の方法。
【請求項５５】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１のうちの少なくとも１つが、Ｃ１〜４アルキルである、請求項５２に記載の方法。
【請求項５６】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１がそれぞれ、水素である、請求項５２に記載の方法。
【請求項５７】
Ｒ１２が、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒａが、水素またはＣ１〜４アルキルである、請求項５２に記載の方法。
【請求項５８】
Ｘが、ＮＨであり、
Ｙが、ＣＲ５Ｒ６であり、
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１３がそれぞれ、水素であり、
Ｒ２が、水素またはＣ１〜４アルキルであり、
Ｒ５が、水素であり、Ｒ６が、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成し、
Ｒ１２が、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、
Ｒａが、水素またはＣ１〜４アルキルである、請求項５２に記載の方法。
【請求項５９】
前記化合物が、
【化２５４】
2021521195.tif 000278
【化２５５】
2021521195.tif 000279
からなる群から選択される、請求項５２に記載の方法。
【請求項６０】
対象においてメラニン濃度をモジュレートする方法であって、前記対象に化合物を接触させるステップを含み、前記化合物が、以下の式の構造：
【化２５６】
2021521195.tif 000280
［式中、
Ｘは、ＮＲ１４およびＯからなる群から選択され、
Ｙは、共有結合、ＣＲ５Ｒ６、ＯまたはＮＲ１５であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ＣＮ、ヒドロキシル、Ｒ１６またはＯＲ１６からなる群から独立して選択され、
Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素またはＲ１６であり、
Ｒ５およびＲ６は、水素、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成し、
Ｒ１２は、水素、−ＣＯＲａおよびＲ１６からなる群から選択され、
Ｒ１６はそれぞれ、独立して、ホルミル、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、
Ｒａは、水素、ヒドロキシルおよびＯＲ１６からなる群から選択される］
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である、方法。
【請求項６１】
以下の構造：
【化２５７】
2021521195.tif 000281
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
Ｙが、ＣＲ５Ｒ６であり、
Ｒ５が、水素であり、Ｒ６が、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成する、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１のうちの少なくとも１つが、Ｃ１〜４アルキルである、請求項６０に記載の方法。
【請求項６４】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１がそれぞれ、水素である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６５】
Ｒ１２が、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒａが、水素またはＣ１〜４アルキルである、請求項６０に記載の方法。
【請求項６６】
Ｘが、ＮＨであり、
Ｙが、ＣＲ５Ｒ６であり、
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１３がそれぞれ、水素であり、
Ｒ２が、水素またはＣ１〜４アルキルであり、
Ｒ５が、水素であり、Ｒ６が、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成し、
Ｒ１２が、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、
Ｒａが、水素またはＣ１〜４アルキルである、請求項６０に記載の方法。
【請求項６７】
前記化合物が、
【化２５８】
2021521195.tif 000282
【化２５９】
2021521195.tif 000283
からなる群から選択される、請求項６０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本発明は、２０１８年４月１２日に出願の米国仮出願第６２／６５６，７６９号、２０１８年５月７日に出願の米国仮出願第６２／６６８，００７号、２０１８年６月１５日に出願の米国仮出願第６２／６８５，８００号、２０１８年６月１９日に出願の米国仮出願第６２／６８６，９１２号、２０１８年８月２４日に出願の米国仮出願第６２／７２２，４１２号、および２０１８年１０月８日に出願の米国仮出願第６２／７４２，６５７号に対する利益を主張する。上記の出願の全内容が、参照により本明細書に組み込まれている。
【０００２】
本発明は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母により産生される、またはこれに由来する化合物、およびその化学アナログに関する。本発明の化合物、および前記化合物を含有する組成物は、有益な特性の中でもとりわけ、光保護特性を有する。本発明の化合物および組成物を使用する方法も企図されている。
【背景技術】
【０００３】
世界中の個体が、皮膚美白剤を使用して、アンチエイジング効果の発生、日焼けによる損傷の修復、および美のある種の文化的基準の合致を含めた、いくつかの化粧目的を実現している。多数の市販の皮膚の美白製品は、有効性の程度は様々であるが、有害成分を含有しており、その一部は、がんにリンクしている。したがって、現在、市販されている作用剤よりも、高いレベルの安全性および／または有効性を示す、新規な皮膚美白剤および製剤が必要とされている。
【０００４】
Ｍａｌａｓｓｅｚｉａは、ヒト皮膚の正常細菌叢に一般に見いだされる、親油性酵母の属である。Ｍａｌａｓｓｅｚｉａは、癜風（tinea  versicolor）（癜風（pityriasis  versicolor））、脂漏性皮膚炎およびアトピー性皮膚炎を含めた、いくつかの皮膚疾患の原因である。
【０００５】
Ｍ．ｆｕｒｆｕｒの自然生息地は、表皮上層である。しかし、紫外光への曝露は、その自然生息地における生物を破壊する。したがって、ＵＶフィルター剤が、生物の生存に必要となることがある。生物により産生される２つのそのようなＵＶフィルター性インドール：ピチリアシトリンおよびピチリアラクトンが特定されている。Mayser  et  al.,  2002に最初に記載されたピチリアシトリンは、Ｍ．ｆｕｒｆｕｒによって合成される。ピチリアシトリンは、ＵＶＡ、ＵＶＢおよびＵＶＣスペクトルに幅広い吸収を示す安定な黄色の親油性化合物である。Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓ属に由来する類似化合物が単離されており、ＵＶ保護剤として権利化されている（Zhang  et  al.,  2018）。
【０００６】
Gambichler  et  al.,  2007は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏ試験方法を使用する、ヒトにおけるピチリアシトリンのＵＶ保護効果を検討した。２９０〜４００ｎｍの波長範囲において、ピチリアシトリンクリームおよびビヒクルの分光測光法が行われた。様々なクリーム製剤に関するＵＶ透過率および日焼け防止指数（「ＳＰＦ」）が評価された。その著者らは、比色分析を使用し、健常な対象のクリームによる保護皮膚および非保護皮膚の照射後の紅斑および色素沈着を評価した。ピチリアシトリン濃度の増加に伴って、ＵＶＢおよびＵＶＡの透過率は低下した。１．２５、２．５および５％のピチリアシトリン濃度の増加は、それぞれ、１．４、１．５および１．７のＳＰＦというわずかな向上を伴った。ｉｎ  ｖｉｖｏ試験により、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで決定されたピチリアシトリン５％クリームのＳＰＦの有効性が確認された。総合的に、ピチリアシトリンのＵＶ保護効果は、非常に弱く、ピチリアシトリンは、恐らく、日光への曝露後の白色癜風病変において、低色素沈着の発症の劣性補因子でしかないことを示唆している。
【０００７】
ピチリアシトリンのＵＶフィルター効果のさらなる検討が、ヒト皮膚微生物叢に対して行われた（Machowinski  et  al.,  2006）。この著者らは、ピチリアシトリンは、試験した範囲では、毒性のないＣａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓおよびｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉに対してＵＶ保護効果を有すると決定した。ピチリアラクトンのＵＶ保護特性が、酵母モデルでも確認された（Mayser  et  al.,  2003）。ピチリアラクトンは、ウッド灯試験において、癜風の黄色蛍光の原因のように思われる。
【０００８】
癜風は、色素沈着レベルを局部的に改変するＭａｌａｓｓｅｚｉａの過成長によって引き起こされる非伝染性皮膚疾患である。Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母は、メラニンおよびトリプトファンに由来するインドール色素を合成する２つの代謝経路を有する。マラセジンおよびインジルビンは、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａの過成長に特有の脱色素に寄与し得る、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａのトリプトファン代謝産物である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本明細書において開示されている発明は、安全かつ有効な皮膚美白性組成物および皮膚色素沈着性組成物の基礎原料として、マラセジン、インジルビンを含めたＭａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生するまたはこれに由来する化合物、およびその化学アナログを利用する。マラセジン、インジルビンおよびそれらの化学アナログを含む光保護性組成物もまた、本明細書において開示されている。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の一実施形態は、皮膚を美白する化合物である。該化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学アナログ、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【００１１】
本発明の別の実施形態は、メラノサイトアポトーシスを誘導する化合物である。該化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学アナログ、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【００１２】
本発明のさらなる実施形態は、メラノサイト活性をモジュレートする化合物である。該化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学アナログ、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【００１３】
本発明の追加的な実施形態は、芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）を作動する化合物である。該化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学アナログ、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【００１４】
本発明の別の実施形態は、色素沈着過度障害によって引き起こされる色素沈着過度を改善する化合物である。該化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学アナログ、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【００１５】
本発明のさらなる実施形態は、メラニン産生をモジュレートする化合物である。該化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学アナログ、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【００１６】
本発明の追加的な実施形態は、メラノソーム生物発生をモジュレートする化合物である。該化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学アナログ、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【００１７】
本発明の別の実施形態は、メラノソーム輸送をモジュレートする化合物である。該化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学アナログ、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【００１８】
本発明のさらなる実施形態は、組成物である。本組成物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母、および化粧品としてまたは薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤または担体を含む。本発明の追加的な実施形態は、組成物である。本組成物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母から単離されるもしくは単離可能な化合物、および化粧品としてまたは薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤または担体を含む。
【００１９】
本発明の別の実施形態は、組成物である。本組成物は、本明細書において開示されているアナログを含めた化合物のいずれか、および化粧品としてまたは薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤または担体を含む。
【００２０】
本発明のさらなる実施形態は、対象において皮膚を美白する方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている化合物または組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【００２１】
本発明の追加的な実施形態は、対象においてメラノサイトアポトーシスを誘導する方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている化合物または組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【００２２】
本発明の別の実施形態は、対象においてメラノサイト活性をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている化合物または組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【００２３】
本発明のさらなる実施形態は、対象において芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）を作動させる方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている化合物または組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【００２４】
本発明の追加的な実施形態は、それを必要とする対象において色素沈着過度障害によって引き起こされる色素沈着過度を改善する方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている化合物または組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【００２５】
本発明の別の実施形態は、対象においてメラニン産生をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている化合物または組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【００２６】
本発明のさらなる実施形態は、対象においてメラノソーム生物発生をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている化合物または組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【００２７】
本発明の追加的な実施形態は、対象においてメラノソーム輸送をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている化合物または組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【００２８】
本発明の別の実施形態は、化合物である。本化合物は、式（ＩＩ）の構造：
【化１】
2021521195.tif 000002
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素およびメチルからなる群から独立して選択され、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１のうちの少なくとも１つは、メチルである）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【００２９】
本発明のさらなる実施形態は、化合物である。本化合物は、式（ＩＩＩ）の構造：
【化２】
2021521195.tif 000003
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、水素およびメチルからなる群から独立して選択され、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの少なくとも１つは、メチルである）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【００３０】
本発明の追加的な実施形態は、皮膚を美白する化合物である。本化合物は、式（ＩＩ）の構造：
【化３】
2021521195.tif 000004
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素およびメチルからなる群から独立して選択される）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【００３１】
本発明の別の実施形態は、皮膚を美白する化合物である。本化合物は、式（ＩＩＩ）の構造：
【化４】
2021521195.tif 000005
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、水素およびメチルからなる群から独立して選択される）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【００３２】
本発明のさらなる実施形態は、メラノサイトアポトーシスを誘導する化合物である。本化合物は、式（ＩＩ）の構造：
【化５】
2021521195.tif 000006
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素およびメチルからなる群から独立して選択される）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【００３３】
本発明の追加的な実施形態は、メラノサイトアポトーシスを誘導する化合物である。本化合物は、式（ＩＩＩ）の構造：
【化６】
2021521195.tif 000007
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、水素およびメチルからなる群から独立して選択される）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【００３４】
本発明の別の実施形態は、芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）を作動する化合物である。本化合物は、式（ＩＩ）の構造：
【化７】
2021521195.tif 000008
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素およびメチルからなる群から独立して選択される）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【００３５】
本発明のさらなる実施形態は、芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）を作動する化合物である。本化合物は、式（ＩＩＩ）の構造：
【化８】
2021521195.tif 000009
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、水素およびメチルからなる群から独立して選択される）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【００３６】
本発明の追加的な実施形態は、組成物である。本組成物は、式（ＩＩ）の構造を有する化合物：
【化９】
2021521195.tif 000010
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素およびメチルからなる群から独立して選択される）あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩、および化粧品としてまたは薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤または担体を含む。
【００３７】
本発明の別の実施形態は、組成物である。本組成物は、式（ＩＩＩ）の構造を有する化合物：
【化１０】
2021521195.tif 000011
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、水素およびメチルからなる群から独立して選択される）あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩、および化粧品としてまたは薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤または担体を含む。
【００３８】
本発明のさらなる実施形態は、対象において皮膚を美白する方法である。本方法は、対象に、式（ＩＩ）の構造を有する化合物：
【化１１】
2021521195.tif 000012
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素およびメチルからなる群から独立して選択される）あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩を接触させるステップを含む。
【００３９】
本発明の追加的な実施形態は、対象において皮膚を美白する方法である。本方法は、対象に、式（ＩＩＩ）の構造を有する化合物：
【化１２】
2021521195.tif 000013
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、水素およびメチルからなる群から独立して選択される）あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩を接触させるステップを含む。
【００４０】
本発明の別の実施形態は、対象においてメラノサイトアポトーシスを誘導する方法である。本方法は、対象に、式（ＩＩ）の構造を有する化合物：
【化１３】
2021521195.tif 000014
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素およびメチルからなる群から独立して選択される）あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩を接触させるステップを含む。
【００４１】
本発明のさらなる実施形態は、対象においてメラノサイトアポトーシスを誘導する方法である。本方法は、対象に、式（ＩＩＩ）の構造を有する化合物：
【化１４】
2021521195.tif 000015
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、水素およびメチルからなる群から独立して選択される）あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩を接触させるステップを含む。
【００４２】
本発明の別の実施形態は、対象において芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）を作動させる方法である。本方法は、対象に、式（ＩＩ）の構造を有する化合物：
【化１５】
2021521195.tif 000016
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素およびメチルからなる群から独立して選択される）あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩を接触させるステップを含む。
【００４３】
本発明のさらなる実施形態は、対象において芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）を作動させる方法である。本方法は、対象に、式（ＩＩＩ）の構造を有する化合物：
【化１６】
2021521195.tif 000017
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、水素およびメチルからなる群から独立して選択される）あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩を接触させるステップを含む。
【００４４】
本発明の一実施形態は、化合物である。本化合物は、以下の式の構造：
【化１７】
2021521195.tif 000018
（式中、Ｘは、ＮＲ１４およびＯからなる群から選択され、Ｙは、共有結合、ＣＲ５Ｒ６、ＯまたはＮＲ１５であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ＣＮ、ヒドロキシル、Ｒ１６またはＯＲ１６からなる群から独立して選択され、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素またはＲ１６であり、Ｒ５およびＲ６は、水素、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成し、Ｒ１２は、水素、−ＣＯＲａおよびＲ１６からなる群から選択され、Ｒ１６はそれぞれ、独立して、ホルミル、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、Ｒａは、水素、ヒドロキシルおよびＯＲ１６からなる群から選択され、Ｒａが、水素であり、Ｙが、ＣＲ５Ｒ６であり、Ｒ１３およびＲ１４が、どちらも水素である場合、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１のうちの少なくとも１つは、Ｒ１６であるか、あるいはＲ５は、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成する）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【００４５】
本発明の別の実施形態は、化合物である。本化合物は、以下の式の構造：
【化１８】
2021521195.tif 000019
（式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９およびＲ１０は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択され、Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、あるいはＲ２とＲ３は一緒になって、５員または６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ７およびＲ８は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ７とＲ８は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、水素またはＲ１３であり、Ｒ１３はそれぞれ、独立して、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの少なくとも１つは水素ではない）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【００４６】
本発明の追加的な実施形態は、皮膚を美白する化合物である。本化合物は、以下の式の構造：
【化１９】
2021521195.tif 000020
（式中、Ｘは、ＮＲ１４およびＯからなる群から選択され、Ｙは、共有結合、ＣＲ５Ｒ６、ＯまたはＮＲ１５であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ＣＮ、ヒドロキシル、Ｒ１６またはＯＲ１６からなる群から独立して選択され、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素またはＲ１６であり、Ｒ５およびＲ６は、水素、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成し、Ｒ１２は、水素、−ＣＯＲａおよびＲ１６からなる群から選択され、Ｒ１６はそれぞれ、独立して、ホルミル、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、Ｒａは、水素、ヒドロキシルおよびＯＲ１６からなる群から選択される）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【００４７】
本発明のさらなる実施形態は、皮膚を美白する化合物である。本化合物は、以下の式の構造：
【化２０】
2021521195.tif 000021
（式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９およびＲ１０は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択され、Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ２とＲ３は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ７およびＲ８は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ７とＲ８は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、水素またはＲ１３であり、Ｒ１３はそれぞれ、独立して、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルである）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【００４８】
本発明の別の実施形態は、皮膚を美白する化合物である。本化合物は、
【化２１】
2021521195.tif 000022
からなる群から選択される。
【００４９】
本発明の追加的な実施形態は、メラノサイトアポトーシスを誘導する化合物である。本化合物は、以下の式の構造：
【化２２】
2021521195.tif 000023
（式中、Ｘは、ＮＲ１４およびＯからなる群から選択され、Ｙは、共有結合、ＣＲ５Ｒ６、ＯまたはＮＲ１５であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ＣＮ、ヒドロキシル、Ｒ１６またはＯＲ１６からなる群から独立して選択され、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素またはＲ１６であり、Ｒ５およびＲ６は、水素、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成し、Ｒ１２は、水素、−ＣＯＲａおよびＲ１６からなる群から選択され、Ｒ１６はそれぞれ、独立して、ホルミル、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、Ｒａは、水素、ヒドロキシルおよびＯＲ１６からなる群から選択される）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【００５０】
本発明のさらなる実施形態は、メラノサイトアポトーシスを誘導する化合物である。本化合物は、以下の式の構造：
【化２３】
2021521195.tif 000024
（式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９およびＲ１０は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択され、Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ２とＲ３は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ７およびＲ８は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ７とＲ８は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、水素またはＲ１３であり、Ｒ１３はそれぞれ、独立して、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルである）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【００５１】
本発明の別の実施形態は、メラノサイトアポトーシスを誘導する化合物である。本化合物は、
【化２４】
2021521195.tif 000025
からなる群から選択される。
【００５２】
本発明の追加的な実施形態は、芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）活性をモジュレートする化合物である。本化合物は、以下の式の構造：
【化２５】
2021521195.tif 000026
（式中、Ｘは、ＮＲ１４およびＯからなる群から選択され、Ｙは、共有結合、ＣＲ５Ｒ６、ＯまたはＮＲ１５であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ＣＮ、ヒドロキシル、Ｒ１６またはＯＲ１６からなる群から独立して選択され、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素またはＲ１６であり、Ｒ５およびＲ６は、水素、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成し、Ｒ１２は、水素、−ＣＯＲａおよびＲ１６からなる群から選択され、Ｒ１６はそれぞれ、独立して、ホルミル、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、Ｒａは、水素、ヒドロキシルおよびＯＲ１６からなる群から選択される）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【００５３】
本発明のさらなる実施形態は、芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）活性をモジュレートする化合物である。本化合物は、以下の式の構造：
【化２６】
2021521195.tif 000027
（式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９およびＲ１０は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択され、Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ２とＲ３は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ７およびＲ８は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ７とＲ８は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、水素またはＲ１３であり、Ｒ１３はそれぞれ、独立して、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルである）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【００５４】
本発明の別の実施形態は、芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）活性をモジュレートする化合物である。本化合物は、
【化２７】
2021521195.tif 000028
からなる群から選択される。
【００５５】
本発明の追加的な実施形態は、メラニン形成をモジュレートする化合物である。本化合物は、以下の式の構造：
【化２８】
2021521195.tif 000029
（式中、Ｘは、ＮＲ１４およびＯからなる群から選択され、Ｙは、共有結合、ＣＲ５Ｒ６、ＯまたはＮＲ１５であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ＣＮ、ヒドロキシル、Ｒ１６またはＯＲ１６からなる群から独立して選択され、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素またはＲ１６であり、Ｒ５およびＲ６は、水素、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成し、Ｒ１２は、水素、−ＣＯＲａおよびＲ１６からなる群から選択され、Ｒ１６はそれぞれ、独立して、ホルミル、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、Ｒａは、水素、ヒドロキシルおよびＯＲ１６からなる群から選択される）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【００５６】
本発明のさらなる実施形態は、メラニン形成をモジュレートする化合物である。本化合物は、以下の式の構造：
【化２９】
2021521195.tif 000030
（式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９およびＲ１０は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択され、Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ２とＲ３は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ７およびＲ８は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ７とＲ８は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、水素またはＲ１３であり、Ｒ１３はそれぞれ、独立して、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルである）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【００５７】
本発明の別の実施形態は、メラニン形成をモジュレートする化合物である。本化合物は、
【化３０】
2021521195.tif 000031
からなる群から選択される。
【００５８】
本発明の追加的な実施形態は、メラニン濃度をモジュレートする化合物である。本化合物は、以下の式の構造：
【化３１】
2021521195.tif 000032
（式中、Ｘは、ＮＲ１４およびＯからなる群から選択され、Ｙは、共有結合、ＣＲ５Ｒ６、ＯまたはＮＲ１５であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ＣＮ、ヒドロキシル、Ｒ１６またはＯＲ１６からなる群から独立して選択され、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素またはＲ１６であり、Ｒ５およびＲ６は、水素、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成し、Ｒ１２は、水素、−ＣＯＲａおよびＲ１６からなる群から選択され、Ｒ１６はそれぞれ、独立して、ホルミル、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、Ｒａは、水素、ヒドロキシルおよびＯＲ１６からなる群から選択される）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【００５９】
本発明のさらなる実施形態は、メラニン濃度をモジュレートする化合物である。本化合物は、以下の式の構造：
【化３２】
2021521195.tif 000033
（式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９およびＲ１０は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択され、Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ２とＲ３は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ７およびＲ８は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ７とＲ８は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、水素またはＲ１３であり、Ｒ１３はそれぞれ、独立して、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルである）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【００６０】
本発明の別の実施形態は、メラニン濃度をモジュレートする化合物である。本化合物は、
【化３３】
2021521195.tif 000034
からなる群から選択される。
【００６１】
本発明の追加的な実施形態は、組成物である。本組成物は、以下の式の構造を有する化合物：
【化３４】
2021521195.tif 000035
（式中、Ｘは、ＮＲ１４およびＯからなる群から選択され、Ｙは、共有結合、ＣＲ５Ｒ６、ＯまたはＮＲ１５であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ＣＮ、ヒドロキシル、Ｒ１６またはＯＲ１６からなる群から独立して選択され、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素またはＲ１６であり、Ｒ５およびＲ６は、水素、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成し、Ｒ１２は、水素、−ＣＯＲａおよびＲ１６からなる群から選択され、Ｒ１６はそれぞれ、独立して、ホルミル、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、Ｒａは、水素、ヒドロキシルおよびＯＲ１６からなる群から選択される）あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩を含む。
【００６２】
本発明のさらなる実施形態は、組成物である。本組成物は、以下の式の構造を有する化合物：
【化３５】
2021521195.tif 000036
（式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９およびＲ１０は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択され、Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ２とＲ３は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ７およびＲ８は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ７とＲ８は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、水素またはＲ１３であり、Ｒ１３はそれぞれ、独立して、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルである）あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩を含む。
【００６３】
本発明の別の実施形態は、組成物である。本組成物は、
【化３６】
2021521195.tif 000037
からなる群から選択される化合物を含む。
【００６４】
本発明の追加的な実施形態は、対象において皮膚を美白する方法である。本方法は、対象に、以下の式の構造を有する化合物：
【化３７】
2021521195.tif 000038
（式中、Ｘは、ＮＲ１４およびＯからなる群から選択され、Ｙは、共有結合、ＣＲ５Ｒ６、ＯまたはＮＲ１５であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ＣＮ、ヒドロキシル、Ｒ１６またはＯＲ１６からなる群から独立して選択され、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素またはＲ１６であり、Ｒ５およびＲ６は、水素、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成し、Ｒ１２は、水素、−ＣＯＲａおよびＲ１６からなる群から選択され、Ｒ１６はそれぞれ、独立して、ホルミル、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、Ｒａは、水素、ヒドロキシルおよびＯＲ１６からなる群から選択される）あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩を接触させるステップを含む。
【００６５】
本発明のさらなる実施形態は、対象において皮膚を美白する方法である。本方法は、対象に、以下の式の構造を有する化合物：
【化３８】
2021521195.tif 000039
（式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９およびＲ１０は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択され、Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ２とＲ３は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ７およびＲ８は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ７とＲ８は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、水素またはＲ１３であり、Ｒ１３はそれぞれ、独立して、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルである）あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩を接触させるステップを含む。
【００６６】
本発明の別の実施形態は、対象において皮膚を美白する方法である。本方法は、対象に、以下からなる群から選択される化合物：
【化３９】
2021521195.tif 000040
を接触させるステップを含む。
【００６７】
本発明の追加的な実施形態は、対象においてメラノサイトアポトーシスを誘導する方法である。本方法は、対象に、以下の式の構造を有する化合物：
【化４０】
2021521195.tif 000041
（式中、Ｘは、ＮＲ１４およびＯからなる群から選択され、Ｙは、共有結合、ＣＲ５Ｒ６、ＯまたはＮＲ１５であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ＣＮ、ヒドロキシル、Ｒ１６またはＯＲ１６からなる群から独立して選択され、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素またはＲ１６であり、Ｒ５およびＲ６は、水素、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成し、Ｒ１２は、水素、−ＣＯＲａおよびＲ１６からなる群から選択され、Ｒ１６はそれぞれ、独立して、ホルミル、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、Ｒａは、水素、ヒドロキシルおよびＯＲ１６からなる群から選択される）あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩を接触させるステップを含む。
【００６８】
本発明のさらなる実施形態は、対象においてメラノサイトアポトーシスを誘導する方法である。本方法は、対象に、以下の式の構造を有する化合物：
【化４１】
2021521195.tif 000042
（式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９およびＲ１０は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択され、Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ２とＲ３は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ７およびＲ８は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ７とＲ８は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、水素またはＲ１３であり、Ｒ１３はそれぞれ、独立して、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルである）あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩を接触させるステップを含む。
【００６９】
本発明の別の実施形態は、対象においてメラノサイトアポトーシスを誘導する方法である。本方法は、対象に、以下からなる群から選択される化合物：
【化４２】
2021521195.tif 000043
を接触させるステップを含む。
【００７０】
本発明の追加的な実施形態は、対象において芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）活性をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、以下の式の構造を有する化合物：
【化４３】
2021521195.tif 000044
（式中、Ｘは、ＮＲ１４およびＯからなる群から選択され、Ｙは、共有結合、ＣＲ５Ｒ６、ＯまたはＮＲ１５であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ＣＮ、ヒドロキシル、Ｒ１６またはＯＲ１６からなる群から独立して選択され、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素またはＲ１６であり、Ｒ５およびＲ６は、水素、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成し、Ｒ１２は、水素、−ＣＯＲａおよびＲ１６からなる群から選択され、Ｒ１６はそれぞれ、独立して、ホルミル、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、Ｒａは、水素、ヒドロキシルおよびＯＲ１６からなる群から選択される）あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩を接触させるステップを含む。
【００７１】
本発明のさらなる実施形態は、対象において芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）活性をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、以下の式の構造を有する化合物：
【化４４】
2021521195.tif 000045
（式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９およびＲ１０は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択され、Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ２とＲ３は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ７およびＲ８は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ７とＲ８は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、水素またはＲ１３であり、Ｒ１３はそれぞれ、独立して、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルである）あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩を接触させるステップを含む。
【００７２】
本発明の別の実施形態は、対象において芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）活性をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、以下からなる群から選択される化合物：
【化４５】
2021521195.tif 000046
を接触させるステップを含む。
【００７３】
本発明の追加的な実施形態は、対象においてメラニン形成をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、以下の式の構造を有する化合物：
【化４６】
2021521195.tif 000047
（式中、Ｘは、ＮＲ１４およびＯからなる群から選択され、Ｙは、共有結合、ＣＲ５Ｒ６、ＯまたはＮＲ１５であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ＣＮ、ヒドロキシル、Ｒ１６またはＯＲ１６からなる群から独立して選択され、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素またはＲ１６であり、Ｒ５およびＲ６は、水素、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成し、Ｒ１２は、水素、−ＣＯＲａおよびＲ１６からなる群から選択され、Ｒ１６はそれぞれ、独立して、ホルミル、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、Ｒａは、水素、ヒドロキシルおよびＯＲ１６からなる群から選択される）あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩を接触させるステップを含む。
【００７４】
本発明のさらなる実施形態は、対象においてメラニン形成をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、以下の式の構造を有する化合物：
【化４７】
2021521195.tif 000048
（式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９およびＲ１０は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択され、Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ２とＲ３は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ７およびＲ８は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ７とＲ８は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、水素またはＲ１３であり、Ｒ１３はそれぞれ、独立して、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルである）あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩を接触させるステップを含む。
【００７５】
本発明の別の実施形態は、対象においてメラニン形成をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、以下からなる群から選択される化合物：
【化４８】
2021521195.tif 000049
を接触させるステップを含む。
【００７６】
本発明の追加的な実施形態は、対象においてメラニン濃度をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、以下の式の構造を有する化合物：
【化４９】
2021521195.tif 000050
（式中、Ｘは、ＮＲ１４およびＯからなる群から選択され、Ｙは、共有結合、ＣＲ５Ｒ６、ＯまたはＮＲ１５であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ＣＮ、ヒドロキシル、Ｒ１６またはＯＲ１６からなる群から独立して選択され、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素またはＲ１６であり、Ｒ５およびＲ６は、水素、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成し、Ｒ１２は、水素、−ＣＯＲａおよびＲ１６からなる群から選択され、Ｒ１６はそれぞれ、独立して、ホルミル、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、Ｒａは、水素、ヒドロキシルおよびＯＲ１６からなる群から選択される）あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩を接触させるステップを含む。
【００７７】
本発明のさらなる実施形態は、対象においてメラニン濃度をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、以下の式の構造を有する化合物：
【化５０】
2021521195.tif 000051
（式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９およびＲ１０は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択され、Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ２とＲ３は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ７およびＲ８は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ７とＲ８は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、水素またはＲ１３であり、Ｒ１３はそれぞれ、独立して、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルである）あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩を接触させるステップを含む。
【００７８】
本発明の別の実施形態は、対象においてメラニン濃度をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、以下からなる群から選択される化合物：
【化５１】
2021521195.tif 000052
を接触させるステップを含む。
【００７９】
本発明の一実施形態は、皮膚を美白する化合物である。本化合物は、以下の式の構造：
【化５２】
2021521195.tif 000053
を有するか、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩である。
【００８０】
本発明の別の実施形態は、メラノサイトアポトーシスを誘導する化合物である。本化合物は、以下の式の構造：
【化５３】
2021521195.tif 000054
を有するか、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩である。
【００８１】
本発明の追加的な実施形態は、芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）活性をモジュレートする化合物である。本化合物は、以下の式の構造：
【化５４】
2021521195.tif 000055
を有するか、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩である。
【００８２】
本発明のさらなる実施形態は、メラニン形成をモジュレートする化合物である。本化合物は、以下の式の構造：
【化５５】
2021521195.tif 000056
を有するか、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩である。
【００８３】
本発明の別の実施形態は、メラニン濃度をモジュレートする化合物である。本化合物は、以下の式の構造：
【化５６】
2021521195.tif 000057
を有するか、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩である。
【００８４】
本発明の追加的な実施形態は、化合物を含む組成物である。本化合物は、以下の式の構造：
【化５７】
2021521195.tif 000058
を有するか、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩である。
【００８５】
本発明のさらなる実施形態は、対象において皮膚を美白する方法である。本方法は、対象に、化合物を接触させるステップであって、該化合物が、以下の式の構造：
【化５８】
2021521195.tif 000059
を有するか、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩である、ステップを含む。
【００８６】
本発明の別の実施形態は、対象においてメラノサイトアポトーシスを誘導する方法である。本方法は、対象に、化合物を接触させるステップであって、該化合物が、以下の式の構造：
【化５９】
2021521195.tif 000060
を有するか、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩である、ステップを含む。
【００８７】
本発明の追加的な実施形態は、対象において芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）活性をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、化合物を接触させるステップであって、該化合物が、以下の式の構造：
【化６０】
2021521195.tif 000061
を有するか、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩である、ステップを含む。
【００８８】
本発明のさらなる実施形態は、対象においてメラニン形成をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、化合物を接触させるステップであって、該化合物が、以下の式の構造：
【化６１】
2021521195.tif 000062
を有するか、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩である、ステップを含む。
【００８９】
本発明の別の実施形態は、対象においてメラニン濃度をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、化合物を接触させるステップであって、該化合物が、以下の式の構造：
【化６２】
2021521195.tif 000063
を有するか、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩である、ステップを含む。
【００９０】
本発明の追加的な実施形態は、組成物である。本組成物は、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を含む。
【００９１】
本発明のさらなる実施形態は、対象において皮膚を美白する方法である。本方法は、対象に、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を接触させるステップを含む。
【００９２】
本発明の別の実施形態は、対象においてメラノサイトアポトーシスを誘導する方法である。本方法は、対象に、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を接触させるステップを含む。
【００９３】
本発明の追加的な実施形態は、対象において芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）活性をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を接触させるステップを含む。
【００９４】
本発明のさらなる実施形態は、対象においてメラニン形成をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を接触させるステップを含む。
【００９５】
本発明の別の実施形態は、対象においてメラニン濃度をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を接触させるステップを含む。
【００９６】
本発明の追加的な実施形態は、組成物である。本組成物は、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を含む。
【００９７】
本発明のさらなる実施形態は、皮膚を美白する組成物である。本組成物は、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を含む。
【００９８】
本発明の別の実施形態は、メラノサイトアポトーシスを誘導する組成物である。本組成物は、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を含む。
【００９９】
本発明の追加的な実施形態は、芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）活性をモジュレートする組成物である。本組成物は、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を含む。
【０１００】
本発明のさらなる実施形態は、メラニン形成をモジュレートする組成物である。本組成物は、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を含む。
【０１０１】
本発明の別の実施形態は、メラニン濃度をモジュレートする組成物である。本組成物は、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を含む。
【０１０２】
本発明の追加的な実施形態は、対象において皮膚を美白する方法である。本方法は、対象に、組成物を接触させるステップであって、該組成物が、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を含む、ステップを含む。
【０１０３】
本発明のさらなる実施形態は、対象においてメラノサイトアポトーシスを誘導する方法である。本方法は、対象に、組成物を接触させるステップであって、該組成物が、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を含む、ステップを含む。
【０１０４】
本発明の別の実施形態は、対象において芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）活性をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、組成物を接触させるステップであって、該組成物が、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を含む、ステップを含む。
【０１０５】
本発明の追加的な実施形態は、対象においてメラニン形成をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、組成物を接触させるステップであって、該組成物が、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を含む、ステップを含む。
本発明のさらなる実施形態は、対象においてメラニン濃度をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、組成物を接触させるステップであって、該組成物が、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を含む、ステップを含む。
【０１０６】
本発明の別の実施形態は、組成物である。本組成物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母、および化粧品としてまたは薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤または担体を含む。
【０１０７】
本発明の追加的な実施形態は、組成物である。本組成物は、以下の式の構造を有する化合物：
【化６３】
2021521195.tif 000064
（式中、
Ｘは、ＮＲ１４およびＯからなる群から選択され、Ｙは、共有結合、ＣＲ５Ｒ６、ＯまたはＮＲ１５であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ＣＮ、ヒドロキシル、Ｒ１６またはＯＲ１６からなる群から独立して選択され、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素またはＲ１６であり、Ｒ５およびＲ６は、水素、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成し、Ｒ１２は、水素、−ＣＯＲａおよびＲ１６からなる群から選択され、Ｒ１６はそれぞれ、独立して、ホルミル、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、Ｒａは、水素、ヒドロキシルおよびＯＲ１６からなる群から選択される）
あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩、
および化粧品としてまたは薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤または担体を含む。
【０１０８】
本発明のさらなる実施形態は、組成物である。本組成物は、以下の式の構造を有する化合物：
【化６４】
2021521195.tif 000065
（式中、
Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９およびＲ１０は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択され、Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ２とＲ３は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ７およびＲ８は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ７とＲ８は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、水素またはＲ１３であり、Ｒ１３はそれぞれ、独立して、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルである）
あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩、
および化粧品としてまたは薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤または担体を含む。
【０１０９】
本発明の別の実施形態は、組成物である。本組成物は、表５または図１３０に列挙される化合物、またはその化学アナログ、結晶形態、水和物、もしくは化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩、
および化粧品としてまたは薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤または担体を含む。
【０１１０】
本発明の追加的な実施形態は、対象においてＵＶ誘発性皮膚損傷を処置または予防する方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【０１１１】
本発明のさらなる実施形態は、対象においてＵＶ誘発性紅斑を処置または予防する方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【０１１２】
本発明の別の実施形態は、対象において皮膚のＵＶ誘発性エイジングを処置または予防する方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【０１１３】
本発明の追加的な実施形態は、対象において日焼けを処置または予防する方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【０１１４】
本発明のさらなる実施形態は、対象においてＵＶ誘発性色素沈着過度を処置または予防する方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【０１１５】
本発明の別の実施形態は、対象において皮膚を美白する方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【０１１６】
本発明の追加的な実施形態は、対象においてメラノサイトアポトーシスを誘導する方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【０１１７】
本発明のさらなる実施形態は、対象において芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）活性をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【０１１８】
本発明の別の実施形態は、対象においてメラニン形成をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【０１１９】
本発明の追加的な実施形態は、対象においてメラニン濃度をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【０１２０】
本特許または出願ファイルは、カラーで作成された少なくとも１つの図面を含む。カラー図面を含む本特許または特許出願公開のコピーは、要請および必要な料金の支払いがあれば事務所より提供される。
【図面の簡単な説明】
【０１２１】
【図１Ａ】図１Ａは、皮膚の構成成分の層の模式図である。挿入図は、表皮および真皮の細胞構成を示す。図１Ｂは、低色素沈着誘発剤の潜在的な作用機序を示す模式図である。
【図１Ｂ】図１Ａは、皮膚の構成成分の層の模式図である。挿入図は、表皮および真皮の細胞構成を示す。図１Ｂは、低色素沈着誘発剤の潜在的な作用機序を示す模式図である。
【０１２２】
【図２Ａ】図２は、マラセジンおよびマラセジン誘導体に関する一連の合成スキームである。図２Ａ：マラセジンおよびインドロ［３，２−ｂ］カルバゾール；図２Ｂ：化合物ＩおよびＩＶ；図２Ｃ：化合物ＩＩ。
【図２Ｂ】図２は、マラセジンおよびマラセジン誘導体に関する一連の合成スキームである。図２Ａ：マラセジンおよびインドロ［３，２−ｂ］カルバゾール；図２Ｂ：化合物ＩおよびＩＶ；図２Ｃ：化合物ＩＩ。
【図２Ｃ】図２は、マラセジンおよびマラセジン誘導体に関する一連の合成スキームである。図２Ａ：マラセジンおよびインドロ［３，２−ｂ］カルバゾール；図２Ｂ：化合物ＩおよびＩＶ；図２Ｃ：化合物ＩＩ。
【０１２３】
【図３−１】図３Ａは、ＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞における、本発明のある特定の化合物に関する、アネキシンＶ誘導のＥＣ５０値を示す要約チャート図である。図３Ｂ〜３Ｍは、様々な濃度の列挙されている化合物に曝露した後の、アネキシンＶで標識したＭｅＷｏ（図３Ｂ〜３Ｇ）またはＷＭ１１５（図３Ｈ〜３Ｍ）細胞の百分率を示す線グラフである。
【図３−２】図３Ａは、ＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞における、本発明のある特定の化合物に関する、アネキシンＶ誘導のＥＣ５０値を示す要約チャート図である。図３Ｂ〜３Ｍは、様々な濃度の列挙されている化合物に曝露した後の、アネキシンＶで標識したＭｅＷｏ（図３Ｂ〜３Ｇ）またはＷＭ１１５（図３Ｈ〜３Ｍ）細胞の百分率を示す線グラフである。
【図３−３】図３Ａは、ＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞における、本発明のある特定の化合物に関する、アネキシンＶ誘導のＥＣ５０値を示す要約チャート図である。図３Ｂ〜３Ｍは、様々な濃度の列挙されている化合物に曝露した後の、アネキシンＶで標識したＭｅＷｏ（図３Ｂ〜３Ｇ）またはＷＭ１１５（図３Ｈ〜３Ｍ）細胞の百分率を示す線グラフである。
【図３−４】図３Ａは、ＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞における、本発明のある特定の化合物に関する、アネキシンＶ誘導のＥＣ５０値を示す要約チャート図である。図３Ｂ〜３Ｍは、様々な濃度の列挙されている化合物に曝露した後の、アネキシンＶで標識したＭｅＷｏ（図３Ｂ〜３Ｇ）またはＷＭ１１５（図３Ｈ〜３Ｍ）細胞の百分率を示す線グラフである。
【図３−５】図３Ａは、ＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞における、本発明のある特定の化合物に関する、アネキシンＶ誘導のＥＣ５０値を示す要約チャート図である。図３Ｂ〜３Ｍは、様々な濃度の列挙されている化合物に曝露した後の、アネキシンＶで標識したＭｅＷｏ（図３Ｂ〜３Ｇ）またはＷＭ１１５（図３Ｈ〜３Ｍ）細胞の百分率を示す線グラフである。
【０１２４】
【図４−１】図４Ａ〜４Ｄは、６、２４、４８および７２時間、様々な濃度の列挙した化合物に曝露した後の、ＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞における、相対アネキシンＶレベル（％）を示すチャート図である。図４Ｅ〜４Ｊは、図４Ａ〜４Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図４Ｋおよび４Ｌは、示されている濃度の列挙されている化合物に６時間、曝露した後の、アネキシンＶで標識したＭｅＷｏ（図４Ｋ）およびＷＭ１１５（図４Ｌ）細胞の百分率を示すヒストグラムである。
【図４−２】図４Ａ〜４Ｄは、６、２４、４８および７２時間、様々な濃度の列挙した化合物に曝露した後の、ＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞における、相対アネキシンＶレベル（％）を示すチャート図である。図４Ｅ〜４Ｊは、図４Ａ〜４Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図４Ｋおよび４Ｌは、示されている濃度の列挙されている化合物に６時間、曝露した後の、アネキシンＶで標識したＭｅＷｏ（図４Ｋ）およびＷＭ１１５（図４Ｌ）細胞の百分率を示すヒストグラムである。
【図４−３】図４Ａ〜４Ｄは、６、２４、４８および７２時間、様々な濃度の列挙した化合物に曝露した後の、ＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞における、相対アネキシンＶレベル（％）を示すチャート図である。図４Ｅ〜４Ｊは、図４Ａ〜４Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図４Ｋおよび４Ｌは、示されている濃度の列挙されている化合物に６時間、曝露した後の、アネキシンＶで標識したＭｅＷｏ（図４Ｋ）およびＷＭ１１５（図４Ｌ）細胞の百分率を示すヒストグラムである。
【図４−４】図４Ａ〜４Ｄは、６、２４、４８および７２時間、様々な濃度の列挙した化合物に曝露した後の、ＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞における、相対アネキシンＶレベル（％）を示すチャート図である。図４Ｅ〜４Ｊは、図４Ａ〜４Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図４Ｋおよび４Ｌは、示されている濃度の列挙されている化合物に６時間、曝露した後の、アネキシンＶで標識したＭｅＷｏ（図４Ｋ）およびＷＭ１１５（図４Ｌ）細胞の百分率を示すヒストグラムである。
【図４−５】図４Ａ〜４Ｄは、６、２４、４８および７２時間、様々な濃度の列挙した化合物に曝露した後の、ＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞における、相対アネキシンＶレベル（％）を示すチャート図である。図４Ｅ〜４Ｊは、図４Ａ〜４Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図４Ｋおよび４Ｌは、示されている濃度の列挙されている化合物に６時間、曝露した後の、アネキシンＶで標識したＭｅＷｏ（図４Ｋ）およびＷＭ１１５（図４Ｌ）細胞の百分率を示すヒストグラムである。
【図４−６】図４Ａ〜４Ｄは、６、２４、４８および７２時間、様々な濃度の列挙した化合物に曝露した後の、ＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞における、相対アネキシンＶレベル（％）を示すチャート図である。図４Ｅ〜４Ｊは、図４Ａ〜４Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図４Ｋおよび４Ｌは、示されている濃度の列挙されている化合物に６時間、曝露した後の、アネキシンＶで標識したＭｅＷｏ（図４Ｋ）およびＷＭ１１５（図４Ｌ）細胞の百分率を示すヒストグラムである。
【図４−７】図４Ａ〜４Ｄは、６、２４、４８および７２時間、様々な濃度の列挙した化合物に曝露した後の、ＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞における、相対アネキシンＶレベル（％）を示すチャート図である。図４Ｅ〜４Ｊは、図４Ａ〜４Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図４Ｋおよび４Ｌは、示されている濃度の列挙されている化合物に６時間、曝露した後の、アネキシンＶで標識したＭｅＷｏ（図４Ｋ）およびＷＭ１１５（図４Ｌ）細胞の百分率を示すヒストグラムである。
【図４−８】図４Ａ〜４Ｄは、６、２４、４８および７２時間、様々な濃度の列挙した化合物に曝露した後の、ＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞における、相対アネキシンＶレベル（％）を示すチャート図である。図４Ｅ〜４Ｊは、図４Ａ〜４Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図４Ｋおよび４Ｌは、示されている濃度の列挙されている化合物に６時間、曝露した後の、アネキシンＶで標識したＭｅＷｏ（図４Ｋ）およびＷＭ１１５（図４Ｌ）細胞の百分率を示すヒストグラムである。
【０１２５】
【図５】図５Ａ〜５Ｋは、様々な濃度のＣＶ−８６８４、ＣＶ−８６８５、ＣＶ−８６８８、ＤＭＳＯおよびスタウロスポリンにより６時間、処置した後のＭｅＷｏ細胞の形状を示す顕微鏡写真である。
【０１２６】
【図６】図６Ａ〜６Ｋは、様々な濃度のＣＶ−８６８４、ＣＶ−８６８５、ＣＶ−８６８８、ＤＭＳＯおよびスタウロスポリンにより２４時間、処置した後のＭｅＷｏ細胞の形状を示す顕微鏡写真である。
【０１２７】
【図７】図７Ａ〜７Ｋは、様々な濃度のＣＶ−８６８４、ＣＶ−８６８５、ＣＶ−８６８８、ＤＭＳＯおよびスタウロスポリンにより４８時間、処置した後のＭｅＷｏ細胞の形状を示す顕微鏡写真である。
【０１２８】
【図８】図８Ａ〜８Ｋは、様々な濃度のＣＶ−８６８４、ＣＶ−８６８５、ＣＶ−８６８８、ＤＭＳＯおよびスタウロスポリンにより７２時間、処置した後のＭｅＷｏ細胞の形状を示す顕微鏡写真である。
【０１２９】
【図９】図９Ａ〜９Ｋは、様々な濃度のＣＶ−８６８４、ＣＶ−８６８５、ＣＶ−８６８８、ＤＭＳＯおよびスタウロスポリンにより６時間、処置した後のＷＭ１１５細胞の形状を示す顕微鏡写真である。
【０１３０】
【図１０】図１０Ａ〜１０Ｋは、様々な濃度のＣＶ−８６８４、ＣＶ−８６８５、ＣＶ−８６８８、ＤＭＳＯおよびスタウロスポリンにより２４時間、処置した後のＷＭ１１５細胞の形状を示す顕微鏡写真である。
【０１３１】
【図１１】図１１Ａ〜１１Ｋは、様々な濃度のＣＶ−８６８４、ＣＶ−８６８５、ＣＶ−８６８８、ＤＭＳＯおよびスタウロスポリンにより４８時間、処置した後のＷＭ１１５細胞の形状を示す顕微鏡写真である。
【０１３２】
【図１２】図１２Ａ〜１２Ｋは、様々な濃度のＣＶ−８６８４、ＣＶ−８６８５、ＣＶ−８６８８、ＤＭＳＯおよびスタウロスポリンにより７２時間、処置した後のＷＭ１１５細胞の形状を示す顕微鏡写真である。
【０１３３】
【図１３−１】図１３Ａ〜１３Ｄは、６、２４、４８および７２時間、様々な濃度のＣＶ−８６８４（図１３Ａ）、ＣＶ−８６８５（図１３Ｂ）、ＣＶ−８６８８（図１３Ｃ）またはスタウロスポリン（図１３Ｄ）により処置した後に残留する生存ＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞の百分率を示すチャート図である。細胞生存率は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）を使用してアッセイした。図１３Ｅ〜１３Ｊは、図１３Ａ〜１３Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図１３Ｋは、列挙した濃度のマラセジン、インドロカルバゾール、化合物ＩＩおよびスタウロスポリンに、２４、４８および７２時間、曝露した後の生存ＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞の百分率を比較する要約チャート図である。
【図１３−２】図１３Ａ〜１３Ｄは、６、２４、４８および７２時間、様々な濃度のＣＶ−８６８４（図１３Ａ）、ＣＶ−８６８５（図１３Ｂ）、ＣＶ−８６８８（図１３Ｃ）またはスタウロスポリン（図１３Ｄ）により処置した後に残留する生存ＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞の百分率を示すチャート図である。細胞生存率は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）を使用してアッセイした。図１３Ｅ〜１３Ｊは、図１３Ａ〜１３Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図１３Ｋは、列挙した濃度のマラセジン、インドロカルバゾール、化合物ＩＩおよびスタウロスポリンに、２４、４８および７２時間、曝露した後の生存ＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞の百分率を比較する要約チャート図である。
【図１３−３】図１３Ａ〜１３Ｄは、６、２４、４８および７２時間、様々な濃度のＣＶ−８６８４（図１３Ａ）、ＣＶ−８６８５（図１３Ｂ）、ＣＶ−８６８８（図１３Ｃ）またはスタウロスポリン（図１３Ｄ）により処置した後に残留する生存ＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞の百分率を示すチャート図である。細胞生存率は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）を使用してアッセイした。図１３Ｅ〜１３Ｊは、図１３Ａ〜１３Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図１３Ｋは、列挙した濃度のマラセジン、インドロカルバゾール、化合物ＩＩおよびスタウロスポリンに、２４、４８および７２時間、曝露した後の生存ＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞の百分率を比較する要約チャート図である。
【図１３−４】図１３Ａ〜１３Ｄは、６、２４、４８および７２時間、様々な濃度のＣＶ−８６８４（図１３Ａ）、ＣＶ−８６８５（図１３Ｂ）、ＣＶ−８６８８（図１３Ｃ）またはスタウロスポリン（図１３Ｄ）により処置した後に残留する生存ＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞の百分率を示すチャート図である。細胞生存率は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）を使用してアッセイした。図１３Ｅ〜１３Ｊは、図１３Ａ〜１３Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図１３Ｋは、列挙した濃度のマラセジン、インドロカルバゾール、化合物ＩＩおよびスタウロスポリンに、２４、４８および７２時間、曝露した後の生存ＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞の百分率を比較する要約チャート図である。
【図１３−５】図１３Ａ〜１３Ｄは、６、２４、４８および７２時間、様々な濃度のＣＶ−８６８４（図１３Ａ）、ＣＶ−８６８５（図１３Ｂ）、ＣＶ−８６８８（図１３Ｃ）またはスタウロスポリン（図１３Ｄ）により処置した後に残留する生存ＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞の百分率を示すチャート図である。細胞生存率は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）を使用してアッセイした。図１３Ｅ〜１３Ｊは、図１３Ａ〜１３Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図１３Ｋは、列挙した濃度のマラセジン、インドロカルバゾール、化合物ＩＩおよびスタウロスポリンに、２４、４８および７２時間、曝露した後の生存ＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞の百分率を比較する要約チャート図である。
【図１３−６】図１３Ａ〜１３Ｄは、６、２４、４８および７２時間、様々な濃度のＣＶ−８６８４（図１３Ａ）、ＣＶ−８６８５（図１３Ｂ）、ＣＶ−８６８８（図１３Ｃ）またはスタウロスポリン（図１３Ｄ）により処置した後に残留する生存ＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞の百分率を示すチャート図である。細胞生存率は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）を使用してアッセイした。図１３Ｅ〜１３Ｊは、図１３Ａ〜１３Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図１３Ｋは、列挙した濃度のマラセジン、インドロカルバゾール、化合物ＩＩおよびスタウロスポリンに、２４、４８および７２時間、曝露した後の生存ＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞の百分率を比較する要約チャート図である。
【図１３−７】図１３Ａ〜１３Ｄは、６、２４、４８および７２時間、様々な濃度のＣＶ−８６８４（図１３Ａ）、ＣＶ−８６８５（図１３Ｂ）、ＣＶ−８６８８（図１３Ｃ）またはスタウロスポリン（図１３Ｄ）により処置した後に残留する生存ＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞の百分率を示すチャート図である。細胞生存率は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）を使用してアッセイした。図１３Ｅ〜１３Ｊは、図１３Ａ〜１３Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図１３Ｋは、列挙した濃度のマラセジン、インドロカルバゾール、化合物ＩＩおよびスタウロスポリンに、２４、４８および７２時間、曝露した後の生存ＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞の百分率を比較する要約チャート図である。
【０１３４】
【図１４−１】図１４Ａ〜１４Ｄは、様々な濃度のＣＶ−８６８４（図１４Ａ）、ＣＶ−８６８５（図１４Ｂ）、ＣＶ−８６８８（図１４Ｃ）またはスタウロスポリン（図１４Ｄ）により、６、２４、４８および７２時間、処置した後のＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞からの乳酸デヒドロゲナーゼ（「ＬＤＨ」）の放出レベルを示すチャート図である。図１４Ｅ〜１４Ｊは、図１４Ａ〜１４Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図１４Ｋおよび１４Ｌは、列挙した濃度のマラセジン、カルバゾール、化合物ＩＩおよびスタウロスポリンにＭｅＷｏ（図１４Ｋ）およびＷＭ１１５（図１４Ｌ）細胞を、２４時間、曝露させた後の乳酸デヒドロゲナーゼレベルを示すヒストグラムである。
【図１４−２】図１４Ａ〜１４Ｄは、様々な濃度のＣＶ−８６８４（図１４Ａ）、ＣＶ−８６８５（図１４Ｂ）、ＣＶ−８６８８（図１４Ｃ）またはスタウロスポリン（図１４Ｄ）により、６、２４、４８および７２時間、処置した後のＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞からの乳酸デヒドロゲナーゼ（「ＬＤＨ」）の放出レベルを示すチャート図である。図１４Ｅ〜１４Ｊは、図１４Ａ〜１４Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図１４Ｋおよび１４Ｌは、列挙した濃度のマラセジン、カルバゾール、化合物ＩＩおよびスタウロスポリンにＭｅＷｏ（図１４Ｋ）およびＷＭ１１５（図１４Ｌ）細胞を、２４時間、曝露させた後の乳酸デヒドロゲナーゼレベルを示すヒストグラムである。
【図１４−３】図１４Ａ〜１４Ｄは、様々な濃度のＣＶ−８６８４（図１４Ａ）、ＣＶ−８６８５（図１４Ｂ）、ＣＶ−８６８８（図１４Ｃ）またはスタウロスポリン（図１４Ｄ）により、６、２４、４８および７２時間、処置した後のＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞からの乳酸デヒドロゲナーゼ（「ＬＤＨ」）の放出レベルを示すチャート図である。図１４Ｅ〜１４Ｊは、図１４Ａ〜１４Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図１４Ｋおよび１４Ｌは、列挙した濃度のマラセジン、カルバゾール、化合物ＩＩおよびスタウロスポリンにＭｅＷｏ（図１４Ｋ）およびＷＭ１１５（図１４Ｌ）細胞を、２４時間、曝露させた後の乳酸デヒドロゲナーゼレベルを示すヒストグラムである。
【図１４−４】図１４Ａ〜１４Ｄは、様々な濃度のＣＶ−８６８４（図１４Ａ）、ＣＶ−８６８５（図１４Ｂ）、ＣＶ−８６８８（図１４Ｃ）またはスタウロスポリン（図１４Ｄ）により、６、２４、４８および７２時間、処置した後のＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞からの乳酸デヒドロゲナーゼ（「ＬＤＨ」）の放出レベルを示すチャート図である。図１４Ｅ〜１４Ｊは、図１４Ａ〜１４Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図１４Ｋおよび１４Ｌは、列挙した濃度のマラセジン、カルバゾール、化合物ＩＩおよびスタウロスポリンにＭｅＷｏ（図１４Ｋ）およびＷＭ１１５（図１４Ｌ）細胞を、２４時間、曝露させた後の乳酸デヒドロゲナーゼレベルを示すヒストグラムである。
【図１４−５】図１４Ａ〜１４Ｄは、様々な濃度のＣＶ−８６８４（図１４Ａ）、ＣＶ−８６８５（図１４Ｂ）、ＣＶ−８６８８（図１４Ｃ）またはスタウロスポリン（図１４Ｄ）により、６、２４、４８および７２時間、処置した後のＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞からの乳酸デヒドロゲナーゼ（「ＬＤＨ」）の放出レベルを示すチャート図である。図１４Ｅ〜１４Ｊは、図１４Ａ〜１４Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図１４Ｋおよび１４Ｌは、列挙した濃度のマラセジン、カルバゾール、化合物ＩＩおよびスタウロスポリンにＭｅＷｏ（図１４Ｋ）およびＷＭ１１５（図１４Ｌ）細胞を、２４時間、曝露させた後の乳酸デヒドロゲナーゼレベルを示すヒストグラムである。
【図１４−６】図１４Ａ〜１４Ｄは、様々な濃度のＣＶ−８６８４（図１４Ａ）、ＣＶ−８６８５（図１４Ｂ）、ＣＶ−８６８８（図１４Ｃ）またはスタウロスポリン（図１４Ｄ）により、６、２４、４８および７２時間、処置した後のＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞からの乳酸デヒドロゲナーゼ（「ＬＤＨ」）の放出レベルを示すチャート図である。図１４Ｅ〜１４Ｊは、図１４Ａ〜１４Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図１４Ｋおよび１４Ｌは、列挙した濃度のマラセジン、カルバゾール、化合物ＩＩおよびスタウロスポリンにＭｅＷｏ（図１４Ｋ）およびＷＭ１１５（図１４Ｌ）細胞を、２４時間、曝露させた後の乳酸デヒドロゲナーゼレベルを示すヒストグラムである。
【図１４−７】図１４Ａ〜１４Ｄは、様々な濃度のＣＶ−８６８４（図１４Ａ）、ＣＶ−８６８５（図１４Ｂ）、ＣＶ−８６８８（図１４Ｃ）またはスタウロスポリン（図１４Ｄ）により、６、２４、４８および７２時間、処置した後のＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞からの乳酸デヒドロゲナーゼ（「ＬＤＨ」）の放出レベルを示すチャート図である。図１４Ｅ〜１４Ｊは、図１４Ａ〜１４Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図１４Ｋおよび１４Ｌは、列挙した濃度のマラセジン、カルバゾール、化合物ＩＩおよびスタウロスポリンにＭｅＷｏ（図１４Ｋ）およびＷＭ１１５（図１４Ｌ）細胞を、２４時間、曝露させた後の乳酸デヒドロゲナーゼレベルを示すヒストグラムである。
【図１４−８】図１４Ａ〜１４Ｄは、様々な濃度のＣＶ−８６８４（図１４Ａ）、ＣＶ−８６８５（図１４Ｂ）、ＣＶ−８６８８（図１４Ｃ）またはスタウロスポリン（図１４Ｄ）により、６、２４、４８および７２時間、処置した後のＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞からの乳酸デヒドロゲナーゼ（「ＬＤＨ」）の放出レベルを示すチャート図である。図１４Ｅ〜１４Ｊは、図１４Ａ〜１４Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図１４Ｋおよび１４Ｌは、列挙した濃度のマラセジン、カルバゾール、化合物ＩＩおよびスタウロスポリンにＭｅＷｏ（図１４Ｋ）およびＷＭ１１５（図１４Ｌ）細胞を、２４時間、曝露させた後の乳酸デヒドロゲナーゼレベルを示すヒストグラムである。
【０１３５】
【図１５Ａ】図１５Ａ〜１５Ｅは、様々な濃度のオメプラゾール（図１５Ａ）、ＣＶ−８６８４（図１５Ｂ）、ＣＶ−８６８５（図１５Ｃ）、ＣＶ−８６８６（図１５Ｄ）およびＣＶ−８６８８（図１５Ｅ）への曝露時の、ＡｈＲ応答性ルシフェラーゼリポーター遺伝子プラスミドを安定的にトランスフェクトしたＨｅｐＧ２細胞における、芳香族炭化水素受容体（「ＡｈＲ」）活性化の生データおよび線グラフを示す。図１５Ｆは、試験した各化合物に関するＥＣ５０値を示す図である。
【図１５Ｂ】図１５Ａ〜１５Ｅは、様々な濃度のオメプラゾール（図１５Ａ）、ＣＶ−８６８４（図１５Ｂ）、ＣＶ−８６８５（図１５Ｃ）、ＣＶ−８６８６（図１５Ｄ）およびＣＶ−８６８８（図１５Ｅ）への曝露時の、ＡｈＲ応答性ルシフェラーゼリポーター遺伝子プラスミドを安定的にトランスフェクトしたＨｅｐＧ２細胞における、芳香族炭化水素受容体（「ＡｈＲ」）活性化の生データおよび線グラフを示す。図１５Ｆは、試験した各化合物に関するＥＣ５０値を示す図である。
【図１５Ｃ】図１５Ａ〜１５Ｅは、様々な濃度のオメプラゾール（図１５Ａ）、ＣＶ−８６８４（図１５Ｂ）、ＣＶ−８６８５（図１５Ｃ）、ＣＶ−８６８６（図１５Ｄ）およびＣＶ−８６８８（図１５Ｅ）への曝露時の、ＡｈＲ応答性ルシフェラーゼリポーター遺伝子プラスミドを安定的にトランスフェクトしたＨｅｐＧ２細胞における、芳香族炭化水素受容体（「ＡｈＲ」）活性化の生データおよび線グラフを示す。図１５Ｆは、試験した各化合物に関するＥＣ５０値を示す図である。
【図１５Ｄ】図１５Ａ〜１５Ｅは、様々な濃度のオメプラゾール（図１５Ａ）、ＣＶ−８６８４（図１５Ｂ）、ＣＶ−８６８５（図１５Ｃ）、ＣＶ−８６８６（図１５Ｄ）およびＣＶ−８６８８（図１５Ｅ）への曝露時の、ＡｈＲ応答性ルシフェラーゼリポーター遺伝子プラスミドを安定的にトランスフェクトしたＨｅｐＧ２細胞における、芳香族炭化水素受容体（「ＡｈＲ」）活性化の生データおよび線グラフを示す。図１５Ｆは、試験した各化合物に関するＥＣ５０値を示す図である。
【図１５Ｅ】図１５Ａ〜１５Ｅは、様々な濃度のオメプラゾール（図１５Ａ）、ＣＶ−８６８４（図１５Ｂ）、ＣＶ−８６８５（図１５Ｃ）、ＣＶ−８６８６（図１５Ｄ）およびＣＶ−８６８８（図１５Ｅ）への曝露時の、ＡｈＲ応答性ルシフェラーゼリポーター遺伝子プラスミドを安定的にトランスフェクトしたＨｅｐＧ２細胞における、芳香族炭化水素受容体（「ＡｈＲ」）活性化の生データおよび線グラフを示す。図１５Ｆは、試験した各化合物に関するＥＣ５０値を示す図である。
【図１５Ｆ】図１５Ａ〜１５Ｅは、様々な濃度のオメプラゾール（図１５Ａ）、ＣＶ−８６８４（図１５Ｂ）、ＣＶ−８６８５（図１５Ｃ）、ＣＶ−８６８６（図１５Ｄ）およびＣＶ−８６８８（図１５Ｅ）への曝露時の、ＡｈＲ応答性ルシフェラーゼリポーター遺伝子プラスミドを安定的にトランスフェクトしたＨｅｐＧ２細胞における、芳香族炭化水素受容体（「ＡｈＲ」）活性化の生データおよび線グラフを示す。図１５Ｆは、試験した各化合物に関するＥＣ５０値を示す図である。
【０１３６】
【図１６−１】図１６Ａ〜１６Ｋは、未処置（図１６Ａ）、滅菌脱イオン水（図１６Ｂ）、１％のコウジ酸（図１６Ｃ）、０．２％のＤＭＳＯ（図１６Ｄ）、０．０５％のＤＭＳＯ（図１６Ｅ）、２００μＭのＣＶ−８６８４（図１６Ｆ）、５０μＭのＣＶ−８６８４（図１６Ｇ）、２００μＭのＣＶ−８６８６（図１６Ｈ）、５０μＭのＣＶ−８６８６（図１６Ｉ）、２００μＭのＣＶ−８６８８（図１６Ｊ）および５０μＭのＣＶ−８６８８（図１６Ｋ）に曝露した後の０日目または７日目のどちらか一方におけるＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）マトリックスの写真である。
【図１６−２】図１６Ａ〜１６Ｋは、未処置（図１６Ａ）、滅菌脱イオン水（図１６Ｂ）、１％のコウジ酸（図１６Ｃ）、０．２％のＤＭＳＯ（図１６Ｄ）、０．０５％のＤＭＳＯ（図１６Ｅ）、２００μＭのＣＶ−８６８４（図１６Ｆ）、５０μＭのＣＶ−８６８４（図１６Ｇ）、２００μＭのＣＶ−８６８６（図１６Ｈ）、５０μＭのＣＶ−８６８６（図１６Ｉ）、２００μＭのＣＶ−８６８８（図１６Ｊ）および５０μＭのＣＶ−８６８８（図１６Ｋ）に曝露した後の０日目または７日目のどちらか一方におけるＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）マトリックスの写真である。
【０１３７】
【図１７−１】図１７Ａ〜１７Ｋは、未処置（図１７Ａ）、滅菌脱イオン水（図１７Ｂ）、１％のコウジ酸（図１７Ｃ）、０．２％のＤＭＳＯ（図１７Ｄ）、０．０５％のＤＭＳＯ（図１７Ｅ）、２００μＭのＣＶ−８６８４（図１７Ｆ）、５０μＭのＣＶ−８６８４（図１７Ｇ）、２００μＭのＣＶ−８６８６（図１７Ｈ）、５０μＭのＣＶ−８６８６（図１７Ｉ）、２００μＭのＣＶ−８６８８（図１７Ｊ）および５０μＭのＣＶ−８６８８（図１７Ｋ）に曝露した後の０日目または７日目のどちらか一方におけるＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）マトリックスの倍率が１５×の顕微鏡写真である。
【図１７−２】図１７Ａ〜１７Ｋは、未処置（図１７Ａ）、滅菌脱イオン水（図１７Ｂ）、１％のコウジ酸（図１７Ｃ）、０．２％のＤＭＳＯ（図１７Ｄ）、０．０５％のＤＭＳＯ（図１７Ｅ）、２００μＭのＣＶ−８６８４（図１７Ｆ）、５０μＭのＣＶ−８６８４（図１７Ｇ）、２００μＭのＣＶ−８６８６（図１７Ｈ）、５０μＭのＣＶ−８６８６（図１７Ｉ）、２００μＭのＣＶ−８６８８（図１７Ｊ）および５０μＭのＣＶ−８６８８（図１７Ｋ）に曝露した後の０日目または７日目のどちらか一方におけるＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）マトリックスの倍率が１５×の顕微鏡写真である。
【０１３８】
【図１８】図１８Ａ〜１８Ｆは、未処置（図１８Ａ）、ＤＭＳＯ（図１８Ｂ）、フェニルチオウレア（「ＰＴＵ」）（図１８Ｃ）、ならびに２．５μＭ（図１８Ｄ）、５μＭ（図１８Ｅ）および１０μＭ（図１８Ｆ）の化合物ＩＩに曝露したゼブラフィッシュの写真である。赤い矢印は、正常なメラノサイトを示す。
【０１３９】
【図１９】図１９Ａ〜１９Ｆは、未処置（図１９Ａ）、ＤＭＳＯ（図１９Ｂ）、フェニルチオウレア（「ＰＴＵ」）（図１９Ｃ）、ならびに０．３μＭ（図１９Ｄ）、１μＭ（図１９Ｅ）および３μＭ（図１９Ｆ）の化合物ＩＩに曝露したゼブラフィッシュの写真である。赤い矢印は、正常なメラノサイトを示す。黄色い矢印は、異常に小さなメラノサイトを示す。
【０１４０】
【図２０】図２０は、列挙した条件に曝露した後に低下した皮膚の色素沈着を有する、ゼブラフィッシュの数および割合を示す要約チャート図である。最後の６列は、様々な濃度の化合物ＩＩの影響を示す。
【図２１】図２１Ａ〜２１Ｅは、未処置（図２１Ａ）、ＤＭＳＯ（図２１Ｂ）、ＰＴＵ（図２１Ｃ）、０．５μＭ（図２１Ｄ）および１．５μＭ（図２１Ｅ）により処置したゼブラフィッシュの写真である。底部パネルは、色スキームの反転領域を含む。
【０１４１】
【図２２Ａ】図２２Ａおよび２２Ｂは、図２１Ａ〜２１Ｅに例示されている、ゼブラフィッシュの胚芽の写真から着色したピクセル／ｍｍ３（図２２Ａ）および合計ピクセル（図２２Ｂ）によって測定した、色素沈着密度を示すヒストグラムである。
【図２２Ｂ】図２２Ａおよび２２Ｂは、図２１Ａ〜２１Ｅに例示されている、ゼブラフィッシュの胚芽の写真から着色したピクセル／ｍｍ３（図２２Ａ）および合計ピクセル（図２２Ｂ）によって測定した、色素沈着密度を示すヒストグラムである。
【０１４２】
【図２３Ａ】図２３Ａ〜２３Ｃは、ＤＭＳＯ（図２３Ａ）、ＲＰＭＩ培地（図２３Ｂ）およびＤＭＥＭ（図２３Ｃ）中のＣＶ−８６８４の質量スペクトルである。図２３Ｄ〜２３Ｆは、ＤＭＳＯ（図２３Ｄ）、ＲＰＭＩ培地（図２３Ｅ）およびＤＭＥＭ（図２３Ｆ）中のＣＶ−８６８６の質量スペクトルである。図２３Ｇ〜２３Ｉは、ＤＭＳＯ（図２３Ｇ）、ＲＰＭＩ培地（図２３Ｈ）およびＤＭＥＭ（図２３Ｉ）中のＣＶ−８６８８の質量スペクトルである。図２３Ｊは、２時間のインキュベート後、列挙した溶媒に残留する試験化合物の割合を示す要約チャート図である。
【図２３Ｂ】図２３Ａ〜２３Ｃは、ＤＭＳＯ（図２３Ａ）、ＲＰＭＩ培地（図２３Ｂ）およびＤＭＥＭ（図２３Ｃ）中のＣＶ−８６８４の質量スペクトルである。図２３Ｄ〜２３Ｆは、ＤＭＳＯ（図２３Ｄ）、ＲＰＭＩ培地（図２３Ｅ）およびＤＭＥＭ（図２３Ｆ）中のＣＶ−８６８６の質量スペクトルである。図２３Ｇ〜２３Ｉは、ＤＭＳＯ（図２３Ｇ）、ＲＰＭＩ培地（図２３Ｈ）およびＤＭＥＭ（図２３Ｉ）中のＣＶ−８６８８の質量スペクトルである。図２３Ｊは、２時間のインキュベート後、列挙した溶媒に残留する試験化合物の割合を示す要約チャート図である。
【図２３Ｃ】図２３Ａ〜２３Ｃは、ＤＭＳＯ（図２３Ａ）、ＲＰＭＩ培地（図２３Ｂ）およびＤＭＥＭ（図２３Ｃ）中のＣＶ−８６８４の質量スペクトルである。図２３Ｄ〜２３Ｆは、ＤＭＳＯ（図２３Ｄ）、ＲＰＭＩ培地（図２３Ｅ）およびＤＭＥＭ（図２３Ｆ）中のＣＶ−８６８６の質量スペクトルである。図２３Ｇ〜２３Ｉは、ＤＭＳＯ（図２３Ｇ）、ＲＰＭＩ培地（図２３Ｈ）およびＤＭＥＭ（図２３Ｉ）中のＣＶ−８６８８の質量スペクトルである。図２３Ｊは、２時間のインキュベート後、列挙した溶媒に残留する試験化合物の割合を示す要約チャート図である。
【図２３Ｄ】図２３Ａ〜２３Ｃは、ＤＭＳＯ（図２３Ａ）、ＲＰＭＩ培地（図２３Ｂ）およびＤＭＥＭ（図２３Ｃ）中のＣＶ−８６８４の質量スペクトルである。図２３Ｄ〜２３Ｆは、ＤＭＳＯ（図２３Ｄ）、ＲＰＭＩ培地（図２３Ｅ）およびＤＭＥＭ（図２３Ｆ）中のＣＶ−８６８６の質量スペクトルである。図２３Ｇ〜２３Ｉは、ＤＭＳＯ（図２３Ｇ）、ＲＰＭＩ培地（図２３Ｈ）およびＤＭＥＭ（図２３Ｉ）中のＣＶ−８６８８の質量スペクトルである。図２３Ｊは、２時間のインキュベート後、列挙した溶媒に残留する試験化合物の割合を示す要約チャート図である。
【図２３Ｅ】図２３Ａ〜２３Ｃは、ＤＭＳＯ（図２３Ａ）、ＲＰＭＩ培地（図２３Ｂ）およびＤＭＥＭ（図２３Ｃ）中のＣＶ−８６８４の質量スペクトルである。図２３Ｄ〜２３Ｆは、ＤＭＳＯ（図２３Ｄ）、ＲＰＭＩ培地（図２３Ｅ）およびＤＭＥＭ（図２３Ｆ）中のＣＶ−８６８６の質量スペクトルである。図２３Ｇ〜２３Ｉは、ＤＭＳＯ（図２３Ｇ）、ＲＰＭＩ培地（図２３Ｈ）およびＤＭＥＭ（図２３Ｉ）中のＣＶ−８６８８の質量スペクトルである。図２３Ｊは、２時間のインキュベート後、列挙した溶媒に残留する試験化合物の割合を示す要約チャート図である。
【図２３Ｆ】図２３Ａ〜２３Ｃは、ＤＭＳＯ（図２３Ａ）、ＲＰＭＩ培地（図２３Ｂ）およびＤＭＥＭ（図２３Ｃ）中のＣＶ−８６８４の質量スペクトルである。図２３Ｄ〜２３Ｆは、ＤＭＳＯ（図２３Ｄ）、ＲＰＭＩ培地（図２３Ｅ）およびＤＭＥＭ（図２３Ｆ）中のＣＶ−８６８６の質量スペクトルである。図２３Ｇ〜２３Ｉは、ＤＭＳＯ（図２３Ｇ）、ＲＰＭＩ培地（図２３Ｈ）およびＤＭＥＭ（図２３Ｉ）中のＣＶ−８６８８の質量スペクトルである。図２３Ｊは、２時間のインキュベート後、列挙した溶媒に残留する試験化合物の割合を示す要約チャート図である。
【図２３Ｇ】図２３Ａ〜２３Ｃは、ＤＭＳＯ（図２３Ａ）、ＲＰＭＩ培地（図２３Ｂ）およびＤＭＥＭ（図２３Ｃ）中のＣＶ−８６８４の質量スペクトルである。図２３Ｄ〜２３Ｆは、ＤＭＳＯ（図２３Ｄ）、ＲＰＭＩ培地（図２３Ｅ）およびＤＭＥＭ（図２３Ｆ）中のＣＶ−８６８６の質量スペクトルである。図２３Ｇ〜２３Ｉは、ＤＭＳＯ（図２３Ｇ）、ＲＰＭＩ培地（図２３Ｈ）およびＤＭＥＭ（図２３Ｉ）中のＣＶ−８６８８の質量スペクトルである。図２３Ｊは、２時間のインキュベート後、列挙した溶媒に残留する試験化合物の割合を示す要約チャート図である。
【図２３Ｈ】図２３Ａ〜２３Ｃは、ＤＭＳＯ（図２３Ａ）、ＲＰＭＩ培地（図２３Ｂ）およびＤＭＥＭ（図２３Ｃ）中のＣＶ−８６８４の質量スペクトルである。図２３Ｄ〜２３Ｆは、ＤＭＳＯ（図２３Ｄ）、ＲＰＭＩ培地（図２３Ｅ）およびＤＭＥＭ（図２３Ｆ）中のＣＶ−８６８６の質量スペクトルである。図２３Ｇ〜２３Ｉは、ＤＭＳＯ（図２３Ｇ）、ＲＰＭＩ培地（図２３Ｈ）およびＤＭＥＭ（図２３Ｉ）中のＣＶ−８６８８の質量スペクトルである。図２３Ｊは、２時間のインキュベート後、列挙した溶媒に残留する試験化合物の割合を示す要約チャート図である。
【図２３Ｉ】図２３Ａ〜２３Ｃは、ＤＭＳＯ（図２３Ａ）、ＲＰＭＩ培地（図２３Ｂ）およびＤＭＥＭ（図２３Ｃ）中のＣＶ−８６８４の質量スペクトルである。図２３Ｄ〜２３Ｆは、ＤＭＳＯ（図２３Ｄ）、ＲＰＭＩ培地（図２３Ｅ）およびＤＭＥＭ（図２３Ｆ）中のＣＶ−８６８６の質量スペクトルである。図２３Ｇ〜２３Ｉは、ＤＭＳＯ（図２３Ｇ）、ＲＰＭＩ培地（図２３Ｈ）およびＤＭＥＭ（図２３Ｉ）中のＣＶ−８６８８の質量スペクトルである。図２３Ｊは、２時間のインキュベート後、列挙した溶媒に残留する試験化合物の割合を示す要約チャート図である。
【図２３Ｊ】図２３Ａ〜２３Ｃは、ＤＭＳＯ（図２３Ａ）、ＲＰＭＩ培地（図２３Ｂ）およびＤＭＥＭ（図２３Ｃ）中のＣＶ−８６８４の質量スペクトルである。図２３Ｄ〜２３Ｆは、ＤＭＳＯ（図２３Ｄ）、ＲＰＭＩ培地（図２３Ｅ）およびＤＭＥＭ（図２３Ｆ）中のＣＶ−８６８６の質量スペクトルである。図２３Ｇ〜２３Ｉは、ＤＭＳＯ（図２３Ｇ）、ＲＰＭＩ培地（図２３Ｈ）およびＤＭＥＭ（図２３Ｉ）中のＣＶ−８６８８の質量スペクトルである。図２３Ｊは、２時間のインキュベート後、列挙した溶媒に残留する試験化合物の割合を示す要約チャート図である。
【０１４３】
【図２４−１】図２４Ａ〜２４Ｓは、本発明のマラセジン誘導体の合成スキームを示す。図２４Ａ：化合物Ｃ（ＣＶ−８８０２）；図２４Ｂ；化合物Ｋ（ＣＶ−８８０３）；図２４Ｃ：化合物Ａ（ＣＶ−８８０４）；図２４Ｄ：化合物Ｅ（ＡＢ１２５０８）；図２４Ｅ：化合物Ａ５（ＣＶ−８８１９）；図２４Ｆ：化合物Ｈ（ＡＢ１２５０９）；図２４Ｇ：化合物Ｂ（ＣＶ−８８７７）；図２４Ｈ：化合物Ｂ１０；図２４Ｉ：化合物ＡＢ１１６４４；図２４Ｊ：Ｏ５２（ＡＢ１２９７６）；図２４Ｋ：ＭａｌａｓｓｅｚｉａインドールＡ（ＡＢ１７０１１）；図２４Ｌ：ピチリアシトリン（ＡＢ１７０１４）；図２４Ｍ：ＡＢ１７１５１；図２４Ｎ：化合物ＶＩ（ＡＢ１７２２５）；図２４Ｏ：マラッセジアラクト酸（ＡＢ１７２２７）；図２４Ｐ：ＡＢ１２５０７；図２４Ｑ：化合物Ｖ（ＡＢ１７２１９）；図２４Ｒ：化合物ＶＩＩＩ（ＡＢ１７２２０）および図２４Ｓ：化合物ＶＩＩ（ＡＢ１７２２１）。
【図２４−２】図２４Ａ〜２４Ｓは、本発明のマラセジン誘導体の合成スキームを示す。図２４Ａ：化合物Ｃ（ＣＶ−８８０２）；図２４Ｂ；化合物Ｋ（ＣＶ−８８０３）；図２４Ｃ：化合物Ａ（ＣＶ−８８０４）；図２４Ｄ：化合物Ｅ（ＡＢ１２５０８）；図２４Ｅ：化合物Ａ５（ＣＶ−８８１９）；図２４Ｆ：化合物Ｈ（ＡＢ１２５０９）；図２４Ｇ：化合物Ｂ（ＣＶ−８８７７）；図２４Ｈ：化合物Ｂ１０；図２４Ｉ：化合物ＡＢ１１６４４；図２４Ｊ：Ｏ５２（ＡＢ１２９７６）；図２４Ｋ：ＭａｌａｓｓｅｚｉａインドールＡ（ＡＢ１７０１１）；図２４Ｌ：ピチリアシトリン（ＡＢ１７０１４）；図２４Ｍ：ＡＢ１７１５１；図２４Ｎ：化合物ＶＩ（ＡＢ１７２２５）；図２４Ｏ：マラッセジアラクト酸（ＡＢ１７２２７）；図２４Ｐ：ＡＢ１２５０７；図２４Ｑ：化合物Ｖ（ＡＢ１７２１９）；図２４Ｒ：化合物ＶＩＩＩ（ＡＢ１７２２０）および図２４Ｓ：化合物ＶＩＩ（ＡＢ１７２２１）。
【図２４−３】図２４Ａ〜２４Ｓは、本発明のマラセジン誘導体の合成スキームを示す。図２４Ａ：化合物Ｃ（ＣＶ−８８０２）；図２４Ｂ；化合物Ｋ（ＣＶ−８８０３）；図２４Ｃ：化合物Ａ（ＣＶ−８８０４）；図２４Ｄ：化合物Ｅ（ＡＢ１２５０８）；図２４Ｅ：化合物Ａ５（ＣＶ−８８１９）；図２４Ｆ：化合物Ｈ（ＡＢ１２５０９）；図２４Ｇ：化合物Ｂ（ＣＶ−８８７７）；図２４Ｈ：化合物Ｂ１０；図２４Ｉ：化合物ＡＢ１１６４４；図２４Ｊ：Ｏ５２（ＡＢ１２９７６）；図２４Ｋ：ＭａｌａｓｓｅｚｉａインドールＡ（ＡＢ１７０１１）；図２４Ｌ：ピチリアシトリン（ＡＢ１７０１４）；図２４Ｍ：ＡＢ１７１５１；図２４Ｎ：化合物ＶＩ（ＡＢ１７２２５）；図２４Ｏ：マラッセジアラクト酸（ＡＢ１７２２７）；図２４Ｐ：ＡＢ１２５０７；図２４Ｑ：化合物Ｖ（ＡＢ１７２１９）；図２４Ｒ：化合物ＶＩＩＩ（ＡＢ１７２２０）および図２４Ｓ：化合物ＶＩＩ（ＡＢ１７２２１）。
【図２４−４】図２４Ａ〜２４Ｓは、本発明のマラセジン誘導体の合成スキームを示す。図２４Ａ：化合物Ｃ（ＣＶ−８８０２）；図２４Ｂ；化合物Ｋ（ＣＶ−８８０３）；図２４Ｃ：化合物Ａ（ＣＶ−８８０４）；図２４Ｄ：化合物Ｅ（ＡＢ１２５０８）；図２４Ｅ：化合物Ａ５（ＣＶ−８８１９）；図２４Ｆ：化合物Ｈ（ＡＢ１２５０９）；図２４Ｇ：化合物Ｂ（ＣＶ−８８７７）；図２４Ｈ：化合物Ｂ１０；図２４Ｉ：化合物ＡＢ１１６４４；図２４Ｊ：Ｏ５２（ＡＢ１２９７６）；図２４Ｋ：ＭａｌａｓｓｅｚｉａインドールＡ（ＡＢ１７０１１）；図２４Ｌ：ピチリアシトリン（ＡＢ１７０１４）；図２４Ｍ：ＡＢ１７１５１；図２４Ｎ：化合物ＶＩ（ＡＢ１７２２５）；図２４Ｏ：マラッセジアラクト酸（ＡＢ１７２２７）；図２４Ｐ：ＡＢ１２５０７；図２４Ｑ：化合物Ｖ（ＡＢ１７２１９）；図２４Ｒ：化合物ＶＩＩＩ（ＡＢ１７２２０）および図２４Ｓ：化合物ＶＩＩ（ＡＢ１７２２１）。
【図２４−５】図２４Ａ〜２４Ｓは、本発明のマラセジン誘導体の合成スキームを示す。図２４Ａ：化合物Ｃ（ＣＶ−８８０２）；図２４Ｂ；化合物Ｋ（ＣＶ−８８０３）；図２４Ｃ：化合物Ａ（ＣＶ−８８０４）；図２４Ｄ：化合物Ｅ（ＡＢ１２５０８）；図２４Ｅ：化合物Ａ５（ＣＶ−８８１９）；図２４Ｆ：化合物Ｈ（ＡＢ１２５０９）；図２４Ｇ：化合物Ｂ（ＣＶ−８８７７）；図２４Ｈ：化合物Ｂ１０；図２４Ｉ：化合物ＡＢ１１６４４；図２４Ｊ：Ｏ５２（ＡＢ１２９７６）；図２４Ｋ：ＭａｌａｓｓｅｚｉａインドールＡ（ＡＢ１７０１１）；図２４Ｌ：ピチリアシトリン（ＡＢ１７０１４）；図２４Ｍ：ＡＢ１７１５１；図２４Ｎ：化合物ＶＩ（ＡＢ１７２２５）；図２４Ｏ：マラッセジアラクト酸（ＡＢ１７２２７）；図２４Ｐ：ＡＢ１２５０７；図２４Ｑ：化合物Ｖ（ＡＢ１７２１９）；図２４Ｒ：化合物ＶＩＩＩ（ＡＢ１７２２０）および図２４Ｓ：化合物ＶＩＩ（ＡＢ１７２２１）。
【図２４−６】図２４Ａ〜２４Ｓは、本発明のマラセジン誘導体の合成スキームを示す。図２４Ａ：化合物Ｃ（ＣＶ−８８０２）；図２４Ｂ；化合物Ｋ（ＣＶ−８８０３）；図２４Ｃ：化合物Ａ（ＣＶ−８８０４）；図２４Ｄ：化合物Ｅ（ＡＢ１２５０８）；図２４Ｅ：化合物Ａ５（ＣＶ−８８１９）；図２４Ｆ：化合物Ｈ（ＡＢ１２５０９）；図２４Ｇ：化合物Ｂ（ＣＶ−８８７７）；図２４Ｈ：化合物Ｂ１０；図２４Ｉ：化合物ＡＢ１１６４４；図２４Ｊ：Ｏ５２（ＡＢ１２９７６）；図２４Ｋ：ＭａｌａｓｓｅｚｉａインドールＡ（ＡＢ１７０１１）；図２４Ｌ：ピチリアシトリン（ＡＢ１７０１４）；図２４Ｍ：ＡＢ１７１５１；図２４Ｎ：化合物ＶＩ（ＡＢ１７２２５）；図２４Ｏ：マラッセジアラクト酸（ＡＢ１７２２７）；図２４Ｐ：ＡＢ１２５０７；図２４Ｑ：化合物Ｖ（ＡＢ１７２１９）；図２４Ｒ：化合物ＶＩＩＩ（ＡＢ１７２２０）および図２４Ｓ：化合物ＶＩＩ（ＡＢ１７２２１）。
【図２４−７】図２４Ａ〜２４Ｓは、本発明のマラセジン誘導体の合成スキームを示す。図２４Ａ：化合物Ｃ（ＣＶ−８８０２）；図２４Ｂ；化合物Ｋ（ＣＶ−８８０３）；図２４Ｃ：化合物Ａ（ＣＶ−８８０４）；図２４Ｄ：化合物Ｅ（ＡＢ１２５０８）；図２４Ｅ：化合物Ａ５（ＣＶ−８８１９）；図２４Ｆ：化合物Ｈ（ＡＢ１２５０９）；図２４Ｇ：化合物Ｂ（ＣＶ−８８７７）；図２４Ｈ：化合物Ｂ１０；図２４Ｉ：化合物ＡＢ１１６４４；図２４Ｊ：Ｏ５２（ＡＢ１２９７６）；図２４Ｋ：ＭａｌａｓｓｅｚｉａインドールＡ（ＡＢ１７０１１）；図２４Ｌ：ピチリアシトリン（ＡＢ１７０１４）；図２４Ｍ：ＡＢ１７１５１；図２４Ｎ：化合物ＶＩ（ＡＢ１７２２５）；図２４Ｏ：マラッセジアラクト酸（ＡＢ１７２２７）；図２４Ｐ：ＡＢ１２５０７；図２４Ｑ：化合物Ｖ（ＡＢ１７２１９）；図２４Ｒ：化合物ＶＩＩＩ（ＡＢ１７２２０）および図２４Ｓ：化合物ＶＩＩ（ＡＢ１７２２１）。
【図２４−８】図２４Ａ〜２４Ｓは、本発明のマラセジン誘導体の合成スキームを示す。図２４Ａ：化合物Ｃ（ＣＶ−８８０２）；図２４Ｂ；化合物Ｋ（ＣＶ−８８０３）；図２４Ｃ：化合物Ａ（ＣＶ−８８０４）；図２４Ｄ：化合物Ｅ（ＡＢ１２５０８）；図２４Ｅ：化合物Ａ５（ＣＶ−８８１９）；図２４Ｆ：化合物Ｈ（ＡＢ１２５０９）；図２４Ｇ：化合物Ｂ（ＣＶ−８８７７）；図２４Ｈ：化合物Ｂ１０；図２４Ｉ：化合物ＡＢ１１６４４；図２４Ｊ：Ｏ５２（ＡＢ１２９７６）；図２４Ｋ：ＭａｌａｓｓｅｚｉａインドールＡ（ＡＢ１７０１１）；図２４Ｌ：ピチリアシトリン（ＡＢ１７０１４）；図２４Ｍ：ＡＢ１７１５１；図２４Ｎ：化合物ＶＩ（ＡＢ１７２２５）；図２４Ｏ：マラッセジアラクト酸（ＡＢ１７２２７）；図２４Ｐ：ＡＢ１２５０７；図２４Ｑ：化合物Ｖ（ＡＢ１７２１９）；図２４Ｒ：化合物ＶＩＩＩ（ＡＢ１７２２０）および図２４Ｓ：化合物ＶＩＩ（ＡＢ１７２２１）。
【図２４−９】図２４Ａ〜２４Ｓは、本発明のマラセジン誘導体の合成スキームを示す。図２４Ａ：化合物Ｃ（ＣＶ−８８０２）；図２４Ｂ；化合物Ｋ（ＣＶ−８８０３）；図２４Ｃ：化合物Ａ（ＣＶ−８８０４）；図２４Ｄ：化合物Ｅ（ＡＢ１２５０８）；図２４Ｅ：化合物Ａ５（ＣＶ−８８１９）；図２４Ｆ：化合物Ｈ（ＡＢ１２５０９）；図２４Ｇ：化合物Ｂ（ＣＶ−８８７７）；図２４Ｈ：化合物Ｂ１０；図２４Ｉ：化合物ＡＢ１１６４４；図２４Ｊ：Ｏ５２（ＡＢ１２９７６）；図２４Ｋ：ＭａｌａｓｓｅｚｉａインドールＡ（ＡＢ１７０１１）；図２４Ｌ：ピチリアシトリン（ＡＢ１７０１４）；図２４Ｍ：ＡＢ１７１５１；図２４Ｎ：化合物ＶＩ（ＡＢ１７２２５）；図２４Ｏ：マラッセジアラクト酸（ＡＢ１７２２７）；図２４Ｐ：ＡＢ１２５０７；図２４Ｑ：化合物Ｖ（ＡＢ１７２１９）；図２４Ｒ：化合物ＶＩＩＩ（ＡＢ１７２２０）および図２４Ｓ：化合物ＶＩＩ（ＡＢ１７２２１）。
【図２４−１０】図２４Ａ〜２４Ｓは、本発明のマラセジン誘導体の合成スキームを示す。図２４Ａ：化合物Ｃ（ＣＶ−８８０２）；図２４Ｂ；化合物Ｋ（ＣＶ−８８０３）；図２４Ｃ：化合物Ａ（ＣＶ−８８０４）；図２４Ｄ：化合物Ｅ（ＡＢ１２５０８）；図２４Ｅ：化合物Ａ５（ＣＶ−８８１９）；図２４Ｆ：化合物Ｈ（ＡＢ１２５０９）；図２４Ｇ：化合物Ｂ（ＣＶ−８８７７）；図２４Ｈ：化合物Ｂ１０；図２４Ｉ：化合物ＡＢ１１６４４；図２４Ｊ：Ｏ５２（ＡＢ１２９７６）；図２４Ｋ：ＭａｌａｓｓｅｚｉａインドールＡ（ＡＢ１７０１１）；図２４Ｌ：ピチリアシトリン（ＡＢ１７０１４）；図２４Ｍ：ＡＢ１７１５１；図２４Ｎ：化合物ＶＩ（ＡＢ１７２２５）；図２４Ｏ：マラッセジアラクト酸（ＡＢ１７２２７）；図２４Ｐ：ＡＢ１２５０７；図２４Ｑ：化合物Ｖ（ＡＢ１７２１９）；図２４Ｒ：化合物ＶＩＩＩ（ＡＢ１７２２０）および図２４Ｓ：化合物ＶＩＩ（ＡＢ１７２２１）。
【図２４−１１】図２４Ａ〜２４Ｓは、本発明のマラセジン誘導体の合成スキームを示す。図２４Ａ：化合物Ｃ（ＣＶ−８８０２）；図２４Ｂ；化合物Ｋ（ＣＶ−８８０３）；図２４Ｃ：化合物Ａ（ＣＶ−８８０４）；図２４Ｄ：化合物Ｅ（ＡＢ１２５０８）；図２４Ｅ：化合物Ａ５（ＣＶ−８８１９）；図２４Ｆ：化合物Ｈ（ＡＢ１２５０９）；図２４Ｇ：化合物Ｂ（ＣＶ−８８７７）；図２４Ｈ：化合物Ｂ１０；図２４Ｉ：化合物ＡＢ１１６４４；図２４Ｊ：Ｏ５２（ＡＢ１２９７６）；図２４Ｋ：ＭａｌａｓｓｅｚｉａインドールＡ（ＡＢ１７０１１）；図２４Ｌ：ピチリアシトリン（ＡＢ１７０１４）；図２４Ｍ：ＡＢ１７１５１；図２４Ｎ：化合物ＶＩ（ＡＢ１７２２５）；図２４Ｏ：マラッセジアラクト酸（ＡＢ１７２２７）；図２４Ｐ：ＡＢ１２５０７；図２４Ｑ：化合物Ｖ（ＡＢ１７２１９）；図２４Ｒ：化合物ＶＩＩＩ（ＡＢ１７２２０）および図２４Ｓ：化合物ＶＩＩ（ＡＢ１７２２１）。
【図２４−１２】図２４Ａ〜２４Ｓは、本発明のマラセジン誘導体の合成スキームを示す。図２４Ａ：化合物Ｃ（ＣＶ−８８０２）；図２４Ｂ；化合物Ｋ（ＣＶ−８８０３）；図２４Ｃ：化合物Ａ（ＣＶ−８８０４）；図２４Ｄ：化合物Ｅ（ＡＢ１２５０８）；図２４Ｅ：化合物Ａ５（ＣＶ−８８１９）；図２４Ｆ：化合物Ｈ（ＡＢ１２５０９）；図２４Ｇ：化合物Ｂ（ＣＶ−８８７７）；図２４Ｈ：化合物Ｂ１０；図２４Ｉ：化合物ＡＢ１１６４４；図２４Ｊ：Ｏ５２（ＡＢ１２９７６）；図２４Ｋ：ＭａｌａｓｓｅｚｉａインドールＡ（ＡＢ１７０１１）；図２４Ｌ：ピチリアシトリン（ＡＢ１７０１４）；図２４Ｍ：ＡＢ１７１５１；図２４Ｎ：化合物ＶＩ（ＡＢ１７２２５）；図２４Ｏ：マラッセジアラクト酸（ＡＢ１７２２７）；図２４Ｐ：ＡＢ１２５０７；図２４Ｑ：化合物Ｖ（ＡＢ１７２１９）；図２４Ｒ：化合物ＶＩＩＩ（ＡＢ１７２２０）および図２４Ｓ：化合物ＶＩＩ（ＡＢ１７２２１）。
【０１４４】
【図２５Ａ】図２５Ａ〜２５Ｄは、示されている処置への曝露後、６時間（図２５Ａ）、２４時間（図２５Ｂ）、４８時間（図２５Ｃ）および７２時間（図２５Ｄ）時におけるアネキシンＶ−陽性細胞の百分率を含むデータ表を示す図である。
【図２５Ｂ】図２５Ａ〜２５Ｄは、示されている処置への曝露後、６時間（図２５Ａ）、２４時間（図２５Ｂ）、４８時間（図２５Ｃ）および７２時間（図２５Ｄ）時におけるアネキシンＶ−陽性細胞の百分率を含むデータ表を示す図である。
【図２５Ｃ】図２５Ａ〜２５Ｄは、示されている処置への曝露後、６時間（図２５Ａ）、２４時間（図２５Ｂ）、４８時間（図２５Ｃ）および７２時間（図２５Ｄ）時におけるアネキシンＶ−陽性細胞の百分率を含むデータ表を示す図である。
【図２５Ｄ】図２５Ａ〜２５Ｄは、示されている処置への曝露後、６時間（図２５Ａ）、２４時間（図２５Ｂ）、４８時間（図２５Ｃ）および７２時間（図２５Ｄ）時におけるアネキシンＶ−陽性細胞の百分率を含むデータ表を示す図である。
【０１４５】
【図２６Ａ】図２６Ａ〜２６Ｄは、示されている処置への曝露後、６時間（図２６Ａ）、２４時間（図２６Ｂ）、４８時間（図２６Ｃ）および７２時間（図２６Ｄ）時におけるカスパーゼ３／７誘導倍率を含むデータ表を示す図である。
【図２６Ｂ】図２６Ａ〜２６Ｄは、示されている処置への曝露後、６時間（図２６Ａ）、２４時間（図２６Ｂ）、４８時間（図２６Ｃ）および７２時間（図２６Ｄ）時におけるカスパーゼ３／７誘導倍率を含むデータ表を示す図である。
【図２６Ｃ】図２６Ａ〜２６Ｄは、示されている処置への曝露後、６時間（図２６Ａ）、２４時間（図２６Ｂ）、４８時間（図２６Ｃ）および７２時間（図２６Ｄ）時におけるカスパーゼ３／７誘導倍率を含むデータ表を示す図である。
【図２６Ｄ】図２６Ａ〜２６Ｄは、示されている処置への曝露後、６時間（図２６Ａ）、２４時間（図２６Ｂ）、４８時間（図２６Ｃ）および７２時間（図２６Ｄ）時におけるカスパーゼ３／７誘導倍率を含むデータ表を示す図である。
【０１４６】
【図２７】図２７Ａ〜２７Ｂは、ＡＢ１２５０８（化合物Ｅ）に曝露した後の、ＭｅＷｏ（図２７Ａ）およびＷＭ１１５（図２７Ｂ）細胞の場合の残留細胞生存百分率を示す図である。
【０１４７】
【図２８】図２８Ａ〜２８Ｂは、未知組成物に曝露した後の、ＭｅＷｏ（図２８Ａ）およびＷＭ１１５（図２８Ｂ）細胞の場合の残留細胞生存百分率を示す図である。
【０１４８】
【図２９】図２９Ａ〜２９Ｂは、ＣＶ−８８０３（化合物Ｋ）に曝露した後の、ＭｅＷｏ（図２９Ａ）およびＷＭ１１５（図２９Ｂ）細胞の場合の残留細胞生存百分率を示す図である。
【０１４９】
【図３０】図３０Ａ〜３０Ｂは、ＣＶ−８８０４（化合物Ａ）に曝露した後の、ＭｅＷｏ（図３０Ａ）およびＷＭ１１５（図３０Ｂ）細胞の場合の残留細胞生存百分率を示す図である。
【０１５０】
【図３１】図３１Ａ〜３１Ｂは、ＣＶ−８６８４（マラセジン）に曝露した後の、ＭｅＷｏ（図３１Ａ）およびＷＭ１１５（図３１Ｂ）細胞の場合の残留細胞生存百分率を示す図である。
【０１５１】
【図３２】図３２Ａ〜３２Ｂは、ＣＶ−８６８５（インドロ［３，２−ｂ］カルバゾール）に曝露した後の、ＭｅＷｏ（図３２Ａ）およびＷＭ１１５（図３２Ｂ）細胞の場合の残留細胞生存百分率を示す図である。
【０１５２】
【図３３】図３３Ａ〜３３Ｂは、ＣＶ−８６８６（化合物Ｉ）に曝露した後の、ＭｅＷｏ（図３３Ａ）およびＷＭ１１５（図３３Ｂ）細胞の場合の残留細胞生存百分率を示す図である。
【０１５３】
【図３４】図３４Ａ〜３４Ｂは、ＣＶ−８６８８（化合物ＩＩ）に曝露した後の、ＭｅＷｏ（図３４Ａ）およびＷＭ１１５（図３４Ｂ）細胞の場合の残留細胞生存百分率を示す図である。
【０１５４】
【図３５】図３５Ａ〜３５Ｂは、スタウロスポリンに曝露した後の、ＭｅＷｏ（図３５Ａ）およびＷＭ１１５（図３５Ｂ）細胞の場合の残留細胞生存百分率を示す図である。
【０１５５】
【図３６】図３６Ａは、様々な濃度のオメプラゾールへの曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値を示す図である。図３６Ｂは、図３６Ａからのデータの線グラフを示す一方、挿入図は、測定したＥＣ５０を示す。
【０１５６】
【図３７】図３７Ａは、様々な濃度のＣＶ−８６８４（マラセジン）への曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値を示す図である。図３７Ｂは、図３７Ａからのデータの線グラフを示す一方、挿入図は、測定したＥＣ５０を示す。
【０１５７】
【図３８】図３８Ａは、様々な濃度のＣＶ−８６８５（インドロ［３，２−ｂ］カルバゾール）への曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値を示す図である。図３８Ｂは、図３８Ａからのデータの線グラフを示す一方、挿入図は、測定したＥＣ５０を示す。
【０１５８】
【図３９】図３９Ａは、様々な濃度のＣＶ−８６８６（化合物Ｉ）への曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値を示す図である。図３９Ｂは、図３９Ａからのデータの線グラフを示す一方、挿入図は、測定したＥＣ５０を示す。
【０１５９】
【図４０】図４０Ａは、様々な濃度の未知組成物への曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値を示す図である。図４０Ｂは、図４０Ａからのデータの線グラフを示す一方、挿入図は、測定したＥＣ５０を示す。
【０１６０】
【図４１】図４１Ａは、様々な濃度のＣＶ−８８０３（化合物Ｋ）への曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値を示す図である。図４１Ｂは、図４１Ａからのデータの線グラフを示す一方、挿入図は、測定したＥＣ５０を示す。
【０１６１】
【図４２】図４２Ａは、様々な濃度のＣＶ−８８０４（化合物Ａ）への曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値を示す図である。図４２Ｂは、図４２Ａからのデータの線グラフを示す一方、挿入図は、測定したＥＣ５０を示す。
【０１６２】
【図４３】図４３Ａは、様々な濃度のＡＢ１２５０８（化合物Ｅ）への曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値を示す図である。図４３Ｂは、図４３Ａからのデータの線グラフを示す一方、挿入図は、測定したＥＣ５０を示す。
【０１６３】
【図４４】図４４Ａは、様々な濃度のＣＶ−８６８８（化合物ＩＩ）への曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値を示す図である。図４４Ｂは、図４４Ａからのデータの線グラフを示す一方、挿入図は、測定したＥＣ５０を示す。
【０１６４】
【図４５】図４５Ａは、様々な濃度のオメプラゾールへの曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値を示す図である。図４５Ｂは、図４５Ａからのデータの線グラフを示す。
【０１６５】
【図４６】図４６Ａは、様々な濃度の未知組成物への曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値を示す図である。図４６Ｂは、図４６Ａからのデータの線グラフを示す。
【０１６６】
【図４７】図４７Ａは、様々な濃度の２，３，７，８−テトラクロロジベンゾジオキシン（ＴＣＤＤ）への曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値を示す図である。図４７Ｂは、図４７Ａからのデータの線グラフを示す。
【０１６７】
【図４８】図４８Ａは、様々な濃度のＣＶ−８８１９（化合物Ａ５）への曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値を示す図である。図４８Ｂは、図４８Ａからのデータの線グラフを示す。
【０１６８】
【図４９】図４９Ａは、様々な濃度のＣＶ−８６８４（マラセジン）への曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値を示す図である。図４９Ｂは、図４９Ａからのデータの線グラフを示す。
【０１６９】
【図５０】図５０Ａは、様々な濃度のＡＢ１２５０８（化合物Ｅ）への曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値を示す図である。図５０Ｂは、図５０Ａからのデータの線グラフを示す。
【０１７０】
【図５１】図５１Ａは、様々な濃度のＣＶ−８６８６（化合物Ｉ）への曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値を示す図である。図５１Ｂは、図５１Ａからのデータの線グラフを示す。
【０１７１】
【図５２】図５２Ａは、様々な濃度のＡＢ１２５０９（化合物Ｈ）への曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値を示す図である。図５２Ｂは、図５２Ａからのデータの線グラフを示す。
【０１７２】
【図５３】図５３Ａは、様々な濃度のＣＶ−８６８８（化合物ＩＩ）への曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値を示す図である。図５３Ｂは、図５３Ａからのデータの線グラフを示す。
【０１７３】
【図５４】図５４Ａは、様々な濃度のＣＶ−８８７７（化合物Ｂ）への曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値を示す図である。図５４Ｂは、図５４Ａからのデータの線グラフを示す。
【０１７４】
【図５５】図５５Ａは、様々な濃度のＣＶ−８６８５（インドロ［３，２−ｂ］カルバゾール）への曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値を示す図である。図５５Ｂは、図５５Ａからのデータの線グラフを示す。
【０１７５】
【図５６】図５６Ａは、様々な濃度の化合物Ｂ１０への曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値を示す図である。図５６Ｂは、図５６Ａからのデータの線グラフを示す。
【０１７６】
【図５７】図５７Ａは、様々な濃度のＣＶ−８６８７（化合物ＩＶ）への曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値を示す図である。図５７Ｂは、図５７Ａからのデータの線グラフを示す。
【０１７７】
【図５８】図５８Ａは、様々な濃度のオメプラゾールへの曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値を示す図である。図５８Ｂは、図５８Ａからのデータの線グラフを示す。
【０１７８】
【図５９】図５９Ａは、様々な濃度のＴＣＤＤへの曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値を示す図である。図５９Ｂは、図５９Ａからのデータの線グラフを示す。
【０１７９】
【図６０】図６０Ａは、様々な濃度のマラセジン前駆体への曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値を示す図である。図６０Ｂは、図６０Ａからのデータの線グラフを示す。
【０１８０】
【図６１】図６１Ａは、様々な濃度のＡＢ１１６４４への曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値を示す図である。図６１Ｂは、図６１Ａからのデータの線グラフを示す。
【０１８１】
【図６２】図６２Ａは、様々な濃度の３−メチルコラントレン（３−ＭＣ）への曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値を示す図である。図６２Ｂは、図６２Ａからのデータの線グラフを示す。
【０１８２】
【図６３】図６３Ａは、様々な濃度のＡＢ１２９７６（Ｏ５２）への曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値を示す図である。図６３Ｂは、図６３Ａからのデータの線グラフを示す。
【０１８３】
【図６４】図６４Ａは、様々な濃度のＡＢ１７０１１（ＭａｌａｓｓｅｚｉａインドールＡ）への曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値を示す図である。図６４Ｂは、図６４Ａからのデータの線グラフを示す。
【０１８４】
【図６５】図６５Ａは、様々な濃度のＡＢ１７０１４（ピチリアシトリン）への曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値を示す図である。図６５Ｂは、図６５Ａからのデータの線グラフを示す。
【０１８５】
【図６６】図６６Ａは、様々な濃度のＡＢ１７１５１への曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値を示す図である。図６６Ｂは、図６６Ａからのデータの線グラフを示す。
【０１８６】
【図６７】図６７Ａは、様々な濃度のＡＢ１７２２５への曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値を示す図である。図６７Ｂは、図６７Ａからのデータの線グラフを示す。
【０１８７】
【図６８】図６８は、様々な濃度の示されている化合物により処置されたＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）基質から解明されたＭＴＴ生存率データを示す表である。
【０１８８】
【図６９】図６９は、様々な濃度の示されている化合物により処置されたＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）基質から解明されたメラニン濃度データを示す表である。
【０１８９】
【図７０】図７０は、指定した日に撮影した、ＣＶ−８６８６（化合物Ｉ）およびＡＢ１１６４４に曝露したＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）試料の代表的な巨視的写真画像を示しており、ここでは、試料は、示されている処置に曝露された。
【０１９０】
【図７１】図７１は、指定した日に撮影した、ＣＶ−８６８６（化合物Ｉ）およびＡＢ１１６４４に曝露したＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）試料の代表的な顕微鏡（１５×）写真画像を示しており、ここでは、試料は、示されている処置に曝露された。
【０１９１】
【図７２】図７２は、指定した日に撮影した、ＣＶ−８６８６（化合物Ｉ）およびコウジ酸に曝露したＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）試料の代表的な顕微鏡（１５×）写真画像を示しており、ここでは、試料は、示されている処置に曝露された。
【０１９２】
【図７３】図７３は、指定した日に撮影した、ＣＶ−８６８６（化合物Ｉ）およびコウジ酸に曝露したＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）試料の代表的な巨視的写真画像を示しており、ここでは、試料は、示されている処置に曝露された。
【０１９３】
【図７４】図７４は、指定した日に撮影した、ＣＶ−８６８６（化合物Ｉ）およびコウジ酸に曝露したＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）試料の代表的な巨視的写真画像を示しており、ここでは、試料は、示されている処置に曝露された。
【０１９４】
【図７５】図７５は、様々な濃度の示されている化合物により処置されたＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）基質から解明された平均組織生存率およびメラニン濃度データを示す表である。スポンサーの表示がブランクである場合、試料は未知組成物であった。
【０１９５】
【図７６】図７６は、指定した日に撮影した、示されている処置に曝露されたＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）試料の代表的な巨視的写真画像を示す。
【０１９６】
【図７７】図７７は、処置後７日目に撮影した、示されている処置に曝露されたＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）試料の代表的な巨視的写真画像を示す。化合物の名称がブランクである場合、試料は未知組成物であった。
【０１９７】
【図７８】図７８は、指定した日に撮影した、示されている処置に曝露されたＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）試料の代表的な顕微鏡（１５×）写真画像を示す。
【０１９８】
【図７９】図７９は、指定した日に撮影した、示されている処置に曝露されたＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）試料の代表的な顕微鏡（１５×）写真画像を示す。化合物の名称がブランクである場合、試料は未知組成物であった。
【０１９９】
【図８０】図８０〜８７は、７日目に撮影した、示されている処置に曝露されたＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）試料の代表的な巨視的写真画像を示す。図８５では、化合物の名称がブランクである場合、試料は未知組成物であった。
【図８１】図８０〜８７は、７日目に撮影した、示されている処置に曝露されたＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）試料の代表的な巨視的写真画像を示す。図８５では、化合物の名称がブランクである場合、試料は未知組成物であった。
【図８２】図８０〜８７は、７日目に撮影した、示されている処置に曝露されたＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）試料の代表的な巨視的写真画像を示す。図８５では、化合物の名称がブランクである場合、試料は未知組成物であった。
【図８３】図８０〜８７は、７日目に撮影した、示されている処置に曝露されたＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）試料の代表的な巨視的写真画像を示す。図８５では、化合物の名称がブランクである場合、試料は未知組成物であった。
【図８４】図８０〜８７は、７日目に撮影した、示されている処置に曝露されたＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）試料の代表的な巨視的写真画像を示す。図８５では、化合物の名称がブランクである場合、試料は未知組成物であった。
【図８５】図８０〜８７は、７日目に撮影した、示されている処置に曝露されたＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）試料の代表的な巨視的写真画像を示す。図８５では、化合物の名称がブランクである場合、試料は未知組成物であった。
【図８６】図８０〜８７は、７日目に撮影した、示されている処置に曝露されたＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）試料の代表的な巨視的写真画像を示す。図８５では、化合物の名称がブランクである場合、試料は未知組成物であった。
【図８７】図８０〜８７は、７日目に撮影した、示されている処置に曝露されたＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）試料の代表的な巨視的写真画像を示す。図８５では、化合物の名称がブランクである場合、試料は未知組成物であった。
【０２００】
【図８８】図８８は、様々な濃度の示されている化合物により処置されたＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）基質から解明された平均組織生存率およびメラニン濃度データを示す表である。
【０２０１】
【図８９−１】図８９Ａ〜８９Ｘは、示されている処置後のＢ１６メラノサイトの生存率およびメラニン変化率のヒストグラムを示す。図８９Ｍ〜８９Ｎでは、化合物の名称がブランクである場合、試料は未知組成物であった。
【図８９−２】図８９Ａ〜８９Ｘは、示されている処置後のＢ１６メラノサイトの生存率およびメラニン変化率のヒストグラムを示す。図８９Ｍ〜８９Ｎでは、化合物の名称がブランクである場合、試料は未知組成物であった。
【図８９−３】図８９Ａ〜８９Ｘは、示されている処置後のＢ１６メラノサイトの生存率およびメラニン変化率のヒストグラムを示す。図８９Ｍ〜８９Ｎでは、化合物の名称がブランクである場合、試料は未知組成物であった。
【図８９−４】図８９Ａ〜８９Ｘは、示されている処置後のＢ１６メラノサイトの生存率およびメラニン変化率のヒストグラムを示す。図８９Ｍ〜８９Ｎでは、化合物の名称がブランクである場合、試料は未知組成物であった。
【図８９−５】図８９Ａ〜８９Ｘは、示されている処置後のＢ１６メラノサイトの生存率およびメラニン変化率のヒストグラムを示す。図８９Ｍ〜８９Ｎでは、化合物の名称がブランクである場合、試料は未知組成物であった。
【図８９−６】図８９Ａ〜８９Ｘは、示されている処置後のＢ１６メラノサイトの生存率およびメラニン変化率のヒストグラムを示す。図８９Ｍ〜８９Ｎでは、化合物の名称がブランクである場合、試料は未知組成物であった。
【図８９−７】図８９Ａ〜８９Ｘは、示されている処置後のＢ１６メラノサイトの生存率およびメラニン変化率のヒストグラムを示す。図８９Ｍ〜８９Ｎでは、化合物の名称がブランクである場合、試料は未知組成物であった。
【図８９−８】図８９Ａ〜８９Ｘは、示されている処置後のＢ１６メラノサイトの生存率およびメラニン変化率のヒストグラムを示す。図８９Ｍ〜８９Ｎでは、化合物の名称がブランクである場合、試料は未知組成物であった。
【図８９−９】図８９Ａ〜８９Ｘは、示されている処置後のＢ１６メラノサイトの生存率およびメラニン変化率のヒストグラムを示す。図８９Ｍ〜８９Ｎでは、化合物の名称がブランクである場合、試料は未知組成物であった。
【図８９−１０】図８９Ａ〜８９Ｘは、示されている処置後のＢ１６メラノサイトの生存率およびメラニン変化率のヒストグラムを示す。図８９Ｍ〜８９Ｎでは、化合物の名称がブランクである場合、試料は未知組成物であった。
【図８９−１１】図８９Ａ〜８９Ｘは、示されている処置後のＢ１６メラノサイトの生存率およびメラニン変化率のヒストグラムを示す。図８９Ｍ〜８９Ｎでは、化合物の名称がブランクである場合、試料は未知組成物であった。
【図８９−１２】図８９Ａ〜８９Ｘは、示されている処置後のＢ１６メラノサイトの生存率およびメラニン変化率のヒストグラムを示す。図８９Ｍ〜８９Ｎでは、化合物の名称がブランクである場合、試料は未知組成物であった。
【０２０２】
【図９０−１】図９０Ａ、９０Ｃおよび９０Ｅは、スタウロスポリンへの曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９０Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図９０Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図９０Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図９０Ｂ、９０Ｄおよび９０Ｆは、スタウロスポリンへの曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９０Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図９０Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図９０Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【図９０−２】図９０Ａ、９０Ｃおよび９０Ｅは、スタウロスポリンへの曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９０Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図９０Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図９０Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図９０Ｂ、９０Ｄおよび９０Ｆは、スタウロスポリンへの曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９０Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図９０Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図９０Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【０２０３】
【図９１−１】図９１Ａ、９１Ｃおよび９１Ｅは、化合物Ｈ（ＡＢ１２５０９）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９１Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図９１Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図９１Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図９１Ｂ、９１Ｄおよび９１Ｆは、化合物Ｈ（ＡＢ１２５０９）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９１Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図９１Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図９１Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【図９１−２】図９１Ａ、９１Ｃおよび９１Ｅは、化合物Ｈ（ＡＢ１２５０９）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９１Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図９１Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図９１Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図９１Ｂ、９１Ｄおよび９１Ｆは、化合物Ｈ（ＡＢ１２５０９）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９１Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図９１Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図９１Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【０２０４】
【図９２−１】図９２Ａ、９２Ｃおよび９２Ｅは、マラセジン（ＣＶ−８６８４）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９２Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図９２Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図９２Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図９２Ｂ、９２Ｄおよび９２Ｆは、マラセジン（ＣＶ−８６８４）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９２Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図９２Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図９２Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【図９２−２】図９２Ａ、９２Ｃおよび９２Ｅは、マラセジン（ＣＶ−８６８４）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９２Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図９２Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図９２Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図９２Ｂ、９２Ｄおよび９２Ｆは、マラセジン（ＣＶ−８６８４）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９２Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図９２Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図９２Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【０２０５】
【図９３−１】図９３Ａ、９３Ｃおよび９３Ｅは、化合物Ｂ（ＣＶ−８８７７）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９３Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図９３Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図９３Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図９３Ｂ、９３Ｄおよび９３Ｆは、化合物Ｂ（ＣＶ−８８７７）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９３Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図９３Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図９３Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【図９３−２】図９３Ａ、９３Ｃおよび９３Ｅは、化合物Ｂ（ＣＶ−８８７７）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９３Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図９３Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図９３Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図９３Ｂ、９３Ｄおよび９３Ｆは、化合物Ｂ（ＣＶ−８８７７）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９３Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図９３Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図９３Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【０２０６】
【図９４−１】図９４Ａ、９４Ｃおよび９４Ｅは、化合物Ｉ（ＣＶ−８６８６）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９４Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図９４Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図９４Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図９４Ｂ、９４Ｄおよび９４Ｆは、化合物Ｉ（ＣＶ−８６８６）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９４Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図９４Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図９４Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【図９４−２】図９４Ａ、９４Ｃおよび９４Ｅは、化合物Ｉ（ＣＶ−８６８６）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９４Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図９４Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図９４Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図９４Ｂ、９４Ｄおよび９４Ｆは、化合物Ｉ（ＣＶ−８６８６）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９４Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図９４Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図９４Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【０２０７】
【図９５−１】図９５Ａ、９５Ｃおよび９５Ｅは、化合物Ｂ１０への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９５Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図９５Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図９５Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図９５Ｂ、９５Ｄおよび９５Ｆは、化合物Ｂ１０への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９５Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図９５Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図９５Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【図９５−２】図９５Ａ、９５Ｃおよび９５Ｅは、化合物Ｂ１０への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９５Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図９５Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図９５Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図９５Ｂ、９５Ｄおよび９５Ｆは、化合物Ｂ１０への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９５Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図９５Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図９５Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【０２０８】
【図９６−１】図９６Ａ、９６Ｃおよび９６Ｅは、化合物ＩＩ（ＣＶ−８６８８）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９６Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図９６Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図９６Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図９６Ｂ、９６Ｄおよび９６Ｆは、化合物ＩＩ（ＣＶ−８６８８）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９６Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図９６Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図９６Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【図９６−２】図９６Ａ、９６Ｃおよび９６Ｅは、化合物ＩＩ（ＣＶ−８６８８）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９６Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図９６Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図９６Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図９６Ｂ、９６Ｄおよび９６Ｆは、化合物ＩＩ（ＣＶ−８６８８）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９６Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図９６Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図９６Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【０２０９】
【図９７−１】図９７Ａ、９７Ｃおよび９７Ｅは、マラセジン前駆体への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９７Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図９７Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図９７Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図９７Ｂ、９７Ｄおよび９７Ｆは、マラセジン前駆体への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９７Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図９７Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図９７Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【図９７−２】図９７Ａ、９７Ｃおよび９７Ｅは、マラセジン前駆体への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９７Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図９７Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図９７Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図９７Ｂ、９７Ｄおよび９７Ｆは、マラセジン前駆体への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９７Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図９７Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図９７Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【０２１０】
【図９８−１】図９８Ａ、９８Ｃおよび９８Ｅは、インドロ［３，２−ｂ］カルバゾール（ＣＶ−８６８５）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９８Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図９８Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図９８Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図９８Ｂ、９８Ｄおよび９８Ｆは、インドロ［３，２−ｂ］カルバゾール（ＣＶ−８６８５）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９８Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図９８Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図９８Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【図９８−２】図９８Ａ、９８Ｃおよび９８Ｅは、インドロ［３，２−ｂ］カルバゾール（ＣＶ−８６８５）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９８Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図９８Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図９８Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図９８Ｂ、９８Ｄおよび９８Ｆは、インドロ［３，２−ｂ］カルバゾール（ＣＶ−８６８５）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９８Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図９８Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図９８Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【０２１１】
【図９９−１】図９９Ａ、９９Ｃおよび９９Ｅは、ＡＢ１７１５１への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９９Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図９９Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図９９Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図９９Ｂ、９９Ｄおよび９９Ｆは、ＡＢ１７１５１への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９９Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図９９Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図９９Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【図９９−２】図９９Ａ、９９Ｃおよび９９Ｅは、ＡＢ１７１５１への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９９Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図９９Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図９９Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図９９Ｂ、９９Ｄおよび９９Ｆは、ＡＢ１７１５１への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図９９Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図９９Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図９９Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【０２１２】
【図１００−１】図１００Ａ、１００Ｃおよび１００Ｅは、化合物ＩＶ（ＣＶ−８６８７）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１００Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図１００Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図１００Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図１００Ｂ、１００Ｄおよび１００Ｆは、化合物ＩＶ（ＣＶ−８６８７）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１００Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図１００Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図１００Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【図１００−２】図１００Ａ、１００Ｃおよび１００Ｅは、化合物ＩＶ（ＣＶ−８６８７）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１００Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図１００Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図１００Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図１００Ｂ、１００Ｄおよび１００Ｆは、化合物ＩＶ（ＣＶ−８６８７）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１００Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図１００Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図１００Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【０２１３】
【図１０１−１】図１０１Ａ、１０１Ｃおよび１０１Ｅは、ＡＢ１７０１１への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１０１Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図１０１Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図１０１Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図１０１Ｂ、１０１Ｄおよび１０１Ｆは、ＡＢ１７０１１への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１０１Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図１０１Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図１０１Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【図１０１−２】図１０１Ａ、１０１Ｃおよび１０１Ｅは、ＡＢ１７０１１への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１０１Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図１０１Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図１０１Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図１０１Ｂ、１０１Ｄおよび１０１Ｆは、ＡＢ１７０１１への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１０１Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図１０１Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図１０１Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【０２１４】
【図１０２−１】図１０２Ａ、１０２Ｃおよび１０２Ｅは、ＡＢ１１６４４への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１０２Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図１０２Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図１０２Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図１０２Ｂ、１０２Ｄおよび１０２Ｆは、ＡＢ１１６４４への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１０２Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図１０２Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図１０２Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【図１０２−２】図１０２Ａ、１０２Ｃおよび１０２Ｅは、ＡＢ１１６４４への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１０２Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図１０２Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図１０２Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図１０２Ｂ、１０２Ｄおよび１０２Ｆは、ＡＢ１１６４４への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１０２Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図１０２Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図１０２Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【０２１５】
【図１０３−１】図１０３Ａ、１０３Ｃおよび１０３Ｅは、ＡＢ１７０１４への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１０３Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図１０３Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図１０３Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図１０３Ｂ、１０３Ｄおよび１０３Ｆは、ＡＢ１７０１４への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１０３Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図１０３Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図１０３Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【図１０３−２】図１０３Ａ、１０３Ｃおよび１０３Ｅは、ＡＢ１７０１４への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１０３Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図１０３Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図１０３Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図１０３Ｂ、１０３Ｄおよび１０３Ｆは、ＡＢ１７０１４への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１０３Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図１０３Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図１０３Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【０２１６】
【図１０４−１】図１０４Ａ、１０４Ｃおよび１０４Ｅは、未知組成物への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１０４Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図１０４Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図１０４Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図１０４Ｂ、１０４Ｄおよび１０４Ｆは、未知組成物への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１０４Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図１０４Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図１０４Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【図１０４−２】図１０４Ａ、１０４Ｃおよび１０４Ｅは、未知組成物への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１０４Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図１０４Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図１０４Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図１０４Ｂ、１０４Ｄおよび１０４Ｆは、未知組成物への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１０４Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図１０４Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図１０４Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【０２１７】
【図１０５−１】図１０５Ａ、１０５Ｃおよび１０５Ｅは、ＡＢ１７２２５への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１０５Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図１０５Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図１０５Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図１０５Ｂ、１０５Ｄおよび１０５Ｆは、ＡＢ１７２２５への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１０５Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図１０５Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図１０５Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【図１０５−２】図１０５Ａ、１０５Ｃおよび１０５Ｅは、ＡＢ１７２２５への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１０５Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図１０５Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図１０５Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図１０５Ｂ、１０５Ｄおよび１０５Ｆは、ＡＢ１７２２５への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１０５Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図１０５Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図１０５Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【０２１８】
【図１０６−１】図１０６Ａ、１０６Ｃおよび１０６Ｅは、化合物Ａ５（ＣＶ−８８１９）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１０６Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図１０６Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図１０６Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図１０６Ｂ、１０６Ｄおよび１０６Ｆは、化合物Ａ５（ＣＶ−８８１９）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１０６Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図１０６Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図１０６Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【図１０６−２】図１０６Ａ、１０６Ｃおよび１０６Ｅは、化合物Ａ５（ＣＶ−８８１９）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１０６Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図１０６Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図１０６Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図１０６Ｂ、１０６Ｄおよび１０６Ｆは、化合物Ａ５（ＣＶ−８８１９）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１０６Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図１０６Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図１０６Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【０２１９】
【図１０７−１】図１０７Ａ、１０７Ｃおよび１０７Ｅは、ＡＢ１２９７６への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１０７Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図１０７Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図１０７Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図１０７Ｂ、１０７Ｄおよび１０７Ｆは、ＡＢ１２９７６への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１０７Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図１０７Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図１０７Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【図１０７−２】図１０７Ａ、１０７Ｃおよび１０７Ｅは、ＡＢ１２９７６への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１０７Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図１０７Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図１０７Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図１０７Ｂ、１０７Ｄおよび１０７Ｆは、ＡＢ１２９７６への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１０７Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図１０７Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図１０７Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【０２２０】
【図１０８−１】図１０８Ａ、１０８Ｃおよび１０８Ｅは、化合物Ｅ（ＡＢ１２５０８）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１０８Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図１０８Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図１０８Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図１０８Ｂ、１０８Ｄおよび１０８Ｆは、化合物Ｅ（ＡＢ１２５０８）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１０８Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図１０８Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図１０８Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【図１０８−２】図１０８Ａ、１０８Ｃおよび１０８Ｅは、化合物Ｅ（ＡＢ１２５０８）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１０８Ａ）、ＭｅＷｏ細胞（図１０８Ｃ）およびＷＭ１１５細胞（図１０８Ｅ）の百分率を含むデータの表を示す図である。図１０８Ｂ、１０８Ｄおよび１０８Ｆは、化合物Ｅ（ＡＢ１２５０８）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）−陽性Ｂ１６Ｆ１細胞（図１０８Ｂ）、ＭｅＷｏ細胞（図１０８Ｄ）およびＷＭ１１５細胞（図１０８Ｆ）の百分率を含むデータの表を示す図である。
【０２２１】
【図１０９】図１０９Ａ、１０９Ｂおよび１０９Ｃは、それぞれ、スタウロスポリンへの曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ビヒクル対照と比較した、Ｂ１６Ｆ１細胞、ＭｅＷｏ細胞およびＷＭ１１５細胞のカスパーゼ３／７誘導率を含むデータの表を示す図である。
【０２２２】
【図１１０】図１１０Ａ、１１０Ｂおよび１１０Ｃは、それぞれ、マラセジン（ＣＶ−８６８４）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ビヒクル対照と比較した、Ｂ１６Ｆ１細胞、ＭｅＷｏ細胞およびＷＭ１１５細胞のカスパーゼ３／７誘導率を含むデータの表を示す図である。
【０２２３】
【図１１１】図１１１Ａ、１１１Ｂおよび１１１Ｃは、それぞれ、化合物Ｉ（ＣＶ−８６８６）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ビヒクル対照と比較した、Ｂ１６Ｆ１細胞、ＭｅＷｏ細胞およびＷＭ１１５細胞のカスパーゼ３／７誘導率を含むデータの表を示す図である。
【０２２４】
【図１１２】図１１２Ａ、１１２Ｂおよび１１２Ｃは、それぞれ、化合物ＩＩ（ＣＶ−８６８８）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ビヒクル対照と比較した、Ｂ１６Ｆ１細胞、ＭｅＷｏ細胞およびＷＭ１１５細胞のカスパーゼ３／７誘導率を含むデータの表を示す図である。
【０２２５】
【図１１３】図１１３Ａ、１１３Ｂおよび１１３Ｃは、それぞれ、インドロ［３，２−ｂ］カルバゾール（ＣＶ−８６８５）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ビヒクル対照と比較した、Ｂ１６Ｆ１細胞、ＭｅＷｏ細胞およびＷＭ１１５細胞のカスパーゼ３／７誘導率を含むデータの表を示す図である。
【０２２６】
【図１１４】図１１４Ａ、１１４Ｂおよび１１４Ｃは、それぞれ、化合物ＩＶ（ＣＶ−８６８７）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ビヒクル対照と比較した、Ｂ１６Ｆ１細胞、ＭｅＷｏ細胞およびＷＭ１１５細胞のカスパーゼ３／７誘導率を含むデータの表を示す図である。
【０２２７】
【図１１５】図１１５Ａ、１１５Ｂおよび１１５Ｃは、それぞれ、ＡＢ１１６４４への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ビヒクル対照と比較した、Ｂ１６Ｆ１細胞、ＭｅＷｏ細胞およびＷＭ１１５細胞のカスパーゼ３／７誘導率を含むデータの表を示す図である。
【０２２８】
【図１１６】図１１６Ａ、１１６Ｂおよび１１６Ｃは、それぞれ、未知組成物への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ビヒクル対照と比較した、Ｂ１６Ｆ１細胞、ＭｅＷｏ細胞およびＷＭ１１５細胞のカスパーゼ３／７誘導率を含むデータの表を示す図である。
【０２２９】
【図１１７】図１１７Ａ、１１７Ｂおよび１１７Ｃは、それぞれ、化合物Ａ５（ＣＶ−８８１９）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ビヒクル対照と比較した、Ｂ１６Ｆ１細胞、ＭｅＷｏ細胞およびＷＭ１１５細胞のカスパーゼ３／７誘導率を含むデータの表を示す図である。
【０２３０】
【図１１８】図１１８Ａ、１１８Ｂおよび１１８Ｃは、それぞれ、化合物Ｅ（ＡＢ１２５０８）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ビヒクル対照と比較した、Ｂ１６Ｆ１細胞、ＭｅＷｏ細胞およびＷＭ１１５細胞のカスパーゼ３／７誘導率を含むデータの表を示す図である。
【０２３１】
【図１１９】図１１９Ａ、１１９Ｂおよび１１９Ｃは、それぞれ、化合物Ｈ（ＡＢ１２５０９）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ビヒクル対照と比較した、Ｂ１６Ｆ１細胞、ＭｅＷｏ細胞およびＷＭ１１５細胞のカスパーゼ３／７誘導率を含むデータの表を示す図である。
【０２３２】
【図１２０】図１２０Ａ、１２０Ｂおよび１２０Ｃは、それぞれ、化合物Ｂ（ＣＶ−８８７７）への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ビヒクル対照と比較した、Ｂ１６Ｆ１細胞、ＭｅＷｏ細胞およびＷＭ１１５細胞のカスパーゼ３／７誘導率を含むデータの表を示す図である。
【０２３３】
【図１２１】図１２１Ａ、１２１Ｂおよび１２１Ｃは、それぞれ、化合物Ｂ１０への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ビヒクル対照と比較した、Ｂ１６Ｆ１細胞、ＭｅＷｏ細胞およびＷＭ１１５細胞のカスパーゼ３／７誘導率を含むデータの表を示す図である。
【０２３４】
【図１２２】図１２２Ａ、１２２Ｂおよび１２２Ｃは、それぞれ、マラセジン前駆体への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ビヒクル対照と比較した、Ｂ１６Ｆ１細胞、ＭｅＷｏ細胞およびＷＭ１１５細胞のカスパーゼ３／７誘導率を含むデータの表を示す図である。
【０２３５】
【図１２３】図１２３Ａ、１２３Ｂおよび１２３Ｃは、それぞれ、ＡＢ１７１５１への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ビヒクル対照と比較した、Ｂ１６Ｆ１細胞、ＭｅＷｏ細胞およびＷＭ１１５細胞のカスパーゼ３／７誘導率を含むデータの表を示す図である。
【０２３６】
【図１２４】図１２４Ａ、１２４Ｂおよび１２４Ｃは、それぞれ、ＡＢ１７０１１への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ビヒクル対照と比較した、Ｂ１６Ｆ１細胞、ＭｅＷｏ細胞およびＷＭ１１５細胞のカスパーゼ３／７誘導率を含むデータの表を示す図である。
【０２３７】
【図１２５】図１２５Ａ、１２５Ｂおよび１２５Ｃは、それぞれ、ＡＢ１７０１４への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ビヒクル対照と比較した、Ｂ１６Ｆ１細胞、ＭｅＷｏ細胞およびＷＭ１１５細胞のカスパーゼ３／７誘導率を含むデータの表を示す図である。
【０２３８】
【図１２６】図１２６Ａ、１２６Ｂおよび１２６Ｃは、それぞれ、ＡＢ１７２２５への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ビヒクル対照と比較した、Ｂ１６Ｆ１細胞、ＭｅＷｏ細胞およびＷＭ１１５細胞のカスパーゼ３／７誘導率を含むデータの表を示す図である。
【０２３９】
【図１２７】図１２７Ａ、１２７Ｂおよび１２７Ｃは、それぞれ、ＡＢ１２９７６への曝露後の６、２４、４８および７２時間時における、ビヒクル対照と比較した、Ｂ１６Ｆ１細胞、ＭｅＷｏ細胞およびＷＭ１１５細胞のカスパーゼ３／７誘導率を含むデータの表を示す図である。
【０２４０】
【図１２８−１】図１２８〜１２９は、様々な濃度の示されている試験物品により処置されたＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）基質を用いる個別の実験から解明された平均組織生存率およびメラニン濃度データを示す表である。
【図１２８−２】図１２８〜１２９は、様々な濃度の示されている試験物品により処置されたＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）基質を用いる個別の実験から解明された平均組織生存率およびメラニン濃度データを示す表である。
【図１２９−１】図１２８〜１２９は、様々な濃度の示されている試験物品により処置されたＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）基質を用いる個別の実験から解明された平均組織生存率およびメラニン濃度データを示す表である。
【図１２９−２】図１２８〜１２９は、様々な濃度の示されている試験物品により処置されたＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）基質を用いる個別の実験から解明された平均組織生存率およびメラニン濃度データを示す表である。
【０２４１】
【図１３０−１】図１３０は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａにより産生する化合物を示す図である。
【図１３０−２】図１３０は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａにより産生する化合物を示す図である。
【図１３０−３】図１３０は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａにより産生する化合物を示す図である。
【図１３０−４】図１３０は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａにより産生する化合物を示す図である。
【０２４２】
【図１３１】図１３１は、様々な濃度の示されている試験物品／試験組成物により処置されたＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）基質を用いる個別の実験から解明された平均組織生存率およびメラニン濃度データを示す表である。
【図１３２】図１３２は、様々な濃度の示されている試験物品／試験組成物により処置されたＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）基質を用いる個別の実験から解明された平均組織生存率およびメラニン濃度データを示す表である。
【０２４３】
【図１３３Ａ】図１３３Ａ〜１３３Ｂは、ＡＢ１７５９０（図１３３Ａ）およびＡＢ１７６５３、ＡＢ１７６５４、ＡＢ１７６５５、ＡＢ１７６５６、ＡＢ１７６５７およびＡＢ１７６５８（図１３３Ｂ）に関する合成スキームを示す図である。
【図１３３Ｂ】図１３３Ａ〜１３３Ｂは、ＡＢ１７５９０（図１３３Ａ）およびＡＢ１７６５３、ＡＢ１７６５４、ＡＢ１７６５５、ＡＢ１７６５６、ＡＢ１７６５７およびＡＢ１７６５８（図１３３Ｂ）に関する合成スキームを示す図である。
【０２４４】
【図１３４】図１３４は、皮膚タイプＩＶの患者の場合の皮膚処置の型を示す概略図である。値は、ｍＪ／ｃｍ２単位の任意の領域のＵＶ用量を示す。
【０２４５】
【図１３５】図１３５は、皮膚タイプＩ〜ＶＩに関するＤｕａｌｉｇｈｔスケールを示す表である。
【０２４６】
【図１３６】図１３６は、７日目に照射した後の８日目における、メラニンおよび紅斑のメグザメーターＭＸ１６による測定値を示す表である。
【０２４７】
【図１３７−１】図１３７は、１４日目の照射後の１５日目における、メラニンおよび紅斑のメグザメーターＭＸ１６による測定値を示す表である。
【図１３７−２】図１３７は、１４日目の照射後の１５日目における、メラニンおよび紅斑のメグザメーターＭＸ１６による測定値を示す表である。
【０２４８】
【図１３８】図１３８は、様々な程度の紅斑に関連する数値である紅斑スケールを示す表である。
【０２４９】
【図１３９】図１３９は、図７に示されている皮膚処置の型による、様々なレベルのＵＶを用いた照射後２４時間の対象の皮膚を示す写真である。照射後の２４時間の最小紅斑量（「ＭＥＤ」）は、１２０ｍＪ  ＵＶＢであった。
【０２５０】
【図１４０】図１４０は、７日目における、対象の皮膚上の試験部位を示す写真である。
【０２５１】
【図１４１】図１４１は、１２０ｍＪ  ＵＶＢで照射後２４時間の８日目における、対象の皮膚上の試験部位を示す写真である。
【０２５２】
【図１４２】図１４２は、さらに１週間のマラセジン治療をした後の１４日目における、対象の皮膚上の試験部位を示す写真である。処置領域に、１２０ｍＪ  ＵＶＢを投与した。
【０２５３】
【図１４３】図１４３は、１２０ｍＪ  ＵＶＢで照射後２４時間の１５日目における、対象の皮膚上の試験部位を示す写真である。７日目および９日目の場合、ビヒクル部位に紅斑があることに留意されたい。１日目および３日目に、かすかな紅斑を伴う、１４日目、１０日目および８日目の場合、マラセジン１％処置部位では、最小限から軽度の紅斑があることにも留意されたい。
【発明を実施するための形態】
【０２５４】
本発明の一実施形態は、皮膚を美白する化合物である。該化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学アナログ、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０２５５】
この実施形態の一態様では、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母により産生される本化合物は、式（Ｉ）の構造：
【化６５】
2021521195.tif 000066
を有する。
【０２５６】
この実施形態の別の態様では、本化合物は、マラセジンの化学アナログである。
【０２５７】
本発明の別の実施形態は、メラノサイトアポトーシスを誘導する化合物である。該化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学アナログ、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０２５８】
この実施形態の一態様では、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母により産生される本化合物は、式（Ｉ）の構造：
【化６６】
2021521195.tif 000067
を有する。
【０２５９】
この実施形態の別の態様では、本化合物は、マラセジンの化学アナログである。
【０２６０】
本発明のさらなる実施形態は、メラノサイト活性をモジュレートする化合物である。該化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学アナログ、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０２６１】
この実施形態の一態様では、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母により産生される本化合物は、式（Ｉ）の構造：
【化６７】
2021521195.tif 000068
を有する。
【０２６２】
この実施形態の別の態様では、本化合物は、マラセジンの化学アナログである。
【０２６３】
本発明の追加的な実施形態は、芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）を作動する化合物である。該化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学アナログ、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０２６４】
この実施形態の一態様では、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母により産生される本化合物は、式（Ｉ）の構造：
【化６８】
2021521195.tif 000069
を有する。
【０２６５】
この実施形態の別の態様では、本化合物は、マラセジンの化学アナログである。
【０２６６】
本発明の別の実施形態は、色素沈着過度障害によって引き起こされる色素沈着過度を改善する化合物である。該化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学アナログ、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０２６７】
この実施形態の一態様では、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母により産生される本化合物は、式（Ｉ）の構造：
【化６９】
2021521195.tif 000070
を有する。
【０２６８】
この実施形態の別の態様では、本化合物は、マラセジンの化学アナログである。
【０２６９】
本発明のさらなる実施形態は、メラニン産生をモジュレートする化合物である。該化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学アナログ、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０２７０】
この実施形態の一態様では、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母により産生される本化合物は、式（Ｉ）の構造：
【化７０】
2021521195.tif 000071
を有する。
【０２７１】
この実施形態の別の態様では、本化合物は、マラセジンの化学アナログである。
【０２７２】
本発明の追加的な実施形態は、メラノソーム生物発生をモジュレートする化合物である。該化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学アナログ、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０２７３】
この実施形態の一態様では、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母により産生される本化合物は、式（Ｉ）の構造：
【化７１】
2021521195.tif 000072
を有する。
【０２７４】
この実施形態の別の態様では、本化合物は、マラセジンの化学アナログである。
【０２７５】
本発明の別の実施形態は、メラノソーム輸送をモジュレートする化合物である。該化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学アナログ、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０２７６】
この実施形態の一態様では、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母により産生される本化合物は、式（Ｉ）の構造：
【化７２】
2021521195.tif 000073
を有する。
【０２７７】
この実施形態の別の態様では、本化合物は、マラセジンの化学アナログである。
【０２７８】
本発明のさらなる実施形態は、組成物である。該組成物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母、および化粧品としてまたは薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤または担体を含む。
【０２７９】
本発明の追加的な実施形態は、組成物である。該組成物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母から単離されるもしくは単離可能な化合物、および化粧品としてまたは薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤または担体を含む。
【０２８０】
本発明の別の実施形態は、組成物である。該組成物は、アナログを含めた本明細書において開示されている化合物のいずれか、および化粧品としてまたは薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤または担体を含む。
【０２８１】
本発明のさらなる実施形態は、対象において皮膚を美白する方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている化合物または組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【０２８２】
本発明の追加的な実施形態は、対象においてメラノサイトアポトーシスを誘導する方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている化合物または組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【０２８３】
本発明の別の実施形態は、対象においてメラノサイト活性をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている化合物または組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【０２８４】
本発明のさらなる実施形態は、芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）を作動させる方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている化合物または組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【０２８５】
本発明の追加的な実施形態は、それを必要とする対象において、色素沈着過度障害によって引き起こされる色素沈着過度を改善する方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている化合物または組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【０２８６】
本発明の別の実施形態は、対象においてメラニン産生をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている化合物または組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【０２８７】
本発明のさらなる実施形態は、対象においてメラノソーム生物発生をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている化合物または組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【０２８８】
本発明の追加的な実施形態は、対象においてメラノソーム輸送をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている化合物または組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【０２８９】
本発明の別の実施形態は、化合物である。本化合物は、式（ＩＩ）の構造：
【化７３】
2021521195.tif 000074
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素およびメチルからなる群から独立して選択され、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１のうちの少なくとも１つは、メチルである）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０２９０】
この実施形態の一態様では、本化合物は、
【化７４】
2021521195.tif 000075
からなる群から選択される。
【０２９１】
本発明のさらなる実施形態は、化合物である。本化合物は、式（ＩＩＩ）の構造：
【化７５】
2021521195.tif 000076
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、水素およびメチルからなる群から独立して選択され、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの少なくとも１つは、メチルである）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０２９２】
この実施形態の一態様では、本化合物は、
【化７６】
2021521195.tif 000077
である。
【０２９３】
本発明の追加的な実施形態は、皮膚を美白する化合物である。本化合物は、式（ＩＩ）の構造：
【化７７】
2021521195.tif 000078
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素およびメチルからなる群から独立して選択される）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０２９４】
この実施形態の一態様では、本化合物は、
【化７８】
2021521195.tif 000079
からなる群から選択される。
【０２９５】
本発明の別の実施形態は、皮膚を美白する化合物である。本化合物は、式（ＩＩＩ）の構造：
【化７９】
2021521195.tif 000080
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、水素およびメチルからなる群から独立して選択される）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０２９６】
この実施形態の一態様では、本化合物は、
【化８０】
2021521195.tif 000081
からなる群から選択される。
【０２９７】
本発明のさらなる実施形態は、メラノサイトアポトーシスを誘導する化合物である。本化合物は、式（ＩＩ）の構造：
【化８１】
2021521195.tif 000082
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素およびメチルからなる群から独立して選択される）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０２９８】
この実施形態の一態様では、本化合物は、
【化８２】
2021521195.tif 000083
からなる群から選択される。
【０２９９】
本発明の追加的な実施形態は、メラノサイトアポトーシスを誘導する化合物である。本化合物は、式（ＩＩＩ）の構造：
【化８３】
2021521195.tif 000084
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、水素およびメチルからなる群から独立して選択される）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０３００】
この実施形態の一態様では、本化合物は、
【化８４】
2021521195.tif 000085
からなる群から選択される。
【０３０１】
本発明の別の実施形態は、芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）を作動する化合物である。本化合物は、式（ＩＩ）の構造：
【化８５】
2021521195.tif 000086
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素およびメチルからなる群から独立して選択される）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０３０２】
この実施形態の一態様では、本化合物は、
【化８６】
2021521195.tif 000087
からなる群から選択される。
【０３０３】
本発明のさらなる実施形態は、芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）を作動する化合物である。本化合物は、式（ＩＩＩ）の構造：
【化８７】
2021521195.tif 000088
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、水素およびメチルからなる群から独立して選択される）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０３０４】
この実施形態の一態様では、本化合物は、
【化８８】
2021521195.tif 000089
からなる群から選択される。
【０３０５】
本発明の追加的な実施形態は、組成物である。本組成物は、式（ＩＩ）の構造を有する化合物：
【化８９】
2021521195.tif 000090
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素およびメチルからなる群から独立して選択される）あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩、および化粧品としてまたは薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤または担体を含む。
【０３０６】
この実施形態の一態様では、本化合物は、
【化９０】
2021521195.tif 000091
からなる群から選択される。
【０３０７】
本発明の別の実施形態は、組成物である。本組成物は、式（ＩＩＩ）の構造を有する化合物：
【化９１】
2021521195.tif 000092
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、水素およびメチルからなる群から独立して選択される）、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩および化粧品としてまたは薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤または担体を含む。
【０３０８】
この実施形態の一態様では、本化合物は、
【化９２】
2021521195.tif 000093
からなる群から選択される。
【０３０９】
本発明のさらなる実施形態は、対象において皮膚を美白する方法である。本方法は、対象に、式（ＩＩ）の構造を有する化合物：
【化９３】
2021521195.tif 000094
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素およびメチルからなる群から独立して選択される）あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩を接触させるステップを含む。
【０３１０】
この実施形態の一態様では、本化合物は、
【化９４】
2021521195.tif 000095
からなる群から選択される。
【０３１１】
本発明の追加的な実施形態は、対象において皮膚を美白する方法である。本方法は、対象に、式（ＩＩＩ）の構造を有する化合物：
【化９５】
2021521195.tif 000096
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、水素およびメチルからなる群から独立して選択される）あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩を接触させるステップを含む。
【０３１２】
この実施形態の一態様では、本化合物は、
【化９６】
2021521195.tif 000097
からなる群から選択される。
【０３１３】
本発明の別の実施形態は、対象においてメラノサイトアポトーシスを誘導する方法である。本方法は、対象に、式（ＩＩ）の構造を有する化合物：
【化９７】
2021521195.tif 000098
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素およびメチルからなる群から独立して選択される）あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩を接触させるステップを含む。
【０３１４】
この実施形態の一態様では、本化合物は、
【化９８】
2021521195.tif 000099
からなる群から選択される。
【０３１５】
本発明のさらなる実施形態は、対象においてメラノサイトアポトーシスを誘導する方法である。本方法は、対象に、式（ＩＩＩ）の構造を有する化合物：
【化９９】
2021521195.tif 000100
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、水素およびメチルからなる群から独立して選択される）あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩を接触させるステップを含む。
【０３１６】
この実施形態の一態様では、本化合物は、
【化１００】
2021521195.tif 000101
からなる群から選択される。
【０３１７】
本発明の追加的な実施形態は、対象において芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）を作動させる方法である。本方法は、対象に、式（ＩＩ）の構造を有する化合物：
【化１０１】
2021521195.tif 000102
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素およびメチルからなる群から独立して選択される）あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩を接触させるステップを含む。
【０３１８】
この実施形態の一態様では、本化合物は、
【化１０２】
2021521195.tif 000103
からなる群から選択される。
【０３１９】
本発明の別の実施形態は、対象において芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）を作動させる方法である。本方法は、対象に、式（ＩＩＩ）の構造を有する化合物：
【化１０３】
2021521195.tif 000104
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、水素およびメチルからなる群から独立して選択される）あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩を接触させるステップを含む。
【０３２０】
この実施形態の一態様では、本化合物は、
【化１０４】
2021521195.tif 000105
からなる群から選択される。
【０３２１】
本発明の一実施形態は、化合物である。本化合物は、以下の式の構造：
【化１０５】
2021521195.tif 000106
（式中、Ｘは、ＮＲ１４およびＯからなる群から選択され、Ｙは、共有結合、ＣＲ５Ｒ６、ＯまたはＮＲ１５であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ＣＮ、ヒドロキシル、Ｒ１６またはＯＲ１６からなる群から独立して選択され、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素またはＲ１６であり、Ｒ５およびＲ６は、水素、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成し、Ｒ１２は、水素、−ＣＯＲａおよびＲ１６からなる群から選択され、Ｒ１６はそれぞれ、独立して、ホルミル、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、Ｒａは、水素、ヒドロキシルおよびＯＲ１６からなる群から選択され、Ｒａが、水素であり、Ｙが、ＣＲ５Ｒ６であり、Ｒ１３およびＲ１４が、どちらも水素である場合、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１のうちの少なくとも１つは、Ｒ１６であるか、あるいはＲ５は、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成する）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０３２２】
この実施形態の一態様では、本化合物は以下の構造：
【化１０６】
2021521195.tif 000107
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０３２３】
この実施形態の別の態様では、Ｘは、ＮＨである。
【０３２４】
この実施形態の追加的な態様では、Ｙは、ＣＲ５Ｒ６であり、Ｒ５は、水素であり、Ｒ６は、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成する。
【０３２５】
好ましくは、ＣＲ５Ｒ６は、ＣＨ２、ＣＨＣＨ３、ＣＨＯＣＨ３、Ｃ＝ＯまたはＣＨ（Ｃ３Ｈ５）である。
【０３２６】
この実施形態のさらなる態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１のうちの少なくとも１つは、Ｃ１〜４アルキルである。
【０３２７】
好ましくは、Ｒ２は、Ｃ１〜４アルキルである。
【０３２８】
より好ましくは、Ｒ２は、メチルである。
【０３２９】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１はそれぞれ、水素である。
【０３３０】
この実施形態の追加的な態様では、Ｒ１２は、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒａは、水素またはＣ１〜４アルキルである。
【０３３１】
好ましくは、Ｒ１２は、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨまたはＣ（＝Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１〜４アルキル）である。
【０３３２】
より好ましくは、Ｒ１２は、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨまたはＣＯ２ＣＨ３である。
【０３３３】
この実施形態のさらなる態様では、Ｘは、ＮＨであり、Ｙは、ＣＲ５Ｒ６であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１３はそれぞれ、水素であり、Ｒ２は、水素またはＣ１〜４アルキルであり、Ｒ５は、水素であり、Ｒ６は、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成し、Ｒ１２は、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒａは、水素またはＣ１〜４アルキルである。
【０３３４】
この実施形態の別の態様では、本化合物は、
【化１０７】
2021521195.tif 000108
【化１０８】
2021521195.tif 000109
からなる群から選択される。
【０３３５】
本発明の別の実施形態は、化合物である。本化合物は、以下の構造：
【化１０９】
2021521195.tif 000110
（式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９およびＲ１０は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択され、Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ２とＲ３は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ７およびＲ８は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ７とＲ８は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、水素またはＲ１３であり、Ｒ１３はそれぞれ、独立して、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの少なくとも１つは水素ではない）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０３３６】
この実施形態の一態様では、本化合物は、式（ＩＩ）による構造：
【化１１０】
2021521195.tif 000111
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０３３７】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、水素およびＣ１〜４アルキルからなる群から独立して選択される。
【０３３８】
好ましくは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの１つまたは２つは、Ｃ１〜４アルキルであり、残りの基は、水素である。
【０３３９】
この実施形態の追加的な態様では、Ｒ５およびＲ１０のうちの一方は、Ｃ１〜４アルキルであり、他方は水素である。
【０３４０】
この実施形態のさらなる態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９のうちの１つは、Ｃ１〜４アルキルであり、残りの基は、水素である。
【０３４１】
好ましくは、Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ、水素であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの１つ、２つ、３つまたは４つは、メチルであり、残りの基は、水素である。
【０３４２】
この実施形態の別の態様では、本化合物は、
【化１１１】
2021521195.tif 000112
からなる群から選択される。
【０３４３】
本発明の追加的な実施形態は、皮膚を美白する化合物である。本化合物は、以下の式の構造：
【化１１２】
2021521195.tif 000113
（式中、Ｘは、ＮＲ１４およびＯからなる群から選択され、Ｙは、共有結合、ＣＲ５Ｒ６、ＯまたはＮＲ１５であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ＣＮ、ヒドロキシル、Ｒ１６またはＯＲ１６からなる群から独立して選択され、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素またはＲ１６であり、Ｒ５およびＲ６は、水素、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成し、Ｒ１２は、水素、−ＣＯＲａおよびＲ１６からなる群から選択され、Ｒ１６はそれぞれ、独立して、ホルミル、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、Ｒａは、水素、ヒドロキシルおよびＯＲ１６からなる群から選択される）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０３４４】
この実施形態の一態様では、本化合物は以下の構造：
【化１１３】
2021521195.tif 000114
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０３４５】
この実施形態の別の態様では、Ｘは、ＮＨである。
【０３４６】
この実施形態の追加的な態様では、Ｙは、ＣＲ５Ｒ６であり、Ｒ５は、水素であり、Ｒ６は、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成する。
【０３４７】
好ましくは、ＣＲ５Ｒ６は、ＣＨ２、ＣＨＣＨ３、ＣＨＯＣＨ３、Ｃ＝ＯまたはＣＨ（Ｃ３Ｈ５）である。
【０３４８】
この実施形態のさらなる態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１のうちの少なくとも１つは、Ｃ１〜４アルキルである。
【０３４９】
好ましくは、Ｒ２は、Ｃ１〜４アルキルである。
【０３５０】
より好ましくは、Ｒ２は、メチルである。
【０３５１】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１はそれぞれ、水素である。
【０３５２】
この実施形態の追加的な態様では、Ｒ１２は、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒａは、水素またはＣ１〜４アルキルである。
【０３５３】
好ましくは、Ｒ１２は、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨまたはＣ（＝Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１〜４アルキル）である。
【０３５４】
より好ましくは、Ｒ１２は、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨまたはＣＯ２ＣＨ３である。
【０３５５】
この実施形態のさらなる態様では、Ｘは、ＮＨであり、Ｙは、ＣＲ５Ｒ６であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１３はそれぞれ、水素であり、Ｒ２は、水素またはＣ１〜４アルキルであり、Ｒ５は、水素であり、Ｒ６は、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成し、Ｒ１２は、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒａは、水素またはＣ１〜４アルキルである。
【０３５６】
この実施形態の別の態様では、本化合物は、
【化１１４】
2021521195.tif 000115
からなる群から選択される。
【０３５７】
この実施形態の追加的な態様では、Ｒａが、水素であり、Ｙが、ＣＲ５Ｒ６であり、Ｒ１３およびＲ１４がどちらも水素である場合、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１のうちの少なくとも１つは、Ｒ１６であるか、またはＲ５は、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成する。
【０３５８】
本発明のさらなる実施形態は、皮膚を美白する化合物である。本化合物は、以下の式：
【化１１５】
2021521195.tif 000116
（式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９およびＲ１０は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択され、Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ２とＲ３は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ７およびＲ８は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ７とＲ８は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、水素またはＲ１３であり、Ｒ１３はそれぞれ、独立して、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルである）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０３５９】
この実施形態の一態様では、本化合物は、式（ＩＩ）による構造：
【化１１６】
2021521195.tif 000117
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０３６０】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、水素およびＣ１〜４アルキルからなる群から独立して選択される。
【０３６１】
好ましくは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの１つまたは２つは、Ｃ１〜４アルキルであり、残りの基は、水素である。
【０３６２】
この実施形態の追加的な態様では、Ｒ５およびＲ１０のうちの一方は、Ｃ１〜４アルキルであり、他方は水素である。
【０３６３】
この実施形態のさらなる態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９のうちの１つは、Ｃ１〜４アルキルであり、残りの基は、水素である。
【０３６４】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ、水素であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの１つ、２つ、３つまたは４つは、メチルであり、残りの基は、水素である。
【０３６５】
この実施形態の追加的な態様では、本化合物は、
【化１１７】
2021521195.tif 000118
からなる群から選択される。
【０３６６】
この実施形態のさらなる態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの少なくとも１つは、水素ではない。
【０３６７】
本発明の別の実施形態は、皮膚を美白する化合物である。本化合物は、
【化１１８】
2021521195.tif 000119
からなる群から選択される。
【０３６８】
本発明の追加的な実施形態は、メラノサイトアポトーシスを誘導する化合物である。本化合物は、以下の式の構造：
【化１１９】
2021521195.tif 000120
（式中、Ｘは、ＮＲ１４およびＯからなる群から選択され、Ｙは、共有結合、ＣＲ５Ｒ６、ＯまたはＮＲ１５であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ＣＮ、ヒドロキシル、Ｒ１６またはＯＲ１６からなる群から独立して選択され、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素またはＲ１６であり、Ｒ５およびＲ６は、水素、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成し、Ｒ１２は、水素、−ＣＯＲａおよびＲ１６からなる群から選択され、Ｒ１６はそれぞれ、独立して、ホルミル、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、Ｒａは、水素、ヒドロキシルおよびＯＲ１６からなる群から選択される）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０３６９】
この実施形態の一態様では、本化合物は以下の構造：
【化１２０】
2021521195.tif 000121
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０３７０】
この実施形態の別の態様では、Ｘは、ＮＨである。
【０３７１】
この実施形態の追加的な態様では、Ｙは、ＣＲ５Ｒ６であり、Ｒ５は、水素であり、Ｒ６は、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成する。
【０３７２】
好ましくは、ＣＲ５Ｒ６は、ＣＨ２、ＣＨＣＨ３、ＣＨＯＣＨ３、Ｃ＝ＯまたはＣＨ（Ｃ３Ｈ５）である。
【０３７３】
この実施形態のさらなる態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１のうちの少なくとも１つは、Ｃ１〜４アルキルである。
【０３７４】
好ましくは、Ｒ２は、Ｃ１〜４アルキルである。
【０３７５】
より好ましくは、Ｒ２は、メチルである。
【０３７６】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１はそれぞれ、水素である。
【０３７７】
この実施形態の追加的な態様では、Ｒ１２は、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒａは、水素またはＣ１〜４アルキルである。
【０３７８】
好ましくは、Ｒ１２は、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨまたはＣ（＝Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１〜４アルキル）である。
【０３７９】
より好ましくは、Ｒ１２は、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨまたはＣＯ２ＣＨ３である。
【０３８０】
この実施形態のさらなる態様では、Ｘは、ＮＨであり、Ｙは、ＣＲ５Ｒ６であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１３はそれぞれ、水素であり、Ｒ２は、水素またはＣ１〜４アルキルであり、Ｒ５は、水素であり、Ｒ６は、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成し、Ｒ１２は、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒａは、水素またはＣ１〜４アルキルである。
【０３８１】
この実施形態の別の態様では、本化合物は、
【化１２１】
2021521195.tif 000122
【化１２２】
2021521195.tif 000123
からなる群から選択される。
【０３８２】
この実施形態の追加的な態様では、Ｒａが、水素であり、Ｙが、ＣＲ５Ｒ６であり、Ｒ１３およびＲ１４がどちらも水素である場合、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１のうちの少なくとも１つは、Ｒ１６であるか、あるいはＲ５は、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成する。
【０３８３】
本発明のさらなる実施形態は、メラノサイトアポトーシスを誘導する化合物であって、以下の式：
【化１２３】
2021521195.tif 000124
（式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９およびＲ１０は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択され、Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ２とＲ３は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ７およびＲ８は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ７とＲ８は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、水素またはＲ１３であり、Ｒ１３はそれぞれ、独立して、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルである）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である化合物である。
【０３８４】
この実施形態の一態様では、本化合物は、式（ＩＩ）による構造：
【化１２４】
2021521195.tif 000125
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０３８５】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、水素およびＣ１〜４アルキルからなる群から独立して選択される。
【０３８６】
好ましくは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの１つまたは２つは、Ｃ１〜４アルキルであり、残りの基は、水素である。
【０３８７】
この実施形態の追加的な態様では、Ｒ５およびＲ１０のうちの一方は、Ｃ１〜４アルキルであり、他方は水素である。
【０３８８】
この実施形態のさらなる態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９のうちの１つは、Ｃ１〜４アルキルであり、残りの基は、水素である。
【０３８９】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ、水素であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの１つ、２つ、３つまたは４つは、メチルであり、残りの基は、水素である。
【０３９０】
この実施形態の追加的な態様では、本化合物は、
【化１２５】
2021521195.tif 000126
【化１２６】
2021521195.tif 000127
からなる群から選択される。
【０３９１】
この実施形態のさらなる態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの少なくとも１つは、水素ではない。
【０３９２】
本発明の別の実施形態は、メラノサイトアポトーシスを誘導する化合物である。本化合物は、
【化１２７】
2021521195.tif 000128
からなる群から選択される。
【０３９３】
本発明の追加的な実施形態は、芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）活性をモジュレートする化合物である。本化合物は、以下の式の構造：
【化１２８】
2021521195.tif 000129
（式中、Ｘは、ＮＲ１４およびＯからなる群から選択され、Ｙは、共有結合、ＣＲ５Ｒ６、ＯまたはＮＲ１５であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ＣＮ、ヒドロキシル、Ｒ１６またはＯＲ１６からなる群から独立して選択され、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素またはＲ１６であり、Ｒ５およびＲ６は、水素、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成し、Ｒ１２は、水素、−ＣＯＲａおよびＲ１６からなる群から選択され、Ｒ１６はそれぞれ、独立して、ホルミル、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、Ｒａは、水素、ヒドロキシルおよびＯＲ１６からなる群から選択される）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０３９４】
この実施形態の一態様では、本化合物は以下の構造：
【化１２９】
2021521195.tif 000130
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０３９５】
この実施形態の別の態様では、Ｘは、ＮＨである。
【０３９６】
この実施形態の追加的な態様では、Ｙは、ＣＲ５Ｒ６であり、Ｒ５は、水素であり、Ｒ６は、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成する。
【０３９７】
好ましくは、ＣＲ５Ｒ６は、ＣＨ２、ＣＨＣＨ３、ＣＨＯＣＨ３、Ｃ＝ＯまたはＣＨ（Ｃ３Ｈ５）である。
【０３９８】
この実施形態のさらなる態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１のうちの少なくとも１つは、Ｃ１〜４アルキルである。
【０３９９】
好ましくは、Ｒ２は、Ｃ１〜４アルキルである。
【０４００】
より好ましくは、Ｒ２は、メチルである。
【０４０１】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１はそれぞれ、水素である。
【０４０２】
この実施形態の追加的な態様では、Ｒ１２は、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒａは、水素またはＣ１〜４アルキルである。
【０４０３】
好ましくは、Ｒ１２は、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨまたはＣ（＝Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１〜４アルキル）である。
【０４０４】
より好ましくは、Ｒ１２は、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨまたはＣＯ２ＣＨ３である。
【０４０５】
この実施形態のさらなる態様では、Ｘは、ＮＨであり、Ｙは、ＣＲ５Ｒ６であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１３はそれぞれ、水素であり、Ｒ２は、水素またはＣ１〜４アルキルであり、Ｒ５は、水素であり、Ｒ６は、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成し、Ｒ１２は、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒａは、水素またはＣ１〜４アルキルである。
【０４０６】
この実施形態の別の態様では、本化合物は、
【化１３０】
2021521195.tif 000131
【化１３１】
2021521195.tif 000132
からなる群から選択される。
【０４０７】
この実施形態の追加的な態様では、Ｒａが、水素であり、Ｙが、ＣＲ５Ｒ６であり、Ｒ１３およびＲ１４がどちらも水素である場合、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１のうちの少なくとも１つは、Ｒ１６であるか、あるいはＲ５は、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成する。
【０４０８】
本発明のさらなる実施形態は、芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）活性をモジュレートする化合物である。本化合物は、以下の式：
【化１３２】
2021521195.tif 000133
（式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９およびＲ１０は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択され、Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ２とＲ３は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ７およびＲ８は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ７とＲ８は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、水素またはＲ１３であり、Ｒ１３はそれぞれ、独立して、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルである）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０４０９】
この実施形態の一態様では、本化合物は、式（ＩＩ）による構造：
【化１３３】
2021521195.tif 000134
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０４１０】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、水素およびＣ１〜４アルキルからなる群から独立して選択される。
【０４１１】
好ましくは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの１つまたは２つは、Ｃ１〜４アルキルであり、残りの基は、水素である。
【０４１２】
この実施形態の追加的な態様では、Ｒ５およびＲ１０のうちの一方は、Ｃ１〜４アルキルであり、他方は水素である。
【０４１３】
この実施形態のさらなる態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９のうちの１つは、Ｃ１〜４アルキルであり、残りの基は、水素である。
【０４１４】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ、水素であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの１つ、２つ、３つまたは４つは、メチルであり、残りの基は、水素である。
【０４１５】
この実施形態の追加的な態様では、本化合物は、
【化１３４】
2021521195.tif 000135
【化１３５】
2021521195.tif 000136
からなる群から選択される。
【０４１６】
この実施形態のさらなる態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの少なくとも１つは、水素ではない。
【０４１７】
本発明の別の実施形態は、芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）活性をモジュレートする化合物である。本化合物は、
【化１３６】
2021521195.tif 000137
からなる群から選択される。
【０４１８】
本発明の追加的な実施形態は、メラニン形成をモジュレートする化合物である。本化合物は、以下の式の構造：
【化１３７】
2021521195.tif 000138
（式中、Ｘは、ＮＲ１４およびＯからなる群から選択され、Ｙは、共有結合、ＣＲ５Ｒ６、ＯまたはＮＲ１５であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ＣＮ、ヒドロキシル、Ｒ１６またはＯＲ１６からなる群から独立して選択され、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素またはＲ１６であり、Ｒ５およびＲ６は、水素、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成し、Ｒ１２は、水素、−ＣＯＲａおよびＲ１６からなる群から選択され、Ｒ１６はそれぞれ、独立して、ホルミル、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、Ｒａは、水素、ヒドロキシルおよびＯＲ１６からなる群から選択される）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０４１９】
この実施形態の一態様では、本化合物は以下の構造：
【化１３８】
2021521195.tif 000139
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０４２０】
この実施形態の別の態様では、Ｘは、ＮＨである。
【０４２１】
この実施形態の追加的な態様では、Ｙは、ＣＲ５Ｒ６であり、Ｒ５は、水素であり、Ｒ６は、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成する。
【０４２２】
好ましくは、ＣＲ５Ｒ６は、ＣＨ２、ＣＨＣＨ３、ＣＨＯＣＨ３、Ｃ＝ＯまたはＣＨ（Ｃ３Ｈ５）である。
【０４２３】
この実施形態のさらなる態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１のうちの少なくとも１つは、Ｃ１〜４アルキルである。
【０４２４】
好ましくは、Ｒ２は、Ｃ１〜４アルキルである。
【０４２５】
より好ましくは、Ｒ２は、メチルである。
【０４２６】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１はそれぞれ、水素である。
【０４２７】
この実施形態の追加的な態様では、Ｒ１２は、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒａは、水素またはＣ１〜４アルキルである。
【０４２８】
好ましくは、Ｒ１２は、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨまたはＣ（＝Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１〜４アルキル）である。
【０４２９】
より好ましくは、Ｒ１２は、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨまたはＣＯ２ＣＨ３である。
【０４３０】
この実施形態のさらなる態様では、Ｘは、ＮＨであり、Ｙは、ＣＲ５Ｒ６であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１３はそれぞれ、水素であり、Ｒ２は、水素またはＣ１〜４アルキルであり、Ｒ５は、水素であり、Ｒ６は、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成し、Ｒ１２は、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒａは、水素またはＣ１〜４アルキルである。
【０４３１】
この実施形態の別の態様では、本化合物は、
【化１３９】
2021521195.tif 000140
【化１４０】
2021521195.tif 000141
からなる群から選択される。
【０４３２】
この実施形態の追加的な態様では、Ｒａが、水素であり、Ｙが、ＣＲ５Ｒ６であり、Ｒ１３およびＲ１４がどちらも水素である場合、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１のうちの少なくとも１つは、Ｒ１６であるか、あるいはＲ５は、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成する。
【０４３３】
本発明のさらなる実施形態は、メラニン形成をモジュレートする化合物である。本化合物は、以下の式：
【化１４１】
2021521195.tif 000142
（式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９およびＲ１０は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択され、Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ２とＲ３は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ７およびＲ８は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ７とＲ８は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、水素またはＲ１３であり、Ｒ１３はそれぞれ、独立して、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルである）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０４３４】
この実施形態の一態様では、本化合物は、式（ＩＩ）による構造：
【化１４２】
2021521195.tif 000143
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０４３５】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、水素およびＣ１〜４アルキルからなる群から独立して選択される。
【０４３６】
好ましくは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの１つまたは２つは、Ｃ１〜４アルキルであり、残りの基は、水素である。
【０４３７】
この実施形態の別の態様では、Ｒ５およびＲ１０のうちの一方は、Ｃ１〜４アルキルであり、他方は水素である。
【０４３８】
この実施形態の追加的な態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９のうちの１つは、Ｃ１〜４アルキルであり、残りの基は、水素である。
【０４３９】
この実施形態のさらなる態様では、Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ、水素であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの１つ、２つ、３つまたは４つは、メチルであり、残りの基は、水素である。
【０４４０】
この実施形態の別の態様では、本化合物は、
【化１４３】
2021521195.tif 000144
【化１４４】
2021521195.tif 000145
からなる群から選択される。
【０４４１】
この実施形態のさらなる態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの少なくとも１つは、水素ではない。
【０４４２】
本発明の別の実施形態は、メラニン形成をモジュレートする化合物である。本化合物は、
【化１４５】
2021521195.tif 000146
からなる群から選択される。
【０４４３】
本発明の追加的な実施形態は、メラニン濃度をモジュレートする化合物である。本化合物は、以下の式の構造：
【化１４６】
2021521195.tif 000147
（式中、Ｘは、ＮＲ１４およびＯからなる群から選択され、Ｙは、共有結合、ＣＲ５Ｒ６、ＯまたはＮＲ１５であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ＣＮ、ヒドロキシル、Ｒ１６またはＯＲ１６からなる群から独立して選択され、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素またはＲ１６であり、Ｒ５およびＲ６は、水素、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成し、Ｒ１２は、水素、−ＣＯＲａおよびＲ１６からなる群から選択され、Ｒ１６はそれぞれ、独立して、ホルミル、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、Ｒａは、水素、ヒドロキシルおよびＯＲ１６からなる群から選択される）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０４４４】
この実施形態の一態様では、本化合物は以下の構造：
【化１４７】
2021521195.tif 000148
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０４４５】
この実施形態の別の態様では、Ｘは、ＮＨである。
【０４４６】
この実施形態の追加的な態様では、Ｙは、ＣＲ５Ｒ６であり、Ｒ５は、水素であり、Ｒ６は、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成する。
【０４４７】
好ましくは、ＣＲ５Ｒ６は、ＣＨ２、ＣＨＣＨ３、ＣＨＯＣＨ３、Ｃ＝ＯまたはＣＨ（Ｃ３Ｈ５）である。
【０４４８】
この実施形態のさらなる態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１のうちの少なくとも１つは、Ｃ１〜４アルキルである。
【０４４９】
好ましくは、Ｒ２は、Ｃ１〜４アルキルである。
【０４５０】
より好ましくは、Ｒ２は、メチルである。
【０４５１】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１はそれぞれ、水素である。
【０４５２】
この実施形態の追加的な態様では、Ｒ１２は、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒａは、水素またはＣ１〜４アルキルである。
【０４５３】
好ましくは、Ｒ１２は、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨまたはＣ（＝Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１〜４アルキル）である。
【０４５４】
より好ましくは、Ｒ１２は、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨまたはＣＯ２ＣＨ３である。
【０４５５】
この実施形態のさらなる態様では、Ｘは、ＮＨであり、Ｙは、ＣＲ５Ｒ６であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１３はそれぞれ、水素であり、Ｒ２は、水素またはＣ１〜４アルキルであり、Ｒ５は、水素であり、Ｒ６は、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成し、Ｒ１２は、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒａは、水素またはＣ１〜４アルキルである。
【０４５６】
この実施形態の別の態様では、本化合物は、
【化１４８】
2021521195.tif 000149
【化１４９】
2021521195.tif 000150
からなる群から選択される。
【０４５７】
この実施形態の追加的な態様では、Ｒａが、水素であり、Ｙが、ＣＲ５Ｒ６であり、Ｒ１３およびＲ１４がどちらも水素である場合、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１のうちの少なくとも１つは、Ｒ１６であるか、あるいはＲ５は、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成する。
【０４５８】
本発明のさらなる実施形態は、メラニン濃度をモジュレートする化合物である。本化合物は、以下の式：
【化１５０】
2021521195.tif 000151
（式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９およびＲ１０は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択され、Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ２とＲ３は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ７およびＲ８は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ７とＲ８は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、水素またはＲ１３であり、Ｒ１３はそれぞれ、独立して、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルである）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０４５９】
この実施形態の一態様では、本化合物は、式（ＩＩ）による構造：
【化１５１】
2021521195.tif 000152
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０４６０】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、水素およびＣ１〜４アルキルからなる群から独立して選択される。
【０４６１】
好ましくは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの１つまたは２つは、Ｃ１〜４アルキルであり、残りの基は、水素である。
【０４６２】
この実施形態の追加的な態様では、Ｒ５およびＲ１０のうちの一方は、Ｃ１〜４アルキルであり、他方は水素である。
【０４６３】
この実施形態のさらなる態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９のうちの１つは、Ｃ１〜４アルキルであり、残りの基は、水素である。
【０４６４】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ、水素であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの１つ、２つ、３つまたは４つは、メチルであり、残りの基は、水素である。
【０４６５】
この実施形態の追加的な態様では、本化合物は、
【化１５２】
2021521195.tif 000153
【化１５３】
2021521195.tif 000154
からなる群から選択される。
【０４６６】
この実施形態のさらなる態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの少なくとも１つは、水素ではない。
【０４６７】
本発明の別の実施形態は、メラニン濃度をモジュレートする化合物である。本化合物は、
【化１５４】
2021521195.tif 000155
からなる群から選択される。
【０４６８】
本発明の追加的な実施形態は、化合物を含む組成物である。本化合物は、以下の式の構造：
【化１５５】
2021521195.tif 000156
（式中、Ｘは、ＮＲ１４およびＯからなる群から選択され、Ｙは、共有結合、ＣＲ５Ｒ６、ＯまたはＮＲ１５であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ＣＮ、ヒドロキシル、Ｒ１６またはＯＲ１６からなる群から独立して選択され、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素またはＲ１６であり、Ｒ５およびＲ６は、水素、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成し、Ｒ１２は、水素、−ＣＯＲａおよびＲ１６からなる群から選択され、Ｒ１６はそれぞれ、独立して、ホルミル、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、Ｒａは、水素、ヒドロキシルおよびＯＲ１６からなる群から選択される）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０４６９】
この実施形態の一態様では、本化合物は以下の構造：
【化１５６】
2021521195.tif 000157
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０４７０】
この実施形態の別の態様では、Ｘは、ＮＨである。
【０４７１】
この実施形態の追加的な態様では、Ｙは、ＣＲ５Ｒ６であり、Ｒ５は、水素であり、Ｒ６は、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成する。
【０４７２】
好ましくは、ＣＲ５Ｒ６は、ＣＨ２、ＣＨＣＨ３、ＣＨＯＣＨ３、Ｃ＝ＯまたはＣＨ（Ｃ３Ｈ５）である。
【０４７３】
この実施形態のさらなる態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１のうちの少なくとも１つは、Ｃ１〜４アルキルである。
【０４７４】
好ましくは、Ｒ２は、Ｃ１〜４アルキルである。
【０４７５】
より好ましくは、Ｒ２は、メチルである。
【０４７６】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１はそれぞれ、水素である。
【０４７７】
この実施形態の追加的な態様では、Ｒ１２は、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒａは、水素またはＣ１〜４アルキルである。
【０４７８】
好ましくは、Ｒ１２は、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨまたはＣ（＝Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１〜４アルキル）である。
【０４７９】
より好ましくは、Ｒ１２は、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨまたはＣＯ２ＣＨ３である。
【０４８０】
この実施形態のさらなる態様では、Ｘは、ＮＨであり、Ｙは、ＣＲ５Ｒ６であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１３はそれぞれ、水素であり、Ｒ２は、水素またはＣ１〜４アルキルであり、Ｒ５は、水素であり、Ｒ６は、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成し、Ｒ１２は、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒａは、水素またはＣ１〜４アルキルである。
【０４８１】
この実施形態の別の態様では、本化合物は、
【化１５７】
2021521195.tif 000158
【化１５８】
2021521195.tif 000159
からなる群から選択される。
【０４８２】
本発明のさらなる実施形態は、化合物を含む組成物である。本化合物は、以下の式：
【化１５９】
2021521195.tif 000160
（式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９およびＲ１０は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択され、Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ２とＲ３は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ７およびＲ８は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ７とＲ８は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、水素またはＲ１３であり、Ｒ１３はそれぞれ、独立して、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルである）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０４８３】
この実施形態の一態様では、本化合物は、式（ＩＩ）による構造：
【化１６０】
2021521195.tif 000161
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０４８４】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、水素およびＣ１〜４アルキルからなる群から独立して選択される。
【０４８５】
好ましくは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの１つまたは２つは、Ｃ１〜４アルキルであり、残りの基は、水素である。
【０４８６】
この実施形態の追加的な態様では、Ｒ５およびＲ１０のうちの一方は、Ｃ１〜４アルキルであり、他方は水素である。
【０４８７】
この実施形態のさらなる態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９のうちの１つは、Ｃ１〜４アルキルであり、残りの基は、水素である。
【０４８８】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ、水素であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの１つ、２つ、３つまたは４つは、メチルであり、残りの基は、水素である。
【０４８９】
この実施形態の追加的な態様では、本化合物は、
【化１６１】
2021521195.tif 000162
からなる群から選択される。
【０４９０】
本発明の別の実施形態は、化合物を含む組成物である。本化合物は、
【化１６２】
2021521195.tif 000163
からなる群から選択される。
【０４９１】
本発明の追加的な実施形態は、対象において皮膚を美白する方法である。本方法は、対象に、化合物を接触させるステップであって、該化合物が、以下の式の構造：
【化１６３】
2021521195.tif 000164
（式中、Ｘは、ＮＲ１４およびＯからなる群から選択され、Ｙは、共有結合、ＣＲ５Ｒ６、ＯまたはＮＲ１５であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ＣＮ、ヒドロキシル、Ｒ１６またはＯＲ１６からなる群から独立して選択され、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素またはＲ１６であり、Ｒ５およびＲ６は、水素、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成し、Ｒ１２は、水素、−ＣＯＲａおよびＲ１６からなる群から選択され、Ｒ１６はそれぞれ、独立して、ホルミル、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、Ｒａは、水素、ヒドロキシルおよびＯＲ１６からなる群から選択される）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である、ステップを含む。
【０４９２】
この実施形態の一態様では、本化合物は以下の構造：
【化１６４】
2021521195.tif 000165
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０４９３】
この実施形態の別の態様では、Ｘは、ＮＨである。
【０４９４】
この実施形態の追加的な態様では、Ｙは、ＣＲ５Ｒ６であり、Ｒ５は、水素であり、Ｒ６は、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成する。
【０４９５】
好ましくは、ＣＲ５Ｒ６は、ＣＨ２、ＣＨＣＨ３、ＣＨＯＣＨ３、Ｃ＝ＯまたはＣＨ（Ｃ３Ｈ５）である。
【０４９６】
この実施形態のさらなる態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１のうちの少なくとも１つは、Ｃ１〜４アルキルである。
【０４９７】
好ましくは、Ｒ２は、Ｃ１〜４アルキルである。
【０４９８】
より好ましくは、Ｒ２は、メチルである。
【０４９９】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１はそれぞれ、水素である。
【０５００】
この実施形態の追加的な態様では、Ｒ１２は、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒａは、水素またはＣ１〜４アルキルである。
【０５０１】
好ましくは、Ｒ１２は、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨまたはＣ（＝Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１〜４アルキル）である。
【０５０２】
より好ましくは、Ｒ１２は、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨまたはＣＯ２ＣＨ３である。
【０５０３】
この実施形態のさらなる態様では、Ｘは、ＮＨであり、Ｙは、ＣＲ５Ｒ６であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１３はそれぞれ、水素であり、Ｒ２は、水素またはＣ１〜４アルキルであり、Ｒ５は、水素であり、Ｒ６は、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成し、Ｒ１２は、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒａは、水素またはＣ１〜４アルキルである。
【０５０４】
この実施形態の別の態様では、本化合物は、
【化１６５】
2021521195.tif 000166
からなる群から選択される。
【０５０５】
本発明のさらなる実施形態は、対象において皮膚を美白する方法である。本方法は、対象に、化合物を接触させるステップであって、該化合物が、以下の式：
【化１６６】
2021521195.tif 000167
（式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９およびＲ１０は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択され、Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ２とＲ３は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ７およびＲ８は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ７とＲ８は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、水素またはＲ１３であり、Ｒ１３はそれぞれ、独立して、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルである）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である、ステップを含む。
【０５０６】
この実施形態の一態様では、本化合物は、式（ＩＩ）による構造：
【化１６７】
2021521195.tif 000168
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０５０７】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、水素およびＣ１〜４アルキルからなる群から独立して選択される。
【０５０８】
好ましくは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの１つまたは２つは、Ｃ１〜４アルキルであり、残りの基は、水素である。
【０５０９】
この実施形態の追加的な態様では、Ｒ５およびＲ１０のうちの一方は、Ｃ１〜４アルキルであり、他方は水素である。
【０５１０】
この実施形態のさらなる態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９のうちの１つは、Ｃ１〜４アルキルであり、残りの基は、水素である。
【０５１１】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ、水素であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの１つ、２つ、３つまたは４つは、メチルであり、残りの基は、水素である。
【０５１２】
この実施形態の追加的な態様では、本化合物は、
【化１６８】
2021521195.tif 000169
からなる群から選択される。
【０５１３】
本発明の別の実施形態は、対象において皮膚を美白する方法である。本方法は、対象に、化合物を接触させるステップであって、該化合物が、
【化１６９】
2021521195.tif 000170
からなる群から選択される、ステップを含む。
【０５１４】
本発明の追加的な実施形態は、対象においてメラノサイトアポトーシスを誘導する方法である。本方法は、対象に、化合物を接触させるステップであって、該化合物が、以下の式の構造：
【化１７０】
2021521195.tif 000171
（式中、Ｘは、ＮＲ１４およびＯからなる群から選択され、Ｙは、共有結合、ＣＲ５Ｒ６、ＯまたはＮＲ１５であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ＣＮ、ヒドロキシル、Ｒ１６またはＯＲ１６からなる群から独立して選択され、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素またはＲ１６であり、Ｒ５およびＲ６は、水素、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成し、Ｒ１２は、水素、−ＣＯＲａおよびＲ１６からなる群から選択され、Ｒ１６はそれぞれ、独立して、ホルミル、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、Ｒａは、水素、ヒドロキシルおよびＯＲ１６からなる群から選択される）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である、ステップを含む。
【０５１５】
この実施形態の一態様では、本化合物は以下の構造：
【化１７１】
2021521195.tif 000172
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０５１６】
この実施形態の別の態様では、Ｘは、ＮＨである。
【０５１７】
この実施形態の追加的な態様では、Ｙは、ＣＲ５Ｒ６であり、Ｒ５は、水素であり、Ｒ６は、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成する。
【０５１８】
好ましくは、ＣＲ５Ｒ６は、ＣＨ２、ＣＨＣＨ３、ＣＨＯＣＨ３、Ｃ＝ＯまたはＣＨ（Ｃ３Ｈ５）である。
【０５１９】
この実施形態のさらなる態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１のうちの少なくとも１つは、Ｃ１〜４アルキルである。
【０５２０】
好ましくは、Ｒ２は、Ｃ１〜４アルキルである。
【０５２１】
より好ましくは、Ｒ２は、メチルである。
【０５２２】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１はそれぞれ、水素である。
【０５２３】
この実施形態の追加的な態様では、Ｒ１２は、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒａは、水素またはＣ１〜４アルキルである。
【０５２４】
好ましくは、Ｒ１２は、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨまたはＣ（＝Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１〜４アルキル）である。
【０５２５】
より好ましくは、Ｒ１２は、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨまたはＣＯ２ＣＨ３である。
【０５２６】
この実施形態のさらなる態様では、Ｘは、ＮＨであり、Ｙは、ＣＲ５Ｒ６であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１３はそれぞれ、水素であり、Ｒ２は、水素またはＣ１〜４アルキルであり、Ｒ５は、水素であり、Ｒ６は、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成し、Ｒ１２は、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒａは、水素またはＣ１〜４アルキルである。
【０５２７】
この実施形態の別の態様では、本化合物は、
【化１７２】
2021521195.tif 000173
【化１７３】
2021521195.tif 000174
からなる群から選択される。
【０５２８】
本発明のさらなる実施形態は、対象においてメラノサイトアポトーシスを誘導する方法である。本方法は、対象に、化合物を接触させるステップであって、該化合物が、以下の式：
【化１７４】
2021521195.tif 000175
（式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９およびＲ１０は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択され、Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ２とＲ３は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ７およびＲ８は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ７とＲ８は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、水素またはＲ１３であり、Ｒ１３はそれぞれ、独立して、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルである）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である、ステップを含む。
【０５２９】
この実施形態の一態様では、本化合物は、式（ＩＩ）による構造：
【化１７５】
2021521195.tif 000176
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０５３０】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、水素およびＣ１〜４アルキルからなる群から独立して選択される。
【０５３１】
好ましくは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの１つまたは２つは、Ｃ１〜４アルキルであり、残りの基は、水素である。
【０５３２】
この実施形態の追加的な態様では、Ｒ５およびＲ１０のうちの一方は、Ｃ１〜４アルキルであり、他方は水素である。
【０５３３】
この実施形態のさらなる態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９のうちの１つは、Ｃ１〜４アルキルであり、残りの基は、水素である。
【０５３４】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ、水素であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの１つ、２つ、３つまたは４つは、メチルであり、残りの基は、水素である。
【０５３５】
この実施形態の追加的な態様では、本化合物は、
【化１７６】
2021521195.tif 000177
からなる群から選択される。
【０５３６】
本発明の別の実施形態は、対象においてメラノサイトアポトーシスを誘導する方法である。本方法は、対象に、化合物を接触させるステップであって、該化合物が、
【化１７７】
2021521195.tif 000178
からなる群から選択される、ステップを含む。
【０５３７】
本発明の追加的な実施形態は、対象において芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）活性をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、化合物を接触させるステップであって、該化合物が、以下の式の構造：
【化１７８】
2021521195.tif 000179
（式中、Ｘは、ＮＲ１４およびＯからなる群から選択され、Ｙは、共有結合、ＣＲ５Ｒ６、ＯまたはＮＲ１５であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ＣＮ、ヒドロキシル、Ｒ１６またはＯＲ１６からなる群から独立して選択され、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素またはＲ１６であり、Ｒ５およびＲ６は、水素、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成し、Ｒ１２は、水素、−ＣＯＲａおよびＲ１６からなる群から選択され、Ｒ１６はそれぞれ、独立して、ホルミル、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、Ｒａは、水素、ヒドロキシルおよびＯＲ１６からなる群から選択される）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である、ステップを含む。
【０５３８】
この実施形態の一態様では、本化合物は以下の構造：
【化１７９】
2021521195.tif 000180
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０５３９】
この実施形態の別の態様では、Ｘは、ＮＨである。
【０５４０】
この実施形態の追加的な態様では、Ｙは、ＣＲ５Ｒ６であり、Ｒ５は、水素であり、Ｒ６は、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成する。
【０５４１】
好ましくは、ＣＲ５Ｒ６は、ＣＨ２、ＣＨＣＨ３、ＣＨＯＣＨ３、Ｃ＝ＯまたはＣＨ（Ｃ３Ｈ５）である。
【０５４２】
この実施形態のさらなる態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１のうちの少なくとも１つは、Ｃ１〜４アルキルである。
【０５４３】
好ましくは、Ｒ２は、Ｃ１〜４アルキルである。
【０５４４】
より好ましくは、Ｒ２は、メチルである。
【０５４５】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１はそれぞれ、水素である。
【０５４６】
この実施形態の追加的な態様では、Ｒ１２は、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒａは、水素またはＣ１〜４アルキルである。
【０５４７】
好ましくは、Ｒ１２は、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨまたはＣ（＝Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１〜４アルキル）である。
【０５４８】
より好ましくは、Ｒ１２は、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨまたはＣＯ２ＣＨ３である。
【０５４９】
この実施形態のさらなる態様では、Ｘは、ＮＨであり、Ｙは、ＣＲ５Ｒ６であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１３はそれぞれ、水素であり、Ｒ２は、水素またはＣ１〜４アルキルであり、Ｒ５は、水素であり、Ｒ６は、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成し、Ｒ１２は、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒａは、水素またはＣ１〜４アルキルである。
【０５５０】
この実施形態の別の態様では、本化合物は、
【化１８０】
2021521195.tif 000181
からなる群から選択される。
【０５５１】
本発明のさらなる実施形態は、対象において芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）活性をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、化合物を接触させるステップであって、該化合物が、以下の式：
【化１８１】
2021521195.tif 000182
（式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９およびＲ１０は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択され、Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ２とＲ３は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ７およびＲ８は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ７とＲ８は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、水素またはＲ１３であり、Ｒ１３はそれぞれ、独立して、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルである）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である、ステップを含む。
【０５５２】
この実施形態の一態様では、本化合物は、式（ＩＩ）による構造：
【化１８２】
2021521195.tif 000183
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０５５３】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、水素およびＣ１〜４アルキルからなる群から独立して選択される。
【０５５４】
好ましくは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの１つまたは２つは、Ｃ１〜４アルキルであり、残りの基は、水素である。
【０５５５】
この実施形態の追加的な態様では、Ｒ５およびＲ１０のうちの一方は、Ｃ１〜４アルキルであり、他方は水素である。
【０５５６】
この実施形態のさらなる態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９のうちの１つは、Ｃ１〜４アルキルであり、残りの基は、水素である。
【０５５７】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ、水素であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの１つ、２つ、３つまたは４つは、メチルであり、残りの基は、水素である。
【０５５８】
この実施形態の追加的な態様では、本化合物は、
【化１８３】
2021521195.tif 000184
からなる群から選択される。
【０５５９】
本発明の別の実施形態は、対象において芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）活性をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、化合物を接触させるステップであって、該化合物が、
【化１８４】
2021521195.tif 000185
からなる群から選択される、ステップを含む。
【０５６０】
本発明の追加的な実施形態は、対象においてメラニン形成をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、化合物を接触させるステップであって、該化合物が、以下の式の構造：
【化１８５】
2021521195.tif 000186
（式中、Ｘは、ＮＲ１４およびＯからなる群から選択され、Ｙは、共有結合、ＣＲ５Ｒ６、ＯまたはＮＲ１５であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ＣＮ、ヒドロキシル、Ｒ１６またはＯＲ１６からなる群から独立して選択され、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素またはＲ１６であり、Ｒ５およびＲ６は、水素、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成し、Ｒ１２は、水素、−ＣＯＲａおよびＲ１６からなる群から選択され、Ｒ１６はそれぞれ、独立して、ホルミル、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、Ｒａは、水素、ヒドロキシルおよびＯＲ１６からなる群から選択される）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である、ステップを含む。
【０５６１】
この実施形態の一態様では、本化合物は以下の構造：
【化１８６】
2021521195.tif 000187
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０５６２】
この実施形態の別の態様では、Ｘは、ＮＨである。
【０５６３】
この実施形態の追加的な態様では、Ｙは、ＣＲ５Ｒ６であり、Ｒ５は、水素であり、Ｒ６は、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成する。
【０５６４】
好ましくは、ＣＲ５Ｒ６は、ＣＨ２、ＣＨＣＨ３、ＣＨＯＣＨ３、Ｃ＝ＯまたはＣＨ（Ｃ３Ｈ５）である。
【０５６５】
この実施形態のさらなる態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１のうちの少なくとも１つは、Ｃ１〜４アルキルである。
【０５６６】
好ましくは、Ｒ２は、Ｃ１〜４アルキルである。
【０５６７】
より好ましくは、Ｒ２は、メチルである。
【０５６８】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１はそれぞれ、水素である。
【０５６９】
この実施形態の追加的な態様では、Ｒ１２は、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒａは、水素またはＣ１〜４アルキルである。
【０５７０】
好ましくは、Ｒ１２は、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨまたはＣ（＝Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１〜４アルキル）である。
【０５７１】
より好ましくは、Ｒ１２は、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨまたはＣＯ２ＣＨ３である。
【０５７２】
この実施形態のさらなる態様では、Ｘは、ＮＨであり、Ｙは、ＣＲ５Ｒ６であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１３はそれぞれ、水素であり、Ｒ２は、水素またはＣ１〜４アルキルであり、Ｒ５は、水素であり、Ｒ６は、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成し、Ｒ１２は、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒａは、水素またはＣ１〜４アルキルである。
【０５７３】
この実施形態の別の態様では、本化合物は、
【化１８７】
2021521195.tif 000188
からなる群から選択される。
【０５７４】
本発明のさらなる実施形態は、対象においてメラニン形成をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、化合物を接触させるステップであって、該化合物が、以下の式：
【化１８８】
2021521195.tif 000189
（式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９およびＲ１０は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択され、Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ２とＲ３は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ７およびＲ８は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ７とＲ８は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、水素またはＲ１３であり、Ｒ１３はそれぞれ、独立して、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルである）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である、ステップを含む。
【０５７５】
この実施形態の一態様では、本化合物は、式（ＩＩ）による構造：
【化１８９】
2021521195.tif 000190
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０５７６】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、水素およびＣ１〜４アルキルからなる群から独立して選択される。
【０５７７】
好ましくは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの１つまたは２つは、Ｃ１〜４アルキルであり、残りの基は、水素である。
【０５７８】
この実施形態の追加的な態様では、Ｒ５およびＲ１０のうちの一方は、Ｃ１〜４アルキルであり、他方は水素である。
【０５７９】
この実施形態のさらなる態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９のうちの１つは、Ｃ１〜４アルキルであり、残りの基は、水素である。
【０５８０】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ、水素であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの１つ、２つ、３つまたは４つは、メチルであり、残りの基は、水素である。
【０５８１】
この実施形態の追加的な態様では、本化合物は、
【化１９０】
2021521195.tif 000191
からなる群から選択される。
【０５８２】
本発明の別の実施形態は、対象においてメラニン形成をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、化合物を接触させるステップであって、該化合物が、
【化１９１】
2021521195.tif 000192
からなる群から選択される、ステップを含む。
【０５８３】
本発明の追加的な実施形態は、対象においてメラニン濃度をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、化合物を接触させるステップであって、該化合物が、以下の式の構造：
【化１９２】
2021521195.tif 000193
（式中、Ｘは、ＮＲ１４およびＯからなる群から選択され、Ｙは、共有結合、ＣＲ５Ｒ６、ＯまたはＮＲ１５であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ＣＮ、ヒドロキシル、Ｒ１６またはＯＲ１６からなる群から独立して選択され、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素またはＲ１６であり、Ｒ５およびＲ６は、水素、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成し、Ｒ１２は、水素、−ＣＯＲａおよびＲ１６からなる群から選択され、Ｒ１６はそれぞれ、独立して、ホルミル、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、Ｒａは、水素、ヒドロキシルおよびＯＲ１６からなる群から選択される）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である、ステップを含む。
【０５８４】
この実施形態の一態様では、本化合物は以下の構造：
【化１９３】
2021521195.tif 000194
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０５８５】
この実施形態の別の態様では、Ｘは、ＮＨである。
【０５８６】
この実施形態の追加的な態様では、Ｙは、ＣＲ５Ｒ６であり、Ｒ５は、水素であり、Ｒ６は、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成する。
【０５８７】
好ましくは、ＣＲ５Ｒ６は、ＣＨ２、ＣＨＣＨ３、ＣＨＯＣＨ３、Ｃ＝ＯまたはＣＨ（Ｃ３Ｈ５）である。
【０５８８】
この実施形態のさらなる態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１のうちの少なくとも１つは、Ｃ１〜４アルキルである。
【０５８９】
好ましくは、Ｒ２は、Ｃ１〜４アルキルである。
【０５９０】
より好ましくは、Ｒ２は、メチルである。
【０５９１】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１はそれぞれ、水素である。
【０５９２】
この実施形態の追加的な態様では、Ｒ１２は、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒａは、水素またはＣ１〜４アルキルである。
【０５９３】
好ましくは、Ｒ１２は、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨまたはＣ（＝Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１〜４アルキル）である。
【０５９４】
より好ましくは、Ｒ１２は、ＣＨＯ、ＣＨ２ＯＨまたはＣＯ２ＣＨ３である。
【０５９５】
この実施形態のさらなる態様では、Ｘは、ＮＨであり、Ｙは、ＣＲ５Ｒ６であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１３はそれぞれ、水素であり、Ｒ２は、水素またはＣ１〜４アルキルであり、Ｒ５は、水素であり、Ｒ６は、水素、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルもしくはＯ−（Ｃ１〜４アルキル）であるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基を形成し、Ｒ１２は、−ＣＯＲａまたはＣ１〜４ヒドロキシアルキルであり、Ｒａは、水素またはＣ１〜４アルキルである。
【０５９６】
この実施形態の別の態様では、本化合物は、
【化１９４】
2021521195.tif 000195
からなる群から選択される。
【０５９７】
本発明のさらなる実施形態は、対象においてメラニン濃度をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、化合物を接触させるステップであって、該化合物が、以下の式：
【化１９５】
2021521195.tif 000196
（式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９およびＲ１０は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択され、Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ２とＲ３は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ７およびＲ８は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ７とＲ８は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、水素またはＲ１３であり、Ｒ１３はそれぞれ、独立して、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルである）を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である、ステップを含む。
【０５９８】
この実施形態の一態様では、本化合物は、式（ＩＩ）による構造：
【化１９６】
2021521195.tif 000197
を有するか、あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩である。
【０５９９】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は、水素およびＣ１〜４アルキルからなる群から独立して選択される。
【０６００】
好ましくは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの１つまたは２つは、Ｃ１〜４アルキルであり、残りの基は、水素である。
【０６０１】
この実施形態の追加的な態様では、Ｒ５およびＲ１０のうちの一方は、Ｃ１〜４アルキルであり、他方は水素である。
【０６０２】
この実施形態のさらなる態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９のうちの１つは、Ｃ１〜４アルキルであり、残りの基は、水素である。
【０６０３】
この実施形態の別の態様では、Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ、水素であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０のうちの１つ、２つ、３つまたは４つは、メチルであり、残りの基は、水素である。
【０６０４】
この実施形態の追加的な態様では、本化合物は、
【化１９７】
2021521195.tif 000198
からなる群から選択される。
【０６０５】
本発明の別の実施形態は、対象においてメラニン濃度をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、化合物を接触させるステップであって、該化合物が、
【化１９８】
2021521195.tif 000199
からなる群から選択される、ステップを含む。
【０６０６】
本発明の一実施形態は、皮膚を美白する化合物である。該化合物は、以下の式の構造：
【化１９９】
2021521195.tif 000200
を有するか、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩である。
【０６０７】
本発明の別の実施形態は、メラノサイトアポトーシスを誘導する化合物である。該化合物は、以下の式の構造：
【化２００】
2021521195.tif 000201
を有するか、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩である。
【０６０８】
本発明の追加的な実施形態は、芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）活性をモジュレートする化合物である。該化合物は、以下の式の構造：
【化２０１】
2021521195.tif 000202
を有するか、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩である。
【０６０９】
本発明のさらなる実施形態は、メラニン形成をモジュレートする化合物である。該化合物は、以下の式の構造：
【化２０２】
2021521195.tif 000203
を有するか、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩である。
【０６１０】
本発明の別の実施形態は、メラニン濃度をモジュレートする化合物である。該化合物は、以下の式の構造：
【化２０３】
2021521195.tif 000204
を有するか、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩である。
【０６１１】
本発明の追加的な実施形態は、化合物を含む組成物である。該化合物は、以下の式の構造：
【化２０４】
2021521195.tif 000205
を有するか、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩である。
【０６１２】
本発明のさらなる実施形態は、対象において皮膚を美白する方法である。本方法は、対象に、化合物を接触させるステップであって、該化合物が、以下の式の構造：
【化２０５】
2021521195.tif 000206
を有するか、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩である、ステップを含む。
【０６１３】
本発明の別の実施形態は、対象においてメラノサイトアポトーシスを誘導する方法である。本方法は、対象に、化合物を接触させるステップであって、該化合物が、以下の式の構造：
【化２０６】
2021521195.tif 000207
を有するか、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩である、ステップを含む。
【０６１４】
本発明の追加的な実施形態は、対象において芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）活性をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、化合物を接触させるステップであって、該化合物が、以下の式の構造：
【化２０７】
2021521195.tif 000208
を有するか、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩である、ステップを含む。
【０６１５】
本発明のさらなる実施形態は、対象においてメラニン形成をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、化合物を接触させるステップであって、該化合物が、以下の式の構造：
【化２０８】
2021521195.tif 000209
を有するか、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩である、ステップを含む。
【０６１６】
本発明の別の実施形態は、対象においてメラニン濃度をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、化合物を接触させるステップであって、該化合物が、以下の式の構造：
【化２０９】
2021521195.tif 000210
を有するか、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩である、ステップを含む。
【０６１７】
本発明の追加的な実施形態は、組成物である。本組成物は、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を含む。この実施形態の一態様では、本組成物は、以下の式の構造を有する第１の化合物：
【化２１０】
2021521195.tif 000211
あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩；および以下の式の構造を有する第２の化合物：
【化２１１】
2021521195.tif 000212
あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を含む。
【０６１８】
本発明のさらなる実施形態は、対象において皮膚を美白する方法である。本方法は、対象に、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を接触させるステップを含む。
【０６１９】
この実施形態の一態様では、対象は、以下の式の構造を有する第１の化合物：
【化２１２】
2021521195.tif 000213
あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩；および以下の式の構造を有する第２の化合物：
【化２１３】
2021521195.tif 000214
あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩に接触される。
【０６２０】
本発明の別の実施形態は、対象においてメラノサイトアポトーシスを誘導する方法である。本方法は、対象に、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を接触させるステップを含む。
【０６２１】
この実施形態の一態様では、対象は、以下の式の構造を有する第１の化合物：
【化２１４】
2021521195.tif 000215
あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩；および以下の式の構造を有する第２の化合物：
【化２１５】
2021521195.tif 000216
あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩に接触される。
【０６２２】
本発明の追加的な実施形態は、対象において芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）活性をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を接触させるステップを含む。
【０６２３】
この実施形態の一態様では、対象は、以下の式の構造を有する第１の化合物：
【化２１６】
2021521195.tif 000217
あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩；および以下の式の構造を有する第２の化合物：
【化２１７】
2021521195.tif 000218
あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩に接触される。
【０６２４】
本発明のさらなる実施形態は、対象においてメラニン形成をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を接触させるステップを含む。
【０６２５】
この実施形態の一態様では、対象は、以下の式の構造を有する第１の化合物：
【化２１８】
2021521195.tif 000219
あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩；および以下の式の構造を有する第２の化合物：
【化２１９】
2021521195.tif 000220
あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩に接触される。
【０６２６】
本発明の別の実施形態は、対象においてメラニン濃度をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を接触させるステップを含む。
【０６２７】
この実施形態の一態様では、対象は、以下の式の構造を有する第１の化合物：
【化２２０】
2021521195.tif 000221
あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩；および以下の式の構造を有する第２の化合物：
【化２２１】
2021521195.tif 000222
あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩に接触される。
【０６２８】
本発明の追加的な実施形態は、組成物である。本組成物は、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を含む。
【０６２９】
本発明のさらなる実施形態は、皮膚を美白する組成物である。本組成物は、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を含む。
【０６３０】
本発明の別の実施形態は、メラノサイトアポトーシスを誘導する組成物である。本組成物は、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を含む。
【０６３１】
本発明の追加的な実施形態は、芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）活性をモジュレートする組成物である。本組成物は、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を含む。
【０６３２】
本発明のさらなる実施形態は、メラニン形成をモジュレートする組成物である。本組成物は、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を含む。
【０６３３】
本発明の別の実施形態は、メラニン濃度をモジュレートする組成物である。本組成物は、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を含む。
【０６３４】
本発明の追加的な実施形態は、対象において皮膚を美白する方法である。本方法は、対象に、組成物を接触させるステップであって、該組成物が、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を含む、ステップを含む。
【０６３５】
本発明のさらなる実施形態は、対象においてメラノサイトアポトーシスを誘導する方法である。本方法は、対象に、組成物を接触させるステップであって、該組成物が、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を含む、ステップを含む。
【０６３６】
本発明の別の実施形態は、対象において芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）活性をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、組成物を接触させるステップであって、該組成物が、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を含む、ステップを含む。
【０６３７】
本発明の追加的な実施形態は、対象においてメラニン形成をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、組成物を接触させるステップであって、該組成物が、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を含む、ステップを含む。
【０６３８】
本発明のさらなる実施形態は、対象においてメラニン濃度をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、組成物を接触させるステップであって、該組成物が、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を含む、ステップを含む。
【０６３９】
好ましい実施形態では、本発明の組成物は、表７に列挙される化合物を含む。
【０６４０】
他の好ましい実施形態では、本発明の組成物は、表８に列挙される化合物を含む。
【０６４１】
追加的な好ましい実施形態では、本発明の組成物は、表９に列挙される化合物を含む。
【０６４２】
さらに好ましい実施形態では、本発明の組成物は、表１０に列挙される化合物を含む。
【０６４３】
他の好ましい実施形態では、本発明の組成物は、表１１に列挙される化合物を含む。
【０６４４】
追加的な好ましい実施形態では、本発明の方法は、対象に、表７に列挙される化合物を含む組成物を接触させるステップを含む。
【０６４５】
さらに好ましい実施形態では、本発明の方法は、対象に、表８に列挙される化合物を含む組成物を接触させるステップを含む。
【０６４６】
他の好ましい実施形態では、本発明の方法は、対象に、表９に列挙される化合物を含む組成物を接触させるステップを含む。
【０６４７】
追加的な好ましい実施形態では、本発明の方法は、対象に、表１０に列挙される化合物を含む組成物を接触させるステップを含む。
【０６４８】
さらに好ましい実施形態では、本発明の方法は、対象に、表１１に列挙される化合物を含む組成物を接触させるステップを含む。
【０６４９】
本発明の別の実施形態は、組成物である。本組成物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母、および化粧品としてまたは薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤または担体を含む。
【０６５０】
本発明の追加的な実施形態は、組成物である。本組成物は、以下の式の構造を有する化合物：
【化２２２】
2021521195.tif 000223
（式中、
Ｘは、ＮＲ１４およびＯからなる群から選択され、Ｙは、共有結合、ＣＲ５Ｒ６、ＯまたはＮＲ１５であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、ハロゲン、ＣＮ、ヒドロキシル、Ｒ１６またはＯＲ１６からなる群から独立して選択され、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、水素またはＲ１６であり、Ｒ５およびＲ６は、水素、ヒドロキシル、ＯＲ１６、Ｒ１６およびＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択されるか、またはＲ５とＲ６は一緒になって、オキソ（＝Ｏ）基もしくはＣ３〜６シクロアルキルを形成し、Ｒ１２は、水素、−ＣＯＲａおよびＲ１６からなる群から選択され、Ｒ１６はそれぞれ、独立して、ホルミル、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルであり、Ｒａは、水素、ヒドロキシルおよびＯＲ１６からなる群から選択される）
あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩
および化粧品としてまたは薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤または担体を含む。
【０６５１】
本発明のさらなる実施形態は、組成物である。本組成物は、以下の式の構造を有する化合物：
【化２２３】
2021521195.tif 000224
（式中、
Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９およびＲ１０は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択され、Ｒ２およびＲ３は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ２とＲ３は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ７およびＲ８は、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、ＣＮ、Ｒ１３、ＯＲ１３、ＯＣＯＲ１３および−ＣＨＯからなる群から独立して選択されるか、またはＲ７とＲ８は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリルを形成し、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、水素またはＲ１３であり、Ｒ１３はそれぞれ、独立して、Ｃ１〜９アルキル、Ｃ２〜９アルケニルまたはＣ２〜９アルキニルである）
あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩
および化粧品としてまたは薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤または担体を含む。
【０６５２】
本発明の別の実施形態は、組成物である。本組成物は、表５または図１３０に列挙される化合物、またはその化学アナログ、結晶形態、水和物、もしくは化粧品としてもしくは薬学的に許容される塩
および化粧品としてまたは薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤または担体を含む。
【０６５３】
好ましい実施形態では、本発明の組成物のいずれも、対象においてＵＶ誘発性紅斑を予防する。
【０６５４】
好ましい実施形態では、本発明の組成物のいずれも、対象において表皮メラニンを低減する。
【０６５５】
好ましい実施形態では、本発明の組成物のいずれも、対象において光保護効果またはＵＶ保護効果を生じる。
【０６５６】
好ましい実施形態では、本発明の組成物のいずれも、ＵＶをフィルターにかける、これを吸収するまたはこれを反射する。
【０６５７】
好ましい実施形態では、本発明の組成物のいずれも、色素沈着過度を予防する、かつ／または低色素沈着を促進する。
【０６５８】
好ましい実施形態では、本発明の組成物のいずれも、日焼け防止剤、光保護剤および／またはＵＶ保護剤である。
【０６５９】
本発明の追加的な実施形態は、対象においてＵＶ誘発性皮膚損傷を処置または予防する方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【０６６０】
本発明のさらなる実施形態は、対象においてＵＶ誘発性紅斑を処置または予防する方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【０６６１】
本発明の別の実施形態は、対象において皮膚のＵＶ誘発性エイジングを処置または予防する方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【０６６２】
本発明の追加的な実施形態は、対象において日焼けを処置または予防する方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【０６６３】
本発明のさらなる実施形態は、対象においてＵＶ誘発性色素沈着過度を処置または予防する方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【０６６４】
本発明の別の実施形態は、対象において皮膚を美白する方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【０６６５】
本発明の追加的な実施形態は、対象においてメラノサイトアポトーシスを誘導する方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【０６６６】
本発明のさらなる実施形態は、対象において芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）活性をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【０６６７】
本発明の別の実施形態は、対象においてメラニン形成をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
【０６６８】
本発明の追加的な実施形態は、対象においてメラニン濃度をモジュレートする方法である。本方法は、対象に、本明細書において開示されている組成物のいずれかを接触させるステップを含む。
定義
【０６６９】
本明細書で使用する場合、用語「化合物」とは、１つまたは複数の化学結合によって結合されている２個またはそれより多い原子を指す。本発明では、化学結合には、以下に限定されないが、共有結合、イオン性結合、水素結合およびファンデルワールス相互作用が含まれる。本発明の共有結合は、単結合、二重結合および三重結合を含む。本発明の化合物には、以下に限定されないが、有機分子が含まれる。
【０６７０】
本発明の有機化合物／分子は、官能基を有するまたは有していない、線状、分岐状および環式炭化水素を含む。用語「Ｃｘ〜ｙ」は、アルキル、アルケニル、アルキニルまたはアルコキシなどの化学部分と合わせて使用される場合、鎖中にｘ〜ｙ個の炭素を含有する基を含むことが意図される。例えば、用語「Ｃｘ〜ｙアルキル」は、トリフルオロメチルおよび２，２，２−トリフルオロエチルなどのハロアルキル基を含めた、鎖中にｘ〜ｙ個の炭素を含有する直鎖アルキルおよび分岐鎖アルキル基を含めた、置換または無置換の飽和炭化水素基を意味する。用語「Ｃｘ〜ｙアルケニル」および「Ｃｘ〜ｙアルキニル」とは、長さが類似しており、上で記載したアルキルに置換がある可能性がある、置換または無置換の不飽和脂肪族基を指すが、それぞれ、少なくとも１つの二重結合または三重結合を含有する。
【０６７１】
用語「脂肪族」は、本明細書で使用する場合、芳香族環を含有しない、炭素および水素原子からなる基を意味する。したがって、脂肪族基には、アルキル、アルケニル、アルキニルおよびカルボシクリル基が含まれる。
【０６７２】
本明細書で使用する場合、用語「アルキル」は、線状および分岐状の非環式炭化水素基を意味し、例えば、「Ｃ１〜Ｃ２０アルキル」とは、１〜２０個の炭素を有するアルキル基を指す。アルキル基は、線状または分岐状であってもよい。アルキル基の例には、以下に限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ｔｅｒｔ−ペンチルヘキシル、イソヘキシルなどが含まれる。他のアルキル基は、本開示の利益を得る分野の当業者に容易に明白になると予想される。アルキル基は、無置換であってもよく、または本明細書に記載されている１つもしくは複数の置換基により置換されていてもよい。例えば、アルキル基は、ハロゲン、−ＣＯ２Ｒ’、−ＣＯＯＨ、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＯＲ’、−ＮＨ２、−ＮＨＲ’、−Ｎ（Ｒ’）２、−ＳＲ’または−ＳＯ２Ｒ’のうちの１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つの独立して選択される置換基）により置換されていてもよく、Ｒ’の各場合は、独立して、Ｃ１〜Ｃ３アルキルである。実施形態では、アルキルは、無置換である。実施形態では、アルキルは、置換されている（例えば、本明細書に記載されている、１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つの置換基による）。例えば、用語「ヒドロキシアルキル」とは、ヒドロキシル（−ＯＨ）置換基を含む、本明細書に記載されているアルキル基を指し、−ＣＨ２ＯＨなどの基を含む。
【０６７３】
本明細書で使用する場合、「アルケニル」は、鎖に沿った任意の安定な点において起こり得る１つまたは複数の不飽和炭素−炭素二重結合を有する、任意の線状または分岐状の炭化水素鎖を意味し、例えば、「Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル」とは、２〜２０個の炭素を有するアルケニル基を指す。例えば、アルケニル基には、プロパ−２−エニル、ブタ−２−エニル、ブタ−３−エニル、２−メチルプロパ−２−エニル、ヘキサ−２−エニル、ヘキサ−５−エニル、２，３−ジメチルブタ−２−エニルなどが含まれる。実施形態では、アルケニルは、１つ、２つまたは３つの炭素−炭素二重結合を含む。実施形態では、アルケニルは、１つの炭素−炭素二重結合を含む。実施形態では、複数の二重結合（例えば、２つまたは３つ）は、共役している。アルケニル基は、無置換であってもよく、または本明細書に記載されている１つもしくは複数の置換基により置換されていてもよい。例えば、アルケニル基は、ハロゲン、−ＣＯ２Ｒ’、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＯＲ’、−ＮＨ２、−ＮＨＲ’、−Ｎ（Ｒ’）２、−ＳＲ’または−ＳＯ２Ｒ’のうちの１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つの独立して選択される置換基）により置換されていてもよく、Ｒ’の各場合は、独立して、Ｃ１〜Ｃ３アルキルである。実施形態では、アルケニルは、無置換である。実施形態では、アルケニルは、置換されている（例えば、本明細書に記載されている、１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つの置換基による）。
【０６７４】
本明細書で使用する場合、「アルキニル」は、鎖に沿った任意の安定な点において起こる１つまたは複数の炭素−炭素三重結合を有する、線状または分岐状のどちらかの立体配置の任意の炭化水素鎖を意味し、例えば、「Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル」とは、２〜２０個の炭素を有するアルキニル基を指す。アルキニル基の例には、プロパ−２−イニル、ブタ−２−イニル、ブタ−３−イニル、ペンタ−２−イニル、３−メチルペンタ−４−イニル、ヘキサ−２−イニル、ヘキサ−５−イニルなどが含まれる。実施形態では、アルキニルは、１つの炭素−炭素三重結合を含む。アルキニル基は、無置換であってもよく、または本明細書に記載されている１つもしくは複数の置換基により置換されていてもよい。例えば、アルキニル基は、ハロゲン、−ＣＯ２Ｒ’、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＯＲ’、−ＮＨ２、−ＮＨＲ’、−Ｎ（Ｒ’）２、−ＳＲ’または−ＳＯ２Ｒ’のうちの１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つの独立して選択される置換基）により置換されていてもよく、Ｒ’の各場合は、独立して、Ｃ１〜Ｃ３アルキルである。実施形態では、アルキニルは、無置換である。実施形態では、アルキニルは、置換されている（例えば、本明細書に記載されている、１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つの置換基による）。
【０６７５】
本明細書で使用する場合、用語「シクロアルキル」は、飽和の非芳香族環式基、例えば「Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル」を意味する。実施形態では、シクロアルキルは、単環式である。実施形態では、シクロアルキルは、多環式（例えば、二環式または三環式）である。多環式シクロアルキル基では、個々の環は、縮合することができる、架橋することができる、またはスピロ環式とすることができる。シクロアルキル基の例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、ノルボルナニル、ビシクロ［３．２．１］オクタニル、オクタヒドロ−ペンタレニルおよびスピロ［４．５］デカニルなどが含まれる。用語「シクロアルキル」は、用語「炭素環」と互換的に使用されてもよい。シクロアルキル基は、無置換であってもよく、または本明細書に記載されている１つもしくは複数の置換基により置換されていてもよい。例えば、シクロアルキル基は、ハロゲン、−ＣＯ２Ｒ’、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＯＲ’、−ＮＨ２、−ＮＨＲ’、−Ｎ（Ｒ’）２、−ＳＲ’または−ＳＯ２Ｒ’のうちの１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つの独立して選択される置換基）により置換されていてもよく、Ｒ’の各場合は、独立して、Ｃ１〜Ｃ３アルキルである。実施形態では、シクロアルキルは、無置換である。実施形態では、シクロアルキルは、置換されている（例えば、本明細書に記載されている、１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つの置換基による）。
【０６７６】
本明細書で使用する場合、用語「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を意味する。
【０６７７】
本明細書で使用する場合、「芳香族化合物」、「芳香族」、または「芳香族環」を含有する化合物は、アリールまたはヘテロアリール化合物である。用語「アリール」は、本明細書で使用する場合、環の原子がそれぞれ炭素である置換または無置換の単環芳香族基を含む。好ましくは、環は、３〜８員の環、より好ましくは６員環である。用語「アリール」はまた、２つまたはそれより多い環式環を有する多環式環系であって、２個またはそれより多い炭素が、２つの隣接する環に共通しており、環の少なくとも１つが、芳香族であり、例えば、他の環式環が、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリールおよび／またはヘテロシクリルとすることができる、多環式環系を含む。アリール基には、ベンゼン、ナフタレン、フェナントレン、フェノール、アニリンなどが含まれる。用語「ヘテロアリール」は、置換または無置換の芳香族単環構造、好ましくは３〜８員環、より好ましくは５〜７員環、さらにより好ましくは５〜６員環を含み、その環構造は、少なくとも１個のヘテロ原子、好ましくは１〜４個のヘテロ原子、より好ましくは１個または２個のヘテロ原子を含む。用語「ヘテロアリール」はまた、２つまたはそれより多い環式環を有する多環式環系であって、２個またはそれより多い炭素が、２つの隣接する環に共通しており、環の少なくとも１つが、複素芳香族であり、例えば、他の環式環が、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリールおよび／またはヘテロシクリルとすることができる、多環式環系を含む。ヘテロアリール基には、例えば、ピロール、フラン、チオフェン、インドール、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジンおよびピリミジンなどが含まれる。好ましくは、本発明のある特定の化合物には、少なくとも１つの、好ましくは２つのインドール基、および少なくとも１つのアルデヒド基が含まれる。
【０６７８】
用語「置換されている」は、主鎖の１つまたは複数の炭素上の水素原子を置き換える、少なくとも１つの置換基を有する部分を意味する。「置換」または「により置換されている」は、このような置換が、置換されている原子および置換基の許容される価数に従うこと、およびこの置換が、例えば、転位、環化、脱離などによって変換を自発的に受けない安定な化合物をもたらすという暗黙の前提を含むことが理解されよう。許容される置換基は、１つまたは複数とすることができ、適切な有機化合物に対して同一または異なることができる。
【０６７９】
本明細書で使用する場合、用語「複素環」または「複素環式」は、少なくとも１個のヘテロ原子を含有する、単環式、二環式または三環式環系を意味する。ヘテロ原子には、以下に限定されないが、酸素、窒素および硫黄が含まれる。
【０６８０】
単環式複素環式環は、少なくとも１個のヘテロ原子を含有する、例えば、３、４、５、６、７、８、９または１０員環からなる。単環式複素環式環の代表例には、以下に限定されないが、アゼチジニル、アゼパニル、アジリジニル、ジアゼパニル、１，３−ジオキサニル、１，３−ジオキソラニル、１，３−ジチオラニル、１，３−ジチアニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、イソチアゾリニル、イソチアゾリジニル、イソオキサゾリニル、イソオキサゾリジニル、モルホリニル、オキサジアゾリニル、オキサジアゾリジニル、オキサゾリニル、オキサゾリジニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピラニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、ピロリニル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、チアジアゾリニル、チアジアゾリジニル、チアゾリニル、チアゾリジニル、チオモルホリニル、１，１−ジオキシドチオモルホリニル（チオモルホリンスルホン）、チオピラニルおよびトリチアニルが含まれる。
【０６８１】
二環式複素環式環は、非限定的な例により、端部の（distal）アリール環に縮合した単環式複素環式環、または端部のシクロアルキル環に縮合した単環式複素環式環、または端部のシクロアルケニル環に縮合した単環式複素環式環、または端部の単環式複素環式環に縮合した単環式複素環式環、または端部の単環式ヘテロアリール環に縮合した単環式複素環式環である。二環式複素環式環の代表例には、以下に限定されないが、１，３−ベンゾジオキソリル、１，３−ベンゾジチオリル、２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキシニル、２，３−ジヒドロ−１−ベンゾフラニル、２，３−ジヒドロ−１−ベンゾチエニル、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドリルおよび１，２，３，４−テトラヒドロキノリニルが含まれる。
【０６８２】
三環式複素環式環は、非限定的な例によって、フェニル基に縮合した二環式複素環式環、またはシクロアルキル基に縮合した二環式複素環式環、またはシクロアルケニル基に縮合した二環式複素環式環、または別の単環式複素環式環に縮合した二環式複素環式環である。三環式複素環式環の代表例には、以下に限定されないが、２，３，４，４ａ，９，９ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−カルバゾリル、５ａ，６，７，８，９，９ａ−ヘキサヒドロジベンゾ［ｂ，ｄ］フラニルおよび５ａ，６，７，８，９，９ａ−ヘキサヒドロジベンゾ［ｂ，ｄ］チエニルが含まれる。
【０６８３】
本発明の複素環は、非限定的な例によって、アルケニル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルコキシアルキニル、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアルキル、アルコキシ−ＮＨ＝Ｃ（アルキル）−、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルカルボニルアルキル、アルキルカルボニルオキシ、アルキルスルホニル、アルキルチオ、アルキニル、アリール、アリールアルコキシ、アリールアルキル、アリールカルボニル、アリールオキシ、カルボキシ、カルボキシアルキル、シアノ、シアノアルキル、シクロアルキル、カルボニル、シクロアルキルアルキル、ホルミル、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシシクロアルキル、メルカプト、ニトロ、オキソおよびフェニルから独立して選択される置換基により置換され得る。
【０６８４】
本明細書で使用する場合、「皮膚色素沈着のモジュレート」およびその文法上の変形は、一般に、本発明の化合物および組成物の、皮膚美白作用および皮膚の暗色化作用を指す。
【０６８５】
本明細書で使用する場合、「皮膚美白」およびその文法上の変形は、皮膚色素沈着の、なんらかの実際のまたは見た目に感じる低下を一般に指す。皮膚の美白方法は、年齢、日光への曝露または色素沈着過度障害に起因する過度に色素沈着した皮膚領域の色素沈着を低減するために使用されている。本発明の化合物および組成物を、例えば対象の皮膚に施用すると、色素沈着を低減することができ、その結果、皮膚は、前記施用前よりも薄く見えるか、または白く見える。皮膚色素沈着は、以下に限定されないが、例えば、ｖｏｎ  Ｌｕｓｃｈａｎの色彩スケール（von  Luschan  chromatic  scale）、フィッツパトリック皮膚分類試験（Fitzpatrick  et  al.,  1988）およびＴａｙｌｏｒの色素沈着過度スケール（Taylor  et  al.,  2005）を使用する目視評価、ならびに反射分光測色法（Zonios,  et  al.,  2001）を含めたいくつかの方法で評価することができる。例えば、フィッツパトリック皮膚分類試験は、６種のタイプの皮膚（Ｉ〜ＶＩ）を含み、この用語が本明細書において使用される場合、タイプＶまたはそれ未満になるタイプＶＩの皮膚が、「美白されている」。以下でさらに議論される通り、皮膚の美白は、以下に限定されないが、メラノサイト活性のモジュレート、メラノサイトアポトーシスの誘導、または芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）活性、メラニン形成、メラノソーム生物発生、メラノソーム輸送もしくはメラニン濃度のモジュレートを含めた、いくつかの現象によって生じ得る。
【０６８６】
同様に、本明細書で使用する場合、「皮膚の暗色化」およびその文法上の変形は、皮膚色素沈着の、なんらかの実際のまたは見た目に感じる増大を一般に指す。皮膚を暗色化する方法は、例えば、低色素沈着障害に起因する色素沈着が減少した皮膚領域の色素沈着を増大するために使用されている。本発明の化合物および組成物を、例えば、対象の皮膚に施用すると、色素沈着を増大することができ、その結果、皮膚は、前記施用前よりも黒く見える。
【０６８７】
本発明のある特定の化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母により産生される、これに由来する、これから単離される、またはこれから単離可能である。Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ属の酵母であり、以下に限定されないが、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｇｌｏｂｏｓａ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｒｅｓｔｒｉｃｔａ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｆｕｒｆｕｒ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｓｙｍｐｏｄｉａｌｉｓ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｓｌｏｏｆｆｉａｅ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｏｂｔｕｓａ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｐａｃｈｙｄｅｒｍａｔｉｓ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｄｅｒｍａｔｉｓ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｎａｎａ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｙａｍａｔｏｅｎｓｉｓ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｅｑｕｉｎｅ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｃａｐｒａｅおよびＭａｌａｓｓｅｚｉａ  ｃｕｎｉｃｕｌｉを含む（Gueho,  et  al.,  1996；Gaitanis,  et  al.,  2013）。Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母は、正常なヒトの皮膚微生物叢の一部であり、通常、病原性作用を生じない。しかし、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母は、以下に限定されないが、癜風（黒色癜風と白色癜風の両方）、脂漏性皮膚炎、ふけ、アトピー性皮膚炎、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ毛嚢炎、乾癬および融合性細網状乳頭腫症を含めた、いくつかの疾患を引き起こす恐れがある（Gaitanis,  et  al.,  2013）。
【０６８８】
本明細書で使用する場合、用語「化学アナログ」とは、親化合物に構造上、関連する化合物を指し、異なる官能基または置換基を含有する。例えば、本発明の親化合物には、マラセジンおよびインジルビンが含まれ、マラセジンおよびインジルビンの化学アナログは、それぞれ、マラセジンおよびインジルビンとは異なるある特定の官能基および置換基を含有する。本発明の化学アナログは、化粧品使用または医薬品使用に好適な薬物動態プロファイルを含めた、所与の親化合物よりも有意な利点を有することがある。一部の実施形態では、化学アナログは、１つまたは複数の化学反応によって、親分子から生成する。他の実施形態では、親化合物を起源としない代替合成スキームを使用して、本発明の化学アナログを生成することができる。
【０６８９】
本発明の化合物は、その寿命サイクルの過程にわたり、適切な成長条件下で、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母が、本化合物を合成する、分泌する、蓄積する、または他には、生成する場合、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される。Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母は、その成長培地に補給されるものに応じて、異なる化合物を分泌する（Nazzaro-Porro,  et  al.,  1978）。本発明は、任意の成長条件下で、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生されるいかなる化合物も含むが、好ましい化合物は、例えば、マラセジン、インジルビンおよびそれらの化学アナログを含む。
【０６９０】
酵母の寿命サイクルの過程における任意の時に、本化合物が酵母表面またはその内部に存在した場合、本発明の化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母に由来する。
【０６９１】
マラセジンは、本発明のＭａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の一例である。２−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−１Ｈ−インドール−３−カルバルデヒドとしても公知のマラセジンは、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｆｕｒｆｕｒから元々単離されたトリプトファン代謝産物である。マラセジンは、細胞成長、分化および遺伝子発現に関与する受容体である、芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）の既知のアゴニストである（Wille  et  al.,  2001）。マラセジンはまた、一次ヒトメラノサイトにおいてアポトーシスを誘導する（Kramer,  et  al.,  2005）。最近、マラセジンのある特定の化学アナログが、Ｗｉｎｓｔｏｎ−ＭｃＰｈｅｒｓｏｎおよび共同研究者によって合成され、彼らは、そのアナログのＡｈＲアゴニスト活性を試験した。（Winston-McPherson,  et  al.,  2014）。
【０６９２】
インジルビンは、本発明のＭａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の別の例である。インジルビンは、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｆｕｒｆｕｒから単離された代謝産物である。インジルビンは、細胞成長、分化および遺伝子発現に関与する受容体である、芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）の既知のアゴニストである。
【０６９３】
本明細書で使用する場合、用語「メラノサイト」とは、チロシナーゼ、およびメラノソーム内でメラニン色素を通常、合成する、表皮の樹状細胞を指す。本発明のメラノサイトは、以下に限定されないが、以下：チロシナーゼ（眼皮膚白皮症ＩＡ）、小眼球症関連転写因子、アルファ−２−マクログロブリン、チロシナーゼ関連タンパク質１、溶質キャリアファミリー１６、ＧＳ３９５５タンパク質、ｖ−ｋｉｔ  Ｈａｒｄｙ−Ｚｕｃｋｅｒｍａｎ４ネコ肉腫、眼白子症１、Ｒａｇ  Ｄタンパク質、グリコゲニン２、Ｇタンパク質共役型受容体、ファミリーＣ、食道がん１において切除される眼皮膚白皮症ＩＩ、メラン−Ａ、ＳＲＹ−ｂｏｘ１０、ＡＴＰアーゼ、クラスＶ、タイプ１０Ｃ、マトリックスメタロプロテイナーゼ１、潜在型トランスフォーミング増殖因子ベータｂ、ＡＴＰ結合カセット、サブファミリーＣ、ヒドロキシプロスタグランジンデヒドロゲナーゼ１５、膜貫通７スーパーファミリーメンバー１、グルタミニル−ペプチドシクロトランスフェラーゼ、ならびにＬｅｅおよび共同研究者ら（Lee,  et  al.,  2013）によって特定された他の遺伝子のうちの１種または複数を含めた、ある特定の遺伝子の上方調節を示す。
【０６９４】
メラノサイトは、他の多くの細胞タイプと同様に、プログラム細胞死、すなわちアポトーシスを受ける。メラノサイトアポトーシス経路は、当業者には公知であり（Wang,  et  al.,  2014）、アポトーシス経路は、Ｅｌｍｏｒｅによって全般的に概説されている（Elmore,  2007）。本発明の化合物または組成物は、例えば、メラノサイトにおいて、ある特定のアポトーシス促進性シグナル伝達経路の活性化を引き起こすか、またはある特定の抗アポトーシス経路の抑制を引き起こすことによって、メラノサイトアポトーシスを「誘導する」。本発明の化合物または組成物は、アポトーシスに関連する経路のシグナル伝達分子と直接相互作用することによって、またはこの経路内で通常、機能しない１つまたは複数の中間分子との直接相互作用を介する、この経路の分子との間接的相互作用によって、この経路を直接、活性化／抑制することができることが構想される。
【０６９５】
メラノサイト活性は、以下に限定されないが、メラノサイトアポトーシスを誘導する、またはメラノサイト遺伝子発現、細胞運動性、細胞成長、メラニン産生、メラノソーム生物発生もしくはメラノソーム輸送を改変することを含めた、本発明に企図されているいくつかの方法でモジュレートすることができる。
【０６９６】
本明細書で使用する場合、用語「モジュレートする」、「モジュレートすること」、およびそれらの文法上の変形は、生物活性または現象を所望のレベルまで調整することを指す。本発明の「モジュレート」は、生物活性または現象のレベルを増大または低下させる調整を含むことが構想される。
【０６９７】
本明細書で使用する場合、用語「アゴニスト」、「作動させる」、およびそれらの文法上の変形は、１つまたは複数の生物活性の引き金となる（例えば、開始または促進する）、これらを部分的にもしくは完全に増強する、刺激するまたは活性化する分子を指す。本発明のアゴニストは、受容体と相互作用して、これを活性化することができ、これにより、その受容体に特徴的な、生理的または薬理学的応答を開始する。本発明のアゴニストは、天然物質および合成物質を含む。
【０６９８】
本明細書で使用する場合、用語「アンタゴニスト」、「拮抗する」、およびそれらの文法上の変形は、１つまたは複数の生物活性を部分的にもしくは完全に抑制する、阻害するまたは不活性化する分子を指す。本発明のアンタゴニストは、アゴニストと同じ部位で受容体に競合的に結合することができるが、受容体の活性形態によって開始される細胞内応答を活性化することはない。本発明のアンタゴニストは、アゴニストまたは部分アゴニストの細胞内応答を阻害することができる。
【０６９９】
本発明の芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）は、本明細書に記載されている対象において、自然に存在する任意の芳香族炭化水素受容体である。芳香族炭化水素受容体は、当業者に公知である（Noakes,  2015）。芳香族炭化水素受容体のアゴニストには、以下に限定されないが、キヌレニン、キヌレン酸、シンナバリニン酸および６−ホルミルインドロ［３，２−ｂ］カルバゾール（ＦＩＣＺ）などのトリプトファン関連化合物が含まれる。マラセジンはまた、芳香族炭化水素受容体アゴニストとしても公知である（Wille,  et  al.,  2001）。
【０７００】
本明細書で使用する場合、本発明の化合物、組成物および方法は、色素沈着過度障害によって引き起こされる色素沈着過度を、例えば、色素沈着過度障害に罹患している領域において、色素沈着過度のレベルを低下させることによって、さらなる色素沈着過度を減速させることによって、またはさらなる色素沈着過度が発生するのを防止することによって改善するために使用され得る。しかし、対象の全員が、特定の投与プロトコール、レジメンまたは方法に応答しない可能性があるので、色素沈着過度障害によって引き起こされる色素沈着過度の改善は、あらゆる対象または対象集団において、所望の生理学的応答または転帰を実現することを必要としない。したがって、所与の対象または対象集団は、投与に応答しないことがあるか、または不適切に応答することがあるが、他の対象または対象集団は、応答することがあり、したがって、その色素沈着過度障害の改善を実感する。
【０７０１】
本明細書で使用する場合、用語「色素沈着過度」は、過度に黒い色をしているという実際のまたは見た目に感じる皮膚障害である。皮膚損傷は、実際のもの、例えば、年齢に起因するもの、過度の日光への曝露、または皮膚領域を黒くする疾患もしくは状態とすることができる。黒い皮膚領域は、斑点、染み、または比較的大きな黒色領域の形態となり得る。この皮膚損傷はまた、見た目に感じ得るもの、例えば、個体の皮膚の色調が暗すぎるという個体による知覚とすることができる。個体は、皮膚の色調を明るくしたいという美容上の希望を有することがある。
【０７０２】
色素沈着過度障害は、色素沈着過度が一次症状である障害、および色素沈着過度が二次症状として生じる障害である。本発明の色素沈着過度障害には、以下に限定されないが、先天性色素沈着過度障害および後天性色素沈着過度障害が含まれる。本発明の先天性色素沈着過度障害には、以下に限定されないが、表皮の色素沈着過度を伴うもの（母斑細胞母斑、スピッツ母斑および扁平母斑）、真皮の色素沈着過度（青色母斑、太田母斑、皮膚メラノーシス、伊藤母斑およびモンゴル斑）、そばかす、網状肢端色素沈着症、先端色素沈着症／肢端色素沈着症および黒子症（全身性黒子症、レオパード症候群、遺伝性パターン化黒子症、カーニー複合体、ポイツ−ジェガーズ症候群、Ｌａｕｇｉｅｒ−Ｈｕｎｚｉｋｅｒ−Ｂａｒａｎ症候群およびクロンカイト−カナダ症候群）が含まれる。（Yamaguchi,  et  al.,  2014）。本発明の後天性色素沈着過度障害には、以下に限定されないが、老人性レンチギン／黒子、黒皮症／肝斑、リールのメラノーシス、唇の黒色子斑、陰茎／外陰膣メラノーシス、顔面毛包性紅斑黒皮症（北村）、ＵＶ誘発色素沈着（日焼けおよび光線性花弁状色素斑）、炎症後の色素沈着（摩擦メラノーシスおよび灰性皮膚症（ashy  dermatosis））、化学的／薬物誘発性色素沈着（ポリ塩化ビフェニル、ヒ素、５−ＦＵ、ブレオマイシン、シクロホスファミド、メトトレキセート、クロルプロマジン、フェニトイン、テトラサイクリンおよびクロロキン）、色素性境界線および異物の堆積（カロテン、銀、金、水銀、ビスマスおよび入れ墨など）が含まれる。全身性障害に関連する色素沈着過度には、代謝／酵素障害（ヘモクロマトーシス、ウィルソン病、ゴーシェ病、ニーマンピック病、アミロイドーシス、組織褐変症、黒色表皮腫および晩発性皮膚ポルフィリン症）、内分泌障害（アジソン病、クッシング症候群および甲状腺機能亢進症）、栄養障害（ペラグラ、ビタミンＢ１２欠如、葉酸欠乏症、ヴァガボンド病および色素性痒疹）、肥満細胞症、膠原病、肝機能障害および腎臓機能障害が含まれる。色素沈着過度はまた、感染症（麻疹、梅毒およびＭａｌａｓｓｅｚｉａ  ｆｕｒｆｕｒ）および症候群（フォンレックリングハウゼン病、ソトス症候群、ＰＯＥＭＳ症候群、ネーゲリ症候群、カントゥ症候群、マッキューン・オルブライト症候群、ワトソン症候群およびブルーム症候群）に関連し得る（Yamaguchi,  et  al.,  2014）。
【０７０３】
メラニンは、皮膚および毛髪に色調をもたらす、天然で産生される色素である。皮膚の模式図が、図１Ａに示されている。メラニンは、メラニン形成として公知の過程によって、メラノソームとして公知の細胞小器官において、メラノサイトによって産生される。本発明の化合物または組成物は、対象において、例えば、メラノソーム生物発生をモジュレートする、およびメラニン合成を酵素レベルで直接または間接的に阻害することによって、メラニン産生（別名はメラニン形成）をモジュレートする。
【０７０４】
メラノソーム生物発生は、４段階で起こる：段階Ｉは、本質的に非色素性の液胞であるプレメラノソームを特徴とする。段階ＩＩにおいて、プレメラノソームは、段階ＩＩＩでメラニンが沈着する条線を発達させる。段階ＩＶによって、メラニン含有量が豊富な成熟メラノソームとなる。本発明の化合物および組成物は、正常に、これらの段階のいずれかまたはすべてを促進する生物学的過程を阻害するまたは減弱させることによって、メラノソーム生物発生をモジュレートする（Wasmeier,  et  al.,  2008）。
【０７０５】
メラニン合成は、主に、３種の酵素：チロシナーゼ、チロシナーゼ関連タンパク質−１およびドーパクロムトートメラーゼを含む。これらの酵素の細胞内輸送に影響を及ぼす追加的な因子には、以下に限定されないが、ＢＬＯＣ−１、ＯＡ１およびＳＬＣ４５Ａ２が含まれる。本発明の化合物および組成物は、例えば、これらの酵素または因子のいずれかの活性を阻害するまたは減弱させることによって、メラニン産生をモジュレートすることができる。（Yamaguchi,  et  al.,  2014）。
【０７０６】
一旦、メラノソームが形成され、メラニンが合成されると、メラノソームは表皮のメラノサイトから皮膚および毛髪のケラチノサイトへと輸送される必要がある。メラノソームは、メラノサイトの核の近傍で生じ、微小管およびアクチンフィラメントに沿ってメラノサイトの周辺部に輸送される。本発明の化合物および組成物は、メラノソームの核周囲領域からメラノサイト周辺部への、および隣接するケラチノサイト内部への輸送をもたらす生物学的過程のいずれかを妨げることによって、メラノソーム輸送をモジュレートする。メラニン合成、メラニン輸送およびメラノサイトアポトーシスの模式図が、図１Ｂに示されている。
【０７０７】
メラニン濃度は、例えば、対象において、メラニン形成を増大もしくは低下させることによって、またはメラニン分解を促進することによって、または対象からなくすことによってモジュレートされ得る。
【０７０８】
本発明のＭａｌａｓｓｅｚｉａ酵母から単離された化合物は、単離前に、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母中に必ず存在するか、またはＭａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される。したがって、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母から単離された化合物は、実際の酵母細胞に由来する。細胞物質から化合物を抽出するための標準プロトコールは、当業者に公知である。
【０７０９】
Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母から単離可能な化合物は、実際の酵母細胞に由来する必要はない。代わりに、合成反応を使用して、実際の酵母細胞の関与なしに、酵母中で産生する化合物を生成することができる。有機合成反応は、当業者に周知であり、この点で使用することができる。
【０７１０】
本明細書で使用する場合、用語「表皮メラニン」とは、表皮中で産生される、表皮に輸送される、または他には、表皮中で見いだされるメラニンを指す。
【０７１１】
本明細書で使用する場合、用語「低下させる」およびその文法上の変形は、所与の生物学的現象または種のレベルの低下を引き起こすことを意味する。例えば、本発明の化合物および組成物は、対象における表皮メラニンを低下させ、このことは、本発明の化合物および組成物は、対象における表皮メラニンのレベルの低下を誘発することを意味する。用語「低下させる」およびその文法上の変形は、例えば、所与の現象または種のレベルを、少なくとも５％、１０％、２５％、５０％、７５％または１００％、低下させることを意味することができる。
【０７１２】
本明細書で使用する場合、用語「接触させる」およびその文法上の変形は、２種またはそれより多い物質を、それらが相互作用することができるほど十分に近接させることを指す。したがって、例示の目的のみの場合では、本発明の化合物は、例えば、メラノサイトの表面の受容体と相互作用することによって、メラノサイトに接触することができる。同様に、本発明の組成物は、例えば、対象の皮膚に直接、施用されることによって、ヒト対象に接触することができる。
【０７１３】
本明細書で使用する場合、「対象」とは、哺乳動物細胞、組織、生物またはそれらの集団を意味する。本発明の対象は、ヒト細胞、組織および生物を含めた、好ましくはヒトであるが、他には、霊長類、家畜、飼育動物、実験室用動物などを含む。農業用動物の一部の例には、ウシ、ブタ、ウマ、ヤギなどが含まれる。飼育動物の一部の例には、イヌ、ネコなどが含まれる。実験室用動物の一部の例には、霊長類、ラット、マウス、ウサギ、モルモットなどが含まれる。
【０７１４】
本明細書で使用する場合、色素沈着過度障害によって引きこされる色素沈着過度の改善を「必要とする」対象には、改善を実際に必要とする、または見た目で感じて必要とされる対象が含まれる。
【０７１５】
本明細書で使用する場合、用語は「処置する」、「処置すること」、「処置」およびそれらの文法上の変形は、個々の対象にプロトコール、レジメン、方法または治療を施すことを意味し、その対象、例えば患者において、生理学的応答または転帰を得ることが望まれる。特に、本発明の方法および組成物は、疾患症状の発症を減速させるため、または疾患もしくは状態の発現を遅延させるため、または疾患の発達の進行を停止させるために使用されてもよい。しかし、処置される対象の全員が、特定の処置プロトコール、レジメン、方法または治療に応答しない可能性があるので、処置することは、あらゆる対象または対象集団、例えば患者集団において、所望の生理学的応答または転帰を実現することを必要としない。したがって、所与の対象または対象集団、例えば、患者集団は、処置に応答しないこと、または不適切に応答することがある。
【０７１６】
本明細書で使用する場合、用語「予防する」、「予防すること」、「予防」およびそれらの文法上の変形は、本発明の化合物は、投与時点で障害または疾患を有している可能性があると診断されていないが、障害もしくは疾患を発症すること、または障害もしくは疾患のリスクが増大状態にあると通常、予想される患者に投与されると、有用であることを意味する。本発明の化合物および組成物は、例えば、障害もしくは疾患の症状の発症を減速させる、障害もしくは疾患の発現を遅延させる、または障害もしくは疾患を個体が発症するのを完全に予防する。予防はまた、年齢、家族歴、遺伝的もしくは染色体異常により、および／または障害もしくは疾患に対する１つもしくは複数の生物学的マーカーの存在により、障害または疾患に罹患しやすいと考えられるそのような個体に本発明の化合物を投与することを含む。
【０７１７】
本明細書で使用する場合、用語「促進する」およびその文法上の変形は、可能にすること、増強すること、許容すること、容易にすること、助長すること、後押しすること、誘発すること、または他には、引き起こす一助となることを意味する。
【０７１８】
本明細書で使用する場合、用語「生じる」およびその文法上の変形は、特定の結果を発生させること、起こすこと、または出現させることを意味する。非限定的な例として、本発明の化合物および組成物は、対象において光保護効果またはＵＶ保護効果を生じる。
【０７１９】
本明細書で使用する場合、用語「紅斑」とは、皮膚の発赤を指す。紅斑は、表面の毛細血管の拡張および／または刺激によって引き起こされることがある。用語「ＵＶ誘発性紅斑」とは、ＵＶ曝露の結果として発症する、皮膚の発赤を指す。本明細書で使用する場合、「日焼け」およびその文法上の変形は、日光への曝露または人工的なＵＶ源（例えば、日焼け用ベッド）への曝露によって引き起こされるＵＶ誘発性紅斑を指す。
【０７２０】
本明細書で使用する場合、用語「色素沈着過度」とは、色素沈着が、皮膚の隣接領域の色素沈着よりも大きな皮膚の領域（例えば、色素斑、加齢斑、黒子など）を一般に指す。本発明の色素沈着過度には、以下に限定されないが、メラノサイト過活性による局所色素沈着過度、良性メラノサイト過活性および増殖による他の局在的色素沈着過度、疾患関連性色素沈着過度に加えて、光過敏、遺伝子構造、化学品摂取または他の曝露（例えばＵＶ曝露）、年齢、ならびに病変後の瘢痕化によるものなどの偶発的色素沈着過度が含まれる。本明細書で使用する場合、「ＵＶ誘発性色素沈着過度」とは、自然ＵＶまたは人工ＵＶへの曝露によって引き起こされる、任意の色素沈着過度を指す。
【０７２１】
本明細書で使用する場合、用語「低色素沈着」とは、色素沈着が、皮膚の隣接領域の色素沈着よりも少ない皮膚の領域を一般に指す。本発明の低色素沈着には、以下に限定されないが、白斑、脱色素、白色粃糠疹、限局性低色素沈着、炎症後低色素沈着、まだら症、白皮症、癜風、光過敏性、先天性色素欠如、低メラニン症、アトピー性皮膚炎、乾癬などが含まれる。
【０７２２】
本明細書で使用する場合、「ＵＶ誘発性皮膚損傷」とは、ＵＶＡ、ＵＶＢおよびＵＶＣを含めたＵＶへの曝露に起因する皮膚損傷を意味する。本発明のＵＶ誘発性皮膚損傷には、以下に限定されないが、しわ、色素沈着過度、形成異常、光線性角化症および皮膚がんが含まれる。
【０７２３】
本明細書で使用する場合、「皮膚のＵＶ誘発性エイジング」とは、ＵＶＡ、ＵＶＢおよびＵＶＣを含めたＵＶへの曝露に起因する皮膚のエイジングを意味する。本発明のＵＶ誘発性の皮膚エイジングは、例えば、しわ、細線、加齢斑、黒子、乾燥、薄化、または皮膚の弾性低下、不均質な皮膚の色調、およびＵＶ曝露により全体にまたは一部に引き起こされる、皮膚の輝き、質感、弾力性、堅さ、たるみおよび透明感における他の低下として現れる。
【０７２４】
本明細書で使用する場合、用語「光保護性」およびその文法上の変形は、本発明の化合物および組成物の効果を説明するために使用される場合、本明細書に記載されている化合物および組成物が、光、特に日光によって引き起こされる損傷を予防および／または緩和することを意味する。同様に、本発明の「光保護剤」は、光、特に日光によって引き起こされる損傷を予防および／または緩和する、本明細書に記載されている化合物および組成物である。
【０７２５】
本明細書で使用する場合、用語「ＵＶ保護性」およびその文法上の変形は、本発明の化合物および組成物の効果を説明するために使用される場合、本明細書に記載されている化合物および組成物が、紫外線（「ＵＶ」）光によって引き起こされる損傷を予防および／または緩和することを意味する。同様に、本発明の「ＵＶ保護剤」は、ＵＶによって引き起こされる損傷を予防および／または緩和する、本明細書に記載されている化合物および組成物である。本発明の紫外光には、例えば、ＵＶＡ（３２０〜２４０ｎｍ）、ＵＶＢ（２９０〜３２０ｎｍ）およびＵＶＣ（２００〜２９０ｎｍ）が含まれる。
【０７２６】
本明細書で使用する場合、用語「フィルター」およびその文法上の変形は、ＵＶを遮断する、反射する、吸収する、または散乱させることを意味する。本発明の「日焼け防止剤」は、ＵＶを遮断する、反射する、吸収するまたは散乱させる、本発明の化合物および組成物のすべてを含む。
【０７２７】
本明細書で使用する場合、用語「吸収する」およびその文法上の変形は、ＵＶを取り込むか、またはＵＶを熱エネルギーに変換することを意味する。非限定的な例として、本発明の化合物および組成物は、ＵＶを吸収することができ、その結果、その周囲に熱エネルギーを放射することができる。
【０７２８】
本明細書で使用する場合、用語「反射する」およびその文法上の変形は、ＵＶの文脈において使用される場合、ＵＶを吸収しないで、ＵＶを発射するか、またはこれを跳ね返すことを意味する。
【０７２９】
本明細書で使用する場合、用語「組成物」とは、１つまたは複数の本発明の化合物を含む実体、および１つまたは複数の本発明の化合物と他の成分との組合せ物に直接または間接的に由来する任意の実体を意味する。本発明の組成物は、例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏでの研究試薬として使用することができる。本発明の組成物はまた、美容効果または医薬品効果のために、ヒトまたは非ヒト対象の皮膚に直接施用することもできる。さらに、本発明の組成物は、表５または図１３０に列挙される化合物の１つまたは複数、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を含む。
【０７３０】
本発明の組成物は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏとｉｎ  ｖｉｖｏの用途の両方のため：経口服用あるいは非経口投与、または腹腔内、皮下、局所、皮内、吸入、肺内、直腸、膣内、舌下、筋肉内、静脈内、動脈内、鞘内もしくはリンパ内などの任意の適切な方法での他の投与のために、任意の所望の有効な方法で投与されてもよい。さらに、本発明の組成物は、他の組成物と連携して投与されてもよい。本発明の組成物は、カプセル封入されていてもよく、または他には、所望の場合、胃もしくは他の分泌物から保護されてもよい。
【０７３１】
本発明の組成物は、１種または複数の化粧品としてまたは薬学的に許容される担体、ならびに必要に応じて、１つまたは複数の他の化合物、成分および／または物質と混合した、１種または複数の活性成分を含む。選択される投与経路にかかわらず、本発明の化合物および組成物は、当業者に公知の従来の方法によって、化粧品としてまたは薬学的に許容される剤形に製剤化される。
【０７３２】
化粧品としてまたは薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤および担体は、当分野で周知であり、過度の毒性、不適合性、不安定性、刺激、アレルギー反応などなしに、ヒトおよび非ヒトの組織に接触させるのに好適な物質を含む。化粧品としてまたは薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤および担体は、例えば、化粧品または医薬品の局所、経口、腹腔または皮下投与に慣用的に使用可能な任意の実質的に非毒性の物質を含み、本発明の化合物および組成物は、ヒトまたは非ヒト対象に施用されても、服用されても、注射されても、またはそれ以外の方法で投与されても、安定で生体利用可能なままである。局所施用に好適な化粧品としてまたは薬学的に許容される担体は当業者に公知であり、慣用的な化粧用ナイトクリーム、ファンデーションクリーム、日焼けローション、日焼け防止剤、ハンドローション、メーキャップおよびメーキャップ基剤、マスクなどの化粧品としてまたは薬学的に許容される液体、クリーム、オイル、ローション、軟膏、ジェルまたは固体を含む。選択される剤形および意図される投与経路に好適な担体は、当分野で周知であり、選択された剤形および投与方法に許容される担体は、当分野における通常の技量を使用して決定することができる。
【０７３３】
本発明の組成物は、芳香剤、エストロゲン、ビタミンＡ、ＣおよびＥ、ピルビン酸、乳酸またはグリコール酸などのアルファ−ヒドロキシ酸またはアルファ−ケト酸、ラノリン、ワセリン、アロエ、メチルパラベンまたはプロピルパラベン、顔料などを含めた、化粧品において慣用的な他の成分を含有することができる。本発明の非限定的な化粧品としてまたは薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤および担体には、糖（例えば、ラクトース、スクロース、マンニトールおよびソルビトール）、デンプン、セルロース調製物、リン酸カルシウム（例えば、リン酸二カルシウム、リン酸三カルシウムおよびリン酸水素カルシウム）、クエン酸ナトリウム、水、水溶液（例えば、生理食塩水、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、デキストロース注射液、デキストロースおよび塩化ナトリウム注射液、乳酸リンゲル注射液）、アルコール（例えば、エチルアルコール、プロピルアルコールおよびベンジルアルコール）、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよびポリエチレングリコール）、有機エステル（例えば、オレイン酸エチルおよびトリグリセリド）、生分解性ポリマー（例えば、ポリラクチド−ポリグリコリド、ポリ（オルトエステル）およびポリ（無水物））、エラストマーマトリックス、リポソーム、マイクロスフィア、オイル（例えば、トウモロコシ、胚芽、オリーブ、ヒマシ、ゴマ、綿実およびラッカセイ）、カカオ脂、ワックス（例えば、坐剤用ワックス）、パラフィン、シリコーン、タルク、サリチレート（silicylate）などが含まれる。
【０７３４】
本発明の組成物は、化粧用組成物に一般に使用される、追加的な成分および／または物質を必要に応じて含有してもよい。これらの成分および物質は、当分野で周知であり、例えば、（１）デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよびケイ酸などの充填剤または増量剤、（２）カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、スクロースおよびアカシアなどの結合剤、（３）グリセロールなどの保湿剤、（４）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカデンプン、アルギン酸、ある特定のシリケート、デンプングリコール酸ナトリウム、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび炭酸ナトリウムなどの崩壊剤、（５）パラフィンなどの溶解遅延剤、（６）第四級アンモニウム化合物などの吸収促進剤、（７）セチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロールなどの湿潤剤、（８）カオリンおよびベントナイトクレイなどの吸収剤、（９）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコールおよびラウリル硫酸ナトリウムなどの滑沢剤、（１０）エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、マイクロクリスタリンセルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天およびトラガカントなどの懸濁化剤、（１１）緩衝化剤、（１２）ラクトース、乳糖、ポリエチレングリコール、動物性および植物性脂肪、油、ワックス、パラフィン、カカオ脂、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルク、サリチレート、酸化亜鉛、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウム、ならびにポリアミド粉末などの賦形剤、（１３）水または他の溶媒などの不活性希釈剤、（１４）防腐剤、（１５）界面活性剤、（１６）分散剤、（１７）ヒドロキシプロピルメチルセルロース、他のポリマーマトリックス、生分解性ポリマー、リポソーム、マイクロスフェア、モノステアリン酸アルミニウム、ゼラチンおよびワックスなどの制御放出剤または吸収遅延剤、（１８）乳白剤、（１９）アジュバント、（２０）湿潤剤、（２１）乳化剤および懸濁化剤、（２２）エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油（特に、綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステルなどの可溶化剤および乳化剤、（２３）クロロフルオロ炭化水素および揮発性無置換炭化水素（ブタンおよびプロパンなど）などの噴射剤、（２４）酸化防止剤、（２５）糖および塩化ナトリウムなどの、製剤を意図されるレシピエントの血液と等張性にする作用剤、（２６）増粘剤、（２７）レシチンなどのコーティング材料、ならびに（２８）甘味剤、着香剤、着色剤、香料および防腐剤を含む。このような成分または物質はそれぞれ、製剤の他の成分と適合可能である、および対象に有害でないという意味において、「許容される」ものでなければならない。選択される剤形および意図される投与経路に好適な成分および物質は、当分野で周知であり、選択された剤形および投与方法に許容される成分および物質は、当分野における通常の技量を使用して決定することができる。
【０７３５】
経口投与に好適な本発明の組成物は、カプセル剤、カシェ剤、丸剤、錠剤、散剤、顆粒剤、溶液剤、または水性もしくは非水性液体中の懸濁液剤、水中油型もしくは油中水型液体エマルション剤、エリキシル剤もしくはシロップ剤、香錠、ボーラス剤、舐剤またはペースト剤の形態とすることができる。これらの製剤は、当分野において公知の方法によって、例えば、慣用的なパンコーティング、混合、造粒または凍結乾燥法によって調製することができる。
【０７３６】
経口投与用の固形剤形（カプセル剤、錠剤、丸剤、糖衣錠、散剤、顆粒剤など）は、例えば、活性成分を、１種または複数の化粧品としてまたは薬学的に許容される担体、ならびに必要に応じて１種または複数の充填剤、増量剤、結合剤、保湿剤、崩壊剤、溶解遅延剤、吸収促進剤、湿潤剤、吸収剤、滑沢剤および／または着色剤と混合することによって調製することができる。同様のタイプの固形組成物は、好適な賦形剤を使用して、軟質および硬質充填ゼラチンカプセル中の充填剤として使用されてもよい。錠剤は、必要に応じて１種または複数の副成分と共に、圧縮または成型することによって作製されてもよい。圧縮錠剤は、好適な結合剤、滑沢剤、不活性希釈剤、防腐剤、崩壊剤、界面活性剤または分散剤を使用して調製されてもよい。成型錠剤は、好適な機械で成型することによって作製されてもよい。錠剤、ならびにカプセル剤、丸剤および顆粒剤などの他の固形剤形は、必要に応じて、刻み目が入れられるか、または腸溶コーティングおよび化粧品配合分野で周知の他のコーティングなどのコーティングおよびシェルと共に調製されてもよい。それらはまた、その中の活性成分の持続または制御放出を実現するよう製剤化されてもよい。それらは、例えば、細菌保持フィルターを通すろ過によって滅菌されてもよい。これらの組成物はまた、乳白剤を必要に応じて含有してもよく、胃腸管のある特定の部分において、必要に応じて、遅延様式で、活性成分だけを、または活性成分を優先的に放出するような組成であってもよい。活性成分はまた、マイクロカプセル封入形態にあることもできる。
【０７３７】
経口投与向けの液状剤形には、化粧品としてまたは薬学的に許容されるエマルション剤、マイクロエマルション剤、溶液剤、懸濁液剤、シロップ剤およびエリキシル剤が含まれる。液状剤形は、当分野において一般に使用される好適な不活性希釈剤を含有してもよい。不活性希釈剤の他に、本経口組成物はまた、湿潤剤、乳化および懸濁化剤、甘味剤、着香剤、着色剤、香料および防腐剤などのアジュバントを含んでもよい。懸濁液剤は、懸濁化剤を含んでもよい。
【０７３８】
直腸または膣内投与向けの本発明の組成物は、坐剤として提供されてもよく、坐剤は、１つまたは複数の活性成分と、１種または複数の好適な非刺激性担体とを混合することにより調製することができ、この担体は、室温では固体であるが、体温では液体であり、したがって、直腸または膣腔中で融解して、活性化合物を放出する。膣内投与に好適な本発明の組成物は、当分野で適切であることが公知のこのような化粧品としてまたは薬学的に許容される担体を含有する、ペッサリー剤、タンポン剤、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、フォーム剤またはスプレー製剤も含む。
【０７３９】
局所または経皮投与向け剤形には、散剤、噴霧剤、軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、溶液剤、パッチ剤、点剤、エマルション剤、懸濁液剤、エアゾール剤および吸入剤が含まれる。所望の任意の慣用的なビヒクル、助剤、および必要に応じてさらなる活性成分が、製剤に添加されてもよい。
【０７４０】
好ましい助剤は、防腐剤、酸化防止剤、安定剤、可溶化剤、ビタミン、着色剤、臭気改善剤、フィルム形成剤、増粘剤および保湿剤を含む群に由来する。
【０７４１】
溶液剤およびエマルション剤は、溶媒、可溶化剤および乳化剤などの慣用的なビヒクル、例えば、水、エタノール、イソプロパノール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチルグリコール、油、特に、綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油、グリセロール脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール、ならびにソルビタンの脂肪酸エステル、またはこれらの物質の混合物を含むことができる。
【０７４２】
エマルション剤は、様々な形態で存在してもよい。したがって、それらは、例えば、油中水（Ｗ／Ｏ）型もしくは水中油（Ｏ／Ｗ）型、または多重エマルション、例えば水中油中水（Ｗ／Ｏ／Ｗ）型のエマルション剤またはマイクロエマルション剤とすることができる。
【０７４３】
本発明による組成物はまた、乳化剤を含まない、分散調製物の形態であってもよい。それらは、例えば、水分散体またはピッカリングエマルションとすることができる。
【０７４４】
懸濁液剤は、液体希釈剤、例えば、水、エタノールまたはプロピレングリコール、懸濁媒体、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールエステルおよびポリオキシエチレンソルビタンエステル、マイクロクリスタリンセルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天およびトラガカント、またはこれらの物質の混合物などの慣用的なビヒクルを含んでもよい。
【０７４５】
ペースト剤、軟膏剤、ゲル剤およびクリーム剤は、慣用的なビヒクル、例えば、動物性および植物性脂肪、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルクおよび酸化亜鉛、またはこれらの物質の混合物を含んでもよい。
【０７４６】
フェイスオイルおよびボディオイルは、合成油（脂肪酸エステル、脂肪アルコール、シリコーン油など）、天然油（植物油および油性植物エキス、パラフィン油、ラノリン油など）、またはこれらの物質の混合物などの慣用的なビヒクルを含んでもよい。
【０７４７】
噴霧剤は、慣用的な噴射剤、例えば、クロロフルオロカーボン、プロパン／ブタンまたはジメチルエーテルを含んでもよい。
【０７４８】
非経口投与に好適な本発明の組成物は、１種または複数の化粧品としてまたは薬学的に許容される滅菌等張性水溶液または非水溶液、分散液、懸濁液もしくはエマルション、または使用直前に滅菌注射用溶液もしくは分散液に復元することができる滅菌粉末と組み合わせた１つまたは複数の化合物を含み、これらは、好適な酸化防止剤、緩衝化剤、製剤を意図されるレシピエントの血液と等張性にする溶質、または懸濁化剤もしくは増粘剤を含有してもよい。適切な流動性は、例えば、コーティング材料の使用により、分散液の場合、必要な粒子サイズの維持により、および界面活性剤の使用により維持することができる。これらの組成物はまた、湿潤剤、乳化剤および分散剤などの好適なアジュバントを含有してもよい。等張剤を含むことも望ましいことがある。さらに、吸収を遅延させる作用剤を含ませることにより、注射用化粧品形態の長期吸収をもたらすことができる。
【０７４９】
一部の場合、効果を延長するため、皮下または筋肉内注射からのその吸収を減速させるのが望ましい。これは、水難溶性を有する、結晶性またはアモルファス物質の液体懸濁液の使用により達成することができる。
【０７５０】
次に、活性剤／薬物の吸収速度は、その溶解速度に依存し、ひいては結晶サイズおよび結晶形態に依存し得る。代替的に、活性組成物を油性ビヒクルに溶解するまたは懸濁させることにより、非経口投与される組成物の遅延吸収を達成することができる。注射可能なデポ剤形態は、生分解性ポリマー中に活性成分のマイクロカプセルマトリックスを形成することにより作製することができる。活性成分のポリマーに対する比、および使用される特定のポリマーの性質に応じて、活性成分の放出速度を制御することができる。注射可能なデポ製剤はまた、身体組織と適合可能なリポソームまたはマイクロエマルション中に薬物を捕捉することにより調製される。注射可能な物質は、例えば、細菌保持フィルターに通すろ過によって滅菌することができる。
【０７５１】
本発明の組成物は、単位用量または多回用量用封止容器、例えば、アンプルおよびバイアルで提供されてもよく、使用直前に、滅菌液体担体、例えば注射用の水を添加することだけを必要とする凍結乾燥状態で保管することができる。即時使用注射溶液剤および懸濁液剤は、上記のタイプの滅菌散剤、顆粒剤および錠剤から調製することができる。
【０７５２】
本発明では、用語「結晶形態」は、化合物の結晶構造を意味する。化合物は、１つまたは複数の結晶形態で存在してもよく、それらは、異なる構造的、物理的、薬理学的または化学的特性を有することがある。核生成、成長速度、凝集および破壊の差を使用して、異なる結晶形態を得ることができる。核生成は、相転移エネルギー障壁が克服されたときに生じ、それによって粒子は過飽和溶液から形成させることが可能となる。結晶成長は、結晶の既存の表面上に化学化合物が堆積することによって生じる結晶粒子の拡大である。核生成および成長の相対速度により、形成される結晶のサイズ分布が決まる。核生成および成長のどちらの熱力学的推進力も過飽和であり、これは熱力学的平衡からの逸脱として定義される。凝集とは、２つまたはそれより多い粒子（例えば、結晶）が互いに付着し合って、より大きな結晶構造を形成することによって、より大きな粒子を形成することである。
【０７５３】
「水和物」という用語は、本明細書で使用する場合、分子複合体中に水を含有する固体または半固体形態の化学化合物を意味する。水は、一般に、化学化合物に対して化学量論量にある。
【０７５４】
本明細書で使用する場合、「化粧品としてまたは薬学的に許容される塩」は、化合物が、その酸塩または塩基塩を作製することにより修飾される、本明細書において開示されている化合物の誘導体を指す。化粧品としてまたは薬学的に許容される塩の例は、以下に限定されないが、アミンなどの塩基性残基の無機酸塩または有機酸塩、カルボン酸などの酸性残基のアルカリ塩または有機塩などを含む。例えば、このような塩には、アンモニア、Ｌ−アルギニン、ベタイン、ベネタミン、ベンザチン、水酸化カルシウム、コリン、デアノール、ジエタノールアミン（２，２’−イミノビス（エタノール））、ジエチルアミン、２−（ジエチルアミノ）−エタノール、２−アミノエタノール、エチレンジアミン、Ｎ−エチル−グルカミン、ヒドラバミン、１Ｈ−イミダゾール、リジン、水酸化マグネシウム、４−（２−ヒドロキシエチル）−モルホリン、ピペラジン、水酸化カリウム、１−（２−ヒドロキシ−エチル）−ピロリジン、水酸化ナトリウム、トリエタノールアミン（２，２’，２”−ニトリロトリス（エタノール））、トロメタミン、水酸化亜鉛、酢酸、２．２−ジクロロ−酢酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸、Ｌ−アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、２，５−ジヒドロキシ安息香酸、４−アセトアミド−安息香酸、（＋）−ショウノウ酸、（＋）−カンファ−１０−スルホン酸、炭酸、桂皮酸、クエン酸、シクラミン酸、デカン酸、ドデシル硫酸、エタン−１，２−二スルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸、エチレンジアミノ四酢酸、ギ酸、フマル酸、粘液酸（galacaric  acid）、ゲンチシン酸、Ｄ−グルコヘプトン酸、Ｄ−グルコン酸、Ｄ−グルクロン酸、グルタミン酸、グルタンチン酸（glutantic  acid）、グルタル酸、２−オキソ−グルタル酸、グリセロ−リン酸、グリシン、グリコール酸、ヘキサン酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩酸、イソ酪酸、ＤＬ−乳酸、ラクトビオン酸、ラウリン酸、リジン、マレイン酸、（−）−Ｌ−リンゴ酸、マロン酸、ＤＬ−マンデル酸、メタンスルホン酸、粘液酸、ナフタレン−１，５−二スルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、ニコチン酸、硝酸、オクタン酸、オレイン酸、オロチン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸（エンボン酸）、リン酸、プロピオン酸、（−）−Ｌ−ピログルタミン酸、サリチル酸、４−アミノ−サリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、硫酸、タンニン酸、（＋）−Ｌ−酒石酸、チオシアン酸、ｐ−トルエンスルホン酸およびウンデシレン酸からの塩が含まれる。さらなる化粧品としてまたは薬学的に許容される塩は、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、亜鉛などのような金属からの陽イオンと共に形成することができる。
【０７５５】
本発明の化粧品としてまたは薬学的に許容される塩は、慣用的な化学的方法により、塩基性または酸性部分を含有する、本明細書において開示されている化合物から合成することができる。一般に、このような塩は、これらの化合物の遊離酸または塩基の形態のものを、水中、あるいはエーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノールもしくはアセトニトリル、またはそれらの混合物のような有機希釈剤中で、十分量の適切な塩基または酸と反応させることにより調製することができる。
【０７５６】
本発明の化合物および組成物は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏでの用途の両方のための、化粧用または医薬組成物に含まれ得ることが構想される。
【０７５７】
表５または図１３０に列挙される１つもしくは複数の化合物を含めた、本発明の化合物および組成物、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩は、対象に共投与されて、本発明の皮膚の色素沈着をモジュレートする目的を実現することが可能であることが構想される。
【０７５８】
本発明の組成物は、表５または図１３０に列挙される１つまたは複数の化合物、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を含むことができることも構想される。例えば、本発明の組成物は、インジルビンまたはその化学アナログをマラセジンまたはその化学アナログと組み合わせて含んでもよい。
【０７５９】
さらに、本発明の化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａによって産生される化合物、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を含むことが構想される。さらに、本発明の組成物および方法は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａによって産生される１つまたは複数の化合物、あるいはその化学アナログ、結晶形態、水和物、または薬学的にもしくは化粧品として許容される塩を含み得ることが構想される。例えば、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａによって産生される、またはこれに由来する化合物は、以下に限定されないが、図１３０に示されている化合物を含む。
【０７６０】
本発明の方法は、本発明の２つまたはそれより多い化合物、および／または組成物を共投与して、本明細書に記載されている皮膚の色素沈着をモジュレートする目的を実現するステップを含むことができることがさらに構想される。
【０７６１】
本発明の共投与される化合物および組成物は、例えば、実質的に同時に、または逐次に、対象に接触させてもよい。
【０７６２】
１つまたは複数のＭａｌａｓｓｅｚｉａ由来の化合物またはその化学アナログを含有する本発明の組成物は、以下に限定されないが、平均組織生存率、メラニン濃度、皮膚の美白、皮膚の暗色化、メラノサイトアポトーシスの誘導、および芳香族炭化水素（ＡｈＲ）活性、メラニン形成またはメラニン濃度のモジュレートを含めた、様々な有効性基準に対して、構成成分化合物単独よりも相乗効果を実証することがある。
【０７６３】
本明細書において使用される技術用語は、特定の実施形態を説明するために過ぎず、限定することを意図するものでない。本明細書および添付の特許請求の範囲において使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が特に明白に指示しない限り、複数の指示物を含む。
【０７６４】
本明細書における数値範囲の列挙に関すると、同じ精度のそれらの間の介在数値の各々は、明確に企図される。例えば、６〜９という範囲の場合、６および９に加えて７および８の数値が企図され、６．０〜７．０の範囲の場合、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９および７．０の数値が明確に企図されている。
【０７６５】
以下の実施例は、本発明の方法をさらに例示するために提示されている。これらの実施例は、単なる例示に過ぎず、本発明の範囲を決して限定することを意図するものではない。
【実施例】
【０７６６】
（実施例１）
物質および方法
Ｍａｌａｓｓｅｚｉａによって生産される化合物の単離
例えば、Wille  et  al.,  2001に概説されている手順を使用して、マラセジンを単離する。プロトコールを以下に手短に概説する。
培地
【０７６７】
Ｔｗｅｅｎ８０（３０ｍＬ）、シクロヘキシミド（０．５ｇ）、クロラムフェニコール（０．０５ｇ）、寒天（２０ｇ）、および１０００ｍＬの混合物とするのに十分な量の水からなる培地を滅菌し、５０℃において、０．３ｇ％の濃度の０．３％の滅菌ろ過したＬ−トリプトファンと混合する。１０ｍＬの分量分を１０ｃｍのペトリ皿に注ぎ入れて、０．１Ｍ  ＨＣｌを使用してｐＨを５．５に調整する。
Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｆｕｒｆｕｒの培養、およびＭ．ｆｕｒｆｕｒにより産生される化合物の単離
【０７６８】
Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｆｕｒｆｕｒを上記の培地にこすりつけ、３０℃で１４日間、インキュベートする。ペトリ皿の内容物はピューレ状になり、１２時間、酢酸エチルにより抽出する。この抽出物をガラスウール上でろ過して蒸発乾固させて、メタノールに溶解する。次に、溶離液としてメタノールを使用するＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０上でのクロマトグラフィーによって、この抽出物を分画する。トルエン：ギ酸エチル：ギ酸（１０：５：３）を用いる分取薄層クロマトグラフィーを用いてさらなる分離を行う。主要区域を水と酢酸エチルとの間に分配する。フラクションは、目的の活性について分析する。目的のフラクションに由来する化合物をＨＰＬＣによって単離する。
マラセジンおよびマラセジンの化学アナログの合成
【０７６９】
マラセジンは、Wille  et  al.,  2001に説明されているプロトコールに準拠して合成する。マラセジンの化学アナログは、新輝合成プロトコール、およびWinston-McPherson,  et  al.,  2014に記載されている合成プロトコールに準拠して合成する。
スクリーニングプロトコール
【０７７０】
有効な皮膚美白化合物を、当業者に公知のスクリーニングプロトコールと新規なスクリーニング法の両方を使用して評価する。例えば、マラセジンおよびその化学アナログは、上記の通り、チロシナーゼバイオアッセイによって評価する。芳香族炭化水素受容体（ＡｈＲ）結合アッセイを含めた、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞およびｉｎ  ｖｉｖｏ組織モデルの両方を含む他のスクリーニングプロトコールを利用する。
チロシナーゼバイオアッセイ
【０７７１】
Wille  et  al.,  2001に記載されている通り、チロシナーゼバイオアッセイを行う。手短に述べると、Ｌ−ドーパをチロシナーゼ酵素と混合する。ドーパキノンの形成を示す消失を１分間かけて測定する。例えば、上で議論されているフラクションを使用して、これらのフラクションをＤＭＳＯに溶解し、対照として純粋なＤＭＳＯを用いて、チロシナーゼ反応に直接加える。チロシナーゼ阻害活性は、対照と比較して、消失の増大の低下として測定する。
芳香族炭化水素受容体結合アッセイ
【０７７２】
ＡｈＲ結合アッセイは、例えば、Song,  et  al.,  2002に記載されているプロトコールに準拠して行う。手短に述べると、例えば、ＴｎＴ  Ｑｕｉｃｋ−ｃｏｕｐｌｅｄ  Ｒｅｔｉｃｕｌｏｃｙｔｅ  Ｌｙｓａｔｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ反応（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を使用して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでヒトおよびマウスＡｈＲを発現させる。受容体リガンドの結合検討は、Karchner,  et  al.,  1999に記載されている、スクロースグラジエント上の速度沈降を利用する。
ＥＲＯＤアッセイ
【０７７３】
本発明の化合物、組成物および製剤はまた、当業者に公知のエトキシレゾルフィン−Ｏ−デエチラーゼ（ＥＲＯＤ）アッセイを使用して評価する（Donato,  et  al.,  1993；Whyte,  et  al.,  2000；Wille  et  al.,  2001）。
メラノサイトアポトーシスのアッセイ
【０７７４】
候補化合物は、メラノサイトにおける、アポトーシス誘導活性について評価する。ヒト表皮メラノサイトは、ヒトメラノサイト増殖サプリメント（ＨＭＧＳ）（Ｔｈｅｒｍｏ−Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）または表皮細胞基礎培地（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）を補給した培地２５４中で培養する。ヒトメラノサイト成長培地の追加構成成分は、以下に限定されないが、インスリン（５μｇ／ｍｌ）、アスコルビン酸（５０μｇ／ｍｌ）、Ｌ−グルタミン（６ｍＭ）、エピネフリン（１．０μＭ）および塩化カルシウム（０．２ｍＭ）を含むことができる。ヒトメラノサイト培養物は、５％ＣＯ２中、３７℃で維持する。
【０７７５】
候補化合物をＤＭＳＯに希釈し、メラノサイト培養物に直接、混合する。純粋なＤＭＳＯの当量体積分を対照として使用する。当業者に公知の細胞毒性アッセイは、製造業者の指示書に準拠して行う。本発明において使用される細胞毒性アッセイは、以下に限定されないが、ＣｅｌｌＴｏｘ（商標）Ｇｒｅｅｎ細胞毒性アッセイ、Ａｐｏ−ＯＮＥ蛍光カスパーゼアッセイ、ＡｐｏＴｏｘ−Ｇｌｏ（商標）アッセイおよびＣａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を含む。蛍光検出は、Kramer,  et  al.,  2005に記載されているものを含めた、当業者に公知の標準ＦＡＣＳまたは顕微鏡アッセイを使用して行う。
【０７７６】
アネキシンＶのためのＦＡＣＳ分析およびカスパーゼ−９発現のためのウエスタンブロットを含めた、アポトーシスを評価する追加的な手段を使用する。ウェスタンブロッティング法は、当業者に公知の方法に準拠して行う。
マウス異種移植片アッセイ
【０７７７】
ヒト皮膚のマウス異種移植片モデルは、当分野で公知のプロトコールに準拠して生成する（Black,  et  al.,  1985；Manning  et  al.,  1973；Reed,  et  al.,  1973；Plenat,  et  al.,  1992；Scott  et  al.,  1998；Otulakowski,  et  al.,  1994）。マウス異種移植片モデルが一旦、確立されると、これを本発明の化合物に曝露させて、色素沈着の変化を対照と比較して観察する。皮膚の色素沈着の変化を、以下に限定されないが、フィッツパトリック皮膚分類試験およびＴａｙｌｏｒの色素沈着過度スケールを含めた、当業者に公知の様々な色素沈着スケールを使用して評価する（Taylor,  et  al.,  2005）。
ヒトアッセイ
【０７７８】
本発明の化合物、組成物および製剤を、ヒトに、例えば、ヒトの皮膚に施用し、対照物質と比較する。皮膚の色素沈着の変化を、以下に限定されないが、フィッツパトリック皮膚分類試験およびＴａｙｌｏｒの色素沈着過度スケールを含めた、当業者に公知の様々な色素沈着スケールを使用して評価する。
（実施例２）
マラセジンおよびそのアナログの生化学的標的
【０７７９】
本発明の化合物および組成物は、例えば、マラセジンに匹敵するチロシナーゼ阻害およびＡｈＲアゴニスト活性を示すと予想される。本発明の化合物および組成物は、例えば、マラセジンと比較してより強力なチロシナーゼ阻害およびより強いＡｈＲ作動性を示すと予想される。同様に、本発明の化合物および組成物のいくつかは、マラセジンよりも効果が低いチロシナーゼ阻害剤およびＡｈＲアゴニストであると予想される。このような化合物、組成物および製剤は、より効力の高い化合物と比較して、より有利な毒性プロファイルを有することができる。
（実施例３）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ有効性
【０７８０】
本発明の化合物および組成物は、マラセジンと少なくとも同程度強力にメラノサイトアポトーシスを誘導し、メラノサイト活性、メラニン産生、メラノソーム生物発生および／またはメラノソーム輸送をモジュレートすると予想される。本発明の化合物および組成物のいくつかは、マラセジンほど強力に、これらの生物学的過程に影響を及ぼさないことも企図される。このような化合物および組成物は、より効力の高い化学種と比較して、より有利な毒性プロファイルを有することができる。
（実施例４）
ｉｎ  ｖｉｖｏ有効性
【０７８１】
本発明の化合物および組成物は、皮膚の美白および色素沈着過度障害によって引き起こされる色素沈着過度の改善に関して、マラセジンと少なくとも同程度に有効であると予想される。本発明の化合物および組成物は、例えば、半減期および吸収に関して、有利な薬物動態プロファイルを示すことがさらに予想される。ある特定の化合物は、より長い半減期を示す一方、他の化合物は、より短い半減期を示すこととなる。同様に、ある特定の化合物は、異なる吸収プロファイルを示し、一部の化合物は、完全に吸収されるのにより時間がかかり、他の化合物は完全に吸収されるのに時間はそれほどかからないであろう。
（実施例５）
マラセジンおよびマラセジン誘導体の合成
【０７８２】
マラセジン（「ＣＶ−８６８４」）およびその環化誘導体であるインドロ［３，２−ｂ］カルバゾール（「ＣＶ−８６８５」）は、図２Ａに示されているスキームに準拠して合成した。
ｔｅｒｔ−ブチル（２−ヨード−フェニル）カルバメートである化合物１の合成
【０７８３】
２−ヨード−アニリン（２５．０ｇ、０．１１４ｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（２５０ｍＬ）溶液に、０℃で、内温を５℃未満に維持しながら、４０分間かけて、ＬｉＨＭＤＳ（２５１．０ｍＬ、ＴＨＦ中１Ｍ、０．２５１ｍｏｌ）をゆっくりと加えた。０℃で３０分間、撹拌した後、内温を５℃未満に維持しながら、４０分間かけて、ＢＯＣ無水物（２７．０ｇ、０．１２５ｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液をゆっくりと加えた。この反応混合物を周囲温度まで温め、１時間、撹拌した。飽和ＮＨ４Ｃｌ（２５０ｍＬ）を加えて、この反応物をクエンチした。有機層を分離して、水（１５０ｍＬ）により洗浄した。合わせた水層を酢酸エチル（２×１５０ｍＬ）により抽出し、層を分離した。酢酸エチル層を元の有機層と一緒にして、真空で濃縮すると、褐色油状物として得られた。粗製化合物をカラムクロマトグラフィー（０〜５％の酢酸エチル／ヘキサン）によって精製した。化合物１が、淡黄色液体（２９．０ｇ、８０％）として得られた。
化合物２の合成
【０７８４】
化合物１（１６．０ｇ、０．０５ｍｏｌ）、プロパルギルメチルエーテル（４．２５ｇ、０．０６ｍｏｌ）の脱気したトリエチルアミン（２００ｍＬ）溶液に、周囲温度で、ヨウ化銅（０．９５ｇ、１０％ｍｏｌ）およびＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）４（１．７５ｇ、５％ｍｏｌ）を加えた。周囲温度で２時間にわたり撹拌した後、反応は完了した（１０％酢酸エチル／ヘキサンを使用するＴＬＣによりモニタリングした）。この反応混合物を酢酸エチル（３００ｍＬ）により希釈し、反応混合物を水、飽和ＮａＣｌにより洗浄してＮａ２ＳＯ４で脱水した。この溶媒をろ過して真空で濃縮すると、褐色油状物として得られた。粗製化合物をカラムクロマトグラフィー（１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製した。化合物２が、淡黄色液体（１３．０ｇ、９９％）として得られた。
化合物３の合成
【０７８５】
オーブン乾燥フラスコに、ジオキサン（１２０ｍＬ）中のＰｔＣｌ２（０．２６ｇ、０．００１ｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（１．６ｇ、０．０１５ｍｏｌ）、インドール（２．３２ｇ、０．０２ｍｏｌ）および化合物２（２．６ｇ、０．０１ｍｏｌ）を加えた。このフラスコを窒素により脱気し、封止し、一晩、１００℃まで加熱した。反応は完了した（１０％酢酸エチル／ヘキサンを使用するＴＬＣによりモニタリングした）。溶媒を減圧下で蒸発させた。この反応混合物を酢酸エチル（２００ｍＬ）により希釈し、反応混合物を水、飽和ＮａＣｌにより洗浄してＮａ２ＳＯ４で脱水した。この溶媒をろ過して真空で濃縮すると、褐色油状物として得られた。
【０７８６】
この反応を、異なる回分で、化合物２（２．６ｇ、０．０１ｍｏｌ）を使用して繰り返した。両方の回分の粗製化合物を合わせて、カラムクロマトグラフィー（１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製した。化合物３が、淡褐色固体（３．８ｇ、５５％）として得られた。
化合物４の合成
【０７８７】
メタノール（１５０ｍＬ）と水（５０ｍＬ）との混合物中の化合物３（３．８ｇ、０．０１０９ｍｏｌ）溶液に、周囲温度で炭酸カリウム（４．６ｇ、０．０３２９ｍｏｌ）を加えた。得られた懸濁液を一晩、加熱して還流した。反応は完了した（２０％酢酸エチル／ヘキサンを使用するＴＬＣによりモニタリングした）。この反応混合物を周囲温度まで冷却し、溶媒を真空で濃縮した。残留物を酢酸エチル（２００ｍＬ）に溶解し、水およびブラインにより洗浄し、次に、乾燥（硫酸ナトリウム）してろ過し、溶媒を真空で濃縮すると、褐色固体として得られた。粗製化合物をカラムクロマトグラフィー（２０％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製した。化合物４が、オレンジ色固体（２．２ｇ、８１％）として得られた。
化合物マラセジン（ＣＶ−８６８４）の合成
【０７８８】
アルゴン下、乾燥した１００ｍＬの２つ口丸底フラスコに、０℃でジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）を加えた。内温を５℃未満に維持しながら、１０分間かけて、ＰＯＣｌ３（０．７５ｇ、０．００４８ｍｏｌ）をゆっくりと加えた。０℃で３０分間、撹拌した後、内温を５℃未満に維持しながら、１０分間かけて、化合物４（１．０ｇ、０．００４ｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（５ｍＬ）溶液をゆっくりと加えた。得られた混合物を周囲温度において、一晩、撹拌した。反応は完了した（２０％酢酸エチル／ヘキサンを使用するＴＬＣによりモニタリングした）。この反応混合物を飽和水性炭酸水素ナトリウム（１５０ｍＬ）に注ぎ入れ、１時間、撹拌した。得られた混合物を酢酸エチル（２×１００ｍＬ）により抽出した。有機層を合わせて、水、飽和ＮａＣｌにより洗浄して、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。この溶媒を、ろ過して真空で濃縮すると、褐色固体として得られた。粗製化合物をカラムクロマトグラフィー（０〜２０％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製した。化合物マラセジン（ＣＶ−８６８４）は、淡いピンク色固体（０．８２ｇ、７４％）として得られた。
【０７８９】
ＨＰＬＣ純度：９７．８％（面積％）。１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃスペクトルは、構造と一致した。ＥＳＩ−ＭＳ：計算値Ｃ１８Ｈ１５Ｎ２Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋：２７５、実測値：２７５．２。
【０７９０】
化合物インドロ［３，２−ｂ］カルバゾール（ＣＶ−８６８５）の合成
【０７９１】
マラセジン（０．７５ｇ）のテトラヒドロフラン（１２０ｍＬ）溶液に、周囲温度で濃ＨＣｌ（０．２５ｍＬ）を加えた。得られた混合物を一晩、加熱して還流した。反応は完了した（４０％酢酸エチル／ヘキサンを使用するＴＬＣによりモニタリングした）。この反応混合物を周囲温度まで冷却して、１時間、撹拌した。固体をろ過して、テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）により洗浄して乾燥すると、インドロ［３，２−ｂ］カルバゾール（ＣＶ−８６８５）が淡黄色固体（０．５５ｇ、７８％）として得られた。
【０７９２】
ＨＰＬＣ純度：９６．２２％（面積％）。１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃスペクトルは、構造と一致した。ＥＳＩ−ＭＳ：計算値Ｃ１８Ｈ１３Ｎ２（Ｍ＋Ｈ）＋：２５７、実測値：２５７．５。
【０７９３】
化合物Ｉ（「ＣＶ−８６８６」）および化合物ＩＶ（「ＣＶ−８６８７」）は、図２Ｂ中に示されているスキームに準拠して合成した。
化合物５の合成
【０７９４】
オーブン乾燥フラスコに、ジオキサン（２５０ｍＬ）中のＰｔＣｌ２（１．０ｇ、０．００３８ｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（６．１ｇ、０．０５７ｍｏｌ）、６−メチルインドール（１０．０ｇ、０．０７６ｍｏｌ）および化合物２（１０．０ｇ、０．０３８ｍｏｌ）を加えた。このフラスコを窒素により脱気し、封止して一晩、１００℃まで加熱した。反応は完了した（１０％酢酸エチル／ヘキサンを使用するＴＬＣによりモニタリングした）。溶媒を減圧下で蒸発させた。この反応混合物を酢酸エチル（４００ｍＬ）により希釈し、反応混合物を水、飽和ＮａＣｌにより洗浄してＮａ２ＳＯ４で脱水した。この溶媒をろ過して真空で濃縮すると、褐色油状物として得られた。粗製化合物をカラムクロマトグラフィー（１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製した。化合物５は、淡褐色固体（６．５ｇ、４７％）として得られた。
化合物６の合成
【０７９５】
メタノール（１５０ｍＬ）と水（５０ｍＬ）との混合物中の化合物５（６．５ｇ、０．０１８ｍｏｌ）の溶液に、周囲温度で炭酸カリウム（７．４ｇ、０．０５４ｍｏｌ）を加えた。得られた懸濁液を一晩、加熱して還流した。反応は完了した（２０％酢酸エチル／ヘキサンを使用するＴＬＣによりモニタリングした）。この反応混合物を周囲温度まで冷却し、溶媒を真空で濃縮した。残留物を酢酸エチル（２００ｍＬ）に溶解して水およびブラインにより洗浄し、次に、乾燥（硫酸ナトリウム）してろ過し、溶媒を真空で濃縮すると、褐色固体として得られた。粗製化合物をカラムクロマトグラフィー（２０％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製した。化合物６が、オレンジ色固体（３．３ｇ、７２％）として得られた。
化合物である化合物Ｉ（ＣＶ−８６８６）の合成
【０７９６】
アルゴン下、乾燥した１００ｍＬの２つ口丸底フラスコに、０℃でジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）を加えた。内温を５℃未満に維持しながら、１０分間かけて、ＰＯＣｌ３（０．６ｇ、０．００３８ｍｏｌ）をゆっくりと加えた。０℃で３０分間、撹拌した後、内温を５℃未満に維持しながら、１０分間かけて、化合物６（１．０ｇ、０．００３８ｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（５ｍＬ）溶液をゆっくりと加えた。得られた混合物を周囲温度において、一晩、撹拌した。反応は完了した（２０％酢酸エチル／ヘキサンを使用するＴＬＣによりモニタリングした）。この反応混合物を飽和水性炭酸水素ナトリウム（１５０ｍＬ）に注ぎ入れ、１時間、撹拌した。得られた混合物を酢酸エチル（２×１００ｍＬ）により抽出した。有機層を合わせて、水、飽和ＮａＣｌにより洗浄して、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。この溶媒を、ろ過して真空で濃縮すると、褐色固体として得られた。粗製化合物をカラムクロマトグラフィー（０〜２０％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製した。化合物Ｉ（ＣＶ−８６８６）は、淡いピンク色固体（０．８４ｇ、７５％）として得られた。
【０７９７】
ＨＰＬＣ純度：９７．０１％（面積％）。１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃスペクトルは、構造と一致した。ＥＳＩ−ＭＳ：計算値Ｃ１９Ｈ１７Ｎ２Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋：２８９、実測値：２８９．１。
化合物である化合物ＩＶ（ＣＶ−８６８７）の合成
【０７９８】
化合物Ｉ（１．０ｇ）のテトラヒドロフラン（１２５ｍＬ）溶液に、周囲温度で濃ＨＣｌ（０．３ｍＬ）を加えた。得られた混合物を一晩、加熱して還流した。反応は完了した（４０％酢酸エチル／ヘキサンを使用するＴＬＣによりモニタリングした）。この反応混合物を周囲温度まで冷却して、１時間、撹拌した。固体をろ過して、テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）により洗浄して乾燥すると、淡黄色固体の化合物ＩＶ（ＣＶ−８６８７）（０．８４ｇ、８９％）が得られた。
【０７９９】
ＨＰＬＣ純度：９８．４％（面積％）。１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃスペクトルは、構造と一致した。ＥＳＩ−ＭＳ：計算値Ｃ１９Ｈ１５Ｎ２（Ｍ＋Ｈ）＋：２７１、実測値：２７１．３。
【０８００】
化合物ＩＩ（「ＣＶ−８６８８」）は、図２Ｃ中に示されているスキームに準拠して合成した。
化合物７の合成
【０８０１】
化合物１（９．０ｇ、０．０３ｍｏｌ）、３−メトキシ−１−ブチン（２．８ｇ、０．０３５ｍｏｌ）の脱気したトリエチルアミン（１５０ｍＬ）溶液に、周囲温度で、ヨウ化銅（０．５３ｇ、１０％ｍｏｌ）およびＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）４（１．０ｇ、５％ｍｏｌ）を加えた。周囲温度で２時間にわたり撹拌した後、反応は完了した（１０％酢酸エチル／ヘキサンを使用するＴＬＣによりモニタリングした）。この反応混合物を酢酸エチル（３００ｍＬ）により希釈し、反応混合物を水、飽和ＮａＣｌにより洗浄してＮａ２ＳＯ４で脱水した。この溶媒をろ過して真空で濃縮すると、褐色油状物として得られた。粗製化合物をカラムクロマトグラフィー（１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製した。化合物７が、淡黄色液体（７．０ｇ、９０％）として得られた。
化合物８の合成
【０８０２】
オーブン乾燥フラスコに、ジオキサン（２５０ｍＬ）中のＰｔＣｌ２（０．６８ｇ、０．００２５ｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（４．０ｇ、０．０３８ｍｏｌ）、インドール（６．０ｇ、０．０５ｍｏｌ）および化合物７（１０．０ｇ、０．０２５ｍｏｌ）を加えた。このフラスコを窒素により脱気し、封止して一晩、１００℃まで加熱した。反応は完了した（１０％酢酸エチル／ヘキサンを使用するＴＬＣによりモニタリングした）。溶媒を減圧下で蒸発させた。この反応混合物を酢酸エチル（４００ｍＬ）により希釈し、反応混合物を水、飽和ＮａＣｌにより洗浄してＮａ２ＳＯ４で脱水した。この溶媒をろ過して真空で濃縮すると、褐色油状物として得られた。粗製化合物をカラムクロマトグラフィー（１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製した。化合物８は、淡褐色固体（３．５ｇ、７７％）として得られた。
化合物９の合成
【０８０３】
メタノール（７５ｍＬ）と水（２５ｍＬ）との混合物中の化合物８（３．３ｇ、０．００９１ｍｏｌ）溶液に、周囲温度で炭酸カリウム（３．８ｇ、０．０２７ｍｏｌ）を加えた。得られた懸濁液を一晩、加熱して還流した。反応は完了した（２０％酢酸エチル／ヘキサンを使用するＴＬＣによりモニタリングした）。この反応混合物を周囲温度まで冷却し、溶媒を真空で濃縮した。残留物を酢酸エチル（２００ｍＬ）に溶解して水およびブラインにより洗浄し、次に、乾燥（硫酸ナトリウム）してろ過し、溶媒を真空で濃縮すると、褐色固体として得られた。粗製化合物をカラムクロマトグラフィー（２０％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製した。化合物９が、オレンジ色固体（２．１ｇ、８８％）として得られた。
化合物である化合物ＩＩ（ＣＶ−８６８８）の合成
【０８０４】
アルゴン下、乾燥した１００ｍＬの２つ口丸底フラスコに、０℃でジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）を加えた。内温を５℃未満に維持しながら、１０分間かけて、ＰＯＣｌ３（０．７６ｇ、０．００５ｍｏｌ）をゆっくりと加えた。０℃で３０分間、撹拌した後、内温を５℃未満に維持しながら、１０分間かけて、化合物９（１．３ｇ、０．００５ｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（５ｍＬ）溶液をゆっくりと加えた。得られた混合物を周囲温度において、一晩、撹拌した。反応は完了した（２０％酢酸エチル／ヘキサンを使用するＴＬＣによりモニタリングした）。この反応混合物を飽和水性炭酸水素ナトリウム（１５０ｍＬ）に注ぎ入れ、１時間、撹拌した。得られた混合物を酢酸エチル（２×１００ｍＬ）により抽出した。有機層を合わせて、水、飽和ＮａＣｌにより洗浄して、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。この溶媒を、ろ過して真空で濃縮すると、褐色固体として得られた。粗製化合物は、クロロホルム（２５ｍＬ）中で結晶化した。化合物ＩＩ（ＣＶ−８６８８）が、淡いピンク色固体（０．８１ｇ、５３％）として得られた。
【０８０５】
ＨＰＬＣ純度：９８．９４％（面積％）。１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃスペクトルは、構造と一致した。ＥＳＩ−ＭＳ：計算値Ｃ１９Ｈ１７Ｎ２Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋：２８９、実測値：２８９．０。
（実施例６）
細胞の形状
【０８０６】
様々な処置後の典型的な細胞の形状を、図５Ａ〜５Ｋ、６Ａ〜６Ｋ、７Ａ〜７Ｋ、８Ａ〜８Ｋ、９Ａ〜９Ｋ、１０Ａ〜１０Ｋ、１１Ａ〜１１Ｋおよび１２Ａ〜１２Ｋに示す。どちらの細胞系の形状も、６時間時に、１００μＭのＣＶ−８６８４およびＣＶ−８６８８、ならびにスタウロスポリンの処置によって有意に影響を受けた。ＣＶ−８６８５は、１００μＭでＷＭ１１５にだけ影響を及ぼすように思われた。
（実施例７）
マラセジンおよびマラセジン誘導体のアポトーシス誘導活性−予備アネキシンＶアッセイ
物質および試薬
【０８０７】
アネキシンＶ−ＦＩＴＣアッセイキットをＢｅｙｏｔｉｍｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから購入し、ＲＰＭＩ１６４０培地およびダルベッコの改変イーグル培地（「ＤＭＥＭ」）はＧｉｂｃｏから購入し、ウシ胎児血清（「ＦＢＳ」）は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから購入し、安定化した抗生物質抗真菌剤溶液（１００×）は、Ｓｉｇｍａから購入し、０．２５％トリプシン−ＥＤＴＡ（１×）、フェノールレッドはＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから購入した。
細胞培養
【０８０８】
ＭｅＷｏ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＨＴＢ−６５（商標））およびＷＭ１１５（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−１６７５）細胞は、ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）から購入し、以下：ＭｅＷｏの場合、１０％ＦＢＳを補給したＤＭＥＭ中に、ＷＭ１１５の場合、１０％ＦＢＳ（１０％ＦＢＳ、１％の安定化した抗生物質抗真菌剤溶液）を補給したＲＰＭＩ１６４０中に維持した。
検討の概要
【０８０９】
アポトーシスの中間段階では、ホスファチジルセリン（「ＰＳ」）は細胞膜の内葉から外葉に転座され、ＰＳが細胞外環境に曝露され、そこでＰＳを検出することができる。蛍光が強いアネキシンＶコンジュゲートは、ＰＳの外在化を検討するための迅速かつ信頼性の高い検出方法をもたらす。
【０８１０】
最初の一連の検討の間に、ＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞の両方を、１００μＭから開始して３倍希釈による１０種の用量の試験化合物で処置した。スタウロスポリンは、陽性対照として使用した。６時間の処置後、アネキシンＶアッセイを使用して細胞のアポトーシスを評価した。評価した試験化合物は、ＣＶ−８６８４、ＣＶ−８６８５、ＣＶ−８６８６、ＣＶ−８６８７およびＣＶ−８６８８であった。
アッセイ手順
【０８１１】
細胞播種のために、細胞を収穫し、Ｃｏｕｎｔｅｓｓ（登録商標）セルカウンターを使用して細胞数を決定した。次に、培養培地を用いて、所望の密度まで細胞を希釈した。３８４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ３７１２−クリアボトムプレート）の必要数のウェルに、ウェルあたり４０μＬの細胞懸濁液を加えた。最終細胞密度は６，０００細胞／ウェルとした。プレート培養後、このプレートを３７℃、および５％ＣＯ２で一晩、インキュベートした。
【０８１２】
化合物源のプレートを調製するために、各試験化合物をＤＭＳＯに溶解し、１０ｍＭの保存溶液にした。ＥＶＯ２００（商標）液体ハンドラー（ＴＥＣＡＮ）を使用して３倍段階希釈を行い、１０種類の濃度の試験化合物を生成した。０．１％ＤＭＳＯをビヒクル（陰性）対照として用いた。次に、化合物源のプレートを、１，０００ＲＰＭ、室温で、１分間、回転させ、プレート振とう器を使用して２分間、撹拌した。
【０８１３】
化合物処置の場合、液体ハンドラーＥｃｈｏ５５０（ＬａｂＣｙｔｅ  Ｉｎｃ．）を使用して、化合物４０ｎＬを化合物源プレートから３８４ウェル培養プレートに移した。６時間インキュベートした後、検出のためにプレートをインキュベータから取り出した。
【０８１４】
予備アネキシンＶアッセイの場合、プレートをインキュベータから取り出し、室温で１５分間、平衡にした。次に、培養培地を除去した。２０μＬの事前混合アネキシンＶ−ＦＩＴＣおよびＨｏｅｃｈｓｔ３３３４２色素作業溶液を各ウェルに加えた。次に、細胞を室温で２０分間インキュベートした。プレートを封止し、１，０００ＲＰＭで１分間、遠心分離して気泡を除去した。その後、プレートをＡｃｕｍｅｎ  ｅＸ３プレートリーダーを使用して読み取った。相対活性を次式に従って計算し：活性（％）＝１００％×（カウント数Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖ／カウント数Ｔｏｔａｌ  ｃｅｌｌ）、ＥＣ５０は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（ｖ．５．０１）を使用して計算した。
結果
【０８１５】
上で議論した予備スクリーニングでは、ＣＶ−８６８８は、ＭｅＷｏ細胞のアネキシンＶ染色を顕著に上昇させ、ＥＣ５０は９０８．５７ｎＭであった。陽性対照であるスタウロスポリンは、どちらの細胞系でもアネキシンＶ染色を大幅に上昇させた。（図３Ａ〜３Ｍ）。
（実施例８）
マラセジンおよびマラセジン誘導体のアポトーシス誘導活性  −  アネキシンＶアッセイを使用する追加評価
検討の概要
【０８１６】
試験化合物がアポトーシスに及ぼす影響をさらに検討するために、ＭｅＷｏ細胞とＷＭ１１５細胞の両方に対して、アポトーシスの様々な段階を包含する多重読取りを行った。両方の細胞タイプを、３用量（１００μＭ、１０μＭおよび１μＭ）の試験化合物で処置した。スタウロスポリンは、陽性対照として使用した。所望の処置期間（６、２４、４８または７２時間）後、試験化合物に曝露した後のアネキシンＶ結合を実証する細胞の百分率を測定することによってアポトーシスを評価した。評価した試験化合物は、ＣＶ−８６８４、ＣＶ−８６８５およびＣＶ−８６８８であった。
アッセイ手順
【０８１７】
細胞播種は、次の点を除いて上で議論した通り実施した。最終細胞密度は、６時間および２４時間で検出する場合、４，０００細胞／ウェルとした一方、４８時間および７２時間で検出する場合、２，０００細胞／ウェルを使用した。各時間点において、３８４ウェルクリアボトムプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ３７１２）および固体ホワイトボトムプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ３５７０）を用意した。上で議論した通り、プレートをインキュベートした。
【０８１８】
化合物源のプレートを調製するため、各試験化合物をＤＭＳＯに溶解し、１０ｍＭの保存溶液にした。１ｍＭおよび０．１ｍＭまで１０倍希釈することによって、さらに２つの濃度を生成した。スタウロスポリンを陽性対照として使用し、１％ＤＭＳＯをビヒクル（陰性）対照として使用した。化合物源のプレートを、１，０００ＲＰＭ、室温で、１分間、回転させ、プレート振とう器を使用して２分間、撹拌した。
【０８１９】
Ｅｃｈｏ５５０液体ハンドラーを使用して、４００ｎＬの試験化合物を化合物源プレートから３８４ウェル培養プレートに移した。６、２４、４８および７２時間後、検出のためにプレートをインキュベータから取り出した。
【０８２０】
アネキシンＶアッセイのため、プレートをインキュベータから取り出し、室温で１５分間、平衡にした。培養培地を除去し、細胞をＰＢＳにより２回、洗浄した。事前混合したアネキシンＶ−ＦＩＴＣ作業溶液２０μＬを各ウェルに加えた。細胞を室温で２０分間インキュベートした。Ａｃｕｍｅｎ  ｅＸ３を使用してプレートを読み取り、ＦＩＴＣ−正細胞の数を計数した。相対活性は、以下の式に従って計算した：相対活性（％）＝１００％×（カウント数ｓａｍｐｌｅ／カウント数ｖｅｈｉｃｌｅ）。
結果
【０８２１】
ＣＶ−８６８４は、ＭｅＷｏ細胞とＷＭ１１５細胞の両方に６時間の処置をした後に、最高試験濃度でアポトーシスを誘導した。ＣＶ−８６８５は、ＷＭ１１５に対する２４時間の処置により、誘導作用を示した一方、両方の細胞のタイプにおいて、４８時間の処置により、アポトーシスが誘発されたように思われた。最後に、ＣＶ−８６８８は、両方の細胞タイプにおいて、処置の６時間以内に、用量依存的に誘導作用を示した。（図４Ａ〜４Ｌ）。
（実施例９）
マラセジンおよびマラセジン誘導体への曝露後の細胞生存率  −  ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイ
アッセイ手順
【０８２２】
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）２．０アッセイは、Ｐｒｏｍｅｇａから購入した。細胞播種、化合物源のプレートの調製および試験化合物への細胞の曝露は、実施例８に記載した通りに実施した。
【０８２３】
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイのため、プレートをインキュベータから取り出し、室温で１５分間、平衡にした。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬を実験前に解凍して、室温へ平衡にした。次に、検出のために、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬４０μＬを各ウェルに添加した（培養培地に対し１：１の比）。次に、プレートを室温で３０分間、インキュベートし、ＥｎＳｐｉｒｅ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）プレートリーダーを使用して読み取った。残存活性を、次式に従って計算した：残存活性（％）＝１００％×（発光量ｓａｍｐｌｅ−発光量ｂｋｇ）／（発光量ｖｅｈｉｃｌｅ−発光量ｂｋｇ）。
結果
【０８２４】
試験した細胞系の両方において、ＣＶ−８６８４は、細胞生存率の用量依存的な阻害を示したが、その阻害効果は、ＭｅＷｏ細胞の方に効力が高いようであった。ＣＶ−８６８５は、２４時間の処置後にのみ、ＷＭ１１５の細胞生存率に用量依存的な阻害効果を示した。ＣＶ−８６８８は、両細胞タイプの生存率を用量依存的に阻害した。陽性対照であるスタウロスポリンは、２４時間の処置後、両細胞系において、細胞生存率の１００％阻害を発揮した（図１３Ａ〜１３Ｋ）。
（実施例１０）
マラセジンおよびマラセジン誘導体の細胞毒性  −  乳酸デヒドロゲナーゼ放出アッセイ
検討の概要
【０８２５】
ＬＤＨアッセイは、損傷細胞から培地に放出された乳酸デヒドロゲナーゼ（「ＬＤＨ」）を、細胞毒性および細胞溶解のバイオマーカーとして定量的に測定するものである。
アッセイ手順
【０８２６】
ＣｙｔｏＴｏｘ−ＯＮＥ（商標）Ｈｏｍｏｇｅｎｏｕｓ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ  ＡｓｓａｙをＰｒｏｍｅｇａから購入した。細胞播種、化合物源のプレートの調製および試験化合物への細胞の曝露は、実施例８に記載した通りに実施した。
【０８２７】
ＬＤＨ放出アッセイのため、プレートをインキュベータから取り出し、室温で１５分間、平衡にした。次に、プレートを１，０００ＲＰＭで１分間、遠心分離した。細胞培養培地２０μＬを、新しい３８４ウェル黒色固体プレートに移した。次に、ＣｙｔｏＴＯＸ−ＯＮＥ（商標）２０μＬを各ウェルに加え、室温で１０分間、インキュベートした。その後、ストップ溶液１０μＬを各ウェルに加え、これらのプレートを５００ｒｐｍで１分間、撹拌した。プレートを、ＥｎＳｐｉｒｅ上で、５６０ｎｍの励起波長および５９０ｎｍの発光波長を使用して読み取った。相対活性は、以下の式に従って計算した：相対活性（％）＝１００％×（発光量ｓａｍｐｌｅ−発光量ｂｋｇ）／（発光量ｖｅｈｉｃｌｅ−発光量ｂｋｇ）。
結果
【０８２８】
ＣＶ−８６８４は、７２時間のインキュベート後、いずれの細胞系においても、有意な放出を誘導しなかった。ＣＶ−８６８５は、２４時間の処置後、ＷＭ１１５細胞からのＬＤＨ放出に対し用量依存的な誘導効果を示したが、ＭｅＷｏ細胞に対しては誘導効果を示さなかった。ＣＶ−８６８８は、最高試験濃度において、ＬＤＨ放出を誘導した（図１４Ａ〜１４Ｌ）。
（実施例１１）
マラセジンおよびマラセジン誘導体の芳香族炭化水素受容体活性化能
アッセイ手順
【０８２９】
ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−Ｌｕｃ細胞は、Ｐｈａｒｍａｒｏｎから購入し、Ｏｎｅ−Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイシステムは、Ｐｒｏｍｅｇａから購入し、ＤＭＥＭは、Ｈｙｃｌｏｎｅから購入し、ペニシリン／ストレプトマイシンは、Ｓｏｌａｂｉｏから購入した。
【０８３０】
安定にトランスフェクトされたＨｅｐＧ２細胞用の培養培地は、ＤＭＥＭに高グルコースおよびＬ−グルタミン、ならびに１０％ＦＢＳを補給することによって調製した。
【０８３１】
ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−Ｌｕｃ細胞を、Ｔ−７５フラスコ内で、３７℃、５％ＣＯ２、および９５％の相対湿度で培養した。細胞を８０〜９０％のコンフルエンスに到達させた後に、剥離および分割した。
【０８３２】
培養細胞は、５ｍＬ  ＰＢＳですすいだ。ＰＢＳを吸引除去し、１．５ｍＬのトリプシンをフラスコに加え、３７℃で約５分間、または細胞が剥離して浮き上がるまで、細胞をインキュベートした。過剰な血清含有培地を加えることによって、トリプシンを不活性化させた。
【０８３３】
細胞懸濁液を円錐管に移し、１２０ｇで１０分間、遠心分離して、細胞をペレットにした。細胞を適度な密度で播種培地中に再懸濁させた。４０μＬの細胞を３８４ウェル培養プレートに移した（５×１０３細胞／ウェル）。プレートを３７℃で２４時間、インキュベータ中に置いた。
【０８３４】
その後、試験化合物の保存溶液およびオメプラゾール陽性対照を調製した。Ｅｃｈｏ５５０を使用し、化合物溶液４０ｎＬをアッセイプレートに移した。次に、このプレートを化合物処置のためにインキュベータ内に戻し置いた。
【０８３５】
後に、２４時間の処置後に、プレートをインキュベータから取り出し、周囲温度で冷却した。培養培地のものと等量のＯｎｅ−Ｇｌｏ試薬３０μＬを各ウェルに加えた。細胞を少なくとも３分間、溶解し、次に照度計で測定した。
【０８３６】
ＸＬｆｉｔの非線形回帰解析を使用して用量応答をグラフにし、ＥＣ５０値も計算した。
結果
【０８３７】
ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイの結果を図１５Ａ〜１５Ｆに示す。
（実施例１２）
ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）アッセイ
検討の概要
【０８３８】
この検討の目的は、後の検討の用量選択のために、反復曝露後のＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）皮膚モデルに対する試験物品の潜在的な皮膚刺激を評価することである。毒性は、試験物品処置組織におけるＭＴＴ（臭化３−［４，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウム）の、陰性／溶媒対照処置組織と比較した相対変換率を測定することによって決定する。
【０８３９】
ＭａｔＴｅｋ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ａｓｈｌａｎｄ、ＭＡ）によって提供されているＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）皮膚モデルを本検討に使用する。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）の組織は、高度に分化した複数層のヒト表皮モデルを形成するように培養された、正常なヒト由来表皮ケラチノサイト（ＮＨＥＫ）およびメラノサイト（ＮＨＭ）からなる。共培養物中のＮＨＭは、自発的なメラニン形成を受けて、様々なレベルの色素沈着の組織をもたらす。培養物は、細胞培養インサート上の気液界面で増殖させて、皮膚モジュレーターを局所施用することが可能となる。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）モデルは、ｉｎ  ｖｉｖｏに似た形態学的特性および微細構造特性を示す。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織の基底細胞層に局在するＮＨＭは樹状であり、自発的にメラニン顆粒を産生し、それは、次第に組織の層を占めていく。したがって、この試験システムは、陰性対照と比較して、メラニン産生を阻害または刺激し得る物質をスクリーニングするために使用することができる。
【０８４０】
本検討の実験設計は、可能な場合、無希釈の試験物品（および／または必要に応じて投与用溶液）のｐＨの決定、および反復曝露後の相対的な組織生存率を決定するための決定的アッセイからなる。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）皮膚モデルを、合計７日間、試験物品に曝露する。４８時間（前回の処置から４８±２時間の時間枠内）毎に試験物品をＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）皮膚モデルに局所施用する。試験物品の毒性は、対照および試験物品処置組織におけるＭＴＴのＮＡＤ（Ｐ）Ｈ依存性ミクロソーム酵素還元によって（および、比較的低い程度のＭＴＴのコハク酸デヒドロゲナーゼ還元によって）決定する（Berridge  et  al.,  1996）。データは、相対的生存率の形態（陰性対照と比較したＭＴＴ変換率）で示される。
物質
【０８４１】
ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）維持培地（ＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ）およびＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）皮膚モデル（ＭＥＬ−３００−Ａ）は、ＭａｔＴｅｋ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによって供給された。１％コウジ酸（滅菌脱イオン水中で調製）およびＭＴＴ（臭化３−［４，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウム）は、Ｓｉｇｍａによって供給された。２ｍＭのＬ−グルタミンを含有するダルベッコの改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（ＭＴＴ添加培地）は、Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌによって供給された。イソプロパノールは、Ａｌｄｒｉｃｈによって供給された。Ｃａ＋＋およびＭｇ＋＋を含まない滅菌ダルベッコのリン酸緩衝食塩水（ＣＭＦ−ＤＰＢＳ）は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎまたは同等のところによって供給された。滅菌脱イオン水は、Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌまたは同等のところによって供給された。ＤＭＳＯは、ＣｉＶｅｎｔｉ  Ｃｈｅｍによって供給された。
アッセイ手順
【０８４２】
試験物品は、一般に、無希釈で試験するか、またはスポンサーによる指示通りに試験する（プロトコール添付書１を参照されたい）。１０マイクロリットル（１０μＬ）または２５μＬの各試験物品を、組織上に直接、上側表面を覆うように施用する。試験物品の性質（液体、ゲル、クリーム、フォームなど）に応じて、試験物品を組織の表面上に一様に広げることができる投与装置、メッシュまたは他の補助具の使用が必要となることがある。
【０８４３】
投与日には、適正な体積のＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ（または溶解度試験の間に決定された代替溶媒）を使用して、各試験物品を少なくとも２００倍に希釈する。ＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ中での新たな希釈液を投与毎に調製する。投与用溶液の調製のために実施する最終希釈は、上記の溶解度評価から決定し、検討ワークブックに記録する。
【０８４４】
ＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ中に０．５％（ｖ／ｖ）として希釈したＤＭＳＯを、ビヒクル対照として使用し、試験物品およびアッセイ対照に使用したものと同じ手順に基づいて、組織上に投与する（１０μＬおよび２５μＬの用量）。
【０８４５】
７日間の試験の間、４８時間（前回の処置から４８±２時間の時間枠内）毎に試験物品をＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織に局所施用する。それぞれ１０および２５マイクロリットルの各試験物品を、各組織に施用する。２５マイクロリットルの陽性および陰性対照をそれぞれ各組織に施用する。
【０８４６】
可能な場合、無希釈の液状試験物品（および／または、適切な場合、投与用溶液）のｐＨを決定する。ｐＨは、ｐＨ試験紙（例えば、推定する０〜１４のｐＨ範囲を有するもの、および／またはより正確な値を決定する５〜１０のｐＨ範囲を有するもの）を使用して決定する。範囲が狭い方のｐＨ試験紙の典型的なｐＨ増分は、約０．３〜０．５ｐＨの単位である。ｐＨ試験紙に対する最大増分は１．０ｐＨの単位である。
【０８４７】
決定的アッセイは、陰性対照および陽性対照を含む。アッセイ陰性対照に指定したＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、２５μＬの滅菌脱イオン水で処置する。アッセイ陽性対照に指定した組織への投与には、２５マイクロリットルの１％コウジ酸（滅菌脱イオン水中で調製し、調製時にろ過する）を使用する。１％コウジ酸は、調製の２時間以内に使用するまで、アルミニウムホイルで覆った管中に保管する。陰性および陽性対照の曝露時間は、試験物品に対して使用した時間と同じである。
【０８４８】
各試験物品が、ＭＴＴを直接還元する能力を評価することが必要である。ＭＴＴ溶液１．０ｍｇ／ｍＬを、下記の通り、ＭＴＴ添加培地中で調製する。約２５μＬの試験物品をＭＴＴ溶液１ｍＬに加え、この混合物を暗所中３７℃±１℃で１〜３時間、インキュベートする。陰性対照である滅菌脱イオン水２５μＬを同時に試験する。ＭＴＴ溶液の色が青色／紫色に変わった場合、試験物品はＭＴＴを還元したと推定する。水不溶性試験物質は、試験物品と培地との間の界面でのみ、直接的な還元（暗色化）を示すことができる。
【０８４９】
試験物品に関するＭＴＴ直接還元試験は、無関係な検討において、以前に実施されていた可能性がある。このような場合、そのＭＴＴ直接還元試験の結果を、この具体的な検討に使用してもよく、初期検討を参照する。
【０８５０】
組織曝露：培養の開始後、少なくとも１６時間時に、デジタルカメラを使用して２種のＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織（０日目での未処置と見なす）の写真を撮り、アッセイのゼロ時間での組織の色素沈着の程度を目視評価する一助とする。組織の画像を収集するために使用した正確な手順を、検討ワークブックおよび報告書に明記する。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織をＣＭＦ−ＤＰＢＳによりすすぎ、滅菌吸収紙上で水分を吸い取って乾燥させ、過剰な液体を除去する。すすぎ後、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を適正なＭＴＴ含有ウェルに移し、ＭＴＴアッセイの項目に記載している通りにＭＴＴアッセイにおいて処理する。
【０８５１】
培養の開始後、少なくとも１６時間時に、事前加温した新たなＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ０．９ｍＬを含有する新しい６ウェルプレート上に組織を移す。この試験は７日間の時間枠にわたり行う。２つの組織を、初日および４８時間（前回の処置から４８＋／−２時間の時間枠内）毎に、それぞれ１０および２５マイクロリットルの各試験物品で局所的に処置する。培地は毎日（前回の再供給から２４＋／−２時間の時間枠内）新しくする。組織を、事前加温した新たなＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ０．９ｍＬを含有する新しい６ウェルプレートに移す。
【０８５２】
２つの組織を、初日および４８時間（前回の処置から４８＋／−２時間の時間枠内）毎に、それぞれ２５μＬの陽性および陰性対照で局所的に処置する。培地は毎日（前回の再供給から２４＋／−２時間の時間枠内）新しくする。組織を、事前加温した新たなＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ０．９ｍＬを含有する新しい６ウェルプレートに移す。組織を、空気中５±１％ＣＯ２の加湿雰囲気中、３７±１℃（標準培養条件）で適正な曝露時間、インキュベートする。
【０８５３】
投与日に、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、最初にＣＭＦ−ＤＰＢＳ約５００μＬを使用して３回、穏やかにすすぎ、いずれの残留試験物品も除去する。次に、組織を、事前加温した新たなＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ０．９ｍＬを含有する新しい６ウェルプレートに移し、適正な試験物品、陰性または陽性対照を投与する。組織を、空気中５±１％ＣＯ２の加湿雰囲気中、３７±１℃（標準培養条件）で適正な曝露時間、インキュベートする。正確なすすぎ手順は、検討ワークブックに記録する。
【０８５４】
７日間の試験の終了時に、デジタルカメラを使用して陰性または陽性対照、および各試験物品を投与したＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織の写真を撮り、アッセイ終了時（７日目）の組織の色素沈着の程度の目視評価の一助とする。組織の画像を収集するために使用した正確な手順を、検討ワークブックおよび報告書に明記する。次に、以下に示されている、ＭＴＴ還元によって、組織の生存率を決定する。
【０８５５】
ＭＴＴアッセイ：ＰＢＳ中で調製したＭＴＴの１０×保存溶液（回分調製時にろ過した）を、使用前２時間以内に解凍し、温かいＭＴＴ添加培地に希釈して、１．０ｍｇ／ｍＬの溶液を生成する。予めラベルを付けた２４ウェルプレートの各表示ウェルにＭＴＴ溶液３００μＬを加える。
【０８５６】
曝露時間後に、ＭＴＴアッセイ用に指定した各ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織をＣＭＦ−ＤＰＢＳですすぎ、滅菌吸収紙上で水分を吸い取って乾燥させ、過剰な液体を除去する。すすぎ後、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を適正なＭＴＴ含有ウェルに移す。２４ウェルプレートを、標準条件で３±０．１時間、インキュベートする。
【０８５７】
３±０．１時間後、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、滅菌吸収紙上で水分を吸い取り、過剰な液体を除去し、各指定ウェル中のイソプロパノール２．０ｍＬを含有する予めラベルを付けた２４ウェルプレートに移す。このプレートをパラフィルムで覆い、最後の曝露時間まで冷蔵庫（２〜８℃）内で保管して収穫する。必要な場合、ＭＴＴを抽出する前に、プレートを冷蔵庫内に一晩保管してもよい（または最後の曝露時間後、最大２４時間保管し、収穫する）。次に、プレートを室温で少なくとも２時間、振とうする。抽出期間の終了時に、細胞培養インサート内の液体を、細胞培養インサートを取り出したウェル内にデカンテーションして入れる。抽出溶液を混合し、２００μＬを９６ウェルプレートの適正なウェルに移す。２００μＬのイソプロパノールを、ブランクと指定したウェルに加える。各ウェルの５５０ｎｍでの吸光度（ＯＤ５５０）をＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｖｍａｘプレートリーダー（ＡＵＴＯＭＩＸ機能をオンにして）で測定する。
【０８５８】
試験物品がＭＴＴを還元することが示される場合、すすぎ後に組織に結合した状態の試験物品だけが、偽のＭＴＴ還元シグナルをもたらし、問題を呈する。考えられる残留試験物品がＭＴＴを直接還元するように作用していないことを実証するために、決定的アッセイで機能確認を行い、試験物質が組織に結合して、偽のＭＴＴ還元シグナルを生じることがないことを示す。
【０８５９】
残留試験物品がＭＴＴを直接還元するように作用しているかどうかを判定するために、凍結死滅させた対照組織を使用する。凍結死滅組織は、ＩＩＶＳにて、未処置のＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）／ＥｐｉＤｅｒｍ（商標）（メラノサイトを含まないＭｅｌａｎｏｄｅｒｍ（商標））組織を−２０℃の冷凍庫内に少なくとも一晩入れ、室温に解凍し、次に再凍結することによって調製する。組織は、一旦、死滅すると、冷凍庫内で無期限に保管してもよい。凍結死滅組織は、ＭａｔＴｅｋ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから既に調製済みのものを入手し、使用するまで−２０℃の冷凍庫内に保管することができる。残留試験物品の還元について試験するために、通常の様式で死滅組織を試験物品で処置する。すべてのアッセイ手順は、生存組織と同じ方法で実施する。死滅組織内の残留ＮＡＤＨおよび関連酵素から、少量のＭＴＴ還元が予想されるので、滅菌脱イオン水で処置した少なくとも１つの死滅対照（陰性死滅対照）を並行して試験する。
【０８６０】
試験物品で処置した死滅対照において、ＭＴＴ還元がほとんどまたは全く観察されない場合、試験物品で処置した生存組織に観察されるＭＴＴ還元は、生存細胞に起因し得る。処置した死滅対照においてかなりのＭＴＴ還元がある場合（処置した生存組織の量に対して）、化学還元を説明する追加ステップを講じなければならないか、またはこの試験物品は、このシステムでは試験不能と見なすことができる。死滅対照からのＯＤ５５０値は、下記の通りに分析する。
【０８６１】
吸光度の生データを取り込み、印刷ファイルとして保存し、Ｅｘｃｅｌのスプレッドシートにインポートする。ブランクのウェルの平均ＯＤ５５０値を計算する。陰性対照の補正後の平均ＯＤ５５０値は、それらの平均ＯＤ５５０値からブランクのウェルの平均ＯＤ５５０値を減算することによって求まる。個々の試験物品に曝露したものおよび陽性対照に曝露したものの補正後のＯＤ５５０値は、それぞれからブランクのウェルの平均ＯＤ５５０値を減算することによって求める。すべての計算は、Ｅｘｃｅｌのスプレッドシートを使用して実施する。処置群レベルでの最終エンドポイント解析を計算するため、議論したアルゴリズムを実施するが、同じ計算を個々の反復試験に適用することができる。
補正した試験物品の曝露ＯＤ５５０＝試験物品の曝露ＯＤ５５０−ブランク平均ＯＤ５５０
【０８６２】
死滅対照（ＫＣ）を使用する場合、試験物品の残留物によって直接還元されたＭＴＴの量を補正するために、以下の追加計算を実施する。陰性対照である死滅対照の生ＯＤ５５０値を、試験物品で処置した死滅対照の各々に対する生のＯＤ５５０値から減算し、試験物品で処置した死滅対照の正味のＯＤ５５０値を求める。
各試験物品ＫＣの正味のＯＤ５５０＝試験物品ＫＣの生ＯＤ５５０−陰性対照ＫＣの生ＯＤ５５０
【０８６３】
正味のＯＤ５５０値は、試験物品残留物による特定の曝露時間での直接還元により還元されたＭＴＴの量を表す。一般に、正味のＯＤ５５０値が、０．１５０より大きい場合、ＭＴＴ還元の正味の量を、処置した生存組織の補正後のＯＤ５５０値から減算して、最終補正後のＯＤ５５０値を得る。次に、これらの最終補正後のＯＤ５５０値を使用して、対照生存率の％を求める。
最終補正後のＯＤ５５０＝補正した試験物品のＯＤ５５０（生存）−正味のＯＤ５５０試験物品（ＫＣ）
【０８６４】
最後に、以下の対照の％の計算を行う：
生存率（％）＝［（試験物品または陽性対照の最終的な補正後のＯＤ５５０）／（陰性対照の補正後の平均ＯＤ５５０）］×１００
結果
【０８６５】
ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）アッセイの結果を図１６Ａ〜１６Ｋに示す。マラセジン、化合物Ｉおよび化合物ＩＩにより処置した組織により、実験の７日目に色素沈着の低減が実証された。図１７Ａ〜１７Ｋは、列挙した処置に曝露したＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）試料の１５×の倍率の画像を示す。
（実施例１３）
ゼブラフィッシュアッセイ
アッセイ手順
【０８６６】
化合物：化合物は、検討スポンサーによって、水／ＰＢＳまたはＤＭＳＯ中の最大可溶濃度でのマスター保存（ＭＳ）溶液として提供される。
【０８６７】
胚を採取する標準手順：Ｐｈｙｌｏｎｉｘ  ＡＢゼブラフィッシュを、自然交配によって、またはＭａｓｓ  Ｅｍｂｒｙｏ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＭＥＰＳ、Ａｑｕａｔｉｃ  Ｈａｂｉｔａｔｓ）を使用して生成する。雌のゼブラフィッシュ一匹あたり約５０匹のゼブラフィッシュを生成する。ゼブラフィッシュは、魚用の水中２８℃に維持する。ゼブラフィッシュを清浄して（死亡ゼブラフィッシュを取り除く）、発生段階によって分類する。ゼブラフィッシュは付着している卵黄嚢から栄養を受けるので、受精後（ｄｐｆ）、６日間は給餌を必要としない。
【０８６８】
化合物溶解度：マスター保存液（ＭＳ）（最高濃度を使用する）を、純粋なＤＭＳＯに希釈し、サブ保存溶液（ＳＳ）、すなわち、１０、５０、１００、２００、３００ｍＭなどにする。Ｐｈｙｌｏｎｉｘによって供給される魚用の水［脱イオン水１リットルあたり２００ｍｇのＩｎｓｔａｎｔ  Ｏｃｅａｎ  Ｓｅａ  Ｓａｌｔ（Ａｑｕａｒｉｕｍ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）；２．５ｍｇ／リットルのＮｅｕｔｒａｌ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ（Ｓｅａｃｈｅｍ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．）でｐＨ６．６〜７．０に維持する；導電率は８５０〜９５０μＳである］を、試験用容器に４ｍｌ／容器で分注する。
【０８６９】
試験化合物溶液（ＴＳ）を生成するため、各ＳＳ４μｌを魚用の水に直接、加える。例：１０ｍＭのＳＳ４μｌを魚用の水に加えて、１０μＭのＴＳを生成する。最終ＤＭＳＯ濃度は０．１％となる。代替的に、同じ最終ＴＳおよびＤＭＳＯ濃度を得るために、ＳＳ１０μｌを１０ｍｌ／容器の魚用の水に加えることができる。最大１％のＤＭＳＯを耐容可能なアッセイの場合、ＳＳ４０μｌを使用して、１００μＭのＴＳを生成することができる。１０ｍｌの魚用の水を使用する場合、同じ最終ＴＳおよびＤＭＳＯ濃度を得るために、ＳＳの体積を比例して増量すべきである。この溶液を、各アッセイについて指定した時間、２８℃でインキュベートし、沈殿物の存在について、毎日、目視検査する。
【０８７０】
最大許容濃度（ＭＴＣ）：化合物の致死率の標準基準としてＭＴＣ（ＬＣ１０）を使用し、１０種の化合物濃度を使用して決定する。最大可溶化合物濃度を決定した後、検討スポンサーが、１０種の濃度を選択する。
【０８７１】
卵膜を有する（chorionated）約２ｄｐｆのＰｈｙｌｏｎｉｘ野生型ＡＢゼブラフィッシュ３０匹を、４ｍｌ／ウェルの魚用の水、および化合物の溶解度に応じて０．１〜１％の範囲の濃度のＤＭＳＯを含有する６ウェルマイクロプレートのウェルに分配する。
【０８７２】
１０種の濃度（すなわち、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１、５、１０、５０、１００および５００μＭ、または化合物の溶解度によって許容される濃度まで）を最初に試験する。必要な場合、追加のより高い（最大２０００μＭ）またはより低い（最低０．００１μＭ）の濃度を試験する。
【０８７３】
ゼブラフィッシュを各濃度の試験化合物と共に、２８℃で３日間、暗所中でインキュベートする。未処置および０．１〜１％のＤＭＳＯで処置したゼブラフィッシュを、アッセイおよびビヒクル対照として使用する。致死率（％）を計算するために、処置後に、死亡ゼブラフィッシュの数を毎日計数して取り除く。５ｄｐｆに、死んだ動物を計数して、致死率（％）を計算する（＝死亡ゼブラフィッシュの総数／３０）。死亡ゼブラフィッシュが分解した場合、死亡ゼブラフィッシュの数は、生存ゼブラフィッシュの数を計数することによって推定することに留意されたい。
【０８７４】
ＭＴＣを推定するために、ＥＸＣＥＬソフトウェアを使用して濃度に対する致死率（％）をプロットすることによって、致死率曲線を生成する。ＭＴＣの平均値およびＳＤを得るために、実験を３回、実施する。
【０８７５】
ゼブラフィッシュの皮膚の色素沈着に及ぼす化合物の効果を目視評価する：黄色素胞、虹色素胞および黒色素胞（メラノサイト）を含むゼブラフィッシュの皮膚色素細胞は、神経堤細胞に由来する。ゼブラフィッシュでは、分化した皮膚色素前駆細胞は、約２４ｈｐｆに色素を発現する。この検討の注目点は、皮膚の表面上の黒色色素であるメラニンを発現するメラノサイトである。メラノサイトは、最初に黒色の小さい斑として背側頭部領域に現れる。ゼブラフィッシュが発育するにつれて、斑の数は増加し、融合して尾部領域まで延びた帯を形成する。対照的に、突然変異体であるアルビノのゼブラフィッシュは、希薄な皮膚の色素沈着を示す。化合物を２ｄｐｆに投与し、化合物が、５ｄｐｆまでに完了する胚の色素沈着の連続過程を停止させるかどうかを評価する。３種の濃度、すなわちＭＴＣ、５０％ＭＴＣおよび２５％ＭＴＣを各化合物について試験する。
【０８７６】
自己孵化した２ｄｐｆのＰｈｙｌｏｎｉｘ野生型ＡＢゼブラフィッシュ３０匹を、各化合物濃度で３日間、処置する。未処置ゼブラフィッシュおよび０．１％ＤＭＳＯで処置したゼブラフィッシュを対照として使用する。陽性対照：フェニルチオウレア（ＰＴＵ、０．０３％）。
【０８７７】
解剖用光学顕微鏡を使用して、ゼブラフィッシュを毎日、目視検査する。化合物およびＰＴＵで処置したゼブラフィッシュを、未処置ゼブラフィッシュおよびビヒクル処置対照ゼブラフィッシュと比較する。色素沈着の減少を示すゼブラフィッシュの数を毎日計数し、試験動物の％として表す。代表的な画像を提示する。色素沈着を低減するための、最適な化合物濃度および処置時間を特定するため、時間（ｄｐｆ）に対する皮膚の色素沈着の低下を示すゼブラフィッシュの％をプロットすることによって速度曲線を生成する。フィッシャーの直接確率検定を使用して、化合物の効果が有意であるかどうかを判定する（Ｐ＜０．０５）。
【０８７８】
ゼブラフィッシュの皮膚の色素沈着に及ぼす化合物の効果の追加的な目視評価を、０．１、１および３μＭで処置した後に実施する。自己孵化した２ｄｐｆのＰｈｙｌｏｎｉｘ野生型ＡＢゼブラフィッシュ３０匹を、各化合物濃度で３日間、処置する。未処置ゼブラフィッシュおよび０．１％ＤＭＳＯで処置したゼブラフィッシュを対照として使用する。陽性対照：フェニルチオウレア（ＰＴＵ、０．００３％）。解剖用光学顕微鏡を使用して、ゼブラフィッシュを毎日、目視検査する。化合物およびＰＴＵで処置したゼブラフィッシュを、未処置ゼブラフィッシュおよびビヒクル処置対照ゼブラフィッシュと比較する。
【０８７９】
５ｄｐｆにおいて、色素沈着の低下を示すゼブラフィッシュの数を計数し、試験動物の％として表す。代表的な画像を提示する。色素沈着を低下させるため、最適な化合物濃度および処置時間を特定するため、濃度に対する皮膚の色素沈着の低下を示すゼブラフィッシュの％をプロットすることによって速度曲線を生成する。フィッシャーの直接確率検定を使用して、化合物の効果が有意であるかどうかを判定する（Ｐ＜０．０５）。
【０８８０】
ゼブラフィッシュの皮膚の色素沈着に及ぼす化合物の効果の定量：目視評価からの結果に基づいて、本発明者らは、最適な条件（濃度、化合物処置時間）を使用して、ゼブラフィッシュの皮膚の色素沈着に及ぼす化合物の効果を定量する。
【０８８１】
目視評価からの結果によって決定された最適段階にあるＰｈｙｌｏｎｉｘ野生型ＡＢゼブラフィッシュ２０匹を、最適な化合物濃度で処置する。未処置ゼブラフィッシュおよび０．１％ＤＭＳＯで処置したゼブラフィッシュを対照として使用する。陽性対照：フェニルチオウレア（ＰＴＵ、０．０３％）。
【０８８２】
ＳＰＯＴカメラを２×で使用し、背側から見たゼブラフィッシュ全体の画像を取り込む。Ａｄｏｂｅ  Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐの選択機能を使用して、背側の頭部および躯幹部領域を関心領域（ＲＯＩ）として定義する。ＲＯＩ内の黒色の皮膚の色素沈着を、Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐの強調表示機能を使用して強調表示する。総色素シグナル（ＰＳ）（ピクセル）を、Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐのヒストグラム機能を使用して決定する。
【０８８３】
化合物がゼブラフィッシュの成長に影響を及ぼす場合、体長（Ｌ）および躯幹部の幅（Ｗ）がより小さくなり、それによってＲＯＩ面積および最終ＰＳが影響を受ける。したがって、本発明者らは、最終シグナル（ＦＳ）の測定値を、ＦＳ＝ＰＳ／Ｌ×Ｗを使用して正規化する。
【０８８４】
未処置およびビヒクルで処置したゼブラフィッシュは、同様のＦＳを示し、ビヒクルが影響を及ぼさないことを実証すると予想される。ＰＴＵで処置したゼブラフィッシュは、低いＦＳを示して、アッセイを確証することが予想される。化合物で処置したゼブラフィッシュを、ビヒクルで処置した対照ゼブラフィッシュと比較する。
【０８８５】
化合物の効果が有意であるかどうか（Ｐ＜０．０５）を判定するために、スチューデントのｔ検定を使用して、化合物で処置したゼブラフィッシュの平均ＦＳをビヒクルで処置したゼブラフィッシュの平均ＦＳと比較する。
【０８８６】
ゼブラフィッシュの皮膚の色素沈着に及ぼす化合物の効果の追加的な定量を、０．５および１．５μＭの化合物濃度で処置した後に実施する。
【０８８７】
２ｄｐｆのＰｈｙｌｏｎｉｘ野生型ＡＢゼブラフィッシュ２０匹を、０．５および１．５μＭの化合物濃度で処置する。未処置ゼブラフィッシュおよび０．１％ＤＭＳＯで処置したゼブラフィッシュを対照として使用する。陽性対照：フェニルチオウレア（ＰＴＵ、０．００３％）。
【０８８８】
ＳＰＯＴカメラを２×で使用し、背側から見たゼブラフィッシュ全体の画像を取り込む。Ａｄｏｂｅ  Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐの選択機能を使用して、背側の頭部を関心領域（ＲＯＩ）として定義する。ＲＯＩ内の黒色の皮膚の色素沈着を、Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐの強調表示機能を使用して強調表示する。総色素シグナル（ＰＳ）（ピクセル）を、Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐのヒストグラム機能を使用して決定する。
【０８８９】
化合物がゼブラフィッシュの成長に影響を及ぼす場合、体長（Ｌ）はより短くなり、躯幹部の幅（Ｗ）はより小さくなり、それによってＲＯＩ面積および最終ＰＳは影響を受ける。したがって、本発明者らは、最終シグナル（ＦＳ）の測定値を、ＦＳ＝ＰＳ／Ｌ×Ｗを使用して正規化する。
【０８９０】
未処置およびビヒクルで処置したゼブラフィッシュは、同様のＦＳを示し、ビヒクルは効果がないことが確認されると予想される。ＰＴＵで処置したゼブラフィッシュは、低いＦＳを示して、アッセイを確証すると予想される。化合物で処置したゼブラフィッシュを、ビヒクルで処置した対照ゼブラフィッシュと比較する。
【０８９１】
化合物の効果が有意であるかどうか（Ｐ＜０．０５）を判定するために、スチューデントのｔ検定を使用して、化合物で処置したゼブラフィッシュの平均ＦＳをビヒクルで処置したゼブラフィッシュの平均ＦＳと比較する。
結果
【０８９２】
化合物ＩＩに曝露したゼブラフィッシュについての目視評価の結果を、図１８Ａ〜１８Ｆおよび１９Ａ〜１９Ｆに示す。検討の目視評価部分からの結果を総括したチャート図を図２０に示す。
【０８９３】
化合物ＩＩに曝露したゼブラフィッシュに関する、関心のある定量的評価領域および結果を図２１Ａ〜２１Ｅおよび図２２Ａ〜２２Ｂに示す。
（実施例１４）
ＤＭＳＯおよび細胞培養培地でのマラセジンおよびマラセジン誘導体の安定性
【０８９４】
試験化合物をＤＭＳＯおよび培養培地中１００μＭで調製した。この溶液を室温で２時間インキュベートし、ＬＣ−ＭＳを使用して分析した。ピーク面積を使用して、溶媒中に残存する化合物を評価した。
結果
【０８９５】
ＬＣ−ＭＳの結果が、図２３Ａ〜２３Ｊに示されている。この結果から、２時間のインキュベート後に化合物が培養培地中で安定であることが示される。
（実施例１５）
マラセジンおよびマラセジン誘導体の合成
【０８９６】
マラセジン（ＣＶ−８６８４）、その環化誘導体インドロ［３，２−ｂ］カルバゾール（ＣＶ−８６８５）、化合物Ｉ（ＣＶ−８６８６）、化合物ＩＶ（ＣＶ−８６８７）、化合物ＩＩ（ＣＶ−８６８８）およびマラセジン前駆体は、これらのどちらも、参照により、本明細書において完全に組み込まれている、米国特許公開第２０１７／０２６０１３３Ａ１号として公開されている、米国特許出願第１５／４５５，９３２号に記載されているプロトコールに準拠して合成した。
化合物Ｃ（ＣＶ−８８０２）の合成
化合物１０の合成
【０８９７】
図２４Ａに示されている通り、２−ヨード−４−メチルアニリン（１０ｇ、０．０４２９ｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（２００ｍＬ）溶液に、０℃で、内温を５℃未満に維持しながら、３０分間かけて、ＮａＨＭＤＳ（９４．４２ｍＬ、ＴＨＦ中１Ｍ、０．０９４４ｍｏｌ）をゆっくりと加えた。０℃で３０分間、撹拌した後、内温を５℃未満に維持しながら、３０分間かけて、ＢＯＣ無水物（１０．２９ｇ、０．０４７２ｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液をゆっくりと加えた。この反応混合物を室温まで温め、１時間、撹拌した。飽和ＮＨ４Ｃｌ（２００ｍＬ）を加えて、この反応物をクエンチした。有機層を分離して、水（２００ｍＬ）により洗浄した。合わせた水層を酢酸エチル（２×１５０ｍＬ）により抽出し、層を分離した。酢酸エチル層を有機層と一緒にして、真空で濃縮すると、褐色油状物が得られた。粗製化合物をカラムクロマトグラフィー（０〜５％の酢酸エチル／ヘキサン）によって精製した。化合物１０が、淡黄色液体（１３．１ｇ、９１％）として得られた。
化合物１１の合成
【０８９８】
ＤＭＦ（１００ｍＬ）に溶解したブタ−３−イン−２−オール（２５ｍＬ、０．３１９ｍｏｌ）を０℃でＤＭＦ（１００ｍＬ）中のＮａＨ（１９．２ｇ、０．４７８ｍｏｌ）に加えた。この反応混合物に３０分間かけてＤＭＳ（４５．２ｍＬ、０．４７８ｍｏｌ）を加え、０℃で３０分間、撹拌した。この反応混合物を室温まで温め、１時間、撹拌し、その後に、１０℃まで冷却し、酢酸（１９．２ｍＬ、０．３１９ｍｏｌ）を１０分間かけて加え、１時間、撹拌した。この反応混合物を水（６００ｍＬ）により希釈し、ジエチルエーテル（４００ｍＬ）により抽出した。有機層を分離して無水硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過して濃縮した。所望の化合物を６４〜６８℃で留去すると、純粋な化合物１１が７ｇｍ（２３％収率）得られた。
化合物１２の合成
【０８９９】
化合物１０（６．０ｇ、０．０１８ｍｏｌ）、化合物１１（１．８１ｇ、０．０２１６ｍｏｌ）の脱気したトリエチルアミン（１００ｍＬ）溶液に、室温で、ヨウ化銅（０．３４ｇ、０．００１８ｍｏｌ）およびＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）４（０．６３２３ｇ、０．０００９ｍｏｌ）を加え、６時間、撹拌した。この反応は完了した（１０％酢酸エチル／ヘキサンを使用するＴＬＣによりモニタリングした）。この反応混合物を酢酸エチル（２００ｍＬ）により希釈し、反応混合物を水、飽和ＮａＣｌ（１００ｍＬ）により洗浄してＮａ２ＳＯ４で脱水した。この溶媒をろ過して真空で濃縮すると、褐色油状物が得られた。粗製化合物をカラムクロマトグラフィー（１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製した。化合物１２が、淡黄色液体（４．８ｇ、９６％）として得られた。
化合物１３の合成
【０９００】
丸底フラスコに、ジオキサン（２００ｍＬ）中のＰｔＣｌ２（０．４４ｇ、０．００１６６ｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（２．６４ｇ、０．０２４９ｍｏｌ）、インドール（３．８９ｇ、０．０３３２ｍｏｌ）および化合物１２（４．８ｇ、０．０１６６ｍｏｌ）を投入した。このフラスコを窒素により脱気し、封止して一晩、１００℃まで加熱した。溶媒を減圧下で蒸発させた。この反応混合物を酢酸エチル（３００ｍＬ）により希釈し、この反応混合物を水（２００ｍＬ）、飽和ＮａＣｌ（２００ｍＬ）により洗浄してＮａ２ＳＯ４で脱水した。この溶媒をろ過して真空で濃縮すると、褐色油状物が得られた。粗製化合物をカラムクロマトグラフィー（１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製した。化合物１３は、淡褐色固体（２．０４ｇ、３４％）として得られた。
化合物１４の合成
【０９０１】
メタノール（３０ｍＬ）と水（１０ｍＬ）との混合物中の化合物１３（２．０ｇ、０．００５５ｍｏｌ）溶液に、周囲温度で炭酸カリウム（２．３ｇ、０．０１６６ｍｏｌ）を加えた。得られた懸濁液を一晩、加熱して還流した。この反応混合物を周囲温度まで冷却し、溶媒を真空で濃縮した。残留物を酢酸エチル（１００ｍＬ）に溶解し、水（１００ｍＬ）およびブライン（１００ｍＬ）により洗浄し、次に、脱水（硫酸ナトリウム）してろ過し、溶媒を真空で濃縮すると、褐色固体が得られた。粗製化合物をカラムクロマトグラフィー（２０％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製した。化合物１４は、オフホワイト色の固体（０．８ｇ、５４％）として得られた。
化合物Ｃの合成
【０９０２】
アルゴン下、乾燥した１００ｍＬの２つ口丸底フラスコに、０℃でジメチルホルムアミド（５ｍＬ）を加えた。内温を５℃未満に維持しながら、１０分間かけて、ＰＯＣｌ３（２４６ｍｇ、１．６０５８ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。０℃で３０分間、撹拌した後、内温を５℃未満に維持しながら、１０分間かけて、化合物１４（４００ｍｇ、１．４５９ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（２ｍＬ）溶液をゆっくりと加えた。得られた混合物を、室温で一晩、撹拌した。反応は完了した（２０％酢酸エチル／ヘキサンを使用するＴＬＣによりモニタリングした）。この反応混合物を飽和水性炭酸水素ナトリウム（１００ｍＬ）に注ぎ入れ、１時間、撹拌した。得られた混合物を酢酸エチル（２×１００ｍＬ）により抽出した。有機層を合わせて、水（１００ｍＬ）、飽和ＮａＣｌ（１００ｍＬ）により洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。この溶媒をろ過して真空で濃縮すると、褐色固体が得られた。粗製化合物をカラムクロマトグラフィー（０〜２０％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製した。
【０９０３】
一部の実験では、このプロトコールの結果は、化合物Ｃ、化合物Ｃ１および化合物Ｃ２（「未知組成物」）のうちの１つまたは複数を含む組成物であった。
化合物Ｋ（ＣＶ−８８０３）の合成
【０９０４】
図２４Ｂに示されている通り、マラセジン（４０ｍｇ、０．１４６ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）溶液を０℃に冷却した。この溶液に０℃でＮａＢＨ４（２７．６ｍｇ、０．７２９ｍｍｏｌ）を加え、激しく撹拌した。３時間後、この反応混合物を室温まで温め、メタノールをｒｏｔａｖａｐｏｒにより除去する。この反応混合物をＤＣＭ（２０ｍＬ）により希釈し、水（２０ｍＬ）中の２０％酢酸およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離して、無水硫酸ナトリウムで脱水した。固体をろ別し、このろ液を濃縮すると、３４ｍｇの化合物Ｋが得られた。
化合物Ａ（ＣＶ−８８０４）の合成
【０９０５】
図２４Ｃに示されている通り、化合物ＩＩ（１２０ｍｇ、０．４１７ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）溶液を０℃に冷却した。この溶液に０℃でＮａＢＨ４（７８．７５ｍｇ、２．０８３ｍｍｏｌ）を加え、激しく撹拌した。３時間後、この反応混合物を室温まで温め、メタノールをｒｏｔａｖａｐｏｒにより除去する。この反応混合物をＤＣＭ（２０ｍＬ）により希釈し、水（２０ｍＬ）中の２０％酢酸およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離して、無水硫酸ナトリウムで脱水した。固体をろ別し、このろ液を濃縮すると、１０１ｍｇの化合物Ａが得られた。
化合物Ｅ（ＡＢ１２５０８）の合成
【０９０６】
図２４Ｄにおいて示されている通り、ＭｅＯＨ（３５０ｍＬ）中のインドール１（１０ｇ、８５．４ｍｍｏｌ）に、シクロプロピルアルデヒド２（２．５ｇ、３５．６ｍｍｏｌ）、次いで１Ｎ  ＨＣｌ水溶液（１７８ｍＬ）を加えて、１時間、７０℃に加熱した。溶媒を除去して、ＤＣＭ（２×）で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水して濃縮した。ＦＣＣにより物質を単離すると、異性体混合物１．０：０．７３（２：３’：３：３’）として、２．４７ｇの淡いオレンジ色固体になった。
【０９０７】
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の前の混合物（１．４４ｇ、５．０ｍｍｏｌ）を０℃でＤＭＦ（１５ｍＬ）中のＰＯＣｌ３（９４７ｍｇ、６．０ｍｍｏｌ）に加えた。この反応混合物を室温まで温め、一晩、撹拌した。次に、この反応混合物をＮａＨＣＯ３（飽和）でクエンチしてＥｔＯＡｃ（２×）により抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、ＦＣＣにより、次に、分取ＨＰＬＣにより精製した。淡緑色固体（２８６ｍｇ）が、凍結乾燥後に得られた。
【０９０８】
［Ｍ＋Ｈ］＋＝３１５；［Ｍ−Ｈ］−＝３１３。1H  NMR  (CDCl3):  10.34  (s,  1H),  8.37  (bs,  1H),  8.33  (d,  J  =  7.5  Hz,  1H),  8.23  (bs,  1H),  7.47  (m,  1H),  7.40  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  7.24-7.29  (m,  2H),  7.16-7.23  (m,  3H),  6.97  (t,  J  =  7.5  Hz,  1H),  4.45  (d,  J  =  8.7  Hz,  1H),  1.48-1.59  (m,  1H),  0.84-0.93  (m,  1H),  0.62-0.71  (m,  1H),  0.47-0.60  (m,  2H).
化合物Ａ５（ＣＶ−８８１９）の合成
化合物３の合成
【０９０９】
図２４Ｅに示されている通り、１−（フェニルスルホニル）インドール（１．１ｇｍ、０．００３８９ｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）溶液を−７８℃まで冷却した。ここにｔ−ＢｕＬｉ（２．５２ｍＬ、０．００４２８ｍｏｌ）を加え、３０分間、撹拌した。この反応混合物を０℃までゆっくりと温めた。０℃に達した後、この反応混合物を−７８℃に冷却して戻した。この混合物に、Ｎ−ＢＯＣ−３−ホルミルインドール（０．９５３ｇｍ、０．００３８９ｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液を３０分間かけて加えた。この反応混合物を０℃まで温めて、０℃で水（５ｍＬ）によりクエンチした。この反応混合物を水（１００ｍＬ）およびブライン（１００ｍＬ）により洗浄し、酢酸エチル（２５０ｍＬ）により抽出した。有機層を分離して無水硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過して濃縮した。粗製反応混合物をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の０〜１５％の酢酸エチル）によって精製した。所望のフラクションをプールし、濃縮すると、１．７ｇｍの純粋な化合物３がオフホワイト色の固体（収率８７％）として得られた。
化合物４の合成
【０９１０】
化合物３（５００ｍｇ、０．９９６ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（５ｍＬ）溶液に、室温でＩＢＸ（３３４．６ｍｇ、１．１９５ｍｍｏｌ）を加え、１８時間、撹拌した。この反応混合物を酢酸エチル（２５ｍＬ）により希釈し、水（２×２５ｍＬ）およびブライン（２５ｍＬ）により洗浄した。有機層を分離して無水硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過して濃縮した（４４４ｍｇが得られた。収率８９％）。この粗製反応混合物は十分に純粋であり、次のステップに精製することなく持ち越した。
化合物５の合成
【０９１１】
化合物４（１１０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）、ＴＢＡＦ（ＴＨＦ中の１Ｍ）（２２０μＬ、０．２２ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（３ｍＬ）の溶液を１時間、還流して、室温まで冷却した。揮発物をｒｏｔａｖａｐｏｒにより除去し、酢酸エチル（２５ｍＬ）により希釈して水（２５ｍＬ）およびブライン（２５ｍＬ）により洗浄した。有機層を分離して、無水硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過して濃縮した。粗製反応混合物をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の０〜１０％の酢酸エチル）によって精製した。所望のフラクションをプールし、濃縮すると、６０ｍｇの純粋な化合物５がオフホワイト色の固体（収率７５％）として得られた。
化合物６の合成
【０９１２】
化合物５（５００ｍｇ、１．３８８ｍｍｏｌ）、ＣＭＭＣ（４７２．２ｍｇ、２．７９ｍｍｏｌ）のジクロロエタン（１０ｍＬ）溶液を３０分間、５０℃まで加熱した。この反応混合物を室温まで冷却し、氷冷水（５０ｍＬ）に注ぎ入れて、０．５Ｍ  ＮａＯＨ（１５ｍＬ）およびブライン（２５ｍＬ）で洗浄して、ジクロロメタン（２５ｍＬ）により抽出した。有機層を分離して、無水硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過して濃縮した。粗製反応混合物をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の０〜２０％の酢酸エチル）によって精製した。所望のフラクションをプールし、濃縮すると、１９８ｍｇの純粋な化合物６がオフホワイト色の固体（収率３６．５％）として得られた。
化合物Ａ５の合成
【０９１３】
化合物６（１９８ｍｇ、０．５１０３ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍｌ）に溶解した。この溶液にＫ３ＰＯ４（２１６．３７ｍｇ、１．０２１ｍｍｏｌ）を加え、３０分間、還流した。この反応混合物を室温まで冷却し、揮発物をｒｏｔａｖａｐｏｒにより除去した。この残留物を酢酸エチル（２５ｍＬ）に溶解し、水（２×２５ｍＬ）により洗浄した。有機層を分離して無水硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過して濃縮した。得られた固体をジエチルエーテル（１０ｍＬ）中で、１時間、激しく撹拌してろ別すると化合物Ａ５（９７ｍｇ、収率６６％）が得られた。
化合物Ｈ（ＡＢ１２５０９）の合成
【０９１４】
図２４Ｆに示されている通り、１−フェニルスルホニルインドール２（３．０５ｇ、１１．９ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（７５ｍＬ）溶液に、−７８℃で、ｎ−ブチルリチウム（ヘキサン中、２．５Ｍ、５．５ｍＬ、１３．７ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。この溶液を室温で１時間、撹拌した後、この溶液を再度、−７８℃まで冷却し、乾燥ＴＨＦ（４５ｍＬ）中の３−ホルミルインドール１（３．３５ｇ、１３．７ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。この反応物を室温まで一晩、温めた。次に、ＭｅＩ（１５当量、１１．１ｍＬ）を加え、この反応混合物を５０℃まで９時間、温めた。Ｈ２Ｏによりクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出してＮａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮した。ＦＣＣ（ＳｉＯ２、５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により、４．０２ｇの３が白色の綿状固体として得られた。
【０９１５】
ビスインドール３（２ｇ、３．９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）溶液に、ＴＢＡＦ（ＴＨＦ中の１Ｍ、５．９ｍＬ、１．５当量）を加え、１４時間、７０℃まで加熱した。飽和ＮＨ４Ｃｌによりクエンチして、ＥｔＯＡｃ（２×）により抽出し、Ｈ２Ｏおよびブラインで洗浄した。この時点で、２２ｍＬのＤＭＦを加え、大部分のＥｔＯＡｃを減圧下で除去した。この粗製混合物を次のステップに使用した。
【０９１６】
ＰＯＣｌ３（３．６ｍＬ、１０当量）のＤＭＦ（２０ｍＬ）溶液に、室温で上記の粗生成物を１．５時間かけてゆっくりと加えた。添加の完了後、この反応物をさらに３０分間、撹拌し、次に、０℃で飽和ＮａＨＣＯ３によりクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３×）により抽出してブラインで洗浄し、濃縮した。ＦＣＣ（ＳｉＯ２、１５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により、８８１ｍｇのビスインドール５が明黄色固体として得られた。
【０９１７】
ビスインドール５（３５０ｍｇ）のＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ（９：１、１７．４ｍＬ）溶液に、Ｋ２ＣＯ３（４５６ｍｇ、３．５当量）を加え、１時間、７５℃まで加熱した。溶媒を除去して物質を水により希釈し、ＤＣＭ（２×）で抽出して濃縮した。分取ＨＰＬＣ（１０〜１００％Ｈ２Ｏ／ＣＨ３ＣＮ、２０ｍＬ／分、３０分間）によって粗製混合物を精製し、凍結乾燥すると、１３４ｍｇのＡＢ１２５０９が白色固体として得られた。
化合物Ｂ（ＣＶ−８８７７）の合成
化合物７の合成
【０９１８】
図２４Ｇに示されている通り、化合物ＩＩ（１ｇｍ、０．００３４ｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液を０℃に冷却した。この溶液にＢＯＣ無水物（１．５１ｇｍ、０．００６９ｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（８４８ｍｇ、０．００６９ｍｏｌ）を加え、０℃で撹拌した。この反応混合物を室温まで温め、１５時間、撹拌した。揮発物をｒｏｔａｖａｐｏｒによって除去した。残留物を酢酸エチル（１００ｍＬ）により希釈し、１Ｎ  ＨＣｌ（５０ｍＬ）、飽和水性炭酸水素ナトリウム（５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）により洗浄した。有機層を分離して無水硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過して濃縮した。粗製反応混合物をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の０〜１０％酢酸エチル）によって精製した。所望のフラクションをプールし、濃縮すると、１．４ｇｍの純粋な化合物７がオフホワイト色の固体（収率８３％）として得られた。
化合物８の合成
【０９１９】
化合物７（２５０ｍｇ、０．５１２ｍｍｏｌ）のｔ−ＢｕＯＨ（１０ｍＬ）溶液を０℃に冷却した。この溶液に、２−メチル−２−ブテン（１０ｍＬ）を加え、次いでＮａＣｌＯ２（１．５ｇ）、ＮａＨ２ＰＯ４（１．５ｇ）および水（１０ｍＬ）を加えた。反応混合物を室温までゆっくりと温め、室温で１５時間、激しく撹拌した。この反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍＬ）により希釈し、水（５０ｍＬ）およびブライン（２５ｍＬ）により洗浄した。有機層を分離して無水硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過して濃縮すると、２３５ｍｇの化合物８（９１％収率）が得られた。この粗製反応混合物は十分に純粋であり、次のステップに精製することなく持ち越した。
化合物９の合成
【０９２０】
化合物８（１００ｍｇ、０．１９８ｍｍｏｌ）のアセトン（１０ｍＬ）溶液に、０℃でＫ２ＣＯ３（８３ｍｇ、０．５９５ｍｍｏｌ）およびヨウ化メチル（３０．９７ｍｇ、０．２１８ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温まで温め、５時間、撹拌した。この反応混合物を酢酸エチル（２５ｍＬ）により希釈し、水（２５ｍＬ）およびブライン（２５ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離して無水硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過して濃縮すると、９１ｍｇの化合物９（８９％収率）が得られた。この粗製反応混合物は十分に純粋であり、次のステップに精製することなく持ち越した。
化合物Ｂの合成
【０９２１】
化合物９（７０ｍｇ、０．１３５ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍｌ）に溶解した。この溶液にＫ３ＰＯ４（５７．３ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を加え、３０分間、還流した。この反応混合物を室温まで冷却し、揮発物をｒｏｔａｖａｐｏｒにより除去した。この残留物を酢酸エチル（２５ｍＬ）に溶解し、水（２×２５ｍＬ）により洗浄した。有機層を分離して無水硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過して濃縮した。得られた固体をジエチルエーテル（１０ｍＬ）中で１時間、激しく撹拌し、ろ別すると化合物Ｂ（２５ｍｇ、収率５８％）が得られた。
化合物Ｂ１０の合成
【０９２２】
図２４Ｈに示されている通り、化合物８（２１ｍｇ、０．０４１ｍｍｏｌ）をメタノール（３ｍｌ）に溶解した。この溶液にＫ３ＰＯ４（１７．６ｍｇ、０．０８３ｍｍｏｌ）を加え、３０分間、還流した。この反応混合物を室温まで冷却し、揮発物をｒｏｔａｖａｐｏｒにより除去した。この残留物を酢酸エチル（２５ｍＬ）に溶解し、水（２×２５ｍＬ）により洗浄した。有機層を分離して無水硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過して濃縮した。得られた残留物をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の７０〜１００％酢酸エチル）により精製し、７ｍｇの化合物Ｂ１０（収率５５％）が得られた。
ＡＢ１１６４４の合成
【０９２３】
図２４Ｉに示されている通り、インドール１（１．０ｇ、８．５４ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ（１１．５ｍＬ）溶液およびアルデヒド２（２９４ｍｇ、４．１６ｍｍｏｌ）に、Ｉ２（２１０ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）を加え、この反応混合物を室温で１７時間、撹拌した。この反応物をＮａ２ＳＯ３でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２×）により抽出してＮａ２ＳＯ４で脱水し、ＦＣＣ（ＳｉＯ２、１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）、次に、分取ＨＰＬＣにより精製して、凍結乾燥すると、１０６ｍｇの対称なビスインドール３が白色固体として得られた。
【０９２４】
［Ｍ−Ｈ］−＝３８５。1H  NMR  (CDCl3):  7.90  (bs,  2H),  7.49  (d,  J  =  7.6  Hz,  2H),  7.33  (d,  J  =  7.6  Hz,  2H),  7.15  (t,  J  =  7.0  Hz,  2H),  7.09  (d,  J  =  2.3  Hz,  2H),  7.00  (t,  J  =  7.0  Hz,  2H),  3.98  (d,  J  =  8.0  Hz,  1H),  1.52-2.00  (m,  1H),  0.60-0.66  (m,  2H),  0.36-0.41  (m,  2H).
Ｏ５２（ＡＢ１２９７６）の合成
【０９２５】
図２４Ｊに示されている通り、化合物１（３．８ｇ）のＤＣＭ（３８ｍＬ）溶液に、０℃でＴＥＡ、ＤＭＡＰ、次に、Ｂｏｃ２Ｏを加えた。この混合物を室温（１８〜２３℃）まで温めて、４時間、撹拌した。この混合物を濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝３０：１〜２０：１〜１０：１〜５：１）によって精製すると、化合物２（６ｇ、９６％）が黄色油状物として得られた。
【０９２６】
化合物２（６．６ｇ、２５．７ｍｍｏｌ、１．０当量）のアセトン／Ｈ２Ｏ（２６４ｍＬ／６４ｍＬ）溶液に、ＮＭＯ（４．５ｇ、３８．６ｍｍｏｌ、１．５当量）、ＯｓＯ４（０．１９７ｇ、２．５７ｍｍｏｌ、０．０３当量）を加えた。この混合物を、室温（１８〜２３℃）で一晩、撹拌した。この混合物をＮａ２Ｓ２Ｏ３（２００ｍＬ）でクエンチし、室温で１０分間、撹拌した。この混合物をＥＡ（３００ｍＬ＊３）により抽出した。有機相を合わせて、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して濃縮すると、粗製化合物３（９ｇ）が褐色油状物として得られ、これをさらに精製することなく、次のステップに使用した。
【０９２７】
化合物３（９．３ｇ、３１．９ｍｍｏｌ、１．０当量）のＭｅＣＮ（８０ｍＬ）溶液に、０℃でＴＥＡ（９．６８ｇ、９５．９ｍｍｏｌ、３．０当量）、次に、ｎ−Ｃ４Ｆ９ＳＯ２Ｆ（１４．４５ｇ、４７．９ｍｍｏｌ、１．５当量）を加えた。この混合物を室温（２０〜２５℃）まで温めて、室温で２時間、撹拌した。この混合物に水（８０ｍＬ）を加え、ＥＡ（１５０ｍＬ＊３）で抽出した。有機相を合わせて、Ｎａ２ＳＯ４により乾燥した。この有機相を濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１〜５：１〜３：１）によって残留物を精製すると、化合物４（５ｇ、５７％）が黄色油状物として得られた。
【０９２８】
化合物５（１．８４ｇ、１５．７ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＣＭ（１８ｍＬ）溶液に、０℃でＭｅＭｇＢｒ（３Ｍ）（１０．４７ｍＬ、３１．４ｍｍｏｌ、２．０当量）を滴下して加え、この溶液を３０分間、撹拌した。次に、この溶液を−２０℃まで冷却し、ＤＣＭ（１８ｍＬ）中の化合物４（３ｇ、１０．９９ｍｍｏｌ、０．７当量）を加えた。この混合物を−２０℃で３時間、撹拌し、次に、室温まで温めて、１時間、撹拌した。この反応物をＮＨ４Ｃｌ（水性）（５０ｍＬ）でクエンチし、ＤＣＭ（５０ｍＬ＊２）により抽出した。有機相を合わせて、Ｎａ２ＳＯ４により乾燥した。この有機相を濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１〜５：１〜３：１）によって残留物を精製すると、化合物６（３．２ｇ、７４％）がかすかに黄色の油状物として得られた。
【０９２９】
化合物６（３．２ｇ、８．２１ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＣＭ（３００ｍＬ）溶液に、デス−マーチン（９．０５ｇ、２１．３３ｍｍｏｌ、２．６当量）を加えた。この混合物を４５℃まで加熱し、一晩、撹拌した。この反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３（６０ｍＬ）およびＮａ２Ｓ２Ｏ３（６０ｍＬ）でクエンチした。有機相および水層を分離し、水層をＥｔ２Ｏ（１００ｍＬ＊２）により抽出した。有機相を合わせて、Ｎａ２ＳＯ４により乾燥した。この有機相を濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１〜５：１〜３：１）によって残留物を精製すると、化合物７（２．３ｇ、７１％）がオレンジ色−黄色固体として得られた。
【０９３０】
化合物７（８３０ｍｇ、２．１４ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＣＭ（１６ｍＬ）溶液に、０℃でＴＦＡ（４．８７６ｇ、４２．８ｍｍｏｌ、２０当量）を加えた。この混合物を室温まで温めて、室温で１．５時間、撹拌した。溶媒を真空により除去し、残留物をＤＣＭ（１５ｍＬ）で溶解した。この溶液に、気泡が見られなくなるまで、炭酸水素ナトリウムの水溶液を加える。溶液をＤＣＭ（３０ｍＬ＊３）により抽出した。有機相を合わせて、Ｎａ２ＳＯ４により乾燥した。この有機相を濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１〜１０：１〜５：１〜３：１〜２：１）によって残留物を精製すると、化合物ＡＢ１２９７６（１４０ｍｇ、２２％）が褐色固体として得られた。
【０９３１】
ＴＬＣ：ＰＥ：ＥＡ＝Ｒｆ（７）＝０．４、Ｒｆ（ＡＢ１２９７６）＝０．１；1H  NMR  (400  MHz,  cdcl3)  δ  8.08  (s,  2H),  7.47  (d,  J  =  7.8  Hz,  2H),  7.31  (d,  J  =  8.1  Hz,  2H),  7.20  (t,  J  =  7.5  Hz,  2H),  7.11  (dd,  J  =  7.8,  7.1  Hz,  2H),  6.97  (d,  J  =  1.8  Hz,  2H),  3.90  (s,  4H).    13C  NMR  (101  MHz,  cdcl3)  δ  207.34,  136.12,  127.30,  123.33,  122.17,  119.67,  118.69,  ,  111.25,  108.57,    38.58.
マラセジアインドールＡ（ＡＢ１７０１１）の合成
【０９３２】
図２４Ｋに示されている通り、化合物１（２０ｇ、０．１０６ｍｏｌ、１．０当量）のＤＣＭ（２０ｍＬ）溶液に、Ｂｏｃ２Ｏ（２４．４ｇ、０．１１２ｍｏｌ、１．０５６当量）、ＤＭＡＰ（６４６ｍｇ、５．２９ｍｍｏｌ、０．０５当量）およびＴＥＡ（５３４ｍｇ、５．２９ｍｍｏｌ、０．０５当量）を逐次、加えた。この混合物を室温で１６時間、撹拌した。この反応混合物のＴＬＣ分析により、所望の生成物への完全な変換が示された。次に、この混合物を減圧下で濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーによって残留物を精製すると、化合物２（２４ｇ、７８％）が得られた。
【０９３３】
化合物２（５ｇ、１７．３０ｍｍｏｌ、１．０当量）およびＤＢＵ（１３．１７ｇ、８６．５１ｍｍｏｌ、５．０当量）のＭｅＣＮ（５０ｍＬ）溶液に、０℃でＰ−ＡＢＳＡ（８．３ｇ、３４．６０ｍｍｏｌ、２．０当量）を加えた。この混合物を室温まで温め、１００分間、室温で撹拌した。この反応混合物のＴＬＣ分析により、所望の生成物への完全な変換が示された。次に、この混合物を減圧下で濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーによって残留物を精製すると、化合物３（３．５ｇ、６３％）が得られた。
【０９３４】
化合物３（１００ｍｇ、０．３１６ｍｍｏｌ、１．０当量）のＭｅＯＨ（６ｍＬ）溶液に、ＬｉＯＨ（７ｍｇ、０．３１６ｍｍｏｌ、１．０当量）のＨ２Ｏ（０．３２ｍＬ）溶液を加えた。この混合物を室温で１時間、撹拌した。この反応混合物のＴＬＣ分析により、所望の生成物への完全な変換が示された。次に、この混合物を減圧下で濃縮すると、粗製化合物４が得られ、これを次のステップに直接、使用した。
【０９３５】
前のステップからの粗製化合物４のＤＭＳＯ（２ｍＬ）溶液に、窒素雰囲気下、ＨＡＴＵ（１５６ｍｇ、０．４１０ｍｍｏｌ、１．３当量）を加えた。次に、化合物４ａ（８１ｍｇ、０．３１６ｍｍｏｌ、１．０当量）およびＤＩＥＡ（１２３ｍｇ、０．９５０ｍｍｏｌ、３．０当量）を加えた。この混合物を室温で１５時間、撹拌した。この反応混合物のＴＬＣ分析により、所望の生成物への完全な変換が示された。次に、この混合物を水により希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製すると、化合物ＡＢ１０７５８（５８ｍｇ、４９％）が得られた。
【０９３６】
ＭｅＯＨ（５ｍＬ）中の化合物ＡＢ１０７５８（１６１．３ｍｇ、０．４３２ｍｍｏｌ、１．０当量）の撹拌溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（９０．６ｍｇ、２．１６ｍｍｏｌ、５．０当量）のＨ２Ｏ（１ｍＬ）溶液を加えた。この混合物を室温で３時間、撹拌した。この反応混合物のＴＬＣ分析により、所望の生成物への完全な変換が示された。次に、この混合物を減圧下で濃縮し、残留物を凍結乾燥すると、化合物ＡＢ１７０１１（Ｌｉ塩形態、１０８ｍｇ、定量的）が淡黄色固体として得られた。
ピチリアシトリン（ＡＢ１７０１４）の合成
【０９３７】
図２４Ｌに示されている通り、化合物１（５ｇ、４２．７４ｍｍｏｌ、１．０当量）の無水Ｅｔ２Ｏ（２０ｍＬ）溶液に、窒素雰囲気下、０℃でＣＯＣｌ２（６．５ｇ、０．２０１ｍｏｌ、２．２当量）をゆっくりと加えた。この混合物を０℃で１時間、撹拌した後、室温にし、０．５時間、室温で撹拌した。この反応混合物のＴＬＣ分析により、所望の生成物への完全な変換が示された。次に、この混合物を減圧下で濃縮すると、粗製化合物２（９ｇ、１００％）が得られた。
【０９３８】
粗製化合物２（８ｇ、３８．２８ｍｍｏｌ、１．０当量）の無水ＥＡ（３０ｍＬ）溶液に、窒素雰囲気下、０℃でＢｕ３ＳｎＨ（１１．１ｇ、３８．２８ｍｍｏｌ、１．０当量）の無水ＥＡ（３０ｍＬ）溶液を加えた。この混合物を０℃で０．５時間、撹拌した後、室温にし、１時間、室温で撹拌した。この反応混合物のＴＬＣ分析により、所望の生成物への完全な変換が示された。次に、この混合物をＰＥ（８０ｍＬ）により希釈し、ろ過した。フィルターケーキをＰＥで洗浄すると、化合物３（３ｇ、４５％）が得られた。
【０９３９】
化合物３ａ（１．５３ｇ、７．５１ｍｍｏｌ、１．３当量）およびＴｓＯＨ（１．２９ｇ、７．５１ｍｍｏｌ、１．３当量）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）溶液に、化合物３（１ｇ、５．７８ｍｍｏｌ、１．０当量）を加えた。この混合物を、５０℃で２時間、撹拌した。この反応混合物のＬＣＭＳ分析により、所望の生成物への完全な変換が示された。次に、この混合物を減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーおよび分取ＴＬＣ（ＰＥ：アセトン＝４：１）により精製すると、化合物ＡＢ１７０１４（２６１ｍｇ、９％）が黄色固体として得られた。
【０９４０】
1H  NMR  (400  MHz,  dmso)  δ  12.05  (d,  J  =  52.6  Hz,  1H),  9.24  (s,  1H),  8.55  (d,  J  =  4.7  Hz,  2H),  8.39  (d,  J  =  4.7  Hz,  1H),  8.29  (d,  J  =  8.0  Hz,  1H),  7.82  (d,  J  =  8.1  Hz,  1H),  7.61  -  7.50  (m,  2H),  7.28  (dd,  J  =  9.3,  5.1  Hz,  4H).
ＡＢ１７１５１の合成
【０９４１】
図２４Ｍにおいて示されている通り、ＭｅＯＨ（１４００ｍＬ）中の化合物１（４０．０ｇ、３４１ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、化合物２（９．９５ｇ、１４２ｍｍｏｌ、０．４１７当量）、次いで１Ｎ  ＨＣｌ水溶液（７１２ｍＬ）を加え、この混合物を１時間、７０℃に加熱した。次に、ＭｅＯＨを真空により除去し、残留物をＤＣＭで溶解した。この混合物を水により洗浄し、この水をＤＣＭにより抽出した。合わせた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥して濃縮した。残留物をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ、２０：１〜５：１）によって精製すると、化合物３（７ｇ、７２％）がわずかにオレンジ色の固体として得られた。
【０９４２】
ＤＭＦ（４８．６ｍＬ）中の化合物３（７．０ｇ、２４．５ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、０℃でＰＯＣｌ３（３．７８ｇ、２４．５ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＭＦ（５９．８ｍＬ）溶液を加えた。この反応混合物を室温（１３〜１８℃）まで温めて、一晩、撹拌した。次に、この混合物をＮａＨＣＯ３（飽和）によりクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２×１１０ｍＬ）で抽出してＮａ２ＳＯ４で脱水し、減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ、７：１）、次に分取ＨＰＬＣによって精製すると、ＡＢ１２５０８（４．４ｇ、５７％）が淡緑色固体として得られた。
【０９４３】
ＤＣＭ（１００ｍＬ）中のＡＢ１２５０８（４．５ｇ、１４．３３ｍｍｏｌ、１．０当量）、Ｂｏｃ２Ｏ（１４．０６ｇ、６４．５ｍｍｏｌ、４．５当量）、ＤＭＡＰ（３８８．５ｍｇ、１．４３３ｍｍｏｌ、０．１当量）およびＴＥＡ（７．２４ｇ、７１．６５ｍｍｏｌ、５．０当量）の混合物を３時間、５０℃に加熱した。次に、この混合物を室温（１３〜１８℃）まで冷却し、濃縮した。残留物をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ、１００：１〜３０：１）によって精製すると、化合物４（５．４ｇ、７３％）が得られた。
【０９４４】
ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の化合物４（５．４ｇ、１０．５ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、室温（１３〜１８℃）でＨ２Ｏ（２０ｍＬ）、ＮａＨ２ＰＯ４（４．５８６ｇ、２９．４ｍｍｏｌ、２．８当量）およびＮａＣｌＯ２（２．８５ｇ、３１．５ｍｍｏｌ、３．０当量）を加えた。この混合物を室温で３時間、撹拌した。反応をＴＬＣによってモニタリングした。次に、この混合物をＥＡ（３×５０ｍＬ）で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水して濃縮した。残留物をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ、５０：１〜１０：１）によって精製すると、化合物５（２．５ｇ、４５％）が得られた。
【０９４５】
ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の化合物５（２．５ｇ、４．７１７ｍｍｏｌ、１．０当量）およびＫ２ＣＯ３（０．９７６ｇ、７．０７５ｍｍｏｌ、１．５当量）の混合物に、室温（１３〜１８℃）でＣＨ３Ｉ（１．０ｇ、７．０７５ｍｍｏｌ、１．５当量）を加えた。この混合物を、６０℃で１時間、撹拌した。反応をＴＬＣによってモニタリングした。次に、この混合物を水（２０ｍＬ）で希釈した。この混合物をＥＡ（３×５０ｍＬ）で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水して濃縮した。残留物をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ、１００：１〜１０：１）によって精製すると、化合物６（１．８ｇ、７０％）が得られた。
【０９４６】
３．０Ｍ  ＨＣｌ／ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中の化合物６（１．８ｇ、３．３ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物を、６０℃で２時間、撹拌した。反応をＴＬＣによってモニタリングした。次に、ＭｅＯＨを真空により除去し、残留物をＤＣＭで溶解した。この混合物を水により洗浄し、この水をＤＣＭにより抽出した。合わせた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥して濃縮した。残留物をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ、２０：１〜５：１）によって精製すると、化合物ＡＢ１７１５１（８１０ｍｇ、純粋ではない）が得られ、これをＰＥ／ＥＡ（５ｍＬ）で粉末にすると、化合物ＡＢ１７１５１（６８０ｍｇ、６０％）がオフホワイト色の固体として得られた。
【０９４７】
1H  NMR  (400  MHz,  dmso)  δ  11.56  (s,  1H),  10.98  (s,  1H),  7.92  (dd,  J  =  6.2,  3.1  Hz,  1H),  7.47  (d,  J  =  1.6  Hz,  1H),  7.30  (ddd,  J  =  8.0,  4.7,  3.1  Hz,  2H),  7.19  (d,  J  =  7.7  Hz,  1H),  7.11  -  7.05  (m,  2H),  7.00  -  6.95  (m,  1H),  6.80  (ddd,  J  =  8.0,  7.0,  1.0  Hz,  1H),  4.74  (d,  J  =  9.9  Hz,  1H),  3.84  (s,  3H),  1.71  -  1.62  (m,  1H),  0.73  (t,  J  =  6.9  Hz,  1H),  0.44  (t,  J  =  9.3  Hz,  1H),  0.38  -  0.26  (m,  2H).
化合物ＶＩ（ＡＢ１７２２５）の合成
【０９４８】
図２４Ｎに示されている通り、撹拌したＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中の化合物１（６００ｍｇ、２．３０８ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、窒素雰囲気下、ＭｅＳＯ３Ｈ（２７ｍｇ、０．２８１ｍｍｏｌ、０．１２当量）およびオルト酢酸トリエチル（９３５ｍｇ、５．７７２ｍｍｏｌ、２．５当量）を逐次、加えた。この混合物を室温で１６時間、撹拌した。この反応混合物のＬＣＭＳ分析により、所望の生成物への完全な変換が示された。次に、この混合物をろ過して、フィルターケーキをＭｅＯＨで２回、洗浄すると、化合物ＡＢ１７２２５（５００ｍｇ、７６％）が白色固体として得られた。
【０９４９】
1H  NMR  (400  MHz,  dmso)  δ  11.03  (s,  1H),  10.81  (s,  1H),  8.20  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H),  8.02  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H),  7.88  (s,  1H),  7.44  (d,  J  =  7.5  Hz,  1H),  7.34  (t,  J  =  7.6  Hz,  1H),  7.25  (s,  1H),  7.11  (t,  J  =  7.5  Hz,  1H),  6.92  (d,  J  =  8.1  Hz,  1H),  3.35  (d,  J  =  2.3  Hz,  3H),  3.00  (s,  3H).
マラッセジアラクト酸（ＡＢ１７２２７）
【０９５０】
図２４Ｏに示されている通り、ジオキサン（２００ｍＬ）中の化合物１（１５．０ｇ、５７．５ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、インドール（１３．５ｇ、１１５．０ｍｏｌ、２．０当量）、トリス（ペンタフルオロフェニル）ホスフィン（６．１ｇ、１１．４ｍｍｏｌ、０．２当量）、Ｎａ２ＣＯ３（９．１ｇ、８６．２ｍｍｏｌ、１．５当量）およびＰｔＣｌ２（１．５ｇ、５．７ｍｍｏｌ、０．１当量）を加えた。このフラスコを窒素により脱気し、封止して一晩、１００℃まで加熱した。反応をＴＬＣによってモニタリングした。溶媒を減圧下で蒸発させた。残留物を酢酸エチル（２００ｍＬ）により希釈して水、飽和ＮａＣｌにより洗浄した。この溶液を真空で濃縮した。粗製化合物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ、２００：１〜１００：１）によって精製すると、化合物２（８．３ｇ、４６．７％）が褐色固体として得られた。
【０９５１】
ＭｅＯＨ（３５０ｍＬ）および水（１２５ｍＬ）中の化合物２（７．４ｇ、２１．４ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、室温でＫ２ＣＯ３（１１．８ｇ、８５．６ｍｍｏｌ、４．０当量）を加えた。この混合物を９０℃で一晩、撹拌した。反応をＴＬＣによってモニタリングした。この反応混合物を周囲温度まで冷却し、溶媒を真空で濃縮した。次に、この残留物を酢酸エチル（５００ｍＬ）に溶解して、水、ブラインで洗浄した。この溶液を真空で濃縮した。粗製化合物をカラムクロマトグラフィー（Ｐ：Ｅ、５０：１〜２０：１〜ＰＥ：ＥＡ：ＤＣＭ、１０：１：１）によって精製すると、化合物３（４．１ｇ、７７．９％）が黄色固体として得られた。
【０９５２】
Ｎ２下、化合物３（２．８ｇ、１１．４ｍｍｏｌ、１．０当量）およびＹｂ（ＣＦ３ＳＯ２）３（２．１ｇ、３．４ｍｍｏｌ、０．３当量）のＤＣＥ（４０ｍＬ）溶液に。この混合物にＮ２下、化合物４（１．４ｇ、１３．７ｍｍｏｌ、１．２当量）を加えた。この混合物を、８０℃で２時間、撹拌した。反応をＴＬＣによってモニタリングした。この反応物を飽和Ｎａ２ＣＯ３（４０ｍＬ）によりクエンチし、この溶液を２Ｍ  ＨＣｌにより酸性にした。この溶液をＤＣＭ（３×４０ｍＬ）により抽出し、合わせた有機層をブライン（４０ｍＬ）により洗浄して乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮すると、粗製化合物５（２．４５ｇ、９０．７％）がピンク色固体として得られた。
【０９５３】
ＭｅＯＨ（４０ｍＬ）および水（１０ｍＬ）中の化合物５（６９０ｍｇ、１．９５ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ＮａＯＨ（０．１５ｇ、３．９ｍｍｏｌ、２．０当量）を加えた。この混合物を室温で２．５時間、撹拌した。反応をＴＬＣによってモニタリングした。反応物を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮した。残留物は、２Ｍ  ＨＣｌで酸性にした。この溶液をＤＣＭ（３×１５０ｍＬ）により抽出し、合わせた有機層をブライン（１５０ｍＬ）により洗浄して乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣにより精製すると、ＡＢ１７２２７（３３０ｍｇ、５１％）が紫色固体として得られた。
【０９５４】
ＴＬＣ：ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１、Ｒｆ（５）＝０．９、Ｒｆ（ＡＢ１７２２７）＝０．２
【０９５５】
1H  NMR  (400  MHz,  DMSO)  δ  10.84(s,  1H),  10.57  (s,  1H),  7.49-7.43(dd,  J1=8.0Hz,  J2=7.2Hz,  2H),  7.32-7.30(d,  J  =  8.0Hz,  1H),  7.20-7.18(d,  J  =  7.6Hz,  1H),  7.10-7.09  (m,  1H),  7.05-7.01(m,  1H),  6.95-6.87(m,  3H),  4.19-4.10(m,  3H),  3.17-3.12(m,  1H),  2.98-2.94(m,  1H).
ＡＢ１２５０７の合成
【０９５６】
図２４Ｐに示されている通り、化合物１（２５ｇ、３５７ｍｍｏｌ、１．０当量）のＴＨＦ（２５０ｍｌ）溶液に、窒素雰囲気下、０℃でＤＭＦ（２００ｍＬ）中のＮａＨ（１７ｇ、４２８．４ｍｍｏｌ、１．２当量）を加えた。３０分後、この混合物に０℃でジメチル硫酸（８１ｇ、６４２ｍｍｏｌ、１．８当量）を加えた。添加後、この反応混合物を３０分間、周囲温度で撹拌し、次に、酢酸をゆっくりと加えた。生成物を反応混合物から、直接、蒸留した。化合物２（２５ｇ、８３％）が得られた。
【０９５７】
化合物３（２０ｇ、８６ｍｍｏｌ、１．０当量）のＴＨＦ（２００ｍｌ）溶液に、０℃で２Ｍ  ＮａＨＭＤＳ（９４．６ｍＬ、１８９．２ｍｍｏｌ、２．２当量）を加えた。この混合物を０℃で３０分間、撹拌した。この混合物に、０℃で４０分間、ＴＨＦ（２００ｍｌ）中のＢｏｃ２Ｏ（２１ｇ、９４．６ｍｍｏｌ、１．１当量）を加えた。この混合物を室温で１時間、撹拌した。次に、この混合物に飽和ＮＨ４Ｃｌを加え、ＥＡ（３×２００ｍＬ）で抽出して、反応混合物を水により洗浄した。有機層をブラインにより洗浄した。残留物をＮａ２ＳＯ４で脱水し、減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ、６０：１〜５０：１）によって精製すると、化合物４（１８ｇ、８３％）が得られた。
【０９５８】
脱気した化合物４（１．０ｇ、３ｍｍｏｌ、１．０当量）のＴＥＡ（１０ｍＬ）溶液に、ＣｕＩ（５７ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ、０．１当量）およびＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）４（１０５ｇ、０．１５ｍｍｏｌ、０．０５当量）を加えた。窒素雰囲気下、この混合物を室温で２時間、撹拌した。反応をＴＬＣによってモニタリングした。この反応混合物をＥＡ（３×１０ｍＬ）により希釈し、反応混合物を水、飽和ＮａＣｌにより洗浄してＮａ２ＳＯ４で脱水した。この溶媒をろ過して真空で濃縮すると、褐色油状物として得られた。粗製化合物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ、６０：１〜５０：１）によって精製すると、化合物５（９００ｍｇ、１００％）が得られた。
【０９５９】
化合物５（５ｇ、１７ｍｍｏｌ、１．０当量）、ＰｔＣｌ２（９００ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ、０．１当量）、Ｎａ２ＣＯ３（２．７ｇ、２５．５ｍｍｏｌ、１．５当量）およびインドール（４．０ｇ、３４ｍｍｏｌ、２．０当量）のジオキサン（５０ｍＬ）溶液を、窒素雰囲気下、１００℃で１２時間、還流した。反応をＴＬＣによってモニタリングした。溶媒を減圧下で蒸発させた。この反応混合物をＥＡ（３×５０ｍＬ）により希釈し、反応混合物を水、飽和ＮａＣｌにより洗浄してＮａ２ＳＯ４で脱水した。この溶媒をろ過して真空で濃縮した。粗製化合物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ、５０：１〜４０：１）によって精製すると、化合物６（３ｇ、８０％）が得られた。
【０９６０】
メタノール（７５ｍＬ）および水（２５ｍＬ）中の化合物６（３ｇ、８ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、室温でＫ２ＣＯ３（３．８ｇ、０．０２７ｍｏｌ）を加えた。得られた懸濁液を一晩、加熱して還流した。反応をＴＬＣによってモニタリングした。この反応混合物を室温まで冷却し、溶媒を真空で濃縮した。残留物を酢酸エチル（２００ｍＬ）に溶解し、水およびブラインで洗浄し、次に、乾燥（硫酸ナトリウム）してろ過し、溶媒を真空で濃縮した。粗製化合物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ、５０：１〜２０：１）によって精製すると、化合物７（１．５ｇ、７５％）が得られた。
【０９６１】
ＰＯＣｌ３（７３ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ、１．２当量）のＤＭＦ（１ｍＬ）溶液を０℃で３０分間、撹拌した。この混合物にＤＭＦ（１ｍＬ）中の化合物７（１００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ、１．０当量）を加えた。この混合物を室温で１２時間、撹拌した。反応をＴＬＣによってモニタリングした。この反応混合物を飽和水性炭酸水素ナトリウム（２ｍＬ）に注ぎ入れ、１時間、撹拌した。得られた混合物をＥＡ（２×２ｍＬ）により抽出した。有機層を合わせて、水、飽和ＮａＣｌにより洗浄して、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。この溶媒をろ過して真空で濃縮した。残留物を分取ＴＬＣにより精製すると、ＡＢ１２５０７（６０ｍｇ、５０％）が得られた。
化合物Ｖ（ＡＢ１７２１９）の合成
【０９６２】
図２４Ｑに示されている通り、化合物１（２０ｇ、９１．３２ｍｍｏｌ、１．０当量）のＴＨＦ（２００ｍＬ）溶液に、窒素雰囲気下、０℃でＮａＨＭＤＳ（ＴＨＦ中の２Ｍ、９４．６ｍＬ、０．２０１ｍｏｌ、２．２当量）をゆっくりと加えた。０℃で０．５時間、撹拌した後、（Ｂｏｃ）２Ｏ（２１ｇ、０．１００ｍｏｌ、１．１当量）のＴＨＦ（４０ｍＬ）溶液を０℃でゆっくりと加えた。この混合物を、室温にして、室温で１時間、撹拌した。この反応混合物のＴＬＣ分析により、所望の生成物への完全な変換が示された。次に、この混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ（２００ｍＬ）でクエンチし、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１００％〜３０：１）によって精製すると、化合物２（１８ｇ、６２％）が黄色油状物として得られた。
【０９６３】
化合物２（１ｇ、３．１３ｍｍｏｌ、１．０当量）および化合物２ａ（０．２４ｇ、３．４３ｍｍｏｌ、１．１当量）のＴＥＡ（１０ｍＬ）溶液に、窒素雰囲気下、室温でＣｕＩ（６０ｍｇ、０．３１６ｍｍｏｌ、０．１当量）およびＰｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（４４ｍｇ、０．０６２７ｍｍｏｌ、０．０２当量）を加えた。この混合物を室温で２時間、撹拌した。この反応混合物のＴＬＣ分析により、所望の生成物への完全な変換が示された。次に、この混合物を水により希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１００％〜５０：１）によって精製すると、化合物３（７２０ｍｇ、９３％）が黄色油状物として得られた。
【０９６４】
化合物３（１ｇ、３．８３ｍｍｏｌ、１．０当量）のジオキサン（２５ｍＬ）溶液に、窒素雰囲気下、１０％  ＰｔＣｌ２（０．１ｇ、０．３７６ｍｍｏｌ、０．１当量）、５−メチルインドール（１ｇ、７．６３ｍｍｏｌ、２．０当量）、トリス（ペンタフルオロフェニル）ホスフィン（４０７ｍｇ、０．７６５ｍｍｏｌ、０．２当量）およびＮａ２ＣＯ３（０．６１ｇ、５．７５ｍｍｏｌ、１．５当量）を加えた。この混合物を、１００℃で１６時間、撹拌した。この反応混合物のＴＬＣ分析により、所望の生成物への完全な変換が示された。次に、この混合物を水により希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１００％〜６：１）によって精製すると、化合物４（５００ｍｇ、９３％）が黄色油状物として得られた。
【０９６５】
化合物４（７８５ｍｇ、２．１８ｍｍｏｌ、１．０当量）のＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ／１０ｍＬ）溶液に、Ｋ２ＣＯ３（１．２ｇ、８．７０ｍｍｏｌ、４．０当量）を加えた。この混合物を、９０℃で１６時間、撹拌した。この反応混合物のＴＬＣ分析により、所望の生成物への完全な変換が示された。次に、この混合物を水により希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１００％〜６：１）によって精製すると、化合物５（３６０ｍｇ、９３％）が得られた。
【０９６６】
撹拌したＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中の化合物５（０．８５ｇ、３．２７ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、窒素雰囲気下、ＭｅＳＯ３Ｈ（３８ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ、０．１２当量）およびオルト酢酸トリエチル（１．３２ｇ、８．１８ｍｍｏｌ、２．５当量）を逐次、加えた。この混合物を室温で４時間、撹拌した。この反応混合物のＴＬＣ分析により、所望の生成物への完全な変換が示された。次に、この混合物をろ過して、フィルターケーキをＭｅＯＨで洗浄すると、化合物ＡＢ１７２１９（７００ｍｇ、７５％）が淡黄色固体として得られた。
【０９６７】
1H  NMR  (400  MHz,  dmso)  δ  11.01  (s,  1H),  10.76  (s,  1H),  8.21  (d,  J  =  7.8  Hz,  1H),  7.92  (d,  J  =  19.3  Hz,  2H),  7.44  (d,  J  =  8.0  Hz,  1H),  7.35  (d,  J  =  8.0  Hz,  2H),  7.18  (d,  J  =  8.2  Hz,  1H),  7.12  (s,  1H),  3.00  (s,  3H),  2.47  (s,  3H).  
化合物ＶＩＩＩ（ＡＢ１７２２０）の合成
【０９６８】
図２４Ｒに示されている通り、ＣｒＯ３（３９ｇ、０．３９ｍｏｌ、２０．０当量）のＨ２Ｏ（５８ｍＬ）溶液に、−５℃で化合物１（５．０ｇ、１９．５３ｍｍｏｌ、１．０当量）のＡｃＯＨ（５８ｍＬ）溶液をゆっくりと加えた。この混合物を、０〜５℃で２時間、撹拌した。この反応混合物のＴＬＣ分析により、所望の生成物への完全な変換が示された。この混合物をろ過して、フィルターケーキをＥｔＯＨおよびＨ２Ｏにより洗浄した。次に、この混合物をろ過すると、不純な化合物２（１．６５２ｇ、２９％）が得られた。
【０９６９】
不純な化合物２（１．９ｇ、６．６４ｍｍｏｌ、１．０当量）のＡｃ２Ｏ（１６０ｍＬ）溶液に、Ｚｎ粉（４．３４ｇ、６６．７７ｍｍｏｌ、１０．０当量）およびＡｃＯＮａ（１．３５ｇ、９．９６ｍｍｏｌ、１．５当量）を加えた。この混合物を１６０℃で０．５時間、撹拌した。この混合物をろ過して、沸騰Ａｃ２Ｏおよびアセトンにより、逐次、洗浄した。次に、この混合物をろ過すると、化合物ＡＢ１７２２０（４１７ｍｇ、１６％）が得られた。
【０９７０】
1H  NMR  (400  MHz,  dmso)  δ  11.35  (s,  2H),  8.00  (d,  J  =  7.9  Hz,  2H),  7.47  (dd,  J  =  20.4,  7.7  Hz,  4H),  7.17  (s,  2H),  2.64  (s,  6H).
化合物ＶＩＩ（ＡＢ１７２２１）の合成
【０９７１】
図２４Ｓに示されている通り、化合物１（３４８ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ、２．１当量）、化合物２（２４６ｍｇ、１ｍｍｏｌ、１当量）、Ａｌｉｑｕａｔ（２０ｍｇ、０．０５当量）、炭酸カリウム（水性）（７７３ｍｇ、５．６ｍｇ、２Ｍ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（２３ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ、０．０２当量）およびジオキサン（７ｍＬ）の混合物を３回、脱気した。この反応混合物を一晩、加熱して還流した。冷却後、この反応混合物を１Ｎ  ＨＣｌ（水性）（１５ｍＬ）によってクエンチした。得られた沈殿物を遠心分離し、ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（１：１、１０ｍＬ×２）により洗浄した。得られた生成物を真空下で乾燥した。
【０９７２】
次に、化合物３（３０ｍｇ、０．０７３ｍｍｏｌ）および亜リン酸トリエチル（１２２ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ、１０当量）の混合物を、３回、脱気し、４８時間、１５２℃まで加熱した。冷却後、この反応混合物を０．５ｍＬのＥｔＯＨおよび０．２ｍＬのＨ２Ｏの溶液に加えた。得られた沈殿物を遠心分離し、ＥｔＯＨ／Ｈ２Ｏ（１：１、０．３ｍＬ×２）により洗浄した。得られた生成物を真空下で乾燥し、分取ＨＰＬＣにより精製すると、ＡＢ１７２２１（９．４ｍｇ）が得られた。
（実施例１６）
マラセジンおよびマラセジン誘導体のアポトーシス誘導活性
試薬
【０９７３】
Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４８８アネキシンＶ／死細胞アポトーシスキット、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）および０．２５％トリプシン−ＥＤＴＡ（１×）、フェノールレッドをＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから購入した。カスパーゼ−Ｇｌｏ３／７アッセイは、Ｐｒｏｍｅｇａから購入した。ＲＰＭＩ１６４０培地およびダルベッコの改変イーグル培地は、Ｇｉｂｃｏから購入した。抗生物質抗真菌剤溶液（１００×）は、Ｓｉｇｍａから購入した。
【０９７４】
細胞系ＭｅＷｏ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＨＴＢ−６５（商標））、ＷＭ１１５（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−１６７５）およびＢ１６Ｆ１（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−６３２３）は、ＡＴＣＣから購入し、以下の培養培地：ＭｅＷｏおよびＢ１６Ｆ１用の培養培地：１０％ＦＢＳを補給したＤＭＥＭ；ＷＭ１１５用の培養培地：１０％ＦＢＳを補給したＲＰＭＩ１６４０に維持した。
実験方法
【０９７５】
細胞を収穫し、Ｃｏｕｎｔｅｓｓセルカウンターを使用して細胞数を決定した。所望の密度まで細胞を培養培地で希釈した。最終的な細胞密度は、６時間および２４時間の処置の場合、４，０００細胞／ウェルであり、４８時間および７２時間の処置の場合、２，０００細胞／ウェルであった。アネキシンＶアッセイの場合、３８４ウェルクリアボトムプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ３７１２）を使用した一方、カスパーゼ−Ｇｌｏアッセイの場合、３８４ウェルソリッドホワイトボトムプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ３５７０）を使用した。プレートはすべて、蓋で覆い、細胞を付着させるため、３７℃および５％ＣＯ２で、一晩、置いた。
【０９７６】
試験化合物をＤＭＳＯに溶解し、３０ｍＭの保存溶液にした。１０倍希釈を行い、３ｍＭおよび０．３ｍＭ濃度を生成した。０．９ｍＭのスタウロスポリンを陽性対照として使用し、ＤＭＳＯを陰性対照（ＮＣ）として使用した。液体ハンドラーＥｃｈｏ５５０を使用して、１３２．５ｎＬの化合物を化合物源プレートから３８４ウェル細胞培養プレートに移した。表示されているインキュベート時間の後、検出のためにプレートをインキュベータから取り出した。
【０９７７】
アネキシンＶアッセイのため、プレートをインキュベータから取り出し、培養培地を除去した。細胞を４０ｕＬのＰＢＳにより２回、洗浄し、ウェルあたり、１５ｕＬの事前混合アネキシンＶ−ＦＩＴＣおよびＨｏｅｃｈｓｔ３３３４２色素作業溶液を加えた。プレートを室温で２０分間、インキュベートし、封止して、１，０００ｒｐｍで１分間、遠心分離し、気泡を除去した。ＩｍａｇｅＸｐｒｅｓｓ  Ｎａｎｏを使用してプレートを読み取った。
【０９７８】
カスパーゼ−Ｇｌｏアッセイのため、プレートをインキュベータから取り出し、室温で１５分間、平衡にした。カスパーゼ−Ｇｌｏ３／７試薬もまた、実験前に解凍して、室温に平衡にした。カスパーゼ−Ｇｌｏ試薬は、培養培地に対して、１：１の比で必要なウェルに加えた。プレートを室温で１５分間、インキュベートし、ＥｎＳｐｉｒｅ（商標）プレートリーダーを使用して読み取った。誘導倍率を以下の式に従って計算した：誘導倍率＝発光量Ｓａｍｐｌｅ／発光量ＮＣ
アネキシンＶアッセイの結果
【０９７９】
処置に対する曝露後、６、２４、４８および７２時間時における、アネキシンＶ−陽性細胞の百分率を含むデータの表が、図２５Ａ〜２５Ｄに示されている。個別の組の実験からのデータは、図９０Ａ〜１０８Ｆに示されている。
【０９８０】
アネキシンＶ染色データにより、３つのすべての細胞系において、１００ｕＭのマラセジンが細胞死を誘導したことが示された。マラセジンは、ＭｅＷｏに比べると、ＷＭ１１５およびＢ１６Ｆ１細胞において、より強力なアポトーシス誘導物質であるが、ＷＭ１１５細胞における応答は、ＭｅＷｏおよびＢ１６Ｆ１細胞におけるよりも遅かった。
カスパーゼ３／７アッセイの結果
【０９８１】
処置に対する曝露後、６、２４、４８および７２時間時における、カスパーゼ３／７の誘導倍率を含むデータの表が、図２６Ａ〜２６Ｄに示されている。個別の組の実験からのデータは、図１０９Ａ〜１２７Ｃに示されている。
【０９８２】
マラセジンは、１００ｕＭでＷＭ１１５およびＭｅＷｏ細胞中のカスパーゼ３／７を活性化した。マラセジンは、ＭｅＷｏ細胞中よりもＷＭ１１５細胞中で、カスパーゼ３／７経路を速やかに誘発し、それは、アネキシンＶ染色のデータに一致した。
（実施例１７）
マラセジンおよびマラセジン誘導体への曝露後の細胞生存率
試薬
【０９８３】
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）２．０アッセイは、Ｐｒｏｍｅｇａから購入した。
実験方法
【０９８４】
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏアッセイに関すると、試験化合物を１０ｍＭ  ＤＭＳＯ溶液中で調製した。化合物を１２種の濃度まで段階的に希釈した。１００，０００細胞／ｍＬの懸濁液からの細胞４０ｕＬを３８４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ３５７０）の各ウェルに分注した。プレートを３７℃、５％ＣＯ２および９５％湿度で一晩、インキュベートした。試験化合物をビヒクル対照としてのＤＭＳＯと共に加えた。プレートを３７℃、５％ＣＯ２および９５％湿度で、６、２４または４８時間、インキュベートし、ウェルに４０ｕＬのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬を加え、細胞生存率を評価した。
結果
【０９８５】
ＡＢ１２５０８（化合物Ｅ）、未知組成物、ＣＶ−８８０３（化合物Ｋ）、ＣＶ−８８０４（化合物Ａ）、ＣＶ−８６８４（マラセジン）、ＣＶ−８６８５（インドロ［３，２−ｂ］カルバゾール）、ＣＶ−８６８６（化合物Ｉ）、ＣＶ−８６８８（化合物ＩＩ）およびスタウロスポリンに曝露した後のＭｅＷｏおよびＷＭ１１５細胞に関する細胞生存百分率が、それぞれ、図２７Ａ〜２７Ｂ、図２８Ａ〜２８Ｂ、図２９Ａ〜２９Ｂ、図３０Ａ〜３０Ｂ、図３１Ａ〜３１Ｂ、図３２Ａ〜３２Ｂ、図３３Ａ〜３３Ｂ、図３４Ａ〜３４Ｂおよび図３５Ａ〜３５Ｂに示されている。試験化合物に曝露した試料に由来するデータのすべてを同じインキュベート時間を有する対応するビヒクル対照に正規化した。
（実施例１８）
マラセジンおよびマラセジン誘導体の芳香族炭化水素受容体活性化能
アッセイ手順
【０９８６】
ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−Ｌｕｃ細胞は、Ｐｈａｒｍａｒｏｎから購入し、Ｏｎｅ−Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイシステムは、Ｐｒｏｍｅｇａから購入し、ＤＭＥＭは、Ｈｙｃｌｏｎｅから購入し、ペニシリン／ストレプトマイシンは、Ｓｏｌａｂｉｏから購入した。
【０９８７】
安定にトランスフェクトされたＨｅｐＧ２細胞用の培養培地は、ＤＭＥＭに高グルコースおよびＬ−グルタミン、ならびに１０％ＦＢＳを補給することによって調製した。
【０９８８】
ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−Ｌｕｃ細胞を、Ｔ−７５フラスコ内で、３７℃、５％ＣＯ２、および９５％の相対湿度で培養した。細胞を８０〜９０％のコンフルエンスに到達させた後に、剥離および分割した。
【０９８９】
培養細胞は、５ｍＬのＰＢＳですすいだ。ＰＢＳを吸引除去し、１．５ｍＬのトリプシンをフラスコに加え、３７℃で約５分間、または細胞が剥離して浮き上がるまで細胞をインキュベートした。過剰な血清含有培地を添加することによって、トリプシンを不活性化させた。
【０９９０】
細胞懸濁液を円錐管に移し、１２０ｇで１０分間、遠心分離して、細胞をペレットにした。細胞を適度な密度で播種培地中に再懸濁させた。４０μＬの細胞を３８４ウェル培養プレートに移した（５×１０３細胞／ウェル）。プレートを３７℃で２４時間、インキュベータ中に置いた。
【０９９１】
その後、試験化合物の保存溶液およびオメプラゾール陽性対照を調製した。Ｅｃｈｏ５５０を使用し、化合物溶液をアッセイプレートに移した。次に、このプレートを化合物で処置するためにインキュベータ内に戻した。
【０９９２】
後に、２４時間の処置後に、プレートをインキュベータから取り出し、周囲温度で冷却した。培養培地のものと等量のＯｎｅ−Ｇｌｏ試薬３０μＬを各ウェルに加えた。細胞を少なくとも３分間、溶解し、次に照度計で測定した。
【０９９３】
ＸＬｆｉｔの非線形回帰解析を使用して用量応答をグラフにし、ＥＣ５０値も計算した。
結果
【０９９４】
様々な濃度のオメプラゾール、ＣＶ−８６８４（マラセジン）、ＣＶ−８６８５（インドロ［３，２−ｂ］カルバゾール）、ＣＶ−８６８６（化合物Ｉ）、未知組成物、ＣＶ−８８０３（化合物Ｋ）、ＣＶ−８８０４（化合物Ａ）、ＡＢ１２５０８（化合物Ｅ）およびＣＶ−８６８８（化合物ＩＩ）への曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値が、それぞれ、図３６Ａ〜３６Ｂ、３７Ａ〜３７Ｂ、３８Ａ〜３８Ｂ、３９Ａ〜３９Ｂ、４０Ａ〜４０Ｂ、４１Ａ〜４１Ｂ、４２Ａ〜４２Ｂ、４３Ａ〜４３Ｂおよび４４Ａ〜４４Ｂに示されている。
【０９９５】
様々な濃度のオメプラゾール、未知組成物、２，３，７，８−テトラクロロジベンゾジオキシン（ＴＣＤＤ）、ＣＶ−８８１９（化合物Ａ５）、ＣＶ−８６８４（マラセジン）、ＡＢ１２５０８（化合物Ｅ）、ＣＶ−８６８６（化合物Ｉ）、ＡＢ１２５０９（化合物Ｈ）、ＣＶ−８６８８（化合物ＩＩ）、ＣＶ−８８７７（化合物Ｂ）、ＣＶ−８６８５（インドロ［３，２−ｂ］カルバゾール）、化合物Ｂ１０およびＣＶ−８６８７（化合物ＩＶ）への曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値が、それぞれ、図４５Ａ〜４５Ｂ、４６Ａ〜４６Ｂ、４７Ａ〜４７Ｂ、４８Ａ〜４８Ｂ、４９Ａ〜４９Ｂ、５０Ａ〜５０Ｂ、５１Ａ〜５１Ｂ、５２Ａ〜５２Ｂ、５３Ａ〜５３Ｂ、５４Ａ〜５４Ｂ、５５Ａ〜５５Ｂ、５６Ａ〜５６Ｂおよび５７Ａ〜５７Ｂに示されている。
【０９９６】
様々な濃度のオメプラゾール、ＴＣＤＤ、マラセジン前駆体、ＡＢ１１６４４、３−メチルコラントレン（３−ＭＣ）、ＡＢ１２９７６（Ｏ５２）、ＡＢ１７０１１（マラセジアインドールＡ）、ピチリアシトリン、ＡＢ１７１５１およびＡＢ１７２２５への曝露時における、ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイからのＡｈＲ活性の読取値が、それぞれ、図５８Ａ〜５８Ｂ、５９Ａ〜５９Ｂ、６０Ａ〜６０Ｂ、６１Ａ〜６１Ｂ、６２Ａ〜６２Ｂ、６３Ａ〜６３Ｂ、６４Ａ〜６４Ｂ、６５Ａ〜６５Ｂ、６６Ａ〜６６Ｂおよび６７Ａ〜６７Ｂに示されている。
【０９９７】
以下の表１および２に、２組の実験の結果を要約する。
【表１】
2021521195.tif 000225
【表２−１】
2021521195.tif 000226
【表２−２】
2021521195.tif 000227
（実施例１９）
ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）アッセイ
検討の概要１
【０９９８】
この検討の目的は、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）皮膚モデルにおける、反復曝露後の皮膚メラニン形成モジュレーターとして、試験物品の潜在作用を評価することであった。処置は、以下の通りとした：隔日で７日間の処置（７ＴＤ）；隔日で７日間の処置、続いて処置なしで７日間（回復）（７ＴＤ＋７ＮＴＤ）；および隔日で１４日間の処置（１４ＴＤ）。本検討はまた、このプロトコールにおいて指定されている処置期間にわたる試験物品への反復曝露後の、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織によるＭＴＴの変換によって測定される、各試験物品によって誘導される潜在的な皮膚刺激を評価した。
【０９９９】
ＭＴＴ（臭化３−［４，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウム）が青色のホルマザン沈殿物へとＮＡＤ（Ｐ）Ｈ−依存性ミクロソーム酵素還元される（およびより少ない程度でのＭＴＴのコハク酸デヒドロゲナーゼ還元）のを測定する、ＭＴＴ変換アッセイを使用して、試験物品への曝露後の細胞の代謝を評価した（Berridge  et  al.,  1996）。潜在的な皮膚刺激に対する証拠である、組織に対する試験物品の毒性は、陰性対照処置組織に対する、相対生存率−ＭＴＴ変換率を測定することにより求めた。
物質および方法
ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）皮膚モデルの受領
【１０００】
ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）皮膚キット（ＭａｔＴｅｋ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）の受領時に、製造業者によって指示されている通りに溶液を保管した。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を使用するまで、２〜８℃で保管した。受領した日（投与の前日）に、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）維持培地（ＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ）を約３７℃に温めた。ＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭの９／１０ｍＬを、６ウェルプレートの適正なウェルに等分した。試験物品または対照、ならびにそれらの用量体積および曝露条件（ＭＴＴおよびメラニンのエンドポイントのために指定）を表示するために、６ウェルプレートにラベルを付けた。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織をそれぞれ、封止パッケージを開口する前に、アガロースゲルと細胞培養インサートとの間の気泡について検査した。細胞培養インサート領域の５０％を超えて覆う気泡を有する組織は使用しなかった。２４ウェルの輸送用容器をプラスチック製バッグから取り出し、その表面を７０％エタノールで消毒した。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、６ウェルプレートに無菌で移した。次に、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、空気中５±１％ＣＯ２の加湿雰囲気中、３７±１℃（標準培養条件）で一晩（少なくとも１６時間）、インキュベートした。
【１００１】
受領した日から組織をインキュベートして少なくとも１６時間後に、ＭＴＴ（２つの組織−この報告の目的の場合、「未処置日数」０と呼ぶ）およびメラニンアッセイ（３つの組織）と指定した８つのＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織をそれぞれ、デジタルカメラ（ＣＡＮＯＮ製カメラ、ＰｏｗｅｒＳｈｏｔ  ＳＸ１３０ＩＳ、１２×光学ズーム、手動設定）を使用して撮影し、このアッセイの開始時における、組織の色素沈着の程度の目視評価の一助とした。これらの写真は、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織の底面から撮影し、メラニンをよりよく表示するようにこれを反転させた。写真はまた、反転したＮｉｋｏｎ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  ＴＥ２０００Ｕ顕微鏡（倍率は、それぞれ、１５×および６０×）に接続したＩｎｆｉｎｉｔｙ２カメラを使用して撮影した。
【１００２】
次に、未処置ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、滅菌Ｃａ＋＋およびＭｇ＋＋不含ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（ＣＭＦ−ＤＰＢＳ）でやさしくすすぎ、滅菌吸収紙上で水分を吸い取って乾燥させ、過剰な液体を除去した。次に、ＭＴＴ生存率のエンドポイント（項目「ＭＴＴアッセイ」を参照されたい）のために、３±０．１時間、適切なＭＴＴを含有するウェルに２つの組織を移した。３つの未処置ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、滅菌外科用メスを使用して細胞培養インサートから取り除き、ラベルを付けた１．５ｍＬマイクロフュージ管に入れて、後でメラニン分析（項目「メラニンアッセイ」を参照されたい）を行うため、＜−６０℃で保管した。
試験物品の調製
【１００３】
試験物品であるＣＶ−８６８６およびＡＢ１１６４４は、ＤＭＳＯ中の保存溶液（それぞれ、約１００ｍＭ）として提供した。試験物品は、滅菌ＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭにおいて、５０μＭおよび２００μＭの希釈液として試験システムに投与した。試験物品のＤＭＳＯ（ビヒクル対照）は、滅菌ＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭにおいて、０．２％希釈液として、試験システムに投与した。
【１００４】
試験物品は、以下の手順を使用してそれぞれ調製した：提供された保存溶液濃度から始めて、各試験物品２μｌを最初に適切な体積のＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭにより希釈し、２００μＭの最終濃度にした。２００μＭの希釈液の２５０ｕＬ（各試験物品に対応する）を７５０μＬのＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭに加え、本検討に使用する５０μＬの希釈液を調製した。この試験物品希釈液を少なくとも１分間、ボルテックスし、１５分間、３７℃±１℃（水浴中）で加熱し、少なくとも１分間、再度、ボルテックスした後に、２５μＬの量で組織に施用した。
【１００５】
溶媒対照であるＤＭＳＯをＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭにより希釈（ｖ／ｖ）して０．２％の最終濃度にした。希釈した溶媒対照を少なくとも１分間、ボルテックスした後、２５μＬの量で組織に施用した。
試験物品によるＭＴＴの直接還元の評価
【１００６】
２ｍＭのＬ−グルタミン（ＭＴＴ添加培地）を含有する温かいダルベッコの改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で１．０ｍｇ／ｍＬのＭＴＴ（Ｓｉｇｍａ）溶液に各試験物品の希釈液を加え、ＭＴＴを直接還元する各試験物品の能力を評価した。約２５μＬの各試験物品をＭＴＴ溶液１ｍＬに加え、この混合物を約１時間、標準培養条件でインキュベートした。陰性対照である滅菌脱イオン水（Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）２５μＬを、同時に試験した。ＭＴＴ溶液の色が青色／紫色に変わった場合、試験物品はＭＴＴを還元したと推定した。
【１００７】
試験物品、ＣＶ−８６８６、ＡＢ１１６４４およびＤＭＳＯは、生存細胞の非存在下で、ＭＴＴを直接、還元することが観察されなかった。
ｐＨ決定
【１００８】
各試験物品のｐＨは、ｐＨ試験紙（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用して測定した。最初に、ｐＨ０〜１４の範囲で、狭いｐＨ範囲に近似するよう、１．０ｐＨ単位の増分のｐＨ試験紙に各試験物品を加えた。次に、ｐＨ５〜１０というより狭い範囲で、より正確なｐＨ値を得るため、０．５ｐＨの単位の増分のｐＨ試験紙に各試験物品を加えた。各試験物品のｐＨは、組織に施用された各用量に関して測定した（適切な場合、０日目、２日目、４日目、６日目、１０日目、１２日目、１４日目）。
決定的なアッセイ
試験物品の処置：７ＴＤ群＝７日間のアッセイ（隔日での処置）
【１００９】
７日間の期間にわたり、２５ｕＬの投与体積で、８つのＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を４８±２時間毎に、試験物品（指定濃度のＣＶ−８６８６およびＡＢ１１６４４）で局所処置した。２つのＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、７日間の試験の間、それぞれ、陰性対照、２５μＬの滅菌脱イオン水（Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）および陽性対照（滅菌脱イオン水中で調製した１％コウジ酸）のそれぞれで、４８±２時間毎に局所処置した。コウジ酸溶液は、調製時にろ過し、使用するまで（調製から２時間）アルミニウムホイルで覆った管中に保管した。組織を試験物品およびアッセイ対照でそれぞれ、７日間の期間にわたり、４８±２時間毎に処置した。次に、曝露組織を標準培養条件でインキュベートした。
試験物品処置：７ＴＤ＋７ＮＴＤ＝隔日で７日間の処置、次に処置なしに７日間（回復）
【１０１０】
７日間の期間にわたり、８つのＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を４８±２時間毎に、２５ｕＬの投与体積の試験物品（プロトコールにおいて指定されている濃度のＣＶ−８６８６）で局所処置した。組織を試験物品で、７日間の期間にわたり、４８±２時間毎に処置した。隔日で最初の７日間の処置後、追加処置を局所的に行わずに、さらに７日間の期間、組織を培養した。以下に詳述されている通り、これらの組織に、毎日、「再供給」した。次に、曝露組織を標準培養条件でインキュベートした。
試験物品処置：１４ＴＤ群＝隔日で１４日間の処置
【１０１１】
７日間の期間にわたり、８つのＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を４８±２時間毎に、２５ｕＬの投与体積の試験物品（プロトコールにおいて指定されている濃度のＣＶ−８６８６およびＤＭＳＯ）で局所処置した。２つのＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、１４日間の試験の間、それぞれ、陰性対照、２５μＬの滅菌脱イオン水（Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）および陽性対照（滅菌脱イオン水中で調製した１％コウジ酸）の各々により、４８±２時間毎に局所処置した。コウジ酸溶液は、調製時にろ過し、使用するまで（調製から２時間）アルミニウムホイルで覆った管中に保管した。組織を試験物品およびアッセイ対照でそれぞれ、１４日間の期間にわたり、４８±２時間毎に処置した。次に、曝露組織を標準培養条件でインキュベートした。
【１０１２】
処置したＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織に、毎日「再供給」した。組織をやさしく叩いて、局所施用された対照の均一な再広がりを確実にした。次に、０．９ｍＬの事前加温した（約３７℃）ＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭを含有する、事前にラベルを付けた新しい６ウェルプレートに処置組織を入れて、インキュベータに戻し、標準培養条件に維持した。
【１０１３】
４８±２時間の各曝露時間の後、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、約５００μＬのＣａ＋＋Ｍｇ＋＋不含ＤＰＢＳにより３回、やさしくすすぎ、いかなる残留試験物品も除去した。最初に、０．９ｍＬの事前加温した（約３７℃）ＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭを含有する事前にラベルを付けた新しい６ウェルプレートに組織を入れて、次に、上で議論した適正な試験物品、陰性または陽性対照を投与した。
【１０１４】
個々の試験（それぞれ、７ＴＤ；７ＴＤ＋７ＮＴＤ；および１４ＴＤ）の終了時に、各処置群の組織（試験物品、陰性対照および陽性対照）をＣａ＋＋Ｍｇ＋＋不含ＤＰＢＳによりやさしくすすぎ、滅菌吸収紙上で水分を吸い取って乾燥させ、過剰な液体を除去した。次に、デジタルカメラ（ＣＡＮＯＮ製カメラ、ＰｏｗｅｒＳｈｏｔ  ＳＸ１３０ＩＳ、１２×光学ズーム、手動設定）を使用して組織の写真を撮影し、アッセイの開始時における、組織の色素沈着の程度の目視評価の一助とした。これらの巨視的写真は、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織の底面から撮影し、メラニンをよりよく表示するようにこれを反転させた。顕微鏡写真は、反転したＮｉｋｏｎ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  ＴＥ２０００Ｕ顕微鏡（倍率は、それぞれ、１５×および６０×）に接続したＩｎｆｉｎｉｔｙ２カメラを使用して撮影した。
【１０１５】
次に、各処置群に由来する３つの組織をＣＭＦ−ＤＰＢＳですすぎ、滅菌吸収紙上で水分を吸い取って乾燥させ、過剰な液体を除去した。滅菌外科用メスを使用してインサートから組織を取り除き、ラベルを付けた１．５ｍＬのマイクロフュージ管に入れて、メラニンアッセイの項目に記載されているその後のメラニン分析のために、＜−６０℃で一晩、保管した。次に、各処置群（試験物品、陰性対照および陽性対照）の２つのＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、滅菌Ｃａ＋＋およびＭｇ＋＋不含のダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（ＣＭＦ−ＤＰＢＳ）でやさしくすすぎ、滅菌吸収紙上で水分を吸い取って乾燥させ、過剰な液体を除去した。次に、ＭＴＴ生存率のエンドポイント（項目「ＭＴＴアッセイ」を参照されたい）のために、約３時間、適切なＭＴＴを含有するウェルに組織を移した。
ＭＴＴアッセイ
【１０１６】
温かいＭＴＴの添加培地中の１．０ｍｇ／ｍＬのＭＴＴ溶液を、使用前の２時間以内に調製した。適切な曝露時間の後、ＭＴＴエンドポイントに指定したＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織をＣＭＦ−ＤＰＢＳにより広範囲にすすぎ、洗浄用培地をデカンテーションした。事前にラベルを付けた２４ウェルプレートにおいて、指定ウェルに０．３ｍＬのＭＴＴ試薬を加えた。すすぎ後、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を適正なウェルに移した。このプレートを約３時間、標準培養条件でインキュベートした。
【１０１７】
ＭＴＴ溶液によるインキュベート期間の後に、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、滅菌吸収紙上で水分を吸い取り、過剰な液体を除去し、各指定ウェルにイソプロパノール２．０ｍＬを含有する、予めラベルを付けた２４ウェルプレートに移した。次に、これらのプレートを室温で少なくとも２時間、振とうした。
【１０１８】
抽出期間の終了時に、細胞培養インサート内の液体を、細胞培養インサートを取り出したウェル内にデカンテーションした。抽出溶液を混合し、２００μＬを各試料について指定した９６ウェルプレートの２つのウェルに移し、２００μＬのイソプロパノールをブランクとして指定した２つのウェルに入れた。各ウェルの５５０ｎｍでの吸光度（ＯＤ５５０）をＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｖｍａｘプレートリーダーで測定した。
メラニンアッセイ
【１０１９】
メラニン抽出の当日、切除した組織を室温で約２０分間、解凍した。可溶物２５０μＬを各マイクロフュージ管に加え、これらの管を、ドライ浴中、メラニン標準品と共に、少なくとも１６時間、６０±２℃でインキュベートした。試料と共に、同日に調製した各試験物品の希釈液２５μＬを可溶物２５０μＬと混合し、ドライ浴中（研究開発目的のためのみ）、少なくとも１６時間、６０±２℃でインキュベートした。メラニンを可溶物に溶解することにより、１ｍｇ／ｍＬのメラニンの標準保存溶液を調製した。一連のメラニン標準品は、１ｍｇ／ｍＬのものから調製した。この標準品のシリーズは、１ｍｇ／ｍＬのメラニン標準保存溶液０．６ｍＬを１．２ｍＬの可溶物に加え、次に、さらに一連の５種の希釈液（希釈ファクターは３）を作製することによって調製した。可溶物をゼロ標準品として使用した。
【１０２０】
メラニン抽出を開始して、少なくとも１６時間後に、試料（ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織から抽出したメラニンとする）、可溶物と混合した試験物品の希釈液、および標準品を含有する管を室温まで冷却して、次に、室温で１３，０００ｒｐｍで５分間、遠心分離した。試料２００μＬを９６ウェルプレートの適正なウェルに移した。標準品２００μＬおよびブランクを９６ウェルプレートの適正なウェルに二連で移した。試験物品の希釈液２００μＬおよびＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ培地を単一ウェルだけの９６ウェルプレートの適正なウェルに移した。各ウェルの４９０ｎｍでの吸光度（ＯＤ４９０）をＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｖｍａｘプレートリーダーで測定した。
データの提示
ＭＴＴデータ  −  ０日目
【１０２１】
生の吸光度データを取り込んだ。ブランクのウェルの平均ＯＤ５５０値を計算した。未処置組織の補正後のＯＤ５５０値は、この未処置組織のＯＤ５５０値からブランクのウェルの平均ＯＤ５５０値を減算することによって求めた。個々の生存率（％）の値は、個々の補正後のＯＤ５５０値を未処置組織に関して計算したＯＤ５５０値のすべての平均値によって除算することによって、個々の組織のそれぞれに関して表にした。総合的な平均％生存率を計算した。最後に、未処置組織の平均生存率の値を棒グラフにプロットした（±１標準偏差のエラーバーによる）。
ＭＴＴデータ  −  ７日目、１４日目
【１０２２】
生の吸光度データを取り込んだ。ブランクのウェルの平均ＯＤ５５０値を計算した。陰性対照の補正後の平均ＯＤ５５０値は、これらの平均ＯＤ５５０値からブランクのウェルの平均ＯＤ５５０値を減算することによって求めた。個々の試験物品に曝露したもの、陽性対照に曝露したものの、および陰性対照に曝露したものの補正後のＯＤ５５０値は、それぞれからブランクのウェルの平均ＯＤ５５０値を減算することによって求めた。
補正した試験物品の曝露時間ＯＤ５５０＝試験物品の曝露時間ＯＤ５５０−ブランクの平均ＯＤ５５０
【１０２３】
試験物品処置組織および陽性対照処置組織に関する対照の以下の割合の計算を行った：
生存率（％）＝［（試験物品または陽性対照の最終的な補正後のＯＤ５５０）／（陰性対照／溶媒対照の補正後の平均ＯＤ５５０）］×１００
【１０２４】
試験物品処置組織に関する対照の以下の割合の計算を行い、この場合、試験物品はＤＭＳＯ（溶媒対照）であった：
生存率（％）＝［（試験物品（溶媒対照）の最終的な補正後のＯＤ５５０）／（陰性対照の補正後の平均ＯＤ５５０）］×１００
【１０２５】
対照値の個々の％を平均して、各試験物品または陽性対照あたりの対照の平均％を計算した。ＭＴＴ生存率の総合的な平均値を計算した。最後に、平均生存率の値を棒グラフにプロットした（±１標準偏差のエラーバーによる）。
メラニンデータ
【１０２６】
生の吸光度データを取り込んだ。各メラニン標準品のＯＤ４９０値を求めた。各メラニン標準品の平均ＯＤ４９０値を使用して、標準曲線を用意した。各メラニン標準品濃度の補正後のＯＤ４９０値は、このメラニン標準品濃度のＯＤ４９０値からブランクのウェルのＯＤ４９０値を減算することによって求めた。標準曲線は、対応する補正後の吸光度（ＯＤ４９０値）に対するｍｇ／ｍＬでの標準品の濃度（ｙ軸）としてプロットした。試験物品処置組織または陽性対照処置組織中のメラニンの量は、標準曲線（二次式）から数学的に補間した。
結果および議論
【１０２７】
アジア人のＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織モデルを使用するメラニン形成モジュレータースクリーニングアッセイにおいて、試験物品、ＣＶ−８６８６、ＤＭＳＯおよびＡＢ１１６４４を試験し、反復曝露後の、メラニン形成に対するそれらの皮膚刺激の可能性および影響を評価した。以下の処置期間を試験した：隔日で７日間の処置（７ＴＤ）；隔日で７日間の処置、続いて処置なしに７日間（回復）（７ＴＤ＋７ＮＴＤ）；および隔日で１４日間の処置（１４ＴＤ）。
【１０２８】
試験物品は、滅菌ＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ中で調製したｖ／ｖ希釈液として、試験システムに投与した。試験物品ＣＶ−８６８６およびＡＢ１１６４４は、２００μＭおよび５０μＭの希釈液として試験システムに投与した。試験物品のＤＭＳＯ（ビヒクル対照）は、０．２％（ｖ／ｖ）希釈液として、試験システムに投与した。試験物品の希釈液はそれぞれ、５つのＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織に局所施用した（ＭＴＴエンドポイントに指定した２つ、およびメラニンのエンドポイントに指定した３つ）。これらの組織を各試験物品２５μＬで、各々の個々の試験期間にわたり、４８±２時間毎に処置した。陰性対照（滅菌脱イオン水）および陽性対照（滅菌脱イオン水中で調製した１％コウジ酸）を５つのＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織の各々（ＭＴＴエンドポイントに指定した２つ、およびメラニンのエンドポイントに指定した３つ）に局所施用し、それぞれ、７日間および１４日間にわたり、４８±２時間毎に２５μＬで処置した。
【１０２９】
図６８〜６９は、試験物品、陰性対照および陽性対照に対する平均組織生存率およびメラニン濃度の結果を要約している。図７０〜７４は、０日目、７日目および１４日目における、組織の色素沈着の程度を目視評価する一助とするために撮影した組織の代表液な巨視的写真および顕微鏡写真（１５×倍率のみ）を含む。それらの写真は、各処置群内の複製組織の代表、および今後のデータの解釈に関連するものと見なす。巨視的写真は、組織中の総合的なメラニン産生、および組織の表面上のその分布を示す。顕微鏡写真により、試験物品／対照処置に関連する、メラニン産生、樹状細胞の存在または任意の形態学的変化に関するメラノサイトの生理的状態の一般的な見解がもたらされる。
【１０３０】
組織生存率の評価を使用して、このプロトコールにおいて指定された期間にわたる反復曝露後の、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織への試験物品の潜在的な皮膚刺激を評価した。試験物品により処置された組織の生存率は、比較的高く（７ＴＤの処置期間の場合、すべての場合で＞７５％である）、このことは、この組織モデルに対する試験物品により誘発される細胞毒性は最小限から全くないことを示す。用量応答は、試験物品ＣＶ−８６８６およびＡＢ１１６４４の場合に顕著であり、この場合、５０μＭの希釈液として調製された化合物により処置された組織に比べると、高い濃度（２００μＭ）で処置された組織ほどわずかに低い生存率を有した。組織の生存率は、曝露時間が長くなるにつれて（７ＴＤ＋７ＮＴＤ；および１４ＴＤ処置期間）、次第に低下した。同様に、このアッセイの陽性対照である１％コウジ酸により処置された組織の生存率は、７ＴＤの試験期間の場合、１１９．０％となり、１４ＴＤ試験期間の場合、４８．８％に低下した。これらの結果は、この組織モデルは、生存率に対する様々な濃度の試験物品の作用を判別することが可能であることを示す。
【１０３１】
このプロトコールにおいて指定されている期間にわたる反復曝露後の試験物品により処置された組織によるメラニン産生の評価を使用して、皮膚メラニン形成モジュレーターとして試験物品の可能性を評価した。陽性対照である１％のコウジ酸により、陽性対照処置組織（７ＴＤ）では、陰性対照処置組織（５５．８μｇ／ｍＬ）と比較すると、メラニン濃度が２３．３μｇ／ｍＬにまで低下した。陽性対照である１％のコウジ酸により、陽性対照処置組織（１４ＴＤ）では、陰性対照処置組織（１７４．０μｇ／ｍＬ）と比較すると、メラニン濃度が２９．１μｇ／ｍＬにまで低下した。ＤＭＳＯにより処置した組織に関して求まったメラニン濃度は、１３５．８μｇ／ｍＬ（１４ＴＤ）となり、こうして、ビヒクル対照は、それ自体、メラニン産生に影響を及ぼさないことを示す。試験物品処置組織におけるメラニン濃度は、陰性対照処置組織（１４ＴＤ期間の場合に際立つ）に比べると、より低かった。一般に、メラニンアッセイを行うことにより得られる客観的結果は、本検討の間に撮影した巨視的写真および顕微鏡写真の解析に基づいた主観的観察によって支持される。
【１０３２】
試験物品、ＣＶ−８６８６、ＤＭＳＯおよびＡＢ１１６４４は、生存細胞の非存在下で、ＭＴＴを直接、還元しなかった。したがって、死滅対照実験は行わなかった。
検討の概要２
【１０３３】
この検討の目的は、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）皮膚モデルにおける、７日の処置にわたる反復曝露後の皮膚メラニン形成モジュレーターとしての試験物品の潜在作用を評価することであった。本検討はまた、７日間の処置期間にわたる試験物品への反復曝露後の、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織によるＭＴＴの変換によって測定される、各試験物品によって誘導される潜在的な皮膚刺激を評価した。
【１０３４】
ＭＴＴ（臭化３−［４，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウム）が青色のホルマザン沈殿物へとＮＡＤ（Ｐ）Ｈ−依存性ミクロソーム酵素還元される（およびより少ない程度でのＭＴＴのコハク酸デヒドロゲナーゼ還元）のを測定する、ＭＴＴ変換アッセイを使用して、試験物品１への曝露後の細胞の代謝を評価した。潜在的な皮膚刺激に対する証拠である、組織に対する試験物品の毒性は、陰性対照処置組織に対する、相対生存率−ＭＴＴ変換率を測定することにより求めた。
物質および方法
ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）皮膚モデルの受領
【１０３５】
ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）皮膚キット（ＭａｔＴｅｋ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）の受領時に、製造業者によって指示されている通りに溶液を保管した。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を使用するまで、２〜８℃で保管した。受領した日（投与の前日）に、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）維持培地（ＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ）を約３７℃に温めた。０．９ｍＬのＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭを６ウェルプレートの適正なウェルに等分した。試験物品または対照、ならびにそれらの用量体積および曝露条件（ＭＴＴおよびメラニンのエンドポイントのために指定）を表示するために、６ウェルプレートにラベルを付けた。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織をそれぞれ、封止パッケージを開口する前に、アガロースゲルと細胞培養インサートとの間の気泡について検査した。細胞培養インサート領域の５０％を超えて覆う気泡を有する組織は使用しなかった。２４ウェルの輸送用容器をプラスチック製バッグから取り出し、その表面を７０％エタノールで消毒した。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、６ウェルプレートに無菌で移した。次に、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、空気中５±１％ＣＯ２の加湿雰囲気中、３７±１℃（標準培養条件）で一晩（少なくとも１６時間）、インキュベートした。
【１０３６】
受領した日から組織をインキュベートして少なくとも１６時間後に、ＭＴＴ（２つの組織−この報告の目的の場合、「未処置日数」０と呼ぶ）およびメラニン（３つの組織）エンドポイントに指定される５つのＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織をそれぞれ、滅菌Ｃａ＋＋およびＭｇ＋＋不含のダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（ＣＭＦ−ＤＰＢＳ）によりやさしくすすぎ、滅菌吸収紙上で水分を吸い取って乾燥させ、過剰な液体を除去した。次に、デジタルカメラ（ＣＡＮＯＮ製カメラ、ＰｏｗｅｒＳｈｏｔ  ＳＸ１３０ＩＳ、１２×光学ズーム、手動設定、およびＲｉｃｏｈ  ＷＧ−５０、顕微鏡モード、１ｃｍズーム）を使用して組織の写真を撮影し、アッセイの開始時における、組織の色素沈着の程度を目視評価する一助とした。これらの写真は、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織の底面から撮影し、メラニンをよりよく表示するようにこれを反転した。写真はまた、反転したＮｉｋｏｎ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  ＴＥ２０００Ｕ顕微鏡（倍率は、それぞれ、１５×および６０×）に接続したＩｎｆｉｎｉｔｙ２カメラを使用して撮影した。
【１０３７】
次に、ＭＴＴ生存率のエンドポイントのために３±０．１時間、適切なＭＴＴを含有するウェルに２つの未処置ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）を移した。３つの未処置ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、滅菌外科用メスを使用して細胞培養インサートから取り除き、ラベルを付けた１．５ｍＬのマイクロフュージ管に入れて、後のメラニン分析（項目メラニンアッセイを参照されたい）のために、＜−６０℃で保管した。
試験物品の調製
【１０３８】
保存溶液濃度をＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭによって希釈して２００μＭおよび５００μＭの最終濃度にすることによって、試験物品、マラセジン（ＣＶ−８６８４）、化合物Ｂ（ＣＶ−８８７７）、化合物Ｅ（ＡＢ１２５０８）、化合物Ｈ（ＡＢ１２５０９）、未知組成物、化合物Ａ５（ＣＶ−８８１９）およびＯ５２（ＡＢ１２９７６）を調製した。保存溶液濃度を５００μＭに希釈することによって、試験物品、化合物Ｉ（ＣＶ−８６８６）を調製した。希釈液はすべて、少なくとも１分間、ボルテックスし、次に、３７℃±１℃の水浴で１５分間、加熱した。次に、組織に投与する前に、この希釈液を少なくとも１分間、再度、ボルテックスした。試験物品および溶媒対照であるＤＭＳＯは、ＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ中、０．５％（ｖ／ｖ）希釈液として調製した。試験物品の希釈液は、組織への施用前に、少なくとも１分間、次に、再度、少なくとも１分間、ボルテックスした。試験物品である化合物Ｉ製剤は、希釈しないで（無希釈）試験した。
試験物品によるＭＴＴの直接還元の評価
【１０３９】
２ｍＭのＬ−グルタミン（ＭＴＴ添加培地）を含有する温かいダルベッコの改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で１．０ｍｇ／ｍＬのＭＴＴ（Ｓｉｇｍａ）溶液に、希釈した最高濃度の各試験物品を加え、ＭＴＴを直接還元するその能力を評価した。約２５μＬの各試験物品をＭＴＴ溶液１ｍＬに加え、この混合物を約１時間、標準培養条件でインキュベートした。陰性対照である滅菌脱イオン水（Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）２５μＬを同時に試験した。ＭＴＴ溶液の色が青色／紫色に変わった場合、試験物品はＭＴＴを還元したと推定した。
【１０４０】
生存細胞の非存在下で、試験物品、ＤＭＳＯ、化合物Ｉ（ＣＶ−８６８６）、マラセジン（ＣＶ−８６８４）、化合物Ｂ（ＣＶ−８８７７）、化合物Ｅ（ＡＢ１２５０８）、化合物Ｈ（ＡＢ１２５０９）、未知組成物、化合物Ａ５（ＣＶ−８８１９）、Ｏ５２（ＡＢ１２９７６）および化合物Ｉの製剤は、ＭＴＴを直接、還元することが観察されなかった。
ｐＨ決定
【１０４１】
各試験物品および陽性対照のｐＨは、ｐＨ試験紙（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用して測定した。最初に、ｐＨ０〜１４の範囲で、狭いｐＨ範囲に近似するよう、１．０ｐＨ単位の増分のｐＨ試験紙に各試験物品または陽性対照を加えた。次に、ｐＨ０〜６または５〜１０というより狭い範囲で、より正確なｐＨ値を得るため、０．５ｐＨの単位の増分のｐＨ試験紙に各試験物品または陽性対照を加えた。各試験物品または陽性対照のｐＨは、適切な場合、組織に施用された各用量に関して測定した（０日目、２日目、４日目、６日目）。
決定的なアッセイ
試験物品の処置
【１０４２】
７日間の期間にわたり、２５ｕＬの投与体積で指定した濃度において、試験物品、溶媒対照（ＤＭＳＯ）、化合物Ｉ（ＣＶ−８６８６）、マラセジン（ＣＶ−８６８４）、化合物Ｂ（ＣＶ−８８７７）、化合物Ｅ（ＡＢ１２５０８）、化合物Ｈ（ＡＢ１２５０９）、未知組成物、化合物Ａ５（ＣＶ−８８１９）、Ｏ５２（ＡＢ１２９７６）および化合物Ｉの製剤によって、５つのＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を４８±２時間毎に局所処置した。
【１０４３】
陰性対照である２５μＬの滅菌脱イオン水（Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）により、１つのＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を４８±２時間毎に局所処置した。５つのＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、７日間の試験の間、陽性対照（滅菌脱イオン水中で調製した１％コウジ酸）で、４８±２時間毎に局所処置した。コウジ酸溶液は、調製時にろ過し、使用するまで（調製から２時間）アルミニウムホイルで覆った管中に保管した。組織を試験物品およびアッセイ対照でそれぞれ、７日間の期間にわたり、４８±２時間毎に処置した。次に、曝露組織を標準培養条件でインキュベートした。
【１０４４】
処置したＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織は、毎日「再供給」した。組織をやさしく叩いて、局所施用された対照の均一な再広がりを確実にした。次に、０．９ｍＬの事前加温した（約３７℃）ＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭを含有する、事前にラベルを付けた新しい６ウェルプレートに処置組織を入れて、インキュベータに戻し、標準培養条件で維持した。
【１０４５】
４８±２時間の各曝露時間の後、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、約５００μＬのＣａ＋＋Ｍｇ＋＋不含のＤＰＢＳにより３回、やさしくすすぎ、いかなる残留試験物品も除去した。次に、０．９ｍＬの事前加温した（約３７℃）ＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭを含有する事前にラベルを付けた新しい６ウェルプレートに組織を入れて、次に、上で議論した適正な試験物品、陰性または陽性対照を投与した。
【１０４６】
７日間の曝露期間の終了時に、各処置群の組織（試験物品、陰性対照、陽性対照および溶媒対照）をＣａ＋＋Ｍｇ＋＋不含ＤＰＢＳによりやさしくすすぎ、滅菌吸収紙上で水分を吸い取って乾燥させ、過剰な液体を除去した。次に、デジタルカメラ（ＣＡＮＯＮ製カメラ、ＰｏｗｅｒＳｈｏｔ  ＳＸ１３０ＩＳ、１２×光学ズーム、手動設定、およびＲｉｃｏｈ  ＷＧ−５０、顕微鏡モード、１ｃｍズーム）を使用して組織の写真を撮影し、アッセイの開始時における、組織の色素沈着の程度の目視評価の一助とした。これらの巨視的写真は、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織の底面から撮影し、メラニンをよりよく表示するようにこれを反転させた。顕微鏡写真は、反転したＮｉｋｏｎ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  ＴＥ２０００Ｕ顕微鏡（倍率は１５×）に接続したＩｎｆｉｎｉｔｙ２カメラを使用して撮影した。
【１０４７】
次に、各試験物品の濃度に関すると、陽性対照および溶媒対照、２つの組織をＣＭＦ−ＤＰＢＳですすぎ、滅菌吸収紙上で水分を吸い取って乾燥させ、過剰な液体を除去した。陰性対照の場合、単一組織をＣＭＦ−ＤＰＢＳですすぎ、滅菌吸収紙上で水分を吸い取って乾燥させ、過剰な液体を除去した。滅菌外科用メスを使用してインサートから組織を取り除き、ラベルを付けた１．５ｍＬのマイクロフュージ管に入れて、その後のメラニン分析のために、＜−６０℃で一晩、保管した。
【１０４８】
次に、試験物品、ＤＭＳＯ、化合物Ｉ（ＣＶ−８６８６）、マラセジン（ＣＶ−８６８４）、化合物Ｂ（ＣＶ−８８７７）、化合物Ｅ（ＡＢ１２５０８）、化合物Ｈ（ＡＢ１２５０９）、未知組成物、化合物Ａ５（ＣＶ−８８１９）（５００μＭ）、Ｏ５２（ＡＢ１２９７６）（５００μＭ）、化合物Ｉの製剤および陽性対照の２つのＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織、ならびに試験物品、化合物Ａ５（ＣＶ−８８１９）（２００μＭ）およびＯ５２（ＡＢ１２９７６）（２００μＭ）の場合の３つのＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、滅菌Ｃａ＋＋およびＭｇ＋＋不含のダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（ＣＭＦ−ＤＰＢＳ）によりやさしくすすぎ、滅菌吸収紙上で水分を吸い取って乾燥させ、過剰な液体を除去した。次に、ＭＴＴ生存率のエンドポイントのために、約３時間、適切なＭＴＴを含有するウェルに組織を移した。
ＭＴＴアッセイ
【１０４９】
温かいＭＴＴの添加培地中の１．０ｍｇ／ｍＬのＭＴＴ溶液を、使用前の２時間以内に調製した。適切な曝露時間の後、ＭＴＴエンドポイントに指定したＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織をＣＭＦ−ＤＰＢＳにより広範囲にすすぎ、洗浄用培地をデカンテーションした。事前にラベルを付けた２４ウェルプレートにおいて、指定ウェルに０．３ｍＬのＭＴＴ試薬を加えた。すすぎ後、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を適正なウェルに移した。このプレートを約３時間、標準培養条件でインキュベートした。
【１０５０】
ＭＴＴ溶液によるインキュベート期間の後に、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、滅菌吸収紙上で水分を吸い取り、過剰な液体を除去し、各指定ウェルにイソプロパノール２．０ｍＬを含有する、予めラベルを付けた２４ウェルプレートに移した。次に、これらのプレートを室温で少なくとも２時間、振とうした。
【１０５１】
抽出期間の終了時に、細胞培養インサート内の液体を、細胞培養インサートを取り出したウェル内にデカンテーションした。抽出溶液を混合し、２００μＬを各試料に指定した９６ウェルプレートの２つのウェルに移し、２００μＬのイソプロパノールをブランクとして指定した２つのウェルに入れた。各ウェルの５５０ｎｍでの吸光度（ＯＤ５５０）をＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｖｍａｘプレートリーダーで測定した。
メラニンアッセイ
【１０５２】
メラニン抽出の当日、切除した組織を室温で約１５分間、解凍した。可溶物２５０μＬを各マイクロフュージ管に加え、これらの管を、ドライ浴中、メラニン標準品と共に、少なくとも１６時間、６０±２℃でインキュベートした。メラニンを可溶物に溶解することにより、１ｍｇ／ｍＬのメラニンの標準保存溶液を調製した。一連のメラニン標準品は、１ｍｇ／ｍＬ保存溶液から調製した。この標準品のシリーズは、１ｍｇ／ｍＬのメラニン標準保存溶液０．６ｍＬを１．２ｍＬの可溶物に加え、次に、さらに一連の５種の希釈液（希釈ファクターは３）を作製することによって調製した。可溶物をゼロ標準品として使用した。
【１０５３】
メラニン抽出を開始して、少なくとも１６時間後に、試料（ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織から抽出したメラニンとする）および標準品を含有する管を室温まで冷却し、次に、室温で、１３，０００ｒｐｍで５分間、遠心分離した。試料２００μＬを９６ウェルプレートの適正なウェルに移した。標準品２００μＬおよびブランクを９６ウェルプレートの適正なウェルに二連で移した。各ウェルの４９０ｎｍでの吸光度（ＯＤ４９０）をＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｖｍａｘプレートリーダーで測定した。
データの提示：
ＭＴＴデータ  −  ０日目
【１０５４】
生の吸光度データを取り込んだ。ブランクのウェルの平均ＯＤ５５０値を計算した。各未処置組織の補正後のＯＤ５５０値は、この未処置組織のＯＤ５５０値からブランクのウェルの平均ＯＤ５５０値を減算することによって求めた。個々の補正後のＯＤ５５０値を未処置組織に関して計算したＯＤ５５０値のすべての平均値によって除算することによる、個々の組織のそれぞれに関する個々の生存率（％）の値を表にした。総合的な平均％生存率を計算した。最後に、未処置組織の平均生存率の値を棒グラフにプロットした（±１標準偏差のエラーバーによる）。
ＭＴＴ  −  ７日目
【１０５５】
生の吸光度データを取り込んだ。計算はすべて、Ｅｘｃｅｌ（登録商標）のスプレッドシートを使用して行った。ブランクのウェルの平均ＯＤ５５０値を計算した。陰性対照の補正後の平均ＯＤ５５０値は、これらの平均ＯＤ５５０値からブランクのウェルの平均ＯＤ５５０値を減算することによって求めた。個々の試験物品に曝露したもの、陽性対照に曝露したものおよび陰性対照に曝露したものの補正後のＯＤ５５０値は、それぞれからブランクのウェルの平均ＯＤ５５０値を減算することによって求めた。
補正した試験物品の曝露時間ＯＤ５５０＝試験物品の曝露時間ＯＤ５５０−ブランク平均ＯＤ５５０
【１０５６】
試験物品処置組織および陽性対照処置組織に関する対照の以下の割合の計算を行った：
生存率（％）＝［（試験物品または陽性対照の最終的な補正後のＯＤ５５０）／（陰性／溶媒対照の補正後の平均ＯＤ５５０）］×１００
【１０５７】
対照値の個々の％を平均して、各試験物品または陽性対照あたりの対照の平均％を計算した。ＭＴＴ生存率の総合的な平均値を計算した。最後に、平均生存率の値を棒グラフにプロットした（±１標準偏差のエラーバーによる）。
メラニンデータ
【１０５８】
生の吸光度データを取り込んだ。各メラニン標準品のＯＤ４９０値を求めた。各メラニン標準品の平均ＯＤ４９０値を使用して、標準曲線を用意した。各メラニン標準品濃度の補正後のＯＤ４９０値は、このメラニン標準品濃度のＯＤ４９０値からブランクのウェルのＯＤ４９０値を減算することによって求めた。標準曲線は、対応する補正後吸光度（ＯＤ４９０値）に対するｍｇ／ｍＬでの標準品の濃度（ｙ軸）としてプロットした。試験物品、陽性対照処置組織または陰性対照処置組織中のメラニンの量は、標準曲線（二次式）から数学的に補間した。
結果および議論
【１０５９】
アジア人のＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織モデルを使用するメラニン形成モジュレータースクリーニングアッセイにおいて、試験物品、ＤＭＳＯ、化合物Ｉ（ＣＶ−８６８６）、マラセジン（ＣＶ−８６８４）、化合物Ｂ（ＣＶ−８８７７）、化合物Ｅ（ＡＢ１２５０８）、化合物Ｈ（ＡＢ１２５０９）、未知組成物、化合物Ａ５（ＣＶ−８８１９）、Ｏ５２（ＡＢ１２９７６）および化合物Ｉの製剤を使用し、７日間の曝露期間にわたる反復曝露後の、メラニン形成に対するそれらの皮膚刺激の可能性および影響を評価した。
【１０６０】
試験物品は、無希釈での、または滅菌ＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ中で調製したｖ／ｖ希釈液として、試験システムに投与した。試験物品マラセジン（ＣＶ−８６８４）、化合物Ｂ（ＣＶ−８８７７）、化合物Ｅ（ＡＢ１２５０８）、化合物Ｈ（ＡＢ１２５０９）、未知組成物、化合物Ａ５（ＣＶ−８８１９）およびＯ５２（ＡＢ１２９７６）を、５００μＭおよび２００μＭの希釈液として試験システムに投与した。試験物品、化合物Ｉ（ＣＶ−８６８６）は、５００μＭの希釈液として、試験システムに投与した。試験物品のＤＭＳＯ（ビヒクル対照）は、０．５％（ｖ／ｖ）希釈液として、試験システムに投与した。試験物品、化合物Ｉの製剤は、無希釈で試験した。試験物品の各希釈液を、５つのＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織に局所施用し、２つ（または３つ）は、ＭＴＴエンドポイントに指定した化合物Ａ５（ＣＶ−８８１９）（２００μＭ）およびＯ５２（ＡＢ１２９７６）（２００μＭ）向けであり、２つは、化合物Ａ５（ＣＶ−８８１９）（２００μＭ）およびＯ５２（ＡＢ１２９７６）（２００μＭ）を除外した、メラニンのエンドポイント向けである。組織を各試験物品２５μＬで、個々の試験期間のそれぞれにわたり、４８±２時間毎に処置した。陽性対照（滅菌脱イオン水中で調製した１％コウジ酸）を５つのＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織それぞれ（ＭＴＴエンドポイントに指定した２つ、およびメラニンのエンドポイントに指定した２つ）に局所的に施用し、７日間の期間にわたり、４８±２時間毎に２５μＬで処置した。
【１０６１】
図７５は、試験物品、陰性対照および陽性対照に対する平均組織生存率およびメラニン濃度の結果を要約している。図７６〜８７は、０日目および７日目における、組織の色素沈着の程度を目視評価する一助とするために撮影した組織の代表液な巨視的写真および顕微鏡写真（１５×倍率のみ）を含む。それらの写真は、各処置群内の複製組織の代表、および今後のデータの解釈に関連するものと見なす。巨視的写真は、組織中の総合的なメラニン産生、および組織の表面上のその分布を示す。顕微鏡写真により、試験物品／対照処置に関連する、メラニン産生、樹状細胞の存在または任意の形態学的変化に関するメラノサイトの生理的状態の一般的な見解がもたらされる。
【１０６２】
７日間にわたる反復曝露後の試験物品により処置された組織によるメラニン産生の評価を使用して、皮膚メラニン形成モジュレーターとして試験物品の可能性を評価した。陽性対照である１％のコウジ酸により、溶媒対照処置組織（５３．８２μｇ／ｍＬ）と比較して、陽性対照処置組織では、メラニン濃度が２２．０１μｇ／ｍＬにまで低下した。一般に、メラニンアッセイを行うことにより得られる客観的結果は、行った本検討の間に撮影した巨視的写真および顕微鏡写真の解析に基づいた主観的観察によって支持される。
【１０６３】
生存細胞の非存在下で、試験物品、ＤＭＳＯ、化合物Ｉ（ＣＶ−８６８６）、マラセジン（ＣＶ−８６８４）、化合物Ｂ（ＣＶ−８８７７）、化合物Ｅ（ＡＢ１２５０８）、化合物Ｈ（ＡＢ１２５０９）、未知組成物、化合物Ａ５（ＣＶ−８８１９）、Ｏ５２（ＡＢ１２９７６）および化合物Ｉの製剤は、ＭＴＴを直接、還元しなかった。したがって、死滅対照実験は行わなかった。
【１０６４】
試験物品により、それらの個々の組織において、メラニンの濃度は、ＤＭＳＯ処置組織と比べて、陽性対照処置組織に対して得られたものと同等のレベルにまで低下した。例えば、試験物品である化合物Ｂ（ＣＶ−８８７７）（５００μＭ）により処置した組織中のメラニン濃度は、２５．９９μｇ／ｍＬであり、試験物品である化合物Ｅ（ＡＢ１２５０８）（５００μＭ）により処置した組織中の濃度は、アッセイでの陽性対照処置組織（２２．０１μｇ／ｍＬ）の濃度に比べると、２５．２６μｇ／ｍＬであった。
追加検討
【１０６５】
ＡＢ１７１５１、化合物Ｂ１０、マラセジン前駆体、ＡＢ１７０１１、ＡＢ１７０１４、ＤＭＳＯ、ＣＶ−８４８４、化合物Ｅおよびコウジ酸に対するＭｅｌａｎｏｄｅｒｍ（商標）の結果が図８８に示されている。
（実施例２０）
マラセジンおよびマラセジン誘導体のメラニン形成能
【１０６６】
この検討の目的は、マラセジンおよびマラセジン誘導体に曝露されたＢ１６メラノサイトのメラニン形成および生存率を観察ならびに報告することであった。
物質および試薬
【１０６７】
プレート培養用の培地は、Ｌ−グルタミン、ＦＢＳ、ペニシリン／ストレプトマイシンおよびＬ−グルタミンを含まないＤＭＥＭを含んだ。アッセイ培地は、フェノールレッドおよびＬ−グルタミン、ＦＢＳ、ペニシリン／ストレプトマイシン、Ｌ−グルタミンおよびａＭＳＨを含まないＤＭＥＭを含んだ。他の試薬は、コウジ酸、ＤＭＳＯおよびＭＴＴを含んだ。試験した細胞は、Ｂ１６細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−６４７５）であった。
プロトコール
【１０６８】
Ｂ１６メラノサイトは、７０％コンフルエントになるまで培養し、収穫した。４０００細胞／ウェルの密度で、９６ウェルプレートに細胞を播種し、一晩、付着させた。翌日、試験物品および対照をＢ１６アッセイ培地に希釈した。一晩、培地を吸引し、２００ｕｌの試験物品および対照を施用した。細胞を３７℃および１０％ＣＯ２で７２時間、インキュベートした。７２時間のインキュベート後、吸光度を５４０ｎｍで読み取った。培地を除去し、１ｍｇ／ｍＬのＭＴＴを含有するプレート培養用培地１００ｕｌと置き換え、３７℃および１０％ＣＯ２で、２時間、インキュベートした。ＭＴＴ培地を除去し、２００ｕｌの９５％エタノール／５％イソプロパノールにより置き換え、１５分間、振とうした。次に、ＭＴＴの吸光度を５７０ｎｍで読み取った。
結果
【１０６９】
メラニンおよび生存率の変化率の結果を、図８９Ａ〜８９Ｘに示す。
（実施例２１）
マラセジンおよびマラセジン誘導体の製剤
０．１％マラセジン製剤
【１０７０】
０．１％マラセジンの組成物は、以下の成分：水、カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド、グリセリン、Ｂｕｔｙｒｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｐａｒｋｉｉ（シア）脂、ウンデシレン酸ヘプチル、オリーブ油脂肪酸セテアリル、セチルアルコール、ジメチルイソソルバイド、ジメチコン、オリーブ油脂肪酸ソルビタン、マラセジン、スクアレン、グリチルリチン酸二カリウム、エチレンジアミンジコハク酸三ナトリウム、スクレロチウムガム、キサンタンガム、カプリリルグリコール、クロルフェンシンおよびフェノキシエタノールを使用して製剤化した。
【１０７１】
得られた組成物は、ｐＨ５．７２および粘度１４，０００ｃｐｓを有する、不透明な粘性のオフホワイト色のクリームであった。
０．１％の化合物Ｉの製剤
【１０７２】
０．１％の化合物Ｉの組成物は、マラセジンの代わりに化合物Ｉを用いて、０．１％マラセジン製剤について上で記載されているものと同じ成分を使用して製剤化した。
【１０７３】
得られた組成物は、ｐＨ５．６６および粘度１４，０００ｃｐｓを有する、不透明な粘性のオフホワイト色のクリームであった。
１％マラセジン製剤
【１０７４】
１％マラセジンの組成物は、以下の成分：水、ジメチルイソソルバイド、オリーブ油グリセレス−８エステル、グリセリン、ヤシアルカン、アクリル酸ヒドロキシエチル／アクリロイルジメチルタウリン酸ナトリウムのコポリマー、マラセジン、トコフェロール、ペンチレングリコール、ココカプリレート／カプレート、水酸化ナトリウム、ＥＤＴＡ二ナトリウム、カプリリルグリコール、クロルフェネシンおよびフェノキシエタノールを使用して製剤化した。
【１０７５】
得られた組成物は、ｐＨ６．２７および粘度２，０００ｃｐｓを有する、不透明な粘性のオフホワイト色のクリームであった。
１％の化合物Ｉの製剤
【１０７６】
１％の化合物Ｉの組成物は、マラセジンの代わりに化合物Ｉを用いて、１％マラセジン製剤について上で記載されているものと同じ成分を使用して製剤化した。
【１０７７】
得られた組成物は、ｐＨ６．００および粘度３０，０００ｃｐｓを有する、不透明な粘性のオフホワイト色のクリームであった。
化合物ＩＩの製剤
【１０７８】
化合物ＩＩの組成物は、以下の成分：水、カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド、グリセリン、Ｂｕｔｙｒｏｓｐｅｒｍｕｍ  ｐａｒｋｉｉ（シア）脂、ウンデシレン酸ヘプチル、ペンチレングリコール、オリーブ油脂肪酸セテアリル、セチルアルコール、ジメチコン、オリーブ油脂肪酸ソルビタン、化合物ＩＩ、グリチルリチン酸二カリウム、スクアレン、スクレロチウムガム、キサンタンガム、エチレンジアミンジコハク酸三ナトリウム、水酸化ナトリウム、カプリリルグリコール、クロルフェンシンおよびフェノキシエタノールを使用して製剤化した。
【１０７９】
得られた組成物は、オフホワイト色のｐＨ５．８０および粘度８，０００ｃｐｓの、不透明な半粘性液体であった。
（実施例２２）
インジルビンおよびインジルビン誘導体のアポトーシス誘導活性
試薬
【１０８０】
Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４８８アネキシンＶ／死細胞アポトーシスキット、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、０．２５％トリプシン−ＥＤＴＡ（１×）、カスパーゼ−Ｇｌｏ３／７アッセイ、ＲＰＭＩ１６４０培地、ダルベッコの改変イーグル培地および抗生物質抗真菌剤溶液（１００×）。
【１０８１】
細胞系ＭｅＷｏ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＨＴＢ−６５（商標））、ＷＭ１１５（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−１６７５）およびＢ１６Ｆ１（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−６３２３）は、以下の培養培地：ＭｅＷｏおよびＢ１６Ｆ１用の培養培地：１０％ＦＢＳを補給したＤＭＥＭ；ＷＭ１１５用の培養培地：１０％ＦＢＳを補給したＲＰＭＩ１６４０に維持する。
実験方法
【１０８２】
細胞を収穫し、Ｃｏｕｎｔｅｓｓセルカウンターを使用して細胞数を決定する。所望の密度まで細胞を培養培地により希釈する。最終的な細胞密度は、例えば、６時間および２４時間の処置の場合、４，０００細胞／ウェルであり、４８時間および７２時間の処置の場合、２，０００細胞／ウェルとすることができる。アネキシンＶアッセイの場合、３８４ウェルクリアボトムプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ３７１２）を使用する一方、カスパーゼ−Ｇｌｏアッセイの場合、３８４ウェルソリッドホワイトボトムプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ３５７０）を使用する。プレートはすべて、蓋で覆い、細胞を付着させるため、３７℃および５％ＣＯ２で、一晩、置く。
【１０８３】
試験化合物をＤＭＳＯに溶解し、３０ｍＭの保存溶液にする。１０倍希釈を行い、３ｍＭおよび０．３ｍＭ濃度を生成する。０．９ｍＭスタウロスポリンを陽性対照として使用し、ＤＭＳＯを陰性対照（ＮＣ）として使用する。液体ハンドラーＥｃｈｏ５５０を使用して、１３２．５ｎＬの化合物を化合物源プレートから３８４ウェル細胞培養プレートに移す。表示されているインキュベート時間の後、検出のためにプレートをインキュベータから取り出す。
【１０８４】
アネキシンＶアッセイのため、プレートをインキュベータから取り出し、培養培地を除去する。細胞を４０ｕＬのＰＢＳにより２回、洗浄し、ウェルあたり、１５ｕＬの事前混合アネキシンＶ−ＦＩＴＣおよびＨｏｅｃｈｓｔ３３３４２色素の作業溶液を加える。プレートを室温で２０分間、インキュベートし、封止して、１，０００ｒｐｍで１分間、遠心分離し、気泡を除去する。ＩｍａｇｅＸｐｒｅｓｓ  Ｎａｎｏを使用してプレートを読み取る。
【１０８５】
カスパーゼ−Ｇｌｏアッセイのため、プレートをインキュベータから取り出し、室温で１５分間、平衡にする。カスパーゼ−Ｇｌｏ３／７試薬もまた、実験前に解凍して、室温と平衡にする。カスパーゼ−Ｇｌｏ試薬は、培養培地に対して、１：１の比で必要なウェルに加える。プレートを室温で１５分間、インキュベートし、ＥｎＳｐｉｒｅ（商標）プレートリーダーを使用して読み取る。誘導倍率を以下の式に従って計算する：誘導倍率＝発光量Ｓａｍｐｌｅ／発光量ＮＣ
アネキシンＶアッセイおよびカスパーゼ３／７アッセイの結果
【１０８６】
インジルビンおよびその化学アナログを含めた、本発明の化合物および組成物は、細胞死を誘導することが予想される。インジルビンの化学アナログは、インジルビンと比べて、例えば、より強力なアポトーシス誘導活性を示すことが予想される。同様に、インジルビンのある特定の化学アナログは、インジルビンと比べて、例えば、それほど有効なアポトーシス誘導活性を実証しないことが予想される。このような化合物は、より効力の高い化合物と比較して、より有利な毒性プロファイルを有することができる。
（実施例２３）
インジルビンおよびインジルビン誘導体への曝露後の細胞生存率
試薬
【１０８７】
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）２．０アッセイ。
実験方法
【１０８８】
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏアッセイに関すると、試験化合物を１０ｍＭ  ＤＭＳＯ溶液中で調製する。化合物を１２種の濃度まで段階的に希釈する。１００，０００細胞／ｍＬの懸濁液からの細胞４０ｕＬを３８４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ３５７０）の各ウェルに分注する。プレートを３７℃、５％ＣＯ２および９５％湿度で一晩、インキュベートする。試験化合物をビヒクル対照としてのＤＭＳＯと共に加える。プレートを３７℃、５％ＣＯ２および９５％湿度で、６、２４または４８時間、インキュベートし、ウェルに４０ｕＬのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬を加え、細胞生存率を評価する。
結果
【１０８９】
インジルビンおよびその化学アナログを含めた、本発明の化合物および組成物は、細胞死を誘導することが予想される。インジルビンの化学アナログは、インジルビンと比べて、例えば、より強力なアポトーシス誘導活性を示すことが予想される。同様に、インジルビンのある特定の化学アナログは、インジルビンと比べて、例えば、それほど有効なアポトーシス誘導活性を実証しないことが予想される。このような化合物は、より効力の高い化合物と比較して、より有利な毒性プロファイルを有することができる。
（実施例２４）
インジルビンおよびインジルビン誘導体の芳香族炭化水素受容体活性化能
アッセイ手順
【１０９０】
安定にトランスフェクトされたＨｅｐＧ２細胞用の培養培地は、ＤＭＥＭに高グルコースおよびＬ−グルタミン、ならびに１０％ＦＢＳを補給することによって調製する。
【１０９１】
ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−Ｌｕｃ細胞を、Ｔ−７５フラスコ内で、３７℃、５％ＣＯ２および９５％の相対湿度で培養する。細胞を８０〜９０％のコンフルエンスに到達させた後、剥離および分割する。
【１０９２】
培養細胞は、５ｍＬのＰＢＳですすぐ。ＰＢＳを吸引除去し、１．５ｍＬのトリプシンをフラスコに加え、３７℃で約５分間、または細胞が剥離して浮き上がるまで、細胞をインキュベートする。過剰な血清含有培地を添加することによって、トリプシンを不活性化させる。
【１０９３】
細胞懸濁液を円錐管に移し、１２０ｇで１０分間、遠心分離して、細胞をペレットにする。細胞を適度な密度で播種培地中に再懸濁させる。４０μＬの細胞を３８４ウェル培養プレートに移す（５×１０３細胞／ウェル）。プレートを３７℃で２４時間、インキュベータ中に置く。
【１０９４】
その後、試験化合物の保存溶液およびオメプラゾール陽性対照を調製する。Ｅｃｈｏ５５０を使用し、化合物溶液をアッセイプレートに移す。次に、このプレートを化合物処置のためにインキュベータ内に戻す。
【１０９５】
後に、２４時間の処置後に、プレートをインキュベータから取り出し、周囲温度で冷却する。培養培地のものと等量のＯｎｅ−Ｇｌｏ試薬３０μＬを各ウェルに加える。細胞を少なくとも３分間、溶解し、次に照度計で測定する。
【１０９６】
ＸＬｆｉｔの非線形回帰解析を使用して用量応答をグラフにし、ＥＣ５０値も計算する。
結果
【１０９７】
インジルビンおよびその化学アナログを含めた、本発明の化合物および組成物は、ＡｈＲ活性をモジュレートすることが予想される。インジルビンの化学アナログは、インジルビンと比べて、例えば、より強力なＡｈＲアゴニスト活性を示すことが予想される。同様に、インジルビンのある特定の化学アナログは、インジルビンと比べて、例えば、それほど有効なＡｈＲアゴニスト活性を実証しないことが予想される。
（実施例２５）
ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）アッセイ
【１０９８】
この検討の目的は、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）皮膚モデルにおける、試験物品の反復曝露後の皮膚メラニン形成モジュレーターとしての試験物品の潜在作用を評価することであった。第２に、この検討の目的は、反復曝露後のＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）皮膚モデルに対する試験物品の潜在的な皮膚刺激を評価することであった。毒性は、試験物品処置組織におけるＭＴＴ（臭化３−［４，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウム）の、陰性／溶媒対照処置組織と比較した相対変換率を測定することによって決定した。メラニン産生に及ぼす潜在的な影響は、陰性／溶媒対照処置組織と比較して、試験物品処置組織によって産生されたメラニンの濃度を測定することにより決定した。
試験物質およびアッセイ対照の特定
【表３】
2021521195.tif 000228
【表４−１】
2021521195.tif 000229
【表４−２】
2021521195.tif 000230
【１０９９】
アッセイ対照には、ＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ中で調製した、陽性対照−１％コウジ酸；陰性対照−滅菌脱イオン水；および溶媒対照−ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）が含まれる。
【１１００】
この検討に関すると、陰性対照を使用しなかった。代わりに、溶媒対照（１７ＡＡ７０）を使用して、それぞれ、陽性対照処置組織および試験物品処置組織に関連するデータを補正した。
【１１０１】
さらに、試験物品および対照を、４つの組織の群に施用し、このうちの２つは、それぞれ、組織生存率（ＭＴＴ）エンドポイントに使用し、２つは、メラニンのエンドポイントに使用した。
試験システム
【１１０２】
ＭａｔＴｅｋ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ａｓｈｌａｎｄ、ＭＡ）によって提供されているＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）皮膚モデルを本検討に使用した。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）の組織は、高度に分化した複数層のヒト表皮モデルを形成するように培養された、正常なヒト由来表皮ケラチノサイト（ＮＨＥＫ）およびメラノサイト（ＮＨＭ）からなる。共培養物中のＮＨＭは、自発的なメラニン形成を受けて、様々なレベルの色素沈着の組織をもたらす。培養物は、細胞培養インサート上の気液界面で増殖させて、皮膚モジュレーターを局所施用することが可能となった。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）モデルは、ｉｎ  ｖｉｖｏに似た形態学的特性および微細構造特性を示す。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織の基底細胞層に局在するＮＨＭは樹状であり、自発的にメラニン顆粒を産生し、それは、次第に組織の層を占めていく。したがって、この試験システムは、陰性対照と比較して、メラニン産生を阻害または刺激し得る物質をスクリーニングするために使用する。
実験設計および方法
【１１０３】
本検討の実験設計は、可能な場合、無希釈の試験物品（および／または必要に応じて投与用溶液）のｐＨの決定、ならびに反復曝露後の相対的な組織生存率およびＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）皮膚モデルに対する皮膚メラニン形成モジュレーターとしての試験物品の潜在作用を決定するための決定的アッセイからなった。試験物品は、合計で７日間、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）皮膚モデルに曝露させた。４８時間（前回の処置から４８＋２時間の時間枠内）毎に試験物品をＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）皮膚モデルに局所施用した。試験物品の毒性は、対照および試験物品処置組織におけるＭＴＴのＮＡＤ（Ｐ）Ｈ依存性ミクロソーム酵素還元によって（および、比較的低い程度のＭＴＴのコハク酸デヒドロゲナーゼ還元によって）決定した。データは、相対生存率の形態（陰性／溶媒対照と比較したＭＴＴ変換率）で提示した。メラニン産生に及ぼす潜在的な影響は、陰性／溶媒対照処置組織と比較して、試験物品処置組織において産生されたメラニンの濃度を決定することにより評価した。データは、メラニン標準品曲線を使用して決定した試験物品処置組織によって産生されるメラニンの濃度の形態で提示した。代替的に、データは、陰性／溶媒対照処置組織に対するメラニン濃度の変化率として提示されてもよい。
【１１０４】
使用した方法は、ＭａｔＴｅｋ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによって提供されている手順を修正したものである。
培地および試薬
【１１０５】
ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）維持培地（ＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ）は、ＭａｔＴｅｋ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから購入した。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）皮膚モデル（ＭＥＬ−３００−Ａ）は、ＭａｔＴｅｋ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから購入した。１％コウジ酸（滅菌脱イオン水中で調製）は、Ｓｉｇｍａから購入した。ＭＴＴ（臭化３−［４，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウム）は、Ｓｉｇｍａから購入した。２ｍＭのＬ−グルタミンを含有するダルベッコの改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（ＭＴＴ添加培地）は、Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌから購入した。抽出溶媒（イソプロパノール）は、Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。Ｃａ＋＋およびＭｇ＋＋を含まない滅菌ダルベッコのリン酸緩衝食塩水（ＣＭＦ−ＤＰＢＳ）は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから購入した。メラニンはＳｉｇｍａから購入した。滅菌脱イオン水は、Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌから購入した。可溶物は、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒから購入した。
試験物品の調製および送達
【１１０６】
このプロトコール内で別段の指定がない限り、２５マイクロリットルの各試験物品を、組織に直接、上側表面を覆うように施用した。試験物品の性質（液体、ゲル、クリーム、フォームなど）に応じて、試験物品を組織の表面上に一様に広げることができる投与装置、メッシュまたは他の補助具の使用が必要となることがあった。
投与経路
【１１０７】
７日間の試験の間、４８時間（前回の処置から４８＋２時間の時間枠内）毎に試験物品をＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織に局所施用した。２５マイクロリットルの各試験物品を各組織に施用した。２５マイクロリットルの陽性および陰性／溶媒対照をそれぞれ各組織に施用した。
ｐＨ決定
【１１０８】
可能な場合、無希釈液体試験物品（および／または、適切な場合、投与用溶液）のｐＨを決定した。ｐＨは、ｐＨ試験紙（例えば、推定する０〜１４のｐＨ範囲を有するもの、および／またはより正確な値を決定する５〜１０のｐＨ範囲を有するもの）を使用して決定した。範囲が狭い方のｐＨ試験紙の典型的なｐＨ増分は、約０．３〜０．５ｐＨの単位とした。ｐＨ試験紙に対する最大増分は１．０ｐＨの単位とした。
対照
【１１０９】
決定的なアッセイは、陰性対照、陽性対照および１つの溶媒対照（ＤＭＳＯ）を含んだ。アッセイの陰性対照に指定したＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、２５μＬの滅菌脱イオン水で処置した。アッセイ陽性対照に指定した組織への投与には、２５マイクロリットルの１％コウジ酸（滅菌脱イオン水中に調製し、調製時にろ過した）を使用した。１％コウジ酸は、調製の２時間以内に使用するまで、アルミニウムホイルで覆った管中に保管した。陰性／溶媒および陽性対照の曝露時間は、試験物品に対して使用した時間と同じとした。未処置組織も、対照として使用した。
試験物品によるＭＴＴの直接還元の評価
【１１１０】
各試験物品が、ＭＴＴを直接還元する能力を評価することが必要であった。ＭＴＴ溶液１．０ｍｇ／ｍＬを、ＭＴＴ添加培地中で調製した。約２５μＬの試験物品をＭＴＴ溶液１ｍＬに加え、この混合物を暗所中３７±１℃で１〜３時間、インキュベートした。陰性対照である滅菌脱イオン水２５μＬを、同時に試験した。ＭＴＴ溶液の色が青色／紫色に変わった場合、試験物品はＭＴＴを還元したと推定した。水不溶性試験物質は、試験物品と培地との界面でのみ、直接的な還元（暗色化）を示すことができた。
ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）の受領
【１１１１】
ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）皮膚キットの受領時、製造業者によって指示されている通りに溶液を保管した。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を使用するまで、２〜８℃で保管した。
【１１１２】
受領した日（投与の前日）に、適切な体積のＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）維持培地（ＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ）を除去し、約３７±１℃に温めた。ＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ／ウェルの９／１０（０．９）ｍＬを、６ウェルプレートの適正なウェルに等分した。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織をそれぞれ、封止パッケージを開口する前に、アガロースゲルと細胞培養インサートとの間の気泡について検査した。細胞培養インサート領域の５０％より広い気泡を有する組織は使用しなかった。２４ウェルの輸送用容器をプラスチック製バッグから取り出し、その表面を７０％エタノールで消毒した。適切な数のＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、２４ウェルの輸送用容器から６ウェルプレートに無菌で移した。組織を順応させるため、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、空気中５±１％ＣＯ２の加湿雰囲気中、３７±１℃（標準培養条件）で一晩（少なくとも１６時間）、インキュベートした。バッグの開口時に、組織の移送時に輸送用寒天に残るいかなる未使用組織も、５％ＣＯ２／９５％空気の雰囲気で短時間で脱気し、バッグを封止して、後の使用のため、２〜８℃に保管した。
決定的なアッセイ
【１１１３】
組織曝露：培養の開始後、少なくとも１６時間時に、デジタルカメラを使用して５つのＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織（０日目での未処置と見なす）の写真を撮り、アッセイのゼロ時間での組織の色素沈着の程度の目視評価の一助とした。２つのＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織をＣＭＦ−ＤＰＢＳによりすすぎ、滅菌吸収紙上で水分を吸い取って乾燥させ、過剰な液体を除去した。すすぎ後、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を適正なＭＴＴ含有ウェルに移し、ＭＴＴアッセイにおいて処理した。３つのＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織をＣＭＦ−ＤＰＢＳによりすすぎ、滅菌吸収紙上で水分を吸い取って乾燥させ、過剰な液体を除去した。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、滅菌外科用メスを使用して細胞培養インサートから取り除き、ラベルを付けた１．５ｍＬマイクロフュージ管に入れて、後のメラニン分析のために、＜−６０℃で保管した。
【１１１４】
培養の開始後、少なくとも１６時間時に、事前加温した新たなＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ０．９ｍＬ／ウェルを含有する新しい６ウェルプレート上に組織の残部を移した。試験は７日間の時間枠にわたり行った。５つの組織を、初日および４８時間（前回の処置から４８＋２時間の時間枠内）毎に、２５μＬの各試験物品で局所的に処置した。培地は毎日（前回の再供給から２４＋２時間の時間枠内）新しくした。組織を、事前加温した新たなＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ０．９ｍＬ／ウェルを含有する新しい６ウェルプレートに移した。
【１１１５】
５つの組織を、初日および４８時間（前回の処置から４８＋２時間の時間枠内）毎に、それぞれ、２５μＬの陽性および陰性／溶媒対照で局所的に処置した。培地は毎日（前回の再供給から２４＋２時間の時間枠内）新しくした。組織を、事前加温した新たなＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ０．９ｍＬ／ウェルを含有する新しい６ウェルプレートに移した。組織を、空気中５±１％ＣＯ２の加湿雰囲気中、３７±１℃（標準培養条件）で適正な曝露時間、インキュベートした。
【１１１６】
投与日に、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、最初に１回のすすぎあたりＣＭＦ−ＤＰＢＳ約５００μＬを使用して３回、やさしくすすぎ、いずれの残留試験物品も除去した。ＣＭＦ−ＤＰＢＳは、やさしいピペット操作でウェルに入れて、次に、滅菌アスピレーターを用いて抜き取った。この組織を、事前加温した新たなＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ０．９ｍＬを含有する新しい６ウェルプレートに移し、適正な試験物品、陰性／溶媒または陽性対照を投与した。組織を、空気中５±１％ＣＯ２の加湿雰囲気中、３７±１℃（標準培養条件）で適正な曝露時間、インキュベートした。
【１１１７】
７日間の試験の終了時に、デジタルカメラを使用して陰性／溶媒または陽性対照、および各試験物品により処置したＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織の写真を撮り、アッセイ終了時（７日目）の組織の色素沈着の程度の目視評価の一助とした。次に、陽性および陰性対照によりそれぞれ処置した、および各試験物品により処置した２つの組織の生存率を、ＭＴＴ還元によって決定した。７日間の試験の終了時に、それぞれ、各試験物品、陽性および陰性／溶媒対照により処置した３つの組織により産生したメラニンを決定した。
【１１１８】
ＭＴＴアッセイ：ＰＢＳ中で調製したＭＴＴの１０×保存溶液（回分調製時にろ過したもの）を、使用前２時間以内に解凍し、温かいＭＴＴ添加培地で希釈して、１．０ｍｇ／ｍＬの溶液を生成した。予めラベルを付けた２４ウェルプレートの各指定ウェルにＭＴＴ溶液３００μＬを添加した。
【１１１９】
曝露時間後に、ＭＴＴアッセイ用に指定した各ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織をＣＭＦ−ＤＰＢＳですすぎ（このステップの許容されるスプレーボトルを使用）、滅菌吸収紙上で水分を吸い取って乾燥させ、過剰な液体を除去した。すすぎ後、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を適正なＭＴＴ含有ウェルに移した。２４ウェルプレートを、標準条件で３±０．１時間、インキュベートした。
【１１２０】
３±０．１時間後、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、滅菌吸収紙上で水分を吸い取り、過剰な液体を除去し、各指定ウェルにイソプロパノール２．０ｍＬを含有する、予めラベルを付けた２４ウェルプレートに移した。このプレートをパラフィルムで覆い、最後の曝露時間まで冷蔵庫（２〜８℃）内で保管し、収穫した。必要な場合、ＭＴＴを抽出する前に、プレートを冷蔵庫内に一晩保管した（または最後の曝露時間後、最大２４時間保管し、収穫する）。次に、これらのプレートを室温で少なくとも２時間、振とうした。抽出期間の終了時に、細胞培養インサート内の液体を、細胞培養インサートを取り出したウェル内にデカンテーションした。抽出溶液を混合し、２００μＬを９６ウェルプレートの適正なウェルに移した。２００μＬのイソプロパノールを、ブランクと指定したウェルに添加した。各ウェルの５５０ｎｍでの吸光度（ＯＤ５５０）をＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｖｍａｘプレートリーダーで測定した。
【１１２１】
メラニンアッセイ：適切な曝露時間の終了時に、メラニンアッセイに指定したＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、１回のすすぎあたり約５００μＬのＣＭＦ−ＤＰＢＳを使用して、少なくとも３回、やさしくすすぎ、培養培地に由来するいかなる残留試験物品も過剰のフェノールレッドも除去し、滅菌吸収紙上で水分を吸い取って乾燥させ、過剰な液体を除去した。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織は、本アッセイの終了時に、デジタルカメラを使用して写真を撮影した。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、滅菌外科用メスまたは滅菌パンチを使用して細胞培養インサートから取り除き、ラベルを付けた１．５ｍＬマイクロフュージ管に入れて、後のメラニン分析のために、＜−６０℃で保管した。
【１１２２】
メラニン抽出アッセイの当日、切除した組織を室温で約１０分間、解凍した。可溶物２５０μＬを各マイクロフュージ管に加え、これらの管を少なくとも１６時間、６０＋２℃でインキュベートした。メラニンを可溶物に溶解することにより、１ｍｇ／ｍＬのメラニンの標準保存溶液を調製した。一連のメラニン標準品を０ｍｇ／ｍＬ〜０．３３ｍｇ／ｍＬの範囲の保存溶液１ｍｇ／ｍＬから調製した。標準品のシリーズは、１ｍｇ／ｍＬのメラニンの標準保存溶液０．６ｍＬを１．２ｍＬの可溶物に加えて、次に、さらに一連の５つの希釈液（希釈ファクター３）を作製することによって調製した。可溶物をゼロ標準品として使用した。メラニン標準品シリーズおよび可溶物を、６０＋２℃で少なくとも１６時間、インキュベートした。
【１１２３】
メラニン抽出を開始して、少なくとも１６時間後に、試料（ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織から抽出したメラニンとする）および標準品を含有する管を室温で冷却し、室温で、１３，０００ｒｐｍで５分間、遠心分離した。試料２００μＬ（単一ウェル）または標準品（二連のウェル）を９６ウェルプレートの適正なウェルに移した。２００μＬの可溶物を、二連のウェルでブランクと指定したウェルに添加した。各ウェルの４９０ｎｍでの吸光度（ＯＤ４９０）をＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｖｍａｘプレートリーダー（Ａｕｔｏｍｉｘ機能を選択）で測定した。
残留試験物品によるＭＴＴの還元を評価するための死滅対照
【１１２４】
考えられる残留試験物品がＭＴＴを直接還元するように作用していないことを実証するために、決定的アッセイで機能確認を行い、試験物質が組織に結合して、偽のＭＴＴ還元シグナルを生じることがないことを示した。
【１１２５】
残留試験物品がＭＴＴを直接還元するように作用しているかどうかを判定するために、凍結死滅させた対照組織を使用した。凍結死滅組織は、未処置のＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）／ＥｐｉＤｅｒｍ（商標）（メラノサイトを含まないＭｅｌａｎｏｄｅｒｍ（商標））組織を−２０℃の冷凍庫内に少なくとも一晩入れ、室温に解凍し、次に再凍結することによって調製した。組織は、一旦、死滅すると、冷凍庫内で無期限に保管してもよい。凍結死滅組織は、ＭａｔＴｅｋ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから既に調製済みのもの入手し、使用するまで−２０℃の冷凍庫内に保管することができる。残留試験物品の還元について試験するために、通常の様式で死滅組織を試験物品で処置した。すべてのアッセイ手順は、生存組織と同じ方法で実施した。死滅組織内の残留ＮＡＤＨおよび関連酵素から、少量のＭＴＴ還元が予想されるので、滅菌脱イオン水で処置した少なくとも１つの死滅対照（陰性死滅対照）を並行して試験した。
【１１２６】
試験物品で処置した死滅対照において、ＭＴＴ還元がほとんどまたは全く観察されなかった場合、試験物品で処置した生存組織に観察されるＭＴＴ還元は、生存細胞に起因し得る。処置した死滅対照においてかなりのＭＴＴ還元があった場合（処置した生存組織の量に対して）、化学還元を説明する追加ステップを講じなければならないか、またはこの試験物品は、このシステムでは試験不能と見なされ得る。
【１１２７】
データ分析
【１１２８】
ブランクのウェルの平均ＯＤ５５０値を計算した。陰性／溶媒対照の補正後の平均ＯＤ５５０値は、これらの平均ＯＤ５５０値からブランクのウェルの平均ＯＤ５５０値を減算することによって求めた。個々の試験物品に曝露したものおよび陽性対照に曝露したものの補正後のＯＤ５５０値は、それぞれからブランクのウェルの平均ＯＤ５５０値を減算することによって求めた。すべての計算は、Ｅｘｃｅｌのスプレッドシートを使用して実施した。議論したアルゴリズムは、処置群レベルでの最終エンドポイント解析を計算するために実施するが、同じ計算を個々の反復試験に適用することができる。
補正した試験物品の曝露ＯＤ５５０＝試験物品の曝露ＯＤ５５０−ブランクの平均ＯＤ５５０
【１１２９】
死滅対照（ＫＣ）を使用する場合、試験物品の残留物によって直接還元されたＭＴＴの量を補正するために、以下の追加的な計算を実施した。陰性対照での死滅対照の生のＯＤ５５０値を、試験物品で処置した死滅対照の各々の生のＯＤ５５０値から減算し、試験物品で処置した死滅対照の正味のＯＤ５５０値を求めた。
各試験物品ＫＣの正味のＯＤ５５０＝生のＯＤ５５０試験物品のＫＣ−生のＯＤ５５０陰性／溶媒対照ＫＣ
【１１３０】
正味のＯＤ５５０値は、試験物品残留物による指定曝露時間での直接還元により還元されたＭＴＴの量を表す。一般に、正味のＯＤ５５０値が、０．１５０より大きい場合、ＭＴＴ還元の正味の量を、処置した生存組織の補正後のＯＤ５５０値から減算して、最終補正後のＯＤ５５０値を得る。次に、これらの最終補正後のＯＤ５５０値を使用して、対照生存率の％を求める。
最終補正後のＯＤ５５０＝補正した試験物品のＯＤ５５０（生存）−正味のＯＤ５５０試験物品（ＫＣ）
【１１３１】
最後に、以下の対照の％の計算を行う：
生存率（％）＝［（試験物品または陽性対照の最終的な補正後のＯＤ５５０）／（陰性／溶媒対照の補正後の平均ＯＤ５５０）］×１００
【１１３２】
メラニン分析：吸光度の生データを取り込み、印刷ファイルとして保存し、Ｅｘｃｅｌのスプレッドシートにインポートした。各試験試料（０日目の未処置ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織から抽出したメラニン、７日目の各試験物品、陰性／溶媒または陽性対照により処置したＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織とする）およびメラニン標準品のＯＤ４９０値を求めた。試験試料および各メラニン標準品に関する補正後のＯＤ４９０値は、ブランクのウェルの平均ＯＤ４９０値を減算することによって求めた。標準曲線は、対応する補正後吸光度に対するｍｇ／ｍＬでの標準品の濃度（ｙ軸）としてプロットした。個々の組織のそれぞれにおけるメラニンの量は、標準曲線（線形）から補間した。最後に、各試験物品または対照処置群のメラニン濃度の平均値をそれぞれ、計算した。
結果
【１１３３】
図１２８は、試験物品、陽性対照および未処置組織に対する平均組織生存率およびメラニン濃度の結果を要約している。予備結果は、本発明のカルバゾール化合物に適用したある特定の製剤は、カルバゾールの皮膚暗色化活性を抑制する中程度の皮膚美白作用を独立して示すことがあることを示唆している。
【１１３４】
図１２９は、個別の実験において観察された試験物品および未処置組織の平均組織生存率およびメラニン濃度の結果を要約している。例えば、マラセジンおよびインジルビンを含む併用処置は、それ自体、どちらかの一方の化合物よりも効果的な皮膚美白作用を示した。
（実施例２６）
インジルビンおよびインジルビン誘導体のメラニン形成能
【１１３５】
この検討の目的は、インジルビンおよびインジルビン誘導体に曝露されたＢ１６メラノサイトのメラニン形成および生存率を観察ならびに報告することである。
物質および試薬
【１１３６】
プレート培養用の培地は、Ｌ−グルタミン、ＦＢＳ、ペニシリン／ストレプトマイシンおよびＬ−グルタミンを含まないＤＭＥＭを含む。アッセイ培地は、フェノールレッドおよびＬ−グルタミン、ＦＢＳ、ペニシリン／ストレプトマイシン、Ｌ−グルタミンおよびａＭＳＨを含まないＤＭＥＭを含む。他の試薬は、コウジ酸、ＤＭＳＯおよびＭＴＴを含む。試験する細胞は、Ｂ１６細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−６４７５）となる。
プロトコール
【１１３７】
Ｂ１６メラノサイトは、７０％コンフルエントになるまで培養し、収穫する。４０００細胞／ウェルの密度で、９６ウェルプレートに細胞を播種し、一晩、付着させる。翌日、試験物品および対照をＢ１６アッセイ培地に希釈する。一晩、培地を吸引し、２００ｕｌの試験物品および対照を施用する。細胞を３７℃および１０％ＣＯ２で７２時間、インキュベートする。７２時間のインキュベート後、吸光度を５４０ｎｍで読み取る。培地を除去し、１ｍｇ／ｍＬ  ＭＴＴを含有するプレート培養用培地１００ｕｌと置き換え、３７℃および１０％ＣＯ２で、２時間、インキュベートする。ＭＴＴ培地を除去し、２００ｕｌの９５％エタノール／５％イソプロパノールにより置き換え、１５分間、振とうさせる。次に、ＭＴＴの吸光度を５７０ｎｍで読み取る。
結果
【１１３８】
インジルビンおよびその化学アナログを含めた、本発明の化合物および組成物は、メラニン形成を阻害することが予想される。インジルビンの化学アナログは、インジルビンと比べて、例えば、より強力なメラニン形成阻害活性を示すことが予想される。同様に、インジルビンのある特定の化学アナログは、インジルビンと比べて、例えば、それほど有効なメラニン形成阻害活性を実証しないことが予想される。
（実施例２７）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ有効性
【１１３９】
本発明の化合物および組成物は、インジルビンと少なくとも同程度強力にメラノサイトアポトーシスを誘導し、メラノサイトの活性、メラニン産生、メラノソーム生物発生および／またはメラノソーム輸送をモジュレートすると予想される。本発明の化合物および組成物のいくつかは、インジルビンほど強力に、これらの生物学的過程に影響を及ぼさないことも企図される。このような化合物および組成物は、より効力の高い化学種と比較して、より有利な毒性プロファイルを有することができる。
（実施例２８）
ｉｎ  ｖｉｖｏ効力
【１１４０】
本発明の化合物および組成物は、皮膚の美白、および様々な障害によって引き起こされる色素沈着過度／低色素沈着の改善を含めた、皮膚の色素沈着のモジュレートに関して、インジルビンと少なくとも同程度に有効であると予想される。本発明の化合物および組成物は、例えば、半減期および吸収に関して、有利な薬物動態プロファイルを示すことがさらに予想される。ある特定の化合物は、より長い半減期を示す一方、他の化合物は、より短い半減期を示すこととなる。同様に、ある特定の化合物は、異なる吸収プロファイルを示し、一部の化合物は、完全に吸収されるのにより時間がかかり、他の化合物は完全に吸収されるのに時間はそれほどかからないであろう。
（実施例２９）
化合物の名称
【１１４１】
以下の表５は、本発明の化合物に関する構造および名称を示す。
【表５−１】
2021521195.tif 000231
【表５−２】
2021521195.tif 000232
【表５−３】
2021521195.tif 000233
【表５−４】
2021521195.tif 000234
【表５−５】
2021521195.tif 000235
【表５−６】
2021521195.tif 000236
【表５−７】
2021521195.tif 000237
【表５−８】
2021521195.tif 000238
（実施例３０）
Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ由来の化合物および／またはその化学アナログを含有する組成物のアポトーシス誘導活性
試薬
【１１４２】
Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４８８アネキシンＶ／死細胞アポトーシスキット、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、０．２５％トリプシン−ＥＤＴＡ（１×）、カスパーゼ−Ｇｌｏ３／７アッセイ、ＲＰＭＩ１６４０培地、ダルベッコの改変イーグル培地および抗生物質抗真菌剤溶液（１００×）。
【１１４３】
細胞系ＭｅＷｏ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＨＴＢ−６５（商標））、ＷＭ１１５（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−１６７５）およびＢ１６Ｆ１（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−６３２３）は、以下の培養培地：ＭｅＷｏおよびＢ１６Ｆ１用の培養培地：１０％ＦＢＳを補給したＤＭＥＭ；ＷＭ１１５用の培養培地：１０％ＦＢＳを補給したＲＰＭＩ１６４０に維持する。
実験方法
【１１４４】
細胞を収穫し、Ｃｏｕｎｔｅｓｓセルカウンターを使用して細胞数を決定する。所望の密度まで細胞を培養培地により希釈する。最終的な細胞密度は、例えば、６時間および２４時間の処置の場合、４，０００細胞／ウェルであり、４８時間および７２時間の処置の場合、２，０００細胞／ウェルとすることができる。アネキシンＶアッセイの場合、３８４ウェルクリアボトムプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ３７１２）を使用する一方、カスパーゼ−Ｇｌｏアッセイの場合、３８４ウェルソリッドホワイトボトムプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ３５７０）を使用する。プレートはすべて、蓋で覆い、細胞を付着させるため、３７℃および５％ＣＯ２で、一晩、置く。
【１１４５】
試験化合物をＤＭＳＯに溶解し、３０ｍＭの保存溶液にする。１０倍希釈を行い、３ｍＭおよび０．３ｍＭ濃度を生成する。０．９ｍＭスタウロスポリンを陽性対照として使用し、ＤＭＳＯを陰性対照（ＮＣ）として使用する。液体ハンドラーＥｃｈｏ５５０を使用して、１３２．５ｎＬの化合物を化合物源プレートから３８４ウェル細胞培養プレートに移す。表示されているインキュベート時間の後、検出のためにプレートをインキュベータから取り出す。
【１１４６】
試験組成物を、ＤＭＳＯ、ＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭまたは任意の適切な溶媒に溶解し、以下の表２〜７中の指示書に準拠して調製することができる。適切な溶媒は当業者に周知である。
【１１４７】
アネキシンＶアッセイのため、プレートをインキュベータから取り出し、培養培地を除去する。細胞を４０ｕＬのＰＢＳにより２回、洗浄し、ウェルあたり、１５ｕＬの事前混合アネキシンＶ−ＦＩＴＣおよびＨｏｅｃｈｓｔ３３３４２色素作業溶液を加える。プレートを室温で２０分間、インキュベートし、封止して、１，０００ｒｐｍで１分間、遠心分離し、気泡を除去する。ＩｍａｇｅＸｐｒｅｓｓ  Ｎａｎｏを使用してプレートを読み取る。
【１１４８】
カスパーゼ−Ｇｌｏアッセイのため、プレートをインキュベータから取り出し、室温で１５分間、平衡にする。カスパーゼ−Ｇｌｏ３／７試薬もまた、実験前に解凍して、室温と平衡にする。カスパーゼ−Ｇｌｏ試薬は、培養培地に対して、１：１の比で必要なウェルに加える。プレートを室温で１５分間、インキュベートし、ＥｎＳｐｉｒｅ（商標）プレートリーダーを使用して読み取る。誘導倍率を以下の式に従って計算する：誘導倍率＝発光量Ｓａｍｐｌｅ／発光量ＮＣ
アネキシンＶアッセイおよびカスパーゼ３／７アッセイの結果
【１１４９】
組成物＃１〜５を含む、本発明の化合物および組成物は、細胞死を誘導することが予想される。本発明の組成物は、例えば、少なくとも１つの構成成分化合物単独に比べて、より強力なアポトーシス誘導活性を示すことが予想される。同様に、本発明の組成物は、例えば、少なくとも１つの構成成分化合物単独に比べて、それほど有効ではないアポトーシス誘導活性を実証することが予想される。このような組成物は、より効力の高い組成物と比較すると、より有利な毒性プロファイルを有することができる。
（実施例３１）
Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ由来の化合物および／またはその化学アナログを含有する組成物への曝露後の細胞生存率
試薬
【１１５０】
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）２．０アッセイ
実験方法
【１１５１】
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏアッセイに関すると、試験化合物を１０ｍＭ  ＤＭＳＯ溶液中で調製する。化合物を１２種の濃度まで段階的に希釈する。１００，０００細胞／ｍＬの懸濁液からの細胞４０ｕＬを３８４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ３５７０）の各ウェルに分注する。プレートを３７℃、５％ＣＯ２および９５％湿度で一晩、インキュベートする。試験化合物をビヒクル対照としてのＤＭＳＯと共に加える。プレートを３７℃、５％ＣＯ２および９５％湿度で、６、２４または４８時間、インキュベートし、ウェルに４０ｕＬのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬を加え、細胞生存率を評価する。
【１１５２】
試験組成物を、ＤＭＳＯ、ＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭまたは任意の適切な溶媒に溶解し、以下の表２〜７中の指示書に準拠して調製することができる。適切な溶媒は当業者に周知である。
結果
【１１５３】
組成物＃１〜５を含む、本発明の化合物および組成物は、細胞死を誘導することが予想される。本発明の組成物は、例えば、少なくとも１つの構成成分化合物単独に比べて、より強力なアポトーシス誘導活性を示すことが予想される。同様に、本発明の組成物は、例えば、少なくとも１つの構成成分化合物単独に比べて、それほど有効ではないアポトーシス誘導活性を実証することが予想される。このような組成物は、より効力の高い組成物と比較すると、より有利な毒性プロファイルを有することができる。
（実施例３２）
Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ由来の化合物および／またはその化学アナログを含有する組成物の芳香族炭化水素受容体活性化能
アッセイ手順
【１１５４】
安定にトランスフェクトされたＨｅｐＧ２細胞用の培養培地は、ＤＭＥＭに高グルコースおよびＬ−グルタミン、ならびに１０％ＦＢＳを補給することによって調製する。
【１１５５】
ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−Ｌｕｃ細胞を、Ｔ−７５フラスコ内で、３７℃、５％ＣＯ２および９５％の相対湿度で培養する。細胞を８０〜９０％のコンフルエンスに到達させた後、剥離および分割する。
【１１５６】
培養細胞は、５ｍＬのＰＢＳですすぐ。ＰＢＳを吸引除去し、１．５ｍＬのトリプシンをフラスコに加え、３７℃で約５分間、または細胞が剥離して浮き上がるまで、細胞をインキュベートする。過剰な血清含有培地を添加することによって、トリプシンを不活性化させる。
【１１５７】
細胞懸濁液を円錐管に移し、１２０ｇで１０分間、遠心分離して、細胞をペレットにする。細胞を適度な密度で播種培地中に再懸濁させる。４０μＬの細胞を３８４ウェル培養プレートに移す（５×１０３細胞／ウェル）。プレートを３７℃で２４時間、インキュベータ中に置く。
【１１５８】
その後、試験化合物、試験組成物およびオメプラゾール陽性対照の保存溶液を調製する。Ｅｃｈｏ５５０を使用し、化合物および組成物溶液をアッセイプレート中に移す。次に、このプレートを化合物／組成物処置のためにインキュベータ内に戻す。
【１１５９】
後に、２４時間の処置後に、プレートをインキュベータから取り出し、周囲温度で冷却する。培養培地のものと等量のＯｎｅ−Ｇｌｏ試薬３０μＬを各ウェルに加える。細胞を少なくとも３分間、溶解し、次に照度計で測定する。
【１１６０】
ＸＬｆｉｔの非線形回帰解析を使用して用量応答をグラフにし、ＥＣ５０値も計算する。
結果
【１１６１】
組成物＃１〜５を含む、本発明の化合物および組成物は、ＡｈＲ活性をモジュレートすることが予想される。本発明の組成物は、例えば、少なくとも１つの構成成分化合物単独と比べて、より強力なＡｈＲアゴニスト活性を示すことが予想される。同様に、本発明の組成物は、例えば、少なくとも１つの構成成分化合物単独に比べて、それほど有効ではないＡｈＲアゴニスト活性を実証することが予想される。本発明の組成物は、例えば、少なくとも１つの構成成分化合物単独に比べて、より強力なＡｈＲアンタゴニスト活性を示すことも予想される。同様に、本発明の組成物はまた、例えば、少なくとも１つの構成成分化合物単独に比べて、それほど有効ではないＡｈＲアンタゴニスト活性を実証することが予想される。
（実施例３３）
ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）アッセイ
【１１６２】
この検討の目的は、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）皮膚モデルにおける、試験物品の反復曝露後の皮膚メラニン形成モジュレーターとしての試験物品の潜在作用を評価することであった。第２に、この検討の目的は、反復曝露後のＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）皮膚モデルに対する試験物品の潜在的な皮膚刺激を評価することであった。毒性は、試験物品処置組織におけるＭＴＴ（臭化３−［４，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウム）の、陰性／溶媒対照処置組織と比較した相対変換率を測定することによって決定した。メラニン産生に及ぼす潜在的な影響は、陰性／溶媒対照処置組織と比較して、試験物品処置組織によって産生されたメラニンの濃度を測定することにより決定した。
試験物質およびアッセイ対照の特定
【表６】
2021521195.tif 000239
【表７】
2021521195.tif 000240
【表８】
2021521195.tif 000241
【表９】
2021521195.tif 000242
【表１０】
2021521195.tif 000243
【表１１】
2021521195.tif 000244
【１１６３】
アッセイ対照には、ＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ中で調製した、陽性対照−マラセジン（ＣＶ−８６８４）（５００μＭ）（１７ＡＪ４１）および溶媒対照−ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）が含まれる。
【１１６４】
さらに、試験物品および対照は、４つの組織の群に施用し、それぞれ、このうちの２つは、組織生存率（ＭＴＴ）エンドポイントに使用し、２つは、メラニンのエンドポイントに使用した。
試験システム
【１１６５】
ＭａｔＴｅｋ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ａｓｈｌａｎｄ、ＭＡ）によって提供されているＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）皮膚モデルを本検討に使用した。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織は、高度に分化した複数層のヒト表皮モデルを形成するように培養された、正常なヒト由来表皮ケラチノサイト（ＮＨＥＫ）およびメラノサイト（ＮＨＭ）からなる。共培養物中のＮＨＭは、自発的なメラニン形成を受けて、様々なレベルの色素沈着の組織をもたらす。培養物は、細胞培養インサート上の気液界面で増殖させて、皮膚モジュレーターを局所施用することが可能となった。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）モデルは、ｉｎ  ｖｉｖｏに似た形態学的特性および微細構造特性を示す。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織の基底細胞層に局在するＮＨＭは樹状であり、自発的にメラニン顆粒を産生し、それは、次第に組織の層を占めていく。したがって、この試験システムは、陰性対照と比較して、メラニン産生を阻害または刺激し得る物質をスクリーニングするために使用する。
実験設計および方法
【１１６６】
本検討の実験設計は、可能な場合、無希釈の試験物品（および／または必要に応じて投与用溶液）のｐＨの決定、ならびに反復曝露後の相対的な組織生存率およびＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）皮膚モデルに対する皮膚メラニン形成モジュレーターとしての試験物品の潜在作用を決定するための決定的アッセイからなった。試験物品は、合計で７日間、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）皮膚モデルに曝露させた。４８時間（前回の処置から４８±２時間の時間枠内）毎に試験物品をＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）皮膚モデルに局所施用した。試験物品の毒性は、対照および試験物品処置組織におけるＭＴＴのＮＡＤ（Ｐ）Ｈ依存性ミクロソーム酵素還元によって（および、比較的低い程度のＭＴＴのコハク酸デヒドロゲナーゼ還元によって）決定した。データは、相対生存率の形態（陰性／溶媒対照と比較したＭＴＴ変換率）で提示した。メラニン産生に及ぼす潜在的な影響は、陰性／溶媒対照処置組織と比較して、試験物品処置組織において産生されたメラニンの濃度を決定することにより評価した。データは、メラニン標準品曲線を使用して決定した試験物品処置組織によって産生されるメラニンの濃度の形態で提示した。代替的に、データは、陰性／溶媒対照処置組織に対するメラニン濃度の変化率として提示されてもよい。
【１１６７】
使用した方法は、ＭａｔＴｅｋ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによって提供されている手順の修正である。
培地および試薬
【１１６８】
ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）維持培地（ＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ）は、ＭａｔＴｅｋ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから購入した。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）皮膚モデル（ＭＥＬ−３００−Ａ）は、ＭａｔＴｅｋ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから購入した。１％のコウジ酸（滅菌脱イオン水中で調製）は、Ｓｉｇｍａから購入した。ＭＴＴ（臭化３−［４，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウム）は、Ｓｉｇｍａから購入した。２ｍＭのＬ−グルタミンを含有するダルベッコの改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（ＭＴＴ添加培地）は、Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌから購入した。抽出溶媒（イソプロパノール）は、Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。Ｃａ＋＋およびＭｇ＋＋を含まない滅菌ダルベッコのリン酸緩衝食塩水（ＣＭＦ−ＤＰＢＳ）は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから購入した。メラニンはＳｉｇｍａから購入した。滅菌脱イオン水は、Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌから購入した。可溶物は、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒから購入した。
試験物品の調製および送達
【１１６９】
このプロトコール内で別段の指定がない限り、２５マイクロリットルの各試験物品を、組織に直接、上側表面を覆うように施用した。試験物品の性質（液体、ゲル、クリーム、フォームなど）に応じて、試験物品を組織の表面上に一様に広げることができる投与装置、メッシュまたは他の補助具の使用が必要となることがあった。
投与経路
【１１７０】
７日間の試験の間、４８時間（前回の処置から４８＋２時間の時間枠内）毎に試験物品をＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織に局所施用した。２５マイクロリットルの各試験物品を各組織に施用した。２５マイクロリットルの陽性および陰性／溶媒対照をそれぞれ各組織に施用した。
ｐＨ決定
【１１７１】
可能な場合、無希釈液体試験物品（および／または、適切な場合、投与用溶液）のｐＨを決定した。ｐＨは、ｐＨ試験紙（例えば、推定する０〜１４のｐＨ範囲を有するもの、および／またはより正確な値を決定する５〜１０のｐＨ範囲を有するもの）を使用して決定した。範囲が狭い方のｐＨ試験紙の典型的なｐＨ増分は、約０．３〜０．５ｐＨの単位とした。ｐＨ試験紙に対する最大増分は１．０ｐＨの単位とした。
対照
【１１７２】
決定的なアッセイは、陰性対照、陽性対照および１つの溶媒対照（ＤＭＳＯ）、または陽性対照および溶媒対照（ＤＭＳＯ）を含んだ。アッセイ陰性／溶媒対照に指定したＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、２５μＬの滅菌脱イオン水またはＤＭＳＯで処置した。アッセイ陽性対照に指定した組織は、２５μＬの１％コウジ酸、マラセジン（ＣＶ−８６８４）（１７ＡＪ４１）５００μＭまたは組成物＃２により処置した。１％コウジ酸は、調製の２時間以内に使用するまで、アルミニウムホイルで覆った管中に保管した。陰性／溶媒および陽性対照の曝露時間は、試験物品に対して使用した時間と同じとした。未処置組織も、対照として使用した。
試験物品によるＭＴＴの直接還元の評価
【１１７３】
各試験物品が、ＭＴＴを直接還元する能力を評価することが必要であった。ＭＴＴ溶液１．０ｍｇ／ｍＬを、ＭＴＴ添加培地中で調製した。約２５μＬの試験物品をＭＴＴ溶液１ｍＬに加え、この混合物を暗所中３７±１℃で１〜３時間、インキュベートした。陰性対照である滅菌脱イオン水２５μＬ、または溶媒対照であるＤＭＳＯ２５μＬを同時に試験した。ＭＴＴ溶液の色が青色／紫色に変わった場合、試験物品はＭＴＴを還元したと推定した。水不溶性試験物質は、試験物品と培地との界面でのみ、直接的な還元（暗色化）を示すことができた。
ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）の受領
【１１７４】
ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）皮膚キットの受領時、製造業者によって指示されている通りに溶液を保管した。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を使用するまで、２〜８℃で保管した。
【１１７５】
受領した日（投与の前日）に、適切な体積のＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）維持培地（ＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ）を除去し、３７±１℃に温めた。ＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ／ウェルの９／１０（０．９）ｍＬを、６ウェルプレートの適正なウェルに等分した。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織をそれぞれ、封止パッケージを開口する前に、アガロースゲルと細胞培養インサートとの間の気泡について検査した。細胞培養インサート領域の５０％より広い気泡を有する組織は使用しなかった。２４ウェルの輸送用容器をプラスチック製バッグから取り出し、その表面を７０％エタノールで消毒した。適切な数のＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、２４ウェルの輸送用容器から６ウェルプレートに無菌で移した。組織を順応させるため、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、空気中５±１％ＣＯ２の加湿雰囲気中、３７±１℃（標準培養条件）で一晩（少なくとも１６時間）、インキュベートした。バッグの開口時に、組織の移送時に輸送用寒天に残るいかなる未使用組織も、５％ＣＯ２／９５％空気の雰囲気で短時間脱気し、バッグを封止して、後の使用のため、２〜８℃に保管した。
決定的なアッセイ
【１１７６】
組織曝露：培養の開始後、少なくとも１６時間時に、デジタルカメラを使用して５つのＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織（０日目での未処置と見なす）の写真を撮り、アッセイのゼロ時間での組織の色素沈着の程度の目視評価の一助とした。２つのＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織をＣＭＦ−ＤＰＢＳによりすすぎ、滅菌吸収紙上で水分を吸い取って乾燥させ、過剰な液体を除去した。すすぎ後、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を適正なＭＴＴ含有ウェルに移し、ＭＴＴアッセイにおいて処理した。２つまたは３つのＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織をＣＭＦ−ＤＰＢＳによりすすぎ、滅菌吸収紙上で水分を吸い取って乾燥させ、過剰な液体を除去した。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、滅菌外科用メスを使用して細胞培養インサートから取り除き、ラベルを付けた１．５ｍＬマイクロフュージ管に入れて、後のメラニン分析のために、＜−６０℃で保管した。
【１１７７】
培養の開始後、少なくとも１６時間時に、事前加温した新たなＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ０．９ｍＬ／ウェルを含有する新しい６ウェルプレート上に組織の残部を移した。試験は７日間の時間枠にわたり行う。４つまたは５つの組織を、初日および４８時間（前回の処置から４８＋２時間の時間枠内）毎に、２５μＬの各試験物品で局所的に処置した。培地は毎日（前回の再供給から２４＋２時間の時間枠内）新しくした。組織を、事前加温した新たなＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ０．９ｍＬ／ウェルを含有する新しい６ウェルプレートに移した。
【１１７８】
４つまたは５つの組織を、初日および４８時間（前回の処置から４８＋２時間の時間枠内）毎に、それぞれ、２５μＬの陽性および陰性／溶媒対照で局所的に処置した。培地は毎日（前回の再供給から２４＋２時間の時間枠内）新しくした。組織を、事前加温した新たなＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ０．９ｍＬ／ウェルを含有する新しい６ウェルプレートに移した。組織を、空気中５±１％ＣＯ２の加湿雰囲気中、３７±１℃（標準培養条件）で適正な曝露時間、インキュベートした。
【１１７９】
投与日に、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、最初に１回のすすぎあたりＣＭＦ−ＤＰＢＳ約５００μＬを使用して３回、やさしくすすぎ、いずれの残留試験物品も除去した。ＣＭＦ−ＤＰＢＳは、やさしいピペット操作でウェルに入れて、次に、滅菌アスピレーターを用いて抜き取った。この組織を、事前加温した新たなＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ０．９ｍＬを含有する新しい６ウェルプレートに移し、適正な試験物品、陰性／溶媒または陽性対照を投与した。組織を、空気中５±１％ＣＯ２の加湿雰囲気中、３７±１℃（標準培養条件）で適正な曝露時間、インキュベートした。
【１１８０】
７日間の試験の終了時に、デジタルカメラを使用して陰性／溶媒または陽性対照、および各試験物品により処置したＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織の写真を撮り、アッセイ終了時（７日目）の組織の色素沈着の程度の目視評価の一助とした。次に、陽性および陰性対照によりそれぞれ処置した、および各試験物品により処置した２つの組織の生存率を、ＭＴＴ還元によって決定した。７日間の試験の終了時に、それぞれ、各試験物品、陽性および陰性／溶媒対照により処置した３つの組織により産生したメラニンを決定した。
【１１８１】
ＭＴＴアッセイ：ＰＢＳ中で調製したＭＴＴの１０×保存溶液（回分調製時にろ過したもの）を、使用前２時間以内に解凍し、温かいＭＴＴ添加培地に希釈して、１．０ｍｇ／ｍＬの溶液を生成した。予めラベルを付けた２４ウェルプレートの各指定ウェルにＭＴＴ溶液３００μＬを加えた。
【１１８２】
曝露時間後に、ＭＴＴアッセイ用に指定した各ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織をＣＭＦ−ＤＰＢＳですすぎ（このステップに許容されるスプレーボトルを使用）、滅菌吸収紙上で水分を吸い取って乾燥させ、過剰な液体を除去した。すすぎ後、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を適正なＭＴＴ含有ウェルに移した。２４ウェルプレートを、標準条件で３±０．１時間、インキュベートした。
【１１８３】
３±０．１時間後、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、滅菌吸収紙上で水分を吸い取り、過剰な液体を除去し、各指定ウェルにイソプロパノール２．０ｍＬを含有する、予めラベルを付けた２４ウェルプレートに移した。このプレートをパラフィルムで覆い、最後の曝露時間まで冷蔵庫（２〜８℃）内で保管し、収穫した。必要な場合、ＭＴＴを抽出する前に、プレートを冷蔵庫内に一晩保管した（または最後の曝露時間後、最大２４時間保管し、収穫する）。次に、これらのプレートを室温で少なくとも２時間、振とうした。抽出期間の終了時に、細胞培養インサート内の液体を、細胞培養インサートを取り出したウェル内にデカンテーションした。抽出溶液を混合し、２００μＬを９６ウェルプレートの適正なウェルに移した。２００μＬのイソプロパノールを、ブランクと指定したウェルに添加した。各ウェルの５５０ｎｍでの吸光度（ＯＤ５５０）をＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｖｍａｘプレートリーダーで測定した。
【１１８４】
メラニンアッセイ：適切な曝露時間の終わりに、メラニンアッセイに指定したＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、１回のすすぎあたり約５００μＬのＣＭＦ−ＤＰＢＳを使用して、少なくとも３回、やさしくすすぎ、培養培地に由来するいかなる残留試験物品または過剰のフェノールレッドも除去し、滅菌吸収紙上で水分を吸い取って乾燥させ、過剰な液体を除去した。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織は、本アッセイの終わりに、デジタルカメラを使用して写真を撮影した。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、滅菌外科用メスまたは滅菌パンチを使用して細胞培養インサートから取り除き、ラベルを付けた１．５ｍＬマイクロフュージ管に入れて、後のメラニン分析のために、＜−６０℃で保管した。
【１１８５】
メラニン抽出アッセイの当日、切除した組織を室温で約１０分間、解凍した。可溶物２５０μＬを各マイクロフュージ管に加え、これらの管を少なくとも１６時間、６０＋２℃でインキュベートした。メラニンを可溶物に溶解することにより、１ｍｇ／ｍＬのメラニンの標準保存溶液を調製した。一連のメラニン標準品を０ｍｇ／ｍＬ〜０．３３ｍｇ／ｍＬの範囲の１ｍｇ／ｍＬ保存溶液から調製した。標準品のシリーズは、１ｍｇ／ｍＬのメラニンの標準保存溶液０．６ｍＬを１．２ｍＬの可溶物に加えて、次に、さらに一連の５つの希釈液（希釈ファクター３）を作製することによって調製した。可溶物をゼロ標準品として使用した。メラニン標準品シリーズおよび可溶物を、６０＋２℃で少なくとも１６時間、インキュベートした。
【１１８６】
メラニン抽出を開始して、少なくとも１６時間後に、試料（ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織から抽出したメラニンとする）および標準品を含有する管を室温で冷却し、室温で、１３，０００ｒｐｍで５分間、遠心分離した。試料２００μＬ（単一ウェル）または標準品（二連のウェル）を９６ウェルプレートの適正なウェルに移した。２００μＬの可溶物を、二連のウェルでブランクと指定したウェルに加えた。各ウェルの４９０ｎｍでの吸光度（ＯＤ４９０）をＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｖｍａｘプレートリーダー（Ａｕｔｏｍｉｘ機能を選択）で測定した。
残留試験物品によるＭＴＴの還元を評価するための死滅対照
【１１８７】
考えられる残留試験物品がＭＴＴを直接還元するように作用していないことを実証するために、決定的アッセイで機能確認を行い、試験物質が組織に結合して、偽のＭＴＴ還元シグナルを生じることがないことを示した。
【１１８８】
残留試験物品がＭＴＴを直接還元するように作用しているかどうかを判定するために、凍結死滅させた対照組織を使用した。凍結死滅組織は、未処置のＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）／ＥｐｉＤｅｒｍ（商標）（メラノサイトを含まないＭｅｌａｎｏｄｅｒｍ（商標））組織を−２０℃の冷凍庫内に少なくとも一晩入れ、室温に解凍し、次に再凍結することによって調製した。組織は、一旦、死滅すると、冷凍庫内で無期限に保管してもよい。凍結死滅組織は、ＭａｔＴｅｋ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから既に調製済みのもの受領し、使用するまで−２０℃の冷凍庫内に保管することができる。残留試験物品の還元について試験するために、通常の様式で死滅組織を試験物品で処置した。すべてのアッセイ手順は、生存組織と同じ方法で実施した。死滅組織内の残留ＮＡＤＨおよび関連酵素から、少量のＭＴＴ還元が予想されるので、滅菌脱イオン水で処置した少なくとも１つの死滅対照（陰性死滅対照）を並行して試験した。
【１１８９】
試験物品で処置した死滅対照において、ＭＴＴ還元がほとんどまたは全く観察されなかった場合、試験物品で処置した生存組織に観察されるＭＴＴ還元は、生存細胞に起因し得る。処置した死滅対照においてかなりのＭＴＴ還元があった場合（処置した生存組織の量に対して）、化学還元を説明する追加ステップを講じなければならないか、またはこの試験物品は、このシステムでは試験不能と見なされ得る。
データ分析
【１１９０】
ブランクのウェルの平均ＯＤ５５０値を計算した。陰性／溶媒対照の補正後の平均ＯＤ５５０値は、これらの平均ＯＤ５５０値からブランクのウェルの平均ＯＤ５５０値を減算することによって求めた。個々の試験物品に曝露したものおよび陽性対照に曝露したものの補正後のＯＤ５５０値は、それぞれからブランクのウェルの平均ＯＤ５５０値を減算することによって求めた。すべての計算は、Ｅｘｃｅｌのスプレッドシートを使用して実施した。議論したアルゴリズムは、処置群レベルでの最終エンドポイント解析を計算するために実施するが、同じ計算を個々の反復試験に適用することができる。
補正した試験物品の曝露ＯＤ５５０＝試験物品の曝露ＯＤ５５０−ブランクの平均ＯＤ５５０
【１１９１】
死滅対照（ＫＣ）を使用する場合、試験物品の残留物によって直接還元されたＭＴＴの量を補正するために、以下の追加的な計算を実施した。陰性対照での死滅対照の生のＯＤ５５０値を、試験物品で処置した死滅対照のそれぞれの生のＯＤ５５０値から減算し、試験物品で処置した死滅対照の正味のＯＤ５５０値を求めた。
各試験物品ＫＣの正味のＯＤ５５０＝生のＯＤ５５０試験物品のＫＣ−生のＯＤ５５０陰性／溶媒対照ＫＣ
【１１９２】
正味のＯＤ５５０値は、試験物品残留物による特定の曝露時間での直接還元により還元されたＭＴＴの量を表す。一般に、正味のＯＤ５５０値が、０．１５０より大きい場合、ＭＴＴ還元の正味の量を、処置した生存組織の補正後のＯＤ５５０値から減算して、最終補正後のＯＤ５５０値を得る。次に、これらの最終補正後のＯＤ５５０値を使用して、対照生存率の％を求める。
最終補正後のＯＤ５５０＝補正した試験物品のＯＤ５５０（生存）−正味のＯＤ５５０試験物品（ＫＣ）
【１１９３】
最後に、以下の対照の％の計算を行う：
生存率（％）＝［（試験物品または陽性対照の最終的な補正後のＯＤ５５０）／（陰性／溶媒対照の補正後の平均ＯＤ５５０）］×１００
【１１９４】
メラニン分析：吸光度の生データを取り込み、印刷ファイルとして保存し、Ｅｘｃｅｌのスプレッドシートにインポートした。各試験試料（０日目の未処置ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織から抽出したメラニン、７日目の各試験物品、陰性／溶媒または陽性対照により処置したＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織とする）およびメラニン標準品のＯＤ４９０値を求めた。試験試料および各メラニン標準品に関する補正後のＯＤ４９０値は、ブランクのウェルの平均ＯＤ４９０値を減算することによって求めた。標準曲線は、対応する補正後吸光度に対するｍｇ／ｍＬでの標準品の濃度（ｙ軸）としてプロットした。個々の組織のそれぞれにおけるメラニンの量は、標準曲線（線形）から補間した。最後に、各試験物品または対照処置群のメラニン濃度の平均値をそれぞれ、計算した。
結果
【１１９５】
図１３１は、試験物品、試験組成物、陽性対照および溶媒対照に関する平均組織生存率およびメラニン濃度の結果を要約している。組成物＃１および＃２を構成する化合物は、単一組成物中で組み合わされると、相乗効果を実証した。
【１１９６】
図１３２は、試験物品、試験組成物、陽性対照および溶媒対照に関する平均組織生存率およびメラニン濃度の結果を要約している。組成物＃２、＃３、＃４および＃５を構成する化合物は、単一組成物中で組み合わされると、相乗効果を実証した。
（実施例３４）
Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ由来の化合物および／またはその化学アナログを含有する組成物のメラニン形成能
【１１９７】
この検討の目的は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ由来の化合物および／またはその化学アナログを含有する組成物に曝露されたＢ１６メラノサイトのメラニン形成および生存率を観察ならびに報告することである。
物質および試薬
【１１９８】
プレート培養用の培地は、Ｌ−グルタミン、ＦＢＳ、ペニシリン／ストレプトマイシンおよびＬ−グルタミンを含まないＤＭＥＭを含む。アッセイ培地は、フェノールレッドおよびＬ−グルタミン、ＦＢＳ、ペニシリン／ストレプトマイシン、Ｌ−グルタミンおよびａＭＳＨを含まないＤＭＥＭを含む。他の試薬は、コウジ酸、ＤＭＳＯおよびＭＴＴを含む。試験する細胞は、Ｂ１６細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−６４７５）となる。
プロトコール
【１１９９】
Ｂ１６メラノサイトは、７０％コンフルエントになるまで培養し、収穫する。４０００細胞／ウェルの密度で、９６ウェルプレートに細胞を播種し、一晩、付着させる。翌日、試験物品、試験組成物および対照をＢ１６アッセイ培地に希釈する。一晩、培地を吸引し、２００ｕｌの試験物品および対照を施用する。細胞を３７℃および１０％ＣＯ２で７２時間、インキュベートする。７２時間のインキュベート後、吸光度を５４０ｎｍで読み取る。培地を除去し、１ｍｇ／ｍＬ  ＭＴＴを含有するプレート培養用培地１００ｕｌと置き換え、３７℃および１０％ＣＯ２で、２時間、インキュベートする。ＭＴＴ培地を除去し、２００ｕｌの９５％エタノール／５％イソプロパノールにより置き換え、１５分間、振とうさせる。次に、ＭＴＴの吸光度を５７０ｎｍで読み取る。
結果
【１２００】
組成物＃１〜５を含む、本発明の化合物および組成物は、メラニン形成を阻害することが予想される。本発明の組成物は、例えば、少なくとも１つの構成成分化合物に比べて、より強力なメラニン形成阻害活性を示すことが予想される。同様に、ある特定の組成物は、例えば、少なくとも１つの構成成分化合物に比べて、それほど有効ではないメラニン形成阻害活性を実証することが予想される。
（実施例３５）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ有効性
【１２０１】
本発明の化合物および組成物は、メラノサイトアポトーシスを誘導し、メラノサイト活性、メラニン産生、メラニン濃度、メラノソーム生物発生および／またはメラノソーム輸送をモジュレートすると予想される。本発明の化合物および組成物のいくつかは、これらの生物学的過程にそれほど強力に影響を及ぼさないことも企図される。このような化合物および組成物は、より効力の高い化学種と比較して、より有利な毒性プロファイルを有することができる。
（実施例３６）
ｉｎ  ｖｉｖｏ効力
【１２０２】
本発明の化合物および組成物は、皮膚の美白、および様々な障害によって引き起こされる色素沈着過度／低色素沈着の改善を含めた、皮膚の色素沈着をモジュレートすると予想される。本発明の化合物および組成物は、例えば、半減期および吸収に関して、有利な薬物動態プロファイルを示すことがさらに予想される。ある特定の化合物は、より長い半減期を示す一方、他の化合物は、より短い半減期を示すこととなる。同様に、ある特定の化合物は、異なる吸収プロファイルを示し、一部の化合物は、完全に吸収されるのにより時間がかかり、他の化合物は完全に吸収されるのに時間はそれほどかからないであろう。
（実施例３７）
マラセジンおよびインジルビンの化学アナログの合成
ＡＢ１７５９０の合成
【１２０３】
図１３３Ａに示されている通り、化合物１ａ（２５．０ｇ、０．３５７ｍｏｌ、１．０当量）のテトラヒドロフラン（２５０ｍＬ）溶液に、０℃で臭化エチニルマグネシウム（ＴＨＦ中の０．５Ｍ、１．０７Ｌ、０．５３５ｍｏｌ、１．５当量）を加え、この反応混合物を室温まで温めて、２時間、撹拌した。次に、この混合物を塩化アンモニウムの飽和水溶液によりクエンチし、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル中の０〜１０％酢酸エチル）により精製すると、化合物１ｂ（９．５ｇ、２７％）が得られた。ＴＬＣ：ＰＥ：ＥＡ＝２０：１、２５４ｎｍ；Ｒｆ（化合物１ａ）＝０．３；Ｒｆ（化合物１ｂ）＝０．７。
【１２０４】
テトラヒドロフラン（１００ｍＬ）中の化合物１ｂ（９．５ｇ、９８．９６ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、窒素雰囲気下、０℃で６０％水素化ナトリウム（４．７ｇ、０．１１９ｍｏｌ、１．２当量）のジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）溶液を加えた。３０分後、０℃でジメチル硫酸（２２．４ｇ、０．１７８ｍｏｌ、１．８当量）を加えた。添加後、この反応混合物を室温まで温め、３０分間、室温で撹拌し、次に、酢酸（１ｍｌ）をゆっくりと加えた。生成物を反応混合物から、直接、蒸留した。こうして、化合物１ｃ（１０．０ｇ、９１％収率）が得られた。
【１２０５】
化合物１（８．０ｇ、２４．０２ｍｍｏｌ、１．０当量）および化合物１ｃ（２．９ｇ、２６．４３ｍｍｏｌ、１．１当量）のトリエチルアミン（８０ｍＬ）溶液に、窒素雰囲気下、室温でヨウ化第一銅（４５６ｍｇ、２．４０ｍｍｏｌ、０．１当量）およびＰｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（３３７ｍｇ、０．４８０ｍｍｏｌ、０．０２当量）を加えた。この混合物を室温で２時間、撹拌した。反応混合物の進行をＴＬＣによってモニタリングした。この反応混合物を水により希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル中の０〜１０％酢酸エチル）により精製すると、化合物２（７．０ｇ、９２％）が得られた。ＴＬＣ：ＰＥ：ＥＡ＝１０：１、２５４ｎｍ；Ｒｆ（化合物１）＝０．８；Ｒｆ（化合物２）＝０．６。
【１２０６】
オーブン乾燥フラスコに、ジオキサン（６５０ｍＬ）中の二塩化白金（６９４ｍｇ、２．０６ｍｍｏｌ、０．１当量）、炭酸ナトリウム（３．３ｇ、３０．９５ｍｍｏｌ、１．５当量）、トリス（ペンタフルオロフェニル）ホスフィン（２．２ｇ、４．１３ｍｍｏｌ、０．２当量）、６−メチルインドール（４．８ｇ、４１．２７ｍｍｏｌ、２．０当量）および化合物２（６．５ｇ、２０．６３ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物を加えた。このフラスコを窒素により脱気して封止し、１６時間、１００℃に加熱した。この反応混合物の進行をＴＬＣによってモニタリングした。溶媒を減圧下で濃縮した。残留物を酢酸エチルにより希釈し、水、飽和ブラインで抽出した、有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル中の０〜１０％酢酸エチル）により精製すると、化合物３（３．０ｇ、３６％）が得られた。ＴＬＣ：ＰＥ：ＥＡ＝１０：１、２５４ｎｍ；Ｒｆ（化合物２）＝０．６；Ｒｆ（化合物３）＝０．２。
【１２０７】
化合物３（３．０ｇ、７．５０ｍｍｏｌ、１．０当量）のテトラヒドロフラン（３０ｍＬ）溶液に、０℃でナトリウムメタノレート（ＭｅＯＨ中の５Ｍ、６．０ｍＬ、２９．９８ｍｍｏｌ、４．０当量）を加えた。この反応混合物を室温まで温め、２時間、撹拌した。反応混合物の進行をＴＬＣによってモニタリングした。この反応混合物を減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル中の０〜１０％酢酸エチル）により精製すると、化合物４（１．５ｇ、６６％）が得られた。ＴＬＣ：ＰＥ：ＥＡ＝５：１、２５４ｎｍ；Ｒｆ（化合物３）＝０．７；Ｒｆ（化合物４）＝０．４。
【１２０８】
アルゴン下、乾燥した５００ｍＬの３つ口丸底フラスコに、０℃でジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）を加えた。次に、内温を５℃未満に維持しながら、１０分間かけて、オキシ塩化リン（１．２ｇ、７．６０ｍｍｏｌ、１．２当量）をゆっくりと加えた。０℃で３０分間、撹拌した後、内温を５℃未満に維持しながら、１０分間かけて、化合物４（１．９ｇ、６．３３ｍｍｏｌ、１．０当量）のジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）溶液をゆっくりと加えた。得られた混合物を、室温で１６時間、撹拌した。反応が完了した後（ヘキサン中の２０％酢酸エチルを使用して、ＴＬＣによりモニタリング）、この反応混合物を飽和水性炭酸水素ナトリウム（５０ｍＬ）に注ぎ入れて、１時間、撹拌した。得られた混合物を酢酸エチル（２×１００ｍＬ）により抽出した。合わせた有機層を水、飽和ブラインにより洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水した。この溶媒をろ過して、減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル中の１０〜５０％酢酸エチル）により精製すると、化合物５（１．８ｇ、８９％）が得られた。ＴＬＣ：ＰＥ：ＥＡ＝１：１、２５４ｎｍ；Ｒｆ（化合物４）＝０．８；Ｒｆ（化合物５）＝０．５。
【１２０９】
化合物５（１．８ｇ、５．４９ｍｍｏｌ、１．０当量）のテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）溶液に、０℃でジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（３．０ｇ、１３．７２ｍｍｏｌ、２．５当量）および４−ジメチルアミノピリジン（１．４ｇ、１１．２５ｍｏｌ、２．０５当量）を加えた。この反応混合物を室温まで温め、３時間、撹拌した。反応混合物の進行をＴＬＣによってモニタリングした。反応混合物を減圧下で濃縮し、残留物を酢酸エチルで希釈して、１Ｎ塩酸、飽和水性炭酸水素ナトリウム（３００ｍＬ）およびブライン（３００ｍＬ）により洗浄した。有機層を分離して無水硫酸ナトリウムで脱水し、ろ過して濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル中の０〜１０％酢酸エチル）により精製すると、化合物６（２．４ｇ、８２％）が得られた。ＴＬＣ：ＰＥ：ＥＡ＝１０：１、２５４ｎｍ；Ｒｆ（化合物５）＝０．１；Ｒｆ（化合物６）＝０．５。
【１２１０】
化合物６（２．４ｇ、４．５５ｍｍｏｌ、１．０当量）のｔｅｒｔ−ブタノール（６０ｍＬ）溶液に、０℃で２−メチル−２−ブテン（３０ｍＬ）を加え、次いで亜塩素酸ナトリウム（８．２ｇ、９０．９１ｍｍｏｌ、２０．０当量）、リン酸二水素ナトリウム（１４．２ｇ、９０．９１ｍｍｏｌ、２０．０当量）および水（６０ｍＬ）を加えた。この混合物を室温までゆっくりと温め、１５時間、室温で撹拌した。反応混合物の進行をＴＬＣによってモニタリングした。この反応混合物をジクロロメタン（１００ｍＬ）により希釈し、分離した。有機層を水（８０ｍＬ）、ブライン（８０ｍＬ）により洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水して減圧下で濃縮すると、粗製化合物７（２．５ｇ、９９％）が得られた。ＴＬＣ：ＰＥ：ＥＡ＝２：１、２５４ｎｍ；Ｒｆ（化合物６）＝０．７；Ｒｆ（化合物７）＝０．３。
【１２１１】
化合物７（２．５ｇ、４．６０ｍｍｏｌ、１．０当量）のジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）溶液に、０℃で炭酸カリウム（９５２ｍｇ、６．８９ｍｍｏｌ、１．５当量）およびヨウ化メチル（９７８ｍｇ、６．８９ｍｍｏｌ、１．５当量）を加えた。この反応混合物を室温まで温め、２時間、撹拌した。反応混合物の進行をＴＬＣによってモニタリングした。この反応混合物を酢酸エチル（１００ｍＬ）により希釈し、水（１００ｍＬ）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル中の５〜１７％酢酸エチル）により精製すると、化合物８（２．３ｇ、８９％）が得られた。ＴＬＣ：ＰＥ：ＥＡ＝５：１、２５４ｎｍ；Ｒｆ（化合物７）＝０．１；Ｒｆ（化合物８）＝０．６。
【１２１２】
塩酸（ＥＡ中の３Ｍ、３０ｍＬ）中の化合物８（１．３ｇ、２．３３ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物を、室温で１６時間、撹拌した。反応をＴＬＣによってモニタリングした。次に、この混合物を減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル中の１０〜２５％酢酸エチル）により精製すると、化合物ＡＢ１７５９０（５０２ｍｇ、６１％）が黄色固体として得られた。ＴＬＣ：ＰＥ：ＥＡ＝３：１、２５４ｎｍ；Ｒｆ（化合物８）＝０．８；Ｒｆ（化合物ＡＢ１７５９０）＝０．５；ＬＣ−ＭＳ：３５９（Ｍ＋１）＋；1H  NMR  (400  MHz,  CDCl3)  δ  8.12  (d,  J  =  19.7  Hz,  2H),  7.94  (s,  1H),  7.42  (s,  1H),  7.35  (d,  J  =  8.1  Hz,  1H),  7.13  (t,  J  =  7.8  Hz,  1H),  7.04  (d,  J  =  8.2  Hz,  1H),  6.93  (dd,  J  =  15.7,  8.6  Hz,  2H),  5.04  (d,  J  =  9.1  Hz,  1H),  3.95  (s,  3H),  2.45  (s,  3H),  1.42  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  0.78  -  0.68  (m,  1H),  0.62  (d,  J  =  4.8  Hz,  1H),  0.54  -  0.41  (m,  2H).
ＡＢ１７６５３の合成
【１２１３】
図１３３Ｂに示されている通り、メタノール（１０ｍＬ）中の化合物１（７２１ｍｇ、３．２０ｍｍｏｌ、１．０当量）、化合物１ａ（５６０ｍｇ、３．２０ｍｍｏｌ、１．０当量）および炭酸ナトリウム（８６６ｍｇ、８．１７ｍｍｏｌ、２．５５当量）の混合物を窒素雰囲気下、室温で３時間、撹拌した。反応混合物の進行をＴＬＣによってモニタリングした。この反応の完了後、この混合物をろ過して、フィルターケーキをメタノールおよび水で洗浄すると、化合物ＡＢ１７６５３（９７９ｍｇ、８９％）が赤色固体として得られた。ＴＬＣ：ＰＥ／ＥＡ＝３／１、２５４ｎｍ；Ｒｆ（化合物１）＝０．６；Ｒｆ（化合物ＡＢ１７６５３）＝０．４；ＬＣ−ＭＳ：３３８．９５（Ｍ−１）−；1H  NMR  (400  MHz,  d6-DMSO)  δ11.01  (d,  J  =  21.5  Hz,  2H),  8.64  (d,  J  =  8.3  Hz,  1H),  7.62  (d,  J  =  7.7  Hz,  1H),  7.55  (t,  J  =  7.6  Hz,  1H),  7.39  (d,  J  =  8.1  Hz,  1H),  7.18  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  7.00  (dd,  J  =  8.8,  4.6  Hz,  2H).
ＡＢ１７６５４の合成
【１２１４】
図１３３Ｂに示されている通り、ピリジン（３０ｍＬ）中の化合物ＡＢ１７６５３（９７９ｍｇ、２．８８ｍｍｏｌ、１．０当量）およびヒドロキシルアミン塩酸塩（５２０ｍｇ、７．４９ｍｍｏｌ、２．６当量）の混合物を、窒素雰囲気下、１２０℃で２時間、撹拌した。反応混合物の進行をＬＣＭＳによってモニタリングした。この反応の完了後、混合物を減圧下で濃縮し、固体が現れるまで１Ｎ  ＨＣｌを加えた。この混合物をろ過して、フィルターケーキを１Ｎ  ＮａＯＨに溶解した。次に、３Ｎ  ＨＣｌを加えて、ｐＨ＝５に調整し、ろ過した。フィルターケーキを１Ｎ  ＨＣｌにより洗浄すると、化合物ＡＢ１７６５４（５００ｍｇ、４８％）が赤色固体として得られた。ＬＣ−ＭＳ：３５７．９５（Ｍ＋１）＋；1H  NMR  (400  MHz,  d6-DMSO)  δ  13.59  (s,  1H),  11.71  (s,  1H),  10.82  (s,  1H),  8.53  (d,  J  =  8.4  Hz,  1H),  8.19  (d,  J  =  7.7  Hz,  1H),  7.42  -  7.35  (m,  2H),  7.11  -  6.96  (m,  3H).
ＡＢ１７６５５の合成
【１２１５】
図１３３Ｂに示されている通り、メタノール（１０ｍＬ）中の化合物２（６３７ｍｇ、３．８６ｍｍｏｌ、１．０当量）、化合物１ａ（６７６ｍｇ、３．８６ｍｍｏｌ、１．０当量）および炭酸ナトリウム（１０４４ｍｇ、９．８４ｍｍｏｌ、２．５５当量）の混合物を窒素雰囲気下、室温で３時間、撹拌した。反応混合物の進行をＴＬＣによってモニタリングした。この反応の完了後、混合物をろ過して、フィルターケーキをメタノールおよび水で洗浄すると、化合物ＡＢ１７６５５（１０２７ｍｇ、９５％）が赤色固体として得られた。ＬＣ−ＭＳ：２８１．０５（Ｍ＋１）＋；1H  NMR  (400  MHz,  d6-DMSO)  δ11.06  (s,  1H),  10.86  (s,  1H),  8.54  (dd,  J  =  10.5,  2.7  Hz,  1H),  7.67  -  7.53  (m,  2H),  7.41  -  7.38  (m,  1H),  7.09  -  6.98  (m,  2H),  6.85  (dd,  J  =  8.5,  4.8  Hz,  1H).  
ＡＢ１７６５６の合成
【１２１６】
図１３３Ｂに示されている通り、ピリジン（３０ｍＬ）中の化合物ＡＢ１７６５５（１０２７ｍｇ、３．６７ｍｍｏｌ、１．０当量）およびヒドロキシルアミン塩酸塩（６６３ｍｇ、９．５４ｍｍｏｌ、２．６当量）の混合物を、窒素雰囲気下、１１０℃で２時間、撹拌した。反応混合物の進行をＬＣＭＳによってモニタリングした。この反応の完了後、混合物を減圧下で濃縮し、固体が現れるまで１Ｎ  ＨＣｌを加えた。この混合物をろ過して、フィルターケーキを１Ｎ  ＮａＯＨに溶解した。次に、３Ｎ  ＨＣｌを加えて、ｐＨ＝５に調整し、ろ過した。フィルターケーキを１Ｎ  ＨＣｌにより洗浄すると、化合物ＡＢ１７６５６（５００ｍｇ、４８％）が赤色固体として得られた。ＬＣ−ＭＳ：２９６．００（Ｍ＋１）＋；1H  NMR  (400  MHz,  d6-DMSO)  δ13.60  (s,  1H),  11.77  (s,  1H),  10.69  (s,  1H),  8.43  (s,  1H),  8.20  (d,  J  =  7.7  Hz,  1H),  7.39  (d,  J  =  5.7  Hz,  2H),  7.02  (s,  1H),  6.91  (s,  1H),  6.83  (d,  J  =  4.9  Hz,  1H).
ＡＢ１７６５７の合成
【１２１７】
図１３３Ｂに示されている通り、メタノール（１０ｍＬ）中の化合物３（３６２ｍｇ、２．４６ｍｍｏｌ、１．０当量）、化合物１ａ（４３１ｍｇ、２．４６ｍｍｏｌ、１．０当量）および炭酸ナトリウム（６６６ｍｇ、６．２８ｍｍｏｌ、２．５５当量）の混合物を窒素雰囲気下、室温で３時間、撹拌した。反応混合物の進行をＴＬＣによってモニタリングした。この反応の完了後、この混合物をろ過して、フィルターケーキをメタノールおよび水で洗浄すると、化合物４（６０６ｍｇ、９３％）が得られた。ＴＬＣ：ＰＥ／ＥＡ＝１／１、２５４ｎｍ；Ｒｆ（化合物３）＝０．７；Ｒｆ（化合物４）＝０．５。
【１２１８】
ピリジン（２０ｍＬ）中の化合物４（６０６ｍｇ、２．３１ｍｍｏｌ、１．０当量）およびヒドロキシルアミン塩酸塩（４１８ｍｇ、６．０１ｍｍｏｌ、２．６当量）の混合物を、窒素雰囲気下、１２０℃で２時間、撹拌した。反応混合物の進行をＴＬＣによってモニタリングした。この反応の完了後、混合物を減圧下で濃縮し、固体が現れるまで１Ｎ  ＨＣｌを加えた。この混合物をろ過して、フィルターケーキを１Ｎ  ＮａＯＨに溶解した。次に、３Ｎ  ＨＣｌを加えて、ｐＨ＝５に調整し、ろ過した。フィルターケーキを１Ｎ  ＨＣｌにより洗浄すると、ＡＢ１７６５７（５００ｍｇ、７８％）が褐色固体として得られた。ＴＬＣ：ＰＥ／ＥＡ＝１／１、２５４ｎｍ；Ｒｆ（化合物４）＝０．５；Ｒｆ（化合物ＡＢ１７６５７）＝０．４；ＬＣ−ＭＳ：２７８．１０（Ｍ＋１）＋；1H  NMR  (400  MHz,  d6-DMSO)  δ13.60  (s,  1H),  11.77  (s,  1H),  10.69  (s,  1H),  8.43  (s,  1H),  8.20  (d,  J  =  7.7  Hz,  1H),  7.39  (d,  J  =  5.7  Hz,  2H),  7.02  (s,  1H),  6.91  (s,  1H),  6.83  (d,  J  =  4.9  Hz,  1H).
ＡＢ１７６５８の合成
【１２１９】
図１３３Ｂに示されている通り、アセトニトリル（１０ｍＬ）中の化合物５ａ（３３７ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ、１．０当量）、化合物５ｂ（５５４ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ、１．０当量）および水酸化カリウム（１１１４ｍｇ、３．４６ｍｍｏｌ、２．０当量）の混合物を窒素雰囲気下、３５℃で１．５時間、撹拌した。反応混合物の進行をＴＬＣによってモニタリングした。反応の完了後、この混合物を減圧下で濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーによって残留物を精製すると、化合物５ｃ（４３６ｍｇ、９９％）が得られた。ＴＬＣ：ＰＥ／ＥＡ＝１／１、２５４ｎｍ；Ｒｆ（化合物５ａ）＝０．８；Ｒｆ（化合物５ｃ）＝０．５。
【１２２０】
メタノール（１０ｍＬ）中の化合物５（３３０ｍｇ、１．７２ｍｍｏｌ、１．０当量）、化合物５ｃ（４３６ｍｇ、１．７２ｍｍｏｌ、１．０当量）および炭酸ナトリウム（４６５ｍｇ、４．３８ｍｍｏｌ、２．５５当量）の混合物を、窒素雰囲気下、室温で３時間、撹拌した。反応混合物の進行をＴＬＣによってモニタリングした。この反応の完了後、この混合物をろ過して、フィルターケーキをメタノールおよび水で洗浄すると、化合物６（６１７ｍｇ、９３％）が得られた。ＴＬＣ：ＰＥ／ＥＡ＝１／１、２５４ｎｍ；Ｒｆ（化合物５）＝０．５；Ｒｆ（化合物６）＝０．４。
【１２２１】
ピリジン（２０ｍＬ）中の化合物６（６１７ｍｇ、１．６０ｍｍｏｌ、１．０当量）およびヒドロキシルアミン塩酸塩（２９０ｍｇ、４．１７ｍｍｏｌ、２．６当量）の混合物を、窒素雰囲気下、１１０℃で２時間、撹拌した。反応混合物の進行をＴＬＣによってモニタリングした。この反応の完了後、混合物を減圧下で濃縮し、固体が現れるまで１Ｎ  ＨＣｌを加えた。この混合物をろ過して、フィルターケーキを１Ｎ  ＮａＯＨに溶解した。次に、３Ｎ  ＨＣｌを加えて、ｐＨ＝５に調整し、ろ過した。フィルターケーキを１Ｎ  ＨＣｌにより洗浄すると、化合物ＡＢ１７６５８（５００ｍｇ、７８％）が赤色固体として得られた。ＴＬＣ：ＰＥ／ＥＡ＝１／１、２５４ｎｍ；Ｒｆ（化合物６）＝０．４；Ｒｆ（化合物ＡＢ１７６５８）＝０．３；ＬＣ−ＭＳ：４０２．９５（Ｍ＋１）＋；1H  NMR  (400  MHz,  d6-DMSO)  δ11.86  (s,  1H),  11.39  (s,  1H),  9.40  (d,  J  =  2.2  Hz,  1H),  8.33  (d,  J  =  1.8  Hz,  1H),  8.06  (dd,  J  =  8.6,  2.4  Hz,  1H),  7.59  (dd,  J  =  8.4,  2.0  Hz,  1H),  7.43  (d,  J  =  8.6  Hz,  1H),  7.02  (d,  J  =  8.6  Hz,  1H).
（実施例３８）
マラセジン、他のＭａｌａｓｓｅｚｉａ由来の化合物およびそれらの化学アナログの光保護特性のｉｎ  ｖｉｖｏ評価
マラセジン１％製剤
【１２２２】
この検討において使用されるマラセジン１％製剤は、以下の成分：水（水（aqua））−６５．９３９％；ジメチルイソソルバイド−２０．０００％；オリーブ油グリセレス−８エステル−３．０００％；グリセリン−２．９９１％；ヤシアルカン−２．７００％；アクリル酸ヒドロキシエチル／アクリロイルジメチルタウリン酸のナトリウムのコポリマー−１．７００％；マラセジン−１．０００％；ペンチレングリコール−１．０００％；フェノキシエタノール−０．６４０％；ココ−カプリレート／カプレート−０．３００％；カプリリルグリコール−０．２００％；クロルフェネシン−０．１６０％；イソステアリン酸ソルビタン−０．１４０％；トコフェロール−０．볯邼볯薼볯鶃菣붂菣馃菣袃볯邼裢邼볯邼볯邼볯鮼臣袂臣ꖼ볯뒼볯貺菣袃菣Ꚃ菣銈볯躼볯閼볯薼苣ꮐ鳦鞁臣芀戼㹲龮꣩궨꣨ઈ䐼噉邀볯銼볯鎼胣㲑䐯噉ਾ†髧骆苣ꒂ菣ꦼ볯꺁볯馼귦꺁ꗥꞀ苣膀臣꺁ꛦ떿껥벨ꓦ躨臣ꮐ臣鮁臣芀㰊䥄㹖胣醼볯銼볯醀⼼䥄㹖 龮꣩꺁볯ꖗ鯧ꮁ胣뺯뇨銂ꧨꆾ臣膀苣벃苣莃菣讞菣궃菣覃菣뎃菣꒼뷯膽뷯覽뷯袽뷯ₔ떼볯ꊼꏨ꺽苣뾽铧鞁臣膀鳦辰蟩꺁듧醖蟩袼胣궼볯꒼胣覼苣몱껥鞁臣芀볯ꒁ臣ꎭ雦ꊽ臣讞苣ꚩ꣩뺯뇨꺁菨궸臣ꚷ룤袼볯躼볯莽뷯쎍醼볯閼뷯趽볯ꮁ뷧蒁臣芀鯥醼볯钼苣芏藧閁苣龁臣芀㰊䥄㹖胣醼볯銼볯醀⼼䥄㹖 뺯뇨꺁髧骆苣ꒂ菣ꮁ雩馁苣궼볯꒼藥ꚩ꣩辇볯炈潨潴†整瑳†潤敳볯銂뷯ꪼ볯莽뷯㲍畳⁰浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯㲒猯灵颍뷤ꞁ鯥醼볯閼臣鞈賦馁苣芀藧蒰臣ꚁ볯钼駦鎖뻥ꮁ胣뺯뇨銂볯ꖼ볯閩뻤ꮁ裦鞁臣芀鯥醼볯馼臣몤臣貂臣蒁苣骀苣膀꿥ꆱ臣궼볯꒼臣醼볯邼뷯ꪼ臣芁臣龁胣ં䐼噉邀볯銼볯隼胣㲑䐯噉ਾ†뛧蒁臣膀꿥ꆱ臣膀볯ꖗ雩膀볯ꖗ볯麛胣貃룤꺁迥뒁臣誸臣ꚩ꣩ꎭ雦ꊽ臣麃菣뮂苣뎃볯薼苣붖铧鞁臣芀곧銼臣뎏臣许臥꺁귦릖뷥銂胣钼韦꺛胣鞼韦꺛臣醼韦銼鯥膀蟥꺽臣膀곧鎼臣궸ꓥ꺁귦릖뷥ꮁ臣膀볯ꖗ鯧ꮁ볯麛胣붖铧鞁臣芀铧邈觧鎃菣꾂菣꾁胣貃룤꺁럥뒁臣鞼韦鎖胣醼韦銼鯥膀雦ꢔ臣龁胣뎛볯钼볯銂迥ꞅ臣貂臣蒁胣뺯뇨꾁胣鞼韦꺛臣膀藧蒰苣鞏臣讂臣膂胣钠ꧧ붖꣨ꮁ裦閁苣龁胣뎛볯鎼볯銂迥ꞅ臣貂臣蒁胣蒐ꧨ鎨菩趽臣膀볯銼볯趽볯꺁볯뚼볯鶛鳩銂藧蒰臣龁胣뺯뇨銂胣覅꿦Ꞁ볯覅뿤랭苣閩뻤馁苣龁苣ꮁ胣銼볯芙雩貾臣뮈臣龁胣뎛볯钼볯銂迥ꞅ臣貂臣蒁胣ં䐼噉邀볯銼볯鞼胣㲑䐯噉ਾ†臣꺁꿥ꆱ臣龮꣩銂뛧骶臣膀郥袨臣醼볯ꖗ雩膀菣ꦃ苣뢂菣醼볯銂迥醁臣芀鯥醼볯銼胣醼볯鎼臣膀믤许臣ꚇ뷧ꮁ鯦늜臣鮁臣뺯뇨꺁髧骆臣颠鿥銂ꓧ鞁臣蒁苣骼菩趽볯钼臣膀菣ꦃ苣뢂菣醼볯銂볯钼韦鎖胣醼韦銼鯥��雦ꢔ臣龁胣ꢃ뷤醼볯ꮁ胣醼볯ꖗ雩膀볯ꖗ볯麛胣麃菣뮂苣뎃볯薼苣붖铧鞁臣芀菩趽볯ꮁ胣颼韦鎖胣醼韦銼鯥膀菣ꦃ苣뢂菣醼볯銂雦ꢔ臣龁胣ꢃ뷤鎼臣膀볯ꖗ雩膀볯ꖗ볯麛胣麃菣뮂苣뎃볯薼苣붖铧鞁臣芀菩趽볯ꮁ胣醼鯥膀菣ꦃ苣뢂菣醼볯銂雦ꢔ臣龁胣鎃菣꾂菣ꢃ뷤ꮁ胣鶁苣麁苣膀볯ꖗ雩誁苣뎁볯ꖗ雩膀볯ꖗ볯麛胣鎃菣꾂菣銂雦ꢔ臣龁胣㲂牢ਾ뗧鲞㰊䥄㹖胣醼볯銼볯醀⼼䥄㹖 뎛볯钼볯ꮁꓧ閁苣ꚁ臣讂胩誂胣떼볯ꊼ鯦늜臣銼볯芙雩貾臣膀꿥ꆱ臣膀菣銃苣ꮃꧨ鎨菩趽臣誁臣ꚁ胣醼菣ꦃ苣鲀볯鞃菣릂臣薴雦銂ꓧ鞁臣芀듧醖苣놂菣ꮃ臣ꊖ臣ꚁ臣膀鯥醼볯颼苣芏藧閁苣龁臣芀꿥ꞅ髧ꮁ胣麃菣뮂苣뎃볯薼苣鞼韦鎖蟥꺽臣龁菩趽臣꾁胣薴雦꾁臣貂臣ꦁꇩ鞑臣꾁臣讁臣龁볯붻뫥覼胣鎼韦鎖胣ꚇ뷧鞁臣ꢃ뷤꺁ꧨꆾ臣膀鳦辰駩꺁듧醖苣몤臣膀볯ꖗ雩꺁雦ꢔ菩趽臣꾁듧醖臣ꪁ臣ꎁ臣芀菣낂苣ꆃ菣뾂菣궼볯醼볯銂뷤ꢔ臣ꚁ郥ꢃ뷤讁苣钯觨蚈黦겸껥ꒀ苣鞾臣ꢁ臣趂胣ꢇ뫥뎦꿥貁ꏨ颻臣覂苣龁胣肜ꓥ薴雦꺁ꫨ随胥銂菣銃苣ꮃ菩趽胣ꆬ臣ꞁ胣麃菣뮂苣뎃臣袂苣鞼韦鎖臣ꚇ뷧ꢃ뷤ꞁꛨ龯臣龁胣肜뷤ꒀ臣膀菣ꦃ苣뢂菣꺁ꃥ袐胣鶁苣麁苣膀볯ꖗ鯧誁苣뎁볯ꖗ鯧꺁菩趽臣뎦꿥閁苣龁胣뎛볯鎼볯銂迥ꞅ臣貂臣蒁胣ં䐼噉邀볯銼볯馼胣㲑䐯噉ਾ†꿥ꆱ臣龮꣩銂뛧骶臣膀볯钼韦꺛臣떼볯ꊼ臣낹苣钿臣ꞅ냥銂迥醁胣醼볯ꖗ鯧ꮁ꟨躘苣財臣龁苣ꮁ裦閁苣龁胣뎛볯钼볯銂迥ꞅ臣貂臣蒁胣醼볯ꖗ鯧꺁蟨誺ꧨꆾ臣袂苣膀볯ꖗ鯧꺁ꃥ袐胣鎃菣꾂菣ꢃ뷤ꮁ룤讨뫥꺁듧醖臣芁苣鎁臣膀臣袂臣馼韦꺛臣꾁ꇩ鞑臣醰臣蒁臣ꢁ臣躘苣讁臣ꪁ臣龁胣뎛볯钼볯銂迥ꞅ臣貂臣蒁胣袂苣醰臣蒁듧醖볯붻뫥覼臣膀볯钼韦꺛胣醼볯ꖗ鯧誁苣뎁볯ꖗ鯧꺁菩趽苣ꮐ苣龁胣麃菣뮂苣뎃볯薼蟥꺽菩趽臣誁臣ꚁꫨ膂苣貂臣芀鳦辰駩꺁듧醖臣膀볯ꖗ鯧誁苣뎁볯ꖗ鯧ꮁ雩鞁臣膀菣ꦃ苣뢂菣醼볯꺁菩趽臣誁臣ꚁꫨ膂苣貂臣芀꿦늉裥邞臣궪迥誂胥銂郥ꢃ뷤讁苣鞾臣膀듧醖臣袂臣ꆃ菣讃菣螌闦銂룦骮臣龁胣邵黦ꮁ苣誂胣麃菣뮂苣뎃볯薼臣袂苣ꚇ뷧鞁臣ꢃ뷤ꮁ臣蒁臣膀듧醖臣袂苣醰臣蒁臣蒁臣ꢇ뫥蒚ꛨ龯臣꾔賦閁苣龁胣뎛볯鎼볯銂迥ꞅ臣貂臣蒁胣ં䐼噉邀볯銼볯邼胣㲑䐯噉ਾ†볯ꖗ鯧ꮁ菣銃苣ꮃ菩趽臣覂胣ꪁ苣뎁臣醼韦꺛臣袂臣鎼韦꺛臣뒠郥膀菣ꦃ苣뢂菣醼볯ꮁ苣誂蟥꺽臣龁菩趽臣覂铧鲤苣ꆎ迥鞁臣芀菣ꦃ菣떂苣袃臣骮蟩誁苣뎁뷯蚽뷯馽뷯薽뷯銽뷯颽ꓦ躨臣龁苣��ꮁ胣ꚩ꣩鎽苣膀菣麃菣궂苣ꪃ菣誁苣뎁苣ꪂ苣뎃胣閃苣뎃苣誃菣莃苣뎃鿦늉胣ꪁ苣뎁臣궼볯늼볯₴ꦼ臣ꊖ臣ꚁ裥邞臣龁胣ં䐼噉邀볯銼볯醼胣㲑䐯噉ਾ†꣨궖볯袼볯覼髧骆†裢ₒꚇ뷧醼韦꺛볯麃菣뮂苣뎃볯薼볯骼菣릂苣莃菣Ꚃ苣벃菣뚊꟨꒱胣ꎭ룥ꮁꛨ袁苣ꆃ菣躃苣ꒂ菣꾁볯궼뷯銽뷯銈볯銂뷤ꢔ臣讂苣ꂃ菣骃菣ꪂ苣랂菣벃苣鎟觨ꮁ苣誂ꋧ趪볯誁苣뎁ꇨ꺚菣ꦃ菣뎃볯閃苣뎃苣誃菣莃苣뎃臣袂苣ꒂ菣躃菣ꮃ苣궂苣肃菣벂鿦늉臣袂苣몢ꫨ覼胣ં䐼噉邀볯銼볯銼胣㲑䐯噉ਾ†꣨궖볯袼볯覼髧骆†裢ₒꚇ뷧鎼韦꺛볯麃菣뮂苣뎃볯薼볯骼菣릂苣莃菣Ꚃ苣벃菣뚊꟨꒱胣ꎼ臣袂臣꒼臣钯臣龁ꃥ袐胣鶁苣뮁臣릨諧Ꞁ臣꾁臣蒁菣ꦃ菣떂苣袃볯궼볯늼볯銈볯込菣ꦃ菣ꆼ苣뾽铧馁苣ꒂ菣躃菣ꮃ苣궂苣肃菣벂鿦늉臣袂苣몢ꫨ覼胣誁苣뎁룤ꎀ뛧颠鿥ꢁ臣ꚁ胣ꢡ髧ꆃ菣讃菣꺁苣骁臣ꪁ뷤许苣뒼臣袼菣ꦂ菣뾂菣麃菣붂菣ꮁ苣讂苣ꂃ菣骃菣ꪂ苣랂菣벃苣鎟觨ꮁ苣誂ꋧ趪볯芀㰊䥄㹖胣醼볯鎼볯醀⼼䥄㹖 모雦骼볯ꎼ볯꺚蛨ₚ銈†菣銃苣ꮃ볯ꎭ룥ꮁꛨ袁苣ꢡ髧ꆃ菣躃苣ꒂ菣袼볯膽뷯钽裢醼苣뾽铧馁苣ꒂ菣躃菣ꮃ苣궂苣肃菣벂鿦늉臣袂苣몢ꫨ覼胣誁苣뎁ꇨ꺚菣ꦃ菣뎃볯閃苣뎃苣誃菣莃苣뎃臣袂苣ꒂ菣躃菣ꮃ苣궂苣肃菣벂鿦늉臣袂苣몢ꫨ覼胣ં䐼噉邀볯銼볯钼胣㲑䐯噉ਾ†꣨궖볯袼볯覼髧骆†裢ₒꎭ룥骼귦뢸臣讦臣讂ꇨ꺚菣ꦃ菣떂苣袃볯궼뷯銽뷯銈볯銂뷤ꢔ臣讂苣ꂃ菣骃菣ꪂ苣랂菣벃苣鎟觨ꮁ苣誂ꋧ趪볯膀臣袂臣ꢡ髧ꆃ菣讃菣袼菣ꦂ菣뾂菣麃菣붂菣ꮁ苣讂苣ꂃ菣骃菣ꪂ苣랂菣벃苣鎟觨ꮁ苣誂ꋧ趪볯芀戼㹲邵ꯨખ䐼噉邀볯銼볯閼胣㲑䐯噉ਾ†臣꺁ꛦ떿껥벨ꓦ躨臣邵黦ꮁ苣誂胣麃菣뮂苣뎃臣떼볯鶿귨릉胦貁껥벨臣貂苣芀㰊䥄㹖胣醼볯鎼볯醀⼼䥄㹖 붿諥꺁苦薀苣ꮐ苣閁苣ꪁ苣鲤꣨ꮁ苣誂胣麃菣뮂苣뎃臣覭뻤ꪁ臣龁臣袂苣릊黦蒚臣떼볯鶿귨릉胦貁껥벨臣貂苣ꢁ꟦뎃臣貂苣芀뿨ꂊꓦ躨臣袂苣膀菣ꦃ苣뢂菣ꮁ苣誂ꫨ躰臣貂苣覅뿤랭臣ꊖ胩馁苣蚈귥랂苣誃菣鶼臩貵럨貁꟨躘臣貂苣鎁臣节꟦뎃臣貂苣芀戼㹲芏胨螖賧㲮牢ਾ䐼噉邀闦醼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄲ㈵ㄱ㔹琮晩㸢〲ㄲ㈵ㄱ㔹琮晩ꃂ〰㈰㔴⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦銼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄲ㈵ㄱ㔹琮晩㸢〲ㄲ㈵ㄱ㔹琮晩ꃂ〰㈰㘴⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀闦鎼胣㲑䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄲ㈵ㄱ㔹琮晩㸢〲ㄲ㈵ㄱ㔹琮晩ꃂ〰㈰㜴⼼㹡⼼䥄㹖ਊ䐼噉邀볯銼볯鞼胣㲑䐯噉ਾ†鳦몇ꇩꮁ볥ꢔ臣貂臣蒁苣馁臣ꚁ臣뢛ꇩ貁胣芁臣讁苣膀鳦躘듧뢛臣誁臣ꚁ껥ꢅ臣鞈賦閁苣ꚁ臣讂臣꺁��ꢁ臣芏藧ꮁ苣誂鳦躘듧뢛臣蒵臣벾臣貂臣蒁苣芀㰊䥄㹖胣醼볯鎼볯醀⼼䥄㹖 겜駧躘臣设ꓧ蒚臣龮雦ꊽ藦貁鳦躘듧뢛臣風볨閁苣ꚁ臣讂臣膀鳦몙飦꾁胣風볨閁苣ꚁ臣讂苣꺁臣邙껥閁苣ꪁ臣鎁臣膀臣袂臣겜駧躘臣蒯鯥뺁臣꾁뛨ꢗ臣覂胩놄臣讂臣ꢁ臣辁胣颧胣ꪁ믤꺁ꓥ뒛臣龁臣꺿귦貁뷥궥胨ꮁ苣ꎁ臣財苣貂뻥讂臣ꢁ苣蚐꟨馁臣趁臣芁苣芀㰊䐯噉ਾ⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀鯥醼볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢㈰㔱ㄲ㤱⸵楴≦㈾㈰㔱ㄲ㤱⸵楴쉦゠〰㠲㰴愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥醼볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢㈰㔱ㄲ㤱⸵楴≦㈾㈰㔱ㄲ㤱⸵楴쉦゠〰㠲㰵愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥銼볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢㈰㔱ㄲ㤱⸵楴≦㈾㈰㔱ㄲ㤱⸵楴쉦゠〰㠲㰶愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥銼볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢㈰㔱ㄲ㤱⸵楴≦㈾㈰㔱ㄲ㤱⸵楴쉦゠〰㠲㰷愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥銼볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢㈰㔱ㄲ㤱⸵楴≦㈾㈰㔱ㄲ㤱⸵楴쉦゠〰㠲㰸愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥鎼裢醼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄲ㈵ㄱ㔹琮晩㸢〲ㄲ㈵ㄱ㔹琮晩ꃂ〰㈰㤸⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯銈볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢㈰㔱ㄲ㤱⸵楴≦㈾㈰㔱ㄲ㤱⸵楴쉦゠〰㤲㰰愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥鎼裢鎼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄲ㈵ㄱ㔹琮晩㸢〲ㄲ㈵ㄱ㔹琮晩ꃂ〰㈰ㄹ⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯銈볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢㈰㔱ㄲ㤱⸵楴≦㈾㈰㔱ㄲ㤱⸵楴쉦゠〰㤲㰲愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥鎼裢閼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄲ㈵ㄱ㔹琮晩㸢〲ㄲ㈵ㄱ㔹琮晩ꃂ〰㈰㌹⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯銈볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢㈰㔱ㄲ㤱⸵楴≦㈾㈰㔱ㄲ㤱⸵楴쉦゠〰㤲㰴愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥钼裢銼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲ㄲ㈵ㄱ㔹琮晩㸢〲ㄲ㈵ㄱ㔹琮晩ꃂ〰㈰㔹⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠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