(57)【要約】本開示は、対象における免疫応答をモジュレートするために、ならびに疾患、例えば自己免疫疾患、心血管疾患、感染疾患、およびがんを処置するために有用な作用剤を提供する。これらの作用剤は、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）、ＯＬＦＲリガンド、または細胞の形質膜へのＯＬＦＲの輸送に関係するタンパク質を含み得る。あるいは、作用剤は、ＯＬＦＲ、ＯＬＦＲリガンド、または細胞の形質膜へのＯＬＦＲの輸送に関係するタンパク質の発現または活性をモジュレートし得る。
2021521248.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における免疫応答をモジュレートする方法であって、１つまたは複数の嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現または活性をモジュレートするステップを含む方法。
【請求項２】
前記ＯＬＦＲが、ｉｎ  ｖｉｖｏで細胞によって発現される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記細胞が、動物細胞であり、ただし、前記細胞は嗅覚細胞ではない、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記細胞がマクロファージである、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記マクロファージが血管マクロファージである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
モジュレーションが、前記ＯＬＦＲの発現を阻害するかまたは前記ＯＬＦＲを非活性化する作用剤の有効量を前記対象に投与するステップを含む方法によって、免疫応答を阻害する、減少させる、低減する、抑制する、制限するか、または制御するステップの１つまたは複数を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
モジュレーションが、前記ＯＬＦＲの発現を阻害するかまたは前記ＯＬＦＲを非活性化する作用剤の有効量を前記対象に投与するステップを含む方法によって、望ましくないまたは異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答、または炎症を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御するステップの１つまたは複数を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
モジュレーションが、前記ＯＬＦＲの発現を阻害するかまたは前記ＯＬＦＲを非活性化する作用剤の有効量を対象に投与するステップを含む方法によって、前記対象における自己免疫応答、障害、または疾患を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御するステップの１つまたは複数を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記モジュレーションが、前記対象における望ましくないもしくは異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答、もしくは炎症の有害な症状、または自己免疫応答、障害、もしくは疾患の有害な症状を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御するステップの１つまたは複数を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記望ましくないもしくは異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答、もしくは炎症の前記有害な症状、または前記自己免疫応答、障害、もしくは疾患の有害な症状が、腫脹、疼痛、発疹、頭痛、発熱、悪心、下痢、鼓腸、無気力、関節硬直、または組織もしくは細胞の損傷である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記望ましくないもしくは異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答、もしくは炎症の前記有害な症状、または前記自己免疫応答、障害、もしくは疾患の前記有害な症状が、慢性または急性である、請求項９または１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記免疫障害、炎症応答、炎症、自己免疫応答障害または自己免疫疾患が、リウマチ性関節炎、若年性リウマチ性関節炎、変形性関節炎、乾癬性関節炎、糖尿病、多発性硬化症、脳脊髄炎、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、自己免疫性甲状腺炎、アトピー性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、乾癬、シェーグレン症候群、クローン病、アフタ性潰瘍、虹彩炎、結膜炎、角結膜炎、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、皮膚エリテマトーデス、強皮症、膣炎、直腸炎、らい性結節性紅斑、自己免疫性ぶどう膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、急性壊死性出血性脳症、特発性両側性進行性感音難聴、再生不良性貧血、赤芽球ろう、特発性血小板減少症、多発性軟骨炎、ウェゲナー肉芽腫症、慢性活動性肝炎、スティーブンス−ジョンソン症候群、特発性スプルー、扁平苔癬、グレーヴス病、サルコイドーシス、原発性胆汁性肝硬変、後部ぶどう膜炎、間質性肺線維症、橋本甲状腺炎、自己免疫性多腺症候群、インスリン依存性糖尿病、インスリン抵抗性糖尿病、免疫性不妊症、自己免疫性アジソン病、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、疱疹状皮膚炎、自己免疫性脱毛症、白斑、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少性紫斑病、悪性貧血、ギラン−バレー症候群、スティフマン症候群、急性リウマチ熱、交感性眼炎、グッドパスチャー症候群、全身性壊死性血管炎、抗リン脂質症候群もしくはアレルギー、ベーチェット病、重度複合免疫不全（ＳＣＩＤ）、リコンビナーゼ活性化遺伝子（ＲＡＧ１／２）欠損、アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）欠損、インターロイキン受容体共通ｇ鎖（ｃ）欠損、ヤヌス関連キナーゼ３（ＪＡＫ３）欠損および細網異形成症；原発性Ｔ細胞免疫不全、例えばディジョージ症候群、ヌード症候群、Ｔ細胞受容体欠損、ＭＨＣクラスＩＩ欠損、ＴＡＰ−２欠損（ＭＨＣクラスＩ欠損）、ＺＡＰ７０チロシンキナーゼ欠損およびプリンヌクレオチドホスホリラーゼ（ＰＮＰ）欠損、抗体欠損症、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症（ブルトン型チロシンキナーゼ欠損）、常染色体劣性無ガンマグロブリン血症、ミュー重鎖欠損、代替軽鎖（ｇ５／１４．１）欠損、高ＩｇＭ症候群：Ｘ連鎖（ＣＤ４０リガンド欠損）もしくは非Ｘ連鎖、Ｉｇ重鎖遺伝子欠失、ＩｇＡ欠損、ＩｇＧサブクラスの欠損（ＩｇＡ欠損を伴うまたは伴わない）、分類不能型免疫不全（ＣＶＩＤ）、正常な免疫グロブリンを伴う抗体欠損；乳児の一過性の低ガンマグロブリン血症、インターフェロンｇ受容体（ＩＦＮＧＲ１、ＩＦＮＧＲ２）欠損、インターロイキン１２もしくはインターロイキン１２受容体欠損、胸腺腫を伴う免疫不全、ウィスコット−アルドリッチ症候群（ＷＡＳタンパク質欠損）、毛細血管拡張性運動失調症（ＡＴＭ欠損）、Ｘ連鎖リンパ増殖症候群（ＳＨ２Ｄ１  Ａ／ＳＡＰ欠損）、または高ＩｇＥ症候群を含む、請求項８から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
モジュレーションが、前記ＯＬＦＲの発現を阻害するかまたは前記ＯＬＦＲを非活性化する作用剤の有効量を前記対象に投与するステップを含む方法によって、有害な心血管事象または心血管疾患を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御するステップの１つまたは複数を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記有害な心血管事象または心血管疾患が、冠動脈疾患、末梢動脈疾患、脳血管疾患、腎動脈疾患、卒中、心筋梗塞（心臓発作）、虚血性心不全、一過性虚血発作、または脳外傷、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化プラーク形成、または血中コレステロールの上昇を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
モジュレーションが、前記ＯＬＦＲの発現を阻害するかまたは前記ＯＬＦＲを非活性化する作用剤の有効量を前記対象に投与するステップを含む方法によって、アテローム性動脈硬化症を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御するステップの１つまたは複数を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＯＬＦＲの発現を増加させるかまたは前記ＯＬＦＲを活性化する作用剤の有効量を対象に投与するステップを含む方法によって、前記対象におけるウイルス、細菌、または真菌感染症を低減するかまたは阻害するステップの１つまたは複数を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
モジュレーションが、前記ＯＬＦＲの発現を増加させるかまたは前記ＯＬＦＲを活性化する作用剤の有効量を前記対象に投与するステップを含む方法によって、新生物、新生物障害、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍、他の部位への新生物、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍の転移、または原発新生物、新生物障害、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍から遠位の他の部位での転移性新生物、新生物障害、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍の形成もしくは確立、またはウイルス、細菌、もしくは真菌感染症の有害な症状を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御するステップの１つまたは複数を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
処置される前記新生物、新生物障害、腫瘍、がん、または悪性腫瘍が、癌腫、肉腫、神経芽腫、子宮頸がん、肝細胞がん、中皮腫、神経膠芽腫、骨髄腫、リンパ腫、白血病、腺腫、腺癌、神経膠腫、神経膠芽腫、網膜芽腫、星細胞種、乏突起膠細胞腫、髄膜腫、リンパ肉腫、脂肪肉腫、骨肉腫、軟骨肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、線維肉腫、もしくは黒色腫；または肺、甲状腺、頭部もしくは頸部、鼻咽頭、咽頭、鼻もしくは副鼻腔、脳、脊椎、乳房、副腎、下垂体、甲状腺、リンパ、消化管（口、食道、胃、十二指腸、回腸、空腸（小腸）、結腸、直腸）、泌尿生殖器管（子宮、卵巣、子宮頸部、子宮内膜、膀胱、精巣、陰茎、前立腺）、腎臓、膵臓、肝臓、骨、骨髄、リンパ、血液、筋肉、または皮膚の新生物、新生物障害、腫瘍、がん、または悪性腫瘍である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＯＬＦＲが、表１〜９ならびに図２Ａおよび２Ｂのいずれか１つに記載のＯＬＦＲである、請求項１から１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＯＬＦＲが、表７に記載のＯＬＦＲである、請求項１から１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＯＬＦＲが、ＯＲ７Ｃ１、ＯＲ７Ｄ４、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ１１Ｈ６、ＯＲ４Ｅ２、ＯＲ１０Ｈ１、およびＯＲ６Ａ２からなる群から選択される、請求項１から１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記作用剤が、前記ＯＬＦＲに結合するか、もしくはリガンドに対する前記ＯＬＦＲの結合を遮断するリガンドもしくは低分子、または前記細胞による前記ＯＬＦＲの発現を阻害する作用剤の群から選択される、請求項６から２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記作用剤が、ＯＬＦＲに結合する抗体、その断片、もしくは模倣体、またはＯＬＦＲリガンド、抗ＯＬＦＲ遺伝子サイレンシング剤、オクタナール、ヘプタナール、またはそれらのプロドラッグもしくは溶媒和物の群から選択される、先行する請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項２４】
前記作用剤が、細胞の形質膜への前記ＯＬＦＲの輸送をモジュレートすることによって前記ＯＬＦＲをモジュレートする、請求項６から２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記作用剤が、受容体輸送タンパク質１（ＲＴＰ１）、ＲＴＰ２、受容体発現増強タンパク質１（ＲＥＥＰ１）、アミノアシラーゼ３（Ａｃｙ３）、またはグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｏｌｆ）サブユニットアルファ（Ｇｎａｌ）の群から選択されるタンパク質である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記作用剤が、受容体輸送タンパク質１（ＲＴＰ１）、ＲＴＰ２、受容体発現増強タンパク質１（ＲＥＥＰ１）、アミノアシラーゼ３（Ａｃｙ３）、およびグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｏｌｆ）サブユニットアルファ（Ｇｎａｌ）からなる群から選択されるタンパク質をコードするヌクレオチドである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
前記免疫応答が、炎症性サイトカインの発現または分泌を増加させる作用剤を投与するステップを含む方法によって刺激される、請求項１６から２６のいずれかに記載の方法。
【請求項２８】
前記炎症性サイトカインが、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、Ｃ−Ｃモチーフケモカインリガンド２（ＣＣＬ２）、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、インターロイキン６（ＩＬ−６）、ＩＬ−１Ｂ、ＩＬ−１８、および酸化窒素シンターゼ２（ＮＯＳ２）からなる群から選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項２９】
必要とする対象における免疫応答を抑制する方法であって、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現または活性を減少させる作用剤を前記対象に投与し、それによって前記対象における免疫応答を抑制するステップを含む方法。
【請求項３０】
前記ＯＬＦＲが、表１〜９のいずれか１つに記載のＯＬＦＲである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記ＯＬＦＲが、表７に記載のＯＬＦＲである、請求項２９または３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記ＯＬＦＲが、ＯＲ７Ｃ１、ＯＲ７Ｄ４、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ１１Ｈ６、ＯＲ４Ｅ２、ＯＲ１０Ｈ１、およびＯＲ６Ａ２からなる群から選択される、請求項２９から３１のいずれかに記載の方法。
【請求項３３】
前記作用剤が遺伝子サイレンシング剤である、請求項２９から３２のいずれかに記載の方法。
【請求項３４】
前記遺伝子サイレンシング剤が、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）分子、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、およびＣｌｕｓｔｅｒｅｄ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ  Ｓｈｏｒｔ  Ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ  Ｒｅｐｅａｔｓ（ＣＲＩＳＰＲ）酵素からなる群から選択される、請求項２３または３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記ＲＮＡｉ分子が、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、およびマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）からなる群から選択される、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記作用剤が、前記ＯＬＦＲとそのリガンドとの結合を阻害することによって、前記ＯＬＦＲの活性を減少させる、請求項２９から３２のいずれかに記載の方法。
【請求項３７】
前記リガンドが、表８に記載のＯＬＦＲリガンドである、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記作用剤がＯＬＦＲアンタゴニストである、請求項２９から３２のいずれかに記載の方法。
【請求項３９】
前記ＯＬＦＲアンタゴニストが、シトラール、ウンデカナール、オキシフェニロン、ｐｈｅｎｉｒａｔ、メチルシンナムアルデヒド、ヒドロシンナムアルデヒド、ブルゲオナール、エチルヘキサン酸、α−イオノン、オクタン酸、それらの溶媒和物またはプロドラッグである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記ＯＬＦＲアンタゴニストが、表９に記載のアンタゴニストである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
前記作用剤が、細胞の形質膜への前記ＯＬＦＲの輸送を阻害することによって、前記ＯＬＦＲの活性を減少させる、請求項２９から３２のいずれかに記載の方法。
【請求項４２】
前記作用剤が、ＯＬＦＲに結合する抗体、その断片、または模倣体である、請求項２９から３２のいずれかに記載の方法。
【請求項４３】
必要とする対象における免疫応答を増加させる方法であって、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を増加させるかまたは促進する作用剤を前記対象に投与し、それによって前記対象における免疫応答を増加させるステップを含む方法。
【請求項４４】
必要とする対象における免疫応答を抑制する方法であって、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を阻害する作用剤を前記対象に投与し、それによって前記対象における免疫応答を抑制するステップを含む方法。
【請求項４５】
必要とする対象における自己免疫疾患を処置する方法であって、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現または活性を減少させる作用剤を前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項４６】
必要とする対象における自己免疫疾患を処置する方法であって、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を阻害する作用剤を前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項４７】
必要とする対象における心血管疾患を処置する方法であって、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現または活性を減少させる作用剤を前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項４８】
必要とする対象における心血管疾患を処置する方法であって、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を阻害する作用剤を前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項４９】
必要とする対象における感染症を処置する方法であって、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現を増加させるかまたは嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）を活性化する作用剤を前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項５０】
必要とする対象における感染症を処置する方法であって、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を増加させるかまたは促進する作用剤を前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項５１】
前記感染症が、ウイルス感染症、細菌感染症、または真菌感染症からなる群から選択される、請求項４９または５０に記載の方法。
【請求項５２】
必要とする対象におけるがんを処置する方法であって、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現を増加させるかまたは嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）を活性化する作用剤を前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項５３】
必要とする対象におけるがんを処置する方法であって、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を増加させるかまたは促進する作用剤を前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項５４】
免疫応答に関係する１つまたは複数のタンパク質の発現または活性をモジュレートする方法であって、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現または活性をモジュレートする作用剤を細胞に接触させるステップを含む方法。
【請求項５５】
前記作用剤が、前記ＯＬＦＲの発現を増加させるかまたは前記ＯＬＦＲを活性化する、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記作用剤が、前記ＯＬＦＲの発現または活性を減少させる、請求項５４に記載の方法。
【請求項５７】
免疫応答に関係する１つまたは複数のタンパク質の発現または活性を増加させる方法であって、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現を増加させるかまたは嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）を活性化する作用剤を細胞に接触させるステップを含む方法。
【請求項５８】
免疫応答に関係する１つまたは複数のタンパク質の発現または活性を減少させる方法であって、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現を減少させるかまたは嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）を阻害する作用剤を細胞に接触させるステップを含む方法。
【請求項５９】
免疫応答に関係する１つまたは複数のタンパク質の発現または活性をモジュレートする方法であって、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送をモジュレートする作用剤を前記細胞に接触させるステップを含む方法。
【請求項６０】
作用剤が、細胞の形質膜へのＯＬＦＲの輸送を増加させるかまたは促進する、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記作用剤が、細胞の形質膜へのＯＬＦＲの輸送を減少させるかまたは阻害する、請求項５９に記載の方法。
【請求項６２】
免疫応答に関係する１つまたは複数のタンパク質の発現または活性を増加させる方法であって、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を増加させるかまたは促進する作用剤を前記細胞に接触させるステップを含む方法。
【請求項６３】
免疫応答に関係する１つまたは複数のタンパク質の発現または活性を減少させる方法であって、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を減少させるかまたは阻害する作用剤を細胞に接触させるステップを含む方法。
【請求項６４】
前記作用剤が、遺伝子サイレンシング剤である、請求項４４から４８、５４、５６、５８、５９、６１、および６３のいずれかに記載の方法。
【請求項６５】
前記遺伝子サイレンシング剤が、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）分子、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、およびＣｌｕｓｔｅｒｅｄ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ  Ｓｈｏｒｔ  Ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ  Ｒｅｐｅａｔｓ（ＣＲＩＳＰＲ）酵素からなる群から選択される、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記ＲＮＡｉ分子が、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、およびマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）からなる群から選択される、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記作用剤が、前記ＯＬＦＲとそのリガンドとの結合を阻害することによって、前記ＯＬＦＲの活性を減少させる、請求項４５、４７、５６、および５８のいずれかに記載の方法。
【請求項６８】
前記リガンドが、表８に記載のＯＬＦＲリガンドである、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記作用剤がＯＬＦＲアンタゴニストである、請求項４４から４８、５４、５６、５８、５９、６１、および６３のいずれかに記載の方法。
【請求項７０】
前記ＯＬＦＲアンタゴニストが、シトラール、ウンデカナール、オキシフェニロン、ｐｈｅｎｉｒａｔ、メチルシンナムアルデヒド、ヒドロシンナムアルデヒド、ブルゲオナール、エチルヘキサン酸、α−イオノン、オクタン酸、それらの溶媒和物またはプロドラッグである、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記ＯＬＦＲアンタゴニストが、表９に記載のアンタゴニストである、請求項６９に記載の方法。
【請求項７２】
前記作用剤が、細胞の形質膜への前記ＯＬＦＲの輸送を阻害することによって、前記ＯＬＦＲの活性を減少させる、請求項４５、４７、５６、および５８のいずれかに記載の方法。
【請求項７３】
前記作用剤が、ＯＬＦＲに結合する抗体、その断片、または模倣体である、請求項４４から４８、５４、５６、５８、５９、６１、および６３のいずれかに記載の方法。
【請求項７４】
前記作用剤がＯＬＦＲアゴニストである、請求項４３、４９から５５、５７、５９、および６０のいずれかに記載の方法。
【請求項７５】
前記ＯＬＦＲアゴニストが、表８に記載のアゴニストである、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
前記ＯＬＦＲアゴニストが、オクタナール、クマリン、ヘリオナール、リリアール、ｂ−イオノン、アンドロステノン、アンドロスタジエノン、キャラメルフラノン、３−フェニルプロピルプロピオネート、オイゲノール、エチルバニリン、２−エチルフェンコール、イソ吉草酸、ノナン酸、ブチリル乳酸ブチル、酪酸、イソ吉草酸、プロピオン酸、酢酸Ｎ−アミル、酢酸オイゲノール、サンダルウッド、Ｓ−（−）−シトロネロール、Ｓ−（−）−シトロネラール、（＋）−カルビン、（−）カルボン、（＋）カルボン、リナロール、ブルゲオナール、アセトフェノン、酪酸アミル、ノナンチオール、フェニル酢酸アリル、酢酸Ｎ−アミル、ムスコン、イソオイゲノール、オイゲノールメチルエーテル、１−ヘキサノール、１−ヘプタノール、１−オクタノール、セロリケトン、アニスアルデヒド、（＋）−メントール、バニリン、グアイアコール、リラール、ヘプタン酸エチル、オクタン酸メチル、ノナナール  １−ノナノール、２−ノナノール、３−オクタノン、３−ノナノン、デシルアルデヒドからなる群から選択される、請求項７４に記載の方法。
【請求項７７】
前記作用剤が、オクタナール、ヘプタナール、またはそれらのプロドラッグもしくは溶媒和物である、請求項４３、４９から５５、５７、５９、および６０のいずれかに記載の方法。
【請求項７８】
前記作用剤が、受容体輸送タンパク質１（ＲＴＰ１）、ＲＴＰ２、受容体発現増強タンパク質１（ＲＥＥＰ１）、アミノアシラーゼ３（Ａｃｙ３）、およびグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｏｌｆ）サブユニットアルファ（Ｇｎａｌ）からなる群から選択されるタンパク質である、請求項４３、４９から５５、５７、５９、および６０のいずれかに記載の方法。
【請求項７９】
前記作用剤が、受容体輸送タンパク質１（ＲＴＰ１）、ＲＴＰ２、受容体発現増強タンパク質１（ＲＥＥＰ１）、アミノアシラーゼ３（Ａｃｙ３）、およびグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｏｌｆ）サブユニットアルファ（Ｇｎａｌ）からなる群から選択されるタンパク質をコードするヌクレオチドを含む、請求項４３、４９から５５、５７、５９、および６０のいずれかに記載の方法。
【請求項８０】
前記ＯＬＦＲが、表１〜９および図２Ａ〜２Ｂのいずれか１つに記載のＯＬＦＲである、請求項４３から７９のいずれかに記載の方法。
【請求項８１】
前記ＯＬＦＲが、表７に記載のＯＬＦＲである、請求項４３から８０のいずれかに記載の方法。
【請求項８２】
前記ＯＬＦＲが、ＯＲ７Ｃ１、ＯＲ７Ｄ４、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ１１Ｈ６、ＯＲ４Ｅ２、ＯＲ１０Ｈ１、およびＯＲ６Ａ２からなる群から選択される、請求項４３から８１のいずれかに記載の方法。
【請求項８３】
前記ＯＬＦＲが、ｉｎ  ｖｉｖｏで細胞によって発現される、請求項４３から８２のいずれかに記載の方法。
【請求項８４】
前記細胞が、動物細胞であり、ただし、前記細胞は嗅覚細胞ではない、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
前記細胞がマクロファージである、請求項８３または８４に記載の方法。
【請求項８６】
前記マクロファージが血管マクロファージである、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
免疫応答に関係する１つまたは複数のタンパク質が、図１６および１７に示すタンパク質のいずれかである、請求項５４から６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８８】
免疫応答に関係する１つまたは複数のタンパク質が、ＣＣＬ５（Ｃ−Ｃモチーフケモカインリガンド５）、Ｔｎｆｒｓｆ１２ａ（オステオプロテゲリン）、Ａｘｉｎ１、Ｎａｄｋ、Ａｈｒ（アリール炭化水素受容体）、ＱＤＰＲ（キノイドジヒドロプテリジンレダクターゼ）、ＨＧＦ（肝細胞増殖因子）、ＡＤＡＭ２３、またはＳｎａｐ２９から選択されるタンパク質である、請求項５４から６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８９】
投与が、局所または全身である、請求項６から５３のいずれかに記載の方法。
【請求項９０】
前記投与が、静脈内投与による、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記対象が哺乳動物である、請求項６から５３、８９、および９０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９２】
前記対象が、免疫調節障害を伴う疾患または障害を有するか、またはその素因を有する、請求項６から５３、および８９から９１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９３】
前記対象がヒト患者である、請求項９１または９２に記載の方法。
【請求項９４】
ＯＬＦＲの活性をモジュレートする作用剤および使用説明書を含むキット。
【請求項９５】
前記作用剤が遺伝子サイレンシング剤である、請求項９４に記載のキット。
【請求項９６】
前記遺伝子サイレンシング剤が、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）分子、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、およびＣｌｕｓｔｅｒｅｄ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ  Ｓｈｏｒｔ  Ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ  Ｒｅｐｅａｔｓ（ＣＲＩＳＰＲ）酵素からなる群から選択される、請求項９５に記載のキット。
【請求項９７】
前記ＲＮＡｉ分子が、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、およびマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）からなる群から選択される、請求項９６に記載のキット。
【請求項９８】
前記作用剤が、前記ＯＬＦＲとそのリガンドとの結合を阻害することによって、前記ＯＬＦＲの活性をモジュレートする、請求項９４から９７のいずれかに記載のキット。
【請求項９９】
前記リガンドが、表８に記載のＯＬＦＲリガンドである、請求項９８に記載のキット。
【請求項１００】
前記作用剤がＯＬＦＲアンタゴニストである、請求項９４に記載のキット。
【請求項１０１】
前記ＯＬＦＲアンタゴニストが、シトラール、ウンデカナール、オキシフェニロン、ｐｈｅｎｉｒａｔ、メチルシンナムアルデヒド、ヒドロシンナムアルデヒド、ブルゲオナール、エチルヘキサン酸、α−イオノン、オクタン酸、それらの溶媒和物またはプロドラッグである、請求項１００に記載のキット。
【請求項１０２】
前記ＯＬＦＲアンタゴニストが、表９に記載のアンタゴニストである、請求項１００に記載のキット。
【請求項１０３】
前記作用剤が、細胞の形質膜への前記ＯＬＦＲの輸送を阻害することによって、前記ＯＬＦＲの活性をモジュレートする、請求項９４に記載のキット。
【請求項１０４】
前記作用剤が、ＯＬＦＲに結合する抗体、その断片または模倣体である、請求項９４に記載のキット。
【請求項１０５】
前記作用剤がＯＬＦＲアゴニストである、請求項９４に記載のキット。
【請求項１０６】
前記ＯＬＦＲアゴニストが、表８に記載のアゴニストである、請求項１０５に記載のキット。
【請求項１０７】
前記ＯＬＦＲアゴニストが、オクタナール、クマリン、ヘリオナール、リリアール、ｂ−イオノン、アンドロステノン、アンドロスタジエノン、キャラメルフラノン、３−フェニルプロピルプロピオネート、オイゲノール、エチルバニリン、２−エチルフェンコール、イソ吉草酸、ノナン酸、ブチリル乳酸ブチル、酪酸、イソ吉草酸、プロピオン酸、酢酸Ｎ−アミル、酢酸オイゲノール、サンダルウッド、Ｓ−（−）−シトロネロール、Ｓ−（−）−シトロネラール、（＋）−カルビン、（−）カルボン、（＋）カルボン、リナロール、ブルゲオナール、アセトフェノン、酪酸アミル、ノナンチオール、フェニル酢酸アリル、酢酸Ｎ−アミル、ムスコン、イソオイゲノール、オイゲノールメチルエーテル、１−ヘキサノール、１−ヘプタノール、１−オクタノール、セロリケトン、アニスアルデヒド、（＋）−メントール、バニリン、グアイアコール、リラール、ヘプタン酸エチル、オクタン酸メチル、ノナナール  １−ノナノール、２−ノナノール、３−オクタノン、３−ノナノン、デシルアルデヒドからなる群から選択される、請求項１０５に記載のキット。
【請求項１０８】
前記作用剤が、オクタナール、ヘプタナール、またはそれらのプロドラッグもしくは溶媒和物である、請求項９４に記載のキット。
【請求項１０９】
前記作用剤が、受容体輸送タンパク質１（ＲＴＰ１）、ＲＴＰ２、受容体発現増強タンパク質１（ＲＥＥＰ１）、アミノアシラーゼ３（Ａｃｙ３）、およびグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｏｌｆ）サブユニットアルファ（Ｇｎａｌ）からなる群から選択されるタンパク質である、請求項９４に記載のキット。
【請求項１１０】
前記作用剤が、受容体輸送タンパク質１（ＲＴＰ１）、ＲＴＰ２、受容体発現増強タンパク質１（ＲＥＥＰ１）、アミノアシラーゼ３（Ａｃｙ３）、およびグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｏｌｆ）サブユニットアルファ（Ｇｎａｌ）からなる群から選択されるタンパク質をコードするヌクレオチドを含む、請求項９４に記載のキット。
【請求項１１１】
前記ＯＬＦＲが、表１〜９および図２Ａ〜２Ｂのいずれか１つに記載のＯＬＦＲである、請求項９４から１１０のいずれかに記載のキット。
【請求項１１２】
前記ＯＬＦＲが、表７に記載のＯＬＦＲである、請求項９４から１１１のいずれかに記載のキット。
【請求項１１３】
前記ＯＬＦＲが、ＯＲ７Ｃ１、ＯＲ７Ｄ４、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ１１Ｈ６、ＯＲ４Ｅ２、ＯＲ１０Ｈ１、およびＯＲ６Ａ２からなる群から選択される、請求項９４から１１２のいずれかに記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）項の下で、その内容の全体が本明細書によって参考として本明細書に援用される、２０１８年４月１６日に出願された米国仮特許出願第６２，６５８，５８１号に基づく優先権を主張する。
【０００２】
米国政府の支援
本発明は、米国国立衛生研究所によって与えられた助成金番号Ｒ０１  ＨＬ１１５２３２およびＨＬ  ０８８０９３の下で行われた。米国政府は本発明に一定の権利を有する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
発明の要旨
本発明において、免疫応答の新規調節剤、および免疫応答をモジュレートするために新規調節剤をモジュレートする方法を提供する。本発明は、生得の免疫応答を含む免疫応答をモジュレートするために標的とすることができるマクロファージ、単球、および樹状細胞における嗅覚受容体を識別する。本発明の特定の実施形態では、識別された嗅覚受容体は、マクロファージ（例えば、血管マクロファージ）上に存在し、その発現、活性、または結合は、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、感染症、またはがんをモジュレートするために標的とすることができる。
【０００４】
このため、一態様では、免疫応答をモジュレートする方法であって、１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性をモジュレートするステップを含む方法を提供する。別の態様では、有害な心血管事象または心血管疾患をモジュレートする方法であって、１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性をモジュレートするステップを含む方法を提供する。追加の態様では、アテローム性動脈硬化症をモジュレートする方法であって、１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性をモジュレートするステップを含む方法を提供する。別の態様では、ウイルス、細菌、または真菌感染症、新生物、新生物障害、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍、他の部位への新生物、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍の転移、または原発新生物、新生物障害、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍から遠位の他の部位での転移性新生物、新生物障害、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍の形成もしくは確立をモジュレートする方法であって、１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性をモジュレートするステップを含む方法を提供する。ある特定の実施形態では、方法は、１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御するステップを含む。他の実施形態では、方法は、１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性を増強する、刺激する、誘導するか、または増加させるステップを含む。
【０００５】
追加の態様では、免疫応答をモジュレートする方法であって、表１、表２、表３、表４、表５、表６、表７、表８、および表９のいずれかに記載の１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性をモジュレートするステップを含む方法を提供する。具体的な実施形態では、１つまたは複数の嗅覚受容体は、Ｏｌｆｒ２を含む。ある特定の実施形態では、方法は、表１、表２、表３、表４、表５、表６、表７、表８、および表９のいずれかに記載の１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御するステップを含む。ある特定の実施形態では、方法は、図２Ａおよび２Ｂのいずれかに記載の１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御するステップを含む。他の実施形態では、方法は、表１、表２、表３、表４、表５、表６、表７、表８、および表９のいずれかに記載の１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性を増強する、刺激する、誘導するか、または増加させるステップを含む。他の実施形態では、方法は、図２Ａおよび２Ｂのいずれかに記載の１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性を増強する、刺激する、誘導するか、または増加させるステップを含む。
【０００６】
別の態様では、対象における望ましくないまたは異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答、または炎症を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御する方法であって、表１、表２、表３、表４、表５、表６、表７、表８、および表９のいずれかに記載の１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性をモジュレートするステップを含む方法を提供する。さらに別の態様では、対象における望ましくないまたは異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答、または炎症を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御する方法であって、図２Ａおよび２Ｂのいずれかに記載の１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性をモジュレートするステップを含む方法を提供する。さらに別の態様では、対象における自己免疫応答、障害、または疾患を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御する方法であって、表１、表２、表３、表４、表５、表６、表７、表８、および表９のいずれかに記載の１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性をモジュレートするステップを含む方法を提供する。さらに別の態様では、対象における自己免疫応答、障害、または疾患を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御する方法であって、図２Ａおよび２Ｂのいずれかに記載の１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性をモジュレートするステップを含む方法を提供する。
【０００７】
ある特定の実施形態では、方法は、１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性をモジュレートするステップを含む、望ましくないまたは異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答、または炎症を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御するステップを含む。異なる実施形態では、方法は、１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性をモジュレートするステップを含む、対象における自己免疫応答、障害、または疾患を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御するステップを含む。
【０００８】
一部の実施形態では、方法は、１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性を低減する、阻害する、抑制する、制限する、制御する、増強する、刺激する、誘導するか、または増加させるステップの１つまたは複数を含む。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性を低減する、阻害する、抑制する、制限する、制御する、増強する、刺激する、誘導するか、または増加させるステップは、嗅覚受容体を通してのシグナル伝達、および／または嗅覚受容体の発現もしくは活性を低減する、阻害する、抑制する、制限する、制御する、増強する、刺激する、誘導する、もしくは増加させるそれぞれの下流のシグナル伝達効果を低減する、阻害する、抑制する、制限する、制御する、増強する、刺激するか、または誘導するステップを含む。ある特定の代替の実施形態は、望ましくないもしくは異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答、もしくは炎症の有害な症状、または自己免疫応答、障害、もしくは疾患の有害な症状を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御するステップを含む。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の嗅覚受容体は、表１、表２、表３、表４、表５、表６、表７、表８、および表９のいずれかに記載の嗅覚受容体から選択される。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の嗅覚受容体は、図２Ａおよび２Ｂのいずれかに記載の嗅覚受容体から選択される。一部の実施形態では、望ましくないもしくは異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答、もしくは炎症のそのような有害な症状、または自己免疫応答、障害、もしくは疾患の有害な症状には、これらに限定されないが、腫脹、疼痛、発疹、頭痛、発熱、悪心、下痢、鼓腸、無気力、関節硬直、または組織もしくは細胞の損傷が含まれる。異なる実施形態では、望ましくないもしくは異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答、もしくは炎症の有害な症状、または自己免疫応答、障害、もしくは疾患の有害な症状は、慢性または急性である。ある特定の実施形態では、対象は、望ましくないもしくは異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答、もしくは炎症、または自己免疫応答、障害、もしくは疾患の処置を必要としているか、またはそれらのリスクがある。本発明の方法の免疫障害、炎症応答、炎症、自己免疫応答障害、または自己免疫疾患には、これらに限定されないが、リウマチ性関節炎、若年性リウマチ性関節炎、変形性関節炎、乾癬性関節炎、糖尿病、多発性硬化症、脳脊髄炎、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、自己免疫性甲状腺炎、アトピー性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、乾癬、シェーグレン症候群、クローン病、アフタ性潰瘍、虹彩炎、結膜炎、角結膜炎、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、皮膚エリテマトーデス、強皮症、膣炎、直腸炎、らい性結節性紅斑、自己免疫性ぶどう膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、急性壊死性出血性脳症、特発性両側性進行性感音難聴、再生不良性貧血、赤芽球ろう、特発性血小板減少症、多発性軟骨炎、ウェゲナー肉芽腫症、慢性活動性肝炎、スティーブンス−ジョンソン症候群、特発性スプルー、扁平苔癬、グレーヴス病、サルコイドーシス、原発性胆汁性肝硬変、後部ぶどう膜炎、間質性肺線維症、橋本甲状腺炎、自己免疫性多腺症候群、インスリン依存性糖尿病、インスリン抵抗性糖尿病、免疫性不妊症、自己免疫性アジソン病、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、疱疹状皮膚炎、自己免疫性脱毛症、白斑、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少性紫斑病、悪性貧血、ギラン−バレー症候群、スティフマン症候群、急性リウマチ熱、交感性眼炎、グッドパスチャー症候群、全身性壊死性血管炎、抗リン脂質症候群もしくはアレルギー、ベーチェット病、重度複合免疫不全（ＳＣＩＤ）、リコンビナーゼ活性化遺伝子（ＲＡＧ１／２）欠損、アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）欠損、インターロイキン受容体共通ｇ鎖（ｃ）欠損、ヤヌス関連キナーゼ３（ＪＡＫ３）欠損および細網異形成症；原発性Ｔ細胞免疫不全、例えばディジョージ症候群、ヌード症候群、Ｔ細胞受容体欠損、ＭＨＣクラスＩＩ欠損、ＴＡＰ−２欠損（ＭＨＣクラスＩ欠損）、ＺＡＰ７０チロシンキナーゼ欠損およびプリンヌクレオチドホスホリラーゼ（ＰＮＰ）欠損、抗体欠損症、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症（ブルトン型チロシンキナーゼ欠損）、常染色体劣性無ガンマグロブリン血症、ミュー重鎖欠損、代替軽鎖（ｇ５／１４．１）欠損、高ＩｇＭ症候群：Ｘ連鎖（ＣＤ４０リガンド欠損）もしくは非Ｘ連鎖、Ｉｇ重鎖遺伝子欠失、ＩｇＡ欠損、ＩｇＧサブクラスの欠損（ＩｇＡ欠損を伴うまたは伴わない）、分類不能型免疫不全（ＣＶＩＤ）、正常な免疫グロブリンを伴う抗体欠損；乳児の一過性の低ガンマグロブリン血症、インターフェロンｇ受容体（ＩＦＮＧＲ１、ＩＦＮＧＲ２）欠損、インターロイキン１２もしくはインターロイキン１２受容体欠損、胸腺腫を伴う免疫不全、ウィスコット−アルドリッチ症候群（ＷＡＳタンパク質欠損）、毛細血管拡張性運動失調症（ＡＴＭ欠損）、Ｘ連鎖リンパ増殖症候群（ＳＨ２Ｄ１  Ａ／ＳＡＰ欠損）、または高ＩｇＥ症候群が含まれる。
【０００９】
別の態様では、有害な心血管事象または心血管疾患を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御する方法であって、１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性をモジュレートするステップを含む方法を提供する。一部の実施形態では、有害な心血管事象または心血管疾患には、これらに限定されないが、冠動脈疾患、末梢動脈疾患、脳血管疾患、腎動脈疾患、卒中、心筋梗塞（心臓発作）、虚血性心不全、一過性虚血性発作、または脳外傷、動脈硬化プラーク形成、または血中コレステロールの上昇が含まれる。別の態様では、アテローム性動脈硬化症を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御する方法であって、１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性をモジュレートするステップを含む方法を提供する。一部の実施形態では、１つまたは複数の嗅覚受容体は、表１、表２、表３、表４、表５、表６、表７、表８、および表９のいずれかに記載の嗅覚受容体から選択される。一部の実施形態では、１つまたは複数の嗅覚受容体は、図２Ａおよび２Ｂのいずれかに記載の嗅覚受容体から選択される。
【００１０】
別の態様では、対象における新生物、新生物障害、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍、他の部位への新生物、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍の転移、または原発新生物、新生物障害、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍から遠位の他の部位での転移性新生物、新生物障害、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍の形成もしくは確立を低減または阻害する方法であって、１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性をモジュレートするステップを含む方法を提供する。一部の実施形態では、１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性をモジュレートするステップは、１つまたは複数の嗅覚受容体のアゴニストを投与するステップを含む。別の態様では、対象における新生物、新生物障害、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍、他の部位への新生物、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍の転移、または原発新生物、新生物障害、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍から遠位の他の部位での転移性新生物、新生物障害、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍の形成もしくは確立を低減または阻害する方法であって、１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性を増加させるステップを含む方法を提供する。一部の実施形態では、１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性を増加させるステップは、１つまたは複数の嗅覚受容体のアゴニストを投与するステップを含む。さらに別の態様では、対象におけるウイルス、細菌、または真菌感染症を低減または阻害する方法であって、１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性をモジュレートするステップを含む方法を提供する。異なる実施形態では、これらの方法は、１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性を低減する、阻害する、抑制する、制限する、制御する  増強する、刺激する、誘導するか、または増加させるステップの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の嗅覚受容体は、表１、表２、表３、表４、表５、表６、表７、表８、および表９のいずれかに記載の嗅覚受容体から選択される。一部の実施形態では、１つまたは複数の嗅覚受容体は、図２Ａおよび２Ｂのいずれかに記載の嗅覚受容体から選択される。一部の実施形態では、アゴニストは、表８に記載のアゴニストの１つまたは複数である。
【００１１】
ある特定の実施形態では、方法は、新生物、新生物障害、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍、他の部位への新生物、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍の転移、または原発新生物、新生物障害、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍から遠位の他の部位での転移性新生物、新生物障害、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍の形成もしくは確立、またはウイルス、細菌、もしくは真菌感染症の有害な症状を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御するステップを含む。本明細書に提供される方法の新生物、新生物障害、腫瘍、がん、または悪性腫瘍には、これらに限定されないが癌腫、肉腫、神経芽腫、子宮頸がん、肝細胞がん、中皮腫、神経膠芽腫、骨髄腫、リンパ腫、白血病、腺腫、腺癌、神経膠腫、神経膠芽腫、網膜芽腫、星細胞種、乏突起膠細胞腫、髄膜腫、リンパ肉腫、脂肪肉腫、骨肉腫、軟骨肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、線維肉腫、もしくは黒色腫；または肺、甲状腺、頭部もしくは頸部、鼻咽頭、咽頭、鼻もしくは副鼻腔、脳、脊椎、乳房、副腎、下垂体、甲状腺、リンパ、消化管（口、食道、胃、十二指腸、回腸、空腸（小腸）、結腸、直腸）、泌尿生殖器管（子宮、卵巣、子宮頸部、子宮内膜、膀胱、精巣、陰茎、前立腺）、腎臓、膵臓、肝臓、骨、骨髄、リンパ、血液、筋肉、または皮膚の新生物、新生物障害、腫瘍、がん、または悪性腫瘍が含まれる。
【００１２】
本発明のある特定の実施形態では、方法は、対象における生得の免疫応答をモジュレートするステップを含む。一部の実施形態では、方法は、マクロファージの活性をモジュレートするステップを含む。代替の実施形態では、マクロファージは血管マクロファージである。
【００１３】
別の態様では、１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性をモジュレートするための方法であって、リガンドに対する嗅覚受容体の結合をモジュレートするステップを含む方法を提供する。一部の実施形態では、リガンドに対する嗅覚受容体の結合をモジュレートするステップは、嗅覚受容体に対するリガンドの結合を阻害するステップを含む。ある特定の代替の実施形態では、リガンドに対する嗅覚受容体の結合をモジュレートするステップは、嗅覚受容体に対するリガンドの結合に対してアゴニストを作用させるステップを含む。
【００１４】
特定の実施形態では、本発明の方法は、表１、表２、表３、表４、表５、表６、表７、表８、および表９のいずれかに記載の１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性をモジュレートする作用剤の治療有効量を対象に投与するステップを含む。あるいは、本発明の方法は、図２Ａおよび２Ｂのいずれかに記載の１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性をモジュレートする作用剤の治療有効量を対象に投与するステップを含む。異なる実施形態では、作用剤は、表１、表２、表３、表４、表５、表６、表７、表８、および表９のいずれかに記載の１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性のアンタゴニストまたはアゴニストである。ある特定の代替の実施形態では、アンタゴニストまたはアゴニストは、表８に記載のアゴニストまたは表９に記載のアンタゴニストの１つまたは複数である。異なる実施形態では、作用剤は、図２Ａおよび２Ｂのいずれかに記載の１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性のアンタゴニストまたはアゴニストである。ある特定の実施形態では、作用剤は、タンパク質、ペプチド、抗体、ｓｉＲＮＡ、低分子、またはリガンド模倣体である。
【００１５】
本方法の一部の実施形態では、対象は、ヒトを含むがこれらに限定されない哺乳動物である。
【００１６】
別の態様では、対象における免疫応答をモジュレートする方法であって、１つまたは複数の嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現または活性をモジュレートするステップを含む方法を提供する。
【００１７】
一部の実施形態では、ＯＬＦＲは、ｉｎ  ｖｉｖｏで細胞によって発現される。一部の実施形態では、細胞は、動物細胞であり、ただし、この細胞は嗅覚細胞ではない。一部の実施形態では、細胞はマクロファージである。一部の実施形態では、マクロファージは血管マクロファージである。
【００１８】
一部の実施形態では、モジュレーションは、ＯＬＦＲの発現を阻害するかまたはＯＬＦＲを非活性化する作用剤の有効量を対象に投与するステップを含む方法によって、免疫応答を阻害する、減少させる、低減する、抑制する、制限するか、または制御するステップの１つまたは複数を含む。
【００１９】
一部の実施形態では、モジュレーションは、ＯＬＦＲの発現を阻害するかまたはＯＬＦＲを非活性化する作用剤の有効量を対象に投与するステップを含む方法によって、望ましくないまたは異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答、または炎症を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御するステップの１つまたは複数を含む。
【００２０】
一部の実施形態では、モジュレーションは、ＯＬＦＲの発現を阻害するかまたはＯＬＦＲを非活性化する作用剤の有効量を対象に投与するステップを含む方法によって、対象における自己免疫応答、障害、または疾患を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御するステップの１つまたは複数を含む。
【００２１】
一部の実施形態では、モジュレーションは、対象における望ましくないもしくは異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答、もしくは炎症の有害な症状、または自己免疫応答、障害、もしくは疾患の有害な症状を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御するステップの１つまたは複数を含む。
【００２２】
一部の実施形態では、望ましくないもしくは異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答、もしくは炎症の有害な症状、または自己免疫応答、障害、もしくは疾患の有害な症状は、腫脹、疼痛、発疹、頭痛、発熱、悪心、下痢、鼓腸、無気力、関節硬直、または組織もしくは細胞の損傷である。一部の実施形態では、望ましくないもしくは異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答、もしくは炎症の有害な症状、または自己免疫応答、障害、もしくは疾患の有害な症状は、慢性または急性である。
【００２３】
一部の実施形態では、免疫障害、炎症応答、炎症、自己免疫応答障害、または自己免疫疾患は、リウマチ性関節炎、若年性リウマチ性関節炎、変形性関節炎、乾癬性関節炎、糖尿病、多発性硬化症、脳脊髄炎、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、自己免疫性甲状腺炎、アトピー性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、乾癬、シェーグレン症候群、クローン病、アフタ性潰瘍、虹彩炎、結膜炎、角結膜炎、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、皮膚エリテマトーデス、強皮症、膣炎、直腸炎、らい性結節性紅斑、自己免疫性ぶどう膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、急性壊死性出血性脳症、特発性両側性進行性感音難聴、再生不良性貧血、赤芽球ろう、特発性血小板減少症、多発性軟骨炎、ウェゲナー肉芽腫症、慢性活動性肝炎、スティーブンス−ジョンソン症候群、特発性スプルー、扁平苔癬、グレーヴス病、サルコイドーシス、原発性胆汁性肝硬変、後部ぶどう膜炎、間質性肺線維症、橋本甲状腺炎、自己免疫性多腺症候群、インスリン依存性糖尿病、インスリン抵抗性糖尿病、免疫性不妊症、自己免疫性アジソン病、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、疱疹状皮膚炎、自己免疫性脱毛症、白斑、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少性紫斑病、悪性貧血、ギラン−バレー症候群、スティフマン症候群、急性リウマチ熱、交感性眼炎、グッドパスチャー症候群、全身性壊死性血管炎、抗リン脂質症候群もしくはアレルギー、ベーチェット病、重度複合免疫不全（ＳＣＩＤ）、リコンビナーゼ活性化遺伝子（ＲＡＧ１／２）欠損、アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）欠損、インターロイキン受容体共通ｇ鎖（ｃ）欠損、ヤヌス関連キナーゼ３（ＪＡＫ３）欠損および細網異形成症；原発性Ｔ細胞免疫不全、例えばディジョージ症候群、ヌード症候群、Ｔ細胞受容体欠損、ＭＨＣクラスＩＩ欠損、ＴＡＰ−２欠損（ＭＨＣクラスＩ欠損）、ＺＡＰ７０チロシンキナーゼ欠損およびプリンヌクレオチドホスホリラーゼ（ＰＮＰ）欠損、抗体欠損症、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症（ブルトン型チロシンキナーゼ欠損）、常染色体劣性無ガンマグロブリン血症、ミュー重鎖欠損、代替軽鎖（ｇ５／１４．１）欠損、高ＩｇＭ症候群：Ｘ連鎖（ＣＤ４０リガンド欠損）もしくは非Ｘ連鎖、Ｉｇ重鎖遺伝子欠失、ＩｇＡ欠損、ＩｇＧサブクラスの欠損（ＩｇＡ欠損を伴うまたは伴わない）、分類不能型免疫不全（ＣＶＩＤ）、正常な免疫グロブリンを伴う抗体欠損；乳児の一過性の低ガンマグロブリン血症、インターフェロンｇ受容体（ＩＦＮＧＲ１、ＩＦＮＧＲ２）欠損、インターロイキン１２もしくはインターロイキン１２受容体欠損、胸腺腫を伴う免疫不全、ウィスコット−アルドリッチ症候群（ＷＡＳタンパク質欠損）、毛細血管拡張性運動失調症（ＡＴＭ欠損）、Ｘ連鎖リンパ増殖症候群（ＳＨ２Ｄ１  Ａ／ＳＡＰ欠損）、または高ＩｇＥ症候群を含む。
【００２４】
一部の実施形態では、モジュレーションは、ＯＬＦＲの発現を阻害するかまたはＯＬＦＲを非活性化する作用剤の有効量を対象に投与するステップを含む方法によって、有害な心血管事象または心血管疾患を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御するステップの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、有害な心血管疾患事象または心血管疾患は、冠動脈疾患、末梢動脈疾患、脳血管疾患、腎動脈疾患、卒中、心筋梗塞（心臓発作）、虚血性心不全、一過性虚血性発作、または脳外傷、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化プラーク形成、または血中コレステロールの上昇を含む。
【００２５】
一部の実施形態では、モジュレーションは、ＯＬＦＲの発現を阻害するかまたはＯＬＦＲを非活性化する作用剤の有効量を対象に投与するステップを含む方法によって、アテローム性動脈硬化症を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御するステップの１つまたは複数を含む。
【００２６】
一部の実施形態では、方法は、ＯＬＦＲの発現を増加させるかまたはＯＬＦＲを活性化する作用剤の有効量を対象に投与するステップを含む方法によって、対象におけるウイルス、細菌、または真菌感染症を低減するかまたは阻害するステップの１つまたは複数を含む。
【００２７】
一部の実施形態では、モジュレーションは、ＯＬＦＲの発現を増加させるかまたはＯＬＦＲを活性化する作用剤の有効量を対象に投与するステップを含む方法によって、新生物、新生物障害、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍、他の部位への新生物、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍の転移、または原発新生物、新生物障害、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍から遠位の他の部位での転移性新生物、新生物障害、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍の形成もしくは確立、またはウイルス、細菌、もしくは真菌感染症の有害な症状を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御するステップの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、処置される新生物、新生物障害、腫瘍、がん、または悪性腫瘍は、癌腫、肉腫、神経芽腫、子宮頸がん、肝細胞がん、中皮腫、神経膠芽腫、骨髄腫、リンパ腫、白血病、腺腫、腺癌、神経膠腫、神経膠芽腫、網膜芽腫、星細胞種、乏突起膠細胞腫、髄膜腫、リンパ肉腫、脂肪肉腫、骨肉腫、軟骨肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、線維肉腫、もしくは黒色腫；または肺、甲状腺、頭部もしくは頸部、鼻咽頭、咽頭、鼻もしくは副鼻腔、脳、脊椎、乳房、副腎、下垂体、甲状腺、リンパ、消化管（口、食道、胃、十二指腸、回腸、空腸（小腸）、結腸、直腸）、泌尿生殖器管（子宮、卵巣、子宮頸部、子宮内膜、膀胱、精巣、陰茎、前立腺）、腎臓、膵臓、肝臓、骨、骨髄、リンパ、血液、筋肉、または皮膚の新生物、新生物障害、腫瘍、がん、または悪性腫瘍である。
【００２８】
一部の実施形態では、ＯＬＦＲは、表１〜９ならびに図２Ａおよび２Ｂのいずれか１つに記載のＯＬＦＲである。一部の実施形態では、ＯＬＦＲは、表７に記載のＯＬＦＲである。一部の実施形態では、ＯＬＦＲは、ＯＲ７Ｃ１、ＯＲ７Ｄ４、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ１１Ｈ６、ＯＲ４Ｅ２、ＯＲ１０Ｈ１、およびＯＲ６Ａ２からなる群から選択される。
【００２９】
一部の実施形態では、作用剤は、ＯＬＦＲに結合するか、もしくはリガンドに対するＯＬＦＲの結合を遮断するリガンドもしくは低分子、または細胞によるＯＬＦＲの発現を阻害する作用剤の群から選択される。一部の実施形態では、作用剤は、ＯＬＦＲに結合する抗体、断片、もしくは模倣体、またはＯＬＦＲリガンド、抗ＯＬＦＲ遺伝子サイレンシング剤、オクタナール、ヘプタナール、またはそれらのプロドラッグもしくは溶媒和物の群から選択される。
【００３０】
一部の実施形態では、作用剤は、細胞の形質膜へのＯＬＦＲの輸送をモジュレートすることによってＯＬＦＲをモジュレートする。一部の実施形態では、作用剤は、受容体輸送タンパク質１（ＲＴＰ１）、ＲＴＰ２、受容体発現増強タンパク質１（ＲＥＥＰ１）、アミノアシラーゼ３（Ａｃｙ３）、またはグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｏｌｆ）サブユニットアルファ（Ｇｎａｌ）の群から選択されるタンパク質である。一部の実施形態では、作用剤は、受容体輸送タンパク質１（ＲＴＰ１）、ＲＴＰ２、受容体発現増強タンパク質１（ＲＥＥＰ１）、アミノアシラーゼ３（Ａｃｙ３）、およびグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｏｌｆ）サブユニットアルファ（Ｇｎａｌ）からなる群から選択されるタンパク質をコードするヌクレオチドである。
【００３１】
一部の実施形態では、免疫応答は、炎症性サイトカインの発現または分泌を増加させる作用剤を投与するステップを含む方法によって刺激される。一部の実施形態では、炎症性サイトカインは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、Ｃ−Ｃモチーフケモカインリガンド２（ＣＣＬ２）、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、インターロイキン６（ＩＬ−６）、ＩＬ−１Ｂ、ＩＬ−１８、および酸化窒素シンターゼ２（ＮＯＳ２）からなる群から選択される。
【００３２】
別の態様では、必要とする対象における免疫応答を抑制する方法であって、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現または活性を減少させる作用剤を対象に投与し、それによって対象における免疫応答を抑制するステップを含む方法を提供する。
【００３３】
一部の実施形態では、ＯＬＦＲは、表１〜９のいずれか１つに記載のＯＬＦＲである。一部の実施形態では、ＯＬＦＲは、表７に記載のＯＬＦＲである。一部の実施形態では、ＯＬＦＲは、ＯＲ７Ｃ１、ＯＲ７Ｄ４、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ１１Ｈ６、ＯＲ４Ｅ２、ＯＲ１０Ｈ１、およびＯＲ６Ａ２からなる群から選択される。
【００３４】
一部の実施形態では、作用剤は、遺伝子サイレンシング剤である。一部の実施形態では、遺伝子サイレンシング剤は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）分子、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、およびＣｌｕｓｔｅｒｅｄ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ  Ｓｈｏｒｔ  Ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ  Ｒｅｐｅａｔｓ（ＣＲＩＳＰＲ）酵素からなる群から選択される。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ分子は、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、およびマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）からなる群から選択される。
【００３５】
一部の実施形態では、作用剤は、ＯＬＦＲとそのリガンドとの結合を阻害することによって、ＯＬＦＲの活性を減少させる。一部の実施形態では、リガンドは、表８に記載のＯＬＦＲリガンドである。
【００３６】
一部の実施形態では、作用剤はＯＬＦＲアンタゴニストである。一部の実施形態では、ＯＬＦＲアンタゴニストは、シトラール、ウンデカナール、オキシフェニロン、ｐｈｅｎｉｒａｔ、メチルシンナムアルデヒド、ヒドロシンナムアルデヒド（ｈｙｄｒｏｃｉｎａｍａｌｄｅｈｙｄｅ）、ブルゲオナール（ｂｏｕｒｇｅｏｎａｌ）、エチルヘキサン酸、α−イオノン、オクタン酸、それらの溶媒和物またはプロドラッグである。一部の実施形態では、ＯＬＦＲアンタゴニストは、表９に記載のアンタゴニストである。
【００３７】
一部の実施形態では、作用剤は、細胞の形質膜へのＯＬＦＲの輸送を阻害することによって、ＯＬＦＲの活性を減少させる。
【００３８】
一部の実施形態では、作用剤は、ＯＬＦＲに結合する抗体、その断片、または模倣体である。
【００３９】
別の態様では、必要とする対象における免疫応答を抑制する方法であって、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を阻害する作用剤を対象に投与し、それによって対象における免疫応答を抑制するステップを含む方法を提供する。
【００４０】
別の態様では、必要とする対象における自己免疫疾患を処置する方法であって、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現または活性を減少させる作用剤を対象に投与するステップを含む方法を提供する。別の態様では、必要とする対象における自己免疫疾患を処置する方法であって、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を阻害する作用剤を対象に投与するステップを含む方法を提供する。
【００４１】
別の態様では、必要とする対象における心血管疾患を処置する方法であって、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現または活性を減少させる作用剤を対象に投与するステップを含む方法を提供する。別の態様では、必要とする対象における心血管疾患を処置する方法であって、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を阻害する作用剤を対象に投与するステップを含む方法を提供する。
【００４２】
別の態様では、必要とする対象における免疫応答を増加させる方法であって、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を増加させるかまたは促進する作用剤を対象に投与し、それによって対象における免疫応答を増加させるステップを含む方法を提供する。
【００４３】
別の態様では、必要とする対象における感染症を処置する方法であって、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現を増加させるかまたは嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）を活性化する作用剤を対象に投与するステップを含む方法を提供する。別の態様では、必要とする対象における感染症を処置する方法であって、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を増加させるかまたは促進する作用剤を対象に投与するステップを含む方法を提供する。一部の実施形態では、感染症は、ウイルス感染症、細菌感染症、または真菌感染症からなる群から選択される。
【００４４】
別の態様では、必要とする対象におけるがんを処置する方法であって、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現を増加させるかまたは嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）を活性化する作用剤を対象に投与するステップを含む方法を提供する。別の態様では、必要とする対象におけるがんを処置する方法であって、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を増加させるかまたは促進する作用剤を対象に投与するステップを含む方法を提供する。
【００４５】
別の態様では、免疫応答に関係する１つまたは複数のタンパク質の発現または活性をモジュレートする方法であって、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現または活性をモジュレートする作用剤を細胞に接触させるステップを含む方法を提供する。一部の実施形態では、作用剤は、ＯＬＦＲの発現を増加させるかまたはＯＬＦＲを活性化する。他の実施形態では、作用剤は、ＯＬＦＲの発現または活性を減少させる。
【００４６】
別の態様では、免疫応答に関係する１つまたは複数のタンパク質の発現または活性を増加させる方法であって、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現を増加させるかまたは嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）を活性化する作用剤を細胞に接触させるステップを含む方法を提供する。
【００４７】
別の態様では、免疫応答に関係する１つまたは複数のタンパク質の発現または活性を減少させる方法であって、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現を減少させるかまたは嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）を阻害する作用剤を細胞に接触させるステップを含む方法を提供する。
【００４８】
別の態様では、免疫応答に関係する１つまたは複数のタンパク質の発現または活性をモジュレートする方法であって、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送をモジュレートする作用剤を細胞に接触させるステップを含む方法を提供する。一部の実施形態では、作用剤は、細胞の形質膜へのＯＬＦＲの輸送を増加させるかまたは促進する。一部の実施形態では、作用剤は、細胞の形質膜へのＯＬＦＲの輸送を減少させるかまたは阻害する。
【００４９】
別の態様では、免疫応答に関係する１つまたは複数のタンパク質の発現または活性を増加させる方法であって、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を増加させるかまたは促進する作用剤を細胞に接触させるステップを含む方法を提供する。
【００５０】
別の態様では、免疫応答に関係する１つまたは複数のタンパク質の発現または活性を減少させる方法であって、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を減少させるかまたは阻害する作用剤を細胞に接触させるステップを含む方法を提供する。
【００５１】
一部の実施形態では、方法は、１つまたは複数の作用剤の使用を含む。一部の実施形態では、作用剤は、遺伝子サイレンシング剤である。一部の実施形態では、遺伝子サイレンシング剤は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）分子、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、およびＣｌｕｓｔｅｒｅｄ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ  Ｓｈｏｒｔ  Ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ  Ｒｅｐｅａｔｓ（ＣＲＩＳＰＲ）酵素からなる群から選択される。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ分子は、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、およびマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）からなる群から選択される。
【００５２】
一部の実施形態では、作用剤は、ＯＬＦＲとそのリガンドとの結合を阻害することによって、ＯＬＦＲの活性を減少させる。一部の実施形態では、リガンドは、表８に記載のＯＬＦＲリガンドである。
【００５３】
一部の実施形態では、作用剤はＯＬＦＲアンタゴニストである。一部の実施形態では、ＯＬＦＲアンタゴニストは、シトラール、ウンデカナール、オキシフェニロン、ｐｈｅｎｉｒａｔ、メチルシンナムアルデヒド、ヒドロシンナムアルデヒド、ブルゲオナール、エチルヘキサン酸、α−イオノン、オクタン酸、それらの溶媒和物またはプロドラッグである。一部の実施形態では、ＯＬＦＲアンタゴニストは、表９に記載のアンタゴニストである。
【００５４】
一部の実施形態では、作用剤は、細胞の形質膜へのＯＬＦＲの輸送を阻害することによって、ＯＬＦＲの活性を減少させる。
【００５５】
一部の実施形態では、作用剤は、ＯＬＦＲに結合する抗体、その断片、または模倣体である。
【００５６】
一部の実施形態では、作用剤はＯＬＦＲアゴニストである。一部の実施形態では、ＯＬＦＲアゴニストは、表８に記載のアゴニストである。一部の実施形態では、ＯＬＦＲアゴニストは、オクタナール、クマリン、ヘリオナール、リリアール、ｂ−イオノン、アンドロステノン、アンドロスタジエノン、キャラメルフラノン、３−フェニルプロピルプロピオネート、オイゲノール、エチル（ｅｔｈｉｌ）バニリン、２−エチルフェンコール、イソ吉草酸、ノナン酸、ブチリル乳酸ブチル、酪酸、イソ吉草酸、プロピオン酸、酢酸Ｎ−アミル、酢酸オイゲノール、サンダルウッド、Ｓ−（−）−シトロネロール、Ｓ−（−）−シトロネラール、（＋）−カルビン、（−）カルボン、（＋）カルボン、リナロール、ブルゲオナール、アセトフェノン、酪酸アミル、ノナンチオール、フェニル酢酸アリル、酢酸Ｎ−アミル、ムスコン、イソオイゲノール、オイゲノールメチルエーテル、１−ヘキサノール、１−ヘプタノール、１−オクタノール、セロリケトン、アニスアルデヒド、（＋）−メントール、バニリン、グアイアコール、リラール、ヘプタン酸エチル、オクタン酸メチル、ノナナール  １−ノナノール、２−ノナノール、３−オクタノン、３−ノナノン、デシルアルデヒドからなる群から選択される。一部の実施形態では、作用剤は、オクタナール、ヘプタナール、またはそれらのプロドラッグもしくは溶媒和物である。
【００５７】
一部の実施形態では、作用剤は、受容体輸送タンパク質１（ＲＴＰ１）、ＲＴＰ２、受容体発現増強タンパク質１（ＲＥＥＰ１）、アミノアシラーゼ３（Ａｃｙ３）、およびグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｏｌｆ）サブユニットアルファ（Ｇｎａｌ）からなる群から選択されるタンパク質である。一部の実施形態では、作用剤は、受容体輸送タンパク質１（ＲＴＰ１）、ＲＴＰ２、受容体発現増強タンパク質１（ＲＥＥＰ１）、アミノアシラーゼ３（Ａｃｙ３）、およびグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｏｌｆ）サブユニットアルファ（Ｇｎａｌ）からなる群から選択されるタンパク質をコードするヌクレオチドを含む。
【００５８】
一部の実施形態では、ＯＬＦＲは、表１〜９および図２Ａ〜２Ｂのいずれか１つに記載のＯＬＦＲである。一部の実施形態では、ＯＬＦＲは、表７に記載のＯＬＦＲである。一部の実施形態では、ＯＬＦＲは、ＯＲ７Ｃ１、ＯＲ７Ｄ４、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ１１Ｈ６、ＯＲ４Ｅ２、ＯＲ１０Ｈ１、およびＯＲ６Ａ２からなる群から選択される。
【００５９】
一部の実施形態では、ＯＬＦＲは、ｉｎ  ｖｉｖｏで細胞によって発現される。一部の実施形態では、細胞は、動物細胞であり、ただし、この細胞は嗅覚細胞ではない。一部の実施形態では、細胞はマクロファージである。一部の実施形態では、マクロファージは血管マクロファージである。
【００６０】
一部の実施形態では、免疫応答に関係する１つまたは複数のタンパク質は、図１６および１７に示すタンパク質のいずれかである。一部の実施形態では、免疫応答に関係する１つまたは複数のタンパク質は、ＣＣＬ５（Ｃ−Ｃモチーフケモカインリガンド５）、Ｔｎｆｒｓｆ１２ａ（オステオプロテゲリン）、Ａｘｉｎ１、Ｎａｄｋ、Ａｈｒ（アリール炭化水素受容体）、ＱＤＰＲ（キノイドジヒドロプテリジンレダクターゼ）、ＨＧＦ（肝細胞増殖因子）、ＡＤＡＭ２３、またはＳｎａｐ２９から選択されるタンパク質である。
【００６１】
一部の実施形態では、投与は、局所または全身である。一部の実施形態では、投与は、静脈内投与を含む。
【００６２】
一部の実施形態では、対象は哺乳動物である。一部の実施形態では、対象は、免疫調節障害を伴う疾患または障害を有するか、またはその素因を有する。一部の実施形態では、対象はヒト患者である。
【００６３】
別の態様では、ＯＬＦＲの活性をモジュレートする作用剤および使用説明書を含むキットを提供する。
【００６４】
一部の実施形態では、作用剤は遺伝子サイレンシング剤である。一部の実施形態では、遺伝子サイレンシング剤は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）分子、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、およびＣｌｕｓｔｅｒｅｄ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ  Ｓｈｏｒｔ  Ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ  Ｒｅｐｅａｔｓ（ＣＲＩＳＰＲ）酵素からなる群から選択される。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ分子は、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、およびマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）からなる群から選択される。
【００６５】
一部の実施形態では、作用剤は、ＯＬＦＲとそのリガンドとの結合を阻害することによって、ＯＬＦＲの活性をモジュレートする。一部の実施形態では、リガンドは、表８に記載のＯＬＦＲリガンドである。
【００６６】
一部の実施形態では、作用剤はＯＬＦＲアンタゴニストである。一部の実施形態では、ＯＬＦＲアンタゴニストは、シトラール、ウンデカナール、オキシフェニロン、ｐｈｅｎｉｒａｔ、メチルシンナムアルデヒド、ヒドロシンナムアルデヒド、ブルゲオナール、エチルヘキサン酸、α−イオノン、オクタン酸、それらの溶媒和物またはプロドラッグである。一部の実施形態では、ＯＬＦＲアンタゴニストは、表９に記載のアンタゴニストである。
【００６７】
一部の実施形態では、作用剤は、細胞の形質膜へのＯＬＦＲの輸送を阻害することによって、ＯＬＦＲの活性をモジュレートする。
【００６８】
一部の実施形態では、作用剤は、ＯＬＦＲに結合する抗体、その断片、または模倣体である。
【００６９】
一部の実施形態では、作用剤はＯＬＦＲアゴニストである。一部の実施形態では、ＯＬＦＲアゴニストは、表８に記載のアゴニストである。一部の実施形態では、ＯＬＦＲアゴニストは、オクタナール、クマリン、ヘリオナール、リリアール、ｂ−イオノン、アンドロステノン、アンドロスタジエノン、キャラメルフラノン、３−フェニルプロピルプロピオネート、オイゲノール、エチルバニリン、２−エチルフェンコール、イソ吉草酸、ノナン酸、ブチリル乳酸ブチル、酪酸、イソ吉草酸、プロピオン酸、酢酸Ｎ−アミル、酢酸オイゲノール、サンダルウッド、Ｓ−（−）−シトロネロール、Ｓ−（−）−シトロネラール、（＋）−カルビン、（−）カルボン、（＋）カルボン、リナロール、ブルゲオナール、アセトフェノン、酪酸アミル、ノナンチオール、フェニル酢酸アリル、酢酸Ｎ−アミル、ムスコン、イソオイゲノール、オイゲノールメチルエーテル、１−ヘキサノール、１−ヘプタノール、１−オクタノール、セロリケトン、アニスアルデヒド、（＋）−メントール、バニリン、グアイアコール、リラール、ヘプタン酸エチル、オクタン酸メチル、ノナナール  １−ノナノール、２−ノナノール、３−オクタノン、３−ノナノン、デシルアルデヒドからなる群から選択される。一部の実施形態では、作用剤は、オクタナール、ヘプタナール、またはそれらのプロドラッグもしくは溶媒和物である。
【００７０】
一部の実施形態では、作用剤は、受容体輸送タンパク質１（ＲＴＰ１）、ＲＴＰ２、受容体発現増強タンパク質１（ＲＥＥＰ１）、アミノアシラーゼ３（Ａｃｙ３）、およびグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｏｌｆ）サブユニットアルファ（Ｇｎａｌ）からなる群から選択されるタンパク質である。一部の実施形態では、作用剤は、受容体輸送タンパク質１（ＲＴＰ１）、ＲＴＰ２、受容体発現増強タンパク質１（ＲＥＥＰ１）、アミノアシラーゼ３（Ａｃｙ３）、およびグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｏｌｆ）サブユニットアルファ（Ｇｎａｌ）からなる群から選択されるタンパク質をコードするヌクレオチドを含む。
【００７１】
一部の実施形態では、ＯＬＦＲは、表１〜９および図２Ａ〜２Ｂのいずれか１つに記載のＯＬＦＲである。一部の実施形態では、ＯＬＦＲは、表７に記載のＯＬＦＲである。一部の実施形態では、ＯＬＦＲは、ＯＲ７Ｃ１、ＯＲ７Ｄ４、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ１１Ｈ６、ＯＲ４Ｅ２、ＯＲ１０Ｈ１、およびＯＲ６Ａ２からなる群から選択される。
【００７２】
本開示に記載され、相互に排他的ではない例示的な実施形態の全ての特色は、互いに組み合わせることができる。一実施形態の要素を、さらに言及することなく他の実施形態において利用することができる。本発明の他の態様および特色は、添付の図面と共に以下の具体的な実施形態の説明を参照することによって当業者に明らかとなるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００７３】
【図１Ａ】図１Ａ〜Ｃは、シトラールでのＯｌｆｒ２阻害、ならびにその結果生じた、炎症性遺伝子発現およびｉｎ  ｖｉｖｏでのアテローム性動脈硬化症進行の減少の非限定的例を示す。図１Ａは、Ｏｌｆｒ２阻害剤シトラールの単独での、またはオクタナールおよびＬＰＳと組み合わせての処理後のＣＣＬ２、ＣＣＬ４、ＴＮＦ、およびｉＮＯＳの遺伝子発現分析の結果を示す。図１Ｂは、ＯＬＦＲ２阻害剤シトラールでの処理後のアテローム性動脈硬化病変評価（病変を有するピクセルの％および数）の結果を示す。図１Ｃは、シトラールまたは生理食塩水（未処理）で処理されたマウスのピン止めされた大動脈の写真を示す。
【図１ＢＣ】同上。
【００７４】
【図２Ａ】図２Ａは、マウス血管マクロファージおよびいくつかの他の組織マクロファージ、ＤＣ、ならびに血中単球に発現したＯｌｆｒ遺伝子（合計１１２３個）のヒートマップを示す。
【００７５】
【図２Ｂ】図２Ｂは、既知のヒトオルソログを有する発現したＯｌｆｒのヒートマップを示す。
【００７６】
【図３ＡＢ】図３Ａは、Ｇａｐｄｈおよび未処理の対照の発現に対して正規化されたＯｌｆｒ２発現の、リアルタイムＰＣＲ分析により定量化されたＯｌｆｒ２の相対的発現を示す。
【００７７】
図３Ｂは、ＢＭＤＭ可溶化液におけるＯｌｆｒ２タンパク質発現を示す。
【００７８】
【図３ＣＤ】図３Ｃ〜Ｄは、細胞外Ｏｌｆｒ２発現のフローサイトメトリー分析を示す。生きているＦ４／８０＋  ＢＭＤＭの蛍光強度中央値（ＭＦＩ）が報告されている。
【００７９】
【図３ＥＦ】図３Ｅは、Ｏｌｆｒ２（ＡＦ４８８）について染色された、前処理されたＢＭＤＭのＡｉｒｙｓｃａｎ高分解能イメージングを示す。Ｈｏｅｃｈｓｔが、核染色に使用された。スケールバー＝２００ｍｍ。
【００８０】
図３Ｆは、リアルタイムＰＣＲにより決定されたＯｌｆｒ２発現を示す。
【００８１】
【図３ＧＨ】図３Ｇ〜Ｈは、大動脈マクロファージによるＯｌｆｒ２のフローサイトメトリー分析を示す。血管マクロファージ（ＣＤ４５＋、生きている、ＴＣＲβ−、ＣＤ１９−、Ｆ４／８０＋）のＯｌｆｒ２蛍光強度中央値（ＭＦＩ）が報告されている（ｎ＝５〜６個／群）。
【００８２】
【図３Ｉ】図３Ｉは、ＷＤを２週間、供給されたＡｐｏｅ−／−マウス由来のホールマウント大動脈におけるＯｌｆｒ２、ＣＤ６８、およびＨｏｅｃｈｓｔ免疫反応性を示す顕微鏡写真を示す。右：Ｏｌｆｒ２＋  ＣＤ６８＋  マクロファージのズームイン。データは、平均値±ＳＥＭとして提示されている。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊＊ｐ＜０．００１。ｐは、一元配置ＡＮＯＶＡ検定、Ｔｕｋｅｙの多重比較検定により計算された。
【００８３】
【図４】図４Ａ〜Ｂは、ｑＰＣＲにより測定された場合の大動脈におけるＲｔｐ１（図４Ａ）およびＲｔｐ２（図４Ｂ）発現を示す。
【００８４】
【図５】図５Ａ〜Ｂは、消化された大動脈全体からのＴ細胞およびＢ細胞におけるＯｌｆｒ２発現を示す。
【００８５】
【図６】図６Ａは、血中単核細胞上のＯｌｆｒ２発現を示す。
【００８６】
図６Ｂは、血中単核細胞上のＯｌｆｒ２発現を示す。
【００８７】
【図７】図７Ａ〜Ｇは、Ｏｌｆｒ２ライゲーションが、血管マクロファージによる炎症応答を誘導することを示す。図７Ａ）ＣｔｒｌおよびＯｃｔのＣａ２＋シグナルが、ドットプリントとして示されている。図７Ｂ）時点分析されたＦｌｕｏ−４蛍光強度中央値（ＭＦＩ）。ＳＤは、各時点について細胞の間で計算されている。（ｎ＝２０〜５０）。図７Ｃ）Ｏｃｔは、大動脈において炎症促進性遺伝子発現を誘導する。図７Ｄ）Ｃｉｔ（１００μＭ）は、大動脈においてＣｃｌ２、Ｃｃｌ４、Ｔｎｆ、およびＮｏｓ２のオクタナール誘導性発現を低減した。（ｎ＝５〜６／群）。図７Ｅ）刺激された大動脈の上清におけるサイトカインビーズアレイおよびフローサイトメトリーによるＣＣＬ２、ＣＣＬ４、およびＴＮＦタンパク質定量化。図７Ｆ）ＭＦＩによって示された、Ｆ４／８０＋  血管マクロファージにおける細胞内ＴＮＦ発現。図７Ｇ）ＢＭＤＭが、ＬＰＳ（５０ｎｇ／ｍＬ）で１８時間、処理され、その後、Ｏｃｔ単独で、Ｃｉｔ単独で、または両方を組み合わせて、刺激された。
【００８８】
【図８】図８Ａ〜Ｂは、ドットプロットとして示されたカルシウム（Ｃａ２＋）シグナル検出を示す。図８Ａ：Ｏｌｆｒ２アゴニストのオクタナール（Ｏｃｔ  １０μＭ）単独、アンタゴニストのシトラール（Ｃｉｔ  １００μＭ）単独、または組合せ（Ｏｃｔ＋Ｃｉｔ）の添加前および後の２μＭ  Ｆｌｕｏ−４を負荷された、ダンプチャネル＋  細胞（ＴＣＲｂ＋およびＣＤ１９＋）。ＯｃｔおよびＣｉｔを６０秒目に注射した。大動脈全体を消化し、３７℃で３０分間、Ｆｌｕｏ４（２μＭ）で染色し、その後、洗浄し、ＲＴで２０分間、細胞表面マーカーとインキュベートした。ＣＤ４５＋、生きている、ダンプチャネル＋（ＴＣＲｂ＋およびＣＤ１９＋）細胞を、フローサイトメトリーにより分析した。図８Ｂ：Ｆｌｕｏ−４の時間平均蛍光強度中央値（ＭＦＩ）が報告されている。ＳＤは、各時点について細胞の間で計算されている（ｎ＝２０〜５０）。分析は、３回の実験のうちの１回から行われている。
【００８９】
【図９】図９Ａ〜Ｂは、オクタナール用量反応を評価する結果を示す。代表的な炎症促進性遺伝子（Ｃｃｌ４およびＮｏｓ２）へのオクタナール（Ｏｃｔ）用量反応分析。ＷＤで維持されたＡｐｏｅ−／−マウスの外植大動脈を、３つのオクタナール濃度（３μＭ、１０μＭ、および３０μＭ）で、ＬＰＳ（５００ｎｇ／ｍＬ）あり（図９Ａ）およびＬＰＳ（５００ｎｇ／ｍＬ）なし（図９Ｂ）で、１２時間、処理した。インキュベーション後、大動脈全体を、Ｑｉａｚｏｌ（５００μｌ；Ｑｉａｇｅｎ）へ移し、ｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳ（商標）Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）で消化した。ＲＮＡ抽出を、Ｑｉａｚｏｌ／ＲＮＡｅａｓｙマイクロキットハイブリッドプロトコール（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、実施した。全ＲＮＡを、ナノドロップ分光光度計（Ｐｅｑｌａｂ）を使用して、定量化し、５００ｎｇを、Ｏｍｎｉｓｃｒｉｐｔ逆転写酵素（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、ｃＤＮＡへ逆転写した。リアルタイムＰＣＲ反応を、ＲＴ２  ＳＹＢＲ  ｇｒｅｅｎ遺伝子発現アッセイプロトコール（Ｑｉａｇｅｎ）に従って実施した。ＲＴ２  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  ｑＰＣＲマスターミックスならびにマウスＣｃｌ２、Ｃｃｌ４、およびＧａｐｄｈについてのあらかじめ作製されたＲＴ２  ｑＰＣＲプライマーアッセイを使用した。相対的発現を、Ｇａｐｄｈ発現および未処理の対照に対して正規化した。データは、平均値±ＳＥＭとして提示されている。群あたりｎ＝３。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊＊ｐ＜０．００１。ｐは、一元配置ＡＮＯＶＡ検定、Ｔｕｋｅｙの多重比較検定により計算された。
【００９０】
【図１０】図１０Ａ〜Ｊは、オクタナール濃度が、西洋風食餌を供給されたマウスの血漿において増加し、アテローム性動脈硬化症を悪化させることを示している。図１０Ａ〜Ｃ：マウス血漿を、オクタナールについて、誘導体化および安定同位体希釈ＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより分析した。内部標準として、誘導体化反応の前に［２Ｈ１６］オクタナールを血漿へスパイクした。雄ＷＴ  Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ（Ｂ）およびＡｐｏｅ−／−（Ｃ）マウスに固形飼料（ＣＤ）または西洋風食餌（ＷＤ）を供給し、血漿を、オクタナール濃度について分析した（ｎ＝９／１０／群）。図１０Ｄ〜Ｇ：溶媒処理、オクタナール処理、またはシトラール処理されたマウスにおけるｅｎ  ｆａｃｅアテローム性動脈硬化症定量化。Ａｐｏｅ−／−マウス（ｎ＝９〜１１／群）にＷＤを８週間、供給し、その最後の４週間、３日ごとに合計１２回の注射で、溶媒（ＰＢＳ＋０．１％ＤＭＳＯ）、オクタナール（Ｏｃｔ、１０ｍｇ／ｋｇ）、またはシトラール（Ｃｉｔ、１０ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内に注射した。Ｄ）溶媒処理およびＯｃｔ処理されたマウスのピン止めされた大動脈弓の代表的な写真。スケールバー＝０．５ｃｍ。Ｅ）分析された総面積に占めるパーセンテージとしての大動脈弓におけるｅｎ  ｆａｃｅアテローム性動脈硬化病変サイズ評価。Ｆ）溶媒処理またはＣｉｔ処理されたマウスのピン止めされた大動脈弓の代表的な写真。スケールバー＝０．５ｃｍ。Ｇ）分析された総面積に占めるパーセンテージとして示された、シトラール処理されたマウスの大動脈弓病変サイズ定量化。図１０Ｈ〜Ｊ）雄Ｌｌｄｒ−／−マウス（ｎ＝８〜１０／群）に致死的に照射し、Ｒｔｐ１／Ｒｔｐ２＋／＋、Ｒｔｐ１／Ｒｔｐ２＋／−、Ｒｔｐ１／Ｒｔｐ２−／−骨髄細胞で再構成し、高コレステロール食餌を１２週間、供給した。（Ｈ）ウェスタンブロットまたは（Ｉ）フローサイトメトリーによる、ＢＭ移植されたマウス由来のＢＭＤＭのＯｌｆｒ２発現。Ｊ）分析された弓面積に占めるパーセントとしての大動脈弓病変サイズ定量化。データは、平均値±ＳＥＭとして提示されている。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊＊ｐ＜０．００１。ｐは、一元配置ＡＮＯＶＡ検定、多重比較のためのＤｕｎｎの検定と共のノンパラメトリックＫｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ検定、および独立ｔ検定により計算された。
【００９１】
【図１１Ａ】図１１Ａ〜Ｂは、オクタナール（図１１Ａ）およびシトラール（図１１Ｂ）で処理されたマウスにおける体重および血液学的パラメータを示す。総白血球中における好中球（ＮＥ）、リンパ球（ＬＹ）、単球（ＭＯ）、好酸球（ＥＯ）、および好塩基球（ＢＡ）の％が報告されている。
【図１１Ｂ】同上。
【００９２】
【図１２】図１２は、Ｒｔｐ１／Ｒｔｐ２＋／＋、Ｒｔｐ１／Ｒｔｐ２＋／−、Ｒｔｐ１／Ｒｔｐ２−／−由来骨髄細胞を移植され、かつ高コレステロール食餌で１２週間、処理された雄Ｌｌｄｒ−／−マウス（群あたりｎ＝８／１０）における体重および血液学的パラメータを示す。総白血球中における好中球（ＮＥ）、リンパ球（ＬＹ）、単球（ＭＯ）、好酸球（ＥＯ）、および好塩基球（ＢＡ）の％が報告されている。
【００９３】
【図１３】図１３は、ヒトマクロファージがＯｌｆｒ２オルソログＯＲ６Ａ２を発現し、ライゲーションが炎症促進性応答を活性化することを示す。図１３Ａ）ヒートマップ（行ごとに、赤色＝高い、青色＝低い）として示されたヒトアテローム性動脈硬化プラークおよびＰＢＭＣにおける嗅覚受容体およびアクセサリー遺伝子発現。データは、ＢＩＫＥデータベース（ＧＳＥ２１５４５）から抽出された。ＯＲ６Ａ２（緑色）を含む、プラークにおいて高度に発現した嗅覚受容体がハイライトされている。図１３Ｂ〜Ｅ）健康なヒトドナー由来の単球は、マクロファージ（ｈＭＤＭ）へ分化した。ｈＭＤＭを、処理せず、またはオクタナール（Ｏｃｔ、１０μＭ）単独と、ＬＰＳ（５００ｎｇ／ｍＬ）単独と、もしくは組合せ（ＬＰＳ＋Ｏｃｔ）と１２時間、インキュベートした。Ｂｉ）Ｇａｐｄｈ発現および未処理の対照に対して正規化されたＯＲ６Ａ２発現の定量的リアルタイムＰＣＲ分析。Ｂｉｉおよびｉｉｉ）ＭＦＩとして報告された、生きているｈＭＤＭ上のＯＲ６Ａ２発現のフローサイトメトリー分析。図１３Ｃ）ＯＲ６Ａ２（ＡＦ４８８）およびｈｏｅｃｈｓｔ色素（核）について染色されたｈＭＤＭの高分解能イメージング。図１３Ｄ）Ｇａｐｄｈおよび未処理の対照に対して正規化された、ヒトＩＬ６、ＴＮＦ、およびＮＯＳ２遺伝子発現についてのリアルタイムＰＣＲ定量化。図１３Ｅ）未処理のｈＭＤＭおよび刺激されたｈＭＤＭ（ｎ＝４／群）の上清におけるサイトカインビーズアレイおよびフローサイトメトリーによるＩＬ６およびＴＮＦタンパク質定量化。図１３Ｆ）ｈＭＤＭを、ＬＰＳ（５０ｎｇ／ｍＬ）で１８時間、処理し、そして、処理しないままにし、またはＯｃｔ単独と、Ｃｉｔ単独と、もしくは組合せとさらにインキュベートした。上清におけるＩＬ−１βタンパク質を、ヒトサイトカインビーズアレイおよびフローサイトメトリーにより定量化した。図１３Ｇ）ｈＭＤＭに、ＯＲ６Ａ２低分子干渉ＲＮＡ（ＳｉＯＲＡ６Ａ２）またはスクランブル対照ｓｉＲＮＡ（ＳｉＣｔｒｌ）をトランスフェクションした。４８時間後、ｈＭＤＭを、ＬＰＳ（５００ｎｇ／ｍＬ）単独またはＬＰＳ＋Ｏｃｔ（１０μＭ）で１２時間、処理した。ＯＲ６Ａ２、ＴＮＦ、ＩＬ６、およびＮＯＳ２遺伝子発現分析を、リアルタイムＰＣＲにより分析し、ＧａｐｄｈおよびＬＰＳ  ｓｉＣｔｒｌ処理された対照に対して正規化した。全ての実験は、少なくとも３回、反復された。データは、平均値±ＳＥＭとして提示されている。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊＊ｐ＜０．００１。ｐは、一元配置ＡＮＯＶＡ検定、Ｔｕｋｅｙの多重比較検定、および独立ｔ検定により計算された。
【００９４】
【図１４】図１４は、Ａｐｏｅ−／−マウスの大動脈における炎症促進性遺伝子ＣＣＬ２、ＣＣＬ４、およびＴｎｆの分析を示す。ＷＤで維持された（２週間）Ａｐｏｅ−／−マウスの外植大動脈を、ＬＰＳ（５００ｎｇ／ｍＬ）および異なる匂い分子（１０μＭ）で１２時間、処理し、または未処理のままにした。Ｃｃｌ２、Ｃｃｌ４、およびＴｎｆの相対的発現を、リアルタイムＰＣＲ分析により定量化し、２−ΔΔＣＴ法を適用して、Ｇａｐｄｈ発現および未処理の対照に対して正規化した。群あたりＮ＝３。
【００９５】
【図１５】図１５は、図１４における炎症促進性遺伝子Ｃｃｌ２、Ｃｃｌ４、およびＴｎｆの相対的発現の統計的分析を示す。Ｃｃｌ２、Ｃｃｌ４、およびＴｎｆについての平均相対的発現を、リアルタイムＰＣＲ分析により定量化し、２−ΔΔＣＴ法を適用して、Ｇａｐｄｈ発現および未処理の対照に対して正規化した。群あたりＮ＝３。ｐは、独立Ｔ検定により計算された。ｐ値＜０．０５が有意とみなされた。
【００９６】
【図１６】図１６は、オクタナール処理されたマウス由来の血漿における有意にモジュレートされたタンパク質を示す。オクタナール処理されたマウスおよび溶媒処理されたマウスからその８週間の終わりにＥＤＴＡ血漿試料を収集し、９２個のタンパク質の分析のために送った。Ｏｌｉｎｋマウス探索パネル（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｏｌｉｎｋ．ｃｏｍ／ｐｒｏｄｕｃｔｓ／ｍｏｕｓｅ−ｅｘｐｌｏｒａｔｏｒｙ／）を含む９２個のタンパク質の分析は、ＰＥＡ（Ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ  Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  Ａｓｓａｙ）テクノロジーを使用して実施された。ＰＥＡ技術は、試料内の各タンパク質と結合するオリゴヌクレオチド標識抗体プローブペアを使用する、タンパク質の同時的評価を可能にする。ＰＥＡ技術はまた、シグナルを発生させるために、正しくマッチした抗体ペアの二重認識と、配列特異的オリゴヌクレオチドからのＤＮＡバーコーディングを必要とすることにより、反復測定でタンパク質レベルの正確な評価を可能にする（ＰＬｏＳ  ＯＮＥ．  ２０１４；９（４））。アッセイは、ｌｏｇ  ２単位での倍の変化を測定する。この分析について、生データが、ｔ−統計値へ変換され、その統計値は、アッセイにわたって比較することができる。データは、平均値±ＳＥＭとして提示されている。独立ｔ検定により計算されたｐ値＜０．０５。
【００９７】
【図１７】図１７は、シトラール処理されたマウス由来の血漿における有意にモジュレートされたタンパク質を示す。シトラール処理されたマウスおよび溶媒処理されたマウスからその８週間の終わりにＥＤＴＡ血漿試料を収集し、９２個のタンパク質の分析のために送った。Ｏｌｉｎｋマウス探索パネル（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｏｌｉｎｋ．ｃｏｍ／ｐｒｏｄｕｃｔｓ／ｍｏｕｓｅ−ｅｘｐｌｏｒａｔｏｒｙ／）を含む９２個のタンパク質の分析は、上記で論じられた、ＰＥＡ（Ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ  Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  Ａｓｓａｙ）テクノロジーを使用して実施された。データは、平均値±ＳＥＭとして提示されている。ｐ値＜０．０５。ｐは独立ｔ検定により計算された。
【００９８】
【図１８】図１８は、オクタナール濃度について分析された、「無菌（ｇｅｒｍ  ｆｒｅｅ）」（微生物叢なし）（ＧＦ）マウス血漿および通常のＣ５７ＢＬ／６Ｊ（Ｃｔｒｌ）マウス血漿を示す（ｎ＝５／群）。
【発明を実施するための形態】
【００９９】
本発明において、いくつかの嗅覚受容体（Ｏｌｆｒ）、ならびに本質的なＯｌｆｒアクセサリー輸送タンパク質ＲＴＰ１（受容体輸送体タンパク質１）およびＲＴＰ２（受容体輸送体タンパク質２）が、ＡｐｏＥ−／−マウス大動脈から単離した血管マクロファージにおいて発現されることが示されている。さらに、低分子の匂い分子（オクタナール）による嗅覚受容体Ｏｌｆｒ２の刺激は、炎症性メディエーターであるＣＣＬ２（Ｃ−Ｃモチーフケモカインリガンド２）、ｉＮＯＳ（誘導型酸化窒素シンターゼ）、およびＴＮＦ（腫瘍壊死因子アルファ）の発現を誘導する；オクタナールおよびＬＰＳ（リポ多糖類）の両方に対する曝露は、炎症応答を悪化させ、このことは、炎症が微生物叢由来の匂い分子によって引き起こされ得ることを示している。
【０１００】
嗅覚受容体（Ｏｌｆｒ）は、揮発性化学リガンドまたは匂い分子によって結合されるクラスＡ、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）である。Ｏｌｆｒは、ラット鼻腔の嗅覚上皮細胞において初めて記載された１，２。Ｏｌｆｒは、３２０±２５アミノ酸残基の平均長を有し、特徴的な保存モチーフを共有する３。Ｏｌｆｒ遺伝子は、マウスにおいて約１１００個の遺伝子およびヒトにおいて約４００個の遺伝子を有する最大のＧＰＣＲファミリーを構成する４，５。多くのＯｌｆｒは、発現のために、輸送体Ｒｔｐ１および２、ならびに他の分子、例えば受容体発現増強タンパク質３（Ｒｅｅｐ３）を必要とする６。Ｏｌｆｒは、それに特化したＧタンパク質（Ｇαｏｌｆ、Ｇｎａｌ）７を通してアデニレートシクラーゼ３（Ａｃｙ３）に共役する８〜１０。Ｇα（ｏｌｆ）およびＡｃｙ３の活性化は、環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）の細胞内濃度の増加を誘導した後に、ｃＡＭＰゲートチャネルの活性化、細胞外Ｎａ＋およびＣａ２＋の流入、ならびに膜の脱分極を誘導する。
【０１０１】
本出願人らは、Ｏｌｆｒ２リガンドであるオクタナールが、ＬＰＳ誘導性炎症性サイトカインを有意に増強し、これはＯｌｆｒ２アンタゴニストであるシトラールによって遮断されることを発見した。オクタナールは、柑橘油に天然に存在し、食品香味添加剤として使用されている。これは、アテローム性動脈硬化症に対して効果を有し得る匂い分子（アルデヒド）の１クラスである。Ａｐｏｅ−／−マウスをシトラールによって処置すると、そのアテローム性動脈硬化症病変を約５０％低減させた。Ｏｌｆｒ２は、血管マクロファージにおいて高度に発現される。ｑＲＴ−ＰＣＲにより、Ｏｌｆｒ２発現がＬＰＳによって４倍増加すること、およびそのリガンドであるオクタナールを添加することによってさらに増加するが、オクタナール単独はＯｌｆｒ２発現に対して影響を有さないことが示された。Ｏｌｆｒ２のこの発現の増加は、タンパク質レベルで確認された。理論に拘束されたくはないが、本出願人らは、それが、いずれもＬＰＳによって誘導される輸送体Ｒｐｔ１および２の発現の増加によって引き起こされ得ると考えている。マウスのＬＰＳ処置もまた、Ｌｙ６Ｃ＋血中単球におけるＯｌｆｒ２発現を増加させ、程度は低いもののＬｙ６Ｃパトロール単球においても増加させたが、大動脈または血液中の他のいかなる免疫細胞においても増加させなかった（データは示していない）。
【０１０２】
血管マクロファージにおけるＯｌｆｒ２の可能性がある機能に取り組み始めるために、炎症性サイトカイン、ケモカイン、およびＭ１定義酵素ｉＮＯＳを、ｑＲＴ−ＰＣＲによって調べた。ＬＰＳによるＣＣＬ２（＝ＭＣＰ−１）およびＣＣＬ４の公知の誘導は、オクタナールによって有意に増強され、オクタナール単独（ＬＰＳなし）であっても、両方のケモカインの測定可能な増加をもたらした。ＬＰＳによって誘導されるｉＮＯＳ発現は、オクタナールによって大きく増強された。オクタナールは、ＴＮＦに対して最大の効果を有し、ＬＰＳ誘導性の増加が顕在化するにはＯｌｆｒ２のライゲーションが必要であった。ＣＣＬ２、ＣＣＬ４、およびＴＮＦの産生の増強は、サイトメトリックビーズアレイによってタンパク質レベルで確認された。オクタナールはまた、Ｌｙ６Ｃ＋およびＬｙ６Ｃ−血中単球の両方においてＴＮＦの発現を強化した。
【０１０３】
一部の微生物叢由来の分子、例えばＴＭＡＯは、アテローム性動脈硬化症を促進することが公知である。ＴＭＡＯは、コリンから腸内細菌によって産生される。これは、血小板活性化の増強を含む様々な効果を有する。他の微生物叢由来の匂い分子も識別されている。制限ではない例として、識別された微生物叢由来の匂い分子の一部には、ＴＭＡおよびその肝誘導体であるＴＭＡＯ、ｐ−クレゾールならびにその肝誘導体であるｐ−クレゾール硫酸およびｐ−クレゾールグルクロニド、インドールならびにその肝誘導体であるインドキシル−サルフェートおよびインドキシル−グルクロニド、トリプタミン、セロトニン（同様に内因性）、ＳＣＦＡ（酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、イソ吉草酸、コハク酸、乳酸）、フェニル酢酸ならびにその肝誘導体であるフェニルアセチル−グルタミンおよびフェニルアセチル−グリシン、インドール−酢酸、インドール−プロピオン酸、フェニル酢酸、フェニルプロピオン酸、安息香酸およびその肝誘導体である馬尿酸（同様に、２−ヒドロキシ安息香酸、３−ヒドロキシ安息香酸、および４−ヒドロキシ安息香酸、ならびにその肝誘導体）が含まれる。
【０１０４】
このように、ある特定の実施形態では、本明細書において識別された嗅覚受容体は、リウマチ性関節炎、若年性リウマチ性関節炎、変形性関節炎、乾癬性関節炎、糖尿病、多発性硬化症、脳脊髄炎、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、自己免疫性甲状腺炎、アトピー性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、乾癬、シェーグレン症候群、クローン病、アフタ性潰瘍、虹彩炎、結膜炎、角結膜炎、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、皮膚エリテマトーデス、強皮症、膣炎、直腸炎、らい性結節性紅斑、自己免疫性ぶどう膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、急性壊死性出血性脳症、特発性両側性進行性感音難聴、再生不良性貧血、赤芽球ろう、特発性血小板減少症、多発性軟骨炎、ウェゲナー肉芽腫症、慢性活動性肝炎、スティーブンス−ジョンソン症候群、特発性スプルー、扁平苔癬、グレーヴス病、サルコイドーシス、原発性胆汁性肝硬変、後部ぶどう膜炎、間質性肺線維症、橋本甲状腺炎、自己免疫性多腺症候群、インスリン依存性糖尿病、インスリン抵抗性糖尿病、免疫性不妊症、自己免疫性アジソン病、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、疱疹状皮膚炎、自己免疫性脱毛症、白斑、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少性紫斑病、悪性貧血、ギラン−バレー症候群、スティフマン症候群、急性リウマチ熱、交感性眼炎、グッドパスチャー症候群、全身性壊死性血管炎、抗リン脂質症候群もしくはアレルギー、ベーチェット病、重度複合免疫不全（ＳＣＩＤ）、リコンビナーゼ活性化遺伝子（ＲＡＧ１／２）欠損、アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）欠損、インターロイキン受容体共通ｇ鎖（ｃ）欠損、ヤヌス関連キナーゼ３（ＪＡＫ３）欠損および細網異形成症；原発性Ｔ細胞免疫不全、例えばディジョージ症候群、ヌード症候群、Ｔ細胞受容体欠損、ＭＨＣクラスＩＩ欠損、ＴＡＰ−２欠損（ＭＨＣクラスＩ欠損）、ＺＡＰ７０チロシンキナーゼ欠損およびプリンヌクレオチドホスホリラーゼ（ＰＮＰ）欠損、抗体欠損症、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症（ブルトン型チロシンキナーゼ欠損）、常染色体劣性無ガンマグロブリン血症、ミュー重鎖欠損、代替軽鎖（ｇ５／１４．１）欠損、高ＩｇＭ症候群：Ｘ連鎖（ＣＤ４０リガンド欠損）もしくは非Ｘ連鎖、Ｉｇ重鎖遺伝子欠失、ＩｇＡ欠損、ＩｇＧサブクラスの欠損（ＩｇＡ欠損を伴うまたは伴わない）、分類不能型免疫不全（ＣＶＩＤ）、正常な免疫グロブリンを伴う抗体欠損；乳児の一過性の低ガンマグロブリン血症、インターフェロンｇ受容体（ＩＦＮＧＲ１、ＩＦＮＧＲ２）欠損、インターロイキン１２もしくはインターロイキン１２受容体欠損、胸腺腫を伴う免疫不全、ウィスコット−アルドリッチ症候群（ＷＡＳタンパク質欠損）、毛細血管拡張性運動失調症（ＡＴＭ欠損）、Ｘ連鎖リンパ増殖症候群（ＳＨ２Ｄ１  Ａ／ＳＡＰ欠損）、または高ＩｇＥ症候群を含むがこれらに限定されない、望ましくないもしくは異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答、もしくは炎症、または自己免疫応答、障害、もしくは疾患の処置のためにモジュレートされる。
【０１０５】
ある特定の実施形態では、望ましくないもしくは異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答、もしくは炎症、または自己免疫応答、障害、もしくは疾患は、がんまたは病原体感染症の症状、副作用、または結果である。
【０１０６】
他の実施形態では、本明細書において識別された嗅覚受容体は、新生物障害、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍、他の部位への新生物、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍の転移、または原発新生物、新生物障害、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍から遠位の他の部位での転移性新生物、新生物障害、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍の形成もしくは確立の処置のためにモジュレートされる。
【０１０７】
一部の実施形態では、本発明は、表１、表２、表３、表４、表５、表６、表７、表８、表９、図２Ａおよび２Ｂのいずれかに記載の１つまたは複数の嗅覚受容体をモジュレートするステップを含む。ある特定の実施形態では、本発明は、表１、表２、表３、表４、表５、表６、表７、表８、表９、図２Ａ、および２Ｂのいずれかに記載の１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御するステップを含む。他の実施形態では、本発明は、表１、表２、表３、表４、表５、表６、表７、表８、表９、図２Ａ、および２Ｂのいずれかに記載の１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性を増強する、刺激する、誘導するか、または増加させるステップを含む。ある特定の実施形態では、本発明は、表１、表２、表３、表４、表５、表６、表７、表８、表９、図２Ａ、および２Ｂのいずれかに記載の１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御するステップ、ならびに表１、表２、表３、表４、表５、表６、表７、表８、表９、図２Ａ、および２Ｂのいずれかに記載の１つまたは複数の異なる嗅覚受容体の発現または活性を増強する、刺激する、誘導するか、または増加させるステップの組合せを含む。
【０１０８】
望ましくないまたは異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答、もしくは炎症、または自己免疫応答、障害、もしくは疾患の非制限的な例には、リウマチ性関節炎、若年性リウマチ性関節炎、変形性関節炎、乾癬性関節炎、糖尿病、多発性硬化症、脳脊髄炎、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、自己免疫性甲状腺炎、アトピー性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、乾癬、シェーグレン症候群、クローン病、アフタ性潰瘍、虹彩炎、結膜炎、角結膜炎、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、皮膚エリテマトーデス、強皮症、膣炎、直腸炎、らい性結節性紅斑、自己免疫性ぶどう膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、急性壊死性出血性脳症、特発性両側性進行性感音難聴、再生不良性貧血、赤芽球ろう、特発性血小板減少症、多発性軟骨炎、ウェゲナー肉芽腫症、慢性活動性肝炎、スティーブンス−ジョンソン症候群、特発性スプルー、扁平苔癬、グレーヴス病、サルコイドーシス、原発性胆汁性肝硬変、後部ぶどう膜炎、間質性肺線維症、橋本甲状腺炎、自己免疫性多腺症候群、インスリン依存性糖尿病、インスリン抵抗性糖尿病、免疫性不妊症、自己免疫性アジソン病、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、疱疹状皮膚炎、自己免疫性脱毛症、白斑、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少性紫斑病、悪性貧血、ギラン−バレー症候群、スティフマン症候群、急性リウマチ熱、交感性眼炎、グッドパスチャー症候群、全身性壊死性血管炎、抗リン脂質症候群もしくはアレルギー、ベーチェット病、重度複合免疫不全（ＳＣＩＤ）、リコンビナーゼ活性化遺伝子（ＲＡＧ１／２）欠損、アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）欠損、インターロイキン受容体共通ｇ鎖（ｃ）欠損、ヤヌス関連キナーゼ３（ＪＡＫ３）欠損および細網異形成症；原発性Ｔ細胞免疫不全、例えばディジョージ症候群、ヌード症候群、Ｔ細胞受容体欠損、ＭＨＣクラスＩＩ欠損、ＴＡＰ−２欠損（ＭＨＣクラスＩ欠損）、ＺＡＰ７０チロシンキナーゼ欠損およびプリンヌクレオチドホスホリラーゼ（ＰＮＰ）欠損、抗体欠損症、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症（ブルトン型チロシンキナーゼ欠損）、常染色体劣性無ガンマグロブリン血症、ミュー重鎖欠損、代替軽鎖（ｇ５／１４．１）欠損、高ＩｇＭ症候群：Ｘ連鎖（ＣＤ４０リガンド欠損）もしくは非Ｘ連鎖、Ｉｇ重鎖遺伝子欠失、ＩｇＡ欠損、ＩｇＧサブクラスの欠損（ＩｇＡ欠損を伴うまたは伴わない）、分類不能型免疫不全（ＣＶＩＤ）、正常な免疫グロブリンを伴う抗体欠損；乳児の一過性の低ガンマグロブリン血症、インターフェロンｇ受容体（ＩＦＮＧＲ１、ＩＦＮＧＲ２）欠損、インターロイキン１２もしくはインターロイキン１２受容体欠損、胸腺腫を伴う免疫不全、ウィスコット−アルドリッチ症候群（ＷＡＳタンパク質欠損）、毛細血管拡張性運動失調症（ＡＴＭ欠損）、Ｘ連鎖リンパ増殖症候群（ＳＨ２Ｄ１  Ａ／ＳＡＰ欠損）、または高ＩｇＥ症候群が含まれる。
【０１０９】
本発明の方法によって処置される新生物、新生物障害、腫瘍、がん、または悪性腫瘍の非制限的な例には、癌腫、肉腫、神経芽腫、子宮頸がん、肝細胞がん、中皮腫、神経膠芽腫、骨髄腫、リンパ腫、白血病、腺腫、腺癌、神経膠腫、神経膠芽腫、網膜芽腫、星細胞種、乏突起膠細胞腫、髄膜腫、リンパ肉腫、脂肪肉腫、骨肉腫、軟骨肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、線維肉腫、もしくは黒色腫、ならびに肺、甲状腺、頭部もしくは頸部、鼻咽頭、咽頭、鼻もしくは副鼻腔、脳、脊椎、乳房、副腎、下垂体、甲状腺、リンパ、消化管（口、食道、胃、十二指腸、回腸、空腸（小腸）、結腸、直腸）、泌尿生殖器管（子宮、卵巣、子宮頸部、子宮内膜、膀胱、精巣、陰茎、前立腺）、腎臓、膵臓、肝臓、骨、骨髄、リンパ、血液、筋肉、または皮膚の新生物、新生物障害、腫瘍、がん、または悪性腫瘍が含まれる。
【０１１０】
本明細書において、必要とする対象における免疫応答をモジュレートする方法を開示する。一部の実施形態では、対象における免疫応答をモジュレートする方法は、１つまたは複数の嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現または活性をモジュレートするステップを含む。ＯＬＦＲは、ｉｎ  ｖｉｖｏで細胞によって発現され得る。細胞は、動物細胞であり得、ただし、この細胞は嗅覚細胞ではない。細胞はマクロファージであり得る。マクロファージは血管マクロファージであり得る。
【０１１１】
モジュレーションは、（ＯＬＦＲ）の発現を阻害するかまたは（ＯＬＦＲ）を非活性化する作用剤の有効量を対象に投与するステップを含む方法によって、免疫応答を阻害する、減少させる、低減する、抑制する、制限するか、または制御するステップの１つまたは複数を含み得る。モジュレーションは、（ＯＬＦＲ）の発現を阻害するかまたは（ＯＬＦＲ）を非活性化する作用剤の有効量を対象に投与するステップを含む方法によって、望ましくないまたは異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答、または炎症を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御するステップの１つまたは複数を含み得る。モジュレーションは、（ＯＬＦＲ）の発現を阻害するかまたは（ＯＬＦＲ）を非活性化する作用剤の有効量を対象に投与するステップを含む方法によって、対象における自己免疫応答、障害、または疾患を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御するステップの１つまたは複数を含み得る。モジュレーションは、対象における望ましくないもしくは異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答、もしくは炎症の有害な症状、または自己免疫応答、障害、もしくは疾患の有害な症状を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御するステップの１つまたは複数を含み得る。
【０１１２】
本明細書に開示される方法または使用は、有害な症状をモジュレートするステップを含み得る。望ましくないもしくは異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答、もしくは炎症の有害な症状、または自己免疫応答、障害、もしくは疾患の有害な症状は、腫脹、疼痛、発疹、頭痛、発熱、悪心、下痢、鼓腸、無気力、関節硬直、または組織もしくは細胞の損傷であり得る。望ましくないもしくは異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答、もしくは炎症の有害な症状、または自己免疫応答、障害、もしくは疾患の有害な症状は、慢性または急性であり得る。
【０１１３】
免疫障害、炎症応答、炎症、自己免疫応答障害、または自己免疫疾患は、リウマチ性関節炎、若年性リウマチ性関節炎、変形性関節炎、乾癬性関節炎、糖尿病、多発性硬化症、脳脊髄炎、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、自己免疫性甲状腺炎、アトピー性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、乾癬、シェーグレン症候群、クローン病、アフタ性潰瘍、虹彩炎、結膜炎、角結膜炎、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、皮膚エリテマトーデス、強皮症、膣炎、直腸炎、らい性結節性紅斑、自己免疫性ぶどう膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、急性壊死性出血性脳症、特発性両側性進行性感音難聴、再生不良性貧血、赤芽球ろう、特発性血小板減少症、多発性軟骨炎、ウェゲナー肉芽腫症、慢性活動性肝炎、スティーブンス−ジョンソン症候群、特発性スプルー、扁平苔癬、グレーヴス病、サルコイドーシス、原発性胆汁性肝硬変、後部ぶどう膜炎、間質性肺線維症、橋本甲状腺炎、自己免疫性多腺症候群、インスリン依存性糖尿病、インスリン抵抗性糖尿病、免疫性不妊症、自己免疫性アジソン病、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、疱疹状皮膚炎、自己免疫性脱毛症、白斑、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少性紫斑病、悪性貧血、ギラン−バレー症候群、スティフマン症候群、急性リウマチ熱、交感性眼炎、グッドパスチャー症候群、全身性壊死性血管炎、抗リン脂質症候群もしくはアレルギー、ベーチェット病、重度複合免疫不全（ＳＣＩＤ）、リコンビナーゼ活性化遺伝子（ＲＡＧ１／２）欠損、アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）欠損、インターロイキン受容体共通ｇ鎖（ｃ）欠損、ヤヌス関連キナーゼ３（ＪＡＫ３）欠損および細網異形成症；原発性Ｔ細胞免疫不全、例えばディジョージ症候群、ヌード症候群、Ｔ細胞受容体欠損、ＭＨＣクラスＩＩ欠損、ＴＡＰ−２欠損（ＭＨＣクラスＩ欠損）、ＺＡＰ７０チロシンキナーゼ欠損およびプリンヌクレオチドホスホリラーゼ（ＰＮＰ）欠損、抗体欠損症、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症（ブルトン型チロシンキナーゼ欠損）、常染色体劣性無ガンマグロブリン血症、ミュー重鎖欠損、代替軽鎖（ｇ５／１４．１）欠損、高ＩｇＭ症候群：Ｘ連鎖（ＣＤ４０リガンド欠損）もしくは非Ｘ連鎖、Ｉｇ重鎖遺伝子欠失、ＩｇＡ欠損、ＩｇＧサブクラスの欠損（ＩｇＡ欠損を伴うまたは伴わない）、分類不能型免疫不全（ＣＶＩＤ）、正常な免疫グロブリンを伴う抗体欠損；乳児の一過性の低ガンマグロブリン血症、インターフェロンｇ受容体（ＩＦＮＧＲ１、ＩＦＮＧＲ２）欠損、インターロイキン１２もしくはインターロイキン１２受容体欠損、胸腺腫を伴う免疫不全、ウィスコット−アルドリッチ症候群（ＷＡＳタンパク質欠損）、毛細血管拡張性運動失調症（ＡＴＭ欠損）、Ｘ連鎖リンパ増殖症候群（ＳＨ２Ｄ１  Ａ／ＳＡＰ欠損）、または高ＩｇＥ症候群を含み得る。
【０１１４】
モジュレーションは、ＯＬＦＲの発現を阻害するかまたはＯＬＦＲを非活性化する作用剤の有効量を対象に投与するステップを含む方法によって、有害な心血管事象または心血管疾患を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御するステップの１つまたは複数を含み得る。有害な心血管疾患事象または心血管疾患は、冠動脈疾患、末梢動脈疾患、脳血管疾患、腎動脈疾患、卒中、心筋梗塞（心臓発作）、虚血性心不全、一過性虚血性発作または脳外傷、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化プラーク形成、または血中コレステロールの上昇を含み得る。
【０１１５】
モジュレーションは、ＯＬＦＲの発現を阻害するかまたはＯＬＦＲを非活性化する作用剤の有効量を対象に投与するステップを含む方法によって、アテローム性動脈硬化症を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御するステップの１つまたは複数を含み得る。
【０１１６】
方法は、ＯＬＦＲの発現を増加させるかまたはＯＬＦＲを活性化する作用剤の有効量を対象に投与するステップを含む方法によって、対象におけるウイルス、細菌、もしくは真菌感染症、または新生物、新生物障害、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍を低減または阻害するステップの１つまたは複数を含み得る。
【０１１７】
モジュレーションは、ＯＬＦＲの発現または活性をモジュレートする作用剤の有効量を対象に投与するステップを含む方法によって、新生物、新生物障害、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍、他の部位への新生物、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍の転移、または原発新生物、新生物障害、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍から遠位の他の部位での転移性新生物、新生物障害、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍の形成もしくは確立、またはウイルス、細菌、もしくは真菌感染症の有害な症状を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御するステップの１つまたは複数を含み得る。
【０１１８】
ＯＬＦＲは、ＯＬＦＲの活性を刺激または増強する作用剤の有効量の投与によって、対象において増強または刺激され得る。ＯＬＦＲは、ＯＬＦＲの投与によって、対象において増強または刺激され得る。ＯＬＦＲは、ＯＬＦＲをコードするヌクレオチドの投与によって、対象において増強または刺激され得る。ＯＬＦＲは、ＯＬＦＲリガンドの投与によって、対象において増強または刺激され得る。ＯＬＦＲは、受容体輸送タンパク質１（ＲＴＰ１）またはＲＴＰ１をコードするヌクレオチドの投与によって、対象において増強または刺激され得る。ＯＬＦＲは、ＲＴＰ２またはＲＴＰ２をコードするヌクレオチドの投与によって、対象において増強または刺激され得る。ＯＬＦＲは、受容体発現増強タンパク質１（ＲＥＥＰ１）またはＲＥＥＰ１をコードするヌクレオチドの投与によって、対象において増強または刺激され得る。ＯＬＦＲは、アミノアシラーゼ３（Ａｃｙ３）またはＡｃｙ３をコードするヌクレオチドの投与によって、対象において増強または刺激され得る。ＯＬＦＲは、グアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｏｌｆ）サブユニットアルファ（Ｇｎａｌ）またはＧｎａｌをコードするヌクレオチドの投与によって、対象において増強または刺激され得る。
【０１１９】
本明細書に開示される方法を使用して、新生物、新生物障害、腫瘍、がん、または悪性腫瘍を処置してもよい。本明細書において、新生物、新生物障害、腫瘍、がん、または悪性腫瘍の処置のための医薬の調製におけるＯＬＦＲの活性または発現をモジュレートする作用剤の使用をさらに開示する。本明細書において、新生物、新生物障害、腫瘍、がん、または悪性腫瘍の処置のための医薬の調製におけるＯＬＦＲの活性または発現を増加させる作用剤の使用をさらに開示する。本明細書において、新生物、新生物障害、腫瘍、がん、または悪性腫瘍の処置のための医薬の調製におけるＯＬＦＲリガンドの使用をさらに開示する。本明細書において、新生物、新生物障害、腫瘍、がん、または悪性腫瘍の処置のための医薬の調製におけるオクタナールの使用を開示する。本明細書において、新生物、新生物障害、腫瘍、がん、または悪性腫瘍の処置のためのＯＬＦＲリガンドの使用を開示する。本明細書において、新生物、新生物障害、腫瘍、がん、または悪性腫瘍の処置のためのオクタナールの使用をさらに開示する。
【０１２０】
処置される新生物、新生物障害、腫瘍、がん、または悪性腫瘍は、癌腫、肉腫、神経芽腫、子宮頸がん、肝細胞がん、中皮腫、神経膠芽腫、骨髄腫、リンパ腫、白血病、腺腫、腺癌、神経膠腫、神経膠芽腫、網膜芽腫、星細胞種、乏突起膠細胞腫、髄膜腫、リンパ肉腫、脂肪肉腫、骨肉腫、軟骨肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、線維肉腫、もしくは黒色腫；または肺、甲状腺、頭部もしくは頸部、鼻咽頭、咽頭、鼻もしくは副鼻腔、脳、脊椎、乳房、副腎、下垂体、甲状腺、リンパ、消化管（口、食道、胃、十二指腸、回腸、空腸（小腸）、結腸、直腸）、泌尿生殖器管（子宮、卵巣、子宮頸部、子宮内膜、膀胱、精巣、陰茎、前立腺）、腎臓、膵臓、肝臓、骨、骨髄、リンパ、血液、筋肉、または皮膚の新生物、新生物障害、腫瘍、がん、または悪性腫瘍であり得る。
【０１２１】
本明細書で開示される方法および使用は、ＯＬＦＲの活性または発現をモジュレートするステップを含み得る。ＯＬＦＲは、表１〜９、表２Ａおよび２Ｂのいずれか１つに記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表１に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表２に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表３に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表４に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表５に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表６に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表７に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表８に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表９に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、図２Ａに記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、図２Ｂに記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ７Ｃ１、ＯＲ７Ｄ４、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ１１Ｈ６、ＯＲ４Ｅ２、ＯＲ１０Ｈ１、およびＯＲ６Ａ２からなる群から選択され得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ７Ｃ１であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ７Ｄ４であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ１０Ａ６であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ１１Ｈ６であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ４Ｅ２であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ１０Ｈ１であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ６Ａ２であり得る。
【０１２２】
作用剤は、ＯＬＦＲに結合するか、もしくはリガンドに対するＯＬＦＲの結合を遮断するリガンドもしくは低分子、または細胞によるＯＬＦＲの発現を阻害する作用剤の群から選択され得る。作用剤は、ＯＬＦＲに結合するリガンドまたは低分子であり得る。作用剤は、リガンドに対するＯＬＦＲの結合を遮断するリガンドまたは低分子であり得る。作用剤は、細胞によるＯＬＦＲの発現を阻害し得る。作用剤は、ＯＬＦＲに結合する抗体、断片、もしくは模倣体、またはＯＬＦＲリガンド、抗ＯＬＦＲ遺伝子サイレンシング剤、またはオクタナール、またはそれらのプロドラッグもしくは溶媒和物の群から選択され得る。作用剤は、ＯＬＦＲに結合する抗体、断片、または模倣体であり得る。作用剤は、ＯＬＦＲリガンドに結合する抗体、断片、または模倣体であり得る。作用剤は、抗ＯＬＦＲ遺伝子サイレンシング剤であり得る。作用剤は、オクタナール、ヘプタナール、またはそれらのプロドラッグもしくは溶媒和物であり得る。
【０１２３】
作用剤は、細胞の形質膜へのＯＬＦＲの輸送を増加させることによってＯＬＦＲを活性化し得る。作用剤は、受容体輸送タンパク質１（ＲＴＰ１）、ＲＴＰ２、受容体発現増強タンパク質１（ＲＥＥＰ１）、アミノアシラーゼ３（Ａｃｙ３）、またはグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｏｌｆ）サブユニットアルファ（Ｇｎａｌ）の群から選択されるタンパク質であり得る。
【０１２４】
作用剤は、受容体輸送タンパク質１（ＲＴＰ１）、ＲＴＰ２、受容体発現増強タンパク質１（ＲＥＥＰ１）、アミノアシラーゼ３（Ａｃｙ３）、およびグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｏｌｆ）サブユニットアルファ（Ｇｎａｌ）からなる群から選択されるタンパク質をコードするヌクレオチドであり得る。
【０１２５】
免疫応答は、炎症性サイトカインの発現または分泌を増加させる作用剤を投与するステップを含む方法によって刺激され得る。炎症性サイトカインは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、Ｃ−Ｃモチーフケモカインリガンド２（ＣＣＬ２）、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターロイキン１−ベータ（ＩＬ−１Ｂ）、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、および酸化窒素シンターゼ２（ＮＯＳ２）からなる群から選択され得る。炎症性サイトカインは、ＴＮＦであり得る。炎症性サイトカインは、ＣＣＬ２であり得る。炎症性サイトカインは、ＣＣＬ４であり得る。炎症性サイトカインは、ＣＣＬ５であり得る。炎症性サイトカインは、ＩＬ−６であり得る。炎症性サイトカインは、ＩＬ−１Ｂであり得る。炎症性サイトカインは、ＩＬ−１８であり得る。炎症性サイトカインは、ＮＯＳ２であり得る。
【０１２６】
免疫応答を増加させるかまたは刺激する
【０１２７】
本明細書において、必要とする対象における免疫応答を増加させるかまたは刺激する方法を開示する。一部の実施形態では、方法は、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）を対象に投与するステップを含む。あるいはまたはさらに、方法は、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現または活性を増加させる作用剤を対象に投与し、それによって対象における免疫応答を増加させるかまたは刺激するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を増加させるかまたは促進する作用剤を対象に投与し、それによって対象における免疫応答を増加させるステップを含む。本明細書において、免疫応答を増加させるかまたは刺激するための医薬の製造における嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の使用をさらに開示する。本明細書において、免疫応答を増加させるかまたは刺激するための医薬の製造における嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現または活性を増加させる作用剤の使用を開示する。本明細書において、免疫応答を増加させるかまたは刺激するための医薬の製造における、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を増加させるかまたは促進する作用剤の使用を開示する。ＯＬＦＲは、表１に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表２に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表３に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表４に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表５に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表６に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表７に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表８に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表９に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、図２Ａに記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、図２Ｂに記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ７Ｃ１、ＯＲ７Ｄ４、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ１１Ｈ６、ＯＲ４Ｅ２、ＯＲ１０Ｈ１、およびＯＲ６Ａ２からなる群から選択され得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ７Ｃ１であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ７Ｄ４であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ１０Ａ６であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ１１Ｈ６であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ４Ｅ２であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ１０Ｈ１であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ６Ａ２であり得る。作用剤は、ＯＬＦＲに結合するリガンドであり得る。作用剤は、ＯＬＦＲアゴニストであり得る。アゴニストは、オクタナール、クマリン、ヘリオナール、リリアール、ｂ−イオノン、アンドロステノン、アンドロスタジエノン、キャラメルフラノン、３−フェニルプロピルプロピオネート、オイゲノール、エチルバニリン、２−エチルフェンコール、イソ吉草酸、ノナン酸、ブチリル乳酸ブチル、酪酸、イソ吉草酸、プロピオン酸、酢酸Ｎ−アミル、酢酸オイゲノール、サンダルウッド、Ｓ−（−）−シトロネロール、Ｓ−（−）−シトロネラール、（＋）−カルビン、（−）カルボン、（＋）カルボン、リナロール、ブルゲオナール、アセトフェノン、酪酸アミル、ノナンチオール、フェニル酢酸アリル、酢酸Ｎ−アミル、ムスコン、イソオイゲノール、オイゲノールメチルエーテル、１−ヘキサノール、１−ヘプタノール、１−オクタノール、セロリケトン、アニスアルデヒド、（＋）−メントール、バニリン、グアイアコール、リラール、ヘプタン酸エチル、オクタン酸メチル、ノナナール、１−ノナノール、２−ノナノール、３−オクタノン、３−ノナノン、デシルアルデヒドからなる群から選択され得る。アゴニストは、表８に提供されるアゴニストの一覧から選択され得る。作用剤は、オクタナール、ヘプタナール、またはそれらのプロドラッグもしくは溶媒和物であり得る。作用剤は、細胞の形質膜へのＯＬＦＲの輸送を増加させることによってＯＬＦＲを活性化し得る。作用剤は、受容体輸送タンパク質１（ＲＴＰ１）、ＲＴＰ２、受容体発現増強タンパク質１（ＲＥＥＰ１）、アミノアシラーゼ３（Ａｃｙ３）、およびグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｏｌｆ）サブユニットアルファ（Ｇｎａｌ）からなる群から選択されるタンパク質であり得る。作用剤は、受容体輸送タンパク質１（ＲＴＰ１）、ＲＴＰ２、受容体発現増強タンパク質１（ＲＥＥＰ１）、アミノアシラーゼ３（Ａｃｙ３）、およびグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｏｌｆ）サブユニットアルファ（Ｇｎａｌ）からなる群から選択されるタンパク質をコードするヌクレオチドを含み得る。免疫応答を刺激するステップは、炎症性サイトカインの発現または分泌を増加させるステップを含み得る。炎症性サイトカインは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、Ｃ−Ｃモチーフケモカインリガンド２（ＣＣＬ２）、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、インターロイキン６（ＩＬ−６）、ＩＬ−１Ｂ、ＩＬ−１８、および酸化窒素シンターゼ２（ＮＯＳ２）からなる群から選択され得る。
【０１２８】
一部の実施形態では、免疫応答は、作用剤によって処置されていない対象における免疫応答と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、または１００％増加するかまたは刺激される。免疫応答は、作用剤によって処置されていない対象における免疫応答と比較して、少なくとも１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０倍またはそれより高く増加し得るかまたは刺激され得る。免疫応答は、作用剤によって処置されていない対象における免疫応答と比較して、少なくとも１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００倍またはそれより多く増加し得るかまたは刺激され得る。免疫応答は、１つまたは複数の炎症性サイトカインのレベルを検出することによって測定され得る。あるいはまたはさらに、免疫応答は、１つまたは複数の炎症性サイトカインの発現を検出することによって測定される。一部の実施形態では、免疫応答は、１つまたは複数の循環中サイトカインおよび／またはケモカインを検出することによって測定される。一部の実施形態では、免疫応答は、活性化ＣＤ８  Ｔ細胞、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｈ１７細胞、ＴＦＨ細胞、ＴＩＰ−ＤＣ、およびＭ１極性化マクロファージから選択される１つまたは複数の細胞を検出することによって測定される。一部の実施形態では、免疫応答は、Ｔ細胞活性化の１つまたは複数のマーカーを検出することによって測定される。一部の実施形態では、免疫応答は、１つまたは複数の腫瘍抗原に対する抗体価レベルを検出することによって測定される。一部の実施形態では、１つまたは複数の炎症性サイトカインの発現レベルの増加は、免疫応答の増加を示している。一部の実施形態では、循環中のサイトカインおよび／またはケモカインの量の増加は、免疫応答の増加を示している。一部の実施形態では、１つまたは複数の細胞の量の増加は、免疫応答の増加を示している。一部の実施形態では、検出されたＴ細胞活性化の１つまたは複数のマーカーの量の増加は、免疫応答の増加を示している。一部の実施形態では、検出された抗体価レベルの増加は、免疫応答の増加を示している。あるいはまたはさらに、免疫応答は、ＥＬＩＳＡ、サイトメトリックビーズアレイ、Ｏｌｉｎｋプロテオミックおよびフローサイトメトリーなどの方法によって測定される。
【０１２９】
免疫応答を抑制すること
【０１３０】
本明細書において、必要とする対象における免疫応答を抑制する方法を開示する。一部の実施形態では、方法は、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現または活性を減少させる作用剤を対象に投与し、それによって対象における免疫応答を抑制するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を阻害する作用剤を対象に投与し、それによって対象における免疫応答を抑制するステップを含む。本明細書において、免疫応答を抑制するための医薬の製造におけるＯＬＦＲの発現または活性を減少させる作用剤の使用をさらに開示する。本明細書において、免疫応答を抑制するための医薬の製造における、細胞の形質膜へのＯＬＦＲの輸送を阻害する作用剤の使用をさらに開示する。ＯＬＦＲは、表１に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表２に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表３に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表４に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表５に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表６に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表７に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表８に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表９に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、図２Ａに記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、図２Ｂに記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ７Ｃ１、ＯＲ７Ｄ４、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ１１Ｈ６、ＯＲ４Ｅ２、ＯＲ１０Ｈ１、およびＯＲ６Ａ２からなる群から選択され得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ７Ｃ１であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ７Ｄ４であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ１０Ａ６であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ１１Ｈ６であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ４Ｅ２であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ１０Ｈ１であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ６Ａ２であり得る。作用剤は、遺伝子サイレンシング剤であり得る。遺伝子サイレンシング剤は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）分子、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、およびＣｌｕｓｔｅｒｅｄ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ  Ｓｈｏｒｔ  Ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ  Ｒｅｐｅａｔｓ（ＣＲＩＳＰＲ）酵素からなる群から選択され得る。ＲＮＡｉ分子は、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、およびマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）からなる群から選択され得る。作用剤は、ＯＬＦＲとそのリガンドとの結合を阻害することによって、ＯＬＦＲの活性を減少させ得る。作用剤はＯＬＦＲアンタゴニストであり得る。ＯＬＦＲアンタゴニストは、シトラール、それらの溶媒和物またはプロドラッグであり得る。ＯＬＦＲアンタゴニストは、メチルシンナムアルデヒド、ヒドロシンナムアルデヒド、ブルゲオナール、ウンデカナール、メチルイソオイゲノール、それらの溶媒和物もしくはプロドラッグであり得る。アンタゴニストは、表８に提供されるアンタゴニストの一覧またはそれらの溶媒和物もしくはプロドラッグから選択され得る。作用剤は、細胞の形質膜へのＯＬＦＲの輸送を阻害することによって、ＯＬＦＲの活性を減少させ得る。作用剤は、ＯＬＦＲに結合する抗体、その断片または模倣体であり得る。
【０１３１】
一部の実施形態では、免疫応答は、作用剤によって処置されていない対象における免疫応答と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、または１００％抑制または減少される。免疫応答は、作用剤によって処置されていない対象における免疫応答と比較して、少なくとも１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０倍またはそれより多く抑制または減少され得る。免疫応答は、作用剤によって処置されていない対象における免疫応答と比較して、少なくとも１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００倍またはそれより多く抑制または減少され得る。免疫応答は、１つまたは複数の炎症性サイトカインのレベルを検出することによって測定され得る。あるいはまたはさらに、免疫応答は、１つまたは複数の炎症性サイトカインの発現を検出することによって測定される。一部の実施形態では、免疫応答は、１つまたは複数の循環中サイトカインおよび／またはケモカインを検出することによって測定される。一部の実施形態では、免疫応答は、活性化ＣＤ８  Ｔ細胞、Ｔｈ１細胞、Ｔｈ２細胞、Ｔｈ１７細胞、ＴＦＨ細胞、ＴＩＰ−ＤＣ、およびＭ１極性化マクロファージから選択される１つまたは複数の細胞を検出することによって測定される。一部の実施形態では、免疫応答は、Ｔ細胞活性化の１つまたは複数のマーカーを検出することによって測定される。一部の実施形態では、免疫応答は、１つまたは複数の腫瘍抗原に対する抗体価レベルを検出することによって測定される。一部の実施形態では、１つまたは複数の炎症性サイトカインの発現レベルの減少は、免疫応答の減少または抑制を示している。一部の実施形態では、循環中のサイトカインおよび／またはケモカインの量の減少は、免疫応答の減少または抑制を示している。一部の実施形態では、１つまたは複数の細胞の量の減少は、免疫応答の減少または抑制を示している。一部の実施形態では、検出されたＴ細胞活性化の１つまたは複数のマーカーの量の減少は、免疫応答の減少または抑制を示している。一部の実施形態では、検出された抗体価レベルの減少は、免疫応答の減少または抑制を示している。あるいはまたはさらに、免疫応答は、ＥＬＩＳＡ、サイトメトリックビーズアレイ、Ｏｌｉｎｋプロテオミックおよびフローサイトメトリーなどの方法によって測定される。
【０１３２】
自己免疫疾患
【０１３３】
本明細書において、必要とする対象における自己免疫疾患を処置する方法をさらに開示する。一部の実施形態では、方法は、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現または活性を減少させる作用剤を対象に投与するステップを含む。あるいはまたはさらに、必要とする対象における自己免疫疾患を処置する方法は、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を阻害する作用剤を対象に投与するステップを含む。本明細書において、自己免疫疾患を処置するための医薬の製造における嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現または活性を減少させる作用剤の使用をさらに開示する。同様に、本明細書において、自己免疫疾患を処置するために、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現または活性を減少させる作用剤の使用も開示する。本明細書において、自己免疫疾患を処置するための医薬の製造における、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を阻害する作用剤の使用をさらに開示する。同様に、本明細書において、自己免疫疾患を処置するための、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を阻害する作用剤の使用も開示する。ＯＬＦＲは、表１に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表２に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表３に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表４に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表５に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表６に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表７に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表８に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表９に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、図２Ａに記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、図２Ｂに記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ７Ｃ１、ＯＲ７Ｄ４、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ１１Ｈ６、ＯＲ４Ｅ２、ＯＲ１０Ｈ１、およびＯＲ６Ａ２からなる群から選択され得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ７Ｃ１であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ７Ｄ４であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ１０Ａ６であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ１１Ｈ６であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ４Ｅ２であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ１０Ｈ１であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ６Ａ２であり得る。作用剤は、遺伝子サイレンシング剤であり得る。遺伝子サイレンシング剤は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）分子、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、およびＣｌｕｓｔｅｒｅｄ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ  Ｓｈｏｒｔ  Ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ  Ｒｅｐｅａｔｓ（ＣＲＩＳＰＲ）酵素からなる群から選択され得る。ＲＮＡｉ分子は、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、およびマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）からなる群から選択され得る。作用剤は、ＯＬＦＲとそのリガンドとの結合を阻害することによって、ＯＬＦＲの活性を減少させ得る。作用剤はＯＬＦＲアンタゴニストであり得る。ＯＬＦＲアンタゴニストは、シトラール、それらの溶媒和物またはプロドラッグであり得る。ＯＬＦＲアンタゴニストは、メチルシンナムアルデヒド、ヒドロシンナムアルデヒド、ブルゲオナール、ウンデカナール、メチルイソオイゲノール、それらの溶媒和物もしくはプロドラッグであり得る。アンタゴニストは、表９に提供されるアンタ��ニストの一覧またはそれらの溶媒和物もしくはプロドラッグから選択され得る。
【０１３４】
作用剤は、細胞の形質膜へのＯＬＦＲの輸送を阻害することによって、ＯＬＦＲの活性を減少させ得る。作用剤は、ＯＬＦＲに結合する抗体、その断片または模倣体であり得る。
【０１３５】
一部の実施形態では、自己免疫疾患は、リウマチ性関節炎、若年性リウマチ性関節炎、変形性関節炎、乾癬性関節炎、糖尿病、多発性硬化症、脳脊髄炎、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、自己免疫性甲状腺炎、アトピー性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、乾癬、シェーグレン症候群、クローン病、アフタ性潰瘍、虹彩炎、結膜炎、角結膜炎、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、皮膚エリテマトーデス、強皮症、膣炎、直腸炎、らい性結節性紅斑、自己免疫性ぶどう膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、急性壊死性出血性脳症、特発性両側性進行性感音難聴、再生不良性貧血、赤芽球ろう、特発性血小板減少症、多発性軟骨炎、ウェゲナー肉芽腫症、慢性活動性肝炎、スティーブンス−ジョンソン症候群、特発性スプルー、扁平苔癬、グレーヴス病、サルコイドーシス、原発性胆汁性肝硬変、後部ぶどう膜炎、間質性肺線維症、橋本甲状腺炎、自己免疫性多腺症候群、インスリン依存性糖尿病、インスリン抵抗性糖尿病、免疫性不妊症、自己免疫性アジソン病、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、疱疹状皮膚炎、自己免疫性脱毛症、白斑、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少性紫斑病、悪性貧血、ギラン−バレー症候群、スティフマン症候群、急性リウマチ熱、交感性眼炎、グッドパスチャー症候群、全身性壊死性血管炎、抗リン脂質症候群もしくはアレルギー、ベーチェット病、重度複合免疫不全（ＳＣＩＤ）、リコンビナーゼ活性化遺伝子（ＲＡＧ１／２）欠損、アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）欠損、インターロイキン受容体共通ｇ鎖（ｃ）欠損、ヤヌス関連キナーゼ３（ＪＡＫ３）欠損および細網異形成症；原発性Ｔ細胞免疫不全、例えばディジョージ症候群、ヌード症候群、Ｔ細胞受容体欠損、ＭＨＣクラスＩＩ欠損、ＴＡＰ−２欠損（ＭＨＣクラスＩ欠損）、ＺＡＰ７０チロシンキナーゼ欠損およびプリンヌクレオチドホスホリラーゼ（ＰＮＰ）欠損、抗体欠損症、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症（ブルトン型チロシンキナーゼ欠損）、常染色体劣性無ガンマグロブリン血症、ミュー重鎖欠損、代替軽鎖（ｇ５／１４．１）欠損、高ＩｇＭ症候群：Ｘ連鎖（ＣＤ４０リガンド欠損）もしくは非Ｘ連鎖、Ｉｇ重鎖遺伝子欠失、ＩｇＡ欠損、ＩｇＧサブクラスの欠損（ＩｇＡ欠損を伴うまたは伴わない）、分類不能型免疫不全（ＣＶＩＤ）、正常な免疫グロブリンを伴う抗体欠損；乳児の一過性の低ガンマグロブリン血症、インターフェロンｇ受容体（ＩＦＮＧＲ１、ＩＦＮＧＲ２）欠損、インターロイキン１２もしくはインターロイキン１２受容体欠損、胸腺腫を伴う免疫不全、ウィスコット−アルドリッチ症候群（ＷＡＳタンパク質欠損）、毛細血管拡張性運動失調症（ＡＴＭ欠損）、Ｘ連鎖リンパ増殖症候群（ＳＨ２Ｄ１  Ａ／ＳＡＰ欠損）、または高ＩｇＥ症候群からなる群から選択される。
【０１３６】
心血管疾患
【０１３７】
本明細書において、必要とする対象における心血管疾患を処置する方法を開示する。一部の実施形態では、方法は、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現または活性を減少させる作用剤を対象に投与するステップを含む。あるいはまたはさらに、方法は、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を阻害する作用剤を対象に投与するステップを含む。本明細書において、心血管疾患を処置するための医薬の製造における嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現または活性を減少させる作用剤の使用をさらに開示する。同様に、本明細書において、心血管疾患を処置するための嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現または活性を減少させる作用剤の使用も開示する。本明細書において、心血管疾患を処置するための医薬の製造における、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を阻害する作用剤の使用をさらに開示する。同様に本明細書において、心血管疾患の処置のための、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を阻害する作用剤の使用も開示する。ＯＬＦＲは、表１に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表２に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表３に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表４に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表５に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表６に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表７に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表８に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表９に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、図２Ａに記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、図２Ｂに記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ７Ｃ１、ＯＲ７Ｄ４、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ１１Ｈ６、ＯＲ４Ｅ２、ＯＲ１０Ｈ１、およびＯＲ６Ａ２からなる群から選択され得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ７Ｃ１であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ７Ｄ４であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ１０Ａ６であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ１１Ｈ６であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ４Ｅ２であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ１０Ｈ１であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ６Ａ２であり得る。作用剤は、遺伝子サイレンシング剤であり得る。遺伝子サイレンシング剤は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）分子、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、およびＣｌｕｓｔｅｒｅｄ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ  Ｓｈｏｒｔ  Ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ  Ｒｅｐｅａｔｓ（ＣＲＩＳＰＲ）酵素からなる群から選択され得る。ＲＮＡｉ分子は、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、およびマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）からなる群から選択され得る。作用剤は、ＯＬＦＲとそのリガンドとの結合を阻害することによって、ＯＬＦＲの活性を減少させ得る。作用剤はＯＬＦＲアンタゴニストであり得る。ＯＬＦＲアンタゴニストは、シトラール、それらの溶媒和物またはプロドラッグであり得る。ＯＬＦＲアンタゴニストは、メチルシンナムアルデヒド、ヒドロシンナムアルデヒド、ブルゲオナール、ウンデカナール、メチルイソオイゲノール、それらの溶媒和物もしくはプロドラッグであり得る。アンタゴニストは、表９に提供されるアンタゴニストの一覧またはそれらの溶媒和物もしくはプロドラッグから選択さ��得る。作用剤は、細胞の形質膜へのＯＬＦＲの輸送を阻害することによって、ＯＬＦＲの活性を減少させ得る。作用剤は、ＯＬＦＲに結合する抗体、その断片または模倣体であり得る。
【０１３８】
一部の実施形態では、有害な心血管事象または心血管疾患は、冠動脈疾患、末梢動脈疾患、脳血管疾患、腎動脈疾患、卒中、心筋梗塞（心臓発作）、虚血性心不全、一過性虚血発作、または脳外傷、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化プラーク形成、および血中コレステロールの上昇からなる群から選択される。
【０１３９】
感染症または感染疾患
【０１４０】
本明細書において、必要とする対象における感染症または感染疾患を処置する方法を開示する。一部の実施形態では、方法は、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）を対象に投与するステップを含む。あるいはまたはさらに、方法は、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現を増加させるかまたは嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）を活性化する作用剤を対象に投与するステップを含む。あるいはまたはさらに、方法は、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を増加させるかまたは促進する作用剤を対象に投与するステップを含む。本明細書において、感染症の処置のための医薬の製造における嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の使用をさらに開示する。本明細書において、感染症の処置のための医薬の製造における、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現を増加させるかまたは嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）を活性化する作用剤の使用をさらに開示する。本明細書において、感染症の処置のための医薬の製造における、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を増加させるかまたは促進する作用剤の使用を開示する。本明細書において、感染症または感染疾患の処置のための嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の使用を開示する。本明細書において、感染症または感染疾患の処置のための、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現を増加させるかまたは嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）を活性化する作用剤の使用を開示する。本明細書において、感染症または感染疾患の処置のための、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を増加させるかまたは促進する作用剤の使用を開示する。ＯＬＦＲは、表１に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表２に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表３に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表４に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表５に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表６に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表７に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表８に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表９に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、図２Ａに記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、図２Ｂに記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ７Ｃ１、ＯＲ７Ｄ４、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ１１Ｈ６、ＯＲ４Ｅ２、ＯＲ１０Ｈ１、およびＯＲ６Ａ２からなる群から選択され得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ７Ｃ１であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ７Ｄ４であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ１０Ａ６であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ１１Ｈ６であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ４Ｅ２であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ１０Ｈ１であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ６Ａ２であり得る。作用剤は、ＯＬＦＲに結合するリガンドであり得る。作用剤は、ＯＬＦＲアゴニストであり得る。アゴニストは、オクタナール、クマリン、ヘリオナール、リリアール、ｂ−イオノン、アンドロステノン、アンドロスタジエノン、キャラメルフラノン、３−フェニルプロピルプロピオネート、オイゲノール、エチルバニリン、２−エチルフェンコール、イソ吉草酸、ノナン酸、ブチリル乳酸ブチル、酪酸、イソ吉草酸、プロピオン酸、酢酸Ｎ−アミル、酢酸オイゲノール、サンダルウッド、Ｓ−（−）−シトロネロール、Ｓ−（−）−シトロネラール、（＋）−カルビン、（−）カルボン、（＋）カルボン、リナロール、ブルゲオナール、アセトフェノン、酪酸アミル、ノナンチオール、フェニル酢酸アリル、酢酸Ｎ−アミル、ムスコン、イソオイゲノール、オイゲノールメチルエーテル、１−ヘキサノール、１−ヘプタノール、１−オクタノール、セロリケトン、アニスアルデヒド、（＋）−メントール、バニリン、グアイアコール、リラール、ヘプタン酸エチル、オクタン酸メチル、ノナナール、１−ノナノール、２−ノナノール、３−オクタノン、３−ノナノン、およびデシルアルデヒドからなる群から選択され得る。アゴニストは、表８に提供されるアゴニストの一覧から選択され得る。作用剤は、オクタナール、ヘプタナール、またはそれらのプロドラッグもしくは溶媒和物であり得る。作用剤は、細胞の形質膜へのＯＬＦＲの輸送を増加させることによってＯＬＦＲを活性化し得る。作用剤は、受容体輸送タンパク質１（ＲＴＰ１）、ＲＴＰ２、受容体発現増強タンパク質１（ＲＥＥＰ１）、アミノアシラーゼ３（Ａｃｙ３）、およびグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｏｌｆ）サブユニットアルファ（Ｇｎａｌ）からなる群から選択されるタンパク質であり得る。作用剤は、受容体輸送タンパク質１（ＲＴＰ１）、ＲＴＰ２、受容体発現増強タンパク質１（ＲＥＥＰ１）、アミノアシラーゼ３（Ａｃｙ３）、およびグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｏｌｆ）サブユニットアルファ（Ｇｎａｌ）からなる群から選択されるタンパク質をコードするヌクレオチドを含み得る。免疫応答を刺激するステップは、炎症性サイトカインの発現または分泌を増加させるステップを含み得る。炎症性サイトカインは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、Ｃ−Ｃモチーフケモカインリガンド２（ＣＣＬ２）、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、インターロイキン６（ＩＬ−６）、ＩＬ−１Ｂ、ＩＬ−１８、および酸化窒素シンターゼ２（ＮＯＳ２）からなる群から選択され得る。感染症はウイルス感染症であり得る。感染症は細菌感染症であり得る。感染症は真菌感染症であり得る。
【０１４１】
一部の実施形態では、感染症はウイルス感染症である。一部の実施形態では、ウイルス感染症は、インフルエンザウイルス、エンテロウイルス（例えば、コクサッキーウイルスおよびエコーウイルス）、サイトメガロウイルス、ジカウイルス、狂犬病ウイルス、西ナイルウイルス、風疹ウイルス、ポリオウイルス、ロタウイルス、ノロウイルス、単純ヘルペスウイルス、水痘−帯状疱疹ウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、チクングニアウイルス、クリミア−コンゴ出血熱ウイルス、日本脳炎ウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ロスリバーウイルス、および跳躍病ウイルスからなる群から選択されるウイルスによって引き起こされる。
【０１４２】
一部の実施形態では、感染症は、細菌感染症である。一部の実施形態では、細菌感染症は、ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ、ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ、ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、およびｖｉｂｒｉｏからなる群から選択される細菌によって引き起こされる。
【０１４３】
一部の実施形態では、感染症は、真菌感染症である。一部の実施形態では、真菌感染症は、ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、ｃａｎｄｉｄａ、ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ、スポロトリコーシス（ｓｐｈｏｒｏｔｒｉｃｈｏｓｉｓ）、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｊｉｒｏｖｅｃｉｉ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、およびＴａｌａｒｏｍｙｃｅｓからなる群から選択される真菌によって引き起こされる。真菌感染症の例には、これらに限定されないが、アスペルギルス症、カンジダ症、Ｃ．ｇａｔｔｉｉ感染症、爪水虫感染症、ムコール症、ニューモシスチス肺炎、ブラストミセス症、スポロトリコーシス、ヒストプラスマ症、マイセトーマ、白癬、タラロマイセス症、水虫、および酵母感染症が含まれる。
【０１４４】
一部の実施形態では、感染症は、呼吸器感染症、消化管感染症、肝臓の感染症、神経系の感染症、耳の感染症、咽頭の感染症、膀胱の感染症、腎臓の感染症、尿路感染症、性行為感染症、および皮膚感染症からなる群から選択される。
【０１４５】
一部の実施形態では、感染症は、呼吸器感染症である。呼吸器感染症の例には、これらに限定されないが、喉の痛み、気管支炎、副鼻腔炎、結核、および肺炎が含まれる。
【０１４６】
一部の実施形態では、感染症は、性行為感染症である。性行為感染症の例には、これらに限定されないが、クラミジア、淋病、梅毒、および細菌性膣症が含まれる。
【０１４７】
一部の実施形態では、感染症は皮膚感染症である。皮膚感染症の例には、これらに限定されないが、蜂窩織炎、毛包炎、膿痂疹、およびできものが含まれる。
【０１４８】
がん
【０１４９】
本明細書において、必要とする対象におけるがんを処置する方法を開示する。一部の実施形態では、方法は、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）を対象に投与するステップを含む。あるいはまたはさらに、方法は、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現を増加させるかまたは嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）を活性化する作用剤を対象に投与するステップを含む。あるいはまたはさらに、方法は、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を増加させるかまたは促進する作用剤を対象に投与するステップを含む。本明細書において、がんの処置のための医薬の製造における、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現を増加させるかまたは嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）を活性化する作用剤の使用をさらに開示する。本明細書において、がんの処置のための医薬の製造における、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を増加させるかまたは促進する作用剤の使用を開示する。本明細書において、がんの処置のための、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現を増加させるかまたは嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）を活性化する作用剤の使用を開示する。本明細書において、がんの処置のための、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を増加させるかまたは促進する作用剤の使用を開示する。ＯＬＦＲは、表１に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表２に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表３に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表４に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表５に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表６に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表７に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表８に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、表９に記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、図２Ａに記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、図２Ｂに記載のＯＬＦＲであり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ７Ｃ１、ＯＲ７Ｄ４、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ１１Ｈ６、ＯＲ４Ｅ２、ＯＲ１０Ｈ１、およびＯＲ６Ａ２からなる群から選択され得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ７Ｃ１であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ７Ｄ４であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ１０Ａ６であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ１１Ｈ６であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ４Ｅ２であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ１０Ｈ１であり得る。ＯＬＦＲは、ＯＲ６Ａ２であり得る。作用剤は、ＯＬＦＲに結合するリガンドであり得る。作用剤は、ＯＬＦＲアゴニストであり得る。アゴニストは、オクタナール、クマリン、ヘリオナール、リリアール、ｂ−イオノン、アンドロステノン、アンドロスタジエノン、キャラメルフラノン、３−フェニルプロピルプロピオネート、オイゲノール、エチルバニリン、２−エチルフェンコール、イソ吉草酸、ノナン酸、ブチリル乳酸ブチル、酪酸、イソ吉草酸、プロピオン酸、酢酸Ｎ−アミル、酢酸オイゲノール、サンダルウッド、Ｓ−（−）−シトロネロール、Ｓ−（−）−シトロネラール、（＋）−カルビン、（−）カルボン、（＋）カルボン、リナロール、ブルゲオナール、アセトフェノン、酪酸アミル、ノナンチオール、フェニル酢酸アリル、酢酸Ｎ−アミル、ムスコン、イソオイゲノール、オイゲノールメチルエーテル、１−ヘキサノール、１−ヘプタノール、１−オクタノール、セロリケトン、アニスアルデヒド、（＋）−メントール、バニリン、グアイアコール、リラール、ヘプタン酸エチル、オクタン酸メチル、ノナナール、１−ノナノール、２−ノナノール、３−オクタノン、３−ノナノン、およびデシルアルデヒドからなる群から選択され得る。アゴニストは、表８に提供されるアゴニストの一覧から選択され得る。作用剤は、オクタナール、ヘプタナール、またはそれらのプロドラッグもしくは溶媒和物であり得る。作用剤は、細胞の形質膜へのＯＬＦＲの輸送を増加させることによってＯＬＦＲを活性化し得る。作用剤は、受容体輸送タンパク質１（ＲＴＰ１）、ＲＴＰ２、受容体発現増強タンパク質１（ＲＥＥＰ１）、アミノアシラーゼ３（Ａｃｙ３）、およびグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｏｌｆ）サブユニットアルファ（Ｇｎａｌ）からなる群から選択されるタンパク質であり得る。作用剤は、受容体輸送タンパク質１（ＲＴＰ１）、ＲＴＰ２、受容体発現増強タンパク質１（ＲＥＥＰ１）、アミノアシラーゼ３（Ａｃｙ３）、およびグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｏｌｆ）サブユニットアルファ（Ｇｎａｌ）からなる群から選択されるタンパク質をコードするヌクレオチドを含み得る。免疫応答を刺激するステップは、炎症性サイトカインの発現または分泌を増加させるステップを含み得る。炎症性サイトカインは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、Ｃ−Ｃモチーフケモカインリガンド２（ＣＣＬ２）、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、インターロイキン６（ＩＬ−６）、ＩＬ−１Ｂ、ＩＬ−１８、および酸化窒素シンターゼ２（ＮＯＳ２）からなる群から選択され得る。投与は局所であり得る。投与は全身性であり得る。投与は、静脈内方法を含み得る。対象は、哺乳動物であり得る。対象は、免疫調節障害を伴う疾患または障害を有し得るか、またはその素因を有し得る。対象はヒト患者であり得る。
【０１５０】
一部の実施形態では、処置される新生物、新生物障害、腫瘍、がん、または悪性腫瘍は、癌腫、肉腫、神経芽腫、子宮頸がん、肝細胞がん、中皮腫、神経膠芽腫、骨髄腫、リンパ腫、白血病、腺腫、腺癌、神経膠腫、神経膠芽腫、網膜芽腫、星細胞種、乏突起膠細胞腫、髄膜腫、リンパ肉腫、脂肪肉腫、骨肉腫、軟骨肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、線維肉腫、もしくは黒色腫；または肺、甲状腺、頭部もしくは頸部、鼻咽頭、咽頭、鼻もしくは副鼻腔、脳、脊椎、乳房、副腎、下垂体、甲状腺、リンパ、消化管（口、食道、胃、十二指腸、回腸、空腸（小腸）、結腸、直腸）、泌尿生殖器管（子宮、卵巣、子宮頸部、子宮内膜、膀胱、精巣、陰茎、前立腺）、腎臓、膵臓、肝臓、骨、骨髄、リンパ、血液、筋肉、または皮膚の新生物、新生物障害、腫瘍、がん、または悪性腫瘍からなる群から選択される。
【０１５１】
作用剤
【０１５２】
本明細書で使用される「作用剤」は、対象に投与することができる任意の分子（例えば、抗体、Ｆａｂ断片、タンパク質、ペプチド、核酸、合成化学物質、低分子化学分子、リガンド模倣体）を指す。表１、表２、表３、表４、表５、表６、表７、表８、表９、図２Ａ、および図２Ｂのいずれかに提供される、嗅覚受容体の発現または活性をモジュレートする作用剤は、対象に投与した場合に、表１、表２、表３、表４、表５、表６、表７、表８、表９、図２Ａ、および図２Ｂのいずれかに提供される嗅覚受容体の発現または活性をモジュレートする分子または組成物である。ある特定の実施形態では、作用剤は、表１、表２、表３、表４、表５、表６、表７、表８、表９、図２Ａ、および図２Ｂのいずれかに提供される嗅覚受容体の発現または活性をモジュレートする、阻害する、遮断する、減少させる、増加させる、増強する、促進するか、または誘発する。一部の実施形態では、作用剤は、表１、表２、表３、表４、表５、表６、表７、表８、表９、図２Ａ、および図２Ｂのいずれかに提供される嗅覚受容体の発現または活性をモジュレートする、増強する、刺激する、誘導するか、または増加させる。ある特定の実施形態では、作用剤は、免疫応答をモジュレートする、阻害する、遮断する、減少させる、増加させる、増強する、促進するか、または誘発する。一部の実施形態では、作用剤は、免疫応答をモジュレートする、増強する、刺激する、誘導するか、または増加させる。ある特定の実施形態では、免疫応答のモジュレーションは、生得の免疫応答（例えば、内皮細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、サイトカイン）をモジュレートするステップを含む。
【０１５３】
本明細書に開示される方法、使用、およびキットは、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の活性をモジュレートする１つまたは複数の作用剤を含み得る。作用剤は、ＯＬＦＲに結合するか、もしくはリガンドに対するＯＬＦＲの結合を遮断するリガンドもしくは低分子、または細胞によるＯＬＦＲの発現を阻害する作用剤の群から選択され得る。作用剤は、ＯＬＦＲに結合する抗体、断片、もしくは模倣体、またはＯＬＦＲリガンド、抗ＯＬＦＲ遺伝子サイレンシング剤、もしくはオクタナール、またはそれらのプロドラッグもしくは溶媒和物の群から選択され得る。
【０１５４】
本明細書に開示される方法、使用、およびキットは、ＯＬＦＲの発現または活性を増加させる１つまたは複数の作用剤を含み得る。作用剤は、表１〜９および図２Ａ〜２Ｂのいずれか１つに記載のＯＬＦＲに結合するリガンドであり得る。作用剤は、表７に記載のＯＬＦＲに結合するリガンドであり得る。作用剤は、ＯＲ７Ｃ１、ＯＲ７Ｄ４、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ１１Ｈ６、ＯＲ４Ｅ２、ＯＲ１０Ｈ１、およびＯＲ６Ａ２からなる群から選択されるＯＬＦＲに結合するリガンドであり得る。作用剤は、オクタナール、ヘプタナール、またはそれらのプロドラッグもしくは溶媒和物であり得る。一部の実施形態では、ＯＬＦＲの発現は、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または１００％またはそれより多く増加する。一部の実施形態では、ＯＬＦＲの発現は、少なくとも約１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、４、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０倍またはそれより多く増加する。一部の実施形態では、ＯＬＦＲの活性は、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または１００％またはそれより多く増加する。一部の実施形態では、ＯＬＦＲの活性は、少なくとも約１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、４、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０倍またはそれより多く増加する。一部の実施形態では、ＯＬＦＲの活性は、１つまたは複数の炎症性サイトカインの発現レベルを測定することによって決定される。一部の実施形態では、ＯＬＦＲの活性は、１つまたは複数の炎症性サイトカインの分泌レベルを測定することによって決定される。一部の実施形態では、ＯＬＦＲの発現の増加は、作用剤を投与されていない対象との比較に基づく。あるいはまたはさらに、ＯＬＦＲの発現は、一定期間にわたって測定され、ＯＬＦＲの発現レベルの増加は、２つまたはそれより多くの時点にわたる対象からの試料の比較に基づく。一部の実施形態では、ＯＬＦＲの活性の増加は、作用剤を投与されていない対象との比較に基づく。あるいはまたはさらに、ＯＬＦＲの活性は、一定期間にわたって測定され、ＯＬＦＲの活性の増加は、２つまたはそれより多くの時点にわたる対象からの試料の比較に基づく。
【０１５５】
本明細書に開示される方法、使用、およびキットは、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を増加させるかまたは促進する１つまたは複数の作用剤を含み得る。作用剤は、受容体輸送タンパク質１（ＲＴＰ１）、ＲＴＰ２、受容体発現増強タンパク質１（ＲＥＥＰ１）、アミノアシラーゼ３（Ａｃｙ３）、またはグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｏｌｆ）サブユニットアルファ（Ｇｎａｌ）の群から選択されるタンパク質であり得る。作用剤は、受容体輸送タンパク質１（ＲＴＰ１）、ＲＴＰ２、受容体発現増強タンパク質１（ＲＥＥＰ１）、アミノアシラーゼ３（Ａｃｙ３）、またはグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｏｌｆ）サブユニットアルファ（Ｇｎａｌ）の群から選択されるタンパク質をコードするヌクレオチドを含み得る。一部の実施形態では、形質膜へのＯＬＦＲの輸送のレベルは、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または１００％またはそれより多く増加する。一部の実施形態では、形質膜へのＯＬＦＲの輸送のレベルは、少なくとも約１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、４、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０倍またはそれより多く増加する。一部の実施形態では、形質膜へのＯＬＦＲの輸送のレベルは、細胞表面上のＯＬＦＲの量を検出することによって決定される。一部の実施形態では、形質膜へのＯＬＦＲの輸送のレベルの増加は、作用剤を投与されていない対象との比較に基づく。あるいはまたはさらに、形質膜へのＯＬＦＲの輸送のレベルは、一定期間にわたって測定され、輸送のレベルの増加は、２つまたはそれより多くの時点にわたる対象からの試料の比較に基づく。
【０１５６】
本明細書に開示される方法、使用、およびキットは、炎症性サイトカインの発現または分泌を増加させる１つまたは複数の作用剤を含み得る。炎症性サイトカインは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、Ｃ−Ｃモチーフケモカインリガンド２（ＣＣＬ２）、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、インターロイキン６（ＩＬ−６）、ＩＬ−１Ｂ、ＩＬ−１８、および酸化窒素シンターゼ２（ＮＯＳ２）からなる群から選択され得る。
【０１５７】
本明細書に開示される方法、使用、およびキットは、ＯＬＦＲの発現または活性を減少させるかまたは阻害する１つまたは複数の作用剤を含み得る。作用剤は、遺伝子サイレンシング剤であり得る。遺伝子サイレンシング剤は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）分子、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、およびＣｌｕｓｔｅｒｅｄ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ  Ｓｈｏｒｔ  Ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ  Ｒｅｐｅａｔｓ（ＣＲＩＳＰＲ）酵素からなる群から選択され得る。ＲＮＡｉ分子は、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、およびマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）からなる群から選択され得る。遺伝子サイレンシング剤は、表１〜９および図２Ａ〜２Ｂのいずれか１つに記載のＯＬＦＲを標的とし得る。遺伝子サイレンシング剤は、表７に記載のＯＬＦＲを標的とし得る。遺伝子サイレンシング剤は、ＯＲ７Ｃ１、ＯＲ７Ｄ４、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ１１Ｈ６、ＯＲ４Ｅ２、ＯＲ１０Ｈ１、およびＯＲ６Ａ２からなる群から選択されるＯＬＦＲを標的とし得る。一部の実施形態では、ＯＬＦＲの発現は、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または１００％またはそれより多く減少する。一部の実施形態では、ＯＬＦＲの発現は、少なくとも約１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、４、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０倍またはそれより多く減少する。一部の実施形態では、ＯＬＦＲの活性は、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または１００％またはそれより多く減少する。一部の実施形態では、ＯＬＦＲの活性は、少なくとも約１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、４、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０倍またはそれより多く減少する。一部の実施形態では、ＯＬＦＲの活性は、１つまたは複数の炎症性サイトカインの発現レベルを測定することによって決定される。一部の実施形態では、ＯＬＦＲの活性は、１つまたは複数の炎症性サイトカインの分泌レベルを測定することによって決定される。一部の実施形態では、ＯＬＦＲの発現の減少は、作用剤を投与されていない対象との比較に基づく。あるいはまたはさらに、ＯＬＦＲの発現は、一定期間にわたって測定され、ＯＬＦＲの発現レベルの減少は、２つまたはそれより多くの時点にわたる対象からの試料の比較に基づく。一部の実施形態では、ＯＬＦＲの活性の減少は、作用剤を投与されていない対象との比較に基づく。あるいはまたはさらに、ＯＬＦＲの活性は、一定期間にわたって測定され、ＯＬＦＲの活性の減少は、２つまたはそれより多くの時点にわたる対象からの試料の比較に基づく。
【０１５８】
当業者は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）、ＣＲＩＳＰＲ、ＴＡＬＥＮ、ＺＦＮなどの方法、またはタンパク質、例えばＯＬＦＲ、ＯＬＦＲリガンド、もしくは細胞の形質膜へのＯＬＦＲの輸送に関係するタンパク質の発現および／もしくは機能を低減もしくは除去するために特異的配列を標的とする他の方法を使用することができる。ＣＲＩＳＰＲ、ＴＡＬＥＮ、ＺＦＮ、または他のゲノム編集ツールもまた、遺伝子の発現および／または機能をモジュレートするために使用することができる。
【０１５９】
本明細書で使用される場合、「ＲＮＡｉ」（ＲＮＡ干渉）は、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）の短い小片および低分子干渉ＲＮＡ（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、またはｍｉＲＮＡ等）の導入を介して分解のための特異的ｍＲＮＡ配列を標的とすることによって細胞における遺伝子発現を低減させるかまたは除去する方法を指す（Ａｇｒａｗａｌ，  Ｎ．  ｅｔ  ａｌ．；  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｒｅｖ．  ２００３；  ６７：６５７−６８５、Ａｒｅｎｚ，  Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．；  Ｎａｔｕｒｗｉｓｓｅｎｓｃｈａｆｔｅｎ．  ２００３；  ９０：３４５−３５９、Ｈａｎｎｏｎ  ＧＪ．；  Ｎａｔｕｒｅ．  ２００２；  ４１８：２４４−２５１）。
【０１６０】
本明細書で使用される場合、用語「ＣＲＩＳＰＲ」は、ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ  ｒｅｇｕｌａｒｌｙ  ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ  ｓｈｏｒｔ  ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ  ｒｅｐｅａｔｓ経路に依存する配列特異的遺伝子操作技術を指す。ＣＲＩＳＰＲを使用して、遺伝子編集および／または遺伝子調節を実施することができ、ならびにタンパク質を特異的ゲノム位置に単に標的させることができる。「遺伝子編集」は、標的ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列を、ポリヌクレオチド配列に対する欠失、挿入、一本鎖もしくは二本鎖切断、または塩基置換の導入によって変化させる遺伝子操作のタイプを指す。一部の態様では、ＣＲＩＳＰＲ媒介性遺伝子編集は、非相同末端結合（ＮＨＥＪ）の経路または相同組換えを利用して編集を実施する。遺伝子調節は、タンパク質またはＲＮＡなどの特異的遺伝子産物の産生を増加または減少させるステップを指す。
【０１６１】
用語「ｇＲＮＡ」または「ガイドＲＮＡ」は、本明細書で使用される場合、ＣＲＩＳＰＲ技術を用いる遺伝子編集のために特異的ポリヌクレオチド配列を標的とするために使用されるガイドＲＮＡ配列を指す。標的特異性に関してｇＲＮＡおよびドナー治療ポリヌクレオチドを設計する技術は当技術分野で周知である。例えば、Ｄｏｅｎｃｈ，  Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２０１４；  ３２（１２）：１２６２−７、Ｍｏｈｒ，  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１６）  ＦＥＢＳ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ２８３：  ３２３２−３８、およびＧｒａｈａｍ，  Ｄ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｂｉｏｌ．  ２０１５；  １６：２６０。ｇＲＮＡは、ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）およびトランス活性化ＣＲＩＰＳＰＲ  ＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）を含む融合ポリヌクレオチド；またはＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）およびトランス活性化ＣＲＩＰＳＰＲ  ＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）を含むポリヌクレオチドを含むか、または代わりに本質的にそれからなるか、またはさらにその上、それからなる。一部の態様では、ｇＲＮＡは、合成である（Ｋｅｌｌｅｙ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  （２０１６）  Ｊ  ｏｆ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３３  （２０１６）７４−８３）。
【０１６２】
用語「Ｃａｓ９」は、この名称によって呼ばれるＣＲＩＳＰＲ関連エンドヌクレアーゼを指す。Ｃａｓ９の非制限的な例には、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  Ｃａｓ９、ヌクレアーゼ不活化型Ｃａｓ９、ならびにその各々のオルトログおよび生物学的均等物が含まれる。オルトログには、これらに限定されないが、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ  Ｃａｓ９（「ｓｐＣａｓ９」）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｅｓ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｌａｃｔａｍｉｃａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｎｏｖｉｃｉｄａ由来のＣａｓ９；ならびにＡｃｉｄａｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ．およびＦｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｎｏｖｉｃｉｄａ  Ｕ１１２を含む様々な細菌種由来のＣｐｆ１（Ｃａｓ９と類似の切断機能を実施する）が含まれる。
【０１６３】
本明細書で使用される場合、「ＴＡＬＥＮ」（転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ）は、ＤＮＡ配列を標的とすることができ、ゲノム編集のために使用することができるＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメインに融合した非特異的ＤＮＡ切断ヌクレアーゼを含む操作されたヌクレアーゼを指す。Ｂｏｃｈ  （２０１１）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ２９：  １３５−６；およびＢｏｃｈ  ｅｔ  ａｌ．  （２００９）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２６：  １５０９−１２；Ｍｏｓｃｏｕ  ｅｔ  ａｌ．  （２００９）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２６：  ３５０１。ＴＡＬＥは、キサントモナス細菌によって分泌されるタンパク質である。ＤＮＡ結合ドメインは、１２番目および１３番目のアミノ酸を例外として、反復される高度に保存された３３〜３４アミノ酸配列を含有する。これらの２つの位置は、高度に可変性であり、特異的ヌクレオチド認識と強い相関を示す。このため、それらを、所望のＤＮＡ配列に結合するように操作することができる。ＴＡＬＥＮを産生するために、ＴＡＬＥタンパク質を、野生型または変異Ｆｏｋｌエンドヌクレアーゼであるヌクレアーゼ（Ｎ）に融合する。ＴＡＬＥＮにおけるその使用のために、Ｆｏｋｌに対するいくつかの変異が作製されている；これらは、例えば切断の特異性または活性を改善する。Ｃｅｒｍａｋ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ３９：  ｅ８２；Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ２９：  １４３−８；Ｈｏｃｋｅｍｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ２９：  ７３１−７３４；Ｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３３３：  ３０７；Ｄｏｙｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ８：  ７４−７９；Ｓｚｃｚｅｐｅｋ  ｅｔ  ａｌ．  （２００７）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ２５：  ７８６−７９３；およびＧｕｏ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏ．  ２００：  ９６。Ｆｏｋｌドメインは二量体として機能し、適切な方向および間隔で標的ゲノムに位置するために独自のＤＮＡ結合ドメインを有する２つの構築物を必要とする。ＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメインとＦｏｋｌ切断ドメインとの間のアミノ酸残基の数、および２つの個々のＴＡＬＥＮ結合部位の間の塩基の数は、どちらも高レベルの活性を達成するために重要なパラメータであるように思われる。Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ２９：  １４３−８。免疫細胞における配列に特異的なＴＡＬＥＮは、モジュール構成要素を使用する様々なスキームを含む当技術分野で公知の任意の方法を使用して構築することができる。Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ２９：  １４９−５３；Ｇｅｉｂｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ６：  ｅ１９５０９。
【０１６４】
本明細書で使用される場合、「ＺＦＮ」（ジンクフィンガーヌクレアーゼ）は、ＤＮＡ配列を標的とし、ゲノム編集のために使用することができるジンクフィンガーＤＮＡ結合ドメインに融合した非特異的ＤＮＡ切断ヌクレアーゼを含む操作されたヌクレアーゼを指す。ＴＡＬＥＮと同様に、ＺＦＮは、ＤＮＡ結合ドメインに融合したＦｏｋｌヌクレアーゼドメイン（またはその誘導体）を含む。ＺＦＮの場合、ＤＮＡ結合ドメインは、１つまたは複数のジンクフィンガーを含む。Ｃａｒｒｏｌｌ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  １８８：  ７７３−７８２；およびＫｉｍ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９３：  １１５６−１１６０。ジンクフィンガーは、１つまたは複数の亜鉛イオンによって安定化される低分子タンパク質構造モチーフである。ジンクフィンガーは、例えばＣｙｓ２Ｈｉｓ２を含み得て、およそ３ｂｐの配列を認識することができる。公知の特異性を有する様々なジンクフィンガーを組み合わせて、約６、９、１２、１５、または１８ｂｐの配列を認識するマルチフィンガーポリペプチドを産生することができる。特異的配列を認識するジンクフィンガー（およびその組合せ）を生成するために、ファージディスプレイ、酵母１ハイブリッド系、細菌１ハイブリッドおよび２ハイブリッド系、ならびに哺乳動物細胞を含む、様々な選択およびモジュラーアセンブリ技術が利用可能である。ＴＡＬＥＮと同様に、ＺＦＮは、ＤＮＡを切断するためには二量体化しなければならない。このため、非回文ＤＮＡ部位を標的とするためには一対のＺＦＮが必要である。２つの個々のＺＦＮは、そのヌクレアーゼが適切に離れるためにはＤＮＡの反対鎖に結合しなければならない。Ｂｉｔｉｎａｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９８）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９５：  １０５７０−５。免疫細胞の配列に特異的なＺＦＮは、当技術分野で公知の任意の方法を使用して構築することができる。例えば、Ｐｒｏｖａｓｉ  （２０１１）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．  １８：  ８０７−８１５；Ｔｏｒｉｋａｉ  （２０１３）  Ｂｌｏｏｄ  １２２：  １３４１−１３４９；Ｃａｔｈｏｍｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２００８）  Ｍｏｌ．  Ｔｈｅｒ．  １６：  １２００−７；Ｇｕｏ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｉ．  ４００：  ９６；米国特許出願公開第２０１１１０１５８９５７号；および米国特許出願公開第２０１２／００６０２３０号を参照されたい。
【０１６５】
作用剤は、ＯＬＦＲとそのリガンドとの結合を阻害することによってＯＬＦＲの活性を減少させ得る。作用剤は、ＯＬＦＲアンタゴニストであり得る。ＯＬＦＲアンタゴニストは、シトラール、それらの溶媒和物またはプロドラッグであり得る。ＯＬＦＲアンタゴニストは、メチルシンナムアルデヒド、ヒドロシンナムアルデヒド、ブルゲオナール、ウンデカナール、メチルイソオイゲノール、それらの溶媒和物またはプロドラッグであり得る。アンタゴニストは、表９に提供されるアンタゴニストの一覧またはそれらの溶媒和物もしくはプロドラッグから選択され得る。
【０１６６】
作用剤は、細胞の形質膜へのＯＬＦＲの輸送を阻害することによってＯＬＦＲの活性を減少させ得る。本明細書に開示される方法、使用、およびキットは、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を減少させるかまたは阻害する１つまたは複数の作用剤を含み得る。作用剤は、受容体輸送タンパク質１（ＲＴＰ１）、ＲＴＰ２、受容体発現増強タンパク質１（ＲＥＥＰ１）、アミノアシラーゼ３（Ａｃｙ３）、およびグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｏｌｆ）サブユニットアルファ（Ｇｎａｌ）の群から選択されるタンパク質の発現を阻害する遺伝子サイレンシング剤であり得る。
【０１６７】
作用剤は、抗体、その断片、誘導体、または模倣体であり得る。抗体、その断片、誘導体、または模倣体は、ＯＬＦＲに結合し得る。作用剤は、表１〜９および図２Ａ〜２Ｂのいずれか１つに記載のＯＬＦＲに結合する抗体であり得る。作用剤は、表７に記載のＯＬＦＲに結合する抗体であり得る。作用剤は、ＯＲ７Ｃ１、ＯＲ７Ｄ４、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ１１Ｈ６、ＯＲ４Ｅ２、ＯＲ１０Ｈ１、およびＯＲ６Ａ２からなる群から選択されるＯＬＦＲに結合する抗体であり得る。抗体、その断片、誘導体、または模倣体は、ＯＬＦＲのリガンドに結合し得る。抗体、その断片、誘導体、または模倣体は、受容体輸送タンパク質１（ＲＴＰ１）、ＲＴＰ２、受容体発現増強タンパク質１（ＲＥＥＰ１）、アミノアシラーゼ３（Ａｃｙ３）、およびグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｏｌｆ）サブユニットアルファ（Ｇｎａｌ）からなる群から選択されるタンパク質に結合し得る。
【０１６８】
抗体は、所望の生物活性を示す限り、ポリクローナル、モノクローナル、多重特異性（例えば、二重特異性抗体）、および抗体断片であってもよい。抗体は、任意の適した生物起源、例えばマウス、ラット、ヒツジ、およびイヌから単離することができる。抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体であり得る。抗体はヒトモノクローナル抗体であり得る。抗体は組換えヒト抗体であり得る。
【０１６９】
本明細書で使用される場合、用語「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」、「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」、および「免疫グロブリン」は、抗体全体およびその任意の抗原結合性断片または一本鎖を含む。このように、用語「抗体」は、免疫グロブリン分子の少なくとも一部を含む分子を含有する任意のタンパク質またはペプチドを含む。用語「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」、「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」、および「免疫グロブリン」はまた、任意のアイソタイプの免疫グロブリン、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆｄ断片、ｄＡｂ、ＶＨ、ＶＬ、ＶｈＨ、およびＶ−ＮＡＲドメインを含むがこれらに限定されない、抗原に対する特異的結合を保持する抗体断片；ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、およびカッパボディ；抗体断片および単離された１つまたは複数から形成される多特異性抗体断片も含む。そのような例には、これらに限定されないが、重鎖もしくは軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）もしくはそのリガンド結合部分、重鎖もしくは軽鎖の可変領域、重鎖もしくは軽鎖の定常領域、フレームワーク（ＦＲ）領域、またはその任意の部分、結合タンパク質の少なくとも１つの部分、キメラ抗体、ヒト化抗体、一本鎖抗体、および抗体の抗原結合性部分と非抗体タンパク質とを含む融合タンパク質が含まれる。免疫グロブリン分子の重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体（Ａｂ）の定常領域は、免疫グロブリンと宿主組織との結合を媒介し得る。用語「抗」がタンパク質名称の前に使用される場合、例えば抗ＤＮＡＢＩＩ、抗ＩＨＦ、抗ＨＵ、抗ＯＭＰ  Ｐ５は、特定のタンパク質に結合するおよび／または特定のタンパク質に対して親和性を有するモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体を指す。例えば、「抗ＩＨＦ」は、ＩＨＦタンパク質に結合する抗体を指す。特異的抗体は、それに対して作製されたタンパク質以外のタンパク質に対して親和性を有してもよく、または結合してもよい。例えば、抗ＩＨＦは、ＩＨＦタンパク質に対して特異的に作製されたが、配列相同性または構造相同性のいずれかを通して関連する他のタンパク質にも結合し得る。
【０１７０】
本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」は、実質的に均一な抗体集団から得られた抗体を指す。モノクローナル抗体は、各々のモノクローナル抗体が抗原上の単一の決定因子に対して作製されることから、非常に特異的である。抗体は、例えば放射性同位元素、検出可能な産物を生成する酵素、蛍光タンパク質等によって検出可能に標識され得る。抗体は、他の部分、例えば特異的結合対のメンバー、例えばビオチン（ビオチン−アビジン特異的結合対のメンバー）等にさらにコンジュゲートされ得る。抗体はまた、ポリスチレンプレートまたはビーズ等を含むがこれらに限定されない、固相支持体に結合され得る。
【０１７１】
モノクローナル抗体は、当技術分野で公知のハイブリドーマ技術または組換えＤＮＡ法を使用して生成してもよい。ハイブリドーマは、抗体産生リンパ球と非抗体産生がん細胞、通常は骨髄腫またはリンパ腫との融合体から研究室で産生される細胞である。ハイブリドーマは増殖し、特異的モノクローナル抗体の持続的な試料を産生する。抗体を生成または選択する代替技術は、目的の抗原に対するリンパ球のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの曝露、および細胞、ファージ、または類似の系における抗体ディスプレイライブラリのスクリーニングを含む。
【０１７２】
用語「ヒト抗体」は、本明細書で使用される場合、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変および定常領域を有する抗体を含むと意図される。本明細書に開示されるヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのランダムもしくは部位特異的変異誘発、またはｉｎ  ｖｉｖｏでの体細胞変異によって導入される変異）を含み得る。しかし、用語「ヒト抗体」は、本明細書で使用される場合、別の哺乳動物種、例えばマウスの生殖系列に由来するＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列にグラフトされている抗体を含むことを意図しない。このように、本明細書で使用される場合、用語「ヒト抗体」は、タンパク質の実質的にあらゆる部分（例えば、ＣＤＲ、フレームワーク、ＣＬ、ＣＨドメイン（例えば、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３）、ヒンジ、（ＶＬ、ＶＨ））が、ごく軽微な配列の変化または変更を伴い、ヒトにおいて実質的に非免疫原性である抗体を指す。同様に、霊長類（サル、ヒヒ、チンパンジー等）、齧歯類（マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ハムスター等）および他の哺乳動物と指定される抗体は、そのような種、亜属、属、亜科、科特異的抗体を指定する。さらに、キメラ抗体は、上記の任意の組合せを含む。そのような変化または変更は、必要に応じて非改変抗体と比較してヒトまたは他の種において免疫原性を保持するか、または低減させる。このように、ヒト抗体は、キメラまたはヒト化抗体とは異なる。ヒト抗体は、機能的に再配列されたヒト免疫グロブリン（例えば、重鎖および／または軽鎖）遺伝子を発現することが可能である非ヒト動物または原核細胞もしくは真核細胞によって産生することができることが指摘される。さらに、ヒト抗体が一本鎖抗体である場合、これは、ネイティブヒト抗体では見出されないリンカーペプチドを含み得る。例えばＦｖは、重鎖の可変領域と軽鎖の可変領域とを接続するリンカーペプチド、例えば２〜約８個のグリシンまたは他のアミノ酸残基を含み得る。そのようなリンカーペプチドは、ヒト起源のペプチドであると考えられる。
【０１７３】
本明細書で使用される場合、ヒト抗体は、抗体が、ヒト免疫グロブリン配列を使用する系から、例えばヒト免疫グロブリン遺伝子を有するトランスジェニックマウスを免疫することによって、またはヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリをスクリーニングすることによって得られる場合、特定の生殖系列配列に「由来する」。ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に「由来する」ヒト抗体は、ヒト抗体のアミノ酸配列をヒト生殖系列免疫グロブリンのアミノ酸配列と比較することによって識別することができる。選択されたヒト抗体は典型的には、ヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列とアミノ酸配列が少なくとも９０％同一であり、他の種の生殖系列免疫グロブリンアミノ酸配列（例えば、マウス生殖系列配列）と比較した場合にヒト抗体をヒトであると識別するアミノ酸残基を含有する。ある特定の例では、ヒト抗体は、生殖系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列とアミノ酸配列が少なくとも９５％、またはさらに少なくとも９６％、９７％、９８％、または９９％同一であり得る。典型的には、特定のヒト生殖系列配列に由来するヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列とは１０個以下のアミノ酸の差を示す。ある特定の例では、ヒト抗体は、生殖系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列とは、５個以下、またはさらに４、３、２、または１個以下のアミノ酸の差を示し得る。
【０１７４】
「ヒトモノクローナル抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する、単一の結合特異性を示す抗体を指す。この用語はまた、組換えヒト抗体も意図する。これらの抗体を作製する方法を、本明細書に記載する。
【０１７５】
用語「組換えヒト抗体」は、本明細書で使用される場合、組換え手段によって調製、発現、作製、または単離された全てのヒト抗体、例えばヒト免疫グロブリン遺伝子に関してトランスジェニックもしくはトランスクロモソーマルである動物（例えば、マウス）もしくはそれから調製されたハイブリドーマから単離された抗体、抗体を発現するように形質転換された宿主細胞、例えばトランスフェクトーマから単離された抗体、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリから単離された抗体、およびヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを伴う任意の他の手段によって調製、発現、作製、または単離された抗体を含む。そのような組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する。しかし、ある特定の実施形態では、そのような組換えヒト抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ変異誘発（または、ヒトＩｇ配列に関してトランスジェニックである動物を使用する場合は、ｉｎ  ｖｉｖｏ体細胞変異誘発）に供することができ、このように、組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列に由来して関連するが、ｉｎ  ｖｉｖｏでヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然には存在しない可能性がある配列である。これらの抗体を作製する方法を、本明細書に記載する。
【０１７６】
本明細書で使用される場合、キメラ抗体は、その軽鎖および重鎖遺伝子が、典型的に遺伝子操作によって、異なる種に属する抗体可変および定常領域遺伝子から構築されている抗体である。
【０１７７】
本明細書で使用される場合、用語「ヒト化抗体」または「ヒト化免疫グロブリン」は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小の配列を含有するヒト／非ヒトキメラ抗体を指す。たいていの場合、ヒト化抗体は、レシピエントの可変領域からの残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有する非ヒト種（ドナー抗体）、例えばマウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類の可変領域からの残基と置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体において見出されない残基を含み得る。ヒト化抗体は、必要に応じて、免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部、ヒト抗体からの対応する位置のアミノ酸に置換されている１つまたは複数のアミノ酸をフレームワーク領域、定常領域、またはＣＤＲに含有する非ヒト抗体を含み得る。一般的には、ヒト化抗体は、同じ抗体の非ヒト化型と比較して、ヒト宿主において低減された免疫応答を産生すると予想される。ヒト化抗体は、抗原結合または他の抗体機能に対して実質的に影響を及ぼさない保存的アミノ酸置換を有し得る。保存的置換をグループ分けしたものとしては：グリシン−アラニン、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リシン−アルギニン、アラニン−バリン、セリン−トレオニン、およびアスパラギン−グルタミンが挙げられる。
【０１７８】
用語「ポリクローナル抗体」または「ポリクローナル抗体組成物」は、本明細書で使用される場合、異なるＢ細胞系に由来する抗体の調製物を指す。それらは、各々が異なるエピトープを認識する特異的抗原に対して分泌される免疫グロブリン分子の混合物である。
【０１７９】
本明細書で使用される場合、用語「抗体誘導体」は、例えば抗体を第２の分子に連結するために、アミノ酸の１つまたは複数がアルキル化、ＰＥＧ化、アシル化、エステル形成、またはアミド形成等によって化学修飾されている、全長抗体または抗体の断片を含む。これらには、これらに限定されないが、ＰＥＧ化抗体、システイン−ＰＥＧ化抗体、およびそのバリアントが含まれる。
【０１８０】
本明細書に開示の方法、使用、およびキットは、炎症性サイトカインの発現または分泌を減少させるかまたは阻害する１つまたは複数の作用剤を含み得る。炎症性サイトカインは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、Ｃ−Ｃモチーフケモカインリガンド２（ＣＣＬ２）、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、インターロイキン６（ＩＬ−６）、ＩＬ−１Ｂ、ＩＬ−１８、および酸化窒素シンターゼ２（ＮＯＳ２）からなる群から選択され得る。
【０１８１】
キット
【０１８２】
本明細書に開示された作用剤のいずれかを含むキットがさらに本明細書で開示される。一部の実施形態では、キットは、ＯＬＦＲの活性をモジュレートする作用剤および使用説明書を含む。代替としてまたは追加として、キットは、ＯＬＦＲの活性を増加させる作用剤および使用説明書を含む。キットは、ＯＬＦＲの発現を増加させる作用剤および使用説明書を含み得る。キットは、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を増加させるかまたは促進する作用剤および使用説明書を含み得る。キットは、ＯＬＦＲの活性を減少させる作用剤および使用説明書を含み得る。キットは、ＯＬＦＲの発現を減少させる作用剤および使用説明書を含み得る。キットは、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を減少させるかまたは阻害する作用剤および使用説明書を含み得る。キットは、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）のリガンドおよび使用説明書を含み得る。キットは、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）アゴニストおよび使用説明書を含み得る。キットは、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）アンタゴニストおよび使用説明書を含み得る。キットは、オクタナールおよび使用説明書を含み得る。キットは、シトラールおよび使用説明書を含み得る。キットは、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）を標的にする遺伝子サイレンシング剤および使用説明書を含み得る。キットは、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）のリガンドを標的にする遺伝子サイレンシング剤および使用説明書を含み得る。キットは、受容体輸送タンパク質１（ＲＴＰ１）、ＲＴＰ２、受容体発現増強タンパク質１（ＲＥＥＰ１）、アミノアシラーゼ３（Ａｃｙ３）、およびグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｏｌｆ）サブユニットアルファ（Ｇｎａｌ）からなる群から選択される１つまたは複数のタンパク質を標的にする遺伝子サイレンシング剤および使用説明書を含み得る。
【０１８３】
本明細書に開示されたキットは、１つまたは複数の薬学的に許容される担体をさらに含み得る。「薬学的に許容される担体」は、本明細書に開示された組成物に使用され得る任意の希釈剤、賦形剤、または担体を指す。薬学的に許容される担体には、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミン、緩衝物質、例えば、リン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質、例えば、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコール、および羊毛脂が含まれる。適切な薬学的担体は、この分野における標準参考書である、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙに記載されている。それらは、意図される投与形式、すなわち、経口の錠剤、カプセル、エリキシル剤、シロップなどに関して、かつ通常の薬務と関連して、選択され得る。
【０１８４】
投与
【０１８５】
本明細書に開示された方法、使用、およびキットは、作用剤を投与すること、または必要とする対象に作用剤を投与するための使用説明書を含み得る。
【０１８６】
「投与」は、１回の用量で、処置の過程を通して、連続的にまたは間欠的に遂行され得る。最も効果的な手段および投与量を決定する方法は、当業者に公知であり、治療に使用される組成物、治療の目的、処置されることになっている標的細胞、および処置されることになっている対象によって異なる。単回または複数回投与が、処置する医師により選択されることになる用量レベルおよびパターンで行われ得る。適切な剤形および作用剤を投与する方法は、当技術分野において公知である。投与経路もまた、決定することができ、最も効果的な投与経路を決定する方法は、当業者に公知であり、処置に使用される組成物、処置の目的、処置されることになっている対象の健康状態または疾患ステージ、および標的細胞または組織によって異なる。投与経路の非限定的例には、経口投与、経鼻投与、注射、および局所適用が含まれる。
【０１８７】
本開示の作用剤は、治療のために任意の適切な投与経路によって投与され得る。最適な経路が、レシピエントの状態および年齢、ならびに処置されることになっている疾患によって異なることもまた認識されているだろう。用語「有効量」は、所望の効果を達成するのに十分な量を指す。治療的または予防的適用の関連において、有効量は、問題の状態の型および重症度、ならびに個々の対象の特性、例えば、全般的健康状態、年齢、性別、体重、および医薬組成物に対する耐性に依存する。免疫原性組成物の関連において、一部の実施形態では、有効量は、病原体に対する防御応答を生じるのに十分な量である。他の実施形態では、免疫原性組成物の有効量は、抗原に対する抗体発生を生じるのに十分な量である。一部の実施形態では、有効量は、必要とする対象に受動免疫を与えるのに必要とされる量である。免疫原性組成物に関して、一部の実施形態では、有効量は、上記の因子に加えて、意図される使用、特定の抗原性化合物の免疫原性の程度、および対象の免疫系の健全性／応答性に依存する。当業者は、これらを始めとする因子に依存する適切な量を決定することができるだろう。
【０１８８】
本明細書で使用される場合、用語「処置する」または「処置」は、発症のいくらかの防止または遅延、症状の頻度または重症度の低減、症状の軽快、患者の快適さまたは機能の向上、状態または疾患状態の重症度の減少、患者における、所定の状態もしくは疾患または状態症状もしくは疾患症状の発生の減少などを指し得る。処置の効果は、所定の処置を受けていない個体もしくは個体のプールと、または同じ患者の処置前もしくは処置中断後と、比較することできる。上記で示されているように、処置は、完全（検出可能な症状がない）であるか、または処置が存在しなければ起こる可能性が高いだろう症状の数よりも少ない数の症状が観察されるような、部分的であり得る。
【０１８９】
一部の実施形態では、処置の方法は、新生物、腫瘍、がん、もしくは悪性細胞塊の部分的もしくは完全な破壊；新生物、腫瘍、がん、もしくは悪性細胞塊の体積、サイズ、もしくは数の低減；新生物、腫瘍、がん、もしくは悪性細胞の壊死、溶解、もしくはアポトーシスを刺激する、誘導する、もしくは増加させること；新生物、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍の細胞質量を低減すること；新生物、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍の体積、質量、サイズ、もしくは細胞数の進行もしくは増加を阻害または防止すること；または寿命を延ばすことを生じる。一部の実施形態では、処置の方法は、新生物、腫瘍、がん、または悪性腫瘍に伴い、またはそれにより引き起こされる有害症状または合併症の重症度、持続期間、または頻度を低減するか、または減少させることを生じる。一部の実施形態では、処置の方法は、疼痛、不快感、悪心、脱力感、または嗜眠を低減するか、または減少させることを生じる。一部の実施形態では、処置の方法は、エネルギーの増加、食欲、運動性または精神的充足の向上を生じる。
【０１９０】
ある特定の実施形態では、処置の方法は、治療有効量の作用剤を対象に投与するステップであって、前記作用剤が、表１、表２、表３、表４、表５、表６、表７、表８、表９、図２Ａ、および図２Ｂのいずれかに記載の１つまたは複数の嗅覚受容体の発現または活性をモジュレートするステップを含む。本明細書で使用される場合、「治療有効量」とは、それが投与されることについての効果（例えば、疾患または障害を処置するまたは防止すること）を生じる用量を意味する。正確な用量および処方は、処置の目的に依存し、公知の技術を使用して当業者によって確認可能である（例えば、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  （ｖｏｌｓ．  １−３，  １９９２）；Ｌｌｏｙｄ，  Ｔｈｅ  Ａｒｔ，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ  （１９９９）；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  ２０ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｇｅｎｎａｒｏ，  Ｅｄｉｔｏｒ  （２００３）、およびＰｉｃｋａｒ，  Ｄｏｓａｇｅ  Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ  （１９９９）参照）。例えば、所定のパラメータについて、治療有効量は、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、４０％、５０％、６０％、７５％、８０％、９０％、または少なくとも１００％の増加または減少を示す。治療有効性はまた、「〜倍」の増加または減少として表現することできる。例えば、治療有効量は、標準対照に対して少なくとも１．２倍、１．５倍、２倍、５倍、またはそれを超える影響を有し得る。治療有効用量または治療有効量は、疾患の１つまたは複数の症状を軽快させ得る。治療有効用量または治療有効量は、それが投与されることになっていることについての効果が、疾患を発生するリスクがある人を処置することである場合、疾患の発症、または疾患の１つもしくは複数の症状を防止し、または遅延させ得る。
【０１９１】
本発明は、本明細書に記載されたアッセイにより識別される新規な作用剤、および本明細書に記載された処置の方法におけるそのような作用剤の使用をさらに提供する。
【０１９２】
他に規定がない限り、本明細書で使用される全ての技術的および科学的用語は、本発明が属する分野の当業者により一般的に理解されているのと同じ意味をもつ。
【０１９３】
本明細書で引用された全ての出願、刊行物、特許、および他の参考文献、ＧｅｎＢａｎｋ引用およびＡＴＣＣ引用は、全体が参照により組み込まれている。矛盾する場合、定義を含む本明細書が支配する。
【０１９４】
本明細書に開示された特徴の全ては、任意の組合せで組み合わせられ得る。本明細書に開示された各特徴は、同じ、等価の、または類似した目的を果たす代替の特徴によって置き換えられ得る。したがって、明確に他に言及がない限り、開示された特徴（例えば、化合物構造）は、等価のまたは類似した特徴の類の例である。
【０１９５】
本明細書で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈が明らかに他に指定しない限り、複数形の指示対象を含む。したがって、例えば、「１つの第１の、第２の、第３の、第４の、第５のなどの予知遺伝子」または「１つの陽性または陰性予知遺伝子」は、複数のそのような第１の、第２の、第３の、第４の、第５のなどの遺伝子、または複数の陽性および／もしくは陰性予知遺伝子を含む。
【０１９６】
本明細書で使用される場合、全ての数値または数の範囲は、文脈が明らかに他に指定しない限り、そのような範囲内の整数、およびその値または範囲内の整数の端数を含む。したがって、例示として、９０〜１００％の範囲への言及は、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９５％、９７％など、加えて、９１．１％、９１．２％、９１．３％、９１．４％、９１．５％など、９２．１％、９２．２％、９２．３％、９２．４％、９２．５％などその他を含む。
【０１９７】
より多い（より大きい）または未満を伴う数への言及は、それぞれ、その参照値より大きいまたは未満の任意の数を含む。したがって、例えば、３０，０００未満への言及は、一（１）という数までずっと下がっていく、２９，９９９、２９，９９８、２９，９９７などを含み、２０，０００未満は、一（１）という数までずっと下がっていく、１９，９９９、１９，９９８、１９，９９７などを含む。
【０１９８】
本明細書で使用される場合、全ての数値または数の範囲は、文脈が明らかに他に指定しない限り、その値の端数、ならびにそのような範囲内の整数およびそのような範囲内のその整数の端数を含む。したがって、例示として、パーセンテージ範囲９０〜１００％などの数の範囲への言及は、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９５％、９７％など、加えて、９１．１％、９１．２％、９１．３％、９１．４％、９１．５％など、９２．１％、９２．２％、９２．３％、９２．４％、９２．５％などその他を含む。したがって、１〜５倍の範囲の言及は、１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、１６倍、１７倍、１８倍、１９倍、２０倍など、加えて、１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍など、２．１倍、２．２倍、２．３倍、２．４倍、２．５倍などその他を含む。
【０１９９】
一連の範囲への言及は、その一連内の異なる範囲の境界の値を組み合わせる範囲を含む。したがって、例示として、２〜７２時間、２〜４８時間、４〜２４時間、４〜１８時間、および６〜１２時間という一連の範囲への言及は、２〜６時間、２〜１８時間、２〜２４時間など、および４〜２７時間、４〜４８時間、４〜６時間などの範囲を含む。
【０２００】
本発明は一般的に、多数の実施形態および態様を記載するために肯定的言語を使用して、本明細書に開示されている。本発明はまた、具体的には、物質もしくは材料、方法ステップおよび条件、プロトコール、または手順などの特定の主題が、完全にまたは部分的に、排除されている態様を含む。例えば、本発明のある特定の実施形態または態様では、材料および／または方法ステップが排除されている。したがって、本発明は、一般的に、本発明が含まないものに関して本明細書で表されていないとはいえ、本明細書に明確には排除されていない態様が、それでもなお、本明細書で開示される。
【０２０１】
本発明のいくつかの実施形態が記載されている。それでもなお、当業者は、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、それを様々な利用および条件に適合するように本発明の様々な変化および改変を施すことができる。したがって、以下の実施例は、例証することを意図され、主張された本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【実施例】
【０２０２】
（実施例１）
炎症性遺伝子（ＣＣＬ２、ＣＣＬ４、ＴＮＦ、およびｉＮＯＳ）の発現へのシトラールの効果
この実施例において、Ａｐｏｅ−／−マウスにおける血管マクロファージのＣＣＬ２、ＣＣＬ４、ＴＮＦ、およびｉＮＯＳ発現へのシトラールの効果を調べた。アテローム性動脈硬化症の広く使用されているモデルである、高脂肪の西洋風食餌を供給されたＡｐｏｅ−／−マウスにおけるアテローム性動脈硬化症へのシトラールの効果もまた、この実施例で調べた。
【０２０３】
西洋風食餌（ＷＤ）で２週間、維持されたａｐｏＥ−／−マウスから大動脈全体を採取し、かつＤＭＳＯ（Ｃｔｒｌ（対照））、シトラール（Ｃｉｔ、１００μＭ）、オクタナール（Ｏｃｔ、ＤＭＳＯ中１０μＭ）、またはリポ多糖（ｌｐｓ、ＤＭＳＯ中０．５μｇ／ｍＬ）で、単独でまたは組み合わせて、１２時間処理することにより、遺伝子発現分析を実施した。インキュベーション後、大動脈を、Ｔｒｉｚｏｌ試薬（１ｍｌ）中に移し、ｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳ（商標）Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ（Ｍｉｌｌｔｅｎｙ）で消化した。その後、全ＲＮＡを、ＲＮＡｓｅ  Ｍｉｃｒｏキット（Ｑｉａｇｅｎ）で精製し、Ｏｍｎｉｓｃｒｉｐｔ逆転写酵素キット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して逆転写した。リアルタイムＰＣＲ反応を、ＲＴ２  Ｓｙｂｒ  Ｇｒｅｅｎ遺伝子発現アッセイプロトコール（Ｑｉａｇｅｎ）に従って実施した。ＲＴ２  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  ｑＰＣＲマスターミックスおよびマウスＧＡＰＤＨ、ＣＣＬ２、ＣＣＬ４、ＴＮＦ、およびｉＮＯＳについて予め作製されたＲＴ２  ｑＰＣＲプライマーアッセイを使用した。データを、ハウスキーピング遺伝子ＧＡＰＤＨの発現レベルに対して正規化した。図１Ａ：Ｏｌｆｒ２阻害剤シトラール単独でのまたはオクタナールおよびＬＰＳと組み合わせての処理後のＣＣＬ２、ＣＣＬ４、ＴＮＦ、およびｉＮＯＳの遺伝子発現分析の結果を示す。図３Ａに示されているように、シトラールは、ＬＰＳの存在下および非存在下の両方において、ＣＣＬ２、ＣＣＬ４、ＴＮＦ、およびｉＮＯＳの増加を完全に遮断した。
【０２０４】
アテローム性動脈硬化症の広く使用されているモデルである、高脂肪の西洋風食餌を供給されたＡｐｏｅ−／−マウスにおけるアテローム性動脈硬化症へのシトラールの効果を調べた。簡単に述べれば、阻害剤シトラール処理を開始する前に、ＡｐｏＥ−／−マウス（週齢１０週間）にＷＤを４週間、供給した。１０ｍｇ／ｋｇのシトラールを１００ｕＬのＰＢＳ中に希釈し、３日ごとに４週間、合計１２回の注射で、腹腔内（Ｉ．Ｐ．）に注射した。この期間中、マウスは、ＷＤを合計８週間、食べ続ける。その後、マウスを屠殺し、大動脈外植およびピン止めのために採取した。図１Ｂは、ＯＬＦＲ２阻害剤シトラールでの処理後のアテローム性動脈硬化病変評価の結果（病変を有するピクセルの％および数）を示す。図１Ｃは、シトラールまたは生理食塩水（未処理）で処理されたマウスのピン止めされた大動脈の写真を示す。図１Ｂに示されているように、シトラール処理されたＡｐｏｅ−／−マウスは、アテローム性動脈硬化病変の、大動脈面積に占める約８％から約５％への有意な低下（Ｐ＜０．０２）を示した。このように、Ｏｌｆｒ２を遮断することは、抗アテローム性動脈硬化であり、Ｏｌｆｒ２がアテローム性動脈硬化症に寄与することを示している。
（実施例２）
血管マクロファージのトランスクリプトーム研究
【０２０５】
アテローム性動脈硬化症は、マクロファージおよび他の免疫細胞によって駆動される動脈壁の炎症性疾患である。嗅覚受容体（Ｏｌｆｒ）は、嗅覚上皮細胞に発現するＧタンパク質共役型受容体であり、嗅覚に関与する。アテローム性動脈硬化症をよりよく理解するために、血管マクロファージのトランスクリプトーム研究を実施した。
【０２０６】
アテローム性動脈硬化症を起こしやすいＡｐｏｅ−／−マウスの大動脈から選別された血管マクロファージのトランスクリプトーム研究において、何百個というＯｌｆｒ、Ｇαｏｌｆ（Ｇｎａｌ）、Ａｃｙ３、Ｒｅｅｐ３、Ｒｔｐ１、Ｒｔｐ２、ならびにサイクリックヌクレオチド感受性イオンチャネルサブユニットＣｎｇａ１−４およびＣｎｇｂ１が、予想外に発現していることが見出された（表２）。これらの遺伝子の一部は、アテローム性動脈硬化症をもたないマウス由来の大動脈マクロファージにおいてさえも検出でき、多くのものは、ＬＰＳに応答して、上方制御された（図２Ａ、表１）。
【０２０７】
図２Ａは、マウス血管マクロファージおよびいくつかの他の組織マクロファージ、ＤＣ、ならびに血中単球に発現したＯｌｆｒ遺伝子（合計１１２３個）のヒートマップを示す［データを、行ごとのＧａｐｄｈ発現ランキング（＝１）によって正規化した］。以下のいくつかのマイクロアレイデータセット（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘマウス遺伝子１．０  ＳＴアレイタイプ）を比較のために使用した：ＧＳＥ６８９６８血管Ｍφ；ＧＳＥ７７１０４  ＢＭＤＭ、ＧＳＥ４３０７５腹膜（ＰＴ）Ｍφ；ＧＳＥ１００３９３小腸（ＳＩ）Ｍφ；ＧＳＥ１５９０７肺Ｍφ；ＧＳＥ１５９０７脾臓（赤脾髄）Ｍφ；ＧＳＥ１５９０７ミクログリア；ＧＳＥ１００３９３  ＳＩ  ＤＣ；ＧＳＥ１５９０７肺ＤＣｓ；ＧＳＥ１５９０７腸間膜ＬＮ（ＭＬＮ）ＤＣ；ＧＳＥ１５９０７血中古典的（ＣＭ）および非古典的単球（ＮＣＭ）亜集団。行と列の１マイナスピアソン相関クラスタリング（ｏｎｅ  ｍｉｎｕｓ  Ｐｅａｒｓｏｎ  ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ）が示されている。Ｏｌｆｒ２、Ｒｔｐ１、Ｒｔｐ２、Ｒｅｅｐ３、Ａｃｙ３、Ｇｎａｌ、Ｃｎｇａ１−４、およびＣｎｇｂ１がハイライトされている。
【０２０８】
他の組織マクロファージ（小腸（ＳＩ）マクロファージ、未処理のまたはＬＰＳで刺激された腹腔内（ＩＰ）マクロファージ、肺ＣＤ１１ｂ−マクロファージ、脾臓の赤脾髄マクロファージ、ミクログリア）、樹状細胞（ＤＣ）（小腸ＤＣ、腸間膜リンパ節（ＭＬＮ）ＤＣ、肺ＤＣ）、および単球（古典的（ＣＭ）、非古典的（ＮＣＭ）、ＭＨＣ−ＩＩ＋と−の両方）の公開されたトランスクリプトームにおいて、はるかに少ないＯｌｆｒが発現していた。正規化Ｏｌｆｒ発現およびアクセサリー分子のリストは、表１に見出すことができる。
【０２０９】
図２Ｂは、既知のヒトオルソログを有する発現したＯｌｆｒのヒートマップを示す。１１２３個の既知のマウスＯｌｆｒのうち、５８２個が既知のヒトオルソログを有し（同じヒトオルソログを共有するＯｌｆｒが含まれる）、そのうちの２８０個（４８％）が、ＬＰＳ処理マウス由来の血管マクロファージにおいて発現していた（図２Ｂ）。
【０２１０】
この実験は、血管マクロファージが、何百個という嗅覚受容体、ならびにＯｌｆｒシグナル伝達および輸送に必要とされるアクセサリー分子を発現することを実証している。
（実施例３）
Ｏｌｆｒ２およびアテローム性動脈硬化症
【０２１１】
実施例２に示されているように、血管マクロファージは、オクタナールの受容体、Ｏｌｆｒ２を含む、何百個という嗅覚受容体を発現する。それらはまた、Ｏｌｆｒシグナル伝達および輸送に必要とされるアクセサリー分子、Ｒｔｐ１、Ｒｔｐ２、Ｒｅｅｐ３、Ａｃｙ３、およびＧｎａｌも発現する。ヒトアテローム性動脈硬化プラークおよびヒト単球由来マクロファージに発現した、Ｏｌｆｒ２のヒトオルソログ（ＯＲ６Ａ２）のライゲーションは、強く炎症促進性である。この実施例において、Ｏｌｆｒ２のアテローム性動脈硬化症における役割を調べる。
【０２１２】
（１）Ｏｌｆｒ２の発現が、ＬＰＳ処理された血管マクロファージにおいて増加していること、（２）Ｏｌｆｒ２が、骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）において発現していること、（３）Ｏｌｆｒ２が既知のリガンド（オクタナールを含む脂肪族アルデヒド）を有すること、（４）Ｏｌｆｒ２が既知の阻害剤（シトラール）を有すること、（５）Ｏｌｆｒ２がヒトオルソログ（ＯＲ６Ａ２）を有すること、（６）そのヒトオルソログが、ヒト頸動脈内膜剥離術試料およびヒト単球由来マクロファージに発現していることの理由により、Ｏｌｆｒ２（ヒトオルソログ：ＯＲ６Ａ２）をこの実施例において調べる。
【０２１３】
Ｏｌｆｒ２は、オクタナールなどの中鎖脂肪族アルデヒドに、約１０μＭのＥＣ５０で結合する１５，１６。オクタナールは、カプリル酸（オクタン酸）のカルボキシ基の還元により、または酸化ストレス中の脂質過酸化を介して、生成される脂肪アルデヒドとしても知られた８炭素アルデヒドである１７。
【０２１４】
ＢＭＤＭにおけるＯｌｆｒ２発現を調べた。簡単に述べれば、Ａｐｏｅ−／−マウス由来の骨髄細胞を、ＭＣＳＦ（２０ｎｇ／ｍｌ）で７日間、刺激して、ＢＭＤＭを発生させ、それを、未処理のままにし、またはＯｌｆｒ２アゴニストのオクタナール（Ｏｃｔ、１０μＭ）、ＬＰＳ（５００ｎｇ／ｍＬ）、もしくは両方と１２時間、インキュベートした。
【０２１５】
マウスＢＭＤＭにおいて、Ｏｌｆｒ２  ｍＲＮＡ（図３Ａ）およびタンパク質発現を、ウェスタンブロットにより見出した（図３Ｂ）。Ｏｌｆｒ２  ｍＲＮＡおよびタンパク質発現は、細菌リポ多糖（ＬＰＳ）、オクタナールにより増強され、組み合わされた両方によって強化された。フローサイトメトリー（図３Ｃ〜Ｄ）は、Ｏｌｆｒ２の表面発現を実証した。細胞表面および細胞内Ｏｌｆｒ２発現を、免疫蛍光により確認した（図３Ｅ）。
【０２１６】
次に、西洋風食餌（ＷＤ）供給雄マウス（ｎ＝５）から採取された大動脈におけるＯｌｆｒ２発現を調べた１８。簡単に述べれば、西洋風食餌（ＷＤ）を２週間供給されたＡｐｏｅ−／−マウスから大動脈全体を採取し、上記のように処理した。Ｏｌｆｒ２発現のリアルタイムＰＣＲ分析により定量化されたＯｌｆｒ２の相対的発現を、Ｇａｐｄｈの発現および未処理の対照に対して正規化した。
【０２１７】
加えて、Ａｐｏｅ−／−マウスから採取された大動脈におけるＲｔｐ１およびＲｔｐ２発現を調べた。簡単に述べれば、Ａｐｏｅ−／−マウスの外植大動脈を、Ｏｃｔ（１０μＭ）および／またはリポ多糖（ＬＰＳ、５００ｎｇ／ｍＬ）で１２時間、処理した。Ｒｔｐ１およびＲｔｐ２発現を、上記のようにｑＰＣＲにより評価した。Ｎ＝３独立的実験（２−ΔΔＣｔ法により計算された相対的発現）。データは、平均値±ＳＥＭとして提示されている。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊＊ｐ＜０．００１。ｐは、一元配置ＡＮＯＶＡ検定、Ｔｕｋｅｙの多重比較検定により計算された。
【０２１８】
図３Ｆおよび４Ａ〜Ｂに示されているように、大動脈のＯｌｆｒ２  ｍＲＮＡ、Ｒｔｐ１およびＲｔｐ２  ｍＲＮＡが、ｅｘ  ｖｉｖｏでのＬＰＳ処理により誘導されることが見出され、オクタナールを加えることにより、有意に増強された。Ｏｌｆｒ２発現は、他の文献で記載されているように１９、大動脈から精製されたＦ４／８０＋血管マクロファージにおけるそのタンパク質レベルにおいて確認された（図３Ｇ〜Ｈ）。
【０２１９】
Ｔ細胞およびＢ細胞におけるＯｌｆｒ２発現もまた調べた。簡単に述べれば、少なくとも２週間、西洋風食餌（ＷＤ）で維持されたＡｐｏｅ−／−マウスから大動脈全体を採取し、オクタナール（Ｏｃｔ、１０μＭ）およびリポ多糖（ＬＰＳ、５００ｎｇ／ｍＬ）と１２時間、インキュベートした。細胞を収集し、（図３Ｅに記載されているように）Ｏｌｆｒ２検出のために染色し、フローサイトメトリー（ＬＳＲＩＩ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）により分析した。Ｂ細胞（ＣＤ４５＋、生きている、ＴＣＲβ−、ＣＤ１９＋）およびＣＤ４＋  Ｔ細胞（ＣＤ４５＋、生きている、ＴＣＲβ＋、ＣＤ４＋）のＯｌｆｒ２−ＡＦ４８８蛍光強度中央値（ＭＦＩ）が報告されている。群あたりＮ＝５。顕著には、ＣＤ４＋  Ｔ細胞およびＣＤ１９＋  Ｂ細胞などの他の大動脈免疫細胞集団は、有意なＯｌｆｒ２発現を示さなかった（図５Ａ〜Ｂ）。ＷＤ供給マウスの大動脈ホールマウントにおける免疫蛍光実験は、多数ではあるが、全部というわけではないＣＤ６８＋マクロファージにおけるＯｌｆｒ２発現を確認した（図３Ｉ）。
【０２２０】
加えて、血中単核細胞におけるＯｌｆｒ２発現および機能を調べた。簡単に述べれば、心穿刺により採取されたＡｐｏｅ−／−マウス血液を、赤血球溶解し、オクタナール（Ｏｃｔ、１０μＭ）およびリポ多糖（ＬＰＳ、５００ｎｇ／ｍＬ）と１２時間、インキュベートした。細胞を収集し、（図３Ｅに記載されているように）Ｏｌｆｒ２検出のために染色し、フローサイトメトリー（ＬＳＲＩＩ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）により分析した。総単球（ＣＤ４５＋、生きている、ＴＣＲβ−、ＣＤ１９−、ＣＤ１１５＋）、古典的単球（ＣＤ４５＋、生きている、ＴＣＲβ−、ＣＤ１９−、ＣＤ１１５＋、Ｌｙ６Ｃ＋）、非古典的単球（ＣＤ４５＋、生きている、ＴＣＲβ−、ＣＤ１９−、ＣＤ１１５＋、Ｌｙ６Ｃ−）、Ｂ細胞（ＣＤ４５＋、生きている、ＴＣＲβ−、ＣＤ１９＋）、およびＣＤ４＋  Ｔ細胞（ＣＤ４５＋、生きている、ＴＣＲβ＋、ＣＤ４＋）のＯｌｆｒ２−ＡＦ４８８蛍光強度中央値（ＭＦＩ）が報告されている。群あたりＮ＝５〜６。データは、平均値±ＳＥＭとして提示されている。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊＊ｐ＜０．００１。ｐは、一元配置ＡＮＯＶＡ検定、Ｔｕｋｅｙの多重比較検定により計算された。Ｏｌｆｒ２タンパク質が、循環古典的（ＣＤ１１５＋Ｌｙ６Ｃ＋）および非古典的（Ｃｄ１１５＋Ｌｙ６Ｃ−）血中単球に発現していることが見出された（図６Ａ）。
【０２２１】
単球におけるＯｌｆｒ２の機能性を評価するために、Ａｐｏｅ−／−マウス血液からネガティブ選択により細胞を濃縮した。その後、精製された単球を、上記のようにインキュベートした。ＴＮＦ発現（ＴＮＦ−ＰＥ）を、フローサイトメトリーによる細胞内染色プロトコールによって評価した。古典的単球と非古典的単球を、以前に記載されているように、分けた（生きている、ＣＤ１１５＋、それぞれ、ＬｙＣ６＋およびＬｙＣ６−）。図６Ｂは、細胞事象数を掛け算したＴＮＦ  ＭＦＩとして報告された単球におけるＯｌｆｒ２機能を示す。群あたりｎ＝５。データは、平均値±ＳＥＭとして提示されている。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊＊ｐ＜０．００１。ｐは、一元配置ＡＮＯＶＡ検定、Ｔｕｋｅｙの多重比較検定により計算された。
【０２２２】
Ｏｌｆｒ２ライゲーションの炎症応答への役割を、血管マクロファージにおいて細胞内遊離カルシウム（Ｃａ２＋）を測定することにより調べた。簡単に述べれば、マウス大動脈細胞懸濁液に２μＭ  Ｆｌｕｏ−４を３７℃で３０分間、負荷し、その後、洗浄し、細胞表面マーカーとＲＴで２０分間、インキュベートした。ＣＤ４５＋、生きている、ダンプチャネル−（ＴＣＲｂ−、ＣＤ１９−）、Ｆ４／８０＋マクロファージを、フローサイトメトリーにより分析した。獲得開始から６０秒（ｓ）後、Ｏｌｆｒ２アゴニストＯｃｔ（１０μＭ）およびアンタゴニストＣｉｔ（１００μＭ）を単独でまたは組み合わせて（Ｏｃｔ＋Ｃｉｔ）、加えた。ＤＭＳＯ（０．１％）を対照（Ｃｔｒｌ）として注入した。
【０２２３】
Ｏｌｆｒ２の機能性を試験するために、フローサイトメトリーによるマウス血管マクロファージにおける時間分解カルシウム流を研究した（図７Ａ）。オクタナールは、注入から１００秒後および１２５秒後において、Ｏｌｆｒの既知のカルシウム動態１５と一致した、細胞内遊離カルシウムの非常に有意な増加を誘導した（図７Ｂ）。このカルシウム流は、Ｏｌｆｒ２阻害剤シトラールによって完全に遮断された９，１６（図７Ｂ）。他の免疫細胞においてカルシウムシグナルは検出されなかった（図８Ａ〜Ｂ）。図８Ａは、Ｏｌｆｒ２アゴニストのオクタナール（Ｏｃｔ  １０μＭ）およびアンタゴニストのシトラール（Ｃｉｔ  １００μＭ）の単独または組合せ（Ｏｃｔ＋Ｃｉｔ）での添加前および添加後に２μＭ  Ｆｌｕｏ−４を負荷された、ダンプチャネル＋細胞（ＴＣＲｂ＋およびＣＤ１９＋）を示す。ＯｃｔおよびＣｉｔを６０秒目に注入した。大動脈全体を消化し、Ｆｌｕｏ４（２μＭ）で、３７℃、３０分間、染色し、その後、洗浄し、細胞表面マーカーとＲＴで２０分間、インキュベートした。ＣＤ４５＋、生きている、ダンプチャネル＋（ＴＣＲｂ＋およびＣＤ１９＋）細胞を、フローサイトメトリーにより分析した。図８Ｂは、報告されたＦｌｕｏ−４の時間平均蛍光強度中央値（ＭＦＩ）を示す。ＳＤは、各時点について細胞の間で計算されている（ｎ＝２０〜５０）。分析は、３回の実験のうちの１回から行われている。
【０２２４】
アテローム性動脈硬化症における初期段階は、リポタンパク質の内皮下貯留であり、それが、その後、時間と共にプラーク進行を駆動させる非分解性炎症過程を引き起こす２０，２１。マクロファージは、炎症促進性サイトカイン、例えば、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、ＣＣＬ２およびＣＣＬ４を含むケモカイン、ならびに誘導型酸化窒素シンターゼ（ｉＮＯＳ）を産生することにより、炎症応答およびプラーク形成に寄与する２２。たいていの血管マクロファージは、出生後すぐに組織に定着する骨髄由来単球からの出生後寄与を有するＣＸ３ＣＲ１＋胚性前駆体に由来する２３，２４。成人期の間、血管マクロファージは局所的に増殖する２５。アテローム動脈硬化性マウスにおいて、プラークは、いくつかの表現型的に異なるマクロファージサブセットを含有する２６〜２８。具体的には、以下の４つの主要なマクロファージ集団がアテローム性動脈硬化性大動脈に見出された：常在型様、炎症性、およびＴＲＥＭ２＋サブセット２６、ならびに泡沫細胞２８。
【０２２５】
Ｏｌｆｒ２活性化の生理的効果をｉｎ  ｓｉｔｕで試験するために、マウス（群あたりｎ＝５）の外植大動脈全体を、ＬＰＳありまたはＬＰＳなしで、オクタナールで処理した。簡単に述べれば、大動脈全体を、未処理のままにし、またはＯｌｆｒ２アゴニストのオクタナール（Ｏｃｔ、１０μＭ）、ＬＰＳ（５００ｎｇ／ｍＬ）、もしくは両方と１２時間、インキュベートした。Ｃｃｌ２、Ｃｃｌ４、Ｔｎｆ、およびＮｏｓ２遺伝子発現を検出するために、定量的リアルタイムＰＣＲ反応を実施した。相対的発現を、Ｇａｐｄｈ発現および未処理の対照に対して正規化した。図７Ｃに示されているように、オクタナール処理は、炎症性ケモカインＣｃｌ２（ＭＣＰ−１）およびＣｃｌ４（ＭＩＰ−１β）、炎症性サイトカインＴｎｆ、ならびに炎症性酸化窒素シンターゼｉＮＯＳ（Ｎｏｓ２）のｍＲＮＡ発現を誘導した。全ての場合において、オクタナールは、これらの炎症性分子のＬＰＳ誘導性発現を増強し、３〜１０μＭでピークに達した（図７Ｃ、図９Ａ〜Ｂ）。逆に、Ｏｌｆｒ２阻害剤シトラールは、オクタナールとインキュベートされた外植大動脈において炎症性メディエーター発現を抑えるのに効果的であった（図７Ｄ）。シトラールは、Ｏｌｆｒ２  ｍＲＮＡ発現に影響しなかった（データ未呈示）。
【０２２６】
オクタナールおよびＬＰＳはまた、ＴＮＦ、ＣＣＬ２、およびＣＣＬ４タンパク質の、処理された大動脈の上清への分泌を増強した（図７Ｅ）。血管マクロファージ（Ｆ４／８０＋）によるＴＮＦ分泌は、フローサイトメトリーを使用する細胞内染色により確認された（図７Ｆ）。同様の結果が、古典的Ｌｙ６Ｃ＋単球および非古典的Ｌｙ６Ｃ−単球において観察された（図６Ｂ）。
【０２２７】
マクロファージは、アテローム性動脈硬化症を駆動させる最も顕著なサイトカインの１つ、ＩＬ−１βの既知のプロデューサーである２９。ＩＬ−１β産生および分泌は、システインプロテアーゼ、カスパーゼの活性化のための分子プラットフォームとして働く、いくつかのタンパク質を含有する細胞質複合体である、インフラマソームのアセンブリを必要とする３０，３１。オクタナールがマクロファージにおけるＩＬ−１β分泌を誘導するかどうかを試験するために、ＢＭＤＭを、低用量のＬＰＳ（５０ｎｇ／ｍＬ）で１８時間、プライムし、その後、オクタナール単独にまたはシトラールと一緒に曝露させた。上清中のＩＬ−１βタンパク質を、サイトカインビーズアレイにより定量化した。データは、平均値±ＳＥＭとして提示されている。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊＊ｐ＜０．００１。ｐは、一元配置ＡＮＯＶＡ検定、Ｔｕｋｅｙの多重比較検定、および独立ｔ検定により計算された。図７Ｇに示されているように、オクタナール（１０μＭ）は、ＩＬ−１βの上清への放出を強く増加させ、そのＩＬ−１βの放出は、シトラールによって阻害された。これらのデータは、オクタナールによるインフラマソーム活性化の増強の可能性を示唆している。
【０２２８】
次に、質量分析を用いて、固形飼料（ＣＤ）または西洋風食餌（ＷＤ）での野生型およびＡｐｏｅ−／−マウスの血漿中のオクタナールを測定した。簡単に述べれば、マウス血漿を、オクタナールについて、誘導体化および安定同位体希釈ＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより分析した。内部標準として、誘導体化反応の前に［２Ｈ１６］オクタナールを血漿へスパイクした。オンラインのタンデム質量分析と組み合わせた安定同位体希釈ＨＰＬＣ（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）（図１０Ａ）は、全てのマウスにおいてオクタナールの検出可能なレベルを示した。ＣＤでのＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの血漿において、オクタナールは、１．５〜２．５μＭの間の範囲であった（図１０Ｂ）。オクタナールレベルは、ＷＤを供給されたマウスにおいて、平均３．５μＭまで有意に増加した（図１０Ｂ）。オクタナールはまた、ＣＤおよびＷＤを受けたＡｐｏｅ−／−マウスにおいて、上昇した（図１０Ｃ）。健康なヒトドナーの血漿もまた、オクタナールを１．５μＭ（±０．８２、ｎ＝５）の平均濃度で含有した。
【０２２９】
Ｏｌｆｒ２のアテローム性動脈硬化症への影響の可能性をｉｎ  ｖｉｖｏで試験するために、雄Ａｐｏｅ−／−マウスに、ＷＤを８週間、供給し、その最後の４週間、オクタナール（１０μｇ／ｇ）を３日ごとに合計１２回の注射で、腹腔内に注射した。大動脈弓のｅｎ  ｆａｃｅ染色は、オクタナール処理が、病変サイズを２倍より大きくしたことを示した（図１０ＤおよびＥ）。オクタナールは、総コレステロールへもＬＤＬコレステロールへもＨＤＬコレステロールへもトリグリセリドへも影響を有さなかった（図１１Ａ）。同様に、機能喪失実験において、雄Ａｐｏｅ−／−マウスをシトラール（１０μｇ／ｇ、４週間にわたって１２回の注射）で処理し、そのことは、アテローム性動脈硬化病変のサイズを約４０％、低減した（図１０ＦおよびＧ）。オクタナールのようにシトラール処理は、他のパラメータに影響を有さなかった（図１１Ａ）。この所見は、揮発性オクタナールの内因性レベルが、Ｏｌｆｒ２の病態生理学的に関連した活性化を誘導するのに十分であることを示唆している。
【０２３０】
たいていの嗅覚受容体、具体的にはＯｌｆｒ２の発現および輸送は、Ｒｔｐ１およびＲｔｐ２により制御されるため１９、それらの欠失がアテローム性動脈硬化病変サイズに影響するかどうかを調べた。雄Ｌｄｌｒ−／−マウスに致死的に照射し、Ｒｔｐ１／Ｒｔｐ２−／−、Ｒｔｐ１／Ｒｔｐ２＋／−、またはＲｔｐ１／Ｒｔｐ２＋／＋マウス由来の骨髄細胞で再構成した。ウェスタンブロットおよびフローサイトメトリー分析は、Ｏｌｆｒ２発現が、Ｒｔｐ１／Ｒｔｐ２−／−マウスのＢＭＤＭにおいて有意に低下したことを確認した（図１０ＨおよびＩ；図１２）。２週間の回復後、マウスに高脂肪食を１２週間、供給した。循環代謝パラメータ（総コレステロール、高密度リポタンパク質コレステロール、およびトリグリセリド）、血中白血球数、および動物の体重は、３つの群間で類似した（図１２）。Ｒｔｐ１／Ｒｔｐ２−／−キメラマウスにおける大動脈弓病変は、Ｒｔｐ１／Ｒｔｐ２＋／＋レシピエントマウスと比較して有意に低下した（図１０Ｊ）。まとめて考えると、Ｒｔｐ１および２により制御されるＯｌｆｒ２およびおそらく他のＯｌｆｒは、マウスにおいてアテローム性動脈硬化症を促進する。Ｏｌｆｒ２の阻害は、マウスにおいてアテローム性動脈硬化症を制限する。
【０２３１】
ヒト血漿がオクタナールを含有することが示されているため、マウスのヒトアテローム性動脈硬化症への適用性を調べた。この目的を達成するために、Ｂｉｏｂａｎｋ  ｏｆ  Ｋａｒｏｌｉｎｓｋａ  Ｅｎｄａｒｔｅｒｅｃｔｏｍｙ（ＢｉＫＥ）に寄託されている頚動脈プラーク（ＧＳＥ２１５４５）のトランスクリプトームを調べた。マウスＯｌｆｒ２のヒトオルソログ、ＯＲ６Ａ２  ｍＲＮＡが、全ての１２６個のプラーク試料（ＲＭＡ＞３）、および末梢血単核球（ＰＢＭＣ）試料の９７個のうちの８３個（８５％）において発現していた（図１３Ａ）。
【０２３２】
次に、ヒト単球由来マクロファージ（ｈＭＤＭ）がＯＲ６Ａ２を発現するかどうかを調べた。ＯＲ６Ａ２  ｍＲＮＡ発現は、検出でき、ＬＰＳにより増加し、オクタナールを加えることによりさらに増加した（図１３Ｂｉ）。ｈＭＤＭにおけるＯＲ６Ａ２タンパク質表面発現は、フローサイトメトリーにより確認された（図１３Ｂｉｉおよびｉｉｉ）。免疫染色は、ＬＰＳ＋オクタナール処理されたｈＭＤＭにおけるＯＲ６Ａ２発現には極性があり得ることを示唆している（図１３Ｃ）。
【０２３３】
ｈＭＤＭのオクタナール処理は、ＴＮＦ、ＩＬ６、およびＮＯＳ２を含む炎症促進性分子のｍＲＮＡ発現を誘導した（図１３Ｄ）。全ての場合において、オクタナールは、これらの炎症性分子のＬＰＳ誘導性発現、および上清において検出されるそれらの分泌を増強した（図１３Ｅ）。マウスマクロファージにおいてのように、インフラマソーム活性化は、オクタナールにより強化され、上清中のＩＬ−１βの非常に有意な増加を生じ、そのことは、シトラールにより部分的ではあるが、有意に阻害された（図１３Ｆ）。
【０２３４】
ＯＲ６Ａ２は、オクタナールについての唯一の受容体ではない（Ａｒａｎｅｄａ，  Ｒ．  Ｃ．，  Ｋｉｎｉ，  Ａ．  Ｄ．  ＆  Ｆｉｒｅｓｔｅｉｎ，  Ｓ．  Ｔｈｅ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｒｅｃｅｐｔｉｖｅ  ｒａｎｇｅ  ｏｆ  ａｎ  ｏｄｏｒａｎｔ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ．  Ｎａｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ３，  １２４８−１２５５，  ｄｏｉ：１０．１０３８／８１７７４  （２０００）；  Ｌｉ，  Ｙ．  ｅｔ  ａｌ．  Ａｌｄｅｈｙｄｅ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｏｄｏｒａｎｔ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｖｉａ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｇｒｏｕｐ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｈｙｄｒａｔｉｏｎ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．  ＡＣＳ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ  ９，  ２５６３−２５７１，  ｄｏｉ：１０．１０２１／ｃｂ４００２９０ｕ  （２０１４））。ＯＲ６Ａ２が、オクタナール媒介性ｈＭＤＭ活性化に関係があるかどうかを試験するために、ＯＲ６Ａ２を、低分子干渉ＲＮＡ（ＳｉＯＲ６Ａ２）により、ｈＭＤＭにおいてサイレンシングした。ＬＰＳ処理およびオクタナール処理されたｈＭＤＭは、スクランブルｓｉＲＮＡで処理されたｈＭＤＭと比較して、ＩＬ６、ＮＯＳ２、およびＴＮＦの発現の低減を示した（図１３Ｇ）。
【０２３５】
アテローム性動脈硬化症を増強する新しいクラスのＧＰＣＲ、Ｏｌｆｒの発見は、新しいクラスの薬物標的を示唆する。オクタナール受容体Ｏｌｆｒ２およびそれのヒトオルソログＯＲ６Ａ２は、大動脈血管マクロファージ、マウスＢＭＤＭ、ヒトｈＭＤＭ、およびヒトアテローム性動脈硬化病変に発現している。Ｏｌｆｒ２／ＯＲ６Ａ２発現は、ＬＰＳにより増加し、ｍＲＮＡレベルおよびタンパク質レベルにおけるオクタナールの存在下でさらに上昇する。オクタナールによるＯｌｆｒ２ライゲーションは、マウスおよびヒトのマクロファージにおいて炎症性サイトカインおよびケモカインを誘導する。既知のＯｌｆｒ２アゴニストのオクタナールをマウスに注射することは、アテローム性動脈硬化症を悪化させ、一方、シトラールによりＯｌｆｒ２を遮断すること、またはＲｔｐ１／Ｒｔｐ２−／−によりＯｌｆｒ輸送を損なうことは、マウスをアテローム性動脈硬化症から保護した。Ｏｌｆｒ２を遮断することまたはＯｌｆｒの輸送を損なうことから、オクタナール、およびおそらく他の天然の内因性揮発性化合物が、ｉｎ  ｖｉｖｏでアテローム性動脈硬化症を有意に駆動させることを示唆している。ヒトアテローム性動脈硬化症との関連性は、ＯＲ６Ａ２が枯渇したオクタナール刺激ｈＭＤＭの炎症性活性化の減少、ヒト血清中のオクタナールの観察、および試験された全ての１２６個のヒトアテローム性動脈硬化プラークにおけるＯＲ６Ａ２の存在により示唆されている。
【０２３６】
Ｏｌｆｒは宿主防御における役割はまだわかっていないため、本実施例は、Ｏｌｆｒ２、他のＯｌｆｒ、および下流のシグナル伝達経路を標的にする薬物様低分子が、アテローム性動脈硬化症の処置、防止、および好転のための実行可能な治療的標的であり得ることを実証している。
【０２３７】
方法
【０２３８】
動物
【０２３９】
Ｃ５７ＢＬ／６ＪバックグラウンドにおけるＡｐｏｅ−／−、Ｌｄｌｒ−／−、およびｗｔマウスは、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入された。Ｒｔｐ１／Ｒｔｐ２−／＋つがいは、親切にもＤｕｋｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｍｅｄｉｃａｌ  ＣｅｎｔｅｒからＤｒ．Ｈｉｒｏａｋｉ  Ｍａｔｓｕｎａｍｉにより提供された。特別の指定がない限り、性別をマッチさせたマウス（週齢８〜１０週間）を全ての実験において使用した。マウスは、通常の環境で飼育され、自由に食餌を食べることができた。週齢８〜１０週間からずっと、Ａｐｏｅ−／−およびＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスを、４２％が脂肪からである西洋風食餌（ＷＤ）（Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｓ  カタログ番号：ＴＤ．８８１３７）を供給され、屠殺までＷＤであり続けた。Ｌｄｌｒ−／−  雄マウス（週齢８〜１０週間）は、下記で詳細に述べられているように骨髄移植実験に使用された。
【０２４０】
全ての動物実験は、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ動物施設における施設内ガイドラインに従って行われた。
【０２４１】
マウス大動脈ｅｘ  ｖｉｖｏ培養
【０２４２】
各大動脈を、外科的に取り出し、ｉｎ  ｓｉｔｕで脂肪組織を注意深く取り除いた。大動脈を、全体のまま保つか、または以前に記載されているように１８、酵素消化した。簡単には、大動脈を小片へ切断し、４５０Ｕ／ｍＬコラゲナーゼＩ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）、２５０Ｕ／ｍＬコラゲナーゼＸＩ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）、１２０Ｕ／ｍＬヒアルロニダーゼ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）、および１２０Ｕ／ｍＬ  ＤＮアーゼＩ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ）を含有するＨＢＳＳ中、３７℃で１時間、個々に消化した。消化された大動脈細胞懸濁液を、５０μｍ細胞ストレーナー（Ｐａｒｔｅｃ）を通して濾過し、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）および１％ペニシリン／ストレプトマイシン溶液（Ｇｉｂｃｏ−ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒ）を追加した温かい３７℃  ＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｇｉｂｃｏ−ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒ）（以下、培地と呼ぶ）で洗浄した。
【０２４３】
大動脈全体または消化された大動脈細胞を、下記のようなさらなる刺激のために培地中で培養した。
【０２４４】
マウス血液収集および白血球単離
【０２４５】
マウス血液を、臓器摘出中、心穿刺により、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）コーティング化チューブ（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）に収集した。
【０２４６】
循環白血球を、１０ｍＬの１×  赤血球（ＲＢＣ）溶解緩衝剤（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）と室温（ＲＴ）、暗闇中、１０分間、インキュベートされたマウス全血から得た。その後、細胞を培地で２回、洗浄し、さらなるフローサイトメトリー研究に使用した。
【０２４７】
骨髄細胞単離およびＢＭＤＭの発生
【０２４８】
マウス骨髄を、５ｍｌ氷冷ＲＰＭＩ−１６４０培地で洗い流された大腿骨および頚骨から単離した。骨髄細胞を、７０μｍ細胞ストレーナー（ＢｉｏＰｉｏｎｅｅｒ）に通過させ、２０ｎｇ／ｍＬのマウス組換えマクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ；Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）を追加した培地中に１×１０６細胞／ｍｌで再懸濁した。細胞を、３．８ｃｍ２ディッシュ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｃｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）において３７℃および５％ＣＯ２で培養した。３日後、５ｍｌの新鮮な培地をその培養物へ加えた。７日目、浮遊細胞を捨て、接着細胞をさらなる研究に使用した。
【０２４９】
ヒト単球由来マクロファージ（ｈＭＤＭ）
【０２５０】
Ｌａ  Ｊｏｌｌａ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙの組織内のＮｏｒｍａｌ  Ｂｌｏｏｄ  Ｄｏｎｏｒ  Ｐｒｏｇｒａｍ（ＮＢＤＰ）からの、説明を受けた健康なドナー（２５〜５０歳）のＥＤＴＡ−静脈血からＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）標準分離プロトコールを使用して末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を単離した。ヒト単球を、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒト単球単離キット（ＳｔｅｍＣｅｌｌ）により、製造会社の使用説明書に従って、ＰＢＭＣから濃縮した。濃縮された単球を、５０ｎｇ／ｍｌ  ｒｈＭ−ＣＳＦを追加した培地と、３７℃および５％ＣＯ２で７日間、インキュベートした。７日目における分化マクロファージをさらなる研究に使用した。
【０２５１】
Ｏｌｆｒ２機能のｅｘ  ｖｉｖｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏでの実験手順
【０２５２】
ｅｘ  ｖｉｖｏ分析
【０２５３】
オクタナール、シトラール、およびジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）は、Ｓｉｇｍａから購入された。使用された全ての化学物質は、分析グレードまたは入手できる最高グレードであった。シトラールおよびオクタナールは、ＤＭＳＯ中１０ｍＭ濃度で再構成／希釈された。
【０２５４】
Ａｐｏｅ−／−マウスに、大動脈外植片培養のための屠殺前に、ＷＤを２週間、供給した。大動脈全体を、ＤＭＳＯ（溶媒として０．１％）、オクタナール（Ｏｃｔ、１０μＭ）単独、ＬＰＳ（５００ｎｇ／ｍＬ）単独、またはオクタナールとＬＰＳの組合せ（ＬＰＳ＋Ｏｃｔ）と、培地中、３７℃および５％ＣＯ２で１２時間、インキュベートした。その後、大動脈を収集し、ＲＮＡ抽出およびフローサイトメトリー分析のために、下記で論じられているようにさらに処理した。培養上清を収集し、分注し、さらなる分析まで−８０℃で凍結させた。
【０２５５】
ｉｎ  ｖｉｖｏ研究
【０２５６】
雄Ａｐｏｅ−／−マウス（週齢９〜１０週間）にＷＤを４週間、供給した。ＯｃｔまたはＣｉｔを、滅菌リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（Ｇｉｂｃｏ）中に１０μｇ／ｇの最終濃度で希釈した。ＷＤ投与を維持しながら、１００μｌを３日ごとに４週間（合計１２回の注射）、腹腔内（ｉ．ｐ．）に注射した。ＰＢＳ＋０．１％ＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を、溶媒対照として同じプロトコールに従って注射した。マウスを屠殺し、２％ヘパリン（Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ  Ｋａｂｉ  ＵＳＡ、ＬＬＣ）を追加したＰＢＳで灌流し、ｅｎ  ｆａｃｅアテローム性動脈硬化病変評価のために大動脈を取り出した。マウス全血（心穿刺）をＥＤＴＡチューブに収集した。白血球数を、ＨｅｍａＶｅｔ  ９５０（Ｄｒｅｗ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で決定した。４℃、３０００ｇで１５分間、遠心分離された血液から血漿を収集し、さらなる分析まで−８０℃で保存した。
【０２５７】
骨髄移植
【０２５８】
週齢１０週間のＬｄｌｒ−／−雄マウスに、５５０ラドのＸ線照射を２〜４時間離して２回、照射して、全身性髄質形成不全を誘導した。照射されたマウスに、週齢１０週間のＲｔｐ１／Ｒｔｐ２＋／＋、Ｒｔｐ１／Ｒｔｐ２＋／−、Ｒｔｐ１／Ｒｔｐ２−／−マウス、それぞれの大腿骨および頚骨から単離された骨髄細胞（５×１０６個の細胞）を静脈内（尾静脈）に加えて再定着させた。２週間の回復期間後、マウスに高コレステロール食餌（製品番号Ｄ１２１０８Ｃ、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ  Ｉｎｃ．）をさらに１２週間、供給した。その１２週間の終わりに、マウスを屠殺し、２％ヘパリン（Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ  Ｋａｂｉ  ＵＳＡ、ＬＬＣ）を追加したＰＢＳで灌流し、ｅｎ  ｆａｃｅアテローム性動脈硬化病変評価のために大動脈を取り出した。血液を心穿刺によりＥＤＴＡチューブに収集した。白血球数を、ＨｅｍａＶｅｔ  ９５０（Ｄｒｅｗ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で決定した。４℃、３０００ｇで１５分間、遠心分離された血液から血漿を収集し、さらなる分析まで−８０℃で保存した。
【０２５９】
大腿骨および頚骨もまた、ＢＭＤＭ分化について、すでに記載された同じプロトコールに従って収集し、Ｏｌｆｒ２発現のフローサイトメトリーおよびウェスタンブロット分析のためにさらに使用した。
【０２６０】
大動脈全体におけるアテローム性動脈硬化症の定量化
【０２６１】
外植後、各大動脈を、室温で少なくとも２時間の４％パラホルムアルデヒドインキュベーション後、広げてピンで留めた。アテローム性動脈硬化プラークについての染色を、試料をスダンＩＶ中でインキュベートすることにより実施した。大動脈表面の管腔（内皮）面の顕微鏡写真を、Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ  ＣＳ（Ａｄｏｂｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して分析した。アテローム性動脈硬化病変サイズ測定は、Ｉｍａｇｅ−Ｐｒｏ  Ｐｒｅｍｉｅｒソフトウェア（Ｍｅｄｉａ  Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ）を使用して、知らされていない研究者によって実施された。
【０２６２】
脂質分析
【０２６３】
収集された血漿の脂質分析を、ＩＤＥＸＸ  ＢｉｏＲｅｓｅａｒｃｈによって実施した。
【０２６４】
定量的リアルタイムＰＣＲ
【０２６５】
ＢＭＤＭおよびｈＭＤＭを、Ｏｃｔ（１０μＭ）単独、ＬＰＳ（５００ｎｇ／ｍＬ）単独、またはＯｃｔと組み合わされたＬＰＳ（ＬＰＳ＋Ｏｃｔ）と、および対照としてＤＭＳＯ（０．１％）と、３７℃および５％ＣＯ２で１２時間、培地中、インキュベートし、Ｑｉａｚｏｌ（５００μＬ；Ｑｉａｇｅｎ）で溶解した。同様に、前に記載されているようにインキュベートされた大動脈全体を、Ｑｉａｚｏｌ（５００μｌ；Ｑｉａｇｅｎ）へ移し、ｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳ（商標）Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）で消化した。
【０２６６】
ＲＮＡ抽出を、Ｑｉａｚｏｌ／ＲＮＡｅａｓｙマイクロキットハイブリッドプロトコール（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して実施した。
【０２６７】
全ＲＮＡを、ナノドロップ分光光度計（Ｐｅｑｌａｂ）を使用して定量化し、５００ｎｇを、Ｏｍｎｉｓｃｒｉｐｔ逆転写酵素（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、ｃＤＮＡへ逆転写した。リアルタイムＰＣＲ反応を、ＲＴ２  ＳＹＢＲ  ｇｒｅｅｎ遺伝子発現アッセイプロトコール（Ｑｉａｇｅｎ）により実施した。ＲＴ２  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  ｑＰＣＲマスターミックスおよびマウスＯｌｆｒ２、Ｒｔｐ１、Ｒｔｐ２、Ｃｃｌ２、Ｃｃｌ４、Ｔｎｆ、Ｎｏｓ２、およびＧａｐｄｈについてのあらかじめ作製されたＲＴ２  ｑＰＣＲプライマーアッセイを使用した。同様に、ｈＭＤＭ試料のリアルタイムＰＣＲ分析をＲＴ２  ＳＹＢＲ  ｇｒｅｅｎ遺伝子発現アッセイプロトコール（Ｑｉａｇｅｎ）に従って実施し、ＲＴ２  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  ｑＰＣＲマスターミックスおよびヒトＯＲ６Ａ２、ＴＮＦ、ＩＬ−６、ＮＯＳ２、およびＧＡＰＤＨについてのあらかじめ作製されたＲＴ２  ｑＰＣＲプライマーアッセイを適用した。結果は、ハウスキーピング遺伝子としてＧａｐｄｈ／ＧＡＰＤＨを使用する２−ΔΔＣＴ法３２を適用して、計算した。
【０２６８】
ｈＭＤＭにおけるＯＲ６Ａ２サイレンシング
【０２６９】
ヒトＭＤＭ細胞（２×１０６個）を、５ｐｍｏｌのサイレンシングをもたらさないｓｉＲＮＡ二重鎖（ｓｉＣｔｒｌ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｃｈｅｒ  ｉｅｎｔｉｆｉｃ）またはＯＲ６Ａ２遺伝子を標的にするサイレンシングｓｉＲＮＡ二重鎖（アッセイＩＤ  １４８３４３、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｃｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を含有する、１００μｌ  ＲＴ  Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ（登録商標）Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ａ混合物（Ａｍａｘａ（登録商標）細胞系Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ（登録商標）キットＶ；Ｌｏｎｚａ）中に再懸濁した。その懸濁液を、アルミニウム電気穿孔キュベット（Ｌｏｎｚａ）へ移し、Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ  ２ｂデバイス（Ｌｏｎｚａ）において、あらかじめ作成されたＢＭＤＭプログラムを使用してパルスした。電気穿孔後、細胞を、２０％のウシ胎仔血清、１００Ｕ／ｍＬペニシリンおよび１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン、ならびに５０ｎｇ／ｍＬ  ｒｈＭＣＳＦ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）を追加したＲＰＭＩ−１６４０培地へ移し、４８ウェルプレートにおいて、３７℃および５％ＣＯ２で、４８時間、培養した。細胞生存率を、トリパンブルー排除アッセイによって決定した。細胞を、Ｏｃｔ（１０μＭ）単独、ＬＰＳ（５００ｎｇ／ｍＬ）単独、またはＯｃｔと組み合わせたＬＰＳ（ＬＰＳ＋Ｏｃｔ）、および対照としてＤＭＳＯ（０．１％）と、３７℃および５％ＣＯ２で１２時間、培地中でさらに処理し、その後、ＲＮＡ精製のためにＱｉａｚｏｌ（５００μｌ）中に溶解した。ＯＲ６Ａ２、ＴＮＦ、ＩＬ６、およびＮＯＳ２発現レベルを、前に記載されているように、リアルタイムＰＣＲにより分析した。
【０２７０】
フローサイトメトリー分析
【０２７１】
ＢＭＤＭ、ｈＭＤＭ、マウス白血球、およびホールマウント大動脈を、Ｏｃｔ（１０μＭ）単独、ＬＰＳ（５００ｎｇ／ｍＬ）単独、または組合せ（ＬＰＳ＋Ｏｃｔ）と培地中、３７℃および５％ＣＯ２で１２時間、インキュベートした。インキュベーション後、大動脈を小片へ切断し、以前に記載されているように消化して細胞懸濁液を得た１８。
【０２７２】
その後、大動脈細胞懸濁液、ＢＭＤＭ、白血球、およびｈＭＤＭを、それぞれ、マウスまたはヒトＦｃブロック溶液と１時間、インキュベートし、Ｏｌｆｒ２（１：５００、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｃｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）またはＯＲ６Ａ２（１：５００、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を検出する一次抗体で、ＲＴ、１時間、染色した。正常ウサギＩｇＧ（１：５００  Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）とインキュベートされた細胞を対照として使用した。
【０２７３】
その後、全細胞を、３回、洗浄し、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８コンジュゲート型ヤギ抗ウサギＩｇＧ二次抗体（１：５００、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｃｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）と、ＲＴで３０分間、インキュベートした。ＰＢＳでの３回の洗浄ステップ後、ＢＭＤＭを、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（ＬＤ）Ｙｅｌｌｏｗ  ｆｉｘａｂｌｅ色素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）およびＦ４／８０−ＢＶ４２１で、暗闇中、ＲＴ、２０分間、染色した。大動脈細胞を、ＣＤ４５−ＰｅｒＣＰ、ＣＤ１１ｂ−ＰＥＣｙ７、ＣＤ１１ｃ−ＢＶ６０５、ＴＣＲβ−ＢＶ７１１、ＣＤ４−ＰＥ−ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６１０、ＣＤ１９−ＡＰＣＣｙ７、ＧＲ１−ＢＶ７８６、Ｆ４／８０−ＢＶ４２１（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）抗体の混合物およびＬＤ  Ｙｅｌｌｏｗ  ｆｉｘａｂｌｅ色素で、暗闇中、ＲＴ、２０分間、染色した。マウス白血球を、ＣＤ４５−ＰｅｒＣＰ、ＣＤ１１５−ＰＥＣｙ７、Ｌｙ６Ｃ−ＢＶ４２１、ＴＣＲβ−ＢＶ７１１、ＣＤ４−ＰＥ−ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６１０、ＣＤ１９−ＡＰＣＣｙ７（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）抗体の混合物およびＬＤ  Ｙｅｌｌｏｗ  ｆｉｘａｂｌｅ色素で、暗闇中、ＲＴ、２０分間、染色した。ｈＭＤＭを、ＬＤ  Ｙｅｌｌｏｗ  ｆｉｘａｂｌｅ色素および抗ヒトＣＤ４５−ＡＦ７００で、暗闇中、ＲＴ、２０分間、染色した。
【０２７４】
試料を、ＬＳＲ−ＩＩフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で分析した。データを、ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェア（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で獲得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅｓｔａｒ  Ｉｎｃ）で分析した。
【０２７５】
細胞内染色
【０２７６】
大動脈全体およびマウス白血球を、Ｏｃｔ（１０μＭ）単独、ＬＰＳ（５００ｎｇ／ｍＬ）単独、または組合せ（ＬＰＳ＋Ｏｃｔ）と、培地中、３７℃および５％ＣＯ２で、１２時間、インキュベートした。タンパク質輸送阻害剤カクテル１×（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を、大動脈全体試料においてまる１２時間、およびマウス白血球試料においてその最後の６時間、加えた。大動脈細胞懸濁液を、上記で言及されているように得て、ＣＤ４５−ＰｅｒＣＰ、ＣＤ１１ｂ−ＰＥＣｙ７、ＣＤ１１ｃ−ＢＶ６０５、ＴＣＲβ−ＢＶ７１１、ＣＤ４−ＰＥ−ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６１０、ＣＤ１９−ＡＰＣＣｙ７、ＧＲ１−ＢＶ７８６、Ｆ４／８０−ＢＶ４２１、およびＬＤ  Ｙｅｌｌｏｗ  ｆｉｘａｂｌｅ色素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で染色した。白血球を、ＣＤ４５−ＰｅｒＣＰ、ＣＤ１１５−ＰＥＣｙ７、Ｌｙ６Ｃ−ＢＶ４２１、ＴＣＲβ−／ＣＤ４／ＣＤ１９−ＡＰＣＣｙ７（ダンプチャネル）、およびＬＤ  Ｙｅｌｌｏｗ  ｆｉｘａｂｌｅ色素で染色した。
【０２７７】
その後、細胞を、洗浄し、細胞内固定および透過処理緩衝剤セット（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）をアプライして、固定し、透過処理し、マウス抗ＴＮＦ−ＰＥ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で染色した。試料を、ＬＳＲ−ＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で分析した。データを、ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェア（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で獲得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅｓｔａｒ  Ｉｎｃ）で分析した。
【０２７８】
ＩＬ−１β産生
【０２７９】
マウスＢＭＤＭおよびヒトＭＤＭを、３７℃および５％ＣＯ２で１８時間、ＬＰＳ（５０ｎｇ／ｍＬ）で前処理し、または未処理のままにした。この期間後、ＬＰＳ前処理されたおよび未処理の細胞をさらに、Ｏｃｔ（１０μＭ）単独、Ｃｉｔ（１００μＭ）単独（それぞれ、ＬＰＳ＋Ｏｃｔ；ＬＰＳ＋Ｃｉｔ；Ｏｃｔ；Ｃｉｔ）、またはそれらの組合せ（ＬＰＳ＋Ｏｃｔ＋Ｃｉｔ）と、さらに８時間、インキュベートした。上清を、４℃、２０００ｇで１５分間の遠心分離により収集し、ＣＢＡ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）によるさらなるＩＬ−１β分析まで、−８０℃で凍結した。
【０２８０】
サイトカインの分泌
【０２８１】
刺激された細胞および大動脈組織の上清を、ＢＤ  ＣＢＡ  Ｆｌｅｘ  Ｓｅｔｓ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）により、マウスＴＮＦα、ＣＣＬ２、ＣＣＬ４、ＩＬ−１β、またはヒトＴＮＦ、ＩＬ６、およびＩＬ−１βについて、製造会社のプロトコールに従って、分析した。試料を、ＬＳＲ−ＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で分析した。データをＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェア（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で獲得し、ＦＣＡＰアレイソフトウェア３．０（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で分析した。
【０２８２】
カルシウムシグナル伝達
【０２８３】
以前に記載されているように１８得られた大動脈細胞懸濁液を、ＣＤ４５−ＰｅｒＣＰ、ＴＣＲβ／ＣＤ４−ＡＰＣＣｙ７（ダンプチャネル）、Ｆ４／８０−ＢＶ４２１、およびＬＤ  Ｙｅｌｌｏｗ  ｆｉｘａｂｌｅ色素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含む血管マクロファージについての細胞外マーカーと、Ｆｃブロック溶液中、ＲＴ、暗闇中、２０分間、プレインキュベートした。その後、大動脈細胞懸濁液を２回、洗浄し、それに２μＭのＦｌｕｏ４色素（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｃｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を３７℃で３０分間、負荷した。
【０２８４】
その後、細胞を、洗浄し、Ｃａ２＋およびＭｇ２＋を含有する、３７℃の温かいＨＢＳＳ緩衝剤中に再懸濁し、ＬＳＲＩＩフローサイトメーターで獲得した。６０秒後、Ｏｃｔ（１０μＭ）、Ｃｉｔ（１００μＭ）、または溶媒（ＤＭＳＯ  ０．１％）を加え、さらに１４０秒間、獲得し続けた。データをＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェア（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で獲得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅｓｔａｒ  Ｉｎｃ）で分析した。Ｆｌｕｏ４の平均蛍光強度を、獲得の開始から２５秒間にわたって積分した（合計８区間）。
【０２８５】
イムノブロッティング
【０２８６】
ＢＭＤＭにおけるＯｌｆｒ２タンパク質検出について、細胞を、Ｏｃｔ（１０μＭ）単独、ＬＰＳ（５００ｎｇ／ｍＬ）単独、または組合せ（ＬＰＳ＋Ｏｃｔ）と、培地中、３７℃および５％ＣＯ２で１２時間、インキュベートした。その後、細胞を、洗浄し、プロテアーゼ阻害剤を含有するＲＩＰＡ緩衝剤に溶解した。総タンパク質含有量を、ＤＣタンパク質アッセイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を使用して定量化し、Ｌａｅｍｍｌｉ緩衝剤（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）によって１：１の体積比で可溶化した。ＳＤＳ−Ｐａｇｅ分析を、試料を９５℃まで１０分間、加熱することにより行い、変性条件下で１２％  Ｍｉｎｉ−ＰＲＯＴＥＡＮ  ＴＧＸゲル（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）上で分離させた。着色タンパク質分子量標準（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｃｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）をマーカーとして使用した。タンパク質を、Ｍｉｎｉ  Ｔｒａｎｓ−ｂｌｏｔ電気泳動転写セル（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を使用して、ニトロセルロース膜（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｒｏｔｒａｎ  ０．２μｍ  ＮＣ）へ転写した。膜を、０．１％  Ｔｗｅｅｎ（登録商標）−２０を含むトリス緩衝生理食塩水（ＴＢＳＴ）中に調製された５％ウシ血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ）においてブロッキングした。膜を、１：１０００希釈されたＯｌｆｒ２一次抗体（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｃｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）またはチューブリン（ＣＳＴ）一次抗体と４℃で一晩、インキュベートした。膜を、ＴＢＳＴで３回、洗浄し、ＨＲＰコンジュゲート型二次抗体（Ｐｒｏｍｅｇａ）とＲＴで１時間、インキュベートした。ブロットを再び、ＴＢＳＴで３回、洗浄し、化学発光基質（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｃｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して発色させた。タンパク質バンドを、Ｉｍａｇｅ  Ｌａｂソフトウェアを使用するＣｈｅｍｉＤｏｃ  ＭＰイメージングシステム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）で可視化した。
【０２８７】
マイクロアレイ分析およびデータセット比較
【０２８８】
以下の公開マイクロアレイデータセット（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘマウス遺伝子１．０  ＳＴアレイ型）を、Ｏｌｆｒ比較に使用した：ＧＳＥ６８９６８血管Ｍφ；ＧＳＥ７７１０４  ＢＭＤＭ、ＧＳＥ４３０７５腹腔内（ＩＰ）Ｍφ；ＧＳＥ１００３９３小腸（ＳＩ）Ｍφ；ＧＳＥ１５９０７肺Ｍφ；ＧＳＥ１５９０７脾臓（赤脾髄）Ｍφ；ＧＳＥ１５９０７ミクログリア；ＧＳＥ１００３９３  ＳＩ  ＤＣ；ＧＳＥ１５９０７肺ＤＣ；ＧＳＥ１５９０７腸間膜ＬＮ（ＭＬＮ）ＤＣ；  ＧＳＥ１５９０７血中古典的単球（ＣＭ）および非古典的単球（ＮＣＭ）亜集団。Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ遺伝子チップデータを、ｒｏｂｕｓｔ  ｍｕｌｔｉ−ａｒｒａｙ  ａｖｅｒａｇｅ（ＲＭＡ）法（ｌｏｇ２、バックグラウンド補正、分位正規化）を使用して正規化した。相関分析は、ピアソンの相関に基づいた。データセット内での遺伝子発現を、ランキングストラテジー：Ｘ−Ｘｍｉｎ／Ｘｍａｘ−Ｘｍｉｎを使用してＧａｐｄｈ発現（Ｘｍａｘ）に基づいて、正規化した。ヒートマップ分析および可視化を、Ｍｏｒｐｈｅｕｓ、ｓｏｆｔｗａｒｅ．ｂｒｏａｄｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．ｏｒｇ／ｍｏｒｐｈｅｕｓを適用して実施した。
【０２８９】
ＲＮＡｓｅｑ分析
【０２９０】
バルクＲＮＡ−ｓｅｑについて、ＷＤを２０週間、供給されたＡｐｏｅ−／−マウスの大動脈由来の生きているＣＤ４５＋、ＴＣＲβ−、ＣＤ１９−、Ｆ４／８０＋マクロファージを、ＦＡＣＳＡｒｉａＩＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）でＦＡＣＳ選別した。
【０２９１】
シーケンシングライブラリーを、精製されたＲＮＡからＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉキット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して調製した。
【０２９２】
二本鎖（ｄｓ）ｃＤＮＡを、ＳＭＡＲＴ−ｓｅｑ  ｖ４  Ｕｌｔｒａ  Ｌｏｗ  ＲＮＡ  Ｋｉｔ  ｆｏｒ  Ｉｌｌｕｍｉｎａ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ（Ｔａｋａｒａ−Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を製造会社の使用説明書に従って使用して、調製した。ｃＤＮＡを、１１サイクル使用して増幅し、１２μＬで溶出した。生じたｃＤＮＡの５μＬを、ＮｅｘｔｅｒａＸＴキット（Ｉｌｌｕｍｉｎａ、ＣＡ、ＵＳＡ）を製造会社の使用説明書に従って使用して、処理した。試料を、２つのバッチへプールし、Ｉｌｌｕｍｉｎａ  ＨｉＳｅｑ４０００に負荷し、５０塩基対シングルエンドリード（ＳＲ５０）でシーケンシングした。トランスクリプトームは、ｍｍ１０マウスゲノムへマッピングされた。マッピング後品質管理チェックを使用して、質の悪い試料を排除した。
【０２９３】
免疫蛍光およびホールマウント大動脈イメージング
【０２９４】
ＢＭＤＭおよびｈＭＤＭを、μ−Ｓｌｉｄｅ  ８ウェルガラス底（Ｉｂｉｄｉ）上で培養し、上記のように処理した。インキュベーション後、細胞を、２％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で、３７℃、３０分間、固定し、５％ＢＳＡと、ＲＴで３０分間、インキュベートした。その後、ＢＭＤＭおよびｈＭＤＭを、Ｏｌｆｒ２一次抗体およびＯＲ６Ａ２一次抗体［１：５００、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｃｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（マウスＯｌｆｒ２）および１：５００  Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ（ヒトＯＲ６Ａ２）］それぞれで、Ｆｃブロッキング溶液中、１時間、染色した。その後、細胞を、冷ＰＢＳで５分間、５回、洗浄し、二次抗ウサギＩｇＧ−ＡＦ４８８（１：４００、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｃｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で、４℃、３０分間、染色した。Ｈｏｅｃｈｓｔ（１：２５００、Ｓｉｇｍａ）での核対比染色を、１０分間、実施した。その後、細胞を、５回、洗浄し、Ｚｅｉｓｓ  ＬＳＭ８８０共焦点走査顕微鏡でイメージングした。イメージ取得設定を、対照試料（非染色試料およびアイソタイプ対照）で調整し、実験を通して維持した。
【０２９５】
ホールマウントイメージングについて、ＷＤを２週間、供給されたＡｐｏｅ−／−マウス由来の大動脈を、ｉｎ  ｓｉｔｕで注意深くきれいにし、４％パラホルムアルデヒド中、４℃で２４時間、固定した。その後、大動脈を、ＰＢＳで洗浄し、Ｏｌｆｒ２一次抗体（１：１０００、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｃｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を含有する５ｍＬインキュベーション緩衝剤（２％ＦＣＳ、０．５％サポニン、０．１％アジ化ナトリウム）へ移し、３７℃で２４時間、撹拌した。その後、大動脈を、ＰＢＳで５回、洗浄し、二次抗ウサギＩｇＧ−ＡＦ５５５（１：５００、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｃｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、抗マウスＣＤ６８−ＡＦ６４７（１：２００、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、およびＨｏｅｃｈｓｔ（１：１００００、Ｓｉｇｍａ）を含有する５ｍＬインキュベーション緩衝剤中、撹拌しながら、３７℃で２４時間、染色した。染色された大動脈を、ＰＢＳで洗浄し、縦方向に開き、スライドグラス間にマウントし、外膜側からＺｅｉｓｓ  ＬＳＭ８８０共焦点走査顕微鏡でイメージングした。イメージ取得設定を、対照試料（非染色試料、ＣＤ６８−ＡＦ６４７  ＦＭＯ、および二次抗ウサギＩｇＧ−ＡＦ５５５  ＦＭＯ）で設定し、実験を通して維持した。イメージおよび走査処理を、Ｚｅｎ顕微鏡ソフトウェア（Ｚｅｉｓｓ）およびＩｍａｒｉｓ分析ソフトウェア（Ｂｉｔｐｌａｎｅ）で実施した。
【０２９６】
血漿オクタナール定量化
【０２９７】
マウス血漿を、ＷＤまたは固形飼料食餌を１日間供給された週齢８〜１０週間のＡｐｏｅ−／−およびＷＴマウスから後眼窩から収集した。
【０２９８】
血漿オクタナールは、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）の存在下で３−ニトロフェニルヒドラジンで誘導体化され、Ｔｉｔａｎ（商標）Ｃ１８  ＵＨＰＬＣカラム（１．９μｍ粒子サイズ、１０ｃｍ×２．１ｍｍ、Ｓｕｐｅｌｃｏ）への注入後、溶媒Ａ、水＋０．０１％ギ酸、および溶媒Ｂ、アセトニトリル＋０．０１％ギ酸から２つのポンプより作製された溶出溶媒で、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより検出された。親から娘へのトランジション、ｍ／ｚ  ２６４．２→１１９．１を有する、ポジティブＭＲＭモードにおけるオクタナール誘導体の典型的なイオン抽出ＬＣクロマトグラムが提供された。誘導体化反応の前に、内部標準として、［２Ｈ１６］オクタナールが、血漿へスパイクされ、ポジティブＭＲＭモードにおいてモニターされ、親から娘へのトランジション、ｍ／ｚ  ２８０．２→１２０．２を有した。一連の濃度のＯｃｔを、一定量の［２Ｈ１６］オクタナールと混合し、その後、誘導体化反応を行い、それらを使用して、検量線を調製した。
【０２９９】
統計
【０３００】
この研究における全ての統計は、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６．０を使用して実施された。
【０３０１】
分析は、通常の一元配置ＡＮＯＶＡ検定、続いて、多重比較のためのＴｕｋｅｙの検定、または多重比較のためのＤｕｎｎの検定と共のノンパラメトリックＫｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ検定で行われた。適切な場合、統計的有意性は、独立ｔ検定で検定された。それぞれの統計的検定は、各図のレジェンドに示されている。データは、平均値±ＳＥＭとして提示されている。０．０５未満のｐ値が有意とみなされた。
（実施例４）
免疫応答をモジュレートするＯＬＦＲの識別
【０３０２】
代表的な炎症促進性遺伝子（Ｃｃｌ２、Ｃｃｌ４、およびＴｎｆ）に関する分析を実施した（図１４）。簡単に述べれば、ＷＤで維持された（２週間）Ａｐｏｅ−／−マウスの外植大動脈を、ＬＰＳ（５００ｎｇ／ｍＬ）および異なる匂い分子（１０μＭ）で１２時間、処理し、または未処理のままにした。Ｃｃｌ２、Ｃｃｌ４、およびＴｎｆの相対的発現を、リアルタイムＰＣＲ分析により定量化し、２−ΔΔＣＴ法を適用して、Ｇａｐｄｈ発現および未処理の対照に対して正規化した。群あたりＮ＝３。
【０３０３】
スクリーニングされた匂い分子のレジェンド：クマリン（Ｃｏｕｍ）、リリアール（ＬＩＬ）、ｂ−イオノン（ｂ−ｉｏｎｏ）、オイゲノール（ＥＵ）、酪酸（ＢＡ）、キャラメルフラノン（ＣＦ）、酢酸オイゲノール（ＥＡ）、サンダルウッド（ＳＷ）、エチルバニリン（ＥＶ）、エチルフェンコール（ＥＦ）、アンドロスタジエノン（ＡＤ）、アンドロステノン（ＡＴ）、イソ吉草酸（ＩＡ）、酢酸Ｎ−アミル（ＮＡ）、プロピルプロピオネート（ＰＰ）、オクタナール（ＯＣＴ）。
【０３０４】
その後、代表的な炎症促進性遺伝子（Ｃｃｌ２、Ｃｃｌ４、およびＴｎｆ）の統計的分析を実施した（図１５）。Ｃｃｌ２、Ｃｃｌ４、およびＴｎｆの平均相対的発現を、リアルタイムＰＣＲ分析により定量化し、２−ΔΔＣＴ法を適用して、Ｇａｐｄｈ発現および未処理の対照に対して正規化した。群あたりＮ＝３。ｐは、独立ｔ検定により計算された。ｐ値＜０．０５は有意とみなされる。この分析は、嗅覚受容体の識別をもたらし、それらに関して、特定の理論に縛られるつもりはないが、これらの嗅覚受容体の１つまたは複数の発現または活性のモジュレーションが、結果として、本明細書に提供された実施形態に対応する免疫応答のモジュレーションを生じる。例として、かつ非限定的に、これらの嗅覚受容体には、表７に記載の嗅覚受容体、またはＯＲ７Ｃ１、ＯＲ７Ｄ４、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ１１Ｈ６、ＯＲ４Ｅ２、ＯＲ１０Ｈ１、もしくはＯＲ６Ａ２、もしくはそのオルソログ、ホモログ、バリアント、もしくは誘導体の１つもしくは複数が含まれ得る。
（実施例５）
血漿プロテオーム分析
【０３０５】
この実施例において、オクタナール処理されたマウス（図１６）およびシトラール処理されたマウス（図１７）由来の血漿における有意にモジュレートされたタンパク質を調べた。簡単に述べれば、オクタナール処理されたマウス、シトラール処理されたマウス、および溶媒処理されたマウスからその８週間の終わりにＥＤＴＡ血漿試料を収集し、それらにおける９２個のタンパク質の分析を調査した。Ｏｌｉｎｋマウス探索パネル（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｏｌｉｎｋ．ｃｏｍ／ｐｒｏｄｕｃｔｓ／ｍｏｕｓｅ−ｅｘｐｌｏｒａｔｏｒｙ／）を含む９２個のタンパク質の分析は、ＰＥＡ（Ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ  Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  Ａｓｓａｙ）テクノロジーを使用して実施された。ＰＥＡ技術は、試料内の各タンパク質と結合するオリゴヌクレオチド標識抗体プローブペアを使用する、タンパク質の同時的評価を可能にする。ＰＥＡ技術はまた、シグナルを発生させるために、正しくマッチした抗体ペアの二重認識と、配列特異的オリゴヌクレオチドからのＤＮＡバーコーディングの両方を必要とすることにより、反復測定でタンパク質レベルの正確な評価を可能にする（ＰＬｏＳ  ＯＮＥ．  ２０１４；９（４））。アッセイは、ｌｏｇ  ２単位での倍の変化を測定する。この分析について、生データが、ｔ−統計値へ変換され、その統計値は、アッセイにわたって比較することができる。データは、平均値±ＳＥＭとして提示されている。独立ｔ検定により計算されたｐ値＜０．０５。嗅覚受容体発現または活性のモジュレーションが、免疫応答に関与するタンパク質の発現または活性を増加または減少させ得、したがって、嗅覚受容体の発現または活性を増加または減少させることが、ある特定の免疫応答関連タンパク質の発現または活性を増加または減少させるために利用され得ることを、この分析は確認した。例として、かつ非限定的に、免疫応答関連タンパク質には、図１６および／もしくは図１７に記載の遺伝子、またはＣＣＬ５（Ｃ−Ｃモチーフケモカインリガンド５）、Ｔｎｆｒｓｆ１２ａ（オステオプロテゲリン）、Ａｘｉｎ  １、Ｎａｄｋ、Ａｈｒ（アリール炭化水素受容体）、ＱＤＰＲ（キノイドジヒドロプテリジンレダクターゼ）、ＨＧＦ（肝細胞増殖因子）、ＡＤＡＭ２３、もしくはＳｎａｐ２９の１つもしくは複数が含まれ得る。
（実施例６）
血漿プロテオーム分析
【０３０６】
食事、（食事由来を含む）様々な前駆体の細菌微生物叢代謝、および対象における天然に存在するオクタナールを含む、ＯＬＦＲリガンドの種々の供給源がある。リガンドの産生における腸内微生物叢の役割は、野生型マウスより低い濃度のＯＬＦＲリガンドを有することが見出されている、腸内微生物叢を欠くマウスの作製により実証されている。例えば、腸内微生物叢を欠くマウスは、野生型マウスの３分の１の濃度のオクタナールを有することが見出されている（図１８）。
（実施例７）
免疫モジュレーションにおけるＯＬＦＲの役割
【０３０７】
免疫モジュレーションにおける嗅覚受容体の役割を決定するために、Ｏｌｆｒノックアウトマウスを調製する。これらのマウスは、ＯＬＦＲのリガンドまたはアゴニストで処理され、同様にそのリガンドまたはアゴニストで処理されたＡｐｏｅ−／−マウスおよびＷＴマウスと比較して、アテローム性動脈硬化症の低減を示す。一例において、Ｏｌｆｒ２ノックアウトマウスを調製し、オクタナールで処理する。これらのマウスは、同様にオクタナールで処理されたＡｐｏｅ−／−マウスおよびＷＴマウスと比較して、アテローム性動脈硬化症の低減を示す。したがって、Ｏｌｆｒ２発現または活性の低減は、免疫応答を低減または阻害する。
【０３０８】
免疫応答をモジュレートすることにおける嗅覚受容体の役割をさらに説明すると、インフラマソーム活性化／シグナル伝達における嗅覚受容体の関与が実証されている。例えば、Ｏｌｆｒ２のそれのリガンドとの結合は、Ｓｉｇｎａｌ  ２、または炎症促進性サイトカインのインターロイキン１−ベータ（ＩＬ−１Ｂ）およびインターロイキン１８（ＩＬ−１８）の成熟および分泌を促進する、活性化シグナルを示す。いかなる特定の理論にも縛られるつもりはないが、嗅覚受容体活性化が、結果として、インフラマソームにおける、ヌクレオチド結合オリゴマー化ドメインおよびロイシンリッチリピートを含有する受容体（ＮＬＲ）の活性化を生じ得る。例として、かつ非限定的に、ＮＡＬＰ３（ＮＡＣＨＴ、ＬＲＲおよびＰＹＤドメイン含有タンパク質３、別名クリオピリン）またはＮＬＲＣ４（ＮＬＲファミリーＣＡＲＤドメイン含有タンパク質４）を含むＮＬＲが、ＯＬＦＲ２によって活性化される。
参考文献
【０３０９】
本出願を通して引用した参考文献を以下に記載する。各々の参考文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【化１】
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【化２】
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【化３】
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【化４】
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例示的な実施形態
１．対象における免疫応答をモジュレートする方法であって、１つまたは複数の嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現または活性をモジュレートするステップを含む方法。
２．ＯＬＦＲが、ｉｎ  ｖｉｖｏで細胞によって発現される、実施形態１に記載の方法。
３．細胞が、動物細胞であり、ただし、この細胞は嗅覚細胞ではない、実施形態２に記載の方法。
４．細胞がマクロファージである、実施形態１から３のいずれか１つに記載の方法。
５．マクロファージが血管マクロファージである、実施形態４に記載の方法。
６．モジュレーションが、ＯＬＦＲの発現を阻害するかまたはＯＬＦＲを非活性化する作用剤の有効量を対象に投与するステップを含む方法によって、免疫応答を阻害する、減少させる、低減する、抑制する、制限するか、または制御するステップの１つまたは複数を含む、実施形態１から５のいずれか１つに記載の方法。
７．モジュレーションが、ＯＬＦＲの発現を阻害するかまたはＯＬＦＲを非活性化する作用剤の有効量を対象に投与するステップを含む方法によって、望ましくないまたは異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答、または炎症を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御するステップの１つまたは複数を含む、実施形態１から５のいずれか１つに記載の方法。
８．モジュレーションが、ＯＬＦＲの発現を阻害するかまたはＯＬＦＲを非活性化する作用剤の有効量を対象に投与するステップを含む方法によって、対象における自己免疫応答、障害、または疾患を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御するステップの１つまたは複数を含む、実施形態１から５のいずれか１つに記載の方法。
９．モジュレーションが、対象における望ましくないもしくは異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答、もしくは炎症の有害な症状、または自己免疫応答、障害、もしくは疾患の有害な症状を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御するステップの１つまたは複数を含む、実施形態８に記載の方法。
１０．望ましくないもしくは異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答、もしくは炎症の有害な症状、または自己免疫応答、障害、もしくは疾患の有害な症状が、腫脹、疼痛、発疹、頭痛、発熱、悪心、下痢、鼓腸、無気力、関節硬直、または組織もしくは細胞の損傷である、実施形態９に記載の方法。
１１．望ましくないもしくは異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答、もしくは炎症の有害な症状、または自己免疫応答、障害、もしくは疾患の有害な症状が、慢性または急性である、実施形態９または１０に記載の方法。
１２．免疫障害、炎症応答、炎症、自己免疫応答障害または自己免疫疾患が、リウマチ性関節炎、若年性リウマチ性関節炎、変形性関節炎、乾癬性関節炎、糖尿病、多発性硬化症、脳脊髄炎、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、自己免疫性甲状腺炎、アトピー性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、乾癬、シェーグレン症候群、クローン病、アフタ性潰瘍、虹彩炎、結膜炎、角結膜炎、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、皮膚エリテマトーデス、強皮症、膣炎、直腸炎、らい性結節性紅斑、自己免疫性ぶどう膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、急性壊死性出血性脳症、特発性両側性進行性感音難聴、再生不良性貧血、赤芽球ろう、特発性血小板減少症、多発性軟骨炎、ウェゲナー肉芽腫症、慢性活動性肝炎、スティーブンス−ジョンソン症候群、特発性スプルー、扁平苔癬、グレーヴス病、サルコイドーシス、原発性胆汁性肝硬変、後部ぶどう膜炎、間質性肺線維症、橋本甲状腺炎、自己免疫性多腺症候群、インスリン依存性糖尿病、インスリン抵抗性糖尿病、免疫性不妊症、自己免疫性アジソン病、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、疱疹状皮膚炎、自己免疫性脱毛症、白斑、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少性紫斑病、悪性貧血、ギラン−バレー症候群、スティフマン症候群、急性リウマチ熱、交感性眼炎、グッドパスチャー症候群、全身性壊死性血管炎、抗リン脂質症候群もしくはアレルギー、ベーチェット病、重度複合免疫不全（ＳＣＩＤ）、リコンビナーゼ活性化遺伝子（ＲＡＧ１／２）欠損、アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）欠損、インターロイキン受容体共通ｇ鎖（ｃ）欠損、ヤヌス関連キナーゼ３（ＪＡＫ３）欠損および細網異形成症；原発性Ｔ細胞免疫不全、例えばディジョージ症候群、ヌード症候群、Ｔ細胞受容体欠損、ＭＨＣクラスＩＩ欠損、ＴＡＰ−２欠損（ＭＨＣクラスＩ欠損）、ＺＡＰ７０チロシンキナーゼ欠損およびプリンヌクレオチドホスホリラーゼ（ＰＮＰ）欠損、抗体欠損症、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症（ブルトン型チロシンキナーゼ欠損）、常染色体劣性無ガンマグロブリン血症、ミュー重鎖欠損、代替軽鎖（ｇ５／１４．１）欠損、高ＩｇＭ症候群：Ｘ連鎖（ＣＤ４０リガンド欠損）もしくは非Ｘ連鎖、Ｉｇ重鎖遺伝子欠失、ＩｇＡ欠損、ＩｇＧサブクラスの欠損（ＩｇＡ欠損を伴うまたは伴わない）、分類不能型免疫不全（ＣＶＩＤ）、正常な免疫グロブリンを伴う抗体欠損；乳児の一過性の低ガンマグロブリン血症、インターフェロンｇ受容体（ＩＦＮＧＲ１、ＩＦＮＧＲ２）欠損、インターロイキン１２もしくはインターロイキン１２受容体欠損、胸腺腫を伴う免疫不全、ウィスコット−アルドリッチ症候群（ＷＡＳタンパク質欠損）、毛細血管拡張性運動失調症（ＡＴＭ欠損）、Ｘ連鎖リンパ増殖症候群（ＳＨ２Ｄ１  Ａ／ＳＡＰ欠損）、または高ＩｇＥ症候群を含む、実施形態８から１１のいずれか１つに記載の方法。
１３．モジュレーションが、ＯＬＦＲの発現を阻害するかまたはＯＬＦＲを非活性化する作用剤の有効量を対象に投与するステップを含む方法によって、有害な心血管事象または心血管疾患を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御するステップの１つまたは複数を含む、実施形態１から５のいずれか１つに記載の方法。
１４．有害な心血管事象または心血管疾患が、冠動脈疾患、末梢動脈疾患、脳血管疾患、腎動脈疾患、卒中、心筋梗塞（心臓発作）、虚血性心不全、一過性虚血発作、または脳外傷、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化プラーク形成、または血中コレステロールの上昇を含む、実施形態１３に記載の方法。
１５．モジュレーションが、ＯＬＦＲの発現を阻害するかまたはＯＬＦＲを非活性化する作用剤の有効量を対象に投与するステップを含む方法によって、アテローム性動脈硬化症を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御するステップの１つまたは複数を含む、実施形態１から５のいずれか１つに記載の方法。
１６．ＯＬＦＲの発現を増加させるかまたはＯＬＦＲを活性化する作用剤の有効量を対象に投与するステップを含む方法によって、対象におけるウイルス、細菌、または真菌感染症を低減するかまたは阻害するステップの１つまたは複数を含む、実施形態１から５のいずれか１つに記載の方法。
１７．モジュレーションが、ＯＬＦＲの発現を増加させるかまたはＯＬＦＲを活性化する作用剤の有効量を対象に投与するステップを含む方法によって、新生物、新生物障害、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍、他の部位への新生物、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍の転移、または原発新生物、新生物障害、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍から遠位の他の部位での転移性新生物、新生物障害、腫瘍、がん、もしくは悪性腫瘍の形成もしくは確立、またはウイルス、細菌、もしくは真菌感染症の有害な症状を減少させる、低減する、阻害する、抑制する、制限するか、または制御するステップの１つまたは複数を含む、実施形態１から５のいずれか１つに記載の方法。
１８．処置される新生物、新生物障害、腫瘍、がん、または悪性腫瘍が、癌腫、肉腫、神経芽腫、子宮頸がん、肝細胞がん、中皮腫、神経膠芽腫、骨髄腫、リンパ腫、白血病、腺腫、腺癌、神経膠腫、神経膠芽腫、網膜芽腫、星細胞種、乏突起膠細胞腫、髄膜腫、リンパ肉腫、脂肪肉腫、骨肉腫、軟骨肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、線維肉腫、もしくは黒色腫；または肺、甲状腺、頭部もしくは頸部、鼻咽頭、咽頭、鼻もしくは副鼻腔、脳、脊椎、乳房、副腎、下垂体、甲状腺、リンパ、消化管（口、食道、胃、十二指腸、回腸、空腸（小腸）、結腸、直腸）、泌尿生殖器管（子宮、卵巣、子宮頸部、子宮内膜、膀胱、精巣、陰茎、前立腺）、腎臓、膵臓、肝臓、骨、骨髄、リンパ、血液、筋肉、または皮膚の新生物、新生物障害、腫瘍、がん、または悪性腫瘍である、実施形態１７に記載の方法。
１９．ＯＬＦＲが、表１〜９ならびに図２Ａおよび２Ｂのいずれか１つに記載のＯＬＦＲである、実施形態１から１８のいずれか１つに記載の方法。
２０．ＯＬＦＲが、表７に記載のＯＬＦＲである、実施形態１から１８のいずれか１つに記載の方法。
２１．ＯＬＦＲが、ＯＲ７Ｃ１、ＯＲ７Ｄ４、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ１１Ｈ６、ＯＲ４Ｅ２、ＯＲ１０Ｈ１、およびＯＲ６Ａ２からなる群から選択される、実施形態１から１８のいずれか１つに記載の方法。
２２．作用剤が、ＯＬＦＲに結合するか、もしくはリガンドに対するＯＬＦＲの結合を遮断するリガンドもしくは低分子、または細胞によるＯＬＦＲの発現を阻害する作用剤の群から選択される、実施形態６から２１のいずれか１つに記載の方法。
２３．作用剤が、ＯＬＦＲに結合する抗体、断片、もしくは模倣体、またはＯＬＦＲリガンド、抗ＯＬＦＲ遺伝子サイレンシング剤、オクタナール、ヘプタナール、またはそれらのプロドラッグもしくは溶媒和物の群から選択される、先行実施形態のいずれかに記載の方法。
２４．作用剤が、細胞の形質膜へのＯＬＦＲの輸送をモジュレートすることによってＯＬＦＲをモジュレートする、実施形態６から２１のいずれか１つに記載の方法。
２５．作用剤が、受容体輸送タンパク質１（ＲＴＰ１）、ＲＴＰ２、受容体発現増強タンパク質１（ＲＥＥＰ１）、アミノアシラーゼ３（Ａｃｙ３）、またはグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｏｌｆ）サブユニットアルファ（Ｇｎａｌ）の群から選択されるタンパク質である、実施形態２４に記載の方法。
２６．作用剤が、受容体輸送タンパク質１（ＲＴＰ１）、ＲＴＰ２、受容体発現増強タンパク質１（ＲＥＥＰ１）、アミノアシラーゼ３（Ａｃｙ３）、およびグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｏｌｆ）サブユニットアルファ（Ｇｎａｌ）からなる群から選択されるタンパク質をコードするヌクレオチドである、実施形態２４に記載の方法。
２７．免疫応答が、炎症性サイトカインの発現または分泌を増加させる作用剤を投与するステップを含む方法によって刺激される、実施形態１６から２６のいずれかに記載の方法。
２８．炎症性サイトカインが、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、Ｃ−Ｃモチーフケモカインリガンド２（ＣＣＬ２）、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、インターロイキン６（ＩＬ−６）、ＩＬ−１Ｂ、ＩＬ−１８、および酸化窒素シンターゼ２（ＮＯＳ２）からなる群から選択される、実施形態２８に記載の方法。
２９．必要とする対象における免疫応答を抑制する方法であって、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現または活性を減少させる作用剤を対象に投与し、それによって対象における免疫応答を抑制するステップを含む方法。
３０．ＯＬＦＲが、表１〜９のいずれか１つに記載のＯＬＦＲである、実施形態２９に記載の方法。
３１．ＯＬＦＲが、表７に記載のＯＬＦＲである、実施形態２９または３０に記載の方法。
３２．ＯＬＦＲが、ＯＲ７Ｃ１、ＯＲ７Ｄ４、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ１１Ｈ６、ＯＲ４Ｅ２、ＯＲ１０Ｈ１、およびＯＲ６Ａ２からなる群から選択される、実施形態２９から３１のいずれかに記載の方法。
３３．作用剤が遺伝子サイレンシング剤である、実施形態２９から３２のいずれかに記載の方法。
３４．遺伝子サイレンシング剤が、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）分子、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、およびＣｌｕｓｔｅｒｅｄ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ  Ｓｈｏｒｔ  Ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ  Ｒｅｐｅａｔｓ（ＣＲＩＳＰＲ）酵素からなる群から選択される、実施形態２３または３３に記載の方法。
３５．ＲＮＡｉ分子が、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、およびマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）からなる群から選択される、実施形態３４に記載の方法。
３６．作用剤が、ＯＬＦＲとそのリガンドとの結合を阻害することによって、ＯＬＦＲの活性を減少させる、実施形態２９から３２のいずれかに記載の方法。
３７．リガンドが、表８に記載のＯＬＦＲリガンドである、実施形態３６に記載の方法。
３８．作用剤がＯＬＦＲアンタゴニストである、実施形態２９から３２のいずれかに記載の方法。
３９．ＯＬＦＲアンタゴニストが、シトラール、ウンデカナール、オキシフェニロン、ｐｈｅｎｉｒａｔ、メチルシンナムアルデヒド、ヒドロシンナムアルデヒド、ブルゲオナール、エチルヘキサン酸、α−イオノン、オクタン酸、それらの溶媒和物またはプロドラッグである、実施形態３８に記載の方法。
４０．ＯＬＦＲアンタゴニストが、表９に記載のアンタゴニストである、実施形態３８に記載の方法。
４１．作用剤が、細胞の形質膜へのＯＬＦＲの輸送を阻害することによって、ＯＬＦＲの活性を減少させる、実施形態２９から３２のいずれかに記載の方法。
４２．作用剤が、ＯＬＦＲに結合する抗体、その断片、または模倣体である、実施形態２９から３２のいずれかに記載の方法。
４３．必要とする対象における免疫応答を増加させる方法であって、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を増加させるかまたは促進する作用剤を対象に投与し、それによって対象における免疫応答を増加させるステップを含む方法。
４４．必要とする対象における免疫応答を抑制する方法であって、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を阻害する作用剤を対象に投与し、それによって対象における免疫応答を抑制するステップを含む方法。
４５．必要とする対象における自己免疫疾患を処置する方法であって、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現または活性を減少させる作用剤を対象に投与するステップを含む方法。
４６．必要とする対象における自己免疫疾患を処置する方法であって、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を阻害する作用剤を対象に投与するステップを含む方法。
４７．必要とする対象における心血管疾患を処置する方法であって、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現または活性を減少させる作用剤を対象に投与するステップを含む方法。
４８．必要とする対象における心血管疾患を処置する方法であって、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を阻害する作用剤を対象に投与するステップを含む方法。
４９．必要とする対象における感染症を処置する方法であって、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現または嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）を増加させるかまたは活性化する作用剤を対象に投与するステップを含む方法。
５０．必要とする対象における感染症を処置する方法であって、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を増加させるかまたは促進する作用剤を対象に投与するステップを含む方法。
５１．感染症が、ウイルス感染症、細菌感染症、または真菌感染症からなる群から選択される、実施形態４９または５０に記載の方法。
５２．必要とする対象におけるがんを処置する方法であって、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現を増加させるかまたは嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）を活性化する作用剤を対象に投与するステップを含む方法。
５３．必要とする対象におけるがんを処置する方法であって、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を増加させるかまたは促進する作用剤を対象に投与するステップを含む方法。
５４．免疫応答に関係する１つまたは複数のタンパク質の発現または活性をモジュレートする方法であって、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現または活性をモジュレートする作用剤を細胞に接触させるステップを含む方法。
５５．作用剤が、ＯＬＦＲの発現を増加させるかまたはＯＬＦＲを活性化する、実施形態５４に記載の方法。
５６．作用剤が、ＯＬＦＲの発現または活性を減少させる、実施形態５４に記載の方法。
５７．免疫応答に関係する１つまたは複数のタンパク質の発現または活性を増加させる方法であって、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現を増加させるかまたは嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）を活性化する作用剤を細胞に接触させるステップを含む方法。
５８．免疫応答に関係する１つまたは複数のタンパク質の発現または活性を減少させる方法であって、嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の発現を減少させるかまたは嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）を阻害する作用剤を細胞に接触させるステップを含む方法。
５９．免疫応答に関係する１つまたは複数のタンパク質の発現または活性をモジュレートする方法であって、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送をモジュレートする作用剤を細胞に接触させるステップを含む方法。
６０．作用剤が、細胞の形質膜へのＯＬＦＲの輸送を増加させるかまたは促進する、実施形態５９に記載の方法。
６１．作用剤が、細胞の形質膜へのＯＬＦＲの輸送を減少させるかまたは阻害する、実施形態５９に記載の方法。
６２．免疫応答に関係する１つまたは複数のタンパク質の発現または活性を増加させる方法であって、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を増加させるかまたは促進する作用剤を細胞に接触させるステップを含む方法。
６３．免疫応答に関係する１つまたは複数のタンパク質の発現または活性を減少させる方法であって、細胞の形質膜への嗅覚受容体（ＯＬＦＲ）の輸送を減少させるかまたは阻害する作用剤を細胞に接触させるステップを含む方法。
６４．作用剤が、遺伝子サイレンシング剤である、実施形態４４から４８、５４、５６、５８、５９、６１、および６３のいずれかに記載の方法。
６５．遺伝子サイレンシング剤が、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）分子、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、およびＣｌｕｓｔｅｒｅｄ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ  Ｓｈｏｒｔ  Ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ  Ｒｅｐｅａｔｓ（ＣＲＩＳＰＲ）酵素からなる群から選択される、実施形態６４に記載の方法。
６６．ＲＮＡｉ分子が、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、およびマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）からなる群から選択される、実施形態６５に記載の方法。
６７．作用剤が、ＯＬＦＲとそのリガンドとの結合を阻害することによって、ＯＬＦＲの活性を減少させる、実施形態４５、４７、５６、および５８のいずれかに記載の方法。
６８．リガンドが、表８に記載のＯＬＦＲリガンドである、実施形態６７に記載の方法。
６９．作用剤がＯＬＦＲアンタゴニストである、実施形態４４から４８、５４、５６、５８、５９、６１、および６３のいずれかに記載の方法。
７０．ＯＬＦＲアンタゴニストが、シトラール、ウンデカナール、オキシフェニロン、ｐｈｅｎｉｒａｔ、メチルシンナムアルデヒド、ヒドロシンナムアルデヒド、ブルゲオナール、エチルヘキサン酸、α−イオノン、オクタン酸、それらの溶媒和物またはプロドラッグである、実施形態６９に記載の方法。
７１．ＯＬＦＲアンタゴニストが、表９に記載のアンタゴニストである、実施形態６９に記載の方法。
７２．作用剤が、細胞の形質膜へのＯＬＦＲの輸送を阻害することによって、ＯＬＦＲの活性を減少させる、実施形態４５、４７、５６、および５８のいずれかに記載の方法。
７３．作用剤が、ＯＬＦＲに結合する抗体、その断片、または模倣体である、実施形態４４から４８、５４、５６、５８、５９、６１、および６３のいずれかに記載の方法。
７４．作用剤がＯＬＦＲアゴニストである、実施形態４３、４９から５５、５７、５９、および６０のいずれかに記載の方法。
７５．ＯＬＦＲアゴニストが、表８に記載のアゴニストである、実施形態７４に記載の方法。
７６．ＯＬＦＲアゴニストが、オクタナール、クマリン、ヘリオナール、リリアール、ｂ−イオノン、アンドロステノン、アンドロスタジエノン、キャラメルフラノン、３−フェニルプロピルプロピオネート、オイゲノール、エチルバニリン、２−エチルフェンコール、イソ吉草酸、ノナン酸、ブチリル乳酸ブチル、酪酸、イソ吉草酸、プロピオン酸、酢酸Ｎ−アミル、酢酸オイゲノール、サンダルウッド、Ｓ−（−）−シトロネロール、Ｓ−（−）−シトロネラール、（＋）−カルビン、（−）カルボン、（＋）カルボン、リナロール、ブルゲオナール、アセトフェノン、酪酸アミル、ノナンチオール、フェニル酢酸アリル、酢酸Ｎ−アミル、ムスコン、イソオイゲノール、オイゲノールメチルエーテル、１−ヘキサノール、１−ヘプタノール、１−オクタノール、セロリケトン、アニスアルデヒド、（＋）−メントール、バニリン、グアイアコール、リラール、ヘプタン酸エチル、オクタン酸メチル、ノナナール  １−ノナノール、２−ノナノール、３−オクタノン、３−ノナノン、デシルアルデヒドからなる群から選択される、実施形態７４に記載の方法。
７７．作用剤が、オクタナール、ヘプタナール、またはそれらのプロドラッグもしくは溶媒和物である、実施形態４３、４９から５５、５７、５９、および６０のいずれかに記載の方法。
７８．作用剤が、受容体輸送タンパク質１（ＲＴＰ１）、ＲＴＰ２、受容体発現増強タンパク質１（ＲＥＥＰ１）、アミノアシラーゼ３（Ａｃｙ３）、およびグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｏｌｆ）サブユニットアルファ（Ｇｎａｌ）からなる群から選択されるタンパク質である、実施形態４３、４９から５５、５７、５９、および６０のいずれかに記載の方法。
７９．作用剤が、受容体輸送タンパク質１（ＲＴＰ１）、ＲＴＰ２、受容体発現増強タンパク質１（ＲＥＥＰ１）、アミノアシラーゼ３（Ａｃｙ３）、およびグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｏｌｆ）サブユニットアルファ（Ｇｎａｌ）からなる群から選択されるタンパク質をコードするヌクレオチドを含む、実施形態４３、４９から５５、５７、５９、および６０のいずれかに記載の方法。
８０．ＯＬＦＲが、表１〜９および図２Ａ〜２Ｂのいずれか１つに記載のＯＬＦＲである、実施形態４３から７９のいずれかに記載の方法。
８１．ＯＬＦＲが、表７に記載のＯＬＦＲである、実施形態４３から８０のいずれかに記載の方法。
８２．ＯＬＦＲが、ＯＲ７Ｃ１、ＯＲ７Ｄ４、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ１１Ｈ６、ＯＲ４Ｅ２、ＯＲ１０Ｈ１、およびＯＲ６Ａ２からなる群から選択される、実施形態４３から８１のいずれかに記載の方法。
８３．ＯＬＦＲが、ｉｎ  ｖｉｖｏで細胞によって発現される、実施形態４３から８２のいずれかに記載の方法。
８４．細胞が、動物細胞であり、ただし、この細胞は嗅覚細胞ではない、実施形態８３に記載の方法。
８５．細胞がマクロファージである、実施形態８３または８４に記載の方法。
８６．マクロファージが血管マクロファージである、実施形態８５に記載の方法。
８７．免疫応答に関係する１つまたは複数のタンパク質が、図１６および１７に示すタンパク質のいずれかである、実施形態５４から６３のいずれか１つに記載の方法。
８８．免疫応答に関係する１つまたは複数のタンパク質が、ＣＣＬ５（Ｃ−Ｃモチーフケモカインリガンド５）、Ｔｎｆｒｓｆ１２ａ（オステオプロテゲリン）、Ａｘｉｎ１、Ｎａｄｋ、Ａｈｒ（アリール炭化水素受容体）、ＱＤＰＲ（キノイドジヒドロプテリジンレダクターゼ）、ＨＧＦ（肝細胞増殖因子）、ＡＤＡＭ２３、またはＳｎａｐ２９から選択されるタンパク質である、実施形態５４から６３のいずれか１つに記載の方法。
８９．投与が、局所または全身である、実施形態６から５３のいずれかに記載の方法。
９０．投与が、静脈内投与を含む、実施形態８９に記載の方法。
９１．対象が哺乳動物である、実施形態６から５３、８９、および９０のいずれか１つに記載の方法。
９２．対象が、免疫調節障害を伴う疾患または障害を有するか、またはその素因を有する、実施形態６から５３、および８９から９１のいずれか１つに記載の方法。
９３．対象がヒト患者である、実施形態９１または９２に記載の方法。
９４．ＯＬＦＲの活性をモジュレートする作用剤および使用説明書を含むキット。
９５．作用剤が遺伝子サイレンシング剤である、実施形態９４に記載のキット。
９６．遺伝子サイレンシング剤が、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）分子、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、およびＣｌｕｓｔｅｒｅｄ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ  Ｓｈｏｒｔ  Ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ  Ｒｅｐｅａｔｓ（ＣＲＩＳＰＲ）酵素からなる群から選択される、実施形態９５に記載のキット。
９７．ＲＮＡｉ分子が、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、およびマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）からなる群から選択される、実施形態９６に記載のキット。
９８．作用剤が、ＯＬＦＲとそのリガンドとの結合を阻害することによって、ＯＬＦＲの活性をモジュレートする、実施形態９４から９７のいずれかに記載のキット。
９９．リガンドが、表８に記載のＯＬＦＲリガンドである、実施形態９８に記載のキット。
１００．作用剤がＯＬＦＲアンタゴニストである、実施形態９４に記載のキット。
１０１．ＯＬＦＲアンタゴニストが、シトラール、ウンデカナール、オキシフェニロン、ｐｈｅｎｉｒａｔ、メチルシンナムアルデヒド、ヒドロシンナムアルデヒド、ブルゲオナール、エチルヘキサン酸、α−イオノン、オクタン酸、それらの溶媒和物またはプロドラッグである、実施形態１００に記載のキット。
１０２．ＯＬＦＲアンタゴニストが、表９に記載のアンタゴニストである、実施形態１００に記載のキット。
１０３．作用剤が、細胞の形質膜へのＯＬＦＲの輸送を阻害することによって、ＯＬＦＲの活性をモジュレートする、実施形態９４に記載のキット。
１０４．作用剤が、ＯＬＦＲに結合する抗体、その断片または模倣体である、実施形態９４に記載のキット。
１０５．作用剤がＯＬＦＲアゴニストである、実施形態９４に記載のキット。
１０６．ＯＬＦＲアゴニストが、表８に記載のアゴニストである、実施形態１０５に記載のキット。
１０７．ＯＬＦＲアゴニストが、オクタナール、クマリン、ヘリオナール、リリアール、ｂ−イオノン、アンドロステノン、アンドロスタジエノン、キャラメルフラノン、３−フェニルプロピルプロピオネート、オイゲノール、エチルバニリン、２−エチルフェンコール、イソ吉草酸、ノナン酸、ブチリル乳酸ブチル、酪酸、イソ吉草酸、プロピオン酸、酢酸Ｎ−アミル、酢酸オイゲノール、サンダルウッド、Ｓ−（−）−シトロネロール、Ｓ−（−）−シトロネラール、（＋）−カルビン、（−）カルボン、（＋）カルボン、リナロール、ブルゲオナール、アセトフェノン、酪酸アミル、ノナンチオール、フェニル酢酸アリル、酢酸Ｎ−アミル、ムスコン、イソオイゲノール、オイゲノールメチルエーテル、１−ヘキサノール、１−ヘプタノール、１−オクタノール、セロリケトン、アニスアルデヒド、（＋）−メントール、バニリン、グアイアコール、リラール、ヘプタン酸エチル、オクタン酸メチル、ノナナール  １−ノナノール、２−ノナノール、３−オクタノン、３−ノナノン、デシルアルデヒドからなる群から選択される、実施形態１０５に記載のキット。
１０８．作用剤が、オクタナール、ヘプタナール、またはそれらのプロドラッグもしくは溶媒和物である、実施形態９４に記載のキット。
１０９．作用剤が、受容体輸送タンパク質１（ＲＴＰ１）、ＲＴＰ２、受容体発現増強タンパク質１（ＲＥＥＰ１）、アミノアシラーゼ３（Ａｃｙ３）、およびグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｏｌｆ）サブユニットアルファ（Ｇｎａｌ）からなる群から選択されるタンパク質である、実施形態９４に記載のキット。
１１０．作用剤が、受容体輸送タンパク質１（ＲＴＰ１）、ＲＴＰ２、受容体発現増強タンパク質１（ＲＥＥＰ１）、アミノアシラーゼ３（Ａｃｙ３）、およびグアニンヌクレオチド結合タンパク質Ｇ（ｏｌｆ）サブユニットアルファ（Ｇｎａｌ）からなる群から選択されるタンパク質をコードするヌクレオチドを含む、実施形態９４に記載のキット。
１１１．ＯＬＦＲが、表１〜９および図２Ａ〜２Ｂのいずれか１つに記載のＯＬＦＲである、実施形態９４から１１０のいずれかに記載のキット。
１１２．ＯＬＦＲが、表７に記載のＯＬＦＲである、実施形態９４から１１１のいずれかに記載のキット。
１１３．ＯＬＦＲが、ＯＲ７Ｃ１、ＯＲ７Ｄ４、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ１１Ｈ６、ＯＲ４Ｅ２、ＯＲ１０Ｈ１、およびＯＲ６Ａ２からなる群から選択される、実施形態９４から１１２のいずれかに記載のキット。
【表１−１】
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【表１−２】
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【表１−３】
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【表１−４】
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【表１−５】
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【表１−６】
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【表１−７】
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【表１−８】
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【表１−９】
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【表１−１０】
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【表１−１１】
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【表１−１２】
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【表１−１３】
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【表１−１４】
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【表１−１５】
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【表１−１６】
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【表１−１７】
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【表１−１８】
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【表１−１９】
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【表１−２０】
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【表１−２１】
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【表１−２２】
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【表１−２３】
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【表１−２４】
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【表１−２５】
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【表１−２６】
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【表１−２７】
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【表１−２８】
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【表１−２９】
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【表１−３０】
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【表１−３１】
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【表１−３２】
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【表１−３３】
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【表１−３４】
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【表１−３５】
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【表１−３６】
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【表１−３７】
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【表１−３８】
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【表１−３９】
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【表１−４０】
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【表１−４１】
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【表１−４２】
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【表１−４３】
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【表１−４４】
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【表１−４５】
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【表１−４６】
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【表２−１】
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【表２−２】
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【表２−３】
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【表２−４】
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【表２−５】
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【表２−６】
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【表２−７】
2021521248.tif 000059
【表３−１】
2021521248.tif 000060
【表３−２】
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【表４−１】
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【表４−２】
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【表４−３】
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【表４−４】
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【表４−５】
2021521248.tif 000066
【表４−６】
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【表５】
2021521248.tif 000068
【表６】
2021521248.tif 000069
【表７】
2021521248.tif 000070
【表８−１】
2021521248.tif 000071
【表８−２】
2021521248.tif 000072
【表８−３】
2021521248.tif 000073
【表８−４】
2021521248.tif 000074
【表８−５】
2021521248.tif 000075
【表９】
2021521248.tif 000076
【図１Ａ】
2021521248.tif 000077
【図１ＢＣ】
2021521248.tif 000078
【図２Ａ】
2021521248.tif 000079
【図２Ｂ】
2021521248.tif 000080
【図３ＡＢ】
2021521248.tif 000081
【図３ＣＤ】
2021521248.tif 000082
【図３ＥＦ】
2021521248.tif 000083
【図３ＧＨ】
2021521248.tif 000084
【図３Ｉ】
2021521248.tif 000085
【図４】
2021521248.tif 000086
【図５】
2021521248.tif 000087
【図６】
2021521248.tif 000088
【図７】
2021521248.tif 000089
【図８】
2021521248.tif 000090
【図９】
2021521248.tif 000091
【図１０】
2021521248.tif 000092
【図１１Ａ】
2021521248.tif 000093
【図１１Ｂ】
2021521248.tif 000094
【図１２】
2021521248.tif 000095
【図１３】
2021521248.tif 000096
【図１４】
2021521248.tif 000097
【図１５】
2021521248.tif 000098
【図１６】
2021521248.tif 000099
【図１７】
2021521248.tif 000100
【図１８】
2021521248.tif 000101
【国際調査報告】
2021521248.tif 000102
2021521248.tif 000103
2021521248.tif 000104
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