(57)【要約】神経筋障害、筋損傷、および痙縮に関連する病気を含む運動障害の処置のための方法および組成物が、本明細書で開示される。処置の方法は、骨格筋ミオシンＩＩを阻害することによって、骨格筋収縮を低減して、筋の損傷を低減する工程を包含する。いくつかの局面において、神経筋の病気を処置する方法が、本明細書で記載される。上記方法は、その必要のある被験体に、骨格筋収縮のインヒビターを投与する工程を包含し得る。骨格筋収縮のインヒビターは、骨格筋収縮を、上記被験体の処置前の骨格筋収縮能力に対して９０％低減するために必要とされる量より少ない量で投与され得る。
2021514010.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
神経筋の病気を処置する方法であって、前記方法は、その必要のある被験体に、骨格筋収縮のインヒビターを投与する工程を包含し、ここで前記骨格筋収縮のインヒビターは、骨格筋収縮を、前記被験体の処置前の骨格筋収縮能力に対して９０％低減するために必要な量より少ない量で投与される、方法。
【請求項２】
神経筋の病気を処置する方法であって、前記方法は、その必要のある被験体に、骨格筋収縮のインヒビターを投与する工程を包含し、ここで前記骨格筋収縮のインヒビターは、骨格筋収縮を、前記被験体の処置前の骨格筋収縮能力に対して５％〜７５％低減する量で投与される、方法。
【請求項３】
神経筋の病気を処置する方法であって、前記方法は、その必要のある被験体に、骨格筋収縮のインヒビターを投与する工程を包含し、ここで前記骨格筋収縮のインヒビターは、クレアチニンキナーゼを、前記被験体の処置前のクレアチニンキナーゼレベルに対して５〜９０％まで調節する量で投与される工程を包含する、方法。
【請求項４】
神経筋の病気を処置する方法であって、前記方法は、その必要のある被験体に、骨格筋収縮のインヒビターを投与する工程を包含し、ここで前記骨格筋収縮のインヒビターは、炎症マーカーを、前記被験体の処置前の値に対して５〜９０％まで調節する量で投与され、ここで前記炎症マーカーは、ＩＬ−１、ＩＬ−６およびＴＮＦ−α、または核磁気共鳴画像法を使用して測定され得る浮腫のような状態からなる群より選択される、方法。
【請求項５】
神経筋の病気を処置する方法であって、前記方法は、その必要のある被験体に、骨格筋収縮のインヒビターを投与する工程を包含し、ここで前記骨格筋収縮のインヒビターは、骨格筋収縮を、エキソビボアッセイ：
ａ．ｍｄｘマウスから解剖した長趾伸筋を、電磁気プラーに据え付け、前記筋を、酸素化クレブス溶液中に浸して、筋機能を維持する；
ｂ．試験化合物を、前記筋に適用する；
ｃ．等尺性収縮工程を行い、ここで前記筋を、一連の６回の電気パルスで刺激する；
ｄ．伸張性収縮工程を行い、ここで前記筋を、０．３５〜０．７秒間にわたって８０〜１２５Ｈｚの一連の５〜６回の電気パルスで刺激し、前記刺激の最後の０．１５〜０．２秒間の間にその静止長より１０％〜２０％大きく伸ばし、ここで各パルスの後に、筋収縮によって生じた筋力を測定する；
ｅ．工程ｄにおける第１のパルスから第６のパルスまでの筋収縮によって生じた筋力の変化を、試験筋力の低下として計算し、前記試験化合物への曝露なしの対照のサンプルにおける第１のパルスから第６のパルスまでの筋収縮によって生じた筋力の変化（対照の筋力低下）と比較する；
において５％〜７５％低減し、
ここで前記試験筋力の低下が、前記対照の筋力低下より少なくとも２０％小さい場合に、前記試験化合物は、骨格筋収縮のインヒビターである、方法。
【請求項６】
神経筋の病気を処置する方法であって、前記方法は、その必要のある被験体に、骨格筋収縮のインヒビターを投与する工程を包含し、ここで前記骨格筋収縮のインヒビターは、以下のアッセイ：
ａ．ミオシンＳ１フラグメントを、重合化アクチンとともに、対照の容器および試験容器中でインキュベートする；
ｂ．試験化合物およびＭｇＡＴＰを前記試験容器中の混合物に添加し、ＭｇＡＴＰを前記対照の容器に添加する；
ｃ．前記対照の容器および試験容器を、前記対照の容器中のＡＴＰのうちの９５％またはこれより多くが加水分解されるまでインキュベートする；
においてＡＴＰａｓｅ活性を阻害し、
前記試験容器中のＡＴＰ消費の量を、前記対照の容器中のＡＴＰ消費の量と比較し、ここで前記試験容器中のＡＴＰ消費が前記対照の容器より少なくとも２０％小さい場合、前記試験化合物は、骨格筋収縮のインヒビターである、方法。
【請求項７】
神経筋の病気を処置する方法であって、前記方法は、
ａ．被験体の心筋収縮または前記心筋収縮からの筋力を測定する工程；
ｂ．その必要のある被験体に、骨格筋収縮のインヒビターを投与する工程：
ｃ．前記骨格筋収縮のインヒビターの投与後に、前記被験体の前記心筋収縮または心筋収縮からの筋力を測定する工程；
を包含し、ここで前記工程ａの心筋収縮は、前記工程ｃの心筋収縮の１０％以内である、方法。
【請求項８】
前記神経筋の病気は、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー、筋強直性ジストロフィー１型、筋強直性ジストロフィー２型、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー、眼咽頭型筋ジストロフィー、肢帯型筋ジストロフィー、腱炎、手根管症候群から選択される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記骨格筋収縮のインヒビターは、ミオシンのインヒビターから選択される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ミオシンのインヒビターは、骨格筋ミオシンＩＩのインヒビターである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
運動障害を処置する方法であって、前記方法は、その必要のある被験体に、骨格筋ミオシンＩＩのインヒビターを投与する工程を包含する方法。
【請求項１２】
前記運動障害は、筋痙縮を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記筋痙縮は、多発性硬化症、パーキンソン病、アルツハイマー病、もしくは脳性麻痺、または傷害、または脳卒中、外傷性脳損傷、脊髄損傷、低酸素症、髄膜炎、脳炎、フェニルケトン尿症、もしくは筋萎縮性側索硬化症のような外傷性事象と関連する痙縮から選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記骨格筋ミオシンＩＩのインヒビターは、不随意的筋収縮を９０％低減するために十分な量で投与される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記骨格筋ミオシンＩＩのインヒビターは、不随意的筋収縮を２５〜７５％低減するために十分な量で投与される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
前記骨格筋ミオシンＩＩのインヒビターは、日常生活動作（ＡＤＬ）または習慣的身体活動に影響しない、請求項１１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記骨格筋収縮のインヒビターは、日常生活動作（ＡＤＬ）または習慣的身体活動に影響しない、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記方法は、前記骨格筋ミオシンＩＩインヒビターを前記被験体に投与する前および投与した後に、前記被験体の骨格筋収縮または前記骨格筋収縮からの筋力を測定する工程をさらに包含する、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記投与の前の前記被験体の骨格筋収縮は、前記被験体への前記投与の後の骨格筋収縮の２０％以内である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記投与の前の前記被験体の骨格筋収縮は、前記被験体への前記投与の後の筋収縮の１０％以内である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
前記骨格筋ミオシンＩＩのインヒビターは、前記被験体の心筋収縮または前記心筋収縮からの筋力を感知できるほど阻害しない、請求項１１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記骨格筋ミオシンＩＩのインヒビターは、前記被験体の肺における１回換気量を感知できるほど阻害しない、請求項１１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記方法は、前記骨格筋ミオシンＩＩインヒビターの投与前および投与後に、前記被験体の心筋収縮または前記心筋収縮からの筋力を測定する工程をさらに包含する、請求項１１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記投与の前の前記被験体の心筋収縮は、前記被験体への前記投与の後の心筋収縮の１０％以内である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
骨格筋線維における収縮誘導性損傷は、不随意的骨格筋収縮に由来する、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記不随意的骨格筋収縮は、神経筋の病気または痙縮に関連する病気と関連する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記神経筋の病気は、デュシェンヌ型筋ジストロフィーである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
骨格筋線維における収縮誘導性損傷は、随意的骨格筋収縮に由来する、請求項２３に記載の方法。
【請求項２９】
前記方法は、前記骨格筋ミオシンＩＩインヒビターを投与する前および投与した後に、前記被験体の心筋収縮または前記心筋収縮からの筋力を測定する工程をさらに包含する、請求項２３〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記骨格筋ミオシンＩＩのインヒビターは、平滑筋収縮を感知できるほど阻害しない、請求項１１〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記方法は、前記骨格筋ミオシンＩＩインヒビターを投与する前および投与した後に、前記被験体の平滑筋収縮または前記平滑筋収縮からの筋力を測定する工程をさらに包含する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記投与の前の前記被験体の平滑筋収縮は、前記投与の後の前記平滑筋収縮の１０％以内である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記骨格筋ミオシンＩＩのインヒビターは、インビトロアッセイにおいて、ＡＴＰａｓｅ活性を阻害するが、心筋ミオシンＳ１  ＡＴＰａｓｅを阻害しない、請求項１０〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
前記骨格筋ミオシンＩＩのインヒビターは、スルホンアミド、ヒドロキシクマリン、ピリダジノン、またはピロリジノンである、請求項１０〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
前記骨格筋ミオシンＩＩのインヒビターは、スルホンアミドである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記骨格筋ミオシンＩＩのインヒビターは、必要に応じて置換されたＮ−ベンジル−ｐ−トリル−スルホンアミドである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記骨格筋ミオシンＩＩのインヒビターは、ピリダジノンである、請求項３４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年２月２０日出願の米国仮出願第６２／６３２，９５７号および２０１８年１１月６日出願の米国仮出願第６２／７５６，５１３号（これらは本明細書に参考として援用される）の利益を主張する。
【背景技術】
【０００２】
背景
骨格筋は、２つの主要な目的を果たす、人体で最大の器官系である。その第１は、筋収縮、自発運動、および姿勢維持を可能にする力の生成である；その第２は、グルコース、脂肪酸およびアミノ酸の代謝である。日々の活動およびエクササイズの間の骨格筋の収縮は、筋の適応に重要である、筋ストレス、破壊およびリモデリングへと自然につながっている。神経筋の病気（例えば、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ））を有する個体では、筋収縮は、身体が修復するのに苦労する、連続したラウンドの増幅された筋破壊をもたらす。最終的には、患者が加齢するにつれて、筋における過度の炎症、線維症、および脂肪沈着の蓄積をもたらす病態生理学的プロセスが出現し、身体機能の急激な低下および死亡率への寄与を予示する。
【０００３】
ＤＭＤは、骨格筋に影響を及ぼす遺伝的障害であり、進行性の筋変性および虚弱によって特徴づけられる。神経筋の病気（例えば、ＤＭＤ）を有する患者において筋破壊を低減する処置のニーズが未だにある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
要旨
いくつかの局面において、神経筋の病気を処置する方法が、本明細書で記載される。上記方法は、その必要のある被験体に、骨格筋収縮のインヒビターを投与する工程を包含し得る。骨格筋収縮のインヒビターは、骨格筋収縮を、上記被験体の処置前の骨格筋収縮能力に対して９０％低減するために必要とされる量より少ない量で投与され得る。
【０００５】
いくつかの局面において、神経筋の病気を処置する方法は、その必要のある被験体に、骨格筋収縮のインヒビターを投与する工程を包含し得る。骨格筋収縮のインヒビターは、骨格筋収縮を、上記被験体の処置前の骨格筋収縮能力に対して５％〜７５％低減する量で投与され得る。
【０００６】
いくつかの局面において、上記骨格筋収縮のインヒビターは、クレアチニンキナーゼを、上記被験体の処置前のクレアチニンキナーゼレベルに対して５〜９０％まで調節する量で投与され得る。
【０００７】
いくつかの局面において、上記骨格筋収縮のインヒビターは、炎症マーカーを調節する量で投与され得る。上記炎症マーカーは、ＩＬ−１、ＩＬ−６およびＴＮＦ−αからなる群より選択されてもよく、または上記骨格筋収縮のインヒビターは、核磁気共鳴画像法を使用して測定され得る浮腫のような状態を上記被験体の処置前の値に対して５〜９０％まで調節する量で投与されてもよい。
【０００８】
いくつかの局面において、上記骨格筋収縮のインヒビターは、骨格筋収縮を、エキソビボアッセイにおいて５％〜９０％低減する。上記エキソビボアッセイにおいて、（ａ）ｍｄｘマウスから解剖した長趾伸筋は、電磁気プラーに据え付けられ得、上記筋は、酸素化クレブス溶液中に浸されて、筋機能を維持し得る；（ｂ）試験化合物は、上記筋に適用され得る；（ｃ）等尺性収縮工程が行われ得、ここで上記筋は、一連の５〜６回の電気パルスで刺激され得る；（ｄ）伸張性収縮工程が行われ得、ここで上記筋は、０．３５〜０．７秒間にわたって８０〜１２５Ｈｚで電気的に刺激され得、その静止長より１０％〜２０％大きく伸ばされ０．３５〜０．７秒間にわたって８０〜１２５Ｈｚで電気刺激され、各パルス後に、上記筋収縮によって生じた力が測定され得る；（ｅ）工程（ｄ）における上記第１のパルスから上記第５〜第６のパルスまでの筋収縮によって生じた力の変化は、試験筋力の低下として計算され得、上記試験化合物への曝露なしの対照のサンプルにおける上記第１のパルスから上記第６のパルスまでの筋収縮によって生じた力の変化（対照の筋力低下）と比較され得る。筋肉の膜の損傷も、等尺性または伸張性収縮後にプロシオンオレンジ中で筋をインキュベートすることによって測定され得る。プロシオンオレンジは、損傷した膜を有する筋線維によって取り込まれる蛍光色素である。次いで、色素陽性線維の数または割合は、組織学によって定量される。上記試験筋力の低下および／または色素陽性線維の割合が、対照の筋力低下および／色素取り込みより少なくとも２０％小さいことがある場合、上記試験化合物は、骨格筋収縮のインヒビターとして選択され得る。
【０００９】
いくつかの局面において、上記骨格筋収縮のインヒビターは、アッセイにおいてＡＴＰａｓｅ活性を阻害する。ミオシンＳ１フラグメントは、対照の容器および試験容器中で重合化アクチンとインキュベートされ得る。試験化合物およびＭｇＡＴＰは、上記試験容器中の混合物に添加され得、ＭｇＡＴＰは、上記対照の容器に添加され得る。上記試験容器中での規定の期間にわたるＡＴＰ消費の量は、上記対照の容器中でのＡＴＰ消費の量と比較され得る。上記規定の期間は、５分間〜２０分間であり得る。上記ＡＴＰ消費は、ＮＡＤ＋の生成に相関し得る。いくつかの場合には、ＡＴＰ消費が、上記対照の容器と比較して、上記試験容器において少なくとも２０％減少される場合、上記試験化合物は、骨格筋収縮のインヒビターとして選択され得る。
【００１０】
いくつかの局面において、神経筋の病気を処置する方法は、被験体の心筋収縮または上記心筋収縮からの筋力を測定する工程を包含し得る。骨格筋収縮のインヒビターは、その必要のある被験体に投与され得る。上記被験体の心筋収縮または上記心筋収縮からの筋力は、上記骨格筋収縮のインヒビターを投与した後に測定され得る。上記被験体の心筋収縮は、処置前の能力に対する上記心筋収縮の１０％以内であり得る。
【００１１】
いくつかの実施形態において、上記神経筋の病気は、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー、筋強直性ジストロフィー１型、筋強直性ジストロフィー２型、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー、眼咽頭型筋ジストロフィー、肢帯型筋ジストロフィー、腱炎、手根管症候群から選択され得る。
【００１２】
いくつかの実施形態において、上記筋収縮のインヒビターは、ミオシンのインヒビターから選択され得る。いくつかの実施形態において、上記ミオシンのインヒビターは、骨格筋ミオシンＩＩのインヒビターであり得る。
【００１３】
いくつかの局面において、運動障害を処置する方法は、その必要のある被験体に骨格筋ミオシンＩＩのインヒビターを投与する工程を包含し得る。いくつかの実施形態において、上記運動障害は、筋痙縮を含む。いくつかの実施形態において、上記筋痙縮は、多発性硬化症、パーキンソン病、アルツハイマー病、もしくは脳性麻痺、または傷害、または外傷的事象（例えば、脳卒中、外傷性脳損傷、脊髄損傷、低酸素症、髄膜炎、脳炎、フェニルケトン尿症、もしくは筋萎縮性側索硬化症）と関連する痙縮から選択され得る。
【００１４】
いくつかの実施形態において、上記骨格筋ミオシンＩＩのインヒビターは、不随意的筋収縮を９０％低減するために十分な量で投与され得る。いくつかの実施形態において、上記骨格筋ミオシンＩＩのインヒビターは、不随意的筋収縮を２５〜７５％低減するために十分な量で投与され得る。
【００１５】
いくつかの実施形態において、上記骨格筋ミオシンＩＩのインヒビターは、日常生活動作（ＡＤＬ）または習慣的身体活動に影響しなくてもよい。いくつかの実施形態において、上記骨格筋収縮のインヒビターは、日常生活動作（ＡＤＬ）または習慣的身体活動に影響しなくてもよい。
【００１６】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記骨格筋ミオシンＩＩインヒビターを上記被験体に投与する前および投与した後に、上記被験体の骨格筋収縮または上記骨格筋収縮からの筋力を測定する工程をさらに包含する。
【００１７】
いくつかの実施形態において、上記投与前の上記被験体の骨格筋収縮は、上記被験体への上記投与後の骨格筋収縮の２０％以内であり得る。いくつかの実施形態において、上記投与前の上記被験体の骨格筋収縮は、上記被験体への上記投与後の筋収縮の１０％以内であり得る。
【００１８】
いくつかの実施形態において、上記骨格筋ミオシンＩＩのインヒビターは、上記被験体の心筋収縮または上記心筋収縮からの筋力を感知できるほど阻害しなくてもよい。いくつかの実施形態において、上記骨格筋ミオシンＩＩのインヒビターは、上記被験体の肺における１回換気量を感知できるほど阻害しなくてもよい。
【００１９】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記骨格筋ミオシンＩＩインヒビターの投与前および投与後に、上記被験体の心筋収縮または上記心筋収縮からの筋力を測定する工程をさらに包含する。いくつかの場合には、上記投与前の上記被験体の心筋収縮は、上記被験体への上記投与後の心筋収縮の１０％以内であり得る。
【００２０】
いくつかの実施形態において、骨格筋線維における上記収縮誘導性損傷は、不随意的骨格筋収縮に由来し得る。いくつかの実施形態において、上記不随意的骨格筋収縮は、神経筋の病気または痙縮に関連する病気と関連し得る。いくつかの実施形態において、上記神経筋の病気は、デュシェンヌ型筋ジストロフィーであり得る。
【００２１】
いくつかの実施形態において、骨格筋線維における上記収縮誘導性損傷は、随意的骨格筋収縮に由来し得る。
【００２２】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記骨格筋ミオシンＩＩインヒビターを投与する前および投与した後に、上記被験体の心筋収縮または上記心筋収縮からの筋力を測定する工程をさらに包含する。いくつかの実施形態において、上記骨格筋ミオシンＩＩのインヒビターは、平滑筋収縮を感知できるほど阻害しなくてもよい。
【００２３】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記骨格筋ミオシンＩＩインヒビターを投与する前および投与した後に、上記被験体の平滑筋収縮または上記平滑筋収縮からの筋力を測定する工程をさらに包含する。いくつかの実施形態において、上記投与前の上記被験体の平滑筋収縮は、上記投与後の上記平滑筋収縮の１０％以内であり得る。
【００２４】
いくつかの実施形態において、上記骨格筋ミオシンＩＩのインヒビターは、インビトロアッセイにおいて、ＡＴＰａｓｅ活性を阻害するが、心筋ミオシンＳ１  ＡＴＰａｓｅを阻害しなくてもよい。いくつかの実施形態において、上記骨格筋ミオシンＩＩのインヒビターは、スルホンアミド、ヒドロキシクマリン、ピリダジノン、またはピロリジノンであり得る。
【００２５】
いくつかの実施形態において、上記骨格筋ミオシンＩＩのインヒビターは、スルホンアミドであり得る。いくつかの実施形態において、上記骨格筋ミオシンＩＩのインヒビターは、必要に応じて置換されたＮ−ベンジル−ｐ−トリル−スルホンアミドであり得る。いくつかの実施形態において、上記骨格筋ミオシンＩＩのインヒビターは、ピリダジノンである。
【００２６】
いくつかの実施形態において、上記骨格筋収縮は、等尺性四肢アッセイ（ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｌｉｍｂ  ａｓｓａｙ）、握力測定アッセイもしくはレッグプレスアッセイ、または心拍計もしくは活動量計によって測定され得る。いくつかの実施形態において、上記骨格筋収縮のインヒビターの投与は、心筋トロポニンまたは遅筋骨格筋トロポニンの放出を感知できるほど阻害しなくてもよい。
【００２７】
本開示のさらなる局面および利点は、本開示の例証に過ぎない実施形態が示され、記載される以下の詳細な説明から当業者に容易に明らかになる。理解されるように、本開示は、他のおよび異なる実施形態が可能あり、そのいくつかの詳細は、全て本開示から逸脱することなく、種々の明らかな点において改変が可能である。よって、図面および詳細な説明は、本質的に例証としてみなされるべきであって、限定としてみなされるべきではない。
【００２８】
本発明の新規な特徴は、添付の請求項において詳細に示される。本発明の特徴および利点のよりよい理解は、例示的実施形態を示し、本発明の原理が利用される以下の詳細な説明および添付の図面（本明細書では、「図（ｆｉｇｕｒｅ）」および「図（ＦＩＧ．）」とも）を参照することによって得られる。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】図１：漸増濃度のカルシウムに曝露した際の正常な筋とＤＭＤの筋との間の比較。
【００３０】
【図２】図２：ＤＭＤゼブラフィッシュモデルの胚における対照の筋およびＢＴＳ処理した筋との間の比較。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
詳細な説明
ある種の局面において、本開示は、速筋線維骨格筋ミオシンの選択的阻害を通じて神経筋の病気を処置するための方法を提供する。特に、本開示の方法は、ＤＭＤおよび他の神経筋の病気の処置において使用され得る。
【００３２】
骨格筋は、２タイプの線維、遅筋線維（すなわち、Ｉ型）および速筋線維（すなわち、ＩＩ型）から主に構成される。各筋において、その２タイプの線維は、種々の筋での、ならびに成長および発生における種々の時点での線維タイプの組成の差異に伴って、モザイク様の配置で構成される。遅筋線維は、優れた有酸素エネルギー生成能力を有する。遅筋線維の収縮速度は遅いが、耐疲労性は高い。遅筋線維は、代表的には、速筋線維が有するより高いミトコンドリアおよびミオグロビンの濃度を有し、速筋線維より多くの毛細管によって取り囲まれている。遅筋線維は、より低いミオシンＡＴＰａｓｅ活性に起因して、速筋線維と比較してより低い速度で収縮し、より低い仕事率を生み出すが、それらは、より長期間にわたって、例えば、安定化、姿勢制御、および持久力エクササイズにおいて収縮機能を維持し得る。
【００３３】
ヒトにおける速筋線維は、それらが発現する特異的骨格筋速筋ミオシン（ＩＩａ型、ＩＩｘ／ｄ型）に依存して、２つの主要な線維タイプにさらに分けられる。速筋線維の第３のタイプ（ＩＩｂ型）は、他の哺乳動物に存在するが、ヒト筋肉においてはほとんど同定されない。速筋線維は、優れた無酸素エネルギー生成能力を有し、短期間にわたって多量の張力を生成し得る。代表的には、速筋線維は、遅筋線維と比較して、より低濃度のミトコンドリア、ミオグロビン、および毛細管を有するので、より早く疲労し得る。速筋は、パワーおよびレジスタンスアクティビティに必要とされる力をより早く発生させる。
【００３４】
Ｉ型およびＩＩ型の割合は、種々の個体で変動し得る。例えば、非アスリート個体は、５０％に近い各筋線維タイプを有し得る。パワー系アスリートは、速筋線維の比率がより高く、例えば、短距離選手では、７０〜７５％のＩＩ型を有し得る。持久系アスリートは、遅筋線維の比率がより高く、例えば、長距離走者では、７０〜８０％を有し得る。Ｉ型線維およびＩＩ型線維の割合はまた、個体の年齢に依存して変動し得る。ＩＩ型線維の、特に、ＩＩｘ型線維の割合は、個体が加齢するにつれて減少し得、除脂肪筋量の低下を生じる。
【００３５】
骨格筋の収縮作用は、神経筋疾患（例えば、ＤＭＤ）を有する被験体において筋損傷をもたらし、この損傷は、速筋線維においてより顕著なようである。ジストロフィーマウスモデルにおいて、伸張性の損傷（ｌｅｎｇｔｈｅｎｉｎｇ  ｉｎｊｕｒｙ）後の急激な筋力低下が、主にＩ型線維の遅筋（すなわち、ヒラメ筋）と比較して主にＩＩ型線維の速筋（すなわち、ＥＤＬ）により多いことが知られている。ジストロフィーマウスモデルにおける急激な筋力低下および組織損傷の程度が、伸張性損傷の間に発生する筋力のピークに比例することも示されている。後期ＤＭＤの病理を特徴づける炎症および不可逆的線維症の前に起こる過剰収縮誘導性損傷は、図１に示される［改訂された図：Ｃｌａｆｌｉｎ  ａｎｄ  Ｂｒｏｏｋｓ，Ａｍ  Ｊ  Ｂｒｏｏｋｓ，Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｃｅｌｌ，２００８，］。これらの患者における収縮誘導性筋損傷は、ＩＩ型線維における筋力生成のピークを制限し、より健康なＩ型線維に対する依存性を増大させることによって、おそらく低減され得る。Ｎ−ベンジル−ｐ−トリル−スルホンアミド（ＢＴＳ）は、骨格筋速筋線維ミオシンのインヒビターであり、図２に示されるとおりのＤＭＤのゼブラフィッシュモデルからの胚において病的な筋の乱れから筋を保護することが示されている［出典：Ｌｉ  ａｎｄ  Ａｒｎｅｒ，ＰＬｏＳＯＮＥ，２０１５］。
【００３６】
ＩＩ型線維に対して選択的でない骨格筋ミオシンのインヒビターは、呼吸機能および心臓活動の障害を含め、骨格筋収縮の過剰な阻害をもたらし得る。なぜなら心臓は、いくつかの構造的構成要素（例えば、Ｉ型ミオシン）をＩ型骨格筋線維と共有するからである。ＩＩ型線維の収縮は、病的なかつ不可逆的な筋損傷を引き起こすと考えられるので、本開示は、ＤＭＤおよび他の神経筋の病気の治療選択肢として、速筋線維骨格筋ミオシンの選択的インヒビターを提供する。ＩＩ型骨格筋ミオシンの標的化阻害は、被験体の日常活動に対する影響を最小限にしながら、骨格筋収縮を低減し得る。
【００３７】
本明細書で考察される方法は、神経筋の病気および運動障害の処置のために使用され得る。神経筋の病気の例としては、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー、筋強直性ジストロフィー１型、筋強直性ジストロフィー２型、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー、眼咽頭型筋ジストロフィー、肢帯型筋ジストロフィー、腱炎および手根管症候群が挙げられるが、これらに限定されない。運動障害の例としては、筋痙縮障害、あるいは多発性硬化症、パーキンソン病、アルツハイマー病、または脳性麻痺と関連する痙縮が挙げられるが、これらに限定されない。本開示の方法は、傷害、または外傷的事象（例えば、脳卒中、外傷性脳損傷、脊髄損傷、低酸素症、髄膜炎、脳炎、フェニルケトン尿症、または筋萎縮性側索硬化症）に由来する運動障害を処置するために使用され得る。骨格筋ミオシンＩＩ、骨格筋トロポニンＣ、骨格筋トロポニンＩ、骨格筋トロポミオシン、骨格筋トロポニンＴ、骨格筋調節性軽鎖、骨格筋ミオシン結合タンパク質Ｃまたは骨格筋アクチンの阻害に応答し得る他の状態も挙げられる。
【００３８】
骨格筋収縮の低減によって神経筋障害および運動障害を処置する方法が、本明細書で示される。選択的速筋骨格筋（ＩＩ型）ミオシンインヒビターでの神経筋障害および運動障害を有する被験体の処置は、過剰な非協調筋収縮を防止することによって、筋破壊を低減し得、より少ない筋損傷を生じる。さらに、本開示の方法は、被験体における身体機能に対する影響を最小限にしながら、筋損傷を低減し得る。機能の保存は、ＩＩ型線維における筋力の生成による損傷レベルを制限すること、およびより健康なＩ型線維に対する依存性を増大させることの両方によって、起こり得る。骨格筋収縮または非協調筋収縮の低減は、骨格筋ミオシンＩＩの阻害によって低減され得る。ある種の実施形態において、その骨格筋ミオシンＩＩのインヒビターは、スルホンアミド、ヒドロキシクマリン、またはピロリジノンである。その骨格筋ミオシンＩＩのインヒビターは、Ｎ−ベンジル−ｐ−トリル−スルホンアミド（ＢＴＳ）のアナログであり得る。
【００３９】
ある種の実施形態において、その骨格筋ミオシンＩＩのインヒビターは、ピリダジノンである。本明細書で使用される場合、ピリダジノンとは、構造：
【化１】
2021514010.tif 000003
によって表される化合物およびその置換されたバージョンに言及する。例えば、ピリダジノンは、１またはこれより多くの位置で置換され得る（例えば、そのピリダジノンの２位、４位、５位、または６位において置換される）。ある種の実施形態において、ピリダジノンは、２位および６位の両方において置換される。そのピリダジノン上での置換基は、必要に応じて置換されたアルキル基、必要に応じて置換された炭素環（例えば、シクロアルキルおよびアリール環）、ならびに必要に応じて置換された複素環、ヘテロシクロアルキルおよびヘテロアリール環から選択され得る。ある種の実施形態において、ピリダジノンは、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１６／０２３８７７（その内容は、本明細書に参考として援用される）に記載される化合物またはその塩から選択される。
【００４０】
用語「置換された」とは、化合物の１またはこれより多くの炭素または置換可能なヘテロ原子（例えば、ＮＨまたはＮＨ２）上での水素を置き換える置換基を有する部分（例えば、ピリダジノン）に言及する。「置換」または「で置換された」が、このような置換が、その置換された原子およびその置換基の許容された結合価に従い、その置換が、安定な化合物（すなわち、再配置、環化、脱離などによるような変形を自然には受けない化合物）を生じるという暗に示される条件を含むことは理解される。ある種の実施形態において、置換されたとは、同じ炭素原子上にある２個の水素原子を置き換える置換基（例えば、１個の炭素上にあるその２個の水素原子を、オキソ、イミノまたはチオキソ基で置換する）を有する部分に言及する。本明細書で使用される場合、用語「置換された」は、有機化合物の全ての許容可能な置換基を含むことが企図される。広い局面において、その許容可能な置換基としては、有機化合物の非環式および環式の、分枝状および非分枝状の、炭素環式および複素環式の、芳香族および非芳香族の置換基が挙げられる。その許容可能な置換基は、適切な有機化合物に対して１個または複数であり得、同じであり得るかまたは異なり得る。
【００４１】
いくつかの実施形態において、置換基は、例えば、本明細書で記載される以下の任意の置換基を含み得る：ハロゲン、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、チオキソ（＝Ｓ）、シアノ（−ＣＮ）、ニトロ（−ＮＯ２）、イミノ（＝Ｎ−Ｈ）、オキシム（ｏｘｉｍｏ）（＝Ｎ−ＯＨ）、ヒドラジノ（＝Ｎ−ＮＨ２）、−Ｒｂ−ＯＲａ、−Ｒｂ−ＯＣ（Ｏ）−Ｒａ、−Ｒｂ−ＯＣ（Ｏ）−ＯＲａ、−Ｒｂ−ＯＣ（Ｏ）−Ｎ（Ｒａ）２、−Ｒｂ−Ｎ（Ｒａ）２、−Ｒｂ−Ｃ（Ｏ）Ｒａ、−Ｒｂ−Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−Ｒｂ−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）２、−Ｒｂ−Ｏ−Ｒｃ−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）２、−Ｒｂ−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−Ｒｂ−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）Ｒａ、−Ｒｂ−Ｎ（Ｒａ）Ｓ（Ｏ）ｔＲａ（ここでｔは１または２である）、−Ｒｂ−Ｓ（Ｏ）ｔＲａ（ここでｔは１または２である）、−Ｒｂ−Ｓ（Ｏ）ｔＯＲａ（ここでｔは１または２である）、および−Ｒｂ−Ｓ（Ｏ）ｔＮ（Ｒａ）２（ここでｔは１または２である）；ならびにアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、アラルケニル、アラルキニル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、およびヘテロアリールアルキルであって、これらのうちのいずれも、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロゲン、ハロアルキル、ハロアルケニル、ハロアルキニル、オキソ（＝Ｏ）、チオキソ（＝Ｓ）、シアノ（−ＣＮ）、ニトロ（−ＮＯ２）、イミノ（＝Ｎ−Ｈ）、オキシム（＝Ｎ−ＯＨ）、ヒドラジン（＝Ｎ−ＮＨ２）、−Ｒｂ−ＯＲａ、−Ｒｂ−ＯＣ（Ｏ）−Ｒａ、−Ｒｂ−ＯＣ（Ｏ）−ＯＲａ、−Ｒｂ−ＯＣ（Ｏ）−Ｎ（Ｒａ）２、−Ｒｂ−Ｎ（Ｒａ）２、−Ｒｂ−Ｃ（Ｏ）Ｒａ、−Ｒｂ−Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−Ｒｂ−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）２、−Ｒｂ−Ｏ−Ｒｃ−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）２、−Ｒｂ−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−Ｒｂ−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）Ｒａ、−Ｒｂ−Ｎ（Ｒａ）Ｓ（Ｏ）ｔＲａ（ここでｔは１または２である）、−Ｒｂ−Ｓ（Ｏ）ｔＲａ（ここでｔは１または２である）、−Ｒｂ−Ｓ（Ｏ）ｔＯＲａ（ここでｔは１または２である）および−Ｒｂ−Ｓ（Ｏ）ｔＮ（Ｒａ）２（ここでｔは１または２である）によって必要に応じて置換され得る；ここで各Ｒａは、水素、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、またはヘテロアリールアルキルから独立して選択され、ここで各Ｒａは、結合価が許容すれば、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロゲン、ハロアルキル、ハロアルケニル、ハロアルキニル、オキソ（＝Ｏ）、チオキソ（＝Ｓ）、シアノ（−ＣＮ）、ニトロ（−ＮＯ２）、イミノ（＝Ｎ−Ｈ）、オキシム（＝Ｎ−ＯＨ）、ヒドラジン（＝Ｎ−ＮＨ２）、−Ｒｂ−ＯＲａ、−Ｒｂ−ＯＣ（Ｏ）−Ｒａ、−Ｒｂ−ＯＣ（Ｏ）−ＯＲａ、−Ｒｂ−ＯＣ（Ｏ）−Ｎ（Ｒａ）２、−Ｒｂ−Ｎ（Ｒａ）２、−Ｒｂ−Ｃ（Ｏ）Ｒａ、−Ｒｂ−Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−Ｒｂ−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）２、−Ｒｂ−Ｏ−Ｒｃ−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）２、−Ｒｂ−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−Ｒｂ−Ｎ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）Ｒａ、−Ｒｂ−Ｎ（Ｒａ）Ｓ（Ｏ）ｔＲａ（ここでｔは１または２である）、−Ｒｂ−Ｓ（Ｏ）ｔＲａ（ここでｔは１または２である）、−Ｒｂ−Ｓ（Ｏ）ｔＯＲａ（ここでｔは１または２である）および−Ｒｂ−Ｓ（Ｏ）ｔＮ（Ｒａ）２（ここでｔは１または２である）で必要に応じて置換され得る；そしてここで各Ｒｂは、直接結合、あるいは直線状もしくは分枝状のアルキレン、アルケニレン、またはアルキニレン鎖から独立して選択され、そして各Ｒｃは、直線状もしくは分枝状のアルキレン、アルケニレン、またはアルキニレン鎖である。
【００４２】
被験体の日常生活動作（ＡＤＬ）または習慣的身体活動は、骨格筋収縮のインヒビターでの処置の前および後にモニターされ得る。ＡＤＬまたは習慣的身体活動は被験体依存性であり、被験体の能力および日課に依存して、単純なウォーキングから集中的なエクササイズまでの範囲に及び得る。本明細書で考察される骨格筋収縮インヒビターの処置選択肢および投与量は、そのＡＤＬおよび習慣的身体活動が変わらないままであるように、被験体に合わせて個別化され得る。
【００４３】
いくつかの局面において、神経筋の病気または運動障害を処置する方法は、その必要のある被験体に、骨格筋収縮のインヒビターを投与する工程を包含し得る。骨格筋収縮のインヒビターは、骨格筋収縮を５０％低減するために必要とされる量に対する量で与えられ得る。その骨格筋収縮のインヒビターは、骨格筋収縮を、その被験体の処置前の骨格筋収縮能力に対して５０％低減するために必要とされる量より少ない量で投与され得る。その骨格筋収縮のインヒビターは、骨格筋収縮を、上記被験体の処置前の骨格筋収縮能力に対して５％〜４５％低減する量で投与され得る。いくつかの場合には、そのインヒビターは、骨格筋収縮を、上記被験体の処置前の骨格筋収縮能力に対して１０％未満、１５％未満、２０％未満、２５％未満、３０％未満、３５％未満、４０％未満、４５％未満、またはさらには５０％未満低減する量で投与され得る。ある種の実施形態において、そのインヒビターは、骨格筋収縮を、上記被験体の処置前の骨格筋収縮能力に対して１％〜５０％低減する量で投与され得る。
【００４４】
いくつかの局面において、神経筋の病気または運動障害を処置する方法は、その必要のある被験体に、Ｉ型骨格筋収縮のインヒビターを投与する工程を包含し得る。Ｉ型骨格筋収縮のインヒビターは、Ｉ型骨格筋収縮を２０％低減するために必要とされる量に対する量で与えられ得る。そのＩ型骨格筋収縮のインヒビターは、Ｉ型骨格筋収縮を、その被験体の処置前のＩ型骨格筋収縮能力に対して２０％低減するために必要とされる量より少ない量で投与され得る。そのＩ型骨格筋収縮のインヒビターは、Ｉ型骨格筋収縮を、上記被験体の処置前のＩ型骨格筋収縮能力に対して０．０１％〜２０％（例えば、１％〜１５％、例えば１％〜１０％）低減する量で投与され得る。いくつかの場合には、そのインヒビターは、Ｉ型骨格筋収縮を、上記被験体の処置前のＩ型骨格筋収縮能力に対して０．０１％未満、０．１％未満、０．５％未満、１％未満、５％未満、１０％未満、１５％未満、または２０％未満低減する量で投与され得る。ある種の実施形態において、そのインヒビターは、Ｉ型骨格筋収縮を、上記被験体の処置前のＩ型骨格筋収縮能力に対して０．０１％〜２０％低減する量で投与され得る。
【００４５】
いくつかの局面において、神経筋の病気または運動障害を処置する方法は、その必要のある被験体に、ＩＩ型骨格筋収縮のインヒビターを投与する工程を包含し得る。ＩＩ型骨格筋収縮のインヒビターは、ＩＩ型骨格筋収縮を９０％低減するために必要とされる量に対する量で投与され得る。そのＩＩ型骨格筋収縮のインヒビターは、ＩＩ型骨格筋収縮を、その被験体の処置前のＩＩ型骨格筋収縮能力に対して９０％低減するために必要な量より少ない量で投与され得る。そのＩＩ型骨格筋収縮のインヒビターは、ＩＩ型骨格筋収縮を、上記被験体の処置前のＩＩ型骨格筋収縮能力に対して５％〜９０％（例えば５％〜８０％、例えば５％〜７５％、例えば５％〜７０％）低減する量で投与され得る。いくつかの場合には、そのインヒビターは、ＩＩ型骨格筋収縮を上記被験体の処置前のＩＩ型骨格筋収縮能力に対して１０％もしくはこれより大きく、１５％もしくはこれより大きく、２０％もしくはこれより大きく、２５％もしくはこれより大きく、３０％もしくはこれより大きく、３５％もしくはこれより大きく、４０％もしくはこれより大きく、４５％もしくはこれより大きく、５０％もしくはこれより大きく、５５％もしくはこれより大きく、６０％もしくはこれより大きく、６５％もしくはこれより大きく、７０％もしくはこれより大きく、７５％もしくはこれより大きく、８０％もしくはこれより大きく、８５％もしくはこれより大きくまたはさらには９０％もしくはこれより大きく、低減する量で投与され得る。ある種の実施形態において、そのインヒビターは、ＩＩ型骨格筋収縮を、上記被験体の処置前のＩＩ型骨格筋収縮能力に対して１％〜５０％低減する量で投与され得る。
【００４６】
いくつかの局面において、骨格筋線維における収縮誘導性損傷を処置する方法は、その必要のある被験体に、骨格筋収縮および／または骨格筋ミオシンＩＩのインヒビターを投与する工程を包含し得る。ある種の実施形態において、そのインヒビターは、心筋収縮を感知できるほど阻害しない。
【００４７】
ある種の実施形態において、その骨格筋線維における収縮誘導性損傷は、不随意的骨格筋収縮に由来する。その不随意的骨格筋収縮は、神経筋の病気または痙縮に関連する病気と関連し得る。ある種の実施形態において、その骨格筋線維における収縮誘導性損傷は、随意的骨格筋収縮、例えば、身体的エクササイズに由来し得る。
【００４８】
ある種の実施形態において、被験体へのその骨格筋収縮のインヒビターの投与は、筋収縮と関連する１種またはこれより多くの生体マーカーを調節する。生体マーカーの例としては、クレアチニンキナーゼ（ＣＫ）、トロポニンＴ（ＴｎＴ）、トロポニンＣ（ＴｎＣ）、トロポニンＩ（ＴｎＩ）、ピルビン酸キナーゼ（ＰＫ）、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）、ミオグロビン、ＴｎＩのアイソフォーム（例えば、心筋、骨格筋遅筋、骨格筋速筋）、および炎症マーカー（ＩＬ１、ＩＬ６、ＩＬ４、ＴＮＦ−α）が挙げられるが、これらに限定されない。生体マーカーはまた、筋の炎症、例えば、浮腫の測定を含み得る。本明細書で記載される生体マーカーのレベルは、その生体マーカーの処置前レベルに対して、そのインヒビターの投与後に増大し得る。あるいは、生体マーカーのレベルは、その生体マーカーの処置前レベルに対して、そのインヒビターの投与後に減少し得る。本明細書で記載されるインヒビターでの１種またはこれより多くの生体マーカーの調節は、神経筋の病気（例えば、本明細書で記載されるもの）の処置を示し得る。
【００４９】
被験体におけるＣＫのレベルは、その被験体が活動していない（例えば、睡眠）場合と比較して、その被験体が活動している場合に増大するので、ＣＫは、骨格筋収縮によって引き起こされる骨格筋破壊を評価するために潜在的な測定指標である。ある種の実施形態において、骨格筋収縮のインヒビターは、軽度、中程度または激しい活動の前に、活動に由来する骨格筋破壊を低減または防止するために被験体に投与され得る。中程度から激しい活動は、被験体の能力に依存し得、心拍数を、その被験体の安静時心拍数に対して少なくとも２０％もしくはこれより大きく（例えば、約５０％もしくはこれより大きく）増大させる身体的エクササイズを含み得る。中程度から激しい活動の例としては、ウォーキング、ランニング、ウェイトリフティング、自転車をこぐ、スイミング、ハイキングなどが挙げられる。
【００５０】
ある種の実施形態において、その骨格筋収縮のインヒビターは、中程度または激しい活動の前、その間、またはその後に、その活動に由来する骨格筋破壊を低減または防止するために投与される。その骨格筋収縮のインヒビターは、同じ活動を行っている処置していない被験体に対して、その被験体のＣＫレベルを低減し得る。そのＣＫレベルは、その活動の間または後に、その被験体の末梢血において測定され得る。本明細書で記載されるインヒビターの投与は、同じ活動を行っている処置していない被験体に対して、活動的な被験体のＣＫレベルを５％〜９０％（例えば５％〜８０％、例えば、１０％〜７５％）低減し得、それによって、その活動に由来する骨格筋破壊を低減または防止する。本明細書で記載されるインヒビターの投与は、そのＣＫレベルを同じ活動を行っている処置していない被験体に対して約５％〜約９０％まで調節し得、それによって、その活動に由来する骨格筋破壊を低減または防止する。本明細書で記載されるインヒビターの投与は、そのＣＫレベルを同じ活動を行っている処置していない被験体に対して少なくとも約５％低減し得、それによって、その活動に由来する骨格筋破壊を低減または防止する。本明細書で記載されるインヒビターの投与は、そのＣＫレベルを同じ活動を行っている処置していない被験体に対して９０％またはそれ未満まで調節し得る。本明細書で記載されるインヒビターの投与は、そのＣＫレベルを同じ活動を行っている処置していない被験体に対して約５％〜約１５％、約５％〜約２５％、約５％〜約３５％、約５％〜約４５％、約５％〜約５５％、約５％〜約６５％、約５％〜約７５％、約５％〜約８５％、約５％〜約９０％、約１５％〜約２５％、約１５％〜約３５％、約１５％〜約４５％、約１５％〜約５５％、約１５％〜約６５％、約１５％〜約７５％、約１５％〜約８５％、約１５％〜約９０％、約２５％〜約３５％、約２５％〜約４５％、約２５％〜約５５％、約２５％〜約６５％、約２５％〜約７５％、約２５％〜約８５％、約２５％〜約９０％、約３５％〜約４５％、約３５％〜約５５％、約３５％〜約６５％、約３５％〜約７５％、約３５％〜約８５％、約３５％〜約９０％、約４５％〜約５５％、約４５％〜約６５％、約４５％〜約７５％、約４５％〜約８５％、約４５％〜約９０％、約５５％〜約６５％、約５５％〜約７５％、約５５％〜約８５％、約５５％〜約９０％、約６５％〜約７５％、約６５％〜約８５％、約６５％〜約９０％、約７５％〜約８５％、約７５％〜約９０％、または約８５％〜約９０％低減し得、それによって、その活動に由来する骨格筋破壊を低減または防止する。本明細書で記載されるインヒビターの投与は、そのＣＫレベルを同じ活動を行っている処置していない被験体に対して約５％、約１５％、約２５％、約３５％、約４５％、約５５％、約６５％、約７５％、約８５％、または約９０％まで調節し得、それによって、その活動に由来する骨格筋破壊を低減または防止する。
【００５１】
被験体へのその骨格筋収縮のインヒビターの投与は、処置していない被験体または処置前の被験体に対して、炎症マーカーのレベルを調節し得る（例えば、１種またはこれより多くの炎症マーカーのレベルを低減し得る）。その炎症マーカーのレベルは、その被験体の末梢血において測定され得る。炎症マーカーの例としては、ＩＬ−１、ＩＬ−６およびＴＮＦ−αが挙げられ得るが、これらに限定されない。炎症マーカーはまた、核磁気共鳴画像法を使用して測定され得る状態（例えば浮腫）の形態にあり得る。その末梢血における炎症マーカーレベルは、その被験体の炎症マーカーの処置前レベルに対して、そのインヒビターの投与後に増大し得る。あるいは、その末梢血における炎症マーカーレベルは、その被験体の炎症マーカーの処置前レベルに対して、そのインヒビターの投与後に減少し得る。本明細書で記載されるインヒビターの投与は、炎症マーカーレベルを、その被験体の炎症マーカーの処置前レベルに対して５％〜９０％まで調節し得る。いくつかの場合には、その炎症マーカーレベルは、その被験体の炎症マーカーの処置前レベルに対して約５％〜約９０％まで調節され得る。いくつかの場合には、その炎症マーカーレベルは、その被験体の炎症マーカーの処置前レベルに対して少なくとも約５％まで調節され得る。いくつかの場合には、その炎症マーカーレベルは、その被験体の炎症マーカーの処置前レベルに対して最大で約９０％まで調節され得る。いくつかの場合には、その炎症マーカーレベルは、その被験体の炎症マーカーの処置前レベルに対して約５％〜約１５％、約５％〜約２５％、約５％〜約３５％、約５％〜約４５％、約５％〜約５５％、約５％〜約６５％、約５％〜約７５％、約５％〜約８５％、約５％〜約９０％、約１５％〜約２５％、約１５％〜約３５％、約１５％〜約４５％、約１５％〜約５５％、約１５％〜約６５％、約１５％〜約７５％、約１５％〜約８５％、約１５％〜約９０％、約２５％〜約３５％、約２５％〜約４５％、約２５％〜約５５％、約２５％〜約６５％、約２５％〜約７５％、約２５％〜約８５％、約２５％〜約９０％、約３５％〜約４５％、約３５％〜約５５％、約３５％〜約６５％、約３５％〜約７５％、約３５％〜約８５％、約３５％〜約９０％、約４５％〜約５５％、約４５％〜約６５％、約４５％〜約７５％、約４５％〜約８５％、約４５％〜約９０％、約５５％〜約６５％、約５５％〜約７５％、約５５％〜約８５％、約５５％〜約９０％、約６５％〜約７５％、約６５％〜約８５％、約６５％〜約９０％、約７５％〜約８５％、約７５％〜約９０％、または約８５％〜約９０％まで調節され得る。いくつかの場合には、その炎症マーカーレベルは、その被験体の炎症マーカーの処置前レベルに対して約５％、約１５％、約２５％、約３５％、約４５％、約５５％、約６５％、約７５％、約８５％、または約９０％まで調節され得る。
【００５２】
被験体へのその骨格筋収縮のインヒビターの投与は、循環骨格筋速筋トロポニンＩ（ｆＳ−ＴｎＩ）のレベルを調節し得る。そのｆＳ−ＴｎＩレベルは、末梢血において測定され得る。その末梢血におけるｆＳ−ＴｎＩレベルは、その被験体のｆＳ−ＴｎＩの処置前レベルに対して、そのインヒビターの投与後に増大し得る。あるいは、その末梢血におけるｆＳ−ＴｎＩレベルは、その被験体のｆＳ−ＴｎＩの処置前レベルに対して、そのインヒビターの投与後に減少し得る。本明細書で記載されるインヒビターの投与は、ｆＳ−ＴｎＩレベルを、その被験体のｆＳ−ＴｎＩの処置前レベルに対して５％〜９０％まで調節し得る。いくつかの場合には、そのｆＳ−ＴｎＩレベルは、その被験体のｆＳ−ＴｎＩの処置前レベルに対して少なくとも約５％まで調節され得る。いくつかの場合には、ｆＳ−ＴｎＩレベルは、その被験体のｆＳ−ＴｎＩの処置前レベルに対して最大で約９０％まで調節され得る。いくつかの場合には、そのｆＳ−ＴｎＩレベルは、その被験体のｆＳ−ＴｎＩの処置前レベルに対して約５％〜約１５％、約５％〜約２５％、約５％〜約３５％、約５％〜約４５％、約５％〜約５５％、約５％〜約６５％、約５％〜約７５％、約５％〜約８５％、約５％〜約９０％、約１５％〜約２５％、約１５％〜約３５％、約１５％〜約４５％、約１５％〜約５５％、約１５％〜約６５％、約１５％〜約７５％、約１５％〜約８５％、約１５％〜約９０％、約２５％〜約３５％、約２５％〜約４５％、約２５％〜約５５％、約２５％〜約６５％、約２５％〜約７５％、約２５％〜約８５％、約２５％〜約９０％、約３５％〜約４５％、約３５％〜約５５％、約３５％〜約６５％、約３５％〜約７５％、約３５％〜約８５％、約３５％〜約９０％、約４５％〜約５５％、約４５％〜約６５％、約４５％〜約７５％、約４５％〜約８５％、約４５％〜約９０％、約５５％〜約６５％、約５５％〜約７５％、約５５％〜約８５％、約５５％〜約９０％、約６５％〜約７５％、約６５％〜約８５％、約６５％〜約９０％、約７５％〜約８５％、約７５％〜約９０％、または約８５％〜約９０％まで調節され得る。いくつかの場合には、そのｆＳ−ＴｎＩレベルは、その被験体のｆＳ−ＴｎＩの処置前レベルに対して約５％、約１５％、約２５％、約３５％、約４５％、約５５％、約６５％、約７５％、約８５％、または約９０％まで調節され得る。
【００５３】
トロポニンのアイソフォームは、骨格筋収縮インヒビターの投与前および投与後に、被験体において測定され得る。骨格筋収縮の阻害は、トロポニンのいくつかのアイソフォーム（例えば、心筋トロポニンＩ（ｃＴｎＩ）または骨格筋遅筋トロポニンＩ（ｓｓＴｎＩ））を阻害しなくてもよい。いくつかの場合には、骨格筋収縮の阻害は、ｃＴｎＩまたはｓｓＴｎＩを感知できるほど阻害しなくてもよい。ｃＴｎＩまたはｓｓＴｎＩに関して本明細書で記載される場合、語句、感知できるほど〜しないとは、そのインヒビターの投与前のｃＴｎＩまたはｓｓＴｎＩに対して１０％未満、８％未満、６％未満、４％未満、２％未満、１％未満、０．５％未満、またはさらに０．１％未満低減される、ｃＴｎＩまたはｓｓＴｎＩに言及する。
【００５４】
骨格筋収縮のインヒビターの投与は、不随意的筋収縮を低減し得る。不随意的筋収縮は、そのインヒビターの投与前の不随意的筋収縮に対して２０％〜９０％低減され得る。いくつかの場合には、不随意的筋収縮は、処置前の不随意的筋収縮に対して少なくとも約２０％低減され得る。いくつかの場合には、不随意的筋収縮は、処置前の不随意的筋収縮に対して最大で約９０％低減され得る。いくつかの場合には、不随意的筋収縮は、処置前の不随意的筋収縮に対して約２０％〜約２５％、約２０％〜約３０％、約２０％〜約４０％、約２０％〜約５０％、約２０％〜約７０％、約２０％〜約７５％、約２０％〜約８０％、約２０％〜約８５％、約２０％〜約９０％、約２５％〜約３０％、約２５％〜約４０％、約２５％〜約５０％、約２５％〜約７０％、約２５％〜約７５％、約２５％〜約８０％、約２５％〜約８５％、約２５％〜約９０％、約３０％〜約４０％、約３０％〜約５０％、約３０％〜約７０％、約３０％〜約７５％、約３０％〜約８０％、約３０％〜約８５％、約３０％〜約９０％、約４０％〜約５０％、約４０％〜約７０％、約４０％〜約７５％、約４０％〜約８０％、約４０％〜約８５％、約４０％〜約９０％、約５０％〜約７０％、約５０％〜約７５％、約５０％〜約８０％、約５０％〜約８５％、約５０％〜約９０％、約７０％〜約７５％、約７０％〜約８０％、約７０％〜約８５％、約７０％〜約９０％、約７５％〜約８０％、約７５％〜約８５％、約７５％〜約９０％、約８０％〜約８５％、約８０％〜約９０％、または約８５％〜約９０％低減され得る。いくつかの場合には、不随意的筋収縮は、処置前の不随意的筋収縮に対して約２０％、約２５％、約３０％、約４０％、約５０％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、または約９０％低減され得る。
【００５５】
その骨格筋収縮のインヒビターは、成熟した、機能的な、損傷していない筋が回復され得ることから、被験体における日常生活動作（ＡＤＬ）または習慣的身体活動を改善するために使用され得る。ＡＤＬまたは習慣的活動の例としては、階段昇降、立ち上がる時、時間測定される椅子立ち上がり（ｔｉｍｅｄ  ｃｈａｉｒ  ｒｉｓｅ）、習慣的な歩行速度、Ｎｏｒｔｈ  Ｓｔａｒ歩行評価、漸増負荷／一定負荷のシャトルウォークおよび６分間歩行距離試験が挙げられるが、これらに限定されない。ＡＤＬまたは習慣的身体活動のレベルまたは能力は、骨格筋インヒビターの投与前および投与後に測定され得る。骨格筋収縮の阻害は、ＡＤＬまたは習慣的身体活動に影響を及ぼさなくてもよい。いくつかの場合には、その骨格筋収縮の阻害は、ＡＤＬまたは習慣的身体活動に感知できるほど影響を及ぼさなくてもよい。ＡＤＬまたは習慣的身体活動に関して本明細書で記載される場合、語句、感知できるほど〜しない、は、そのインヒビターの投与前のＡＤＬまたは習慣的活動に対して２０％未満、１５％未満、１０％未満、８％未満、６％未満、４％未満、２％未満、１％未満、０．５％未満、またはさらには０．１％未満低減されるＡＤＬまたは習慣的活動のレベルに言及する。被験体における骨格筋収縮または筋力は、その骨格筋収縮のインヒビターの投与前および投与後に測定され得る。このような測定は、その骨格筋収縮のインヒビターの用量応答曲線を作成するために行われ得る。その骨格筋収縮のインヒビターの投与量は、ＩＩ型骨格筋収縮を９０％低減する用量に対して、約５％〜５０％まで調節され得る。いくつかの場合には、その骨格筋収縮インヒビターの投与量は、ＩＩ型骨格筋収縮を９０％低減する用量に対して少なくとも約５％まで調節され得る。いくつかの場合には、その骨格筋収縮インヒビターの投与量は、ＩＩ型骨格筋収縮を９０％低減する用量に対して最大で約５０％まで調節され得る。いくつかの場合には、その骨格筋収縮インヒビターの投与量は、ＩＩ型骨格筋収縮を９０％低減する用量に対して、約５％〜約１０％、約５％〜約１５％、約５％〜約２０％、約５％〜約２５％、約５％〜約３０％、約５％〜約３５％、約５％〜約４０％、約５％〜約５０％、約１０％〜約１５％、約１０％〜約２０％、約１０％〜約２５％、約１０％〜約３０％、約１０％〜約３５％、約１０％〜約４０％、約１０％〜約５０％、約１５％〜約２０％、約１５％〜約２５％、約１５％〜約３０％、約１５％〜約３５％、約１５％〜約４０％、約１５％〜約５０％、約２０％〜約２５％、約２０％〜約３０％、約２０％〜約３５％、約２０％〜約４０％、約２０％〜約５０％、約２５％〜約３０％、約２５％〜約３５％、約２５％〜約４０％、約２５％〜約５０％、約３０％〜約３５％、約３０％〜約４０％、約３０％〜約５０％、約３５％〜約４０％、約３５％〜約５０％、または約４０％〜約５０％まで調節され得る。いくつかの場合には、その骨格筋収縮インヒビターの投与量は、ＩＩ型骨格筋収縮を９０％低減する用量に対して、約１０％、約１２％、約１５％、約１８％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％または約５０％まで調節され得る。骨格筋収縮は、骨格筋収縮インヒビターの投与前および投与後に、表面電極を使用する神経刺激後の筋力テスト（例えば、脚における腓骨神経刺激後の底屈）、等尺性四肢アッセイ、心拍計もしくは活動量計、またはこれらの等価物によって測定され得る。
【００５６】
被験体の心筋の筋力または心筋収縮は、骨格筋収縮のインヒビターの投与前および投与後に測定され得る。骨格筋収縮の阻害は、心筋収縮または心筋の筋力を阻害しなくてもよい。いくつかの実施形態において、骨格筋収縮の阻害は、心筋収縮を感知できるほど阻害しなくてもよい。心筋収縮に関するある種の実施形態において、語句、感知できるほど〜しない、は、そのインヒビターの投与前の心筋の筋力に対して１０％未満、８％未満、６％未満、４％未満、２％未満、１％未満、０．５％未満、またはさらには０．１％未満低減される心筋の筋力に言及する。骨格筋収縮のインヒビターの投与後の被験体の心筋の筋力または心筋収縮は、そのインヒビターの投与前の心筋収縮または心筋の筋力の０．１％〜１０％以内であり得る。心筋の筋力または心筋収縮は、心エコー図（左室内径短縮率）または他の等価な試験を使用して測定され得る。
【００５７】
被験体の肺における１回換気量は、骨格筋収縮インヒビターの投与前および投与後に測定され得る。骨格筋収縮の阻害は、肺における１回換気量を阻害しなくてもよい。いくつかの場合には、骨格筋収縮の阻害は、肺における１回換気量を感知できるほど阻害しなくてもよい。肺における１回換気量に関するある種の実施形態において、語句、感知できるほど〜しない、は、そのインヒビターの投与前の肺における１回換気量に対して１０％未満、８％未満、６％未満、４％未満、２％未満、１％未満、０．５％未満、または０．１％未満低減される肺における１回換気量に言及する。被験体の肺における１回換気量は、１秒量（ＦＥＶ１）もしくは努力肺活量（ＦＶＣ）、またはこれらの等価物を使用して測定され得る。
【００５８】
被験体における平滑筋収縮は、骨格筋収縮インヒビターの投与前および投与後に測定され得る。骨格筋収縮の阻害は、平滑筋収縮を阻害しなくてもよい。いくつかの場合には、その骨格筋収縮の阻害は、平滑筋収縮を感知できるほど阻害しなくてもよい。平滑筋収縮に関して本明細書で使用される場合、語句、感知できるほど〜しない、は、そのインヒビターの投与前の平滑筋収縮に対して１０％未満、８％未満、６％未満、４％未満、２％未満、１％未満、０．５％未満、またはさらには０．１％未満低減される平滑筋収縮に言及される。被験体における平滑筋収縮は、被験体の血圧を測定することによって評価され得る。
【００５９】
被験体における神経筋カップリングは、骨格筋収縮インヒビターの投与前および投与後に測定され得る。本明細書で記載されるインヒビターでの骨格筋収縮の阻害は、被験体における骨格筋の神経伝導、神経伝達物質放出または脱分極を障害しなくてもよい。いくつかの場合には、その骨格筋収縮の阻害は、被験体における神経筋カップリングを感知できるほど障害しなくてもよい。神経筋カップリングに関して本明細書で記載される場合、用語、感知できるほど〜しない、は、そのインヒビターの投与前のその被験体における神経筋カップリングのレベルに対して１０％未満、８％未満、６％未満、４％未満、２％未満、１％未満、０．５％未満、または０．１％未満低減される、被験体における神経筋カップリングのレベルに言及する。被験体における神経筋カップリングは、表面電極もしくは針電極を使用する筋電図（ＥＭＧ）で、電気的刺激または随意刺激後に骨格筋によって生成される電気活動を記録することによって、骨格筋の神経誘導性脱分極を測定することによって評価され得る。
【００６０】
いくつかの局面において、その神経筋の病気または運動障害を処置する方法は、被験体に、骨格筋収縮のインヒビターを投与する工程であって、ここでその骨格筋収縮のインヒビターは、ミオシンＡＴＰａｓｅ活性、天然の骨格筋筋原線維ＡＴＰａｓｅ（カルシウム調節される）またはアクチン、トロポミオシンおよびトロポニンで再構成したＳ１を阻害し得る工程を包含し得る。インビトロアッセイは、そのミオシンＡＴＰａｓｅ活性に対する試験化合物またはインヒビターの効果を試験するために使用され得る。試験化合物は、それらの筋収縮阻害活性を評価するためにスクリーニングされ得る。阻害活性は、アクチン活性化ＡＴＰａｓｅ活性を決定するために吸光度アッセイを使用して測定され得る。ウサギの筋ミオシンサブフラグメント１（Ｓ１）は、重合化アクチンと混合され得、ヌクレオチドなしのアッセイプレートのウェルに分配され得る。次いで、試験化合物は、ピンアレイとともにそのウェルへと添加され得る。ＭｇＡＴＰにより反応が開始され得る。その試験容器の中での規定された期間にわたるＡＴＰ消費の量は、対照容器の中でのＡＴＰ消費の量と比較され得る。その規定された期間は、５分間〜２０分間であり得る。そのＡＴＰ消費は、直接的アッセイまたは間接的アッセイによって決定され得る。そのミオシンＳ１  ＡＴＰａｓｅ活性を再現性高くかつ強力に阻害した試験化合物は、解剖した筋に対して、エキソビボでその化合物のＩＣ５０を決定する用量応答アッセイにおいてさらに評価され得る。そのアッセイは、そのミオシンを、ピルビン酸キナーゼおよび乳酸デヒドロゲナーゼにカップリングして、ＡＤＰ蓄積によって駆動されるＮＡＤＨからＮＡＤ＋への変換に基づく３４０ｎｍでの吸光度検出法を提供することによって、間接的にＡＴＰａｓｅ活性を測定し得る。いくつかの場合には、ＡＴＰ消費が、上記対照容器より上記試験容器において少なくとも２０％減少される場合、上記試験化合物は、骨格筋収縮のインヒビターとして選択され得る。試験化合物は、動力学アッセイにおいてＮＡＤ＋生成を少なくとも２０％より高く阻害する場合に選択され得る。
【００６１】
その選択されるインヒビターまたは試験化合物は、インビトロアッセイにおいて心筋ミオシンＳ１  ＡＴＰａｓｅを阻害しなくてもよい。いくつかの場合には、その心筋ミオシンＳ１  ＡＴＰａｓｅまたは心臓筋原線維または再構成システムは、試験化合物または骨格筋収縮のインヒビターがインビトロアッセイにおいて試験される場合に１０％未満、８％未満、５％未満、３％未満、２％未満、１％未満、または０．５％未満まで阻害され得る。
【００６２】
骨格筋収縮の試験化合物は、除膜線維に対して試験され得る。膜を除去し、カルシウム投与後に収縮の直接的活性化を可能にするように処理された単一の骨格筋線維が、使用され得る。インヒビターは、単一の骨格筋の収縮を、処置前の値または処置されていない対照の単一骨格筋に対して約５％〜約９０％阻害し得る。インヒビターは、単一骨格筋の収縮を、処置前の値または処置されていない対照の単一骨格筋に対して少なくとも約５％阻害し得る。インヒビターは、単一骨格筋の収縮を、処置前の値または処置されていない対照の単一骨格筋に対して最大で約９０％を阻害し得る。インヒビターは、単一骨格筋の収縮を、処置前の能力または処置されていない対照の単一骨格筋に対して約５％〜約１０％、約５％〜約２０％、約５％〜約３０％、約５％〜約４０％、約５％〜約５０％、約５％〜約６０％、約５％〜約７０％、約５％〜約８０％、約５％〜約９０％、約１０％〜約２０％、約１０％〜約３０％、約１０％〜約４０％、約１０％〜約５０％、約１０％〜約６０％、約１０％〜約７０％、約１０％〜約８０％、約１０％〜約９０％、約２０％〜約３０％、約２０％〜約４０％、約２０％〜約５０％、約２０％〜約６０％、約２０％〜約７０％、約２０％〜約８０％、約２０％〜約９０％、約３０％〜約４０％、約３０％〜約５０％、約３０％〜約６０％、約３０％〜約７０％、約３０％〜約８０％、約３０％〜約９０％、約４０％〜約５０％、約４０％〜約６０％、約４０％〜約７０％、約４０％〜約８０％、約４０％〜約９０％、約５０％〜約６０％、約５０％〜約７０％、約５０％〜約８０％、約５０％〜約９０％、約６０％〜約７０％、約６０％〜約８０％、約６０％〜約９０％、約７０％〜約８０％、約７０％〜約９０％、または約８０％〜約９０％阻害し得る。インヒビターは、単一骨格筋の収縮を、処置前の能力または処置されていない対照の単一骨格筋に対して約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、または約９０％阻害し得る。
【００６３】
遅筋Ｉ型骨格筋線維、心筋束または肺の筋線維に対する試験化合物の効果が、評価され得る。試験化合物またはインヒビターは、遅筋Ｉ型骨格筋線維、心筋束または肺の筋線維の機能を感知できるほど調節せず、ＩＩ型骨格筋に特異的であるように選択され得る。本明細書で使用される場合、用語「感知できるほど調節する」とは、そのインヒビターの投与前の筋力／収縮に対して、１０％未満、８％未満、６％未満、４％未満、２％未満、１％未満、０．５％未満、またはさらには０．１％未満低減されるそのインヒビター投与後の筋肉の収縮能力に言及し得る。
【００６４】
いくつかの局面において、神経筋の病気または運動障害を処置する方法は、その必要のある被験体に、骨格筋収縮のインヒビターを投与する工程であって、ここでその骨格筋収縮のインヒビターは、骨格筋収縮を、エキソビボアッセイにおいて５％〜９０％低減する工程を包含し得る。その使用されるエキソビボアッセイは、マウスモデルであり得る。その使用されるマウスモデルは、ジストロフィーマウスモデル（例えば、ｍｄｘマウス）であり得る。そのｍｄｘマウスは、そのジストロフィン遺伝子において点変異を有し、コードするアミノ酸がグルタミンからスレオニンへと変化しており、機能的でないジストロフィンタンパク質を生成し、筋損傷および虚弱が増大したＤＭＤを生じる。長趾伸筋は、ｍｄｘマウスから解剖され得、レバーアームに据え付けられ得る。その筋は、筋機能を維持するために。酸素化クレブス溶液に浸漬され得る。試験化合物または骨格筋収縮のインヒビターは、その筋に適用され得る。次いで、等尺性（固定長）収縮工程が行われ得、ここでその筋は、一連の電気パルスで刺激される。伸張性（引き伸ばした状態での）収縮工程が行われ得、ここでその筋は、その静止長より１０％、１５％、２０％、２５％、または３０％長く伸ばされ、弛緩するかまたは電気パルスで刺激される。これは、筋線維損傷を引き起こすために４回、５回、６回、７回、または８回反復され得る。その電気パルスは、１１０Ｈｚ〜１５０Ｈｚの周波数を有し得る。その電気パルスは、１１０Ｈｚ、１１５Ｈｚ、１２０Ｈｚ、１２５Ｈｚ、１３０Ｈｚ、１３５Ｈｚ、１４０Ｈｚ、１４５Ｈｚ、または１５０Ｈｚの周波数を有し得る。一連の電気パルスは、種々の周波数の個々のパルスから構成され得る。その一連の電気パルスにおける各パルスの期間は、各パルスに関して０．１秒間〜０．５秒間の間であり得る。各パルスに関する時間は、０．１秒間、０．２秒間、０．３秒間、０．３５秒間、０．４秒間、または０．５秒間であり得る。筋肉膜損傷はまた、その等尺性または伸張性収縮後に、プロシオンオレンジ中で筋をインキュベートすることによって測定され得る。プロシオンオレンジは、損傷した膜を有する筋線維によって取り込まれる蛍光色素である。次いで、色素陽性線維の数または割合は、組織学によって定量され得る。その試験筋力の低下および／または色素陽性線維の割合が、対照の筋力低下および／または色素取り込みの少なくとも２０％未満であり得る場合、その試験化合物は、骨格筋収縮のインヒビターとして選択され得る。
【００６５】
等尺性または伸張性の収縮セットにおいて筋によって生成される筋力が、測定され得る。等尺性または伸張性の収縮セットの前および後に筋によって生成される力の変化は、その試験筋力の低下として計算され得、その試験化合物への曝露なしの対照サンプルにおけるその第１のパルスから最後のパルスまでの筋収縮によって生成される力の変化（対照の筋力低下）と比較され得る。筋力低下は、筋損傷の代替として使用され得、試験化合物またはインヒビターは、その試験筋力の低下がその対照の筋力低下の少なくとも２０％未満である場合に選択され得る。
【実施例】
【００６６】
【００６７】
試験化合物の有効性は、対照のマウスおよびジストロフィーマウスの筋を比較することによって、エキソビボおよびインビボでのアッセイによって決定され得る。
【００６８】
実施例１：  収縮特性を評価するためのエキソビボアッセイ
【００６９】
筋を、対照（Ｃ５７ＢＬ／１０ＳｃＳｎ）のマウスおよびジストロフィー（ｍｄｘ）マウスから解剖することによって調製し得る。大部分が速筋線維から構成される筋（例えば、横隔膜ストリップまたは無傷の長趾伸筋（ＥＤＬ）の四肢の筋）を、使用し得る。筋を、若年または成体のマウス、３０日齢〜１１０日齢のマウスから解剖し得る。筋を、ｐＨ７．４に緩衝化した２５ｍＭ  Ｈｅｐｅｓの生理学的溶液中に浸漬し得る。その生理学的溶液は、蛍光性の低分子量色素を含み得る（リンゲル溶液中０．２％  プロシオンオレンジ）。その生理学的溶液を、連続して酸素化し得、室温または約２３℃で維持し得る。筋を、一方の端部を固定柱に、および他方をデュアルモードサーボモーターシステムのレバーにそれらの骨または腱を挿入することによって取り付けて、筋を入れるバスの中に水平にまたは垂直に据え付け得る。この実験設定は、力の測定ならびに所定の速度および量による筋の長さの変化を可能にし得る。筋を、その筋の両側に配置した２枚の白金プレート電極を使用することによって刺激し得る。次いで、その筋を、最大単収縮力が達成されることを可能にする最適な長さ（Ｌ０）に調節し得る。いったんＬ０が特定されたら、筋線維長を、精密ノギスで測定し得る。
【００７０】
試験化合物を、対照の筋およびｍｄｘ筋に適用して、収縮特性、特に、その筋によって生成される力として測定される筋の強度を評価し得る。処理されていないかまたはビヒクル（ＤＭＳＯ）処理した筋を、比較のために使用し得る。対照の筋およびｍｄｘ筋を、以下の手順のうちの１つに供し得る：（ａ）５回の最大刺激トレイン（７００ｍｓ継続時間の間に８０Ｈｚの頻度）を含む伸張性収縮レジメン（その筋を、最後の２００ｍｓの間に、速度０．５  Ｌ０／ｓで距離１０％Ｌ０に渡って長くする）（ｂ）５回の最大刺激トレインを含む等尺性収縮レジメン（筋を、Ｌ０で維持し、その力−時間積分は、その伸張性のプロトコールに合わせる）；（ｃ）筋刺激なしの受動的伸張（その伸張パラメーターは、その伸張手順に合わせる）。４分間の回復期を、その刺激または受動性伸張の各々の間に許容し得る（その筋の長さはＬ０で維持される）。手順（ａ）は、手順（ｂ）〜（ｃ）と比較して、より高いピークストレスを生成し得る。手順（ｂ）は、その手順の残りと比較して、中程度のピークストレスを生成し得る一方で、手順（ｃ）は、活性化なしの低いピークストレスを生成し得る。手順（ａ）および（ｃ）では、その筋を、その元の線維長（Ｌｏ）の約１０〜２０％伸張し得る。等尺性の筋力を、その伸張の開始直前に各収縮に関して測定し得る。その第１の収縮と最後の収縮との間の筋力低下は、筋肉膜損傷と相関し得る。筋力低下が大きいほど、より大きな筋肉膜損傷と相関し得る。その筋力低下のパーセンテージは、以下の等式を使用して計算され得る：  筋力低下＝１００（第１の収縮での筋力−最後の収縮での筋力）／第１の収縮での筋力）。処理されていないｍｄｘ筋または対照の筋と比較して、処置したｍｄｘ筋においてより小さいまたは少ない急性の筋力低下を伴う試験化合物を、さらに評価し得る。
【００７１】
実施例２：  筋肉膜完全性を評価するためのエキソビボアッセイ
【００７２】
対照のマウスおよびｍｄｘマウスの筋を準備し、実施例１に記載される手順に供して、筋肉膜完全性を維持することにおける試験化合物の有効性を評価し得る。その処置したおよび処理されていない対照の筋ならびにｍｄｘ筋をともに、酸素化した０．２％  プロシオンオレンジ／リンゲル溶液中に、合計継続時間９０分間にわたって浸し得る。刺激していない反対側の対応物を含む内部対照も使用し得、その溶液の中に浸す。次いで、その筋を、通常のリンゲル溶液で５分間、２回すすぎ、次いで、急速凍結し、組織学のために固定し、切片にし得る。損傷した膜を有する筋線維は、その色素を取り込むことができ、色素陽性線維としてスコア付けされ得る。無傷の膜を有する筋線維は、その色素を取り込むことができず、色素陰性線維としてスコア付けされ得る。その筋の膜完全性を、蛍光顕微鏡法を使用して、色素陽性線維のパーセンテージを決定することによって評価し得る。その筋切片の縁部は、筋の解剖または切片化のアーティファクトに起因して潜在的に損傷した線維を回避するためにスコア付けから排除され得る。処理されていないｍｄｘ筋、対照の筋、または内部対照と比較して、ｍｄｘ筋において色素陰性線維のより高いパーセンテージを有する試験化合物を、さらに評価し得る。
【００７３】
実施例３：  日常生活動作（ＡＤＬ）または習慣的身体活動を評価するためのインビボアッセイ
【００７４】
ＡＤＬ評価を、その試験化合物の投与前および投与後に、対照の被験体およびジストロフィー被験体における筋の強度を決定するために使用し得る。ＡＤＬは、セルフケアの作業を含み、これらとしては、入浴およびシャワーを浴びる、個人的な衛生および身繕い（ブラシをかける／髪を梳かす／ヘアスタイルを整えるが挙げられる）、身支度をする、トイレの衛生（トイレに行き、自分をきれいにし、立ち上がる）、機能的可動性、および自分で食事をとる（調理または咀嚼および嚥下は含まない）が挙げられるが、これらに限定されない。機能的可動性はまた、歩く、ベッドに入るおよびベッドから出る、ならびに椅子に座るおよび椅子から立ち上がる能力によって測定されるように、「移動する」ことに言及され得る。試験化合物を、ＡＤＬを実行するにあたってその試験化合物の有効性を評価するために、対照の個体およびジストロフィー個体に投与し得る。処置前の状態とまたは対照の被験体と比較して、ジストロフィー被験体においてＡＤＬの改善を生じるその試験化合物を、さらに評価し得る。
【００７５】
実施例４：  筋の強度を評価するためのインビボアッセイ
【００７６】
随意的アッセイ（例えば、握力およびレッグプレス）は、その試験化合物の投与前および投与後に、対照の被験体およびジストロフィー被験体において筋の強度を評価するために使用され得る。握力は、手が握力計の周りをぎゅっと握ることができる静的な力の量を測定することによって定量され得る。その力は、最も一般には、キログラム単位およびポンド単位で測定されるが、水銀ミリリットル単位およびニュートン単位でも測定される。握力計（例えば、Ｊａｍａｒ、ＤｅｘｔｅｒおよびＢａｓｅｌｉｎｅ）が使用され得る。いくつかの場合には、処置前の状態とまたは対照の被験体と比較して、ジストロフィー被験体において握力の改善を生じるその試験化合物を、さらに評価し得る。
【００７７】
レッグプレスは、斜めまたは垂直の「スレッド」レッグプレスもしくは「ケーブル」タイプレッグプレス、または「着座レッグプレス」タイプのレッグプレスであり得る。ウエイトディスク（プレート）が、そのスレッドに直接取り付けられ、レール上に固定される。そのユーザーは、スレッドの下に座り、彼らの足でそれを押し上げる。これらの機械は通常、ユーザーがそのウエイトの下に閉じ込めれないようにする調節可能なセーフティーブラケットを含む。そのユーザーは姿勢よく座り、長いスチールケーブルによってウエイトスタックに取り付けられたプレートに対し、彼らの足を前方に押し伸ばす。
【００７８】
不随意的アッセイ（例えば、等尺性四肢アッセイ）を、その試験化合物の投与前および投与後に、対照の被験体およびジストロフィー被験体において筋の強度を評価するために使用し得る。その試験化合物に対する薬力学的応答を、深腓骨神経の経皮的電気刺激によって誘発される前脛骨筋収縮の筋力−収縮頻度の関係を測定することによって決定し得る。前脛骨筋の筋力を測定するために、力センサーを組み込んだ一体型フットプレートを有する調節可能な剛性の椅子フレームを使用し得る。各被験体をその椅子にはめ込み、下肢および膝を固定した状態で右足をそのフットプレートにしっかりとひもで結びつけ得る。その椅子を、着座したときに、その被験体の膝関節がおよそ６０度に曲がり、足首関節の角度を（足底に対して向こうずねを）１０５度で固定するように構成し得る。フットプレートの底部に連結されたロードセル（ＭＬＰ−７５；Ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｔｅｍｅｃｕｌａ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を含む歪みゲージを、背屈力を測定するために使用し得る。接着性表面電極（６１−２５１０；ＣｏｎＭｅｄ，ＵＳＡ）を脚上部の側面に腓骨頭の直ぐ下で固定し、これをカソードとして使用し得、深腓骨神経に経皮的に刺激パルスを送達し得る。アノードを、膝関節の内側に配置し得る。最適なカソード配置を特定するために、携帯式の非接着性電極（これを通じて強度の低い刺激パルスが送達され得る）を使用して、拮抗筋群を刺激することなく神経を活性化し、触診により決定する。その刺激強度を、前脛骨筋単収縮力の大きさおよび得られる筋電図（ＥＭＧ）シグナルが、大きさにおいて増大しなくなるまで、各刺激パルスの間の電流をゆっくりと増大させることによって設定し得る。次いで、最後の刺激電流を、その投与期間全体を通じて最大の神経活性化を確実にするためにおよそ２０％大きく設定し得る。各被験体の筋力−収縮頻度応答を、対照の被験体およびジストロフィー被験体において、ベースライン、ならびにその４回の投与期間の各々の間に、投与後１時間、３時間、５時間、および７時間で測定し得る。各刺激プロトコールは、０．５ｍｓパルス幅および８００−ｍｓ継続時間の５ＨＺ、７．５ＨＺ、１０ＨＺ、１２．５ＨＺ、１５ＨＺ、１７．５ＨＺ、２５ＨＺ、および５０ＨＺの刺激トレインからなり得る。その刺激頻度をランダムな順番で送達し得、被験体が、各刺激トレインの５秒前および５秒後に送達される単収縮応答を誘発する１個の刺激パルスを有するその各刺激トレインの強度を予想できないようにする。単収縮−トレイン−単収縮のシーケンスを、３０秒間分離し得る。各評価時点において、その刺激プロトコールは三連で行うことができ、相応の血液サンプルを、試験化合物の血漿濃度を測定するために、採取し得る。そのデータ獲得システムは、刺激パルストレインを作製し、そのＥＭＧを増幅し、歪みゲージ出力を測定するために使用され得、カスタムデザインされ得る。処置前の状態とまたは対照の被験体と比較して、ジストロフィー被験体において筋力頻度応答の減少を生じるその試験化合物を、さらに評価し得る。試験化合物は、このような不随意的試験システムにおける高頻度での筋力の発生を抑制し得る。このようなアッセ���を、薬物の薬物動態および薬力学を確立するために使用し得る。
【００７９】
他のインビボアッセイとしては、活動量計、心臓モニターなどが挙げられ得る。
【００８０】
実施例５：  血液生体マーカーを使用するインビボアッセイ
【００８１】
血液生体マーカーを使用して、その試験化合物の投与前および投与後に、対照の被験体およびジストロフィー被験体においてその試験化合物の有効性を評価し得る。血清クレアチンキナーゼ（ＣＫ）レベルは、筋損傷の程度と相関し得る。ＣＫレベルを、市販の機器とともにＨｉｔａｃｈｉ  Ｍｏｄｕｌａｒ  ＰＴ自動化臨床化学分析器（Ｒｏｃｈｅ，  Ｇｅｒｍａｎｙ）によって決定し得る。処置前の値と比較してジストロフィー被験体においてＣＫレベルの低減を生じるその試験化合物を、さらに評価し得る。
【００８２】
ＣＫレベルはまた、トロポニン（ＴｎＩ）レベルと相関し得る。ＣＫレベルに加えてまたはＣＫレベルの代わりに、血清の骨格筋速筋トロポニンＩアイソフォーム（ｆｓＴｎＩ）および骨格筋遅筋トロポニンＩアイソフォーム（ｓｓＴｎＩ）濃度を決定し得る。ＴｎＩレベルを、酵素結合イムノソルベントアッセイによって決定し得る。対照の被験体と比較して、ジストロフィー被験体においてｆｓＴｎＩレベルの低減を生じるその試験化合物を、さらに評価し得る。
【００８３】
筋損傷は、炎症分子を血漿中に放出させて、炎症応答を誘導し得る。このような炎症分子のレベルを、筋損傷を決定するための生体マーカーとして使用し得る。サイトカイン（例えば、ＴＮＦα、ＩＬ−１、ＩＬ−６およびＩＬ−４）を、イムノソルベントアッセイ、ＲＴ−ＰＣＲまたはマイクロアレイを使用することによって、筋損傷の生体マーカーとして使用し得る。対照の被験体と比較して、ジストロフィー被験体において炎症生体マーカーのレベルの低減を生じるその試験化合物を、さらに評価し得る。
【００８４】
実施例６：  試験化合物のバイオアベイラビリティーを評価するためのインビボアッセイ
【００８５】
バイオアベイラビリティーは、その試験化合物が全身循環に入り、それによって、作用部位に接近する程度および速度に言及し得る。バイオアベイラビリティーは、投与方法に基づいて異なり得る。静脈内投与される試験化合物は、１００％のバイオアベイラビリティーを有し得る。他の経路（例えば、経口）を介して投与される試験化合物は、静脈内投与された試験化合物に対して減少したバイオアベイラビリティーを有し得る。
【００８６】
バイオアベイラビリティーは、絶対的または相対的であり得る。絶対的バイオアベイラビリティーを、非静脈内投与（例えば、経口、眼、直腸、経皮、皮下、または舌下）後の全身循環におけるその試験化合物のバイオアベイラビリティーと、静脈内投与後のその同じ試験化合物のバイオアベイラビリティーとを比較することによって決定し得る。相対的バイオアベイラビリティーは、別の試験化合物と比較される場合に、試験化合物のバイオアベイラビリティーを測定することによって決定され得る。
【００８７】
バイオアベイラビリティーを、その試験化合物の投与後に、血漿中のその試験化合物の濃度（血漿濃度）を経時的に決定することによって評価し得る。バイオアベイラビリティーを、血漿濃度−時間曲線下の面積（ＡＵＣ）を決定することによって測定し得る。その試験化合物の血漿濃度は、その試験化合物の吸収の程度と相関し得る。その試験化合物の血漿濃度は、吸収の程度とともに増大し得る。その最大（ピーク）血漿濃度は、薬物排除速度が吸収速度と等しくなったときに達し得る。ピーク時間（最大血漿薬物濃度が生じる時）を、吸収速度の一般的指数として使用し得る。より遅いピーク時間は、より遅い吸収と相関し得る。
【００８８】
バイオアベイラビリティーを、単一用量後に排出されるその試験化合物の総量を測定することによって予測し得る。その吸収された試験化合物の完全な尿回収のために、７〜１０回の排出半減期の期間にわたって尿を集め得る。多数回の投与後に、定常状態条件下で２４時間の期間にわたって、変化していない薬物を尿から回収し測定することによって、バイオアベイラビリティーを予測し得る。
【００８９】
本発明の好ましい実施形態が、本明細書で示され、記載されているが、このような実施形態が例示によって提供されるに過ぎないことは、当業者に明らかである。多くのバリエーション、変更、および置換は、本発明から逸脱することなく当業者によって今や想起され得る。本明細書で記載される本発明の実施形態に対する種々の変更が、本発明を実施するにあたって使用され得ることは、理解されるべきである。以下の請求項は、本発明の範囲を規定すること、およびこれらの請求項の範囲内の方法および構造ならびにそれらの均等物は、請求項によって網羅されることが意図される。
【００９０】
本発明の種々の実施形態が、本明細書で示され、記載されているが、このような実施形態が例示によって提供されるに過ぎないことは、当業者に明らかである。多くのバリエーション、変更、および置換は、本発明から逸脱することなく当業者によって今や想起され得る。本明細書で記載される本発明の実施形態に対する種々の変更が使用され得ることは、理解されるべきである。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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