(57)【要約】トロポミオシン受容体キナーゼ（ＴｒｋＡ）に対する抗体、そのような抗体を含む組成物、ならびに術後疼痛、関節リウマチ疼痛、神経障害性疼痛、および変形性関節症疼痛を含む疼痛の治療のためのそのような抗体の使用方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含むトロポミオシン受容体キナーゼ（ＴｒｋＡ）に結合する抗体であって、前記ＨＣＶＲが、相補性決定領域（ＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＶＲが、ＣＤＲ  ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列が、配列番号３であり、ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列が、配列番号４であり、ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列が、配列番号５であり、ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列が、配列番号７であり、ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列が、配列番号８であり、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が、配列番号９である、抗体。
【請求項２】
配列番号７の残基１０のＸａａがＡである、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
配列番号７の残基１０のＸａａがＱである、請求項１に記載の抗体。
【請求項４】
前記ＨＣＶＲのアミノ酸配列が、配列番号１０であり、前記ＬＣＶＲのアミノ酸配列が、配列番号１１である、請求項１に記載の抗体。
【請求項５】
配列番号１１の残基３３のＸａａがＡである、請求項４に記載の抗体。
【請求項６】
配列番号１１の残基３３のＸａａがＱである、請求項４に記載の抗体。
【請求項７】
重鎖（ＨＣ）および軽鎖（ＬＣ）を含むトロポミオシン受容体キナーゼ（ＴｒｋＡ）に結合する抗体であって、前記ＨＣのアミノ酸配列が、配列番号１および配列番号２からなる群から選択され、前記ＬＣのアミノ酸配列が、配列番号６である、抗体。
【請求項８】
各々が配列番号１のアミノ酸配列を有する２つのＨＣが存在し、各々が配列番号６のアミノ酸配列を有する２つのＬＣが存在する、請求項７に記載の抗体。
【請求項９】
配列番号６の残基３３のＸａａがＡである、請求項８に記載の抗体。
【請求項１０】
配列番号６の残基３３のＸａａがＱである、請求項８に記載の抗体。
【請求項１１】
各々が配列番号２のアミノ酸配列を有する２つのＨＣが存在し、各々が配列番号６のアミノ酸配列を有する２つのＬＣが存在する、請求項７に記載の抗体。
【請求項１２】
配列番号６の残基３３のＸａａがＡである、請求項１１に記載の抗体。
【請求項１３】
配列番号６の残基３３のＸａａがＱである、請求項１１に記載の抗体。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体と、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
【請求項１５】
疼痛を治療する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体を投与することを含む、方法。
【請求項１６】
前記疼痛が、術後疼痛、神経障害性疼痛、関節リウマチ疼痛、および変形性関節症疼痛のうちの１つである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記疼痛が慢性疼痛である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
疼痛を治療する方法であって、それを必要とする患者に、請求項１４に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
【請求項１９】
前記疼痛が、術後疼痛、神経障害性疼痛、関節リウマチ疼痛、および変形性関節症疼痛のうちの１つである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記疼痛が慢性疼痛である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
療法における使用のための、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２２】
疼痛の治療における使用のための、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２３】
前記疼痛が、術後疼痛、関節リウマチ疼痛、神経障害性疼痛、および変形性関節症疼痛のうちの１つである、請求項２２に記載の使用のための抗体。
【請求項２４】
前記疼痛が慢性疼痛である、請求項２２に記載の使用のための抗体。
【請求項２５】
疼痛の治療のための薬剤の製造における請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体の使用。
【請求項２６】
前記疼痛が、術後疼痛、神経障害性疼痛、関節リウマチ疼痛、および変形性関節症疼痛のうちの１つである、請求項２５に記載の使用。
【請求項２７】
前記疼痛が慢性疼痛である、請求項２５に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬の分野に属する。特に、本発明は、トロポミシン受容体キナーゼＡ（ＴｒｋＡ）に対する抗体、そのような抗ＴｒｋＡ抗体を含む組成物、およびそのような抗体を疼痛の治療に使用する方法に関する。抗体およびそれを使用する方法は、侵害受容性／炎症性、神経障害性、侵害可塑性（ｎｏｃｉｐｌａｓｔｉｃ）、または混合病因の急性または慢性の疼痛を治療し得る。他の実施形態では、抗体および方法は、起源が筋骨格性または神経障害性である急性または慢性の疼痛を治療するために使用され得る。疼痛の具体的で非限定的な例としては、例えば、術後疼痛、関節リウマチ疼痛、変形性関節症疼痛、神経障害性疼痛、糖尿病性神経障害性疼痛（ＤＮＰ）、ならびに非神経根性（非神経障害性）および神経根性腰痛（腰仙部神経根症（ＬＳＲ）または坐骨神経痛と呼ばれることもある）を含む慢性腰痛（ＣＬＢＰ）、ならびに内臓痛（例えば、慢性前立腺炎、間質性膀胱炎（膀胱痛）または慢性骨盤痛など）が挙げられる。
【背景技術】
【０００２】
米国特許出願公開第２０１３／０３３６９６４号は、ヒト疼痛系におけるＴｒｋＡおよび神経成長因子（ＮＧＦ）の役割を説明している。具体的には、ある特定の状況において、ＮＧＦは身体における疼痛経路の一部としてＴｒｋＡタンパク質に結合し、活性化する。この結合は、複数の機構を介して疼痛のシグナル伝達を増強する。（ＷＯ２０１６／０８７６７７を参照されたい）。したがって、ＮＧＦを標的化することは、潜在的に疼痛の治療に有用であり得、炎症に関連する疼痛は、動物モデルにおいてＮＧＦの生物活性を中和することによって大幅に低減され得る。（例えば、ＷＯ２０１６／０８７６７７、および米国特許第７，４４９，６１６号を参照されたい）。米国特許出願公開第２０１３／０３３６９６１号、米国特許第７，６０１，８１８号、ＷＯ２０００／７３３４４およびＷＯ２０１６／０８７６７７には、ＴｒｋＡに結合するように設計された様々な抗体が列挙されている。ヒトＴｒｋＡのタンパク質配列は、米国特許出願公開第２０１３／０３３６９６１号に提供されている。
【０００３】
持続性疼痛は主要な健康問題であり、生活の質を大幅に低下させる。持続性疼痛は、異なるレベルの重症度を示す場合があり、背部損傷または変性椎間板疾患、片頭痛、関節炎、糖尿病性神経障害、癌、および他の疾患などの様々な病状に関連している。軽度の疼痛は現在、アセトアミノフェン、アスピリン、および他の（典型的には市販の）薬剤で治療されている。中程度の疼痛は、コルチゾールおよびプレドニゾンなどのコルチコステロイド薬を使用して制御することができる。既存の治療の有効性および／または忍容性に関する問題は周知であり、例えば、コルチコステロイドは、体重増加、不眠症、および免疫系衰弱を含む顕著な悪影響を示す。中程度または重度の疼痛は、モルヒネおよびフェンタニルなどのオピオイドで治療され得るが、アヘン剤の長期使用は、依存症、耐性、および身体依存症の発症を含む、いくつかの重大な欠点によって制限される。オピオイドの過剰使用の可能性は、オピオイドを使用し、中毒になっている可能性のある人々の数の増加を考慮して、「オピオイド蔓延」として特徴付けられている。
【０００４】
現在の疼痛療法は効果が不十分であることが多く、かつ／または重大な望ましくない副作用があるため、新しい分子標的に向けられ、かつ安全性、効力、有効性、および忍容性を含む、改善された薬理学的特性の組み合わせ、特に慢性疼痛の治療を提供し得る薬物を開発することが急務である。今日まで、ＴｒｋＡシグナル伝達を標的とする薬剤は、疼痛の治療のために承認されていない。したがって、代替の抗ＴｒｋＡ抗体などの、ＴｒｋＡシグナル伝達を阻害することができる薬剤の必要性が残存する。治療効果を提供するそのような薬剤の必要性も存在する。
【発明の概要】
【０００５】
本発明は、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含むＴｒｋＡに結合する抗体を提供し、ＨＣＶＲは、相補性決定領域（ＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＶＲは、ＣＤＲ  ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号３であり、ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号４であり、ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号５であり、ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号７であり、ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号８であり、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号９である。下記のように、配列番号７のＬＣＤＲ１のアミノ酸配列は、残基１０に、Ｎ、Ａ、またはＱのうちの１つであるＸａａを含む。現在好ましい実施形態のいくつかでは、配列番号７の１０位のＸａａはＡである。現在好ましい実施形態の他では、配列番号７の１０位のＸａａはＱである。
【０００６】
本発明の実施形態は、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲを含むＴｒｋＡに結合する抗体を提供し、ＨＣＶＲのアミノ酸配列は、配列番号１０であり、ＬＣＶＲのアミノ酸配列は、配列番号１１である。下記のように、配列番号１１のＬＣＶＲのアミノ酸配列は、残基３３に、Ｎ、Ａ、またはＱのうちの１つであるＸａａを含む。現在好ましい実施形態のいくつかでは、配列番号１１の残基３３のＸａａはＡである。他の現在好ましい実施形態では、配列番号１１の残基３３のＸａａはＱである。
【０００７】
さらなる実施形態では、本発明は、重鎖（ＨＣ）および軽鎖（ＬＣ）を含むＴｒｋＡに結合する抗体を提供し、ＨＣのアミノ酸配列は、配列番号１および配列番号２からなる群から選択され、ＬＣのアミノ酸配列は、配列番号６である。下記のように、配列番号６で定義されるＬＣのアミノ酸配列は、残基３３に、Ｎ、Ａ、またはＱのうちの１つであるＸａａを含む。現在好ましい態様のいくつかでは、配列番号６の残基３３のＸａａはＡである。他の現在好ましい実施形態では、配列番号６の残基３３のＸａａはＱである。いくつかの実施形態では、２つのＨＣおよび２つのＬＣが存在し、ＬＣの各々は、配列番号６のアミノ酸配列を有し、ＨＣの各々は、配列番号１または配列番号２のいずれかのアミノ酸配列を有する。
【０００８】
配列番号６のＬＣの様々な実施形態は、配列番号１のＨＣまたは配列番号２のＨＣのいずれかとともに使用され得る。一実施形態では、ＨＣは、配列番号１によって定義され、配列番号６のＬＣは、配列番号６の残基３３のＸａａがＱであるように構築される。別の実施形態では、ＨＣは、配列番号１によって定義され、配列番号６のＬＣは、配列番号６の残基３３のＸ  ａａがＡであるように構築される。さらなる実施形態では、ＨＣは、配列番号２によって定義され、配列番号６のＬＣは、配列番号６の残基３３のＸａａがＱであるように構築される。さらに追加の実施形態では、ＨＣは、配列番号２によって定義され、配列番号６のＬＣは、配列番号６の残基３３のＸａａがＡであるように構築される。
【０００９】
本発明はさらに、本発明の抗体と、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とを含む、薬学的組成物を提供する。さらに、本発明は、治療を必要とする患者に、本発明の薬学的組成物を投与することを含む、疼痛を治療する方法を提供する。なおもさらなる実施形態では、本発明は、侵害受容性／炎症性、神経障害性、侵害可塑性、または混合病因の急性または慢性の疼痛を治療する方法を提供する。他の実施形態では、疼痛は、起源が筋骨格性または神経障害性である急性または慢性の疼痛である。本実施形態によって治療され得る疼痛の具体的で非限定的な例としては、例えば、術後疼痛、関節リウマチ疼痛、神経障害性疼痛、および変形性関節症疼痛が挙げられる。（本明細書で使用される場合、変形性関節症疼痛は、非神経根性（非神経障害性）疼痛を明確に含む。本明細書で使用される場合、神経障害性疼痛は、神経根性疼痛ＣＬＢＰ、ＤＮＰ、およびＬＳＲを明確に含む。）いくつかの実施形態では、疼痛は、例えば、筋骨格性および神経障害性起源の両方の慢性疼痛などの慢性疼痛である。他の実施形態では、疼痛の内臓痛（例えば、慢性前立腺炎、間質性膀胱炎（膀胱痛）または慢性骨盤痛など）。
【００１０】
なおもさらなる実施形態では、本発明は、治療を必要とする患者に、本発明の薬学的組成物を投与することを含む、疼痛を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、疼痛は、例えば、筋骨格性および神経障害性起源の両方の慢性疼痛などの慢性疼痛である。
【００１１】
加えて、本発明は、治療を必要とする患者に、本発明の有効量の抗体を投与することを含む、疼痛を治療する方法を提供する。より特定の実施形態では、本発明は、侵害受容性／炎症性、神経障害性、侵害可塑性、または混合病因の急性または慢性の疼痛を治療する方法を提供する。他の実施形態では、疼痛は、起源が筋骨格性または神経障害性である急性または慢性の疼痛である。疼痛の具体的で非限定的な例としては、例えば、非神経根性（非神経障害性）および神経根性ＣＬＢＰ、ＤＮＰ、およびＬＳＲを含む、術後疼痛、慢性関節リウマチ疼痛、神経障害性疼痛、および変形性関節症疼痛が挙げられ、治療を必要とする患者に、本発明の有効量の抗体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、治療方法は、例えば、筋骨格性および神経障害性起源の両方の慢性疼痛などの慢性疼痛である疼痛の治療を伴う。他の実施形態では、治療方法は、内臓痛（例えば、慢性前立腺炎、間質性膀胱炎（膀胱痛）または慢性骨盤痛など）である疼痛の治療を伴う。
【００１２】
本発明はまた、療法における使用のための本発明の抗体も提供する。より具体的には、本発明は、疼痛の治療に使用するための本発明の抗体を提供する。特定の実施形態では、本発明は、侵害受容性／炎症性、神経障害性、侵害可塑性、または混合病因（これらに限定されないが、例えば、非神経根性（非神経障害性）ならびに神経根性ＣＬＢＰ、ＤＮＰ、およびＬＳＲを含む、術後疼痛、神経障害性疼痛、関節リウマチ疼痛、および変形性関節症疼痛を含む）の急性または慢性の疼痛の治療に使用するための本発明の抗体を提供する。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、例えば、筋骨格性および神経障害性起源の両方の慢性疼痛などの慢性または急性の疼痛である疼痛の治療に使用するためのものである。他の実施形態では、本発明の抗体は、内臓痛（例えば、慢性前立腺炎、間質性膀胱炎（膀胱痛）または慢性骨盤痛など）である疼痛の治療に使用するためのものである。
【００１３】
さらに、本発明は、侵害受容性／炎症性、神経障害性、侵害可塑性、または混合病因（これらに限定されないが、例えば、非神経根性（非神経障害性）ならびに神経根性ＣＬＢＰ、ＤＮＰ、およびＬＳＲを含む、術後疼痛、神経障害性疼痛、関節リウマチ疼痛、および変形性関節症疼痛を含む）の急性または慢性の疼痛の治療のための薬剤の製造に使用される本発明の抗体の使用を提供する。いくつかのそのような実施形態では、本発明の抗体は、例えば、筋骨格性および神経障害性起源の両方の慢性疼痛などの急性または慢性の疼痛である疼痛の治療のための薬剤の製造に使用される。他の実施形態では、本発明の抗体は、疼痛の内臓痛（例えば、慢性前立腺炎、間質性膀胱炎（膀胱痛）または慢性骨盤痛など）の治療のための薬剤の製造に使用される。
【００１４】
本実施形態は、疼痛を治療するための薬剤の製造のための、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含むＴｒｋＡに結合する抗体（ＨＣＶＲは、相補性決定領域（ＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＶＲは、ＣＤＲ  ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号３であり、ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号４であり、ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号５であり、ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号７であり、ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号８であり、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号９である）、またはそのような抗体を含む薬学的組成物の使用も提供する。いくつかの実施形態では、抗体（またはそのような抗体を含む薬学的組成物）は、侵害受容性／炎症性、神経障害性、侵害可塑性、または混合病因（これらに限定されないが、例えば、非神経根性（非神経障害性）ならびに坐骨神経痛としても知られる神経根性ＣＬＢＰ、ＤＮＰ、およびＬＳＲを含む、術後疼痛、関節リウマチ疼痛、神経障害性疼痛、および変形性関節症疼痛を含む）の急性または慢性の疼痛を治療するための薬剤の製造に使用される。他の実施形態では、抗体（またはそのような抗体を含む薬学的組成物）は、慢性疼痛を治療するための薬剤の製造に使用される。他の実施形態では、抗体（またはそのような抗体を含む薬学的組成物）は、内臓痛（例えば、慢性前立腺炎、間質性膀胱炎（膀胱痛）または慢性骨盤痛など）を治療するための薬剤の製造に使用される。他の実施形態では、抗体（またはそのような抗体を含む薬学的組成物）は、起源が筋骨格性および神経障害性の急性または慢性の疼痛を治療するための薬剤の製造に使用される。
【００１５】
本抗体はＴｒｋＡに結合する。より具体的には、本抗体は、ＮＧＦがＴｒｋＡへの結合を遮断または防止されるように、ＴｒｋＡに結合することができる。一般に、ＮＧＦはＴｒｋＡ受容体のドメイン５に結合する。しかしながら、本抗体は、ＴｒｋＡに結合し、それにより、ＮＧＦがドメイン５の全てもしくは一部またはＴｒｋＡの別の部分に結合するのを遮断／防止し得る。
【００１６】
以下は、本実施形態の範囲内のいくつかの例示的な抗体の配列である：
【００１７】
配列番号６のＬＣ（配列番号６の残基３３のＸａａがＮである）および配列番号１のＨＣを有する抗体（以下、「ｍＡｂ  Ａ」と称する）：
軽鎖
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＳＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＲＮＧＮＴＹＬＳＷＬＱＱＲＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＫＩＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＡＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＡＲＱＦＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
重鎖
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＧＶＳＩＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＥＴＴＳＳＧＴＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ
【００１８】
配列番号６のＬＣ（配列番号６の残基３３のＸａａがＡである）および配列番号１のＨＣを有する抗体（以下、「ｍＡｂ  Ｂ」と称する）：
軽鎖
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＳＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＲＡＧＮＴＹＬＳＷＬＱＱＲＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＫＩＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＡＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＡＲＱＦＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
重鎖
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＧＶＳＩＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＥＴＴＳＳＧＴＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ
【００１９】
配列番号６のＬＣ（配列番号６の残基３３のＸａａがＱである）および配列番号１のＨＣを有する抗体（以下、「ｍＡｂ  Ｃ」と称する）：
軽鎖
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＳＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＲＱＧＮＴＹＬＳＷＬＱＱＲＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＫＩＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＡＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＡＲＱＦＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
重鎖
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＧＶＳＩＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＥＴＴＳＳＧＴＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ
【００２０】
配列番号６のＬＣ（配列番号６の残基３３のＸａａがＡである）および配列番号２のＨＣを有する抗体（以下、「ｍＡｂ  Ｄ」と称する）：
軽鎖
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＳＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＲＡＧＮＴＹＬＳＷＬＱＱＲＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＫＩＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＡＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＡＲＱＦＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
重鎖
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＧＶＳＩＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＥＴＴＳＳＧＴＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
【００２１】
配列番号６のＬＣ（配列番号６の残基３３のＸａａがＱである）および配列番号２のＨＣを有する抗体（以下、「ｍＡｂ  Ｅ」と称する）：
軽鎖
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＳＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＲＱＧＮＴＹＬＳＷＬＱＱＲＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＫＩＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＡＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＡＲＱＦＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
重鎖
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＧＶＳＩＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＥＴＴＳＳＧＴＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
【００２２】
配列番号６のＬＣ（配列番号６の残基３３のＸａａがＮである）および配列番号２のＨＣを有する抗体（以下、「ｍＡｂ  Ｆ」と称する）：
軽鎖
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＳＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＲＮＧＮＴＹＬＳＷＬＱＱＲＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＫＩＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＡＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＡＲＱＦＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
重鎖
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＧＶＳＩＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＥＴＴＳＳＧＴＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
【００２３】
さらに、本発明は、プロセスに従って調製された抗体を提供し、該プロセスは、本発明のポリヌクレオチド配列を含む宿主細胞を、抗体が発現されるような条件下で培養することと、該宿主細胞から本発明の抗体を回収することとを含む。
【００２４】
本明細書で使用される場合、「抗体」は、ジスルフィド結合により相互接続された２つのＨＣおよび２つのＬＣを含む免疫グロブリン分子である。各ＬＣおよびＨＣのアミノ末端部分は、その中に収容されるＣＤＲを介した抗原認識を主に担う約１００〜１２０個のアミノ酸の可変領域を含む。ＣＤＲには、フレーム領域（「ＦＲ」）と呼ばれる、より保存された領域が散在している。各ＬＣＶＲおよびＨＣＶＲは、以下のＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順で、アミノ末端からカルボキシ末端に配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成される。ＬＣの３つのＣＤＲは、「ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３」と呼ばれ、ＨＣの３つのＣＤＲは、「ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３」と呼ばれる。ＣＤＲは、抗原と特異的な相互作用を形成する残基の大部分を含む。ある抗体が特定の抗原と結合する機能的能力は、６つのＣＤＲによって大きく影響される。本発明の抗体のＬＣＶＲおよびＨＣＶＲ領域内のＣＤＲドメインへのアミノ酸の割り当ては、周知のＫａｂａｔ番号付け規則（Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９０：３８２−９３（１９７１）、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２（１９９１））、およびＮｏｒｔｈ番号付け規則（Ｎｏｒｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ａ  Ｎｅｗ  Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ＣＤＲ  Ｌｏｏｐ  Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，４０６：２２８−２５６（２０１１））に基づいている。
【００２５】
ＬＣは、カッパまたはラムダとして分類され、これらは各々、当該技術分野で既知の特定の定常領域を特徴とする。本発明の抗体は、カッパＬＣを含む。ＨＣは、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロンとして分類され、それぞれ抗体のアイソタイプをＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥとして定義する。本発明の抗体は、ＩｇＧ  ＨＣを含む。ＩｇＧ抗体は、サブクラス、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４にさらに分けることができる。特定の実施形態では、本発明の抗体は、ＩｇＧ４またはＩｇＧ１である。各ＨＣのカルボキシ末端部分は、エフェクター機能を主に担う定常領域を定義する。特定の実施形態では、本発明の抗体は、エフェクター機能を低減するか、または抗体の安定性を改善する各ＨＣの定常領域に１つ以上の修飾を有する。
【００２６】
本発明の抗体は、モノクローナル抗体（「ｍＡｂ」）である。ｍＡｂは、例えば、ハイブリドーマ技術、組み換え技術、ファージ提示技術、合成技術、例えば、ＣＤＲ移植、またはそのような技術または当該技術分野で既知の他の技術の組み合わせによって産生することができる。本明細書で言及される場合、ｍＡｂは、単一のコピーまたはクローン（例えば、任意の真核生物、原核生物、もしくはファージのクローンを含む）に由来する抗体であり、それが産生される方法ではない。
【００２７】
抗体を産生および精製する方法は、当該技術分野で周知である。例えば、ファージライブラリをスクリーニングすることができ、それにより、組み換えヒトＴｒｋとの相互作用について数千のＦａｂ断片がスクリーニングされる。結果として生じる相互作用を回収、精製し、当該技術分野で周知の従来の方法を使用してアミノ酸配列を決定することができ、それにより、初期リード抗体を構築することができる。本発明の抗体は、１つ以上のヒトフレームワーク領域を含有するように設計されている。ヒトフレームワークの生殖系列配列は、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＮＧＴ）からそのウェブサイト（ｈｔｔｐ：／／ｉｍｇｔ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒ）を通して、またはＴｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ＦａｃｔｓＢｏｏｋ  ｂｙ  Ｍａｒｉｅ−Ｐａｕｌｅ  Ｌｅｆｒａｎｃ  ａｎｄ  Ｇｅｒａｒｄ  Ｌｅｆｒａｎｃ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，２００１（ＩＳＢＮ０１２４４１３５１）から得ることができる。特定の実施形態によれば、本発明の抗体に使用するための生殖系列ＨＣおよびＬＣフレームワーク領域は、それぞれ、３〜２１およびＡ２３を含む。
【００２８】
本発明の特定の実施形態では、抗体、または抗体をコードする核酸は、単離された形態で提供される。本明細書で使用される場合、「単離された」という用語は、細胞環境内に見出される他の高分子種を含まないか、または実質的に含まない、タンパク質、ポリペプチド、または核酸を指す。
【００２９】
本発明の抗体は、既知の方法を使用して調製および精製することができる。例えば、ＨＣ（例えば、配列番号１によって示されるアミノ酸配列）およびＬＣ（例えば、配列番号６によって示されるアミノ酸配列）をコードするｃＤＮＡ配列をクローニングし、ＧＳ（グルタミンシンテターゼ）発現ベクター中に操作することができる。次いで、操作された免疫グロブリン発現ベクターを、ＣＨＯ細胞中に安定してトランスフェクトすることができる。当業者であれば理解されるように、抗体の哺乳動物発現は、典型的には、Ｆｃ領域内の高度に保存されたＮ−グリコシル化部位でのグリコシル化をもたらすであろう。安定なクローンは、ＴｒｋＡに特異的に結合する抗体の発現について検証され得る。陽性クローンは、バイオリアクター内での抗体産生のために無血清培地へと増殖させることができる。抗体が分泌された培地は、従来の技術によって精製することができる。例えば、培地は、リン酸緩衝生理食塩水などの適合性のある緩衝液で平衡化したプロテインＡまたはＧ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＦＦカラムに好都合に適用することができる。カラムを洗浄して、非特異的結合構成成分を除去する。結合した抗体を、例えば、ｐＨ勾配によって溶出し、抗体画分を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥなどによって検出し、抗ＴｒｋＡ対ＴｒｋＡをプールする。抗体は、一般的な技術を使用して濃縮および／または滅菌濾過されてもよい。可溶性凝集体および多量体は、サイズ排除、疎水性相互作用、イオン交換、またはヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーを含む、一般的な技術によって効率的に除去することができる。産物を、例えば、−７０℃で直ちに凍結させるか、または凍結乾燥させてもよい。
【００３０】
本発明の抗体は、患者の治療に使用することができる。より具体的には、本発明の抗体は、侵害受容性／炎症性、神経障害性、侵害可塑性、または混合病因の急性または慢性の疼痛などの疼痛のクラスを治療することが期待される。そのような疼痛には、限定されないが、例えば、非神経根性（非神経障害性）および神経根性ＣＬＢＰ、ＤＮＰ、およびＬＳＲを含む、術後疼痛、神経障害性疼痛、関節リウマチ疼痛、および変形性関節症疼痛が明確に含まれる。本発明の抗体は、上述の術後疼痛、神経障害性疼痛、関節リウマチ疼痛、および変形性関節症疼痛を含む疼痛の治療に有用であることが期待されるが、そのような抗体はまた、他の疼痛の治療にも有用であり得る。本明細書で互換的に使用される場合、「治療」および／または「治療すること」および／または「治療する」は、本明細書に記載の障害の進行の緩徐化、妨害、抑止、制御、停止、または逆転が存在し得る全てのプロセスを指すことが意図されるが、全ての障害の症状の完全な排除を必ずしも示すものではない。治療には、疼痛の予防も含まれ得る。
【００３１】
治療は、ＴｒｋＡ活性の低減により利益を得るであろうヒトにおける疾患または状態の治療のための本発明の抗体の投与を含み、（ａ）疾患のさらなる進行を阻害すること、すなわち、その発症を抑止することと、（ｂ）疾患を軽減すること、すなわち、疾患もしくは障害の退縮を引き起こすか、またはその症状もしくは合併症を緩和することと、（ｃ）症状の疾患の発症を予防することとを含む。
【００３２】
本明細書で定義される治療は、疼痛の発生率の低減、疼痛または疼痛の１つ以上の症状の寛解、疼痛または疼痛の１つ以上の症状の緩和、疼痛の発症の遅延を明確に含む。治療には、いくつかの状況では、疼痛の治療も含まれるが、必ずしも疼痛を引き起こす基礎疾患または状態を修正しない。
【００３３】
疼痛の「発生の低減」とは、重症度（例えばアヘン剤を含む、この状態に一般的に使用される他の薬物および／または療法の必要性および／または量（例えば、それへの暴露）の低減を含み得る）、持続時間、および／または頻度（例えば、個体の術後疼痛までの時間の遅延または増加を含む）の低減のいずれかを意味する。当業者によって理解されるように、個体は、治療に対する彼らの応答に関して異なる可能性があり、したがって、例えば、「個体における関節リウマチ疼痛または変形性関節症疼痛の発生を低減する方法」は、そのような投与がその特定の個体における発生においてそのような低減を引き起こす可能性が高いという合理的な期待に基づく抗体の投与を反映する。
【００３４】
疼痛または疼痛の１つ以上の症状（関節リウマチ疼痛または変形性関節症疼痛など）を「寛解させること」とは、抗体を投与しない場合と比較して、疼痛の１つ以上の症状が軽減または改善されることを意味する。「寛解させること」には、症状の持続時間の短縮または低減も含まれる。
【００３５】
疼痛または疼痛の１つ以上の症状（関節リウマチ疼痛または変形性関節症疼痛など）の「緩和」とは、本発明による抗体で治療された個体または個体の集団における術後疼痛の１つ以上の望ましくない臨床症状の程度を軽減することを意味する。
【００３６】
本明細書で使用される場合、疼痛の発症を「遅延させること」とは、術後疼痛、関節リウマチ疼痛、または変形性関節症疼痛などの疼痛の進行を保留する、妨げる、緩徐化する、遅らせる、安定させる、および／または延期することを意味する。この遅延は、疾患の病歴および／または治療される個体に応じて、様々な長さの時間であり得る。当業者に明らかであるように、十分または有意な遅延は、個体が疼痛を発症しないという点で、事実上、予防を包含し得る。症状の発症を「遅延させる」方法は、方法を使用しない場合と比較して、所与の時間枠において症状が発症する可能性を低減し、かつ／または所与の時間枠において症状の程度を低減する方法である。そのような比較は、典型的には、統計的に有意な数の対象を使用した臨床研究に基づく。
【００３７】
本明細書で使用される場合、「疼痛」は、侵害受容性／炎症性病因の疼痛、神経障害性病因の疼痛、侵害可塑性病因の疼痛、または混合病因の疼痛を含むあらゆる病因の疼痛を指す。疼痛には、急性および慢性の疼痛が明確に含まれる。疼痛は、起源が筋骨格性または神経障害性である急性または慢性の疼痛を含む。疼痛には、炎症性成分によるあらゆる疼痛も含まれる。疼痛には、内臓痛（例えば、慢性前立腺炎、間質性膀胱炎（膀胱痛）または慢性骨盤痛など）も含まれる。非限定的な疼痛の例としては、術後（ｐｏｓｔ−ｓｕｒｇｉｃａｌ）疼痛、術後（ｐｏｓｔ−ｏｐｅｒａｔｉｖｅ）疼痛（歯痛を含む）、片頭痛、頭痛および三叉神経痛、火傷、創傷、または腎臓結石に関連する疼痛、外傷に関連する疼痛（外傷性頭部損傷を含む）、神経障害性疼痛、関節リウマチ、変形性関節症などの筋骨格障害に関連する疼痛（例えば、非神経根性（非神経障害性）および神経根性ＣＬＢＰ（ＬＳＲまたは坐骨神経痛を含む）を含む）、ＤＮＰ、強直性脊椎炎、血清陰性（非リウマチ）関節症、非関節性リウマチおよび関節周囲障害、ならびに癌に関連する疼痛（「突出痛」および末期癌に関連する疼痛を含む）、末梢神経障害および帯状疱疹後神経痛が挙げられる。（上記のもののいくつかに加えて）炎症性成分を伴う疼痛の非限定的な例としては、リウマチ痛、粘膜炎に関連する疼痛、および月経困難症が挙げられる。
【００３８】
本明細書で定義されるように、疼痛は、筋骨格性および神経障害性起源の両方の慢性疼痛を明確に含む。疼痛には、急性疼痛および突然の疼痛も含まれる。
【００３９】
「術後疼痛」（「切開後」または「外傷後疼痛」と交換可能に呼ばれる）は、個体の組織への切り傷、刺し傷、切開、裂傷、または創傷などの外的外傷（侵襲的または非侵襲的にかかわらず、すべての外科的処置から生じるものを含む）から生じるまたは起因する疼痛を指す。本明細書で使用される場合、術後疼痛は、外部の身体的外傷なしに発生する（生じるまたは由来する）疼痛を含まない。いくつかの実施形態では、術後疼痛は内的または外的（末梢を含む）疼痛であり、創傷、切り傷、外傷、裂傷、または切開は、偶発的に（外傷性創傷と同様に）または故意に（外科的切開と同様に）発生し得る。本明細書で使用される場合、「疼痛」は、侵害受容および痛覚を含み、疼痛スコアおよび当技術分野で周知の他の方法を使用して、疼痛を客観的および主観的に評価することができる。本明細書で使用される場合、術後疼痛には、異痛症（すなわち、通常は非有害な刺激に対する反応の増加）および痛覚過敏（すなわち、通常の有害または不快な刺激に対する反応の増加）が含まれ、これは、熱的または機械的（触覚）であり得る。いくつかの実施形態では、疼痛は、熱的感受性、機械的感受性、および／または安静時痛を特徴とする。いくつかの実施形態では、術後疼痛には、機械的に誘導される疼痛または安静時痛が含まれる。他の実施形態では、術後疼痛には、安静時痛が含まれる。当技術分野で周知のように、疼痛は、一次性または二次性疼痛であり得る。
【００４０】
本明細書で互換的に使用される場合、「患者」、「対象」、および「個体」という用語は、ヒトを指す。ある特定の実施形態では、患者は、ＴｒｋＡ活性の低減から利益を得るであろう疾患、障害、または状態（例えば、疼痛、例えば、一次性もしくは二次性頭痛、および／または片頭痛（慢性片頭痛を含む））をさらに特徴とする。別の実施形態では、患者は、上記の状態、またはＴｒｋＡ活性の低減から利益を得るであろう状態を発症するリスクがあるとさらに特徴付けられる。
【００４１】
本明細書で使用される場合、「結合する（ｂｉｎｄ）」、「結合する（ｂｉｎｄｓ）」、または「に結合する」という用語は、抗体とヒトＴｒｋＡのエピトープとの相互作用を指す。本明細書で使用される場合、「エピトープ」という用語は、本発明の抗体によって認識される抗原の別個の三次元部位を指す。
【００４２】
本発明の抗体は、当該技術分野で周知の方法によって調製することができ、本発明の抗体と、１つ以上の薬学的に許容される担体（複数可）および／または希釈剤（複数可）とを含む、薬学的組成物に組み込むことができる（例えば、一般に開業医に知られている製剤化技術の概要を提供する、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｏｙｄ  Ｖ．，Ｅｄ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ，２０１２）。薬学的組成物に好適な担体には、本発明の抗体と組み合わせたときに分子の活性を保持し、かつ患者の免疫系とは非反応性である、任意の材料が含まれる。
【００４３】
本発明の抗体を含む薬学的組成物は、親経路（例えば、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、または経皮）によって、本明細書に記載の疾患または障害のリスクがあるか、またはそれを呈する患者に投与することができる。本発明の薬学的組成物は、「有効」量または「治療有効」量（本明細書で互換的に使用される）の本発明の抗体を含有する。有効量は、所望の治療結果を達成するのに必要な量（投与量および期間および投与手段で）を指す。抗体の有効量は、個体の病状、年齢、性別、および体重、ならびに抗体が個体において所望の応答を誘発する能力などの因子に応じて変動し得る。有効量はまた、本発明の抗体の任意の毒性効果または有害効果よりも治療的に有益な効果が上回る量である。いくつかの実施形態では、有効量は、臨床的に有意な疼痛の低減をもたらす。
【実施例】
【００４４】
実施例は、ｍＡｂ  Ａ、ｍＡｂ  Ｂ、ｍＡｂ  Ｃ、ｍＡｂ  Ｄ、およびｍＡｂ  Ｅを含む今回請求される抗体のいくつかを使用し、そのような抗体の配列は本明細書に示されている。
【００４５】
実施例１．ｍＡｂ  Ａ〜Ｅの操作、発現、および精製
ＴｒｋＡに特異的な抗体を開発するために、ヒト免疫グロブリン可変領域のトランスジェニックであるＡｌｉｖａＭａｂマウス（Ａｂｌｅｘｉｓ）を、Ｈｉｓタグ付きヒトＴｒｋＡ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）で免疫化する。ヒトＴｒｋＡ結合に陽性のマウスＢ細胞を、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）によって選別し、抗体を、単一細胞ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によってヒトＩｇＧ４ＰＡＡ／カッパ抗体としてクローニングする。操作された分子は、ＩｇＧ４ＰＡＡアイソタイプおよびＩｇＧ１ＥＮアイソタイプの両方として作製される。
【００４６】
本発明の抗体は、周知の方法による投与のために、生合成、精製、および製剤化することができる。チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）などの適切な宿主細胞を、２つのベクターが使用される場合は、所定のＨＣ：ＬＣベクター比を使用して抗体を分泌するための発現系で、または重鎖および軽鎖の両方をコードする単一ベクター系で、一時的または安定的のずれかでトランスフェクトする。これらの一般的に使用される宿主細胞からの抗体の発現および分泌に好適なベクターは周知である。抗体の発現および分泌後、培地を清澄化して細胞を除去する。清澄化した培地を、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）などの適合性のある緩衝液で平衡化したプロテインＡ親和性カラムに適用する。このカラムを、１ＭのＮａＣｌが補充された緩衝液で洗浄して、非特異的結合構成成分を除去する。結合した抗体を、例えば、ｐＨ約３．５のクエン酸ナトリウムを用いて溶出し、画分を、１Ｍの２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）プロパン−１，３−ジオール（Ｔｒｉｓ）緩衝液で中和する。抗体画分を、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）または分析的サイズ排除などによって検出し、次いでプールする。可溶性凝集体および多量体は、サイズ排除、疎水性相互作用、イオン交換、またはヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーを含む、一般的な技術によって効率的に除去することができる。本発明の例示される抗体は、一般的な技術を使用して濃縮および／または滅菌濾過される。これらのクロマトグラフィーステップ後の例示される抗体の純度は９５％を超え、試料は、−７０℃ですぐに凍結されるか、または４℃で数か月間保存され得る。
【００４７】
本実施例の抗体がＴｒｋＡに結合し、かつまたはＴｒｋＡによるシグナル伝達を阻害する能力は、実施例２〜７により評価され得る。
【００４８】
実施例２．ｍＡｂ  Ａ〜Ｅの結合動態および親和性
ヒト、カニクイザル、ラット、マウス、およびウサギのＴｒｋＡに対する例示される抗体の結合動態および親和性は、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）８Ｋ機器（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の表面プラズモン共鳴アッセイを使用して、以下に記載されるように決定される。ヒトＴｒｋＡの２つの異なるアイソフォーム（アイソフォーム１およびアイソフォーム２）が、ヒトＴｒｋＢおよびヒトＴｒｋＣとともに評価される。ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）８Ｋは、ＨＢＳ−ＥＰ＋泳動用緩衝液［１０ｍＭの２−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル］エタンスルホン酸（ヘペスｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、０．０５％ポリソルベート２０界面活性剤（Ｐ２０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）］でプライミングされる。分析温度は３７℃に設定され、試料コンパートメントは１５℃に設定される。結合動態および親和性は、抗体捕捉法を用いた平行動態アッセイを使用して得られる。抗体は、Ｓｅｒｉｅｓ−Ｓ  Ｓｅｎｓｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ  ＣＭ５チップ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上に捕捉される。各チャネルでは、フローセル１（ＦＣ１）が緩衝液参照として指定され、フローセル２（ＦＣ２）が抗体捕捉用に指定される。８つすべてのチャネルのすべてのＦＣ２は、１０μＬ／分の流量で約８９応答単位（ＲＵ）の抗体を捕捉するように設定される。抗体試料は、泳動用緩衝液に希釈することによって１μｇ／ｍＬに調製される。ヒトＴｒｋＡアイソフォーム１および２、マウス、ラット、ウサギ、およびカニクイザルのＴｒｋＡ分析物は、泳動用緩衝液に希釈することによって、最終濃度４００、２００、１００、５０、２５、１２．５、６．２５、および３．１２５ｎＭに調製される。ヒトＴｒｋＢおよびＴｒｋＣ分析物は、泳動用緩衝液に希釈することによって、最終濃度８００、４００、２００、１００、５０、２５、１２．５、および６．２５ｎＭに調製される。分析サイクルの前に、チップの表面を洗浄するために、ＦＣ１およびＦＣ２に１５秒の接触時間にわたって１００μＬ／分でグリシン（ｐＨ約１．５）を３回注入してチップを再生する。再生の後に、（１）ＦＣ２に、５μＬ／分で１５秒間、５μｇ／ｍＬのＩｇＧ４アイソタイプ対照抗体、（２）ＦＣ１およびＦＣ２に、泳動用緩衝液を３０μＬ／分で２５０秒間、そして解離を６００秒間、（３）１５秒の接触時間にわたって１００μＬ／分でグリシン（ｐＨ約１．５）を注入することによるチップ表面の再生からなる条件付けステップが続く。各分析サイクルは、（１）８つすべてのＦＣ２で試験抗体を捕捉し、８つすべてのそれぞれのＦＣ１対が１０μＬ／分で緩衝液参照として使用される、（２）泳動用緩衝液洗浄ステップ、（３）１００μＬ／分でＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、またはＴｒｋＣを、降順濃度でチャネル１〜８に１２０秒の接触時間にわたって注入する、（４）解離時間６００秒の間緩衝液フローに戻る、（５）注入あたり１５秒間、１００μＬ／分でグリシン（ｐＨ約１．５）を２回注入することによりチップ表面を再生する、（６）最終泳動用緩衝液洗浄ステップ、からなる。データを、参照を減算して、事前に定義された抗体の平行動態を使用して処理し、ＢＩＡ���ＯＲＥ（商標）８Ｋ評価ソフトウェア（バージョン１．１．１．７４４２）を使用して１：１結合モデルにあてはめ、会合速度（オン速度、ｋｏｎ、Ｍ−１ｓ−１単位）および解離速度（オフ速度、ｋｏｆｆ、ｓ−１単位）を決定する。モル単位で、ＫＤ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎの関係から平衡解離定数（ＫＤ）を計算する。特に明記されていない限り、平均（Ａｖｇ）ＫＤおよび標準偏差（ＳＤ）として報告される誤差は、３つの独立した実験から決定される。例示される抗体は、ヒト、カニクイザル、ラット、マウス、およびウサギのＴｒｋＡへの濃度依存的結合を示す。注入されたヒトＴｒｋＢおよびヒトＴｒｋＣの最高濃度（８００ｎＭ）では、結合応答シグナルは理論上の最大半量の応答シグナルに達しない。結果として、ヒトＴｒｋＢおよびヒトＴｒｋＣに対する試験された抗体のＫＤは、＞８００ｎＭであると推定される。結果を、表１に示す。
【表１】
2021514960.tif 000002
【００４９】
表１の「分析物」列に列記されるＴｒｋタンパク質の配列は、以下の配列番号２０〜２７に示される。
【００５０】
実施例３．ｍＡｂ  Ａ〜Ｅのインビトロ神経突起伸長アッセイ
ニューロンに対するＮＧＦ誘導神経突起伸長の阻害を、ラットＮＥＵＲＯＳＣＲＥＥＮ（商標）−１細胞（褐色細胞腫ＰＣ１２サブクローン、ＣＥＬＬＯＭＩＣＳ（登録商標））を用いて評価する。細胞は、コラーゲンでコーティングされたフラスコ内で、３７℃、湿度９５％で、Ｆ−１２Ｋ基礎培地、１２．５％熱不活化ウマ血清、２．５％熱不活化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、１Ｘ  ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）（ＩＮＶＩＴＲＯＧＥＮ（商標）、カタログ＃３５０５００６１）、および１Ｘ  Ａｎｔｉ−Ａｎｔｉ（ＩＮＶＩＴＲＯＧＥＮ（商標）、カタログ番号１５２４０）中に維持される。神経突起伸長を測定するために、ＮＥＵＲＯＳＣＲＥＥＮ（商標）−１細胞を、内部の６０ウェルのみを使用して、成長培地のウェルあたり２０００細胞でコラーゲンＩ  ９６ウェルプレートに播種する。翌日、培地を除去し、２５ｎｇ／ｍＬのＮＧＦ（Ｒ＆Ｄ  ＳＹＳＴＥＭＳ（登録商標）、カタログ番号：２５６−ＧＦ）の存在下または不在下で抗ＴｒｋＡ抗体の８点希釈系列を含有する新鮮な成長培地と交換する。希釈系列の各点には、３つの技術的反復がある。プレートを、３７℃、湿度９５％で４日間インキュベートした後、１Ｘ  Ｐｒｅｆｅｒ固定液（Ａｎａｔｅｃｈ，Ｌｔｄ）で１時間固定する。プレートを、１Ｘダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）で２回、１Ｘ  ＮＯ緩衝液［１Ｘ  ＤＢＰＳ、０．５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、０．０１％サポニン］で１回洗浄する。細胞を、ＮＯ緩衝液中１：８００に希釈した一次抗体マウス抗ベータ３チューブリン（ＴＵ−２０、ＩＮＶＩＴＲＯＧＥＮ（商標）、カタログ＃Ｍａ１−１９１８７）で一晩、そしてＮＯ緩衝液中１：５００に希釈した二次抗体ヤギ抗マウスＤＹＬＩＧＨＴ（登録商標）４８８（ＩＮＶＩＴＲＯＧＥＮ（商標）、カタログ＃３５５０２）で＞２時間免疫染色する。Ｎｅｕｒｏｎａｌ  Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ  ｖ４．０アルゴリズムを使用したハイコンテンツイメージングおよび分析のために、プレートを、ＮＯ緩衝液で１回、ＤＰＢＳで２回洗浄し、密封し、ＣＥＬＬＩＮＳＩＧＨＴ（商標）機器に充填する。アルゴリズムによって生成されたデータを、ＧｒａｐｈＰａｄ  ＰＲＩＳＭ（登録商標）ソフトウェアを用いてＩＣ５０の計算のために処理する。結果を、表２に示す。
【表２】
2021514960.tif 000003
【００５１】
例示される抗ＴｒｋＡ抗体は、ＮＧＦ誘導神経突起伸長の濃度依存的阻害を示す。例示される抗体ＤおよびＥは、ＮＧＦの不在下で神経突起伸長に対して一貫してより大きい刺激効果を示した。
【００５２】
実施例４．ｍＡｂ  Ａ〜ＥのヒトまたはラットＴｒｋＡのＮＧＦ誘導リン酸化の阻害（およびいくつかの比較データ）
ＴｒｋＡのラットまたはヒトＮＧＦ刺激リン酸化の阻害は、トランスフェクトされ、ヒト胚性腎細胞（ＨＥＫ２９３）または標準的な線維芽細胞（３Ｔ３）バックグラウンドで、それぞれ、ラットまたはヒトのいずれかのＴｒｋＡ受容体を発現する細胞において評価される。細胞をＰＢＳまたは試験抗体と５分間インキュベートした後、室温で１０μｇ／ｍＬのラットまたはヒトβ−ＮＧＦを用いて、または用いずに５分間刺激する。抗体濃度は、１．５ｍＬのエッペンドルフチューブ中３００〜４５０μＬのＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、カタログ＃２００１２−０２７）の体積で１μＭ〜０．１ｐＭの範囲である。試料をドライアイス上で凍結させ、抽出するまで−８０℃で保存する。細胞溶解緩衝液は、２×組織溶解緩衝液（ＣＥＬＬ  ＳＩＧＮＡＬＬＩＮＧ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ（登録商標）、カタログ＃９８０３Ｓ）からなり、１００Ｘ  ＨＡＬＴ（商標）プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤カクテル（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）ならびに１ｍＭのフッ化フェニルメチルスルホニルを含む。溶解緩衝液を各チューブに添加し、氷上で１０秒間均質化する（Ｑｉａｇｅｎ  Ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒ）。４℃で１５分間、１２，０００の相対遠心力（ＲＣＦ）で遠心分離した上清を、Ｐｒｉｃｅら（Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８２：３４−４２，２０１７）に記載されている方法を使用して、ＥＬＩＳＡ法で分析してｐＴｒｋＡを測定し、各試料は２つ組または４つ組で測定する。
【００５３】
ラットＴｒｋＡ捕捉抗体（Ｒ＆Ｄ  ＳＹＳＴＥＭＳ登録商標）、カタログ＃ＡＦ１０５６）またはヒトＴｒｋＡの捕捉抗体（Ｒ＆Ｄ  ＳＹＳＴＥＭＳ（登録商標）、カタログ＃ＭＡＢ１７５１）のいずれかを、炭酸−炭酸水素緩衝液（ＰＩＥＲＣＥ（商標）ＣＨＥＭＩＣＡＬ、カタログ＃２８３８２）で３μｇ／ｍＬに希釈し、１００μＬ／ウェルを使用して、黒色ＭＡＸＩＳＯＲＰ（商標）９６ウェルプレート（ＮＵＮＣ（商標）、カタログ＃４４６４７１）を４℃で一晩コーティングする。プレートを、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ約７．４（ＴＢＳ）を含有する２０ｍＭのＴｒｉｓ緩衝生理食塩水で洗浄し、室温で１時間、ＴＢＳ中３％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ、カタログ＃Ａ３０５９）で遮断した後、ふき取り乾燥し、密封し、４℃で保存した後、２週間以内に使用する。上記のホモジネート（１００μＬ）を各ウェルに添加し、４℃で一晩インキュベートする。プレートを、ＴＢＳＴ（０．０５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０を含むＴＢＳ、３Ｘ  ３００μＬ／ウェル）で洗浄し、１００μＬ／ウェルで１％ＢＳＡ／ＴＢＳＴ中１：２０，０００に希釈したウサギＰｈｏｓｐｈｏ−ＴｒｋＡ（Ｔｙｒ６７４／６７５）／ＴｒｋＢ（Ｔｙｒ７０６／７０７）（ＣＥＬＬ  ＳＩＧＮＡＬＬＩＮＧ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ（登録商標）、カタログ＃４６２１）を添加し、室温で２時間インキュベートする。プレートを前と同様に洗浄し、二次抗体のヤギ抗ウサギアルカリホスファターゼ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｓ、カタログ＃１１１−０５５−１４４）を、１％ＢＳＡ／ＴＢＳＴ中１：２０，０００に希釈し、１００μＬ／ウェルで添加し、室温で１時間インキュベートする。プレートをＴＢＳＴで５  Ｘ  ３００μＬ／ウェルで洗浄し、１００μＬ／ウェルのアルカリホスファターゼＣＤＰ−ｓｔａｒ基質（ＡＰＰＬＩＥＤ  ＢＩＯＳＹＳＴＥＭＳ（商標）、カタログ＃Ｔ２２１４）を添加する。発光増強プロトコル（ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  ｐｒｏｔｏｃｏｌ）を用いて、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（登録商標）（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）プレートリーダーで、プレートを３０分後に読み取る。得られるカウント毎秒（ＣＰＳ）は、式：１００  ＊（ＣＰＳ試料−ＣＰＳ対照）／（ＣＰＳ  ＮＧＦ−ＣＰＳ対照）を用いてＮＧＦシグナルのパーセントに変換され、例示される抗体の濃度に対してプロットされ、Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄ  ＰＲＩＳＭ（登録商標）７を使用して４係数曲線あてはめを決定して、ＩＣ５０／ＥＣ５０値を得る。
【表３】
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【表４】
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【表５】
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【表６】
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【００５４】
例示される抗ＴｒｋＡ抗体は、ラットおよびヒトのＴｒｋＡ受容体のＮＧＦ誘導リン酸化の濃度依存的阻害を示す。例示されるｍＡｂ  Ｂを他の２つの独立した実験において試験し、実験の完全なセットを表７にまとめる。主張される（ｐｒｏｐｏｒｔｅｄ）ＴｒｋＡ受容体抗体ｍＡｂ  １およびｍＡｂ  ２は、ヒトＴｒｋＡ受容体のＮＧＦ誘導リン酸化を阻害（ＩＣ５０＞１０００ｎＭ）できなかった。（ｍＡｂ  １およびｍＡｂ２は、以下に概説するように作製および精製された。）
【表７】
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【００５５】
実施例５．ｍＡｂ  ＡのインビトロでのＴｒｋＡ受容体抗体の内部移行
ｍＡｂ  Ａの合計および内部移行に対応する蛍光シグナルは、４つの異なる細胞株（ヒトＴｒｋＡ  ３Ｔ３、ＳＫＮＳＨ神経芽細胞腫、ラットＴｒｋＡ  ＨＥＫ２９３、およびＰＣ１２褐色細胞腫）においてハイコンテンツ生細胞イメージングアッセイを実施することによって測定される。簡潔に、３３ｎＭ（５μｇ／ｍＬ）のｍＡｂ  Ａを、培養培地中で、ＤＹＬＩＧＨＴ（登録商標）６５０（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ、カタログ＃６２２６６）またはｐＨＡｂ色素（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ＃Ｇ９８４５）のいずれかで標識した０．２ｕＭ（１０μｇ／ｍＬ）の抗ヒトＩｇＧＦｃγ断片特異的Ｆａｂ断片（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、カタログ＃１０９−００７−００８）と混合し、９６ウェルプレートで、３７℃で成長させた生細胞と一晩インキュベートする。翌日、細胞を洗浄し、ＮＵＣＢＬＵＥ（登録商標）Ｈｏｅｃｈｓｔ色素（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ、カタログ＃Ｒ３７６０５）と２０分間インキュベートし、再び洗浄し、ＣＹＴＡＴＩＯＮ（商標）５  Ｈｉｇｈ  Ｃｏｎｔｅｎｔ  Ｉｍａｇｅｒ（ＢＩＯＴＥＫ（登録商標））を用いて撮像する。ＤＹＬＩＧＨＴ（登録商標）６５０は、総抗体レベルをシグナル測定し、一方ｐＨＡｂ  ｐＨセンサー色素は、内部移行した蛍光のみをシグナル測定する。各ウェルのシグナルの強度をＨｏｅｃｈｓｔ染色された核の数で割って、細胞あたりのシグナル強度を決定する。バックグラウンドシグナルは、ヒトＩｇＧアイソタイプ対照から決定され、最終値から差し引かれる。次に、内部移行した蛍光シグナルは、細胞株にわたって相対的蛍光を決定するために、ＤＹＬＩＧＨＴ（登録商標）６５０により総抗体蛍光に正規化される。
【表８】
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【００５６】
実施例６．ｍＡｂ  ＡのインビボでのＣＦＡ誘導歩行障害の減弱
関節内腔に送達された完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）によって誘導される時間的および空間的歩行特徴の減弱は、前に記載されるように（Ａｄａｍｓら、２０１６）本発明のｍＡｂ  Ａで評価される。簡潔に、試験開始時の体重が１７５〜２０９ｇのメスのスプラーグドーリーラット（Ｅｎｖｉｇｏ）を集団で飼育し、試験中を除いて食餌および水は自由に摂取可能である。ラットは、試験の開始時にＥｘｅｒＧａｉｔトレッドミル装置（Ｃｏｌｕｍｂｕｓ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）への馴化セッションを受ける。デジタルカメラ（Ｂａｓｌｅｒ）は、ラットがプレキシガラスチャンバー内に収納された長さ約１０．５インチｘ幅３．５インチのトレッドミルベルトを歩く間、１００フレーム／秒で活動を記録する。馴化セッションの間、トレッドミルを止めてラットを約３０秒間チャンバーに入れる。トレッドミルを作動させ、ラットが前へ歩くのを２回試みる間に、３ｃｍ／秒、８ｃｍ／秒、１２ｃｍ／秒、１５ｃｍ／秒に徐々にゆっくり増加させる。馴化後、ラットは、０．４ｍｇ／Ｌ（１ｍＬ／ｋｇ）の１０ｍｇ／ｋｇのＩｇＧ４陰性対照、０．１、１、もしくは１０ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ  Ａ、または陽性対照を形成するように、フロイント不完全アジュバント（ＩＦＡ，ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ  ＬＬＣ、カタログ＃：６４２８６１、ロット＃：０７２６３）と混合される、５０μＬの完全フロイントアジュバント（１ｍｇ／ｍＬの濃度のＣＦＡ、Ｓｉｇｍａロット＃：ＳＬＢＫ１７３１Ｖ）の関節内腔注射を受ける。ｍＡｂ  Ａ（ロット番号ＢＥ０５３６６−０４８）は、初期濃度１２．４ｍｇ／ｍＬ〜ＰＢＳ中０．１、１、および１０ｍｇ／ｍＬに希釈される。対照ＩｇＧ４ＰＡＡは、ＰＢＳ中１４．５ｍｇ／ｍＬ〜１０ｍｇ／ｍＬに希釈される。試験セッションは、ＣＦＡ投与の１、２、および３日後に実施される。各試験セッションで、ラットをチャンバーに入れ、トレッドミルを０ｃｍ／秒から１６ｃｍ／秒にゆっくりと傾斜させる。ビデオは、十分な数のフレーム（約１２００〜２０００フレーム）上を歩くラットを１６ｃｍ／秒で記録する。依存測定には、各肢の動作範囲（スタンスの開始時からスタンスの終了時までの、後足から体の正中線までの距離の減算）、スタンス／スイング比（各肢についてスタンス時間をスイング時間で割ったもの）、正規化されたスタンス距離（スタンス期のストライドの時間のパーセントに総ストライド長を掛けたもの）、および足跡サイズ（トレッドミルと接触している肢を捕捉するプリセットされた色条件により決定される、足跡で検出されたピクセル数）が含まれる。これらの４つのエンドポイントは、対照肢からの変化のパーセンテージを提供するために、ＣＦＡが注射されない反対側の肢と比較することにより、指標尺度に変換される。次に、４つすべての尺度を合計して、歩行指数スコアを提供する。反復測定ＡＮＯＶＡは、０．０５のアルファレベルで行われ、その後ＩｇＧ４対照に対するダネットの事後比較が行われる。ｍＡｂ  Ａの１ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇの用量レベルは両方とも、複合歩行指数スコア対ＩｇＧ４対照において統計的に有意な改善を示した（表の＊で示される）。
【表９】
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【００５７】
実施例７．ｍＡｂ  Ａの脳、皮膚、および後根神経節におけるエクスビボでのＴｒｋＡのＮＧＦ誘導リン酸化の阻害
ＴｒｋＡのＮＧＦ刺激リン酸化の阻害は、脳、皮膚、または後根神経節組織においてエクスビボで評価される。メスのスプラーグドーリーラットを安楽死させ、１つの海馬を、１００μＬＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、カタログ＃２００１２−０２７）または１００μＬのラットβ−ＮＧＦ（ＰＢＳ中１０μｇ／ｍＬ）のいずれかを含有する２ｍＬのエッペンドルフチューブあたり１つの尾状核脳領域と組み合わせる。同様に、２つの６ｍｍの皮膚パンチを後足の肉球から採取し、１５０μＬのＰＢＳまたは１５０μＬのラットβ−ＮＧＦ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ＃Ｎ−２５１３、ＰＢＳ中１０μｇ／ｍＬ）を含有する２ｍＬのチューブに入れる。後根神経節を解剖し、２００μＬのＰＢＳまたは１５０μＬのラットβ−ＮＧＦ（ＰＢＳ中１０μｇ／ｍＬ）を含有する２ｍＬのチューブに１０の神経節を入れる。２つの５ｍｍステンレス鋼ビーズを各試料に追加し、手で１０秒間振とうし、室温で５分間インキュベートする。試料をドライアイス上で凍結させ、抽出するまで−８０℃で保存する。２×組織溶解緩衝液（ＣＥＬＬ  ＳＩＧＮＡＬＩＮＧ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ（登録商標）、カタログ＃９８０３Ｓ）、１Ｘ  ＨＡＬＴ（商標）プロテアーゼ、ホスファターゼ阻害剤カクテル（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ＃７８４４１）、および１ｍＭのフッ化フェニルメタンスルホニルからなる細胞溶解緩衝液を各チューブに添加し（総体積５００μＬを得る）、３０Ｈｚ  ２ｘ３分に設定されたＱｉａｇｅｎ  ｔｉｓｓｕｅｌｙｚｅｒを使用して均質化する。４℃で１５分間、１２，０００ＲＣＦで遠心分離した上清を、Ｐｒｉｃｅら（Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８２：３４−４２，２０１７）に記載されている手順を使用して、ＥＬＩＳＡ法で分析してｐＴｒｋＡを測定する。
【００５８】
ラットＴｒｋＡ捕捉抗体（Ｒ＆ＤＳＹＳＴＥＭＳ（登録商標）、カタログ＃ＡＦ１０５６）またはヒトＴｒｋＡの捕捉抗体（Ｒ＆Ｄ  ＳＹＳＴＥＭＳ（登録商標）、カタログ＃ＭＡＢ１７５１）のいずれかを、炭酸−炭酸水素緩衝液（ＴＨＥＲＭＯ  ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ（商標）ＰＩＥＲＣＥ（商標）ＣＨＥＭＩＣＡＬ、カタログ＃２８３８２）中３μｇ／ｍＬに希釈し、１００μＬ／ウェルを使用して、黒色ＭＡＸＩＳＯＲＰ（商標）９６ウェルプレート（ＮＵＮＣ（商標）、カタログ＃４４６４７１）を４℃で一晩コーティングする。プレートを、ＴＢＳ中１５０ｍＭのＮａＣｌ  ＮａＣｌ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ＃Ｓ３０１４−５００Ｇ）、ｐＨ  ７．４（ＴＢＳ）を含有する２０ｍＭのＴｒｉｓ緩衝生理食塩水（ＩＮＶＩＴＲＯＧＥＮ（商標）、カタログ＃１５５６７−０２７）で洗浄し、室温で１時間、ＴＢＳ中３％のＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ＃Ａ３０５９）で遮断した後、ふき取り乾燥し、密封し、４℃で保存した後、２週間以内に使用する。上記のホモジネート（１００μＬ）を各ウェルに添加し、４℃で一晩インキュベートする。プレートを、ＴＢＳＴ（０．０５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ、カタログ＃  ＢＰ３３７１００）を含むＴＢＳ、３Ｘ３００μＬ／ウェル）で洗浄し、１００μＬ／ウェルで１％ＢＳＡ／ＴＢＳＴ中１：２０，０００に希釈したウサギＰｈｏｓｐｈｏ−ＴｒｋＡ（Ｔｙｒ６７４／６７５）／ＴｒｋＢ（Ｔｙｒ７０６／７０７）（ＣＥＬＬ  ＳＩＧＮＡＬＩＮＧ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ（登録商標）、カタログ＃４６２１）を添加し、穏やかな振盪機上でプレートを室温で２時間インキュベートする。プレートを前と同様に洗浄し、１％ＢＳＡ／ＴＢＳＴ中１：２０，０００に希釈した二次抗体のヤギ抗ウサギアルカリホスファターゼ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，ＩＮＣ．、カタログ＃１１１−０５５−１４４）を添加し（１００μＬ／ウェル）、室温で１時間インキュベートする。プレートをＴＢＳＴで５  Ｘ  ３００μＬ／ウェルで洗浄し、１００μＬ／ウェルのアルカリホスファターゼＣＤＰ−ｓｔａｒ基質（ＡＰＰＬＩＥＤ  ＢＩＯＳＹＳＴＥＭＳ（商標）、カタログ＃Ｔ２２１４）を添加する。発光増強プロトコルを用いて、ＥＮＶＩＳＩＯＮ（登録商標）（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）プレートリーダーで、プレートを３０分後に読み取る。各動物からの各組織試料のベースラインおよびＮＧＦ刺激について得られた平均カウント毎秒（ＣＰＳ）を表９に示す。
【表１０】
2021514960.tif 000011
【００５９】
本明細書に記載の抗体の対応するＤＮＡ配列を調製することができる。ｍＡｂ  Ａ、ｍＡｂ  Ｂ、ｍＡｂ  Ｃ、ｍＡｂ  Ｄ、およびｍＡｂ  ＥについてのそのようなＤＮＡ配列は、以下の表１０に示されるように本明細書に列記される。
【表１１】
2021514960.tif 000012
【００６０】
実施例８．ｍＡｂ  Ａ〜ＥのヒトＴｒｋ  ＡのＮＧＦへの結合の遮断
９６ウェルの高結合透明底マイクロタイタープレート（Ｍｉｃｒｏｌｏｎ、＃６５５０６１）の各列を、リン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．２（ＰＢＳ）中２μｇ／ｍＬに希釈した１００μＬ／ウェルの組換えヒトＴｒｋＡタンパク質を用いて４℃で一晩コーティングした。翌日、コーティング溶液を除去し、プレートを、２５℃で１時間、穏やかに振とうしながら、１５０μＬのカゼイン−ＰＢＳ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、＃３７５２８）で遮断した。次に、プレートを、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ＰＢＳＴ）を補充したＰＢＳで３回洗浄した。カゼイン−ＰＢＳ中２０ｎＭから開始する２倍希釈系列の例示される抗体が、ＩｇＧ４およびＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体とともに生成された。１００μＬの各希釈系列試料を、３７℃で３０分間、穏やかに振とうしながらウェルに添加した。次に、プレートをＰＢＳＴで３回洗浄した。ビオチン化組換えヒトＮＧＦ（ｂｔＮＧＦ）の１００ｎＭの溶液をカゼイン−ＰＢＳ緩衝液において調製し、１００μＬ／ウェルをプレートに添加し、３７℃で７５分間、穏やかに振とうしながらインキュベートした。次に、プレートをＰＢＳＴで３回洗浄した。カゼイン−ＰＢＳ中の１ｍｇ／ｍＬのストレプトアビジン−ＨＲＰ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、＃２１１３０）のストック溶液の１：３５００希釈液を調製し、３７℃で２０分間穏やかに振とうしながら、１００μＬを各ウェルに添加した。プレートをＰＢＳＴで３回洗浄した。１：１  ＴＭＢ：Ｈ２Ｏ２（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、＃１８５４０５０、＃１８５４０６０）の１００μＬ溶液を各ウェルに添加し、３分間インキュベートした。１００μＬの１ＭのＨ３ＰＯ４を各ウェルに添加することにより、反応を停止させた。４５０ｎｍでの吸光度（Ａｂｓ４５０）を、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  ３４０ＰＣプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して測定した。抗体濃度に対してＡｂｓ４５０をプロットし、ＳｉｇｍａＰｌｏｔ  １２．５（Ｓｙｓｔａｔ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｉｎｃ．）を使用して４係数曲線あてはめを決定し、ＩＣ５０値を得る。
【００６１】
例示されるｍＡｂ  Ａ〜Ｅは、試験された抗体濃度範囲内で、用量依存的様式でヒトＴｒｋＡのＮＧＦへの結合を遮断するが、ＩｇＧ４およびＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体は遮断しない（表１１に示すとおり）。
【表１２】
2021514960.tif 000013
【００６２】
実施例９．ｍＡｂ  １およびｍＡｂ  ２の操作、発現、精製
ｍＡｂ  １の哺乳動物発現用の発現ベクターは、特許第ＷＯ２０１６／０８７６７７Ａ１号で提供される軽鎖配列（配列番号２９）および重鎖配列（配列番号５７）を使用して生成された。したがって、ｍＡｂ  １は、ＷＯ２０１６／０８７６７７Ａ１の配列番号２９によって定義される軽鎖配列および配列番号５７によって定義される重鎖配列を有する。ｍＡｂ  ２の哺乳動物発現用の発現ベクターは、特許第ＵＳ２０１３／０３３６９６４Ａ１号で提供される軽鎖配列（配列番号９１）および重鎖配列（配列番号９０）を使用して生成された。したがって、ｍＡＢ２は、米国特許出願公開２０１３／０３３６９６４の配列番号９１によって定義される軽鎖配列および配列番号９０によって定義される重鎖配列を有する。
【００６３】
これらの抗体は、周知の方法による投与のために、生合成、精製、および製剤化することができる。チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）などの適切な宿主細胞は、２つのベクターが使用される場合は、所定のＨＣ：ＬＣベクター比を使用して抗体を分泌するための発現系で、または重鎖および軽鎖の両方をコードする単一ベクター系で、一時的または安定的のずれかでトランスフェクトされる。これらの一般的に使用される宿主細胞からの抗体の発現および分泌に好適なベクターは周知である。抗体の発現および分泌後、培地を清澄化して細胞を除去する。清澄化した培地を、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）などの適合性のある緩衝液で平衡化したプロテインＡ親和性カラムに適用する。このカラムを、１ＭのＮａＣｌが補充された緩衝液で洗浄して、非特異的結合構成成分を除去する。結合した抗体を、例えば、ｐＨ約３．５のクエン酸ナトリウムを用いて溶出し、画分を、１Ｍの２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）プロパン−１，３−ジオール（Ｔｒｉｓ）緩衝液で中和する。抗体画分を、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）または分析的サイズ排除などによって検出し、次いでプールする。可溶性凝集体および多量体は、サイズ排除、疎水性相互作用、イオン交換、またはヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーを含む、一般的な技術によって効率的に除去することができる。本発明の例示される抗体は、一般的な技術を使用して濃縮および／または滅菌濾過される。これらのクロマトグラフィーステップ後の例示される抗体の純度は９５％を超え、試料は、−７０℃ですぐに凍結されるか、または４℃で数か月間保存され得る。ｍＡｂ  １およびｍＡｂ  ２がＴｒｋＡに結合し、かつ／またはシグナル伝達を阻害する能力は、実施例１０〜１２により評価され得る。
【００６４】
実施例１０．ｍＡｂ  Ｂ、ｍＡｂ  １およびｍＡｂ  ２の結合動態および親和性
ヒト、カニクイザル、ラット、マウス、およびウサギのＴｒｋＡに対する例示される抗体の結合動態および親和性は、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）８Ｋ機器（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の表面プラズモン共鳴アッセイを使用して、以下に記載されるように決定される。ヒトＴｒｋＡの２つの異なるアイソフォーム（アイソフォーム１およびアイソフォーム２）が、ヒトＴｒｋＢおよびヒトＴｒｋＣとともに評価される。ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）８Ｋは、ＨＢＳ−ＥＰ  ＋泳動用緩衝液［１０ｍＭの２−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル］エタンスルホン酸（ヘペスｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、０．０５％ポリソルベート２０界面活性剤（Ｐ２０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）］でプライミングされる。分析温度は３７℃に設定され、試料コンパートメントは１５℃に設定される。結合動態および親和性は、抗体捕捉法を用いた平行動態アッセイを使用して得られる。抗体は、Ｓｅｒｉｅｓ−Ｓ  Ｓｅｎｓｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ  ＣＭ５チップ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上に捕捉される。各チャネルでは、フローセル１（ＦＣ１）が緩衝液参照として指定され、フローセル２（ＦＣ２）が抗体捕捉用に指定される。８つすべてのチャネルのすべてのＦＣ２は、１０μＬ／分の流量で約８９応答単位（ＲＵ）の抗体を捕捉するように設定される。すべての抗体試料は、泳動用緩衝液に希釈することによって５μｇ／ｍＬに調製される。ヒトＴｒｋＡアイソフォーム２分析物は、泳動用緩衝液に希釈することによって、最終濃度４００、２００、１００、５０、２５、１２．５、６．２５、および３．１２５ｎＭに調製された。分析サイクルの前に、チップの表面を洗浄するために、ＦＣ１およびＦＣ２に１５秒の接触時間にわたって１００μＬ／分でグリシン（ｐＨ約１．５）を３回注入してチップを再生する。再生の後に、（１）ＦＣ２に、５μＬ／分で１５秒間、５μｇ／ｍＬのＩｇＧ４アイソタイプ対照抗体、（２）ＦＣ１およびＦＣ２に、泳動用緩衝液を３０μＬ／分で２５０秒間、そして解離を６００秒間、（３）１５秒間、１００μＬ／分でグリシン（ｐＨ約１．５）を注入することによるチップ表面の再生からなる条件付けステップが続く。各分析サイクルは、（１）８つすべてのＦＣ２で試験抗体を捕捉し、８つすべてのそれぞれのＦＣ１対は１０μＬ／分で緩衝液参照として使用する、（２）泳動用緩衝液洗浄ステップ、（３）１００μＬ／分でＴｒｋＡ分析物を、降順濃度でチャネル１〜８に１２０秒間注入する、（４）解離時間６００秒の緩衝液フローに戻る、（５）注入あたり１５秒間、１００μＬ／分でグリシン（ｐＨ約１．５）を２回注入することによりチップ表面を再生する、（６）最終泳動用緩衝液洗浄ステップ、からなる。これは、評価される各抗体に対して繰り返される。データを、参照を減算して、事前に定義された抗体の平行動態を使用して処理し、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）８Ｋ評価ソフトウェア（バージョン１．１．１．７４４２）を使用して１：１結合モデルにあてはめ、会合速度（オン速度、ｋｏｎ、Ｍ−１ｓ−１単位）および解離速度（オフ速度、ｋｏｆｆ、ｓ−１単位）を決定する。モル単位で、ＫＤ��ｋｏｆｆ／ｋｏｎの関係から平衡解離定数（ＫＤ）を計算する。平均（Ａｖｇ）ＫＤおよび標準偏差（ＳＤ）として報告される誤差は、３つの独立した実験から決定される。例示される抗体ｍＡｂ  ＢおよびｍＡｂ  １は、ヒトＴｒｋＡへの濃度依存的結合を示す。しかしながら、例示される抗体ｍＡｂ  ２は、注入されたヒトＴｒｋＡの最高濃度（４００ｎＭ）で観察可能な結合シグナルを示さず、結合応答シグナルは、理論上の最大半量の応答シグナルに達しない。結果として、ヒトＴｒｋＡに対するｍＡｂ  ２のＫＤは、＞４００ｎＭであると推定される。結果を、表１２に示す。
【表１３】
2021514960.tif 000014
【００６５】
実施例１１．ｍＡｂ  １およびｍＡｂ  ＢのヒトＴｒｋＡのＮＧＦ誘導リン酸化の阻害
抗体の前処理の１または２４時間後のＴｒｋＡのヒトＮＧＦ刺激リン酸化の阻害は、トランスフェクトされ、ヒトＴｒｋＡ受容体標準線維芽細胞（３Ｔ３）バックグラウンドを発現する細胞において評価される。方法は、以下を除いて、実施例４で説明したとおりである。標準の成長培地において標準の２４ウェルプレートに８００，０００細胞／ウェルで細胞を播種し、３７℃／５％ＣＯ２インキュベーターに１．５〜２時間入れて細胞を付着させる。培地またはヒトβ−ＮＧＦを添加する１時間または２４時間前のいずれかに、例示されるｍＡｂ  Ｂ、ＩｇＧ４対照ｍＡｂ、または主張されるＴｒｋＡ受容体抗体ｍＡｂ  １を、１μＭの最終濃度で培地に添加し、最終濃度１０μｇ／ｍＬを得た。室温で５分間インキュベートした後、培地を除去する。１ｍＬの上記の細胞溶解緩衝液を添加し、細胞をこすり落とし、ホモジネートを１．５ｍＬのエッペンドルフチューブに移し、ドライアイスで凍結させ、−８０℃で保存する。試料は、４℃で１５分間、１２，０００の相対遠心力（ＲＣＦ）で遠心分離した解凍した上清であり、実施例４に詳述されるように、Ｐｒｉｃｅら（Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８２：３４−４２，２０１７）に記載されている方法を使用して、ｐＴｒｋＡを測定するためにＥＬＩＳＡ法により分析されたタンパク質濃度およびタンパク質当量について分析される。
【００６６】
得られるカウント毎秒（ＣＰＳ）を、以下の表１３に示す。
【表１４】
2021514960.tif 000015
【００６７】
表Ｘの結果からわかるように、例示されるｍＡｂ  Ｂは、１または２４時間のいずれかでプレインキュベートしたとき、ヒトＴｒｋＡのＮＧＦ誘導リン酸化を同程度まで阻害した。対照的に、ｍＡｂ  １は、細胞と１または２４時間プレインキュベートしたとき、ヒトＴｒｋＡのＮＧＦ誘導リン酸化を阻害できなかった。
【００６８】
実施例１２．ｍＡｂ  ＢおよびｍＡｂ  １のヒトＴｒｋ  ＡのＮＧＦへの結合の遮断
９６ウェルの高結合透明底マイクロタイタープレート（Ｍｉｃｒｏｌｏｎ、＃６５５０６１）の各列を、リン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．２（ＰＢＳ）中２μｇ／ｍＬに希釈した１００μＬ／ウェルの組換えヒトＴｒｋＡタンパク質を用いて４℃で一晩コーティングした。翌日、コーティング溶液を除去し、プレートを、２５℃で１時間、穏やかに振とうしながら、１５０μＬのカゼイン−ＰＢＳ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、＃３７５２８）で遮断した。次に、プレートを、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ＰＢＳＴ）を補充したＰＢＳで３回洗浄した。カゼイン−ＰＢＳ中３００ｎＭから開始する３倍希釈系列のｍＡｂ  Ｂ、ｍＡｂ  １、およびＩｇＧ４アイソタイプ対照ｍＡｂが、生成された。１００μＬの各希釈系列試料を、３７℃で３０分間、穏やかに振とうしながらウェルに添加した。次に、プレートをＰＢＳＴで３回洗浄した。ビオチン化組換えヒトＮＧＦ（ｂｔＮＧＦ）の１００ｎＭの溶液をカゼイン−ＰＢＳ緩衝液において調製し、１００μＬ／ウェルをプレートに添加し、３７℃で７５分間、穏やかに振とうしながらインキュベートした。バックグラウンドシグナルを評価するためにｂｔＮＧＦが試料から除外された、カゼイン−ＰＢＳ緩衝液対照列が含まれた。次に、プレートをＰＢＳＴで３回洗浄した。カゼイン−ＰＢＳ中の１ｍｇ／ｍＬのストレプトアビジン−ＨＲＰ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、＃２１１３０）のストック溶液の１：３５００希釈液を調製し、３７℃で２０分間穏やかに振とうしながら、１００μＬを各ウェルに添加した。プレートをＰＢＳＴで３回洗浄した。１：１  ＴＭＢ：Ｈ２Ｏ２（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、＃１８５４０５０、＃１８５４０６０）の１００μＬ溶液を各ウェルに添加し、３分間インキュベートした。１００μＬの１Ｍ  Ｈ３ＰＯ４を各ウェルに添加することにより、反応を停止させた。４５０ｎｍでの吸光度（Ａｂｓ４５０）を、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  ３４０ＰＣプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して測定した。抗体濃度に対してＡｂｓ４５０をプロットした。ＮＧＦへのＴｒｋＡ結合の完全な遮断は、Ａｂｓ４５０が、試験された最高抗体濃度で緩衝液ベースラインのレベルに達したかどうかによって決定された。結果を、表１４にまとめる。
【００６９】
結合シグナルが試験された最高抗体濃度で緩衝液対照ベースラインに達したため、例示されるｍＡｂ  Ｂは、用量依存的様式でＴｒｋＡのＮＧＦへの完全な遮断を示した。結合シグナルが試験された最高抗体濃度で緩衝液対照ベースラインに達しなかったため、分子ｍＡｂ  １は、試験された濃度範囲内でＴｒｋＡのＮＧＦへの完全な遮断を示さなかった。代わりに、ｍＡｂ  １の結合シグナルは、緩衝液対照ベースラインよりも高い結合シグナルでプラトーに達した。これは、ｍＡｂ  １がＮＧＦへのＴｒｋＡ結合の部分的な遮断物であることを示唆する。ＩｇＧ４アイソタイプ対照ｍＡｂは、試験した濃度範囲内でＮＧＦへのＴｒｋＡ結合を遮断しない。
【表１５】
2021514960.tif 000016
【００７０】
配列
例示されるＨＣ＃１（ヒトＩｇＧ４ＰＡＡ  ／カッパ）（配列番号１）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＧＶＳＩＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＥＴＴＳＳＧＴＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ
【００７１】
例示されるＨＣ＃２（ヒトＩｇＧ１ＥＮ  ／カッパ）（配列番号２）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＧＶＳＩＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＥＴＴＳＳＧＴＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
【００７２】
例示されるＨＣＤＲ１（配列番号３）
ＡＡＳＧＦＴＦＳＧＶＳＩＮ
【００７３】
例示されるＨＣＤＲ２（配列番号４）
ＳＥＴＴＳＳＧＴＩＹＹＡＤＳＶＫＧ
【００７４】
例示されるＨＣＤＲ３（配列番号５）
ＡＲＳＹＹＹＧＭＤＶ
【００７５】
例示されるＬＣ（配列番号６）
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＳＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＲＸａａＧＮＴＹＬＳＷＬＱＱＲＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＫＩＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＡＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＡＲＱＦＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列中、残基３３のＸａａは、Ｎ、Ａ、またはＱのうちの１つである。
【００７６】
例示されるＬＣＤＲ１（配列番号７）
ＲＳＳＱＳＬＶＨＲＸａａＧＮＴＹＬＳ
配列中、残基１０のＸａａは、Ｎ、Ａ、またはＱのうちの１つである。
【００７７】
例示されるＬＣＤＲ２（配列番号８）
ＹＫＩＳＮＲＦＳ
【００７８】
例示されるＬＣＤＲ３（配列番号９）
ＭＱＡＲＱＦＰＬＴ
【００７９】
例示されるＨＣＶＲ（配列番号１０）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＧＶＳＩＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＥＴＴＳＳＧＴＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
【００８０】
例示されるＬＣＶＲ（配列番号１１）
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＳＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＲＸａａＧＮＴＹＬＳＷＬＱＱＲＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＫＩＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＡＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＡＲＱＦＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列中、残基３３のＸａａは、Ｎ、Ａ、またはＱのうちの１つである。
【００８１】
ｍＡｂ  Ａの軽鎖ＤＮＡ配列（最適化されていないＤＮＡ）（配列番号１２）（最適化されていない）
ＧＡＴＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＡＣＴＣＴＣＣＴＣＡＣＣＴＧＴＣＡＣＣＣＴＴＧＧＡＣＡＧＣＣＧＧＣＣＴＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＴＣＴＡＧＴＣＡＡＡＧＴＣＴＣＧＴＡＣＡＣＡＧＡＧＣＴＧＧＡＡＡＣＡＣＣＴＡＣＴＴＧＡＧＴＴＧＧＣＴＴＣＡＧＣＡＧＡＧＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＣＣＴＣＣＡＡＧＡＣＴＣＣＴＡＡＴＴＴＡＴＡＡＧＡＴＴＴＣＴＡＡＣＣＧＧＴＴＣＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＧＡＣＡＧＡＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＧＣＡＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＡＣＴＧＡＡＡＡＴＣＡＧＣＡＧＧＧＴＧＧＡＡＧＣＴＧＡＧＧＡＴＧＴＣＧＧＡＧＴＴＴＡＴＴＡＴＴＧＣＡＴＧＣＡＡＧＣＴＡＧＡＣＡＡＴＴＴＣＣＧＣＴＣＡＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＣ
【００８２】
ｍＡｂ  Ａの重鎖ＤＮＡ配列（最適化されていないＤＮＡ）（配列番号１３）（最適化されていない）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＡＧＧＡＧＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＴＧＧＣＧＴＣＡＧＣＡＴＡＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＴＣＡＴＣＣＧＡＧＡＣＴＡＣＡＡＧＴＡＧＴＧＧＴＡＣＡＡＴＡＴＡＣＴＡＣＧＣＡＧＡＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡＣＴＣＡＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＡＧＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＴＡＴＧＧＡＣＧＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＣＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＧＣＴＡＧＣＧＣＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＡＧＣＡＣＣＴＣＣＧＡＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＡＧＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＴＡＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＧＧＧＧＧＡＣＣＡＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＧＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＧＣＣＴＣＣＣＧＴＣＣＴＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＡＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＧＧＣＴＡＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＴ
【００８３】
ｍＡｂ  Ｂの軽鎖ＤＮＡ配列（コドン最適化）（配列番号１４）（最適化）
ＧＡＣＡＴＣＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＣＣＣＴＴＴＡＴＣＣＴＣＣＣＣＣＧＴＴＡＣＡＣＴＧＧＧＣＣＡＧＣＣＣＧＣＴＴＣＣＡＴＣＴＣＴＴＧＴＣＧＴＴＣＣＴＣＣＣＡＧＴＣＴＴＴＡＧＴＧＣＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＡＡＣＡＣＣＴＡＴＴＴＡＴＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＡＧＧＣＣＣＧＧＴＣＡＧＣＣＴＣＣＴＣＧＴＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＡＧＡＴＣＡＧＣＡＡＣＣＧＧＴＴＣＴＣＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＧＡＴＣＧＴＴＴＴＴＣＣＧＧＣＴＣＣＧＧＡＧＣＣＧＧＣＡＣＣＧＡＴＴＴＣＡＣＴＴＴＡＡＡＧＡＴＣＴＣＴＣＧＴＧＴＧＧＡＧＧＣＣＧＡＧＧＡＴＧＴＧＧＧＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＡＴＧＣＡＡＧＣＴＣＧＴＣＡＧＴＴＣＣＣＴＣＴＧＡＣＣＴＴＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧＣＧＴＡＣＧＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴ
【００８４】
ｍＡｂ  ＢおよびｍＡｂ  Ｃの重鎖ＤＮＡ配列（コドン最適化）（配列番号１５）（最適化）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＣＧＴＧＧＡＧＴＣＣＧＧＣＧＧＡＧＧＡＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＣＧＧＴＧＧＣＴＣＴＴＴＡＡＧＧＣＴＧＴＣＴＴＧＴＧＣＣＧＣＴＴＣＣＧＧＣＴＴＣＡＣＣＴＴＣＴＣＣＧＧＣＧＴＧＴＣＣＡＴＣＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＧＧＣＡＡＧＣＴＣＣＣＧＧＴＡＡＧＧＧＴＴＴＡＧＡＧＴＧＧＧＴＧＴＣＣＴＣＣＧＡＧＡＣＣＡＣＣＴＣＣＴＣＣＧＧＣＡＣＣＡＴＣＴＡＣＴＡＣＧＣＣＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＴＣＧＴＧＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡＣＴＣＴＴＴＡＴＡＴＴＴＡＣＡＧＡＴＧＡＡＣＴＣＴＴＴＡＡＧＧＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＴＣＧＴＴＣＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＡＴＧＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＴＡＣＣＡＣＣＧＴＧＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＣＧＣＴＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＣＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＧＣＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＡＧＣＡＣＣＴＣＣＧＡＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＡＧＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＴＡＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＡＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＧＧＣＡＧＣＴＧＧＧＧＧＡＣＣＡＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＧＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＧＣＣＴＣＣＣＧＴＣＣＴＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＧＧＣＴＡＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＴ
【００８５】
ｍＡｂ  Ｃの軽鎖ＤＮＡ配列（コドン最適化）（配列番号１６）（最適化）
ＧＡＣＡＴＣＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＣＣＣＴＴＴＡＴＣＣＴＣＣＣＣＣＧＴＴＡＣＡＣＴＧＧＧＣＣＡＧＣＣＣＧＣＴＴＣＣＡＴＣＡＧＣＴＧＴＡＧＧＴＣＣＴＣＣＣＡＧＴＣＴＴＴＡＧＴＧＣＡＴＣＧＴＣＡＡＧＧＴＡＡＣＡＣＡＴＡＴＴＴＡＴＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＡＧＧＣＣＣＧＧＴＣＡＡＣＣＴＣＣＴＣＧＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＡＧＡＴＣＴＣＣＡＡＣＣＧＧＴＴＣＴＣＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＧＡＴＡＧＧＴＴＣＴＣＣＧＧＣＴＣＣＧＧＣＧＣＴＧＧＣＡＣＣＧＡＴＴＴＣＡＣＴＴＴＡＡＡＧＡＴＣＴＣＴＣＧＴＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＧＴＧＧＧＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＡＴＧＣＡＡＧＣＴＣＧＴＣＡＧＴＴＣＣＣＴＴＴＡＡＣＣＴＴＣＧＧＡＧＧＣＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧＣＧＴＡＣＧＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴ
【００８６】
ｍＡｂ  Ｄの軽鎖ＤＮＡ配列（コドン最適化）（配列番号１７）（最適化）
ＧＡＣＡＴＣＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＣＣＣＴＴＴＡＴＣＣＴＣＣＣＣＣＧＴＴＡＣＡＣＴＧＧＧＣＣＡＧＣＣＣＧＣＴＴＣＣＡＴＣＴＣＴＴＧＴＣＧＴＴＣＣＴＣＣＣＡＧＴＣＴＴＴＡＧＴＧＣＡＴＣＧＴＧＣＴＧＧＣＡＡＣＡＣＣＴＡＴＴＴＡＴＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＡＧＧＣＣＣＧＧＴＣＡＧＣＣＴＣＣＴＣＧＴＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＡＧＡＴＣＡＧＣＡＡＣＣＧＧＴＴＣＴＣＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＧＡＴＣＧＴＴＴＴＴＣＣＧＧＣＴＣＣＧＧＡＧＣＣＧＧＣＡＣＣＧＡＴＴＴＣＡＣＴＴＴＡＡＡＧＡＴＣＴＣＴＣＧＴＧＴＧＧＡＧＧＣＣＧＡＧＧＡＴＧＴＧＧＧＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＡＴＧＣＡＡＧＣＴＣＧＴＣＡＧＴＴＣＣＣＴＣＴＧＡＣＣＴＴＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧＣＧＴＡＣＧＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴ
【００８７】
ｍＡｂ  Ｅの軽鎖ＤＮＡ配列（コドン最適化）（配列番号１８）（最適化）
ＧＡＣＡＴＣＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＣＣＣＴＴＴＡＴＣＣＴＣＣＣＣＣＧＴＴＡＣＡＣＴＧＧＧＣＣＡＧＣＣＣＧＣＴＴＣＣＡＴＣＡＧＣＴＧＴＡＧＧＴＣＣＴＣＣＣＡＧＴＣＴＴＴＡＧＴＧＣＡＴＣＧＴＣＡＡＧＧＴＡＡＣＡＣＡＴＡＴＴＴＡＴＣＴＴＧＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＡＧＧＣＣＣＧＧＴＣＡＡＣＣＴＣＣＴＣＧＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＡＧＡＴＣＴＣＣＡＡＣＣＧＧＴＴＣＴＣＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＧＡＴＡＧＧＴＴＣＴＣＣＧＧＣＴＣＣＧＧＣＧＣＴＧＧＣＡＣＣＧＡＴＴＴＣＡＣＴＴＴＡＡＡＧＡＴＣＴＣＴＣＧＴＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＧＴＧＧＧＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＡＴＧＣＡＡＧＣＴＣＧＴＣＡＧＴＴＣＣＣＴＴＴＡＡＣＣＴＴＣＧＧＡＧＧＣＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧＣＧＴＡＣＧＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴ
【００８８】
ｍＡｂ  ＤおよびｍＡｂ  Ｅの重鎖ＤＮＡ配列（コドン最適化）（配列番号１９）（最適化）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＣＧＴＧＧＡＧＴＣＣＧＧＣＧＧＡＧＧＡＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＣＧＧＴＧＧＣＴＣＴＴＴＡＡＧＧＣＴＧＴＣＴＴＧＴＧＣＣＧＣＴＴＣＣＧＧＣＴＴＣＡＣＣＴＴＣＴＣＣＧＧＣＧＴＧＴＣＣＡＴＣＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＧＧＣＡＡＧＣＴＣＣＣＧＧＴＡＡＧＧＧＴＴＴＡＧＡＧＴＧＧＧＴＧＴＣＣＴＣＣＧＡＧＡＣＣＡＣＣＴＣＣＴＣＣＧＧＣＡＣＣＡＴＣＴＡＣＴＡＣＧＣＣＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＴＣＧＴＧＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡＣＴＣＴＴＴＡＴＡＴＴＴＡＣＡＧＡＴＧＡＡＣＴＣＴＴＴＡＡＧＧＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＴＣＧＴＴＣＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＡＴＧＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＴＡＣＣＡＣＣＧＴＧＡＣＡＧＴＣＴＣＣＴＣＣＧＣＴＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＣＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＣＧＧＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＧＣＣＧＡＧＧＧＧＧＣＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＴＣＣＴＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡ
【００８９】
ヒトＴｒｋＡ細胞外ドメインアイソフォーム１（３３〜４１４）（精製タグ：Ｎ末端８Ｘヒスチジン）（配列番号２０）
ＨＨＨＨＨＨＨＨＡＡＰＣＰＤＡＣＣＰＨＧＳＳＧＬＲＣＴＲＤＧＡＬＤＳＬＨＨＬＰＧＡＥＮＬＴＥＬＹＩＥＮＱＱＨＬＱＨＬＥＬＲＤＬＲＧＬＧＥＬＲＮＬＴＩＶＫＳＧＬＲＦＶＡＰＤＡＦＨＦＴＰＲＬＳＲＬＮＬＳＦＮＡＬＥＳＬＳＷＫＴＶＱＧＬＳＬＱＥＬＶＬＳＧＮＰＬＨＣＳＣＡＬＲＷＬＱＲＷＥＥＥＧＬＧＧＶＰＥＱＫＬＱＣＨＧＱＧＰＬＡＨＭＰＮＡＳＣＧＶＰＴＬＫＶＱＶＰＮＡＳＶＤＶＧＤＤＶＬＬＲＣＱＶＥＧＲＧＬＥＱＡＧＷＩＬＴＥＬＥＱＳＡＴＶＭＫＳＧＧＬＰＳＬＧＬＴＬＡＮＶＴＳＤＬＮＲＫＮＶＴＣＷＡＥＮＤＶＧＲＡＥＶＳＶＱＶＮＶＳＦＰＡＳＶＱＬＨＴＡＶＥＭＨＨＷＣＩＰＦＳＶＤＧＱＰＡＰＳＬＲＷＬＦＮＧＳＶＬＮＥＴＳＦＩＦＴＥＦＬＥＰＡＡＮＥＴＶＲＨＧＣＬＲＬＮＱＰＴＨＶＮＮＧＮＹＴＬＬＡＡＮＰＦＧＱＡＳＡＳＩＭＡＡＦＭＤＮＰＦＥＦＮＰＥＤＰＩＰＶＳＦＳＰＶＤＴＮＳＴＳＧＤＰＶＥＫＫＤＥＴ
【００９０】
ヒトＴｒｋＡ細胞外ドメインアイソフォーム２（３３〜４０８）（精製タグ：Ｎ末端８Ｘヒスチジン）（配列番号２１）
ＨＨＨＨＨＨＨＨＡＡＰＣＰＤＡＣＣＰＨＧＳＳＧＬＲＣＴＲＤＧＡＬＤＳＬＨＨＬＰＧＡＥＮＬＴＥＬＹＩＥＮＱＱＨＬＱＨＬＥＬＲＤＬＲＧＬＧＥＬＲＮＬＴＩＶＫＳＧＬＲＦＶＡＰＤＡＦＨＦＴＰＲＬＳＲＬＮＬＳＦＮＡＬＥＳＬＳＷＫＴＶＱＧＬＳＬＱＥＬＶＬＳＧＮＰＬＨＣＳＣＡＬＲＷＬＱＲＷＥＥＥＧＬＧＧＶＰＥＱＫＬＱＣＨＧＱＧＰＬＡＨＭＰＮＡＳＣＧＶＰＴＬＫＶＱＶＰＮＡＳＶＤＶＧＤＤＶＬＬＲＣＱＶＥＧＲＧＬＥＱＡＧＷＩＬＴＥＬＥＱＳＡＴＶＭＫＳＧＧＬＰＳＬＧＬＴＬＡＮＶＴＳＤＬＮＲＫＮＶＴＣＷＡＥＮＤＶＧＲＡＥＶＳＶＱＶＮＶＳＦＰＡＳＶＱＬＨＴＡＶＥＭＨＨＷＣＩＰＦＳＶＤＧＱＰＡＰＳＬＲＷＬＦＮＧＳＶＬＮＥＴＳＦＩＦＴＥＦＬＥＰＡＡＮＥＴＶＲＨＧＣＬＲＬＮＱＰＴＨＶＮＮＧＮＹＴＬＬＡＡＮＰＦＧＱＡＳＡＳＩＭＡＡＦＭＤＮＰＦＥＦＮＰＥＤＰＩＰＤＴＮＳＴＳＧＤＰＶＥＫＫＤＥＴ
【００９１】
ヒトＴｒｋＢ細胞外ドメイン（３２〜４３０）（精製タグ：Ｎ末端８Ｘヒスチジン）（配列番号２２）
ＨＨＨＨＨＨＨＨＣＰＴＳＣＫＣＳＡＳＲＩＷＣＳＤＰＳＰＧＩＶＡＦＰＲＬＥＰＮＳＶＤＰＥＮＩＴＥＩＦＩＡＮＱＫＲＬＥＩＩＮＥＤＤＶＥＡＹＶＧＬＲＮＬＴＩＶＤＳＧＬＫＦＶＡＨＫＡＦＬＫＮＳＮＬＱＨＩＮＦＴＲＮＫＬＴＳＬＳＲＫＨＦＲＨＬＤＬＳＥＬＩＬＶＧＮＰＦＴＣＳＣＤＩＭＷＩＫＴＬＱＥＡＫＳＳＰＤＴＱＤＬＹＣＬＮＥＳＳＫＮＩＰＬＡＮＬＱＩＰＮＣＧＬＰＳＡＮＬＡＡＰＮＬＴＶＥＥＧＫＳＩＴＬＳＣＳＶＡＧＤＰＶＰＮＭＹＷＤＶＧＮＬＶＳＫＨＭＮＥＴＳＨＴＱＧＳＬＲＩＴＮＩＳＳＤＤＳＧＫＱＩＳＣＶＡＥＮＬＶＧＥＤＱＤＳＶＮＬＴＶＨＦＡＰＴＩＴＦＬＥＳＰＴＳＤＨＨＷＣＩＰＦＴＶＫＧＮＰＫＰＡＬＱＷＦＹＮＧＡＩＬＮＥＳＫＹＩＣＴＫＩＨＶＴＮＨＴＥＹＨＧＣＬＱＬＤＮＰＴＨＭＮＮＧＤＹＴＬＩＡＫＮＥＹＧＫＤＥＫＱＩＳＡＨＦＭＧＷＰＧＩＤＤＧＡＮＰＮＹＰＤＶＩＹＥＤＹＧＴＡＡＮＤＩＧＤＴＴＮＲＳＮＥＩＰＳＴＤＶＴＤＫＴＧＲＥＨ
【００９２】
ヒトＴｒｋＣ細胞外ドメイン（３２〜４２８）（精製タグ：Ｎ末端８Ｘヒスチジン）（配列番号２３）
ＨＨＨＨＨＨＨＨＣＰＡＮＣＶＣＳＫＴＥＩＮＣＲＲＰＤＤＧＮＬＦＰＬＬＥＧＱＤＳＧＮＳＮＧＮＡＳＩＮＩＴＤＩＳＲＮＩＴＳＩＨＩＥＮＷＲＳＬＨＴＬＮＡＶＤＭＥＬＹＴＧＬＱＫＬＴＩＫＮＳＧＬＲＳＩＱＰＲＡＦＡＫＮＰＨＬＲＹＩＮＬＳＳＮＲＬＴＴＬＳＷＱＬＦＱＴＬＳＬＲＥＬＱＬＥＱＮＦＦＮＣＳＣＤＩＲＷＭＱＬＷＱＥＱＧＥＡＫＬＮＳＱＮＬＹＣＩＮＡＤＧＳＱＬＰＬＦＲＭＮＩＳＱＣＤＬＰＥＩＳＶＳＨＶＮＬＴＶＲＥＧＤＮＡＶＩＴＣＮＧＳＧＳＰＬＰＤＶＤＷＩＶＴＧＬＱＳＩＮＴＨＱＴＮＬＮＷＴＮＶＨＡＩＮＬＴＬＶＮＶＴＳＥＤＮＧＦＴＬＴＣＩＡＥＮＶＶＧＭＳＮＡＳＶＡＬＴＶＹＹＰＰＲＶＶＳＬＥＥＰＥＬＲＬＥＨＣＩＥＦＶＶＲＧＮＰＰＰＴＬＨＷＬＨＮＧＱＰＬＲＥＳＫＩＩＨＶＥＹＹＱＥＧＥＩＳＥＧＣＬＬＦＮＫＰＴＨＹＮＮＧＮＹＴＬＩＡＫＮＰＬＧＴＡＮＱＴＩＮＧＨＦＬＫＥＰＦＰＥＳＴＤＮＦＩＬＦＤＥＶＳＰＴＰＰＩＴＶＴＨＫＰＥＥＤ
【００９３】
カニクイザルＴｒｋＡ細胞外ドメイン（５９〜４３４）（精製タグ：Ｎ末端８Ｘヒスチジン）（配列番号２４）
ＨＨＨＨＨＨＨＨＡＳＰＣＰＤＡＣＣＰＨＧＳＳＧＬＲＣＴＲＤＧＡＬＤＳＬＨＨＬＰＧＡＥＮＬＴＥＬＹＩＥＮＱＱＨＬＱＨＬＥＬＲＤＬＲＧＬＧＥＬＲＮＬＴＩＶＫＳＧＬＲＦＶＡＰＤＡＦＨＦＴＰＲＬＳＲＬＮＬＳＦＮＡＬＥＳＬＳＷＫＴＶＱＧＬＳＬＱＥＬＶＬＳＧＮＰＬＨＣＳＣＡＬＲＷＬＱＲＷＥＥＥＧＬＧＧＶＨＥＱＫＬＱＣＨＧＱＧＰＬＡＨＭＰＮＡＳＣＧＶＰＭＬＫＶＱＶＰＮＡＳＶＤＶＧＤＤＶＬＬＷＣＱＶＥＧＲＧＬＥＱＡＧＷＩＬＴＥＬＥＱＳＡＴＶＭＫＳＧＡＬＰＳＬＧＬＴＬＡＮＶＴＳＤＬＮＲＫＮＶＴＣＷＡＥＮＤＶＧＲＡＥＬＳＶＱＶＮＶＳＦＰＡＳＶＱＬＨＴＡＶＥＭＨＨＷＣＩＰＦＳＶＤＧＱＰＡＰＳＬＲＷＬＦＮＧＳＶＬＮＥＴＳＦＩＦＴＥＦＬＥＰＡＡＮＥＴＶＲＨＧＣＬＲＬＮＱＰＴＨＶＮＮＧＮＹＴＬＬＡＡＮＰＦＧＱＡＳＡＳＩＭＡＡＦＭＤＮＰＦＥＦＮＰＥＤＰＩＰＤＴＮＳＴＳＧＤＰＶＥＫＫＤＥＴ
【００９４】
マウスＴｒｋＡ細胞外ドメイン（３９６〜４０１の欠失を伴う３３〜４１７）（精製タグ：Ｎ末端８Ｘヒスチジン）（配列番号２５）
ＨＨＨＨＨＨＨＨＡＡＳＣＲＥＶＣＣＰＶＧＰＳＧＬＲＣＴＲＡＧＳＬＤＴＬＲＧＬＲＧＡＧＮＬＴＥＬＹＶＥＮＱＱＨＬＱＲＬＥＦＥＤＬＱＧＬＧＥＬＲＳＬＴＩＶＫＳＧＬＲＦＶＡＰＤＡＦＲＦＴＰＲＬＳＨＬＮＬＳＳＮＡＬＥＳＬＳＷＫＴＶＱＧＬＳＬＱＤＬＴＬＳＧＮＰＬＨＣＳＣＡＬＦＷＬＱＲＷＥＱＥＧＬＣＧＶＨＴＱＴＬＨＤＳＧＰＧＤＱＦＬＰＬＧＨＮＴＳＣＧＶＰＴＶＫＩＱＭＰＮＤＳＶＥＶＧＤＤＶＦＬＱＣＱＶＥＧＬＡＬＱＱＡＤＷＩＬＴＥＬＥＧＡＡＴＶＫＫＦＧＤＬＰＳＬＧＬＩＬＶＮＶＴＳＤＬＮＫＫＮＶＴＣＷＡＥＮＤＶＧＲＡＥＶＳＶＱＶＳＶＳＦＰＡＳＶＨＬＧＬＡＶＥＱＨＨＷＣＩＰＦＳＶＤＧＱＰＡＰＳＬＲＷＬＦＮＧＳＶＬＮＥＴＳＦＩＦＴＱＦＬＥＳＡＬＴＮＥＴＭＲＨＧＣＬＲＬＮＱＰＴＨＶＮＮＧＮＹＴＬＬＡＡＮＰＹＧＱＡＡＡＳＶＭＡＡＦＭＤＮＰＦＥＦＮＰＥＤＰＩＰＤＧＮＳＴＳＲＤＰＶＥＫＫＤＥＴ
【００９５】
ラットＴｒｋＡ細胞外ドメイン（３３〜４１１）（精製タグ：Ｎ末端８Ｘヒスチジン）（配列番号２６）
ＨＨＨＨＨＨＨＨＡＡＳＣＲＥＴＣＣＰＶＧＰＳＧＬＲＣＴＲＡＧＴＬＮＴＬＲＧＬＲＧＡＧＮＬＴＥＬＹＶＥＮＱＲＤＬＱＲＬＥＦＥＤＬＱＧＬＧＥＬＲＳＬＴＩＶＫＳＧＬＲＦＶＡＰＤＡＦＨＦＴＰＲＬＳＨＬＮＬＳＳＮＡＬＥＳＬＳＷＫＴＶＱＧＬＳＬＱＤＬＴＬＳＧＮＰＬＨＣＳＣＡＬＬＷＬＱＲＷＥＱＥＤＬＣＧＶＹＴＱＫＬＱＧＳＧＳＧＤＱＦＬＰＬＧＨＮＮＳＣＧＶＰＳＶＫＩＱＭＰＮＤＳＶＥＶＧＤＤＶＦＬＱＣＱＶＥＧＱＡＬＱＱＡＤＷＩＬＴＥＬＥＧＴＡＴＭＫＫＳＧＤＬＰＳＬＧＬＴＬＶＮＶＴＳＤＬＮＫＫＮＶＴＣＷＡＥＮＤＶＧＲＡＥＶＳＶＱＶＳＶＳＦＰＡＳＶＨＬＧＫＡＶＥＱＨＨＷＣＩＰＦＳＶＤＧＱＰＡＰＳＬＲＷＦＦＮＧＳＶＬＮＥＴＳＦＩＦＴＱＦＬＥＳＡＬＴＮＥＴＭＲＨＧＣＬＲＬＮＱＰＴＨＶＮＮＧＮＹＴＬＬＡＡＮＰＹＧＱＡＡＡＳＩＭＡＡＦＭＤＮＰＦＥＦＮＰＥＤＰＩＰＤＴＮＳＴＳＲＤＰＶＥＫＫＤＥＴ
【００９６】
ウサギＴｒｋＡ細胞外ドメイン（３３〜４１４）（精製タグ：Ｃ末端ポリヒスチジンタグ（長さ不明））（配列番号２７）
ＡＡＬＣＰＤＶＣＣＰＲＧＰＳＧＬＬＣＴＲＰＧＡＬＤＲＬＲＨＬＰＧＩＥＮＬＴＥＬＹＬＥＮＱＮＬＱＨＬＴＬＧＤＬＲＧＬＲＥＬＲＮＬＡＩＶＮＳＧＬＱＳＶＡＴＤＡＦＲＦＴＰＲＬＳＨＬＮＬＳＦＮＡＬＥＳＬＳＷＫＴＶＱＧＬＰＬＱＥＬＶＬＳＧＮＳＬＲＣＳＣＡＬＲＷＬＱＲＷＥＥＥＧＬＡＧＶＲＥＱＫＬＲＣＳＥＳＥＰＬＡＬＭＰＮＡＳＣＧＭＰＴＬＫＶＱＭＰＮＧＳＶＤＶＧＤＳＶＦＬＱＣＱＶＥＧＱＧＬＥＫＡＧＷＳＬＴＥＬＥＥＬＡＴＶＭＩＱＫＳＥＤＬＰＴＬＲＬＴＬＡＮＶＴＳＤＬＮＲＫＮＶＴＣＷＡＥＮＤＶＧＲＴＥＶＳＶＱＶＮＶＳＦＰＡＳＶＱＬＨＴＡＶＥＭＨＨＷＣＩＰＦＳＶＤＧＱＰＡＰＳＬＨＷＬＦＮＧＳＶＬＮＥＴＳＦＩＦＴＥＦＬＥＰＡＡＮＥＴＭＲＨＧＣＬＲＬＮＱＰＴＨＶＮＮＧＮＹＴＬＬＡＴＮＰＳＧＱＡＡＡＳＩＭＡＡＦＭＤＮＰＦＥＦＮＰＥＤＰＩＰＶＳＦＳＰＶＤＡＮＳＴＳＧＤＰＶＥＫＫＤＥ
【配列表】
2021514960000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和2年8月21日(2020.8.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含むトロポミオシン受容体キナーゼ（ＴｒｋＡ）に結合する抗体であって、前記ＨＣＶＲが、相補性決定領域（ＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＶＲが、ＣＤＲ  ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列が、配列番号３であり、ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列が、配列番号４であり、ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列が、配列番号５であり、ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列が、配列番号７であり、ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列が、配列番号８であり、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が、配列番号９である、抗体。
【請求項２】
配列番号７の残基１０のＸａａがＡである、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
配列番号７の残基１０のＸａａがＱである、請求項１に記載の抗体。
【請求項４】
前記ＨＣＶＲのアミノ酸配列が、配列番号１０であり、前記ＬＣＶＲのアミノ酸配列が、配列番号１１である、請求項１に記載の抗体。
【請求項５】
配列番号１１の残基３３のＸａａがＡである、請求項４に記載の抗体。
【請求項６】
配列番号１１の残基３３のＸａａがＱである、請求項４に記載の抗体。
【請求項７】
重鎖（ＨＣ）および軽鎖（ＬＣ）を含むトロポミオシン受容体キナーゼ（ＴｒｋＡ）に結合する抗体であって、前記ＨＣのアミノ酸配列が、配列番号１および配列番号２からなる群から選択され、前記ＬＣのアミノ酸配列が、配列番号６である、抗体。
【請求項８】
各々が配列番号１のアミノ酸配列を有する２つのＨＣが存在し、各々が配列番号６のアミノ酸配列を有する２つのＬＣが存在する、請求項７に記載の抗体。
【請求項９】
配列番号６の残基３３のＸａａがＡである、請求項８に記載の抗体。
【請求項１０】
配列番号６の残基３３のＸａａがＱである、請求項８に記載の抗体。
【請求項１１】
各々が配列番号２のアミノ酸配列を有する２つのＨＣが存在し、各々が配列番号６のアミノ酸配列を有する２つのＬＣが存在する、請求項７に記載の抗体。
【請求項１２】
配列番号６の残基３３のＸａａがＡである、請求項１１に記載の抗体。
【請求項１３】
配列番号６の残基３３のＸａａがＱである、請求項１１に記載の抗体。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体と、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
【請求項１５】
疼痛を治療するための、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体を含む組成物。
【請求項１６】
前記疼痛が、術後疼痛、神経障害性疼痛、関節リウマチ疼痛、および変形性関節症疼痛のうちの１つである、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記疼痛が慢性疼痛である、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１８】
疼痛の治療のための薬剤の製造における請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体の使用。
【請求項１９】
前記疼痛が、術後疼痛、神経障害性疼痛、関節リウマチ疼痛、および変形性関節症疼痛のうちの１つである、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
前記疼痛が慢性疼痛である、請求項１８に記載の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４３】
本発明の抗体を含む薬学的組成物は、親経路（例えば、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、または経皮）によって、本明細書に記載の疾患または障害のリスクがあるか、またはそれを呈する患者に投与することができる。本発明の薬学的組成物は、「有効」量または「治療有効」量（本明細書で互換的に使用される）の本発明の抗体を含有する。有効量は、所望の治療結果を達成するのに必要な量（投与量および期間および投与手段で）を指す。抗体の有効量は、個体の病状、年齢、性別、および体重、ならびに抗体が個体において所望の応答を誘発する能力などの因子に応じて変動し得る。有効量はまた、本発明の抗体の任意の毒性効果または有害効果よりも治療的に有益な効果が上回る量である。いくつかの実施形態では、有効量は、臨床的に有意な疼痛の低減をもたらす。
本発明の様々な実施形態を以下に示す。
１．重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含むトロポミオシン受容体キナーゼ（ＴｒｋＡ）に結合する抗体であって、前記ＨＣＶＲが、相補性決定領域（ＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＶＲが、ＣＤＲ  ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列が、配列番号３であり、ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列が、配列番号４であり、ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列が、配列番号５であり、ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列が、配列番号７であり、ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列が、配列番号８であり、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が、配列番号９である、抗体。
２．配列番号７の残基１０のＸａａがＡである、上記１に記載の抗体。
３．配列番号７の残基１０のＸａａがＱである、上記１に記載の抗体。
４．前記ＨＣＶＲのアミノ酸配列が、配列番号１０であり、前記ＬＣＶＲのアミノ酸配列が、配列番号１１である、上記１に記載の抗体。
５．配列番号１１の残基３３のＸａａがＡである、上記４に記載の抗体。
６．配列番号１１の残基３３のＸａａがＱである、上記４に記載の抗体。
７．重鎖（ＨＣ）および軽鎖（ＬＣ）を含むトロポミオシン受容体キナーゼ（ＴｒｋＡ）に結合する抗体であって、前記ＨＣのアミノ酸配列が、配列番号１および配列番号２からなる群から選択され、前記ＬＣのアミノ酸配列が、配列番号６である、抗体。
８．各々が配列番号１のアミノ酸配列を有する２つのＨＣが存在し、各々が配列番号６のアミノ酸配列を有する２つのＬＣが存在する、上記７に記載の抗体。
９．配列番号６の残基３３のＸａａがＡである、上記８に記載の抗体。
１０．配列番号６の残基３３のＸａａがＱである、上記８に記載の抗体。
１１．各々が配列番号２のアミノ酸配列を有する２つのＨＣが存在し、各々が配列番号６のアミノ酸配列を有する２つのＬＣが存在する、上記７に記載の抗体。
１２．配列番号６の残基３３のＸａａがＡである、上記１１に記載の抗体。
１３．配列番号６の残基３３のＸａａがＱである、上記１１に記載の抗体。
１４．上記１〜１３のいずれかに記載の抗体と、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
１５．疼痛を治療する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の上記１〜１３のいずれかに記載の抗体を投与することを含む、方法。
１６．前記疼痛が、術後疼痛、神経障害性疼痛、関節リウマチ疼痛、および変形性関節症疼痛のうちの１つである、上記１５に記載の方法。
１７．前記疼痛が慢性疼痛である、上記１５に記載の方法。
１８．疼痛を治療する方法であって、それを必要とする患者に、上記１４に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
１９．前記疼痛が、術後疼痛、神経障害性疼痛、関節リウマチ疼痛、および変形性関節症疼痛のうちの１つである、上記１８に記載の方法。
２０．前記疼痛が慢性疼痛である、上記１８に記載の方法。
２１．療法における使用のための、上記１〜１３のいずれかに記載の抗体。
２２．疼痛の治療における使用のための、上記１〜１３のいずれかに記載の抗体。
２３．前記疼痛が、術後疼痛、関節リウマチ疼痛、神経障害性疼痛、および変形性関節症疼痛のうちの１つである、上記２２に記載の使用のための抗体。
２４．前記疼痛が慢性疼痛である、上記２２に記載の使用のための抗体。
２５．疼痛の治療のための薬剤の製造における上記１〜１３のいずれかに記載の抗体の使用。
２６．前記疼痛が、術後疼痛、神経障害性疼痛、関節リウマチ疼痛、および変形性関節症疼痛のうちの１つである、上記２５に記載の使用。
２７．前記疼痛が慢性疼痛である、上記２５に記載の使用。
【国際調査報告】
2021514960.tif 000017
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