(57)【要約】本発明は、式（１）、Ｘ−Ｔｂ−Ｖａ−Ｕ−Ｙ−Ｚ（１）のリンカー分子、及び前記リンカー分子を使用してペプチドを精製する方法に関する。リンカー分子は、部分Ｘを介して精製樹脂にカップリングし、脱離基Ｚの放出下で部分Ｙを介してペプチドにカップリングすることができる。Ｔは任意のスペーサー部分であり、Ｖは任意の電子吸引性部分である。Ｕは、少なくとも１つの電子求引性部分Ｖ、Ｗ、又はＥに結合されるアリール又は５員若しくは６員のヘテロアリールの部分である。リンカーは酸性条件下で安定しており、還元剤の添加時にペプチドを放出する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式１、Ｘ−Ｔｂ−Ｖａ−Ｕ−Ｙ−Ｚ（１）の化合物であって、式中、
−  Ｘは、式２、２ａ、３、３ａ又は４の、特に式２、２ａ、３又は３ａの、より特に式２又は２ａの部分から選択され、
【化１】
2021535139.tif 000052
式中、
−  各Ｒ１及びＲ２は、互いに独立して、Ｈ又はＢから選択され、少なくともＲ１又はＲ２は、Ｂであり、
−  Ｒ３は、Ｈ又はＢから選択され、
−  Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル又はアリールから選択され、アルデヒド基又はケト基は、酸に不安定な保護基によって保護され得、
−  Ｂは、酸に不安定なアミン保護基であり、
−  Ｔは、部分、−Ｃ１〜１２アルキル−、（−Ｃ２Ｈ４Ｏ−）１〜１２、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＪＲ９−、−ＪＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＪＲ９−、フェニル、５員若しくは６員ヘテロアリールのうちの少なくとも１つ、特に１〜５つを含む直鎖状又は分岐状のスペーサーであり、式中、
Ｊは、ＣＨ又はＮであり、特にＮであり、
特にＴは：
−Ｃ１〜Ｃ１２アルキル−から、特にＣ１〜６アルキルから、より特にＣ１〜３アルキル、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｒ５’−ＮＲ９’Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ５’−ＮＲ９’−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｒ５’−ＮＲ９’−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ５’−ＮＲ９’−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ６−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ６−、−Ｒ５−フェニル−Ｒ６−、−Ｒ５−フェニル−、−フェニル−Ｒ６−、−フェニル−、−Ｒ５−ピロイル、−Ｒ５−ピラゾイル、−Ｒ５−イミダゾイル、Ｒ５−ピペラジニル−、−Ｒ５−ピリジニル、−Ｒ５−ピリミジニル、−Ｒ５−ピラジニル、−Ｒ５−ピリダジニル、−Ｒ５−ピロイル−Ｒ６−、−Ｒ５−ピラゾイル−Ｒ６−、−Ｒ５−イミダゾイル−Ｒ６−、−Ｒ５−ピペラジニル−Ｒ６−、−Ｒ５−ピリジニル−Ｒ６−、−Ｒ５−ピリミジニル−Ｒ６−、−Ｒ５−ピラジニル−Ｒ６−、−Ｒ５−ピリダジニル−Ｒ６−、ピロイル−Ｒ６−、ピラゾイル−Ｒ６−、イミダゾイル−Ｒ６−ピパラジニル−Ｒ６−、ピリジニル−Ｒ６−、ピリミジニル−Ｒ６−、ピラジニル−Ｒ６−、ピリダジニル−Ｒ６−、ピロイル、ピラゾイル、イミダゾイル、ピペラジニル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル及びピリダジニル、
から選択されるスペーサーであり、式中、
Ｒ５、Ｒ５’及びＲ６は、互いに独立して、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル又は（−Ｃ２Ｈ４Ｏ−）１〜１２から、特にＣ１〜Ｃ６アルキルから、特にＣ１〜Ｃ３アルキルから選択され、かつ、式中、
Ｒ９及びＲ９’は、互いに独立して、Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、−Ｃ１〜６アルキル−ＮＨ２、−Ｃ１〜６アルキル−ＮＨＢ、−Ｃ１〜６アルキル−ＮＢ２、−Ｒ１５、−Ｃ１〜６アルキル−Ｒ１５、−Ｃ１〜６アルキル−ＮＨ−Ｒ１５から、特にＨ及びＣ１〜２アルキルから選択され、より特にＲ９はＨであり、式中、
Ｂは、独立して選択される酸に不安定なアミン保護基であり、
Ｒ１５は、アルデヒド部分と反応することができるブロッキング剤であり、特にＲ１５は、システイニル、スレオニニル、２−メルカプトエタノール、システアミン、エタンジチオール、ヒドロキシルアミン、Ｏ−メチルヒドロキシルアミン、Ｎ−メチルヒドロキシルアミン、ジチオスレイトール、ヒドラジンから、特にシステイニル及びＮ−メチルヒドロキシルアミンから、より特にシステイニルから選択され、ここで、
ブロッキング剤のアミン部分及び／又はチオール部分は、独立して選択される酸に不安定なアミン保護基Ｂによって、特にＢｏｃ、及び／又は酸に不安定なチオール保護基によって、特にトリチルによって保護され得、
−  ｂは、０又は１であり、特に１であり、
−  Ｖは、−ＮＲ１１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１１−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１２−（ＣＨ２）ｐ−、−ピペラジニル−（ＣＨ２）ｐ−、−ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、
【化２】
2021535139.tif 000053
、
−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−から、特に−ＮＲ１１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１１−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１２−（ＣＨ２）ｐ−、−ピペラジニル−（ＣＨ２）ｐ−、−ピリジニル−、ピリミジニルから、より特に−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、−Ｎ−（ＣＨ３）−、−ピペラジニル−（ＣＨ２）ｐ−、−ピリジニル−、ピリミジニルから選択される電子求引性部分であり、式中、
Ｒ１１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから、特にＨ及びＣ１〜２アルキルから選択され、より特にＲ１１はＨであり、
Ｒ１２は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから、特にＨ及びＣ１〜２アルキルから選択され、より特にＲ１２はメチルであり、
ｐは、０、１又は２であり、特に０又は１であり、
−  ａは、０又は１であり、ａとｂとの合計は、１又は２であり、
−  Ｕは、フェニル又は５員若しくは６員のヘテロアリール部分であり、特にフェニル又は６員ヘテロアリール部分であり、より特にフェニルであり、これは部分Ｖ、Ｗｑ及びＥｎの少なくとも１つに結合し、かつＣ１〜６アルキルによって、特にＣ１〜３アルキルによって任意に置換され得、式中、
Ｖは、上記のとおり定義され、
Ｗは、−Ｎ３、−ＮＯ２、−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ８、−Ｓ−Ｓ−Ｒ８、−Ｏ−ＣＨ２−Ｎ３、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−ＣＨ２−Ｎ３、−Ｎ＝Ｎ−フェニル、−Ｎ＝Ｎ−Ｒ８、
【化３】
2021535139.tif 000054
から、特に−Ｎ３、−Ｎ＝Ｎ−Ｒ８、−Ｏ−ＣＨ２−Ｎ３、−Ｓ−Ｓ−Ｒ８から選択され、式中、
Ｒ８は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル又は−（ＣＨ２）ｐ−ＮＭｅ２であり、特にピリジル又は−Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、ｐは、１、２、３又は４であり、
Ｅは、酸性条件下で電子吸引基であり、
ｎは、０〜４の間の整数であり、特に０〜２の間、より特に０又は１の整数であり、ｑは、０〜４の間の整数であり、特に０〜２の間、より特に０及び１の間の整数であり、ｎとｑとの合計は、４以下であり、式中、
Ｕがフェニル部分であり、かつＹが−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−である場合に、酸性条件下でのＶ、Ｗ、Ｅのハメット定数の合計は、０．４５より大きく、かつ式中、
Ｗは、Ｙに対してオルト位又はパラ位にあり、
−  Ｙは、−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（＝Ｏ）−又は−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、ｍは、１、２又は３であり、特に１又は２であり、より特に１であり、
−  Ｚは、電子吸引性脱離基である、
前記化合物。
【請求項２】
Ｅは、ピペリジニル、ピペラジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、−Ｎ（Ｃ２Ｈ４）２ＮＨ２、−Ｎ（Ｃ２Ｈ４）２Ｎ−Ｂ、−Ｎ＝Ｎ−フェニル、−Ｎ＝Ｎ−Ｒ８、−（ＣＨ２）ｒ−ＮＨ−Ｃ１〜６アルキル、−（ＣＨ２）ｒ−Ｎ（Ｃ１〜６アルキル）２−、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−ＣＦ３、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＳＯ２Ｍｅ、−ＳＯＭｅ、−ＳＯ２Ｅｔ、−ＳＯＥｔから、特に、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、−Ｎ＝Ｎ−フェニル、−Ｎ＝Ｎ−Ｒ８、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−ＣＦ３、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯ２Ｈから、より特に、ピリジル、ピリミジニル、ピリダジニル又は−Ｂｒから選択され、
Ｒ８は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル又は−（ＣＨ２）ｐ−ＮＭｅ２であり、特にピリジル又は−Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、ｐは、１、２、３又は４であり、かつ
Ｂは、酸に不安定なアミン保護基であり、かつ
ｒは、０、１、２、３又は４であり、特に０、１又は２である、
請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
−  Ｂは、Ｂｏｃ（−Ｃ（＝Ｏ）ＯｔＢｕ）、Ｅｅｉ（＝ＣＭｅＯＥｔ，１−エトキシエチリデン）トリチル（−Ｃ（Ｐｈ）３）、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＰｈ３、Ｍｍｔ（−Ｃ（Ｐｈ）２Ｃ６Ｈ４ＯＭｅ）、ＤＭＴ（−Ｃ（Ｐｈ）（Ｃ６Ｈ４ＯＭｅ）２）、Ｃｂｚ（−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２Ｐｈ）、ベンジリデンアミン（＝ＣＰｈ）、フタリミド（＝（ＣＯ）２Ｃ６Ｈ４）、ｐ−トルエンスルホンアミド（−ＳＯ２Ｃ６Ｈ４Ｍｅ）、ベンジルアミン（−ＣＨ２Ｐｈ）、アセトアミド（−ＣＯＭｅ）、トリフルオロアセトアミド（−ＣＯＣＦ３）、Ｄｄｅ（１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキサ−１−イリデン）−３−エチル）及び１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキサ−１−イリデン）−３−メチルブチル（ｉｖＤｄｅ）から選択され、特にＢは、Ｂｏｃ又はＥｅｉであり、より特にＢは、Ｂｏｃであり、及び／又は
−  アセタール又はケタールの保護基は、
【化４】
2021535139.tif 000055
から選択され、
式中、ｒは、０〜１２であり、特に０〜６であり、より特に０、１又は２であり、かつ
Ｒ１０は、−Ｃ１〜Ｃ１２アルキル−であり、特にＣ１〜６アルキルであり、より特にＣ１〜３アルキルである、
請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｔは、−Ｃ１〜Ｃ１２アルキル−から、特にＣ１〜６アルキルから、より特にＣ１〜３アルキル、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ５’−ＮＲ９’Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−から、特に、Ｃ１〜３アルキル、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−から、より特に、Ｃ１〜３アルキル又は−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−から選択され、
Ｒ５、Ｒ５’、Ｒ６、Ｒ９’及びＲ９は、上記で定義されたとおりである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
部分Ｕの５員若しくは６員のヘテロアリール部分は、１又は２個のヘテロ原子を含み、特に、部分Ｕの５員ヘテロアリール部分は、ピラゾール、イミダゾールから選択され、かつ部分Ｕの６員ヘテロアリール部分は、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジンから、特にピリジンから選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｕは、式５、６、７又は８の、特に式５又は６の部分から選択され、
【化５】
2021535139.tif 000056
式中、
Ｔ、Ｖ、Ｙ、Ｗ、及びＥは、上記のとおり定義され、
式５及び６の場合、Ｕは、部分Ｔ又はＶ（Ｔ  ｏｒ  Ｖ）に結合され、
式７及び８の場合、Ｕは、部分Ｖに結合され、
Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４及びＤ１、Ｄ２、Ｄ３、Ｄ４は、互いに独立して、Ｃ、Ｎ、Ｓ及びＯから、特にＣ及びＮから選択され、Ａ１、Ａ２、Ａ３及びＡ４、又はＤ１、Ｄ２、Ｄ３及びＤ４の２〜４個の部分は、Ｃであり、特にＡ１、Ａ２、Ａ３及びＡ４、又はＤ１、Ｄ２、Ｄ３及びＤ４の３又は４個の部分は、Ｃであり、より特にＡ１、Ａ２、Ａ３及びＡ４、又はＤ１、Ｄ２、Ｄ３及びＤ４のすべての部分は、Ｃであり、
ｎは、
式５及び６の場合、０〜３の間の、特に０〜２の間の整数であり、
式７及び８の場合、０〜４の間の、特に０〜２の間の、より特に０〜１の間の整数であり、
ｑは、０〜４の間の、特に０〜２の間の、より特に０〜１の間の整数であり、ｎとｑとの合計は、４以下である、
請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｕは、式９、１０、１１又は１２の、特に式９又は１０の部分から選択され、
【化６】
2021535139.tif 000057
式中、
Ｔ、Ｖ、Ｙ、Ｗ、Ｅ、ｑ及びｎは、上記のとおり定義され、
式９及び１０の場合、Ｕは部分Ｔ又はＶ（Ｔ  ｏｒ  Ｖ）に結合され、
式１１及び１２の場合、Ｕは部分Ｖに結合され、
すべての部分Ａ２、Ａ３及びＡ４は、Ｃである、又はＡ２、Ａ３及びＡ４のうちの２つはＣであり、かつＡ２、Ａ３及びＡ４のうちの他の２つはＮであり、特にＡ２及びＡ３はともにＣであり、かつ
Ｄ２は、Ｃ又はＮであり、特にＣである、
請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｕは、式１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０又は２１の、特に式１３〜１９の、より特に式１５又は１９の部分から選択され、
【化７】
2021535139.tif 000058
式中、
Ｔ、Ｖ、Ｙ、Ｗ、Ｅ、ｑ及びｎは、上記のとおり定義され、
式１３、１４及び１５の場合、Ｕは、部分Ｔ又はＶ（Ｔ  ｏｒ  Ｖ）に結合され、
式１６、１７及び１８の場合、Ｕは、部分Ｖに結合され、
Ａ２、Ａ３及びＡ４は、Ｃ又はＮであり、特にＣであり、
Ｄ２は、Ｃ又はＮである、
請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｚは、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−Ｎ３、−ＯＨ、−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２（Ｃ＝Ｏ）ＯＨ、−ＳＲ１４、−ＯＣＦ３、−ＯＣＨ２ＣＦ３、−ＯＳＯ２ＣＦ３、−ＳＯ２Ｃ６Ｈ４ＣＨ３、−ＳＯ２ＣＦ３、−ＳＯ２ＣＨ３、
【化８】
2021535139.tif 000059
から、特に、−ＯＨ、−Ｃｌ、
【化９】
2021535139.tif 000060
から、特に、−ＯＨ、
【化１０】
2021535139.tif 000061
から選択され、
式中、Ｒ１４は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、アリール（ａｒｙｌｉｃ）又はベンジルの置換基である、
請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
ペプチドを精製する方法であって、以下のステップ：
−  粗リンカー修飾ペプチドを提供するステップであり、粗ペプチドは、請求項１に記載のリンカー分子に共有結合される、前記ステップ、
−  カップリングステップにおいて、リンカー修飾ペプチドを固体支持体にカップリングして、固定化リンカー修飾ペプチドを得る、前記ステップ、
−  放出ステップにおいて、ペプチドを、特に酸性条件下で還元剤を加えることによって、放出する、前記ステップ、
を含む、前記方法。
【請求項１１】
放出ステップにおいて、固定化リンカー修飾ペプチドの還元されたリンカー部分によって特徴付けられる還元中間体が達成され、引き金によって、特に、温度及び／又はｐＨの変化によって、より特に、アミンスイッチの場合にｐＨを還元中間体のリンカー部分の最も塩基性のヘテロ原子のｐＫａに対してｐＨ＞ｐＫａに増加させることによって、又はカルバメートスイッチの場合にｐＨをカルバメートのｐＫａに対してｐＨ＜ｐＫａに減少させることによって、ペプチドは前記還元中間体から放出される、
請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
リンカー修飾ペプチドは、合成樹脂にさらに結合され、かつ合成樹脂は、カップリングステップが実行される前に切断される、請求項１０又は１１に記載の方法。
【請求項１３】
請求項１に記載のリンカー分子は、アジド部分を含む部分Ｗ及び／又はＥを含む、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
固体支持体の非反応アルデヒド部分は、ステップ（ｂ）を実行した後にブロッキング剤を使用して、特に、システイン、スレオニン、２−メルカプトエタノール、システアミン、エタンジチオール、ヒドロキシルアミン、Ｏ−メチルヒドロキシルアミン、Ｎ−メチルヒドロキシルアミン、ジチオスレイトール、ヒドラジンから選択されるブロッキング剤を使用することによって、より特に、システイン及びＮ−メチルヒドロキシルアミンから選択されるブロッキング剤を使用することによってブロッキングされる、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
還元剤は、トリフェニルホスフィン、トリメチルホスフィン、トリエチルホスフィン、トリブチルホスフィン又はトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン、トリメチルホスファイト、トリエチルホスファイト、トリブチルホスファイト、ジエチルホスファイト、５，５’−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）、亜ジチオン酸ナトリウム（Ｎａ２Ｓ２Ｏ４）、エタンジチオール、プロパンジチオール、ジチオエリスリトール、ジチオスレイトール、Ｎａ２Ｓ、ＮａＳＨ、グルタチオン、２，２’−ジチオジピリジン、ＢＨ３、４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン、カテコールボラン、ボランテトラヒドロフラン、ボランジメチルスルフィド、ボランジメチルアミン錯体、ボラントリフェニルホスフィン錯体、ボランｔｅｒｔ−ブチルアミン、ＬｉＡｌＨ４、ＬｉＢＨ４、ＮａＢＨ４、ＮａＢＨ３ＣＮ、ＮａＢＨ（ＯＭｅ）３、ＮａＢＨ（ＯＣＣＨ３）３、ＬｉＡｌＨ（ＯＣＭｅ３）３、ヒドロキノン、アスコルビン酸ナトリウム、アスコルビン酸、ＫＩを含むアスコルビン酸、ヒドラジン、ＮＨ＝ＮＨ、ホルムアルデヒドから、特に、ジチオエリスリトール、ジチオスレイトール、トリフェニルホスフィン、ＫＩを含むアスコルビン酸、トリブチルホスフィン、トリメチルホスフィン、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン、亜ジチオン酸ナトリウム（Ｎａ２Ｓ２Ｏ４）、ボランジメチルスルフィド、ボラントリフェニルホスフィン錯体、ＮａＢＨ４、アスコルビン酸から、より特にトリフェニルホスフィン及びトリメチルホスフィンから選択される、
請求項１０〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）によって生成されるペプチド又はペプチド核酸を精製する方法、及び前記精製に使用するリンカー分子に関する。
【背景技術】
【０００２】
固相ペプチド合成は、ペプチドの合成の方法として確立されている。標準的な手順は、第１のＮ末端で保護されたアミノ酸を合成樹脂にカップリングした後、Ｎ末端の脱保護のサイクルを繰り返し、次のＮ末端で保護されたアミノ酸をカップリングし、未反応のペプチド配列をキャッピングすることである。最後に、合成されたペプチドは合成樹脂から切断され、精製される。
【０００３】
ペプチドの精製に広く使用されている方法は、分取高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）である。この方法の欠点は、所望の生産量に関するスケーラビリティが低いことであり、そのため、１つの同じシステムで様々な量を生産することはできない。これにより、対応する複合デバイスの取得費用が比較的高くなる。さらなる欠点は、個々の断片を正しく分析評価するためには、比較的広範な知識を必要とするということである。さらに、ＨＰＬＣ精製では、実行中に溶媒、及び時にはカラム材（固相）を大量に消費することがある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】欧州特許第０５５２３６８（Ａ１）号
【特許文献２】欧州特許第２５０１７１１（Ｂ１）号
【特許文献３】ＷＯ２０１７１２９８１８（Ａ１）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
それ故、安価で不良傾向の少ない方法は、ペプチド製造の費用削減に有利である。
【０００６】
代替的な方法では、ペプチドに結合できるリンカー分子を使用し、その後、精製時に使用される官能化固相にカップリングする。
【０００７】
欧州特許第０５５２３６８（Ａ１）号には、精製支持体に共有結合できるチオールを有するリンカー分子が記載されている。ただし、この方法は、アミノ酸のシステイン又はペニシラミンを含むようなチオール含有ペプチドには適していない。
【０００８】
欧州特許第２５０１７１１（Ｂ１）号では、銅の存在を必要とするアジド（−Ｎ３）とアルキンとの間の１，３−双極性環化付加反応によってリンカーを固相に結合させる類似の方法が提案されている。しかし、メチオニン、システイン、アルギニン、リジンを含むペプチドは、銅と複合化して除去が困難になる場合がある。銅の毒性のため、このようなペプチドは、医薬品用途のようなすべての適用に適していない。
【０００９】
ＷＯ２０１７１２９８１８（Ａ１）は、ＳＰＰＳ後に合成樹脂になお結合したままのペプチドに結合し得るリンカー分子を開示している。一般的に使用されているＴＦＡ条件を適用して、ペプチドはその後に合成から切断される。しかし、ＷＯ２０１７１２９８１８（Ａ１）に開示されるとおり、ペプチドとベンジルカルバメートを形成するリンカー分子の欠点は、酸性処理に対する不安定性である（ＴＦＡ＞５０％、水の存在下でｐＨ＜０）。リンカー分子の早期分解は、精製ペプチドの収量の大幅な低下を引き起こす。
【００１０】
Ｎ末端にＴｈｒ、Ｓｅｒ、又はＣｙｓを含有するペプチドとの望ましくない副反応もまた発生し、これは、ペプチドの放出に使用される塩基性条件（ｐＨ＞９）の下で、リンカーのスルホ・エチレン・カルバメート部分に対するβ−ヒドロキシル基又はβ−チオール基の求核攻撃に起因する。ＷＯ２０１７１２９８１８（Ａ１）に開示されているリンカー分子のさらなる副反応は、アスパルチミド形成及びＡｒｇ−Ｇｌｕ配列でのアルギニンのシトルリンへの変換、並びに塩基性条件下での内部Ｃｙｓ残基によるジスルフィド形成及び求核性副反応である。
【００１１】
さらに、ＷＯ２０１７１２９８１８（Ａ１）に記載されているスルホンリンカーは、固体レポートに残り、かつ追加の消光ステップを必要とする反応性ビニルスルホン部分に悩まされている。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
塩基性条件下での副反応及び酸性条件下でのリンカーの早期分解の欠点を克服するために、本発明は、ＴＦＡ条件下で安定であり、かつ穏やかな酸性条件下、特にｐＨ≦７でペプチド放出を可能にするリンカー分子を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１は、Ｘ−Ｔｂ−Ｖａ−Ｕ（Ｗ）−Ｙ−Ｚ型（式中、ＷはＮ３である）のリンカーの使用による本発明のペプチド精製の模式図であり、この方法は請求項１０に記載されている。ＳＲ＝合成樹脂、ＰＢ＝精製ビーズ；１．）４当量のＸ−Ｔｂ−Ｖａ−Ｕ（Ｗ）−Ｙ−Ｚ、６当量のオキシマ、６当量のＤＩＥＡ、２時間、３．）ＤＭＳＯによる粗ペプチドの溶解及び１０体積％のクエン酸Ｎａ  ｐＨ  ４．５の添加、９０分、４．）洗浄、５．）ＭｅＣＮ／ＡｃＯＨ  ９：１中のＰＰｈ３、１５分、６．）ＭｅＣＮで洗浄、７．）Ｈ２Ｏ／ＴＦＡによる加水分解、８．）１，６−又は１，４−脱離、９．）最終的なエーテル沈殿。
【図２−１】図２は、本発明のリンカー分子Ｘ１及びＸ２の使用による、ペプチドＰ１（Ｈ−ＡＲＴＫＱＴＡＲＫＳＴＧＧＫＡ−ＯＨ）の本発明のペプチド精製の例を示す。Ａ＝吸収（２１０ｎｍ）、Ｂ＝時間／分；１．）Ｐ１へのリンカーカップリング前の粗ペプチド試料のクロマトグラム、２．）リンカーＸ１の使用及び請求項１０に記載の方法による精製後のＰ１のクロマトグラム、３．）リンカーＸ２の使用及び請求項１０に記載の方法による精製後のＰ１のクロマトグラム。
【図２−２】図２は、本発明のリンカー分子Ｘ１及びＸ２の使用による、ペプチドＰ１（Ｈ−ＡＲＴＫＱＴＡＲＫＳＴＧＧＫＡ−ＯＨ）の本発明のペプチド精製の例を示す。Ａ＝吸収（２１０ｎｍ）、Ｂ＝時間／分；１．）Ｐ１へのリンカーカップリング前の粗ペプチド試料のクロマトグラム、２．）リンカーＸ１の使用及び請求項１０に記載の方法による精製後のＰ１のクロマトグラム、３．）リンカーＸ２の使用及び請求項１０に記載の方法による精製後のＰ１のクロマトグラム。
【図３−１】図３は、本発明のリンカー分子Ｘ２の使用による、ペプチドＰ２（Ｈ−ＡＫＡＤＥＶＳＬＨＫＷＹＧ−ＮＨ２）の本発明のペプチド精製の例を示す。Ａ＝吸収（２１０ｎｍ）、Ｂ＝時間／分；１．）Ｐ２にリンカーカップリングする前の粗ペプチド試料のクロマトグラム、２．）リンカーＸ２の使用及び請求項１０に記載の方法による精製後のＰ２のクロマトグラム。約３−アミノ安息香酸は、ペプチドの定量化のための内部標準として使用した。
【図３−２】図３は、本発明のリンカー分子Ｘ２の使用による、ペプチドＰ２（Ｈ−ＡＫＡＤＥＶＳＬＨＫＷＹＧ−ＮＨ２）の本発明のペプチド精製の例を示す。Ａ＝吸収（２１０ｎｍ）、Ｂ＝時間／分；１．）Ｐ２にリンカーカップリングする前の粗ペプチド試料のクロマトグラム、２．）リンカーＸ２の使用及び請求項１０に記載の方法による精製後のＰ２のクロマトグラム。約３−アミノ安息香酸は、ペプチドの定量化のための内部標準として使用した。
【図４−１】図４は、本発明のリンカー分子Ｘ１の使用による、ペプチドＰ３（Ｈ−ＹＦＴＧＳＥＶＥＮＶＳＶＮＶＨ−ＮＨ２）、ペプチドＰ４（Ｈ−ＰＳＮＰＦＹＥＡＬＳＴ−ＮＨ２）、ペプチドＰ５（Ｈ−ＤＡＥＦＲＨＤＳＧＹＥＶＨＨＱＫＬＶＦＦ−ＮＨ２）及びペプチドＰ６（Ｈ−ＣＫＡＤＥＶＳＭＨＫＷＹＧ−ＮＨ２）の本発明のペプチド精製の４つの例を示す。Ａ＝吸収（２１０ｎｍ）、Ｂ＝時間／分；１．）ペプチドへのリンカーカップリングの前の粗ペプチド試料のクロマトグラム、２．）リンカーＸ１の使用及び請求項１０に記載の方法による精製後のペプチドのクロマトグラム。
【図４−２】図４は、本発明のリンカー分子Ｘ１の使用による、ペプチドＰ３（Ｈ−ＹＦＴＧＳＥＶＥＮＶＳＶＮＶＨ−ＮＨ２）、ペプチドＰ４（Ｈ−ＰＳＮＰＦＹＥＡＬＳＴ−ＮＨ２）、ペプチドＰ５（Ｈ−ＤＡＥＦＲＨＤＳＧＹＥＶＨＨＱＫＬＶＦＦ−ＮＨ２）及びペプチドＰ６（Ｈ−ＣＫＡＤＥＶＳＭＨＫＷＹＧ−ＮＨ２）の本発明のペプチド精製の４つの例を示す。Ａ＝吸収（２１０ｎｍ）、Ｂ＝時間／分；１．）ペプチドへのリンカーカップリングの前の粗ペプチド試料のクロマトグラム、２．）リンカーＸ１の使用及び請求項１０に記載の方法による精製後のペプチドのクロマトグラム。
【図４−３】図４は、本発明のリンカー分子Ｘ１の使用による、ペプチドＰ３（Ｈ−ＹＦＴＧＳＥＶＥＮＶＳＶＮＶＨ−ＮＨ２）、ペプチドＰ４（Ｈ−ＰＳＮＰＦＹＥＡＬＳＴ−ＮＨ２）、ペプチドＰ５（Ｈ−ＤＡＥＦＲＨＤＳＧＹＥＶＨＨＱＫＬＶＦＦ−ＮＨ２）及びペプチドＰ６（Ｈ−ＣＫＡＤＥＶＳＭＨＫＷＹＧ−ＮＨ２）の本発明のペプチド精製の４つの例を示す。Ａ＝吸収（２１０ｎｍ）、Ｂ＝時間／分；１．）ペプチドへのリンカーカップリングの前の粗ペプチド試料のクロマトグラム、２．）リンカーＸ１の使用及び請求項１０に記載の方法による精製後のペプチドのクロマトグラム。
【図４−４】図４は、本発明のリンカー分子Ｘ１の使用による、ペプチドＰ３（Ｈ−ＹＦＴＧＳＥＶＥＮＶＳＶＮＶＨ−ＮＨ２）、ペプチドＰ４（Ｈ−ＰＳＮＰＦＹＥＡＬＳＴ−ＮＨ２）、ペプチドＰ５（Ｈ−ＤＡＥＦＲＨＤＳＧＹＥＶＨＨＱＫＬＶＦＦ−ＮＨ２）及びペプチドＰ６（Ｈ−ＣＫＡＤＥＶＳＭＨＫＷＹＧ−ＮＨ２）の本発明のペプチド精製の４つの例を示す。Ａ＝吸収（２１０ｎｍ）、Ｂ＝時間／分；１．）ペプチドへのリンカーカップリングの前の粗ペプチド試料のクロマトグラム、２．）リンカーＸ１の使用及び請求項１０に記載の方法による精製後のペプチドのクロマトグラム。
【図５】図５〜図８の総論：図５〜図８では、以下のような略語が使用される：Ｐ＝ペプチド、Ｅ＝矢印は電子吸引又は電子供与の方向を示す、ａ）リンカー修飾ペプチドを得るための合成樹脂（ＳＲ）のＴＦＡ切断、ｂ）リンカー修飾ペプチドを精製ビーズ（ＰＢ）に固定化するためのアルデヒド官能化固体支持体とのインキュベーション、ｃ）合成不純物を除去するためのビーズの洗浄、ｄ）還元剤を添加することによる還元、ｅ）還元剤の洗浄、ｆ）放出の電子構造をもたらすためのｐＨの調整、ｇ）１，６−、１，４−脱離又は求核攻撃のいずれかによるリンカー分子の自然な分解。図５は、アジド還元型セーフティロックを有するアミンスイッチ（タイプ１）である。切断可能な芳香族のコアと共役している塩基性窒素原子は、プロトン化される場合に電子を引き抜く（Ｅ：矢印）。構造１の正電荷は、溶解性を高め、合成樹脂（ＳＲ）のリンカー−ペプチド構造の酸性切断時にＴＦＡの安定性を提供する。ペプチドの放出は２つのステップで行われる。最初に、アジド（部分Ｗ）が−ＮＨ２に還元されることで、放出の安全ロックが除去される。リンカーの安定性は、ｐＨが最も塩基性の高い窒素のｐＫａより低い場合、プロトン化されたアミン基の電子吸引性により、構造２の還元後もなお保持される。これにより、還元剤の除去及び酸性条件下での洗浄を可能にする。第２のステップでは、ｐＨを、最も塩基性の高い窒素のｐＫａに対してｐＨ＞ｐＫａに上昇させることによって、精製されたペプチドが放出される。ｐＨの増加は、１，６−脱離反応を誘導する。リンカーはＣＯ２の放出下で分解する。このペプチドは、遊離Ｎ末端を有して得られる。
【図６】図５〜図８の総論：図５〜図８では、以下のような略語が使用される：Ｐ＝ペプチド、Ｅ＝矢印は電子吸引又は電子供与の方向を示す、ａ）リンカー修飾ペプチドを得るための合成樹脂（ＳＲ）のＴＦＡ切断、ｂ）リンカー修飾ペプチドを精製ビーズ（ＰＢ）に固定化するためのアルデヒド官能化固体支持体とのインキュベーション、ｃ）合成不純物を除去するためのビーズの洗浄、ｄ）還元剤を添加することによる還元、ｅ）還元剤の洗浄、ｆ）放出の電子構造をもたらすためのｐＨの調整、ｇ）１，６−、１，４−脱離又は求核攻撃のいずれかによるリンカー分子の自然な分解。図６は、アジドではなく、ニトロ基、ジスルフィド基、又はアゾ基などの他の還元性部分を持つ還元的安全ロックを有するアミンスイッチ（タイプ２）を示す。切断可能な芳香族のコアと共役している塩基性窒素原子は、プロトン化される場合に電子を引き抜く（Ｅ：矢印）。構造１の正電荷は、溶解性を高め、合成樹脂（ＳＲ）のリンカー−ペプチド構造の酸性切断時にＴＦＡの安定性を提供する。ペプチドの放出は２つのステップで行われる。最初に、ニトロ（部分Ｗ）が−ＮＨ２に還元されることで、放出の安全ロックが除去される。リンカーの安定性は、ｐＨが最も塩基性の高い窒素のｐＫａより低い場合、プロトン化されたアミン基の電子吸引性により、構造２の還元後もなお保持される。これにより、還元剤の除去及び酸性条件下での洗浄を可能にする。第２のステップでは、ｐＨを、最も塩基性の高い窒素のｐＫａに対してｐＨ＞ｐＫａに上昇させることによって、精製されたペプチドが放出される。ｐＨの増加は、１，６−脱離反応を誘導する。リンカーはＣＯ２の放出下で分解する。このペプチドは、遊離Ｎ末端を有して得られる。
【図７】図５〜図８の総論：図５〜図８では、以下のような略語が使用される：Ｐ＝ペプチド、Ｅ＝矢印は電子吸引又は電子供与の方向を示す、ａ）リンカー修飾ペプチドを得るための合成樹脂（ＳＲ）のＴＦＡ切断、ｂ）リンカー修飾ペプチドを精製ビーズ（ＰＢ）に固定化するためのアルデヒド官能化固体支持体とのインキュベーション、ｃ）合成不純物を除去するためのビーズの洗浄、ｄ）還元剤を添加することによる還元、ｅ）還元剤の洗浄、ｆ）放出の電子構造をもたらすためのｐＨの調整、ｇ）１，６−、１，４−脱離又は求核攻撃のいずれかによるリンカー分子の自然な分解。図７は、求核的放出を有するアミンスイッチ（タイプ３）を示す。求核的放出を介してペプチドを放出することが可能なリンカーは、カーボネート部分（Ｙ＝−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）、Ｚ＝Ｏ−Ｒ）の代わりに、カルボキシレート（Ｙ＝Ｃ（＝Ｏ）、Ｚ＝ＯＨ）を含む。炭酸塩なしに、リンカーは溶液中及び保存中に高い安定性を示す。ペプチドへのカップリングは、カルバメート結合の代わりにアミド結合を生じる一般的なアミノ酸カップリングとして行うことができる。カルバメート結合の欠如により、リンカーはＴＦＡなどの酸性条件下で安定している。また、ここではペプチドの放出は２つのステップで行われる。最初に、還元性部分（−Ｎ３）がアミンに還元されるため、放出の安全ロックが除去される。ｐＨが最も塩基性の高い窒素のｐＫａよりも高い場合、還元後もなおリンカーの安定性が保たれる。これにより、還元剤の除去及び酸性条件下での洗浄を可能にする。第２のステップでは、ｐＨを、最も塩基性の高い窒素のｐＫａに対してｐＨ＞ｐＫａに上昇させることによって、精製されたペプチドが放出される。ｐＨの増加により求核的放出が誘導され、遊離Ｎ末端を有するペプチドが得られる。ｐＨがカルバメートのｐＫａよりも高い場合、還元後もなおリンカーの安定性が保たれる。
【図８】図５〜図８の総論：図５〜図８では、以下のような略語が使用される：Ｐ＝ペプチド、Ｅ＝矢印は電子吸引又は電子供与の方向を示す、ａ）リンカー修飾ペプチドを得るための合成樹脂（ＳＲ）のＴＦＡ切断、ｂ）リンカー修飾ペプチドを精製ビーズ（ＰＢ）に固定化するためのアルデヒド官能化固体支持体とのインキュベーション、ｃ）合成不純物を除去するためのビーズの洗浄、ｄ）還元剤を添加することによる還元、ｅ）還元剤の洗浄、ｆ）放出の電子構造をもたらすためのｐＨの調整、ｇ）１，６−、１，４−脱離又は求核攻撃のいずれかによるリンカー分子の自然な分解。図８は、カルバメートスイッチ（タイプ４）を示す。カルバメートスイッチを介してペプチドを放出することができるリンカーは、部分Ｙ＝−Ｏ−（＝Ｏ）−を含む。さらに、リンカーは、電子吸引性部分Ｅ、例えば−Ｂｒ、及び還元性部分Ｗ、例えば−Ｎ３を含む。ＴＦＡの安定性は、ＴＦＡ切断中の電子求引性部分−Ｂｒによって、固体支持体、例えば精製樹脂へのリンカー−ペプチド構造の固定化によって、及びその後の酸性条件下での洗浄ステップによって媒介される。還元性部分−Ｎ３を−ＮＨ２に還元すると、放出のための安全ロックが除去される。ｐＨがこのカルバメートのｐＫａよりも高い場合リンカー分子は安定している。これにより、還元剤の除去と洗浄が可能となる。最後に、１，６−又は１，４−脱離及びＣＯ２の放出によって、カルバメートのｐＫａに対してｐＨ＜ｐＫａまでｐＨを減少させることによって、精製されたペプチドが放出される。このペプチドは、遊離Ｎ末端を有して得られる。
【図９】図９は、３つの本発明リンカー分子の使用によるペプチドＰ２（Ｈ−ＡＫＡＤＥＶＳＬＨＫＷＹＧ−ＮＨ２）の本発明ペプチド精製のそれぞれの例を示す。２．）アジドの還元的安全ロックを有するタイプ１のアミンスイッチのＸ９、３．）他の還元的安全ロックを有するタイプ２のアミンスイッチのＸ１３、４．）求核的放出を有するタイプ３のアミンスイッチのＸ２２。Ａ＝吸収（２１０ｎｍ）、Ｂ＝時間／分；単離されたペプチドの同一性は常にＵＰＬＣ−ＥＳＩ／ＭＳ分析によって確認した。同定されたＰ２生成物には＊でマークされている。１．）Ｐ２（＊）にリンカーカップリングする前の粗製ペプチド試料のクロマトグラム。２．）以下の実施例のセクションに記載されるとおり、タイプ１のリンカーＸ９の使用、及び対応する方法による精製の後のＰ２（＊）のクロマトグラム。３．）以下の実施例のセクションに記載されるとおり、タイプ２のリンカーＸ１３の使用、及び対応する方法による精製の後のＰ２（＊）のクロマトグラム。４．）以下の実施例のセクションに記載されるとおり、タイプ３のリンカーＸ２２の使用、及び対応する方法による精製の後のＰ２（＊）のクロマトグラム。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
説明
本発明の第１の態様によれば、式１、Ｘ−Ｔｂ−Ｖａ−Ｕ−Ｙ−Ｚ（１）の化合物が提供され、
式中、
−  Ｘは、式２、２ａ、３、３ａ又は４の、特に式２、２ａ、３又は３ａの、より特に式２又は２ａの部分から選択され、
【化１】
2021535139.tif 000002
式中、
−  各Ｒ１及びＲ２は、互いに独立して、Ｈ又はＢから選択され、少なくともＲ１又はＲ２は、Ｂであり、
−  Ｒ３は、Ｈ又はＢから選択され、
−  Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル又はアリールから選択され、アルデヒド基又はケト基は、酸に不安定な保護基で保護され得、
−  Ｂは、酸に不安定なアミン保護基であり、
−  Ｔは、部分、−Ｃ１〜１２アルキル−、（−Ｃ２Ｈ４Ｏ−）１〜１２、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＪＲ９−、−ＪＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＪＲ９−、フェニル、５又は６員ヘテロアリールの、特に−Ｃ１−１２アルキル−、（−Ｃ２Ｈ４Ｏ−）１〜１２、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＪＲ９−、−ＪＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＪＲ９−のうちの少なくとも１つ、特に１〜５、より特に１〜３を含む直鎖状又は分岐状スペーサーであり、式中、
Ｊは、ＣＨ又はＮであり、特にＮであり、
特にＴは：
−Ｃ１〜Ｃ１２アルキル−から、特に−Ｃ１〜６アルキル−から、より特に−Ｃ１〜３アルキル−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｒ５’−ＮＲ９’Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ５’−ＮＲ９’−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｒ５’−ＮＲ９’−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ５’−ＮＲ９’−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ６−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ６−、−Ｒ５−フェニル−Ｒ６−、−Ｒ５−フェニル−、−フェニル−Ｒ６−、−フェニル−、−Ｒ５−ピロリル、−Ｒ５−ピラゾイル、−Ｒ５−イミダゾイル、Ｒ５−ピペラジニル−、−Ｒ５−ピリジニル、−Ｒ５−ピリミジニル、−Ｒ５−ピラジニル、−Ｒ５−ピリダジニル、−Ｒ５−ピロリル−Ｒ６−、−Ｒ５−ピラゾイル−Ｒ６−、−Ｒ５−イミダゾイル−Ｒ６−、−Ｒ５−ピペラジニル−Ｒ６−、−Ｒ５−ピリジニル−Ｒ６−、−Ｒ５−ピリミジニル−Ｒ６−、−Ｒ５−ピラジニル−Ｒ６−、−Ｒ５−ピリダジニル−Ｒ６−、ピロリル−Ｒ６−、ピラゾイル−Ｒ６−、イミダゾイル−Ｒ６−ピパラジニル−Ｒ６−、ピリジニル−Ｒ６−、ピリミジニル−Ｒ６−、ピラジニル−Ｒ６−、ピリダジニル−Ｒ６−、ピロイル（ｐｙｒｒｏｙｌ）、ピラゾイル、イミダゾイル、ピペラジニル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、及びピリダジニル、
から選択されるスペーサーであり、式中、
Ｒ５、Ｒ５’及びＲ６は、互いに独立して、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル又は（−Ｃ２Ｈ４Ｏ−）１〜１２から、特にＣ１〜Ｃ６アルキルから、特にＣ１〜Ｃ３アルキルから選択され、かつ、式中、
Ｒ９及びＲ９’は、互いに独立して、Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、−Ｃ１〜６アルキル−ＮＨ２、−Ｃ１〜６アルキル−ＮＨＢ、−Ｃ１〜６アルキル−ＮＢ２、−Ｒ１５、−Ｃ１〜６アルキル−Ｒ１５、−Ｃ１〜６アルキル−ＮＨ−Ｒ１５から、特にＨ及びＣ１〜２アルキルから選択され、より特にＲ９は、Ｈであり、式中、
Ｂは、独立して選択される酸に不安定なアミン保護基であり、
Ｒ１５は、アルデヒド部分と反応することができるブロッキング剤であり、特にＲ１５は、システイニル、スレオニニル、２−メルカプトエタノール、システアミン、エタンジチオール、ヒドロキシルアミン、Ｏ−メチルヒドロキシルアミン、Ｎ−メチルヒドロキシルアミン、ジチオスレイトール、ヒドラジンから、特にシステイニル及びＮ−メチルヒドロキシルアミンから、より特にシステイニルから選択され、式中、
ブロッキング剤のアミン部分及び／又はチオール部分は、独立して選択される酸に不安定なアミン保護基Ｂによって、特にＢｏｃ、及び／又は酸に不安定なチオール保護基によって、特にトリチルによって保護され得、
−  ｂは、０又は１であり、特に１であり、
−  Ｖは、−ＮＲ１１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１１−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１２−（ＣＨ２）ｐ−、−ピペラジニル−（ＣＨ２）ｐ−、−ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、
【化２】
2021535139.tif 000003
、
−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−から、特に−ＮＲ１１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１１−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１２−（ＣＨ２）ｐ−、−ピペラジニル−（ＣＨ２）ｐ−、−ピリジニル−、ピリミジニルから、より特に−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、−Ｎ−（ＣＨ３）−、−ピペラジニル−（ＣＨ２）ｐ−、−ピリジニル−、ピリミジニルから選択される電子求引性部分であり、式中、
Ｒ１１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから、特にＨ及びＣ１〜２アルキルから選択され、より特にＲ１１はＨであり、
Ｒ１２は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから、特にＨ及びＣ１〜２アルキルから選択され、より特にＲ１２はメチルであり、
ｐは、０、１又は２であり、特に０又は１であり、
−  ａは０又は１であり、ａとｂとの合計は、１又は２であり、
−  Ｕは、フェニル又は５員若しくは６員のヘテロアリール部分であり、特にフェニル又は６員のヘテロアリール部分であり、より特にフェニルであり、これは部分Ｖ、Ｗｑ及びＥｎの少なくとも１つに結合され、かつＣ１〜６アルキルによって、特にＣ１〜３アルキルによって任意に置換され得、式中、
Ｖは上記のとおり定義され、
Ｗは、−Ｎ３、−ＮＯ２、−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ８、−Ｓ−Ｓ−Ｒ８、−Ｏ−ＣＨ２−Ｎ３、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−ＣＨ２−Ｎ３、−Ｎ＝Ｎ−フェニル、−Ｎ＝Ｎ−Ｒ８、
【化３】
2021535139.tif 000004
から、特に−Ｎ３、−Ｎ＝Ｎ−Ｒ８、−Ｏ−ＣＨ２−Ｎ３、−Ｓ−Ｓ−Ｒ８から選択され、式中、
Ｒ８は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル又は−（ＣＨ２）ｐ−ＮＭｅ２であり、特にピリジル又は−Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、ｐは、１、２、３又は４であり、
Ｅは、酸性条件下で電子吸引基であり、
ｎは０〜４の間の整数であり、特に０〜２の間、より特に０又は１の整数であり、かつｑは０〜４の間の整数であり、特に０〜２の間、より特に０及び１の整数であり、ｎとｑとの合計は、４以下であり、式中、
Ｕがフェニル部分であり、かつＹが−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−である場合、酸性条件下でのＶ、Ｗ、Ｅのハメット定数の合計が０．４５より大きく、かつ
式中、
Ｗは、Ｙに対してオルト位又はパラ位にあり、
−  Ｙは、−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（＝Ｏ）−又は−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、ｍは１、２又は３であり、特に１又は２であり、より特に１であり、
−  Ｚは、電子吸引性脱離基である。
【００１５】
特定の実施形態では、
−  Ｘは、式２、２ａ、３、３ａ又は４の、特に式２、２ａ、３又は３ａの、より特に式２又は２ａの部分から選択され、
【化４】
2021535139.tif 000005
式中、
−  各Ｒ１及びＲ２は、互いに独立して、Ｈ又はＢから選択され、少なくともＲ１又はＲ２は、Ｂであり、
−  Ｒ３は、Ｈ又はＢから選択され、
−  Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル又はアリールから選択され、アルデヒド基又はケト基は、酸に不安定な保護基で保護され得、
−  Ｂは、酸に不安定なアミン保護基であり、
−  Ｔは、部分、−Ｃ１〜１２アルキル−、（−Ｃ２Ｈ４Ｏ−）１〜１２、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＪＲ９−、−ＪＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＪＲ９−のうちの少なくとも１つを含む直鎖状又は分岐状のスペーサーであり、式中、
Ｊは、Ｃ又はＮであり、特にＮであり、
特にＴは：
−Ｃ１〜Ｃ１２アルキル−から、特にＣ１〜６アルキルから、より特にＣ１〜３アルキル、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｒ５’−ＮＲ９’Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ５’−ＮＲ９’−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｒ５’−ＮＲ９’−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ５’−ＮＲ９’−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ６−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ６−、−Ｒ５−フェニル−Ｒ６−、−Ｒ５−フェニル−、−フェニル−Ｒ６−、−フェニル−、
から選択されるスペーサーであり、式中、
Ｒ５、Ｒ５’及びＲ６は、互いに独立して、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル又は（−Ｃ２Ｈ４Ｏ−）１〜１２から、特にＣ１〜Ｃ６アルキルから、特にＣ１〜Ｃ３アルキルから選択され、かつ、
Ｒ９及びＲ９’は、互いに独立して、Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、−Ｃ１〜６アルキル−ＮＨ２、−Ｃ１〜６アルキル−ＮＨＢ、−Ｃ１〜６アルキル−ＮＢ２、−Ｒ１５、−Ｃ１〜６アルキル−Ｒ１５、−Ｃ１〜６アルキル−ＮＨ−Ｒ１５から、特にＨ及びＣ１〜２アルキルから選択され、より特にＲ９は、Ｈであり、式中、
Ｂは、独立して選択される酸に不安定なアミン保護基であり、
Ｒ１５は、アルデヒド部分と反応することができるブロッキング剤であり、特にＲ１５は、システイニル、スレオニニル、２−メルカプトエタノール、システアミン、エタンジチオール、ヒドロキシルアミン、Ｏ−メチルヒドロキシルアミン、Ｎ−メチルヒドロキシルアミン、ジチオスレイトール、ヒドラジンから、特にシステイニル及びＮ−メチルヒドロキシルアミンから、より特にシステイニルから選択され、式中、
ブロッキング剤のアミン部分及び／又はチオール部分は、独立して選択される酸に不安定なアミン保護基Ｂによって、特にＢｏｃ、及び／又は酸に不安定なチオール保護基によって、特にトリチルによって保護され得、
−  ｂは、０又は１であり、特に１であり、
−  Ｖは、−ＮＲ１１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１１−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１２−、−ピペラジニル−、−ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、
【化５】
2021535139.tif 000006
、
−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−から、特に、−ＮＲ１１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１１−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１２−、−ピペラジニル−、−ピリジニル−、ピリミジニルから、より特に−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、−Ｎ−（ＣＨ３）−、−ピペラジニル−、−ピリジニル−、ピリミジニルから選択される電子吸引性部分であり、式中、
Ｒ１１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから、特にＨ及びＣ１〜２アルキルから選択され、より特にＲ１１はＨであり、
Ｒ１２は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから、特にＨ及びＣ１〜２アルキルから選択され、より特にＲ１２はメチルであり、
−  ａは０又は１であり、ａとｂとの合計は、１又は２であり、
−  Ｕは、フェニル又は５員若しくは６員のヘテロアリール部分であり、特にフェニル又は６員のヘテロアリール部分であり、より特にフェニルであり、これは部分Ｖ、Ｗｑ及びＥｎの少なくとも１つに結合し、かつＣ１〜６アルキルによって、特にＣ１〜３アルキルによって任意に置換され得、式中、
Ｖは上記のとおり定義され、
Ｗは、−Ｎ３、−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ８、−Ｓ−Ｓ−Ｒ８、−Ｏ−ＣＨ２−Ｎ３、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−ＣＨ２−Ｎ３、−Ｎ＝Ｎ−フェニル、−Ｎ＝Ｎ−Ｒ８、
【化６】
2021535139.tif 000007
から、特に−Ｎ３、−Ｎ＝Ｎ−Ｒ８、−Ｏ−ＣＨ２−Ｎ３、−Ｓ−Ｓ−Ｒ８から選択され、式中、
Ｒ８は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル又は−（ＣＨ２）ｐ−ＮＭｅ２であり、特に、ピリジル又は−Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、ｐは、１、２、３又は４であり、
Ｅは、酸性条件下で電子吸引基であり、
ｎは、０〜４の間、特に０〜２の間の整数であり、より特に０又は１の整数であり、かつｑは、０〜４の間の、特に０〜２の間の整数であり、より特に０及び１の整数であり、ｎとｑとの合計は、４以下であり、式中、
Ｕがフェニル部分であり、かつＹが−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−である場合、酸性条件下でのＶ、Ｗ、Ｅのハメット定数の合計が０．４５より大きく、
−  Ｙは、−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（＝Ｏ）−又は−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、ｍは、１、２又は３であり、特に１又は２であり、より特に１であり、
−  Ｚは、電子吸引性脱離基である。
【００１６】
特定の実施形態では、
−  Ｘは、式２、２ａ、３、３ａ又は４の、特に式２、２ａ、３又は３ａの、より特に式２又は２ａの部分から選択され、
【化７】
2021535139.tif 000008
式中、
−  各Ｒ１及びＲ２は、互いに独立して、Ｈ又はＢから選択され、少なくともＲ１又はＲ２は、Ｂであり、
−  Ｒ３は、Ｈ又はＢから選択され、
−  Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル又はアリールから選択され、アルデヒド基又はケト基は、酸に不安定な保護基によって保護され得、
−  Ｂは、酸に不安定なアミン保護基であり、
−  Ｔは：
−Ｃ１〜Ｃ１２アルキル−から、特にＣ１〜６アルキルから、より特にＣ１〜３アルキル、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｒ５’−ＮＲ９’Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ５’−ＮＲ９’−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ６−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ６−、−Ｒ５−フェニル−Ｒ６−、−Ｒ５−フェニル−、−フェニル−Ｒ６−、−フェニル−、
から選択されるスペーサーであり、式中、
Ｒ５、Ｒ５’及びＲ６は、互いに独立して、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルから、特にＣ１〜Ｃ６アルキルから、特にＣ１〜Ｃ３アルキルから選択され、Ｒ９及びＲ９’は、互いに独立して、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから、特にＨ及びＣ１〜２アルキルから選択され、より特にＲ９は、Ｈであり、
−  ｂは、０又は１であり、特に１であり、
−  Ｖは、−ＮＲ１１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１１−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１２−、−ピペラジニル−、−ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、
【化８】
2021535139.tif 000009
、
−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−から、特に、−ＮＲ１１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１１−、Ｓ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１２−、−ピペラジニル−、−ピリジニル−、ピリミジニルから、より特に−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、−Ｎ−（ＣＨ３）−、−ピペラジニル−、−ピリジニル−、ピリミジニルから選択される電子吸引性部分であり、式中、
Ｒ１１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから、特にＨ及びＣ１〜２アルキルから選択され、より特にＲ１１は、Ｈであり、
Ｒ１２は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから、特にＨ及びＣ１〜２アルキルから選択され、より特にＲ１２は、メチルであり、
−  ａは、０又は１であり、ａとｂとの合計は、１又は２であり、
−  Ｕは、フェニル又は５員若しくは６員のヘテロアリール部分であり、特にフェニル又は６員のヘテロアリール部分であり、より特にフェニルであり、これは部分Ｖ、Ｗｑ及びＥｎの少なくとも１つに結合し、かつＣ１〜６アルキルによって、特にＣ１〜３アルキルによって任意に置換され得、式中、
Ｖは、上記のとおり定義され、
Ｗは、−Ｎ３、−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ８、−Ｓ−Ｓ−Ｒ８、−Ｏ−ＣＨ２−Ｎ３、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−ＣＨ２−Ｎ３、−Ｎ＝Ｎ−フェニル、−Ｎ＝Ｎ−Ｒ８、
【化９】
2021535139.tif 000010
から、特に、−Ｎ３、−Ｎ＝Ｎ−Ｒ８、−Ｏ−ＣＨ２−Ｎ３、−Ｓ−Ｓ−Ｒ８から選択され、式中、
Ｒ８は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル又は−（ＣＨ２）ｐ−ＮＭｅ２であり、特に、ピリジル又は−Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、ｐは、１、２、３又は４であり、
Ｅは、酸性条件下で電子吸引基であり、
ｎは０〜４の間の、特に０〜２の間の整数であり、より特に０又は１の整数であり、かつｑは０〜４の間の、特に０〜２の間の整数である、より特に０及び１の整数であり、ｎとｑとの合計は４以下であり、かつ式中、
Ｕがフェニル部分であり、かつＹが−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−である場合、酸性条件下でのＶ、Ｗ、Ｅのハメット定数の合計が０．４５より大きく、かつ式中、
特に、ＷはＹに対してオルト位又はパラ位にあり、
−  Ｙは、−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（＝Ｏ）−又は−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、ｍは、１、２又は３であり、特に１又は２であり、より特に１であり、
−  Ｚは、電子吸引性脱離基である。
【００１７】
特定の実施形態では、
−  Ｘは、式２、２ａ、３、３ａ又は４の、特に、式２、２ａ、３又は３ａの、より特に、式２又は２ａの、最も特に式２の部分から選択され、
【化１０】
2021535139.tif 000011
式中、
−  各Ｒ１及びＲ２は、互いに独立して、Ｈ又はＢから選択され、少なくともＲ１又はＲ２は、Ｂであり、
−  Ｒ３は、Ｈ又はＢから選択され、
−  Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル又はアリールから選択され、アルデヒド基又はケト基は、酸に不安定な保護基で保護され得、
−  Ｂは、酸に不安定なアミン保護基であり、
−  Ｔは：
−Ｃ１〜Ｃ１２アルキル−から、特にＣ１〜６アルキルから、より特にＣ１〜３アルキル、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ６−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｒ５−ＮＲ９Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ６−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ６−、−Ｒ５−フェニル−Ｒ６−、−Ｒ５−フェニル−、−フェニル−Ｒ６−、−フェニル−、
から選択されるスペーサーであり、式中、
Ｒ５及びＲ６は、互いに独立して、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルから、特にＣ１〜Ｃ６アルキルから、特にＣ１〜Ｃ３アルキルから選択され、Ｒ９は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから、特にＨ及びＣ１〜２アルキルから選択され、より特にＲ９は、Ｈであり、
−  ｂは、０又は１であり、特に１であり、
−  Ｖは、−ＮＲ１１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１１−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１２−、−ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−から、特に−ＮＲ１１−Ｃ（＝Ｏ）−、Ｓ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１２−、−ピリジニル−、ピリミジニルから選択される電子吸引性部分であり、式中、
Ｒ１１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから、特にＨ及びＣ１〜２アルキルから選択され、より特にＲ１１は、Ｈであり、
Ｒ１２は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから、特にＨ及びＣ１〜２アルキルから選択され、より特にＲ１２は、メチルであり、
−  ａは０又は１であり、ａとｂとの合計は、１又は２であり、
−  Ｕは、フェニル又は５員若しくは６員のヘテロアリール部分であり、特にフェニル又は６員のヘテロアリール部分であり、これは、部分Ｖ、Ｗ及びＥのうちの少なくとも１つに結合しており、式中、
Ｖは、上記のとおり定義され、
Ｗは、−Ｎ３、−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ８、−ＳＳＲ８、−ＯＣＨ２Ｎ３、−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＣＨ２−Ｎ３、−Ｎ＝Ｎ−フェニル、−Ｎ＝Ｎ−ピリジン、
【化１１】
2021535139.tif 000012
から選択され、式中、
Ｒ８は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、又は−（ＣＨ２）ｐ−ＮＭｅ２であり、ｐは、１、２、３又は４であり、
Ｅは、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−ＣＦ３、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＳＯ２Ｍｅ、−ＳＯＭｅ、−ＳＯ２Ｅｔ、−ＳＯＥｔから、特に、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−ＣＦ３、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯ２Ｈから選択され、
Ｒ１３は、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＰＦ６から選択され、かつ式中、
Ｕがフェニル部分であり、かつＹが−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−である場合、酸性条件下でのＶ、Ｗ、Ｅのハメット定数の合計が０．４５より大きく、かつ式中、
特に、Ｗは、Ｙに対してオルト位又はパラ位にあり、
−  Ｙは、−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（＝Ｏ）−又は−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、ｍは、１、２又は３であり、特に１又は２であり、より特に１であり、
−  Ｚは、電子吸引性脱離基である。
【００１８】
式１のリンカー分子は、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）後のペプチドの精製に適している。
【００１９】
リンカー分子を使用してＳＰＰＳ後にペプチドを精製する一般的なアプローチは、最後のカップリングのステップでリンカー分子をペプチドのＮ末端にカップリングさせるアプローチである。このカップリングのステップでは、ペプチドのＮ末端がリンカー分子を求核攻撃して、このリンカーの部分Ｙと共有結合性カルバメート結合又はアミド結合を形成する一方で、電子吸引性の脱離基Ｚが放出される。その後、ＴＦＡを加えることによってペプチドリンカー構築物が合成樹脂から切断される。
【００２０】
本発明によるリンカーは、例えばＴＦＡを使用することによってペプチドリンカー構築物が切断される場合に酸性条件下で安定している。
【００２１】
リンカーの部分Ｘは、精製時に使用される樹脂などの官能化固相にカップリングされ得る。部分Ｘは、アルデヒド、ケトン、アミノオキシ、ヒドラジンなどの官能化固相の適切な部分と反応することで、ヒドラゾン結合又はオキシム結合を形成し得る。
【００２２】
部分Ｔは、一般的に適用される精製条件で非反応性のスペーサーを表す。
【００２３】
部分Ｔは、部分Ｕに直接結合している、又は部分Ｖを介して結合している。
【００２４】
部分Ｕは、酸性条件下、特にＴＦＡ＞５０％、水の存在下、ｐＨ＜０でのリンカー分子の安定性に寄与する。これは、電子吸引性部分Ｅ、Ｗ、Ｖの少なくとも１つに結合している複素環部分又はフェニル部分を使用することのいずれかによって達成される。
【００２５】
電子吸引部分（Ｅ、Ｗ、Ｖ）がフェニル部分に結合される場合、ペプチドに結合したリンカー分子のベンジル位は電子密度が低くなるため、酸触媒による分解の影響を受けにくくなる。酸性条件下での本発明のリンカー分子の十分な安定性のために、電子吸引の特定の閾値が満たされる必要がある。この閾値は、０．４５より大きい酸性条件下でのＶ、Ｗ、Ｅのハメット定数（σｍ及びσｐ）の合計として表される。Ｈａｍｍｅｔｔ定数はＨａｎｓｃｈ  ａｎｄ  Ｔａｆｔ（１９９１）、Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９１：１６５−１９５に従って計算される。正のハメット定数は、置換基がフェニル部分に電子吸引効果を発揮する能力を反映し、負の値は、置換基が電子供与効果を発揮することを示している。
【００２６】
ハメット定数は、メタ位（σｍ）及びパラ位（σｐ）の安息香酸誘導体のフェニルのコアの置換基について経験的に決定された定数であり、異なる酸性度（ｐＫａ）をもたらす。本発明の文脈において、この位置は、部分Ｙの結合に関連して決定される。オルト位の置換基については、パラ位のハメット値は良好な近似であり、したがって、本発明の文脈において置換基Ｖ、Ｗ、及びＥのハメット値の合計を計算するために使用される。
【００２７】
留意すべきことに、ハメット定数は、酸性条件下で置換基Ｖ、Ｗ、及びＥについて計算される。例えば、中性ｐＨのアミン部分は、ハメット定数がσｍ＝−０．１６及びσｐ＝−０．６６であり、したがって電子を押し出す置換基により特徴付けられる。酸性条件下では、アミン部分がプロトン化される。プロトン化アミンについては、ハメット定数はσｍ＝＋０．８６及びσｐ＝＋０．６０であり、プロトン化アミンが電子吸引性置換基であることを示し、これはまた、Ｕ上の置換基として直接であれ、又はＵのπ共役であれ、プロトン化形態におけるＵから共役π系を介して電子を吸引することができる芳香族アミンも含む。
【００２８】
０．４５より大きいハメット定数の合計の閾値は、Ｕがフェニル部分であり、かつＹが−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、ｍ＝１である場合に適用され、これは、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−がベンジル位に良好な脱離を含み、酸触媒による分解を促進するためである。したがって、芳香環の電子密度は、Ｙのベンジル位のカチオンの安定化を防ぐのに十分に低い必要がある。
【００２９】
【表１】
2021535139.tif 000013
【００３０】
部分Ｙが−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（＝Ｏ）−の場合、−Ｃ（＝Ｏ）−はベンジル位における良好な脱離基ではないため、この閾値は必要ではない。
【００３１】
複素環式部分Ｕを含む酸性条件下でのリンカー分子の安定性のために、特定の部分Ｖ、Ｗ及びＥを選択するためのそのような余剰の閾値は必要ではない。複素環式部分自体はフェニル部分と比較して電子不足であるため、酸性条件下でのリンカー分子の安定性には、Ｖ、Ｗ、及びＥの任意の組み合わせで十分であるようである。特に、Ｕが窒素含有複素環である場合、ペプチドの酸性放出中に窒素がプロトン化され、Ｕの芳香族系の電子密度が特に低くなる。したがって、ベンジルカチオンを安定化することができない。
【００３２】
酸性条件下でのリンカー分子の安定性を媒介することは別として、部分Ｖ、Ｗ及びＥは、ペプチドの放出メカニズムに関して重要である。さらに、それらは酸性条件下でのリンカー分子の溶解性に寄与することができる。
【００３３】
部分Ｗは、リンカーの崩壊、したがってペプチドの放出を引き起こす還元可能な置換基である。還元部分Ｗを含むリンカーは、還元中間体とも呼ばれる。安定したリンカー分子とは対照的に、還元中間体は不安定である。還元中間体の不安定性は、ｐＨに依存する。部分Ｗがプロトン化可能である場合（例えば、ピリジル）、それはまた、酸性条件下でのリンカー分子の溶解性にも寄与する。
【００３４】
部分Ｅは電子求引性置換基であり、これは酸性条件下で電子求引性効果を示す。例えば、酸性条件下で正のハメット定数を有する部分は、特にｐＨ３〜６、より特にｐＨ４．５にて、電子吸引性である。部分Ｅがプロトン化可能である場合、それは酸性条件下でのリンカー分子の溶解性にも寄与する。
【００３５】
部分Ｅに加えて、又は代替的に、部分Ｖは、酸性条件下で電子吸引効果を示し得る。また、部分Ｖは、酸性条件下でのリンカーの安定性及び溶解性に寄与し得る。
【００３６】
本発明によるリンカー分子は、アミンスイッチメカニズム（図５、６及び７を参照）又はカルバメートスイッチメカニズム（図８を参照）を介してペプチドを放出し得る。
【００３７】
部分Ｙは、−Ｃ（＝Ｏ）−部分又は−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−部分のいずれかである。リンカー分子がカップリングすると、アミド（−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−）部分又はカルバメート（−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−）部分がリンカー分子とペプチドのＮ末端との間に形成される。精製後、このペプチドは１．４又は１．６の脱離又は求核攻撃のいずれかによる還元条件下でのリンカー分子から、よって精製媒体から放出される。この還元刺激はＷを還元型に変換し、電子供与基及び求核試薬として機能するようになり、よってペプチドの放出が可能になる。
【００３８】
特定の実施形態では、Ｘは、式２又は３の部分から選択される。
【００３９】
特定の実施形態では、Ｘは、式２の部分から選択される。
【００４０】
ヒドラゾン又はオキシム結合の形成による部分Ｘの官能化固相へのカップリングに必要な反応時間は、式４の部分を有するリンカーを使用する場合は長く、式２又は３の部分を有するリンカーを使用する場合は短くなる。固体支持体のアルデヒド又はケトン部分と、式３の部分Ｘとの間のヒドラゾン結合の形成は可逆的である。この可逆性により、発明者は、精製中の各洗浄ステップ後にペプチド材料の最大約１０％の損失を観察した。これとは対照的に、式２の部分を有するリンカーを使用した場合、ペプチド材料の損失はほとんど観察されなかった。
【００４１】
特定の実施形態では、ＵはＣ１〜６アルキルで置換されている。
【００４２】
特定の実施形態では、ＵはＣ１〜３アルキルで置換されている。
【００４３】
特定の実施形態では、Ｕはメチルで置換されている。
【００４４】
Ｕが１つ以上のアルキル部分でさらに置換されている場合は、アルキル部分のハメット値が考慮される。Ｕがさらにフェニル部分又はヘテロ原子で置換されている場合には、Ｖ、Ｗ、Ｅ及び任意にアルキル置換基のハメット値の合計が０．４５より大きい。特定の実施形態では、Ｅは、ピペリジニル、ピペラジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、−Ｎ（Ｃ２Ｈ４）２ＮＨ２、−Ｎ（Ｃ２Ｈ４）２Ｎ−Ｂ、−Ｎ＝Ｎ−フェニル、−Ｎ＝Ｎ−Ｒ８、−（ＣＨ２）ｒ−ＮＨ−Ｃ１〜６アルキル、−（ＣＨ２）ｒ−Ｎ（Ｃ１〜６アルキル）２−、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−ＣＦ３、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＳＯ２Ｍｅ、−ＳＯＭｅ、−ＳＯ２Ｅｔ、−ＳＯＥｔから選択され、
Ｒ８は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル又は−（ＣＨ２）ｐ−ＮＭｅ２であり、特にピリジル又は−Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、ｐは１、２、３又は４であり、かつ
Ｂは、本明細書で定義されるとおり酸に不安定なアミン保護基であり、特に−Ｃ（＝Ｏ）ＯｔＢｕ（Ｂｏｃ）又はＣ（＝Ｏ）ＣＰｈ３であり、かつ
ｒは、０、１、２、３又は４であり、特に０、１又は２である。
【００４５】
特定の実施形態では、Ｅは、ピペリジニル、ピペラジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、−（ＣＨ２）ｒ−ＮＨ−Ｃ１〜６アルキル、−（ＣＨ２）ｒ−Ｎ（Ｃ１〜６アルキル）２−、−Ｎ＝Ｎ−フェニル、−Ｎ＝Ｎ−Ｒ８、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−ＣＦ３、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯ２Ｈから選択され、ｒは、０、１、２、３又は４であり、特に０、１又は２である。
【００４６】
特定の実施形態では、Ｅは、ピペリジニル、ピペラジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピリダジニル−ＮＨ−Ｃ１〜６アルキル、−Ｎ（Ｃ１〜６アルキル）２−、−Ｎ＝Ｎ−ピリジニル又は−Ｂｒから選択される。
【００４７】
特定の実施形態では、Ｅは、ピペリジニル、ピペラジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピリダジニル−ＮＨ−Ｃ１〜６アルキル、−Ｎ（Ｃ１〜６アルキル）２−、又は−Ｂｒから選択される。
【００４８】
特定の実施形態では、Ｅは、ピリジル、ピリミジニル、ピリダジニル−ＮＨ−Ｃ１〜６アルキル、−Ｎ（Ｃ１〜６アルキル）２−、又は−Ｂｒから選択される。
【００４９】
特定の実施形態では、Ｅは、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、−Ｎ＝Ｎ−フェニル、−Ｎ＝Ｎ−Ｒ８、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−ＣＦ３、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＳＯ２Ｍｅ、−ＳＯＭｅ、−ＳＯ２Ｅｔ、−ＳＯＥｔから選択され、Ｒ８は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル又は−（ＣＨ２）ｐ−ＮＭｅ２であり、特にピリジル又は−Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、ｐは１、２、３又は４である。
【００５０】
特定の実施形態では、Ｅは、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、−Ｎ＝Ｎ−フェニル、−Ｎ＝Ｎ−Ｒ８、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−ＣＦ３、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯ２Ｈから選択され、Ｒ８は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル又は−（ＣＨ２）ｐ−ＮＭｅ２であり、特にピリジル又は−Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、ｐは１、２、３又は４である。
【００５１】
特定の実施形態では、Ｅは、ピペリジニル、ピペラジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、−（ＣＨ２）ｒ−ＮＨ−Ｃ１〜６アルキル、−（ＣＨ２）ｒ−Ｎ（Ｃ１〜６−アルキル）２−から選択され、特に−（ＣＨ２）ｒ−ＮＨ−Ｃ１〜３−アルキル、−（ＣＨ２）ｒ−Ｎ（Ｃ１〜３アルキル）２−、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−ＣＦ３、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＳＯ２Ｍｅ、−ＳＯＭｅ、−ＳＯ２Ｅｔ、−ＳＯＥｔから選択され、ｒは０、１又は２であり、特に０である。
【００５２】
特定の実施形態では、Ｅは、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−ＣＦ３、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＳＯ２Ｍｅ、−ＳＯＭｅ、−ＳＯ２Ｅｔ、−ＳＯＥｔから選択される。
【００５３】
特定の実施形態では、Ｅは、ピペリジニル、ピペラジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、−（ＣＨ２）ｒ−ＮＨ−Ｃ１〜６アルキル、−（ＣＨ２）ｒ−Ｎ（Ｃ１〜６アルキル）２−から選択され、特に−（ＣＨ２）ｒ−ＮＨ−Ｃ１〜３アルキル、−（ＣＨ２）ｒ−Ｎ（Ｃ１〜３アルキル）２−、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−ＣＦ３、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯ２Ｈから選択される。
【００５４】
特定の実施形態では、Ｅは、ピペリジニル、ピペラジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−ＣＦ３、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯ２Ｈから選択され、ｒは、０、１又は２であり、特に０である。
【００５５】
特定の実施形態では、Ｅは、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−ＣＦ３、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯ２Ｈから選択される。
【００５６】
特定の実施形態では、Ｅは、ピリジル、ピリミジニル、ピリダジニル、−ＮＨ−Ｃ１〜６アルキル、−Ｎ（Ｃ１〜６アルキル）２−、特に−ＮＨ−Ｃ１−３アルキル、−Ｎ（Ｃ１−３アルキル）２−、又は−Ｂｒから選択される。
【００５７】
特定の実施形態では、Ｅは、ピリジル、ピリミジニル、ピリダジニル又は−Ｂｒから選択される。
【００５８】
特定の実施形態では、ｎは、０、１又は２である。
【００５９】
特定の実施形態では、Ｅは、ピリジル、ピリミジニル、ピリダジニルから選択され、かつｎは１である、又はＥは−Ｂｒであり、かつｎは１又は２である。
【００６０】
アミンスイッチを介するペプチド放出（図５、図６、図７）には、プロトン化することができる塩基性窒素を必要とする。そのような塩基性窒素は、部分Ｅによって提供され得る。
【００６１】
特定の実施形態では、Ｅは、−（ＣＨ２）ｒ−ＮＨ−Ｃ１〜６アルキル、−（ＣＨ２）ｒ−Ｎ（Ｃ１〜６アルキル）２−から選択され、特に−（ＣＨ２）ｒ−ＮＨ−Ｃ１〜３アルキル、−（ＣＨ２）ｒ−Ｎ（Ｃ１〜３アルキル）２−、ピペリジニル、ピペラジニル、ピリジル、ピリミジニル及びピリダジニルから選択され、ｒは０、１又は２であり、特に０であり、ここで特にｎは、１である。
【００６２】
特定の実施形態では、Ｅは、−（ＣＨ２）ｒ−ＮＨ−Ｃ１〜６アルキル、−（ＣＨ２）ｒ−Ｎ（Ｃ１〜６アルキル）２−から選択され、特に−（ＣＨ２）ｒ−ＮＨ−Ｃ１〜３アルキル、−（ＣＨ２）ｒ−Ｎ（Ｃ１〜３アルキル）２−、ピリジル、ピリミジニル及びピリダジニルから選択され、ｒは０、１又は２であり、特に０であり、かつｎは１である。
【００６３】
特に、カルバメートスイッチ（図８）によってペプチドを放出するリンカー分子は、部分Ｗの還元に用いられる還元剤によって還元されない電子吸引部分を含む。カルバメートスイッチに適した置換基Ｅは、ハロゲン又はニトロ置換基などの非プロトン性であり得る。また、０未満である対応する酸のｐＫａによって特徴付けられる置換基もまた、カルバメートスイッチに適した置換基Ｅである。
【００６４】
特定の実施形態では、Ｅは、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＯ２、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＣ、ＢＦ２、−ＰＦ４、−ＯＣＦ３、−ＳＯＣＦ３、−ＳＯＲ８、−ＳＯ２Ｒ８である。
【００６５】
特定の実施形態では、Ｅは、−Ｂｒである。
【００６６】
特定の実施形態では、Ｅは−Ｂｒであり、ｎは１又は２である。
【００６７】
例えば疎水性ペプチドの精製のために、酸性条件下でのリンカーの溶解性を高める必要がある場合、Ｅはプロトン化可能な部分から選択され得る。特定の実施形態では、Ｅは、ピペリジニル、ピペラジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、−Ｎ（Ｃ２Ｈ４）２ＮＨ２、−Ｎ（Ｃ２Ｈ４）２Ｎ−Ｂ、−Ｎ＝Ｎ−Ｒ８、−（ＣＨ２）ｒ−ＮＨ−Ｃ１〜６アルキル、−（ＣＨ２）ｒ−Ｎ（Ｃ１〜６アルキル）２−、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＳＯ２Ｍｅ、−ＳＯＭｅ、−ＳＯ２Ｅｔ、−ＳＯＥｔから選択され、Ｒ８は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、−（ＣＨ２）ｐ−ＮＭｅ２から選択され、ここでｐは１、２、３又は４であり、特に１又は２である。
【００６８】
特定の実施形態では、Ｂは、
−  Ｂｏｃ（−Ｃ（＝Ｏ）ＯｔＢｕ）、Ｅｅｉ（＝ＣＭｅＯＥｔ、１−エトキシエチリデン）、トリチル（−Ｃ（Ｐｈ）３）、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＰｈ３、Ｍｍｔ（−Ｃ（Ｐｈ）２Ｃ６Ｈ４ＯＭｅ）、ＤＭＴ（−Ｃ（Ｐｈ）（Ｃ６Ｈ４ＯＭｅ）２）、Ｃｂｚ（−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２Ｐｈ）、ベンジリデンアミン（＝ＣＰｈ）、フタリミド（＝（ＣＯ）２Ｃ６Ｈ４）、ｐ−トルエンスルホンアミド（−ＳＯ２Ｃ６Ｈ４Ｍｅ）、ベンジルアミン（−ＣＨ２Ｐｈ）、アセトアミド（−ＣＯＭｅ）、トリフルオロアセトアミド（−ＣＯＣＦ３）、Ｄｄｅ（１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシ−１−イリデン）−３−エチル）、及び１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシ−１−イリデン）−３−メチルブチル（ｉｖＤｄｅ）から選択され、特にＢは、Ｂｏｃ又はＥｅｉであり、ここでより特にＢは、Ｂｏｃである、又は
−  以下から選択されるアセタール又はケタールの保護基から選択され、
【化１２】
2021535139.tif 000014
式中、ｒは０〜１２であり、特に０〜６、より特に０、１又は２であり、かつＲ１０は、−Ｃ１〜Ｃ１２アルキル−であり、特にＣ１〜６アルキル、より特にＣ１〜３アルキルである。
【００６９】
特定の実施形態では、Ｂは
−  Ｂｏｃ（−Ｃ（＝Ｏ）ＯｔＢｕ）、Ｅｅｉ（＝ＣＭｅＯＥｔ，１−エトキシエチリデン）、トリチル（−Ｃ（Ｐｈ）３）、Ｍｍｔ（−Ｃ（Ｐｈ）２Ｃ６Ｈ４ＯＭｅ）、ＤＭＴ（−Ｃ（Ｐｈ）（Ｃ６Ｈ４ＯＭｅ）２）、Ｃｂｚ（−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２Ｐｈ）、ベンジリデンアミン（＝ＣＰｈ）、フタリミド（＝（ＣＯ）２Ｃ６Ｈ４）、ｐ−トルエンスルホンアミド（−ＳＯ２Ｃ６Ｈ４Ｍｅ）、ベンジルアミン（−ＣＨ２Ｐｈ）、アセトアミド（−ＣＯＭｅ）、トリフルオロアセトアミド（−ＣＯＣＦ３）、Ｄｄｅ（１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキサ−１−イリデン）−３−エチル）及び１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキサ−１−イリデン）−３−メチルブチル（ｉｖＤｄｅ）特にＢはＢｏｃ又はＥｅｉであり、より特にＢはＢｏｃである、又は
−  以下から選択されるアセタール又はケタールの保護基から選択され、
【化１３】
2021535139.tif 000015
式中、ｒは０〜１２であり、特に０〜６であり、より特に０、１又は２であり、かつ
Ｒ１０は、−Ｃ１〜Ｃ１２アルキル−であり、特にＣ１〜６アルキルであり、より特にＣ１〜３アルキルである。
【００７０】
特定の実施形態では、Ｂは、Ｂｏｃ（−Ｃ（＝Ｏ）ＯｔＢｕ）、Ｅｅｉ（＝ＣＭｅＯＥｔ，１−エトキシエチリデン）、トリチル（−Ｃ（Ｐｈ）３）、Ｍｍｔ（−Ｃ（Ｐｈ）２Ｃ６Ｈ４ＯＭｅ）、ＤＭＴ（−Ｃ（Ｐｈ）（Ｃ６Ｈ４ＯＭｅ）２）、Ｃｂｚ（−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２Ｐｈ）、ベンジリデンアミン（＝ＣＰｈ）、フタリミド（＝（ＣＯ）２Ｃ６Ｈ４）、ｐ−トルエンスルホンアミド（−ＳＯ２Ｃ６Ｈ４Ｍｅ）、ベンジルアミン（−ＣＨ２Ｐｈ）、アセトアミド（−ＣＯＭｅ）、トリフルオロアセトアミド（−ＣＯＣＦ３）、Ｄｄｅ（１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキサ−１−イリデン）−３−エチル）及び１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキサ−１−イリデン）−３−メチルブチル（ｉｖＤｄｅ）から選択される。
【００７１】
特定の実施形態では、Ｂは、Ｂｏｃ又はＥｅｉ（＝ＣＭｅＯＥｔ，１−エトキシエチリデン）である。
【００７２】
特定の実施形態では、Ｂは、Ｂｏｃである。
【００７３】
特定の実施形態では、Ｂは、以下から選択されるアセタール又はケタールの保護基から選択され、
【化１４】
2021535139.tif 000016
式中、ｒは０〜１２であり、特に０〜６であり、より特に０、１又は２であり、Ｒ１０は、−Ｃ１〜Ｃ１２アルキル−であり、特にＣ１〜６アルキルである。
【００７４】
特定の実施形態では、Ｔは、部分−Ｃ１〜１２アルキル−、（−Ｃ２Ｈ４Ｏ−）１〜１２、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＪＲ９−、−ＪＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＪＲ９−、フェニル、５員若しくは６員のヘテロアリールのうちの少なくとも１つを含む直鎖状又は分岐状のスペーサーであり、式中、ＪはＣＨ又はＮであり、特にＮであり、式中、Ｒ９は、Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、−Ｃ１〜６アルキル−ＮＨ２、−Ｃ１〜６アルキル−ＮＨＢ、−Ｃ１〜６アルキル−ＮＢ２から、特にＨ及びＣ１〜２アルキルから独立して選択され、より特にＲ９は、Ｈであり、式中、Ｂは、独立して選択される酸に不安定なアミン保護基である。
【００７５】
特定の実施形態では、Ｔは、−Ｃ１〜１２アルキル−、（−Ｃ２Ｈ４Ｏ−）１〜１２、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＪＲ９−、−ＪＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＪＲ９−、フェニル、５員若しくは６員のヘテロアリールから独立して選択される１〜５個の部分を含む直鎖状又は分岐状のスペーサー、特に直鎖状のスペーサーである。
【００７６】
特定の実施形態では、Ｔは、部分−Ｃ１〜１２アルキル−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−、−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ９−、フェニル、ピペラジニル、ピロイル、ピラゾイル、イミダゾイル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、及びピリダジニルの少なくとも１つ、特に１〜５つを含む直鎖状又は分岐状のスペーサーである。
【００７７】
特定の実施形態では、Ｔは、部分−Ｃ１〜１２アルキル−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−、−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ９−、フェニル、イミダゾイル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、及びピリダジニルの少なくとも１つ、特に１〜５つを含む直鎖状又は分岐状のスペーサーである。
【００７８】
特定の実施形態では、Ｔは直鎖状のスペーサーである。
【００７９】
特定の実施形態では、Ｔは、部分−Ｃ１〜１２アルキル−、（−Ｃ２Ｈ４Ｏ−）１〜１２、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＪＲ９−、−ＪＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＪＲ９−の少なくとも１つを含む直鎖状又は分岐状のスペーサーであり、式中、ＪはＣ又はＮであり、特にＮであり、式中、Ｒ９は、Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、−Ｃ１〜６アルキル−ＮＨ２、−Ｃ１〜６アルキル−ＮＨＢ、−Ｃ１〜６アルキル−ＮＢ２から、特にＨ及びＣ１〜２アルキルから独立して選択され、より特にＲ９は、Ｈであり、式中、Ｂは、独立して選択される酸に不安定なアミン保護基である。
【００８０】
特定の実施形態では、スペーサーＴの全長は、０．５〜１００ｎｍの間である。
【００８１】
特定の実施形態では、Ｔは、−Ｃ１〜Ｃ１２アルキル−から、特にＣ１〜６アルキルから、より特にＣ１〜３アルキル、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｒ５’−ＮＲ９’Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ５’−ＮＲ９’−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｒ５’−ＮＲ９’−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ５’−ＮＲ９’−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ６−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ６−、−Ｒ５−フェニル−Ｒ６、−Ｒ５−フェニル、−フェニル−Ｒ６−、−フェニル−、−Ｒ５−ピロイル、−Ｒ５−ピラゾイル、−Ｒ５−イミダゾイル、Ｒ５−ピペラジニル−、−Ｒ５−ピリジニル、−Ｒ５−ピリミジニル、−Ｒ５−ピラジニル、−Ｒ５−ピリダジニル、−Ｒ５−ピロイル−Ｒ６−、−Ｒ５−ピラゾイル−Ｒ６−、−Ｒ５−イミダゾイル−Ｒ６−、−Ｒ５−ピペラジニル−Ｒ６−、−Ｒ５−ピリジニル−Ｒ６−、−Ｒ５−ピリミジニル−Ｒ６−、−Ｒ５−ピラジニル−Ｒ６−、−Ｒ５−ピリダジニル−Ｒ６−、ピロイル−Ｒ６−、ピラゾイル−Ｒ６−、イミダゾイル−Ｒ６−ピパラジニル−Ｒ６−、ピリジニル−Ｒ６−、ピリミジニル−Ｒ６−、ピラジニル−Ｒ６−、ピリダジニル−Ｒ６−、ピロイル、ピラゾイル、イミダゾイル、ピペラジニル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、及びピリダジニルから選択される。
【００８２】
特定の実施形態では、Ｔは、−Ｃ１〜Ｃ１２アルキル−から、特にＣ１〜６アルキルから、より特にＣ１〜３アルキル、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｒ５’−ＮＲ９’Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ５’−ＮＲ９’−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｒ５’−ＮＲ９’−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ５’−ＮＲ９’−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ６−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ６−、−Ｒ５−フェニル−Ｒ６−、−Ｒ５−フェニル−、−フェニル−Ｒ６−、−フェニル−、−Ｒ５−イミダゾイル、−Ｒ５−イミダゾイル−Ｒ６−、イミダゾイル−Ｒ６−、イミダゾイルから選択される。
【００８３】
特定の実施形態では、Ｔは、−Ｃ１〜Ｃ１２アルキル−から、特にＣ１〜６アルキルから、より特にＣ１〜３アルキル、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｒ５’−ＮＲ９’Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ５’−ＮＲ９’−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｒ５’−ＮＲ９’−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ５’−ＮＲ９’−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ６−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ６−、−Ｒ５−イミダゾイル、−Ｒ５−イミダゾイル−Ｒ６−、−イミダゾイル−Ｒ６−、イミダゾイルから選択される。
【００８４】
特定の実施形態では、Ｔは、−Ｃ１〜Ｃ１２アルキル−から、特にＣ１〜６アルキルから、より特にＣ１〜３アルキル、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｒ５’−ＮＲ９’Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ５’−ＮＲ９’−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｒ５’−ＮＲ９’−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ５’−ＮＲ９’−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ６−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ６−から選択される。
【００８５】
特定の実施形態では、Ｔは、−Ｃ１〜Ｃ１２アルキル−から、特にＣ１〜６アルキルから、より特にＣ１〜３アルキル、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ５’−ＮＲ９’Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−から選択され、特にＣ１〜３アルキル、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−から、より特にＣ１〜３アルキル又は−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−から選択され、Ｒ５、Ｒ５’、Ｒ６、Ｒ９’及びＲ９は上記で定義されるとおりである。
【００８６】
特定の実施形態では、Ｔは、部分−Ｃ１〜１２アルキル−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−、−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ９−、フェニル、５〜６員ヘテロアリールの少なくとも１つ、特に１〜５つを含む直鎖状又は分岐状のスペーサーであり、式中、Ｒ９は、Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、−Ｃ１〜６アルキル−ＮＨ２、−Ｃ１〜６アルキル−ＮＨＢ、−Ｃ１〜６アルキル−ＮＢ２、−Ｒ１５、−Ｃ１〜６アルキル−Ｒ１５、−Ｃ１〜６アルキル−ＮＨ−Ｒ１５から、特にＨ及びＣ１〜２アルキルから独立して選択され、特にＲ９はＨであり、式中、Ｂは独立して選択される酸に不安定なアミン保護基であり、式中、
Ｒ１５は、アルデヒド部分と反応することができるブロッキング剤であり、特にＲ１５は、システイニル、スレオニニル、２−メルカプトエタノール、システアミン、エタンジチオール、ヒドロキシルアミン、Ｏ−メチルヒドロキシルアミン、Ｎ−メチルヒドロキシルアミン、ジチオスレイトール、ヒドラジンから、特にシステイニル及びＮ−メチルヒドロキシルアミンから、より特にシステイニルから選択され、式中、
ブロッキング剤のアミン部分及び／又はチオール部分は、独立して選択される酸に不安定なアミン保護基Ｂによって、特にＢｏｃ、及び／又は酸に不安定なチオール保護基によって、特にトリチルによって保護され得る。
【００８７】
特定の実施形態では、Ｔは、部分−Ｃ１〜１２アルキル−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−、−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ９−、フェニル、ピロイル、ピラゾイル、イミダゾイル、ピペラジニル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニルの少なくとも１つ、特に１〜５つを含む直鎖状又は分岐状のスペーサーである。
【００８８】
特定の実施形態では、Ｔは、部分−Ｃ１〜１２アルキル−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−、−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ９−、フェニル、イミダゾイル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、及びピリダジニルの少なくとも１つ、特に１〜５つを含む直鎖状又は分岐状のスペーサーである。
【００８９】
特定の実施形態では、Ｔは、部分−Ｃ１〜１２アルキル−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−、−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ９−の少なくとも１つを含む直鎖状又は分岐状のスペーサーであり、式中、Ｒ９は、Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、−Ｃ１〜６アルキル−ＮＨ２、−Ｃ１〜６アルキル−ＮＨＢ、−Ｃ１〜６アルキル−ＮＢ２、−Ｒ１５、−Ｃ１〜６アルキル−Ｒ１５、−Ｃ１〜６アルキル−ＮＨ−Ｒ１５から、特にＨ及びＣ１〜２アルキルから独立して選択され、より特にＲ９はＨであり、式中、Ｂは独立して選択される酸に不安定なアミン保護基であり、
Ｒ１５は、アルデヒド部分と反応することができるブロッキング剤であり、特にＲ１５は、システイニル、スレオニニル、２−メルカプトエタノール、システアミン、エタンジチオール、ヒドロキシルアミン、Ｏ−メチルヒドロキシルアミン、Ｎ−メチルヒドロキシルアミン、ジチオスレイトール、ヒドラジンから、特にシステイニル及びＮ−メチルヒドロキシルアミンから、より特にシステイニルから選択され、ここで、
ブロッキング剤のアミン部分及び／又はチオール部分は、独立して選択される酸に不安定なアミン保護基Ｂによって、特にＢｏｃ、及び／又は酸に不安定なチオール保護基によって、特にトリチルによって保護され得る。
【００９０】
上記のとおり、スペーサーＴは、酸性条件下での保護基の除去を除いて、一般的に適用される精製条件では全般的に非反応性である。スペーサーＴは、リンカー分子の溶解性を増強し得る。特に、Ｒ９にて保護又は非保護のアミン部分を含む分岐状スペーサーは、溶解性の増強に寄与する。酸性条件下では、アミン保護基Ｂが除去され、アミンがプロトン化される。
【００９１】
特定の実施形態では、Ｔは、部分−Ｃ１〜１２アルキル−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−、−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ９−の少なくとも１つを含む直鎖状又は分岐状のスペーサーであり、式中、Ｒ９は、Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、−Ｃ１〜６アルキル−ＮＨ２、−Ｃ１〜６アルキル−ＮＨＢ、−Ｃ１〜６アルキル−ＮＢ２から、特に、Ｈ及びＣ１〜２アルキルから独立して選択され、より特にＲ９はＨであり、式中、Ｂは独立して選択される酸に不安定なアミン保護基である。
【００９２】
スペーサーＴはまた、ブロッキング機能を含み得る。特に、分岐状スペーサーは、アルデヒド部分に結合するのに適したブロッキング剤を含み得る。ペプチド精製に使用される固相がアルデヒド部分を含む場合（例えばアガロースビーズ）、リンカー化合物の部分Ｘは、例えばオキシム結合の形成によって固相に共有結合することができる。未反応のアルデヒド部分は、その後の精製時に不要な副反応を引き起こし得る。このような副反応を防ぐために、固相の非反応アルデヒド部分をスペーサーのブロッキング機能、例えばシステイニル部分によってブロックすることができる。
【００９３】
特定の実施形態では、Ｔは、部分−Ｃ１〜１２アルキル−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−、−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ９−の少なくとも１つを含む直鎖状又は分岐状のスペーサーであり、式中、Ｒ９は、Ｈ、Ｃ１〜４アルキル、−Ｒ１５、−Ｃ１〜６アルキル−Ｒ１５、−Ｃ１〜６アルキル−ＮＨ−Ｒ１５から、特にＨ及びＣ１〜２アルキルから独立して選択され、より特にＲ９はＨであり、式中、Ｂは独立して選択される酸に不安定なアミン保護基であり、
Ｒ１５は、アルデヒド部分と反応することができるブロッキング剤であり、特にＲ１５は、システイニル、スレオニニル、２−メルカプトエタノール、システアミン、エタンジチオール、ヒドロキシルアミン、Ｏ−メチルヒドロキシルアミン、Ｎ−メチルヒドロキシルアミン、ジチオスレイトール、ヒドラジンから、特にシステイニル及びＮ−メチルヒドロキシルアミンから、より特にシステイニルから選択され、ここで、
ブロッキング剤のアミン部分及び／又はチオール部分は、独立して選択される酸に不安定なアミン保護基Ｂによって、特にＢｏｃ、及び／又は酸に不安定なチオール保護基、特にトリチルによって保護され得る。
【００９４】
特定の実施形態では、Ｔは、−Ｃ１〜Ｃ１２アルキル−から、特にＣ１〜６アルキルから、より特にＣ１〜３アルキル、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ６−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ６−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｒ５−ＮＲ９Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−から、特に−Ｃ１〜Ｃ１２アルキル−から、特にＣ１〜６アルキルから、より特にＣ１〜３アルキル、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−、−Ｒ５−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−Ｒ６−、−Ｒ５−ＮＲ９−Ｒ５−ＮＲ９Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−、最も特に−Ｒ５−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６−から選択され、Ｒ５、Ｒ６及びＲ９は上記で定義したとおりである。
【００９５】
上記のとおり、部分Ｕ、Ｖ、Ｗ、Ｅは、酸性条件下でリンカーの安定性に寄与する。例えば、アミン又はピリジンなどの複素環を含む部分Ｕ又はＶを含むリンカーは、アミン又は複素環がプロトン化されるため、酸性条件下、特にＴＦＡ＞５０％、水の存在下ｐＨ＜０で安定である。さらに、プロトン化リンカーは、リンカー−ペプチド複合体の溶解性を向上させる。ｐＨがリンカーのｐＫａより高い場合、最後のステップのとおり、所望のペプチドの放出の際にリンカーが急速に分解するであろう。
【００９６】
特定の実施形態では、Ｖは、−ＮＲ１１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１１−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１２−（ＣＨ２）ｐ−、−ピペラジニル−（ＣＨ２）ｐ−、−ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、
【化１５】
2021535139.tif 000017
、
−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−から選択される電子吸引性部分であり、式中、
Ｒ１１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから、特にＨ及びＣ１〜２アルキルから選択され、より特にＲ１１はＨであり、
Ｒ１２は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから、特にＨ及びＣ１〜２アルキルから選択され、より特にＲ１２はメチルであり、
ｐは０、１又は２であり、特に０又は１である。
【００９７】
特定の実施形態では、Ｖは、−ＮＲ１１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１１−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１２−（ＣＨ２）ｐ−、−ピペラジニル−（ＣＨ２）ｐ−、−ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、
【化１６】
2021535139.tif 000018
、
−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−から選択される電子吸引性部分であり、式中、ピリジニル部分は、３位にてＵに接続される。
【００９８】
特定の実施形態では、Ｖは、−ＮＲ１１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１１−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１２−（ＣＨ２）ｐ−、−ピペラジニル−（ＣＨ２）ｐ−から選択される。
【００９９】
特定の実施形態では、Ｖは、−ＮＲ１１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１１−、−ＮＲ１２−（ＣＨ２）ｐ−、−ピペラジニル−（ＣＨ２）ｐ−から選択される。
【０１００】
特定の実施形態では、Ｖは、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、−Ｎ−（ＣＨ３）−、−ＮＨ−、−ピペラジニル−（ＣＨ２）ｐ−から選択される。
【０１０１】
特定の実施形態では、Ｖは、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、−Ｎ−（ＣＨ３）−、−ピペラジニル−（ＣＨ２）ｐ−から選択される。
【０１０２】
特定の実施形態では、Ｖは、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、−Ｎ−（ＣＨ３）−、−ピペラジニル−（ＣＨ２）ｐ−から選択され、ｐは、０又は１である。
【０１０３】
特定の実施形態では、Ｖは、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−及び−ピペラジニル−（ＣＨ２）ｐ−から選択され、ｐは、０又は１であり、特にｐは０である。
【０１０４】
特に、カルバメートスイッチを介してペプチドを放出するリンカー分子（図８）は、塩基性窒素原子を含んでおらず、そのような原子は対応する酸のｐＫａが２未満である。特定の実施形態では、Ｖは、−ＮＲ１１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１１−及び−Ｓ（＝Ｏ）−から、特に−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−及び−Ｃ（Ｏ＝）−ＮＨ−から選択され、より特にＶは、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−である。
【０１０５】
Ｖは、−ＮＲ１１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１１−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１２−、−ピペラジニル−、−ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、
【化１７】
2021535139.tif 000019
、
−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−から選択される電子吸引性部分であり、式中、Ｒ１１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから、特にＨ及びＣ１〜２アルキルから選択され、より特にＲ１１はＨであり、Ｒ１２は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから、特にＨ及びＣ１〜２アルキルから選択され、より特にＲ１２はメチルである。
【０１０６】
Ｖは、−ＮＲ１１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１１−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１２−、−ピペラジニル−、−ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−から選択される電子吸引性部分であり、式中、Ｒ１１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから、特にＨ及びＣ１〜２アルキルから選択され、より特にＲ１１はＨであり、Ｒ１２は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから、特にＨ及びＣ１〜２アルキルから選択され、より特にＲ１２はメチルである。
【０１０７】
Ｖは、−ＮＲ１１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１１−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１２−、−ピペラジニル−、−ピリジニル−、ピリミジニルから選択される電子吸引性部分であり、式中、Ｒ１１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから、特にＨ及びＣ１〜２アルキルから選択され、より特にＲ１１はＨであり、Ｒ１２は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから、特にＨ及びＣ１〜２アルキルから選択され、より特にＲ１２はメチルである。
【０１０８】
Ｖは、−ＮＲ１１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１１−、−ＮＲ１２−、−ピペラジニル−、−ピリジニル−、ピリミジニルから選択される電子吸引性部分であり、式中、Ｒ１１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから、特にＨ及びＣ１〜２アルキルから選択され、より特にＲ１１は、Ｈであり、Ｒ１２は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから、特にＨ及びＣ１〜２アルキルから選択され、より特にＲ１２はメチルである。
【０１０９】
Ｖは、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＨＮ−、−Ｎ−（ＣＨ３）−、−ピペラジニル−、−ピリジニル−、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニルから選択される電子吸引性部分である。
【０１１０】
Ｖは、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＨＮ−、−Ｎ−（ＣＨ３）−、−ピペラジニル−、−ピリジニル−、ピリミジニルから選択される電子吸引性部分である。
【０１１１】
特定の実施形態では、Ｖは、−ＮＲ１１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１１−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１２−、−ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−から選択される電子吸引性部分である。
【０１１２】
特定の実施形態では、Ｖは、−ＮＲ１１−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１１−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１２−及び−ピリジニル−、ピリミジニルから選択され、式中、Ｒ１１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから、特にＨ及びＣ１〜２アルキルから選択され、より特にＲ１１はＨであり、かつＲ１２は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから、特にＨ及びＣ１〜２アルキルから選択され、より特にＲ１２はメチルである。
【０１１３】
特定の実施形態では、Ｖは、−ＮＲ１１−Ｃ（＝Ｏ）−、Ｓ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１２−、−ピリジニル−、ピリミジニルから選択され、式中、Ｒ１１は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから選択され、かつＲ１２は、Ｈ及びＣ１〜４アルキルから選択される。
【０１１４】
特定の実施形態では、Ｖは、−ＮＲ１１−Ｃ（＝Ｏ）−、Ｓ（＝Ｏ）−、−ＮＲ１２−、−ピリジニル−、ピリミジニルから選択され、式中、Ｒ１１は、Ｈ及びＣ１〜２アルキルから選択され、かつＲ１２は、Ｈ及びＣ１〜２アルキルから選択される。
【０１１５】
特定の実施形態では、Ｖは、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ−（ＣＨ３）−、−ピリジニル−、ピリミジニルから選択される。
【０１１６】
特に、アミンスイッチを介してペプチドを放出するリンカー分子は、塩基性窒素原子を必要とする。塩基性窒素原子は、部分Ｖ、Ｅ又はＵ（Ｕ＝ヘテロアリール）を介して提供され得る。Ｕがフェニルである場合、塩基性窒素原子は、部分Ｖ又はＥを介して提供され得る。
【０１１７】
特定の実施形態では、Ｅ及びＶは上記のとおり選択され、Ｕがフェニルである場合には、少なくとも１つの部分Ｅ又はＶは以下から選択される：
−  Ｅ：ピペリジニル、ピペラジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、−Ｎ（Ｃ２Ｈ４）２ＮＨ２、−Ｎ（Ｃ２Ｈ４）２Ｎ−Ｂ、−Ｎ＝Ｎ−Ｒ８、−（ＣＨ２）ｒ−ＮＨ−Ｃ１〜６アルキル、−（ＣＨ２）ｒ−Ｎ（Ｃ１〜６アルキル）２−、−Ｎ３、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＳＯ２Ｍｅ、−ＳＯＭｅ、−ＳＯ２Ｅｔ、−ＳＯＥｔであって、Ｒ８は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、−（ＣＨ２）ｐ−ＮＭｅ２から選択され、ｐ及びＢは、本明細書に記載されるとおり定義されている、及び
−  Ｖ：−ＮＲ１２−（ＣＨ２）ｐ−、−ピペラジニル−（ＣＨ２）ｐ−、−ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、
【化１８】
2021535139.tif 000020
であって、特に−ＮＲ１２−（ＣＨ２）ｐ−、−ピペラジニル−（ＣＨ２）ｐ−、−ピリジニル、ピリミジニルであり、Ｒ１２及びｐは本明細書に記載されてとおり定義される。
【０１１８】
上記のとおり、Ｗは、還元可能な部分である。Ｗの還元時に、還元中間体はｐＨ依存的様式においてさらに分解し、遊離Ｎ末端を有するペプチドを放出する。
【０１１９】
特定の実施形態では、Ｗは、−Ｎ３、−ＮＯ２、−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ８、−Ｓ−Ｓ−Ｒ８、−Ｏ−ＣＨ２−Ｎ３、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−ＣＨ２−Ｎ３、−Ｎ＝Ｎ−フェニル、−Ｎ＝Ｎ−Ｒ８、
【化１９】
2021535139.tif 000021
から選択され、式中、
Ｒ８は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル又は−（ＣＨ２）ｐ−ＮＭｅ２であり、特にピリジル又は−Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、ｐは１、２、３又は４である。Ｃ１〜６アルキルは直鎖状又は分岐状であり得、例えばブチル又はｔｅｒｔ−ブチルであり得る。
【０１２０】
特定の実施形態では、Ｗは、−Ｎ３、−ＮＯ２、−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ８、−Ｓ−Ｓ−Ｒ８、−Ｏ−ＣＨ２−Ｎ３、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−ＣＨ２−Ｎ３、−Ｎ＝Ｎ−フェニル、−Ｎ＝Ｎ−Ｒ８、
【化２０】
2021535139.tif 000022
から選択される。
【０１２１】
特定の実施形態では、Ｗは、−Ｎ３、−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ８、−Ｓ−Ｓ−Ｒ８、−Ｏ−ＣＨ２−Ｎ３、−Ｎ＝Ｎ−Ｒ８から、特に−Ｎ３、−Ｎ＝Ｎ−Ｒ８、−Ｏ−ＣＨ２−Ｎ３、−Ｓ−Ｓ−Ｒ８から選択され、式中、Ｒ８は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、又は−（ＣＨ２）ｐ−ＮＭｅ２であり、特にピリジル又は−Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、ｐは１、２、３又は４である。
【０１２２】
特定の実施形態では、Ｗは、−Ｎ３、−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ８、−Ｓ−Ｓ−Ｒ８、−Ｏ−ＣＨ２−Ｎ３、−Ｎ＝Ｎ−Ｒ８から、特に−Ｎ３、−Ｎ＝Ｎ−Ｒ８、−Ｏ−ＣＨ２−Ｎ３、−Ｓ−Ｓ−Ｒ８から選択され、式中、Ｒ８は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、又は−（ＣＨ２）ｐ−ＮＭｅ２であり、特にピリジル又は−Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、ｐは１、２、３又は４である。
【０１２３】
Ｒ８がＣ１〜６アルキルである場合、アルキル部分は直鎖状又は分岐状であり得、例えばｔｅｒｔ−ブチルであり得る。特にＷが−Ｓ−Ｓ−Ｒ８である場合、Ｒ８は、ピリジル又は−Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり得、特にピリジル又はｔｅｒｔ−ブチルであり得る。
【０１２４】
部分Ｗ＝−Ｓ−Ｓ−Ｒ８を含むリンカーは、チオールを用いて切断され得る。したがって、酸性条件下（例えば、ＴＦＡ＞５０％、水の存在下ｐＨ＜０）でＳＰＰＳの際に使用される合成樹脂からのペプチド−リンカー複合体の切断は、このようなリンカーがペプチドの精製に使用される場合、チオールなしで行うことができる。
【０１２５】
特定の実施形態では、Ｗは、−Ｎ３、−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ８、−Ｓ−Ｓ−Ｒ８、−Ｏ−ＣＨ２−Ｎ３、−Ｎ＝Ｎ−Ｒ８から、特に−Ｎ３、−Ｎ＝Ｎ−Ｒ８、−Ｏ−ＣＨ２−Ｎ３、−Ｓ−Ｓ−Ｒ８から選択され、式中、Ｒ８は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル若しくは−Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、又は特にピリミジニル、ピリジル若しくは−Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、より特にピリジル又は−Ｃ１〜Ｃ６アルキルである。
【０１２６】
特定の実施形態では、Ｗは、−Ｎ３、−Ｓ−Ｓ−Ｒ８（Ｒ８は、−Ｃ１〜Ｃ６アルキルである）、及びＮＯ２から選択される。
【０１２７】
アジド還元的安全ロックを有するアミンスイッチ（図５）又はカルバメートスイッチ（図８）を介してペプチドを放出するリンカー分子は、還元可能な部分Ｎ３を含む。特定の実施形態では、Ｗは、−Ｎ３である。
【０１２８】
アジドを含まない還元的安全ロックを有するアミンスイッチを介してペプチドを放出するリンカー分子（図６）は、−ＮＯ２又は−Ｓ−ｔｅｒｔ−ブチルなどの還元可能な部分を含む。特定の実施形態では、Ｗは、−Ｓ−Ｓ−Ｒ８（Ｒ８が−Ｃ１〜Ｃ６アルキルである）、−ＮＯ２、
【化２１】
2021535139.tif 000023
−Ｎ＝Ｎ−Ｒ８（Ｒ８がピリジル、ピリミジニル、ピラジニル又はピリダジルである）から選択される。
【０１２９】
特定の実施形態では、Ｗは、−Ｓ−Ｓ−Ｒ８（Ｒ８が−Ｃ１〜Ｃ６アルキルである）、−ＮＯ２、−Ｎ＝Ｎ−Ｒ８（Ｒ８がピリジル、ピリミジニル、ピラジニル又はピリダジルである）から選択され、特に−ＮＯ２又は−Ｓ−Ｓ−Ｒ８（Ｒ８が−Ｃ１〜Ｃ６アルキルである）から選択される。
【０１３０】
アミンスイッチを介してペプチドを求核的放出により放出するリンカー分子（図７）は、−Ｎ３、−Ｓ−Ｓ−Ｒ８（Ｒ８はＣ１〜６アルキル、特にｔｅｒｔブチルである、又はＲ８はピリジニルである）などの還元可能な部分を含む。
【０１３１】
上記のとおり、リンカー分子は、酸性条件下、特に疎水性ペプチド精製時に、リンカー−ペプチド構築物の溶解性に寄与することができる。溶解性はまた、部分Ｗによっても媒介され得、すなわち、Ｗは、０〜７のｐＨ範囲で精製されるペプチドに対して溶解性の増強をもたらす基から選択される。
【０１３２】
特定の実施形態では、Ｗは、−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ８、−Ｓ−Ｓ−Ｒ８、−Ｎ＝Ｎ−Ｒ８、
【化２２】
2021535139.tif 000024
から選択され、式中、
Ｒ８は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジル、−（ＣＨ２）ｐ−ＮＨＢｏｃ又は−（ＣＨ２）ｐ−ＮＭｅ２であり、特にピリジル又は−（ＣＨ２）ｐ−ＮＨＢｏｃ−であり、ｐは１、２、３又は４である。
【０１３３】
特定の実施形態では、Ｕは、フェニル又は５員若しくは６員の複素環から選択され、５員若しくは６員の複素環は、１又は２個のヘテロ原子を含む。
【０１３４】
特定の実施形態では、Ｕは、フェニル又は５員若しくは６員の複素環から選択され、５員若しくは６員の複素環は１個のヘテロ原子を含む。
【０１３５】
特定の実施形態では、Ｕは、フェニル又は６員の複素環から選択される。
【０１３６】
特定の実施形態では、Ｕは、フェニル又は６員の複素環から選択され、６員の複素環は、１又は２個のヘテロ原子を含む。
【０１３７】
特定の実施形態では、Ｕの５員若しくは６員のヘテロアリール部分は、１又は２個のヘテロ原子を含み、特に、部分Ｕの５員ヘテロアリール部分は、ピラゾール、イミダゾールから選択され、部分Ｕの６員ヘテロアリール部分は、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジンから、特にピリジンから選択される。
【０１３８】
特定の実施形態では、Ｕは、フェニル又は６員の複素環から選択され、６員の複素環は、１個のヘテロ原子を含む。特定の実施形態では、部分Ｕの５員の複素環はピラゾール、イミダゾールから選択され、部分Ｕの６員の複素環はピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジンから選択される。
【０１３９】
特定の実施形態では、Ｕは、フェニル、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジンから、特にフェニル又はピリジンから、より特にフェニルから選択される。
【０１４０】
本発明によるリンカーは、アミンスイッチ（図５〜７）又はカルバメートスイッチ（図８）によってペプチドを放出することができる。これらの放出メカニズムは、部分Ｙに対してオルト位又はパラ位にある還元可能な置換基Ｗを必要とする。
【０１４１】
特定の実施形態では、Ｕは、式５又は６の部分から選択され、
【化２３】
2021535139.tif 000025
式中、
Ｔ、Ｖ、Ｙ、Ｗ、及びＥは、上記のとおり定義され、
Ｕは、部分Ｔ又はＶ（Ｔ  ｏｒ  Ｖ）に結合され、
Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４及びＤ１、Ｄ２、Ｄ３、Ｄ４は、互いに独立して、Ｃ、Ｎ、Ｓ及びＯから、特にＣ及びＮから選択され、かつ
ｎは、０〜３の間の、特に０、１又は２の整数である。
【０１４２】
特定の実施形態では、Ａ１、Ａ２、Ａ３及びＡ４、又はＤ１、Ｄ２、Ｄ３及びＤ４の２〜４個の部分は、Ｃであり、特にＡ１、Ａ２、Ａ３及びＡ４、又はＤ１、Ｄ２、Ｄ３及びＤ４の３又は４個の部分は、Ｃである。
【０１４３】
特定の実施形態では、すべての部分Ａ１、Ａ２、Ａ３及びＡ４又はＤ１、Ｄ２、Ｄ３及びＤ４の部分は、Ｃである。
【０１４４】
特定の実施形態では、Ｕは、式５、６、７又は８の部分から選択され、
【化２４】
2021535139.tif 000026
式中、
Ｔ、Ｖ、Ｙ、Ｗ、及びＥは、上記のとおり定義され、
式５及び６の場合、Ｕは部分Ｔ又はＶに結合され、
式７及び８の場合、Ｕは部分Ｖに結合され、
Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４及びＤ１、Ｄ２、Ｄ３、Ｄ４は、互いに独立して、Ｃ、Ｎ、Ｓ及びＯから、特にＣ及びＮから選択され、Ａ１、Ａ２、Ａ３及びＡ４、又はＤ１、Ｄ２、Ｄ３及びＤ４の２〜４個の部分は、Ｃであり、特にＡ１、Ａ２、Ａ３及びＡ４、又はＤ１、Ｄ２、Ｄ３及びＤ４の３又は４個の部分は、Ｃであり、より特にＡ１、Ａ２、Ａ３及びＡ４、又はＤ１、Ｄ２、Ｄ３及びＤ４のすべての部分は、Ｃであり、
ｎは、
式５及び６の場合、０〜３の間の整数であり、
式７及び８の場合、０〜４の間の整数であり、
ｑは、０〜４の間の整数であり、ｎとｑとの合計は４以下である。
【０１４５】
特定の実施形態では、Ｕは、式５又は６の部分から選択される。
【０１４６】
特定の実施形態では、Ｕは、式５、６、７又は８の部分から選択され、式中、
Ｔ、Ｖ、Ｙ、Ｗ、及びＥは、上記のとおり定義され、
式５及び６の場合、Ｕは部分Ｔ又はＶに結合され、
式７及び８の場合、Ｕは部分Ｖに結合され、
Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４及びＤ１、Ｄ２、Ｄ３、Ｄ４は、互いに独立して、Ｃ、Ｎ、Ｓ及びＯから、特にＣ及びＮから選択され、
ｎは、
式５及び６の場合、０〜２の間の整数であり、
式７及び８の場合、０〜２の間の、特に０〜１の間の整数であり、
ｑは０〜２の間の、特に０〜１の間の整数である。
【０１４７】
特定の実施形態では、Ｕは、式９、１０、１１又は１２の、特に式９又は１０の部分から選択され、
【化２５】
2021535139.tif 000027
式中、
Ｔ、Ｖ、Ｙ、Ｗ、Ｅ、ｑ及びｎは、上記のとおり定義され、
式９及び１０の場合、Ｕは部分Ｔ又はＶに結合され、
式１１及び１２の場合、Ｕは部分Ｖに結合され、
すべての部分Ａ２、Ａ３及びＡ４はＣである、又はＡ２、Ａ３及びＡ４のうちの２つはＣであり、かつＡ２、Ａ３及びＡ４のうちの他の２つがＮであり、特にＡ２及びＡ３がともにＣであり、かつ
Ｄ２は、Ｃ又はＮであり、特にＣである。
【０１４８】
特定の実施形態では、Ｕは、式９、１０、１１又は１２の、特に式９又は１０の部分から選択され、
【化２６】
2021535139.tif 000028
式中、
Ｔ、Ｖ、Ｙ、Ｗ、Ｅ、ｑ及びｎは、上記のとおり定義され、
式９及び１０の場合、Ｕは部分Ｔ又はＶに結合され、
式１１及び１２の場合、Ｕは部分Ｖに結合され、
Ａ２及びＡ３がともにＣである、又はＡ２及びＡ３の一方がＣであり、かつＡ２及びＡ３の他方がＮであり、
Ｄ２は、Ｃ又はＮである。
【０１４９】
部分ＵがＮ含有ヘテロアリールを含む場合、Ｎ原子は酸性条件下でプロトン化され、したがってリンカー分子の溶解性が増加する。
【０１５０】
特定の実施形態では、Ｕは、式１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０又は２１の、特に式１３〜１９の、より特に式１５又は１９の部分から選択され、
【化２７】
2021535139.tif 000029
式中、
Ｔ、Ｖ、Ｙ、Ｗ、Ｅ、ｑ及びｎは、上記のとおり定義され、
式１３、１４及び１５の場合、Ｕは部分Ｔ又はＶに結合され、
式１６、１７及び１８の場合、Ｕは部分Ｖに結合され、
Ａ２、Ａ３及びＡ４は、Ｃ、Ｎ又はＮ＋Ｍｅであり、特にＣであり、
Ｄ２は、Ｃ又はＮである。
【０１５１】
特定の実施形態では、Ｕは、式１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１又は２２の部分から選択され、
【化２８】
2021535139.tif 000030
式中、Ｔ、Ｖ、Ｙ、Ｗ、Ｅ、ｑ及びｎは、上記のとおり定義され、
式１３、１４、１５、１９、２０、２１及び２２の場合、Ｕは部分Ｔ又はＶに結合され、
式１６、１７及び１８の場合、Ｕは部分Ｖに結合され、
Ａ２、Ａ３及びＡ４は、Ｃ又はＮであり、特にＣであり、
Ｄ２はＣ又はＮである。
【０１５２】
特定の実施形態では、Ｕは、式１３、１４、１５、１６、１７又は１８の部分から選択され、
【化２９】
2021535139.tif 000031
式中、
Ｔ、Ｖ、Ｙ、Ｗ、Ｅ、ｑ及びｎは、上記のとおり定義され、
式１３、１４及び１５の場合、Ｕは部分Ｔ又はＶに結合され、
式１６、１７及び１８の場合、Ｕは部分Ｖに結合され、
Ａ３は、Ｃ又はＮであり、
Ｄ２は、Ｃ又はＮである。
【０１５３】
特定の実施形態では、Ｕは、式１３、１４、１５、２１又は２２の部分から選択され、式中、
Ｔ、Ｖ、Ｙ、Ｗ、Ｅ及びｎは、上記のとおり定義され、
Ｕは、部分Ｔ又はＶに結合され、
Ａ３及びＡ４は、Ｃ又はＮであり、特にＣであり、
Ｄ２は、Ｃ又はＮである、
【０１５４】
特定の実施形態では、Ｕは、式１３、２１又は２２の部分から選択される。
【０１５５】
特に、カルバメートスイッチを介してペプチドを放出するリンカー分子について、Ｕはフェニルである。特定の実施形態では、Ｕは上記のとおり選択され、かつすべてのＡ及びすべてのＤはＣである。
【０１５６】
還元的安全ロックを有するアミンスイッチ（図５、６）及びカルバメートスイッチ（図８）について、部分Ｙは、特に、ｐＨの変化によってリンカーの崩壊が引き起こされ、遊離Ｎ末端を有するペプチドが放出される場合に、ＣＯ２を放出することができる−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−である。
【０１５７】
特定の実施形態では、Ｕは式１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１又は２２の部分であり、かつＹは−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−である。
【０１５８】
特定の実施形態では、Ｕは式１３、１４、１５、２１又は２２の部分であり、かつＹは−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−である。
【０１５９】
特定の実施形態では、Ｕは式１３又は２１の部分であり、かつＹは−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−である。
【０１６０】
求核的放出を伴うアミンスイッチについて（図７）、リンカーは、部分Ｙがペプチドとアミド結合を形成する場合、酸性条件下でのみ安定である。特定の実施形態では、Ｙは−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（＝Ｏ）−である。
【０１６１】
リンカー分子の末端が−ＣＯＯＨを有する場合、ペプチドは、一般的なアミノ酸カップリングを介してペプチドとカップリングされ得る。特定の実施形態では、Ｙは−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、かつＺは−ＯＨである。
【０１６２】
求核性放出を伴うアミンスイッチについては、Ｕは特に式２２の部分であり、Ｙは−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、Ｚは−ＯＨである。
【０１６３】
特定の実施形態では、Ｚは以下：−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−Ｎ３、−ＯＨ、−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ２（Ｃ＝Ｏ）ＯＨ、−ＳＲ１４、−ＯＣＦ３、−ＯＣＨ２ＣＦ３、−ＯＳＯ２ＣＦ３、−ＳＯ２Ｃ６Ｈ４ＣＨ３、−ＳＯ２ＣＦ３、−ＳＯ２ＣＨ３、
【化３０】
2021535139.tif 000032
から選択され、特に、−ＯＨ、−Ｃｌ、
【化３１】
2021535139.tif 000033
から選択され、特に−ＯＨ、
【化３２】
2021535139.tif 000034
から選択され、式中、Ｒ１４は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル−、アリール（ａｒｙｌｉｃ）−又はベンジル−置換基である。
【０１６４】
アジド還元的安全ロックを有するアミンスイッチによるペプチドの放出に適したタイプ１のリンカー分子（図５）は、以下の部分から構成され得る：
Ｕは、フェニル又はピリミジルであり、特にＵは、式１３、１４、１５、２１又は２２であり、
Ｗは、−Ｎ３であり、
Ｅのｎは、１であり、かつＥはピリジル、ピリミジニル、ピリダジニル、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ＝Ｎ−ピリジルから選択され、又はｎは０であり、特にｎは０であり、
Ｖのａは、１であり、かつＶは、−ピペラジニル−、−ピペラジニル−ＣＨ２−、−Ｎ（ＣＨ３）−、ピリミジニル、ピリジルから、特に−ピペラジニル−、−ピペラジニル−ＣＨ２−、−Ｎ（ＣＨ３）−から選択され、かつ
Ｙは、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、ｍは１、２又は３であり、特に１又は２であり、より特に１である。
【０１６５】
ピリジル部分は、３位又は５位でＵに接続される。
【０１６６】
特定の実施形態では、Ｕは、式１３、１４、１５、２１又は２２の部分から選択される。
【０１６７】
アジドなしのアミンスイッチによるペプチドの放出に適したタイプ２のリンカー分子（図６）は、以下の部分から構成され得る：
Ｕは、ピリジニル又はフェニルであり、特にＵは式１３、１４又は２１であり、
Ｗは、−Ｓ−Ｓ−ｔｅｒｔブチル、−ＮＯ２、−Ｎ＝Ｎ−ピリジル、
【化３３】
2021535139.tif 000035
から選択され、特に−Ｓ−Ｓ−ｔｅｒｔブチル，−ＮＯ２から選択され、
Ｅのｎは、０であり、
Ｖのａは、１であり、かつＶは−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−及びピペラジニルから選択され、かつ
Ｙは、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、ｍは１、２又は３であり、特に１又は２であり、より特に１である。
【０１６８】
特定の実施形態では、Ｕは、式１３、１４又は２１の部分から選択される。
【０１６９】
求核的放出を伴うアミンスイッチによるペプチドの放出に適したタイプ３のリンカー分子（図７）は、以下の部分から構成され得る：
Ｕは、フェニル又はピリジニルであり、特にフェニルであり、より特にＵは、式１３又は１４の部分であり、
Ｗは−Ｎ３、−Ｓ−Ｓ−ｔｅｒｔブチル、−Ｓ−Ｓ−ピリジルであり、特に−Ｎ３であり、
Ｅのｎは、０であり、
Ｖのａは、１であり、かつＶはピペラジニル、−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−であり、特にピペラジニルであり、かつ
Ｙは、−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、ｍは１、２又は３であり、特に１又は２であり、より特に１である。
【０１７０】
特定の実施形態では、Ｕは、式１３又は１４の部分から選択され、特にすべての部分Ｄ及びＡは、Ｃである。
【０１７１】
カルバメートスイッチによるペプチドの放出に適したタイプ４のリンカー分子（図８）は、以下の部分から構成され得る：
Ｕはフェニルであり、特にＵは、式１３又は１５であり、特に部分ＡはＣであり、
Ｗは、−Ｎ３であり、
Ｅのｎは、１又は２であり、Ｅは−Ｂｒであり、
Ｖのａは、１であり、かつＶは、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、かつ
Ｙは、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、ｍは１、２又は３であり、特に１又は２であり、より特に１である。
【０１７２】
特定の実施形態では、Ｕは、式１３又は１５の部分から選択され、特に部分Ａは、Ｃである。
【０１７３】
特定の実施形態では、Ｚは以下：−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−Ｎ３、−ＯＨ、−ＳＲ１４、−ＯＣＦ３、−ＯＣＨ２ＣＦ３、−ＯＳＯ２ＣＦ３、−ＳＯ２Ｃ６Ｈ４ＣＨ３、−ＳＯ２ＣＦ３、−ＳＯ２ＣＨ３、
【化３４】
2021535139.tif 000036
から選択され、特に、−ＯＨ、−Ｃｌ、
【化３５】
2021535139.tif 000037
から選択され、特に−ＯＨ、
【化３６】
2021535139.tif 000038
から選択され、式中、Ｒ１４は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、アリール又はベンジルの置換基である。
【０１７４】
Ｚが−ＯＨである場合、−ＯＨ部分は、固相ペプチド合成などで一般的に使用されるとおりのカップリング試薬によって活性化され、脱離基として機能する。
【０１７５】
特定の実施形態では、式１の化合物は、式：Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９、Ｘ１０、Ｘ１１、Ｘ１２、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５、Ｘ１６、Ｘ１７、Ｘ１８、Ｘ１９、Ｘ２０、Ｘ２１、Ｘ２２、Ｘ２３、Ｘ２４、Ｘ２５、Ｘ２６、Ｘ２７、ｘ２８、Ｘ２９、Ｘ３０、Ｘ３１、Ｘ３２、Ｘ３３、Ｘ３４、Ｘ３５、Ｘ３６、Ｘ３７、Ｘ３８、Ｘ３９、Ｘ４０、Ｘ４１、Ｘ４２、Ｘ４３、Ｘ４４、Ｘ４５、Ｘ４６又はＸ４７の化合物から選択される。
【化３７】
2021535139.tif 000039
【化３８】
2021535139.tif 000040
【化３９】
2021535139.tif 000041
【化４０】
2021535139.tif 000042
【化４１】
2021535139.tif 000043
【化４２】
2021535139.tif 000044
【化４３】
2021535139.tif 000045
【化４４】
2021535139.tif 000046
【０１７６】
本発明の第２の態様は、ペプチドを精製する方法を目的とする。
【０１７７】
本発明の第２の態様によれば、ペプチドを精製する方法が提供される。この方法は、以下のステップを含む：
−  粗リンカー修飾ペプチドを提供するステップであって、粗ペプチドは、本発明の第１の態様によるリンカー分子に共有結合される、前記ステップ、
−  カップリングステップにおいて、リンカー修飾ペプチドを固体支持体にカップリングして、固定化リンカー修飾ペプチドを得る、前記ステップ、
−  放出ステップにおいて、酸性条件下で還元剤を加えてペプチドを放出する、前記ステップ。
【０１７８】
本発明の第１の態様に従うリンカー分子は、ペプチドを精製する方法に使用することができる。第１のステップでは、粗ペプチド混合物は、本発明の第１の態様に従うリンカー分子と接触し、かつ粗ペプチドは、リンカー分子にカップリングされて、粗リンカー修飾ペプチドが得られる。この粗ペプチドは、化学、生化学、薬学の分野の一般的な専門家に一般的に知られている標準的な方法でリンカー分子にカップリングされる。精製時には、ｐＨを調整することでリンカー分子の安定性を図ることができる。酸性条件下（特に、リンカー分子の最も塩基性のヘテロ原子のｐＫａより低いｐＨ）では、このヘテロ原子がプロトン化されて電子を吸引することに起因して、リンカー分子は安定する（図５、６、７）。リンカーがペプチドに結合して固体支持体に固定化されると、例えば、酸性条件下でトリフェニルホスフィンなどの還元剤を添加するなど、還元条件下で還元中間体を介してペプチドが放出される。還元中間体は、還元リンカー部分、例えばアザイリド（ａｚａｙｌｉｄｅ）によって特徴付けられる。還元中間体のリンカー部分は、時間の経過とともに、又はｐＨの上昇など、特に還元中間体のリンカー部分の最も塩基性のヘテロ原子のｐＫａに対してｐＨ＞ｐＫａとなる引き金によって分解する。したがって、ペプチドを放出する前のすべてのステップ（カップリング、任意の洗浄、及びリンカーの還元）は、酸性条件下で行われる。還元中間体のリンカー部分の最も塩基性のヘテロ原子のｐＫａを超えるｐＨにｐＨが上昇すると、還元中間体のリンカー部分は、１．４／１．６の脱離反応又は求核攻撃によって分解し、ペプチドが放出される。
【０１７９】
還元中間体のリンカー分子／リンカー部分の最も塩基性のヘテロ原子は、以下に関連する：例えば、部分Ｕは、−Ｎ３で置換されたピリジンからなる。ピリジンのヘテロ原子Ｎは、−Ｎ３部分又は還元された−Ｎ３部分のｐＫａよりも高いｐＫａであるｐＫａ約５を有する（−ＮＨ３のｐＫａは約４．６）。したがって、最も塩基性のヘテロ原子は、ピリジン部分のＮである。ｐＨをｐＨ＞５にシフトすることで、還元中間体のリンカー部分が脱離反応を起こし、ペプチドが放出される。このメカニズムはアミンスイッチと呼ばれている。
【０１８０】
あるいは、リンカー分子は、カルバメートスイッチによって分解することができる（図８）。適切なリンカー分子は、−Ｂｒなどの電子吸引性部分及び−Ｎ３などの還元性部分を含む。このリンカー分子は、この電子求引性に起因して、ＴＦＡ条件下で安定している。還元されると、ｐＨがこのカルバメートのｐＫａよりも高い場合リンカー分子は安定している。最後に、このカルバメートのｐＫａに対してｐＨ＜ｐＫａになるようにｐＨを減少することによって、１．６−脱離を介してペプチドが放出される。
【０１８１】
特定の実施形態では、還元剤を添加する前のすべてのステップにおけるｐＨでは、リンカー部分の最も塩基性のヘテロ原子のｐＫａに対してｐＨ＜ｐＫａである。
【０１８２】
ある実施形態では、ペプチドは中間体を介して放出される。
【０１８３】
特定の実施形態では、酸性条件下で還元剤を添加することによる、固定化されたリンカー修飾ペプチドの還元されたリンカー部分を特徴とする還元中間体を介してペプチドが放出される。
【０１８４】
特定の実施形態では、放出ステップにおいて、固定化されたリンカー修飾ペプチドの還元されたリンカー部分を特徴とする還元中間体が達成され、ペプチドが引き金によって、特に温度及び／又はｐＨの変化によって、より特に、ｐＨをアミンスイッチの場合は還元中間体のリンカー部分の最も塩基性のヘテロ原子のｐＫａに対してｐＨ＞ｐＫａへ増加させることによって、又はカルバメートスイッチの場合はカルバメートのｐＫａに対してｐＨ＜ｐＫａへｐＨを減少させることによって、ペプチドが前記還元中間体から放出される。
【０１８５】
特定の実施形態では、固定化リンカー修飾ペプチドの還元されたリンカー部分を特徴とする還元中間体は、放出ステップで達成され、ペプチドは、引き金によって、特に、温度及び／又はｐＨの変化によって、より特に、ｐＨを還元中間体のリンカー部分の最も塩基性のヘテロ原子のｐＫａに対してｐＨ＞ｐＫａに増加させることによって前記還元中間体から放出される。
【０１８６】
ペプチドは自発的に、あるいは引き金によって中間体から放出される。
【０１８７】
特定の実施形態では、温度及び／又はｐＨの変化が引き金となる。
【０１８８】
特定の実施形態では、温度の変化は、周囲温度（２０℃〜３０℃）からより高い温度への上昇であり、より高い温度は１００℃を超えず、特に７０℃、より特に５０℃を超えない。
【０１８９】
上記のとおり、アミンスイッチに適したリンカーは、−還元される場合−最も塩基性の高いヘテロ原子のｐＫａを超えるｐＨまでｐＨが上昇される場合、分解する。
【０１９０】
特定の実施形態では、引き金はｐＨのシフト、特にｐＨの上昇である。
【０１９１】
特定の実施形態では、ｐＨを、還元中間体のリンカー部分の最も塩基性のヘテロ原子のｐＫａに対してｐＨ＞ｐＫａに上昇させることにより、ペプチドが還元された中間体から放出される。
【０１９２】
カルバメートスイッチに適したリンカーは、カルバメートのｐＫａ未満のｐＨにｐＨが減少する場合−還元される場合−分解する。
【０１９３】
特定の実施形態では、引き金はｐＨのシフトであり、特にｐＨの減少である。
【０１９４】
特定の実施形態では、リンカー部分のカルバメートのｐＫａに対してｐＨ＜ｐＫａまでｐＨを減少させることにより、ペプチドが還元中間体から放出される。
【０１９５】
還元中間体が酸性条件下で安定している場合（アミンスイッチ）、又はカルバメートのｐＫａに対してｐＨ＞ｐＫａで安定している場合（カルバメートスイッチ）、過剰な還元剤を除去するために追加の洗浄ステップを行うことができる。還元剤はリンカー部分だけでなく、ペプチドとも反応する可能性があるため、洗浄ステップを追加することで、還元剤とペプチドとの間の不要な副反応が低減される。さらに、不揮発性還元剤又はそれらの使用の生成物もまた不純物であり、追加の精製ステップによって除去する必要があるであろう。
【０１９６】
特定の実施形態では、還元中間体が形成された後、並びにペプチドが還元中間体から放出される前に、洗浄によって還元剤が除去される。
【０１９７】
特定の実施形態では、ＭｅＣＮを用いて還元剤が除去される。
【０１９８】
特定の実施形態では、本発明の第１の態様によるリンカー分子は、アジド（−Ｎ３）部分を含む部分Ｗ及び／又はＥを含む。
【０１９９】
特定の実施形態では、リンカー修飾ペプチドは合成樹脂に付加的に結合され、カップリングステップを実行する前に、特にリンカー分子の最も塩基性のヘテロ原子のｐＫａに対してｐＨ＜ｐＫａにて、合成樹脂が切断される。
【０２００】
合成支持体からのペプチドの切断は、ＴＦＡを使用して達成され、最後にＴＦＡ混合物からペプチドを沈殿させて（例えば、２−８時間後）、粗ペプチド混合物を得る。沈殿には、冷エーテル（Ｅｔ２Ｏ、ｉＰｒ２Ｏ、ＭｅＯｔＢｕ、ＴＨＦ／ヘキサン（１：１））が使用され得る。
【０２０１】
粗ペプチド混合物を適切な有機溶媒、特にＤＭＳＯに溶解し、緩衝系、特に１０体積％のクエン酸ナトリウム緩衝液０．１Ｍ、ｐＨ４．５が添加される。
【０２０２】
カップリングステップのための固体支持体は、アルデヒド修飾固体支持体、特にアガロースビーズ、ポリリジン、ポリエチレングリコール、ポリアミド、ポリスチレン及びそれらのコポリマーであり、そこに溶解した粗ペプチド混合物が添加される。
【０２０３】
特定の実施形態では、固体支持体はアルデヒド部分を含む。
【０２０４】
特定の実施形態では、カップリングステップを実行した後、固体支持体の非反応アルデヒド部分がブロッキング剤を用いてブロックされる。
【０２０５】
特定の実施形態では、ブロッキング剤は、固体支持体のアルデヒド部分と反応し、チオール及び／又はアミン部分を含む。
【０２０６】
特定の実施形態では、ブロッキング剤は、システイン、スレオニン、２−メルカプトエタノール、システアミン、エタンジチオール、ヒドロキシルアミン、Ｏ−メチルヒドロキシルアミン、Ｎ−メチルヒドロキシルアミン、ジチオスレイトール、ヒドラジンから選択される。
【０２０７】
特定の実施形態では、ブロッキング剤は、システイン及びＮ−メチルヒドロキシルアミンから選択される。
【０２０８】
カップリングした生成物は、特にＤＭＳＯ、６Ｍの塩酸グアニジウム、０．１ＭのＮａＣｌを有するＥｔＯＨ／水（７：３）、水、ＭｅＣＮで洗浄される。
【０２０９】
特定の実施形態では、放出ステップは、リンカー分子の最も塩基性のヘテロ原子のｐＫａに対してｐＨ＜ｐＫａで行われる。
【０２１０】
特定の実施形態では、放出ステップは、リンカー分子のカルバメートのｐＫａに対してｐＨ＜ｐＫａで行われる。
【０２１１】
特定の実施形態では、還元剤は、トリフェニルホスフィン、トリメチルホスフィン、トリエチルホスフィン、トリブチルホスフィン又はトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン、トリメチルホスファイト、トリエチルホスファイト、トリブチルホスフィン、ジエチルホスファイト、５，５’−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）、亜ジチオン酸ナトリウム（Ｎａ２Ｓ２Ｏ４）、エタンジチオール、プロパンジチオール、ジチオエリスリトール、ジチオスレイトール、Ｎａ２Ｓ、ＮａＳＨ、グルタチオン、２，２’−ジチオジピリジン、ＢＨ３、４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン、カテコールボラン、ボランテトラヒドロフラン、ボランジメチルスルフィド、ボランジメチルアミン錯体、ボラントリフェニルホスフィン錯体、ボランｔｅｒｔ−ブチルアミン、ＬｉＡｌＨ４、ＬｉＢＨ４、ＮａＢＨ４、ＮａＢＨ３ＣＮ、ＮａＢＨ（ＯＭｅ）３、ＮａＢＨ（ＯＣＣＨ３）３、ＬｉＡｌＨ（ＯＣＭｅ３）３、ヒドロキノン、アスコルビン酸ナトリウム塩、アスコルビン酸、ＫＩ含有アスコルビン酸、ヒドラジン、ＮＨ＝ＮＨ、ホルムアルデヒドから選択される。
【０２１２】
特定の実施形態では、還元剤は、ジチオエリスリトール、ジチオスレイトール、トリフェニルホスフィン、ＫＩ含有アスコルビン酸、トリブチルホスフィン、トリメチルホスフィン、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン、亜ジチオン酸ナトリウム（Ｎａ２Ｓ２Ｏ４）、ボランジメチルスルフィド、ボラントリフェニルホスフィン錯体、ＮａＢＨ４、アスコルビン酸から選択される。
【０２１３】
特定の実施形態では、還元剤は、ジチオエリスリトール、ジチオスレイトール、ＫＩ含有アスコルビン酸、トリフェニルホスフィン及びトリメチルホスフィンから選択される。
【０２１４】
特定の実施形態では、還元剤は、トリフェニルホスフィン、トリメチルホスフィン、トリエチルホスフィン、トリブチルホスフィン又はトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン、トリメチルホスファイト、トリエチルホスファイト、トリブチルホスフィン、ジエチルホスファイト、５，５’−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）、亜ジチオン酸ナトリウム（Ｎａ２Ｓ２Ｏ４）、エタンジチオール、プロパンジチオール、ジチオスレイトール、Ｎａ２Ｓ、ＮａＳＨ、グルタチオン、２，２’−ジチオジピリジン、ＢＨ３、４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン、カテコールボラン、ボランテトラヒドロフラン、ボランジメチルスルフィド、ボランジメチルアミン錯体、ボラントリフェニルホスフィン錯体、ボランｔｅｒｔ−ブチルアミン、ＬｉＡｌＨ４、ＬｉＢＨ４、ＮａＢＨ４、ＮａＢＨ３ＣＮ、ＮａＢＨ（ＯＭｅ）３、ＮａＢＨ（ＯＣＣＨ３）３、ＬｉＡｌＨ（ＯＣＭｅ３）３、ヒドロキノン、アスコルビン酸ナトリウム、アスコルビン酸、ヒドラジン、ＮＨ＝ＮＨ、ホルムアルデヒドから選択される。
【０２１５】
特定の実施形態では、還元剤は、トリフェニルホスフィン、トリブチルホスフィン、トリメチルホスフィン、トリエチルホスフィン、又はトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン、亜ジチオン酸ナトリウム（Ｎａ２Ｓ２Ｏ４）、ボランジメチルスルフィド、ボラントリフェニルホスフィン錯体、ＮａＢＨ４、アスコルビン酸から選択される。
【０２１６】
特定の実施形態では、還元剤は、トリフェニルホスフィン、トリメチルホスフィン、トリエチルホスフィン又はトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン、亜ジチオン酸ナトリウム（Ｎａ２Ｓ２Ｏ４）、ボランジメチルスルフィド、ボラントリフェニルホスフィン錯体、ＮａＢＨ４、アスコルビン酸から選択される。
【０２１７】
特定の実施形態では、還元剤は、トリフェニルホスフィン、亜ジチオン酸ナトリウム（Ｎａ２Ｓ２Ｏ４）、ボランジメチルスルフィド、ボラントリフェニルホスフィン錯体、ＮａＢＨ４、アスコルビン酸から選択される。
【０２１８】
特定の実施形態では、還元剤は、トリフェニルホスフィン及びトリメチルホスフィンから選択される。
【０２１９】
特定の実施形態では、還元剤は、トリフェニルホスフィンである。
【０２２０】
特定の実施形態では、方法は以下のステップを含む：
−  粗リンカー修飾ペプチドを提供するステップであって、粗ペプチドは、本発明の第１の態様に従うリンカー分子に共有結合され、リンカー分子は、アジド部分を含む部分Ｗ及び／又はＥを含む、前記ステップ、
−  カップリングステップにおいて、リンカー修飾ペプチドを固体支持体にカップリングして、固定化リンカー修飾ペプチドを得る、前記ステップ、
−  放出ステップにおいて、酸性条件下で還元剤を加えることによってペプチドを放出させる、前記ステップ。
【０２２１】
特定の実施形態では、方法は以下のステップを含む：
−  粗リンカー修飾ペプチドを提供するステップであって、粗ペプチドは、本発明の第１の態様に従うリンカー分子に共有結合され、リンカー分子は、アジド部分を含む部分Ｗ及び／又はＥを含む、前記ステップ、
−  カップリングステップにおいて、リンカー修飾ペプチドを固体支持体にカップリングして、固定化リンカー修飾ペプチドを得る、前記ステップ、
−  放出ステップにおいて、酸性条件下で還元剤を添加し、還元中間体を得た後に、還元中間体のリンカー部分の最も塩基性のヘテロ原子のｐＫａに対してｐＨ＞ｐＫａになるようにｐＨを上昇させることによりペプチドを放出させる、前記ステップ。
−  
【０２２２】
特定の実施形態では、方法は以下のステップを含む：
−  粗リンカー修飾ペプチドを提供するステップであって、粗ペプチドは、本発明の第１の態様に従うリンカー分子に共有結合され、リンカー分子は、アジド部分を含む部分Ｗ及び／又はＥを含む、前記ステップ、
−  カップリングステップにおいて、リンカー修飾ペプチドを固体支持体にカップリングして、固定化リンカー修飾ペプチドを得る、前記ステップ、
−  放出ステップにおいて、酸性条件下でトリフェニルホスフィン、トリメチルホスフィン、トリエチルホスフィン、又はトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィンを、特にトリフェニルホスフィンを添加し、還元中間体を生成した後に、最も塩基性のヘテロ原子のｐＫａに対してｐＨ＞ｐＫａとなるようにｐＨを増加させることによってペプチドを放出させる、前記ステップ。
【０２２３】
本発明の第２の態様の副態様によれば、固相ペプチド合成によって調製される粗ペプチドを精製する方法が提供される。
【０２２４】
特定の実施形態では、ペプチドを精製する方法は、以下のステップを含む：
ａ）  合成樹脂に結合されたペプチドを提供するステップであって、該ペプチドが請求項１に記載のリンカー分子にさらに共有結合され、該リンカー分子がアジド部分を含む部分Ｗ及び／又はＥを含む、前記ステップ、
ｂ）  合成樹脂からペプチドを切断するステップ、
ｃ）  切断されたペプチド混合物を固体支持体とカップリングするステップ、
ｄ）  ペプチドをトリフェニルホスフィン、又はトリメチルホスフィン、トリエチルホスフィン、又はトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィンを、特にトリフェニルホスフィンを用いて放出するステップ。
【０２２５】
合成支持体からのペプチドの切断は、ＴＦＡを使用して達成され、最後にＴＦＡ混合物からペプチドを沈殿させて（例えば、２−８時間後）、粗ペプチド混合物を得る。沈殿には、冷エーテル（Ｅｔ２Ｏ、ｉＰｒ２Ｏ、ＭｅＯｔＢｕ、ＴＨＦ／ヘキサン（１：１））が使用され得る。
【０２２６】
粗ペプチド混合物を適切な有機溶媒、特にＤＭＳＯに溶解し、緩衝系、特に１０体積％のクエン酸ナトリウム緩衝液０．１Ｍ、ｐＨ４．５が添加される。
【０２２７】
カップリングステップのための固体支持体は、アルデヒド修飾固体支持体であり、特にアガロースビーズ、ポリリジン、ポリエチレングリコール、ポリアミド、ポリスチレン及びそれらのコポリマーであり、そこに溶解した粗ペプチド混合物が添加される。
【０２２８】
カップリングした生成物は、特にＤＭＳＯ、６Ｍの塩酸グアニジウム、０．１ＭのＮａＣｌを有するＥｔＯＨ／水（７：３）、水、ＭｅＣＮで洗浄される。
【０２２９】
特定の実施形態では、トリフェニルホスフィン、トリメチルホスフィン、トリエチルホスフィン又はトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィンが、特にトリフェニルホスフィンが、ＭｅＣＮ／ＡｃＯＨ（９：１）に添加される。特定の実施形態では、添加は１５分間行われる。
【０２３０】
特定の実施形態では、トリフェニルホスフィン、トリメチルホスフィン、トリエチルホスフィン又はトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィンを、ＭｅＣＮ／ＡｃＯＨ／Ｈ２Ｏ（９０：５：５）に添加し、及び／又はトリフェニルホスフィン、トリメチルホスフィン、トリエチルホスフィン又はトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィンを、特にトリフェニルホスフィンを添加した後、形成されるアザイリドが、特にＭｅＣＮ又はＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ（９：１）を用いて洗浄される。
【０２３１】
特定の実施形態では、トリフェニルホスフィン、トリメチルホスフィン、トリエチルホスフィン又はトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィンは、特にトリフェニルホスフィンは、ＭｅＣＮ／ＡｃＯＨ／Ｈ２Ｏ（９０：５：５）に添加される。特定の実施形態では、添加は１５分間行われる。
【０２３２】
特定の実施形態では、トリフェニルホスフィン、トリメチルホスフィン、トリエチルホスフィン又はトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィンの添加後、形成されるアザイリドは、特にＭｅＣＮ又はＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ（９：１）を用いて洗浄される。
【０２３３】
特定の実施形態では、トリフェニルホスフィン、トリメチルホスフィン、トリエチルホスフィン又はトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィンの添加後、形成されるアザイリドは、特にＭｅＣＮを用いて洗浄される。
【０２３４】
特定の実施形態では、形成されるアザイリドは、特にＨ２Ｏ／ＴＦＡを用いて加水分解される。その比率は、水が９９．９５％〜５０％であり得る。
【０２３５】
リンカー、特にＵ、Ｅ、Ｗ又はＶが窒素含有複素環である場合、ｐＨは複素環部分のｐＫａを超える必要があり、これはＴＦＡと水の加水分解混合物の場合にすでにそうなっている、又は所望のｐＨの緩衝液を加えることで可能となる。
【０２３６】
特定の実施形態では、加水分解の後に、特にＴＦＡ／Ｈ２Ｏを用いて、特に９：１の比率で溶出ステップが行われる。
【０２３７】
特定の実施形態では、加水分解の後に、特にＴＦＡ／Ｈ２Ｏを用いて、特に９５：５の比率で溶出ステップが行われる。
【０２３８】
特定の実施形態では、加水分解生成物は、特に冷エーテル、より特にはＥｔ２Ｏ、ｉＰｒ２Ｏ、ＭｅＯｔＢｕ、ＴＨＦ／ヘキサン（１：１）を添加することによって沈殿する。
【０２３９】
用語及び定義
本発明の文脈において、「電子吸引基」又は「ＥＷＧ」は、誘導効果又はメソメリー効果を介して、その接続された原子又はアリール系から電子を引き離すことができる任意の化学基である。
【０２４０】
本発明の文脈において、ハメット定数は、Ｈａｎｓｃｈ及びＴａｆｔ（１９９１）、Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９１：１６５−１９５で計算及び記載されるとおりの定数である。正のハメット定数は、置換基がフェニル部分に電子吸引効果を発揮する能力を反映し、負の値は、置換基が電子供与効果を発揮することを示している。電子吸引効果は、ハメット定数が大きいほど強くなる。ハメット定数とは、メタ位（σｍ）及びパラ位（σｐ）のフェニル部分の置換基について経験的に決定された定数である。本発明の文脈において、この位置は、部分Ｙの結合に関連して決定される。オルト位の置換基については、パラ位のハメット値は良好な近似であり、したがって、本発明の文脈において置換基Ｖ、Ｗ、及びＥのハメット値の合計を計算するために使用される。
【０２４１】
本発明の文脈において、「酸性条件下で」という用語は、ｐＨ７未満のｐＨ、特にリンカーのｐＫａ未満のｐＨ、より特にＴＦＡ＞５０％、水の存在下でｐＨ＜０に関する。
【０２４２】
本発明の文脈では、アルキルという用語は、直鎖状又は分岐状の飽和炭化水素を意味する。例えば、Ｃ１〜１２アルキルという用語は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２個の炭素原子を有する飽和の直鎖状又は分枝状の炭化水素を指す。Ｃ１〜Ｃ４アルキルの非限定的な例としては、メチル、エチル、プロピル、ｎ−ブチル、２−メチルプロピル、  ｔｅｒｔ−ブチルが挙げられる。
【実施例】
【０２４３】
リンカータイプ４の実施例１：天然由来及び研究用ペプチド、Ｐ１及びＰ２の精製
本発明のペプチドの精製方法を、極性の異なる２つのペプチドに適用した。これらはヒストンＨ３タンパク質のＨ−ＡＲＴＫＱＴＡＲＫＳＴＧＧＫＡ−ＯＨ（配列番号：１）（Ｐ１）断片２〜１６であり、かつＨ−ＡＫＡＤＥＶＳＬＨＫＷＹＧ−ＮＨ２（配列番号：２）（Ｐ２）は研究用のペプチド配列であった。
【０２４４】
ペプチド配列は、標準的な固相ペプチド合成条件下で合成し、それによって、合成樹脂は、各アミノ酸カップリングの後に無水酢酸及びピリジンで処理し、未反応のアミノ基をブロックした。リンカーＸ１は、ＤＭＦ中で４当量のリンカー、６当量のオキシマ、６当量のジイソプロピルアミン（ＤＩＥＡ）を２時間使用することにより、樹脂上のＰ１へカップリングした。本発明の方法を図１に示す。リンカーＸ２は、４当量のリンカー、６当量のオキシマ、６当量のＤＩＥＡを使用することによって樹脂上のＰ１及びＰ２に２時間カップリングした。その後、ペプチドをＴＦＡ／ＰｈＯＨ／ＰｈＳＨ／Ｈ２Ｏ／エタンジチオール（ＥＤＴ，８２．５：５：５：２．５）の混合物によって合成樹脂から切断した。粗ペプチド混合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した。アルデヒド修飾アガロースビーズを水及びクエン酸Ｎａ緩衝液０．１Ｍ（ｐＨ４．５にて）で各３回洗浄した。ペプチドのＤＭＳＯ溶液に１０体積％のクエンＮａ酸緩衝液を加え、次いで、この溶液をアガロースビーズに９０分かけて適用して、目的のペプチドがアガロースビーズに定量的に固定化された。その後、アセチル化した末端配列及びその他の不純物を除去するために、８Ｍの尿素、ＤＭＳＯ、ＥｔＯＨ／水（７：３）、０．１ＭのＮａＣｌ、水、ＭｅＣＮで各３回の洗浄を行った。固定化されたリンカーの切断は、アガロース樹脂を１ｍＬのＭｅＣＮ／ＡｃＯＨ（９：１）あたり５０ｍｇのＰＰｈ３で処理することで行った。その後、支持体をＭｅＣＮで４回リンスし、Ｈ２Ｏ／ＭｅＣＮ／ＴＦＡ（７０：２９：１）の溶液を１８０分間で加えた。その後、上清を遠心チューブに濾過し、支持体をＴＦＡ／Ｈ２Ｏ（９：１）で３回、同じチューブにリンスした。Ｅｔ２Ｏを１０倍添加して沈殿を起こし、チューブを遠心分離して有機の上清を処理することによってペプチドを得た。
【０２４５】
ＵＰＬＣ−ＭＳを用いて各フェーズの純度を確認した。非精製（リンカー分子なし）及び精製のペプチドのＵＰＬＣクロマトグラムを図２及び図３に示し、さらに結果を表２にまとめた。ペプチドの同一性はＥＳＩ−ＭＳで確認した。１００μｍｏｌのＰ１の精製において、純度９３％のＸ１を使用することで、２６ｍｇの量（回収率６２％）のペプチドＰ１を得た（元は４１％）。Ｘ２リンカーの使用により、２１ｍｇ（回収率５０％）が９３％の純度で得られた。Ｐ２はＸ２リンカーの試料によって５μｍｏｌスケールで精製し、それにより、４ｍｇ（回収率７３％）が、純度９５％で得られた（元は５５％）。
【０２４６】
【表２】
2021535139.tif 000047
【０２４７】
リンカータイプ４の実施例２：天然由来及び研究用ペプチド、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５及びＰ６の精製
第２のセットでは、５つのペプチドを合成した。これらは、以下である：Ｈ−ＹＦＴＧＳＥＶＥＮＶＳＶＮＶＨ−ＮＨ２（配列番号：３）（Ｐ３）ヒトサイトメガロウイルス低マトリックスリン酸化タンパク質（ｌｏｗｅｒ  ｍａｔｒｉｘ  ｐｈｏｓｐｈｏｐｒｏｔｅｉｎ）（ＣＭＶ）の断片８１〜９５、Ｈ−ＰＳＮＰＦＹＥＡＬＳＴ−ＮＨ２（配列番号：４）（Ｐ４）ヒトＬｅｍｕｒチロシンキナーゼ３（ＬＭＴＫ３）の断片５１０〜５２０、Ｈ−ＤＡＥＦＲＨＤＳＧＹＥＶＨＨＱＫＬＶＦＦ−ＮＨ２（配列番号：５）（Ｐ５）ヒトアミロイドベータの断片１〜２０、Ｈ−ＣＫＡＤＥＶＳＭＨＫＷＹＧ−ＮＨ２（配列番号：６）（Ｐ６）研究用に意図されるペプチド配列。
【０２４８】
ペプチド配列Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５及びＰ６は、標準的な固相ペプチド合成条件下で１００μｍｏｌスケールで合成し、それによって、合成樹脂は、各アミノ酸カップリングの後に無水酢酸及びピリジンで処理し、未反応のアミノ基をブロックした。１．３ｍＬのＤＭＦ中で、２時間、４当量のリンカーＸ１（３０１ｍｇ）、６当量のオキシマ（８６ｍｇ）、及び６当量のジイソプロピルアミン（ＤＩＥＡ、１０５μＬ）を使用して、リンカーＸ１を樹脂上のＰ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６にカップリングした。その後、ＴＦＡ／ＰｈＯＨ／ＰｈＳＨ／Ｈ２Ｏ／エタンジチオール（ＥＤＴ，８２．５：５：５：２．５）の混合物で合成樹脂からペプチドを切断し、冷ジエチルエーテルにおいて沈殿した。粗ペプチド混合物を４．５ｍＬのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した。アルデヒド修飾アガロースビーズ（１．５ｍＬの沈降ビーズ）を、水及びｐＨ  ４．５の０．１Ｍのクエン酸ナトリウム緩衝液でそれぞれ３回洗浄した。ペプチドのＤＭＳＯ溶液に、８Ｍの塩酸グアニジウムを有する１０ｖｏｌ．％（５００μＬ）のクエン酸ナトリウム緩衝液を加えた。次いで、この溶液をアガロースビーズに９０分間適用して目的のペプチドがアガロースビーズに定量的に固定化した。その後、未反応のアルデヒド基をブロックするために、ｐＨ  ４．５の０．１Ｍのクエン酸ナトリウム緩衝液中のＬ−システインの１ｗ％溶液を固定化混合物に直接１５分間添加した。その後、精製媒体をＤＭＳＯ、６Ｍの塩酸グアニジウム、０．１ＭのＮａＣｌを有するＥｔＯＨ／水（７：３）、水、ＭｅＣＮでそれぞれ３回洗浄し、いずれのアセチル化末端配列及びその他の不純物を除去した。固定化されたリンカーの切断は、アガロース樹脂を１０ｍＬの５０ｍｇ／ｍＬ  ＰＰｈ３のＭｅＣＮ／ＡｃＯＨ／Ｈ２Ｏ（９０：５：５）で処理することで行った。その後、支持体をＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ（９：１）で３回リンスし、２ｍＬのＨ２Ｏ／ＴＦＡ（６０：４０）の溶液を６０分間で添加した。その後、上清に２ｍＬのＴＦＡを加え、得られた混合物を遠心チューブに濾過し、支持体をＴＦＡ／Ｈ２Ｏ（９５：５）で２回、同じチューブにリンスした。Ｅｔ２ＯをＴＦＡ−水の量に対して５倍加えて沈殿を開始し、チューブの遠心分離と有機上清の処理によってペプチドを取得した。
【０２４９】
ＵＰＬＣ−ＭＳを使用して各フェーズの純度を検証した。非精製ペプチド（リンカー分子なし）及び精製ペプチドのＵＰＬＣ−クロマトグラムを図４に示す。ペプチドの同一性はＥＳＩ−ＭＳで確認した。凍結乾燥後に得られたペプチド量、計算された回収率、及び精製前後のＵＶ純度を表３に示す。
【０２５０】
【表３】
2021535139.tif 000048
【０２５１】
タイプ１のリンカーの実施１：研究用ペプチドＰ２の精製
タイプ１のリンカーを有するペプチドを精製する本発明の方法を、ペプチドＨ−ＡＫＡＤＥＶＳＬＨＫＷＹＧ−ＮＨ２（配列番号：２）（Ｐ２）（これは研究を意図したペプチド配列である）に適用した。
【０２５２】
ペプチドは、標準的な固相ペプチド合成条件下で合成し、それによって、合成樹脂は、各アミノ酸カップリングの後に無水酢酸及びピリジンで処理し、未反応のアミノ基をブロックした。タイプ１のリンカーＸ９を、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中で４当量のリンカー、６当量のオキシマ、６当量のジイソプロピルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて樹脂上のＰ２に２時間カップリングさせた。その後、ＴＦＡ／ＴＩＳ／ＤＴＴ／Ｈ２Ｏ（８４：２：６：８）の混合物で合成樹脂からペプチドを切断し、ジエチルエーテルにおいて沈殿させた。３０ｍｇのリンカー修飾ペプチドを得た。このリンカータイプ１の本発明方法を図５に示す。粗ペプチド混合物のうち１．９ｍｇを１００μＬのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した。アルデヒド修飾アガロースビーズを、Ｈ２Ｏ／ＥｔＯＨ（４：１）スラリーの各７５μＬの５０％ビーズ懸濁液を有するカートリッジに加え、その後、ビーズを水及びｐＨ  ４．５の０．１Ｍのクエン酸ナトリウム緩衝液で３回洗浄した。ペプチドのＤＭＳＯ溶液に、８Ｍの塩酸グアニジウムを有する１０ｖｏｌ．％（１０μＬ）のクエン酸ナトリウム緩衝液を加えた。次いで、１１０μＬのこの溶液をアガロースビーズに９０分かけて適用し、これにより、所望のペプチドがアガロースビーズに定量的に固定化された（固定化上清のＵＰＬＣ分析）。その後、固定化混合物を１５分で間濾別して未反応のアルデヒド基をブロックし、イミンの形成をリバースした後に、ｐＨ  ４．５の０．１Ｍのクエン酸ナトリウム緩衝液中のＬ−システインの２ｗ％溶液１００μＬをビーズに加えた。その後、精製媒体を０．９Ｍの塩酸グアニジウムを有するＤＭＳＯ、０．１ＭのＮａＣｌを有するＥｔＯＨ／水（７：３）で５００μＬずつ３回洗浄して、アセチル化末端配列及びその他の不純物を除去した。固定化されたリンカーペプチドの切断は、アガロース樹脂をリアクターごとに２００μＬのＴＣＥＰ（２５ｍｇ／ｍＬ）で３０分間処理することで行った。その後、支持体を０．１％  ＴＦＡを含有するＨ２Ｏで３回リンスした。アミンスイッチを使用してペプチドをアガロースから放出させるため、ｐＨ９の０．２ＭのＮＨ４ＨＣＯ３溶液２００μＬをビーズに１５分間かけて添加した。これにより、ピペラジニル部分が脱プロトン化され、ペプチドが放出された。ＥＳＩ／ＭＳで所望のペプチドの同一性を確認した（図９、表４）。
【０２５３】
【表４】
2021535139.tif 000049
【０２５４】
タイプ２のリンカーの実施１：研究用ペプチドＰ２の精製
タイプ２のリンカーを有するペプチドを精製する本発明の方法を、ペプチドＨ−ＡＫＡＤＥＶＳＬＨＫＷＹＧ−ＮＨ２（配列番号：２）（Ｐ２）（これは研究を意図したペプチド配列である）に適用した。
【０２５５】
ペプチドは、標準的な固相ペプチド合成条件下で合成し、それによって、合成樹脂は、各アミノ酸カップリングの後に無水酢酸及びピリジンで処理し、未反応のアミノ基をブロックした。リンカーＸ１３を、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中で４当量のリンカー、６当量のオキシマ、６当量のジイソプロピルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて、樹脂上のＰ２に３時間かけてカップリングした。このリンカータイプ２の本発明方法を図６に示す。その後、ＴＦＡ／ＴＩＳ／ＤＴＴ／Ｈ２Ｏ（８４：２：６：８）の混合物でペプチドを合成樹脂から切断した。粗ペプチド混合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した。アルデヒド修飾アガロースビーズを、水及びｐＨ  ４．５の０．１Ｍのクエン酸ナトリウム緩衝液でそれぞれ３回洗浄した。ペプチドのＤＭＳＯ溶液に、クエン酸ナトリウム緩衝液中の６ＭのＧｄｍＣｌ１０体積％を加えた。得られた溶液をアガロースビーズに加え、混合物を９０分間振とうすることで、所望のペプチドをアガロースビーズ上に定量的に固定化した。上清を除去し、残渣をクエン酸Ｎａ緩衝液中の１重量％のＬ−Ｃｙｓで１５分間処理した。その後、ビーズをＤＭＳＯ、６Ｍの水性ＧｄｍＣｌ、ＥｔＯＨ／０．１Ｍ  ＮａＣｌ（７：３）、水、ＭｅＣＮ、ＥｔＯＨ中０．１体積％のＴＦＡでそれぞれ３回洗浄し、アセチル化末端配列及びその他の不純物を除去した。固定化されたリンカーの切断は、アガロース樹脂をＥｔＯＨ（０．５Ｍ）中の１０当量のＳｎＣｌ２で３時間処理することによって行った。その後、支持体を、ＥｔＯＨ中０．１体積％のＴＦＡ、Ｈ２Ｏ中０．１体積％のＴＦＡ、ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ（９：１）で各３回洗浄した。０．２Ｍ水性ＮＨ４ＨＣＯ２（ｐＨ  ８．８５）／ＭｅＣＮ（１：１）の溶液を１５分間かけて添加した。上清を遠心チューブに濾過し、支持体をＨ２Ｏで２回、同じチューブにリンスした。残渣を凍結乾燥することにより精製ペプチドを得た。
【０２５６】
ＵＰＬＣ−ＭＳを用いて各ステップの純度を検証した。非精製ペプチド（リンカー分子なし）及び精製ペプチドのＵＰＬＣ−クロマトグラムを図９に示す。ペプチドの同一性はＥＳＩ−ＭＳで確認した（表５）。精製実験にてＸ１３及び５０μｍｏｌの粗Ｐ２を使用することで、最終純度９７％（元は７７％）の３６ｍｇ（回収率７３％）のペプチドＰ２が得られた。
【０２５７】
【表５】
2021535139.tif 000050
【０２５８】
タイプ３のリンカーの実施１：研究用ペプチドＰ２の精製
タイプ３のリンカーを有するペプチドを精製する本発明の方法を、ペプチドＨ−ＡＫＡＤＥＶＳＬＨＫＷＹＧ−ＮＨ２（配列番号：２）（Ｐ２）（これは研究を意図したペプチド配列である）に適用した。
【０２５９】
ペプチドは、標準的な固相ペプチド合成条件下で合成し、それによって、合成樹脂は、各アミノ酸カップリングの後に無水酢酸及びピリジンで処理し、未反応のアミノ基をブロックした。タイプ３のリンカーＸ２２を、樹脂上のＰ２に、４当量のリンカー、３．６当量の２−（６−クロロ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアミニウム−ヘキサフルオロホスファト（ＨＣＴＵ）、４当量のオキシマ及びジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の８当量のジイソプロピルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて２時間かけてカップリンクした。その後、ＴＦＡ／ＴＩＳ／ＤＴＴ／Ｈ２Ｏ（８４：２：６：８）の混合物でペプチドを合成樹脂から切断し、ジエチルエーテルにおいて沈殿させた。２７ｍｇのリンカー修飾ペプチドを得た。このリンカータイプ３の本発明方法を図７に示す。粗ペプチド混合物のうち２．１  ｍｇを１００μＬのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した。アルデヒド修飾アガロースビーズを、Ｈ２Ｏ／ＥｔＯＨ（４：１）スラリーの各７５μＬの５０％ビーズ懸濁液を有するカートリッジに加え、その後、ビーズを水及びｐＨ  ４．５の０．１Ｍのクエン酸ナトリウム緩衝液で３回洗浄した。ペプチドのＤＭＳＯ溶液に、８Ｍの塩酸グアニジウムを有する１０ｖｏｌ．％（１０μＬ）のクエン酸ナトリウム緩衝液を加えた。その後、１１０μＬのこの溶液をアガロースビーズに９０分かけて適用し、これにより、所望のペプチドがアガロースビーズに定量的に固定化された（固定化上清のＵＰＬＣ分析）。その後、固定化混合物を１５分で間濾別して未反応のアルデヒド基をブロックし、イミンの形成をリバースした後に、ｐＨ  ４．５の０．１Ｍのクエン酸ナトリウム緩衝液中のＬ−システインの２ｗ％溶液１００μＬをビーズに加えた。その後、精製媒体を０．９Ｍの塩酸グアニジウムを有するＤＭＳＯ、０．１ＭのＮａＣｌを有するＥｔＯＨ／水（７：３）で５００μＬずつ３回洗浄して、アセチル化末端配列及びその他の不純物を除去した。固定化されたリンカーペプチドの切断は、アガロース樹脂をリアクターごとに２００μＬのＴＣＥＰ（２５ｍｇ／ｍＬ）で３０分間処理することで行った。その後、支持体を０．１％  ＴＦＡを含有するＨ２Ｏで３回リンスした。求核性放出を伴うアミンスイッチを使用することにより、ペプチドをアガロースから放出し、したがって、ｐＨ７の水溶液中の０．２ＭのＮＥｔ３の２００μＬをビーズに１００時間加えた。これにより、ピペラジニル及びアニリン−ＮＨ３＋部分が脱プロトン化され、次いでアニリン−ＮＨ２の求核攻撃によってペプチドが放出された。ＥＳＩ／ＭＳで所望のペプチドの同一性を確認した（図９、表６）。
【０２６０】
【表６】
2021535139.tif 000051
【０２６１】
カルバメートスイッチ（タイプ４）リンカー分子Ｘ１とＸ２の化学合成
２−（（２−（２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（アミノオキシ）アセトアミド）エチル）カルバモイル）−４−アジド−３−ブロモベンジル（４−ニトロフェニル）カーボネート（Ｘ１）を合成するための合成ステップ
【０２６２】
６−アミノ−７−ブロモフタリド
ＴＨＦ（８０ｍＬ）中の６−アミノフタリド（５．１３ｇ、３４．０５ｍｍｏｌ）の冷却溶液（０℃）に、Ｎ−ブロモスクシンイミド（６．１２ｇ、３４．０５ｍｍｏｌ、１当量）を加えた。冷却浴を取り外し、溶液を１時間撹拌し、次いで減圧下で溶媒を除去した。黄色の残渣を酢酸エチル（４００ｍｌ）に取り混み、水（各２００ｍＬ）で３回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で除去して、６−アミノ−７−ブロモフタリドを褐色の固体として得た（６．５３ｇ、２８．６３ｍｍｏｌ、８４％）。Ｒｆ＝０．２（シクロヘキサン／酢酸エチル２：１）；ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝１．４５分（５分で勾配１０〜９０％のＢ）；ＵＰＬＣ純度（２１０ｎｍ）＝８３．１％；ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＨ＋：２２７．９７、２２９．９６，検出：２２８．０１、２３０．０１）
【０２６３】
６−アジド−７−ブロモフタリド
６−アミノ−５−ブロモフタリド（５．５４ｇ、２４．１７ｍｍｏｌ）を０°Ｃの冷塩酸（１Ｍ、１００ｍＬ）に加えた。冷却した懸濁液に濃硫酸を、固体が完全に溶解するまで（２５ｍＬ）撹拌しながら滴下し、溶液が再び０℃に達するまでさらに冷却した。水（１７ｍＬ）中の亜硝酸ナトリウム（３．３４ｇ、４８．３４ｍｍｏｌ、２当量）の溶液をゆっくりと加えた（溶液が温かすぎると亜硝酸ガスが形成される）。１０分間撹拌した後、水中（２０ｍＬ）のアジ化ナトリウムの溶液（３．１４ｇ、４８．３４ｍｍｏｌ、２当量）をゆっくりと滴下して添加した（注意：アジ化水素酸の形成）。３０分後、懸濁液を酢酸エチル（２００ｍＬ）で抽出した。水相を濾過し、濾過ケーク（ｆｉｌｔｅｒ  ｃａｋｅ）を水（各１００ｍＬ）で３回及びシクロヘキサン（１５０ｍＬ）で１回洗浄した。６−アジド−７−ブロモフタリド（６．５８ｇ（９４％）、２４．１７ｍｍｏｌ、定量的）が黄色の固体として得られた。Ｒｆ＝０．３（シクロヘキサン／酢酸エチル２：１）；ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝２．２４分（５分で勾配１０〜９０％のＢ）；ＵＰＬＣ純度（２１０ｎｍ）＝５０．３％
【０２６４】
Ｎ−（２−（２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（アミノオキシ）アセトアミド）エチル）−３−アジド−２−ブロモ−６−（ヒドロキシメチル）ベンズアミド
６−アジド−７−ブロモフタリド（５．５４ｇ（９４％）、２４．１７ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１５０ｍＬ）に取り込み、この懸濁液を撹拌しながら５０℃に加熱した。エチレンジアミン（２３．４ｍＬ、３５０．４７ｍｍｏｌ、１４．５当量）を加え、従って、１０分後に固体が完全に溶解した。５０℃で１時間撹拌した後、溶媒及び過剰のエチレンジアミンを減圧下で除去して、残渣として赤色の油（８．４９ｇ）を得た。飽和塩水（８０ｍＬ）を加え、得られた懸濁液を３０分間超音波処理し、４０°Ｃで３０分間撹拌し、濾過した。濾過ケークを飽和塩水（５０ｍＬ）で１回、シクロヘキサン（１００ｍＬ）で１回洗浄した。濾過ケークを乾燥させた後、表題の化合物を黄色の固体として得た（３．８４ｇ、１２．２ｍｍｏｌ、５０．６％）。生成物３はまた、酢酸エチルで抽出することにより（毎回１５０ｍｌで６回）濾液からも得られた（４．７９ｇ、１５．２２ｍｍｏｌ、６３．１％）。Ｒｆ＝０．１（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ８：２）；ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝１．０３分（５分で勾配１０〜９０％のＢ）；ＵＰＬＣ純度（２１０ｎｍ）＝８３．５％；ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＮａ＋：３３６．０１、３３８．０１ｇ／ｍｏｌ、検出：３３５．９５、３３７．９６ｍ／ｚ）
【０２６５】
Ｎ−（２−（２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（アミノオキシ）アセトアミド）エチル）−３−アジド−２−ブロモ−６−（ヒドロキシメチル）ベンズアミド
ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（アミノオキシ）酢酸（（Ｂｏｃ）２ＡＯＡｃ−ＯＨ、４．７１ｇ、１５．８６ｍｍｏｌ、１．３当量）及びＮＨＳ（１．８４ｇ、１５．８６ｍｍｏｌ、１．３当量）のアセトニトリル（４０ｍＬ）中の攪拌溶液にジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、３．３０ｇ、１５．８６ｍｍｏｌ、１．３当量）を加える。１時間撹拌した後、溶液を濾過により得られた白色沈殿物から分離し、濾過ケークをアセトニトリル（４０ｍＬ）で洗浄する。濾液をアセトニトリルで１２０ｍＬに希釈する。Ｎ−（２−（２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（アミノオキシ）アセトアミド）エチル）−３−アジド−２−ブロモ−６−（ヒドロキシメチル）ベンズアミド（３．７９ｇ、１２．０６ｍｍｏｌ、１当量）をアセトニトリル（３０ｍＬ）に取り込み、懸濁液を５０分間超音波処理する。次に、（Ｂｏｃ）２ＡＯＡｃ−ＮＨＳを有する濾液をこの懸濁液に加え、反応混合物を２．５時間撹拌する。減圧下で溶媒を除去した後、得られたオレンジ色の油（１０．４７ｇ）に酢酸エチル（１５０ｍｌ）を加え、懸濁液を１０分間超音波処理し、５０℃で１０分間撹拌する。懸濁液を洗浄した後（８０ｍＬの５重量％のＮａＨＣＯ３溶液（ｐＨ  ８）で３回、８０ｍＬの２％のクエン酸溶液（ｐＨ  ４．５）で１回、８０ｍＬの塩水で２回）、有機相を分離して、硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下で溶媒を除去し、黄色の泡を粗生成物（６．８４ｇ）として得た。粗生成物を高真空下で乾燥した後、生成物を黄色の固体として得た（６．４３ｇ、７５．８９％純度（ＵＶ／可視で測定）、８．３１ｍｍｏｌ、６８．９１％収率）。ｃ＝０．１５（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ９５：５）；ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝２．６０分（３分で１０〜９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２１ｎｍ）＝７９．１％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＮａ＋：６０９．１３、６１１．１３ｇ／ｍｏｌ、検出：６０９．０３、６１１．０６ｍ／ｚ）
【０２６６】
２−（（２−（２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（アミノオキシ）アセトアミド）エチル）カルバモイル）−４−アジド−３−ブロモベンジル（４−ニトロフェニル）カーボネート
Ｎ−（２−（２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（アミノオキシ）アセトアミド）エチル）−３−アジド−２−ブロモ−６−（ヒドロキシメチル）ベンズアミド（６．３９ｇ（７９％）、８．２６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶解し、０°Ｃに冷却した。この溶液に、最初に無水ピリジン（１．００ｍＬ、１２．４８ｍｍｏｌ、１．５当量）を攪拌しながら加え、次にＤＣＭ（２０ｍＬ）中のクロロギ酸ｐ−ニトロフェニルの溶液（２．５２ｇ、１２．４８ｍｍｏｌ、１．５当量）をゆっくりと加えた。反応混合物を室温に温め、１時間撹拌した。減圧下で溶媒を除去し、得られたオレンジ色の油（９．９９ｇ）を１５０ｍＬの酢酸エチルに溶解する。懸濁液を濾過し、溶媒を濾液から減圧下で除去して、黄色の泡状固体を粗生成物（８．８５ｇ）として得た。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、シクロヘキサン：酢酸エチル  ２：１〜１：１）で精製した後、生成物（３．８２ｇ）を１００ｍＬのジエチルエーテルに取り込み、超音波で１０分間処理し、４０℃で３０分間撹拌し、次に−２０°Ｃで一晩保存した。生成物を濾過し、１００ｍＬの−２０℃の冷ジエチルエーテルで洗浄し、高真空後に乾燥して、淡黄色の固体（２．４７ｇ、３．２９ｍｍｏｌ、３９．５％）とした。
【０２６７】
Ｒｆ＝０．２５（酢酸エチル／シクロヘキサン  ２：１）、ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝３．１８分（５分で１０〜９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝８８．４％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＮａ＋：７７４．１３、７７６．１３ｇ／ｍｏｌ、検出：７７３．９１、７７５．８８ｍ／ｚ）
【０２６８】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）  δ  ８．７１（ｓ，１Ｈ），８．３２（ｄ，Ｊ＝９．２  Ｈｚ，２Ｈ），７．９５（ｓ，１Ｈ），７．６２（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５２（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），５．２５（ｓ，２Ｈ），４．３６（ｓ，２Ｈ），３．３３（ｍ，４Ｈ），１．４６（ｓ，１８Ｈ）
【０２６９】
２−（（２−（２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（アミノオキシ）アセトアミド）エチル）カルバモイル）−４−アジド−３，５−ジブロモベンジル（４−ニトロフェニル）カーボネート（Ｘ２）
５，７−ジブロモ−６−アミノフタリド
６−アミノフタリド（２０．００ｇ、１３２．７５ｍｍｏｌ）を、撹拌子付きの１Ｌの丸底フラスコに入れ、５５０ｍＬのＴＨＦ及び３０ｍＬのＭｅＣＮを０℃にて加えた。溶液が褐色に変わった後、溶液にＮ−ブロモスクシンイミドを粉末漏斗を通して固体としてゆっくりと加えた。氷浴を取り除き、しばらくすると溶液が黄色に変わった。室温で２時間撹拌した後、ＵＰＬＣ−ＭＳ及びＴＬＣは二臭化物への完全な変換を示した。回転式エバポレーターにて減圧下で溶媒を除去した。残りの固体を６００ｍｌの酢酸エチルに溶解し、水で３回洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発後、３９．８６ｇ（１２９．８６ｍｍｏｌ、９８％）の所望の生成物を淡黄色の固体として得た。Ｒｆ＝０．６（シクロヘキサン／酢酸エチル  ２：１）、ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝２．３６分（３分で１０〜９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２５４ｎｍ）＝８７．０％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＨ＋：３０７．９５ｇ／ｍｏｌ、検出：３０７．７６ｍ／ｚ）
【０２７０】
５５，７−ジブロモ−６−アジドフタリド
５，７−ジブロモ−６−アミノフタリド（３８．５０ｇ、１２４．１８ｍｍｏｌ）を２Ｌフラスコ内の２００ｍＬの濃Ｈ２ＳＯ４に溶解し、この茶色の溶液を大きな氷のバケツで冷却し、次いで、２３５ｍＬの１ＭのＨＣｌをゆっくりと加え、ＨＣｌ添加中に沈殿物が形成された。ＮａＮＯ２（１７．３１ｇ、２４８．３５ｍｍｏｌ、２当量）を３２ｍＬの水に溶解し、それが５°Ｃに達した後、懸濁液にゆっくりと加えた。その後、沈殿物は溶解した。溶液をさらに０℃で１５分間撹拌し、その後に７５ｍＬの水中のＮａＮ３（１６．３１ｇ、２４８．３５ｍｍｏｌ、２当量）をパスツールピペットによって滴下して加えた。ガス（Ｎ２、ＨＮ３）の強い形成を観察した。泡状の溶液を１時間撹拌し、その後、氷での冷却下で５００ｍｌの水を加えた。泡の発生が止まり、溶液が室温に達した後、懸濁液をブフナー漏斗を使用して濾過し、一方で２Ｌの水を使用して固体を漏斗に移し、それによって固体を洗浄した。湿った生成物を結晶皿中で減圧下で乾燥させた後、生成物はわずかに茶色がかった固体として得られた（３６．０１ｇ、１０８．１６ｍｍｏｌ、８７．１％）。Ｒｆ＝０．４５（シクロヘキサン／酢酸エチル  ２：１）、ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝２．８９分（３分で１０〜９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２５４ｎｍ）＝９５．３％、
【０２７１】
Ｎ−（２−アミノエチル）−３−アジド−２，４−ジブロモ−６−（ヒドロキシメチル）ベンズアミド
５，７−ジブロモ−６−アジドフタリド（１８．００ｇ、５３．５２ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（４９０ｍＬ）に溶解し、不溶性不純物を濾別し、エチレンジアミン（５２．７３ｍＬ、７４９．３２ｍｍｏｌ、１４当量）を０℃にて加えた。反応物を室温で１時間撹拌し、その後、ＵＰＬＣ−ＭＳは定量的変換を示した。反応混合物を、１００ｍＬの塩水が添加された分液漏斗に移した。水相を分離した後、有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、回転式エバポレーターで有機溶媒をオレンジ色の固体として蒸発させた後、所望の生成物を得た。（２０．５０ｇ、５２．１６ｍｍｏｌ、９７．４％）。Ｒｆ＝０．２５（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ８：２）、ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝１．８０分（３分で１０〜９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２５４ｎｍ）＝８４．２％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＨ＋：３９３．９３ｇ／ｍｏｌ、検出：３９３．８７ｍ／ｚ）
【０２７２】
Ｎ−（２−（２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（アミノオキシ）アセトアミド）エチル）−３−アジド−２，４−ジブロモ−６−（ヒドロキシメチル）ベンズアミド
ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（アミノオキシ）酢酸（（Ｂｏｃ）２ＡＯＡｃＯＨ、１７．３０ｇ、５８．１８ｍｍｏｌ、１．１当量）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ、６．７６ｇ、５８．１８ｍｍｏｌ、１．１当量）を３５０ｍＬのアセトニトリルに溶解した。この溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、１２．１３ｇ、５８．１８ｍｍｏｌ、１．１当量）を固体として加え、ＤＣＣの溶解後に白色の沈殿物が形成された。反応混合物を室温で１時間撹拌し、そこで（Ｂｏｃ）２ＡＯＡｃ−ＮＨＳエステルがＵＰＬＣ−ＭＳに従って定量的に形成された。その後、混合物を１Ｌフラスコに濾過して、ＤＣＣ−尿素を除去した。Ｎ−（２−アミノエチル）−３−アジド−２，４−ジブロモ−６−（ヒドロキシメチル）ベンズアミド（２０．５ｇ、５２．９０ｍｍｏｌ）を５３０ｍＬの酢酸エチルに溶解し、続いて（Ｂｏｃ）２ＡＯＡｃ−ＮＨＳの溶液に加えた。混合物を室温で１時間撹拌し、その後、反応の完了をＴＬＣ及びＵＰＬＣ−ＭＳによって確認した。追加の形成された沈殿物を濾別し、有機相を５％のＮａＨＣＯ３（各２００ｍＬ）で２回、ブライン１回及び２％クエン酸溶液（ｐＨ  ４．５）／塩水１：１（各１５０ｍＬ）で２回洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、従って、有機溶媒を真空で除去し、表題の化合物を淡黄色の油として得た（３７．７０ｇ、５６．５８ｍｍｏｌ、定量的）。Ｒｆ＝０．４（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ９５：５）、ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝２．９７分（３分で１０〜９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２５４ｎｍ）＝５４．２％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＨ＋：６６７．０５、ＭＮａ＋：６８９．０４ｇ／ｍｏｌ、検出：６８８．９５ｍ／ｚ）
【０２７３】
２−（（２−（２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（アミノオキシ）アセトアミド）エチル）カルバモイル）−４−アジド−３，５−ジブロモベンジル（４−ニトロフェニル）カーボネート
Ｎ−（２−（２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（アミノオキシ）アセトアミド）エチル）−３−アジド−２，４−ジブロモ−６−（ヒドロキシメチル）ベンズアミド（３７．７０ｇ（９４％）、５２．９０ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（１７０ｍＬ）に入れ、（乾燥、分子ふるい上に入れた）ピリジン（４．７２ｍＬ、５８．５０ｍｍｏｌ、１．１当量）を加えた。その後、４−ニトロフェニルクロロホルミエート（１２．０３ｇ、５８．５０ｍｍｏｌ、１．１当量）を、水浴の使用により温度を一定に保ちながら、室温にて固体としてゆっくりと加えた。反応により、ＤＣＭのフラスコの中央での蒸発が引き起こされる可能性がある。ＬＣＭＳ及びＴＬＣで示されるように、１時間後に完全な反応が示された。ジクロロメタンを真空で除去して５２ｇの粗褐色油を得て、残渣を５００ｍＬの酢酸エチルに溶解し、２％のクエン酸溶液（ｐＨ  ４．５）／塩水１：１（各２５０ｍＬ）で２回及び塩水１５０ｍＬで１回洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４を用いて乾燥させた。その後、この懸濁液をグラスフリットにおいて５０ｇのシリカプラグで濾過したが、オレンジと赤みがかった不純物はシリカに残留した。有機溶媒を、高粘度のわずかに琥珀色の油が残るまで、減圧下で濾液から除去した。この油に７０ｍｌのＥｔ２Ｏを加え、２相エマルジョンを４５°Ｃで１０分間、１つの均一な相が形成されるまで回転式エバポレーターで回転させた。結晶化開始剤として小さなサンドコーン（ｓａｎｄ  ｃｏｒｎ）をフラスコに加え、フラスコを冷蔵庫に一晩（１６時間）置いた。フラスコの中にはドロドロした沈殿物が形成されていた。さらに２００ｍＬの冷（−２５°Ｃ）エーテルをフラスコに加え、フラスコを穏やかに振とうし、氷浴中で撹拌した。白い星のような結晶を、フィルターを満たしたブフナー漏斗に移し、さらに２００ｍＬの冷Ｅｔ２Ｏで洗浄した。したがって、表題の化合物を白色の固体として得た（２９．９５ｇ、３６．０２ｍｍｏｌ、６８．１％）。Ｒｆ＝０．６（酢酸エチル／シクロヘキサン  ２：１）、ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝２．８６分（３分で３０〜９５％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝９３．５％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＨ＋：８３２．０６、ＭＮａ＋：８５４．０４ｇ／ｍｏｌ、検出：８５３．８７ｍ／ｚ）
【０２７４】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）  δ  ８．７３（ｓ，１Ｈ），８．３３（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ），７．９３（ｓ，１Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ），５．２４（ｓ，２Ｈ），４．３６（ｓ，２Ｈ），３．４０−３．３２（ｍ，４Ｈ），１．４６（ｓ，１８Ｈ）
【０２７５】
アジド還元安全ロック（タイプ１）リンカー分子Ｘ６及びＸ９を有するアミンスイッチの化学合成
３−（（４−（２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（アミノオキシ）アセチル）ピペラジン−１−イル）メチル）−４−アジドベンジル（４−ニトロフェニル）カーボネート（Ｘ６）の合成のための合成ステップ
【０２７６】
４−ニトロ−３−（ピペラジン−１−イルメチル）安息香酸
４−ニトロ−３−メチル安息香酸メチルエステル（５．０３ｇ、２５．５０ｍｍｏｌ）を、撹拌子を備えた５００ｍＬの丸底フラスコ中の１７０ｍＬの乾燥ベンゼンに溶解した。Ｎ−ブロモスクシンイミド（５．２７ｇ、２９．３３ｍｍｏｌ）及び過酸化ベンゾイル（０．６２ｇ、２．５５ｍｍｏｌ）を加え、溶液を加熱還流した。１２時間後、ＵＰＬＣ−ＵＶ／可視は、臭素化出発材料への変換が１０％しかないことを示した。再び、Ｎ−ブロモスクシンイミド（３．６６ｇ、２０．５６ｍｍｏｌ）及び過酸化ベンゾイル（０．６２ｇ、２．５５ｍｍｏｌ）を加えた。３６時間後、ＵＰＬＣ−ＵＶ／可視は８０％の変換を示した。混合物を真空で濃縮し、８５ｍＬのクロロホルムを加えた。それを、撹拌子を備えた５００ｍＬの丸底フラスコ中の８５ｍＬのクロロホルム中のピペラジン（８．８７ｇ、１０２．００ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（４．６３ｇ、３３．１５ｍｍｏｌ）の混合物にゆっくりと濾過した。２時間後、ＵＰＬＣ−ＵＶ／可視は、所望の生成物への完全な変換を示した。回転式エバポレーターで溶媒を除去した。残渣に２５０ｍＬの酢酸エチルを加え、混合物を分液漏斗へ濾過した。有機相を１００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３で３回、１００ｍＬの塩水で３回洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥し、蒸発させた後、７．３ｇ（完全に乾燥していない）の所望の生成物が黄色の油として得られた。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝１．６０２分（３分で１０〜９０％ＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝６８．３％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＨ＋：２８０．１２ｇ／ｍｏｌ、検出：２８０．１１ｍ／ｚ）
【０２７７】
（４−ニトロ−３−（ピペラジン−１−イルメチル）フェニル）メタノール
４−ニトロ−３−（ピペラジン−１−イルメチル）安息香酸（１．１０ｇ，推定３．００ｍｍｏｌ）を２５０ｍＬの丸底フラスコにおいて８ｍＬのＴＨＦに溶解し、磁気攪拌子を用いて室温で撹拌した。ＬｉＣｌ（０．７７ｇ、１８．００ｍｍｏｌ）、ＮａＢＨ４（０．６９ｇ、１８．００ｍｍｏｌ）、及び１６ｍＬのエタノールを順次加えた。１２時間後、ＵＰＬＣ−ＵＶ／可視は、出発材料の完全な変換を示した。反応混合物を真空で濃縮し、残渣を６０ｍＬの酢酸エチルに懸濁した。混合物を急速に撹拌しながら、２５ｍＬの１ＭのＮＨ４Ｃｌを滴下して加えた。２時間後、２５ｍＬの１ＭのＮａＯＨをゆっくりと加え、混合物を分離漏斗に移した。この層を分離し、水相を５０ｍＬの酢酸エチルで２回、５０ｍＬのクロロホルムで２回抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、有機溶媒を蒸発させた後に、所望の生成物が黄色の固体として得られた（０．５９ｇ、２．３５ｍｍｏｌ、８８％）。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝１．２７分（３分で１０〜９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝５０．４％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＨ＋：２５２．２９ｇ／ｍｏｌ、検出：２５２．１７ｍ／ｚ）
【０２７８】
２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（アミノオキシ）−１−（４−（５−（ヒドロキシメチル）−２−ニトロベンジル）ピペラジン−１−イル）エタン−１−オン
１００ｍＬの丸底フラスコで、Ｂｉｓ−Ｂｏｃ保護されたアミノオキシ酢酸（０．７８ｇ、２．６３ｍｍｏｌ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（０．３１ｇ、２．６３ｍｍｏｌ）を２５ｍＬのアセトニトリルに溶解し、マグネチック攪拌子で攪拌した。ジシクロヘキシルカルボジイミド（０．５５ｇ、２．６３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１．５時間撹拌した。滴下漏斗へ濾過した後、それを、２５０ｍＬの丸底フラスコにおいて２５ｍＬのクロロホルム中の４−ニトロ−３−（ピペラジン−１−イルメチル）ベンジルアルコール（０．５９ｇ、２．３５ｍｍｏｌ）の溶液にゆっくりと加えた。１時間後、ＵＰＬＣ−ＵＶ／可視は、出発材料の完全な変換を示した。溶媒を回転式エバポレーターで除去し、残渣を１００ｍＬの酢酸エチルに懸濁し、分液漏斗へ移した。有機相を５０ｍＬの水で３回、５０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３溶液で３回、５０ｍＬの塩水で３回洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。有機溶媒を蒸発させた後、黄色の固体として所望の生成物が得られた（１．８ｇ、完全に乾燥していない）。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝２．２４分（３分で１０〜９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝１９．８％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＨ＋：５２５．１４ｇ／ｍｏｌ、検出：５２５．２５ｍ／ｚ）
【０２７９】
１−（４−（２−アミノ−５−（ヒドロキシメチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（アミノオキシ）エタン−１−オン
丸底フラスコで、２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（アミノオキシ）−１−（４−（５−（ヒドロキシメチル）−２−ニトロベンジル）ピペラジン−１−イル）エタン−１−オンを１６ｍＬの水／エタノール（１：４）に溶解した。この後、鉄粉（０．２３ｇ、４ｍｍｏｌ）及び塩化アンモニウム（０．２５ｇ、４ｍｍｏｌ）を溶液に加えた。反応混合物を室温で一晩撹拌した。ＵＰＬＣ−ＭＳを介して出発材料の完全な消費を確認した後、反応混合物をセライトで濾過して過剰の鉄を除去した。溶媒を可能な限り真空で濃縮した。５０ｍＬのＣＨＣｌ３を加えた後、有機相を３５０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３溶液で３回、５０ｍＬの塩水で３回洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させた後、回転式エバポレーターにて減圧下で有機溶媒を除去した。最終生成物（０．１９ｇ、０．４ｍｍｏｌ）が茶色の油として得られた。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝２．０５分（３分で１０〜９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝２４．７％，ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＨ＋：４９５．２８、ＭＮａ＋：５１７．２６ｇ／ｍｏｌ、検出：５１７．２９ｍ／ｚ）
【０２８０】
２−ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（アミノオキシ）−１−（４−（２−アジド−５−（ヒドロキシメチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）エタン−１−オン
丸底フラスコに、１−（４−（２−アミノ−５−（ヒドロキシメチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）−２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（アミノオキシ）エタン−１−オン（０．１９ｇ、０．４ｍｍｏｌ）を乾燥アセトニトリルに溶解した。攪拌しながら、氷浴でこの溶液を冷却し、ｔｅｒｔ−ブチルニトリル（２３６μＬ、２ｍｍｏｌ）、次いでトリメチルシリルアジド（３５１μＬ、１．６ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。この溶液を、密閉フラスコ内で２時間、氷冷しながらさらに撹拌した。ＵＰＬＣ−ＭＳが不完全な変換を示した後、ｔｅｒｔ−ブチルニトリル（５７２μＬ、４ｍｍｏｌ）、次にトリメチルシリルアジド（７０２μＬ、３．２ｍｍｏｌ）を再びゆっくりと加えた。この反応混合物をさらに２時間攪拌した。次に、溶媒を回転式エバポレーターで減圧下で除去した。粗生成物を５０ｍＬの酢酸エチルに溶解した後、有機相を５０ｍＬのＮａＨＣＯ３で３回、５０ｍＬの塩水溶液で３回洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。有機溶媒を蒸発させた後、所望の生成物（０．１４ｇ、０．２０ｍｍｏｌ）が得られた。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝２．３４分（３分で１０〜９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝２０．４％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＨ＋：５２１．２７、検出：５２１．３０ｍ／ｚ）
【０２８１】
３−（（４−（２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（アミノオキシ）アセチル）ピペラジン−１−イル）メチル）−４−アジドベンジル（４−ニトロフェニル）カーボネート（Ｘ６）
２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（アミノオキシ）−１−（４−（２−アジド−５−（ヒドロキシメチル）ベンジル）ピペラジン−１−イル）エタン−１−オン（１４９ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を０．２ｍＬの乾燥ＤＣＭを使用して丸底フラスコに溶解した。ピリジン（１９．２μＬ、０．２４ｍｍｏｌ）を加え、氷浴を用いて溶液を冷却した。この混合物に、０．２ｍＬの乾燥ＤＣＭにおけるｐ−ニトロフェニルクロロホルミエート（３２．９ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）の溶液をゆっくりと加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。有機溶媒を真空で除去し、所望の生成物を暗褐色の油として得た（０．２１ｇ、完全に乾燥していない）ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝１０．７２分（１１分で０〜６０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝８．３９％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＨ＋：６８６．２８、ＭＮａ＋：７０８．２６ｇ／ｍｏｌ、検出：６８６．３８ｍ／ｚ）
【０２８２】
３−（４−（２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（アミノオキシ）アセチル）ピペラジン−１−イル）−４−アジドベンジル（４−ニトロフェニル）カーボネート（Ｘ９）の合成のための合成ステップ
１−（４−（２−アミノ−５−（ヒドロキシメチル）フェニル）ピペラジン−１−イル）−２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（アミノオキシ）エタン−１−オン
２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（アミノオキシ）−１−（４−（５−（ヒドロキシメチル）−２−ニトロフェニル）ピペラジン−１−イル）エタン−１−オン（１．００ｇ、１．９６ｍｍｏｌ）を、丸底フラスコにおいて７８ｍＬのメタノールに溶解した。この溶液にマグネシウム粉末（１．２８ｇ、１９．６ｍｍｏｌ）を加えた。攪拌下で、ギ酸アンモニウム（１．２３ｇ、１９．６ｍｍｏｌ）を固体として加えた。この溶液を室温で２０分間さらに撹拌すると同時に、ガスの形成が観察された。この溶液を直ちにマグネシウムを除去するために濾別し、回転式エバポレーターにて減圧下で溶媒を除去した。粗生成物を１：１の水／アセトニトリルの溶媒混合物を用いて凍結乾燥した。この粗生成物（２．２０ｇ）は、任意のさらなる精製を行わずに使用した。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝２．２１分（３分で１０〜９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝５３．２％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＨ＋：４８１．２７ｇ／ｍｏｌ、ＭＮａ＋：５０３．２５ｇ／ｍｏｌ、検出：４７７．３０ｍ／ｚ）
【０２８３】
２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（アミノオキシ）−１−（４−（２−アジド−５−（ヒドロキシメチル）フェニル）ピペラジン−１−イル）エタン−１−オン
丸底フラスコに、１−（４−（２−アミノ−５−（ヒドロキシメチル）フェニル）ピペラジン−１−イル）−２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−アミノオキシ）エタン−１−オン（１．００ｇ、２．０８ｍｍｏｌ）を乾燥アセトニトリルに溶解した。撹拌下で、氷浴でこの溶液を冷却し、ｔｅｒｔ−ブチルニトリル（１．３７ｍＬ、１０．４ｍｍｏｌ）、次にトリメチルシリルアジド（１．１６ｍＬ、８．３２ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。この溶液を、密閉フラスコ内で２時間、氷冷しながらさらに撹拌した。ＵＰＬＣ−ＭＳが不完全な変換を示した後、ｔｅｒｔ−ブチルニトリル（１．３７ｍＬ、１０．４ｍｍｏｌ）、次にトリメチルシリルアジド（１．１６ｍＬ、８．３２ｍｍｏｌ）を再びゆっくりと加えた。この反応混合物をさらに一晩攪拌した。次に、溶媒を回転式エバポレーターで減圧下で除去した。粗生成物を５０ｍＬの酢酸エチルに溶解した後、有機相を５０ｍＬのＮａＨＣＯ３で３回、５０ｍＬの塩水溶液で３回洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。有機溶媒を蒸発させ、フラッシュカラム（３：２  ＥｔＯＡＣ／シクロヘキサン）で精製した後、所望の生成物（０．２ｇ、０．３９ｍｍｏｌ）を得た。Ｒｆ＝０．５（ＥｔＯＡｃ／シクロヘキサン  ４：１）、ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝２．９２分（３分で１０〜９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝８４．２％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＨ＋：５０７．２６ｇ／ｍｏｌ、ＭＮａ＋：５２９．２４ｇ／ｍｏｌ、検出：５２９．３０ｍ／ｚ）
【０２８４】
３−（４−（２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（アミノオキシ）アセチル）ピペラジン−１−イル）−４−アジドベンジル（４−ニトロフェニル）カーボネート（Ｘ９）
２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（アミノオキシ）−１−（４−（２−アジド−５−（ヒドロキシメチル）フェニル）ピペラジン−１−イル）エタン−１−オン（７６ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を１ｍＬの乾燥ＤＣＭを使用して丸底フラスコに溶解した。ピリジン（１２．２μＬ、０．１５ｍｍｏｌ）を加え、氷浴を用いて溶液を冷却した。この溶液に、ｐ−ニトロフェニルクロロホルミエート（２０．３ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を固体としてゆっくりと加えた。１０分後、氷浴を除去し、反応混合物を室温で一晩撹拌した。有機溶媒を真空で除去し、粗生成物を３０ｍＬのＥｔＯＡｃに再溶解した。次に、有機相を飽和ＮａＨＣＯ３溶液で３回、塩水で３回洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、有機溶媒を再び真空で除去した。粗生成物を、ＥｔＯＡｃ／シクロヘキサン（１：１）溶媒混合物を使用するフラッシュカラムによって最終的に精製した。所望の化合物を淡黄色の油（３０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）として得た。Ｒｆ＝０．５４（ＥｔＯＡＣ／シクロヘキサン  １：１）、ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝３．５３分（３分で１０〜９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝９３．６％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＨ＋：６７１．６６、ＭＮａ＋：６９４．２４ｇ／ｍｏｌ、検出：６９４．４０ｍ／ｚ）
【０２８５】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２５ °Ｃ）：δ［ｐｐｍ］＝８．２８（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），７．３８（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），７．２２−７．０６（ｍ，３Ｈ），５．２２（ｓ，２Ｈ），４．６２（ｓ，２Ｈ），３．９４（ｔ，Ｊ＝３．９３，２Ｈ），３．８１（ｔ，Ｊ＝３．８１，２Ｈ），３．１２（ｔ，Ｊ＝３．１２，２Ｈ），３．０７（ｔ，Ｊ＝３．０７，２Ｈ），１．５４（ｓ，１８Ｈ）
【０２８６】
他の還元的安全ロック（タイプ２）リンカー分子Ｘ１２、Ｘ１３、及びＸ４３を有するアミンスイッチの化学合成
（５−（２−（２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（アミノオキシ）アセトアミド）−６−（ｔｅｒｔ−ブチルジスルファニル）ピリジン−３−イル）メチル（４−ニトロフェニル）カーボネート（Ｘ１２）の合成
メチル６−メラカプト−５−ニトロピリジン−３−カルボキシレートの合成
メタノール（２５ｍｌ）中のメチル６−クロロ−５−ニトロピリジン−３−カルボキシレート（１．６ｇｍ、７．０３７ｍｍｏｌ）の冷却溶液に、７０％硫化水素ナトリウム水和物（１．１１５、１４．１２７ｍｍｏｌ）を少しずつ加えた。この混合物を撹拌しながら３０分〜１時間静置する。続いて、この固体材料を濾過した。回転式エバポレーターを使用して、残りの溶液を５ｍｌに減縮した。残りの溶液を、０°Ｃにて１ＭのＨＣｌをゆっくりと加えることにより、ｐＨ  ２に酸性化した。得られた黄色の固体材料を濾過により回収し、その材料は精製せずにさらなるステップに使用する。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝１．８０分（３分で１０〜９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝９５．０％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＨ＋：２１５．０１ｇ／ｍｏｌ、検出：２１５．２０ｍ／ｚ）
【０２８７】
メチル６−メラカプト−５−アミノピリジン−３−カルボキシレートの合成
メチル６−メラカプト−５−ニトロピリジン−３−カルボキシレート（１．００ｇｍ、４．５３７ｍｍｏｌ）及び鉄粉１．８５ｇｍ（３２．４８ｍｍｏｌ）を、７５％メタノール及び２５％水５０ｍＬを含有する反応フラスコに入れた。次いで、塩化カルシウム（０．４１ｇｍ、３．６３ｍｍｏｌ）を加え、出発材料が生成物に完全に変換するまで、混合物を油浴上で還流した。還流の終了後、混合物をセライトで濾過して過剰の鉄を除去した。濾液をほぼ乾固するまで濃縮し、続いて水（２５ｍｌ）を加え、酢酸エチルを使用して化合物を抽出した（３回×２５ｍｌ）。溶媒を減圧下で除去し、得られた粗残渣は、更なる進行に十分な純度であった（３．４９ｍｍｏｌ、７７％）。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝１．２６分（３分で１０〜９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝９３％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＨ＋：１８５．０４ｇ／ｍｏｌ、検出：１８５．１４ｍ／ｚ）
【０２８８】
（５−アミノ−６−メラカプトピリジン−３−イル）メタノールの合成
メチル６−メラカプト−５−アミノピリジン−３−カルボキシレート（０．７ｇｍ、３．６８ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（２０ｍＬ）に溶解し、この溶液を０°Ｃに冷却した。水素化リチウムアルミニウム（１．４２ｇｍ、３６．８９ｍｍｏｌ）を、Ｎ２雰囲気下で１０分間反応混合物に少しずつ加えた。得られた溶液を室温で２４時間撹拌した。ＵＰＬＣで示されるように反応が完了した後、１．４ｍｌの水、１．４ｍｌの１０％ＮａＯＨ、０°Ｃの４．２ｍｌの水を同時に加えることにより、過剰のＬｉＡｌＨ４をクエンチした。Ａｌ塩を濾別し、固形材料を水及びＭｅＯＨ（１：１、１００ｍｌ）で洗浄した。溶媒を蒸発させ、イソプロパノール（３回×５０ｍｌ）を使用して固体ケークから化合物を抽出した。イソプロパノールを減圧下で除去して、純粋な形で所望の生成物（１．９２ｍｍｏｌ、５２％）を得た。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝１．０１分（３分で１０〜９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝９６％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＨ＋：１５７．０４ｇ／ｍｏｌ、検出：１５７．１１ｍ／ｚ）
【０２８９】
（２−（２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（アミノオキシ））−Ｎ−（２−（ｔｅｒｔ−ブチルジスルファニル）−５−（ヒドロキシメチル）ピリジン−３−イル）アセトアミド）の合成
６−メルカプト−５−アミノピリジン−３−カルボン酸（１．３ｇｍ、８．０３ｍｍｏｌ）を入れたシュレンクフラスコに、ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）、２−メチル−２−プロパンチオール（０．９１ｍｌ、８．０３ｍｍｏｌ）及びＴＢＨＰ（１．１３ｇｍ、８．８３ｍｍｏｌ、水の７０％溶液）をＮ２雰囲気下で加えた。３０秒後、ＮＩＳ（０．１９ｇｍ、０．１８ｍｍｏｌ）を１つのバッチで加えた。次に、シュレンクフラスコを２５°Ｃで１時間反応させた。反応終了後、水（２０．０ｍＬ）でクエンチし、酢酸エチルで抽出した（３回×３０ｍＬ）。有機層を組み合わせて、真空下で蒸発させ、化合物をさらに精製することなく次のステップで使用した。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝１．６８分（３分で１０〜９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝９３％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＨ＋：２４５．０８ｇ／ｍｏｌ、検出：２４５．１８ｍ／ｚ）
【０２９０】
（５−（２−（２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（アミノオキシ）アセトアミド）−６−（ｔｅｒｔ−ブチルジスルファニル）ピリジン−３−イル）メチル（４−ニトロフェニル）カーボネート（Ｘ１２）の合成
（５−アミノ−６−（ｔｅｒｔ−ブチルジスルファニル）ピリジン−３−イル）メタノール（８３．５ｍｇ、０．１５６ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）に入れ、乾燥ピリジン（０．１６１ｍＬ、０．１９ｍｍｏｌ）を加えた。その後、４−ニトロフェニルクロロホルミエート（３１．９ｍｇ、０．１５４ｍｍｏｌ）を加えた。ＬＣＭＳ及びＴＬＣによって反応が１２時間後に完了したことが示される。ジクロロメタンを真空で除去して、淡黄色／オレンジ色の粗油を得て、残渣を１０ｍＬの酢酸エチルに再溶解し、水と塩水を１：１（各５ｍＬ）で洗浄した。最後に、ＥｔｏＡｃを減圧下で除去して、所望の生成物（０．０８ｍｍｏｌ、７５％）を得た。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝１２．５９分（１１．５０分で１０〜６０％のＭｅＣＮ、１１．５１〜１３分で６０〜９０％）、ＵＰＬＣ純度（＝ｎｍ）＝７０％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＮａ＋：７０５．１９ｇ／ｍｏｌ、検出：７０５．４１ｍ／ｚ）
【０２９１】
３−（４−（２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（（アミノオキシ）アセチル）ピペラジン−１−イル）−４−ニトロベンジル（４−ニトロフェニル）カーボネート（Ｘ１３）の合成のための合成ステップ
メチル３−フルオロ−４−ニトロベンゾエート
３−フルオロ−４−ニトロ安息香酸（５．００ｇ、２７．０１ｍｍｏｌ）を、攪拌子で２５０ｍＬ丸底フラスコ内で、１００ｍＬのメタノールに溶解し、３ｍＬの（５４，０２ｍｍｏｌ）Ｈ２ＳＯ４を添加した。５０°Ｃで４２時間撹拌した後、ＵＰＬＣ−ＵＶ／可視はメチルエステルへの完全な変換を示した。回転式エバポレーターで反応混合物を１０ｍＬに濃縮した。１００ｍＬの酢酸エチル及び１００ｍＬのＨ２Ｏを加えた後、混合物を攪拌し、続いてＫ２ＣＯ３（７．００ｇ）を少しずつ加えた。混合物を分液漏斗に移し、層を分離し、水相を１００ｍＬの酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、蒸発後、４．８１ｇ（２４．１５ｍｍｏｌ、８９％）の所望の生成物をオレンジ色の固体として得た。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝２．５３分（３分で１０〜９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２１０ｎｍ）＝９９．４％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＨ＋：２００．１４ｇ／ｍｏｌ、検出：−）。
【０２９２】
メチル４−ニトロ−３−（ピペラジン−１−イル）ベンゾエート
ピペラジン（４．０７ｇ、４７．２０ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（４．２４ｇ、３０．６８ｍｍｏｌ）を、攪拌子で２５０ｍＬ丸底フラスコ内の５０ｍＬのクロロホルムに懸濁した。５０ｍＬのクロロホルムに溶解したメチル３−フルオロ−４−ニトロベンゾエート（４．７ｇ、２３．６０ｍｍｏｌ）を、室温で１時間かけて滴下漏斗からゆっくりと加え、混合物を急速に攪拌した。６６時間後、ＵＰＬＣ−ＵＶ／可視は、出発材料の１０％のみが変換したことを示した。ピペラジン（４．０７ｇ、４７．２０ｍｍｏｌ）を加え、２時間後にＵＰＬＣ−ＵＶ／可視は完全な変換を示した。１５分後、１００ｍＬのクロロホルム及び１５０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３溶液を加え、混合物を分液漏斗に移した。層を分離し、有機相を１００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３溶液で２回、１００ｍＬの塩水で１回洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥した後、回転式エバポレーターで有機溶媒を蒸発させた後、所望の生成物を赤色の固体（７．８７ｇ、完全に乾燥していない）として得た。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝１．７２分（３分で１０〜９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２１０ｎｍ）＝８７．２％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＨ＋：２６６．２７ｇ／ｍｏｌ、検出：２６６．２３ｍ／ｚ）
【０２９３】
（４−ニトロ−３−（ピペラジン−１−イル）フェニル）メタノール
メチル４−ニトロ−３−（ピペラジン−１−イル）ベンゾエート（５．８５ｇ、完全に乾燥していない、推定２０．００ｍｍｏｌ）を５００ｍＬの丸底フラスコで４０ｍＬのＴＨＦに溶解し、磁気撹拌子で攪拌した。ＬｉＣｌ（５．０９ｇ、１２０．００ｍｍｏｌ）、ＮａＢＨ４（４．５４ｇ、１２０．００ｍｍｏｌ）、及び８０ｍＬのエタノールを連続して添加した。１５時間後、ＵＰＬＣ−ＵＶ／可視は完全な変換を示した。反応混合物を真空で濃縮し、２０ｍＬのクロロホルムを加え、３０ｍＬの２ＭのＮＨ４Ｃｌ溶液を滴下して加えながら混合物を急速に撹拌した。１時間後、１２０ｍＬの１ＭのＮａＯＨ及び８０ｍＬのクロロホルムをゆっくりと加え、混合物を分液漏斗に移した。層を分離し、水相を１００ｍＬのクロロホルムで３回抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、有機溶媒を蒸発させた後に、所望の生成物がオレンジ色の固体として得られた（３．９７ｇ、１６．７３ｍｍｏｌ、８４％）。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝１．２７分（３分で１０〜９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２１０ｎｍ）＝７０．０％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＨ＋：２３８．２６ｇ／ｍｏｌ、検出：２３８．２４ｍ／ｚ）
【０２９４】
２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（アミノオキシ）−１−（４−（５−（ヒドロキシメチル）−２−ニトロフェニル）ピペラジン−１−イル）エタン−１−オン
ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（アミノオキシ）酢酸（（Ｂｏｃ）２ＡＯＡｃＯＨ、２．９６ｇ、９．９６ｍｍｏｌ、１．２当量）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ、１．１５ｇ、９．９６ｍｍｏｌ、１．２当量）を１０ｍＬのアセトニトリルに溶解した。この溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、２．０７ｇ、９．９６ｍｍｏｌ、１．２当量）を固体として加え、ＤＣＣの溶解後に白色の沈殿物が形成された。反応混合物を室温で１時間撹拌し、そこで（Ｂｏｃ）２ＡＯＡｃ−ＮＨＳエステルがＵＰＬＣ−ＭＳに従って定量的に形成された。その後、混合物を（４−ニトロ−３−（ピペラジン−１−イル）フェニル）メタノール（１．９８ｇ、８．３０ｍｍｏｌ）を８３ｍＬのクロロホルムに入れた丸底フラスコに濾過した。混合物を室温で１時間撹拌し、その後、反応の完了をＴＬＣ及びＵＰＬＣ−ＭＳによって確認した。更なる形成された沈殿物を濾別し、有機相を水で３回、飽和ＮａＨＣＯ３溶液で３回、および塩水溶液で３回洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、従って、有機溶媒を真空で除去し、表題の化合物を黄色の油として得た（４．３５ｇ、８．５２ｍｍｏｌ、定量的、完全に乾燥していない）。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝３．００分（３分で１０〜９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝４８．２％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＨ＋：５１１．２４、ＭＮａ＋：５３４．２３ｇ／ｍｏｌ、検出：−）。
【０２９５】
３−（４−（２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（（アミノオキシ）アセチル）ピペラジン−１−イル）−４−ニトロベンジル（４ニトロフェニル）カーボネート（Ｘ１３）
２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−アミノオキシ）−１−（４−（５−（ヒドロキシメチル）−２−ニトロフェニル）ピペラジン−１−イル）エタン−１−オン（２．０６ｇ、４ｍｍｏｌ）を撹拌子を有する８ｍＬ丸底フラスコ内に入れた。この溶液に、乾燥ピリジンを加えた。その後、４−ニトロフェニルクロロホルミエート（０．８６ｇ、４．２ｍｍｏｌ）を固体として室温でゆっくり加えた。反応は発熱性であり、ＤＣＭの泡立ちを引き起こし得る。室温で２時間撹拌した後、ＵＰＬＣ−ＭＳ及びＴＬＣは炭酸塩への完全な変換を示した。回転式エバポレーターにて減圧下で溶媒を除去した。生成物をカラムクロマトグラフィー（シクロヘキサン／酢酸エチル  １：１）で精製し、黄色の固体（４１０ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）を得た。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝３．４４分（３分で１０〜９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝９２．４％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＨ＋：６７６．２５ｇ／ｍｏｌ、ＭＮａ＋：６９８．２３ｇ／ｍｏｌ、検出：６９８．５１ｍ／ｚ）
【０２９６】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２５ °Ｃ）：δ［ｐｐｍ］＝８．２９（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），７．８４（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），７．１９（ｓ，１Ｈ），７．１６（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），５．２９（ｓ，２Ｈ），４．６１（ｓ，２Ｈ），３．８９（ｔ，Ｊ＝３．９０，２Ｈ），３．７８（ｔ，Ｊ＝３．７８，２Ｈ），３．１５（ｔ，Ｊ＝３．１５，２Ｈ），３．１０（ｔ，Ｊ＝３．１０，２Ｈ），１．５４（ｓ，１８Ｈ）
【０２９７】
３−（（４−（２−（アミノオキシ）アセチル）ピペラジン−１−イル）メチル）−４−ニトロベンジル（４−ニトロフェニル）カーボネート（Ｘ４３）を合成するための合成ステップ
２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（アミノオキシ）−１−（４−（５−（ヒドロキシメチル）−２−ニトロベンジル）ピペラジン−１−イル）エタン−１−オン（１．２７ｇ、完全に乾燥していない、推定１．８６ｍｍｏｌ）を磁気撹拌子を用いて５０ｍＬ丸底フラスコ内の５ｍＬクロロホルムに溶解し、氷浴で０°Ｃに冷却した。乾燥ピリジン（０．２３ｍＬ、０．２３ｇ、２．８８ｍｍｏｌ）及びｐ−ニトロフェニルクロロホルメート（０．５９ｇ、２．８８ｍｍｏｌ）を連続して加えた。ｘ時間後、ＵＰＬＣ−ＵＶ／可視は、出発材料の完全な変換を示した。回転式エバポレーターで溶媒を除去し、残渣を５ｍＬの酢酸エチル／シクロヘキサン（１：１）に溶解した。酢酸エチル／シクロキサン（１：１）を用いたフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製した後、所望の生成物（０．０２ｇ、０．０３ｍｍｏｌ）を得た。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝２．９６分（３分で１０〜９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝５５．６％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＮａ＋：７１２．２４ｇ／ｍｏｌ、検出：７１２．４１ｍ／ｚ）
【０２９８】
求核性放出（タイプ３）リンカー分子Ｘ２２及びＸ４２を有するアミンスイッチの化学合成
２−（２−アジド−５−（４−（２−（（２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）オキシ）アセチル）ピペラジン−１−イル）フェニル）酢酸（Ｘ２２）の合成
【０２９９】
メチル２−（５−フルオロ−２−ニトロフェニル）アセテートの合成
５−フルオロ−２−ニトロフェニル酢酸（３．００ｇｍ、１４．９２ｍｍｏｌ）を、撹拌子と共に１００ｍｌの丸底フラスコに入れた。化合物を４０ｍｌのＭｅＯＨに溶解し、そして１．６２ｍｌ（２９．８４ｍｍｏｌ）のＨ２ＳＯ４を室温でゆっくりと加えた。得られた反応混合物を６時間還流した。反応の進行は、ＵＰＬＣ−ＭＳ及びＴＬＣによってモニターした。反応終了後、回転式エバポレーターにて減圧下でメタノールを除去した。得られた粗製物に、２０ｍｌの水を加え、飽和Ｋ２ＣＯ３溶液（５０ｍｌ）を用いて溶液を中和した。沈殿した固体を濾過し、水で洗浄し、減圧下で乾燥して、所望の生成物を白色の固体として得た（１２９．８６ｍｍｏｌ、９８％）。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝２．４１分（３分で１０〜９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝９７％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＨ＋：２１４．０５ｇ／ｍｏｌ、検出：…）
【０３００】
ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−４−ニトロフェニル）ピペラジン−１−カルボキシレートの合成
メチル２−（５−フルオロ−２−ニトロフェニル）アセテート（０．７０ｇｍ、３．２５ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦに溶解した。この溶液に、１−Ｂｏｃ−ピペラジン（０．８３ｇｍ、４．３９ｍｍｏｌ）及びＮａ２ＣＯ３（０．７１ｇｍ、６．５ｍｍｏｌ）を室温で加え、得られた反応混合物を一晩、最大８０℃で加熱した。反応の進行を、ＵＰＬＣ−ＭＳ及びＴＬＣによってモニターした。反応の完了後、溶液を濾過して固体副生成物を除去し、回転式エバポレーターを使用して減圧下でＤＭＦを除去した。粗材料に氷冷水（２５ｍｌ）を加え、得られた固体を濾過し、水（５０ｍｌ）で洗浄し、減圧下で乾燥させて、黄色の固体ＵＰＬＣの目的の生成物（１．０１ｇｍ、２．６６ｍｍｏｌ、８２％）を得た。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝３．０１分（３分で１０〜９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝９６．０％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＨ＋：３８０．１８ｇ／ｍｏｌ、検出：３２４．１０（Ｍ２Ｈ＋−ｔブチル（ｔｂｕ））。
【０３０１】
ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−アミノ−３−（２−メトキシ−２−オキソエチル）フェニル）ピペラジン−１−カルボキシレートの合成
ジオキサン／Ｈ２Ｏ（２５ｍＬ、３：１）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（３−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−４−ニトロフェニル）ピペラジン−１−カルボキシレート（１．００ｇｍ、２．５８ｍｍｏｌ）の溶液に、室温でＮＨ４Ｃｌ（１．２３ｇｍ、１．０１ｇｍ、１８．５０ｍｍｏｌ）及び亜鉛末（１．２３ｇｍ、１８．５０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を同じ温度で３時間撹拌し、その後、それをセライトベッドに濾過した。得られた溶液を蒸発させ、粗材料をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）の間で区画化した。有機層を分離し、乾燥濃縮して（ＭｇＳＯ４）、黄色の固体（１．７５ｍｍｏｌ、６８％）で所望の生成物を得た。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝２．１２分（３分で１０〜９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝９４．０％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＨ＋：３５０．２１ｇ／ｍｏｌ、検出：３５０．１９ｍ／ｚ）
【０３０２】
ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−アジド−３−（２−メトキシ−２−オキソエチル）フェニル）ピペラジン−１−カルボキシレートの合成
ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−アミノ−３−（２−メトキシ−２−オキソエチル）フェニル）ピペラジン−１−カルボキシレート（０．３５ｇｍ、０．９９ｍｍｏｌ）を乾燥アセトニトリル（２５ｍＬ）に溶解し、０°Ｃに冷却した。９０％の亜硝酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．８３７ｇ、７．９４ｍｍｏｌ）を反応混合物に滴下して加え、次にＴＭＳＮ３（０．７２２ｇ、５．９５ｍｍｏｌ）を１０分かけて加えた。得られた赤色の混合物を３時間撹拌した。反応の進行はＵＰＬＣ−ＭＳでモニターした。反応終了後、過剰のＴＭＳＮ３、ｔ−ＢｕＯＮＯ及び溶媒を減圧下で除去し、得られた赤色残渣を５０ｍＬの酢酸エチルに溶解し、水で洗浄した（２回×５０ｍＬ）。酢酸エチル層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で除去してオレンジ色の固体を得た（これをさらに精製することなく進めた）（０．３３ｇｍ、０．８８ｍｍｏｌ）。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝３．０１分（３分で１０〜９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝９５．０％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＨ＋：３７６．２０ｇ／ｍｏｌ、検出：３７６．２８ｍ／ｚ）
【０３０３】
２−（２−アジド−５−（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペラジン−１−イル）フェニル）酢酸の合成
ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−アジド−３−（２−メトキシ−２−オキソエチル）フェニル）ピペラジン−１−カルボキシレート（０．３１４ｇｍ、０．８３ｍｍｏｌ）、ＬｉＯＨ（０．１０２ｇｍ、４．１４ｍｍｏｌ）、ＭｅＯＨ（５ｍＬ）、及びＨ２Ｏ（０．２ｍＬ）の溶液を、室温で３時間撹拌した。出発材料を生成物に完全に変換した後（ＵＰＬＣ−ＭＳでモニター）、反応混合物を蒸発させ、得られた粗材料に、溶液のＰＨが６に達するまで飽和ＮＨ４Ｃｌを加えた。得られた溶液をＥｔＯＡｃで抽出し（２回×２５ｍＬ）、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮して、生成物を黄色の固体（０．６５ｍｍｏｌ、７８％）としてもたらした。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝２．５５分（３分で１０〜９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝９５．０％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＨ＋：３６２．１８ｇ／ｍｏｌ、検出：３０６．０４ｍ／ｚ）
【０３０４】
４−（４−アジド−３−（カルボキシメチル）フェニル）ピペラジン−１−イウム２，２，２−トリフルオロアセテートの合成
純粋なトリフルオロ酢酸（０．６ｍｌ、６．１４ｍｍｏｌ）を、２−（２−アジド−５−（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペラジン−１−イル）フェニル）酢酸（０．２２ｇｍ、０．６１ｍｍｏｌ）を含有する丸底フラスコに滴下して加え、得られた溶液を室温で１時間撹拌した。反応の完了後（ＵＰＬＣ−ＭＳでモニター）、冷エーテル（２５ｍＬ）を加え、得られた固体を濾過し、冷エーテルで洗浄した。得られた薄茶色の固体（０．３０ｇｍ、８５％）を乾燥させ、精製せずにさらなるステップに進めた。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝２．８０分（３分で１０〜９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝８７．０％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＨ＋：２６２．１３ｇ／ｍｏｌ、検出：２６２．１１ｍ／ｚ）間違った質量。
【０３０５】
２−（２−アジド−５−（４−（２−（（（（２−ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）オキシ）アセチル）ピペラジン−１−イル）フェニル）酢酸（Ｘ２２）の合成
ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（アミノオキシ）酢酸（（Ｂｏｃ）２ＡＯＡｃＯＨ、８８．４ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ、３４．６ｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を２ｍＬの乾燥アセトニトリルに溶解した。この溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、６２．０ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を固体として加え、ＤＣＣの溶解後に白色の沈殿物が形成された。反応混合物を室温で１時間撹拌し、そこで（Ｂｏｃ）２ＡＯＡｃ−ＮＨＳエステルがＵＰＬＣ−ＭＳに従って定量的に形成された。その後、混合物を、ＤＣＣ−尿素を除去するために、４−（４−アジド−３−（カルボキシメチル）フェニル）ピペラジン−１−イウム２，２，２−トリフルオロアセテート（１００ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（２ｍｌ）及びＤＩＥＰＡ（１５５μＬ、０．８９ｍｍｏｌ）に含有する反応フラスコへ直接濾紙で濾過した。混合物をさらに室温で１〜２時間撹拌した。反応終了後、減圧下で溶媒を蒸発させ、ＮＨ４Ｃｌ（２５ｍｌ）を加えて反応混合物を中和した。化合物をＥｔＯＡｃで抽出し（２回×２５ｍＬ）、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮して、生成物を暗褐色の固体（０．１９ｍｍｏｌ、９７％）としてもたらした。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝２．８０分（３分で１０〜９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝８７．０％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＮａ＋：５５７．２３ｇ／ｍｏｌ、検出：５５７．２８ｍ／ｚ）
１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，）δ  ７．０６（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８３（ｓ，１Ｈ），４．６０（ｓ，２Ｈ），３．９０−３．８４（ｍ，２Ｈ），３．７７−３．７２（ｍ，２Ｈ），３．５９（ｓ，２Ｈ），３．２４−３．１１（ｍ，４Ｈ），１．５４（ｓ，１８Ｈ）
【０３０６】
２−（５−（４−（２−（（２−ビス−）ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）オキシ）アセチル）ピペラジン−１−イル）−２−ニトロフェニル）酢酸（Ｘ４２）の合成
２−（５−（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペラジン−１−イル）−２−ニトロフェニル）酢酸の合成
ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ（２１．２ｍＬ、１６：１）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（３−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−４−ニトロフェニル）ピペラジン−１−カルボキシレート（０．５０ｇｍ、１．３０ｍｍｏｌ）の溶液にＬｉＯＨを加え、室温で一晩撹拌した。出発材料を生成物に完全に変換した後に（ＵＰＬＣ−ＭＳでモニター）、反応混合物を蒸発させ、得られた粗材料に飽和ＮＨ４Ｃｌ（２５ｍＬ）を溶液のＰＨが６に達するまで加えた。化合物をＥｔＯＡｃで抽出し（４回×２５ｍＬ）、ＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮して、所望の生成物を黄色の固体としてもたらした（０．７８ｍｍｏｌ、５９％）。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝２．３６分（３分で１０〜９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝９７．０％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＨ＋：３８０．１８ｇ／ｍｏｌ、検出：３１０．０４ｍ／ｚ（２Ｈ＋−ｔｂｕ  ｍ／ｚ））
【０３０７】
４−（３−（カルボキシメチル）−４−ニトロフェニル）ピペラジン−１−イウム２，２，２−トリフルオロアセテートの合成
純粋なトリフルオロ酢酸（０．７３ｍｌ、７．５９ｍｍｏｌ）を、２−（５−（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペラジン−１−イル）−２−ニトロフェニル）酢酸（０．２８ｇｍ、０．７６ｍｍｏｌ）を含有する丸底フラスコに室温で滴下して加え、得られた溶液を１時間撹拌した。反応の完了後（ＵＰＬＣ−ＭＳでモニター）、冷エーテル（２５ｍＬ）を加え、得られた固体を濾過し、冷エーテルで洗浄した。得られた黄色の固体（８８％）を乾燥し、精製せずにさらなるステップに進めた。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝１．３５分（３分で１０〜９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝８８．９％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＨ＋：２６６．１１ｇ／ｍｏｌ、検出：２６６．１１ｍ／ｚ）
【０３０８】
２−（５−（４−（２−（（２−ビス−）ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）オキシ）アセチル）ピペラジン−１−イル）−２−ニトロフェニル）酢酸（Ｘ４２）の合成
ビス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−（アミノオキシ）酢酸（（Ｂｏｃ）２ＡＯＡｃＯＨ、８８．４ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ、３４．６ｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を２ｍＬの乾燥アセトニトリルに溶解した。この溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、６２．０ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を固体として加え、ＤＣＣの溶解後に白色の沈殿物が形成された。反応混合物を室温で１時間撹拌し、そこで（Ｂｏｃ）２ＡＯＡｃ−ＮＨＳエステルがＵＰＬＣ−ＭＳに従って定量的に形成された。その後、混合物を、ＤＣＣ−尿素を除去するために、４−（３−（カルボキシメチル）−４−ニトロフェニル）ピペラジン−１−イウム２，２，２−トリフルオロアセテート（１００ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（２ｍｌ）及びＤＩＥＰＡ（１５５μＬ、０．８９ｍｍｏｌ）に含有する反応フラスコへ直接濾紙で濾過した。混合物を室温で１〜２時間撹拌し、その後、反応の完了をＵＰＬＣ−ＭＳによって確認した。反応終了後、減圧下で溶媒を留去し、ＮＨ４Ｃｌ（２５ｍｌ）を加えて反応混合物を中和した。得られた溶液を ＥｔＯＡｃで抽出し（２回×２５ｍＬ）、濃縮して、生成物を暗褐色の固体としてもたらした（０．１９ｍｍｏｌ、９７％）。ＵＰＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝２．７４分（３分で１０〜９０％のＭｅＣＮ）、ＵＰＬＣ純度（２７８ｎｍ）＝８７．０％、ＥＳＩ−ＭＳ：（計算上のＭＮａ＋：５６１．２２ｇ／ｍｏｌ、検出：５６１．２８ｍ／ｚ）。
【図１】
2021535139.tif 000062
【図２−１】
2021535139.tif 000063
【図２−２】
2021535139.tif 000064
【図３−１】
2021535139.tif 000065
【図３−２】
2021535139.tif 000066
【図４−１】
2021535139.tif 000067
【図４−２】
2021535139.tif 000068
【図４−３】
2021535139.tif 000069
【図４−４】
2021535139.tif 000070
【図５】
2021535139.tif 000071
【図６】
2021535139.tif 000072
【図７】
2021535139.tif 000073
【図８】
2021535139.tif 000074
【図９】
2021535139.tif 000075
【配列表】
2021535139000001.app
【国際調査報告】
2021535139.tif 000076
2021535139.tif 000077