(57)【要約】  本発明は、プラチナ(IV)プロドラッグ脂質ベースの両親媒性物質およびその組成物に関する。 特に、安定な液晶ナノ粒子および結晶性ナノ粒子を製造する能力を有するシスプラチン、オキサリプラチンおよびカルボプラチンプロドラッグ、ならびにそれらを使用してヒトを含む動物の癌を治療することに関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式(I)のプロドラッグ：
【化１】
2021527675.tif 000037
ここで、Ａは、酸化されたプラチナ(IV)ベースの治療的活性エージェントである。
Y1とY2は、それぞれX1とX2、およびAの間で独立して選択された切断可能な結合である。
n = 0または1。ここで、X2が式(a)、(b)、または(c)による置換基である場合、nは1である。
X1は、式(a)による置換基、式(b)による置換基、および式(c) による置換基からなるグループから選択される。
【化２】
2021527675.tif 000038
X2は、Ｈ、式(a)による置換基、式(b)による置換基、および式(c) による置換基からなるグループから選択される。
【化３】
2021527675.tif 000039
ここで
Rは、アルキル、アルケニル、アルキニル、分岐アルキル、分岐アルケニル、分岐アルキニル、置換アルキル、置換アルケニルおよび置換アルキニル基からなるグループおよびそれらの類似体から選択される。
Sは、（ポリエチレングリコール）m（m = 1−10）、アミノ酸、およびエタノールアミド官能化アミノ酸からなるグループから選択される。
Ｌは、１つの付着部位でS-Rに、そしてＡへの結合Ｙを介して第２の付着部位で治療的活性エージェントＡに共有結合しているリンカー基である。
【請求項２】
請求項1に記載のプロドラッグであって、ここで、酸化プラチナ(IV)ベースの治療的活性剤が、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、およびそれらの誘導体からなるグループから選択される。
【請求項３】
請求項1または２記載のプロドラッグであって、ここで、一般式(I)  が式(II)による化合物である。
【化４】
2021527675.tif 000040
【請求項４】
請求項3記載のプロドラッグであって、ここで、式(II)による化合物は、以下からなるグループから選択される。
【化５−１】
2021527675.tif 000041
【化５−２】
2021527675.tif 000042
【請求項５】
請求項1または２記載のプロドラッグであって、ここで、一般式(I)  は、式(III) による化合物である。
【化６】
2021527675.tif 000043
【請求項６】
請求項５記載のプロドラッグであって、ここで、式(III) による化合物は、以下からなるグループから選択される。
【化７】
2021527675.tif 000044
【請求項７】
請求項1または２記載のプロドラッグであって、ここで、一般式(I)  は、式(IV) による化合物である。
【化８】
2021527675.tif 000045
【請求項８】
請求項７記載のプロドラッグであって、ここで、式(IV)による化合物は、以下からなるグループから選択される。
【化９】
2021527675.tif 000046
【請求項９】
請求項1-8のいずれかのプロドラッグから形成された自己組織化構造であって、生理学的条件下でメソ相を示し、ラメラ相、双連続キュービック相、ヘキサゴナル相およびスポンジ相からなるグループから選択される。
【請求項１０】
請求項９記載の自己組織化構造であって、表わされるメソ相がラメラ相および逆相である。
【請求項１１】
請求項1-8記載のいずれかのプロドラッグから形成される自己組織化構造であって、構造が固体脂質粒子である。
【請求項１２】
請求項9-11のいずれかに記載の自己組織化構造であって、リン脂質、コレステロール、グリセロール脂質、その他の両親媒性プロドラッグ、疎水性薬物およびそれらの組み合わせからなるグループから選択される成分をさらに含む。
【請求項１３】
酸化されたプラチナ(IV)ベースの治療活性剤又はインビボで代謝されることができる薬剤のバイオアベイラビリティ及び放出を調節する方法、酸化されたプラチナ(IV)ベースの治療活性剤又はインビボで代謝されることができる薬剤と、少なくとも一つのテール成分に共有結合して、生理学的条件下で自己組織化される構造に自己組織化することができる両親媒性剤を形成することを含む方法、及び両親媒性剤がインビボで切断可能であることを特徴とする、前記両親媒性剤は、一般式(I)のものである。
【化１０】
2021527675.tif 000047
ここで
Y1とY2は、それぞれX1とX2、およびAの間で独立して選択された切断可能な結合である。
n = 0または1。ここで、X2が式(a)、(b)、または（c）による置換基である場合、nは1である。
X1は、式(a）による置換基、式(b)  による置換基、および式(c) による置換基からなるグループから選択される。
【化１１】
2021527675.tif 000048
X2は、Ｈ、式(a)による置換基、式(b)  による置換基、および式(c)による置換基からなるグループから選択される。
【化１２】
2021527675.tif 000049
ここで
Rは、アルキル、アルケニル、アルキニル、分岐アルキル、分岐アルケニル、分岐アルキニル、置換アルキル、置換アルケニルおよび置換アルキニル基からなるグループおよびそれらの類似体から選択される。
Sは、（ポリエチレングリコール）m（m = 1-10）、アミノ酸、およびエタノールアミド官能化アミノ酸からなるグループから選択される。
Ｌは、１つの付着部位でＳ-Ｒに、そしてＡへの結合Ｙを介して第２の付着部位で治療的活性エージェントＡに共有結合しているリンカー基である。
【請求項１４】
請求項13記載の方法であって、ここで、一般式(I)の両親媒性が式(II)に記載の化合物である。
【化１３】
2021527675.tif 000050
【請求項１５】
請求項13記載の方法であって、ここで、一般式(I)の両親媒性が式(III)に記載の化合物である。
【化１４】
2021527675.tif 000051
【請求項１６】
請求項７記載のプロドラッグであって、ここで、一般式(I)の両親媒性が式(IV)に記載の化合物である。
【化１５】
2021527675.tif 000052
【請求項１７】
請求項13-16のいずれかに記載の方法であって, ここで、両親媒性物質が、活性型の治療薬の形成を促進する酵素反応または化学反応の基質である。
【請求項１８】
請求項9-12のいずれかに記載の自己組織化構造を人に投与することを含む、それを必要とする人における癌を治療または予防する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［本発明の分野］
本発明は、改良されたプロドラッグ、およびその組成物に関する。特に、それは、安定な液晶または結晶性ナノ粒子を作製する能力を有する両親媒性プラチナベースのプロドラッグ、およびヒトを含む動物を治療するためのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
［発明の背景］
プラチナベースの抗がん剤は、重大な遺伝毒性を示す最も広く使用されている無機抗がん剤の1つである。プラチナ薬はDNAとの結合を介してDNA複製を妨げることが知られている。ヒトの癌の治療には、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチンの3つのプラチナ含有薬が世界中で承認されている。
【０００３】
シス - ジアミンジクロロプラチナ(II) （シスプラチン）は1960年代後半に偶然に発見され、非常に効果的な化学療法薬である。米国国立衛生研究所（NIH）によって公開され、EMAによって維持されているヨーロッパの臨床試験登録者、およびWHOの国際臨床試験登録プラットフォームによって公開された臨床試験データベースは、他のどの抗がん剤よりも最大数のアクティブな臨床試験を行う薬剤としてシスプラチンをリストしている。細胞に入ると、血流（100 mM）と比較して塩化物イオンの細胞内濃度が低い（4-20 mM）と、塩化物リガンドの一方または両方が水化される。得られたアクア化シスプラチンは、DNA塩基グアニン（G）および程度は低いがアデニン（A）と共有結合付加物を形成し、DNAヘリックスを歪ませ、複製と転写を阻害し、最終的にアポトーシスに至る。シスプラチンは、特に非小細胞肺がん、精巣がん、卵巣がん、頭頸部がんの患者に大きな臨床的影響を及ぼした。シスプラチンは化学療法を受けているがん患者の40ー80%に投与されると推定される。しかし、腎毒性（腎障害、腎機能低下）、神経毒性（神経毒性）、耳毒性（難聴）、骨髄抑制（白血球、赤血球、血小板を含む種々の血球の産生減少）、後天的な薬物耐性などの重い副作用により、臨床上の使用が制限されることが多い。
【０００４】
シスプラチンを腫瘍部位に効率的に送達するには、部位特異的な標的化が必要である。ナノ粒子は、独特の血管障害や特性、リンパ系の回復系の欠如、いわゆる「強化された透過および保持効果(EPR: Enhanced Permeation and Retention Effect)」現象により、腫瘍や炎症組織に受動的に蓄積することがよく知られている。
【０００５】
ナノ粒子内への抗がん剤のカプセル化は、第二世代の化学療法剤として研究された。シスプラチン（liplacis(R)）をリポソームの内部空洞に物理的にカプセル化することによるシスプラチンのリポソーム製剤（WO2011032563A1）は、腫瘍を標的とした薬物送達を促進するために開発された。プラチナ系結合体を内包する合成高分子ナノ粒子が広く研究された（WO2006098496とGue et al 2008）。 しかし、物理的に封入された抗がん剤のカプセル化、希望の標的に到達する前のナノ粒子からの急速な漏れ、バースト放出、および標的ナノ粒子の再現性のある製剤を調製することの難しさは、物理的にカプセル化されたナノ送達システムの欠点であり、有効性の欠如や患者への危険などの悪影響を引き起こす可能性がある。
【０００６】
プラチナ系の抗がん剤を投与するより良い方法を生み出す必要は依然として残っている。
【０００７】
本明細書における先行技術への言及は、この先行技術がオーストラリアまたは他の管轄区域における共通一般知識の一部を形成すること、またはこの先行技術が合理的に可能であるという承認または形式または提案ではなく、またそのように解釈されるべきではなく、 当業者によって確認され、理解され、関連があると見なされることが期待される。
【発明の概要】
【０００８】
［発明の概要］
本発明は、自己組織化を形成することのできるプラチナベースのプロドラッグを提供することを目指している。本発明はまた、その医薬組成物を提供する。これらの高次相は、プラチナベースの薬剤の放出プロファイルを変更する。
【０００９】
ある態様では、本発明は、一般式(I)のプロドラッグを提供する：
【００１０】
【化１】
2021527675.tif 000002
【００１１】
ここで、Aは酸化プラチナ(IV)をベースとする治療的活性エージェント（活性剤（active agent）である。
【００１２】
Y1とY2は、それぞれX1とX２、およびAの間で独立して選択された切断可能な結合である。
【００１３】
n = 0または1、ここで、X2が式(a)、(b)、または(c)による置換基である場合、nは1である。
【００１４】
X1は、式(a)による置換基、式(b)による置換基、および式(c)による置換基からなるグループから選択される。
【００１５】
【化２】
2021527675.tif 000003
【００１６】
X2は、Ｈ、式(a)による置換基、式(b)による置換基、および式(c)による置換基からなるグループから選択される。
【００１７】
【化３】
2021527675.tif 000004
【００１８】
ここで
Rは、アルキル、アルケニル、アルキニル、分岐アルキル、分岐アルケニル、分岐アルキニル、置換アルキル、置換アルケニルおよび置換アルキニル基およびそれらの類似体からなる基から選択され、
Sは、(ポリエチレングリコール)m、（m = 1-10）、アミノ酸、およびエタノールアミド官能化アミノ酸からなるグループから選択される。
【００１９】
Ｌは、１つの付着部位でS-Rに、そしてＡへの結合Ｙを介して第２の付着部位で治療的活性エージェントＡに共有結合しているリンカー基である。
【００２０】
好ましい実施形態では、Ａは、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチンおよびそれらの誘導体からなるグループから選択される。 １つの好ましい実施形態では、Ａはシスプラチンまたはその誘導体である。別の好ましい実施形態において、Ａは、オキサリプラチンまたはその誘導体である。さらに別の好ましい実施形態では、Ａはカルボプラチンまたはその誘導体である。
【００２１】
X1と X２ は同一でも異なっている場合もある。
【００２２】
一実施形態では、X2は水素であり、X1は、式(a)による置換基、式(b)による置換基、および式(c)による置換基からなるグループから選択される。この実施形態では、プラチナ(IV)ベースの治療的活性エージェントは、切断可能な共有結合Y1を介して、直接（式Ｉ(a)）、スペーサー基Ｓ（式I (b)）を介して、１つのＲ基に結合される。またはリンカー基Lおよびスペーサー基Sを介して（式I (c)）。 R基は、プラチナ(IV)ベースの治療的活性エージェントに自己組織化特性を与えることができる分子である。この実施形態では、Y2が存在し得る(n = 1)または存在し得ない(n = 0)ように、n = 0または１である。
【００２３】
好ましい実施形態では、X1およびX2は、式(a)による置換基、式(b)による置換基、および式(c)による置換基からなるグループから独立して選択される。この実施形態では、プラチナ(IV)ベースの治療的活性エージェントは、独立して選択された切断可能な共有結合Y1およびY2を介して、スペーサー基Ｓ（式Ｉ）を介して直接（式Ｉ(a)）２つのＲ基に結合される。この実施形態では、プラチナ(IV)ベースの治療的活性エージェントは、独立して選択された切断可能な共有結合を介して、Y1およびY2を介して、直接(式I(a))、スペーサーグループS(式I(b))を介して、またはリンカーグループLおよびスペーサーグループS(式I(c))を介して結合する。X1と X2 は同一でも異なっている場合もある。好ましくは、X1とX2は同一である。本実施例では、n=1である。 
【００２４】
Rは、一般に疎水性である。場合によっては、Rは10-30個の炭素原子に相当する線形鎖長を有する。一実施形態において、Rはαトコフェロールである。別の実施形態では、Rはイソプレノイド基である。他の実施形態において、Rは、ヒドロキシル化アルキルまたはヒドロキシル化アルケニル基である。Rの好ましい実施形態は、以下に限定されないが、アルキル、アルケニル、アルキニル、分岐アルキニル(イソプレノイド)、分岐アルキニル、置換アルキル、置換アルケニル、置換アルキニル基およびα-トコフェロール、ヒドロキシ化アルキルまたはアルケニルグループなどのそれらの類似体を含む。好ましい実施形態において、Rは、10-30個の炭素原子に相当する鎖長を有する。好ましくは、鎖長は10ー24個の炭素原子に相当し、さらに好ましくは12ー24個の炭素原子に相当し、さらに好ましくは14ー20個の炭素原子に相当する。一般に、Rは自己組織化特性をAに与えることを目的としている。
【００２５】
好ましい実施形態において、Ｒは、ミリスチル、ミリストイル、パルミチル、パルミトイル、ステアリル、ステアロイル、オレイル、オレオイル、リノレイル、リノレオイル、リノレニル、リノレノイル、アラキドニル、アラキドノイル、フィタニル、フタノイル、ヘキサヒドロファルネシル、およびヘキサヒドロファルネシルからなるグループから選択される。最も好ましくは、Ｒは、ミリスチル、ミリストイル、オレイル、オレオイル、リノレイル、リノレオイル、フィタニル、フィタノイル、ヘキサヒドロファルネシル、およびヘキサヒドロファルネソイル鎖からなるグループから選択される。
【００２６】
好ましくは、Y（Y1およびY2を含む）は、エステルおよびカーボネートからなるグループから独立して選択される選択的に切断可能な結合である。好ましくは、Ｙはエステルである。Y1とY2は同一でも異なっていてもよいが、Y1とY2は同一であることが好ましい。特に好ましい実施形態では、Y1およびY2は両方ともエステルである。
【００２７】
Sは、(ポリエチレングリコール)m、（m = 1-10）、アミノ酸、およびエタノールアミド官能化アミノ酸からなるグループから選択される。 １つの好ましい実施形態において、Ｓは、（ポリエチレングリコール）ｍからなるグループから選択され、ここで、ｍ ＝1-10であり、ここで、ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８からなるグループから選択される。特に好ましい実施形態において、Ｓは、ポリエチレングリコール(ペグ（PEG))1-10、、α-カルボキシポリエチレングリコール(HOOC-ペグ)1-10、およびα-アミノポリエチレングリコール(H2N-ペグ)1-10からなるグループから選択される。好ましくは、Sは（ペグ）1-10であり、より好ましくは、Sは (ペグ)1-6である。特に好ましい実施形態では、Ｓは(ペグ）3-6である。別の好ましい実施形態において、Ｓはエタノールアミド官能化アミノ酸、好ましくはリシノイルエタノールアミドである。
【００２８】
一実施形態では、Ｌは、無水コハク酸、無水マレイン酸、無水グルタル酸、無水ジグリコール酸、グリコール酸、クロロ酢酸、ヒドロキシプロパンスルホン酸、グリシンおよびアラニンからなるグループから選択される選択的に切断可能なリンカー基である。
【００２９】
一つの好ましい実施形態では、一般式(I)は、式(II)に従った化合物である:
【００３０】
【化４】
2021527675.tif 000005
【００３１】
ここで
Y1およびY2は、それぞれX1とX2の間、およびプラチナ(IV)ベースの治療的活性エージェントの間で独立して選択された切断可能な結合である。
【００３２】
n = 0または1、ここで、X2が式(a) 、(b）、または（c）による置換基である場合、nは1である。
【００３３】
X1は、式(a)に従った置換基、式(b)に従った置換基、および式(c)に従った置換基からなるグループから選択される。
【００３４】
【化５】
2021527675.tif 000006
【００３５】
X2は、H、式(a)による置換基、式(b)による置換基、および(c)による置換基からなるグループから選択される。
【００３６】
【化６】
2021527675.tif 000007
【００３７】
ここで
Ｒは、アルキル、アルケニル、アルキニル、分岐アルキル、分岐アルケニル、分岐アルキニル、置換アルキル、置換アルケニル、置換アルキニル基、およびそれらの類似体からなるグループから選択される。
【００３８】
Sは、(ポリエチレングリコール)m（m = 1-10）、アミノ酸、およびエタノールアミド官能化アミノ酸からなるグループから選択される。
【００３９】
Lは、1つの付着部位でS-Rに共有結合し、2番目の付着部位でプラチナ(IV)ベースの治療的活性エージェントへの結合Yを介してプラチナ(IV)ベースの治療的活性エージェントに共有結合するリンカー基である。
【００４０】
特に好ましい実施形態では、一般式(II)は、以下からなるグループから選択される化合物である。
【００４１】
【化７−１】
2021527675.tif 000008
【００４２】
【化７−２】
2021527675.tif 000009
【００４３】
別の好ましい実施形態では、一般式(I)は、下記式(III)に従う化合物である。
【００４４】
【化８】
2021527675.tif 000010
【００４５】
ここで、Y1、Y2、X1、およびX2は、式(II)と同じ定義である。
【００４６】
特に好ましい実施形態では、一般式(III)は、以下からなるグループから選択される化合物である。
【００４７】
【化９−１】
2021527675.tif 000011
【００４８】
【化９−２】
2021527675.tif 000012
【００４９】
さらに別の好ましい実施形態では、一般式(I)は、式(IV)に従った化合物である:
【００５０】
【化１０】
2021527675.tif 000013
【００５１】
ここで、Y1、Y2、X1、およびX2は、式(II)と同じ定義である。
【００５２】
特に好ましい実施形態では、一般式(IV)は、以下からなるグループから選択される化合物である。
【００５３】
【化１１】
2021527675.tif 000014
【００５４】
好ましくは、一般式(I)、(II)、(III)、または(IV)のプロドラッグは、ラメラ、キュービック、ヘキサゴナル、スポンジ、ミセル、または結晶性ラメラ形態を表示するリオトロピック相を有する自己組織化構造を形成することができる。より好ましくは、相は、ラメラ、キュービック、ヘキサゴナル、ミセルまたはスポンジ相である。なお好ましくは、相は逆相である。
【００５５】
本発明の第2の態様では、上記の態様の一般式(I)、(II)、(III)、または(IV)のプロドラッグの自己組織化構造が設けられている。一実施形態において、一般式(I)、(II)、(III)、または(IV)のプロドラッグの自己組織化構造は、さらに、リン脂質、コレステロール、グリセロール脂質、その他のプロドラッグ両親媒性体、疎水性薬物及びそれらの組合せからなるグループから選択される成分を含む。
【００５６】
好ましくは、自己組織化構造は、ラメラ、キュービック、ヘキサゴナル、スポンジ、エマルジョン、または結晶性ラメラ形態を表示する。より好ましくは、相は、ラメラ、キュービック、ヘキサゴナル、ミセル(L2)またはスポンジ(L3)相である。さらに好ましくは、相は逆相である。一般に逆相は、過剰な水における熱力学的安定性、より大きな表面積および制御されたチャネル寸法のためにドラッグデリバリー担体として有利であり、後者の特性は自己組立マトリックス内に埋め込まれた活性剤の放出にとって特に重要である。したがって、ラメラ、逆キュービック、逆スポンジ(L３)、逆ヘキサゴナル、または逆ミセル(L2)相、好ましくはラメラ、逆キュービック、L2またはL３相に自己組織化することができるプロドラッグが提供される。 別の実施形態では、自己組織化プロドラッグは結晶構造を有する。
【００５７】
本発明によるプロドラッグの自己組織化構造は、バルク相であってもよいし、そこから導出されるコロイド粒子またはナノ粒子であってもよい。特に好ましいコロイド粒子またはナノ粒子は、リポソーム、キュボソーム、ヘキソソーム、「スポンジ状」粒子(スポンゴソーム)または逆ミセルから選択することができる。条件に応じて、複数の相またはコロイド粒子が自己組織化構造で存在し得る。
【００５８】
特に好ましい実施形態では、自己組織化構造は、式(II)のシスプラチンプロドラッグの化合物、式(III)のオキサリプラチンプロドラッグの化合物、または式(IV)のカルボプラチンプロドラッグの化合物から選択される。好ましくは、自己集合構造は、ラメラ、キュービック、L2またはL3相、固体脂質ナノ粒子、またはそれらの組み合わせである。このような自己組織化構造は、ポリエチレングリコール-脂質、ポリソルベート、ポロキサマー、およびそれらの組み合わせのような界面活性剤安定剤による医薬用に好適に安定化され得る。
【００５９】
本発明の別の態様において、プラチナ(IV)ベースの治療的活性エージェント(例えば薬物又はプロドラッグ)の放出を調節する方法が提供され、プラチナ(IV)ベースの治療的活性エージェントAを好ましくはスペーサーＳと任意選択でリンカーＬおよび切断可能な共有結合Ｙを介して少なくとも一つのテール成分Ｒに共有結合し、一般式(I)、(II)、(III)、または(IV)の両親媒性を形成し、自己組織化構造に自己組織化させることができる。ここで両親媒性体がインビボで切断可能であり、治療的活性エージェントを放出する。両親媒性物質は、エクスビボおよび／またはインビボで自己組織化構造に自己組織化することができる可能性がある。
【００６０】
本発明の別の態様において、プラチナ(IV)ベースの治療的活性エージェントＡを共有結合させることを含む、薬物またはプロドラッグなどのプラチナ(IV)ベースの治療的活性エージェントの放出を調節する方法が提供される。活性な薬剤Aを好ましくはスペーサーＳと任意選択でリンカーＬおよび切断可能な共有結合Ｙを介して少なくとも一つのテール成分Ｒに共有結合し、一般式(I)、(II)、(III)、または(IV)の両親媒性を形成し、生理学的条件下で自己組織化すること、および両親媒性物質がインビボで切断可能であり、治療的活性エージェントを放出する。
【００６１】
この態様の一実施形態において、プラチナ(IV)ベースの治療的活性エージェントのバイオアベイラビリティを調節する方法が提供され、この方法は、プラチナ(IV)ベースの治療的活性エージェントAを好ましくはスペーサーＳと任意選択でリンカーＬおよび切断可能な共有結合Ｙを介して少なくとも一つのテール成分Ｒに共有結合し、式(I)、(II)、(III)、または(IV)の両親媒性物質を形成する。ここで共有結合がインビボで切断可能であり、自己組織化構造から治療的活性エージェントを放出し、患者に両親媒性の自己組織化構造を投与する。
【００６２】
この態様の一実施形態では、プラチナ(IV)ベースの治療的活性エージェントのバイオアベイラビリティを調節する方法が提供され、この方法は、プラチナ(IV)ベースの治療的活性エージェントＡを好ましくはスペーサーＳと任意選択でリンカーＬおよび切断可能な共有結合Ｙを介して少なくとも一つのテール成分Ｒに共有結合し、一般式(I)、(II)、(III)、または(IV) の両親媒性物質を形成する。ここで共有結合がインビボで切断可能であり、自己組織構造から治療的活性エージェントを放出し、両親媒性物質を患者に投与すると、両親媒性物質は自己組織化して自己組織化構造を提供する。
【００６３】
本発明の別の態様では、プラチナ(IV)ベースの治療的活性エージェントを共有結合させることを含み、薬物またはプロドラッグなどのプラチナ(IV)ベースの治療的活性エージェントのバイオアベイラビリティおよび放出を調節する方法が提供される。一般式(I)、(II)、(III)、または(IV) の両親媒性物質を形成するために、好ましくはスペーサーＳを含み、場合によりリンカーＬを含む、切断可能な共有結合Ｙを介して治療的活性エージェントＡを少なくとも１つのテール成分Ｒに共有結合させる。両親媒性物質は自己組織化構造に自己組織化することができ、インビボで切断可能であり、治療的活性エージェントを放出する。両親媒性物質は、エクスビボおよび／またはインビボで自己組織化構造に自己組織化することができる可能性がある。
【００６４】
本発明の別の態様では、プラチナ(IV)ベースの治療的活性エージェントを共有結合させることを含み、薬物またはプロドラッグなどのプラチナ(IV)ベースの治療的活性エージェントのバイオアベイラビリティおよび放出を調節する方法が提供される。一般式(I)、(II)、(III)、または(IV)の両親媒性物質を形成するために、好ましくはスペーサーＳを含み、場合によりリンカーＬを含む、切断可能な共有結合Ｙを介して治療的活性エージェントＡを少なくとも１つのテール成分Ｒに共有結合させる。両親媒性物質は生理学的条件下で自己組織化構造に自己組織化することができ、インビボで切断可能であり、治療的活性エージェントを放出する。
【００６５】
別の局面において、プラチナベースの治療的活性エージェントまたはインビボでプラチナベースの治療的活性エージェントに代謝され得る薬剤の放出を調節する方法が提供される。この方法は、酸化プラチナ(IV) ベースの治療活性剤Aを少なくとも1つのテール成分Xに結合し、自己組織化構造に自己組織化することができる両親媒性物質を形成し、両親媒性物質はインビボで切断可能であり、治療活性剤を放出することを含む。ここで、両親媒性物質は、一般式(I)、(II)、(III)、または(IV)のものである。両親媒性物質は、エクスビボおよび／またはインビボで自己組織化構造に自己組織化することができる可能性がある。
【００６６】
別の局面において、プラチナベースの治療的活性エージェントまたはインビボでプラチナベースの治療的活性エージェントに代謝され得る薬剤の放出を調節する方法が提供される。この方法は、酸化プラチナ(IV) ベースの治療活性剤Aを少なくとも1つのテール成分Xに結合し、生理学的条件下で自己組織化構造に自己組織化することができる両親媒性物質を形成する。両親媒性物質は、インビボで切断可能であり、治療的活性エージェントを放出し、ここで、両親媒性物質は、一般式一般式(I)、(II)、(III)、または(IV)のものである。
【００６７】
この態様の一実施形態では、プラチナ(IV) ベースの治療的活性エージェントのバイオアベイラビリティを調節する方法が提供される。この方法は、酸化プラチナ(IV) ベースの治療的活性エージェントＡを少なくとも１つのテール成分Ｘに共有結合させることを含む。両親媒性物質は一般式(I)、(II)、(III)、または(IV)であり、ここで、共有結合はインビボで切断可能であり、自己組織化構造から治療的活性エージェントを放出する。両親媒性物質の自己組織化構造を患者に投与する。
【００６８】
この態様の一実施形態では、プラチナ(IV) ベースの治療的活性エージェントのバイオアベイラビリティを調節する方法が提供される。この方法は、酸化プラチナ(IV) ベースの治療的活性エージェントＡを少なくとも１つのテール成分Ｘに共有結合させることを含む。両親媒性物質は一般式(I)、(II)、(III)、または(IV)であり、ここで、共有結合はインビボで切断可能であって、生物学的活性エージェントを自己組織化構造から放出される。患者に両親媒性物質を投与し、両親媒性物質が自己組織化構造に自己組織化することが挙げられる。
【００６９】
別の態様では、プラチナベースの治療的活性エージェントまたはインビボでプラチナベースの治療的活性エージェントに代謝され得る薬剤のバイオアベイラビリティおよび放出を調節する方法が提供される。この方法は、酸化プラチナ(IV) ベースの治療活性剤Aを少なくとも1つのテール成分Xに結合し、自己組織化構造に自己組織化することができる両親媒性物質を形成し、両親媒性物質は、インビボで切断可能であって、治療的活性エージェントを放出することを含み、ここで、両親媒性物質は、一般式式(I)、(II)、(III)、または(IV)のものである。両親媒性物質は、エクスビボおよび／またはインビボで自己組織化構造に自己組織化することができる可能性がある。
【００７０】
別の態様では、プラチナベースの治療的活性エージェントまたはインビボでプラチナベースの治療的活性エージェントに代謝され得る薬剤のバイオアベイラビリティおよび放出を調節する方法が提供される。この方法は酸化されたプラチナ（IV）ベースの治療活性剤Ａを少なくとも１つのテール成分Ｘに共有結合させて、生理学的条件下で自己組織化構造に自己組織化することができる両親媒性物質を形成することを含む。両親媒性物質は、インビボで切断可能であり、治療的活性エージェントを放出し、ここで、両親媒性物質は、一般式(I)、(II)、(III)、または(IV)のものである。
【００７１】
別の態様では、プラチナベースの治療的活性エージェントまたはインビボでプラチナベースの治療的活性エージェントに代謝され得る薬剤のバイオアベイラビリティおよび放出を調節する方法が提供される。この方法は酸化されたプラチナ（IV）ベースの治療活性剤Ａを少なくとも１つのテール成分Ｘに共有結合させて、自己組織化構造に自己組織化することができる両親媒性物質を形成することを含む。両親媒性物質は、インビボで切断可能であり、治療的活性エージェントを放出する。ここで、両親媒性物質は、一般式(I)、(II)、(III)、または(IV)のものである。両親媒性物質は、エクスビボおよび／またはインビボで自己組織化構造に自己組織化することができる可能性がある。
【００７２】
本発明の別の態様では、式(I)、(II)、(III)、または(IV)の自己組織化構造を有効成分として含む病状の治療のための医薬組成物が提供される。いくつかの実施形態において、疾患状態の治療のための医薬組成物は、本質的に、式(I)、(II)、(III)、または(IV)の自己組織化構造である活性成分から成り、場合により、リン脂質、コレステロール、グリセロール脂質、他のプロドラッグ両親媒性物質、疎水性薬物、およびそれらの組み合わせからなるグループから選択される追加の成分と組み合わせて、自己組織化構造を構成する。いくつかの実施形態では、自己組織化構造は、ラメラ、キュービック、ヘキサゴナル、ミセルキュービック、ミセルまたはスポンジ相を示す。 好ましくは、活性成分は、式(I)、(II)、(III)、または(IV)の自己組織化構造であり、ここで、自己組織化構造は、リポソーム、キュボソーム、ヘキソソーム、逆ミセル、秩序のないスポンジ状ナノ粒子、固体脂質ナノ粒子、またはそれらの組み合わせからなるグループから選択される。
【００７３】
いくつかの実施形態では、病状は腫瘍の存在の病状であり、医薬組成物は、有効成分として、式(I)、(II)、(III)、または(IV)の固体脂質粒子または自己組織化構造を含む。
【００７４】
自己組織化構造／有効成分は、好ましくは、治療的に活性な量で医薬組成物中に存在する。
【００７５】
本発明の別の態様においては、疾患状態の治療方法が提供され、それを必要とする患者に、治療的有効量の医薬組成物を投与することを含み、式(I)、(II)、(III)、または(IV)の自己組織化構造を持つ活性成分を含み、場合により、リン脂質、コレステロール、グリセロール脂質、プロドラッグ両親媒性剤、疎水性薬物、およびそれらの組み合わせからなるグループから選択される追加の成分と組み合わせて、自己組織構造に含まれる。いくつかの実施形態において、自己組織化構造は、ラメラ、キュービック、ヘキサゴナル、ミセルキュービック、ミセルまたはスポンジ様相を示す。 好ましくは、活性成分は、式（I）、（II）、（III）、または（IV）の自己組織化構造であり、ここで、自己組織化構造は、リポソーム、キュボソーム、ヘキソソーム、逆ミセル、秩序のないスポンジ状ナノ粒子、固体脂質ナノ粒子、またはそれらの組み合わせからなるグループから選択される。
【００７６】
いくつかの実施形態では、疾患状態は腫瘍の存在によるものであり、この場合、医薬組成物は、式(I)、(II)、(III)、または(IV)の自己組織化構造を持つ活性成分を含み、場合により、リン脂質、コレステロール、グリセロール脂質、他のプロドラッグ両親媒性物質、疎水性薬物、およびそれらの組み合わせからなるグループから選択される追加の成分と組み合わせて、リポソーム、キュボソーム、ヘキソソーム、逆ミセル、順序の少ないスポンジナノ粒子、固体脂質ナノ粒子、またはそれらの組み合わせの形態の自己組織化構造に含まれることが好ましい。
【００７７】
本発明の別の態様において、式(I)、(II)、(III)、または(IV)の本発明によるプロドラッグは、任意に、リン脂質、コレステロール、グリセロール脂質、他のプロドラッグ両親媒性剤、疎水性薬物、およびそれらの組み合わせからなるグループから選択される追加の成分と組み合わせて、疾患状態の治療のための薬剤を製造するための自己組織化構造で提供される。 医薬は、本発明の前の態様に記載されているような自己組織化バルクまたはコロイド粒子構造を含む。
【００７８】
この態様の一実施形態では、活性物質を含む自己組織化構造を形成することによって増強された浸透および保持効果を利用するプラチナ（IV）ベースの治療活性剤を送達する方法が提供される。この方法は、プラチナ（IV）ベースの治療活性剤Ａを好ましくはスペーサーＳを含み、場合によりリンカーＬを含む、切断可能な共有結合Ｙを介して、少なくとも１つのテール成分Ｒ、好ましくは２つのテール成分に共有結合することを含み、 式(I)、(II)、(III)、または(IV)の両親媒性物質を形成し、自己組織化構造に自己組織化することができる。ここで、両親媒性物質はインビボで切断可能であり、治療的活性エージェントを放出する。両親媒性物質は、エクスビボおよび／またはインビボで自己組織化構造に自己組織化することができる可能性がある。 好ましくは、治療的活性エージェントは、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、またはそれらの誘導体である。 
【００７９】
この態様の一実施形態では、活性物質を含む自己組織化構造を形成することによって増強された浸透および保持効果を利用するプラチナ（IV）ベースの治療活性剤を送達する方法が提供される。この方法は、プラチナ（IV）ベースの治療活性剤Ａを好ましくはスペーサーＳを含み、場合によりリンカーＬを含む、切断可能な共有結合Ｙを介して、少なくとも１つのテール成分Ｒ、好ましくは２つのテール成分に共有結合することを含み、式(I)、(II)、(III)、または(IV)の両親媒性物質を形成する。ここで共有結合はインビボで切断可能であり、自己組織化構造から治療的活性エージェントを放出し、 両親媒性物質の自己組織化構造を患者に投与する。好ましくは、治療的活性エージェントは、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、またはそれらの誘導体である。 
【００８０】
この態様の一実施形態では、プラチナ（IV）ベースの治療活性剤を送達する方法が提供される。この方法は、プラチナ（IV）ベースの治療活性剤Ａを好ましくはスペーサーＳを含み、場合によりリンカーＬを含む、切断可能な共有結合Ｙを介して、少なくとも１つのテール成分Ｒ、好ましくは２つのテール成分に共有結合することを含み、式(I)、(II)、(III)、または(IV)の両親媒性物質を形成し、インビボで切断可能であり、自己組織化構造から治療的活性エージェントを放出する。両親媒性物質の自己組織化構造を患者に投与する。
【００８１】
この態様の一実施形態では、プラチナ（IV）ベースの治療活性剤を送達する方法が提供される。この方法は、プラチナ（IV）ベースの治療活性剤Ａを好ましくはスペーサーＳを含み、場合によりリンカーＬを含む、切断可能な共有結合Ｙを介して、少なくとも１つのテール成分Ｒ、好ましくは２つのテール成分に共有結合することを含み、式(I)、(II)、(III)、または(IV)の両親媒性物質を形成し、インビボで切断可能であり、自己組織化構造から治療的活性エージェントを放出する。両親媒性物質を患者に投与し、両親媒性物質が自己組織化構造に自己組織化する。
【００８２】
好ましくは、両親媒性物質は自己組織化して、ラメラ、キュービック、ヘキサゴナル、ミセルキュービック、ミセル形態およびそれらの類似のナノ粒子、固体脂質ナノ粒子またはそれらの組み合わせを示すリオトロピック中間相の自己組織化構造を形成する。
【００８３】
一実施形態では、疾患状態を治療する方法で使用するための活性成分として式(I)、(II)、(III)、または(IV)の自己組織化構造を含む医薬組成物が提供される。 いくつかの実施形態では、医薬組成物は、本質的に、式(I)、(II)、(III)、または(IV)の自己組織化構造である活性成分から成り、場合により、リン脂質、コレステロール、グリセロール脂質、他のプロドラッグ両親媒性物質、疎水性薬物、およびそれらの組み合わせからなるグループから選択される追加の成分と組み合わせて、自己組織化構造を構成する。いくつかの実施形態では、自己組織化構造は、ラメラ、キュービック、ヘキサゴナル、ミセルキュービック、ミセルまたはスポンジ相を示す。 好ましくは、活性成分は、リポソーム、逆キュボソーム、逆ヘキソソーム、逆ミセルまたはそれ以下の秩序化したスポンジ状ナノ粒子または固体脂質ナノ粒子、またはそれらの組み合わせにおける、式(I)、(II)、(III)、または(IV)の自己組織化構造である。
【００８４】
本発明のこの態様のいくつかの実施形態では、病状は腫瘍の存在の病状であり、そして医薬組成物は、有効成分として、式(I)、(II)、(III)、または(IV)の固体脂質粒子または自己組織化構造を含む。
【００８５】
本発明のさらなる態様は、バルク相を調製するためのプロセスに関連するものであり、ラメラ相、キュービック相、ヘキサゴナル相、スポンジ相および結晶中間相は、この態様のプロセスによって調製される。
【００８６】
本発明のさらなる態様は、本発明によるバルク相からコロイド粒子を調製するための方法に関する。 この態様の方法によって調製された本発明によるコロイド粒子がさらに提供される。
【００８７】
本明細書の任意の実施形態は、特に明記しない限り、必要な変更を加えて他の任意の実施形態に適用するものとする。
【００８８】
本開示は、例示のみを目的とする本明細書に記載の特定の実施形態によって範囲が限定されるべきではない。機能的に同等の製品、組成物および方法は、本明細書に記載されるように、明らかに本発明の範囲内にある。
【００８９】
本発明のさらなる態様および前の段落に記載された態様のさらなる実施形態は、例として、添付の図面を参照して与えられた以下の説明から明らかになるであろう。
【００９０】
本明細書で使用される「含む (原文comprises)」（またはその文法上の変形）という用語は、「含む (原文includes)」という用語と同等であり、他の要素または特徴の存在を除外するものと解釈されるべきではないことが理解されよう。
【図面の簡単な説明】
【００９１】
【図１】図1 :さまざまな両親媒性物質の水和時に発生する可能性のあるさまざまな相の概略図。異なる中間相の略語はミセル（L1）、ミセルキュービック（I1）、通常ヘキサゴナル（H1）、二連続キュービック（V1）、ラメラ（Lα）、逆バイコンティニュアスキュービック（V2）、逆ヘキサゴナル（H2）、逆ミセルキュービック（I2）、および逆ミセル（L2）である。ここで、下付き文字1と2はそれぞれ「通常」および「逆」相を指す。
【図２】図2 :プラチナ(II)錯体を官能化するための例示的な方法を示す概略フローチャート。
【図３】図3 : CP両親媒性物質のDSCサーモグラム。両親媒性物質の融解に対応する遷移ピークは観察されなかった。これは、両親媒性物質の融点が分解温度を超えている可能性があることを示唆している。
【図４】図4 : 典型的なCP両親媒性物質のPOM画像、（A）：CP-ビス（コハク酸-リシン（オレオイル）エタノールアミド）、（B）：CP-ビス（コハク酸-ペグ3-オレオイル）、（C）：CP-ビス（コハク酸-ペグ6-oleoyl）。 25℃の水を加える前、および25℃と37℃の水で平衡化した後、室温で偏光顕微鏡下で撮影した画像。過剰な水でのバンドは、両親媒性物質が水にさらされたときに膨潤することができたことを示しており、液晶構造の形成を示唆している。 CP-ビス（コハク酸-リシン（オレオイル）エタノールアミド）は、おそらく立方相の形成のために、水にさらされると暗いバンドを形成したが、CP-ビス（コハク酸-ペグ3-オレオイル）とCP-ビス（コハク酸- ペグ6-オレオイル）は、層状および乳化したバンド（L2またはL3）の中間相を示した。
【図５】図5 : 典型的なシスプラチン両親媒性物質のニートでリオトロピックな中間相挙動の1D SAXS回折パターン：（a）：CP-ビス（ラウロイル）、（b）：CP-ビス（ミリストイル）、（c）：CP-ビス（パルミトイル） 、（d）：CP-ビス（オレオイル）、（e）：CP-ビス（リノレオイル）、（f）：CP-ビス（フィタノイル）（g）：CP-ビス（コハク酸-ペグ3-オレオイル）、（h ）：CP-ビス（コハク酸-ペグ3-オレオイル）、（i）：CP-ビス（コハク酸-アミノ-ペグ3-オレオイル）、（j）：CP-ビス（コハク酸-リシン（オレオイル）エタノールアミド）。
【図６】図6 :典型的なシスプラチン両親媒性物質の分散ナノ粒子の1DSAXS回折パターン。 （a）：CP-ビス（ペグ3-オレオイル）、（b）：CP-ビス（コハク酸-ペグ3-オレオイル）（c）：CP-ビス（コハク酸-アミノ-ペグ3-オレオイル）、（d）：CP-ビス（コハク酸-リシン（オレオイル）エタノールアミド）。
【図７】図7 : CPプロドラッグナノ粒子の低温電子顕微鏡画像、（a）：CP-ビス（ペグ3-オレオイル）、（b）： CP-ビス（コハク酸-アミノペグ3-オレオイル）、（c）：CP-ビス（コハク酸-アミノペグ3-オレオイル）/リン脂質/コレステロール9/81 / 10w / w％、（d）：CP-ビス（コハク酸-リシン（オレオイル）エタノールアミド）。
【図８】図 8 : 動的光散乱（DLS）によって決定された強度によるナノ粒子分散液の粒子サイズ分布、（a）：CP-ビス（ペグ3-オレオリル）、（b）：CP-ビス（コハク酸-アミノペグ3-オレオリル）、（c）：ビス（コハク酸-アミノペグ3-オレオリル）/リン脂質/コレステロール、（d）：CP-ビス（コハク酸-リシン（オレオイルエタノールアミド）。
【図９】図9 :還元剤としてアスコルビン酸を使用したプラチナ(IV)プロドラッグナノ粒子の還元キネティックス（a）：1および5 mMのアスコルビン酸の2つの異なる濃度のCP-ビス（コハク酸-アミノペグ3-オレオリル）、基質に対するアスコルビン酸の比率は50：1および10：1; （b）：1 mMアスコルビン酸中のオキサリプラチン-ビス（ミリストイル）およびカルボプラチンビス（ミリストイル）。
【図１０】図 10 :耐性MIAPACA-2膵臓癌細胞由来異種移植マウスモデルにおけるCP-ビス（コハク酸-アミノペグ3-オレオリル）プロドラッグナノ粒子対CPおよびPBSの腫瘍阻害。（a）：すべてのグループ（n = 5）の腫瘍はサイズが大きくなったが、CP-プロドラッグナノ粒子は、コントロールグループおよびCPドラッグと比較して成長阻害を改善した。（b）：3つのグループすべてで体重減少は観察されなかった。
【図１１】図 11 : 腎臓の組織病理学。各治療グループの腎臓切片の典型的な光学顕微鏡写真。シスプラチンナノ粒子対CPおよび対照PBSで処理された異種移植マウスから切除された組織。正常組織は、PBS対照マウス（a）および0.75mg / Kg CPナノ粒子で治療されたマウス（c）で観察されたが、CP薬物0.75mg / Kgで治療されたマウスは急性尿細管壊死をもたらした（b）。
【図１２】図 12 : デュアルプロドラッグリポソームナノ粒子（NP）に応答したCFPAC-1膵臓癌細胞由来異種移植マウスモデルにおける腫瘍増殖阻害。 6匹のマウスのグループを1）デュアルプロドラッグNP（Gem-フィタニル（4.5 mg / Kg）、CP-ビス（ミリストイル）1mg / Kg /リン脂質/コレステロール）vs、2）シングルプロドラッグNP（ジェム-フィタニル（4.5 mg / Kg）/リン脂質/コレステロール）、3）100 mg /Kgのジェムシタビン薬および４）PBSビヒクルコントロールグループ、すべてのグループに週2回4週間注射した。ジェムの濃度が有意に高いジェムコントロールグループ（ナノ粒子グループのジェム活性薬物と比較して活性ジェムの22倍以上）は、他のグループよりも腫瘍のサイズを大幅に縮小した。二重薬物NPまたはジェムのみで治療されたマウスの腫瘍増殖阻害は、マウスにおける一般的な治療の活性ジェムの4.5％で有意な増殖阻害を示したが、元の腫瘍サイズを縮小しなかった。デュアルドラッグNPは、ジェムのみのNPと比較してわずかに優れた阻害を示した。（b）：すべてのグループで体重減少は観察されなかった。
【発明を実施するための形態】
【００９２】
［実施形態の詳細な説明］
本明細書、実施例および特許請求の範囲において用いられる種々の用語は、当業者によって理解される意味を有することに留意されたい。ただし、このドキュメントで意図される意味を明確にするために、特定の用語は以下に定義されている。
【００９３】
本明細書全体で使用される「プロドラッグ」という用語は、その構造修飾を含む治療的活性な化合物を指し、その結果、インビボで、プロドラッグは、例えば、加水分解、酸化、還元または酵素的切断によって、1つまたは複数の反応またはステップにって治療的に活性な化合物に変換される。それは、活性治療分子を産生するために代謝の一般的なステップを必要とする活性物質を含み、すなわち、この用語はまた、「プレプロドラッグ」を包含すると理解される。
【００９４】
本明細書を通して使用される用語シスプラチンプロドラッグは、例えば、還元的化学反応または酵素反応によって、インビボでシスプラチンに変換されることができる一般式(II)の化合物を指す。
【００９５】
【化１２】
2021527675.tif 000015
【００９６】
本明細書を通して使用される用語オキサリプラチンプロドラッグは、例えば、還元的化学反応又は酵素反応によって、インビボでオキサリプラチンに変換されることができる一般式(III)の化合物を指す。
【００９７】
【化１３】
2021527675.tif 000016
【００９８】
本明細書を通して使用される用語カルボプラチンプロドラッグは、例えば、還元的化学反応又は酵素反応によって、インビボでカルボプラチンに変換されることができる一般式(IV)の化合物を指す。
【００９９】
【化１４】
2021527675.tif 000017
【０１００】
ここで
Y1およびY2は、それぞれX1とX2の間、およびプラチナ(IV)ベースの治療的活性エージェントの間で独立して選択された切断可能な結合である。
【０１０１】
n = 0または1、ここで、X2が式(a) 、(b）、または（c）による置換基である場合、nは1である。
【０１０２】
X1は、式(a)に従った置換基、式(b)に従った置換基、および式(c)に従った置換基からなるグループから選択される。
【０１０３】
【化１５】
2021527675.tif 000018
【０１０４】
X2は、H、式(a)による置換基、式(b)による置換基、および(c)による置換基からなるグループから選択される。
【０１０５】
【化１６】
2021527675.tif 000019
【０１０６】
ここで
Ｒは、アルキル、アルケニル、アルキニル、分岐アルキル、分岐アルケニル、分岐アルキニル、置換アルキル、置換アルケニル、置換アルキニル基、およびそれらの類似体からなるグループから選択される。
【０１０７】
Sは、(ポリエチレングリコール)m（m = 1-10）、アミノ酸、およびエタノールアミド官能化アミノ酸からなるグループから選択される。
【０１０８】
Ｌは、プラチナ(IV)ベースの治療活性剤への結合Ｙを介して、１つの付着部位でＳ−Ｒに、そして第２の付着部位でプラチナ(IV)ベースの治療活性剤に共有結合するリンカー基である。
【０１０９】
本明細書を通して使用される「自己組織化構造」という用語は、ある程度の内部組織秩序を有する両親媒性物質の集合体を指すことを意味する。 自己組織化された構造は、両親媒性物質を溶媒と接触させることによって形成することができる。自己組織化構造は、バルクリオトロピック相、それに由来するコロイド粒子（いわゆる「コロイドソーム」）、または固体脂質粒子のいずれかを指すことを意味する。
【０１１０】
本明細書を通して使用される「バルク相」という用語は、ミセルキュービック（I1）、通常ヘキサゴナル（H1）、二連続キュービック（V1）、ラメラ（Lα）、逆二連続キュービック（V2）、逆ヘキサゴナル（H2）、逆ミセル（L2）およびスポンジ（L3）相を含むが、これらに限定されないリオトロピック相を意味すると理解される。
【０１１１】
本明細書全体で使用される「コロイド粒子」という用語は、「コロイドソーム」および固体脂質粒子を指すと理解されるべきである。本明細書全体で使用される「コロイドソーム」という用語は、バルクリオトロピック相と同じ内部ナノ構造を有するコロイド粒子を指すと理解されるべきである。本明細書全体で使用される固体脂質粒子という用語は、本発明のプロドラッグのコロイド粒子を意味すると理解され、コロイド粒子は、ニートプロドラッグのコアを含み、通常、界面活性剤の表面層によって安定化される。ニートプロドラッグのコアは、結晶性、微結晶性、液晶性、または非結晶性の形態であり得る。 「粒子」という用語は、それらの平均サイズに基づいてナノ粒子またはマイクロ粒子であり得る粒子を指すことが理解されよう。多くの場合、そのような粒子は「固体脂質ナノ粒子」と呼ばれるが、実際には微粒子のサイズ範囲にある場合がある。この形態の自己組織化構造は、過剰な溶媒と接触しても膨潤しない。
【０１１２】
本明細書全体で使用される「ラメラ相」という用語は、積み重ねられた二重層配置を意味すると理解されるべきであり、両親媒性分子の親水性部分の対向する単分子層が極性溶媒ドメインによって分離され、両親媒性分子の疎水性部分が背中合わせの層は、疎水性層を形成するために密接に接触している。平面ラメラ相は「L３ 相」と呼ばれる。
【０１１３】
本明細書全体で使用される「キュービック相」という用語は、ミセルキュービックおよび双連続キュービックの２つの主要なクラスの相を指す。 「ミセルキュービック相」とは、キュービック配列に配置された球状ミセルからなる相を指す。 「通常のミセルキュービック相」または「L1相」は、球状の通常のミセルで構成される。 「逆ミセルキュービック相」という用語は、キュービック配列に配置された球状逆ミセルで構成されている。
【０１１４】
「双連続キュービック相（バイコンティニュアスキュービックフェーズ相）」とは、極性溶媒空間を2つの連続しているが交差しないボリュームに分離する複雑なネットワークを形成する。単一の湾曲した脂質二重層からなる密接に関連するフェーズのファミリーを指す。双連続キュービック相は、キュービック単位セルに基づく長距離秩序を持っている。双連続キュービック相の平均曲率はゼロである。つまり、両親媒性二重層の表面のすべての点で、表面は凹面であるのと同じくらい凸面である。双連続キュービック相は、通常（「VI相」）または逆（「VII相」）タイプであり得る。双連続キュービック相では、いくつかのタイプの長距離オリエンテーションオーダーが観察されている。これらのフェーズの方向の順序は、空間グループIa3d、Pn3m、およびIm3mに対応する。コロイドソームがバルクキュービック相の内部構造を有する場合、コロイドソームは「キュボソーム」と呼ばれることがある。
【０１１５】
本明細書全体で使用される「ヘキサゴナル相」という用語は、六角形の配列に詰められた長い棒状のミセルからなる両親媒性相を意味すると理解されるべきである。 「通常のヘキサゴナル相」は、長い棒状の通常のミセルからなるヘキサゴナル相であり、「逆ヘキサゴナル相」は、長い棒状の逆ミセルからなるヘキサゴナル相である。通常のヘキサゴナル相は「ＨI相」と呼ばれ、逆ヘキサゴナル相は「ＨII相」と呼ばれる。コロイドソームがバルクヘキサゴナル相の内部構造を有する場合、コロイドソームは「ヘキソソーム」と呼ばれることがある。
【０１１６】
本明細書全体で使用される「スポンジ相」または「L3相」という用語は、極性溶媒空間を2つの接続されていないボリュームに分離する両親媒性二重層を有するという点で、双連続キュービック相に似た相を指すが、長距離オーダーを持っていない。したがって、これらの相は「溶融キュービック相」に類似している。
【０１１７】
本明細書全体で使用される「格子定数」という用語は、結晶性固体または液晶のユニットセルを定義する格子定数のセットを意味し、ユニットセルの長さなどの値を含み得る。
【０１１８】
本明細書全体で使用される「イソプレノイド」という用語は、イソプレン（２−メチル−１，３−ブタジエン）モノマーまたはサブユニットからなるアルキル鎖を意味する。本明細書で使用される「イソプレノイド」という用語の使用は、不飽和、部分的に飽和または完全に飽和したイソプレン類似体および誘導体を包含することを意図している。
【０１１９】
本明細書全体で使用されるという「医薬組成物」用語は、本発明による少なくとも一つのプロドラッグと、意図される投与形態に基づいて選択される少なくとも一つの薬学的に許容される担体、賦形剤、希釈剤、添加剤または担体の治療的有効量を含み、従来の医薬的慣行と一致する組成物を意味する。
【０１２０】
本明細書全体を通して使用される「治療的活性エージェント」、「薬学的活性エージェント」、「活性エージェント」および「活性成分」という用語は、生物学的系における状態の診断、治癒、緩和、治療、予防および／または修飾を意図するが、これらに限定されない物質を指す。 用語「薬物」および「治療的活性エージェント」は、本明細書全体を通じて互換的に使用される。
【０１２１】
本発明の文脈において、「治療的活性エージェント」は、プラチナベースの治療的活性エージェントである。 好ましい実施形態では、治療的活性エージェントは、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチンおよびそれらの誘導体からなるグループから選択される。 好ましい一実施形態では、治療的活性エージェントは、シスプラチンまたはその誘導体である。 別の好ましい実施形態において、Ａは、オキサリプラチンまたはその誘導体である。 さらに別の好ましい実施形態では、Ａは、カルボプラチンまたはその誘導体である。 本発明の目的は、プラチナ(IV)プロドラッグの形態でプラチナベースの薬物を送達することである。 この分野の当業者は、このような薬物の活性形が、生物学的システムにおける状態の診断、治癒、緩和、治療、予防および／または改変が可能な形態であることを理解している。プラチナベースの薬物であるシスプラチン、オキサリプラチンおよびカルボプラチンの活性型は、現在、ネイティブプラチナ(II)ベースの形態、特にシスプラチン(II)、オキサリプラチン(II)およびカルボプラチン(II)およびその誘導体であると理解されている。本発明の目的は、インビボで代謝されることができる形態のプラチナベースの薬物を、直接的または間接的に、例えば二つの軸性ヒドロキシル基を含む酸化されたプラチナ(IV)ベースの薬物を介して、活性なプラチナ(II)ベースの薬物に送達することである。 したがって、投与されたPt(IV)）がインビボでPt (II)に変換されるように、本明細書における「治療的活性エージェント」は、Pt (IV)およびPt(II) 形態の両方を含む。
【０１２２】
一実施形態では、治療的活性エージェントは、少なくとも１つの軸方向ヒドロキシル基で官能化されたプラチナベースの薬剤である。一実施形態では、酸化プラチナ(IV)ベースの薬剤は、１つの軸方向ヒドロキシル基および１つの軸方向カルボキシル基で官能化されている。好ましい実施形態では、酸化プラチナ(IV)ベースの薬剤は、２つの軸方向ヒドロキシル基で官能化されている。 １つの好ましい実施形態では、酸化プラチナ(IV)ベースの薬剤は、２つの軸方向ヒドロキシル基で官能化されたシスプラチン（IV）である。別の好ましい実施形態において、プラチナベースの薬剤は、２つの軸方向ヒドロキシル基で官能化されたオキサリプラチン（IV）である。さらに別の好ましい実施形態では、酸化プラチナ(IV)ベースの薬剤は、２つの軸方向ヒドロキシル基で官能化されたカルボプラチン（IV）である。
【０１２３】
一実施形態では、治療的活性エージェントはプロドラッグであり、その場合、X1−Y1−Ａ−(Y２)n−Ｘ２はプレプロドラッグを表す。この実施形態では、軸方向ヒドロキシル基は、X1−Y1および  (Y２)n−Ｘ２でさらに官能化されている。 ｎ ＝ ０およびＸ2＝ Ｈである一実施形態では、１つの軸方向ヒドロキシル基のみが官能化されている。X1−Y1−Ａ−（Y２)n−Ｘ２は、直接または2つの軸方向ヒドロキシル基を含む酸化プラチナ(IV)ベースの薬物を介して、インビボでプラチナ(II)ベースの薬物に代謝されることができる。
【０１２４】
本明細書で使用される場合、「治療的有効量」は、１つまたは複数の望ましい効果、特に腫瘍増殖の阻害または停止をもたらすシスプラチンプロドラッグまたはその組成物などの薬物の量または用量に関する。物質の治療有効量は、対象の病状、年齢、性別、および体重、ならびに対象において望ましい応答を誘発する物質の能力などの要因によって変化するであろう。
【０１２５】
一態様では、本発明は、一般式(I)のプロドラッグを提供する：
【０１２６】
【化１７】
2021527675.tif 000020
【０１２７】
ここで、Ａは、酸化されたプラチナ(IV)ベースの治療的活性エージェントである。
【０１２８】
Y1とY2は、それぞれX1とX2、およびAの間で独立して選択された切断可能な結合である。
【０１２９】
n = 0または1、ここで、X2が式(a)、(b)、または(c)による置換基である場合、nは1である。
【０１３０】
X１は、式(a)による置換基、式(b)による置換基、および式(c)による置換基からなるグループから選択される。
【０１３１】
【化１８】
2021527675.tif 000021
【０１３２】
X2は、Ｈ、式(a)による置換基、式(b)による置換基、および式(c)による置換基からなるグループから選択される。
【０１３３】
【化１９】
2021527675.tif 000022
【０１３４】
ここで
Ｒは、アルキル、アルケニル、アルキニル、分岐アルキル、分岐アルケニル、分岐アルキニル、置換アルキル、置換アルケニル、置換アルキニル基、およびそれらの類似体からなるグループから選択される。
【０１３５】
Sは、(ポリエチレングリコール)m（m = 1ー10）、アミノ酸、およびエタノールアミド官能化アミノ酸からなるグループから選択される。
【０１３６】
Ｌは、１つの付着部位でS-Rに、そしてＡへの結合Ｙを介して第２の付着部位で治療的活性エージェントＡに共有結合しているリンカー基である。
【０１３７】
Rは一般的に疎水性である。任意選択で、Rは10から30個の炭素原子に相当する線形鎖長を有する。一実施形態では、Ｒはアルファ−トコフェロールである。別の実施形態では、Ｒはイソプレノイド基である。他の実施形態では、Ｒは、ヒドロキシル化アルキルまたはヒドロキシル化アルケニル基である。 Ｒの好ましい実施形態には、アルキル、アルケニル、アルキニル、分岐アルキル、分岐アルケニル（イソプレノイド）、分岐アルキニル、置換アルキル、置換アルケニル、置換アルキニル基、およびそれらの類似体、例えばα-トコフェロール、ヒドロキシル化アルキルまたはアルケニル基が含まれるが、これらに限定されない。好ましい実施形態では、Ｒは、10から30個の炭素原子に相当する鎖長を有する。好ましくは、鎖長は、１0から24個の炭素原子に相当し、より好ましくは12から24個の炭素原子に相当し、より好ましくは１４から２０個の炭素原子に相当する。一般に、Rは自己組織化特性をAに与えることを目的としている。
【０１３８】
好ましい実施形態において、Ｒは、ミリスチル、ミリストイル、パルミチル、パルミトイル、ステアリル、ステアロイル、オレイル、オレオイル、リノレイル、リノレオイル、リノレニル、リノレノイル、アラキドニル、アラキドノイル、フィタニル、フィタノイル、ヘキサヒドロファルネシル、ヘキサヒドロファルネシルからなるグループから選択される。最も好ましくは、Ｒは、オレイル、オレオイル、リノレイル、リノレオイル、フィタニル、フィタノイル、ヘキサヒドロファルネシル、ヘキサヒドロファルネソイル、ミリストイルおよびミリストイル鎖からなるグループから選択される。
【０１３９】
本明細書で使用される場合、「アルキル」という用語は、10から30個の炭素原子、またはその間の任意の範囲を有する直鎖または分岐鎖炭化水素ラジカルを指す。アルキル基は、場合により置換基で置換されており、複数置換度が可能である。本明細書で使用される「アルキル」の例には、デカン、ウンデカン、ドデカン、トリデカン、テトラデカン、ペンタデカン、ヘキサデカン、ヘプタデカン、オクタデカン、ノナデカン、イコサン、ヘニコサン、ドコサン、トリコサン、テトラコサン、ペンタコサン、ヘキサコサン、ヘプタコサン、オクタコサン、ノナコサン、トリアコンタンなどが含まれるが、これらに限定されない。
【０１４０】
本明細書で使用される場合、「C10-C30アルキル」という用語は、それぞれ少なくとも10個および最大で30個の炭素原子、または12-24の間の任意の範囲を含む、上で定義されたアルキル基を指す。 （例えば、12-24個の炭素原子を含むアルキル基もC10-C30の範囲内にある）。
【０１４１】
本明細書で使用される場合、「アルキニル」という用語は、二重結合を含むアルキル基を指す。必要に応じて置換基で置換することもでき、複数の程度の置換が可能である。
【０１４２】
本明細書全体で使用される「任意選択で置換される」または「置換され得る」などの用語は、基が（多環式系を形成するために）1つまたは複数の非水素置換基で置換または融合されてもされなくてもよいことを示している。 特定の官能基に適した化学的に実行可能な置換基は、当業者には明らかであろう。 適切な置換基の例には、酸素または硫黄で置換された類似体が含まれるが、これらに限定されない。
【０１４３】
本発明によるいくつかの実施形態では、Ｌはリンカー基である。 「リンカー」は、治療的活性エージェントＡとグループS-Rとの間の多機能ドメインとして作用するグループを指す。リンカーは少なくとも二官能性であり、分子内のある部位にグループS-Rを固定するための少なくとも1つの官能基（「結合部位」）と、Y結合を介して薬物Aを固定するための別の結合部位にある別の選択的に切断可能な官能基を含む。好ましくは、リンカー基は共有結合である。
【０１４４】
Ｌは、無水コハク酸、無水マレイン酸、無水グルタル酸、クロロ酢酸、ヒドロキシプロパンスルホン酸、グリシンおよびアラニンからなるグループから選択される選択的に切断可能な官能基を含む。
【０１４５】
AとXの間の結合Y（Y1とY2を含む）は、X1-Y1-A-(Y2)n-X2の代謝時にインビボで切断することができる。結合Ｙの例には、エステルおよびカーボネートを含むがこれらに限定されない、選択的に切断可能な結合が含まれる。好ましい実施形態では、共有結合は不安定であるため、活性薬物を放出するために必要なときに切断され得るが、時期尚早の活性化に抵抗するのに十分安定している。好ましくは、Ｙはエステル結合である。 Y1とY2は同一でも異なっていてもよく、Y1とY2は同一であることが好ましい。特に好ましい実施形態では、Y1およびY2は両方ともエステルである。
【０１４６】
本発明によるいくつかの実施形態では、Ｓはスペーサーである。 「スペーサー」は、治療的に活性なドメインＡに直接、または一端のリンカーＬおよび他端の疎水性基Ｒを介して連結する二官能性基を指す。スペーサーは、極性溶媒へのヘッドグループの溶媒和の改善をサポートし、より優れた自己組織化特性を提供する。スペーサーは通常二官能性であり、分子の一端のR基に固定する1つの官能基と、選択的で切断可能なY結合を使用して薬物Aまたはリンカー（L）を介して結合する1つの官能基を含む。
【０１４７】
Sは、（ポリエチレングリコール)m（m = 1ー10）、アミノ酸、およびエタノールアミド官能化アミノ酸からなるグループから選択される。 １つの好ましい実施形態において、Ｓは、（ポリエチレングリコール)mからなるグループから選択され、ここで、ｍ ＝1ー10であり、ここで、ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８からなるグループから選択される。特に好ましい実施形態では、Ｓは、ポリエチレングリコール（ペグ)1-10  、α-カルボキシポリエチレングリコール（HOOC-ペグ)1-10  、またはα-アミノポリエチレングリコール（H2N-ペグ)1-10  からなるグループから選択される。好ましくは、Sは（ペグであり、より好ましくは、Sは（ペグ)1-6  である。特に好ましい実施形態では、Ｓは（ペグ)3-6  である。別の好ましい実施形態において、Ｓは、エタノールアミド官能化アミノ酸、好ましくは、リジノイル（lysinoyl）エタノールアミドである。
【０１４８】
本明細書において、「アミノ酸」とは、アミノ基及びカルボキシ基の両方を含有する分子を指す。例えば、α-アミノ酸には、アミノ基とカルボキシル基の両方を有する炭素原子に直接結合した「α-アミノ基」と、アミノ基とカルボキシル基の両方を有する炭素原子に直接結合した「α-カルボキシル基」が存在する。用語「カルボキシル」は、COOH基または-COO-基のいずれかを指し得る。 α-アミノ酸は、一般的な形態H2N-CHR-COOHであり、式中、Ｒは側鎖またはＨである。 側鎖は一般にアルキル鎖であり、これは場合によっては置換されるが、一般にはその遠位端では必ずしもそうではない。 アミノ酸のＮ末端は、アミン機能性が位置する末端であり、Ｃ末端は、カルボキシル機能性が位置する末端である。 アミノ酸は、ＬまたはＤ型であるかどうかにかかわらず、これらに限定されないが、２０のカノニカル（canonical)／天然アミノ酸を含むことは当業者には明らかであろう。
【０１４９】
本明細書で上述したように、本開示に従って、アミノ酸はまた、化学的に官能化することができる。「官能化された」とは、化学的に誘導体化された一つまたは複数の官能性側基を有する対象アミノ酸を指す。 このような官能化分子としては、例えば、フリーアミノ基、フリーカルボキシル基、側鎖基、またはそれらの組み合わせが誘導体化された分子が挙げられる。 用語「官能化された」および「誘導体化された」は、本明細書において互換的に使用される。 機能化されたアミノ酸の例は、リシノイルエタノールアミドである。
【０１５０】
好ましくは、Ａは親水性の治療的活性エージェントである。例えば、Ａは、logP値が０未満の治療活性剤である。別の実施形態では、Ａは、治療活性剤に代謝され得る薬剤であり、治療活性剤は、logP値が０未満の親水性である。一実施形態では、Ａはそれ自体、例えば、加水分解、酸化、還元または酵素的切断によって、１つまたは複数の反応ステップによって治療的活性エージェントに変換されるプロドラッグである。 Ａ自体がプロドラッグである場合、一般式(I)は、プレプロドラッグと呼ばれる化合物を説明すると見なすことができる。
【０１５１】
本発明は、治療的活性エージェント自体が、薬物または活性剤ではなくプロドラッグであり得ることを想定している。上記の式(I)による化合物において、Ａは、治療的活性エージェントを放出するためにインビボで修飾を受けるプロドラッグであることが当業者によって認識されるであろう。すなわち、プラチナベースの薬物は、例えば化学反応によるプロドラッグの切断後にインビボで形成される治療的活性エージェントの前駆体である。
【０１５２】
化合物Ａは、治療的に活性な形態をもたらす前に、さらなる化学修飾ステップを必要とする場合もあれば、必要としない場合もある。すなわち、化合物Aはそれ自体がプロドラッグである可能性があり、その場合、X1-Y1-A-(Y2)n-X2はプレプロドラッグとして説明することができる。治療活性剤自体がプロドラッグである実施形態では、両親媒性プロドラッグが治療活性形態に変換される前に、少なくともさらなる化学修飾ステップが必要となる場合がある。
【０１５３】
Aは治療的に活性なプラチナ(IV)ベースの薬剤である。好ましい実施形態では、Ａは、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチンおよびそれらの誘導体からなるグループから選択される。 １つの好ましい実施形態では、Ａはシスプラチンまたはその誘導体である。別の好ましい実施形態において、Ａは、オキサリプラチンまたはその誘導体である。さらに別の好ましい実施形態では、Ａはカルボプラチンまたはその誘導体である。
【０１５４】
好ましくは、両親媒性物質は、両親媒性物質に存在する治療活性剤の治療活性形態の形成を促進する酵素反応または化学反応の基質である。両親媒性物質は、患者の化学反応によって作用され得るものであることが事前に決定されていることが好ましい。より好ましくは、化学反応は切断可能なリンカーに作用する。
【０１５５】
１つの好ましい実施形態において、一般式(I)は、式(II）による化合物である。
【０１５６】
【化２０】
2021527675.tif 000023
【０１５７】
ここで
Y1とY2は、それぞれX1とX2の間で独立して選択された切断可能な結合であり、プラチナ(IV)ベースの治療活性剤である。
【０１５８】
n = 0または1、ここで、X2が式(a)、(b)、または(c)による置換基である場合、nは1である。
【０１５９】
X１は、式(a)による置換基、式(b)による置換基、および式(c)による置換基からなるグループから選択される。
【０１６０】
【化２１】
2021527675.tif 000024
【０１６１】
X2は、Ｈ、式(a)による置換基、式(b)による置換基、および式(c)による置換基からなるグループから選択される。
【０１６２】
【化２２】
2021527675.tif 000025
【０１６３】
ここで
Ｒは、アルキル、アルケニル、アルキニル、分岐アルキル、分岐アルケニル、分岐アルキニル、置換アルキル、置換アルケニル、置換アルキニル基、およびそれらの類似体からなるグループから選択される。
【０１６４】
Sは、(ポリエチレングリコール)m、m = 1ー10、アミノ酸、およびエタノールアミド官能化アミノ酸）からなるグループから選択される。
【０１６５】
Lは、1つの付着部位でS-Rに共有結合し、2番目の付着部位でプラチナ(IV)ベースの治療活性剤への結合Yを介してプラチナ(IV)ベースの治療活性剤に共有結合するリンカー基である。
【０１６６】
Rは、化合物に自己組織化特性を与えることができる分子である。好ましくは、Ｒは、12-24個の炭素原子の間の鎖長のアルキル、アルケニル、アルキニルまたはイソプレノイドである。好ましくは、Ｙはエステルまたはカーボネートであり、より好ましくはエステルである。好ましくは、Ｓは、m=1-6、より好ましくはm=3-6であるペグｍである。別の好ましい実施形態では、Ｓはリシノイルエタノールアミドである。
【０１６７】
特に好ましい実施形態では、一般式(II)は、以下からなるグループから選択される化合物である。
【０１６８】
【化２３−１】
2021527675.tif 000026
【０１６９】
【化２３−２】
2021527675.tif 000027
【０１７０】
本発明の化合物の特に好ましい実施形態は、シス、シス、トランス−[PtCl2(NH3)2(ラウロイル)２]- シス、シス、トランス−[PtCl2(NH3)2 (ミリストイル)2]; シス、シス、トランス−[PtCl2(NH3)2(パルミトイル)2]; シス、シス、トランス−[PtCl2(NH3)2(オレオイル)2]; シス、シス、トランス−[PtCl2(NH3)2(リノレオイル)2]; シス、シス、トランス−[PtCl2(NH3)2(フィタノイル)2]; シス、シス、トランス−[PtCl2(NH3)2(オレオイルカーボネート)2]; シス、シス、トランス−[PtCl2(NH3)2（Nα-コハク酸-）-（Nε-オレオイル）-リジノイル-エタノールアミド）2];シス、シス、トランス-[ PtCl2(NH3)2(コハク酸-トリエチレングリコール-オレオイル)2]、または溶媒和物、水和物、および塩を含むそれらの薬学的に許容される形態。
【０１７１】
別の好ましい実施形態において、一般式(I)は、式(III)による化合物である。
【０１７２】
【化２４】
2021527675.tif 000028
【０１７３】
ここで、Y1、Y2、X1およびX2は、式(II)のように定義される通りである。
【０１７４】
特に好ましい実施形態では、一般式(III)は、以下からなるグループから選択される化合物である。
【０１７５】
【化２５】
2021527675.tif 000029
【０１７６】
さらに別の好ましい実施形態において、一般式(I)は、式(IV)による化合物である。
【０１７７】
【化２６】
2021527675.tif 000030
【０１７８】
ここで、Y1、Y2、X1およびX2は、式(II)のように定義される通りである。
【０１７９】
特に好ましい実施形態では、一般式(IV)は、以下からなるグループから選択される化合物である。
【０１８０】
【化２７】
2021527675.tif 000031
【０１８１】
好ましくは、一般式(I)、(II)、(III)、または(IV)のプロドラッグは、ラメラ相、キュービック、ヘキサゴナル、スポンジ、エマルジョン、または結晶ラメラ形態を示すリオトロピック相を有する自己組織化構造を形成することができる。より好ましくは、相は、ラメラ相、キュービック、ヘキサゴナル、スポンジ相である。さらに好ましくは、相は逆相である。
【０１８２】
また、上記態様の一般式(I)、(II)、(III)、または(IV)のプロドラッグの自己組織化構造も提供される。 一実施形態では、式(I)、(II)、(III)、または(IV)のプロドラッグの自己組織化構造は、リン脂質、グリセロール脂質、コレステロール、他のプロドラッグ両親媒性物質、疎水性薬物、およびそれらの組み合わせからなるグループから選択される、自己組織化構造でナノ粒子を形成し、化学療法と診断を組み合わせた化学療法または診断を提供する機能を備えている。
【０１８３】
いくつかの実施形態において、式(I)、(II)、(III)、または(IV)のプロドラッグは、標的化(ターゲティング)分子、ペプチド、抗体、タンパク質またはアプタマーを含む標的化(ターゲティング) リガンドと組み合わせ,より効率的に活性剤を標的に送達する。
【０１８４】
特に好ましい実施形態では、自己組織化構造は、リン脂質、グリセロール脂質、コレステロール、他のプロドラッグ両親媒性物質、疎水性薬物からなるグループから選択される追加の成分と任意選択で組み合わせた、式(II)のシスプラチン(IV)の化合物、ならびにそれらの組み合わせ自己組織化構造である。そのような構造は、ポロキサマー、ペグ化脂質、ポリソルベート、およびそれらの組み合わせなどの界面活性剤安定剤から利益を得る医薬品用途のために適切に安定化され得る。
【０１８５】
本発明による好ましい実施形態は、上記式(II）による化合物を含む自己組織化構造である。 好ましくは、自己組織化構造は、ラメラ、キュービック、ヘキサゴナル、およびスポンジ相の形態である。 自己組織化構造がナノ粒子の形態である場合、平均粒子サイズは、好ましくは10-500nm、より好ましくは10-200nmの間である。
【０１８６】
本発明による化合物の合成のための反応条件は、最小限の実験量で当業者によって容易に決定され、添付の実施例にも例示されている。特に好ましい実施形態において、化合物は、スキーム１に従って調製される。
【０１８７】
【化２８】
2021527675.tif 000032
【０１８８】
ここで、Ｘ1およびＸ2は、本明細書に記載されるように定義される。
【０１８９】
本発明による追加の化合物を調製するための反応スキームを図２に示す。これらは例示的なものであり、網羅的な例を意図するものではないことが理解されよう。
【０１９０】
本発明による化合物の合成のための反応条件は、最小限の実験量で当業者によって容易に決定され、添付の実施例にも例示されている。
【０１９１】
本発明に従って化合物を合成するために使用される出発原料および試薬は、特に明記しない限り、または当業者に知られている方法によって調製されない限り、例えば、ケミカルカンパニーシグマアルドリッチ（ミズーリ州セントルイス）およびメルク（オーストラリア）などの商業的供給業者から入手可能である。
【０１９２】
ラメラ、逆キュービック、逆ヘキサゴナル、逆スポンジおよびミセル相への自己組織化を形成しないプロドラッグと比較して本発明の自己組織化構造は、それらの改変された放出特性のために、望ましいプロドラッグ送達システムを表す。理論または作用様式に拘束されることを望まないが、本発明の自己組織化構造は、第一に、自己組織化両親媒性分子に対する加水分解効果の違い、および非組織化系における単離された単一分子のそれと比較して、自己組織化系における分子へのアクセスが複雑であるために，修飾された放出特性を有すると考えられる。第二に、好ましい化合物の場合には、好ましいプロドラッグの疎水性テールＲおよびスペーサーＳは、プロドラッグおよびその類似体をシスプラチンまたはオキサリプラチンまたはカルボプラチンに変換するのに必要な還元のための異なる基質活性を有する化合物をもたらし、従って本発明による化合物の修飾放出プロファイルをもたらすと考えられる。最後に、本発明の化合物の加水分解により、脂肪鎖部分が放出され、それ自体が自己組織化構造を形成する可能性があり、それが局所環境を変化させ、その結果、プロドラッグのネイティブプラチナ(II) 薬 への化学的還元および変換に影響を与えると考えられる。
【０１９３】
さらに同様に、本発明による自己組織化構造は、ミセル形態を示すプロドラッグ自己組織化構造よりも望ましいと考えられる。 本発明によるプロドラッグラメラ、キュービック、ヘキサゴナル、スポンジ相または逆ミセルナノ粒子は、以前に開示されたプロドラッグ自己組織化構造のいずれよりもはるかに大きな両親媒性：溶媒界面面積を有する。 さらに、通常のミセルとは異なり、本発明による逆相は、過剰な水性溶媒中で安定である。
【０１９４】
一実施形態では、本発明の自己組織化構造は、少なくとも１つの溶媒ドメインおよび少なくとも１つの両親媒性ドメインを含み、両親媒性ドメインは、式(I)、(II)、(III)、または(IV)に従って少なくとも１つのプロドラッグを含み、ここで、Ｒは、治療的活性エージェントに自己組織化特性を付与することができる任意の基として定義される。
【０１９５】
本発明の溶媒ドメインは、少なくとも一つの極性溶媒を含む。 極性溶媒としては、両親媒性自己組織化に通常用いられる溶媒、例えば、水、グリセロール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、Ｎ-メチルホルムアミド、ヒドラジン、プロピレンカーボネート、メタノール、エタノール、硝酸アンモニウムなどの選択されたイオン性液体、およびこれらの混合物などが挙げられる。
【０１９６】
溶媒はまた、他の成分、例えば塩、pH緩衝剤、グルコースおよびショ糖などの糖、ポリソルベート80などの安定化試薬、ペグ-PPO-ペグ（PEG-PPO-PEG） 共重合体、より具体的にはポロキサマー127、ポロキサマー108、様々なペグ長のペグ脂質鎖または脂質鎖、例えばペグ4000-オレオイル、ペグ4000-リノレオイル、ペグ2000-オレオイル、ペグ2000-リノレオイル、ペグ10000-オレオイル、ペグ10000-リノレオイル、およびそれらの組み合わせを含むことができる。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、式(I)、(II)、(III)、または(IV)のプロドラッグは、リン脂質、グリセロール脂質、コレステロール、他のプロドラッグ両親媒性薬物、疎水性薬物、およびそれらの組み合わせからなるグループから選択される追加の成分と組み合わせて、リポソーム、キュボソーム、ヘキソソーム、逆ミセルおよびスポンジ様ナノ粒子から選択される自己組織化構造において使用され得る。
【０１９８】
両親媒性ドラッグデリバリー担体に組み込まれることができる薬学的活性なエージェントは、当業者に公知である。 例えば、WO2005/0210046(DBL Australia Pty Ltd)およびWO9830206を参照のこと。担体に組み込まれ得る薬学的または治療的活性エージェントの例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：グローバルタンパク質および糖タンパク質、プロスタグランジンのような高反応性の脂質、タンパク質のような生物活性の大きい薬物分子、多糖類、ＤＮＡおよびＲＮＡ、シクロスポリンのようなより小さい薬物分子、パクリタキセル、インドメタシン、フェノフィブラート、プロゲステロン、アンホテリシンＢ（ＡＭＢ）、イリノテカン、およびこれらの組み合わせが挙げられる。
【０１９９】
本発明の望ましいリオトロピック液晶相の形成は、特定の親水性ドメインと疎水性ドメインとの間の厳密なバランスが必要であることが当業者によって認識されるであろう。したがって、当業者は、Ａに対するＸの選択が、本発明のプロドラッグが本発明によるリオトロピック相および／または固体脂質粒子のいずれかを形成するかどうかを決定することを認識するであろ。
【０２００】
一般に、界面活性剤ヘッドグループ、テールおよび体積の相互作用は、リオトロピック相挙動を決定する上で非常に重要である。 分子形状と相挙動との関係は臨界充填因子(CPP) によって記述できる。CPPは、CPP= v/a0lcとして定義され、ここで、vは分子体積、a0は界面活性剤ヘッドグループの断面積、およびlcは疎水性テールの長さに対応する。この式の開発以来、CPPは分子の曲率に基づいて中間相挙動を予測するのに広く使用されてきた。 小さなヘッドグループとバルキーな疎水性を持つ分子のために、CPP値は同等または1より大きくなり、それによって平均ゼロまたは負の界面曲率と逆メソ相のCPP値は1より大きくなり、それによって平均負の界面曲率と逆メソ相の潜在的に形成を誘導する。
【０２０１】
本発明による切断可能なテールは、本発明によるヘッドグループのコンテキストにおいて考慮されるときに、１より大きいCPPの形成に基づいて選択される。図1は、ヘッドグループとテールグループ間のこの相互作用を示している。ラメラ相の左側の相の充填密度は1未満であり、両親媒性物質の濃度が低い場合に発生することがよくある。ラメラ相の左側の相は1未満の臨界充填密度を有し、しばしば両親媒性物質の低濃度で起こる。 ラメラ相の右側にある相はCPPが1以上あり、通常は両親媒性物質の濃度が高いときに起こる。CPPは両親媒性分子に対して一定ではなく、両親媒性分子の温度、圧力、濃度およびpH、ならびにいくつかの追加の溶媒および添加剤などの外的要因による。しかしながら、このパラメータは、室温または生理学的温度および生理学的pHおよび圧力で両親媒性物質の水和時に起こり得る相の単純な推測として使用することができる。
【０２０２】
溶媒中の両親媒性物質の自己組織化挙動は，溶媒と両親媒性分子の親水性または疎水性部分のいずれかとの間の優先的相互作用のために生じる。 両親媒性物質が極性溶媒にさらされると、両親媒性物質の親水性部分は、極性溶媒と優先的に相互作用する傾向があり、その結果、親水性ドメイン（「溶媒ドメイン」）の形成をもたらす。 両親媒性分子の疎水性部分は、このドメインから除外される傾向があり、その結果、疎水性ドメイン（「疎水性ドメイン」）が形成される。
【０２０３】
リオトロピック液晶は、適切な固体または液体両親媒性物質に溶媒を添加することによって形成される。 それらは、親水性ドメインと疎水性ドメインとの間の界面の曲率によって分類され得る。 これらのドメイン間の曲率は、両親媒性物質の濃度および分子構造を含むいくつかの要因に依存する。 界面が疎水性ドメインに向かってネット曲率を表示するとき、相は「通常」と呼ばれる。 界面が親水性ドメインに向かってネット曲率を表示するとき、相は「逆」と呼ばれる。 系のネット曲率がゼロに近づくと，得られる相は溶媒ドメインによって分離された平面両親媒性二重層からなるラメラ型構造を有することができる。 あるいは、表面上の各点がある次元で凸であり、別の次元で凹である場合、ネット曲率はゼロに近づくことがあり、そのような相は「二連続キュービック相」と呼ばれる。 自己組織化構造によって形成することができる特定の相の例としては、ミセル（通常および逆）、ヘキサゴナル（通常および逆）、ラメラ、キュービック相（通常、逆および両連続相）、および逆ミセルキュービック相、リボン、メッシュ、または非キュービック「スポンジ」両連続相などの他の中間相が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２０４】
上記のバルク相は、分散されて、非分散バルク相の内部構造を保持するコロイド粒子を形成することができる。 これらのコロイド粒子は、ドラッグデリバリー担体としての応用についても研究されている。 米国特許5,531,925は、内部相の二層または単層層に固定された表面相によって囲まれた両親媒性相の内部を含むコロイド粒子を開示している。 粒子の内部相は、ラメラ相、逆キュービック相、ヘキサゴナル相またはL3 (「スポンジ」)相、またはそれらの混合物から選択され得る。
【０２０５】
これらの粒子が逆二連続キュービック相の内部構造を有する場合、粒子は口語的にキュボソームと呼ばれる。 同様に、粒子が逆ヘキサゴナル相の内部構造を有する場合、それらはヘキソソームと呼ばれる。 粒子がラメラ相の内部構造を有する場合、それらはリポソームと呼ばれる。コロイド粒子またはナノ粒子はまた、「スポンジ」相から形成され得る。
【０２０６】
代替ドラッグデリバリー担体は、固体脂質粒子である。 固体脂質粒子は、ポリソルベート80、ポロキサマーおよびペグ化脂質などの界面活性剤表層によって安定化された結晶性両親媒性コアから構成される。 固体脂質粒子は、疎水性薬剤の担体として使用されてきた。 例えば、固体脂質に吸着され、SLNsとして分散された抗癌剤であるカンプトテシンは、脳組織における薬剤レベルの増加を示した（Yang1999,J.control release,59(3):299-307）。 しかしながら、従来のSLNの薬剤負荷は、脂質溶融物中の薬剤の溶解度および脂質マトリックスの構造によって制限される。
【０２０７】
薬物負荷を増加させるために、「ファーマコソーム」アプローチが採用されている。 この方法は、ミセルまたはリポソームに組み立てることができるプロドラッグを生成することを含む。ジンら正常なラメラベシクルまたはより高次のナノ構造を形成することができるいくつかの脂質-ヌクレオシド類似体を同定した(WO2010063080A1,US8603999B2)。 しかしながら、ミセルは、薬物送達に適した相として実質的な欠点を有する。 ミセル系は希釈下および臨界ミセル濃度（CMC）以下で崩壊する可能性がある。
【０２０８】
バルク相
一態様では、本発明の自己組織化構造は、少なくとも１つのバルク相を含む。
【０２０９】
本発明のバルク相は、次のグループから選択される少なくとも一つの相を含む：ラメラ、逆二連続キュービック、逆ヘキサゴナル、逆ミセル（L2）、およびスポンジ（L3）。 好ましくは、バルク相は、ラメラ相、逆キュービック相、L2逆ミセル相、およびL3「sponge」相からなるグループから選択される少なくとも一つの相を含む。 最も好ましくは、バルク相は、ラメラ相、逆キュービック相、および逆ミセル相およびスポンジ相を含む。
【０２１０】
好ましい実施形態では、本発明によるバルク相は、およそ室温から約50℃の温度範囲で容易に製造され得、この温度範囲内で少なくとも数ヶ月間安定である。
【０２１１】
本発明による好ましい実施形態は、バルクリオトロピック逆相である。 過剰な水性溶媒中で希釈することに対する本発明によるリオトロピック相の熱力学的安定性は，バルク相がその一次高次構造を維持することを意味するが，格子パラメータは水中の両親媒性物質の膨潤により変化する可能性がある。最も好ましくは、本発明によるリオトロピック相は、ラメラ相、逆二連続キュービック相、逆ミセル相または逆スポンジ相である。
【０２１２】
観察されたリオトロピック相は温度に依存することは当業者によって認識されるであろう。 本発明によるバルク相は、室温と生理学的温度との間で安定であり、好ましくは約35℃から約40℃の温度で安定であり、最も好ましくは約35℃から約37℃の温度で安定である。
【０２１３】
本発明によるバルク相を調製するためのプロセスは、当業者に公知である。 一実施形態において、本発明によるバルク相は、各両親媒性物質を適切な緩衝液中に適切な濃度に溶解することによって調製することができる。 適切な緩衝剤の例としては、生理学的に許容される緩衝剤、例えば、リン酸、リン酸緩衝生理食塩水（PBS）、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Tris）、4-（2-ヒドロキシエチル）-1-ピペラジンエタンスルホン酸（HEPES）、トリス-スクロース、トリス-グリシン、およびグリシン緩衝剤が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０２１４】
別の実施形態では、本発明による好ましい相は、視覚的に均質なサンプルが得られるまで、室温-50℃の間で溶融脂質を機械的に混合することによっ 任意選択的に、例えば10-20重量％の範囲のエタノールのような共溶媒の添加は、均質化プロセスを助け得る。
【０２１５】
コロイド粒子：コロイドソームまたはナノ粒子
本発明のさらなる態様は、バルク相の内部構造を保持する一つまたは複数の粒子を含む本発明の自己組織化構造に関する。 このような粒子は、「コロイドソーム」または「ナノ粒子」と呼ばれる。
【０２１６】
一実施形態では、本発明の自己組織化構造は、コロイドソームを含むか、または以下のグループから選択される：リポソーム、キュボソーム、ヘキソソームおよび「スポンジ状」 好ましい実施形態において、コロイド粒子は、以下のグループから選択される：リポソーム、キュボソーム、ヘキソソーム、およびスポンジ状粒子最も好ましくは、コロイド粒子は、リポソームおよびキュボソーム、およびスポンジ状粒子である。
【０２１７】
本発明による特に好ましい実施形態では、コロイドソームは、ラメラ相および逆相に由来する。 本発明によるリオトロピック相の熱力学的安定性は、バルク相を過剰の水性溶媒中で徐々に希釈し、バルク相と同じ液晶構造を維持しながらコロイドソーム中に分散させることができることを意味する。
【０２１８】
本発明によるコロイドソームは、当業者に知られているプロセスに従って調製することができる。例えば、コロイドソーム／ナノ粒子は、水または生理食塩水（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）中で脂質薄膜を水和することによって調製することができる。さらに、グルコース、デキストロースなどの糖が培地に添加される場合がある。逆キュボソームやヘキソソームなどの逆相コロイドソームは、水中で水和してバルク相のようなゲルを形成し、安定剤の存在下で超音波処理や高圧均質化などのせん断力を使用して粒子に分散させることができる。
【０２１９】
安定なコロイドソームを調製するためには、安定化剤または断片化剤を添加することが必要であることは、当業者によって認識されるであろう。 適切な断片化剤は、当業者に公知であり、例えば、ポロキサマーまたはポリソルベートまたはペグ化脂質を含む。 ポロキサマーは、逆相コロイドソームのための最も広く使用されている安定剤であり、ポリエチレングリコール（ペグ）とポリプロピレンオキシド（PPO）のブロック共重合体である。 本発明による好ましい実施形態では、安定化剤は、異なるビルディングブロックのペグ-PPO-ペグのトリブロック共重合体である。 本発明による特に好ましい態様において、安定化剤は、ポロキサマー407、ポロキサマー108、およびペグ化脂質（ペグ2k-10K-オレオイル）である。
【０２２０】
一実施形態では、コロイド粒子は、バルク相を分散させることによって調製される。本発明のバルク相は、安定化試薬を含む水にバルク相のエタノール溶液を滴下することによって分散させることができる。あるいは、バルク相は、少なくとも１つの安定化試薬を含む水をバルク相に加えることによって分散させることができる。これらの粒子のサイズは、当業者に周知の技術である、ボルテックス、超音波処理、濾過、押し出しおよび均質化によって制御することができる。
【０２２１】
好ましい実施形態において、本発明によるコロイドソームまたはナノ粒子分散体は、プロドラッグ-両親媒性混合のバルク相を、ボルテキシングを用いた安定化試薬を含む水、およびプローブ型超音波ホモジナイザーまたは超音波浴のようなせん断力で好ましく分散させることによって調製される。 この実施形態に従って調製されたコロイドソームは、任意選択で一つまたは複数の追加の処理工程を受けてもよい。 このような処理方法は、当業者に公知であり、高圧均質化、および膜を通る段階的押出を含む。 段階的押出のために用いられる膜は、例えば、0.8、0.4、0.2、0.1および0.05μmを含む細孔サイズを有し得る。 一実施形態では、処理ステップは、サイズ選択処理である。
【０２２２】
好ましい実施形態では、コースコロイドソームまたはナノ粒子調製物は、一連のポリカーボネート(PC) 膜を通過することによってさらに処理される。 膜のサイズ範囲は、最終製品の望ましい粒子サイズに従って当業者によって選択されるであろう。 この処理工程に用いることができる装置は、当業者に公知であるが、例えば押出機を含み得る。
【０２２３】
本発明のナノ粒子のサイズが意図される用途に依存することは、当業者によって認識されるであろう。 例えば、静脈内投与のために、好ましいコロイドソームサイズ範囲は、一般に約30nm-約400nmの間である。 より好ましくは、サイズ範囲は、静脈内適用のために約30nm-約200nmの間である。
【０２２４】
肝臓などの特定の臓器へのナノ粒子のデリバリーおよび腫瘍への受動的標的化のために、約30nmから約400nmの間の粒子サイズが企図される。より好ましくは、粒子サイズは、約30nmから約200nm未満である。理論に拘束されることを望まないが、30-200 nmのサイズの粒子は、固形腫瘍の漏出性と混沌とした新生血管系での浸透および保持時間が強化されているため、癌細胞を受動的に標的としていると考えられている。例、Matsumura et alおよびBrannon-Peppas L.et al2012を参照のこと。
【０２２５】
コロイド粒子：固体脂質粒子
本発明の好ましい態様は、少なくとも一つのプラチナ(IV)ベースのプロドラッグからなる固体-脂質粒子を提供することを目指す。
【０２２６】
本発明による固体脂質粒子は、当業者に公知の方法によって製造することができる。 例、MehnertおよびMader2001を参照のこと。
【０２２７】
本発明に従って固体脂質粒子を製造するために使用される適切な方法は、本発明のプロドラッグの物理化学的性質に従って選択され得る。 固体脂質粒子を製造するための典型的な方法のいくつか、例えば、水溶液中に脂質を溶融することを必要とする方法は、本発明による100℃以上の融点を持つものプロドラッグには適用できないことが当業者によって認識されるであろう。
【０２２８】
一実施形態において、本発明の固体脂質粒子は、機械的方法に従って調製される。 この実施形態によれば、一つまたは複数の安定剤がニート両親媒性物質に添加される。 安定剤の例としては、トリブロックポリマー（例えば、ポロキサマー407、ポロキサマー108、およびペグ化脂質）が挙げられるが、これらに限定されない。 ニート両親媒性物質に添加される安定剤の量は、約5-30％（w/w）の間であり得、好ましくは約10-30％（w/w）の間であり、最も好ましくは約15-30％（w/w）の間である。 初期バルク相を調製するために、通常20-７0重量％の水を両親媒性物質に、通常は室温（約22-約25℃）で添加する。 次いで、両親媒性物質−水混合物を当業者に公知の方法を用いて剪断する。好ましい実施形態では、両親媒性物質−水混合物は、大まかな均質化を使用して剪断される。次に、混合物をさらに処理して、望ましいサイズおよび多分散性の粒子を生成することができる。さらなる処理の方法は当業者に知られており、例えば、高圧均質化、超音波処理、および既知の孔径を有する異なる膜を介した押し出しを含み得る。好ましい実施形態では、混合物をさらに処理して、望ましいサイズおよび多分散性の粒子を生成することができる。
【０２２９】
本発明による固体脂質粒子の平均サイズおよびサイズ分布は、本発明によるコロイドソームについて記載されたものと同様である。
【０２３０】
医薬組成物
本発明のさらなる態様は、本発明の医薬組成物に関する。 一実施形態において、本発明による医薬組成物は、式(I) による化合物の少なくとも一つを含む。 別の実施形態において、医薬組成物は、本発明による少なくとも一つの自己組織化構造を含む。 さらなる実施形態において、組成物は、本発明の固体-脂質粒子の少なくとも一つを含む。
【０２３１】
一実施形態では、本発明による医薬組成物は、凍結乾燥、噴霧凍結乾燥、リオフィライズ、または噴霧乾燥粉末であり得る。
【０２３２】
本発明による医薬組成物は、意図された投与形態に基づいて選択され、従来の医薬慣行と一致する、薬学的に許容される担体、賦形剤、希釈剤、添加剤および担体を含み得る。適切な医薬担体、賦形剤、希釈剤、添加剤およびビヒクルは、当業者に知られており、例えば、レミントン：The Science and Practice of Pharmacyなどの刊行物に記載されている。
【０２３３】
本発明による医薬組成物は、防腐剤、湿潤剤または抗菌剤を含むがこれらに限定されないアジュバントをさらに含み得る。他の補助剤には、凍結防止剤、噴霧乾燥補助剤、緩衝液、等張性調整剤、およびpH調整材料が含まれるが、これらに限定されない。
【０２３４】
単一の剤形を生成するために担体材料と組み合わせることができる有効成分の量は、治療されるホストおよび特定の投与様式に応じて変化するであろう。投薬単位形態は、一般に、約1mgから約5,000 mgの有効成分を含み、好ましくは20から 1000 ｍgの有効成分を含み、最も好ましくは10から750 mgの有効成分を含む。
【０２３５】
有効成分の質量への言及は、自己組織化構造またはその固体脂質粒子の質量ではなく、プラチナ(IV)ベースのプロドラッグの質量を指すことが理解されよう。
【０２３６】
治療法
本発明の別の態様は、腫瘍増殖の阻害のための本発明による自己組織化構造、固体脂質粒子またはその医薬組成物の使用に関する。 好ましい実施形態において、本発明の医薬組成物は、固形腫瘍および転移性腫瘍の増殖を阻害するために使用される。 特に好ましい態様において、本発明による医薬組成物は、膵臓癌、結腸癌、結腸直腸癌、胃癌、卵巣癌、肺癌、精巣癌、膀胱癌、子宮頸癌または乳癌に関連する固形腫瘍または転移性腫瘍の増殖を阻害するために使用される。
【０２３７】
一実施形態では、それを必要とする人に本発明による自己組織化構造を投与することを含む、個体の癌を治療または予防する方法が提供される。
【０２３８】
「治療」とは、一般的に、治療的治療と予防的または予防的措置の両方を指す。
【０２３９】
治療の目的または結果は、がん細胞の数を減らすことかもしれない。原発腫瘍のサイズを縮小する。末梢器官への癌細胞の浸潤を阻害する（すなわち、ある程度遅くし、好ましくは停止する）。腫瘍転移を阻害する（すなわち、ある程度遅くし、好ましくは停止させる）。腫瘍の成長をある程度阻害する。および/または障害に関連する症状の1つまたは複数をある程度緩和する。
【０２４０】
治療の有効性は、生存期間、疾患進行までの時間、応答速度（リソポンス-レイト：RR）、応答期間、および／または生活の質を評価することによって測定することができる。
【０２４１】
一実施形態では、この方法は、疾患の進行を遅らせるために特に有用である。
【０２４２】
一実施形態において、この方法は、全生存および無増悪生存を含む、ヒトの生存を延長するために特に有用である。
【０２４３】
一実施形態では、この方法は、治療に対する完全な反応を提供するために特に有用であり、それにより、治療に反応した癌のすべての徴候が消失した。これは必ずしも癌が治癒したことを意味するわけではない。
【０２４４】
一実施形態では、この方法は、治療に反応して、１つまたは複数の腫瘍または病変のサイズ、または体内の癌の程度が減少した治療に対する部分的反応を提供するために特に有用である。
【０２４５】
別の実施形態において、それを必要とする個体にインビボで活性薬物のプロドラッグを提供する方法が提供され、好ましくは、活性薬物は、プラチナベースの薬物であり、プロドラッグは、例えば、加水分解、酸化、還元によって生物変換を受ける。または、好ましくは望ましい作用部位（腫瘍など）での活性薬物への酵素的切断。プロドラッグは、活性薬物と比較した場合、全身毒性の低下、薬物動態および/または薬力学の改善、および体液中での安定性の改善という、より多くの特徴の1つを示す可能性がある。プロドラッグは、より高いペイロードの活性薬物の送達を可能にし、活性薬物を早期の不活性化から保護し、その結果、効力が増加し、全身毒性が減少する可能性がある。好ましくは、プロドラッグは、自己組織化構造の形態で提供される。より好ましくは、自己組織化構造は、リン脂質、コレステロール、グリセロール脂質、プロドラッグ両親媒性物質、疎水性薬物、およびそれらの組み合わせからなるグループから選択される追加の成分を含む。最も好ましくは、自己組織化構造は、リン脂質、コレステロール、およびそれらの組み合わせからなるグループから選択される追加の成分を含む。
【０２４６】
自己組織化構造の意図された投与形態は、そのバルク相として、それから誘導されたコロイド粒子として、または固体脂質粒子としてのいずれかであることが認識されるであろう。
【０２４７】
本発明による自己組織化構造、固体脂質粒子またはそれらの医薬組成物の投与計画は、化合物、自己組織化構造、コロイド粒子またはナノ粒子およびそれらの組成物の薬力学的特性などの既知の要因に応じて変化する。現在の発明、およびそれらの投与様式および経路、患者の年齢、性別、健康状態、病状、体重、症状の性質と程度、同時治療の種類、治療の頻度、腎臓、肝臓、心臓血管、その他の必要な患者の一般的な健康状態そのような治療の、そして標準的な臨床技術によって容易に決定することができる。
【０２４８】
本明細書において開示および定義される本発明は、テキストまたは図面から言及されるか、または明らかな二つ以上の個々の特徴のすべての代替的な組み合わせに及ぶことが理解されよう。 これらの異なる組み合わせの全ては、本発明の様々な代替態様を構成する。
【０２４９】
以下の実施例は、本発明を説明することを意図しているが、決して限定するものではない。
【０２５０】
材料：
すべての溶媒は分析グレードであり、Merck Australiaから購入した。 全ての試薬をSigma-Alrichから得た。 シスプラチン、カルボプラチンおよびオキサリプラチンは、Simagchem、中国から購入した。 脂肪酸およびアルコールは、Nucheck prep INC. （MN、アメリカ）購入した。 t-Boc-アミノ（ペグ）3-アルコールリンカーは、Leo Biochem（中国）から購入した。
【０２５１】
計装:
核磁気共鳴（NMR）: 1H NMRスペクトルは、特に明記しない限り、内部標準としてテトラメチルシラン((CH3)4Si、TMS)を使用して重水素化溶媒中でBrukerAC400に記録された。溶質濃度は、標準の5mmNMRチューブで約15mg /mLでした。スペクトルは、mNovaソフトウェアを使用して分析された。化学シフト値（δ）はppmで表され、結合定数はヘルツ単位のJ値で表された。
【０２５２】
高速液体クロマトグラフィー（HPLC）：分析用HPLCは、Phenomenex Gemini C18カラム（5μM、 4.6 X150 mm）およびAltech 3300蒸発光散乱（ELS）およびShimadzu UV-Vis（λ= 260nm）検出器を備えた600溶媒デリバリーシステムで構成されるWaters HPLC装置（Waters Corporation、ミルフォード、マサチューセッツ州、米国）で実施した。プロドラッグ両親媒性物質の分析用の移動相は、（A）50:50 水/アセトニトリルおよび（B）60:40 テトラヒドロフラン /アセトニトリルで構成されていた。
【０２５３】
フラッシュカラムクロマトグラフィー：プロドラッグ両親媒性物質の精製は、Reveleris(登録商標）iESフラッシュクロマトグラフィーシステム（Grace Division Discover Sciences、Deerfield、IL、USA）で、Reveleris(登録商標)C18 12または40g、および80gカラムを使用して行った。プロドラッグ両親媒性物質の分析用の移動相は、（バッファーA）水 /エタノール（90/10）、（バッファーB）エタノールで構成された。
【０２５４】
エレクトロスプレーイオン化質量分分析（ESI-MS）：エレクトロスプレーイオン化質量分析（ESI-MS）は、ESI界面を備えたFinnagan LCQアドバンテージMAXイオントラップ質量分析計（Thermo Electron Corporation，ＣA，ＵSA）を使って行った。 試料は、注射器ポンプまたはＬＣシステム付きオートサンプラー（Thermo Electron Corporation）を用いて注入した。 特に記載のない限り、移動相としてメタノールを使用した。
【０２５５】
物理化学的特性
示差走査熱量測定（DSC）：示差走査熱量測定（DSC）測定は、メトラーTSO 801ROサンプルロボット（メトラートレド、スイス）を備えたメトラートレドDSC822システムで実行された。サンプルは、4-8mgのサンプルを40μLのアルミニウムるつぼに量り入れて密封することにより調製した。サンプルを-130℃に冷却した後、2.5℃ /分の速度で300℃まで加熱した。
【０２５６】
DSCサーモグラムは、STAReソフトウェアパッケージ（Mettler Toledo、スイス）を使用して記録された。機器の校正にはインジウムを使用した。
【０２５７】
偏光光学顕微鏡法（POM）：偏光光学顕微鏡法（POM）に使用されるサンプルは、顕微鏡スライド上に少量のプロドラッグ両親媒性物質を置き、カバーガラスで覆うことによって調製された。カバースリップの端に水を置き、毛細管現象によってサンプルに流入させた。顕微鏡スライドをLinkamPE94ホットステージ（Linkam Scientific Instruments Ltd. Surrey、England）に配置し、室温と50℃の間で3℃ /分で加熱した。水と両親媒性物質の相互作用は、交差偏光レンズの存在下および非存在下で、OlympusGX51倒立光学顕微鏡（OlympusAustraliaPty）で観察された。画像はNikonDS-Ri-1カメラで撮影された。すべての画像は100倍の倍率で撮影された。
【０２５８】
動的光散乱（DLS）：分散液の粒子サイズ分布は、He-Neレーザー（4 mW、633 nm）を備えたMalvern Zetasizer（Nano ZS、Worcestershire、UK）を使用して分析した。すべての測定には、散乱角90°の使い捨て40 μLキュベットを使用した。サンプルを25℃で1分間平衡化した。粘度と屈折率の値は、すべての分散液でそれぞれ0.8872cPと1.330に設定された。サイズ分布は、強度と数で記録された。
【０２５９】
小角X線散乱（SAXS）：
両親媒性物質のバルク相およびリオトロピック相のSAXS分析は、Bruker NanoSTAR実験室SAXS装置（Brucker AXS、カールスルーエ、ドイツ）で実行された。
【０２６０】
平衡化されたリオトロピック相は、取り外し可能なボタンサンプルセルに配置された。分散液の分析には、マルチキャピラリーホルダーを使用した。ボタンセルとキャピラリーホルダーは、ペルチェヒーター・クーラーシステムで温度制御されたブロックセットアップに交換可能に適合する。 2D散乱画像は、従来の1D散乱プロットに対して放射状に平均化され、q値（Å-1）の関数として計算された。ここで、qは、式q =（4π/λ）sin（θ/2）を使用して計算された散乱ベクトルの長さである。ここで、λは波長、θは散乱角である。
【０２６１】
形成された中間相は、De Campo et al.、Langmuir、2004。20（13）、5254-5261によって説明されているように、反射則を使用してピークにインデックスを付けることによって決定された。エマルジョンやリポソームの小角X線散乱パターンは大きく広いピークを示すが、キュボソームやヘキソソームなどの高度に秩序化されたナノ構造粒子の液晶相は明確な鋭いピークを示す。ピークの相対位置（「間隔」）により、構造の対称性を解明できる。 2つの反射面間の面間距離（d）は、式d = (2π)/qを使用して計算できる。ここで、qはピークの絶対位置である。これにより、単位格子のサイズである格子定数（a）の計算が可能になる。
【０２６２】
細胞増殖および細胞毒性アッセイ：
細胞増殖と細胞毒性アッセイMTS(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium)アッセイによって異なる細胞株で行われた。 細胞を薬物 (フリードラッグ)またはプロドラッグナノ粒子で処理し、10％FBSを補充し、72時間インキュベートした培地中の異なる濃度で処理した。
【０２６３】
マウスにおけるヒト癌細胞異種移植:
皮下異種移植片は、2-3x106  CFPAC-1またはMIAPACA-2ヒト膵臓癌細胞株の培養物から細胞を移植することによって確立された。 六週齢の男性非肥満糖尿病／重症複合免疫不全（NOD/SCID）、または非肥満糖尿病／重症複合免疫不全-γ（NSG）マウスを、オーストラリアのパース動物研究センターから入手した。 これらのマウスは、シドニー大学のKolling Institute of Medical ResearchのKearns施設で、標準的な動物規制と施設の間を移動することを可能にする厳格な健康管理に従って、一週間にわたって順応させられた。 動物のケアとハウジングは、シドニー北部ローカル保健地区（NSLHD）動物ケア＆倫理委員会（ACEC）（プロトコル番号1011-015A）の制度上のガイドラインに従って実施された。
【０２６４】
腫瘍の成長は少なくとも週に2回測定されました。 腫瘍が約~40-100 mm3の場合、コントロールとゲムシタビンのみのグループには腹腔内注射（IP）を、シスプラチンのみとナノ粒子グループには静脈内（IV）注射を4週間、週2回投与しました。30日で各実験臓器および腫瘍を分析のために採取した。
【０２６５】
病理組織学:
組織サンプルは10％リン酸緩衝ホルマリンに固定され、パラフィンに埋め込まれた。 ホルマリン固定、パラフィン埋め込まれたセクションは、4μmの厚さのセクションをカットし、メイヤーのヘマトキシリンとエオシン（H＆E）で染色した。 免疫組織化学のために、セクションを特定の抗体とインキュベートし、次に製造業者のプロトコルに従ってDako Envision+System-HRP labelled polymer detection kit（DaKo）を使用し、MayerのヘマトキシリンおよびScottのbluingソリューションでカウンターステインした。 取り付け後、切片を光学顕微鏡下で観察した（ECLIPSE80i;Nikon）。
【０２６６】
実施例1：シス、シス、トランス-[PtCl2(NH3)2(ラウロイル)2]、CP-ビス（ラウロイル）の合成
この方法は、シスプラチン（IV）（オキソプラチン）の合成と脂肪アシルクロリドとの結合を含んでいた。
【０２６７】
シス、トランス、シス-[PtCl2 (OH)2(NH3)2]、オキソプラチンの合成
シスプラチン（2.00 g, (6.65 mmol）を丸底フラスコ内のミリポア水（50mL）に懸濁し、H2O2（70mL、30％v / v、10モル当量）を加え、溶液を1.5時間55℃で撹拌し、溶液を室温に戻し、冷蔵庫で一晩保存して目的の生成物を結晶化させた。沈殿物を真空濾過により回収し、冷水（5mL）、エタノール（5mL）およびジエチルエーテル（5mL）で洗浄した。その結果、オキソプラチンの淡黄色の粉末（2.14 g、6.41 mmol、95.9％）が得られる。195PtNMR（86 MHz、D2O）δ837。
【０２６８】
II.オキソプラチン（0.300 g、0.898 mmol）をDMF（6mL）とピリジン（2mL）の混合物に懸濁した。THF（3mL）中に２モル当量の塩化ラウロイル（０.40ｇ、１.82 mmol）を含む溶液を、オキソプラチン懸濁液に滴下して加え、45℃で２時間撹拌した。反応の完了時に、オフホワイトの塩酸塩を濾過により除去した。得られた溶液を減圧下で蒸発乾固させた。残留物をDCMに再溶解し、水で抽出して、未反応のオキソプラチンを除去した。 DCM層から白い沈殿物が分離された。これを濾過により収集し、望ましい生成物であると決定した。 CP-ビスラウロイルは白色粉末（0.560 g、89.3％）として現れた。1H NMR (400 MHz, THF-d8): δ 6.23 (m, 6H, -NH3); 2.24 (t, 4H, α-CH2-); 1.54 (m, 4H, β-CH2-); 1.21 - 1.40 (m, 32H, -CH2-); 0.89 (t, 6H, -CH3). 13C NMR (400 MHz, THF-d8): δ 183.14, 36.90, 32.94, 30.69, 30.62, 30.51, 30.37, 30.30, 30.18, 26.90 23.62 14.50. 195Pt-{1H NMR (86 MHz, THF-d8)}: δ 1146 ppm. ESI - MS (50/50 MeOH:THF) -ve mode m/z: 697.80 [M - H]-, 733.47 [M -H + Cl]-, 1395.27 [2M - 2H]-,  1431.07 [2M - H + Cl]-。
【０２６９】
実施例２：シス、シス、トランス-[PtCl2(NH3)2 (ミリストイル)２］、ＣＰ−ビス（ミリストイル）の合成
オキソプラチン（0.125 g、0.374 mmol）をDMF（6mL）とピリジン（2mL）の混合物に懸濁させた。THF（3mL）中に２モル当量の塩化ミリストイル（0.185ｇ、0.749 mmol）を含む溶液を、オキソプラチン懸濁液に滴下して加え、45℃で２時間撹拌した。反応の完了時に、オフホワイトの塩酸塩を濾過により除去した。得られた溶液を減圧下で乾燥するまで還元した。未反応の塩化ミリストイルを、ヘキサンで洗浄し、続いて濾過することにより除去して、望ましい化合物を単離した。化合物を精製するためにDCM /水抽出を行った。 DCM層から白い沈殿物が分離された。これを濾過により収集し、望ましい生成物であると決定した。 CP-ビス（ミリストイル）は塩化物塩白色粉末（0.182 g、64.4％）として現れた。 1H NMR（400 MHz、DMSO-d6）: δ, ppm 6.48 (m, 6H, NH3); 2.23 (t, 4H, α-CH2-); 1.54 (m, 4H, J = 6.84 Hz, β-CH2-); 1.20 - 1.32 (m, 40 H, CH2-); 0.85 (t, 6H, -CH3). 13C NMR (400 MHz, THF-d8): δ 181.17, 36.09, 35.94, 31.63, 29.44, 29.38, 29.31, 29.13, 29.07, 29.05, 28.93, 25.70, 22.34, 13.42. 195Pt-{1H NMR (86 MHz, THF-d8)}: δ 1218 ppm. ESI -MS (50/50 MeOH:THF) -ve mode m/z: 753.60 [M - H]-, 789.33 [M - H + Cl]-, 1507.47 [2M - 2H]-, 1543.33 [2M - 2H + Cl]-。
【０２７０】
実施例３：シス、シス、トランス-[PtCl2(NH3)2(パルミトイル)２］、ＣＰ−ビス（パルミトイル）の合成
オキソプラチン（0.125 g、0.374 mmol）をDMF（6mL）とピリジン（2mL）の混合物に懸濁させた。THF（3ｍＬ）中に２モル当量の塩化パルミトイル（0.207ｇ、0.751mmol）を含む溶液を、オキソプラチン懸濁液に滴下して加え、45℃で２時間撹拌した。反応の完了時に、オフホワイトの塩酸塩を濾過により除去した。得られた溶液を減圧下で乾燥するまで還元した。未反応のパルミトイルクロリドをヘキサンで洗浄し、続いて濾過することにより除去して、望ましい化合物を単離した。化合物を精製するためにDCM /水抽出を行った。 DCM層から白い沈殿物が分離された。これを濾過により収集し、望ましい生成物であると決定した。 CP-ビス（パルミトイル）は白色粉末（0.236 g、74.8％）として現れた。 1H NMR（400 MHz、THF-d8）：δ 6.19 (m, 6H, -NH3); 2.25 (t, 4H, α-CH2-); 1.55 (m, 4H, β-CH2-); 1.17 - 1.41 (m, 48 H, CH2-); 0.89 (t, 6H, J = 6.07 Hz, -CH3). 13C NMR (400 MHz, THF-d8): δ 183.26, 37.00, 33.05, 30.84, 30.79, 30.75, 30.63, 30.42, 27.02, 26.02, 25.82, 25.62, 25.39, 25.18, 23.74, 14.61. 195Pt-{1H NMR (86 MHz, THF-d8)}: δ 1198 ppm. ESI - MS (50/50 MeOH:THF) -ve mode m/z: 809.93 [M - H]-, 846.00 [M + Cl]-, 1619.87 [2M - 2H]-, 1655.67 [2M - 2H + Cl]-。
【０２７１】
実施例4：シス、シス、トランス-[PtCl2(NH3)2(オレオイル)2]、CP-ビス（オレオイル）の合成
オキソプラチン（0.166 g、0.497 mmol）をDMF（6mL）とピリジン（2mL）の混合物に懸濁させた。 ＴHF (3mL）中に２モル当量の塩化オレオイル（0.300g、0.997 mmol）を含む溶液を、オキソプラチン懸濁液に滴下して加え、室温で一晩撹拌した。 TEAを使用して、溶液のpHを約pH 9に維持した。反応の完了時に、オフホワイトの塩酸塩を濾過により除去した。得られた溶液を減圧下で乾燥するまで還元した。未反応の塩化オレオイルをヘキサンで洗浄し、続いて濾過することにより除去して、望ましい化合物を単離した。化合物を精製するためにDCM /水抽出を行った。 DCM層から黄色の沈殿物が分離された。これを濾過により収集し、望ましい生成物であると決定した。 CP-ビス（オレオイル）は黄色のワックス（0.167 g、38.9％）として現れた。 1H NMR（400 MHz、THF-d8）：δ 6.25 (m, 6H, -NH3); 5.33 (m, 4H, C=C); 2.24 (t, 4H, J = 7.54 Hz, α-CH2-); 2.03 (q, 8H, J = 5.64 Hz, -CH2-); 1.56 (m, 4H, J = 7.14 Hz, β-CH2-); 1.22 - 1.41 (m, 40H, -CH2-); 0.89 (t, 6H, J = 6.82 Hz, -CH3). 13C NMR (400 MHz, THF-d8): δ 183.24, 130.73, 130.63, 37.01, 33.03, 30.89, 30.66, 30.53, 30.45, 30.41, 28.24, 28.19, 27.01, 26.02, 25.82, 25.62, 23.73, 14.61. 195Pt-{1H NMR (86 MHz, THF-d8}): δ 1220 ppm. ESI - MS (50/50 MeOH:THF) -ve mode m/z: 861.13 [M - H]-, 896.91 [M -H + Cl]-, 1725.00 [2M - 2H]-, 1758.90 [2M - 2H + Cl]-。
【０２７２】
実施例5：シス、シス、トランス-[PtCl2(NH3)2(リノレオイル)2]、CP-ビス（リノレオイル）の合成
オキソプラチン（0.48 g、1.43 mmol）をDMF（6mL）とピリジン（2mL）の混合物に懸濁させた。THF(3mL)中に２モル当量の塩化リノレオイル（0.86ｇ、2.87mmol）を含む溶液を、オキソプラチン懸濁液に滴下して加え、室温で一晩撹拌した。 TEAを使用して、溶液のpHを約pH 9に維持した。反応の完了時に、オフホワイトの塩酸塩を濾過により除去した。得られた溶液を減圧下で乾燥するまで還元した。化合物は、移動相（A）50:50 H2O /アセトニトリルおよび（B）60:40 THF /アセトニトリルを使用してC18カラムで精製することにより単離した。 CP-ビス（リノレオイル）は黄色のワックス（0.20 g、16.2％）として現れた。 1H NMR（400 MHz、THF-d8）：δ6.20 (m, 6H, -NH3); 5.25 - 5.40 (m, 8H, C=C); 2.78 (t, 4H, -CH2-); 2.27 (t, 4H, α-CH2-); 2.06 (m, 8H, -CH2-); 1.54 (m, 4H, β-CH2-); 1.24 - 1.42 (m, 28H, -CH2-); 0.90 (t, 6H, J = 6.64 Hz, -CH3). 13C NMR (400 MHz, THF-d8): δ 183.28, 130.85, 128.99, 37.01, 32.62, 30.81, 30.52, 30.47, 30.39, 28.20, 27.01, 26.52, 26.02, 25.82, 23.63, 14.59. 195Pt-{1H NMR (86 MHz, THF-d8)}: δ1053 ppm. ESI - MS (50/50 MeOH:THF) -ve mode m/z: 857.73 [M -H]-, 893.40 [M -H + Cl]-, 1715.40 [2M - 2H]-, 1752.07 [2M - H + Cl]-。
【０２７３】
実施例６：シス、シス、トランス-[PtCl2(NH3)2(フィタノイル)２］、ＣＰ−ビス（フィタノイル）の合成
オキソプラチン（0.30 g、0.88 mmol）をDMF（6mL）とピリジン（2mL）の混合物に懸濁させた。THF (3mL) 中に２モル当量の塩化フィタノイル（0.40ｇ、1.80 mmol）を含む溶液を、オキソプラチン懸濁液に滴下して加え、45℃で２時間撹拌した。 TEAを使用して、溶液のpHを約pH 9に維持した。反応の完了時に、オフホワイトの塩酸塩を濾過により除去した。得られた溶液を減圧下で乾燥するまで還元した。化合物は、移動相（A）50:50 H2O /アセトニトリルおよび（B）60:40 THF /アセトニトリルを使用してC18カラムで精製することにより単離した。化合物は淡黄色のワックス（0.15 g、18.1％）として現れた。 1H NMR（400 MHz、THF-d8）：δ 6.24 (m, 6H, -NH3); 2.23 - 2.37 (m, 2H, α-CH-); 2.03 - 2.10 (m, 2H, -CH-); 1.89 (m, 2H J = 6.3 Hz, -CH-) 1.53 (m, 2H, J = 6.65 Hz, β-CH2-); 0.99 - 1.45 (m, 40H, -CH2-); 0.92 (d, 6H -CH2-); 0.88 (d, 12H, -CH2-); 0.86 (d, 12H, -CH3). 13C NMR (400 MHz, THF-d8): δ 182.85, 44.55, 38.56, 38.49, 38.45, 38.42, 38.32, 38.24, 33.86, 31.94, 29.99, 28.99, 25.90, 25.30, 25.50, 23.12, 20.25, 20.13. 195Pt-{1H NMR (86 MHz, THF-d8)}: δ 1044 ppm. ESI - MS (50/50 MeOH:THF) -ve mode m/z: 921.47 [M - 2H]-, 957.13 [M -H + Cl]-, 1844.27 [2M - 2H]-, 1879.67 [2M - 2H + Cl]-。
【０２７４】
実施例7：シス、シス、トランス-[PtCl2(NH3)2(オレオイルカーボネート)2]、CPビス（オレオイルカーボネート）の合成
オキソプラチン（0.150 g、0.449 mmol）をDMF（6mL）とピリジン（2mL）の混合物に懸濁させた。THF (3mL)中に２モル当量のクロロギ酸オレオイル（0.330、0.906 mmol）を含む溶液を、オキソプラチン溶液に滴下して加え、室温で一晩撹拌した。 TEAを使用して溶液のpHを9に維持した。反応の完了時に、副生成物であるピリジン塩酸塩の沈殿物を濾別した。得られた溶液を減圧下で乾燥するまで還元した。未反応のクロロギ酸オレオイルをヘキサンで洗浄し、続いて濾過することにより除去した。化合物を精製するためにDCM /水抽出を行った。 DCM層から白い沈殿物が分離された。これを濾過により収集し、望ましい生成物であると決定した。 CP-ビス（オレオイル-カーボネート）は黄色のワックス（0.127 g、32.6％）として現れた。 1H NMR（400 MHz、THF-d8）：δ 6.44 (m, 6H, -NH3); 5.33 (m, 4H, C=C); 3.94 (t, 4H, J = 6.64, α-CH2-); 2.03 (q, 8H, -CH2-); 1.55 (m, 4H, β-CH2-); 1.22 - 1.41 (m, 44H, -CH2-); 0.89 (t, 6H, -CH3). 13C NMR (400 MHz, THF-d8): δ 161.79, 130.69, 130.67, 33.03, 30.92, 30.88, 30.66, 30.54, 30.45, 30.41, 30.27, 28.21, 28.18, 27.10, 26.01, 25.81, 25.61, 23.73, 14.61. 195Pt-{1H NMR (86 MHz, THF-d8)}: δ 1251 ppm. ESI - MS (50/50 MeOH:THF) -ve mode m/z: 921.40 [M - 2H]-, 957.13 [M - H + Cl]-, 1843.20 [2M - 2H]-, 1879.00 [2M - 2H + Cl]-。
【０２７５】
実施例8 ：シス、シス、トランス-[PtCl2(NH3)2 （(Nα-コハク酸）-（Nε-オレオイル）-リジノイル-エタノールアミド）2]、CP-ビス（コハク酸-リシン（オレオイル）-エタノールアミド）の合成
表題の化合物の合成には、Nε-オレオイルリジノイル-エタノールアミドを調製するための5段階の合成と、オキサリプラチンコハク酸との反応が含まれていた。
【０２７６】
中間化合物の合成
実施例8.I：中間化合物シス、シス、トランス- [PtCl2(NH3)2(コハク酸)2]（CP-bis(コハク酸)）の合成
オキソプラチン（2.06g、6.17 mmol）および無水コハク酸（2.47g、25 mmol）をDMSO（6mL）に溶解し、70℃で1.5時間撹拌した。次に、反応混合物を室温に冷却し、溶液を凍結乾燥することによりDMSOを除去した。残留物をTHF中で沈殿させた。その後のTHF洗浄とそれに続く濾過により、黄色の固体が得られた。 （2.03g、61.7％の収率）。 1H NMR（400 MHz、DMSO-d6）：δ 12.12 (s, 2H, -OH), 6.44 (bs, 6H, -NH3), 2.45 (m, 4H, -CH2-), 2.34 (m, 4H -CH2-)。
【０２７７】
実施例8.II：中間化合物（Nα-Boc、Nε-Cbz）リジノイルエタノールアミドの合成
Nα-Boc-（Nε-Cbz）-リジン（5.00 g、13.14 mmol）をDMF（20mL）に溶解し、O-（ベンゾトリアゾール-1-イル）-N、N、N '、N'-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート(TBTU）（5.48 g、17.07 mmol）と反応させ、丸底フラスコ内で、室温で1時間撹拌する。次にエタノールアミン（1.61mL、26.36 mmol）を滴下し、トリエチルアミンを使用してpHを9.0に調整した。反応物を室温で２時間撹拌し続け、反応の進行をHPLCおよびESI/MSを使用してモニターした。生成物は、移動相（A）90:10 H2O / EtOHおよび（B）100％EtOHを使用してC18カラムで精製することにより単離された。化合物は白色粉末（3.35g、68.1％）として現れた。 1H NMR（400 MHz、CDCl3）：δ7.33 (s, 5H, CH), 6.60 (s, 1H, -NH), 5.25 (s, 1H, -NH), 5.07 (s, 2H, -CH2-), 4.93 (s, 1H, -OH), 3.99 (s, 1H, CH), 3.66 (t, 2H,-CH2-), 3.39 (dt, -CH2-), 3.18 (q, 2H), 1.79 (s, 1H, -NH), 1.69 (s, 2H, -CH2-), 1.50 (m, 2H, -CH2-), 1.41 (s, 9H, -CH3), 1.36 (t, 2H, -CH2-). ESI - MS (MeOH) +ve mode m/z: 446.05[M + H + Na]+。
【０２７８】
実施例8.III：中間化合物Nα-Boc-リジノイルエタノールアミドの合成
Nα-Boc-（Nε-Cbz）-リジノイルエタノールアミド（3.35 g、7.91 mmol）を水素化フラスコ内でメタノールとDCMに溶解した。10％活性化パラジウム炭素（0.34ｇ）をフラスコに加え、フラスコの内容物を、Parr水素化装置を使用して40 PSI水素雰囲気下で一晩振とうした。パラジウム/カーボンはセライトを使用してろ過した。次に、Nα-Boc-リジノイルエタノールアミドの溶液を蒸発乾固させて、白色粉末（2.04 g、88.9％）を得た。ESI - MS（MeOH）+ veモードm/z：289.80 [M + H] +。
【０２７９】
実施例8.IV：中間化合物Nα-アミノ-（Nε-オレオイル）-リジノイルエタノールアミドの合成
オレイン酸（2.00g、7.08 mmol）をDMF（10mL）に溶解し、TBTU（2.90g、9.03ミリモル）を加え、反応混合物を室温で1時間撹拌した。 Nα-Boc-リジノイルエタノールアミド（2.04 g、7.05 mmol）をDMFに溶解し、反応混合物に滴下した。反応pHを9.0に調整し、室温で2時間撹拌した。反応は、HPLCおよびESI / MSを使用してモニターした。化合物は、移動相（A）90:10 H2O / EtOHおよび（B）100％EtOHを使用してC18カラムで精製することにより単離された。次に、DCM：TFA 50/50の4mL溶液中で化合物を4℃で30分間撹拌することにより、Boc基を除去した。次に、溶液を減圧下で蒸発させ、さらに精製することなく将来のステップで使用した。化合物は薄茶色の油として現れた（1.71g、53.4％）。 1H NMR（400 MHz、CDCl3）：δ 8.28 (bs, 3H, -NH2, NH), 7.96 (s, 1H, -NH), 6.97 (bs, 1H, -OH), 5.31 (q, J = 5.4 Hz, 2H, C=C), 3.99 (s, 1H, -CH), 3.18 (m, 4H, -CH2-), 2.21 (t, 2H, -CH2-), 1.97 (m, 4H, -CH2-), 1.51 (m, 6H, -CH2-), 1.36 - 1.18 (m, 22H, -CH2-), 0.85 (t, J = 6.7 Hz, 3H, -CH3). ESI - MS (MeOH) +ve mode m/z: 576.07[M + H +Na]+, 1129.07 [2M + H + Na]+。
【０２８０】
実施例8.V：表題化合物の合成
シス、シス、トランス-[ PtCl2(NH3)2(コハク酸)2]（0.812 g、1.52 mmol）をDMF（20mL）に溶解し、続いてTBTU、（1.216 g、3.79 mmol）およびTEA（0.530mL、3.79 mmol）を添加した。反応混合物を室温で１時間撹拌した。次に、（Nα-アミノ-（Nε-オレオイル）-リジノイル）エタノールアミド（1.377 g、3.03 mmol）を溶液に加え、TEAを加えることによってpHを9.0に調整した。反応物を室温で２時間撹拌し、HPLCおよびESI/MSを使用してモニターした。溶媒を蒸発させ、残留物をエタノールに再溶解し、移動相（Ａ）90：10 Ｈ2O／ EtOHおよび（Ｂ）100％EtOHを使用してＣ18カラムで精製した。化合物は淡黄色のワックス（1.22 g、57.1％）として現れた。 1H NMR（400 MHz、DMSO-d6）：δ 7.95 (dd, 2H, - NH), 7.81 (q, 2H, -NH-), 7.71 (t, 2H, -NH-), 6.50 (s, 6H, NH3), 5.32 (m, 4H, C=C), 4.64 (m, 2H, -OH), 4.14 (m, 2H -CH), 3.37 (d, 4H, -CH2-), 3.11 (q, J = 5.7 Hz, 4H, -CH2-), 2.97 (q, J = 6.7 Hz, 4H, -CH2-), 2.46 (d, 4H, -CH2-), 2.33 (m, 4H, -CH2-), 1.98 (m, 12H, -CH2-), 1.61 (m, 4H, -CH2-) 1.46 (m, 8H, -CH2-), 1.39 - 1.13 (m, 44H, -CH2-), 0.85 (t, 6H, -CH3). 13C NMR (101 MHz, THF-d8) δ 182.16, 174.27, 173.83, 173.74, 130.73, 130.65, 68.14, 61.98, 54.67, 43.25, 39.84, 37.17, 37.05, 33.04, 30.97, 30.90, 30.68, 30.62, 30.58, 30.55, 30.46, 30.43, 28.27, 28.22, 26.02, 25.89, 25.82, 23.74, 14.62. 195Pt-NMR (86 MHz, THF-d8): δ 1219 ppm.  ESI -MS (MeOH) +ve mode m/z: 1445.92[M + H +Na]+, 423.63 [M + H]+ 。
【０２８１】
実施例9：シス、シス、トランス- [PtCl2(NH3)2-（コハク酸-トリエチレングリコール-オレオイル)2]、CP-ビス（コハク酸-アミノ-ペグ3-オレオイル）の合成
表題の化合物は、アミノ-トリエチレングリコール-オレオイルを製造するための3段階の合成およびオキサリプラチンコハク酸との反応を含んだ。
【０２８２】
実施例9.I：中間化合物オレオイルクロリドの合成
オレイン酸（5.5g、19.57 mmol）を30mLのDCMに溶解し、氷浴で冷却した。塩化オキサリル（5mL、58.7 mmol）を溶液に30分間滴下した。反応混合物を4℃でさらに30分間撹拌し、次に室温に戻し、１時間撹拌し続けた。ロータリーエバポレーターを使用して減圧下で溶媒および過剰の塩化オキサリルを除去し、残留物を追加のDCMで繰り返し共蒸発させた。得られた油をさらに精製することなくさらなる反応に使用した。
【０２８３】
実施例9.II：中間化合物アミノ-トリエチレングリコール-オレオイル（オレイル-ペグ3-NH2）の合成
塩化オレオイル（2.6g、8.66 mmol）を20mLのDCMに溶解し、O-（2-Boc-アミノ）エチルO'-ジエチレングリコール（2g、8.66 mmol）の10mLのDCM溶液に10分かけて滴下した。最小1mLのTEAを添加して反応混合物のpHを8-9に調整し、室温で1時間撹拌した。反応の完了は、MSおよびHPLCによって確認された。ロータリーエバポレーターを使用して溶媒を減圧下で蒸発させた後、BOC基を脱保護した。油性残留物を10mLのDCMに再溶解し、氷浴で冷却した。トリフルオロ酢酸（10mL）を加え、反応混合物を4℃で1時間撹拌した。溶媒とTFAを蒸発乾固し、残留物をエタノールに再溶解し、移動相（A）90:10 H2O / EtOHおよび（B）100％EtOHを使用してRevelerisC18カラムで精製した。化合物は淡黄色の油として現れた（3.0g、収率：65.2％）。 ESI- MS（MeOH）+ veモードm / z：414.22 [M + H]。
【０２８４】
実施例9.III：表題化合物の合成
実施例８.Iに記載のように合成されたCP−コハク酸塩（930ｍｇ、1.748 mmol）を2mLのDMFに溶解した。 TBTU（1.4 g、4.37 mmol）およびTEA（353.76 mg、3.496 mmol）を溶液に加え、室温で1時間撹拌した。 5mLのDCMに溶解したオレオイル-ペグ3-NH2（1.59 g、3.846 mmol）を反応混合物に添加し、1.1mLのTEAを添加してpHを調整した。反応混合物を30分間撹拌した。溶媒を蒸発乾固し、残留物をエタノールに再溶解し、移動相（A）90:10 H2O / EtOHおよび（B）100％EtOHを使用してReveleris C18カラムで精製し、1.3gの純粋な表題化合物を生成した。総収量は27.3％。
【０２８５】
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.85 (2H, -NH-CO),  6.50 (s, 6H, NH3), 5.32 (m, 4H, C=C), 4.2 (t, 4H -CH2-OCO), 3.55 (t, (t, 4H, O-CH2-CH2-O-CO), 3.49 (q, 8H, -CH2-O), 3.37 (t, 4H, -CH2-O), 3.15 (t, 4H, -CH2-NH),  2.4 (t, 4H, α-CH2-), 2.26 (t, 8H, -CH2-CO), 1.98 (m, 8H, -CH2-), 1.61 (m, 4H, -CH2-) 1.46 (m, 4H, β-CH2-), 1.39 - 1.13 (m, 40H, -CH2-), 0.85 (t, 6H, -CH3). 13C NMR (101 MHz, THF-d8):δ 182.16, 173.49, 172.07, 130.26, 70.29, 70.14, 69.72, 68.94, 63.63, 40.76, 40.55, 40.34, 40.13, 39.92, 39.51, 34.01, 31.94, 31.90, 29.71, 29.68, 29.45, 29.30, 29.20, 29.17, 29.08, 29.02, 27.18, 25.04, 22.7, 14.62. 195Pt (THF-d8): δ 1219 ppm.  ESI - MS (MeOH) -ve mode m/z: 1323.27[M - H], 1358.97 [M -H+Cl]。
【０２８６】
実施例10 : シス、シス、トランス-[PtCl2(NH3)2-（トリエチレングリコール-オレオイル）]、CP-ペグ3-モノオレオイルおよびシス、シス、トランス-[PtCl2(NH3)2-（トリエチレングリコール-オレオイル）2]、CP-ビス（ペグ3-オレオイル）の合成
表題の化合物は、トリエチレングリコール-オレオイルを調製するための4段階の合成およびオキソプラチンとの反応を含んだ。
【０２８７】
実施例10.I、II：中間化合物オレオイル-ペグ3の合成
オレイン酸（5.0g、17.8 mmol）を30mLのDCMに溶解し、氷浴で冷却した。塩化オキサリル（5mL、49.6 mmol）を溶液に30分間滴下した。反応混合物を4℃でさらに30分間撹拌し、次に室温に戻し、１時間撹拌し続けた。ロータリーエバポレーターを使用して減圧下で溶媒および過剰の塩化オキサリルを除去し、残留物を追加のDCMで繰り返し共蒸発させた。得られた油をさらに精製することなくさらなる反応に使用した。
【０２８８】
塩化オレオイル（2.67g、8.9 mmol）を20mLのDCMに溶解し、トリエチレングリコール（5.34g、35.6 mmol）の10mLのDCM溶液に10分間かけて滴下した。1.28mLのTEAを添加して、反応混合物のpHを8-9に調整し、室温で1時間撹拌した。反応の完了は、MSおよびHPLCによって確認された。ロータリーエバポレーターを使用して溶媒を減圧下で蒸発させ、残留物をエタノールに再溶解し、移動相（A）90:10 H2O / EtOHおよび（B）100％EtOHを使用してRevelerisC18カラムで精製した。化合物は透明な油として現れた（3.0g、収率：81.5％）。 ESI- MS（MeOH）+ veモードm/z：415.00 [M + H]。
【０２８９】
実施例10.III：中間化合物オレオイル-ペグ３-クロロホルメートの合成
10mLのDCMに溶解したオレオイル-ペグ3（1.0g、2.4 mmol）に、トリホスゲン（0.237g、0.8 mmol）を加えた。無水ピリジン（0.2mL、2.4 mmol）を氷浴上の混合溶液に加え、反応混合物を30分間撹拌し、続いて室温で2時間撹拌した。反応混合物を蒸発乾固させ、残留物を次のステップの反応に使用した。
【０２９０】
実施例10.IV：表題化合物の合成
オキソプラチン（1.08g、3.07 mmol）を無水DMF（8 mL）と無水ピリジン（3mL）の溶液に溶解した。 10mLのDCMに溶解した前のステップからのオレオイル-ペグ３-クロロホルメート（1.1g、2.4mmol）を氷上の反応混合物に加えた。反応は氷中で30分間、室温で2時間続けた。沈殿物を除去し、濾液を減圧下で蒸発乾固し、残留物をエタノールに再溶解し、移動相（A）90:10 H2O / EtOHおよび（B）100％EtOHを使用してRevelerisC18カラムで精製して得た。 270mgのCP-モノ（ペグ３-オレオイル）および60mgのCP-ビス（ペグ３-オレオイル）。両方のサンプルは透明な黄色の油として現れ、収率：15％。 ESI- MS（MeOH）-veモードm / z：773.00 [M-H]、モノ（ペグ３-オレオイル）の場合は808.87 [M - H + Cl]、1213.27 [M-H]、および1248.93 [M - H + Cl]ビス（ペグ３-オレオイル）の場合。
【０２９１】
CP-モノ（ペグ３-オレオイル）の1H NMR (400 MHz,CDCl3): δ 6.20 (s, 6H, NH3), 5.32 (m, 2H, C=C), 4.22 (t, 2H O-CO-OCH2), 4.18 (t, 2H CO-OCH2),  3.55-3.75 (m, 8H, O-CH2-CH2), 2.4 (t, 2H, α-CH2-), 1.98 (m, 4H, -CH2-CH), 1.61 (m, 2H, β-CH2-) 1.46 (m, 4H, -CH2-), 1.39 - 1.2 (m, 20H, -CH2-), 0.85 (t, 3H, -CH3).
CP-ビス（ペグ３-オレオイル）（400 MHz、CDCl3）の1H NMR：δ 6.20 (s, 6H, NH3), 5.32 (m, 4H, C=C), 4.22 (t, 4H O-CO-OCH2), 4.18 (t, 2H CO-OCH2),  3.55-3.75 (m, 8H, O-CH2-CH2), 2.4 (t, 2H, α-CH2-), 1.98 (m, 8H, -CH2-), 1.61 (m, 4H, β-CH2-) 1.46 (m, 4H, -CH2-), 1.39 - 1.2 (m, 40H, -CH2-), 0.85 (t, 6H, -CH3). 195Pt-{1H NMR (CDCl3)}: δ 1048 ppm。
【０２９２】
実施例11：シス、シス、トランス-[PtCl2(NH3)2-（コハク酸-トリエチレングリコール-オレオイル）2]、CP-ビス（コハク酸-ペグ３-オレオイル）の合成
表題の化合物は、オレオイル-ペグ３-コハク酸塩を調製するための4段階の合成およびオキソプラチンとの反応を含んだ。
【０２９３】
実施例11.I、II：中間化合物オレオイル-ペグ３-コハク酸塩の合成
実施例10.Iに記載のオレオイル-ペグ３（２.0ｇ、4.82 mmol）を50mLのアセトニトリルに溶解し、50mLのアセトン中の無水コハク酸（4.82 g 、48.22 mmol）に加えた。 TEAを反応混合物に加えてpHを8-9に維持した。反応混合物を室温で5時間撹拌した。溶媒を蒸発乾固させ、残留物をDCMに再溶解し、水で抽出した。 DCM相を真水で3回抽出した。 DCM相を蒸発乾固し、残留物をエタノールに再溶解し、移動相（A）90:10 H2O / EtOHおよび（B）100％EtOHを使用してReveleris C18カラムで精製し、2.3gの純粋なサンプルを得た。 ESI- MS（MeOH）+ veモードm / z：515 [M + H]、537 [M + H + Na]。
【０２９４】
実施例11.III：中間化合物オレオイル-ペグ３-コハク酸クロリドの合成
20mLのDCM中のオレオイル-ペグ３-コハク酸（1g、1.95 mmol）に塩化オキサリル（0.99g、7.8 mmol）を加え、反応混合物を室温で4時間撹拌した。ロータリーエバポレーターを使用して、過剰の塩化オキサリルを減圧下で蒸発させた。残留物をさらに精製することなく次のステップの反応に使用した。
【０２９５】
実施例11.IV：表題化合物の合成
ＤＭＦ（10mL）とピリジン（3mL）の混合物に懸濁されたオキソプラチン（０.15ｇ、0.44 mmol）に、5mLのTHFに溶解された０.48ｇのオレオイル−ペグ３−コハク酸クロリドの溶液を滴下して加えた。 0.2mLのDIEAを加えることにより、反応pHを8-9に調整し、反応混合物を45℃で2時間撹拌した。沈殿物を濾過し、濾液をロータリーエバポレーターを使用して減圧下で蒸発乾固させた。残留物を2mLのエタノールに再溶解し、移動相（A）90:10 H2O / EtOHおよび（B）100％EtOHを使用してReveleris C18カラムで精製し、210 mgの淡黄色油（36％収率）を得た。 、ESI- MS（MeOH）-veモードm / z：1325.13 [M-H]、1360 [M + H + Cl]。 CP-ビス（コハク酸-ペグ３-オレオイル）、（400 MHz、CDCl3）の1H NMR：δ 5.80 (s, 6H, NH3), 5.32 (m, 4H, C=C), 4.22 (t, 4H O-CO-OCH2), 3.55-3.75 (m, 8H, O-CH2-CH2), 2.71 (t, ,8H, CH2-C=O), 2.32 (t, 2H, α-CH2-) , 1.98 (m, 8H, -CH2-CH), 1.61 (m, 4H, β-CH2-) 1.46 (m, 4H, -CH2-), 1.39 - 1.2 (m, 40H, -CH2-), 0.85 (t, 6H, -CH3). 195Pt-NMR (CDCl3): δ 1048 ppm。
【０２９６】
実施例12：シス、トランス[Pt（（1R、2R）-1,2シクロヘキサンジアミン-N、N '）（シュウ酸塩（2-）O、O'）（ミリストイル）2]、オキサリプラチン-ビス（ミリストイル）の合成
この方法には、オキサリプラチン(IV)の合成と、塩化ミリストイルとの結合が含まれていた。
【０２９７】
実施例12.I：中間化合物シス、トランス[Pt（（1R、2R）-1,2シクロヘキサンジアミン-N、N '）（シュウ酸塩（2-）O、O'）（OH）2]、オキサリプラチン(IV)の合成
オキサリプラチン（1.00 g、2.51 mmol）を丸底フラスコ内のミリポア水（25mL）に懸濁した。 H2O2（35mL、30％v / v、10モル当量）を加え、溶液を55℃ で5時間暗所で撹拌した。溶液を室温に戻し、減圧下で蒸発させた。残留溶液は、移動相（A）H2Oおよび（B）H2O / EtOH（50/50）を使用してRevelerisC18カラムで精製した。純粋な画分を蒸発乾固させて、オキサリプラチン(IV)の白色沈殿物（0.8g、収率：73％）を得た。 1H NMR（400 MHz、DMSO-d6）：δ 7.62 (b, 2H, NH2) 6.8 (b, 2H, -NH2); 2.52 (m, 2, -CH); 2.0 (t, 2H, -CH2-); 1.55 (m, 2H, -CH2-); 1.47 (m, 2H, -CH2-); 1.2 (m, 2H, -CH2-). ESI - MS (MeOH) -ve mode m/z: 431.30 [M-H], 862.73 [2M-H]。
【０２９８】
実施例12.II：表題化合物の合成
オキサリプラチン(IV)(0.210 g、0.49 mmol）を無水DMF（2mL）とピリジン（1mL）の混合物に懸濁した。 DCM（2mL）に塩化ミリストイル（0.256 g、1.03 mmol）を含む溶液を懸濁液に滴下し、45℃で2時間撹拌した。反応の完了時に、得られた溶液を減圧下で蒸発乾固させた。残留物にヘキサンを加え、室温で10分間撹拌した。白色の沈殿物が形成され、ヘキサンを遠心分離およびデカントによって除去した。残留物をＤＣＭに溶解し、水で抽出して、未反応のオキサリプラチン（IV）を除去した。 ＤＣＭ層を蒸発乾固させて白色の残留物を得て、望ましい生成物であると決定した。オキサリプラチンビス-ミリストイルは白色粉末として現れた（0.390g、収率：94％）。 1H NMR（400 MHz、DMSO-d6）: 8.42 (b, 4H, -NH2); ,  8.21 (b, 4H, -NH2); 2.59 (m, 2, -CH-NH2); 2.09-2.33 (m, 6H, α-CH2-, cyclohexane -CH2-), 1.36-,1.60 (m, 8H, -CH2-, β--CH2-); 1.2-1.36 (m, 40H, -CH2-); 1.15 (m, 2H, -CH2-). 0.89 (t, 6H, -CH3). 13 C NMR (400M MHz, DMSO-d6): 180.8, 174.3, 174.1, 163.0, 61.0, 35.7, 33.5, 31.2, 28.9, 28.6, 28.4. 25.2, 24.3, 22.0,14.0. ESI - MS (MeOH) -ve mode m/z: 850.10 [M - H]-, 1702.12 [2M -H]-。
【０２９９】
実施例13：シス、トランス[Pt（（1R、2R）-1,2シクロヘキサンジアミン-N、N '）（シュウ酸塩（2-）O、O'）（コハク酸アミドトリエチレングリコール-ミリストイル）2]、オキサリプラチン-ビス（コハク酸-ペグ３-ミリストイル）の合成
標題の化合物は、アミノ-トリエチレングリコール-ミリストイルを作り、オキサリプラチンビス-コハク酸と反応させる3段階の合成を含んだ。
【０３００】
実施例13.I：中間化合物アミノトリエチレングリコール-ミリストイル（アミノ-ペグ３-ミリストイル）の合成
塩化ミリストイル（2.18g、4.42 mmol）を4mLのDCMに溶解し、O-（2-Boc-アミノ）エチルO'-ジエチレングリコール（2g、8.66 mmol）の12mLのDCM溶液に10分間滴下した。 0.60mL TEAを添加して反応混合物のpHを8-9に調整し、室温で1時間撹拌した。反応の完了は、MSおよHPLCによって確認された。ロータリーエバポレーターを使用して、溶媒を減圧下で蒸発させた。油性残留物を12mLのDCMに再溶解し、氷浴で冷却した。トリフルオロ酢酸（12mL）を加え、反応混合物を4℃で1時間撹拌した。溶媒およびTFAを蒸発乾固させた。残留物をエタノール/水に再溶解し、移動相（A）90:10 H2O / EtOHおよび（B）100％EtOHを使用してRevelerisC18カラムで精製した。化合物は透明な油として現れた（2.0g、収率：69.4％）。 1H NMR（400 MHz、CDCl3）：δ 4.62 (bs, 2H, -NH2); 4.31(t, 4H, -CH2-COO); 4.31(t, 2H, -CH2-O); 3.77 (t, 2H, -CH2-O); 3.67 (t, 3H, -CH2-O); 3.66 (t, 2H, -CH2-O); 3.19 (t, 2H, -CH2-NH2); 2.32 (t, 2H, 2.32 (t, 2H, α-CH2-); 1.60  (m, 2H, β-CH2-); 1.18 - 1.35 (m, 20H, -CH2-); 0.88 (t, 6H, -CH3).13C NMR (400 MHz, CDCl3): δ 183.14, 70.7, 69.8, 69.6, 68.8, 65.7, 62.5, 38.7, 33.7, 31.4, 29.2, 29.0, 28.8, 28.6, 24.4, 22.2,15.  ESI- MS (MeOH) +ve mode m/z: 360 [M + H]。
【０３０１】
実施例13.II：中間化合物シス、トランス、[Pt（（1R、2R）-1,2シクロヘキサンジアミン-N、N '）（シュウ酸塩（2-）O、O'）（コハク酸）2]、オキサリプラチン(IV)-ビス（コハク酸）の合成
オキサリプラチン(IV)（0.62g、1.43 mmol）および無水コハク酸（0.58g、5.72 mmol）をDMSO（3mL）に溶解し、75℃で1時間撹拌した。次に、反応混合物を室温に冷却し、溶液を凍結乾燥することにより、DMSOの容量を1mLに減らした。残留物に3mLのエタノール/水50/50を添加し、移動相（A）100％H2Oおよび（B）50/50（EtOH /水）を使用してRevelerisC18カラムで精製した。純粋な画分を収集し、蒸発乾固させて、純粋なサンプルを得た。 （0.36g、収率：40％）。1H NMR（400 MHz、DMSO-d6）：δ 8.38 (b, 2H, -NH2) 8.17 (b, 2H, -NH2); 2.47-2.65 (t, 6H, -CH2-C=O, -CH-NH2); 2.44 (t, 4H, -CH2-C=O); 2.12 (t, 2H, -CH2-); 1.53 (m, 2H, -CH2-); 1.42 (m, 2H, -CH2-); 1.18 (m, 2H, -CH2-). 13C NMR (400M MHz, DMSO-d6): 179.6, 175.5, 173.55,163.3, 60.7, 30.7, 30.3, 29.5, 28.8, 23.4. ESI - MS (MeOH) -ve mode m/z: 629.80[M - H]-, 1260.77 [2M - H]-。
【０３０２】
実施例13.III：表題化合物の合成
オキサリプラチン(IV)-ビス（コハク酸）、0.34 g（0.54 mmol）を1ｍLの無水DMFに溶解した。 TBTU（0.433 g、1.35 mmol）およびTEA（0.19mL、1.35 mmol）を反応混合物に加え、30分間撹拌した。アミノペグ3-ミリストイル（0.426 g、1.31 mmol）を4mLのDCMに溶解し、反応溶液に滴下した。 0.3mLのTEAを添加して反応混合物のpHを8-9に調整し、室温で1時間撹拌した。反応の完了は、MSおよびHPLCによって確認された。ロータリーエバポレーターを使用して、溶媒を減圧下で蒸発させた。油性残留物を5mLエタノール/水50/50に再溶解し、移動相（A）90:10 H2O / EtOHおよび（B）100％EtOHを使用してRevelerisC18カラムで精製した。化合物は透明なワックス状物質として現れた（0.212g、収率：％30）。 1H NMR（400 MHz、DMSO-d6）：δ 8.39 (b, 2H, -NH2); 8.17 (b, 2H, -NH2); 7.95 (t, 2H, C=O-NH), 4.15 (t, 4H, CH2-O-C=O); 3.62 (t, 4H, -CH2-O-) 3.55 (t, 4H, -CH2-O); 3.54 (t, 4H, -CH2-O); 3.42 (t, 4H, -CH2-CONH); 3.21 (m, 4H, -CH2-); 2.72 (m, 2H, -CH2-); 2.47-2.52 (m, 8H, -CH2-C=O); 2.32 (m, 6H, α-CH2-, -CH2-); 2.1 (m, 2H, -CH2); 1.54 (m, 4H, β-CH2-); 1.42 (m, 2H, -CH2-); 1.2-1.36 (m, 40H, -CH2-); 1.21 ( m, 2H, -CH2); 0.89 (t, 6H, -CH3). 13C NMR (400M MHz, DMSO-d6): 180.0, 172.8, 171.2, 163.1, 69.5, 69.4, 69.0, 68.2, 62.9, 33.3, 31.2, 30.7, 28.9, 28.8, 28.6, 28.3, 24.5, 21.9, 14.0. ESI- MS (MeOH) -ve mode m/z: 1312.24 [M - H]。
【０３０３】
実施例１４：シス、トランス［（ジアミン）（１，１−シクロブタンジカルボキシレイト）（ビスミリストイル）］、カルボプラチン−ビスミリストイルの合成
この方法には、カルボプラチン(IV)の合成および、塩化ミリストイルとの結合が含まれた。
【０３０４】
実施例14.I：中間化合物シス、トランス[Pt（ジアミン）（1,1-シクロブタンジカルボキシレイト）（OH）2]、カルボプラチン(IV)の合成
カルボプラチン（1.00 g、2.68 mmol）を丸底フラスコ内のミリポア水（25mL）に懸濁した。 H2O2（35mL、30％v / v、10モル当量）を加え、溶液を55℃で1.5時間撹拌した。溶液を室温に戻し、減圧下で蒸発させた。カルボプラチン（IV）の白い沈殿物が形成された。さらに水を加えて沈殿物を洗浄し、4℃で一晩放置した。沈殿物を遠心分離により回収し、乾燥させてカルボプラチン（IV）（1g、収率91.4％）を得た。 1HNMR（400 MHz、D2O）：δ 2.53 (t, 4H, -CH2-), 1.90 (m, 4H, -CH2-). 13C NMR (400 MHz, D2O): δ 180.8, 55.9, 32.2, 15.8.ESI - MS (MeOH) -ve m/z:404.80 [M - H]-, 808.70 (2M-2H)。
【０３０５】
実施例14.II：表題化合物の合成
カルボプラチン(IV)（0.3 g、0.74 mmol）を無水DMF（3mL）とピリジン（1.5mL）の混合物に懸濁した。DCM（2mL）中に塩化ミリストイル（０.34ｇ、１.48 mmol）を含む溶液を懸濁液に滴下して加え、45℃で２時間撹拌した。反応の完了時に、得られた溶液を減圧下で蒸発乾固させた。残留物にヘキサンを加え、室温で10分間撹拌した。白色の沈殿物が形成され、これを遠心分離およびヘキサンのデカントによって除去した。残留物をDCMに溶解し、水で抽出して、未反応のカルボプラチン（IV）を除去した。 DCM層を蒸発乾固させて白色の残留物を得て、望ましい生成物であると確認された。カルボプラチンビス-ミリストイルは白色粉末（0.55 g、89％）として現れた。 1H NMR（400 MHz、DMSO-d6）：δ 5.97 (m, 6H, -NH3); 2.57 (m, 4H, -CH2); 1.84 (m, 2H, -CH2-); 1.45 (m, 4H, β-CH2-); 1.2-1.35 (m, 40H, -CH2-); 0.89 (t, 6H, -CH3). ESI - MS (MeOH) -ve mode m/z: 824.10 [M - H]-, 1648.90 [2M - H]-。
【０３０６】
実施例15：シス、トランス［Pt（ジアミン）（1,1-シクロブタンジカルボキシレイト）（コハク酸アミド−トリエチレングリコール−ミリストイル）２］、カルボプラチン−ビス（コハク酸-ペグ３−ミリストイル）の合成
標題の化合物は、アミノ-トリエチレングリコール-ミリストイルを作り、カルボプラチンビス-コハク酸と反応させる3段階の合成を含んだ。
【０３０７】
実施例15.I：中間化合物アミノ-トリエチレングリコール-ミリストイル（アミノ-ペグ３-ミリストイル）の合成
この化合物の合成は、実施例13.Iに記載されている。
【０３０８】
実施例15.II：中間化合物シス、トランス [Pt（ジアミン）（1,1-シクロブタンジカルボキシレイト）（コハク酸）2]、カルボプラチン(IV)-ビス（コハク酸）の合成
カルボプラチン（IV）（0.62g、1.43 mmol）および無水コハク酸（0.58g、5.72 mmol）をDMSO（3mL）に溶解し、75℃で1時間撹拌した。次に、反応混合物を室温に冷却し、溶液を凍結乾燥することにより、DMSOの容量を1mLに減らした。残留物に3mLのエタノール/水50/50を添加し、移動相（A）100％H2Oおよび（B）50/50（EtOH /水）を使用してRevelerisC18カラムで精製した。純粋な画分を収集し、蒸発乾固させて、純粋なサンプルを得た。 （0.42 g、収率; 50％）。 1H NMR（400 MHz、DMSO-d6）：δ 6.35 (m, 6H, NH3); 2.46-2.59 (m, 8H, CH2-C=O, -CH2-); 2.38 (m, 4H, CH2-C=O), 1.84 (m, 2H, -CH2-). 13C NMR (400M MHz, DMSO-d6): 178.5, 176.1, 173.3, 55.6, 31.1, 29.9, 29.5, 15.6. ESI - MS (MeOH) -ve mode m/z: 603.76 [M - H]-, 1208.65 [2M - H]-, 1813.49 [3M - H]。
【０３０９】
実施例15.III：表題化合物の合成
カルボプラチン(IV)-ビス（コハク酸）0.35 g（0.58 mmol）を3mLの無水DMFに溶解した。 TBTU（0.453 g、1.45 mmol）およびTEA（0.2mL）を反応混合物に加え、30分間撹拌した。アミノペグ3-ミリストイル（0.426 g、1.27 mmol）を4mLのDCMに溶解し、反応溶液に滴下した。 0.4mL TEAを添加して反応混合物のpHを8-9に調整し、室温で1時間撹拌した。反応の完了は、MSおよびHPLCによって確認された。ロータリーエバポレーターを使用して、溶媒を減圧下で蒸発させた。油性残留物を5mLエタノール/水50/50に再溶解し、移動相（A）90:10 H2O / EtOHおよび（B）100％EtOHを使用してRevelerisC18カラムで精製した。化合物は透明なワックス状物質として現れた（0.170g、収率：％22）。 1H NMR（400 MHz、DMSO-d6）：δ 7.92 (t, 2H, O=C-NH); 6.35 (m, 6H, -NH3); 4.15 (t, 4H, CH2-O-C=O); 3.61 (t, 4H, CH2-O-) 3.54 (m, 4H, CH2-O); 3.53 (m, 4H, CH2-O); 3.41 (t, 4H, CH2-O); 3.20 (m, 4H, -CH2-NH-C=O); 2.43-2.59 (m, 8H, -CH2-C=O, CH2); 2.30 (m, 8H, -CH2-C=O, α-CH2 ); 1.83 (m, 2H, -CH2-); 1.54 (m, 4H, β-CH2); 1.2-1.35 (m, 40H, -CH2-); 0.88 (t, 6H, -CH3). 13C NMR (400M MHz, DMSO-d6): 178.8, 175.6, 170.3, 169.7, 69.6, 69.4, 68.9, 68.2, 62.90, 38.4, 32.9, 31.2, 28.9, 28.7, 28.6, 28.3, 25.0, 22.0, 14.3. ESI- MS (MeOH) -ve mode m/z: 1287.16 [M - H]。
【０３１０】
例16：CP両親媒性物質のDSC
DSCを使用して、さまざまなシスプラチンプロドラッグ両親媒性物質の相転移に関連する温度を測定した（図3）。
【０３１１】
遷移温度は、吸熱のピーク最小値から得られた（表2）。エンタルピーは、遷移ピークの積分によって得られた。 CP両親媒性物質のDSCサーモグラムは、明確な融点を示さなかった。サンプルの大部分は、堅く完全に伸びた密に詰まった結晶から無秩序な液晶流体鎖への鎖の変換に関連する吸熱転移温度を持っていた。この吸熱ピークは、冷却と加熱のサイクルを繰り返した後に再び観察され、劣化とは対照的に、状態の可逆的な相転移を示唆している。別の吸熱または発熱転移はより高い温度で観察され、サンプルの劣化の原因であった。 これらのピークは冷却および熱サイクルを繰り返した後に再び観察されず，転移が両親媒性物質の分解温度に対応することを示した。、この現象は、目視観察および熱重量分析によっても確認された（図示せず）。 CP（IV）と疎水性アシル鎖の間にスペーサーのないすべてのサンプルは固体の結晶性化合物であったが、スペーサーのある両親媒性物質はワックス状または油性の材料を形成した。
【０３１２】
【表１】
2021527675.tif 000033
【０３１３】
自己組織化挙動のデモンストレーション
例17：偏光光学顕微鏡（POM）とSAXSを使用したCPプロドラッグ両親媒性物質の中間相挙動の分析
リオトロピック中相の形成は、プロドラッグ両親媒性物質と水との相互作用に基づいている。プロドラッグ両親媒性物質の液晶または結晶構造を調べるために偏光光学顕微鏡を用いた。この方法は、両親媒性物質の形態学的変化を観察し、水との水和時に形成される中間相の構造変化を予測するための予備的および定性的調査として使用された。各プロドラッグ両親媒性物質について，少量のニートで乾燥したサンプルを顕微鏡スライド上に置き，カバースリップで覆った。毛細管現象によってサンプルに流入できるように、カバースリップの端に水を置いた。水の添加前および添加後に25℃、および水への曝露後に37℃で捕捉された。37℃は、その生理学的関連性のために選択された。 サンプルは、温度制御されたホットステージを用いて制御された各温度で30分間平衡された。水に曝された後の新しい暗いバンドの形成や複屈折のような両親媒性物質の質感の外観の変化は，水和時に様々な中間相を形成するプロドラッグ両親媒性物質の能力を示唆している。
【０３１４】
CP-ビス（ラウロイル）、CP-ビス（ミリストイル）、CP-ビス（パルミトイル）は、25または37℃のいずれかで水との水和後に観察可能な差を示さなかった。これは、水が両親媒性物質と相互作用したり、それらの結晶構造を貫通したりすることができないことを示した。CP-ビス（オレオイル），CP-ビス（リノレオイル）およびCP-ビス（フィタノイル）は柔らかい非晶質組織を有し，各両親媒性物質と水の間に境界の視覚的変化が観察された。しかし，明確な中間相は形成できなかった。CP-ビス（オレオイル），CP-ビス（リノレオイル），およびCP-ビス（フィタノイル）がある程度まで膨潤しやすかったことは、CP両親媒性物質が層状結晶構造を形成する可能性を示した（画像は図示しない）。 これらの観測結果を以下にまとめる（表2）。
【０３１５】
【表２】
2021527675.tif 000034
【０３１６】
CP-ビス（コハク酸-リシン（オレオイル）-エタノールアミド）、CP- ビス（ペグ３-オレオイル）、およびCP- ビス（コハク酸-ペグ6-オレオイル）、のCPプロドラッグ両親媒性物質の代表的な画像を図4に示している。
【０３１７】
水はCPと疎水性鎖の間にスペーサーを有する両親媒性構造を貫通することができ，リオトロピック液晶メソ相の形成の可能性を示した。 CP-ビス（コハク酸-リシン（オレオイル）-エタノールアミド）は、両親媒性物質と水の境界に暗いバンドを示し、37℃で広がる可能性のあるキュービック相の形成を示唆している（図4a）。 CP-ビス（ペグ３-オレオイル）は、図4bに示すように、水との境界上の新しい明確な複屈折テクスチャの形成によってラメラ液晶構造の形成を示した。 CP-ビス（コハク酸-ペグ6-オレオイル）は、より少ない無秩序なL3中間相の形成を示した（図4C）。
【０３１８】
例18：シンクロトロン小角X線散乱（SSAXS）およびSAXSを使用したCPプロドラッグ両親媒性物質中間相の特性評価
ニートおよび水和シスプラチン両親媒性物質のSAXS散乱パターンが得られ（図5）、格子定数（ユニットセルの寸法）が計算された（表3）。ニートCP両親媒性物質の散乱パターンは、ラメラ結晶構造（Lc）を示す鋭い等距離のピークによって特徴づけられた。脂肪族鎖を持つすべての両親媒性物質で、2つの異なる格子定数に対応する2セットの等距離ピークが観察された。脂肪族両親媒性物質（CP-ビス（ラウロイル）、CP-ビス（ミリストイル）、およびCP-ビス（パルミトイル）は、より長い鎖がより大きな面積を占めるため、炭化水素鎖の長さが増加するにつれて格子定数の増加を示した。CP-ビス（オレオイル）、CP-ビス（リノレオイル）およびCP-ビス（フィタノイル）は、1セットの等距離ピークを示した。脂肪族シスプラチン両親媒性物質の散乱パターンにおける二組の等距離ピークは二つの異なるラメラ結晶相を示し，その配向に依存する脂質鎖の相互指定によって説明できると考えられる。この配置では、結晶格子中の両親媒性物質のパッキングは、鎖が空間を最小にするように配向されるので、より緊密である。 このタイプの結晶構造は、各単位細胞間の間隔が小さいために、より小さな格子パラメータをもたらすであろう。シスが形成する脂質鎖の配向は、脂質鎖が互いに接触して挿入される配列をもたらす可能性があるが、立体効果のために部分的な交互嵌合のみが起こることができる。 この部分相互指定は単位セルのサイズを大きくし，この格子パラメータを大きくした。 過剰水による両親媒性物質の水和は、図5（a-f）および表3に示すように、CP-ビス（ラウロイル）、CP-ビス（ミリストイル）、CP-ビス（パルミトイル）、CP-ビス（オレオイル）、CP-ビス（リノレオイル）またはCP-ビス（フィタノイル）の散乱パターンまたはこの格子パラメータに影響を与えなかった。
【０３１９】
CPと疎水性アシル鎖の間に様々なスペーサーを有するCP両親媒性物質のSAXS散乱パターンを図5(g-J)に示し、それらの格子パラメータを表3に表す。 CP-ビス（ペグ3-オレオイル）は、非水和時にラメラ結晶メソ相を示し、水和時に格子パラメータの膨潤および増加によってラメラ液晶に変換される（図5g）。CP-ビス（ペグ6-オレオイル）は、q=0.153 Å-1で広いピークを示すことによって、より溶融相を示した。 過剰な水（水/両親媒性の70/30％）で水和すると、この溶融相は水で膨潤し、47.42Åの格子パラメータを有するラメラ液晶メソ相に変換された。 37℃では格子パラメータは47.0Åに減少した(図5h)。 CP-ビス（コハク酸-リシン（オレオイル）-エタノールアミド）ニート両親媒性物質は、等距離のピークを有する散乱パターンを示し、47.0±0.5Åの格子パラメータを有するラメラ結晶相の代表である（図5j）。 水との両親媒性物質の水和は、Ia3d対称性（ジャイロイド）121.38±0.5Åの格子パラメータを有するキュービック相の形成をもたらした。 サンプルを37℃に加熱すると、格子パラメータは121.1±0.5Å-1に減少した。
【０３２０】
【表３】
2021527675.tif 000035
【０３２１】
実施例19：コロイド粒子またはナノ粒子分散液の調製
本発明による好ましいプロドラッグは、以下の手順を用いることによって、水溶液に分散させ、非常に微細な内部ナノ構造を有し、20-1000nmのサイズ範囲でコロイド粒子またはナノ粒子を形成することができる。
【０３２２】
典型的なナノ粒子分散液は、各唯一のプロドラッグ両親媒性物質から、またはリン脂質、例えばジオレオイルホスファチジルコリン（DOPC）またはジミリストイルホスファチジルコリン（DMPC）およびコレステロールと組み合わせて、以下の方法に従って調製した。
【０３２３】
CPプロドラッグ両親媒性物質は、10-30％PEG4K-オレオイルまたはF108またはF127などの他の立体安定剤を含む暖かいPBSで水和し、超音波浴で超音波処理し、脂質エマルジョンをもたらすプローブ超音波処理器を使用した。 その後、ナノ粒子は、均質なサイジングを確実にするために、押出機（Avestin、LipoFast LF-50）を用いてポリカーボネート膜（3x400nm、3x200nmおよび3x100nm）を介して処理された。ＣＰプロドラッグ-りん脂質／コレステロールナノ粒子をエタノール中でＣＰ両親媒性物質，DMPCおよびコレステロールを混合し，激しい混合および減圧下で穏やかに蒸発させて薄膜を作製した。 その後、薄膜を10-30％のペグ4K-オレオイ溶液を含む温かいPBSで水和し、超音波処理器浴中で超音波処理し、プローブ超音波処理器を使用して脂質エマルジョンを生じさせた。その後、ナノ粒子をポリカーボネート膜（3X400、3x200nm、9x100nm）を介して押出機（Avestin、LipoFast LF-50）を用いて20-200間の均質なサイジングを確実にするために処理した。
【０３２４】
インビトロ（in vitro）またはインビボ（in vivo）試験に使用される分散液は、220 nMフィルターを用いて滅菌ろ過した。 ナノ粒子溶液の最終濃度は10-15 mg/mLであった。 上記の分散液の粒度分布および形態は、ナノサイザーおよびクライオ-TEM特性評価法を用いて上記の方法を用いて決定した。
【０３２５】
例20:シンクロトロン小角x線散乱(SSAXS)およびSAXSを用いたCPプロドラッグ両親媒性ナノ粒子の特性評価
シスプラチン（IV）のアキシアルヒドロキソ配位子に直接結合したアルキル鎖を有するCPプロドラッグ両親媒性物質の分散ナノ粒子は水と相互作用して液晶構造を形成することができず，固体脂質ナノ粒子のみを作ることができた。ただし、POMおよびSAXS分析で証明されているように、コハク酸リンカーを介して、またはコハク酸リンカーなしでペグやリジノイルエタノールアミドなどの親水性スペーサーを挿入すると、液晶中間相を形成することができた。CP-ビス (ペグ３-オレオイル)、CP-ビス(コハク酸-ペグ3-オレオリル) 、CP-ビス(コハク酸-アミノペグ3-オレオリル)およびCP-ビス(コハク酸-リシン（オレオイル）-エタノールアミド)の分散ナノ粒子のSAXSを図6に示す。 CP-ビス(ペグ３-オレオイル)、図6aは、44.28±0.5Åの格子定数を有する層状分散ナノ粒子を示し、実施例14に記載のバルク過剰水に示すLα中間相と一致した。CP-ビス（コハク酸-アミノペグ3-オレオイル）は47.62±0.5Åの格子定数を持つ多層分散ナノ粒子を示した（図6c）。CP-ビス(コハク酸-リシン（オレオイル）-エタノールアミド)のシンクロトロンSAXS(SSAXS)解析、図6dは、Ia3d対称性を持つキュボソームの形成を明らかにした。 第一および第二の散乱ピークは√6、√8の比であり、121.4A格子定数である。ペグ安定剤のタイプは、形成された分散液のタイプに影響を及ぼさなかった。SSAXSはキュービック相の形成を予測したPOMを用いて得られた予備結果と一致した。
【０３２６】
例21：形態およびサイズ分布
21.Iクライオ-TEM
ナノ粒子の低温電子顕微鏡画像（クライオ-TEM）の画像は、実験室で構築されたガラス化システムを使用して取得され、サンプルのプランジングおよびガラス化中に湿度を90％近くに保つことができる。4-5μlのサンプル溶液を、レース状のカーボンフィルム（ProSciTech、Thuringowa Qld 4817Australia）でコーティングされた300メッシュの銅TEMグリッドに適用し、30秒間静置した。グリッドを手動で10-15秒間ブロットし、得られた薄膜を液体エタンに浸してガラス化した。グリッドは、Gatan626-DHクライオホルダーに移す前に液体窒素で保管した。イメージングは、MegaView III CCDカメラとAnalySisイメージングソフトウェア（Olympus Soft Imaging Solutions）を備えた120kVで動作するFEI Tecnai 12 TEMを使用して実行された。サンプルは-180℃の温度に保たれ、放射線による損傷を最小限に抑えるために標準的な低線量手順が使用された。 CP-プロドラッグ両親媒性物質のみから作られた3つの異なるナノ粒子のクライオTEMを図7（a、b、d）に示す。さまざまな構造のCP-プロドラッグナノ粒子は、乳化ナノ粒子からキュボソームおよび多層リポソームまでさまざまな形態を示した。それらがリン脂質/コレステロールマトリックス内に組み込まれると、分散したナノ粒子は、図7cに示すように単層リポソームを形成した（CP-ビス（コハク酸-ペグ３-オレオイル））。
【０３２７】
21.II分散の特性評価：粒子サイズ分布
ナノ粒子分散液（コロイドソーム）の粒子サイズ分布の決定は、He-Neレーザー（4mw、633 nm）とアバランシェフォトダイオード検出器を備えたゼータサイザー（nano zs、Malvern、England）を使用して実行された。動的光散乱（DLS）分析は、25℃で散乱角θ= 90°の使い捨てサイジングキュベット内の分散に対して実行された。各測定は少なくとも3回繰り返された。データ計算では、それぞれ0.8872cpと1.330の粘度とRI値を使用した。サイズ分布は強度によって記録された。
【０３２８】
さまざまな両親媒性物質から製造された典型的なナノ粒子分散液を図8に示す。これは、平均サイズ50-200nmの均質な分散ナノ粒子を示している。
【０３２９】
インビトロ(生体外)およびインビボ（生体内）での生物活性の実証
実施例22：インビトロ細胞毒性
唯一のCP両親媒性物質から作られたCP-プロドラッグナノ粒子の細胞毒性を、CFPAC-1膵臓癌細胞株におけるネイティブCPと比較して評価した。
【０３３０】
細胞株は、さまざまな濃度の処理薬（100-0.2μ m）を含むメディアにさらされ、72時間インキュベートした。 細胞生存率は、MTS法またはクリスタルバイオレット法を用いて決定され、IC50値を導出するために三重に行った。
【０３３１】
処理により、すべての細胞株で細胞生存率が用量依存的に低下した。プロドラッグCP-ビス-ペグ3-オレイルナノ粒子は、ネイティブCPと比較してIC50毒性がわずかに少なかった。それぞれ5.1μM対3.6μM。この現象の理由は、ナノ粒子が活性で細胞毒性のあるフリーCPに完全に変換するのに必要な時間枠が長いためである可能性がある。CFPAC1、MCF7およびCACO2の細胞株におけるIC50の結果を表4に示す。
【０３３２】
【表４】
2021527675.tif 000036
【０３３３】
実施例23：Pt(IV)プロドラッグ両親媒性物質の Pt(II)への還元
Pt(IV)プロドラッグ両親媒性物質は、癌細胞内で還元を受け、Pt(II)生成物を生成して抗癌活性を発揮する必要がある。
【０３３４】
種々のシスプラチン，オキサリプラチンおよびカルボプラチンプロドラッグナノ粒子のナノ粒子分散液にグルタチオン（GSH）またはアスコルビン酸を添加することにより，その場で還元キネティックスを調べた。 還元剤は、生細胞の環境、例えば1mMアスコルビン酸または2mMグルタチオン（GSH）で見つかったものに対応する濃度で適用された。
【０３３５】
Pt(IV)プロドラッグ両親媒性物質の分散ナノ粒子をGSH，アスコルビン酸またはそれらの組み合わせと混合した。プラチナプロドラッグに対する還元剤の比率は、アスコルビン酸の場合は10:1または50:1、GSHの場合は20:1であった。 各プロドラッグ両親媒性に関連するピークをモニタリングすることにより，還元キネティックスをLC-MSによって分析した。 プロドラッグは各プラチナ両親媒性に対して最適化された負イオンによって検出された。 還元キネティックスは，インキュベーション時間に対する還元剤の添加前のピークと比較したPt(IV)プロドラッグのピーク下の面積の割合としてプロットされた。 反応溶液から取り出されたサンプルの各時点10μl において、Phenomenex C8 150mmX2mm 5 μm Lunaカラム（Phenomenex、Australia）に直接注入した。 100％メタノール溶液を0.5mL/分の流量で8分間移動相として使用した。カラム分離後のサンプルをESI 源に溶出した。
【０３３６】
キャピラリー温度およびイオンスプレー電圧は、それぞれ375℃および4.60に設定された。 サンプルは、温度制御されたオートサンプラーでインキュベーションすることにより、全体の測定中に37℃の温度でよく維持された。 データを取得し、Xcalibur Quanクロマトグラフィーソフトウェアで処理した。
【０３３７】
典型的な両親媒性物質であるCP-ビス（コハク酸-ペグ3-オレオイル）、2つの異なる濃度のアスコルビン酸（1mMと5mM）および0.1 mMのプロドラッグ濃度）の還元速度をインキュベーション時間に対してプロットした（図9a）。 5mMアスコルビン酸での還元速度は4時間まで1mMをわずかに上回ったが、7時間までのインキュベーション時間が長くなると、両方の濃度で同様の還元プラチナプロドラッグが示された。プラチナプロドラッグの軸方向位置に結合した疎水性リガンド（コハク酸-ペグ３-オレオイル）に関連するピークの出現により、プロドラッグのPt(II)薬物への還元が確認された。
【０３３８】
アスコルビン酸の1mM濃度は、インビボでの細胞内アスコルビン酸の濃度と同等であるため、他のすべてのプラチナプロドラッグナノ粒子の還元には、1mM濃度のアスコルビン酸を使用した。 リポソームDMPC/コレステロールナノ粒子の膜内に組み込まれた0.1mM濃度で作られたオキサリプラチン-ビス（ミリストイル）とカルボプラチン-ビス（ミリストイル）の二つの両親媒性プロドラッグナノ粒子の典型的なグラフも図9bに示されている。両方のプロドラッグ両親媒性物質に対するアスコルビン酸の濃度は10:1であった。 オキサリプラチンプロドラッグは、カルボプラチンプロドラッグと比較して3時間まで高い速度で減少したが、カルボプラチンとオキサリプラチンの両方が5時間で最大80％減少し、24時間まで変化しなかった。オキサリプラチンとカルボプラチン両親媒性物質の最大還元は80％であり、CP両親媒性物質の100％とは対照的であった。 グルタチオン還元剤は、Pt(IV)プロドラッグナノ粒子の活性還元プロファイルを示さなかった。
【０３３９】
例24:インビボ腫瘍抑制
インビボでの抗がん剤の評価は、薬物の期待される臨床転帰への洞察を提供するため、不可欠である。 CP対CPプロドラッグナノ粒子の抗癌効果のインビボ評価は、NOD-SCIDマウスにおける耐性MIAPACA-2（ヒト膵臓癌）細胞由来異種移植片に行われた。 この研究では、グループあたり5匹のマウスを使用し、すべての治療を週2回4週間IV注射で投与した。フリーCPグループに投与されたCPの量は0.75mg/kgであり、CP-ビス（コハク酸-ペグ３-オレオイル）から作られ、30％ペグ4K-オレオイル（図7b）で安定化されたナノ粒子は0.75mg/kgの同等のCPを含んでいた。
【０３４０】
時間の経過とともにグラフ化された相対腫瘍容積を図10(a)に示す。PBSのみで処理した対照マウスは、時間の経過とともに腫瘍容積が大きく成長していた。 CPプロドラッグナノ粒子を用いた治療グループは、PBSグループと比較して、時間の経過とともに有意な腫瘍増殖阻害（PBSグループの51％）を示したが、一方、フリーCPグループもPBSグループと比較して成長阻害を示したが、ナノ粒子で処理したグループよりは少なかった。しかし、その差は統計的に有意であることは見出されなかった。
【０３４１】
実験の過程を通してモニターされたマウスの相対体重は、それらの初期体重と比較した。 CP-プロドラッグナノ粒子グループ、フリーCPおよびコントロールグループにおける実験終了時のすべてのマウスの体重は、それぞれ平均して11％、14％および15％増加した（図10（b））。 グループ間の差は統計的に有意ではなかった。 これは、体重の損失は、本研究で使用された用量での治療のいずれかの副作用ではなかったことを示唆している。
【０３４２】
すべての治療グループの腎臓の組織病理学も調べた。 CP治療グループは、急性尿細管壊死、多くの糸球体への出血、および毛細血管の腫れの形で深刻な病理学的変化を明らかにした（図11b）。 しかし、CPプロドラッグナノ粒子を用いた治療グループ（図11c）は、PBSグループの正常な腎臓組織（図11a）と比較して、糸球体および炎症性浸潤物に軽度の沈殿物のみを示した。
【０３４３】
別の研究では、二重薬物化学療法プロドラッグナノ粒子を使用して、NOD-SCIDガンママウス（NSG）のCFPAC-1（ヒト膵臓癌）細胞株由来の異種移植片を28日間にわたって治療した。ナノ粒子は、DMPC /コレステロール/ゲムシタビンフィタニル[PCT / AU2019 / 050363]およびCP-ビス（ミリストイル）から75.86 / 8.35 / 12.62 / 3.17（w / w％）の比率で自己組織化された。デュアルナノ粒子グループのアクティブジェムの用量とCPの用量は、それぞれ同等の薬剤の4.5 mg / Kgと1mg / Kgであった。 ジェムナノ粒子グループのマウスは、4.5 mg / Kgの活性ジェムのみを含むNPで処理された。 ジェムナノ粒子グループの組成は、それぞれ73.52 /8.10 / 18.38（w / w％）のDMPC /コレステロール/ゲムシタビン-フィタニルであった。コントロールグループには、100mg / Kgの市販のフリーゲムシタビンおよびPBS（コントロール）を注射した。 ゲムシタビングループは、静脈内注射の毒性が高いため、腹腔内（IP）注射によって投与された。 この研究では24匹のマウスを使用し、6匹のマウス/グループを治療した。
【０３４４】
腫瘍体積を経時的にグラフ化し、図12(a)に表示した。PBSのみで治療された対照マウスは、研究の28日間にわたって腫瘍サイズの大きな成長を示した。 異種移植齧歯動物の治療に一般的に使用される最大用量100mg / Kgの市販のゲムシタビンで治療されたマウスは、腫瘍体積を有意に減少させた。 活性ジェムの4.5％という非常に低用量の両方のナノ粒子グループまたは4.5mg / Kgの同等のジェム+ 1mg / Kg相当のCPを含む二重薬物ナノ粒子は、対照PBSグループと比較して腫瘍増殖を有意に阻害した。 しかしながら、この研究は、膵臓異種移植片のためのジェムNPよりもデュアルドラッグNPの使用において有意な改善を示さなかった。 これは、ゲムシタビン薬のみに対するこの異種移植モデルの高感度と健全な反応が原因である可能性がある。 図12(b）に示すように、すべてのマウスの体重は、初期体重と比較して時間の経過とともに増加した。
【０３４５】
参考文献
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【国際調査報告】
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