(57)【要約】本発明は、動物におけるサルモネラ症の予防又は治療に使用するための組成物に関し、上記使用は、組成物を動物に投与することを含み、組成物は、２ｋＤａ超の分子量を有し、ガラクツロン酸残基及びラムノース残基からなる主鎖を有するラムノガラクツロナンＩ（ＲＧ−Ｉ）多糖を乾物重量に基づき少なくとも０．０１％含有し、上記ラムノース残基は、α（１→４）−ガラクツロン酸−α（１→２）−ラムノース残基に含有されており、ＲＧ−Ｉ多糖中のガラクツロン酸残基のラムノース残基に対するモル比は、５０：１〜１：１の範囲内である。サルモネラ症の治療又は予防におけるＲＧ−Ｉ多糖の使用は、抗生物質の広範な使用の代替手段をもたらす。さらに、これらのＲＧ−Ｉ多糖は、抗生物質に耐性があるサルモネラ株が原因であるサルモネラ症を予防又は治療するのに使用することができる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
動物におけるサルモネラ症の予防又は治療に使用するための組成物であって、前記使用が、前記組成物を前記動物に投与することを含み、前記組成物は、２ｋＤａ超の分子量を有する、ガラクツロン酸残基及びラムノース残基からなる主鎖を有するラムノガラクツロナンＩ（ＲＧ−Ｉ）多糖を、乾物重量に基づき少なくとも０．０１％含有し、前記ラムノース残基が、α（１→４）−ガラクツロン酸−α（１→２）−ラムノース残基に含有されており、前記ＲＧ−Ｉ多糖中のガラクツロン酸残基のラムノース残基に対するモル比は、５０：１〜１：１の範囲内である、組成物。
【請求項２】
少なくとも１日１回、少なくとも３日の期間、１日当たり体重１ｋｇ当たり少なくとも１ｍｇのＲＧ−Ｉ多糖を供給する量で前記動物に投与される、請求項１に記載の動物におけるサルモネラ症の予防又は治療に使用するための組成物。
【請求項３】
サルモネラ症にまだ罹っていない動物に投与される、請求項１又は２に記載の動物におけるサルモネラ症の予防又は治療に使用するための組成物。
【請求項４】
前記サルモネラ症が、サルモネラ・エンテリカ血清型エンテリティディスを原因とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載の動物におけるサルモネラ症の予防又は治療に使用するための組成物。
【請求項５】
前記サルモネラ症が、サルモネラ・エンテリカ血清型ティフィムリウムを原因とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の動物におけるサルモネラ症の予防又は治療に使用するための組成物。
【請求項６】
前記動物が家禽である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の動物におけるサルモネラ症の予防又は治療に使用するための組成物。
【請求項７】
前記動物がブタである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の動物におけるサルモネラ症の予防又は治療に使用するための組成物。
【請求項８】
前記動物がヒトである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の動物におけるサルモネラ症の予防又は治療に使用するための組成物。
【請求項９】
前記組成物が、
１，０００〜２，５００ＩＵ／ｋｇのビタミンＡ；
０．１〜１０ｍｃｇ／ｋｇのビタミンＢ１２；
１００〜３５０ＩＵ／ｋｇのビタミンＤ；
２〜２０ＩＵ／ｋｇのビタミンＥ；及び
０．２５〜０．６０ｍｇ／ｋｇのビタミンＫ
を含有する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の動物におけるサルモネラ症の予防又は治療に使用するための組成物。
【請求項１０】
前記ＲＧ−Ｉ多糖の前記主鎖におけるガラクツロニル酸残基のラムノシル残基に対するモル比が２０：１を超えない、請求項１〜９のいずれか一項に記載の動物におけるサルモネラ症の予防又は治療に使用するための組成物。
【請求項１１】
ＲＧ−Ｉ多糖が、前記組成物中に存在するペクチン多糖の少なくとも１０重量％を占める、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の動物におけるサルモネラ症の予防又は治療に使用するための組成物。
【請求項１２】
ラムノースが、前記ＲＧ−Ｉ多糖に含有されている全ての単糖残基の３〜５０％を占める、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の動物におけるサルモネラ症の予防又は治療に使用するための組成物。
【請求項１３】
前記ＲＧ−Ｉ多糖が、リンゴ、ピーマン、ビルベリー、ニンジン、柑橘類果実、ブドウ、ジャガイモ、サトウダイコン、オリーブ、エンドウ及びそれらの組合せから選択される植物供給源から得られる、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の動物におけるサルモネラ症の予防又は治療に使用するための組成物。
【請求項１４】
１つ又は複数の食用原料を、乾物重量に基づき少なくとも５％の請求項１に特定した前記ＲＧ−Ｉ多糖を含有する多糖成分と混合することを含む、食用組成物を調製する方法。
【請求項１５】
請求項１４に記載の方法によって得られた食用組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の技術分野】
【０００１】
本発明は、動物におけるサルモネラ症の予防に関する。より詳細には、本発明は、２ｋＤａ超の分子量を有し、ガラクツロン酸残基及びラムノース残基からなる主鎖を有するラムノガラクツロナンＩ（ＲＧ−Ｉ）多糖を含有する組成物を動物に投与することによる、そのような動物におけるサルモネラ症の予防又は治療に関し、ラムノース残基は、α（１→４）−ガラクツロン酸−α（１→２）−ラムノース残基に含有されており、ここでＲＧ−Ｉ多糖中のガラクツロン酸残基のラムノース残基に対するモル比は、５０：１〜１：１の範囲内である。
【０００２】
上述のＲＧ−Ｉ多糖は、リンゴ、ピーマン、ビルベリー、ニンジン、柑橘類果実、ブドウ、サトウダイコン、オリーブ、エンドウ又はジャガイモなどの果実及び野菜から単離することができる。
【発明の背景】
【０００３】
サルモネラ症は、２種のサルモネラ（サルモネラ・エンテリカ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｅｎｔｅｒｉｃａ）、及びＳ．ボンゴリ（Ｓ．ｂｏｎｇｏｒｉ））の微生物が原因である、ヒト及び動物の感染症である。主に腸内細菌であるが、サルモネラは、環境中に広範囲に及び、農場廃水、生活排水及び糞便汚を受けた任意の物質に一般的に見られる。サルモネラ菌はヒトの下痢及び全身感染症の病因学的因子であり、最も一般的には、動物及び環境に由来する食物の二次汚染物質として、通常、食用動物における無症状感染の結果として、肉、卵、及び牛乳の汚染又は糞便廃棄物によって施肥若しくは灌漑された果実及び野菜の二次汚染を招く。
【０００４】
ヒトサルモネラ症は、最も一般的で経済的に重要な人蓄共通疾患の一つである。サルモネラ菌は、動物飼料にも見られることがあり、動物、特に家禽及びブタに無症状胃腸保菌又は感染症を引き起こす。サルモネラ症は、全ての国で認識されているが、集約的な畜産、特に閉じ込めて飼育されているブタ及び子ウシ及びいくつかの種類の家禽の領域で最も流行しているようである。いくつかの血清型は、宿主特異的（例えばヒツジにおけるヒツジ流産菌（Ｓ．Ａｂｏｒｔｕｓｏｖｉｓ）又はヒトにおけるチフス菌（Ｓ．ｔｙｐｈｉ））であり、又は宿主に適合（例えばブタにおける豚コレラ菌（Ｓ．ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ）及びウシにおけるＳ．ダブリン（Ｓ．ｄｕｂｌｉｎ））。
【０００５】
疾患は、家畜の全ての種に影響を与えることができ；若い動物と妊娠中及び授乳中の動物は、最も影響を受けやすい。腸溶性疾患は、最も一般的な臨床症状であるが、急性敗血症、流産、関節炎及び呼吸器疾患を含む、広範囲の臨床徴候が見られることがある。サルモネラ感染は、消化に悪影響を与える可能性があり、若い動物の成長を損なう可能性がある。多くの動物、特にブタ及び家禽は、感染している可能性もあるが、臨床的疾患を示さない。このような動物は、群れ（ｆｌｏｃｋｓ）と群れ（ｈｅｒｄｓ）の間の感染の拡大に関連して、食品汚染及びヒト感染の供給源として、重要かもしれない。
【０００６】
ＷＨＯは、ヒトのサルモネラ感染を含む食品伝染疾患の予防及び制御のための適切な対策の開発についての情報を提供する。感染の最も一般的な媒体は、卵及び卵製品、家禽肉及び他の食用動物の肉、及び肉製品である。腸炎菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）及びネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）は、多くのヨーロッパ諸国で最も広まった血清型である。ネズミチフス菌は、北アメリカで優性の血清型である。
【０００７】
ネズミチフス菌（アンピシリン、ストレプトマイシン、スルホンアミド及びテトラサイクリンに耐性があるＳ．４，５，１２：ｉ：−ＤＴ１９３）の単相バリアントは、ブタで出現し、世界中のいくつかの国でヒトにサルモネラ症の大発生を引き起こし、近年、多くの国で様々な動物種及び人間で認識されている様々に異なる耐性パターンをもつ他のいくつかの出現した単相Ｓ．４，５，１２：ｉ：−及びＳ．４，１２：ｉ：−株がある。
【０００８】
広範囲の病原菌内の抗菌剤耐性は、国や複数のセクターにとって幅広い関心のある増大する公衆衛生上の脅威である。ますます、世界中の政府は、現代医学の成果を脅かすほど深刻な問題に注意を向け始めている。抗生物質後の時代は−一般的な感染症と軽傷が殺し得る−終末論的な空想には程遠く、むしろ２１世紀にとって非常に現実的な可能性である。
【０００９】
畜産−家畜、家禽及び養魚を含む−における抗生物質の使用は、不適切な使用を回避し、畜産及び養殖、並びにヒトにおける抗生物質の使用を減らすために、緊急の行動が必要であるという認識の高まりをもたらす。
【００１０】
Ｐｅｔｅｒｓｅｎら（Ｓｏｍｅ  ｐｕｔａｔｉｖｅ  ｐｒｅｂｉｏｔｉｃｓ  ｉｎｃｒｅａｓｅ  ｔｈｅ  ｓｅｖｅｒｉｔｙ  ｏｆ  Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｅｎｔｅｒｉｃａ  ｓｅｒｏｖａｒ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｉｃｅ、ＢＭＣ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ（２００９）、９：２４５）は、マウスのネズミチフス菌ＳＬ１３４４感染が、異なる構造及び消化プロファイルをもつ食事性炭水化物の投与によって予防できるかどうかを調べた研究の結果について説明している。ＢＡＬＢ／ｃマウスに、経口サルモネラ投与（ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）（１０７ＣＦＵ）前の３週間、以下の炭水化物：イヌリン、フルクトオリゴ糖、キシロオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、リンゴペクチン、ポリデキストロース又はβ−グルカンのいずれかを１０％含有する食餌を与え、コーンスターチベースの対照食を与えたマウスと比較した。フルクトオリゴ糖又はキシロオリゴ糖を含有する食餌を与えたマウスは、コーンスターチベースの対照食を与えたマウスと比較して、有意に高い（Ｐ＜０．０１及びＰ＜０．０５）数のネズミチフス菌ＳＬ１３４４を肝臓、脾臓及び腸間膜リンパ節で有していた。著しく増加した量（Ｐ＜０．０１）のサルモネラが、リンゴペクチンを補充した食餌を与えたマウスの回腸及び糞便内容物で検出されたが、これらのマウスは、対照群（Ｐ＜０．２０）の動物よりも有意に高い数のネズミチフス菌を肝臓、脾臓及びリンパ節で示さなかった。
【００１１】
Ｐａｒｓｏｎｓら（Ｄｉｅｔａｒｙ  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  Ｓｏｌｕｂｌｅ  Ｐｌａｎｔａｉｎ  Ｎｏｎ−Ｓｔａｒｃｈ  Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  Ｉｎｖａｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｃｈｉｃｋｅｎ、ＰＬＯＳ  ＯＮＥ、Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２０１４、Ｖｏｌｕｍｅ  ９、Ｉｓｓｕｅ  ２、ｅ８７６５８）は、食事性オオバコ繊維が、サルモネラによるニワトリ腸粘膜への侵入を防ぐと報告している。Ｉｎ  ｖｉｖｏ実験は、可溶性オオバコＮＳＰ（０〜２００ｍｇ／ｄ）を含有するペレット食餌を孵化してから与え、８日齢でネズミチフス菌４／７４に経口感染させたヒヨコで行なった。オオバコＮＳＰ５０ｍｇ／ｄを用いたｉｎ  ｖｉｖｏ栄養補給は、脾臓組織からの生細菌数に反映されるように、ネズミチフス菌による侵入を９８．９％（９５％ＣＩ、９８．１〜９９．７；Ｐ＜０．０００１）減少させた。Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ研究は、オオバコＮＳＰ（５〜１０ｍｇ／ｍｌ）が、ネズミチフス菌４／７４のブタ上皮細胞株（７３％平均阻害（９５％ＣＩ、６４〜８１）；Ｐ，０．００１）及び主にヒヨコ盲腸陰窩（８２％平均阻害（９５％ＣＩ、７５〜９０）；Ｐ，０．００１）への接着を阻害することを確認した。オオバコＮＳＰの阻害活性は、主として酸性／ペクチン（ホモガラクツロナンに富む）成分内にある。
【００１２】
Ａｚｉｚ（Ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃａｐｓｉｃｕｍ  ａｎｎｕｕｍ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｉｅｔ  ｏｆ  ｂｒｏｉｌｅｒｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｈｅｄｄｉｎｇ  ｒａｔｅ  ｏｆ  Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｐａｒａｔｙｐｈｏｉｄ、Ｋｕｆａ  Ｊｏｕｒｎａｌ  Ｆｏｒ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｖｏｌ．（１）  Ｎｏ．（１）  ２０１０、２８〜３８）は、ブロイラー鶏におけるネズミチフス菌のチャレンジ用量（ｃｈａｌｌｅｎｇｅ  ｄｏｓｅ）に対する抗生物質の可能な代替物としてのピーマン（Ｃ．ａｎｎｕｕｍ）の阻害効果が調査された研究について記載されている。結果は、ピーマンをパーセントで１％及び２％混合した食餌の使用が、ネズミチフス菌感染に対して効果的であったことを示した。
【００１３】
国際公開第２０１１／１３６６３４号は、サルモネラ感染に罹っているか、又はサルモネラ感染に罹りやすい対象における体重減少の予防及び／又は治療のためのペクチン分解生成物の使用について記載されている。
【００１４】
米国特許出願公開第２０１０／００４７２０９号は、家畜におけるサルモネラ感染を緩和するためのプロバイオティック組成物について記載されており、プロバイオティック組成物は、ラクトバチルスムリヌス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｕｒｉｎｕｓ）、Ｌ．ペントーサス（Ｌ．ｐｅｎｔｏｓｕｓ７）、Ｌ．サリバリウス（Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）亜種サリバリウス、及びペディオコッカスペントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）からなる群から選択される１つ又は複数の微生物培養物を含む。
【００１５】
ペクチンは、陸上植物の一次細胞壁に存在する構造的なヘテロ多糖である。
【００１６】
ペクチン多糖は、様々に異なる量の以下の多糖成分：
（ｉ）ホモガラクツロナン（ＨＧ）、
（ｉｉ）キシロガラクツロナン（ＸＧ）、
（ｉｉｉ）アピオガラクツロナン（ＡＧ）
（ｉｖ）ラムノガラクツロナン−Ｉ（ＲＧ−Ｉ）、及び
（ｖ）ラムノガラクツロナン−ＩＩ（ＲＧ−ＩＩ）
を含む多糖の異種グループである。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図１は、上述の５つの多糖成分を含むペクチン多糖の構造の概略図を示す。多糖成分ＡＧ、ＸＧ及びＲＧ−ＩＩは、通常、ペクチン多糖のごく一部しか表していないことに注意されたい。  多糖成分ＨＧ、ＡＧ、ＸＧ及びＲＧ−ＩＩは、それぞれα−（１−４）−結合のＤ−ガラクツロン酸単糖単位の直鎖からなる主鎖を含む。
【図２】ＲＧ−Ｉのみが、反復二糖単位：４）−α−Ｄ−ガラクツロン酸−（１，２）−α−Ｌ−ラムノース−（１の直鎖からなる主鎖を含む。ＲＧ−Ｉの構造の概略図を図２に示す。
【００１８】
ペクチン多糖組成物及び微細構造は、植物供給源及び適用される抽出条件に応じて大きく異なる。ホモガラクツロナンドメインは、長さが最大約１００の連続したＤ−ＧａｌＡ残基であってよい。側鎖を含有するＲＧ−Ｉドメインは、通常、「分枝領域（ｒａｍｉｆｉｅｄ  ｒｅｇｉｏｎ）」又は「毛様領域（ｈａｉｒｙ  ｒｅｇｉｏｎ）」と呼ばれるが、ホモガラクツロナンドメイン（ＲＧ−Ｉドメインに連結されている）は、通常グリコシド／又はグリコシド側鎖で置換されていない。
【００１９】
ＲＧ−Ｉ中のＧａｌＡ残基は、１及び４位を介してＲｈａ残基と結合しているが、Ｒｈａ残基は、アノマー及びＯ−２位を介してＧａｌＡ残基と結合している。一般に、Ｒｈａ残基の約２０〜８０％は、Ｏ−４位で分枝状であり（植物供給源及び単離方法に応じて）、中性及び酸性側鎖を有する。これらの側鎖は、主として種々の手段で結合したＡｒａ及びＧａｌ残基からなり、アラビナン、アラビノガラクタンＩ（ＡＧ−Ｉ）及び／又はＡＧ−ＩＩとして知られているポリマーを構成している。ＡＧ  Ｉは、α−Ｌ−アラビノシル基のＯ−３で置換されたβ−（１，４）−結合のＤ−Ｇａｌ主鎖で構成されており；Ｇａｌ主鎖は、α（１，５）−Ｌ−Ａｒａ単位で空間を満たすことができる。ＡＧ−ＩＩは、主に内部のβ（１，３）−結合のＤ−Ｇａｌを含み、短い（１，６）−結合した鎖の外部での置換を伴う、高度に分枝したガラクタンからなる。後者は、さらに（１，３）−及び／又はα（１，５）−結合したＬ−Ａｒａのアタッチメントを有する。側鎖は、直鎖又は分枝状であってもよく、これらの側鎖のいくつかは、α−Ｌ−フコシド、β−Ｄ−グルクロニド、及び４−Ｏ−メチルβ−Ｄ−グルクロニル残基で終端してもよい。
【００２０】
国際公開第２０１１／０６９７８１号は、免疫応答を調節することが可能な多糖について記載されており、多糖は、チャノキ（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）種の植物から得られ、ここで、多糖の主鎖は、互い違いのラムノガラクツロナン−Ｉドメイン及びα（１，４）−結合のポリガラクツロン酸又はα（１，４）−結合のオリゴガラクツロン酸ドメインを含み、ここで、多糖の主鎖におけるガラクツロニル酸残基のラムノシル残基に対するモル比は、２．５：１〜１：１の範囲であり、ここで、多糖は、分子量が少なくとも７０ｋＤａである。
【００２１】
［発明の概要］
本発明者らは、動物におけるサルモネラ症が、２ｋＤａ超の分子量を有し、ガラクツロン酸残基及びラムノース残基からなる主鎖を有するラムノガラクツロナンＩ（ＲＧ−Ｉ）多糖を含有する組成物をこの動物に投与することによって、非常に効果的に予防又は治療できることを発見しており、ラムノース残基は、α（１→４）−ガラクツロン酸−α（１→２）−ラムノース残基に含有されており、ここでＲＧ−Ｉ多糖中のガラクツロン酸残基のラムノース残基に対するモル比は、５０：１〜１：１の範囲内である。
【００２２】
したがって、本発明の一態様は、動物におけるサルモネラ症の予防又は治療における、乾物重量に基づき少なくとも０．０１％のＲＧ−Ｉ多糖を含有する組成物の使用に関し、上記使用は、組成物を動物に投与することを含む。
【００２３】
サルモネラ症の予防又は治療におけるＲＧ−Ｉ多糖の使用は、抗生物質の広範な使用の代替手段をもたらす。さらに、これらのＲＧ−Ｉ多糖は、抗生物質に耐性があるサルモネラ株が原因であるサルモネラ症を予防又は治療するのに使用することができる。
【００２４】
本発明に基づいて使用されるＲＧ−Ｉ多糖は、リンゴ、ピーマン、ビルベリー、ニンジン、柑橘類果実、ブドウ、サトウダイコン、オリーブ、エンドウ及びジャガイモなどの果実及び野菜から適切に単離することができる。国際公開第２０１２／１４８２７７号は、ＲＧ−Ｉ多糖を単離するのに使用できる単離方法を記載している。
【００２５】
本発明の別の態様は、食用組成物を調製する方法に関し、該方法は、１種又は複数の食用成分を、乾物重量に基づき少なくとも５％のＲＧ−Ｉ多糖を含有する多糖成分と混合することを含む。
【発明の詳細な説明】
【００２６】
本発明の第１の態様は、動物におけるサルモネラ症の予防又は治療に使用するための組成物に関し、上記使用は、組成物を動物に投与することを含み、組成物は、２ｋＤａ超の分子量を有し、ガラクツロン酸残基及びラムノース残基からなる主鎖を有するラムノガラクツロナンＩ（ＲＧ−Ｉ）多糖を乾物重量に基づき少なくとも０．０１％含有し、ラムノース残基は、α（１→４）−ガラクツロン酸−α（１→２）−ラムノース残基に含有されており、ＲＧ−Ｉ多糖中のガラクツロン酸残基のラムノース残基に対するモル比は、５０：１〜１：１の範囲内である。
【００２７】
用語「サルモネラ症」は、本明細書では、サルモネラ細菌が原因の感染症を意味する。
【００２８】
用語「サルモネラ」は、本明細書では、腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）の桿状（桿菌（ｂａｃｉｌｌｕｓ））グラム陰性菌の属を意味する。２種のサルモネラは、Ｓ．エンテリカ及びＳ．ボンゴリである。Ｓ．エンテリカ亜種は、温血動物、及び環境で見られる。Ｓ．ボンゴリは、冷血動物に限定されている。
【００２９】
用語「動物」は、本明細書では、ヒトを含む脊椎動物を意味する。
【００３０】
用語「分枝状多糖」は、本明細書では、グリコシド結合によって一緒に結合した単糖単位の直鎖状の主鎖を含む多糖を意味し、ここで、主鎖内の少なくとも１つの単糖単位は、１つ又は複数のグリコシド結合した単糖単位の側鎖をもつ。
【００３１】
本明細書では、用語「主鎖（ｂａｃｋｂｏｎｅ  ｃｈａｉｎ）」及び「主鎖（ｂａｃｋｂｏｎｅ）」は、同義語である。
【００３２】
用語「ペクチン多糖」は、本明細書では、分子量が２ｋＤａ超であり、ガラクツロン酸残基及びラムノース残基からなる主鎖を含む、任意選択で分枝した多糖を意味し、ラムノース残基は、α（１→４）−ガラクツロン−α（１→２）−ラムノース残基に含有されている。
【００３３】
用語「ストレッチ」は、本明細書では、多糖の主鎖内の一連の２つのグリコシド結合した単糖単位の配列を意味し、そこに結合している任意の側鎖は除く。
【００３４】
用語「ドメイン」は、本明細書では、ストレッチと、該ストレッチに結合している任意の側鎖を意味する。
【００３５】
用語「ラムノガラクツロナン−Ｉストレッチ」又は「ＲＧ−Ｉストレッチ」は、ガラクツロン酸（ＧａｌＡ）とラムノース（Ｒｈａ）の１対からなるストレッチを意味し、ここで、ＧａｌＡ残基は、１及び４位を介してＲｈａ残基と結合しており、一方、Ｒｈａ残基は、アノマー及びＯ−２位を介してＧａｌＡ残基に結合しており、すなわち、α（１→４）−ガラクツロン−α（１→２）−ラムノース残基を互い違いにする。ＲＧ−Ｉドメインは、例えばガラクタン、アラビナン及びアラビノガラクタン側鎖などの側鎖を含んでいてよい。
【００３６】
用語「ラムノガラクツロナン−Ｉ多糖」又は「ＲＧ−Ｉ多糖」は、１つ又は複数のラムノガラクツロナン−Ｉストレッチを含有する主鎖を含む、任意選択で分枝したペクチン多糖を意味する。
【００３７】
用語「α（１，４）−結合のガラクツロン酸ストレッチ」は、α（１→４）−ガラクツロン残基からなるストレッチを意味する。
【００３８】
ＲＧ−Ｉドメインに加えて、本発明のＲＧ−Ｉ多糖は、１つ又は複数の以下のドメイン：
ホモガラクツロナン（ＨＧ）、
キシロガラクツロナン（ＸＧ）、
アピオガラクツロナン（ＡＧ）
ラムノガラクツロナン−ＩＩ（ＲＧ−ＩＩ）
を含有していてもよい。
【００３９】
ドメインＸＧ、ＡＧ及びＲＧ−ＩＩは、通常、ＲＧ−Ｉ多糖のごく一部しか表していない。
【００４０】
本発明のＲＧ−Ｉ多糖中に任意選択で存在するＨＧドメイン、ＸＧドメイン、ＡＧ及びＲＧ−ＩＩドメインは、２つ以上のα−（１−４）−結合のＤ−ガラクツロン酸の直鎖からなる主鎖を含む。
【００４１】
ＨＧドメインは、任意の側鎖を含有しない。ＨＧドメインの主鎖内のガラクツロン酸残基のカルボキシル基は、エステル化してもよい。ガラクツロン酸は、メチル又はアセチル基のいずれかによってエステル化することができ、それぞれメチル又はアセチルエステルを形成する。
【００４２】
ＸＧドメインの主鎖は、Ｄ−キシロースの形態で１つ又は複数の側鎖を含有する。
【００４３】
ＡＧドメインの主鎖は、１つ又は複数のＤ−アピオース残基から構成されている１つ又は複数の側鎖を含有する。
【００４４】
ＲＧ−ＩＩの主鎖は、Ｄ−キシロース又はＤ−アピオースだけで構成されているわけではない１つ又は複数の側鎖を含有する。ＲＧ−ＩＩドメインの主鎖内のガラクツロン酸残基のカルボキシル基は、エステル化することができる。ガラクツロン酸は、メチル又はアセチル基のいずれかによってエステル化することができ、それぞれメチル又はアセチルエステルを形成する。
【００４５】
専門用語「アセチル化度」は、ガラクツロン酸残基当たりのアセチル残基の数をパーセントで表したものを意味する。
【００４６】
専門用語「メチル化度」は、ガラクツロン酸残基当たりのメチル残基の数をパーセントで表したものを意味する。
【００４７】
異なる多糖及びそれらの単糖組成物の濃度は、当業者に既知の分析技術によって決定することができる。酸加水分解（メタノリシス）後、中性糖の単糖組成は、高性能陰イオン交換クロマトグラフィーとパルスアンペロメトリック検出（ＨＰＡＥＣ−ＰＡＤ）を組み合わせて適切に決定することができる。
【００４８】
ウロン酸（ガラクツロン酸はウロン酸より優勢である）は、比色ｍ−ヒドロキシジフェニルアッセイを使用して決定した。
【００４９】
分子粒度分布は、屈折率（ＲＩ）検出（濃度）を用いて高速サイズ排除クロマトグラフィーによって決定することができる。
【００５０】
上述の分析方法は：Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｖｏｌ．２０７、Ｉｓｓｕｅ  １、１９９２、ｐｇ  １７６（中性糖分析のため）及びＭｏｌ．Ｎｕｔｒ．Ｆｏｏｄ  Ｒｅｓ．、Ｖｏｌ６１、Ｉｓｓｕｅ１、２０１７、１６００２４３（ウロン酸分析及び分子粒度分布のため）に記載されている。
【００５１】
本明細書で言及される全てのパーセント値は、特に明記しない限り、重量パーセントを意味する。
【００５２】
本発明は、サルモネラ症を予防又は治療するためのＲＧ−Ｉ多糖組成物の使用を包含する。本発明の特に好ましい実施形態では、ＲＧ−Ｉ多糖含有組成物は、サルモネラ症を予防するために動物に投与される。
【００５３】
本発明の利益は、ＲＧ−１多糖組成物がサルモネラ症に（まだ）感染していない動物に投与されたときに特に評価される。したがって、サルモネラ症に起因する臨床的疾患は、予防するか、又は少なくとも臨床的疾患の重症度を軽減することができる。
【００５４】
本発明に基づくサルモネラ症の予防又は治療は、家畜に有利に利用して飼料の利用及び成長を最適化することができる。
【００５５】
ＲＧ−Ｉ多糖含有組成物は、本明細書で定義したように、乾物重量に基づき、好ましくは少なくとも０．０３％、より好ましくは０．１〜１０％、最も好ましくは０．２〜５％のＲＧ−Ｉ多糖を有する。
【００５６】
ＲＧ−Ｉ多糖は、細胞壁材料のマトリックスに絡まっていない場合、サルモネラ症の予防又は治療に特に有効であると考えられている。したがって、特に好ましい実施形態では、本発明のＲＧ−Ｉ多糖含有組成物は、乾物重量に基づき少なくとも０．０１％、より好ましくは、乾物重量に基づき少なくとも０．０３％さらにより好ましくは、乾物重量に基づき少なくとも０．１％、最も好ましくは、乾物重量に基づき少なくとも０．２％の、容易に水に溶けるＲＧ−Ｉ多糖を含有する。ＲＧ−Ｉ多糖含有組成物中の容易に水に溶けるＲＧ−Ｉの濃度は、脱イオン水（２０℃）１００ｍｌと、十分な量のＲＧ−Ｉ多糖含有組成物とを合わせて、乾物２．５グラムをもたらし、続いて５分間撹拌し、１００μｍフィルターでろ過することによって決定することができる。ろ液中のＲＧ−多糖は、容易に水に溶けるＲＧ−Ｉ多糖である。
【００５７】
本発明の特に好ましい実施形態によれば、本発明の組成物は、少なくとも１日１回、少なくとも３日の期間、１日当たり体重１ｋｇ当たり少なくとも１ｍｇのＲＧ−Ｉ多糖を供給する量で動物に投与される。ＲＧ−Ｉ多糖を含有する組成物を少なくとも１日１回投与することによって、より好ましくは、１日当たり体重１ｋｇ当たり少なくとも１０ｍｇのＲＧ−Ｉ多糖の量、さらにより好ましくは１日当たり少なくとも１００ｍｇ／ｋｇ体重、最も好ましくは１日当たり体重１ｋｇ当たり少なくとも２５０ｍｇのＲＧ−Ｉ多糖が、少なくとも７日の期間、最も好ましくは少なくとも１４日の期間供給される。
【００５８】
別の好ましい実施形態によれば、ＲＧ−Ｉ多糖含有組成物は、少なくとも２１日の期間動物に投与して、１日当たり体重１ｋｇ当たり少なくとも１ｍｇのＲＧ−Ｉ多糖、より好ましくは１日当たり体重１ｋｇ当たり５０〜５００ｍｇのＲＧ−Ｉ多糖の量でＲＧ−Ｉ多糖を供給する。
【００５９】
動物に投与されるＲＧ−Ｉ多糖含有組成物は、好ましくはタンパク質、脂肪及びミネラルを含有する食品又は飼料組成物である。通常、組成物は、ブタ、子ウシ及び家禽などの動物に対して、１０〜６０エネルギー％（ｅｎ％）のタンパク質及び５〜５０エネルギー％の脂肪及び１５〜９０エネルギー％の炭水化物及び０〜１０重量％の灰分を含有する。
【００６０】
ＲＧ−Ｉ多糖含有組成物は、好ましくはビタミンの組合せを含有する。より具体的には、該組成物は：
１，０００〜２，５００ＩＵ／ｋｇのビタミンＡ；
０．１〜１０ｍｃｇ／ｋｇのビタミンＢ１２；
１００〜３５０ＩＵ／ｋｇのビタミンＤ；
２〜２０ＩＵ／ｋｇのビタミンＥ；及び
０．２５〜０．６０ｍｇ／ｋｇのビタミンＫ
を含有する。
【００６１】
別の好ましい実施形態によれば、ＲＧ−Ｉ多糖含有組成物が、サルモネラ症にまだ罹っていない動物に投与される。実施例に示すように、ＲＧ−Ｉ多糖含有組成物は、サルモネラに感染する前に投与した場合、サルモネラ症から迅速に回復する動物の能力を高めるのに特に有効である。
【００６２】
本発明のＲＧ−Ｉ多糖含有組成物は、Ｓ．エンテリカが原因であるサルモネラ症を予防又は治療するために効果的に使用することができる。さらにより好ましくは、組成物は、腸炎菌又はネズミチフス菌が原因であるサルモネラ症を予防又は治療するために使用する。したがって、本発明の有利な一実施形態は、腸炎菌が原因であるサルモネラ症の予防又は治療に関する。別の有利な実施形態によれば、本発明は、ネズミチフス菌が原因であるサルモネラ症の予防又は治療に関する。
【００６３】
好ましい実施形態によれば、ＲＧ−Ｉ多糖含有組成物は、家畜におけるサルモネラ症を予防又は治療するために使用する。特に好ましい実施形態によれば、上記組成物は、家禽、例えばニワトリ、カモ、ガチョウ又はシチメンチョウにおけるサルモネラ症を予防又は治療するために使用する。別の特に好ましい実施形態によれば、組成物は、ブタにおけるサルモネラ症を予防又は治療するために使用する。
【００６４】
別の好ましい実施形態によれば、組成物を含有するＲＧ−Ｉ多糖は、ヒトにおけるサルモネラ症を予防又は治療するために使用される。好ましくは、組成物を含有するＲＧ−Ｉ多糖は、ヒトにおけるサルモネラ症を治療するために使用される。
【００６５】
本発明に基づいて使用されるＲＧ−Ｉ多糖は、好ましくはリンゴ、ピーマン、ビルベリー、ニンジン、柑橘類、ブドウ、ジャガイモ、サトウダイコン及びオリーブ及びその組合せから選択される植物供給源から得られる。より好ましくは、ＲＧ−Ｉ多糖は、リンゴ（例えばリンゴの搾りかす）、ピーマン、ニンジン（例えばニンジンパルプ）、柑橘類果実（例えばピール）、ブドウ、サトウダイコン（例えばサトウダイコンパルプ）、オリーブ（例えばオリーブパルプ）、エンドウ（例えばエンドウパルプ）、ジャガイモ（例えばジャガイモパルプ）及びその組合せから選択される植物供給源から得られる。さらにより好ましくは、ＲＧ−Ｉ多糖は、リンゴ、ニンジン、オリーブ及びその組合せから選択される植物供給源から得られる。最も好ましくは、ＲＧ−Ｉ多糖は、リンゴ及び／又はニンジンから得られる。
【００６６】
ＲＧ−Ｉ多糖は、ラムノガラクツロナン−Ｉストレッチ及び任意選択でα（１，４）−結合のホモ−ガラクツロン酸ストレッチを含む主鎖を有する。ＲＧ−Ｉ多糖中のガラクツロン酸残基のラムノース残基に対するモル比は、２０：１〜１：１の範囲内である。好ましくは、ＲＧ−Ｉ多糖中のガラクツロン酸残基のラムノース残基に対するモル比は、１５：１〜１：１、より好ましくは１２：１〜１：１、さらにより好ましくは１０：１〜１：１、最も好ましくは９：１〜１：１である。
【００６７】
好ましくは、ラムノース残基は、ＲＧ−Ｉ多糖の主鎖における単糖残基の３〜５０％、より好ましくは５〜５０％、最も好ましくは１０〜５０％を占める。
【００６８】
ラムノース残基は、通常、ＲＧ−Ｉ多糖に含有されている全ての単糖残基の３〜５０％、より好ましくは３．５〜４０％、最も好ましくは４〜３５％を占める。すなわち側鎖に含有されている単糖残基を含む。
【００６９】
ガラクツロン酸残基は、通常、ＲＧ−Ｉ多糖の主鎖における単糖残基の５０〜９７％、より好ましくは５０〜９５％、最も好ましくは５０〜９０％を占める。
【００７０】
ガラクツロン酸残基は、通常、ＲＧ−Ｉ多糖に含有されている全ての単糖残基の１０〜８０％、より好ましくは１５〜７０％、最も好ましくは２０〜６５％を占める。すなわち側鎖に含有されている単糖残基を含む。
【００７１】
アラビノース残基は、通常、ニンジンＲＧ−Ｉ多糖に含有されている全ての単糖残基の４〜３８％、より好ましくは６〜３６％、最も好ましくは８〜３４％を占める。
【００７２】
ガラクトース残基は、通常、ニンジンＲＧ−Ｉ多糖に含有されている全ての単糖残基の４〜４２％、より好ましくは８〜４０％、最も好ましくは１０〜３８％を占める。
【００７３】
ＲＧ−Ｉ多糖は、通常、分子量が少なくとも１０ｋＤａである。好ましくは、ＲＧ−Ｉ多糖は、分子量が１５ｋＤａ〜２，０００ｋＤａ、より好ましくは２０ｋＤａ〜１，５００ｋＤａ、さらにより好ましくは３５ｋＤａ〜１，２００ｋＤａ、最も好ましくは４０ｋＤａ〜１，０００ｋＤａである。
【００７４】
本発明の組成物に含有されているＲＧ−Ｉ多糖の平均分子量は、好ましくは３０ｋＤａより大きく、より好ましくは４０ｋＤａより大きく、最も好ましくは６０ｋＤａより大きい。
【００７５】
好ましくは、ＲＧ−Ｉ多糖中のガラクツロン酸残基の８５％未満は、メチルエステルの形態にエステル化されている。より好ましくは、ＲＧ−Ｉ多糖は、そのようなエステル化度が０％〜７０％、より好ましくは０％〜６０％、さらにより好ましくは０％〜５５％、最も好ましくは０％〜５０％である。
【００７６】
好ましくは、ＲＧ−Ｉ多糖中のガラクツロン酸残基の０〜９５％は、アセチルエステルの形態にエステル化されている。より好ましくは、ＲＧ−Ｉ多糖は、そのようなエステル化度が５％〜９０％、より好ましくは７％〜５０％、最も好ましくは８％〜３０％である。
【００７７】
ＲＧ−Ｉ多糖の主鎖は、１つ又は複数の側鎖を含んでいてよい。これらの側鎖は、アラビノース及び／又はガラクトースの残基、並びにフコース、グルコース、グルクロン酸、キシロース、及び／又はウロン酸のモノマーの少量の残基を含んでいてもよい。１つ又は複数の側鎖は、好ましくはガラクタン側鎖、アラビナン側鎖及びアラビノガラクタン側鎖から選択される。
【００７８】
アラビナン側鎖は、少なくとも１つ又は複数のα（１，５）−結合のアラビノース残基を含み、ＲＧ−Ｉドメインのラムノース残基のＯ−４位で置換されている。アラビナン側鎖は、直鎖状であっても分枝状であってもよい。側鎖が直鎖状の場合、側鎖は、α（１，５）−結合のアラビノース残基からなる。アラビナン側鎖が分枝状の側鎖の場合、１つ又は複数のα−アラビノース残基は、α（１，５）−結合のアラビノースのＯ−２及び／又はＯ−３に結合している。
【００７９】
ガラクタン側鎖は、少なくとも１つ又は複数のβ（１，４）−結合のガラクトース残基を含み、ＲＧ−Ｉドメインのラムノース残基のＯ−４位で置換されている。
【００８０】
アラビノガラクタン側鎖は、ＲＧ−Ｉドメインのラムノース残基のＯ−４位で置換されており、Ｉ型アラビノガラクタン（ＡＧＩ）又はＩＩ型アラビノガラクタン（ＡＧＩＩ）であってよい。ＡＧＩは、Ｏ−６又はＯ−３位でモノマーＧａｌｐ単位による置換が起こり得る（１→４）−β−Ｄ−Ｇａｌｐ主鎖で構成されている。ＡＧＩは、α−Ｌ−Ａｒａｆ−ｐ残基及び／又は（１→５）−α−Ｌ−Ａｒａｆ短側鎖でさらに置換されている。ＡＧＩＩは、アラビノシル化された（１→６）−β−Ｄ−Ｇａｌｐ二次鎖で修飾されたα（１→３）−β−Ｄ−Ｇａｌｐ主鎖で構成されている。
【００８１】
好ましくは、アラビノース残基及びラムノース残基は、３０：１未満、より好ましくは１５：１未満、さらにより好ましくは８：１未満、最も好ましくは５：１未満のモル比でＲＧ−Ｉ多糖中に存在する。
【００８２】
ガラクトース残基及びラムノース残基は、好ましくは３０：１未満、より好ましくは１５：１未満、さらにより好ましくは８：１未満、最も好ましくは５：１未満のモル比でＲＧ−Ｉ多糖中に存在する。
【００８３】
アラビノース残基と、一方ではガラクトース残基及び他方ではラムノース残基との組合せが、通常、４０：１未満、より好ましくは２０：１未満、最も好ましくは１０：１未満のモル比でＲＧ−Ｉ多糖中に存在する。
【００８４】
ＲＧ−Ｉ多糖は、好ましくはＲＧ−Ｉ多糖に多く含まれるペクチン多糖単離物の形態でＲＧ−Ｉ多糖含有組成物に組み込まれている。したがって、特に好ましい実施形態では、ＲＧ−Ｉ多糖は、ＲＧ−Ｉ多糖含有組成物中に存在するペクチン多糖の少なくとも１０重量％、より好ましくは少なくとも２０重量％、さらにより好ましくは少なくとも３０重量％、最も好ましくは少なくとも４０重量％を占める。
【００８５】
通常、ガラクツロン酸残基、ラムノース残基、アラビノース残基及びガラクトース残基の組合せは、ＲＧ−Ｉ多糖含有組成物に含有されている糖中に存在する単糖残基の少なくとも３０モル％を構成する。より好ましくはこの組合せは、上記糖中の単糖残基の少なくとも４０モル％、さらにより好ましくは少なくとも４５モル％、さらにより好ましくは少なくとも５０モル％、最も好ましくは少なくとも７０モル％を構成する。
【００８６】
特に好ましいＲＧ−Ｉ多糖含有組成物では、ガラクツロン酸残基とラムノース残基の組合せは、ＲＧ−Ｉ多糖含有組成物に含有されている糖中に存在する単糖残基の少なくとも２５モル％、より好ましくは３０〜９０モル％、最も好ましくは３５〜７０モル％を占める。
【００８７】
本発明の別の態様では、食用組成物を調製する方法に関し、該方法は、１つ又は複数の食用原料を、乾物重量に基づき、少なくとも５％、より好ましくは少なくとも１０％、最も好ましくは少なくとも１５％の本明細書で先に特定したＲＧ−Ｉ多糖を含有する多糖成分と混合することを含む。
【００８８】
特に好ましい実施形態では、ＲＧ−Ｉ多糖は、多糖成分中に存在するペクチン多糖の少なくとも２０重量％、より好ましくは少なくとも４０重量％、さらにより好ましくは少なくとも５０重量％、最も好ましくは少なくとも６０重量％を占める。
【００８９】
多糖成分は、好ましくはリンゴ、ピーマン、ビルベリー、ニンジン、柑橘類果実、ブドウ、サトウダイコン、オリーブ、エンドウ、ジャガイモ及びその組合せから選択される植物供給源から得られた単離物である。
【００９０】
別の好ましい実施形態によれば、多糖成分は、含水量が６重量％未満、より好ましくは４重量％未満、最も好ましくは２重量％未満である。
【００９１】
多糖成分は、好ましくは微粒子材料、例えば粉末、顆粒又はペレット状材料である。
【００９２】
多糖成分は、乾物重量に基づき、好ましくは５０％未満、より好ましくは４０重量％未満、最も好ましくは２５重量％未満の、グルコース、フルクトース、スクロース及びその組合せから選択される糖を含有する。
【００９３】
本発明のさらに別の態様は、本発明の方法によって調製された食用組成物に関する。
【００９４】
好ましくは、食用組成物は、１０〜６０エネルギー％のタンパク質及び５〜５０エネルギー％の脂肪及び１５〜９０エネルギー％の炭水化物を含有する。
【００９５】
別の好ましい実施形態によれば、食用組成物は：
１，０００〜２，５００ＩＵ／ｋｇのビタミンＡ；
０．１〜１０ｍｃｇ／ｋｇのビタミンＢ１２；
１００〜３５０ＩＵ／ｋｇのビタミンＤ；
２〜２０ＩＵ／ｋｇのビタミンＥ；及び
０．２５〜０．６０ｍｇ／ｋｇのビタミンＫ
を含有する。
【実施例】
【００９６】
本発明は、以下の非限定的な例によってさらに例示されている。
【００９７】
実施例１
パイロットプラント規模で、以下に説明する手順を使用して、ＲＧ−Ｉ多糖画分を乾燥ピーマン粉末（Ｐａｐｒｉｋａ  Ｍｉｌｄ  ８０−１００  Ａｔｓａ  Ｓｔｅａｍｔｒ−  Ｆｅｌｉｘ  Ｒｅｖｅｒｔｅ  Ｓ．Ａ．）から単離した。
【００９８】
ピーマン材料（１００ｋｇ）を、８０％水性エタノールを用いて穏やかな操縦下で３回、すなわち８０℃で２時間を２回、次いで室温で終夜洗浄し；毎回１２．５％（ｗ／ｖ）を使用して、エタノール可溶性物質を除去した。エタノール不溶性残基を毎回遠心分離（１０００Ｇで１０分）によって回収した。３回の洗浄サイクル後に得られたエタノール不溶性残基を乾燥させ、９０ｋｇを温度が９５℃の熱水１０００Ｌで９０分間２回抽出した。毎回、１０００Ｇで１０分間遠心分離した後、上清を保持した。回収した上清を続いて布に通してろ過し、２ＫＤａの分子量カットオフ膜を使用して限外ろ過して、低分子量物質を除去した。濃縮水を乾燥させることによって乾燥ＲＧ−Ｉ濃縮（ｅｎｒｉｃｈｅｄ）抽出物が得られ、約５ｋｇの乾燥ＲＧ−Ｉ濃縮多糖抽出物をもたらした。
【００９９】
ＲＧ−Ｉ多糖濃縮抽出物のキャラクタリゼーション
抽出物の単糖組成を酸加水分解（メタノリシス）後に決定した。中性単糖を、パルスアンペロメトリック検出と組合せた高性能陰イオン交換クロマトグラフィー（ＨＰＡＥＣ−ＰＡＤ）を使用して分析した。ウロン酸（ガラクツロン酸はウロン酸より優勢である）を、比色ｍ−ヒドロキシジフェニルアッセイを使用して決定した。
【０１００】
アセチル化度及びメチル化度を次のように決定した：
多糖試料（２〜５ｍｇ）を水酸化ナトリウム（０．１Ｍ、終夜、２０℃）で処理した。ＤＢ−ＷＡＸ  ＥＴＲカラム、Ｃｒｙｏ  Ｆｏｃｕｓ−４冷却トラップ及びＦＩＤ検出を備えたヘッドスペースＧＣを使用して、放出したメタノールを測定した（Ｈｕｉｓｍａｎら、Ｆｏｏｄ  Ｈｙｄｒｏｃｏｌｌｏｉｄｓ、１８、４、２００４、６６５−６６８から適応させた）。試料を中和（１Ｍ  ＨＣｌ）し、次いで放出されたアセチルを、Ａｍｉｎｅｘ  ＨＰＸ  ８７Ｈカラムとガードカラム及びＲＩ検出を備えたＨＰＬＣを使用して定量化した（Ｖｏｒａｇｅｎら  Ｆｏｏｄ  Ｈｙｄｒｏｃｏｌｌｏｉｄｓ、１、１、１９８６、６５−７０から適応させた）。メチル化度及びアセチル化度が既知のサトウダイコンペクチンを標準として使用した。エステル化度は、ウロン酸の量のパーセント値として放出されるメタノール及び酢酸のモル量として表す。
抽出物の分子特性を表１に示す。
【０１０１】
【表１】
2021514383.tif 000002
【０１０２】
実施例２
６週齢の特定病原体を含まない雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、自由に滅菌飲料水と、３０ｍｍｏｌ／ｋｇカルシウム（非感染及び感染グループ）を含む半合成の照射されたＡＩＮ−９３Ｇ食餌（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｗｉｊｋ  ｂｉｊ  Ｄｕｕｒｓｔｅｄｅ、オランダ）又はピーマンからのＲＧ−Ｉ濃縮抽出物１％（ｗ／ｗ）を補充した同じ食物を与えた。
【０１０３】
マウスを無作為に治療グループに割り当て、１ケージ当たりマウス３匹を２週間飼育し、その後個々にさらに１週間飼育した。ＡＩＮ−９３Ｇ食餌の組成は、Ｒｅｅｖｅｓら（ＡＩＮ−９３  ｐｕｒｉｆｉｅｄ  ｄｉｅｔｓ  ｆｏｒ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｒｏｄｅｎｔｓ：  ｆｉｎａｌ  ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  ａｄ  ｈｏｃ  ｗｒｉｔｉｎｇ  ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｒｅｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＡＩＮ−７６Ａ  ｒｏｄｅｎｔ  ｄｉｅｔ．  Ｊ  Ｎｕｔｒ  （１９９３）１２３：１９３９−１９５１）によって記載されている。
【０１０４】
３週間の食餌治療後、マウスは１０８ＣＦＵのＳ．エンテリカ血清型エンテリティディス（臨床分離株、ファージ４型；ＮＩＺＯ１２４１株、ＮＩＺＯ  ｆｏｏｄ  ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｅｄｅ、オランダ）を含有する生理食塩水０．２ｍＬで強制飼養により感染させた。マウスの１つのグループは偽治療し（非感染、Ｎ＝６）、他の２つのグループは感染させた（感染；Ｎ＝１２及び感染させた試験グループ；Ｎ＝１２）。
【０１０５】
糞便は、感染させた日から毎日回収した。マウスを安楽死させ、感染させた４日後に回腸試料を回収した。生存可能なＳ．エンテリカ血清型エンテリティディスの数を定量化するために、回腸の中心から約１ｃｍを切り、縦方向に開き、生理食塩水で簡単に洗い流した。糞便及び回腸試料を滅菌の生理食塩水中でホモジナイズし、希釈液を、コロニー形成単位（ＣＦＵ）カウントのためにブリリアントグリーン修飾プレート（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）に平板培養した。細菌数は、湿重量１グラム当たりのＣＦＵの対数として表す。結果を表２及び３にまとめて示す。
【０１０６】
【表２】
2021514383.tif 000003
【０１０７】
【表３】
2021514383.tif 000004
【０１０８】
実施例３
ヒト結腸の短期シミュレーションでは、サルモネラエンテリティディスに対するリンゴからのＲＧ−Ｉ多糖の抗病原性活性を試験した。
【０１０９】
リンゴＲＧ−Ｉ多糖は、ペクチナーゼ（ペクチネックス（Ｐｅｃｔｉｎｅｘ）（登録商標）Ｕｌｔｒａ  Ｍａｓｈ、Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）を使用した水抽出（１０％ｗ／ｗ  ２時間４５℃）、熱不活性化（９０℃、１０分）、デカントによる不溶性残留物の除去、限外ろ過（４０ｋＤａのカット）及び最後に乾燥させることによって、乾燥リンゴ搾りかすから製造した（リンゴジュース製造の残渣、ＧｒｅｅｎｄＦｉｅｌｄｓ、ポーランド）。単糖組成の決定は、実施例１に記載されているように行なった。結果を表４に示す。
【０１１０】
【表４】
2021514383.tif 000005
【０１１１】
結腸に存在する栄養素（例えばムチンなどの宿主由来グリカン）を含有する、糖を含まない基本結腸培地を、試験抽出物（５ｇ／Ｌ最終濃度）を既に含有している７０ｍＬペニシリンボトルに導入した。ボトルをゴム栓で密封し、嫌気性はＮ２で洗い流すことで達成した。続いて、凍結した糞便試料からヒト糞便接種材料を調製した。解凍、嫌気性リン酸緩衝液との混合、均質化、及び遠心分離（２分、５００Ｇ）による粒子の除去の後、糞便接種材料を異なるボトルに加えた。ディスバイオシスコミュニティの技術シミュレーションとして、糞便接種材料を５倍希釈で投与した。さらに、ＢＨＩブロスで終夜育成したサルモネラエンテリティディス培養物の２％接種材料を、培養に加えた（３．６２  １０７ＣＦＵ／ｍＬ最終濃度）。その時点で、４８時間の培養を開始し、その間、温度を３７℃に制御し、振盪機（９０ｒｐｍ）で連続混合を保証した。２４及び４８時間培養後に試料を採取した。
【０１１２】
サルモネラエンテリティディスコロニー形成を、サルモネラ株の耐性があるストレプトマイシン１００ｐｐｍを投与した選択的マッコンキー寒天を使用した選択的計数を使用して評価した。ラクトースを利用できないため、サルモネラ種を他の細菌と区別した結果、ピンク色ではないコロニーが得られた。
【０１１３】
糖を含まない結腸培地及びイヌリン、よく知られているプレバイオティック（Ｂｅｎｅｏ、ＤＰ≧２３、約１００％イヌリン）は、それぞれ負及び正の対照として使用した。
培養実験の結果を表５に示す。
【０１１４】
【表５】
2021514383.tif 000006
【図１】
2021514383.tif 000007
【図２】
2021514383.tif 000008
【手続補正書】
【提出日】令和2年8月4日(2020.8.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
動物におけるサルモネラ症の予防又は治療に使用するための組成物の製造における、ペクチン多糖の使用であって、
前記使用が、前記組成物を前記動物に投与することを含み、
前記組成物は、少なくとも２０ｋＤａの分子量を有する、ガラクツロン酸残基及びラムノース残基からなる主鎖を有するラムノガラクツロナンＩ（ＲＧ−Ｉ）多糖を、（ｉ）乾物重量に基づき少なくとも０．０１％、かつ（ｉｉ）前記ペクチン多糖の少なくとも１０重量％含有し、
前記ラムノース残基が、α（１→４）−ガラクツロン酸−α（１→２）−ラムノース残基に含有されており、
ラムノース残基が、前記ＲＧ−１多糖に含有されている単糖残基の４〜３５％を占め、
ガラクツロン酸残基が、前記ＲＧ−１多糖に含有されている前記単糖残基の２０〜７０％を占め、
前記ＲＧ−Ｉ多糖中の、ガラクツロン酸残基のラムノース残基に対するモル比は、９：１〜１：１の範囲内であり、
前記ＲＧ−１多糖中の、アラビノース残基のラムノース残基に対するモル比は、８：１未満であり、
前記ＲＧ−１多糖中の、ガラクトース残基のラムノース残基に対するモル比は、５：１未満であり、
アラビノース残基、ガラクトース残基及びラムノースの組合せが、前記ＲＧ−１多糖中に１０：１未満のモル比で存在し、
前記ＲＧ−１多糖中の前記ガラクツロン酸残基の０〜５０％が、メチルエステルの形態にエステル化されており、
前記ＲＧ−１多糖中の前記ガラクツロン酸残基の８〜３０％がアセチルエステルの形態にエステル化されており、
ペクチン多糖が、任意選択で分枝状多糖であり、前記分枝状多糖が、２ｋＤａ超の分子量を有し、ガラクツロン酸残基及びラムノース残基からなる主鎖を含み、前記ラムノース残基が、α（１→４）−ガラクツロン酸−α（１→２）ラムノース残基に含まれている、使用。
【請求項２】
前記組成物が、少なくとも１日１回、少なくとも３日の期間、１日当たり体重１ｋｇ当たり少なくとも１ｍｇのＲＧ−Ｉ多糖を供給する量で前記動物に投与される、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記組成物が、サルモネラ症にまだ罹っていない動物に投与される、請求項１又は２に記載の使用。
【請求項４】
前記サルモネラ症が、サルモネラ・エンテリカ血清型エンテリティディスを原因とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
前記サルモネラ症が、サルモネラ・エンテリカ血清型ティフィムリウムを原因とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
前記動物が家禽である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７】
前記動物がブタである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
前記動物がヒトである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
前記組成物が、
１，０００〜２，５００ＩＵ／ｋｇのビタミンＡ；
０．１〜１０ｍｃｇ／ｋｇのビタミンＢ１２；
１００〜３５０ＩＵ／ｋｇのビタミンＤ；
２〜２０ＩＵ／ｋｇのビタミンＥ；及び
０．２５〜０．６０ｍｇ／ｋｇのビタミンＫ
を更に含有する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０】
ＲＧ−Ｉ多糖が、前記組成物中に存在するペクチン多糖の少なくとも１０重量％を占める、請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１】
ガラクツロン酸残基、ラムノース残基、アラビノース残基及びガラクトース残基の組合せが、前記組成物に含有されている前記糖中に存在する前記単糖残基の少なくとも３０モル％を構成する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２】
ガラクツロン酸残基及びラムノース残基の組合せが、前記組成物に含有されている前記糖中に存在する前記単糖残基の少なくとも２５モル％を占める、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３】
前記ＲＧ−Ｉ多糖が、リンゴ、ピーマン、ビルベリー、ニンジン、柑橘類果実、ブドウ、ジャガイモ、サトウダイコン、オリーブ、エンドウ及びそれらの組合せから選択される植物供給源から得られる、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４】
乾物重量に基づき少なくとも５％の請求項１に特定した前記ＲＧ−Ｉ多糖を含有する多糖成分の、ブタ、子ウシ又は家禽のための飼料の調製のための使用であって、前記飼料が、１０〜６０エネルギー％のタンパク質、５〜５０エネルギー％の脂肪、１５〜９０エネルギー％の炭水化物及び０〜１０重量％の間の灰分を含む、使用。
【請求項１５】
前記ＲＧ−１多糖が、前記多糖成分中に存在する前記ペクチン多糖の少なくとも２０重量％を占める、請求項１４に記載の使用。
【国際調査報告】
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