(57)【要約】本発明は、ＪＡＫに対する阻害活性を有する医療薬剤の調製のための中間体として有用である化合物を調製するためのプロセスに関する。ＪＡＫファミリーの４つのメンバーの各々が、炎症に関連するサイトカインのうちの少なくとも１つのシグナル伝達に関わっている。その結果、JAKファミリーのすべてのメンバーに対して汎活性を持つ化学阻害剤は、重度の喘息、COPD、および慢性移植肺機能不全（CLAD）などの肺炎症性疾患に寄与する広範囲の炎症促進性経路を調節し得る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｊ−１５の化合物またはその塩：
【化６６】
2021535176.tif 000070
（式中、Ｘは、Ｂｒ、ＩおよびＣｌからなる群から選択され、
ＰＧ１は、カルボン酸保護基であり、
ＰＧ２は、アミノ保護基であり、
ＰＧ３は、アミノ保護基である）
を調製するためのプロセスであって、
前記プロセスは、
（ａ）式Ｊ−１４の化合物：
【化６７】
2021535176.tif 000071
またはその塩をヒドラジンと反応させ、式Ｊ−１５の前記化合物を得る工程、および
（ｂ）必要に応じて化合物Ｊ−１５の塩を形成する工程
を含む、プロセス。
【請求項２】
ヒドラジンとの前記反応が、６０℃±２０℃で行われる、請求項１に記載のプロセス。
【請求項３】
Ｘが、Ｂｒ、ＩおよびＣｌからなる群から選択され、
ＰＧ１が、アルキルまたはベンジル基であり、前記ベンジル基は、必要に応じて置換されており、
ＰＧ２が、アシル基、アルコキシカルボニル基、アリールメチル基およびシリル基からなる群から選択され、
ＰＧ３が、アシル基、アルコキシカルボニル基、アリールメチル基およびシリル基からなる群から選択される、請求項１または２のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項４】
ＸがＢｒであり、ＰＧ１がベンジルであり、ＰＧ２がｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルであり、ＰＧ３がベンジルである、請求項１または２のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項５】
化合物Ｊ−１４またはその塩が、
（ａ）式Ｊ−１３の化合物：
【化６８】
2021535176.tif 000072
（式中、Ｙは、脱離基である）を式Ｊ−１１の化合物：
【化６９】
2021535176.tif 000073
と塩基の存在下で反応させ、Ｊ−１４を得る工程、および
（ｂ）必要に応じて化合物Ｊ−１４の塩を形成する工程
によって調製される、請求子１または４のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項６】
Ｙが、Ｃｌである、請求項５に記載のプロセス。
【請求項７】
式Ｊ−１４の化合物
【化７０】
2021535176.tif 000074
またはその塩であって、
式中、Ｘは、Ｂｒ、ＩおよびＣｌからなる群から選択され、
ＰＧ１は、カルボン酸保護基であり、
ＰＧ２は、アミノ保護基であり、
ＰＧ３は、アミノ保護基である、
化合物またはその塩。
【請求項８】
Ｘが、Ｂｒ、ＩおよびＣｌからなる群から選択され、
ＰＧ１が、アルキルまたはベンジル基であり、前記ベンジル基は、必要に応じて置換されており、
ＰＧ２が、アシル基、アルコキシカルボニル基、アリールメチル基およびシリル基からなる群から選択され、
ＰＧ３が、アシル基、アルコキシカルボニル基、アリールメチル基およびシリル基からなる群から選択される、請求項７に記載の化合物またはその塩。
【請求項９】
前記式Ｉ−１４：
【化７１】
2021535176.tif 000075
を有する、請求項７に記載の化合物またはその塩。
【請求項１０】
式Ｊ−１５の化合物：
【化７２】
2021535176.tif 000076
またはその塩であって、
式中、
Ｘは、Ｂｒ、ＩおよびＣｌからなる群から選択され、
ＰＧ１は、カルボン酸保護基であり、
ＰＧ２は、アミノ保護基であり、
ＰＧ３は、アミノ保護基である、
化合物またはその塩。
【請求項１１】
Ｘが、Ｂｒ、ＩおよびＣｌからなる群から選択され、
ＰＧ１が、アルキルまたはベンジル基であり、前記ベンジル基は、必要に応じて置換されており、
ＰＧ２が、アシル基、アルコキシカルボニル基、アリールメチル基およびシリル基からなる群から選択され、
ＰＧ３が、アシル基、アルコキシカルボニル基、アリールメチル基およびシリル基からなる群から選択される、請求項１０に記載の化合物またはその塩。
【請求項１２】
前記式Ｉ−１５：
【化７３】
2021535176.tif 000077
を有する、請求項１０に記載の化合物またはその塩。
【請求項１３】
式Ｊ−１６の化合物またはその塩：
【化７４】
2021535176.tif 000078
（式中、
ＰＧ１は、カルボン酸保護基であり、
ＰＧ２は、アミノ保護基であり、
ＰＧ３は、アミノ保護基であり、
ＰＧ４は、ヒドロキシル保護基であり、
Ｒは、ＨまたはＦである）
を調製するためのプロセスであって、
前記プロセスは、
（ａ）式Ｊ−１３の化合物：
【化７５】
2021535176.tif 000079
（式中、Ｘは、Ｂｒ、ＩおよびＣｌからなる群から選択され、Ｙは脱離基である）を式Ｊ−１１の化合物：
【化７６】
2021535176.tif 000080
と塩基の存在下で反応させ、式Ｊ−１４の化合物：
【化７７】
2021535176.tif 000081
を得る工程、および必要に応じて化合物Ｊ−１４の塩を形成する工程；
（ｂ）式Ｊ−１４の前記化合物またはその塩をヒドラジンと反応させ、式Ｊ−１５の化合物：
【化７８】
2021535176.tif 000082
を得る工程、および必要に応じて化合物Ｊ−１５の塩を形成する工程；
（ｃ）式Ｊ−１５の前記化合物またはその塩を式Ｊ−５、Ｊ−６またはＪ−７の化合物：
【化７９】
2021535176.tif 000083
（式中、ＲａおよびＲｂは、Ｃ１−８アルキルからそれぞれ独立して選択され、ここで、ＲａおよびＲｂは必要に応じて一緒になって４〜８員環を形成し得る）
と塩基、パラジウム触媒およびホスフィン配位子の存在下で反応させ、式Ｊ−１６の前記化合物を得る工程、および必要に応じて化合物Ｊ−１６の塩を形成する工程を含む、プロセス。
【請求項１４】
工程（ｃ）が、ジボロン試薬または触媒の存在下で行われる、請求項１３に記載のプロセス。
【請求項１５】
工程（ｃ）が、テトラヒドロキシジボロン、ジボロン酸エステルまたはビス（ピナコラト）ジボロンとフッ化カリウムフッ化水素酸塩との反応の生成物の存在下で行われる、請求項１４に記載のプロセス。
【請求項１６】
工程（ｂ）におけるヒドラジンとの前記反応が、６０℃±２０℃で行われる、請求項１３から１５のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項１７】
Ｘが、Ｂｒ、ＩおよびＣｌからなる群から選択され、
ＰＧ１が、アルキルまたはベンジル基であり、前記ベンジル基は、必要に応じて置換されており、
ＰＧ２が、アシル基、アルコキシカルボニル基、アリールメチル基およびシリル基からなる群から選択され、
ＰＧ３が、アシル基、アルコキシカルボニル基、アリールメチル基およびシリル基からなる群から選択され、
ＰＧ４が、シリル基、アシル基、およびアリールメチル基からなる群から選択される、請求項１３から１６のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項１８】
ＸがＢｒであり、ＰＧ１がベンジルであり、ＰＧ２がｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルであり、ＰＧ３がベンジルであり、ＰＧ４がベンジルである、請求項１３から１６のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項１９】
ＹがＣｌである、請求項１３から１８のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項２０】
工程（ｃ）の前記パラジウム触媒およびホスフィン配位子が、ビス（ジ‐ｔｅｒｔ‐ブチル（４‐ジメチルアミノフェニル）ホスフィン）ジクロロパラジウム（ＩＩ）である、求項１３から１９のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項２１】
式Ｊ−５の化合物が、工程（ｃ）において使用される、請求項１３から２０のいずれか一項に記載のプロセス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の背景
発明の分野
本発明は、医療薬剤の調製のための中間体として有用である化合物を調製するためのプロセスに関する。特に、本発明は、ＪＡＫ阻害剤の中間体の調製に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＪＡＫファミリーは、４つのメンバー、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、およびチロシンキナーゼ２（ＴＹＫ２）を含む。サイトカインとＪＡＫ依存性サイトカイン受容体の結合は受容体二量体化を誘導し、それによりＪＡＫキナーゼのチロシン残基がリン酸化され、ＪＡＫ活性化がもたらされる。次に、リン酸化されたＪＡＫは、様々なＳＴＡＴタンパク質に結合してリン酸化し、そのタンパク質が二量体化し、細胞核内に取り込まれ、遺伝子転写を直接調節し、他の作用の中でも、炎症性疾患に関連する下流の作用をもたらす。ＪＡＫは通常、ホモ二量体またはヘテロ二量体としてサイトカイン受容体と対で会合する。ＪＡＫファミリーの４つのメンバーの各々が、炎症に関連するサイトカインのうちの少なくとも１つのシグナル伝達に関わっている。その結果、JAKファミリーのすべてのメンバーに対して汎活性を持つ化学阻害剤は、重度の喘息、COPD、および慢性移植肺機能不全（CLAD）などの肺炎症性疾患に寄与する広範囲の炎症促進性経路を調節し得る。したがって、特定のＪＡＫ阻害剤を調製するための効率的なプロセスを有することが望ましいであろう。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
発明の概要
本発明は、ＪＡＫに対する阻害活性を有する医療薬剤の調製のための中間体として有用である化合物を調製するためのプロセスに関する。
【０００４】
したがって、一態様において、本発明は、式Ｊ−１５の化合物またはその塩：
【化１】
2021535176.tif 000002
（式中、Ｘは、Ｂｒ、ＩおよびＣｌからなる群から選択され、
ＰＧ１は、カルボン酸保護基であり、
ＰＧ２は、アミノ保護基であり、
ＰＧ３は、アミノ保護基である）
を調製するためのプロセスを提供し、
前記プロセスは、
（ａ）式Ｊ−１４の化合物：
【化２】
2021535176.tif 000003
またはその塩をヒドラジンと反応させ、式Ｊ−１５の前記化合物を得る工程、および
（ｂ）必要に応じて化合物Ｊ−１５の塩を形成する工程
を含む。
【０００５】
別の態様において、本発明は、式Ｊ−１４の化合物
【化３】
2021535176.tif 000004
またはその塩であって、
式中、Ｘは、Ｂｒ、ＩおよびＣｌからなる群から選択され、
ＰＧ１は、カルボン酸保護基であり、
ＰＧ２は、アミノ保護基であり、
ＰＧ３は、アミノ保護基である、
化合物またはその塩を提供する。
【０００６】
別の態様において、本発明は、式Ｊ−１５の化合物：
【化４】
2021535176.tif 000005
またはその塩であって、
式中、
Ｘは、Ｂｒ、ＩおよびＣｌからなる群から選択され、
ＰＧ１は、カルボン酸保護基であり、
ＰＧ２は、アミノ保護基であり、
ＰＧ３は、アミノ保護基である、
式Ｊ−１５の化合物またはその塩を提供する。
【０００７】
別の態様において、本発明は、式Ｊ−１６の化合物またはその塩：
【化５】
2021535176.tif 000006
（式中、
ＰＧ１は、カルボン酸保護基であり、
ＰＧ２は、アミノ保護基であり、
ＰＧ３は、アミノ保護基であり、
ＰＧ４は、ヒドロキシル保護基であり、
Ｒは、ＨまたはＦである）
を調製するためのプロセスを提供し、
前記プロセスは、
（ａ）式Ｊ−１３の化合物：
【化６】
2021535176.tif 000007
（式中、Ｘは、Ｂｒ、ＩおよびＣｌからなる群から選択され、Ｙは脱離基である）を式Ｊ−１１の化合物：
【化７】
2021535176.tif 000008
と塩基の存在下で反応させ、式Ｊ−１４の化合物：
【化８】
2021535176.tif 000009
を得る工程、および必要に応じて化合物Ｊ−１４の塩を形成する工程；
（ｂ）式Ｊ−１４の前記化合物またはその塩をヒドラジンと反応させ、式Ｊ−１５の化合物：
【化９】
2021535176.tif 000010
を得る工程、および必要に応じて化合物Ｊ−１５の塩を形成する工程；
（ｃ）式Ｊ−１５の前記化合物またはその塩を式Ｊ−５、Ｊ−６またはＪ−７の化合物：
【化１０】
2021535176.tif 000011
（式中、ＲａおよびＲｂは、Ｃ１−８アルキルからそれぞれ独立して選択され、ここで、ＲａおよびＲｂは必要に応じて一緒になって４〜８員環を形成し得る）
と塩基、パラジウム触媒およびホスフィン配位子の存在下で反応させ、式Ｊ−１６の前記化合物を得る工程、および必要に応じて化合物Ｊ−１６の塩を形成する工程を含む。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
発明の詳細な説明
一態様において、本発明は、式Ｊ−１５の化合物またはその塩：
【化１１】
2021535176.tif 000012
（式中、Ｘは、Ｂｒ、ＩおよびＣｌからなる群から選択され、
ＰＧ１は、カルボン酸保護基であり、
ＰＧ２は、アミノ保護基であり、
ＰＧ３は、アミノ保護基である）
を調製するためのプロセスを提供し、
前記プロセスは、
（ａ）式Ｊ−１４の化合物：
【化１２】
2021535176.tif 000013
またはその塩をヒドラジンと反応させ、式Ｊ−１５の前記化合物を得る工程、および
（ｂ）必要に応じて化合物Ｊ−１５の塩を形成する工程
を含む。
いくつかの態様において、ヒドラジンとの反応は、約60℃で行われる。いくつかの態様において、ヒドラジンとの反応は、60℃±20℃で行われる。
【０００９】
いくつかの態様において、Ｘは、Ｂｒ、ＩおよびＣｌからなる群から選択され、ＰＧ１は、アルキルまたはベンジル基であり、前記ベンジル基は、必要に応じて置換されており、ＰＧ２は、アシル基、アルコキシカルボニル基、アリールメチル基およびシリル基からなる群から選択され、ＰＧ３は、アシル基、アルコキシカルボニル基、アリールメチル基およびシリル基からなる群から選択される。
【００１０】
いくつかの態様において、ＸはＢｒである。いくつかの態様において、ＸはＢｒであり、ＰＧ１はベンジルであり、ＰＧ２はｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルであり、ＰＧ３はベンジルである。
【００１１】
いくつかの態様において、化合物Ｊ−１４またはその塩は、
（ａ）式Ｊ−１３の化合物：
【化１３】
2021535176.tif 000014
（式中、Ｙは、脱離基である）を式Ｊ−１１の化合物：
【化１４】
2021535176.tif 000015
と塩基の存在下で反応させ、Ｊ−１４を得る工程、および
（ｂ）必要に応じて化合物Ｊ−１４の塩を形成する工程
によって調製される。
【００１２】
いくつかの態様において、ＹはＣｌである。
【００１３】
いくつかの態様において、本発明は、式Ｊ−１４の化合物：
【化１５】
2021535176.tif 000016
またはその塩であって、
式中、Ｘは、Ｂｒ、ＩおよびＣｌからなる群から選択され、
ＰＧ１は、カルボン酸保護基であり、
ＰＧ２は、アミノ保護基であり、
ＰＧ３は、アミノ保護基である、
化合物またはその塩を提供する。
【００１４】
いくつかの態様において、Ｘは、Ｂｒ、ＩおよびＣｌからなる群から選択され、ＰＧ１が、アルキルまたはベンジル基であり、前記ベンジル基は、必要に応じて置換されており、ＰＧ２は、アシル基、アルコキシカルボニル基、アリールメチル基およびシリル基からなる群から選択され、ＰＧ３は、アシル基、アルコキシカルボニル基、アリールメチル基およびシリル基からなる群から選択される。
【００１５】
別の態様において、本発明は、式Ｉ−１４：
【化１６】
2021535176.tif 000017
を有する化合物またはその塩を提供する。
【００１６】
別の態様において、本発明は、式Ｊ−１５の化合物：
【化１７】
2021535176.tif 000018
またはその塩であって、
式中、
Ｘは、Ｂｒ、ＩおよびＣｌからなる群から選択され、
ＰＧ１は、カルボン酸保護基であり、
ＰＧ２は、アミノ保護基であり、
ＰＧ３は、アミノ保護基である、
化合物またはその塩を提供する。
【００１７】
いくつかの態様において、Ｘは、Ｂｒ、ＩおよびＣｌからなる群から選択され、ＰＧ１が、アルキルまたはベンジル基であり、前記ベンジル基は、必要に応じて置換されており、ＰＧ２は、アシル基、アルコキシカルボニル基、アリールメチル基およびシリル基からなる群から選択され、ＰＧ３は、アシル基、アルコキシカルボニル基、アリールメチル基およびシリル基からなる群から選択される。
【００１８】
別の態様において、本発明は、式Ｉ−１５：
【化１８】
2021535176.tif 000019
を有する化合物またはその塩を提供する。
【００１９】
別の態様において、本発明は、式Ｊ−１６の化合物またはその塩：
【化１９】
2021535176.tif 000020
（式中、
ＰＧ１は、カルボン酸保護基であり、
ＰＧ２は、アミノ保護基であり、
ＰＧ３は、アミノ保護基であり、
ＰＧ４は、ヒドロキシル保護基であり、
Ｒは、ＨまたはＦである）
を調製するためのプロセスを提供し、
前記プロセスは、
（ａ）式Ｊ−１３の化合物：
【化２０】
2021535176.tif 000021
（式中、Ｘは、Ｂｒ、ＩおよびＣｌからなる群から選択され、Ｙは脱離基である）を式Ｊ−１１の化合物：
【化２１】
2021535176.tif 000022
と塩基の存在下で反応させ、式Ｊ−１４の化合物：
【化２２】
2021535176.tif 000023
を得る工程、および必要に応じて化合物Ｊ−１４の塩を形成する工程；
（ｂ）式Ｊ−１４の前記化合物またはその塩をヒドラジンと反応させ、式Ｊ−１５の化合物：
【化２３】
2021535176.tif 000024
を得る工程、および必要に応じて化合物Ｊ−１５の塩を形成する工程；
（ｃ）式Ｊ−１５の前記化合物またはその塩を式Ｊ−５、Ｊ−６またはＪ−７の化合物：
【化２４】
2021535176.tif 000025
（式中、ＲａおよびＲｂは、Ｃ１−８アルキルからそれぞれ独立して選択され、ここで、ＲａおよびＲｂは必要に応じて一緒になって４〜８員環を形成し得る）
と塩基、パラジウム触媒およびホスフィン配位子の存在下で反応させ、式Ｊ−１６の前記化合物を得る工程、および必要に応じて化合物Ｊ−１６の塩を形成する工程を含む。
【００２０】
いくつかの態様において、工程（ｃ）は、ジボロン試薬の存在下で行われる。いくつかの態様において、工程（ｃ）は、テトラヒドロキシジボロンまたはジボロン酸エステルの存在下で行われる。いくつかの実施形態では、触媒は、ビス（ピナコラト）ジボロンとフッ化カリウムフッ化水素酸塩との反応の生成物である。いくつかの実施形態では、触媒は、プロパン−２−オール中のビス（ピナコラト）ジボロンを水中のフッ化カリウムフッ化水素酸塩と反応させ、続いて得られた固体を濾過および乾燥することによって得られる。
【００２１】
いくつかの態様において、工程（ｂ）におけるヒドラジンとの反応は、６０℃±２０℃で行われる。
【００２２】
いくつかの態様において、Ｘは、Ｂｒ、ＩおよびＣｌからなる群から選択され、
ＰＧ１は、アルキルまたはベンジル基であり、前記ベンジル基は、必要に応じて置換されており、
ＰＧ２は、アシル基、アルコキシカルボニル基、アリールメチル基およびシリル基からなる群から選択され、
ＰＧ３は、アシル基、アルコキシカルボニル基、アリールメチル基およびシリル基からなる群から選択され、
ＰＧ４が、シリル基、アシル基、およびアリールメチル基からなる群から選択される。いくつかの態様において、ＸはＢｒである。いくつかの態様において、ＸはＢｒであり、ＰＧ１はベンジルであり、ＰＧ２はｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルであり、ＰＧ３はベンジルであり、ＰＧ４はベンジルである。
【００２３】
いくつかの態様において、ＹはＣｌである。
【００２４】
いくつかの態様において、工程（ｃ）のパラジウム触媒およびホスフィン配位子は、ビス（ジ‐ｔｅｒｔ‐ブチル（４‐ジメチルアミノフェニル）ホスフィン）ジクロロパラジウム（ＩＩ）である。
【００２５】
本プロセスにおいて、化合物J-13：
【化２５】
2021535176.tif 000026
は、式J-11の化合物：
【化２６】
2021535176.tif 000027
と塩基の存在下で反応し、式J-14の化合物：
【化２７】
2021535176.tif 000028
を与える。
【００２６】
典型的には、反応は、トリメチルアミンなどの過剰（例えば、３から７当量）の塩基の存在下で、アセトニトリルなどの溶媒中で行われる。1から2当量のJ-13が典型的に使用される。
【００２７】
本プロセスにおいて、化合物Ｊ−１４またはその塩は、ヒドラジンと反応して、式Ｊ−１５の化合物：
【化２８】
2021535176.tif 000029
を与える。
【００２８】
典型的には、反応はＴＨＦなどの溶媒中で行われ、過剰のヒドラジンが、例えば２から１０当量で使用される。反応は、完了するまで、典型的には０．５から６時間、約６０℃で加熱される。
【００２９】
本プロセスにおいて、化合物Ｊ−１５またはその塩を、式Ｊ−５、Ｊ−６またはＪ−７の化合物：
【化２９】
2021535176.tif 000030
と塩基、パラジウム触媒およびホスフィン配位子の存在下で反応させ、式Ｊ-16の化合物：
【化３０】
2021535176.tif 000031
を得る。
【００３０】
反応は、触媒量のパラジウム触媒およびホスフィン配位子（約０．００５から約０．1当量）ならびに約2から約6当量の塩基の存在下で、Ｊ−１６を約１から約１．５当量のＪ−５、Ｊ−６またはＪ−７と接触させることによって典型的に行われる。追加の触媒の存在下で反応を行うと、生成物J-16の収率が増加する。追加の触媒は、ジボロン試薬であり得る。追加の触媒は、調製４に示されるように、テトラヒドロキシジボロン、ジボロン酸エステル、またはビス（ピナコラト）ジボロンとフッ化カリウムフッ化水素酸塩との反応の生成物であり得る。
【００３１】
適切なパラジウム触媒として、ビス（ジ-tert-ブチル（4-ジメチルアミノフェニル）ホスフィン）ジクロロパラジウム（II）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（0）（Pd2dba3）、酢酸パラジウム（II）（Pd（OAc）2）、ジクロロ（1,1'-ビス（ジフェニルホスフィノ）−フェロセン）ジパラジウム（II）（Pd（dppf）Cl2）、ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）−パラジウム（II）（Pd（PPh3）2Cl2）などが挙げられ、一般的な略語は、括弧内に示される。本反応に有用なホスフィン配位子として、トリシクロヘキシルホスフィン（PCy3）、トリシクロヘキシルホスフィンテトラフルオロボレート（PCy3HBF4）、1,1'-ビス（ジフェニルホスフィノ）−フェロセン（dppf）、1,1'-ビス（ジ-tert-ブチルホスフィノ）フェロセン、トリ（2-フリル）ホスフィン、1,3-ビス（ジフェニルホスフィノ）プロパン（dppp）、1,5-ビス（ジフェニルホスフィノ）ペンタン（dpppe）、トリ-tert-ブチルホスフィン（P（t-Bu）3）、および9，9-ジメチル-4,5-ビス（ジフェニルホスフィノ）キサンテン（キサントホス）が挙げられる。
【００３２】
カップリング反応のための典型的な塩基として、フッ化カリウム、炭酸セシウム、およびフッ化セシウムが挙げられる。あるいは、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、酢酸ナトリウム、カリウムtert-ブトキシド、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデカ-7-エン（DBU）、または1,4-ジアザビシクロ[2.2.2]オクタン（DABCO）を塩基に使用できる。反応は、テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、またはＮ−メチルピロリドンなどの不活性希釈剤中で典型的に行われる。適切な混合溶媒システムとして、テトラヒドロフランおよび水、テトラヒドロフランおよびN，N-ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフランおよびN-メチルピロリドン、アセトンおよび水、エタノールおよび水、ならびにイソプロパノールおよび水が挙げられる。反応は、約４０から約１２０℃の温度で、約１から約２０時間、または反応が実質的に完了するまで典型的に行われる。生成物J-16は、従来の手順で固体として単離される。  
【００３３】
定義
様々な態様および実施形態を含む本発明を説明する際、以下の用語は、別段示されない限り、以下の意味を有する。
【００３４】
用語「アルキル」は、直鎖もしくは分枝鎖またはそれらの組み合わせであり得る一価の飽和炭化水素基を意味する。別段定義されない限り、そのようなアルキル基は、代表的には、１〜１０個の炭素原子を含む。代表的なアルキル基の例としては、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、ｎ−プロピル（ｎ−Ｐｒ）または（ｎＰｒ）、イソプロピル（ｉ−Ｐｒ）または（ｉＰｒ）、ｎ−ブチル（ｎ−Ｂｕ）または（ｎＢｕ）、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル（ｔ−Ｂｕ）または（ｔＢｕ）、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、２，２−ジメチルプロピル、２−メチルブチル、３−メチルブチル、２−エチルブチル、２，２−ジメチルペンチル、２−プロピルペンチルなどが挙げられる。
【００３５】
具体的な数の炭素原子が、特定の用語に対して意図されているとき、炭素原子の数は、その用語の前に示される。例えば、用語「Ｃ１−３アルキル」は、１〜３個の炭素原子を有するアルキル基を意味し、ここで、それらの炭素原子は、直鎖または分枝鎖の配置を含む化学的に許容され得る任意の配置で存在する。
【００３６】
用語「シクロアルキル」は、単環式または多環式であり得る一価の飽和炭素環式基を意味する。別段定義されない限り、そのようなシクロアルキル基は、代表的には、３〜１０個の炭素原子を含む。代表的なシクロアルキル基の例としては、シクロプロピル（ｃＰｒ）、シクロブチル（ｃＢｕ）、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、アダマンチルなどが挙げられる。
【００３７】
用語「ｃプロピル（ｃｐｒｏｐｙｌ）」は、シクロプロピルを意味する。
【００３８】
用語「ヘテロシクリル」、「複素環式」または「複素環式環」は、合計３〜１０個の環原子を有する一価の飽和または部分不飽和の環式の非芳香族基を意味し、ここで、その環は、２〜９個の炭素環原子、ならびに窒素、酸素および硫黄から選択される１〜４個の環ヘテロ原子を含む。複素環式基は、単環式または多環式（すなわち、縮合または架橋）であり得る。代表的なヘテロシクリル基の例としては、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、イミダゾリジニル、モルホリニル、チオモルホリル、インドリン−３−イル、２−イミダゾリニル、テトラヒドロピラニル、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−２−イル、キヌクリジニル、７−アザノルボルナニル、ノルトロパニルなどが挙げられ、ここで、結合点は、任意の利用可能な炭素または窒素環原子に存在する。状況によって複素環式基の結合点が明らかである場合、そのような基は、代わりに、無価種、すなわち、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、イミダゾール、テトラヒドロピランなどと称され得る。
【００３９】
用語「ハロ」は、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードを意味する。
【００４０】
用語「治療有効量」は、処置を必要とする患者に投与されたとき、処置をもたらすのに十分な量を意味する。
【００４１】
用語「処置すること」または「処置」とは、患者（特にヒト）において処置される医学的症状、疾患または障害（例えば、呼吸器疾患）を予防、改善または抑制すること；あるいは、医学的症状、疾患または障害の症状を緩和することを意味する。
【００４２】
用語「薬学的に許容され得る塩」は、患者または哺乳動物（例えば、ヒト）への投与が許容され得る塩（例えば、所与の投与レジメンについて許容され得る哺乳動物の安全性を有する塩）を意味する。代表的な薬学的に許容され得る塩としては、酢酸、アスコルビン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、エジシル酸（ｅｄｉｓｙｌｉｃ）、フマル酸、ゲンチシン酸、グルコン酸、グルクロン酸（ｇｌｕｃｏｒｏｎｉｃ）、グルタミン酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、粘液酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ナフタレン−２，６−ジスルホン酸、ニコチン酸、硝酸、オロチン酸、パモ酸、パントテン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸およびキシナホ酸（ｘｉｎａｆｏｉｃ  ａｃｉｄ）などの塩が挙げられる。
【００４３】
用語「その塩」は、酸の水素がカチオン（例えば、金属カチオンまたは有機カチオンなど）によって置き換えられたときに形成される化合物を意味する。例えば、カチオンは、プロトン化型の化合物、すなわち、１つまたはそれを超えるアミノ基が酸によってプロトン化されている形態であり得る。代表的には、塩は、薬学的に許容され得る塩であるが、これは、患者への投与が意図されていない中間体化合物の塩には求められない。
【００４４】
「アミノ保護基」という用語は、アミノ窒素での望ましくない反応を防止するのに適した保護基を意味する。代表的なアミノ保護基として、ホルミル；アシル基、例えば、アセチルおよびトリフルオロアセチルなどのアルカノイル基；tert-ブトキシカルボニル（Boc）などのアルコキシカルボニル基;ベンジルオキシカルボニル（Cbz）、9-フルオレニルメトキシカルボニル（Fmoc）、p-ニトロベンジルオキシカルボニル（PNZ）、2,4-ジクロロベンジルオキシカルボニル、および5-ベンゾイソキサゾリルメトキシカルボニルなどのアリールメトキシカルボニル基；ベンジル（Bn）、4-メトキシベンジル、トリチル（Tr）、および1,1-ジ-（4'-メトキシフェニル）メチルなどのアリールメチル基；トリメチルシリル（TMS）、tert-ブチルジメチルシリル（TBDMS）、[2-（トリメチルシリル）エトキシ]メチル（SEM）などのシリル基などが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４５】
「カルボン酸保護基」という用語は、カルボン酸での望ましくない反応を防止するのに適した保護基を意味する。代表的なカルボン酸保護基として、メチル、エチル、tert-ブチル、ベンジル（Bn）、p-メトキシベンジル（PMB）、9-フルオレニルメチル（Fm）、トリメチルシリル（TMS）、tert-ブチルジメチルシリル（TBS、TBDMS）、ジフェニルメチル（ベンズヒドリル、DPM）などのエステルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４６】
「ヒドロキシル保護基」という用語は、ヒドロキシル基での望ましくない反応を防止するのに適した保護基を意味する。代表的なヒドロキシル保護基として、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、トリエチルシリル（ＴＥＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ）などのトリ（Ｃ１-６アルキル）シリル基を含むシリル基；ホルミル、アセチルなどのC1-6アルカノイル基を含むエステル（アシル基）；ベンジル（Bn）、p-メトキシベンジル（PMB）、9-フルオレニルメチル（Fm）、ジフェニルメチル（ベンズヒドリル、DPM）などのアリールメチル基が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４７】
多数の保護基、ならびにそれらの導入および除去は、T.  W.  Greene  and  P.G.M.  Wuts,  Protecting  Groups  in  Organic  Synthesis,  Third  Edition,  Wiley,  New  Yorkに記載されている。
【実施例】
【００４８】
実施例
以下の合成実施例は、本発明を例証するために提供されるのであって、決して本発明の範囲を限定すると解釈されるべきでない。下記の実施例では、以下の省略形は、別段示されない限り、以下の意味を有する。下記に定義されない省略形は、それらの一般に認められている意味を有する。
ACN     =     アセトニトリル
DMF     =     N,N-ジメチルホルムアミド
EtOAc   =     酢酸エチル
EtOH   =     エタノール
NaHMDS =     ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド
MeTHF   =     2-メチルテトラヒドロフラン
MTBE   =     tert-ブチルメチルエーテル
psi     =     ポンド毎平方インチ
Rt     =    保持時間
【００４９】
試薬および溶媒は、商業的供給業者（Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔｒｅｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，  Ｉｎｃなど）から購入し、さらに精製せずに使用した。反応混合物の進行は、分析用高速液体クロマトグラフィーおよび質量分析法によってモニターした。生成物のエンド/エキソ比を、以下に説明するプロトコルを使用したHPLC分析によって決定した。反応混合物は、各反応において具体的に記載されるようにワークアップした；通常、それらは、抽出および他の精製方法（例えば、温度依存性および溶媒依存性の結晶化および沈殿）によって精製した。反応生成物の特徴付けは、質量分析法および１Ｈ−ＮＭＲ分光法によって通例のように行った。ＮＭＲ測定の場合、サンプルを重水素化溶媒（ＤＭＳＯ−ｄ６またはＣＤＣｌ３）に溶解し、標準的な観測条件下でＶａｒｉａｎ  Ｇｅｍｉｎｉ  ２０００装置（４００ＭＨｚ）を用いて１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを取得した。化合物の質量分析同定は、Ａｇｉｌｅｎｔ（Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，  ＣＡ）モデル１１００  ＬＣ／ＭＳＤ機器を使用して行った。
【００５０】
一般的なHPLC条件
カラム:Zorbax  SB-Aq,  5  μm.  4.6  x  250  mm
カラム温度:  40  ℃
流速:   1.0  mL/分
移動相:       A  =  水/ACN  (98:2)  +  0.1  %  TFA
B  =水/ACN  (10:90)  +  0.1  %  TFA,  
注入体積:    10  μL
検出器の波長:214  nm
【００５１】
HPLC法  1
粗化合物を水/ACN（50:50）に約1  mg/mLで溶解し、以下のグラジエントを使用して20分かけて分析した（時間（分）/％B）:0/10,  2.5/20,  9/75,  15/90,  17/90,  18/10,  20/10.
【００５２】
HPLC法  ２
化合物を水/ACN（90:10）に約1  mg/mLで溶解し、以下のグラジエントを使用して30分かけて分析した（時間（分）/％B）:  0/10,  13/10,  23/65,  28/90,  29/90,  30/10.    
【００５３】
HPLC法  ３
化合物を水/ACN（90:10）に約1  mg/mLで溶解し、以下のグラジエントを使用して55分かけて分析した（時間（分）/％B）:  0/10,  10/20,  46/75,  47/90,  50/10,  55/10.    
【００５４】
調製１：４−（ベンジルオキシ）−２−エチルフェニル）トリフルオロ−λ４−ボラン，カリウム塩Ｉ−５
【化３１】
2021535176.tif 000032
（ａ）１−（ベンジルオキシ）−３−エチルベンゼン（Ｉ−２）
３−エチルフェノール（Ｉ−１）（２５．０ｇ、２０４．０ｍｍｏｌ）のＡＣＮ（２５０ｍＬ、１０体積）中の撹拌溶液に、炭酸カリウム（４２．０ｇ、３０６ｍｍｏｌ）を室温で加えた。得られた反応塊を室温で１５分間撹拌し、続いて臭化ベンジル（２４．０ｍＬ、２０４ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。得られた反応混合物を室温で６時間撹拌した。反応の完了後（ＴＬＣでモニター）、得られた反応塊を水（１．０Ｌ）に注ぎ、続いてＥｔＯＡｃ（２ｘ２Ｌ）で化合物を抽出した。合わせた有機物を冷水、ブライン溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。次に、粗生成物を２％ＥｔＯＡｃを含むヘキサンの溶離液を使用するシリカゲル（１００〜２００Ｍ）でのカラムクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物（Ｉ−２）を淡黄色の油状化合物として得た（３５．０ｇ、８１％）。
【化３２】
2021535176.tif 000033
【００５５】
（ｂ）４−（ベンジルオキシ）−１−ブロモ−２−エチルベンゼン（Ｉ−３）
１−（ベンジルオキシ）−３−エチルベンゼン（Ｉ−２）（３５．０ｇ、１６４ｍｍｏｌ）のＡＣＮ（５２５ｍＬ、１５体積）中の氷冷撹拌溶液に、Ｎ−ブロモスクシンイミド（３２．０ｇ、１８１ｍｍｏｌ）を１５分間にわたり少量ずつ加えた。得られた反応混合物を、１時間室温で撹拌した。反応の完了後（ＴＬＣでモニター）、得られた反応塊を氷冷水（１．５０Ｌ）に注ぎ、続いてＥｔＯＡｃ（２×１Ｌ）で化合物を抽出した。合わせた有機物を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させて、粗生成物を得た。粗材料にｎ−ヘキサン（２５０ｍＬ）を加えてスラリーにし、続いて半融漏斗で濾過した。母液を減圧下で蒸発させて、所望の生成物Ｉ−３を淡黄色の油状化合物として得た（４２．０ｇ、８７％）。
【化３３】
2021535176.tif 000034
【００５６】
（ｃ）２−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチルフェニル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（Ｉ−４）
４−（ベンジルオキシ）−１−ブロモ−２−エチルベンゼン（Ｉ−３）（４２．０ｇ、１４４ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（４４．０ｇ、１７３ｍｍｏｌ）、および酢酸カリウム（２８ｇ、２８８ｍｍｏｌ）のジオキサン（４４０ｍＬ）中の撹拌溶液を、Ｎ２（ｇ）を１５分間パージすることにより脱気し、続いてＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）．ＤＣＭ錯体（１１．０ｇ、１５ｍｍｏｌ）を加えた。得られた反応混合物を、それから１６時間、８０℃まで加熱した。反応の完了後（ＴＬＣでモニター）、反応塊をセライト床で濾過し、母液を減圧下で蒸発させて、粗生成物を得た。粗残渣を、１％ＥｔＯＡｃを含むヘキサンの溶離液を使用することによるシリカゲル（１００〜２００Ｍ）でのカラムクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物（Ｉ−４）を淡黄色の油状化合物として得た（３２．０ｇ、６６％）。
【化３４】
2021535176.tif 000035
【００５７】
（ｄ）（４−（ベンジルオキシ）−２−エチルフェニル）トリフルオロ−λ４−ボラン，カリウム塩（Ｉ−５）
化合物２−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチルフェニル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（Ｉ−４）（２０ｇ、５９．０ｍｍｏｌ）のアセトン：メタノール（２００ｍＬ、１：１比、１０体積）中の撹拌溶液に、フッ化水素カリウムの３Ｍ溶液（２３．０ｇ、２９５ｍｍｏｌ、９８．０ｍＬの水に溶解）を加えた。得られた反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応の完了後（ＴＬＣでモニター）、得られた反応塊を減圧下で蒸発させた。このようにして得た固体を水（１００ｍＬ）に取り、室温で３０分間撹拌した。得られた反応塊を半融漏斗で濾過し、ｎ−ヘキサンで洗浄し、減圧下で乾燥させて、所望の生成物（Ｉ−５）を白色固体として得た（１４．０ｇ、７４％）。
【化３５】
2021535176.tif 000036
【００５８】
調製２：６−ベンジル５−（ｔｅｒｔ−ブチル）（Ｓ）−３−ベンジル−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（Ｉ−１１）
【化３６】
2021535176.tif 000037
（ａ）（Ｓ）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，塩酸塩（Ｉ−７）
Ｌ−ヒスチジン（Ｉ−６）（５．０ｋｇ、３２．１４ｍｏｌ）の水（４０Ｌ、８体積）中の氷冷撹拌懸濁液に、濃塩酸（３．９３Ｌ、３３．７５ｍｏｌ）を加え、続いてホルムアルデヒド（５．５０Ｌ、６７．５ｍｏｌ、３７％水溶液）を滴下して加えた。得られた溶液を同じ温度で３０分間撹拌し、次いで８０℃で８時間加熱した。反応の進行はＬＣＭＳでモニターした。水を減圧下で除去して粗生成物を得、得られた粗生成物をトルエン（２０Ｌ）中で２時間撹拌した。有機物を減圧下で除去して過剰の水を除去し、化合物を共沸乾燥させた。次に、得られた材料をジエチルエーテル（２０Ｌ）に取り、２時間撹拌した。次に、固体材料を濾過し、風乾させて、所望の生成物（Ｉ−７）をオフホワイト固体として得た（６．５０Ｋｇ、８５％）。
【化３７】
2021535176.tif 000038
【００５９】
（ｂ）（Ｓ）−３，５−ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸（Ｉ−８）
（Ｓ）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸二塩酸塩（Ｉ−７）（６．１０Ｋｇ、２５．４０ｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（４８Ｌ、８体積）および水（４８Ｌ、８体積）中の氷冷撹拌溶液に、トリエチルアミン（１２．３６Ｌ、８９ｍｏｌ）を滴下して加え、続いて二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１８．０７Ｌ、７８．７４ｍｏｌ、５Ｌの１，４−ジオキサンに溶解）を３０分間にわたって加えた。得られた反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応の完了後（ＴＬＣおよびＬＣＭＳでモニター）、黄色がかった反応混合物を水（１０Ｌ）で希釈し、ジエチルエーテル（２×１０Ｌ）およびＥｔＯＡｃ（２×７．５０Ｌ）で連続して洗浄した。有機相を廃棄した。水層を冷却し、６Ｎ  ＨＣｌ溶液でｐＨを約３にした；水相をＥｔＯＡｃ（３×１０Ｌ）で抽出した。合わせた有機物をブライン溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。油状残渣を３０％  ＥｔＯＡｃ：ヘキサンから結晶化させて、所望の生成物（Ｉ−８）をオフホワイトの固体として得た（５．１Ｋｇ、５５％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１７Ｈ２５Ｎ３Ｏ６の計算値３６８．１８、実測値３６８．２１。
【００６０】
（ｃ）６−ベンジル３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−３，５，６（４Ｈ）−トリカルボキシレート（Ｉ−９）
（Ｓ）−３，５−ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸（Ｉ−８）（５．１Ｋｇ、１３．８８ｍｏｌ）のＤＣＭ（５１Ｌ、１０体積）中の氷冷溶液に、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（４１．０Ｌ、８体積）、ヨウ化テトラブチルアンモニウム（５．１３Ｋｇ、１３．８８ｍｏｌ）および臭化ベンジル（２．４７Ｌ、２０．８２ｍｏｌ）順次加えた。得られた反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応の完了後（ＴＬＣおよびＬＣＭＳでモニター）、二相溶液を分離した。水層をＤＣＭ（３×１０Ｌ）で抽出した。合わせた有機物をブライン溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得、これを４０％ＥｔＯＡｃを含むヘキサンの溶離液を使用するシリカゲル（１００〜２００Ｍ）によるカラムクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物（Ｉ−９）を粘稠性油状物質として得た（４．５０Ｋｇ、７２％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ２４Ｈ３１Ｎ３Ｏ６の計算値４５８．２２、実測値４５８．６０。
【００６１】
（ｄ）６−ベンジル５−（ｔｅｒｔ−ブチル）（Ｓ）−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（Ｉ−１０）
６−ベンジル３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−３，５，６（４Ｈ）−トリカルボキシレート（Ｉ−９）（４．５０Ｋｇ、９．８４ｍｏｌ）のＩＰＡ（４５Ｌ、１０体積）中の氷冷溶液に、水酸化アンモニウム（３６Ｌ、８体積）を滴下して加えた。得られた反応混合物を室温でそれから１６時間さらに撹拌した。反応の完了後（ＴＬＣおよびＬＣＭＳでモニター）、得られた混合物を水（２５Ｌ）で希釈し、続いてＥｔＯＡｃ（３×２０Ｌ）で抽出した。合わせた有機物をブライン溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得、これを２％ＭｅＯＨを含むＤＣＭの溶離液を使用するシリカゲル（１００〜２００Ｍ）によるカラムクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物（Ｉ−１０）を濃厚な粘稠性油状物質として得た（２．７０Ｋｇ、７７％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１９Ｈ２３Ｎ３Ｏ４の計算値３５８．１７、実測値３５８．３３。
【００６２】
（ｅ）６−ベンジル５−（ｔｅｒｔ−ブチル）（Ｓ）−３−ベンジル−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（Ｉ−１１）
６−ベンジル５−（ｔｅｒｔ−ブチル）（Ｓ）−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（Ｉ−１０）（２．７０ｋｇ、７．５５ｍｏｌ）のＤＣＭ（３２．４Ｌ、１２体積）中の氷冷溶液に、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（２４．３Ｌ、９体積）を加え、続いてヨウ化テトラブチルアンモニウム（２．８０Ｋｇ、７．５５ｍｏｌ）および臭化ベンジル（０．９９Ｌ、８．３１ｍｏｌ）を順次加えた。得られた反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応の完了後（ＴＬＣおよびＬＣＭＳでモニター）、二相溶液を分離した。水層をＤＣＭ（３×１０Ｌ）で抽出した。合わせた有機物をブライン溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得、これを４０％ＥｔＯＡｃを含むヘキサンの溶離液を使用するシリカゲル（１００〜２００Ｍ）でのカラムクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物（Ｉ−１１）を粘稠性油状物質として得た（１．７０Ｋｇ、６３％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ２６Ｈ２９Ｎ３Ｏ４の計算値４４８．２２、実測値４４８．２０。
【００６３】
調製３：６−ベンジル５−（ｔｅｒｔ−ブチル）（Ｓ）−３−ベンジル−２−（６−ブロモ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（Ｉ−１５）
【化３８】
2021535176.tif 000039
（ａ）４−ブロモ−２−フルオロベンゾイルクロリド（Ｉ−１３）
４−ブロモ−２−フルオロ安息香酸（Ｉ−１２）（１．２５Ｋｇ、５．７１ｍｏｌ）のＤＣＭ（１２．５Ｌ、１５体積）中の氷冷撹拌溶液に、塩化オキサリル（０．９８Ｌ、１１．４２ｍｏｌ）を滴下して加えた。得られた反応混合物を同じ温度で１０分間撹拌した。次に、ＤＭＦ（１５０ｍＬ）を反応混合物に滴下して加えた。得られた反応塊を室温まで温め、２時間撹拌した。反応の完了後（ＴＬＣでモニター）、過剰の塩化オキサリルを、窒素雰囲気下、減圧下で除去して粗生成物（Ｉ−１３）を得（１．０８Ｋｇ、８０％）、これをさらに精製せずに次のステップで使用した。
【００６４】
（ｂ）６−ベンジル５−（ｔｅｒｔ−ブチル）（Ｓ）−３−ベンジル−２−（４−ブロモ−２−フルオロベンゾイル）−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（Ｉ−１４）
６−ベンジル５−（ｔｅｒｔ−ブチル）（Ｓ）−３−ベンジル−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（Ｉ−１１）（１．７０Ｋｇ、３．８０ｍｏｌ）のＡＣＮ（１３．６Ｌ、８体積）中の撹拌溶液に、トリエチルアミン（２．１１Ｌ、１５．２ｍｏｌ）を加え、続いて４−ブロモ−２−フルオロベンゾイルクロリド（Ｉ−１３）（１．０８Ｋｇ、３．４ＬのＡＣＮ中４．５６ｍｏｌ、２体積）を室温で加えた。添加の完了後、得られた反応混合物の色は淡黄色から褐色に変わった。得られた反応混合物を同じ温度で３０分間撹拌し、反応の進行をＴＬＣでモニターした。得られた反応混合物を氷冷水（１０Ｌ）でクエンチし、続いてＥｔＯＡｃ（３×５Ｌ）で抽出し、合わせた有機物をブライン溶液で洗浄した。有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得、これを２０％ＥｔＯＡｃを含むヘキサンの溶離液を使用するシリカゲル（１００〜２００Ｍ）でのカラムクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物（Ｉ−１４）を得た（１．７４Ｋｇ、７１％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ３３Ｈ３１ＢｒＦＮ３Ｏ５の計算値６４８．１４、実測値６４８．２０。
【００６５】
（ｃ）６−ベンジル５−（ｔｅｒｔ−ブチル）（Ｓ）−３−ベンジル−２−（６−ブロモ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（Ｉ−１５）
６−ベンジル５−（ｔｅｒｔ−ブチル）（Ｓ）−３−ベンジル−２−（４−ブロモ−２−フルオロベンゾイル）−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（Ｉ−１４）（１．７４Ｋｇ、２．６８ｍｏｌ）のＴＨＦ（２６．０Ｌ、１５体積）中の撹拌溶液に、ヒドラジン水和物（０．７０５Ｌ、１３．４ｍｏｌ）を室温で加えた。得られた反応混合物を、６０℃で３時間加熱した。反応の完了後（ＴＬＣでモニター）、得られた反応塊を氷冷水（１０Ｌ）に注ぎ、続いてＥｔＯＡｃ（３×１０Ｌ）で化合物を抽出した。合わせた有機物をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させて粗生成物を得、これを、２０％ＥｔＯＡｃを含むヘキサンの溶離液を使用するシリカゲル（１００〜２００Ｍ）でのカラムクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物（Ｉ−１５）をオフホワイト固体として得た（１．１２Ｋｇ、６５％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ３３Ｈ３２ＢｒＮ５Ｏ４の計算値６４２．１６、実測値６４２．２１。
【００６６】
調製４：６−ベンジル５−（ｔｅｒｔ−ブチル）（Ｓ）−３−ベンジル−２−（６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチルフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（Ｉ−１６）
【化３９】
2021535176.tif 000040
ビス（ピナコラト）ジボロン（２５０ｇ、９８４ｍｍｏｌ）を、フッ化物化学を使用して事前にエッチングした５Ｌの３口単層フラスコ（ｓｉｎｇｌｅ  ｗａｌｌｅｄ  ｆｌａｓｋ）に、プロパン−２−オール（１８８２ｍＬ、２．４６Ｅ＋０４ｍｍｏｌ）とともに装入し、混合物を完全に溶解するまで撹拌した。溶解は吸熱性であった（−４℃）。フッ化物化学を使用して事前にエッチングした４Ｌエルレンマイヤーフラスコ内で、ＫＨＦ２（５３８ｇ、６８９１ｍｍｏｌ）を水（２３０６ｍＬ、１．２８Ｅ＋０５ｍｍｏｌ）に溶解して３Ｍ溶液を形成した。溶解は吸熱性であった（−１２℃）。次に、溶液を濾過して、少量の不溶性材料をフッ化カリウムフッ化水素酸塩から除去した。両方の溶液が完全に溶解したら、エルレンマイヤーフラスコの内容物を１５分にわたり少量ずつ単層フラスコに装入した。中程度の発熱が観察された（＋１０℃）。溶液は添加中に濃厚で半透明の灰色のスラリーになり、内容物が十分に混合されるように撹拌が増やされた。混合物を１．５時間撹拌した後、粗いフリットガラス漏斗（４Ｌ、事前にエッチング済）に通して濾過した。濾過が完了するまでに３０〜４５分かかった。透明な二相の濾液を廃棄した。白色の固体をフィルター上で１０分間乾燥させた（ケーキの亀裂が観察された）。固体を洗浄した５Ｌの３口単層フラスコに戻し、水（１３３０ｍＬ、７．３８Ｅ＋０４ｍｍｏｌ）再びスラリーにした。スラリーを２時間撹拌し、その後スラリーは透明で均質なヒドロゲルを形成した。溶液をさらに１時間撹拌し、その後すぐに４Ｌの粗いガラス漏斗（事前にエッチング済）を使用して固体／ゲルを濾過した。固形物をフィルター上で３０分間乾燥させた。固体を洗浄した５Ｌの３口単層フラスコに戻し、アセトン（１０８４ｍＬ、１．４８Ｅ＋０４ｍｍｏｌ）で再びスラリーにした。白色／灰色のスラリーを１時間撹拌した後、４Ｌの粗いガラス漏斗（事前にエッチング済）で濾過した。濾過が完了するまで２０分かかり、その後漏斗上でさらに１時間乾燥させた。この間、固体を時々かき混ぜて均一な乾燥を確保した。フィルター上で乾燥させた後に、薄白色の粉末が残った。固体を真空下５５℃で２０時間、ゆっくりと窒素を入れながら乾燥させて、ふわふわした白色の固体を得た（２００．３ｇを回収）。
【００６７】
６−ベンジル５−（ｔｅｒｔ−ブチル）（Ｓ）−３−ベンジル−２−（６−ブロモ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（Ｉ−１５）（１０．０ｇ、１６．０ｍｍｏｌ）の２−メチルテトラヒドロフラン（１００ｍＬ、１０体積）中の撹拌溶液に、（４−（ベンジルオキシ）−２−エチルフェニル）トリフルオロ−λ４−ボラン，カリウム塩（Ｉ−５）（８．０ｇ、２０ｍｍｏｌ）、および上記で得られたふわふわした白色の固体（０．２０ｇ）を加えた。得られた反応混合物を窒素ガスで３０分間脱気した。この溶液に、調製した炭酸セシウムの水溶液（２０．０ｇ、水６０ｍＬ中６２．０ｍｍｏｌ、６体積）を加えた。得られた反応混合物をさらに１５分間脱気し、続いてビス（ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（４−ジメチルアミノフェニル）ホスフィン）ジクロロパラジウム（ＩＩ）（０．６６ｇ、０．９３ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を真空下で排気し、窒素で流した。得られた反応混合物を、１１０℃で２０時間加熱した。反応の完了後（ＴＬＣおよびＬＣＭＳでモニター）、得られた反応混合物を室温まで冷却し、セライト床で濾過した後、ＥｔＯＡｃ（３×０．５Ｌ）でさらに洗浄した。合わせた有機物を１Ｎ水酸化ナトリウム溶液（３×０．５Ｌ）で洗浄した。次に、合わせた有機物をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させて粗生成物を得、これを、２０％ＥｔＯＡｃを含むヘキサンの溶離液を使用するシリカゲル（１００〜２００Ｍ）でのカラムクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物（Ｉ−１６）を（Ｎ−ベンジル位置異性体の混合物として）淡黄色の固体として得た（８．０ｇ、６６％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ４８Ｈ４７Ｎ５Ｏ５の計算値７７４．３６、実測値７７４．５９。
【００６８】
調製５：（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，塩酸塩（Ｉ−１８）
【化４０】
2021535176.tif 000041
（ａ）ベンジル（Ｓ）−３−ベンジル−２−（６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチルフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボンキシレート，塩酸塩（Ｉ−１７）
６−ベンジル５−（ｔｅｒｔ−ブチル）（Ｓ）−３−ベンジル−２−（６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチルフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（Ｉ−１６）（１．０ｇ、１．２９２ｍｍｏｌ）をジオキサン（８ｍＬ）および水（１．５ｍＬ）に溶解し、次いでジオキサン中４Ｍの塩化水素溶液（７ｍＬ、２８．０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で３時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。次に、反応混合物を凍結し、凍結乾燥し、粗生成物（Ｉ−１７）を次の反応で直接使用した（定量的収量を想定）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ４３Ｈ３９Ｎ５Ｏ３の計算値６７４．３１、実測値６７４．３。
【００６９】
（ｂ）（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，塩酸塩（Ｉ−１８）
ベンジル（Ｓ）−３−ベンジル−２−（６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチルフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボキシレート、塩酸塩（Ｉ−１７）（０．９１８ｇ、１．２９２ｍｍｏｌ）を、２−プロパノール（１５ｍＬ）、水中５Ｍの塩化水素溶液（０．２５８ｍＬ、１．２９２ｍｍｏｌ）、および水（０．２５ｍＬ）に５０℃で溶解し、次いで炭素上１０重量％のパラジウム、５０％の水（０．１３８ｇ、０．０６５ｍｍｏｌ）を加えた。次に、反応フラスコを窒素でパージし、水素バルーンを取り付け、反応混合物を５０℃で４日間撹拌し、必要に応じて水素バルーンを補充した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。次に、すべての固体を濾過により除去し、得られた溶液を濃縮した。残渣を１：１のＡＣＮ／水に溶解し、凍結し、凍結乾燥した。得られた粉末（Ｉ−１８）を、さらに精製せずに使用した（定量的収量を想定）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ２２Ｈ２１Ｎ５Ｏ３の計算値４０４．１７、実測値４０４．２。
【００７０】
調製６：（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸（Ｉ−１９）
【化４１】
2021535176.tif 000042
（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＨＣｌ（Ｉ−１８）（０．２５ｇ、０．５６８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２．５ｍＬ）およびアセトン（２．５ｍＬ）に懸濁し、次に酢酸（０．０９８ｍＬ、１．７０５ｍｍｏｌ）およびシアノ水素化ホウ素ナトリウム（０．１７９ｇ、２．８４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で２４時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。反応混合物を濃縮し、次に粗生成物を逆相クロマトグラフィー（５〜７０％ＡＣＮ／水の勾配、５０ｇ  Ｃ１８ａｑカラム）により精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（１４９ｍｇ、収率４７％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ２５Ｈ２７Ｎ５Ｏ３の計算値４４６．２１、実測値４４６．３。
【００７１】
調製７：（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−プロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸（Ｉ−２０）
【化４２】
2021535176.tif 000043
（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＨＣｌ（Ｉ−１８）（０．１６０ｇ、０．３６４ｍｍｏｌ）およびプロピオンアルデヒド（０．０３９ｍＬ、０．５４６ｍｍｏｌ）をメタノール（３．０ｍＬ）に溶解し、次にシアノ水素化ホウ素ナトリウム（０．０６９ｇ、１．０９１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で２４時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。反応混合物を濃縮し、粗生成物を逆相クロマトグラフィー（５〜７０％ＡＣＮ／水の勾配、５０ｇ  Ｃ１８カラム）により精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（７８ｍｇ、収率３８％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ２５Ｈ２７Ｎ５Ｏ３の計算値４４６．２１、実測値４４６．３。
【００７２】
調製８：（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸（Ｉ−２１）
【化４３】
2021535176.tif 000044
（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＨＣｌ（Ｉ−１８）（０．１６０ｇ、０．３６４ｍｍｏｌ）および水中３７重量％のホルムアルデヒドの溶液（０．０３２ｍＬ、０．４３６ｍｍｏｌ）をメタノール（３．０ｍＬ）に溶解し、次にシアノ水素化ホウ素ナトリウム（０．０６９ｇ、１．０９１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で４時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。水素化ホウ素ナトリウム（１４ｍｇ、０．３６４ｍｍｏｌ）を加えて、過剰なホルムアルデヒドをクエンチし、次に反応混合物を濃縮した。粗生成物を逆相クロマトグラフィー（５〜７０％ＡＣＮ／水の勾配、５０ｇ  Ｃ１８カラム）により精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（１１０ｍｇ、収率５７％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ２３Ｈ２３Ｎ５Ｏ３の計算値４１８．１８、実測値４１８．２。
【００７３】
調製９：（Ｒ）−２−（３−メチルピペラジン−１−イル）エタン−１−オール，二塩酸塩（Ｉ−２４）
【化４４】
2021535176.tif 000045
（ａ）ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−４−（２−ヒドロキシエチル）−２−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（Ｉ−２３）
（Ｒ）−１−ｂｏｃ−２−メチル−ピペラジン（０．２ｇ、０．９９９ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．６９８ｍＬ、３．９９ｍｍｏｌ）、および２−ブロモエタノール（０．０８５ｍＬ、１．１９８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解し、反応混合物を６０℃で１６時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。反応混合物を濃縮した後、１０ｍＬのジエチルエーテルを残渣に加えた。残留ゲルが消失し、固体が形成されるまで、溶液を超音波処理した。次に、エーテル溶液をデカントして固体から流去した。その後固体を次の反応で直接使用した（定量的収量を想定）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１２Ｈ２４Ｎ２Ｏ３の計算値２４５．１８、実測値２４５．４。
【００７４】
（ｂ）（Ｒ）−２−（３−メチルピペラジン−１−イル）エタン−１−オール，二塩酸塩（Ｉ−２４）
ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−４−（２−ヒドロキシエチル）−２−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（０．２４４ｇ、０．９９９ｍｍｏｌ）をジオキサン（３．０ｍＬ）および水（０．５ｍＬ）に溶解し、次に、ジオキサン中４Ｍの塩化水素溶液（２．０ｍＬ、６５．８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で３時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。反応混合物を凍結し、凍結乾燥し、得られた生成物を精製を行わずに使用した（定量的収量を想定）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ７Ｈ１６Ｎ２Ｏの計算値１４５．１３、実測値１４５．４。
【００７５】
実施例１：（Ｓ）−（２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−プロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル）メタノン
【化４５】
2021535176.tif 000046
（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−プロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＴＦＡ（Ｉ−２０）（４０ｍｇ、０．０７１ｍｍｏｌ）、ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン（０．０１８ｍＬ、０．１４３ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（０．０２５ｍＬ、０．１４３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．５ｍＬ）に溶解し、次にＨＡＴＵ（４０．８ｍｇ、０．１０７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で３時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。ヒドラジン（０．０１１ｍＬ、０．３５７ｍｍｏｌ）を加えて望ましくない副生成物を切断した後、溶液を室温で１０分間撹拌した。次に、反応混合物を濃縮し、粗生成物を分取ＨＰＬＣ（５〜７０％ＡＣＮ／水の勾配、Ｃ１８カラム）により精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（３１ｍｇ、収率５６％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ３１Ｈ３９Ｎ７Ｏ３の計算値５５８．３１、実測値５５８．３。
【化４６】
2021535176.tif 000047
【００７６】
実施例２：（（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−プロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）（（１Ｓ，４Ｓ）−５−メチル−２，５−ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル）メタノン
【化４７】
2021535176.tif 000048
（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−プロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＴＦＡ（Ｉ−２０）（４０ｍｇ、０．０７１ｍｍｏｌ）、（１Ｓ，４Ｓ）−５−メチル−２，５−ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン二臭化水素酸塩（２９．４ｍｇ、０．１０７ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（０．０６２ｍＬ、０．３５７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．５ｍＬ）に溶解し、次にＨＡＴＵ（４０．８ｍｇ、０．１０７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で３時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。ヒドラジン（０．０１１ｍＬ、０．３５７ｍｍｏｌ）を加えて望ましくない副生成物を切断した後、溶液を室温で１０分間撹拌した。次に、反応混合物を濃縮し、粗生成物を分取ＨＰＬＣ（５〜７０％ＡＣＮ／水の勾配、Ｃ１８カラム）により精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（３２ｍｇ、収率５９％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ３１Ｈ３７Ｎ７Ｏ２の計算値５４０．３０、実測値５４０．３。
【００７７】
実施例３：（（Ｓ）−２，４−ジメチルピペラジン−１−イル）（（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン３
【化４８】
2021535176.tif 000049
（ａ）ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボニル）−３−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（Ｉ−２５）
（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＴＦＡ（Ｉ−２１）（５５ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）、（ｓ）−４−ｎ−ｂｏｃ−２−メチルピペラジン（４１．５ｍｇ、０．２０７ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（０．０３６ｍＬ、０．２０７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．５ｍＬ）に溶解し、次にＨＡＴＵ（５９．０ｍｇ、０．１５５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１６時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。ヒドラジン（０．０１６ｍＬ、０．５１７ｍｍｏｌ）を加えて望ましくない副生成物を切断した後、反応混合物を室温で１０分間撹拌した。次に、反応混合物を濃縮し、粗生成物を逆走クロマトグラフィー（５〜７０％ＡＣＮ／水の勾配、５０ｇ  Ｃ１８カラム）により精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（５４ｍｇ、収率７２％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ３３Ｈ４１Ｎ７Ｏ４の計算値６００．３３、実測値６００．３。
【００７８】
（ｂ）（（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）（（Ｓ）−２−メチルピペラジン−１−イル）メタノン（Ｉ−２６）
ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボニル）−３−メチルピペラジン−１−カルボキシレート，ＴＦＡ（Ｉ−２５）（０．１２６ｇ、０．１７７ｍｍｏｌ）をジオキサン（１．５ｍＬ）および水（０．３ｍＬ）に溶解し、次に、ジオキサン中４Ｍの塩化水素溶液（１．５ｍＬ、６．００ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で２時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。反応混合物を凍結し、凍結乾燥し（ｌｙｏｐｈｉｌｚｅｄ）、得られた粉末を次の反応で直接使用した（定量的収量を想定）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ２８Ｈ３３Ｎ７Ｏ２の計算値５００．２７、実測値５００．３。
【００７９】
（ｃ）（（Ｓ）−２，４−ジメチルピペラジン−１−イル）（（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン
（（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）（（Ｓ）−２−メチルピペラジン−１−イル）メタノン，二塩酸塩（０．１０１ｇ、０．１７６ｍｍｏｌ）および水中３７重量％のホルムアルデヒドの溶液（０．０１６ｍＬ、０．２１２ｍｍｏｌ）をメタノール（３．０ｍＬ）に溶解した後、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（０．０５５ｇ、０．８８２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１６時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。水素化ホウ素ナトリウム（７ｍｇ、０．１７６ｍｍｏｌ）を加えて、残っているホルムアルデヒドをクエンチした。反応混合物を濃縮し、次に粗生成物を分取ＨＰＬＣ（５〜６０％ＡＣＮ／水の勾配、Ｃ１８カラム）により精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（２８ｍｇ、収率２１％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ２９Ｈ３５Ｎ７Ｏ２の計算値５１４．２９、実測値５１４．３。
【００８０】
実施例４：（Ｓ）−（２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）（４−メチル−１，４−ジアゼパン−１−イル）メタノン
【化４９】
2021535176.tif 000050
（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＴＦＡ（Ｉ−１９）（５０ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）、１−メチルホモピペラジン（０．０２２ｍＬ、０．１７９ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（０．０３１ｍＬ、０．１７９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．５ｍＬ）に溶解し、次にＨＡＴＵ（５１．０ｍｇ、０．１３４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で３時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。ヒドラジン（０．０１４ｍＬ、０．４４７ｍｍｏｌ）を加えて望ましくない副生成物を切断し、溶液を室温で１０分間撹拌した。次に、反応混合物を濃縮し、粗生成物を分取ＨＰＬＣ（２〜７０％ＡＣＮ／水の勾配、Ｃ１８カラム）により精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（２９ｍｇ、収率４２％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ３１Ｈ３９Ｎ７Ｏ２の計算値５４２．３２、実測値５４２．３。
【化５０】
2021535176.tif 000051
【００８１】
実施例５：（（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）（（Ｒ）−４−（２−ヒドロキシエチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）メタノン
【化５１】
2021535176.tif 000052
（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＴＦＡ（Ｉ−２１）（５５ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）、（Ｒ）−２−（３−メチルピペラジン−１−イル）エタン−１−オール，二塩酸塩（Ｉ−２４）（３３．７ｍｇ、０．１５５ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（０．０９０ｍＬ、０．５１７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．５ｍＬ）に溶解し、次にＨＡＴＵ（５９．０ｍｇ、０．１５５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１６時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。ヒドラジン（０．０１６ｍＬ、０．５１７ｍｍｏｌ）を加えて望ましくない副生成物を切断した後、反応混合物を室温で１０分間撹拌した。次に、反応混合物を濃縮し、粗生成物を分取ＨＰＬＣ（５〜７０％ＡＣＮ／水の勾配、Ｃ１８カラム）により精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（２２ｍｇ、収率２８％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ３０Ｈ３７Ｎ７Ｏ３の計算値５４４．３０、実測値５４４．３。
【００８２】
実施例６：（（Ｓ）−３−（ジメチルアミノ）ピロリジン−１−イル）（（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン
【化５２】
2021535176.tif 000053
（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＴＦＡ（Ｉ−１９）（５０ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−（−）−３−（ジメチルアミノ）ピロリジン（０．０２３ｍＬ、０．１７９ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（０．０３１ｍＬ、０．１７９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．５ｍＬ）に溶解し、次にＨＡＴＵ（５１．０ｍｇ、０．１３４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で３時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。ヒドラジン（０．０１４ｍＬ、０．４４７ｍｍｏｌ）を加えて望ましくない副生成物を切断し、溶液を室温で１０分間撹拌した。次に、反応混合物を濃縮し、粗生成物を分取ＨＰＬＣ（５〜７０％ＡＣＮ／水の勾配、Ｃ１８カラム）により精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（３７ｍｇ、収率５３％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ３１Ｈ３９Ｎ７Ｏ２の計算値５４２．３２、実測値５４２．３。
【００８３】
実施例７：（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル）（２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン
【化５３】
2021535176.tif 000054
（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＴＦＡ（Ｉ−１９）（５０ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）、３−（ジメチルアミノ）アゼチジン二塩酸塩（２３．２０ｍｇ、０．１３４ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（０．０７８ｍＬ、０．４４７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．５ｍＬ）に溶解し、次にＨＡＴＵ（５１．０ｍｇ、０．１３４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で３時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。ヒドラジン（０．０１４ｍｌ、０．４４７ｍｍｏｌ）を加えて望ましくない副生成物を切断し、溶液を室温で１０分間撹拌した。次に、反応混合物を濃縮し、粗生成物を分取ＨＰＬＣ（５〜７０％ＡＣＮ／水の勾配、Ｃ１８カラム）により精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（２５ｍｇ、収率３７％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ３０Ｈ３７Ｎ７Ｏ２の計算値５２８．３０、実測値５２８．３。
【化５４】
2021535176.tif 000055
【００８４】
調製10:  6-ベンジル5-(tert-ブチル)(S)-1-ベンジル-2-(6-(4-(ベンジルオキシ)-2-エチル-5-フルオロフェニル)-1H-インダゾール-3-イル)-1,4,6,7-テトラヒドロ-5H-イミダゾ[4,5-c]ピリジン-5,6-ジカルボキシレート
【化５５】
2021535176.tif 000056
２−メチルテトラヒドロフラン（１１．２Ｌ、１０体積）中の6-ベンジル5-（tert-ブチル）（S）-1-ベンジル-2-（6-ブロモ-1H-インダゾール-3-イル）-1,4,6,7-テトラヒドロ-5H−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（１．１２Ｋｇ、１．７４mol）の撹拌溶液に（（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５-フルオロフェニル）トリフルオロボラン、カリウム塩）（0.702Kg、2.1mol）および調製4で単離されたふわふわした白色固体（0.223Kg、1.04mol）を加えた。得られた反応混合物を、スポイト注入口を通して次の３０分間窒素ガスで脱気した。この溶液に、Cs2CO3の調製水溶液（2.27Kg、7.30LのH2O、6体積中6.96mol）を加えた。得られた反応混合物を次の15分にわたってさらに脱気した。Ｐｄ（amphos）（０．７４Ｋｇ、１．０４mol）を得られた反応混合物中に加え、反応混合物を真空下で排気し、窒素で洗った。得られた反応混合物を90℃にし20時間加熱した。反応の完了後、得られた反応混合物を室温に冷却し、セライト床を通して濾過し、酢酸エチル（３×７．５Ｌ）で洗浄した。合わせた有機物を１Ｎ  ＮａＯＨ溶液（３×３Ｌ）で洗浄した。合わせた有機物をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させて粗物質を得、これを、溶離液ヘキサン中の20％酢酸エチルを使用することによりシリカゲル（100〜200M）でのカラムクロマトグラフィーで精製して、表題生成物をオフホワイト固体として位置異性体の混合物として得た（1.10Kg、80％）。(m/z):  [M+H]+  C48H46FN5O5の計算値792.92、実測値792.34.
【００８５】
調製１１：ベンジル（Ｓ）−１−ベンジル−２−（６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−ジカルボキシレート、２ベンゼンスルホン酸
【化５６】
2021535176.tif 000057
窒素下、2-メチルテトラヒドロフラン（10,050mL）および酢酸イソプロピル（4,321.5mL）中の6-ベンジル5-（tert-ブチル）（S）-1-ベンジル-2-（6-（4-（ベンジルオキシ）-2-エチル-5-フルオロフェニル）-1H-インダゾール-3-イル）-1,4,6,7-テトラヒドロ-5H-イミダゾ[4,5-c]ピリジン-5,6-ジカルボキシレート（1,005g、1269mmol）の溶液に、ベンゼンスルホン酸（703g、4,442mmol）を加えた。得られた反応混合物を50℃で15時間かけて撹拌した。完了した反応に酢酸イソプロピル（5,728.5mL）を加えた。スラリーを20℃に冷却し、1時間保持した。次に、濃縮したスラリーを窒素圧下で濾過した。次に、ケーキを酢酸イソプロピル（5,000mL）ですすいで、窒素圧下、25℃で2時間にわたって乾燥させた後、60℃で16時間、窒素を抜きながら高真空下でさらに乾燥させ、表題化合物をオフホワイトの自由流動性固体として得た（1,210g、95％収率）。(m/z):  [M+H]+  C43H38FN5O3の計算値692.81、実測値692.88.
【００８６】
調製１２：ベンジル（Ｓ）−１−ベンジル−２−（６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−ジカルボキシレート
【化５７】
2021535176.tif 000058
アセトン（12.0L）中のモレキュラーシーブ（1.21Kg）の懸濁液に、ベンジル（S）-1-ベンジル-2-（6-（4-（ベンジルオキシ）-2-エチル-5-フルオロフェニル）-1H-インダゾール-3-イル）-4,5,6,7-テトラヒドロ-1H-イミダゾ[4,5-c]ピリジン-6-カルボキシレート、2ベンジルスルホン酸（1.20Kg、1,190mmol）および酢酸（26mL、446mmol）を加えた。懸濁液を25℃で30分にわたって撹拌して、不均一なオフホワイトから黄色の不均一な混合物を得た。反応混合物にトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（492g、2,321mmol）を加え、25℃で1時間にわたって撹拌した。反応混合物をセライトで濾過し、ケーキを2-メチルテトラヒドロフラン（500mL）で洗浄した。濾液を2-メチルテトラヒドロフラン（8.0L）で希釈し、アセトンの蒸留により溶媒を交換した。溶液を洗浄するために飽和重炭酸ナトリウム（3,025mL）を加え、混合物を1時間撹拌し、撹拌を停止し、層を15分かけて分離し、水層（pH  =  7.5）を廃棄し、洗浄を今度は層分離の前に2時間攪拌して繰り返した。有機層を２．０Ｌまで蒸留し、酢酸イソプロピル（８．０Ｌ）を加え、２−メチルテトラヒドロフランの蒸留により溶媒を交換して、スラリーを得た。スラリーを２０℃で１時間にわたって撹拌し、次に窒素圧下で濾過して、表題化合物をオフホワイトの固体として得た（７９５ｇ、９１％収率）。  (m/z):  [M+H]+  C46H44FN5O3の計算値734.89、実測値734.96.
【００８７】
調製１３：（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸、２ＨＣｌ
【化５８】
2021535176.tif 000059
ベンジル（S）-1-ベンジル-2-（6-（4-（ベンジルオキシ）-2-エチル-5-フルオロフェニル）-1H-インダゾール-3-イル）-5-イソプロピル-4,5,6,7-テトラヒドロ-1H-イミダゾ[4,5-c]ピリジン-6-カルボキシレート（760g、1,036mmol）、プロパン-2-オール（3,800  mL）および1M塩化水素（aq）（2589mL、2,589mmol）の脱気し撹拌した均一溶液に50℃で、10wt％Pd/C、50wt％H2O（76g、35.7mmol）を加えた直後に、反応混合物に水素ガスを4時間かけてバブリングした。反応混合物をセライト（200グラム）パッドに通して濾過した。透明な暗黄色の濾液にSiliaMetSチオール（76g、白色固体として）を加え、50℃で1時間にわたって撹拌して、残りのパラジウムを除去した。SiliaMetSチオールを0.2ミクロンのフィルターで濾過して除き、淡黄色の均一な濾液を得たところ、SiliaMetSチオールは明るいオレンジ色になった。濾液に酢酸イソプロピル（7,600mL）を加え、それをロトバップで約3.0リットルに濃縮した。濁った懸濁液としての濃縮溶液に、酢酸イソプロピル（7,600mL）を加え、約3.0リットルに濃縮した。次に濃スラリーとしての濃縮物に、酢酸イソプロピル（7,600mL）を加え、その時点でスラリーは自由流動性で濾過可能であった。スラリーを濾過し、ケーキを酢酸イソプロピル（3,000mL）ですすぎ、高真空下で1時間にわたって乾燥させ、次に高真空下で50℃で18時間にわたって窒素を抜きながらさらに乾燥させ、表題化合物（472g、81％収率）を得た。(m/z):  [M+H]+  C25H26FN5O3の計算値464.51、実測値464.58.
【００８８】
実施例８：（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル）（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン
【化５９】
2021535176.tif 000060
-20℃に冷却したN,N-ジメチルアセトアミド（2,436mL）中の（S）-2-（6-（2-エチル-5-フルオロ-4-ヒドロキシフェニル）-1H-インダゾール-3-イル）-5-イソプロピル-4,5,6,7-テトラヒドロ-3H-イミダゾ[4,5-c]ピリジン-6-カルボン酸、2HCl（470g、876mmol）およびN,N-ジメチルアゼチジン-3-アミン、2HCl（197g、1,139mmol）の撹拌溶液に、DIPEA（413mL、2,366mmol）を少なくとも15分にわたって加えた（発熱付加によりバッチ温度が-9.1℃に上昇した）。バッチを-15℃に冷却し、HCTU（453g、1095mmol）を加えた。混合物を1時間かけて20℃に温め、さらに1時間保持した。完了した反応混合物に酢酸イソプロピル（5.0L）および1M  HCl（2.0L）を加え、混合物を15分にわたって撹拌し、層を分離して、酢酸イソプロピル層中に不純物を抽出した。生成物を含む水層を酢酸イソプロピル（各5.0L）でさらに3回抽出した。4回目の抽出後、水層を2-メチルテトラヒドロフラン、続いて飽和重炭酸ナトリウム溶液（約2.2L、pH  =8に調整）に加え、15分間撹拌し、層を分離し、水層を廃棄した。有機層をアセトニトリルに溶媒交換し、最終容量2.35Lで撹拌し、その時点で生成物はアモルファスの濾過可能な固体として溶液から沈殿した。次に、スラリーを窒素圧下で濾過して、３４５グラムの粗生成物を得た。粗生成物（３４５ｇ）を５５℃で撹拌しながらメタノール（１．０３５Ｌ）に溶解し、１５時間にわたって保持して、溶液から生成物を結晶化した。スラリーを10℃に冷却し、2時間かけて撹拌しながらその温度に保持した。濃縮したスラリーを窒素圧下で20℃で2時間かけて濾過し、続いて65℃で18時間かけて窒素を抜きながら高真空下でさらに乾燥させ、表題化合物をオフホワイトから白色の自由流動性固体として得た（253g、53％収率）。(m/z):  [M+H]+  C30H36FN7O2の計算値546.66、実測値546.73.
【００８９】
調製14:  (S)-5-エチル-2-(6-(2-エチル-4-ヒドロキシフェニル)-1H-インダゾール-3-イル)-4,5,6,7-テトラヒドロ-3H-イミダゾ[4,5-c]ピリジン-6-カルボン酸
【化６０】
2021535176.tif 000061
（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＨＣｌ（０．１００ｇ、０．２２７ｍｍｏｌ）（Ｉ−１８）およびアセトアルデヒド（０．０１９ｍＬ、０．３４１ｍｍｏｌ）をメタノール（３．０ｍＬ）に溶解し、次にシアノ水素化ホウ素ナトリウム（０．０５７ｇ、０．９０９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１６時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。水素化ホウ素ナトリウム（９ｍｇ、０．２２７ｍｍｏｌ）を加えて、残っているアセトアルデヒドをクエンチし、次に反応混合物を濃縮した。次に、粗生成物を逆相クロマトグラフィー（５〜７０％ＡＣＮ／水の勾配、４０ｇ  Ｃ１８カラム）により精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（６２ｍｇ、収率５０％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ２４Ｈ２５Ｎ５Ｏ３の計算値４３２．２０、実測値４３２．１。
【００９０】
実施例９：（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル）（５−エチル−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン
【化６１】
2021535176.tif 000062
（Ｓ）−５−エチル−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＴＦＡ（３０ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）、３−（ジメチルアミノ）アゼチジン二塩酸塩（１４．２８ｍｇ、０．０８２ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（０．０４８ｍＬ、０．２７５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．５０ｍＬ）に溶解し、次にＨＡＴＵ（３１．４ｍｇ、０．０８２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。ヒドラジン（５．１８μｌ、０．１６５ｍｍｏｌ）を加えて望ましくない副生成物を切断した後、溶液を室温で１０分間撹拌した。次に、反応混合物を濃縮し、粗生成物を分取ＨＰＬＣ（５〜６０％ＡＣＮ／水の勾配、Ｃ１８カラム）により精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（２５ｍｇ、収率６３％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ２９Ｈ３５Ｎ７Ｏ２の計算値５１４．２９、実測値５１４．２。
【００９１】
実施例１０：（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）−３−メチルアゼチジン−１−イル）（５−エチル−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン
【化６２】
2021535176.tif 000063
（Ｓ）−５−エチル−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＴＦＡ（３０ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ，３−トリメチルアゼチジン−３−アミン塩酸塩（１２．４３ｍｇ、０．０８２ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（０．０４８ｍＬ、０．２７５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．５０ｍＬ）に溶解し、次にＨＡＴＵ（３１．４ｍｇ、０．０８２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。ヒドラジン（５．１８μｌ、０．１６５ｍｍｏｌ）を加えて望ましくない副生成物を切断した後、溶液を室温で１０分間撹拌した。次に、反応混合物を濃縮し、粗生成物を分取ＨＰＬＣ（５〜６０％ＡＣＮ／水の勾配、Ｃ１８カラム）により精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（２５ｍｇ、収率６２％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ３０Ｈ３７Ｎ７Ｏ２の計算値５２８．３０、実測値５２８．２。
【００９２】
実施例１１：（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）−３−メチルアゼチジン−１−イル）（２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン
【化６３】
2021535176.tif 000064
（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸（４０ｍｇ、０．０９０ｍｍｏｌ）（Ｉ−１９）Ｎ，Ｎ，３−トリメチルアゼチジン−３−アミン塩酸塩（２０．２９ｍｇ、０．１３５ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（０．０４７ｍＬ、０．２６９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．５０ｍＬ）に溶解し、次にＨＡＴＵ（５１．２ｍｇ、０．１３５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１６時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。ヒドラジン（８．４５μｌ、０．２６９ｍｍｏｌ）を加えて望ましくない副生成物を切断した後、溶液を室温で１０分間撹拌した。次に、反応混合物を濃縮し、粗生成物を分取ＨＰＬＣ（５〜６０％ＡＣＮ／水の勾配、Ｃ１８カラム）により精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（２６ｍｇ、収率３８％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ３１Ｈ３９Ｎ７Ｏ２の計算値５４２．３２、実測値５４２．２。
【００９３】
実施例１２：（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル）（２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−プロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン
【化６４】
2021535176.tif 000065
（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−プロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＴＦＡ（３０ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ）、（Ｉ−２０）３−（ジメチルアミノ）アゼチジン二塩酸塩（１３．９２ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（０．０４７ｍＬ、０．２６８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．５０ｍＬ）に溶解し、次にＨＡＴＵ（３０．６ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。ヒドラジン（５．０５μｌ、０．１６１ｍｍｏｌ）を加えて望ましくない副生成物を切断した後、溶液を室温で１０分間撹拌した。次に、反応混合物を濃縮し、粗生成物を分取ＨＰＬＣ（５〜６０％ＡＣＮ／水の勾配、Ｃ１８カラム）により精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（２６ｍｇ、収率６３％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ３０Ｈ３７Ｎ７Ｏ２の計算値５２８．３０、実測値５２８．２。
【００９４】
実施例１３：（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）−３−メチルアゼチジン−１−イル）（２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−プロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン
【化６５】
2021535176.tif 000066
（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−プロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＴＦＡ（３０ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ）、（Ｉ−２０）Ｎ，Ｎ，３−トリメチルアゼチジン−３−アミン塩酸塩（１２．１２ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（０．０４７ｍＬ、０．２６８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．５０ｍＬ）に溶解し、次にＨＡＴＵ（３０．６ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。ヒドラジン（５．０５μｌ、０．１６１ｍｍｏｌ）を加えて望ましくない副生成物を切断した後、溶液を室温で１０分間撹拌した。次に、反応混合物を濃縮し、粗生成物を分取ＨＰＬＣ（５〜６０％ＡＣＮ／水の勾配、Ｃ１８カラム）により精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（１８ｍｇ、収率４４％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ３１Ｈ３９Ｎ７Ｏ２の計算値５４２．３２、実測値５４２．２。
【００９５】
生物学的アッセイ
本開示の化合物を、以下の生物学的アッセイのうちの１つまたはそれを超えるアッセイにおいて特徴付けた。
【００９６】
アッセイ１：生化学的ＪＡＫキナーゼアッセイ
４つのＬａｎｔｈａＳｃｒｅｅｎ  ＪＡＫ生化学的アッセイのパネル（ＪＡＫ１、２、３およびＴｙｋ２）を、通常のキナーゼ反応緩衝液（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．５、０．０１％Ｂｒｉｊ−３５、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２および１ｍＭ  ＥＧＴＡ）に含めた。組換えＧＳＴタグ化ＪＡＫ酵素およびＧＦＰタグ化ＳＴＡＴ１ペプチド基質をＬｉｆｅ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手した。
【００９７】
段階希釈した化合物を、それらの４つのＪＡＫ酵素の各々および基質とともに、白色３８４ウェルマイクロプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）において周囲温度で１時間プレインキュベートした。続いて、ＡＴＰを加えて、１％ＤＭＳＯを含む１０μＬの総体積でキナーゼ反応を開始した。ＪＡＫ１、２、３およびＴｙｋ２に対する最終的な酵素濃度は、それぞれ４．２ｎＭ、０．１ｎＭ、１ｎＭおよび０．２５ｎＭであり；使用された対応するＫｍ  ＡＴＰ濃度は、２５μＭ、３μＭ、１．６μＭおよび１０μＭであり；基質濃度は、４つすべてのアッセイについて２００ｎＭである。キナーゼ反応を周囲温度で１時間進めた後、ＴＲ−ＦＲＥＴ希釈緩衝液（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中のＥＤＴＡ（最終濃度１０ｍＭ）およびＴｂ−抗ｐＳＴＡＴ１（ｐＴｙｒ７０１）抗体（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，最終濃度２ｎＭ）の１０μＬ調製物を加えた。そのプレートを周囲温度で１時間インキュベートした後、ＥｎＶｉｓｉｏｎリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）において読み出した。発光シグナル比（Ｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｒａｔｉｏ  ｓｉｇｎａｌｓ）（５２０ｎｍ／４９５ｎｍ）を記録し、それを用いて、ＤＭＳＯに基づくパーセント阻害値およびバックグラウンドコントロールを算出した。
【００９８】
用量反応解析の場合、パーセント阻害のデータを化合物の濃度に対してプロットし、Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いて、４パラメータのロバストな適合モデルからＩＣ５０値を決定した。結果は、ｐＩＣ５０（ＩＣ５０の対数に負号をつけたもの）として表され、続いてＣｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ式を用いてｐＫｉ（解離定数Ｋｉの対数に負号をつけたもの）に変換した。
【００９９】
４つのＪＡＫアッセイのそれぞれにおいてより低いＫｉ値またはより高いｐＫｉ値を有する試験化合物は、ＪＡＫ活性のより大きな阻害を示す。
【０１００】
アッセイ２：Ｔａｌｌ−１  Ｔ細胞におけるＩＬ−２刺激ｐＳＴＡＴ５の阻害
Ｔａｌｌ−１ヒトＴ細胞株（ＤＳＭＺ）におけるインターロイキン−２（ＩＬ−２）刺激ＳＴＡＴ５リン酸化の阻害に対する試験化合物の効力を、ＡｌｐｈａＬｉｓａを使用して測定した。ＩＬ−２はＪＡＫ１／３を介してシグナル伝達するので、このアッセイによりＪＡＫ１／３細胞効力の尺度を提供する。
【０１０１】
リン酸化ＳＴＡＴ５を、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ  ＳｕｒｅＦｉｒｅ  Ｕｌｔｒａ  ｐＳＴＡＴ５（Ｔｙｒ６９４／６９９）キット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）によって測定した。
【０１０２】
Ｔａｌｌ−１細胞株由来のヒトＴ細胞を、３７℃、５％ＣＯ２加湿恒温器において、１５％熱失活ウシ胎児血清（ＦＢＳ，Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２ｍＭ  Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、および１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）が補充されたＲＰＭＩ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で培養した。化合物をＤＭＳＯで段階希釈し、空のウェルに音響学的に分注した。アッセイ培地（１０％ＦＢＳ（ＡＴＣＣ）が補充された無フェノールレッドＤＭＥＭ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ））を分注し（４μＬ／ウェル）、プレートを９００ｒｐｍで１０分間振盪した。細胞を、アッセイ培地（４μＬ／ウェル）中に４５，０００細胞／ウェルで播種し、３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートした後、予め加温したアッセイ培地（４μＬ）中にＩＬ−２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；最終濃度３００ｎｇ／ｍＬ）を３０分間加えた。サイトカイン刺激の後、細胞を、１×ＰｈｏｓＳｔｏｐおよびＣｏｍｐｌｅｔｅ  ｔａｂｌｅｔ（Ｒｏｃｈｅ）を含む６ｕｌの３×ＡｌｐｈａＬｉｓａ溶解緩衝液（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で溶解した。ライセートを、室温（ＲＴ）にて９００ｒｐｍで１０分間振盪した。リン酸化ＳＴＡＴ５を、ｐＳＴＡＴ５  ＡｌｐｈａＬｉｓａキット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）によって計測した。新たに調製したアクセプタービーズ混合物を、緑色フィルタリングした１００ｌｕｘ未満の光の下でライセート（５μＬ）上に分注した。プレートを９００ｒｐｍで２分間振盪し、短時間遠沈し、ＲＴの暗所で２時間インキュベートした。ドナービーズを、緑色フィルタリングした１００ｌｕｘ未満の光の下で分注した（５μＬ）。プレートを９００ｒｐｍで２分間振盪し、短時間遠沈し、ＲＴの暗所で一晩インキュベートした。ルミネセンスを、ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を用いて緑色フィルタリングした１００ｌｕｘ未満の光の下で６８９ｎｍでの励起および５７０ｎｍでの発光を使用して測定した。
【０１０３】
試験化合物のＩＬ−２に応答する阻害性効力を測定するために、ヒトＴ細胞株におけるｐＳＴＡＴ５に結合したビーズの平均発光強度を計測した。化合物濃度に対するシグナル強度の阻害曲線の解析から、ＩＣ５０値を決定した。データは、ｐＩＣ５０（負の常用対数ＩＣ５０）値（平均値±標準偏差）として表される。
【０１０４】
インビトロアッセイの結果
本開示の化合物は、上記の４つのＪＡＫ酵素アッセイ；JAK1、JAK2、JAK3、およびTyk2、ならびにBEAS-2B細胞効力アッセイで試験した。
表1
【表１】
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【０１０５】
アッセイ３：肺組織におけるＩＬ−１３誘導性ｐＳＴＡＴ６誘導のマウス（Ｍｕｒｉｎｅ））（マウス（Ｍｏｕｓｅ））モデル
ＩＬ−１３は喘息の病態生理学の基礎となる重要なサイトカインである（Ｋｕｄｌａｃｚら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２００８，５８２，１５４−１６１）。ＩＬ−１３は、キナーゼのヤヌスファミリー（ＪＡＫ）のメンバーを活性化する細胞表面受容体に結合し、それは次にＳＴＡＴ６をリン酸化し、その後さらなる転写経路を活性化する。記載されるモデルでは、ある用量のＩＬ−１３をマウスの肺に局所送達してＳＴＡＴ６のリン酸化（ｐＳＴＡＴ６）を誘導し、次にこれをエンドポイントとして測定した。
【０１０６】
ハーランから入手した成体Ｂａｌｂ／ｃマウスをアッセイに使用した。試験当日、動物をイソフルランで軽く麻酔し、ビヒクルまたは試験化合物（１ｍｇ／ｍＬ、数回の呼吸で総体積５０μＬ）を経口吸引で投与した。動物を投与後横臥位に置き、麻酔から完全に回復するのをモニターした後、ホームケージに戻した。４時間後、動物を再度短時間麻酔し、経口吸引によりビヒクルまたはＩＬ−１３のいずれか（送達された総用量０．０３μｇ、総体積５０μＬ）を負荷した後、麻酔から回復するのをモニターしてホームケージに戻した。ビヒクルまたはＩＬ−１３投与の１時間後、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）ＳｕｒｅＦｉｒｅ（登録商標）Ｕｌｔｒａ（商標）ＨＶ  ｐ−ＳＴＡＴ６（Ｔｙｒ６４１）アッセイキットを使用する肺ホモジネート中のｐＳＴＡＴ６検出と、肺と血漿の両方の総薬物濃度分析の両方のために、全血と肺を収集した。血液試料を４℃で約１２，０００ｒｐｍで４分間遠心分離（エッペンドルフ遠心分離機、５８０４Ｒ）して血漿を収集した。肺をＤＰＢＳ（ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水）ですすぎ、パッドで乾燥させ、急速凍結し、秤量し、ＨＰＬＣ水中の０．１％ギ酸に１：３に希釈してホモジナイズした。試験化合物の血漿および肺のレベルは、試験マトリックスの標準曲線に構築された分析標準に対するＬＣ−ＭＳ解析によって決定された。肺と血漿の比は、５時間での肺濃度（ｎｇ／ｇ）と血漿濃度（ｎｇ／ｍＬ）の比と決定された。
【０１０７】
モデルの活性は、ビヒクルで処理されてＩＬ−１３を負荷された対照動物と比較した、５時間で処理動物の肺に存在するｐＳＴＡＴ６のレベルの低下によって証明される。ビヒクルで処理されてＩＬ−１３を負荷された対照動物と、ビヒクルで処理されてビヒクルを負荷された対照動物の違いは、任意の所与実験においてそれぞれ０％および１００％の阻害効果となった。アッセイで試験された化合物は、以下に記載されているように、ＩＬ−１３負荷後５時間でＳＴＡＴ６リン酸化の阻害を示した。
表２：観察したｐSTAT６の阻害と血漿/肺の暴露
【表２】
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【０１０８】
マウス肺において試験した化合物の有意な濃度の観察により、ＩＬ−１３誘導ｐＳＴＡＴ６誘導の観察された阻害が試験化合物の活性の結果であることが確認された。５時間の肺と血漿の比は、マウスにおいて化合物１〜６が血漿中の曝露よりも肺において有意に多くの曝露を示したことを示した。
【０１０９】
アッセイ４：ヒト末梢血単核細胞におけるＴＳＬＰ誘発ＴＡＲＣ放出の阻害
胸腺間質性リンホポエチン（ＴＳＬＰ）と、胸腺および活性化制御ケモカイン（ＴＡＲＣ）は、喘息の気道に過剰発現し、疾患の重症度と相関している。肺では、アレルゲンやウイルス感染に反応して、ＴＳＬＰが気管支上皮細胞から放出されることがある。ＴＳＬＰは、上皮細胞、内皮細胞、好中球、マクロファージ、および肥満細胞をはじめとする幅広い組織および細胞種に見出されるＩＬ−７Ｒα／ＴＳＬＰＲヘテロ二量体を通してシグナルを伝達する。ＴＳＬＰがその受容体に結合すると、コンフォメーション変化が誘発され、ＪＡＫ１とＪＡＫ２が活性化されて、ＳＴＡＴ３およびＳＴＡＴ５をはじめとするさまざまな転写因子がリン酸化される。免疫細胞では、これは細胞内イベントのカスケードを引き起こし、細胞増殖、抗アポトーシス、樹状細胞の遊走、ならびにＴｈ２サイトカインおよびケモカインの産生がもたらされる。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）では、ＴＳＬＰは、骨髄樹状細胞を活性化してＴ細胞を誘引および刺激する（化学誘引物質ＴＡＲＣによって媒介されるプロセスである）ことにより、炎症促進作用を示す。
【０１１０】
このアッセイでは、ＴＳＬＰ刺激がＰＢＭＣからのＴＡＲＣ放出を誘発すること、および、この応答が化合物による処理によって用量依存的に減衰することが示された。試験化合物の効力を、ＴＡＲＣ放出の阻害について測定した。
【０１１１】
３〜５人のドナーからのＰＢＭＣアリコート（事前に全血から単離し、アリコートを−８０℃で凍結）を３７℃で解凍し、５０ｍＬファルコンチューブ内の４０ｍＬの予熱済、滅菌濾過済の完全ＲＰＭＩ培地に滴下して加えた。細胞をペレット化し、完全培地に２．２４×１０６細胞／ｍＬで再懸濁した。細胞を、ウェルあたり８５μＬ（１９０，０００細胞）で組織培養処理した９６ウェル平底マイクロプレートに播種した。細胞を３７℃、５％ＣＯ２で１時間静置した。
【０１１２】
化合物は、ＤＭＳＯ中の１０ｍＭ保存液として受け取った。３．７倍段階希釈を行って、ＤＭＳＯ中の９濃度の試験化合物を最終アッセイ試験濃度の３００倍で生成した。１５０倍の中間希釈は完全培地で行い、０．２％ＤＭＳＯで最終アッセイ試験濃度の２倍の濃度の化合物を生成した。１時間の休止期間の後、９５μＬの２Ｘ化合物をＰＢＭＣの各ウェルに添加し、最終アッセイ濃度範囲を３３．３３μＭから０．９５μＭにした。完全培地中の０．２％ＤＭＳＯ９５μＬを未処理の対照ウェルに加えた。刺激の前に、細胞を化合物で１時間、３７℃、５％ＣＯ２で前処理した。
【０１１３】
組換えヒトＴＳＬＰタンパク質を０．１％ＢＳＡを含む無菌ＤＰＢＳで１０μｇ／ｍＬに再構成し、−２０℃でアリコートで保存した。使用直前にアリコートを解凍し、完全培地中で最終アッセイ濃度の２０倍に調製した。１０μＬの２０倍のＴＳＬＰをＰＢＭＣの各ウェルに加えて最終アッセイ濃度を１０ｎｇ／ｍＬにした。１０μＬの完全培地を未刺激の対照ウェルに加えた。化合物の存在下、４８時間、３７℃、５％ＣＯ２で細胞を刺激した。
【０１１４】
刺激後、細胞培養上清を採取し、製造者の指示に従ってＨｕｍａｎ  ＣＣＬ１７／ＴＡＲＣ  Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＃ＤＤＮ００）を用いて、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）によりＴＡＲＣレベルを検出した。
【０１１５】
用量反応分析では、各ドナーの反応率値に対してｌｏｇ［試験化合物（Ｍ）］をプロットし、可変勾配を伴う４パラメータのシグモイド型用量反応アルゴリズムを使用するＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアによる非直線回帰分析を使用してＩＣ５０値を決定した。データは、個々のドナーのｐＩＣ５０値から計算され、小数点以下第１位に丸められた平均ｐＩＣ５０（１０を底とする負の対数ＩＣ５０）値として表される。阻害の効力値を表３に要約する。
表３：ヒト末梢血単核細胞におけるＴＳＬＰ誘発ＴＡＲＣ放出の阻害についての試験化合物の効力（ｐＩＣ５０）値
【表３】
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【０１１６】
本発明は、その特定の実施形態を参照して説明されてきたが、本発明の真の精神および範囲から逸脱することなく、様々な変更を加えることができ、同等物を置き換えることができることを当業者は理解すべきである。さらに、特定の状況、材料、物質の組成、プロセス、プロセス工程（複数可）を、本発明の目的、精神および範囲に適合させるために、多くの修正を行うことができる。そのようなすべての修正は、本明細書に添付された特許請求の範囲内にあることを意図している。さらに、本明細書の上記で引用されたすべての刊行物、特許、および特許文書は、参照により独立して組み込まれるかのように、参照により完全に本明細書に組み込まれる。
【国際調査報告】
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