(57)【要約】    高度に精製されたステビオール配糖体、特に、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４の調製方法が記載される。本方法は、様々な出発組成物を対象とするステビオール配糖体に変換するための酵素調製物及び組み換え微生物を利用することを含む。高度に精製されたステビオール配糖体は、任意の飲料、菓子、ベーカリー製品、クッキー、及びチューインガムなどの食用及び咀嚼可能な組成物中のノンカロリー甘味料、風味増強剤、甘味増強剤、及び発泡抑制剤として有用である。  【選択図】図１ａ
2021526521.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式を有するレバウジオシドＮ２。
【化１】
2021526521.tif 000022
【請求項２】
以下の式を有するレバウジオシドＯ４。
【化２】
2021526521.tif 000023
【請求項３】
請求項１に記載の高度に精製されたレバウジオシドＮ２を産生するための方法であって、
ａ．少なくとも１つの炭素原子を有する有機化合物を含む出発組成物を提供する工程と、
ｂ．ステビオール生合成酵素、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼ、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼ、並びに任意にＵＤＰ−グルコース及びＵＤＰ−ラムノースリサイクル酵素から選択される少なくとも１つの酵素を含有する酵素調製物又は微生物を提供する工程と、
ｃ．前記酵素調製物又は微生物を、前記出発組成物を含有する培地と接触させて、レバウジオシドＮ２を含む培地を産生する工程と、を含む、方法。
【請求項４】
請求項２に記載の高度に精製されたレバウジオシドＯ４を産生するための方法であって、
ａ．少なくとも１つの炭素原子を有する有機化合物を含む出発組成物を提供する工程と、
ｂ．ステビオール生合成酵素、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼ、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼ、並びに任意にＵＤＰ−グルコース及びＵＤＰ−ラムノースリサイクル酵素から選択される少なくとも１つの酵素を含有する酵素調製物又は微生物を提供する工程と、
ｃ．前記酵素調製物又は微生物を、前記出発組成物を含有する培地と接触させて、レバウジオシドＯ４を含む培地を産生する工程と、を含む、方法。
【請求項５】
請求項１に記載の高度に精製されたレバウジオシドＮ２を産生するための方法であって、
ａ．少なくとも１つの炭素原子を有する有機化合物を含む出発組成物を提供する工程と、
ｂ．ステビオール生合成酵素、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼ、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼ、並びに任意にＵＤＰ−グルコース及びＵＤＰ−ラムノースリサイクル酵素から選択される少なくとも１つの酵素を含む生体酵素を提供する工程と、
ｃ．前記生体酵素を、前記出発組成物を含有する培地と接触させて、レバウジオシドＮ２を含む培地を産生する工程と、を含む、方法。
【請求項６】
請求項２に記載の高度に精製されたレバウジオシドＯ４を産生するための方法であって、
ａ．少なくとも１つの炭素原子を有する有機化合物を含む出発組成物を提供する工程と、
ｂ．ステビオール生合成酵素、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼ、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼ、並びに任意にＵＤＰ−グルコース及びＵＤＰ−ラムノースリサイクル酵素から選択される少なくとも１つの酵素を含む生体酵素を提供する工程と、
ｃ．前記生体酵素を、前記出発組成物を含有する培地と接触させて、レバウジオシドＯ４を含む培地を産生する工程と、を含む、方法。
【請求項７】
更に、
ｄ．前記レバウジオシドＮ２を前記培地から分離して、高度に精製されたレバウジオシドＮ２組成物を提供する工程を含む、請求項３又は５に記載の方法。
【請求項８】
更に、
ｄ．前記レバウジオシドＯ４を前記培地から分離して、高度に精製されたレバウジオシドＯ４組成物を提供する工程を含む、請求項４又は６に記載の方法。
【請求項９】
前記出発組成物が、ステビオール、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、他のステビオール配糖体、ポリオール、炭水化物、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項３、４、５又は６に記載の方法。
【請求項１０】
前記微生物が、大腸菌（E.coli）、サッカロマイセス属（Saccharomyces sp.）、アスペルギルス属（Aspergillus sp.）、ピキア属（Pichia sp.）、バチルス属（Bacillus sp.）、及びヤロウィア属（Yarrowia sp.）からなる群から選択される、請求項３又は４に記載の方法。
【請求項１１】
前記生体触媒が、前記出発組成物をレバウジオシドＮ２に変換することができる酵素、又は１つ以上の酵素を含む細胞である、請求項５に記載の方法。
【請求項１２】
前記生体触媒が、前記出発組成物をレバウジオシドＯ４に変換することができる酵素、又は１つ以上の酵素を含む細胞である、請求項６に記載の方法。
【請求項１３】
前記酵素が、メバロン酸（ＭＶＡ）経路酵素、２−Ｃ−メチル−Ｄ−エリスリトール−４−リン酸経路（ＭＥＰ／ＤＯＸＰ）酵素、ゲラニルゲラニル二リン酸シンターゼ、コパリル二リン酸シンターゼ、カウレンシンターゼ、カウレンオキシダーゼ、カウレン酸１３−ヒドロキシラーゼ（ＫＡＨ）、ステビオールシンターゼ、デオキシキシルロース５−リン酸シンターゼ（ＤＸＳ）、Ｄ−１−デオキシキシルロース５−リン酸レダクトイソメラーゼ（ＤＸＲ）、４−ジホスホシチジル−２−Ｃ−メチル−Ｄ−エリスリトールシンターゼ（ＣＭＳ）、４−ジホスホシチジル−２−Ｃ−メチル−Ｄ−エリスリトールキナーゼ（ＣＭＫ）、４−ジホスホシチジル−２−Ｃ−メチル−Ｄ−エリスリトール２，４−シクロ二リン酸シンターゼ（ＭＣＳ）、１−ヒドロキシ−２−メチル−２（Ｅ）−ブテニル４−二リン酸シンターゼ（ＨＤＳ）、１−ヒドロキシ−２−メチル−２（Ｅ）−ブテニル４−二リン酸レダクターゼ（ＨＤＲ）、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼ、切断型ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ、メバロン酸キナーゼ、ホスホメバロン酸キナーゼ、メバロン酸ピロリン酸デカルボキシラーゼ、シトクロムＰ４５０レダクターゼ、ＵＧＴ７４Ｇ１、ＵＧＴ８５Ｃ２、ＵＧＴ９１Ｄ２、ＥＵＧＴ１１、ＵＧＴＳｌ２、ＵＧＴ７６Ｇ１、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又は＞８５％アミノ酸配列同一性、＞８６％アミノ酸配列同一性、＞８７％アミノ酸配列同一性、＞８８％アミノ酸配列同一性、＞８９％アミノ酸配列同一性、＞９０％アミノ酸配列同一性、＞９１％アミノ酸配列同一性、＞９２％アミノ酸配列同一性、＞９３％アミノ酸配列同一性、＞９４％アミノ酸配列同一性、＞９５％アミノ酸配列同一性、＞９６％アミノ酸配列同一性、＞９７％アミノ酸配列同一性、＞９８％アミノ酸配列同一性、＞９９％アミノ酸配列同一性を有するそれらの変異バリアントからなる群から選択される、請求項３又は４に記載の方法。
【請求項１４】
高度に精製されたレバウジオシドＮ２組成物中の前記レバウジオシドＮ２の含有量が、乾燥基準で約９５重量％超である、請求項７に記載の方法。
【請求項１５】
高度に精製されたレバウジオシドＯ４組成物中の前記レバウジオシドＯ４含有量が、乾燥基準で約９５重量％超である、請求項８に記載の方法。
【請求項１６】
請求項１に記載のレバウジオシドＮ２を含む消費製品であって、食物、飲料、医薬組成物、タバコ製品、栄養補助組成物、口腔衛生組成物、及び化粧品組成物からなる群から選択される、消費製品。
【請求項１７】
請求項２に記載のレバウジオシドＯ４を含む消費製品であって、食物、飲料、医薬組成物、タバコ製品、栄養補助組成物、口腔衛生組成物、及び化粧品組成物からなる群から選択される、消費製品。
【請求項１８】
前記製品が、飲料、天然ジュース、清涼飲料、炭酸ソフトドリンク、ダイエット飲料、ゼロカロリー飲料、低カロリー飲料及び食物、ヨーグルト飲料、インスタントジュース、インスタントコーヒー、粉末型インスタント飲料、製缶品、シロップ、発酵大豆ペースト、醤油、酢、ドレッシング、マヨネーズ、ケチャップ、カレー、スープ、インスタントブイヨン、粉末醤油、粉末酢、ビスケットの種類、米菓、クラッカー、パン、チョコレート、キャラメル、キャンディ、チューインガム、ゼリー、プリン、保存加工された果物及び野菜、生クリーム、ジャム、マーマレード、フラワーペースト、粉末ミルク、アイスクリーム、シャーベット、瓶詰野菜及び果物、煮豆缶詰甘味を付与したソースで煮た肉及び食物、農産野菜食品、海産物、ハム、ソーセージ、魚肉ハム、魚肉ソーセージ、魚肉ペースト、魚の揚げ物製品海産物の干物、冷凍食品、保存加工された海藻、保存加工された肉、タバコ並びに医薬製品からなる群から選択される、請求項１６又は１７に記載の消費製品。
【請求項１９】
炭水化物、ポリオール、アミノ酸及びそれらの対応する塩、ポリアミノ酸及びそれらの対応する塩、糖酸及びそれらの対応する塩、ヌクレオチド、有機酸、無機酸、有機酸塩及び有機塩基塩を含む有機塩、無機塩、苦味化合物、カフェイン、風味剤及び風味成分、渋味化合物、タンパク質又はタンパク質加水分解物、界面活性剤、乳化剤、フラボノイド、アルコール、ポリマー、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの添加剤を更に含む、請求項１６又は１７に記載の消費製品。
【請求項２０】
サポニン、酸化防止剤、食物繊維源、脂肪酸、ビタミン、グルコサミン、ミネラル、防腐剤、水和剤、プロバイオティクス、プレバイオティクス、体重管理剤、骨粗しょう症管理剤、フィトエストロゲン、長鎖一級脂肪族飽和アルコール、フィトステロール、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの機能性成分を更に含む、請求項１６又は１７に記載の消費製品。
【請求項２１】
ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＡ２、レバウジオシドＡ３、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＢ、レバウジオシドＣ２、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＤ２、レバウジオシドＤ３、レバウジオシドＤ４、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＦ、レバウジオシドＦ２、レバウジオシドＦ３、レバウジオシドＧ、レバウジオシドＨ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＩ２、レバウジオシドＩ３、レバウジオシドＪ、レバウジオシドＫ２、レバウジオシドＬ、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ２、レバウジオシドＮ、レバウジオシドＯ、レバウジオシドＯ２、レバウジオシドＯ３、レバウジオシドＱ、レバウジオシドＱ２、レバウジオシドＱ３、レバウジオシドＲ、レバウジオシドＳ、レバウジオシドＴ、レバウジオシドＴ１、レバウジオシドＵ、レバウジオシドＵ２、レバウジオシドＶ、レバウジオシドＶ２、レバウジオシドＷ、レバウジオシドＷ２、レバウジオシドＷ３、レバウジオシドＹ、レバウジオシドＺ１、レバウジオシドＺ２、ステビオールビオシド、ステビオシド、ステビオシドＤ、ステビオシドＥ、ステビオシドＥ２、ステビオシドＦ、ＮＳＦ−０２、モグロシドＶ、羅漢果、アルロース、Ｄ−アロース、Ｄ−タガトース、エリスリトール、ブラゼイン、ネオヘスペリジンジヒドロカルコン、グリチルリジン酸及びその塩、ソーマチン、ペリラルチン（perillartine）、ペルナンズルシン（pernandulcin）、ムクロジオシド、バイユノシド、ファルミソシド−Ｉ、ジメチル−ヘキサヒドロフルオレン−ジカルボン酸、アブルソシド、ペリアンドリン、カルノシフロシド、シクロカリオシド、プテロカリオシド、ポリポドシドＡ、ブラジリン、ヘルナンズルシン、フィロズルシン、グリシフィリン、フロリジン、トリロバチン、ジヒドロフラボノール、ジヒドロケルセチン−３−アセテート、ネオアスチリビン、トランス−シンナムアルデヒド、モナチン及びその塩、セリゲアインＡ、ヘマトキシリン、モネリン、オスラジン、プテロカリオシドＡ、プテロカリオシドＢ、マビンリン、ペンタジン、ミラクリン、クルクリン、ネオクリン、クロロゲン酸、シナリン、シアメノシド、スクラロース、アセスルファムカリウム、アスパルターム、アリターム、サッカリン、シクラメート、ネオターム、ズルシン、スオサンアドバンテーム、ギムネマ酸、ホズルシン、ジジフィン、ラクチゾール、グルタメート、アスパラギン酸、グリシン、アラニン、スレオニン、プロリン、セリン、リジン、トリプトファン、マルチトール、マンニトール、ソルビトール、ラクチトール、キシリトール、イノシトール、イソマルト、プロピレングリコール、グリセロール、スレイトール、ガラクチトール、水素添加イソマルツロース、還元イソマルト−オリゴ糖、還元キシロ−オリゴ糖、還元ゲンチオ−オリゴ糖、還元マルトースシロップ、還元グルコースシロップ、加水分解水添デンプン、ポリグリシトール、糖アルコール、Ｌ−糖、Ｌ−ソルボース、Ｌ−アラビノース、トレハロース、ガラクトース、ラムノース、様々なシクロデキストリン、環状オリゴ糖、様々な種類のマルトデキストリン、デキストラン、スクロース、グルコース、リブロース、フルクトース、トレオース、キシロース、リキソース、アルトロース、マンノース、イドース、ラクトース、マルトース、転化糖、イソトレハロース、ネオトレハロース、イソマルツロース、エリトロース、デオキシリボース、グロース、タロース、エリトルロース、キシルロース、セロビオース、アミロペクチン、グルコサミン、マンノサミン、グルクロン酸、グルコン酸、グルコノ−ラクトン、アベクオース、ガラクトサミン、ビートオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖（イソマルトース、イソマルトトリオース、パノースなど）、キシロ−オリゴ糖（キシロトリオース、キシロビオースなど）、キシロ末端オリゴ糖、ゲンチオ−オリゴ糖（ゲンチオビオース、ゲンチオトリオース、ゲンチオテトラオースなど）、ニゲロ−オリゴ糖、パラチノースオリゴ糖、フルクトオリゴ糖（ケストース、ニストースなど）、マルトテトラオール、マルトトリオール、マルトオリゴ糖（マルトトリオース、マルトテトラオース、マルトペンタオース、マルトヘキサオース、マルトヘプタオースなど）、デンプン、イヌリン、イヌロ−オリゴ糖、ラクツロース、メリビオース、ラフィノース、高フルクトースコーンシロップなどの異性化液糖、カップリング糖、大豆オリゴ糖、Ｄ−プシコース、Ｄ−リボース、Ｌ−グルコース、Ｌ−フコース、Ｄ−ツラノース、Ｄ−ロイクロースからなる群から選択される化合物を更に含む、請求項１６又は１７に記載の消費製品。
【請求項２２】
甘味料を含む飲料又は食品の甘味を増強するための方法であって、
ａ．甘味料を含む飲料又は食品を提供することと、
ｂ．請求項１に記載のレバウジオシドＮ２を含む甘味増強剤を添加することと、を含み、
レバウジオシドＮ２が、甘味認識閾値以下の濃度で存在する、方法。
【請求項２３】
甘味料を含む飲料又は食品の甘味を増強するための方法であって、
ａ．甘味料を含む飲料又は食品を提供することと、
ｂ．請求項２に記載のレバウジオシドＯ４を含む甘味増強剤を添加することと、を含み、
レバウジオシドＯ４が、甘味認識閾値以下の濃度で存在する、方法。
【請求項２４】
飲料又は食品の風味を改質するための方法であって、
ａ．飲料又は食品を提供することと、
ｂ．請求項１に記載のレバウジオシドＮ２を含む組成物を添加することと、を含む、方法。
【請求項２５】
飲料又は食品の風味を改質するための方法であって、
ａ．飲料又は食品を提供することと、
ｂ．請求項２に記載のレバウジオシドＯ４を含む組成物を添加することと、を含む、方法。
【請求項２６】
飲料又は食品の発泡を抑制するための方法であって、
ａ．飲料又は食品を提供することと、
ｂ．請求項１に記載のレバウジオシドＮ２を含む発泡抑制剤を添加することと、を含む、方法。
【請求項２７】
飲料又は食品の発泡を抑制するための方法であって、
ａ．飲料又は食品を提供することと、
ｂ．請求項２に記載のレバウジオシドＯ４を含む発泡抑制剤を添加することと、を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、高度に精製されたステビオール配糖体組成物を含むステビオール配糖体を含む組成物を調製するためのプロセスに関する。
【０００２】
配列表
「ＰＣ＿７８ＰＲＯＶ．ｔｘｔ」と題された、１９キロバイトのデータを有する２０１８年６月８日に作成され、本願と同時に出願されたテキストファイルは、参照によりその全体が本出願に組み込まれる。
【背景技術】
【０００３】
高甘味度甘味料は、スクロースの甘味レベルよりも何倍も大きい甘味レベルを有する。これらは本質的にノンカロリーであり、食物及び飲料を含む食事並びに低カロリー製品において一般的に使用されている。高甘味度甘味料は、血糖応答を誘発せず、糖尿病患者及び炭水化物の摂取を制御することに関心のある他の人々を対象とした製品において使用するのに好適である。
【０００４】
ステビオール配糖体は、ステビア・レバウディアナ・ベルトニー（Stevia rebaudiana Bertoni）、南米の特定の地域を原産とするキク科（Asteraceae(Compositae)family）の多年生の低木の葉に見出される化合物の部類である。これらは、Ｃ１３位及びＣ１９位での炭水化物残基の存在によって異なる単一の塩基、ステビオールによって構造的に特徴付けられる。これらはステビア葉に蓄積し、総乾燥重量の約１０％〜２０％を構成する。乾燥重量基準では、ステビアの葉に見られる４つの主要配糖体には、典型的には、ステビオシド（９．１％）、レバウジオシドＡ（３．８％）、レバウジオシドＣ（０．６〜１．０％）及びズルコシドＡ（０．３％）が含まれる。他の既知のステビオールとしては、レバウジオシドＢ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ及びＭ、ステビオールビオシド、及びルブソシドが挙げられる。
【０００５】
ステビア・レバウディアナ（Stevia rebaudiana）からステビオール配糖体を調製するための方法が知られているが、これらの方法の多くは商業的に使用するのに好適ではない。
【０００６】
したがって、高度に精製されたステビオール配糖体組成物を含むステビオール配糖体を含む組成物を調製するための、簡単、効率的かつ経済的な方法が依然として必要とされている。
【発明の概要】
【０００７】
本発明は、有機基質を含む出発組成物を微生物細胞及び／又は酵素調製物と接触させることにより、対象とするステビオール配糖体を含む組成物を産生することによって、対象とするステビオール配糖体を含む組成物を調製するためのプロセスを提供する。
【０００８】
出発組成物は、少なくとも１つの炭素原子を含む任意の有機化合物であり得る。一実施形態では、出発組成物は、ステビオール配糖体、ポリオール又は糖アルコール、様々な炭水化物からなる群から選択される。
【０００９】
対象とするステビオール配糖体は、任意のステビオール配糖体であり得る。一実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、レバウジオシドＯ４、又は合成ステビオール配糖体である。
【００１０】
一実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＮ２である。
【００１１】
一実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＯ４である。
【００１２】
いくつかの好ましい実施形態では、出発組成物を対象とするステビオール配糖体に変換することが可能な、１つ以上の酵素を含む酵素調製物、又は１つ以上の酵素を含む微生物細胞が使用される。酵素は、細胞の表面上及び／又は内部に配置することができる。酵素調製物は、全細胞懸濁液、粗溶解物、又は精製酵素（複数可）の形態で提供することができる。酵素調製物は、遊離形態であり得るか、又は無機若しくは有機材料から作製された固体支持体に固定化され得る。
【００１３】
いくつかの実施形態では、微生物細胞は、出発組成物を対象とするステビオールに変換するために、必要な酵素及びその酵素をコードする遺伝子を含む。したがって、本発明はまた、有機基質を含む出発組成物を、出発組成物を対象とするステビオール配糖体に変換することができる少なくとも１つの酵素を含む微生物細胞と接触させることにより、少なくとも１つの対象とするステビオール配糖体を含む培地を産生することによって、対象とするステビオール配糖体を含む組成物を調整するためのプロセスも提供する。
【００１４】
出発組成物を対象とするステビオール配糖体に変換するのに必要な酵素としては、ステビオール生合成酵素、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼ（UDP-glucosyltransferase、ＵＧＴ）、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼ（以下、ＵＤＰ−ｇｌｙｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ、ＵＧｌｙＴ）及び／又はＵＤＰ−リサイクル酵素が挙げられる。
【００１５】
一実施形態では、ステビオール生合成酵素としては、メバロン酸（mevalonate、ＭＶＡ）経路酵素が挙げられる。
【００１６】
別の実施形態では、ステビオール生合成酵素としては、非メバロン酸２−Ｃ−メチル−エリスリトール−４−リン酸経路（ＭＥＰ／ＤＯＸＰ）酵素が挙げられる。
【００１７】
一実施形態では、ステビオール生合成酵素は、ゲラニルゲラニル二リン酸シンターゼ、コパリル二リン酸シンターゼ、カウレンシンターゼ、カウレンオキシダーゼ、カウレン酸１３−ヒドロキシラーゼ（kaurenoic acid 13-hydroxylase、ＫＡＨ）、ステビオールシンセターゼ、デオキシキシルロース５−リン酸シンターゼ（deoxyxylulose 5 -phosphate synthase、ＤＸＳ）、Ｄ−１−デオキシキシルロース５−リン酸レダクトイソメラーゼ（D-1-deoxyxylulose 5-phosphate reductoisomerase、ＤＸＲ）、４−ジホスホシチジル−２−Ｃ−メチル−Ｄ−エリスリトールシンターゼ（4-diphosphocytidyl-2-C-methyl-D-erythritol synthase、ＣＭＳ）、４−ジホスホシチジル−２−Ｃ−メチル−Ｄ−エリスリトールキナーゼ（4-diphosphocytidyl-2-C-methyl-D-erythritol kinase、ＣＭＫ）、４−ジホスホシチジル−２−Ｃ−メチル−Ｄ−エリスリトール２，４−シクロ二リン酸シンターゼ（4-diphosphocytidyl-2-C-methyl-D-erythritol 2,4-cyclodiphosphate synthase、ＭＣＳ）、１−ヒドロキシ−２−メチル−２（Ｅ）−ブテニル４−二リン酸シンターゼ（1-hydroxy-2-methyl-2(E)-butenyl 4-diphosphate synthase、ＨＤＳ）、１−ヒドロキシ−２−メチル−２（Ｅ）−ブテニル４−二リン酸レダクターゼ（1-hydroxy-2-methyl-2(E)-butenyl 4-diphosphate reductase、ＨＤＲ）、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼ、切断型ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ、メバロン酸キナーゼ、ホスホメバロン酸キナーゼ、メバロン酸ピロリン酸デカルボキシラーゼ、シトクロムＰ４５０レダクターゼなどを含む群から選択される。
【００１８】
ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオール及び／又はステビオール配糖体基質に付加して、対象とするステビオール配糖体を提供することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼであり得る。
【００１９】
ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をステビオール及び／又はステビオール配糖体基質に付加して、対象とするステビオール配糖体を提供することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼであり得る。
【００２０】
本明細書で使用するとき、用語「ＳｕＳｙ＿ＡＴ」は、特に明記しない限り、実施例１に記載されるようなアミノ酸配列「配列番号１」を有するスクロースシンターゼ、又は、配列番号１のポリペプチドと実質的な（＞８５％、＞８６％、＞８７％、＞８８％、＞８９％、＞９０％、＞９１％、＞９２％、＞９３％、＞９４％、＞９５％、＞９６％、＞９７％、＞９８％、＞９９％）アミノ酸配列同一性を有するポリペプチド、並びにそれらのポリペチドをコードする単離された核酸分子を指す。
【００２１】
本明細書で使用するとき、用語「ＵＧＴＳｌ２」は、特に明記しない限り、実施例１に記載されるようなアミノ酸配列「配列番号２」を有するＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼ、又は、配列番号２のポリペプチドと実質的な（＞８５％、＞８６％、＞８７％、＞８８％、＞８９％、＞９０％、＞９１％、＞９２％、＞９３％、＞９４％、＞９５％、＞９６％、＞９７％、＞９８％、＞９９％）アミノ酸配列同一性を有するポリペプチド、並びにそれらのポリペチドをコードする単離された核酸分子を指す。
【００２２】
本明細書で使用するとき、用語「ＵＧＴ７６Ｇ１」は、特に明記しない限り、実施例１に記載されるようなアミノ酸配列「配列番号３」を有するＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼ、又は、配列番号３のポリペプチドと実質的な（＞８５％、＞８６％、＞８７％、＞８８％、＞８９％、＞９０％、＞９１％、＞９２％、＞９３％、＞９４％、＞９５％、＞９６％、＞９７％、＞９８％、＞９９％）アミノ酸配列同一性を有するポリペプチド、並びにそれらのポリペチドをコードする単離された核酸分子を指す。
【００２３】
本明細書で使用するとき、用語「ＵＧＬｙＴ９１Ｃ１」は、特に明記しない限り、実施例１に記載されるようなアミノ酸配列「配列番号４」を有するＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼ、又は、配列番号４のポリペプチドと実質的な（＞８５％、＞８６％、＞８７％、＞８８％、＞８９％、＞９０％、＞９１％、＞９２％、＞９３％、＞９４％、＞９５％、＞９６％、＞９７％、＞９８％、＞９９％）アミノ酸配列同一性を有するポリペプチド、並びにそれらのポリペチドをコードする単離された核酸分子を指す。
【００２４】
一実施形態では、ステビオール生合成酵素、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼ、及びＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、微生物細胞において産生される。微生物細胞は、例えば、大腸菌（E.coli）、サッカロマイセス属（Saccharomyces sp.）、アスペルギルス属（Aspergillus sp.）、ピキア属（Pichia sp.）、バチルス属（Bacillus sp.）、ヤロウィア属（Yarrowia sp.）などであってもよい。別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは合成される。
【００２５】
一実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、ＵＧＴ８５Ｃ２、ＵＧＴ７６Ｇ１、ＵＧＴ９１Ｄ２、ＵＧＴＳｌ２、ＥＵＧＴ１１及びこれらのポリペプチドと実質的な（＞８５％、＞８６％、＞８７％、＞８８％、＞８９％、＞９０％、＞９１％、＞９２％、＞９３％、＞９４％、＞９５％、＞９６％、＞９７％、＞９８％、＞９９％）アミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ並びにこれらのＵＧＴをコードする単離された核酸分子を含む群から選択される。
【００２６】
一実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１及びこれらのポリペプチドと実質的な（＞８５％、＞８６％、＞８７％、＞８８％、＞８９％、＞９０％、＞９１％、＞９２％、＞９３％、＞９４％、＞９５％、＞９６％、＞９７％、＞９８％、＞９９％）アミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴ並びにこれらのＵＧｌｙＴをコードする単離された核酸分子を含む群から選択される。
【００２７】
一実施形態では、ステビオール生合成酵素、ＵＧＴ、ＵＧｌｙＴ、ＵＤＰ−グルコースリサイクル系及びＵＤＰ−ラムノースリサイクル系は、１つの微生物（微生物細胞）中に存在する。微生物細胞は、例えば、大腸菌（E.coli）、サッカロマイセス属（Saccharomyces sp.）、アスペルギルス属（Aspergillus sp.）、ピキア属（Pichia sp.）、バチルス属（Bacillus sp.）、ヤロウィア属（Yarrowia sp.）などであってもよい。
【００２８】
一実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位を、Ｃ１３において−ＯＨ官能基を担持するステビオール又は任意の出発ステビオール配糖体に付加して、Ｃ１３において−Ｏ−グルコースβグルコピラノシドグリコシド結合を有する対象とするステビオール配糖体を与えることができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００２９】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位を、Ｃ１９において−ＣＯＯＨ官能基を担持するステビオール又は任意の出発ステビオール配糖体に付加して、Ｃ１９において−ＣＯＯ−グルコースβグルコピラノシドグリコシド結合を有する対象とするステビオール配糖体を与えることができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００３０】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位を、任意の出発ステビオール配糖体のＣ１９において存在するグルコースに付加して、新たに形成されたグリコシド結合（複数可）において少なくとも１つのβ１→２グルコピラノシドグリコシド結合（複数可）を担持する少なくとも１つの追加のグルコースを有する対象とするステビオール配糖体を得ることができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００３１】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位を、任意の出発ステビオール配糖体のＣ１９において存在するグルコースに付加して、新たに形成された結合であるグリコシド結合（複数可）において少なくとも１つのβ１→３グルコピラノシドグリコシド結合（複数可）を担持する少なくとも１つの追加のグルコースを有する対象とするステビオール配糖体を得ることができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００３２】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位を、任意の出発ステビオール配糖体のＣ１３において存在するグルコースに付加して、新たに形成されたグリコシド結合（複数可）において少なくとも１つのα１→２ラムノピラノシドグリコシド結合（複数可）を担持する少なくとも１つの追加のラムノースを有する対象とするステビオール配糖体を得ることができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【００３３】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位を、任意の出発ステビオール配糖体のＣ１３において存在するグルコースに付加して、新たに形成された結合であるグリコシド結合（複数可）において少なくとも１つのβ１→３グルコピラノシドグリコシド結合（複数可）を担持する少なくとも１つの追加のグルコースを有する対象とするステビオール配糖体を得ることができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００３４】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位を、任意の出発ステビオール配糖体のＣ１３において存在するグルコースに付加して、新たに形成されたグリコシド結合（複数可）において少なくとも１つのβ１→６グルコピラノシドグリコシド結合（複数可）を担持する少なくとも１つの追加のグルコースを有する対象とするステビオール配糖体を得ることができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００３５】
一実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールに付加してステビオールモノシドを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００３６】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールに付加してステビオールモノシドＡを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００３７】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をステビオールモノシドに付加してステビオールモノシドＣを形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【００３８】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールモノシドに付加してステビオールビオシドＤを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００３９】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールモノシドに付加してステビオールビオシドＥを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００４０】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールモノシドに付加してルブソシドを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００４１】
一実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールモノシドＡに付加してルブソシドを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００４２】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールモノシドＡに付加してステビオールビオシドＡを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００４３】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールモノシドＡに付加してステビオールビオシドＢを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００４４】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＣに付加してズルコシドＣを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００４５】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＣに付加してズルコシドＤを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００４６】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＣに付加してズルコシドＡを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００４７】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をステビオールビオシドＤに付加してズルコシドＣを形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【００４８】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＤに付加してレバウジオシドＢ２を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００４９】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＤに付加してステビオシドＧを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００５０】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をステビオールビオシドＥに付加してズルコシドＤを形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【００５１】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＥに付加してレバウジオシドＢ２を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００５２】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＥに付加してステビオシドＨを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００５３】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をルブソシドに付加してズルコシドＡを形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【００５４】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をルブソシドに付加してステビオシドＧを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００５５】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をルブソシドに付加してステビオシドＨを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００５６】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をルブソシドに付加してステビオシドＡを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００５７】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をルブソシドに付加してステビオシドＢを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００５８】
一実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＡに付加してステビオシドＡを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００５９】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＡに付加してステビオシドＣを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００６０】
一実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＢに付加してステビオシドＢを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００６１】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＢに付加してステビオシドＣを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００６２】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をズルコシドＣに付加してレバウジオシドＣ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００６３】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をズルコシドＣに付加してレバウジオシドＣを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００６４】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をズルコシドＤに付加してレバウジオシドＣ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００６５】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をズルコシドＤに付加してレバウジオシドＣ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００６６】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＢ２に付加してレバウジオシドＣ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【００６７】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＢ２に付加してレバウジオシドＡ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００６８】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をズルコシドＡに付加してレバウジオシドＣを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００６９】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をズルコシドＡに付加してレバウジオシドＣ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００７０】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をズルコシドＡに付加してレバウジオシドＣ５を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００７１】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をズルコシドＡに付加してレバウジオシドＣ６を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００７２】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をステビオシドＧに付加してレバウジオシドＣを形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【００７３】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＧに付加してレバウジオシドＡ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００７４】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＧに付加してレバウジオシドＥ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００７５】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＧに付加してレバウジオシドＥ６を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００７６】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をステビオシドＨに付加してレバウジオシドＣ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【００７７】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＨに付加してレバウジオシドＡ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００７８】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＨに付加してレバウジオシドＥ５を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００７９】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＨに付加してレバウジオシドＥ７を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００８０】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をステビオシドＡに付加してレバウジオシドＣ５を形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【００８１】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＡに付加してレバウジオシドＥ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００８２】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＡに付加してレバウジオシドＥ５を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００８３】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＡに付加してレバウジオシドＥ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００８４】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をステビオシドＢに付加してレバウジオシドＣ６を形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【００８５】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＢに付加してレバウジオシドＥ６を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００８６】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＢに付加してレバウジオシドＥ７を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００８７】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＢに付加してレバウジオシドＥ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００８８】
一実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオサイＣに付加してレバウジオシドＥ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００８９】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ３に付加してレバウジオシドＨ２を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００９０】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣに付加してレバウジオシドＨ２を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００９１】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣに付加してレバウジオシドＫを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００９２】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣに付加してレバウジオシドＨ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００９３】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ４に付加してレバウジオシドＨ２を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００９４】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ４に付加してレバウジオシドＨ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００９５】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ４に付加してレバウジオシドＨ５を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００９６】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＡ４に付加してレバウジオシドＨ２を形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【００９７】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＡ４に付加してレバウジオシドＤ５を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００９８】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＡ４に付加してレバウジオシドＤ６を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【００９９】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ５に付加してレバウジオシドＫを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１００】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ５に付加してレバウジオシドＨ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１０１】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ５に付加してレバウジオシドＨ６を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１０２】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＥ４に付加してレバウジオシドＫを形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【０１０３】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ４に付加してレバウジオシドＤ５を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１０４】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ４に付加してレバウジオシドＤ７を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１０５】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＥ５に付加してレバウジオシドＨ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【０１０６】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ５に付加してレバウジオシドＤ５を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１０７】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ５に付加してレバウジオシドＤ８を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１０８】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ６に付加してレバウジオシドＨ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１０９】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ６に付加してレバウジオシドＨ５を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１１０】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ６に付加してレバウジオシドＨ６を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１１１】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＥ６に付加してレバウジオシドＨ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【０１１２】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ６に付加してレバウジオシドＤ６を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１１３】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ６に付加してレバウジオシドＤ７を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１１４】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＥ７に付加してレバウジオシドＨ５を形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【０１１５】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ７に付加してレバウジオシドＤ６を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１１６】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ７に付加してレバウジオシドＤ８を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１１７】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＥ３に付加してレバウジオシドＨ６を形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【０１１８】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ３に付加してレバウジオシドＤ７を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１１９】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ３に付加してレバウジオシドＤ８を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１２０】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ２に付加してレバウジオシドＮ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１２１】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ２に付加してレバウジオシドＮ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１２２】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＫに付加してレバウジオシドＮ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１２３】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＫに付加してレバウジオシドＮ２を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１２４】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ３に付加してレバウジオシドＮ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１２５】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ３に付加してレバウジオシドＮ５を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１２６】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＤ５に付加してレバウジオシドＮ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【０１２７】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＤ５に付加してレバウジオシドＭ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１２８】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ４に付加してレバウジオシドＮ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１２９】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ４に付加してレバウジオシドＮ２を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１３０】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ５に付加してレバウジオシドＮ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１３１】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ５に付加してレバウジオシドＮ５を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１３２】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＤ６に付加してレバウジオシドＮ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【０１３３】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＤ６に付加してレバウジオシドＭ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１３４】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ６に付加してレバウジオシドＮ２を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１３５】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ６に付加してレバウジオシドＮ５を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１３６】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＤ７に付加してレバウジオシドＮ２を形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【０１３７】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＤ７に付加してレバウジオシドＭ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１３８】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＤ８に付加してレバウジオシドＮ５を形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【０１３９】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＤ８に付加してレバウジオシドＭ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１４０】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＮ３に付加してレバウジオシドＯ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１４１】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＮ４に付加してレバウジオシドＯ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１４２】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＮ２に付加してレバウジオシドＯ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１４３】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＮ５に付加してレバウジオシドＫ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０１４４】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＭ３に付加してレバウジオシドＯ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【０１４５】
任意に、本発明の方法は、ＵＤＰ−グルコースを提供するためにＵＤＰをリサイクルすることを更に含む。一実施形態では、本方法は、リサイクル触媒及びリサイクル基質を提供することによってＵＤＰをリサイクルすることを含み、これにより、ステビオール及び／又はステビオール配糖体基質の対象とするステビオール配糖体への生体内変換は、触媒量のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼ及びＵＤＰ−グルコースを使用して行われる。
【０１４６】
任意に、本発明の方法は、ＵＤＰ−ラムノースを提供するために、ＵＤＰをリサイクルすることを更に含む。一実施形態では、本方法は、リサイクル触媒及びリサイクル基質を提供することによってＵＤＰをリサイクルすることを含み、これにより、ステビオール及び／又はステビオール配糖体基質の対象とするステビオール配糖体への生体内変換は、触媒量のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼ及びＵＤＰ−ラムノースを使用して行われる。
【０１４７】
一実施形態では、リサイクル触媒は、スクロースシンターゼＳｕＳｙ＿ＡＴ又はＳｕＳｙ＿ＡＴと＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するスクロース合成酵素である。
【０１４８】
一実施形態では、ＵＤＰ−グルコースリサイクル触媒のリサイクル基質は、スクロースである。
【０１４９】
一実施形態では、ＵＤＰ−ラムノースリサイクル触媒のリサイクル基質は、ラムノシル残基を含む分子である。
【０１５０】
任意に、本発明の方法は、レシピエントの対象とするステビオール配糖体分子を改変するために、糖供与体としてオリゴ糖類又は多糖類を使用するトランスグリコシダーゼの使用を更に含む。非限定的な例としては、シクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼ（cyclodextrin glycosyltransferase、ＣＧＴａｓｅ）、フルクトフラノシダーゼ、アミラーゼ、サッカラーゼ、グルコスクラーゼ、β−ｈ−フルクトシダーゼ、β−フルクトシダーゼ、スクラーゼ、フルクトシルインベルターゼ、アルカリ性インベルターゼ、酸インベルターゼ、フルクトフラノシダーゼが挙げられる。いくつかの実施形態では、グルコース及びグルコース以外の糖（複数可）（フルクトース、キシロース、ラムノース、アラビノース、デオキシグルコース、ガラクトースを含むがこれらに限定されない）が、レシピエントの対象とするステビオール配糖体に移される。一実施形態では、レシピエントステビオール配糖体は、レバウジオシドＮ２である。別の実施形態では、レシピエントステビオール配糖体は、レバウジオシドＯ４である。
【０１５１】
任意に、本発明の方法は、対象とするステビオール配糖体を培地から分離して、高度に精製された対象とするステビオール配糖体組成物を提供することを更に含む。対象とするステビオール配糖体は、例えば、結晶化、膜による分離、遠心分離、抽出、クロマトグラフィー分離、又はこのような方法の組み合わせなど、少なくとも１つの好適な方法によって分離することができる。
【０１５２】
一実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、微生物内で産生され得る。別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、培地中に分泌され得る。別の一実施形態では、放出されたステビオール配糖体は、培地から連続的に取り出すことができる。更に別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、変換反応の完了後に分離される。
【０１５３】
一実施形態では、分離は、無水基準で約８０％超の対象とするステビオール配糖体を含む組成物、すなわち、高度に精製されたステビオール配糖体組成物を含む組成物を産生する。別の実施形態では、分離は、約９０重量％超の対象とするステビオール配糖体を含む組成物を産生する。別の実施形態では、組成物は、約９５重量％超の対象とするステビオール配糖体を含む。他の実施形態では、組成物は、約９９重量％超の対象とするステビオール配糖体を含む。
【０１５４】
対象とするステビオール配糖体は、水和物、溶媒和物、無水物、又はこれらの組み合わせを含む、任意の多形体又は非晶形であり得る。
【０１５５】
精製された対象とするステビオール配糖体は、甘味料、風味調整剤、改質特性を有する風味料、及び／又は発泡抑制剤として、消費製品に使用することができる。好適な消費者製品としては、食物、飲料、医薬組成物、タバコ製品、栄養補助組成物、口腔衛生組成物、及び化粧品組成物が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５６】
以下の発明の詳細な説明がより良く理解され得るように、前述のものは、本発明の特徴及び技術的利点をより広く概説したものである。本発明の請求項の主題を形成する本発明の更なる特徴及び利点は、以下に記載される。開示される概念及び特定の実施形態は、本発明の同じ目的を実施するための他の構造を修正又は設計するための基礎として容易に利用され得ることを理解されたい。また、このような等価な構造は、添付の特許請求の範囲に記載される本発明の趣旨及び範囲から逸脱しないことも理解されたい。本発明に特徴的であると考えられる新規な特徴は、更なる目的及び利点と一緒にその組織及び動作方法の両方について、添付の図面と関連して考慮される場合、以下の説明からよりよく理解されるであろう。しかしながら、図面のそれぞれは、例示及び説明のみを目的として提供され、本発明の限界の定義として意図されていないことを明示的に理解するべきである。
【図面の簡単な説明】
【０１５７】
【図１ａ】レバウジオシドＮ２の化学構造を示す。
【図１ｂ】レバウジオシドＮ２の化学構造を示す。
【図１ｃ】レバウジオシドＯ４の化学構造を示す。
【図１ｄ】レバウジオシドＯ４の化学構造を示す。
【図１ｅ】アグリコン構造を有するステビオール配糖体の化学構造を示す。
【図２ａ】レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＯ４、及び様々なステビオール配糖体を、ステビオール及び様々な中間ステビオール配糖体から産生する経路を示す。
【図２ｂ】レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＯ４、及び様々なステビオール配糖体を、ステビオール及び様々な中間ステビオール配糖体から産生する経路を示す。
【図２ｃ】レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＯ４、及び様々なステビオール配糖体を、ステビオール及び様々な中間ステビオール配糖体から産生する経路を示す。
【図２ｄ】レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＯ４、及び様々なステビオール配糖体を、ステビオール及び様々な中間ステビオール配糖体から産生する経路を示す。
【図２ｅ】レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＯ４、及び様々なステビオール配糖体を、ステビオール及び様々な中間ステビオール配糖体から産生する経路を示す。
【図２ｆ】レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＯ４、及び様々なステビオール配糖体を、ステビオール及び様々な中間ステビオール配糖体から産生する経路を示す。
【図２ｇ】レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＯ４、及び様々なステビオール配糖体を、ステビオール及び様々な中間ステビオール配糖体から産生する経路を示す。
【図２ｈ】レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＯ４、及び様々なステビオール配糖体を、ステビオール及び様々な中間ステビオール配糖体から産生する経路を示す。
【図２ｉ】レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＯ４、及び様々なステビオール配糖体を、ステビオール及び様々な中間ステビオール配糖体から産生する経路を示す。
【図２ｊ】レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＯ４、及び様々なステビオール配糖体を、ステビオール及び様々な中間ステビオール配糖体から産生する経路を示す。
【図２ｋ】レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＯ４、及び様々なステビオール配糖体を、ステビオール及び様々な中間ステビオール配糖体から産生する経路を示す。
【図２ｌ】レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＯ４、及び様々なステビオール配糖体を、ステビオール及び様々な中間ステビオール配糖体から産生する経路を示す。
【図３ａ】酵素ＵＧＴＳｌ２及びＵＧＴ７６Ｇ１を使用したレバウジオシドＣからのレバウジオシドＮ２の生体触媒産生、並びにスクロースシンターゼＳｕＳｙ＿ＡＴを介したＵＤＰのＵＤＰ−グルコースへの同時リサイクルを示す。
【図３ｂ】酵素ＵＧＴＳｌ２及びＵＧＴ７６Ｇ１を使用したレバウジオシドＣからのレバウジオシドＯ４の生体触媒産生、並びにスクロースシンターゼＳｕＳｙ＿ＡＴを介したＵＤＰのＵＤＰ−グルコースへの同時リサイクルを示す。
【図４】レバウジオシドＣのＨＰＬＣクロマトグラムを示す。２４．５３５分の保持時間のピークは、レバウジオシドＣに相当する。
【図５】レバウジオシドＣからのレバウジオシドＮ２及びレバウジオシドＯ４の生体触媒産生の産生物のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。１１．３１７分及び８．６０３分の保持時間のピークは、それぞれ、レバウジオシドＮ２及びレバウジオシドＯ４に相当する。１２．５６７分のピークは、レバウジオシドＫに相当する。
【図６ａ】ＨＰＬＣによる精製後のレバウジオシドＮ２のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。１０．７４５分の保持時間のピークは、レバウジオシドＮ２に相当する。
【図６ｂ】ＨＰＬＣによる精製後のレバウジオシドＯ４のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。８．１８５分の保持時間のピークは、レバウジオシドＯ４に相当する。
【図７ａ】それぞれ、レバウジオシドＮ２及びレバウジオシドＯ４の１Ｈ  ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ、ピリジン−ｄ５）を示す。
【図７ｂ】それぞれ、レバウジオシドＮ２及びレバウジオシドＯ４の１Ｈ  ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ、ピリジン−ｄ５）を示す。
【図８ａ】それぞれ、レバウジオシドＮ２及びレバウジオシドＯ４のＨＳＱＣスペクトル（５００ＭＨｚ、ピリジン−ｄ５）を示す。
【図８ｂ】それぞれ、レバウジオシドＮ２及びレバウジオシドＯ４のＨＳＱＣスペクトル（５００ＭＨｚ、ピリジン−ｄ５）を示す。
【図９ａ】それぞれ、レバウジオシドＮ２及びレバウジオシドＯ４のＨ，Ｈ  ＣＯＳＹスペクトル（５００ＭＨｚ、ピリジン−ｄ５）を示す。
【図９ｂ】それぞれ、レバウジオシドＮ２及びレバウジオシドＯ４のＨ，Ｈ  ＣＯＳＹスペクトル（５００ＭＨｚ、ピリジン−ｄ５）を示す。
【図１０ａ】それぞれ、レバウジオシドＮ２及びレバウジオシドＯ４のＨＭＢＣスペクトル（５００ＭＨｚ、ピリジン−ｄ５）を示す。
【図１０ｂ】それぞれ、レバウジオシドＮ２及びレバウジオシドＯ４のＨＭＢＣスペクトル（５００ＭＨｚ、ピリジン−ｄ５）を示す。
【図１１ａ】それぞれ、レバウジオシドＮ２及びレバウジオシドＯ４のＨＳＱＣ−ＴＯＣＳＹスペクトル（５００ＭＨｚ、ピリジン−ｄ５）を示す。
【図１１ｂ】それぞれ、レバウジオシドＮ２及びレバウジオシドＯ４のＨＳＱＣ−ＴＯＣＳＹスペクトル（５００ＭＨｚ、ピリジン−ｄ５）を示す。
【図１２ａ】それぞれ、レバウジオシドＮ２のＬＣクロマトグラム及び質量スペクトルを示す。
【図１２ｂ】それぞれ、レバウジオシドＮ２のＬＣクロマトグラム及び質量スペクトルを示す。
【図１３ａ】それぞれ、レバウジオシドＯ４のＬＣクロマトグラム及び質量スペクトルを示す。
【図１３ｂ】それぞれ、レバウジオシドＯ４のＬＣクロマトグラム及び質量スペクトルを示す。
【発明を実施するための形態】
【０１５８】
本発明は、有機基質を含む出発組成物を微生物細胞及び／又は酵素調製物と接触させることにより、対象とするステビオール配糖体を含む組成物を産生することによって、対象とするステビオール配糖体を含む組成物を調製するためのプロセスを提供する。
【０１５９】
本発明の１つの目的は、対象とするステビオール配糖体、特に、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、レバウジオシドＯ４、又は合成ステビオール配糖体を、様々な出発組成物から調製するための効率的な生体触媒方法を提供することである。
【０１６０】
本明細書で使用するとき、略語「ｒｅｂ」は、「レバウジオシド」を指す。両方の用語は同じ意味を有し、互換的に使用されてもよい。
【０１６１】
本明細書で使用するとき、「生体触媒作用」又は「生体触媒の」は、酵素などの天然又は遺伝子操作された生体触媒、又は有機化合物上の単一又は複数の工程化学変換が可能な１つ以上の酵素を含む細胞の使用を指す。生体触媒プロセスとしては、発酵、生合成、生物変換、及び生体内変換プロセスが挙げられる。単離酵素及び全細胞生体触媒法の両方が当該技術分野において既知である。生体触媒タンパク質酵素は、天然に存在し得るか、又は組み換えタンパク質であり得る。
【０１６２】
本明細書で使用するとき、用語「ステビオール配糖体（複数可）」は、限定されないが、天然に存在するステビオール配糖体、例えば、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、レバウジオシドＯ４、合成ステビオール配糖体、例えば酵素的にグリコシル化されたステビオール配糖体、及びこれらの組み合わせを含む、ステビオールの配糖体を指す。
【０１６３】
出発組成物
本明細書で使用するとき、「出発組成物」は、少なくとも１つの炭素原子を含む１つ以上の有機化合物を含有する任意の組成物（一般に水溶液）を指す。
【０１６４】
一実施形態では、出発組成物は、ステビオール、ステビオール配糖体、ポリオール、及び様々な炭水化物からなる群から選択される。
【０１６５】
出発組成物のステビオール配糖体は、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、ステビア・レバウディアナ（Stevia rebaudiana）植物で見出されるステビオールの他の配糖体、合成ステビオール配糖体、例えば酵素的にグリコシル化されたステビオール配糖体、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【０１６６】
一実施形態では、出発組成物は、ステビオールである。
【０１６７】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、ステビオールモノシドである。
【０１６８】
更に別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、ステビオールモノシドＡである。
【０１６９】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、ステビオールモノシドＢである。
【０１７０】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、ステビオールビオシドＣである。
【０１７１】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、ステビオールビオシドＤである。
【０１７２】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、ステビオールビオシドＥである。
【０１７３】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、ルブソシドである。
【０１７４】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、ズルコシドＡである。
【０１７５】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、ズルコシドＣである。
【０１７６】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、ズルコシドＤである。
【０１７７】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、ステビオシドＡである。
【０１７８】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、ステビオシドＢである。
【０１７９】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、ステビオシドＣである。
【０１８０】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、ステビオシドＧである。
【０１８１】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、ステビオシドＨである。
【０１８２】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＢ２である。
【０１８３】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＢ２である。
【０１８４】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＡ４である。
【０１８５】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＣである。
【０１８６】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＣ３である。
【０１８７】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＣ４である。
【０１８８】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＣ５である。
【０１８９】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＣ６である。
【０１９０】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＥ３である。
【０１９１】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＥ４である。
【０１９２】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＥ５である。
【０１９３】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＥ６である。
【０１９４】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＥ７である。
【０１９５】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＤ５である。
【０１９６】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＤ６である。
【０１９７】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＤ７である。
【０１９８】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＤ８である。
【０１９９】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＨ２である。
【０２００】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＨ３である。
【０２０１】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＨ４である。
【０２０２】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＨ５である。
【０２０３】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＨ６である。
【０２０４】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＫである。
【０２０５】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＮ２である。
【０２０６】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＮ３である。
【０２０７】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＮ４である。
【０２０８】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＮ５である。
【０２０９】
別の実施形態では、出発組成物のステビオール配糖体は、レバウジオシドＭ３である。
【０２１０】
用語「ポリオール」は、２つ以上のヒドロキシル基を含有する分子を指す。ポリオールは、それぞれ２、３、及び４つのヒドロキシル基を含有するジオール、トリオール、又はテトラオールであってもよい。ポリオールはまた、それぞれ５、６、又は７つのヒドロキシル基を含有するペンタノール、ヘキサオール、ヘプタノールなどの、４つを超えるヒドロキシル基を含有してもよい。更に、ポリオールはまた、糖アルコール、多価アルコール、又は炭水化物の還元形態であるポリアルコールであってもよく、この中でカルボニル基（アルデヒド又はケトン、還元糖）は、一級又は二級ヒドロキシル基に還元されている。ポリオールの例としては、エリスリトール、マルチトール、マンニトール、ソルビトール、ラクチトール、キシリトール、イノシトール、イソマルト、プロピレングリコール、グリセロール、スレイトール、ガラクチトール、水素添加イソマルツロース、還元イソマルト−オリゴ糖、還元キシロ−オリゴ糖、還元ゲンチオ−オリゴ糖、還元マルトースシロップ、還元グルコースシロップ、加水分解水添デンプン、ポリグリシトール及び糖アルコール、又は還元可能な任意の他の炭水化物が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２１１】
用語「炭水化物」は、一般式（ＣＨ２Ｏ）ｎ（式中、ｎは３〜３０である）の複数のヒドロキシル基で置換されたアルデヒド又はケトン、並びにそれらのオリゴマー及びポリマーを指す。加えて、本発明の炭水化物は、１つ以上の位置で置換又は脱酸素化され得る。本明細書で使用するとき、炭水化物は、非修飾炭水化物、炭水化物誘導体、置換炭水化物、及び修飾炭水化物を包含する。本明細書で使用するとき、語句「炭水化物誘導体」、「置換炭水化物」、及び「修飾炭水化物」は同義である。修飾炭水化物は、少なくとも１つの原子が付加、除去、若しくは置換された任意の炭水化物、又はこれらの組み合わせを意味する。したがって、炭水化物誘導体又は置換炭水化物としては、置換及び非置換の単糖、二糖類、オリゴ糖、及び多糖類が挙げられる。炭水化物誘導体又は置換炭水化物は、任意に、任意の対応するＣ位で脱酸素化されてもよく、かつ／又は水素、ハロゲン、ハロアルキル、カルボキシル、アシル、アシルオキシ、アミノ、アミド、カルボキシル誘導体、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルコキシ、アリールオキシ、ニトロ、シアノ、スルホ、メルカプト、イミノ、スルホニル、スルフェニル、スルフィニル、スルファモイル、カルボアルコキシ、カルボキシアミド、ホスホニル、ホスフィニル、ホスホリル、ホスフィノ、チオエステル、チオエーテル、オキシミノ、ヒドラジノ、カルバミル、ホスホ、ホスホナト、又は炭水化物誘導体若しくは置換炭水化物官能基に提供される任意の他の実行可能な官能基などの１つ以上の部分で置換されて、甘味料組成物の甘味を向上させることができる。
【０２１２】
本発明に従って使用され得る炭水化物の例としては、タガトース、トレハロース、ガラクトース、ラムノース、様々なシクロデキストリン、環状オリゴ糖、様々な種類のマルトデキストリン、デキストラン、スクロース、グルコース、リブロース、フルクトース、トレオース、アラビノース、キシロース、リキソース、アロース、アルトロース、マンノース、イドース、ラクトース、マルトース、転化糖、イソトレハロース、ネオトレハロース、イソマルツロース、エリトロース、デオキシリボース、グロース、イドース、タロース、エリトルロース、キシルロース、プシコース、ツラノース、セロビオース、アミロペクチン、グルコサミン、マンノサミン、フコース、グルクロン酸、グルコン酸、グルコノ−ラクトン、アベクオース、ガラクトサミン、ビートオリゴ糖、イソマルト−オリゴ糖（イソマルトース、イソマルトトリオース、パノースなど）、キシロ−オリゴ糖（キシロトリオース、キシロビオースなど）、キシロ−末端オリゴ糖、ゲンチオ−オリゴ糖（ゲンチオビオース、ゲンチオトリオース、ゲンチオテトラオースなど）、ソルボース、ニゲロ−オリゴ糖、パラチノースオリゴ糖、フルクトオリゴ糖（ケストース、ニストースなど）、マルトテトラオール、マルトトリオール、マルトオリゴ糖（マルトトリオース、マルトテトラオース、マルトペンタオース、マルトヘキサオース、マルトヘプタオースなど）、デンプン、イヌリン、イヌロ−オリゴ糖、ラクツロース、メリビオース、ラフィノース、リボノース、高フルクトースコーンシロップなどの異性化液糖、カップリング糖、及び大豆オリゴ糖が挙げられるが、これらに限定されない。更に、本明細書で使用される炭水化物は、Ｄ−又はＬ−立体配置のいずれかであってもよい。
【０２１３】
出発組成物は、市販又は調製された合成若しくは精製（部分的又は完全的）であってもよい。
【０２１４】
一実施形態では、出発組成物はグリセロールである。
【０２１５】
別の実施形態では、出発組成物はグルコースである。
【０２１６】
別の実施形態では、出発組成物はラムノースである。
【０２１７】
更に別の実施形態では、出発組成物はスクロースである。
【０２１８】
更に別の実施形態では、出発組成物はデンプンである。
【０２１９】
別の実施形態では、出発組成物はマルトデキストリンである。
【０２２０】
更に別の実施形態では、出発組成物はセルロースである。
【０２２１】
更に別の実施形態では、出発組成物はアミロースである。
【０２２２】
出発組成物の有機化合物（複数可）は、本明細書に記載されるように、対象とするステビオール配糖体（複数可）の産生のための基質（複数可）として機能する。
【０２２３】
対象とするステビオール配糖体
本方法の対象とするステビオール配糖体は、本明細書に開示されるプロセスによって調製することができる任意のステビオール配糖体であり得る。一実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、レバウジオシドＯ４、ステビア・レバウディアナ（Stevia rebaudiana）植物で見出されるステビオールの他の配糖体、合成ステビオール配糖体、例えば酵素的にグリコシル化されたステビオール配糖体、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【０２２４】
一実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ステビオールモノシドである。
【０２２５】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ステビオールモノシドＡである。
【０２２６】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ステビオールビオシドＡである。
【０２２７】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ステビオールビオシドＢである。
【０２２８】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ステビオールビオシドＣである。
【０２２９】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ステビオールビオシドＤである。
【０２３０】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ステビオールビオシドＥである。
【０２３１】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ルブソシドである。
【０２３２】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ズルコシドＡである。
【０２３３】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ズルコシドＣである。
【０２３４】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ズルコシドＤである。
【０２３５】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ステビオシドＡである。
【０２３６】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ステビオシドＢである。
【０２３７】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ステビオシドＣである。
【０２３８】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ステビオサイドＧである。
【０２３９】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、ステビオシドＨである。
【０２４０】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＢ２である。
【０２４１】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＡ４である。
【０２４２】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＣである。
【０２４３】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＣ３である。
【０２４４】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＣ４である。
【０２４５】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＣ５である。
【０２４６】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＣ６である。
【０２４７】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＥ３である。
【０２４８】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＥ４である。
【０２４９】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＥ５である。
【０２５０】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＥ６である。
【０２５１】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＥ７である。
【０２５２】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＤ５である。
【０２５３】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＤ６である。
【０２５４】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＤ７である。
【０２５５】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＤ８である。
【０２５６】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＨ２である。
【０２５７】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＨ３である。
【０２５８】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＨ４である。
【０２５９】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＨ５である。
【０２６０】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＨ６である。
【０２６１】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＫである。
【０２６２】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＮ２である。
【０２６３】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＮ３である。
【０２６４】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＮ４である。
【０２６５】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＮ５である。
【０２６６】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＭ３である。
【０２６７】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体は、レバウジオシドＯ４である。
【０２６８】
対象とするステビオール配糖体は、水和物、溶媒和物、無水物、又はこれらの組み合わせを含む、任意の多形体又は非晶形であり得る。
【０２６９】
一実施形態では、本発明は、ステビオールモノシドの産生のための生体触媒プロセスである。
【０２７０】
一実施形態では、本発明は、ステビオールモノシドＡの産生のための生体触媒プロセスである。
【０２７１】
一実施形態では、本発明は、ステビオールビオシドＡの産生のための生体触媒プロセスである。
【０２７２】
一実施形態では、本発明は、ステビオールビオシドＢの産生のための生体触媒プロセスである。
【０２７３】
一実施形態では、本発明は、ステビオールビオシドＣの産生のための生体触媒プロセスである。
【０２７４】
一実施形態では、本発明は、ステビオールビオシドＤの産生のための生体触媒プロセスである。
【０２７５】
一実施形態では、本発明は、ステビオールビオシドＥの産生のための生体触媒プロセスである。
【０２７６】
一実施形態では、本発明は、ルブソシドの産生のための生体触媒プロセスである。
【０２７７】
一実施形態では、本発明は、ズルコシドＡの産生のための生体触媒プロセスである。
【０２７８】
一実施形態では、本発明は、Ｃの産生のための生体触媒プロセスである。
【０２７９】
一実施形態では、本発明は、ズルコシドＤの産生のための生体触媒プロセスである。
【０２８０】
一実施形態では、本発明は、ステビオシドＡの産生のための生体触媒プロセスである。
【０２８１】
一実施形態では、本発明は、ステビオシドＢの産生のための生体触媒プロセスである。
【０２８２】
一実施形態では、本発明は、ステビオシドＣの産生のための生体触媒プロセスである。
【０２８３】
一実施形態では、本発明は、ステビオシドＧの産生のための生体触媒プロセスである。
【０２８４】
一実施形態では、本発明は、ステビオシドＨの産生のための生体触媒プロセスである。
【０２８５】
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＢ２の産生のための生体触媒プロセスである。
【０２８６】
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＡ４の産生のための生体触媒プロセスである。
【０２８７】
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＣの産生のための生体触媒プロセスである。
【０２８８】
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＣ３の産生のための生体触媒プロセスである。
【０２８９】
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＣ４の産生のための生体触媒プロセスである。
【０２９０】
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＣ５の産生のための生体触媒プロセスである。
【０２９１】
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＣ６の産生のための生体触媒プロセスである。
【０２９２】
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＥ３の産生のための生体触媒プロセスである。
【０２９３】
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＥ４の産生のための生体触媒プロセスである。
【０２９４】
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＥ５の産生のための生体触媒プロセスである。
【０２９５】
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＥ６の産生のための生体触媒プロセスである。
【０２９６】
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＥ７の産生のための生体触媒プロセスである。
【０２９７】
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＤ５の産生のための生体触媒プロセスである。
【０２９８】
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＤ６の産生のための生体触媒プロセスである。
【０２９９】
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＤ７の産生のための生体触媒プロセスである。
【０３００】
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＤ８の産生のための生体触媒プロセスである。
【０３０１】
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＨ２の産生のための生体触媒プロセスである。
【０３０２】
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＨ３の産生のための生体触媒プロセスである。
【０３０３】
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＨ４の産生のための生体触媒プロセスである。
【０３０４】
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＨ５の産生のための生体触媒プロセスである。
【０３０５】
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＨ６の産生のための生体触媒プロセスである。
【０３０６】
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＫの産生のための生体触媒プロセスである。
【０３０７】
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＮ２の産生のための生体触媒プロセスである。
【０３０８】
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＮ３の産生のための生体触媒プロセスである。
【０３０９】
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＮ４の産生のための生体触媒プロセスである。
【０３１０】
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＮ５の産生のための生体触媒プロセスである。
【０３１１】
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＭ３の産生のための生体触媒プロセスである。
【０３１２】
一実施形態では、本発明は、レバウジオシドＯ４の産生のための生体触媒プロセスである。
【０３１３】
特定の実施形態では、本発明は、レバウジオシドＣ及びＵＤＰ−グルコースを含む出発組成物からのレバウジオシドＮ２の産生のための生体触媒プロセスを提供する。
【０３１４】
別の特定の実施形態では、本発明は、レバウジオシドＣ及びＵＤＰ−グルコースを含む出発組成物からのレバウジオシドＯ４の産生のための生体触媒プロセスを提供する。
【０３１５】
任意に、本発明の方法は、対象とするステビオール配糖体を培地から分離して、高度に精製された対象とするステビオール配糖体組成物を提供することを更に含む。対象とするステビオール配糖体は、例えば、結晶化、膜による分離、遠心分離、抽出、クロマトグラフィー分離、又はこのような方法の組み合わせなど、任意の好適な方法によって分離することができる。
【０３１６】
特定の実施形態では、本明細書に記載のプロセスは、高度に精製された対象とするステビオール配糖体組成物をもたらす。本明細書で使用するとき、用語「高度に精製された」は、無水（乾燥）基準で、約８０重量％超の対象とするステビオール配糖体を有する組成物を指す。一実施形態では、高度に精製された対象とするステビオール配糖体組成物は、例えば、乾燥基準で約９１％超、約９２％超、超約９３％超、約９４％、超約９５％超、約９６％超、約９７％超、約９８％超、又は約９９％超の対象とするステビオール配糖体含有量などの、無水（乾燥）基準で約９０重量％超の対象とするステビオール配糖体を含有する。
【０３１７】
一実施形態では、対象とするステビオール配糖体がｒｅｂ  Ｎ２である場合、本明細書に記載のプロセスは、乾燥基準で約９０重量％超のｒｅｂ  Ｎ２含有量を有する組成物を提供する。別の特定の実施形態では、対象とするステビオール配糖体がｒｅｂ  Ｎ２である場合、本明細書に記載のプロセスは、乾燥基準で約９５重量％超のｒｅｂ  Ｎ２含有量を含む組成物を提供する。
【０３１８】
別の実施形態では、対象とするステビオール配糖体がｒｅｂ  Ｏ４である場合、本明細書に記載のプロセスは、乾燥基準で約９０重量％超のｒｅｂ  Ｏ４含有量を有する組成物を提供する。別の特定の実施形態では、対象とするステビオール配糖体がｒｅｂ  Ｏ４である場合、本明細書に記載のプロセスは、乾燥基準で約９５重量％超のｒｅｂ  Ｏ４含有量を含む組成物を提供する。
【０３１９】
微生物及び酵素調製物
本発明の一実施形態では、微生物（微生物細胞）及び／又は酵素調製物を、出発組成物を含有する培地と接触させて、対象とするステビオール配糖体を産生する。
【０３２０】
酵素は、全細胞懸濁液、粗溶解物、精製酵素、又はこれらの組み合わせの形態で提供することができる。一実施形態では、生体触媒は、出発組成物を対象とするステビオール配糖体に変換することができる精製酵素である。別の実施形態では、生体触媒は、出発組成物を対象とするステビオール配糖体に変換することができる少なくとも１つの酵素を含む粗溶解物である。更に別の実施形態では、生体触媒は、出発組成物を対象とするステビオール配糖体に変換することができる少なくとも１つの酵素を含む全細胞懸濁液である。
【０３２１】
別の実施形態では、生体触媒は、出発組成物を対象とするステビオール配糖体に変換することができる酵素（複数可）を含む１つ以上の微生物細胞である。酵素は、細胞の表面上、細胞内、又は細胞の表面上及び細胞内の両方に位置することができる。
【０３２２】
出発組成物を対象とするステビオール配糖体に変換するのに好適な酵素としては、ステビオール生合成酵素、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼ（ＵＧＴ）及びＵＤＰグリコシルトランスフェラーゼ（ＵＧｌｙＴ）が挙げられるが、これらに限定されない。任意に、これには、ＵＤＰリサイクル酵素（複数可）が含まれてもよい。
【０３２３】
一実施形態では、ステビオール生合成酵素としては、メバロン酸（ＭＶＡ）経路酵素が挙げられる。
【０３２４】
別の実施形態では、ステビオール生合成酵素としては、非メバロン酸２−Ｃ−メチル−エリスリトール−４−リン酸経路（ＭＥＰ／ＤＯＸＰ）酵素が挙げられる。
【０３２５】
一実施形態では、ステビオール生合成酵素は、ゲラニルゲラニル二リン酸シンターゼ、コパリル二リン酸シンターゼ、カウレンシンターゼ、カウレンオキシダーゼ、カウレン酸１３−ヒドロキシラーゼ（ＫＡＨ）、ステビオールシンセターゼ、デオキシキシルロース５−リン酸シンターゼ（ＤＸＳ）、Ｄ−１−デオキシキシルロース５−リン酸レダクトイソメラーゼ（ＤＸＲ）、４−ジホスホシチジル−２−Ｃ−メチル−Ｄ−エリスリトールシンターゼ（ＣＭＳ）、４−ジホスホシチジル−２−Ｃ−メチル−Ｄ−エリスリトールキナーゼ（ＣＭＫ）、４−ジホスホシチジル−２−Ｃ−メチル−Ｄ−エリスリトール２，４−シクロ二リン酸シンターゼ（ＭＣＳ）、１−ヒドロキシ−２−メチル−２（Ｅ）−ブテニル４−二リン酸シンターゼ（ＨＤＳ）、１−ヒドロキシ−２−メチル−２（Ｅ）−ブテニル４−二リン酸レダクターゼ（ＨＤＲ）、アセトアセチル−ＣｏＡチオラーゼ、切断型ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ、メバロン酸キナーゼ、ホスホメバロン酸キナーゼ、メバロン酸ピロリン酸デカルボキシラーゼ、シトクロムＰ４５０レダクターゼなどを含む群から選択される。
【０３２６】
ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオール及び／又はステビオール配糖体基質に付加して、対象とするステビオール配糖体を提供することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼであり得る。
【０３２７】
ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をステビオール及び／又はステビオール配糖体基質に付加して、対象とするステビオール配糖体を提供することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼであり得る。
【０３２８】
一実施形態では、ステビオール生合成酵素、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼ、及びＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、微生物細胞において産生される。微生物細胞は、例えば、大腸菌（E.coli）、サッカロマイセス属（Saccharomyces sp.）、アスペルギルス属（Aspergillus sp.）、ピキア属（Pichia sp.）、バチルス属（Bacillus sp.）、ヤロウィア属（Yarrowia sp.）などであってもよい。別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは合成される。
【０３２９】
一実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、ＵＧＴ８５Ｃ２、ＵＧＴ７６Ｇ１、ＵＧＴ９１Ｄ２、ＵＧＴＳｌ２、ＥＵＧＴ１１及びこれらのポリペプチドと実質的な（＞８５％、＞８６％、＞８７％、＞８８％、＞８９％、＞９０％、＞９１％、＞９２％、＞９３％、＞９４％、＞９５％、＞９６％、＞９７％、＞９８％、＞９９％）アミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ並びにこれらのＵＧＴをコードする単離された核酸分子を含む群から選択される。
【０３３０】
一実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１及びこれらのポリペプチドと実質的な（＞８５％、＞８６％、＞８７％、＞８８％、＞８９％、＞９０％、＞９１％、＞９２％、＞９３％、＞９４％、＞９５％、＞９６％、＞９７％、＞９８％、＞９９％）アミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴ並びにこれらのＵＧｌｙＴをコードする単離された核酸分子を含む群から選択される。
【０３３１】
一実施形態では、ステビオール生合成酵素、ＵＧＴ、ＵＧｌｙＴ、ＵＤＰ−グルコースリサイクル系及びＵＤＰ−ラムノースリサイクル系は、１つの微生物（微生物細胞）中に存在する。微生物細胞は、例えば、大腸菌（E.coli）、サッカロマイセス属（Saccharomyces sp.）、アスペルギルス属（Aspergillus sp.）、ピキア属（Pichia sp.）、バチルス属（Bacillus sp.）、ヤロウィア属（Yarrowia sp.）などであってもよい。
【０３３２】
一実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位を、Ｃ１３において−ＯＨ官能基を担持するステビオール又は任意の出発ステビオール配糖体に付加して、Ｃ１３において−Ｏ−グルコースβグルコピラノシドグリコシド結合を有する対象とするステビオール配糖体を与えることができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３３３】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位を、Ｃ１９において−ＣＯＯＨ官能基を担持するステビオール又は任意の出発ステビオール配糖体に付加して、Ｃ１９において−ＣＯＯ−グルコースβグルコピラノシドグリコシド結合を有する対象とするステビオール配糖体を与えることができるＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３３４】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位を、任意の出発ステビオール配糖体のＣ１９において存在するグルコースに付加して、新たに形成されたグリコシド結合（複数可）において少なくとも１つのβ１→２グルコピラノシドグリコシド結合（複数可）を担持する少なくとも１つの追加のグルコースを有する対象とするステビオール配糖体を得ることができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３３５】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位を、任意の出発ステビオール配糖体のＣ１９において存在するグルコースに付加して、新たに形成された結合であるグリコシド結合（複数可）において少なくとも１つのβ１→３グルコピラノシドグリコシド結合（複数可）を担持する少なくとも１つの追加のグルコースを有する対象とするステビオール配糖体を得ることができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３３６】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位を、任意の出発ステビオール配糖体のＣ１３において存在するグルコースに付加して、新たに形成されたグリコシド結合（複数可）において少なくとも１つのα１→２ラムノピラノシドグリコシド結合（複数可）を担持する少なくとも１つの追加のラムノースを有する対象とするステビオール配糖体を得ることができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【０３３７】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位を、任意の出発ステビオール配糖体のＣ１３において存在するグルコースに付加して、新たに形成された結合であるグリコシド結合（複数可）において少なくとも１つのβ１→３グルコピラノシドグリコシド結合（複数可）を担持する少なくとも１つの追加のグルコースを有する対象とするステビオール配糖体を得ることができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３３８】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位を、任意の出発ステビオール配糖体のＣ１３において存在するグルコースに付加して、新たに形成されたグリコシド結合（複数可）において少なくとも１つのβ１→６グルコピラノシドグリコシド結合（複数可）を担持する少なくとも１つの追加のグルコースを有する対象とするステビオール配糖体を得ることができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３３９】
一実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールに付加してステビオールモノシドを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３４０】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールに付加してステビオールモノシドＡを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３４１】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をステビオールモノシドに付加してステビオールモノシドＣを形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【０３４２】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールモノシドに付加してステビオールビオシドＤを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３４３】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールモノシドに付加してステビオールビオシドＥを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３４４】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールモノシドに付加してルブソシドを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３４５】
一実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールモノシドＡに付加してルブソシドを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３４６】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールモノシドＡに付加してステビオールビオシドＡを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３４７】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールモノシドＡに付加してステビオールビオシドＢを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３４８】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＣに付加してズルコシドＣを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３４９】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＣに付加してズルコシドＤを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３５０】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＣに付加してズルコシドＡを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３５１】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をステビオールビオシドＤに付加してズルコシドＣを形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【０３５２】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＤに付加してレバウジオシドＢ２を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３５３】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＤに付加してステビオシドＧを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３５４】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をステビオールビオシドＥに付加してズルコシドＤを形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【０３５５】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＥに付加してレバウジオシドＢ２を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３５６】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＥに付加してステビオシドＨを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３５７】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をルブソシドに付加してズルコシドＡを形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【０３５８】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をルブソシドに付加してステビオシドＧを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３５９】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をルブソシドに付加してステビオシドＨを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３６０】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をルブソシドに付加してステビオシドＡを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３６１】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をルブソシドに付加してステビオシドＢを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３６２】
一実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＡに付加してステビオシドＡを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３６３】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＡに付加してステビオシドＣを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３６４】
一実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＢに付加してステビオシドＢを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３６５】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオールビオシドＢに付加してステビオシドＣを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３６６】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をズルコシドＣに付加してレバウジオシドＣ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３６７】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をズルコシドＣに付加してレバウジオシドＣを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３６８】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をズルコシドＤに付加してレバウジオシドＣ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３６９】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をズルコシドＤに付加してレバウジオシドＣ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３７０】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＢ２に付加してレバウジオシドＣ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【０３７１】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＢ２に付加してレバウジオシドＡ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３７２】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をズルコシドＡに付加してレバウジオシドＣを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３７３】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をズルコシドＡに付加してレバウジオシドＣ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３７４】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をズルコシドＡに付加してレバウジオシドＣ５を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３７５】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をズルコシドＡに付加してレバウジオシドＣ６を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３７６】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をステビオシドＧに付加してレバウジオシドＣを形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【０３７７】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＧに付加してレバウジオシドＡ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３７８】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＧに付加してレバウジオシドＥ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３７９】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＧに付加してレバウジオシドＥ６を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３８０】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をステビオシドＨに付加してレバウジオシドＣ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【０３８１】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＨに付加してレバウジオシドＡ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３８２】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＨに付加してレバウジオシドＥ５を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３８３】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＨに付加してレバウジオシドＥ７を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３８４】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をステビオシドＡに付加してレバウジオシドＣ５を形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【０３８５】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＡに付加してレバウジオシドＥ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３８６】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＡに付加してレバウジオシドＥ５を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３８７】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＡに付加してレバウジオシドＥ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３８８】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をステビオシドＢに付加してレバウジオシドＣ６を形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【０３８９】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＢに付加してレバウジオシドＥ６を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３９０】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＢに付加してレバウジオシドＥ７を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３９１】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオシドＢに付加してレバウジオシドＥ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３９２】
一実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をステビオサイＣに付加してレバウジオシドＥ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ８５Ｃ２、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴ、又はＵＧＴ８５Ｃ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３９３】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ３に付加してレバウジオシドＨ２を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７４Ｇ１、又はＵＧＴ７４Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３９４】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣに付加してレバウジオシドＨ２を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３９５】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣに付加してレバウジオシドＫを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３９６】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣに付加してレバウジオシドＨ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３９７】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ４に付加してレバウジオシドＨ２を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３９８】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ４に付加してレバウジオシドＨ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０３９９】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ４に付加してレバウジオシドＨ５を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４００】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＡ４に付加してレバウジオシドＨ２を形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【０４０１】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＡ４に付加してレバウジオシドＤ５を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４０２】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＡ４に付加してレバウジオシドＤ６を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４０３】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ５に付加してレバウジオシドＫを形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４０４】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ５に付加してレバウジオシドＨ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４０５】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ５に付加してレバウジオシドＨ６を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４０６】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＥ４に付加してレバウジオシドＫを形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【０４０７】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ４に付加してレバウジオシドＤ５を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４０８】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ４に付加してレバウジオシドＤ７を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４０９】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＥ５に付加してレバウジオシドＨ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【０４１０】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ５に付加してレバウジオシドＤ５を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４１１】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ５に付加してレバウジオシドＤ８を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４１２】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ６に付加してレバウジオシドＨ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４１３】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ６に付加してレバウジオシドＨ５を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４１４】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＣ６に付加してレバウジオシドＨ６を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４１５】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＥ６に付加してレバウジオシドＨ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【０４１６】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ６に付加してレバウジオシドＤ６を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４１７】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ６に付加してレバウジオシドＤ７を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４１８】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＥ７に付加してレバウジオシドＨ５を形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【０４１９】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ７に付加してレバウジオシドＤ６を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４２０】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ７に付加してレバウジオシドＤ８を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４２１】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＥ３に付加してレバウジオシドＨ６を形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【０４２２】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ３に付加してレバウジオシドＤ７を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４２３】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＥ３に付加してレバウジオシドＤ８を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４２４】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ２に付加してレバウジオシドＮ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４２５】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ２に付加してレバウジオシドＮ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４２６】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＫに付加してレバウジオシドＮ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４２７】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＫに付加してレバウジオシドＮ２を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４２８】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ３に付加してレバウジオシドＮ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４２９】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ３に付加してレバウジオシドＮ５を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４３０】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＤ５に付加してレバウジオシドＮ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【０４３１】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＤ５に付加してレバウジオシドＭ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４３２】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ４に付加してレバウジオシドＮ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４３３】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ４に付加してレバウジオシドＮ２を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４３４】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ５に付加してレバウジオシドＮ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４３５】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ５に付加してレバウジオシドＮ５を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４３６】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＤ６に付加してレバウジオシドＮ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【０４３７】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＤ６に付加してレバウジオシドＭ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４３８】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ６に付加してレバウジオシドＮ２を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４３９】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＨ６に付加してレバウジオシドＮ５を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４４０】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＤ７に付加してレバウジオシドＮ２を形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【０４４１】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＤ７に付加してレバウジオシドＭ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４４２】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＤ８に付加してレバウジオシドＮ５を形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【０４４３】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＤ８に付加してレバウジオシドＭ３を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４４４】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＮ３に付加してレバウジオシドＯ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４４５】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＮ４に付加してレバウジオシドＯ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４４６】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＮ２に付加してレバウジオシドＯ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴＳｌ２、又はＵＧＴＳｌ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＥＵＧＴ１１、又はＥＵＧＴ１１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。更に別の特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ９１Ｄ２、又はＵＧＴ９１Ｄ２と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４４７】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのグルコース単位をレバウジオシドＮ５に付加してレバウジオシドＫ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＵＧＴ７６Ｇ１、又はＵＧＴ７６Ｇ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧＴである。
【０４４８】
別の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、少なくとも１つのラムノース単位をレバウジオシドＭ３に付加してレバウジオシドＯ４を形成することができる任意のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼである。特定の実施形態では、ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼは、ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１、又はＵＧｌｙＴ９１Ｃ１と＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するＵＧｌｙＴである。
【０４４９】
任意に、本発明の方法は、ＵＤＰ−グルコースを提供するためにＵＤＰをリサイクルすることを更に含む。一実施形態では、本方法は、リサイクル触媒及びリサイクル基質を提供することによってＵＤＰをリサイクルすることを含み、これにより、ステビオール及び／又はステビオール配糖体基質の対象とするステビオール配糖体への生体内変換は、触媒量のＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼ及びＵＤＰ−グルコースを使用して行われる。ＵＤＰリサイクル酵素は、スクロースシンターゼＳｕＳｙ＿ＡＴ又はＳｕＳｙ＿ＡＴと＞８５％のアミノ酸配列同一性を有するスクロースシンターゼであってもよく、リサイクル基質はスクロースであってもよい。
【０４５０】
任意に、本発明の方法は、ＵＤＰ−ラムノースを提供するために、ＵＤＰをリサイクルすることを更に含む。一実施形態では、本方法は、リサイクル触媒及びリサイクル基質を提供することによってＵＤＰをリサイクルすることを含み、これにより、ステビオール及び／又はステビオール配糖体基質の対象とするステビオール配糖体への生体内変換は、触媒量のＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼ及びＵＤＰ−ラムノースを使用して行われる。
【０４５１】
任意に、本発明の方法は、レシピエントの対象とするステビオール配糖体分子を改変するために、糖供与体としてオリゴ糖類又は多糖類を使用するトランスグリコシダーゼの使用を更に含む。非限定的な例としては、シクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼ（ＣＧＴａｓｅ）、フルクトフラノシダーゼ、アミラーゼ、サッカラーゼ、グルコスクラーゼ、β−ｈ−フルクトシダーゼ、β−フルクトシダーゼ、スクラーゼ、フルクトシルインベルターゼ、アルカリ性インベルターゼ、酸インベルターゼ、フルクトフラノシダーゼが挙げられる。いくつかの実施形態では、グルコース及びグルコース以外の糖（複数可）（フルクトース、キシロース、ラムノース、アラビノース、デオキシグルコース、ガラクトースを含むがこれらに限定されない）が、レシピエントの対象とするステビオール配糖体に移される。一実施形態では、レシピエントステビオール配糖体は、レバウジオシドＮ２である。別の実施形態では、レシピエントステビオール配糖体は、レバウジオシドＯ４である。
【０４５２】
別の実施形態では、少なくとも１つのグルコース単位を出発組成物ステビオール配糖体に付加することができるＵＤＰ−グルコシルトランスフェラーゼは、ＧｅｎＩｎｆｏ識別子番号の以下のリストから、好ましくは表１、及び表２に提示された群から選択されるＵＧＴと＞８５％のアミノ酸配列同一性を有する。
【０４５３】
【表１−１】
2021526521.tif 000003
【０４５４】
【表１−２】
2021526521.tif 000004
（上記表の続き）
【０４５５】
【表１−３】
2021526521.tif 000005
（上記表の続き）
【０４５６】
【表２−１】
2021526521.tif 000006
表１
【０４５７】
【表２−２】
2021526521.tif 000007
（表１の続き）
【０４５８】
【表３】
2021526521.tif 000008
表２
【０４５９】
本発明の一実施形態は、酵素、すなわち、出発組成物を対象とするステビオール配糖体に変換することができる酵素を含む微生物細胞である。したがって、本方法のいくつかの実施形態は、微生物を、出発組成物を含有する培地と接触させて、少なくとも１つの対象とするステビオール配糖体を含む培地を提供することを含む。
【０４６０】
微生物は、出発組成物を対象とするステビオール配糖体（複数可）に変換するために必要な酵素（複数可）を有する任意の微生物であり得る。これらの酵素は、微生物のゲノム内にコードされる。
【０４６１】
好適な微生物としては、大腸菌（E.coli）、サッカロマイセス属（Saccharomyces sp.）、アスペルギルス属（Aspergillus sp.）、ピキア属（Pichia sp.）、バチルス属（Bacillus sp.）、ヤロウィア属（Yarrowia sp.）などが挙げられる。
【０４６２】
一実施形態では、微生物は、出発組成物と接触させたときに遊離している。
【０４６３】
別の実施形態では、微生物は、出発組成物と接触させたときに固定化される。例えば、微生物は、無機又は有機材料から作製された固体支持体に固定化されてもよい。微生物を固定化するのに好適な固体支持体の非限定的な例としては、誘導体化セルロース若しくはガラス、セラミックス、金属酸化物、又は膜が挙げられる。微生物は、例えば、共有結合、吸着、架橋、捕捉、又は封入によって固体支持体に固定化され得る。
【０４６４】
更に別の実施形態では、出発組成物を対象とするステビオール配糖体に変換することができる酵素は、微生物から反応培地に分泌される。
【０４６５】
対象とするステビオール配糖体は、任意に精製される。反応培地からの対象とするステビオール配糖体の精製は、高度に精製された対象とするステビオール配糖体組成物を提供するための少なくとも１つの好適な方法によって達成することができる。好適な方法としては、結晶化、膜による分離、遠心分離、抽出（液相又は固相）、クロマトグラフィー分離、ＨＰＬＣ（分取若しくは分析）、又はこのような方法の組み合わせが挙げられる。
【０４６６】
利用
本発明により得られた高度に精製された対象とする配糖体（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、レバウジオシドＯ４は、「現状のままで（as-is）」、又は他の甘味料、風味料、食物成分、及びこれらの組み合わせと組み合わせて使用することができる。
【０４６７】
風味料の非限定的な例としては、ライム、レモン、オレンジ、果実、バナナ、ブドウ、梨、パイナップル、マンゴー、ベリー、ビターアーモンド、コーラ、シナモン、砂糖、綿菓子、バニラ、及びこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【０４６８】
他の食物成分の非限定的な例としては、酸味料、有機及びアミノ酸、着色剤、増量剤、加工デンプン、ガム、調質剤、防腐剤、カフェイン、酸化防止剤、乳化剤、安定剤、増粘剤、ゲル化剤、及びこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【０４６９】
本発明により得られた高度に精製された対象とする配糖体（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、レバウジオシドＯ４は、水和物、溶媒和物、無水物、非晶形、及びこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない様々な多形体で調製することができる。
【０４７０】
本発明により得られた高度に精製された対象とする配糖体（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、レバウジオシドＯ４は、食料品、飲料、医薬組成物、化粧品、チューインガム、卓上製品、シリアル、乳製品、練り歯磨き、及び他の口腔用組成物などの高甘味度天然甘味料として組み込むことができる。
【０４７１】
本発明に従って得られた高度に精製された対象とする配糖体（複数可）、特に、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、レバウジオシドＯ４、又は合成ステビオール配糖体は、単一の甘味料として甘味料化合物として使用されてもよく、又はこれは、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＡ２、レバウジオシドＡ３、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＢ、レバウジオシドＣ２、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＤ２、レバウジオシドＤ３、レバウジオシドＤ４、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＦ、レバウジオシドＦ２、レバウジオシドＦ３、レバウジオシドＧ、レバウジオシドＨ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＩ２、レバウジオシドＩ３、レバウジオシドＪ、レバウジオシドＫ２、レバウジオシドＬ、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ２、レバウジオシドＮ、レバウジオシドＯ、レバウジオシドＯ２、レバウジオシドＯ３、レバウジオシドＱ、レバウジオシドＱ２、レバウジオシドＱ３、レバウジオシドＲ、レバウジオシドＳ、レバウジオシドＴ、レバウジオシドＴ１、レバウジオシドＵ、レバウジオシドＵ２、レバウジオシドＶ、レバウジオシドＶ２、レバウジオシドＷ、レバウジオシドＷ２、レバウジオシドＷ３、レバウジオシドＹ、レバウジオシドＺ１、レバウジオシドＺ２、ステビオールビオシド、ステビオシド、ステビオシドＤ、ステビオシドＥ、ステビオシドＥ２、ステビオシドＦ、モグロシド、ブラゼイン、ネオヘスペリジンジヒドロカルコン、グリチルリジン酸及びその塩、ソーマチン、ペリラルチン（perillartine）、ペルナンズルシン（pernandulcin）、ムクロジオシド、バイユノシド、ファルミソシド−Ｉ、ジメチル−ヘキサヒドロフルオレン−ジカルボン酸、アブルソシド、ペリアンドリン、カルノシフロシド、シクロカリオシド、プテロカリオシド、ポリポドシドＡ、ブラジリンヘルナンズルシン、フィロズルシン、グリシフィリン、フロリジン、トリロバチン、ジヒドロフラボノール、ジヒドロケルセチン−３−アセテート、ネオアスチリビン、トランス［−シンナムアルデヒド、モナチン及びその塩、セリゲアインＡ、ヘマトキシリン、モネリン、オスラジン、プテロカリオシドＡ、プテロカリオシドＢ、マビンリン、ペンタジン、ミラクリン、クルクリン、ネオクリン、クロロゲン酸、シナリン、羅漢果甘味料、モグロシドＶ、シアメノシド及びこれらの組み合わせなどの少なくとも１つの天然に存在する高甘味度甘味料と一緒に使用されてもよい。
【０４７２】
特定の実施形態では、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４は、
レバウジオシドＡ、レバウジオシドＡ２、レバウジオシドＡ３、レバウジオシドＡＭ、レバウジオシドＢ、レバウジオシドＣ２、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＤ２、レバウジオシドＤ３、レバウジオシドＤ４、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＥ２、レバウジオシドＦ、レバウジオシドＦ２、レバウジオシドＦ３、レバウジオシドＧ、レバウジオシドＨ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＩ２、レバウジオシドＩ３、レバウジオシドＪ、レバウジオシドＫ２、レバウジオシドＬ、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＭ２、レバウジオシドＮ、レバウジオシドＯ、レバウジオシドＯ２、レバウジオシドＯ３、レバウジオシドＱ、レバウジオシドＱ２、レバウジオシドＱ３、レバウジオシドＲ、レバウジオシドＳ、レバウジオシドＴ、レバウジオシドＴ１、レバウジオシドＵ、レバウジオシドＵ２、レバウジオシドＶ、レバウジオシドＶ２、レバウジオシドＷ、レバウジオシドＷ２、レバウジオシドＷ３、レバウジオシドＹ、レバウジオシドＺ１、レバウジオシドＺ２、スｓテビオールビオシド、ステビオシド、ステビオシドＤ、ステビオシドＥ、ステビオシドＥ２、ステビオシドＦ、ＮＳＦ−０２、モグロシドＶ、羅漢果、アルロース、アロース、Ｄ−タガトース、エリスリトール、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される化合物を含む甘味料組成物で使用することができる。
【０４７３】
高度に精製された対象とする配糖体（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４はまた、スクラロース、アセスルファムカリウム、アスパルターム、アリターム、サッカリン、ネオヘスペリジンジヒドロカルコン、シクラメート、ネオターム、ズルシン、スオサンアドバンテーム、これらの塩、及びこれらの組み合わせなどの合成高甘味度甘味料と組み合わせて使用されてもよい。
【０４７４】
更に、高度に精製された対象とする配糖体（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、レバウジオシドＯ４は、ギムネマ酸、ホズルシン、ジジフィン、ラクチゾール、及び他のものなどの天然甘味料抑制剤と組み合わせて使用することができる。ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４もまた、様々な旨味増強剤と組み合わせてもよい。ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４は、グルタメート、アスパラギン酸、グリシン、アラニン、スレオニン、プロリン、セリン、グルタミン酸、リジン、トリプトファン及びこれらの組み合わせなどの旨味及び甘味アミノ酸と混合することができる。
【０４７５】
高度に精製された対象とするステビオール配糖体（複数可）、特に、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４は、炭水化物、ポリオール、アミノ酸及びこれらに対応する塩、ポリアミノ酸及びそれらの対応する塩、ポリ−アミノ酸及びそれらの対応する塩、糖酸及びそれらの対応する塩、有機酸塩及び有機塩基塩を含む有機塩、無機塩、苦味化合物、風味剤及び風味成分、渋味化合物、タンパク質又はタンパク質加水分解物、界面活性剤、乳化剤、フラボノイド、アルコール、ポリマー、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上の添加剤と組み合わせて使用することができる。
【０４７６】
高度に精製された対象とするステビオール配糖体（複数可）、特に、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４は、ポリオール又は糖アルコールと組み合わせてもよい。用語「ポリオール」は、２つ以上のヒドロキシル基を含有する分子を指す。ポリオールは、それぞれ２、３、及び４つのヒドロキシル基を含有するジオール、トリオール、又はテトラオールであってもよい。ポリオールはまた、それぞれ５、６、又は７つのヒドロキシル基を含有するペンタノール、ヘキサオール、ヘプタノールなどの、４つを超えるヒドロキシル基を含有してもよい。更に、ポリオールはまた、糖アルコール、多価アルコール、又は炭水化物の還元形態であるポリアルコールであってもよく、この中でカルボニル基（アルデヒド又はケトン、還元糖）は、一級又は二級ヒドロキシル基に還元されている。ポリオールの例としては、エリスリトール、マルチトール、マンニトール、ソルビトール、ラクチトール、キシリトール、イノシトール、イソマルト、プロピレングリコール、グリセロール、スレイトール、ガラクチトール、水素添加イソマルツロース、還元イソマルト−オリゴ糖、還元キシロ−オリゴ糖、還元ゲンチオ−オリゴ糖、還元マルトースシロップ、還元グルコースシロップ、加水分解水添デンプン、ポリグリシトール及び糖アルコール、又は甘味料組成物の味に悪影響を及ぼさない還元可能な任意の他の炭水化物が挙げられるが、これらに限定されない。
【０４７７】
高度に精製された対象とするステビオール配糖体（複数可）、特に、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４は、例えば、Ｄ−タガトース、Ｌ−糖、Ｌ−ソルボース、Ｌ−アラビノース及びこれらの組み合わせなどの低カロリー甘味料と組み合わせてもよい。
【０４７８】
高度に精製された対象とするステビオール配糖体（複数可）、特に、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４は、様々な炭水化物と組み合わせてもよい。用語「炭水化物」は、一般には、一般式（ＣＨ２Ｏ）ｎ（式中、ｎは３〜３０である）の複数のヒドロキシル基で置換されたアルデヒド又はケトン、並びにそれらのオリゴマー及びポリマーを指す。加えて、本発明の炭水化物は、１つ以上の位置で置換又は脱酸素化され得る。本明細書で使用するとき、炭水化物は、非修飾炭水化物、炭水化物誘導体、置換炭水化物、及び修飾炭水化物を包含する。本明細書で使用するとき、語句「炭水化物誘導体」、「置換炭水化物」、及び「修飾炭水化物」は同義である。修飾炭水化物は、少なくとも１つの原子が付加、除去、若しくは置換された任意の炭水化物、又はこれらの組み合わせを意味する。したがって、炭水化物誘導体又は置換炭水化物としては、置換及び非置換の単糖、二糖類、オリゴ糖、及び多糖類が挙げられる。炭水化物誘導体又は置換炭水化物は、任意に、任意の対応するＣ位で脱酸素化されてもよく、かつ／又は水素、ハロゲン、ハロアルキル、カルボキシル、アシル、アシルオキシ、アミノ、アミド、カルボキシル誘導体、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルコキシ、アリールオキシ、ニトロ、シアノ、スルホ、メルカプト、イミノ、スルホニル、スルフェニル、スルフィニル、スルファモイル、カルボアルコキシ、カルボキシアミド、ホスホニル、ホスフィニル、ホスホリル、ホスフィノ、チオエステル、チオエーテル、オキシミノ、ヒドラジノ、カルバミル、ホスホ、ホスホナト、又は炭水化物誘導体若しくは置換炭水化物官能基に提供される任意の他の実行可能な官能基などの１つ以上の部分で置換されて、甘味料組成物の甘味を向上させることができる。
【０４７９】
本発明に従って使用され得る炭水化物の例としては、プシコース、ツラノース、アロース、タガトース、トレハロース、ガラクトース、ラムノース、様々なシクロデキストリン、環状オリゴ糖、様々な種類のマルトデキストリン、デキストラン、スクロース、グルコース、リブロース、フルクトース、トレオース、アラビノース、キシロース、リキソース、アロース、アルトロース、マンノース、イドース、ラクトース、マルトース、転化糖、イソトレハロース、ネオトレハロース、イソマルツロース、エリトロース、デオキシリボース、グロース、イドース、タロース、エリトルロース、キシルロース、プシコース、ツラノース、セロビオース、アミロペクチン、グルコサミン、マンノサミン、フコース、グルクロン酸、グルコン酸、グルコノ−ラクトン、アベクオース、ガラクトサミン、ビートオリゴ糖、イソマルト−オリゴ糖（イソマルトース、イソマルトトリオース、パノースなど）、キシロ−オリゴ糖（キシロトリオース、キシロビオースなど）、キシロ−末端オリゴ糖、ゲンチオ−オリゴ糖（ゲンチオビオース、ゲンチオトリオース、ゲンチオテトラオースなど）、ソルボース、ニゲロ−オリゴ糖、パラチノースオリゴ糖、フルクトオリゴ糖（ケストース、ニストースなど）、マルトテトラオール、マルトトリオール、マルトオリゴ糖（マルトトリオース、マルトテトラオース、マルトペンタオース、マルトヘキサオース、マルトヘプタオースなど）、デンプン、イヌリン、イヌロ−オリゴ糖、ラクツロース、メリビオース、ラフィノース、リボノース、高フルクトースコーンシロップなどの異性化液糖、カップリング糖、及び大豆オリゴ糖が挙げられるが、これらに限定されない。更に、本明細書で使用される炭水化物は、Ｄ−又はＬ−立体配置のいずれかであってもよい。
【０４８０】
本発明により得られた高度に精製された対象とするステビオール配糖体（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４は、様々な生理活性物質又は機能性成分と組み合わせて使用することができる。機能性成分は、一般に、カロテノイド、食物繊維、脂肪酸、サポニン、酸化防止剤、栄養補助食品、フラボノイド、イソチオシアネート、フェノール、植物ステロール及びスタノール（フィトステロール及びフィトスタノール）；ポリオール；プレバイオティクス、プロバイオティクス；フィトエストロゲン；大豆タンパク質；硫化物／チオール；アミノ酸；タンパク質；ビタミン；及びミネラルなどのカテゴリに分類される。機能性成分はまた、心血管、コレステロール低減、及び抗炎症などの健康効果に基づいて分類され得る。例示的な機能性成分は、国際公開第２０１３／０９６４２０号に提供され、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【０４８１】
本発明により得られた高度に精製された対象とするステビオール配糖体（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４は、高甘味度の甘味料として適用され、ゼロカロリー、低カロリー又は糖尿病患者用飲料、及び改善した味特性を有する食品を生み出すことができる。また、飲料、食料品、医薬品、及び糖を使用できない他の製品にも使用することができる。加えて、高度に精製された対象とするステビオール配糖体（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４は、ヒトの消費に特化した飲み物、食料品、及び他の製品のみならず、改善した特性を有する動物用の餌及び飼料にも、高甘味度の甘味料として使用することができる。
【０４８２】
本発明により得られた高度に精製された対象とする配糖体（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４は、発泡抑制剤として適用され、ゼロカロリー、低カロリー又は糖尿病患者用飲料、及び食品を生み出すことができる。
【０４８３】
高度に精製された対象とする配糖体（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４が甘味料化合物として使用され得る消費製品の例としては、ウォッカ、ワイン、ビール、リキュール、及び日本酒などのアルコール飲料；天然ジュース；清涼飲料；炭酸ソフトドリンク；ダイエット飲料；ゼロカロリー飲料；低カロリー飲料及び食物；ヨーグルト飲料；インスタントジュース；インスタントコーヒー；粉末型インスタント飲料；製缶品；シロップ；発酵大豆ペースト；醤油；酢；ドレッシング；マヨネーズ；ケチャップ；カレー；スープ；インスタントブイヨン；粉末醤油；粉末酢；ビスケットの種類；米菓；クラッカー；パン；チョコレート；キャラメル；キャンディ；チューインガム；ゼリー；プリン；保存加工された果物及び野菜；生クリーム；ジャム；マーマレード；フラワーペースト；粉末ミルク；アイスクリーム；シャーベット；瓶詰野菜及び果物；煮豆缶詰甘味を付与したソースで煮た肉及び食物；農産野菜食品；海産物；ハム；ソーセージ；魚肉ハム；魚肉ソーセージ；魚肉ペースト；魚の揚げ物製品海産物の干物；冷凍食品；保存加工された海藻；保存加工された肉；タバコ；医療製品、及び多くの他のものが挙げられるが、これらに限定されない。原則として、それは、無制限の用途を有することができる。
【０４８４】
高度に精製された対象とする配糖体（複数可）、特にステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４が風味改質剤又は改質特性を有する風味剤として使用され得る消費可能な製品の例としては、ウォッカ、ワイン、ビール、リキュール、及び日本酒などのアルコール飲料；天然ジュース；清涼飲料；炭酸ソフトドリンク；ダイエット飲料；ゼロカロリー飲料；低カロリー飲料及び食物；ヨーグルト飲料；インスタントジュース；インスタントコーヒー；粉末型インスタント飲料；製缶品；シロップ；発酵大豆ペースト；醤油；酢；ドレッシング；マヨネーズ；ケチャップ；カレー；スープ；インスタントブイヨン；粉末醤油；粉末酢；ビスケットの種類；米菓；クラッカー；パン；チョコレート；キャラメル；キャンディ；チューインガム；ゼリー；プリン；保存加工された果物及び野菜；生クリーム；ジャム；マーマレード；フラワーペースト；粉末ミルク；アイスクリーム；シャーベット；瓶詰野菜及び果物；煮豆缶詰甘味を付与したソースで煮た肉及び食物；農産野菜食品；海産物；ハム；ソーセージ；魚肉ハム；魚肉ソーセージ；魚肉ペースト；魚の揚げ物製品海産物の干物；冷凍食品；保存加工された海藻；保存加工された肉；タバコ；医療製品、及び多くの他のものが挙げられるが、これらに限定されない。原則として、それは、無制限の用途を有することができる。
【０４８５】
食料品、飲料、医薬品、化粧品、卓上製品、及びチューインガムなどの製品の製造中に、混合、混練、溶解、ピックリング、浸透、パーコレーション、スプリンキング、噴霧、注入、及び他の方法などの従来の方法を使用することができる。
【０４８６】
更に、本発明で得られた高度に精製された対象とするステビオール配糖体（複数可）のステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４は、乾燥又は液体の形態で使用されてもよい。
【０４８７】
高度に精製された対象とするステビオール配糖体は、食品の熱処理の前後に添加することができる。高度に精製された対象とするステビオール配糖体（複数可）、特に、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４の量は、使用目的に応じる。上述のように、これは、単独で又は他の化合物と組み合わせて添加することができる。
【０４８８】
本発明はまた、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４を甘味増強剤として使用する飲料の甘味増強も目的とし、ここでは、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４は、それぞれの甘味認識閾値以下の濃度で存在する。
【０４８９】
本明細書で使用するとき、用語「甘味増強剤（sweetness enhancer）」は、飲料などの組成物中の甘味の知覚を増強又は強化することができる化合物を指す。用語「甘味増強剤（sweetness enhancer）」は、「甘味増強剤（sweet taste potentiator）」、「甘味増強剤（sweetness potentiator）」、「甘味増幅剤（sweetness amplifier）」、及び「甘味強化剤（sweetness intensifier）」という用語と同義である。
【０４９０】
本明細書で一般に使用される用語「甘味認識閾値濃度」は、ヒトの味覚によって知覚可能な甘味化合物の最も低い既知濃度であり、典型的には約１．０％スクロース当量（１．０％ＳＥ）である。一般に、甘味増強剤は、所与の甘味増強剤の甘味認識閾値濃度以下で存在するとき、それら自体で著しい甘味を提供することなく、甘味料の甘味を増強又は強化することができるが、甘味増強剤は、甘味認識閾値濃度を上回る濃度でそれ自体が甘味を提供することができる。甘味認識閾値濃度は、特定の増強剤に特異的であり、飲料マトリックスに基づいて変化し得る。甘味認識閾値濃度は、所与の飲料マトリックス中の１．０％超のスクロース当量が検出されるまで、所与の増強剤の濃度を増加させる味試験によって容易に判定することができる。約１．０％スクロース当量を提供する濃度は、甘味認識閾値と見なされる。
【０４９１】
いくつかの実施形態では、甘味料は、例えば、約１．０重量％、約１．５重量％、約２．０重量％、約２．５重量％、約３．０重量％、約３．５重量、約４．０％重量％、約４．５重量％、約５．０重量％、約５．５重量％、約６．０重量％、約６．５重量％、約７．０％重量％、約７．５重量％、約８．０重量％、約８．５重量％、約９．０重量％、約９．５重量％、約１０．０重量％、約１０．５重量％、約１１．０重量％、約１１．５重量％又は約１２．０重量％などの約０．５重量％〜約１２重量％の量で飲料中に存在する。
【０４９２】
特定の実施形態では、甘味料は、例えば、約２重量％〜約８重量％、約３重量％〜約７重量％、又は約４重量％〜約６重量％などの、約０．５重量％〜約１０重量の量で飲料中に存在する。特定の実施形態では、甘味料は、約０．５重量％〜約８重量％の量で飲料中に存在する。別の特定の実施形態では、甘味料は、約２重量％〜約８重量％の量で飲料中に存在する。
【０４９３】
一実施形態では、甘味料は、従来のカロリー甘味料である。好適な甘味料としては、スクロース、フルクトース、グルコース、高フルクトースコーンシロップ、及び高フルクトースコーンシロップが挙げられるが、これらに限定されない。
【０４９４】
別の実施形態では、甘味料はエリスリトールである。
【０４９５】
更に別の実施形態では、甘味料は希少糖である。好適な希少糖としては、Ｄ−アロース、Ｄ−プシコース、Ｄ−リボース、Ｄ−タガトース、Ｌ−グルコース、Ｌ−フコース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−ツラノース、Ｄ−ロイクロース、及びこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【０４９６】
甘味料は、単独で、又は他の甘味料と組み合わせて使用することができることが想到される。
【０４９７】
一実施形態では、希少糖はＤ−アロースである。より具体的な実施形態では、Ｄ−アロースは、例えば、約２重量％〜約８重量％などの、約０．５重量％〜約１０重量％の量で飲料中に存在する。
【０４９８】
別の実施形態では、希少糖はＤ−プシコースである。より具体的な実施形態では、Ｄ−プシコースは、例えば、約２重量％〜約８重量％などの、約０．５重量％〜約１０重量％の量で飲料中に存在する。
【０４９９】
更に別の実施形態では、希少糖はＤ−リボースである。より具体的な実施形態では、Ｄ−リボースは、例えば、約２重量％〜約８重量％などの、約０．５重量％〜約１０重量％の量で飲料中に存在する。
【０５００】
更に別の実施形態では、希少糖はＤ−タガトースである。より具体的な実施形態では、Ｄ−タガトースは、例えば、約２重量％〜約８重量％などの、約０．５重量％〜約１０重量％の量で飲料中に存在する。
【０５０１】
更なる実施形態では、希少糖は、Ｌ−グルコースである。より具体的な実施形態では、Ｌ−グルコースは、例えば、約２重量％〜約８重量％などの、約０．５重量％〜約１０重量％の量で飲料中に存在する。
【０５０２】
一実施形態では、希少糖はＬ−フコースである。より具体的な実施形態では、Ｌ−フコースは、例えば、約２重量％〜約８重量％などの、約０．５重量％〜約１０重量％の量で飲料中に存在する。
【０５０３】
別の実施形態では、希少糖はＬ−アラビノースである。より具体的な実施形態では、Ｌ−アラビノースは、例えば、約２重量％〜約８重量％などの、約０．５重量％〜約１０重量％の量で飲料中に存在する。
【０５０４】
更に別の実施形態では、希少糖はＤ−ツラノースである。より具体的な実施形態では、Ｄ−ツラノースは、例えば、約２重量％〜約８重量％などの、約０．５重量％〜約１０重量％の量で飲料中に存在する。
【０５０５】
更に別の実施形態では、希少糖はＤ−ロイクロースである。より具体的な実施形態では、Ｄ−ロイクロースは、例えば、約２重量％〜約８重量％などの、約０．５重量％〜約１０重量％の量で飲料中に存在する。
【０５０６】
甘味増強剤の甘味認識閾値以下の濃度での添加は、甘味増強剤の非存在下での対応する飲料と比較して、甘味料及び甘味増強剤を含む飲料の検出されたスクロース当量を増加させる。更に、甘味は、任意の甘味料の非存在下で、少なくとも１つの甘味増強剤の同じ濃度を含有する溶液の検出可能な甘味よりも多い量だけ増加させることができる。
【０５０７】
更に、本発明はまた、甘味料を含む飲料を提供することと、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４若しくはこれらの組み合わせから選択される甘味増強剤を添加することと、を含む、甘味料を含む飲料の甘味を増強させるための方法も提供し、ここでは、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４は、それらの甘味認識閾値以下の濃度で存在する。
【０５０８】
ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４の、甘味認識閾値以下の濃度での甘味料を含有する飲料への添加は、検出されるスクロース当量を、例えば、１．０％、約１．５％、約２．０％、約２．５％、約３．０％、約３．５％、約４．０％、約４．５％又は約５．０％などの約１．０％〜約５．０％まで増加させ得る。
【０５０９】
以下の実施例は、高度に精製された対象とするステビオール配糖体（複数可）、特に、ステビオールモノシド、ステビオールモノシドＡ、ステビオールビオシドＡ、ステビオールビオシドＢ、ステビオールビオシドＣ、ステビオールビオシドＤ、ステビオールビオシドＥ、ルブソシド、ズルコシドＡ、ズルコシドＣ、ズルコシドＤ、ステビオシドＡ、ステビオシドＢ、ステビオシドＣ、ステビオシドＧ、ステビオシドＨ、レバウジオシドＢ２、レバウジオシドＡ４、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＣ３、レバウジオシドＣ４、レバウジオシドＣ５、レバウジオシドＣ６、レバウジオシドＥ３、レバウジオシドＥ４、レバウジオシドＥ５、レバウジオシドＥ６、レバウジオシドＥ７、レバウジオシドＤ５、レバウジオシドＤ６、レバウジオシドＤ７、レバウジオシドＤ８、レバウジオシドＨ２、レバウジオシドＨ３、レバウジオシドＨ４、レバウジオシドＨ５、レバウジオシドＨ６、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＮ２、レバウジオシドＮ３、レバウジオシドＮ４、レバウジオシドＮ５、レバウジオシドＭ３、及び／又はレバウジオシドＯ４の調製のための本発明の好ましい実施形態を例証する。本発明は、単なる例示である実施例に記載される材料、比率、条件、及び手順に限定されないことを理解されたい。
【０５１０】
実施例
実施例１
生体触媒プロセスで使用される操作された酵素のタンパク質配列
配列番号１：
＞ＳｕＳｙ＿ＡＴ、バリアントＰＭ１−５４−２−Ｅ０５（操作されたスクロースシンターゼ；ＷＴ遺伝子の供給源：シロイヌナズナ（Arabidopsis thaliana））
ＭＡＮＡＥＲＭＩＴＲＶＨＳＱＲＥＲＬＮＥＴＬＶＳＥＲＮＥＶＬＡＬＬＳＲＶＥＡＫＧＫＧＩＬＱＱＮＱＩＩ  ＡＥＦＥＡＬＰＥＱＴＲＫＫＬＥＧＧＰＦＦＤＬＬＫＳＴＱＥＡＩＶＬＰＰＷＶＡＬＡＶＲＰＲＰＧＶＷＥＹＬ  ＲＶＮＬＨＡＬＶＶＥＥＬＱＰＡＥＦＬＨＦＫＥＥＬＶＤＧＶＫＮＧＮＦＴＬＥＬＤＦＥＰＦＮＡＳＩＰＲＰＴ  ＬＨＫＹＩＧＮＧＶＤＦＬＮＲＨＬＳＡＫＬＦＨＤＫＥＳＬＬＰＬＬＤＦＬＲＬＨＳＨＱＧＫＮＬＭＬＳＥＫＩ  ＱＮＬＮＴＬＱＨＴＬＲＫＡＥＥＹＬＡＥＬＫＳＥＴＬＹＥＥＦＥＡＫＦＥＥＩＧＬＥＲＧＷＧＤＮＡＥＲＶＬ  ＤＭＩＲＬＬＬＤＬＬＥＡＰＤＰＳＴＬＥＴＦＬＧＲＶＰＭＶＦＮＶＶＩＬＳＰＨＧＹＦＡＱＤＮＶＬＧＹＰＤ  ＴＧＧＱＶＶＹＩＬＤＱＶＲＡＬＥＩＥＭＬＱＲＩＫＱＱＧＬＮＩＫＰＲＩＬＩＬＴＲＬＬＰＤＡＶＧＴＴＣＧ  ＥＲＬＥＲＶＹＤＳＥＹＣＤＩＬＲＶＰＦＲＴＥＫＧＩＶＲＫＷＩＳＲＦＥＶＷＰＹＬＥＴＹＴＥＤＡＡＶＥＬ  ＳＫＥＬＮＧＫＰＤＬＩＩＧＮＹＳＤＧＮＬＶＡＳＬＬＡＨＫＬＧＶＴＱＣＴＩＡＨＡＬＥＫＴＫＹＰＤＳＤＩ  ＹＷＫＫＬＤＤＫＹＨＦＳＣＱＦＴＡＤＩＦＡＭＮＨＴＤＦＩＩＴＳＴＦＱＥＩＡＧＳＫＥＴＶＧＱＹＥＳＨＴ  ＡＦＴＬＰＧＬＹＲＶＶＨＧＩＤＶＦＤＰＫＦＮＩＶＳＰＧＡＤＭＳＩＹＦＰＹＴＥＥＫＲＲＬＴＫＦＨＳＥＩ  ＥＥＬＬＹＳＤＶＥＮＤＥＨＬＣＶＬＫＤＫＫＫＰＩＬＦＴＭＡＲＬＤＲＶＫＮＬＳＧＬＶＥＷＹＧＫＮＴＲＬ  ＲＥＬＶＮＬＶＶＶＧＧＤＲＲＫＥＳＫＤＮＥＥＫＡＥＭＫＫＭＹＤＬＩＥＥＹＫＬＮＧＱＦＲＷＩＳＳＱＭＤ  ＲＶＲＮＧＥＬＹＲＹＩＣＤＴＫＧＡＦＶＱＰＡＬＹＥＡＦＧＬＴＶＶＥＡＭＴＣＧＬＰＴＦＡＴＣＫＧＧＰＡ  ＥＩＩＶＨＧＫＳＧＦＨＩＤＰＹＨＧＤＱＡＡＤＬＬＡＤＦＦＴＫＣＫＥＤＰＳＨＷＤＥＩＳＫＧＧＬＱＲＩＥ  ＥＫＹＴＷＱＩＹＳＱＲＬＬＴＬＴＧＶＹＧＦＷＫＨＶＳＮＬＤＲＬＥＨＲＲＹＬＥＭＦＹＡＬＫＹＲＰＬＡＱ  ＡＶＰＬＡＱＤＤ
【０５１１】
配列番号２：
＞ＵＧＴＳｌ２バリアント０２３４（操作されたグルコシルトランスフェラーゼ；ＷＴ遺伝子の供給源：トマト（Solanum lycopersicum））
ＭＡＴＮＬＲＶＬＭＦＰＷＬＡＹＧＨＩＳＰＦＬＮＩＡＫＱＬＡＤＲＧＦＬＩＹＬＣＳＴＲＩＮＬＥＳＩＩＫＫ  ＩＰＥＫＹＡＤＳＩＨＬＩＥＬＱＬＰＥＬＰＥＬＰＰＨＹＨＴＴＮＧＬＰＰＨＬＮＰＴＬＨＫＡＬＫＭＳＫＰＮ  ＦＳＲＩＬＱＮＬＫＰＤＬＬＩＹＤＶＬＱＰＷＡＥＨＶＡＮＥＱＧＩＰＡＧＫＬＬＶＳＣＡＡＶＦＳＹＦＦＳＦ  ＲＫＮＰＧＶＥＦＰＦＰＡＩＨＬＰＥＶＥＫＶＫＩＲＥＩＬＡＫＥＰＥＥＧＧＲＬＤＥＧＮＫＱＭＭＬＭＣＴＳ  ＲＴＩＥＡＫＹＩＤＹＣＴＥＬＣＮＷＫＶＶＰＶＧＰＰＦＱＤＬＩＴＮＤＡＤＮＫＥＬＩＤＷＬＧＴＫＰＥＮＳ  ＴＶＦＶＳＦＧＳＥＹＦＬＳＫＥＤＭＥＥＩＡＦＡＬＥＡＳＮＶＮＦＩＷＶＶＲＦＰＫＧＥＥＲＮＬＥＤＡＬＰ  ＥＧＦＬＥＲＩＧＥＲＧＲＶＬＤＫＦＡＰＱＰＲＩＬＮＨＰＳＴＧＧＦＩＳＨＣＧＷＮＳＶＭＥＳＩＤＦＧＶＰ  ＩＩＡＭＰＩＨＮＤＱＰＩＮＡＫＬＭＶＥＬＧＶＡＶＥＩＶＲＤＤＤＧＫＩＨＲＧＥＩＡＥＡＬＫＳＶＶＴＧＥ  ＴＧＥＩＬＲＡＫＶＲＥＩＳＫＮＬＫＳＩＲＤＥＥＭＤＡＶＡＥＥＬＩＱＬＣＲＮＳＮＫＳＫ
【０５１２】
配列番号３：
＞ＵＧＴ７６Ｇ１バリアント００４２（操作されたグルコシルトランスフェラーゼ；ＷＴ遺伝子の供給源：ステビア・レバウディアナ（Stevia rebaudiana））
ＭＥＮＫＴＥＴＴＶＲＲＲＲＲＩＩＬＦＰＶＰＦＱＧＨＩＮＰＩＬＱＬＡＮＶＬＹＳＫＧＦＡＩＴＩＬＨＴＮＦＮＫＰＫＴＳＮＹＰＨＦＴＦＲＦＩＬＤＮＤＰＱＤＥＲＩＳＮＬＰＴＨＧＰＬＡＧＭＲＩＰＩＩＮＥＨＧＡＤＥＬＲＲＥＬＥＬＬＭＬＡＳＥＥＤＥＥＶＳＣＬＩＴＤＡＬＷＹＦＡＱＤＶＡＤＳＬＮＬＲＲＬＶＬＭＴＳＳＬＦＮＦＨＡＨＶＳＬＰＱＦＤＥＬＧＹＬＤＰＤＤＫＴＲＬＥＥＱＡＳＧＦＰＭＬＫＶＫＤＩＫＳＡＹＳＮＷＱＩＧＫＥＩＬＧＫＭＩＫＱＴＫＡＳＳＧＶＩＷＮＳＦＫＥＬＥＥＳＥＬＥＴＶＩＲＥＩＰＡＰＳＦＬＩＰＬＰＫＨＬＴＡＳＳＳＳＬＬＤＨＤＲＴＶＦＥＷＬＤＱＱＡＰＳＳＶＬＹＶＳＦＧＳＴＳＥＶＤＥＫＤＦＬＥＩＡＲＧＬＶＤＳＧＱＳＦＬＷＶＶＲＰＧＦＶＫＧＳＴＷＶＥＰＬＰＤＧＦＬＧＥＲＧＫＩＶＫＷＶＰＱＱＥＶＬＡＨＰＡＩＧＡＦＷＴＨＳＧＷＮＳＴＬＥＳＶＣＥＧＶＰＭＩＦＳＳＦＧＧＤＱＰＬＮＡＲＹＭＳＤＶＬＲＶＧＶＹＬＥＮＧＷＥＲＧＥＶＶＮＡＩＲＲＶＭＶＤＥＥＧＥＹＩＲＱＮＡＲＶＬＫＱＫＡＤＶＳＬＭＫＧＧＳＳＹＥＳＬＥＳＬＶＳＹＩＳＳＬ
【０５１３】
配列番号４：
＞ＵＤＰ−グリコシルトランスフェラーゼ９１Ｃ１（ＵＧｌｙＴ９１Ｃ１；ＷＴ遺伝子の供給源：イネジャポニカ型（Oryza sativa Japonica）；ＮＣＢＩ参照配列：ＸＰ＿０１５６２９１４１．１）
ＭＤＳＧＹＳＳＳＹＡＡＡＡＧＭＨＶＶＩＣＰＷＬＡＦＧＨＬＬＰＣＬＤＬＡＱＲＬＡＳＲＧＨＲＶＳＦＶＳＴＰＲＮＩＳＲＬＰＰＶＲＰＡＬＡＰＬＶＡＦＶＡＬＰＬＰＲＶＥＧＬＰＤＧＡＥＳＴＮＤＶＰＨＤＲＰＤＭＶＥＬＨＲＲＡＦＤＧＬＡＡＰＦＳＥＦＬＧＴＡＣＡＤＷＶＩＶＤＶＦＨＨＷＡＡＡＡＡＬＥＨＫＶＰＣＡＭＭＬＬＧＳＡＨＭＩＡＳＩＡＤＲＲＬＥＲＡＥＴＥＳＰＡＡＡＧＱＧＲＰＡＡＡＰＴＦＥＶＡＲＭＫＬＩＲＴＫＧＳＳＧＭＳＬＡＥＲＦＳＬＴＬＳＲＳＳＬＶＶＧＲＳＣＶＥＦＥＰＥＴＶＰＬＬＳＴＬＲＧＫＰＩＴＦＬＧＬＭＰＰＬＨＥＧＲＲＥＤＧＥＤＡＴＶＲＷＬＤＡＱＰＡＫＳＶＶＹＶＡＬＧＳＥＶＰＬＧＶＥＫＶＨＥＬＡＬＧＬＥＬＡＧＴＲＦＬＷＡＬＲＫＰＴＧＶＳＤＡＤＬＬＰＡＧＦＥＥＲＴＲＧＲＧＶＶＡＴＲＷＶＰＱＭＳＩＬＡＨＡＡＶＧＡＦＬＴＨＣＧＷＮＳＴＩＥＧＬＭＦＧＨＰＬＩＭＬＰＩＦＧＤＱＧＰＮＡＲＬＩＥＡＫＮＡＧＬＱＶＡＲＮＤＧＤＧＳＦＤＲＥＧＶＡＡＡＩＲＡＶＡＶＥＥＥＳＳＫＶＦＱＡＫＡＫＫＬＱＥＩＶＡＤＭＡＣＨＥＲＹＩＤＧＦＩＱＱＬＲＳＹＫＤ
【０５１４】
実施例２
配列番号１のＳｕＳｙ＿ＡＴバリアントの発現及び配合
配列番号１（実施例１）のＳｕＳｙ＿ＡＴバリアントをコードする遺伝子を、発現ベクターｐＬＥ１Ａ１７（ｐＲＳＦ−１ｂの誘導体、Ｎｏｖａｇｅｎ）にクローニングした。得られたプラスミドを、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＢＬ２１（ＤＥ３）細胞の形質転換に使用した。
【０５１５】
細胞を、３７℃でカナマイシン（５０ｍｇ／ｌ）を補充したＺＹＭ５０５培地（Ｆ．Ｗｉｌｌｉａｍ  Ｓｔｕｄｉｅｒ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ４１（２００５）２０７−２３４）中で培養した。遺伝子の発現を、ＩＰＴＧ（０．２ｍＭ）により対数相で誘導し、３０℃及び２００ｒｐｍで１６〜１８時間実施した。
【０５１６】
細胞を遠心分離（３２２０×ｇ、２０分、４℃）によって採取し、細胞溶解緩衝液（１００ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．０；２ｍＭのＭｇＣｌ２、ＤＮＡヌクレアーゼ２０Ｕ／ｍＬ、リゾチーム０．５ｍｇ／ｍＬ））で２００の光学密度（６００ｎｍ（ＯＤ６００）で測定）まで再懸濁した。次いで、細胞を超音波処理により破壊し、粗抽出物を遠心分離（１８０００×ｇ４０分、４℃）により細胞残屑から分離した。上清を、０．２μｍのフィルターを通した濾過によって滅菌し、蒸留水で５０：５０に希釈し、酵素活性調製物を得た。
【０５１７】
ＳｕＳｙ＿ＡＴの酵素活性調製物については、単位での活性は以下のように定義される：１ｍＵのＳｕＳｙ＿ＡＴは１分間で１ｎｍｏｌのスクロースフルクトースに変化させる。アッセイの反応条件は、３０℃、５０ｍＭのリン酸カリウム緩衝液ｐＨ７．０、ｔ０で４００ｍＭのスクロース、３ｍＭのＭｇＣｌ２、及び１５ｍＭのウリジン二リン酸（ＵＤＰ）である。
【０５１８】
実施例３
配列番号２のＵＧＴＳｌ２バリアントの発現及び配合
配列番号２（実施例１）のＵＧＴＳｌ２バリアントをコードする遺伝子を、発現ベクターｐＬＥ１Ａ１７（ｐＲＳＦ−１ｂの誘導体、Ｎｏｖａｇｅｎ）にクローニングした。得られたプラスミドを、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＢＬ２１（ＤＥ３）細胞の形質転換に使用した。
【０５１９】
細胞を、３７℃でカナマイシン（５０ｍｇ／ｌ）を補充したＺＹＭ５０５培地（Ｆ．Ｗｉｌｌｉａｍ  Ｓｔｕｄｉｅｒ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ４１（２００５）２０７−２３４）中で培養した。遺伝子の発現を、ＩＰＴＧ（０．１ｍＭ）により対数相で誘導し、３０℃及び２００ｒｐｍで１６〜１８時間実施した。
【０５２０】
細胞を遠心分離（３２２０×ｇ、２０分、４℃）によって採取し、細胞溶解緩衝液（１００ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．０；２ｍＭのＭｇＣｌ２、ＤＮＡヌクレアーゼ２０Ｕ／ｍＬ、リゾチーム０．５ｍｇ／ｍＬ））で２００の光学密度（６００ｎｍ（ＯＤ６００）で測定）まで再懸濁した。次いで、細胞を超音波処理により破壊し、粗抽出物を遠心分離（１８０００×ｇ４０分、４℃）により細胞残屑から分離した。上清を、０．２μｍのフィルターを通した濾過によって滅菌し、１Ｍのスクロース溶液で５０：５０に希釈し、酵素活性調製物を得た。
【０５２１】
ＵＧＴＳｌ２の酵素活性調製物については、単位での活性は以下のように定義される：１ｍＵのＵＧＴＳｌ２は１分間で１ｎｍｏｌのレバウジオシドＡ（Ｒｅｂ  Ａ）をレバウジオシドＤ（Ｒｅｂ  Ｄ）に変化させる。アッセイの反応条件は、３０℃、５０ｍＭのリン酸カリウム緩衝液ｐＨ７．０、ｔ０で１０ｍＭのＲｅｂ  Ａ、５００ｍＭのスクロース、３ｍＭのＭｇＣｌ２、０．２５ｍＭのウリジン二リン酸（ＵＤＰ）及び３Ｕ／ｍＬのＳｕＳｙ＿ＡＴである。
【０５２２】
実施例４
配列番号３のＵＧＴ７６Ｇ１バリアントの発現及び配合
配列番号３（実施例１）のＵＧＴ７６Ｇ１バリアントをコードする遺伝子を、発現ベクターｐＬＥ１Ａ１７（ｐＲＳＦ−１ｂの誘導体、Ｎｏｖａｇｅｎ）にクローニングした。得られたプラスミドを、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＢＬ２１（ＤＥ３）細胞の形質転換に使用した。
【０５２３】
細胞を、３７℃でカナマイシン（５０ｍｇ／ｌ）を補充したＺＹＭ５０５培地（Ｆ．Ｗｉｌｌｉａｍ  Ｓｔｕｄｉｅｒ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ４１（２００５）２０７−２３４）中で培養した。遺伝子の発現を、ＩＰＴＧ（０．１ｍＭ）により対数相で誘導し、３０℃及び２００ｒｐｍで１６〜１８時間実施した。
【０５２４】
細胞を遠心分離（３２２０×ｇ、２０分、４℃）によって採取し、細胞溶解緩衝液（１００ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．０；２ｍＭのＭｇＣｌ２、ＤＮＡヌクレアーゼ２０Ｕ／ｍＬ、リゾチーム０．５ｍｇ／ｍＬ））で２００の光学密度（６００ｎｍ（ＯＤ６００）で測定）まで再懸濁した。次いで、細胞を超音波処理により破壊し、粗抽出物を遠心分離（１８０００×ｇ４０分、４℃）により細胞残屑から分離した。上清を、０．２μｍのフィルターを通した濾過によって滅菌し、１Ｍのスクロース溶液で５０：５０に希釈し、酵素活性調製物を得た。
【０５２５】
ＵＧＴ７６Ｇ１の酵素活性調製物については、単位での活性は以下のように定義される：１ｍＵのＵＧＴ７６Ｇ１は１分間で１ｎｍｏｌのレバウジオシドＤ（Ｒｅｂ  Ｄ）をレバウジオシドＭ（Ｒｅｂ  Ｍ）に変化させる。アッセイの反応条件は、３０℃、５０ｍＭのリン酸カリウム緩衝液ｐＨ７．０、ｔ０で１０ｍＭのＲｅｂ  Ｄ、５００ｍＭのスクロース、３ｍＭのＭｇＣｌ２、０．２５ｍＭのウリジン二リン酸（ＵＤＰ）及び３Ｕ／ｍＬのＳｕＳｙ＿ＡＴである。
【０５２６】
実施例５
ＵＧＴＳｌ２、ＳｕＳｙ＿ＡＴ及びＵＧＴ７６Ｇ１を同時に添加する、ワンポット反応でのレバウジオシドＣからのレバウジオシドＮ２及びレバウジオシドＯ４の合成。
【０５２７】
レバウジオシド  Ｎ２（ｒｅｂ  Ｎ２）及びレバウジオシド  Ｏ４（ｒｅｂ  Ｏ４）を、３つの酵素（実施例１、２、３、及び４を参照）：ＵＧＴＳｌ２（配列番号２のバリアント）、ＳｕＳｙ＿ＡＴ（配列番号１のバリアント）及びＵＧＴ７６Ｇ１（配列番号３のバリアント）を利用して、レバウジオシドＣからワンポット反応で直接合成した（図３ａ及び図３ｂを参照）。最終反応溶液は、１０５Ｕ／Ｌ  のＵＧＴＳｌ２、４０５Ｕ／Ｌ  のＳｕＳｙ＿ＡＴ、３Ｕ／Ｌ  のＵＧＴ７６Ｇ１、５ｍＭのレバウジオシドＣ、０．２５ｍＭのウリジン二リン酸（ＵＤＰ）、１Ｍのスクロース、４ｍＭのＭｇＣｌ２、及びリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．６）を含有した。まず、２０７ｍＬの蒸留水を、０．２４ｇのＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、１０３ｇのスクロース、９．９ｍＬの１．５Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．６）及び１５ｇのレバウジオシドＣと混合した。成分を溶解した後、温度を４５℃に調整し、ＵＧＴＳｌ２、ＳｕＳｙ＿ＡＴ、ＵＧＴ７６Ｇ１、及び３９ｍｇのＵＤＰを添加した。反応混合物を４５℃振盪器で２４時間インキュベートした。更に３９ｍｇのＵＤＰを８時間目及び１８時間目に添加した。いくつかの時点でのｒｅｂ  Ｏ４、ｒｅｂ  Ｎ２、ｒｅｂ  Ｋ、及びｒｅｂ  Ｃの含有量を、ＨＰＬＣにより分析した。
【０５２８】
分析のために、１７％のＨ３ＰＯ４を用いて反応混合物をｐＨ５．５に調整し、次いで１０分間沸騰させることによって、生体内変換試料を不活性化した。得られた試料を濾過し、濾液を１０倍に希釈し、ＨＰＬＣ分析用の試料として使用した。ＨＰＬＣアッセイは、ポンプ、カラムサーモスタット、オートサンプラー、バックグラウンド補正が可能なＵＶ検出器、及びデータ収集システムからなるＡｇｉｌｅｎｔ  ＨＰ  １２００  ＨＰＬＣシステムで実施した。分析物を、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ  １２０  ＳＢ−Ｃ１８、４．６ｍｍ×１５０ｍｍ、２．７μｍ使用して４０℃で分離した。移動相は、２つのプレミックスから構成された：
−７５％の１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ２．６）及び２５％のアセトニトリルを含有するプレミックス１、及び
−６８％の１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ２．６）及び３２％のアセトニトリルを含有するプレミックス２．
【０５２９】
プレミックス１で溶出勾配を開始し、１２．５分でプレミックス２に代えて５０％にし、１３分でプレミックス２に代えて１００％にした。合計運転時間は４５分であった。カラム温度を４０℃に維持した。注入量は５μＬであった。レバウジオシド種は、２１０ｎｍでＵＶによって検出された。
【０５３０】
表３は、Ｒｅｂ  Ｃの特定されたレバウジオシド種への変換（面積百分率）を示す。レバウジオシドＣのクロマトグラム及び９６時間での反応混合物を、それぞれ図４及び図５に示す。当業者であれば、保持時間は、溶媒及び／又は装置の変化によって時折変化し得ることを理解するであろう。
【０５３１】
【表４】
2021526521.tif 000009
【０５３２】
実施例６
レバウジオシドＮ２及びＯ４の精製
４０ｍＬの実施例５の反応混合物（９６時間後）を、ｐＨをｐＨ５．５にＨ３ＰＯ４で調整し、次いで１０分間沸騰させ、濾過した。濾液を、水で予め平衡化した３０ｍＬのＹＷＤ０３（Ｃａｎｇｚｈｏｕ  Ｙｕａｎｗｅｉ，Ｃｈｉｎａ）樹脂を含有するカラムに充填した。樹脂を１５０ｍＬの温水（３５℃）で洗浄し、この工程からの水流出液を捨てた。
【０５３３】
２００ｍＬの７０％ｖ／ｖエタノール／水で溶出することにより、ステビオール配糖体をＹＷＤ０３樹脂カラムから溶出させた。この工程からの流出液を回収し、試料の容量が約２５ｍＬになるまでロータリーエバポレーターで蒸発させた。この濃縮した試料を、以下の表４に記載の条件を使用して分取ＨＰＬＣにより更に精製した。
【０５３４】
複数の実施から個々の化合物に相当する分取ＨＰＬＣ分画を、保持時間に従って組み合わせた。試料を凍結乾燥して、６０ｍｇのレバウジオシドＮ２及び１０ｍｇのレバウジオシドＯ４を得た。
【０５３５】
【表５】
2021526521.tif 000010
【０５３６】
精製したｒｅｂ  Ｎ２及びｒｅｂ  Ｏ４のクロマトグラムを、それぞれ図６ａ及び６ｂに示す。当業者であれば、保持時間は、溶媒及び／又は装置の変化によって時折変化し得ることを理解するであろう。
【０５３７】
実施例７
レバウジオシドＮ２の構造解明
ＮＭＲ実験をＢｒｕｋｅｒ  ５００ＭＨｚ分光計で実施し、試料をピリジン−ｄ５に溶解した。試料からのシグナルと共に、δｃ１２３．５、１３５．５、１４９．９ｐｐｍ及びδＨ７．１９、７．５５、８．７１ｐｐｍでのピリジン−ｄ５からのシグナルを観測した。
ピリジン−ｄ５で記録されたレバウジオシドＮ２の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、試料の優れた品質を確認した（図７ａを参照）。ＨＳＱＣ（図８ａを参照）は、Ｈ，Ｈ−ＣＯＳＹ（図９ａ）で観測可能な、Ｃ−１５に長距離結合した糖領域中のエキソ−メチレン基の存在を示している。四級炭素（Ｃ−１３、Ｃ−１６及びＣ−１９）の他の深視野シグナルは、ＨＭＢＣによって検出される（図１０ａ）。ＨＳＱＣ、ＨＭＢＣ及びＨ，Ｈ−ＣＯＳＹ中のシグナルの相関は、以下のアグリコン構造を有するステビオール配糖体の存在を明らかにする（図１ｅを参照）。
【０５３８】
【化１】
2021526521.tif 000011
レバウジオシドＮ２のＨＳＱＣスペクトルはまた、糖領域のシグナルとのＨ，Ｈ−ＣＯＳＹ相関を有するメチル−二重項（Ｊ＝６．３Ｈｚ）の存在を示す。ＨＳＱＣはまた、６つのアノマーシグナルの存在を示し、これらのアノマーシグナルのうちの５つは約８Ｈｚのカップリング定数を有し、それらの糖結合のブロードシグナルは、これら６つの糖をβ−Ｄ−配糖体として特定することを可能にする。第６のアノマーシグナルはブロードの一重項であり、メチル二重項とのＨ，Ｈ−ＣＯＳＹ相関は、この糖をα−Ｌ−ラムノースとして特定することを可能にする。
【０５３９】
ＨＳＱＣとＨＭＢＣとを組み合わせたアノマープロトンの観測は、糖結合及びアグリコンとの相関を明らかにする。ＨＳＱＣ−ＴＯＣＳＹ（図１１ａ）及びＨＳＱＣの組み合わせを使用することにより、糖配列の割り当てを確認した。
【０５４０】
これと共に、上記のＮＭＲ実験の結果を使用して、レバウジオシドＮ２の構造のプロトン及び炭素の化学シフトを割り当てた（表５を参照されたい）。
【０５４１】
【表６】
2021526521.tif 000012
【０５４２】
【表７】
2021526521.tif 000013
【０５４３】
【表８】
2021526521.tif 000014
【０５４４】
全てのＮＭＲ結果の相関は、以下の化学構造で示されるように、ステビオールアグリコンに結合した５つのβ−Ｄ−グルコースと、１つのα−Ｌ−ラムノースとを有するレバウジオシドＮ２を示す（図１ａ及び１ｂを参照）：
【０５４５】
【化２】
2021526521.tif 000015
【０５４６】
レバウジオシドＮ２のＬＣＭＳ（図１２ａ及び図１２ｂ）分析は、ｍ／ｚ１２７３．０での［Ｍ−Ｈ］−イオンを、Ｃ５６Ｈ９０Ｏ３２の予想される分子式（［Ｃ５６Ｈ８９Ｏ３２］−イオン１２７３．５について計算、誤差＜０．０５％）と良好に一致して示した。ＭＳデータは、レバウジオシドＮ２がＣ５６Ｈ９０Ｏ３２の分子式を有することを確認している。ＬＣＭＳ分析を、表６に列挙した以下の条件で行った。
【０５４７】
【表９】
2021526521.tif 000016
【０５４８】
実施例８
レバウジオシドＯ４の構造の解明
ＮＭＲ実験をＢｒｕｋｅｒ  ５００ＭＨｚ分光計で実施し、試料をピリジン−ｄ５に溶解した。試料からのシグナルと共に、δｃ１２３．５、１３５．５、１４９．９ｐｐｍ及びδＨ７．１９、７．５５、８．７１ｐｐｍでのピリジン−ｄ５からのシグナルを観測した。
【０５４９】
ピリジン−ｄ５で記録されたレバウジオシドＯ４の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、試料の優れた品質を確認した（図７ｂを参照）。ＨＳＱＣ（図８ｂを参照）は、Ｈ，Ｈ−ＣＯＳＹ（図９ｂ）で観測可能な、Ｃ−１５に長距離結合した糖領域中のエキソ−メチレン基の存在を示している。四級炭素（Ｃ−１３、Ｃ−１６及びＣ−１９）の他の深視野シグナルは、ＨＭＢＣによって検出される（図１０ｂ）。ＨＳＱＣ、ＨＭＢＣ及びＨ，Ｈ−ＣＯＳＹ中のシグナルの相関は、以下のアグリコン構造を有するステビオール配糖体の存在を明らかにする（図１ｅを参照）。
【０５５０】
【化３】
2021526521.tif 000017
【０５５１】
レバウジオシドＯ４のＨＳＱＣスペクトルはまた、糖領域のシグナルとのＨ，Ｈ−ＣＯＳＹ相関を有するメチル−ダブレット（Ｊ＝６．３Ｈｚ）の存在を示す。ＨＳＱＣはまた、７つのアノマーシグナルの存在を示し、これらのアノマーシグナルのうちの６つは約８Ｈｚのカップリング定数を有し、それらの糖結合のブロードシグナルは、これら６つの糖をβ−Ｄ−配糖体として特定することを可能にする。第７のアノマーシグナルはブロードの一重項であり、メチル二重項とのＨ，Ｈ−ＣＯＳＹ相関は、この糖をα−Ｌ−ラムノースとして特定することを可能にする。
【０５５２】
ＨＳＱＣとＨＭＢＣとを組み合わせたアノマープロトンの観測は、糖結合及びアグリコンとの相関を明らかにする。ＨＳＱＣ−ＴＯＣＳＹ（図１１ｂ）及びＨＳＱＣの組み合わせを使用することにより、糖配列の割り当てを確認した。
【０５５３】
上記のＮＭＲ実験の結果を使用して、レバウジオシドＯ４の構造のプロトン及び炭素の化学シフトを割り当てた（表７を参照されたい）。
【０５５４】
【表１０】
2021526521.tif 000018
【０５５５】
【表１１】
2021526521.tif 000019
【０５５６】
【表１２】
2021526521.tif 000020
【０５５７】
全てのＮＭＲ結果の相関は、以下の化学構造で示されるように、ステビオールアグリコンに結合した６つのβ−Ｄ−グルコースと、１つのα−Ｌ−ラムノースとを有するレバウジオシドＯ４を示す（図１ｃ及び１ｄを参照）：
【０５５８】
【化４】
2021526521.tif 000021
【０５５９】
レバウジオシドＯ４のＬＣＭＳ（図１３ａ及び図１３ｂ）分析は、ｍ／ｚ１４３５．０での［Ｍ−Ｈ］−イオンを、Ｃ６２Ｈ１００Ｏ３７の予想される分子式（［Ｃ６２Ｈ９９Ｏ３７］−イオン１４３５．６について計算、誤差＜０．０５％）と良好に一致して示した。ＭＳデータは、レバウジオシドＯ４がＣ６２Ｈ１００Ｏ３７の分子式を有することを確認している。ＬＣＭＳ分析を、表６に列挙した条件を使用して行った。
【０５６０】
本発明及びその利点について詳細に説明してきたが、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、様々な変更、置換、及び変更を行うことができることを理解されたい。更に、本出願の範囲は、本明細書に記載されるプロセス、機械、製造、物質の組成、手段、方法及び工程の特定の実施形態に限定されることを意図するものではない。当業者であれば、本発明の開示から容易に理解されるように、本明細書に記載される対応する実施形態と実質的に同じ機能を実行するか、又は実質的に同じ結果を達成する現在の既存の又は今後開発されるプロセス、機械、製造、物質の組成物、手段、方法、又は工程が、本発明に従って利用され得る。したがって、添付の特許請求の範囲は、その範囲内に、そのようなプロセス、機械、製造、物質の組成物、手段、方法、又は工程を含むことが意図される。
【図１ａ】
2021526521.tif 000024
【図１ｂ】
2021526521.tif 000025
【図１ｃ】
2021526521.tif 000026
【図１ｄ】
2021526521.tif 000027
【図１ｅ】
2021526521.tif 000028
【図２ａ】
2021526521.tif 000029
【図２ｂ】
2021526521.tif 000030
【図２ｃ】
2021526521.tif 000031
【図２ｄ】
2021526521.tif 000032
【図２ｅ】
2021526521.tif 000033
【図２ｆ】
2021526521.tif 000034
【図２ｇ】
2021526521.tif 000035
【図２ｈ】
2021526521.tif 000036
【図２ｉ】
2021526521.tif 000037
【図２ｊ】
2021526521.tif 000038
【図２ｋ】
2021526521.tif 000039
【図２ｌ】
2021526521.tif 000040
【図３ａ】
2021526521.tif 000041
【図３ｂ】
2021526521.tif 000042
【図４】
2021526521.tif 000043
【図５】
2021526521.tif 000044
【図６ａ】
2021526521.tif 000045
【図６ｂ】
2021526521.tif 000046
【図７ａ】
2021526521.tif 000047
【図７ｂ】
2021526521.tif 000048
【図８ａ】
2021526521.tif 000049
【図８ｂ】
2021526521.tif 000050
【図９ａ】
2021526521.tif 000051
【図９ｂ】
2021526521.tif 000052
【図１０ａ】
2021526521.tif 000053
【図１０ｂ】
2021526521.tif 000054
【図１１ａ】
2021526521.tif 000055
【図１１ｂ】
2021526521.tif 000056
【図１２ａ】
2021526521.tif 000057
【図１２ｂ】
2021526521.tif 000058
【図１３ａ】
2021526521.tif 000059
【図１３ｂ】
2021526521.tif 000060
【配列表】
2021526521000001.app
【国際調査報告】
2021526521.tif 000061