(57)【要約】  ＩＬ−１１Ｒαに結合することが可能な抗原結合性分子、ならびにこれを使用する、医学的処置および予防の方法が提供される。【選択図】図１
2021527086.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩＬ−１１Ｒαに結合することが可能であり、
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号５２のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号２２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号２３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号２４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域
を含む抗原結合性分子、任意選択で、単離抗原結合性分子。
【請求項２】
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１９のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号２２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号２３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号２４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域
を含む、請求項１に記載の抗原結合性分子。
【請求項３】
配列番号７、８、９、１０、１１、または１２のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号１３、１４、１５、１６、または１７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域
を含む、請求項１または請求項２に記載の抗原結合性分子。
【請求項４】
配列番号１１のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号１７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域
を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の抗原結合性分子。
【請求項５】
ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達を阻害することが可能である、請求項１から４のいずれか一項に記載の抗原結合性分子。
【請求項６】
（ｉ）請求項１から５のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、および（ｉｉ）ＩＬ−１１Ｒα以外の抗原に結合することが可能な抗原結合性分子を含む抗原結合性分子、任意選択で、単離抗原結合性分子。
【請求項７】
ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体と、ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体に対する相互作用パートナーとの相互作用を阻害することが可能である、請求項１から６のいずれか一項に記載の抗原結合性分子。
【請求項８】
請求項１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
【請求項９】
請求項１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、または請求項８に記載のＣＡＲをコードする、１つの核酸または複数の核酸、任意選択で、１つの単離核酸または複数の単離核酸。
【請求項１０】
請求項９に記載の、１つの核酸または複数の核酸を含む、１つの発現ベクターまたは複数の発現ベクター。
【請求項１１】
請求項１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、請求項８に記載のＣＡＲ、請求項９に記載の、１つの核酸もしくは複数の核酸、または請求項１０に記載の、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクターを含む細胞。
【請求項１２】
請求項９に記載の、１つの核酸もしくは複数の核酸、または請求項１０に記載の、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクターを含む細胞を、抗原結合性分子またはＣＡＲの、核酸（複数可）または発現ベクター（複数可）からの発現に適する条件下で培養するステップを含む方法。
【請求項１３】
請求項１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、請求項８に記載のＣＡＲ、請求項９に記載の、１つの核酸もしくは複数の核酸、請求項１０に記載の、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、または請求項１１に記載の細胞を含む組成物。
【請求項１４】
医学的処置または予防の方法における使用のための、請求項１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、請求項８に記載のＣＡＲ、請求項９に記載の１つの核酸もしくは複数の核酸、請求項１０に記載の１つの発現ベクターまたは複数の発現ベクター、請求項１１に記載の細胞、または請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
線維症、線維症により特徴付けられる疾患、がん、炎症、炎症により特徴付けられる疾患、肝毒性、肝毒性により特徴付けられる疾患、代謝性疾患、消耗性障害、腎損傷、腎毒性、または腎毒性（ｈｅｐａｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）により特徴付けられる疾患の処置または防止の方法における使用のための、請求項１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、請求項８に記載のＣＡＲ、請求項９に記載の、１つの核酸もしくは複数の核酸、請求項１０に記載の、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、請求項１１に記載の細胞、または請求項１３に記載の組成物。
【請求項１６】
ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達を阻害する方法であって、ＩＬ−１１Ｒα発現細胞を、請求項１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子と接触させるステップを含む方法。
【請求項１７】
ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体に結合した、請求項１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子を含むｉｎ  ｖｉｔｒｏ複合体、任意選択で、単離ｉｎ  ｖｉｔｒｏ複合体。
【請求項１８】
ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体を含有するか、またはこれを含有することが疑われる試料を、請求項１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子と接触させるステップと、抗原結合性分子の、ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体との複合体の形成を検出するステップとを含む方法。
【請求項１９】
対象を、ＩＬ−１１Ｒαターゲティング剤による処置のために選択または層別化する方法であって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、対象に由来する試料を、請求項１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子と接触させるステップと、抗原結合性分子の、ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体との複合体の形成を検出するステップとを含む方法。
【請求項２０】
請求項１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子の、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏにおける診断または予後診断剤としての使用。
【請求項２１】
所定数量の、請求項１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、請求項８に記載のＣＡＲ、請求項９に記載の、１つの核酸もしくは複数の核酸、請求項１０に記載の、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、請求項１１に記載の細胞、または請求項１３に記載の組成物を含むキットオブパーツ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、その内容および要素が、参照によりその全体において、全ての目的のために本明細書に組み込まれる、２０１８年６月１３日に出願された、ＧＢ１８０９７００．６からの優先権を主張する。
発明の分野
本発明は、分子生物学の分野に関し、より具体的には、抗体技術の分野に関する。本発明はまた、医学的な処置および予防の方法にも関する。特に、ＩＬ−１１Ｒαに結合することが可能な抗原結合性分子が提供される。
【背景技術】
【０００２】
ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達は、造血を刺激し、破骨活性を刺激し、神経形成を刺激し、脂肪生成を阻害し、炎症促進性サイトカインの発現を低減し、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の代謝をモジュレートし、消化器上皮細胞の、正常な増殖制御を媒介することが示されている。インターロイキン１１（ＩＬ−１１）の生理学的役割は、依然として、不明である。ＩＬ−１１／ＩＬ−１１Ｒシグナル伝達は、造血細胞の活性化および血小板の産生と、最も強力に連関しているが、また、炎症促進性であるほか、抗炎症性、血管新生促進性でもあり、新生物に重要であることも示唆されている。
【発明の概要】
【０００３】
第１の態様において、本発明は、ＩＬ−１１Ｒαに結合することが可能であり、
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号５２のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号２２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号２３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号２４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域
を含む抗原結合性分子、任意選択で、単離抗原結合性分子を提供する。
【０００４】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１９のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号２２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号２３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号２４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。
【０００５】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号２０アミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号２２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号２３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号２４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。
【０００６】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、
配列番号７、８、９、１０、１１または１２のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号１３、１４、１５、１６または１７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。
【０００７】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号７０に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなるポリペプチドを含む。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号７３に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなるポリペプチドを含む。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号７４に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなるポリペプチドを含む。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号７０または７３に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなるポリペプチド、および配列番号７４に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなるポリペプチドを含む。
【０００８】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達を阻害することが可能である。
本発明はまた、（ｉ）本明細書で記載される抗原結合性分子、および（ｉｉ）ＩＬ−１１Ｒα以外の抗原に結合することが可能な抗原結合性分子を含む抗原結合性分子、任意選択で、単離抗原結合性分子も提供する。
【０００９】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体と、ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体に対する相互作用パートナーとの相互作用を阻害することが可能である。
【００１０】
本発明はまた、本明細書で記載される、抗原結合性分子を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）も提供する。
本発明はまた、本明細書で記載される、抗原結合性分子またはＣＡＲをコードする１つの核酸または複数の核酸、任意選択で、単離核酸も提供する。
【００１１】
本発明はまた、本明細書で記載される、１つの核酸または複数の核酸を含む１つの発現ベクターまたは複数の発現ベクターも提供する。
本発明はまた、本明細書で記載される、抗原結合性分子、ＣＡＲ、１つの核酸もしくは複数の核酸、または１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクターを含む細胞も提供する。
【００１２】
本発明はまた、本明細書で記載される、１つの核酸もしくは複数の核酸、または１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクターを含む細胞を、抗原結合性分子またはＣＡＲの、核酸（複数可）または発現ベクター（複数可）からの発現に適する条件下で培養するステップを含む方法も提供する。
【００１３】
本発明はまた、本明細書で記載される、抗原結合性分子、ＣＡＲ、１つの核酸もしくは複数の核酸、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、または細胞を含む組成物も提供する。
【００１４】
本発明はまた、医学的処置または予防の方法における使用のための、本明細書で記載される、抗原結合性分子、ＣＡＲ、１つの核酸もしくは複数の核酸、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、細胞、または組成物も提供する。
【００１５】
本発明はまた、線維症、線維症により特徴付けられる疾患、がん、炎症、または炎症により特徴付けられる疾患の処置または防止の方法における使用のための、本明細書で記載される、抗原結合性分子、ＣＡＲ、１つの核酸もしくは複数の核酸、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、細胞、または組成物も提供する。
【００１６】
本発明はまた、線維症、線維症により特徴付けられる疾患、がん、炎症、または炎症により特徴付けられる疾患の処置または防止の方法における使用のための医薬の製造における、本明細書で記載される、抗原結合性分子、ＣＡＲ、１つの核酸もしくは複数の核酸、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、細胞、または組成物の使用も提供する。
【００１７】
本発明はまた、線維症、線維症により特徴付けられる疾患、がん、炎症、または炎症により特徴付けられる疾患を処置または防止する方法であって、対象へと、治療または予防有効量の、本明細書で記載される、抗原結合性分子、ＣＡＲ、１つの核酸もしくは複数の核酸、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、細胞、または組成物を投与するステップを含む方法も提供する。
【００１８】
本発明はまた、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達を阻害する方法であって、ＩＬ−１１Ｒα発現細胞を、本明細書で記載される、抗原結合性分子と接触させるステップを含む方法も提供する。
【００１９】
本発明はまた、ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体に結合した、本明細書で記載される、抗原結合性分子を含むｉｎ  ｖｉｔｒｏ複合体、任意選択で、単離ｉｎ  ｖｉｔｒｏ複合体も提供する。
【００２０】
本発明はまた、ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体を含有するか、またはこれを含有することが疑われる試料を、本明細書で記載される、抗原結合性分子と接触させるステップと、抗原結合性分子の、ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体との複合体の形成を検出するステップとを含む方法も提供する。
【００２１】
本発明はまた、対象を、ＩＬ−１１Ｒαターゲティング剤による処置のために選択または層別化する方法であって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、対象に由来する試料を、本明細書で記載される、抗原結合性分子と接触させるステップと、抗原結合性分子の、ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体との複合体の形成を検出するステップとを含む方法も提供する。
【００２２】
本発明はまた、本明細書で記載される、抗原結合性分子の、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏにおける診断または予後診断剤としての使用も提供する。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本発明は、公知の抗ＩＬ−１１Ｒα抗体と比較して、改善された特性を有する、新規のＩＬ−１１Ｒα結合性分子に関する。本発明のＩＬ−１１Ｒα結合性分子は、先行技術において開示された、ＩＬ−１１Ｒα結合性抗原結合性分子と比較して、所望の生物物理的特性および機能的特性の組合せを備えている。
インターロイキン１１およびＩＬ−１１に対する受容体
脂肪生成阻害因子としてもまた公知の、インターロイキン１１（ＩＬ−１１）は、多機能サイトカインであり、ＩＬ−６、ＩＬ−１１、ＩＬ−２７、ＩＬ−３１、オンコスタチン、白血病阻害性因子（ＬＩＦ）、カーディオトロフィン１（ＣＴ−１）、カーディオトロフィン様サイトカイン（ＣＬＣ）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、およびニューロポエチン（ＮＰ−１）を含む、サイトカインのＩＬ−６ファミリーのメンバーである。
【００２４】
インターロイキン１１（ＩＬ−１１）は、様々な間葉細胞型内で発現される。ＩＬ−１１のゲノム配列は、第１９染色体、および第７１染色体のセントロメア領域にマッピングされ、細胞からの効率的な分泌を確保する、カノニカルのシグナルペプチドにより転写される。そのプロモーター配列内に位置する、ＩＬ−１１の活性化因子タンパク質複合体である、ｃＪｕｎ／ＡＰ−１は、ＩＬ−１１の、基礎的転写調節に、極めて重要である（ＤｕおよびＷｉｌｌｉａｍｓ、Ｂｌｏｏｄ、１９９７、８９巻：３８９７〜３９０８）。ヒトＩＬ−１１の未成熟形態が、１９９アミノ酸のポリペプチドであるのに対し、ＩＬ−１１の成熟形態は、１７８アミノ酸残基のタンパク質をコードする（ＧａｒｂｅｒｓおよびＳｃｈｅｌｌｅｒ、Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２０１３、３９４（９）：１１４５〜１１６１）。ヒトＩＬ−１１のアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号：Ｐ２０８０９（Ｐ２０８０９．１；ＧＩ：１２４２９４；配列番号１）下で入手可能である。組換えヒトＩＬ−１１（オプレルベキン）もまた、市販されている。マウス、ラット、ブタ、ウシ、いくつかの種硬骨魚類、および霊長動物を含む、他の種に由来するＩＬ−１１もまた、クローニングおよびシーケンシングされている。
【００２５】
本明細書では、「ＩＬ−１１」とは、任意の種に由来するＩＬ−１１を指し、任意の種に由来する、ＩＬ−１１の、アイソフォーム、断片、変異体、または相同体を含む。本明細書で使用される、タンパク質の「断片」、「変異体」、または「相同体」は、任意選択で、参照タンパク質のアミノ酸配列に対する、少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有することとして特徴付けられうる。一部の実施形態では、参照タンパク質の、断片、変異体、アイソフォーム、および相同体は、参照タンパク質により果たされる機能を果たす能力により特徴付けられうる。
【００２６】
「断片」とは、一般に、参照タンパク質の部分を指す。「変異体」とは、一般に、参照タンパク質のアミノ酸配列と比べて、１つまたは複数のアミノ酸の置換、挿入、欠失、または他の修飾を含むが、参照タンパク質のアミノ酸配列に対する、かなりの程度の配列同一性（例えば、少なくとも６０％）を保持するアミノ酸配列を有するタンパク質を指す。「アイソフォーム」とは、一般に、参照タンパク質の種と同じ種により発現される、参照タンパク質の変異体を指す。「相同体」とは、一般に、参照タンパク質の種と比較して、異なる種により産生される、参照タンパク質の変異体を指す。相同体は、オーソログを含む。「断片」は、任意の長さ（アミノ酸の数による）でありうるが、任意選択で、参照タンパク質（すなわち、断片が由来するタンパク質）の長さの、少なくとも２０％であることが可能であり、参照タンパク質の長さの、５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のうちの１つの、最大の長さを有しうる。ＩＬ−１１の断片は、１０アミノ酸の、最小の長さ、および１５、２０、２５、３０、４０、５０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、または１９５アミノ酸のうちの１つの、最大の長さを有しうる。
【００２７】
一部の実施形態では、ＩＬ−１１は、哺乳動物に由来するＩＬ−１１（例えば、霊長動物（非ヒト霊長動物である、アカゲザル、カニクイザル、またはヒト）、および／または齧歯動物（例えば、ラットまたはマウス）のＩＬ−１１）である。ＩＬ−１１の、アイソフォーム、断片、変異体、または相同体は、任意選択で、所与の種、例えば、ヒトに由来する、未成熟または成熟のＩＬ−１１アイソフォームのアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有すると特徴付けられうる。一部の実施形態では、本開示のＩＬ−１１は、配列番号１に対する、少なくとも７０％、好ましくは、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはこれらからなる。
【００２８】
ＩＬ−１１の、アイソフォーム、断片、変異体、または相同体は、任意選択で、ＩＬ−１１受容体（例えば、好ましくは、同じ種に由来する、ＩＬ−１１Ｒα、ｇｐ１３０、ならびに／またはＩＬ−１１Ｒαおよびｇｐ１３０を含む複合体）に結合し、ＩＬ−１１Ｒαおよびｇｐ１３０を発現する細胞内のシグナル伝達を刺激する能力により特徴付けられうる（例えば、Ｃｕｒｔｉｓら、Ｂｌｏｏｄ、１９９７、９０（１１）；またはＫａｒｐｏｖｉｃｈら、Ｍｏｌ．Ｈｕｍ．Ｒｅｐｒｏｄ．、２００３、９（２）：７５〜８０において記載されている通りに）。
【００２９】
ＩＬ−１１は、遍在的に発現される糖タンパク質１３０（ｇｐ１３０；また、糖タンパク質１３０、ＩＬ−６ＳＴ、ＩＬ−６−ベータ、またはＣＤ１３０としても公知である）のホモ二量体を介して、シグナル伝達する。ｇｐ１３０は、ＩＬ−６受容体ファミリーを伴う、Ｉ型サイトカイン受容体の、１つのサブユニットを形成する、膜貫通タンパク質である。特異性は、個別のインターロイキン１１受容体サブユニットアルファ（ＩＬ−１１Ｒα）を介して得られ、ＩＬ−１１Ｒαは、シグナル伝達に、直接的に参与しないが、α受容体への、初期のサイトカイン結合イベントは、ｇｐ１３０との、最終的な複合体の形成をもたらす。
【００３０】
ヒトｇｐ１３０（２２アミノ酸のシグナルペプチドを含む）は、９１８アミノ酸のタンパク質であり、成熟形態は、５９７アミノ酸の細胞外ドメインと、２２アミノ酸の膜貫通ドメインと、２７７アミノ酸の細胞内ドメインとを含む、８６６アミノ酸である。ヒトｇｐ１３０タンパク質の細胞外ドメインは、ｇｐ１３０の、サイトカイン結合性モジュール（ＣＢＭ）を含む。ｇｐ１３０のＣＢＭは、ｇｐ１３０のＩｇ様ドメインである、Ｄ１と、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメインである、Ｄ２およびＤ３とを含む。ヒトｇｐ１３０のアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ：受託番号Ｐ４０１８９−１（配列番号２）下で、入手可能である。
【００３１】
ヒトＩＬ−１１Ｒαは、４２２アミノ酸のポリペプチド（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ１４６２６）であり、マウスＩＬ−１１Ｒαと、約８５％のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列の同一性を共有する（ＤｕおよびＷｉｌｌｉａｍｓ、Ｂｌｏｏｄ、８９巻、１１号、１９９７年６月１日）。細胞質ドメインが異なる、ＩＬ−１１Ｒαの、２つのアイソフォーム（ＨＣＲ１（配列番号３）およびＨＣＲ２（配列番号４））が報告されており、アイソフォームであるＨＣＲ１の、Ｃ末端の３２アミノ酸は、ＨＣＲ２には存在しない（ＤｕおよびＷｉｌｌｉａｍｓ、前出）。ＩＬ−１１受容体のα鎖（ＩＬ−１１Ｒα）は、ＩＬ−６受容体のα鎖（ＩＬ−６Ｒα）と、多くの、構造的かつ機能的な類似性を共有する。細胞外ドメインは、特徴的な、保存的Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｘ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ（ＷＳＸＷＳ）モチーフを含む、２４％のアミノ酸同一性を示す。短い細胞質ドメインは、ＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達経路の活性化要求される、Ｂｏｘ  １領域およびＢｏｘ  ２領域を欠く。
【００３２】
マウスＩＬ−１１上の受容体結合性部位はマッピングされており、３つの部位（部位Ｉ、ＩＩ、およびＩＩＩ）が同定されている。ｇｐ１３０への結合は、部位ＩＩ領域内の置換、および部位ＩＩＩ領域内の置換により低減される。部位ＩＩＩの突然変異体は、検出可能なアゴニスト活性を示さず、ＩＬ−１１Ｒαアンタゴニスト活性を有する（「Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」、８章；Ｇｅｎｎａｒｏ  ＣｉｌｉｂｅｒｔｏおよびＲｏｃｃｏ  Ｓａｖｉｎｏ編、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、２００１）。
【００３３】
本明細書では、ＩＬ−１１受容体／ＩＬ−１１に対する受容体（ＩＬ−１１Ｒ）とは、ＩＬ−１１および／またはＩＬ−１１を含む複合体に結合することが可能な、ポリペプチドまたはポリペプチド複合体を指す。一部の実施形態では、ＩＬ−１１受容体は、ＩＬ−１１および／またはＩＬ−１１を含む複合体に結合し、ＩＬ−１１受容体を発現する細胞内のシグナル伝達を誘導することが可能である。「ＩＬ−１１を含む複合体」とは、ＩＬ−１１と、ＩＬ−１１との、非共有結合的会合が可能なポリペプチドとの、非共有結合的複合体でありうる。
【００３４】
ＩＬ−１１受容体は、任意の種に由来することが可能であり、任意の種に由来する、ＩＬ−１１受容体の、アイソフォーム、断片、変異体、または相同体を含みうる。好ましい実施形態では、種は、ヒト（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）である。
【００３５】
一部の実施形態では、ＩＬ−１１受容体（ＩＬ−１１Ｒ）は、ＩＬ−１１Ｒαでありうる。一部の実施形態では、ＩＬ−１１に対する受容体は、ＩＬ−１１Ｒαを含む、ポリペプチド複合体でありうる。一部の実施形態では、ＩＬ−１１受容体は、ＩＬ−１１Ｒαおよびｇｐ１３０を含む、ポリペプチド複合体でありうる。一部の実施形態では、ＩＬ−１１受容体は、ＩＬ−１１が結合する、ｇｐ１３０またはｇｐ１３０を含む複合体でありうる。
【００３６】
本明細書では、「ＩＬ−１１Ｒα」とは、任意の種に由来するＩＬ−１１Ｒαを指し、任意の種に由来する、ＩＬ−１１Ｒαの、アイソフォーム、断片、変異体、または相同体を含む。ＩＬ−１１Ｒαの断片は、１０アミノ酸の、最小の長さ、および１５、２０、２５、３０、４０、５０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２５０、３００、４００、または４１５アミノ酸のうちの１つの、最大の長さを有しうる。
【００３７】
一部の実施形態では、ＩＬ−１１Ｒαは、哺乳動物に由来するＩＬ−１１Ｒα（例えば、霊長動物（アカゲザル、カニクイザル、非ヒト霊長動物、またはヒト）、および／または齧歯動物（例えば、ラットまたはマウス）のＩＬ−１１）である。ＩＬ−１１Ｒαの、アイソフォーム、断片、変異体、または相同体は、任意選択で、所与の種、例えば、ヒトに由来する、未成熟または成熟のＩＬ−１１Ｒαアイソフォームのアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有することとして特徴付けられうる。一部の実施形態では、本開示のＩＬ−１１Ｒαは、配列番号３、または４に対する、少なくとも７０％、好ましくは、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む、またはこれらからなる。
【００３８】
ＩＬ−１１Ｒαの、アイソフォーム、断片、変異体、または相同体は、任意選択で、ＩＬ−１１および／またはＩＬ−１１を含む複合体（好ましくは、同じ種に由来する）に結合し、ＩＬ−１１Ｒαおよびｇｐ１３０を発現する細胞内のシグナル伝達を刺激する能力により特徴付けられうる（例えば、Ｃｕｒｔｉｓら、Ｂｌｏｏｄ、１９９７、９０（１１）；またはＫａｒｐｏｖｉｃｈら、Ｍｏｌ．Ｈｕｍ．Ｒｅｐｒｏｄ．、２００３、９（２）：７５〜８０において記載されている通りに）。
ＩＬ−１１／ＩＬ−１１Ｒシグナル伝達
ＩＬ−１１は、ＩＬ−１１Ｒαに、低アフィニティー（Ｋｄ≒１Ｌ当たり１０ナノモル）で結合し、これらの結合パートナー単独の間の相互作用は、生物学的シグナルを伝達するのに不十分である。シグナル伝達が可能な、高アフィニティーの受容体（Ｋｄ≒１Ｌ当たり４００〜８００ピコモル）の発生は、ＩＬ−１１Ｒαと、ｇｐ１３０との共発現を要求する（Ｃｕｒｔｉｓら、Ｂｌｏｏｄ、１９９７年１２月１日、９０（１１）：４４０３〜１２；Ｈｉｌｔｏｎら、ＥＭＢＯ  Ｊ、１３：４７６５、１９９４；Ｎａｎｄｕｒｋａｒら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、１２：５８５、１９９６）。ＩＬ−１１の、細胞表面ＩＬ−１１Ｒαへの結合は、ヘテロ二量体化、チロシンのリン酸化、ｇｐ１３０、ならびにマイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）カスケード、ならびにＪａｎｕｓキナーゼ／シグナル伝達因子および転写活性化因子（Ｊａｋ／ＳＴＡＴ）経路を主に介する、下流のシグナル伝達の活性化を誘導する（ＧａｒｂｅｒｓおよびＳｃｈｅｌｌｅｒ、前出）。
【００３９】
原則として、可溶型ＩＬ−１１Ｒαもまた、ＩＬ−１１との、生物学的に活性の可溶型複合体を形成しうる（Ｐｆｌａｎｚら、１９９９、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ、４５０、１１７〜１２２）ことから、一部の場合に、ＩＬ−１１も、ＩＬ−６と同様に、細胞表面ｇｐ１３０に結合する前に、可溶型ＩＬ−１１Ｒαに結合する可能性を惹起する（ＧａｒｂｅｒｓおよびＳｃｈｅｌｌｅｒ、前出）。Ｃｕｒｔｉｓら、（Ｂｌｏｏｄ、１９９７年１２月１日、９０（１１）：４４０３〜１２）は、可溶型マウスＩＬ−１１Ｒ（ｓＩＬ−１１Ｒ）のα鎖の発現について記載しており、ｇｐ１３０を発現する細胞内のシグナル伝達について検討した。ｇｐ１３０の存在下では、ｓＩＬ−１１Ｒは、Ｍ１白血病細胞の、ＩＬ−１１依存的分化、およびＢａ／Ｆ３細胞の増殖、ならびに膜貫通型ＩＬ−１１Ｒを介するシグナル伝達と同様な、ｇｐ１３０、ＳＴＡＴ３、およびＳＨＰ２のリン酸化を含む、早期細胞内イベントを媒介したが、膜貫通型ＩＬ−１１Ｒの存在下では、これらを媒介しなかった。可溶型ＩＬ−１１Ｒαに結合したＩＬ−１１による、細胞膜結合型ｇｐ１３０を介するシグナル伝達の活性化が、近年裏付けられた（Ｌｏｋａｕら、２０１６、Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ、１４、１７６１〜１７７３）。この、いわゆるＩＬ−１１トランスシグナル伝達は、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の、極めて重要構成要素である可能があり、なお、ＩＬ−１１Ｒαの発現が、細胞型の、比較的小さなサブセットに制約されるのに対し、ｇｐ１３０は、広範にわたる細胞型において発現されるため、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の、最も一般的な形態でもありうる。
【００４０】
本明細書で使用される、「ＩＬ−１１シグナル伝達」、「ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達」、および「ＩＬ−１１／ＩＬ−１１Ｒシグナル伝達」とは、ＩＬ−１１、成熟ＩＬ−１１分子の機能を有するこの断片、またはＩＬ−１１を含む複合体もしくは成熟ＩＬ−１１分子の機能を有するこの断片の、ＩＬ−１１に対する受容体への結合により媒介されるシグナル伝達を指す。
【００４１】
本明細書で使用される、「ＩＬ−１１トランスシグナル伝達」は、ＩＬ−１１Ｒαに結合したＩＬ−１１の、ｇｐ１３０への結合により誘発されるシグナル伝達を指すのに使用される。ＩＬ−１１は、非共有結合的複合体として、ＩＬ−１１Ｒαに結合していることがある。ｇｐ１３０は、膜結合型であり、ＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα複合体の、ｇｐ１３０への結合の後において、シグナル伝達が生じる細胞により発現される。一部の実施形態では、ＩＬ−１１Ｒαは、可溶型ＩＬ−１１Ｒαでありうる。一部の実施形態では、可溶型ＩＬ−１１Ｒαは、ＩＬ−１１Ｒαの、可溶型（分泌型）アイソフォーム（例えば、膜貫通ドメインを欠く）である。一部の実施形態では、可溶型ＩＬ−１１Ｒαは、細胞膜結合型ＩＬ−１１Ｒαの細胞外ドメインの、タンパク質分解性切断の遊離産物である。一部の実施形態では、ＩＬ−１１Ｒαは、細胞膜結合型の場合があり、ｇｐ１３０を介するシグナル伝達は、細胞膜結合型ＩＬ−１１Ｒαに結合したＩＬ−１１への結合により誘発される場合があり、「ＩＬ−１１シスシグナル伝達」と称されうる。
【００４２】
ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達は、造血および血小板産生を刺激し、破骨活性を刺激し、神経形成を刺激し、脂肪生成を阻害し、炎症促進性サイトカインの発現を低減し、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の代謝をモジュレートし、消化器上皮細胞の、正常な増殖制御を媒介することが示されている（ＤｕおよびＷｉｌｌｉａｍｓ、前出）。
【００４３】
インターロイキン１１（ＩＬ−１１）の生理学的役割は、依然として、不明である。ＩＬ−１１は、造血細胞の活性化および血小板の産生と、最も強力に連関しているが、また、炎症促進性であるほか、抗炎症性、血管新生促進性でもあり、新生物に重要であることも示唆されている。ＴＧＦβ１または組織損傷は、ＩＬ−１１の発現を誘導することが公知である（Ｚｈｕ，Ｍ．ら、ＰＬＯＳ  Ｏｎｅ、１０、（２０１５）；Ｙａｓｈｉｒｏ，Ｒ．ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ．３３、１６５〜７１（２００６）；Ｏｂａｎａ，Ｍ．ら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、１２１、６８４〜９１（２０１０）；Ｔａｎｇ，Ｗら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７３、５５０６〜１３（１９９８））。
【００４４】
ＩＬ−１１は、ＴＧＦβ媒介性シグナル伝達の、重要な、転写後モジュレーターである。ＴＧＦβ１は、ＩＬ−１１の、ＡＰ−１プロモーター領域を刺激することが示されており、ＩＬ−１１の、ＴＧＦβ誘導性分泌は、腸の筋線維芽細胞内の、ＭＡＰキナーゼである、ＥＲＫｐ４２／４４およびｐ３８の活性化を誘導することが示されている（Ｂａｍｂａら、Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ  Ｌｉｖｅｒ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．（２００３）、２８５（３）：Ｇ５２９〜３８）。ＭＡＰキナーゼ阻害剤は、ＩＬ−１１の、ＴＧＦβ誘導性分泌を、著明に低減することが可能であり、ＭＡＰキナーゼであるｐ３８に媒介される、ｍＲＮＡの安定化は、ＩＬ−１１の、ＴＧＦβ誘導性分泌に、極めて重要であることが示されている。
【００４５】
ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達は、近年、多種多様な組織内の、線維症性過程において、鍵となる役割を果たすことが裏付けられている（例えば、それらのいずれもが、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１７／１０３１０８  Ａ１；およびＳｃｈａｆｅｒら、（２０１７）、Ｎａｔｕｒｅ、５５２：１１０〜１１５を参照されたい）。
【００４６】
ＷＯ２０１７／１０３１０８  Ａ１（参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる）は、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の、線維症促進性役割について報告し、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達に対するアンタゴニストの、線維症の処置／防止における、治療的有用性を確立する。ＷＯ２０１７／１０３１０８  Ａ１の、実施例２および図７Ａおよび７Ｂは、初代ヒト心房線維芽細胞の、組換えヒトＩＬ−１１を伴うインキュベーションが、十分に確立された線維症性過程である、線維芽細胞による、コラーゲンの沈着を増大させることを裏付ける。抗ＩＬ−１１中和抗体による処置は、ＴＧＦβ１による、線維芽細胞の刺激（公知の線維症促進性刺激である）により誘導される、コラーゲンの産生を失効化させることが示された（しかし、アイソタイプ対照抗体による処置では、これが示されなかった）。ＷＯ２０１７／１０３１０８  Ａ１の、実施例３および図１０は、抗ＩＬ−１１中和抗体が、ヒト心房線維芽細胞による、他の、多様な線維症促進性刺激（ＡＮＧ２、ＰＤＧＦ、ＥＴ−１）に応答する、コラーゲン産生の増大を失効化させる能力をさらに裏付ける。ＷＯ２０１７／１０３１０８  Ａ１の、実施例５．２および図２０Ａ〜２０Ｅは、心臓組織内の、ＩＬ−１１の、線維症促進性の役割を裏書きする、さらなるデータを提示する。ヒト心房線維芽細胞が、ヒトＩＬ−１１タンパク質による処理に応答して、細胞外マトリックス構成要素（コラーゲン、ペリオスチン）の産生の著明な増大、ならびに線維症促進性マーカー（αＳＭＡ、ＩＬ−６、ＭＭＰ２、ＴＩＭＰ１）の発現の増大を呈することが示された。これは、これらの因子の産生が、線維症促進性刺激である、ＴＧＦβ１による処理に応答して増大するのと同じである。ＷＯ２０１７／１０３１０８  Ａ１の、実施例５．３．１および図３８Ａ〜３８Ｄはまた、細胞外マトリックス構成要素の産生の増大、およびヒトＩＬ−１１による処理に応答する、ヒト初代肝線維芽細胞による、線維症マーカーの発現の増大も示し、また、抗ＩＬ−１１中和抗体が、ＴＧＦβ１による刺激の、線維症促進性効果を失効化させる能力も示す。ＷＯ２０１７／１０３１０８  Ａ１の、図２２Ａ〜２２Ｆおよび２３Ａおよび２３Ｂは、ＴＧＦβ１媒介性線維症が、抗ＩＬ−１１中和抗体を伴う処置により阻害されうることを示し、図２４は、ＩＬ−１１結合性デコイ受容体分子、抗ＩＬ−１１Ｒα中和抗体、ならびにＩＬ−１１およびＩＬ−１１ＲＡの遺伝子の発現の、アンチセンスノックダウンのための、ｓｉＲＮＡをコードするオリゴヌクレオチドも同様に、線維芽細胞の、筋線維芽細胞（線維症のエフェクター細胞）への、ＴＧＦβ１媒介性移行を阻害することが可能であることをさらに示す。デコイＩＬ−１１受容体を使用する、ＴＧＦβ１媒介性線維症性応答の阻害を示す、さらなるデータは、ＷＯ２０１７／１０３１０８  Ａ１の、図３２Ａおよび３２Ｂに提示されている。ＷＯ２０１７／１０３１０８  Ａ１の、実施例５．３．３および図２１Ｂおよび２１Ｃは、ＩＬ−１１が、様々な組織内で、線維症促進性であることを裏付ける、ｉｎ  ｖｉｖｏデータを提示する。マウスへの、組換えマウスＩＬ−１１の注射は、心臓、腎臓、肺、および肝臓の相対重量��増大を引き起こし（図２１Ｂ）、これは、これらの組織内の、コラーゲン含量の増大と関連した（図２１Ｃ）。ＩＬ−１１について、線維症促進性の役割を裏書きする、さらなるｉｎ  ｖｉｖｏデータは、ＷＯ２０１７／１０３１０８  Ａ１の、実施例７．２および７．３、ならびに図２７Ａ〜２７Ｄおよび図２８に提示されている。これらの実験は、ＩＬ−１１ＲＡノックアウトマウスが、線維症促進性刺激により誘導される、心臓組織および腎臓組織の線維症から保護されることを示すことから、線維症性過程の重要メディエーターとしての、ＩＬ−１１受容体を介するシグナル伝達を指し示す。なおさらに、ＷＯ２０１７／１０３１０８  Ａ１の図３１に対するキャプションにおいてまとめられた、図３１Ａおよび３１Ｂは、線維柱帯切除術の７日後において、野生型マウスから得られた眼切片では、ＩＬ−１１ＲＡノックアウトマウスより、多くの線維症が検出されることについて報告する。したがって、ＷＯ２０１７／１０３１０８  Ａ１は、ＩＬ−１１／ＩＬ−１１Ｒシグナル伝達が、広範な組織内で、線維症の、鍵となるメディエーターであり、線維症性応答についての様々なマーカーの解析により決定される通り、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の阻害は、線維症を軽減することを裏付けることを実証する、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ研究およびｉｎ  ｖｉｖｏ研究の両方からの、豊富なデータを提示する。
ＩＬ−１１Ｒαに結合することが可能な抗原結合性分子
本発明は、ＩＬ−１１Ｒαに結合することが可能な抗原結合性分子を提供する。
【００４７】
「抗原結合性分子」とは、標的抗原に結合することが可能な分子を指し、それらが、対象とする標的分子（複数可）への結合を呈する限りにおいて、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、単一特異性抗体および多特異性抗体（例えば、二特異性抗体）、ならびに抗体断片（例えば、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、ｓｃＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ２、ダイアボディー、トリアボディー、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、ミニボディー、単一ドメイン抗体（例えば、ＶｈＨ）など）を包含する。「抗体」により、本発明者らは、合成抗体および断片を含む、断片およびこの誘導体を含む。本明細書で使用される、抗体とは、対象とする標的分子（すなわち、抗体が特異的である抗原）に、特異的に結合することが可能なポリペプチドである。本発明に従う抗体および抗原結合性分子は、単離形態で提供されうる。
【００４８】
モノクローナル抗体技術と関連する、現代的技法の観点では、抗体は、大半の抗原に対して調製されうる。抗原結合性部分は、抗体の一部（例えば、Ｆａｂ断片）の場合もあり、合成抗体断片（例えば、単鎖Ｆｖ断片［ＳｃＦｖ］）の場合もある。選択された抗原に適するモノクローナル抗体は、公知の技法、例えば、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、Ｈ  Ｚｏｌａ（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、１９８８）；および「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、Ｊ  Ｇ  Ｒ  Ｈｕｒｒｅｌｌ（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、１９８２）において開示されている技法により調製されうる。キメラ抗体については、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら（１９８８、第８回国際バイオテクノロジーシンポジウム第２部、７９２〜７９９）により論じられている。
【００４９】
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、本発明の方法において有用であり、抗原上の、単一のエピトープを、特異的にターゲティングする、抗体の均質な集団である。
Ｆａｂ断片およびＦａｂ２断片など、抗体の抗原結合性断片もまた、遺伝子操作抗体および抗体断片として使用／提供されうる。抗体の可変重鎖（ＶＨ）ドメインおよび可変軽鎖（ＶＬ）ドメインは、初期のプロテアーゼ消化実験により、最初に認識された事実である、抗原認識に関与する。さらなる確認は、齧歯動物抗体の「ヒト化」により見出された。齧歯動物由来の可変ドメインは、結果として得られる抗体が、齧歯動物による親抗体の、抗原への特異性を保持するように、ヒト由来の定常ドメインへと融合されうる（Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｄ．ＵＳＡ、８１、６８５１〜６８５５）。
【００５０】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、完全ヒト抗体／抗体断片である。完全ヒト抗体／抗体断片は、ヒト核酸配列（複数可）によりコードされる。完全ヒト抗体／抗体断片は、非ヒトアミノ酸配列を欠く。
【００５１】
完全ヒト抗体を作製するために、最も一般に利用される、２つの技法は、（ｉ）ヒト抗体遺伝子が、ファージディスプレイライブラリー内で発現される、ファージディスプレイ、および（ｉｉ）ヒト抗体遺伝子を有するように操作された、トランスジェニックマウスにおける抗体の産生（ＰａｒｋおよびＳｍｏｌｅｎ、「Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」（２００１）、５６：３６９〜４２１において記載されている）である。略述すると、ヒト抗体遺伝子のファージディスプレイ法では、ＶＨ鎖およびＶＬ鎖をコードする遺伝子が、「ナイーブ」ヒトリンパ球からのＰＣＲ増幅およびクローニングにより作出され、それらが発現されるライブラリーへと、ジスルフィド連結されたＦａｂ断片または単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片としてとしてアセンブルされる。ＦａｂまたはｓｃＦｖをコードする遺伝子が、線維状バクテリオファージの表面コートタンパク質へと融合され、次いで、目的の標的に結合することが可能なＦａｂまたはｓｃＦｖが、抗原で、ライブラリーをスクリーニングすることにより同定される。Ｆａｂ／ｓｃＦｖ断片のアフィニティーを増強するのに、分子進化またはアフィニティー成熟の手順が利用されうる。トランスジェニックマウス法では、内因性のマウスＩｇ（ｌｇ）遺伝子の遺伝子座が、それらのヒト相同体による相同組換えで置きかえられたマウスが、抗原により免疫化され、完全ヒトモノクローナル抗体をもたらすように、従来のハイブリドーマ技術により、モノクローナル抗体が調製される。
【００５２】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、マウス抗体／抗体断片である。一部の実施形態では、抗体／抗体断片は、ヒトナイーブ抗体遺伝子ライブラリーを使用する、ファージディスプレイにより調製されうる。
【００５３】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、マウス／ヒトキメラ抗体／抗体断片（例えば、マウス可変ドメインおよびヒト定常領域を含む抗原結合性分子）である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ヒト化抗体／抗体断片（例えば、マウスＣＤＲと、ヒトのフレームワークおよび定常領域とを含む抗原結合性分子）である。
【００５４】
マウス／ヒトキメラ抗原結合性分子は、例えば、「Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」、Ｍｉｃｈａｅｌ  Ｓｔｅｉｎｉｔｚ（編）、「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」、１０６０、「Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ（２０１４）、同書の８章、特に、８章の３節において記載されている、キメラ化の工程により、マウスモノクローナル抗体から調製されうる。
【００５５】
ヒト化抗原結合性分子は、「Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」、Ｍｉｃｈａｅｌ  Ｓｔｅｉｎｉｔｚ（編）、「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」、１０６０、「Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ（２０１４）、同書の７章、特に、「抗体のヒト化」と題された、７章の３．１節において記載されている、ヒト化の工程により、マウス抗体から調製されうる。
【００５６】
本発明の抗原結合性分子は、標的抗原（複数可）に結合することが可能な部分を含む。一部の実施形態では、標的抗原に結合することが可能な部分は、標的抗原に特異的に結合することが可能な抗体の、抗体重鎖可変領域（ＶＨ）と、抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む。一部の実施形態では、標的抗原に結合することが可能な部分は、標的抗原に結合することが可能なアプタマー、例えば、核酸アプタマー（例えば、ＺｈｏｕおよびＲｏｓｓｉ、Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．、２０１７、１６（３）：１８１〜２０２において総説された）を含むか、またはこれからなる。一部の実施形態では、標的抗原に結合することが可能な部分は、抗原結合性ペプチド／ポリペプチド、例えば、ペプチドアプタマー、チオレドキシン、モノボディー、アンチカリン、Ｋｕｎｉｔｚドメイン、アビマー、ノッティン、フィノマー、アトリマー、ＤＡＲＰｉｎ、アフィボディー、ナノボディー（すなわち、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ））、アフィリン、アルマジロリピートタンパク質（ＡｒｍＲＰ）、ＯＢｏｄｙ、またはフィブロネクチン（例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Ｒｅｖｅｒｄａｔｔｏら、Ｃｕｒｒ  Ｔｏｐ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．、２０１５、１５（１２）：１０８２〜１１０１において総説された（例えば、Ｂｏｅｒｓｍａら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ（２０１１）、２８６：４１２７３〜８５；およびＥｍａｎｕｅｌら、Ｍａｂ（２０１１）、３：３８〜４８もまた参照されたい））を含むか、またはこれからなる。
【００５７】
本発明の抗原結合性分子は、一般に、標的抗原に特異的に結合することが可能な、抗体のＶＨおよびＶＬを含む、抗原結合性ドメインを含む。本明細書では、ＶＨおよびＶＬにより形成される抗原結合性ドメインはまた、Ｆｖ領域とも称される。
【００５８】
抗原結合性分子は、抗原結合性ポリペプチド、または抗原結合性ポリペプチド複合体でありうるか、またはこれを含みうる。抗原結合性分子は、併せて、抗原結合性ドメインを形成する、１つを超えるポリペプチドを含みうる。ポリペプチドは、共有結合的に会合する場合もあり、非共有結合的に会合する場合もある。一部の実施形態では、ポリペプチドは、ポリペプチドを含むより大型ポリペプチドの一部を形成する（例えば、ＶＨおよびＶＬを含むｓｃＦｖの場合、またはＶＨ−ＣＨ１およびＶＬ−ＣＬを含むｓｃＦａｂの場合において）。
【００５９】
抗原結合性分子は、１つを超えるポリペプチド（例えば、２つ、３つ、４つ、６つ、または８つのポリペプチド）、例えば、２つの重鎖ポリペプチドと、２つの軽鎖ポリペプチドとを含む、ＩｇＧ様抗原結合性分子の、非共有結合的または共有結合的複合体を指す場合がある。
【００６０】
本発明の抗原結合性分子は、ＩＬ−１１Ｒαに結合することが可能な、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の配列を使用して、デザインおよび調製されうる。単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、およびＦ（ａｂ’）２断片など、抗体の抗原結合性領域もまた、使用されうる／もたらされうる。「抗原結合性領域」とは、所与の抗体が特異的である標的に結合することが可能な抗体の、任意の断片である。
【００６１】
抗体は、一般に、重鎖可変（ＶＨ）領域内の３つ：ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、およびＨＣ−ＣＤＲ３、ならびに軽鎖可変（ＶＬ）領域内の３つ：ＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、およびＬＣ−ＣＤＲ３である、６つの相補性決定領域であるＣＤＲを含む。６つのＣＤＲは、併せて、標的抗原に結合する、抗体の部分である、抗体のパラトープを規定する。
【００６２】
ＶＨ領域およびＶＬ領域は、各ＣＤＲのいずれの側にも、ＣＤＲのための足場をもたらす、フレームワーク領域（ＦＲ）を含む。Ｎ末端から、Ｃ末端へと、ＶＨ領域は、以下の構造：Ｎ末端−［ＨＣ−ＦＲ１］−［ＨＣ−ＣＤＲ１］−［ＨＣ−ＦＲ２］−［ＨＣ−ＣＤＲ２］−［ＨＣ−ＦＲ３］−［ＨＣ−ＣＤＲ３］−［ＨＣ−ＦＲ４］−Ｃ末端を含み、ＶＬ領域は、以下の構造：Ｎ末端−［ＬＣ−ＦＲ１］−［ＬＣ−ＣＤＲ１］−［ＬＣ−ＦＲ２］−［ＬＣ−ＣＤＲ２］−［ＬＣ−ＦＲ３］−［ＬＣ−ＣＤＲ３］−［ＬＣ−ＦＲ４］−Ｃ末端を含む。
【００６３】
Ｋａｂａｔら、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（１９９１）；Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６：９０１〜９１７（１９８７）において記載された慣例、ならびにＲｅｔｔｅｒら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、（２００５）、３３（増刊１号）：Ｄ６７１〜Ｄ６７４において記載されたＶＢＡＳＥ２など、抗体のＣＤＲおよびＦＲを規定するための、いくつかの異なる慣例が存在する。本明細書で記載される抗体クローンの、ＶＨ領域およびＶＬ領域のＣＤＲおよびＦＲは、Ｋａｂａｔシステムに従い規定された。
【００６４】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＩＬ−１１Ｒαに結合することが可能な抗原結合性分子のＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＩＬ−１１Ｒαに結合することが可能な抗原結合性分子のＦＲを含む。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＩＬ−１１Ｒαに結合することが可能な抗原結合性分子のＣＤＲおよびＦＲを含む。すなわち、一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＩＬ−１１Ｒαに結合することが可能な抗原結合性分子のＶＨ領域およびＶＬ領域を含む。
【００６５】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、本明細書で記載されるＩＬ−１１Ｒα結合性抗体クローン（例えば、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体クローンである、ＢＳＯ−９Ａ７（９Ａ７  ＶＨ、９Ａ７  ＶＨ  １、９Ａ７  ＶＨ  ２、９Ａ７  ＶＨ  ３、９Ａ７  ＶＨ  ４または９Ａ７  ＶＨ  ５および９Ａ７  ＶＬ、９Ａ７  ＶＬ  １、９Ａ７  ＶＬ  ２、９Ａ７  ＶＬ  ３または９Ａ７  ＶＬ  ４を含む））のＶＨ／ＶＬ領域であるか、またはこれらに由来する、ＶＨ領域およびＶＬ領域を含む。
【００６６】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号１３、１４、１５、１６、または１７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含み、この場合、９１位に対応する位置は、アルギニンではなく、かつ／または１０５位に対応する位置は、メチオニンではない。
【００６７】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号１３、１４、１５、１６、または１７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含み、この場合、９１位に対応する位置は、セリンであり、かつ／または１０５位に対応する位置は、ロイシンまたはイソロイシンである。
【００６８】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号５９のアミノ酸配列に対する、１００％未満の配列同一性を有するＶＬ領域を含む。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号５９のアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなるＶＬ領域を含まない。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号５９のアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなるペプチド／ポリペプチドを含まない。
【００６９】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号６０のアミノ酸配列に対する、１００％未満の配列同一性を有するＬＣ−ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号６０のアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなるＬＣ−ＣＤＲ３を含まない。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、配列番号６０のアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなるペプチド／ポリペプチドを含まない。
【００７０】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、下記の（１）〜（３）のうちの１つに従うＶＨ領域を含む。
（１）（９Ａ７  ＶＨ、９Ａ７  ＶＨ  １、９Ａ７  ＶＨ  ２、９Ａ７  ＶＨ  ３、９Ａ７  ＶＨ  ４、９Ａ７  ＶＨ  ５）以下のＣＤＲ：
配列番号１８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号５２のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３、
またはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、もしくはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数における、１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＨ領域。
【００７１】
（２）（９Ａ７  ＶＨ、９Ａ７  ＶＨ  １、９Ａ７  ＶＨ  ２、９Ａ７  ＶＨ  ３、９Ａ７  ＶＨ  ４）以下のＣＤＲ：
配列番号１８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１９のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３、
またはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、もしくはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数における、１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＨ領域。
【００７２】
（３）（９Ａ７  ＶＨ  ５）以下のＣＤＲ：
配列番号１８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号２０のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３、
またはＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、もしくはＨＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数における、１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＨ領域。
【００７３】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、下記の（４）〜（９）のうちの１つに従うＶＨ領域を含む。
（４）（９Ａ７  ＶＨ）以下のＦＲ：
配列番号２５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ１
配列番号２９のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ２
配列番号３３のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ３
配列番号３７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ４、
またはＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３、もしくはＨＣ−ＦＲ４のうちの１つもしくは複数における、１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＨ領域。
【００７４】
（５）（９Ａ７  ＶＨ  １）以下のＦＲ：
配列番号２６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ１
配列番号３０のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ２
配列番号３４のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ３
配列番号３８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ４、
またはＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３、もしくはＨＣ−ＦＲ４のうちの１つもしくは複数における、１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＨ領域。
【００７５】
（６）（９Ａ７  ＶＨ  ２）以下のＦＲ：
配列番号２７のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ１
配列番号３０のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ２
配列番号３５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ３
配列番号３８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ４、
またはＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３、もしくはＨＣ−ＦＲ４のうちの１つもしくは複数における、１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＨ領域。
【００７６】
（７）（９Ａ７  ＶＨ  ３）以下のＦＲ：
配列番号２８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ１
配列番号３１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ２
配列番号３５のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ３
配列番号３８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ４、
またはＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３、もしくはＨＣ−ＦＲ４のうちの１つもしくは複数における、１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＨ領域。
【００７７】
（８）（９Ａ７  ＶＨ  ４）以下のＦＲ：
配列番号２８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ１
配列番号３１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ２
配列番号３６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ３
配列番号３８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ４、
またはＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３、もしくはＨＣ−ＦＲ４のうちの１つもしくは複数における、１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＨ領域。
【００７８】
（９）（９Ａ７  ＶＨ  ５）以下のＦＲ：
配列番号２８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ１
配列番号３２のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ２
配列番号３６のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ３
配列番号３８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＦＲ４、
またはＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３、もしくはＨＣ−ＦＲ４のうちの１つもしくは複数における、１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＨ領域。
【００７９】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、上記の（１）〜（３）のうちの１つに従うＣＤＲと、上記の（４）〜（９）のうちの１つに従うＦＲとを含むＶＨ領域を含む。
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、下記の（１０）〜（１５）のうちの１つに従うＶＨ領域を含む。
【００８０】
（１０）（９Ａ７  ＶＨ）（２）に従うＣＤＲと、（４）に従うＦＲとを含むＶＨ領域。
（１１）（９Ａ７  ＶＨ  １）（２）に従うＣＤＲと、（５）に従うＦＲとを含むＶＨ領域。
【００８１】
（１２）（９Ａ７  ＶＨ  ２）（２）に従うＣＤＲと、（６）に従うＦＲとを含むＶＨ領域。
（１３）（９Ａ７  ＶＨ  ３）（２）に従うＣＤＲと、（７）に従うＦＲとを含むＶＨ領域。
【００８２】
（１４）（９Ａ７  ＶＨ  ４）（２）に従うＣＤＲと、（８）に従うＦＲとを含むＶＨ領域。
（１５）（９Ａ７  ＶＨ  ５）（３）に従うＣＤＲと、（９）に従うＦＲとを含むＶＨ領域。
【００８３】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、下記の（１６）〜（２１）のうちの１つに従うＶＨ領域を含む。
（１６）（９Ａ７  ＶＨ）配列番号７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
【００８４】
（１７）（９Ａ７  ＶＨ  １）配列番号８のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
【００８５】
（１８）（９Ａ７  ＶＨ  ２）配列番号９のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
【００８６】
（１９）（９Ａ７  ＶＨ  ３）配列番号１０のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
【００８７】
（２０）（９Ａ７  ＶＨ  ４）配列番号１１のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
【００８８】
（２１）（９Ａ７  ＶＨ  ５）配列番号１２のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域。
【００８９】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、下記の（２２）に従うＶＬ領域を含む。
（２２）（９Ａ７  ＶＬ、９Ａ７  ＶＬ  １、９Ａ７  ＶＬ  ２、９Ａ７  ＶＬ  ３、９Ａ７  ＶＬ  ４）以下のＣＤＲ：
配列番号２２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号２３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号２４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３、
またはＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、もしくはＬＣ−ＣＤＲ３のうちの１つもしくは複数における、１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＬ領域。
【００９０】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、下記の（２３）〜（２７）のうちの１つに従うＶＬ領域を含む。
（２３）（９Ａ７  ＶＬ）以下のＦＲ：
配列番号３９のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ１
配列番号４１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ２
配列番号４５のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ３
配列番号５０のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ４、
またはＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３、もしくはＬＣ−ＦＲ４のうちの１つもしくは複数における、１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＬ領域。
【００９１】
（２４）（９Ａ７  ＶＬ  １）以下のＦＲ：
配列番号４０のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ１
配列番号４２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ２
配列番号４６のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ３
配列番号５１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ４、
またはＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３、もしくはＬＣ−ＦＲ４のうちの１つもしくは複数における、１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＬ領域。
【００９２】
（２５）（９Ａ７  ＶＬ  ２）以下のＦＲ：
配列番号４０のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ１
配列番号４３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ２
配列番号４７のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ３
配列番号５１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ４、
またはＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３、もしくはＬＣ−ＦＲ４のうちの１つもしくは複数における、１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＬ領域。
【００９３】
（２６）（９Ａ７  ＶＬ  ３）以下のＦＲ：
配列番号４０のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ１
配列番号４４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ２
配列番号４８のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ３
配列番号５１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ４、
またはＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３、もしくはＬＣ−ＦＲ４のうちの１つもしくは複数における、１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＬ領域。
【００９４】
（２７）（９Ａ７  ＶＬ  ４）以下のＦＲ：
配列番号４０のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ１
配列番号４４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ２
配列番号４９のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ３
配列番号５１のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＦＲ４、
またはＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３、もしくはＬＣ−ＦＲ４のうちの１つもしくは複数における、１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が、別のアミノ酸で置換された、これらの変異体を組み込んだＶＬ領域。
【００９５】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、上記の（２２）に従うＣＤＲと、上記の（２３）〜（２７）のうちの１つに従うＦＲとを含むＶＬ領域を含む。
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、下記の（２８）〜（３２）のうちの１つに従うＶＬ領域を含む。
【００９６】
（２８）（９Ａ７  ＶＬ）（２２）に従うＣＤＲと、（２３）に従うＦＲとを含むＶＬ領域。
（２９）（９Ａ７  ＶＬ  １）（２２）に従うＣＤＲと、（２４）に従うＦＲとを含むＶＬ領域。
【００９７】
（３０）（９Ａ７  ＶＬ  ２）（２２）に従うＣＤＲと、（２５）に従うＦＲとを含むＶＬ領域。
（３１）（９Ａ７  ＶＬ  ３）（２２）に従うＣＤＲと、（２６）に従うＦＲとを含むＶＬ領域。
【００９８】
（３２）（９Ａ７  ＶＬ  ４）（２２）に従うＣＤＲと、（２７）に従うＦＲとを含むＶＬ領域。
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、下記の（３３）〜（３７）のうちの１つに従うＶＬ領域を含む。
【００９９】
（３３）（９Ａ７  ＶＬ）配列番号１３のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域。
【０１００】
（３４）  （９Ａ７  ＶＬ  １）配列番号１４のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域。
【０１０１】
（３５）  （９Ａ７  ＶＬ  ２）配列番号１５のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域。
【０１０２】
（３６）  （９Ａ７  ＶＬ  ３）配列番号１６のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域。
【０１０３】
（３７）  （９Ａ７  ＶＬ  ４）配列番号１７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性、より好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域。
【０１０４】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、上記の（１）〜（２１）のうちのいずれか１つに従うＶＨ領域と、上記の（２２）〜（３７）のうちのいずれか１つに従うＶＬ領域とを含む。
【０１０５】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、（１０）または（１６）に従うＶＨ領域と、（２８）または（３３）に従うＶＬ領域とを含む。
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、（１４）または（２０）に従うＶＨ領域と、（３２）または（３７）に従うＶＬ領域とを含む。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、（１４）に従うＶＨ領域と、（３２）に従うＶＬ領域とを含む。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、（２０）に従うＶＨ領域と、（３７）に従うＶＬ領域とを含む。
【０１０６】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、（１３）または（１９）に従うＶＨ領域と、（３０）または（３５）に従うＶＬ領域とを含む。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、（１３）または（１９）に従うＶＨ領域と、（３１）または（３６）に従うＶＬ領域とを含む。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、（１３）または（１９）に従うＶＨ領域と、（３２）または（３７）に従うＶＬ領域とを含む。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、（１４）または（２０）に従うＶＨ領域と、（３０）または（３５）に従うＶＬ領域とを含む。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、（１４）または（２０）に従うＶＨ領域と、（３１）または（３６）に従うＶＬ領域とを含む。
【０１０７】
１つまたは複数のアミノ酸が、別のアミノ酸で置換される、本発明に従う実施形態では、置換は、例えば、以下の表に従う、保存的置換でありうる。一部の実施形態では、中欄の同じブロック内のアミノ酸が置換される。一部の実施形態では、最も右の欄の同じ連なりのアミノ酸が置換される。
【０１０８】
【表１】
2021527086.tif 000003
【０１０９】
一部の実施形態では、置換（複数可）は、機能的に保存的でありうる。すなわち、一部の実施形態では、置換は、同等の非置換分子と比較して置換を含む抗原結合性分子の、１つまたは複数の機能的特性（例えば、標的への結合）に影響を及ぼさない場合がある（またはこれに実質的に影響を及ぼさない場合がある）。
【０１１０】
一部の実施形態では、参照のＶＨ配列またはＶＬ配列と比べた置換（複数可）は、ＶＨ配列またはＶＬ配列の、特定の１つの領域内または複数の領域内に焦点が当てられる場合がある。例えば、参照のＶＨ配列またはＶＬ配列からの変異は、フレームワーク領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、および／またはＦＲ４）のうちの１つまたは複数に焦点が当てられる場合がある。
【０１１１】
抗体の抗原結合性領域の、ＶＨおよびＶＬ領域は、併せて、Ｆｖ領域を構成する。一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、ＩＬ−１１Ｒαに結合するＦｖ領域を含むか、またはこれらからなる。一部の実施形態では、ＦｖのＶＨおよびＶＬ領域は、リンカー領域により接合された、単一のポリペプチド、すなわち、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として提供される。
【０１１２】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、免疫グロブリンの重鎖定常配列の、１つまたは複数の領域を含む。一部の実施形態では、免疫グロブリンの重鎖定常配列は、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、またはＩｇＭの重鎖定常配列であるか、またはこれらに由来する。
【０１１３】
一部の実施形態では、免疫グロブリンの重鎖定常配列は、ヒト免疫グロブリンＧ１定常配列（ＩＧＨＧ１；ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ０１８５７−１、ｖ１；配列番号５３）である。配列番号５３の１〜９８位は、ＣＨ１領域（配列番号５４）を形成する。配列番号５３の９９〜１１０位は、ＣＨ１とＣＨ２領域との間のヒンジ領域（配列番号５５）を形成する。配列番号５３の１１１〜２２３位は、ＣＨ２領域（配列番号５６）を形成する。配列番号５３の２２４〜３３０位は、ＣＨ３領域（配列番号５７）を形成する。
【０１１４】
一部の実施形態では、ＣＨ１領域は、配列番号５４の配列、または配列番号５４のアミノ酸配列に対する、少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有する配列を含むか、またはこれらからなる。一部の実施形態では、ＣＨ１−ＣＨ２ヒンジ領域は、配列番号５５の配列、または配列番号５５のアミノ酸配列に対する、少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有する配列を含むか、またはこれらからなる。一部の実施形態では、ＣＨ２領域は、配列番号５６の配列、または配列番号５６のアミノ酸配列に対する、少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有する配列を含むか、またはこれらからなる。一部の実施形態では、ＣＨ３領域は、配列番号５７の配列、または配列番号５７のアミノ酸配列に対する、少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有する配列を含むか、またはこれらからなる。
【０１１５】
一部の実施形態では、免疫グロブリン重鎖定常配列は、ヒト免疫グロブリンＧ４定常配列（ＩＧＨＧ４；ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ０１８６１、ｖ１；配列番号６１）である。配列番号６１の１〜９８位は、ＣＨ１領域（配列番号６２）を形成する。配列番号６１の９９〜１１０位は、ＣＨ１領域とＣＨ２領域の間のヒンジ領域（配列番号６３）を形成する。配列番号６１の１１１〜２２０位は、ＣＨ２領域（配列番号６４）を形成する。配列番号６１の２２１〜３２７位は、ＣＨ３領域（配列番号６５）を形成する。
【０１１６】
一部の実施形態では、ＣＨ１領域は、配列番号６２の配列、または配列番号６２のアミノ酸配列に対する、少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有する配列を含むか、またはこれらからなる。一部の実施形態では、ＣＨ１−ＣＨ２ヒンジ領域は、配列番号６３の配列、または配列番号６３のアミノ酸配列に対する、少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有する配列を含むか、またはこれらからなる。一部の実施形態では、ＣＨ２領域は、配列番号６４の配列、または配列番号６４のアミノ酸配列に対する、少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有する配列を含むか、またはこれらからなる。一部の実施形態では、ＣＨ３領域は、配列番号６５の配列、または配列番号６５のアミノ酸配列に対する、少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有する配列を含むか、またはこれらからなる。
【０１１７】
一部の実施形態では、免疫グロブリン重鎖定常配列は、本発明の抗原結合性分子に対して、改善された特性を付与するアミノ酸置換を含む、ヒト免疫グロブリンＧ４定常配列（ＩＧＨＧ４；ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ０１８６１、ｖ１）である。一部の実施形態では、免疫グロブリン重鎖定常配列は、置換である、Ｓ２４１Ｐおよび／またはＬ２４８Ｅを含む、ヒトＩｇＧ４である。Ｓ２４１Ｐ突然変異が、ヒンジ安定化性突然変異であるのに対し、Ｌ２４８Ｅ突然変異は、ＩｇＧ４の、既に低度のＡＤＣＣエフェクター機能をさらに低減する（ＤａｖｉｅｓおよびＳｕｔｔｏｎ、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ．、２０１５年１１月、２６８（１）：１３９〜１５９；Ａｎｇａｌら、Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９３年１月；３０（１）：１０５〜８）。低度のＡＤＣＣ活性は、抗体の、潜在的な皮下投与に有利である。
【０１１８】
一部の実施形態では、免疫グロブリン重鎖定常配列は、配列番号６６に記載される置換である、Ｓ２４１Ｐ（Ｋａｂａｔシステムに従い番号付けされた）を含む、ヒト免疫グロブリンＧ４定常配列（ＩＧＨＧ４；ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ０１８６１、ｖ１）である。配列番号６６の１〜９８位は、ＣＨ１領域（配列番号６２）を形成する。配列番号６６の９９〜１１０位は、Ｓ２４１Ｐ置換を含む、ＣＨ１領域とＣＨ２領域の間のヒンジ領域（配列番号６７）を形成する。配列番号６６の１１１〜２２０位は、ＣＨ２領域（配列番号６４）を形成する。配列番号６６の２２１〜３２７位は、ＣＨ３領域（配列番号６５）を形成する。
【０１１９】
一部の実施形態では、ＣＨ１領域は、配列番号６２の配列、または配列番号６２のアミノ酸配列に対する、少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有する配列を含むか、またはこれらからなる。一部の実施形態では、ＣＨ１−ＣＨ２ヒンジ領域は、配列番号６７の配列、または配列番号６７のアミノ酸配列に対する、少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有する配列を含むか、またはこれらからなる。一部の実施形態では、ＣＨ２領域は、配列番号６４の配列、または配列番号６４のアミノ酸配列に対する、少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有する配列を含むか、またはこれらからなる。一部の実施形態では、ＣＨ３領域は、配列番号６５の配列、または配列番号６５のアミノ酸配列に対する、少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有する配列を含むか、またはこれらからなる。
【０１２０】
一部の実施形態では、免疫グロブリン重鎖定常配列は、配列番号６８に記載される置換である、Ｓ２４１ＰおよびＬ２４８Ｅ（Ｋａｂａｔシステムに従い番号付けされた）を含む、ヒト免疫グロブリンＧ４定常配列（ＩＧＨＧ４；ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ０１８６１、ｖ１）である。配列番号６８の１〜９８位は、ＣＨ１領域（配列番号６２）を形成する。配列番号６８の９９〜１１０位は、Ｓ２４１Ｐ置換を含む、ＣＨ１領域とＣＨ２領域の間のヒンジ領域（配列番号６７）を形成する。配列番号６８の１１１〜２２０位は、Ｌ２４８Ｅ置換を含む、ＣＨ２領域（配列番号６９）を形成する。配列番号６８の２２１〜３２７位は、ＣＨ３領域（配列番号６５）を形成する。
【０１２１】
一部の実施形態では、ＣＨ１領域は、配列番号６２の配列、または配列番号６２のアミノ酸配列に対する、少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有する配列を含むか、またはこれらからなる。一部の実施形態では、ＣＨ１−ＣＨ２ヒンジ領域は、配列番号６７の配列、または配列番号６７のアミノ酸配列に対する、少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有する配列を含むか、またはこれらからなる。一部の実施形態では、ＣＨ２領域は、配列番号６９の配列、または配列番号６９のアミノ酸配列に対する、少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有する配列を含むか、またはこれらからなる。一部の実施形態では、ＣＨ３領域は、配列番号６５の配列、または配列番号６５のアミノ酸配列に対する、少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有する配列を含むか、またはこれらからなる。
【０１２２】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、免疫グロブリンの軽鎖定常配列の、１つまたは複数の領域を含む。一部の実施形態では、免疫グロブリンの軽鎖定常配列は、ヒト免疫グロブリンカッパ定常配列（ＩＧＫＣ；Ｃκ；ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ０１８３４−１、ｖ２；配列番号５８）である。一部の実施形態では、免疫グロブリン軽鎖定常配列は、ヒト免疫グロブリンラムダ定常配列（ＩＧＬＣ；Ｃλ）、例えば、ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６、またはＩＧＬＣ７（配列番号７５、７６、７７、７８、または７９）である。一部の実施形態では、ＣＬ領域は、配列番号５８の配列、または配列番号５８のアミノ酸配列に対する、少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有する配列を含むか、またはこれらからなる。一部の実施形態では、ＣＬ領域は、配列番号７５、７６、７７、７８、もしくは７９の配列、または配列番号７５、７６、７７、７８、もしくは７９のアミノ酸配列に対する、少なくとも６０％、好ましくは、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有する配列を含むか、またはこれらからなる。
【０１２３】
抗体の抗原結合性領域の、ＶＬおよび軽鎖定常（ＣＬ）領域、ならびにＶＨ領域および重鎖定常１（ＣＨ１）領域は、併せて、Ｆａｂ領域を構成する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＶＨ、ＣＨ１、ＶＬ、ＣＬ（例えば、ＣκまたはＣλ）を含むＦａｂ領域を含む。一部の実施形態では、Ｆａｂ領域は、ＶＨとＣＨ１とを含むポリペプチド（例えば、ＶＨ−ＣＨ１融合ポリペプチド）、およびＶＬとＣＬとを含むポリペプチド（例えば、ＶＬ−ＣＬ融合ポリペプチド）を含む。一部の実施形態では、Ｆａｂ領域は、ＶＨとＣＬとを含むポリペプチド（例えば、ＶＨ−ＣＬ融合ポリペプチド）、およびＶＬとＣＨとを含むポリペプチド（例えば、ＶＬ−ＣＨ１融合ポリペプチド）を含む；すなわち、一部の実施形態では、Ｆａｂ領域は、ＣｒｏｓｓＦａｂ領域である。一部の実施形態では、ＦａｂまたはＣｒｏｓｓＦａｂの、ＶＨ、ＣＨ１、ＶＬ、およびＣＬ領域は、リンカー領域により接合された、単一のポリペプチド、すなわち、単鎖Ｆａｂ（ｓｃＦａｂ）または単鎖ＣｒｏｓｓＦａｂ（ｓｃＣｒｏｓｓＦａｂ）として提供される。
【０１２４】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、ＩＬ−１１Ｒαに結合するＦａｂ領域を含むか、またはこれらからなる。
一部の実施形態では、本明細書で記載される抗原結合性分子は、ＩＬ−１１Ｒαに結合する全抗体を含むか、またはこれらからなる。本明細書で使用される、「全抗体」とは、免疫グロブリン（Ｉｇ）の構造と、実質的に同様の構造を有する抗体を指す。異なる種類の免疫グロブリン、およびそれらの構造については、例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、ＳｃｈｒｏｅｄｅｒおよびＣａｖａｃｉｎｉ、Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１０）、１２５（２０２）：Ｓ４１〜Ｓ５２において記載されている。
【０１２５】
Ｇ型の免疫グロブリン（すなわち、ＩｇＧ）は、２つの重鎖と、２つの軽鎖とを含む、約１５０ｋＤａの糖タンパク質である。Ｎ末端から、Ｃ末端へと、重鎖は、ＶＨに続き、３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３）を含む、重鎖定常領域を含み、同様に、軽鎖は、ＶＬに続き、ＣＬを含む。重鎖に応じて、免疫グロブリンは、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、またはＩｇＭと分類されうる。軽鎖は、カッパ（κ）鎖の場合もあり、ラムダ（λ）鎖の場合もある。
【０１２６】
一部の実施形態では、本明細書で記載される抗原結合性分子は、ＩＬ−１１Ｒαに結合するＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、またはＩｇＭを含むか、またはこれらからなる。
【０１２７】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、ＩＬ−１１Ｒαに対して、少なくとも一価の結合性分子である。結合価とは、所与の抗原決定基についての、抗原結合性分子内の結合性部位の数を指す。したがって、一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＩＬ−１１Ｒαに対する、少なくとも１つの結合性部位を含む。
【０１２８】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＩＬ−１１Ｒαに対する、１つを超える結合性部位、例えば、２つ、３つ、または４つの結合性部位を含む。結合性部位は、同じ場合もあり、異なる場合もある。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＩＬ−１１Ｒαに対して、例えば、二価、三価、または四価である。
【０１２９】
本発明の態様は、多特異性の抗原結合性分子に関する。「多特異性」とは、抗原結合性分子が、１つを超える標的への特異的結合をもたらすことを意味する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、二特異性の抗原結合性分子である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、少なくとも２つの、異なる抗原結合性ドメイン（すなわち、例えば、同一でないＶＨおよびＶＬを含む、少なくとも２つの抗原結合性ドメイン）を含む。
【０１３０】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＩＬ−１１Ｒα、および別の標的（例えば、ＩＬ−１１Ｒα以外の抗原）に結合するので、少なくとも二特異性である。「二特異性」という用語は、抗原結合性分子が、少なくとも２つの、別個の抗原決定基に特異的に結合することが可能であることを意味する。
【０１３１】
本発明に従う抗原結合性分子（例えば、多特異性抗原結合性分子）は、抗原結合性分子が特異的である標的に結合することが可能な抗原結合性分子を含みうることが理解されるであろう。例えば、ＩＬ−１１ＲαおよびＩＬ−１１Ｒα以外の抗原に結合することが可能な抗原結合性分子は、（ｉ）ＩＬ−１１Ｒαに結合することが可能な抗原結合性分子、および（ｉｉ）ＩＬ−１１Ｒα以外の抗原に結合することが可能な抗原結合性分子を含みうる。
【０１３２】
また、本発明に従う抗原結合性分子（例えば、多特異性抗原結合性分子）は、抗原結合性分子が特異的である標的に結合することが可能な、抗原結合性ポリペプチド、または抗原結合性ポリペプチド複合体を含みうることも理解されるであろう。例えば、本発明に従う抗原結合性分子は、例えば、（ｉ）ＩＬ−１１Ｒαに結合することが可能な、抗原結合性ポリペプチド複合体であって、軽鎖ポリペプチド（構造ＶＬ−ＣＬを含む）と、重鎖ポリペプチド（構造ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３を含む）とを含む複合体、および（ｉｉ）ＩＬ−１１Ｒα以外の抗原に結合することが可能な、抗原結合性ポリペプチド複合体であって、軽鎖ポリペプチド（構造ＶＬ−ＣＬを含む）と、重鎖ポリペプチド（構造ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３を含む）とを含む複合体を含みうる。
【０１３３】
一部の実施形態では、より大型の抗原結合性分子（例えば、多特異性抗原結合性分子）の、構成要素である抗原結合性分子は、より大型の抗原結合性分子の、例えば、「抗原結合性ドメイン」または「抗原結合性領域」と称されうる。
【０１３４】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＩＬ−１１Ｒαに結合することが可能な抗原結合性分子と、ＩＬ−１１Ｒα以外の抗原に結合することが可能な抗原結合性分子とを含む。一部の実施形態では、ＩＬ−１１Ｒα以外の抗原は、免疫細胞の表面分子である。一部の実施形態では、ＩＬ−１１Ｒα以外の抗原は、がん細胞抗原である。一部の実施形態では、ＩＬ−１１Ｒα以外の抗原は、受容体分子、例えば、細胞表面受容体である。一部の実施形態では、ＩＬ−１１Ｒα以外の抗原は、細胞シグナル伝達分子、例えば、サイトカイン、ケモカイン、インターフェロン、インターロイキン、またはリンホカインである。一部の実施形態では、ＩＬ−１１Ｒα以外の抗原は、増殖因子またはホルモンである。
【０１３５】
がん細胞抗原とは、がん細胞により発現または過剰発現される抗原である。がん細胞抗原は、任意のペプチド／ポリペプチド、糖タンパク質、リポタンパク質、グリカン、糖脂質、脂質、またはこれらの断片でありうる。がん細胞抗原の発現は、がんと関連しうる。がん細胞抗原は、がん細胞により、異常に発現される場合もあり（例えば、がん細胞抗原は、異常な局在化を伴って発現されうる）、がん細胞による、異常な構造を伴って発現される場合もある。がん細胞抗原は、免疫応答を誘発することが可能でありうる。一部の実施形態では、抗原は、がん細胞の細胞表面において発現される（すなわち、がん細胞抗原は、がん細胞表面抗原である）。一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子が結合する、抗原の部分は、がん細胞の外部表面上に呈示される（すなわち、細胞外にある）。がん細胞抗原は、がん関連抗原でありうる。一部の実施形態では、がん細胞抗原は、その発現が、がんの発症、進行、または症状の重症度と関連する抗原である。がん関連抗原は、がんの原因または病理と関連する場合もあり、がんの帰結として、異常に発現される場合もある。一部の実施形態では、がん細胞抗原は、その発現が、がんの細胞により、例えば、同等の非がん性細胞（例えば、同じ組織／細胞型に由来する、非がん性細胞）による発現レベルと比較して、上方調節される（例えば、ＲＮＡレベルおよび／またはタンパク質レベルで）抗原である。一部の実施形態では、がん関連抗原は、がん性細胞により、優先的に発現され、同等な非がん性細胞（例えば、同じ組織／細胞型に由来する、非がん性細胞）により発現されない場合がある。一部の実施形態では、がん関連抗原は、突然変異したがん遺伝子、または突然変異した腫瘍サプレッサー遺伝子の産物でありうる。一部の実施形態では、がん関連抗原は、過剰発現された細胞内タンパク質の産物の場合もあり、発がん性ウイルス、がん胎児抗原、または細胞表面糖脂質もしくは糖タンパク質により産生されたがん抗原の場合もある。
【０１３６】
免疫細胞の表面分子は、免疫細胞の細胞表面、または細胞表面上において発現される、任意のペプチド／ポリペプチド、糖タンパク質、リポタンパク質、グリカン、糖脂質、脂質、またはこれらの断片でありうる。一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子が結合する、免疫細胞の表面分子の部分は、免疫細胞の外部表面上にある（すなわち、細胞外にある）。免疫細胞の表面分子は、任意の免疫細胞の細胞表面において発現されうる。一部の実施形態では、免疫細胞は、造血細胞由来の細胞、例えば、好中球、好酸球、好塩基球、樹状細胞、リンパ球、または単球でありうる。リンパ球は、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、もしくは自然リンパ球細胞（ＩＬＣ）、またはこれらの前駆細胞（例えば、胸腺細胞またはプレＢ細胞）でありうる。一部の実施形態では、免疫細胞の表面分子は、共刺激分子（例えば、ＣＤ２８、ＯＸ４０、４−１ＢＢ、ＩＣＯＳ、またはＣＤ２７）またはこれらのリガンドでありうる。一部の実施形態では、免疫細胞の表面分子は、チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、ＴＩＧＩＴ、またはＢＴＬＡ）またはこれらのリガンドでありうる。
【０１３７】
本発明に従う、多特異性抗原結合性分子は、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、ＢｒｉｎｋｍａｎｎおよびＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ、ＭＡｂｓ（２０１７）、９（２）：１８２〜２１２において記載されたフォーマットなど、任意の適切なフォーマットで提供されうる。適切なフォーマットは、ＢｒｉｎｋｍａｎｎおよびＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ、ＭＡｂｓ（２０１７）、９（２）：１８２〜２１２の図２に示されたフォーマット：抗体コンジュゲート、例えば、ＩｇＧ２、Ｆ（ａｂ’）２、またはＣｏｖＸ−Ｂｏｄｙ；ＩｇＧまたはＩｇＧ様分子、例えば、ＩｇＧ、キメラＩｇＧ、κλ−ｂｏｄｙの共通ＨＣ；ＣＨ１／ＣＬ融合タンパク質、例えば、ｓｃＦｖ２−ＣＨ１／ＣＬ、ＶＨＨ２−ＣＨ１／ＣＬ；「可変ドメインだけの」二特異性抗原結合性分子、例えば、タンデムｓｃＦｖ（ｔａＦＶ）、トリプルボディー、ダイアボディー（Ｄｂ）、ｄｓＤｂ、Ｄｂ（ｋｉｈ）、ＤＡＲＴ、ｓｃＤＢ、ｄｓＦｖ−ｄｓＦｖ、ｔａｎｄＡｂ、トリプルヘッド、タンデムｄＡｂ／ＶＨＨ、四価ｄＡｂ．ＶＨＨ；非Ｉｇ融合タンパク質、例えば、ｓｃＦｖ２−アルブミン、ｓｃＤｂ−アルブミン、ｔａＦｖ−アルブミン、ｔａＦｖ−毒素、ミニ抗体、ＤＮＬ−Ｆａｂ２、ＤＮＬ−Ｆａｂ２−ｓｃＦｖ、ＤＮＬ−Ｆａｂ２−ＩｇＧ−サイトカイン２、ＩｍｍＴＡＣ（ＴＣＲ−ｓｃＦｖ）；修飾Ｆｃ／ＣＨ３融合タンパク質、例えば、ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ｋｉｈ）、ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ＣＨ３電荷対）、ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ＥＷ−ＲＶＴ）、ｓｃＦｖ−ｆｃ（ＨＡ−ＴＦ）、ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ＳＥＥＤｂｏｄｙ）、ｔａＦｖ−Ｆｃ（ｋｉｈ）、ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ｋｉｈ）−Ｆｖ、Ｆａｂ−Ｆｃ（ｋｉｈ）−ｓｃＦｖ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ｋｉｈ）、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ＢＥＡＴ）、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ＳＥＥＤｂｏｄｙ）、ＤＡＲＴ−Ｆｃ、ｓｃＦｖ−ＣＨ３（ｋｉｈ）、ＴｒｉＦａｂ；Ｆｃ融合体、例えば、ジダイアボディー、ｓｃＤｂ−Ｆｃ、ｔａＦｖ−Ｆｃ、ｓｃＦｖ−Ｆｃ−ｓｃＦｖ、ＨＣＡｂ−ＶＨＨ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、ｓｃＦｖ４−Ｉｇ、ｓｃＦｖ２−Ｆｃａｂ；ＣＨ３融合体、例えば、ダイア−ダイアボディー、ｓｃＤｂ−ＣＨ３；ＩｇＥ／ＩｇＭ  ＣＨ２融合体、例えば、ｓｃＦｖ−ＥＨＤ２−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖＭＨＤ２−ｓｃＦｖ；Ｆａｂ融合タンパク質、例えば、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ（バイボディー）、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ２（トリボディー）、Ｆａｂ−Ｆｖ、Ｆａｂ−ｄｓＦｖ、Ｆａｂ−ＶＨＨ、直交型Ｆａｂ−Ｆａｂ；非Ｉｇ融合タンパク質、例えば、ＤＮＬ−Ｆａｂ３、ＤＮＬ−Ｆａｂ２−ｓｃＦｖ、ＤＮＬ−Ｆａｂ２−ＩｇＧ−サイトカイン２；非対称ＩｇＧまたはＩｇＧ様分子、例えば、ＩｇＧ（ｋｉｈ）、ＩｇＧ（ｋｉｈ）共通ＬＣ、ＺＷ１  ＩｇＧ共通ＬＣ、Ｂｉｃｌｏｎｉｃｓ共通ＬＣ、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ＣｒｏｓｓＭａｂ（ｋｉｈ）、ｓｃＦａｂ−ＩｇＧ（ｋｉｈ）、Ｆａｂ−ｓｃＦａｂ−ＩｇＧ（ｋｉｈ）、直交型Ｆａｂ  ＩｇＧ（ｋｉｈ）、ＤｕｅｔＭａｂ、ＣＨ３電荷対＋ＣＨ１／ＣＬ電荷対、ヒンジ／ＣＨ３電荷対、ＳＥＥＤ−ｂｏｄｙ、デュオボディー、ｆｏｕｒ−ｉｎ−ｏｎｅ−ＣｒｏｓｓＭａｂ（ｋｉｈ）、ＬＵＺ−Ｙ共通ＬＣ；ＬＵＺ−Ｙ  ｓｃＦａｂ−ＩｇＧ、ＦｃＦｃ＊；アペンデッド／Ｆｃ修飾ＩｇＧ、例えば、ＩｇＧ（ｋｉｈ）−Ｆｖ、ＩｇＧ  ＨＡ−ＴＦ−Ｆｖ、ＩｇＧ（ｋｉｈ）ｓｃＦａｂ、ｓｃＦａｂ−Ｆｃ（ｋｉｈ）−ｓｃＦｖ２、ｓｃＦａｂ−Ｆｃ（ｋｉｈ）−ｓｃＦｖ、ｈａｌｆ  ＤＶＤ−Ｉｇ、ＤＶＩ−Ｉｇ（ｆｏｕｒ−ｉｎ−ｏｎｅ）、ＣｒｏｓｓＭａｂ−Ｆａｂ；修飾Ｆｃ／ＣＨ３融合タンパク質、例えば、Ｆａｂ−Ｆｃ（ｋｉｈ）−ｓｃＦｖ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ｋｉｈ）、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ（ＢＥＡＴ）、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ−ＳＥＥＤｂｏｄｙ、ＴｒｉＦａｂ；アペンデッドＩｇＧ−ＨＣ融合体、例えば、ＩｇＧ−ＨＣ、ｓｃＦｖ、ＩｇＧ−ｄＡｂ、ＩｇＧ−ｔａＦＶ、ＩｇＧ−ＣｒｏｓｓＦａｂ、ＩｇＧ−直交型Ｆａｂ、ＩｇＧ−（ＣαＣβ）Ｆａｂ、ｓｃＦｖ−ＨＣ−ＩｇＧ、タンデムＦａｂ−ＩｇＧ（直交型Ｆａｂ）Ｆａｂ−ＩｇＧ（ＣαＣβ  Ｆａｂ）、Ｆａｂ−ＩｇＧ（ＣＲ３）、Ｆａｂ−ヒンジ−ＩｇＧ（ＣＲ３）；アペンデッドＩｇＧ−ＬＣ融合体、例えば、ＩｇＧ−ｓｃＦｖ（ＬＣ）、ｓｃＦｖ（ＬＣ）−ＩｇＧ、ｄＡｂ−ＩｇＧ；アペンデッドＩｇＧ−ＨＣ／ＬＣ融合体、例えば、ＤＶＤ−Ｉｇ、ＴＶＤ−Ｉｇ、ＣＯＤＶ−Ｉｇ、ｓｃＦｖ４−ＩｇＧ、Ｚｙｂｏｄｙ；Ｆｃ融合体、例えば、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、ｓｃＦｖ４−Ｉｇ；Ｆ（ａｂ’）２融合体、例えば、Ｆ（ａｂ’）２−ｓｃＦｖ２；ＣＨ１／ＣＬ融合タンパク質、例えば、ｓｃＦｖ２−ＣＨ１−ヒンジ／ＣＬ；修飾ＩｇＧ、例えば、ＤＡＦ（ｔｗｏ−ｉｎ−ｏｎｅ−ＩｇＧ）、ＤｕｔａＭａｂ、Ｍａｂ２；および非Ｉｇ融合体、例えば、ＤＮＬ−Ｆａｂ４−ＩｇＧを含む。
【０１３８】
当業者は、二特異性の抗原結合性分子を、デザインし、調製することが可能である。二特異性の抗原結合性分子を作製するための方法は、例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、ＳｅｇａｌおよびＢａｓｔ、２００１、「Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ」、「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、１４：ＩＶ：２．１３：２．１３．１〜２．１３．１６において記載される通りに、例えば、還元性ジスルフィド結合または非還元性チオエーテル結合により、抗原結合性分子または抗体断片を、化学的に架橋するステップを含む。例えば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（−２−ピリジルジチオ）−プロピオネート（ＳＰＤＰ）は、例えば、ヒンジ領域のＳＨ基を介して、Ｆａｂ断片を、化学的に架橋して、ジスルフィドにより連結された、二特異性Ｆ（ａｂ）２ヘテロ二量体を創出するのに使用されうる。
【０１３９】
二特異性の抗原結合性分子を作製するための、他の方法は、抗体産生ハイブリドーマを、例えば、ポリエチレングリコールと融合させて、例えば、Ｄ．Ｍ．およびＢａｓｔ，Ｂ．Ｊ．、２００１、「Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ」、「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、１４：ＩＶ：２．１３：２．１３．１〜２．１３．１６に記載された、二特異性抗体を分泌することが可能なクァドローマ細胞を作製するステップを含む。
【０１４０】
本発明に従う、二特異性抗原結合性分子はまた、例えば、それらの両方の全内容が、参照により本明細書に組み込まれる、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」、２版（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、２０１２）、４０章：「Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：Ｄｉａｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔａｎｄｅｍ  ｓｃＦｖ」（ＨｏｒｎｉｇおよびＦａｅｒｂｅｒ−Ｓｃｈｗａｒｚ）；またはＦｒｅｎｃｈ、「Ｈｏｗ  ｔｏ  ｍａｋｅ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ」、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．、２０００、４０：３３３〜３３９に記載された、抗原結合性分子のためのポリペプチドをコードする核酸構築物からの組換え発現によっても作製されうる。例えば、２つの抗原結合性断片のための軽鎖および重鎖可変ドメイン（すなわち、ＩＬ−１１Ｒαに結合することが可能な抗原結合性断片のための、軽鎖および重鎖可変ドメイン、ならびに別の標的タンパク質に結合することが可能な抗原結合性断片のための、軽鎖および重鎖可変ドメイン）をコードし、抗原結合性断片の間の、適切なリンカーまたは二量体化ドメインをコードする配列を含むＤＮＡ構築物は、分子クローニング法により調製されうる。その後、組換え二特異性抗体は、適切な宿主細胞（例えば、哺乳動物宿主細胞）内の、構築物の発現（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける）により産生され、次いで、発現された組換え二特異性抗体は、任意選択で、精製されうる。
【０１４１】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、Ｆｃ領域を含む。Ｆｃ領域は、１つのポリペプチドに由来する、ＣＨ２およびＣＨ３領域と、別のポリペプチドに由来する、ＣＨ２およびＣＨ３領域とから構成される。２つのポリペプチドに由来する、ＣＨ２およびＣＨ３領域が、併せて、Ｆｃ領域を形成する。
【０１４２】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、ＣＨ２およびＣＨ３領域のうちの１つまたは複数における、Ｆｃ領域の会合を促進する修飾を含むＦｃ領域を含む。抗原結合性分子の構成要素であるポリペプチドの組換え共発現、および後続する会合は、いくつかの可能な組合せをもたらす。組換え作製において、抗原結合性分子内の、所望の組合せのポリペプチドの収率を改善するために、所望の組合せの、重鎖ポリペプチドの会合を促進する、Ｆｃ領域の修飾（複数可）を導入することが有利である。修飾は、例えば、異なるポリペプチド鎖の、ＣＨ２および／またはＣＨ３領域の間の疎水性および／または静電相互作用を促進しうる。適切な修飾については、例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Ｈａら、Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｎｏｌ（２０１６）、７：３９４において記載されている。一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、Ｈａら、Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｎｏｌ（２０１６）、７：３９４の表１において示される、以下のフォーマット：ＫｉＨ、ＫｉＨＳ−Ｓ、ＨＡ−ＴＦ、ＺＷ１、７．８．６０、ＤＤ−ＫＫ、ＥＷ−ＲＶＴ、ＥＷ−ＲＶＴＳ−Ｓ、ＳＥＥＤ、またはＡ１０７のうちの１つに従う、Ｆｃ領域のＣＨ３領域内に、対をなす置換を含むＦｃ領域を含む。
ポリペプチド
本発明はまた、抗原結合性分子の、ポリペプチド構成要素も提供する。ポリペプチドは、単離形態で提供される場合もあり、実質的な精製形態で提供される場合もある。
【０１４３】
本発明の抗原結合性分子は、ポリペプチドの複合体でありうるか、またはこれを含みうる。
ポリペプチドが、１つを超えるドメインまたは領域を含む、本明細書では、複数のドメイン／領域が、同じポリペプチド鎖内に存在することが好ましいことが理解されるであろう。すなわち、１つを超えるドメインまたは領域を含むポリペプチドは、ドメイン／領域を含む融合ポリペプチドである。
【０１４４】
一部の実施形態では、本発明に従うポリペプチドは、本明細書で記載されるＶＨを含むか、またはこれらからなる。一部の実施形態では、本発明に従うポリペプチドは、本明細書で記載されるＶＬを含むか、またはこれらからなる。
【０１４５】
一部の実施形態では、ポリペプチドは、加えて、１つまたは複数の、抗体の重鎖定常領域（ＣＨ）を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、加えて、１つまたは複数の、抗体の軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、免疫グロブリン（Ｉｇ）のＣＨ１、ＣＨ２領域、および／またはＣＨ３領域を含む。
【０１４６】
一部の実施形態では、ポリペプチドは、免疫グロブリンの重鎖定常配列の、１つまたは複数の領域を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、本明細書で記載されるＣＨ１領域を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、本明細書で記載される、ＣＨ１−ＣＨ２間のヒンジ領域を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、本明細書で記載されるＣＨ２領域を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、本明細書で記載されるＣＨ３領域を含む。
【０１４７】
一部の実施形態では、ポリペプチドは、参照により本明細書の上記に組み込まれた、Ｈａら、Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｎｏｌ（２０１６）、７：３９４の表１に示されるアミノ酸置換／アミノ酸置換の組合せのうちのいずれか１つを含む、ＣＨ３領域を含む。
【０１４８】
一部の実施形態では、ポリペプチドのＣＨ２および／またはＣＨ３領域は、ポリペプチドの、ＣＨ２および／またはＣＨ３領域を含む、別のポリペプチドとの会合を促進するための、１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。
【０１４９】
一部の実施形態では、ポリペプチドは、免疫グロブリンの軽鎖定常配列の、１つまたは複数の領域を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、本明細書で記載されるＣＬ領域を含む。
【０１５０】
一部の実施形態では、本発明に従うポリペプチドは、Ｎ末端から、Ｃ末端へと、以下：
（ｉ）ＶＨ
（ｉｉ）ＶＬ
（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＨ１
（ｉｖ）ＶＬ−ＣＬ
（ｖ）ＶＬ−ＣＨ１
（ｖｉ）ＶＨ−ＣＬ
（ｖｉｉ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３
（ｖｉｉｉ）ＶＬ−ＣＬ−ＣＨ２−ＣＨ３
（ｉｘ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３
（ｘ）ＶＨ−ＣＬ−ＣＨ２−ＣＨ３
のうちの１つに従う構造を含む。
【０１５１】
本発明によりまた、本発明のポリペプチドから構成される抗原結合性分子も提供される。一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、以下のポリペプチドの組合せ：
（Ａ）ＶＨ＋ＶＬ
（Ｂ）ＶＨ−ＣＨ１＋ＶＬ−ＣＬ
（Ｃ）ＶＬ−ＣＨ１＋ＶＨ−ＣＬ
（Ｄ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＬ−ＣＬ
（Ｅ）ＶＨ−ＣＬ−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＬ−ＣＨ１
（Ｆ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＨ−ＣＬ
（Ｇ）ＶＬ−ＣＬ−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＨ−ＣＨ１
（Ｈ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＬ−ＣＬ−ＣＨ２−ＣＨ３
（Ｉ）ＶＨ−ＣＬ−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３
のうちの１つを含む。
【０１５２】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、上記の（Ａ）〜（Ｉ）に示された組合せのポリペプチドのうちの、１つを超えるポリペプチドを含む。例を目的として述べると、上記の（Ｄ）を参照すると、一部の実施形態では、抗原結合性分子は、構造ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３を含む、２つのポリペプチドと、構造ＶＬ−ＣＬを含む、２つのポリペプチドとを含む。
【０１５３】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、以下のポリペプチドの組合せ：
（Ｊ）ＶＨ（抗ＩＬ−１１Ｒα）＋ＶＬ（抗ＩＬ−１１Ｒα）
（Ｋ）ＶＨ（抗ＩＬ−１１Ｒα）−ＣＨ１＋ＶＬ（抗ＩＬ−１１Ｒα）−ＣＬ
（Ｌ）ＶＬ（抗ＩＬ−１１Ｒα）−ＣＨ１＋ＶＨ（抗ＩＬ−１１Ｒα）−ＣＬ
（Ｍ）ＶＨ（抗ＩＬ−１１Ｒα）−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＬ（抗ＩＬ−１１Ｒα）−ＣＬ
（Ｎ）ＶＨ（抗ＩＬ−１１Ｒα）−ＣＬ−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＬ（抗ＩＬ−１１Ｒα）−ＣＨ１
（Ｏ）ＶＬ（抗ＩＬ−１１Ｒα）−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＨ（抗ＩＬ−１１Ｒα）−ＣＬ
（Ｐ）ＶＬ（抗ＩＬ−１１Ｒα）−ＣＬ−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＨ（抗ＩＬ−１１Ｒα）−ＣＨ１
（Ｑ）ＶＨ（抗ＩＬ−１１Ｒα）−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＬ（抗ＩＬ−１１Ｒα）−ＣＬ−ＣＨ２−ＣＨ３
（Ｒ）ＶＨ（抗ＩＬ−１１Ｒα）−ＣＬ−ＣＨ２−ＣＨ３＋ＶＬ（抗ＩＬ−１１Ｒα）−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３
のうちの１つを含むが、この場合、「ＶＨ（抗ＩＬ−１１Ｒα）」とは、本明細書で記載される、例えば、（１）〜（２１）のうちのいずれか１つにおいて規定される、ＩＬ−１１Ｒαに結合することが可能な抗原結合性分子のＶＨを指し；「ＶＬ（抗ＩＬ−１１Ｒα）」とは、本明細書で記載される、例えば、（２２）〜（３７）のうちのいずれか１つにおいて規定される、ＩＬ−１１Ｒαに結合することが可能な抗原結合性分子のＶＬを指す。
【０１５４】
一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号７〜１７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる。
【０１５５】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、配列番号７０に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなるポリペプチドを含む。一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、配列番号７１に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなるポリペプチドを含む。一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、配列番号７２に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなるポリペプチドを含む。一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、配列番号７３に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなるポリペプチドを含む。一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、配列番号７４に対する、少なくとも７０％、好ましくは、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなるポリペプチドを含む。
リンカーおよびさらなる配列
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子およびポリペプチドは、アミノ酸配列の間に、１つまたは複数のリンカー配列を含む。リンカー配列は、抗原結合性分子／ポリペプチドの、ＶＨ、ＶＬ、ＣＨ１−ＣＨ２間のヒンジ領域、ＣＨ２領域、およびＣＨ３領域のうちの１つまたは複数の、一方または両方の末端にもたらされうる。
【０１５６】
当業者には、リンカー配列が公知であり、例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Ｃｈｅｎら、Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ（２０１３）、６５（１０）：１３５７〜１３６９において記載されている。一部の実施形態では、リンカー配列は、可動性リンカー配列でありうる。可動性リンカー配列は、リンカー配列により連結されたアミノ酸配列の、相対的運動を可能とする。当業者には、リンカー配列が公知であり、いくつかのリンカー配列は、Ｃｈｅｎら、Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ（２０１３）、６５（１０）：１３５７〜１３６９において同定されている。可動性リンカー配列は、しばしば、高比率のグリシン残基および／またはセリン残基を含む。
【０１５７】
一部の実施形態では、リンカー配列は、少なくとも１つのグリシン残基、および／または少なくとも１つのセリン残基を含む。一部の実施形態では、リンカー配列は、グリシンおよびセリン残基からなる。一部の実施形態では、リンカー配列は、１〜２、１〜３、１〜４、１〜５、または１〜１０アミノ酸の長さを有する。
【０１５８】
本発明の抗原結合性分子およびポリペプチドは、加えて、さらなるアミノ酸またはアミノ酸の配列を含みうる。例えば、抗原結合性分子およびポリペプチドは、抗原結合性分子／ポリペプチドの、発現、フォールディング、トラフィッキング、プロセシング、精製、または検出を容易とするアミノ酸配列（複数可）を含みうる。例えば、抗原結合性分子／ポリペプチドは、任意選択で、抗原結合性分子／ポリペプチドのＮ末端またはＣ末端において、Ｈｉｓ（例えば、６×Ｈｉｓ）、Ｍｙｃ、ＧＳＴ、ＭＢＰ、ＦＬＡＧ、ＨＡ、Ｅ、またはビオチンタグをコードする配列を含みうる。一部の実施形態では、抗原結合性分子／ポリペプチドは、検出用部分、例えば、蛍光、発光、免疫検出用、放射性、化学、核酸、または酵素標識を含む。
【０１５９】
本発明の抗原結合性分子およびポリペプチドは、加えて、シグナルペプチド（また、リーダー配列またはシグナル配列としても公知である）を含みうる。シグナルペプチドは通常、単一のアルファヘリックスを形成する、５〜３０の疎水性アミノ酸の配列からなる。細胞表面で分泌されるタンパク質および発現されるタンパク質は、しばしば、シグナルペプチドを含む。
【０１６０】
シグナルペプチドは、抗原結合性分子／ポリペプチドのＮ末端に存在することが可能であり、新たに合成される抗原結合性分子／ポリペプチド内に存在しうる。シグナルペプチドは、抗原結合性分子／ポリペプチドの、効率的なトラフィッキングおよび分泌をもたらす。シグナルペプチドは、しばしば、切断により除去されるため、抗原結合性分子／ポリペプチドを発現する細胞から分泌される、成熟抗原結合性分子／ポリペプチド内に含まれない。
【０１６１】
シグナルペプチドは、多くのタンパク質について公知であり、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ、Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ、ＴｒＥＭＢＬ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋ、Ｅｎｓｅｍｂｌ、およびＩｎｔｅｒＰｒｏなどのデータベースに記録されており、かつ／または例えば、ＳｉｇｎａｌＰ（Ｐｅｔｅｒｓｅｎら、２０１１、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｔｈｏｄｓ、８：７８５〜７８６）またはＳｉｇｎａｌ−ＢＬＡＳＴ（ＦｒａｎｋおよびＳｉｐｐｌ、２００８、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ、２４：２１７２〜２１７６）などのアミノ酸配列解析ツールを使用して、同定／予測されうる。
標識およびコンジュゲート
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、加えて、検出可能部分または化学的部分を含む。
【０１６２】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、検出可能部分、例えば、蛍光標識、リン光標識、発光標識、免疫検出可能標識（例えば、エピトープタグ）、放射性標識、化学、核酸、または酵素標識を含む。抗原結合性分子は、検出可能部分で、共有結合的に標識付けされる場合もあり、非共有結合的に標識付けされる場合もある。
【０１６３】
蛍光標識は、例えば、フルオレセイン、ローダミン、アロフィコシアニン、エオシン、およびＮＤＢ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、ユーロピウム（Ｅｕ）、テルビウム（Ｔｂ）、およびサマリウム（Ｓｍ）など、希土類のキレート剤、テトラメチルローダミン、Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ、４−メチルウンベリフェロン、７−アミノ−４−メチルクマリン、Ｃｙ３、Ｃｙ５を含む。放射性標識は、ヨウ素１２３、ヨウ素１２５、ヨウ素１２６、ヨウ素１３１、ヨウ素１３３、臭素７７、テクネシウム９９ｍ、インジウム１１１、インジウム１１３ｍ、ガリウム６７、ガリウム６８、ルテニウム９５、ルテニウム９７、ルテニウム１０３、ルテニウム１０５、水銀２０７、水銀２０３、レニウム９９ｍ、レニウム１０１、レニウム１０５、スカンジウム４７、テルリウム１２１ｍ、テルリウム１２２ｍ、テルリウム１２５ｍ、ツリウム１６５、ツリウム１６７、ツリウム１６８、銅６７、フッ素１８、イットリウム９０、パラジウム１００、ビスマス２１７、およびアンチモニー２１１などの放射性同位体を含む。発光標識は、放射性発光標識、化学発光標識（例えば、アクリジニウムエステル、ルミノール、イソルミノール）、および生物発光標識を含む。免疫検出可能標識は、ハプテン、ペプチド／ポリペプチド、抗体、受容体、およびビオチン、アビジン、ストレプトアビジン、またはジゴキシゲニンなどのリガンドを含む。核酸標識は、アプタマーを含む。酵素標識は、例えば、ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、グルコースオキシダーゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼを含む。
【０１６４】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、化学的部分へとコンジュゲートされる。化学的部分は、治療効果をもたらすための部分でありうる。抗体−薬物コンジュゲートについては、例えば、Ｐａｒｓｌｏｗら、Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅｓ、２０１６年９月、４（３）：１４において総説されている。一部の実施形態では、化学的部分は、薬物部分（例えば、細胞傷害剤）でありうる。一部の実施形態では、薬物部分は、化学療法剤でありうる。一部の実施形態では、薬物部分は、カリケアミシン、ＤＭ１、ＤＭ４、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、ＳＮ−３８、ドキソルビシン、デュオカルマイシン、Ｄ６．５、およびＰＢＤから選択される。
抗原結合性分子の機能的特性
本明細書で記載される抗原結合性分子は、ある特定の機能的特性に言及することにより特徴付けられうる。一部の実施形態では、本明細書で記載される抗原結合性分子は、以下の特性：
ａ）ＩＬ−１１Ｒα（例えば、ヒトＩＬ−１１および／またはマウスＩＬ−１１Ｒα）に対する特異的結合；
ｂ）例えば、ＥＬＩＳＡにより決定される、ＥＣ５０＝１０００ｎｇ／ｍｌ未満の結合アフィニティーによる、ＩＬ−１１Ｒα（例えば、ヒトＩＬ−１１Ｒα）への結合；
ｃ）ＩＬ−１１Ｒαと、ＩＬ−１１との相互作用の阻害；
ｄ）ＩＬ−１１Ｒαと、ｇｐ１３０との相互作用の阻害；
ｅ）ＩＬ−１１Ｒα：ｇｐ１３０受容体複合体と、ＩＬ−１１との相互作用の阻害；
ｆ）ＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα複合体と、ｇｐ１３０との相互作用の阻害；
ｇ）ＩＬ−１１／ＩＬ−１１Ｒシグナル伝達の阻害；
ｈ）ＩＬ−１１により媒介されるシグナル伝達の阻害；
ｉ）ＩＬ−１１の、ＩＬ−１１Ｒα：ｇｐ１３０受容体複合体への結合により媒介されるシグナル伝達の阻害；
ｊ）ＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα複合体の、ｇｐ１３０への結合（すなわち、ＩＬ−１１トランスシグナル伝達）により媒介されるシグナル伝達の阻害；
ｋ）線維芽細胞の増殖の阻害；
ｌ）筋線維芽細胞の、線維芽細胞からの発生の阻害；
ｍ）筋線維芽細胞の、線維芽細胞からの発生の反転／退縮；
ｎ）筋線維芽細胞の、星細胞、例えば、肝星細胞または膵星細胞からの発生の阻害；
ｏ）筋線維芽細胞の、星細胞、例えば、肝星細胞または膵星細胞からの発生の反転／退縮；
ｐ）線維芽細胞、星細胞、または筋線維芽細胞の遊走的挙動および／または浸潤的挙動の阻害（すなわち、遊走および／または浸潤の阻害）；
ｑ）臓器内の免疫細胞の存在の阻害；
ｒ）ＩＬ−１１／ＩＬ−１１Ｒシグナル伝達により媒介される病理学的過程の阻害；
ｓ）線維症の阻害；
ｔ）線維症の反転／退縮；
ｕ）例えば、線維症促進性因子による刺激の後における、線維芽細胞内または星細胞内の、コラーゲン、フィブロネクチン、ペリオスチン、ＩＬ−６、ＩＬ−１１、αＳＭＡ（ＡＣＴＡ２）、ＴＩＭＰ１、ＭＭＰ２、ＴＮＦα、ＣＣＬ２のうちの１つまたは複数の遺伝子発現またはタンパク質発現の阻害；
ｖ）線維芽細胞または星細胞による、細胞外マトリックスの産生の阻害；
ｗ）がん細胞の増殖および／または生存の阻害；
ｘ）ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるがんの発生および／または進行の阻害；
ｙ）腫瘍の増殖の阻害；
ｚ）ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体を発現する／含む細胞の殺滅
のうちの１つまたは複数を所有しうる。
【０１６５】
本明細書では、「阻害」とは、対照条件と比べた、低減、減少、または低下を指す。例えば、抗原結合性分子による過程の阻害とは、抗原結合性分子の非存在下、および／または適切な対照の抗原結合性分子の存在下における、この過程の広がり／程度の、低減、減少、または低下を指す。
【０１６６】
本明細書では、阻害はまた、中和またはアンタゴニズムとも称されうる。すなわち、機能または過程（例えば、ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含有する複合体により媒介される、相互作用、シグナル伝達、または他の活性）を阻害することが可能な、ＩＬ−１１Ｒαに結合する抗原結合性分子対象とする機能または過程に関して、「中和」性抗原結合性分子と言われる場合もあり、「アンタゴニスト」の抗原結合性分子であると言われる場合もある。例えば、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達を阻害することが可能な抗原結合性分子は、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達を中和することが可能な抗原結合性分子と称される場合もあり、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストと称される場合もある。
【０１６７】
当業者は、所与のアッセイに適切な対照条件を同定することが可能である。例えば、対照の抗原結合性分子は、アッセイにおいて探索される特性に関与する役割を果たさないことが公知である、標的タンパク質に対して方向付けられた、抗原結合性分子でありうる。対照の抗原結合性分子は、解析される、抗ＩＬ−１１Ｒα抗原結合性分子と同じアイソタイプであることが可能であり、例えば、同じ定常領域を有しうる。
【０１６８】
本明細書で記載される抗原結合性分子は、好ましくは、ＩＬ−１１Ｒαへの特異的結合を呈する。本明細書で使用される、「特異的結合」とは、抗原に対して選択的であり、非標的抗原への非特異的結合から区別されうる結合を指す。標的分子に特異的に結合する抗原結合性分子は、好ましくは、他の非標的分子に結合する場合より、大きなアフィニティーおよび／または長い持続時間で、標的に結合する。一部の実施形態では、本抗体／断片は、ＩＬ−１１Ｒαに、ＩＬ−６受容体ファミリーの、１つまたは複数のメンバーに対するより、大きなアフィニティーで結合しうる。一部の実施形態では、本抗原結合性分子は、ＩＬ−１１Ｒαに、ＩＬ−６Ｒα、白血病阻害性因子受容体（ＬＩＦＲ）、オンコスタチンＭ受容体（ＯＳＭＲ）、および毛様体神経栄養因子受容体アルファ（ＣＮＴＦＲα）のうちの１つまたは複数に対するより、大きなアフィニティーで結合しうる。
【０１６９】
複数の実施形態では、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の阻害は、ＩＬ−１１媒介性シスシグナル伝達を破壊することにより達成されるが、ＩＬ−１１媒介性トランスシグナル伝達を破壊することによっては達成されない、例えば、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の阻害は、膜結合型ＩＬ−１１Ｒαを伴う、ｇｐ１３０媒介性シス複合体を阻害することにより達成される。複数の実施形態では、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の阻害は、ＩＬ−１１媒介性トランスシグナル伝達を破壊することにより達成されるが、ＩＬ−１１媒介性シスシグナル伝達を破壊することによっては達成されない、すなわち、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の阻害は、可溶型ＩＬ−１１Ｒαに結合したＩＬ−１１、または可溶型ＩＬ−６Ｒに結合したＩＬ−６など、ｇｐ１３０媒介性トランスシグナル伝達複合体を阻害することにより達成される。複数の実施形態では、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の阻害は、ＩＬ−１１媒介性シスシグナル伝達、およびＩＬ−１１媒介性トランスシグナル伝達を破壊することにより達成される。
【０１７０】
所与のポリペプチドが、所与の分子に特異的に結合する能力は、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ；例えば、Ｈｅａｒｔｙら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ（２０１２）、９０７：４１１〜４４２を参照されたい）、バイオレイヤー干渉法（例えば、Ｌａｄら（２０１５）、Ｊ  Ｂｉｏｍｏｌ  Ｓｃｒｅｅｎ、２０（４）：４９８〜５０７を参照されたい）、フローサイトメトリー、または放射性標識抗原結合性アッセイ（ＲＩＡ）、酵素免疫測定アッセイによる方法など、当技術分野で公知の方法に従う解析により決定されうる。このような解析によって、所与の分子への結合は、測定および定量されうる。一部の実施形態では、結合は、所与のアッセイにおいて検出される応答でありうる。
【０１７１】
一部の実施形態では、抗原結合性分子の、非標的分子への結合の程度は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＳＰＲ、バイオレイヤー干渉法により、またはＲＩＡにより測定される、抗体の、標的分子への結合の、約１０％未満である。代替的に、結合特異性は、抗原結合性分子が、抗原結合性分子の、非標的分子へのＫＤを超える、少なくとも０．１の桁数（すなわち、０．１×１０ｎ［式中、ｎは、桁数を表す整数である］）である解離定数（ＫＤ）でＩＬ−１１Ｒαに結合する、結合アフィニティーの点でも反映されうる。これは、任意選択で、少なくとも０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、または２．０のうちの１つでありうる。
【０１７２】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ヒトＩＬ−１１Ｒαへの結合を呈する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、マウスＩＬ−１１Ｒαへの結合を呈する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ヒトＩＬ−１１ＲαおよびマウスＩＬ−１１Ｒαへの結合を呈する。すなわち、一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ヒトＩＬ−１１ＲαおよびマウスＩＬ−１１Ｒαについて、交差反応性である。一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、非ヒト霊長動物のＩＬ−１１Ｒαとの交差反応性を呈する。
【０１７３】
一部の実施形態では、本明細書に従う抗原結合性分子は、５μＭ以下、好ましくは、≦１μＭ、≦５００ｎＭ、≦１００ｎＭ、≦７５ｎＭ、≦５０ｎＭ、≦４０ｎＭ、≦３０ｎＭ、≦２０ｎＭ、≦１５ｎＭ、≦１２．５ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦９ｎＭ、≦８ｎＭ、≦７ｎＭ、≦６ｎＭ、≦５ｎＭ、≦４ｎＭ、≦３ｎＭ、≦２ｎＭ、≦１ｎＭのうちの１つのＫＤで、ＩＬ−１１Ｒαに結合する。
【０１７４】
一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、ＩＬ−１１Ｒα（例えば、ヒトＩＬ−１１Ｒα）に、例えば、ＳＰＲ解析により決定される、≦２０ｎＭ、≦１５ｎＭ、≦１２．５ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦９ｎＭ、≦８ｎＭ、≦７ｎＭ、または≦６ｎＭのＫＤで結合する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＩＬ−１１Ｒαに、≧１ｎＭであり、かつ、≦２０ｎＭである、例えば、≧１ｎＭであり、かつ、≦１５ｎＭである、または≧１ｎＭであり、かつ、≦１０ｎＭのＫＤで結合する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＩＬ−１１Ｒαに、≧５ｎＭであり、かつ、≦２０ｎＭである、例えば、≧５ｎＭであり、かつ、≦１５ｎＭである、または≧５ｎＭであり、かつ、≦１０ｎＭであるＫＤで結合する。
【０１７５】
一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、ＩＬ−１１Ｒαに、ＥＣ５０＝１０００ｎｇ／ｍｌまたはこれ未満、好ましくは、≦９００ｎｇ／ｍｌ、≦８００ｎｇ／ｍｌ、≦７００ｎｇ／ｍｌ、≦６００ｎｇ／ｍｌ、≦５００ｎｇ／ｍｌ、≦４００ｎｇ／ｍｌ、≦３００ｎｇ／ｍｌ、≦２００ｎｇ／ｍｌ、≦１００ｎｇ／ｍｌ、≦９０ｎｇ／ｍｌ、≦８０ｎｇ／ｍｌ、≦７０ｎｇ／ｍｌ、≦６０ｎｇ／ｍｌ、≦５０ｎｇ／ｍｌ、≦４０ｎｇ／ｍｌ、≦３０ｎｇ／ｍｌ、≦２０ｎｇ／ｍｌ、≦１５ｎｇ／ｍｌ、≦１０ｎｇ／ｍｌ、≦７．５ｎｇ／ｍｌ、≦５ｎｇ／ｍｌ、≦２．５ｎｇ／ｍｌ、または≦１ｎｇ／ｍｌのうちの１つの結合アフィニティー（例えば、ＥＬＩＳＡにより決定される）で結合する。
【０１７６】
抗原結合性分子による、ＩＬ−１１Ｒαへの結合のアフィニティーは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、ＥＬＩＳＡアッセイにより解析されうる。当技術分野では、適切なアッセイが周知であり、例えば、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ」、１巻（２版）、「Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  （２０１０）、Ｖ部、６５７〜６６５頁において記載されている通りに、当業者により実施されうる。例えば、抗原結合性分子による、ＩＬ−１１Ｒαに対する結合アフィニティーは、本明細書の、実験例において記載される方法に従い解析されうる。
【０１７７】
抗原結合性分子が、２つのタンパク質の間の相互作用を阻害する能力は、例えば、抗原結合性分子の存在下、または相互作用パートナーの一方もしくは両方の、抗原結合性分子を伴うインキュベーションの後における、相互作用の解析により決定されうる。所与の抗原結合性分子が、２つの相互作用パートナーの間の相互作用を阻害することが可能であるのかどうかを決定するのに適するアッセイの例は、競合ＥＬＩＳＡアッセイである。
【０１７８】
相互作用（例えば、ＩＬ−１１ＲαとＩＬ−１１の間、またはＩＬ−１１Ｒαとｇｐ１３０の間、またはＩＬ−１１Ｒα：ｇｐ１３０とＩＬ−１１の間、またはＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒαとｇｐ１３０の間の相互作用）を阻害することが可能な抗原結合性分子は、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）における相互作用のレベルと比較した、抗原結合性分子の存在下（または相互作用パートナーの一方または両方の、抗原結合性分子を伴うインキュベーションの後）における、相互作用パートナー間の相互作用のレベルの低減／減少の観察により同定されうる。適切な解析は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、例えば、組換え相互作用パートナーを使用するか、または相互作用パートナーを発現する細胞を使用して実施されうる。相互作用パートナーを発現する細胞は、これを、内因的に発現させる場合もあり、細胞へと導入された核酸から発現させる場合もある。このようなアッセイの目的で、相互作用パートナーの一方もしくは両方、および／または抗原結合性分子は、相互作用のレベルを検出および／または測定することを目的とする、検出可能実体で標識付けされる場合もあり、これと共に使用される場合もある。
【０１７９】
抗原結合性分子が、２つの結合パートナーの間の相互作用を阻害する能力はまた、このような相互作用の、下流における機能的な帰結、例えば、受容体シグナル伝達の解析によっても決定されうる。例えば、ＩＬ−１１Ｒα：ｇｐ１３０と、ＩＬ−１１との相互作用、またはＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒαと、ｇｐ１３０との相互作用の、下流における機能的な帰結は、線維芽細胞の増殖、線維芽細胞からの、筋線維芽細胞の発生、またはコラーゲン、フィブロネクチン、ペリオスチン、ＩＬ−６、ＩＬ−１１、αＳＭＡ、ＴＩＭＰ１、ＭＭＰ２のうちの１つもしくは複数の、遺伝子発現もしくはタンパク質発現を含みうる。
【０１８０】
本開示に従う線維芽細胞は、肝臓、肺、腎臓、心臓、血管、眼、皮膚、膵臓、脾臓、腸（例えば、大腸または小腸）、脳、および骨髄を含む、任意の組織に由来しうる。特定の実施形態では、抗原結合性分子を解析する目的で、線維芽細胞は、心臓線維芽細胞（例えば、心房線維芽細胞）、皮膚線維芽細胞、肺線維芽細胞、腎臓線維芽細胞、または肝臓線維芽細胞でありうる。線維芽細胞は、ＣＯＬ１Ａ、ＡＣＴＡ２、プロリル−４−ヒドロキシラーゼ、ＭＡＳ５１６、およびＦＳＰ１のうちの１つまたは複数の、遺伝子発現またはタンパク質発現により特徴付けられうる。
【０１８１】
遺伝子発現は、当業者に公知の、多様な手段により、例えば、定量的リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）を介して、ｍＲＮＡのレベルを測定することにより、またはレポーターベースの方法により測定されうる。同様に、タンパク質発現は、当業者に周知の、多様な手段により、例えば、抗体ベースの方法により、例えば、ウェスタンブロット、免疫組織化学、免疫細胞化学、フローサイトメトリー、ＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＳＰＯＴにより、またはレポーターベースの方法により測定されうる。
【０１８２】
一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、１つまたは複数の線維症マーカーのタンパク質発現、例えば、コラーゲン、フィブロネクチン、ペリオスチン、ＩＬ−６、ＩＬ−１１、αＳＭＡ、ＴＩＭＰ１、ＭＭＰ２のうちの１つまたは複数のタンパク質発現を阻害しうる。
【０１８３】
抗原結合性分子が、ＩＬ−１１Ｒα：ｇｐ１３０と、ＩＬ−１１との相互作用を阻害する能力は、例えば、線維芽細胞を、ＴＧＦβ１で刺激し、抗原結合性分子の存在下で、細胞をインキュベートし、規定された時間の後で、αＳＭＡ陽性表現型を有する細胞の比率を解析することにより解析されうる。このような例では、ＩＬ−１１Ｒα：ｇｐ１３０と、ＩＬ−１１との相互作用の阻害は、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）、または適切な対照抗原結合性分子の存在下で、細胞を、ＴＧＦβ１により処理する、陽性対照条件と比較して、低比率のαＳＭＡ陽性表現型を有する細胞の観察により同定されうる。
【０１８４】
このようなアッセイもまた、抗原結合性分子が、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達を阻害する能力について解析するのに適する。
一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、ＩＬ−１１Ｒαと、ＩＬ−１１との相互作用を、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）における、ＩＬ−１１Ｒαと、ＩＬ−１１との相互作用のレベルの、１００％未満、例えば、９９％もしくはこれ未満、９５％もしくはこれ未満、９０％もしくはこれ未満、８５％もしくはこれ未満、８０％もしくはこれ未満、７５％もしくはこれ未満、７０％もしくはこれ未満、６５％もしくはこれ未満、６０％もしくはこれ未満、５５％もしくはこれ未満、５０％もしくはこれ未満、４５％もしくはこれ未満、４０％もしくはこれ未満、３５％もしくはこれ未満、３０％もしくはこれ未満、２５％もしくはこれ未満、２０％もしくはこれ未満、１５％もしくはこれ未満、１０％もしくはこれ未満、５％もしくはこれ未満、または１％もしくはこれ未満のうちの１つへと阻害することが可能である。一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、ＩＬ−１１Ｒαと、ＩＬ−１１との相互作用を、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）における、ＩＬ−１１Ｒαと、ＩＬ−１１との相互作用のレベルの、１倍未満、例えば、≦０．９９倍、≦０．９５倍、≦０．９倍、≦０．８５倍、≦０．８倍、≦０．７５倍、≦０．７倍、≦０．６５倍、≦０．６倍、≦０．５５倍、≦０．５倍、≦０．４５倍、≦０．４倍、≦０．３５倍、≦０．３倍、≦０．２５倍、≦０．２倍、≦０．１５倍、≦０．１倍のうちの１つへと阻害することが可能である。
【０１８５】
一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、ＩＬ−１１Ｒαと、ｇｐ１３０との相互作用を、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）における、ＩＬ−１１Ｒαと、ｇｐ１３０との相互作用のレベルの、１００％未満、例えば、９９％もしくはこれ未満、９５％もしくはこれ未満、９０％もしくはこれ未満、８５％もしくはこれ未満、８０％もしくはこれ未満、７５％もしくはこれ未満、７０％もしくはこれ未満、６５％もしくはこれ未満、６０％もしくはこれ未満、５５％もしくはこれ未満、５０％もしくはこれ未満、４５％もしくはこれ未満、４０％もしくはこれ未満、３５％もしくはこれ未満、３０％もしくはこれ未満、２５％もしくはこれ未満、２０％もしくはこれ未満、１５％もしくはこれ未満、１０％もしくはこれ未満、５％もしくはこれ未満、または１％もしくはこれ未満のうちの１つへと阻害することが可能である。一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、ＩＬ−１１Ｒαと、ｇｐ１３０との相互作用を、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）における、ＩＬ−１１Ｒαと、ｇｐ１３０との相互作用のレベルの、１倍未満、例えば、≦０．９９倍、≦０．９５倍、≦０．９倍、≦０．８５倍、≦０．８倍、≦０．７５倍、≦０．７倍、≦０．６５倍、≦０．６倍、≦０．５５倍、≦０．５倍、≦０．４５倍、≦０．４倍、≦０．３５倍、≦０．３倍、≦０．２５倍、≦０．２倍、≦０．１５倍、≦０．１倍のうちの１つへと阻害することが可能である。
【０１８６】
一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、ＩＬ−１１Ｒα：ｇｐ１３０と、ＩＬ−１１との相互作用を、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）における、ＩＬ−１１Ｒα：ｇｐ１３０と、ＩＬ−１１との相互作用のレベルの、１００％未満、例えば、９９％もしくはこれ未満、９５％もしくはこれ未満、９０％もしくはこれ未満、８５％もしくはこれ未満、８０％もしくはこれ未満、７５％もしくはこれ未満、７０％もしくはこれ未満、６５％もしくはこれ未満、６０％もしくはこれ未満、５５％もしくはこれ未満、５０％もしくはこれ未満、４５％もしくはこれ未満、４０％もしくはこれ未満、３５％もしくはこれ未満、３０％もしくはこれ未満、２５％もしくはこれ未満、２０％もしくはこれ未満、１５％もしくはこれ未満、１０％もしくはこれ未満、５％もしくはこれ未満、または１％もしくはこれ未満のうちの１つへと阻害することが可能である。一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、ＩＬ−１１Ｒα：ｇｐ１３０と、ＩＬ−１１との相互作用を、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）における、ＩＬ−１１Ｒα：ｇｐ１３０と、ＩＬ−１１との相互作用のレベルの、１倍未満、例えば、≦０．９９倍、≦０．９５倍、≦０．９倍、≦０．８５倍、≦０．８倍、≦０．７５倍、≦０．７倍、≦０．６５倍、≦０．６倍、≦０．５５倍、≦０．５倍、≦０．４５倍、≦０．４倍、≦０．３５倍、≦０．３倍、≦０．２５倍、≦０．２倍、≦０．１５倍、≦０．１倍のうちの１つへと阻害することが可能である。
【０１８７】
一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、ＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα複合体と、ｇｐ１３０との相互作用を、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）における、ＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα複合体と、ｇｐ１３０との相互作用のレベルの、１００％未満、例えば、９９％もしくはこれ未満、９５％もしくはこれ未満、９０％もしくはこれ未満、８５％もしくはこれ未満、８０％もしくはこれ未満、７５％もしくはこれ未満、７０％もしくはこれ未満、６５％もしくはこれ未満、６０％もしくはこれ未満、５５％もしくはこれ未満、５０％もしくはこれ未満、４５％もしくはこれ未満、４０％もしくはこれ未満、３５％もしくはこれ未満、３０％もしくはこれ未満、２５％もしくはこれ未満、２０％もしくはこれ未満、１５％もしくはこれ未満、１０％もしくはこれ未満、５％もしくはこれ未満、または１％もしくはこれ未満のうちの１つへと阻害することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα複合体と、ｇｐ１３０との相互作用を、抗原結合性分子の非存在下における、ＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα複合体と、ｇｐ１３０との相互作用のレベルの、１倍未満、例えば、≦０．９９倍、≦０．９５倍、≦０．９倍、≦０．８５倍、≦０．８倍、≦０．７５倍、≦０．７倍、≦０．６５倍、≦０．６倍、≦０．５５倍、≦０．５倍、≦０．４５倍、≦０．４倍、≦０．３５倍、≦０．３倍、≦０．２５倍、≦０．２倍、≦０．１５倍、≦０．１倍のうちの１つへと阻害することが可能である。
【０１８８】
ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の阻害はまた、３Ｈ−チミジンの取込み、および／または、例えば、Ｃｕｒｔｉｓら、Ｂｌｏｏｄ、１９９７、９０（１１）；およびＫａｒｐｏｖｉｃｈら、Ｍｏｌ．Ｈｕｍ．Ｒｅｐｒｏｄ．、２００３、９（２）：７５〜８０において記載されている、Ｂａ／Ｆ３細胞増殖アッセイなどのＢａ／Ｆ３細胞増殖アッセイを使用しても解析されうる。Ｂａ／Ｆ３細胞は、ＩＬ−１１Ｒαと、ｇｐ１３０とを共発現する。
【０１８９】
本明細書で使用される、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達、および／またはＩＬ−１１媒介性シグナル伝達により媒介される過程は、ＩＬ−１１またはＩＬ−１１Ｒαの断片、およびＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒα、またはこれらの断片を含む、ポリペプチド複合体により媒介されるシグナル伝達を含む。ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達は、ヒトＩＬ−１１もしくはヒトＩＬ−１１Ｒα、および／またはマウスＩＬ−１１もしくはマウスＩＬ−１１Ｒαにより媒介されるシグナル伝達でありうる。ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達は、ＩＬ−１１またはＩＬ−１１を含有する複合体の、ＩＬ−１１または前記複合体が結合する受容体への結合の後で生じうる。
【０１９０】
一部の実施形態では、本発明に従う抗体および断片は、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒα、またはＩＬ−１１もしくはＩＬ−１１Ｒαを含有する複合体の生物学的活性を阻害することが可能である。一部の実施形態では、抗体／断片は、ＩＬ−１１またはｇｐ１３０への結合に重要な領域内で、ＩＬ−１１Ｒαに結合し、これにより、ＩＬ−１１への結合、および／またはＩＬ−１１媒介性シグナル伝達を破壊する。
【０１９１】
一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、ＩＬ−１１Ｒαおよび／またはｇｐ１３０を含む受容体の複合体、例えば、ＩＬ−１１Ｒα：ｇｐ１３０を介するシグナル伝達により活性化される、１つまたは複数のシグナル伝達経路のアンタゴニストである。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＩＬ−１１Ｒαおよび／またはｇｐ１３０を含む１つまたは複数の免疫受容体の複合体、例えば、ＩＬ−１１Ｒα：ｇｐ１３０を介するシグナル伝達を阻害することが可能である。
【０１９２】
一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達を、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）における、シグナル伝達のレベルの、１００％未満、例えば、９９％もしくはこれ未満、９５％もしくはこれ未満、９０％もしくはこれ未満、８５％もしくはこれ未満、８０％もしくはこれ未満、７５％もしくはこれ未満、７０％もしくはこれ未満、６５％もしくはこれ未満、６０％もしくはこれ未満、５５％もしくはこれ未満、５０％もしくはこれ未満、４５％もしくはこれ未満、４０％もしくはこれ未満、３５％もしくはこれ未満、３０％もしくはこれ未満、２５％もしくはこれ未満、２０％もしくはこれ未満、１５％もしくはこれ未満、１０％もしくはこれ未満、５％もしくはこれ未満、または１％もしくはこれ未満のうちの１つへと阻害することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達を、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）における、シグナル伝達のレベルの、１倍未満、例えば、≦０．９９倍、≦０．９５倍、≦０．９倍、≦０．８５倍、≦０．８倍、≦０．７５倍、≦０．７倍、≦０．６５倍、≦０．６倍、≦０．５５倍、≦０．５倍、≦０．４５倍、≦０．４倍、≦０．３５倍、≦０．３倍、≦０．２５倍、≦０．２倍、≦０．１５倍、≦０．１倍のうちの１つへと低減することが可能である。
【０１９３】
一部の実施形態では、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達は、ＩＬ−１１の、ＩＬ−１１Ｒα：ｇｐ１３０受容体への結合により媒介されるシグナル伝達である。このようなシグナル伝達は、例えば、ＩＬ−１１Ｒαおよびｇｐ１３０を発現する細胞を、ＩＬ−１１で処理することにより解析される場合もあり、ＩＬ−１１Ｒαおよびｇｐ１３０を発現する細胞内の、ＩＬ−１１の産生を刺激することにより解析される場合もある。
【０１９４】
ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の阻害のための、抗原結合性分子についてのＩＣ５０は、例えば、ＩＬ−１１Ｒαおよびｇｐ１３０を発現するＢａ／Ｆ３細胞を、ヒトＩＬ−１１およびヒトＩＬ−１１への結合剤の存在下で培養し、３Ｈ−チミジンの、ＤＮＡへの取込みを測定することにより決定されうる。
【０１９５】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、このようなアッセイにおいて、１０μｇ／ｍｌまたはこれ未満、好ましくは、≦５μｇ／ｍｌ、≦４μｇ／ｍｌ、≦３．５μｇ／ｍｌ、≦３μｇ／ｍｌ、≦２μｇ／ｍｌ、≦１μｇ／ｍｌ、≦０．９μｇ／ｍｌ、≦０．８μｇ／ｍｌ、≦０．７μｇ／ｍｌ、≦０．６μｇ／ｍｌ、または≦０．５μｇ／ｍｌのうちの１つのＩＣ５０を呈しうる。
【０１９６】
一部の実施形態では、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達は、ＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα複合体の、ｇｐ１３０への結合により媒介されるシグナル伝達でありうる。一部の実施形態では、ＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα複合体は、例えば、ＩＬ−１１Ｒαの細胞外ドメインと、ＩＬ−１１との、可溶性の複合体、または可溶性のＩＬ−１１Ｒαアイソフォーム／断片と、ＩＬ−１１との複合体でありうる。一部の実施形態では、可溶型ＩＬ−１１Ｒαは、ＩＬ−１１Ｒαの可溶型（分泌型）アイソフォームであるか、または、細胞膜結合型ＩＬ−１１Ｒαの細胞外ドメインの、タンパク質分解性切断の遊離産物である。本明細書では、ＩＬ−１１Ｒαに結合したＩＬ−１１の、ｇｐ１３０への結合により媒介されるＩＬ−１１媒介性シグナル伝達は、「ＩＬ−１１トランスシグナル伝達」と称される。
【０１９７】
一部の実施形態では、ＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα複合体は、細胞結合型複合体、例えば、細胞膜結合型ＩＬ−１１Ｒαと、ＩＬ−１１との複合体でありうる。ＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα複合体の、ｇｐ１３０への結合により媒介されるシグナル伝達は、ｇｐ１３０を発現する細胞を、ＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα複合体、例えば、ペプチドリンカーにより、ＩＬ−１１Ｒαの細胞外ドメインへと接続された、ＩＬ−１１（例えば、本明細書で記載される、ハイパーＩＬ−１１）を含む、組換え融合タンパク質で処理することにより解析されうる。
【０１９８】
一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、ＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα複合体の、ｇｐ１３０への結合により媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能であり、また、ＩＬ−１１の、ＩＬ−１１Ｒα：ｇｐ１３０受容体への結合により媒介されるシグナル伝達を阻害することが可能でもある。
【０１９９】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、線維芽細胞の増殖を阻害することが可能である。線維芽細胞の増殖は、時間経過にわたり、細胞分裂を解析することにより決定されうる。所与の線維芽細胞集団についての細胞分裂は、例えば、３Ｈ−チミジンの取込みについてのｉｎ  ｖｉｔｒｏ解析により解析される場合もあり、例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、ＦｕｌｃｈｅｒおよびＷｏｎｇ、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ（１９９９）、７７（６）：５５９〜５６４において記載されている、ＣＦＳＥ希釈アッセイにより解析される場合もある。増殖細胞（例えば、増殖線維芽細胞）はまた、例えば、それらのいずれもが、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる、Ｂｕｃｋら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．、２００８年６月；４４（７）：９２７〜９；ならびにＳａｌｉおよびＭｉｔｃｈｉｓｏｎ、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ、２００８年２月１９日、１０５（７）：２４１５〜２４２０において記載されている、適切なアッセイによる、５−エチニル−２’−デオキシウリジン（ＥｄＵ）の取込みについての解析によっても同定されうる。
【０２００】
本開示に従う線維芽細胞は、肝臓、肺、腎臓、心臓、血管、眼、皮膚、膵臓、脾臓、腸（例えば、大腸または小腸）、脳、および骨髄を含む、任意の組織に由来しうる。特定の実施形態では、抗原結合性分子を解析する目的で、線維芽細胞は、心臓線維芽細胞（例えば、心房線維芽細胞）、皮膚線維芽細胞、肺線維芽細胞、腎臓線維芽細胞、または肝臓線維芽細胞でありうる。
【０２０１】
一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、線維芽細胞の増殖を、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）における、線維芽細胞の増殖のレベルの、１００％未満、例えば、９９％もしくはこれ未満、９５％もしくはこれ未満、９０％もしくはこれ未満、８５％もしくはこれ未満、８０％もしくはこれ未満、７５％もしくはこれ未満、７０％もしくはこれ未満、６５％もしくはこれ未満、６０％もしくはこれ未満、５５％もしくはこれ未満、５０％もしくはこれ未満、４５％もしくはこれ未満、４０％もしくはこれ未満、３５％もしくはこれ未満、３０％もしくはこれ未満、２５％もしくはこれ未満、２０％もしくはこれ未満、１５％もしくはこれ未満、１０％もしくはこれ未満、５％もしくはこれ未満、または１％もしくはこれ未満のうちの１つへと阻害することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、線維芽細胞の増殖を、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）における、線維芽細胞の増殖のレベルの、１倍未満、例えば、≦０．９９倍、≦０．９５倍、≦０．９倍、≦０．８５倍、≦０．８倍、≦０．７５倍、≦０．７倍、≦０．６５倍、≦０．６倍、≦０．５５倍、≦０．５倍、≦０．４５倍、≦０．４倍、≦０．３５倍、≦０．３倍、≦０．２５倍、≦０．２倍、≦０．１５倍、≦０．１倍のうちの１つへと低減することが可能である。
【０２０２】
一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、例えば、線維症促進性因子（例えば、ＴＧＦβ１）による刺激の後において、ＩＬ−１１／ＩＬ−１１Ｒシグナル伝達により媒介される病理学的過程を阻害することが可能である。ＩＬ−１１／ＩＬ−１１Ｒシグナル伝達により媒介される病理学的過程は、線維症を含み、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏにおいて査定されうる。
【０２０３】
一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、線維症を阻害することが可能である。一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、線維症を反転または退縮させることが可能である。一部の実施形態では、線維症は、確立された線維症、または重度の線維症である。本明細書で使用される、線維症を阻害すること、または線維症の阻害とは、抗原結合性分子が、線維症の発症を低減、抑制、または防止する能力を指す。一部の実施形態では、線維症の阻害とは、例えば、線維症が、発症することが防止される、予防効果を指す。一部の実施形態では、線維症の阻害とは、例えば、既存の、早期または後期の線維症が、さらなる進行（ａｄｖａｎｃｅｄ）期へと進行すること（ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇまたはａｄｖａｎｃｉｎｇ）が防止される、処置効果を指す。本明細書で使用される、線維症を反転させること／線維症の反転、または線維症を退縮させること／線維症の退縮とは、抗原結合性分子が、線維症状態を、より進行した（ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ）状態から、それほど進行して（ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ）いない状態へと改善する（ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ）か、または線維症自体またはその症状の重症度を軽減する能力を指す。線維症を反転させること／線維症の反転は、線維症状態の改善（ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ）と関連しうる。
【０２０４】
本明細書の実験例では、線維症の阻害、反転、または退縮は、例えば、Ｏｐｅｒｅｔｔａ  Ｈｉｇｈ−Ｃｏｎｔｅｎｔ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍを使用して、ＡＣＴＡ２＋細胞の数または百分率を測定することにより、ヒドロキシプロリン含量の評価を介して、細胞内または臓器内のコラーゲン含量を測定することにより、ウェスタンブロット法を介して、ＥＲＫの活性化／リン酸化を測定することにより、かつ／あるいは定量的ＰＣＲを介して、ＴＮＦαおよびＣＣＬ２などの炎症マーカー、またはＴＧＦβ１、αＳＭＡ（ＡＣＴＡ２）、ＴＩＭＰ１、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ１Ａ２、もしくはＣＯＬ３Ａ１などの線維症マーカーの発現レベルを測定することにより解析される。肝臓などの組織では、線維症の阻害、反転、または退縮は、例えば、トリグリセリド含量および血清ＡＬＴレベルを決定することにより解析される。
【０２０５】
線維症は、特定の組織、またはいくつかの組織、例えば、肝臓、肺、腎臓、心臓、血管、眼、皮膚、膵臓、脾臓、腸（例えば、大腸または小腸）、脳、または骨髄の線維症でありうる。線維症は、当業者に周知の手段により、例えば、所与の１つの組織内または複数の組織内の、１つもしくは複数の筋線維芽細胞マーカーの、遺伝子発現またはタンパク質発現、および／または１つもしくは複数の線維症マーカーの、遺伝子発現またはタンパク質発現を解析することにより測定されうる。
【０２０６】
筋線維芽細胞マーカーは、αＳＭＡ、ビメンチン、パラジン、コフィリン、またはデスミンの増大のうちの１つまたは複数を含みうる。線維症についてのマーカーは、コラーゲン、フィブロネクチン、ペリオスチン、ＩＬ−６、ＩＬ−１１、αＳＭＡ、ＴＩＭＰ１、およびＭＭＰ２のレベルの増大、細胞外マトリックス構成要素、筋線維芽細胞の数／比率、ならびに臓器の重量を含む。
【０２０７】
線維症の、阻害／反転／退縮は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏにおいて測定されうる。例えば、抗原結合性分子が、所与の組織内の線維症を阻害する／反転させる／退縮させることが可能であるのかどうかは、この組織に由来する線維芽細胞を、線維症促進性刺激で処理し、次いで、抗体が、線維芽細胞からの、筋線維芽細胞の発生（または、例えば、線維症についての、他の一部のマーカー）を低減しうるか、またはこれを反転させうるのかどうかを解析することにより、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて解析されうる。抗原結合性分子が、線維症を阻害する／反転させる／退縮させることが可能であるのかどうかは、例えば、抗原結合性分子を、対象（例えば、線維症促進性刺激へと曝露された対象）へと投与し、組織（複数可）を、１つまたは複数の線維症マーカーについて解析することにより、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて解析されうる。
【０２０８】
一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、線維症を、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）における、線維症のレベルの、１００％未満、例えば、９９％もしくはこれ未満、９５％もしくはこれ未満、９０％もしくはこれ未満、８５％もしくはこれ未満、８０％もしくはこれ未満、７５％もしくはこれ未満、７０％もしくはこれ未満、６５％もしくはこれ未満、６０％もしくはこれ未満、５５％もしくはこれ未満、５０％もしくはこれ未満、４５％もしくはこれ未満、４０％もしくはこれ未満、３５％もしくはこれ未満、３０％もしくはこれ未満、２５％もしくはこれ未満、２０％もしくはこれ未満、１５％もしくはこれ未満、１０％もしくはこれ未満、５％もしくはこれ未満、または１％もしくはこれ未満のうちの１つへと阻害する／反転させる／退縮させることが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、線維症を、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）における、線維症のレベルの、１倍未満、例えば、≦０．９９倍、≦０．９５倍、≦０．９倍、≦０．８倍、≦０．８５倍、≦０．７５倍、≦０．７倍、≦０．６５倍、≦０．６倍、≦０．５５倍、≦０．５倍、≦０．４５倍、≦０．４倍、≦０．３５倍、≦０．３倍、≦０．２５倍、≦０．２倍、≦０．１５倍、≦０．１倍のうちの１つへと低減する／反転させる／退縮させることが可能である。
【０２０９】
一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、例えば、線維芽細胞または星細胞の、線維症促進性因子への曝露後における、線維芽細胞または星細胞（例えば、肝星細胞または膵星細胞）からの、筋線維芽細胞の発生を阻害することが可能である。線維芽細胞または星細胞からの、筋線維芽細胞の発生は、筋線維芽細胞マーカーについての解析により探索されうる。本開示に従う線維症促進性因子は、例えば、ＴＧＦβ１、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３、ＰＤＧＦ、ＥＴ−１、オンコスタチンＭ（ＯＳＭ）、またはＡＮＧ２（アンジオテンシンＩＩ）でありうる。一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、線維症促進性因子による、線維芽細胞または星細胞の活性化を阻害することが可能である。
【０２１０】
一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、星細胞の老化を促進することが可能である。老化は、Ｐ１６、Ｐ２１、およびＰ５３など、老化マーカーの発現を検出することにより測定されうる。
【０２１１】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、例えば、線維症促進性因子による刺激の後における、線維芽細胞内、星細胞内、または線維芽細胞内／星細胞由来細胞内（例えば、筋線維芽細胞内）の、コラーゲン、フィブロネクチン、ペリオスチン、ＩＬ−６、ＩＬ−１１、αＳＭＡ、ＴＩＭＰ１、ＭＭＰ２、ＴＮＦα、ＣＣＬ２のうちの１つまたは複数の遺伝子発現またはタンパク質発現を阻害することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、例えば、線維症促進性因子による刺激の後における、線維芽細胞内、または線維芽細胞由来細胞内（例えば、筋線維芽細胞内）の、１つまたは複数の細胞外マトリックス構成要素の遺伝子発現またはタンパク質発現を阻害することが可能である。
【０２１２】
本明細書の実験例では、線維芽細胞または星細胞からの、筋線維芽細胞の発生は、ＴＧＦβ１による、線維芽細胞の刺激の後において、Ｏｐｅｒｅｔｔａ  Ｈｉｇｈ−Ｃｏｎｔｅｎｔ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍを使用して、αＳＭＡのタンパク質発現レベルを測定することにより解析される。
【０２１３】
一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、線維芽細胞または星細胞からの、筋線維芽細胞の発生を、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）における、線維芽細胞または星細胞からの、筋線維芽細胞の発生のレベルの、１００％未満、例えば、９９％もしくはこれ未満、９５％もしくはこれ未満、９０％もしくはこれ未満、８５％もしくはこれ未満、８０％もしくはこれ未満、７５％もしくはこれ未満、７０％もしくはこれ未満、６５％もしくはこれ未満、６０％もしくはこれ未満、５５％もしくはこれ未満、５０％もしくはこれ未満、４５％もしくはこれ未満、４０％もしくはこれ未満、３５％もしくはこれ未満、３０％もしくはこれ未満、２５％もしくはこれ未満、２０％もしくはこれ未満、１５％もしくはこれ未満、１０％もしくはこれ未満、５％もしくはこれ未満、または１％もしくはこれ未満のうちの１つへと阻害することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、線維芽細胞または星細胞からの、筋線維芽細胞の発生を、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）における、線維芽細胞または星細胞からの、筋線維芽細胞の発生のレベルの、１倍未満、例えば、≦０．９９倍、≦０．９５倍、≦０．９倍、≦０．８５倍、≦０．８倍、≦０．７５倍、≦０．７倍、≦０．６５倍、≦０．６倍、≦０．５５倍、≦０．５倍、≦０．４５倍、≦０．４倍、≦０．３５倍、≦０．３倍、≦０．２５倍、≦０．２倍、≦０．１５倍、≦０．１倍のうちの１つへと低減することが可能である。
【０２１４】
一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、例えば、線維症促進性因子（例えば、ＴＧＦβ１）による刺激の後における、線維芽細胞内、星細胞内、または筋線維芽細胞内の、コラーゲン、フィブロネクチン、ペリオスチン、ＩＬ−６、ＩＬ−１１、αＳＭＡ、ＴＩＭＰ１、ＭＭＰ２、ＴＮＦα、ＣＣＬ２のうちの１つまたは複数の遺伝子発現またはタンパク質発現を阻害することが可能である。一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、遺伝子発現またはタンパク質発現を、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）における、遺伝子発現またはタンパク質発現のレベルの、１００％未満、例えば、９９％もしくはこれ未満、９５％もしくはこれ未満、９０％もしくはこれ未満、８５％もしくはこれ未満、８０％もしくはこれ未満、７５％もしくはこれ未満、７０％もしくはこれ未満、６５％もしくはこれ未満、６０％もしくはこれ未満、５５％もしくはこれ未満、５０％もしくはこれ未満、４５％もしくはこれ未満、４０％もしくはこれ未満、３５％もしくはこれ未満、３０％もしくはこれ未満、２５％もしくはこれ未満、２０％もしくはこれ未満、１５％もしくはこれ未満、１０％もしくはこれ未満、５％もしくはこれ未満、または１％もしくはこれ未満のうちの１つへと阻害することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、遺伝子発現またはタンパク質発現を、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）における、遺伝子発現またはタンパク質発現のレベルの、１倍未満、例えば、≦０．９９倍、≦０．９５倍、≦０．９倍、≦０．８５倍、≦０．８倍、≦０．７５倍、≦０．７倍、≦０．６５倍、≦０．６倍、≦０．５５倍、≦０．５倍、≦０．４５倍、≦０．４倍、≦０．３５倍、≦０．３倍、≦０．２５倍、≦０．２倍、≦０．１５倍、≦０．１倍のうちの１つへと低減することが可能である。
【０２１５】
一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、例えば、線維症促進性因子（例えば、ＴＧＦβ１）による刺激の後における、線維芽細胞または星細胞による、細胞外マトリックスの産生を阻害することが可能である。細胞外マトリックスの産生は、例えば、細胞外マトリックス構成要素のレベルを測定することにより査定されうる。本発明に従う、細胞外マトリックス構成要素は、例えば、プロテオグリカン、硫酸ヘパラン、硫酸コンドロイチン、硫酸ケラタン、ヒアルロン酸、コラーゲン、ペリオスチン、フィブロネクチン、ビトロネクチン、エラスチン、フィブロネクチン、ラミニン、窒素、ゼラチンおよびアグレカンを含む。一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、線維芽細胞、星細胞、および／または筋線維芽細胞からの、コラーゲンの分泌を阻害することが可能である。
【０２１６】
一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、線維芽細胞または星細胞による、細胞外マトリックスの産生を、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）における、線維芽細胞または星細胞による、細胞外マトリックスの産生のレベルの、１００％未満、例えば、９９％もしくはこれ未満、９５％もしくはこれ未満、９０％もしくはこれ未満、８５％もしくはこれ未満、８０％もしくはこれ未満、７５％もしくはこれ未満、７０％もしくはこれ未満、６５％もしくはこれ未満、６０％もしくはこれ未満、５５％もしくはこれ未満、５０％もしくはこれ未満、４５％もしくはこれ未満、４０％もしくはこれ未満、３５％もしくはこれ未満、３０％もしくはこれ未満、２５％もしくはこれ未満、２０％もしくはこれ未満、１５％もしくはこれ未満、１０％もしくはこれ未満、５％もしくはこれ未満、または１％もしくはこれ未満のうちの１つへと阻害することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、線維芽細胞または星細胞による、細胞外マトリックスの産生を、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）における、細胞外マトリックス産生のレベルの、１倍未満、例えば、≦０．９９倍、≦０．９５倍、≦０．９倍、≦０．８５倍、≦０．８倍、≦０．７５倍、≦０．７倍、≦０．６５倍、≦０．６倍、≦０．５５倍、≦０．５倍、≦０．４５倍、≦０．４倍、≦０．３５倍、≦０．３倍、≦０．２５倍、≦０．２倍、≦０．１５倍、≦０．１倍のうちの１つへと低減することが可能である。
【０２１７】
一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、肝細胞内の、１つまたは複数の脂質の生成および／またはβ酸化に関与する遺伝子／タンパク質の、遺伝子発現またはタンパク質発現を上方調節することが可能である。このような遺伝子／タンパク質は、例えば、ＡＣＯＸ１（アシルＣｏＡオキシダーゼ１）、ＳＣＤ１（ステアロイルＣｏＡデサチュラーゼ１）、ＦＡＳＮ（脂肪酸シンターゼ）、またはＳＲＥＢＦ１（ステロール調節エレメント結合性タンパク質１）でありうる。一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、遺伝子発現またはタンパク質発現を、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）における、遺伝子発現またはタンパク質発現のレベルの、１倍を超えて、例えば、≧１．０１倍、≧１．０５倍、≧１．１倍、≧１．１５倍、≧１．２倍、≧１．２５倍、≧１．３倍、≧１．３５倍、≧１．４倍、≧１．４５倍、≧１．５倍、≧１．５５倍、≧１．６倍、≧１．６５倍、≧１．７倍、≧１．７５倍、≧１．８倍、≧１．８５倍、≧１．９倍、≧１．９５倍、≧２倍、≧２．５倍、≧３倍、≧３．５倍、≧４倍、≧４．５倍、≧５倍、≧６倍、≧７倍、≧８倍、≧９倍、または≧１０倍のうちの１つに上方調節することが可能である。
【０２１８】
一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、線維芽細胞、星細胞、または筋線維芽細胞の遊走的挙動および／または浸潤的挙動を阻害すること、すなわち、これらの遊走および／または浸潤を阻害することが可能である。このような細胞の遊走および浸潤は、線維症の病態において、極めて重要でありうる。細胞の遊走は、例えば、ポリカーボネート膜、およびＴＧＦβ１またはＣＣＬ２などの浸潤性刺激因子を使用して査定されうる。細胞の浸潤は、例えば、ボイデンチャンバー浸潤アッセイまたはＥＣＭコーティングマトリゲルを使用して測定されうる。一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、線維芽細胞、星細胞、または筋線維芽細胞の、遊走および／または浸潤を、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）における、遊走および／または浸潤のレベルの、１００％未満、例えば、９９％もしくはこれ未満、９５％もしくはこれ未満、９０％もしくはこれ未満、８５％もしくはこれ未満、８０％もしくはこれ未満、７５％もしくはこれ未満、７０％もしくはこれ未満、６５％もしくはこれ未満、６０％もしくはこれ未満、５５％もしくはこれ未満、５０％もしくはこれ未満、４５％もしくはこれ未満、４０％もしくはこれ未満、３５％もしくはこれ未満、３０％もしくはこれ未満、２５％もしくはこれ未満、２０％もしくはこれ未満、１５％もしくはこれ未満、１０％もしくはこれ未満、５％もしくはこれ未満、または１％もしくはこれ未満のうちの１つへと阻害することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、遊走および／または浸潤を、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）における、遊走および／または浸潤のレベルの、１倍未満、例えば、≦０．９９倍、≦０．９５倍、≦０．９倍、≦０．８５倍、≦０．８倍、≦０．７５倍、≦０．７倍、≦０．６５倍、≦０．６倍、≦０．５５倍、≦０．５倍、≦０．４５倍、≦０．４倍、≦０．３５倍、≦０．３倍、≦０．２５倍、≦０．２倍、≦０．１５倍、≦０．１倍のうちの１つへと低減することが可能である。
【０２１９】
一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、臓器内の免疫細胞の存在を阻害することが可能である。一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、臓器内の免疫細胞の数を低減することが可能である。臓器は、線維症に罹患しやすいか、またはこれを患う臓器、例えば、肝臓または腎臓でありうる。免疫細胞は、ＣＤ４５＋細胞、例えば、ＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞である、Ｂリンパ球、顆粒球、および単球でありうる。免疫細胞は、マウス単球マーカーである、ＬｙＣ６を発現しうる。一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、臓器内の免疫細胞の数を、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）における、臓器内の免疫細胞の数の、１００％未満、例えば、９９％もしくはこれ未満、９５％もしくはこれ未満、９０％もしくはこれ未満、８５％もしくはこれ未満、８０％もしくはこれ未満、７５％もしくはこれ未満、７０％もしくはこれ未満、６５％もしくはこれ未満、６０％もしくはこれ未満、５５％もしくはこれ未満、５０％もしくはこれ未満、４５％もしくはこれ未満、４０％もしくはこれ未満、３５％もしくはこれ未満、３０％もしくはこれ未満、２５％もしくはこれ未満、２０％もしくはこれ未満、１５％もしくはこれ未満、１０％もしくはこれ未満、５％もしくはこれ未満、または１％もしくはこれ未満のうちの１つへと低減することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、臓器内の免疫細胞の数を、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）における、臓器内の免疫細胞の数の、１倍未満、例えば、≦０．９９倍、≦０．９５倍、≦０．９倍、≦０．８５倍、≦０．８倍、≦０．７５倍、≦０．７倍、≦０．６５倍、≦０．６倍、≦０．５５倍、≦０．５倍、≦０．４５倍、≦０．４倍、≦０．３５倍、≦０．３倍、≦０．２５倍、≦０．２倍、≦０．１５倍、≦０．１倍のうちの１つへと低減することが可能である。
【０２２０】
一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、がん細胞の増殖および／または生存を阻害することが可能である。当業者は、抗原結合性分子が、例えば、抗原結合性分子の、がん細胞に対する効果を解析することにより、がん細胞の増殖および／または生存を阻害することが可能であるのかどうかを決定することが可能である。例えば、細胞の増殖は、本明細書に記載される通り、例えば、３Ｈチミジンの取込みにより測定される場合もあり、ＣＦＳＥ希釈アッセイにより測定される場合もある。細胞の生存は、抗原結合性分子による処置後における、細胞を、細胞の生存／細胞死のマーカーについて測定することにより解析されうる。
【０２２１】
一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、がん細胞の増殖および／または生存を、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）における、がん細胞の増殖および／または生存のレベルの、１００％未満、例えば、９９％もしくはこれ未満、９５％もしくはこれ未満、９０％もしくはこれ未満、８５％もしくはこれ未満、８０％もしくはこれ未満、７５％もしくはこれ未満、７０％もしくはこれ未満、６５％もしくはこれ未満、６０％もしくはこれ未満、５５％もしくはこれ未満、５０％もしくはこれ未満、４５％もしくはこれ未満、４０％もしくはこれ未満、３５％もしくはこれ未満、３０％もしくはこれ未満、２５％もしくはこれ未満、２０％もしくはこれ未満、１５％もしくはこれ未満、１０％もしくはこれ未満、５％もしくはこれ未満、または１％もしくはこれ未満のうちの１つへと阻害することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、がん細胞の増殖および／または生存を、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）における、がん細胞の増殖および／または生存のレベルの、１倍未満、例えば、≦０．９９倍、≦０．９５倍、≦０．９倍、≦０．８５倍、≦０．８倍、≦０．７５倍、≦０．７倍、≦０．６５倍、≦０．６倍、≦０．５５倍、≦０．５倍、≦０．４５倍、≦０．４倍、≦０．３５倍、≦０．３倍、≦０．２５倍、≦０．２倍、≦０．１５倍、≦０．１倍のうちの１つへと低減することが可能である。
【０２２２】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるがんの発症および／または進行を阻害する。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、例えば、エフェクター免疫細胞により、がん細胞の殺滅を引き起こす。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、例えば、適切な対照条件と比較した、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるがん細胞の数の低減を引き起こす。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、例えば、時間経過にわたり、腫瘍サイズ／容量を測定することにより決定される、腫瘍増殖を阻害する。
【０２２３】
本発明の抗原結合性分子は、適切なｉｎ  ｖｉｖｏモデルにおいて、がんの発症および／または進行を阻害する能力について解析されうる。がんは、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達、および／またはＩＬ−１１ＲαもしくはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体を発現する／含む細胞が、病理学的に関与するがんでありうる。このようながんは、それらのいずれもが、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる、Ｘｕら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ．（２０１６）、３７３（２）：１５６〜６３；およびＪｏｈｎｓｔｏｎｅら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ＆  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｒｅｖｉｅｗｓ（２０１５）、２６（５）：４８９〜４９８において記載されているがんを含む。
【０２２４】
一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子の投与は、例えば、がんについての、適切なｉｎ  ｖｉｖｏモデルにおいて決定する場合、がんの発症／進行の阻害、がんの発生までの遅延／がんの発生の防止、腫瘍増殖の軽減／腫瘍増殖までの遅延／腫瘍増殖の防止、転移の軽減／転移までの遅延／転移の防止、がんの症状の重症度の軽減、がん細胞数の低減、腫瘍サイズ／体積の低減、および／または生存（例えば、無増悪生存期間）の延長のうちの１つまたは複数を引き起こしうる。一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、化学療法剤と共に、例えば、別個に、同時に、または逐次的に投与された場合、単独で投与された化学療法剤と比較して、相加効果を提示する。相加効果は、ＩＬ−１１シグナル伝達の低減、がんの発症／進行の阻害、および／または腫瘍増殖の阻害など、本明細書で記載される、任意の効果でありうる。
【０２２５】
一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、腫瘍の増殖を、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）における、腫瘍の増殖のレベルの、１００％未満、例えば、９９％もしくはこれ未満、９５％もしくはこれ未満、９０％もしくはこれ未満、８５％もしくはこれ未満、８０％もしくはこれ未満、７５％もしくはこれ未満、７０％もしくはこれ未満、６５％もしくはこれ未満、６０％もしくはこれ未満、５５％もしくはこれ未満、５０％もしくはこれ未満、４５％もしくはこれ未満、４０％もしくはこれ未満、３５％もしくはこれ未満、３０％もしくはこれ未満、２５％もしくはこれ未満、２０％もしくはこれ未満、１５％もしくはこれ未満、１０％もしくはこれ未満、５％もしくはこれ未満、または１％もしくはこれ未満のうちの１つへと阻害することが可能である。一部の実施形態では、抗原結合性分子は、腫瘍の増殖を、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）における、腫瘍の増殖のレベルの、１倍未満、例えば、≦０．９９倍、≦０．９５倍、≦０．９倍、≦０．８５倍、≦０．８倍、≦０．７５倍、≦０．７倍、≦０．６５倍、≦０．６倍、≦０．５５倍、≦０．５倍、≦０．４５倍、≦０．４倍、≦０．３５倍、≦０．３倍、≦０．２５倍、≦０．２倍、≦０．１５倍、≦０．１倍のうちの１つへと低減することが可能である。
【０２２６】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体を発現する／含む細胞の殺滅を引き起こすことが可能である。ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体を発現する／含む細胞の殺滅は、抗原結合性分子のエフェクター機能を介して増大させうる。抗原結合性分子が、Ｆｃ領域を含む実施形態では、抗原結合性分子は、補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）、および抗体依存性細胞性食作用（ＡＤＣＰ）のうちの１つまたは複数を介して、ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体を発現する／含む細胞の殺滅を引き起こしうる。
【０２２７】
ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体を発現する／含む細胞の殺滅を引き起こすことが可能な抗原結合性分子は、適切なアッセイの、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）において検出される細胞殺滅のレベルと比較した、抗原結合性分子の存在下（またはＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体を発現する／含む細胞の、抗原結合性分子を伴うインキュベーションの後）における、ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体を発現する／含む細胞の殺滅のレベルの観察により同定されうる。当業者には、ＣＤＣ、ＡＤＣＣ、およびＡＤＣＰについてのアッセイが周知である。ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体を発現する／含む細胞の殺滅のレベルはまた、異なる処置条件への曝露の後における、ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体を発現する／含む細胞の、生存および／または非生存の数／比率を測定することによっても決定されうる。
【０２２８】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体を発現する／含む細胞の殺滅を、抗原結合性分子の非存在下（または適切な対照抗原結合性分子の存在下）における、観察される殺滅のレベルの１倍を超えて、例えば、≧１．０１倍、≧１．０２倍、≧１．０３倍、≧１．０４倍、≧１．０５倍、≧１．１倍、≧１．２倍、≧１．３倍、≧１．４倍、≧１．５倍、≧１．６倍、≧１．７倍、≧１．８倍、≧１．９倍、≧２倍、≧３倍、≧４倍、≧５倍、≧６倍、≧７倍、≧８倍、≧９倍、または≧１０倍にすることが可能である。
【０２２９】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体を発現する／含む細胞の数を、同等なアッセイの、抗原結合性分子の非存在下における（または適切な対照抗原結合性分子の存在下のインキュベーション後における）、インキュベーション後に検出される、ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体を発現する／含む細胞の数の１倍未満、例えば、≦０．９９倍、≦０．９５倍、≦０．９倍、≦０．８５倍、≦０．８倍、≦０．７５倍、≦０．７倍、≦０．６５倍、≦０．６倍、≦０．５５倍、≦０．５倍、≦０．４５倍、≦０．４倍、≦０．３５倍、≦０．３倍、≦０．２５倍、≦０．２倍、≦０．１５倍、≦０．１倍、≦０．０５倍、または≦０．０１倍にすることが可能である。細胞の数および比率は、例えば、細胞型の検出を可能とする抗体を使用する、フローサイトメトリー解析により決定されうる。
【０２３０】
一部の実施形態では、本発明に従う抗原結合性分子は、１つまたは複数の、ＩＬ−１１Ｒαに結合することが可能な、この参照抗体／抗原結合性断片と比較して、同等であるか、または改善された特性を有する。
【０２３１】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、ＩＬ−１１Ｒαに結合することが可能な、この参照抗体／抗原結合性断片と比較した、以下の特性：
（ｉ）ＩＬ−１１Ｒαに、同等であるか、またはこれを超える特異性で結合すること（すなわち、ＩＬ−１１Ｒα以外の、ＩＬ−６サイトカイン受容体ファミリーのタンパク質に対する、同等であるか、または低減された交差反応性を有すること）；
（ｉｉ）ＩＬ−１１Ｒα（例えば、ヒトＩＬ−１１Ｒαおよび／またはマウスＩＬ−１１Ｒα）に、同等であるか、またはこれを超えるアフィニティーで結合すること（例えば、ＥＬＩＳＡにより決定される、同等であるか、または低値のＥＣ５０を有すること；例えば、ＳＰＲ解析により決定される、同等であるか、または低値のＫＤを有すること）；
（ｉｉｉ）ＩＬ−１１Ｒαと、ＩＬ−１１との相互作用の、同等であるか、またはこれを超える阻害；
（ｉｖ）ＩＬ−１１Ｒαと、ｇｐ１３０との相互作用の、同等であるか、またはこれを超える阻害；
（ｖ）ＩＬ−１１Ｒα：ｇｐ１３０受容体複合体と、ＩＬ−１１との相互作用の、同等であるか、またはこれを超える阻害；
（ｖｉ）ＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα複合体と、ｇｐ１３０との相互作用の、同等であるか、またはこれを超える阻害；
（ｖｉｉ）ＩＬ−１１／ＩＬ−１１Ｒシグナル伝達の、同等であるか、またはこれを超える阻害；
（ｖｉｉｉ）ＩＬ−１１により媒介されるシグナル伝達（例えば、適切なアッセイにおいて、ＥＬＩＳＡにより決定される、同等であるか、または低値のＩＣ５０を有する）の、同等であるか、またはこれを超える阻害；
（ｉｘ）ＩＬ−１１の、ＩＬ−１１Ｒα：ｇｐ１３０受容体複合体への結合により媒介されるシグナル伝達の、同等であるか、またはこれを超える阻害；
（ｘ）ＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα複合体の、ｇｐ１３０への結合（すなわち、ＩＬ−１１トランスシグナル伝達）により媒介されるシグナル伝達の、同等であるか、またはこれを超える阻害；
（ｘｉ）線維芽細胞の増殖の、同等であるか、またはこれを超える阻害；
（ｘｉｉ）筋線維芽細胞の、線維芽細胞からの発生の、同等であるか、またはこれを超える阻害；
（ｘｉｉｉ）筋線維芽細胞の、線維芽細胞からの発生の、同等であるか、またはこれを超える反転／退縮；
（ｘｉｖ）筋線維芽細胞の、星細胞、例えば、肝星細胞または膵星細胞からの発生の、同等であるか、またはこれを超える阻害；
（ｘｖ）筋線維芽細胞の、星細胞、例えば、肝星細胞または膵星細胞からの発生の、同等であるか、またはこれを超える反転／退縮；
（ｘｖｉ）線維芽細胞、星細胞、または筋線維芽細胞の遊走的挙動および／または浸潤的挙動の、同等であるか、またはこれを超える阻害（すなわち、遊走および／または浸潤の阻害）；
（ｘｖｉｉ）臓器内の免疫細胞の存在の、同等であるか、またはこれを超える阻害；
（ｘｖｉｉｉ）ＩＬ−１１／ＩＬ−１１Ｒシグナル伝達により媒介される病理学的過程の、同等であるか、またはこれを超える阻害；
（ｘｉｘ）線維症の、同等であるか、またはこれを超える阻害；
（ｘｘ）線維症の、同等であるか、またはこれを超える反転／退縮；
（ｘｘｉ）例えば、線維症促進性因子による刺激の後における、線維芽細胞内の、コラーゲン、フィブロネクチン、ペリオスチン、ＩＬ−６、ＩＬ−１１、αＳＭＡ（ＡＣＴＡ２）、ＴＩＭＰ１、ＭＭＰ２、ＴＮＦα、ＣＣＬ２のうちの１つまたは複数の遺伝子発現またはタンパク質発現の、同等であるか、またはこれを超える阻害；
（ｘｘｉｉ）線維芽細胞または星細胞による、細胞外マトリックスの産生の、同等であるか、またはこれを超える阻害；
（ｘｘｉｉｉ）がん細胞の増殖および／または生存の、同等であるか、またはこれを超える阻害；
（ｘｘｉｖ）ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるがんの発生および／または進行の、同等であるか、またはこれを超える阻害；
（ｘｘｖ）腫瘍の増殖の、同等であるか、またはこれを超える阻害；
（ｘｘｖｉ）ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体を発現する／含む細胞の、同等であるか、またはこれを超える殺滅
のうちの１つまたは複数を呈する。
【０２３２】
一部の実施形態では、「（〜を）超える特異性」または「（〜を）超えるアフィニティー」または「（〜を）超える阻害」または「（〜を）超える殺滅」とは、それぞれ、適切なアッセイにおいて決定される、ＩＬ−１１Ｒαに結合することが可能な、この参照抗体／抗原結合性断片が呈するレベルの、１倍を超える、例えば、≧１．０１倍、≧１．０２倍、≧１．０３倍、≧１．０４倍、≧１．０５倍、≧１．０６倍、≧１．０７倍、≧１．０８倍、≧１．０９倍、≧１．１倍、≧１．２倍、≧１．３倍、≧１．４倍、≧１．５倍、≧１．６倍、≧１．７倍、≧１．８倍、≧１．９倍、≧２倍、≧２．１倍、≧２．２倍、≧２．３倍、≧２．４倍、≧２．５倍、≧２．６倍、≧２．７倍、≧２．８倍、≧２．９倍、≧３倍、≧３．５倍、≧４倍、≧４．５倍、≧５倍、≧６倍、≧７倍、≧８倍、≧９倍、≧１０倍、≧１５倍、≧２０倍、≧２５倍、≧３０倍、≧３５倍、≧４０倍、≧４５倍、≧５０倍、≧６０倍、≧７０倍、≧８０倍、≧９０倍、≧１００倍、≧２００倍、≧３００倍、≧４００倍、≧５００倍、≧６００倍、≧７００倍、≧８００倍、≧９００倍、≧１０００倍である、特異性、アフィニティー、阻害、または殺滅のレベルを指す。
【０２３３】
一部の実施形態では、「同等な特異性」または「同等なアフィニティー」または「同等な阻害」または「同等な殺滅」とは、それぞれ、適切なアッセイにおいて決定される、ＩＬ−１１Ｒαに結合することが可能な、この参照抗体／抗原結合性断片が呈するレベルの、≧０．２倍であり、かつ、≦５倍である、例えば、≧０．３倍であり、かつ、≦４倍である、≧０．４倍であり、かつ、≦３倍である、≧０．５倍であり、かつ、≦２倍である、≧０．６倍であり、かつ、≦１．７５倍である、≧０．７倍であり、かつ、≦１．５倍である、≧０．７５倍であり、かつ、≦１．２５倍である、≧０．８倍であり、かつ、≦１．２倍である、≧０．８５倍であり、かつ、≦１．１５倍である、≧０．９倍であり、かつ、≦１．１倍である、≧０．９１倍であり、かつ、≦１．０９倍である、≧０．９２倍であり、かつ、≦１．０８倍である、≧０．９３倍であり、かつ、≦１．０７倍である、≧０．９４倍であり、かつ、≦１．０６倍である、≧０．９５倍であり、かつ、≦１．０５倍である、≧０．９６倍であり、かつ、≦１．０４倍である、≧０．９７倍であり、かつ、≦１．０３倍である、≧０．９８倍であり、かつ、≦１．０２倍、または≧０．９９倍であり、かつ、≦１．０１倍である、特異性、アフィニティー、阻害、または殺滅のレベルを指す。
【０２３４】
一部の実施形態では、ＩＬ−１１Ｒαに結合することが可能な参照抗体／抗体断片は、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体のクローンである、ＢＳＯ−９Ａ７のＣＤＲを含みうる。一部の実施形態では、ＩＬ−１１Ｒαに結合することが可能な参照抗体／抗体断片は、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体のクローンである、ＢＳＯ−９Ａ７の、ＶＨ配列およびＶＬ配列を含みうるか、またはこれらからなりうる。
【０２３５】
一部の実施形態では、ＩＬ−１１Ｒαに結合することが可能な参照抗体／抗体断片は、配列番号７のアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなるＶＨと、配列番号５９のアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなるＶＬとを含みうる。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
本発明はまた、本発明の抗原結合性分子またはポリペプチドを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）も提供する。
【０２３６】
ＣＡＲは、抗原結合およびＴ細胞活性化機能の両方をもたらす、組換え受容体である。ＣＡＲの構造および操作については、例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Ｄｏｔｔｉら、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ（２０１４）、２５７（１）において総説されている。ＣＡＲは、細胞膜アンカー領域およびシグナル伝達領域へと連結された、抗原結合性領域を含む。任意選択のヒンジ領域は、抗原結合性領域と、細胞膜アンカー領域との分離をもたらすことが可能であり、可動性リンカーとして作用しうる。
【０２３７】
本発明のＣＡＲは、本発明の抗原結合性分子を含むか、もしくはこれからなるか、または本発明に従うポリペプチドを含むか、もしくはこれからなる、抗原結合性領域を含む。
細胞膜アンカー領域は、ＣＡＲの、抗原結合性領域と、シグナル伝達領域との間にもたらされ、細胞外腔に抗原結合性領域を伴い、細胞内部にシグナル伝達領域を伴う、ＣＡＲの、ＣＡＲを発現する細胞の細胞膜へのアンカリングをもたらす。一部の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ３−ζ、ＣＤ４、ＣＤ８、またはＣＤ２８のうちの１つの、膜貫通領域のアミノ酸配列を含むか、これからなるか、またはこれに由来するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる細胞膜アンカー領域を含む。本明細書で使用される、参照アミノ酸配列「に由来する」領域は、参照配列に対する、少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちの１つを有するアミノ酸配列を含む。
【０２３８】
ＣＡＲのシグナル伝達領域は、Ｔ細胞の活性化を可能とする。ＣＡＲのシグナル伝達領域は、ＣＡＲ発現Ｔ細胞のリン酸化および活性化のための、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）をもたらす、ＣＤ３−ζの細胞内ドメインのアミノ酸配列を含みうる。ＣＡＲでは、ＦｃγＲＩなど、他のＩＴＡＭ含有タンパク質の配列を含むシグナル伝達領域もまた利用されている（Ｈａｙｎｅｓら、２００１、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１６６（１）：１８２〜１８７）。ＣＡＲのシグナル伝達領域はまた、標的タンパク質への結合時における、ＣＡＲ発現Ｔ細胞の活性化を容易とするように、共刺激分子のシグナル伝達領域に由来する、共刺激配列も含みうる。適切な共刺激分子は、ＣＤ２８、ＯＸ４０、４−１ＢＢ、ＩＣＯＳ、およびＣＤ２７を含む。場合によって、ＣＡＲは、異なる細胞内シグナル伝達経路の共刺激をもたらすように操作される。例えば、ＣＤ２８の共刺激と関連するシグナル伝達が、ホスファチジルイノシトール３キナーゼ（Ｐ１３Ｋ）経路を優先的に活性化させるのに対し、４−１ＢＢ媒介性シグナル伝達ＴＮＦ受容体関連因子（ＴＲＡＦ）アダプタータンパク質を介する。したがって、ＣＡＲのシグナル伝達領域は、場合によって、１つを超える共刺激分子のシグナル伝達領域に由来する共刺激配列を含有する。一部の実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＤ２８、ＯＸ４０、４−１ＢＢ、ＩＣＯＳ、およびＣＤ２７のうちの１つまたは複数の細胞内ドメインのアミノ酸配列を含むか、これからなるか、またはこれに由来するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる、１つまたは複数の共刺激配列を含む。
【０２３９】
任意選択のヒンジ領域は、抗原結合性ドメインと、膜貫通ドメインとの分離をもたらすことが可能であり、可動性リンカーとして作用しうる。ヒンジ領域は、ＩｇＧ１に由来しうる。一部の実施形態では、本発明のＣＡＲは、このＩｇＧ１のヒンジ領域のアミノ酸配列を含むか、これからなるか、またはこれに由来するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなるヒンジ領域を含む。
【０２４０】
また、本発明に従うＣＡＲを含む細胞も提供される。本発明に従うＣＡＲは、ＣＡＲ発現免疫細胞、例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞またはＣＡＲ−ＮＫ細胞を作出するのに使用されうる。ＣＡＲの、免疫細胞への操作は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける培養時に実施されうる。
【０２４１】
本発明のＣＡＲの抗原結合性領域は、例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂなど、任意の適切なフォーマットでもたらされうる。
核酸およびベクター
本発明は、本発明に従う、抗原結合性分子、ポリペプチド、またはＣＡＲをコードする、１つの核酸または複数の核酸を提供する。
【０２４２】
一部の実施形態では、核酸は、例えば、他の核酸から、精製または単離される場合もあり、天然に存在する生物学的素材から、精製または単離される場合もある。一部の実施形態では、核酸（複数可）は、ＤＮＡおよび／またはＲＮＡを含むか、またはこれからなる。
【０２４３】
本発明はまた、本発明に従う、１つの核酸または複数の核酸を含む、１つのベクターまたは複数のベクターも提供する。
ヌクレオチド配列は、ベクター、例えば、発現ベクター内に含有されうる。本明細書で使用される、「ベクター」とは、外因性核酸を、細胞へと導入するビヒクルとして使用される核酸分子である。ベクターは、細胞内で核酸を発現させるためのベクターでありうる。このようなベクターは、発現される配列をコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結されたプロモーター配列を含みうる。ベクターはまた、終止コドンおよび発現エンハンサーも含みうる。当技術分野で公知である、任意の、適切なベクター、プロモーター、エンハンサー、および終止コドンが、ペプチドまたはポリペプチドを、本発明に従うベクターから発現させるのに使用されうる。
【０２４４】
「作動可能に連結された」という用語は、核酸配列の発現を、調節配列の影響下または制御下に置く（これにより、発現カセットを形成する）ように、選択された核酸配列と、調節的核酸配列（例えば、プロモーターおよび／またはエンハンサー）とが、共有結合的に連結された状況を含みうる。したがって、調節配列が、核酸配列の転写を実行することが可能な場合、調節配列は、選択された核酸配列に作動可能に連結されている。次いで、結果として得られる転写物（複数可）は、所望のペプチド（複数可）／ポリペプチド（複数可）へと翻訳されうる。
【０２４５】
適切なベクターは、プラスミド、二元ベクター、ＤＮＡベクター、ｍＲＮＡベクター、ウイルスベクター（例えば、ガンマレトロウイルスベクター（例えば、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）由来ベクター）、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、およびヘルペスウイルスベクター）、トランスポゾンベースのベクター、および人工染色体（例えば、酵母人工染色体）を含む。
【０２４６】
一部の実施形態では、ベクターは、真核生物ベクター、例えば、真核細胞内のベクターからの、タンパク質の発現に必要なエレメントを含むベクターでありうる。一部の実施形態では、ベクターは、例えば、タンパク質の発現を駆動する、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）またはＳＶ４０プロモーターを含む、哺乳動物ベクターでありうる。
【０２４７】
本発明に従う抗原結合性分子の、構成要素であるポリペプチドは、複数の核酸のうちの、異なる核酸、または複数のベクターのうちの、異なるベクターによりコードされうる。
抗原結合性分子およびポリペプチドを含む／発現する細胞
本発明はまた、本発明に従う、抗原結合性分子、ポリペプチド、またはＣＡＲを含むか、またはこれを発現する細胞も提供する。また、本発明に従う１つの核酸、複数の核酸、１つのベクター、または複数のベクターを含むか、またはこれを発現する細胞も提供される。
【０２４８】
細胞は、真核細胞、例えば、哺乳動物細胞でありうる。哺乳動物は、霊長動物（アカゲザル、カニクイザル、非ヒト霊長動物、またはヒト）、または非ヒト哺乳動物（例えば、ウサギ、モルモット、ラット、マウスまたは他の齧歯動物（ネズミ目内の任意の動物を含む）、ネコ、イヌ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、畜牛（ウシ、例えば、乳牛、またはウシ目内の任意の動物を含む）、ウマ（ウマ目内の任意の動物を含む）、ロバ、および非ヒト霊長動物）でありうる。
【０２４９】
本発明はまた、本発明に従う核酸（複数可）またはベクター（複数可）を含む細胞を作製するための方法であって、本発明に従う１つの核酸、複数の核酸、１つのベクター、または複数のベクターを、細胞へと導入するステップを含む方法も提供する。一部の実施形態では、本発明に従う、単離核酸（複数可）または単離ベクター（複数可）を、細胞へと導入するステップは、形質転換、トランスフェクション、電気穿孔、または形質導入（例えば、レトロウイルスによる形質導入）を含む。
【０２５０】
本発明はまた、本発明に従う、抗原結合性分子、ポリペプチド、またはＣＡＲを発現する／含む細胞を作製するための方法であって、本発明に従う１つの核酸、複数の核酸、１つのベクター、または複数のベクターを、細胞へと導入するステップを含む方法も提供する。一部の実施形態では、方法は、細胞を、細胞による、核酸（複数可）またはベクター（複数可）の発現にも適する条件下で培養するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて実施される。
【０２５１】
本発明はまた、本発明に従う方法により得られるか、または得られうる細胞も提供する。
抗原結合性分子およびポリペプチドの作製
本発明に従う抗原結合性分子およびポリペプチドは、当業者に公知の、ポリペプチドを作製するための方法に従い調製されうる。
【０２５２】
ポリペプチドは、化学合成、例えば、液相または固相合成により調製されうる。例えば、ペプチド／ポリペプチドは、例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Ｃｈａｎｄｒｕｄｕら、Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ（２０１３）、１８：４３７３〜４３８８において記載された方法を使用して合成されうる。
【０２５３】
代替的に、抗原結合性分子およびポリペプチドは、組換え発現によっても作製されうる。当技術分野では、それらのいずれもが、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる、ＧｒｅｅｎおよびＳａｍｂｒｏｏｋ、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」（４版）、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ、２０１２；ならびにＮａｔ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．（２００８）、５（２）：１３５〜１４６において明示された分子生物学法など、ポリペプチドの組換え作製に適する分子生物学法が周知である。抗原結合性分子の組換え作製のための方法はまた、それらのいずれもが、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる、Ｆｒｅｎｚｅｌら、Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１３）、４：２１７；ならびにＫｕｎｅｒｔおよびＲｅｉｎｈａｒｔ、Ａｐｐｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（２０１６）、１００：３４５１〜３４６１においても記載されている。
【０２５４】
場合によって、本発明の抗原結合性分子は、１つを超えるポリペプチド鎖から構成される。このような場合に、抗原結合性分子の作製は、抗原結合性分子を形成するのに、１つを超えるポリペプチドの転写および翻訳と、後続するポリペプチド鎖の会合とを含みうる。
【０２５５】
本発明に従う組換え作製のために、ポリペプチドの発現に適する、任意の細胞が使用されうる。細胞は、原核細胞の場合もあり、真核細胞の場合もある。一部の実施形態では、細胞は、古細菌または細菌の細胞などの原核細胞である。一部の実施形態では、細菌は、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｃｅａｅ科の細菌、例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉなどのグラム陰性菌でありうる。一部の実施形態では、細胞は、酵母細胞、植物細胞、昆虫細胞、または哺乳動物細胞、例えば、ＣＨＯ、ＨＥＫ（例えば、ＨＥＫ２９３）、ＨｅＬａ、またはＣＯＳ細胞などの真核細胞である。一部の実施形態では、細胞は、一過性に、または安定的にポリペプチドを発現するＣＨＯ細胞である。
【０２５６】
場合によって、細胞は、一部の原核細胞は、真核細胞と同じフォールディングまたは翻訳後修飾を可能としないため、原核細胞ではない。加えて、真核細胞内では、極めて高度の発現レベルが可能であり、タンパク質は、適切なタグを使用する、真核細胞からの精製が容易である。タンパク質の、培地への分泌を増強する、特異的なプラスミドもまた利用されうる。
【０２５７】
一部の実施形態では、ポリペプチドは、例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、Ｚｅｍｅｌｌａら、Ｃｈｅｍｂｉｏｃｈｅｍ（２０１５）、１６（１７）：２４２０〜２４３１において記載されたシステムを使用する、無細胞タンパク質合成（ＣＦＰＳ）により調製されうる。
【０２５８】
作製は、目的のポリペプチド（複数可）を発現するように修飾された、真核細胞の培養または発酵を伴いうる。培養または発酵は、栄養物、空気／酸素、および／または増殖因子の適切な供給がなされたバイオリアクター内で実施されうる。分泌されたタンパク質は、培養培地／発酵培養液を、細胞から分別し、タンパク質含有物を抽出し、個別のタンパク質を分離して、分泌されたポリペプチド（複数可）を単離することにより回収されうる。当業者には、培養、発酵、および分離法が周知であり、例えば、ＧｒｅｅｎおよびＳａｍｂｒｏｏｋ、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」（４版；参照により、本明細書の上記に組み込まれた）において記載されている。
【０２５９】
バイオリアクターは、細胞が培養されうる、１または複数の反応槽を含む。バイオリアクター内の培養は、反応物の、リアクターへの、持続的な流入と、培養された細胞の、リアクターからの、持続的な流出とにより、持続的に生じうる。代替的に、培養は、バッチ内で生じうる。バイオリアクターは、培養される細胞に、最適の条件がもたらされるように、ｐＨ、酸素、反応槽への流入および反応槽からの流出の流量、ならびに反応槽内の攪拌などの環境条件をモニタリングし、制御する。
【０２６０】
抗原結合性分子／ポリペプチド（複数可）を発現する細胞の培養の後、目的のポリペプチド（複数可）は、単離されうる。当技術分野で公知の、細胞から、タンパク質を分離するための、任意の適切な方法が使用されうる。ポリペプチドを単離するために、細胞を、栄養培地から分離することが必要でありうる。目的のポリペプチド（複数可）が、細胞から分泌される場合、細胞は、分泌された目的のポリペプチド（複数可）を含有する培養培地から、遠心分離により分離されうる。目的のポリペプチド（複数可）が、細胞内に集まる場合、タンパク質の単離は、細胞を、細胞培養培地から分離する遠心分離、細胞ペレットの、溶解緩衝液による処理、および超音波処理、急速な凍結−融解、または浸透圧溶解による、細胞の破壊を含みうる。
【０２６１】
次いで、目的のポリペプチド（複数可）を、他のタンパク質および非タンパク質成分を含有しうる、上清または培養物培地を単離することが所望されうる。タンパク質成分を、上清または培養培地から分離するための、一般的な手法は、沈殿である。可溶性が異なるタンパク質は、硫酸アンモニウムなど、異なる濃度の沈殿剤で沈殿する。例えば、低濃度の沈殿剤では、水溶性のタンパク質が抽出される。したがって、増大させる、異なる濃度の沈殿剤を添加することにより、可溶性の異なるタンパク質が、識別されうる。その後、分離されたタンパク質から、硫酸アンモニウムを除去するのに、透析が使用されうる。
【０２６２】
当技術分野では、異なるタンパク質を識別するための、他の方法、例えば、イオン交換クロマトグラフィーおよびサイズクロマトグラフィーが公知である。これらは、沈殿に対する代替法として使用される場合もあり、沈殿に後続して実施される場合もある。
【０２６３】
目的のポリペプチド（複数可）が、培養物から単離されたら、ポリペプチド（複数可）を濃縮することが所望または必要でありうる。当技術分野では、限外濾過または凍結乾燥など、タンパク質を濃縮する、多数の方法が公知である。
組成物
本発明はまた、本明細書で記載される、抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸、発現ベクター、および細胞を含む組成物も提供する。
【０２６４】
本明細書で記載される、抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸、発現ベクター、および細胞は、臨床使用のための医薬組成物または医薬として製剤化される場合があり、薬学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤、またはアジュバントを含みうる。組成物は、注射または注入を含みうる、局所、非経口、全身、腔内、静脈内、動脈内、筋内、髄腔内、眼内、結膜内、腫瘍内、皮下、皮内、髄腔内、経口、または経皮投与経路のために製剤化されうる。
【０２６５】
適切な製剤は、滅菌媒体中または等張性媒体中の抗原結合性分子を含みうる。医薬および医薬組成物は、ゲル形態を含む、流体中で製剤化されうる。流体製剤は、ヒトまたは動物体内の、選択された領域への、注射または注入（例えば、カテーテルを介する）による投与のために製剤化されうる。
【０２６６】
一部の実施形態では、組成物は、例えば、血管または腫瘍への、注射または注入のために製剤化される。
また、本発明に従い、本明細書で記載される、薬学的に有用な組成物を作製するための方法も提供され、このような作製法は、本明細書で記載される、抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（または複数の核酸）、発現ベクター（または複数の発現ベクター）、もしくは細胞を作製するステップ；本明細書で記載される、抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（または複数の核酸）、発現ベクター（または複数の発現ベクター）、もしくは細胞を単離するステップ；および／または本明細書で記載される、抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（または複数の核酸）、発現ベクター（または複数の発現ベクター）、もしくは細胞を、薬学的に許容される担体、アジュバント、賦形剤、または希釈剤と混合するステップから選択される、１つまたは複数のステップを含みうる。
【０２６７】
例えば、本明細書で記載される、本発明のさらなる態様は、疾患／状態（例えば、がん）の処置における使用のための医薬または医薬組成物を製剤化または作製する方法であって、本明細書で記載される、抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（または複数の核酸）、発現ベクター（または複数の発現ベクター）、または細胞を、薬学的に許容される担体、アジュバント、賦形剤、または希釈剤と混合することにより、医薬組成物または医薬を製剤化するステップに関する。
治療適用および予防適用
本明細書で記載される、抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸、発現ベクター、細胞、および組成物は、治療法および予防法において使用される。
【０２６８】
本発明は、医学的処置または予防の方法における使用のための、本明細書で記載される、抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（または複数の核酸）、発現ベクター（または複数の発現ベクター）、細胞、または組成物を提供する。また、疾患または状態を処置または防止するための医薬の製造における、本明細書で記載される、抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（または複数の核酸）、発現ベクター（または複数の発現ベクター）、細胞、または組成物の使用も提供される。また、疾患または状態を処置または防止する方法であって、対象へと、治療または予防有効量の、本明細書で記載される、抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（または複数の核酸）、発現ベクター（または複数の発現ベクター）、細胞、または組成物を投与するステップを含む方法も提供される。
【０２６９】
方法は、疾患／状態の発症もしくは進行の低減、疾患／状態の症状の緩和、または疾患／状態の病態の軽減に効果的でありうる。方法は、疾患／状態の進行を防止する、例えば、疾患／状態の増悪を防止するか、または疾患／状態の発症速度を遅くするのに効果的でありうる。一部の実施形態では、方法は、疾患／状態の改善、例えば、疾患／状態の症状の軽減、または疾患／状態の、重症度／活動性についての、他の一部の相関因子の低減をもたらしうる。一部の実施形態では、方法は、疾患／状態の後期（例えば、慢性期または転移）の発症を防止しうる。一部の実施形態では、方法は、疾患／状態を反転または退縮させるのに効果的でありうる、例えば、疾患／状態の病態は、発症後期から、発症早期へと反転させられうる。一部の実施形態では、方法は、疾患／状態の症状、または疾患／状態の、重症度／活性の、他の一部の相関物を反転または退縮させるのに効果的でありうる。一部の実施形態では、方法は、疾患／状態を、疾患／状態を伴わない対象において観察される状態と同様の状態へと反転／退縮させるのに効果的でありうる。
【０２７０】
本発明の物品は、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のレベルの低減（すなわち、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の阻害またはアンタゴニズム）、ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体を発現する細胞の数および／または活性の低減から、治療または予防利益を引き出す、任意の疾患／状態の処置／防止のために使用されうることが理解されるであろう。
【０２７１】
例えば、疾患／状態は、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達が、病理学的に関与する疾患／状態、例えば、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のレベルの増大が、疾患／状態の発生、発症、もしくは進行、および／または疾患／状態の１つもしくは複数の症状の重症度と正に関連するか、あるいはＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のレベルの増大が、疾患／状態の、発生、発症、または進行の危険性因子である、疾患／状態でありうる。
【０２７２】
例えば、疾患／状態は、ＩＬ−１１Ｒαを発現する細胞が、病理学的に関与する疾患／状態、例えば、ＩＬ−１１Ｒαを発現する細胞の数／比率の増大が、疾患／状態の発生、発症、もしくは進行、および／または疾患／状態の１つもしくは複数の症状の重症度と正に関連するか、あるいはＩＬ−１１Ｒαを発現する細胞の数／比率の増大が、疾患／状態の、発生、発症、または進行の危険性因子である、疾患／状態でありうる。
【０２７３】
一部の実施形態では、本発明に従い処置／防止される疾患／状態は、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達またはこの相関物のレベルの、疾患／状態の非存在下における、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達／この相関物のレベルと比較した増大（例えば、疾患／状態の症状が顕在化する臓器／組織における）により特徴付けられる疾患／状態である。
【０２７４】
一部の実施形態では、本発明に従い処置／防止される疾患／状態は、ＩＬ−１１Ｒαを発現する細胞の数／比率／活性の、例えば、疾患／状態の非存在下における、ＩＬ−１１Ｒαを発現する細胞の数／比率／活性と比較した増大により特徴付けられる疾患／状態である。
【０２７５】
一部の実施形態では、対象は、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達またはこの相関物のレベルの増大、および／またはＩＬ−１１Ｒαを発現する細胞の、数／比率／活性の増大、例えば、末梢、もしくは疾患／状態の影響を受ける臓器／組織（例えば、疾患／状態の症状が顕在化する臓器／組織）における、ＩＬ−１１Ｒαを発現する細胞の、数／比率／活性の増大の検出に基づき、本明細書で記載される処置／予防に選択されうる。疾患／状態は、任意の組織または臓器または臓器系に影響を及ぼしうる。一部の実施形態では、疾患／状態は、いくつかの組織／臓器／臓器系に影響を及ぼしうる。
【０２７６】
一部の実施形態では、対象は、対象が、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達もしくはこの相関物のレベルを、健常対象における、ＩＬ−１１（Ｌ−１１）媒介性シグナル伝達／この相関物のレベル、またはＩＬ−１１Ｒαを発現する細胞の、数／比率／活性と比べて増大させており、かつ／または、例えば、末梢、もしくは臓器／組織における、ＩＬ−１１Ｒαを発現する細胞の、数／比率／活性を、健常対象における、ＩＬ−１１（Ｌ−１１）媒介性シグナル伝達／この相関物のレベル、またはＩＬ−１１Ｒαを発現する細胞の、数／比率／活性と比べて増大させていることの決定に基づき、本発明に従う治療／予防に選択されうる。
【０２７７】
本発明の抗原結合性分子は、好ましくは、ＩＬ−１１Ｒαと、ＩＬ−１１Ｒαとを含有する分子／複合体（例えば、ＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα複合体）に結合し、これらの生物学的活性を阻害することが可能である。したがって、本発明の抗原結合性分子は、ＩＬ−１１Ｒαが、疾患／障害の病態に関与している、疾患および障害の処置または防止において使用される。すなわち、本発明の抗原結合性分子は、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達と関連する疾患および障害の、処置または防止において使用される。
【０２７８】
一部の実施形態では、疾患／障害は、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒα、および／またはｇｐ１３０の、遺伝子発現またはタンパク質発現の、例えば、対照（すなわち、非罹患）状態と比較した増大と関連しうる。一部の実施形態では、疾患／障害は、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達（例えば、ＩＬ−１１／ＩＬ−１１Ｒシグナル伝達）のレベルの、対照条件と比較した増大と関連しうる。一部の実施形態では、疾患／障害は、ＥＲＫ経路および／またはＳＴＡＴ３経路を介する、シグナル伝達のレベルの、対照条件と比較した増大と関連しうる。一部の実施形態では、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒα、および／もしくはｇｐ１３０の発現／活性の増大、ならびに／またはＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のレベルの増大は、疾患／障害のエフェクター細胞内で観察されうる。一部の実施形態では、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒα、および／もしくはｇｐ１３０の発現／活性の増大、ならびに／またはＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のレベルの増大は、エフェクター細胞以外の細胞内で観察されうる。
【０２７９】
ＥＲＫを介するシグナル伝達は、例えば、「Ａｓｓａｙ  Ｇｕｉｄａｎｃｅ  Ｍａｎｕａｌ：Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＥＲＫ  Ａｓｓａｙｓ」、Ｋｉｍ  Ｅ．Ｇａｒｂｉｓｏｎ、Ｂｅｖｅｒｌｙ  Ａ．Ｈｅｉｎｚ、Ｍａｒｙ  Ｅ．Ｌａｊｉｎｅｓｓ、Ｊｅｆｆｒｅｙ  Ｒ．Ｗｅｉｄｎｅｒ、およびＧ．Ｓｉｔｔａ  Ｓｉｔｔａｍｐａｌａｍ、Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ＆  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｓｉｔｔａｍｐａｌａｍ  ＧＳ、Ｃｏｕｓｓｅｎｓ  ＮＰ、Ｎｅｌｓｏｎ  Ｈら編、Ｂｅｔｈｅｓｄａ（ＭＤ）：Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ＆  Ｃｏｍｐａｎｙ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ａｄｖａｎｃｉｎｇ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、２００４において記載されているアッセイなど、ＥＲＫのリン酸化についてのアッセイを使用して測定されうる。ＳＴＡＴ３を介するシグナル伝達は、例えば、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＳＴＡＴ３（Ｔｙｒ７０５）Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（Ｃｉｓｂｉｏ  Ａｓｓａｙｓ）など、ＳＴＡＴ３のリン酸化についてのアッセイを使用して測定されうる。
【０２８０】
一部の実施形態では、処置は、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の低減が治療的である疾患／障害の処置である。一部の実施形態では、処置は、過剰な、ＥＲＫおよび／またはＳＴＡＴ３によるシグナル伝達と関連する疾患／障害の処置である。一部の実施形態では、処置は、線維芽細胞の過剰な増殖もしくは高度活性化と関連するか、または筋線維芽細胞の過剰と関連する疾患／障害の処置である。
【０２８１】
一部の実施形態では、処置は、筋線維芽細胞またはαＳＭＡ陽性線維芽細胞の、数または比率を減少させることにより、疾患／障害を防止または処置することを目的としうる。
一部の実施形態では、疾患／障害は、線維症、線維症状態、または線維症により特徴付けられる疾患／障害でありうる。本明細書で使用される、「線維症」とは、細胞外マトリックス構成要素、例えば、コラーゲンの、過剰な沈着の結果としての、過剰な線維性結合組織の形成を指す。線維性結合組織は、高コラーゲン含量を伴う、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）を有することにより特徴付けられる。コラーゲンは、鎖としてもたらされる場合もあり、線維としてもたらされる場合もあり、これらは、不規則的に配置される場合もあり、整列させられる場合もある。線維性結合組織のＥＣＭはまた、グリコサミノグリカンも含みうる。
【０２８２】
本明細書で使用される、「過剰な線維性結合組織」とは、所与の箇所（例えば、所与の組織もしくは臓器、または所与の組織もしくは臓器の一部）における、線維症の非存在下、例えば、正常な、非病理学的状態下で、その箇所に存在する、結合組織の量を超える量の結合組織を指す。本明細書で使用される、「細胞外マトリックス構成要素の過剰な沈着」とは、線維症の非存在下、例えば、正常な、非病理学的状態下における、沈着のレベルを超えるレベルの、１つまたは複数の細胞外マトリックス構成要素の沈着を指す。
【０２８３】
線維症の細胞機構および分子機構については、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる、Ｗｙｎｎ、Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．（２００８）、２１４（２）：１９９〜２１０；ならびにＷｙｎｎおよびＲａｍａｌｉｎｇａｍ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２０１２）、１８：１０２８〜１０４０において記載されている。線維症の、主要な細胞エフェクターは、コラーゲンに富む細胞外マトリックスを産生する、筋線維芽細胞である。
【０２８４】
組織損傷に応答して、損傷細胞および白血球は、線維芽細胞を、αＳＭＡ発現筋線維芽細胞へと活性化し、筋線維芽細胞を、損傷部位へと動員する、ＴＧＦβ、ＩＬ−１３、およびＰＤＧＦなどの線維症促進性因子を産生する。筋線維芽細胞は、大量の細胞外マトリックスを産生し、創傷の拘縮および閉止の一助となる、重要なメディエーターである。しかし、遷延性感染の条件下、または慢性炎症時には、筋線維芽細胞の過剰活性化および動員がみられる場合があり、これにより、過剰な線維性結合組織の形成を結果としてもたらす、細胞外マトリックス構成要素の過剰産生がなされうる。
【０２８５】
一部の実施形態では、線維症は、病理学的状態、例えば、ＴＧＦβ１などの線維症促進性因子の産生をもたらす状態、感染、または疾患状態により誘発されうる。一部の実施形態では、線維症は、物理的損傷／刺激、化学的損傷／刺激、または環境的損傷／刺激により引き起こされうる。物理的損傷／刺激は、手術時に、例えば、医原性原因により生じうる。化学的損傷／刺激は、例えば、ブレオマイシン、シクロホスファミド、アミオダロン、プロカインアミド、ペニシラミン、金、およびニトロフラントインなどの薬物の慢性投与後における、薬物誘導性線維症を含みうる（Ｄａｂａら、Ｓａｕｄｉ  Ｍｅｄ  Ｊ、２００４年６月、２５（６）：７００〜６）。環境的損傷／刺激は、アスベスト線維またはシリカへの曝露を含みうる。
【０２８６】
線維症は、体内の、多くの組織において生じうる。例えば、線維症は、肺、肝臓（例えば、肝硬変）、腎臓、心臓、血管、眼、皮膚、膵臓、脾臓、腸（例えば、大腸または小腸）、脳、および骨髄において生じうる。線維症はまた、一度に、複数の臓器においても生じうる。
【０２８７】
本明細書における複数の実施形態では、線維症は、消化器系の臓器、例えば、肝臓、小腸、大腸、または膵臓に関与しうる。一部の実施形態では、線維症は、呼吸器系の臓器、例えば、肺に関与しうる。複数の実施形態では、線維症は、心血管系の臓器、例えば、心臓または血管に関与しうる。一部の実施形態では、線維症は、皮膚に関与しうる。一部の実施形態では、線維症は、神経系の臓器、例えば、脳に関与しうる。一部の実施形態では、線維症は、泌尿器系の臓器、例えば、腎臓に関与しうる。一部の実施形態では、線維症は、筋骨格系の臓器、例えば、筋組織に関与しうる。
【０２８８】
一部の好ましい実施形態では、線維症は、心線維症もしくは心筋線維症、肝線維症、または腎線維症である。一部の実施形態では、心線維症または心筋線維症は、心臓の筋肉組織の機能不全もしくは電気特性、または心臓壁もしくは心弁の肥厚と関連する。一部の実施形態では、線維症は、心房および／または心室の線維症である。心房線維症または心室線維症の処置または防止は、心房細動、心室細動、または心筋梗塞の危険性または発生を低減する一助となりうる。
【０２８９】
一部の好ましい実施形態では、肝線維症は、慢性肝疾患または肝硬変と関連する。一部の好ましい実施形態では、腎線維症は、慢性腎疾患と関連する。
本発明に従う、線維症により特徴付けられる疾患／障害は、肺線維症、嚢胞性線維症、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、進行性塊状線維症、強皮症、閉塞性細気管支炎、ヘルマンスキー−パドラック症候群、アスベスト症、硅肺、慢性肺高血圧症、ＡＩＤＳ関連肺高血圧症、サルコイドーシス、肺疾患における腫瘍間質、および喘息などの呼吸器状態；慢性肝疾患、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、住血吸虫性肝疾患、肝硬変、脂肪性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、早期ＮＡＳＨ、後期ＮＡＳＨ、アルコール性脂肪性肝炎、脂肪症；非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、慢性膵炎および膵線維症などの膵状態；肥大型心筋症、拡張型心筋症（ＤＣＭ）、心房線維症、心房細動、心室線維症、心室細動、心筋線維症、ブルガーダ症候群、心筋炎、心内膜心筋線維症、心筋梗塞、線維症性血管疾患、高血圧性心疾患、催不整脈性右室心筋症（ＡＲＶＣ）、尿細管間質／糸球体線維症、アテローム性動脈硬化、静脈瘤、脳梗塞などの心血管状態；グリオーシスおよびアルツハイマー病などの神経状態；デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）またはベッカー型筋ジストロフィー（ＢＭＤ）などの筋ジストロフィー；クローン病、顕微鏡的大腸炎、および原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）などの消化器状態；強皮症、腎性全身性線維症、および皮膚ケロイドなどの皮膚状態；関節線維化；デュピュイトラン拘縮；縦隔線維症；腹膜後線維症；骨髄線維症；ペイロニー病；癒着性関節包炎；腎疾患（例えば、腎線維症、腎炎症候群、アルポート症候群、ＨＩＶ関連腎症、多発性嚢胞腎、ファブリー病、糖尿病性腎症、慢性糸球体腎炎、腎炎と関連する全身性エリテマトーデス、腎間質性線維症（ＩＦ））；腎損傷、例えば、急性腎損傷／腎不全；腎毒性；進行性全身性硬化症（ＰＳＳ）；慢性移植片対宿主病；グレーブス眼症、網膜上線維症（例えば、糖尿病網膜症（ＤＲ））、緑内障、網膜下線維症（例えば、黄斑変性（例えば、滲出型加齢黄斑変性（ＡＭＤ）または萎縮型ＡＭＤ）と関連する）、黄斑浮腫、ドルーセンの形成、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、術後線維症（例えば、白内障術後の後嚢、または緑内障のための、線維柱帯切除術後のブレブによる線維症）、結膜線維症、結膜下線維症など、眼の疾患／障害および関連する過程；関節炎；線維症性前新生物性疾患および線維症性新生物性疾患；ならびに化学的傷害または環境的傷害（例えば、がん化学療法、殺虫剤、放射線／がん放射線療法）により誘導される線維症を含むがこれらに限定されない。
【０２９０】
本明細書では、早期ＮＡＳＨとは、肝臓が炎症を起こしている、ＮＡＳＨ状態への過渡期でありうる、脂肪肝疾患、例えば、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）の脂肪期を指す。本明細書では、後期ＮＡＳＨとは、線維症を含みうる、遷延性肝炎の状態を指す。
【０２９１】
上記で列挙された疾患／状態の多くは、相互に関連していることが理解されるであろう。例えば、心室の線維症は、心筋梗塞後に生じる場合があり、ＤＣＭ、ＨＣＭ、および心筋炎と関連する。
【０２９２】
特定の実施形態では、疾患／障害は、肺線維症、心房細動、心室細動、肥大型心筋症（ＨＣＭ）、拡張型心筋症（ＤＣＭ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝硬変、慢性腎疾患、強皮症、全身性硬化症、ケロイド、嚢胞性線維症、クローン病、術後線維症、または例えば、滲出型加齢黄斑変性（ＡＭＤ）と関連する、網膜線維症のうちの１つでありうる。
【０２９３】
一部の実施形態では、方法は、線維症を反転または退縮させるのに効果的でありうる。線維症は、確立された線維症、または重度の線維症であることが可能であり、本明細書で記載される疾患／障害のうちのいずれかと関連しうる。一部の実施形態では、方法は、本明細書で記載される疾患／障害のうちのいずれかを反転または退縮させるのに効果的でありうる。
【０２９４】
線維症は、疾患／障害の発症を、直接的または間接的にもたらす場合もあり、かつ／またはこれ疾患／障害助長する場合もある。例えば、８０％を超える肝細胞癌（ＨＣＣ）が、線維症性肝臓または硬変性肝臓において発症する（Ａｆｆｏら、２０１６、Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｐａｔｈｏｌ．）ことは、肝臓の、前悪性環境（ＰＭＥ）における、肝線維症の重要な役割を示唆する。
【０２９５】
したがって、本発明の抗原結合性分子は、線維症と関連する疾患／障害、および／または線維症が危険性因子である疾患／障害の処置および防止のための方法において使用される。一部の実施形態では、線維症と関連する疾患／障害、または線維症が危険性因子である疾患／障害は、がん、例えば、肝がん（例えば、肝細胞癌）である。
【０２９６】
ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達はまた、他の疾患／障害の病態にも関与し、したがって、本発明の抗原結合性分子はまた、これらの疾患／障害の症状を処置し、防止し、緩和し、かつ／または反転もしくは退縮させる方法においても使用される。
【０２９７】
一部の実施形態では、線維症は、例えば、眼内の血管新生と関連しうる。一部の実施形態では、線維症を処置または防止する方法、このような処置／防止に対する、対象の適性を決定する方法、および本明細書で記載される、線維症を診断／予後診断する方法はまた、血管新生の処置／防止／診断／予後診断へも適用可能であり、この逆も成り立つ。眼の線維症は、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）と関連しうる。
【０２９８】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、代謝性疾患を処置および／または防止する方法における使用のために提供される。すなわち、本発明は、例えば、細胞、組織／臓器／臓器系／対象における、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の阻害を介する、代謝性疾患の処置／防止を提供する。本明細書で使用される、「代謝性疾患」とは、代謝の異常により引き起こされるか、またはこれにより特徴付けられる、任意の疾患または状態を指す。この文脈における「代謝」とは、エネルギー供給源、例えば、栄養を供給するために摂取された物質の、体内における、エネルギーへの転換／加工、および／または貯蔵のための転換／加工を指す。「正常な代謝」とは、疾患を有さない、例えば、代謝性疾患を有さないか、または代謝性疾患の症状／相関物を所有しない、健常対象の代謝でありうる。
【０２９９】
代謝性疾患を有する対象は、代謝の異常を顕示しうる。代謝性疾患を有する対象は、代謝の異常の症状／相関物を有しうる。代謝性疾患を有する対象は、代謝性疾患を有すると診断されている。対象は、代謝性疾患の診断のための診断基準を満たしうる。一部の実施形態では、本発明は、代謝性疾患が予後不良をもたらす対象における、疾患／状態の処置／防止を提供する。
【０３００】
一部の実施形態では、代謝性疾患は、肝臓、膵臓、心血管系、消化器系、排泄系、呼吸器系、腎臓系、生殖系、循環系、筋肉系、内分泌系、外分泌系、リンパ系、免疫系、神経系、および／または骨格系のうちの１つまたは複数に影響する。
【０３０１】
一部の実施形態では、代謝性疾患は、肥満、２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）、１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）、前糖尿病、過体重、代謝性症候群、妊娠関連高血糖症（すなわち、妊娠糖尿病）、胆汁鬱滞性肝疾患、高血糖症、高脂血症、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、消耗性、悪液質、化学療法関連体重減少、膵臓の不全、膵炎、急性膵炎、慢性膵炎、脂肪症、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪肝臓（ＮＡＦＬ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、リポジストロフィー、脂肪肥大症、皮下脂肪萎縮症、インスリン欠損症、インスリン抵抗性、および高グルカゴン血症であるか、またはこれらを含む（例えば、これらにより特徴付けられる）。一部の実施形態では、代謝性疾患は、肥満であるか、またはこれを含む。一部の実施形態では、代謝性疾患は、胆汁うっ滞、すなわち、肝臓から、十二指腸への、胆汁の流動の低減であるか、またはこれを含む。疾患は、例えば、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）および原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）を含む、胆汁鬱滞性肝疾患（それらのいずれもが、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる、Ｊａｎｓｅｎら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ（２０１７）、６５（２）：７２２〜７３８；ならびにＰｏｌｌｏｃｋおよびＭｉｎｕｋ、Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  Ｈｅｐａｔｏｌ（２０１７）、３２（７）：１３０３〜１３０９）でありうる。
【０３０２】
本発明の態様は、代謝において役割を有する、細胞／組織（複数可）／臓器（複数可）／臓器系の、機能異常および／または機能不全の、処置および／または防止に関する。特に、本明細書では、膵臓の細胞／膵組織／膵臓の、機能異常および／または機能不全の、処置および／または防止は、肝臓の細胞／肝組織／肝臓の、機能異常および／または機能不全の、処置および／または防止が想定されるのと同様に想定される。
【０３０３】
一部の実施形態では、代謝性疾患は、消耗であるか、またはこれを含む。本明細書で使用される、「消耗」という用語は、進行性の場合もあり、かつ／または変性の場合もある、意図しない体重減少を指す。消耗とは、脂肪重量の減少を伴うか、または伴わない、筋肉の喪失として規定される場合があり、典型的に、著明な、通例、意図しない、体重（骨格筋を含む）の減少を伴い、脂肪組織の喪失を含む場合もあり、これを含まない場合もある。一部の場合には、脂肪組織の消耗は、リポジストロフィー性疾患において見られる通り、孤立して生じうる。消耗とは、食物摂取量の低減および代謝の異常の、可変的な組合せにより駆動される、負のタンパク質およびエネルギーの収支により特徴付けられうる（Ｆｅａｒｏｎら、Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌ．（２０１１）、１２（５）：４８９〜９５）。消耗は、進行性の身体機能障害、生活の質の低下、罹患および死亡の危険性の増大をもたらしうる。場合によって、消耗は、無力症（異常な身体の虚弱または気力の減退）、および／または貧血（血液中の、赤血球またはヘモグロビンの欠損）をもたらす。場合によって、消耗は、従来の栄養支持、または現在までに試行された治療的介入によっては、完全に反転させられない場合がある。通例、体重の減少が、患者の、従来の、安定的な体重の３０％に達したら、死が生じる（Ｔｉｓｄａｌｅ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ、２、８６２〜８７１（２００２））。
【０３０４】
消耗により特徴付けられる疾患／状態は、悪液質（加齢非関連性の、筋肉重量の減少）、サルコペニア（筋肉重量の減少：例えば、加齢関連性の筋肉重量の減少、不使用、宇宙旅行、または除神経による筋肉重量の減少）、拒食障害（タンパク質−エネルギー性栄養不良）、筋ジストロフィー、リポジストロフィー（例えば、脂肪組織の異常状態または変性状態）、皮下脂肪萎縮症（顔面および他の組織における、加齢関連性の、皮下脂肪の喪失）、およびミオペニア（任意の慢性疾病における筋肉の消耗；Ｆｅａｒｏｎら、Ｊ  Ｃａｃｈｅｘｉａ  Ｓａｒｃｏｐｅｎｉａ  Ｍｕｓｃｌｅ、２０１１、２：１〜３により提起されている）を含む。本明細書では、消耗により特徴付けられる疾患／状態はまた、「消耗性障害」とも称される。一部の実施形態では、本開示に従う消耗性障害は、悪液質、前悪液質、難治性悪液質、サルコペニア、食欲不振、リポジストロフィー、皮下脂肪萎縮症、および／またはミオペニアである。本明細書で記載される、多様な態様に従う、一部の実施形態では、消耗性障害は、悪液質、前悪液質、および／または難治性悪液質である。
【０３０５】
慢性疾病に起因して生じる消耗性障害は、「軽度筋肉消耗性疾患」（フレイルを伴うか、または伴わない）、「中等度筋肉消耗性疾患」（フレイルを伴うか、または伴わない；場合によって、「前悪液質」として公知である）、または「重度筋肉消耗性疾患」（場合によって、「悪液質」と呼ばれ、フレイルを提示することが多い）を含みうる。悪液質は、従来の、安定的な体重からの、＞５％の、意図しない体重減少、＞２％である、任意の程度の体重減少を伴う、体格指数（ＢＭＩ）＜２０ｋｇ／ｍ２（６５歳より若齢の者）、もしくは＜２２ｋｇ／ｍ２（６５歳以上の者）、または＞２％である、任意の程度の体重減少を伴う、サルコペニアと符合する骨格筋指数として規定されうる。対象はまた、＜１０％の体脂肪、および／または＜３５ｇ／ｌの低血液アルブミンレベルも呈しうる。これらの基準はまた、消耗性障害を発症する「危険性がある」集団を同定する一助ともなりうる（Ｆｅａｒｏｎら、Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌ．、２０１１、１２（５）：４８９〜９５）。
【０３０６】
進行中の体重減少の程度と組み合わせた、エネルギー貯蔵および体内タンパク質（ＢＭＩ）の枯渇の程度に従い分類される重症度を伴う、悪液質についての、３段階の分類が提起されている。
【０３０７】
１．前悪液質：患者が、＜５％の体重減少を有するが、いまだ、重篤な合併症を発症していない場合。
２．悪液質：体重の減少が、上記で言及されたパラメータを上回り、症候群が進行しつつあるが、なお、潜在的に処置が可能な場合。
【０３０８】
３．難治性悪液質：疾患が、もはや、処置に応答しない地点、または処置の利益が、負荷および危険性に凌駕される時点（Ｆｅａｒｏｎら、前出）。難治期は、下記で記載される基礎疾病の全体的な状態、および患者の状態により指示されることが多い。
【０３０９】
代謝性疾患は、急性または慢性の疾患状況において存在しうる。本発明の態様は、代謝性疾患と関連する疾患／状態の、処置／防止をもたらす。代謝性疾患と関連する疾患／状態は、代謝性疾患の発生と、正に関連する疾患／状態を含む。一部の実施形態では、代謝性疾患と関連する疾患／状態は、代謝性疾患を引き起こしうる／引き起こす／引き起こした（すなわち、代謝性疾患をもたらしうるか、もたらすか、またはもたらした）疾患／状態である。
【０３１０】
代謝性疾患と関連する疾患／状態はまた、代謝性疾患により、引き起こされ、かつ／または増悪する（悪化し、進行し、かつ／または併発する）疾患／状態も含む。一部の実施形態では、代謝性疾患と関連する疾患／状態は、代謝性疾患の発生と、正に関連する場合があり、また、代謝性疾患により、増悪する。「関連する」疾患／状態は、代謝性疾患関連病態を含む疾患／状態でありうる。
【０３１１】
本発明の複数の実施形態では、代謝性疾患、または代謝性疾患と関連する疾患／状態は、心臓、肝臓、腎臓、脳、皮膚、筋肉系、胃、小腸、大腸、膵臓、口腔、唾液腺、咽頭、食道、胆嚢、気管、喉頭、膀胱、卵巣、子宮、精巣、内分泌腺、例えば、下垂体系、または甲状腺、リンパ系、例えば、脾臓など、任意の臓器／組織に存在しうるか、またはこれらに影響しうる。
【０３１２】
本発明の複数の実施形態では、代謝性疾患と関連する疾患／状態は、がん、心疾患、腎疾患、肺疾患、肝疾患、慢性感染、神経変性疾患、急性損傷、外傷性損傷／外傷、術後状態、または加齢／老化のうちの１つまたは複数でありうる。
【０３１３】
本発明の多様な態様に従う、本発明に従い、代謝性疾患を処置および／または防止する方法は、以下：
血中脂質レベルを低減するステップ；
血中グルコースレベルを低減するステップ；
耐糖能（例えば、耐糖能異常対象の）を増大させるステップ；
インスリン耐性（例えば、インスリン抵抗性対象の）を増大させるステップ；
膵機能を増大させるステップ；
体重（例えば、体重過剰／肥満対象の）を低減するステップ；
体脂肪量を低減するステップ；
除脂肪体重を増大させるステップ；
空腹時血中グルコースレベルを低減するステップ；
血清トリグリセリドレベルを低減するステップ；
血清コレステロールレベルを低減するステップ；
耐糖能を増大させるステップ；
膵機能（例えば、外分泌機能および／または内分泌機能）を増大させるステップ；
膵組織の増殖を増大させるステップ；
膵組織を再生させるステップ；
膵重量を増大させるステップ；
膵島細胞過形成を低減するステップ；
グルカゴンの発現を低減するステップ；
インスリンの発現を増大させるステップ；
体重（例えば、消耗性疾患、例えば、悪液質を有する対象の）を増大させるステップ；
肝臓内の、ＩＬ−１１タンパク質の発現を低減するステップ；
肝臓内の、Ｅｒｋ活性化を低減するステップ；
例えば、肝臓の脂肪症を低減するステップ；
肝トリグリセリドレベルを低減するステップ；
血清ＡＬＴレベルを低減するステップ；
炎症促進性因子（例えば、ＴＮＦａ、ＣＣＬ２、ＣＣＬ５、ＩＬ−６、ＣＸＣＬ５、および／またはＣＸＣＬ１）の発現を低減するステップ；
線維症促進性因子（例えば、ＩＬ−１１、ＴＩＭＰ１、ＡＣＴＡ２、ＴＧＦβ１、ＭＭＰ２、ＴＩＭＰ２、ＭＭＰ９、ＣＯＬ１Ａ２、ＣＯＬ１Ａ１、および／またはＣＯＬ３Ａ１）の発現を低減するステップ；
血清ＴＧＦβ１レベルを低減するステップ；
ＨＳＣによる、ＩＬ−１１、ＡＣＴＡ２、ＭＭＰ２、ＴＧＦβ１、ＰＤＧＦ、ＡＮＧ  ＩＩ、ｂＦＧＦ、ＣＣＬ２、および／またはＨ２Ｏ２の発現／産生を低減するステップ；
ＨＳＣによる、ＨＳＣ−筋線維芽細胞間移行を阻害するステップ；
肝臓内の、筋線維芽細胞の数／比率を低減するステップ；
肝臓ヒドロキシプロリンレベルを低減するステップ；
肝機能を増大させるステップ；
代謝性疾患の影響を受ける臓器／組織の機能を増大させるステップ；
肝損傷を低減するステップ；ならびに
肝臓内の、ＣＤ４５＋細胞の数／比率を低減するステップ
のうちの１つまたは複数を含みうる。
【０３１４】
ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達は、多様ながんの発症および進行に関与している。研究は、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達が、ＳＴＡＴ３の過剰な活性化を介して、慢性胃炎、ならびに随伴する、胃がん、結腸がん、肝細胞がん、および乳がんの腫瘍発生（ｔｕｍｏｒｏｇｅｎｅｓｉｓ）を促進するのに重要であり（Ｅｒｎｓｔ  Ｍら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．（２００８）、１１８：１７２７〜１７３８）、ＩＬ−１１が、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ細胞内シグナル伝達経路を誘発することにより、腫瘍発生を促進する場合があり、また、ＰＩ３Ｋ−ＡＫＴ−ｍＴＯＲＣ１経路を通るシグナル伝達を介して、転移をも促進しうる（Ｘｕら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔｅｒｓ（２０１６）、３７３（２）：１５６〜１６３）ことを示唆する。ＳＴＡＴ３を介して、ＩＬ−１１は、消化器腫瘍の、生存、増殖、浸潤、血管新生、および転移を促進し、ＩＬ−１１／ＧＰ１３０／ＪＡＫ／ＳＴＡＴ３のシグナル伝達軸は、消化器腫瘍の進行について律速性であることが可能であり、ＩＬ−１１の発現の上昇は、乳がん患者の予後不良と関連する（Ｊｏｈｎｓｔｏｎｅら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ＆  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｒｅｖｉｅｗｓ（２０１５）、２６（５）：４８９〜４９８）。ＩＬ−１１はまた、乳がん幹細胞の動態および腫瘍異質性に影響を及ぼすことも示されている（Ｊｏｈｎｓｔｏｎｅら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ＆  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｒｅｖｉｅｗｓ（２０１５）、２６（５）：４８９〜４９８）。近年、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達は、肺腺癌の化学療法耐性に関与しており、がんに関連する線維芽細胞は、ＩＬ−１１を上方調節し、ＩＬ−１１／ＩＬ−１１Ｒ／ＳＴＡＴ３による、抗アポトーシス性シグナル伝達経路の活性化を介して、肺がん細胞に、化学療法耐性を付与することが見出された（Ｔａｏら、２０１６、Ｓｃｉ  Ｒｅｐ．、６；６：３８４０８）。ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達は、線維芽細胞−筋線維芽細胞間移行、ならびに前悪性環境（ＰＭＥ）内および腫瘍微小環境（ＴＭＥ）内の、線維芽細胞による細胞外マトリックス産生を促進しうる。
【０３１５】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、がんを処置／防止する方法における使用のために提供される。一部の実施形態では、がんは、炎症および／または線維症を、直接的に、または間接的にもたらすがんでありうる。
【０３１６】
がんは、任意の、望ましくない細胞増殖（または望ましくない細胞増殖により顕示される、任意の疾患）、新生物、もしくは腫瘍、または望ましくない細胞増殖、新生物、もしくは腫瘍の危険性の増大もしくはこれらに対する素因でありうる。がんは、良性の場合もあり、悪性の場合もあり、原発性の場合もあり、続発性（転移性）の場合もある。新生物または腫瘍は、細胞の、任意の異常な増殖（ｇｒｏｗｔｈまたはｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）であることが可能であり、任意の組織内に位置しうる。
【０３１７】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、がん、例えば、上皮細胞がん、乳がん、消化器がん（例えば、食道がん、胃がん、膵臓がん、肝がん（例えば、ＨＣＣ）、胆嚢がん、結腸直腸がん、肛門がん、消化器カルチノイド腫瘍）、および肺がん（例えば、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）または小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）））を処置／防止する方法における使用のために提供される。一部の実施形態では、がんは、急性炎症および／または慢性炎症が、危険性因子である、がんである。一部の実施形態では、がんは、線維症により特徴付けられる疾患／障害（例えば、本明細書で記載される）が、危険性因子である、がんである。
【０３１８】
一部の実施形態では、がんは、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒα、および／またはｇｐ１３０の、遺伝子発現またはタンパク質発現の増大と関連しうる。例えば、がん細胞は、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒα、および／またはｇｐ１３０の発現を、同等な、非がん性細胞と比較して増大させている場合もあり、他の細胞（例えば、非がん性細胞）による、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒα、および／またはｇｐ１３０の発現の、がんの非存在下における（例えば、健常対照である対象における）、同等な細胞による発現のレベルと比較した増大と関連する場合もある。一部の実施形態では、がんの細胞は、ＥＲＫ経路および／またはＳＴＡＴ３経路を介する、シグナル伝達のレベルを、同等な、非がん性細胞と比較して増大させていることが決定されうる。
【０３１９】
一部の実施形態では、がんは、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒα、および／またはｇｐ１３０における突然変異と関連しうる。一部の実施形態では、このような突然変異は、突然変異の非存在下で観察される、発現／シグナル伝達のレベルと比べた、遺伝子発現またはタンパク質発現のレベルの増大と関連する場合もあり、ＩＬ−１１／ＩＬ−１１Ｒシグナル伝達のレベルの増大と関連する場合もある。
【０３２０】
ＩＬ−１１／ＩＬ−１１Ｒシグナル伝達はまた、炎症により特徴付けられる疾患／障害にも関与している。ＩＬ−１１の関節内注射は、関節炎症を引き起こすことが示されており（Ｗｏｎｇら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ（２００５）、２９：７２〜７６）、ＩＬ−１１は、ＩＬ−１３媒介性組織炎症の部位において、炎症促進性であることが示されている（Ｃｈｅｎら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（２００５）、１７４：２３０５〜２３１３）。ＩＬ−１１の発現はまた、アトピー性皮膚炎における、慢性皮膚病変内で、著明に増大することも観察されており、気管支炎症に関与することも公知である（Ｔｏｄａら、Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（２００３）、１１１：８７５〜８８１）。ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）および喘息に関与している（ＰｕｔｏｃｚｋｉおよびＥｒｎｓｔ、Ｊ  Ｌｅｕｋｏ  Ｂｉｏｌ（２０１０）、８８（６）１１０９〜１１１７）。ＩＬ−１１はまた、多発性硬化症に対する危険性因子としても同定されており、ＩＬ−１１は、ＣＩＳ（ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）を伴う患者の脳脊髄液中で、対照の対象の場合と比較して上昇し、ＩＬ−１１の血清レベルは、再発−寛解型多発性硬化症を伴う患者について、再発時に高レベルであり、ＩＬ−１１は、ＣＤ４＋  Ｔ細胞の、ＴＨ１７表現型への分化を促進しうる（ＴＨ１７細胞は、多発性硬化症の発症機序において、重要な細胞である）（Ｚｈａｎｇら、Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ（２０１５）、６（３２）：３２２９７〜３２２９８）。
【０３２１】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、炎症により特徴付けられる疾患／障害を処置／防止する方法における使用のために提供される。一部の実施形態では、炎症により特徴付けられる、疾患または障害は、がんおよび／または線維症を、直接的に、または間接的にもたらす、疾患／障害でありうる。炎症により特徴付けられる疾患は、例えば、アレルギー性喘息および気管支炎症、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、および眼のアレルギー性疾患などのアレルギー性炎症、ならびに多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、慢性活動性肝炎、１型糖尿病、セリアック病、グレーブス病、ブドウ膜炎、天疱瘡、乾癬、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、貧血、および自己免疫性甲状腺炎などの自己免疫疾患を含む。
【０３２２】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、肝毒性、および肝毒性により特徴付けられる疾患／障害を処置／防止する方法における使用のために提供される。本明細書で使用される肝毒性とは、肝細胞／組織への損傷、および／またはこれらの死を指す。肝毒性とは、肝臓に対する、毒性損傷の状態、とりわけ、肝臓内の肝細胞の死を指す場合がある。肝毒性は、本明細書の下記で記載される、肝毒性の、１つまたは複数の相関物の検出により、決定／診断されうる。肝毒性は、肝毒性傷害の帰結として生じうる。本明細書で使用される「肝毒性傷害」とは、肝毒性をもたらす、任意の処置、事象、または状態を指す。例えば、肝毒性傷害は、化学的／物理的処置／実験、または気体条件により引き起こされうる。一部の実施形態では、肝毒性傷害は、例えば、薬物誘導性肝損傷、例えば、ＡＰＡＰ誘導性肝毒性の場合、化学的である。一部の実施形態では、肝毒性傷害は、例えば、肝組織への、手術による損傷の結果として生じる（ａｒｉｓｉｎｇ）、例えば、疾患を処置するための手術、および／または肝移植のための手術の結果として生じ（ｏｃｃｕｒ）うる、肝毒性の場合（例えば、肝毒性は、医原性原因を有しうる）、物理的である。一部の実施形態では、肝毒性傷害は、例えば、虚血の帰結としての低酸素状態から生じる（ａｒｉｓｅｓ）か、または再灌流から生じ（ｒｅｓｕｌｔ）うる（例えば、肝毒性傷害は、ＩＲＩから生じうる）。
【０３２３】
肝毒性は、薬、化学物質、虚血、再灌流、敗血症、またはハーブ系サプリメントもしくは栄養補助食品により引き起こされる、化学物質駆動性の肝損傷、例えば、損傷または傷害でありうる。一部の実施形態では、肝毒性とは、薬物誘導性肝損傷（ＤＩＬＩ）を指す。一部の実施形態では、肝毒性とは、肝毒素により引き起こされる肝損傷を指す。肝毒素は、アルコールでありうる。肝毒性はまた、毒性肝炎とも称されうる。肝毒性は、急性肝毒性および／または慢性肝毒性を指す場合がある。
【０３２４】
肝毒性は、アルコール摂取、例えば、慢性アルコール消費により直接的に、または間接的に引き起こされうる。本明細書で言及される肝毒性は、空腹、栄養不良、感染作用物質（例えば、肝炎ウイルス（例えば、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス、またはＥ型肝炎ウイルス）、ＨＩＶ）による感染、がん、または薬物相互作用により直接的に、または間接的に引き起こされうる。
【０３２５】
肝毒性は、他の障害、疾患、および状態と関連して存在しうる。肝毒性と関連する障害、疾患、または状態は、急性肝損傷（ＡＬＩ）、急性肝不全、急性肝疾患、慢性肝疾患、肝損傷、肝炎、例えば、ウイルス性肝炎、アルコール性肝炎、虚血−再灌流肝損傷（ＩＲＩ）、例えば、「温」阻血−再灌流（ＷＩＲ）、放射線誘導性肝疾患（ＲＩＬＤ）、薬物誘導性肝損傷（ＤＩＬＩ）、自己免疫性肝損傷、胆汁鬱滞性肝疾患、ＨＩＶ、およびがんを含む。
【０３２６】
薬物誘導性肝損傷（ＤＩＬＩ）は、内因性肝毒性および特異体質性肝毒性を含み、特異体質性ＤＩＬＩは、アレルギー反応および非アレルギー反応をさらに含む。内因性機構が、用量依存性肝毒性と関連するのに対し、特異体質性肝毒性は、用量依存性ではなく、予測不可能な形で起こりうる。特異体質性アレルギー性肝毒性は、獲得免疫系反応に典型的な、症状および徴候であって、発熱、皮膚反応、好酸球増加症、自己抗体の形成、および特に、再曝露後における短潜伏期間を含む、症状および徴候の存在によりさらに特徴づけられる（Ｋｈｏｕｒｙら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｈｅｐａｔｏｌ．、２０１５年６月２８日、３（２）：９９〜１０８）。
【０３２７】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、アセトアミノフェン（ＡＰＡＰ）誘導性肝毒性の、診断、処置、および予防のために使用されうる。アセトアミノフェンはまた、Ｎ−アセチル−ｐ−アミノフェノールもしくはパラセタモールとして、またはＴｙｌｅｎｏｌおよびＰａｎａｄｏｌの商標名によっても公知である。アセトアミノフェン中毒は、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、乳酸デヒドロゲナーゼ、およびアラニンアミノトランスフェラーゼなど、肝細胞からの漏出酵素の血清濃度の増大、小葉中心の変性および壊死、ならびにクッパー細胞の活性化と関連する肝毒性を結果としてもたらす（Ｔｒｅｐｉｃｃｈｉｏ  ＷＬら、Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｐａｔｈｏｌ．、２００１；２９（２）：２４２〜９）。
【０３２８】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、腎損傷、例えば、急性腎損傷（ＡＫＩ；急性腎不全）、または腎損傷と関連する疾患／障害を処置／防止する方法における使用のために提供される。腎損傷は、尿細管上皮細胞（ＴＥＣ）への損傷、および／またはＴＥＣの、上皮細胞〜間葉細胞様の表現型（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ−ｔｏ−ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ  ｃｅｌｌ−ｌｉｋｅ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）（すなわち、ＥＭＴ）への移行により特徴付けられうる。ＴＥＣの、間葉細胞様表現型への移行は、例えば、Ｅ−カドヘリンの発現の低減、ＳＮＡＩＬの発現の増大、および／またはＡＣＴＡ２の発現の増大により特徴付けられうる。腎損傷は、任意の原因を有することが可能であり、例は、機械的（すなわち、物理的）な損傷もしくは傷害、化学的な損傷もしくは傷害、虚血、または遺伝的素因から生じる腎損傷を含む。原因または損傷は、通常、腎不全をもたらしうる、腎機能の毀損を結果としてもたらす。機械的な損傷または傷害は、対象、腎臓、ＴＥＣ、または足細胞への物理的損傷を含みうる。機械的な損傷または傷害はまた、尿細管の閉塞／例えば、尿路の遮断も含みうる。一部の実施形態では、腎損傷は、薬物誘導性腎損傷または薬物誘導性急性腎損傷である。
【０３２９】
虚血性損傷は、例えば、敗血症、血液喪失、もしくは手術、または化学的薬剤、例えば、別の疾患、障害、または状態を処置するために、対象へと投与された、薬または薬物の作用に起因する低血圧など、多数の因子により引き起こされうる腎臓への血流の減少から生じうる。虚血により引き起こされる腎損傷は、虚血誘導性腎損傷または虚血誘導性急性腎損傷でありうる。挫傷により引き起こされる腎損傷は、血管収縮を伴う虚血誘導性腎損傷の場合もあり、機械的因子である、尿細管円柱、または循環因子、例えば、ミオグロビンの毒性効果により引き起こされる場合もある。
【０３３０】
一部の実施形態では、ＡＫＩでありうる腎損傷は、腎臓の尿細管上皮細胞（ＴＥＣ）、すなわち、腎尿細管上皮細胞への損傷、場合によって、ＴＥＣの死を含むか、またはこれをもたらしうる損傷により特徴付けられる。ＴＥＣは、ＡＫＩでは、これらのいずれもが損傷されうる、近位ＴＥＣの場合もあり、遠位ＴＥＣの場合もあり、腎糸球体内の足細胞もまた同様でありうる。ＴＥＣへの損傷はまた、例えば、上記で記載された、任意の種類の損傷、傷害（ｉｎｊｕｒｙまたはｉｎｓｕｌｔ）の場合もあり、これは、機械的損傷の場合もあり、化学的損傷の場合もあり、虚血性の場合もある。ＴＥＣへの損傷は、腎損傷、特に、ＡＫＩの、一般的な原因因子である。ＴＥＣの増殖が、腎機能の回収および復旧のための機構をもたらすのに対し、ＴＥＣ増殖の不全は、疾患の発症、ならびに例えば、慢性腎疾患および腎不全への進行をもたらしうる。糸球体機能を回復させる、足細胞の前駆体の増殖もまた生じうるが、ＴＥＣの増殖ほど十分には記載されていない。機械的損傷は、例えば、片側尿管閉塞術（ＵＵＯ）を含みうる。
【０３３１】
一部の実施形態では、腎損傷は、腎臓に対する毒性を指す、腎毒性である。腎毒性は、ある特定の物質の、腎機能に対する毒性作用の結果として生じる場合もあり、したがって、化学的な損傷または傷害の帰結として考えられうる。化学的な損傷または傷害と同様に、腎毒性は、腎臓内で生じないか、または腎臓、および、１つまたは複数の、他の組織の両方において生じる、疾患または状態を処置する薬剤の投与の副作用でありうる。一部の実施形態では、腎毒性は、がんを防止または処置するために、対象へと投与される、化学療法剤の投与の副作用でありうる。このように、腎毒性は、薬物誘導性腎損傷または薬物誘導性急性腎損傷の形態でありうる。一部の実施形態では、腎損傷は、葉酸により誘導される場合があり、すなわち、葉酸誘導性腎損傷である。
【０３３２】
一部の実施形態では、抗原結合性分子は、シスプラチン誘導性腎損傷の、診断、処置、および／または予防における使用のために提供される。これは、シスプラチン誘導性急性腎損傷またはシスプラチン誘導性腎毒性を含みうる。シスプラチン（ジクロロジアミノ白金；（ＳＰ−４−２）−ジアミンジクロロ白金（ＩＩ））とは、頭頸部がん、乳がん、肺がん、精巣がん、卵巣がん、脳がん、および膀胱がんを含む範囲のがんを処置するのに、広く使用され、腎損傷、ならびに尿細管の損傷および壊死を伴う機能不全をもたらすことが広く認知されている化学療法剤である（例えば、Ｏｈら、Ｅｌｅｃｔｒｏｌｙｔｅ  Ｂｌｏｏｄ  Ｐｒｅｓｓ、２０１４年１２月、１２（２）：５５〜６５；ＰＡ  Ａｒｕｎｋｕｍａｒら、Ａｓｉａｎ  Ｐａｃ  Ｊ  Ｔｒｏｐ  Ｂｉｏｍｅｄ、２０１２年８月、２（８）：６４０〜６４４）。他の白金ベースの化学療法剤（ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ａｇｅｎｔｓ）もまた、腎損傷を引き起こす。
【０３３３】
腎損傷を有する対象はまた、分離可能な病因を有する疾患状態として、または腎損傷の続発作用として、腎臓の線維症も提示することが認識される。一部の実施形態では、診断、処置、または防止される腎損傷は、腎臓の線維症、例えば、腎線維症ではない。一部の実施形態では、対象は、線維症を有さない。一部の実施形態では、ＴＥＣ損傷は、線維症の非存在下で生じる（ｏｃｃｕｒｓ）。一部の実施形態では、線維症は、例えば、ＴＥＣの不完全な再生に起因して、ＡＫＩとは別個に（例えば、これに続発して）生じる（ａｒｉｓｅｓ）。一部の実施形態では、対象における、損傷されたＴＥＣは、線維症促進性ＴＥＣではない。一部の実施形態では、線維症は、生じない。
【０３３４】
一部の実施形態では、本発明の抗原結合性分子は、特に、感染が、線維症、がん、または炎症を、直接的に、または間接的にもたらす場合の感染と関連する、疾患／障害を処置／防止する方法における使用のために提供される。感染と関連する疾患は、対象とする感染作用物質による感染により引き起こされるか、または増悪する疾患の場合もあり、対象とする感染作用物質による感染が、危険性因子である疾患の場合もある。
【０３３５】
感染は、任意の感染または感染性疾患、例えば、細菌感染、ウイルス感染、真菌感染、または寄生虫感染でありうる。特定の実施形態では、疾患／障害は、ウイルス感染と関連しうる。一部の実施形態では、特に、例えば、このような感染が、炎症、がん、および／または線維症と関連する、慢性／遷延性感染を処置することが所望でありうる。
【０３３６】
感染は、慢性、遷延性、潜在性、または遅発性でることが可能であり、細菌感染、ウイルス感染、真菌感染、または寄生虫感染の結果でありうる。このように、処置は、細菌感染、ウイルス感染、または真菌感染を有する患者へと施されうる。細菌感染の例は、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉの感染、および肺の、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染を含む。ウイルス感染の例は、ＥＢＶ、ＨＰＶ、ＨＩＶ、Ｂ型肝炎ウイルス、またはＣ型肝炎ウイルスの感染を含む。
【０３３７】
処置は、ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体の生物学的活性を阻害することにより、ＩＬ−１１シグナル伝達と関連し、かつ／または本明細書で記載される、任意の疾患／障害／状態を改善、処置、または防止するステップを伴いうる。処置は、ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体の生物学的活性を阻害することによる、疾患／障害の、反転または退縮を伴いうる。このような方法は、ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体に結合し、この生物学的活性を阻害する、本発明に従う、抗体／断片／組成物の投与を含みうる。本明細書では、ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体の生物学的活性を阻害することは、「中和」と称される場合がある。
【０３３８】
処置法は、任意選択で、生物学的アジュバントの、がんを処置するための薬剤（例えば、化学療法）、放射線、または手術による処置など、がんを処置するための従来の療法と組み合わせた共投与を含みうる。医学的処置の方法はまた、自家細胞および／もしくは異種細胞、または不死化細胞系を使用する免疫療法を含む、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける免疫療法、ｅｘ  ｖｉｖｏにおける免疫療法、および養子免疫療法も伴いうる。
【０３３９】
処置は、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の亢進／上昇と関連する疾患／障害の防止を目的としうる。このように、抗体、抗原結合性断片、およびポリペプチドは、医薬組成物または医薬を製剤化するのに使用される場合があり、対象は、疾患状態の発症に対して、予防的に処置されうる。これは、疾患状態の症状の発生の前になされる場合もあり、かつ／または疾患もしくは障害の、大きな危険性があると考えられる対象へと施される場合もある。
【０３４０】
本開示に従う薬剤の投与は、好ましくは、「治療有効」量または「予防有効」量における投与であり、これは、対象に対して利益を示すのに十分な量における投与である。投与される、実際の量、ならびに投与の速度および時間経過は、疾患／状態の性質および重症度、ならびに薬剤の性質に依存する。処置の処方、例えば、投与量などについての決定は、一般開業医、および他の医師の責任の範囲内にあり、典型的に、処置される疾患／状態、個々の対象の状態、送達部位、投与法、および医療従事者に公知の他の因子を考慮する。上記で言及された技法およびプロトコールの例は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、２０版、２０００、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ刊において見出されうる。
【０３４１】
本明細書で記載される、抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸、発現ベクター、細胞、および組成物は、好ましくは、薬学的に許容される担体、アジュバント、賦形剤、希釈剤、充填剤、緩衝剤、保存剤、抗酸化剤、滑沢剤、安定化剤、可溶化剤、界面活性剤（例えば、湿潤剤）、マスキング剤、着色剤、芳香剤、および甘味剤を含むがこれらに限定されない、当業者に周知の、１つまたは複数の、他の、薬学的に許容される成分と併せて、医薬（ｍｅｄｉｃａｍｅｎｔまたはｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）として製剤化される。本明細書で使用される「薬学的に許容される」という用語は、穏当な医学的判断の範囲内にあり、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を伴わずに、問題の対象（例えば、ヒト）の組織と接触させる使用に適し、妥当な有益性／危険性比に見合う、化合物、成分、材料、組成物、剤形などに関する。各担体、アジュバント、賦形剤などはまた、製剤の、他の成分と適合性であるという意味で、「許容可能」でもなければならない。適切な担体、アジュバント、賦形剤などは、標準的な薬学の教科書、例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、１８版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ．、１９９０；および「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ」、２版、１９９４において見出されうる。
【０３４２】
製剤は、処置される疾患／状態に適する投与のために調製されうる。例えば、製剤は、注射を含みうる、局所投与経路、非経口投与経路、全身投与経路、静脈内投与経路、動脈内投与経路、筋内投与経路、髄腔内投与経路、眼内投与経路、眼内局所（例えば、結膜下、硝子体内、球後、前房内）投与経路、結膜内投与経路、皮下投与経路、経口投与経路、または経皮投与経路のために製剤化されうる。本開示の薬剤は、流体形態または固体形態で製剤化されうる。流体製剤は、ヒトまたは動物の体内の、選択された領域への、注射または注入による投与のために製剤化されうる。注射用製剤は、滅菌培地中または等張性培地中の、選択された薬剤を含みうる。
【０３４３】
製剤は、薬学技術分野で周知の、任意の方法により調製されうる。このような方法は、活性化合物を、１つまたは複数の補助成分を構成する担体と会合させるステップを含む。一般に、製剤は、活性化合物を、担体（例えば、液体担体、微粉化された固体担体など）と、一様かつ緊密に会合させ、次いで、必要な場合、生成物を成形することにより調製される。
【０３４４】
本発明に従う方法はまた、薬学的に有用な組成物の作製のためにも提供され、このような作製法は、本明細書で記載される抗体または抗原結合性断片を単離するステップ；および／または本明細書で記載される単離抗体または単離抗原結合性断片を、薬学的に許容される担体、アジュバント、賦形剤、もしくは希釈剤と混合するステップから選択される、１つまたは複数のステップを含みうる。例えば、本発明のさらなる態様は、医学的処置の方法における使用のための、医薬または医薬組成物を製剤化または作製する方法であって、本明細書で記載される抗体または抗原結合性断片を、薬学的に許容される担体、アジュバント、賦形剤、または希釈剤と混合することにより、医薬組成物または医薬を製剤化するステップを含む方法に関する。
【０３４５】
抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（または複数の核酸）、発現ベクター（または複数の発現ベクター）、細胞、または組成物の複数回投与がなされうる。１回もしくは複数回、または各回の投与は、別の治療剤の、同時的または逐次的投与に随伴されうる。
【０３４６】
複数回投与は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、もしくは３１日間、または１、２、３、４、５、もしくは６カ月間のうちの１つであるように選択されうる、所定の時間間隔により隔てられうる。例を目的として述べると、投与は、７、１４、２１、または２８日（±３、２、または１日）ごとになされうる。
【０３４７】
本明細書で記載される、抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸、発現ベクター、細胞、および組成物は、単独で投与される場合もあり、他の治療的介入または予防的介入と組み合わせて投与される場合もある。このような、他の治療的介入または予防的介入は、本開示により包含される療法の前になされる場合もあり、この療法時になされる場合もあり、かつ／またはこの療法の後でなされる場合もあり、他の治療的介入または予防的介入の送達は、本開示の療法と同じ投与経路を介してなされる場合もあり、異なる投与経路を介してなされる場合もある。
【０３４８】
一部の実施形態では、本明細書で記載される、抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸、発現ベクター、細胞、および組成物の投与は、感染を処置または防止するための薬剤（例えば、抗生剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、または抗寄生虫剤）を伴いうる。一部の実施形態では、本発明の抗体、抗原結合性断片、または組成物による処置は、炎症を処置または防止するための薬剤（例えば、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ））を伴いうる。一部の実施形態では、本発明の抗体、抗原結合性断片、または組成物による処置は、放射線療法（すなわち、イオン化放射線、例えば、Ｘ線またはγ線による処置）、および／またはがんを処置もしくは防止するための薬剤（例えば、化学療法剤）を伴いうる。一部の実施形態では、化学療法剤は、アルキル化剤、例えば、シスプラチンである。一部の実施形態では、本発明の抗体、抗原結合性断片、または組成物は、免疫療法との組合せ処置の一部として投与されうる。
【０３４９】
同時的投与とは、一体の、例えば、薬剤を含有する医薬組成物（すなわち、組合せ調製物）としての、または、互いの直後における、任意選択で、同じ投与経路を介する、例えば、同じ動脈、静脈、または他の血管への、薬剤の投与を指す。ある特定の実施形態では、同時的投与において、薬剤のうちの、２つまたはこれを超える薬剤は、異なる投与経路を介して投与されうる。一部の実施形態では、同時的投与とは、同時の投与、または例えば、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、８時間、１２時間、２４時間、３６時間、もしくは４８時間以内の投与を指す。
【０３５０】
逐次的投与とは、所与の時間間隔の後に、薬剤のうちの１つまたは複数の投与に、薬剤のうちの別の薬剤の、別個の投与が後続することを指す。２つの薬剤が、同じ経路により投与されることは要求されないが、一部の実施形態では、これが該当する。時間間隔は、数時間、数日間、数週間、数カ月間、または数年間を含む、任意の時間間隔でありうる。一部の実施形態では、逐次的投与とは、少なくとも１０分間、３０分間、１時間、６時間、８時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、３日間、４日間、５日間、６日間、１週間、２週間、３週間、１カ月間、６週間、２カ月間、３カ月間、４カ月間、５カ月間、または６カ月間のうちの１つの時間間隔により隔てられた投与を指す。
検出法
本発明はまた、ＩＬ−１１ＲαもしくはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体、またはＩＬ−１１ＲαもしくはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体を発現する／含む細胞を検出、位置特定、またはイメージングする方法における使用のための、本発明の物品も提供する。本明細書で記載される抗原結合性分子は、抗原結合性分子の、ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体への結合を伴う方法において使用されうる。このような方法は、抗原結合性分子とＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体との結合複合体の検出を伴いうる。
【０３５１】
ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体の検出は、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達、および／またはＩＬ−１１ＲαもしくはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体を発現する／含む細胞が病理学的に関与する疾患／状態を診断／予後診断し、このような疾患／状態を発症する危険性がある対象を同定する方法において有用な場合もあり、かつ／または治療介入に対する、対象の応答を予測する方法において有用な場合もある。
【０３５２】
このように、ＩＬ−１１ＲαもしくはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体、またはＩＬ−１１ＲαもしくはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体を発現する／含む細胞を含有するか、またはこれを含有することが疑われる試料を、本明細書で記載される抗原結合性分子と接触させるステップと、抗原結合性分子と、ＩＬ−１１Ｒα／ＩＬ−１１Ｒαを含む複合体との複合体の形成を検出するステップとを含む方法が提供される。また、ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体を発現する／含む細胞を含有するか、またはこれを含有することが疑われる試料を、本明細書で記載される抗原結合性分子と接触させるステップと、抗原結合性分子と、ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体を発現する／含む細胞との複合体の形成を検出するステップとを含む方法も提供される。
【０３５３】
当技術分野では、サンドイッチアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡなどのイムノアッセイを含む、適する方法フォーマットが周知である。方法は、検出可能部分、例えば、蛍光標識、リン光標識、発光標識、免疫検出可能標識、放射性標識、化学、核酸、または酵素標識により、抗原結合性分子、または標的（複数可）、またはこれらの両方を標識付けするステップを伴いうる。ＩＬ−１１Ｒαの発現は、例えば、生検により得られた組織試料についての免疫組織化学（ＩＨＣ）により測定されうる。一部の実施形態では、標識は、放射性ヌクレオチド（ｒａｄｉｏ−ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）、ポジトロンを放出する放射性核種（例えば、ポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）のための）、ＭＲＩ造影剤、または蛍光標識から選択されうる。
【０３５４】
当業者には、検出法が周知であり、標識化剤と対応するように選択されうる。ＩＬ−１１／ＩＬ−１１Ｒシグナル伝達により媒介される過程についての、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏにおける解析は、例えば、適切に標識された種の検出を介する、ポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）、または蛍光イメージングによる解析を伴いうる。
【０３５５】
この種の方法は、ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体の、検出および／または定量を要求する疾患または状態についての、診断法のベースをもたらしうる。このような方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、対象試料に対して実施される場合もあり、対象試料の加工後に実施される場合もある。試料が回収されたら、対象は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける診断法の実施に立ち会うことを要求されないため、方法は、ヒトまたは動物体内に対しては行われない方法である。一部の実施形態では、本開示に従う、抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸、発現ベクター、細胞、または組成物は、本明細書で記載される、任意の診断法、検出法、または定量法における使用のために提供される。
【０３５６】
このような方法は、例えば、患者試料中で、ＩＬ−１１ＲαもしくはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体またはＩＬ−１１ＲαもしくはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体を発現する細胞を検出または定量するステップを伴いうる。方法が、対象とする因子を定量するステップを含む場合、方法は、診断的または予後診断的査定の一部として、決定された量を、標準値または参照値に対して比較するステップをさらに含みうる。他の診断／予後診断検査は、診断もしくは予後診断の精度を増強するか、または本明細書で記載される検査を使用することにより得られる結果を確認するように、本明細書で記載される診断検査／予後診断検査と共に使用されうる。
【０３５７】
試料中の、ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体の検出は、対象における、感染性疾患、自己免疫障害、またはがん性状態の診断、感染性疾患、自己免疫障害、またはがん性状態に対する素因の診断を目的として使用される場合もあり、感染性疾患、自己免疫障害、またはがん性状態について予後診断する（予知する）ために使用される場合もある。診断または予後診断は、既存の（既に診断された）感染性疾患／障害、炎症性疾患／障害、もしくは自己免疫疾患／障害、またはがん性状態に関しうる。
【０３５８】
ＩＬ−１１ＲαもしくはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体のレベルの増大が検出されるか、またはＩＬ−１１ＲαもしくはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体を発現する／含む細胞の存在（またはこれらの数／比率の増大）が、対象から得られた試料中に検出される場合、対象は、本開示に従う疾患／状態を有すると診断される場合もあり、またはこのような疾患／状態を発症する危険性があると診断される場合もある。このような方法では、細胞の発現のレベルまたは数／比率「の増大」とは、例えば、健常対象から得られる、同等な試料（例えば、同じ体液、組織、臓器などから得られた、同じ種類の試料）中で検出されるレベル／数／比率など、適切な対照条件について決定されるレベル／数／比率を超えるレベル／数／比率を指す。
【０３５９】
ＩＬ−１１ＲαもしくはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体のレベルの増大が検出されるか、またはＩＬ−１１ＲαもしくはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体を発現する／含む細胞の存在（またはこれらの数／比率の増大）が、対象から得られた試料中に検出される場合、対象は、同等な試料（例えば、例えば、同じ体液、組織、臓器などから得られた、同じ種類の試料）中の、ＩＬ−１１ＲαもしくはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体のレベルが低レベルであるか、またはＩＬ−１１ＲαもしくはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体を発現する／含む細胞の数／比率が低減されていることが決定された対象と比較して、予後不良であると決定されうる。
【０３６０】
こうして、本発明は、対象を、本発明に従う、抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸、発現ベクター、細胞、または組成物による処置のために選択／層別化するための方法を提供する。一部の実施形態では、対象は、例えば、対象から得られた試料中の、ＩＬ−１１ＲαもしくはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体、またはＩＬ−１１ＲαもしくはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体を発現する細胞の検出／定量に基づき、本発明に従う処置／防止のために選択されるか、またはこのような処置／防止から、利益を得る対象として同定される。対象試料中に存在する、ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体のレベルは、対象が、本発明に従い抗原結合性分子または組成物による処置に対して応答しうることを指し示しうる。試料中の、ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体の、高レベルの存在は、対象を、本明細書で記載される処置のために選択するのに使用されうる。したがって、本発明の抗原結合性分子は、対象を、ＩＬ−１１Ｒα−ターゲティング療法による処置のために選択するのに使用されうる。
【０３６１】
試料は、任意の組織または体液から採取されうる。試料は、多量の血液；フィブリン塊および血液細胞を除去した後で得られる、血液の流体部分を含みうる、個体の血液に由来する、多量の血清；組織試料または生検；胸水；脳脊髄液（ＣＳＦ）；または前記個体から単離された細胞を含みうるか、またはこれらに由来しうる。一部の実施形態では、試料は、疾患／状態の影響を受ける、１つの組織または複数の組織（例えば、疾患の症状が顕在化するか、または疾患／状態の発症機序に関与する、１つの組織または複数の組織）から得られうるか、またはこれらに由来しうる。
【０３６２】
本発明に従う診断法および予後診断法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、対象から得られた試料に対して実施される場合もあり、対象から得られた試料の加工後に実施される場合もある。試料が回収されたら、患者は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける、診断法および予後診断法の実施に立ち会うことを要求されないため、方法は、ヒトまたは動物体内に対しては行われない方法である。「ｉｎ  ｖｉｔｒｏ」と言う用語が、培養物中の細胞による実験を包含することが意図されるのに対し、「ｉｎ  ｖｉｖｏ」と言う用語は、無傷の多細胞生物による実験および／または無傷の多細胞生物に対する処置を包含することが意図される。
【０３６３】
本発明の診断および予後診断法は、疾患および／または処置の経過を通して、複数の時点において、対象から得られた試料に対して実施される場合があり、時間経過にわたり、例えば、対象へと投与された処置に応答する、疾患／状態の発症をモニタリングするのに使用されうる。方法に従う特徴付けの結果は、いつ、どのような種類の治療を、対象へと投与するのかについての臨床的決定に情報を与えるのに使用されうる。
対象
本明細書で記載される、本発明の態様に従う対象は、任意の動物またはヒトでありうる。対象は、好ましくは、哺乳動物、より好ましくは、ヒトである。対象は、非ヒト哺乳動物でもありうるが、より好ましくは、ヒトである。対象は、雄の場合もあり、雌の場合もある。対象は、患者でありうる。対象は、処置を要求する疾患または状態（例えば、がん）を伴うと診断されている場合もあり、このような疾患／状態を有することが疑われる場合もあり、このような疾患／状態を発症する／このような疾患／状態に罹患する危険性がある場合もある。
【０３６４】
対象／患者は、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のレベルの低減（すなわち、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の阻害またはアンタゴニズム）、ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体を発現する細胞の数および／または活性の低減から、治療利益または予防利益を引き出す、疾患／障害を有しうる。対象／患者は、本明細書で記載される疾患／障害を有しうる。対象／患者は、処置を要求する、本明細書で記載される疾患／障害を伴うと診断されている場合もあり、このような疾患／障害を有することが疑われる場合もあり、このような疾患／障害を発症する危険性がある場合もある。
【０３６５】
本発明に従う実施形態では、対象は、好ましくは、ヒト対象である。一部の実施形態では、本明細書における、本発明の治療または予防法に従い処置される対象は、がんを有するか、またはがんを発症させる危険性がある対象である。本発明に従う実施形態では、対象は、このような疾患／状態の、ある特定のマーカーについての特徴付けに基づく方法に従う処置のために選択されうる。
キット
本発明の一部の態様では、本明細書で記載されるキットオブパーツが提供される。一部の実施形態では、キットは、所定数量の、本明細書で記載される、抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（または複数の核酸）、発現ベクター（または複数の発現ベクター）、細胞、または組成物を有する、少なくとも１つの容器を有しうる。
【０３６６】
一部の実施形態では、キットは、本明細書で記載される、抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（または複数の核酸）、発現ベクター（または複数の発現ベクター）、細胞、または組成物を作製するための素材を含みうる。
【０３６７】
キットは、抗原結合性分子、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸（または複数の核酸）、発現ベクター（または複数の発現ベクター）、細胞、または組成物を、指定された疾患／状態を処置するための、患者への投与のための指示書と併せて提供しうる。
【０３６８】
一部の実施形態では、キットは、所定数量の、別の治療剤（例えば、抗感染症剤または化学療法剤）を有する、少なくとも１つの容器をさらに含みうる。このような実施形態では、キットはまた、２つの医薬または医薬組成物が、特異的な疾患または状態のための組合せ処置をもたらすよう、同時に、または個別に投与されうるように、第２の医薬または医薬組成物も含みうる。治療剤はまた、腫瘍または血液への注射または注入に適するようにも製剤化されうる。
配列同一性
本明細書で使用される、「配列同一性」とは、配列の間で、最大の配列同一性パーセントを達成するように、配列をアライメントし、必要な場合は、ギャップを導入した後で、参照配列内のヌクレオチド／アミノ酸残基と同一な、対象配列内のヌクレオチド／アミノ酸残基のパーセントを指す。２つ以上のアミノ酸配列または核酸配列の間の配列同一性パーセントを決定することを目的とする、対での、複数の配列アライメントは、例えば、ＣｌｕｓｔａｌＯｍｅｇａ（Ｓｏｄｉｎｇ、Ｊ．２００５、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ、２１、９５１〜９６０）、Ｔ−ｃｏｆｆｅｅ（Ｎｏｔｒｅｄａｍｅら、２０００、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（２０００）、３０２、２０５〜２１７）、Ｋａｌｉｇｎ（ＬａｓｓｍａｎｎおよびＳｏｎｎｈａｍｍｅｒ、２００５、ＢＭＣ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ、６（２９８））、およびＭＡＦＦＴ（ＫａｔｏｈおよびＳｔａｎｄｌｅｙ、２０１３、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ、３０（４）、７７２〜７８０）ソフトウェアなど、市販のコンピュータソフトウェアを使用して、当業者に公知の、多様な形で達成されうる。このようなソフトウェアを使用する場合、例えば、ギャップペナルティーおよび伸長ペナルティーについての、デフォルトのパラメータを使用することが好ましい。
配列
【０３６９】
【表２−１】
2021527086.tif 000004
【０３７０】
【表２−２】
2021527086.tif 000005
【０３７１】
【表２−３】
2021527086.tif 000006
【０３７２】
【表２−４】
2021527086.tif 000007
【０３７３】
【表２−５】
2021527086.tif 000008
【０３７４】
本発明の態様および実施形態に関連する、番号付けされた項目（ｐａｒａ）：
１．ＩＬ−１１Ｒαに結合することが可能であり、
（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号５２のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号２２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号２３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号２４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域
を含む抗原結合性分子、任意選択で、単離抗原結合性分子。
【０３７５】
２．（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号１９のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号２２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号２３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号２４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域
を含む、項目１に記載の抗原結合性分子。
【０３７６】
３．（ｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号１８のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ１
配列番号２０のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ２
配列番号２１のアミノ酸配列を有するＨＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ重鎖可変（ＶＨ）領域；および
（ｉｉ）以下のＣＤＲ：
配列番号２２のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ１
配列番号２３のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ２
配列番号２４のアミノ酸配列を有するＬＣ−ＣＤＲ３
を組み込んだ軽鎖可変（ＶＬ）領域
を含む、項目１に記載の抗原結合性分子。
【０３７７】
４．配列番号７、８、９、１０、１１、または１２のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域；および
配列番号１３、１４、１５、１６、または１７のアミノ酸配列に対する、少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域
を含む、項目１から３のいずれか一項に記載の抗原結合性分子。
【０３７８】
５．ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達を阻害することが可能である、項目１から４のいずれか一項に記載の抗原結合性分子。
６．（ｉ）項目１から５のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、および（ｉｉ）ＩＬ−１１Ｒα以外の抗原に結合することが可能な抗原結合性分子を含む、抗原結合性分子、任意選択で、単離抗原結合性分子。
【０３７９】
７．ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体と、ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体に対する相互作用パートナーとの相互作用を阻害することが可能である、項目１から６のいずれか一項に記載の抗原結合性分子。
【０３８０】
８．項目１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
９．項目１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、または項目８に記載のＣＡＲをコードする、１つの核酸または複数の核酸、任意選択で、１つの単離核酸または複数の単離核酸。
【０３８１】
１０．項目９に記載の、１つの核酸または複数の核酸を含む、１つの発現ベクターまたは複数の発現ベクター。
１１．項目１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、項目８に記載のＣＡＲ、項目９に記載の、１つの核酸もしくは複数の核酸、または項目１０に記載の、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクターを含む細胞。
【０３８２】
１２．項目９に記載の、１つの核酸もしくは複数の核酸、または項目１０に記載の、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクターを含む細胞を、抗原結合性分子またはＣＡＲの、核酸（複数可）または発現ベクター（複数可）からの発現に適する条件下で培養するステップを含む方法。
【０３８３】
１３．項目１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、項目８に記載のＣＡＲ、項目９に記載の、１つの核酸もしくは複数の核酸、項目１０に記載の、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、または項目１１に記載の細胞を含む組成物。
【０３８４】
１４．医学的処置または予防の方法における使用のための、項目１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、項目８に記載のＣＡＲ、項目９に記載の１つの核酸もしくは複数の核酸、項目１０に記載の１つの発現ベクターまたは複数の発現ベクター、項目１１に記載の細胞、または項目１３に記載の組成物。
【０３８５】
１５．線維症、線維症により特徴付けられる疾患、がん、炎症、または炎症により特徴付けられる疾患の処置または防止の方法における使用のための、項目１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、項目８に記載のＣＡＲ、項目９に記載の、１つの核酸もしくは複数の核酸、項目１０に記載の、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、項目１１に記載の細胞、または項目１３に記載の組成物。
【０３８６】
１６．線維症、線維症により特徴付けられる疾患、がん、炎症、または炎症により特徴付けられる疾患の処置または防止の方法における使用のための医薬の製造における、項目１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、項目８に記載のＣＡＲ、項目９に記載の、１つの核酸もしくは複数の核酸、項目１０に記載の、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、項目１１に記載の細胞、または項目１３に記載の組成物の使用。
【０３８７】
１８．線維症、線維症により特徴付けられる疾患、がん、炎症、または炎症により特徴付けられる疾患を処置または防止する方法であって、対象へと、治療または予防有効量の、項目１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子、項目８に記載のＣＡＲ、項目９に記載の、１つの核酸もしくは複数の核酸、項目１０に記載の、１つの発現ベクターもしくは複数の発現ベクター、項目１１に記載の細胞、または項目１３に記載の組成物を投与するステップを含む方法。
【０３８８】
１９．ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達を阻害する方法であって、ＩＬ−１１Ｒα発現細胞を、項目１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子と接触させるステップを含む方法。
【０３８９】
２０．ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体に結合した、項目１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子を含むｉｎ  ｖｉｔｒｏ複合体、任意選択で、単離ｉｎ  ｖｉｔｒｏ複合体。
【０３９０】
２１．ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体を含有するか、またはこれを含有することが疑われる試料を、項目１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子と接触させるステップと、抗原結合性分子の、ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体との複合体の形成を検出するステップとを含む方法。
【０３９１】
２２．対象を、ＩＬ−１１Ｒαターゲティング剤による処置のために選択または層別化する方法であって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、対象に由来する試料を、項目１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子と接触させるステップと、抗原結合性分子の、ＩＬ−１１ＲαまたはＩＬ−１１Ｒαを含む複合体との複合体の形成を検出するステップとを含む方法。
【０３９２】
２３．項目１から７のいずれか一項に記載の抗原結合性分子の、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏにおける診断または予後診断剤としての使用。
本発明は、このような組合せが、明らかに許容されないか、または明示的に回避される場合を除き、記載される態様と好ましい特徴との組合せを含む。
【０３９３】
本明細書で使用される節の小見出しは、構成上の目的だけのものであり、記載される対象物を限定するものと見なすべきではない。
ここで、付属の図面を参照しながら、例を目的として、本発明の態様および実施形態が例示される。当業者には、さらなる態様および実施形態が明らかであろう。本文で言及される全ての文献は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０３９４】
本明細書および後続の特許請求の範囲を通して、文脈によりそうでないことが要求されない限りにおいて、「〜を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という語、ならびに「〜を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「〜を含むこと」などの変化形は、言明された整数またはステップまたは整数もしくはステップの群の包含を含意し、他の任意の整数もしくはステップまたは整数もしくはステップの群の除外は含意しないように理解される。
【０３９５】
そうでないことが文脈により明確に指示されない限りにおいて、本明細書および付属の特許請求の範囲において使用される単数形の「ある（ａ）」、「ある（ａｎ）」、および「その」は、複数の指示対象を含むことに注意されたい。本明細書では、範囲は、「約」１つ特定の値から、かつ／または「約」別の特定の値までの範囲として表される。このような範囲が表される場合、別の実施形態は、１つ特定の値から、かつ／または他の特定の値までの範囲を含む。同様に、値が、先行詞である「約」の使用により、近似値として表される場合、特定の値は、別の実施形態を形成することが理解されるであろう。
【０３９６】
本明細書で、核酸配列が開示される場合、その逆相補体もまた、明示的に想定される。
本明細書で記載される方法は、好ましくは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて実施されうる。「ｉｎ  ｖｉｔｒｏ」と言う用語が、培養物中の細胞に対して実施される手順を包含することが意図されるのに対し、「ｉｎ  ｖｉｖｏ」と言う用語は、無傷の多細胞生物に対する／上の手順を包含することが意図される。
【０３９７】
ここで、付属の図を参照しながら、本発明の原理を例示する、実施形態および実験が論じられる。
【図面の簡単な説明】
【０３９８】
【図１】図１は、１７の抗ヒトＩＬ−１１Ｒα抗体クローンをまとめる表である。
【図２】図２は、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の存在下の、ＴＧＦβ１による刺激の後における、αＳＭＡ陽性細胞の百分率の倍数変化により決定される、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの、ヒト心房線維芽細胞内の、ＩＬ−１１により媒介されるシグナル伝達の、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体による、対照（刺激されていない）線維芽細胞と比較した阻害を示す棒グラフである。
【図３】図３は、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の存在下の、ＴＧＦβ１による刺激の後における、αＳＭＡ陽性細胞の百分率の倍数変化により決定される、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの、マウス心房線維芽細胞内の、ＩＬ−１１により媒介されるシグナル伝達の、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体による、対照（刺激されていない）線維芽細胞と比較した阻害を示す棒グラフである。
【図４】図４は、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の存在下の、ハイパーＩＬ−１１による刺激の後における、細胞培養物上清中の、ＭＭＰ２の量の倍数変化により決定される、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの、ヒト心房線維芽細胞内の、ハイパーＩＬ−１１により媒介される、ＩＬ−１１トランスシグナル伝達の、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体による、対照（刺激されていない）線維芽細胞と比較した阻害を示す棒グラフである。
【図５】図５は、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体についての、図２〜４の倍数変化データをまとめる表である。１〜１７と番号付けされた候補抗体は、図１に表示のクローンの呼称に対応する。「業界標準」とは、マウスモノクローナル抗ＩＬ−１１  ＩｇＧ２Ａ；クローン番号：２２６２６；型番：ＭＡＢ２１８；Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＭＮ、ＵＳＡである。
【図６Ａ】図６Ａは、ハイパーＩＬ−１１に応答する、線維芽細胞の活性化を示すグラフである。細胞を、表示量（ｎｇ／ｍｌ単位）のハイパーＩＬ−１１または組換えＩＬ−１１で刺激し、線維芽細胞の活性化を、α−ＳＭＡ陽性細胞の百分率についての解析により測定した。２つの異なる実験の結果を提示する。
【図６Ｂ】図６Ｂは、ハイパーＩＬ−１１に応答する、線維芽細胞の活性化を示すグラフである。細胞を、表示量（ｎｇ／ｍｌ単位）のハイパーＩＬ−１１または組換えＩＬ−１１で刺激し、線維芽細胞の活性化を、α−ＳＭＡ陽性細胞の百分率についての解析により測定した。２つの異なる実験の結果を提示する。
【図７】図７は、ハイパーＩＬ−１１による、初代線維芽細胞内の、ＩＬ−１１の分泌の誘導を示すグラフである。細胞を、ハイパーＩＬ−１１で刺激し、ＩＬ−１１  ＲＮＡおよび天然ＩＬ−１１タンパク質のレベルは、表示の時点において、ＥＬＩＳＡにより、細胞培養物上清中で測定した。
【図８Ａ】図８Ａおよび８Ｂは、ｉＱｕｅ解析により決定される、マウス抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の、ヒトＩＬ−１１Ｒαへの結合を示す表および棒グラフである。図８Ａは、実験の結果をまとめる表である。図８Ｂは、陽性対照である、抗ＦＬＡＧ抗体（１００％）と比べた結合強度を示す棒グラフであり、番号は、図１に表示のクローンに対応する。
【図８Ｂ】図８Ａおよび８Ｂは、ｉＱｕｅ解析により決定される、マウス抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の、ヒトＩＬ−１１Ｒαへの結合を示す表および棒グラフである。図８Ａは、実験の結果をまとめる表である。図８Ｂは、陽性対照である、抗ＦＬＡＧ抗体（１００％）と比べた結合強度を示す棒グラフであり、番号は、図１に表示のクローンに対応する。
【図８Ｃ】図８Ｃおよび８Ｄは、ＩＬ−１１Ｒαに特異的に結合して、ヒト（図８Ｃ）およびマウス（図８Ｄ）における、線維芽細胞の活性化を中和する抗体の能力を示すグラフである。１００％の阻害は、刺激されていない線維芽細胞のレベルを指し示し、０％は、完全に活性化された線維芽細胞を指し示す。
【図８Ｄ】図８Ｃおよび８Ｄは、ＩＬ−１１Ｒαに特異的に結合して、ヒト（図８Ｃ）およびマウス（図８Ｄ）における、線維芽細胞の活性化を中和する抗体の能力を示すグラフである。１００％の阻害は、刺激されていない線維芽細胞のレベルを指し示し、０％は、完全に活性化された線維芽細胞を指し示す。
【図８Ｅ】図８Ｅは、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体である、５Ｅ５、９Ａ７、および１３Ｂ１０が、ＩＬ−１１Ｒαに結合し、内因的に産生されたＩＬ−１１が、相互作用することを遮断し、ヒト心房線維芽細胞内の、線維形成性タンパク質である、ＭＭＰ２およびＴＩＭＰ１の産生を阻害する能力を示すグラフである。
【図８Ｆ】図８Ｆは、抗体が、ＩＬ−１１トランスシグナル伝達を中和することを確認する図である。
【図８Ｇ】図８Ｇは、９Ａ７が、外因性もしくは内因性のＩＬ−１１、またはハイパーＩＬ−１１を遮断し、マウス心臓線維芽細胞内の、ＩＬ−１１によるシスシグナル伝達およびトランスシグナル伝達を中和し、線維形成性タンパク質の産生を阻害することを示す図である。
【図８Ｈ】図８Ｈは、９Ａ７が、内因性ＩＬ−１１（上）または外因性ＩＬ−１１（下）により誘導された、ヒト肝星細胞内の、線維形成性タンパク質（ＭＭＰ２）の産生を阻害する能力を示す図である。
【図９Ａ】図９Ａは、腎線維症についてのマウスモデルにおいて、異なる処置にかけられたマウスに由来する腎臓切片についての組織学的解析の結果を示す、画像およびグラフである。腎線維症は、マウスにおいて、媒体（０．３ＭのＮａＨＣＯ３）中の葉酸（ＦＡ、１８０ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内（ＩＰ）注射により誘導し、対照マウスには、媒体を、単独で投与した。マウスに、葉酸による損傷後１日目から、実験の持続期間にわたり、アイソタイプ対照ＩｇＧ２（２０ｍｇ／ｋｇ、毎週３回、腹腔内）、抗ＩＬ−１１Ｒａ抗体（２０ｍｇ／ｋｇ、毎週３回、腹腔内）を投与した。動物は、葉酸誘導性腎損傷の２８日後に屠殺し、マッソントリクローム染料を使用して、線維症について、組織学的に解析した。マッソントリクロームで染色された腎臓切片の画像である。コラーゲンを含有する線維症性領域は、明るく見える健常領域と比較して、暗く見える。
【図９Ｂ】図９Ｂは、腎線維症についてのマウスモデルにおいて、異なる処置にかけられたマウスに由来する腎臓切片についての組織学的解析の結果を示す、画像およびグラフである。腎線維症は、マウスにおいて、媒体（０．３ＭのＮａＨＣＯ３）中の葉酸（ＦＡ、１８０ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内（ＩＰ）注射により誘導し、対照マウスには、媒体を、単独で投与した。マウスに、葉酸による損傷後１日目から、実験の持続期間にわたり、アイソタイプ対照ＩｇＧ２（２０ｍｇ／ｋｇ、毎週３回、腹腔内）、抗ＩＬ−１１Ｒａ抗体（２０ｍｇ／ｋｇ、毎週３回、腹腔内）を投与した。動物は、葉酸誘導性腎損傷の２８日後に屠殺し、マッソントリクローム染料を使用して、線維症について、組織学的に解析した。全腎臓領域に対する百分率（％）としての、コラーゲン領域についての半定量的解析を示すグラフである。＊＊＊：ＡＮＯＶＡによる、ＦＡ＋ＩｇＧと比較した、Ｐ＜０．００１である。
【図１０Ａ】図１０Ａは、腎線維症についてのマウスモデルにおいて、異なる処置にかけられたマウスにおける、尿中アルブミン／クレアチニン比を示すグラフである。腎線維症は、マウスにおいて、媒体（０．３ＭのＮａＨＣＯ３）中の葉酸（ＦＡ、１８０ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内（ＩＰ）注射により誘導し、対照マウスには、媒体を、単独で投与した。ＦＡで処理されたマウスに、葉酸による損傷後１日目から、実験の持続期間にわたり、アイソタイプ対照ＩｇＧ２（２０ｍｇ／ｋｇ、毎週３回、腹腔内）または抗ＩＬ１１Ｒａ抗体（２０ｍｇ／ｋｇ、毎週３回、腹腔内）を投与した。マウスを、代謝ケージに入れ、製造元の指示書に従い、市販のアッセイ（Ａｂｃａｍ）を使用して、尿中のクレアチニンおよびアルブミンを測定した。＊＊＊：ＡＮＯＶＡによる、ＦＡ＋ＩｇＧと比較した、Ｐ＜０．００１である。
【図１０Ｂ】図１０Ｂは、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の、マウスモデルの、葉酸により誘導された腎線維症における、腎臓コラーゲン含量に対する、用量依存的効果を示すグラフである。
【図１１Ａ】図１１Ａは、急性腎損傷についてのマウスモデルにおいて、異なる処置にかけられたマウスに由来する腎臓切片についての、組織学的解析の結果を示す画像およびグラフである。マウスを、一方の尿管に対する、偽手術または尿管閉塞術により処理した。マウスに、ＩｇＧ、抗ＩＬ−１１Ｒａ抗体（術後−１、１、３、５日目における２０ｍｇ／ｋｇ）を施し、傷害腎臓（ＵＵＯ  ＩｇＧ、ＩＬ−１１Ｒａ）または対側（Ｃｏｎ）非傷害腎臓（Ｃｏｎ  ＩｇＧ、ＩＬ−１１Ｒａ）を、術後７日目に採取した。
【図１１Ｂ】図１１Ｂは、急性腎損傷についてのマウスモデルにおいて、異なる処置にかけられたマウスに由来する腎臓切片についての、組織学的解析の結果を示す画像およびグラフである。尿細管損傷についての半定量的評価は、実験条件に対して盲検化された、尿細管円柱、尿細管萎縮、または尿細管拡大についての組織学的解析により（尿細管損傷スコア：０＝なし；１＝最小限；２＝軽度；３＝中等度；４＝重度）決定した。＊：ＡＮＯＶＡによる、ＵＵＯ  ＩｇＧと比較した、Ｐ＜０．０５である。
【図１２Ａ】図１２Ａは、心臓線維症についてのマウスモデルにおいて、異なる処置にかけられたマウスに由来する心臓線維症についての、組織学的解析の結果を示す画像および棒グラフである。マウス（Ｃ５７Ｂｌ６、雄、８〜１２週齢）を、線維症誘導性横大動脈狭窄術（ＴＡＣ）または偽手術にかけた。ＴＡＣ処理動物に、対照抗体（２０ｍｇ／ｋｇ、毎週３回、腹腔内）、または抗ＩＬ−１１Ｒａ中和抗体（２０ｍｇ／ｋｇ、毎週３回、腹腔内）を施した。２週間後に、心臓を採取し、マッソントリクローム染料を使用して、線維症の程度について評価した。
【図１２Ｂ】図１２Ｂは、心臓線維症についてのマウスモデルにおいて、異なる処置にかけられたマウスに由来する心臓線維症についての、組織学的解析の結果を示す画像および棒グラフである。マウス（Ｃ５７Ｂｌ６、雄、８〜１２週齢）を、線維症誘導性横大動脈狭窄術（ＴＡＣ）または偽手術にかけた。ＴＡＣ処理動物に、対照抗体（２０ｍｇ／ｋｇ、毎週３回、腹腔内）、または抗ＩＬ−１１Ｒａ中和抗体（２０ｍｇ／ｋｇ、毎週３回、腹腔内）を施した。Ｑｕｉｃｋｚｙｍｅ  Ｔｏｔａｌ  Ｃｏｌｌａｇｅｎアッセイキット（Ｑｕｉｃｋｚｙｍｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用する、ヒドロキシプロリンの比色検出により決定される、心臓内の総コラーゲンの量を示す。＊＊：Ｐ＜０．０１であり、ｎｓ、ＳＨＡＭ手術と対比して非有意である。＃：ＴＡＣ＋ＩｇＧ対照と対比した、ＴＡＣ＋抗ＩＬ１１ＲＡについて、Ｐ＜０．０５である。Ａｂ：抗体である。
【図１３Ａ】図１３Ａは、ＨＳＣと、ＩＬ−１１との関係を示すグラフである。ＴＧＦβ１で刺激された、肝星細胞（ＨＳＣ）内の、ＩＬ−１１の発現であり、ＦＣ：倍数変化である。
【図１３Ｂ】図１３Ｂおよび１３Ｃは、ＨＳＣと、ＩＬ−１１との関係を示すグラフである。図１３Ｂは、ＨＳＣ内の、ＩＬ６Ｒ、ｇｐ１３０、およびＩＬ１１ＲＡの発現であり、ＴＰＭ：ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ  ｐｅｒ  ｍｉｌｌｉｏｎである。図１３Ｃは、ウェスタンブロット法により検出される、健常個体およびＮＡＳＨを患う患者の、ヒト肝臓試料からの、ＩＬ−１１の発現についての密度測定を示すグラフである。
【図１３Ｃ】図１３Ｂおよび１３Ｃは、ＨＳＣと、ＩＬ−１１との関係を示すグラフである。図１３Ｂは、ＨＳＣ内の、ＩＬ６Ｒ、ｇｐ１３０、およびＩＬ１１ＲＡの発現であり、ＴＰＭ：ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ  ｐｅｒ  ｍｉｌｌｉｏｎである。図１３Ｃは、ウェスタンブロット法により検出される、健常個体およびＮＡＳＨを患う患者の、ヒト肝臓試料からの、ＩＬ−１１の発現についての密度測定を示すグラフである。
【図１３Ｄ】図１３Ｄおよび１３Ｅは、ＨＳＣと、ＩＬ−１１との関係を示すグラフである。ＨＳＣの、刺激を伴わない（−）か、またはＴＧＦβ１、ＰＤＧＦ、もしくはＩＬ−１１を伴うインキュベーションの後における、（図１３Ｄ）ＡＣＴＡ２＋ｖｅ細胞、および（図１３Ｅ）コラーゲンＩ免疫染色についての、自動式蛍光定量を示すグラフである。
【図１３Ｅ】図１３Ｄおよび１３Ｅは、ＨＳＣと、ＩＬ−１１との関係を示すグラフである。ＨＳＣの、刺激を伴わない（−）か、またはＴＧＦβ１、ＰＤＧＦ、もしくはＩＬ−１１を伴うインキュベーションの後における、（図１３Ｄ）ＡＣＴＡ２＋ｖｅ細胞、および（図１３Ｅ）コラーゲンＩ免疫染色についての、自動式蛍光定量を示すグラフである。
【図１３Ｆ】図１３Ｆおよび１３Ｇは、ＨＳＣと、ＩＬ−１１との関係を示すグラフである。図１３Ｆは、ＴＧＦβ１、ＰＤＧＦ、またはＩＬ−１１で刺激されたＨＳＣの、コラーゲン分泌上清（Ｓｉｒｉｕｓ  ｒｅｄアッセイ）を示すグラフである。図１３Ｇは、ＩＬ−１１により誘導されたＨＳＣの、用量依存的マトリゲル浸潤を示す。
【図１３Ｇ】図１３Ｆおよび１３Ｇは、ＨＳＣと、ＩＬ−１１との関係を示すグラフである。図１３Ｆは、ＴＧＦβ１、ＰＤＧＦ、またはＩＬ−１１で刺激されたＨＳＣの、コラーゲン分泌上清（Ｓｉｒｉｕｓ  ｒｅｄアッセイ）を示すグラフである。図１３Ｇは、ＩＬ−１１により誘導されたＨＳＣの、用量依存的マトリゲル浸潤を示す。
【図１３Ｈ】図１３Ｈは、ＨＳＣと、ＩＬ−１１との関係を示すグラフである。２１日間にわたり、毎日ＩＬ−１１を投与されたマウスに由来する、相対肝ヒドロキシプロリン含量、線維症促進性マーカーからのｍＲＮＡ発現、および血清ＡＬＴレベルを示すグラフである。ＦＣ：倍数変化である。
【図１４Ａ】図１４Ａおよび１４Ｂは、ＨＳＣの、筋線維芽細胞への活性化、およびＨＳＣの浸潤能に対する、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の効果（Ａ〜Ｄ）を示す略図である。図１４Ａは、ＴＧＦβ１で刺激され、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体またはＩｇＧ対照で処置された、ＨＳＣ培養物中の、ＡＣＴＡ２＋ｖｅ細胞の数を示す。図１４Ｂは、ＰＤＧＦ（２０ｎｇ／ｍｌ）、ＣＣＬ２（５ｎｇ／ｍｌ）、アンジオテンシンＩＩ（１００ｎＭ）、ｂＦＧＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）またはＨ２Ｏ２（０．２ｍＭ）で刺激され、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体またはＩｇＧ対照で処置された、ＨＳＣ培養物中の、ＡＣＴＡ２＋ｖｅ細胞の数を示す。
【図１４Ｂ】図１４Ａおよび１４Ｂは、ＨＳＣの、筋線維芽細胞への活性化、およびＨＳＣの浸潤能に対する、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の効果（Ａ〜Ｄ）を示す略図である。図１４Ａは、ＴＧＦβ１で刺激され、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体またはＩｇＧ対照で処置された、ＨＳＣ培養物中の、ＡＣＴＡ２＋ｖｅ細胞の数を示す。図１４Ｂは、ＰＤＧＦ（２０ｎｇ／ｍｌ）、ＣＣＬ２（５ｎｇ／ｍｌ）、アンジオテンシンＩＩ（１００ｎＭ）、ｂＦＧＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）またはＨ２Ｏ２（０．２ｍＭ）で刺激され、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体またはＩｇＧ対照で処置された、ＨＳＣ培養物中の、ＡＣＴＡ２＋ｖｅ細胞の数を示す。
【図１４Ｃ】図１４Ｃおよび１４Ｄは、ＨＳＣの、筋線維芽細胞への活性化、およびＨＳＣの浸潤能に対する、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の効果（Ａ〜Ｄ）を示す略図である。図１４Ｃは、抗体およびＩｇＧ対照の、ＰＤＧＦ誘導性ＨＳＣ浸潤およびＣＣＬ２誘導性ＨＳＣ浸潤に対する効果を示す。図１４Ｄは、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の、刺激されたＨＳＣ培養物による、コラーゲンＩの産生に対する効果である。
【図１４Ｄ】図１４Ｃおよび１４Ｄは、ＨＳＣの、筋線維芽細胞への活性化、およびＨＳＣの浸潤能に対する、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の効果（Ａ〜Ｄ）を示す略図である。図１４Ｃは、抗体およびＩｇＧ対照の、ＰＤＧＦ誘導性ＨＳＣ浸潤およびＣＣＬ２誘導性ＨＳＣ浸潤に対する効果を示す。図１４Ｄは、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の、刺激されたＨＳＣ培養物による、コラーゲンＩの産生に対する効果である。
【図１４Ｅ】図１４Ｅおよび１４Ｆは、早期ＮＡＳＨについてのマウスモデルにおける、ＨＳＣの、筋線維芽細胞への活性化、およびＨＳＣの浸潤能に対する、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の効果（Ｅ〜Ｆ）を示す略図である。マウスにおいて、ＨＦＭＣＤ（高脂肪メチオニン／コリン欠乏）食餌により誘導された、早期ＮＡＳＨにおける、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の、ＡＬＴレベルおよびコラーゲン産生に対する効果である。
【図１４Ｆ】図１４Ｅおよび１４Ｆは、早期ＮＡＳＨについてのマウスモデルにおける、ＨＳＣの、筋線維芽細胞への活性化、およびＨＳＣの浸潤能に対する、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の効果（Ｅ〜Ｆ）を示す略図である。マウスにおいて、ＨＦＭＣＤ（高脂肪メチオニン／コリン欠乏）食餌により誘導された、早期ＮＡＳＨにおける、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の、ＡＬＴレベルおよびコラーゲン産生に対する効果である。
【図１５Ａ】図１５Ａ〜１５Ｃは、進行性ＮＡＳＨについてのマウスモデルにおける、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の治療効果を示す図である。高脂肪メチオニン／コリン欠乏（ＨＦＭＣＤ）食餌により、６週間にわたり、ＮＡＳＨを刺激し、次いで、隔週で、４週間にわたる、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体処置により処置した。ＩｇＧを、対照として使用した。図１５Ａは、マウス肝臓のＥＲＫ活性化状態についてのウェスタンブロットを示す。図１５Ｂは、相対肝ヒドロキシプロリン含量を示す。図１５Ｃは、血清ＡＬＴレベルを示す。
【図１５Ｂ】図１５Ａ〜１５Ｃは、進行性ＮＡＳＨについてのマウスモデルにおける、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の治療効果を示す図である。高脂肪メチオニン／コリン欠乏（ＨＦＭＣＤ）食餌により、６週間にわたり、ＮＡＳＨを刺激し、次いで、隔週で、４週間にわたる、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体処置により処置した。ＩｇＧを、対照として使用した。図１５Ａは、マウス肝臓のＥＲＫ活性化状態についてのウェスタンブロットを示す。図１５Ｂは、相対肝ヒドロキシプロリン含量を示す。図１５Ｃは、血清ＡＬＴレベルを示す。
【図１５Ｃ】図１５Ａ〜１５Ｃは、進行性ＮＡＳＨについてのマウスモデルにおける、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の治療効果を示す図である。高脂肪メチオニン／コリン欠乏（ＨＦＭＣＤ）食餌により、６週間にわたり、ＮＡＳＨを刺激し、次いで、隔週で、４週間にわたる、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体処置により処置した。ＩｇＧを、対照として使用した。図１５Ａは、マウス肝臓のＥＲＫ活性化状態についてのウェスタンブロットを示す。図１５Ｂは、相対肝ヒドロキシプロリン含量を示す。図１５Ｃは、血清ＡＬＴレベルを示す。
【図１５Ｄ−１】図１５Ｄは、進行性ＮＡＳＨについてのマウスモデルにおける、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の治療効果を示す図である。ストレプトゾトシンの単回皮下注射により、ＮＡＳＨを刺激し、マウスに、通常飼料による食餌を、４週間にわたり給餌し、次いで、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体またはＩｇＧ対照と共に、ＨＦＭＣＤ食餌を、７週間にわたり給餌した。グラフは、７週間後における、線維症遺伝子および炎症遺伝子のＲＮＡ発現を示す。
【図１５Ｄ−２】同上
【図１６】図１６は、抗ＩＬ−１１Ｒα療法の、肝線維症に対する反転効果を示す図である。マウスに、ＨＦＭＣＤ食餌により、１０週間にわたり、重度の肝線維症を確立し、次いで、マウスに、ＨＦＭＣＤ食餌をなおも給餌しながら、これを、毎週２回ずつ、６週間にわたり、食餌＋抗ＩＬ−１１Ｒα抗体またはＩｇＧ（２０ｍｇ／ｋｇ）で処置した。総肝ヒドロキシプロリン含量を示す。
【図１７Ａ】図１７Ａおよび１７Ｂは、形質転換され、ＴＧＦβ１またはＰＤＧＦで、７２時間にわたり刺激され、次いで、持続的なＴＧＦβ１またはＰＤＧＦによる刺激の存在下で、２４時間にわたり、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体またはＩｇＧ対照により処置されたＨＳＣに対する、抗ＩＬ−１１Ｒα療法の効果を示す図である。図１７Ａは、処置、およびＴＧＦβ１による処理、次いで、抗体による処置の後における、ＡＣＴＡ２＋ｖｅ細胞の百分率の定量のスケジュールを示す。図１７Ｂは、ＰＤＧＦによる処理、次いで、抗体による処置の後における、ＡＣＴＡ２＋ｖｅ細胞の百分率の定量（図１７Ａにおける通りの処置のスケジュール）を示す。データは、中央値（中央の直線）、第２５〜７５百分位数（箱）、および最小〜最大の百分位数（髭）を伴う箱髭図として示される。
【図１７Ｂ】図１７Ａおよび１７Ｂは、形質転換され、ＴＧＦβ１またはＰＤＧＦで、７２時間にわたり刺激され、次いで、持続的なＴＧＦβ１またはＰＤＧＦによる刺激の存在下で、２４時間にわたり、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体またはＩｇＧ対照により処置されたＨＳＣに対する、抗ＩＬ−１１Ｒα療法の効果を示す図である。図１７Ａは、処置、およびＴＧＦβ１による処理、次いで、抗体による処置の後における、ＡＣＴＡ２＋ｖｅ細胞の百分率の定量のスケジュールを示す。図１７Ｂは、ＰＤＧＦによる処理、次いで、抗体による処置の後における、ＡＣＴＡ２＋ｖｅ細胞の百分率の定量（図１７Ａにおける通りの処置のスケジュール）を示す。データは、中央値（中央の直線）、第２５〜７５百分位数（箱）、および最小〜最大の百分位数（髭）を伴う箱髭図として示される。
【図１７Ｃ】図１７Ｃ〜１７Ｅは、形質転換され、ＴＧＦβ１またはＰＤＧＦで、７２時間にわたり刺激され、次いで、持続的なＴＧＦβ１またはＰＤＧＦによる刺激の存在下で、２４時間にわたり、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体またはＩｇＧ対照により処置されたＨＳＣに対する、抗ＩＬ−１１Ｒα療法の効果を示す図である。図１７Ｃは、ＴＧＦβ１による処理、次いで、抗体による処置の後において分泌されたコラーゲンの量を示す。図１７Ｄは、ＰＤＧＦによる処理、次いで、抗体による処置の後において分泌されたコラーゲンの量を示す。図１７Ｅは、ＴＧＦβ１による処理、次いで、抗体による処置の後におけるＥＲＫ活性を示す。データは、中央値（中央の直線）、第２５〜７５百分位数（箱）、および最小〜最大の百分位数（髭）を伴う箱髭図として示される。
【図１７Ｄ】図１７Ｃ〜１７Ｅは、形質転換され、ＴＧＦβ１またはＰＤＧＦで、７２時間にわたり刺激され、次いで、持続的なＴＧＦβ１またはＰＤＧＦによる刺激の存在下で、２４時間にわたり、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体またはＩｇＧ対照により処置されたＨＳＣに対する、抗ＩＬ−１１Ｒα療法の効果を示す図である。図１７Ｃは、ＴＧＦβ１による処理、次いで、抗体による処置の後において分泌されたコラーゲンの量を示す。図１７Ｄは、ＰＤＧＦによる処理、次いで、抗体による処置の後において分泌されたコラーゲンの量を示す。図１７Ｅは、ＴＧＦβ１による処理、次いで、抗体による処置の後におけるＥＲＫ活性を示す。データは、中央値（中央の直線）、第２５〜７５百分位数（箱）、および最小〜最大の百分位数（髭）を伴う箱髭図として示される。
【図１７Ｅ】図１７Ｃ〜１７Ｅは、形質転換され、ＴＧＦβ１またはＰＤＧＦで、７２時間にわたり刺激され、次いで、持続的なＴＧＦβ１またはＰＤＧＦによる刺激の存在下で、２４時間にわたり、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体またはＩｇＧ対照により処置されたＨＳＣに対する、抗ＩＬ−１１Ｒα療法の効果を示す図である。図１７Ｃは、ＴＧＦβ１による処理、次いで、抗体による処置の後において分泌されたコラーゲンの量を示す。図１７Ｄは、ＰＤＧＦによる処理、次いで、抗体による処置の後において分泌されたコラーゲンの量を示す。図１７Ｅは、ＴＧＦβ１による処理、次いで、抗体による処置の後におけるＥＲＫ活性を示す。データは、中央値（中央の直線）、第２５〜７５百分位数（箱）、および最小〜最大の百分位数（髭）を伴う箱髭図として示される。
【図１８Ａ】図１８Ａおよび１８Ｂは、ＨＦＭＣＤ食餌を、１週間にわたり施され、次いで、食餌＋抗ＩＬ−１１Ｒα抗体またはＩｇＧを、５週間にわたり施されたマウスにおいて確立された、早期ＮＡＳＨにおける、抗ＩＬ−１１Ｒα療法の効果を示す図である。図１８Ａは、ＩｇＧ処置または抗ＩＬ−１１Ｒα処置の５週間後における、代表的な肉眼的肝臓画像、および肝臓についての、代表的なマッソントリクロームによる染色画像を示す。図１８Ｂは、処置の５週間後における、肝トリグリセリドレベルを示す。
【図１８Ｂ】図１８Ａおよび１８Ｂは、ＨＦＭＣＤ食餌を、１週間にわたり施され、次いで、食餌＋抗ＩＬ−１１Ｒα抗体またはＩｇＧを、５週間にわたり施されたマウスにおいて確立された、早期ＮＡＳＨにおける、抗ＩＬ−１１Ｒα療法の効果を示す図である。図１８Ａは、ＩｇＧ処置または抗ＩＬ−１１Ｒα処置の５週間後における、代表的な肉眼的肝臓画像、および肝臓についての、代表的なマッソントリクロームによる染色画像を示す。図１８Ｂは、処置の５週間後における、肝トリグリセリドレベルを示す。
【図１８Ｃ】図１８Ｃおよび１８Ｄは、ＨＦＭＣＤ食餌を、１週間にわたり施され、次いで、食餌＋抗ＩＬ−１１Ｒα抗体またはＩｇＧを、５週間にわたり施されたマウスにおいて確立された、早期ＮＡＳＨにおける、抗ＩＬ−１１Ｒα療法の効果を示す図である。図１８Ｃは、血清ＡＬＴレベルを示す。図１８Ｄは、３週間にわたる抗ＩＬ−１１Ｒα療法の、血清ＡＬＴレベルの反転に対する、用量依存的効果を示す。
【図１８Ｄ】図１８Ｃおよび１８Ｄは、ＨＦＭＣＤ食餌を、１週間にわたり施され、次いで、食餌＋抗ＩＬ−１１Ｒα抗体またはＩｇＧを、５週間にわたり施されたマウスにおいて確立された、早期ＮＡＳＨにおける、抗ＩＬ−１１Ｒα療法の効果を示す図である。図１８Ｃは、血清ＡＬＴレベルを示す。図１８Ｄは、３週間にわたる抗ＩＬ−１１Ｒα療法の、血清ＡＬＴレベルの反転に対する、用量依存的効果を示す。
【図１８Ｅ】図１８Ｅ〜１８Ｇは、ＨＦＭＣＤ食餌を、１週間にわたり施され、次いで、食餌＋抗ＩＬ−１１Ｒα抗体またはＩｇＧを、５週間にわたり施されたマウスにおいて確立された、早期ＮＡＳＨにおける、抗ＩＬ−１１Ｒα療法の効果を示す図である。図１８Ｅは、肝ヒドロキシプロリン含量を示す。図１８Ｆは、抗ＩＬ−１１Ｒα療法の、総ヒドロキシプロリン含量に対する用量依存的効果を示す。図１８Ｇは、処置の５週間後における、肝ＥＲＫのリン酸化を示す。
【図１８Ｆ】図１８Ｅ〜１８Ｇは、ＨＦＭＣＤ食餌を、１週間にわたり施され、次いで、食餌＋抗ＩＬ−１１Ｒα抗体またはＩｇＧを、５週間にわたり施されたマウスにおいて確立された、早期ＮＡＳＨにおける、抗ＩＬ−１１Ｒα療法の効果を示す図である。図１８Ｅは、肝ヒドロキシプロリン含量を示す。図１８Ｆは、抗ＩＬ−１１Ｒα療法の、総ヒドロキシプロリン含量に対する用量依存的効果を示す。図１８Ｇは、処置の５週間後における、肝ＥＲＫのリン酸化を示す。
【図１８Ｇ】図１８Ｅ〜１８Ｇは、ＨＦＭＣＤ食餌を、１週間にわたり施され、次いで、食餌＋抗ＩＬ−１１Ｒα抗体またはＩｇＧを、５週間にわたり施されたマウスにおいて確立された、早期ＮＡＳＨにおける、抗ＩＬ−１１Ｒα療法の効果を示す図である。図１８Ｅは、肝ヒドロキシプロリン含量を示す。図１８Ｆは、抗ＩＬ−１１Ｒα療法の、総ヒドロキシプロリン含量に対する用量依存的効果を示す。図１８Ｇは、処置の５週間後における、肝ＥＲＫのリン酸化を示す。
【図１８Ｈ】図１８Ｈおよび１８Ｉは、ＨＦＭＣＤ食餌を、１週間にわたり施され、次いで、食餌＋抗ＩＬ−１１Ｒα抗体またはＩｇＧを、５週間にわたり施されたマウスにおいて確立された、早期ＮＡＳＨにおける、抗ＩＬ−１１Ｒα療法の効果を示す図である。図１８Ｈは、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体またはＩｇＧ対照による処置の後の、通常飼料による食餌を施されるマウス、およびＨＦＭＣＤ食餌を施されるマウスにおける、線維症促進性遺伝子および炎症促進性遺伝子のＺスコアの示差的発現についてのヒートマップを示す。図１８Ｉは、炎症促進性遺伝子のＲＮＡ発現を示す。
【図１８Ｉ】図１８Ｈおよび１８Ｉは、ＨＦＭＣＤ食餌を、１週間にわたり施され、次いで、食餌＋抗ＩＬ−１１Ｒα抗体またはＩｇＧを、５週間にわたり施されたマウスにおいて確立された、早期ＮＡＳＨにおける、抗ＩＬ−１１Ｒα療法の効果を示す図である。図１８Ｈは、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体またはＩｇＧ対照による処置の後の、通常飼料による食餌を施されるマウス、およびＨＦＭＣＤ食餌を施されるマウスにおける、線維症促進性遺伝子および炎症促進性遺伝子のＺスコアの示差的発現についてのヒートマップを示す。図１８Ｉは、炎症促進性遺伝子のＲＮＡ発現を示す。
【図１８Ｊ】図１８Ｊおよび１８Ｋは、ＨＦＭＣＤ食餌を、１週間にわたり施され、次いで、食餌＋抗ＩＬ−１１Ｒα抗体またはＩｇＧを、５週間にわたり施されたマウスにおいて確立された、早期ＮＡＳＨにおける、抗ＩＬ−１１Ｒα療法の効果を示す図である。図１８Ｊは、線維症促進性遺伝子のＲＮＡ発現を示す。図１８Ｋは、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体が、肝臓における脂質代謝を、ＩｇＧと比較して改善したことをを示す、脂質生成遺伝子およびβ酸化遺伝子の示差的発現についてのヒートマップを示す。
【図１８Ｋ】図１８Ｊおよび１８Ｋは、ＨＦＭＣＤ食餌を、１週間にわたり施され、次いで、食餌＋抗ＩＬ−１１Ｒα抗体またはＩｇＧを、５週間にわたり施されたマウスにおいて確立された、早期ＮＡＳＨにおける、抗ＩＬ−１１Ｒα療法の効果を示す図である。図１８Ｊは、線維症促進性遺伝子のＲＮＡ発現を示す。図１８Ｋは、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体が、肝臓における脂質代謝を、ＩｇＧと比較して改善したことをを示す、脂質生成遺伝子およびβ酸化遺伝子の示差的発現についてのヒートマップを示す。
【図１９Ａ】図１９Ａおよび１９Ｂは、早期ＮＡＳＨモデルにおける、抗ＩＬ−１１Ｒα療法の、肝臓の炎症性細胞集団に対する効果を示す図である。図１９Ａは、肝臓における、ＣＤ４５＋ｖｅ免疫細胞の数を示す。図１９Ｂは、全ＣＤ４５＋ｖｅ集団内の、Ｌｙ６Ｃ＋ｖｅＴＧＦβ１＋ｖｅ細胞を示す。データは、中央値（中央の直線）、第２５〜７５百分位数（箱）、および最小〜最大の百分位数（髭）を伴う箱髭図として示される。（Ａ〜Ｂ）両側、スチューデントのｔ検定による。
【図１９Ｂ】図１９Ａおよび１９Ｂは、早期ＮＡＳＨモデルにおける、抗ＩＬ−１１Ｒα療法の、肝臓の炎症性細胞集団に対する効果を示す図である。図１９Ａは、肝臓における、ＣＤ４５＋ｖｅ免疫細胞の数を示す。図１９Ｂは、全ＣＤ４５＋ｖｅ集団内の、Ｌｙ６Ｃ＋ｖｅＴＧＦβ１＋ｖｅ細胞を示す。データは、中央値（中央の直線）、第２５〜７５百分位数（箱）、および最小〜最大の百分位数（髭）を伴う箱髭図として示される。（Ａ〜Ｂ）両側、スチューデントのｔ検定による。
【図１９Ｃ】図１９Ｃは、早期ＮＡＳＨモデルにおける、抗ＩＬ−１１Ｒα療法の、肝臓の炎症性細胞集団に対する効果を示す図である。図１９Ｃは、血清ＴＧＦβレベル（群１つ当たりのｎ≧５）を示す。データは、中央値（中央の直線）、第２５〜７５百分位数（箱）、および最小〜最大の百分位数（髭）を伴う箱髭図として示される。（Ｃ）チューキー補正された、両側、スチューデントのｔ検定による。
【図２０】図２０は、抗ＩＬ−１１Ｒａ抗体の、ヒトＩＬ−１１Ｒαに対する結合アフィニティーについての、マルチサイクルカイネティクス解析の結果を示すセンサーグラムおよび表である。２つの個別の解析の結果を示す。
【図２１】図２１は、５ｎｇ／ｍｌのＴＧＦβ１で刺激されたＨＳＣによる、ＭＭＰ２の分泌の阻害における、抗ＩＬ−１１Ｒａ抗体である、クローンＢＳＯ−９Ａ７の用量反応曲線およびＩＣ５０値を示す図である。
【図２２Ａ】図２２Ａおよび２２Ｂは、放射性標識された抗ＩＬ−１１Ｒα抗体のクローンである、１２５Ｉ−９Ａ７の、半減期（図２２Ａ）、および肝臓への取込み（図２２Ｂ）を示すグラフである。
【図２２Ｂ】図２２Ａおよび２２Ｂは、放射性標識された抗ＩＬ−１１Ｒα抗体のクローンである、１２５Ｉ−９Ａ７の、半減期（図２２Ａ）、および肝臓への取込み（図２２Ｂ）を示すグラフである。
【図２３Ａ】図２３Ａおよび２３Ｂは、消耗関連体重減少についてのモデルにおける、抗ＩＬ−１１Ｒα（９Ａ７）抗体による処置の、体重（Ａ）および食物消費（Ｂ）に対する効果を示すグラフである。ＨＦＭＣＤ食餌を給餌されたマウスを、毎週２回、０．５、１、５、または１０ｍｇ／ｋｇの抗ＩＬ−１１Ｒα抗体で処置した。対照マウスには、通常飼料（ＮＣ）を給餌するか、またはＨＦＭＣＤ食餌を給餌し、ＩｇＧアイソタイプ対照で処置した。
【図２３Ｂ】図２３Ａおよび２３Ｂは、消耗関連体重減少についてのモデルにおける、抗ＩＬ−１１Ｒα（９Ａ７）抗体による処置の、体重（Ａ）および食物消費（Ｂ）に対する効果を示すグラフである。ＨＦＭＣＤ食餌を給餌されたマウスを、毎週２回、０．５、１、５、または１０ｍｇ／ｋｇの抗ＩＬ−１１Ｒα抗体で処置した。対照マウスには、通常飼料（ＮＣ）を給餌するか、またはＨＦＭＣＤ食餌を給餌し、ＩｇＧアイソタイプ対照で処置した。
【図２４】図２４は、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体である、９Ａ７、および９Ａ７の、６つのヒト化クローンが、ＩＬ−１１シグナル伝達を中和する能力を示すグラフである。初代ヒト心房線維芽細胞を、ＴＧＦβ１で刺激し、線維形成性タンパク質である、ＭＭＰ２の産生を、抗体濃度を変動させて測定した。ＩＣ５０値が表示される。
【図２５】図２５は、ヒト化抗ＩＬ−１１Ｒα抗体である、ＶＨ３／ＶＬ３およびＶＨ４／ＶＬ４が、ＩＬ−１１シグナル伝達を中和する能力を示すグラフである。ヒト肝星細胞を、ＴＧＦβ１で刺激し、線維形成性タンパク質である、ＭＭＰ２の産生を、抗体濃度を変動させて測定した。ＩＣ５０値が表示される。
【図２６】図２６は、９Ａ７、およびヒト化抗ＩＬ−１１Ｒα抗体である、ＶＨ３／ＶＬ３およびＶＨ４／ＶＬ４が、ＩＬ−１１シグナル伝達を中和する能力を示すグラフである。ヒト肺線維芽細胞を、ＴＧＦβ１で刺激し、線維形成性タンパク質である、ＴＩＭＰ１の産生を、抗体濃度を変動させて測定した。ＩＣ５０値が表示される。
【図２７Ａ】図２７Ａおよび２７Ｂは、代謝性疾患を伴うマウスにおける、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の効果についての、研究の結果を示す図である。通常飼料による食餌（ＮＣ）、または果糖を伴う洋風食餌（ＷＤＦ）を給餌され、抗ＩＬ−１１ＲＡ抗体、またはＩｇＧ対照で処置されたマウスについて、体重の変化を示す、グラフおよび箱髭図である。図２７Ａは、時間経過（週）にわたる、体重変化の百分率を示す。図２７Ｂは、総体脂肪量と、除脂肪体重との差違の百分率を示す。＊：Ｐ＜０．０５である。
【図２７Ｂ】図２７Ａおよび２７Ｂは、代謝性疾患を伴うマウスにおける、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の効果についての、研究の結果を示す図である。通常飼料による食餌（ＮＣ）、または果糖を伴う洋風食餌（ＷＤＦ）を給餌され、抗ＩＬ−１１ＲＡ抗体、またはＩｇＧ対照で処置されたマウスについて、体重の変化を示す、グラフおよび箱髭図である。図２７Ａは、時間経過（週）にわたる、体重変化の百分率を示す。図２７Ｂは、総体脂肪量と、除脂肪体重との差違の百分率を示す。＊：Ｐ＜０．０５である。
【図２７Ｃ】図２７Ｃおよび２７Ｄは、代謝性疾患を伴うマウスにおける、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の効果についての、研究の結果を示す図である。果糖を伴う洋風食餌（ＷＤＦ）を給餌され、抗ＩＬ−１１ＲＡ抗体、またはＩｇＧ対照で処置されたマウスについて、腹腔内耐糖能試験（ｉｐＧＴＴ）により決定される耐糖能を示す、グラフ、略図、および棒グラフである。図２７Ｃは、１分後の時点からの、グルコースレベル（ｍＭ）の変化を示す。図２７Ｄは、曲線下面積を示す。＊：Ｐ＜０．０５、＊＊：Ｐ＜０．０１である。
【図２７Ｄ】図２７Ｃおよび２７Ｄは、代謝性疾患を伴うマウスにおける、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の効果についての、研究の結果を示す図である。果糖を伴う洋風食餌（ＷＤＦ）を給餌され、抗ＩＬ−１１ＲＡ抗体、またはＩｇＧ対照で処置されたマウスについて、腹腔内耐糖能試験（ｉｐＧＴＴ）により決定される耐糖能を示す、グラフ、略図、および棒グラフである。図２７Ｃは、１分後の時点からの、グルコースレベル（ｍＭ）の変化を示す。図２７Ｄは、曲線下面積を示す。＊：Ｐ＜０．０５、＊＊：Ｐ＜０．０１である。
【図２７Ｅ】図２７Ｅおよび２７Ｆは、代謝性疾患を伴うマウスにおける、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の効果についての、研究の結果を示す図である。図２７Ｅは、通常飼料による食餌（ＮＣＤ）、または果糖を伴う洋風食餌（ＷＤＦ）を給餌され、異なる時点から、抗ＩＬ−１１ＲＡ抗体、またはＩｇＧ対照で処置されたマウスについて、膵重量を示す箱髭図である。＊＊＊＊：Ｐ＜０．０００１である。図２７Ｆは、通常飼料による食餌（ＮＣＤ）、または果糖を伴う洋風食餌（ＷＤＦ）を給餌され、表示の時点において、抗ＩＬ−１１ＲＡ抗体、またはＩｇＧ対照で処置されたマウスについて、血清コレステロールレベル（ｍｇ／ｄｌ）を示す箱髭図である。
【図２７Ｆ】図２７Ｅおよび２７Ｆは、代謝性疾患を伴うマウスにおける、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の効果についての、研究の結果を示す図である。図２７Ｅは、通常飼料による食餌（ＮＣＤ）、または果糖を伴う洋風食餌（ＷＤＦ）を給餌され、異なる時点から、抗ＩＬ−１１ＲＡ抗体、またはＩｇＧ対照で処置されたマウスについて、膵重量を示す箱髭図である。＊＊＊＊：Ｐ＜０．０００１である。図２７Ｆは、通常飼料による食餌（ＮＣＤ）、または果糖を伴う洋風食餌（ＷＤＦ）を給餌され、表示の時点において、抗ＩＬ−１１ＲＡ抗体、またはＩｇＧ対照で処置されたマウスについて、血清コレステロールレベル（ｍｇ／ｄｌ）を示す箱髭図である。
【図２７Ｇ】図２７Ｇおよび２７Ｈは、代謝性疾患を伴うマウスにおける、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の効果についての、研究の結果を示す図である。通常飼料による食餌（ＮＣＤ）、または果糖を伴う洋風食餌（ＷＤＦ）を給餌され、表示の時点において、抗ＩＬ−１１ＲＡ抗体、またはＩｇＧ対照で処置されたマウスについて、（図２７Ｇ）血清トリグリセリドレベル（ｍｇ／ｇ）、および（図２７Ｈ）空腹時血液グルコースレベル（ｍＭ）を示す箱髭図である。
【図２７Ｈ】図２７Ｇおよび２７Ｈは、代謝性疾患を伴うマウスにおける、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の効果についての、研究の結果を示す図である。通常飼料による食餌（ＮＣＤ）、または果糖を伴う洋風食餌（ＷＤＦ）を給餌され、表示の時点において、抗ＩＬ−１１ＲＡ抗体、またはＩｇＧ対照で処置されたマウスについて、（図２７Ｇ）血清トリグリセリドレベル（ｍｇ／ｇ）、および（図２７Ｈ）空腹時血液グルコースレベル（ｍＭ）を示す箱髭図である。
【図２７Ｉ】図２７Ｉおよび２７Ｊは、代謝性疾患を伴うマウスにおける、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の効果についての、研究の結果を示す図である。通常飼料による食餌（ＮＣＤ）を給餌され、１６週間後から、抗ＩＬ−１１ＲＡ抗体、またはＩｇＧ対照で処置されたマウス、または果糖を伴う洋風食餌（ＷＤＦ）を給餌され、１６週間後から、抗ＩＬ−１１ＲＡ抗体、またはＩｇＧ対照で処置されたマウスから、２４週目において得られた膵組織の切片の、（図２７Ｉ）グルカゴン含量、および（図２７Ｊ）インスリン含量についての、免疫組織化学解析の結果を示す画像である。
【図２７Ｊ】図２７Ｉおよび２７Ｊは、代謝性疾患を伴うマウスにおける、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の効果についての、研究の結果を示す図である。通常飼料による食餌（ＮＣＤ）を給餌され、１６週間後から、抗ＩＬ−１１ＲＡ抗体、またはＩｇＧ対照で処置されたマウス、または果糖を伴う洋風食餌（ＷＤＦ）を給餌され、１６週間後から、抗ＩＬ−１１ＲＡ抗体、またはＩｇＧ対照で処置されたマウスから、２４週目において得られた膵組織の切片の、（図２７Ｉ）グルカゴン含量、および（図２７Ｊ）インスリン含量についての、免疫組織化学解析の結果を示す画像である。
【図２８Ａ】図２８Ａおよび２８Ｂは、抗ＩＬ１１Ｒα中和抗体が、ＨＦＭＣＤ誘導性ＮＡＳＨおよびＷＤＦ誘導性ＮＡＳＨの病態を阻害することを示す図である。ＮＡＳＨを誘導するように、マウスに、ＷＤＦを、１６週間にわたり給餌し、次いで、抗ＩＬ１１Ｒα抗体またはＩｇＧ（１０ｍｇ／ｋｇ）で、８週間にわたり処置したが、この間、ＷＤＦの給餌を、連続的に行った。図２８Ａは、２４週間にわたり、ＮＣまたはＷＤＦを給餌されたマウスに由来する、肝臓内の、ｐ−ＥｒｋおよびＥｒｋについてのウェスタンブロットを示す。図２８Ｂは、ＮＣまたはＷＤＦを給餌され、ＩｇＧまたは抗ＩＬ１１Ｒαで処置されたマウス（群１つ当たりのｎ≧５）における、総肝ヒドロキシプロリン含量を示す。データは、中央値（中央の直線）、第２５〜７５百分位数（箱）、および最小〜最大の百分位数（髭）を伴う箱髭図として示し、両側スチューデントのｔ検定による。ＦＣ：倍数変化であり、ＮＣ：通常飼料であり、ＷＤＦ：洋風食餌＋１５％（ｗ／ｖ）果糖である。
【図２８Ｂ】図２８Ａおよび２８Ｂは、抗ＩＬ１１Ｒα中和抗体が、ＨＦＭＣＤ誘導性ＮＡＳＨおよびＷＤＦ誘導性ＮＡＳＨの病態を阻害することを示す図である。ＮＡＳＨを誘導するように、マウスに、ＷＤＦを、１６週間にわたり給餌し、次いで、抗ＩＬ１１Ｒα抗体またはＩｇＧ（１０ｍｇ／ｋｇ）で、８週間にわたり処置したが、この間、ＷＤＦの給餌を、連続的に行った。図２８Ａは、２４週間にわたり、ＮＣまたはＷＤＦを給餌されたマウスに由来する、肝臓内の、ｐ−ＥｒｋおよびＥｒｋについてのウェスタンブロットを示す。図２８Ｂは、ＮＣまたはＷＤＦを給餌され、ＩｇＧまたは抗ＩＬ１１Ｒαで処置されたマウス（群１つ当たりのｎ≧５）における、総肝ヒドロキシプロリン含量を示す。データは、中央値（中央の直線）、第２５〜７５百分位数（箱）、および最小〜最大の百分位数（髭）を伴う箱髭図として示し、両側スチューデントのｔ検定による。ＦＣ：倍数変化であり、ＮＣ：通常飼料であり、ＷＤＦ：洋風食餌＋１５％（ｗ／ｖ）果糖である。
【図２８Ｃ】図２８Ｃおよび２８Ｄは、抗ＩＬ１１Ｒα中和抗体が、ＨＦＭＣＤ誘導性ＮＡＳＨおよびＷＤＦ誘導性ＮＡＳＨの病態を阻害することを示す図である。ＮＡＳＨを誘導するように、マウスに、ＷＤＦを、１６週間にわたり給餌し、次いで、抗ＩＬ１１Ｒα抗体またはＩｇＧ（１０ｍｇ／ｋｇ）で、８週間にわたり処置したが、この間、ＷＤＦの給餌を、連続的に行った。ＮＣまたはＷＤＦを給餌され、ＩｇＧおよび抗ＩＬ１１Ｒαで処置されたマウス（群１つ当たりのｎ≧５）における、（Ｃ）肝臓トリグリセリド、（Ｄ）血清ＡＬＴのレベルである。データは、中央値（中央の直線）、第２５〜７５百分位数（箱）、および最小〜最大の百分位数（髭）を伴う箱髭図として示し、チューキー補正された、両側スチューデントのｔ検定による。ＦＣ：倍数変化であり、ＮＣ：通常飼料であり、ＷＤＦ：洋風食餌＋１５％（ｗ／ｖ）果糖である。
【図２８Ｄ】図２８Ｃおよび２８Ｄは、抗ＩＬ１１Ｒα中和抗体が、ＨＦＭＣＤ誘導性ＮＡＳＨおよびＷＤＦ誘導性ＮＡＳＨの病態を阻害することを示す図である。ＮＡＳＨを誘導するように、マウスに、ＷＤＦを、１６週間にわたり給餌し、次いで、抗ＩＬ１１Ｒα抗体またはＩｇＧ（１０ｍｇ／ｋｇ）で、８週間にわたり処置したが、この間、ＷＤＦの給餌を、連続的に行った。ＮＣまたはＷＤＦを給餌され、ＩｇＧおよび抗ＩＬ１１Ｒαで処置されたマウス（群１つ当たりのｎ≧５）における、（Ｃ）肝臓トリグリセリド、（Ｄ）血清ＡＬＴのレベルである。データは、中央値（中央の直線）、第２５〜７５百分位数（箱）、および最小〜最大の百分位数（髭）を伴う箱髭図として示し、チューキー補正された、両側スチューデントのｔ検定による。ＦＣ：倍数変化であり、ＮＣ：通常飼料であり、ＷＤＦ：洋風食餌＋１５％（ｗ／ｖ）果糖である。
【図２８Ｅ】図２８Ｅおよび２８Ｆは、抗ＩＬ１１Ｒα中和抗体が、ＨＦＭＣＤ誘導性ＮＡＳＨおよびＷＤＦ誘導性ＮＡＳＨの病態を阻害することを示す図である。ＮＡＳＨを誘導するように、マウスに、ＷＤＦを、１６週間にわたり給餌し、次いで、抗ＩＬ１１Ｒα抗体またはＩｇＧ（１０ｍｇ／ｋｇ）で、８週間にわたり処置したが、この間、ＷＤＦの給餌を、連続的に行った。ＮＣまたはＷＤＦを給餌され、ＩｇＧおよび抗ＩＬ１１Ｒαで処置されたマウス（群１つ当たりのｎ≧５）における、（Ｅ）空腹時血中グルコース、（Ｆ）血清トリグリセリドである。データは、中央値（中央の直線）、第２５〜７５百分位数（箱）、および最小〜最大の百分位数（髭）を伴う箱髭図として示し、チューキー補正された、両側スチューデントのｔ検定による。ＦＣ：倍数変化であり、ＮＣ：通常飼料であり、ＷＤＦ：洋風食餌＋１５％（ｗ／ｖ）果糖である。
【図２８Ｆ】図２８Ｅおよび２８Ｆは、抗ＩＬ１１Ｒα中和抗体が、ＨＦＭＣＤ誘導性ＮＡＳＨおよびＷＤＦ誘導性ＮＡＳＨの病態を阻害することを示す図である。ＮＡＳＨを誘導するように、マウスに、ＷＤＦを、１６週間にわたり給餌し、次いで、抗ＩＬ１１Ｒα抗体またはＩｇＧ（１０ｍｇ／ｋｇ）で、８週間にわたり処置したが、この間、ＷＤＦの給餌を、連続的に行った。ＮＣまたはＷＤＦを給餌され、ＩｇＧおよび抗ＩＬ１１Ｒαで処置されたマウス（群１つ当たりのｎ≧５）における、（Ｅ）空腹時血中グルコース、（Ｆ）血清トリグリセリドである。データは、中央値（中央の直線）、第２５〜７５百分位数（箱）、および最小〜最大の百分位数（髭）を伴う箱髭図として示し、チューキー補正された、両側スチューデントのｔ検定による。ＦＣ：倍数変化であり、ＮＣ：通常飼料であり、ＷＤＦ：洋風食餌＋１５％（ｗ／ｖ）果糖である。
【図２８Ｇ】図２８Ｇは、抗ＩＬ１１Ｒα中和抗体が、ＨＦＭＣＤ誘導性ＮＡＳＨおよびＷＤＦ誘導性ＮＡＳＨの病態を阻害することを示す図である。ＮＡＳＨを誘導するように、マウスに、ＷＤＦを、１６週間にわたり給餌し、次いで、抗ＩＬ１１Ｒα抗体またはＩｇＧ（１０ｍｇ／ｋｇ）で、８週間にわたり処置したが、この間、ＷＤＦの給餌を、連続的に行った。ＮＣまたはＷＤＦを給餌され、ＩｇＧおよび抗ＩＬ１１Ｒαで処置されたマウス（群１つ当たりのｎ≧５）における、血清コレステロールである。データは、中央値（中央の直線）、第２５〜７５百分位数（箱）、および最小〜最大の百分位数（髭）を伴う箱髭図として示し、チューキー補正された、両側スチューデントのｔ検定による。ＦＣ：倍数変化であり、ＮＣ：通常飼料であり、ＷＤＦ：洋風食餌＋１５％（ｗ／ｖ）果糖である。
【図２９Ａ】図２９Ａは、１０週間にわたり、ＨＦＭＣＤを給餌することにより、線維症を確立した、１、３、または６週間後における、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体による、重度の肝線維症の反転を示す図である。マウスに、ＨＦＭＣＤを、１０週間にわたり給餌することにより、線維症を確立し、次いで、ＨＦＭＣＤを、ＮＣで置きかえ、抗体療法を開始する、反転実験を示す概略図である。マウスは、表示の時点において安楽死させた。
【図２９Ｂ】図２９Ｂは、１０週間にわたり、ＨＦＭＣＤを給餌することにより、線維症を確立した、１、３、または６週間後における、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体による、重度の肝線維症の反転を示す図である。ＩｇＧまたは抗ＩＬ−１１Ｒα抗体で、６週間にわたり処置されたマウスから定量された、マッソントリクローム染色による肝コラーゲン含量である。
【図３０Ａ】図３０Ａは、ＩＬ−１１の、肝細胞に対する効果を示す図である。初代ヒト肝細胞は、ＩＬ−１１Ｒα受容体を発現する。
【図３０Ｂ】図３０Ｂおよび３０Ｃは、ＩＬ−１１の、肝細胞に対する効果を示す図である。図３０Ｂは、ＩＬ−１１による処理（０．０１９〜１０ｎｇ／ｍｌ）後における、上清中の、ＡＬＴレベルの用量依存的増大を示す。図３０Ｃは、Ｈ２Ｏ２誘導性のＩＬ−１１発現を示す。
【図３０Ｃ】図３０Ｂおよび３０Ｃは、ＩＬ−１１の、肝細胞に対する効果を示す図である。図３０Ｂは、ＩＬ−１１による処理（０．０１９〜１０ｎｇ／ｍｌ）後における、上清中の、ＡＬＴレベルの用量依存的増大を示す。図３０Ｃは、Ｈ２Ｏ２誘導性のＩＬ−１１発現を示す。
【図３０Ｄ】図３０Ｄおよび３０Ｅは、ＡＰＡＰ誘導性肝損傷についてのマウスモデルにおける肝毒性に対する、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体療法の効果を示す図である。ＩｇＧ抗体を、対照として使用した。図３０Ｄは、肝損傷の程度を示す、ＡＬＴレベルを示す。図３０Ｅは、肝重量の、ＡＰＡＰ誘導性減少の程度を示す。
【図３０Ｅ】図３０Ｄおよび３０Ｅは、ＡＰＡＰ誘導性肝損傷についてのマウスモデルにおける肝毒性に対する、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体療法の効果を示す図である。ＩｇＧ抗体を、対照として使用した。図３０Ｄは、肝損傷の程度を示す、ＡＬＴレベルを示す。図３０Ｅは、肝重量の、ＡＰＡＰ誘導性減少の程度を示す。
【図３０Ｆ】図３０Ｆは、ＡＰＡＰ誘導性肝損傷についてのマウスモデルにおける肝毒性に対する、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体療法の効果を示す図である。ＩｇＧ抗体を、対照として使用した。図３０Ｆは、抗ＩＬ１１Ｒα抗体またはＩｇＧ対照で処置されたマウスに由来する肝組織内の、小葉中心壊死の程度を示す、ヘマトキシリン／エオシン（Ｈ＆Ｅ）染色を示す。
【図３１Ａ】図３１Ａは、抗ＩＬ１１Ｒα抗体が、ＡＰＡＰ媒介性肝細胞死を防止することを示す散布図である。ヒト肝細胞を、抗ＩＬ１１Ｒα（２μｇ／ｍｌ）、またはＩｇＧ対照抗体の、存在下または非存在下（ＢＬ）において、ＡＰＡＰ（２０ｍＭ）で処理した。その後、細胞を、Ａｎｎｅｘｉｎ  ＶおよびＰＩで染色し、細胞死を、フローサイトメトリーにより解析した。ＢＬ＝ベースラインである。
【図３１Ｂ】図３１Ｂは、抗ＩＬ１１Ｒα抗体が、ＥｒｋおよびＪｎｋの、ＡＰＡＰ媒介性活性化を防止することを示すウェスタンブロットの画像である。ヒト肝細胞を、抗ＩＬ１１Ｒα（２μｇ／ｍｌ）、またはＩｇＧ対照抗体の、存在下または非存在下（ＢＬ）において、ＡＰＡＰ（１０ｍＭ）で処理した。細胞抽出物を調製し、ウェスタンブロットを実施して、ＥｒｋキナーゼおよびＪｎｋキナーゼの活性化（リン酸化）状態を評価した。ＢＬ＝ベースラインである。
【図３２Ａ】図３２Ａは、ＡＰＡＰの過剰摂取の１６時間前に施された抗ＩＬ１１Ｒα療法が、急性肝損傷を防止することを示す箱髭図および画像である。重度のＡＰＡＰ過剰摂取量（４００ｍｇ／ｋｇ）を、マウスへと、２０ｍｇ／ｋｇの、抗ＩＬ１１Ｒα抗体、またはＩｇＧ対照抗体のＩＰ投与の１６時間後に投与した。２４時間後に、マウスを安楽死させた。血清アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）を、急性肝損傷および肝細胞死のマーカーとして測定した。
【図３２Ｂ】図３２Ｂは、ＡＰＡＰの過剰摂取の１６時間前に施された抗ＩＬ１１Ｒα療法が、急性肝損傷を防止することを示す箱髭図および画像である。重度のＡＰＡＰ過剰摂取量（４００ｍｇ／ｋｇ）を、マウスへと、２０ｍｇ／ｋｇの、抗ＩＬ１１Ｒα抗体、またはＩｇＧ対照抗体のＩＰ投与の１６時間後に投与した。２４時間後に、マウスを安楽死させた。肝臓を摘出し、１０％の中性緩衝ホルマリン中で固定し、脱水し、パラフィンブロック内に包埋し、切片化し、次いで、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色して、ＡＰＡＰ過剰摂取において見られる、特徴的な小葉中心肝細胞壊死を可視化した。
【図３３Ａ】図３３Ａは、ＡＰＡＰ過剰摂取の１０時間後に施された抗ＩＬ１１ＲＡ療法が、急性肝損傷を処置することを示す画像および箱髭図である。重度のＡＰＡＰ過剰摂取量（４００ｍｇ／ｋｇ）を、マウスへと投与し、１０時間後に、マウスに、２０ｍｇ／ｋｇの、抗ＩＬ１１Ｒα抗体、またはＩｇＧ対照抗体を、ＩＰ投与した。表示の時点において、肝臓を摘出し、１０％の中性緩衝ホルマリン中で固定し、肉眼的形状および外観を記録した。
【図３３Ｂ】図３３Ｂおよび３３Ｃは、ＡＰＡＰ過剰摂取の１０時間後に施された抗ＩＬ１１ＲＡ療法が、急性肝損傷を処置することを示す画像および箱髭図である。重度のＡＰＡＰ過剰摂取量（４００ｍｇ／ｋｇ）を、マウスへと投与し、１０時間後に、マウスに、２０ｍｇ／ｋｇの、抗ＩＬ１１Ｒα抗体、またはＩｇＧ対照抗体を、ＩＰ投与した。表示の時点において、血清アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）を、急性肝損傷および肝細胞死のマーカーとして測定した。ＡＰＡＰ過剰摂取の１０時間後に施された抗ＩＬ１１ＲＡ療法が、ＪｎｋおよびＥＲＫの活性化を阻害することを示す、ウェスタンブロットの画像である。重度のＡＰＡＰ過剰摂取量（４００ｍｇ／ｋｇ）を、マウスへと投与し、１０時間後に、マウスに、２０ｍｇ／ｋｇの、抗ＩＬ１１Ｒα抗体、またはＩｇＧ対照抗体を、ＩＰ投与した。表示の時点において、肝臓を摘出し、ウェスタンブロットを実施して、ＥｒｋキナーゼおよびＪｎｋキナーゼの活性化（リン酸化）状態を評価した。
【図３３Ｃ】図３３Ｂおよび３３Ｃは、ＡＰＡＰ過剰摂取の１０時間後に施された抗ＩＬ１１ＲＡ療法が、急性肝損傷を処置することを示す画像および箱髭図である。重度のＡＰＡＰ過剰摂取量（４００ｍｇ／ｋｇ）を、マウスへと投与し、１０時間後に、マウスに、２０ｍｇ／ｋｇの、抗ＩＬ１１Ｒα抗体、またはＩｇＧ対照抗体を、ＩＰ投与した。表示の時点において、血清アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）を、急性肝損傷および肝細胞死のマーカーとして測定した。ＡＰＡＰ過剰摂取の１０時間後に施された抗ＩＬ１１ＲＡ療法が、ＪｎｋおよびＥＲＫの活性化を阻害することを示す、ウェスタンブロットの画像である。重度のＡＰＡＰ過剰摂取量（４００ｍｇ／ｋｇ）を、マウスへと投与し、１０時間後に、マウスに、２０ｍｇ／ｋｇの、抗ＩＬ１１Ｒα抗体、またはＩｇＧ対照抗体を、ＩＰ投与した。表示の時点において、肝臓を摘出し、ウェスタンブロットを実施して、ＥｒｋキナーゼおよびＪｎｋキナーゼの活性化（リン酸化）状態を評価した。
【図３４Ａ】図３４Ａおよび３４Ｂは、ＡＰＡＰ過剰摂取の１０時間後に施された抗ＩＬ１１Ｒα療法が、急性肝損傷に起因する死を防止し、肝機能を回復させることを示すグラフ、画像、および箱髭図である。致死性のＡＰＡＰ過剰摂取（５５０ｍｇ／ｋｇ）量を、マウスへと投与し、１０時間後に、マウスに、２０ｍｇ／ｋｇの、抗ＩＬ１１Ｒα抗体、またはＩｇＧ対照抗体を、ＩＰ投与した。２つの処置群における、過剰摂取後８日間にわたる死亡率を示すグラフである。表示の時点において、肝臓を摘出し、１０％の中性緩衝ホルマリン中で固定し、肉眼的形状および外観を記録した。
【図３４Ｂ】図３４Ａおよび３４Ｂは、ＡＰＡＰ過剰摂取の１０時間後に施された抗ＩＬ１１Ｒα療法が、急性肝損傷に起因する死を防止し、肝機能を回復させることを示すグラフ、画像、および箱髭図である。致死性のＡＰＡＰ過剰摂取（５５０ｍｇ／ｋｇ）量を、マウスへと投与し、１０時間後に、マウスに、２０ｍｇ／ｋｇの、抗ＩＬ１１Ｒα抗体、またはＩｇＧ対照抗体を、ＩＰ投与した。２つの処置群における、過剰摂取後８日間にわたる死亡率を示すグラフである。表示の時点において、肝臓を摘出し、１０％の中性緩衝ホルマリン中で固定し、肉眼的形状および外観を記録した。
【図３４Ｃ】図３４Ｃは、ＡＰＡＰ過剰摂取の１０時間後に施された抗ＩＬ１１Ｒα療法が、急性肝損傷に起因する死を防止し、肝機能を回復させることを示すグラフ、画像、および箱髭図である。致死性のＡＰＡＰ過剰摂取（５５０ｍｇ／ｋｇ）量を、マウスへと投与し、１０時間後に、マウスに、２０ｍｇ／ｋｇの、抗ＩＬ１１Ｒα抗体、またはＩｇＧ対照抗体を、ＩＰ投与した。過剰摂取の８日後の、抗ＩＬ１１Ｒα抗体で処置されたマウスにおいて、血清アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）を、肝損傷および肝細胞死のマーカーとして測定し、正常対照マウスにおけるレベルと比較した。
【実施例】
【０３９９】
以下の実施例では、本発明者らは、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の開発、および抗体の機能的特徴付けについて記載する。
実施例１
抗ヒトＩＬ−１１Ｒα抗体
ヒトＩＬ−１１Ｒαタンパク質に対して方向付けられた、マウスモノクローナル抗体は、以下の通りに作出した。
【０４００】
ヒトＩＬ−１１Ｒαのアミノ酸をコードするｃＤＮＡを、発現プラスミド（Ａｌｄｅｖｒｏｎ  ＧｍｂＨ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）へとクローニングした。
粒子ボンバードメント（「遺伝子銃」）のための携帯型デバイスを使用する、ＤＮＡコーティング金粒子の皮内適用により、マウスを免疫化した。一連の免疫化の後で、血清試料を、マウスから回収し、ヒトＩＬ−１１Ｒα発現プラスミドを、一過性にトランスフェクトされた、ＨＥＫ細胞上のフローサイトメトリーにより調べた（一過性にトランスフェクトされたＨＥＫ細胞による、ヒトＩＬ−１１Ｒαの細胞表面発現を、ＩＬ−１１Ｒαタンパク質のＮ末端へと付加されたタグを認識する、抗タグ抗体で確認した）。
【０４０１】
標準的手順に従い、抗体産生細胞を、マウスから単離し、マウス骨髄腫細胞（Ａｇ８）と融合させた。
ＩＬ−１１Ｒαに特異的な抗体を産生するハイブリドーマは、フローサイトメトリーを介して、ＩＬ−１１Ｒαを発現するＨＥＫ細胞に結合する能力についてスクリーニングすることにより同定した。
【０４０２】
ＲＮＡ保護剤（ＲＮＡｌａｔｅｒ、型番：ＡＭ７０２０；ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製）を使用して、陽性ハイブリドーマ細胞の細胞ペレットを調製し、抗体の可変ドメインのシーケンシングのために、さらに加工した。
【０４０３】
シーケンシングは、製造元の指示書に従い、ＢｉｇＤｙｅ（登録商標）Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ  ｖ３．１  Ｃｙｃｌｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇキット（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（登録商標））を使用して実施した。３７３０ｘｌ  ＤＮＡ  ＡｎａｌｙｚｅｒシステムおよびＵｎｉｆｉｅｄ  Ｄａｔａ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎソフトウェア（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（登録商標））を使用して、全てのデータを回収した。配列アセンブリーは、ＣｏｄｏｎＣｏｄｅ  Ａｌｉｇｎｅｒ（ＣｏｄｏｎＣｏｄｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用して実施した。混合塩基判定は、最も高頻度の塩基判定を、混合塩基判定へと自動的に割り当てることにより分解した。高頻度性は、塩基判定の頻度、および個々の塩基判定の品質の両方により決定した。
【０４０４】
合計で１７の、マウス抗ヒトＩＬ−１１Ｒαモノクローナル抗体クローン：クローンである、ＢＳＯ−１Ｅ３、ＢＳＯ−２Ｃ１、ＢＳＯ−２Ｅ５、ＢＳＯ−４Ｇ３、ＢＳＯ−５Ｅ５、ＢＳＯ−７Ｇ９、ＢＳＯ−９Ａ７、ＢＳＯ−１０Ｄ１１、ＢＳＯ−１３Ｂ１０、ＢＳＷ−１Ｄ３、ＢＳＷ−１Ｆ６、ＢＳＷ−４Ｇ５、ＢＳＷ−６Ｈ３、ＢＳＷ−７Ｅ９、ＢＳＷ−７Ｇ８、ＢＳＷ−７Ｈ８、およびＢＳＷ−８Ｂ７を作出した（図１）。
【０４０５】
ＶＬドメイン配列およびＶＨドメイン配列を、抗体クローンである、ＢＳＯ−１Ｅ３、ＢＳＯ−２Ｅ５、ＢＳＯ−４Ｇ３、ＢＳＯ−５Ｅ５、ＢＳＯ−７Ｇ９、ＢＳＯ−９Ａ７、ＢＳＯ−１０Ｄ１１、およびＢＳＯ−１３Ｂ１０について決定した。クローンＢＳＯ−９Ａ７について決定されるＶＨ配列およびＶＬ配列を、配列番号７および１３に示す。
【０４０６】
実施例２
抗ヒトＩＬ−１１Ｒα抗体の、機能的な特徴付け
２．１．ヒトＩＬ−１１／ＩＬ−１１Ｒにより媒介されるシグナル伝達を阻害する能力
抗ＩＬ−１１Ｒα抗体が、ヒトＩＬ−１１／ＩＬ−１１Ｒにより媒介されるシグナル伝達を中和する能力について探索するために、ヒト心房線維芽細胞を、ＴＧＦβ１（５ｎｇ／ｍｌ）の存在下で、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の存在下、または非存在にある、９６ウェルプレートのウェル内で、２４時間にわたり培養した。この線維症促進性刺激は、ＩＬ−１１の発現を促進し、ＩＬ−１１は、休眠線維芽細胞から、活性化型αＳＭＡ陽性線維芽細胞への移行を駆動する。ＩＬ−１１の中和は、ＴＧＦβ１誘導性の、活性化型αＳＭＡ−陽性線維芽細胞への移行を防止することが、既に示されている。
【０４０７】
抗ＩＬ−１１Ｒα抗体（２μｇ／ｍｌ）を、ＴＧＦβ１で刺激された線維芽細胞培養物へと添加し、２４時間の培養時間の終了時に、αＳＭＡ陽性線維芽細胞の百分率を決定した。百分率は、ＴＧＦβ１で刺激されていない線維芽細胞の培養物中で観察される、αＳＭＡ陽性線維芽細胞の百分率に基づき正規化した。
【０４０８】
αＳＭＡの発現を、Ｏｐｅｒｅｔｔａ  Ｈｉｇｈ−Ｃｏｎｔｅｎｔ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍにより、自動ハイスループット方式で解析した。
結果を、図２および５に示す。ＴＧＦβ１による刺激は、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の非存在下で、２４時間にわたる培養時間の終了時における、αＳＭＡ陽性の、活性化線維芽細胞の数の、１．５８倍の増大を結果としてもたらした。
【０４０９】
市販の、マウス抗ＩＬ−１１モノクローナル抗体（マウスモノクローナルＩｇＧ２Ａ；クローン番号：２２６２６；型番：ＭＡＢ２１８；Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＭＮ、ＵＳＡ）を、対照として組み入れた。この抗体は、活性化線維芽細胞の百分率を、非刺激培養物（すなわち、ＴＧＦβ１による刺激の非存在下にある培養物）中の活性化線維芽細胞の百分率の、０．８９倍へと低減することが可能であることが見出された。
【０４１０】
抗ＩＬ−１１Ｒα抗体は、ヒト線維芽細胞内の、ＩＬ−１１／ＩＬ−１１Ｒシグナル伝達を阻害することが可能であることが見出され、いくつかの抗体は、ＩＬ−１１／ＩＬ−１１Ｒシグナル伝達を、マウス抗ＩＬ−１１モノクローナル抗体：ＢＳＯ−１Ｅ３、ＢＳＯ−５Ｅ５、およびＢＳＯ−１３Ｂ１０より大幅に阻害することが可能であった。
２．２．マウスＩＬ−１１媒介性シグナル伝達を阻害する能力
抗ＩＬ−１１Ｒα抗体が、マウスＩＬ−１１媒介性シグナル伝達を阻害する能力もまた、上記の２．１節で記載された、同じ手順に従うが、ヒト心房線維芽細胞ではなく、マウス心房線維芽細胞を使用して探索した。
【０４１１】
結果を、図３および５に示す。ＴＧＦβ１による刺激は、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の非存在下で、２４時間にわたる培養時間の終了時における、αＳＭＡ陽性の、活性化線維芽細胞の数の、２．２４倍の増大を結果としてもたらした。
【０４１２】
市販の、マウス抗ＩＬ−１１モノクローナル抗体（マウスモノクローナルＩｇＧ２Ａ；クローン番号：２２６２６；型番：ＭＡＢ２１８；Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＭＮ、ＵＳＡ）を、対照として組み入れた。この抗体は、活性化線維芽細胞の百分率を、非刺激培養物（すなわち、ＴＧＦβ１による刺激の非存在下にある培養物）中の活性化線維芽細胞の百分率の、１．４４倍へと低減することが可能であることが見出された。
【０４１３】
抗ＩＬ−１１Ｒα抗体は、マウス線維芽細胞内の、ＩＬ−１１／ＩＬ−１１Ｒシグナル伝達を阻害することが可能であることが見出され、いくつかの抗体は、ＩＬ−１１／ＩＬ−１１Ｒシグナル伝達を、マウス抗ＩＬ−１１モノクローナル抗体：ＢＳＯ−１Ｅ３、ＢＳＯ−２Ｃ１、ＢＳＯ−５Ｅ５、ＢＳＯ−９Ａ７、およびＢＳＯ−１３Ｂ１０より大幅に阻害することが可能であった。
２．３．ＩＬ−１１Ｒαと複合体化させたＩＬ−１１による、ＩＬ−１１トランスシグナル伝達を阻害する能力
トランスシグナル伝達は、ＩＬ−６と、可溶型ＩＬ−６Ｒαとの複合体が、ｇｐ１３０を発現するが、ＩＬ−６受容体を欠く細胞を活性化する、ＩＬ−６シグナル伝達の、主要な態様として認識される（ＨｕｎｔｅｒおよびＪｏｎｅｓ、２０１５、Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１６、４４８〜４５７）。
【０４１４】
近年、ＩＬ−１１と、可溶型ＩＬ−１１Ｒαとの複合体による、トランスシグナル伝達もまた、ＩＬ−１１生物学に重要であることが示唆されている（Ｌｏｋａｕら、Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ（２０１６）、１４、１７６１〜１７７３）。ＩＬ−１１の組換え融合タンパク質と、ＩＬ−１１Ｒαとを使用して（Ｐｆｌａｎｚら、Ｆｅｂｓ  Ｌｅｔｔ（１９９９）、４５０：１１７〜１２２において記載されている通り）、抗ＩＬ−１１抗体を、ＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα複合体により媒介される、トランスシグナル伝達を阻害する能力についてスクリーニングした。
【０４１５】
重要なことは、古典的なＩＬ−１１媒介性シグナル伝達、およびＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα複合体による、ＩＬ−１１トランスシグナル伝達の両方を阻害することが可能な抗体が、ＩＬ−１１／ＩＬ−１１Ｒシグナル伝達の、全ての公知の方式を阻害することが可能であることである。
【０４１６】
ＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα融合タンパク質（本明細書の以下では、ハイパーＩＬ−１１と称される）は、ＩＬ−１１へと連結された、ＩＬ−１１受容体アルファ（ＩＬ−１１Ｒα）の細胞外ドメインからなる。本実施例において使用される、ＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα融合タンパク質は、配列番号５のアミノ酸配列を有する。
【０４１７】
ハイパーＩＬ−１１は、組換えＩＬ−１１タンパク質より強力な、ヒト線維芽細胞の活性化因子であることが見出された。略述すると、２つの個別の実験において、ヒト線維芽細胞を、刺激を伴わずに（ベースライン）、異なる量のハイパーＩＬ−１１（０．００８ｎｇ／ｍｌ、０．０４ｎｇ／ｍｌ、０．２ｎｇ／ｍｌ、１ｎｇ／ｍｌ、および５ｎｇ／ｍｌ）、または市販の供給源から得られた、５ｎｇ／ｍｌの組換えヒトＩＬ−１１の存在下で培養し、本明細書で記載される通りに、αＳＭＡ陽性細胞の百分率を決定することにより、線維芽細胞の活性化を解析した。結果を、図６Ａおよび６Ｂに示す。ハイパーＩＬ−１１は、線維芽細胞を、用量依存的に活性化し、ＩＬ−１１より強力な活性化因子であった。
【０４１８】
ＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα融合タンパク質は、以下の通りに調製した：
・ＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα融合タンパク質をコードするＤＮＡ（すなわち、配列番号９８）を、ｐＴＴ５ベクターへとクローニングし、無血清のＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｍｅｄｉｕｍ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）による培養物中の、２９３−６Ｅ細胞へとトランスフェクトした。細胞を、５％のＣＯ２を伴う、オービタルフラスコ（ＶＷＲ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）上、３７℃の、Ｅｒｌｅｎｍｅｙｅｒ  Ｆｌａｓｋｓ（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｉｎｃ．）内で維持した。
【０４１９】
・細胞培養物上清を、６日目に回収し、精製のために使用した。
・細胞培養物上清を、アフィニティー精製カラムへとロードした。
・適切な緩衝液による洗浄および溶出の後、溶出された画分をプールし、最終製剤用緩衝液へと、緩衝液交換した。
【０４２０】
・精製されたＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα融合タンパク質を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ウェスタンブロットで解析して、分子量および純度を確認した。
ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて培養され、ハイパーＩＬ−１１で刺激された線維芽細胞は、ＥＬＩＳＡにより決定される通り、ＩＬ−１１のタンパク質発現を上方調節することが示された（図７）。興味深いことに、ハイパーＩＬ−１１による刺激に応答する、ＩＬ−１１  ＲＮＡレベルの増大は、検出されなかった。ＩＬ−１１の発現を、ＲＮＡおよびタンパク質のいずれのレベルでも増大させる、ＴＧＦＢ１と異なり、ハイパーＩＬ−１１は、ＩＬ−１１の発現を、転写後、タンパク質レベルに限り上方調節すると考えられる。
【０４２１】
マウス抗ＩＬ−１１Ｒα抗体が、ハイパーＩＬ−１１により媒介されるシグナル伝達を阻害する能力を探索した。
ヒト心房線維芽細胞を、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体（２μｇ／ｍｌ）、またはアイソタイプ対照抗体の存在下で、ハイパーＩＬ−１１（０．２ｎｇ／ｍｌ）と共に、２４時間にわたりインキュベートした。インキュベーション後、細胞培養物上清を、ＭＭＰ２について解析した。ハイパーＩＬ−１１による刺激は、ＭＭＰ２の分泌の、刺激されていない培養物と比較した増大を結果としてもたらす。
【０４２２】
実験の結果を、図４および５に示す。抗ＩＬ−１１Ｒα抗体は、ハイパーＩＬ−１１により媒介されるシグナル伝達（すなわち、ＩＬ−１１トランスシグナル伝達）を中和することが可能であることが見出され、いくつかの抗体は、トランスシグナル伝達を、市販の、マウス抗ＩＬ−１１モノクローナル抗体（マウスモノクローナルＩｇＧ２Ａ；クローン番号：２２６２６；型番：ＭＡＢ２１８；Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＭＮ、ＵＳＡ）：ＢＳＯ−１Ｅ３（ＲＡ１）、ＢＳＯ−２Ｅ５（ＲＡ３）、ＢＳＯ−５Ｅ５（ＲＡ５）、ＢＳＯ−９Ａ７（ＲＡ７）、ＢＳＯ−１３Ｂ１０（ＲＡ９）、およびＢＳＷ−１Ｆ６（ＲＡ１１）より大幅に阻害することが可能であることが見出された。
【０４２３】
クローンである、ＢＳＯ−１Ｅ３（ＲＡ１）、ＢＳＯ−５Ｅ５（ＲＡ５）、ＢＳＯ−９Ａ７（ＲＡ７）、ＢＳＯ−１３Ｂ１０（ＲＡ９）は、ヒトおよびマウス両方のＩＬ−１１／ＩＬ−１１Ｒシグナル伝達を阻害する、良好な能力と、ＩＬ−１１トランスシグナル伝達の良好な阻害とを示す、さらなる開発に有望な候補物質（図５で強調される）として同定した。
２．４．ＩＬ−１１Ｒαに結合する能力についてのスクリーニング
抗ヒトＩＬ−１１Ｒα抗体を産生する、マウスハイブリドーマをサブクローニングし、サブクローニングされたハイブリドーマに由来する、細胞培養物上清を、「ミックスアンドメジャー」ｉＱｕｅアッセイにより、（ｉ）ヒトＩＬ−１１Ｒαに結合する能力、および（ｉｉ）ＩＬ−１１Ｒα以外の抗原に対する交差反応性について解析した。
【０４２４】
略述すると、標識対照細胞（細胞表面において、ＩＬ−１１Ｒαを発現しない）、およびそれらの表面において、ヒトＩＬ−１１Ｒαを発現する、非標識標的細胞（ＦＬＡＧでタグ付けされたヒトＩＬ−１１Ｒαをコードするプラスミドによる、一過性トランスフェクションの後における）を、細胞培養物上清（マウス抗ＩＬ−１１Ｒα抗体を含有する）、および二次検出抗体（蛍光標識された抗マウスＩｇＧ抗体）と併せて混合した。
【０４２５】
次いで、２つの標識（すなわち、細胞標識、および二次抗体上の標識）について、ＨＴＦＣ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ（ｉＱｕｅ）を使用して、細胞を解析した。非標識の、ＩＬ−１１Ｒαを発現する細胞上の、二次抗体の検出は、マウス抗ＩＬ−１１Ｒα抗体が、ＩＬ−１１Ｒαに結合する能力を指し示した。標識された、対照細胞上の、二次抗体の検出は、マウス抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の、ＩＬ−１１Ｒα以外の標的に対する交差反応性を指し示した。
【０４２６】
陽性対照条件として、標識細胞および非標識細胞を、一次抗体としての、マウス抗ＦＬＡＧタグ抗体と共にインキュベートした。
結果を、図８Ａおよび８Ｂに示す。サブクローニングされたハイブリドーマの大部分は、ヒトＩＬ−１１Ｒαに結合することが可能であり、この標的を、高度の特異性で認識する抗体を発現した。サブクローンである、ＢＳＯ−１Ｅ３により産生された抗体は、ヒトＩＬ−１１Ｒαに結合しないことが見出された。
【０４２７】
抗体である、ＢＳＯ−２Ｃ１およびＢＳＯ−９Ａ７は、ＩＬ−１１Ｒαへの結合について、陽性対照である、タグに対する、抗タグ抗体についてのシグナルより、強いシグナルをもたらしたことは、これらの抗体が、ＩＬ−１１Ｒαに、極めて高度のアフィニティーで結合することを指し示す。
２．５  抗体の、ヒトＩＬ−１１Ｒαに対するアフィニティーについての解析
抗ヒトＩＬ−１１Ｒα抗体を、それらの、ヒトＩＬ−１１Ｒαに対する結合アフィニティーについて、ＥＬＩＳＡアッセイにより解析した。
【０４２８】
組換えヒトＩＬ−１１Ｒαは、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔから得、西洋ワサビベルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲート抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）抗体は、Ｓｉｇｍａから得る。Ｃｏｒｎｉｎｇ製の９６ウェルＥＬＩＳＡプレートは、Ｓｉｇｍａから得る。Ｐｉｅｒｃｅ製の３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）ＥＬＩＳＡ基質キットは、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから得る（０．４ｇ／ｍＬのＴＭＢ液、クエン酸緩衝液中、０．０２％の過酸化水素）。ウシ血清アルブミンおよび硫酸は、Ｓｉｇｍａから得る。洗浄緩衝液は、リン酸緩衝生理食塩液中に０．０５％のＴｗｅｅｎ−２０（ＰＢＳ−Ｔ）を含む。精製ＩｇＧ対照は、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから購入した。Ｔｅｃａｎ  Ｉｎｆｉｎｉｔｅ  ２００  ＰＲＯ  ＮａｎｏＱｕａｎｔを使用して、吸光度を測定する。
【０４２９】
交差系列希釈解析は、Ｈｏｒｎｂｅｃｋら（２０１５）、Ｃｕｒｒ  Ｐｒｏｔｏｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１１０、２．１．１〜２３により記載されている通りに実施して、抗原、一次抗体、二次抗体をコーティングする最適濃度を決定した。
【０４３０】
既に記載されている通り、間接的ＥＬＩＳＡを実施して、５０％効果濃度（ＥＣ５０）における、マウス抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の結合アフィニティーを評価する（Ｕｎｖｅｒｄｏｒｂｅｎら（２０１６）、ＭＡｂｓ、８、１２０〜１２８）。ＥＬＩＳＡプレートを、１μｇ／ｍＬの組換えヒトＩＬ−１１Ｒαにより、４℃で、一晩にわたりコーティングし、残りの結合性部位は、ＰＢＳ中に２％のＢＳＡでブロッキングする。抗体を、ＰＢＳ中に１％のＢＳＡ中で希釈し、滴定して、８００、２００、５０、１２．５、３．１２５、０．７８、０．１９５、および０．０４９ｎｇ／ｍＬの作業濃度を得、室温において、二連で、２時間にわたりインキュベートする。抗原−抗体間の結合の検出は、１５．６２５ｎｇ／ｍＬの、ＨＲＰコンジュゲート抗マウスＩｇＧ抗体により実施する。検出抗体を伴うインキュベーションの２時間後、１００μｌのＴＭＢ基質を、１５分間にわたり添加し、発色反応を、２ＭのＨ２ＳＯ４  １００μｌにより停止させた。吸光度の読取りは、参照波長補正を５７０ｎｍとする、４５０ｎｍで測定する。データを、抗体濃度の対数変換を伴う、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアにより当てはめるのに続き、非対称（５パラメータ）ロジスティック用量反応曲線による非線形回帰解析にかけて、個々のＥＣ５０値を決定する。
２．５．１  ヒトおよびマウスの線維芽細胞内の、内因性ＩＬ−１１の産生を遮断する、線維症スクリーニング
線維芽細胞を、通例、２４時間後に、上清中、５００ｐｇ／ｍｌ〜１ｎｇ／ｍｌの間のＩＬ−１１濃度を結果としてもたらす、心房線維芽細胞内の、ＩＬ−１１の発現の、最も強力な刺激因子である、最大用量のＴＧＦＢ１で刺激した。この手法は、生理学的に対象となる、最大レベルの産生時における、適正にフォールディングされた、内因的に産生されたＩＬ−１１の阻害を確保する。このアッセイでは、線維症において対象となる、ＩＬ−１１の、線維芽細胞に対する、直接的な自己分泌活性が中和される。
【０４３１】
ＴＧＦＢ１は、ＩＬ−１１の発現を刺激し、その後、ＩＬ−１１が、休眠線維芽細胞から、活性化（ＡＣＴＡ２陽性）筋線維芽細胞への移行を駆動する。ＩＬ１１ＲＡ中和抗体は、この移行を阻害するはずである。したがって、ＴＧＦＢ１刺激の後に、活性化線維芽細胞の百分率を低下させる抗体は、中和剤および抗線維症剤であると考えられる。
【０４３２】
線維芽細胞を、９６ウェルＣｅｌｌＣａｒｒｉｅｒプレート内、１ｃｍ２（１ｃｍ）当たり１×１０４個の密度で播種し、線維症促進性サイトカインＴＧＦＢ１（５ｎｇ／ｍｌ）、およびマウスモノクローナル抗ＩＬ１１ＲＡ抗体（６μｇ／ｍｌ）で、２４時間にわたり刺激した。実験条件に従い、細胞を、リン酸緩衝生理食塩液（ＰＢＳ）中ですすぎ、４％のパラホルムアルデヒド中で固定し、ＰＢＳ中に０．１％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００で透過化した。非特異的部位を、ブロッキング溶液（０．５％のＢＳＡ、およびＰＢＳ中に０．１％のＴｗｅｅｎ−２０）を使用してブロッキングした。細胞を、ブロッキング液中で、１：５００に希釈された、マウス抗平滑筋アクチンモノクローナルと共に、４℃で、一晩にわたりインキュベートし、次いで、洗浄し（０．２５％のＢＳＡ、およびＰＢＳ中に０．１％のＴｗｅｅｎ−２０）、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８ヤギ抗マウスＩｇＧ（１：１０００）と共に、暗所内、室温で、１時間にわたりインキュベートした。細胞を、ブロッキング液中のローダミンファロイジン（１：１０００）、およびＤＡＰＩ（１μｇ／ｍｌ）で対比染色した。プレートを走査し、画像を、Ｏｐｅｒｅｔｔａ  Ｈｉｇｈ−Ｃｏｎｔｅｎｔ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍで収集した。Ｈａｒｍｏｎｙソフトウェアｖｅｒｓｉｏｎ  ４．１（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して、ＡＣＴＡ２＋ｖｅ細胞の画分を推定した。
【０４３３】
図８Ｃは、ＩＬ１１ＲＡに特異的に結合する、いくつかの抗体が、ヒト線維芽細胞の活性化を中和することが可能であったことを示す。１００％の阻害は、刺激されていない線維芽細胞のレベルを指し示し、０％は、完全に活性化された線維芽細胞を指し示す。
【０４３４】
上記実験を、初代マウス皮膚線維芽細胞により繰り返して、種間中和能について探索した。図８Ｄは、ＩＬ１１ＲＡに特異的に結合する、いくつかの抗体が、マウス線維芽細胞の活性化を中和することが可能であったことを示す。１００％の阻害は、刺激されていない線維芽細胞のレベルを指し示し、０％は、完全に活性化された線維芽細胞を指し示す。
２．５．２  抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける効能
５Ｅ５クローン、９Ａ７クローン、および１３Ｂ１０クローンの系列希釈液を使用して、中和アッセイを実施した。右心耳生検から単離された、ヒト心房線維芽細胞を、９６ウェルＣｅｌｌＣａｒｒｉｅｒプレート内、１ｃｍ２当たり１×１０４個の密度で播種した。細胞を、線維症促進性サイトカインである、ＴＧＦＢ１（５ｎｇ／ｍｌ）で刺激し、様々な濃度の、５Ｅ５、９Ａ７、または１３Ｂ１０と共に、２４時間にわたりインキュベートした。培地を回収し、プロトコールに従い、ＭＭＰ２およびＴＩＭＰ１についてのＥＬＩＳＡを実施した。線維芽細胞による、ＭＭＰ２およびＴＩＭＰ１の、上清への分泌を評価して、阻害％を推定した。高濃度（２μｇ／ｍｌ）における市販の抗ＩＬ−１１抗体を、陽性対照として使用し、１００％の中和と考えた。ＩｇＧ対照と共にインキュベートされ、刺激された細胞のタンパク質レベルは、０％の中和を指し示す。
【０４３５】
図８Ｅは、抗体が、ＩＬ−１１Ｒαに結合し、内因的に産生されたＩＬ−１１が相互作用することを遮断することを示す。ＩＬ−１１シグナル伝達は、中和され、これは、線維形成性タンパク質である、ＭＭＰ２の産生およびＴＩＭＰ１の産生を阻害する。
【０４３６】
トランスシグナル伝達イベントの遮断を確認するために、ＩＬ−１１：ＩＬ１１ＲＡ（０．２ｎｇ／ｍｌ）、ならびに様々な濃度の、５Ｅ５、９Ａ７、および１３Ｂ１０を使用して、実験を繰り返した。
【０４３７】
図８Ｆは、抗体が、線維芽細胞内の、ＩＬ−１１トランスシグナル伝達を中和し、線維形成性タンパク質の産生を阻害することを示す。線維芽細胞による、ＭＭＰ２タンパク質およびＴＩＭＰ１タンパク質の、上清への分泌を評価して、阻害％を推定した。
【０４３８】
初代マウス心臓線維芽細胞を使用して、上記の実験を繰り返した。ＭＭＰ２レベルをモニタリングすることにより、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける、線維症性応答の中和を評価した。初代マウス心臓線維芽細胞を、ＴＧＦＢ１（５ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ−１１（２ｎｇ／ｍｌ）、またはＩＬ−１１：ＩＬ１１ＲＡ（０．２ｎｇ／ｍｌ）、および様々な濃度の９Ａ７と共にインキュベートした。線維芽細胞による、ＭＭＰ２の、上清への分泌を評価して、阻害％を推定した。
【０４３９】
図８Ｇは、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体である、９Ａ７が、外因性もしくは内因性のＩＬ−１１、またはハイパーＩＬ−１１を遮断し、線維芽細胞内の、ＩＬ−１１シグナル伝達を中和し、線維形成性タンパク質の産生を阻害することを示す。
【０４４０】
種間反応性を、９Ａ７について、２μｇ／ｍｌの、ＩｇＧ対照、または９Ａ７抗体の存在下で、２４時間にわたり、組換えマカクザルＩＬ−１１（５ｎｇ／ｍｌ）により刺激された、マカクザル皮膚線維芽細胞内で確認した。コラーゲン、ＡＣＴＡ２＋ｖｅ、およびＥｄＵ＋ｖｅ細胞は、Ｏｐｅｒｅｔｔａ  Ｈｉｇｈ  Ｃｏｎｔｅｎｔ  Ｉｍａｇｉｎｇプラットフォームを使用して定量した。分泌コラーゲンは、シリウスレッド比色（ｃａｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ）コラーゲンアッセイを使用して定量した。９Ａ７は、各線維症マーカーのレベルを、非ＩＬ−１１処置対照と同等なレベルまで低減することが見出された。
２．６．様々な組織内の、ヒトＩＬ−１１／ＩＬ−１１Ｒシグナル伝達を阻害する能力
抗体が、様々な、異なる組織から得られた線維芽細胞内の、ＩＬ−１１／ＩＬ−１１Ｒシグナル伝達、およびトランスシグナル伝達を中和する能力について、ヒト心房線維芽細胞ではなく、肝臓、肺、腎臓、眼、皮膚、膵臓、脾臓、腸、脳、および骨髄に由来する、ヒト線維芽細胞を、実験に使用することを除き、本質的に、２．１および２．３節に記載された通りに探索する。
【０４４１】
抗ＩＬ−１１Ｒα抗体は、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の存在下の、２４時間にわたる培養時間の終了時における、αＳＭＡ陽性の、活性化線維芽細胞の比率の、抗体の非存在下における培養と比較した、相対的低下の観察により決定される通り、多様な、異なる組織に由来する線維芽細胞内のＩＬ−１１／ＩＬ−１１Ｒシグナル伝達を中和することが可能であることが裏付けられる。
【０４４２】
実施例３
マウス抗ヒトＩＬ−１１抗体の、キメラ形およびヒト化形
実施例１の、マウス抗ヒトＩＬ−１１Ｒαモノクローナル抗体の、マウス／ヒトキメラ形およびヒト化形は、標準的方法に従い調製する。
３．１．マウス／ヒトキメラ抗体
マウス／ヒトキメラ抗体は、「Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」、Ｍｉｃｈａｅｌ  Ｓｔｅｉｎｉｔｚ（編）、「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」、１０６０、「Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ（２０１４）、同書の８章において記載されている通りに、マウス抗ヒトＩＬ−１１Ｒαモノクローナル抗体から調製する。
【０４４３】
略述すると、マウス抗ヒトＩＬ−１１Ｒα抗体を産生するハイブリドーマの、ＶＨおよびＶＬをコードするＤＮＡ配列を決定し、ヒト免疫グロブリン定常領域をコードするＤＮＡ配列と組み合わせて、哺乳動物細胞内で、キメラマウス／ヒト抗体が発現されるマウス／ヒトキメラ抗体配列を作製する。
３．２．ヒト化抗体
ＢＳＯ−９Ａ７の、ＶＨ配列およびＶＬ配列のヒト化形もまた、デザインしたが、これらを、配列番号８〜１２および１４〜１７に示す。
【０４４４】
ヒト化抗体は、「Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」、Ｍｉｃｈａｅｌ  Ｓｔｅｉｎｉｔｚ（編）、「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」、１０６０、「Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ（２０１４）、同書の７章、特に、「抗体のヒト化」と題された、７章の３．１節において記載されている通りに、マウス抗ヒトＩＬ−１１Ｒαモノクローナル抗体から調製する。
【０４４５】
略述すると、マウス抗ヒトＩＬ−１１Ｒα抗体を産生するハイブリドーマの、ＶＨおよびＶＬをコードするＤＮＡ配列を決定し、ヒト抗体可変領域のフレームワーク領域、および免疫グロブリン定常領域をコードするＤＮＡ配列へと挿入して、哺乳動物細胞内で、ヒト化抗体が発現されるヒト化抗体配列を作製する。
【０４４６】
ヒト化抗体の特徴付けについては、実施例１４において記載する。
実施例４
抗ＩＬ−１１Ｒα抗体についての、さらなる生化学的解析
上記で記載された抗体を、さらなる生化学的解析にかける。
【０４４７】
ヒトＩＬ−１１Ｒαに対する結合アフィニティーを決定するために、抗体を、ＢＩＡｃｏｒｅ、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）、およびＭｉｃｒｏＳｃａｌｅ  Ｔｈｅｒｍｏｐｈｏｒｅｓｉｓ（ＭＳＴ）解析により解析した。
【０４４８】
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）解析を介する、ＢＩＡｃｏｒｅによる、抗体アフィニティーの決定は、Ｒｉｃｈら、Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２００８年２月１日、３７３（１）：１１２〜２０において記載されている通りに実施する。
【０４４９】
抗体のアフィニティーについての、バイオレイヤー干渉法解析は、Ｃｏｎｃｅｐｃｉｏｎら、Ｃｏｍｂ  Ｃｈｅｍ  Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｓｃｒｅｅｎ．、２００９年９月、１２（８）：７９１〜８００において記載されている通りに実施する。
【０４５０】
抗体のアフィニティーについての、ＭｉｃｒｏＳｃａｌｅ  Ｔｈｅｒｍｏｐｈｏｒｅｓｉｓ解析は、Ｊｅｒａｂｅｋ−Ｗｉｌｌｅｍｓｅｎら、Ａｓｓａｙ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．、２０１１年８月、９（４）：３４２〜３５３において記載されている通りに実施する。
【０４５１】
抗体の凝集は、Ｉａｃｏｂら、Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ．、２０１３年１２月、１０２（１２）：４３１５〜４３２９において記載されている通りに、サイズ除外クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により解析する。
【０４５２】
抗体の疎水性は、Ｈａｖｅｒｉｃｋら、ＭＡｂｓ．、２０１４年７〜８月、６（４）：８５２〜８において記載されている通りに、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）により解析する。
【０４５３】
抗体の溶融温度は、ＭｅｎｚｅｎおよびＦｒｉｅｓｓ、Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ．、２０１３年２月；１０２（２）：４１５〜２８において記載されている通りに、示差走査蛍光測定（ＤＳＦ）により解析する。
【０４５４】
実施例５
抗ＩＬ−１１Ｒα抗体を使用する、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける線維症の阻害
抗ヒトＩＬ−１１Ｒα抗体の治療有用性を、ｉｎ  ｖｉｖｏの、多様な、異なる組織についての、線維症のマウスモデルにおいて裏付ける。実験において使用されるマウスは、野生型（すなわち、ＩＬ−１１ＲＡ＋／＋）マウスである。
５．１．心臓線維症
ポンプを植込み、マウスを、アンジオテンシンＩＩ（１日当たり２ｍｇ／ｋｇ）で、２８日間にわたり処置する。
【０４５５】
抗ＩＬ−１１Ｒα中和抗体、または対照抗体を、静脈内注射により、異なる群のマウスへと投与する。実験の終了時に、ヒドロキシプロリンベースの比色（ｃａｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ）分析アッセイキットを使用して、マウス心房内のコラーゲン含量を評価し、線維症についてのマーカーである、Ｃｏｌ１Ａ２、αＳＭＡ（ＡＣＴＡ２）、およびフィブロネクチン（Ｆｎ１）のＲＮＡ発現レベルを、ｑＰＣＲにより解析した。
【０４５６】
抗ＩＬ−１１Ｒα中和抗体で処置されたマウスは、線維症についてのマーカーの発現の低減により証拠立てられる通り、心臓組織内の線維症性応答を、対照抗体で処置されたマウスと比較して低減した。
５．２．腎線維症
線維症を、媒体（０．３ＭのＮａＨＣＯ３）中の葉酸（１８０ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内注射により誘導する、腎線維症についてのマウスモデルを確立し、対照マウスに、媒体単独を投与した。
【０４５７】
抗ＩＬ−１１Ｒα中和抗体、または対照抗体を、静脈内注射により、異なる群のマウスへと投与する。２８日目に、腎臓を摘出し、秤量し、マッソントリクローム染色およびシリウス染色のために、１０％中性緩衝ホルマリン中で固定するか、またはコラーゲンアッセイ、ＲＮＡ研究、およびタンパク質研究のために、瞬時凍結させた。
【０４５８】
Ｔｒｉｚｏｌ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）およびＱｉａｇｅｎ  ＴｉｓｓｕｅＬｙｚｅｒ法に続き、ＲＮｅａｓｙカラム（Ｑｉａｇｅｎ）精製を使用して、全ＲＮＡを、瞬時凍結させた腎臓から抽出する。製造元の指示書に従い、各反応物が、１μｇの全ＲＮＡを含有した、ｉＳｃｒｉｐｔ（商標）ｃＤＮＡ合成キットを使用して、ｃＤＮＡを調製する。定量的ＲＴ−ＰＣＲによる遺伝子発現解析は、三連試料に対して、ＳｔｅｐＯｎｅＰｌｕｓ（商標）（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用する、ＴａｑＭａｎ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）技術またはＦａｓｔ  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ（Ｑｉａｇｅｎ）技術により、４０サイクルにわたり実施する。発現データは、ＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡの発現レベルに照らして正規化し、２−ΔΔＣｔ法を使用して、倍数変化を計算する。瞬時凍結させた腎臓を、６ＭのＨＣ中、５０ｍｇ／ｍｌの濃度で加熱すること（９５℃、２０時間）により、酸加水分解にかける。加水分解物中の総コラーゲン量は、製造元の指示書に従い、Ｑｕｉｃｋｚｙｍｅ  Ｔｏｔａｌ  Ｃｏｌｌａｇｅｎアッセイキット（Ｑｕｉｃｋｚｙｍｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用する、ヒドロキシプロリンの比色検出に基づき定量する。
【０４５９】
抗ＩＬ−１１Ｒα中和抗体で処置されたマウスは、線維症についてのマーカーの発現の低減により証拠立てられる通り、腎臓組織内の線維症性応答を、対照抗体で処置されたマウスと比較して低減した。
５．３．肺線維症
０日目に、マウスを、ブレオマイシンの気管内投与により処置して、肺内の線維症性応答（肺線維症）を確立する。
【０４６０】
抗ＩＬ−１１Ｒα中和抗体、または対照抗体を、静脈内注射により、異なる群のマウスへと投与する。２１日目に、マウスを屠殺し、線維症マーカーの差違について解析する。
抗ＩＬ−１１Ｒα中和抗体で処置されたマウスは、線維症についてのマーカーの発現の低減により証拠立てられる通り、肺組織内の線維症性応答を、対照抗体で処置されたマウスと比較して低減した。
５．４．皮膚線維症
０日目に、マウスを、ブレオマイシンの皮下投与により処置して、皮膚内の線維症性応答を確立する。
【０４６１】
抗ＩＬ−１１Ｒα中和抗体、または対照抗体を、静脈内注射により、異なる群のマウスへと投与する。２１日目に、マウスを屠殺し、線維症マーカーの差違について解析する。
抗ＩＬ−１１Ｒα中和抗体で処置されたマウスは、線維症についてのマーカーの発現の低減により証拠立てられる通り、皮膚組織内の線維症性応答を、対照抗体で処置されたマウスと比較して低減した。
５．５．眼線維症
眼内の線維症を解析するために、０日目において、ＩＬ−１１ＲＡ−／−マウス、およびＩＬ−１１ＲＡ＋／＋マウスに、線維柱帯切除術（濾過手術）を施して、眼内の創傷治癒応答を誘発する。緑内障濾過手術についての、このマウスモデルは、眼内の創傷治癒応答について査定するのに、効率的なモデルであることが示されており（Ｋｈａｗら、２００１、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ、１２、１４３〜１４８；Ｓｅｅｔら、２０１１、Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．１７、５５７〜５６７）、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、線維症モジュレーターの有益な効果を示すことに成功している（Ｍｅａｄら、２００３、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．、４４、３３９４〜３４０１；Ｗｏｎｇら、２００３、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．、４４、１０９７〜１１０３；Ｗｏｎｇら、２００５、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．、４６、２０１８〜２０２２）。
【０４６２】
略述すると、結膜を、切除して、基底をなす強膜を露出させ、この後、３０ゲージの注射針を使用して、強膜を通して、眼の前房へと、切り込みを入れた。創出された瘻孔は、房水が、結膜内に、かつ、結膜下に溢出することを可能とする。次いで、切除された結膜を、角膜縁において、１０−０（０．２メトリック）の、Ｅｔｈｉｌｏｎ製の黒色モノフィラメント強膜用縫合糸により固定し、閉止した。手順の終了時に、フシジン酸軟膏を塗布する。手術は、０．１ｍｌのケタミン／キシラジン混合物の腹腔内注射、ならびに眼１つ当たり１滴ずつの、１％キシロカインの局所適用による麻酔下で実施する。フシジン酸軟膏は、感染を防止するために、手術後に塗布する。手術は、７０％のプロピルアルコールで滅菌処理された手術用の鋏および鉗子、ならびに滅菌注射針により実施する。
【０４６３】
縫合された結膜下に蓄積された房水を、結膜ブレブとして観察する。マウスは、解析のために、手術後７日目に安楽死させる。定性的な免疫組織学的解析のために、マウスから、眼を、摘出により採取し、次いで、切片化する。コラーゲン線維の成熟は、Ｐｉｃｒｏ−ｓｉｒｉｕｓ  Ｒｅｄ／偏光法（Ｓｚｅｎｄｒｏｅｉら、１９８４、Ａｃｔａ  Ｍｏｒｐｈｏｌ  Ｈｕｎｇ、３２、４７〜５５）を使用して査定し、オレンジ〜赤は、成熟コラーゲンを指し示し、黄／緑は、新たに形成された未成熟コラーゲンを指し示す。
【０４６４】
抗ＩＬ−１１Ｒα中和抗体、または対照抗体を、静脈内注射により、異なる群のマウスへと投与し、眼組織内の線維症をモニタリングする。
抗ＩＬ−１１Ｒα中和抗体で処置されたマウスは、線維症についてのマーカーの発現の低減により証拠立てられる通り、眼組織内の線維症性応答を、対照抗体で処置されたマウスと比較して低減した。
５．６．他の組織
抗ＩＬ−１１Ｒα中和抗体による処置の、線維症に対する効果はまた、肝臓、腎臓、腸など、他の組織についての、線維症のマウスモデルにおいても解析し、また、多臓器（すなわち、全身）線維症を対象とするモデルにおいても解析する。
【０４６５】
線維症性応答を測定し、抗ＩＬ−１１Ｒα中和抗体で処置されたマウスと、対照抗体で処置されたマウスとの間で比較する。抗ＩＬ−１１Ｒα中和抗体で処置されたマウスは、線維症についてのマーカーの発現の低減により証拠立てられる通り、線維症性応答が、対照抗体で処置されたマウスと比較して低減された。
【０４６６】
抗ＩＬ−１１Ｒα抗体である、９Ａ７の中和効能は、初代ヒト肝星（肝）細胞内で、実施例２．５．２におけるプロトコールに従い、ＭＭＰ２濃度を測定することにより決定した。初代ヒトＨＳＣを、ＴＧＦＢ１（５ｎｇ／ｍｌ；内因性ＩＬ−１１）、または外因性ＩＬ−１１（２ｎｇ／ｍｌ）、および様々な濃度の９Ａ７と共にインキュベートした。線維芽細胞による、ＭＭＰ２の、上清への分泌を評価して、阻害％を推定した。
【０４６７】
図８Ｈは、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体である、９Ａ７が、内因性ＩＬ−１１（上）または外因性ＩＬ−１１（下）により誘導される、線維形成性タンパク質の産生を阻害し、これにより、線維症性応答の中和を裏付けることを示す。
【０４６８】
実施例６
抗ＩＬ−１１Ｒα抗体を使用する、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるがんの処置
抗ＩＬ−１１Ｒα中和抗体による処置の、がんに対する効果を、がんについてのマウスモデルにおいて解析した。
【０４６９】
乳がん、肺がん、および消化器がんについてのモデルが、マウスにおいて確立されており、マウスを、抗ＩＬ−１１Ｒα中和抗体、または対照抗体の投与により処置し、がんの発症／進行をモニタリングする。
【０４７０】
対照抗体で処置されたマウスと比較した、がんの症状の軽減、および／または生存の延長により証拠立てられる抗がん効果を、抗ＩＬ−１１Ｒα中和抗体について観察する。
化学療法剤、例えば、シスプラチンと組み合わせた、抗ＩＬ−１１Ｒα中和抗体の効果についてもまた探索する。
【０４７１】
抗ＩＬ−１１Ｒα抗体を、化学療法剤と組み合わせて使用する場合の相加効果を、腫瘍増殖の阻害について観察する。
実施例７
抗ＩＬ−１１Ｒα抗体を使用する、ＡＭＤの処置
抗ＩＬ−１１Ｒα中和抗体による処置の効果について、滲出型加齢黄斑変性（ＡＭＤ）において探索する。
【０４７２】
抗ＩＬ−１１Ｒα中和抗体を、滲出型ＡＭＤを有する対象へと投与する。一部の処置条件では、対象に、ＶＥＧＦアンタゴニスト療法（例えば、ラニビズマブ、ベバシズマブ、ペガプタニブ、ブロルシズマブ、またはアフリベルセプト）、ＰＤＧＦアンタゴニスト療法（例えば、ペグプレラニブ）を投与するか、または対象を、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体による処置に加えた、レーザー凝固療法により処置する。
【０４７３】
滲出型ＡＭＤの病態の軽減、および／または滲出型ＡＭＤの症状の改善を、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体で処置された対象において、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体で処置されなかった対象と比較して観察する。
【０４７４】
実施例８
抗ＩＬ−１１Ｒａ抗体を使用する、腎線維症または腎損傷の阻害
媒体（０．３ＭのＮａＨＣＯ３）中の葉酸（１８０ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内（ｉ．ｐ．）注射により、１０〜１２週齢で、同様な体重の、同腹仔マウスに、腎線維症を誘導し、対照マウスに、媒体単独を投与した。
【０４７５】
葉酸による処理の１日後に、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体のクローンである、ＢＳＯ−９Ａ７（ＶＨ＝配列番号７、ＶＬ＝配列番号１３）を投与し、次いで、毎週３回、２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。マウスは、注射の２８日後に安楽死させた。
【０４７６】
尿素およびクレアチニンの、マウス血漿レベルは、それぞれ、製造元の指示書に従い、尿素アッセイキット（ａｂ８３３６２、Ａｂｃａｍ）およびクレアチニンアッセイキット（ａｂ６５３４０、Ａｂｃａｍ）を使用して定量した。腎臓内の、総コラーゲンの量は、Ｑｕｉｃｋｚｙｍｅ  Ｔｏｔａｌ  Ｃｏｌｌａｇｅｎアッセイキット（Ｑｕｉｃｋｚｙｍｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用する、ヒドロキシプロリンの比色検出に基づき定量した。全ての比色アッセイは、製造元の指示書に従い実施した。
【０４７７】
組織をパラフィン包埋し、腎臓を、３μｍで切片化した。パラフィン切片のために、組織を、１０％の中性緩衝ホルマリン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）中、室温で、２４時間にわたり固定し、脱水し、パラフィン中に包埋した。低温切片のために、切り出されたばかりの臓器を、Ｔｉｓｓｕｅ−Ｔｅｋ  Ｏｐｔｉｍａｌ  Ｃｕｔｔｉｎｇ  Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ化合物（ＶＷＲ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）で包埋した。次いで、低温鋳型を、液体窒素中で冷却した、イソペンタンを伴う金属ビーカー内で凍結させ、切片を、−８０℃で保存した。総コラーゲンを、製造元の指示書に従い、マッソントリクローム染色キット（ＨＴ１５、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）で染色した。切片の画像を、捕捉し、青色に染色された線維症性領域を、ＩｍａｇｅＪソフトウェア（ｖｅｒｓｉｏｎ  １．４９）で、半定量的に決定した。免疫組織化学のために、組織切片を、抗ＡＣＴＡ２抗体（ａｂ５６９４、Ａｂｃａｍ）と共にインキュベートした。一次抗体による染色は、ＩｍｍＰＲＥＳＳ  ＨＲＰ  Ａｎｔｉ−Ｒａｂｂｉｔ  ＩｇＧ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎキット（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を、色原体としてのＩｍｍＰＡＣＴ  ＤＡＢ  Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）と共に使用して可視化した。次いで、切片を、マイヤーヘマトキシリン（Ｍｅｒｃｋ）で対比染色した。
【０４７８】
図９Ａおよび９Ｂは、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体で処置されたマウスが、コラーゲンについての染色を、著明に低減したことが見出されたことは、抗ＩＬ−１１Ｒａ抗体による処置が、腎線維症を阻害したことを指し示す。
【０４７９】
図１０Ａは、尿中アルブミン／クレアチニン比が、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体を伴う処置により、著明に低減されたことは、抗ＩＬ−１１Ｒａ抗体で処置されたマウスにおける、腎損傷のレベルの低減を指し示す。
【０４８０】
抗ＩＬ−１１Ｒα抗体のクローンである、ＢＳＯ−９Ａ７を、異なる濃度（０．５、１、５、および１０ｍｇ／ｋｇ）において、葉酸誘導性腎線維症を低減する、その能力について評価した。ＩｇＧ（１０ｍｇ／ｋｇ）を、対照として使用した。抗体の注射は、葉酸による処理の１日前に開始し、隔週で実施した。ＨＰＡアッセイを使用して、腎コラーゲン含量を評価するために、葉酸誘導性損傷の３週間後に、動物を屠殺した。
【０４８１】
図１０Ｂは、抗ＩＬ−１１Ｒα療法は、葉酸誘導性腎線維症における、腎コラーゲン含量を、用量依存的に低減すると見出されたことを示す。
別の実験では、急性腎損傷のマウスモデルを、片側尿管閉塞術（ＵＵＯ）により誘導した。略述すると、マウスを、一方の尿管に対する、偽手術または尿管閉塞術により処理した。マウスに、ＩｇＧ、抗ＩＬ−１１Ｒａ抗体クローンＢＳＯ−９Ａ７（２０ｍｇ／ｋｇ；術後−１、１、３、５日目における）を施し、傷害腎臓（「ＵＵＯ」）または対側非傷害腎臓（Ｃｏｎ）を、術後７日目に採取した。
【０４８２】
尿細管損傷についての半定量的評価は、実験条件に対して盲検化された、尿細管円柱、尿細管萎縮、または尿細管拡大についての組織学的解析により（尿細管損傷スコア：０＝なし；１＝最小限；２＝軽度；３＝中等度；４＝重度）実施した。
【０４８３】
図１１Ａおよび１１Ｂは、抗ＩＬ−１１Ｒａ抗体による処置が、急性腎損傷のマウスモデルにおける尿細管損傷を軽減したことを示す。
実施例９
抗ＩＬ−１１Ｒａ抗体を使用する、心臓線維症の阻害
抗ＩＬ−１１Ｒａ抗体による処置の、抗線維症効果を、心臓線維症についてのマウスモデルにおいて解析した。
【０４８４】
略述すると、横大動脈狭窄術（ＴＡＣ）は、雄マウスにおいて、既に記載されている（Ｔａｒｎａｖｓｋｉ，Ｏ．ら、「Ｍｏｕｓｅ  ｃａｒｄｉａｃ  ｓｕｒｇｅｒｙ：ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｄｉｓｅａｓｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｇｅｎｏｍｉｃ  ｓｔｕｄｉｅｓ」、Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ、１６、３４９〜３６０（２００４））通りに実施した。週齢をマッチさせたマウスに、ＴＡＣを伴わない、偽手術手順を施した。経胸壁二次元ドップラー心エコー法を使用して、圧力勾配の増大（＞４０ｍｍＨｇ）を確認したことは、ＴＡＣの成功を指し示す。
【０４８５】
マウスは、組織学的評価および分子的評価のために、ＴＡＣの２週間後に安楽死させた。抗ＩＬ−１１Ｒａ抗体クローンである、ＢＳＯ−９Ａ７（ＶＨ＝配列番号７、ＶＬ＝配列番号１３）、または対照ＩｇＧ抗体を、毎週３回、２０ｍｇ／ｋｇの用量で、腹腔内投与した。２週間後に、心臓を採取し、製造元の指示書に従い、マッソントリクローム染料キット（ＨＴ１５、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用して、線維症の程度について評価した。心臓内の、総コラーゲンの量は、Ｑｕｉｃｋｚｙｍｅ  Ｔｏｔａｌ  Ｃｏｌｌａｇｅｎアッセイキット（Ｑｕｉｃｋｚｙｍｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用する、ヒドロキシプロリンの比色検出に基づき定量した。
【０４８６】
解析の結果を、図１２Ａおよび１２Ｂに示す。抗ＩＬ−１１Ｒａ中和抗体で処置されたマウスは、心臓内のコラーゲンのレベルを、ＩｇＧ対照抗体で処置されたマウスと比較して低減しており（図１２Ａ）、心外膜、心内膜、および血管周囲領域における線維症のレベルを、ＩｇＧ対照抗体で処置されたマウスと比較して低減することが見出された（図１２Ｂ）。
【０４８７】
実施例１０
抗ＩＬ−１１Ｒａ抗体を使用する、肝線維症の阻害および反転
非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）は、炎症から、線維症への進行と、最終的に、肝不全への進行とにより特徴付けられる、一般的な肝疾患である。肝星細胞（ＨＳＣ）は、ＮＡＳＨの発症機序において、重要な役割を果たす。線維症促進性刺激、例えば、ＴＧＦβ１、ＰＤＧＦ、および炎症促進性因子は、ＨＳＣを活性化し、線維芽細胞由来の筋線維芽細胞と、特色を共有する、肝臓の筋線維芽細胞へと形質転換する。ＮＡＳＨを、肝線維症の例として使用した。
１０．１．ＩＬ−１１および肝線維症
ＴＧＦβ１で刺激されたＨＳＣ内の、ＩＬ−１１の発現は、ｑＰＣＲにより検出した。Ｔｒｉｚｏｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に続き、ＲＮｅａｓｙカラム（Ｑｉａｇｅｎ）精製を使用して、全ＲＮＡを、ＨＳＣ溶解物から抽出した。ｃＤＮＡは、製造元の指示書に従い、ｉＳｃｒｉｐｔ（商標）ｃＤＮＡ合成キット（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）により合成した。遺伝子発現解析は、二連試料に対して、ＳｔｅｐＯｎｅＰｌｕｓ（商標）（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用する、ＴａｑＭａｎ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）技術またはＦａｓｔ  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ（Ｑｉａｇｅｎ）技術により、４０サイクルにわたり実施した。発現データは、ＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡの発現に照らして正規化し、２−ΔΔＣｔ法を使用して、倍数変化を計算した。ＨＳＣ内の、ＩＬ６Ｒ、ｇｐ１３０、およびＩＬ−１１Ｒαの発現レベルもまた、ｑＰＣＲにより検出した。
【０４８８】
患者の肝臓試料中のＩＬ−１１レベルは、切断され、ＴＧＦβ１と共に、２４時間にわたりインキュベートされた、ヒト精密切断肝臓スライスから検出した。ウェスタンブロットを実施し、ブロットの密度測定値を、ＧＡＰＤＨの参照レベルと比較してプロットした。
【０４８９】
結果を、図１３Ａ〜１３Ｃに示す。ＩＬ−１１は、ＴＧＦβ１で刺激されたＨＳＣ内で、上方調節されることが見出された（１３Ａ）。ＨＳＣは、高レベルのＩＬ−１１受容体サブユニットアルファ（ＩＬ−１１Ｒα）を発現する（１３Ｂ）。ＮＡＳＨ患者の肝臓試料中のＩＬ−１１レベルは、健常個体と比較して、増大することが見出された（１３Ｃ）。
【０４９０】
細胞を、ＩＬ−１１、ＴＧＦβ１、またはＰＤＧＦで刺激して、ＩＬ−１１の、ＨＳＣの活性化および浸潤に対する効果について探索した。
ＨＳＣを、９６ウェル黒色ＣｅｌｌＣａｒｒｉｅｒプレート（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）内に、ウェル１つ当たりの細胞５×１０３個の密度で播種した。実験条件に従い、細胞を、４％のパラホルムアルデヒド（ＰＦＡ、２８９０８、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）内で固定し、０．１％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００（Ｓｉｇｍａ）で透過化し、非特異的部位を、０．５％のＢＳＡ、およびＰＢＳ中に０．１％のＴｗｅｅｎ−２０でブロッキングした。細胞を、一次抗体（１：５００）と共に、一晩にわたり（４℃）インキュベートするのに続き、適切なＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ４８８二次抗体（１：１０００）を伴うインキュベーションにかけた。製造元のプロトコールに従い、Ｃｌｉｃｋ−ｉＴ  ＥｄＵ  Ｌａｂｅｌｌｉｎｇキット（Ｃ１０３５０、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、ＥｄＵ−Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８を組み込んだ。細胞を、ブロッキング溶液中、１μｇ／ｍｌのＤＡＰＩ（Ｄ１３０６、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で対比染色した。各条件を、Ｏｐｅｒｅｔｔａ  Ｈｉｇｈ−Ｃｏｎｔｅｎｔ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ  １４８３（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して、二連のウェル、およびウェル１つ当たり最小で７つずつの視野からイメージングした。Ｈａｒｍｏｎｙ  ｖ３．５．２（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して、筋線維芽細胞の数を指し示す、ＡＣＴＡ２＋ｖｅ細胞の定量を測定した。単位面積当たりの、コラーゲンＩの蛍光強度の測定（細胞数に照らして正規化された）は、Ｃｏｌｕｍｂｕｓ  ２．７．１（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）により実施した。細胞培養物上清中の全分泌コラーゲンは、Ｓｉｒｉｕｓ  ｒｅｄコラーゲン検出キット（９０６２、Ｃｈｏｎｄｒｅｘ）を使用して定量した。
【０４９１】
ヒトＨＳＣの浸潤挙動は、２４ウェルボイデンチャンバー浸潤アッセイ（Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌａｂｓ  Ｉｎｃ．）を使用してアッセイした。無血清ＨＳＣ培地中に、等しい数のＨＳＣを、ＥＣＭコーティングマトリゲルへと、三連で播種し、０．２％のＦＢＳを含有するＨＳＣ培地へと浸潤させた。刺激を伴うインキュベーションの４８時間後、培地を吸引し、コットンスワブを使用して、非浸潤細胞を除去した。下層チャンバーへと浸潤した細胞を、細胞染色液（Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌａｂｓ  Ｉｎｃ．）で染色し、各膜の、５つの重複しない視野に由来する浸潤細胞をイメージングし、４０倍の倍率下でカウントした。
【０４９２】
結果を、図１３Ｄ〜１３Ｇに示す。ＩＬ−１１は、ＨＳＣを、ＴＧＦβ１またはＰＤＧＦと同様の程度に活性化し、休眠ＨＳＣを、コラーゲンを、産生（１３Ｅ）および分泌する（１３Ｆ）、ＡＣＴＡ２＋ｖｅ筋線維芽細胞へと形質転換する（１３Ｄ）ことが見出された。ＩＬ−１１はまた、ＨＳＣによる、用量依存的なマトリックス浸潤を促進する（１３Ｇ；浸潤は、ＮＡＳＨにおける、ＨＳＣ病態の、重要な側面である）ことも見出された。
【０４９３】
ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、組換えマウスＩｌ−１１（ｒｍＩｌ−１１；１００μｇ／ｋｇ）を、マウスへと、２１日間にわたり、毎日、皮下投与した。肝臓内の総ヒドロキシプロリン含量は、Ｑｕｉｃｋｚｙｍｅ  Ｔｏｔａｌ  Ｃｏｌｌａｇｅｎアッセイキット（Ｑｕｉｃｋｚｙｍｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して測定した。アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）の、マウス血清レベルは、Ａｌａｎｉｎｅ  Ｔｒａｎｓａｍｉｎａｓｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（ａｂ１０５１３４、ａｂｃａｍ）を使用して測定した。線維症促進性マーカーである、Ａｃｔａ２、Ｃｏｌ１ａ１、Ｃｏｌ１ａ２、およびＣｏｌ１ａ３のＲＮＡ発現は、前出の通りに、ｑＰＣＲにより測定した。
【０４９４】
結果を、図１３Ｈに示す。ＩＬ−１１の投与は、肝コラーゲン含量、線維症マーカーのｍＲＮＡレベル、および血清アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベルを増大させる。
【０４９５】
これらのデータは、ＨＳＣが、ヒト肝臓内の、ＩＬ−１１の、供給源および顕著な標的の両方であり、ＮＡＳＨでは、ＩＬ−１１が上昇することを示す。ＩＬ−１１は、肝星細胞の活性化および肝線維症を誘導する。
１０．２．抗ＩＬ−１１Ｒα療法を使用する、ＮＡＳＨの処置
抗ＩＬ−１１Ｒα抗体のクローンである、ＢＳＯ−９Ａ７を、ＮＡＳＨにおいて、線維症を処置する、その能力について評価した。
【０４９６】
ＨＳＣを、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の存在下、または非存在で、ＮＡＳＨ促進性因子により処置して、ＨＳＣの、筋線維芽細胞への形質転換について探索した。ＨＳＣ培養物を、ＩｇＧまたは抗ＩＬ−１１Ｒα抗体（６μｇ／ｍｌ）の存在下で、５ｎｇ／ｍｌのＴＧＦβ１により、２４時間にわたり刺激した。ＡＣＴＡ２＋ｖｅ細胞数（活性化筋線維芽細胞）は、上記で記載した通り、Ｏｐｅｒｅｔｔａプラットフォーム上で測定した。ＨＳＣ培養物を、ＩｇＧまたは抗ＩＬ−１１Ｒα抗体（２μｇ／ｍｌ）の存在下で、ＮＡＳＨ刺激である、ＰＤＧＦ（２０ｎｇ／ｍｌ）、ＣＣＬ２（５ｎｇ／ｍｌ）、アンジオテンシンＩＩ（１００ｎＭ）、ｂＦＧＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）または酸化ストレス（Ｈ２Ｏ２；０．２ｍＭ）により、２４時間にわたり、個別に刺激した。ＡＣＴＡ２＋ｖｅ細胞の比率、およびＨＳＣの浸潤は、前出の通りに測定した。各ＨＳＣ培養物により産生されたコラーゲン１を、免疫染色および蛍光定量した。ＩｇＧ抗体を、対照として使用した。
【０４９７】
結果を、図１４Ａ〜１４Ｄに示す。抗ＩＬ−１１Ｒα抗体は、ＴＧＦβ１で刺激されたＨＳＣ培養物（１４Ａ）中、ならびにＰＤＧＦ、ＣＣＬ２、アンジオテンシンＩＩ、ｂＦＧＦ、または酸化ストレスで刺激されたＨＳＣ（１４Ｂ）内の、ＡＣＴＡ２＋ｖｅ細胞数を低減することが見出された、すなわち、抗体による処置は、刺激駆動性の、ＨＳＣの、筋線維芽細胞への移行を遮断した。抗ＩＬ−１１Ｒα抗体はまた、ＰＤＧＦまたはＣＣＬ２により誘導される、ＨＳＣの浸潤を低減することも見出された（１４Ｃ）。コラーゲン１の産生は、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体による処置の後で低減されることが見出された（１４Ｄ）。
【０４９８】
したがって、抗ＩＬ−１１Ｒα療法による、Ｉｌ−１１シグナル伝達の阻害は、肝星細胞の活性化および肝線維症を防止する。
早期ＮＡＳＨにおける、肝疾患防止研究を実施して、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける、９Ａ７の、抗線維症活性および肝臓保護活性について検証した。Ｃ５７Ｂｌ／６Ｎｔａｃマウスに、ＮＡＳＨ誘導性６０ｋｃａｌ％の脂肪を補充された、メチオニン／コリン欠乏（ＭＣＤ）食餌（Ａ０６０７１３０２、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ）（ＨＦＭＣＤ食餌）を給餌して、肝損傷および線維症を誘導した。ＮＡＳＨ食餌の１週間後（ＡＬＴレベルは、約８００ｕ／Ｌ（通常飼料と比較して、約４０倍の増大）であり、この時点において、確立され、かつ、ロバストな脂肪性肝炎がみられる）、動物に、毎週２回、４週間にわたる、ＩｇＧ対照または抗ＩＬ−１１Ｒα抗体による処置を開始した。４週間後、動物を安楽死させ、解析のために、試料を回収した。データは、平均値±ＳＤであり、各点は、生物学的多連を指し示す；ＩｇＧ対照処置と対比した、９Ａ７処置についてのダネットの検定である；＊：Ｐ＜０．０５；＊＊：Ｐ＜０．０１；＊＊＊＊：Ｐ＜０．０００１である。
【０４９９】
図１４Ｅおよび１４Ｆは、０．５ｍｇ／ｋｇであってもなお、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体による処置が、マウスモデルにおける血清ＡＬＴレベルに対して、有意な効果を及ぼしたことを示す。高用量は、確立された肝損傷を、ほぼ完全に（＞９０％）反転させ、この極めて極限的なモデルにおいて、肝線維症を、ロバストに防止することが見出された。
【０５００】
ｉｎ  ｖｉｖｏ実験を実施して、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の、後期ＮＡＳＨに対する効果を決定した。
５週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６Ｎマウスに、ＮＡＳＨ誘導性の、６０ｋｃａｌ％の脂肪を補充された、メチオニン／コリン欠乏（ＭＣＤ）食餌（Ａ０６０７１３０２、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ）（ＨＦＭＣＤ食餌）を給餌した。対照マウスに、通常飼料（ＮＣ、Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｆｅｅｄｓ）を給餌した。ＩＬ−１１が強力に上方調節され、コラーゲンが蓄積される時点である、ＨＦＭＣＤ食餌を給餌してから６週間後に、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体である、ＢＳＯ−９Ａ７（１０ｍｇ／ｋｇ）を、隔週で、４週間にわたり投与した。１０週目に、肝臓および血清を回収し、ＥＲＫの活性化、肝ヒドロキシプロリン含量、および血清ＡＬＴレベルについて解析した。肝臓内の総ＥＲＫレベルおよびリン酸化ＥＲＫレベルは、ウェスタンブロットにより検出し、肝臓内の総ヒドロキシプロリン含量は、Ｑｕｉｃｋｚｙｍｅ  Ｔｏｔａｌ  Ｃｏｌｌａｇｅｎアッセイキット（Ｑｕｉｃｋｚｙｍｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して測定し、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）の血清レベルは、Ａｌａｎｉｎｅ  Ｔｒａｎｓａｍｉｎａｓｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（ａｂ１０５１３４、ａｂｃａｍ）を使用して測定した。
【０５０１】
結果を、図１５Ａ〜１５Ｃに示す。抗ＩＬ−１１Ｒα療法は、脂肪症は、変化させないが、ＥＲＫの活性化を失効化させ（１５Ａ）、肝線維症の進行を阻害し（１５Ｂ）、血清ＡＬＴレベルを低減した（１５Ｃ）ことが見出された。
【０５０２】
抗ＩＬ−１１Ｒα療法を、進行性ＮＡＳＨについての、別のモデルにおいて探索した。２日齢のＣ５７ＢＬ／６マウスに、単回の皮下注射による、ストレプトゾトシン２００μｇを投与し、通常飼料による食餌を、４週間にわたり給餌した。次いで、マウスを、７週間にわたり、ＨＦＭＣＤ食餌へと切り替え、次いで、後続の７週間にわたり、ＨＦＭＣＤ食餌と共に、１０ｍｇ／ｋｇの、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体であるＢＳＯ−９Ａ７、またはＩｇＧ対照で、毎週３回処置した。ＲＮＡの発現は、線維症遺伝子および炎症遺伝子である、Ｃｏｌ１ａ１、Ｃｏｌ１ａ２、Ｃｏｌ１ａ３、Ｔｉｍｐ１、Ｔｇｆβ１、Ｍｍｐ２、Ｔｎｆα、Ｃｃｌ２、およびＣｃｌ５について測定した。
【０５０３】
結果を、図１５Ｄに示す。抗ＩＬ−１１Ｒα療法は、線維症および炎症を指し示す遺伝子の発現を、ロバストに阻害することが見出された。
１０．３．ＩＬ−１１シグナル伝達の中和は、肝線維症を反転させる
マウスＮＡＳＨ  ＭＣＤ食餌を、１０週間にわたり給餌することにより、重度の肝線維症を確立した。次いで、給餌を、通常飼料（ＮＣ）へと切り替え、マウスを、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体である、ＢＳＯ−９Ａ７（２０ｍｇ／ｋｇ）で、毎週２回、６週間にわたり処置した。実験期間にわたりＮＣ食餌を給餌され、ＩｇＧ抗体を施されたマウスを、対照として使用した。総コラーゲンは、上記で記載した通り、肝ヒドロキシプロリン含量を検出することにより測定した。ｍＲＮＡの発現は、上記で記載した通り、ｑＰＣＲにより測定した。
【０５０４】
結果を、図１６に示す。肝コラーゲン含量は、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体処置の３週間後に、著明に反転させられ、６週間には、なおさらなる反転が見られた（１６Ａ）。注目すべきことは、ＩｇＧ対照処置動物では、肝コラーゲン含量が、実験期間にわたり、不変を維持したことである。グラフは、１０週目に、抗体を追加した後における、総週数を示す。
【０５０５】
肝線維症の反転は、形質転換されたＨＳＣが、不活性の、ＡＣＴＡ２−ｖｅ細胞状態への、老化または復帰を経る場合に好都合である。抗ＩＬ−１１Ｒα抗体療法は、Ａｃｔａ２、Ｍｍｐ２、およびＴｉｍｐ１の発現を低下させ、老化マーカーである、ｐ２１、ｐ１６、およびｐ５３を増大させることが見出された。
【０５０６】
ＩＬ−１１シグナル伝達が、ＨＳＣを、形質転換状態に維持するのに要求されるのかどうかを、直接点検するために、ＨＳＣを、ＴＧＦβ１（５ｎｇ／ｍｌ）またはＰＤＧＦ（２０ｎｇ／ｍｌ）で、７２時間にわたり刺激し、次いで、進行中の、ＴＧＦβ１またはＰＤＧＦによる刺激の存在下で、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体である、ＢＳＯ−９Ａ７、またはＩｇＧ対照（２μｇ／ｍｌ）により、さらに２４時間にわたり処置した。刺激されていないＨＳＣを、非線維症性対照として使用した。ＡＣＴＡ２＋ｖｅ細胞および分泌されたコラーゲンは、免疫染色により検出し、蛍光を定量した。ＥＲＫ活性は、ウェスタンブロット法により検出した。
【０５０７】
結果を、図１７Ａ〜１７Ｅに示す。抗ＩＬ−１１Ｒαによる処置は、ＩＬ−１１シグナル伝達阻害から２４時間以内に、ＡＣＴＡ２＋ｖｅ細胞の百分率（１７Ａ、Ｂ）、および分泌されたコラーゲンの量（１７Ｃ、Ｄ）を、ベースラインレベル近傍まで反転させることが見出された。ＥＲＫ活性もまた、ＴＧＦβ１／ＰＤＧＦ刺激の続行にもかかわらず、２４時間以内に、大幅に減少することが見出された（１７Ｅ）。
【０５０８】
したがって、抗ＩＬ−１１Ｒα療法による、ＩＬ−１１依存的ＨＳＣ形質転換の阻害は、ＨＳＣの老化および復帰を引き起こし、線維症の退縮をもたらす。
早期ＮＡＳＨにおける、抗ＩＬ−１１療法の効果について探索した。ＮＡＳＨについての、ＨＦＭＣＤ食餌モデルでは、炎症は、６週間後にピークに達し、次いで、重度の線維症期が後続する。マウスに、ＨＦＭＣＤ食餌を、１週間にわたり給餌し、次いで、毎週２回ずつ、さらに５週間にわたり、食餌を給餌しながら、１０ｍｇ／ｋｇの、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体であるＢＳＯ−９Ａ７、またはＩｇＧ対照で処置した。通常飼料（ＮＣ）による食餌を、対照として使用した。肝ヒドロキシプロリン含量および血清ＡＬＴレベルもまた、０．５、１、および５ｍｇ／ｋｇの抗ＩＬ−１１Ｒα抗体を使用して検出した。ＥＲＫのリン酸化、肝ヒドロキシプロリン含量、および血清ＡＬＴレベルは、前出の通りに評価した。肝トリグリセリド（ＴＧ）の測定は、トリグリセリド比色アッセイキット（１００１０３０３、Ｃａｙｍａｎ）を使用して実施した。肝臓組織を、１０％の中性緩衝ホルマリン（ＮＢＦ）中、ＲＴで、４８時間にわたり固定し、脱水し、パラフィンブロック内に包埋し、７μｍで切片化した。マッソントリクロームで染色された切片を、光学顕微鏡で観察した（スケールバー：１００μｍ）。
【０５０９】
結果を、図１８Ａ〜１８Ｇに示す。抗ＩＬ−１１Ｒα療法を使用する、早期脂肪性肝炎時の、ＩＬ−１１シグナル伝達の阻害は、脂肪性を顕著に低下させ、脂肪滴（１８Ａ）およびトリグリセリド含量（１８Ｂ）のいずれをも、有意に低減した肝臓を有するマウスを結果としてもたらすことが見出された。ＨＦＭＣＤ食餌は、１週間後に、顕著な脂肪性肝炎および肝損傷（ＡＬＴ＞７００Ｕ／Ｌ）を誘導するが、これは、抗ＩＬ−１１Ｒα療法の３週間後に、用量依存的に、正常近傍へと反転させられた（１８Ｃ、１８Ｄ）。肝ヒドロキシプロリン（コラーゲン）含量（１８Ｅ）、およびＥＲＫのリン酸化（１８Ｇ）は、６週間にわたり、増大しなかったことは、抗ＩＬ−１１Ｒαで処置されたマウスが、実験時に、線維症を発症しなかったことを裏付け、ＩＬ−１１シグナル伝達の阻害と関連する、強力な抗線維症効果を再確認する。抗ＩＬ−１１Ｒα療法は、肝ヒドロキシプロリン（コラーゲン）含量に対して、用量依存的効果を及ぼすことが見出された（１８Ｆ）。
【０５１０】
前出の通りに実施された、ＲＮＡ−ｓｅｑおよびｑＰＣＲを使用して、ＮＡＳＨマウスモデルにおける、抗ＩＬ−１１Ｒαによる処置の、線維症促進性遺伝子および炎症促進性遺伝子の発現に対する効果を評価した。脂質代謝に関与する遺伝子（ＡＣＯＸ１、ＳＣＤ１、ＦＡＳＮ、およびＳＲＥＢＦ１）の発現もまた評価した。
【０５１１】
結果を、図１８Ｈ〜１８Ｋに示す。線維症促進性遺伝子および炎症促進性遺伝子の上方調節は、抗ＩＬ−１１Ｒα療法の後で失効化された。Ｚスコア（Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ  Ｐｅｒ  Ｍｉｌｌｉｏｎ  ｍａｐｐｅｄ  ｒｅａｄｓ：ＴＰＭ）による、線維症促進性遺伝子および炎症促進性遺伝子の示差的発現についてのヒートマップは、抗ＩＬ−１１Ｒαによる処置が、線維症促進性遺伝子および炎症促進性遺伝子の、ＮＣ対照食餌を給餌されたマウス（非ＮＡＳＨマウス）において観察された発現と、同様な発現をもたらしたことを示す（１８Ｇ）。抗ＩＬ−１１Ｒα療法で処置されたマウスでは、炎症マーカーである、ＴｎｆαおよびＣｃｌ２（１８Ｉ）も、線維症促進性マーカーである、Ｔｇｆβ１、Ａｃｔａ２、Ｔｉｍｐ１、Ｃｏｌ１ａ１、Ｃｏｌ１ａ２、またはＣｏｌ３ａ１（１８Ｊ）も、上方調節されなかった。脂質代謝遺伝子の発現もまた、抗ＩＬ−１１Ｒα療法により再確立されることが見出された（１８Ｋ）。
【０５１２】
したがって、ＩＬ−１１シグナル伝達の中和は、早期ＮＡＳＨにおける肝損傷を反転させる。
常在マクロファージおよび浸潤単球は、ＮＡＳＨの発症機序に重要であり、疾患進行時における、ＴＧＦβ１の、主要な供給源である。早期ＮＡＳＨモデルにおける、肝臓炎症性細胞集団を、免疫（ＣＤ４５＋）細胞一般の存在と、特に、Ｌｙ６Ｃ＋ｖｅＴＧＦβ１＋ｖｅ細胞の存在とについて検討した。
【０５１３】
免疫細胞を、既に記載されている通りに、肝臓から単離した（Ｓｈｅｎｇ，Ｊ．、Ｒｕｅｄｌ，Ｃ．、およびＫａｒｊａｌａｉｎｅｎ，Ｋ．「Ｍｏｓｔ  Ｔｉｓｓｕｅ−Ｒｅｓｉｄｅｎｔ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  Ｅｘｃｅｐｔ  Ｍｉｃｒｏｇｌｉａ  Ａｒｅ  Ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｒｏｍ  Ｆｅｔａｌ  Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ」、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、４３、３８２〜３９３（２０１５））。肝臓組織を切り刻み、３７℃で、１００μｇ／ｍｌのコラゲナーゼＩＶおよび２０Ｕ／ｍｌのＤＮアーゼＩにより、１時間にわたり消化した。消化後、細胞を、ストレイナーに通して、単一細胞懸濁液を得、免疫細胞を単離するために、Ｐｅｒｃｏｌｌ勾配遠心分離にかけた。ＣｙＴＯＦ（Ｍａｓｓ  ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  ｂｙ  Ｔｉｍｅ  ｏｆ  Ｆｌｉｇｈｔ）染色は、既に記載されている通りに実施した（Ｃｈｅｗ，Ｖ．ら、「Ｄｅｌｉｎｅａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎ  ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｉｎ  ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｕｓｉｎｇ  ｈｉｇｈ−ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ  ｐｒｏｔｅｏｍｉｃ  ａｎｄ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｉｃ  ａｎａｌｙｓｅｓ」、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、１１４、Ｅ５９００〜Ｅ５９０９（２０１７））。細胞を融解させ、シスプラチン（Ｆｌｕｉｄｉｇｍ）で染色して、生細胞を同定するのに続き、バーコード処理を目的として、金属コンジュゲートＣＤ４５抗体による染色にかけた。バーコード処理の後、細胞を、金属コンジュゲート細胞表面抗体（Ｌｙ６Ｃ）で染色した。次いで、細胞を、１．６％のＰＦＡで固定し、１００％のメタノールで透過化し、細胞内抗体染色（ＴＧＦβ１）にかけた。最後に、細胞を、ＤＮＡ挿入剤で標識してから、Ｈｅｌｉｏｓ  ｍａｓｓ  ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ（Ｆｌｕｉｄｉｇｍ）上の収集を行った。解析のために、まず、単一生細胞を同定するのに続き、バーコードを解読して、個々の試料を同定した。Ｆｌｏｗｊｏソフトウェア（Ｆｌｏｗｊｏ，ＬＬＣ、ＵＳＡ）を使用して、手動のゲーティングを実施した。
【０５１４】
結果を、図１９Ａ〜１９Ｃに示す。抗ＩＬ−１１Ｒα抗体療法は、処置された肝臓内の、ＣＤ４５＋細胞の数を低減することが見出され（１９Ａ）、Ｌｙ６Ｃ＋ｖｅＴＧＦβ１＋ｖｅ細胞（１９Ｂ）の特異的低減を引き起こした。循環ＴＧＦβ１レベルは、ＨＦＭＣＤ食餌により上昇したが、抗体療法により低減され、これは、抗ＩＬ１１Ｒα療法が、疾患修飾性であることを示す（１９Ｃ）。
【０５１５】
まとめると、ＩＬ−１１は、ＨＳＣの活性化および形質転換に要求され、ＨＳＣ病態において、中心的役割を有する。ＩＬ−１１中和抗体は、抗線維症効果単独を超えて、疾患修飾性の治療的影響力を示す。ＩＬ−１１Ｒα抗体は、ＴＧＦβ１またはＰＤＧＦの下流にある、肝星細胞（ＨＳＣ）の活性化を反転させうる。ＩＬ−１１シグナル伝達の阻害は、炎症および脂肪症を防止し、疾患の後期における、肝線維症および肝細胞損傷を反転させうる。脂肪性肝炎時の早期に施されると、抗ＩＬ−１１療法は、ＨＳＣからの炎症性シグナルを遮断し、肝細胞損傷を防止し、ＨＳＣ−マクロファージ間相互作用の阻害を介して、代謝機能を改善する。本発明者らは、肝病態における、ＩＬ−１１の、知られていなかった中心的役割を同定した。中和抗体による、ＩＬ−１１シグナル伝達のターゲティングは、ＮＡＳＨのスペクトルにわたる、線維症、脂肪症、肝細胞死、および炎症を反転させる。
【０５１６】
実施例１１
９Ａ７の、ＩＬ−１１Ｒαに対する結合アフィニティーについての解析
ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｔ２００を使用する、マルチサイクルカイネティクス解析により、抗ＩＬ−１１Ｒａ抗体クローンである、ＢＳＯ−９Ａ７（ＶＨ＝配列番号７、ＶＬ＝配列番号１３）を、ヒトＩＬ−１１Ｒαに対する結合アフィニティーについて解析した。
【０５１７】
略述すると、組換えヒトＩＬ−１１Ｒα（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ；型番：１０２５２−Ｈ０８Ｈ）を、チップ上に固定化し、会合は、異なる濃度の、ＩｇＧ１フォーマットの抗体を、ランニング緩衝液（０．５％のＢＳＡおよび１５０ｍＭのＮａＣｌを含有する、ＨＢＳ−Ｐ＋緩衝液）中、４０μｌ／分の流量でチップ上に流過させることにより実施した。会合時間は、２４０秒間であり、解離時間は、４００秒間であった。表面は、ｐＨ１．７のグリシンを使用して再生した。
【０５１８】
２つ個別の解析：
・以下の濃度：１００ｎＭ、５０ｎＭ、２５ｎＭ、１２．５ｎＭ、６．２５ｎＭ、３．１２５ｎＭ、および１．５６ｎＭのＢＳＯ−９Ａ７を使用する、第１の解析（図２０の（１））；
・以下の濃度：５０ｎＭ、２５ｎＭ、１２．５ｎＭ、６．２５ｎＭ、３．１２５ｎＭ、および１．５６ｎＭのＢＳＯ−９Ａ７を使用する、第２の解析（図２０の（２））
を実施した。
【０５１９】
得られた生データについての解析は、ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｔ２００査定ソフトウェアＶ２．０．１を使用し、バックグラウンドを減算したデータを、１：１相互作用モデルへと当てはめて実施した。
【０５２０】
２つの解析の結果を、図２０に示す。ＢＳＯ−９Ａ７は、ナノモル単位のアフィニティーで、ヒトＩＬ−１１Ｒαに結合することが見出された。
実施例１２
９Ａ７についての、生化学的解析
抗ＩＬ−１１Ｒａ抗体クローンである、ＢＳＯ−９Ａ７を、ＩＬ−１１シグナル伝達を阻害する、その能力について解析した。
【０５２１】
ＨＳＣを、ＩｇＧ（４μｇ／ｍｌ）、および様々な濃度の９Ａ７（４μｇ／ｍｌ〜６１ｐｇ／ｍｌ；４倍の希釈率）の存在下で、ＴＧＦβ１（５ｎｇ／ｍｌ、２４時間）により刺激した。上清を回収し、分泌されたＭＭＰ２の量についてアッセイした。用量反応曲線は、最小二乗法（ｏｒｄｉｎａｒｙ  ｌｅａｓｔ  ｓｑｕａｒｅｓ）による当てはめを使用して、９Ａ７の被験濃度（ｐＭ）の対数値を、対応する阻害パーセント値と対比してプロットすることにより作成した。ＩＣ５０値は、阻害剤濃度の対数を、正規化された反応変数と対比する、傾きの式を使用して計算した。
【０５２２】
結果を、図２１に示す。ＢＳＯ−９Ａ７は、ＨＳＣからの、線維形成性タンパク質の分泌を、５．４ｐＭのＩＣ５０で遮断した。
抗ＩＬ−１１Ｒａ抗体クローンである、ＢＳＯ−９Ａ７を、薬物動態研究において使用した。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（１０〜１２週齢）に、ＰＢＳ中に１００μｌの、放射性標識されたばかりの１２５Ｉ−９Ａ７（５μＣｉ、２．５μｇ）を眼窩後注射した。２％イソフルランにより、マウスに麻酔をかけ、注射後いくつかの時点（２、５、１０、１５、３０分後、１、２、４、６、８時間後、１、２、３、７、１４、および２１日後）において、顎下腺を介して、血液を回収した。生体内分布研究のために、心穿刺を介して、血液を回収し、以下の時点：注射の１、４時間後、１、３、７、１４、２１日後において、組織を採取した。放射能含量は、減衰補正（用量１００μｌの、１００倍希釈液）を伴う、ガンマカウンター（２４８０  Ｗｉｚａｒｄ２、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して測定した。測定された放射能は、組織１ｇ当たりの注射用量％に照らして正規化した。
【０５２３】
結果を、図２２Ａおよび２２Ｂに示す。１２５Ｉ−９Ａ７を使用する薬物動態研究は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける、１８日間を超える半減期（２２Ａ）、および肝臓内の強力な取込み（２２Ｂ）を明らかにした。
【０５２４】
実施例１３
抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の、消耗性障害に対する効果
ＨＦＭＣＤ食餌を給餌された動物は、体重が減少し、極めて体調不良となる（また、実施例１０．２も参照されたい）。ＩＬ−１１シグナル伝達の阻害は、ＨＦＭＣＤ誘導性の体重減少を改善し、９Ａ７抗体は、体重の増加に対する、用量依存的効果を示した。
【０５２５】
前出の通りに、５週齢の雄マウスに、１週間にわたり、ＨＦＭＣＤ食餌または通常飼料（ＮＣ）による食餌を給餌して、消耗を誘導し、ＭＣＤマウスにおいて、約１５％の体重減少を結果としてもたらした。１週目の後、マウスに、毎週２回、０．５、１、５、または１０ｍｇ／ｋｇの、抗ＩＬ−１１ＲＡ抗体である、９Ａ７を腹腔内注射した。１０ｍｇ／ｋｇの、ＩｇＧアイソタイプ抗体を、対照として使用した。体重および食物消費量は、毎週測定した。食物消費について、平均食物摂取量（１週間当たりマウス１匹当たりのｇ数）は、ケージ（ケージ１つ当たりのマウスのｎ＝３）からのフードホッパー内で測定した。
【０５２６】
結果を、図２３Ａおよび２３Ｂに示す。抗ＩＬ−１１Ｒα療法は、体重（２３Ａ）および食物消費（２３Ｂ）の用量依存的増加ことが見出されたことは、消耗に対する反転を指し示す。最高用量は、最大の消耗反転効果を示した。ＮＣ食餌を給餌されたマウスが、着実に、体重を増加させたのに対し、ＨＦＭＣＤ食餌を給餌され、ＩｇＧ対照で処置されたマウスは、処置の経過にわたり、体重が、約３０％減少した。最高用量が、食物消費に対して、最大の効果を及ぼしたのに対し、ＩｇＧ対照で処置されたマウスは、食物消費の、わずかな低減を示した。
【０５２７】
急性疾患、例えば、外傷または敗血症もまた、消耗、例えば、食欲不振および悪液質と関連しうる。急性腎損傷についてのマウスモデルにおける、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニズムの、食欲不振および悪液質に対する効果について研究した。腎損傷は、媒体（０．３ＭのＮａＨＣＯ３）中の葉酸（１８０ｍｇ／ｋｇ）の、１０週齢の雄マウスへのＩＰ注射により誘導し、対照マウスに、媒体単独を投与した。動物は、注射の２８日後に屠殺した。マウスに、葉酸投与の１時間前から始めて、マウスを屠殺するまで、３日ごとに、２０ｍｇ／ｋｇの、抗ＩＬ−１１ＲＡ抗体、または同一濃度の、ＩｇＧアイソタイプ対照を、腹腔内注射した。
【０５２８】
葉酸誘導性腎損傷は、重度で両側の腎損傷の急性期と関連する、急速な、食欲不振／悪液質関連の体重減少を結果としてもたらすことが見出された。損傷時、および損傷期間にわたり、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体を施されるマウス（群１つ当たりのｎ＝７）は、ＩｇＧ対照と比較して、より迅速に、体重を取り戻し、３週間後までに、正常体重、または正常近くの体重に戻った。
【０５２９】
これとは別の実験でも、腎損傷は、前出の通りに、葉酸のＩＰ注射により誘導した。マウスは、腎損傷の２１日間後から初めて、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体またはＩｇＧ対照で処置した。動物の体重は、抗体処置の前後において評価する。葉酸を施されない、健常マウスを、対照として使用した。抗ＩＬ−１１Ｒα抗体で処置された動物が、処置が開始されると、体重を取り戻し始めたことは、消耗関連の体重減少が、後期疾患においても改善されうることを示す。
【０５３０】
実施例１４
ＢＳＯ−９Ａ７のヒト化変異体の特徴付け
ＢＳＯ−９Ａ７の、ＶＨ配列およびＶＬ配列のヒト化形は、配列番号８〜１２および１４〜１７において示される通りにデザインした。
１４．１．結合解析
５つのヒト化重鎖と、４つのヒト化軽鎖との組合せを作出し、ＩＬ−１１Ｒαへの結合について調べた。２０のヒト化変異体：
ＶＨ１／ＶＬ１；ＶＨ１／ＶＬ２；ＶＨ１／ＶＬ３；ＶＨ１／ＶＬ４；
ＶＨ２／ＶＬ１；ＶＨ２／ＶＬ２；ＶＨ２／ＶＬ３；ＶＨ２／ＶＬ４；
ＶＨ３／ＶＬ１；ＶＨ３／ＶＬ２；ＶＨ３／ＶＬ３；ＶＨ３／ＶＬ４；
ＶＨ４／ＶＬ１；ＶＨ４／ＶＬ２；ＶＨ４／ＶＬ３；ＶＨ４／ＶＬ４；
ＶＨ５／ＶＬ１；ＶＨ５／ＶＬ２；ＶＨ５／ＶＬ３；ＶＨ５／ＶＬ４
の、ＩＬ−１１Ｒへの結合を、シングルサイクルのカイネティクス解析により調べた。
【０５３１】
この解析から、６つ抗体：ＶＨ３／ＶＬ２；ＶＨ３／ＶＬ３；ＶＨ３／ＶＬ４；ＶＨ４／ＶＬ２；ＶＨ４／ＶＬ３；およびＶＨ４／ＶＬ４を、さらなる評価のために同定した。
【０５３２】
【表３】
2021527086.tif 000009
【０５３３】
６つの抗体を、最終濃度を１μｇ／ｍｌとし、２５℃、０．１％のＢＳＡを含有する、ＨＢＳ−Ｐ＋ランニング緩衝液（ｐＨ７．４）と共に、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００測定器を使用してなされた、マルチサイクルカイネティクス解析により評価した。
【０５３４】
反応速度パラメータを、下記の表に示す。相対ＫＤは、ヒト化変異体のＫＤを、同じ実験でアッセイされた、９Ａ７抗体のＫＤで除することにより計算した。６つのヒト化抗体は全て、ＩＬ−１１Ｒに、９Ａ７（配列番号７および１３）の２倍以内で結合した。
【０５３５】
【表４】
2021527086.tif 000010
【０５３６】
１４．２．ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける、ヒト化抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の効能
６つの抗体を、ＴＧＦβ１に応答して、初代ヒト心房線維芽細胞から分泌された、内因性ＩＬ−１１を中和する能力について調べた。９Ａ７を、陽性対照として組み入れた。アッセイは、実施例２．５．２において記載されている通りに実施した。ヒト線維芽細胞による、ＭＭＰ２の、上清への分泌を評価して、阻害％を推定した。
【０５３７】
結果を、図２４に示す。全ての抗体は、ＩＬ−１１Ｒαに結合し、内因的に産生されたＩＬ−１１が、受容体と相互作用することを遮断する。ＩＬ−１１シグナル伝達は、中和され、これは、線維形成性タンパク質である、ＭＭＰ２の産生を阻害する。
【０５３８】
特定のヒト化クローンの効能を、ヒト肝星細胞内で、さらに調べた。前出の通り、細胞を、５ｎｇ／ｍｌのＴＧＦβ１、および様々な濃度の、ＶＨ３／ＶＬ３またはＶＨ４／ＶＨ４と共にインキュベートした。ＭＭＰ２の、上清への分泌をモニタリングすることにより、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける、線維症性応答の中和を評価して、阻害％を推定した。
【０５３９】
図２５は、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体が、内因性のＩＬ−１１シグナル伝達を遮断し、線維形成性タンパク質である、ＭＭＰ２の産生を阻害することを示す。
同様なアッセイは、ヒト肺線維芽細胞内で実施した。初代ヒト肺線維芽細胞を、ＴＧＦＢ１（５ｎｇ／ｍｌ）、および様々な濃度の、９Ａ７、ＶＨ３／ＶＬ３またはＶＨ４／ＶＨ４と共にインキュベートした。ＴＩＭＰ１の、上清への分泌をモニタリングすることにより、線維症性応答の中和を評価して、阻害％を推定した。
【０５４０】
図２６は、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体が、内因性のＩＬ−１１シグナル伝達を遮断し、線維形成性タンパク質である、ＴＩＭＰ１の産生を阻害することを示す。
１４．３．ｉｎ  ｖｉｖｏにおける、ヒト化抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の効能
ヒト化抗ヒトＩＬ−１１Ｒα抗体の治療有用性を、例えば、実施例５、６、１０、および１２において実施された通りに、ｉｎ  ｖｉｖｏの、多様な、異なる組織についての、線維症のマウスモデルにおいて裏付ける。
【０５４１】
ヒト化抗ＩＬ−１１Ｒα中和抗体で処置されたマウスは、線維症性応答を低減した。
実施例１５
抗ＩＬ−１１Ｒα抗体の、代謝性障害に対する効果
ヒト化抗ＩＬ−１１Ｒα抗体である、ＶＨ４／ＶＬ４の効果を、肥満およびＩＩ型糖尿病などの代謝性疾患を伴うマウスにおいて探索した。果糖を伴う洋風食餌（ＷＤＦ）を使用して、肥満、ＩＩ型糖尿病、および非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）時のヒトにおける代謝性障害に近似する、代謝性障害を確立した（Ｂａｅｎａら、Ｓｃｉ  Ｒｅｐ（２０１６）、６：２６１４９；Ｍａｃｈａｄｏら、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ（２０１５）、１０：ｅ０１２７９９１）。マウスに、１２週齢から、１６週間にわたり、飲用水中に、１５重量／容量％の果糖を補充した、洋風食餌（Ｄ１２０７９Ｂ、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ）（ＷＤＦ）を給餌した。対照の対象に、通常飼料（ＮＣ、Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｆｅｅｄｓ）および飲用水を給餌した。ＩｇＧ抗体を、対照として使用した。
【０５４２】
図２７Ａおよび２７Ｂは、ＷＤＦを給餌された、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体処置マウスが、ＷＤＦを給餌された、対照ＩｇＧ抗体（ａｎｙｂｏｄｙ）処置マウスと比較した場合、体重（Ａ）および脂肪重量（Ｂ）の、有意な低減を示したことを示す。抗ＩＬ−１１Ｒα抗体で処置されたマウスではまた、除脂肪体重の、ＩｇＧ対照処置マウスと比較した増大も観察されたことは、ＷＤＦ誘導性代謝性発症機序における、ＩＬ−１１シグナル伝達の阻害が、筋肉重量を回復させたことを示唆する。さらに、腹腔内耐糖能試験（ｉｐＧＴＴ）の結果は、空腹時グルコースと共に、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体で処置されたマウスにおける、耐糖能の、有意な改善を示した（図２７Ｃおよび２７Ｄ）。
【０５４３】
解析を、膵臓に対する効果へと拡張した。ＷＤＦを給餌された、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体処置マウスは、８〜１６週間にわたり処置された（代謝性疾患と関連する影響に対して保護するために）のであれ、１６〜２４週間にわたり処置された（代謝性疾患と関連する反転効果のために）のであれ、ＩｇＧ対照処置マウスと比較した場合に、ＷＤＦ誘導性膵臓喪失に対して、目覚ましい保護を呈することが、予測外に見出された（図２７Ｅ）。
【０５４４】
図２７Ｆは、ＷＤＦを給餌された、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体処置マウスが、ＷＤＦを給餌された、対照ＩｇＧ抗体（ａｎｙｂｏｄｙ）処置マウスと比較して、著明に低値の血清コレステロールレベルを有したことを示し、図２７Ｇは、ＷＤＦを給餌された、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体処置マウスが、ＷＤＦを給餌された、対照ＩｇＧ抗体（ａｎｙｂｏｄｙ）処置マウスと比較して、著明に低値の血清トリグリセリドレベルを有したことを示す。図２７Ｈは、ＷＤＦを給餌された、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体処置マウスが、ＷＤＦを給餌された、対照ＩｇＧ抗体（ａｎｙｂｏｄｙ）処置マウスと比較して、著明に低値の空腹時血中グルコースレベルを有したことを示す。
【０５４５】
さらに、膵臓についての免疫組織学はまた、ＩｇＧで処置された、ＷＤＦを給餌マウスにおいて、ＩＩ型糖尿病の、古典的な特色（Ｂｏｎｎｅｒ−ＷｅｉｒおよびＯ’Ｂｒｉｅｎ、Ｄｉａｂｅｔｅｓ（２００８）、５７：２８９９〜２９０４）である、膵島内のグルカゴン染色およびインスリン染色の増大を膵島過形成と共にも明らかにした（図２７Ｉおよび２７Ｊ）。ＷＤＦ給餌マウスにおける、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体による、１６〜２４週間にわたる処置が、膵島過形成およびグルカゴン染色を、目覚ましく低減するほか、ＷＤＦ給餌マウスの膵島内のインスリン発現を改善したことは、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニズムが、洋風食餌により引き起こされた、代謝性疾患を改善し、反転させるのに有用であることを示唆する。
【０５４６】
ＨＦＭＣＤモデルは、脂肪性肝炎に続き、線維症を、早期に発生させた。しかし、このモデルは、肥満性またはインスリン抵抗性についてのモデルではない。ＷＤＦ誘導性ＮＡＳＨについてのモデルを使用して、抗ＩＬ−１１Ｒ療法の効果について、肥満、インスリン抵抗性、および糖尿病の文脈で調べた。マウスに、ＷＤＦを、１６週間にわたり給餌したところ、１６週間後までに、マウスは、肝臓脂肪症、炎症、および線維症を伴う、肥満性およびインスリン抵抗性となった。次いで、抗ＩＬ１１Ｒα抗体による処置を開始した。ＩＬ−１１シグナル伝達をターゲティングしたところ、ＮＡＳＨ肝臓内の、肝Ｅｒｋの活性化が阻害された（図２８Ａ）。同様な体重増加にもかかわらず、抗ＩＬ１１Ｒα療法を施されたマウスでは、肝線維症、脂肪症、炎症の反転、および血清ＡＬＴレベルの低減が観察された。これは、血清グルコースレベル、トリグリセリドレベル、およびコレステロールレベルの低減を伴った（図２８Ｂ−２８Ｇ）。したがって、抗ＩＬ１１Ｒα中和療法は、ＷＤＦ誘導性ＮＡＳＨ病態を反転させる。
【０５４７】
したがって、データは、抗ＩＬ−１１療法が、線維症を反転させたことを示すが、この効果が、持続的または漸進的であるのかどうかを評価しなかった。さらに、組合せ療法は、ＮＡＳＨにおいて、線維症を反転させるために有益でありうる。これらの点について取り組むために、ＨＦＭＣＤを、１０週間にわたり使用して、重度肝線維症を確立し、次いで、マウスを、通常飼料へと転換し、ロバストな代謝への介入を模倣し、並行して、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体処置を開始した（図２９Ａ）。代謝への刺激を除去すると、Ｅｒｋの活性化が、徐々に後退し、これは、抗体処置により加速化された。ＩｇＧ処置動物では、実験期間にわたり、線維症が変化しなかったことは、完全代謝補正単独が、線維症を反転させないか、または線維症を反転させても、極めて緩徐であることを示唆する。これに対し、抗体処置の３週間後に、肝コラーゲン含量が、著明に反転させられ（２４％）、６週間後には、さらに反転させられた（４６％）ことは、漸進的かつ持続的な効果を示す（図２９Ｂ）。
【０５４８】
線維症の退縮は、低ＴＩＭＰレベルおよび高ＭＭＰレベルと関連し、これは、好適なマトリックスリモデリングを促進する。抗ＩＬ１１Ｒα抗体で処置された、重度の線維症を伴うマウスが、Ｍｍｐ２を、急速に上方調節し、Ｔｉｍｐ１を、急速に下方調節することが見出されたことは、これと符合する。肝線維症の反転は、形質転換されたＨＳＣが、アポトーシス、老化を経、かつ／または不活性のＡＣＴＡ２−ｖｅ状態へと戻る場合に好適である。ＩＬ−１１が、ＨＳＣを、形質転換状態に維持するのに要求されるのかどうかを点検するために、ＨＳＣを、ＴＧＦβ１またはＰＤＧＦで刺激するのに続き、ＩＬ−１１シグナル伝達の阻害を行った。ＩＬ−１１阻害から２４時間以内に、ＴＧＦβ１／ＰＤＧＦ刺激の続行にもかかわらず、ＡＣＴＡ２＋ｖｅ細胞の百分率、および分泌コラーゲン量が、ベースラインレベル近傍へと反転させられ、ＥＲＫの活性が、大幅に減少した。
【０５４９】
実施例１６
ＩＬ−１１シグナル伝達の阻害の、肝毒性における効果
１６．１．抗ＩＬ−１１療法の、肝毒性に対する効果
ＩＬ−１１は、肝細胞の細胞死を、直接的に引き起こし、肝細胞を、肝臓の再生能を制限することが公知である（Ｇｒａｎｔ  Ｒｏｗｅら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、２０１１、３１（１２）：２３９２〜２４０３）、機能不全性の、部分的上皮間葉転換（ＥＭＴ）状態へと駆動する。初代ヒト肝細胞は、ＩＬ−１１Ｒα受容体を、高度に発現することが見出され、ＩＬ−１１による刺激は、生理学的に対象となる用量範囲にわたり、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）の、漸進的な増大により証拠立てられる通り、用量依存的な肝細胞の細胞死を誘導することが見出され、ヒト肝細胞の、Ｈ２Ｏ２による刺激は、上清中の、ＩＬ−１１の、１０倍の上方調節を結果としてもたらす（図３０Ａ〜３０Ｃ）。
【０５５０】
アセトアミノフェン（ＡＰＡＰ）誘導性肝損傷についてのマウスモデルを利用して、抗ＩＬ−１１療法の、肝毒性に対する効果について探索した。１２〜１４週齢の雄マウスを、飢餓状態に置き、ＡＰＡＰ（Ａ３０３５、Ｓｉｇｍａ）注射（ＩＰ、４００ｍｇ／ｋｇ）の１６時間前に、１０ｍｇ／ｋｇの抗ＩＬ−１１Ｒα抗体、またはＩｇＧアイソタイプ対照を、腹腔内（ＩＰ）注射した。マウスは、ＡＰＡＰ投与の２４時間後に屠殺した。それぞれ、製造元のプロトコールに従い、Ｍｏｕｓｅ  ＩＬ−１１  ＤｕｏＳｅｔ（ＤＹ４１８およびＤＹ００８、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、およびＨｕｍａｎ  ＩＬ−１１  Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ＥＬＩＳＡキット（Ｄ１１００、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、マウス血清中および肝細胞上清中の、ＩＬ−１１のレベルを定量した。肝臓試料を切り出し、１０％の中性緩衝ホルマリン（ＮＢＦ）中、室温で、４８時間にわたり固定し、脱水し、パラフィンブロック内に包埋し、７μｍで切片化した。切片を、標準的プロトコールに従い、ヘマトキシリン／エオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色し、光学顕微鏡により観察した。
【０５５１】
図３０Ｄ〜３０Ｆは、抗ＩＬ１１Ｒα抗体療法の単回投与を施されたマウスは、著明に低値のＡＬＴレベル（ＩｇＧ対照と比較して、５５％の低下；３０Ｄ）、すなわち、肝損傷の程度の、顕著な低減を有することが見出されたことを示す。抗ＩＬ−１１療法はまた、肝細胞の破壊を反映する、肝重量（肝指数；３０Ｅ）の、ＡＰＡＰ誘導性減少を、ＩｇＧ対照抗体による、肝重量の２４％の減少と比較して防止することも見出された。ヘマトキシリン／エオシン（Ｈ＆Ｅ）染色による肝臓組織学は、ＩｇＧ処置マウスにおいて、ＡＰＡＰ毒性の、典型的な組織学的特色である、重度の小葉中心壊死を示したが、これは、抗ＩＬ１１Ｒα療法により軽減されることが見出された（３０Ｆ）。
【０５５２】
ＩｇＧ対照または抗ＩＬ−１１Ｒα抗体で処置されたマウスの運動および活動性を、ＡＰＡＰ処置の２４時間後において観察した。対照ＩｇＧ処置マウスが、健康状態の悪化の、視覚的特色（例えば、立毛、猫背の姿勢）を伴う、静止／瀕死状態にあることが見出されたのに対し、抗ＩＬ−１１Ｒα抗体で処置されたマウスは、正常な運動および活動性を有した。
【０５５３】
よって、ＩＬ−１１Ｒαの遮断を介する、ＩＬ−１１シグナル伝達の阻害は、ＡＰＡＰ誘導性肝損傷（薬物誘導性肝損傷；ＤＩＬＩ）についての、許容された、橋渡しモデルにおける肝毒性を防止する。
１６．２．ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニズムは、肝細胞を、薬物誘導性細胞死に対して保護する
ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニズムの、肝細胞の生存率に対する効果を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて解析した。
【０５５４】
ヒト肝細胞を、アンタゴニストの抗ＩＬ１１Ｒα抗体（２μｇ／ｍｌ）、またはアイソタイプをマッチさせたＩｇＧ対照抗体（ＩｇＧ、２μｇ／ｍｌ）の非存在下（ベースライン、ＢＬ）、または存在下において、最終濃度を２０ｍＭとする、ＡＰＡＰ（Ａ３０３５、Ｓｉｇｍａ）で、２４時間にわたり処置した。
【０５５５】
次いで、製造元の指示書に従い、ＦＩＴＣ  Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖ／Ｄｅａｄ  Ｃｅｌｌ  Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  Ｋｉｔ（Ｖ１３２４２、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して、肝細胞を染色し、Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖ−ＦＩＴＣ／ＰＩで染色された細胞を、ＢＤ  ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用する、フローサイトメトリーにより解析した。試料１例当たりの細胞１０，０００個を解析した。データを、ＦｌｏｗＪｏ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ７ソフトウェアを使用して解析した。
【０５５６】
図３１Ａは、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニスト抗体である阻害剤による、肝細胞の処置は、死滅肝細胞の比率を、実質的に低減することが見出されたことを示す。
【０５５７】
別個の実験では、肝細胞を、アンタゴニストの抗ＩＬ１１Ｒａ抗体（２μｇ／ｍｌ）、またはアイソタイプをマッチさせたＩｇＧ対照抗体（ＩｇＧ、２μｇ／ｍｌ）の非存在下（ベースライン、ＢＬ）、または存在下において、最終濃度を１０ｍＭとする、ＡＰＡＰ（Ａ３０３５、Ｓｉｇｍａ）で、２４時間にわたり処置した。プロテアーゼ阻害剤およびホスファターゼ阻害剤を含有する、放射性免疫沈降アッセイ（ＲＩＰＡ）緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃｓ）を使用して、肝細胞から、タンパク質抽出物を調製するのに続き、遠心分離を行って、溶解物を清澄化させた。タンパク質濃度を、ブラッドフォードアッセイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）により決定した。等量のタンパク質溶解物を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離し、ＰＶＤＦ膜へと転写し、表示の一次抗体（ＥＲＫ、ｐＥＲＫ、ｐＪＮＫ）について、免疫ブロット解析にかけた。ＥＣＬ検出システム（Ｐｉｅｒｃｅ）を、適切な二次抗体と共に使用して、タンパク質を可視化した。
【０５５８】
図３１Ｂは、ＡＰＡＰによる、肝細胞の処理が、ｐ−ＥＲＫおよびｐＪＮＫのレベルを、著明に上方調節することが見出されたことを示す（ＩｇＧと対比したＢＬを参照されたい）。ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニスト抗体である阻害剤による、肝細胞の処置は、ｐ−ＥＲＫおよびｐＪＮＫのレベルを、実質的に低減することが見出された（抗ＩＬ−１１Ｒα抗体と対比したＩｇＧを参照されたい）。
１６．３．ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニズムは、薬物誘導性肝損傷に対して保護する
重度のＡＰＡＰ過剰摂取量（４００ｍｇ／ｋｇ）、または等容量の生理食塩液を、１２〜１４週齢の雄マウスへと、ＩＰ注射により投与し、１６時間後に、２０ｍｇ／ｋｇのアンタゴニストの抗ＩＬ１１ＲＡ抗体、またはアイソタイプをマッチさせたＩｇＧ対照抗体のＩＰ投与を行った。
【０５５９】
ＡＰＡＰ投与の２４時間後に、マウスを安楽死させた。製造元の指示書に従い、ＡＬＴ活性アッセイキット（ａｂ１０５１３４、Ａｂｃａｍ）を使用して、血清アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベルを測定し、肝臓を摘出し、１０％の中性緩衝ホルマリン（ＮＢＦ）中、室温で、４８時間にわたり固定し、脱水し、パラフィンブロック内に包埋し、７μｍで切片化した。切片を、標準的プロトコールに従い、ヘマトキシリン／エオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色し、光学顕微鏡により観察した。
【０５６０】
結果を、図３２Ａおよび３２Ｂに示す。ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニスト抗体である阻害剤による前処置は、血清ＡＬＴレベルの、実質的な低減により決定される通り、マウスを、肝機能の、ＤＩＬＩ関連阻害から、著明に保護することが示された（図３２Ａ）。ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニスト抗体である阻害剤で前処置されたマウスの肝臓はまた、ＩｇＧ処置対照に由来する肝臓と比較した、肝細胞壊死の実質的な低下も呈した（図３２Ｂ）。
１６．４．薬物誘導性肝損傷の後における、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニズムは、肝損傷の症状を反転させ、肝機能を回復させる
重度のＡＰＡＰ過剰摂取量（４００ｍｇ／ｋｇ）、または等容量の生理食塩液を、１２〜１４週齢の雄マウスへと、ＩＰ注射により投与し、１０時間後に、マウスに、２０ｍｇ／ｋｇのアンタゴニストの抗ＩＬ１１Ｒα抗体、アイソタイプをマッチさせたＩｇＧ対照抗体を、ＩＰ投与するか、または処置しなかった。マウスは、２４、３６、および４８時間後に安楽死させた。血清ＡＬＴレベルを、実施例１６．３において記載されている通りに解析した。実施例１６．３において記載されている通りに、肝臓を摘出し、固定し、デジタル写真を撮影した。
【０５６１】
結果を、図３３Ａおよび３３Ｂに示す。重度のＡＰＡＰ過剰摂取の１０時間後に投与された、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニスト抗体である阻害剤は、肝臓の肉眼的形状を、ＡＰＡＰで処理されていないマウスの肉眼的形状へと回復させることが示された（図３３Ａ）。重度のＡＰＡＰ過剰摂取の１０時間後に投与された、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニスト抗体である阻害剤は、血清ＡＬＴレベルの、実質的な低減により決定される通り、マウスを、肝機能の、ＤＩＬＩ関連阻害からレスキューすることが、さらに裏付けられた（図３３Ｂ）。
【０５６２】
マウスの肝臓から調製された、タンパク質抽出物に対して、ウェスタンブロットもまた実施した。肝臓組織を、プロテアーゼ阻害剤およびホスファターゼ阻害剤を含有する、放射性免疫沈降アッセイ（ＲＩＰＡ）緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃｓ）中でホモジナイズし、その後、溶解物を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離し、ウェスタンブロットにより解析した。図３３Ｃは、ＡＰＡＰの過剰摂取が、ｐ−ＥＲＫ、ｐＪＮＫ１、およびｐＪＮＫ２のレベルを、著明に上方調節した（１０時間後と対比した対照を参照されたい）のに対し、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニスト抗体である阻害剤による、後続の処置は、ｐ−ＥＲＫ、ｐＪＮＫ１、およびｐＪＮＫ２のレベルを、実質的に低減した（抗ＩＬ−１１Ｒα抗体と対比したＩｇＧを参照されたい）ことを示す。
【０５６３】
さらなる実験では、致死性のＡＰＡＰ過剰摂取量（５５０ｍｇ／ｋｇ）、または等容量の生理食塩液を、１２〜１４週齢の雄マウスへと、ＩＰ注射により投与し、１０時間後に、マウスに、２０ｍｇ／ｋｇのアンタゴニストの抗ＩＬ１１Ｒα抗体、アイソタイプをマッチさせたＩｇＧ対照抗体を、ＩＰ投与するか、または処置しなかった。
【０５６４】
マウスの生存を、ＡＰＡＰ／生理食塩液投与の後、８日間にわたりモニタリングし、結果を、図３４Ａに示す。ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニスト抗体である阻害剤による処置は、致死性用量のＡＰＡＰを投与されたマウスの生存を、ＩｇＧ処置対照と比べて、著明に改善した。
【０５６５】
マウスは、２４時間後および１９２時間（８日）後において安楽死させた。血清ＡＬＴレベルを、実施例１６．３において記載されている通りに解析した。実施例１６．３において記載されている通りに、肝臓を摘出し、固定し、デジタル写真を撮影した。
【０５６６】
結果を、図３４Ｂおよび３４Ｃに示す。致死性のＡＰＡＰ過剰摂取の１０時間後に投与された、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニスト抗体である阻害剤は、８日後に、肝臓の肉眼的形状を、ＡＰＡＰで処理されていないマウスの肉眼的形状へと回復させることが示された（図３４Ｂ）。致死性のＡＰＡＰ過剰摂取の１０時間後に投与された、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニスト抗体である阻害剤は、マウスを、肝機能の、ＤＩＬＩ関連阻害からレスキューし；８日後に血清ＡＬＴレベルも、正常（生理食塩液を投与された）対照マウスのレベルと、著明に異ならないことが、さらに裏付けられた（図３４Ｃ）。
【０５６７】
肝毒性傷害の１０時間後に投与された、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストによる処置が、ＤＩＬＩ関連肝毒性を反転させ、重度／致死性のＡＰＡＰの過剰摂取量を投与された対象の死を防止する能力は、真に、目覚ましい結果であった。マウスにおける、過剰摂取の１０時間後は、ヒトにおける過剰摂取の、約２４時間後と同等であると考えられる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図８Ｅ】
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【図８Ｆ】
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【図８Ｇ】
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【図８Ｈ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１３Ｄ】
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【図１３Ｅ】
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【図１３Ｆ】
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【図１３Ｇ】
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【図１３Ｈ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１４Ｃ】
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【図１４Ｄ】
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【図１４Ｅ】
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【図１４Ｆ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【図１５Ｄ−１】
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【図１５Ｄ−２】
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【図１６】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１７Ｃ】
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【図１７Ｄ】
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【図１７Ｅ】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１８Ｃ】
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【図１８Ｄ】
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【図１８Ｅ】
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【図１８Ｆ】
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【図１８Ｇ】
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【図１８Ｈ】
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【図１８Ｉ】
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【図１８Ｊ】
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【図１８Ｋ】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図１９Ｃ】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７Ａ】
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【図２７Ｂ】
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【図２７Ｃ】
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【図２７Ｄ】
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【図２７Ｅ】
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【図２７Ｆ】
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【図２７Ｇ】
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【図２７Ｈ】
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【図２７Ｉ】
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【図２７Ｊ】
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【図２８Ａ】
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【図２８Ｂ】
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【図２８Ｃ】
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【図２８Ｄ】
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【図２８Ｅ】
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【図２８Ｆ】
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【図２８Ｇ】
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【図２９Ａ】
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【図２９Ｂ】
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【図３０Ａ】
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【図３０Ｂ】
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【図３０Ｃ】
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【図３０Ｄ】
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【図３０Ｅ】
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【図３０Ｆ】
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【図３１Ａ】
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【図３１Ｂ】
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【図３２Ａ】
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【図３２Ｂ】
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【図３３Ａ】
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【図３３Ｂ】
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【図３３Ｃ】
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【図３４Ａ】
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【図３４Ｂ】
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【図３４Ｃ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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