(57)【要約】  ｐ２１バイオマーカーは、患者が腎損傷又は腎不全に罹患しているか否かの評価に利用され、さらに、腎代替療法を開始する１つ又は複数の妥当性を決定することによって腎損傷又は腎不全を治療し、腎臓に損傷を与えることが知られている化合物の送達を中止し、腎臓に損傷を与えることが知られている手順を遅らせるか、又は回避し、利尿薬の投与を変更する方法において使用することができる。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
腎損傷又は腎臓病が進行しているリスクのある患者を治療する方法であって、
（ａ）前記患者のｐ２１のレベルを決定するためのアッセイを実施すること；及び
（ｂ）前記患者がｐ２１のレベルの上昇を示した場合、さらなる腎損傷のリスクを減らすために患者を治療することを含み、治療は、１つ又は複数のステロイド、ＡＣＥ阻害剤、ＮＲＦ２アクティベーター、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、抗酸化剤、アルドステロン拮抗薬、抗炎症薬、抗線維症薬、バソプレシン拮抗薬、ＳＧＬＴ−２阻害薬、免疫抑制剤の投与、臓器保護、又は急性腎損傷治療、腎代替療法の開始、腎臓に損傷を与えることが知られている化合物の送達の中止、腎臓に損傷を与えることが知られている手順の遅延又は回避、及び利尿薬投与の変更の１つ又は複数を含む、方法。
【請求項２】
前記アッセイが、（ｉ）患者から体液サンプルを入手すること、（ｉｉ）前記体液サンプルの全部又は一部を、ｐ２１の検出のために特異的に結合する結合試薬と接触させること、及び、結合試薬へのｐ２１の結合を示すアッセイ結果を決定して、１つ又は複数のアッセイ結果を提供することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記治療が、１つ又は複数のステロイド、細胞老化遮断薬、ＡＣＥ阻害剤、ＮＲＦ２アクティベーター、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、抗炎症薬、抗線維症薬、バソプレッシン拮抗薬、ＳＧＬＴ−２阻害薬、免疫抑制薬の投与、臓器保護、又は急性腎損傷の治療を含む、請求項１の方法。
【請求項４】
急性又は慢性腎臓病及び組織老化の進行のリスクを決定する方法であって、
（ａ）前記患者の血清、尿、又は血漿のｐ２１レベルによって示される臓器老化のレベルを決定するためのアッセイを実施すること；及び、
（ｂ）前記患者がｐ２１のレベルの上昇を示す場合、前記患者の老化を治療することが知られている薬剤の投与量を投与することを含む、方法。
【請求項５】
前記アッセイが、（ｉ）前記患者から体液サンプルを入手すること、（ｉｉ）前記体液サンプルの全部又は一部を、ｐ２１の検出のために特異的に結合する結合試薬と接触させること、及び、結合試薬へのｐ２１の結合を示すアッセイ結果を決定して、１つ又は複数のアッセイ結果を提供することを含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記老化を治療することが知られている薬物の投与量が、ｐ２１のレベルが増加していると決定される場合に増加される、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
将来において腎損傷のリスクがあると決定された患者を治療する方法であって、
（ａ）前記患者のｐ２１のレベルを決定するためのアッセイを実施すること；
（ｂ）前記患者の尿中アルブミンのレベルを決定するためのアッセイを実施すること；及び、
（ｃ）前記患者がｐ２１及びアルブミンのレベルの上昇を示す場合、さらなる腎損傷のリスクを減らすために患者を治療（ここで、治療は、１つ又は複数のステロイド、ＡＣＥ阻害剤、ＮＲＦ２アクティベーター、抗酸化剤、アルドステロン拮抗薬、抗炎症薬、抗線維症薬、バソプレシン拮抗薬、ＳＧＬＴ−２阻害剤、免疫抑制剤の投与、臓器保護、又は急性腎損傷の治療、腎代替療法の開始、腎臓に損傷を与えることが知られている化合物の送達の中止、腎臓に損傷を与えることが知られている手順の遅延又は回避、及び利尿薬投与の変更の１以上を含む）することを含む、方法。
【請求項８】
対象における腎状態を評価するための方法であって、
（ａ）前記対象から得られた体液サンプルに存在するｐ２１の測定を含む、腎損傷マーカーを検出するように構成された１つ又は複数のアッセイを実行すること、
（ｂ）アッセイ結果を使用することによって、測定されたｐ２１レベルを、前記対象から体液サンプルが採取されてから７２時間以内に前記対象が将来の急性腎障害のリスクにさらされる可能性と相関させ、７２時間以内に将来の急性腎障害の既知の素因を有する個体の所定の部分母集団に前記対象を割り当てること；及び、
（ｃ）前記患者が割り当てられた個人の所定の部分母集団に基づいて対象を治療（ここで、治療は、１つ又は複数のステロイド、ＡＣＥ阻害剤、ＮＲＦ２アクティベーター、抗酸化剤、アルドステロン拮抗薬、抗炎症薬、抗線維症薬、バソプレシン拮抗薬、ＳＧＬＴ−２阻害薬、免疫抑制薬の投与、臓器保護、又は急性腎損傷の治療、腎代替療法の開始、腎臓に損傷を与えることが知られている化合物の送達の中止、腎臓に損傷を与えることが知られている手順の遅延又は回避、及び利尿薬投与の変更の１つ又は複数を含む）することを含む、方法。
【請求項９】
腎損傷又は腎臓病が進行しているリスクのある患者を治療する方法であって、
（ａ）前記患者のｐ１６ｉｎｋ４ａ、ｐ１９、及びｐ２１のレベルを決定するためのアッセイを実行すること、
（ｂ）ｐ１６ｉｎｋ４ａ、ｐ１９、及びｐ２１の相対レベルを考慮して、前記患者が腎損傷又は腎臓病に罹患しているか否かを決定すること；及び、
（ｃ）前記患者が腎損傷又は腎臓病に罹患していると決定された場合、さらなる腎損傷のリスクを減らすために前記患者を治療（ここで、治療は、１つ又は複数のステロイド、ＡＣＥ阻害剤、ＮＲＦ２アクティベーター、抗酸化剤、アルドステロン拮抗薬、抗炎症薬、抗線維症薬、バソプレシン拮抗薬、ＳＧＬＴ−２阻害薬、免疫抑制薬の投与、臓器保護、又は急性腎損傷治療、腎代替療法の開始、腎臓に損傷を与えることが知られている化合物の送達の中止、腎臓に損傷を与えることが知られている手順の遅延又は回避、及び利尿薬投与の変更の１つ又は複数を含む）することを含む、方法。
【請求項１０】
前記患者が、鉄又は鉄複合体と、ヘムタンパク質分解阻害剤との組み合わせで治療される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記患者が、鉄スクロースとスズプロトポルフィリンとの組み合わせで治療される、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記患者が、クルクミノイド製剤で治療される、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記患者が、バルドキソロンメチルで治療される、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記患者が鉄又は鉄複合体と、ヘムタンパク質分解阻害剤との組み合わせで治療される、請求項７に記載の方法。
【請求項１５】
前記患者が鉄スクロースとスズプロトポルフィリンの組み合わせで治療される、請求項７に記載の方法。
【請求項１６】
前記患者が、クルクミノイド製剤で治療される、請求項７に記載の方法。
【請求項１７】
前記患者が、バルドキソロンメチルで治療される、請求項７に記載の方法。
【請求項１８】
前記患者が、鉄又は鉄複合体と、ヘムタンパク質分解阻害剤との組み合わせで治療される、請求項８に記載の方法。
【請求項１９】
前記患者が、鉄スクロースとスズプロトポルフィリンとの組み合わせで治療される、請求項８に記載の方法。
【請求項２０】
前記患者が、クルクミノイド製剤で治療される、請求項８に記載の方法。
【請求項２１】
前記患者が、バルドキソロンメチルで治療される、請求項８に記載の方法。
【請求項２２】
前記患者が、鉄又は鉄複合体と、ヘムタンパク質分解阻害剤との組み合わせで治療される、請求項９に記載の方法。
【請求項２３】
前記患者が、鉄スクロースとスズプロトポルフィリンとの組み合わせで治療される、請求項９に記載の方法。
【請求項２４】
前記患者が、クルクミノイド製剤で治療される、請求項９に記載の方法。
【請求項２５】
前記患者が、バルドキソロンメチルで治療される、請求項９に記載の方法。
【請求項２６】
患者を治療する方法であって、（ａ）前記患者のｐ１６ｉｎｋ４ａ、ｐ１９、及びｐ２１のレベルを決定するためのアッセイを実行すること；（ｂ）ｐ１６ｉｎｋ４ａ、ｐ１９、及びｐ２１の相対レベルを考慮して、患者が肝臓、腎臓、心臓、又は脳の機能障害、損傷、又は老化に罹患しているか否かを決定することを含む、方法。
【請求項２７】
腎損傷に罹患している患者に有効量のヒトｐ２１を投与することを含む、腎損傷に罹患している患者を治療する方法。
【請求項２８】
前記ヒトｐ２１が組換えヒトｐ２１である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
腎損傷に罹患している患者に有効量のヒトｐ２１活性化因子を投与することを含む、腎損傷に罹患している患者を治療する方法。
【請求項３０】
前記ヒトｐ２１活性化因子がテノビン−１である、請求項２９記載の方法。
【請求項３１】
（ａ）前記患者のｐ２１のレベルを決定するためのアッセイを実施することはまた、前記患者の微量アルブミン、フェリチン、ヘモペキシン、及びハプトグロビンのレベルを決定するためのアッセイを実施することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３２】
（ａ）前記患者のｐ２１のレベルを決定するためのアッセイを実施することはまた、患者の微量アルブミン、フェリチン、ヘモペキシン、及びハプトグロビンのレベルを決定するためのアッセイを実施することを含む、請求項７に記載の方法。
【請求項３３】
（ａ）前記患者のｐ２１のレベルを決定するためのアッセイを実施することはまた、患者の微量アルブミン、フェリチン、ヘモペキシン、及びハプトグロビンのレベルを決定するためのアッセイを実施することを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項３４】
（ａ）前記患者のｐ２１のレベルを決定するためのアッセイを実施することはまた、前記患者の微量アルブミン、フェリチン、ヘモペキシン、及びハプトグロビンのレベルを決定するためのアッセイを実施することを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項３５】
前記患者が腎臓移植を受けた、請求項１に記載の方法。
【請求項３６】
前記患者が腎臓移植を受けた、請求項７に記載の方法。
【請求項３７】
前記患者が腎臓移植を受けた、請求項８に記載の方法。
【請求項３８】
前記患者が腎臓移植を受けた、請求項９に記載の方法。
【請求項３９】
前記患者が腎臓移植を受けた、請求項２６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
本出願の請求項は、２０１８年５月２４日に出願された米国仮出願６２ / ６７６，１５７および２０１８年８月７日に出願された６２ / ７１５，５０８から利益を得る。これらはそれぞれ、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
腎臓は、体からの水分と溶質の排泄に関与している。その機能には、酸塩基平衡の維持、電解質濃度の調節、血液量の制御、及び血圧の調節が含まれる。腎臓はまた、エリスロポエチンを生成することによって血中ヘモグロビン／ヘマトクリットを維持するのを助け、また活性化されたビタミンＤを生成する。このように、損傷及び／又は疾患による腎機能の喪失は、実質的な罹患率及び死亡率をもたらす。腎障害については、Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  １７．ｓｕｐ．ｔｈ  Ｅｄ．，  ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ｐａｇｅｓ  １７４１ー１８３０、において詳細な記載がなされており、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。腎疾患及び／又は損傷は、急性又は慢性の場合がある。急性及び慢性腎臓病は、次のように説明されている（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ＆Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ２００８、４７ｔｈ  Ｅｄ、ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ｐａｇｅｓ  ７８５ー８１５、これらは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）：急性腎不全は、数時間から数日にわたって腎機能を悪化させ、その結果、血中の窒素廃棄物（尿素窒素など）及びクレアチニンが蓄積する。これらの物質の蓄積は高窒素血症と呼ばれる。慢性腎不全（慢性腎臓病）は、数ヶ月から数年にわたる腎機能の異常な喪失に起因する。
【０００３】
急性腎不全（ＡＲＦ、急性腎損傷、又はＡＫＩとも呼ばれる）は、糸球体濾過の突然の減少（通常、約４８時間から１週間以内に検出）である。このろ過能力の喪失により、通常は腎臓から排泄される窒素（尿素及びクレアチニン）並びに非窒素の老廃物が蓄積するか、尿量が減少するか、又はその両方が発生する。ＡＲＦは、入院の約５％、心肺バイパス手術の１５〜３０％、集中治療入院の最大３５％を悪化させると報告されている。ＡＲＦは、原因として、腎前、内因性腎、又は腎後に分類される場合がある。内因性腎疾患はさらに、糸球体、尿細管、間質、及び血管の異常に分類することができる。ＡＲＦの主な原因は、以下の表に記載されており、これは、出典メルクマニュアル、第１７版、第２２章であり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００４】
慢性腎障害への進行を防ぐために、適切な介入を行う腎損傷及び腎不全の早期診断及び予後診断の方法の開発に関心が高まっている。そのようなテストの１つは、バイオマーカーＴＩＭＰ−２（メタロプロテイナーゼ２の組織阻害剤）及びＩＧＦＢＰ−７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）に依存しており、カリフォルニア州サンディエゴのＡｓｔｕｔｅＭｅｄｉｃａｌからＮＥＰＨＲＯＣＨＥＣＫ（登録商標）として市販されている。特許には、例えば、ジョセフ・アンダーバーグらに発行され、Ａｓｔｕｔｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ、Ｉｎｃに譲渡された、「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ  ｏｆ  ｒｅｎａｌ  ｉｎｊｕｒｙ  ａｎｄ  ｒｅｎａｌ  ｆａｉｌｕｒｅ」と題する、米国特許第８，７７８，６１５号が含まれる。’６１５の特許は、いくつかのバイオマーカーの組み合わせを使用した腎損傷及び腎不全の診断を開示している。その他の関連特許には、９，８７９，０９１；９，８２２，１７２；９，７８４，７５０；９，７３３，２６１；９，６９６，３２２；９，４７０，６９５；９，４５９，２６１；９，４１７，２５０；９，３６６，６８３；９，３６０，４８８；９，２２９，０１０；９，０５７，７３５；９，０２９，０９３；８，９９３，２５０；及び８，８７１，４５９が含まれる。
【０００５】
Ａｓｔｕｔｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ  ＮＥＰＨＲＯＣＨＥＣＫ（登録商標）テストシステムは、患者評価の１２時間以内の中程度又は重度の急性腎損傷（ＡＫＩ）に関するリスク評価の補助として、現時点で急性心血管系及び／又は呼吸器系障害に罹患しているか、又は過去２４時間以内に罹患した患者であり、かつ、ＩＣＵ患者である患者において、臨床評価と組み合わせて用いられることが意図されている。ＮＥＰＨＲＯＣＨＥＣＫ（登録商標）テストシステムは、２１歳以上の患者に使用することが意図されている。ＦＤＡは、「腎ストレス」の検出用にＮＥＰＨＲＯＣＨＥＣＫ（登録商標）を承認した。
【０００６】
腎臓のストレス又は腎損傷のバイオマーカーとしてのＴＩＭＰ−２及びＩＧＦＢＰ−７の問題の１つは、損傷に反応して腎臓で生成されないことである。むしろ、それらの尿中上昇は、血漿からの濾過後、尿細管細胞からのそれらの喪失から、これらのタンパク質を再吸収できないことを反映している。さらに、それらの有用性は、腎臓の損傷を測定するための長い間認められている標準の尿中アルブミンよりも優れていることが実証されていない。ＮＥＰＨＲＯＣＨＥＣＫ（登録商標）テストは細胞周期停止テストとして提案されているが、ＮＥＰＨＲＯＣＨＥＣＫ（登録商標）マーカーが腎臓から失われ、細胞周期停止／老化プロセスを引き起こす可能性が非常に低いため、これは正確ではない可能性がある。これらのプロセスは進行性の腎臓（及び他の臓器）の損傷を引き起こすため、医師が新しい治療法を導入できるようにするこれらのプロセスのマーカーを開発することが重要である。
【０００７】
早期腎損傷を示すより安定したバイオマーカーに基づき、さらなる腎損傷の治療法を開発する必要が依然として存在する。特に、「細胞周期停止」として知られる損傷後のプロセスの尿中マーカーを特定する必要がある。これは、「老化」として知られる「早期の組織老化」につながる可能性のあるプロセスである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】米国特許第８７７８６１５号明細書
【特許文献２】米国特許第９８７９０９１号明細書
【特許文献３】米国特許第９８２２１７２号明細書
【特許文献４】米国特許第９７８４７５０号明細書
【特許文献５】米国特許第９７３３２６１号明細書
【特許文献６】米国特許第９６９６３２２号明細書
【特許文献７】米国特許第９４７０６９５号明細書
【特許文献８】米国特許第９４５９２６１号明細書
【特許文献９】米国特許第９４１７２５０号明細書
【特許文献１０】米国特許第９３６６６８３号明細書
【特許文献１１】米国特許第９３６０４８８号明細書
【特許文献１２】米国特許第９２２９０１０号明細書
【特許文献１３】米国特許第９０５７７３５号明細書
【特許文献１４】米国特許第９０２９０９３号明細書
【特許文献１５】米国特許第８９９３２５０号明細書
【特許文献１６】米国特許第８８７１４５９号明細書
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、腎損傷又は腎臓病が進行していることを含む、腎臓病のリスクのある患者又は腎臓移植を受けた患者を治療する方法に関する。これらの方法は、一般に、（ａ）患者のｐ２１のレベルを決定するためのアッセイを実施すること；及び（ｂ）患者がｐ２１のレベルの上昇を示した場合、さらなる腎損傷のリスクを減らすために患者を治療することに関する。治療は、１つ又は複数のステロイド、ＡＣＥ阻害剤、ＮＲＦ２アクティベーター、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、抗酸化剤、アルドステロン拮抗薬、抗炎症薬、抗線維症薬、バソプレシン拮抗薬、ＳＧＬＴ−２阻害薬、免疫抑制剤の投与、臓器保護、又は急性腎損傷治療、腎代替療法の開始、腎臓に損傷を与えることが知られている化合物の送達の中止、腎臓に損傷を与えることが知られている手順の遅延又は回避、及び利尿薬投与の変更の１つ又は複数を含み得る。場合によっては、治療には、１つ又は複数のステロイド、細胞老化遮断薬、ＡＣＥ阻害剤、ＮＲＦ２アクティベーター、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、抗炎症薬、抗線維症薬、バソプレッシン拮抗薬、ＳＧＬＴ−２阻害薬、免疫抑制薬の投与、臓器保護、又は急性腎損傷の治療が含まれる。
【００１０】
一態様では、患者は、鉄又は鉄複合体（例えば、鉄スクロース）と、ヘムタンパク質分解阻害剤（スズプロトポルフィリン、ＳｎＰＰ）との組み合わせで治療され得る。別の態様において、患者は、クルクミノイド製剤で治療され得る。さらに別の態様では、患者はバルドキソロンメチルで治療され得る。
【００１１】
一態様では、患者のｐ２１のレベルを決定するためのアッセイを実施するステップ（ａ）はまた、患者の微量アルブミン、フェリチン、ヘモペキシン、及びハプトグロビンのレベルを決定するためのアッセイを実施することを含む。
【００１２】
一実施形態では、本発明は、（ａ）患者の血清、尿、又は血漿のｐ２１レベルによって示される臓器老化のレベルを決定するためのアッセイを実施すること；及び、（ｂ）患者がｐ２１のレベルの上昇を示す場合、患者の老化を治療することが知られている薬剤の投与量を投与することを含む、急性又は慢性腎臓病及び組織老化の進行のリスクを決定する方法を含み得る。特定の実施形態では、老化を治療することが知られている薬物の投与量は、ｐ２１のレベルが増加していると決定される場合に増加される。
【００１３】
一実施形態では、本発明は、（ａ）患者のｐ２１のレベルを決定するためのアッセイを実施すること；（ｂ）患者の尿中アルブミンのレベルを決定するためのアッセイを実施すること；及び、（ｃ）患者がｐ２１及びアルブミンのレベルの上昇を示す場合、さらなる腎損傷のリスクを減らすために患者を治療（ここで、治療は、１つ又は複数のステロイド、ＡＣＥ阻害剤、ＮＲＦ２アクティベーター、抗酸化剤、アルドステロン拮抗薬、抗炎症薬、抗線維症薬、バソプレシン拮抗薬、ＳＧＬＴ−２阻害剤、免疫抑制剤の投与、臓器保護、又は急性腎損傷治療、腎代替療法の開始、腎臓に損傷を与えることが知られている化合物の送達の中止、腎臓に損傷を与えることが知られている手順の遅延又は回避、及び利尿薬投与の変更を含む）することを含む、将来において腎損傷のリスクがあると決定された患者を治療する方法を含み得る。
【００１４】
一態様では、患者は、鉄又は鉄複合体（例えば、鉄スクロース）と、ヘムタンパク質分解阻害剤（スズプロトポルフィリン、ＳｎＰＰ）との組み合わせで治療され得る。別の態様では、患者は、クルクミノイド製剤で治療され得る。
【００１５】
さらに別の態様では、患者はバルドキソロンメチルで治療され得る。一態様では、患者のｐ２１のレベルを決定するためのアッセイを実施するステップ（ａ）はまた、患者の微量アルブミン、フェリチン、ヘモペキシン、及びハプトグロビンのレベルを決定するためのアッセイを実施することを含む。
【００１６】
一実施形態では、本発明は、（ａ）対象から得られた体液サンプルに存在するｐ２１の測定を含む、腎損傷マーカーを検出するように構成された１つ又は複数のアッセイを実行すること、（ｂ）アッセイ結果を使用することによって、測定されたｐ２１レベルを、対象から体液サンプルが採取されてから７２時間以内に対象が将来の急性腎障害のリスクにさらされる可能性と相関させ、７２時間以内に将来の急性腎障害の既知の素因を有する個体の所定の部分母集団に対象を割り当てること；及び、（ｃ）患者が割り当てられていた個人の所定の部分母集団に基づいて対象を治療（ここで、治療は、１つ又は複数のステロイド、ＡＣＥ阻害剤、ＮＲＦ２アクティベーター、抗酸化剤、アルドステロン拮抗薬、抗炎症薬、抗線維症薬、バソプレシン拮抗薬、ＳＧＬＴ−２阻害薬、免疫抑制薬の投与、臓器保護、又は急性腎損傷治療、腎代替療法の開始、腎臓に損傷を与えることが知られている化合物の送達の中止、腎臓に損傷を与えることが知られている手順の遅延又は回避、及び利尿薬投与の変更の１つ又は複数を含む）することを含む、対象における腎状態を評価するための方法を含み得る。一態様では、患者は、鉄又は鉄複合体（例えば、鉄スクロース）と、ヘムタンパク質分解阻害剤（スズプロトポルフィリン、ＳｎＰＰ）との組み合わせで治療され得る。別の態様において、患者は、クルクミノイド（例えば、テトラヒドロクルクミン）製剤で治療され得る。さらに別の態様では、患者はバルドキソロンメチルで治療され得る。
【００１７】
一実施形態では、本発明は、（ａ）患者のｐ１６ｉｎｋ４ａ、ｐ１９、及びｐ２１のレベルを決定するためのアッセイを実行すること、（ｂ）ｐ１６ｉｎｋ４ａ、ｐ１９、及びｐ２１の相対レベルを考慮して、患者が腎損傷又は腎臓病に罹患しているか否かを決定すること；及び、（ｃ）患者が腎損傷又は腎臓病に罹患していると決定された場合、さらなる腎損傷のリスクを減らすために患者を治療（ここで、治療は、１つ又は複数のステロイド、ＡＣＥ阻害剤、ＮＲＦ２アクティベーター、抗酸化剤、アルドステロン拮抗薬、抗炎症薬、抗線維症薬、バソプレシン拮抗薬、ＳＧＬＴ−２阻害薬、免疫抑制薬の投与、臓器保護、又は急性腎損傷治療、腎代替療法の開始、腎臓に損傷を与えることが知られている化合物の送達の中止、腎臓に損傷を与えることが知られている手順の遅延又は回避、及び利尿薬投与の変更の１つ又は複数を含む）することを含む、腎損傷又は腎臓病が進行しているリスクのある患者を治療する方法を含み得る。患者は、腎臓移植を受けた患者であり得る。
【００１８】
一態様では、患者は、鉄又は鉄複合体（例えば、鉄スクロース）と、ヘムタンパク質分解阻害剤（スズプロトポルフィリン、ＳｎＰＰ）との組み合わせで治療され得る。別の態様において、患者は、クルクミノイド（例えば、テトラヒドロクルクミン）製剤で治療され得る。さらに別の態様では、患者はバルドキソロンメチルで治療され得る。
【００１９】
一態様では、患者のｐ２１のレベルを決定するためのアッセイを実施するステップ（ａ）はまた、患者の微量アルブミン、フェリチン、ヘモペキシン、及びハプトグロビンのレベルを決定するためのアッセイを実施することを含む。
【００２０】
一実施形態では、本発明は、（ａ）患者のｐ１６ｉｎｋ４ａ、ｐ１９、及びｐ２１のレベルを決定するためのアッセイを実行すること；（ｂ）ｐ１６ｉｎｋ４ａ、ｐ１９、及びｐ２１の相対レベルを考慮して、患者が肝臓、腎臓、心臓、又は脳の機能障害、損傷、又は老化に罹患しているか否かを決定することを含む、患者を治療する方法を含み得る。
【００２１】
アッセイステップのいずれかにおいて、アッセイは、（ｉ）患者から体液サンプルを入手すること、（ｉｉ）体液サンプルの全部又は一部を、ｐ２１の検出のために特異的に結合する結合試薬と接触させること、及び、結合試薬へのｐ２１の結合を示すアッセイ結果を決定して、１つ又は複数のアッセイ結果を提供することを含み得る。
【００２２】
一実施形態では、本発明は、腎損傷に罹患している患者に有効量のヒトｐ２１を投与することを含む、腎損傷に罹患している患者を治療する方法を含み得る。ヒトｐ２１は組換えヒトｐ２１であり得る。
【００２３】
一実施形態では、本発明は、腎損傷に罹患している患者に有効量のヒトｐ２１活性化因子を投与することを含む、腎損に罹患している患者を治療する方法を含み得る。ヒトｐ２１活性化因子はテノビン−１を含み得る。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】腎損傷後のいくつかの体液で上昇したｐ２１の増加を示している。
【図２】腎損傷後の経時的なｐ２１の増加を示している。
【図３】加齢に伴って増加するｐ２１を示している。
【図４】腎損傷後の肝臓の老化バイオマーカーと比較したｐ２１を示している。
【図５】腎損傷後の腎臓の老化バイオマーカーと比較したｐ２１を示している。
【図６】腎損傷後の心臓の老化バイオマーカーと比較したｐ２１を示している。
【図７】腎損傷後の脳の老化バイオマーカーと比較したｐ２１を示している。
【図８】腎損傷に関連する心臓及び脳におけるｐ２１発現を示している。
【００２５】
サイクリン依存性キナーゼ阻害剤１、又はＣＤＫ相互作用タンパク質１としても知られる、ｐ２１は、全てのサイクリン／ＣＤＫ複合体を阻害できるサイクリン依存性キナーゼ阻害剤（ＣＫＩ）である。ヒトｐ２１のアミノ酸配列は以下のとおりである。
【００２６】
【化１】
2021526221.tif 000003
【００２７】
Ｐ２１はｐ５３活性の主要な標的を表す。したがって、ＤＮＡ損傷により細胞周期停止に至ることと関連している。これにより、ｐ２１はこのプロセスをテストするための有望な診断分子マーカーとなる。本発明は、急性腎障害又は急性腎不全の早期発見及び治療におけるｐ２１バイオマーカーの使用、並びに関連する細胞周期停止、並びに、好ましくは血漿及び尿の両方におけるｐ２１バイオマーカーの試験キットに関する。本発明者らは、ｐ２１が、状態、特にＡＫＩを含む腎臓に影響を与える状態を治療するために治療的に使用され得ることを見出した。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
本発明は、ｐ２１が、損傷後２時間という早い時期に尿を含むいくつかの体液で上昇し、虚血性損傷後少なくとも２４時間持続するという、発明者による驚くべき発見に基づいていた。図１に示すように、ｐ２１  ｍＲＮＡの増加は、腎損傷後のｐ２１の産生の増加を示している。ｐ２１タンパク質の産生のこの増加は、腎皮質レベルの増加、つまり、ｐ２１の尿中レベルの増加につながる。ｐ２１のいくつかはそれをプラズマにする。驚くべきことに、尿中及び血漿中のレベルは予想外に劇的であり、腎臓細胞損傷／細胞周期停止バイオマーカーとしてのそれらの有用性を強調している。ｐ２１細胞核タンパク質が、細胞死がなければ尿中に漏出するであろうことは、全く予想外である。理論に拘束されることを望まないが、ｐ２１の尿への輸送は、おそらく細胞プロセスであるエキソサイトーシスによって起こり、これにより、細胞はタンパク質産物をパッケージ化し、尿に入る細胞からそれらを輸送する。
【００２９】
血漿と尿の両方でｐ２１バイオマーカーを検出する機能により、尿サンプルは腎臓の状態の診断に日常的に利用されるため、腎障害のバイオマーカーとして特に有利となる。ｐ２１バイオマーカーは、血漿、血清、尿でＥＬＩＳＡを使用して測定できる。あるいは、試験は試験紙上で行うことができる。好ましい実施形態では、ｐ２１は、ｐ２１を捕捉するためにプレートに固定された一次抗体を含むプレートを使用して測定される。その後、プレートに捕捉されたｐ２１を検出するために、２次抗体が適用される。検出抗体には、ＥＬＩＳＡプレートリーダーを使用して定量化できる可視マーカー（西洋ワサビペルオキシダーゼなど）がある。１つの好ましい態様における抗体対は、マウスｐ２１捕捉抗体（部品番号３２０００８６）及びマウスｐ２１検出抗体（部品番号３２０００８７）を含むＡｂｃａｍ＃ａｂ２１２０７２である。試験紙は、血液、尿、又はその他の体液中のｐ２１を検出するために使用できる。
【００３０】
ｐ２１バイオマーカーは、ＡＫＩ後の時間とともに増加し、図２に示すように、少なくとも部分的に老化プロセスに起因する腎疾患進行の潜在的なマーカーとなる。
【００３１】
ｐ２１の１つの様態は、図３に示すように、ｐ２１のベースラインレベルが加齢に伴って増加することである。これらのデータは、健康なマウスで血漿ｐ２１のレベルが時間とともに増加することを示している。データはまた、血漿ｐ２１が腎皮質ｐ２１と密接に相関していることを示している。この情報は、測定されたｐ２１の特定の値が腎損傷を示しているか否かを決定する際に考慮することができる。
【００３２】
加齢に伴ってｐ２１が増加すると、バイオマーカーは健康な人の老化を検出するのにも役立つ。例えば、ｐ２１のベースラインレベルは、年代順の年齢とは異なる可能性のある個人の生物学的年齢を決定する際に利用できる。全てが等しい場合、ｐ２１のレベルが大きく異なる同じ年代の２人は、生物学的年齢が異なると見なされ得る。これは、特定の患者がより積極的な治療オプションに耐える能力を評価するのに役立つ可能性がある。したがって、ｐ２１アッセイを利用して患者の生物学的年齢を決定し、その情報を利用して特定の患者の治療オプションの中から選択することができる。
【００３３】
ｐ２１バイオマーカーは、ｐ１６及びｐ１９アッセイを含む老化の他のバイオマーカーと組み合わせて利用することができる。以下のデータは、健康なマウスの脳、腎臓、心臓、肝臓における老化のこれらのバイオマーカーの進行を、ｍＲＮＡに反映されていることに示している。以下の図４〜７を参照されたい。
【００３４】
別の実施形態では、本発明が、ｐ１６ｉｎｋ４ａ、ｐ１９、及びｐ２１を含む少なくとも３つのバイオマーカーの患者のレベルを試験し、これらのバイオマーカーの患者プロファイルに基づいて、患者が肝臓、腎臓、心臓及び／又は脳の損傷又は老化を受けているか否かを決定することに関する。次の図に示すように、これらの３つのバイオマーカーの反応は、損傷が肝臓、腎臓、心臓、脳のいずれにあるかによって異なる。
【００３５】
本発明は、臓器損傷の独特のマーカーとしてのｐ２１、並びに細胞老化及び細胞周期停止へのその移行に依存している。現在、これらの決定を行うための信頼できる方法はない。ｐ１６及びｐ１９の同時測定は、それらが老化プロセスのマーカーでもあるため、ｐ２１の結果を裏付けるデータを提供する。組織が異なれば、老化を起こしている間、ｐ２１、ｐ１６、ｐ１９の比率も異なる。したがって、血漿、血清、又は尿中のこれらのタンパク質の比率は、腎臓以外の組織（心臓及び脳など）と比較して、老化プロセスを腎臓に局在化させるのに役立つ。そのようにすることによって、これらのアッセイは、特定の臓器標的化にどの治療薬を使用すべきかについての見通しを提供することができる。
【００３６】
一態様では、本発明は、３つのバイオマーカーのプロファイルを検討して、損傷又は老化が腎機能障害に関連しているか否かを決定することに関する。進行中の腎損傷は従来の技術を使用して決定するのが難しい場合があるため、観察されたｐ２１活性が腎機能障害に関連しているか否かを決定する機能は特に有用である。上記のチャートに示されているように、虚血性損傷に起因する腎機能障害は、３つ全てのバイオマーカーの存在の増加を示すが、他の臓器損傷は、３つ全てのバイオマーカーよりも低いレベルの上昇をもたらす。したがって、３つのバイオマーカー全ての分析は、腎臓機能障害、相対的な一般化された臓器機能障害、又は他の臓器損傷に関連するｐ２１活性を指摘することができる。
【００３７】
一態様では、腎損傷のある患者を診断するために使用されるバイオマーカーの組み合わせには、患者のｐ２１のレベルを決定するためのアッセイ、及び患者の微量アルブミン、フェリチン、ヘモペキシン、及びハプトグロビンのレベルを決定するためのアッセイが含まれる。
【００３８】
腎損傷が検出されると、患者はさらなる腎損傷のリスクを減らすために治療を受けることがある。治療は、１つ又は複数のステロイド、ＡＣＥ阻害剤、ＮＲＦ２アクティベーター、抗酸化剤、アルドステロン拮抗薬、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）、抗炎症薬、抗線維症薬、バソプレシン拮抗薬、ＳＧＬＴ−２阻害薬、免疫抑制剤の投与、臓器保護、又は急性腎損傷治療、腎代替療法の開始、腎臓に損傷を与えることが知られている化合物の送達の中止、腎臓に損傷を与えることが知られている手順の遅延又は回避、及び利尿薬投与の変更の１つ又は複数を含み得る。
【００３９】
適切なステロイドには、メチルプレドニゾロン及びプレドニゾロンが含まれ得る。適切なＡＣＥ阻害剤には、ベナゼプリル（Ｌｏｔｅｎｓｉｎ）、カプトプリル（Ｃａｐｏｔｅｎ−製造中止ブランド）、エナラプリル（Ｖａｓｏｔｅｃ、Ｅｐａｎｅｄ）、フォシノプリル（Ｍｏｎｏｐｒｉｌ−製造中止ブランド）、リシノプリル（Ｐｒｉｎｉｖｉｌ、ゼストリル、クブレリス）、モエキシプリラート（Ｕｎｉｖａｓｃ−製造中止ブランド）、ペリンドプリル（Ａｃｅｏｎ）、キナプリル（Ａｃｃｕｐｒｉｌ）、ラミプリル（Ａｌｔａｃｅ）、トランドラプリル（Ｍａｖｉｋ）が含まれる。適切なＮＲＦ２アクティベーターには、バルドキソロン及びスルフォラファン（イソチオシアネート）が含まれる。適切な抗酸化剤には、ビタミンＣ、ビタミンＥ、アルファリポ酸、セレン、及びベータカロチン、リコピン、ルテイン、ゼアキサンチンなどのカロテノイド、及びクルクミノイド（テトラヒドロクルクミン、ターメリック）が含まれる。適切なアルドステロン拮抗薬には、エプレレノン（Ｉｎｓｐｉｒａ）及びスピロノラクトン（Ａｌｄａｃｔｏｎｅ、ＣａｒｏＳｐｉｒ）が含まれる。適切なアンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）には、アジルサルタン（Ｅｄａｒｂｉ）、カンデサルタン（Ａｔａｃａｎｄ）、エプロサルタン、イルベサルタン（Ａｖａｐｒｏ）、ロサルタン（Ｃｏｚａａｒ）、オルメサルタン（Ｂｅｎｉｃａｒ）、テルミサルタン（Ｍｉｃａｒｄｉｓ）、バルサルタン（Ｄｉｏｖａｎ）が含まれる。適切なＡＣＥ阻害剤には、ベナゼプリル（Ｌｏｔｅｎｓｉｎ）、カプトプリル、エナラプリル（Ｖａｓｏｔｅｃ）、フォシノプリル、リシノプリル（Ｐｒｉｎｉｖｉｌ、Ｚｅｓｔｒｉｌ）、モエキシプリル、ペリンドプリル（Ａｃｅｏｎ）、キナプリル（Ａｃｃｕｐｒｉｌ）、ラミプリル（Ａｌｔａｃｅ）、又はトランドラプリル（Ｍａｖｉｋ）が含まれる。適切なバソプレシン拮抗薬には、トルバプタン及びコニバプタンが含まれる。適切なＳＧＬＴ−２阻害剤には、カナグリフロジン（Ｉｎｖｏｋａｎａ）、ダパグリフロジン（Ｆａｒｘｉｇａ）、エンパグリフロジン（Ｊａｒｄｉａｎｃｅ）、エンパグリフロジン／リナグリプチン（Ｇｌｙｘａｍｂｉ）、エンパグリフロジン／メトホルミン（Ｓｙｎｊａｒｄｙ）、及びダパグリフロジン／メトホルミン（Ｘｉｇｄｕｏ  ＸＲ）が含まれる。適切な免疫抑制剤には、コルチコステロイド、ヤヌスキナーゼ阻害剤、カルシニューリン阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＩＭＤＨ阻害剤、生物製剤、及びモノクローナル抗体を含むことができる。免疫抑制剤の特定の例には、プレドニゾン（Ｄｅｌｔａｓｏｎｅ、Ｏｒａｓｏｎｅ）、ブデソニド（Ｅｎｔｏｃｏｒｔ  ＥＣ）、プレドニゾロン（Ｍｉｌｌｉｐｒｅｄ）、トファシチニブ（Ｘｅｌｊａｎｚ）、シクロスポリン（Ｎｅｏｒａｌ、Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ、ＳａｎｇＣｙａ）、タクロリムス（Ａｓｔａｇｒａｆ  ＸＬ、Ｅｎｖａｒｓｕｓ  ＸＲ、Ｐｒｏｇｒａｆ）、アザチオプリン（Ａｚａｓａｎ、Ｉｍｕｒａｎ）、レフルノミド（Ａｒａｖａ）、ミコフェノール酸（ＣｅｌｌＣｅｐｔ、Ｍｙｆｏｒｔｉｃ）、アバタセプト（Ｏｒｅｎｃｉａ）、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ）、アナキンラ（Ｋｉｎｅｒｅｔ）、���ルトリズマブ（Ｃｉｍｚｉａ）、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ）、ゴリムマブ（Ｓｉｍｐｏｎｉ）、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ）、イキセキズマブ（Ｔａｌｔｚ）、ナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ）、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ）、セクキヌマブ（Ｃｏｓｅｎｔｙｘ）、トシリズマブ（Ａｃｔｅｍｒａ）、ウステキヌマブ（Ｓｔｅｌａｒａ）、ベドリズマブ（Ｅｎｔｙｖｉｏ）、バシリキシマブ（Ｓｉｍｕｌｅｃｔ）、及びダクリズマブ（Ｚｉｎｂｒｙｔａ）を含むことができる。適切な臓器保護剤は、好ましくは腎保護剤であり、フロセミド、ドーパミン、テオフィリン、マンニトール、カルシウムチャネル遮断薬、α２アドレナリン受容体アゴニスト、強心配糖体、ナトリウム利尿ペプチド、プロスタグランジン（ＰＧＥ２、プロスタサイクリン、ミストプロストル）、一酸化窒素シンテターゼ阻害剤（Ｌ−ＮＭＭＡ）、カテコールアミン（アドレナリン、ノルアドレナリン、ドブタミン、ドペキサミン）、血管内容積充填、及び成長因子（ＩＧＦ１、表皮成長因子、肝細胞成長因子）を含む他の薬剤、ブラジキニン、マグネシウム、エンドセリン−１拮抗薬、及び低用量エンドセリン−１を含むことができる。適切な急性腎損傷の治療には、上記の薬剤の多く、並びに、抗アポトーシス／壊死剤（カスパーゼ阻害剤、ミノサイクリン、グアノシン及びピフィスリン−α（ｐ５３阻害剤）、ポリＡＤＰ−リボースポリメラーゼ阻害剤）、フリーラジカルスカベンジャー（デフェロキサミン）、防腐剤（ピルビン酸エチル、活性化プロテインＣ、インスリン）、成長因子（組換えエリスロポエチン、肝細胞成長因子）、血管拡張剤（一酸化炭素放出化合物及びビリルビン、エンドセリン拮抗薬）、抗炎症薬（例：スフィンゴシン１リン酸（Ｓ１Ｐ）アナログ、選択的Ａ２ＡＲアゴニスト、誘導型一酸化窒素合成酵素阻害剤）、及び好中球ゼラチナーゼ関連リポカリンを含む他の化合物、ＩＬ−６及びＣ５ａ拮抗薬、ＩＬ−１０、及びα−メラノサイト刺激ホルモンが含まれる。適切なＡＲＢには、アジルサルタン（Ｅｄａｒｂｉ）、カンデサルタン（Ａｔａｃａｎｄ）、エプロサルタン、イルベサルタン（Ａｖａｐｒｏ）、ロサルタン（Ｃｏｚａａｒ）、オルメサルタン（Ｂｅｎｉｃａｒ）、テルミサルタン（Ｍｉｃａｒｄｉｓ）、バルサルタン（Ｄｉｏｖａｎ）が含まれる。適切なＡＣＥ阻害剤には、ベナゼプリル（Ｌｏｔｅｎｓｉｎ）、カプトプリル、エナラプリル（Ｖａｓｏｔｅｃ）、フォシノプリル、リシノプリル（Ｐｒｉｎｉｖｉｌ、Ｚｅｓｔｒｉｌ）、モエキシプリル、ペリンドプリル（Ａｃｅｏｎ）、キナプリル（Ａｃｃｕｐｒｉｌ）、ラミプリル（Ａｌｔａｃｅ）、又はトランドラプリル（Ｍａｖｉｋ）が含まれる。
【００４０】
一態様では、上記の方法に従って腎損傷が検出された患者は、鉄又は鉄複合体（例えば、鉄スクロース）と、ヘムタンパク質分解阻害剤（スズプロトポルフィリン、ＳｎＰＰ）の組み合わせで治療され得る。これらの治療法は、Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ，  Ｋｉｔｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｔｏ  Ｉｎｄｕｃｅ  Ａｃｑｕｉｒｅｄ  Ｃｙｔｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  Ｕｓｉｎｇ  Ｓｔｒｅｓｓ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎｄｕｃｅｒｓと題される、米国特許第９，８４４，５６３号にさらに記載されており、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。’５６３特許に記載されている治療法により、予見される損傷の前に臓器を保護することができる。患者が腎損傷と診断された場合、例えば、鉄スクロース及びＳｎＰＰを投与して、さらなる損傷のリスクを低減することができる。
【００４１】
別の態様では、上記の方法に従って腎損傷が検出された患者は、クルクミノイド（例えば、テトラヒドロクルクミン）製剤で治療することができる。これらの治療法は、Ｄｅｕｔｅｒａｔｅｄ  ｏｒ  ａ  Ｎｏｎ−Ｄｅｕｔｅｒａｔｅｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓと題される、米国特許第９，３７５，４０８号にさらに記載されている。‘４０８特許に記載されている治療法により、テトラヒドロクルクミン（ＴＨＣｕ）製剤を投与することにより、腎損傷の進行を予防又は遅らせることができる。一態様では、ＴＨＣｕはリポソーム中に製剤化されている。
【００４２】
さらに別の態様では、上記の方法に従って腎損傷が検出された患者は、バルドキソロンメチル（ＲＴＡ  ４０２）で治療することができる。この化合物は、“Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓ  ａｎｄ  ｍｅｔｈｏｄ  ｏｆ  ｕｓｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｄｉｓｅａｓｅ．”と題される、米国特許第８，４５５，５４４号に記載されている。バルドキソロンメチルは、炎症及び癌関連の適応症の臨床開発における抗酸化炎症モジュレーター（ＡＩＭ）であり、炎症組織の酸化還元ホメオスタシスを回復することによって免疫性炎症を抑制する。それは細胞保護転写因子Ｎｒｆ２を誘導し、酸化促進性及び炎症性転写因子ＮＦ−κＢ及びＳＴＡＴ３の活性を抑制する。インビボでは、ＲＴＡ  ４０２は、シスプラチンモデルの腎障害及び虚血再灌流モデルの急性腎障害など、炎症のいくつかの動物モデルで有意な単剤抗炎症活性を示している。さらに、ＲＴＡ  ４０２で治療された患者では、血清クレアチニンの有意な低下が観察されている。
【００４３】
ｐ２１バイオマーカーの別の態様は、その存在が加齢に伴って自然に増加することである。したがって、それを超えると腎損傷の可能性が高いと考えられるｐ２１のベースラインレベルを決定する際に、患者の年齢を考慮に入れることができる。例えば、若い患者は、ｐ２１血漿レベルが２００ｐｇ／ｍｌを超える腎損傷に罹患している可能性があると見なされる場合があるが、高齢患者は、腎損傷の可能性が高いと見なすには、４００ｐｇ／ｍｌを超えるｐ２１血漿レベルを必要とする場合がある。いずれの場合も、ｐ２１レベルは、腎損傷後数時間以内にベースラインレベルを下回るレベルまで上昇していなければならない。例えば、損傷の場合、７００ｐｇ／ｍｌ又は２０００ｐｇ／ｍｌを超えるレベルが予想される。または、腎損傷の可能性が高いと考えられるｐ２１のベースラインレベルは、高齢患者で観察される自然レベルによって設定され得る。
【００４４】
別の実施形態では、介入のレベルは、測定されたｐ２１バイオマーカーのレベルに合わせて調整される場合がある。例えば、ｐ２１レベルがベースラインをわずかに上回っている患者では、介入は、腎臓に損傷を与えることが知られている化合物の送達の中止、腎臓に損傷を与えることが知られている手順の遅延又は回避、及び利尿薬の投与の変更に限定され得る。  血漿中の６０ｐｇ／ｍｌを超えるレベルなど、より高いレベルのｐ２１によってさらなる腎損傷が示される場合、治療には、１つ又は複数のステロイド、ＡＣＥ阻害剤、ＮＲＦ２アクティベーター、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬、抗酸化剤、アルドステロン拮抗薬、抗炎症薬、抗線維症薬、バソプレシン拮抗薬、ＳＧＬＴ−２阻害薬、免疫抑制薬の投与、臓器保護、又は急性腎損傷治療が含まれ得るか、あるいはまた、腎代替療法の開始が含まれる場合もある。
【実施例】
【００４５】
図８に示すように、心臓及び脳におけるＰ２１の発現は腎損傷に関連している。腎虚血は、再灌流又は偽手術、すなわち腎損傷のない手術によって誘発された。３つの臓器のｐ２１レベルは、再灌流又は偽手術の１８時間後に測定された。虚血は腎臓ｐ２１を６倍増加させた。しかしながら、驚くべきことに、腎不全（ＢＵＮとクレアチニン（Ｃｒ）の増加で示される）もまた心臓及び脳のｐ２１  ｍＲＮＡを２倍にした。そのため、腎損傷は非腎器官でｐ２１遺伝子の活性化を引き起こす。
【００４６】
近位尿細管をマウスの腎臓から分離し、インキュベートした。酸素欠乏への曝露により、シミュレートされた虚血性損傷が誘発された。３０分以内に単離された細胞からｐ２１漏出の３倍の増加が起こり、漏出の程度は細胞死の程度とよく相関している。ＡＴＰの細胞を枯渇させると、核がｐ２１を保持することが不可能になり、これはおそらくエネルギーに依存するプロセスであると信じられている。次のグラフは、虚血性損傷後のｐ２１放出の増加率を示している。
【００４７】
【表１】
2021526221.tif 000004
【００４８】
これらのデータは、細胞傷害が細胞核から細胞外（尿）空間へのｐ２１の尿細管細胞放出を引き起こすことを証明している。ｐ２１は核から放出され、尿だけでなく血液にも浸透するため、細胞核及び、おそらくＤＮＡの損傷を示す能力において、他のバイオマーカーより優れている。さらに、血液及び尿中のｐ２１の検出可能性により、ポイントオブケア検出及び定量化が可能となる。
【００４９】
本発明はまた、患者の尿中のｐ２１のレベルを測定するための尿検査装置を含む。上記のように、尿中のｐ２１バイオマーカーを検出する能力は、尿サンプルが腎臓の状態の診断に日常的に利用されるため、腎障害のバイオマーカーとして特に有利となる。尿検査装置には、２つの抗体を含むテストストリップが含まれている。各抗体は、ｐ２１タンパク質の異なる部位に向けられる。１つの抗体がディップスティックに埋め込まれ、血漿、血清、又は尿サンプルのｐ２１に結合又は捕捉する。ディップスティックをサンプルに数分間曝露させ、ｐ２１を結合させた後、ディップスティックを洗浄し（生理食塩水に１〜２秒間浸し）、検出可能な読み出しがバインドされている（定義される）二次抗体を含む溶液にスティックを入れる。その後、読み出し分子（例えば、蛍光シグナル）が、蛍光シグナルを読み取ることができるデバイスで定量化される。
【００５０】
本発明はまた、患者の血液中のｐ２１のレベルを測定するための血液検査装置を含む。上記のように、血液中のｐ２１バイオマーカーを検出する能力は、血液サンプルが腎臓の状態の診断に日常的に利用されるため、腎障害のバイオマーカーとして特に有利となる。このデバイスは、血液滴を処理するか、又は、糖尿病患者の血糖値を測定するための既知のデバイスと同様のピン刺しを利用することができる。血液検査装置は、上記のように２つの抗体を含む試験ストリップを含む。あるいは、ｐ２１のレベルは、臨床検査室が利用可能な状況でネフィロメトリーを使用して臨床検査室で行うことができる。
【００５１】
別の態様では、ｐ２１バイオマーカーは、既知のＡＫＩバイオマーカーと組み合わせることができる。既知のＡＫＩバイオマーカーは３つのカテゴリーに分類される。最初のグループには、早期ＡＫＩに反応して尿中に放出される構成的に発現する近位尿細管タンパク質が含まれる。例としては、リソソーム酵素Ｎ−アセチルβ−グルコサミニダーゼ（ＮＡＧ）、細胞質ゾルタンパク質乳酸デヒドロゲナーゼ、又は刷子縁タンパク質ｇｐ３３０（以前は腎尿細管上皮抗原と呼ばれていた）がある。２番目のグループには、尿細管の「ストレス分子」が含まれる。これは、遺伝子転写（ｍＲＮＡの上昇）、タンパク質の翻訳、そして最終的には尿路へのタンパク質の放出の増加で損傷に反応する。好中球ゼラチナーゼ関連リプカリン（ＮＧＡＬ）及びＫＩＭ−１は、おそらくこのカテゴリー内で最もよく知られている分子であるが、他の例（ヘムオキシゲナーゼ１［ＨＯ−１］、α−フェトプロテイン、ハプトグロビン）も存在する。３番目のカテゴリーには、糸球体によって自由にろ過される低分子量タンパク質（β２−ミクログロブリン、リゾチーム、α１−ミクログロブリン、軽鎖、シスタチンｃなど）が含まれる。これらのバイオマーカーは異なる病態生理学的経路を反映するため、組み合わせバイオマーカーとしてｐ２１と組み合わせて有利に使用することができる。
【００５２】
ｐ２１タンパク質は、様々な腎臓病を治療するための治療薬としても使用できる。この場合、ヒトｐ２１タンパク質は、組換え技術を使用して産生され、腎臓病を治療するために静脈内又は筋肉内経路を介して投与され得る。治療上有効な用量は、投与時に、患者の尿細管ｐ２１のレベルが、その発現を軽減するために、損傷時に自然に存在するレベルよりも高くなるようなものでなければならない。投与は、手術の場合など、損傷の直前に行うことができ、または一般に、損傷が発生しているか、又は予想される臓器のｐ２１レベルを上げるために使用することができる。これは、細胞が保護タンパク質としてｐ２１を作るためである。組換えｐ２１は、例えば、ａｂｃａｍ、１  Ｋｅｎｄａｌｌ  Ｓｑｕａｒｅ、Ｓｕｉｔｅ  Ｂ２３０４、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ  ０２１３９−１５１７  ＵＳＡから入手できる。
【００５３】
ｐ２１タンパク質は、腎臓細胞でのｐ２１産生レベルの上昇を引き起こす薬剤の投与によっても誘導される可能性がある。テノビン−１は、細胞周期停止のｐ２１活性化因子及び誘導因子である。Ｗｉｌｋｉｎｇ、Ｍ．Ｊ．、Ｓｉｎｇｈ、Ｃ．、Ｎｉｈａｌ、Ｍ．、Ｚｈｏｎｇ、Ｗ．＆Ａｈｍａｄ、Ｎ．ＳＩＲＴ１デアセチラーゼはヒトメラノーマで過剰発現しており、その小分子阻害はｐ５３の活性化を介して抗増殖反応をもたらす。Ａｒｃｈ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  ５６３，  ９４―１００  （２０１４）。本実施形態は、患者の腎臓病を治療するために、それを必要とする患者に治療有効量でテノビン−１を投与することを含む。
【００５４】
本発明の他の実施形態及び使用は、本明細書に開示される本発明の仕様及び実施を考慮することから当業者には明らかであろう。全ての米国並びに、外国の特許及び特許出願を含む、本明細書で引用された全ての参考文献は、参照により本明細書に具体的かつ完全に組み込まれる。本明細書及び実施例は、以下の特許請求の範囲によって示される本発明の真の範囲及び精神を用いて、例示のみと見なされることが意図されている。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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