(57)【要約】本出願は、一般式（Ｉ）で表されるＣＤ７３阻害剤およびその類似体、これらの化合物を含む医薬組成物、それらを調製する方法、ならびに、ＣＤ７３活性に関連する疾患または状態、例えばさまざまな癌の治療のための治療薬としてのこれらの化合物の使用を開示する。【化１】2021535102.tif 000074
2021535102.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2021535102.tif 000056
の化合物、または互変異性体、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグ；
式中：
Ｙは、ＯまたはＳであり；
Ｚは、ＯまたはＮＨであり；
Ｗは、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、ＮＲａおよびＣ（Ｒｂ）２からなる群から選択され、ここでＲａはアルキルであり、Ｒｂは各出現にて、水素、ハロゲン、アルキルおよびアルケニルからなる群から独立して選択され；
Ｇ１およびＧ２は、それぞれ独立してＮまたはＣＲｃであり、ここでＲｃは、水素、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され；
Ｇ３およびＧ４は、Ｃ、ＣＨ、ＣＨ２、Ｎ、ＮＨ、Ｏ、ＳおよびＳＯ２からなる群からそれぞれ独立して選択され；
Ｑは、−ＣＨ２−Ｏ−Ｃ（Ｒｓ）（Ｒｔ）−、−ＣＨ２−Ｎ（Ｒｍ）−Ｃ（Ｒｓ）（Ｒｔ）−、−ＣＨ２−Ｓ−Ｃ（Ｒｓ）（Ｒｔ）−、−ＣＨ２−Ｓ（Ｏ）２−Ｃ（Ｒｓ）（Ｒｔ）−、−フェニル−Ｏ−Ｃ（Ｒｓ）（Ｒｔ）−、−ＣＨ２−フェニル−Ｏ−Ｃ（Ｒｓ）（Ｒｔ）−、−ＣＨ２−ヘテロシクリル−、−Ｃ（Ｒｍ）（Ｒｎ）−、−ＣＨ２−Ｃ（Ｒｍ）（Ｒｎ）−Ｃ（Ｒｓ）（Ｒｔ）−、−Ｃ（Ｒｓ）＝Ｃ（Ｒｔ）−、−Ｃ（Ｒｍ）（Ｒｎ）−Ｃ（Ｒｓ）（Ｒｔ）−、−Ｃ（Ｒｍ）（Ｒｎ）−Ｃ（Ｒｓ）＝Ｃ（Ｒｔ）−および−Ｃ（Ｒｓ）＝Ｃ（Ｒｔ）−Ｃ（Ｒｍ）（Ｒｎ）からなる群から選択され；
Ｒｓ、Ｒｔ、ＲｍおよびＲｎは、Ｈ、Ｄ、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキルおよびアミノからなる群からそれぞれ独立して選択されるか；または
任意の−Ｃ（Ｒｓ）（Ｒｔ）−中のＲｓおよびＲｔは、一緒にオキソを形成するか；または
ＲｍおよびＲｎは、一緒にオキソを形成し；
環Ａは、Ｃ５−８シクロアルキル、５〜８員ヘテロシクリル、アリール縮合Ｃ５−８シクロアルキル、ヘテロアリール縮合Ｃ５−８シクロアルキル、アリール縮合５〜８員ヘテロシクリルおよびヘテロアリール縮合５〜８員ヘテロシクリルからなる群から選択され；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、ヒドロキシ、水素、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、シアノ、アミノ、アジド基およびＯＲ１０からなる群からそれぞれ独立して選択されるか；または
Ｒ１およびＲ２は、それらが結合している炭素原子と一緒に、シクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成し、当該ヘテロシクリルは、Ｎ、ＯおよびＳからなる群から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を含み；かつ、当該シクロアルキルおよびヘテロシクリルは、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、シアノ、アミノ、ニトロ、シクロアルキルおよびヘテロシクリルからなる群から独立して選択される１つ以上の置換基によってそれぞれ任意に置換され；
Ｒ５は、水素、ハロゲン、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、シアノ、アミノ、ニトロおよびアジドからなる群から選択され；
Ｒ６およびＲ７は、水素、アルキル、アリール、−Ｃ（ＲｍＲｎ）−アリール、−Ｃ（ＲｍＲｎ）−Ｏ−Ｃ（Ｏ）ＯＲｄ、−Ｃ（ＲｍＲｎ）−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｒｄ、−Ｃ（ＲｍＲｎ）Ｃ（Ｏ）ＯＲｄ、シクロアルキル、複素環、アリールおよびヘテロアリールからなる群からそれぞれ独立して選択され、当該アルキルは、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から独立して選択される１つ以上の置換基によって任意に置換され；任意に、Ｒ６およびＲ７は、一緒に５〜６員の複素環を形成し；
Ｒｄは、水素、アルキルおよびアルコキシからなる群から選択され；
Ｒ８は、水素、ハロゲン、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、シアノ、アミノ、ニトロ、アジド、シクロアルキルおよびヘテロシクリルからなる群から選択され；
Ｒ９は、水素、ハロゲン、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、シアノ、アミノ、ニトロ、アジド、シクロアルキルおよびヘテロシクリルからなる群から選択され；
Ｒ１０は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１１、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１１および−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ６）（ＯＲ７）からなる群から選択され；
Ｒ１１は、水素、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシルおよびヒドロキシアルキルからなる群から選択され；
ｍは、１、２または３であり；および
ｓは、０、１、２、３または４である。
【請求項２】
式（ＩＩ）：
【化２】
2021535102.tif 000057
の化合物、または互変異性体、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグである、請求項１に記載の化合物；
式中：
Ｚ、Ｙ、Ｗ、Ｑ、Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４、環Ａ、Ｒ１〜Ｒ９、ｍおよびｓは、請求項１に記載のとおりである。
【請求項３】
式（ＩＩＩ）：
【化３】
2021535102.tif 000058
の化合物、または互変異性体、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグである、請求項１または２に記載の化合物；
式中：
Ｚ、Ｑ、Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４、環Ａ、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ６〜Ｒ９、ｍおよびｓは、請求項１に記載のとおりである。
【請求項４】
Ｑは、−ＣＨ２−Ｏ−Ｃ（Ｒｓ）（Ｒｔ）−、−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｒｓ）（Ｒｔ）−、−ＣＨ２−Ｓ−Ｃ（Ｒｓ）（Ｒｔ）−、−ＣＨ２Ｓ（Ｏ）２−Ｃ（Ｒｓ）（Ｒｔ）−、−フェニル−Ｏ−Ｃ（Ｒｓ）（Ｒｔ）−、−ＣＨ２−フェニル−Ｏ−Ｃ（Ｒｓ）（Ｒｔ）−および−ＣＨ２−ヘテロシクリル−からなる群から選択され；および、ここでＲｓおよびＲｔは、請求項１に記載のとおりである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物、または互変異性体、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグ。
【請求項５】
Ｒ２およびＲ４は、それぞれ水素であり；および、Ｒ１およびＲ３は、ヒドロキシ、水素、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ハロアルキル、ハロアルコキシおよびヒドロキシアルキルからなる群からそれぞれ独立して選択される、請求項１、２および４のいずれか一項に記載の化合物、または互変異性体、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグ。
【請求項６】
式（ＩＶ）：
【化４】
2021535102.tif 000059
の化合物、またはその互変異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物、または互変異性体、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグ；
式中：
Ｍは、Ｏ、Ｓ、ＳＯ２、ＮＨおよび−フェニレン−Ｏからなる群から選択され；および
環Ａ、Ｇ３、Ｇ４、Ｒ８、Ｒ９、ｍおよびｓは、請求項１に記載のとおりである。
【請求項７】
【化５】
2021535102.tif 000060
は、
【化６】
2021535102.tif 000061
からなる群から選択され；および、Ｒ９およびｓは、請求項１に記載のとおりである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物、または互変異性体、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグ。
【請求項８】
Ｒ６およびＲ７は、水素、アルキルおよび−Ｃ（ＲｍＲｎ）−Ｏ−Ｃ（Ｏ）ＯＲｄからなる群からそれぞれ独立して選択される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物、または互変異性体、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグ。
【請求項９】
Ｒ８は、水素、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ハロアルキルおよびハロアルコキシからなる群から選択される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物、または互変異性体、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグ。
【請求項１０】
Ｒ９は、水素、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ハロアルキルおよびハロアルコキシからなる群から選択される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物、または互変異性体、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグ。
【請求項１１】
式（Ｖ）：
【化７】
2021535102.tif 000062
の化合物である、請求項１に記載の化合物、または互変異性体、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグ；
式中：
Ｒ６およびＲ７は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリール、−Ｃ（ＲｍＲｎ）−アリール、−Ｃ（ＲｍＲｎ）−Ｏ−Ｃ（Ｏ）ＯＲｄおよび−Ｃ（ＲｍＲｎ）−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｒｄからなる群からそれぞれ独立して選択され、当該アルキルは、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、５〜１０員ヘテロシクリル、Ｃ６−Ｃ１０アリールおよび５〜１０員ヘテロアリールからなる群から選択される１つ以上の基によって任意に置換され；
ＲｍおよびＲｎは、Ｈ、Ｄ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキルおよびＣ１−Ｃ４ハロアルコキシからなる群からそれぞれ独立して選択され；
ＲｄはＣ１−Ｃ６アルキルであり；
Ｒ８は、水素、ハロゲンおよびＣ１−Ｃ４アルキルからなる群から選択され；
【化８】
2021535102.tif 000063
は、
【化９】
2021535102.tif 000064
からなる群から選択され；
ｓは、０、１または２であり；および
Ｒ９は各出現にて、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキルおよびＣ１−Ｃ４ハロアルコキシからなる群から独立して選択される。
【請求項１２】
Ｒ６およびＲ７は、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、フェニル、−ＣＨ（Ｒｍ）−Ｏ−Ｃ（Ｏ）ＯＲｄおよび−ＣＨ（Ｒｍ）−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｒｄからなる群からそれぞれ独立して選択され；
Ｒｍは、Ｈ、ＤまたはＣ１−Ｃ４アルキルであり；
Ｒｄは、Ｃ１−Ｃ６アルキルであり；
Ｒ８は、水素またはハロゲンであり；
【化１０】
2021535102.tif 000065
は、
【化１１】
2021535102.tif 000066
からなる群から選択され；
ｓは、０、１または２であり；および
Ｒ９は各出現にて、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキルおよびＣ１−Ｃ４アルコキシからなる群から独立して選択される、請求項１１に記載の化合物、または互変異性体、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグ。
【請求項１３】
前記化合物は、以下：
【化１２−１】
2021535102.tif 000067
【化１２−２】
2021535102.tif 000068
からなる群から選択される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物、または互変異性体、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグ。
【請求項１４】
式（ＩＡ）：
【化１３】
2021535102.tif 000069
の化合物、または互変異性体、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグ；
式中：
ＺはＯであり；
Ｒｘはアルキルであり；および
Ｙ、Ｗ、Ｑ、Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４、環Ａ、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８、Ｒ９、ｍおよびｓは、請求項１に記載のとおりである。
【請求項１５】
式（ＩＶＡ）：
【化１４】
2021535102.tif 000070
の化合物、または互変異性体、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグである、請求項１４に記載の化合物；
式中：
Ｒｘはアルキルであり；
ＭはＯであり；および
環Ａ、Ｇ３、Ｇ４、Ｒ８、Ｒ９、ｍおよびｓは、請求項１２に記載のとおりである。
【請求項１６】
以下：
【化１５】
2021535102.tif 000071
からなる群から選択される、請求項１４または１５に記載の化合物。
【請求項１７】
以下のステップを含む、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物を調製するためのプロセス：
【化１６】
2021535102.tif 000072
式（ＩＡ）の化合物を反応させて保護基Ｒｘおよびアセタールを除去して、式（Ｉ）の化合物を得るステップ；
式中：
Ｒｘはアルキルであり；
ＺはＯであり；
Ｒ６およびＲ７は、それぞれ水素であり；
Ｒ１およびＲ３は、それぞれヒドロキシであり；および
Ｙ、Ｗ、Ｑ、Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４、環Ａ、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８、Ｒ９、ｍおよびｓは、請求項１に記載のとおりである。
【請求項１８】
以下のステップを含む、請求項６に記載の式（ＩＶ）の化合物を調製するためのプロセス：
【化１７】
2021535102.tif 000073
式（ＩＶＡ）の化合物を反応させて保護基Ｒｘおよびアセタールを除去して、前記式（ＩＶ）の化合物を得るステップ；
式中：
Ｒｘはアルキルであり；
ＭはＯであり；および
環Ａ、Ｇ３、Ｇ４、Ｒ８、Ｒ９、ｍおよびｓは、請求項６に記載のとおりである。
【請求項１９】
治療有効量の請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグと、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤および／または賦形剤とを含む、医薬組成物。
【請求項２０】
ＣＤ７３を含む生物学的サンプルを、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグ、または請求項１９に記載の医薬組成物と接触させることを含む、ＣＤ７３を阻害する方法。
【請求項２１】
それを必要とする対象に、治療有効量の請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグ、または請求項１９に記載の医薬組成物を投与することを含む、アデノシンまたはアデノシン受容体関連の疾患または障害を治療するための方法。
【請求項２２】
それを必要とする対象に、治療有効量の請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグ、または請求項１９に記載の医薬組成物を投与することを含む、ＣＤ７３によって媒介される疾患または状態を治療するための方法であって、前記疾患または状態は、腫瘍、癌、免疫関連疾患、炎症関連疾患、神経系疾患、神経変性疾患および中枢神経系疾患、うつ病、パーキンソン病、脳および心臓の虚血性疾患、睡眠障害ならびに線維症からなる群から選択される、方法。
【請求項２３】
癌は、黒色腫、脳腫瘍、食道癌、胃癌、肝臓癌、膵臓癌、結腸直腸癌、肺癌、腎臓癌、乳癌、卵巣癌、子宮癌（ｍｅｔｒｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）、子宮内膜症、前立腺癌、皮膚癌、神経芽細胞腫、肉腫、骨軟骨腫、骨腫、骨肉腫、セミノーマ、精巣腫瘍、子宮癌（ｕｔｅｒｉｎｅ  ｃａｎｃｅｒ）、頭頸部癌、多発性骨髄腫、リンパ腫、真性赤血球増加症、白血病、甲状腺腫瘍、尿管腫瘍、膀胱癌、胆嚢癌、胆管癌、絨毛上皮癌および小児腫瘍からなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
アデノシンおよびアデノシン受容体関連の疾患または障害を治療するための薬剤の製造における、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグ、または請求項１９に記載の医薬組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【０００１】
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）の下で、２０１８年８月２８日に出願された米国仮特許出願第６２／７２３，６２３号に基づく優先権を主張し、その開示は参照によりその全体が本明細書に援用される。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、新規ヌクレオシドおよびヌクレオチド類似体、ＣＤ７３によって媒介される癌および他の疾患の治療のためのＣＤ７３阻害剤として有用なこれらの化合物を含む医薬組成物、ならびにこれらの化合物および組成物を調製する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
ＣＤ７３（エクト−５’−ヌクレオチダーゼとしても知られる）は、グリコシルホスファチジルイノシトール結合を介して細胞膜に固定される細胞表面酵素であり、さまざまな組織、特に結腸、腎臓、脳、肝臓、心臓、肺、脾臓、リンパ節、および骨髄で発現する（Ａｎｔｏｎｉｏｌｉ，  Ｌ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｍｏｌ．  Ｍｅｄ．，  ２０１３年，  １９，  ３５５−３６７頁）。ＣＤ７３の酵素活性は、ヌクレオシド一リン酸の対応するヌクレオシドへの（例えば、５−ＡＭＰのアデノシンへの）細胞外脱リン酸化を触媒することである。ＣＤ７３は、主にその酵素ヌクレオシド生成物、特に細胞外空間内のアデノシンを介して生理学的影響を及ぼし、該生理学的影響には、上皮イオンおよび体液輸送、組織バリア機能制御、低酸素への適応、虚血性プレコンディショニング、抗炎症、および免疫抑制シグナル伝達が含まれる（Ｃｏｌｇａｎ，  Ｓ．Ｐ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｕｒｉｎｅｒｇｉｃ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，  ２００６年，  ２，  ３５１−３６０頁）。
【０００４】
アデノシンは、神経調節特性を有する遍在する細胞外シグナル伝達分子として、アデノシン受容体（受容体サブタイプ：Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ、およびＡ３）との相互作用を介して人体に幅広い生理学的反応をもたらし、該生理学的反応には、心血管系における血管拡張特性および房室伝導抑制特性; 中枢神経系における鎮静効果、局所ニューロン興奮性抑制効果、抗けいれん効果、および神経保護効果（Ｄｕｎｗｉｄｄｉｅ，  Ｔ．Ｖ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ２００１年，  ２４，  ３１−５５頁）；呼吸器系における気管支収縮効果（Ｐａｕｗｅｌｓ，  Ｒ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  １９９３年，  ２８，  ３１８−３２１頁）；および免疫系における免疫／炎症反応の仲介（Ｈａｓｋｏ，  Ｇ．，  ｅｔ  ａｌ．，  “Ａ  Ｋｅｙ  Ｌｉｎｋ  ｂｅｔｗｅｅｎ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ａｎｄ  Ｂｒａｉｎ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ”，  ２０１３年，  ２３３−２５１頁）が含まれる。
【０００５】
ＣＤ７３は多くの種類の癌で広く発現しており（Ａｎｔｏｎｉｏｌｉ，  Ｌ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ，  ２０１６年，  ２（２），  ９５−１０９頁）、多くの種類の癌の予後不良に関連している（Ａｌｌａｒｄ，  Ｄ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，  ２０１６年，  ８（２），  １４５−１６３頁）。ＣＤ７３は、癌の転移（Ｙａｎｇ，  Ｑ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐａｔｈｏｌ．  Ｏｎｃｏｌ．  Ｒｅｓ．，  ２０１３年，  １９，  ８１１−８１４頁）および化学療法抵抗性（Ｌｏｉ，  Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．，  ＰＮＡＳ，  ２０１３年，  １１０（２７），  １１０９１−１１０９６頁）を促進する。免疫系において、ＣＤ７３は、マクロファージ、リンパ球、制御性Ｔ細胞、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、および樹状細胞の表面に見られる。主にＣＤ７３によって産生される細胞外アデノシンは、腫瘍微小環境に慢性的に蓄積し、アデノシン受容体を活性化し、腫瘍誘発性単核食細胞を促進し、抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節解除し、ＭＤＳＣ集団を拡大し、免疫抑制を引き起こし、免疫監視からの癌細胞の脱出を促進し、したがって癌の形質転換および増殖を促進する（Ａｎｔｏｎｉｏｌｉ，  Ｌ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ，  ２０１３年，  １３，  ８４２−８５７頁）。
【０００６】
人体におけるアデノシンの幅広い生理学的機能のために、ＣＤ７３阻害剤は、免疫応答を増強し、アデノシンおよびアデノシン受容体関連の疾患または障害を治療するために使用され得、該疾患または障害には、神経学的、神経変性およびＣＮＳ障害および疾患、うつ病およびパーキンソン病、脳および心臓の虚血性疾患、睡眠障害、線維症、免疫および炎症性疾患、ならびに癌が含まれる。
【０００７】
様々な小分子ＣＤ７３阻害剤が、ＷＯ２０１５１６４５７３、ＷＯ２０１７０９８４２１、ＷＯ２０１７１２０５０８、ＷＯ２０１７１５３９５２、ＵＳ２０１７００４４２０３、ＷＯ２０１８０４９１４５、ＷＯ２０１８０６７４２４およびＷＯ２０１８０９４１４８などのいくつかの公開済みの特許出願で開示されているが、１つの化合物のみが第Ｉ相臨床試験中であると報告されている。したがって、腫瘍微小環境における細胞外アデノシンレベルを低下させて、癌細胞に対する免疫細胞の効果的な応答を再開することによって、腫瘍の進行および転移を制限し、抗癌療法の有効性を高め、かつ／または癌を治療するのに治療的に有用な新規なＣＤ７３阻害剤を開発する緊急の必要性が依然として存在する。
【発明の概要】
【０００８】
本発明は、前述の必要性を満たし、一態様では、式（Ｉ）の化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグを提供する：
【化１】
2021535102.tif 000003
式中：
Ｙは、ＯまたはＳであり；
Ｚは、ＯまたはＮＨであり；
Ｗは、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、ＮＲａおよびＣ（Ｒｂ）２からなる群から選択され、ここでＲａはアルキルであり、Ｒｂは各出現にて、水素、ハロゲン、アルキルおよびアルケニルからなる群から独立して選択され；
Ｇ１およびＧ２は、それぞれ独立してＮまたはＣＲｃであり、ここでＲｃは、水素、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され；
Ｇ３およびＧ４は、Ｃ、ＣＨ、ＣＨ２、Ｎ、ＮＨ、Ｏ、ＳおよびＳＯ２からなる群からそれぞれ独立して選択され；
Ｑは、−ＣＨ２−Ｏ−Ｃ（Ｒｓ）（Ｒｔ）−、−ＣＨ２−Ｎ（Ｒｍ）−Ｃ（Ｒｓ）（Ｒｔ）−、−ＣＨ２−Ｓ−Ｃ（Ｒｓ）（Ｒｔ）−、−ＣＨ２−Ｓ（Ｏ）２−Ｃ（Ｒｓ）（Ｒｔ）−、−フェニル−Ｏ−Ｃ（Ｒｓ）（Ｒｔ）−、−ＣＨ２−フェニル−Ｏ−Ｃ（Ｒｓ）（Ｒｔ）−、−ＣＨ２−ヘテロシクリル−、−Ｃ（Ｒｍ）（Ｒｎ）−、−ＣＨ２−Ｃ（Ｒｍ）（Ｒｎ）−Ｃ（Ｒｓ）（Ｒｔ）−、−Ｃ（Ｒｓ）＝Ｃ（Ｒｔ）−、−Ｃ（Ｒｍ）（Ｒｎ）−Ｃ（Ｒｓ）（Ｒｔ）−、−Ｃ（Ｒｍ）（Ｒｎ）−Ｃ（Ｒｓ）＝Ｃ（Ｒｔ）−および−Ｃ（Ｒｓ）＝Ｃ（Ｒｔ）−Ｃ（Ｒｍ）（Ｒｎ）からなる群から選択され；
Ｒｓ、Ｒｔ、ＲｍおよびＲｎは、Ｈ、Ｄ、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキルおよびアミノからなる群からそれぞれ独立して選択されるか；または
任意の−Ｃ（Ｒｓ）（Ｒｔ）−中のＲｓおよびＲｔは、一緒にオキソを形成するか；または
ＲｍおよびＲｎは、一緒にオキソを形成し；
環Ａは、Ｃ５−８シクロアルキル、５〜８員ヘテロシクリル、アリール縮合Ｃ５−８シクロアルキル、ヘテロアリール縮合Ｃ５−８シクロアルキル、アリール縮合５〜８員ヘテロシクリルおよびヘテロアリール縮合５〜８員ヘテロシクリルからなる群から選択され；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、ヒドロキシ、水素、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、シアノ、アミノ、アジド基およびＯＲ１０からなる群からそれぞれ独立して選択されるか；または
Ｒ１およびＲ２は、それらが結合している炭素原子と一緒に、シクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成し、当該ヘテロシクリルは、Ｎ、ＯおよびＳと同じかまたは異なる１〜２個のヘテロ原子を含み、かつ、当該シクロアルキルおよびヘテロシクリルは、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、シアノ、アミノ、ニトロ、シクロアルキルおよびヘテロシクリルからなる群から選択される１つ以上の基によってそれぞれ任意に置換され；
Ｒ５は、水素、ハロゲン、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、シアノ、アミノ、ニトロおよびアジドからなる群から選択され；
Ｒ６およびＲ７は、水素、アルキル、アリール、−Ｃ（ＲｍＲｎ）−アリール、−Ｃ（ＲｍＲｎ）−Ｏ−Ｃ（Ｏ）ＯＲｄ、−Ｃ（ＲｍＲｎ）−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｒｄ、−Ｃ（ＲｍＲｎ）Ｃ（Ｏ）ＯＲｄ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群からそれぞれ独立して選択され、当該アルキルは、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される１つ以上の基によって任意に置換され；任意に、Ｒ６およびＲ７は、一緒に５〜６員の複素環を形成し；
Ｒｄは、水素、アルキルおよびアルコキシからなる群から選択され；
Ｒ８は、水素、ハロゲン、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、シアノ、アミノ、ニトロ、アジド、シクロアルキルおよびヘテロシクリルからなる群から選択され；
Ｒ９は、水素、ハロゲン、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、シアノ、アミノ、ニトロ、アジド、シクロアルキルおよびヘテロシクリルからなる群から選択され；
Ｒ１０は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１１、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１１および−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ６）（ＯＲ７）からなる群から選択され；
Ｒ１１は、水素、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシルおよびヒドロキシアルキルからなる群から選択され；
ｍは、１、２または３であり；および
ｓは、０、１、２、３または４である。
【０００９】
別の態様では、本発明は、治療有効量の式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグと、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤および／または賦形剤とを含む、医薬組成物を提供する。
【００１０】
別の態様では、本発明は、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグを調製するための方法およびプロセス、ならびに中間化合物を提供する。
【００１１】
別の態様では、本発明は、それを必要とする対象に、治療有効量の式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、またはそれらの医薬組成物を投与することを含む、ＣＤ７３によって媒介される疾患または状態、特にさまざまな癌を治療するための方法を提供する。
【００１２】
別の態様では、本発明は、ＣＤ７３を含む生物学的サンプルを、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグと接触させることを含む、ＣＤ７３を阻害する方法を提供する。
【００１３】
別の態様では、本発明は、ＣＤ７３によって媒介される疾患または状態、特にさまざまな癌を治療するための薬剤の製造における、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグの使用を提供する。
【００１４】
本発明の他の態様および利点は、以下の詳細な説明、実施例、および特許請求の範囲を通じてよりよく理解されるであろう。
【発明の詳細な説明】
【００１５】
一態様では、本発明は、式（Ｉ）：
【化２】
2021535102.tif 000004
の化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグを提供し、式中、ｍ、ｓ、環Ａ、Ｇ１〜Ｇ４、Ｒ１〜Ｒ９、Ｗ、ＹおよびＺは、上記で定義したとおりである。
【００１６】
本発明の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩ）： 
【化３】
2021535102.tif 000005
の化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグから選択され、
式中：
Ｚ、Ｙ、Ｗ、Ｑ、Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４、環Ａ、Ｒ１〜Ｒ９、ｍおよびｓは、式（Ｉ）で定義したとおりである。
【００１７】
本発明の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩＩ）：
【化４】
2021535102.tif 000006
の化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグから選択され、
式中：
Ｚ、Ｑ、Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４、環Ａ、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ６〜Ｒ９、ｍおよびｓは、式（Ｉ）で定義したとおりである。
【００１８】
一実施形態では、本発明は、Ｑは、−ＣＨ２−Ｏ−Ｃ（Ｒｓ）（Ｒｔ）−、−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｒｓ）（Ｒｔ）−、−ＣＨ２−Ｓ−Ｃ（Ｒｓ）（Ｒｔ）−、−ＣＨ２Ｓ（Ｏ）２−Ｃ（Ｒｓ）（Ｒｔ）−、−フェニル−Ｏ−Ｃ（Ｒｓ）（Ｒｔ）−、−ＣＨ２−フェニル−Ｏ−Ｃ（Ｒｓ）（Ｒｔ）−および−ＣＨ２−ヘテロシクリル−からなる群から選択され；ＲｓおよびＲｔは、式（Ｉ）で定義したとおりである、式（Ｉ）の化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグを提供する。
【００１９】
一実施形態では、本発明は、Ｒ２およびＲ４は水素であり；Ｒ１およびＲ３は、ヒドロキシ、水素、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ハロアルキル、ハロアルコキシおよびヒドロキシアルキルからなる群からそれぞれ独立して選択される、式（Ｉ）の化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグを提供する。
【００２０】
本発明の一実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＶ）：
【化５】
2021535102.tif 000007
の化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグから選択され；
式中：
Ｍは、Ｏ、Ｓ、ＳＯ２、ＮＨおよび−フェニル−Ｏからなる群から選択され；および
環Ａ、Ｇ３、Ｇ４、Ｒ８、Ｒ９、ｍおよびｓは、式（Ｉ）で定義したとおりである。
【００２１】
一実施形態では、本発明は、
【化６】
2021535102.tif 000008
は、
【化７】
2021535102.tif 000009
からなる群から選択され；および、Ｒ９およびｓは、式（Ｉ）で定義したとおりである、式（Ｉ）の化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグを提供する。一実施形態では、本発明は、Ｒ６およびＲ７は、水素、アルキルおよび−Ｃ（ＲｍＲｎ）−Ｏ−Ｃ（Ｏ）ＯＲｄからなる群からそれぞれ独立して選択される、式（Ｉ）の化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグを提供する。
【００２２】
一実施形態では、本発明は、Ｒ８は、水素、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ハロアルキルおよびハロアルコキシからなる群から選択される、式（Ｉ）の化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグを提供する。
【００２３】
一実施形態では、本発明は、Ｒ９は、水素、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ハロアルキルおよびハロアルコキシからなる群から選択される、式（Ｉ）の化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグを提供する。
【００２４】
一実施形態では、時々好ましく、本発明は、式（Ｖ）：
【化８】
2021535102.tif 000010
の化合物、またはその互変異性体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグを提供し；
式中：
Ｒ６およびＲ７は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリール、−Ｃ（ＲｍＲｎ）−アリール、−Ｃ（ＲｍＲｎ）−Ｏ−Ｃ（Ｏ）ＯＲｄおよび−Ｃ（ＲｍＲｎ）−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｒｄからなる群からそれぞれ独立して選択され、当該アルキルは、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、５〜１０員ヘテロシクリル、Ｃ６−Ｃ１０アリールおよび５〜１０員ヘテロアリールからなる群から選択される１つ以上の基によって任意に置換され；
ＲｍおよびＲｎは、Ｈ、Ｄ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキルおよびＣ１−Ｃ４ハロアルコキシからなる群からそれぞれ独立して選択され；
ＲｄはＣ１−Ｃ６アルキルであり；
Ｒ８は、水素、ハロゲンおよびＣ１−Ｃ４アルキルからなる群から選択され；
【化９】
2021535102.tif 000011
は、
【化１０】
2021535102.tif 000012
からなる群から選択され；
ｓは、０、１または２であり；および
Ｒ９は各出現にて、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４ハロアルキルおよびＣ１−Ｃ４ハロアルコキシからなる群から独立して選択される。
【００２５】
いくつかの実施形態では、時々より好ましく、式（Ｖ）の化合物、またはその互変異性体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくはプロドラッグにおいて：
Ｒ６およびＲ７は、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、フェニル、−ＣＨ（Ｒｍ）−Ｏ−Ｃ（Ｏ）ＯＲｄおよび−ＣＨ（Ｒｍ）−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｒｄからなる群からそれぞれ独立して選択され；
Ｒｍは、Ｈ、ＤまたはＣ１−Ｃ４アルキルであり；
Ｒｄは、Ｃ１−Ｃ６アルキルであり；
Ｒ８は、水素またはハロゲンであり；
【化１１】
2021535102.tif 000013
は、
【化１２】
2021535102.tif 000014
からなる群から選択され；
ｓは、０、１または２であり；および
Ｒ９は各出現にて、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキルおよびＣ１−Ｃ４アルコキシからなる群から独立して選択される。
【００２６】
他の実施形態では、当業者が理解するように、本発明は、そのような組み合わせが化学結合の原理に違反しない安定した化合物を形成する限り、本明細書に記載の式（Ｉ）〜（Ｖ）の構造のいずれかで定義される官能基に関して、例示された実施形態のあらゆるすべての妥当な組み合わせを包含する。
【００２７】
本発明の例示的な化合物には、以下が含まれるが、これらに限定されない：
【００２８】
【表１−１】
2021535102.tif 000015
【表１−２】
2021535102.tif 000016
【表１−３】
2021535102.tif 000017
【表１−４】
2021535102.tif 000018
【表１−５】
2021535102.tif 000019
【００２９】
別の態様では、本発明は、式（Ｉ）の化合物を調製するための中間体として使用される式（ＩＡ）：
【化１３】
2021535102.tif 000020
の化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ提供し、
式中：
ＺはＯであり；
Ｒｘはアルキルであり；および
Ｙ、Ｗ、Ｑ、Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４、環Ａ、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８、Ｒ９、ｍおよびｓは、式（Ｉ）で定義したとおりである。
【００３０】
本発明の一実施形態では、式（ＩＡ）の化合物は、式（ＩＶＡ）：
【化１４】
2021535102.tif 000021
の化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグから選択され、
式中：
Ｒｘはアルキルであり；
ＭはＯであり；および
環Ａ、Ｇ３、Ｇ４、Ｒ８、Ｒ９、ｍおよびｓは、式（ＩＡ）で定義したとおりである。
【００３１】
本発明の例示的な化合物には、以下が含まれるが、これらに限定されない：
【００３２】
【表２−１】
2021535102.tif 000022
【表２−２】
2021535102.tif 000023
【００３３】
別の態様では、本発明は、以下のステップを含む、式（Ｉ）の化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩を調製するためのプロセスを提供する：
【化１５】
2021535102.tif 000024
式（ＩＡ）の化合物からＲｘおよびアセタールの保護基を除去するために反応させて、式（Ｉ）の化合物を得るステップ；
式中：
Ｒｘはアルキルであり；
ＺはＯであり；
Ｒ６およびＲ７は、ともに水素であり；および
Ｒ１およびＲ３は、ともにヒドロキシであり；
Ｙ、Ｗ、Ｑ、Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４、環Ａ、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８、Ｒ９、ｍおよびｓは、式（Ｉ）で定義したとおりである。
【００３４】
別の態様では、本発明は、以下のステップを含む、式（ＩＶ）の化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩を調製するためのプロセスを提供する：
【化１６】
2021535102.tif 000025
式（ＩＶＡ）の化合物からＲｘおよびアセタールの保護基を除去するために反応させて、式（ＩＶ）の化合物を得るステップ；
式中：
Ｒｘはアルキルであり；
ＭはＯであり；および
環Ａ、Ｇ３、Ｇ４、Ｒ８、Ｒ９、ｍおよびｓは、式（ＩＶ）で定義したとおりである。
【００３５】
本発明はまた、治療有効量の式（Ｉ）〜（Ｖ）のいずれか１つの化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグと、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤とを含む、医薬組成物も提供する。
【００３６】
本発明はまた、ＣＤ７３を含む生物学的サンプルを、式（Ｉ）〜（Ｖ）のいずれか１つの化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ、またはそれらの医薬組成物と接触させることを含む、ＣＤ７３を阻害する方法に関する。
【００３７】
本発明はまた、それを必要とする対象に、治療有効量の式（Ｉ）〜（Ｖ）のいずれか１つの化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ、またはそれらの医薬組成物を投与するステップを含む、ＣＤ７３によって媒介される疾患または状態を治療するための方法に関する。
【００３８】
本発明はまた、それを必要とする対象に、治療有効量の式（Ｉ）〜（Ｖ）のいずれか１つの化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ、またはそれらの医薬組成物を投与することを含む、疾患または状態を治療するための方法であって、前記疾患または状態は、腫瘍、癌、免疫関連疾患、炎症関連疾患、神経系疾患、神経変性疾患および中枢神経系疾患、うつ病、パーキンソン病、脳および心臓の虚血性疾患、睡眠障害ならびに線維症からなる群から選択される、方法に関する。
【００３９】
前記癌は、黒色腫、脳腫瘍、食道癌、胃癌、肝臓癌、膵臓癌、結腸直腸癌、肺癌、腎臓癌、乳癌、卵巣癌、子宮癌（ｍｅｔｒｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）、子宮内膜症、前立腺癌、皮膚癌、神経芽細胞腫、肉腫、骨軟骨腫、骨腫、骨肉腫、セミノーマ、精巣腫瘍、子宮癌（ｕｔｅｒｉｎｅ  ｃａｎｃｅｒ）、頭頸部癌、多発性骨髄腫、リンパ腫、真性赤血球増加症、白血病、甲状腺腫瘍、尿管腫瘍、膀胱癌、胆嚢癌、胆管癌、絨毛上皮癌および小児腫瘍からなる群から選択される。
【００４０】
別の態様では、本発明はまた、ＣＤ７３によって媒介される疾患または状態を治療するための薬剤の調製における、式（Ｉ）〜（Ｖ）のいずれか１つの化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ、またはそれらの医薬組成物の使用に関する。
【００４１】
前記ＣＤ７３によって媒介される疾患または状態には、限定されないが、腫瘍、癌、免疫関連疾患、炎症関連疾患、神経系疾患、神経変性疾患および中枢神経系疾患、うつ病、パーキンソン病、脳および心臓の虚血性疾患、睡眠障害ならびに線維症が含まれる。
【００４２】
本発明の組成物は、１つ以上の薬学的に許容される担体を使用する従来の方法によって処方することができる。したがって、本発明の活性化合物は、経口、頬側、鼻腔内、非経口（例えば、静脈内、筋肉内または皮下）、直腸投与、吸入または吹送投与用の様々な剤形として処方され得る。本発明の化合物は、徐放性剤形としても処方され得る。
【００４３】
適切な剤形には、錠剤、トローチ剤、ロゼンジ剤（ｌｏｚｅｎｇｅ）、水性または油性懸濁液、分散性粉末または顆粒、エマルジョン、硬質または軟質カプセル、またはシロップもしくはエリキシルが含まれるが、これらに限定されない。経口組成物は、医薬組成物を調製するための当技術分野の任意の既知の方法に従って調製することができる。そのような組成物は、心地よくて口当たりの良い医薬調製物を提供するために、甘味料、香味料、着色剤および防腐剤からなる群から選択される１つ以上の添加剤を含むことができる。錠剤は、有効成分と錠剤の製造に適した非毒性の薬学的に許容される賦形剤を含む。これらの賦形剤は、不活性賦形剤、造粒剤、崩壊剤、および潤滑剤であり得る。錠剤は、コーティングされないか、または薬物の味をマスクするため、もしくは胃腸管における薬物の崩壊および吸収を遅らせ、それにより長期間にわたる持続放出を可能にするために、既知の技術によってコーティングされ得る。例えば、水溶性の味覚マスキング材料を使用することができる。
【００４４】
経口製剤はまた、有効成分が不活性な固体希釈剤と混合されるか、または有効成分が水溶性担体と混合されるソフトゼラチンカプセルとしても提供され得る。
【００４５】
水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に適した賦形剤と混合された有効成分を含む。そのような賦形剤は、懸濁剤、分散剤または保湿剤であり、天然に存在するリン脂質であり得る。水性懸濁液は、１つ以上の防腐剤、１つ以上の着色剤、１つ以上の香味料、および１つ以上の甘味料も含むことができる。
【００４６】
油懸濁液は、有効成分を植物油または鉱油に懸濁することによって処方することができる。油懸濁液は増粘剤を含むことができる。口当たりの良い調製物を提供するために、前述の甘味料および香味料を添加することができる。これらの組成物は、抗酸化剤を加えることによって保存することができる。
【００４７】
有効成分および分散剤または湿潤剤、懸濁剤または１つ以上の防腐剤は、水を加えることによって水性懸濁液を調製するのに適した分散性粉末または顆粒として調製され得る。適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤は、すでに上述したものによって例示されている。甘味料、香料および着色剤などの追加の賦形剤を加えることもできる。これらの組成物は、アスコルビン酸などの抗酸化剤を加えることによって保存することができる。
【００４８】
本発明の医薬組成物は、水中油型エマルジョンの形態でもあり得る。油相は、植物油、または鉱油、またはそれらの混合物であり得る。適切な乳化剤は、天然に存在するリン脂質であり得る。甘味料を使用することができる。そのような配合物は、モデレーター（ｍｏｄｅｒａｔｏｒ）、防腐剤、着色剤および抗酸化剤も含み得る。
【００４９】
医薬組成物は、無菌の注射可能な水溶液の形態であり得る。使用できる許容されるビヒクルおよび溶媒は、水、リンゲル液および等張塩化ナトリウム溶液である。無菌の注射可能な調製物はまた、有効成分が油相に溶解されている無菌の注射可能な水中油型マイクロエマルジョンであり得る。注射可能な溶液またはマイクロエマルジョンは、局所ボーラス注射によって個人の血流に導入することができる。あるいは、本化合物の一定の循環濃度を維持するような方法で溶液またはマイクロエマルジョンを投与することが有利であり得る。そのような一定の濃度を維持するために、連続的な静脈内送達デバイスを利用することができる。そのようなデバイスの一例は、Ｄｅｌｔｅｃ  ＣＡＤＤ−ＰＬＵＳ．  ＴＭ．  ５４００静脈内注射ポンプである。
【００５０】
医薬組成物は、筋肉内および皮下投与用の無菌の注射可能な水性または油性懸濁液の形態であり得る。そのような懸濁液は、既知の技術に従って、上述した適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を用いて処方され得る。無菌の注射可能な調製物はまた、非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒で調製された無菌の注射可能な溶液または懸濁液であり得る。さらに、滅菌固定油を溶媒または懸濁媒体として容易に使用することができ、脂肪酸を注射剤の調製に使用することもできる。
【００５１】
本化合物は、直腸投与用の坐剤の形態で投与することができる。これらの医薬組成物は、常温では固体であるが直腸内では液体であり、それにより直腸内で溶融して薬物を放出する適切な非刺激性賦形剤と薬物を混合することによって調製することができる。
【００５２】
頬側投与の場合、組成物は、従来の手段によって錠剤またはロゼンジ剤（ｌｏｚｅｎｇｅ）として処方することができる。
【００５３】
鼻腔内投与または吸入による投与の場合、本発明の活性化合物は、適切な噴射剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素またはその他の適切なガス）を使用して、患者によって圧搾または圧送されるポンプスプレー容器から放出される溶液もしくは懸濁液の形態で、または加圧容器もしくはネブライザーから放出されるエアロゾルスプレーとして都合よく送達される。加圧エアロゾルの場合、投与量の単位は、計量された量を送達するためのバルブを提供することによって決定することができる。加圧容器またはネブライザーは、活性化合物の溶液または懸濁液を含むことができる。吸入器または吹送器で使用するためのカプセルまたはカートリッジ（例えば、ゼラチン製の）は、本発明の粉末混合物と、ラクトースまたはデンプンなどの適切な粉末ベースとを含むように処方され得る。
【００５４】
薬物の投与量が、限定されないが以下の要因を含むさまざまな要因に依存することは当業者によく知られている：特定の化合物の活性、患者の年齢、体重、全身の健康、行動、食事、投与時間、投与経路、排泄率、薬物の組み合わせなど。さらに、治療モード、式（Ｉ）の化合物の１日量、またはその薬学的に許容される塩の種類などの最良の治療は、従来の治療レジメンによって検証することができる。
【００５５】
特に明記しない限り、本明細書および特許請求の範囲で使用される用語は、以下に記載される意味を有する。
【００５６】
「アルキル」は、Ｃ１−Ｃ２０直鎖基および分岐鎖基を含む飽和脂肪族炭化水素基を指す。好ましくは、アルキル基は、１〜１２個の炭素原子を有するアルキルである。代表的な例には、限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｎ−ペンチル、１，１−ジメチルプロピル、１，２−ジメチルプロピル、２，２−ジメチルプロピル、１−エチルプロピル、２−メチルブチル、３−メチルブチル、ｎ−ヘキシル、１−エチル−２−メチルプロピル、１，１，２−トリメチルプロピル、１，１−ジメチルブチル、１，２−ジメチルブチル、２，２−ジメチルブチル、１，３−ジメチルブチル、２−エチルブチル、２−メチルペンチル、３−メチルペンチル、４−メチルペンチル、２，３−ジメチルブチル、ｎ−ヘプチル、２−メチルヘキシル、３−メチルヘキシル、４−メチルヘキシル、５−メチルヘキシル、２，３−ジメチルペンチル、２，４−ジメチルペンチル、２，２−ジメチルペンチル、３，３−ジメチルペンチル、２−エチルペンチル、３−エチルペンチル、ｎ−オクチル、２，３−ジメチルヘキシル、２，４−ジメチルヘキシル、２，５−ジメチルヘキシル、２，２−ジメチルヘキシル、３，３−ジメチルヘキシル、４，４−ジメチルヘキシル、２−エチルヘキシル、３−エチルヘキシル、４−エチルヘキシル、２−メチル−２−エチルペンチル、２−メチル−３−エチルペンチル、ｎ−ノニル、２−メチル−２−エチルヘキシル、２−メチル−３−エチルヘキシル、２，２−ジエチルペンチル、ｎ−デシル、３，３−ジエチルヘキシル、２，２−ジエチルヘキシル、およびそれらの分岐鎖異性体が含まれる。より好ましくは、アルキル基は、１〜６個の炭素原子を有する低級アルキルである。代表的な例には、限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｎ−ペンチル、１，１−ジメチルプロピル、１，２−ジメチルプロピル、２，２−ジメチルプロピル、１−エチルプロピル、２−メチルブチル、３−メチルブチル、ｎ−ヘキシル、１−エチル−２−メチルプロピル、１，１，２−トリメチルプロピル、１，１−ジメチルブチル、１，２−ジメチルブチル、２，２−ジメチルブチル、１，３−ジメチルブチル、２−エチルブチル、２−メチルペンチル、３−メチルペンチル、４−メチルペンチル、２，３−ジメチルブチル等が含まれる。アルキル基は、置換されていても、または無置換のものでもよい。置換されている場合、置換基は任意の利用可能な接続点で置換され得、好ましくは、置換基は、アルキル、ハロゲン、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、アルキルスルホ、アルキルアミノ、チオール、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、アミノ、シクロアルキル、複素環式アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシル、複素環、シクロアルキルチオ、複素環式アルキルチオおよびオキソ基からなる群から独立して選択される１つ以上の基である。
【００５７】
「アルケニル」は、少なくとも２つの炭素原子および少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する上記で定義されるアルキル、例えば、ビニル、１−プロペニル、２−プロペニル、１−、２−、または３−ブテニルなどを指し、好ましくはＣ２−２０アルケニル、より好ましくはＣ２−１２アルケニル、最も好ましくはＣ２−６アルケニルである。アルケニル基は、置換されていても、または無置換のものでもよい。置換されている場合、置換基は、好ましくは、アルキル、ハロゲン、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、アルキルスルホ、アルキルアミノ、チオール、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、アミノ、シクロアルキル、複素環式アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシル、複素環、シクロアルキルチオ、複素環式アルキルチオおよびオキソ基からなる群から独立して選択される１つ以上の基である。
【００５８】
「アルキニル」は、少なくとも２つの炭素原子および少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有する上記のように定義されるアルキル、例えば、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、１−、２−、または３−ブチニルなどを指し、好ましくはＣ２−２０アルキニル、より好ましくはＣ２−１２アルキニル、最も好ましくはＣ２−６アルキニルである。アルキニル基は、置換されていても、または無置換のものでもよい。置換されている場合、置換基は、好ましくは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルスルホ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、複素環式アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシル、複素環式アルコキシル、シクロアルキルチオ、複素環式アルキルチオおよびオキソ基からなる群から独立して選択される１つ以上の基である。
【００５９】
「アルキレン」は、親アルカンの同じ炭素原子または２個の異なる炭素原子から２個の水素原子を除去することから誘導される２個の残基を有する、飽和直鎖または分岐脂肪族炭化水素基を指す。１〜２０個の炭素原子を含む直鎖または分岐鎖基は、好ましくは１〜１２個の炭素原子、より好ましくは１〜６個の炭素原子を有する。アルキレン基の非限定的な例には、限定されないが、メチレン（−ＣＨ２−）、１，１−エチレン（−ＣＨ（ＣＨ３）−）、１，２−エチレン（−ＣＨ２ＣＨ２）−、１，１−プロピレン（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）−）、１，２−プロピレン（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−）、１，３−プロピレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、１，４−ブチリデン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）などが含まれる。アルキレン基は、置換されていても、または無置換のものでもよい。置換されている場合、置換基は、好ましくは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルスルホ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、複素環式アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシル、複素環式アルコキシル、シクロアルキルチオ、複素環式アルキルチオおよびオキソ基からなる群から独立して選択される１つ以上の基である。
【００６０】
「アルケニレン」は、少なくとも２つの炭素原子および少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する上記で定義されるアルキレンを指し、好ましくはＣ２−２０アルケニレン、より好ましくはＣ２−１２アルケニレン、最も好ましくはＣ２−６アルケニレンである。アルケニレン基の非限定的な例には、限定されないが、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ２−などが含まれる。アルケニレン基は、置換されていても、または無置換のものでもよい。置換されている場合、置換基は、好ましくは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルスルホ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、複素環式アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシル、複素環式アルコキシル、シクロアルキルチオ、複素環式アルキルチオおよびオキソ基からなる群から独立して選択される１つ以上の基である。
【００６１】
「シクロアルキル」は、３〜２０個の炭素原子、好ましくは３〜１２個の炭素原子、より好ましくは３〜８個の炭素原子、最も好ましくは５〜８個の炭素原子または５〜６個の炭素原子を有する飽和または部分的に非飽和の単環式または多環式の炭化水素基を指す。単環式シクロアルキルの代表的な例には、限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、シクロヘプチル、シクロヘプタトリエニル、シクロオクチル等が含まれる。多環式シクロアルキルには、スピロ環、縮合環、または架橋環を有するシクロアルキルが含まれる。
【００６２】
「スピロシクロアルキル」は、１つの共通の炭素原子（スピロ原子と呼ばれる）を通じて結合している環を有する５〜２０員の多環式基を指し、該１つ以上の環は、１つ以上の二重結合を含むことができ、それはアリールおよびヘテロアリールであり得る。好ましくは、スピロシクロアルキルは６〜１４員、より好ましくは８〜１０員である。共通のスピロ原子の数により、スピロシクロアルキルは、モノ−スピロシクロアルキル、ジ−スピロシクロアルキル、またはポリ−スピロシクロアルキルに分けられ、好ましくは、モノ−スピロシクロアルキルまたはジ−スピロシクロアルキル、より好ましくは、４員／４員、４員／５員、４員／６員、５員／５員、または５員／６員のモノ−スピロシクロアルキルを指す。スピロシクロアルキルの代表的な例には、限定されないが、以下の群が含まれる：
【化１７】
2021535102.tif 000026
【００６３】
「縮合シクロアルキル」は、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールから選択される１つ以上の基と一緒に縮合方式で結合したシクロアルキルである多環式基を指す。ここで、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールは、本発明で定義されるとおりである。環員数により、縮合シクロアルキルは、二環式、三環式、四環式または多環式縮合シクロアルキルに分けられ、好ましくは二環式または三環式縮合シクロアルキルを指し、より好ましくはアリール縮合Ｃ５−８シクロアルキル、ヘテロアリール縮合Ｃ５−８シクロアルキル、４員ヘテロシクリル縮合Ｃ５−８シクロアルキル、５員ヘテロシクリル縮合Ｃ５−８シクロアルキル、Ｃ６シクロアルキル縮合Ｃ５−８シクロアルキルまたはＣ５シクロアルキル縮合Ｃ５−８シクロアルキルを指す。縮合シクロアルキルの代表的な例には、限定されないが、以下の群が含まれる：
【化１８】
2021535102.tif 000027
【００６４】
「架橋シクロアルキル」は、５〜２０員の多環式炭化水素基であって、系内のどの２つの環も２つの連結していない炭素原子を共有しているものを指す。当該環は１つ以上の二重結合を有し得るが、完全に共役したπ電子系を有さない。好ましくは、架橋シクロアルキルは６〜１４員、より好ましくは７〜１０員である。環員数により、架橋シクロアルキルは、二環式、三環式、四環式または多環式架橋シクロアルキルに分けられ、好ましくは二環式、三環式または四環式架橋シクロアルキル、より好ましくは二環式または三環式架橋シクロアルキルを指す。架橋シクロアルキルの限定されない例の代表的な例には、限定されないが、以下の群が含まれる：
【化１９】
2021535102.tif 000028
【００６５】
シクロアルキルは、アリール、ヘテロアリールまたは複素環式アルキルの環に縮合していてもよく、親構造に結合した環はシクロアルキルである。代表的な例には、限定されないが、インダニル酢酸、テトラヒドロナフタレン、ベンゾシクロヘプチルなどが含まれる。シクロアルキルは、任意に置換されていても、または無置換のものであってもよい。置換されている場合、置換基は、好ましくは、アルキル、ハロゲン、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、アルキルスルホ、アルキルアミノ、チオール、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、アミノ、シクロアルキル、複素環式アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシル、複素環、シクロアルキルチオ、複素環式アルキルチオおよびオキソ基からなる群から独立して選択される１つ以上の基である。
【００６６】
「ヘテロシクリル」は、Ｎ、ＯおよびＳ（Ｏ）ｍ（式中、ｍは０、１、または２である）からなる群から選択される１つ以上のヘテロ原子を環原子として有する、３〜２０員の飽和および／または部分的に非飽和の単環式または多環式炭化水素基を指す。ただし、環内に−Ｏ−Ｏ−、−Ｏ−Ｓ−、またはＳ−Ｓ−はなく、残りの環原子がＣである。好ましくは、ヘテロシクリルは、１〜４個のヘテロ原子を有する３〜１２員；より好ましくは、１〜３個のヘテロ原子を有する３〜１０員；最も好ましくは、１〜２個のヘテロ原子を有する５〜８員である。単環式ヘテロシクリルの代表的な例には、限定されないが、ピロリジル、ピペリジル、ピペラジニル、モルホリニル、スルホモルホリニル、ホモピペラジニルなどが含まれる。多環式ヘテロシクリルには、スピロ環、縮合環または架橋環を有するヘテロシクリルが含まれる。
【００６７】
「スピロヘテロシクリル」は、１つの共通の炭素原子（スピロ原子と呼ばれる）を通じて結合している環を有する５〜２０員の多環式ヘテロシクリルであって、前記環は、環原子としてＮ、Ｏ、およびＳ（Ｏ）ｍ（式中、ｍは、０、１または２である）からなる群から選択される１つ以上のヘテロ原子を有し、残りの環原子はＣであって、１つ以上の環は、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールから選択される１つ以上の基と一緒に縮合方式で結合することができる。ここで、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールは、本発明で定義されるとおりである。好ましくは、スピロヘテロシクリルは６〜１４員である。スピロヘテロシクリルの代表的な例には、限定されないが、以下の群が含まれる：
【化２０】
2021535102.tif 000029
【００６８】
「縮合ヘテロシクリル」は、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールから選択される１つ以上の基と一緒に縮合方式で結合したヘテロシクリルである多環式基を指す。ここで、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールは、本発明で定義されるとおりである。環員数により、縮合ヘテロシクリルは、二環式、三環式、四環式または多環式縮合ヘテロシクリルに分けられ、好ましくは二環式または三環式縮合ヘテロシクリルを指し、より好ましくはアリール縮合５〜８員ヘテロシクリル、ヘテロアリール縮合５〜８員ヘテロシクリル、Ｃ５−８シクロアルキル縮合４員ヘテロシクリル、Ｃ５−８シクロアルキル縮合５員ヘテロシクリル、Ｃ５−８シクロアルキル縮合６員ヘテロシクリルを指す。縮合ヘテロシクリルの代表的な例には、限定されないが、以下の群が含まれる：
【化２１】
2021535102.tif 000030
【００６９】
「架橋ヘテロシクリル」は、５〜１４員の多環式複素環式アルキル基であって、系内のどの２つの環も２つの連結していない原子を共有しており、当該環は１つ以上の二重結合を有していてもよいが、完全に共役したπ電子系は有さず、当該環は、環原子としてＮ、ＯおよびＳ（Ｏ）ｍ（式中、ｍは、０、１または２である）からなる群から選択される１つ以上のヘテロ原子を有し、残りの環原子はＣであるものを指す。好ましくは、架橋ヘテロシクリルは６〜１４員、より好ましくは７〜１０員である。環員数により、架橋ヘテロシクリルは、二環式、三環式、四環式または多環式架橋ヘテロシクリルに分けられ、好ましくは二環式、三環式または四環式架橋ヘテロシクリル、より好ましくは二環式または三環式架橋ヘテロシクリルを指す。架橋ヘテロシクリルの代表的な例には、限定されないが、以下の群が含まれる：
【化２２】
2021535102.tif 000031
【００７０】
前記ヘテロシクリルの環は、アリール、ヘテロアリールまたはシクロアルキルの環に縮合していてもよく、親構造に結合した環はヘテロシクリルである。代表的な例には、限定されないが、以下の群が含まれる：
【化２３】
2021535102.tif 000032
【００７１】
ヘテロシクリルは、任意に置換されていても、または無置換のものでもよい。置換されている場合、置換基は、好ましくは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルスルホ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、複素環式アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシル、複素環式アルコキシル、シクロアルキルチオ、複素環式アルキルチオおよびオキソ基からなる群から独立して選択される１つ以上の基である。
【００７２】
「アリール」は、６〜１４員の全て炭素の単環式環または多環式縮合環（「縮合」環系とは、系内の各環が隣り合った炭素原子対を系内の別の環と共有することを意味する）の基を指し、完全に共役したπ電子系を有する。好ましくは、アリールは６〜１０員、例えばフェニルおよびナフチルであり、最も好ましくはフェニルである。アリールは、ヘテロアリール、ヘテロシクリルまたはシクロアルキルの環に縮合していてもよく、親構造に結合した環がアリールである。代表的な例には、限定されないが、以下の群が含まれる：
【化２４】
2021535102.tif 000033
【００７３】
アリール基は、置換されていても、または無置換のものでもよい。置換されている場合、置換基は、好ましくは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルスルホ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、複素環式アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシル、複素環式アルコキシル、シクロアルキルチオ、複素環式アルキルチオおよびオキソ基からなる群から独立して選択される１つ以上の基である。
【００７４】
「ヘテロアリール」は、環原子としてＯ、ＳおよびＮからなる群から選択される１〜４個のヘテロ原子を有し、かつ５〜１４個の環状原子を有するアリール系を指す。好ましくは、ヘテロアリールは５〜１０員、より好ましくは５員または６員であり、例えばチアジアゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、オキサジアゾリル、イミダゾリル、トリアゾリル、チアゾリル、フリル、チエニル、ピリジル、ピロリル、Ｎ−アルキルピロリル、ピリミジニル、ピラジニル、イミダゾリル、テトラゾリルなどである。ヘテロアリールは、アリール、ヘテロシクリルまたはシクロアルキルの環に縮合していてもよく、親構造に結合した環がヘテロアリールである。代表的な例には、限定されないが、以下の群が含まれる：
【化２５】
2021535102.tif 000034
【００７５】
ヘテロアリール基は、置換されていても、または無置換のものでもよい。置換されている場合、置換基は、好ましくは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルスルホ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、複素環式アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシル、複素環式アルコキシル、シクロアルキルチオ、複素環式アルキルチオおよびオキソ基からなる群から独立して選択される１つ以上の基である。
【００７６】
「アルコキシ」は、−Ｏ−（アルキル）および−Ｏ−（無置換シクロアルキル）基の両方を指し、ここで、アルキルは、上記で定義したとおりである。代表的な例には、限定されないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、シクロプロピルオキシ、シクロブチルオキシ、シクロペンチルオキシ、シクロヘキシルオキシなどが含まれる。アルコキシは、置換されていても、または無置換のものでもよい。置換されている場合、置換基は、好ましくは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルスルホ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、複素環式アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシル、複素環式アルコキシル、シクロアルキルチオ、複素環式アルキルチオおよびオキソ基からなる群から独立して選択される１つ以上の基である。
【００７７】
「結合」は、「―」の記号を使用した共有結合を指す。
【００７８】
「ヒドロキシアルキル」は、ヒドロキシ基で置換されたアルキル基を指し、ここで、アルキルは上記で定義されたとおりである。
【００７９】
「ヒドロキシ」は、−ＯＨ基を指す。
【００８０】
「ハロゲン」は、フッ素原子、塩素原子、臭素原子またはヨウ素原子を指す。
【００８１】
「アミノ」は、−ＮＨ２基を指す。
【００８２】
「シアノ」は、−ＣＮ基を指す。
【００８３】
「ニトロ」は、−ＮＯ２基を指す。
【００８４】
「オキソ基」は、＝Ｏ基を指す。
【００８５】
「カルボキシル」は、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ基を指す。
【００８６】
「任意の」または「任意に」は、続いて記載した出来事や状況が発生し得るが、発生する必要はないことを意味し、そのような記載は、その出来事や状況が発生し得るまたは発生し得ない状態を含んでいる。例えば、「アルキルで任意に置換された複素環基」は、アルキル基が存在し得るが、存在する必要はないことを意味し、そのような記載は、複素環基がアルキルで置換されている場合と複素環基がアルキルで置換されていない場合を含む。
【００８７】
「置換された」は、基内の１個以上の水素原子、好ましくは最大５個、より好ましくは１〜３個の水素原子が、対応する数の置換基で独立して置換されていることを指す。置換基は、それらの可能な化学的位置にのみ存在することは言うまでもない。当業者は、実験または理論による過剰な努力を払うことなく、置換が可能であるか不可能であるかを決定することができる。例えば、フリーの水素を有するアミノ基またはヒドロキシ基と、不飽和結合（例えば、オレフィン性）を有する炭素原子との組み合わせは不安定である可能性がある。
【００８８】
「医薬組成物」は、本発明に記載の１つ以上の化合物またはその生理学的／薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグと、生理学的／薬学的に許容される担体および賦形剤などの他の化学成分との混合物を指す。医薬組成物の目的は、化合物の生物への投与を容易にすることであり、このことは、有効成分の吸収、したがって生物学的活性を示すことに寄与する。
【００８９】
「薬学的に許容される塩」は、本発明の化合物の塩を指し、そのような塩は、哺乳動物において使用される場合に安全かつ効果的であり、対応する生物学的活性を有する。
【００９０】
塩の形態に加えて、本発明は、プロドラッグの形態である化合物を提供する。本明細書に記載の化合物のプロドラッグは、生理学的条件下で容易に化学変化を受けて本発明の化合物をもたらす化合物である。さらに、プロドラッグは、ｅｘ  ｖｉｖｏ環境において化学的または生化学的方法によって本発明の化合物に変換され得る。例えば、プロドラッグは、適切な酵素または化学試薬とともに経皮パッチリザーバーに配置された場合、本発明の化合物にゆっくりと変換され得る。
【００９１】
本発明の特定の化合物は、非溶媒和形態、ならびに水和形態を含む溶媒和形態で存在することができる。一般に、溶媒和形態は非溶媒和形態と同等であり、本発明の範囲内に含まれることが意図されている。本発明の特定の化合物は、複数の結晶形態またはアモルファス形態で存在し得る。一般に、すべての物理的形態は、本発明によって企図される使用について同等であり、本発明の範囲内にあることが意図されている。
【００９２】
本発明の化合物はまた、そのような化合物を構成する１つ以上の原子において非天然な割合の原子同位体を含み得る。同位体の非天然な割合は、自然界に見られる量から問題の原子の１００％からなる量までの範囲として定義され得る。例えば、化合物は、例えばトリチウム（３Ｈ）、ヨウ素−１２５（１２５１）もしくは炭素−１４（１４Ｃ）などの放射性同位体、または重水素（Ｄ）もしくは炭素−１３（１３Ｃ）などの非放射性同位体を取り込むことができる。このような同位体のバリエーションは、本出願内の他の場所で説明されている有用性に対する追加の有用性を与えることができる。例えば、本発明の化合物の同位体バリアントは、限定されないが、診断および／または画像化試薬としての、または細胞毒性／放射線毒性治療薬としてのものを含む、追加の有用性を見出すことができる。
【００９３】
「治療有効量」という句は、対象に投与されたときに、疾患、障害、または状態の任意の症状、側面、または特徴に対して任意の検出可能な正の効果を有することができる量で、単独でまたは医薬組成物の一部として、および単回投与または一連の投与の一部として、対象に薬剤を投与することを指す。治療有効量は、関連する生理学的効果を測定することによって確認することができ、投与レジメンおよび対象の状態の診断分析などに関連して調整することができる。例として、投与後の特定の時点でのＣＤ７３阻害剤（または、例えば、その代謝産物）の血清レベルの測定は、治療有効量が使用されたかどうかを示し得る。
【００９４】
・合成方法
本発明の目的を達成するために、本発明は、限定されないが、以下の技術的解決策を適用する：
【化２６】
2021535102.tif 000035
（ＴＭＳＢｒなどの）酸性条件下で式（ＩＡ）の化合物を反応させてＲｘおよびアセタールの保護基を除去して、式（Ｉ）の化合物を得ること；
式中：
Ｒｘはアルキルであり：
ＺはＯであり；
Ｒ６およびＲ７はともに水素であり；
Ｒ１およびＲ３はともにヒドロキシであり；および
Ｙ、Ｗ、Ｑ、Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４、環Ａ、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８、Ｒ９、ｍおよびｓは、式（Ｉ）で定義されているとおりである。
【００９５】
酸性条件をもたらす試薬には、限定されないが、塩化水素、塩化水素１，４−ジオキサン溶液、トリメチルシリルブロミド（ＴＭＳＢｒ）、塩化アンモニウム、トリフルオロ酢酸、ギ酸、酢酸、塩酸、硫酸、メタンスルホン酸、硝酸、リン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物およびＴＭＳＯＴｆが含まれる。
【００９６】
該反応は好ましくは溶媒中においてであり、該反応で使用される溶媒には、限定されないが、酢酸、メタノール、エタノール、トルエン、アセトン、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、ジメチルスルホキシド、１，４−ジオキサン、水、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドおよびそれらの混合物が含まれる。
【００９７】
本発明の目的を達成するために、本発明は、限定されないが、以下の技術的解決策を適用する：
【化２７】
2021535102.tif 000036
（ＴＭＳＢｒなどの）酸性条件下で式（ＩＩＡ）の化合物を反応させてＲｘおよびアセタールの保護基を除去して、式（ＩＩ）の化合物を得ること；
式中：
Ｒｘはアルキルであり：
ＺはＯであり；
Ｒ６およびＲ７はともに水素であり；
Ｒ１およびＲ３はともにヒドロキシであり；および
Ｙ、Ｗ、Ｑ、Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４、環Ａ、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８、Ｒ９、ｍおよびｓは、式（ＩＩ）で定義されているとおりである。
【００９８】
酸性条件をもたらす試薬には、限定されないが、塩化水素、塩化水素１，４−ジオキサン溶液、トリメチルシリルブロミド（ＴＭＳＢｒ）、塩化アンモニウム、トリフルオロ酢酸、ギ酸、酢酸、塩酸、硫酸、メタンスルホン酸、硝酸、リン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物およびＴＭＳＯＴｆが含まれる。
【００９９】
該反応は好ましくは溶媒中においてであり、該反応で使用される溶媒には、限定されないが、酢酸、メタノール、エタノール、トルエン、アセトン、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、ジメチルスルホキシド、１，４−ジオキサン、水、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドおよびそれらの混合物が含まれる。
【０１００】
本発明の目的を達成するために、本発明は、限定されないが、以下の技術的解決策を適用する：
【化２８】
2021535102.tif 000037
（ＴＭＳＢｒなどの）酸性条件下で式（ＩＩＩＡ）の化合物を反応させてＲｘおよびアセタールの保護基を除去して、式（ＩＩＩ）の化合物を得ること；
式中：
Ｒｘはアルキルであり：
ＺはＯであり；
Ｒ１およびＲ３はともにヒドロキシであり；および
Ｗ、Ｑ、Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４、環Ａ、Ｒ８、Ｒ９、ｍおよびｓは、式（ＩＩＩ）で定義されているとおりである。
【０１０１】
酸性条件をもたらす試薬には、限定されないが、塩化水素、塩化水素１，４−ジオキサン溶液、トリメチルシリルブロミド（ＴＭＳＢｒ）、塩化アンモニウム、トリフルオロ酢酸、ギ酸、酢酸、塩酸、硫酸、メタンスルホン酸、硝酸、リン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物およびＴＭＳＯＴｆが含まれる。
【０１０２】
該反応は好ましくは溶媒中においてであり、該反応で使用される溶媒には、限定されないが、酢酸、メタノール、エタノール、トルエン、アセトン、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、ジメチルスルホキシド、１，４−ジオキサン、水、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドおよびそれらの混合物が含まれる。
【化２９】
2021535102.tif 000038
【０１０３】
ステップ１、（ＤＢＵなどの）アルカリ性条件下で式（ＩＶ−１）と式（ＩＶ−２）を反応させて、式（ＩＶ−３）を得るステップ；
ステップ２、（ｐ−トルエンスルホン酸などの）酸性条件下で式（ＩＶ−３）と２，２−ジメトキシプロパンを反応させてから反応混合物を中和して、式（ＩＶ−４）を得るステップ；
ステップ３、（マグネシウムｔ−ブトキシドなどの）アルカリ性条件下で式（ＩＶ−４）と式（ＩＶ−５）を反応させて、式（ＩＶＡ）を得るステップ；
ステップ４、（ＴＭＳＢｒなどの）酸性条件下で式（ＩＶＡ）の化合物を反応させてＲｘおよびアセタールの保護基を除去して、式（ＩＶ）の化合物を得るステップ；
式中：
Ｘはハロゲン、好ましくは塩素であり；
Ｒｘはアルキルであり；
Ｒｙは脱離基、好ましくは
【化３０】
2021535102.tif 000039
であり；
ＭはＯであり；および
環Ａ、Ｇ３、Ｇ４、Ｒ８、Ｒ９、ｍおよびｓは、式（ＩＶ）で定義されているとおりである。
【０１０４】
アルカリ性条件は、有機塩基または無機塩基によってもたらされ、当該有機塩基には、限定されないが、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデセ−７−エン（ＤＢＵ）、ｎ−ブチルリチウム、ｔｅｒｔ−ブチルカリウムアルコキシド、マグネシウムｔ−ブトキシドが含まれ；当該無機塩基には、限定されないが、水素化ナトリウム、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、重炭酸カリウム、または炭酸セシウムが含まれる。
【０１０５】
酸性条件をもたらす試薬には、限定されないが、塩化水素、塩化水素１，４−ジオキサン溶液、トリメチルシリルブロミド（ＴＭＳＢｒ）、塩化アンモニウム、トリフルオロ酢酸、ギ酸、酢酸、塩酸、硫酸、メタンスルホン酸、硝酸、リン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物およびＴＭＳＯＴｆが含まれる。
【０１０６】
該反応は好ましくは溶媒中においてであり、該反応で使用される溶媒には、限定されないが、酢酸、メタノール、エタノール、トルエン、アセトン、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、ジメチルスルホキシド、１，４−ジオキサン、水、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドおよびそれらの混合物が含まれる。
【実施例】
【０１０７】
化合物の構造は、質量分析（ＭＳ）および／または核磁気共鳴（ＮＭＲ）によって決定される。ＮＭＲシフト（δ）は、１０−６（ｐｐｍ）の単位で与えられる。
【０１０８】
マススペクトル（ＭＳ）は、Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＬＣＭＳ−２０２０液体クロマトグラフ−質量分析計を用いて測定した。
【０１０９】
ＮＭＲ測定は、Ｂｒｕｋｅｒ社製ＡＶＡＮＣＥ−４００および５００  Ｕｌｔｒａｓｈｉｅｌｄ核磁気共鳴分光計で行った。溶媒は、重水素化ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ−ｄ６）、重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）および重水素化メタノール（ＣＤ３ＯＤ）であった。
【０１１０】
ＨＰＬＣは、Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＯＰＴＩＯＮ  ＢＯＸ−Ｌ高圧液相クロマトグラフ（Ｇｉｍｉｎｉ  ５μｍ  ＮＸ−Ｃ１８  １００×２１．２ｍｍカラム）を用いて行った。
【０１１１】
使用した薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）シリカゲルプレートは、サイズ５０μｍのＡｇｅｌａ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製Ｔ−ＣＳＦ１００５０−Ｍシリカゲルプレートであった。
【０１１２】
カラムクロマトグラフィーは、通常、ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ  Ｒｆ＋  自動フラッシュクロマトグラフィーシステム（ＴＥＬＥＤＹＮＥ  ＩＳＣＯ）とＡｇｅｌａ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製フラッシュカラムシリカ−ＣＳプレパックカラムを使用して行われた。
【０１１３】
本発明の既知の出発物質は、当技術分野で既知の方法により合成され得るか、またはＡｃｒｏｓ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ、ＡｓｔａＴｅｃｈおよび他の会社から購入され得る。実施例に別段の定めがない限り、反応は、アルゴン雰囲気または窒素雰囲気下で実施され得る。
【０１１４】
アルゴン雰囲気または窒素雰囲気は、約１Ｌのアルゴンバルーンまたは窒素バルーンに接続された反応フラスコを指す。
【０１１５】
水素雰囲気は、体積約１Ｌの水素バルーンに接続された反応ボトルを指す。
【０１１６】
水素化反応は通常、真空にし、水素で満たすことを３回繰り返す。
【０１１７】
マイクロ波反応では、ＣＥＭ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒ−Ｓ  ９０８８６０マイクロ波反応器を使用した。
【０１１８】
実施例に別段の定めがない限り、反応温度は室温であり、２０℃〜３０℃である。
【０１１９】
実施例における反応の進行は、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を用いてモニターされ、反応のための展開溶媒、化合物の精製のためのカラムクロマトグラフィー溶離液、および薄層クロマトグラフィーのための展開系には以下が含まれる：Ａ：ジクロロメタン／メタノール系、Ｂ：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル系、Ｃ：ジクロロメタン／酢酸エチル系。溶媒の体積比は、化合物の極性に応じて調整される。少量のトリエチルアミンおよび酢酸およびその他のアルカリ性または酸性試薬が調整のために使用され得る。
【０１２０】
ＴＥＡはトリエチルアミンであり、
ＴＨＦはテトラヒドロフランであり、
ＤＢＵは１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデセ−７−エンであり、
ＤＩＡＤはアゾジカルボン酸ジイソプロピルであり；
ＤＩＰＥＡはＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンであり、
ＥｔＯＡｃは酢酸エチルであり、
Ｅｔ３Ｎはトリエチルアミンであり、
ＨＡＴＵは１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスフェートであり、
ＭｇＳＯ４は硫酸マグネシウムであり、
ＮａＨＣＯ３は重炭酸ナトリウムであり、
ＮＨ４ＨＣＯ３は重炭酸アンモニウムであり、
ＴＢＡＦはテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオリドであり、
ｐ−ＴｓＯＨはｐ−トルエンスルホン酸であり、
ＴＭＳＢｒはブロモトリメチルシランであり、
ＴＭＳＯＴｆはトリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリルであり、
ＤＣＭはジクロロメタンであり、
ＤＭＦはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドであり、
ＤＭＳＯはジメチルスルホキシドであり、および
ＭＳは質量分析法であり、（＋）は、一般にＭ＋１（またはＭ＋Ｈ）吸収を与えるポジティブモードを指し、ここでＭは分子量に等しい。
【０１２１】
・実施例１
（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−クロロ−４−（２−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）メチル）ホスホン酸  １
【化３１】
2021535102.tif 000040
【０１２２】
・ステップ１
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２−（アセトキシメチル）−５−（４，６−ジクロロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）テトラヒドロフラン−３，４−ジイルジアセテート  １ｃ
乾燥した丸底フラスコ（５００ｍＬ）に、４，６−ジクロロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン  １ｂ（１２．５ｇ、６６．１ｍｍｏｌ）、硫酸アンモニウム（０．１ｇ、０．７５ｍｍｏｌ）およびヘキサメチルジシラザン（７５ｍＬ）を入れた。３時間還流した後、混合物を室温に冷却してから、真空中で濃縮乾固した。得られた残留物をアセトニトリル（１５０ｍＬ）に取り、続いて（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（アセトキシメチル）−テトラヒドロフラン−２，３，４−トリイルトリアセテート  １ａ（２５．３ｇ、７９．５ｍｍｏｌ）を加えた。次に、混合物を０℃に冷却し、続いてＴＭＳＯＴｆ（１３．５ｍＬ、７２．５ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。
【０１２３】
室温までゆっくりと温めた温度で１８時間撹拌した後、反応混合物をロータリーエバポレーター（ｒｏｔａｖａｐｏｒ）で濃縮し、残留物をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）に取り、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液およびブラインで順番に洗浄した。有機相を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、ロータリーエバポレーター（ｒｏｔａｖａｐｏｒ）で濃縮し、ＴＥＬＥＤＹＮＥ  ＩＳＣＯシステム上で溶離液としてヘキサン中の０〜４０％ＥｔＯＡｃを用いたシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって残留物を精製して、黄色がかった粘着性油として１ｃを得た（２２．４ｇ、収率：７６％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４４７［Ｍ＋１］。
【０１２４】
・ステップ２
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−２−（６−クロロ−４−（２−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−５−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３，４−ジオール  １ｄ
ＭｅＯＨ（１５ｍＬ）中の（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２−（アセトキシメチル）−５−（４，６−ジクロロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）テトラヒドロフラン−３，４−ジイルジアセテート  １ｃ（３ｇ、６．７２ｍｍｏｌ）の溶液に、２−アザスピロ［３．５］ノナン（０．８４ｇ、６．７２ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（０．９４ｍＬ、６．７２ｍｍｏｌ）を室温で順番に加えた。室温で２時間撹拌した後、混合物にＤＢＵ（１．５１ｍＬ、１０．０８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物をさらに室温で２時間撹拌し、真空で濃縮した。ＴＥＬＥＤＹＮＥ  ＩＳＣＯシステム上で溶離液としてＤＣＭ中の５％ＭｅＯＨを用いたシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって、得られた残留物を精製して、白色固体として１ｄを得た（２．１ｇ、収率：７６％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４１０［Ｍ＋１］。
【０１２５】
・ステップ３
（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−クロロ−４−（２−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メタノール  １ｅ
無水アセトン（１５ｍＬ）中の（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−２−（６−クロロ−４−（２−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−５−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３，４−ジオール  １ｄ（１．１２ｇ、２．７４ｍｍｏｌ）の溶液に、２，２−ジメトキシプロパン（４．０４ｍＬ、３２．８８ｍｍｏｌ）およびｐ−トルエンスルホン酸一水和物（５２１ｍｇ、２．７４ｍｍｏｌ）を順番に加えた。室温で２時間撹拌した後、混合物に重炭酸ナトリウム（３４５ｍｇ、４．１ｍｍｏｌ）および水（７ｍＬ）を加え、混合物を室温で２時間撹拌し続けた。混合物を水（１０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をブラインで洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、そして真空で濃縮した。ＴＥＬＥＤＹＮＥ  ＩＳＣＯシステム上で溶離液としてヘキサン中の０〜６０％ＥｔＯＡｃを用いたシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって残留物を精製して、白色固体として１ｅを得た（０．９８ｇ、収率：８０％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４５０［Ｍ＋１］。
【０１２６】
・ステップ３
ジエチル（（（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−クロロ−４−（２−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メトキシ）メチル）ホスホネート  １ｆ
ＤＭＦ（２ｍＬ）中の（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−クロロ−４−（２−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メタノール  １ｅ（１６８ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）およびマグネシウムｔ−ブトキシド（９５ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）の溶液を室温で５分間撹拌した後、ＤＭＦ（１ｍＬ）中の（ジエトキシホスホリル）−メチル２−ニトロベンゼンスルホネート（１９８ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。４０℃で３時間撹拌した後、反応混合物を真空で濃縮した。次に、ＴＥＬＥＤＹＮＥ  ＩＳＣＯシステム上で溶離液としてヘキサン中の０〜５０％ＥｔＯＡｃを用いたシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって残留物を精製して、白色固体として１ｆを得た（１５５ｍｇ、収率：７０％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝６００［Ｍ＋１］。
【０１２７】
・ステップ５
（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−クロロ−４−（２−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）メチル）ホスホン酸  １
ＤＣＭ（２ｍＬ）中のジエチル（（（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−クロロ−４−（２−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メトキシ）メチル）ホスホネート  １ｆ（１０３．８ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＭＳＢｒ（０．２３ｍＬ、１．７３ｍｍｏｌ）を０℃で滴下した。０℃で５時間撹拌した後、反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液でクエンチし、ＨＰＬＣによって精製して、白色固体として１を得た（２５ｍｇ、収率：２９％）：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．１９（ｓ，１Ｈ）、６．０２（ｄ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，１Ｈ）、４．５７（ｔ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，１Ｈ）、４．３３（ｔ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ）、４．２１−４．１２（ｍ，２Ｈ）、４．０６（ｍ，２Ｈ）、３．９２（ｂｒｓ，３Ｈ）、３．８０−３．７０（ｍ，３Ｈ）、３．７０−３．１０（ｍ，３Ｈ）、１．７３−１．７１（ｍ，２Ｈ）、１．５４−１．４４（ｍ，４Ｈ）、１．４２−１．３５（ｍ，２Ｈ）、１．３４−１．２４（ｍ，２Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ（２０３ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１７．００（ｓ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝５０４［Ｍ＋１］。
【０１２８】
・実施例２
【化３２】
2021535102.tif 000041
（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−クロロ−４−（２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）メチル）ホスホン酸  ２
【化３３】
2021535102.tif 000042
【０１２９】
・ステップ１
メチル２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−カルボキシレート  ２ｂ
乾燥した丸底フラスコに、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−カルボン酸  ２ａ（１０．０ｇ、６１．６６ｍｍｏｌ）およびＤＣＭ（１００ｍＬ）を入れ、続いて室温でＳＯＣｌ２（６．７ｍＬ、９２．４９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌してから、ロータリーエバポレーター（ｒｏｔａｖａｐｏｒ）で半分の体積に濃縮した。上記の反応混合物にＭｅＯＨ（１００ｍＬ）をゆっくりと加え、反応を室温で３時間撹拌し続けた。次に、混合物をロータリーエバポレーター（ｒｏｔａｖａｐｏｒ）で濃縮し、ＴＥＬＥＤＹＮＥ  ＩＳＣＯシステム上で溶離液としてヘキサン中の０〜２５％ＥｔＯＡｃ用いたシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製して、無色の油として所望の生成物２ｂを得た（９．８５ｇ、収率：９１％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝１７７［Ｍ＋１］。
【０１３０】
・ステップ２
１−エチル１−メチル２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１，１−ジカルボキシレート  ２ｃ
乾燥した丸底フラスコに、メチル２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−カルボキシレート  ２ｂ（３．８０ｇ、２１．６ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（５０ｍＬ）を入れ、溶液を−７８℃に冷却した。この溶液に、ヘキサン／ＴＨＦ中の１Ｍリチウムジイソプロピルアミド（２４ｍＬ、２４ｍｍｏｌ）を加え、１時間撹拌した。次に、シアノギ酸エチル（２．９７ｇ、３０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を一晩撹拌しながら、温度をゆっくりと室温まで温めた。反応を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチし、１５分間撹拌した。次に、混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で抽出し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、そしてロータリーエバポレーター（ｒｏｔａｖａｐｏｒ）で濃縮した。ＴＥＬＥＤＹＮＥ  ＩＳＣＯシステム上で溶離液としてヘキサン中の０〜３０％ＥｔＯＡｃを用いたシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって残留物を精製して、無色の油として２ｃを得た（４．５ｇ、収率：９０％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２４９［Ｍ＋１］。
【０１３１】
・ステップ３
（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１，１−ジイル）ジメタノール  ２ｄ
乾燥した丸底フラスコに、１−エチル１−メチル２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１，１−ジカルボキシレート  ２ｃ（３．００ｇ、１２．００ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（１５ｍＬ）を入れ、続いて溶液を０℃に冷却した。この溶液に、ＴＨＦ中の１Ｍ水素化アルミニウムリチウム（９６ｍＬ、９６ｍｍｏｌ）を滴下して加え、混合物を一晩撹拌して、温度を室温まで上昇させた。混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液および４Ｍ  ＨＣｌでそれぞれ０℃にてクエンチして透明な溶液を得てから、ＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、ロータリーエバポレーター（ｒｏｔａｖａｐｏｒ）で濃縮した。得られた残留物を、ＴＥＬＥＤＹＮＥ  ＩＳＣＯシステム上で溶離液としてヘキサン中の０〜５０％ＥｔＯＡｃを用いたシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製して、白色固体として２ｄを得た（１．６ｇ、収率：７５％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝１７９［Ｍ＋１］。
【０１３２】
・ステップ４
（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１，１−ジイル）ビス（メチレン）ジメタンスルホネート  ２ｅ
乾燥した丸底フラスコに、（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１，１−ジイル）ジメタノール  ２ｄ（１．００ｇ、５．６１ｍｍｏｌ）、Ｅｔ３Ｎ（２．７２ｍＬ、１９．６４ｍｍｏｌ）およびＤＣＭ（１５ｍＬ）を入れ、続いて溶液を０℃に冷却した。この溶液にメタンスルホニルクロリド（１．３０ｍＬ、１６．８３ｍｍｏｌ）を加え、０℃で２時間撹拌した。次に、混合物をＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ）で希釈し、水で洗浄した。有機相を分離し、水相をＥｔＯＡｃ（２×２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、そしてロータリーエバポレーター（ｒｏｔａｖａｐｏｒ）で濃縮した。ＴＥＬＥＤＹＮＥ  ＩＳＣＯシステム上で溶離液としてヘキサン中の０〜３０％ＥｔＯＡｃを用いたシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって残留物を精製して、白色固体として２ｅを得た（１．７３ｇ、収率：９２％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３３５［Ｍ＋１］。
【０１３３】
・ステップ５
１−ベンジル−２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］  ２ｆ
バイアルに、（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１，１−ジイル）ビス（メチレン）ジメタンスルホネート  ２ｅ（１．５０ｇ、４．４９ｍｍｏｌ）およびベンジルアミン（１０ｍＬ）を入れ、１１０℃で１５時間撹拌した。冷却して、ロータリーエバポレーター（ｒｏｔａｖａｐｏｒ）で揮発性物質を除去した後、残留物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液でクエンチした。有機相を分離し、水相をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、そしてロータリーエバポレーター（ｒｏｔａｖａｐｏｒ）で濃縮した。ＴＥＬＥＤＹＮＥ  ＩＳＣＯシステム上で溶離液としてヘキサン中０〜６０％のＥｔＯＡｃを用いたシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって残留物を精製して、白色固体として２ｆを得た（０．２６ｇ、収率：２３％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２５０［Ｍ＋１］。
【０１３４】
・ステップ６
２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］アセテート  ２ｇ
丸底フラスコに、１−ベンジル−２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］  ２ｆ（０．２６ｇ、１．０４ｍｍｏｌ）、２０％Ｐｄ／Ｃ（１００ｍｇ）、ＡｃＯＨ（０．１ｍＬ）およびメタノール（１５ｍＬ）を入れた。フラスコにセプタムをかぶせ、真空および窒素ガスの補充により空気を窒素ガスと交換した。次に、混合物を１気圧のＨ２雰囲気下、室温で１５時間撹拌した。固体をろ過により除去し、メタノールで洗浄した。ろ液をロータリーエバポレーター（ｒｏｔａｖａｐｏｒ）で濃縮し、残留物を真空乾燥して粗製の２ｇを得、これをさらに精製することなく次の反応に直接使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝１６０［Ｍ＋１］。
【０１３５】
・ステップ７
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−２−（６−クロロ−４−（２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−５−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３，４−ジオール  ２ｈ
丸底フラスコに、粗製の２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］アセテート  ２ｇ（０．２６ｇ、１．２０ｍｍｏｌ）、Ｅｔ３Ｎ（０．５ｍＬ、３．６ｍｍｏｌ）およびメタノール（１０ｍＬ）を入れてから、０℃に冷却した。この溶液に、メタノール（２ｍＬ）中の（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２−（アセトキシメチル）−５−（４，６−ジクロロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）テトラヒドロフラン−３，４−ジイルジアセテート  １ｃ（０．５４ｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を０℃で１時間および室温で１時間それぞれ撹拌した。次に、反応混合物を０℃に再冷却し、続いてＤＢＵ（０．５１ｍＬ、３．６ｍｍｏｌ）を加えた。温度を室温まで温めながら、反応を２時間行った。混合物をロータリーエバポレーター（ｒｏｔａｖａｐｏｒ）で濃縮し、ＴＥＬＥＤＹＮＥ  ＩＳＣＯシステム上で溶離液としてジクロロメタン中の０〜１０％メタノールを用いたシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって残留物を精製して、白色固体として２ｈを得た（０．３３ｇ、収率：６２％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４４４［Ｍ＋１］。
【０１３６】
・ステップ８
（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−クロロ−４−（２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メタノール  ２ｉ
バイアルに、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−２−（６−クロロ−４−（２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−５−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３，４−ジオール  ２ｈ（０．３３ｇ、０．７４ｍｍｏｌ）、２，２−ジメトキシプロパン（１．１２ｍＬ、８．８８ｍｍｏｌ）およびアセトン（５ｍＬ）を入れた。この溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．１３ｇ、０．６８ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で４時間撹拌した。反応混合物をロータリーエバポレーター（ｒｏｔａｖａｐｏｒ）で濃縮し、残留物をＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ）に取り、続いて飽和ＮａＨＣＯ３水溶液でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２×２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をブラインで洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、そしてロータリーエバポレーター（ｒｏｔａｖａｐｏｒ）で濃縮した。ＴＥＬＥＤＹＮＥ  ＩＳＣＯシステム上で溶離液としてＤＣＭ中の０〜４０％ＥｔＯＡｃを用いたシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって残留物を精製して、白色固体として２ｉを得た（０．１８ｇ、収率：５０％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４８４［Ｍ＋１］。
【０１３７】
・ステップ９
ジエチル（（（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−クロロ−４−（２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メトキシ）メチル）ホスホネート  ２ｊ
乾燥したバイアルに、（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−クロロ−４−（２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メタノール  ２ｉ（０．１０ｇ、０．２１ｍｍｏｌ）、Ｍｇ（ＯｔＢｕ）２（０．１１ｇ、０．３２ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（１．５ｍＬ）を入れ、続いて室温で５分間撹拌した。この混合物に、ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中の（ジエトキシホスホリル）メチルノシレート（７２ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）の溶液を加え、４０℃で３時間撹拌した。次に、反応混合物をＨ２Ｏ（５ｍＬ）で希釈し、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（２ｍＬ）でクエンチし、そしてＥｔＯＡｃ（３×１５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をブラインで洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、そしてロータリーエバポレーター（ｒｏｔａｖａｐｏｒ）で濃縮した。ＴＥＬＥＤＹＮＥ  ＩＳＣＯシステム上で溶離液としてＤＣＭ中の０〜７０％ＥｔＯＡｃを用いたシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって残留物を精製して、無色の粘着性油として２ｊを得た（０．１３ｇ、収率：９８％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝６３４［Ｍ＋１］。
【０１３８】
・ステップ１０
（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−クロロ−４−（２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）メチル）ホスホン酸  ２
乾燥したバイアルに、ジエチル（（（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−クロロ−４−（２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メトキシ）メチル）ホスホネート  ２ｊ（１３０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）およびＤＣＭ（３ｍＬ）を入れ、続いて氷浴で溶液を０℃に冷却した。それにトリメチルシリルブロミド（０．２３ｍＬ、１．６８ｍｍｏｌ）を滴下し、反応混合物を０℃で４時間撹拌した。次に、溶液をロータリーエバポレーター（ｒｏｔａｖａｐｏｒ）により０℃で濃縮し、残留物を真空中で乾燥させた。残留物に、氷冷したＴＦＡ水溶液（５％Ｈ２Ｏを含む０．６４ｍＬ）を加えた。０℃で１時間撹拌した後、反応混合物を撹拌しながらＨ２Ｏ中（１０ｍＬ）の炭酸ナトリウム（０．８９ｇ）の溶液に滴下して加えた。３０分後、懸濁した混合物をアセトニトリルおよび水と混合して透明な溶液を得、これをＨ２Ｏ中の１０〜７０％メタノール＋０．５％ＮＨ４ＨＣＯ３を用いたＨＰＬＣによる精製に使用して、白色固体として２を得た（５６ｍｇ、収率：４９％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝５３８［Ｍ＋１］。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ８．１０（ｓ，１Ｈ）、７．５３（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３５−７．１９（ｍ，３Ｈ）、６．２５（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ）、４．７６（ｔ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．７４−４．５８（ｍ，２Ｈ）、４．５２（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．５０−４．３８（ｍ，２Ｈ）、４．２２（ｑ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ）、３．７９（ｄｄ，Ｊ＝１０．５，４．６Ｈｚ，１Ｈ）、３．７１（ｄｄ，Ｊ＝１０．５，６．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．６２（ｄｄ，Ｊ＝９．０，１．７Ｈｚ，２Ｈ）、３．０１（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）、２．５４（ｑ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ（２０３ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ１４．８９（ｓ）。
【０１３９】
・実施例３および４
【化３４】
2021535102.tif 000043
（（（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−クロロ−４−（２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）メチル）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）メチルイソプロピルカーボネート  ３、および
（（（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−クロロ−４−（２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）メチル）ホスホリル）ビス（オキシ））ビス（メチレン）ジイソプロピルデカーボネート  ４
【化３５】
2021535102.tif 000044
【０１４０】
・ステップ１
（（（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−クロロ−４−（２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メトキシ）メチル）ホスホン酸  ２ｋ
乾燥した丸底フラスコに、２ｊ（４７８ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）およびＤＣＭ（１０ｍＬ）を入れた。得られた溶液を０℃に冷却した後、ＴＭＳＢｒ（１．０ｍＬ、７．５４ｍｍｏｌ）を滴下した。０℃で３時間撹拌した後、反応混合物をロータリーエバポレーター（ｒｏｔａｖａｐｏｒ）で濃縮し、さらに真空中で乾燥させた。得られた残留物を氷冷ＤＣＭに取り、その後、Ｈ２Ｏ（３ｍＬ）中のＮＨ４ＨＣＯ３（１１９ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で滴下して加えた。０℃で３０分間撹拌した後、溶離液としてＨ２Ｏ中の４０〜９０％ＭｅＯＨを用いたＨＰＬＣによって混合物を精製して、白色固体として２ｋを得た（２１０ｍｇ、４９％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝５７８［Ｍ＋１］。
【０１４１】
・ステップ２
（（（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−クロロ−４−（２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）メチル）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）メチルイソプロピルカーボネート  ３、および
（（（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−クロロ−４−（２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）メチル）ホスホリル）ビス（オキシ））ビス（メチレン）ジイソプロピルデカーボネート  ４
乾燥した丸底フラスコに、２ｋ（１８０ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）、クロロメチルイソプロピルカーボネート（２８５ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ）、ｎ−Ｂｕ４ＮＢｒ（４００ｍｇ、１．２４ｍｍｏｌ）およびＮ−メチルピロリドン（１．５ｍＬ）を入れ、続いて室温でＥｔ３Ｎ（０．１３ｍＬ、０．９３ｍｍｏｌ）を加えた。５５℃で４時間撹拌した後、反応混合物を室温に冷却し、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）で希釈し、そしてＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をブラインで洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、ロータリーエバポレーター（ｒｏｔａｖａｐｏｒ）で濃縮し、さらに真空で乾燥させた。得られた残留物を氷冷したＴＦＡ（５％Ｈ２Ｏを含む０．４７ｍＬ）に取った。０℃で１時間撹拌した後、反応混合物を０℃でＨ２Ｏ（１５ｍＬ）中のＮａＨＣＯ３（８２２ｍｇ）の溶液にゆっくりと滴下し、室温で１５分間撹拌した。得られた混合物を、Ｈ２Ｏ中の３０〜８０％ＭｅＣＮを用いたＨＰＬＣによって精製して、白色固体としての３（３２ｍｇ、収率：１６％）、ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝６５４［Ｍ＋１］および白色固体としての４（１６ｍｇ、収率：７％）、ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝７７０［Ｍ＋１］をそれぞれ得た。
【０１４２】
・実施例５
【化３６】
2021535102.tif 000045
（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−クロロ−４−（５’−クロロ−３’Ｈ−スピロ［アゼチジン−３，１’−イソベンゾフラン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）メチル）ホスホン酸  ５
【化３７】
2021535102.tif 000046
【０１４３】
・ステップ１
ｔｅｒｔ−ブチル３−（４−クロロ−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−３−ヒドロキシアゼチジン−１−カルボキシレート  ５ｃ
無水ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の（２−ブロモ−５−クロロフェニル）メタノール  ５ａ（２．００ｇ、９．０３ｍｍｏｌ）の溶液に、−７８°Ｃでｎ−ブチルリチウム（８．５０ｍＬ、ヘキサン中１．６Ｍ、１３．６０ｍｍｏｌ）を滴下した。−７８℃で１時間撹拌した後、反応混合物に、無水ＴＨＦ（５ｍＬ）中のＮ−Ｂｏｃ−３−アゼチジノン  ５ｂ（１．６０ｇ、９．３５ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。反応混合物を室温に温め、１６時間撹拌した。反応混合物を氷冷のＮＨ４Ｃｌ水溶液（１０ｍＬ、１０％）でクエンチし、酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、そして真空下で濃縮した。得られた残留物を、シリカゲルのカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝３：７）によって精製して、５ｃを得た（０．５０ｇ、収率：１７．６％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３１４［Ｍ＋１］。
【０１４４】
・ステップ２
ｔｅｒｔ−ブチル３−（４−クロロ−２−（クロロメチル）フェニル）−３−ヒドロキシアゼチジン−１−カルボキシレート  ５ｄ
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル３−（４−クロロ−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−３−ヒドロキシアゼチジン−１−カルボキシレート  ５ｃ（０．５ｇ、１．５９ｍｍｏｌ）の溶液に、メタンスルホニルクロリド溶液（０．５３７ｍＬ、６．９４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１．０９５ｍＬ、８．０１ｍｍｏｌ）を室温で加えた。室温で３時間撹拌した後、反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、ＤＣＭで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、次いで真空下で濃縮した。シリカゲルのカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝３：７）によって残留物を精製して、５ｄを得た（０．１ｇ、収率：１８．９％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３３３［Ｍ＋１］。
【０１４５】
・ステップ３
ｔｅｒｔ−ブチル５’−クロロ−３’Ｈ−スピロ［アゼチジン−３，１’−イソベンゾフラン］−１−カルボキシレート  ５ｅ
ＴＨＦ（５ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル３−（４−クロロ−２−（クロロメチル）フェニル）−３−ヒドロキシアゼチジン−１−カルボキシレート（０．１ｇ、０．３０ｍｍｏｌ）５ｄの溶液に、水素化ナトリウム（２７ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ、鉱油中６０％）を０℃で少しずつ加えた。得られた混合物を室温で２時間撹拌してから、氷水でクエンチし、続いてＥｔＯＡｃ（３×２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を水およびブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、そして真空下で濃縮した。シリカゲルのカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝３：７）によって残留物を精製して、５ｅを得た（８０ｍｇ、収率：９０％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２９６［Ｍ＋１］。
【０１４６】
・ステップ４
５’−クロロ−３’Ｈ−スピロ［アゼチジン−３，１’−イソベンゾフラン］  ５ｆ
ＤＣＭ（２ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル５’−クロロ−３’Ｈ−スピロ［アゼチジン−３，１’−イソベンゾフラン］−１−カルボキシレート  ５ｅ（８０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）およびトリフルオロ酢酸（１ｍＬ）の溶液を室温で２時間撹拌した。溶液を真空で濃縮して５ｆを得た（５０ｍｇ、収率：９５％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝１９６．０［Ｍ＋１］。
【０１４７】
・ステップ５
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２−（アセトキシメチル）−５−（６−クロロ−４−（５’−クロロ−３’Ｈ−スピロ［アゼチジン−３，１’−イソベンゾフラン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）テトラヒドロフラン−３，４−ジイルジアセテート  ５ｇ
エタノール（１０ｍＬ）中の５’−クロロ−３’Ｈ−スピロ［アゼチジン−３，１’−イソベンゾフラン］  ５ｆ（５０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）の溶液に、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２−（アセトキシメチル）−５−（４，６−ジクロロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）テトラヒドロフラン−３，４−ジイルジアセテート  １ｃ（１２５ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（５０ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物を０℃で１５分間、次に室温で３．０時間撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮し、シリカゲルのカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：１）によって残留物を精製して、５ｇを得た（１４６ｍｇ、収率：９３％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝６０６［Ｍ＋１］。
【０１４８】
・ステップ６
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−２−（６−クロロ−４−（５’−クロロ−３’Ｈ−スピロ［アゼチジン−３，１’−イソベンゾフラン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−５−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３，４−ジオール  ５ｈ
エタノール（１５ｍｌ）中の（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２−（アセトキシメチル）−５−（６−クロロ−４−（５’−クロロ−３’Ｈ−スピロ［アゼチジン−３，１’−イソベンゾフラン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）テトラヒドロフラン−３，４−ジイルジアセテート  ５ｇ（２３０ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＢＵ（１１６ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）を室温で加えた。室温で１時間撹拌した後、反応混合物を真空下で濃縮し、シリカゲルのカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝４：１）によって残留物を精製して、５ｈを得た（１３５ｍｇ、収率：７４％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４８０．０［Ｍ＋１］。
【０１４９】
・ステップ７
（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−クロロ−４−（５’−クロロ−３’Ｈ−スピロ［アゼチジン−３，１’−イソベンゾフラン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メタノール  ５ｉ
アセトン（５ｍＬ）中の（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−２−（６−クロロ−４−（５’−クロロ−３’Ｈ−スピロ［アゼチジン−３，１’−イソベンゾフラン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−５−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３，４−ジオール  ５ｈ（１３５ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）の溶液に、２，２−ジメトキシプロパン（４３．９ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）およびｐ−ＴｓＯＨ一水和物（７１．７ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）を室温で加えた。室温で２時間撹拌した後、反応物をＥｔ３Ｎ（２００μＬ）で中和し、真空下で濃縮した。シリカゲルのカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中のＥｔＯＡｃ７５％〜１００％）によって粗生成物を精製して、５ｉを得た（８８ｍｇ、収率：６０．２％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝５２０［Ｍ＋１］。
【０１５０】
・ステップ８
ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（（（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−クロロ−４−（５’−クロロ−３’Ｈ−スピロ［アゼチジン−３，１’−イソベンゾフラン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メトキシ）メチル）ホスホネート  ５ｊ
無水ＤＭＦ（２．５ｍＬ）中の（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−クロロ−４−（５’−クロロ−３’Ｈ−スピロ［アゼチジン−３，１’−イソベンゾフラン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メタノール  ５ｉ（８８ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）の溶液に、（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）メチル４−ニトロベンゼンスルホネート（１０４ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）およびマグネシウム２−メチルプロパン−２−オレート（７２．１ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）を室温で加えた。反応混合物を５０℃で１８時間撹拌してから室温に冷却し、続いて水（１０ｍＬ）および酢酸エチル（２０ｍＬ）を加えた。反応混合物をセライトの短いパッドに通した。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、そして真空で濃縮した。シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ：メタノール＝１０：１）によって残留物を精製して、５ｊを得た（８０ｍｇ、収率：６５％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝７２６［Ｍ＋１］。
【０１５１】
・ステップ９
（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−クロロ−４−（５’−クロロ−３’Ｈ−スピロ［アゼチジン−３，１’−イソベンゾフラン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）メチル）ホスホン酸  ５
ＤＣＭ（２ｍＬ）に溶解したジ−ｔｅｒｔ−ブチル（（（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−クロロ−４−（５’−クロロ−３’Ｈ−スピロ［アゼチジン−３，１’−イソベンゾフラン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メトキシ）メチル）ホスホネート  ５ｊ（８０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＦＡ（０．５ｍＬ）および水（０．５ｍＬ）を加えた。反応混合物を室温で０．５時間撹拌した。反応混合物を真空で濃縮した。得られた残留物をＭｅＯＨ（２ｍＬ）で希釈し、ＭｅＯＨ中の７．０ＭのＮＨ３（２ｍＬ）でｐＨ約７．０に中和した。混合物を真空で濃縮し、逆相ＨＰＬＣ（Ｃ−１８カラム、０．１％ＨＣＯＯＨを含むアセトニトリルおよび水の０〜３０％グラジエント）によって残留物を精製して、黄色の固体として５を得た（２０ｍｇ、収率：３２％）：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ８．０９（ｓ，１Ｈ）、７．５８（ｓ，１Ｈ）、７．４１（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．３６（ｓ，１Ｈ）、６．２４（ｓ，１Ｈ）、５．１７（ｓ，２Ｈ）、４．８２（ｂｒｓ，２Ｈ）、４．７４（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．６２（ｂｒｓ，２Ｈ）、４．５０（ｔ，Ｊ＝５Ｈｚ，１Ｈ）、４．２２−４．１８（ｍ，１Ｈ）、３．７９−３．７５（ｍ，１Ｈ）、３．７１−３．６７（ｍ，１Ｈ）、３．００（ｓ，１Ｈ）、２．８６（ｓ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝５７４［Ｍ＋１］。
【０１５２】
・実施例６
【化３８】
2021535102.tif 000047
（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−クロロ−４−（６’−フルオロ−２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）メチル）ホスホン酸  ６
【化３９】
2021535102.tif 000048
【０１５３】
・ステップ１
６−フルオロ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−カルボニトリル  ６ｂ
ＴＨＦ−エタノール（１００ｍＬ、１：１）中の６−フルオロ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−オン  ６ａ（２０．０ｇ、１３３．２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＨＦ（３５ｍＬ）中のカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（３０．０ｇ、２６７．４ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物を２０℃に温め、続いてｐ−トリルスルホニルメチルイソシアニド（４０．０ｇ、２０４．８８ｍｍｏｌ）を１時間で少しずつ加えた。反応混合物を同じ温度で１６時間撹拌し続け、次に０℃に冷却した後、激しく撹拌しながらブライン（１００ｍＬ）を加えた。混合物をブライン（５００ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（４×２５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、そして真空中で濃縮した。シリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって残留物を精製して、６ｂを得た（１３．０ｇ、収率：６０．６％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．２７−７．２１（ｍ，１Ｈ）、７．１５−７．１２（ｍ，１Ｈ）、７．００−６．９９（ｍ，１Ｈ）、４．１０（ｔ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ）、３．０６−３．００（ｍ，１Ｈ）、２．９５−２．８５（ｍ，１Ｈ）、２．６５−２．６０（ｍ，１Ｈ）、２．４７−２．４０（ｍ，１Ｈ）。
【０１５４】
・ステップ２
６−フルオロ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−カルボン酸  ６ｃ
水（５０ｍＬ）中の６−フルオロ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−カルボニトリル  ６ｂ（５．０ｇ、３１．０ｍｍｏｌ）および水酸化ナトリウム（２．５０ｇ、６２．５ｍｍｏｌ）の混合物を５．０時間加熱還流した。室温まで冷却した後、溶液をＥｔＯＡｃ（２×２５ｍＬ）で抽出した。水相を水（５０ｍＬ）で希釈し、濃塩酸を注意深く加えることにより、０℃でｐＨ値を２〜３に調整した。得られた濁った混合物をＤＣＭ（５０ｍＬ）で抽出し、ＤＣＭ層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、そして真空で濃縮した。ヘキサン／ＥｔＯＡｃ溶離液を用いたシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって残留物を精製して、６ｃを得た（５．０ｇ、収率：８９．５％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝１７９［Ｍ−１］。
【０１５５】
・ステップ３
メチル６−フルオロ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−カルボキシレート  ６ｄ
ＤＣＭ（２５ｍＬ）中の６−フルオロ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−カルボン酸  ６ｃ（５．０ｇ、２７．８ｍｍｏｌ）の溶液およびピリジン（２２０ｍｇ、２．７８ｍｍｏｌ）に、塩化チオニル（２．０１ｍＬ、２．７８ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。メタノール（２５ｍＬ）を加える前に、溶液を室温で２．０時間撹拌した。室温でさらに２時間撹拌した後、反応混合物を真空で濃縮した。得られた残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：２）によって精製して、６ｄを得た（５．２０ｇ、収率：９６．５％）。
【０１５６】
・ステップ４
６−フルオロ−１−（ヒドロキシメチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−カルボン酸  ６ｅ
ＤＭＳＯ（２０ｍｌ）中のメチル６−フルオロ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−カルボキシレート  ６ｄ（２．０ｇ、１０．３０ｍｍｏｌ）、ホルムアルデヒド（１．７５ｇ、２０．７５ｍｍｏｌ、水中３８％）および炭酸カリウム（４．３ｇ、３１．１ｍｍｏｌ）の混合物を室温で１６時間撹拌した。次に、混合物を氷水（５０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、そして真空で濃縮した。得られた残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：２）によって精製して、６ｅを得た（２．１ｇ、収率：９７．１％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２０９［Ｍ−１］。
【０１５７】
・ステップ５
Ｎ−ベンジル−６−フルオロ−１−（ヒドロキシメチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−カルボキサミド  ６ｆ
ＤＭＦ（２５ｍＬ）中の６−フルオロ−１−（ヒドロキシメチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−カルボン酸  ６ｅ（２．１ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）の溶液に、フェニルメタンアミン（１．２ｇ、１１．２ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（１．９５ｇ、１５．１ｍｍｏｌ）、およびＨＡＴＵ（３．６ｇ、１５．３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、ＤＣＭと水との間で分配した。有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、そして真空で濃縮した。シリカゲルのカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の１０％ＭｅＯＨ）によって残留物を精製して、６ｆを得た（２．７０ｇ、収率：９０．３％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３００［Ｍ＋１］。
【０１５８】
・ステップ６
（１−（ベンジルカルバモイル）−６−フルオロ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）メチルメタンスルホネート  ６ｇ
ＤＣＭ（４０ｍＬ）中のＮ−ベンジル−６−フルオロ−１−（ヒドロキシメチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−カルボキサミド  ６ｆ（２．７０ｇ、９．０２ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（１．８９ｍＬ、１３．５４ｍｍｏｌ）およびメタンスルホニルクロリド（０．８９ｍＬ、１１．３５ｍｍｏｌ）を０〜５℃で順番に加えた。室温で１２時間撹拌した後、反応混合物を氷水（５０ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（３×２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、そして真空で濃縮した。シリカゲルのカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝６：１）によって残留物を精製して、６ｇを得た（３．０ｇ、収率：８８．２％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３７８［Ｍ＋１］。
【０１５９】
・ステップ７
１−ベンジル−６’−フルオロ−２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−２−オン  ６ｈ
アセトニトリル（２５ｍｌ）中の（１−（ベンジルカルバモイル）−６−フルオロ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）メチルメタンスルホネート  ６ｇ（３．０ｇ、７．９５ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸カリウム（２．２ｇ、１５．９２ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１６時間撹拌した後、混合物を氷水（５０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、そして真空で濃縮した。シリカゲルのカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：２）によって残留物を精製して、６ｈを得た（２．０ｇ、収率：８９．５％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２８２［Ｍ＋１］。
【０１６０】
・ステップ８
１−ベンジル−６’−フルオロ−２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］  ６ｉ
ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の塩化アルミニウム（０．９５ｇ、７．１５ｍｍｏｌ）の溶液に、水素化アルミニウムリチウム（４．３６ｍＬ、１０．９１ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中の２．５Ｍ溶液）を０℃で加えた。混合物を０℃で３０分間撹拌した。混合物に、ＴＨＦ（５ｍＬ）中の１−ベンジル−６’−フルオロ−２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−２−オン  ６ｈ（１．０ｇ、３．５５ｍｍｏｌ）の溶液を０℃で滴下して加えた。反応混合物を２５℃で１６時間撹拌した後、水（２５ｍＬ）、水酸化ナトリウム水溶液（１５％、２５ｍＬ）、水（７５ｍＬ）を０℃で滴下して加えた。０℃で１０分間撹拌した後、混合物にＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）を加え、セライトを通してろ過した。ろ液の有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、水（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、そして真空で濃縮した。シリカゲルのカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：１）によって残留物を精製して、６ｉを得た（０．６６ｇ、収率：６９．６％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２６８［Ｍ＋１］。
【０１６１】
・ステップ９
６’−フルオロ−２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］  ６ｊ
メタノール（２０ｍｌ）中の１−ベンジル−６’−フルオロ−２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］  ６ｉ（０．５３ｇ、１．９８ｍｍｏｌ）の溶液に、ジヒドロキシパラジウム（２７８ｍｇ、３９５．９ｕｍｏｌ、炭素上２０％、約５０％の水で湿らせたもの（２０％  ｏｎ  ｃａｒｂｏｎ，  ｗｅｔｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｃａ．  ５０％  Ｗａｔｅｒ））、およびギ酸アンモニウム（１５０ｍｇ、２．３８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を水素ガスのバルーン下で６０℃にて１６時間撹拌した。反応混合物をろ過し、メタノール（３０ｍＬ）で洗浄した。ろ液を真空で濃縮し、シリカゲルのカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：１）によって精製して、６ｊを得た（０．２ｇ、収率：５７％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝１７８［Ｍ＋１］。
【０１６２】
・ステップ１０
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２−（アセトキシメチル）−５−（６−クロロ−４−（６’−フルオロ−２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）テトラヒドロフラン−３，４−ジイルジアセテート  ６ｋ
エタノール（１０ｍＬ）中の６’−フルオロ−２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］  ６ｊ（０．２６ｇ、１．４７ｍｍｏｌ）の溶液に、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２−（アセトキシメチル）−５−（４，６−ジクロロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）テトラヒドロフラン−３，４−ジイルジアセテート  １ｃ（６６０ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２８５ｍｇ、２．２１ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物を０℃で１５分間、次に室温で３．０時間撹拌した。反応混合物を真空で濃縮し、シリカゲルのカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：１）によって残留物を精製して、６ｋを得た（０．７３ｇ、収率：８４．５％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝５８８［Ｍ＋１］。
【０１６３】
・ステップ１１
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−２−（６−クロロ−４−（６’−フルオロ−２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−５−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３，４−ジオール  ６ｌの合成
エタノール（２５ｍＬ）中の（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２−（アセトキシメチル）−５−（６−クロロ−４−（６’−フルオロ−２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）テトラヒドロフラン−３，４−ジイルジアセテート  ６ｋ（７３０ｍｇ、１．２４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＢＵ（０．４７ｇ、０．８７ｍｍｏｌ）を室温で加えた。室温で１．０時間撹拌した後、反応混合物を真空で濃縮し、シリカゲルのカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝４：１）によって残留物を精製して、６ｌを得た（４００ｍｇ、７０％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４６２［Ｍ＋１］。
【０１６４】
・ステップ１２
（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−クロロ−４−（６’−フルオロ−２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メタノール  ６ｍの合成
アセトン（１５ｍＬ）中の（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−２−（６−クロロ−４−（６’−フルオロ−２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−５−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−３，４−ジオール  ６ｌ（４００ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）、２，２−ジメトキシプロパン（９５．０ｍｇ、０．９１ｍｍｏｌ）およびｐ−ＴｓＯＨ（１６５．０ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）の溶液を室温で２時間撹拌した。反応混合物をＥｔ３Ｎ（２００μＬ）で中和し、真空で濃縮した。シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中の７５％〜１００％ＥｔＯＡｃ）によって残留物を精製して、６ｍを得た（３６０ｍｇ、収率：８２．４％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝５０２［Ｍ＋１］。
【０１６５】
・ステップ１３
ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（（（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−クロロ−４−（６’−フルオロ−２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メトキシ）メチル）ホスホネート  ６ｎ
ＤＭＦ（２．０ｍＬ）中の（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−クロロ−４−（６’−フルオロ−２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メタノール  ６ｍ（５０ｍｇ、０．０９９ｍｍｏｌ）、（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシホスホリル）メチル４−ニトロベンゼンスルホネート（５０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）およびマグネシウム２−メチルプロパン−２−オレート（４５ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）の混合物を５０℃で１８時間撹拌した。周囲温度に冷却した後、反応混合物に水（１０ｍＬ）およびＥＴＯＡｃ（２０ｍＬ）を加えた。反応混合物をセライトの短いパッドに通した。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、そして真空で濃縮した。シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ：メタノール＝１０：１）によって残留物を精製して、６ｎを得た（２０ｍｇ、収率：２８．５％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝７０８［Ｍ＋１］。
【０１６６】
・ステップ１４
（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−クロロ−４−（６’−フルオロ−２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）メチル）ホスホン酸  ６
ＤＣＭ（２ｍＬ）中のジ−ｔｅｒｔ−ブチル（（（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−クロロ−４−（６’−フルオロ−２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メトキシ）メチル）ホスホネート  ６ｎ（２０ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＦＡ（０．５ｍＬ）および水（０．５ｍＬ）を室温で加えた。室温で０．５時間撹拌した後、反応混合物を真空で濃縮した。残留物をメタノール（２ｍＬ）に溶解し、ＭｅＯＨ中の７．０ＭのＮＨ３（２ｍＬ）でｐＨ約７．０に中和した。反応混合物を真空で濃縮した。逆相ＨＰＬＣ（Ｃ−１８カラム、０．１％ＨＣＯＯＨを含むアセトニトリルおよび水の０〜３０％グラジエント）によって残留物を精製して、黄色の固体として生成物６を得た（１２ｍｇ、収率：７６．４％）：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ８．１１（ｓ，１Ｈ）、７．９６−７．９４（ｍ，１Ｈ）、７．２５（ｂｒｓ，１Ｈ）、６．２３（ｄ，Ｊ＝４Ｈｚ，１Ｈ）、４．５０−４．４３（ｍ，２Ｈ）、４．２３−４．１５（ｍ，２Ｈ）、３．７９−３．７３（ｍ，２Ｈ）、３．６４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、３．０１（ｓ，２Ｈ）、２．９６−２．９３（ｍ，２Ｈ）、２．８７（ｓ，２Ｈ）、２．５６（ｓ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝５５６［Ｍ＋１］。
【０１６７】
・実施例７
【化４０】
2021535102.tif 000049
（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−クロロ−４−（５’−メトキシ−２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）メチル）ホスホン酸  ７
表題化合物は、実施例６と同様の方法で合成された：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ８．１０（ｓ，１Ｈ）、７．４１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、６．９２−６．８１（ｍ，２Ｈ）、６．２１（ｓ，１Ｈ）、４．７１−４．５８（ｍ，２Ｈ）、４．４９−４．４０（ｍ，３Ｈ）、４．２４（ｓ，１Ｈ）、３．７９（ｓ，３Ｈ）、３．７５−３．６１（ｍ，２Ｈ）、３．０１−２．８６（ｍ，３Ｈ）、２．５６−２．４３（ｍ，２Ｈ）、１．３０−１．２６（ｍ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝５６６［Ｍ−１］。
【０１６８】
・実施例８および９
【化４１】
2021535102.tif 000050
（（（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−クロロ−４−（２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）メチル）ホスホリル）ビス（オキシ））ビス（エタン−１，１−ジイル）ビス（２，２−ジメチルプロパノエート）  ８、および
１−（（（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−クロロ−４−（２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）メチル）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）エチルピバレート  ９
表題化合物は、実施例３および４と同じ方法で合成された：それぞれ、化合物８の場合はＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝７９４［Ｍ＋１］、化合物９の場合はＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝６６６［Ｍ＋１］。
【０１６９】
・実施例１０および１１
【化４２】
2021535102.tif 000051
ジフェニル（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−クロロ−４−（２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）メチル）ホスホネート  １０、および
フェニル水素（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−クロロ−４−（２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）メチル）ホスホネート  １１
【化４３】
2021535102.tif 000052
【０１７０】
・ステップ１
（（（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−クロロ−４−（２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メトキシ）メチル）ホスホン酸  ２ｋ
ＤＣＭ（５ｍＬ）中のジエチル（（（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−クロロ−４−（２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メトキシ）メチル）ホスホネート  ２ｊ（３３０ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＭＳＢｒ（０．６４ｍＬ、４．８９ｍｍｏｌ）およびピリジン（０．４８ｍＬ、５．８８ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。０℃で３．５時間撹拌した後、反応混合物を真空で濃縮した。溶離液としてＨ２Ｏ中の４０〜９０％ＭｅＯＨを用いたＨＰＬＣによって残留物を精製して、白色固体として２ｋを得た（２４０ｍｇ、８０％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝５７８［Ｍ＋１］。
【０１７１】
・ステップ２
（（（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−クロロ−４−（２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メトキシ）メチル）ホスホン酸ジクロリド  １０ａ
ＤＣＭ（２．５ｍＬ）中の（（（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−クロロ−４−（２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メトキシ）メチル）ホスホン酸  ２ｋ（１００ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＭ中の塩化オキサリル（２Ｍ、０．１６ｍＬ、０．３２ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（２滴）を室温で加えた。室温で３０分間撹拌した後、揮発性物質を真空で除去した。残留物に無水トルエンを加え、真空で２回蒸発させた。したがって、処理された残留物は、さらに精製することなく、次のステップに直接使用された。
【０１７２】
・ステップ３
ジフェニル（（（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−クロロ−４−（２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メトキシ）メチル）ホスホネート  １０ｂ
１０ａを含む残留物をＤＣＭ（１ｍＬ）に溶解した後、ＤＣＭ（１ｍＬ）中のフェノール（６４ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）の溶液およびＥｔ３Ｎ（０．２２ｍＬ、１．５４ｍｍｏｌ）溶液を０℃で順番に添加した。０℃で２０分間撹拌し、室温で１５分間撹拌した後、反応混合物を真空で濃縮した。シリカゲルのカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の０〜２％メタノール）によって残留物を精製して、１０ｂを得た（２３ｍｇ、収率：２ステップで１８．５％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝７３０［Ｍ＋１］。
【０１７３】
・ステップ４
ジフェニル（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−クロロ−４−（２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）メチル）ホスホネート  １０、および
フェニル水素（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−クロロ−４−（２’，３’−ジヒドロスピロ［アゼチジン−３，１’−インデン］−１−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）メチル）ホスホネート  １１
ＤＣＭ（１ｍＬ）中の１０ｂ（２３ｍｇ、０．０３１ｍｍｏｌ）の溶液に、ギ酸（８０％、０．５ｍＬ）を０℃で加えた。反応混合物を室温に温め、室温で１６時間撹拌し続けた。得られた混合物を、水中の３０〜８０％アセトニトリルを用いたＨＰＬＣによって精製して、白色固体として１０（１．２ｍｇ、収率：５．６％）を、白色固体として１１（３．８ｍｇ、収率：２０％）をそれぞれ得た。１０：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ７．９１（ｓ，１Ｈ）、７．４７−７．１０（ｍ，１４Ｈ）、６．２１（ｓ，１Ｈ）、４．７１−４．４０（ｍ，６Ｈ）、４．２０−４．１２（ｍ，３Ｈ）、３．９０−３．７５（ｍ，２Ｈ）、３．０１−２．８９（ｍ，２Ｈ）、２．５２−２．４５（ｍ，２Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ（１６０ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ１５．６８（ｓ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝６９０［Ｍ＋１］。１１：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ８．０１（ｓ，１Ｈ）、７．３０−７．０２（ｍ，９Ｈ）、６．２４（ｓ，１Ｈ）、４．７５−４．３０（ｍ，６Ｈ）、４．２６−４．１５（ｍ，１Ｈ）、３．８０−３．５５（ｍ，４Ｈ）、３．０１−２．８８（ｍ，２Ｈ）、２．５４−２．４８（ｍ，２Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ（１６０ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ１５．５３（ｓ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝６１４［Ｍ＋１］。
【０１７４】
・実施例１２
【化４４】
2021535102.tif 000053
（３−（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−クロロ−４−（２−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）ベンジル）ホスホン酸  １２
【化４５】
2021535102.tif 000054
【０１７５】
・ステップ１
１−（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（（３−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）フェノキシ）メチル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）−６−クロロ−４−（２−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン  １２ａ
ＴＨＦ（６ｍＬ）中のトリフェニルホスフィン（３７８ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）の溶液に、（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−クロロ−４−（２−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メタノール  １ｅ（４００ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）およびＤＩＡＤ（０．３３ｍＬ、１．６８ｍｍｏｌ）を室温で順番に加えた。室温で３０分間撹拌した後、反応混合物に、ＴＨＦ（１ｍＬ）中の３−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）フェノール（２１７ｍｇ、０．９１ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。１６時間還流した後、反応混合物を室温に冷却して、真空で濃縮した。シリカゲルのカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の０〜５０％ＥｔＯＡｃ）によって残留物を精製して、白色固体として１２ａを得た（１１４．５ｍｇ、収率：１９％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝６７０［Ｍ＋１］。
【０１７６】
・ステップ２
（３−（（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−クロロ−４−（２−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メトキシ）フェニル）メタノール  １２ｂ
ＴＨＦ（１．５ｍＬ）中の１−（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（（３−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）フェノキシ）メチル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）−６−クロロ−４−（２−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン  １２ａ（１７０．５ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＢＡＦ（ＴＨＦ中の１Ｍ、０．３１ｍＬ、０．３１ｍｍｏｌ）を室温で加えた。室温で２時間撹拌した後、反応混合物を真空で濃縮し、シリカゲルのカラムクロマトグラフィー（最初にヘキサン中の０〜３０％ＥｔＯＡｃ、次にＤＣＭ中の０〜５％メタノール）によって残留物を精製して、オフホワイトの固体として１２ｂを得た（１０２ｍｇ、収率：７２％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝５５６［Ｍ＋１］。
【０１７７】
・ステップ３
６−クロロ−１−（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（（３−（ヨードメチル）フェノキシ）メチル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）−４−（２−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン  １２ｃ
ＤＭＦ（１ｍＬ）中の（３−（（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−クロロ−４−（２−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メトキシ）フェニル）メタノール  １２ｂ（５０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）の溶液に、メチルトリフェノキシホスホニウムヨージド（８１．４ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を室温で加えた。室温で３０分間撹拌した後、メタノールを反応混合物に加え、溶液をさらに１５分間撹拌した。溶媒を蒸発乾固させた；残留物をＤＣＭに再溶解し、５％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液で１回、次に水で１回洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、そして蒸発乾固させた。シリカゲルのカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の０〜３０％ＥｔＯＡｃ）によって粗残留物を精製して、白色固体として１２ｃを得た（４６．３ｍｇ、収率：７７％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝６６６［Ｍ＋１］。
【０１７８】
・ステップ４
ジエチル（３−（（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−クロロ−４−（２−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メトキシ）ベンジル）ホスホネート  １２ｄ
６−クロロ−１−（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（（３−（ヨードメチル）フェノキシ）メチル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）−４−（２−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン  １２ｃ（３６ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ）を亜リン酸トリエチル（１ｍＬ）に溶解し、溶液をマイクロ波で１５０℃に５分間照射した。溶液を蒸発乾固し、シリカゲルのカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の０〜５０％ＥｔＯＡｃ）によって残留物を精製して、１２ｄを得た（２３ｍｇ、収率：６３％）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝６７６［Ｍ＋１］。
【０１７９】
・ステップ５
（３−（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（６−クロロ−４−（２−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）ベンジル）ホスホン酸  １２
ＤＣＭ（１ｍＬ）中のジエチル（３−（（（３ａＲ，４Ｒ，６Ｒ，６ａＲ）−６−（６−クロロ−４−（２−アザスピロ［３．５］ノナン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−２，２−ジメチルテトラヒドロフロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４−イル）メトキシ）ベンジル）ホスホネート  １２ｄ（１９．６ｍｇ、０．０２９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＭＳＢｒ（０．０２ｍＬ、０．１８ｍｍｏｌ）およびピリジン（０．０２ｍＬ、０．２５ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。０℃で５時間撹拌した後、反応混合物を蒸発乾固させた。残留物に氷冷したＴＦＡ水溶液（５％Ｈ２Ｏを含む０．５ｍＬ）を加えた。０℃で１時間撹拌した後、反応混合物を撹拌しながら飽和炭酸ナトリウム水溶液で中和した。混合物をアセトニトリルおよび水と混合して透明な溶液を得、これを、Ｈ２Ｏ中の１０〜７０％メタノール＋０．５％ＮＨ４ＨＣＯ３を用いたＨＰＬＣによる精製に使用して、白色固体として１２を得た（６．６ｍｇ、収率：３９％）：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ８．００（ｓ，１Ｈ）、７．０８（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）、６．９８（ｓ，１Ｈ）、６．９２（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ）、６．６６（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、６．２４（ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，１Ｈ）、４．６６−４．５８（ｍ，２Ｈ）、４．３７（ｔｄ，Ｊ＝６．０，３．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．２７（ｄｄ，Ｊ＝１０．８，３．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．１８−４．０８（ｍ，３Ｈ）、３．９４（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ）、２．８８（ｄ，Ｊ＝１９．８Ｈｚ，２Ｈ）、１．７７（ｄｔ，Ｊ＝１３．０，５．８Ｈｚ，４Ｈ）、１．５３（ｑ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，４Ｈ）、１．４５（ｑ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ（２０３ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ１８．４６（ｓ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝５８０［Ｍ＋１］。
【０１８０】
・生物学的アッセイ
本発明は、以下の試験例を参照してさらに説明されるが、これらの例は、本発明の範囲を限定するものと見なされるべきではない。
【０１８１】
・試験例１
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＣＤ７３酵素活性に対する阻害についての本発明の化合物の試験。
エクト−５’−ヌクレオチダーゼであるＣＤ７３酵素は、細胞外ヌクレオシド−５’−一リン酸をヌクレオシドに変換し、ＡＭＰまたはＣＭＰが好ましい基質である。このアッセイでは、チャイニーズハムスター卵巣細胞株（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）から発現した組換えヒトＣＤ７３を使用して、シチジン一リン酸（ＣＭＰ）をシチジンとリン酸に変換した。基質を加える前に、ＣＤ７３酵素を化合物と２時間プレインキュベートした。次に、リン酸の量をマラカイトグリーンリン酸検出キット（Ｍａｌａｃｈｉｔｅ  Ｇｒｅｅｎ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔ）で測定した。実験方法は以下のように要約される：
【０１８２】
Ｉ．実験材料および装置
１．マラカイトグリーンリン酸検出キット（Ｍａｌａｃｈｉｔｅ  ｇｒｅｅｎ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｋｉｔ）（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号、ＤＹ９９６）
２．組換えヒト５’−ヌクレオチダーゼ（ＣＤ７３）（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号、５７９５−ＥＮ）
３．ＨＥＰＥＳバッファー（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号、１５６３０−０８０）
４．ＣＭＰ（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号、Ｃ１００６）
５．ＤＭＳＯ（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ、カタログ番号、Ｄ１２８−１）
６．ＮａＣｌ  ５Ｍ（Ｂｏｓｔｏｎ  Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ、カタログ番号、ＢＭ−２４４）
７．３８４ウェルプレート（Ｆｉｓｈｅｒ、カタログ番号、５７９５−ＥＮ）
８．ＴＥＣＡＮプレートリーダー（ＴＥＣＡＮ）
【０１８３】
ＩＩ．実験手順
化合物を最初にＤＭＳＯに溶解してストック溶液として１０ｍＭにする。化合物のＩＣ５０を決定するときは、１２５μＭの最高濃度で合計１２の濃度ポイントの３倍段階希釈を調製し、各希釈物に等量のＤＭＳＯが含まれていることを確認する。３８４ウェルプレートの各ウェルにおいて、０．３４ｎＭの組換えヒト５’−ヌクレオチダーゼ（ＣＤ７３）を、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳバッファー（ｐＨ７．４）、１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、０．００１％Ｔｗｅｅｎ２０を含むアッセイバッファー中で、試験化合物とともに３７℃で２時間プレインキュベートした。各ウェルにおける反応の最終反応容量は１２μＬであった。化合物の最高濃度は１２５μＭであり、ＤＭＳＯ濃度は１．２５％であった。プレインキュベーション後、アッセイバッファーに溶解した３μＬのＣＭＰを各反応物に添加した。最終的なＣＭＰ濃度は４５μＭであった。反応物を３７℃で１５分間インキュベートした。次に、３μＬのマラカイトグリーン試薬Ａを各反応物に加えた。プレートを遠心分離機で３０秒間短時間遠心した。室温でさらに１０分間インキュベートした後、３μＬのマラカイトグリーン試薬Ｂを各反応物に添加した。プレートを遠心分離機で３０秒間短時間遠心した。室温で２０分間インキュベートした後、シグナルをＯＤ６２０でＴＥＣＡＮリーダーで読み取った。ＣＤ７３酵素、基質ＣＭＰおよびＤＭＳＯを含む反応物（化合物なし）がアッセイのポジティブコントロールとして使用され、基質ＣＭＰおよびＤＭＳＯを含むがＣＤ７３酵素を含まない反応物がアッセイのネガティブコントロールとして使用される。ＩＣ５０値は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍの適切なプログラムを使用して、化合物濃度の対数と阻害率をプロットすることによって計算された。
【０１８４】
本発明の化合物によるＣＤ７３酵素活性の生化学的阻害は、上記のアッセイによって決定され、得られたＩＣ５０値は表１に示されている。
【０１８５】
【表３】
2021535102.tif 000055
【０１８６】
結論：本発明の化合物は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＣＤ７３酵素活性に対して有意な阻害効果を有する。
【０１８７】
・試験例２
本発明の化合物がＩＦＮγサイトカイン産生によって細胞性免疫機能を調節することの決定
Ｉ．実験材料および装置
１．細胞：凍結保存されたヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ、カタログ番号７００２５）。ボトルあたり１００万、１５００万から２５００万個の細胞
２．リンパ球培地（Ｚｅｎｂｉｏ、カタログ番号ＬＹＭＰＨ−１）
３．ＴｅｘＭＡＣＳ培地（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ、カタログ番号１３０−０９７−１９６）
４．ＣＤ３およびＣＤ２８抗体ビーズ（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１  １６１Ｄ）
５．ＨＴＲＦヒトＩＦＮγサイトカインキット（Ｃｉｓｂｉｏ、ヒトＩＦＮγ  カタログ番号６２ＨＩＦＮＧＰＥＨ）
６．ＰＨＥＲＡｓｔａｒ  ＦＳＸマルチラベルリーダー（ＢＭＧ  Ｌａｂｔｅｃｈ）
【０１８８】
ＩＩ．実験手順
リンパ球培地とＴｅｘＭＡＣＳ培地を３７℃のウォーターバスでインキュベートした。インキュベートしたリンパ球培地１０ｍＬを５０ｍＬコニカルチューブに加えた。細胞を３７℃のウォーターバスですばやく解凍し、５０ｍｌチューブに移し、チューブを静かに旋回させた。細胞懸濁液を１１００ｒｐｍで１０分間室温にて遠心分離した。上清を除去し、細胞ペレットを１０ｍＬのＴｅｘＭＡＣＳ培地に穏やかに再懸濁した。細胞をカウントして、５×１０５細胞／ｍｌにした。１００μＬの５×１０５細胞／ｍｌのＰＢＭＣシードを９６ウェルプレートに挿入し（５０，０００細胞／ウェルの細胞密度）、９６ウェルプレートの最も外側のエッジウェルは水で満たし、試験のために使用しなかった。正常なドナー由来のヒトＰＢＭＣにおける腫瘍微小環境を模倣し、ＣＤ７３酵素に対する化合物の阻害活性を測定するために、ＣＤ７３の基質であるＡＭＰをヒトＰＢＭＣ細胞培養物に添加して、ＣＤ７３酵素を介してより多くのアデノシンを生成した。他の各ウェルに５０μＬの２００μＭ  ＡＭＰ（Ｓｉｇｍａ  Ａ２２５２）を添加した。最終的なＡＭＰ濃度は５０μＭであった。化合物をＴｅｘＭＡＣＳ培地で４０μＭに希釈した。「ＡＭＰのみ」のウェルに加えて、５０μＬの化合物を各ウェルに添加した。最終化合物濃度は０．１％ＤＭＳＯ中１０μＭであった。０．４％ＤＭＳＯをＴｅｘＭＡＣＳ培地で調製し、５０μＬをＡＭＰコントロールウェルに添加した。ボードを軽くタッピングして均一に混ぜた。３７℃で５％ＣＯ２と２時間インキュベートした後、ＣＤ３およびＣＤ２８抗体ビーズをＴｅｘＭＡＣＳ培地とマグネットラックで２回洗浄した。各ウェルに２μＬのＣＤ３およびＣＤ２８抗体ビーズを添加した。最終的な抗体ビーズと細胞の比率は１：１であった。細胞と抗体ビーズを数回ピペッティングして均質化した。５％ＣＯ２加湿インキュベーター内にて３７℃で７２時間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を遠心し（１０００ｒｐｍで５分間）、９０μＬの細胞培養上清を注意深く収集し、該培養上清をＨＴＲＦ  ＩＦＮγサイトカイン試薬とともに保存し、直ちにアッセイするか、−８０℃で凍結した。ＴｅｘＭＡＣＳ培地で希釈したサンプル（２５倍および１００倍）では、１２．８μＬのサンプルを３８４ウェルプレート（Ｐｒｏｘｉｐｌａｔｅ−３８４ｐｌｕｓ）の各ウェルに添加した。ＩＦＮクリプテート（ＩＦＮ  Ｃｒｙｐｔａｔｅ）をＸＬと混合（１：１）し、３．２μＬの混合溶液をプレートの各ウェルに添加した。すばやく旋回し、スピンダウンした。室温にて光から保護した。ＰＨＥＲＡｓｔａｒ  ＦＳＸマルチラベルリーダーで６６５ｎｍと６２０ｎｍの値を読み取った。
【０１８９】
ＩＩＩ．データ解析：
計算された比＝（６６５ｎｍのシグナル／６２０ｎｍのシグナル）×１０４。これは「生のシグナル（ｒａｗ  ｓｉｇｎａｌ）」を反映していた。デルタ比は特定の信号を反映していた。デルタ比＝スタンダードまたはサンプル比−スタンダード０比。ここで、スタンダード０はネガティブコントロールであり、内部アッセイコントロールとして使用された。ベンダーの指示に従って、２次カーブフィット法と共に比を使用して標準曲線を作成した。標準曲線に対応する各サンプルのＩＦＮγサイトカインの濃度を計算した。化合物によるＩＦＮγサイトカインの応答比（倍）＝（サンプル−ＡＭＰのみ）／（ＤＭＳＯ−ＡＭＰのみ）。式中、サンプル＝０．１％ＤＭＳＯ中の化合物１０μＭおよび５０μＭ  ＡＭＰによって産生されたＩＦＮγ；ＤＭＳＯ＝０．１％ＤＭＳＯ（ビヒクルコントロール）および５０μＭ  ＡＭＰによって産生されたＩＦＮγ；ＡＭＰのみ＝５０μＭ  ＡＭＰによって産生されたＩＦＮγ（バックグラウンドとして）。
【０１９０】
本発明の化合物によるＩＦＮγサイトカインの産生は、上記の試験によって測定された。１０μＭの化合物は、ビヒクルコントロール（ＤＭＳＯ）と比較して、１について４．１倍および２について４．３倍、ＩＦＮγサイトカインをそれぞれ産生することができた。
【０１９１】
ＩＶ．結論
本発明の化合物は、ＩＦＮγサイトカインの産生を刺激することができ、したがって、細胞性免疫機能に対して有意な調節効果を有し得る。
【０１９２】
前述の実施形態および例は、例示のみを目的として提供されており、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。開示された実施形態に対する様々な変更および修正は、本開示に基づいて当業者には明らかであり、そのような変更および修正は、本発明の精神および範囲から逸脱することなく行うことができる。引用されたすべての文献および参考文献は、その全体が参照により本明細書に援用される。
【国際調査報告】
2021535102.tif 000075
2021535102.tif 000076