(57)【要約】抗ＩＬ−１８受容体アルファまたはベータに対して結合特異性を有する抗体またはそのフラグメントが提供される。癌ならびに炎症性疾患および自己免疫疾患などの疾患を処置および診断するために抗体またはそのフラグメントを使用する方法も提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１のアミノ酸配列を有するヒトインターロイキン−１８受容体ベータ（ＩＬ−１８Ｒβ）タンパク質に対して結合特異性を有する抗体またはそのフラグメントであって、
前記結合は少なくとも以下を含む、抗体またはそのフラグメント：
配列番号１のＬ１６７、Ｄ２１３およびＴ２４２からなる群から選択されるアミノ酸残基、
配列番号１のＶ２４４、Ｇ２４５およびＤ２４６からなる群から選択されるアミノ酸残基、ならびに
配列番号１のＧ２７８、Ｆ２７９、Ｒ２８１、Ｖ２８２、Ｆ２８３、Ｎ２８４、Ｐ２８５、Ｓ３１０、Ｅ３１５およびＩ３１７からなる群から選択されるアミノ酸残基。
【請求項２】
前記結合は少なくとも以下を含む、請求項１に記載の抗体またはそのフラグメント：
配列番号１のＤ２１３およびＴ２４２からなる群から選択されるアミノ酸残基、
配列番号１のＶ２４４、Ｇ２４５およびＤ２４６からなる群から選択されるアミノ酸残基、ならびに
配列番号１のＧ２７８、Ｒ２８１、Ｖ２８２、Ｆ２８３、Ｎ２８４、Ｐ２８５、Ｓ３１０、Ｅ３１５およびＩ３１７からなる群から選択されるアミノ酸残基。
【請求項３】
前記結合は少なくとも以下を含む、請求項１に記載の抗体またはそのフラグメント：
配列番号１のＤ２１３およびＴ２４２からなる群から選択されるアミノ酸残基、
配列番号１の前記アミノ酸残基Ｖ２４４、ならびに
配列番号１のＧ２７８、Ｒ２８１、Ｖ２８２、Ｆ２８３、Ｎ２８４、Ｐ２８５、Ｓ３１０、Ｅ３１５およびＩ３１７からなる群から選択されるアミノ酸残基。
【請求項４】
前記結合は、少なくとも配列番号１の前記アミノ酸残基Ｄ２１３、Ｔ２４２、Ｖ２４４、Ｇ２７８、Ｒ２８１、Ｖ２８２、Ｆ２８３、Ｎ２８４、Ｐ２８５、Ｓ３１０、Ｅ３１５およびＩ３１７を含む、請求項１に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項５】
前記結合は、少なくとも配列番号１の前記アミノ酸残基Ｌ１６７、Ｄ２１３、Ｔ２４２、Ｖ２４４、Ｇ２７８、Ｆ２７９、Ｒ２８１、Ｖ２８２、Ｆ２８３、Ｎ２８４、Ｐ２８５、Ｓ３１０、Ｅ３１５およびＩ３１７を含む、請求項１に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項６】
さらにマウスＩＬ−１８Ｒβタンパク質に結合することができる、前請求項のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項７】
ヒトインターロイキン−１８受容体ベータ（ＩＬ−１８Ｒβ）タンパク質に対して結合特異性を有する抗体またはそのフラグメントであって、
前記抗体またはそのフラグメントは、軽鎖相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３を含有する軽鎖可変領域と、重鎖相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３を含有する重鎖可変領域を含み、
前記ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３は、表Ｂの組み合わせ１〜２７、または前記ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３のそれぞれが１つ、２つ、または３つのアミノ酸付加、アミノ酸欠失、保存的アミノ酸置換またはそれらの組み合わせを含む前記組み合わせ１〜２７のそれぞれから選択される、抗体またはそのフラグメント。
【請求項８】
前記ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３は、表Ｂの組み合わせ１から選択されるか、または１つのアミノ酸置換を有する、請求項７に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項９】
前記置換は表Ｂ１から選択される、請求項８に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項１０】
前記ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３は、表Ｂの組み合わせ１〜２７または表９のいずれかの行から選択される、請求項７に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項１１】
前記ＣＤＲＬ１およびＣＤＲＬ２は、それぞれ、ＱＳＶＳＳＡ（配列番号４５）およびＳＡＳ（配列番号４６）の配列を有する、請求項７〜１０のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項１２】
前記ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３は、以下からなる群から選択される、請求項７に記載の抗体またはそのフラグメント：
それぞれ、配列番号４５、４６、４７、７４、９５および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、６８、９０、１１１および１３４の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、６９、９１、１１２および１３５の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、３３２、７４、９５および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、４７、７４、３４０および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、４７、７４、３４１および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、４７、７４、３４２および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、４７、７４、３４３および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、４７、７４、３４４および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、３３３、７４、３４５および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、４７、７４、３４６および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、３３４、７４、９５および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、４７、７４、３４７および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、４７、７４、３４７および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、３３３、７４、９５および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、３３５、７４、９５および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、４７、７４、３４８および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３２２、４７、７４、９５および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、４７、７４、３４９および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、４７、７４、３５０および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３２３、４７、７４、９５および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３２４、４７、７４、９５および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、４７、７４、９５および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３２５、４７、７４、９５および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３２６、４７、７４、９５および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３２２、４７、７４、９５および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、４７、７４、９５および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３２５、４７、７４、９５および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３２７、４７、７４、９５および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、４７、７４、３５１および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、３３６、７４、９５および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、４７、７４、３５２および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、３３６、７４、３５２および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３２８、４７、７４、９５および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３２９、４７、７４、９５および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３３０、４７、７４、９５および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３３１、４７、７４、９５および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、４７、３３７、３５０および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、４７、３３８、３５０および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、４７、３３９、３５０および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、４７、３３７、３４３および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、４７、３３８、３４３および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、４７、３３９、３４３および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３２８、４７、７４、３５０および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３２８、４７、３３７、３５０および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３２８、４７、３３８、３５０および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３２８、４７、３３９、３５０および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３２８、４７、７４、３４３および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３２８、４７、３３７、３４３および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３２８、４７、３３８、３４３および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３２８、４７、３３９、３４３および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、３３３、７４、３５０および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、３３３、３３７、３５０および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、３３３、３３８、３５０および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、３３３、３３９、３５０および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、３３３、７４、３４３および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、３３３、３３７、３４３および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、３３３、３３８、３４３および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、３３３、３３９、３４３および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３２８、３３３、７４、３５０および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３２８、３３３、３３７、３５０および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３２８、３３３、３３８、３５０および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３２８、３３３、３３９、３５０および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３２８、３３３、７４、３４３および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３２８、３３３、３３７、３４３および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３２８、３３３、３３８、３４３および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３２８、３３３、３３９、３４３および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、３３５、７４、３５０および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、３３５、３３７、３５０および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、３３５、３３８、３５０および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、３３５、３３９、３５０および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、３３５、７４、３４３および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、３３５、３３７、３４３および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、３３５、３３８、３４３および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、４６、３３５、３３９、３４３および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３２８、３３５、７４、３５０および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３２８、３３５、３３７、３５０および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３２８、３３５、３３８、３５０および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３２８、３３５、３３９、３５０および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３２８、３３５、７４、３４３および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３２８、３３５、３３７、３４３および１１７の前記アミノ酸配列、
それぞれ、配列番号４５、３２８、３３５、３３８、３４３および１１７の前記アミノ酸配列、ならびに
それぞれ、配列番号４５、３２８、３３５、３３９、３４３および１１７の前記アミノ酸配列。
【請求項１３】
ヒトインターロイキン−１８受容体アルファ（ＩＬ−１８Ｒα）タンパク質に対して結合特異性を有する抗体またはそのフラグメントであって、
前記抗体またはそのフラグメントは、軽鎖相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３を含有する軽鎖可変領域と、重鎖相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３を含有する重鎖可変領域を含み、
前記ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３は、表Ｃの組み合わせ１〜１２、または前記ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３のそれぞれが１つ、２つ、または３つのアミノ酸付加、アミノ酸欠失、保存的アミノ酸置換またはそれらの組み合わせを含む前記組み合わせ１〜１２のそれぞれから選択される、抗体またはそのフラグメント。
【請求項１４】
前記ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３は、表Ｃの組み合わせ１１から選択されるか、または１つのアミノ酸置換を有する、請求項１３に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項１５】
前記置換は表Ｃ１から選択される、請求項１４に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項１６】
前記ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３は、表Ｃの組み合わせ１〜１２から選択される、請求項１３に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項１７】
前記ＣＤＲＬ１およびＣＤＲＬ２は、それぞれ、ＱＳＶＳＳＡ（配列番号４５）およびＳＡＳ（配列番号４６）の配列を有する、請求項１３〜１６のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項１８】
配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、１６３、１６５、１６７、１６９、１７１、１７３、１７５、１７７、１７９、１８１、１８３、１８５、１８７、１８９、１９１、１９３、１９５、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、２３９、２４１、２４３、２４５、２４７、２４９、２５１、２５３、２５５、２５７、２５９、２６１、２６３、２６５、２６７、２６９、２７１、２７３、２７５、２７７、２７９、２８１、２８３、２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、および３２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含有する重鎖可変領域、または
配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、１６３、１６５、１６７、１６９、１７１、１７３、１７５、１７７、１７９、１８１、１８３、１８５、１８７、１８９、１９１、１９３、１９５、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、２３９、２４１、２４３、２４５、２４７、２４９、２５１、２５３、２５５、２５７、２５９、２６１、２６３、２６５、２６７、２６９、２７１、２７３、２７５、２７７、２７９、２８１、２８３、２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、および３２１からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む、請求項１または７に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項１９】
配列番号４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、２１４、２１６、２１８、２２０、２２２、２２４、２２６、２２８、２３０、２３２、２３４、２３６、２３８、２４０、２４２、２４４、２４６、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含有する軽鎖可変領域、または
配列番号４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、２１４、２１６、２１８、２２０、２２２、２２４、２２６、２２８、２３０、２３２、２３４、２３６、２３８、２４０、２４２、２４４、２４６、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む、請求項１、７または１８に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項２０】
前記配列番号４２のアミノ酸配列を含有する重鎖可変領域、または前記配列番号４２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む、請求項１３に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項２１】
前記配列番号４４のアミノ酸配列を含有する軽鎖可変領域、または前記配列番号４４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む、請求項１３または２０に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項２２】
第２の標的タンパク質に対する他の抗体と組み合わせることができる、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項２３】
前記第２の標的タンパク質は、ＩＬ−１、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ１３、ＩＬ−１７およびＩＬ３６を含むがこれらに限定されない他の炎症性サイトカインであり得る、請求項２２に記載の抗体またはそのフラグメント。他の例には、ＣＤ３、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２８、ＣＤ６４、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ−３（ＣＤ２２３とも呼ばれる）、ＣＤ２８、ＣＤ１２２、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７とも呼ばれる）、ＴＩＭ３、ＯＸ−４０またはＯＸ４０Ｌ、ＣＤ４０またはＣＤ４０Ｌ、ＬＩＧＨＴ、ＩＣＯＳ／ＩＣＯＳＬ、ＧＩＴＲ／ＧＩＴＲＬ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２７、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＨＥＶＭまたはＢＴＬＡ（ＣＤ２７２とも呼ばれる）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）およびＣＤ４７が含まれるが、これらに限定されない。
【請求項２４】
請求項１〜２３のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメントと、薬学的に許容される担体とを含む、組成物。
【請求項２５】
請求項１〜２３のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメントをコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む、単離された細胞。
【請求項２６】
それを必要とする患者における自己免疫疾患または炎症性疾患を処置する方法であって、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメントを前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項２７】
前記自己免疫疾患または炎症性疾患は、パーキンソン病、関節炎、関節リウマチ、多発性硬化症、乾癬、乾癬性関節炎、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、ループス、全身性エリテマトーデス、若年性関節リウマチ、若年性特発性関節炎、グレーブス病、橋本甲状腺炎、アジソン病、セリアック病、皮膚筋炎、多発性硬化症、重症筋無力症、悪性貧血、シェーグレン症候群、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、血管炎、ブドウ膜炎、敗血症、アテローム性動脈硬化症および強直性脊椎炎からなる群から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
それを必要とする患者における癌を処置する方法であって、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメントを前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項２９】
前記癌は、膀胱癌、肝臓癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、白血病、リンパ腫、膵臓癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、乳癌、尿道癌、頭頸部癌、胃腸癌、胃癌、食道癌、卵巣癌、腎癌、黒色腫、前立腺癌および甲状腺癌からなる群から選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
サンプルにおけるＩＬ−１８受容体の発現を検出する方法であって、
前記サンプルを請求項１〜２３のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメントに、前記抗体またはそのフラグメントが前記ＩＬ−１８受容体に結合する条件下で接触させることと、前記サンプルにおけるＩＬ−１８受容体の発現を示す前記結合を検出すること、
を含む、方法。
【請求項３１】
前記サンプルはヒト患者から単離される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記検出は、前記ＩＬ−１８受容体の異常な発現に関連する疾患を示す、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
前記疾患は、感染症、自己免疫疾患もしくは炎症性疾患、または癌からなる群から選択される、請求項３２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【優先権主張】
【０００１】
本発明は、２０１８年６月１９日に出願されたＰＣＴ／ＣＮ２０１８／０９１７８０の優先権を主張し、その内容はその全体が本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
インターロイキン（ＩＬ）は、免疫応答の形成における白血球のコミュニケーションのために使用される可溶性サイトカインのクラスである。１９７０年代後半に発見されて以来、４０を超える異なるタンパク質が、他のＩＬとの配列同一性または機能的活性に応じてＩＬとして分類されてきた。
【０００３】
ＩＬ−１８はもともと、ＩＬ−１２と生物学的機能を共有して相乗的に作用する炎症性のＩＦＮ−γ誘導性サイトカインとして発見された。サイトカインのＩＬ−１ファミリーのメンバーとして、ＩＬ−１８は初期の炎症反応に関与すると考えられており、造血細胞および非造血細胞の両方（例えば、マクロファージ、樹状細胞、クッパー細胞、ケラチノサイト、骨芽細胞、星状細胞、副腎皮質細胞、腸上皮細胞、ミクログリア細胞、および滑膜線維芽細胞）によって、構成的に、ならびにリポ多糖およびＴＮＦ−αなどの他のサイトカインに応答して合成され、成熟した１８ｋＤａ種の機能的活性のために、カスパーゼ−１によって翻訳後切断される。次に、活性型ＩＬ−１８は、造血組織および非造血組織の両方で広く発現しているＩＬ−１８受容体を発現する細胞を標的とする。
【０００４】
ＩＬ−１８受容体は、リガンド結合ＩＬ−１８Ｒアルファ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニットと、機能的シグナル伝達に必須である非リガンド結合ＩＬ−１８Ｒベータ（ＩＬ−１８Ｒβ）サブユニットとからなるヘテロ二量体膜貫通タンパク質である。受容体のリガンド誘導性活性化は、細胞内の骨髄分化８８（ＭｙＤ８８）およびＩＬ−１Ｒ関連キナーゼ（ＩＲＡＫ）の動員と活性化をもたらし、Ａｋｔ、ｐ３８およびＳＡＰＫ／ＪＮＫの活性化を含むＰＩ３Ｋ経路とＭＡＰＫ経路を活性化する少なくとも２つの異なるリン酸化カスケードを同時にトリガーする。これらの経路の活性化は、ＮＦ−κＢの活性化と、ＩＦＮ−γ、ケモカイン、転写因子、Ｇタンパク質および細胞表面受容体を含むその下流遺伝子の転写に最終的に至る。ＩＬ−１８は、そのシグナル伝達経路の要素をＩＬ−１と共有するが、別個の要素も有する。
【０００５】
Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージおよび好中球などの造血細胞では、ＩＬ−１８リガンド刺激は、Ｔ細胞およびＮＫ細胞の成熟、サイトカイン分泌、細胞毒性および接着を強化することができる。ＩＬ−１８によって誘導されるナイーブＴ細胞の分化は、ＩＬ−４またはＩＬ−１２のいずれかとは独立してＴｈ１またはＴｈ２系統のいずれかを誘導することができる。分化したＴｈ１クローンでは、ＩＬ−１８は、ＩＦＮ−γ、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）または腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）の産生と分泌を誘導することができる；ただし、これは主にＩＬ−１２との相乗効果で行われる。好中球では、ＩＬ−１８はサイトカインおよびケモカインの発現と分泌を誘導し、細胞表面接着分子であるＣＤ１１ｂの発現をアップレギュレートし、好中球の呼吸バーストを増強することが示されている。重要なことに、ＩＬ−１８受容体自体は、ＩＬ−１２によってナイーブＴ、Ｔｈ１およびＢ細胞上でアップレギュレートされ得、これにより、これら２つのサイトカイン間の相乗効果が部分的に説明される。ＩＬ−１８はまたＩＬ−２と相乗的に作用し、ＩＬ−１３（ＩＦＮ−γ依存的に）およびＩＬ−１０（ＩＦＮ−γ非依存的に）の発現を誘導する。まとめると、これらの結果は、自然免疫応答と適応免疫応答の両方におけるＩＬ−１８の役割を強調している。
【０００６】
内皮および上皮細胞、滑膜線維芽細胞ならびに軟骨細胞などの非造血細胞では、ＩＬ−１８は、接着分子（Ｅ−セレクチン、ＩＣＡＭおよびＶＣＡＭなど）、他のサイトカイン、ケモカイン（ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ１２、ＣＣＬ、ＣＣＬ２０）、ならびに血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）およびトロンボスポンジンなどの血管新生メディエーターの発現をアップレギュレートすることができる。全体として、これらのエフェクターのＩＬ−１８誘導の効果は、白血球の動員、細胞接着、免疫細胞の血管外遊出、ならびに細胞移動の促進と新しい血管の形成を増加させることである。
【０００７】
ＩＬ−１８およびその受容体に関するマウスの研究は、マウスとヒトのリガンドおよびそれらの同系（ｃｏｇｎａｔｅ）受容体の間の妥当な程度の同一性によって促進されてきた。マウスとヒトのＩＬ−１８のアラインメントはオルソログ間で６３．５％の同一性を示し、マウスとヒトのＩＬ−１８ＲαおよびＩＬ−１８Ｒβのアラインメントはそれぞれ６４％と６５％の配列同一性を示した。
【０００８】
ＩＬ−１８は、パターン認識受容体と、Ｃ型肝炎、チクングニア熱、結核菌、ヒト免疫不全ウイルス、ヘリオバクテリアなどを含む多数の異なる微生物の繰り返しサブユニットとの相互作用によって誘導され得る。
【０００９】
感染のマウスモデルは、Ｔｏｌｌ受容体（ＴＬＲ）およびＮｏｄ様受容体（ＮＬＲ）によって認識される病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）がインフラマソーム内のカスパーゼ−１を活性化し、ＩＬ−１８（およびＩＬ−１β）の切断と成熟を引き起こし、免疫病理学的応答を制限するのに役立つ可能性があることを示唆している。ＩＬ−１８−／−マウスにおけるグラム陰性菌Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉの研究は、ＩＬ−１８を介したＩＦＮ−γの産生が生存に不可欠であることを示唆している。あるいは、ＩＬ−１８Ｒ−／−マウスにおける必須の細胞内細菌Ｉｘｏｄｅｓ  Ｏｖａｔｕｓ  Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ（ＩＯＥ）に関する研究では、免疫病原性応答の低下と感染制御の強化が明らかになり、ＩＬ−１８が感染に対する保護の付与においてよりも、むしろ免疫応答の調節においてより大きな役割を果たす可能性があることが示唆された。興味深いことに、オルソポックスウイルスのホストは、ＩＬ−１８シグナルを阻害することによってこれらのウイルスの病原性を高める、天然に存在する阻害剤であるＩＬ−１８結合タンパク質（ＩＬ−１８ＢＰ）の機能的ホモログをコードしている。
【００１０】
多数の炎症性疾患との関連で、ＩＬ−１８はアップレギュレートされる、疾患と相関している、または疾患発症の危険因子であることが示されている。例としては、クローン病、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、心血管疾患などが挙げられる。ＩＬ−１８レベルの上昇は、Ｉ型糖尿病（Ｔ１Ｄ）またＩＩ型糖尿病（Ｔ２Ｄ）のいずれかを発症するリスクのある個人で観察されている。ＩＬ−１８の上昇は、若年および成人のＴ１ＤおよびＴ２Ｄ患者の血清、尿および膵島でも観察されており、疾患の重症度、および糖尿病性腎症などの後遺症の発症と相関している。アルツハイマー病の患者に関する研究では、ＩＬ−１８の発現が脳において増加し、酸化ストレスを高め、アミロイドベータ（Ａβ）形成に寄与するタンパク質の発現を変化させる免疫および炎症プロセスに寄与すると考えられることが明らかになった。
【００１１】
炎症性疾患の免疫病原性におけるＩＬ−１８の潜在的な役割を認識し、いくつかの研究が、遺伝子ノックアウトまたは抗ＩＬ−１８アンタゴニストのいずれかを介したＩＬ−１８抑止（ａｂｒｏｇａｔｉｏｎ）の前臨床評価を実施した。コラーゲン注射後４〜８日以内にＩＬ−１８レベルが上昇するコラーゲン誘発関節炎のマウスモデルを使用して、抗マウスウサギポリクローナル抗体と組換え抗ＩＬ−１８結合タンパク質を含むＩＬ−１８阻害の２つの異なるモダリティの有効性に関する前臨床の洞察を得た。著者らは、両方のモダリティが、炎症性の足の腫れなどの病理学的進行の全体的な測定値と、軟骨の侵食の程度などの疾患の重症度の組織学的測定値を妨げることができると結論付けた。これらの結果は、両方の処置で血清ＩＦＮ−γ、ＩＬ−６、ＴＮＦ−αおよび軟骨オリゴマーマトリックスタンパク質（ＣＯＭＰ）が減少したことを示す血清学的測定値によってさらに確認された。このことは、前臨床評価のための強力な理論的根拠と明確な経路の両方を提供する。
【００１２】
敗血症の実験的マウスモデルにおいて、ＩＬ−１８およびＩＬ−１βの二重遺伝子欠損が、致死量のリポ多糖（ＬＰＳ）、ＴＮＦ−α、または腸管穿孔モデルと呼ばれる敗血症様状態を誘発する外科的処置からマウスを保護することが示された。敗血症は、サイトカインによって媒介される「抑制されていない過炎症反応」としばしば見なされ、集中治療室における主要な死亡原因の１つである。重要なことに、ＩＬ−１βまたはＩＬ−１８のいずれかの喪失は、デュアルノックアウトによってもたらされる完全な保護とは対照的に、敗血症性致死性に対する部分的な保護のみをもたらし、これら２つの炎症性サイトカインの補完的な役割を強調していた。
【００１３】
まとめると、これらの研究により、炎症性障害が、拮抗する抗ＩＬ−１８の使用による抗ＩＬ−１８媒介シグナルの遮断が有効性を示す可能性があり、かつ明確に定義された前臨床試験に対する十分な機会が存在する病状のクラスを表す可能性があることが示唆される。
【００１４】
癌の前臨床モデルでの研究は、ＩＬ−１８の抗腫瘍活性がＴ細胞およびＮＫ細胞などのエフェクター細胞を増強するその能力から生じることを示唆し、臨床研究でのその使用を支持しているが、これまでの結果は、癌におけるＩＬ−１８の積極的な役割について控え目なサポートを与える。高いＩＬ−１８レベルが、腫瘍部位または乳房、食道、胃腸、肺、肝臓、卵巣などを含む全身で、多数の癌において観察され得る。
【発明の概要】
【００１５】
本開示は、ＩＬ−１８受容体アルファおよびベータサブユニットに対して特異的な抗体および抗原結合フラグメントを提供する。これらの抗体およびフラグメントは、ＩＬ−１８受容体にリンクされた下流のシグナル伝達経路を破壊することができるため、ＩＬ−１８またはその受容体の発現または過剰発現に関連する炎症性疾患および自己免疫疾患ならびに癌などの特定の疾患および症状を処置するために使用され得る。
【００１６】
したがって、一実施形態では、本開示は、配列番号１のアミノ酸配列を有するヒトインターロイキン−１８受容体ベータ（ＩＬ−１８Ｒβ）タンパク質に対して結合特異性を有する抗体またはそのフラグメントであって、
前記結合は少なくとも以下を含む、抗体またはそのフラグメントを提供する：
配列番号１のＬ１６７、Ｄ２１３およびＴ２４２からなる群から選択されるアミノ酸残基、
配列番号１のＶ２４４、Ｇ２４５およびＤ２４６からなる群から選択されるアミノ酸残基、ならびに
配列番号１のＧ２７８、Ｆ２７９、Ｒ２８１、Ｖ２８２、Ｆ２８３、Ｎ２８４、Ｐ２８５、Ｓ３１０、Ｅ３１５およびＩ３１７からなる群から選択されるアミノ酸残基。
【００１７】
いくつかの実施形態では、前記結合は少なくとも以下を含む：
配列番号１のＤ２１３およびＴ２４２からなる群から選択されるアミノ酸残基、
配列番号１のＶ２４４、Ｇ２４５およびＤ２４６からなる群から選択されるアミノ酸残基、ならびに
配列番号１のＧ２７８、Ｒ２８１、Ｖ２８２、Ｆ２８３、Ｎ２８４、Ｐ２８５、Ｓ３１０、Ｅ３１５およびＩ３１７からなる群から選択されるアミノ酸残基。
【００１８】
いくつかの実施形態では、前記結合は少なくとも以下を含む：
配列番号１のＤ２１３およびＴ２４２からなる群から選択されるアミノ酸残基、
配列番号１の前記アミノ酸残基Ｖ２４４、ならびに
配列番号１のＧ２７８、Ｒ２８１、Ｖ２８２、Ｆ２８３、Ｎ２８４、Ｐ２８５、Ｓ３１０、Ｅ３１５およびＩ３１７からなる群から選択されるアミノ酸残基。いくつかの実施形態では、前記結合は、少なくとも配列番号１の前記アミノ酸残基Ｄ２１３、Ｔ２４２、Ｖ２４４、Ｇ２７８、Ｒ２８１、Ｖ２８２、Ｆ２８３、Ｎ２８４、Ｐ２８５、Ｓ３１０、Ｅ３１５およびＩ３１７を含む。いくつかの実施形態では、前記結合は、少なくとも配列番号１の前記アミノ酸残基Ｌ１６７、Ｄ２１３、Ｔ２４２、Ｖ２４４、Ｇ２７８、Ｆ２７９、Ｒ２８１、Ｖ２８２、Ｆ２８３、Ｎ２８４、Ｐ２８５、Ｓ３１０、Ｅ３１５およびＩ３１７を含む。
【００１９】
いくつかの実施形態では、前記抗体またはそのフラグメントは、さらにマウスＩＬ−１８Ｒβタンパク質に結合することができる。
【００２０】
本開示の別の実施形態は、ヒトインターロイキン−１８受容体ベータ（ＩＬ−１８Ｒβ）タンパク質に対して結合特異性を有する抗体またはそのフラグメントであって、
前記抗体またはそのフラグメントは、軽鎖相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３を含有する軽鎖可変領域と、重鎖相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３を含有する重鎖可変領域を含み、
前記ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３は、表Ｂの組み合わせ１〜２７、または前記ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３のそれぞれが１つ、２つ、または３つのアミノ酸付加、アミノ酸欠失、保存的アミノ酸置換またはそれらの組み合わせを含む前記組み合わせ１〜２７のそれぞれから選択される、抗体またはそのフラグメントを提供する。
【００２１】
いくつかの実施形態では、前記ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３は、表Ｂの組み合わせ１から選択されるか、または１つのアミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態では、前記置換は表Ｂ１から選択される。いくつかの実施形態では、前記ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３は、表Ｂの組み合わせ１〜２７または表９のいずれかの組み合わせから選択される。いくつかの実施形態では、前記ＣＤＲＬ１およびＣＤＲＬ２は、それぞれ、ＱＳＶＳＳＡ（配列番号４５）およびＳＡＳ（配列番号４６）の配列を有する。
【００２２】
本開示のさらに別の実施形態は、ヒトインターロイキン−１８受容体アルファ（ＩＬ−１８Ｒα）タンパク質に対して結合特異性を有する抗体またはそのフラグメントであって、
前記抗体またはそのフラグメントは、軽鎖相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３を含有する軽鎖可変領域と、重鎖相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３を含有する重鎖可変領域を含み、
前記ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３は、表Ｃの組み合わせ１〜１２、または前記ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３のそれぞれが１つ、２つ、または３つのアミノ酸付加、アミノ酸欠失、保存的アミノ酸置換またはそれらの組み合わせを含む前記組み合わせ１〜１２のそれぞれから選択される、抗体またはそのフラグメントを提供する。
【００２３】
いくつかの実施形態では、前記ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３は、表Ｃの組み合わせ１１から選択されるか、または１つのアミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態では、前記置換は表Ｃ１から選択される。いくつかの実施形態では、前記ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３は、表Ｃの組み合わせ１〜１２から選択される。いくつかの実施形態では、前記ＣＤＲＬ１およびＣＤＲＬ２は、それぞれ、ＱＳＶＳＳＡ（配列番号４５）およびＳＡＳ（配列番号４６）の配列を有する。
【００２４】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体またはそのフラグメントは、配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、１６３、１６５、１６７、１６９、１７１、１７３、１７５、１７７、１７９、１８１、１８３、１８５、１８７、１８９、１９１、１９３、１９５、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、２３９、２４１、２４３、２４５、２４７、２４９、２５１、２５３、２５５、２５７、２５９、２６１、２６３、２６５、２６７、２６９、２７１、２７３、２７５、２７７、２７９、２８１、２８３、２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、および３２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含有する重鎖可変領域、または
配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３８、１６３、１６５、１６７、１６９、１７１、１７３、１７５、１７７、１７９、１８１、１８３、１８５、１８７、１８９、１９１、１９３、１９５、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、２３９、２４１、２４３、２４５、２４７、２４９、２５１、２５３、２５５、２５７、２５９、２６１、２６３、２６５、２６７、２６９、２７１、２７３、２７５、２７７、２７９、２８１、２８３、２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、および３２１からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む。
【００２５】
いくつかの実施形態では、前記抗体またはそのフラグメントは、配列番号４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、２１４、２１６、２１８、２２０、２２２、２２４、２２６、２２８、２３０、２３２、２３４、２３６、２３８、２４０、２４２、２４４、２４６、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含有する軽鎖可変領域、または
配列番号４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６、４０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、２１４、２１６、２１８、２２０、２２２、２２４、２２６、２２８、２３０、２３２、２３４、２３６、２３８、２４０、２４２、２４４、２４６、２４８、２５０、２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む。
【００２６】
いくつかの実施形態では、前記抗体またはそのフラグメントは、前記配列番号４２のアミノ酸配列を含有する重鎖可変領域、または前記配列番号４２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む。いくつかの実施形態では、前記抗体またはそのフラグメントは、前記配列番号４４のアミノ酸配列を含有する軽鎖可変領域、または前記配列番号４４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む。
【００２７】
いくつかの実施形態では、前記抗体またはそのフラグメントは、第２の標的タンパク質に対する第２の特異性をさらに有する。いくつかの実施形態では、前記第２の標的タンパク質は、ＩＬ−１、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ１３、ＩＬ−１７およびＩＬ３６を含むがこれらに限定されない他の炎症性サイトカインであり得る。他の例には、ＣＤ３、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２８、ＣＤ６４、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ−３（ＣＤ２２３とも呼ばれる）、ＣＤ２８、ＣＤ１２２、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７とも呼ばれる）、ＴＩＭ３、ＯＸ−４０またはＯＸ４０Ｌ、ＣＤ４０またはＣＤ４０Ｌ、ＬＩＧＨＴ、ＩＣＯＳ／ＩＣＯＳＬ、ＧＩＴＲ／ＧＩＴＲＬ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２７、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＨＥＶＭまたはＢＴＬＡ（ＣＤ２７２とも呼ばれる）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）およびＣＤ４７が含まれるが、これらに限定されない。
【００２８】
一実施形態では、本開示の抗体またはそのフラグメントと、薬学的に許容される担体とを含む、組成物も提供される。また、本開示の抗体またはそのフラグメントをコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む、単離された細胞も提供される。
【００２９】
処置の方法および使用も提供される。一実施形態では、それを必要とする患者における自己免疫疾患または炎症性疾患を処置する方法であって、本開示の抗体またはそのフラグメントを前記患者に投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、前記自己免疫疾患または炎症性疾患は、パーキンソン病、関節炎、関節リウマチ、多発性硬化症、乾癬、乾癬性関節炎、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、ループス、全身性エリテマトーデス、若年性関節リウマチ、若年性特発性関節炎、グレーブス病、橋本甲状腺炎、アジソン病、セリアック病、皮膚筋炎、多発性硬化症、重症筋無力症、悪性貧血、シェーグレン症候群、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、血管炎、ブドウ膜炎、敗血症、アテローム性動脈硬化症および強直性脊椎炎からなる群から選択される。
【００３０】
一実施形態では、それを必要とする患者における癌を処置する方法であって、本開示の抗体またはそのフラグメントを前記患者に投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、前記癌は、膀胱癌、肝臓癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、白血病、リンパ腫、膵臓癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、乳癌、尿道癌、頭頸部癌、胃腸癌、胃癌、食道癌、卵巣癌、腎癌、黒色腫、前立腺癌および甲状腺癌からなる群から選択される。
【００３１】
サンプルにおけるＩＬ−１８受容体の発現を検出する方法であって、
前記サンプルを本開示の抗体またはそのフラグメントに、前記抗体またはそのフラグメントが前記ＩＬ−１８受容体に結合する条件下で接触させることと、前記サンプルにおけるＩＬ−１８受容体の発現を示す前記結合を検出すること、
を含む、方法がさらに提供される。
【００３２】
いくつかの実施形態では、前記サンプルはヒト患者から単離される。いくつかの実施形態では、前記検出は、前記ＩＬ−１８受容体の異常な発現に関連する疾患を示す。いくつかの実施形態では、前記疾患は、感染症、自己免疫疾患もしくは炎症性疾患、または癌からなる群から選択される。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】ルシフェラーゼアッセイによるＮＦ−κＢシグナル伝達のＦａｂを介した阻害の評価。ＩＬ−１８応答性ルシフェラーゼレポーターアッセイを使用して、ＩＬ−１８によるＮＦ−κＢの転写活性化に対するＡ）抗ＩＬ−１８Ｒα結合ＦａｂおよびＢ）抗ＩＬ−１８Ｒβ結合Ｆａｂの効果を評価した。トランスフェクトされた細胞におけるＩＬ−１８（１０ｎｇ／ｍＬ）によるＮＦ−κＢ誘導ルシフェラーゼシグナルを、Ｆａｂで前処理された細胞と比較し、正規化された相対ルシフェラーゼ単位として表す。エラーバーは、複製サンプルの標準偏差を表す。
【図２】抗体結合とエピトープマッピング。ＩＬ−１８Ｒα（赤色のトレース）およびＩＬ−１８Ｒβ（黒色のトレース）の両方に対するＦａｂ結合のＥＣ５０値とＩＣ５０値は、Ａ）マルチポイント直接結合ＥＬＩＳＡ、およびＢ）可溶性受容体の２倍希釈系列とのインキュベーション後の競合結合ＥＬＩＳＡによって決定された。生成された曲線は、適切なモデルとフィッティング曲線から抽出された値を使用してフィッティングされた。Ｃ）ＥＣ５０／ＩＣ５０の推定値を確認するために、抗ＩＬ−１８Ｒβ  Ｆａｂ結合の速度論が、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって同系ヒト受容体に対して決定された。抗ＩＬ−１８Ｒα  Ｆａｂとその同系ヒト受容体との間の相互作用の速度論は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって同様に決定された。Ｄ）示された抗ＩＬ−１８Ｒβ結合Ｆａｂの重複を評価するために、ｈＩＬ−１８ＲβへのＩｇＧ結合をＥＬＩＳＡによって測定し（白棒）、飽和Ｆａｂの存在下で得られたＩｇＧ結合シグナル（黒棒）と比較した。エラーバーは、反復測定の標準偏差を表す。
【図３】免疫蛍光法およびフローサイトメトリーによる、異所的に発現した細胞表面ＩＬ−１８ＲへのＩｇＧの結合。抗ＩＬ−１８Ｒα  ＩｇＧまたはアイソタイプコントロールＩｇＧを使用して、Ａ）ｈＩＬ−１８Ｒα−ＧＦＰまたはＢ）ｈＩＬ−１８Ｒβ−ＧＦＰコンストラクトでトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞を免疫染色した。ＧＦＰ発現（緑色）およびＩｇＧ結合（赤色）由来の蛍光色素シグナルがＣｙ３チャネルおよびＣｙ５チャネルで測定され、右端の列においてＤＡＰＩ染色された核（青色）に対してマージされた。細胞結合はまた、４００ｎＭのＩｇＧで、（Ｃ）ｈＩＬ−１８Ｒαおよび（Ｄ）ｈＩＬ−１８Ｒβについて、アイソタイプコントロールＩｇＧまたは二次抗体のみに対して受容体を発現するＨＥＫ２９３細胞またはトランスフェクトされていないＨＥＫ２９３細胞を使用して、フローサイトメトリーによって特性評価された。ＩｇＧまたはコントロール結合の蛍光強度の中央値を、Ｃｙ３チャネル（ＩｇＧ）、ＡＰＣチャネル（コントロール抗１８Ｒα）、またはＰＥ３（コントロールＩＬ−１８β）チャネルで測定し、ヒストグラムとして視覚化した。
【図４】ＩｇＧを介したＩＬ−１８のシグナルおよび機能の阻害。Ａ）ＩＬ−１８誘導性リン酸化シグナルをアッセイして、ＩｇＧとの細胞プレインキュベーションの効果を評価し、ウエスタンブロットによって非リン酸化親タンパク質のレベルと比較した。デンシトメトリーによって決定されたバンド強度を使用して、ＩＬ−１８または抗体のいずれかで処理されていないコントロールに対するリン酸シグナルの正規化された比率を計算し、Ｂ）リン酸化ＩＫＫα／β、Ｃ）リン酸化ｐ３８およびＤ）リン酸化ＳＡＰＫ／ＪＮＫについて棒グラフとしてプロットした。ＩＬ−１８なしのコントロールと比較した、下流エフェクターであるＩＫＫ−α／β、ｐ３８  ＭＡＲＫおよびＳＡＰＫ／ＪＮＫのＩＬ−１８誘導性リン酸化の変化における統計的有意性をｔ検定によって評価し、＊はｐ＜０．０５を示す。ＩＬ−１８が誘導するＩＦＮ−γ分泌の刺激に対する抗体プレインキュベーションの細胞効果を、Ｅ）ＫＧ−１骨髄芽球とＦ）単離されたＰＢＭＣの両方について、ＩｇＧ濃度の範囲にわたって評価した。
【図５】ｓｃＦｖ３１３１と複合体を形成したＩＬ−１８Ｒβの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）の精製。Ａ）ｓｃＦｖ３１３１と複合体を形成したＩＬ−１８ＲβのＥＣＤは、サイズ排除クロマトグラフィーカラム（Ｓ２００  ２６／６００、ＧＥ）から精製された。Ｂ）サイズ排除クロマトグラフィーのＳＤＳ−ＰＡＧＥプロファイル。
【図６】抗体結合の構造解析により、非競合的拮抗作用の新規モードが明らかになった。Ａ）参考のためにＰＤＢ  ＩＤが３ＷＯ４のＩＬ−１８の３者シグナル伝達複合体の構造を示す。Ｂ）ＩＬ−１８Ｒβ（ＰＤＢ  ＩＤ  ５ＺＸ７）と複合体を形成したｓｃＦｖとして再フォーマットされたＩｇＧ３１３１の精密化モデルは、ドメイン２とドメイン３の間の受容体のヒンジ領域への結合が、ＩＬ−１８ＲβをＩＬ−１８Ｒαについての非結合コンフォメーションにロックするという新規な阻害モードを明らかにする。両方の構造におけるＩＬ−１８ＲβのＤ３ドメインは同じ向きで示されている。
【図７】単離された新鮮なカニクイザルＰＢＭＣについてＩｇＧ濃度の範囲にわたって評価された、アカゲザルＩＬ−１８（５０ｎｇ／ｍｌ）とアカゲザルＩＬ−１２（５ｎｇ／ｍｌ）によって誘導されたＩＦＮ−γ分泌の刺激に対するＩｇＧ３１３１プレインキュベーションの細胞効果を示す図である。平均と標準偏差（ＳＤ）は、３匹の異なるサルから計算された。ＩＣ５０値は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（Ｖｅｒｓｉｏｎ５．０）におけるカーブフィッティングによって用量反応曲線から推定された。
【図８】ＩｇＧ３１３１の投与後のオスのサルにおけるＩｇＧ３１３１の個々の血清濃度−時間曲線を示す図である。
【図９】親３１３１抗体と比較して、例７で開発されたＡＭ２抗体バリアントのエピトープを評価するための結合競合の結果を示す図である。組換えヒトＩＬ−１８Ｒｂに対する精製されたＡＭ２  Ｆａｂクローンの結合シグナル（白棒）を、飽和ＩｇＧ３１３１の存在下で得られたシグナル（黒棒）と比較した。Ｆａｂ３１３１をポジティブコントロールとして使用した。エラーバーは、反復測定の標準偏差を表す。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
・定義
「１つの（ａまたはａｎ）」エンティティという用語は、そのエンティティの１つまたは複数を指すことに留意されたい；例えば、「１つの抗体（ａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、１つまたは複数の抗体を表すと理解される。したがって、「１つの（ａまたはａｎ）」、「１つ以上の」（または「１つまたは複数の」）、および「少なくとも１つの」という用語は、本明細書で交換可能に使用され得る。
【００３５】
本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」という用語は、単一の「ポリペプチド」ならびに複数の「ポリペプチド」を包含することが意図され、アミド結合（ペプチド結合とも呼ばれる）によって直線的に連結されたモノマー（アミノ酸）から構成される分子を指す。「ポリペプチド」という用語は、２つ以上のアミノ酸の任意の鎖（複数可）を指し、特定の長さの産物を指すものではない。したがって、ペプチド、ジペプチド、トリペプチド、オリゴペプチド、「タンパク質」、「アミノ酸の鎖」、または２つ以上のアミノ酸の鎖（複数可）を指すために使用される他の用語は、「ポリペプチド」の定義に含まれ、「ポリペプチド」という用語は、これらの用語のいずれかの代わりに、またはこれらの用語のいずれかと交換可能に使用され得る。「ポリペプチド」という用語は、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、既知の保護／遮断基による誘導体化、タンパク質分解切断、または非天然アミノ酸による修飾を含むがこれらに限定されない、ポリペプチドの発現後修飾の産物を指すことも意図される。ポリペプチドは、天然の生物学的供給源に由来する場合があるほか、組換え技術によって産生される場合もあるが、必ずしも指定された核酸配列から翻訳されるとは限らない。これは、化学合成を含む任意の方法で産生され得る。
【００３６】
細胞、ＤＮＡまたはＲＮＡなどの核酸に関して本明細書で使用される「単離された」という用語は、高分子の天然の供給源に存在する、それぞれ他のＤＮＡまたはＲＮＡから分離された分子を指す。本明細書で使用される「単離された」という用語はまた、組換えＤＮＡ技術によって産生される場合、細胞物質、ウイルス物質または培養培地を実質的に含まない、あるいは化学的に合成される場合、化学前駆体または他の化学物質を実質的に含まない核酸またはペプチドを指す。さらに、「単離された核酸」は、フラグメントとして天然に存在せず、天然状態では見出されないであろう核酸フラグメントを含むことを意味する。「単離された」という用語はまた、本明細書において、他の細胞タンパク質または組織から単離された細胞またはポリペプチドを指すために使用される。単離されたポリペプチドは、精製されたポリペプチドと組換えポリペプチドの両方を包含することを意味する。
【００３７】
本明細書で使用される場合、ポリペプチドまたはポリヌクレオチドに関連する「組換え」という用語は、天然には存在しないポリペプチドまたはポリヌクレオチドの形態を意図し、その非限定的な例は、通常は一緒に発生しないポリペプチドまたはポリヌクレオチドを組み合わせることによって作製することができる。
【００３８】
「相同性」または「同一性」または「類似性」は、２つのペプチド間または２つの核酸分子間の配列類似性を指す。相同性は、比較の目的でアラインメントされ得る各配列中の位置を比較することによって決定することができる。比較された配列中の位置が同じ塩基またはアミノ酸で占められている場合、分子はその位置で相同である。配列間の相同性の程度は、当該配列によって共有される一致したまたは相同な位置の数の関数である。「無関係の」または「非相同な」配列は、本開示の配列の１つと、４０％未満の同一性、好ましくは２５％未満の同一性を共有する。
【００３９】
ポリヌクレオチドもしくはポリヌクレオチド領域（またはポリペプチドもしくはポリペプチド領域）が別の配列に対して特定のパーセンテージ（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％）の「配列同一性」を有するとは、アラインメントされた場合、塩基（またはアミノ酸）のそのパーセンテージが２つの配列を比較する際に同じであることを意味する。このアラインメントおよびパーセント相同性または配列同一性は、当技術分野で知られているソフトウェアプログラム、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．  ｅｄｓ．（２００７年）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙに記載されているものを使用して決定することができる。好ましくは、デフォルトのパラメーターがアラインメントのために使用される。１つのアライメントプログラムは、デフォルトのパラメーターを使用したＢＬＡＳＴである。特に、プログラムはＢＬＡＳＴＮとＢＬＡＳＴＰであり、次のデフォルトパラメータを使用する：遺伝暗号＝標準；フィルター＝なし；ストランド＝両方；カットオフ＝６０；ｅｘｐｅｃｔ＝１０；マトリックス＝ＢＬＯＳＵＭ６２；説明＝５０シーケンス；ソート＝ＨＩＧＨ  ＳＣＯＲＥ；データベース＝非冗長；ＧｅｎＢａｎｋ＋ＥＭＢＬ＋ＤＤＢＪ＋ＰＤＢ＋ＧｅｎＢａｎｋ  ＣＤＳ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｓ＋ＳｗｉｓｓＰｒｏｔｅｉｎ＋ＳＰｕｐｄａｔｅ＋ＰＩＲ。生物学的に同等のポリヌクレオチドは、上記の特定のパーセント相同性を有し、同じまたは類似の生物学的活性を有するポリペプチドをコードするものである。
【００４０】
「同等の核酸またはポリヌクレオチド」という用語は、核酸またはその相補体のヌクレオチド配列と特定の程度の相同性または配列同一性を有するヌクレオチド配列を有する核酸を指す。二本鎖核酸のホモログは、当該二本鎖核酸またはその相補体と特定の程度の相同性を有するヌクレオチド配列を有する核酸を含むことを意図している。一態様では、核酸のホモログは、当該核酸またはその相補体にハイブリダイズすることができる。同様に、「同等のポリペプチド」は、参照ポリペプチドのアミノ酸配列と特定の程度の相同性または配列同一性を有するポリペプチドを指す。いくつかの態様では、配列同一性は、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％である。いくつかの態様では、同等のポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、参照ポリペプチドまたはポリヌクレオチドと比較して、１つ、２つ、３つ、４つまたは５つの付加、欠失、置換およびそれらの組み合わせを有する。いくつかの態様では、同等の配列は、参照配列の活性（例えば、エピトープ結合）または構造（例えば、塩橋）を保持する。
【００４１】
ハイブリダイゼーション反応は、異なる「ストリンジェンシー」の条件下で実施され得る。一般に、低ストリンジェンシーのハイブリダイゼーション反応は、約１０×ＳＳＣまたは同等のイオン強度／温度の溶液中にて約４０℃で実施される。中程度のストリンジェンシーのハイブリダイゼーションは、通常、約６×ＳＳＣ中にて約５０℃で実施され、高ストリンジェンシーのハイブリダイゼーション反応は、一般に、約１×ＳＳＣ中にて約６０℃で実施される。ハイブリダイゼーション反応はまた、当業者によく知られている「生理学的条件下」で実施され得る。生理学的状態の非限定的な例は、細胞に通常見られる温度、イオン強度、ｐＨおよびＭｇ２＋濃度である。
【００４２】
ポリヌクレオチドは、以下の４つのヌクレオチド塩基の特定の配列から構成される：アデニン（Ａ）；シトシン（Ｃ）；グアニン（Ｇ）；チミン（Ｔ）；およびポリヌクレオチドがＲＮＡの場合、チミンの代わりにウラシル（Ｕ）。したがって、「ポリヌクレオチド配列」という用語は、ポリヌクレオチド分子のアルファベット表現である。このアルファベット表現は、中央処理装置を有するコンピューターにおけるデータベースに入力され、機能ゲノミクスおよび相同性検索などのバイオインフォマティクスアプリケーションのために使用され得る。「多型」という用語は、遺伝子またはその一部の複数の形態の共存を指す。少なくとも２つの異なる形態、すなわち２つの異なるヌクレオチド配列が存在する遺伝子の一部は、「遺伝子の多型領域」と呼ばれる。多型領域は単一ヌクレオチドであり得、そのアイデンティティは異なる対立遺伝子で異なる。
【００４３】
「ポリヌクレオチド」および「オリゴヌクレオチド」という用語は交換可能に使用され、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドまたはそれらの類似体のいずれかの任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態を指す。ポリヌクレオチドは、任意の三次元構造を有することができ、既知または未知の任意の機能を実行することができる。以下は、ポリヌクレオチドの非限定的な例である：遺伝子または遺伝子フラグメント（例えば、プローブ、プライマー、ＥＳＴまたはＳＡＧＥタグ）、エキソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、リボザイム、ｃＤＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分岐ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列の単離されたＤＮＡ、任意の配列の単離されたＲＮＡ、核酸プローブおよびプライマー。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチドおよびヌクレオチド類似体などの修飾ヌクレオチドを含むことができる。存在する場合、ヌクレオチド構造への修飾は、ポリヌクレオチドの組み立ての前または後に与えられ得る。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分によって中断され得る。ポリヌクレオチドは、重合後に、例えば標識成分とのコンジュゲーションによって、さらに修飾され得る。この用語はまた、二本鎖分子と一本鎖分子の両方を指す。別段の指定または要求がない限り、ポリヌクレオチドである本開示の任意の実施形態は、二本鎖形態と、二本鎖形態を構成することが知られているまたは予測される２つの相補的な一本鎖形態のそれぞれの両方を包含する。
【００４４】
ポリヌクレオチドに適用される「コードする」という用語は、その天然状態で、または当業者に周知の方法によって操作されたときに、ポリペプチドが転写および／または翻訳されてポリペプチドおよび／またはそのフラグメントのためのｍＲＮＡを生成することができる場合、ポリペプチドを「コードする」と言われるポリヌクレオチドを指す。アンチセンス鎖はそのような核酸の相補体であり、それからコード配列を推定することができる。
【００４５】
本明細書で使用される場合、「抗体」または「抗原結合ポリペプチド」は、抗原を特異的に認識して結合するポリペプチドまたはポリペプチド複合体を指す。抗体は、抗体全体および任意の抗原結合フラグメントまたはその一本鎖であり得る。したがって、「抗体」という用語は、抗原に結合する生物学的活性を有する免疫グロブリン分子の少なくとも一部を含む任意のタンパク質またはペプチド含有分子を含む。そのような例には、重鎖もしくは軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）またはそのリガンド結合部分、重鎖または軽鎖可変領域、重鎖または軽鎖定常領域、フレームワーク（ＦＲ）領域、またはそれらの任意の部分、または結合タンパク質の少なくとも一部が含まれるが、これらに限定されない。
【００４６】
本明細書で使用される「抗体フラグメント」または「抗原結合フラグメント」という用語は、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖなどの抗体の一部である。構造に関係なく、抗体フラグメントは、そのインタクト抗体によって認識されるのと同じ抗原と結合する。「抗体フラグメント」という用語は、アプタマー、シュピーゲルマー（ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒ）、およびダイアボディを含む。「抗体フラグメント」という用語はまた、特定の抗原に結合して複合体を形成することによって抗体のように作用する任意の合成または遺伝子操作されたタンパク質を含む。
【００４７】
「一本鎖可変フラグメント」または「ｓｃＦｖ」は、免疫グロブリンの重鎖（ＶＨ）および軽鎖（ＶＬ）の可変領域の融合タンパク質を指す。いくつかの態様では、その領域は、１０〜約２５アミノ酸の短いリンカーペプチドと接続されている。リンカーは、柔軟性のためにグリシンが豊富であり得、溶解性のためにセリンまたはスレオニンが豊富であり得、ＶＨのＮ末端をＶＬのＣ末端に接続するか、またはその逆を行うことができる。このタンパク質は、定常領域の除去とリンカーの導入にもかかわらず、元の免疫グロブリンの特異性を保持している。ｓｃＦｖ分子は当技術分野で知られており、例えば、米国特許第５，８９２，０１９号に記載されている。
【００４８】
抗体という用語は、生化学的に識別可能な、さまざまな広範なクラスのポリペプチドを包含する。当業者であれば、重鎖が、いくつかのサブクラスを含む（例えばγ１〜γ４）、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロン（γ、μ、α、δ、ε）に分類されることを理解するであろう。抗体の「クラス」をそれぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥとして決定するのは、この鎖の性質である。免疫グロブリンのサブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４は十分に特徴付けられており、機能の特化を付与することが知られている。これらのクラスおよびアイソタイプの各々の修飾されたバージョンは、本開示に鑑みて、当業者によって容易に識別されるので、本開示の範囲に含まれる。免疫グロブリンの全てのクラスが明瞭に本開示の範囲に含まれ、以下の議論は一般に、ＩｇＧクラスの免疫グロブリン分子に関する。ＩｇＧに関しては、標準的な免疫グロブリン分子は、分子量が約２３，０００ダルトンの２つの同一の軽鎖ポリペプチド、および分子量が５３，０００〜７０，０００ダルトンの２つの同一の重鎖ポリペプチドを含む。４本の鎖は典型的には、「Ｙ」字の形状でジスルフィド結合によって連結され、ここで軽鎖は、「Ｙ」字の開口部から始まって可変領域の全体へと続く重鎖を囲む（ｂｒａｃｋｅｔ）。
【００４９】
本開示の抗体、抗原結合ポリペプチド、バリアント、またはその誘導体には、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、多重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体、エピトープ結合フラグメント、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＫまたはＶＨドメインのいずれかを含むフラグメント、Ｆａｂ発現ライブラリーによって産生されたフラグメント、および抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、本明細書に開示されるＬＩＧＨＴ抗体に対する抗Ｉｄ抗体を含む）が含まれるが、これらに限定されない。本開示の免疫グロブリンまたは抗体分子は、免疫グロブリン分子の任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡｌおよびＩｇＡ２）またはサブクラスであり得る。
【００５０】
軽鎖は、カッパまたはラムダ（Ｋ、λ）のいずれかに分類される。各重鎖クラスは、カッパ軽鎖またはラムダ軽鎖のいずれかに結合することができる。一般に、軽鎖と重鎖は互いに共有結合しており、２つの重鎖の「テール」部分は、免疫グロブリンがハイブリドーマ、Ｂ細胞、または遺伝子操作されたホスト細胞のいずれかによって産生される場合に、共有ジスルフィド結合または非共有結合によって互いに結合している。重鎖において、アミノ酸配列は、Ｙ字の分岐した末端のＮ末端から各鎖の基部のＣ末端まで伸びている。
【００５１】
軽鎖および重鎖の両方が、構造的および機能的相同性の領域に分けられる。「定常」および「可変」という用語は、機能的に使用される。これに関して、軽（ＶＫ）鎖および重（ＶＨ）鎖部分の両方の可変ドメインが抗原認識および抗原特異性を決定することが理解されよう。逆に、軽鎖の定常ドメイン（ＣＫ）および重鎖の定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、またはＣＨ３）は、分泌、経胎盤移動（ｔｒａｎｓｐｌａｃｅｎｔａｌ  ｍｏｂｉｌｉｔｙ）、Ｆｃ受容体結合、補体結合などの重要な生物学的特性を付与する。慣習的に、定常領域ドメインのナンバリングは、抗体の抗原結合部位すなわちアミノ酸末端から遠位に向かうにしたがって数が大きくなる。Ｎ末端部分は可変領域であり、およびＣ末端部分は定常領域である；ＣＨ３ドメインおよびＣＫドメインは実際に、それぞれ重鎖および軽鎖のカルボキシ末端を含む。
【００５２】
上述したように、可変領域によって、抗体は抗原上のエピトープを選択的に認識し、これに特異的に結合することが可能となる。すなわち、抗体のＶＫドメインおよびＶＨドメイン、または相補性決定領域（ＣＤＲ）のサブセットが組み合わさって、３次元の抗原結合部位を規定する可変領域を形成する。この４次元抗体構造は、Ｙ字の各アームの末端に存在する抗原結合部位を形成する。より具体的には、抗原結合部位は、ＶＨ鎖およびＶＫ鎖のそれぞれの３つのＣＤＲ（即ち、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３）によって規定される。場合によっては、例えば、ラクダ種に由来する特定の免疫グロブリン分子、またはラクダの免疫グロブリンに基づいて操作された特定の免疫グロブリン分子の場合は、完全な免疫グロブリン分子が軽鎖を含まず、重鎖のみからなる場合がある。これについては例えば、Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３６３：４４６−４４８頁（１９９３年）を参照されたい。
【００５３】
天然に存在する抗体では、各抗原結合ドメイン中に存在する６つの「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、抗体が水性環境中でその３次元構造をとるときに、抗原結合ドメインを形成するように特異的に配置されたアミノ酸の短い非連続配列である。「フレームワーク」領域と呼ばれる、抗原結合ドメイン中の残りのアミノ酸は、分子間の変動がより少ない。フレームワーク領域は主にβ−シート構造をとり、ＣＤＲはループを形成し、当該ループはβ−シート構造を連結し、場合によってはβ−シート構造の一部を形成する。したがって、フレームワーク領域は、鎖間の非共有結合的相互作用によって、ＣＤＲを正しい方向に配置するためのスキャフォールドを形成するように機能する。配置されたＣＤＲによって形成される抗原結合ドメインは、免疫反応性抗原上のエピトープに相補的な表面を規定する。この相補的な表面は、抗体の、その同系エピトープへの非共有結合を促進する。ＣＤＲおよびフレームワーク領域をそれぞれ含むアミノ酸は、精確に定義されているので、当業者によって、任意の所与の重鎖または軽鎖可変領域について容易に同定され得る（「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、Ｋａｂａｔ，  Ｅ．，  ｅｔ  ａｌ．，  米国保健福祉省，  （１９８３年）；およびＣｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  １９６：９０１−９１７頁（１９８７年）を参照）。
【００５４】
当技術分野で使用されているおよび／または受け入れられている用語に２つ以上の定義がある場合、特に明記しない限りにおいて、本明細書で用いられるその用語の定義は、そのような全ての意味を含むことが意図される。具体的な例は、重鎖および軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内に見られる非連続抗原結合部位を説明する「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）という用語の使用である。この特定の領域は、参照によりその全体が本明細書に援用される、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，  米国保健福祉省、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」（１９８３年）、およびＣｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １９６：９０１−９１７頁（１９８７年）に記載されている。ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａによるＣＤＲの定義には、互いに比較したとき、アミノ酸残基の重複またはサブセットが含まれる。それにもかかわらず、抗体またはそのバリアントのＣＤＲを指すためのいずれかの定義の適用は、本明細書で定義および使用される用語の範囲内にあることが意図される。上記の参考文献の各々によって定義されたＣＤＲを包含する適切なアミノ酸残基を、比較として以下の表に示す。特定のＣＤＲを包含する正確な残基番号は、ＣＤＲの配列およびサイズによって異なるであろう。当業者は、抗体の可変領域のアミノ酸配列が与えられると、どの残基が特定のＣＤＲを含むかをルーチン的に決定することができる。
【表１】
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【００５５】
Ｋａｂａｔらは、任意の抗体に適用可能な可変ドメインの配列のナンバリングシステムについても定義した。当業者は、配列自体を超えるいかなる実験データに依存することなく、この「Ｋａｂａｔナンバリング」のシステムを任意の可変ドメイン配列に明確に割り当てることができる。本明細書で使用される場合、「Ｋａｂａｔナンバリング」は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，  米国健康福祉省、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」（１９８３年）に記載されたナンバリングシステムを指す。
【００５６】
上の表に加えて、ＫａｂａｔナンバーシステムはＣＤＲ領域を以下のように記載する。ＣＤＲ−Ｈ１はアミノ酸３１位付近（つまり、最初のシステイン残基の後の約９残基）から始まり、約５〜７個のアミノ酸を含み、次のトリプトファン残基で終わる。ＣＤＲ−Ｈ２は、ＣＤＲ−Ｈ１の終わりの後の１５番目の残基から始まり、約１６〜１９個のアミノ酸を含み、次のアルギニンまたはリジン残基で終わる。ＣＤＲ−Ｈ３は、ＣＤＲ−Ｈ２の終わりの後の約３３番目のアミノ酸残基から始まり、３〜２５個のアミノ酸を含み、配列Ｗ−Ｇ−Ｘ−Ｇで終わる。ここで、Ｘは任意のアミノ酸である。ＣＤＲ−Ｌ１は残基２４位付近（つまり、システイン残基に続く）から始まり、約１０〜１７残基を含み、次のトリプトファン残基で終わる。ＣＤＲ−Ｌ２は、ＣＤＲ−Ｌ１の終わりの後の約１６番目の残基から始まり、約７残基を含む。ＣＤＲ−Ｌ３は、ＣＤＲ−Ｌ２の終わりの後の約３３番目の残基から始まり（つまり、システイン残基に続く）、約７〜１１残基を含み、配列ＦまたはＷ−Ｇ−Ｘ−Ｇで終わる。ここで、Ｘは任意のアミノ酸である。
【００５７】
本明細書に開示される抗体は、鳥および哺乳動物を含む任意の動物起源のものであり得る。好ましくは、抗体は、ヒト、ネズミ、ロバ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ラマ、ウマ、またはニワトリの抗体である。別の実施形態では、可変領域は、起源がコンドリクトイド（ｃｏｎｄｒｉｃｔｈｏｉｄ）（例えば、サメ由来）であり得る。
【００５８】
本明細書で使用される場合、「重鎖定常領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖に由来するアミノ酸配列を含む。重鎖定常領域を含むポリペプチドは、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ（例えば、上部、中間、および／または下部ヒンジ領域）ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、またはそれらのバリアントもしくはフラグメントのうちの少なくとも１つを含む。例えば、本開示における使用のための抗原結合ポリペプチドは、ＣＨ１ドメインを含むポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメイン、ヒンジドメインの少なくとも一部、およびＣＨ２ドメインを含むポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメインおよびＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメイン、ヒンジドメインの少なくとも一部、およびＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖；またはＣＨ１ドメイン、ヒンジドメインの少なくとも一部、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖を含む場合がある。別の態様では、本開示のポリペプチドは、ＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖を含む。さらに、本開示における使用のための抗体は、ＣＨ２ドメインの少なくとも一部（例えば、ＣＨ２ドメインの全部または一部）を欠く場合がある。上述したように、重鎖定常領域は天然に存在する免疫グロブリン分子とはアミノ酸配列が異なるように修飾され得ることが、当業者によって理解されるであろう。
【００５９】
本明細書に開示される抗体の重鎖定常領域は、異なる免疫グロブリン分子に由来する場合がある。例えば、ポリペプチドの重鎖定常領域は、ＩｇＧ１分子に由来するＣＨ１ドメイン、およびＩｇＧ３分子に由来するヒンジ領域を含む場合がある。別の例では、重鎖定常領域は、一部はＩｇＧ１分子に由来し、一部はＩｇＧ３分子に由来するヒンジ領域を含むことができる。別の例では、重鎖部分は、一部はＩｇＧ１分子に由来し、一部はＩｇＧ４分子に由来するキメラのヒンジを含むことができる。
【００６０】
本明細書で使用される場合、「軽鎖定常領域」という用語は、抗体の軽鎖に由来するアミノ酸配列を含む。好ましくは、軽鎖定常領域は、定常カッパドメインまたは定常ラムダドメインのうちの少なくとも一方を含む。
【００６１】
「軽鎖−重鎖対」は、軽鎖のＣＬドメインと重鎖のＣＨ１ドメインとの間のジスルフィド結合を介して二量体を形成することができる軽鎖および重鎖の集合体を指す。
【００６２】
前に示したように、さまざまな免疫グロブリンクラスの定常領域のサブユニット構造および三次元構成はよく知られている。本明細書で使用される場合、「ＶＨドメイン」という用語は、免疫グロブリン重鎖のアミノ末端可変ドメインを含み、「ＣＨ１ドメイン」という用語は、免疫グロブリン重鎖の最初の（最もアミノ末端側の）定常領域ドメインを含む。ＣＨ１ドメインはＶＨドメインに隣接しており、免疫グロブリン重鎖分子のヒンジ領域のアミノ末端にある。
【００６３】
本明細書で使用される場合、「ＣＨ２ドメイン」という用語は、例えば、従来のナンバリングスキームを使用して、抗体の残基２４４位付近から残基３６０位（Ｋａｂａｔナンバリングでは残基２４４位〜３６０位；およびＥＵナンバリングシステムでは残基２３１位〜３４０位）にわたる重鎖分子の部分を含む；Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，  米国保健福祉省、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」（１９８３年）を参照。ＣＨ２ドメインは、別のドメインと密接に対合しないという点で固有である。むしろ、２つのＮ−結合型分岐糖鎖が、インタクトな天然ＩｇＧ分子の２つのＣＨ２ドメインの間に挿入されている。また、ＣＨ３ドメインがＣＨ２ドメインからＩｇＧ分子のＣ末端まで伸びており、約１０８残基を含むことも十分に立証されている。
【００６４】
本明細書で使用される場合、「ヒンジ領域」という用語は、ＣＨ１ドメインをＣＨ２ドメインに連結する重鎖分子の部分を含む。このヒンジ領域は約２５残基を含み、柔軟性があるため、２つのＮ末端の抗原結合領域が独立して動くことができる。ヒンジ領域は、上部、中間および下部ヒンジドメインの３つの異なるドメインに細分することができる（Ｒｏｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６１：４０８３（１９９８年））。
【００６５】
本明細書で使用される場合、「ジスルフィド結合」という用語は、２つの硫黄原子間に形成された共有結合を含む。アミノ酸システインは、第２のチオール基とジスルフィド結合または架橋を形成可能なチオール基を含む。ほとんどの天然に存在するＩｇＧ分子では、ＣＨ１領域とＣＫ領域はジスルフィド結合によって連結され、２つの重鎖はＫａｂａｔナンバリングシステムを使用して２３９位および２４２位（ＥＵナンバリングで２２６位または２２９位）に対応する位置で２つのジスルフィド結合によって連結されている。
【００６６】
本明細書で使用される場合、「キメラ抗体」という用語は、免疫反応性領域または部位が第１の種から得られるかまたは第１の種に由来し、かつ（インタクト、部分的、または本開示によって修飾され得る）定常領域が第２の種から得られる任意の抗体を意味すると解釈される。特定の実施形態では、標的結合領域または標的結合部位は非ヒト供給源（例えば、マウスまたは霊長類）に由来し、定常領域はヒトに由来する。
【００６７】
本明細書で使用される場合、「ヒト化パーセント」は、ヒト化ドメインと生殖細胞系ドメインとの間のフレームワークアミノ酸の差異（すなわち、非ＣＤＲの差異）の数を決定し、アミノ酸の総数からその数を差し引き、次にそれをアミノ酸の総数で割って１００を掛けることによって計算される。
【００６８】
「特異的に結合する」または「特異性を有する」とは、一般に、抗体がその抗原結合ドメインを介してエピトープに結合すること、およびその結合が抗原結合ドメインとエピトープの間のある程度の相補性を伴うことを意味する。この定義によれば、抗体は、ランダムな無関係のエピトープに結合する場合よりも容易に、その抗原結合ドメインを介してエピトープに結合する場合に、そのエピトープに「特異的に結合する」と表現される。「特異性」という用語は、本明細書では、特定の抗体が特定のエピトープに結合する際の相対的な親和性を認定するために使用される。例えば、抗体「Ａ」は、抗体「Ｂ」よりも所与のエピトープに対して高い特異性を有すると見なされる場合があるほか、抗体「Ａ」は、関連したエピトープ「Ｄ」に対するよりも高い特異性でエピトープ「Ｃ」に結合すると表現される場合がある。
【００６９】
本明細書で使用される場合、「処置する」または「処置」という用語は、治療目的の処置と予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ／ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）措置の両方を指し、その目的は、癌の進行などの望ましくない生理学的な変化または障害を予防または減速（軽減）することである。有益または望ましい臨床結果には、検出可能か不可能かを問わず、症状の緩和、疾患の程度の縮小、疾患状態の安定した（すなわち、悪化しない）状態、疾患の進行の遅延または緩徐化、疾患状態の改善または緩和、および寛解（部分的または全体的）が含まれるが、これらに限定されない。「処置」は、処置を受けていない場合に予想される生存期間と比較して、生存期間を延長することを意味する場合もある。処置を必要とする者には、既に症状もしくは障害を有する者、ならびに症状もしくは障害を有する傾向のある者、または症状もしくは障害を予防する必要がある者が含まれる。
【００７０】
「対象」または「個体（個人）」または「動物」または「患者」または「哺乳動物」とは、診断、予後予測、または治療が望まれる任意の対象、特に哺乳動物対象を意味する。哺乳動物対象には、ヒト、家畜動物、農場動物、および動物園で飼育されている動物、狩猟対象動物、または愛玩動物、例えば、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、畜牛、乳牛などが含まれる。
【００７１】
本明細書で使用される場合、「処置を必要とする患者に」または「処置を必要とする対象」などの句は、例えば、検出、診断手順および／または処置のために使用される本開示の抗体または組成物の投与から利益を得るであろう哺乳動物対象などの対象を含む。
【００７２】
・抗ＩＬ−１８Ｒアルファおよびベータ抗体
いくつかのサイトカイン指向療法は、感染症の増加と関連している。これは、抗ＩＬ−１８指向性抗体ではそれほど問題にならないかもしれない。それにもかかわらず、３０ｐＭの親和性を有する抗ＩＬ−１８モノクローナル抗体の安全性および有効性を調査する最近の臨床研究は、空腹時血漿グルコース制御、インスリンレベルおよびＣ反応性ペプチド（インスリンレベルの代用）を回復する能力を評価するために使用され、感知できるほどの有効性を示すことができなかった。したがって、その受容体を標的とする治療用抗体が開発されていないことは驚くべきことではない。
【００７３】
本開示の様々な実施形態は、ＩＬ−１８受容体αまたはβに対して特異的な抗体を提供する。これらの抗体は、そのユニークな特徴を考えると、効果的な治療薬になり得る。多くの場合、拮抗抗体は、リガンド結合部位の立体的遮断によって受容体を介したシグナル伝達を妨げる。しかしながら、本開示の抗ＩＬ−１８Ｒβ抗体３１３１は、本明細書で得られた構造データに示されるように、受容体の非リガンド結合成分を標的とする。受容体のこのサブユニットはリガンドと直接接触するのではなく、リガンド結合ＩＬ−１８Ｒαサブユニットと分子間接触を形成する。そうすることで、それは受容体複合体のシグナル伝達機能を媒介し、それがなければ、リガンドシグナルの伝達は起こらない。ＩＬ−１８Ｒβとの抗体３１３１の相互作用は、ドメイン２（Ｄ２）とドメイン３（Ｄ３）の間のヒンジ領域で発生すると思われ、それらの間の相対角度を歪ませて、ＩＬ−１８Ｒαと相互作用できないコンフォメーションにする。これは、機能的な受容体−リガンド複合体の形成を効果的に妨げ、新規な方法で下流のシグナル伝達を阻害する。
【００７４】
また、ＩＬ−１８Ｒβ抗体３１３１がそのマウスオルソログに対してかなりの親和性を示したことも興味深い。これは、内因性受容体に対するマウスモデルにおけるその分布、安全性、および活性の前臨床評価を可能にし、開発と臨床評価への道を容易にするので有用である。
【００７５】
本開示の一実施形態によれば、ＩＬ−１８Ｒβタンパク質に特異的に結合する抗体およびそのフラグメントが提供される。これらの抗体またはフラグメントは、ヒトインターロイキン−１８受容体ベータ（ＩＬ−１８Ｒβ）タンパク質の（１）Ｄ１−Ｄ２ドメイン、（２）ヒンジ領域、および（３）Ｄ３ドメインのうちの２つ以上の領域に対して結合特異性を有し得る。ヒンジ領域は、例示的なＩＬ−１８Ｒβ配列である配列番号１６１（ＵｎｉＰｒｏｔ  ＩＤ  Ｏ９５２５６；表Ａ）で説明することができる。配列番号１において、アミノ酸残基１〜２４３はＤ１およびＤ２ドメインであり、アミノ酸残基２４４〜２４６はヒンジ領域を構成し、アミノ酸残基２４７〜３５６はＤ３ドメインを構成する。
【００７６】
抗体またはフラグメントの結合に関与し得るＤ１−Ｄ２ドメインのアミノ酸残基には、Ｌ１６７、Ｄ２１３およびＴ２４２が含まれるが、これらに限定されない。抗体またはフラグメントの結合に関与し得るヒンジ領域のアミノ酸残基には、Ｖ２４４、Ｇ２４５およびＤ２４６が含まれるが、これらに限定されない。抗体またはフラグメントの結合に関与し得るＤ３ドメインのアミノ酸残基には、Ｇ２７８、Ｆ２７９、Ｒ２８１、Ｖ２８２、Ｆ２８３、Ｎ２８４、Ｐ２８５、Ｓ３１０、Ｅ３１５およびＩ３１７が含まれるが、これらに限定されない。
【００７７】
一実施形態では、抗体またはそのフラグメントは、Ｄ１−Ｄ２ドメインの少なくとも１残基（例えば、Ｌ１６７、Ｄ２１３またはＴ２４２の１つ以上、好ましくはＤ２１３またはＴ２４２の１つ以上）およびヒンジ領域の少なくとも１残基（例えば、Ｖ２４４、Ｇ２４５またはＤ２４６の１つ以上、好ましくはＶ２４４）に結合する。
【００７８】
一実施形態では、抗体またはそのフラグメントは、Ｄ１−Ｄ２ドメインの少なくとも１残基（例えば、Ｌ１６７、Ｄ２１３およびＴ２４２の１つ以上、好ましくはＤ２１３およびＴ２４２の１つ以上）およびＤ３ドメインの少なくとも１残基（Ｇ２７８、Ｆ２７９、Ｒ２８１、Ｖ２８２、Ｆ２８３、Ｎ２８４、Ｐ２８５、Ｓ３１０、Ｅ３１５またはＩ３１７の１つ以上、または好ましくはＧ２７８、Ｒ２８１、Ｖ２８２、Ｆ２８３、Ｎ２８４、Ｐ２８５、Ｓ３１０、Ｅ３１５またはＩ３１７の１つ以上）に結合する。
【００７９】
一実施形態では、抗体またはそのフラグメントは、ヒンジ領域の少なくとも１残基（例えば、Ｖ２４４、Ｇ２４５またはＤ２４６の１つ以上、好ましくはＶ２４４）およびＤ３ドメインの少なくとも１残基（Ｇ２７８、Ｆ２７９、Ｒ２８１、Ｖ２８２、Ｆ２８３、Ｎ２８４、Ｐ２８５、Ｓ３１０、Ｅ３１５またはＩ３１７の１つ以上、または好ましくはＧ２７８、Ｒ２８１、Ｖ２８２、Ｆ２８３、Ｎ２８４、Ｐ２８５、Ｓ３１０、Ｅ３１５またはＩ３１７の１つ以上）に結合する。
【００８０】
一実施形態では、抗体またはそのフラグメントは、Ｄ１−Ｄ２ドメインの少なくとも１残基（例えば、Ｌ１６７、Ｄ２１３またはＴ２４２の１つ以上、好ましくはＤ２１３またはＴ２４２の１つ以上）、ヒンジ領域の少なくとも１残基（例えば、Ｖ２４４、Ｇ２４５またはＤ２４６の１つ以上、好ましくはＶ２４４）、およびＤ３ドメインの少なくとも１残基（Ｇ２７８、Ｆ２７９、Ｒ２８１、Ｖ２８２、Ｆ２８３、Ｎ２８４、Ｐ２８５、Ｓ３１０、Ｅ３１５またはＩ３１７の１つ以上、または好ましくはＧ２７８、Ｒ２８１、Ｖ２８２、Ｆ２８３、Ｎ２８４、Ｐ２８５、Ｓ３１０、Ｅ３１５またはＩ３１７の１つ以上）に結合する。
【００８１】
一実施形態では、抗体またはそのフラグメントは、Ｄ１−Ｄ２のＤ２１３およびＴ２４２、ヒンジ領域のＶ２４４、ならびにＧ２７８、Ｆ２７９、Ｒ２８１、Ｖ２８２、Ｆ２８３、Ｎ２８４、Ｐ２８５、Ｓ３１０、Ｅ３１５およびＩ３１７から、またはＧ２７８、Ｒ２８１、Ｖ２８２、Ｆ２８３、Ｎ２８４、Ｐ２８５、Ｓ３１０、Ｅ３１５およびＩ３１７から選択されるＤ３ドメインの少なくとも２、３、４、５、６、７または８残基に結合する。
【００８２】
一実施形態では、抗体またはそのフラグメントは、アミノ酸残基Ｄ２１３、Ｔ２４２、Ｖ２４４、Ｇ２７８、Ｒ２８１、Ｖ２８２、Ｆ２８３、Ｎ２８４、Ｐ２８５、Ｓ３１０、Ｅ３１５およびＩ３１７に結合する。一実施形態では、抗体またはそのフラグメントは、アミノ酸残基Ｌ１６７、Ｄ２１３、Ｔ２４２、Ｖ２４４、Ｇ２７８、Ｆ２７９、Ｒ２８１、Ｖ２８２、Ｆ２８３、Ｎ２８４、Ｐ２８５、Ｓ３１０、Ｅ３１５およびＩ３１７に結合する。
【表２】
2021527683.tif 000003
【００８３】
いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、ヒトおよびマウスの両方のＩＬ−１８Ｒβタンパク質に結合することができる。
【００８４】
本開示の抗体およびフラグメントはまた、それらのＣＤＲ配列に関して記載される。一実施形態では、ヒトインターロイキン−１８受容体ベータ（ＩＬ−１８Ｒβ）タンパク質に対して結合特異性を有する抗体またはそのフラグメントが提供され、当該抗体またはそのフラグメントは、軽鎖相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３を含有する軽鎖可変領域と、重鎖相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３を含有する重鎖可変領域を含み、ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３は、表Ｂの組み合わせ１〜２７から選択される。本明細書における抗体またはフラグメントの開示は、ＣＤＲＬ１およびＣＤＲＬ２も含み得る。ここで、さまざまなＣＤＲＬ１およびＣＤＲＬ２配列が使用され得る。非限定的な例には、それぞれＱＳＶＳＳＡ（配列番号４５）およびＳＡＳ（配列番号４６）、ならびに表Ｂ１に示されるような置換を伴うそれらが含まれる。
【表３−１】
2021527683.tif 000004
【表３−２】
2021527683.tif 000005
【００８５】
抗体またはフラグメントの結合活性を保持しながら、１つ以上のＣＤＲ配列に対する特定の修飾（例えば、１つ、２つまたは３つのアミノ酸付加、アミノ酸欠失、保存的アミノ酸置換）を行うことができることは容易に理解できる。いくつかの実施形態では、修飾は、１残基、２残基または３残基のアミノ酸置換である。
【００８６】
いくつかの実施形態では、修飾は、各ＣＤＲ由来のわずか１つのホットスポット位置での置換である。いくつかの実施形態では、修飾は、１つ、２つまたは３つのそのようなホットスポット位置での置換である。一実施形態では、修飾は、ホットスポット位置の１つでの置換である。そのような置換は、いくつかの実施形態では、保存的置換である。
【００８７】
「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置換されるものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは当技術分野で定義されており、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含む。したがって、免疫グロブリンポリペプチドの非必須アミノ酸残基は、好ましくは、同じ側鎖ファミリーからの別のアミノ酸残基で置換される。別の実施形態では、アミノ酸のストリング（ｓｔｒｉｎｇ）は、側鎖ファミリーメンバーの順序および／または組成が異なる構造的に類似したストリングで置換され得る。
【００８８】
保存的アミノ酸置換の非限定的な例を以下の表に示す。表中で、０以上の類似性スコアは、それら２つのアミノ酸間の保存的置換を示す。
【表４】
2021527683.tif 000006
【表５】
2021527683.tif 000007
【００８９】
適切な置換を有するＣＤＲ（Ｆ３１３１由来、表Ｂの＃１）の具体例を以下の表に示す。
【表６−１】
2021527683.tif 000008
【表６−２】
2021527683.tif 000009
【００９０】
特定の例示的な抗体には、配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４もしくは３８の重鎖配列および／または配列番号４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３６もしくは４０の軽鎖配列を有するもの、ならびにそれらの各々の生物学的バリアントが含まれる。
【００９１】
（配列番号２の重鎖可変領域および配列番号４の軽鎖可変領域を有する）抗体３１３１は、数ラウンドの親和性成熟を経て、３１３１  ＡＭ１−１および３１３１  ＡＭ１−２（表２を参照）、および表８に示されているものが生成された。これらの親和性成熟抗体のそれぞれ、それらのＦａｂフラグメント、可変領域およびＣＤＲも、本開示の範囲内である。
【００９２】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体またはフラグメントは、３１３１のＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３、またはその親和性成熟バリアントのそれぞれを含む（例えば、表９）。いくつかの実施形態では、本開示の抗体またはフラグメントは、３１３１のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３、またはその親和性成熟バリアントのそれぞれを含む（例えば、表９）。
【００９３】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体またはフラグメントは、以下のものなどの表８の親和性成熟変バリアントの重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む：ＡＭ２−１、ＡＭ２−１、ＡＭ２−２、ＡＭ２−２、ＡＭ２−３、ＡＭ２−３、ＡＭ２−４、ＡＭ２−４、ＡＭ２−５、ＡＭ２−５、ＡＭ２−６、ＡＭ２−６、ＡＭ２−７、ＡＭ２−７、ＡＭ２−８、ＡＭ２−８、ＡＭ２−９、ＡＭ２−９、ＡＭ２−１０、ＡＭ２−１０、ＡＭ２−１１、ＡＭ２−１１、ＡＭ２−１３、ＡＭ２−１３、ＡＭ２−１４、ＡＭ２−１４、ＡＭ２−１５、ＡＭ２−１５、ＡＭ２−１６、ＡＭ２−１６、ＡＭ２−１７、ＡＭ２−１７、ＡＭ２−１８、ＡＭ２−１８、ＡＭ２−２１、ＡＭ２−２１、ＡＭ２−２４、ＡＭ２−２４、ＡＭ２−２５、ＡＭ２−２５、ＡＭ２−２６、ＡＭ２−２６、ＡＭ２−２８、ＡＭ２−２８、ＡＭ２−２９、ＡＭ２−２９、ＡＭ２−３０、ＡＭ２−３０、ＡＭ２−３１、ＡＭ２−３１、ＡＭ２−３２、ＡＭ２−３２、ＡＭ２−３３、ＡＭ２−３３、ＡＭ２−３５、ＡＭ２−３５、ＡＭ２−３６、ＡＭ２−３６、ＡＭ２−３７、ＡＭ２−３７、ＡＭ２−ＳＧ、ＡＭ２−ＳＧ、ＡＭ２−ＳＴ、ＡＭ２−ＳＴ、ＡＭ２−ＳＨ、ＡＭ２−ＳＨ、ＡＭ２−ＳＹ、ＡＭ２−ＳＴ、ＡＭ２−Ｏ−０１、ＡＭ２−Ｏ−０１、ＡＭ２−Ｏ−０２、ＡＭ２−Ｏ−０２、ＡＭ２−Ｏ−０３、ＡＭ２−Ｏ−０３、ＡＭ２−Ｏ−０４、ＡＭ２−Ｏ−０４、ＡＭ２−Ｏ−０５、ＡＭ２−Ｏ−０５、ＡＭ２−Ｏ−０６、ＡＭ２−Ｏ−０６、ＡＭ２−Ｏ−０７、ＡＭ２−Ｏ−０７、ＡＭ２−Ｏ−０８、ＡＭ２−Ｏ−０８、ＡＭ２−Ｏ−０９、ＡＭ２−Ｏ−０９、ＡＭ２−Ｏ−１０、ＡＭ２−Ｏ−１０、ＡＭ２−Ｏ−１１、ＡＭ２−Ｏ−１１、ＡＭ２−Ｏ−１２、ＡＭ２−Ｏ−１２、ＡＭ２−Ｏ−１３、ＡＭ２−Ｏ−１３、ＡＭ２−Ｏ−１４、ＡＭ２−Ｏ−１４、ＡＭ２−Ｏ−１５、ＡＭ２−Ｏ−１５、ＡＭ２−Ｏ−１６、ＡＭ２−Ｏ−１６、ＡＭ２−Ｏ−１７、ＡＭ２−Ｏ−１７、ＡＭ２−Ｏ−１８、ＡＭ２−Ｏ−１８、ＡＭ２−Ｏ−１９、ＡＭ２−Ｏ−１９、ＡＭ２−Ｏ−２０、ＡＭ２−Ｏ−２０、ＡＭ２−Ｏ−２１、ＡＭ２−Ｏ−２１、ＡＭ２−Ｏ−２２、ＡＭ２−Ｏ−２２、ＡＭ２−Ｏ−２３、ＡＭ２−Ｏ−２３、ＡＭ２−Ｏ−２４、ＡＭ２−Ｏ−２４、ＡＭ２−Ｏ−２５、ＡＭ２−Ｏ−２５、ＡＭ２−Ｏ−２６、ＡＭ２−Ｏ−２６、ＡＭ２−Ｏ−２７、ＡＭ２−Ｏ−２７、ＡＭ２−Ｏ−２８、ＡＭ２−Ｏ−２８、ＡＭ２−Ｏ−２９、ＡＭ２−Ｏ−２９、ＡＭ２−Ｏ−３０、ＡＭ２−Ｏ−３０、ＡＭ２−Ｏ−３１、ＡＭ２−Ｏ−３１、ＡＭ２−Ｏ−３２、ＡＭ２−Ｏ−３２、ＡＭ２−Ｏ−３３、ＡＭ２−Ｏ−３３、ＡＭ２−Ｏ−３４、ＡＭ２−Ｏ−３４、ＡＭ２−Ｏ−３５、ＡＭ２−Ｏ−３５、ＡＭ２−Ｏ−３６、ＡＭ２−Ｏ−３６、ＡＭ２−Ｏ−３７、ＡＭ２−Ｏ−３７、ＡＭ２−Ｏ−３８、ＡＭ２−Ｏ−３８、ＡＭ２−Ｏ−３９、ＡＭ２−Ｏ−３９、ＡＭ２−Ｏ−４０、ＡＭ２−Ｏ−４０、ＡＭ２−Ｏ−４１、ＡＭ２−Ｏ−４１、ＡＭ２−Ｏ−４２、ＡＭ２−Ｏ−４２、ＡＭ２−Ｏ−４３、ＡＭ２−Ｏ−４３、ＡＭ２−Ｏ−４４、ＡＭ２−Ｏ−４４、ＡＭ２−Ｏ−４５、ＡＭ２−Ｏ−４５、ＡＭ２−Ｏ−４６、およびＡＭ２−Ｏ−４６。
【００９４】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体またはフラグメントは、以下のものなどの表８の親和性成熟変バリアントのＣＤＲを含む：ＡＭ２−１、ＡＭ２−１、ＡＭ２−２、ＡＭ２−２、ＡＭ２−３、ＡＭ２−３、ＡＭ２−４、ＡＭ２−４、ＡＭ２−５、ＡＭ２−５、ＡＭ２−６、ＡＭ２−６、ＡＭ２−７、ＡＭ２−７、ＡＭ２−８、ＡＭ２−８、ＡＭ２−９、ＡＭ２−９、ＡＭ２−１０、ＡＭ２−１０、ＡＭ２−１１、ＡＭ２−１１、ＡＭ２−１３、ＡＭ２−１３、ＡＭ２−１４、ＡＭ２−１４、ＡＭ２−１５、ＡＭ２−１５、ＡＭ２−１６、ＡＭ２−１６、ＡＭ２−１７、ＡＭ２−１７、ＡＭ２−１８、ＡＭ２−１８、ＡＭ２−２１、ＡＭ２−２１、ＡＭ２−２４、ＡＭ２−２４、ＡＭ２−２５、ＡＭ２−２５、ＡＭ２−２６、ＡＭ２−２６、ＡＭ２−２８、ＡＭ２−２８、ＡＭ２−２９、ＡＭ２−２９、ＡＭ２−３０、ＡＭ２−３０、ＡＭ２−３１、ＡＭ２−３１、ＡＭ２−３２、ＡＭ２−３２、ＡＭ２−３３、ＡＭ２−３３、ＡＭ２−３５、ＡＭ２−３５、ＡＭ２−３６、ＡＭ２−３６、ＡＭ２−３７、ＡＭ２−３７、ＡＭ２−ＳＧ、ＡＭ２−ＳＧ、ＡＭ２−ＳＴ、ＡＭ２−ＳＴ、ＡＭ２−ＳＨ、ＡＭ２−ＳＨ、ＡＭ２−ＳＹ、ＡＭ２−ＳＴ、ＡＭ２−Ｏ−０１、ＡＭ２−Ｏ−０１、ＡＭ２−Ｏ−０２、ＡＭ２−Ｏ−０２、ＡＭ２−Ｏ−０３、ＡＭ２−Ｏ−０３、ＡＭ２−Ｏ−０４、ＡＭ２−Ｏ−０４、ＡＭ２−Ｏ−０５、ＡＭ２−Ｏ−０５、ＡＭ２−Ｏ−０６、ＡＭ２−Ｏ−０６、ＡＭ２−Ｏ−０７、ＡＭ２−Ｏ−０７、ＡＭ２−Ｏ−０８、ＡＭ２−Ｏ−０８、ＡＭ２−Ｏ−０９、ＡＭ２−Ｏ−０９、ＡＭ２−Ｏ−１０、ＡＭ２−Ｏ−１０、ＡＭ２−Ｏ−１１、ＡＭ２−Ｏ−１１、ＡＭ２−Ｏ−１２、ＡＭ２−Ｏ−１２、ＡＭ２−Ｏ−１３、ＡＭ２−Ｏ−１３、ＡＭ２−Ｏ−１４、ＡＭ２−Ｏ−１４、ＡＭ２−Ｏ−１５、ＡＭ２−Ｏ−１５、ＡＭ２−Ｏ−１６、ＡＭ２−Ｏ−１６、ＡＭ２−Ｏ−１７、ＡＭ２−Ｏ−１７、ＡＭ２−Ｏ−１８、ＡＭ２−Ｏ−１８、ＡＭ２−Ｏ−１９、ＡＭ２−Ｏ−１９、ＡＭ２−Ｏ−２０、ＡＭ２−Ｏ−２０、ＡＭ２−Ｏ−２１、ＡＭ２−Ｏ−２１、ＡＭ２−Ｏ−２２、ＡＭ２−Ｏ−２２、ＡＭ２−Ｏ−２３、ＡＭ２−Ｏ−２３、ＡＭ２−Ｏ−２４、ＡＭ２−Ｏ−２４、ＡＭ２−Ｏ−２５、ＡＭ２−Ｏ−２５、ＡＭ２−Ｏ−２６、ＡＭ２−Ｏ−２６、ＡＭ２−Ｏ−２７、ＡＭ２−Ｏ−２７、ＡＭ２−Ｏ−２８、ＡＭ２−Ｏ−２８、ＡＭ２−Ｏ−２９、ＡＭ２−Ｏ−２９、ＡＭ２−Ｏ−３０、ＡＭ２−Ｏ−３０、ＡＭ２−Ｏ−３１、ＡＭ２−Ｏ−３１、ＡＭ２−Ｏ−３２、ＡＭ２−Ｏ−３２、ＡＭ２−Ｏ−３３、ＡＭ２−Ｏ−３３、ＡＭ２−Ｏ−３４、ＡＭ２−Ｏ−３４、ＡＭ２−Ｏ−３５、ＡＭ２−Ｏ−３５、ＡＭ２−Ｏ−３６、ＡＭ２−Ｏ−３６、ＡＭ２−Ｏ−３７、ＡＭ２−Ｏ−３７、ＡＭ２−Ｏ−３８、ＡＭ２−Ｏ−３８、ＡＭ２−Ｏ−３９、ＡＭ２−Ｏ−３９、ＡＭ２−Ｏ−４０、ＡＭ２−Ｏ−４０、ＡＭ２−Ｏ−４１、ＡＭ２−Ｏ−４１、ＡＭ２−Ｏ−４２、ＡＭ２−Ｏ−４２、ＡＭ２−Ｏ−４３、ＡＭ２−Ｏ−４３、ＡＭ２−Ｏ−４４、ＡＭ２−Ｏ−４４、ＡＭ２−Ｏ−４５、ＡＭ２−Ｏ−４５、ＡＭ２−Ｏ−４６、およびＡＭ２−Ｏ−４６。
【００９５】
そのようなＣＤＲの組み合わせの例には、限定されないが、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３について、以下が含まれる：配列番号４５、４６、３３２、７４、９５および１１７（ＡＭ２−１）、配列番号４５、４６、４７、７４、３４０および１１７（ＡＭ２−２）、配列番号４５、４６、４７、７４、３４１および１１７（ＡＭ２−３）、配列番号４５、４６、４７、７４、３４２および１１７（ＡＭ２−４）、配列番号４５、４６、４７、７４、３４３および１１７（ＡＭ２−５）、配列番号４５、４６、４７、７４、３４４および１１７（ＡＭ２−６）、配列番号４５、４６、３３３、７４、３４５および１１７（ＡＭ２−７）、配列番号４５、４６、４７、７４、３４６および１１７（ＡＭ２−８）、配列番号４５、４６、３３４、７４、９５および１１７（ＡＭ２−９）、配列番号４５、４６、４７、７４、３４７および１１７（ＡＭ２−１０）、配列番号４５、４６、４７、７４、３４７および１１７（ＡＭ２−１１）、配列番号４５、４６、３３３、７４、９５および１１７（ＡＭ２−１３）、配列番号４５、４６、３３５、７４、９５および１１７（ＡＭ２−１４）、配列番号４５、４６、４７、７４、３４８および１１７（ＡＭ２−１５）、配列番号４５、３２２、４７、７４、９５および１１７（ＡＭ２−１６）、配列番号４５、４６、４７、７４、３４９および１１７（ＡＭ２−１７）、配列番号４５、４６、４７、７４、３５０および１１７（ＡＭ２−１８）、配列番号４５、３２３、４７、７４、９５および１１７（ＡＭ２−２１）、配列番号４５、３２４、４７、７４、９５および１１７（ＡＭ２−２４）、配列番号４５、４６、４７、７４、９５および１１７（ＡＭ２−２５）、配列番号４５、３２５、４７、７４、９５および１１７（ＡＭ２−２６）、配列番号４５、３２６、４７、７４、９５および１１７（ＡＭ２−２８）、配列番号４５、３２２、４７、７４、９５および１１７（ＡＭ２−２９）、配列番号４５、４６、４７、７４、９５および１１７（ＡＭ２−３０）、配列番号４５、３２５、４７、７４、９５および１１７（ＡＭ２−３１）、配列番号４５、３２７、４７、７４、９５および１１７（ＡＭ２−３２）、配列番号４５、４６、４７、７４、３５１および１１７（ＡＭ２−３３）、配列番号４５、４６、３３６、７４、９５および１１７（ＡＭ２−３５）、配列番号４５、４６、４７、７４、３５２および１１７（ＡＭ２−３６）、配列番号４５、４６、３３６、７４、３５２および１１７（ＡＭ２−３７）、配列番号４５、３２８、４７、７４、９５および１１７（ＡＭ２−Ｓ−Ｇ）、配列番号４５、３２９、４７、７４、９５および１１７（ＡＭ２−Ｓ−Ｔ）、配列番号４５、３３０、４７、７４、９５および１１７（ＡＭ２−Ｓ−Ｈ）、配列番号４５、３３１、４７、７４、９５および１１７（ＡＭ２−Ｓ−Ｙ）、配列番号４５、４６、４７、３３７、３５０および１１７（ＡＭ２−Ｏ−０１）、配列番号４５、４６、４７、３３８、３５０および１１７（ＡＭ２−Ｏ−０２）、配列番号番号４５、４６、４７、３３９、３５０および１１７（ＡＭ２−Ｏ−０３）、配列番号４５、４６、４７、３３７、３４３および１１７（ＡＭ２−Ｏ−０４）、配列番号４５、４６、４７、３３８、３４３および１１７（ＡＭ２−Ｏ−０５）、配列番号４５、４６、４７、３３９、３４３および１１７（ＡＭ２−Ｏ−０６）、配列番号４５、３２８、４７、７４、３５０および１１７（ＡＭ２−Ｏ−０７）、配列番号４５、３２８、４７、３３７、３５０および１１７（ＡＭ２−Ｏ−０８）、配列番号４５、３２８、４７、３３８、３５０および１１７（ＡＭ２−Ｏ−０９）、配列番号４５、３２８、４７、３３９、３５０および１１７（ＡＭ２−Ｏ−１０）、配列番号４５、３２８、４７、７４、３４３および１１７（ＡＭ２−Ｏ−１１）、配列番号４５、３２８、４７、３３７、３４３および１１７（ＡＭ２−Ｏ−１２）、配列番号４５、３２８、４７、３３８、３４３および１１７（ＡＭ２−Ｏ−１３）、配列番号４５、３２８、４７、３３９、３４３および１１７（ＡＭ２−Ｏ−１４）、配列番号４５、４６、３３３、７４、３５０および１１７（ＡＭ２−Ｏ−１５）、配列番号４５、４６、３３３、３３７、３５０および１１７（ＡＭ２−Ｏ−１６）、配列番号４５、４６、３３３、３３８、３５０および１１７（ＡＭ２−Ｏ−１７）、配列番号４５、４６、３３３、３３９、３５０および１１７（ＡＭ２−Ｏ−１８）、配列番号４５、４６、３３３、７４、３４３および１１７（ＡＭ２−Ｏ−１９）、配列番号４５、４６、３３３、３３７、３４３および１１７（ＡＭ２−Ｏ−２０）、配列番号４５、４６、３３３、３３８、３４３および１１７（ＡＭ２−Ｏ−２１）、配列番号４５、４６、３３３、３３９、３４３および１１７（ＡＭ２−Ｏ−２２）、配列番号４５、３２８、３３３、７４、３５０および１１７（ＡＭ２−Ｏ−２３）、配列番号４５、３２８、３３３、３３７、３５０および１１７（ＡＭ２−Ｏ−２４）、配列番号４５、３２８、３３３、３３８、３５０および１１７（ＡＭ２−Ｏ−２５）、配列番号４５、３２８、３３３、３３９、３５０および１１７（ＡＭ２−Ｏ−２６）、配列番号４５、３２８、３３３、７４、３４３および１１７（ＡＭ２−Ｏ−２７）、配列番号４５、３２８、３３３、３３７、３４３および１１７（ＡＭ２−Ｏ−２８）、配列番号４５、３２８、３３３、３３８、３４３および１１７（ＡＭ２−Ｏ−２９）、配列番号４５、３２８、３３３、３３９、３４３および１１７（ＡＭ２−Ｏ−３０）、配列番号４５、４６、３３５、７４、３５０および１１７（ＡＭ２−Ｏ−３１）、配列番号４５、４６、３３５、３３７、３５０および１１７（ＡＭ２−Ｏ−３２）、配列番号４５、４６、３３５、３３８、３５０および１１７（ＡＭ２−Ｏ−３３）、配列番号４５、４６、３３５、３３９、３５０および１１７（ＡＭ２−Ｏ−３４）、配列番号４５、４６、３３５、７４、３４３および１１７（ＡＭ２−Ｏ−３５）、配列番号４５、４６、３３５、３３７、３４３および１１７（ＡＭ２−Ｏ−３６）、配列番号４５、４６、３３５、３３８、３４３および１１７（ＡＭ２−Ｏ−３７）、配列番号４５、４６、３３５、３３９、３４３および１１７（ＡＭ２−Ｏ−３８）、配列番号４５、３２８、３３５、７４、３５０および１１７（ＡＭ２−Ｏ−３９）、配列番号４５、３２８、３３５、３３７、３５０および１１７（ＡＭ２−Ｏ−４０）、配列番号４５、３２８、３３５、３３８、３５０および１１７（ＡＭ２−Ｏ−４１）、配列番号４５、３２８、３３５、３３９、３５０および１１７（ＡＭ２−Ｏ−４２）、配列番号４５、３２８、３３５、７４、３４３および１１７（ＡＭ２−Ｏ−４３）、配列番号４５、３２８、３３５、３３７、３４３および１１７（ＡＭ２−Ｏ−４４）、配列番号４５、３２８、３３５、３３８、３４３および１１７（ＡＭ２−Ｏ−４５）、ならびに配列番号４５、３２８、３３５、３３９、３４３および１１７（ＡＭ２−Ｏ−４６）。
【００９６】
そのような抗体またはフラグメントの非限定的な例には、それぞれのＣＤＲ配列（例えば、表９参照）を保持しながら、表８の各バリアントの重鎖可変領域および軽鎖可変領域を有するもの、ならびに表８の各バリアントの重鎖可変領域および軽鎖可変領域のそれぞれに対して少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するものが含まれる。
【００９７】
本開示は、同様に、ヒトインターロイキン−１８受容体アルファ（ＩＬ−１８Ｒα）タンパク質に対して特異的に結合する抗体およびそのフラグメントを提供する。いくつかの実施形態では、抗体またはそのフラグメントは、軽鎖相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３を含有する軽鎖可変領域と、重鎖相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３を含有する重鎖可変領域を含み、ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３は、表Ｃの組み合わせ１〜１２から選択される。本明細書における抗体またはフラグメントの開示は、ＣＤＲＬ１およびＣＤＲＬ２も含み得る。ここで、さまざまなＣＤＲＬ１およびＣＤＲＬ２配列が使用され得る。非限定的な例には、それぞれＱＳＶＳＳＡ（配列番号４５）およびＳＡＳ（配列番号４６）、ならびに表Ｃ１に示されるようなそれらの生物学的同等物が含まれる。
【表７】
2021527683.tif 000010
【００９８】
抗体またはフラグメントの結合活性を保持しながら、１つ以上のＣＤＲ配列に対する特定の修飾（例えば、１つ、２つまたは３つのアミノ酸付加、アミノ酸欠失、保存的アミノ酸置換）を行うことができることが容易に理解できる。いくつかの実施形態では、修飾は、１残基、２残基または３残基のアミノ酸置換である。
【００９９】
いくつかの実施形態では、修飾は、各ＣＤＲ由来のわずか１つのホットスポット位置での置換である。いくつかの実施形態では、修飾は、１つ、２つまたは３つのそのようなホットスポット位置での置換である。一実施形態では、修飾は、ホットスポット位置の１つでの置換である。そのような置換は、いくつかの実施形態では、保存的置換である。
【０１００】
適切な置換を有する（表ＣにおけるＣＤＲの組み合わせ＃１１からの）ＣＤＲの具体例を以下の表に示す。
【表８−１】
2021527683.tif 000011
【表８−２】
2021527683.tif 000012
【０１０１】
特定の例示的な抗体には、配列番号４２の重鎖配列および／または配列番号４４の軽鎖配列を有するもの、ならびにそれらのそれぞれの生物学的バリアントが含まれる。
【０１０２】
本明細書に開示される抗体は、それらが由来する天然に存在する結合ポリペプチドとはアミノ酸配列が異なるように修飾され得ることも当業者によって理解されるであろう。例えば、指定されたタンパク質に由来するポリペプチドまたはアミノ酸配列は、出発配列に類似している可能性があり、例えば出発配列に対して特定のパーセントの同一性を有し得、例えばそれは出発配列と６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一である可能性がある。
【０１０３】
特定の実施形態では、抗体は、通常は抗体に関連しないアミノ酸配列または１つ以上の部分を含む。例示的な修飾については、以下でより詳細に説明する。例えば、本開示の抗体は、柔軟なリンカー配列を含み得るか、または機能的部分（例えば、ＰＥＧ、薬物、毒素、または標識）を付加するように修飾され得る。
【０１０４】
本開示の抗体、バリアントまたはその誘導体には、修飾された誘導体、すなわち、共有結合が抗体のエピトープへの結合を妨げないように、抗体への任意の種類の分子の共有結合によって修飾された誘導体が含まれる。例えば、限定ではないが、抗体は、例えば、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、リン酸化、アミド化、既知の保護／遮断基による誘導体化、タンパク質分解切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質への結合などによって修飾され得る。多数の化学修飾のいずれかが、特異的な化学的切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成などを含むがこれらに限定されない既知の技術によって実施され得る。さらに、抗体は、１つ以上の非古典的アミノ酸を含み得る。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、抗体は、治療薬、プロドラッグ、ペプチド、タンパク質、酵素、ウイルス、脂質、生物学的反応修飾因子（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｍｏｄｉｆｉｅｒｓ）、医薬品、またはＰＥＧにコンジュゲートされ得る。
【０１０６】
抗体は、放射性標識などの検出可能な標識を含み得る治療薬、免疫調節剤、ホルモン、酵素、オリゴヌクレオチド、光活性治療薬または診断薬、薬物または毒素であり得る細胞毒性剤、超音波増強剤、非放射性標識、それらの組み合わせ、および当技術分野で知られている他のそのような薬剤にコンジュゲートまたは融合され得る。
【０１０７】
抗体は、化学発光化合物にカップリングすることで検出可能に標識され得る。次に、化学発光タグ付き抗原結合ポリペプチドの存在は、化学反応の過程で生じる発光の存在を検出することによって決定される。特に有用な化学発光標識化合物の例は、ルミノール、イソルミノール、熱アクリジニウムエステル、イミダゾール、アクリジニウム塩およびシュウ酸塩エステルである。
【０１０８】
抗体はまた、１５２Ｅｕまたはランタニド系列の他のものなどの蛍光発光金属を使用して検出可能に標識され得る。これらの金属は、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）またはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などの金属キレート基を使用して抗体に結合させることができる。さまざまな部分を抗体にコンジュゲートさせるための技術はよく知られている。例えば、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｒｅｉｓｆｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．（編）、２４３〜５６頁（Ａｌａｎ  Ｒ．  Ｌｉｓｓ，  Ｉｎｃ．（１９８５年））中のＡｒｎｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ」；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  （第２版），  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（編），  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．，６２３〜５３頁（１９８７年）中のＨｅｌｌｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ’８４：  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，  Ｐｉｎｃｈｅｒａ  ｅｔ  ａｌ．（編）、４７５〜５０６頁（１９８５年）中のＴｈｏｒｐｅ，「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  Ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：  Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ」；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  Ｂａｌｄｗｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（編），  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  ３０３〜１６頁（１９８５年）中の「Ａｎａｌｙｓｉｓ，  Ｒｅｓｕｌｔｓ，  Ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｕｓｅ  Ｏｆ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ」；およびＴｈｏｒｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｔｈｅ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  Ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｔｏｘｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ」，  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｒｅｖ．  （５２：１１９〜５８頁（１９８２年））を参照。
【０１０９】
・二機能性分子
IＬ−１８は、炎症性のＩＦＮ−γ誘導性サイトカインである。サイトカインのＩＬ−１ファミリーのメンバーとして、ＩＬ−１８は初期の炎症反応に関与すると考えられており、造血細胞および非造血細胞の両方（例えば、マクロファージ、樹状細胞、クッパー細胞、ケラチノサイト、骨芽細胞、星状細胞、副腎皮質細胞、腸上皮細胞、ミクログリア細胞、および滑膜線維芽細胞）によって、構成的にならびにリポ多糖およびＴＮＦ−αなどの他のサイトカインに応答して合成される。抗ＩＬ−１８Ｒアルファもしくはベータ抗体またはフラグメントを、サイトカイン、免疫チェックポイントまたは癌抗原に対して特異性（第２の特異性）を有する別の分子またはフラグメントと組み合わせる二機能性分子は、処置において相乗効果を有すると考えられる。
【０１１０】
いくつかの実施形態では、第２の特異性は、ＩＬ−１、ＣＤ３、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２８およびＣＤ６４から選択される分子に対するものである。他の例には、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ−３（ＣＤ２２３とも呼ばれる）、ＣＤ２８、ＣＤ１２２、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７とも呼ばれる）、ＴＩＭ３、ＯＸ−４０またはＯＸ４０Ｌ、ＣＤ４０またはＣＤ４０Ｌ、ＬＩＧＨＴ、ＩＣＯＳ／ＩＣＯＳＬ、ＧＩＴＲ／ＧＩＴＲＬ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２７、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＨＥＶＭまたはＢＴＬＡ（ＣＤ２７２とも呼ばれる）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、およびＣＤ４７が含まれる。
【０１１１】
免疫チェックポイント阻害剤として、ＩＬ−１８受容体に対して特異的な抗体または抗原結合フラグメントを腫瘍抗原に対して特異的な第２の抗原結合フラグメントと組み合わせて、二重特異性抗体を生成することができる。「腫瘍抗原」は、腫瘍細胞で産生される抗原性物質である。すなわち、「腫瘍抗原」は、ホストにおいて免疫応答を誘発する。腫瘍抗原は腫瘍細胞の同定に有用であり、癌治療における使用のための潜在的な候補である。体内の正常なタンパク質は抗原性ではない。しかしながら、特定のタンパク質は腫瘍形成中に産生または過剰発現されるため、体にとって「外来」に見える。これには、免疫系から十分に隔離されている正常なタンパク質、通常は非常に少量で産生されるタンパク質、通常は特定の発生段階でのみ産生されるタンパク質、または突然変異によってその構造が変化するタンパク質が含まれ得る。
【０１１２】
豊富な腫瘍抗原が当技術分野で知られており、新しい腫瘍抗原はスクリーニングによって容易に同定され得る。腫瘍抗原の非限定的な例には、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４７、ＣＤ５２、ＣＤ１３３、ＣＤ７３、ＣＥＡ、ｇｐＡ３３、ムチン、ＴＡＧ−７２、ＣＩＸ、ＰＳＭＡ、葉酸結合タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＭ２、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、インテグリン、αＶβ３、α５β１、ＥＲＢＢ２、ＥＲＢＢ３、ＭＥＴ、ＩＧＦ１Ｒ、ＥＰＨＡ３、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＩＬＲ２、ＲＡＮＫＬ、ＦＡＰおよびテネイシン（Ｔｅｎａｓｃｉｎ）が含まれる。
【０１１３】
また、異なるフォーマットの二重特異性抗体も提供される。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ−１８受容体フラグメントおよび第２のフラグメントのそれぞれは、Ｆａｂフラグメント、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）または単一ドメイン抗体からそれぞれ独立して選択される。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、Ｆｃフラグメントをさらに含む。
【０１１４】
単に抗体または抗原結合フラグメントだけを含むわけではない二機能性分子も提供される。腫瘍抗原標的化分子として、ＩＬ−１８Ｒアルファまたはベータに対して特異的な抗体または抗原結合フラグメント、例えば本明細書に記載されているものは、任意にペプチドリンカーを介して免疫サイトカインまたはリガンドと組み合わされ得る。連結される免疫サイトカインまたはリガンドには、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−α、ＣＤ４０Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＬＩＧＨＴおよびＧＩＴＲＬが含まれるが、これらに限定されない。このような二機能性分子は、免疫チェックポイント阻害効果と腫瘍部位の局所免疫調節を組み合わせることができる。
【０１１５】
・抗体をコードするポリヌクレオチドおよび抗体の調製方法
本開示は、本開示の抗体、そのバリアントまたは誘導体をコードする単離されたポリヌクレオチドまたは核酸分子（例えば、配列番号４１および４３）も提供する。本開示のポリヌクレオチドは、同じポリヌクレオチド分子上または別個のポリヌクレオチド分子上に、抗原結合ポリペプチド、そのバリアントまたは誘導体の重鎖および軽鎖可変領域全体をコードし得る。さらに、本開示のポリヌクレオチドは、同じポリヌクレオチド分子上または別個のポリヌクレオチド分子上に、抗原結合ポリペプチド、そのバリアントまたは誘導体の重鎖および軽鎖可変領域の一部をコードし得る。
【０１１６】
抗体を作製する方法は当技術分野で周知であり、本明細書に記載されている。特定の実施形態では、本開示の抗原結合ポリペプチドの可変領域および定常領域の両方は、完全にヒトのものである。完全ヒト抗体は、当技術分野に記載されている技術を使用して、本明細書に記載されているように作製することができる。例えば、特定の抗原に対する完全ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答してそのような抗体を産生するように改変されているが、その内因性遺伝子座は無効にされているトランスジェニック動物にその抗原を投与することによって調製することができる。そのような抗体を作製するために使用することができる例示的な技術は、参照によりその全体が援用される米国特許第６，１５０，５８４号、第６，４５８，５９２号、第６，４２０，１４０号に記載されている。
【０１１７】
・自己免疫疾患および炎症性疾患
提供されているように、ＩＬ−１８はアップレギュレートされているか、クローン病、関節リウマチ、全身性エリテマトーデスおよび心血管疾患などのさまざまな自己免疫疾患および炎症性疾患の発症の危険因子であることが示されている。
【０１１８】
さらに、ＩＬ−１８レベルの上昇は、Ｉ型糖尿病（Ｔ１Ｄ）またはＩＩ型糖尿病（Ｔ２Ｄ）のいずれかを発症するリスクのある個人で観察されている。ＩＬ−１８の上昇は、若年および成人のＴ１ＤおよびＴ２Ｄ患者の血清、尿および膵島でも観察されており、疾患の重症度、および糖尿病性腎症などの後遺症の発症と相関している。さらに、アルツハイマー病の患者に関する研究では、ＩＬ−１８の発現が脳において増加し、酸化ストレスを高め、Ａβ形成に寄与するタンパク質の発現を変化させる免疫および炎症プロセスに寄与すると考えられることが明らかになった。
【０１１９】
したがって、一実施形態では、自己免疫疾患および炎症性疾患を処置するために抗体およびそのフラグメントを使用する方法が提供される。非限定的な例には、パーキンソン病、関節炎、関節リウマチ、多発性硬化症、乾癬、乾癬性関節炎、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、ループス、全身性エリテマトーデス、若年性関節リウマチ、若年性特発性関節炎、グレーブス病、橋本甲状腺炎、アジソン病、セリアック病、皮膚筋炎、多発性硬化症、重症筋無力症、悪性貧血、シェーグレン症候群、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、血管炎、ブドウ膜炎、敗血症、アテローム性動脈硬化症および強直性脊椎炎が含まれる。
【０１２０】
・癌の処置
上述のように、高いＩＬ−１８レベルが、腫瘍部位または全身のいずれかで、多くの癌において観察されている。そのような癌には、乳癌、食道癌、胃腸癌、肺癌、肝臓癌、および卵巣癌が含まれる。本明細書に記載されている抗体の投与は、癌を処置または阻害するのに有用であり得ると考えられており、癌の前臨床モデルでの研究は、ＩＬ−１８の抗腫瘍活性がＴ細胞およびＮＫ細胞などのエフェクター細胞を増強するその能力から生じることを示唆している。
【０１２１】
したがって、いくつかの実施形態では、それを必要とする患者における癌を処置するための方法が提供される。この方法は、一実施形態では、有効量の本開示の抗体を患者に投与することを伴う。いくつかの実施形態では、患者における癌細胞の少なくとも１つ（例えば、間質細胞）は、ＩＬ−１８またはその受容体の１つを発現するか、過剰発現するか、または発現するように誘導される。
【０１２２】
適切に処置され得る癌には、膀胱癌、非小細胞肺癌、腎癌、乳癌、尿道癌、結腸直腸癌、頭頸部癌、扁平上皮癌、メルケル細胞癌、胃腸癌、胃癌、食道癌、卵巣癌、腎癌、および小細胞肺癌が含まれる。したがって、本明細書に開示されている抗体は、任意の１つ以上のそのような癌を処置するために使用され得る。いくつかの実施形態では、癌は、乳癌、食道癌、胃腸癌、肺癌、肝臓癌および卵巣癌から選択される。
【０１２３】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法などの細胞療法も、本開示において提供される。本開示の抗ＩＬ−１８Ｒアルファまたはベータ抗体と接触させられる適切な細胞を使用することができる。そのような接触または操作により、細胞は、処置を必要とする癌患者に導入され得る。癌患者は、本明細書に開示されるような種類のいずれかの癌を有し得る。細胞（例えば、Ｔ細胞）は、限定されることなく、例えば、腫瘍浸潤性Ｔリンパ球、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、またはそれらの組み合わせであり得る。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、細胞は、癌患者自身から単離された。いくつかの実施形態では、細胞は、ドナーによって、または細胞バンクから提供された。細胞が癌患者から単離されるとき、望ましくない免疫反応を最小限に抑えることができる。
【０１２５】
本開示の抗体またはバリアントまたはその誘導体で処置、予防、診断および／または予後予測され得る、細胞生存の増加に関連する追加の疾患または症状には、限定されないが、白血病（急性白血病（例えば、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病（骨髄芽球性白血病、前骨髄性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病、および赤白血病を含む））および慢性白血病（例えば、慢性骨髄性（顆粒球性）白血病および慢性リンパ性白血病）を含む）、真性多血症、リンパ腫（例えば、ホジキン病および非ホジキン病）、多発性骨髄腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、重鎖疾患、および固形腫瘍（線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜肉腫、中皮腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓癌、乳癌、甲状腺癌、子宮内膜癌、黒色腫、前立腺癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄質癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝癌、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胚性癌、ウィルムス腫瘍、頸部癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫および網膜芽細胞腫などの肉腫および癌腫を含むがそれらに限定されない）などの悪性腫瘍および関連する障害の進行および／または転移が含まれる。
【０１２６】
・併用療法
さらなる実施形態では、本開示の組成物は、抗腫瘍剤、抗ウイルス剤、抗菌剤、抗生物質または抗真菌剤と組み合わせて投与される。当技術分野で知られているこれらの薬剤のいずれかが、本開示の組成物において投与され得る。このような組み合わせは、さまざまな癌を処置するのに有用であり得る。
【０１２７】
別の実施形態では、本開示の組成物は、化学療法剤と組み合わせて投与される。本開示の組成物と共に投与され得る化学療法剤には、以下が含まれるが、これらに限定されない：抗生物質誘導体（例えば、ドキソルビシン、ブレオマイシン、ダウノルビシン、およびダクチノマイシン）；抗エストロゲン（例えば、タモキシフェン）；代謝拮抗物質（例えば、フルオロウラシル、５−ＦＵ、メトトレキサート、フロクスウリジン、インターフェロンアルファ−２ｂ、グルタミン酸、プリカマイシン、メルカプトプリン、および６−チオグアニン）；細胞毒性薬（例えば、カルムスチン、ＢＣＮＵ、ロムスチン、ＣＣＮＵ、シトシンアラビノシド、シクロホスファミド、エストラムスチン、ヒドロキシ尿素、プロカルバジン、マイトマイシン、ブスルファン、シスプラチン、および硫酸ビンクリスチン）；ホルモン（例えば、メドロキシプロゲステロン、エストラムスチンリン酸ナトリウム、エチニルエストラジオール、エストラジオール、酢酸メゲストロール、メチルテストステロン、ジエチルスチルベストロール二リン酸、クロロトリアニセン、およびテストラクトン）；ナイトロジェンマスタード誘導体（例えば、メファレン（ｍｅｐｈａｌｅｎ）、コランブシル（ｃｈｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）およびチオテパ）；ステロイドおよび組み合わせ（例えば、ベタメタゾンリン酸ナトリウム）；およびその他（例えば、ダカルバジン（ｄｉｃａｒｂａｚｉｎｅ）、アスパラギナーゼ、ミトタン、硫酸ビンクリスチン、硫酸ビンブラスチン、およびエトポシド）。
【０１２８】
追加の実施形態では、本開示の組成物は、サイトカインと組み合わせて投与される。本開示の組成物と共に投与され得るサイトカインには、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、抗ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、およびＴＮＦ−αが含まれるが、これらに限定されない。
【０１２９】
追加の実施形態では、本開示の組成物は、他の治療または予防レジメン、例えば放射線療法と組み合わせて投与される。
【０１３０】
・診断方法
ＩＬ−１８またはその受容体の過剰発現は、特定の腫瘍サンプルで観察され、そのような患者は、本開示の抗ＩＬ−１８受容体抗体による処置に応答する可能性が高い。したがって、本開示の抗体は、診断および予後予測の目的のためにも使用することができる。
【０１３１】
好ましくは細胞を含むサンプルは、癌患者または診断を望む患者であり得る患者から得ることができる。細胞は、腫瘍組織もしくは腫瘍ブロック、血液サンプル、尿サンプルまたは患者由来の任意のサンプルの細胞であり得る。サンプルの任意の前処理の際に、サンプルは、抗体がそのサンプル中に潜在的に存在するＩＬ−１８受容体タンパク質と相互作用することを可能にする条件下で、本開示の抗体と共にインキュベートされ得る。抗ＩＬ−１８受容体抗体を利用して、ＥＬＩＳＡなどの方法を使用して、サンプル中のＩＬ−１８受容体タンパク質の存在を検出することができる。
【０１３２】
サンプル中のＩＬ−１８受容体タンパク質の存在（任意に量または濃度とともに）は、癌の診断のために、患者が抗体による処置に適していることの指標として、または患者が癌の処置に反応した（もしくは反応しなかった）ことの指標として使用され得る。予後予測法の場合、検出を、一度、二度またはそれ以上、特定の段階で、癌処置の開始時に、処置の進行を示すために行うことができる。
【０１３３】
・組成物
本開示は医薬組成物も提供する。そのような組成物は、有効量の抗体、および許容される担体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、第２の抗癌剤（例えば、免疫チェックポイント阻害剤）をさらに含む。
【０１３４】
特定の実施形態では、「薬学的に許容される」という用語は、連邦もしくは州政府の規制機関によって承認されたこと、または動物、より具体的にはヒトで使用するために米国薬局方もしくは他の一般に認められた薬局方に記載されていることを意味する。さらに、「薬学的に許容される担体」は、一般に、任意の種類の非毒性の固体、半固体もしくは液体の充填剤、希釈剤、カプセル化材料または製剤補助剤である。
【０１３５】
「担体」という用語は、治療薬と共に投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤またはビヒクルを指す。そのような医薬担体は、石油、動物、植物または合成起源のもの（例えば、落花生油、大豆油、鉱油、ごま油など）を含む、水および油などの無菌液体であり得る。医薬組成物が静脈内投与される場合、水が好ましい担体である。生理食塩水ならびにデキストロースおよびグリセロール水溶液も、特に注射可能な溶液の場合、液体担体として使用され得る。適切な医薬賦形剤には、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが含まれる。組成物は、必要に応じて、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、または酢酸塩、クエン酸塩もしくはリン酸塩などのｐＨ緩衝剤を含むこともできる。ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸などのキレート剤；および、塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの張性を調整するための薬剤も想定されている。これらの組成物は、溶液、懸濁液、乳濁液、錠剤、丸薬、カプセル、粉末、徐放性製剤などの形態をとることができる。組成物は、トリグリセリドなどの従来の結合剤および担体を用いて、坐剤として処方することができる。経口製剤は、医薬グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの標準的な担体を含むことができる。適切な医薬担体の例は、参照により本明細書に援用される、Ｅ．Ｗ．ＭａｒｔｉｎによるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓに記載されている。そのような組成物は、患者への適切な投与のための形態を提供するために、適切な量の担体と共に、治療有効量の抗原結合ポリペプチドを、好ましくは精製された形態で含む。製剤は投与方法に適合している必要がある。親製剤は、ガラスもしくはプラスチック製のアンプル、使い捨て注射器または複数回投与バイアルに入れることができる。
【０１３６】
一実施形態では、組成物は、ヒトへの静脈内投与に適合した医薬組成物として通常の手順に従って処方される。典型的には、静脈内投与のための組成物は、無菌の等張水性緩衝液中の溶液である。必要に応じて、組成物は、注射部位の痛みを和らげるために、可溶化剤およびリグノカインなどの局所麻酔薬も含み得る。一般に、成分は、別々に供給されるか、または単位剤形で一緒に混合されて、例えば、活性剤の量を示すアンプルまたはサシェットなどの密閉容器内の乾燥凍結乾燥粉末または水を含まない濃縮物として供給される。組成物が注入によって投与される場合、組成物は、無菌の医薬品グレードの水または生理食塩水を含む注入ボトルを用いて投与され得る。組成物が注射によって投与される場合、注射用の滅菌水または生理食塩水のアンプルを提供して、投与前に成分を混合することができる。
【０１３７】
本開示の化合物は、中性または塩の形態として処方され得る。薬学的に許容される塩には、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来する陰イオンなどの陰イオンで形成されるもの、および水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来する陽イオンなどの陽イオンで形成されるものが含まれる。
【実施例】
【０１３８】
・例１．ＩＬ−１８Ｒアルファおよびベータ抗体のセレクション、特性評価および最適化
ヒトＩＬ−１８ＲαまたはＲβ受容体（Ｒ＆Ｄ）の精製されたＦｃタグ付きバージョンに対してｉｎ  ｖｉｔｒｏでパニング（ｐａｎｎｉｎｇ）することにより、この例では、各受容体に対する高親和性抗体バインダーを単離した。具体的には、各々に対する受容体結合Ｆａｂ−ファージクローンを配列決定し、ＩｇＧに変換し、見かけの親和性、細胞結合、および機能的なＩＬ−１８シグナル伝達を阻害する能力について評価した。
【０１３９】
ヒトＩＬ−１８ＲαＥＣＤＦｃ融合（８１６−ＬＲ−１００；Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ）に対するセレクションは、１２のユニークな受容体結合Ｆａｂ配列（表１）を生成したが、ＩＬ−１８Ｒβ  ＥＣＤ  Ｆｃ融合（１１８−ＡＰ−１００、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）に対するセレクションは、２１のユニークな配列を生成した（表２）。Ｆａｂタンパク質の発現および精製のために、ＦａｂファージクローンのＣＤＲコード領域を発現コンストラクトにサブクローニングした。
【表９】
2021527683.tif 000013
【表１０】
2021527683.tif 000014
【０１４０】
代表的なＦａｂフラグメントのアミノ酸配列およびヌクレオチド配列を、以下の表３および４に示す。
【表１１】
2021527683.tif 000015
【表１２−１】
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【表１２−２】
2021527683.tif 000017
【表１２−３】
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【表１２−４】
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【表１２−５】
2021527683.tif 000020
【表１２−６】
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【表１２−７】
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【０１４１】
・例２．ＩＬ−１８Ｒ結合抗体の機能的特徴
ＩＬ−１８依存性ＮＦ−κＢ細胞ルシフェラーゼレポーターアッセイにおける発現および精製されたＦａｂタンパク質の評価は、２つの抗ＩＬ−１８ＲαＦａｂ（Ｆａｂ９および１２）による＞６０％のＩＬ−１８誘導性ルシフェラーゼシグナルの阻害（図１Ａ）と、７つの抗ＩＬ−１８ＲβＦａｂによる＞８０％のＩＬ−１８誘導性ルシフェラーゼシグナルの阻害（図１Ｂ）を示した。配列の同一性と類似のエピトープの可能性が高いことを考慮して、５つのＦａｂ（１つの抗ＩＬ−１８Ｒαと４つの抗ＩＬ−１８Ｒβ）のＦａｂ  ＣＤＲ領域をＩｇＧ発現コンストラクトにサブクローニングし、２９３Ｆ細胞でトランスフェクトおよび発現させた後、セファロースＡカラムで培地から均一に精製した。次に、各ＩｇＧの受容体へのｉｎ  ｖｉｔｒｏ結合をさまざまな濃度にわたって評価したところ、すべての場合で、ＩＬ−１８Ｒβへの２桁の低いナノモル結合のＥＣ５０値と、試験したすべての濃度でどちらのネガティブコントロールタンパク質（ＦＲｃＲ、ＢＳＡ）にも実質的に結合しないことが明らかになった（図２、パネルＡ）。マルチポイント競合ＥＬＩＳＡによる結合親和性のさらなる推定は、１００ｎＭおよびサブ１００ｎＭの範囲の親和性を明らかにした（図２、パネルＢ）。同じＦａｂのＳＰＲ分析により、これらの推定値が確認され、速度論定数と平衡結合親和性の決定が可能になった（表５）。
【表１３】
2021527683.tif 000023
【０１４２】
ＩｇＧが固有のエピトープまたは重複するエピトープに結合するかどうかを決定するために、ＩｇＧを固定化受容体とプレインキュベートしてエピトープをブロックすることにより結合実験を行い、ＩｇＧでブロックされた受容体との共インキュベーションによるＦａｂ結合を試験した。結果は、ＦａｂクローンＦＡ３が対応するＩｇＧによってのみブロックされる（固有のエピトープを示唆する）のに対し、残りの３つのＦａｂ（Ｆ３１３１、Ｆ３１３２、Ｆ３１４４）はＩＡ３クローン（Ｆａｂ  ＦＡ３に対応する）を除くＩｇＧ分子（Ｉ３１３１、Ｉ３１３２、Ｉ３１４４）のいずれにもよってブロックされ得ることを示し（図２、パネルＤ）、共有または重複するエピトープを示唆していた。
【０１４３】
・例３．蛍光顕微鏡およびフローサイトメトリーによるＩＬ−１８Ｒ結合抗体の細胞結合
その標的細胞受容体へのＩｇＧの結合を評価するために、ＨＥＫ２９３細胞に、全長ＩＬ−１８ＲαまたはＩＬ−１８Ｒβのいずれかをコードするコンストラクトを一過性にトランスフェクトし、ＩｇＧ標識の前に２４時間培養した。トランスフェクトされていない細胞と受容体−ＧＦＰ融合体で一過性にトランスフェクトされた細胞の両方を飽和濃度のＩＬ−１８Ｒ結合ＩｇＧ（またはアイソタイプコントロール）とともにインキュベートした後、洗浄およびＣｙ３標識二次抗体による蛍光染色を行った。二次抗体を除去して固定した後、細胞を蛍光顕微鏡で画像化した（図３、パネルＡおよびＢ）。抗ＩＬ−１８Ｒ抗体の各ＩｇＧで染色して得られた画像では、コントロールのＩｇＧ染色細胞では見られなかったＧＦＰ発現（受容体発現の確認として取得）と抗体染色の同時発生が明らかになった。フローサイトメトリーによるＧＦＰ発現細胞の同様の分析により、各ＩｇＧおよび市販のポジティブブコントロールで陽性に染色されたＩＬ−１８Ｒ発現（ＧＦＰ発現に基づく）細胞の異なる集団が明らかになった。
【０１４４】
個々の受容体の発現のために同じ方法でトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞を使用して、フローサイトメトリーによって結合をさらに試験した。ＩＬ−１８Ｒ−ＧＦＰ融合体を発現する細胞を飽和ＩｇＧ濃度で染色し（赤いヒストグラム）、非受容体結合アイソタイプコントロールＩｇＧ（濃い灰色のヒストグラム）または抗ヒトＡｌｅｘａ４８８標識二次抗体のみ（青いヒストグラム）で染色した受容体発現細胞と比較した（図３、パネルＣおよびＤ）。これらの結果により、二次抗体のみまたはアイソタイプコントロールのいずれでも明らかではなかった受容体発現細胞の有意なシフトが確認された。ＩＬ−１８ＲαおよびＩＬ−１８Ｒβを標的とするコントロールＩｇＧも、それらの同系受容体を発現する細胞へのそれぞれの結合を示したが、それらは二次抗体のみのコントロールで結合がないにもかかわらず（緑色のヒストグラム）、非発現ＨＥＫ２９３細胞への結合も示した（ピンクのヒストグラム）。これらの細胞はＩＬ−１８受容体のいずれも発現しないと予想されるため、これは単に、ＩＬ−１８Ｒβに対する抗体の１つ（ＩｇＧ３１３２）とＩＬ−１８Ｒαに対する単一の抗体（ＩｇＧＡ３）で明らかな非発現細胞への粘着性を表している可能性がある。
【０１４５】
内因的に発現したＩＬ−１８Ｒβへの細胞結合を試験するために、両方のＩＬ−１８Ｒを発現することが知られているマクロファージ由来ＫＧ−１骨髄芽球細胞を、非結合アイソタイプコントロール抗体と比較して、さまざまな濃度にわたって各ＩｇＧで同様に免疫染色した（これは添加される必要がある）。抗体濃度の範囲に対する染色の蛍光強度の中央値のプロットは、さまざまな結合曲線のフィッティングと細胞結合についてのＥＣ５０の推定を可能にする明確で飽和可能な結合を明らかにした（図４）。
【０１４６】
・例４．ホスホウエスタン分析およびＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＡによるＩＬ−１８Ｒ  ＩｇＧ結合の機能的結果
ＩｇＧによる抗ＩＬ１８Ｒβ結合の機能的結果を評価するために、各タンパク質内の特定の残基のリン酸化を定量化するウエスタンブロットにおけるリン酸化特異的抗体を使用して、ＩＫＫα／ＩＫＫβ、ｐ３８ＭＡＰＫおよびＳＡＰＫ／ＪＮＫを含むＩＬ−１８Ｒ活性化のいくつかの下流エフェクターについて、ＩＬ−１８誘導性リン酸化シグナル伝達をＫＧ−１細胞において最初に評価した。また、それぞれの非リン酸化親タンパク質に特異的な抗体も使用して、同じ溶解物から調製したブロットをロードコントロールとして比較のためにプローブした（図４、パネルＡ）。最初に、刺激の前に、ＫＧ−１細胞を飽和濃度のＩＬ−１８Ｒ結合抗体とともに１時間インキュベートした。次に、細胞を抗体の存在下でＩＬ−１８（１０ｎｇ／ｍＬ、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）で２４時間刺激した後、ウエスタンブロット分析のために細胞溶解物を収集し、抗体の非存在下の細胞、および抗体とともにインキュベートしたがＩＬ−１８で刺激しなかった細胞と比較した。刺激後、細胞溶解物を氷上で収集し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離してから固体ＰＶＤＦ支持体に移した。移されたタンパク質は、ウサギ抗ヒトｐ−ＩＫＫα／β（Ｓｅｒ１７６／１８０）（＃２０７８；Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）に対する抗体、ｐ−ｐ３８  ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ１８０／Ｔｙｒ１８２）（＃４６３１；Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）に対する抗体、またはリン酸化ｐ４４／４２  ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）（＃４３７０；Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）モノクローナル抗体で個別にプローブされ、抗ウサギ−ＨＲＰ融合二次抗体（＃７０７４；Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）および強化された化学発光試薬（ＥＣＬ；＃３４０９５，Ｔｈｅｒｍｏ）で展開された。
【０１４７】
両方からの強度結果をデンシトメトリーによって定量化して、リン酸化タンパク質と非リン酸化タンパク質の比率を計算し、抗体なし・ＩＬ−１８なしのコントロールに対して正規化し、比率をＩＬ−１８刺激有または無しの抗体処理に対してプロットした。結果は、ＩＬ−１８誘導性のＩＫＫα／β、ｐ３８ＭＡＰＫおよびＳＡＰＫ／ＪＮＫのリン酸化を示しおり、当該リン酸化は、４つの抗ＩＬ−１８Ｒβ抗体のいずれかとのプレインキュベーションによって阻害され得、その結果、リン酸化シグナルはＩＬ−１８なしのコントロールと実質的に区別できなくなり、強力な阻害を示唆している（図４、パネルＢ−Ｄ）。
【０１４８】
これらの結果を裏付けるために、ＩＦＮ−γの分泌を表現型の読み出しとしてさらに使用して、活性を評価し、ＥＬＩＳＡによって細胞上清から定量化した。ＫＧ−１細胞または単離されたＰＢＭＣを、さまざまな濃度の抗ＩＬ−１８ＲβＩｇＧとともにインキュベートし、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ−１８で２４時間刺激した。試験した各抗体について明らかになった分泌ＩＦＮ−γの定量化により、ＫＧ−１細胞と単離されたＰＢＭＣの両方で分泌ＩＦＮ−γが用量依存的に同様に減少し、ＫＧ−１細胞において、ＩｇＧ３１３１、３１３２および３１４４の場合は約０．５〜２μＭの範囲で最大値の約５０％に減少し、ＩｇＧＡ３の場合は約４〜６μＭの範囲で最大値の約５０％に減少する（その親和性が低いことに対応して活性が低い）ことが明らかになった（図４、パネルＥ）。同様の結果がＰＢＭＣで得られ、ＩｇＧ３１３１、３１３２および３１４４は約０．５〜２μＭで最大シグナルの約５０％を阻害し、同様の阻害に必要なＩｇＧＡ３のレベルは大幅に高くなった（図４、パネルＦ）。さらに、抗ＩＬ−１８Ｒα結合ＩｇＧ１２は、ＩＬ−１８Ｒβ結合抗体と同様の効力を有し、ＰＢＭＣにおいて約１μＭのＩｇＧで分泌ＩＦＮ−γの約５０％を阻害することが示された。
【０１４９】
・例５．抗ＩＬ−１８Ｒα／ＩＬ−１８Ｒβ複合体の構造特性
抗ＩＬ−１８Ｒβ結合Ｆａｂ３１３１がＩＬ−１８Ｒの非リガンド結合受容体成分をどのように阻害したかについてのさらなる洞察を収集するために、結晶学的研究を行って、Ｆａｂ３１３１のｓｃＦｖフォーマットと受容体ＩＬ−１８Ｒβの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）の間の相互作用を構造的に特性評価した。ＩＬ−１８Ｒβは、Ｈｉｇｈ  Ｆｉｖｅ昆虫細胞において、バキュロウイルス発現ベクターｐＦａｓｔＢａｃＤｕａｌからＮ末端Ｈｉｓ×６タグ融合体として発現させた。３１３１のｓｃＦｖフォーマットは、ＶＨおよびＶＬを１７アミノ酸のリンカーと融合させることによって、Ｆａｂ３１３１から構築された。ｓｃＦｖ３１３１は、大腸菌においてＮ末端Ｈｉｓ×６タグ融合タンパク質として発現され、ＴＡＬＯＮ（登録商標）Ｍｅｔａｌ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｒｅｓｉｎを使用して均一に精製された。ＩＬ−１８Ｒβ受容体のＥＣＤは、ＴＡＬＯＮ（登録商標）Ｍｅｔａｌ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｒｅｓｉｎを使用して均一に精製され、精製されたｓｃＦｖ３１３１と１：２のモル比で混合された；次に、混合物を、複合体の精製のためにサイズ排除クロマトグラフィーカラムにロードした（図５）。一連の結晶化セット（ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ  ｓｕｉｔｅｓ）で結晶をスクリーニングする前に、複合体を１０ｍｇ／ｍＬに濃縮した。最終的に、結晶が０．２Ｍヨウ化アンモニウムおよび２０％（ｗ／ｖ）ＰＥＧ３３５０から構成されるバッファーから生成され、単離された結晶はＸ線回折の前に液体Ｎ２中の凍結溶液に保存された。
【０１５０】
Ｘ線回折データは、３．３Åの解像度で上海シンクロトロン放射施設（ＳＳＲＦ）において収集された。結晶はＰ３１に属し、ユニットセルはａ＝１６３．１６０、ｂ＝１６３．１６０、ｃ＝６４．１４５、α＝９０°、β＝９０°、γ＝１２０°であった。
【０１５１】
精密化されたモデルは、抗体がリガンド結合部位の反対側の面に結合し、リガンド結合部位の形状が破壊された非機能的コンフォメーションに受容体をロックする非競合的拮抗作用の新規モードを明らかにした（図６）。これらの結果は、受容体の非リガンド結合成分を介したシグナル伝達の拮抗作用のモードに関するメカニズム的な洞察を与え、当該洞察は、拮抗作用がＩＬ−１８Ｒα−リガンド複合体との相互作用を妨げるコンフォメーションに受容体をロックすることから生じることを示唆している。
【０１５２】
・例６．サルＩＬ−１８ＲβへのＩｇＧ３１３１結合の特性評価
この例では、サルＩＬ−１８Ｒβへの抗体３１３１の結合を試験した。
【０１５３】
アカゲザルＩＬ−１８ＲβへのＩｇＧ３１３１結合のＥＣ５０値を、マルチポイント直接結合ＥＬＩＳＡによって決定した。ＩｇＧ３１３１結合の速度論を、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によってアカゲザルＩＬ−１８受容体ベータに対して決定し、ＥＣ５０の推定値を確認した。アカゲザルＩＬ−１８（５０ｎｇ／ｍｌ）とアカゲザルＩＬ−１２（５ｎｇ／ｍｌ）が誘導するＩＦＮ−γ分泌の刺激に対するＩｇＧ３１３１プレインキュベーションの細胞効果を、単離された新鮮なカニクイザルＰＢＭＣのＩｇＧ濃度の範囲にわたって評価した。平均および標準偏差（ＳＤ）を、３匹の異なるサルから計算した。ＩＣ５０値を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（Ｖｅｒｓｉｏｎ５．０）のカーブフィッティングによって用量反応曲線から推定した。要約結果を以下に示し、用量依存性を図７にプロットする。
【表１４】
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【０１５４】
・個々のサルからのＩｇＧ３１３１血清濃度。
３０ｍｇ／ｋｇ（群１、またはＧ１）または１０ｍｇ／ｋｇ（群２、またはＧ２）の用量でＩｇＧ３１３１を静脈内投与した後、２ｍｌの全血を、投与前、０．５時間、１時間、３時間、６時間、２４時間、４８時間、３日、４日、１４４時間（６日）、１９２時間（８日）、２４０時間（１０日）および３３６時間（１４日）で収集した。血清単離後、サンプルＩｇＧの分析をＥＬＩＳＡによって行った。結果を表６および図８に示す。
【表１５】
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【０１５５】
表７は、オスのサルにおけるＩｇＧ３１３１の選択された薬物動態パラメーターを示す。
【表１６】
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【０１５６】
・例７．ＩｇＧ３１３１のさらなる親和性成熟
この例は、抗体３１３１の親和性成熟に由来する抗体Ｆａｂ配列を示している。親和性成熟ライブラリーは、各ラウンドで抗原の濃度を減少させながら、親和性に基づく液相ファージディスプレイセレクションのラウンドに供された。親和性が改善された抗体を表８に示す。
【表１７−１】
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【表１７−２】
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【表１７−３】
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【表１７−４】
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【表１７−５】
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【表１７−６】
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【表１７−７】
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【表１７−８】
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【表１７−９】
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【０１５７】
ＣＤＲは、以下の表９に要約されている。
【表１８−１】
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【表１８−２】
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【表１８−３】
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【表１８−４】
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【０１５８】
・例８．アフィニティー成熟抗体の結合競合アッセイ
この例では、親３１３１抗体と比較して、例７の親和性成熟抗体バリンアント（ＡＭ２）のエピトープを評価した。
【０１５９】
結果を図９に示す。図９では、組換えヒトＩＬ−１８Ｒｂに対する精製ＡＭ２Ｆａｂクローン（白棒）の結合シグナルをＥＬＩＳＡで評価し、飽和ＩｇＧ３１３１の存在下で得られたシグナル（黒棒）と比較した。Ｆａｂ３１３１を、ＩｇＧ３１３１による自己ブロッキングを観察するためのポジティブコントロールとして使用した（上のプロット、左端）。エラーバーは、反復測定の標準偏差を表す。結果は、これらの親和性成熟抗体バリアントが親３１３１抗体と同じエピトープに結合することを示している。
【０１６０】
本開示は、開示の個々の態様の単一の例示として意図される記載された特定の実施形態によって範囲が限定されるべきではなく、機能的に同等である任意の組成物または方法は、本開示の範囲内である。本開示の精神または範囲から逸脱することなく、本開示の方法および組成物においてさまざまな修正および変形を行うことができることは、当業者には明らかであろう。したがって、本開示は、添付の特許請求の範囲およびそれらの均等物の範囲内に入るという条件で、本開示の修正および変形をカバーすることが意図されている。
【０１６１】
本明細書に記載されているすべての刊行物および特許出願は、個々の刊行物または特許出願が参照により援用されることが具体的かつ個別に示されている場合と同程度に、参照により本明細書に援用される。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和3年3月11日(2021.3.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１６１のアミノ酸配列を有するヒトインターロイキン−１８受容体ベータ（ＩＬ−１８Ｒβ）タンパク質に対して結合特異性を有する抗体またはそのフラグメントであって、
前記結合は少なくとも以下を含む、抗体またはそのフラグメント：
配列番号１６１のＬ１６７、Ｄ２１３およびＴ２４２からなる群から選択されるアミノ酸残基、
配列番号１６１のＶ２４４、Ｇ２４５およびＤ２４６からなる群から選択されるアミノ酸残基、ならびに
配列番号１６１のＧ２７８、Ｆ２７９、Ｒ２８１、Ｖ２８２、Ｆ２８３、Ｎ２８４、Ｐ２８５、Ｓ３１０、Ｅ３１５およびＩ３１７からなる群から選択されるアミノ酸残基。
【請求項２】
前記結合は少なくとも以下を含む、請求項１に記載の抗体またはそのフラグメント：
配列番号１６１のＤ２１３およびＴ２４２からなる群から選択されるアミノ酸残基、
配列番号１６１のＶ２４４、Ｇ２４５およびＤ２４６からなる群から選択されるアミノ酸残基、ならびに
配列番号１６１のＧ２７８、Ｒ２８１、Ｖ２８２、Ｆ２８３、Ｎ２８４、Ｐ２８５、Ｓ３１０、Ｅ３１５およびＩ３１７からなる群から選択されるアミノ酸残基。
【請求項３】
前記結合は、少なくとも配列番号１６１のアミノ酸残基Ｄ２１３、Ｔ２４２、Ｖ２４４、Ｇ２７８、Ｒ２８１、Ｖ２８２、Ｆ２８３、Ｎ２８４、Ｐ２８５、Ｓ３１０、Ｅ３１５およびＩ３１７を含み、
好ましくは、前記結合は、少なくとも配列番号１６１のアミノ酸残基Ｌ１６７、Ｄ２１３、Ｔ２４２、Ｖ２４４、Ｇ２７８、Ｆ２７９、Ｒ２８１、Ｖ２８２、Ｆ２８３、Ｎ２８４、Ｐ２８５、Ｓ３１０、Ｅ３１５およびＩ３１７を含む、請求項１に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項４】
さらにマウスＩＬ−１８Ｒβタンパク質に結合することができる、前請求項のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項５】
軽鎖相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３を含有する軽鎖可変領域（ＶＬ）と、重鎖相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３を含有する重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、かつ
前記ＣＤＲＬ１は、配列番号４５のアミノ酸配列を含み；
前記ＣＤＲＬ２は、配列番号４６または配列番号４６から１つまたは２つのアミノ酸置換を有するそのバリアントのアミノ酸配列を含み；
前記ＣＤＲＬ３は、配列番号４７または配列番号４７から１つまたは２つのアミノ酸置換を有するそのバリアントのアミノ酸配列を含み；
前記ＣＤＲＨ１は、配列番号７４または配列番号７４から１つまたは２つのアミノ酸置換を有するそのバリアントのアミノ酸配列を含み；
前記ＣＤＲＨ２は、配列番号９５または配列番号９５から１つまたは２つのアミノ酸置換を有するそのバリアントのアミノ酸配列を含み；および
前記ＣＤＲＨ３は、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項６】
前記ＣＤＲＬ１は、配列番号４５のアミノ酸配列を含み；
前記ＣＤＲＬ２は、配列番号４６および３２２〜３３１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
前記ＣＤＲＬ３は、配列番号４７および３３２〜３３６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
前記ＣＤＲＨ１は、配列番号７４および３３７〜３３９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
前記ＣＤＲＨ２は、配列番号９５および３４０〜３５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；および
前記ＣＤＲＨ３は、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項７】
前記ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、配列番号４５、４６、３３３、７４、３４６および１１７のアミノ酸配列を含む、請求項６に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項８】
前記ＶＬは配列番号１７４のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＶＨは配列番号１７７のアミノ酸配列を含む、請求項７に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項９】
前記ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、配列番号４５、４６、３３３、７４、３５２および１１７のアミノ酸配列を含む、請求項６に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項１０】
前記ＶＬは配列番号１７４のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＶＨは配列番号２１９のアミノ酸配列を含む、請求項９に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項１１】
前記ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３は、それぞれ、配列番号４５、４６、３３６、７４、３４６および１１７のアミノ酸配列を含む、請求項６に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項１２】
前記ＶＬは配列番号２１６のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＶＨは配列番号１７７のアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項１３】
ヒトインターロイキン−１８受容体アルファ（ＩＬ−１８Ｒα）タンパク質に対して結合特異性を有する抗体またはそのフラグメントであって、
前記抗体またはそのフラグメントは、軽鎖相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３を含有する軽鎖可変領域と、重鎖相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３を含有する重鎖可変領域を含み、
前記ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３は、表Ｃの組み合わせ１〜１２、または前記ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３のそれぞれが１つ、２つ、または３つのアミノ酸付加、アミノ酸欠失、保存的アミノ酸置換またはそれらの組み合わせを含む前記組み合わせ１〜１２のそれぞれから選択される、抗体またはそのフラグメント。
【請求項１４】
自己免疫疾患または炎症性疾患の処置に使用するための請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメントであって、
前記自己免疫疾患または炎症性疾患は、パーキンソン病、関節炎、関節リウマチ、多発性硬化症、乾癬、乾癬性関節炎、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、ループス、全身性エリテマトーデス、若年性関節リウマチ、若年性特発性関節炎、グレーブス病、橋本甲状腺炎、アジソン病、セリアック病、皮膚筋炎、多発性硬化症、重症筋無力症、悪性貧血、シェーグレン症候群、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、血管炎、ブドウ膜炎、敗血症、アテローム性動脈硬化症および強直性脊椎炎からなる群から任意に選択される、抗体またはそのフラグメント。
【請求項１５】
癌の処置に使用するための請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体またはそのフラグメントであって、
前記癌は、膀胱癌、肝臓癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、白血病、リンパ腫、膵臓癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、乳癌、尿道癌、頭頸部癌、胃腸癌、胃癌、食道癌、卵巣癌、腎癌、黒色腫、前立腺癌および甲状腺癌からなる群から任意に選択される、抗体またはそのフラグメント。
【国際調査報告】
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