(57)【要約】  本発明は、式（Ｉ）2021535219.tif 000033（式中、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、本明細書に記載されるとおりである）の化合物、又はその薬学的に許容される塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマー、並びに該化合物を含む組成物及び該化合物を使用する方法に関する。
2021535219.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
2021535219.tif 000028
の化合物であって、式中、
Ｒ１は、
【化２】
2021535219.tif 000029
（式中、Ｒ４がシアノ、Ｃ１−６アルキル、ハロゲン、ハロＣ１−６アルキル、又はニトロである）であり、
Ｒ２は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、又はハロＣ１−６アルキルであり、
Ｒ３は、−Ｃ１−６アルキル−Ｒ５、又は−ＣＯＮＲ６Ｒ７
（式中、
Ｒ５は、ヘテロシクリルであり、
Ｒ６は、Ｈであり、
Ｒ７は、ヘテロシクリル又はヘテロシクリルＣ１−６アルキルアミノである）である、
化合物、又はその薬学的に許容される塩、エナンチオマー、若しくはジアステレオマーー。
【請求項２】
Ｒ１が、
【化３】
2021535219.tif 000030
（式中、Ｒ４は、シアノである）であり、
Ｒ２が、Ｃ１−６アルキルであり、
Ｒ３が、−Ｃ１−６アルキル−Ｒ５、又は−ＣＯＮＲ６Ｒ７
（式中、
Ｒ５は、アミノアザビシクロ［３．２．１］オクタニル、アミノピペリジニル、Ｃ１−６アルキルジアザスピロ［５．５］ウンデカニル、ジアザスピロ［３．５］ノナニル、ジアザスピロ［４．５］デカニル、ジアザスピロ［４．５］デカニル、ジアザスピロ［５．５］ウンデカニル、ジアザスピロ［５．５］ウンデカニル又はピペリジニルピペリジニルであり、
Ｒ６は、Ｈであり、
Ｒ７は、Ｃ１−６アルキルピペリジニル、又はＣ１−６アルキルモルホリニルＣ１−６アルキルである）である、
請求項１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩、エナンチオマー、若しくはジアステレオマー。
【請求項３】
Ｒ３が、−ＣＨ２−Ｒ５、又は−ＣＯＮＲ６Ｒ７である、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２がメチルである、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ５が、２，８−ジアザスピロ［３．５］ノナン−２−イル、２，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−８−イル、２，９−ジアザスピロ［４．５］デカン−２−イル、２，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−９−イル、２−メチル−２，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−９−イル、３，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−３−イル、３−アミノ−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−イル、４−（１−ピペリジニル）−１−ピペリジニル、４−アミノ−１−ピペリジニルである、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ７が１−メチル−４−ピペリジニル又は４−メチルモルホリン−２−イルメチルである、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
以下：
７−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−（２，９−ジアザスピロ［４．５］デカン−２−イルメチル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル；
７−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［（４−アミノ−１−ピペリジル）メチル］−６−メチル−モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル；
７−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−（２，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−９−イルメチル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル；
７−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−（２，８−ジアザスピロ［３．５］ノナン−２−イルメチル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル；
７−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−（３，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−３−イルメチル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル；
７−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−（２，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−８−イルメチル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル；
７−［（２Ｒ，６Ｓ）−２−メチル−６−［［４−（１−ピペリジル）−１−ピペリジル］メチル］モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル；
エンド−７−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［（１Ｒ，５Ｓ）−３−アミノ−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−イル］メチル］−６−メチル−モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル；
エクソ−７−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［（１Ｓ，５Ｒ）−３−アミノ−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−イル］メチル］−６−メチル−モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル；
７−［（２Ｒ，６Ｓ）−２−メチル−６−［（２−メチル−２，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−９−イル）メチル］モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル；
（２Ｒ，６Ｒ）−４−（４−シアノ−１，３−ベンゾチアゾール−７−イル）−６−メチル−Ｎ−（１−メチル−４−ピペリジル）モルホリン−２−カルボキサミド；
（２Ｒ，６Ｒ）−４−（４−シアノ−１，３−ベンゾチアゾール−７−イル）−６−メチル−Ｎ−［（４−メチルモルホリン−２−イル）メチル］モルホリン−２−カルボキサミド；
から選択される、請求項２に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩、エナンチオマー、若しくはジアステレオマー。
【請求項８】
以下のステップ：
ａ）式（ＶＩＩ）の化合物
【化４】
2021535219.tif 000031
の、塩基の存在下でのアミンによる置換；
ｂ）式（ＶＩＩＩ）の化合物
【化５】
2021535219.tif 000032
の、カップリング試薬の存在下でのアミン（ＩＸ）との反応；
（ここで、塩基はＣｓ２ＣＯ３であり、カップリング試薬はＨＡＴＵであり、Ｒ２及びＲ４は、請求項１〜６のいずれか一項に記載のように定義される）
のいずれか１つを含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物の調製方法。
【請求項９】
治療活性物質として使用するための、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物、又は薬学的に許容される塩、エナンチオマー、若しくはジアステレオマー。
【請求項１０】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物と、治療上不活性である担体とを含む、医薬組成物。
【請求項１１】
全身性エリテマトーデス又はループス腎炎の処置又は予防のための、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項１２】
全身性エリテマトーデス又はループス腎炎の処置又は予防のための医薬を調製するための、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項１３】
ＴＬＲ７又はＴＬＲ８又はＴＬＲ９のアンタゴニストとしての、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項１４】
ＴＬＲ７及びＴＬＲ８及びＴＬＲ９のアンタゴニストとしての、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項１５】
全身性エリテマトーデス又はループス腎炎の処置又は予防のための、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物、又は薬学的に許容される塩、エナンチオマー、若しくはジアステレオマー。
【請求項１６】
請求項８に記載の方法に従って製造された、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物、又は薬学的に許容される塩、エナンチオマー、若しくはジアステレオマー。
【請求項１７】
全身性エリテマトーデス又はループス腎炎の処置又は予防のための方法であって、治療有効量の請求項１〜７のいずれか一項で定義された化合物を投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、哺乳動物における治療及び／又は予防に有用な有機化合物、特に全身性エリテマトーデス又はループス腎炎の処置に有用な、ＴＬＲ７及び／又はＴＬＲ８及び／又はＴＬＲ９のアンタゴニストに関する。
【背景技術】
【０００２】
技術の分野
自己免疫性結合組織病（ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｄｉｓｅａｓｅ：ＣＴＤ）には、全身性エリテマトーデス（ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ：ＳＬＥ）、原発性シェーグレン症候群（ｐｒｉｍａｒｙ  Ｓｊｏｅｇｒｅｎ’ｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ：ｐＳｊＳ）、混合性結合組織病（ｍｉｘｅｄ  ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｄｉｓｅａｓｅ：ＭＣＴＤ）、皮膚筋炎／多発性筋炎（ｄｅｒｍａｔｏｍｙｏｓｉｔｉｓ／ｐｏｌｙｍｙｏｓｉｔｉｓ：ＤＭ／ＰＭ）、関節リウマチ（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ：ＲＡ）、及び全身性硬化症（ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ：ＳＳｃ）などのプロトタイプの自己免疫症候群が含まれる。ＲＡを除いて、患者が利用可能である実際に効果的で安全な治療法はない。ＳＬＥは、１００，０００人あたり２０〜１５０人の有病率を有するプロトタイプのＣＴＤであり、皮膚や関節で一般的に観察される症状から腎不全、肺不全、心不全に至るまで、さまざまな臓器において広範な炎症や組織損傷を引き起こす。従来、ＳＬＥは、非特異的な抗炎症薬又は免疫抑制薬で処置されてきた。しかし、免疫抑制薬、例えばコルチコステロイドの長期使用は、部分的にしか効果がなく、望ましくない毒性及び副作用を伴う。ベリムマブは、過去５０年間にＦＤＡが承認した唯一の狼瘡薬であるが、ＳＬＥ患者のごく一部にしか効果がなく、それも控えめで遅れがある（Ｎａｖａｒｒａ，Ｓ．Ｖ．ら、Ｌａｎｃｅｔ  ２０１１年、３７７巻  ７２１頁）。抗ＣＤ２０ｍＡｂ、特定のサイトカインに対するｍＡｂ又は可溶性受容体などの他の生物学的製剤は、ほとんどの臨床研究で失敗している。したがって、より多くの患者群で持続的な改善を提供し、多くの自己免疫疾患及び自己炎症性疾患で慢性的に使用しても安全性が高い、新規治療法が必要とされている。
【０００３】
Ｔｏｌｌ様受容体（ｔｏｌｌ  ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ＴＬＲ）は、さまざまな免疫細胞において広範な免疫応答を開始することができるパターン認識受容体（ｐａｔｔｅｒｎ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ＰＲＲ）の重要なファミリである。自然宿主防御センサとして、エンドソームＴＬＲ７、８、及び９は、ウイルス、細菌に由来する核酸を認識し、具体的には、ＴＬＲ７／８及びＴＬＲ９は、それぞれ一本鎖ＲＮＡ（ｓｉｎｇｌｅ−ｓｔｒａｎｄｅｄ  ＲＮＡ：ｓｓＲＮＡ）及び一本鎖ＣｐＧ−ＤＮＡを認識する。しかし、ＴＲＬ７、８、９の異常な核酸感知は、幅広い自己免疫疾患及び自己炎症性疾患の重要なノードと見なされている（Ｋｒｉｅｇ，Ａ．Ｍ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２００７年、２２０巻、２５１頁。Ｊｉｍeｎｅｚ−Ｄａｌｍａｒｏｎｉ，Ｍ．Ｊ．ら、Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ  Ｒｅｖ．２０１６年、１５、１頁。Ｃｈｅｎ，Ｊ．Ｑ．ら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ａｌｌｅｒｇｙ＆Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２０１６年、５０巻、１頁）したがって、ＴＬＲ７、８、９は、ステロイドを含まず非細胞毒性の効果的な経口薬が存在しない自己免疫疾患及び自己炎症性疾患の処置のための新しい治療標的であり、これら全ての経路を非常に上流から阻害することにより、満足のいく治療効果を提供することができる。安全性の観点から、複数の核酸感知経路（例えば、他のＴＬＲ、ｃＧＡＳ／ＳＴＩＮＧ）があるため、そのような冗長性は、ＴＬＲ７８９阻害の存在下でも感染への応答を可能にするはずである。このように、本発明者らは、自己免疫疾患及び自己炎症性疾患の処置のために、ＴＬＲ７、８、９を標的としてそれらを抑制する経口化合物を提案し、発明した。
【発明の概要】
【０００４】
本発明は、式（Ｉ）
【化１】
2021535219.tif 000003
の新規化合物であって、
式中、
Ｒ１は、
【化２】
2021535219.tif 000004
（式中、Ｒ４がシアノ、Ｃ１−６アルキル、ハロゲン、ハロＣ１−６アルキル、又はニトロである）であり、
Ｒ２は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、又はハロＣ１−６アルキルであり、
Ｒ３は、−Ｃ１−６アルキル−Ｒ５、又は−ＣＯＮＲ６Ｒ７
（式中、
Ｒ５は、ヘテロシクリルであり、
Ｒ６は、Ｈであり、
Ｒ７は、ヘテロシクリル又はヘテロシクリルＣ１−６アルキルアミノである）である、
新規化合物、又はその薬学的に許容される塩、エナンチオマー、若しくはジアステレオマーに関する。
【０００５】
本発明の別の目的は、式（Ｉ）の新規化合物、その製造、本発明に従った化合物に基づく医薬及びその製造、並びにＴＬＲ７及び／又はＴＬＲ８及び／又はＴＬＲ９のアンタゴニストとしての、全身性エリテマトーデス又はループス腎炎の処置又は予防のための式（Ｉ）の化合物の使用に関する。式（Ｉ）の化合物は、優れたＴＬＲ７及び／又はＴＬＲ８及び／又はＴＬＲ９のアンタゴニズム活性を示す。加えて、式（Ｉ）の化合物はまた、良好な細胞毒性、可溶性、ヒトミクロソーム安定性、及びＳＤＰＫプロファイル、並びに低いＣＹＰ阻害も示す。
【発明を実施するための形態】
【０００６】
定義
用語「Ｃ１−６アルキル」とは、１〜６個、特に１〜４個の炭素原子を含む飽和、直鎖又は分枝鎖のアルキル基、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチルなどを意味する。特に「Ｃ１−６アルキル」基は、メチル、エチル、及びｎ−プロピルである。
【０００７】
用語「ハロゲン」及び「ハロ」とは、本明細書で互換的に使用され、フルオロ、クロロ、ブロモ、又はヨードを意味する。
【０００８】
用語「ハロＣ１−６アルキル」とは、アルキル基の水素原子の少なくとも１つが、同じ又は異なるハロゲン原子、特にフルオロ原子で置き換えられているアルキル基を意味する。ハロＣ１−６アルキルの例としては、モノフルオロメチル、ジフルオロメチル、若しくはトリフルオロメチル、モノフルオロエチル、ジフルオロエチル、若しくはトリフルオロエチル、又はモノフルオロプロピル、ジフルオロプロピル、若しくはトリフルオロプロピル、例えば３，３，３−トリフルオロプロピル、２−フルオロエチル、２，２，２−トリフルオロエチル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、及びトリフルオロエチルが挙げられる。
【０００９】
用語「ヘテロシクリル」とは、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１、２、又は３個の環ヘテロ原子を含み、残りの環原子が炭素である、３〜１２個の環原子からなる一価の飽和又は部分的不飽和の単環系又は二環系を意味する。特定の実施形態では、ヘテロシクリルとは、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１、２、又は３個の環ヘテロ原子を含み、残りの環原子が炭素である、４〜１０個の環原子からなる一価の飽和又は部分的不飽和の単環系又は二環系である。単環式飽和ヘテロシクリルの例は、アジリジニル、オキシラニル、アゼチジニル、オキセタニル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロ−チエニル、ピラゾリジニル、イミダゾリジニル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリル、チアゾリジニル、ピペリジニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ピペラジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、１，１−ジオキソ−チオモルホリン−４−イル、アゼパニル、オキサゼパニル、ジアゼパニル、ホモピペラジニル、又はオキサゼパニルである。二環式飽和ヘテロシクリルの例は、アミノアザビシクロ［３．２．１］オクタニル、アミノアザビシクロ［３．２．１］オクタニル、Ｃ１−６アルキルジアザスピロ［５．５］ウンデカニル、ジアザスピロ［３．５］ノナニル、ジアザスピロ［４．５］デカニル、ジアザスピロ［４．５］デカニル、ジアザスピロ［５．５］ウンデカニル及びジアザスピロ［５．５］ウンデカニルである。部分的不飽和ヘテロシクリルの例は、ジヒドロフリル、イミダゾリニル、ジヒドロ−オキサゾリル、テトラヒドロピリジニル、及びジヒドロピラニルである。単環式又は二環式ヘテロシクリルは、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−６アルキル、ハロＣ１−６アルキル又はヘテロシクリルでさらに置換することができる。
【００１０】
用語「エナンチオマー」とは、互いに重ね合わせることができない鏡像体である、ある化合物の２つの立体異性体を意味する。
【００１１】
用語「ジアステレオマー」とは、２つ以上のキラル中心（ｃｅｎｔｅｒｓ  ｏｆ  ｃｈｉｒａｌｉｔｙ）を有し、その分子が互いに鏡像体ではない立体異性体を意味する。ジアステレオマーは、例えば、融点、沸点、スペクトル特性、及び反応性などの物理特性が異なる。
【００１２】
用語「薬学的に許容される塩」とは、生物学的に、又は他の点で望ましくないものではない塩を意味する。薬学的に許容される塩は、酸付加塩及び塩基付加塩の両方を含む。
【００１３】
用語「薬学的に許容される酸付加塩」は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、炭酸、リン酸などの無機酸、及び脂肪族、脂環式、芳香族、芳香脂肪族（ａｒａｌｉｐｈａｔｉｃ）、複素環式、カルボン酸、及びスルホン酸類から選択される有機酸、例えば、蟻酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マレイン酸、マロン酸（ｍａｌｏｎｅｉｃ  ａｃｉｄ）、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、アスパラギン酸、アスコルビン酸、グルタミン酸、アントラニル酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、エンボン酸、フェニル酢酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、及びサリチル酸と形成される薬学的に許容される塩を意味する。
【００１４】
用語「薬学的に許容される塩基付加塩」とは、有機塩基又は無機塩基と形成される薬学的に許容される塩を意味する。許容される無機塩基の例には、ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、マンガン塩、及びアルミニウム塩が含まれる。薬学的に許容される有機非毒性塩基から誘導される塩としては、第一級、第二級、及び第三級アミン、天然に存在する置換アミンを含む置換アミン、環状アミン、及び塩基性イオン交換樹脂、例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、２−ジエチルアミノエタノール、トリメタミン、ジシクロヘキシルアミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、プリン、ピペリジン（ｐｉｐｅｒｉｚｉｎｅ）、ピペリジン、Ｎ−エチルピペリジン、及びポリアミン樹脂の塩が挙げられる。
【００１５】
用語「薬学的に活性な代謝物」とは、特定の化合物又はその塩の体内での代謝を通じて産生される薬理学的に活性な生成物を意味する。体内に入った後、ほとんどの薬物は化学反応の基質となり、それらの物理的特性及び生物学的効果を変化させ得る。これらの代謝変換は、通常、本発明の化合物の極性に影響を与え、薬物が体内に分配されて体内から排泄される方法を変える。しかし、場合によっては、治療効果のために薬物の代謝が必要になる。
【００１６】
用語「治療有効量」とは、対象に投与されると、（ｉ）特定の疾患、状態、若しくは障害を処置若しくは予防する、（ｉｉ）特定の疾患、状態、若しくは障害のうちの１種以上の症状を減衰、改善、若しくは排除する、又は（ｉｉｉ）本明細書に記載の特定の疾患、状態、若しくは障害のうちの１種以上の症状の発症を予防若しくは遅延させる、本発明の化合物又は分子の量を意味する。治療有効量は、化合物、処置される病状、処置される疾患の重症度、対象の年齢及び相対的な健康状態、投与の経路及び形態、主治医又は獣医師の判断、並びにその他の要因に応じて異なる。
【００１７】
用語「医薬組成物」とは、治療有効量の活性医薬成分と、薬学的に許容される添加剤とを含み、それを必要とする哺乳動物、例えばヒトに投与される混合物又は溶液を意味する。
【００１８】
ＴＬＲ７及び／又はＴＬＲ８及び／又はＴＬＲ９のアンタゴニスト
本発明は、式（Ｉ）
【化３】
2021535219.tif 000005
の化合物であって、
式中、
Ｒ１は、
【化４】
2021535219.tif 000006
（式中、Ｒ４がシアノ、Ｃ１−６アルキル、ハロゲン、ハロＣ１−６アルキル、又はニトロである）であり、
Ｒ２は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、又はハロＣ１−６アルキルであり、
Ｒ３は、−Ｃ１−６アルキル−Ｒ５、又は−ＣＯＮＲ６Ｒ７
（式中、
Ｒ５は、ヘテロシクリルであり、
Ｒ６は、Ｈであり、
Ｒ７は、ヘテロシクリル又はヘテロシクリルＣ１−６アルキルアミノである）である、
化合物、又はその薬学的に許容される塩、エナンチオマー、若しくはジアステレオマーに関する。
【００１９】
本発明のさらなる実施形態は、（ｉｉ）式（Ｉ）の化合物であって、式中、
Ｒ１が、
【化５】
2021535219.tif 000007
（式中、Ｒ４は、シアノである）であり、
Ｒ２が、Ｃ１−６アルキルであり、
Ｒ３が、−Ｃ１−６アルキル−Ｒ５、又は−ＣＯＮＲ６Ｒ７、
（式中、
Ｒ５は、アミノアザビシクロ［３．２．１］オクタニル、アミノピペリジニル、Ｃ１−６アルキルジアザスピロ［５．５］ウンデカニル、ジアザスピロ［３．５］ノナニル、ジアザスピロ［４．５］デカニル、ジアザスピロ［４．５］デカニル、ジアザスピロ［５．５］ウンデカニル、ジアザスピロ［５．５］ウンデカニル又はピペリジニルピペリジニルであり、
Ｒ６は、Ｈであり、
Ｒ７は、Ｃ１−６アルキルピペリジニル、又はＣ１−６アルキルモルホリニルＣ１−６アルキルである）である、
化合物、又はその薬学的に許容される塩、エナンチオマー、若しくはジアステレオマーに関する。
【００２０】
本発明のさらなる実施形態は、（ｉｉｉ）（ｉｉ）に記載の式（Ｉ）の化合物であって、式中、Ｒ３が、−ＣＨ２−Ｒ５、又は−ＣＯＮＲ６Ｒ７である化合物である。
【００２１】
本発明のさらなる実施形態は、（ｉｖ）（ｉｉｉ）に記載の式（Ｉ）の化合物であって、式中、Ｒ２がメチルである化合物である。
【００２２】
本発明のさらなる実施形態は、（ｖ）（ｉｖ）に記載の式（Ｉ）の化合物であって、式中、Ｒ５が、２，８−ジアザスピロ［３．５］ノナン−２−イル、２，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−８−イル、２，９−ジアザスピロ［４．５］デカン−２−イル、２，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−９−イル、２−メチル−２，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−９−イル、３，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−３−イル、３−アミノ−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−イル、４−（１−ピペリジニル）−１−ピペリジニル、４−アミノ−１−ピペリジニルである化合物である。
【００２３】
本発明のさらなる実施形態は、（ｖｉ）（ｖ）に記載の式（Ｉ）の化合物であって、式中、Ｒ７が１−メチル−４−ピペリジニル、又は４−メチルモルホリン−２−イルメチルである化合物である。
【００２４】
本発明の別の実施形態は、（ｖｉｉ）以下の式（Ｉ）の特定の化合物：
７−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−（２，９−ジアザスピロ［４．５］デカン−２−イルメチル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル；
７−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［（４−アミノ−１−ピペリジル）メチル］−６−メチル−モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル；
７−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−（２，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−９−イルメチル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル；
７−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−（２，８−ジアザスピロ［３．５］ノナン−２−イルメチル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル；
７−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−（３，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−３−イルメチル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル；
７−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−（２，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−８−イルメチル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル；
７−［（２Ｒ，６Ｓ）−２−メチル−６−［［４−（１−ピペリジル）−１−ピペリジル］メチル］モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル；
エンド−７−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［（１Ｒ，５Ｓ）−３−アミノ−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−イル］メチル］−６−メチル−モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル；
エクソ−７−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［（１Ｓ，５Ｒ）−３−アミノ−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−イル］メチル］−６−メチル−モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル；
７−［（２Ｒ，６Ｓ）−２−メチル−６−［（２−メチル−２，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−９−イル）メチル］モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル；
（２Ｒ，６Ｒ）−４−（４−シアノ−１，３−ベンゾチアゾール−７−イル）−６−メチル−Ｎ−（１−メチル−４−ピペリジル）モルホリン−２−カルボキサミド；
（２Ｒ，６Ｒ）−４−（４−シアノ−１，３−ベンゾチアゾール−７−イル）−６−メチル−Ｎ−［（４−メチルモルホリン−２−イル）メチル］モルホリン−２−カルボキサミド；
又はその薬学的に許容される塩、エナンチオマー、若しくはジアステレオマーに関する。
【００２５】
合成
本発明の化合物は、任意の従来の手段によって調製することができる。これらの化合物及びそれらの出発物質を合成するための好適なプロセスは、以下のスキーム及び実施例に提供されている。全ての置換基、特にＲ１〜Ｒ７は、特に明記しない限り、上記で定義した通りである。さらに、特に明記しない限り、全ての反応、反応条件、略語、及び記号は、有機化学における当業者に周知の意味を有する。
【００２６】
式（Ｉ）の化合物を調製するための一般的な合成経路を以下のスキーム１に示す。
スキーム１
【化６】
2021535219.tif 000008
式中、Ｘはハロゲンである。
【００２７】
式（ＩＩ）の化合物の合成をスキーム１に示す。ハロゲン化物（ＩＶ）と式（Ｖ）の化合物とのカップリングは、ＤＩＰＥＡ又はＫ２ＣＯ３などの塩基の存在下で、又はＢｕｃｈｗａｌｄ−Ｈａｒｔｗｉｇアミノ化条件下で直接カップリングすることによって実現することができ（参照：Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．１９９８年、３１巻、８０５〜８１８頁；Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．２０１６年、１１６巻、１２５６４〜１２６４９頁；Ｔｏｐｉｃｓ  ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００２年、２１９巻、１３１〜２０９頁；及びそこに引用されている参考文献）、Ｒｕｐｈｏｓ  Ｐｄ−Ｇ２などの触媒、及びＣｓ２ＣＯ３などの塩基を用いて式（ＶＩ）の化合物が提供され、該化合物が２，６−ジメチルピリジンなどの塩基、及びＴｆ２Ｏなどのトリフレーション試薬の存在下で式（ＶＩＩ）の化合物を形成する。Ｃｓ２ＣＯ３などの塩基の存在下で式（ＶＩＩ）の化合物をアミンで置換すると、式（ＩＩ）の化合物が得られる。いくつかの実施形態では、式（ＶＩＩ）の化合物とアミンとの反応は、アミンから生じる保護基、例えばＢｏｃを含有する生成物を得ることができ、該保護基を除去した後に、式（ＩＩ）の最終化合物を得ることになる。
【００２８】
式（ＩＩＩ）の化合物を調製するための一般的な合成経路をスキーム２に示す。
スキーム２
【化７】
2021535219.tif 000009
式中、Ｒ６及びＲ７は、Ｈ、ヘテロシクリル又はヘテロシクリルＣ１−６アルキルアミノから独立して選択される。
【００２９】
アルコール（ＶＩ）は、過酸化ベンゾイル／ＴＥＭＰＯなどの酸化試薬によって酸化され、式（ＶＩＩＩ）の化合物が得られる。カルボン酸（ＶＩＩＩ）を、ＨＡＴＵなどのカップリング試薬の存在下でアミン（ＩＸ）との縮合条件に適用して、式（ＩＩＩ）の化合物を得る。いくつかの実施形態では、式（ＶＩＩＩ）の化合物とアミンとの反応は、アミン（ＩＸ）から生じる保護基、例えばＢｏｃを含有する生成物を得ることができ、該保護基を除去した後に、式（ＩＩＩ）の最終化合物を得ることになる。
【００３０】
本発明はまた、以下のステップ：
ａ）式（ＶＩＩ）の化合物
【化８】
2021535219.tif 000010
の、塩基の存在下でのアミンによる置換；
ｂ）式（ＶＩＩＩ）の化合物
【化９】
2021535219.tif 000011
の、カップリング試薬の存在下でのアミン（ＩＸ）との反応；
（式中、Ｒ２及びＲ４は、上記に定義される通りである。）
のいずれかを含む、式（Ｉ）の化合物の調製のための方法に関する。
【００３１】
ステップａ）において、塩基は、例えば、Ｃｓ２ＣＯ３であり得る。
【００３２】
ステップｂ）において、カップリング試薬は、例えば、ＨＡＴＵであり得る。
【００３３】
式（Ｉ）、（ＩＩ）、又は（ＩＩＩ）の化合物もまた、上記の方法に従って製造された場合、本発明の対象となる。
【００３４】
本発明の化合物は、ジアステレオマー又はエナンチオマーの混合物として得ることができ、これらは、当技術分野で周知の方法、例えば、（キラル）ＨＰＬＣ又はＳＦＣによって分離することができる。
【００３５】
適応症及び処置方法
本発明は、ＴＬＲ７及び／又はＴＬＲ８及び／又はＴＬＲ９アンタゴニストとして使用することができ、ＴＬＲ７及び／又はＴＬＲ８及び／又はＴＬＲ９を介した経路活性化、並びに、限定するものではないが、あらゆる種類のサイトカイン及びあらゆる形態の自己抗体の産生を通じて媒介される自然免疫応答及び適応免疫応答を含むそれぞれの下流の生物学的イベントを阻害する化合物を提供する。したがって、本発明の化合物は、限定するものではないが、形質細胞様樹状細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、マクロファージ、単球、好中球、ケラチノサイト、上皮細胞を含む、そのような受容体（複数可）を発現するあらゆる種類の細胞において、ＴＬＲ７及び／又はＴＬＲ８及び／又はＴＬＲ９をブロックするのに有用である。このように、本化合物は、全身性エリテマトーデス及びループス腎炎の治療薬又は予防薬として使用することができる。
【００３６】
本発明は、処置又は予防を必要とする患者における全身性エリテマトーデス及びループス腎炎の処置又は予防のための方法を提供する。
【００３７】
別の実施形態は、そのような処置を必要とする哺乳動物における全身性エリテマトーデス及びループス腎炎を処置又は予防する方法であって、治療有効量の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体、互変異性体、プロドラッグ、又は薬学的に許容される塩を前記哺乳動物に投与することを含む方法を含む。
【実施例】
【００３８】
本発明は、以下の実施例を参照することによってより充分に理解される。しかし、これらの実施例は、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。
【００３９】
略語
本発明は、以下の実施例を参照することによってより充分に理解される。しかし、これらの実施例は、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。
【００４０】
本明細書で使用されている略語は、以下の通りである：
ＡＣＮ：アセトニトリル
Ｂｏｃ２Ｏ：二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル
Ｔｆ２Ｏ：トリフルオロメタンスルホン酸無水物
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＤＩ  薬物間相互作用
ＤＩＰＥＡ  ジエチルイソプロピルアミン
ＤＭＡ：ジメチルアセトアミド
ＥＡ又はＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
ＦＡ：蟻酸
ＨＡＴＵ  １−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスフェート
ＨＬＭ  ヒト肝ミクロソーム
ｈｒ  時間
ｈｒｓ  時間
ＩＣ５０：半数阻害濃度
ＬＣＭＳ  液体クロマトグラフィ質量分析
ＬＹＳＡ  凍結乾燥溶解度アッセイ
ＭＳ：質量分析法
ＰＥ：石油エーテル
分取ＨＰＬＣ：分取高速液体クロマトグラフィ
ｒｔ：室温
ＲＴ：保持時間
ＲｕＰｈｏｓ  Ｐｄ  Ｇ２：クロロ（２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，６’−ジイソプロポキシ−１，１’−ビフェニル）［２−（２’−アミノ−１，１’−ビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）第２世代
ＳＦＣ：超臨界流体クロマトグラフィ
Ｔｆ：トリフルオロメタンスルホニル
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ｖ／ｖ  体積比
【００４１】
一般的な実験条件
中間体及び最終化合物を、次の機器のいずれか１つを用いて、フラッシュクロマトグラフィにより精製した：（ｉ）Ｂｉｏｔａｇｅ  ＳＰ１システム及びＱｕａｄ  １２／２５カートリッジモジュール；（ｉｉ）ＩＳＣＯコンビフラッシュクロマトグラフィ機器。シリカゲルのブランドと細孔径：ｉ）ＫＰ−ＳＩＬ６０Å、粒径：４０〜６０μｍ；ｉｉ）ＣＡＳ登録番号：シリカゲル：６３２３１−６７−４、粒径：４７〜６０ミクロンシリカゲル；ｉｉｉ）Ｑｉｎｇｄａｏ  Ｈａｉｙａｎｇ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，ＬｔｄのＺＣＸ、細孔：２００〜３００又は３００〜４００。
【００４２】
中間体及び最終化合物を、ＸＢｒｉｄｇｅ（商標）Ｐｒｅｐ−Ｃ１８（５μｍ、ＯＢＤ（商標）３０×１００ｍｍ）カラム、ＳｕｎＦｉｒｅ（商標）Ｐｒｅｐ−Ｃ１８（５μｍ、ＯＢＤ（商標）３０×１００ｍｍ）カラム、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｓｙｎｅｒｇｉ−Ｃ１８（１０μｍ、２５×１５０ｍｍ）若しくはＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ−Ｃ１８（１０μｍ、２５×１５０ｍｍ）、Ｗａｔｅｒｓ  ＡｕｔｏＰ精製システム（サンプルマネージャー２７６７、ポンプ２５２５、検出器：Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＱ及びＵＶ２４８７、溶媒系：アセトニトリル及び水中０．１％水酸化アンモニウム；アセトニトリル及び水中０．１％ＦＡ又はアセトニトリル及び水中０．１％ＴＦＡ）、又はＧｉｌｓｏｎ−２８１精製システム（ポンプ３２２、検出器：ＵＶ  １５６、溶媒系：アセトニトリル及び水中０．０５％水酸化アンモニウム；アセトニトリル及び水中０．２２５％ＦＡ；アセトニトリル及び水中０．０５％ＨＣｌ；アセトニトリル及び水中０．０７５％ＴＦＡ；又はアセトニトリル及び水）を使用して、逆相カラムでの分取ＨＰＬＣにより精製した。
【００４３】
ＳＦＣキラル分離では、中間体を、キラルカラム（ダイセル製ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＩＣ、５μｍ、３０×２５０ｍｍ）、ＡＳ（１０μｍ、３０×２５０ｍｍ）、又はＡＤ（１０μｍ、３０×２５０ｍｍ）によって、Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ製ＳＦＣ−Ｍｕｌｔｉｇｒａｍ  ＩＩＩシステム、Ｗａｔｅｒｓ製８０Ｑ分取ＳＦＣ又はＴｈａｒ製８０分取ＳＦＣ、溶媒系：ＣＯ２及びＩＰＡ（ＩＰＡ中０．５％ＴＥＡ）又はＣＯ２及びＭｅＯＨ（ＭｅＯＨ中０．１％ＮＨ３・Ｈ２Ｏ）、背圧１００ｂａｒ、２５４又は２２０ｎｍでの検出を用いて、分離した。
【００４４】
化合物のＬＣ／ＭＳスペクトルを、ＬＣ／ＭＳ（Ｗａｔｅｒｓ（商標）Ａｌｌｉａｎｃｅ  ２７９５−Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＱ、Ｓｈｉｍａｄｚｕ  Ａｌｌｉａｎｃｅ  ２０２０−Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＱ、又はＡｇｉｌｅｎｔ  Ａｌｌｉａｎｃｅ  ６１１０−Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＱ）を用いて取得した。ＬＣ／ＭＳ条件は以下の通りであった（実行時間３又は１．５分）：
酸性条件Ｉ：Ａ：Ｈ２Ｏ中０．１％ＴＦＡ、Ｂ：アセトニトリル中０．１％ＴＦＡ、
酸性条件ＩＩ：Ａ：Ｈ２Ｏ中０．０３７５％ＴＦＡ、Ｂ：アセトニトリル中０．０１８７５％ＴＦＡ、
塩基性条件Ｉ：Ａ：Ｈ２Ｏ中０．１％ＮＨ３・Ｈ２Ｏ、Ｂ：アセトニトリル、
塩基性条件ＩＩ：Ａ：Ｈ２Ｏ中０．０２５％ＮＨ３・Ｈ２Ｏ、Ｂ：アセトニトリル、
中性条件：Ａ：Ｈ２Ｏ；Ｂ：アセトニトリル。
【００４５】
質量スペクトル（ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒａ：ＭＳ）：一般的には親質量を示すイオンのみが報告されており、特に明記しない限り、引用される質量イオンは正の質量イオン（ＭＨ）＋である。
【００４６】
ＮＭＲスペクトルを、Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  ４００ＭＨｚを用いて取得した。
【００４７】
マイクロ波支援反応は、Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ  Ｓｉｘｔｙマイクロ波シンセサイザで行った。空気に敏感な試薬を含む全ての反応は、アルゴン又は窒素雰囲気下で行った。試薬は、特に明記しない限り、さらに精製することなく、商業的な供給元から入手したまま使用した。
【００４８】
調製実施例
以下の実施例は、本発明の意味を例示することを意図しているが、決して本発明の意味の範囲内での限定を表すものではない。
【００４９】
実施例１
７−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−（２，９−ジアザスピロ［４．５］デカン−２−イルメチル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル
【化１０】
2021535219.tif 000012
【００５０】
標題化合物を、以下のスキームに従って調製した：
【化１１】
2021535219.tif 000013
【００５１】
ステップ１：１−（５−クロロ−２−ヨードフェニル）チオ尿素（化合物１ｂ）の調製
【００５２】
５−クロロ−２−ヨードアニリン（化合物１ａ、５．０ｇ、１９．７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（８７ｍＬ）中溶液に、イソチオシアン酸ベンゾイル（ＣＡＳ：５３２−５５−８、６．４ｇ、３９．４ｍｍｏｌ）を１０〜２０℃において添加した。反応物を２０℃で１６時間撹拌した後、溶媒を真空下で除去し、固体をＥｔＯＨ（４０ｍＬ）とＰＥ（１０ｍＬ）との混合溶媒で洗浄し、続いて風乾して８．７ｇの中間体を得た。該中間体をメタノール（１００ｍＬ）中に溶解し、炭酸カリウム（８．２ｇ、５９．２ｍｍｏｌ）の水（４０ｍＬ）溶液で処理した。反応混合物を７０℃で４時間加熱し、次いで溶媒を真空下で除去し、続いて水（２０ｍＬ）を添加した。固体をフィルタにかけることによって回収し、水（２０ｍＬ）でさらに洗浄し、乾燥させて、化合物１ｂ（５．０ｇ、１６．０ｍｍｏｌ、収率８１％）を黄色固体として得た。
【００５３】
ステップ２：７−クロロ−４−ヨード−１，３−ベンゾチアゾール−２−アミン（化合物１ｃ）の調製
【００５４】
１−（５−クロロ−２−ヨードフェニル）チオ尿素（化合物１ｂ、４．０ｇ、１２．８ｍｍｏｌ）のクロロホルム（３２ｍＬ）中溶液に、臭素（０．６６ｍＬ、１２．８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を７８℃で１８時間加熱した。反応物を室温に冷却した後、溶媒を真空下で除去し、固体をＤＣＭ：ＭｅＯＨの混合溶媒（１００ｍＬ、１：１）に溶解した。この溶液に、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３の水溶液（飽和、２０ｍＬ）を加えた。次に、溶媒を真空下で除去し、３０ｍＬの水を加えた。固体をフィルタにかけることにより収集し、乾燥させて、所望の生成物である化合物１ｃ（３．５ｇ、１１．３ｍｍｏｌ、収率８８％）を黄色固体として得た。ＭＳ：計算値３１１［（Ｍ＋Ｈ）＋］、測定値３１１［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００５５】
ステップ３：７−クロロ−４−ヨード−１，３−ベンゾチアゾール（化合物１ｄ）の調製
【００５６】
７−クロロ−４−ヨード−１，３−ベンゾチアゾール−２−アミン（化合物１ｃ、３．０ｇ、９．７ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（６０ｍＬ）中溶液に、亜硝酸ｔｅｒｔ−ブチル（２．０ｇ、１９．３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を９０℃で１８時間加熱した後、溶媒を真空下で除去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ＰＥ）で精製して粗生成物を得、これをＰＥ（１５ｍＬ）中で粉砕して、所望の生成物である化合物１ｄ（１．５ｇ、５．１ｍｍｏｌ、収率５２％）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値２９６［（Ｍ＋Ｈ）＋］、測定値２９６［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００５７】
ステップ４：７−クロロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル（化合物１ｆ）の調製
【００５８】
７−クロロ−４−ヨード−１，３−ベンゾチアゾール（化合物１ｄ、１．５ｇ、５．１ｍｍｏｌのＤＭＡ（４０ｍＬ）中溶液に、シアン化亜鉛（０．８９ｇ、７．６ｍｍｏｌ）及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．２ｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１００℃で１８時間加熱し、次いで水（１００ｍＬ）に注いだ。固体をフィルタにかけることにより収集し、ＥＡ（４００ｍＬ）に溶解した。この有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して、所望の生成物である化合物１ｆ（０．９ｇ、４．６ｍｍｏｌ、収率９１％）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値１９５［（Ｍ＋Ｈ）＋］、測定値１９５［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００５９】
ステップ５：７−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−（ヒドロキシメチル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル（化合物１ｈ）の調製
【００６０】
［（２Ｒ，６Ｒ）−６−メチルモルホリン−２−イル］メタノール（化合物１ｇ、ＷｕＸｉ  Ａｐｐｔｅｃ、ＣＡＳ：１７００６０９−４８−８、６０．６ｍｇ、０．２６  ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２ｍＬ）中溶液にＨＣｌ（０．５ｍＬ、ＭｅＯＨ中１０％）を室温で加えた。この反応混合物を室温で２時間撹拌した後、溶媒を真空下で除去し、残留物をＤＭＡ（０．５ｍＬ）中に溶解した。この溶液に、７−クロロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル（化合物１ｆ、５１．７ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１３ｍＬ、０．７７ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を１５０℃で２時間撹拌した後、水（１０ｍＬ）を添加した。次いで、混合物を冷却し、ＥＡ（１０ｍＬ）で抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して、残留物を得、これを、分取ＴＬＣ（ＰＥ：ＥＡ＝２：１）によって精製して、所望の生成物である化合物１ｈ（１５ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ、収率２０％）を黄色のゴム状物質として得た。ＭＳ：計算値２９０［（Ｍ＋Ｈ）＋］、測定値２９０［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００６１】
ステップ６：［（２Ｒ，６Ｒ）−４−（４−シアノ−１，３−ベンゾチアゾール−７−イル）−６−メチル−モルホリン−２−イル］メチルトリフルオロメタンスルホネート（化合物１ｉ）の調製
【００６２】
７−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−（ヒドロキシメチル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル（化合物１ｈ、１５．０ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１ｍＬ）中溶液に、２，６−ジメチルピリジン（２２．２ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）及び無水トリフルオロメタンスルホン酸（２９．２ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を０℃で１時間撹拌し、次いで氷水（１０ｍＬ）に注いだ。混合物をＤＣＭ（１０ｍＬ）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して、化合物１ｉ（２０ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ、収率９１％）を黄色固体として得た。
【００６３】
ステップ７：ｔｅｒｔ−ブチル２−（（（２Ｓ，６Ｒ）−４−（４−シアノ−１，３−ベンゾチアゾール−７−イル）−６−メチルモルホリン−２−イル）メチル）−２，７−ジアザスピロ［４．５］デカン−７−カルボキシレート（化合物１ｋ）の調製。
【００６４】
（（２Ｒ，６Ｒ）−４−（４−シアノ−１，３−ベンゾチアゾール−７−イル）−６−メチルモルホリン−２−イル）メチルトリフルオロメタンスルホネート（化合物１ｉ、２０．０ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）のＡＣＮ（２ｍＬ）中溶液に、化合物１ｊ（ＰｈａｒｍａＢｌｏｃｋ、ＣＡＳ：２３６４０６−６１−４、１４．８３ｍｇ、０．０６０ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（１３．１２ｍｇ、０．０９０ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を６０℃で１４時間撹拌した後、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）を添加した。混合物をフィルタにかけ、濃縮して、化合物１ｋ（３０ｍｇ、０．０６０  ｍｍｏｌ、粗収率約１００％）を黄色固体として得た。ＭＳ：計算値５１２［（Ｍ＋Ｈ）＋］、測定値５１２［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００６５】
ステップ８：７−［ｒａｃ−（２Ｓ，６Ｒ）−２−（２，９−ジアザスピロ［４．５］デカン−２−イルメチル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル（実施例１）の調製
【００６６】
ｔｅｒｔ−ブチル２−（（（２Ｓ，６Ｒ）−４−（４−シアノ−１，３−ベンゾチアゾール−７−イル）−６−メチルモルホリン−２−イル）メチル）−２，７−ジアザスピロ［４．５］デカン−７−カルボキシレート（化合物１ｋ、２０．０ｍｇ、０．０４０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１ｍＬ）中溶液にトリフルオロ酢酸（０．１ｍＬ）を添加した。この混合物を２０℃で１時間撹拌し、次いで溶媒を除去した。残留物を分取ＨＰＬＣ（ＨＣｌ）によって精製して、所望の生成物である実施例１（２．４ｍｇ、０．０１０ｍｍｏｌ、収率１５％）を黄色のゴム状物質として得た。ＭＳ：計算値４１２［（Ｍ＋Ｈ）＋］、測定値４１２［（Ｍ＋Ｈ）＋］。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭＥＴＨＡＮＯＬ−ｄ４）δ  ｐｐｍ：９．４３（ｓ，１Ｈ），７．９２（ｄ，Ｊ＝８．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．１９（ｄ，Ｊ＝８．０  Ｈｚ，１Ｈ），４．３１（ｓ，１Ｈ），４．０６（ｓ，１Ｈ），３．９７−３．８６（ｍ，２Ｈ），３．８１−３．６６（ｍ，３Ｈ），３．６３−３．３４（ｍ，５Ｈ），３．２６−３．１２（ｍ，２Ｈ），２．８８−２．７２（ｍ，２Ｈ），２．４０−２．０８（ｍ，２Ｈ），１．９１（ｓ，４Ｈ），１．３６（ｄ，Ｊ＝５．８  Ｈｚ，３Ｈ）。
【００６７】
実施例２
７−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［（４−アミノ−１−ピペリジル）メチル］−６−メチル−モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル
【化１２】
2021535219.tif 000014
【００６８】
表題化合物を、実施例１の調製と同様に、ｔｅｒｔ−ブチル２，７−ジアザスピロ［４．５］デカン−７−カルボキシレート（化合物１ｊ）の代わりに４−Ｂｏｃ−アミノピペリジン（ＰｈａｒｍａＢｌｏｃｋ、ＣＡＳ：７３８７４−９５−０））を使用して調製した。実施例２（１．２ｍｇ）を白色のゴム状物質として得た。ＭＳ：計算値３７２［（Ｍ＋Ｈ）＋］、測定値３７２［（Ｍ＋Ｈ）＋］。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭＥＴＨＡＮＯＬ−ｄ４）δ  ｐｐｍ：９．４３（ｓ，１Ｈ），７．９３（ｄ，Ｊ＝８．３  Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，１Ｈ），４．４０−４．３４（ｍ，１Ｈ），４．１１−４．０３（ｍ，１Ｈ），３．９６−３．６６（ｍ，５Ｈ），３．５７−３．４７（ｍ，１Ｈ），３．４６−３．３９（ｍ，２Ｈ），３．３１−３．２３（ｍ，１Ｈ），２．９０−２．７１（ｍ，２Ｈ），２．３８−２．２８（ｍ，２Ｈ），２．２２−２．０８（ｍ，２Ｈ），１．３５（ｄ，Ｊ＝６．３  Ｈｚ，３Ｈ）。
【００６９】
実施例３
７−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−（２，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−９−イルメチル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル
【化１３】
2021535219.tif 000015
【００７０】
表題化合物を、実施例１の調製と同様に、ｔｅｒｔ−ブチル２，７−ジアザスピロ［４．５］デカン−７−カルボキシレート（化合物１ｊ）の代わりにｔｅｒｔ−ブチル２，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−９−カルボキシレート（ＰｈａｒｍａＢｌｏｃｋ、ＣＡＳ：１８９３３３−０３−７）を使用して調製した。実施例３（７．２ｍｇ）を黄色のゴム状物質として得た。ＭＳ：計算値４２５［（Ｍ＋Ｈ）＋］、測定値４２６［（Ｍ＋Ｈ）＋］。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭＥＴＨＡＮＯＬ−ｄ４）δ  ｐｐｍ：９．４３（ｓ，１Ｈ），７．９３（ｄ，Ｊ＝８．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝８．３  Ｈｚ，１Ｈ），４．４０−４．３１（ｍ，１Ｈ），４．０９−４．０１（ｍ，１Ｈ），３．７７−３．５９（ｍ，４Ｈ），３．５２−３．３９（ｍ，２Ｈ），３．３２−３．２６（ｍ，２Ｈ），３．２１−３．１５（ｍ，２Ｈ），３．０６（ｓ，１Ｈ），２．８９−２．７３（ｍ，２Ｈ），２．１６−２．０１（ｍ，２Ｈ），１．８９（ｓ，６Ｈ），１．６９−１．６５（ｍ，１Ｈ），１．３５（ｄ，Ｊ＝６．３  Ｈｚ，３Ｈ）。
【００７１】
実施例４
７−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−（２，８−ジアザスピロ［３．５］ノナン−２−イルメチル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル
【化１４】
2021535219.tif 000016
【００７２】
表題化合物を、実施例１の調製と同様に、ｔｅｒｔ−ブチル２，７−ジアザスピロ［４．５］デカン−７−カルボキシレート（化合物１ｊ）の代わりにｔｅｒｔ−ブチル２，６−ジアザスピロ［３．５］ノナン−６−カルボキシレート（ＷｕＸｉ  Ａｐｐｔｅｃ、ＣＡＳ：８８５２７２−１７−３）を使用して調製した。実施例４（９．７ｍｇ）を白色のゴム状物質として得た。ＭＳ：計算値３９８［（Ｍ＋Ｈ）＋］、測定値３９８［（Ｍ＋Ｈ）＋］。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭＥＴＨＡＮＯＬ−ｄ４）δ  ｐｐｍ：９．４０（ｓ，１Ｈ），７．８９（ｄ，Ｊ＝８．１  Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝８．１  Ｈｚ，１Ｈ），４．０４−３．６３（ｍ，８Ｈ），３．３９（ｓ，２Ｈ），３．１１（ｄ，Ｊ＝４．１  Ｈｚ，４Ｈ），２．８７−２．６３（ｍ，２Ｈ），２．００（ｓ，２Ｈ），１．８２（ｓ，２Ｈ），１．２９（ｄ，Ｊ＝５．８  Ｈｚ，３Ｈ）。
【００７３】
実施例５
７−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−（３，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−３−イルメチル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル
【化１５】
2021535219.tif 000017
【００７４】
表題化合物を、実施例１の調製と同様に、ｔｅｒｔ−ブチル２，７−ジアザスピロ［４．５］デカン−７−カルボキシレート（化合物１ｊ）の代わりにｔｅｒｔ−ブチル３，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−３−カルボキシレート（Ｂｉｄｅ、ＣＡＳ：１７３４０５−７８−２）を使用して調製した。実施例５（７．０ｍｇ）を黄色のゴム状物質として得た。ＭＳ：計算値４２６［（Ｍ＋Ｈ）＋］、測定値４２６［（Ｍ＋Ｈ）＋］。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭＥＴＨＡＮＯＬ−ｄ４）δ  ｐｐｍ：９．４３（ｓ，１Ｈ），７．９３（ｄ，Ｊ＝８．３  Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝８．２  Ｈｚ，１Ｈ），４．３５（ｔ，Ｊ＝１０．０  Ｈｚ，１Ｈ），４．０９−４．０２（ｍ，１Ｈ），３．７８−３．５６（ｍ，４Ｈ），３．５１−３．３６（ｍ，２Ｈ），３．３０−３．２３（ｍ，６Ｈ），２．８７−２．７３（ｍ，２Ｈ），２．１１−１．９５（ｍ，４Ｈ），１．９１−１．７３（ｍ，４Ｈ），１．３４（ｄ，Ｊ＝６．１  Ｈｚ，３Ｈ）。
【００７５】
実施例６
７−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−（２，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−８−イルメチル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル
【化１６】
2021535219.tif 000018
【００７６】
表題化合物を、実施例１の調製と同様に、ｔｅｒｔ−ブチル２，７−ジアザスピロ［４．５］デカン−７−カルボキシレート（化合物１ｊ）の代わりにｔｅｒｔ−ブチル２，８−ジアザスピロ［４．５］デカン−２−カルボキシレート（ＰｈａｒｍａＢｌｏｃｋ、ＣＡＳ：３３６１９１−１７−４）を使用して調製した。実施例６（１１．１ｍｇ）を黄色固体として得た。ＭＳ：計算値４１２［（Ｍ＋Ｈ）＋］、測定値４１２［（Ｍ＋Ｈ）＋］。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭＥＴＨＡＮＯＬ−ｄ４）δ  ｐｐｍ：９．４１（ｓ，１Ｈ），７．９０（ｄ，Ｊ＝８．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｄ，Ｊ＝８．３  Ｈｚ，１Ｈ），４．２４−４．１５（ｍ，１Ｈ），４．０３−３．９３（ｍ，１Ｈ），３．７７−３．６８（ｍ，２Ｈ），３．４３（ｔ，Ｊ＝７．４  Ｈｚ，２Ｈ），３．１９（ｓ，２Ｈ），３．１４−２．９６（ｍ，６Ｈ），２．８３−２．６８（ｍ，２Ｈ），２．０２（ｔ，Ｊ＝７．４  Ｈｚ，２Ｈ），１．８８（ｔ，Ｊ＝５．３  Ｈｚ，４Ｈ），１．３１（ｄ，Ｊ＝６．１  Ｈｚ，３Ｈ）。
【００７７】
実施例７
７−［（２Ｒ，６Ｓ）−２−メチル−６−［［４−（１−ピペリジル）−１−ピペリジル］メチル］モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル
【化１７】
2021535219.tif 000019
【００７８】
表題化合物を、実施例１の調製と同様に、ｔｅｒｔ−ブチル２，７−ジアザスピロ［４．５］デカン−７−カルボキシレート（化合物１ｊ）の代わりに４−ピペリジノピペリジン（Ｔｉｔａｎ、ＣＡＳ：４８９７−５０−１）を使用して調製した。実施例７（１１．７９ｍｇ）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値４４０［（Ｍ＋Ｈ）＋］、測定値４４０［（Ｍ＋Ｈ）＋］。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭＥＴＨＡＮＯＬ−ｄ４）δ  ｐｐｍ：９．４１（ｓ，１Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝８．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝８．２  Ｈｚ，１Ｈ），４．４１（ｔ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，１Ｈ），４．１３−３．８２（ｍ，３Ｈ），３．８１−３．５３（ｍ，６Ｈ），３．５２−３．３４（ｍ，３Ｈ），３．１１（ｔ，Ｊ＝１０．９  Ｈｚ，２Ｈ），２．９１−２．７１（ｍ，２Ｈ），２．５４−２．２２（ｍ，４Ｈ），２．０６−１．８４（ｍ，５Ｈ），１．５１−１．６４（ｍ，１Ｈ），１．３４（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，３Ｈ）。
【００７９】
実施例８
エンド−７−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［（１Ｒ，５Ｓ）−３−アミノ−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−イル］メチル］−６−メチル−モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル
【化１８】
2021535219.tif 000020
【００８０】
表題化合物を、実施例１の調製と同様に、ｔｅｒｔ−ブチル２，７−ジアザスピロ［４．５］デカン−７−カルボキシレート（化合物１ｊ）の代わりにｔｅｒｔ−ブチルＮ−［エンド−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−３−イル］カーバメート（ＰｈａｒｍａＢｌｏｃｋ、ＣＡＳ：１３２２３４−６９−６）を使用して調製した。実施例８（８．３ｍｇ）を黄色固体として得た。ＭＳ：計算値３９８［（Ｍ＋Ｈ）＋］、測定値３９８［（Ｍ＋Ｈ）＋］。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭＥＴＨＡＮＯＬ−ｄ４）δ  ｐｐｍ：９．４０（ｓ，１Ｈ），７．８９（ｄ，Ｊ＝８．３  Ｈｚ，１Ｈ），７．１３（ｄ，Ｊ＝８．３  Ｈｚ，１Ｈ），４．１１−４．０１（ｍ，１Ｈ），４．００−３．９１（ｍ，１Ｈ），３．８８（ｄ，Ｊ＝１２．０  Ｈｚ，１Ｈ），３．７７（ｓ，１Ｈ），３．６９（ｄ，Ｊ＝１２．０  Ｈｚ，１Ｈ），３．６２（ｓ，１Ｈ），３．５５−３．５２（ｍ，１Ｈ），２．９２−２．８４（ｍ，１Ｈ），２．８１−２．７０（ｍ，３Ｈ），２．５９−２．５１（ｍ，２Ｈ），２．３７−２．２０（ｍ，２Ｈ），１．９８−１．８８（ｍ，２Ｈ），１．７４（ｔ，Ｊ＝１２．１  Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｄ，Ｊ＝６．３  Ｈｚ，３Ｈ）。
【００８１】
実施例９
エクソ−７−［（２Ｓ，６Ｒ）−２−［［（１Ｓ，５Ｒ）−３−アミノ−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−８−イル］メチル］−６−メチル−モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル
【化１９】
2021535219.tif 000021
【００８２】
表題化合物を、実施例１の調製と同様に、ｔｅｒｔ−ブチル２，７−ジアザスピロ［４．５］デカン−７−カルボキシレート（化合物１ｊ）の代わりにｔｅｒｔ−ブチルＮ−［エクソ−８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−３−イル］カーバメート（ＷｕＸｉ  Ａｐｐｔｅｃ、ＣＡＳ：１３２２３４−６８−５）を使用して調製した。実施例９（２１．２ｍｇ）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値３９８［（Ｍ＋Ｈ）＋］、測定値３９８［（Ｍ＋Ｈ）＋］。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭＥＴＨＡＮＯＬ−ｄ４）δ  ｐｐｍ：９．３９（ｓ，１Ｈ），７．８９（ｄ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．１３（ｄ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，１Ｈ），４．１５−４．０７（ｍ，１Ｈ），３．９６−３．９０（ｍ，１Ｈ），３．８７−３．７９（ｍ，２Ｈ），３．７３−３．６５（ｍ，２Ｈ），３．５５−３．４５（ｍ，１Ｈ），２．９５−２．９０（ｍ，１Ｈ），３．８５−３．７０（ｍ，３Ｈ），２．２５−２．１３（ｍ，２Ｈ），１．９９−１．９２（ｍ，４Ｈ），１．８６−１．７５（ｍ，２Ｈ），１．２８（ｄ，Ｊ＝６．０  Ｈｚ，３Ｈ）。
【００８３】
実施例１０
７−［（２Ｒ，６Ｓ）−２−メチル−６−［（２−メチル−２，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−９−イル）メチル］モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル
【化２０】
2021535219.tif 000022
【００８４】
標題化合物を、以下のスキームに従って調製した：
【化２１】
2021535219.tif 000023
【００８５】
ステップ１：ｔｅｒｔ−ブチル２−メチル−２，９−ジアザスピロ［５，５］ウンデカン−９−カルボキシレート（化合物１０ｂ）の調製
【００８６】
ｔｅｒｔ−ブチル２，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン−９−カルボキシレート（化合物１０ａ、ＰｈａｒｍａＢｌｏｃｋ、ＣＡＳ：１０２３５９５−１９−８、０．１５ｇ、０．５９ｍｍｏｌ）のメタノール（６ｍＬ）中溶液にホルムアルデヒド（０．４ｇ、４．９ｍｍｏｌ、３７％）及びＰｄ／Ｃ（２０．０ｍｇ、１０％）を添加した。この反応混合物をＨ２（１気圧）下、２５℃で１８時間撹拌した。混合物をフィルタにかけ、濾液を真空下で濃縮して、化合物１０ｂ（０．１５ｇ、０．５６ｍｍｏｌ、収率９５％）を無色のゴム状物質として得た。
【００８７】
ステップ２：２−メチル−２，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン（化合物１０ｃ）の調製
【００８８】
ｔｅｒｔ−ブチル２−メチル−２，９−ジアザスピロ［５，５］ウンデカン−９−カルボキシレート（化合物１０ｂ、０．１５ｇ、０．５６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２ｍＬ）中溶液に、トリフルオロ酢酸（０．６８ｍＬ、８．８ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を２０℃で１時間撹拌した後、真空下で溶媒を除去し、残留物をＡＣＮ／ＤＣＭ（１０ｍＬ、１：１）に再溶解した。得られた溶液を固体ＮａＨＣＯ３でｐＨ＝８に塩基性化し、沈殿剤を濾別した。濾液を真空下で濃縮して、所望の生成物である化合物１０ｃ（１００ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ、粗収率約１００％）を黄色の油状物質として得、これを精製せずに次のステップで使用した。
【００８９】
ステップ３：（５−フルオロ−２−ヨード−フェニル）チオ尿素（化合物１０ｅ）の調製
【００９０】
５−フルオロ−２−ヨードアニリン（化合物１０ｄ、２０．０ｇ、８４．４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３７５ｍＬ）中溶液に、イソチオシアン酸ベンゾイル（ＣＡＳ：５３２−５５−８、２７．０ｇ、１６８．８ｍｍｏｌ）を１０〜２０℃で添加した。反応混合物を２０℃で１６時間加熱した後、溶媒を真空下で除去し、続いてＥｔＯＨ（８０ｍＬ）を添加した。沈殿物をフィルタにかけることにより収集し、風乾して中間体（３４．０ｇ）を得た。中間体をメタノール（４３０ｍＬ）に再溶解し、炭酸カリウム（３５．０ｇ）の水（５０ｍＬ）溶液を加えた。反応混合物を７０℃で４時間撹拌し、次いで室温に冷却し、溶媒を真空下で除去し、そして残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィによって精製して、所望の生成物である化合物１０ｅ（１９．０ｇ、６４．２ｍｍｏｌ、収率７６％）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値２９７［（Ｍ＋Ｈ）＋］、測定値２９７［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００９１】
ステップ４：７−フルオロ−４−ヨード−１，３−ベンゾチアゾール−２−アミン（化合物１０ｆ）の調製
【００９２】
（５−フルオロ−２−ヨード−フェニル）チオ尿素（化合物１０ｅ、２０．０ｇ、６７．５ｍｍｏｌ）のクロロホルム（３６０ｍＬ）中溶液に、臭素（３．５ｍＬ、６７．５ｍｍｏｌ）を１０℃で添加した。反応混合物を８０℃で４時間撹拌し、次いで室温においてＭｅＯＨ（５０ｍＬ）で希釈し、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３（飽和、１００ｍＬ）及びＮａＨＣＯ３（飽和、１００ｍＬ）を添加した。有機層を分離し、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１）によって精製して、所望の生成物である化合物１０ｆ（６．７ｇ、２２．８ｍｍｏｌ、収率３３％）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値２９５［（Ｍ＋Ｈ）＋］、測定値２９５［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００９３】
ステップ５：７−フルオロ−４−ヨード−１，３−ベンゾチアゾール（化合物１０ｇ）の調製
【００９４】
７−フルオロ−４−ヨード−１，３−ベンゾチアゾール−２−アミン（化合物１０ｆ、４．０ｇ、１３．６ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（８４ｍＬ）中溶液に、亜硝酸ｔｅｒｔ−ブチル（２．８ｇ、２７．２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を８０℃で１８時間加熱した後、溶媒を真空下で除去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１）により精製して、所望の生成物である化合物１０ｇ（３．５ｇ、１２．５ｍｍｏｌ、収率９２％）を黄色固体として得た。ＭＳ：計算値２８０［（Ｍ＋Ｈ）＋］、測定値２８０［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００９５】
ステップ６：７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル（化合物１０ｈ）の調製
【００９６】
７−フルオロ−４−ヨード−１，３−ベンゾチアゾール（化合物１０ｇ、４．４ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）のＤＭＡ（１５６ｍＬ）中溶液に、シアン化亜鉛（２．７ｇ、２３．６ｍｍｏｌ）及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．６６ｇ、０．５７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１００℃で１８時間撹拌し、次いで室温に冷却した後、水（１００ｍＬ）を加え、得られた混合物をＥＡ（１００ｍＬ）で抽出した。有機層を合せて、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、フィルタにかけて濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ＰＥ：ＥＡ＝２０：１〜１０：１）で精製して、所望の生成物である化合物１０ｈ（２．３ｇ、１２．９ｍｍｏｌ、収率８１％）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値１７９［（Ｍ＋Ｈ）＋］、測定値１７９［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００９７】
ステップ７：７−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−（ヒドロキシメチル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル（化合物１０ｊ）の調製
【００９８】
［（２Ｒ，６Ｒ）−６−メチルモルホリン−２−イル］メタノール（化合物１ｇ、ＷｕＸｉ  Ａｐｐｔｅｃ、ＣＡＳ：１７００６０９−４８−８、３１１．８ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）中溶液にＨＣｌ（５ｍＬ、ＭｅＯＨ中１０％）を室温で加えた。この反応混合物を室温で２時間撹拌した後、溶媒を真空下で除去し、残留物をＤＭＡ（３ｍＬ）中に溶解した。得られた溶液に、７−フルオロ−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル（化合物１０ｈ、０．２ｇ、１．１ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．６ｍＬ、３．４ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を１３０℃で１８時間撹拌し、次いで室温に冷却した後、水（１５ｍＬ）を加え、得られた混合物をＥＡ（２×１０ｍＬ）で抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ＰＥ：ＥＡ＝５：１）で精製して、所望の生成物である化合物１０ｊ（０．３ｇ、１．０ｍｍｏｌ、収率９２％）を黄色固体として得た。ＭＳ：計算値２９０［（Ｍ＋Ｈ）＋］、測定値２９０［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００９９】
ステップ８：［（２Ｒ，６Ｒ）−４−（４−シアノ−１，３−ベンゾチアゾール−７−イル）−６−メチル−モルホリン−２−イル］メチルトリフルオロメタンスルホネート（化合物１０ｋ）の調製
【０１００】
７−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−（ヒドロキシメチル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル（化合物１０ｊ、２５．０ｍｇ、０．０９０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１．３ｍＬ）中溶液に、２，６−ジメチルピリジン（３７．０ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）及び無水トリフルオロメタンスルホン酸（４８．７ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を添加した。０℃で１時間撹拌した後、この反応物を氷水（１０ｍＬ）に加え、ＤＣＭ（１０ｍＬ）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、フィルタにかけ、濃縮して、化合物１０ｋ（３６．０ｍｇ、０．０９０ｍｍｏｌ、収率９８％）を黄色のゴム状物質として得、これをさらに精製することなく、次のステップに使用した。
【０１０１】
ステップ７：７−［（２Ｒ，６Ｓ）−２−メチル−６−［（２−メチル−２，９−ジアザスピロ［５，５］ウンデカン−９−イル］メチル］モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル（実施例１０）の調製
【０１０２】
［（２Ｒ，６Ｒ）−４−（４−シアノ−１，３−ベンゾチアゾール−７−イル）−６−メチル−モルホリン−２−イル］メチルトリフルオロメタンスルホネート（化合物１０ｋ、３６．０  ｍｇ、０．０９０ｍｍｏｌ）のＡＣＮ（２．２ｍＬ）中溶液に、２−メチル−２，９−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン（化合物１０ｃ、１８．７ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（２３．６ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を５５℃で４時間撹拌し、次いで室温に冷却した後、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）を該混合物に添加した。有機層を分離し、水（１０ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮した。粗生成物を分取ＨＰＬＣによりさらに精製して、実施例１０（６．７ｍｇ、０．０１０ｍｍｏｌ、収率１５．１％）を白色のゴム状物質として得た。ＭＳ：計算値４４０［（Ｍ＋Ｈ）＋］、測定値４４０［（Ｍ＋Ｈ）＋］。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭＥＴＨＡＮＯＬ−ｄ４）δ  ｐｐｍ：９．４１（ｓ，１Ｈ），７．９０（ｄ，Ｊ＝８．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｄ，Ｊ＝８．３  Ｈｚ，１Ｈ），４．１９（ｓ，１Ｈ），４．０３−３．９４（ｍ，１Ｈ），３．７３（ｄ，Ｊ＝１１．９  Ｈｚ，２Ｈ），３．２５−２．８８（ｍ，１０Ｈ），２．８３−２．６８（ｍ，５Ｈ），１．９１−１．５８（ｍ，８Ｈ），１．３１（ｄ，Ｊ＝６．１  Ｈｚ，３Ｈ）。
【０１０３】
実施例１１
（２Ｒ，６Ｒ）−４−（４−シアノ−１，３−ベンゾチアゾール−７−イル）−６−メチル−Ｎ−（１−メチル−４−ピペリジル）モルホリン−２−カルボキサミド
【化２２】
2021535219.tif 000024
【０１０４】
標題化合物を、以下のスキームに従って調製した：
【化２３】
2021535219.tif 000025
【０１０５】
ステップ１：（２Ｒ，６Ｒ）−４−（４−シアノ−１，３−ベンゾチアゾール−７−イル）−６−メチル−モルホリン−２−カルボン酸（化合物１１ｂ）の調製
【０１０６】
７−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−（ヒドロキシメチル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］−１，３−ベンゾチアゾール−４−カルボニトリル（化合物１１ａ、２０．０ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１．０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（０．５ｍＬ）中溶液に、過酸化ベンゾイル（４５．０  ｍｇ、０．１４  ｍｍｏｌ）及びＴＥＭＰＯ（２．１  ｍｇ、０．０１４  ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２０℃で１８時間撹拌した後、該混合物のｐＨをＨＣｌ（１Ｍ）の添加により３に調整した。得られた混合物をＥＡ（２０ｍＬ）で抽出し、水相をＮａＨＣＯ３水溶液で塩基性化し、ＥＡ（２×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を真空下で濃縮して、化合物１１ｂ（１５．０ｍｇ、粗製）を無色の油状物質として得た。ＭＳ：計算値３０４［（Ｍ＋Ｈ）＋］、測定値３０４［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【０１０７】
ステップ２：（２Ｒ，６Ｒ）−４−（４−シアノ−１，３−ベンゾチアゾール−７−イル）−６−メチル−Ｎ−（１−メチル−４−ピペリジル）モルホリン−２−カルボキサミド（実施例１１）
【０１０８】
（２Ｒ，６Ｒ）−４−（４−シアノ−１，３−ベンゾチアゾール−７−イル）−６−メチル−モルホリン−２−カルボン酸（化合物１１ｂ、１５．０ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．０ｍＬ）中溶液に、Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２０．０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（２８．０ｍｇ、０．０７５ｍｍｏｌ）、及び１−メチルピペリジン−４−アミン（化合物１１ｃ、ＷｕＸｉ  Ａｐｐｔｅｃ、４１８３８−４６−４、８ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２５℃で２時間撹拌した後、該混合物をＥＡ（３０ｍＬ）で希釈し、ブライン（２×２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空下で濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣ（ＦＡ）によって精製して、実施例１１（３．２ｍｇ、１６％）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値４００［（Ｍ＋Ｈ）＋］、測定値４００［（Ｍ＋Ｈ）＋］。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭＥＴＨＡＮＯＬ−ｄ４）δ  ｐｐｍ：９．４２（ｓ，１Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝８．３  Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｄ，Ｊ＝８．２  Ｈｚ，１Ｈ），４．３４（ｄｄ，Ｊ＝２．６，１０．８  Ｈｚ，１Ｈ），４．０８−３．９８（ｍ，３Ｈ），３．７１（ｄ，Ｊ＝１２．３  Ｈｚ，１Ｈ），３．５０（ｄ，Ｊ＝１１．２  Ｈｚ，２Ｈ），３．１２（ｔ，Ｊ＝１１．２  Ｈｚ，２Ｈ），２．９２−２．８４（ｍ，４Ｈ），２．８２−２．７２（ｍ，１Ｈ），２．１２（ｓ，２Ｈ），１．９９−１．８５（ｍ，２Ｈ），１．３８（ｄ，Ｊ＝６．３  Ｈｚ，３Ｈ）。
【０１０９】
実施例１２
（２Ｒ，６Ｒ）−４−（４−シアノ−１，３−ベンゾチアゾール−７−イル）−６−メチル−Ｎ−［（４−メチルモルホリン−２−イル）メチル］モルホリン−２−カルボキサミド
【化２４】
2021535219.tif 000026
【０１１０】
表題化合物を、実施例１１の調製と同様に、１−メチルピペリジン−４−アミン（化合物１１ｃ）の代わりに、（４−メチルモルホリン−２−イル）メタンアミン（Ｂｉｄｅ、ＣＡＳ：１４１８１４−５７−５）を使用して調製した。実施例１２（１１．９ｍｇ、２３％）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値４１６［（Ｍ＋Ｈ）＋］、測定値４１６［（Ｍ＋Ｈ）＋］。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭＥＴＨＡＮＯＬ−ｄ４）δ  ｐｐｍ：９．４３（ｓ，１Ｈ），７．９２（ｄ，Ｊ＝８．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．１７（ｄ，Ｊ＝８．３  Ｈｚ，１Ｈ），４．４０−４．３３（ｍ，１Ｈ），４．１３−３．９８（ｍ，３Ｈ），３．８２−３．６８（ｍ，３Ｈ），３．５１−３．３８（ｍ，３Ｈ），３．３１−３．１６（ｍ，２Ｈ），２．９１−２．７８（ｍ，３Ｈ），２．７６（ｓ，３Ｈ），１．３８（ｄ，Ｊ＝６．４  Ｈｚ，３Ｈ）。
【０１１１】
実施例１３
以下の試験を、ＨＥＫ２９３−Ｂｌｕｅ−ｈＴＬＲ−７／８／９細胞アッセイにおいて式（Ｉ）の化合物の活性を測定するために行った。
【０１１２】
ＨＥＫ２９３−Ｂｌｕｅ−ｈＴＬＲ−７細胞アッセイ：
安定したＨＥＫ２９３−Ｂｌｕｅ−ｈＴＬＲ−７細胞株を、ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ（カタログ番号：ｈｋｂ−ｈｔｌｒ７、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳＡ）から購入した。これらの細胞はもともと、ＮＦ−κＢの活性化をモニタリングすることによってヒトＴＬＲ７の刺激を研究するために設計された。ＳＥＡＰ（分泌型胎児アルカリホスファターゼ）レポータ遺伝子を、５つのＮＦ−κＢ及びＡＰ−１結合部位に融合したＩＦＮ−β最小プロモータの制御下に置いた。ＳＥＡＰは、ＴＬＲ７リガンドでＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  ｈＴＬＲ７細胞を刺激して、ＮＦ−κＢ及びＡＰ−１を活性化することによって誘導した。したがって、レポータの発現は、Ｒ８４８（Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）などのリガンドの刺激下で２０時間インキュベーションすることで、ＴＬＲ７アンタゴニストによって低下された。細胞培養上清のＳＥＡＰレポータ活性を、ＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅ（商標）キット（カタログ番号：ｒｅｐ−ｑｂ１、Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａ、ＵＳＡ）を使用して、波長６４０  ｎｍにおいて測定した。検出媒体は、アルカリホスファターゼの存在下で紫色又は青色に変わる。
【０１１３】
ＨＥＫ２９３−Ｂｌｕｅ−ｈＴＬＲ７細胞を、４．５ｇ／Ｌグルコース、５０Ｕ／ｍＬペニシリン、５０ｍｇ／ｍＬストレプトマイシン、１００ｍｇ／ｍＬノルモシン、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１０％（ｖ／ｖ）熱不活化ウシ胎児血清を含み、段階希釈した２０μＬの試験化合物を加えたダルベッコ変法イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  ｍｅｄｉｕｍ：ＤＭＥＭ）で、上記ＤＭＥＭ中最終１％のＤＭＳＯ及び１０μＬの２０ｕＭ  Ｒ８４８の存在下で９６ウェルプレートにおいて、１７０μＬの体積で密度２５０，０００〜４５０，０００細胞／ｍＬにてインキュベートし、インキュベーションはＣＯ２インキュベータ内で３７℃において２０時間行った。次に、各ウェルの上清２０μＬを１８０μＬのＱｕａｎｔｉ−ｂｌｕｅ基質溶液と共に３７℃で２時間インキュベートし、分光光度計を使用して６２０〜６５５ｎｍで吸光度を読み取った。ＴＬＲ７の活性化が下流のＮＦ−κＢの活性化につながるシグナル伝達経路は広く認められているので、ＴＬＲ７アンタゴニストを評価するために同様のレポータアッセイを改良した。
【０１１４】
ＨＥＫ２９３−Ｂｌｕｅ−ｈＴＬＲ−８細胞アッセイ：
安定したＨＥＫ２９３−Ｂｌｕｅ−ｈＴＬＲ−８細胞株を、ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ（カタログ番号：ｈｋｂ−ｈｔｌｒ８、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳＡ）から購入した。これらの細胞はもともと、ＮＦ−κＢの活性化をモニタリングすることによってヒトＴＬＲ８の刺激を研究するために設計された。ＳＥＡＰ（分泌型胎児アルカリホスファターゼ）レポータ遺伝子を、５つのＮＦ−κＢ及びＡＰ−１結合部位に融合したＩＦＮ−β最小プロモータの制御下に置いた。ＳＥＡＰは、ＴＬＲ８リガンドでＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  ｈＴＬＲ８細胞を刺激して、ＮＦ−κＢ及びＡＰ−１を活性化することによって誘導した。したがって、レポータの発現は、Ｒ８４８などのリガンドの刺激下で２０時間インキュベーションすることで、ＴＬＲ８アンタゴニストによって低下された。細胞培養上清のＳＥＡＰレポータ活性を、ＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅ（商標）キット（カタログ番号：ｒｅｐ−ｑｂ１、Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａ、ＵＳＡ）を使用して、波長６４０ｎｍにおいて測定した。検出媒体は、アルカリホスファターゼの存在下で紫色又は青色に変わる。
【０１１５】
ＨＥＫ２９３−Ｂｌｕｅ−ｈＴＬＲ８細胞を、４．５ｇ／Ｌグルコース、５０Ｕ／ｍＬペニシリン、５０ｍｇ／ｍＬストレプトマイシン、１００ｍｇ／ｍＬノルモシン、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１０％（ｖ／ｖ）熱不活化ウシ胎児血清を含み、段階希釈した２０μＬの試験化合物を加えたダルベッコ変法イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  ｍｅｄｉｕｍ：ＤＭＥＭ）で、上記ＤＭＥＭ中最終１％のＤＭＳＯ及び１０μＬの６０ｕＭ  Ｒ８４８の存在下で９６ウェルプレートにおいて、１７０μＬの体積で密度２５０，０００〜４５０，０００細胞／ｍＬにてインキュベートし、インキュベーションはＣＯ２インキュベータ内で３７℃において２０時間行った。次に、各ウェルの上清２０μＬを１８０μＬのＱｕａｎｔｉ−ｂｌｕｅ基質溶液と共に３７℃で２時間インキュベートし、分光光度計を使用して６２０〜６５５ｎｍで吸光度を読み取った。ＴＬＲ８の活性化が下流のＮＦ−κＢの活性化につながるシグナル伝達経路は広く認められているので、ＴＬＲ８アンタゴニストを評価するために同様のレポータアッセイを改良した。
【０１１６】
ＨＥＫ２９３−Ｂｌｕｅ−ｈＴＬＲ−９細胞アッセイ：
安定したＨＥＫ２９３−Ｂｌｕｅ−ｈＴＬＲ−９細胞株を、ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ（カタログ番号：ｈｋｂ−ｈｔｌｒ９、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳＡ）から購入した。これらの細胞はもともと、ＮＦ−κＢの活性化をモニタリングすることによってヒトＴＬＲ９の刺激を研究するために設計された。ＳＥＡＰ（分泌型胎児アルカリホスファターゼ）レポータ遺伝子を、５つのＮＦ−κＢ及びＡＰ−１結合部位に融合したＩＦＮ−β最小プロモータの制御下に置いた。ＳＥＡＰは、ＴＬＲ９リガンドでＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  ｈＴＬＲ９細胞を刺激して、ＮＦ−κＢ及びＡＰ−１を活性化することによって誘導した。したがって、レポータの発現は、ＯＤＮ２００６（カタログ番号：ｔｌｒｌ−２００６−１、Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳＡ）などのリガンドの刺激下で２０時間のインキュベーションすることで、ＴＬＲ９アンタゴニストによって低下された。細胞培養上清のＳＥＡＰレポータ活性を、ＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅ（商標）キット（カタログ番号：ｒｅｐ−ｑｂ１、Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳＡ）を使用して、波長６４０  ｎｍにおいて測定した。検出媒体は、アルカリホスファターゼの存在下で紫色又は青色に変わる。
【０１１７】
ＨＥＫ２９３−Ｂｌｕｅ−ｈＴＬＲ９細胞を、４．５ｇ／Ｌグルコース、５０Ｕ／ｍＬペニシリン、５０ｍｇ／ｍＬストレプトマイシン、１００ｍｇ／ｍＬノルモシン、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１０％（ｖ／ｖ）熱不活化ウシ胎児血清を含み、段階希釈した２０μＬの試験化合物を加えたダルベッコ変法イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  ｍｅｄｉｕｍ：ＤＭＥＭ）で、上記ＤＭＥＭ中最終１％のＤＭＳＯ及び１０μＬの２０ｕＭ  ＯＤＮ２００６の存在下で９６ウェルプレートにおいて、１７０μＬの体積で密度２５０，０００〜４５０，０００細胞／ｍＬにてインキュベートし、インキュベーションはＣＯ２インキュベータ内で３７℃において２０時間行った。次に、各ウェルの上清２０μＬを１８０μＬのＱｕａｎｔｉ−ｂｌｕｅ基質溶液と共に３７℃で２時間インキュベートし、分光光度計を使用して６２０〜６５５ｎｍで吸光度を読み取った。ＴＬＲ９の活性化が下流のＮＦ−κＢの活性化につながるシグナル伝達経路は広く認められているので、ＴＬＲ９アンタゴニストを評価するために同様のレポータアッセイを改良した。
【０１１８】
式（Ｉ）の化合物は、ヒトＴＬＲ７及び／又はＴＬＲ８阻害活性（ＩＣ５０値）が０．５μＭ未満、詳細には０．０２０μＭ未満である。その上、いくつかの化合物はまた、ヒトＴＬＲ９阻害活性が１μＭ未満、詳細には０．２μＭ未満である。本発明の化合物の活性データを表１に示した。
【表１】
2021535219.tif 000027
【国際調査報告】
2021535219.tif 000034
2021535219.tif 000035
2021535219.tif 000036