(57)【要約】  本発明は、治療有効用量のクロファジミンを含む吸入用医薬組成物であって、クロファジミンは懸濁物の形態で提供される、吸入用医薬組成物と、それを調製するためのプロセスと、に関する。更に本発明は、経肺吸入用エアロゾルの形態にあるクロファジミンを含む組合せ医薬を提供する。本発明により提供される組合せ及び組成物は、マイコバクテリア及び他のグラム陽性細菌により引き起こされる肺感染症並びに肺真菌感染症の治療及び／又は予防に使用することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
医薬組成物であって：
（ａ）治療有効用量のクロファジミン又はその医薬的に許容される誘導体若しくは塩と；
（ｂ）親水性−親油性バランス値が１０を超える非イオン性界面活性剤と；
（ｃ）水、等張生理食塩水、緩衝生理食塩水、及び電解質水溶液から選択される水性液体担体と；
を含み、
前記クロファジミン又はその医薬的に許容される誘導体若しくは塩は、懸濁物中の粒子の形態で提供され、
且つ
クロファジミン又はその医薬的に許容される誘導体若しくは塩の前記粒子は、中央径が５μｍ未満であり、且つＤ９０が６μｍ未満である、医薬組成物。
【請求項２】
クロファジミン又はその医薬的に許容される誘導体若しくは塩の前記粒子は、平均径が２μｍ未満であり、且つＤ９０が３μｍ未満である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
医薬組成物であって：
（ａ）治療有効用量のクロファジミンと；
（ｂ）親水性−親油性バランス値が１０を超える非イオン性界面活性剤と；
（ｃ）水、等張生理食塩水、緩衝生理食塩水、及び電解質水溶液から選択される水性液体担体と；
を含み、
前記クロファジミンは、懸濁物中の粒子の形態で提供され、
且つ
クロファジミンの前記粒子は、中央径が５μｍ未満であり、且つＤ９０が６μｍ未満である、医薬組成物。
【請求項４】
前記粒子は、中央径が２μｍ未満であり、且つＤ９０が３μｍ未満である、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記クロファジミンは、三斜晶系ＦＩ型、単斜晶系ＦＩＩ型、及び斜方晶系ＦＩＩＩ型、並びにこの種の型の混合物から選択される１種又は複数種の多形で提供される、請求項３又は４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記クロファジミンは、実質的に斜方晶系ＦＩＩＩ型で提供される、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０、ステアリルアルコール、親水性−親油性バランス値が１４〜１６である水添ヒマシ油のポリエチレングリコール誘導体、親水性−親油性バランス値が１５〜１７である水添ヒマシ油のポリエチレングリコール誘導体、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノステアレート、ポリオキシエチレン（２０）オレイルエーテル、ポリオキシエチレン（２０）セチルエーテル、ポリオキシエチレン（１０）セチルエーテル、ポリオキシエチレン（１０）オレイルエーテル、ポリオキシエチレン（１００）ステアリルエーテル、ポリオキシエチレン（１０）ステアリルエーテル、ポリオキシエチレン（２０）ステアリルエーテル、ポリオキシエチレン（４）ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン（２０）セチルエーテル、ポリオキシエチレン（２）セチルエーテル、カプリロカプロイルポリオキシル−８グリセリド、ポリエチレングリコール（２０）モノステアレート、ポリエチレングリコール（４０）ステアレート、ポリエチレングリコール（１００）ステアレート、ポリエチレングリコール（８）ステアレート、及びポリオキシル４０ステアレート、並びにこれらの混合物から選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート８０であり、且つ
前記水性液体担体は、蒸留水、高張生理食塩水、又は等張生理食塩水である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記高張生理食塩水は、１％〜７％（ｗ／ｖ）塩化ナトリウムである、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記非イオン性界面活性剤は、超高純度ポリソルベート８０であり、前記水性液体担体は、等張生理食塩水である、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記組成物の重量オスモル濃度は、２００〜７００ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲にある、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記組成物の重量オスモル濃度は、３００〜４００ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲にある、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記非イオン性界面活性剤は、組成物全体の０．００１％〜５％（ｖ／ｖ）の範囲にあり、且つ
クロファジミンの量は、組成物全体の０．１％〜２０％（ｗ／ｖ）の範囲にある、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
次に示すステップ：
（１）クロファジミン、前記非イオン性界面活性剤、及び水の懸濁物を、適切な粒径のクロファジミンを含む懸濁物を得るために均質化するステップと、
（２）（１）から得られた前記懸濁物のｐＨを、ｐＨ５．５〜ｐＨ７．５の間のｐＨに調整するステップと、
（３）塩化ナトリウムの濃度を適切な濃度に調整するステップと、
（４）重量オスモル濃度を適切な水準に調整するステップと、
を含むプロセスにより調製される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
次に示すステップ：
（１）クロファジミン及び非水性液体の懸濁物を、適切な粒径のクロファジミンを含む懸濁物を得るために均質化するステップと、
（２）前記クロファジミンを単離するステップと、
（３）前記クロファジミンを、前記非イオン性界面活性剤及び水に添加するステップと、
（４）（３）から得られた懸濁物のｐＨを、ｐＨ５．５〜ｐＨ７．５の間のｐＨに調整するステップと、
（５）塩化ナトリウム濃度を適切な濃度に調整するステップと、
を含むプロセスにより調製される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
次に示すステップ：
（１）クロファジミンを、適切な粒径のクロファジミンを得るために微粉化するステップと、
（２）前記クロファジミンを前記非イオン性界面活性剤及び水に添加するステップと、
（３）（２）から得られた懸濁物のｐＨをｐＨ５．５〜ｐＨ７．５の間のｐＨに調整するステップと、
（４）塩化ナトリウム濃度を適切な濃度に調整するステップと、
を含むプロセスにより調製される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記非イオン性界面活性剤、適切な濃度の塩化ナトリウムを含み、ｐＨ５．５〜ｐＨ７．５の間のｐＨに調整された水中にクロファジミンを懸濁させた懸濁物を、適切な粒径のクロファジミンを得るために均質化することを含むプロセスにより調製される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記ｐＨは７．４に調整され、前記塩化ナトリウム濃度は１５４ｍＭ塩化ナトリウムに調整される、請求項１４、１５、又は１６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記ｐＨは７．４であり、前記塩化ナトリウムの適切な濃度は１５４ｍＭ塩化ナトリウムである、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記クロファジミンの前記微粉化は、ジェットミル粉砕、噴霧乾燥、ボールミル粉砕、又は超臨界流体処理により行われる、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
ステップ（１）の前記均質化は、高圧均質化、高剪断均質化、湿式粉砕、超音波均質化、又はこの種の処理の組合せにより行われる、請求項１４、１５、１７、又は１９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
クロファジミンの前記均質化は、多段階の均質化により行われる、請求項１４、１５、１７、１８、１９、又は２１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
クロファジミンの前記微粉化は、多段階の微粉化により行われる、請求項１６又は２０に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
前記適切な粒径の前記クロファジミンは、平均径が５μｍ未満であり、且つＤ９０が６μｍ未満の粒子である、請求項１４〜２３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
前記適切な粒径の前記クロファジミンは、平均径が２μｍ未満であり、且つＤ９０が３μｍ未満の粒子である、請求項１４〜２３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
請求項１〜２５のいずれか一項に記載の組成物を、超音波ネブライザー、帯電噴霧式ネブライザー、振動膜ネブライザー、ジェット式ネブライザー、及び機械式ソフトミスト定量吸入器から選択される噴霧器具によってエアロゾル化することにより調製される、吸入用エアロゾルの形態にある組合せ医薬であって、
前記噴霧器具により生成する前記エアロゾルの粒子の空気動力学的質量中央径は１〜５μｍである、組合せ医薬。
【請求項２７】
吸入用前記エアロゾルは、下部呼吸器系に沈着させるためのものである、請求項２６に記載の組合せ医薬。
【請求項２８】
噴霧化された４〜７％高張生理食塩水、メタ過ヨウ素酸塩、ドデシル硫酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、トロメタミン、銀ナノ粒子、ビスマス−チオール、エチレンジアミン四酢酸、ゲンタマイシン担持ホスファチジルコリン修飾金ナノ粒子、キレート剤、シス−２−デセン酸、Ｄ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸残基を含むペプチド、ガリウムメソポルフィリンＩＸ、ガリウムプロトポルフィリンＩＸ、クルクミン、パツリン、ペニシリン酸、バイカレイン、ナリンゲニン、ウルソール酸、アシアチン酸、コロソリン酸、脂肪酸、宿主防御ペプチド、及び抗微生物ペプチドから選択される、バイオフィルムを分散及び／若しくは破壊するための剤、粘液溶解剤及び／若しくは粘液活性剤、並びに／又はバイオフィルム形成を低減する剤と組み合わせて使用するための、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
噴霧化された４〜７％高張生理食塩水、メタ過ヨウ素酸塩、ドデシル硫酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、トロメタミン、銀ナノ粒子、ビスマス−チオール、エチレンジアミン四酢酸、ゲンタマイシン担持ホスファチジルコリン修飾金ナノ粒子、キレート剤、シス−２−デセン酸、Ｄ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸残基を含むペプチド、ガリウムメソポルフィリンＩＸ、ガリウムプロトポルフィリンＩＸ、クルクミン、パツリン、ペニシリン酸、バイカレイン、ナリンゲニン、ウルソール酸、アシアチン酸、コロソリン酸、脂肪酸、宿主防御ペプチド、及び抗微生物ペプチドから選択される、バイオフィルムを分散及び／若しくは破壊するための剤、粘液溶解剤及び／若しくは粘液活性剤、並びに／又はバイオフィルム形成を低減する剤と組み合わせて使用するための、請求項２６又は２７に記載の組合せ医薬。
【請求項３０】
マイコバクテリア又は他のグラム陽性細菌により引き起こされる肺感染症の治療及び／又は予防に使用するための、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
マイコバクテリア又は他のグラム陽性細菌により引き起こされる肺感染症の治療及び／又は予防に使用するための、請求項２６又は２７に記載の組合せ医薬。
【請求項３２】
前記感染症は、非結核性抗酸菌及び結核菌（マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ））群並びにこれらの組合せから選択される、マイコバクテリウム属（ｇｅｎｕｓ  ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）に属する菌種により引き起こされる、請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
前記感染症は、非結核性抗酸菌及び結核菌（マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ））群並びにこれらの組合せから選択される、マイコバクテリウム属（ｇｅｎｕｓ  ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）に属する菌種により引き起こされる、請求項３１に記載の使用のための組合せ医薬。
【請求項３４】
前記非結核性抗酸菌は、マイコバクテリウム・アビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ）、マイコバクテリウム・イントラセルラーレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、マイコバクテリウム・アブセッサス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ）、及びライ菌（マイコバクテリウム・レプラエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ））、並びにこれらの組合せから選択される、請求項３２に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項３５】
前記非結核性抗酸菌は、マイコバクテリウム・アビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ）、マイコバクテリウム・イントラセルラーレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、マイコバクテリウム・アブセッサス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ）、及びライ菌（マイコバクテリウム・レプラエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ））、並びにこれらの組合せから選択される、請求項３３に記載の使用のための組合せ医薬。
【請求項３６】
前記感染症は、嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺、又は後天性免疫不全症候群の患者における肺ＭＡＣ症及び非結核性抗酸菌症から選択される日和見感染症である、請求項３２に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項３７】
前記感染症は、嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺、又は後天性免疫不全症候群の患者における肺ＭＡＣ症及び非結核性抗酸菌症から選択される日和見感染症である、請求項３３に記載の使用のための組合せ医薬。
【請求項３８】
前記感染症は、嚢胞性線維症の患者における非結核性抗酸菌の日和見感染症である、請求項３６に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項３９】
前記感染症は、嚢胞性線維症の患者における非結核性抗酸菌の日和見感染症である、請求項３７に記載の組合せ医薬。
【請求項４０】
マイコバクテリア又は他のグラム陽性細菌により引き起こされる肺感染症を治療又は予防する際の抗菌活性の付与に使用するための系であって、前記系は：
１）
（ａ）治療有効用量のクロファジミンと；
（ｂ）親水性−親油性バランス値が１０を超える非イオン性界面活性剤と；
（ｃ）水、等張生理食塩水、緩衝生理食塩水、及び電解質水溶液から選択される水性液体担体と、
を含む噴霧化された組合せ医薬と、
２）噴霧器と、
を含み、
前記クロファジミンは懸濁物の形態で存在し、
且つ
前記系により生成するエアロゾル粒子は空気動力学的質量中央径が１〜５μｍである、系。
【請求項４１】
前記噴霧器具は、噴出速度が０．１〜１．０ｍｌ／ｍｉｎである、請求項２８〜３９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４２】
総吸入体積は１ｍｌ〜５ｍｌの間にある、請求項２８〜３９、又は４１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４３】
前記組成物は、ベダキリン又はその医薬的に許容される塩若しくは誘導体、セフォキシチン（ｃｅｆｏｘｉｔｉｎｅ）、アミカシン、クラリスロマイシン、ピラジンアミド、リファムピン、モキシフロキサシン、レボフロキサシン、及びパラ−アミノサリチレート、並びにこれらの混合物から選択される剤を投与する前、同時、又は後に投与される、請求項２８、３０、３２、３４、３６、又は３８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４４】
前記組合せは、ベダキリン又はその医薬的に許容される塩若しくは誘導体、セフォキシチン（ｃｅｆｏｘｉｔｉｎｅ）、アミカシン、クラリスロマイシン、ピラジンアミド、リファムピン、モキシフロキサシン、レボフロキサシン、及びパラ−アミノサリチレート、並びにこれらの混合物から選択される剤を投与する前、同時、又は後に投与される、請求項２９、３１、３３、３５、３７、又は３９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４５】
肺真菌感染症若しくはクロストリジウム・ディフィシル又はこれらの組合せの治療及び／又は予防に使用するための、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項４６】
肺真菌感染症若しくはクロストリジウム・ディフィシル又はこれらの組合せの治療及び／又は予防に使用するための、請求項２６、２７、２９、３１、３３、３５、３７、又は３９のいずれか一項に記載の組合せ医薬。
【請求項４７】
肺真菌感染症の治療及び／又は予防に使用するための、請求項４５に記載の医薬組成物。
【請求項４８】
肺真菌感染症の治療及び／又は予防に使用するための請求項４６に記載の組合せ医薬。
【請求項４９】
前記肺真菌感染症は、カンジダ・アルビカンス（ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）若しくはアスペルギルス・フミガツス（ａｓｐｅｒｇｉｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）又はこれらの組合せである、請求項４５又は４７に記載の医薬組成物。
【請求項５０】
前記肺真菌感染症は、カンジダ・アルビカンス（ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）若しくはアスペルギルス・フミガツス（ａｓｐｅｒｇｉｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）又はこれらの組合せである、請求項４６又は４８に記載の組合せ医薬。
【請求項５１】
前記組成物は、ベダキリン又はその医薬的に許容される塩若しくは誘導体及びアミカシン並びにこれらの混合物から選択される剤を投与する前、同時、又は後に投与される、請求項４３に記載の使用。
【請求項５２】
前記組成物は、ベダキリン又はその医薬的に許容される塩若しくは誘導体を投与する前、同時、又は後に投与される、請求項４３に記載の使用。
【請求項５３】
請求項１〜２５のいずれか一項に記載の組成物を吸入により投与することを含む、それを必要とする患者における肺感染症の治療又は予防方法。
【請求項５４】
前記感染症は、非結核性抗酸菌及び結核菌（マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ））群並びにこれらの組合せから選択される、マイコバクテリウム属（ｇｅｎｕｓ  ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）に属する菌種により引き起こされる、請求項５３に記載の治療又は予防方法。
【請求項５５】
前記非結核性抗酸菌は、マイコバクテリウム・アビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ）、マイコバクテリウム・イントラセルラーレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、マイコバクテリウム・アブセッサス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ）、及びライ菌（マイコバクテリウム・レプラエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ））、並びにこれらの組合せから選択される、請求項５４に記載の治療又は予防方法。
【請求項５６】
前記感染症は、嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患、又は後天性免疫不全症候群の患者における肺ＭＡＣ症及び非結核性抗酸菌症から選択される日和見感染症である、請求項５３に記載の治療又は予防方法。
【請求項５７】
前記感染症は、嚢胞性線維症の患者における非結核性抗酸菌の日和見感染症である、請求項５６に記載の治療又は予防方法。
【請求項５８】
ベダキリン又はその医薬的に許容される誘導体の塩、セフォキシチン（ｃｅｆｏｘｉｔｉｎｅ）、アミカシン、クラリスロマイシン、ピラジンアミド、リファムピン、モキシフロキサシン、レボフロキサシン、及びパラ−アミノサリチレート、並びにこれらの混合物から選択される剤を投与する前、同時、又は後に、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の組成物を吸入により投与することを含む、それを必要とする患者におけるマイコバクテリア又は他のグラム陽性細菌により引き起こされる肺感染症の治療又は予防方法。
【請求項５９】
前記剤はベダキリン又はアミカシンである、請求項５８に記載の治療又は予防方法。
【請求項６０】
前記剤はベダキリンである、請求項５９に記載の治療又は予防方法。
【請求項６１】
次に示すステップ：
（１）クロファジミン、前記非イオン性界面活性剤、及び水の懸濁物を、適切な粒径のクロファジミンを含む懸濁物を得るために均質化するステップと、
（２）（１）から得られた前記懸濁物のｐＨを、ｐＨ５．５〜ｐＨ７．５の間のｐＨに調整するステップと、
（３）塩化ナトリウム濃度を適切な濃度に調整するステップと、
（４）重量オスモル濃度を適切な水準に調整するステップと、
を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の医薬組成物を調製するためのプロセス。
【請求項６２】
次に示すステップ：
（１）クロファジミン及び非水性液体の懸濁物を、適切な粒径のクロファジミンを含む懸濁物を得るために均質化するステップと、
（２）前記クロファジミンを単離するステップと、
（３）前記クロファジミンを前記非イオン性界面活性剤及び水に添加するステップと、
（４）（３）から得られた懸濁物のｐＨをｐＨ５．５〜ｐＨ７．５の間のｐＨに調整するステップと、
（５）塩化ナトリウム濃度を適切な濃度に調整するステップと、
を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の医薬組成物を調製するためのプロセス。
【請求項６３】
次に示すステップ：
（１）クロファジミンを、適切な粒径のクロファジミンを得るために微粉化するステップと、
（２）前記クロファジミンを、前記非イオン性界面活性剤及び水に添加するステップと、
（３）（２）から得られた懸濁物のｐＨを、ｐＨ５．５〜ｐＨ７．５の間のｐＨに調整するステップと、
（４）塩化ナトリウム濃度を適切な濃度に調整するステップと、
を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の医薬組成物を調製するためのプロセス。
【請求項６４】
前記非イオン性界面活性剤、適切な濃度の塩化ナトリウムを含み、ｐＨがｐＨ５．５〜ｐＨ７．５の間のｐＨに調整された水中にクロファジミンを懸濁させた懸濁物を、適切な粒径のクロファジミンを得るために均質化することを含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の医薬組成物を調製するためのプロセス。
【請求項６５】
前記ｐＨは７．４に調整され、前記塩化ナトリウム濃度は１５４ｍＭ塩化ナトリウムに調整される、請求項６１、６２、又は６３のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項６６】
前記ｐＨは７．４であり、塩化ナトリウムの前記適切な濃度は１５４ｍＭ塩化ナトリウムである、請求項６４に記載のプロセス。
【請求項６７】
前記クロファジミンの前記微粉化は、ジェットミル粉砕、噴霧乾燥、ボールミル粉砕、又は超臨界流体処理により行われる、請求項６３に記載のプロセス。
【請求項６８】
ステップ（１）の前記均質化は、高圧均質化、湿式粉砕、超音波均質化、又はこの種の処理の組合せにより行われる、請求項６１、６２、６４、又は６６のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項６９】
クロファジミンの前記均質化は、多段階の均質化により行われる、請求項６１、６２、６４、６５、６６、又は６８のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項７０】
クロファジミンの前記微粉化は、多段階の微粉化により行われる、請求項６３又は２０に記載のプロセス。
【請求項７１】
前記適切な粒径のクロファジミンは、平均径が５μｍ未満であり、且つＤ９０が６μｍ未満の粒子である、請求項６１〜７０のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項７２】
前記適切な粒径のクロファジミンは、平均径が２μｍ未満であり、且つＤ９０が３μｍ未満の粒子である、請求項６１〜７０のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項７３】
次に示すステップ：（ａ）クロファジミン、前記非イオン性界面活性剤、及び水の懸濁物を、適切な粒径のクロファジミンを含む懸濁物を得るために均質化するステップと；（ｂ）得られた懸濁物のｐＨを、ｐＨ５．５〜ｐＨ７．５の間のｐＨに調整するステップと；（ｃ）塩化ナトリウム濃度を適切な濃度に調整するステップと、（ｄ）重量オスモル濃度を適切な水準に調整するステップと；を含み、ステップ（ｂ）、（ｃ）、及び（ｄ）は、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｃ）；（ｃ）、（ｂ）、（ｄ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｂ）；（ｄ）、（ｂ）、（ｃ）；又は（ｄ）、（ｃ）、（ｂ）の順序で行うことができる、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の医薬組成物を調製するためのプロセス。
【請求項７４】
次に示すステップ：（ａ）クロファジミン及び非水性液体の懸濁物を、適切な粒径のクロファジミンを含む懸濁物を得るために均質化するステップと；（ｂ）前記クロファジミンを単離するステップと；（ｃ）前記クロファジミンを前記非イオン性界面活性剤及び水に添加するステップと；（ｄ）得られた懸濁物のｐＨをｐＨ５．５〜ｐＨ７．５の間のｐＨに調整するステップと；（ｅ）塩化ナトリウム濃度を適切な濃度に調整するステップと；を含み、ステップ（ｄ）及び（ｅ）は、（ｄ）、（ｅ）；又は（ｅ）、（ｄ）の順序で行うことができる、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の医薬組成物を調製するためのプロセス。
【請求項７５】
次に示すステップ：（ａ）クロファジミンを、適切な粒径のクロファジミンを得るために微粉化するステップと、（ｂ）前記クロファジミンを、前記非イオン性界面活性剤、適切な濃度の塩化ナトリウムを含み、ｐＨがｐＨ５．５〜７．５の間に調整されている水に添加するステップと、を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の医薬組成物を調製するためのプロセス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１８年８月２３日に出願された米国仮出願第６２／７２２，０４８号明細書の優先権を主張するものであり、本出願はまた、２０１９年１月２５日に出願された米国仮出願第６２／７９６，３２２号明細書の優先権も主張するものであり、両明細書の内容を本明細書の一部を構成するものとしてここに援用する。
【０００２】
本発明は、治療有効用量（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ｄｏｓｅ）のクロファジミンを含む吸入用医薬組成物であって、クロファジミンは懸濁物の形態で提供される組成物；それを調製するためのプロセス；並びにそれを含む使用及び治療方法に関する。更に本発明は、経肺吸入用エアロゾルの形態にある、クロファジミンを含む組合せ医薬を提供する。
【０００３】
本発明により提供される組合せ及び組成物は、マイコバクテリア及び他のグラム陽性細菌により引き起こされる肺感染症並びに肺真菌感染症の治療及び／又は予防に使用することができる。
【背景技術】
【０００４】
クロファジミンは、抗マイコバクテリア活性及び抗炎症活性を有する、極めて疎水性が高い（ＬｏｇＰ＝７．６６）抗生物質であるリミノフェナジンであり、最初に記載されたのが１９５７年である。構造式を次に示す。
【化１】
2021535124.tif 000002
【０００５】
クロファジミンがその抗菌作用を発揮する正確な機序は分かっていない。しかしながら、マイコバクテリアのＤＮＡに優先的に結合することにより、ＤＮＡの複製及び細胞増殖を阻害することは知られている。他の提案されている作用機序としては、膜の損傷／不安定化、膜を不安定化させるリゾリン脂質の生成、カリウム輸送及び／又は細胞内酸化還元サイクルの妨害が挙げられる。クロファジミンは、生体外では、多剤耐性株を含む結核菌（マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ））（ＭＴＢ）に優れた活性を示す一方で、最近までは、肺結核の治療には有効ではないという考えが一般的であった（例えば、Ｃｈｏｌｏ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，２０１２  Ｆｅｂ，６７（２）：２９０−８参照）。
【０００６】
クロファジミンは、ライ菌（マイコバクテリウム・レプラエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ））により引き起こされるハンセン病の治療用として、世界保健機関（Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ）により推奨されている３種の主要薬のうちの１種であり、近年は、非結核性抗酸菌（ＮＴＭ）により引き起こされる薬剤耐性結核等の他のマイコバクテリア感染症の治療に使用されることが増えてきている。
【０００７】
クロファジミンは水にほとんど溶解せず、高い膜透過性を示すことから、生物薬剤学分類システム（Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ）（ＢＣＳ）のクラスＩＩ薬物に分類されている。
【０００８】
薬物の経口吸収が低く、且つバイオアベイラビリティが低いことに付随する問題を克服することを目的として、経口剤形の最適化に当たり、微粉化、ナノ粒子化（ｎａｎｏｎｉｚａｔｉｏｎ）、超臨界流体を用いた再結晶（ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ  ｆｌｕｉｄ  ｒｅ−ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ）、液中での噴霧凍結乾燥（ｓｐｒａｙ  ｆｒｅｅｚｅ  ｄｒｙｉｎｇ  ｉｎｔｏ  ｌｉｑｕｉｄ）、固体分散体、及び固溶体等の様々な戦略が用いられてきた。
【０００９】
クロファジミンは、ＢＣＳクラスＩＩ薬物に分類されていることから、通常は、経口バイオアベイラビリティを向上するべく固体分散体に配合することが理想的な選択肢であると見なされている（例えば、Ｂｈｕｓｎｕｒｅ  ｅｔ  ａｌ．ＩＪＲＰＣ  ２０１４，４（４），９０６−９１８参照）。
【００１０】
これに従い、親油性を有するクロファジミンは、経口吸収を向上することを目的として、油−ロウ基剤（ｏｉｌ−ｗａｘ  ｂａｓｅ）中の微結晶懸濁物として投与されるのが通常である。経口投与後の人体による吸収率にはかなり差がある（４５〜６２％）。クロファジミンの有害作用は用量関連性であり、主として、皮膚、眼、胃腸管に影響を及ぼし、ＱＴ延長副作用には皮膚及び結膜の赤褐色の変色の発生が伴い、休薬により緩徐に回復する可逆性を示す。これは、長期間に亘り全身に貯留することに起因する。
【００１１】
マイコバクテリウム属（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）は放線細菌門（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）の一属であり、マイコバクテリウム科（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）という独立した科である。マイコバクテリアは棹状形状を有し、ロウ質の外膜を有する。
【００１２】
そのようなものとして、マイコバクテリアは３つの群に分けることができる：
・結核菌（マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ））群−結核の起因病原体
・ライ菌（マイコバクテリウム・レプラエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ））−ハンセン病の起因病原体
・非結核性抗酸菌（Ｎｏｎｔｕｂｅｒｃｕｌｏｕｓ  ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ）（ＮＴＭ）−結核菌（Ｍ・ツベルクローシス（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ））及びライ菌（Ｍ・レプラエ（Ｍ．ｌｅｐｒａｅ））以外の全てのマイコバクテリアを含む。マイコバクテリウム・アブセッサス・コンプレックス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ  ｃｏｍｐｌｅｘ）（ＭＡＢＳＣ）、マイコバクテリウム・アビウム・コンプレックス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ  ｃｏｍｐｌｅｘ）（ＭＡＣ）等。
【００１３】
結核症（ＴＢ）は結核菌群菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｂａｃｔｅｒｉａ）により引き起こされる感染症である。ＴＢは、文書に残されている最も古いヒトの感染性病原体の１種であり、今も尚、世界中の死亡率及び罹患率を上昇させる重大な原因となっている。２０１５年の新規ＴＢ感染者数は１０４０万人と推定されており、１４０万人が活動性ＴＢによって死亡している（例えば、世界保健機関（ＷＨＯ）世界結核報告書（Ｇｌｏｂａｌ  Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ  Ｒｅｐｏｒｔ）２０１６参照）。このような有病率及び死亡率の高さに加えて、多剤耐性結核（ＭＤＲ−ＴＢ）の出現に対する懸念が高まっており、２０１５年には５８０，０００人の患者が薬剤耐性ＴＢに感染していたことが示されている。ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）等の同時罹患は治療を複雑化し、２０１５年においては１２０万のＴＢ症例に関与していた。
【００１４】
多剤耐性菌（ＭＤＲ）感染を治療するために、ＷＨＯは、抗ＴＢ薬の第２選択薬を用いた９〜１２ヶ月間の治療レジメンを実施することを推奨してきた。９〜１２ヶ月間のバングラディシュレジメン（Ｂａｎｇｌａｄｅｓｈ  ｒｅｇｉｍｅｎ）等のこのようなレジメンでは、ＭＤＲ−ＴＢに対しガチフロキサン、エタンブトール、ピラジンアミド、及びクロファジミンの併用治療が行われ、患者の８７．９％が無再発治癒を達成した（例えば、Ｓｏｔｇｉｕ，Ｇ，ｅｔ  ａｌ．，“Ａｐｐｌｉｃａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓｈｏｒｔｅｒ‘Ｂａｎｇｌａｄｅｓｈ  ｒｅｇｉｍｅｎ’ｉｎ  ｈｉｇｈ  ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ  ｓｅｔｔｉｎｇｓ”，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  （２０１７）５６  １９０−１９３参照）。
【００１５】
ＴＢ治療期間の短縮について調査を行った他の研究から、クロファジミンは２週間経口投与した後も臨床的有用性がないことが示された（例えば、Ｄｉａｃｏｎ，Ａ．Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，“Ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｙｒａｚｉｎａｍｉｄｅ  ａｎｄ  Ｃｌｏｆａｚｉｍｉｎｅ  Ａｌｏｎｅ  ａｎｄ  ｉｎ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ  ｗｉｔｈ  Ｐｒｅｔｏｍａｎｉｄ  ａｎｄ  Ｂｅｄａｑｕｉｌｉｎｅ”，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ａｎｄ  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２０１５），１９１（８），９４３−９５３参照）。この薬物は循環血液中の血清タンパク質と高い親和性で結合するという理論が立てられていることから、こうした有効性の欠如は薬物のバイオアベイラビリティの低さに起因すると考えられた。クロファジミンは、ＭＤＲ−ＴＢ及び超薬剤耐性ＴＢ（ＸＤＲ−ＴＢ）の治療に有効であると経験的に実証されているにも関わらず、短期治療では、全身投与後のバイオアベイラビリティの低さにより、生物活性が限られるようである（例えば、Ｓｗａｎｓｏｎ，Ｒ．Ｖ．，ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓ  ｏｆ  Ｃｌｏｆａｚｉｍｉｎｅ  ｉｎ  ａ  Ｍｏｕｓｅ  Ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ”，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ（２０１５），５９（６），３０４２−３０５１参照）。
【００１６】
抗生物質を吸入することによる肺感染の治療は、肺中の薬物濃度がより高くなると共に、全身送達と比較して副作用が低減され（例えば、Ｔｏｕｗ，Ｄ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，“Ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ｉｎ  ｃｙｓｔｉｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ”，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｊｏｕｒｎａｌ（１９９５），８，１５９４−１６０４参照）、その結果として生物活性及び有効性が高くなることが知られている（例えば、Ｈｉｃｋｅｙ，Ａ．Ｊ．，“Ｉｎｈａｌｅｄ  ｄｒｕｇ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ：Ｐａｓｔ  ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ａｎｄ  ｆｕｔｕｒｅ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ”，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，（２０１６），２４０，１２７−１３４参照）。ＴＢ感染モデルにクロファジミンをエアロゾル化して投与すると、クロファジミンを経口投与した場合と比較して、バシラス属細菌（ｂａｃｉｌｌｉ）の除去率が治療開始からわずか２８日後に有意に改善されることがｉｎ  ｖｉｖｏマウスモデルで実証された（例えば、Ｖｅｒｍａ，Ｒ．Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．，“Ｉｎｈａｌｅｄ  ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｃｌｏｆａｚｉｍｉｎｅ  ａｒｅ  ｅｆｆｉｃａｃｉｏｕｓ  ｉｎ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｅ”，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ（２０１３），５７（２），１０５０−１０５２参照）。この短期間における有効性の改善は、クロファジミンが肺の感染部位に直接送達された結果、結核性肉芽腫の肺内マクロファージのクロファジミン濃度がより高くなることに起因していると思われる。
【００１７】
したがって、ＭＤＲ  ＴＢ、又はＸＤＲ−ＴＢ感染患者にクロファジミンをエアロゾル化して投与すれば患者の治療成果が更に向上するはずであり、また、現行の治療レジメンの期間が短縮される可能性もある。
【００１８】
かつては非定型又は遍在性（ｕｂｉｑｕｉｔｏｕｓ）マイコバクテリアと呼ばれていた非結核性抗酸菌（ＮＴＭ）群には、１５０を超える菌種が含まれる。ＮＴＭは自然環境中に広く見られ、多様性に富んでいる。これらは土壌、地面、及び飲用水のみならず、低温殺菌乳やチーズ等の食品中でも検出されることがある。通常、ＮＴＭは、病原性が低いと考えられている。しかしながら、これらは、ヒト、特に免疫力が低下したヒトや既に肺疾患に罹患しているヒトには重大な疾患の原因となる可能性がある。現在、ＮＴＭは、その発育速度に応じて分類されており、遅発育（ＳＧＭ）及び迅速発育（ＲＧＭ）マイコバクテリアに分けられる。
【００１９】
遅発育マイコバクテリウム・アビウム・コンプレックス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ  ｃｏｍｐｌｅｘ）（ＭＡＣ）には、マイコバクテリウム・アビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ）、マイコバクテリウム・キマイラ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｃｈｉｍａｅｒａ）、及びマイコバクテリウム・イントラセルラーレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）の菌種が含まれ、これらが最も重要且つ最もよく見られる病原性ＮＴＭである。マイコバクテリウム・カンサシ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋａｎｓａｓｉｉ）、マイコバセテリウム・マルモエンセ（Ｍｙｃｏｂａｃｅｔｅｒｉｕｍ  ｍａｌｍｏｅｎｓｅ）、マイコバクテリウム・ゼノピ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｘｅｎｏｐｉ）、マイコバクテリウム・シミエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ．ｓｉｍｉａｅ）、マイコバクテリウム・アブセッサス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ）、マイコバクテリウム・ゴルドネ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｏｒｄｏｎａｅ）、マイコバクテリウム・フォーチュイタム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｆｏｒｔｕｉｔｕｍ）、及びマイコバクテリウム・ケロネー（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｃｈｅｌｏｎａｅ）と同じように、これらの大部分も肺感染症を引き起こす。マイコバクテリウム・マリナム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍａｒｉｎｕｍ）は、水槽肉芽腫（ａｑｕａｒｉｕｍ  ｇｒａｎｕｌｏｍａ）のような皮膚及び軟部組織の感染症に関与している。
【００２０】
特にＲＧＭは、生命に関わる深刻な慢性肺疾患を引き起こし、播種性の、多くの場合は致死性の感染症に関与する。感染は、通常、カテーテルが関与する汚染された物質（ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｅｄ  ｍａｔｅｒｉａｌ）及び侵襲的手技、非滅菌的外科処置又は注射、並びに異物移植が原因となる。シャワーヘッドやジャグジーとの接触も感染のリスクがあると報告されている。ＮＴＭは、通常、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）や嚢胞性線維症（ＣＦ）等の慢性肺疾患の患者及び他の免疫機能が低下した患者に日和見感染を起こす。
【００２１】
近年、迅速発育型（ＲＧＭ）マイコバクテリウム・アブセッサス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ）群菌（亜種であるマイコバクテリウム・アブセッサス亜種アブセッサス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ  ｓｕｂｓｐ．  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ）（Ｍ．ａ．ａｂｓｃｅｓｓｕｓ（Ｍ・ａ・アブセッサス））、マイコバクテリウム・アブセッサス・ボレチ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｃｅｓｓｕｓ  ｂｏｌｌｅｔｉｉ．）、及びマイコバクテリウム・アブセッサス・マシリエンセ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ  ｍａｓｓｉｌｉｅｎｓｅ）を含むマイコバクテリウム・アブセッサス・コンプレックス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ  ｃｏｍｐｌｅｘ、ＭＡＢＳＣ））のヒト病原体としての重要性が明らかになってきており、他のどのＲＧＭよりも非常に高い致死率が伴う。
【００２２】
ＣＦ患者がマイコバクテリウム・アブセッサス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ）に感染すると、肺破壊が拡大し、多くの場合は治療不能であり、治療不成功率が６０〜６６％と高いことから、特に問題である。（例えば、Ｏｂｒｅｇｏｎ−Ｈｅｎａｏ  Ａ  ｅｔ  ａｌ，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，  Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２０１５，Ｖｏｌ  ５９，Ｎｏ  １１，ｐ．６９０４−６９１２；Ｑｖｉｓｔ，Ｔ．，Ｐｒｅｓｓｌｅｒ，Ｔ．，Ｈｏｉｂｙ，Ｎ．ａｎｄ  Ｋａｔｚｅｎｓｔｅｉｎ，ＴＬ．，“Ｓｈｉｆｔｉｎｇ  ｐａｒａｄｉｇｍｓ  ｏｆ  ｎｏｎｔｕｂｅｒｃｕｌｏｕｓ  ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ  ｉｎ  ｃｙｓｔｉｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ”，Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２０１４），１５（１）：ｐｐ．４１−４７参照）。
【００２３】
ＮＴＭのヒト感染と、ヒト後天性免役不全症候群の大流行との関連性が一層高まっている。マイコバクテリウム・アビウム・コンプレックス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ  ｃｏｍｐｌｅｘ）（ＭＡＣ）に属するマイコバクテリアが、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に感染した患者の日和見感染症の主要な起因菌であると同定されている。
【００２４】
ＮＴＭの幾つかの菌種はバイオフィルムを形成することが知られている。バイオフィルムは細胞外基質に内包された細菌の小集落（ｍｉｃｒｏｃｏｌｏｎｙ）であり、ヒトの免疫機構に対し安定性及び抵抗性を付与する。近年、ＮＴＭの幾つかの菌種が消毒剤及び抗菌剤に対する抵抗性を高めるバイオフィルムを形成することが示された。バイオフィルムの集合は、可逆的付着、不可逆的付着、細菌凝集によるバイオフィルム形成、組織化、及びシグナル伝達、及び最終的な分散を含む、幾つかの段階を経て進展する。この過程が進行する間、細菌は、多糖、脂質、及び核酸等の細胞外高分子物質（ＥＰＳ）を含むマトリックスを構築し、複雑な３次元構造を形成する（例えば、Ｓｏｕｓａ  Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ  ４（２０１５），３６−４３参照）。具体的には、マイコバクテリアは菌体外多糖を産生しないので、マイコバクテリアのＥＰＳは他のバイオフィルムとは性質が異なる（例えば、Ｚａｍｂｒａｎｏ  ＭＭ，Ｋｏｌｔｅｒ  Ｒ．Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｂｉｏｆｉｌｍｓ：ａ  ｇｒｅａｓｙ  ｗａｙ  ｔｏ  ｈｏｌｄ  ｉｔ  ｔｏｇｅｔｈｅｒ．Ｃｅｌｌ．２００参照）。マイコバクテリアのバイオフィルムは菌種間で異なるが、ミコール酸、糖ペプチド脂質、ミコリル−ジアシルグリセロール、リポオリゴ糖、リポペプチド、及び細胞外ＤＮＡを含み得る（Ｒｏｓｅ  ＳＪ，Ｂａｂｒａｋ  ＬＭ，Ｂｅｒｍｕｄｅｚ  ＬＥ（２０１５）Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ  Ｐｏｓｓｅｓｓｅｓ  Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ＤＮＡ  ｔｈａｔ  Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  ｔｏ  Ｂｉｏｆｉｌｍ  Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ，ａｎｄ  Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｔｏ  Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ．ＰＬｏＳ  ＯＮＥからの概説及び独創研究）。バイオフィルム内の集合体は抗菌剤に対する抵抗性を高めることが知られている（例えば、Ｆａｒｉａ  Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ，Ｖｏｌ  ２０１５，Ａｒｔｉｃｌｅ  ＩＤ  ８０９０１４参照）。
【００２５】
ＮＴＭ肺感染治療の新たなアプローチとして、エアロゾル化されたリポソームアミカシンの送達／ジェット式ネブライザーにより噴霧されるアミカシン溶液の吸入（Ｒｏｓｅ  Ｓ．ｅｔ  ａｌ，２０１４，ＰＬｏＳ  ＯＮＥ，Ｖｏｌｕｍｅ  ９，Ｉｓｓｕｅ  ９，ｅ１０８７０３及びＯｌｉｖｉｅｒ  Ｋ．ｅｔ  ａｌ，Ａｎｎ  Ａｍ  Ｔｈｏｒａｃ  Ｓｏｃ  Ｖｏｌ  １１，Ｎｏ  １，ｐｐ．３０−３５）に加えて、抗ＴＢ薬の経肺送達用乾燥粉末微粒子の吸入（Ｃｈｏｌｏ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．２０１２  Ｆｅｂ；６７（２）：２９０−８  ａｎｄ  Ｆｏｕｒｉｅ  Ｂ．  ａｎｄ  Ｎｅｔｔｅｙ  Ｏ．，２０１５  Ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ  Ｍａｇａｚｉｎｅ，  Ｖｅｒｍａ  ２０１３  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ）が提案されている。
【００２６】
ＮＴＭ肺疾患の治療において、非経口アミノグリコシド、チゲサイクリン、並びにリネゾリド、デラマニド、及びベダキリン等の他の有望な経口用抗菌薬、並びに選択された症例においては外科的介入による初期治療に続いて、アミカシンを吸入することによる多剤併用療法レジメンにより、成果が期待されることが示されている（Ｌｕ  Ｒｙｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｕｂｅｒｃ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｄｉｓ  ２０１６；７９：７４−８４）。しかしながら、ＮＴＭ感染症、特にＮＴＭ肺疾患の発生率及び有病率が増加していることと、治療の選択肢が限られていることとから、クロファジミン等の現在使用されている抗菌薬のバイオアベイラビリティを向上させる新規な剤形／医薬製剤を発展させることが必要とされている。吸入は、経口及び非経口治療と比較して、有効性を高めると共に副作用を低減する可能性がある。
【００２７】
クロファジミン及びアミカシンを併用すると、マイコバクテリウム・アブセッサス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ）及びマイコバクテリウム・アビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ）の両方に対し相乗的に作用することがｉｎ  ｖｉｔｒｏで示されている（例えば、ｖａｎ  Ｉｎｇｅｎ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，“Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｓｙｎｅｒｇｙ  ｂｅｔｗｅｅｎ  Ｃｌｏｆａｚｉｍｉｎｅ  ａｎｄ  Ａｍｉｋａｃｉｎ  ｉｎ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｎｏｎｔｕｂｅｒｃｕｌｏｕｓ  Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｌ  Ｄｉｓｅａｓｅ”，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ５６（１２），６３２４−６３２７（２０１２）参照）。更に、結核菌（マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ））に対しクロファジミン及びベダキリンを併用することによる相乗作用も示されている（例えば、Ｃｏｋｏｌ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，“Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｆａｃｔｏｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｉｇｈ−ｏｒｄｅｒ  ｄｒｕｇ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ”，Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ２０１７：３：ｅ１７０８８１，１１  Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２０１７参照）。また、非結核性抗酸菌であるマイコバクテリウム・アブセッサスに対しても、クロファジミン／ベダキリンの併用による相乗作用が示されている（Ｒｕｔｈ，Ｍ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，“Ａ  Ｂｅｄａｑｕｉｌｉｎｅ／Ｃｌｏｆａｚｉｍｉｎｅ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  Ｒｅｇｉｍｅｎ  Ｍｉｇｈｔ  Ａｄｄ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ  Ｒｅｌｅｖａｎｔ  Ｎｏｎ−Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｕｓ  Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ”，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ（２０１９），ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０９３／ｊａｃ／ｄｋｙ５２６）。
【００２８】
ヒトの死亡率の主要原因として病原性真菌が目立つようになってきている。現在の推定では、深在性真菌症に起因する死亡が、それよりもよく知られている結核等の感染症に匹敵することが示唆されている。カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、及びアスペルギルス・フミガツス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｉｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）は、ヒトの病原性真菌で最も感染頻度が高いものである。これらの菌種は、それぞれが毎年何十万人もの感染に関与しているが、診断法が充分でなく、治療の選択肢が限られていることから、死亡率は受け容れられないほど高い。クロファジミンは配合剤として複数種の真菌に有効であることが示されている（例えば、Ｒｏｂｂｉｎｓ，Ｎ．，ｅｔ  ａｌ．，  “Ａｎ  Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  Ｍａｔｒｉｘ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ  ａ  Ｒｉｃｈ  Ｐｏｏｌ  ｏｆ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｔｈａｔ  Ｅｎｈａｎｃｅ  Ｄｒｕｇ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｇａｉｎｓｔ  Ｄｉｖｅｒｓｅ  Ｆｕｎｇａｌ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ”，Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  １３，１４８１−１４９２，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  １７，２０１５参照）。真菌は、嚢胞性線維症においては、片利共生菌、生着菌、及び／又は病原菌としても作用する（例えば、Ｃｈｏｔｉｒｍａｌｌ，Ｓ．Ｈ．ａｎｄ  ＭｃＥｌｖａｎｅｙ，Ｎ．Ｇ．，“Ｆｕｎｇｉ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｙｓｔｉｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｌｕｎｇ：Ｂｙｓｔａｎｄｅｒｓ  ｏｒ  ｐａｔｈｏｇｅｎｓ？”，Ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ５２（２０１４），１６１−１７３参照）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２９】
クロファジミンは、水溶性が低いため、経口バイオアベイラビリティが低く、薬剤耐性（ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）が高い。下部呼吸器系（ｌｏｗｅｒ  ｌｕｎｇ）にエアロゾル粒子を沈着させることを目的として噴霧器（ｎｅｂｕｌｉｚｅｒ）によるエアロゾル化等が行えるよう液体水性担体中で製剤化するために、薬物を可溶化及び安定化させる特殊な技法も必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００３０】
本発明の一実施形態によれば：
（ａ）治療有効用量のクロファジミン又はその医薬的に許容される誘導体若しくは塩と；
（ｂ）親水性−親油性バランス値が１０を超える非イオン性界面活性剤と；
（ｃ）水、等張生理食塩水、緩衝生理食塩水、及び電解質水溶液から選択される水性液体担体と；
を含む医薬組成物であって、
クロファジミン又はその医薬的に許容される誘導体若しくは塩は、懸濁物中の粒子の形態で提供され、
且つ
クロファジミン又はその医薬的に許容される誘導体若しくは塩の粒子の中央径は５μｍ未満であり、且つＤ９０は６μｍ未満である、医薬組成物が提供される。
【００３１】
本発明の他の実施形態によれば、クロファジミン又はその医薬的に許容される誘導体若しくは塩の粒子は、平均径が２μｍ未満であり、且つＤ９０が３μｍ未満である。
【００３２】
本発明の他の実施形態において：
（ａ）治療有効用量のクロファジミンと；
（ｂ）親水性−親油性バランス値が１０を超える非イオン性界面活性剤と；
（ｃ）水、等張生理食塩水、緩衝生理食塩水、及び電解質水溶液から選択される水性液体担体と；
を含む医薬組成物であって、
クロファジミンは、懸濁物中の粒子の形態で提供され、
且つ
クロファジミンの粒子は、中央径が５μｍ未満であり、且つＤ９０が６μｍ未満である、医薬組成物が提供される。
【００３３】
本発明の他の実施形態において、クロファジミンの粒子の中央径は２μｍ未満であり、且つＤ９０は３μｍ未満である。
【００３４】
本発明の組成物を適切な噴霧器でエアロゾル化することにより、エアロゾル化されたクロファジミンの下部呼吸器系（即ち、気管支、細気管支、並びに中及び末梢肺（ｃｅｎｔｒａｌ  ａｎｄ  ｌｏｗｅｒ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｌｕｎｇ）の肺胞へ）への送達が大幅に向上し、それにより治療効果が実質的に向上する。
【００３５】
更に好ましくは、吸入器具を、下部呼吸器系に均一に沈着させることを目的として、最適な粒径分布を有するエアロゾルを肺に局所的に送達させるように更に適合させるべきである。
【００３６】
したがって本発明は、肺胞及び細気管支への送達を促進する粒径を有するエアロゾルを提供する。肺胞及び細気管支を標的とする好適な空気動力学的粒子径は１〜５μｍの間にある。それよりも大きな粒子は、上部呼吸器系（ｕｐｐｅｒ  ｌｕｎｇ）、即ち、気管支及び気管並びに口及び咽頭、即ち、口腔咽頭領域に選択的に沈着する。したがって、吸入器具は、空気動力学的質量中央径（ＭＭＡＤ）が約１〜約５μｍの範囲にあり、好ましくは約１〜約３μｍの範囲にあるエアロゾルを生成するように適合される。更なる実施形態においては、粒径分布は狭く、幾何標準偏差（ＧＳＤ）は約２．５未満である。
【００３７】
本発明は、クロファジミンを懸濁物の形態で肺にエアロゾル投与することにより、下部（即ち、深部）呼吸器系に活性作用物質を沈着させることができ、それにより、非常に疎水性の高いＢＣＳクラスＩＩの作用物質のバイオアベイラビリティが向上し、その結果として、治療効果が大幅に向上すると共に全身性副作用が低減されるという予期せぬ発見に基づいている。
【００３８】
他の態様において、この発見により、マイコバクテリア及びグラム陽性細菌により引き起こされる感染症、特に、ＮＴＭによる肺感染症、例えば、ＣＦ、ＣＯＰＤ、及び免疫機能が低下した患者（ＨＩＶ患者等）の日和見感染等の抗菌薬治療が改善される。
【００３９】
更に本発明は、グラム陽性細菌による肺感染、特に肺のＴＢ及びＮＴＭ感染に関し確立された経口治療レジメンの全身性副作用を解消するのみならず、クロファジミンの用量及び治療期間を低減することを目的とする。
【００４０】
本出願は、本明細書に開示する個々の特徴のあらゆる組合せも開示することが当業者により理解される。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
定義
「医薬的に許容される塩」という語は、本発明化合物の生物学的な有効性及び性質を保持し、生物学的に又はそれ以外の形で望ましくないものではない塩を指す。多くの場合、本発明化合物は、アミノ基及び／若しくはカルボキシル基又はそれらに類する基が存在することによって、酸及び／又は塩基の塩を形成することができる。医薬的に許容される酸付加塩は無機酸及び有機酸を用いて形成することができる。塩を誘導することができる無機酸としては、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等が挙げられる。塩を誘導することができる有機酸としては、例えば、酢酸、プロピオン酸、ナフトエ酸、オレイン酸、パルミチン酸、パモ（エンボン）酸、ステアリン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、グルコヘプトン酸、グルクロン酸、乳酸、ラクトビオン酸、酒石酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸等が挙げられる。
【００４２】
医薬的に許容される塩基付加塩は、無機及び有機塩基を用いて形成することができる。塩を誘導することができる無機塩基としては、例えば、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウム等が挙げられ；アンモニウム、カリウム、ナトリウム、カルシウム、及びマグネシウムの各塩が特に好ましい。塩を誘導することができる有機塩基としては、例えば、１級、２級、及び３級アミン、天然置換アミン等の置換アミン、環状アミン、塩基性イオン交換樹脂等が挙げられ、具体的には、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、ヒスチジン、アルギニン、リジン、ベネタミン、Ｎ−メチル−グルカミン、及びエタノールアミン等である。他の酸としては、ドデシル硫酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、及びサッカリンが挙げられる。
【００４３】
本発明によれば、この遊離塩基以外に、メタンスルホン酸、マレイン酸、イソニコチン酸、ニコチン酸、マロン酸、及びサリチレート、特にクロファジミンメタンスルホン酸塩を使用することが好ましい。
【００４４】
本明細書において使用される「医薬的に許容される誘導体」という語は、例えば、米国特許第９，５４０，３３６号明細書に開示されている化合物を意味し、米国特許第９，５４０，３３６号明細書の開示全体を本明細書の一部を構成するものとしてここに援用する。これに加えて、誘導体の意味は、Ｌｕ，Ｙ．，Ｚｈｅｎ，Ｍ．，Ｗａｎｇ，Ｂ．，Ｆｕ，Ｌ．，Ｚｈａｏ，Ｗ．，Ｌｉ，Ｐ．，Ｘｕ，Ｊ．，Ｚｈｕ，Ｈ．，Ｊｉｎ，Ｈ．，Ｙｉｎ，Ｄ．，Ｈｕａｎｇ，Ｈ．，Ｕｐｔｏｎ，ＡＭ．ａｎｄ  Ｍａ，Ｚ．，“Ｃｌｏｆａｚｉｍｉｎｅ  Ａｎａｌｏｇｓ  ｗｉｔｈ  Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ａｇａｉｎｓｔ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｒｅｄｕｃｅｄ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  Ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ”Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ（２０１１），５５（１１）：ｐｐ．５１８５−５１９３に記載されている通りである。更に、化合物の「医薬的に許容される誘導体」とは、例えば、上記化合物のプロドラッグである。一般に、プロドラッグは、投与後に化合物の活性形態を提供することが可能な、該化合物の誘導体である。この種の誘導体は、例えば、カルボキシル基のエステル若しくはアミド、ヒドロキシル基のカルボキシルエステル、又はヒドロキシル基のリン酸エステルとすることができる。
【００４５】
「治療有効量（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｍｏｕｎｔ）」、「治療有効用量（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ｄｏｓｅ）」、又は「医薬有効量（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｍｏｕｎｔ）」は、本発明に関し開示したクロファジミン又はその医薬的に許容される塩若しくは誘導体が治療効果を示す量を意味する。治療に有効なクロファジミンの用量は、治療有効量である。したがって、本明細書において使用する治療有効量は、臨床試験結果及び／又は動物モデルを用いた感染実験（ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｙ）から判定される、所望の治療効果をもたらすクロファジミンの量を意味する。
【００４６】
クロファジミンの量及び１日用量は当業者が機械的に決定することができ、幾つかの因子、例えば、関与する具体的な微生物菌株に応じて変化するであろう。更にこの量は、患者の身長、体重、性別、年齢、及び病歴にも依存し得る。予防的治療の場合の治療有効量は、微生物感染を防ぐのに有効となる量である。
【００４７】
「治療効果」は、感染の１又は複数の症状をある程度まで軽減（ｒｅｌｉｅｖｅ）することであり、感染の治癒（ｃｕｒｉｎｇ）も含む。「治癒」とは、活動性感染の症状が消失（ｅｌｉｍｉｎａｔｅｄ）することを意味し、感染に関与している生菌の過剰な分が完全に又は実質的に消失して、従来の測定による検出閾値以下になることを含む。但し、感染症の特定の長期的又は永続的な影響は、治癒が達成された後でさえも存在する可能性がある（広範囲な組織損傷等）。本明細書において使用する「治療効果」は、宿主の細菌量の統計学的に有意な低下、抵抗性の発現、又はヒトの臨床成績若しくは動物実験により判定される感染症状の改善として定義される。
【００４８】
本明細書において使用する「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、又は「治療する（こと）（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、医薬組成物／組合せを予防及び／又は治療目的で投与することを指す。
【００４９】
「予防的治療（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という語は、未だ感染していないが、特定の感染症に罹りやすい、又はそれ以外の形でリスクがある患者を治療することを指す。「治療目的の治療（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という語は、既に感染症に罹患している患者に治療を施すことを指す。したがって、好ましい実施形態において、治療は、哺乳動物に（治療又は予防目的のいずれかで）治療有効量のクロファジミンを投与することである。
【００５０】
本明細書において特に明記しない限り、「吸入（ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ）」という語は経肺吸入を意味する。
【００５１】
本明細書において特に明記しない限り、本明細書において使用する「感染（症）」という語は、肺感染（症）を指すことを意味する。
【００５２】
特に明記しない限り、化合物の純度を指すために使用される「実質的に」という語は、化合物の純度が純度９５％を超えることを表す。
【００５３】
特に明記しない限り、「適切な（ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ）粒径」という語は、患者に投与した場合に、所望の治療効果を提供する組成物中のクロファジミン又は組成物の粒径を指す。
【００５４】
特に明記しない限り、「適切な濃度」という語は、医薬的に許容される組成物又は組合せを提供する組成物又は組合せ中の成分の濃度を指す。
【００５５】
医薬組成物及び組合せ医薬
次に示す水の品質等級（ｇｒａｄｅ）が特に本発明に適切である：滅菌精製水、滅菌注射用水、滅菌洗浄用水（ｓｔｅｒｉｌｅ  ｗａｔｅｒ  ｆｏｒ  ｉｒｒｉｇａｔｉｏｎ）、滅菌吸入用水（ｓｔｅｒｉｌｅ  ｗａｔｅｒ  ｆｏｒ  ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ）（ＵＳＰ）及び、例えば、欧州薬局方（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ）又は国民医薬品集（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ）に準拠する水の品質等級に相当するもの。
【００５６】
本発明に従い水性液体担体として使用される電解質水溶液は、更に、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化リチウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、又はこれらの混合物を含むことができる。
【００５７】
水性液体担体は、好ましくは、等張生理食塩水（約１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、好ましくは１５４ｍＭ  ＮａＣｌに相当する０．９％ＮａＣｌ）である。
【００５８】
クロファジミンには少なくとも４種の多形が存在することが示されている（例えば、Ｂａｎｎｉｇａｎ，ｅｔ  ａｌ．，“Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ｉｎｔｏ  ｔｈｅ  Ｓｏｌｉｄ  ａｎｄ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  Ｋｎｏｗｎ  ａｎｄ  Ｎｏｖｅｌ  Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｃｌｏｆａｚｉｍｉｎｅ”，Ｃｒｙｓｔ．Ｇｒｏｗｔｈ  Ｄｅｓ．２０１６，１６（１２），ｐｐ．７２４０−７２５０参照）。クロファジミンは、三斜晶系ＦＩ型、単斜晶系ＦＩＩ型、及び斜方晶系ＦＩＩＩ型で存在することができる。他の型であるＦＩＶも高温においてのみ認められている。
【００５９】
したがって、本発明の更なる実施形態においては：
（ａ）治療有効用量のクロファジミンと；
（ｂ）親水性−親油性バランス値が１０を超える非イオン性界面活性剤と；
（ｃ）水、等張生理食塩水、緩衝生理食塩水、及び電解質水溶液から選択される水性液体担体と；
を含む医薬組成物であって、
クロファジミンは、懸濁物中の粒子の形態で提供され、
且つ
クロファジミンの粒子の中央径は５μｍ未満であり、且つＤ９０は６μｍ未満であり、好ましくは、中央径は２μｍ未満であり、且つＤ９０は３μｍ未満であり、クロファジミンは、三斜晶系ＦＩ型、単斜晶系ＦＩＩ型、及び斜方晶系ＦＩＩＩ型、並びにこの種の型の混合物から選択される１又は複数種の多形で提供される、医薬組成物が提供される。他の実施形態において、クロファジミンは、実質的に斜方晶系ＦＩＩＩ型で提供される。
【００６０】
本発明の更なる実施形態においては、本明細書に記載する組成物実施形態のいずれかによる医薬組成物が提供され、非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート２０（例えば、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０、ポリソルベート６０（例えば、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６０）、ポリソルベート８０（例えば、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０）、ステアリルアルコール、親水性−親油性バランス値が１４〜１６である水添ヒマシ油のポリエチレングリコール誘導体（例えば、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＲＨ４０）、親水性−親油性バランス値が１５〜１７である水添ヒマシ油のポリエチレングリコール誘導体（例えば、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＲＨ６０）、ソルビタンモノラウレート（例えば、Ｓｐａｎ（登録商標）２０）、ソルビタンモノパルミテート（例えば、Ｓｐａｎ（登録商標）４０）、ソルビタンモノステアレート（例えば、Ｓｐａｎ（登録商標）６０）、ポリオキシエチレン（２０）オレイルエーテル（例えば、Ｂｒｉｊ（登録商標）０２０）、ポリオキシエチレン（２０）セチルエーテル（例えば、Ｂｒｉｊ（登録商標）５８）、ポリオキシエチレン（１０）セチルエーテル（例えば、Ｂｒｉｊ（登録商標）Ｃ１０）、ポリオキシエチレン（１０）オレイルエーテル（例えば、Ｂｒｉｊ（登録商標）Ｏ１０）、ポリオキシエチレン（１００）ステアリルエーテル（例えば、Ｂｒｉｊ（登録商標）Ｓ１００）、ポリオキシエチレン（１０）ステアリルエーテル（例えば、Ｂｒｉｊ（登録商標）Ｓ１０）、ポリオキシエチレン（２０）ステアリルエーテル（例えば、Ｂｒｉｊ（登録商標）Ｓ２０）、ポリオキシエチレン（４）ラウリルエーテル（例えば、Ｂｒｉｊ（登録商標）Ｌ４）、ポリオキシエチレン（２０）セチルエーテル（例えば、Ｂｒｉｊ（登録商標）９３）、ポリオキシエチレン（２）セチルエーテル（例えば、Ｂｒｉｊ（登録商標）Ｓ２）、カプリロカプロイルポリオキシル−８グリセリド（例えば、Ｌａｂｒａｓｏｌ（登録商標））、ポリエチレングリコール（２０）ステアレート（例えば、Ｍｙｒｊ（商標）４９）、ポリエチレングリコール（４０）ステアレート（例えば、Ｍｙｒｊ（商標）Ｓ４０）、ポリエチレングリコール（１００）ステアレート（例えば、Ｍｙｒｊ（商標）Ｓ１００）、ポリエチレングリコール（８）ステアレート（例えば、Ｍｙｒｊ（商標）Ｓ８）、及びポリオキシル４０ステアレート（例えば、Ｍｙｒｊ（商標）５２）、並びにこれらの混合物から選択される。
【００６１】
本発明の他の実施形態において、本明細書に記載する組成物実施形態のいずれかによる医薬組成物が提供され、非イオン性界面活性剤はポリソルベート８０であり、水性液体担体は、蒸留水、高張生理食塩水、又は等張生理食塩水である。本発明の他の実施形態においては、医薬組成物が提供され、高張生理食塩水は、１％〜７％（ｗ／ｖ）塩化ナトリウムである。本発明の更なる実施形態において、医薬組成物が提供され、非イオン性界面活性剤は、超高純度ポリソルベート８０（例えば、ＮＯＦ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ８０（Ｈｘ２））であり、水性液体担体は、等張生理食塩水である。
【００６２】
本発明の他の実施形態において、本明細書に記載する組成物実施形態のいずれか１つによる医薬組成物が提供され、組成物の重量オスモル濃度は２００〜７００ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲にある。更なる実施形態において、組成物の重量オスモル濃度は３００〜４００ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲にある。
【００６３】
本発明の更なる実施形態において、本明細書に記載する組成物実施形態のいずれか１つによる医薬組成物が提供され、非イオン性界面活性剤は、組成物全体の０．００１％〜５％（ｖ／ｖ）の範囲にあり、クロファジミンの量は、組成物全体の０．１％〜２０％（ｗ／ｖ）の範囲にある。
【００６４】
本発明の他の実施形態においては、本明細書に記載する組成物実施形態のいずれか１つによる医薬組成物が提供され、医薬組成物は、次に示すステップ：
（１）クロファジミン、非イオン性界面活性剤、及び水の懸濁物を、適切な粒径のクロファジミンを含む懸濁物を得るために均質化するステップと、
（２）（１）から得られた懸濁物のｐＨを、ｐＨ５．５〜ｐＨ７．５の間のｐＨに調整するステップと、
（３）塩化ナトリウム濃度を適切な濃度に調整するステップと、
（４）重量オスモル濃度を適切な水準に調整するステップと、
を含むプロセスにより調製される。
【００６５】
更なる実施形態において、ｐＨは７．４に調整され、塩化ナトリウム濃度は１５４ｍＭ塩化ナトリウムに調整される。他の実施形態において、ステップ（１）の均質化は、高圧均質化、高剪断均質化、湿式粉砕、超音波均質化、又はこの種の処理の組合せにより実施される。他の態様において、クロファジミンの均質化は、多段階の均質化により実施される。他の実施形態において、適切な粒径のクロファジミンは、平均径が５μｍ未満であり、且つＤ９０が６μｍ未満の粒子である。更なる実施形態において、適切な粒径のクロファジミンは、平均径が２μｍ未満であり、且つＤ９０が３μｍ未満の粒子である。
【００６６】
本発明の更なる実施形態において、本明細書に記載する組成物実施形態のいずれか１つによる医薬組成物が提供され、医薬組成物は、次に示すステップ：
（１）クロファジミン及び非水性液体の懸濁物を、適切な粒径のクロファジミンを含む懸濁物を得るために均質化するステップと、
（２）クロファジミンを単離するステップと、
（３）クロファジミンを非イオン性界面活性剤及び水に添加するステップと、
（４）（３）から得られた懸濁物のｐＨをｐＨ５．５〜ｐＨ７．５の間のｐＨに調整するステップと、
（５）塩化ナトリウム濃度を適切な濃度に調整するステップと、
を含むプロセスにより調製される。
【００６７】
更なる実施形態において、ｐＨは、７．４に調整され、塩化ナトリウム濃度は、塩化ナトリウム１５４ｍＭに調整される。更なる実施形態において、ステップ（１）における均質化は、高圧均質化、高剪断均質化、湿式粉砕、超音波均質化、又はこの種の処理の組合せにより実施される。他の実施形態において、クロファジミンの均質化は、多段階の均質化により実施される。他の実施形態において、適切な粒径を有するクロファジミンは、平均径が５μｍ未満であり、且つＤ９０が６μｍ未満の粒子である。更なる実施形態において、適切な粒径を有するクロファジミンは、平均径が２μｍ未満であり、且つＤ９０が３μｍ未満の粒子である。
【００６８】
更なる実施形態においては、本明細書に記載する組成物実施形態のいずれか１つによる医薬組成物が提供され、この組成物は、次に示すステップ：
（１）クロファジミンを、適切な粒径のクロファジミンを得るために微粉化するステップと、
（２）クロファジミンを、非イオン性界面活性剤及び水に添加するステップと、
（３）（２）から得られた懸濁物のｐＨを、ｐＨ５．５〜ｐＨ７．５の間のｐＨに調整するステップと、
（４）塩化ナトリウム濃度を適切な濃度に調整するステップと、
を含むプロセスにより調製される。
【００６９】
更なる実施形態において、ｐＨは７．４に調整され、塩化ナトリウム濃度は１５４ｍＭ塩化ナトリウムに調整される。
【００７０】
他の実施形態において、クロファジミンの微粉化は、ジェットミル粉砕、噴霧乾燥、ボールミル粉砕、又は超臨界流体処理により実施される。他の実施形態において、クロファジミンの微粉化は、多段階の微粉化により実施される。他の実施形態において、適切な粒径のクロファジミンは、平均径が５μｍ未満であり、且つＤ９０が６μｍ未満の粒子である。更なる実施形態において、適切な粒径のクロファジミンは、平均径が２μｍ未満であり、且つＤ９０が３μｍ未満の粒子である。
【００７１】
更なる実施形態においては、本明細書に記載する組成物実施形態のいずれか１つによる医薬組成物が提供され、この組成物は、クロファジミンを、非イオン性界面活性剤、適切な濃度の塩化ナトリウムを含み、ｐＨがｐＨ５．５〜ｐＨ７．５の間に調整された水中に懸濁させた懸濁物を、適切な粒径のクロファジミンを得るために均質化することを含むプロセスにより調製される。更なる実施形態において、ｐＨは７．４に調整され、塩化ナトリウム濃度は１５４ｍＭ塩化ナトリウムに調整される。更なる実施形態において、均質化は、高圧均質化、高剪断均質化、湿式粉砕、超音波均質化、又はこの種の処理の組合せにより実施される。他の実施形態において、クロファジミンの均質化は、多段階の均質化により実施される。他の実施形態において、適切な粒径のクロファジミンは、粒子の平均径が５μｍ未満であり、且つＤ９０が６μｍ未満である。更なる実施形態において、適切な粒径のクロファジミンは、平均径が２μｍ未満であり、且つＤ９０が３μｍ未満の粒子である。
【００７２】
他の実施形態においては、本明細書に記載する組成物実施形態のいずれかによる医薬組成物を調製するためのプロセスであって、次に示すステップ：
（１）クロファジミン、非イオン性界面活性剤、及び水の懸濁物を、適切な粒径のクロファジミンを含む懸濁物を得るために均質化するステップと、
（２）（１）から得られた懸濁物のｐＨを、ｐＨ５．５〜ｄｐＨ７．５の間のｐＨに調整するステップと、
（３）塩化ナトリウム濃度を適切な濃度に調整するステップと、
（４）重量オスモル濃度を適切な水準に調整するステップと、
を含むプロセスが提供される。
【００７３】
他の実施形態において、ｐＨは７．４に調整され、塩化ナトリウム濃度は１５４ｍＭ塩化ナトリウムに調整される。更なる実施形態において、均質化は、高圧均質化、湿式粉砕、超音波均質化、又はこの種の処理の組合せにより実施される。更なる実施形態において、クロファジミンの均質化は、多段階の均質化により実施される。更なる実施形態において、適切な粒径のクロファジミンは、平均径が５μｍ未満であり、且つＤ９０が６μｍ未満の粒子である。他の実施形態において、適切な粒径のクロファジミンは、平均径が２μｍであり、且つＤ９０は３μｍ未満の粒子である。
【００７４】
他の実施形態においては、本明細書に記載する医薬組成物の実施形態を調製するためのプロセスであって、
（１）クロファジミン及び非水性液体の懸濁物を、適切な粒径のクロファジミンを含む懸濁物を得るために均質化するステップと、
（２）クロファジミンを単離するステップと、
（３）クロファジミンを非イオン性界面活性剤及び水に添加するステップと、
（４）（３）から得られた懸濁物のｐＨを、ｐＨ５．５〜ｐＨ７．５の間のｐＨになるように調整するステップと、
（５）塩化ナトリウム濃度を適切な濃度に調整するステップと、
を含むプロセスが提供される。
【００７５】
他の実施形態において、ｐＨは７．４に調整され、塩化ナトリウム濃度は１５４ｍＭ塩化ナトリウムに調整される。更なる実施形態において、均質化は、高圧均質化、湿式粉砕、超音波均質化、又はこの種の処理の組合せにより実施される。更なる実施形態において、クロファジミンの均質化は、多段階の均質化により実施される。更なる実施形態において、適切な粒径のクロファジミンは、平均径が５μｍ未満であり、且つＤ９０が６μｍ未満の粒子である。他の実施形態において、適切な粒径のクロファジミンは、平均径が２μｍであり、且つＤ９０が３μｍ未満の粒子である。
【００７６】
更なる実施形態においては、本明細書に記載する医薬組成物実施形態のいずれか１つによる医薬組成物を調製するためのプロセスであって、次に示すステップ：
（１）クロファジミンを、適切な粒径のクロファジミンを得るために微粉化するステップと、
（２）クロファジミンを、非イオン性界面活性剤及び水に添加するステップと、
（３）（２）から得られた懸濁物のｐＨを、ｐＨ５．５〜ｐＨ７．５の間のｐＨに調整するステップと、
（４）塩化ナトリウム濃度を適切な濃度に調整するステップと、
を含むプロセスが提供される。
【００７７】
他の実施形態においては、ｐＨは７．４に調整され、塩化ナトリウム濃度は１５４ｍＭ塩化ナトリウムに調整される。更なる実施形態において、クロファジミンの微粉化は、ジェットミル粉砕、噴霧乾燥、ボールミル粉砕、又は超臨界流体処理により実施される。更なる実施形態において、クロファジミンの微粉化は、多段階の微粉化により実施される。更なる実施形態において、適切な粒径のクロファジミンは、平均径が５μｍ未満であり、且つＤ９０が６μｍ未満の粒子である。他の実施形態において、適切な粒径のクロファジミンは、平均径が２μｍであり、且つＤ９０が３μｍ未満の粒子である。
【００７８】
他の実施形態においては、本明細書に記載する医薬組成物実施形態のいずれか１つによる医薬組成物を調製するためのプロセスであって、クロファジミンを、非イオン性界面活性剤、適切な濃度の塩化ナトリウムを含み、ｐＨがｐＨ５．５〜ｐＨ７．５の間に調整された水中に懸濁させた懸濁物を、適切な粒径のクロファジミンを得るために均質化することを含むプロセスが提供される。他の実施形態において、ｐＨは７．４であり、塩化ナトリウムの適切な濃度は１５４ｍＭ塩化ナトリウムである。更なる実施形態において、均質化は、高圧均質化、湿式粉砕、超音波均質化、又はこの種の処理の組合せにより実施される。更なる実施形態において、クロファジミンの均質化は、多段階の均質化により実施される。更なる実施形態において、適切な粒径のクロファジミンは、平均径が５μｍ未満であり、且つＤ９０が６μｍ未満の粒子である。他の実施形態において、適切な粒径のクロファジミンは、平均径が２μｍであり、且つＤ９０が３μｍ未満の粒子である。
【００７９】
更なる実施形態において、本明細書に記載する組成物実施形態のいずれか１つによる医薬組成物を調製するためのプロセスであって、次に示すステップ：（ａ）クロファジミン、非イオン性界面活性剤、及び水の懸濁物を、適切な粒径のクロファジミンを含む懸濁物を得るために均質化するステップと；（ｂ）得られた懸濁物のｐＨを、ｐＨ５．５〜ｐＨ７．５の間のｐＨに調整するステップと；（ｃ）塩化ナトリウム濃度を適切な濃度に調整するステップと、（ｄ）重量オスモル濃度を適切な水準に調整するステップと、を含み；ステップ（ｂ）、（ｃ）及び（ｄ）は、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）；（ｂ）、（ｄ）、（ｃ）；（ｃ）、（ｂ）、（ｄ）；（ｃ）、（ｄ）、（ｂ）；（ｄ）、（ｂ）、（ｃ）；又は（ｄ）、（ｃ）、（ｂ）の順序で行うことができる、プロセスが提供される。
【００８０】
他の実施形態において、本明細書に記載する組成物実施形態のいずれか１つによる医薬組成物を調製するためのプロセスであって、次に示すステップ：（ａ）クロファジミン及び非水性液体の懸濁物を、適切な粒径のクロファジミンを含む懸濁物を得るために均質化するステップと；（ｂ）クロファジミンを単離するステップと；（ｃ）クロファジミンを非イオン性界面活性剤及び水に添加するステップと；（ｄ）得られた懸濁物のｐＨを、ｐＨ５．５〜ｐＨ７．５の間のｐＨになるように調整するステップと；（ｅ）塩化ナトリウム濃度を適切な濃度に調整するステップと；を含み、ステップ（ｄ）及び（ｅ）は、（ｄ）、（ｅ）；又は（ｅ）、（ｄ）の順序で行うことができる、プロセスが提供される。
【００８１】
他の実施形態においては、本明細書に記載する組成物実施形態のいずれか１つによる医薬組成物を調製するためのプロセスであって、次に示すステップ：（ａ）クロファジミンを、適切な粒径のクロファジミンを得るために微粉化するステップと、（ｂ）クロファジミンを、非イオン性界面活性剤、適切な濃度の塩化ナトリウムを含み、ｐＨがｐＨ５．５〜７．５の間に調整された水に添加するステップと、を含むプロセスが提供される。
【００８２】
本発明の他の実施形態においては、吸入用エアロゾルの形態にある組合せ医薬であって、本明細書に記載する組成物実施形態のいずれか１つによる組成物を、超音波ネブライザー、帯電噴霧式（ｅｌｅｃｔｒｏｎ  ｓｐｒａｙ）ネブライザー、振動膜ネブライザー、ジェット式ネブライザー、及び機械式ソフトミスト定量吸入器から選択される噴霧器具（ｎｅｂｕｌｉｚｉｎｇ  ｄｅｖｉｃｅ）によってエアロゾル化することにより調製される組合せ医薬が提供され、噴霧器具により生成するエアロゾル粒子は、空気動力学的質量中央径が１〜５μｍである。更なる実施形態において、吸入用エアロゾルは、下部呼吸器系に沈着させるためのものである。他の実施形態において、噴霧器具の噴出速度は０．１〜１．０ｍｌ／ｍｉｎである。他の実施形態において、総吸入量は１ｍｌ〜５ｍｌの間にある。
【００８３】
他の実施形態においては、本明細書に記載する組成物実施形態のいずれか１つによる医薬組成物であって、噴霧化された４〜７％高張生理食塩水、メタ過ヨウ素酸塩、ドデシル硫酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、トロメタミン、銀ナノ粒子、ビスマス−チオール、エチレンジアミン四酢酸、ゲンタマイシン担持ホスファチジルコリン修飾金ナノ粒子（ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ  ｌｏａｄｅｄ  ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ−ｄｅｃｏｒａｔｅｄ  ｇｏｌｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ）、キレート剤、シス−２−デセン酸、Ｄ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸残基を含むペプチド（Ｄ−ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅ）、ガリウムメソポルフィリンＩＸ、ガリウムプロトポルフィリンＩＸ、クルクミン、パツリン、ペニシリン酸、バイカレイン、ナリンゲニン、ウルソール酸、アシアチン酸、コロソリン酸、脂肪酸、宿主防御ペプチド、及び抗微生物ペプチドから選択される、バイオフィルムを分散及び／若しくは破壊するための剤、粘液溶解剤及び／若しくは粘液活性剤、並びに／又はバイオフィルムの形成を低減する剤と組み合わせて使用するための、医薬組成物が提供される。他の実施形態において、この使用のための組成物は、ベダキリン又はその医薬的に許容される塩若しくは誘導体、セフォキシチン（ｃｅｆｏｘｉｔｉｎｅ）、アミカシン、クラリスロマイシン、ピラジンアミド、リファムピン、モキシフロキサシン、レボフロキサシン、及びパラ−アミノサリチレート、並びにこれらの混合物から選択される剤を投与する前、同時、又は後に投与される。
【００８４】
他の実施形態において、本明細書に記載する組合せ実施形態のいずれかによる組合せ医薬であって、噴霧化された４〜７％高張生理食塩水、メタ過ヨウ素酸塩、ドデシル硫酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、トロメタミン、銀ナノ粒子、ビスマス−チオール、エチレンジアミン四酢酸、ゲンタマイシン担持ホスファチジルコリン修飾金ナノ粒子、キレート剤、シス−２−デセン酸、Ｄ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸残基を含むペプチド、ガリウムメソポルフィリンＩＸ、ガリウムプロトポルフィリンＩＸ、クルクミン、パツリン、ペニシリン酸、バイカレイン、ナリンゲニン、ウルソール酸、アシアチン酸、コロソリン酸、脂肪酸、宿主防御ペプチド、及び抗微生物ペプチドから選択される、バイオフィルムを分散及び／若しくは破壊するための剤、粘液溶解剤及び／若しくは粘液活性剤、並びに／又はバイオフィルム形成を低減する剤と組み合わせて使用するための組合せ医薬が提供される。他の実施形態において、この使用のための組合せは、ベダキリン又はその医薬的に許容される塩若しくは誘導体、セフォキシチン（ｃｅｆｏｘｉｔｉｎｅ）、アミカシン、クラリスロマイシン、ピラジンアミド、リファムピン、モキシフロキサシン、レボフロキサシン、及びパラ−アミノサリチレート、及びこれらの混合物から選択される剤を投与する前、同時、又は後に、本発明の組成物を投与するために使用される。他の実施形態において、この組成物は、ベダキリン又はその医薬的に許容される塩若しくは誘導体、及びアミカシン、並びにこれらの混合物から選択される剤を投与する前、同時、又は後に投与される。更なる実施形態において、この組成物は、ベダキリン又はその医薬的に許容される塩若しくは誘導体を投与する前、同時、又は後に投与される。
【００８５】
他の実施形態においては、本明細書に記載する組成物実施形態のいずれか１つによる医薬組成物が、マイコバクテリア又は他のグラム陽性細菌により引き起こされる肺感染症の治療及び／又は予防に使用するために提供される。更なる実施形態において、この感染症は、非結核性抗酸菌及び結核菌（マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ））群並びにこれらの組合せから選択されるマイコバクテリウム属（ｇｅｎｕｓ  ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）に属する菌種によって引き起こされる。更なる実施形態において、この非結核性抗酸菌は、マイコバクテリウム・アビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ）、マイコバクテリウム・イントラセルラーレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、マイコバクテリウム・アブセッサス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ）、及びライ菌（マイコバクテリウム・レプラエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ））、並びにこれらの組合せから選択される。他の実施形態において、この感染症は、嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺、又は後天性免疫不全症候群の患者の肺ＭＡＣ症及び非結核性抗酸菌症（ｎｏｎｔｕｂｅｒｃｕｌｏｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）から選択される日和見感染症である。他の実施形態において、この感染症は、嚢胞性線維症患者における非結核性抗酸菌による日和見感染症である。他の実施形態において、この使用のための組成物は、ベダキリン又はその医薬的に許容される塩若しくは誘導体、セフォキシチン（ｃｅｆｏｘｉｔｉｎｅ）、アミカシン、クラリスロマイシン、ピラジンアミド、リファムピン、モキシフロキサシン、レボフロキサシン、及びパラ−アミノサリチレート、並びにこれらの混合物から選択される剤を投与する前、同時、又は後に投与される。他の実施形態において、この組成物は、ベダキリン又はその医薬的に許容される塩若しくは誘導体、及びアミカシン、並びにこれらの混合物から選択される剤を投与する前、同時、又は後に投与される。更なる実施形態において、この組成物は、ベダキリン又はその医薬的に許容される塩若しくは誘導体を投与する前、同時、又は後に投与される。
【００８６】
他の実施形態においては、本明細書に記載する組合せ実施形態のいずれかによる組合せ医薬が、マイコバクテリア又は他のグラム陽性細菌により引き起こされる肺感染症の治療及び／又は予防に使用するために提供される。更なる実施形態において、この感染症は、非結核性抗酸菌及び結核菌（マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ））並びにこれらの組合せから選択される、マイコバクテリウム属（ｇｅｎｕｓ  ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）に属する菌種により引き起こされる。更なる実施形態において、非結核性抗酸菌は、マイコバクテリウム・アビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ）、マイコバクテリウム・イントラセルラーレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、マイコバクテリウム・アブセッサス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ）、及びライ菌（マイコバクテリウム・レプラエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ））、並びにこれらの組合せから選択される。他の実施形態において、この感染症は、嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺、又は後天性免疫不全症候群の患者における肺ＭＡＣ症及び非結核性抗酸菌症から選択される日和見感染症である。他の実施形態において、この感染症は、嚢胞性線維症患者における非結核性抗酸菌による日和見感染症である。他の実施形態において、この使用のための組合せは、ベダキリン又はその医薬的に許容される塩若しくは誘導体、セフォキシチン（ｃｅｆｏｘｉｔｉｎｅ）、アミカシン、クラリスロマイシン、ピラジンアミド、リファムピン、モキシフロキサシン、レボフロキサシン、及びパラ−アミノサリチレート、並びにこれらの混合物から選択される剤を投与する前、同時、又は後に本発明の組成物を投与するために使用される。他の実施形態において、この使用のための組合せは、ベダキリン又はその医薬的に許容される塩若しくは誘導体、及びアミカシン、並びにこれらの混合物から選択される剤を投与する前、同時、又は後に本発明の組成物を投与するために使用される。他の実施形態において、この使用のための組合せは、ベダキリン又はその医薬的に許容される塩若しくは誘導体を投与する前、同時、又は後に本発明の組成物を投与するために使用される。
【００８７】
他の実施形態においては、マイコバクテリア又は他のグラム陽性細菌により引き起こされる肺感染症を治療又は予防する際の抗菌活性の付与に使用するための系が提供され、この系は：
１）
（ａ）治療有効用量のクロファジミンと；
（ｂ）親水性−親油性バランス値が１０を超える非イオン性界面活性剤と；
（ｃ）水、等張生理食塩水、緩衝生理食塩水、及び電解質水溶液から選択される水性液体担体と；
を含む、噴霧化された組合せ医薬と、
２）噴霧器と、
を含み、
クロファジミンは懸濁物の形態で存在し、
この系により生成したエアロゾル粒子は空気動力学的質量中央径が１〜５μｍである。
【００８８】
更なる実施形態においては、肺真菌感染症若しくはクロストリジウム・ディフィシル（ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）又はこれらの組合せの治療及び／又は予防に使用するための、本明細書に記載する組成物実施形態のいずれか１つによる医薬組成物が提供される。他の実施形態においては、肺真菌感染症の治療及び／又は予防に使用するための、本明細書に記載する組成物実施形態のいずれか１つによる医薬組成物が提供される。更なる実施形態において、肺真菌感染症は、カンジダ・アルビカンス（ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）若しくはアスペルギルス・フミガツス（ａｓｐｅｒｇｉｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）又はこれらの組合せである。
【００８９】
更なる実施形態においては、肺真菌感染症若しくはクロストリジウム・ディフィシル又はこれらの組合せの治療及び／又は予防に使用するための、本明細書に記載する組合せ実施形態のいずれか１つによる組合せ医薬が提供される。肺真菌感染症の治療及び／又は予防に使用するための、本明細書に記載する組合せ実施形態のいずれか１つによる組合せ医薬が提供される。更なる実施形態において、肺真菌感染症は、カンジダ・アルビカンス（ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）若しくはアスペルギルス・フミガツス（ａｓｐｅｒｇｉｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、又はこれらの組合せである。
【００９０】
他の実施形態において、それを必要とする患者における肺感染症を治療又は予防する方法であって、本明細書に記載する組成物実施形態のいずれか１つによる組成物を吸入することにより投与することを含む、方法が提供される。他の実施形態において、この感染症は、非結核性抗酸菌及び結核菌（マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ））群並びにこれらの組合せから選択される、マイコバクテリウム属（ｇｅｎｕｓ  ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）に属する菌種により引き起こされる。更なる実施形態において、非結核性抗酸菌は、マイコバクテリウム・アビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ）、マイコバクテリウム・イントラセルラーレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、マイコバクテリウム・アブセッサス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ）、及びライ菌（マイコバクテリウム・レプラエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ））、並びにこれらの組合せから選択される。更なる実施形態において、この感染症は、嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患、又は後天性免疫不全症候群の患者における肺ＭＡＣ症及び非結核性抗酸菌症から選択される日和見感染症である。他の実施形態において、この感染症は、嚢胞性線維症患者における非結核性抗酸菌による日和見感染症である。
【００９１】
更なる実施形態においては、それを必要とする患者におけるマイコバクテリア又は他のグラム陽性細菌により引き起こされる肺感染症を治療又は予防する方法であって、ベダキリン又はその医薬的に許容される誘導体の塩、セフォキシチン（ｃｅｆｏｘｉｔｉｎｅ）、アミカシン、クラリスロマイシン、ピラジンアミド、リファムピン、モキシフロキサシン、レボフロキサシン、及びパラ−アミノサリチレート、並びにこれらの混合物から選択される剤を投与する前、同時、又は後に、本明細書に記載する組成物実施形態のいずれか１つによる組成物を吸入することにより投与することを含む、方法が提供される。他の実施形態において、この剤は、ベダキリン又はアミカシンである。更なる実施形態において、この剤はベダキリンである。
【００９２】
粒径及び分布
エアロゾル療法の治療効果は沈着量（ｄｏｓｅ  ｄｅｐｏｓｉｔｅｄ）及びその分布に依存する。エアロゾルの粒径は、薬物のエアロゾルの肺内における沈着量及び分布を定める重要な変量の１つである。
【００９３】
一般に、吸入されたエアロゾル粒子は２種類の機構：衝突（普通はより大きなエアロゾル粒子を支配する）及び沈降（より小さなエアロゾル粒子で優勢となる）のうちの１種により沈着する傾向がある。衝突は、吸入されたエアロゾル粒子の運動量が、粒子が気流に従わないほど十分に大きい場合に起こり、生理学的表面（ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｕｒｆａｃｅ）に行き着く。それとは対照的に、沈降は、吸気の流れに乗って運ばれた非常に小さいエアロゾル粒子が、主として下部呼吸器系で重力の作用により沈降した結果として生理学的表面に行き着いた場合に起こる。
【００９４】
肺への薬物送達は、口腔咽頭を介してエアロゾルを吸入することにより行うことができる。空気動力学的直径が約５μｍを超えるエアロゾル粒子は一般に肺に到達しない。そうならずに、これらは喉の奥に衝突する傾向にあり、嚥下され、経口吸収される可能性もある。直径が約３〜約５μｍのエアロゾル粒子は、上〜中部気道領域（ｕｐｐｅｒ−ｔｏ  ｍｉｄ−ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｒｅｇｉｏｎ）（誘導気道）に到達するのに十分に小さいが、肺胞に到達するには大き過ぎる。それよりも小さい、即ち、約０．５〜約３μｍのエアロゾル粒子は肺胞領域に到達することができる。直径が約０．５μｍよりも小さいエアロゾル粒子は、安静呼吸時に呼吸と共に排出される傾向にあるが、息止めにより肺胞領域に沈着させることも可能である。
【００９５】
肺薬物送達に使用されるエアロゾルは、幅広い範囲のエアロゾル粒径から構成されているため、統計学的記述子が使用される。肺薬物送達に使用されるエアロゾルは、通常、その質量中央径（ＭＭＤ）で表される。即ち、エアロゾル粒子に含まれる質量の半分がＭＭＤよりも大きく、エアロゾル粒子に含まれる質量の半分がＭＭＤよりも小さい。粒子の密度が均一である場合は、体積中央径（ＶＭＤ）をＭＭＤと交換可能に使用することができる。ＶＭＤ及びＭＭＤの決定はレーザー回折を用いて行われる。分布の幅は幾何標準偏差（ＧＳＤ）で表される。一方、気道内のエアロゾル粒子の沈着は、粒子の空気動力学的直径を用いる方が正確に表せるので、通常は空気動力学的質量中央径が用いられる。ＭＭＡＤ測定は、慣性衝突又は飛行時間の測定により行われる。水粒子の場合、ＶＭＤ、ＭＭＤ、及びＭＭＡＤは等しいはずである。しかし、エアロゾルがインパクターを通過する間の湿度が制御されていない場合は、脱水が起こるため、ＭＭＡＤの測定値はＭＭＤ及びＶＭＤよりも小さくなるであろう。この記述法を用いるためには、ＶＭＤ、ＭＭＤ、及びＭＭＡＤの測定は、ＶＭＤ、ＭＭＤ、及びＭＭＡＤの記述が比較可能（ｃｏｍｐａｒａｂｌｅ）となるように、管理された条件下で行われるものと見なされる。
【００９６】
しかしながら、説明を目的とする場合、エアロゾル粒子のエアロゾル粒径は、米国薬局方協会（ＵＳ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ  Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ）に準拠し、次世代インパクター（Ｎｅｘｔ  Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  Ｉｍｐａｃｔｏｒ）（ＮＧＩ）を用いて室温で測定することにより決定されるＭＭＡＤとして与えられるであろう（Ｉｎ  Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｒｅｖｉｓｉｏｎ  ＜６０１＞  Ａｅｒｏｓｏｌｓ，Ｎａｓａｌ  Ｓｐｒａｙｓ，  Ｍｅｔｅｒｅｄ−Ｄｏｓｅ  Ｉｎｈａｌｅｒｓ，ａｎｄ  Ｄｒｙ  Ｐｏｗｄｅｒ  Ｉｎｈａｌｅｒｓ，Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ  Ｆｏｒｕｍ（２００３），Ｖｏｌｕｍｅ  Ｎｕｍｂｅｒ  ２９，ｐａｇｅｓ  １１７６−１２１０、Ｊｏｌｙｏｎ  Ｍｉｔｃｈｅｌｌ，  Ｍａｒｋ  Ｎａｇｅｌ“Ｐａｒｔｉｃｌｅ  Ｓｉｚｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ａｅｒｏｓｏｌｓ  ｆｒｏｍ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｉｎｈａｌｅｒｓ”，ＫＯＮＡ  Ｐｏｗｄｅｒ  ａｎｄ  Ｐａｒｔｉｃｌｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ（２００４），Ｖｏｌｕｍｅ  ２２，ｐａｇｅｓ３２−６５にも開示）。
【００９７】
本発明によれば、エアロゾルの粒径は、クロファジミンを感染部位に最大限に沈着させると共に忍容性が最大になるように最適化される。エアロゾル粒径は、空気動力学的質量中央径（ＭＭＡＤ）に換算して表すことができる。大きな粒子（例えば、ＭＭＡＤ＞５μｍ）は、気道の屈曲に沿って進むには大き過ぎるため、胸腔外及び上気道に沈着する傾向にある。大きな粒子が上気道に沈着すると不耐症状（例えば、咳及び気管支痙攣）が現れる可能性がある。
【００９８】
したがって、好ましい実施形態によれば、エアロゾルのＭＭＡＤは約５μｍ未満とすべきであり、好ましくは約１〜５μｍの間にあり、より好ましくは３μｍ未満（＜３μｍ）である。
【００９９】
しかしながら、呼吸法を指導（ｇｕｉｄｅｄ  ｂｒｅａｔｈｉｎｇ  ｍａｎｅｕｖｅｒ）することによって、より大きな粒子を胸腔外及び上気道を通過させ、安静呼吸時よりも肺の深部に侵入させることが可能になり、それによってエアロゾルの中及び下部呼吸器系への沈着が増加するであろう。指導により呼吸法を１００ｍｌ／ｍｉｎと遅くすることもできる。したがって、指導された呼吸法を用いる場合、エアロゾルの好ましいＭＭＡＤは約１０μｍ未満となるはずである。
【０１００】
同様に重要な他の因子（エアロゾル粒径以外に）は、固体粒子の粒径及び粒径分布であり、この場合はクロファジミンの粒径及び分布である。所与のエアロゾル粒子の固体粒子の粒径は、それを含むエアロゾル粒子よりも小さくなければならない。より大きなエアロゾル粒子は、１個又は複数個の固体粒子を含む可能性がある。更に、希薄な懸濁物を扱う際は、エアロゾル粒子の大部分は固体粒子を含まない可能性がある。
【０１０１】
そのため、エアロゾル粒子のＭＭＡＤよりも大幅に小さい固体薬物粒子を用いることが望ましい。例えば、エアロゾル粒子のＭＭＡＤが３μｍである場合、固体粒子は１μｍ以下とすることが望ましいであろう。
【０１０２】
他の考慮すべき事項は、例えば、振動メッシュ式（ｖｉｂｒａｔｉｎｇ  ｍｅｓｈ）ネブライザーを用いる場合であり、製剤はプレートの孔を介して送り出され、このプレートは懸濁物を小滴に分解する。その場合、こうした理由から、固体粒子が孔を通過するように、孔よりも小さくすることも必要である。
【０１０３】
懸濁物中の固体の粒径は粒子の平均径で与えることができ、粒子の分布によって与えることもできる。Ｄ９０値は、懸濁物中の粒子の９０％がその平均径以下にあることを表す。
【０１０４】
噴霧器
水性及び他の非加圧式液体系用として、各種噴霧器（スモールボリュームネブライザー（ｓｍａｌｌ  ｖｏｌｕｍｅ  ｎｅｂｕｌｉｚｅｒ）を含む）が、製剤をエアロゾル化するために利用可能である。コンプレッサー駆動式噴霧器には、ジェット噴霧技術が組み込まれており、圧縮空気を使用して液体のエアロゾルを生成する。この種の器具は、例えば、Ｈｅａｌｔｈｄｙｎｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．；Ｉｎｖａｃａｒｅ，Ｉｎｃ．；Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ，Ｉｎｃ．；Ｐａｒｉ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ，Ｉｎｃ．；Ｍａｄａ  Ｍｅｄｉｃａｌ，Ｉｎｃ．；Ｐｕｒｉｔａｎ−Ｂｅｎｎｅｔ；Ｓｃｈｕｃｏ，Ｉｎｃ．，ＤｅＶｉｌｂｉｓｓ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｃａｒｅ，Ｉｎｃ．；及びＨｏｓｐｉｔａｋ，Ｉｎｃから市販されている。超音波ネブライザーは、吸入可能な液滴を生成するために、圧電結晶を振動させる形で機械的エネルギーを利用しており、例えば、Ｏｍｒｏｎ  Ｈｅａｔｈｃａｒｅ，Ｉｎｃ．及びＤｅＶｉｌｂｉｓｓ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｃａｒｅ，Ｉｎｃから市販されている。振動メッシュ式ネブライザーは、吸入可能な液滴を生成するために圧電パルス又は機械的パルスのいずれかを利用している。本明細書に記載するクロファジミンと一緒に使用される噴霧器の他の例は、米国特許第４，２６８，４６０号明細書；米国特許第４，２５３，４６８号明細書；米国特許第４，０４６，１４６号明細書；米国特許第３，８２６，２５５号明細書；米国特許第４，６４９，９１１号明細書；米国特許第４，５１０，９２９号明細書；米国特許第４，６２４，２５１号明細書；米国特許第５，１６４，７４０号明細書；米国特許第５，５８６，５５０号明細書；米国特許第５，７５８，６３７号明細書；米国特許第６，６４４，３０４号明細書；米国特許第６，３３８，４４３号明細書；米国特許第５，９０６，２０２号明細書；米国特許第５，９３４，２７２号明細書；米国特許第５，９６０，７９２号明細書；米国特許第５，９７１，９５１号明細書；米国特許第６，０７０，５７５号明細書；米国特許第６，１９２，８７６号明細書；米国特許第６，２３０，７０６号明細書；米国特許第６，３４９，７１９号明細書；米国特許第６，３６７，４７０号明細書；米国特許第６，５４３，４４２号明細書；米国特許第６，５８４，９７１号明細書；米国特許第６，６０１，５８１号明細書；米国特許第４，２６３，９０７号明細書；米国特許第５，７０９，２０２号明細書；米国特許第５，８２３，１７９号明細書；米国特許第６，１９２，８７６号明細書；米国特許第６，６４４，３０４号明細書；米国特許第５，５４９，１０２号明細書；米国特許第６，０８３，９２２号明細書；米国特許第６，１６１，５３６号明細書；米国特許第６，２６４，９２２号明細書；米国特許第６，５５７，５４９号明細書；及び米国特許第６，６１２，３０３号明細書に記載されており、これら全ての全内容を本明細書の一部を構成するものとしてここに援用する。本明細書に記載するクロファジミン組成物と一緒に使用することができる市販の噴霧器の例としては、Ａｅｒｏｇｅｎ製Ｒｅｓｐｉｒｇａｒｄ  ＩＩ（登録商標）、Ａｅｒｏｎｅｂ（登録商標）、Ａｅｒｏｎｅｂ（登録商標���Ｐｒｏ、及びＡｅｒｏｎｅｂ（登録商標）Ｇｏ；Ａｒａｄｉｇｍ製ＡＥＲｘ（登録商標）及びＡＥＲｘ  Ｅｓｓｅｎｃｅ（商標）；Ｉ−ｎｅｂ  Ｒｅｓｐｉｒｏｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．製Ｐｏｒｔａ−Ｎｅｂ（登録商標）、Ｆｒｅｅｗａｙ  Ｆｒｅｅｄｏｍ（商標）、Ｓｉｄｅｓｔｒｅａｍ、Ｖｅｎｔｓｔｒｅａｍ；並びにＰＡＲＩ，ＧｍｂＨ製ＰＡＲＩ  ＬＣＰｌｕｓ（登録商標）、ＰＡＲＩ  ＬＣ−Ｓｔａｒ（登録商標）、及びｅ−Ｆｌｏｗ７ｍが挙げられる。他の非限定的な例は米国特許第６，１９６，２１９号明細書に開示されている。
【０１０５】
本発明によれば、医薬組成物は、好ましくは、超音波ネブライザー、帯電噴霧式ネブライザー、振動膜ネブライザー、ジェット式ネブライザー、又は機械式ソフトミスト定量吸入器から選択される噴霧器具を用いてエアロゾル化することができる。
【０１０６】
器具が患者の吸入速度を電気的方式又は機械的方式のいずれかにより制御することが好ましい。
【０１０７】
更なる好ましい実施形態において、器具によるエアロゾルの生成は、ＡＫＩＴＡデバイス（ＡＫＩＴＡ  ｄｅｖｉｃｅ）のように、患者の吸入動作により作動する。
【０１０８】
本発明に従い使用される上述の噴霧器／器具の好ましい（市販品の）例は、Ｖｅｃｔｕｒａ  ｆｏｘ、Ｐａｒｉ  ｅＦｌｏｗ、Ｐａｒｉ  Ｔｒｅｋ  Ｓ、Ｐｈｉｌｉｐｓ  Ｉｎｎｏｓｐｉｒｅ  ｍｉｎｉ、Ｐｈｉｌｉｐｓ  ＩｎｎｏＳｐｉｒｅ  Ｇｏ、Ｍｅｄｓｐｒａｙ  ｄｅｖｉｃｅ、Ａｅｒｏｎｅｂ  Ｇｏ、Ａｅｒｏｇｅｎ  Ｕｌｔｒａ、Ｒｅｓｐｉｒｏｎｉｃｓ  Ａｅｒｏｎｅｂ、Ａｋｉｔａ、Ｍｅｄｓｐｒａｙ  Ｅｃｏｍｙｓｔ、及びＲｅｓｐｉｍａｔである。
【０１０９】
治療及び／又は予防における使用
本発明による医薬組成物及び組合せ医薬（エアロゾル、エアロゾル化された製剤）及び系は、マイコバクテリア又は黄色ブドウ球菌（スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）（メチシリン耐性及びバンコマイシン中間耐性株を含む）、肺炎連鎖球菌（ストレプトコッカス・ニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ））、及び腸球菌（エンテロコッカス属菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ．））等の他のクロファジミン感受性細菌により引き起こされる肺感染症の治療及び／又は予防に使用することが意図されている。本発明の医薬組成物及び組合せ医薬は、肺真菌感染症の治療及び／又は予防にも使用することができる。
【０１１０】
クロファジミンの投薬
本発明によれば、医薬組成物は、本発明の医薬組成物を約１〜５ｍｌ、好ましくは１〜２ｍｌ噴霧化することにより送達される。
【０１１１】
したがって、医薬組成物中のクロファジミン濃度が約２０ｍｇ／ｍｌであることに基づけば、目標充填量（ｆｉｌｌ  ｄｏｓｅ）は、クロファジミン２０〜１００ｍｇに相当する約１〜５ｍｌである。
【０１１２】
本発明に従い投与されるクロファジミンの１日経肺用量（ｄａｉｌｙ  ｌｕｎｇ  ｄｏｓｅ）（即ち、肺に沈着する薬量）は、Ｍ・アブセッサス（Ｍ．ａｂｓｃｅｓｓｕｓ）感染症の場合は約５〜１０ｍｇであり、これは名目投与量１５〜３０ｍｇ（器具が投与した薬量）に相当する。
【０１１３】
当業者であれば、投与すべきクロファジミンの経肺用量（したがって、充填量／名目投与量／噴霧体積）を、当該技術分野において十分に確立されているクロファジミンの各細菌株に対する最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）に基づき、機械的に調整するであろうことが理解されよう。
【０１１４】
したがって、１日経肺用量は１日１回又は２回の投与頻度に応じて分割されることになる。
【０１１５】
本発明によれば、クロファジミンは、１日の総経肺用量が結果として約５〜１０ｍｇとなるように、１日１回又は２回投与される。
【０１１６】
上に述べた量はクロファジミンの遊離塩基に関するものであり、誘導体及び塩の用量は、各化合物及び菌株のＭＩＣに基づき調整しなければならないことは当業者に明らかであろう。
【０１１７】
粘液溶解剤／バイオフィルム変性剤（ｂｉｏｆｉｌｍ  ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）
エアロゾル治療時に痰の粘度を低下させること、及び存在するバイオフィルムを破壊することを目的として、本発明による治療及び／又は予防は、粘液溶解剤及び／又はバイオフィルム破壊剤の追加投与を含むことができる。
【０１１８】
これらの剤は、配合剤（ｆｉｘｅｄ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）として製剤化するか、又は本発明によるクロファジミンを含む医薬組成物／エアロゾルの組合せと同時に又はそれに続いて投与することができる。
【０１１９】
本発明に従い使用されるバイオフィルムを分散／破壊するための剤、粘液溶解剤及び／若しくは粘液活性剤、並びに／又はバイオフィルム形成を低減する剤は、噴霧化された４〜７％高張生理食塩水、メタ過ヨウ素酸塩、ドデシル硫酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、トロメタミン、銀ナノ粒子、ビスマス−チオール、エチレンジアミン四酢酸、ゲンタマイシン担持ホスファチジルコリン修飾金ナノ粒子、キレート剤、シス−２−デセン酸、Ｄ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸残基を含むペプチド、ガリウムメソポルフィリンＩＸ、ガリウムプロトポルフィリンＩＸ、クルクミン、パツリン、ペニシリン酸、バイカレイン、ナリンゲニン、ウルソール酸、アシアチン酸、コロソリン酸、脂肪酸、宿主防御ペプチド、及び抗微生物ペプチドから選択される。
【０１２０】
更に、他の医薬活性剤を、本発明による医薬組成物／エアロゾルの組合せと併用することができる。この種の活性剤は、ベダキリン又はその医薬的に許容される塩若しくは誘導体、セフォキシチン（ｃｅｆｏｘｉｔｉｎｅ）、アミカシン、クラリスロマイシン、ピラジンアミド、リファムピン、モキシフロキサシン、レボフロキサシン、及びパラ−アミノサリチレート、並びにこれらの混合物から選択することができる。
【０１２１】
これらの剤は、配合剤として製剤化することもできるし、或いは、本発明によるクロファジミンを含む医薬組成物／エアロゾルの組合せの前、同時、又は後に投与することもできる。
【０１２２】
以下に示す実施例は、上に述べた発明を用いる様式をより充分に説明すると共に、本発明の様々な態様を実施するために考えられる最良の形態を説明する役割を果たすものである。本発明による実施例は、ここに記載する特許請求の範囲に包含される。
【実施例】
【０１２３】
試験
以下に示す例示的な組成物及び組合せを本明細書に記載するプロセスに従い調製した。
【０１２４】
実施例１
クロファジミン（三斜晶系Ｉ型として）２００ｍｇ、塩化ナトリウム９０ｍｇ、及び水９．５ｍｌを、Ｕｌｔｒａ−Ｔｕｒｒａｘホモジナイザーにて１０，０００ｒｐｍで５分間の混合を２回行った。ポリソルベート８０（ＮＯＦ  Ｈｘ２）０．５ｍｌを加えた。この混合物を超音波振動子（ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ  ｐｒｏｂｅ）（Ｂａｎｄｅｌｉｎ  Ｓｏｎｏｐｌｕｓ  Ｐｒｏｂｅ  ＭＳ７３を取り付けたＢｒａｎｓｏｎ  Ｄｉｇｉｔａｌ  Ｓｏｎｉｆｉｅｒ（商標）２５０Ｄ）にて振幅７０％で７回（各３分間）処理した。体積を水で１０ｍｌに調整した。この懸濁物をＶＷＲ折り畳み定性濾紙（３０３、粒子保持能５〜１３μｍ、サイズ：１５０ｍｍ）で濾過することにより、実施例１の組成物を得た。実施例１の組成物のクロファジミンの中央粒径は３．９μｍであり、Ｄ９０は６．７μｍであった。クロファジミンの濃度は、紫外／可視分光法により２８０ｎｍで測定し、移動相で希釈したクロファジミンの１ｍｇ／ｍｌの原液で較正することにより、７．１６ｍｇ／ｍｌであると求められた。
【０１２５】
実施例１の組成物を表１に示す。
【０１２６】
【表１】
2021535124.tif 000003
【０１２７】
斜方晶系ＩＩＩ型のクロファジミンの調製
クロファジミン（１０ｇ）のトルエン（２０ｍｌ）中スラリーを４０℃の油浴中でマグネチックスターラーを使用し８００ｒｐｍで７２時間撹拌した。スラリーの固体部分をるつぼ型濾過器（ｃｒｕｃｉｂｌｅ）で濾過して回収し、オーブン内で最高温度を４０℃として真空乾燥させた。これにより実質的に純粋な（≧９８％）斜方晶系ＩＩＩ型のクロファジミンを収量８．６４ｇで得た。
【０１２８】
実施例２
ポリソルベート８０（ＮＯＦ  Ｈｘ２）０．５％及び塩化ナトリウム０．６％を含む水１００ｍｌ中に斜方晶系ＩＩＩ型のクロファジミン６ｇを含む懸濁物を、Ｕｌｔｒａ−Ｔｕｒｒａｘ（登録商標）を用いて１０，０００ｒｐｍで約４０秒間予備的に微粒子化した。０．６％塩化ナトリウムを含む水を加えて体積を３００ｍｌとすることにより予備調製物を調製した。この懸濁物３００ｍｌをホモジナイザーであるＭ−１１０ＥＨ−３０  ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ、Ｗｅｓｔｗｏｏｄ、ＭＡ、ＵＳＡ）の入口に投入し、懸濁物をＨ３０Ｚチャンバに５，０００ｐｓｉで１５分間循環させることにより予備均質化ステップを実施した。次いで、２番目のＨ１０Ｚチャンバを第１のチャンバに対し直列に取り付け、懸濁物を更に２３分間２５，０００ｐｓｉで均質化した。ＨＯＲＩＢＡ  ＬＡ  ９５０を用いて粒径解析を実施したところ、中央粒径が０．８３μｍであり、Ｄ９０値が１．１７μｍであることが示された。紫外／可視分光法により２８０ｎｍで測定し、移動相で希釈したクロファジミンの１ｍｇ／ｍｌの原液で較正することにより、クロファジミンの濃度は１６．０５ｍｇ／ｍｌと求められた。
【０１２９】
実施例２の組成を表２に示す。
【０１３０】
【表２】
2021535124.tif 000004
【０１３１】
実施例３
クロファジミン（結晶変態：斜方晶系ＩＩＩ型）を、水、塩化ナトリウム、及びポリソルベート８０の溶液に懸濁させた懸濁物を、Ｍ−１１０ＥＨ−３０  Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ（登録商標）Ｐｒｏｃｅｓｓｏｒ（チャンバ：Ｈ３０Ｚ及びＧ１０Ｚ）を使用し、Ｈ３０Ｚ−Ｇ１０Ｚ配置とし、圧力２８，２５０ｐｓｉで３０分間運転することにより実施例３の組成物を生成した。得られたクロファジミンの粒子の中央粒径は１．２８μｍであり、Ｄ９０は２μｍ未満であった。
【０１３２】
実施例３の組成を表３に示す。
【０１３３】
【表３】
2021535124.tif 000005
【０１３４】
粘度測定
実施例３の組成物の粘度をＳＴＲＥＳＳＴＥＣＨ  Ｒｈｅｏｍｅｔｅｒを用いて応力制御モードで測定した。中空円筒治具（ｄｏｕｂｌｅ  ｇａｐ  ｇｅｏｍｅｔｒｙ）を利用し、スピンドルを連続回転させて、各温度点（ｄｕｒｉｎｇ  ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ  ｐｏｉｎｔｓ）で微粒子が確実に懸濁したままになるようにした。粘度測定は、応力を０．０１、０．０５、及び０．１Ｐａとし、それぞれ２０℃、２５℃、及び３０℃で測定した。２回の別々の試料充填（ｌｏａｄｉｎｇ）で実施することにより得られた粘度の平均値を次の表４に示す。
【０１３５】
【表４】
2021535124.tif 000006
【０１３６】
動物モデル及び効力試験
クロファジミンを全身投与するのではなく、直接呼吸器に送達した後の肺組織における濃度水準を確立するための予備データを得ることを目的として、臨床分離（ｃｌｉｎｉｃａｌ）ＮＴＭ菌種のｉｎ  ｖｉｖｏ急性肺感染マウスモデルにおいて本発明の組成物が増殖を阻害する能力を試験した。対象とする菌種毎のＮＴＭ肺感染を調査するために２種の別々のマウスモデルを使用した。試験を行うために、マイコバクテリウム・アビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ、）２２８５菌株及びマイコバクテリウム・アブセッサス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ）１０３菌株を使用した（菌株の詳細は、ＥＭＢＬ／ＧｅｎＢａｎｋ／ＤＤＢＪデータベースに登録（２０１４年９月）されている“Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ｕｓｉｎｇ  ｗｈｏｌｅ  ｇｅｎｏｍｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ”．Ｈａｚｂｏｎ  Ｍ．Ｈ．，Ｒｉｏｊａｓ  Ｍ．Ａ．，Ｄａｍｏｎ  Ａ．Ｍ．，Ａｌａｌａｄｅ  Ｒ．，Ｃａｎｔｗｅｌｌ  Ｂ．Ｊ．，Ｍｏｎａｃｏ  Ａ．，Ｋｉｎｇ  Ｓ．，Ｓｏｈｒａｂｉ  Ａ．に記載されている）。これらの２種の菌種は、既に文献においてＮＴＭ感染のモデルとして使用されている（Ｏｂｒｅｇｏｎ−Ｈｅｎａｏ  ｅｔ  ａｌ．２０１５  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ；ａｎｄ  Ｃｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎｉｍａｌ  Ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  Ｎｏｎ−Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｕｓ  Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｌ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ，Ｍｙｃｏｂａｃｔ  Ｄｉｓ  ２０１６）。
【０１３７】
Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおける生体内安全性試験：
生体内安全性及び忍容性を評価するために、６〜８週齢のＢａｌｂ／Ｃ雌性マウスをＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒより入手した。投薬前にマウスを１週間休息させた。クロファジミンの各用量に３匹の健康なマウスを提供し、１日置きに計３回投与した。クロファジミン１０．０、５．０１、及び２．５１ｍｇ／ｋｇを実施例１の組成物中でマウスに投与した。３匹の健康なマウスにこの化合物のエアロゾルをＭｉｃｒｏｓｐｒａｙｅｒ（登録商標）を用いて気管内に１日置きに計３回投与した。
【０１３８】
クロファジミンは２０ｍｇ／ｋｇ（強制経口投与、２００μｌ）の安全性が確認されている。実施例１の組成物は試験を行った最大用量でも毒性を示さなかった（１０．０ｍｇ／ｋｇ；０．２５０６ｍｇ／回、３５μｌ中、気管内）。したがって、式Ｉの組成物は１０．０ｍｇ／ｋｇで安全であり、充分な忍容性を示すと見なされる。
【０１３９】
最小発育阻止濃度の決定
最小発育阻害濃度（ＭＩＣ）試験をミューラー・ヒントン（ＭＨ）ブロス（陽イオン調整）（ＣＬＳＩ規格Ｍ７−Ａ７で推奨されているカルシウム及びマグネシウムイオン濃度）（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用し、微量液体希釈法（ｍｉｃｒｏｂｒｏｔｈ  ｄｉｌｕｔｉｏｎ  ｍｅｔｈｏｄ）により実施した。ＭＩＣ試験は、７Ｈ９ブロス（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を用いる微量液体希釈法によっても実施した。化合物のスクリーニングにＭＨ及び７Ｈ９の両方のブロスを使用することの根拠は、抗マイコバクテリア化合物が、ＭＩＣ試験に使用するブロスに応じて異なるＭＩＣ活性を示すことが分かっているためである。
【０１４０】
Ｍ・アブセッサス（Ｍ．ａｂｓｃｅｓｓｕｓ）は７Ｈ１１寒天平板（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）上で３５〜３７℃の空気中（ｉｎ  ａｍｂｉｅｎｔ  ａｉｒ）（細菌株に応じて異なる）で３日間増殖させ、Ｍ・アビウム（Ｍ．ａｖｉｕｍ）は７Ｈ１１寒天平板（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）上で３７℃の空気中で２１〜３０日間増殖させた。
【０１４１】
コロニー形成単位（ＣＦＵ）を寒天平板から採取し、ｔｗｅｅｎ−８０を０．０５％添加したＭＨブロス又は７Ｈ９ブロスのいずれかに添加し、３日目（Ｍ・アブセッサス（Ｍ．ａｂｓｃｅｓｓｕｓ））又は１２日目（Ｍ．アビウム（Ｍ．ａｖｉｕｍ））以降に光学密度（ＯＤ）を吸光度で測定し、（ＯＤ）０．０８〜０．１（マクファーランド濁度標準液０．５番）になるまで３５〜３７℃の空気中で増殖させた。次いで生理食塩水中で菌体懸濁液を（ＯＤ）０．０８〜０．１（マクファーランド濁度標準液０．５番）に一致するように調製することにより確認した。ＤＭＳＯ中で化合物を濃度１．２８ｍｇ／ｍｌで懸濁させることにより化合物の原液を調製し、試験範囲を６４〜０．０６２μｇ／ｍｌとして即座に使用した。続いてブロス１８０μｌ（ＭＨ又は７Ｈ９のいずれか）を９６ウェルプレートの１列目に加え、９６ウェルプレートの残りの列にブロス１００μｌを加えた。化合物の原液２０μｌを１列目のウェルに加え、段階希釈した。最後に、ＮＴＭ菌体懸濁液１００μｌを、培地のみの対照ウェルを除く全てのウェルに加えた。各微生物に特異的なＱＣ試薬：１）細菌のみの陰性対照２）培地のみの陰性対照３）クラリスロマイシン陽性薬物対照。
【０１４２】
Ｍ・アブセッサス（Ｍ．ａｂｓｃｅｓｓｕｓ）のＯＤを３日後に測定し、Ｍ・アビウム（Ｍ．ａｖｉｕｍ）については１２日後に測定した。これらの測定に続いて、Ｒｅｓａｚｕｒｉｎ  Ｍｉｃｒｏｔｉｔｅｒ  Ａｓｓａｙ  Ｐｌａｔｅ法を用いてプレートを測定した。簡潔には、この方法は、レサズリン（７−ヒドロキシ−３Ｈ−フェノキサジン−３−オン１０−オキシド）を９６ウェルプレートに添加するものである。レサズリンは青色色素であり、それ自体は弱い蛍光を発するが、不可逆的に還元されるとピンク色の強い赤色蛍光を発するレゾルフィンになる。これは、ＭＩＣ測定における細菌細胞生存率を決定するための酸化還元指示薬として使用されている。
【０１４３】
試験は３連で実施した。試験＃１は実施例１の組成物を４℃で２ヵ月間保管した後に実施し、試験＃２は４ヵ月後に実施し、試験＃３は５ヵ月後に実施した。
【０１４４】
ＣＦ痰の存在下及び非存在下における最小発育阻止濃度
最小発育阻止濃度測定を上に述べたように実施した。
【０１４５】
嚢胞性線維症（ＣＦ）患者の痰がクロファジミン（ＣＦＺ）及び実施例１の組成物の抗菌活性に与える影響を調査するために、抗菌薬を４８時間以内に投与されていない患者から痰を回収し、その痰をＵＶ光に曝露することにより滅菌して内在する細菌を除去した。滅菌後、Ｍ・アブセッサス（Ｍ．ａｂｓｃｅｓｓｕｓ）、Ｍ・アビウム（Ｍ．ａｖｉｕｍ）、Ｍ・イントラセルラーレ（Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、及びＭ・キマイラ（Ｍ．Ｃｈｉｍａｅｒａ）を１０％ＣＦ痰中でインキュベートした後、ＭＩＣ試験を行った。上に述べたものと同じＣＬＳＩプロトコルに従い、嚢胞性線維症患者の痰の存在下及び非存在下に、実施例１の組成物のＭＩＣを測定した。試験は全て２連で実施した。
【０１４６】
痰の存在下及び非存在下におけるクロファジミン及び実施例１の組成物のＭＩＣ値を表５に示す。
【０１４７】
【表５】
2021535124.tif 000007
【０１４８】
表５に示した結果から、クロファジミン及び実施例１の組成物は両方共、幅広い非結核性抗酸菌種に対し安定したＭＩＣを示すことが分かる。
【０１４９】
これらのデータは、実施例１の組成物が、Ｍ・アブセッサス（Ｍ．ａｂｓｃｅｓｓｕｓ）及びＭ・アビウム（Ｍ．ａｖｉｕｍ）の両方に対し強力なｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性を示し、少なくともこの期間は安定であることを示唆している。
【０１５０】
ＳＣＩＤマウスにおけるＭ・アブセッサス（Ｍ．ａｂｓｃｅｓｓｕｓ）のマウスモデル
６〜８週齢のＳＣＩＤ雌性マウスをＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒから購入した。マウスは感染前に１週間休息させた。
【０１５１】
Ｍ・アブセッサス（Ｍ．ａｂｓｃｅｓｓｕｓ）１０３株の試験用原液（ｗｏｒｋｉｎｇ  ｓｔｏｃｋ）を１ｍｌ分取し、使用時まで−８０℃で保管した。感染させるために分取液を解凍し、２６ｇのニードルを取り付けた１ｍｌのルアーロックシリンジを用いて２０回崩壊させ、滅菌１×ＰＢＳで希釈した。
【０１５２】
急性感染ＳＣＩＤマウスモデルに１×１０６ＣＦＵ／匹（Ｍ・アブセッサス（Ｍ．ａｂｓｃｅｓｓｕｓ）１０３株）を非侵襲的に気管内注入することにより肺感染させた。
【０１５３】
マウス３匹を感染後１日目に屠殺し、細菌の取り込み量（ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｕｐｔａｋｅ）を求めた。全肺、脾臓、及び肝臓を摘出し、１×ＰＢＳ４．５ｍｌ中にホモジナイズした。ホモジナイゼートを１：１０の希釈倍率で段階希釈し、希釈液（０−１−２−３−４−５−６−７）を７Ｈ１１寒天平板上に塗沫した。平板を３２℃のドライエアインキュベーター（菌株に応じて異なる）に７日間静置した。
【０１５４】
実施例１の組成物１０．０ｍｇ／ｋｇをＭｉｃｒｏｓｐｒａｙｅｒ（登録商標）を用いて経肺経路で投与し（３５μｌ）、クロファジミン（強制経口投与）、アミカシン（皮下）を、マウス１匹当たり２００μｌの量で投与した。これらを感染後２日目に開始し、１日置きに８日間継続した。
【０１５５】
化合物の最後の用量を投与してから２日後にマウスを屠殺した。全ての群の６匹のマウス（無治療対照、クロファジミン（強制経口投与）、実施例１の組成物、及びアミカシン治療マウス）を屠殺し、菌量を測定した。肺ホモジネートを０−１−２−３−４−５−６−７、脾臓を０−１−２−３−４−５−６−７、及び肝臓を０−１−２−３−４−５−６−７でプレートに塗抹した。
【０１５６】
Ｌｏｇ１０で表される防御値（ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｖａｌｕｅ）が少なくとも０．６０であれば、活性が統計的に有意であることを示唆している。統計学的解析は、まずＣＦＵを対数に変換し、次いでこれをｏｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡで評価した後、ｏｎｅ−ｗａｙ  Ｔｕｋｅｙ  ｔｅｓｔで多重比較による分散分析を行うことにより実施した（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ解析ソフト）。差は９５％の信頼水準で有意であると見なす。
【０１５７】
表６に、ＳＣＩＤマウスにＭ・アブセッサス（Ｍ．ａｂｓｃｅｓｓｕｓ）を感染させた後のＬｏｇ１０ＣＦＵデータの平均値及び平均値の標準誤差（ＳＥＭ）を示す。「ｎ」は屠殺時の１群当たりの動物の総数である。
【０１５８】
【表６】
2021535124.tif 000008
【０１５９】
表６のデータは、実施例１の組成物を用いた治療により、Ｍ・アブセッサス（Ｍ．ａｂｓｃｅｓｓｕｓ）に感染した動物の肺及び脾臓から回収された菌量が大幅に低下したことを示している。この菌量の低下は、アミカシン又は経口クロファジミンを用いた治療と比較しても統計的に改善されていた。
【０１６０】
ＢｅｉｇｅマウスにＭ・アビウム（Ｍ．ａｖｉｕｍ）を感染させたマウスモデル
６〜８週齢の雌性ＢｅｉｇｅマウスをＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒから購入した。感染前にマウスを１週間休息させた。
【０１６１】
急性感染Ｂｅｉｇｅマウスモデルに１×１０８コロニー形成単位（ＣＦＵ）／ｍｌ（Ｍ・アビウム（Ｍ．ａｖｉｕｍ）２２８５株ｒｏｕｇｈ型）をエアロゾルに曝露させることにより非侵襲的に肺感染させた。Ｍ・アビウム（Ｍ．ａｖｉｕｍ）２２８５株ｒｏｕｇｈ型の試験用原液を１ｍｌ分取して凍結させ、使用時まで−８０℃で保管した。感染させるために分取液を解凍し、２６ｇのニードルを取り付けた１ｍｌのルアーロックシリンジを用いて２０回崩壊させ、滅菌１×リン酸緩衝生理食塩水で希釈した。
【０１６２】
感染後１日目及び７日目に３匹のマウスを屠殺し、細菌の取り込みを測定した。全肺、脾臓、及び肝臓を摘出し、１×ＰＢＳ４．５ｍｌ中でホモジナイズし、１：１０で希釈した。希釈液（０−１−２−３−４−５−６−７）を７Ｈ１１／ＯＡＤＣ、ＴＳＡ、及びチャコール寒天平板上に塗抹し、３２℃（菌株に応じて異なる）のドライエアインキュベーターで３０日間インキュベートした。
【０１６３】
実施例１の組成物１０．０ｍｇ／ｋｇをＭｉｃｒｏｓｐｒａｙｅｒ（登録商標）を用いて経肺経路で投与し（３５μｌ）、クロファジミン（強制経口投与）をマウス１匹当たり２００μｌの量で投与した。これらを感染後７日目に開始し、１日置きに１０日間継続した。
【０１６４】
化合物の最終用量を投与してから５日後にマウスを屠殺した。全ての群の６匹のマウス（無治療対照、クロファジミン（強制経口投与）、及び実施例１の組成物）を屠殺し、菌量を測定した。肺ホモジネートの０−１−２−３−４−５−６−７、脾臓の０−１−２−３−４−５−６−７、及び肝臓の０−１−２−３−４−５−６−７を平板に塗抹した。
【０１６５】
Ｌｏｇ１０で表される防御値が少なくとも０．６０であれば、活性が統計的に有意であることを示唆している。統計学的解析は、まずＣＦＵを対数に変換し、次いでこれをｏｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡで評価した後、ｏｎｅ−ｗａｙ  Ｔｕｋｅｙ  ｔｅｓｔで多重比較による分散分析を行うことにより実施した（ＳｉｇｍａＳｔａｔソフトウェアプログラム）。差は９５％の信頼水準で有意であると見なす。
【０１６６】
表７に、ＢｅｉｇｅマウスにＭ・アビウム（Ｍ．ａｖｉｕｍ）を感染させた後のＬｏｇ１０ＣＦＵデータの平均値を示す。
【０１６７】
【表７】
2021535124.tif 000009
【０１６８】
表７のデータは、実施例１の組成物を用いた治療により、Ｍ・アビウム（Ｍ．ａｖｉｕｍ）に感染した動物の肺及び脾臓から回収された菌量が大幅に低下したことを示している。
【０１６９】
慢性感染Ｂｅｉｇｅマウスモデル
６〜８週齢のＢｅｉｇｅマウスを感染前に１週間休息させた。０日目にＭ・アビウム（Ｍ．ａｖｉｕｍ）２２８５ｒｏｕｇｈ型を１×１０８ＣＦＵをマウスに肺感染させた。１日目に３匹、２７日目に６匹のマウスを屠殺し、菌の取り込み及び治療前の菌量を測定した。全肺、脾臓、及び肝臓を摘出し、１×ＰＢＳ４．５ｍｌ中にホモジナイズし、希釈液（０−１−２−３−４−５−６−７）を７Ｈ１１寒天平板及びチャコール寒天平板上に塗沫した。平板を３７℃のドライエアインキュベーターに２５〜３０日間静置した。
【０１７０】
残りの感染Ｂｅｉｇｅマウスは、２８日目から開始して１日置きに治療を行い、計１４回治療した。動物には次に示す治療のうちの１種を行った：生理食塩水（Ｍｉｃｒｏｓｐｒａｙｅｒ（登録商標）、３５μｌ）；クロファジミン（強制経口投与、２０ｍｇ／ｋｇ、２００μｌ）；実施例１の組成物（ＩＴ、Ｍｉｃｒｏｓｐｒａｙｅｒ（登録商標）、１０ｍｇ／ｋｇ、３５μｌ）。
【０１７１】
マウスを最後の治療から２日後の５７日目に屠殺した。平板を３７℃のドライエアインキュベーターに３０日間静置した。
【０１７２】
統計学的解析は、まずＣＦＵを対数に変換し、次いでこれをｏｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡで評価した後、ｏｎｅ−ｗａｙ  Ｔｕｋｅｙ  ｔｅｓｔで多重比較による分散分析を行うことにより実施した。差は９５％の信頼水準で有意であると見なす。
【０１７３】
表８に、ＢｅｉｇｅマウスにＭ・アビウム（Ｍ．ａｖｉｕｍ）を慢性感染させた後のＬｏｇ１０ＣＦＵデータの平均値を示す。
【０１７４】
【表８】
2021535124.tif 000010
【０１７５】
これらのデータは、定着（ｅｓｔａｂｌｉｓｈ）した「慢性」ＮＴＭ感染動物モデルにより形成された肉芽腫様構造にクロファジミンがなかなか浸透しないことを示唆している。本発明の組成物にはこの問題がなく、抗マイコバクテリア活性を、感染が充分に定着した後でさえも維持することができるようである。
【０１７６】
肺上皮細胞に実施例３の組成物をｉｎ  ｖｉｔｒｏで曝露した後のバリア機能の健全性及び炎症に対する効果
細胞生存率
肺上皮細胞の細胞生存率を評価するために３種の異なる種類の細胞：Ｃａｌｕ−３；Ａ５４９；及びｈＡＥＬＶｉ細胞を２種のｉｎ  ｖｉｔｒｏ条件下に使用した。細胞を「浸漬条件」（即ち、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ（商標）プレート上の細胞培養液中）又は細胞頂端側から細胞培養液を除去した「空気−液体界面」模擬条件（ＡＬＩ）のいずれかで処理した。「浸漬条件」では、Ｃａｌｕ−３細胞を実施例３の組成物に３種の用量（１０％、５０％、又は１００％）で４時間曝露した。細胞生存率を評価するために、細胞をアクリジンオレンジ／ヨウ化プロピジウム（ＡＯ／ＰＩ）染色を用いて染色し、生細胞／死細胞を区別した。赤色の蛍光は死細胞であることを表す。
【０１７７】
マクロファージによる取り込み
ＴＨＰ−１細胞をホルボール１２−ミリスタート１３アセタート（ＰＭＡ）１２４ｎｇ／ｍｌと一緒に３日間インキュベートし、マクロファージ様細胞に分化させた。細胞が成熟したら実施例３の組成物（ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）で１：２００に希釈）に４時間曝露した。細胞を上に述べたようにＡＯ／ＰＩで染色することにより、曝露後の細胞生存率を決定した。
【０１７８】
経上皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）測定
Ｃａｌｕ−３細胞を１×１０５ｃｅｌｌｓ／ウェルとなるようＴｒａｎｓｗｅｌｌ（商標）３４６０に播種し、コンフルエントに達するまで１２日間増殖させた。ＥＶＯＭ２（Ｗｏｒｌｄ  Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｆｒｉｅｄｂｅｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用し、製造業者の指示に従いＴＥＥＲ測定を行った。播種後のＣａｌｕ−３細胞を生理食塩水（陰性対照）又は実施例３の組成物（濃度：２０ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、又は２ｍｇ／ｍｌ）のいずれかに曝露した。細胞を２〜４時間曝露した後、ＴＥＥＲを測定した。
【０１７９】
炎症性サイトカイン産生
分化させたＴＨＰ−１細胞（ｄＴＨＰ−１）を実施例３の組成物に４時間又は２４時間曝露した（ＨＢＳＳで１：２００に希釈）。ＨＢＳＳのみの曝露を陰性対照として使用し、陽性対照としてリポ多糖（ＬＰＳ）（１００ｎｇ／ｍｌ）を投与した。
【０１８０】
ｔ＝４時間又は２４時間インキュベーションを行った後、上清を細胞から取り除いてプールした。プールした上清サンプルに酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）を実施した。製造業者の指示に従い、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、及びＩＬ−１０に対し別々のＥＬＩＳＡキットを使用した。
【０１８１】
一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を実施した後、Ｔｕｋｅｙ  ｐｏｓｔ−ｈｏｃ  ｔｅｓｔを用いて統計解析を行った。確率値＜０．０５であれば統計的に有意であると判定した。
【０１８２】
結果
「浸漬」条件下において４時間インキュベートした後も、実施例３の組成物は、投与したどの濃度においても、目視では細胞生存率を低下させなかった。
【０１８３】
「ＡＬＩ」条件下においては、３種の異なる細胞（Ｃａｌｕ−３、Ａ５４９、及びＨＡＥＬＶｉ細胞）を異なる時点で３回（５時間後、２日後、及び７日後）調査した。４時間後はどの細胞においても、Ｃａｌｕ−３細胞の場合は２日後も、細胞毒性はほとんど又は全く認められなかった。Ａ５４９細胞においては２日後及び７日後に、Ｃａｌｕ−３細胞においては７日後にある程度の毒性が認められた。技術的限界により死細胞の定量はできなかった。
【０１８４】
マクロファージによる取り込みに関しては、分化後のＴＨＰ−１細胞を１：２００ＨＢＳＳで４時間インキュベートし、曝露後のマクロファージの細胞生存率を決定した。実施例３の組成物は細胞死を誘導しなかったが、クロファジミンがマクロファージに取り込まれたことは確実に示された。
【０１８５】
ＴＥＥＲ測定に関しては、Ｃａｌｕ−３細胞をＨＢＳＳ又は３種の濃度の実施例３の組成物に４時間曝露し、ＴＥＥＲ測定値を曝露時の様々な時点で抽出した。任意の所与の時点で、対照と比較してＴＥＥＲが≧５０％低下したら、バリア機能の健全性が有意に低下したと見なした。
【０１８６】
Ｃａｌｕ−３細胞を実施例３の組成物に曝露した場合、曝露から１時間後もバリア機能の健全性に影響は見られなかった。２０ｍｇ／ｍｌで曝露を行うと、２時間後に有意に（即ち≧５０％）低下した。１０ｍｇ／ｍｌの濃度では２時間後のどの時点においても僅かな低下（即ち２５〜３５％）が見られた。２ｍｇ／ｍｌで曝露した場合は試験期間を通してバリア機能の低下は見られなかった。
【０１８７】
炎症性サイトカイン産生
陽性対照であるＬＰＳは本モデルにおいて予想通りの挙動を示した。実施例３の組成物は調査を行ったどの時点においてもサイトカインの有意な変化は認められなかった。
【０１８８】
結果を表９に示す。
【０１８９】
【表９】
2021535124.tif 000011
【０１９０】
生体内安全性及び忍容性
６〜８週齢の  Ｂａｌｂ／Ｃ雌性マウスに１日置きに計３回投与を行った。マウスには実施例１の組成物を１０．０、５．０１、及び２．５１ｍｇ／ｋｇを投与した。組成物はＭｉｃｒｏｓｐｒａｙｅｒ（登録商標）を用いてエアロゾルを３５μｌ／匹の量で気管内（ＩＴ）投与した。注入後、マウスを投与から１０分、１、２、及び４時間後に観察し、その後毎日観察を行った。
【０１９１】
表１０に投与後の総括的観察を示す。「ＢＡＲ」は、動物が利口であり（ｂｒｉｇｈｔ）、活発であり（ａｃｔｉｖｅ）、且つ応答性（ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ）を示したことを表す。
【０１９２】
【表１０】
2021535124.tif 000012
【表１１】
2021535124.tif 000013
【０１９３】
これらのデータは、３日間の治療で体重は統計的に有意な変化を示さなかったことを表している。
【０１９４】
これらの結果は、本発明の組成物が試験に用いた用量では十分な忍容性を示すことを表している。
【国際調査報告】
2021535124.tif 000014
2021535124.tif 000015