(57)【要約】  本開示は、抗ラムダ骨髄腫抗原（ＬＭＡ）結合タンパク質に関する。そのような結合タンパク質は、抗体である。これらの抗体を含む組成物及びこれらの抗体をコードする核酸も開示される。これらの抗体、組成物及び核酸は、ＬＭＡを発現する病状の治療に使用され得る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗原結合ドメインを有する抗ラムダ骨髄腫抗原（ＬＭＡ）結合タンパク質であって、前記抗原結合ドメインが、遊離ラムダ軽鎖上のＬＭＡと優先的に結合し、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＨが、配列番号１に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号３に示されるようなＣＤＲ３を含む、前記抗ラムダ骨髄腫抗原結合タンパク質。
【請求項２】
前記ＶＨが、配列番号４に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の結合タンパク質。
【請求項３】
前記ＶＬが、配列番号６に示されるようなＣＤＲ１、配列番号７に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号８または配列番号１３に示されるようなＣＤＲ３を含む、請求項１または請求項２に記載の結合タンパク質。
【請求項４】
前記ＶＬが、配列番号９または配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項５】
前記ＶＬが、配列番号９に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項６】
抗原結合ドメインを有する抗ＬＭＡ結合タンパク質であって、前記抗原結合ドメインが、ＬＭＡに結合し、ＶＨ及びＶＬを含み、
−前記ＶＨが、配列番号３１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号３２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号３３に示されるようなＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、配列番号３６もしくは配列番号４１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号３７もしくは配列番号４２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号３８もしくは配列番号４３に示されるようなＣＤＲ３を含むか、または
−前記ＶＨが、配列番号６１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号６２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号６３に示されるようなＣＤＲ３を含み、前記ＶＬが、配列番号６６もしくは配列番号７１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号６７もしくは配列番号７２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号６８もしくは配列番号７３に示されるようなＣＤＲ３を含む、
前記抗ＬＭＡ結合タンパク質。
【請求項７】
前記ＶＨが、配列番号３４または配列番号６４に示されるアミノ酸配列を含む、請求項６に記載の結合タンパク質。
【請求項８】
前記ＶＬが、配列番号３９、４４、６９、または７４のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む、請求項６または請求項７に記載の結合タンパク質。
【請求項９】
抗原結合ドメインを有する抗ＬＭＡ結合タンパク質であって、前記抗原結合ドメインが、ＬＭＡに結合し、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、
−前記ＶＨが、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号１０または配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含み、
−前記ＶＨが、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号４０または配列番号４５に示されるアミノ酸配列を含み、
−前記ＶＨが、配列番号６５に示されるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号７０または配列番号７５に示されるアミノ酸配列を含む、
前記抗ＬＭＡ結合タンパク質。
【請求項１０】
前記結合タンパク質が、ＬＭＡと特異的に結合する、請求項６〜９のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項１１】
抗体である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項１２】
前記抗体が、ＬＭＡと特異的に結合する、請求項１１に記載の結合タンパク質。
【請求項１３】
前記ＶＨ及びＶＬが、単一ポリペプチド鎖である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項１４】
（ｉ）一本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）、
（ｉｉ）二量体ｓｃＦｖ（ｄｉ−ｓｃＦｖ）、
（ｉｉｉ）三量体ｓｃＦｖ（ｔｒｉ−ｓｃＦｖ）、
（ｉｖ）抗体の定常領域、Ｆｃ、または重鎖定常ドメインＣＨ２及び／またはＣＨ３に連結している（ｉ）、（ｉｉ）、または（ｉｉｉ）のうちのいずれか１つ
である、請求項１３に記載の結合タンパク質。
【請求項１５】
前記ＶＨ及びＶＬが、別々のポリペプチド鎖である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項１６】
（ｉ）ダイアボディ、
（ｉｉ）トリアボディ、
（ｉｉｉ）テトラボディ、
（ｉｖ）Ｆａｂ、
（ｖ）Ｆ（ａｂ’）２、
（ｖｉ）Ｆｖ、
（ｖｉｉ）抗体の定常領域、Ｆｃ、または重鎖定常ドメインＣＨ２及び／またはＣＨ３に連結している（ｉ）〜（ｖｉ）のうちの１つ、あるいは、
（ｖｉｉｉ）インタクト抗体
である、請求項１５に記載の結合タンパク質。
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれか１項で定義される、結合タンパク質をコードする核酸。
【請求項１８】
請求項１７で定義される核酸を含む、発現構築物。
【請求項１９】
請求項１〜１６のいずれか１項で定義される結合タンパク質、請求項１７で定義される核酸、または請求項１８に記載の発現構築物を発現する、単離または組み換え細胞。
【請求項２０】
医薬担体及び請求項１〜１６のいずれか１項で定義される結合タンパク質のいずれかを含む、組成物。
【請求項２１】
対象のＬＭＡ発現がんを処置する方法であって、前記方法が、前記対象に請求項１〜１６のいずれか１項で定義される有効量の結合タンパク質または請求項２０の組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項２２】
ＬＭＡ発現がんを処置するための医薬の製造における、請求項１〜１６のいずれか１項で定義される結合タンパク質または請求項２０の組成物の使用。
【請求項２３】
ＬＭＡ発現がんの処置に使用される、請求項１〜１６のいずれか１項で定義される結合タンパク質または請求項２０の組成物。
【請求項２４】
前記ＬＭＡ発現がんが、多発性骨髄腫、Ｗａｌｄｅｎｓｔｒｏｍマクログロブリン血症、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、ＰＯＥＭＳ症候群、またはアミロイドーシスである、請求項２１〜２３のいずれか１項で定義される方法または使用。
【請求項２５】
対象の自己免疫障害を処置する方法であって、前記方法が、前記対象に請求項１〜１６のいずれか１項で定義される有効量の結合タンパク質または請求項２０に記載の組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項２６】
自己免疫障害を処置するための薬品の製造における、請求項１〜１６のいずれか１項で定義される結合タンパク質または請求項２０の組成物の使用。
【請求項２７】
自己免疫障害の処置に使用される、請求項１〜１６のいずれか１項で定義される結合タンパク質または請求項２０の組成物。
【請求項２８】
前記自己免疫障害が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、糖尿病、及び多発性硬化症からなる群より選択される、請求項２５〜２７のいずれか１項で定義される方法または使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、抗ＬＭＡ結合タンパク質に関する。そのような結合タンパク質は、形質細胞及び／またはそれらの前駆体の異常な増殖に関連する障害を処置するのに有用であり得る。
【背景技術】
【０００２】
形質細胞及び／またはその前駆細胞の異常増殖は、種々のヒト病状の特質である。１つの例は、骨髄形質細胞の悪性腫瘍である多発性骨髄腫（ＭＭ）である。疾患は、ラムダまたはラムダ軽鎖制限モノクローナルパラタンパク質のいずれかを分泌する悪性形質細胞を特徴とする。ラムダ制限は、骨髄腫患者の約４０％で発生し、ラムダ骨髄腫抗原（ＬＭＡ）の発現は、悪性エフェクター細胞に高度に制限される。最近の治療法の進歩にもかかわらず、多発性骨髄腫は依然として不治である。その臨床経過は、治療の初期奏効を特徴とし、続いて、全ての形態の処置に対する最終的な耐性を伴う再発を繰り返す。それは、利用可能な処置から疾患自体及び毒性の両方に起因する重大な罹患及び身体障害とも関連する。
【０００３】
従って、形質細胞及び／またはそれらの前駆体の異常増殖を処置するための新しいアプローチが必要とされる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本開示のヒト結合タンパク質を産生する時、本発明者らは、ＬＭＡ陽性細胞株に結合して死滅させるヒト抗体の選択を同定した。本発明者らはまた、遊離ラムダ軽鎖（例えば、血清抗原）よりもＬＭＡ（すなわち、細胞表面抗原）への優先的結合を導く重鎖修飾を有するヒト抗体を同定した。そのような修飾は、ＬＭＡを発現する細胞を優先的に標的とするために、種々の結合タンパク質に組み込まれてもよい。そのような結合タンパク質は特に、ＬＭＡ発現がん細胞などのＬＭＡを発現する細胞の標的化された殺傷を媒介するのに効果的であり得る。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
従って、第１の態様では、本開示は、抗原結合ドメインを有する抗ラムダ骨髄腫抗原（ＬＭＡ）結合タンパク質に関し、抗原結合ドメインは、遊離ラムダ軽鎖よりもＬＭＡと優先的に結合し、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨは、配列番号１に示されるような相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号３に示されるようなＣＤＲ３を含む。別の例では、ＶＨは、配列番号４に示されるアミノ酸配列を含む。別の例では、ＶＬは、配列番号６に示されるＣＤＲ１、配列番号７に示されるＣＤＲ２、及び配列番号８または配列番号１３に示されるＣＤＲ３を含む。別の例では、ＶＬは、配列番号９または配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含む。別の例では、ＶＬは、配列番号９に示されるアミノ酸配列を含む。一例では、上で参照された結合タンパク質は、ラムダアイソタイプ２及び３に結合する。一例では、上で参照された抗体は、ラムダアイソタイプ１に結合しない。別の例では、上で参照された抗体は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）で測定されたＫＤが１×１０１０未満である遊離ラムダ軽鎖に結合する。別の例では、上記で参照された抗体は、ＳＰＲで測定されたＫＤが５×１０９未満である遊離ラムダ軽鎖に結合する。別の例では、上記で参照された抗体は、ＳＰＲで測定されたＫＤが１×１０９未満である遊離ラムダ軽鎖に結合する。別の例では、上記で参照された抗体は、ＳＰＲで測定されたＫＤが５×１０８未満である遊離ラムダ軽鎖に結合する。別の例では、上記で参照された抗体は、ＳＰＲで測定されたＫＤが５×１０７未満である遊離ラムダ軽鎖に結合する。
【０００６】
別の例では、本開示は、抗原結合ドメインを有する抗ＬＭＡ結合タンパク質を包含し、抗原結合ドメインは、ＬＭＡに結合し、ＶＨ及びＶＬを含み、
−ＶＨは、配列番号３１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号３２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号３３に示されるようなＣＤＲ３を含み、ＶＬは、配列番号３６もしくは配列番号４１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号３７もしくは配列番号４２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号３８もしくは配列番号４３に示されるようなＣＤＲ３を含むか、または
−ＶＨは、配列番号６１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号６２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号６３に示されるようなＣＤＲ３を含み、ＶＬは、配列番号６６もしくは配列番号７１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号６７もしくは配列番号７２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号６８もしくは配列番号７３に示されるようなＣＤＲ３を含む。一例では、ＶＨは、配列番号３４または配列番号６４に示されるアミノ酸配列を含む。別の例では、ＶＬは、配列番号３９、４４、６９、または７４のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む。
【０００７】
別の例では、本開示は、抗原結合ドメインを有する抗ＬＭＡ結合タンパク質を包含し、抗原結合ドメインは、ＬＭＡに結合し、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、
−ＶＨは、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１０または配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含み、
−ＶＨは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号４０または配列番号４５に示されるアミノ酸配列を含み、
−ＶＨは、配列番号６５に示されるアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号７０または配列番号７５に示されるアミノ酸配列を含む。
【０００８】
別の例では、本開示は、抗原結合ドメインを有する抗ＬＭＡ結合タンパク質を包含し、抗原結合ドメインは、ＬＭＡに結合し、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、
−ＶＨは、配列番号５に示されるアミノ酸配列由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、ＶＬは、配列番号１０または配列番号１５に示されるアミノ酸配列由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、
−ＶＨは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、ＶＬは、配列番号４０または配列番号４５に示されるアミノ酸配列由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、
−ＶＨは、配列番号６５に示されるアミノ酸配列由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、ＶＬは、配列番号７０または配列番号７５に示されるアミノ酸配列由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔを使用して割り当てられる。
【０００９】
別の例では、本開示は、抗原結合ドメインを有する抗ＬＭＡ結合タンパク質を包含し、抗原結合ドメインは、ＬＭＡに結合し、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、
−ＶＨは、配列番号５に示されるアミノ酸配列由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、ＶＬは、配列番号１０または配列番号１５に示されるアミノ酸配列由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、
−ＶＨは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、ＶＬは、配列番号４０または配列番号４５に示されるアミノ酸配列由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、
−ＶＨは、配列番号６５に示されるアミノ酸配列由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、ＶＬは、配列番号７０または配列番号７５に示されるアミノ酸配列由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、
ＣＤＲは、ＩＭＧＴを使用して割り当てられる。
【００１０】
別の例では、本明細書に開示の結合タンパク質は、ＬＭＡと特異的に結合する。別の例では、本明細書に開示の結合タンパク質は、抗体である。一例では、抗体は、ＬＭＡと特異的に結合する。一例では、抗体は、ヒト抗体である。一例では、本明細書に開示の結合タンパク質のＶＨ及びＶＬは、単一ポリペプチド鎖に存在する。例えば、結合タンパク質は、以下のものであってよい：
（ｉ）一本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）、
（ｉｉ）二量体ｓｃＦｖ（ｄｉ−ｓｃＦｖ）、
（ｉｉｉ）三量体ｓｃＦｖ（ｔｒｉ−ｓｃＦｖ）、
（ｉｖ）抗体の定常領域、Ｆｃ、または重鎖定常ドメインＣＨ２及び／またはＣＨ３に連結している（ｉ）、（ｉｉ）、または（ｉｉｉ）のうちのいずれか１つ。
【００１１】
別の例では、本明細書に開示の結合タンパク質のＶＨ及びＶＬは、別々のポリペプチド鎖に存在する。例えば、結合タンパク質は、以下のものであってよい：
（ｉ）ダイアボディ、
（ｉｉ）トリアボディ、
（ｉｉｉ）テトラボディ、
（ｉｖ）Ｆａｂ、
（ｖ）Ｆ（ａｂ’）２、
（ｖｉ）Ｆｖ、
（ｖｉｉ）抗体の定常領域、Ｆｃ、または重鎖定常ドメインＣＨ２及び／またはＣＨ３に連結している（ｉ）〜（ｖｉ）のうちの１つ、あるいは、
（ｖｉｉｉ）インタクト抗体。
【００１２】
別の例では、本開示は、本明細書に開示の結合タンパク質をコードする核酸を包含する。別の例では、本開示は、本明細書に開示の結合タンパク質をコードする核酸を含むベクターを包含する。一例では、そのようなベクターは、核酸の発現のための宿主細胞に提供することができる。従って、一例では、本開示は、本明細書で定義される結合タンパク質を発現する単離または組み換え細胞を包含する。
【００１３】
別の例では、本開示は、医薬担体及び本明細書で定義される結合タンパク質のいずれかを含む組成物を包含する。
【００１４】
別の例では、本開示は、対象におけるＬＭＡ発現がんを処置する方法を包含し、方法は、対象に本明細書で定義される結合タンパク質の有効量を投与することを含む。別の例では、本開示は、ＬＭＡ発現がんを処置するための薬品の製造における、本明細書で定義される結合タンパク質の使用を包含する。別の例では、本開示は、ＬＭＡ発現がんの処置に使用される、本明細書で定義される結合タンパク質を包含する。一例では、ＬＭＡ発現がんは、多発性骨髄腫、Ｗａｌｄｅｎｓｔｒｏｍマクログロブリン血症、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、ＰＯＥＭＳ症候群、またはアミロイドーシスである。
【００１５】
別の例では、本開示は、対象の自己免疫障害を処置する方法を包含し、方法は、対象に本明細書に定義される有効量の結合タンパク質を投与することを含む。別の例では、本開示は、自己免疫障害を処置するための薬品の製造における、本明細書で定義される結合タンパク質の使用を包含する。別の例では、本開示は、自己免疫障害の処置に使用される、本明細書で定義される結合タンパク質を包含する。一例では、自己免疫障害は、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、真性糖尿病、及び多発性硬化症からなる群より選択される。
【００１６】
本明細書のいずれかの例は、別途具体的な記載のない限り、他の任意の例に準用すると解釈されるべきである。
【００１７】
本開示は、本明細書に記載の特定の例により範囲を限定されないものとする。そのような特定の例は、例示のために意図されているに過ぎない。機能的に同等の製品、組成物、及び方法は、本明細書に記載されるように、明らかに本開示の範囲内である。
【００１８】
本明細書全体にわたって、別途具体的な記載のない限り、または文脈が別途要求しない限り、単一のステップ、物質の組成、ステップの群、または物質の組成の群への言及は、それらのステップ、組成物、ステップの群、または組成物の群のうちの１つ及び複数（すなわち、１つ以上）を包含すると解釈されるべきである。
【００１９】
本開示は、以下の非限定例により且つ添付の図面を参照して、以下に説明される。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】ラムダ遊離軽鎖の４Ｇ７モノクローナル抗体エピトープ。左パネルは、ラムダ遊離軽鎖１、２、及び３アイソタイプのアミノ酸配列のアラインメントを示し、ラムダアイソタイプ２及び３は、発現されたラムダ軽鎖レパートリーの９５％を構成する。アスタリスクは、配列同一性を示す。異なるアミノ酸が、強調表示される。右パネルは、ラムダ軽鎖二量体（ＭＣＧ二量体）及びＭＣＧ  Ｉｇの３Ｄ構造の識別されたペプチドを示し、折りたたまれた軽鎖タンパク質内で、２つのペプチドがコンジュゲートを形成して非イディオタイプの立体配座エピトープを作成することを示す。
【図２Ａ】精製ラムダ軽鎖へのヒト抗ＬＭＡ抗体の親和性。（Ａ）グラフは、精製ラムダ軽鎖ＢＪＰ（ＬＡＭ０３４ＭＤ、ＬＡＭ１３４ＭＤ、ＭＡＬ７８８ＭＤ、ＬＡＭ８８５Ｄ、ＬＡＭ８９３Ｄ）（２０ｎｇ／ｍＬ）に対するヒト抗ＬＭＡ抗体クローン（１Ａ１１、７Ｆ１１、１０Ｂ３、１８Ｅ８、１８Ｅ１１、及び１８Ｆ９）（２０μｇ／ｍＬ）のＳＰＲ値４Ｇ７を示す。抗κＢＪＰモノクローナル抗体ＭＤＸ−１０９７及びκＢＪＰ（２０ｎｇ／ｍＬ）（ＫＡＰ９６０Ｍ）を陰性対照として使用した。ヒト抗ＬＭＡ抗体クローンは、７Ｆ１１は別として、精製ラムダ軽鎖ＢＪＰに対して同等の高い選択的親和性を示し、７Ｆ１１は、より低い親和性を示した。ラムダ軽鎖ＢＪＰの末端の略称：Ｍ：単量体；ＭＤ：単量体及び二量体の混合物；Ｄ：二量体。
【図２Ｂ】精製ラムダ軽鎖へのヒト抗ＬＭＡ抗体の親和性。（Ｂ）グラフは、市販のラムダ軽鎖（Ｂｅｔｈｙｌ）に対するヒト抗ＬＭＡ抗体クローン（１８Ｅ８、７Ｆ１１、及び１８Ｆ９）（７００ｎｇ／ｍＬ）のＳＰＲ値を示す。ヒト抗ＬＭＡ抗体７Ｆ１１は、クローン１８Ｅ８及び１８Ｆ９と比較して、市販のラムダ軽鎖（Ｂｅｔｈｙｌ）に弱く結合する。
【図３】ＨＥＫ細胞由来の組み換えラムダ軽鎖分離株へのヒト抗ＬＭＡ抗体の親和性。グラフは、カニクイザルラムダ軽鎖（ＣＹＮＯ１、ＣＹＮＯ３）、ラムダ軽鎖がトランスフェクトされたＨＥＫ細胞、ＬＰ−１ラムダ軽鎖分離株（ＬＰ−１  ＩＳＯ）、及びＲＰＭＩ−８２２６ラムダ軽鎖分離株（ＲＰＭＩ−８２２６  ＩＳＯ）由来の上清対するヒト抗ＬＭＡ抗体候補（１Ａ１１、７Ｆ１１、１０Ｂ３、１８Ｅ８、１８Ｅ１１、１８Ｆ９）（２０μｇ／ｍＬ）のＳＰＲ値を示す。抗κＢＪＰモノクローナル抗体ＭＤＸ−１０９７を陰性対照として使用した。ヒト抗ＬＭＡ抗体クローンは、７Ｆ１１は別として、カニクイザルラムダ軽鎖ならびにＨＥＫ、ＬＰ−１、及びＲＰＭＩ−８２２６由来のラムダ軽鎖分離株に対し同等の高い選択的親和性を示し、７Ｆ１１は、低親和性を示した。
【図４】上清ヒト多発性骨髄腫細胞株へのヒト抗ＬＭＡ抗体の親和性。グラフは、ヒト多発性骨髄腫細胞株（ＲＰＭＩ−８２２６（ラムダアイソタイプ２）、ＬＰ−１（ラムダアイソタイプ１）、ＪＪＮ３（カッパ）、ＯＰＭ−２（ラムダアイソタイプ３））の上清に対するヒト抗ＬＭＡ抗体候補（６Ａ１、１３Ｈ３、及び４Ａ１）（２０μｇ／ｍＬ）のＳＰＲ値を示す。ヒト抗ＬＭＡ抗体クローンは、ヒト多発性骨髄腫細胞株により発現される可溶性ラムダ軽鎖アイソタイプに対して高い選択的親和性を示し、ＪＪＮ３細胞株により発現されるカッパ軽鎖に対して高い選択的親和性を示さなかった。
【図５Ａ】ＬＭＡ陽性ヒト骨髄腫細胞株へのヒト抗ＬＭＡ抗体の結合。（Ａ）グラフは、フローサイトメトリー分析で決定された１次抗体対照なしと比較した、ＬＭＡ陽性ヒト骨髄腫細胞株（ヒト抗ＬＭＡ抗体候補（１Ａ１１、７Ｆ１１、１０Ｂ３、１８Ｅ８、１８Ｅ１１、及び１８Ｆ９）によるＲＰＭＩ−８２２６（ラムダアイソタイプ２）、Ｕ２６６（ラムダアイソタイプ２）、ＪＪＮ３（カッパ）、ＯＰＭ−２（ラムダアイソタイプ３））の相対的染色（幾何平均）を示す。ヒト抗ＬＭＡ抗体は、試験された全てのヒト骨髄腫細胞株の選択的染色を示したが、染色されたＪＪＮ３（カッパ）細胞株を示さなかった（またはわずかに示した）。
【図５Ｂ】ＬＭＡ陽性ヒト骨髄腫細胞株へのヒト抗ＬＭＡ抗体の結合。（Ｂ）グラフは、フローサイトメトリー分析で決定された１次抗体対照なしと比較した、ＬＭＡ陽性ヒト骨髄腫細胞株（ヒト抗ＬＭＡ抗体候補（１Ａ１１、７Ｆ１１、１０Ｂ３、１８Ｅ８、１８Ｅ１１、１８Ｆ９、６Ａ１、４Ａ１、及び１３Ｈ３）によるＵ２６６（ラムダアイソタイプ２）、ＯＰＭ−２（ラムダアイソタイプ３）、及びＫＭＳ−１８（ラムダアイソタイプ１））の相対的染色（幾何平均）を示す。
【図６】骨髄腫細胞に対する抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）。
【図７】骨髄腫細胞に対する補体媒介性細胞毒性（ＣＤＣ）。
【図８】７Ｆ１１と、１０Ｂ３、１８Ｅ１１、及び１８Ｅ８を比較する配列アラインメント。下線を引かれた重鎖ＣＤＲ。アスタリスクは、配列同一性を示す。
【図９】１０μｇ／ｍＬの１０Ｂ３で染色されたヒト扁桃腺（ＨＴ２４４９−１）の凍結切片。４０倍の対物レンズ。
【図１０】１０μｇ／ｍＬの７Ｆ１１で染色されたヒト扁桃腺（ＨＴ２４４９−１）の凍結切片。４０倍の対物レンズ。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
配列表の解読
ＮＢ：ＣＤＲ及びフレームワーク配列を割り当てるために使用されるＫａｂａｔ番号付けシステム
配列番号１−７Ｆ１１重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列
配列番号２−７Ｆ１１重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列
配列番号３−７Ｆ１１重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列
配列番号４−７Ｆ１１重鎖フレームワークアミノ酸配列
配列番号５−７Ｆ１１重鎖全長アミノ酸配列
配列番号６−７Ｆ１１軽鎖１−ＣＤＲ１アミノ酸配列
配列番号７−７Ｆ１１軽鎖１−ＣＤＲ２アミノ酸配列
配列番号８−７Ｆ１１軽鎖１−ＣＤＲ３アミノ酸配列
配列番号９−７Ｆ１１軽鎖１−フレームワークアミノ酸配列
配列番号１０−７Ｆ１１軽鎖１−全長アミノ酸配列
配列番号１１−７Ｆ１１軽鎖２−ＣＤＲ１アミノ酸配列
配列番号１２−７Ｆ１１軽鎖２−ＣＤＲ２アミノ酸配列
配列番号１３−７Ｆ１１軽鎖２−ＣＤＲ３アミノ酸配列
配列番号１４−７Ｆ１１軽鎖２−フレームワークアミノ酸配列
配列番号１５−７Ｆ１１軽鎖２−全長アミノ酸配列
配列番号１６−７Ｆ１１重鎖ＣＤＲ１  ＤＮＡ配列
配列番号１７−７Ｆ１１重鎖ＣＤＲ２  ＤＮＡ配列
配列番号１８−７Ｆ１１重鎖ＣＤＲ３  ＤＮＡ配列
配列番号１９−７Ｆ１１重鎖フレームワークＤＮＡ配列
配列番号２０−７Ｆ１１重鎖全長ＤＮＡ配列
配列番号２１−７Ｆ１１軽鎖１−ＣＤＲ１  ＤＮＡ配列
配列番号２２−７Ｆ１１軽鎖１−ＣＤＲ２  ＤＮＡ配列
配列番号２３−７Ｆ１１軽鎖１−ＣＤＲ３  ＤＮＡ配列
配列番号２４−７Ｆ１１軽鎖１−フレームワークＤＮＡ配列
配列番号２５−７Ｆ１１軽鎖１−全長ＤＮＡ配列
配列番号２６−７Ｆ１１軽鎖２−ＣＤＲ１  ＤＮＡ配列
配列番号２７−７Ｆ１１軽鎖２−ＣＤＲ２  ＤＮＡ配列
配列番号２８−７Ｆ１１軽鎖２−ＣＤＲ３  ＤＮＡ配列
配列番号２９−７Ｆ１１軽鎖２−フレームワークＤＮＡ配列
配列番号３０−７Ｆ１１軽鎖２−全長ＤＮＡ配列
配列番号３１−１８Ｅ８重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列
配列番号３２−１８Ｅ８重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列
配列番号３３−１８Ｅ８重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列
配列番号３４−１８Ｅ８重鎖フレームワークアミノ酸配列
配列番号３５−１８Ｅ８重鎖全長アミノ酸配列
配列番号３６−１８Ｅ８軽鎖１−ＣＤＲ１アミノ酸配列
配列番号３７−１８Ｅ８軽鎖１−ＣＤＲ２アミノ酸配列
配列番号３８−１８Ｅ８軽鎖１−ＣＤＲ３アミノ酸配列
配列番号３９−１８Ｅ８軽鎖１−フレームワークアミノ酸配列
配列番号４０−１８Ｅ８軽鎖１−全長アミノ酸配列
配列番号４１−１８Ｅ８軽鎖２−ＣＤＲ１アミノ酸配列
配列番号４２−１８Ｅ８軽鎖２−ＣＤＲ２アミノ酸配列
配列番号４３−１８Ｅ８軽鎖２−ＣＤＲ３アミノ酸配列
配列番号４４−１８Ｅ８軽鎖２−フレームワークアミノ酸配列
配列番号４５−１８Ｅ８軽鎖２−全長アミノ酸配列
配列番号４６−１８Ｅ８重鎖ＣＤＲ１  ＤＮＡ配列
配列番号４７−１８Ｅ８重鎖ＣＤＲ２  ＤＮＡ配列
配列番号４８−１８Ｅ８重鎖ＣＤＲ３  ＤＮＡ配列
配列番号４９−１８Ｅ８重鎖フレームワークＤＮＡ配列
配列番号５０−１８Ｅ８重鎖全長ＤＮＡ配列
配列番号５１−１８Ｅ８軽鎖１−ＣＤＲ１  ＤＮＡ配列
配列番号５２−１８Ｅ８軽鎖１−ＣＤＲ２  ＤＮＡ配列
配列番号５３−１８Ｅ８軽鎖１−ＣＤＲ３  ＤＮＡ配列
配列番号５４−１８Ｅ８軽鎖１−フレームワークＤＮＡ配列
配列番号５５−１８Ｅ８軽鎖１−全長ＤＮＡ配列
配列番号５６−１８Ｅ８軽鎖２−ＣＤＲ１  ＤＮＡ配列
配列番号５７−１８Ｅ８軽鎖２−ＣＤＲ２  ＤＮＡ配列
配列番号５８−１８Ｅ８軽鎖２−ＣＤＲ３  ＤＮＡ配列
配列番号５９−１８Ｅ８軽鎖２−フレームワークＤＮＡ配列
配列番号６０−１８Ｅ８軽鎖２−全長ＤＮＡ配列
配列番号６１−１０Ｂ３重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列
配列番号６２−１０Ｂ３重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列
配列番号６３−１０Ｂ３重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列
配列番号６４−１０Ｂ３重鎖フレームワークアミノ酸配列
配列番号６５−１０Ｂ３重鎖全長アミノ酸配列
配列番号６６−１０Ｂ３軽鎖１−ＣＤＲ１アミノ酸配列
配列番号６７−１０Ｂ３軽鎖１−ＣＤＲ２アミノ酸配列
配列番号６８−１０Ｂ３軽鎖１−ＣＤＲ３アミノ酸配列
配列番号６９−１０Ｂ３軽鎖１−フレームワークアミノ酸配列
配列番号７０−１０Ｂ３軽鎖１−全長アミノ酸配列
配列番号７１−１０Ｂ３軽鎖２−ＣＤＲ１アミノ酸配列
配列番号７２−１０Ｂ３軽鎖２−ＣＤＲ２アミノ酸配列
配列番号７３−１０Ｂ３軽鎖２−ＣＤＲ３アミノ酸配列
配列番号７４−１０Ｂ３軽鎖２−フレームワークアミノ酸配列
配列番号７５−１０Ｂ３軽鎖２−全長アミノ酸配列
配列番号７６−１０Ｂ３重鎖ＣＤＲ１  ＤＮＡ配列
配列番号７７−１０Ｂ３重鎖ＣＤＲ２  ＤＮＡ配列
配列番号７８−１０Ｂ３重鎖ＣＤＲ３  ＤＮＡ配列
配列番号７９−１０Ｂ３重鎖フレームワークＤＮＡ配列
配列番号８０−１０Ｂ３重鎖全長ＤＮＡ配列
配列番号８１−１０Ｂ３軽鎖１−ＣＤＲ１  ＤＮＡ配列
配列番号８２−１０Ｂ３軽鎖１−ＣＤＲ２  ＤＮＡ配列
配列番号８３−１０Ｂ３軽鎖１−ＣＤＲ３  ＤＮＡ配列
配列番号８４−１０Ｂ３軽鎖１−フレームワークＤＮＡ配列
配列番号８５−１０Ｂ３軽鎖１−全長ＤＮＡ配列
配列番号８６−１０Ｂ３軽鎖２−ＣＤＲ１  ＤＮＡ配列
配列番号８７−１０Ｂ３軽鎖２−ＣＤＲ２  ＤＮＡ配列
配列番号８８−１０Ｂ３軽鎖２−ＣＤＲ３  ＤＮＡ配列
配列番号８９−１０Ｂ３軽鎖２−フレームワークＤＮＡ配列
配列番号９０−１０Ｂ３軽鎖２−全長ＤＮＡ配列
配列番号９１−４Ｇ７エピトープ（ラムダアイソタイプ２及び３）エピトープ１
配列番号９２−４Ｇ７エピトープ（ラムダアイソタイプ２及び３）エピトープ２
配列番号９３−４Ｇ７エピトープ（ラムダアイソタイプ１）エピトープ１
配列番号９４−４Ｇ７エピトープ（ラムダアイソタイプ１）エピトープ２
【００２２】
一般的な技術及び選択された定義
別途具体的な明示のない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語（例えば、分子生物学、生化学、抗体、抗体フラグメント、及び臨床試験）は、当業者が一般に理解するのと同じ意味を有すると解釈されるべきである。
【００２３】
「ラムダ骨髄腫抗原」（ＬＭＡ）は、悪性骨髄腫細胞などの形質細胞、及び一部の場合では、形質芽球などの非悪性形質細胞前駆体の表面に見出される細胞膜抗原である。具体的には、ＬＭＡは、細胞膜に発現した遊離ラムダ軽鎖からなる。本開示に包含される抗ＬＭＡ結合タンパク質は、ラムダ軽鎖が重鎖と会合していない時に結合のみに利用可能な、ラムダ軽鎖上の立体配座エピトープを特異的に認識する。従って、本開示に包含される抗ＬＭＡ結合タンパク質は、インタクトなラムダ鎖含有ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、またはＩｇＡに結合しない。
【００２４】
本明細書で使用される場合、本明細書に記載の結合タンパク質及びＬＭＡの相互作用に関する「結合する」という用語は、相互作用が、ＬＭＡ上の特定の構造（例えば、抗原決定基またはエピトープ）の存在に依存することを意味する。例えば、結合タンパク質は、一般に、抗原ではなく特異抗原を認識して結合する。例えば、結合タンパク質がエピトープ「Ａ」に結合する場合、標識「Ａ」及び結合タンパク質を含む反応におけるエピトープ「Ａ」（または遊離の非標識「Ａ」）を含有する分子の存在は、結合タンパク質に結合している標識「Ａ」の量を低減させるであろう。一例では、本明細書に開示のＬＭＡ結合タンパク質は、遊離ラムダ軽鎖（例えば、血清抗原）よりもＬＭＡ（すなわち、細胞表面抗原）に優先的に結合する。遊離ラムダ軽鎖よりもＬＭＡに優先的に結合する本明細書で開示の結合タンパク質は、遊離軽鎖よりも頻繁に、迅速に、長い期間で、及び／または大きなＬＭＡとの親和性で、反応または会合する。
【００２５】
本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」という用語は、結合タンパク質及びＬＭＡ間の結合相互作用が、結合タンパク質によるＬＭＡの検出に依存することを意味すると解釈されるべきである。従って、結合タンパク質は、他の分子、細胞、または生物の混合物中に存在する時でも、ＬＭＡに特異的に結合または認識する。一例では、結合タンパク質は、代替の抗原または細胞よりも、頻繁に、迅速に、長い期間で、及び／または高いＬＭＡとの親和性で、反応または会合する。一例では、ＬＭＡに特異的に結合する本明細書に開示の結合タンパク質はまた、遊離軽鎖よりもＬＭＡに優先的に結合または認識することができる。また、例えば、ＬＭＡに特異的に結合する結合タンパク質が、第２抗原に特異的に結合してもしなくてもよいことが、この定義を読むと理解される。そのようなものであるから、「特異的結合」は、別の抗原の排他的な結合または検出不可能な結合を必ずしも必要としない。「特異的に結合する」という用語は、本明細書において「選択的に結合する」と互換的に使用することができる。一般に、本明細書における結合への言及は、特異的結合を意味し、各用語は、他の用語を明示的にサポートするものと理解されるべきである。特異的結合を決定するための方法は、当業者には明らかであろう。例えば、本開示の結合タンパク質を、ＬＭＡまたは代替抗原と接触させる。次に、ＬＭＡまたは代替抗原への結合タンパク質の結合は、決定され、上述されるように、代替抗原よりもＬＭＡに結合する結合タンパク質は、ＬＭＡに特異的に結合すると考えられる。同様の方法は、優先的な結合を同定するために使用されてもよい。この場合、代替抗原は、遊離軽鎖であろう。
【００２６】
「免疫グロブリン」という用語は、免疫グロブリンドメインを含む抗ＬＭＡ結合タンパク質を含むと理解されるであろう。例示的な免疫グロブリンは、抗体である。「免疫グロブリン」という用語に包含されるさらなるタンパク質には、ドメイン抗体、ラクダ科抗体、及び軟骨魚由来の抗体（すなわち、免疫グロブリンの新しい抗原受容体（ＩｇＮＡＲ））を含む。一般に、ラクダ科抗体及びＩｇＮＡＲは、ＶＨを含むが、ＶＬを欠き、多くの場合、重鎖免疫グロブリンと呼ばれる。他の「免疫グロブリン」は、Ｔ細胞受容体を含む。
【００２７】
「結合タンパク質」という用語は、本開示の文脈では、特定の抗原と免疫学的に反応するヒト免疫グロブリン分子を指すために使用され、ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体の両方を含む。「結合タンパク質」という用語はまた、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃａｔａｌｏｇｕｅ  ａｎｄ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，１９９４−１９９５（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．）；Ｋｕｂｙ，Ｊ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，３ｒｄ  Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ＆  Ｃｏ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９８）で検討されるような抗原結合能を有するフラグメント（例えば、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、Ｆｖ、及びｒＩｇＧ）を含む抗体の抗原結合形態を含む。用語はまた、組み換え一本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）ならびにその二価（ｄｉ−ｓｃＦｖ）及び三価（ｔｒｉ−ｓｃＦＶ）形態を指すために使用される。抗体という用語はまた、ダイアボディ、トリアボディ、及びテトラボディを含む。
【００２８】
抗体の「抗原結合フラグメント」は、インタクト抗体の１つ以上の可変領域を含む。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフラグメント；ダイアボディ；線状抗体；ならびに抗体フラグメントから形成される一本鎖抗体分子が挙げられる。例えば、抗原結合フラグメントという用語は、組み換え一本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）ならびにその二価（ｄｉ−ｓｃＦｖ）及び三価（ｔｒｉ−ｓｃＦｖ）形態を指すために使用されてもよい。
そのようなフラグメントは、当該技術分野で既知の種々の方法を介して生成することができる。
【００２９】
「全長抗体」、「インタクト抗体」、または「全抗体」という用語は、抗体の抗原結合フラグメントとは対照的に、実質的にインタクトな形態の抗体を指すために互換的に使用される。具体的には、全抗体は、Ｆｃ領域を含む重鎖及び軽鎖を有するものを含む。定常ドメインは、野生型配列定常ドメイン（例えば、ヒト野生型配列定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列多様体であってよい。
【００３０】
「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」という用語は、本開示の文脈では、特定の抗原を認識して結合する抗体の２つの可変鎖（重鎖及び軽鎖）の一部を指すために使用される。ＣＤＲは、可変鎖の最も可変な部分であり、結合タンパク質にその特異性を提供する。一般に、可変重（ＶＨ）鎖及び可変軽（ＶＬ）鎖のそれぞれに３つのＣＤＲがある。
【００３１】
本明細書で使用される場合、「可変領域」は、抗原に特異的に結合する本明細書で定義されるような抗体の軽鎖及び／または重鎖の部分を指し、例えば、ＣＤＲ、すなわち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、ならびにフレームワーク領域（ＦＲ）、のアミノ酸配列を含む。例えば、可変領域は、３つのＣＤＲとともに３つまたは４つのＦＲ（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及び任意に、ＦＲ４）を含む。ＶＨは、重鎖の可変領域を指す。ＶＬは、軽鎖の可変領域を指す。
【００３２】
一例では、ＣＤＲ及びＦＲに割り当てられるアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  Ｍｄ．，１９８７及び１９９１（本明細書では、「Ｋａｂａｔ番号付けシステム」または「Ｋａｂａｔ」とも呼ばれる）に従って定義される。
【００３３】
可変ドメインの修正または代替番号付けシステムを含む他の規則には、ＩＭＧＴ（Ｌｅｆｒａｎｃ，ｅｔ  ａｌ．（２００３），Ｄｅｖ  Ｃｏｍｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２７：５５−７７）、Ｃｈｏｔｈｉａ（Ｃｈｏｔｈｉａ  Ｃ，Ｌｅｓｋ  ＡＭ（１９８７），Ｊ  Ｍａｌ  Ｂｉｏｌ  １９６：９０１−９１７；Ｃｈｏｔｈｉａ，ｅｔ  ａｌ．（１９８９），Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３）、及びＡＨｏ（Ｈｏｎｅｇｇｅｒ  Ａ，Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  Ａ（２００１）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ３０９：６５７−６７０）を含む。便宜上、本開示の結合タンパク質の例はまた、ＩＭＧＴに従って標識されてもよい。
【００３４】
本明細書で使用される「定常領域」という用語は、可変領域以外の抗体の重鎖または軽鎖の一部を指す。重鎖では、定常領域は一般に、複数の定常ドメイン及びヒンジ領域を含み、例えば、ＩｇＧ定常領域は、以下の連結構成要素、定常重鎖ＣＨ１、リンカー、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む。重鎖では、定常領域は、Ｆｃを含む。軽鎖では、定常領域は一般に、１つの定常ドメイン（ＣＬ１）を含む。
【００３５】
「フラグメント結晶化可能」または「Ｆｃ」または「Ｆｃ領域」または「Ｆｃ部分」という用語（本明細書で互換的に使用することができる）は、少なくとも１つの定常ドメインを含む抗体の領域を指し、これは、一般に（必ずしもではないが）、グリコシル化され、１つ以上のＦｃ受容体及び／または補体カスケードの成分に結合することが可能である。重鎖定常領域は、５つのアイソタイプ：α、δ、ε、γ、またはμのいずれかから選択することができる。例示的な重鎖定常領域は、ガンマ１（ＩｇＧ１）、ガンマ２（ＩｇＧ２）、及びガンマ３（ＩｇＧ３）、またはそれらのハイブリッドである。
【００３６】
「定常ドメイン」は、抗体中のドメインであり、この配列は、抗体において非常に類似し／同じタイプの抗体、例えば、ＩｇＧまたはＩｇＭまたはＩｇＥである。抗体の定常領域は一般に、複数の定常ドメインを含み、例えば、γ、α、またはδ重鎖の定常領域は、２つの定常ドメインを含む。
【００３７】
「抗体重鎖」という用語は、本明細書では、天然に存在する立体配座の全ての抗体分子に存在する２つのタイプのポリペプチド鎖のうち大きい方を指すために使用される。本明細書で使用される「抗体軽鎖」は、天然に存在する立体配座の全ての抗体分子に存在する２つのタイプのポリペプチド鎖のうちの小さい方を指す。κ及びλ軽鎖は、２つの主要な抗体軽鎖アイソタイプを指す。
【００３８】
「ネイキッド」という用語は、別の化合物、例えば、毒性化合物または放射性標識にコンジュゲートされていない、本開示の結合タンパク質を指すために使用される。例えば、「ネイキッド」という用語は、別の化合物にコンジュゲートされていない結合タンパク質を指すために使用することができる。従って、一例では、本開示の結合タンパク質は、「ネイキッド」である。換言すれば、本開示の結合タンパク質は、コンジュゲートされていない可能性がある。
【００３９】
対照的に、「コンジュゲートされている」という用語は、本開示の文脈では、別の化合物、例えば、細胞毒性剤または放射性標識などの毒性化合物、にコンジュゲートされている本明細書に記載の結合タンパク質を指すために使用される。従って、一例では、本開示の結合タンパク質は、「コンジュゲート」されている。
【００４０】
本明細書で使用される「細胞毒性剤」という用語は、細胞機能を阻害もしくは防止し、及び／または細胞死もしくは細胞破壊を引き起こす物質を指す。細胞毒性剤は、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、１１３１、１１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ、Ｐ、Ｐｂ、及びＬｕの放射性同位体）、化学療法剤または薬物（例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン、または他の挿入剤）；成長阻害剤；核酸分解酵素などの酵素及びそのフラグメント；抗生物質；フラグメント及び／または多様体を含む細菌、真菌、植物、または動物起源の小分子毒素または酵素活性毒素などの毒素；ならびに以下に開示の種々の抗腫瘍剤または抗がん剤を含むが、これらに限定されない。
【００４１】
「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養」などの用語は、本開示の文脈において、そのような細胞の子孫を含む外因性核酸が導入されている細胞を指すために互換的に使用される。宿主細胞は、初代形質転換細胞及び継代数にかかわらずそれに由来する子孫を含む「形質転換体」及び「形質転換細胞」を含む。子孫は、核酸含量において親細胞と完全に同一でなくてもよいが、変異を含有してもよい。元々形質転換された細胞においてスクリーニングまたは選択されるものと同じ機能または生物活性を有する変異型子孫が本明細書に含まれる。
【００４２】
本開示による「単離核酸」は、自然環境の成分から分離されている核酸分子である。単離核酸には、核酸分子を通常含有する細胞内に含有される核酸分子が含まれるが、その核酸分子は、染色体外に、またはその天然の染色体位置とは異なる染色体位置に、存在する。
【００４３】
本明細書で使用される「発現ベクター」という用語は、発現されるべき核酸配列に作動可能に連結している少なくとも１つの発現制御配列を含む組み換え核酸配列を含むベクターを指す。発現ベクターは、発現に必要な全ての必要なシス作用要素を含む。発現ベクターの例としては、発現されるべき組み換えポリヌクレオチドをコードするプラスミド、コスミド、及びウイルスが挙げられるが、これらに限定されない。他の例では、発現ベクターは、ゲノム、例えば、ＰｉｇｇｙＢａｃ発現系、に組み込むことが可能な転位因子を含む。別の例では、発現ベクターは、発現ベクター内容物の宿主ゲノムへの組み込みを可能にするウイルスベクター、例えば、レトロウイルスベクター及びレンチウイルスベクター、である。
【００４４】
参照ポリペプチド配列に関する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」は、必要に応じて、最大パーセント配列同一性を達成するように、配列をアラインさせてギャップを導入した後に、参照ポリペプチド配列のアミノ酸残基と同一である候補配列のアミノ酸残基の割合として定義され、配列同一性の一部としての任意の保存的置換を考慮しない。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピューターソフトウェアを使用して、当業者らの技能の範囲内にある種々の方法で達成することができる。当業者らは、比較されている配列の全長にわたる最大のアライメントを得るために必要とされる任意のアルゴリズムを含む、配列をアラインするのに適切なパラメータを決定し得る。
【００４５】
本開示による結合タンパク質及びそれを含む組成物は、種々の適応症を処置するために対象に投与することができる。「対象」、「患者」、または「個人」などの用語は、本開示では、文脈において互換的に使用することができる用語である。一例では、対象は、哺乳動物である。哺乳動物は、イヌもしくはネコなどのコンパニオンアニマル、またはウマもしくはウシなどの家畜動物であってよい。一例では、対象は、ヒトである。例えば、対象は、成人であり得る。別の例では、対象は、子供であり得る。別の例では、対象は、青年であり得る。
【００４６】
本明細書で使用される場合、「処置」という用語は、臨床的病理の経過中に処置されている個体または細胞の自然経過を改変するように設計された臨床的介入を指す。処置の望ましい効果は、疾患進行速度の減少、疾患状態の改善または緩和、及び寛解または予後の改善を含む。個体は、例えば、疾患に関連する１つ以上の症状が緩和または解消される場合、うまく「処置」される。
【００４７】
本明細書で使用される場合、「予防」という用語は、個体における疾患の発生または再発に関して予防を提供することを含む。個体は、疾患または疾患が再発しやすいか、またはそれを発症するリスクがあり得るが、まだ疾患または再発と診断されていない。
【００４８】
「有効量」は、所望の治療的結果または予防的結果を達成するのに、必要な投薬量及び期間で、少なくとも有効な量を指す。有効量は、１回以上の投与で提供することができる。本開示の一部の例では、「有効量」という用語は、以下に記載の疾患または状態の処置を行うのに必要な量を意味する。有効量は、処置されるべき疾患または状態に応じて、さらに体重、年齢、人種的背景、性別、健康、及び／または物理的状態ならびに処置される対象に関連する他の要因に応じて、変動し得る。通常、有効量は、医師による日常的な治験及び実験を通じて決定することができる比較的広い範囲（例えば、「投薬量」の範囲）に入るであろう。
【００４９】
「治療的有効量」は、特定の障害（例えば、がん）の測定可能な改善をもたらすのに必要な少なくとも最小濃度である。本明細書における治療的有効量は、患者の病状、年齢、性別、及び体重、ならびに結合タンパク質が個体において所望の応答を誘発する能力などの要因により変動し得る。治療的有効量はまた、結合タンパク質のいずれかの毒性または有害な影響よりも、治療上有益な効果が上回るものである。がんの場合、治療的有効量の結合タンパク質は、がん細胞の数を低減させ；初期の腫瘍のサイズを低減させ；末梢器官へのがん細胞浸潤を阻害し（すなわち、ある程度まで遅らせ、一部の例では、停止させ）；腫瘍転移を阻害し（すなわち、ある程度まで遅らせ、一部の例では、停止させ）；腫瘍成長もしくは腫瘍の進行をある程度まで阻害するか、もしくは遅延させ；及び／またはがんに関連する症状のうちの１つ以上を軽減し得る。結合タンパク質が成長を防止し及び／または既存のがん細胞を死滅させ得る限度において、それは、細胞増殖抑制及び／または細胞毒性であってよい。がん治療法では、ｉｎ  ｖｉｖｏでの有効性は、例えば、生存期間、疾患進行までの時間（ＴＴＰ）、奏効率（ＲＲ）、奏効期間、及び／または生活の質を評価することにより測定することができる。
【００５０】
ヒト結合タンパク質
本開示は、「ヒト」結合タンパク質に関する。一例では、本開示の「ヒト」結合タンパク質は、ヒト配列によりコードされないアミノ酸残基、例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの（タンパク質の少数の残基における、例えば、タンパク質の残基のうちの１、２、３、４、または５における、保存的置換または変異を含む特定の変異での）ランダムに導入される変異または部位特異的変異、を含み得る。これらの「ヒト結合タンパク質」は、必ずしもヒトの免疫応答の結果として生成される必要はなく、むしろ、それらは、組み換え手段を使用して（例えば、ファージディスプレイライブラリーをスクリーニングして）、及び／またはヒト抗体定常領域及び／またはヒト抗体可変領域をコードする核酸を含むトランスジェニック動物（例えば、マウス）により、及び／または（例えば、米国特許第５，５６５，３３２号に記載されるような）ガイド選択を使用して、生成することができる。この用語は、そのような抗体の親和性成熟形態も包含する。一例では、用語は、ヒト抗体を包含する。
【００５１】
モノクローナル抗体は、本開示により企図される結合タンパク質の別の例示的な形態である。「モノクローナル抗体」または「ＭＡｂ」という用語は、同じ抗原（複数可）に、例えば、抗原内の同じエピトープに、結合することが可能な均一な抗体集団を指す。この用語は、抗体の供給源またはそれが作製される方法に関して限定されるものではない。
【００５２】
本開示はまた、例えば、ＷＯ２０００／３４３１７及びＷＯ２００４／１０８１５８に記載されるような、脱免疫化抗体またはその抗原結合フラグメントを企図する。脱免疫化抗体及びフラグメントは、１つ以上のエピトープ、例えば、Ｂ細胞エピトープまたはＴ細胞エピトープが除去され（すなわち、変異し）、それにより、対象が抗体またはタンパク質に対する免疫応答を引き起こす可能性が低減される。例えば、本開示の抗体は、１つ以上のＢ細胞またはＴ細胞エピトープを同定するために分析され、エピトープ内の１つ以上のアミノ酸残基を変異させて、それにより、抗体の免疫原性を低減させる。
【００５３】
抗体フラグメント
単一ドメイン抗体
一部の例では、本開示の結合タンパク質は、単一ドメイン抗体（「ドメイン抗体」または「ｄＡｂ」という用語と互換的に使用される）であるか、またはそれを含む。単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全部または一部を含む単一のポリペプチド鎖である。
【００５４】
一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメント
当業者は、ｓｃＦｖが、単一のポリペプチド鎖中のＶＨ領域及びＶＬ領域、ならびにｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造形成することができる（すなわち、単一のポリペプチド鎖のＶＨ及びＶＬが互いに会合してＦｖを形成する）ＶＨ及びＶＬ間のポリペプチドリンカーを含むことを認識するであろう。一本鎖可変フラグメントは、完全な抗体分子に見出される定常Ｆｃ領域を欠き、それにより、免疫原性を低減している可能性がある。例示的なリンカーは、１２個を超えるアミノ酸残基を含み、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３は、ｓｃＦｖにとってより好ましいリンカーのうちの１つである。
【００５５】
本開示はまた、ジスルフィドで安定化されたＦｖ（またはｄｉＦｖもしくはｄｓＦｖ）を企図し、単一のシステイン残基がＶＨのＦＲ及びＶＬのＦＲに導入され、システイン残基がジスルフィド結合で連結されて、安定なＦｖを生成する。
【００５６】
別の例では、本開示は、二量体ｓｃＦｖ（ｄｉ−ｓｃＦＶ）、すなわち、例えば、ロイシンジッパードメイン（例えば、ＦｏｓまたはＪｕｎに由来する）による非共有結合または共有結合により連結されている２つのｓｃＦｖ分子を含むタンパク質、または三量体ｓｃＦＶ（ｔｒｉ−ｓｃＦｖ）を包含する。別の例では、２つのｓｃＦｖは、例えば、米国特許公開出願第２００６０２６３３６７号に記載されるように、両方のｓｃＦｖが形成及び抗原への結合を可能にするのに十分な長さのペプチドリンカーにより連結されている。
【００５７】
ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ
一部の例では、本開示の抗原結合フラグメントは、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、またはＷＯ９８／０４４００１及び／またはＷＯ９４／００７９２１に記載されるような高次タンパク質複合体であるか、またはそれを含む。
【００５８】
例えば、ダイアボディは、２つの関連ポリペプチド鎖を含むタンパク質であり、各ポリペプチド鎖は、構造ＶＬ−Ｘ−ＶＨまたはＶＨ−Ｘ−ＶＬを含み、Ｘは、単一のポリペプチド鎖のＶＨ及びＶＬが会合する（もしくはＦｖを形成する）ことを可能にする不十分な残基を含むリンカーであるか、または存在せず、１つのポリペプチド鎖のＶＨは、他のポリペプチド鎖のＶＬに結合して、抗原結合部位を形成し、すなわち、１つ以上の抗原に特異的に結合することが可能なＦｖ分子を形成する。
【００５９】
免疫グロブリン及び免疫グロブリンフラグメント
本開示の結合タンパク質の例は、Ｔ細胞受容体または重鎖免疫グロブリン（例えば、ＩｇＮＡＲ、ラクダ抗体）などの免疫グロブリンの可変領域を含むタンパク質（例えば、抗体模倣物）である。
【００６０】
Ｖ様タンパク質
本開示の結合タンパク質の例は、Ｔ細胞受容体である。Ｔ細胞受容体は、組み合わせて、抗体のＦｖモジュールに類似する構造になる２つのＶドメインを有する。Ｎｏｖｏｔｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８８：８６４６−８６５０，１９９１は、Ｔ細胞受容体の２つのＶドメイン（アルファ及びベータと称される）が、融合して一本鎖ポリペプチドとして発現させることができる方法、さらに、抗体ｓｃＦｖに全く類似する疎水性を低減するように表面の残基を変更する方法について記載する。２つのＶ−アルファ及びＶ−ベータドメインを含む一本鎖Ｔ細胞受容体または多量体Ｔ細胞受容体の産生について記載する他の刊行物としては、ＷＯ１９９９／０４５１１０またはＷＯ２０１１／１０７５９５が挙げられる。
【００６１】
抗原結合ドメインを含む他の非抗体タンパク質としては、Ｖ様ドメインを有するタンパク質が挙げられ、これは一般に、単量体である。そのようなＶ様ドメインを含むタンパク質の例としては、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ２８、及びＩＣＯＳが挙げられる。そのようなＶ様ドメインを含むタンパク質のさらなる開示は、ＷＯ１９９９／０４５１１０に含まれる。
【００６２】
アフィボディ
さらなる例では、本開示の結合タンパク質は、アフィボディである。アフィボディは、抗原に結合するように操作することができるＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓのプロテインＡのＺドメイン（抗原結合ドメイン）に由来する足場である。Ｚドメインは、およそ５８アミノ酸の３本ヘリックス束からなる。ライブラリーは、表面残基のランダム化により生成されている。さらなる詳細については、ＥＰ１６４１８１８を参照のこと。
【００６３】
アビマー
さらなる例では、本開示の結合タンパク質は、アビマーである。アビマーは、Ａドメインスキャフォールドファミリーに由来するマルチドメインタンパク質である。約３５アミノ酸の天然ドメインは、定義されたジスルフィド結合構造を採用する。多様性は、Ａドメインのファミリーにより示される天然の変形形態をシャッフリングすることにより生成される。さらなる詳細については、ＷＯ２００２／０８８１７１を参照のこと。
【００６４】
他の結合タンパク質
本開示に包含される結合タンパク質の他の例としては、以下が挙げられる：
（ｉ）アフィマー及びアドヒロンなどのペプチドディスプレイ足場（ＷＯ２００９１３６１８２；Ｔｉｅｄｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ  Ｄｅｓ  Ｓｅｌ  ２７，１４５−１５５）；ならびに、
（ｉｉ）センチリン（ｃｅｎｔｙｒｉｎｓ）（Ｊａｃｏｂｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ  Ｄｅｓ  Ｓｅｌ．２５，１０７−１１７；Ｄｉｅｍ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ  Ｄｅｓ  ｓｅｌ．２７，４９−４２９）。
【００６５】
ラムダ骨髄腫抗原（ＬＭＡ）結合タンパク質
本明細書で定義される結合タンパク質は、ラムダ骨髄腫抗原（ＬＭＡ）に結合するか、または特異的に結合する抗原結合ドメインを有する。一例では、本明細書で定義される結合タンパク質は、遊離軽鎖よりもＬＭＡに優先的に結合する抗原結合ドメインを有する。一例では、本開示による抗ＬＭＡ結合タンパク質は、配列番号１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号３に示されるようなＣＤＲ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。別の例では、抗ＬＭＡ結合タンパク質は、配列番号６に示されるようなＣＤＲ１、配列番号７に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号８または配列番号１３に示されるようなＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。別の例では、抗ＬＭＡ結合タンパク質は、配列番号６に示されるようなＣＤＲ１、配列番号７に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号８に示されるようなＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。別の例では、抗ＬＭＡ結合タンパク質は、配列番号６に示されるようなＣＤＲ１、配列番号７に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号１３に示されるようなＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。従って、別の例では、抗ＬＭＡ結合タンパク質は、配列番号１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号３に示されるようなＣＤＲ３を有するＶＨ；ならびに配列番号６に示されるようなＣＤＲ１、配列番号７に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号８に示されるようなＣＤＲ３を有するＶＬを含む。別の例では、抗ＬＭＡ結合タンパク質は、配列番号１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号３に示されるようなＣＤＲ３を有するＶＨ；ならびに配列番号６に示されるようなＣＤＲ１、配列番号７に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号１３に示されるようなＣＤＲ３を有するＶＬを含む。これらの例の実施形態では、ＬＭＡ結合タンパク質は、ＬＭＡアイソタイプ２及びＬＭＡアイソタイプ３と結合する。
【００６６】
別の例では、抗ＬＭＡ結合タンパク質は、配列番号４に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。別の例では、抗ＬＭＡ結合タンパク質は、配列番号９または配列番号１４に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。例えば、ＶＬは、配列番号９に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得る。別の例では、ＶＬは、配列番号１４に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得る。別の例では、ＶＨは、配列番号５に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。別の例では、ＶＬは、配列番号１０または配列番号１５に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。例えば、ＶＬは、配列番号１０に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得る。別の例では、ＶＬは、配列番号１５に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。従って、別の例では、抗ＬＭＡ結合タンパク質は、配列番号４に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号１０または配列番号１５で示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。例えば、ＶＨは、配列番号４に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得、ＶＬは、配列番号１０に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。例えば、ＶＨは、配列番号４に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得、ＶＬは、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含む。これらの例では、ＶＨ及び／またはＶＬは、列挙された配列番号と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であり得る。
【００６７】
別の例では、抗ＬＭＡ結合タンパク質は、配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。別の例では、抗ＬＭＡ結合タンパク質は、配列番号９または配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。例えば、ＶＬは、配列番号９に示されるアミノ酸配列を含み得る。別の例では、ＶＬは、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含み得る。別の例では、ＶＨは、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含む。別の例では、ＶＬは、配列番号１０または配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含む。例えば、ＶＬは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含み得る。別の例では、ＶＬは、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含む。従って、別の例では、抗ＬＭＡ結合タンパク質は、配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＶＨ；ならびに配列番号１０または配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。例えば、ＶＨは、配列番号４に示されるアミノ酸配列を含み得、ＶＬは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含む。例えば、ＶＨは、配列番号４に示されるアミノ酸配列を含み得、ＶＬは、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含む。これらの例では、結合タンパク質は、ＬＭＡと特異的に結合する。例えば、結合タンパク質は、遊離ラムダ軽鎖よりも優先的にＬＭＡと結合し得る。
【００６８】
別の例では、抗ＬＭＡ結合タンパク質は、配列番号３１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号３２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号３３に示されるようなＣＤＲ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。別の例では、抗ＬＭＡ結合タンパク質は、配列番号６１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号６２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号６３に示されるようなＣＤＲ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。別の例では、抗ＬＭＡ結合タンパク質は、配列番号３６または配列番号４１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号３７または配列番号４２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号３８または配列番号４３に示されるようなＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。例えば、抗ＬＭＡ結合タンパク質は、配列番号３６に示されるようなＣＤＲ１、配列番号３７に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号３８に示されるようなＣＤＲ３を有するＶＬを含み得る。別の例では、抗ＬＭＡ結合タンパク質は、配列番号４１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号４２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号４３に示されるようなＣＤＲ３を有するＶＬを含み得る。従って、例では、抗ＬＭＡ結合タンパク質は、配列番号３１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号３２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号３３に示されるようなＣＤＲ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに配列番号３６または配列番号４１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号３７または配列番号４２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号３８または配列番号４３に示されるようなＣＤＲ３を含むＶＬを含み得る。例えば、抗ＬＭＡ結合タンパク質は、配列番号３１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号３２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号３３に示されるようなＣＤＲ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに配列番号３６に示されるようなＣＤＲ１、配列番号３７に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号３８に示されるようなＣＤＲ３を含むＶＬを含み得る。別の例では、抗ＬＭＡ結合タンパク質は、配列番号３１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号３２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号３３に示されるようなＣＤＲ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに配列番号４１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号４２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号４３に示されるようなＣＤＲ３を含むＶＬを含み得る。
【００６９】
別の例では、抗ＬＭＡ結合タンパク質は、配列番号６１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号６２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号６３に示されるようなＣＤＲ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに配列番号６６または配列番号７１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号６７または配列番号７２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号６８または配列番号７３に示されるようなＣＤＲ３を含むＶＬを含み得る。例えば、抗ＬＭＡ結合タンパク質は、配列番号６１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号６２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号６３に示されるようなＣＤＲ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに配列番号６６に示されるようなＣＤＲ１、配列番号６７に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号６８に示されるようなＣＤＲ３を含むＶＬを含み得る。別の例では、抗ＬＭＡ結合タンパク質は、配列番号６１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号６２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号６３に示されるようなＣＤＲ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに配列番号７１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号７２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号７３に示されるようなＣＤＲ３を含むＶＬを含み得る。これらの例の実施形態では、ＬＭＡ結合タンパク質は、ＬＭＡアイソタイプ１、２及びアイソタイプ３と結合する。
【００７０】
別の例では、ＶＨは、配列番号３４または配列番号６４に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。例えば、ＶＨは、配列番号３４に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得る。別の例では、ＶＨは、配列番号６４に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得る。別の例では、ＶＬは、配列番号３９、４４、６９、または７４のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。別の例では、ＶＨは、配列番号３４または配列番号６４に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号３９、４４、６９、または７４のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。例えば、ＶＨは、配列番号３４に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得、ＶＬは、配列番号３９に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得る。別の例では、ＶＨは、配列番号３４に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得、ＶＬは、配列番号４４に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得る。別の例では、ＶＨは、配列番号６４に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得、ＶＬは、配列番号３９に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得る。別の例では、ＶＨは、配列番号６４に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得、ＶＬは、配列番号４４に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得る。別の例では、ＶＨは、配列番号６４に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得、ＶＬは、配列番号６９に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得る。別の例では、ＶＨは、配列番号６４に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得、ＶＬは、配列番号７４に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得る。別の例では、ＶＨは、配列番号５に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得、ＶＬは、配列番号１０または配列番号１５に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得る。別の例では、ＶＨは、配列番号５に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得、ＶＬは、配列番号１０に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得る。別の例では、ＶＨは、配列番号５に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得、ＶＬは、配列番号１５に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得る。別の例では、ＶＨは、配列番号３４に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得、ＶＬは、配列番号４０または配列番号４５に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得る。別の例では、ＶＨは、配列番号３４に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得、ＶＬは、配列番号４０に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得る。別の例では、ＶＨは、配列番号３４に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得、ＶＬは、配列番号１０または配列番号４５に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得る。別の例では、ＶＨは、配列番号６５に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得、ＶＬは、配列番号７０または配列番号７５に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得る。別の例では、ＶＨは、配列番号６５に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得、ＶＬは、配列番号７０に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得る。別の例では、ＶＨは、配列番号６５に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得、ＶＬは、配列番号７５に示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み得る。これらの例では、ＶＨ及び／またはＶＬは、列挙された配列番号と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であり得る。別の例では、ＶＨは、配列番号３４または配列番号６４に示されるアミノ酸配列を含む。例えば、ＶＨは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含む。別の例では、ＶＨは、配列番号６４に示されるアミノ酸配列を含む。別の例では、ＶＬは、配列番号３９、４４、６９、または７４のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む。別の例では、ＶＨは、配列番号３４または配列番号６４に示されるアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号３９、４４、６９、または７４のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む。例えば、ＶＨは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含み得、ＶＬは、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含み得る。別の例では、ＶＨは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号４４に示されるアミノ酸配列を含む。別の例では、ＶＨは、配列番号６４に示されるアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含む。別の例では、ＶＨは、配列番号６４に示されるアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号４４に示されるアミノ酸配列を含む。別の例では、ＶＨは、配列番号６４に示されるアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号６９に示されるアミノ酸配列を含む。別の例では、ＶＨは、配列番号６４に示されるアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号７４に示されるアミノ酸配列を含む。別の例では、ＶＨは、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１０または配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含む。別の例では、ＶＨは、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含む。別の例では、ＶＨは、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含む。別の例では、ＶＨは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号４０または配列番号４５に示されるアミノ酸配列を含む。別の例では、ＶＨは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号４０に示されるアミノ酸配列を含む。別の例では、ＶＨは、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１０または配列番号４５に示されるアミノ酸配列を含む。別の例では、ＶＨは、配列番号６５に示されるアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号７０または配列番号７５に示されるアミノ酸配列を含む。別の例では、ＶＨは、配列番号６５に示されるアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号７０に示されるアミノ酸配列を含む。別の例では、ＶＨは、配列番号６５に示されるアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号７５に示されるアミノ酸配列を含む。
【００７１】
一例では、上で言及された結合タンパク質は、抗体である。例えば、本開示は、ＣＤＲの上で言及された組み合わせを有する抗体を包含する。例えば、本開示の抗体は、配列番号１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号３に示されるようなＣＤＲ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）を含み得る。別の例では、抗体は、配列番号６に示されるようなＣＤＲ１、配列番号７に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号８または配列番号１３に示されるようなＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。別の例では、抗体は、配列番号６に示されるようなＣＤＲ１、配列番号７に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号８に示されるようなＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。別の例では、抗体は、配列番号６に示されるようなＣＤＲ１、配列番号７に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号１３に示されるようなＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。従って、別の例では、抗体は、配列番号１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号３に示されるようなＣＤＲ３を有するＶＨ；ならびに配列番号６に示されるようなＣＤＲ１、配列番号７に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号８に示されるようなＣＤＲ３を有するＶＬを含む。別の例では、抗体は、配列番号１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号３に示されるようなＣＤＲ３を有するＶＨ；ならびに配列番号６に示されるようなＣＤＲ１、配列番号７に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号１３に示されるようなＣＤＲ３を有するＶＬを含む。これらの例の実施形態では、抗体は、ＬＭＡアイソタイプ２及びアイソタイプ３と結合する。
【００７２】
別の例では、本開示に包含される結合タンパク質は、上で例示されたＶＨ及びＶＬの組み合わせのＣＤＲを含み得る。例では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔを使用して定義される。別の例では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴを使用して定義される。
【００７３】
上で言及された％配列同一性を有する結合タンパク質に言及すると、種々の例では、本開示に包含される結合タンパク質は、言及された配列識別子番号と比較して、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つのアミノ酸置換を有し得る。例示的な置換としては、以下の表Ａに記載されるような保存的アミノ酸置換が挙げられる。
【表Ａ】
2021514369.tif 000002
【００７４】
「４Ｇ７」という用語は、本開示の文脈で使用され、以下に示されるアミノ酸配列を含むエピトープと結合するヒト遊離ラムダ軽鎖に対するモノクローナル抗体を指す：
−配列番号９１（ＫＡＤＧＳＰＶＫ）及び９３（ＳＨＲ）（アイソタイプ１）、
−配列番号９２（ＫＡＤＳＳＰＶＫ）及び９３（ＳＨＲ）（アイソタイプ２）、または
−配列番号９２（ＫＡＤＳＳＰＶＫ）及び９４（ＳＨＫ）（アイソタイプ３）。
４Ｇ７は、種々の供給元（例えば、Ａｂｃａｍ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ，＃ａｂ５４３８０；Ｙａｍａｓａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｃｈｏｓｈｉ，Ｊａｐａｎ、＃７６４２）から市販されている。
【００７５】
一例では、本開示に包含される抗ＬＭＡ結合タンパク質は、４Ｇ７と同じエピトープと結合し得る。例えば、本開示に包含される抗ＬＭＡ結合タンパク質は、以下に示されるアミノ酸配列を含むエピトープと結合し得る：
−配列番号９１及び９３（ラムダアイソタイプ１）、
−配列番号９２及び９３（ラムダアイソタイプ２）、または
−配列番号９２及び９４（ラムダアイソタイプ３）。
【００７６】
別の例では、本開示に包含される抗ＬＭＡ結合タンパク質は、以下に示されるアミノ酸配列を含むエピトープと結合し：
−配列番号９１及び９３（ラムダアイソタイプ１）、
−配列番号９２及び９３（ラムダアイソタイプ２）、または
−配列番号９２及び９４（ラムダアイソタイプ３）、
可溶性ラムダ軽鎖には結合しない。
【００７７】
別の例では、結合タンパク質は、配列番号９２及び９３（ラムダアイソタイプ２）ならびに配列番号９２及び９４（ラムダアイソタイプ３）と結合する。
【００７８】
種々のラムダ軽鎖アイソタイプが報告されており、これらのアイソタイプは、分子の定常領域におけるアミノ酸の相違で定義される。
【００７９】
様々な頻度のラムダ軽鎖アイソタイプが表される。例えば、多発性骨髄腫の対象では、約１４％が、アイソタイプ１を発現し、約６４％が、アイソタイプ２を発現し、約２３％が、アイソタイプ３を発現する。従って、一部の例では、１つ以上または全てのラムダ軽鎖アイソタイプと結合する本開示による抗体を投与することが望ましい場合がある。一例では、結合タンパク質は、ラムダアイソタイプ２及びアイソタイプ３と結合する。一例では、結合タンパク質は、アイソタイプ１に結合しない。
【００８０】
別の例では、結合タンパク質は、４Ｇ７と比較して製造性が向上している。
【００８１】
製造性の向上は、脱アミド化部位、アスパルタート異性化部位、酸化部位、例えば、メチオニン及びトリプトファン、遊離システインチオール基、Ｎ＆Ｏ−グリコシル化部位の数の低減、Ｃ末端リジンの存在、及び／または等電点に関連する翻訳後修飾または化学的安定性の向上を包含する。
【００８２】
一例では、結合タンパク質は、４Ｇ７と比較して、より少ないアスパラギンをＶＨ及び／またはＶＬに含む。
【００８３】
一例では、結合タンパク質は、４Ｇ７と比較して、より少ないメチオニンをＶＨ及び／またはＶＬに含む。
【００８４】
一例では、結合タンパク質は、４Ｇ７と比較して、より少ないトリプトファンをＶＨ及び／またはＶＬに含む。
【００８５】
一例では、結合タンパク質は、４Ｇ７と比較して、より少ないアスパラギン酸をＶＨ及び／またはＶＬに含む。
【００８６】
一例では、結合タンパク質の物理的安定性は、４Ｇ７よりも大きい。
【００８７】
物理的安定性は、溶液中での凝集の傾向を含み得る。「凝集」という用語は、本開示の文脈では、単離、精製、及び製剤プロセスに、細胞培養及び発酵から複数の環境で発生し得るタンパク質の自己会合を指すために使用される。例えば、「凝集」という用語は、封入体の形成；細胞分画後の「不溶性」分画へのタンパク質の蓄積；試料中の濁りの出現、タンパク質沈殿、もしくは粒子の形成；または、とりわけ、小さな可溶性オリゴマーの形成を説明する時に使用することができる。
【００８８】
従って、上で言及された例では、結合タンパク質の物理的安定性は、溶液中の物理的安定性に基づくことができ、溶液からの結合タンパク質の沈殿は、結合タンパク質が不安定になっていることを示す。物理的安定性を評価するために、本開示による結合タンパク質または４Ｇ７を含む溶液は、４℃でインキュベートし、２週間、４週間、１２週間、６ヶ月、及び１２ヶ月での沈殿について視覚的に評価することができる。
【００８９】
別の例では、結合タンパク質は、４Ｇ７と比較して、ヒト対象において免疫原性が低減している。例えば、結合タンパク質は、免疫原性が酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）により測定される時、４Ｇ７と比較して免疫原性が低減している可能性がある。別の例では、結合タンパク質は、免疫原性が表面プラズモン共鳴を介して測定される時、４Ｇ７と比較して免疫原性が低減している可能性がある。
【００９０】
別の例では、結合タンパク質は、４Ｇ７よりもＬＭＡに対してより高い特異性を有する。
【００９１】
別の例では、結合タンパク質は、４Ｇ７と比較して、より低い交差反応性（すなわち、結合タンパク質が異なるタンパク質上の類似の抗原部位と反応する能力）を有する。この例では、結合タンパク質の交差反応性は、様々な方法を使用して測定することができる。一例では、交差反応性は、ＥＬＩＳＡを介して評価される。
【００９２】
別の例では、結合タンパク質は、４Ｇ７よりもＬＭＡに対してより高い結合親和性を有する。
【００９３】
別の例では、結合タンパク質は、軽鎖と比較して４Ｇ７よりも、ＬＭＡに対してより高い結合親和性を有する。
【００９４】
上で言及される例では、ＬＭＡに対する結合タンパク質の親和性は、種々の方法を使用して測定することができる。一例では、ＬＭＡに対する結合タンパク質の解離定数（ＫＤ）または会合定数（ＫＡ）または平衡定数（ＫＤ）が決定される。一例では、結合タンパク質に対するこれらの定数は、放射標識または蛍光標識ＬＭＡ結合アッセイにより測定される。このアッセイは、非標識ＬＭＡの滴定シリーズの存在下で、最小濃度の標識ＬＭＡで結合タンパク質を平衡させる。結合していないＬＭＡを除去するために洗浄した後、標識の量が決定される。
【００９５】
親和性測定は、以下の抗体反応に対する標準的手法により決定することができる、例えば、イムノアッセイ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）（Ｒｉｃｈ  ａｎｄ  Ｍｙｓｚｋａ  Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １１：５４，２０００；Ｅｎｇｌｅｂｉｅｎｎｅ  Ａｎａｌｙｓｔ．１２３：１５９９，１９９８）、等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）、または当該技術分野で既知の他の速度論的相互作用アッセイ。
【００９６】
一例では、定数は、表面プラズモン共鳴アッセイを使用することにより、例えば、固定化ＬＭＡを用いるＢＩＡコア表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用することにより、測定される。例示的なＳＰＲ法は、米国特許第７，２２９，６１９号に記載される。
【００９７】
他の例では、ＬＭＡに対する結合タンパク質の親和性は、等温滴定マイクロ熱量測定を使用して測定することができる。
【００９８】
結合タンパク質の生成
組み換え発現
一例では、本明細書に記載の結合タンパク質は、ペプチドまたはポリペプチドである（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメントである）。一例では、結合タンパク質は、組み換えのものである。
【００９９】
組み換えペプチドまたはポリペプチドの場合、それをコードする核酸を発現ベクターにクローン化することができ、次に、これを、別途免疫グロブリンまたは抗体タンパク質を産生しない宿主細胞、例えば、Ｅ．  ｃｏｌｉ細胞、酵母細胞、昆虫細胞、または哺乳動物細胞、例えば、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）細胞、もしくは骨髄腫細胞にトランスフェクトする。
【０１００】
好適な分子クローニング技術は、当該技術分野で既知であり、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，（ｅｄｉｔｏｒｓ），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９８８、現在までの全ての更新を含む）またはＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９８９）に記載される。多種多様なクローニング及びｉｎ  ｖｉｔｒｏ増幅法が、組み換え核酸の構築に適する。組み換え抗体の生成方法も当該技術分野で既知である。米国特許第４，８１６，５６７号または米国特許第５，５３０，１０１号を参照のこと。
【０１０１】
単離後、さらなるクローニング（ＤＮＡの増幅）または無細胞系もしくは細胞における発現のための発現構築物または発現ベクター中のプロモーターに作動可能に連結される核酸が挿入される。従って、本開示の別の例は、本開示の単離核酸及び１つ以上の追加のヌクレオチド配列を含む発現構築物を提供する。適切には、発現構築物は、当該技術分野で理解されるように、プラスミド、バクテリオファージ、コスミド、酵母、または細菌人工染色体の形態であるか、またはその遺伝子成分を含む。発現構築物は、細菌または他の宿主細胞における単離核酸の維持及び増殖、組み換えＤＮＡ技術による操作、及び／または本開示の核酸もしくは結合タンパク質の発現に適し得る。
【０１０２】
細胞内での発現のための多くのベクターが利用可能である。ベクター成分は一般に、以下のうちの１つ以上を含むが、これらに限定されない：シグナル配列、結合タンパク質をコードする配列（例えば、本明細書に提供される情報から得られる）、エンハンサー要素、プロモーター、及び転写終結配列。例示的なシグナル配列としては、原核生物分泌シグナル（例えば、ｐｅｌＢ、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、Ｉｐｐ、もしくは熱安定性エンテロトキシンＩＩ）、酵母分泌シグナル（例えば、インベルターゼリーダー、α因子リーダー、もしくは酸性ホスファターゼリーダー）または哺乳動物分泌シグナル（例えば、単純ヘルペスｇＤシグナル）が挙げられる。
【０１０３】
哺乳動物細胞で活性のある例示的なプロモーターとしては、サイトメガロウイルス前初期プロモーター（ＣＭＶ−ＩＥ）、ヒト伸長因子１−αプロモーター（ＥＦ１）、小さな核ＲＮＡプロモーター（Ｕ１ａ及びＵ１ｂ）、α−ミオシン重鎖プロモーター、シミアンウイルス４０プロモーター（ＳＶ４０）、ラウス肉腫ウイルスプロモーター（ＲＳＶ）、アデノウイルス主要後期プロモーター、β−アクチンプロモーター；ＣＭＶエンハンサー／β−アクチンプロモーターまたは免疫グロブリンまたは抗体プロモーターまたはそれらの活性フラグメントを含むハイブリッド制御要素が挙げられる。有用な哺乳動物宿主細胞株の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５１）により形質転換されるサル腎臓ＣＶ１株；ヒト胚性腎臓株（懸濁培養液中で成長用にサブクローン化された２９３もしくは２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  １０）；またはチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）である。
【０１０４】
酵母細胞、例えば、Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、及びＳ．ｐｏｍｂｅを含む群より選択される酵母細胞における発現に適する代表的なプロモーターは、ＡＤＨ１プロモーター、ＧＡＬ１プロモーター、ＧＡＬ４プロモーター、ＣＵＰ１プロモーター、ＰＨＯ５プロモーター、ｎｍｔプロモーター、ＲＰＲ１プロモーター、またはＴＥＦ１プロモーターを含むが、これらに限定されない。
【０１０５】
単離核酸またはそれを含む発現構築物を発現のために細胞に導入するための手段は、当業者らに既知である。所与の細胞に使用される技術は、既知の良好な技術に依存する。細胞に組み換えＤＮＡを導入する手段は、マイクロインジェクション、ＤＥＡＥ−デキストランを介したトランスフェクション、例えば、リポフェクタミン（Ｇｉｂｃｏ，ＭＤ，ＵＳＡ）及び／またはセルフェクチン（Ｇｉｂｃｏ，ＭＤ，ＵＳＡ）を使用することによる、リポソームを介したトランスフェクション、ＰＥＧ媒介性ＤＮＡ取り込み、エレクトロポレーション、とりわけ、例えば、ＤＮＡコーティングされたタングステンまたは金粒子（Ａｇｒａｃｅｔｕｓ  Ｉｎｃ．，ＷＩ，ＵＳＡ）を使用することによる微粒子衝突を含む。
【０１０６】
結合タンパク質（例えば、抗体または抗原結合フラグメント）を生成するために使用される宿主細胞は、使用される細胞型に応じて、様々な培地で培養されてもよい。ＨａｍのＦ１０（Ｓｉｇｍａ）、最小必須培地（（ＭＥＭ）、（Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭＬ−１６４０（Ｓｉｇｍａ）、及びダルベッコ改変イーグル培地（（ＤＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）などの市販の培地は、哺乳動物細胞を培養するのに適する。本明細書で考察される他の細胞タイプを培養するための培地は、当該技術分野で既知である。
【０１０７】
当業者は、本開示が、本開示の結合タンパク質（例えば、ペプチドまたはポリペプチド結合タンパク質または抗体もしくはその抗原結合フラグメント）をコードする単離核酸も提供することを上述の説明から理解するであろう。
【０１０８】
本開示はまた、プロモーターに作動可能に連結している本開示の単離核酸を含む発現構築物を提供する。一例では、発現構築物は、発現ベクターである。
【０１０９】
一例では、本開示の発現構築物は、プロモーターに作動可能に連結されているポリペプチド（例えば、ＶＨを含む）をコードする核酸及びプロモーターに作動可能に連結されている別のポリペプチド（例えば、ＶＬを含む）をコードする核酸を含む。
【０１１０】
本開示はまた、本開示による発現構築物を含む宿主細胞を提供する。
【０１１１】
本開示はまた、本開示の結合タンパク質を発現する単離細胞、または結合タンパク質を発現するように遺伝子改変された組み換え細胞を提供する。
【０１１２】
タンパク質の単離
本開示による結合タンパク質の精製方法は、当該技術分野で既知である。ペプチドまたはポリペプチドが培地に分泌される場合、そのような発現系由来の上清は、最初に、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えば、ＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過ユニットを使用して濃縮することができる。タンパク質分解を阻害するためにＰＭＳＦなどのプロテアーゼ阻害剤が前述のステップのうちのいずれかに含まれてもよく、外来性夾雑物の成長を防止するために抗生物質が含まれてもよい。
【０１１３】
細胞から調製される結合タンパク質は、例えば、イオン交換、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、アフィニティークロマトグラフィー（例えば、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーもしくはプロテインＧクロマトグラフィー）、または上述の任意の組み合わせを使用して精製することができる。これらの方法は、当該技術分野で既知であり、例えば、ＷＯ９９／５７１３４またはＥｄ  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄ  Ｌａｎｅ（ｅｄｉｔｏｒｓ）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，（１９８８）に記載される。
【０１１４】
コンジュゲート
一例では、本開示の結合タンパク質は、別の化合物にコンジュゲートされる。結合タンパク質は、化合物に直接的または間接的に結合することができる（例えば、間接的結合の場合にリンカーを含み得る）。化合物の例としては、放射性同位元素（例えば、ヨウ素−１３１、イットリウム−９０、またはインジウム−１１１）、検出可能な標識（例えば、フルオロフォアまたは蛍光ナノクリスタルまたは量子ドット）、治療化合物（例えば、化学療法的または抗炎症性）、コロイド（例えば、金）、毒素（例えば、リシンまたは破傷風トキソイド）、核酸、対象において化合物の半減期を延長する薬剤（例えば、ポリエチレングリコールまたはこの活性を有する他の水溶性ポリマー）及びそれらの混合物が挙げられる。
【０１１５】
薬物または他の小分子医薬品を抗体に付着させるための方法は、周知であり、Ｎ−スクシンイミジル（４−ヨードアセチル）−アミノベンゾアート；スルホスクシンイミジル（４−ヨードアセチル）−アミノベンゾアート；４−スクシンイミジル−オキシカルボニル−（２−ピリジルジチオ）トルエン；スルホスクシンイミジル−６−［αメチル∀−（ピリジルジチオール）−トルアミド］ヘキサノアート；Ｎ−スクシンイミジル−３−（−２−ピリジルジチオ）−プロピオナート；スクシンイミジル−６−［３（−（−２−ピリジルジチオ）−プロピオンアミド］ヘキサノアート；スルホスクシンイミジル−６−［３（−（−２−ピリジルジチオ）−プロピオンアミド］ヘキサノアート；３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオニルヒドラジド、エルマンズ試薬、ジクロロトリアジン酸、Ｓ−（２−チオピリジル）−Ｌ−システインなどの二官能性化学リンカーの使用を含み得る。さらなる二官能性リンカー分子は、例えば、米国特許第５，３４９，０６６号、同第５，６１８，５２８号、同第４，５６９，７８９号、同第４，９５２，３９４号、及び同第５，１３７，８７７号に記載される。
【０１１６】
リンカーは、切断可能または切断不可能であり得る。非常に安定なリンカーは、循環中に脱落するペイロードの量を低減させて、それにより、安全性プロファイルを改善し、より多くのペイロードが標的細胞に到着するようにし得る。リンカーは、ジスルフィド、ヒドラゾン、またはペプチド（切断可能）、またはチオエーテル（切断不可能）を含む化学モチーフに基づき得、標的細胞への活性薬剤の分布及び送達を制御する。切断可能及び切断不可能なタイプのリンカーは、前臨床及び臨床試験で安全であることが証明されている（例えば、カテプシンにより切断可能な酵素感受性リンカーを含むブレンツキシマブベドチン、及び安定した切断不可能なリンカーを含むトラスツズマブエムタンシンを参照のこと）。一例では、リンカーは、Ｅｄｍａｎ分解により切断可能なペプチドリンカーである（Ｂａｃｈｏｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ，１７（３）：６０５−１１（２０１３））。
【０１１７】
一例では、結合タンパク質は、ナノ粒子またはマイクロ粒子にコンジュゲートされる（例えば、Ｋｏｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ｌｏｎｄ）．２：２８７−３０６，２００７に概説されるような）。ナノ粒子は、金属ナノ粒子であってよい。粒子は、ポリマー粒子、リポソーム、ミセル、マイクロバブル、ならびに当該技術分野で既知の他の担体及び送達ビヒクルであり得る。
【０１１８】
本開示の結合タンパク質にコンジュゲートすることができる一部の例示化合物は、表Ｂに列挙される。
【表Ｂ】
2021514369.tif 000003
【０１１９】
一例では、本開示の結合タンパク質は、化学療法剤にコンジュゲートされる。
【０１２０】
組成物
適切には、組成物または対象に本開示による結合タンパク質を投与するための方法では、結合タンパク質は、当該技術分野で理解されるように、薬学的に許容される担体と組み合わされる。一例では、本開示は、薬学的に許容される担体と組み合わされた本開示の結合タンパク質を含む組成物（例えば、医薬組成物）を提供する。別の例では、本開示は、対象への投与前に、本明細書に開示の結合タンパク質と組み合わせるか、または混合するのに適する薬学的に許容される担体を含むキットを提供する。この例では、キットはさらに、使用説明書を含んでもよい。
【０１２１】
一般論として、「担体」は、対象、例えば、ヒト対象、に安全に投与され得る固体もしくは液体の充填剤、結合剤、希釈剤、カプセル化物質、乳化剤、湿潤剤、溶媒、懸濁剤、コーティング、または滑沢剤を指すために使用される。特定の投与経路に応じて、以下に記載されるように、当該技術分野で既知の様々な許容可能な担体が使用されてもよい、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．Ｎ．Ｊ．ＵＳＡ，１９９１）。
【０１２２】
例えば、好適な担体は、糖（例えば、スクロース、マルトース、トレハロース、グルコース）、デンプン、セルロース及びその誘導体、麦芽、ゼラチン、タルク、硫酸カルシウム、植物油を含む油、合成油及び合成モノグリセリドまたは合成ジグリセリド、低級アルコール、ポリオール、アルギン酸、リン酸緩衝液、ステアリン酸ナトリウムまたはステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤、等張食塩水、ならびに発熱性物質不含水を含む群より選択されてもよい。一例では、担体は、Ｈ２Ｏではない。
【０１２３】
一例では、担体は、非経口投与と適合性があるか、またはそれに適する。非経口投与は、消化管を介さない投与経路を含む。非経口投与の例としては、注射、注入などが挙げられる。注射による投与の例としては、静脈内、動脈内、筋肉内、及び皮下注射が挙げられる。別の例では、組成物は、皮内、筋肉内、または皮下に送達され得るデポーまたは徐放性製剤を介して送達することができる。
【０１２４】
一例では、本明細書で開示のＬＭＡ結合タンパク質は、がんの部位（複数可）を検出するのに利用される。方法は通常、それを必要とする対象に、画像診断または核医学技術を使用して検出可能な薬剤を有効量投与すること、及び薬剤を検出することを含む。そのような方法では、薬剤は通常、ＬＭＡ結合タンパク質にコンジュゲートされるか、またはＬＭＡ結合タンパク質とコンジュゲートされる送達ビヒクルにカプセル化される。画像診断または核医学技術は、例えば、ＰＥＴ−ＣＴ、骨スキャン、ＭＲＩ、ＣＴ、心エコー検査、超音波、及びＸ線であり得る。
【０１２５】
一例では、結合タンパク質及びそれを含む組成物は、ＬＭＡ発現がんなどのＬＭＡ発現細胞の異常増殖を特徴とする状態の処置のための薬剤の製造に使用することができる。別の例では、本開示は、状態の処置に使用される結合タンパク質またはそれを含む組成物に関する。処置されるべき状態の例は、以下で考察される。
【０１２６】
処置されるべき状態
一例では、本開示は、ＬＭＡ発現がんを処置する方法を包含し、方法は、本明細書で定義される抗ＬＭＡ結合タンパク質を投与することを含む。例えば、本開示は、悪性Ｂ細胞がＬＭＡを発現するＢ細胞悪性腫瘍を処置する方法を包含する。別の例では、本開示は、多発性骨髄腫及び関連病状を処置する方法を包含する。「多発性骨髄腫」または「骨髄腫」という用語は、本開示の文脈では、形質細胞のがんを指すために使用される。本開示の文脈では、これらの用語は、分泌性骨髄腫、非分泌性骨髄腫、軽鎖のみの骨髄腫、くすぶり型骨髄腫、及び関連病状を包含する。関連病状の例としては、形質細胞腫、アミロイドーシス、意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症がある。一例では、多発性骨髄腫は、ラムダ型多発性骨髄腫である。
【０１２７】
従って、一例では、本開示は、アミロイドーシスを処置する方法を包含する。一例では、そのような方法は、遊離ラムダ軽鎖に対して高い親和性を有する本明細書に開示の結合タンパク質を投与することを含む。例えば、配列番号３１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号３２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号３３に示されるようなＣＤＲ３を有するＶＨ；ならびに配列番号３６に示されるようなＣＤＲ１、配列番号３７に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号３８に示されるようなＣＤＲ３を有するＶＬを含む結合タンパク質を投与することができる。別の例では、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号３９に示されるアミノ酸配列を有するＶＬを有する結合タンパク質を投与することができる。別の例では、配列番号６６に示されるようなＣＤＲ１、配列番号６７に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号６８に示されるようなＣＤＲ３を有するＶＨ、ならびに配列番号７１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号７２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号７３に示されるようなＣＤＲ３を有するＶＬを含む結合タンパク質を投与することができる。別の例では、配列番号６４に示されるアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号７４に示されるアミノ酸配列を有するＶＬを有する結合タンパク質を投与することができる。別の例では、配列番号６１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号６２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号６３に示されるようなＣＤＲ３を有するＶＨ、ならびに配列番号６６に示されるようなＣＤＲ１、配列番号６７に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号６８に示されるようなＣＤＲ３を有するＶＬを含む結合タンパク質を投与することができる。
【０１２８】
多発性骨髄腫を有する対象は、種々の対象集団に特徴付けることができる。例示的な集団は、（Ｒａｊｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．２０１１）に記載される。
【０１２９】
一例では、対象の多発性骨髄腫は、進行性疾患として特徴付けることができる（Ｒａｊｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．２０１１）。換言すれば、本開示の方法は、対象における進行性多発性骨髄腫の処置に関する。「進行性疾患」の例示的な指標としては、以下のうちのいずれか１つの、最小応答値からの約２５％の増加を含む：血清Ｍ成分（０．５ｇ／ｄＬ以上の絶対増加）、及び／または尿Ｍ成分（絶対増加は、２００ｍｇ／２４時間以上でなければならない）。他の例示的な指標は、多発性骨髄腫のみに起因し得る新たな骨病変もしくは軟部組織形質細胞腫の明確な進行または既存の骨病変もしくは軟部組織形質細胞腫のサイズの明確な増加；高カルシウム血症の進行（１１．５ｍｇ／ｄＬを超える補正された血清カルシウム）を含む。一例では、対象の多発性骨髄腫は、再発しており、進行性疾患を特徴とする。この例では、対象の多発性骨髄腫は、治療法にも不応であり得る。
【０１３０】
一例では、対象の多発性骨髄腫が再発している。「再発性骨髄腫」は、進行し、サルベージ療法の開始を必要とするが、いずれかの「原発性難治性骨髄腫」について基準を満たさない、以前に処置された骨髄腫を指すために使用される。
【０１３１】
別の例では、対象は、原発性難治性骨髄腫を有する。「原発性難治性骨髄腫」は、いかなる治療でも最小限の応答以上を達成したことがない患者において不応性の疾患を指すために使用される。
【０１３２】
別の例では、対象は、難治性骨髄腫を有する。「難治性骨髄腫」という用語は、１次療法もしくはサルベージ療法中に不応性であるか、または最後の療法から６０日以内に進行する疾患を指すために使用される。一例では、対象の多発性骨髄腫は、抗がん治療法に不応である。「難治性」という用語は、この文脈で、対象の多発性骨髄腫に対してもはや治療上有効ではない抗がん治療ラインを指すために使用される。例えば、本開示の方法により処置される対象は、少なくとも１つのプロテアソーム阻害剤に対して不応であり得る。「治療ライン」は、計画された処置プログラムの１つ以上のサイクルとして定義される。これは、単剤療法または併用療法の１つ以上の計画されたサイクル、及び計画された方法で投与された一連の処置で構成されてもよい。例えば、導入療法の計画された処置アプローチ、続く、自己由来幹細胞移植、続く、維持療法は、１つの治療ラインとみなされる。
【０１３３】
別の例では、対象は、少なくとも２つの以前の治療ラインに対して不応である。別の例では、対象は、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つの以前の治療ラインに対して不応であってよい。
【０１３４】
別の例では、対象は、再発性及び難治性骨髄腫を有する。「再発性及び難治性骨髄腫」は、サルベージ療法中に不応性であるか、または疾患経過において進行する前のある時点で最小奏効（ＭＲ）以上を達成している患者の最後の治療から６０日以内に進行する疾患を指すために使用される。
【０１３５】
一例では、本開示に従って処置される多発性骨髄腫は、最初の投与時に安定した疾患を特徴とする。換言すれば、対象は、最初の投与時にプラトー期にあり得る。安定した疾患の例示的な基準は、継続的な処置、骨髄腫の症状がほとんどないか、もしくは全くない、及び／または輸血の必要がないにもかかわらず、さらなる腫瘍退行なしのＭタンパク質の安定化を含み得る（Ｂｌａｄｅ  ｅｔ  ａｌ．１９９８）。
【０１３６】
別の例では、本開示の方法は、Ｂ細胞リンパ腫及びマクログロブリン血症を処置するために使用することができる。
【０１３７】
別の例では、本開示の方法は、ＰＯＥＭＳを処置するために使用することができる。本明細書で使用される場合、「ＰＯＥＭＳ症候群」は、神経を損傷する珍しい血液障害であり、身体の多くの他の部分に影響を与える。「ＰＯＥＭＳ」は、これらの徴候及び症状：多発性神経障害：脚の及び手の経時的な麻痺、刺痛、及び衰弱ならびに呼吸困難；臓器肥大症：脾臓、肝臓、またはリンパ節の肥大；内分泌障害：甲状腺機能低下（甲状腺機能亢進症）、糖尿病、性的問題、疲労、手足の腫れ、ならびに代謝及び他の必須機能の問題をもたらし得る異常なホルモンレベル；モノクローナル血漿増殖性障害：血流に見出すことができるタンパク質を産生する異常骨髄細胞（形質細胞）；皮膚の変化：皮膚上の通常より多くの色、場合により、厚い皮膚、ならびに顔及び／または脚の毛の増加を表す。
【０１３８】
別の例では、本明細書で定義される結合タンパク質は、自己免疫障害を処置するために対象に投与することができる。一例では、自己免疫障害は、ＬＭＡを膜遊離軽鎖（ｍＦＬＣ）として発現する形質細胞前駆体の異常な増殖を特徴とする。例えば、本明細書で定義される結合タンパク質は、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、真性糖尿病、多発性硬化症、クローン病、免疫性血小板減少性紫斑病、尋常性天疱瘡、自己免疫性じんま疹、セリアック病、疱疹性皮膚炎、急性リウマチ熱、グレーブス病、筋無力症、シェーグレン症候群、グッドパスチャー症候群、連鎖球菌後糸球体腎炎、接触皮膚炎、自己免疫性甲状腺炎、橋本甲状腺炎、アジソン病、自己免疫性溶血性貧血、悪性貧血、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）による血管炎、結節性多発性動脈炎、自己免疫性肝炎、及び原発性胆汁性肝硬変などの自己免疫障害を処置するために対象に投与することができる。例えば、本開示の方法は、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、真性糖尿病、及び多発性硬化症を処置するために使用することができる。従って、一例では、本開示の方法は、関節リウマチを処置するために使用することができる。別の例では、本開示は、全身性エリテマトーデスを処置するために使用することができる。別の例では、本開示による結合タンパク質は、真性糖尿病を処置するために使用することができる。別の例では、本開示による結合タンパク質は、多発性硬化症を処置するために使用することができる。
【０１３９】
別の例では、本開示による結合タンパク質は、対象におけるラムダ遊離軽鎖レベルを低減させる（すなわち、細胞膜上で発現しない対象におけるラムダ軽鎖、例えば、血清中のラムダ軽鎖、の量を低減させる）ために使用することができる。そのような方法は、遊離ラムダ軽鎖に対して高い親和性を有する本明細書に開示の結合タンパク質を投与することを含む。例えば、配列番号３１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号３２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号３３に示されるようなＣＤＲ３を有するＶＨ；ならびに配列番号３６に示されるようなＣＤＲ１、配列番号３７に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号３８に示されるようなＣＤＲ３を有するＶＬを含む結合タンパク質を投与することができる。別の例では、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号３９に示されるアミノ酸配列を有するＶＬを有する結合タンパク質を投与することができる。別の例では、配列番号６６に示されるようなＣＤＲ１、配列番号６７に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号６８に示されるようなＣＤＲ３を有するＶＨ、ならびに配列番号７１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号７２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号７３に示されるようなＣＤＲ３を有するＶＬを含む結合タンパク質を投与することができる。別の例では、配列番号６４に示されるアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号７４に示されるアミノ酸配列を有するＶＬを有する結合タンパク質を投与することができる。別の例では、配列番号６１に示されるようなＣＤＲ１、配列番号６２に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号６３に示されるようなＣＤＲ３を有するＶＨ、ならびに配列番号６６に示されるようなＣＤＲ１、配列番号６７に示されるようなＣＤＲ２、及び配列番号６８に示されるようなＣＤＲ３を有するＶＬを含む結合タンパク質を投与することができる。
【０１４０】
別の例では、本開示の方法は、遊離ラムダ軽鎖に対し低親和性を有する本開示の結合タンパク質と組み合わせて、遊離ラムダ軽鎖に対して高親和性を有する本開示の結合タンパク質を投与することにより、本明細書で開示のＬＭＡ発現がんまたは他の障害を処置することを包含する。例えば、配列番号６４に示されるアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号７４に示されるアミノ酸配列を有するＶＬを有する結合タンパク質は、配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＶＬを有する結合タンパク質と組み合わせて投与することができる。別の例では、配列番号６４に示されるアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号７４に示されるアミノ酸配列を有するＶＬを有する結合タンパク質は、配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＶＨ及び配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＶＬを有する結合タンパク質と組み合わせて投与することができる。
【０１４１】
本開示の方法の実施の一部として組み合わせた投与された抗体は、同時にまたは連続的に投与されてもよい。
【実施例】
【０１４２】
実施例１：ラムダ多発性骨髄腫細胞上のラムダ骨髄腫抗原（ＬＭＡ）
ラムダ多発性骨髄腫細胞の表面上のラムダ骨髄腫抗原（ＬＭＡ）の存在を確認するために、ラムダベンスジョーンズタンパク質（ＢＪＰ）に対するマウスモノクローナル抗体４Ｇ７を、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、及びウェスタンブロットアッセイに使用した。マウスモノクローナル抗体４Ｇ７は、全ての遊離ラムダ軽鎖ＢＪＰ及びマウスモノクローナル抗体３Ｄ１２と比較して３つの主要なラムダ軽鎖アイソタイプを包含した幅広いラムダヒト多発性骨髄腫細胞株に対して汎反応性を示した（表１及び表２）。その相互作用は、ラムダヒト多発性骨髄腫細胞株ＲＰＭＩ８２２６の細胞表面上のラムダ軽鎖の存在を実証するために、ＩｇＧ／ラムダではなく、ラムダ遊離軽鎖により阻害することができる。４Ｇ７はまた、フローサイトメトリー分析により決定されたＣＤ３８及びＣＤ１３８に陽性であったラムダ多発性骨髄腫患者由来の骨髄単核細胞集団でＬＭＡを検出した（表３）。エピトープ切除実験により、２つのペプチドがラムダ多発性骨髄腫細胞株上の４Ｇ７モノクローナル抗体エピトープの構成要素として同定された（図１）。
【表１】
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【表２】
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【表３】
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【０１４３】
実施例２：ヒト抗ＬＭＡ抗体の生成
Ｉｇ遊離ラムダ軽鎖及びラムダ骨髄腫抗原（ＬＭＡ）陽性細胞株で、ＨｕＭＡｂ−マウス（Ｍｅｄａｒｅｘ）を免疫した。ＬＭＡ特異的候補を同定するためにＥＬＩＳＡを使用して、Ｉｇ遊離ラムダ軽鎖及びＩｇ結合ラムダ軽鎖への結合について、ヒト抗ＬＭＡ抗体をスクリーニングした。ヒト抗ＬＭＡ抗体を精製し、フローサイトメトリーを使用してＬＭＡ陽性細胞株への結合を、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析を使用してＩｇ遊離ラムダ軽鎖に対する親和性を特徴付けた。同定されたヒト抗ＬＭＡ抗体候補は、１Ａ１１、７Ｆ１１、１０Ｂ３、１８Ｅ８、１８Ｅ１１、１８Ｆ９であった。
【０１４４】
実施例３：ヒト抗ＬＭＡ抗体は、ラムダ軽鎖と結合する
ラムダ軽鎖に対する抗ＬＭＡ抗体の結合親和性を決定するために、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）実験を実施した。抗ヒトＩｇ軽鎖をＢＩＡＣＯＲＥ  ＣＭ５チップ上に固定化し、これを使用してヒト抗ＬＭＡ抗体候補（２０μｇ／ｍｌ）を捕捉した。候補捕捉後に、試験されたラムダ軽鎖を注入し（２０μＬ／ｍｉｎ）、ＳＰＲを決定した（相対単位：ＲＵ）。
【０１４５】
ヒト抗ＬＭＡ抗体（クローン１Ａ１１、７Ｆ１１、１０Ｂ３、１８Ｅ８、１８Ｅ１１、及び１８Ｆ９）は、精製ラムダ軽鎖ＢＪＰ（κＢＪＰ（ＫＡＰ９６０Ｍ）ではない）（図２Ａ）、カニクイザルラムダ軽鎖（ＣＹＮＯ１、ＣＹＮＯ３）、ならびにラムダ軽鎖がトランスフェクトされたＨＥＫ細胞、ＬＰ−１ラムダ軽鎖分離株（ＬＰ−１  ＩＳＯ）、及びＲＰＭＩ−８２２６ラムダ軽鎖分離株（ＲＰＭＩ−８２２６  ＩＳＯ）の上清（図３）に対して高い選択的親和性を示した。同様に、ヒト抗ＬＭＡ抗体（６Ａ１、１３Ｈ３、及び４Ａ１）は、ラムダ軽鎖アイソタイプを発現するヒト多発性骨髄腫細胞株に対して高い選択的親和性を示し、カッパ軽鎖発現ＪＪＮ３細胞株に対して高い選択的親和性を示さないが（図４）、クローン１８Ｅ８、７Ｆ１１、及び１８Ｆ９は、市販のラムダ軽鎖（Ｂｅｔｈｙｌ）に対して選択的親和性を示した（図２Ｂ）。
【０１４６】
ヒト抗ＬＭＡ抗体７Ｆ１１は、試験された他のクローンと比較して精製ラムダ軽鎖ＢＪＰに対し、より低い選択的親和性を示し（図２Ａ、図２Ｂ）、カニクイザルラムダ軽鎖（ＣＹＮＯ１、ＣＹＮＯ３；図３）ならびにラムダ軽鎖がトランスフェクトされたＨＥＫ細胞、ＬＰ−１ラムダ軽鎖分離株（ＬＰ−１  ＩＳＯ）、及びＲＰＭＩ−８２２６ラムダ軽鎖分離株（ＲＰＭＩ−８２２６  ＩＳＯ）由来の上清に対し低親和性を示した（図４）。
【０１４７】
実施例４：ヒト抗ＬＭＡ抗体は、ＬＭＡ陽性ヒト骨髄腫細胞株と結合する
異なるラムダアイソタイプのＬＭＡを発現するヒト骨髄腫細胞株へのヒト抗ＬＭＡ抗体の結合を決定するために、フローサイトメトリー分析を実施した。
【０１４８】
ヒト抗ＬＭＡ抗体（５０μｇ／ｍＬ）またはマウス抗ＬＭＡ抗体４Ｇ７の溶液で、ヒト骨髄腫細胞株（５ｘ１０５細胞）を染色した。ヒト抗ＬＭＡ抗体（１Ａ１１、７Ｆ１１、１０Ｂ３、１８Ｅ８、１８Ｅ１１、及び１８Ｆ９）は、試験された全てのヒト骨髄腫細胞株（ＲＰＭＩ−８２２６（ラムダアイソタイプ２）、Ｕ２６６（ラムダアイソタイプ２）、ＪＪＮ３（カッパ）、ＯＰＭ−２（ラムダアイソタイプ３））の選択的染色を示し、染色されたＪＪＮ３（カッパ）細胞株を示さず（またはわずかに示し）（図５Ａ）、ＫＭＳ−１８（ラムダアイソタイプ１）に対し弱い染色を示した（図５Ｂ）。ヒト抗ＬＭＡ抗体（６Ａ１、４Ａ１、及び１３Ｈ３）は、試験された全てのＬＭＡ陽性ヒト骨髄腫細胞株の弱い染色を示した。
【０１４９】
実施例５：抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）
末梢血単核細胞（ＰＭＢＣ）調製物、またはＰＭＢＣ調製物に含有されるナチュラルキラー（ＮＫ）細胞もしくは単球などの特定の細胞集団をＡＤＣＣアッセイで分析した。血液をフィコールに重層し、勾配を遠心分離し、ＰＢＭＣを勾配の界面から収集した。
【０１５０】
磁気標識抗体調製物（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して生成されたＰＭＢＣ調製物から特定の細胞集団を分離して、好ましくない細胞を除去した。エフェクター細胞及び標的細胞を混合し、１０％のウシ胎児血清が補充されたＲＰＭＩ中、３７℃で１６時間インキュベートした。放出された細胞内乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）のレベルを測定することにより、細胞溶解の程度を決定した（ＣｙｔｏＴｏｘ−ＯＮＥ，Ｈｏｍｏｇｅｎｏｕｓ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ；Ｐｒｏｍｅｇａ，ＵＳＡ）。
【０１５１】
ヒト抗ＬＭＡ抗体は、様々な程度のエフェクター機能を示し、クローン１０Ｂ３は、試験された抗体中で最も強いＡＤＣＣを示した（図６）。
【０１５２】
実施例６：補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）
１０％のウシ胎児血清が補充されたＲＰＭＩ中で、補体（補体を含有する精製またはヒト血清のいずれか）及び抗体の存在下で、標的細胞を３７℃で３０分〜１２時間インキュベートした。放出された細胞内乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）のレベルを測定することにより、細胞溶解の程度を決定した（ＣｙｔｏＴｏｘ−ＯＮＥ  Ｈｏｍｏｇｅｎｏｕｓ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ；Ｐｒｏｍｅｇａ，ＵＳＡ）。Ａｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＵＳＡ）を使用して、細胞の代謝状態を測定した。
【０１５３】
ヒト抗ＬＭＡ抗体は、様々な程度のエフェクター機能を示し、クローン１０Ｂ３は、試験された抗体中で最も強いＣＤＣ活性を示した（図７）。
【０１５４】
実施例７：遊離ラムダ軽鎖でなく、ＬＭＡについて選択的であるヒト抗ＬＭＡ抗体７Ｆ１１
ヒト抗ＬＭＡ抗体１０Ｂ３及び１８Ｅ８は、可溶性ラムダ軽鎖及びＬＭＡ陽性細胞の両方に結合し、ラムダ発現ＲＰＭＩ８２２６細胞を標的とするために使用される時、ＡＤＣＣ及びＣＤＣを促進し得る（表５）。興味深いことに、ヒト抗ＬＭＡ抗体７Ｆ１１は、ＬＭＡ（膜結合軽鎖）について選択的であり、ラムダ発現ＲＰＭＩ８２２６細胞を標的とするために使用されるが、可溶性ラムダ軽鎖に結合しない時、ＡＤＣＣ及びＣＤＣを促進し得る（表５）。７Ｆ１１配列の分析により、遊離軽鎖と結合した他のヒト抗体と比較して、ユニークな重鎖ＣＤＲが明らかになった（図８）。１０Ｂ３及び１８Ｅ８と比較して、ヒト抗ＬＭＡ抗体７Ｆ１１間の異なる結合特性は、遊離ラムダ軽鎖を枯渇させ、及び／またはＬＭＡ陽性細胞を標的とするための選択的使用を可能にする。
【表５】
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【０１５５】
表５は、７Ｆ１１がラムダ軽鎖アイソタイプ１を発現する細胞に結合しないが、４Ｇ７、１８Ｅ８、及び１０Ｂ３が結合することを示す。
【０１５６】
実施例８：ヒト組織におけるヒト抗ＬＭＡ抗体染色
ヒトＬＰ−１（多発性骨髄腫）細胞、ＪＪＮ３（形質細胞白血病）、ヒト扁桃腺標本、及びヒト小脳標本を、１０Ｂ３及び７Ｆ１１抗体と接触させて、抗体染色をＨｕＩｇＧ１−ラムダ由来の対照抗体染色と比較した。
【０１５７】
ＬＰ−１細胞は、ＬＭＡアイソタイプ１を発現する。１０Ｂ３は、ＬＰ−１細胞を染色したが、７Ｆ１１は、ＬＰ−１細胞を染色しなかった。これらの結果は、１０Ｂ３がラムダアイソタイプ１と結合するが、７Ｆ１１が結合しないことを示す上記の結果と一致する。ＪＪＮ３細胞の染色が、１０Ｂ３または７Ｆ１１のいずれかを用いても観察されなかった。
【０１５８】
扁桃腺は、微生物及び環境の抗原が体内で管理される第１の部位であり、それ故、リンパ系細胞を収容する（リンパ系細胞の約５５％はＢ細胞である）。濾胞胚中心、濾胞間胚中心、及び濾胞間領域の希少単核細胞の弱い染色〜強い染色が、１０Ｂ３及び７Ｆ１１で観察された（図９及び図１０；１０Ｂ３で染色された、７Ｆ１１よりも高い親和性を有するヒト扁桃腺）。これらの結果は、１０Ｂ３及び７Ｆ１１がともに、ヒトにおいてＬＭＡを発現する細胞に結合し得ることを確認する。
【０１５９】
重要なことに、ヒト小脳の染色は、１０Ｂ３または７Ｆ１１では観察されなかった。ヒト小脳は、非特異的結合を評価するための効果的な対照であることが知られる。１０Ｂ３及び７Ｆ１１の両方での染色の不足は、ＬＭＡについてのこれらの抗体の特異性を強調し、ｉｎ−ｖｉｖｏでの非特異的結合のリスクを低減する。
【０１６０】
実施例９：抗ＬＭＡ抗体親和性
ＣＭ５センサーチップ上に抗ヒトＦｃ  ＩｇＧを固定化した（プロテインＡ；Ｆｃ２を抗体で捕捉し、Ｆｃ１をブランクとして設定した）。抗ＬＭＡ抗体（７Ｆ１１−ＶＬ１；１０Ｂ３−ＶＬ１；１０Ｂ３−ＶＬ２）を、チップ表面上に２５℃で流し（ランニング緩衝液：１ｘＨＢＳ−ＥＰ＋（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５％のＰ２０、ｐＨ７．４）、Ｂｉａｃｏｒｅ  ８ｋを使用して結合特性を記録した。アッセイの特徴は、表６にまとめられる。親和性測定値は、表７に示される。
【０１６１】
１０Ｂ３−ＶＬ１は、全てのラムダ遊離軽鎖抗原に対して高親和性で結合した。７Ｆ１１のみが、Ｓｉｇｍａ、１３４ｃ及び７８８ａのラムダ遊離軽鎖抗原に結合したが、親和性が低かった。これらの知見は、遊離ラムダ軽鎖ではなく、ＬＭＡについて７Ｆ１１が選択的であることを示す実施例７と一致する。１０Ｂ３−ＶＬ２は、ラムダ軽鎖に結合せず、この抗体のＪ遺伝子への変更がラムダ遊離軽鎖に対する親和性をなくしたことを示唆した。
【０１６２】
重要なことに、試験された抗体のいずれについても、カッパ軽鎖への結合が観察されず、さらに、ラムダ軽鎖について、これらの抗体の特異性が確認された。
【０１６３】
要約すれば、７Ｆ１１は、可溶性ラムダ軽鎖に結合する親和性がない／低いが、アイソタイプ２及び３のＬＭＡ＋細胞株に結合する。対照的に、１０Ｂ３−ＶＬ１は、全ての可溶性ラムダ軽鎖に高親和性で結合し、全てのＬＭＡ＋細胞株（アイソタイプ１、２、及び３）に結合する。１０Ｂ３−ＶＬ１とは異なるＪ遺伝子を有する１０Ｂ３−ＶＬ２は、可溶性ラムダ軽鎖には結合しない。
【表６】
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【表７】
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【０１６４】
広範に説明される本開示の趣旨または範囲から逸脱することなく、特定の実施形態に示されるように、多数の変形及び／または修正が本開示に対して行われ得ることが当業者らにより理解されるであろう。それ故、本実施形態は、あらゆる点で、例示的であり、制約的ではないとみなされるべきである。
【０１６５】
上述の全ての刊行物は、全体が本明細書に組み込まれる。
【０１６６】
本明細書に含まれている文書、行為、材料、デバイス、記事などの任意の考察は、本開示の文脈を提供することのみを目的とする。本出願の各請求項の優先日前に存在していたように、これらの問題のいずれかもしくはその全てが、従来技術のベースの一部を形成するか、または本開示に関連する分野における共通の一般知識であったことを認めるものと解釈すべきではない。
【０１６７】
本出願は、２０１８年２月２０日に出願されたＡＵ  ２０１８９００５３４の優先権を主張し、この全内容が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１６８】
（参考文献）
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【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６】
2021514369.tif 000018
【図７】
2021514369.tif 000019
【図８】
2021514369.tif 000020
【図９】
2021514369.tif 000021
【図１０】
2021514369.tif 000022
【配列表】
2021514369000001.app
【国際調査報告】
2021514369.tif 000023
2021514369.tif 000024
2021514369.tif 000025
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