(57)【要約】  本発明は、式（１）で表される構造を有する化合物又はその塩及びその調製方法、並びに応用に関する。【化１】2021527715.tif 000113   式（１）中の各置換基の意味は明細書の通りである。式（１）で表される化合物又はその塩を固相樹脂に担持した後に固相合成を行うことが可能である。
2021527715.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）で表される化合物又はその塩。
【化１】
2021527715.tif 000093
［式（１）中、Ｒ１は、水素又はアミノの保護基である。
Ｒ２とその連結するＮ原子とがアミノとして、アミノ酸もしくは保護基を有するアミノ酸又はそれらによるペプチド鎖を形成する。
Ｘ１、Ｘ２はそれぞれ独立にＯ又はＳである。
Ｒ３は、Ｈ又は固相樹脂担持官能基と反応可能な活性基を含む置換基である。
Ｒ４は、Ｈ又はアルキルである。］
【請求項２】
前記アミノの保護基が、Ｆｍｏｃ、Ｂｏｃ、Ａｌｌｏｃ、Ｄｄｅ、ｉｖＤｄｅ、Ｔｒｔ、Ｍｔｔ又はＭｍｔを含む、請求項１に記載の化合物又はその塩。
【請求項３】
前記アミノ酸又は保護基を有するアミノ酸が、α−アミノ酸又は保護基を有するα−アミノ酸である、請求項１〜２のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
【請求項４】
Ｒ２が、
【化２】
2021527715.tif 000094
又は
【化３】
2021527715.tif 000095
である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
［ここで、Ｐがアミノ又は水酸基の保護基であり、複数のＰが同一又は異なっていても良い。］
【請求項５】
前記Ｒ２が、
【化４】
2021527715.tif 000096
又は
【化５】
2021527715.tif 000097
である、請求項４に記載の化合物又はその塩。
【請求項６】
前記Ｒ２が、
【化６】
2021527715.tif 000098
又は
【化７】
2021527715.tif 000099
である、請求項５記載の化合物又はその塩。
【請求項７】
Ｒ３が、カルボキシル、水酸基及び／又はＮＨ２を含む置換基である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
【請求項８】
Ｒ３がＨ又は−（ＣＨ２）ｍＣＯＯＨであり、ｍが１〜１０の整数であり、（ＣＨ２）ｍのうちのいずれか１つ又は複数のＣＨ２が置換されていてもよい、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
【請求項９】
Ｒ３が、Ｘ１と共に−ＯＨ、−Ｏ（ＣＨ２）ｍＣＯＯＨ、−ＳＨ又は−Ｏ（ＣＨ２）ｍＣＯＯＨを構成する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
【請求項１０】
Ｘ１、Ｘ２がいずれもＯである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
【請求項１１】
前記式（１）が、以下の構造を有する、請求項１に記載の化合物又はその塩。
【化８】
2021527715.tif 000100
［式（ＶＩ）、式（ＩＸ）、式（Ｘ）、式（ＸＩＩ）中、Ｒ１〜Ｒ４、Ｘ１、Ｘ２、ｍの意味が、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の通りである。
Ｒ５が、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、
【化９】
2021527715.tif 000101
、−（ＣＨ２）４ＮＨ２、
【化１０】
2021527715.tif 000102
、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＳＨ、Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、−（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、
【化１１】
2021527715.tif 000103
又は
【化１２】
2021527715.tif 000104
から選択される。
Ｒ５にカルボキシル、水酸基、−ＮＨ２、−ＮＨ−、メルカプト基、グアニジノ基が存在する場合、保護基で保護されてもよい。
Ｒ６がカルボキシの保護基である。
］
【請求項１２】
前記式（１）が、以下の構造を有する、請求項１に記載の化合物又はその塩。
【化１３】
2021527715.tif 000105
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物又はその塩の合成方法であって、前記化合物が以下の合成ルートで調製される、方法。
【化１４】
2021527715.tif 000106
［ここで、Ｙが脱離基であり、他の置換基の意味が請求項１〜１２のいずれか１項に記載の通りである。
ステップ（ａ）が求核置換反応であり、ステップ（ｂ）が還元アミノ化反応であり、ステップ（ｃ）がアミノ保護反応である。］
【請求項１４】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の式（１）で表される化合物又はその塩を担持した固相樹脂であって、前記担持した固相樹脂が以下の構造を有する、固相樹脂。
【化１５】
2021527715.tif 000107
［ここで、式（１）−樹脂における
（外１）
2021527715.tif 000108
が固相樹脂の本体を示し、式（１）−樹脂おけるＧは、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の式（１）におけるＲ３に含まれる基と固相樹脂の側鎖上の基とが反応してなる接続構造であり、Ｒ’３がＲ３反応後の残存構造であり、Ｚが固相樹脂側鎖反応後の残存構造であり、他の置換基が式（１）におけるものと同義である。Ｒ’３−Ｇ−Ｚは、Ｒ’３−ＣＯＮＨ−Ｚ、Ｒ’３−ＣＯＯ−Ｚであることが好ましい。選択肢としては、Ｒ’３−Ｇが無くて、Ｚが直接Ｘ１に繋がってもよい。］
【請求項１５】
式（１）−樹脂が以下の式（ＶＩ）−樹脂、式（ＩＸ）−樹脂、式（Ｘ）−樹脂、式（ＸＩＩ）−樹脂で示される構造を有し、式（１）−樹脂が以下の式（ｉｉ）−樹脂、式（ｉｉｉ）−樹脂、式（ｉｖ）−樹脂、式（ｉｘ）−樹脂、式（ｘ）−樹脂で示される構造を有することが好ましい、請求項１４に記載の固相樹脂。
【化１６】
2021527715.tif 000109
［式（ｉ）−樹脂〜式（ｉｖ）−樹脂及び式（ｉｘ）〜式（ｘ）−樹脂における樹脂が、ＡＭ樹脂、ＭＢＨＡ樹脂、Ｓｉｅｂｅｒ樹脂又はＲｉｎｋ樹脂から選択されることが好ましく、ＡＭ樹脂、ＭＢＨＡ樹脂であることが好ましい。
好ましくは、式（ｉｘ）−樹脂〜式（ｘ）−樹脂における樹脂がＣＴＣ樹脂である。］
【請求項１６】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の式（１）で表される化合物若しくはその塩又は請求項１４若しくは１５に記載の式（１）−樹脂の、式（１）中の−ＮＨＲ２を炭素末端に含む標的ポリペプチド又はその塩の調製における応用であって、選択肢としては、−ＮＨＲ２が、目的とする構造に変換されてもよく、或いはポリペプチド鎖の残部と環合してもいい、応用。
【請求項１７】
以下の：
式（１）で表される化合物を出発固相樹脂に担持させた式（１）−樹脂を得るか、又は式（１）−樹脂を直接提供するステップであって、
【化１７】
2021527715.tif 000110
［式（１）−樹脂におけるの各基が請求項１４又は１５におけるものと同義である。］
なお、Ｒ１がアミノの保護基である場合、該アミノの保護基を脱離してＮＨ基を露出させ、Ｒ１が水素である場合、脱離する必要はない；
露出したＮＨ基に完全保護ペプチド鎖のペプチド樹脂を固相段階的カップリング法で調製するステップ；
ペプチド樹脂から完全保護ペプチド鎖を切り出して標的ポリペプチド又はその塩を直接に獲得するか、又は保護基を脱離させた後に標的ポリペプチド又はその塩を得るステップであって、
選択肢として、ペプチド樹脂から完全保護ペプチド鎖を切り出す前に、該完全保護ペプチド鎖を出発ペプチドとして環化反応させて環状ペプチドを形成させることができる。この完全保護ペプチド鎖において環化する反応サイトは、Ｒ２であることが好ましく、
樹脂上のペプチドに結合したＦｍｏｃ保護基の脱離は、各カップリングの前に行われ、
前記標的ポリペプチドが環状ペプチドとしてのＰＭＸ−５３又はその塩である場合に、前記式（１）−樹脂におけるＮＲ２が
【化１８】
2021527715.tif 000111
であり、ここで、Ｐ１、Ｐ２が保護基である。好ましくは、ＮＲ２が
【化１９】
2021527715.tif 000112
である。前記式（１）−樹脂が請求項１５に記載の式（ＶＩ）−樹脂であってもよい。前記式（ＶＩ）−樹脂が請求項１５に記載の式（ｉｘ）−樹脂であってもよい。この式（ｉｘ）−樹脂における樹脂はＣＴＣ樹脂であることが好ましく、
さらに好ましくは、標的ポリペプチドがＰＭＸ−５３又はその塩である場合、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｃｈａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｏｒｎ（Ｄｄｅ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨのようなカップリングされるアミノ酸を反応剤として、露出したＮＨ２に固相段階的カップリング法で順次カップリングさせて、最後にカップリングされたアミノ酸上のアミノをアセチル化することにより、ＰＭＸ−５３環化前の全保護のペプチド樹脂を調製して、Ａｃ−Ｐｈｅ−Ｏｒｎ（Ｄｄｅ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ｃｈａ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−式（１）−樹脂であり、好ましくはＡｃ−Ｐｈｅ−Ｏｒｎ（Ｄｄｅ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ｃｈａ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−式（ＶＩ）−樹脂であり、より好ましくはＡｃ−Ｐｈｅ−Ｏｒｎ（Ｄｄｅ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ｃｈａ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−式（ｉｘ）−樹脂であり、さらに好ましくはＡｃ−Ｐｈｅ−Ｏｒｎ（Ｄｄｅ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ｃｈａ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−式（ｉｘ）−ＣＴＣ樹脂であるＰＭＸ−５３環化前の完全保護ペプチドのペプチド樹脂が得られ、
樹脂上のペプチドに結合したＦｍｏｃ保護基の脱離は、各カップリングの前に行われり；
その後、Ａｌｌ保護基及びＤｄｅ保護基を脱離しさらに環化反応を行って、Ａｃ−Ｐｈｅ−ｃ（Ｏｒｎ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ｃｈａ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ａｒｇ（ｐｂｆ））−樹脂（当該樹脂はＣＴＣ樹脂であることが好ましい）であるＰＭＸ−５３の完全保護ペプチドのペプチド樹脂を得る；
最後に、保護基を開裂脱離させることにより前記ＰＭＸ−５３又はその塩を得て、
前記標的ポリペプチドがリラグルチド又はその塩である場合、その炭素末端が−ＮＣＨ２ＣＯＯＨであり、前記式（１）−樹脂におけるＮＲ２がＮＣＨ２ＣＯＯＰであり、前記Ｐが保護基であり、好ましくはｔｅｒｔ−ブチルである。前記式（１）−樹脂が請求項１５に記載の式（ＶＩ）−樹脂であってもよい。前記式（ＶＩ）−樹脂が請求項１５に記載の式（ｘ）−樹脂であってもよい。この式（ｘ）−樹脂における樹脂は、ＡＭ樹脂、ＭＢＨＡ樹脂、Ｓｉｅｂｅｒ樹脂又はＲｉｎｋ樹脂等が好ましく、前の２種の樹脂が好ましく、
さらに好ましくは、前記標的ポリペプチドがリラグルチド又はその塩である場合、ｍｏｃ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｎ−ε−（Ｐａｌｍ−Ｇｌｕ−Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ＨｍｂＧｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨのようなカップリングされるアミノ酸を反応剤として、露出したＮＨに固相段階的カップリング法で順次カップリングさせてリラグルチドの完全保護のペプチド樹脂を調製して、Ｈ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ａｌａ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＨｍｂＧｌｙ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ａｓｐ（Ｏｔ−Ｂｕ）−Ｖａｌ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｎ−ε−（Ｐａｌｍ−Ｇｌｕ−Ｏｔ−Ｂｕ））−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−Ｇｌｙ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−式（１）−樹脂であり、好ましくはＨ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ａｌａ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＨｍｂＧｌｙ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ａｓｐ（Ｏｔ−Ｂｕ）−Ｖａｌ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｎ−ε−（Ｐａｌｍ−Ｇｌｕ−Ｏｔ−Ｂｕ））−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−Ｇｌｙ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−式（ＶＩ）−樹脂であり、より好ましくはＨ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ａｌａ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＨｍｂＧｌｙ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ａｓｐ（Ｏｔ−Ｂｕ）−Ｖａｌ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｎ−ε−（Ｐａｌｍ−Ｇｌｕ−Ｏｔ−Ｂｕ））−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−Ｇｌｙ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−式（ｘ）−樹脂であり、さらに好ましくはＨ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ａｌａ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−Ｈｍｂ���ｌｙ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ａｓｐ（Ｏｔ−Ｂｕ）−Ｖａｌ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｎ−ε−（Ｐａｌｍ−Ｇｌｕ−Ｏｔ−Ｂｕ））−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−Ｇｌｙ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−式（ｘ）−ＡＭ樹脂であるリラグルチドの完全保護ペプチドのペプチド樹脂を得る；
樹脂上のペプチドに結合したＦｍｏｃ保護基の脱離は、各カップリングの前に行われる；
ステップを含む、請求項１６に記載の応用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、化合物又はその塩、その調製方法および応用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ここでの記載は、本発明に関連する背景情報を提供するだけに過ぎず、必ずしも従来技術を構成するものではない。
【０００３】
本発明者らは、ポリペプチド薬物が重要な価値を有することを知っている。例えば、酢酸リュープロレリン、アラレリン、リラグルチド、ＰＭＸ−５３（ＰＭＸ−５３の構造については、ＥＰ１０１７７１３又はＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９９，４２，１９６５−１９７４；Ｌｏｗ−Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ−Ｗｅｉｇｈｔ  Ｐｅｐｔｉｄｉｃ  ａｎｄ  Ｃｙｃｌｉｃ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｃ５ａの記載を参照）等は、重要な医薬用途を有しているが、ポリペプチド薬物の合成は容易ではない。本発明者らにとっては、ポリペプチドの合成として、一般的に固相合成法、液相合成法、固液結合合成法等が知られており、一般的に固相合成法が主流なものであるが、いくつかの修飾に関与すると、固相合成法で独立して完成することが難しく、完成しても収率があまり高くない。例えば、酢酸リュープロレリンを合成する場合、ＣＮ１０１１９５６５３Ｂに開示の合計収率が１６．５％、純度が９８％であり、その粗品純度については言及されていない。黄体形成ホルモン放出ホルモンの高速液体クロマトグラフィーによる分離精製に関する研究（陳小芬）に開示の粗品純度が５３％であり、精製後の純度が８５％であり、精製収率が７６％であり、精製後に純度が低くなり、合計収率を計算できない。ＣＮ１０１５９９７３２５Ｂに開示の精製収率が７１％であり、純度が９８．５％より大きく、粗品純度及び収率については言及されず、合計収率を計算できない。ＣＮ１０２４６４７０２Ｂに開示の粗品収率が１５％〜２５％であり、精製収率が９５％であり、合計収率が１４％〜２４％であり、純度が９９．５％である。
【発明の概要】
【０００４】
一方、本発明は、下記式（１）の化合物又はその塩に関する。
【０００５】
【化１】
2021527715.tif 000003
［式（１）中、Ｒ１は、水素又はアミノの保護基である。
【０００６】
Ｒ２は、アルキル、フェニル、カルボキシル、アルコキシカルボニル、カルバモイルから選ばれる置換基０〜３個で置換されていてもよいアルキル、アミノから選択されるものである。
【０００７】
選択肢としては、Ｒ２をアルキルとする場合、その炭素鎖が、二重結合および／又は三重結合を含んでいてもよい。
【０００８】
選択肢としては、Ｒ２とその連結するＮ原子とがアミノとして、アミノ酸もしくは保護基を有するアミノ酸又はそれらによるペプチド鎖を形成してもよい。
【０００９】
Ｒ３は、Ｈ又は固相樹脂と反応可能な活性基（反応サイト）を含む置換基である。
【００１０】
Ｘ１、Ｘ２はそれぞれ独立にＯ又はＳである。
【００１１】
Ｒ４は、Ｈ又はアルキルである。］
一方、本発明は、上記式（１）で表される化合物又はその塩を担持した樹脂に関する。
【００１２】
さらに一方、本発明は、上記式（１）記載の化合物又はその塩、又は上記式（１）で表される化合物又はその塩を担持した樹脂の応用に関する。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明をより詳細に了解するために、本発明を以下に詳述したが、本発明の何ら限定されるものではない。
【００１４】
一方、本発明は、下記式（１）の化合物又はその塩に関する。
【００１５】
【化２】
2021527715.tif 000004
式（１）中、Ｒ１は水素又はアミノの保護基である。いくつかの実施態様において、前記アミノの保護基は、Ｆｍｏｃ、Ｂｏｃ、Ａｌｌｏｃ、Ｄｄｅ、ｉｖＤｄｅ、Ｔｒｔ、Ｍｔｔ又はＭｍｔを含む。
【００１６】
Ｒ２は、アルキル、フェニル、カルボキシル、アルコキシカルボニル、カルバモイルから選ばれる置換基０〜３個で置換されていてもよいアルキル、アミノから選択されるものである。前記アルキルは、Ｃ１〜１０アルキルであり、例えば、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜４アルキル、ｎ−ブチル、ｉｓｏ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、プロピル、エチル、メチルなどであることが好ましい。
【００１７】
選択肢としては、Ｒ２をアルキルとする場合、その炭素鎖が、二重結合および／又は三重結合を含んでいてもよい。
【００１８】
選択肢としては、Ｒ２とその連結するＮ原子とがアミノとして、アミノ酸もしくは保護基を有するアミノ酸又はそれらによるペプチド鎖（即ち、式（１）においてＲ２と連結しているＮをＮ末端として、Ｒ２とともに保護基を有してもいいアミノ酸、又は保護基又は保護基を有してもいいジペプチド、トリペプチドなどのようなペプチド鎖を形成）を形成してもよい。いくつかの実施態様において、前記アミノ酸又は保護基を有するアミノ酸は、α−アミノ酸又は保護基を有するα−アミノ酸である。
【００１９】
いくつかの実施形態において、Ｒ２が、ＣＨ３（ＣＨ２）ｎ−、ＣＨ２＝ＣＨ−（ＣＨ２）ｐ−、三（ＣＨ２）ｑ−、Ｐｈ−（ＣＨ２）Ｒ−、ＮＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、Ｃ１〜６アルキル−ＮＨ−、
【００２０】
【化３】
2021527715.tif 000005
、
【００２１】
【化４】
2021527715.tif 000006
、
【００２２】
【化５】
2021527715.tif 000007
、
【００２３】
【化６】
2021527715.tif 000008
又は
【００２４】
【化７】
2021527715.tif 000009
である。ここで、Ｐがアミノ又は水酸基の保護基であり、複数のＰが同一でも異なってもよい（例えば、
【００２５】
【化８】
2021527715.tif 000010
が
【００２６】
【化９】
2021527715.tif 000011
であり、
【００２７】
【化１０】
2021527715.tif 000012
が
【００２８】
【化１１】
2021527715.tif 000013
であり、
【００２９】
【化１２】
2021527715.tif 000014
が
【００３０】
【化１３】
2021527715.tif 000015
であり、
【００３１】
【化１４】
2021527715.tif 000016
が
【００３２】
【化１５】
2021527715.tif 000017
であり、
【００３３】
【化１６】
2021527715.tif 000018
が
【００３４】
【化１７】
2021527715.tif 000019
である）。但し、ｎ、ｐ、ｑ、ｒがそれぞれ０〜１０の整数である。（ＣＨ２）ｎ、（ＣＨ２）ｐ、（ＣＨ２）ｑ又は（ＣＨ２）ｒのうちのいずれか１つ又は複数のＣＨ２が置換されていてもよい。例えば、一つ又は複数のＣ１〜３アルキル（例えばメチル、エチルなど）のようなアルキルで置換されていてもよい。
【００３５】
いくつかの実施形態において、Ｒ２は、メチル、エチル、プロピル、ｎ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、
【００３６】
【化１８】
2021527715.tif 000020
又は
【００３７】
【化１９】
2021527715.tif 000021
である。
【００３８】
いくつかの実施形態において、Ｒ２が、エチル、
【００３９】
【化２０】
2021527715.tif 000022
又は
【００４０】
【化２１】
2021527715.tif 000023
である。
【００４１】
Ｒ３は、Ｈ又は固相樹脂と反応可能な活性基（反応サイト）を含む置換基である。該置換基は、カルボキシル、水酸基及び／又はＮＨ２等を含む置換基であることが好ましい。
【００４２】
いくつかの実施態様において、Ｒ３が、Ｈ又は−（ＣＨ２）ｍＣＯＯＨであり、ｍが１〜１０の整数であり、（ＣＨ２）ｍのうちのいずれか１つ又は複数のＣＨ２が置換されていてもいい。例えば、一つ又は複数のＣ１〜３アルキル（例えばメチル、エチルなど）のようなアルキルで置換されていてもよい。
【００４３】
いくつかの実施形態において、Ｒ３が、Ｘ１と共に−ＯＨ、−Ｏ（ＣＨ２）ｍＣＯＯＨ、−ＳＨ又は−Ｏ（ＣＨ２）ｍＣＯＯＨを構成する。
【００４４】
Ｘ１又はＸ２がそれぞれＯ又はＳである。
【００４５】
いくつかの実施形態において、Ｘ１、Ｘ２はいずれもＯである。
【００４６】
Ｒ４はＨ又はアルキルであり、好ましくは、該アルキルがＣ１〜６アルキルであり、例えば、Ｃ１〜４アルキル、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉｓｏ−プロピル等である。
【００４７】
本発明の上記の化合物は、少なくとも以下のルートで調製される。
【００４８】
【化２２】
2021527715.tif 000024
上記ルートにおいて、Ｙが脱離基である。他の置換基が上記のような意味に従って選択されるので、ここでは説明を省略する。
【００４９】
上記ルートにおいて、ステップ（ａ）が求核置換反応であり、ステップ（ｂ）が還元アミノ化反応であり、ステップ（ｃ）がアミノ保護反応である。これらの反応の具体的な条件は本分野の一般的な技術で行うことができる。
【００５０】
上記ルートにおける各ステップにおいて、反応条件に感受性のある基がある場合、予め保護してから脱保護すればいい。
【００５１】
本発明の上記のような化合物は、Ｒ３を固相樹脂に担持させることにより、ポリペプチド固相合成におけるリンカーと類似の作用を果たすことができ、保護基を脱離した後に、式（１）のＮＨ（以下の枠で示された通り）ではポリペプチドとのカップリング反応が進行し、最後に開裂によってポリペプチドの炭素末端が−ＣＯＮＨＲ２であるポリペプチド鎖となる（Ｒ２又はカップリングによるペプチド鎖に保護基が含まれると、脱離によって標的ペプチド鎖を形成できる。ペプチド鎖の他の部分もＲ２と環化反応して環状ペプチド等を形成することもできる）。
【００５２】
【化２３】
2021527715.tif 000025
本発明の式（１）で表される化合物を固相樹脂に担持させることによるポリペプチドの合成は、炭素末端修飾ポリペプチドの合成を簡素化させ、固相環化の範囲を拡大させ、ＡＭ／ＭＢＨＡ又はその同等機能の樹脂で炭素末端がカルボキシル（Ｒ２は保護脱離後にカルボキシルとなる）であるポリペプチドを合成するように固相樹脂の用途を変えることができる。そして、樹脂変性後に、（例えばリラグルチドの合成において）ポリペプチドの合成過程でのアミノ酸のカップリングの難易度を明らかに改善でき、（例えばリュープロレリンやアラレリンの合成において）従来より良い粗品純度や収率を得ることができる。
【００５３】
そこで、本発明は、上記のような化合物（１）を固相樹脂に担持させて反応により炭素末端が−ＣＯＮＨＲ２を含むポリペプチドを調製するための応用を提供する。いくつかの実施形態において、式（１）は、以下の構造を有する。
【００５４】
【化２４】
2021527715.tif 000026
式（Ｉ）〜式（ＸＩＩ）中、Ｒ１〜Ｒ４、Ｘ１、Ｘ２、ｎ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔの意味は上記の通りである。
【００５５】
Ｒ５が、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、
【００５６】
【化２５】
2021527715.tif 000027
、−（ＣＨ２）４ＮＨ２、
【００５７】
【化２６】
2021527715.tif 000028
、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＯＮ
Ｈ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＳＨ、Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、−（ＣＨ２）２Ｓ
ＣＨ３、
【００５８】
【化２７】
2021527715.tif 000029
、
【００５９】
【化２８】
2021527715.tif 000030
又は
【００６０】
【化２９】
2021527715.tif 000031
から選択される。Ｒ５にカルボキシル、水酸基、−ＮＨ２、−ＮＨ−、メルカプト基、グアニジノ基が存在する場合、例えばＢｏｃ、Ｔｒｔ、
【００６１】
【化３０】
2021527715.tif 000032
から選択される保護基で保護さ
れてもよい。カルボキシルの保護基は、例えば、ｔ−Ｂｕ（ｔｅｒｔ−ブチル）、Ａｌｌ（アリル）等である。水酸基の保護基は、例えば、ｔ−Ｂｕ、ＴＭＳ（トリメチルシリル）等である。アミノの保護基は、例えば、Ｆｍｏｃ（９−フルオレニルメトキシカルボニル）、Ｂｏｃ（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）、Ａｌｌｏｃ（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）、Ｄｄｅ（１−（４、４−ジメチル−２、６−ジオキサシクロヘキシレニル）エチル）等である。メルカプトの保護基は、例えば、Ｔｒｔ（トリチル）、Ａｃｍ（アセチルアミノメチル）等である。
【００６２】
Ｒ６がカルボキシルの保護基である。いくつかの実施例において、Ｒ６が、Ｃ１〜６アルキル、ベンジル、Ｂｏｃ等である。
【００６３】
Ｒ７が、Ｃ１〜６アルキルである。
【００６４】
いくつかの実施形態において、式（１）は、以下の構造を有する。
【００６５】
【化３１】
2021527715.tif 000033
いくつかの実施形態において、式（Ｘ）は、以下の構造を有する。
【００６６】
【化３２】
2021527715.tif 000034
式（Ｘ−１）中、Ｒ１はＨ又はアミノの保護基である。
【００６７】
ｍは１〜１０の整数である。（ＣＨ２）ｍのうちのいずれか１つ又は複数のＣＨ２が置換されていてもいい。例えば、一つ又は複数のＣ１〜３アルキル（例えばメチル、エチルなど）のようなアルキルで置換されていてもよい。いくつかの実施形態において、ｍは２〜６の整数であり、例えば２、３、４、５又は６である。
【００６８】
本発明の上記式（Ｘ−１）の化合物は、固相樹脂に担持されるので、この上記式（Ｘ−１）の化合物担持固相樹脂を利用してポリペプチドを合成すると、アミノ酸のカップリングの難易度を改善し、（例えばリュープロレリンやアラレリンの合成において）優れる粗品純度と収率を得ることができる。少なくともいくつかの実施態様において、式（Ｘ−１）の化合物はＡＭ固相樹脂又はＭＢＨＡ固相樹脂に担持されて、リュープロレリンポリペプチドの合成に用いられる。その結果として、良い粗品純度と収率を得ることができる。
【００６９】
いくつかの実施形態において、式（Ｘ−１）におけるアミノの保護基の例としては、Ｆｍｏｃ、Ｂｏｃ、Ａｌｌｏｃ、Ｄｄｅ、ｉｖＤｄｅ、Ｔｒｔ、Ｍｔｔ又はＭｎｔを挙げるが、それらに限定されない。即ち、式（Ｘ−１）で表される化合物は上記の式（ｘｉ）〜式（ｘｘ）を含むが、それらに限定されない。
【００７０】
少なくとも一つの実施形態において、式（Ｘ−１）におけるアミノの保護基はＦｍｏｃ又はＢｏｃであり、即ち、式（Ｘ−１）は式（ｘｉｉ）又は式（ｘｉｉｉ）である。これにより、この２つの保護基を用いた保護反応の過程において選択される原料の価格が安くなり、市販で入手でき、反応条件が簡単となり、後処理が容易となるという有利な効果が得られる。Ｆｍｏｃについては、その保護基を脱離する反応が便利となり、条件が温和となる。
【００７１】
一方、本発明の式（Ｘ−１）で表される化合物は、以下のような合成ルートの一つに従って調製される。
【００７２】
合成ルート１
【００７３】
【化３３】
2021527715.tif 000035
上記合成ルート１において、Ｙが求核置換脱離基である。Ｍが水素又はカルボキシルの保護基であり、ｍの意味が上記の通りであるが、ｍが２又は３であることが好ましい。Ｒ１は、Ｈ又はアミノの保護基であり、例えば、Ｆｍｏｃ、Ｂｏｃ、Ａｌｌｏｃ、Ｄｄｅ、ｉｖＤｄｅ、Ｔｒｔ、Ｍｔｔ又はＭｍｔなどである。
【００７４】
いくつかの実施形態において、Ｙがハロゲン原子又はスルホン酸エステルである。いくつかの実施形態において、ハロゲン原子が、塩素、臭素又はヨウ素である。いくつかの実施形態において、スルホン酸エステルが、メタンスルホン酸エステル、エタンスルホン酸エステル、ベンゼンスルホン酸エステル、ｐ−トルエンスルホン酸エステルである。
【００７５】
いくつかの実施形態において、Ｍが、メチル、エチル、ｔｅｒｔ−ブチル、又はベンジルである。
【００７６】
いくつかの実施形態において、上記合成ルート１におけるステップ（ａ）が、アルカリ条件下で行われる。
【００７７】
いくつかの実施形態において、上記合成ルート１におけるステップ（ｂ）は、エチルアミン又はその塩と生じる還元アミン化反応である。いくつかの実施形態において、ステップ（ｂ）では、水素化ホウ素ナトリウム、水素化シアノホウ素ナトリウム、水素化酢酸ホウ素ナトリウム、Ｈ２／パラジウム炭素、Ｈ２／水酸化パラジウムを用いて還元アミン化反応させる。
【００７８】
いくつかの実施形態において、上記合成ルート１におけるステップ（ｃ）が、加水分解反応である。
【００７９】
いくつかの実施態様において、Ｒ１がアミノの保護基である場合には、Ｒ１基を用いてアミノを保護するステップ（ｄ）をさらに行う。本発明では、Ｒ１基によるアミノ保護の技術手段として、一般的なものを利用すればいいが、Ｒ１がＦｍｏｃである場合、式（Ａ−２）で表される化合物を得るように、アルカリ雰囲気下でＦｍｏｃ−Ｏｓｕ又はＦｍｏｃ−Ｃｌを利用して窒素原子上の水素をＦｍｏｃで置換する。
【００８０】
合成ルート２
【００８１】
【化３４】
2021527715.tif 000036
Ｙ、Ｍ、Ｒ１、ｍの意味は合成ルート１の通りであり、ここでは説明を省略する。
【００８２】
いくつかの実施形態において、上記合成ルート２におけるステップ（ａ）の反応条件は、上記合成ルート１におけるステップ（ａ）と同じである。
【００８３】
いくつかの実施形態において、上記合成ルート２におけるステップ（ｂ）の反応条件は、上記合成ルート１におけるステップ（ｃ）と同じである。
【００８４】
合成ルート３
【００８５】
【化３５】
2021527715.tif 000037
Ｒ１、Ｍ、ｍの意味は合成ルート１の通りであり、ここでは説明を省略する。
【００８６】
いくつかの実施形態において、上記合成ルート３におけるステップ（ａ）の反応条件は、上記合成ルート１におけるステップ（ｂ）と同じである。
【００８７】
いくつかの実施形態において、上記合成ルート３におけるステップ（ｂ）の反応条件は、上記合成ルート１におけるステップ（ｃ）と同じである。
【００８８】
いくつかの実施形態において、上記合成ルート３におけるステップ（ｃ）の反応条件は、上記合成ルート１におけるステップ（ｄ）と同じである。
【００８９】
合成ルート４
【００９０】
【化３６】
2021527715.tif 000038
Ｙ、Ｍ、Ｒ１、ｍの意味は、合成ルート１の通りである。
【００９１】
いくつかの実施形態において、上記合成ルート４におけるステップ（ａ）では、
【００９２】
【化３７】
2021527715.tif 000039
による求核置換反応又は
【００９３】
【化３８】
2021527715.tif 000040
による還元アミノ化反応を起こす。いくつかの実施形態において、
【００９４】
【化３９】
2021527715.tif 000041
がハロゲン化エタンである。この求核置換反応を生じさせる条件は、合成ルート１におけるステップ（ａ）と同じである。この還元アミノ化反応の条件は、合成ルート１におけるステップ（ｂ）と同じである。
【００９５】
いくつかの実施形態において、上記合成ルート４におけるステップ（ｂ）の反応条件は、上記合成ルート１におけるステップ（ｃ）と同じである。
【００９６】
いくつかの実施形態において、上記合成ルート４におけるステップ（ｃ）の反応条件は、上記合成ルート１におけるステップ（ｄ）と同じである。
【００９７】
一方、本発明は、上記式（１）で表される化合物を担持した固相樹脂であって、以下のような構造を有する固相樹脂を提供する。
【００９８】
【化４０】
2021527715.tif 000042
ここで、式（１）−樹脂における
（外１）
2021527715.tif 000043
が固相樹脂の本体を示し、式（１）−樹脂おけるＧは、上記の式（１）におけるＲ３に含まれる基と固相樹脂の側鎖上の基とが反応してなる接続構造であり、Ｒ’３がＲ３反応後の残存構造であり、Ｚが固相樹脂側鎖反応後の残存構造であり、他の置換基が式（１）におけるものと同義である。Ｒ’３−Ｇ−Ｚは、Ｒ’３−ＣＯＮＨ−Ｚ、Ｒ’３−ＣＯＯ−Ｚ（即ち固相樹脂上の活性機能基がアミノ又は水酸基である）であることが好ましい。選択肢としては、Ｒ’３−Ｇが無くて、Ｚが直接Ｘ１に繋がってもよい（即ち固相樹脂上の活性機能基が活性塩素などの活性ハロゲンである）。
【００９９】
いくつかの実施形態において、式（１）−樹脂における樹脂は、ＡＭ樹脂、ＭＢＨＡ樹脂、Ｓｉｅｂｅｒ樹脂、Ｒｉｎｋ樹脂、ＣＴＣ樹脂等を含む。これらの樹脂は、市販で入手可能である。
【０１００】
ＡＭ樹脂は、以下のような構造を有する。
【０１０１】
【化４１】
2021527715.tif 000044
その中のＮＨ２は、通常、式（１）におけるＲ３との連結基である。Ｒ３には、連結のために一般的に−ＣＯＯＨ等を持っている。
【０１０２】
ＭＢＨＡ樹脂は、以下のような構造を有する。
【０１０３】
【化４２】
2021527715.tif 000045
その中のＮＨ２は、通常、式（１）におけるＲ３との連結基である。Ｒ３には、連結のために一般的に−ＣＯＯＨ等を持っている。
【０１０４】
Ｓｉｅｂｅｒ樹脂は、以下のような構造を有する。
【０１０５】
【化４３】
2021527715.tif 000046
その中のＮＨ２は、通常、式（１）におけるＲ３との連結基である。Ｒ３には、連結のために一般的に−ＣＯＯＨ等を持っている。
【０１０６】
Ｒｉｎｋ樹脂は、以下のような構造を有する。
【０１０７】
【化４４】
2021527715.tif 000047
その中のＮＨ２は、通常、式（１）におけるＲ３との連結基である。Ｒ３には、連結のために一般的に−ＣＯＯＨ等を持っている。
【０１０８】
ＣＴＣ樹脂は、以下のような構造を有する。
【０１０９】
【化４５】
2021527715.tif 000048
その中の塩素に連結する四級炭素は、通常、式（１）においてＲ３との連結基である。Ｒ３には、連結のために一般的に−ＯＨ、−ＮＨ２等を持っている。或いは、Ｒ３が水素である場合、その四級炭素が直接Ｘ１に連なっている。
【０１１０】
いくつかの実施形態において、式（１）−樹脂は、以下の構造を有する。
【０１１１】
【化４６】
2021527715.tif 000049
いくつかの実施形態において、式（１）−樹脂は、以下の構造を有する。
【０１１２】
【化４７】
2021527715.tif 000050
いくつかの実施形態において、式（ｉ）−樹脂〜式（ｖｉｉ）−樹脂および式（ｘ）〜式（ｘｘ）−樹脂における樹脂が、ＡＭ樹脂、ＭＢＨＡ樹脂、Ｓｉｅｂｅｒ樹脂又はＲｉｎｋ樹脂から選択されるが、ＡＭ樹脂、ＭＢＨＡ樹脂であることが好ましい。
【０１１３】
いくつかの実施形態において、式（ｖｉｉｉ）−樹脂〜式（ｉｘ）−樹脂における樹脂は、ＣＴＣ樹脂である。
【０１１４】
いくつかの実施形態において、式（Ｘ）−樹脂は、以下の構造を有する。
【０１１５】
【化４８】
2021527715.tif 000051
式（Ｘ−１）−樹脂において、
（外２）
2021527715.tif 000052
が固相樹脂の本体を示し、Ｚ、Ｒ１、ｍの意味が上記の通りであり、ここでは説明を省略する。
【０１１６】
いくつかの実施形態において、式（Ｘ−１）−樹脂における樹脂は、ＡＭ樹脂又はＭＢＨＡ樹脂である。
【０１１７】
ＡＭ固相樹脂である場合、式（Ｘ−１）−樹脂は具体的に以下の通りである。
【０１１８】
【化４９】
2021527715.tif 000053
ＭＢＨＡ固相樹脂である場合、式（Ｘ−１）−樹脂は具体的に以下の通りである。
【０１１９】
【化５０】
2021527715.tif 000054
一方、本発明は、上記のような式（１）で表される化合物若しくはその塩又は上記の式（１）−樹脂の、式（１）中の−ＮＲ２を炭素末端に含む標的ポリペプチドまたはその塩の調製における応用であって、選択肢としては、−ＮＲ２が、目的とする構造に変換されてもよく、或いはポリペプチド鎖の残部と環合してもいい、応用を提供する。
【０１２０】
いくつかの実施態様において、前記応用は、
式（１）で表される化合物を出発固相樹脂に担持させた式（１）−樹脂を得るか、又は式（１）−樹脂を直接提供するステップと、
【０１２１】
【化５１】
2021527715.tif 000055
［式（１）−樹脂におけるの各基の意味が上記の通りであり、ここでは説明を省略する。］
なお、Ｒ１がアミノの保護基である場合、該アミノの保護基を脱離してＮＨ基を露出させる。Ｒ１が水素である場合、脱離する必要はない。
【０１２２】
露出したＮＨ基に対して完全保護ペプチド鎖のペプチド樹脂を固相段階的カップリング法で調製するステップと、
ペプチド樹脂から完全保護ペプチド鎖を切り出して標的ポリペプチドまたはその塩を直接に獲得するか、または保護基を脱離させた後に標的ポリペプチドまたはその塩を得るステップと、
を含む。
【０１２３】
選択肢として、ペプチド樹脂から完全保護ペプチド鎖を切り出す前に、該完全保護ペプチド鎖を出発ペプチドとして環化反応させて環状ペプチドを形成させることができる。この完全保護ペプチド鎖において環化する反応サイトは、Ｒ２であることが好ましい。
【０１２４】
いくつかの実施態様において、前記標的ポリペプチドがリュープロレリン又はその塩である場合に、その炭素末端が−ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ３であり、式（１）−樹脂におけるＮＲ２が即ちＮＣＨ２ＣＨ３である。
【０１２５】
いくつかの実施態様において、前記標的ポリペプチドがリュープロレリン又はその塩である場合に、前記式（１）−樹脂が式（Ｘ−１）−樹脂又は式（ＩＸ）−樹脂である。いくつかの実施形態において、前記（Ｘ−１）−樹脂が式（ｘｉ）−樹脂乃至式（ｘｘ）−樹脂のいずれかである。いくつかの実施態様において、前記式（ＩＸ）−樹脂が前記式（ｖｉｉｉ）−樹脂であり、当該式（ｖｉｉｉ）−樹脂における樹脂がＣＴＣ樹脂である。いくつかの実施形態において、式（ｘｉ）−樹脂乃至式（ｘｘ）−樹脂における前記樹脂が、ＡＭ樹脂、ＭＢＨＡ樹脂、Ｓｉｅｂｅｒ樹脂、又はＲｉｎｋ樹脂等であるが、前の２種の樹脂であることが好ましい。式（Ｘ−１）−樹脂の構造例は、例えば、以下に示される。ただし、Ｒ１がアミノの保護基である。
【０１２６】
【化５２】
2021527715.tif 000056
式（Ｘ−１）−ＡＭ樹脂                式（Ｘ−１）−ＭＢＨＡ樹脂
【０１２７】
【化５３】
2021527715.tif 000057
式（Ｘ−１）−Ｓｉｅｂｅｒ樹脂          式（Ｘ−１）−Ｒｉｎｋ樹脂
少なくともいくつかの実施態様において、標的ポリペプチドがリュープロレリンまたはその塩である場合、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ＤＬｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｈ−Ｇｌｐ−ＯＨのようなカップリングされるアミノ酸を反応剤として、露出したＮＨ２に対して固相段階的カップリング法で順次カップリングさせてリュープロレリンの完全保護ペプチドのペプチド樹脂を調製して、Ｇｌｐ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＤＬｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−Ｐｒｏ−式（１）−樹脂であり、好ましくはＧｌｐ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＤＬｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−Ｐｒｏ−式（Ｘ−１）−樹脂であり、より好ましくはＧｌｐ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＤＬｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−Ｐｒｏ−式（Ｘ−１）−ＡＭ樹脂、Ｇｌｐ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＤＬｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−Ｐｒｏ−式（Ｘ−１）−ＭＢＨＡ樹脂、Ｇｌｐ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＤＬｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−Ｐｒｏ−式（Ｘ−１）−Ｓｉｅｂｅｒ樹脂又はＧｌｐ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＤＬｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−Ｐｒｏ−式（Ｘ−１）−Ｒｉｎｋ樹脂であるリュープロレリンの全保護ペプチドのペプチド樹脂が得られる。
【０１２８】
樹脂上のペプチドに連結したＦｍｏｃ保護基の脱離は、各カップリングの前に行われる。
【０１２９】
いくつかの実施態様において、前記標的ポリペプチドがアラレリン又はその塩である場合に、その炭素末端が−ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ３であり、式（１）−樹脂におけるＮＨＲ２が即ちＮＨＣＨ２ＣＨ３である。
【０１３０】
いくつかの実施態様において、前記標的ポリペプチドがアラレリン又はその塩である場合に、前記式（１）−樹脂が式（Ｘ−１）−樹脂又は式（ＩＸ）−樹脂である。いくつかの実施形態において、前記（Ｘ−１）−樹脂が式（ｘｉ）−樹脂乃至式（ｘｘ）−樹脂のいずれかである。いくつかの実施態様において、前記式（ＩＸ）−樹脂が式（ｖｉｉｉ）−樹脂であり、当該式（ｖｉｉｉ）−樹脂における樹脂がＣＴＣ樹脂である。いくつかの実施形態において、式（ｘｉ）−樹脂乃至式（ｘｘ）−樹脂における前記樹脂が、ＡＭ樹脂、ＭＢＨＡ樹脂、Ｓｉｅｂｅｒ樹脂、又はＲｉｎｋ樹脂等であるが、前の２種の樹脂であることが好ましい。式（Ｘ−１）−樹脂の構造は以下の通りである。前記式（ＩＸ）−樹脂は、例えば、以下の通りである。
【０１３１】
【化５４】
2021527715.tif 000058
式（ＩＸ）−ＣＴＣ樹脂において、Ｒ１がアミノの保護基である。
【０１３２】
少なくともいくつかの実施態様において、標的ポリペプチドがアラレリンまたはその塩である場合、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ＤＡｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｈ−Ｇｌｐ−ＯＨのようなカップリングされるアミノ酸を反応剤として、露出したＮＨ２に対して固相段階的カップリング法で順次カップリングさせてアラレリンの完全保護ペプチドのペプチド樹脂を調製して、Ｇｌｐ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＤＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−Ｐｒｏ−式（１）−樹脂であり、好ましくはＧｌｐ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＤＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−Ｐｒｏ−式（ＩＸ）−樹脂、より好ましくはＧｌｐ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＤＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−Ｐｒｏ−式（ＩＸ）−ＣＴＣ樹脂であるアラレリンの完全保護ペプチドのペプチド樹脂が得られる。
【０１３３】
樹脂上のペプチドに連結したＦｍｏｃ保護基の脱離は、各カップリングの前に行われる。
【０１３４】
いくつかの実施態様において、前記標的ポリペプチドが環状ペプチドとして
のＰＭＸ−５３又はその塩である場合に、前記式（１）−樹脂におけるＮＲ２が
【０１３５】
【化５５】
2021527715.tif 000059
であり、ここで、Ｐ１、Ｐ２が保護基である。好ましくは、ＮＲ２が
【０１３６】
【化５６】
2021527715.tif 000060
である。
【０１３７】
いくつかの実施態様において、前記標的ポリペプチドがＰＭＸ−５３又はその塩であり、前記式（１）−樹脂が式（ＶＩ）−樹脂である。いくつかの実施態様において、前記式（ＶＩ）−樹脂が式（ｉｘ）−樹脂である。この式（ｉｘ）−樹脂における樹脂は、ＣＴＣ樹脂であることが好ましい。
【０１３８】
少なくともいくつかの実施態様において、標的ポリペプチドがＰＭＸ−５３またはその塩である場合、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｃｈａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｏｒｎ（Ｄｄｅ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨのようなカップリングされるアミノ酸を反応剤として、露出したＮＨ２に対して固相段階的カップリング法で順次カップリングさせて、最後にカップリングされたアミノ酸上のアミノをアセチル化することにより、ＰＭＸ−５３環化前の全保護のペプチド樹脂を調製して、Ａｃ−Ｐｈｅ−Ｏｒｎ（Ｄｄｅ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ｃｈａ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−式（１）−樹脂であり、好ましくはＡｃ−Ｐｈｅ−Ｏｒｎ（Ｄｄｅ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ｃｈａ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−式（ＶＩ）−樹脂であり、より好ましくはＡｃ−Ｐｈｅ−Ｏｒｎ（Ｄｄｅ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ｃｈａ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−式（ｉｘ）−樹脂であり、さらに好ましくはＡｃ−Ｐｈｅ−Ｏｒｎ（Ｄｄｅ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ｃｈａ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−式（ｉｘ）−ＣＴＣ樹脂であるＰＭＸ−５３環化前の完全保護ペプチドのペプチド樹脂が得られる。
【０１３９】
樹脂上のペプチドに連結したＦｍｏｃ保護基の脱離は、各カップリングの前に行われる。
【０１４０】
その後、Ａｌｌ保護基及びＤｄｅ保護基を脱離しさらに環化反応を行って、Ａｃ−Ｐｈｅ−ｃ（Ｏｒｎ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ｃｈａ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ａｒｇ（ｐｂｆ））−樹脂（当該樹脂はＣＴＣ樹脂であることが好ましい）であるＰＭＸ−５３の完全保護ペプチドのペプチド樹脂を得る。
【０１４１】
最後に、保護基を開裂脱離させることにより前記ＰＭＸ−５３又はその塩を得る。
【０１４２】
いくつかの実施態様において、前記標的ポリペプチドがリラグルチド又はその塩である場合に、その炭素末端が−ＣＯＮＨＣＨ２ＣＯＯＨであり、前記式（１）−樹脂におけるＮＲ２がＮＣＨ２ＣＯＯＰ３であり、前記Ｐ３が保護基であり、好ましくはｔｅｒｔ−ブチルである。
【０１４３】
いくつかの実施態様において、前記標的ポリペプチドがリラグルチド又はその塩である場合に、前記式（１）−樹脂が前記式（ＶＩ）−樹脂である。いくつかの実施態様において、前記式（ＶＩ）−樹脂が式（ｘ）−樹脂である。この式（ｘ）−樹脂における樹脂は、ＡＭ樹脂、ＭＢＨＡ樹脂、Ｓｉｅｂｅｒ樹脂又はＲｉｎｋ樹脂等が好ましく、前の２種の樹脂であることが好ましい。前記式（ＶＩ）−樹脂は、例えば、以下の通りである。
【０１４４】
【化５７】
2021527715.tif 000061
少なくともいくつかの実施態様において、前記標的ポリペプチドがリラグルチドまたはその塩である場合、ｍｏｃ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｎ−ε−（Ｐａｌｍ−Ｇｌｕ−Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ＨｍｂＧｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨのようなカップリングされるアミノ酸を反応剤として、露出したＮＨ２に対して固相段階的カップリング法で順次カップリングさせてリラグルチドの完全保護のペプチド樹脂を調製して、Ｈ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ａｌａ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＨｍｂＧｌｙ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ａｓｐ（Ｏｔ−Ｂｕ）−Ｖａｌ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｎ−ε−（Ｐａｌｍ−Ｇｌｕ−Ｏｔ−Ｂｕ））−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−Ｇｌｙ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−式（１）−樹脂であり、好ましくはＨ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ａｌａ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＨｍｂＧｌｙ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ａｓｐ（Ｏｔ−Ｂｕ）−Ｖａｌ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｎ−ε−（Ｐａｌｍ−Ｇｌｕ−Ｏｔ−Ｂｕ））−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−Ｇｌｙ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−式（ＶＩ）−樹脂であり、より好ましくはＨ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ａｌａ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＨｍｂＧｌｙ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ａｓｐ（Ｏｔ−Ｂｕ）−Ｖａｌ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｎ−ε−（Ｐａｌｍ−Ｇｌｕ−Ｏｔ−Ｂｕ））−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−Ｇｌｙ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−式（ｘ）−樹脂であり、さらに好ましくはＨ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ａｌａ���Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＨｍｂＧｌｙ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ａｓｐ（Ｏｔ−Ｂｕ）−Ｖａｌ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｎ−ε−（Ｐａｌｍ−Ｇｌｕ−Ｏｔ−Ｂｕ））−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−Ｇｌｙ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−式（ｘ）−ＡＭ樹脂であるリラグルチドの完全保護ペプチドのペプチド樹脂を得る。
【０１４５】
樹脂上のペプチドに連結したＦｍｏｃ保護基の脱離は、各カップリングの前に行われる
いくつかの実施形態において、上記各種ポリペプチドの合成反応における出発固相樹脂は、ＡＭ樹脂、ＭＢＨＡ樹脂、Ｓｉｅｂｅｒ樹脂、Ｒｉｎｋ樹脂、ＣＴＣ樹脂、又はこれと同等の機能を有する樹脂を含むが、それらに限定されない。これにより得られる式（１）−樹脂は、例えば、式（１）−ＡＭ樹脂、式（１）−ＭＢＨＡ樹脂、式（１）−Ｓｉｅｂｅｒ樹脂、式（１）−Ｒｉｎｋ樹脂又は式（１）−ＣＴＣ樹脂である。いくつかの実施形態において、これらの樹脂の置換度は、０．３〜２．０ｍｍｏｌ／ｇである。
【０１４６】
いくつかの実施態様において、上記各種ポリペプチドの合成反応では、カップリング剤を用いて、式（１）で表される化合物又はその塩を前記出発固相樹脂に担持する。いくつかの実施態様において、このカップリング剤は、ＤＩＣ／ＨｏＢｔ、ＤＩＣ／Ｃｌ−ＨｏＢｔ、ＤＩＣ／ＨｏｏＢｔ又はＤＩＣ／ＨｏＡｔの組み合わせのうち１つ又は複数を含むが、それらに限定されない。いくつかの実施形態において、これらのカップリング剤と前記出発固相樹脂における有効な反応サイトと式（Ａ）化合物とのモル比は１：０．５〜３．０：０．５〜３．０である。このような形態は、式（１）で表される化合物と樹脂とがアミド基を介して連結するのに適している。これらの樹脂は、例えば、ＡＭ樹脂、ＭＢＨＡ樹脂、Ｓｉｅｂｅｒ樹脂、Ｒｉｎｋ樹脂等であってもよい。なお、ＣＴＣ樹脂のようなものについては、式（１）で表される化合物が通常それに直接−Ｏ−結合で連結しておる。その際、求核置換反応により、式（１）で表される化合物とＣＴＣ樹脂を連結させることができる。
【０１４７】
いくつかの実施態様において、上記各種ポリペプチドの合成反応では、アミノ酸をカップリングする毎に、樹脂における有効な反応サイト：カップリングされるアミノ酸：カップリング剤のモル比率が１．０：１．５〜６．０：１．５〜６．０である。
【０１４８】
本発明樹脂における有効な反応サイトのモル数は、一般的な技術によって確定される。例えば、紫外線法によって測定される。
【０１４９】
いくつかの実施態様において、上記各種ポリペプチドの合成反応では、１回あたりのカップリングの前に、カップリングされるアミノ酸反応液を２〜８℃で５〜１５分間予備活性化する。反応時間は３０分間〜１５０分間である。本発明の予備活性化は、カップリングされるアミノ酸およびＨｏＢｔ、Ｃｌ−ＨｏＢｔ、ＨｏｏＢｔ、ＨｏＡｔ等を溶解した後に縮合剤としてのＤＩＣ等を低温で加えて行われるものである。この方法によって得られる有益な効果としては、低温予備活性化がアミノ酸のラセミ抑制に有利となるうえ、ｉｎ−ｓｉｔｕ法で活性化エステルを生成するのに時間を要するため、予備活性化によって反応時間を節約することができることが挙げられる。
【０１５０】
本発明は、１回あたりのアミノ酸のカップリング反応及び保護基脱離反応において、一般的な技術手段を用いてモニタリングすることができる。いくつかの実施形態において、アミノ酸のカップリング反応の終点及び脱保護反応の終点は、ニンヒドリン検出／クロラニル検出によって判定される。
【０１５１】
いくつかの実施態様において、該目的のポリペプチドまたはその塩は、ペプチド樹脂から完全保護ペプチドをライセートにより切り出し、保護基を同時にまたは異なる時間に除去することにより得られる。前記ライセートとは、一般的に、ペプチド鎖を樹脂から放出させる試薬をいい、ペプチド鎖の保護基を同時に又は異なる時間に脱離させることができるものであるが、ペプチド鎖の保護基を脱離できない場合には、本発明の通常の方法でこれらの保護基を脱離させることができる。少なくとも一つの実施形態において、前記ライセートは、ＴＦＡ：ＥＤＴ：Ｈ２Ｏ＝９０〜９５：２．５〜５：２．５〜５（体積比）である。いくつかの実施形態において、前記ライセートと前記完全保護ペプチドのペプチド樹脂との割合は、６〜１５ｍｌの該ライセート：１ｇの該ペプチド樹脂である。
【０１５２】
保護基の除去が必要な場合、本発明の保護基は本分野の一般的な技術手段によって除去されて良いが、いくつかの実施形態において、Ｆｍｏｃ保護基は、体積分率が２０％のピペリジン／ＤＭＦ溶液（例えば、１００ｍｌあたり約２０ｍｌのピペリジン及び約８０ｍｌのＤＭＦ溶液を含む）又は２％ピペリジン／２％ＤＢＵ／ＤＭＦ溶液（例えば、１００ｍｌあたり約２ｍｌのピペリジン、約２ｍｌのＤＢＵ及び約９６ｍｌのＤＭＦ溶液を含む）によって脱離される。脱保護の時間が５分間〜３０分間である。いくつかの実施態様において、Ｔｒｔ保護基は、体積分率が８０％の酢酸／テトラヒドロフラン溶液（例えば、１００ｍｌあたり約８０ｍｌの酢酸及び約２０ｍｌのテトラヒドロフランを含む）によって脱離される。いくつかの実施形態において、ｉｖＤｄｅ保護基は、体積分率が２．５％のヒドラジン水和物／ＤＭＦ溶液（例えば、１００ｍｌあたり約２．５ｍｌのヒドラジン水和物及び約９７．５ｍｌＤＭＦを含む）によって脱離される。いくつかの実施形態において、Ａｌｌｏｃ保護基は、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム／ＤＣＭ溶液によって脱離される。いくつかの実施態様において、Ｍｔｔ又はＭｍｔ保護基は、２％ＴＦＡ／ＤＣＭ溶液（例えば、１００ｍｌあたり約２ｍｌのＴＦＡ及び約９８ｍｌのＤＣＭを含む）によって脱離される。いくつかの実施形態において、Ｂｏｃ保護基は、２、６−ジメチルピリジン／ＤＣＭとＴＢＳＯＴｆ／ＤＣＭとの混合溶液によって脱離される。
【０１５３】
いくつかの実施態様において、ペプチド樹脂から完全保護ペプチドを放出させつつ保護基を脱離して前記標的ポリペプチド又はその塩を得た後、さらに精製を行う。精製は本分野の一般的な技術手段を採用できるが、いくつかの実施形態においては、逆相分取液体クロマトグラフィー精製により標的ポリペプチド又はその塩の純物を得る。いくつかの実施態様において、逆相分取液体クロマトグラフィーにおける移動相を０．１％ＴＦＡ／水溶液及び０．１％ＴＦＡ／アセトニトリル溶液とし、得られた標的ポリペプチドのトリフルオロ酢酸塩を精製する。標的ポリペプチドの酢酸塩を得るために、塩交換ステップにおいて逆相分取液体クロマトグラフィーのバッファー系を０．１〜１．０％酢酸／水溶液−アセトニトリルとすることができる。最後に凍結乾燥して標的ポリペプチド酢酸塩が得られる。
【０１５４】
本発明のカップリング剤は、アミノ酸のカルボキシルとアミノとの縮合を起こしてアミド結合を形成することができるものを示す。
【０１５５】
本発明のライセートは、ポリペプチドの合成完了後、ペプチド鎖を樹脂から放出するものであって、ペプチド鎖の保護基を同時に又は異なる時間に脱離することができるものを示す。
【０１５６】
本発明の英語略称の一部は、以下のような名称を有するが、列挙されない英語略称は、固相合成の技術分野における解釈に従う。
【０１５７】
【表１】
2021527715.tif 000062
本発明において、リラグルチドの検出方法は以下の通りである。
【０１５８】
カラム：オクタデシル結合シリカゲル
移動相Ａ：１３．６ｇリン酸二水素カリウム溶液（ｐＨ＝３．５）
移動相Ｂ：アセトニトリル：水＝１：１
グラジエント溶離：時間（分間）        Ｂ％
０            ５０
２５            ５０
３５            ９０
３８            ５０
４５            ５０
検出波長：２１５ナノメートル
本発明において、アラレリンの検出方法は以下の通りである。
【０１５９】
カラム：オクタデシル結合シリカゲル
移動相：０．１ｍｍｏｌ／Ｌ  リン酸溶液（トリエチルアミンでｐＨ値が３．０となるように調整された）−アセトニトリル（８０：２０）
稼動時間：９０分間
検出波長：２２０ナノメートル
本発明において、ＰＭＸ−５３の検出方法は以下の通りである。
【０１６０】
カラム：オクタデシル結合シリカゲル
移動相Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸／水溶液
移動相Ｂ：０．１％トリフルオロ酢酸／アセトニトリル：水＝８０：２０
グラジエント溶離：４９〜５９％Ｂ、２０分間
検出波長：２２０ナノメートル
実施例１  式（ｘｉｉ）で表される化合物の調製
本実施例では、式（ｘｉｉ）で表される化合物を以下のルートで調製する。
【０１６１】
【化５８】
2021527715.tif 000063
（１）化合物ｘｉｉ−１の調製
１Ｌの反応容器に４−メトキシサリチルアルデヒド（１００ｇ、６５７ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）、Ｋ２ＣＯ３（１８１ｇ、１３１４ｍｍｏｌ、２．０ｅｑ）を秤量して、ＴＨＦ（３．０ｅｑ、３００ｍｌ）と４−ブロモブタン酸エチル（１９２ｇ（１４１ｍｌ）、９８５．５ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）を加え、攪拌し、反応が完了するまでに加熱した。後処理およびＭＴＢＥ再結晶を経って、さらに乾燥して化合物Ａ−２−１を合計で１５５ｇ（収率８８．７％、純度９８．６７％）得た。
【０１６２】
（２）化合物ｘｉｉ−２の調製
１５５ｇの化合物ｘｉｉ−１を２Ｌの反応ボトルに移送し、さらにＥｔＮＨ２．ＨＣｌ（５９．６９ｇ、７３２ｍｍｏｌ，１．５ｅｑ）、ＮａＢＨ３ＣＮ（９２．０ｇ，１４６４ｍｍｏｌ、３ｅｑ）のＭｅＯＨ溶液を加え、室温で２４時間撹拌し、さらにＮａＯＨ（４８．８ｇ、１２２０ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ）を加え１２時間撹拌した。残留物をＭＴＢＥで１回抽出し、不純物を除いてそのまま次ステップに用いられる。
【０１６３】
（３）化合物（ｘｉｉ）の調製
上記ステップ（２）で得られた溶液のすべてにＮａ２ＣＯ３（５２ｇ、４８８ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）のテトラヒドロフラン水溶液を加え、最後にＦｍｏｃ−Ｏｓｕ（２４７ｇ、７３２ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）を加え、室温で反応が完了するまで撹拌した。後処理、ＭＴＢＥ再結晶及び再乾燥を経て、化合物（ｘｉｉ）を合計で１４４ｇ（合計収率：４４．８％、その純度が出発原料の４−メトキシサリチルアルデヒド換算で９７．８４％）得た。
【０１６４】
ＭＷ＝４８９．５６    ＥＳＩ，  Ｎｅｇ  ：［２Ｍ−２Ｈ］−＝９７７．４。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ｐｐｍ）δ：１２．１０（ｂｒｓ，１Ｈ），７．８７（ｍ，２Ｈ），７．６４（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５１  （ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ），  ７．４０（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝６．８５Ｈｚ，２Ｈ），６．３１−７．５０（ｍ，３Ｈ），４．４４（ｄｄ，Ｊ１＝２２．４５Ｈｚ，Ｊ２＝４．６Ｈｚ，  ２Ｈ），４．１５〜４．２５（ｍ，，３Ｈ），３．９６（ｄ，Ｊ＝５．０５Ｈｚ，２Ｈ），３．７３（ｓ，３Ｈ），３．１６（ｄ，Ｊ＝５．９５Ｈｚ，１Ｈ），２．９３（ｄ，Ｊ＝５．９５Ｈｚ，１Ｈ），２．９３（ｍ，２Ｈ），１．９０（ｓ，２Ｈ），０．９５（ｓ，１．５Ｈ），０．７２（ｓ，１．５Ｈ）。
実施例２  式（ｘｉｉ）で表される化合物の調製
（１）化合物ｘｉｉ−１の調製
１Ｌの反応容器に４−メトキシサリチルアルデヒド（１００ｇ、６５７ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）、Ｋ２ＣＯ３（１８１ｇ、１３１４ｍｍｏｌ、２．０ｅｑ）を秤量して、ＴＨＦ（３．０ｅｑ、３００ｍｌ）と４−ブロモブタン酸エチル（１９２ｇ（１４１ｍｌ）、９８５．５ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）を加え、攪拌し、反応が完了するまでに加熱した。後処理およびＭＴＢＥ再結晶を経って、さらに乾燥して化合物ｘｉｉ−１を合計で１５９．３ｇ（収率８９．８％、純度９８．８０％）得た。
【０１６５】
（２）化合物ｘｉｉ−２の調製
１５９．３ｇの化合物Ａ−２−１を投入した上記反応ボトルに、ＮａＯＨ（５９．８ｇ、１４９５ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ）のメタノール水溶液を加え、最後にＥｔＮＨ２・ＨＣｌ（７３．１４ｇ、８９７ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）及びＰｄ／Ｃ（２２．２ｇ）を加えて、Ｈ２で０．２〜２０ｂａｒに加圧し、室温２５℃に反応が完了するまで攪拌し、濾過でＰｄ／Ｃを除去し、ロータリーエバポレーターでメタノールを完全に除去した後、残存物をＭＴＢＥで１回抽出し、不純物を除いてそのまま次ステップに用いられる。
【０１６６】
（３）化合物ｘｉｉの調製
上記ステップ（２）で得られた溶液のすべてにＮａ２ＣＯ３（６３．４ｇ、５９８ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）のテトラヒドロフラン水溶液を加え、その後にＦｍｏｃ−Ｏｓｕ（３０２．３ｇ、８９７ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）を加え、室温で反応が完了するまで撹拌した。後処理、ＭＴＢＥ再結晶及び再乾燥を経て、化合物ｘｉｉを合計で１９５．２ｇ（合計収率：６０．７％、その純度が出発原料の４−メトキシサリチルアルデヒド換算で９６．６４％）得た。
【０１６７】
ＭＷ＝４８９．５６    ＥＳＩ，  Ｎｅｇ  ：［２Ｍ−２Ｈ］−  ＝９７７．３。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ｐｐｍ）δ：１２．１２（ｂｒｓ，１Ｈ），７．８４（ｍ，２Ｈ），７．６３（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５０  （ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ），  ７．４１（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝６．８５Ｈｚ，２Ｈ），６．３１−７．５１（ｍ，３Ｈ），４．４２（ｄｄ，Ｊ１＝２２．４５Ｈｚ，Ｊ２＝４．６Ｈｚ，  ２Ｈ），４．１４〜４．２５（ｍ，，３Ｈ），３．９６（ｄ，Ｊ＝５．０５Ｈｚ，２Ｈ），３．７３（ｓ，３Ｈ），３．１６（ｄ，Ｊ＝５．９５Ｈｚ，１Ｈ），２．９２（ｄ，Ｊ＝５．９５Ｈｚ，１Ｈ），２．９２（ｍ，２Ｈ），  １．９０（ｓ，２Ｈ），０．９５（ｓ，１．５Ｈ），０．７２（ｓ，１．５Ｈ）。
実施例３  式ＩＩＩで表される化合物の調製
【０１６８】
【化５９】
2021527715.tif 000064
（１）１Ｌの反応容器に４−メトキシサリチルアルデヒド（１００ｇ、６５７ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）、Ｋ２ＣＯ３（１８１ｇ、１３１４ｍｍｏｌ、２．０ｅｑ）を秤量して、ＴＨＦ（３．０ｅｑ、３００ｍｌ）と４−ブロモブタン酸エチル（１９２ｇ（１４１ｍｌ）、９８５．５ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）を加え、攪拌し、反応が完了するまでに加熱した。後処理およびＭＴＢＥ再結晶を経って、さらに乾燥して化合物ｘｉｉ−１を合計で１５４．６ｇ（収率８７．０％、純度９８．４７％）得た。
【０１６９】
（２）１５４．６ｇの化合物ｘｉｉ−１を投入した上記反応ボトルに、ＮａＯＨ（５８．１ｇ、１４５１．５ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ）のメタノール水溶液を加え、さらにＥｔＮＨ２・ＨＣｌ（７１．０ｇ、８７０．９ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）及びＰｄ／Ｃ（２２．５ｇ）を加えて、Ｈ２で０．２〜２０ｂａｒに加圧し、室温２５℃に反応が完了するまで攪拌し、濾過でＰｄ／Ｃを除去し、ロータリーエバポレーターでメタノールを完全に除去した後、残存物をＭＴＢＥで１回抽出し、不純物を除いてそのまま次ステップに用いられる。
【０１７０】
（３）前のステップの反応で得られた溶液にＮａ２ＣＯ３（６１．５ｇ、５８０．６ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）を加え、２Ｌの反応容器にＨ２ＯとＴＨＦを加え、最後に（Ｂｏｃ）２Ｏ（１３９．２ｇ、６３８．７ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ）を加え、室温で反応が完了するまで撹拌し、後処理及び順相シリカゲルカラムの精製を経て、式ｘｉｉｉで表される化合物を合計で１０７．３ｇ（合計収率：４４．４％、純度が出発原料の４−メトキシサリチルアルデヒド換算で９８．７２％）得た。
【０１７１】
ＭＷ＝３６７．４４，ＥＳＩ，  Ｎｅｇ  ：［２Ｍ−２Ｈ］−＝７３２．７。
【０１７２】
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６，  ｐｐｍ）  δ：１２．１５（ｂｒｓ，１Ｈ），６．３１〜７．５０（ｍ，３Ｈ），４．４４（ｄｄ，Ｊ１＝２２．４５Ｈｚ，Ｊ２＝４．６Ｈｚ，２Ｈ），  ３．９６（ｄ，Ｊ＝５．０５Ｈｚ，２Ｈ），３．７３（ｓ，３Ｈ），３．１６（ｄ，Ｊ＝５．９５Ｈｚ，１Ｈ），２．９３（ｄ，Ｊ＝５．９５Ｈｚ，１Ｈ），２．９３（ｍ，２Ｈ），１．９１（ｓ，２Ｈ），０．９０−０．９５（ｍ，１２Ｈ）。
【０１７３】
実施例３の手順に従い、（Ｂｏｃ）２Ｏの代わりに、それぞれＴｒｔ−Ｃｌ、Ｍｔｔ−Ｃｌ、Ｍｍｔ−Ｃｌ又はＡｌｌｏｃ−Ｃｌを使用し、アルカリ条件下で反応させて、式（ｘｖｉｉ）、式（ｘｖｉｉｉ）、式（ｘｉｘ）、式（ｘｉｖ）で表される化合物をそれぞれ得た。
【０１７４】
実施例３の手順に従い、（Ｂｏｃ）２Ｏの代わりに、２−アセチル−５、５−ジメチル−１、３−シクロヘキサンジオン（２−ａｃｅｔｙｌｄｉｍｅｄｏｎｅ）又はＤＭＡＢ−ＯＨを使用し、酸性条件下で加熱還流して、式（ｘｖ）、式（ｘｖｉ）で表される化合物を得た。
実施例４  下記式（ｘｘ）で表される化合物の調製
【０１７５】
【化６０】
2021527715.tif 000065
（１）１Ｌの反応容器に４−メトキシサリチルアルデヒド（１００ｇ、６５７ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）、Ｋ２ＣＯ３（１８１ｇ、１３１４ｍｍｏｌ、２．０ｅｑ）を秤量して、ＴＨＦ（３．０ｅｑ、３００ｍｌ）と３−ブロモプロピオン酸エチル１７８ｇ（１２６ｍｌ）、９８５．５ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）を加え、攪拌するとともに加熱を開始させ、反応が完了するまでに加熱した。後処理およびＭＴＢＥ再結晶を経って、さらに乾燥して以下のような中間体１４２．４ｇ（収率６５．５％、純度９８．６７％）を得た。
【０１７６】
【化６１】
2021527715.tif 000066
（２）１４２．４ｇのステップ（１）で得られた化合物を投入した上記反応ボトルに、ＮａＯＨ（５６．４ｇ、１４１１ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ）のメタノール水溶液を加え、さらにＥｔＮＨ２・ＨＣｌ（６９．０ｇ、８４６．８ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）及びＰｄ／Ｃ（２１．４ｇ）を加えて、Ｈ２で０．２〜２０ｂａｒに加圧し、室温２５℃に反応が完了するまで攪拌し、濾過でＰｄ／Ｃを除去し、ロータリーエバポレーターでメタノールを完全に除去した後、残存物をＭＴＢＥで１回抽出し、不純物を除いてそのまま次ステップに用いられる。
【０１７７】
（３）上記溶液のすべてにＮａ２ＣＯ３（４５．６ｇ、５６４．４ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）を加え、２Ｌの反応容器にＨ２ＯとＴＨＦを加え、最後にＦｍｏｃ−Ｏｓｕ（２８５．３ｇ、８４６．６ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）を加え、室温２５℃で反応が完了するまで撹拌した。後処理、ＭＴＢＥ再結晶及び再乾燥を経て、次の標的化合物ｘｘを合計で１５８．３５ｇ（合計収率：５０．１％、純度が４−メトキシサリチルアルデヒド換算で９８．７４％）得た。
【０１７８】
【化６２】
2021527715.tif 000067
ＭＷ＝４７５．５３    ＥＳＩ，  Ｎｅｇ  ：［２Ｍ−２Ｈ］−＝９４９．２。
【０１７９】
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６，  ｐｐｍ）  δ：１２．１１（ｂｒｓ，１Ｈ），７．８８（ｍ，２Ｈ），７．６５（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ），  ７．５２（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，  １Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），７．２７（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），６．３０〜７．５０（ｍ，３Ｈ），４．４５（ｄｄ，Ｊ１＝２１．４５Ｈｚ，  Ｊ２＝４．５Ｈｚ，２Ｈ），４．１０〜４．３０（ｍ，３Ｈ），３．９９（ｄ，Ｊ＝５．１５Ｈｚ，２Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），３．１８（ｄ，Ｊ＝６．０５Ｈｚ，１Ｈ），２．９３（ｄ，Ｊ＝６．０５Ｈｚ，１Ｈ），  ２．９４（ｍ，２Ｈ），０．９４（ｓ，１．５Ｈ），０．７５（ｓ，１．５Ｈ）。
実施例５  下記式（ｖｉｉｉ）で表される化合物の調製
【０１８０】
【化６３】
2021527715.tif 000068
４−メトキシサリチルアルデヒド（１００ｇ、６５７ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）、ＥｔＮＨ２・ＨＣｌ（８０ｇ、９８１ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）を秤量して、８００ｍＬの水に溶解した。溶液は濁っている。さらにＮａＯＨ（３９．３６ｇ、９８１ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）を加えた後、溶液が清澄になり、１時間撹拌し続けた。氷浴条件下、ＮａＢＨ３ＣＮ（３３ｇ、５２５ｍｍｏ、０．８ｅｑ）を加えて３時間反応させ、反応液を酢酸エチルに入れ、攪拌・分液し、水相を酢酸エチルで２回抽出した後、有機相を合わせた。有機相は、飽和食塩水で１回洗浄し無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、粗品として１２６．２８ｇ用意された。
【０１８１】
上記１２６．２８ｇ粗品をＨ２ＯとＴＨＦ溶液に溶解し、Ｎａ２ＣＯ３（７３．７７ｇ、６９６ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）を加え、反応容器にＨ２ＯとＴＨＦを加え、最後にＦｍｏｃ−Ｏｓｕ（２３５ｇ、６９６ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）を加え、室温で反応が完了するまで撹拌した。酢酸エチルによる再結晶の後、標的式（ｖｉｉｉ）で表される化合物を合計で２１８ｇ（合計収率：８１．１％、純度が９８．６４％）得た。
【０１８２】
ＭＷ＝４０３．４７    ＥＳＩ，  Ｎｅｇ  ：［２Ｍ−２Ｈ］−＝８０４．８。
【０１８３】
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ，  ｐｐｍ），δ：９．３２（ｂｒｓ，０．７Ｈ），７．８９（ｍ，２Ｈ），７．６５（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，  １Ｈ），７．５２  （ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ），  ７．３８（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），７．２７（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），６．３１〜７．４９（ｍ，３Ｈ），４．４５（ｄｄ，Ｊ１＝２１．４５Ｈｚ，Ｊ２＝４．５Ｈｚ，  ２Ｈ），  ４．１０〜４．３０（ｍ，，３Ｈ），３．９９（ｄ，Ｊ＝  ５．１５Ｈｚ，２Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），０．９４（ｓ，１．５Ｈ），０．７５（ｓ，１．５Ｈ）。
実施例６  下記式（ｉｘ）で表される化合物の調製
【０１８４】
【化６４】
2021527715.tif 000069
本実施例では、この化合物が以下のルートで合成される。
【０１８５】
【化６５】
2021527715.tif 000070
４−メトキシサリチルアルデヒド（１００ｇ、６５７ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）、Ｈ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−ＯＡ１１．ＨＣｌ（４９３ｇ、９８１ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）を秤量して、４００ｍＬのメタノールに溶解した。溶液は濁っている。さらにトリエチルアミン（６６．４ｇ、６５７ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）を加えた後、溶液が清澄になり、１時間撹拌し続けた。氷浴条件下、ＮａＢＨ３ＣＮ（３３ｇ、５２５ｍｍｏ、０．８ｅｑ）を加えて３時間反応させ、水で希釈した後に反応液を酢酸エチルに入れ、攪拌・分液し、水相を酢酸エチルで２回抽出した後、有機相を合わせた。有機相は、飽和食塩水で１回洗浄し無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、粗品として１２６．２８ｇ用意された。
【０１８６】
上記１２６．２８ｇ粗品をＨ２ＯとＴＨＦ溶液に溶解し、Ｎａ２ＣＯ３（７３．７７ｇ、６９６ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）を加え、反応容器にＨ２ＯとＴＨＦを加え、最後にＦｍｏｃ−Ｏｓｕ（２３５ｇ、６９６ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）を加え、室温２５℃で反応が完了するまで撹拌した。
【０１８７】
検出によって、反応完了を確認した後、溶液をクエン酸水溶液に入れ、分液ロートで分液した。水相は酢酸エチルで１回抽出して、有機相を合わせてそのまま真空濃縮した。さらに順相シリカゲルカラムで精製して、標的化合物ｉｘを、合計で３９１．４ｇ（合計収率：６４．５％、純度が９８．６４％）得た。
【０１８８】
ＭＷ＝９１１．０７    ＥＳＩ，  Ｎｅｇ  ：［２Ｍ−２Ｈ］−＝１８２０．１。
実施例７  式（ｘ）で表される化合物の調製
本実施例では、式（ｘ）の化合物が以下のルートで調製される。
【０１８９】
【化６６】
2021527715.tif 000071
１Ｌの反応容器に、４−メトキシサリチルアルデヒド（１０ｇ、６５．７ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）、Ｋ２ＣＯ３（１８．１ｇ、１３１．４ｍｍｏｌ、２．０ｅｑ）を秤量して、ＴＨＦ（３．０ｅｑ、３５ｍｌ）と４−ブロモブタン酸エチル（１９．２ｇ、９８．６ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）を加え、撹拌し、反応が完了するまでに加熱した。後処理およびＭＴＢＥの再結晶を経って、再乾燥した後、化合物ｘｉｉ−１を合計１５．１ｇ（収率が８６．３％、純度が９８．７４％）を得た。
【０１９０】
ＮａＯＨ（６．０ｇ、１５０ｍｍｏｌ、２．５ｅｑ）のメタノール水溶液を上記反応ボトルに添加し、最後にＨ−Ｇｌｙ−ＯＢｕ−ｔ・ＨＣｌ（１５．１ｇ、９０ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）及びＰｄ／Ｃ（３．２ｇ）を加えて、Ｈ２で加圧し、室温で反応が完了するまでに撹拌し、濾過してＰｄ／Ｃを除去し、ロータリーエバポレーターでメタノールを完全に除去した後、残存物をＭＴＢＥで１回抽出し、不純物を除いて次ステップにそのまま用いられる。
【０１９１】
前記溶液に、Ｎａ２ＣＯ３（６．０ｇ、５６．７ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）のテトラヒドロフラン水溶液を加え、その後、Ｆｍｏｃ−Ｏｓｕ（２８．７３ｇ、８５．１ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）を加え、室温で反応が完了するまで撹拌した。後処理、ＭＴＢＥの再結晶及び再乾燥を経って、式ｘで表される化合物を、合計で２２．７ｇ（合計収率：５８．６％、純度が９７．５５％）得た。
【０１９２】
ＭＷ＝５７５．６５    ＥＳＩ，  Ｎｅｇ  ：［２Ｍ−２Ｈ］−  ＝１１４９．３
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ｐｐｍ）δ：１２．１２（ｂｒｓ，１Ｈ），７．８４（ｍ，２Ｈ），７．６３（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ），  ７．４１（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝６．８５Ｈｚ，２Ｈ），６．３１−７．５１（ｍ，３Ｈ），４．５５（ｓ，２Ｈ），４．４２（ｄｄ，Ｊ１＝２２．４５Ｈｚ，Ｊ２＝４．６Ｈｚ，２Ｈ），４．１４−４．２５（ｍ，３Ｈ），３．７３（ｓ，３Ｈ），３．１６（ｄ，Ｊ＝５．９５Ｈｚ，１Ｈ），２．９２（ｄ，Ｊ＝５．９５Ｈｚ，１Ｈ），２．９２（ｍ，２Ｈ），１．９０（ｓ，２Ｈ），  １．２５（ｓ，９Ｈ）。
【０１９３】
実施例８  酢酸リュープロレリンの調製
本実施例では、式（Ａ−２）で表される化合物を使用して以下のルートでリュープロレリンを調製する。
【０１９４】
【化６７】
2021527715.tif 000072
リュープロレリンの完全保護ペプチド樹脂の調製は以下の通りである。
【０１９５】
ＡＭ樹脂（９．４１ｇ、５ｍｍｏｌの有効な反応サイトである−ＮＨ２を含み、置換度０．５３ｍｍｏｌ／ｇ）を秤量してジャケット付きガラス反応器に加え、１００ｍｌＤＣＭを加えて２時間膨潤させ、さらに吸引濾過するとともに、体積分率が５％のＤＩＥＡ／ＤＣＭ溶液で２回洗浄し、ＤＭＦで２回洗浄し、実施例２における式（Ａ−２）で表される化合物（４．９０ｇ、１０ｍｍｏｌ）、ＨｏＢｔ（１．３５ｇ、１０ｍｍｏｌ）を加え、さらに適量ＤＭＦで溶解させた後、ＤＩＣ（１．５８ｍｌ、１０ｍｍｏｌ）を加え、循環水温が３０℃のジャケット反応器に２．５時間反応させ。反応の終点は、ニンヒドリン検出液とクロラニル検出液によってそれぞれ確認された。２つの検出液による検出では、いずれも陰性を示すと、反応が完了したことを意味する。反応が完了した後、Ｆｍｏｃ保護基を脱離した。Ｆｍｏｃ基の脱離は、体積分率が２０％のピペリジン／ＤＭＦ溶液を用いて３０分間脱保護することで行われる。Ｆｍｏｃを脱離した後、保護基で保護されたアミノ酸をＳＰＰＳ法によて順次カップリングした。順次カップリングしたアミノ酸は、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ＤＬｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｈ−Ｇｌｐ−ＯＨである。
【０１９６】
樹脂に連結したペプチドにおけるＦｍｏｃ保護基を、各カップリングの前に脱離した。Ｆｍｏｃ基の脱離は、体積分率が２０％のピペリジン／ＤＭＦ溶液を用いて３０分間脱保護することで行われる。
【０１９７】
各アミノ酸のカップリングにはカップリング剤としてＨｏＢｔ＋ＤＩＣが用いられ、ポリペプチド樹脂における有効な反応サイトとカップリングすべきアミノ酸とカップリング剤のモル仕込み比が１：３：３となった。毎回、カップリングすべきアミノ酸を氷水浴中で１５分間程度予め活性化する必要がある。即ち、カップリングすべきアミノ酸にカップリング剤を加えて反応させ、その後連結を行う。
【０１９８】
調製されたリュープロレリンの完全保護ペプチド樹脂は、以下の通りである。
【０１９９】
【化６８】
2021527715.tif 000073
乾燥後、リュープロレリンの完全保護ペプチド樹脂２１．８１ｇを得た。
【０２００】
リュープロレリンのトリフルオロ酢酸塩粗ペプチドの調製
ライセートの調製は以下の通りである。ライセートが１５０ｍｌ調製される。当該ライセートにトリフルオロ酢酸１３５ｍｌ、ＥＤＴ（１、２−エタンジチオール）７．５ｍｌ、純水７．５ｍｌを含む。均一に振った後に−２０℃で３０分間冷却して、用意された。
【０２０１】
上記で調製された完全保護のリュープロレリンペプチド樹脂２１．８１ｇ（−２０℃で３０分間予備冷却）を１３０ｍｌのマグネート付き丸底フラスコに入れ、予備冷却したライセートを取って均一に振った後にフラスコに入れ、３０分間をかけて開裂温度を３０℃に上昇させ、３０±２℃に維持するとともに２．５時間撹拌し、サンドコアフィルタで濾過し、少量の切り出し液で樹脂を洗浄した。合せた濾液を冷たいメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（−２０℃で２時間予備予冷）９００ｍｌにゆっくり導入し、導入過程においてメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルが一定の速度で撹拌されるように保ち、白色沈殿を生じさせ、ブフナーロートで濾過し、冷たいメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルでケーキを３回洗浄し、真空乾燥してリュープロレリンのトリフルオロ酢酸塩粗ペプチド５．８７ｇ（粗ペプチド収率：９２．６％、）を得た。粗ペプチド収率は、出発樹脂中に含まれる５ｍｍｏｌの有効な反応サイトである−ＮＨ２に対して計算される。そして、粗ペプチド収率は、理論的に得られる標的生成物の重量を出発のモル数よって計算して、さらに実際に最終的に得られる重量に粗品の純度を乗じ、さらに理論重量で除算してなるものである。なお、以下の収率は同じ方法で計算される。粗品純度は９５．４４％である。
【０２０２】
リュープロレリンのトリフルオロ酢酸塩粗ペプチドの精製
上記で調製されたリュープロレリンのトリフルオロ酢酸塩粗ペプチドを５％のアセトニトリル水溶液で溶解し、その溶液を０．４５μｍの精密濾過膜で濾過して、使用に供する。
【０２０３】
逆相マトグラフィー精製による精製の条件は以下の通りである。カラムは、粒径が１０μｍで孔径が３００ÅのＣ１８結合シリカゲルを固定相とする。移動相は、０．１％ＴＦＡ／水溶液（移動相Ａ）及び０．１％ＴＦＡ／アセトニトリル溶液（移動相Ｂ）である。
【０２０４】
【表２】
2021527715.tif 000074
検測のために純度＞９７％のサンプルを採取し、０．５％酢酸／水溶液（移動相Ｃ）及び０．５％酢酸／アセトニトリル溶液（移動相Ｄ）で精製した。ラン勾配が以下の通りである。
【０２０５】
【表３】
2021527715.tif 000075
本形態によれば、酢酸リュープロレリンのアセトニトリル／水溶液が得られ、ロータリーエバポレーターによる蒸留及び凍結を経て、酢酸リュープロレリンの製品２．４６ｇを得た。出発樹脂中に含まれる５ｍｍｏｌの有効な反応サイトである−ＮＨ２に対して計算された合計収率が４０．６％であり、ＥＰ８．０（欧州薬局方８．０）の検出方法により検出された純度が９９．８１％であり、単一雑質がいずれも０．１５％未満である。ＭＷ：１２０９．４，ＥＳＩ−ＭＳ，Ｐｏｓ  ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１２１０．５。
【０２０６】
以上のように、酢酸リュープロレリンの合成方法については、ＣＮ１０１１９５６５３Ｂに開示の合計収率が１６．５％、純度が９８％であり、その粗品純度については言及されていない。黄体形成ホルモン放出ホルモンを高速液体クロマトグラフィーで分離精製する研究（陳小芬）に開示の粗品純度が５３％であり、精製後の純度が８５％であり、精製収率が７６％であり、精製後に純度が低くなり、合計収率を計算できない。ＣＮ１０１５９９７３２５Ｂに開示の精製収率が７１％であり、純度が９８．５％より大きく、粗品純度及び収率については言及されておらず、合計収率を計算できない。ＣＮ１０２４６４７０２Ｂに開示の粗品収率が１５％〜２５％であり、精製収率が９５％であり、合計収率が１４％〜２４％であり、純度が９９．５％である。本発明の酢酸リュープロレリンは、ＴＦＡ系（移動相Ａ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ、Ｂ：０．１％ＴＦＡ／アセトニトリル。勾配は、２０分間内、２５％Ａ＋７５％Ｂから３５％Ａ＋６５％Ｂに移行する。流速：１ｍＬ／ｍｉｎ）によって検出されたところ、精製収率が６５％であり、粗品純度が９９．３％であり、最大単一雑質が１〜０．２７％であった。
実施例９  酢酸リュープロレリンの調製
リュープロレリンの完全保護ペプチド樹脂の調製
ＡＭ樹脂（９．４１ｇ、５ｍｍｏｌの有効な反応サイトである−ＮＨ２を含み、置換度０．５３ｍｍｏｌ／ｇ）を秤量してジャケット付きガラス反応器に加え、１００ｍｌＤＣＭを加えて２時間膨潤させ、さらに吸引濾過するとともに、体積分率が５％のＤＩＥＡ／ＤＣＭ溶液で２回洗浄し、ＤＭＦで２回洗浄した。実施例３における化合物Ａ−３（３．６７ｇ、１０ｍｍｏｌ）、ＨｏＢｔ（１．３５ｇ、１０ｍｍｏｌ）を加え、さらに適量ＤＭＦで溶解させた後、ＤＩＣ（１．５８ｍｌ、１０ｍｍｏｌ）を加え、循環水温が３０℃のジャケット反応器に２．５時間反応させ。反応の終点は、ニンヒドリン検出液とクロラニル検出液によってそれぞれ確認された。２つの検出液による検出では、いずれも陰性を示すと、反応が完了したことを意味する。反応が完了になると、Ｂｏｃ保護基を脱離した。Ｂｏｃ脱保護は、まず脱保護液Ｂを約４０ｍＬ加えてから脱保護液Ａを約４０ｍＬ加えて３０分間脱保護することで行われる。ここで、脱保護液Ａ：１０ｍｏｌ％２、６−ジメチルピリジン／ＤＣＭ（２．５％２、６−ジメチルピリジン／ＤＣＭ（ｖ／ｖ））、脱保護液Ｂ：１０ｍｏｌ％ＴＢＳＯＴｆ／ＤＣＭ（５％ＴＢＳＯＴｆ／ＤＣＭ（ｖ／ｖ））。Ｂｏｃを脱離した後、保護基で保護されたアミノ酸をＳＰＰＳ法によて順次カップリングした。順次カップリングしたアミノ酸は、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ＤＬｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｈ−Ｇｌｐ−ＯＨである。
【０２０７】
各アミノ酸のカップリングにはカップリング剤としてＨｏＢｔ＋ＤＩＣが用いられ、ポリペプチド樹脂における有効な反応サイトとカップリングすべきアミノ酸とカップリング剤のモル仕込み比が１：３：３となった。毎回、カップリングすべきアミノ酸を氷水浴中で１５分間程度予め活性化する必要がある。即ち、カップリングすべきアミノ酸にカップリング剤を加えて反応させ、その後連結を行う。
【０２０８】
Ｆｍｏｃ基脱離は、体積分率が２０％のピペリジン／ＤＭＦ溶液を使用して３０分間脱保護することで行われる。
【０２０９】
調製されたリュープロレリンの完全保護ペプチド樹脂は、以下の通りである。
【０２１０】
【化６９】
2021527715.tif 000076
乾燥後、リュープロレリンの完全保護ペプチド樹脂１９．２６ｇを得た。
【０２１１】
リュープロレリンのトリフルオロ酢酸塩粗ペプチドの調製
ライセートが１５０ｍｌ調製される。当該ライセートにトリフルオロ酢酸１３５ｍｌ、ＥＤＴ（１、２−エタンジチオール）７．５ｍｌ、純水７．５ｍｌを含む。均一に振った後に−２０℃で３０分間冷却して、用意された。
【０２１２】
上記で調製された完全保護のリュープロレリンペプチド樹脂１９．２６ｇ（−２０℃で３０分間予備冷却）をマグネート付き丸底フラスコに入れ、予備冷却したライセートを取って均一に振った後に１３５ｍｌを量ってフラスコに入れ、３０分間をかけて開裂温度を３０℃に上昇させ、３０±２℃に維持するとともに２．５時間撹拌し、サンドコアフィルタで濾過し、少量の切り出し液で樹脂を洗浄した。合せた濾液を冷たいメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（−２０℃で２時間予備予冷）８１０ｍｌにゆっくり導入し、導入過程においてメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルが一定の速度で撹拌されるように保ち、白色沈殿を生じさせ、ブフナーロートで濾過し、冷たいメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルでケーキを３回洗浄し、真空乾燥してリュープロレリンのトリフルオロ酢酸塩粗ペプチド５．４６ｇ（粗ペプチド収率：８５．６％、）を得た。粗ペプチド収率は、出発樹脂中に含まれる５ｍｍｏｌの有効な反応サイトである−ＮＨ２に対して計算される。粗品純度は９４．８４％である。
【０２１３】
リュープロレリンのトリフルオロ酢酸塩粗ペプチドの精製
上記で調製されたリュープロレリンのトリフルオロ酢酸塩粗ペプチドを５％のアセトニトリル水溶液で溶解し、その溶液を０．４５μｍの精密濾過膜で濾過して、使用に供する。
【０２１４】
粗品の逆相マトグラフィー精製による精製の条件は以下の通りである。カラムは、粒径が１０μｍで孔径が３００ÅのＣ１８結合シリカゲルを固定相とする。移動相は、０．１％ＴＦＡ／水溶液（移動相Ａ）及び０．１％ＴＦＡ／アセトニトリル溶液（移動相Ｂ）である。
【０２１５】
【表４】
2021527715.tif 000077
検測のために純度＞９７％のサンプルを採取し、０．５％酢酸／水溶液（移動相Ｃ）及び０．５％酢酸／アセトニトリル溶液（移動相Ｄ）で精製した。ラン勾配が以下の通りである。
【０２１６】
【表５】
2021527715.tif 000078
本形態によれば、酢酸リュープロレリンのアセトニトリル／水溶液が得られ、ロータリーエバポレーターによる蒸留及び凍結を経て、酢酸リュープロレリンの製品２．０２ｇを得た。出発樹脂中に含まれる５ｍｍｏｌの有効な反応サイトである−ＮＨ２に対して計算された合計収率が３３．４％であり、ＥＰ８．０（欧州薬局方８．０）の検出方法により検出された純度が９９．６７％であり、単一雑質がいずれも０．１５％未満である。ＭＷ：１２０９．４１、ＥＳＩ−ＭＳ、Ｐｏｓ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１２１０．５。
【０２１７】
実施例１０  酢酸リュープロレリンの調製
リュープロレリンの完全保護ペプチド樹脂の調製
ＡＭ樹脂（９．４１ｇ、５ｍｍｏｌの有効な反応サイトである−ＮＨ２を含み、置換度０．５３ｍｍｏｌ／ｇ）を秤量してジャケット付きガラス反応器に加え、１００ｍｌＤＣＭを加えて２時間膨潤させ、さらに吸引濾過するとともに、体積分率が５％のＤＩＥＡ／ＤＣＭ溶液で２回洗浄し、ＤＭＦで２回洗浄した。実施例４で調製した以下のような化合物４．７６ｇ（１０ｍｍｏｌ）及びＨｏＢｔ（１．３５ｇ、１０ｍｍｏｌ）を加えて、
【０２１８】
【化７０】
2021527715.tif 000079
さらに適量ＤＭＦで溶解させた後、ＤＩＣ（１．５８ｍｌ、１０ｍｍｏｌ）を加え、循環水温が３０℃のジャケット反応器に２．５時間反応させ。反応の終点は、ニンヒドリン検出液とクロラニル検出液によってそれぞれ確認された。２つの検出液による検出では、いずれも陰性を示すと、反応が完了したことを意味する。反応が完了した後に、Ｆｍｏｃ保護基を脱離した。Ｆｍｏｃ基の脱離は、体積分率が２０％のピペリジン／ＤＭＦ溶液を用いて３０分間脱保護することで行われる。Ｆｍｏｃを脱離した後、保護基で保護されたアミノ酸をＳＰＰＳ法によて順次カップリングした。順次カップリングしたアミノ酸は、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ＤＬｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｈ−Ｇｌｐ−ＯＨである。
【０２１９】
各アミノ酸のカップリングにはカップリング剤としてＨｏＢｔ＋ＤＩＣが用いられ、ポリペプチド樹脂における有効な反応サイトとカップリングすべきアミノ酸とカップリング剤のモル仕込み比が１：３：３となった。毎回、カップリングすべきアミノ酸を氷水浴中で１５分間程度予め活性化する必要がある。即ち、カップリングすべきアミノ酸にカップリング剤を加えて反応させ、その後連結を行う。
【０２２０】
カップリングの過程において、Ｆｍｏｃ基脱離は、体積分率が２０％のピペリジン／ＤＭＦ溶液を使用して３０分間脱保護することで行われる。
【０２２１】
調製されたリュープロレリンの完全保護ペプチド樹脂は、以下の通りである。
【０２２２】
【化７１】
2021527715.tif 000080
乾燥後、リュープロレリンの完全保護ペプチド樹脂２０．９５ｇを得た。
【０２２３】
リュープロレリンのトリフルオロ酢酸塩粗ペプチドの調製
ライセートが１５０ｍｌ調製される。当該ライセートにトリフルオロ酢酸１３５ｍｌ、ＥＤＴ（１、２−エタンジチオール）７．５ｍｌ、純水７．５ｍｌを含む。均一に振った後に−２０℃で３０分間冷却して、用意された。
【０２２４】
上記で調製された完全保護のリュープロレリンペプチド樹脂２０．９５ｇ（−２０℃で３０分間予備冷却）をマグネート付き丸底フラスコに入れ、予備冷却したライセートを取って均一に振った後にフラスコに入れ、３０分間をかけて開裂温度を３０℃に上昇させ、３０±２℃に維持するとともに２．５時間撹拌し、サンドコアフィルタで濾過し、少量の切り出し液で樹脂を洗浄した。合せた濾液を冷たいメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（−２０℃で２時間予備予冷）９００ｍｌにゆっくり導入し、導入過程においてメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルが一定の速度で撹拌されるように保ち、白色沈殿を生じさせ、ブフナーロートで濾過し、冷たいメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルでケーキを３回洗浄し、真空乾燥してリュープロレリンのトリフルオロ酢酸塩粗ペプチド５．７１ｇ（粗ペプチド収率：９０．５％、）を得た。粗ペプチド収率は、出発樹脂中に含まれる５ｍｍｏｌの有効な反応サイトである−ＮＨ２に対して計算される。粗品純度は９５．７９％である。
【０２２５】
リュープロレリンのトリフルオロ酢酸塩粗ペプチドの精製
上記で調製されたリュープロレリンのトリフルオロ酢酸塩粗ペプチドを５％のアセトニトリル水溶液で溶解し、その溶液を０．４５μｍの精密濾過膜で濾過して、使用に供する。
【０２２６】
逆相クロマトグラフィー精製による精製の条件は以下の通りである。カラムは、粒径が１０μｍで孔径が３００ÅのＣ１８結合シリカゲルを固定相とする。移動相は、０．１％ＴＦＡ／水溶液（移動相Ａ）及び０．１％ＴＦＡ／アセトニトリル溶液（移動相Ｂ）である。
【０２２７】
【表６】
2021527715.tif 000081
検測のために純度＞９７％のサンプルを採取し、０．５％酢酸／水溶液（移動相Ｃ）及び０．５％酢酸／アセトニトリル溶液（移動相Ｄ）で精製した。ラン勾配が以下の通りである。
【０２２８】
【表７】
2021527715.tif 000082
本形態によれば、酢酸リュープロレリンのアセトニトリル／水溶液が得られ、ロータリーエバポレーターによる蒸留及び凍結を経て、酢酸リュープロレリンの製品２．３５ｇを得た。出発樹脂中に含まれる５ｍｍｏｌの有効な反応サイトである−ＮＨ２に対して計算された合計収率が３８．８％であり、ＥＰ８．０（欧州薬局方８．０）の検出方法により検出された純度が９９．７９％であり、単一雑質がいずれも０．１５％未満である。ＭＷ：１２０９．４１、ＥＳＩ−ＭＳ、Ｐｏｓ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１２１０．４。
実施例１１  酢酸アラレリンの調製
本実施例では、アラレリンが以下のルートで合成される。
【０２２９】
【化７２】
2021527715.tif 000083
アラレリンの完全保護ペプチド樹脂の調製
ＣＴＣ樹脂（３０ｇ、３６ｍｍｏｌの有効な反応サイトである３級炭素Ｃｌを含み、置換度１．２ｍｍｏｌ／ｇ）及び式（ｖｉｉｉ）で表される化合物（１４．５ｇ、３６ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を秤量してジャケット付きガラス反応器に加え、３００ｍｌのＤＣＭを加えて、窒素バブリングして、ＤＩＥＡ（２５ｍｌ、１４４ｍｍｏｌ、４ｅｑ）を加えた。循環水温が３０℃のジャケット反応器に２．５時間反応させ、メタノールで３０分間末端封止した後、ＤＭＦ×３、ＭｅＯＨ×３で３回洗浄し、真空引きして樹脂を得た。測定された置換度は０．３５ｍｍｏｌ／ｇである。
【０２３０】
上記で得られた式（ｖｉｉｉ）で表される化合物が連結した樹脂（１４．２８ｇ、５ｍｍｏｌの有効な反応サイトであるＮ−Ｆｍｏｃを含み、置換度が０．３５ｍｍｏｌ／ｇ）をジャケット付ガラス反応器に添加し、ＤＭＦ１５０ｍｌを加えて１２０分間膨潤させ、２０％ピペリジン溶液で３０分間脱保護して、Ｆｍｏｃ基を脱離した。Ｆｍｏｃを脱離した後に、保護基で保護されたアミノ酸をＳＰＰＳ法によって順次カップリングした。順次カップリングしたアミノ酸は、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ＤＡｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ，Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｈ−Ｇｌｐ−ＯＨである。
【０２３１】
各アミノ酸のカップリングにはカップリング剤としてＨｏＢｔ＋ＤＩＣが用いられ、ポリペプチド樹脂における有効な反応サイトとカップリングされるアミノ酸とカップリング剤のモル仕込み比が１：３：３となった。毎回、カップリングされた反応液を氷水浴中で１５分間程度予め活性化して連結を行う必要がある。カップリングの過程において、Ｆｍｏｃ基の脱離は、体積分率が２０％のピペリジン溶液を使用して３０分間脱保護することで行われる。
【０２３２】
調製されたアラレリンの完全保護ペプチド樹脂は、以下の通りである。
【０２３３】
【化７３】
2021527715.tif 000084
乾燥後、アラレリンの完全保護ペプチド樹脂９０．３ｇを得た。
【０２３４】
アラレリンのトリフルオロ酢酸塩粗ペプチドの調製
ライセートが２００ｍｌ調製される。当該ライセートにトリフルオロ酢酸１８０ｍｌ、ＥＤＴ（１、２−エタンジチオール）１０ｍｌ、純水１０ｍｌを含む。均一に振った後に−２０℃で３０分間冷却して、用意された。
【０２３５】
上記で調製された完全保護のアラレリンペプチド樹脂３０．１ｇ（−２０℃で３０分間予備冷却）を秤量しマグネート付き丸底フラスコに入れ、予備冷却したライセートを取って均一に振った後に１８０ｍｌを量ってフラスコに入れ、３０分間をかけて開裂温度を３０℃に上昇させ、３０±２℃に維持するとともに２．５時間撹拌し、サンドコアフィルタで濾過し、少量の切り出し液で樹脂を洗浄した。合せた濾液を冷たいメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（−２０℃で２時間予備予冷）１０００ｍｌにゆっくり導入し、導入過程においてメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルが一定の速度で撹拌されるように保ち、白色沈殿を生じさせ、ブフナーロートで濾過し、冷たいメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルでケーキを３回洗浄し、真空乾燥してアラレリンのトリフルオロ酢酸塩粗ペプチド１０．７８ｇ（粗品収率：８８．４％）を得た。粗品収率は、式（ｖｉｉｉ）で表される化合物が連結した樹脂に含まれる５ｍｍｏｌの有効な反応サイトであるＮ−Ｆｍｏｃに対して計算される。上記ＥＰ（８．０）の検出方法により検出された粗品純度は９６．１４％である。
【０２３６】
アラレリンのトリフルオロ酢酸塩粗ペプチドの精製
上記で調製されたアラレリンのトリフルオロ酢酸塩粗ペプチドを５％のアセトニトリル水溶液で溶解し、その溶液を０．４５μｍの精密濾過膜で濾過して、使用に供する。
【０２３７】
逆相クロマトグラフィー精製による精製の条件は以下の通りである。カラムは、粒径が１０μｍで孔径が３００ÅのＣ１８結合シリカゲルを固定相とする。移動相は、０．１％ＴＦＡ／水溶液（移動相Ａ）及び０．１％ＴＦＡ／アセトニトリル溶液（移動相Ｂ）である。
【０２３８】
【表８】
2021527715.tif 000085
検測のために純度＞９７％のサンプルを採取し、０．５％酢酸／水溶液（移動相Ｃ）及び０．５％酢酸／アセトニトリル溶液（移動相Ｄ）で精製した。ラン勾配が以下の通りである。
【０２３９】
【表９】
2021527715.tif 000086
本形態によれば、酢酸アラレリンのアセトニトリル／水溶液が得られ、ロータリーエバポレーターによる蒸留及び凍結を経て、酢酸アラレリンの製品４．１６ｇを得た。式（ｖｉｉｉ）で表される化合物が連結した樹脂中に含まれる５ｍｍｏｌの有効な反応サイトであるＮ−Ｆｍｏｃに対して計算された合計収率が３５．５％であり、ＥＰ８．０（欧州薬局方８．０）の検出方法により検出された純度が９９．７６％であり、単一雑質がいずれも０．１５％未満である。ＭＷ：１１６７．３４、ＥＳＩ−ＭＳ、Ｐｏｓ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１１６８．４。
実施例１２  ＰＭＸ−５３の調製
本実施例では、ＰＭＸ−５３が以下のルートで合成される。
【０２４０】
【化７４】
2021527715.tif 000087
式（ｉｘ）−ＣＴＣ樹脂の調製
ＣＴＣ樹脂１０ｇ（有効な反応サイトである３級炭素Ｃｌを１０ｍｍｏｌ含み、置換度１．０ｍｍｏｌ／ｇ、１ｅｑ）を秤量し乾燥の２５０ｍＬのフラスコに入れて、式（ｉｘ）で表される化合物（１２．３６ｇ、１５ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）、無水ＤＣＭ  １００ｍＬを加えて、シェーカー上に１０分間振とうし、振とうするとともにＤＩＥＡ（７ｍＬ、４０ｍｍｏｌ、４ｅｑ）をゆっくり添加した。ＤＩＥＡの添加後、シェーカー上に室温で１２．５時間反応させた。さらに、ＭｅＯＨを１０ｍＬ加えて、シェーカー上に３０分間反応させ、混合液を中子反応器に移送し、ＤＭＦ及びＭｅＯＨでそれぞれ３回洗浄し、３０分間真空引きし、乾燥ボックスに移送して３０℃で１６時間真空乾燥して、式（ｉｘ）−ＣＴＣ樹脂１３．２ｇを得た。紫外分光光度計で測定した置換度は０．３６ｍｍｏｌ／ｇであった。
【０２４１】
ＰＭＸ−５３線状完全保護ペプチド樹脂の調製
ジャケット付ガラス反応器に式（ｉｘ）−ＣＴＣ樹脂（２．７８ｇ、１ｍｍｏｌの有効反応サイトであるＮ−Ｆｍｏｃを含み、置換度０．３６ｍｍｏｌ／ｇ）を加え、ＤＭＦ  ３０ｍＬを加えて６０分間膨潤させて、体積分率が２０％のピペリジン溶液でＦｍｏｃ保護脱離を３０分間行った。Ｆｍｏｃを脱離した後に、保護基で保護されたアミノ酸をＳＰＰＳ法によって順次カップリングした。順次カップリングしたアミノ酸は、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｃｈａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｏｒｎ（Ｄｄｅ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨである。その後、無水酢酸でアセチル化した。
【０２４２】
カップリングの過程において、Ｆｍｏｃ基の脱離は、体積分率が２０％のピペリジンＤＭＦ溶液を使用して３０分間脱保護することで行われる。
【０２４３】
各アミノ酸のカップリングにはカップリング剤としてＨｏＢｔ＋ＤＩＣが用いられ、ポリペプチド樹脂における有効な反応サイトとカップリングされるアミノ酸とカップリング剤のモル仕込み比が１：３：３となった。毎回、カップリング反応液を氷水浴中で１５分間程度予め活性化して連結を行う必要がある。調製されたＰＭＸ−５３の完全保護線形ペプチド樹脂は、以下の通りである。
【０２４４】
【化７５】
2021527715.tif 000088
乾燥後、アラレリン完全保護ペプチド樹脂３．７０ｇを得た。
【０２４５】
ＰＭＸ−５３環化ペプチドのペプチド樹脂の調製
Ａｌｌ保護基の脱離：上記線状ペプチド樹脂の全てを中子反応器に移し、ＤＭＦ４０ｍｌを加えて３０分間膨潤させて、ＤＣＭで２回洗浄した。そして、溶媒として３０ｍｌのＤＣＭを加え、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム０．１２ｇ（０．１ｍｍｏｌ、０．１ｅｑ）、フェニルシラン１．２ｍｌ（１０ｍｍｏｌ、１０ｅｑ）を加えて１５分間反応させた。この反応を３回繰り返した後、０．５％ＤＩＥＡ／ＤＭＦ及び０．５％ジエチルジチオカルバミン酸ナトリウム／ＤＭＦで５回洗浄した後、ＤＭＦで３回洗浄した。
【０２４６】
Ｄｄｅ保護基の脱離：２．５％のヒドラジン水和物／ＤＭＦ溶液３０ｍｌを上記反応器に加え、１時間反応させた後、ＤＭＦで５回洗浄した。
【０２４７】
ＰＭＸ−５３環化完全保護ペプチドのペプチド樹脂の調製
ＤＭＦ２５ｍｌを上記反応器に入れ、ＰｙＢｏｐ  １．５６ｇ（３ｍｍｏｌ、３  ｅｑ）、ＤＩＥＡ  １．０５ｍｌ（６ｍｍｏｌ、６ｅｑ）を加え、室温で６０分間反応させた後、少量の樹脂を取って洗浄した後にニンヒドリン検出を行ったところ、陰性とした。ＤＭＦ、ＭｅＯＨでそれぞれ３回洗浄した後、真空引きし、環化完全保護ペプチドのペプチド樹脂３．３４ｇを得た。
【０２４８】
ＰＭＸ−５３のトリフルオロ酢酸塩粗ペプチドの調製
ライセートが３００ｍｌ調製される。当該ライセートにトリフルオロ酢酸２７ｍｌ、ＥＤＴ（１、２−エタンジチオール）１．５ｍｌ、純水１．５ｍｌを含む。均一に振った後に−２０℃で３０分間冷却して、用意された。
【０２４９】
調製された環化完全保護ペプチドのペプチド樹脂３．３４ｇ（−２０℃で３０分間予備冷却）を５０ｍｌの遠心管に入れ、予備冷却したライセートを取って均一に振った後に２４ｍｌを量って遠心管に入れ、室温でシェーカーで３時間振動させて、サンドコアフィルタで濾過し、少量の切り出し液で樹脂を洗浄した。合せた濾液を冷たいメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（−２０℃で２時間予備予冷）１８０ｍｌにゆっくり導入し、導入過程においてメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルが一定の速度で撹拌されるように保ち、白色沈殿を生じさせ、上清を遠心分離機で遠心分離し、冷たいメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで沈殿を３回洗浄し、真空乾燥してＰＭＸ−５３のトリフルオロ酢酸塩粗ペプチド０．７８ｇ（粗品収率：８７．３％）を得た。粗品収率は、式（ｉｘ）で表される化合物が連結した樹脂に含まれる１ｍｍｏｌの有効な反応サイトであるＮ−Ｆｍｏｃに対して計算される。粗品純度は８５．２４％である。
【０２５０】
ＰＭＸ−５３のトリフルオロ酢酸塩粗ペプチドの精製
上記で調製されたＰＭＸ−５３のトリフルオロ酢酸塩粗ペプチドを５％のアセトニトリル水溶液で溶解し、その溶液を０．４５μｍの精密濾過膜で濾過して、使用に供する。
【０２５１】
逆相クロマトグラフィー精製による精製条件は以下の通りである。カラムは、粒径が１０μｍで孔径が３００ÅのＣ１８結合シリカゲルを固定相とする。移動相は、０．１％ＴＦＡ／水溶液（移動相Ａ）及び０．１％ＴＦＡ／アセトニトリル溶液（移動相Ｂ）である。
【０２５２】
【表１０】
2021527715.tif 000089
本形態によれば、ＰＭＸ−５３のトリフルオロ酢酸塩のアセトニトリル／水溶液が得られ、凍結を経て、ＰＭＸ−５３の製品０．４２ｇを得た。式（ｉｘ）で表される化合物を連結した樹脂に含まれる１ｍｍｏｌの有効な反応サイトであるＮ−Ｆｍｏｃに対して計算された合計収率が４６．４％である。ＥＰ８．０（欧州薬局方８．０）の検出方法により検出された純度が９９．１２％であり、単一雑質がいずれも０．２％未満である。ＭＷ＝８９６．０９、ＥＳＩ、Ｎｅｇ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝８９７．２。
【０２５３】
実施例１３  酢酸リラグルチドの調製
リラグルチドの完全保護ペプチド樹脂の調製
ＡＭ樹脂（１．６９ｇ、１ｍｍｏｌの有効な反応サイトである−ＮＨ２を含み、置換度０．５９ｍｍｏｌ／ｇ）を秤量してジャケット付きガラス反応器に加え、２０ｍｌＤＣＭを加えて２時間膨潤させ、さらに吸引濾過するとともに、５％ＤＩＥＡ／ＤＣＭ溶液で２回洗浄し、ＤＭＦで２回洗浄した。式（ｘ）で表される化合物（１．１５ｇ、２ｍｍｏｌ）、ＨｏＢｔ（０．２７ｇ、２ｍｍｏｌ）を加え、さらに適量ＤＭＦで溶解させた後、ＤＩＣ（０．３１５ｍｌ、１０ｍｍｏｌ）を加えた。循環水温が３０℃のジャケット反応器に２．５時間反応させ。反応の終点は、ニンヒドリン検出液とクロラニル検出液によってそれぞれ確認された。２つの検出液による検出では、いずれも陰性を示すと、反応が完了したことを意味する。反応が完了した後に、２０％ピペリジンＤＭＦ溶液を用いてＦｍｏｃ保護脱離を３０分間行った。Ｆｍｏｃを脱離した後、保護基で保護されたアミノ酸をＳＰＰＳ法によて順次カップリングした。順次カップリングしたアミノ酸は、ｍｏｃ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｎ−ε−（Ｐａｌｍ−Ｇｌｕ−Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ＨｍｂＧｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨである。
【０２５４】
各アミノ酸のカップリングにはカップリング剤としてＨｏＢｔ＋ＤＩＣが用いられ、ポリペプチド樹脂における有効な反応サイトとカップリングされるアミノ酸とカップリング剤のモル仕込み比が１：３：３となった。毎回、カップリング反応液を氷水浴中で１５分間程度予め活性化して連結を行う必要がある。
【０２５５】
カップリングの過程において、Ｆｍｏｃ基脱離は、２０％のピペリジンＤＭＦ溶液を使用して３０分間脱保護することで行われる。
【０２５６】
上記反応により、リラグルチドの完全保護ペプチドのペプチド樹脂が得られた。
【０２５７】
【化７６】
2021527715.tif 000090
乾燥後、リラグルチドの完全保護ペプチド樹脂９．１２ｇを得た。
【０２５８】
リラグルチドのトリフルオロ酢酸塩粗ペプチドの調製
ライセートの調製：ライセートが１００ｍｌ調製される。当該ライセートにトリフルオロ酢酸９０ｍｌ、ＥＤＴ（１、２−エタンジチオール）５ｍｌ、純水５ｍｌを含む。均一に振った後に−２０℃で３０分間冷却して、用意された。
【０２５９】
上記で調製された完全保護のリラグルチドペプチド樹脂９．１２ｇ（−２０℃で３０分間予備冷却）を２５０ｍｌのマグネート付き丸底フラスコに入れ、予備冷却したライセートを取って均一に振った後にフラスコに入れ、３０分間をかけて開裂温度を３０℃に上昇させ、３０±２℃に維持するとともに２．５時間撹拌し、サンドコアフィルタで濾過し、少量のトリフルオロ酢酸で樹脂を洗浄した。合せた濾液を冷たいメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（−２０℃で２時間予備予冷）６００ｍｌにゆっくり導入し、導入過程においてメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルが一定の速度で撹拌されるように保ち、白色沈殿を生じさせ、ブフナーロートで濾過し、冷たいメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルでケーキを３回洗浄し、真空乾燥してリラグルチドのトリフルオロ酢酸塩粗ペプチド３．７２ｇ（粗ペプチド収率：６６．９％、）を得た。粗ペプチド収率は、出発ＡＭ樹脂中に含まれる１ｍｍｏｌの有効な反応サイトである−ＮＨ２に対して計算される。粗品純度は６７．４５％である。
【０２６０】
リラグルチドのトリフルオロ酢酸塩粗ペプチドの精製
上記で調製されたリラグルチドのトリフルオロ酢酸塩粗ペプチドを５％のアセトニトリル水溶液で溶解し、その溶液を０．４５μｍの精密濾過膜で濾過して、使用に供する。
【０２６１】
逆相クロマトグラフィー精製による精製の条件は以下の通りである。カラムは、粒径が７μｍで孔径が３００ÅのＣ８結合シリカゲルを固定相とする。移動相は、０．１％ＴＦＡ／水溶液（移動相Ａ）及び０．１％ＴＦＡ／アセトニトリル溶液（移動相Ｂ）である。
【０２６２】
【表１１】
2021527715.tif 000091
検測のために純度＞９７％のサンプルを採取し、０．５％酢酸／水溶液（移動相Ｃ）及び０．５％酢酸／アセトニトリル溶液（移動相Ｄ）で精製した。ラン勾配が以下の通りである。
【０２６３】
【表１２】
2021527715.tif 000092
本態様によれば、酢酸リラグルチドのアセトニトリル／水溶液が得られ、ロータリーエバポレーターによる蒸留及び凍結を経て、リラグルチド酢酸塩の製品０．６８ｇを得た。出発Ａｍ樹脂中に含まれる１ｍｍｏｌの有効な反応サイトである−ＮＨ２に対して計算された合計収率が１８．１％である。ＥＰ８．０（欧州薬局方８．０）の検出方法により検出された純度が９９．２１％であり、単一雑質がいずれも０．１５％未満である。ＭＷ：３７５１．２０、ＭＯＤＩ−ＴＯＦ、［Ｍ＋Ｈ］＋＝３７５２．４
なお、以上の実施例は、本発明の実施過程及び特点のみを説明するためのものであり、本発明の技術案を限定するものではない。上記実施例を参照して本発明を詳細に説明してきたが、本発明を修正や均等置換することは当業者には理解されるところである。そして、本発明の要旨や範囲から逸脱することなく行われる本発明の修正や一部の置換も、本願特許請求の範囲に包含されることは明らかである。
【国際調査報告】
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