(57)【要約】本発明は、Ｔ細胞上の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの発現を検出するための改善された方法を提供する。本発明は、概して、抗体およびその抗原結合断片、そのコンジュゲート、ならびにそれらを使用してＣＡＲ＋  Ｔ細胞および／または１つもしくは複数のＴ細胞上のＣＡＲの発現を検出、決定、または測定する方法を提供する。様々な実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、抗ＢＣＭＡキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を結合する１つまたは複数のＣＤＲを含む。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗ＢＣＭＡキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を結合する１つまたは複数のＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２】
前記１つまたは複数のＣＤＲが、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖドメインを結合する、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３】
３つの軽鎖ＣＤＲが、前記抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖドメインを結合する、請求項１または請求項２に記載の抗体。
【請求項４】
３つの重鎖ＣＤＲが、前記抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖドメインを結合する、請求項１から３のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項５】
３つの軽鎖ＣＤＲおよび３つの重鎖ＣＤＲが、前記抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖドメインを結合する、請求項１から４のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項６】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号２５に記載の抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖ配列の１つまたは複数のエピトープを結合する、請求項１から５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項７】
前記抗体またはその抗原結合断片がヒト型である、請求項１から６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項８】
前記抗体またはその抗原結合断片がヒト化型である、請求項１から６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項９】
前記抗体またはその抗原結合断片がマウス型である、請求項１から６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１０】
前記抗体またはその抗原結合断片がキメラ型である、請求項１から６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１１】
前記抗体またはその抗原結合断片がモノクローナルである、請求項１から１０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１２】
前記抗体またはその抗原結合断片が抗原結合断片である、請求項１から１１のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１３】
前記抗体またはその抗原結合断片が、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、二重特異性Ｆａｂ二量体（Ｆａｂ２）、三重特異性Ｆａｂ三量体（Ｆａｂ３）、Ｆｖ、単鎖Ｆｖタンパク質（「ｓｃＦｖ」）、ビスｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（「ｄｓＦｖ」）、および単ドメイン抗体（ｓｄＡｂ、ナノボディ）からなる群から選択される、請求項１から１２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１４】
前記抗体またはその抗原結合断片がｓｃＦｖである、請求項１から１３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１５】
配列番号１〜３に記載のＣＤＲＬ１〜ＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖と、配列番号４〜６に記載のＣＤＲＨ１〜ＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖とを含む、抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１６】
配列番号７に記載の可変軽鎖配列を含む、請求項１５に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１７】
配列番号８に記載の可変重鎖配列を含む、請求項１５または請求項１６に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１８】
配列番号７に記載の可変軽鎖配列と、配列番号８に記載の可変重鎖配列とを含む、請求項１５から１７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１９】
配列番号９〜１１に記載のＣＤＲＬ１〜ＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖と、配列番号１２〜１４に記載のＣＤＲＨ１〜ＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖とを含む、抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２０】
配列番号１５に記載の可変軽鎖配列を含む、請求項１９に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２１】
配列番号１６に記載の可変重鎖配列を含む、請求項１９または請求項２０に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２２】
配列番号１５に記載の可変軽鎖配列と、配列番号１６に記載の可変重鎖配列とを含む、請求項１９から２１のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２３】
配列番号１７〜１９に記載のＣＤＲＬ１〜ＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖と、配列番号２０〜２２に記載のＣＤＲＨ１〜ＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖とを含む、抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２４】
配列番号２３に記載の可変軽鎖配列を含む、請求項２３に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２５】
配列番号２４に記載の可変重鎖配列を含む、請求項２３または請求項２４に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２６】
配列番号２３に記載の可変軽鎖配列と、配列番号２４に記載の可変重鎖配列とを含む、請求項２３から２５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２７】
前記抗体またはその抗原結合断片がヒト型である、請求項１５から２６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２８】
前記抗体またはその抗原結合断片がヒト化型である、請求項１５から２６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２９】
前記抗体またはその抗原結合断片がマウス型である、請求項１５から２６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３０】
前記抗体またはその抗原結合断片がキメラ型である、請求項１５から２６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３１】
前記抗体またはその抗原結合断片がモノクローナルである、請求項１５から２６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３２】
前記抗体またはその抗原結合断片が抗原結合断片である、請求項１５から２６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３３】
前記抗体またはその抗原結合断片が、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、二重特異性Ｆａｂ二量体（Ｆａｂ２）、三重特異性Ｆａｂ三量体（Ｆａｂ３）、Ｆｖ、単鎖Ｆｖタンパク質（「ｓｃＦｖ」）、ビスｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（「ｄｓＦｖ」）、および単ドメイン抗体（ｓｄＡｂ、ナノボディ）からなる群から選択される、請求項１５から２６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３４】
前記抗体またはその抗原結合断片がｓｃＦｖである、請求項１５から２６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３５】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号２５に記載の抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖ配列の１つまたは複数のエピトープを結合する、請求項１５から３４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３６】
前記抗体またはその抗原結合断片または請求項１から３５のいずれか１項と検出のための手段とを含むコンジュゲート。
【請求項３７】
前記抗体またはその抗原結合断片または請求項１から３５のいずれか１項と検出手段とを含むコンジュゲート。
【請求項３８】
前記抗体またはその抗原結合断片または請求項１から３５のいずれか１項と検出可能な標識とを含むコンジュゲート。
【請求項３９】
前記検出可能な標識が、ハプテン、蛍光色素、蛍光タンパク質、発色団、金属イオン、金粒子、銀粒子、磁性粒子、ポリペプチド、酵素、発光化合物、またはオリゴヌクレオチドからなる群から選択される、請求項３８に記載のコンジュゲート。
【請求項４０】
前記検出可能な標識が、Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ（登録商標）、Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｂｌｕｅ（商標）、Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｏｒａｎｇｅ（商標）、Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｇｒｅｅｎ（商標）、Ｃａｓｃａｄｅ  Ｂｌｕｅ（商標）、Ｃａｓｃａｄｅ  Ｙｅｌｌｏｗ（商標）、Ｌｕｃｉｆｅｒ  Ｙｅｌｌｏｗ（商標）、Ｍａｒｉｎａ  Ｂｌｕｅ（商標）、およびＴｅｘａｓ  Ｒｅｄ（登録商標）（ＴｘＲｅｄ）からなる群から選択される蛍光色素である、請求項３８または請求項３９に記載のコンジュゲート。
【請求項４１】
前記検出可能な標識が、ＡＦ３５０、ＡＦ４０５、ＡＦ４８８、ＡＦ５００、ＡＦ５１４、ＡＦ５３２、ＡＦ５４６、ＡＦ５５５、ＡＦ５６８、ＡＦ５９４、ＡＦ６１０、ＡＦ６３３、ＡＦ６３５、ＡＦ６４７、ＡＦ６８０、ＡＦ７００、ＡＦ７１０、ＡＦ７５０、ＡＦ７９０、およびＡＦ８００からなる群から選択されるＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）（ＡＦ）色素である、請求項３８または請求項３９に記載のコンジュゲート。
【請求項４２】
前記検出可能な標識が、Ｑｄｏｔ（登録商標）５２５、Ｑｄｏｔ（登録商標）５６５、Ｑｄｏｔ（登録商標）５８５、Ｑｄｏｔ（登録商標）６０５、Ｑｄｏｔ（登録商標）６５５、Ｑｄｏｔ（登録商標）７０５、およびＱｄｏｔ（登録商標）８００からなる群から選択されるＱＤｏｔ（登録商標）である、請求項３８または請求項３９に記載のコンジュゲート。
【請求項４３】
前記検出可能な標識が、ＤＬ５４９、ＤＬ６４９、ＤＬ６８０、およびＤＬ８００からなる群から選択されるＤｙＬｉｇｈｔ（商標）Ｄｙｅ（ＤＬ）である、請求項３８または請求項３９に記載のコンジュゲート。
【請求項４４】
前記検出可能な標識が、フルオレセインまたはその誘導体、フルオレセインイソチオシアネート、カルボキシフルオレセイン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ジゴキシゲニン、ジニトロフェノール（ＤＮＰ）、トリニトロフェノール（ＴＮＰ）、およびビオチンからなる群から選択されるハプテンである、請求項３８または請求項３９に記載のコンジュゲート。
【請求項４５】
前記検出可能な標識が、Ｃｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、およびＣｙ７．５からなる群から選択されるＣｙ  Ｄｙｅである、請求項３８または請求項３９に記載のコンジュゲート。
【請求項４６】
前記検出可能な標識が、フィコエリスリン（ＰＥ、Ｒ−フィコエリスリン（ＲＰＥ））、Ｂ−フィコエリスリン（ＢＰＥ）、ペリジニンクロロフィル（ＰｅｒＣＰ）、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）、およびＣ−フィコシアニンからなる群から選択される蛍光分子である、請求項３８または請求項３９に記載のコンジュゲート。
【請求項４７】
前記検出可能な標識が、Ａｔｔｏ  ３９０、Ａｔｔｏ  ４２５、Ａｔｔｏ  ４６５、Ａｔｔｏ  ４８８、Ａｔｔｏ  ４９５、Ａｔｔｏ  ５１４、Ａｔｔｏ  ５２０、Ａｔｔｏ  ５３２、Ａｔｔｏ  ５５０、Ａｔｔｏ  ５６５、Ａｔｔｏ  ５９０、Ａｔｔｏ  ５９４、Ａｔｔｏ  ６１０、Ａｔｔｏ  ６２０、Ａｔｔｏ  ６３３、Ａｔｔｏ  ６４７、Ａｔｔｏ  ６５５、Ａｔｔｏ  ６６５、Ａｔｔｏ  ６８０、Ａｔｔｏ  ７００、Ａｔｔｏ  ７２５、Ａｔｔｏ  ７４０、Ｓｕｐｅｒ  Ｂｒｉｇｈｔ（商標）４３６、Ｓｕｐｅｒ  Ｂｒｉｇｈｔ（商標）６００、Ｓｕｐｅｒ  Ｂｒｉｇｈｔ（商標）６４５、Ｓｕｐｅｒ  Ｂｒｉｇｈｔ（商標）７０２、Ｓｕｐｅｒ  Ｂｒｉｇｈｔ（商標）７８０、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ  ４２１、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ  ４８０、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ  ５１０、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ  ６０５、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｖｉｏｌｅｔ（商標）６５０、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｖｉｏｌｅｔ（商標）７１１、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｖｉｏｌｅｔ（商標）７８６、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ  ３９５  （ＢＵＶ３９５）、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ  ４９６（ＢＵＶ４９６）、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ  ５６３（ＢＵＶ５６３）、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ  ６６１（ＢＵＶ６６１）、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ  ７３７  （ＢＵＶ７３７）、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ  ８０５  （ＢＵＶ８０５）、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｂｌｕｅ  ５１５  （ＢＢ５１５）、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｂｌｕｅ  ７００  （ＢＢ７００）、およびＩＲ  Ｄｙｅ  ６８０、ＩＲ  Ｄｙｅ  ６８０ＬＴ、ＩＲ  Ｄｙｅ  ７００、ＩＲ  Ｄｙｅ  ７００ＤＸ、ＩＲ  Ｄｙｅ  ８００、ＩＲ  Ｄｙｅ  ８００ＲＳ、およびＩＲ  Ｄｙｅ  ８００ＣＷからなる群から選択される蛍光色素である、請求項３８または請求項３９に記載のコンジュゲート。
【請求項４８】
前記検出可能な標識が、ＲＰＥ−Ｃｙ５、ＲＰＥ−Ｃｙ５．５、ＲＰＥ−Ｃｙ７、ＲＰＥ−ＣＦ５９４、ＲＰＥ−ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）タンデムコンジュゲート；ＲＰＥ−Ａｌｅｘａ６１０、ＲＰＥ−ＴｘＲｅｄ、ＡＰＣ−Ｈ７、ＡＰＣ−Ｒ７００、ＡＰＣ−Ａｌｅｘａ６００、ＡＰＣ−Ａｌｅｘａ６１０、ＡＰＣ−Ａｌｅｘａ７５０、ＡＰＣ−Ｃｙ５、ＡＰＣ−Ｃｙ５．５、およびＡＰＣ−Ｃｙ７からなる群から選択されるタンデム蛍光色素である、請求項３８または請求項３９に記載のコンジュゲート。
【請求項４９】
前記検出可能な標識が、ＧＦＰ、ｅＧＦＰ、ＢＦＰ、ＣＦＰ、ＹＦＰ、ＤｓＲｅｄ、ＤｓＲｅｄ２、ｍＲＦＰ、ｍＢａｎａｎａ、ｍＯｒａｎｇｅ、ｄＴｏｍａｔｏ、ｔｄＴｏｍａｔｏ、ｍＴａｎｇｅｒｉｎｅ、ｍＳｔｒａｗｂｅｒｒｙ、ｍＣｈｅｒｒｙ、ｍＰｌｕｍ、およびｍＲａｓｐｂｅｒｒｙからなる群から選択される蛍光タンパク質である、請求項３８または請求項３９に記載のコンジュゲート。
【請求項５０】
前記検出可能な標識が、アルカリホスファターゼ、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、およびβ−ガラクトシダーゼからなる群から選択される酵素である、請求項３８または請求項３９に記載のコンジュゲート。
【請求項５１】
前記検出可能な標識が、炭素（１４Ｃ）、クロム（５１Ｃｒ）、コバルト（５７Ｃｏ）、フッ素（１８Ｆ）、ガドリニウム（１５３Ｇｄ、１５９Ｇｄ）、ゲルマニウム（６８Ｇｅ）、ホルミウム（１６６Ｈｏ）、インジウム（１１５Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１１２Ｉｎ、ｍＩｎ）、ヨウ素（１２５Ｉ、１２３Ｉ、１２１Ｉ）、ランタン（１４０Ｌａ）、ルテチウム（１７７Ｌｕ）、マンガン（５４Ｍｎ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、リン（３２Ｐ）、プラセオジム（１４２Ｐｒ）、プロメチウム（１４９Ｐｍ）、レニウム（１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ）、ロジウム（１０５Ｒｈ）、ルテニウム（rutheroium）（９７Ｒｕ）、サマリウム（１５３Ｓｍ）、スカンジウム（４７Ｓｃ）、セレン（７５Ｓｅ）、（８５Ｓｒ）、硫黄（３５Ｓ）、テクネチウム（９９Ｔｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、スズ（１１３Ｓｎ、１１７Ｓｎ）、トリチウム（３Ｈ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、イッテルビウム（１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ）、およびイットリウム（９０Ｙ）からなる群から選択される放射性核種である、請求項３８または請求項３９に記載のコンジュゲート。
【請求項５２】
請求項１から３５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチド。
【請求項５３】
請求項１から３５のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または請求項５２に記載のポリヌクレオチドを含む宿主細胞。
【請求項５４】
請求項１から３５のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、請求項３６から５１のいずれか１項に記載のコンジュゲート、請求項５２に記載のポリヌクレオチド、または請求項５３に記載の宿主細胞を含む組成物。
【請求項５５】
請求項１から３５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片を宿主細胞で発現することと、前記抗体を回収または単離することとを含む、抗体またはその抗原結合断片を生産する方法。
【請求項５６】
請求項１から３５のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または請求項３６から５１のいずれか１項に記載のコンジュゲートと、使用のための指示書とを含むキット。
【請求項５７】
請求項１から３５のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または請求項３６から５１のいずれか１項に記載のコンジュゲートにＴ細胞を接触させること；ならびに抗体：抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ複合体の形成を検出することを含む、Ｔ細胞上の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの発現を検出する方法。
【請求項５８】
請求項１から３５のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または請求項３６から５１のいずれか１項に記載のコンジュゲートにＴ細胞集団を接触させること；ならびに前記１つまたは複数のＴ細胞上の抗体：抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ複合体の形成を検出することを含む、Ｔ細胞集団での抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの発現を検出する方法。
【請求項５９】
請求項１から３５のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または請求項３６から５１のいずれか１項に記載のコンジュゲートにＴ細胞を接触させること；抗体：抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ複合体の形成を検出すること；ならびに前記複合体の量を測定して前記Ｔ細胞上の前記抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの発現を決定することを含む、Ｔ細胞上の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの発現を決定する方法。
【請求項６０】
請求項１から３５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片または請求項３６から５１のいずれか１項に記載のコンジュゲートにＴ細胞集団を接触させること；１つまたは複数のＴ細胞上の抗体：抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ複合体の形成を検出すること；ならびに前記複合体の量を測定して前記１つまたは複数のＴ細胞上の前記抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの発現を決定することを含む、Ｔ細胞集団での抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの発現を決定する方法。
【請求項６１】
請求項１から３５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片または請求項３６から５１のいずれか１項に記載のコンジュゲートにＴ細胞集団を接触させること；１つまたは複数のＴ細胞上の抗体：抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ複合体の形成を検出すること；ならびに前記抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを発現するＴ細胞を計数することを含む、Ｔ細胞集団中の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ＋Ｔ細胞の数を決定する方法。
【請求項６２】
免疫組織化学的検査、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、免疫吸着アッセイ、化学発光アッセイ、電気化学発光アッセイ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）ベースバイオセンサー（例えばＢＩＡｃｏｒｅ）、蛍光顕微鏡観察、またはフローサイトメトリー、蛍光活性化細胞分取法（ＦＡＣＳ）を使用して、抗体：抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ複合体の形成を検出する、請求項５７から６１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６３】
免疫組織化学的検査、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、免疫吸着アッセイ、化学発光アッセイ、電気化学発光アッセイ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）ベースバイオセンサー（例えばＢＩＡｃｏｒｅ）、蛍光顕微鏡観察、またはフローサイトメトリー、蛍光活性化細胞分取法（ＦＡＣＳ）を使用して、抗体：抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ複合体の量を測定する、請求項５９または請求項６０に記載の方法。
【請求項６４】
免疫組織化学的検査、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、免疫吸着アッセイ、化学発光アッセイ、電気化学発光アッセイ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）ベースバイオセンサー（例えばＢＩＡｃｏｒｅ）、蛍光顕微鏡観察、またはフローサイトメトリー、蛍光活性化細胞分取法（ＦＡＣＳ）を使用して、前記抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを発現するＴ細胞を計数する、請求項６１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願との相互参照
本願は、本明細書にその全体を参照により組み込まれる２０１８年６月１４日出願の米国仮特許出願第６２／６８５，０４３号の、米国特許法第１１９条（ｅ）下の優先権を請求するものである。
【０００２】
配列表に関する陳述
本願に関連する配列表は、紙出力に代えてテキストフォーマットにて提供され、ここに参照により本明細書に組み込まれる。配列表を含むテキストファイルの名称は、ＢＬＢＤ＿０９９＿０１ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ．である。このテキストファイルは、１９ＫＢであり、２０１９年６月１４日に作成され、明細書の提出と共にＥＦＳ−Ｗｅｂを介して電子提出されている。
【０００３】
本発明は抗体組成物に関する。さらに具体的には、本発明は抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲに結合する抗体および抗原結合断片、ならびにそのコンジュゲート、ならびにそれらを用いて抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞を検出する方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
遺伝的なアプローチは、免疫認識とがん細胞の排除とを亢進するための可能性のある手段をもたらす。有望なストラテジーの１つは、細胞毒性を腫瘍細胞に向け直すキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するための免疫エフェクター細胞を遺伝子工学的に作出することである。しかし、１つまたは複数の養子導入ＣＡＲ  Ｔ細胞上のＣＡＲの発現と、ＣＡＲ  Ｔ細胞活性を測定する試みを攪乱するｉｎ  ｖｉｖｏでのＣＡＲ  Ｔ細胞の持続性とを、正確に測定することは難しい。ＣＡＲ  Ｔ細胞を評価するための最もよくあるアプローチは、ＣＡＲ特異的プライマーを用いる定量的ＰＣＲである。しかし、この手法は不適当であり、ＣＡＲ  Ｔ細胞の多重パラメーター解析を可能にするものではない。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、概して、抗体およびその抗原結合断片、そのコンジュゲート、ならびにそれらを使用してＣＡＲ＋  Ｔ細胞および／または１つもしくは複数のＴ細胞上のＣＡＲの発現を検出、決定、または測定する方法を提供する。
【０００６】
様々な実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、抗ＢＣＭＡキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を結合する１つまたは複数のＣＤＲを含む。
【０００７】
具体的な実施形態では、１つまたは複数のＣＤＲは、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖドメインを結合する。
【０００８】
一部の実施形態では、３つの軽鎖ＣＤＲは、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖドメインを結合する。
【０００９】
特定の実施形態では、３つの重鎖ＣＤＲは、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖドメインを結合する。
【００１０】
具体的な実施形態では、３つの軽鎖ＣＤＲおよび３つの重鎖ＣＤＲは、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖドメインを結合する。
【００１１】
特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２５に記載の抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖ配列の１つまたは複数のエピトープを結合する。
【００１２】
具体的な実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、ヒト型である。
【００１３】
一部の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、ヒト化型である。
【００１４】
特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、マウス型である。
【００１５】
具体的な実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、キメラ型である。
【００１６】
特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナルである。
【００１７】
特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、抗原結合断片である。
【００１８】
具体的な実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、二重特異性Ｆａｂ二量体（Ｆａｂ２）、三重特異性Ｆａｂ三量体（Ｆａｂ３）、Ｆｖ、単鎖Ｆｖタンパク質（「ｓｃＦｖ」）、ビスｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（「ｄｓＦｖ」）、および単ドメイン抗体（ｓｄＡｂ、ナノボディ）からなる群から選択される。
【００１９】
一部の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、ｓｃＦｖである。
【００２０】
様々な実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１〜３に記載のＣＤＲＬ１〜ＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖と、配列番号４〜６に記載のＣＤＲＨ１〜ＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖とを含む。
【００２１】
さらに別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７に記載の可変軽鎖配列を含む。
【００２２】
具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８に記載の可変重鎖配列を含む。
【００２３】
追加の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７に記載の可変軽鎖配列と、配列番号８に記載の可変重鎖配列とを含む。
【００２４】
様々な実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号９〜１１に記載のＣＤＲＬ１〜ＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖と、配列番号１２〜１４に記載のＣＤＲＨ１〜ＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖とを含む。
【００２５】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１５に記載の可変軽鎖配列を含む。
【００２６】
具体的実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１６に記載の可変重鎖配列を含む。
【００２７】
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１５に記載の可変軽鎖配列と、配列番号１６に記載の可変重鎖配列とを含む。
【００２８】
様々な実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１７〜１９に記載のＣＤＲＬ１〜ＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖と、配列番号２０〜２２に記載のＣＤＲＨ１〜ＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖とを含む。
【００２９】
具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２３に記載の可変軽鎖配列を含む。
【００３０】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２４に記載の可変重鎖配列を含む。
【００３１】
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２３に記載の可変軽鎖配列と、配列番号２４に記載の可変重鎖配列とを含む。
【００３２】
具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ヒト型である。
【００３３】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ヒト化型である。
【００３４】
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、マウス型である。
【００３５】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、キメラ型である。
【００３６】
具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナルである。
【００３７】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、抗原結合断片である。
【００３８】
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、二重特異性Ｆａｂ二量体（Ｆａｂ２）、三重特異性Ｆａｂ三量体（Ｆａｂ３）、Ｆｖ、単鎖Ｆｖタンパク質（「ｓｃＦｖ」）、ビスｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（「ｄｓＦｖ」）、および単ドメイン抗体（ｓｄＡｂ、ナノボディ）からなる群から選択される。
【００３９】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ｓｃＦｖである。
【００４０】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２５に記載の抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖ配列の１つまたは複数のエピトープを結合する。
【００４１】
様々な実施形態では、コンジュゲートは、本明細書で想定される抗体またはその抗原結合断片と検出のための手段とを含む。
【００４２】
様々な実施形態では、コンジュゲートは、本明細書で想定される抗体またはその抗原結合断片と検出手段とを含む。
【００４３】
様々な実施形態では、コンジュゲートは、本明細書で想定される抗体またはその抗原結合断片と検出可能な標識とを含む。
【００４４】
一部の実施形態では、検出可能な標識は、ハプテン、蛍光色素、蛍光タンパク質、発色団、金属イオン、金粒子、銀粒子、磁性粒子、ポリペプチド、酵素、発光化合物、またはオリゴヌクレオチドからなる群から選択される。
【００４５】
具体的な実施形態では、検出可能な標識は、Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ（登録商標）、Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｂｌｕｅ（商標）、Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｏｒａｎｇｅ（商標）、Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｇｒｅｅｎ（商標）、Ｃａｓｃａｄｅ  Ｂｌｕｅ（商標）、Ｃａｓｃａｄｅ  Ｙｅｌｌｏｗ（商標）、Ｌｕｃｉｆｅｒ  Ｙｅｌｌｏｗ（商標）、Ｍａｒｉｎａ  Ｂｌｕｅ（商標）、およびＴｅｘａｓ  Ｒｅｄ（登録商標）（ＴｘＲｅｄ）からなる群から選択される蛍光色素である。
【００４６】
特定の実施形態では、検出可能な標識は、ＡＦ３５０、ＡＦ４０５、ＡＦ４８８、ＡＦ５００、ＡＦ５１４、ＡＦ５３２、ＡＦ５４６、ＡＦ５５５、ＡＦ５６８、ＡＦ５９４、ＡＦ６１０、ＡＦ６３３、ＡＦ６３５、ＡＦ６４７、ＡＦ６８０、ＡＦ７００、ＡＦ７１０、ＡＦ７５０、ＡＦ７９０、およびＡＦ８００からなる群から選択されるＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）（ＡＦ）色素である。
【００４７】
一部の実施形態では、検出可能な標識は、Ｑｄｏｔ（登録商標）５２５、Ｑｄｏｔ（登録商標）５６５、Ｑｄｏｔ（登録商標）５８５、Ｑｄｏｔ（登録商標）６０５、Ｑｄｏｔ（登録商標）６５５、Ｑｄｏｔ（登録商標）７０５、およびＱｄｏｔ（登録商標）８００からなる群から選択されるＱＤｏｔ（登録商標）である。
【００４８】
具体的な実施形態では、検出可能な標識は、ＤＬ５４９、ＤＬ６４９、ＤＬ６８０、およびＤＬ８００からなる群から選択されるＤｙＬｉｇｈｔ（商標）Ｄｙｅ（ＤＬ）である。
【００４９】
特定の実施形態では、検出可能な標識は、フルオレセインまたはその誘導体、フルオレセインイソチオシアネート、カルボキシフルオレセイン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ジゴキシゲニン、ジニトロフェノール（ＤＮＰ）、トリニトロフェノール（ＴＮＰ）、およびビオチンからなる群から選択されるハプテンである。
【００５０】
具体的な実施形態では、検出可能な標識は、Ｃｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、およびＣｙ７．５からなる群から選択されるＣｙ  Ｄｙｅである。
【００５１】
一部の実施形態では、検出可能な標識は、フィコエリスリン（ＰＥ、Ｒ−フィコエリスリン（ＲＰＥ））、Ｂ−フィコエリスリン（ＢＰＥ）、ペリジニンクロロフィル（ＰｅｒＣＰ）、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）、およびＣ−フィコシアニンからなる群から選択される蛍光分子である。
【００５２】
具体的な実施形態では、検出可能な標識は、Ａｔｔｏ  ３９０、Ａｔｔｏ  ４２５、Ａｔｔｏ  ４６５、Ａｔｔｏ  ４８８、Ａｔｔｏ  ４９５、Ａｔｔｏ  ５１４、Ａｔｔｏ  ５２０、Ａｔｔｏ  ５３２、Ａｔｔｏ  ５５０、Ａｔｔｏ  ５６５、Ａｔｔｏ  ５９０、Ａｔｔｏ  ５９４、Ａｔｔｏ  ６１０、Ａｔｔｏ  ６２０、Ａｔｔｏ  ６３３、Ａｔｔｏ  ６４７、Ａｔｔｏ  ６５５、Ａｔｔｏ  ６６５、Ａｔｔｏ  ６８０、Ａｔｔｏ  ７００、Ａｔｔｏ  ７２５、Ａｔｔｏ  ７４０、Ｓｕｐｅｒ  Ｂｒｉｇｈｔ（商標）４３６、Ｓｕｐｅｒ  Ｂｒｉｇｈｔ（商標）６００、Ｓｕｐｅｒ  Ｂｒｉｇｈｔ（商標）６４５、Ｓｕｐｅｒ  Ｂｒｉｇｈｔ（商標）７０２、Ｓｕｐｅｒ  Ｂｒｉｇｈｔ（商標）７８０、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ  ４２１、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ  ４８０、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ  ５１０、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ  ６０５、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｖｉｏｌｅｔ（商標）６５０、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｖｉｏｌｅｔ（商標）７１１、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｖｉｏｌｅｔ（商標）７８６、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ  ３９５  （ＢＵＶ３９５）、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ  ４９６（ＢＵＶ４９６）、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ  ５６３（ＢＵＶ５６３）、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ  ６６１（ＢＵＶ６６１）、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ  ７３７  （ＢＵＶ７３７）、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ  ８０５  （ＢＵＶ８０５）、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｂｌｕｅ  ５１５（ＢＢ５１５）、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｂｌｕｅ  ７００（ＢＢ７００）、およびＩＲ  Ｄｙｅ  ６８０、ＩＲ  Ｄｙｅ  ６８０ＬＴ、ＩＲ  Ｄｙｅ  ７００、ＩＲ  Ｄｙｅ  ７００ＤＸ、ＩＲ  Ｄｙｅ  ８００、ＩＲ  Ｄｙｅ  ８００ＲＳ、およびＩＲ  Ｄｙｅ  ８００ＣＷからなる群から選択される蛍光色素である。
【００５３】
特定の実施形態では、検出可能な標識は、ＲＰＥ−Ｃｙ５、ＲＰＥ−Ｃｙ５．５、ＲＰＥ−Ｃｙ７、ＲＰＥ−ＣＦ５９４、ＲＰＥ−ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）タンデムコンジュゲート；ＲＰＥ−Ａｌｅｘａ６１０、ＲＰＥ−ＴｘＲｅｄ、ＡＰＣ−Ｈ７、ＡＰＣ−Ｒ７００、ＡＰＣ−Ａｌｅｘａ６００、ＡＰＣ−Ａｌｅｘａ６１０、ＡＰＣ−Ａｌｅｘａ７５０、ＡＰＣ−Ｃｙ５、ＡＰＣ−Ｃｙ５．５、およびＡＰＣ−Ｃｙ７からなる群から選択されるタンデム蛍光色素である。
【００５４】
特定の実施形態では、検出可能な標識は、ＧＦＰ、ｅＧＦＰ、ＢＦＰ、ＣＦＰ、ＹＦＰ、ＤｓＲｅｄ、ＤｓＲｅｄ２、ｍＲＦＰ、ｍＢａｎａｎａ、ｍＯｒａｎｇｅ、ｄＴｏｍａｔｏ、ｔｄＴｏｍａｔｏ、ｍＴａｎｇｅｒｉｎｅ、ｍＳｔｒａｗｂｅｒｒｙ、ｍＣｈｅｒｒｙ、ｍＰｌｕｍ、およびｍＲａｓｐｂｅｒｒｙからなる群から選択される蛍光タンパク質である。
【００５５】
具体的な実施形態では、検出可能な標識は、アルカリホスファターゼ、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、およびβ−ガラクトシダーゼからなる群から選択される酵素である。
【００５６】
特定の実施形態では、検出可能な標識は、炭素（１４Ｃ）、クロム（５１Ｃｒ）、コバルト（５７Ｃｏ）、フッ素（１８Ｆ）、ガドリニウム（１５３Ｇｄ、１５９Ｇｄ）、ゲルマニウム（６８Ｇｅ）、ホルミウム（１６６Ｈｏ）、インジウム（１１５Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１１２Ｉｎ、ｍＩｎ）、ヨウ素（１２５Ｉ、１２３Ｉ、１２１Ｉ）、ランタン（１４０Ｌａ）、ルテチウム（１７７Ｌｕ）、マンガン（５４Ｍｎ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、リン（３２Ｐ）、プラセオジム（１４２Ｐｒ）、プロメチウム（１４９Ｐｍ）、レニウム（１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ）、ロジウム（１０５Ｒｈ）、ルテニウム（rutheroium）（９７Ｒｕ）、サマリウム（１５３Ｓｍ）、スカンジウム（４７Ｓｃ）、セレン（７５Ｓｅ）、（８５Ｓｒ）、硫黄（３５Ｓ）、テクネチウム（９９Ｔｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、スズ（１１３Ｓｎ、１１７Ｓｎ）、トリチウム（３Ｈ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、イッテルビウム（１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ）、およびイットリウム（９０Ｙ）からなる群から選択される放射性核種である。
【００５７】
様々な実施形態では、ポリヌクレオチドは、想定される抗体またはその抗原結合断片をコードする。
【００５８】
特定の実施形態では、宿主細胞は、本明細書で想定される抗体もしくはその抗原結合断片またはポリヌクレオチドを含む。
【００５９】
一部の実施形態では、組成物は、本明細書で想定される抗体もしくはその抗原結合断片、コンジュゲート、ポリヌクレオチド、または宿主細胞を含む。
【００６０】
様々な実施形態では、抗体またはその抗原結合断片を生産する方法は、本明細書で想定される抗体またはその抗原結合断片を宿主細胞で発現することと、抗体を回収または単離することとを含む。
【００６１】
特定の実施形態では、キットは、本明細書で想定される抗体もしくはその抗原結合断片またはコンジュゲートと、使用のための指示書とを含む。
【００６２】
具体的な実施形態では、Ｔ細胞上の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの発現を検出する方法は、本明細書で想定される抗体もしくはその抗原結合断片またはコンジュゲートにＴ細胞を接触させること、ならびに抗体：抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ複合体の形成を検出することを含む。
【００６３】
様々な実施形態では、Ｔ細胞集団での抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの発現を検出する方法は、本明細書で想定される抗体もしくはその抗原結合断片またはコンジュゲートにＴ細胞集団を接触させること、ならびに１つまたは複数のＴ細胞上の抗体：抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ複合体の形成を検出することを含む。
【００６４】
特定の実施形態では、Ｔ細胞上の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの発現を決定する方法は、本明細書で想定される抗体もしくはその抗原結合断片またはコンジュゲートにＴ細胞を接触させること、抗体：抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ複合体の形成を検出すること、ならびに複合体の量を測定してＴ細胞上の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの発現を決定することを含む。
【００６５】
具体的な実施形態では、Ｔ細胞集団での抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの発現を決定する方法は、本明細書で想定される抗体もしくはその抗原結合断片またはコンジュゲートにＴ細胞集団を接触させること、１つまたは複数のＴ細胞上の抗体：抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ複合体の形成を検出すること、ならびに複合体の量を測定して１つまたは複数のＴ細胞上の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの発現を決定することを含む。
【００６６】
様々な実施形態では、Ｔ細胞集団中の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ＋Ｔ細胞の数を決定する方法は、本明細書で想定される抗体もしくはその抗原結合断片  コンジュゲートにＴ細胞集団を接触させること、１つまたは複数のＴ細胞上の抗体：抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ複合体の形成を検出すること、ならびに抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを発現するＴ細胞を計数することを含む。
【００６７】
一部の実施形態では、免疫組織化学的検査、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、免疫吸着アッセイ、化学発光アッセイ、電気化学発光アッセイ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）ベースバイオセンサー（例えばＢＩＡｃｏｒｅ）、蛍光顕微鏡観察、またはフローサイトメトリー、蛍光活性化細胞分取法（ＦＡＣＳ）を使用して、抗体：抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ複合体の形成を検出する。
【００６８】
特定の実施形態では、免疫組織化学的検査、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、免疫吸着アッセイ、化学発光アッセイ、電気化学発光アッセイ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）ベースバイオセンサー（例えばＢＩＡｃｏｒｅ）、蛍光顕微鏡観察、またはフローサイトメトリー、蛍光活性化細胞分取法（ＦＡＣＳ）を使用して、抗体：抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ複合体の量を測定する。
【００６９】
具体的な実施形態では、免疫組織化学的検査、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、免疫吸着アッセイ、化学発光アッセイ、電気化学発光アッセイ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）ベースバイオセンサー（例えばＢＩＡｃｏｒｅ）、蛍光顕微鏡観察、またはフローサイトメトリー、蛍光活性化細胞分取法（ＦＡＣＳ）を使用して、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを発現するＴ細胞を計数する。
【図面の簡単な説明】
【００７０】
【図１】図１は、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（配列番号２５）を含むＴ細胞集団に結合する抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ抗体の代表的なＦＡＣＳプロットを示す。
【発明を実施するための形態】
【００７１】
配列識別子の簡単な説明
配列番号１〜３は、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを結合する抗体の例示的な軽鎖ＣＤＲ配列のアミノ酸配列を記載する。
配列番号４〜６は、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを結合する抗体の例示的な重鎖ＣＤＲ配列のアミノ酸配列を記載する。
配列番号７は、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを結合する抗体の例示的な軽鎖配列のアミノ酸配列を記載する。
配列番号８は、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを結合する抗体の例示的な重鎖配列のアミノ酸配列を記載する。
配列番号９〜１１は、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを結合する抗体の例示的な軽鎖ＣＤＲ配列のアミノ酸配列を記載する。
配列番号１２〜１４は、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを結合する抗体の例示的な重鎖ＣＤＲ配列のアミノ酸配列を記載する。
配列番号１５は、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを結合する抗体の例示的な軽鎖配列のアミノ酸配列を記載する。
配列番号１６は、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを結合する抗体の例示的な重鎖配列のアミノ酸配列を記載する。
配列番号１７〜１９は、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを結合する抗体の例示的な軽鎖ＣＤＲ配列のアミノ酸配列を記載する。
配列番号２０〜２２は、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを結合する抗体の例示的な重鎖ＣＤＲ配列のアミノ酸配列を記載する。
配列番号２３は、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを結合する抗体の例示的な軽鎖配列のアミノ酸配列を記載する。
配列番号２４は、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを結合する抗体の例示的な重鎖配列のアミノ酸配列を記載する。
配列番号２５は、配列番号１〜２４に記載の配列を含む抗体の結合する抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲのアミノ酸配列を記載する。
配列番号２６〜３６は、様々なリンカーのアミノ酸配列を記載する。
【００７２】
Ａ．概要
本発明は、概して、抗ＢＣＭＡキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を結合する抗体および抗原結合断片、ならびにそのコンジュゲート、組成物、ならびにそれらを使用する方法に関する。特に好適な実施形態では、本発明は、配列番号２５に記載の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを結合する抗体、断片、およびコンジュゲート、その組成物および使用に関する。
【００７３】
ＢＣＭＡは、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーのメンバーである（例えば、Thompson  et  al.,  J.  Exp.  Medicine,  192(1):  129-135,  2000、およびMackay  et  al.,  Annu.  Rev.  Immunol,  21:  231-264,  2003を参照。ＢＣＭＡは、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）および増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）を結合する（例えば、Mackay  et  al.,  2003およびKalled  et  al.,  Immunological  Reviews,  204:  43-54,  2005）。非悪性細胞の中でも、ＢＣＭＡは、主として形質細胞と成熟Ｂ細胞のサブセットとにおいて発現することが報告されている（例えば、Laabi  et  al.,  EMBO  J.,  77(1):  3897-3904,  1992；Laabi  et  al.,  Nucleic  Acids  Res.,  22(7):  1147-1154,,  1994；Kalled  et  al.,  2005;  O'Connor  et  al.,  J.  Exp.  Medicine,  199(1):  91-97,  2004；およびNg  et  al.,  J.  Immunol.,  73(2):  807-817,  2004を参照。ＢＣＭＡを欠損したマウスは、健康であり、正常な数のＢ細胞を有するが、長期持続性の形質細胞の生存が損なわれている（例えば、O'Connor  et  al.,  2004；Xu  et  al.,  Mol.  Cell.  Biol,  21(12):  4067-4074,  2001；およびSchiemann  et  al.,  Science,  293(5537):  2  111-21  14,  2001を参照）。複数の研究者により、ＢＣＭＡ  ＲＮＡは、多発性骨髄腫細胞の至る所におよび他のリンパ腫に検出されており、ＢＣＭＡタンパク質は、多発性骨髄腫患者由来の形質細胞の表面に検出されている（例えば、Novak  et  al.,  Blood,  103(2):  689-694,  2004；Neri  et  al.,  Clinical  Cancer  Research,  73(19):  5903-5909,  2007；Bellucci  et  al.,  Blood,  105(10):  3945-3950,  2005；およびMoreaux  et  al.,  Blood,  703(8):  3148-3157,  2004を参照。
【００７４】
抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲは、多発性骨髄腫またはＢ細胞リンパ腫に罹った対象に対し、治癒性であり１回限りとなる可能性のある療法をもたらす。抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの発現と活性とを相関させるために使用される既存の方法は、最適なものではなく改善を要する。既存の方法を使用して、ｅｘ  ｖｉｖｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏの両方で抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの発現と活性とを精密に相関させること、ならびに患者内での抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞の生存および持続性を追跡することは難しい。抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを結合する本明細書で想定される抗体、断片、およびコンジュゲート、組成物および関連の使用方法は、これらの問題および他の問題に対する解決策を提供する。
【００７５】
様々な実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体またはその一部を結合する抗体またはその抗原結合断片が提供される。具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、１つまたは複数の検出可能な標識をさらに含むことがある。
【００７６】
抗体およびその抗原結合断片、そのコンジュゲート、ならびに関連する組成物を使用する方法もまた、本明細書に開示される。
【００７７】
組換えの（すなわち工学的に作出された）ＤＮＡ、ペプチド、およびオリゴヌクレオチドの合成、免疫アッセイ、組織培養、形質転換（例えばエレクトロポレーション、リポフェクション）、酵素反応、精製のための手法、ならびに関連する手法および手順は、一般に、本願明細書を通じて引用および議論される微生物学、分子生物学、生化学、分子遺伝学、細胞生物学、ウイルス学、および免疫学の様々な一般的およびより具体的な参考文献に記載されるように実施されうる。例えば、Sambrook  et  al.,  Molecular  Cloning:  A  Laboratory  Manual,  3d  ed.,  Cold  Spring  Harbor  Laboratory  Press,  Cold  Spring  Harbor,  N.Y.；Current  Protocols  in  Molecular  Biology  (John  Wiley  and  Sons、2008年7月にアップデート)；Short  Protocols  in  Molecular  Biology:  A  Compendium  of  Methods  from  Current  Protocols  in  Molecular  Biology,  Greene  Pub.  Associates  and  Wiley-Interscience；Glover,  DNA  Cloning:  A  Practical  Approach,  vol.  I  &  II  (IRL  Press,  Oxford  Univ.  Press  USA,  1985)；Current  Protocols  in  Immunology  (Edited  by:  John  E.  Coligan,  Ada  M.  Kruisbeek,  David  H.  Margulies,  Ethan  M.  Shevach,  Warren  Strober  2001  John  Wiley  &  Sons,  NY,  NY)；Real-Time  PCR:  Current  Technology  and  Applications,  Edited  by  Julie  Logan,  Kirstin  Edwards  and  Nick  Saunders,  2009,  Caister  Academic  Press,  Norfolk,  UK；Anand,  Techniques  for  the  Analysis  of  Complex  Genomes,  (Academic  Press,  New  York,  1992);  Guthrie  and  Fink,  Guide  to  Yeast  Genetics  and  Molecular  Biology  (Academic  Press,  New  York,  1991)；Oligonucleotide  Synthesis  (N.  Gait,  Ed.,  1984)；Nucleic  Acid  The  Hybridization  (B.  Hames  &  S.  Higgins,  Eds.,  1985)；Transcription  and  Translation  (B.  Hames  &  S.  Higgins,  Eds.,  1984);  Animal  Cell  Culture  (R.  Freshney,  Ed.,  1986)；Perbal,  A  Practical  Guide  to  Molecular  Cloning  (1984)；Next-Generation  Genome  Sequencing  (Janitz,  2008  Wiley-VCH)；PCR  Protocols  (Methods  in  Molecular  Biology)  (Park,  Ed.,  3rd  Edition,  2010  Humana  Press)；Immobilized  Cells  And  Enzymes  (IRL  Press,  1986);  the  treatise,  Methods  In  Enzymology  (Academic  Press,  Inc.,  N.Y.)；Gene  Transfer  Vectors  For  Mammalian  Cells  (J.  H.  Miller  and  M.  P.  Calos  eds.,  1987,  Cold  Spring  Harbor  Laboratory)；Harlow  and  Lane,  Antibodies,  (Cold  Spring  Harbor  Laboratory  Press,  Cold  Spring  Harbor,  N.Y.,  1998)；Immunochemical  Methods  In  Cell  And  Molecular  Biology  (Mayer  and  Walker,  eds.,  Academic  Press,  London,  1987)；Handbook  Of  Experimental  Immunology,  Volumes  I-IV  (D.  M.  Weir  andCC  Blackwell,  eds.,  1986)；Roitt,  Essential  Immunology,  6th  Edition,  (Blackwell  Scientific  Publications,  Oxford,  1988)；Current  Protocols  in  Immunology  (Q.  E.  Coligan,  A.  M.  Kruisbeek,  D.  H.  Margulies,  E.  M.  Shevach  and  W.  Strober,  eds.,  1991)；Annual  Review  of  Immunology；ならびにAdvances  in  Immunologyなどの刊行物内のモノグラフを参照されたい。
【００７８】
Ｂ．定義
本開示をさらに詳細に記載する前に、その理解には、本明細書に使用される特定の用語の定義を提供することが役立ちうる。
【００７９】
別段に定義のない限り、本明細書に使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明の属する分野の当業者により一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと同様のまたは等しい任意の方法および材料が、具体的な実施形態の実践または試験に使用できるとはいえ、組成物、方法、および材料の好適な実施形態が本明細書に記載される。本願開示を目的として、以下の用語を下記に定義する。追加的な定義は、本開示を通じて記載される。
【００８０】
冠詞「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、１つまたは１つを超える（すなわち、少なくとも１つ、または１つもしくは複数の）冠詞の文法的な対象を参照するために本明細書に使用される。例として、「ａｎ要素」は、１つの要素または１つもしくは複数の要素を意味する。
【００８１】
選択肢の使用（例えば「ｏｒ」）は、選択肢のうちどちらか一方、両方、またはそれらの任意の組合せを意味するものと理解される。
【００８２】
用語「および／または」は、選択肢のうちどちらか一方または両方を意味するものと理解されるべきである。
【００８３】
本明細書に使用される際に、用語「約」または「およそ」とは、参照とする数量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重量、または長さに対し１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、または１％ほど変わる数量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重量、または長さを指す。一実施形態では、用語「約」または「およそ」は、参照とする数量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重量、または長さの前後の数量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重量、または長さの±１５％、±１０％、±９％、±８％、±７％、±６％、±５％、±４％、±３％、±２％、または±１％の範囲を指す。
【００８４】
本明細書を通じて、コンテクストが別段に必要としない限り、「含む（comprise）」、「含む（comprises）」、および「含むこと（comprising）」とは、記述された工程もしくは要素または工程群もしくは要素群を包含するが、任意の他の工程もしくは要素または工程群もしくは要素群を除外することを含意するものと理解されるものとなる。「からなる」は、句「からなる」に続くあらゆるものを含むこと、およびそれに限定されることを意味する。そのため、句「からなる」とは、列挙された要素が必要とされているかまたは必須であり、他の要素が存在し得ないことを示す。「から実質的になる」は、その句の後に列挙された任意の要素を含むこと、および列挙された要素について本開示に指定された活性または作用に干渉または寄与しない他の要素に限定されることを意味する。そのため、句「から実質的になる」とは、列挙された要素が必要とされているかまたは必須であるが、列挙された要素の活性または作用に著しく影響を及ぼす他の要素が存在しないことを示す。
【００８５】
本明細書を通じた「一実施形態」、「実施形態」、「具体的な実施形態」、「関連の実施形態」、「特定の実施形態」、「追加的な実施形態」、もしくは「さらに別の実施形態」、またはそれらの組合せへの言及は、実施形態に関連して記載される具体的な特徴、構造、または特性が本発明の少なくとも１つの実施形態に含まれることを意味する。そのため、本明細書を通じた様々な場所における前述の句の出現は、必ずしもすべてが同じ実施形態を指すわけではない。さらに、上記具体的な特徴、構造、または特性は、１つまたは複数の実施形態において任意の適した様式で組み合わされうる。また、一実施形態における特徴の肯定的な記載が、具体的な一実施形態における特徴を除外するための根拠として役立つことも理解される。
【００８６】
Ｃ．抗体
具体的な実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを結合する抗体またはその抗原結合断片が提供される。
【００８７】
用語「抗体」とは、少なくとも軽鎖または重鎖の免疫グロブリン可変領域またはその断片を含むポリペプチドである結合作因を指し、この領域または断片は、免疫細胞によって認識されるものなどの抗原決定基を含有するペプチド、脂質、多糖、または核酸など、抗原の１つまたは複数のエピトープを特異的に認識し結合する。
【００８８】
「エピトープ」または「抗原決定基」とは、結合作因の結合する抗原の領域を指す。エピトープは、連続したアミノ酸とタンパク質の三次フォールディングにより並列する非連続のアミノ酸とのどちらからも形成することができる。連続したアミノ酸から形成されたエピトープは、典型的には変性溶媒に曝露されて保持されるのに対し、三次フォールディングにより形成されたエピトープは、典型的には変性溶媒による処理時に失われる。エピトープは、典型的には少なくとも３個、さらに通常は少なくとも５個、約９個、または特有の空間的立体構造では約８〜１０個のアミノ酸である。
【００８９】
「単離された抗体またはその抗原結合断片」とは、その自然環境の構成成分から特定ならびに分離および／または回収されている、抗体またはその抗原結合断片を指す。
【００９０】
本明細書に使用される際の用語「特異的結合親和性」または「特異的に結合する」または「特異的に結合した」または「特異的結合」または「特異的に標的とする」とは、バックグラウンド結合よりも大きな結合親和性で抗体またはその抗原結合断片が抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲに結合することを記載する。抗体またはその抗原結合断片は、例えば約１０５Ｍ−１以上の親和性またはＫａ（すなわち、単位１／Ｍを伴う具体的な結合相互作用の平衡会合定数）で抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲと結合または会合する場合に、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲと「特異的に結合する」。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、約１０６Ｍ−１、１０７Ｍ−１、１０８Ｍ−１、１０９Ｍ−１、１０１０Ｍ−１、１０１１Ｍ−１、１０１２Ｍ−１、または１０１３Ｍ−１以上のＫａで抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲと結合する。「高親和性」抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも１０７Ｍ−１、少なくとも１０８Ｍ−１、少なくとも１０９Ｍ−１、少なくとも１０１０Ｍ−１、少なくとも１０１１Ｍ−１、少なくとも１０１２Ｍ−１、少なくとも１０１３Ｍ−１、またはそれらを超えるＫａを有する。
【００９１】
あるいは、親和性は、単位Ｍを伴う（例えば、１０−５Ｍから１０−１３Ｍ、またはそれらを下回る）具体的な結合相互作用の平衡解離定数（Ｋｄ）として定義されうる。本明細書で想定される抗体またはその抗原結合断片の親和性は、従来の手法を使用して、例えば、競合ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）によって、または標識リガンドを用いた結合の会合または転置のアッセイによって、またはビアコア社、ピスカタウェイ、ニュージャージー州から入手可能なＢｉａｃｏｒｅ  Ｔ１００などの表面プラズモン共鳴装置、もしくはコーニングおよびパーキンエルマーからそれぞれ入手可能なＥＰＩＣシステムもしくはＥｎＳｐｉｒｅなどの光学バイオセンサー技術を使用するなどによって（例えば、Scatchard  et  al.  (1949)  Ann.  N.Y.  Acad.  Sci.  51:660；および米国特許第５，２８３，１７３号；第５，４６８，６１４号、またはその同等物も参照）、容易に決定することができる。
【００９２】
一実施形態では、特異的結合の親和性は、バックグラウンド結合の約２倍大きいか、バックグラウンド結合の約５倍大きいか、バックグラウンド結合の約１０倍大きいか、バックグラウンド結合の約２０倍大きいか、バックグラウンド結合の約５０倍大きいか、バックグラウンド結合の約１００倍大きいか、もしくはバックグラウンド結合の約１０００倍大きいか、またはそれらを超える。
【００９３】
「抗原（Ａｇ）」とは、動物において抗体の産生またはＴ細胞の応答を刺激することのできる化合物、組成物、または物質を指し、そのようなものとしては、動物内に注射また吸収される組成物（例えばがん特異的タンパク質を含むものなど）が挙げられる。抗原は、特異的な体液性免疫または細胞性免疫の産物に反応し、そのような産物としては、開示された抗原などの異種抗原によって誘導されるものが挙げられる。具体的な実施形態では、標的抗原は抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを含む。
【００９４】
抗体としては、その抗原結合断片、例えばラクダＩｇ、Ｉｇ  ＮＡＲ、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、二重特異性Ｆａｂ二量体（Ｆａｂ２）、三重特異性Ｆａｂ三量体（Ｆａｂ３）、Ｆｖ、単鎖Ｆｖタンパク質（「ｓｃＦｖ」）、ビスｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（「ｄｓＦｖ」）、および単ドメイン抗体（ｓｄＡｂ、ナノボディ）など；ならびに抗原結合に関与する完全長抗体の一部が挙げられる。この用語はまた、遺伝子工学的に作出された形態、例えば、キメラ抗体（例えばヒト化マウス抗体）、ヘテロコンジュゲート抗体（例えば二重特異性抗体など）、およびその抗原結合断片なども含む。Pierce  Catalog  and  Handbook,  1994-1995  (Pierce  Chemical  Co.,  Rockford,  IL);  Kuby,  J.,  Immunology,  3rd  Ed.,  W.  H.  Freeman  &  Co.,  New  York,  1997も参照されたい。
【００９５】
当業者に理解されるものとなるように、また本明細書のいずれかの箇所に記載されるように、完全な抗体は２つの重鎖と２つの軽鎖とを含む。各重鎖は、１つの可変領域と第１、第２、および第３の定常領域とからなるのに対し、各軽鎖は、１つの可変領域と１つの定常領域とからなる。哺乳動物の重鎖は、α、δ、ε、γ、およびμに分類される。哺乳動物の軽鎖は、λまたはκに分類される。α、δ、ε、γ、およびμの重鎖を含む免疫グロブリンは、免疫グロブリン（Ｉｇ）Ａ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭに分類される。完全な抗体の形態は、「Ｙ」字形状である。Ｙの幹は、共に結合する２つの重鎖の第２および第３の定常領域（ならびにＩｇＥおよびＩｇＭでは第４の定常領域）からなり、ジスルフィド結合（鎖間）がヒンジに形成されている。重鎖γ、α、およびδは、３つのタンデムな（一列の）Ｉｇドメインから構成される定常領域と、可撓性を加えるためのヒンジ領域とを有し；重鎖μおよびεは、４つの免疫グロブリンドメインから構成される定常領域を有する。第２および第３の定常領域は、それぞれ「ＣＨ２ドメイン」および「ＣＨ３ドメイン」とよばれる。Ｙの各腕は、単一の軽鎖の可変領域および定常領域に結合した単一の重鎖の可変領域と第１の定常領域とを含む。軽鎖および重鎖の可変領域は、抗原結合性に関与する。
【００９６】
軽鎖および重鎖の可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」ともよばれる３つの超可変領域によって遮られる「フレームワーク」領域を含有する。ＣＤＲは、従来の方法によって、例えば、Ｋａｂａｔら（Wu,  TT  and  Kabat,  E.  A.,  J  Exp  Med.  132(2):211-50,  (1970);  Borden,  P.  and  Kabat  E.  A.,  PNAS,  84:  2440-2443  (1987)；（ここに参照により組み込まれるKabat  et  al.,  Sequences  of  Proteins  of  Immunological  Interest,  U.S.  Department  of  Health  and  Human  Services,  1991を参照）に従って配列によって、またはＣｈｏｔｈｉａら（Chothia,  C.  and  Lesk,  A.M.,  J  Mol.  Biol.,  196(4):  901-917  (1987),  Chothia,  C.  et  al,  Nature,  342:  877  -  883  (1989)）に従って構造によって、定義または特定することができる。
【００９７】
軽鎖のＣＤＲを予測するための規則の説明的な例は、以下を含む：ＣＤＲ−Ｌ１は、残基約２４番で開始し、Ｃｙｓが先行し、約１０〜１７残基であり、Ｔｒｐが後に続き（典型的にはＴｒｐ−Ｔｙｒ−ＧｌｎであるがＴｒｐ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ、Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ、Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕもある）；ＣＤＲ−Ｌ２は、ＣＤＲ−Ｌ１の末端の後に約１６残基を開始し、一般にはＩｌｅ−Ｔｙｒが先行するがＶａｌ−Ｔｙｒ、Ｉｌｅ−Ｌｙｓ、Ｉｌｅ−Ｐｈｅもあり、７残基であり；ＣＤＲ−Ｌ３は、ＣＤＲ−Ｌ２の末端の後に約３３残基を開始し、Ｃｙｓが先行し、７〜１１残基であり、Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＸＸＸ−Ｇｌｙ（配列番号３７）（ＸＸＸは任意のアミノ酸である）が後に続く。
【００９８】
重鎖のＣＤＲを予測するための規則の説明的な例は、以下を含む：ＣＤＲ−Ｈ１は、残基約２６番で開始し、Ｃｙｓ−ＸＸＸ−ＸＸＸ−ＸＸＸ（配列番号３８）が先行し、１０〜１２残基であり、Ｔｒｐが後に続き（典型的にはＴｒｐ−ＶａｌであるがＴｒｐ−Ｉｌｅ、Ｔｒｐ−Ａｌａもある）；ＣＤＲ−Ｈ２は、ＣＤＲ−Ｈ１の末端の後に約１５残基を開始し、一般にはＬｅｕ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ（配列番号３９）または多数のバリエーションが先行し、１６〜１９残基であり、Ｌｙｓ／Ａｒｇ−Ｌｅｕ／Ｉｌｅ／Ｖａｌ／Ｐｈｅ／Ｔｈｒ／Ａｌａ−Ｔｈｒ／Ｓｅｒ／Ｉｌｅ／Ａｌａが後に続き；ＣＤＲ−Ｈ３は、ＣＤＲ−Ｈ２の末端の後に約３３残基を開始し、Ｃｙｓ−ＸＸＸ−ＸＸＸ（典型的にはＣｙｓ−Ａｌａ−Ａｒｇ）が先行し、３〜２５残基であり、Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−ＸＸＸ−Ｇｌｙ（配列番号４０）が後に続く。
【００９９】
一実施形態では、軽鎖のＣＤＲおよび重鎖のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ法に従って決定される。
【０１００】
一実施形態では、軽鎖のＣＤＲならびに重鎖のＣＤＲ２およびＣＤＲ３は、Ｋａｂａｔ法に従って決定され、重鎖のＣＤＲ１は、Ｋａｂａｔ法とＣｌｏｔｈｉａ法との構成であるＡｂＭ法に従って決定されるが、例えば、Whitelegg  N  &  Rees  AR,  Protein  Eng.  2000  Dec;13(12):819-24およびMethods  Mol  Biol.  2004;248:51-91を参照されたい。ＣＤＲを予測するためのプログラムは、公的に入手可能であり、例えば、ＡｂＹｓｉｓ（www.bioinf.org.uk/abysis/）がある。
【０１０１】
異なる軽鎖または重鎖のフレームワーク領域の配列は、種、例えばヒトの間で比較的保存されている。抗体のフレームワーク領域は、構成する軽鎖および重鎖のフレームワーク領域の組合せであり、三次元空間にＣＤＲを配置し整列させるのに役立つ。ＣＤＲは、主には抗原の１つまたは複数のエピトープとの結合に関与する。各鎖のＣＤＲは、典型的にはＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とよばれ、これらは、Ｎ端から始まって連続的に付番され、また典型的には、具体的なＣＤＲの位置する鎖によって特定される。そのため、抗体の重鎖の可変ドメインに位置するＣＤＲは、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３とよばれるのに対し、抗体の軽鎖の可変ドメインに位置するＣＤＲは、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３とよばれる。異なる特異性（すなわち、異なる抗原に対する異なる結合部位）を有する抗体は、異なるＣＤＲを有する。抗体によって異なるのはＣＤＲであるとはいえ、抗原結合では、ＣＤＲ内の限られた数のアミノ酸の位置が直接的に関与するに過ぎない。ＣＤＲ内のこれらの位置は、特異性決定残基（ＳＤＲ）とよばれる。軽鎖ＣＤＲの説明的な例は、配列番号１〜３、９〜１１、および１７〜１９に記載のＣＤＲ配列を含む。重鎖ＣＤＲを説明的な例は、配列番号４〜６、１２〜１４、および２０〜２２に記載のＣＤＲ配列を含む。
【０１０２】
「ＶＬ」または「ＶＬ」への言及は、免疫グロブリン軽鎖の可変領域を指し、そのようなものとしては、抗体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、または本明細書に開示の他の抗体断片のものが挙げられる。軽鎖可変領域の説明的な例は、配列番号７、１５、および２３に記載の軽鎖可変領域配列を含む。
【０１０３】
「ＶＨ」または「ＶＨ」への言及は、免疫グロブリン重鎖の可変領域を指し、そのようなものとしては、抗体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、または本明細書に開示の他の抗体断片のものが挙げられる。重鎖可変領域の説明的な例は、配列番号８、１６、および２４に記載の重鎖可変領域配列を含む。
【０１０４】
「モノクローナル抗体」とは、Ｂリンパ球の単クローンによって、または単一抗体の軽鎖および重鎖の遺伝子をトランスフェクトされている細胞によって産生される抗体である。モノクローナル抗体は、当業者に公知の方法によって、例として、骨髄腫細胞と免疫脾臓細胞との融合からハイブリッド抗体形成細胞を作製することによって産生される。モノクローナル抗体としては、ヒト化モノクローナル抗体が挙げられる。
【０１０５】
「キメラ抗体」は、ヒトなどのある種に由来するフレームワーク残基と、マウスなどの別の種に由来するＣＤＲ（一般に抗原結合をもたらす）とを有する。具体的に好適な実施形態では、抗体は、キメラ抗体またはその抗原結合断片である抗原特異的結合ドメインを含む。
【０１０６】
具体的な実施形態では、抗体はヒト抗体（例えばヒトモノクローナル抗体など）またはその断片である。ヒト抗体は、ヒト由来ファージディスプレイライブラリーから選択されたＦｖクローンの可変ドメイン配列を上記に記載の公知のヒト定常ドメイン配列と組み合わせることによって構築することができる。あるいは、ヒトモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法によって作製されうる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫細胞株およびマウス−ヒト異種骨髄腫細胞株は、例えば、Kozbor  J.  Immunol.,  133:  3001  (1984)；Brodeur  et  al.,  Monoclonal  Antibody  Production  Techniques  and  Applications,  pp.  51-63  (Marcel  Dekker,  Inc.,  New  York,  1987)；およびBoerner  et  al.,  J.  Immunol.,  147:  86  (1991)によって記載されている。さらに、遺伝子導入動物（例えばマウス）を用いて、内在性の免疫グロブリンの産生のない状態でヒト抗体の完全レパートリーを生産することができる。例えば、Jakobovits  et  al.,  PNAS  USA,  90:  2551  (1993)；Jakobovits  et  al.,  Nature,  362:  255  (1993)；Bruggermann  et  al.,  Year  in  Immunol.,  7:  33  (1993)を参照されたい。また、遺伝子シャッフリングを用いて、非ヒトの、例えば、齧歯類の抗体からヒト抗体を得ることができ、その場合、そのヒト抗体は、最初の非ヒト抗体と同様の親和性および特異性を有する（１９９３年４月１日公開のＰＣＴ出願ＷＯ９３／０６２１３を参照）。ＣＤＲによる昔ながらの非ヒト抗体のヒト化とは異なり、この手法は、非ヒト由来のＦＲ残基またはＣＤＲ残基を含まない完全にヒト型の抗体をもたらす。
【０１０７】
一実施形態では、抗体とは、「ヒト化」抗体である。ヒト化抗体は、ヒトのフレームワーク領域と、非ヒト（例えばマウス、ラット、または合成）の免疫グロブリン由来の１つまたは複数のＣＤＲとを含む免疫グロブリンである。ＣＤＲを提供する非ヒト免疫グロブリンは「ドナー」と称され、フレームワークを提供するヒト免疫グロブリンは「アクセプター」と称される。一実施形態では、すべてのＣＤＲは、ヒト化免疫グロブリンのドナー免疫グロブリンに由来する。定常領域は存在する必要はないが、それらがあるならば、ヒト免疫グロブリン定常領域に実質的に同一、すなわち、少なくとも約８５〜９０％、例えば約９５％以上、同一でなければならない。ゆえに、ヒト化免疫グロブリンのすべての部分は、可能性としてＣＤＲを除いて、天然のヒト免疫グロブリン配列の対応する部分と実質的に同一である。ヒト化のまたは他のモノクローナル抗体は、追加の保存されているアミノ酸置換を有することがあり、それらは実質的に抗原結合または他の免疫グロブリン機能に影響を及ぼさない。ヒト化抗体は、遺伝子工学を用いて構築することができる（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号を参照）。
【０１０８】
具体的な実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを結合する抗体またはその抗原結合断片としては、以下に限定されないが、ラクダＩｇ（ラクダ科動物抗体（ＶＨＨ））、Ｉｇ  ＮＡＲ、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、二重特異性Ｆａｂ二量体（Ｆａｂ２）、三重特異性Ｆａｂ三量体（Ｆａｂ３）、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ抗体（「ｓｃＦｖ」）、ビスｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（「ｄｓＦｖ」）、および単ドメイン抗体（ｓｄＡｂ、ナノボディ）が挙げられる。
【０１０９】
本明細書に使用される際の「ラクダＩｇ」または「ラクダ科動物ＶＨＨ」とは、重鎖抗体の公知の最小の抗原結合ユニットを指す（Koch-Nolte,  et  al,  FASEB  J.,  21:  3490-3498  (2007)）。「重鎖抗体」または「ラクダ科動物抗体」とは、２つのＶＨドメインを含有し軽鎖を含有しない抗体を指す（Riechmann  L.  et  al,  J.  Immunol.  Methods  231:25-38  (1999)；ＷＯ９４／０４６７８；ＷＯ９４／２５５９１；米国特許第６，００５，０７９号）。
【０１１０】
「免疫グロブリン新抗原受容体」の「ＩｇＮＡＲ」とは、１つの可変新抗原受容体（ＶＮＡＲ）ドメインと５つの定常新抗原受容体（ＣＮＡＲ）ドメインとのホモ二量体からなるサメの免疫レパートリー由来の抗体のクラスを指す。ＩｇＮＡＲは、一部の公知の最小の免疫グロブリンベースのタンパク質スキャフォールドを表し、高い安定性を有し、効率の良い結合特性を有する。本来の安定性は、以下の両方に起因すると考えることができる：（ｉ）マウス抗体に見出される従来の抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインに比べて、荷電した親水性の表面を露出した数多くの残基を提示する、基となるＩｇスキャフォールド；ならびに（ｉｉ）ループ間ジスルフィド架橋とループ内水素結合のパターンとを含めた相補性決定領域（ＣＤＲ）ループ中の安定化促進性の構造的特徴。
【０１１１】
抗体のパパイン消化は、それぞれが単一の抗原結合部位を有する「Ｆａｂ」断片とよばれる２つの同一の抗原結合断片と、容易に結晶化できる能力をその名前が反映する１つの残りの「Ｆｃ」断片とを生じる。ペプシン処理は、２つの抗原結合部位を有しかつなおも抗原を架橋可能である、Ｆ（ａｂ’）２断片を産生する。
【０１１２】
「Ｆｖ」は、完全な抗原結合部位を含有する最小の抗体断片である。一実施形態では、２鎖のＦｖ種は、堅固な非共有結合により会合する１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインとの二量体からなる。単鎖のＦｖ（ｓｃＦｖ）種では、１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインとを、可撓性のあるペプチドリンカーにより共有結合で連結することができ、その結果、軽鎖と重鎖は、２鎖のＦｖ種に類似した「二量体」構造で会合することができる。この立体配置では、各可変ドメインの３つの超可変領域（ＨＶＲ）が相互作用してＶＨ−ＶＬ二量体の表面に抗原結合部位を画定する。全体として、この６つのＨＶＲは、抗原結合特異性を抗体にもたらす。しかし、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的なＨＶＲを３つのみ含むＦｖの半片）でさえ、全体の揃った結合部位よりも低い親和性であるとはいえ、抗原を認識し結合する能力を有する。
【０１１３】
Ｆａｂ断片は、重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインとを含有し、また、軽鎖の定常ドメインと重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）とを含有する。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域由来の１つまたは複数のシステインを含めた重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ端の少数の残基の付加により、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨとは、定常ドメインのシステイン残基がフリーのチオール基を有するＦａｂ’に対する、本明細書での呼称である。本来、Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、その間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として産生されたものである。抗体断片の他の化学カップリングも公知である。二重特異性Ｆａｂ二量体（Ｆａｂ２）は２つのＦａｂ’断片を有し、そのそれぞれが異なる抗原を結合する。三重特異性Ｆａｂ三量体（Ｆａｂ３）は３つのＦａｂ’断片を有し、そのそれぞれが異なる抗原を結合する。
【０１１４】
用語「ダイアボディ」は、２つの抗原結合部位を有する抗体断片を指し、それらの断片は、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を同じポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬ）に含む。同じ鎖上の２つのドメイン間を対合させるには短過ぎるリンカーを用いることにより、ドメインは、２つの抗原結合部位を作り出すのに別の鎖の相補的なドメインと対合せざるを得ないものとされる。ダイアボディは二価であってもよいし二重特異性であってもよい。ダイアボディは、例えば、欧州特許出願公開第４０４，０９７号；ＷＯ１９９３／０１１６１；Hudson  et  al.,  Nat.  Med.  9:129-134  (2003);  and  Hollinger  et  al.,  PNAS  USA  90:  6444-6448  (1993)にさらに十分に記載されている。トリアボディおよびテトラボディもHudson  et  al.,  Nat.  Med.  9:129-134  (2003)に記載されている。
【０１１５】
「単ドメイン抗体」または「ｓｄＡｂ」または「ナノボディ」は、抗体重鎖（ＶＨドメイン）の可変領域または抗体軽鎖（ＶＬドメイン）の可変領域からなる抗体断片を指す（Holt,  L.,  et  al,  Trends  in  Biotechnology,  21(11):  484-490）。
【０１１６】
「単鎖Ｆｖ」抗体断片または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインを含み、その場合、これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖にどちらかの方位に（例えば、ＶＬ−ＶＨまたはＶＨ−ＶＬ）存在する。一般に、ｓｃＦｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、このリンカーは、ｓｃＦｖが抗原結合のために所望の構造を形成することを可能にする。ｓｃＦｖの概観のために、例えば、Pluckthun,  in  The  Pharmacology  of  Monoclonal  Antibodies,  vol.  113,  Rosenburg  and  Moore  eds.,  (Springer-Verlag,  New  York,  1994),  pp.  269-315を参照されたい。
【０１１７】
具体的な実施形態では、抗原結合断片とはｓｃＦｖである。具体的な実施形態では、ｓｃＦｖは、マウス型、ヒト型、またはヒト化のｓｃＦｖである。単鎖抗体は、所望の標的に特異的なハイブリドーマのＶ領域遺伝子からクローニングされうる。そのようなハイブリドーマの生産は定型的となっている。可変領域重鎖（ＶＨ）および可変領域軽鎖（ＶＬ）をクローニングするために使用できる手法は、例えば、Orlandi  et  al.,  PNAS,  1989;  86:  3833-3837に記載されている。
【０１１８】
様々な実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲに結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１〜３、９〜１１、もしくは１７〜１９に記載のＣＤＲＬ１〜ＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖配列、および／または配列番号４〜６、１２〜１４、もしくは２０〜２２に記載のＣＤＲＨ１〜ＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖配列を含む。
【０１１９】
一部の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７、１５、もしくは２３のうちいずれか１つに記載の可変軽鎖配列、および／または配列番号８、１６、もしくは２４のうちいずれか１つに記載の可変重鎖配列を含む。一部の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７、１５、もしくは２３のうちいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％のアミノ酸同一性を有する可変軽鎖配列、および／または配列番号８、１６、もしくは２４のうちいずれか１つに記載のアミノ酸配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％のアミノ酸同一性を有する可変重鎖配列を含む。
【０１２０】
一実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲに結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１〜３、９〜１１、または１７〜１９に記載の軽鎖ＣＤＲ配列を含む。具体的な一実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体もしくは抗体断片または抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖ部分に結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１〜３、９〜１１、または１７〜１９に記載の軽鎖ＣＤＲ配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のアミノ酸同一性を有する軽鎖ＣＤＲ配列を含む。
【０１２１】
一実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲに結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４〜６、１２〜１４、または２０〜２２に記載の重鎖ＣＤＲ配列を含む。具体的な一実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲに結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４〜６、１２〜１４、または２０〜２２に記載の重鎖ＣＤＲ配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のアミノ酸同一性を有する重鎖ＣＤＲ配列を含む。
【０１２２】
具体的な実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲに結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１〜３のうちいずれか１つに記載の１つもしくは複数の軽鎖ＣＤＲ、および／または配列番号４〜６のうちいずれか１つに記載の１つもしくは複数の重鎖ＣＤＲを含む。特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７に記載の可変軽鎖配列、および／または配列番号８に記載の可変重鎖配列を含む。
【０１２３】
一部の実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲに結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号９〜１１のうちいずれか１つに記載の１つもしくは複数の軽鎖ＣＤＲ、および／または配列番号１２〜１４のうちいずれか１つに記載の１つもしくは複数の重鎖ＣＤＲを含む。さらに別の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１５に記載の可変軽鎖配列、および／または配列番号１６に記載の可変重鎖配列を含む。
【０１２４】
追加的な実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲに結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１７〜１９のうちいずれか１つに記載の１つもしくは複数の軽鎖ＣＤＲ、および／または配列番号２０〜２２のうちいずれか１つに記載の１つもしくは複数の重鎖ＣＤＲを含む。具体的な実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２３に記載の可変軽鎖配列、および／または配列番号２４に記載の可変重鎖配列を含む。
【０１２５】
一部の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２５に記載の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを結合する可変軽鎖配列および／または可変重鎖配列を含む。
【０１２６】
Ｄ．コンジュゲート
様々な実施形態では、抗体またはその抗原結合断片と標識とを含むコンジュゲートが提供される。好適な実施形態では、コンジュゲートは、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを結合する抗体またはその抗原結合断片と、検出可能な標識または検出可能なシグナルを産生可能な標識とを含む。さらに好適な実施形態では、コンジュゲートは、検出可能な標識にカップリングされた抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを結合する抗体またはその抗原結合断片を含む。さらにいっそう好適な実施形態では、コンジュゲートは、検出可能な標識に共有結合により結合するかまたは化学的にカップリングされている、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを結合する抗体またはその抗原結合断片を含む。
【０１２７】
本明細書に使用される際に、用語「標識」とは、検出可能な標識、または検出可能なシグナルを産生可能な標識を指す。具体的な実施形態では、標識は、放射性核種、核酸、小分子、またはポリペプチドを含む。一部の実施形態では、標識は直接的に検出可能である。一部の実施形態では、標識は間接的に検出可能である。
【０１２８】
具体的な実施形態において想定されるコンジュゲートでの使用に適した検出可能な標識の説明的な例としては、以下に限定されないが、ハプテン、蛍光分子、蛍光色素、蛍光タンパク質、発色団、金属イオン、金粒子、銀粒子、磁性粒子、放射性核種、ポリペプチド、酵素、発光化合物、またはオリゴヌクレオチドが挙げられる。
【０１２９】
具体的な実施形態における検出可能な標識としての使用に適した分子の説明的な例としては、以下に限定されないが、Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ（登録商標）；Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｂｌｕｅ（商標）；Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｏｒａｎｇｅ（商標）；Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｇｒｅｅｎ（商標）；Ｃａｓｃａｄｅ  Ｂｌｕｅ（商標）；Ｃａｓｃａｄｅ  Ｙｅｌｌｏｗ（商標）；Ｌｕｃｉｆｅｒ  Ｙｅｌｌｏｗ（商標）；Ｍａｒｉｎａ  Ｂｌｕｅ（商標）；Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ（登録商標）（ＴｘＲｅｄ）  ；ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）（ＡＦ）色素、例えば、ＡＦ３５０、ＡＦ４０５、ＡＦ４８８、ＡＦ５００、ＡＦ５１４、ＡＦ５３２、ＡＦ５４６、ＡＦ５５５、ＡＦ５６８、ＡＦ５９４、ＡＦ６１０、ＡＦ６３３、ＡＦ６３５、ＡＦ６４７、ＡＦ６８０、ＡＦ７００、ＡＦ７１０、ＡＦ７５０、ＡＦ７９０、およびＡＦ８００など；ＱＤｏｔ（登録商標）ナノクリスタル、例えば、Ｑｄｏｔ（登録商標）５２５、Ｑｄｏｔ（登録商標）５６５、Ｑｄｏｔ（登録商標）５８５、Ｑｄｏｔ（登録商標）６０５、Ｑｄｏｔ（登録商標）６５５、Ｑｄｏｔ（登録商標）７０５、およびＱｄｏｔ（登録商標）８００など；ＤｙＬｉｇｈｔ（商標）Ｄｙｅｓ  （ＤＬ）、例えば、ＤＬ５４９、ＤＬ６４９、ＤＬ６８０、およびＤＬ８００など；フルオレセインまたはその誘導体、例えば、フルオレセインイソチオシアネート、カルボキシフルオレセイン、およびジクロロトリアジニルアミンフルオレセインなど；ジゴキシゲニン；ジニトロフェノール（ＤＮＰ）；トリニトロフェノール（ＴＮＰ）；ビオチン；Ｃｙ色素、例えば、Ｃｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、およびＣｙ７．５など；フィコエリスリン（ＰＥ、Ｒ−フィコエリスリン（ＲＰＥ））；Ｂ−フィコエリスリン（ＢＰＥ）；ペリジニンクロロフィル（ＰｅｒＣＰ）；アロフィコシアニン（ＡＰＣ）；Ｃ−フィコシアニン；Ａｔｔｏ（登録商標）Ｄｙｅ、例えば、Ａｔｔｏ  ３９０、Ａｔｔｏ  ４２５、Ａｔｔｏ  ４６５、Ａｔｔｏ  ４８８、Ａｔｔｏ  ４９５、Ａｔｔｏ  ５１４、Ａｔｔｏ  ５２０、Ａｔｔｏ  ５３２、Ａｔｔｏ  ５５０、Ａｔｔｏ  ５６５、Ａｔｔｏ  ５９０、Ａｔｔｏ  ５９４、Ａｔｔｏ  ６１０、Ａｔｔｏ  ６２０、Ａｔｔｏ  ６３３、Ａｔｔｏ  ６４７、Ａｔｔｏ  ６５５、Ａｔｔｏ  ６６５、Ａｔｔｏ  ６８０、Ａｔｔｏ  ７００、Ａｔｔｏ  ７２５、およびＡｔｔｏ  ７４０など；Ｓｕｐｅｒ  Ｂｒｉｇｈｔ（商標）Ｄｙｅ、例えば、Ｓｕｐｅｒ  Ｂｒｉｇｈｔ（商標）４３６、Ｓｕｐｅｒ  Ｂｒｉｇｈｔ（商標）６００、Ｓｕｐｅｒ  Ｂｒｉｇｈｔ（商標）６４５、Ｓｕｐｅｒ  Ｂｒｉｇｈｔ（商標）７０２、およびＳｕｐｅｒ  Ｂｒｉｇｈｔ（商標）７８０；Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｄｙｅ、例えば、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ  ４２１、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ  ４８０、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ  ５１０、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ  ６０５、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｖｉｏｌｅｔ（商標）６５０、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｖｉｏｌｅｔ（商標）７１１、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｖｉｏｌｅｔ（商標）７８６、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ  ３９５（ＢＵＶ３９��）、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ  ４９６  （ＢＵＶ４９６）、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ  ５６３  （ＢＵＶ５６３）、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ  ６６１（ＢＵＶ６６１）、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ  ７３７（ＢＵＶ７３７）、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ  ８０５（ＢＵＶ８０５）、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｂｌｕｅ  ５１５（ＢＢ５１５）、およびＢｒｉｌｌｉａｎｔ（商標）Ｂｌｕｅ  ７００（ＢＢ７００）など；ならびにＩＲ  Ｄｙｅ、例えば、ＩＲ  Ｄｙｅ  ６８０、ＩＲ  Ｄｙｅ  ６８０ＬＴ、ＩＲ  Ｄｙｅ  ７００、ＩＲ  Ｄｙｅ  ７００ＤＸ、ＩＲ  Ｄｙｅ  ８００、ＩＲ  Ｄｙｅ  ８００ＲＳ、およびＩＲ  Ｄｙｅ  ８００ＣＷなどが挙げられる。
【０１３０】
検出可能な標識としての使用に適したタンデムな蛍光色素分子の説明的な例としては、以下に限定されないが、ＲＰＥ−Ｃｙ５、ＲＰＥ−Ｃｙ５．５、ＲＰＥ−Ｃｙ７、ＲＰＥ−ＣＦ５９４、ＲＰＥ−ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）タンデムコンジュゲート、ＲＰＥ−Ａｌｅｘａ６１０、ＲＰＥ−ＴｘＲｅｄ、ＡＰＣ−Ｈ７、ＡＰＣ−Ｒ７００、ＡＰＣ−Ａｌｅｘａ６００、ＡＰＣ−Ａｌｅｘａ６１０、ＡＰＣ−Ａｌｅｘａ７５０、ＡＰＣ−Ｃｙ５、ＡＰＣ−Ｃｙ５．５、およびＡＰＣ−Ｃｙ７が挙げられる。
【０１３１】
検出可能な標識としての使用に適した蛍光タンパク質の説明的な例としては、以下に限定されないが、ＧＦＰ、ｅＧＦＰ、ＢＦＰ、ＣＦＰ、ＹＦＰ、ＤｓＲｅｄ、ＤｓＲｅｄ２、ｍＲＦＰ、ｍＢａｎａｎａ、ｍＯｒａｎｇｅ、ｄＴｏｍａｔｏ、ｔｄＴｏｍａｔｏ、ｍＴａｎｇｅｒｉｎｅ、ｍＳｔｒａｗｂｅｒｒｙ、ｍＣｈｅｒｒｙ、ｍＰｌｕｍ、およびｍＲａｓｐｂｅｒｒｙが挙げられる。
【０１３２】
検出可能な標識としての使用に適した酵素の説明的な例としては、以下に限定されないが、アルカリホスファターゼ、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、およびβ−ガラクトシダーゼが挙げられる。
【０１３３】
検出可能な標識としての使用に適した放射性核種の説明的な例としては、以下に限定されないが、炭素（１４Ｃ）、クロム（５１Ｃｒ）、コバルト（５７Ｃｏ）、フッ素（１８Ｆ）、ガドリニウム（１５３Ｇｄ、１５９Ｇｄ）、ゲルマニウム（６８Ｇｅ）、ホルミウム（１６６Ｈｏ）、インジウム（１１５Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１１２Ｉｎ、ｍＩｎ）、ヨウ素（１２５Ｉ、１２３Ｉ、１２１Ｉ）、ランタン（１４０Ｌａ）、ルテチウム（１７７Ｌｕ）、マンガン（５４Ｍｎ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、リン（３２Ｐ）、プラセオジム（１４２Ｐｒ）、プロメチウム（１４９Ｐｍ）、レニウム（１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ）、ロジウム（１０５Ｒｈ）、ルテニウム（rutheroium）（９７Ｒｕ）、サマリウム（１５３Ｓｍ）、スカンジウム（４７Ｓｃ）、セレン（７５Ｓｅ）、（８５Ｓｒ）、硫黄（３５Ｓ）、テクネチウム（９９Ｔｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、スズ（１１３Ｓｎ、１１７Ｓｎ）、トリチウム（３Ｈ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、イッテルビウム（１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ）、およびイットリウム（９０Ｙ）が挙げられる。
【０１３４】
具体的な実施形態では、コンジュゲートは、１つまたは複数の標識にコンジュゲート、カップリング、または連結(例えば共有結合)された抗体または抗体断片を含む。特定の実施形態では、標識は、直接的にまたは間接的に(例えばリンカー基を介して)のどちらかで、抗体または断片にコンジュゲート、カップリング、または連結されうる。抗体および標識のそれぞれが他方と反応可能な置換基を有する際に、抗体は１つまたは複数の標識と直接的に共有結合することができる。例えば、一方にあるアミノ基やスルフヒドリル基などの求核基は、他方にある無水物や酸ハロゲン化物などのカルボニル含有基と、または良い脱離基(例えばハロゲン化物)を含有するアルキル基と、反応可能でありうる。
【０１３５】
具体的な実施形態では、一価もしくは多価のリンカーまたはスペーサーを介して抗体または抗体断片を１つまたは複数の標識にカップリング、コンジュゲート、または連結することが望ましいことがある。リンカーまたはスペーサーを用いて、抗体と標識との間に十分な距離を提供し、立体障害または抗体結合能への干渉を避けることができる。種々の二官能性または多官能性の試薬であって、ホモ官能性とヘテロ官能性のものの両方が（ピアス・ケミカル社、ロックフォード、イリノイ州のカタログに記載されているものなど）、リンカー基として採用されうることが、当業者には明らかとなろう。カップリングは、例えば、アミノ基、カルボキシル基、スルフヒドリル基、または酸化炭水化物残基を通じてもたらされうる。そのような方法論を記載している非常に数多くの参考文献があり、例えば、Ｒｏｄｗｅｌｌらに与えられた米国特許第４，６７１，９５８号がある。
【０１３６】
特定の実施形態では、リンカーは、約１〜１００個の原子、１〜８０個の原子、１〜６０個の原子、１〜４０個の原子、１〜３０個の原子、１〜２０個の原子、または１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、または２０個の原子の全鎖長を有し、鎖中の原子はＣ、Ｓ、Ｎ、Ｐ、およびＯを含む。
【０１３７】
本発明の具体的な実施形態において有用なリンカーまたは連結の説明的な例としては、以下のうち１つまたは複数が挙げられるがこれらに限定されない：−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）２−６−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＨ−（ＣＨ２）２−６−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−トリアゾール−（ＣＨ２）２−６−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ−（ＣＨ２）２−６−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ−（ＣＨ２）０−６−ＣＨ（ＣＯＮＨ２）−（ＣＨ２）０−６−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ−（ＣＨ２）０−６−ＣＨ（ＣＯＮＨ−ＰＥＧ）−（ＣＨ２）０−６−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ−Ｓ−（ＣＨ２）２−６−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ−Ｓ−（ＣＨ２）０−６−ＣＨ（ＣＯＮＨ２）−（ＣＨ２）０−６−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ−Ｓ−（ＣＨ２）０−６−ＣＨ（ＣＯＮＨ−ＰＥＧ）−（ＣＨ２）０−６−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＨ−（ＣＨ２）０−６−ＣＨ（ＣＯＮＨ−ＰＥＧ）−（ＣＨ２）０−６−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＨ−（ＣＨ２）０−６−ＣＨ（ＣＯＮＨ２）−（ＣＨ２）０−６−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−  −Ｃ＝Ｎ−Ｏ−（ＣＨ２）２−６−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ＝Ｎ−ＮＨ−（ＣＯ）−（ＣＨ２）２−６−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−スクシンイミド−（ＣＨ２）２−６−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−ジアゾジカルボキシアミド−（フェニル）−Ｊ−（ＣＨ２）２−６−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−であってＪがＯ、ＣＨ２、ＮＨ、Ｓ、ＮＨ  （ＣＯ）、（ＣＯ）ＮＨであるもの、−ＮＨ−（ＣＨ２）２−６−、（ＣＨ２）１−６−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）２−６−、−Ｃ（Ｓ）−（ＣＨ２）０−６−、−（ＣＨ２）１−６−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）２−６−、−（ＣＨ２）１−６−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）２−６−、−（ＣＨ２）１−６−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）２−６−、−（ＣＨ２）１−６−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（ＣＨ２）２−６−、（ＣＨ２）１−６−ＮＨ−（ＣＨ２）２−６、（ＣＨ２）１−６−Ｃ（Ｏ−（ＣＨ２）２−６−、分岐または非分岐の−Ｃ１−Ｃ１６−アルキル、分岐または非分岐の−Ｃ１−Ｃ１６−アルキルであって炭素原子のうち１つが任意選択的にヘテロ原子に置換されうるもの、Ｒ２−ＮＨ−（ＣＨ２）２−６−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、Ｒ２−Ｓ−（ＣＨ２）２−６−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、Ｒ２−トリアゾール−（ＣＨ２）２−６−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、Ｒ２−ＮＨ−Ｏ  −（ＣＨ２）２−６−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、Ｒ２＝Ｎ−ＮＨ−（ＣＯ）−（ＣＨ２）２−６−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−であってＲ２がアルキル、置換アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）［すなわち−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１−２０］からなる群から選択される１個から３個の二官能性または三官能性の置換架橋型有機ラジカルであるもの。
【０１３８】
具体的な実施形態では、コンジュゲートは、以降の本明細書の他の箇所で想定されるポリペプチドリンカーを介して、ポリペプチドベースの標識、例えば蛍光タンパク質または酵素に共有結合により結合された抗体または抗体断片を含む。
【０１３９】
好適な実施形態では、コンジュゲートは、ＰＥ標識に共有結合により結合された抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲに結合する抗体またはその抗原結合断片を含む。
【０１４０】
Ｅ．ポリペプチド
様々なポリペプチド、融合ポリペプチド、およびポリペプチドバリアントが本明細書で想定され、そのようなものとしては、以下に限定されないが、抗体およびその抗原結合断片が挙げられる。好適な実施形態では、ポリペプチドは、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを結合する抗体またはその抗原結合断片を含む。
【０１４１】
「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」は、逆の指定のない限り、従来の意味に従って、すなわちアミノ酸の配列として、互換的に使用される。ポリペプチドは、特定の長さに限定されず、例えば、全長ポリペプチドでもポリペプチド断片でも含むことがあり、ポリペプチドの１つまたは複数の翻訳後修飾、例えばグリコシル化、アセチル化、リン酸化など、ならびに当技術分野に公知の他の修飾を、天然と非天然とのいずれでも含みうる。
【０１４２】
「単離タンパク質」、「単離ペプチド」、または「単離ポリペプチド」などは、本明細書に使用される際には、細胞環境と隔てられた、かつ細胞の他の構成成分との関係から隔てられた、すなわちｉｎ  ｖｉｖｏの物質と大きな関係のない、ペプチドまたはポリペプチドの分子のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの合成、単離、および／または精製を指す。
【０１４３】
ポリペプチドは「ポリペプチドバリアント」を含む。ポリペプチドバリアントは、１つまたは複数の置換、欠失、付加、および／または挿入がある点で、天然に発生したポリペプチドとは異なることがある。そのようなバリアントは、天然に発生したものでもありうるし、合成によって、例えば１つまたは複数の上記ポリペプチド配列を改変することによって生成されたものでもありうる。例えば、具体的な実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸置換、欠失、付加、および／または挿入を導入することによって、抗体またはその抗原結合断片の結合親和性および／または他の生物学的な性質を向上させることが望ましいことがある。具体的な実施形態では、ポリペプチドは、本明細書で想定される任意の参照配列と少なくとも約６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、８６％、９７％、９８％、または９９％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含み、典型的にはこのバリアントは、参照配列の少なくとも１つの生物学的活性を維持する。
【０１４４】
ポリペプチドは「ポリペプチド断片」を含む。ポリペプチド断片とは、天然に発生したかまたは組換えにより生産されたポリペプチドのアミノ端の欠失、カルボキシル端の欠失、および／または内部の欠失もしくは置換を有する、単量体または多量体でありうるポリペプチドを指す。生物学的に活性なポリペプチド断片の説明的な例としては、抗体断片が挙げられる。本明細書に使用される際に、用語「生物学的に活性な断片」または「生物学的に活性な最小限の断片」とは、天然に発生したポリペプチドの活性の少なくとも１００％、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、少なくとも５０％、少なくとも４０％、少なくとも３０％、少なくとも２０％、少なくとも１０％、または少なくとも５％を保持するポリペプチド断片を指す。好適な実施形態では、生物活性とはエピトープとの結合親和性である。特定の実施形態では、ポリペプチド断片は、少なくとも５アミノ酸から約５００アミノ酸の長さのアミノ酸鎖を含みうる。特定の実施形態では、断片は、少なくとも５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個、１００個、１１０個、１５０個、２００個、２５０個、３００個、３５０個、４００個、または４５０個のアミノ酸の長さであることが認識されよう。具体的に有用なポリペプチド断片は、機能ドメインを含み、そのようなものとしては、抗体の抗原結合ドメインまたは断片が挙げられる。抗体の場合、有用な断片としては、以下に限定されないが、１つまたは複数のＣＤＲ領域、重鎖または軽鎖のＣＤＲ３領域；重鎖または軽鎖の可変領域；２つのＣＤＲを含む抗体鎖または可変領域の一部などが挙げられる。
【０１４５】
上述したように、ポリペプチドは、アミノ酸の置換、欠失、切頭、および挿入を含めた様々な仕方で変えられうる。そのような操作のための方法は、概して当技術分野に公知である。例えば、参照ポリペプチドのアミノ酸配列バリアントは、DNAの変異によって調製することができる。変異誘発およびヌクレオチド配列変更のための方法は、当技術分野に公知である。例えば、Ｋｕｎｋｅｌ（1985,  Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA.  82:  488-492)、Kunkel  et  al.,  (1987,  Methods  in  Enzymol,  154:  367-382)、米国特許第４，８７３，１９２号、Ｗａｔｓｏｎ，Ｊ．Ｄ．ら（Molecular  Biology  of  the  Gene,  Fourth  Edition,  Benjamin/Cummings,  Menlo  Park,  Calif.,  1987）およびそれらに引用された参考文献を参照されたい。目的のタンパク質の生物活性に影響を及ぼさない適切なアミノ酸の置換についてのガイダンスは、Dayhoff  et  al.,  (1978)  Atlas  of  Protein  Sequence  and  Structure  (Natl.  Biomed.  Res.  Found.,  Washington,  D.C.）のモデルに見出されうる。
【０１４６】
特定の実施形態では、ポリペプチドバリアントは、１つまたは複数の保存された置換を含む。「保存された置換」とは、ポリペプチドの二次構造およびハイドロパシー性が実質的に変化しないものとペプチド化学分野の当業者が予想するように、アミノ酸が、類似の性質を有する別のアミノ酸に置換されているものである。好ましくは、本明細書に開示されるタンパク質バリアントにおけるアミノ酸の変更は、保存されたアミノ酸の変更、すなわち、同様に荷電または非荷電のアミノ酸の置換である。保存されたアミノ酸の変更は、その側鎖に関連するアミノ酸のファミリーのうち１つの置換を含む。天然に発生するアミノ酸は、概して４つのファミリーに分かれる：酸性アミノ酸（アスパラギン酸、グルタミン酸）、塩基性アミノ酸（リジン、アルギニン、ヒスチジン）、非極性アミノ酸（アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、および非荷電の極性アミノ酸（グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシン）。フェニルアラニン、トリプトファン、およびチロシンは、時には芳香族アミノ酸として共に分類される。ペプチドまたはタンパク質では、適切な保存されたアミノ酸の置換は当業者に公知であり、一般には、結果として得られる分子の生物活性を変えることなく行うことができる。一般に、ポリペプチドの非必須領域の単アミノ酸置換は、生物活性を実質的に変えないことを当業者は認識している（例えば、Watson  et  al.  Molecular  Biology  of  the  Gene,  4th  Edition,  1987,  The  Benjamin/Cummings  Pub.  Co.,  p.224を参照）。
【０１４７】
ポリペプチドバリアントは、グリコシル化体、他の分子との凝集性コンジュゲート、および関連のない化学部分との共有結合コンジュゲート（例えばペグ化分子）をさらに含む。共有結合バリアントは、当技術分野に公知であるように、アミノ酸鎖またはＮ端残基もしくはＣ端残基に見出される基に官能基を連結することによって、調製することができる。また、バリアントとしては、対立遺伝子バリアント、種間バリアント、および突然変異タンパク質が挙げられる。タンパク質の機能的な活性に影響を及ぼさない領域の切頭または欠失もバリアントである。
【０１４８】
具体的な実施形態では、ポリペプチドは、ポリペプチドリンカーを含む。「リンカー」とは、分子の適切な離間、立体構造、および機能のために付加される、２つ以上のポリペプチドドメインの間の複数のアミノ酸残基を指す。
【０１４９】
具体的な実施形態では、ポリペプチドリンカーは、可変領域連結配列である。「可変領域連結配列」とは、ＶＨドメインおよびＶＬドメインを接続し、結果として得られるポリペプチドが同じ軽鎖および重鎖の可変領域を含む抗体と同じ標的分子への特異的結合親和性を保持するように、２つのサブ結合ドメインの相互作用に適合したスペーサー機能を提供する、アミノ酸配列である。
【０１５０】
具体的な実施形態では、コンジュゲートは、抗体または抗体断片を１つまたは複数のタンパク質ベースの標識、例えば蛍光タンパク質または酵素に、共有結合により結合するポリペプチドリンカーを含む。
【０１５１】
本明細書で想定される具体的な実施形態における使用に適したリンカーの説明的な例としては、以下のアミノ酸配列が挙げられるがこれらに限定されない：ＧＧＧ；ＤＧＧＧＳ（配列番号２６）；ＴＧＥＫＰ（配列番号２７）（例えば、Liu  et  al.,  PNAS  5525-5530  (1997)を参照）；ＧＧＲＲ（配列番号２８）（Pomerantz  et  al.  1995、上記）；（ＧＧＧＧＳ）ｎであって、式中ｎ＝１、２、３、４、または５（配列番号２９）（Kim  et  al.,  PNAS  93,  1156-1160  (1996.）；ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＶＤ（配列番号３０）（Chaudhary  et  al.,  1990,  Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  U.S.A.  87:1066-1070）；ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号３１）（Bird  et  al.,  1988,  Science  242:423-426）、ＧＧＲＲＧＧＧＳ（配列番号３２）；ＬＲＱＲＤＧＥＲＰ（配列番号３３）；ＬＲＱＫＤＧＧＧＳＥＲＰ（配列番号３４）；ＬＲＱＫＤ（ＧＧＧＳ）２ＥＲＰ（配列番号３５）。あるいは、可撓性のリンカーは、ＤＮＡ結合部位とペプチド自体との両方をモデリングすることのできるコンピュータプログラム（Desjarlais  &  Berg,  PNAS  90:2256-2260  (1993),  PNAS  91:11099-11103  (1994)を用いて、またはファージディスプレイ法によって、合理的に設計することができる。一実施形態では、リンカーは、以下のアミノ酸配列を含む：ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号３６）（Cooper  et  al.,  Blood,  101(4):  1637-1644  (2003)）。
【０１５２】
好適な実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１〜２４に記載のアミノ酸配列を含む。
【０１５３】
Ｆ．ポリヌクレオチド
好適な実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを結合する抗体またはその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドが提供される。本明細書に使用される際に、用語「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ（ｇＤＮＡ）、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、または組換えＤＮＡを指す。ポリヌクレオチドとしては、一本鎖および二本鎖のポリヌクレオチドが挙げられる。具体的な実施形態では、ポリヌクレオチドとしては、本明細書で想定される任意の参照配列と少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、８６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するポリヌクレオチドまたはバリアントが挙げられる。様々な説明的な実施形態では、本明細書で想定されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドとしては、以下に限定されないが、配列番号１〜２４に記載のポリペプチド配列が挙げられる。
【０１５４】
具体的な実施形態では、少なくとも約５、１０、２５、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、５００、１０００、１２５０、１５００、１７５０、もしくは２０００またはそれを超える連続したアミノ酸残基数のポリペプチドならびにすべての中間的な長さのものをコードする、ポリヌクレオチドが提供される。このコンテクストにおける「中間的な長さ」とは、引用された値の間の任意の長さ、例えば  ６、７、８、９など、１０１、１０２、１０３など；１５１、１５２、１５３など；２０１、２０２、２０３などを意味することが容易に理解されよう。
【０１５５】
具体的な実施形態では、ポリヌクレオチドはコドン最適化されることがある。本明細書に使用される際に、用語「コドン最適化される」とは、ポリペプチドの発現、安定性、および／または活性を増加させるためにポリヌクレオチド中のコドンを置換することを指す。コドン最適化に影響を与える要因としては、以下のうち１つまたは複数が挙げられるが、これらに限定されない：（ｉ）２種以上の生物もしくは遺伝子の間のコドンバイアスのバリエーションまたは合成により構築されたバイアスの表、（ｉｉ）生物、遺伝子、または遺伝子セット内におけるコドンバイアスの程度のバリエーション、（ｉｉｉ）コンテクストを含めたコドンの体系的なバリエーション、（ｉｖ）その復号されるｔＲＮＡに従ったコドンのバリエーション、（ｖ）全体またはある位置のトリプレットのどちらかにおけるＧＣ％に従ったコドンのバリエーション、（ｖｉ）参照配列、例えば天然に発生した配列との類似性の程度のバリエーション、（ｖｉｉ）コドン頻度のカットオフのバリエーション、（ｖｉｉｉ）ＤＮＡ配列から転写されるｍＲＮＡの構造的な性質、（ｉｘ）コドン置換のセットの設計の基とするＤＮＡ配列の機能に関する予備知識、（ｘ）各アミノ酸のコドンセットの系統的なバリエーション、および／または（ｘｉ）偽翻訳開始部位の単発的な除去。
【０１５６】
本明細書に使用される際に、用語「ポリヌクレオチドバリアント」および「バリアント」などは、参照ポリヌクレオチド配列、または本明細書に後に規定されるストリンジェントな条件下で参照配列とハイブリダイズするポリヌクレオチドと実質的な配列同一性を呈する、ポリヌクレオチドを指す。これらの用語は、参照ポリヌクレオチドに比べて１つまたは複数のヌクレオチドが付加されているか、欠失しているか、または異なるヌクレオチドに置き換えられている、ポリヌクレオチドを含む。これに関連して、変異、付加、欠失、および置換を含めたある特定の変更を参照ポリヌクレオチドに対して行うことができ、それによって、変更されたポリヌクレオチドが参照ポリヌクレオチドの生物学的な機能または活性を保持することが、当技術分野でよく理解されている。
【０１５７】
ポリヌクレオチドバリアントは、生物学的に活性なポリペプチド断片またはバリアントをコードするポリヌクレオチド断片を含む。本明細書に使用される際に、用語「ポリヌクレオチド断片」とは、天然に発生したポリペプチド活性の少なくとも１００％、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、少なくとも５０％、少なくとも４０％、少なくとも３０％、少なくとも２０％、少なくとも１０％、または少なくとも５％を保持するポリペプチドバリアントをコードする、少なくとも５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個、１００個、１１０個、１５０個、２００個、２５０個、３００個、３５０個、４００個、４５０個、５００個、５５０個、６００個、６５０個、７００個、７５０個、８００個、８５０個、９００個、９５０個、１０００個、１１００個、１２００個、１３００個、１４００個、１５００個、１６００個、１７００個またはそれを超えるヌクレオチド数の長さのポリヌクレオチド断片を指す。ポリヌクレオチド断片とは、天然に発生したかもしくは組換えにより生産されたポリペプチドの１つもしくは複数のアミノ酸のアミノ端の欠失、カルボキシル端の欠失、および／または内部の欠失もしくは置換を有する、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。
【０１５８】
「配列同一性」という記載、または例えば「に５０％同一性のある配列」を含むことは、本明細書に使用される際には、比較枠にわたって配列がヌクレオチド毎のベースまたはアミノ酸毎のベースで同一性を有する程度を指す。そのため「配列同一性のパーセンテージ」は、最適にアラインメントされた２つの配列を比較枠にわたって比較し、両方の配列中で同一の核酸塩基（例えばＡ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｉ）または同一のアミノ酸残基（例えばＡｌａ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｃｙｓ、およびＭｅｔ）の発生する位置の数を決定して合致する位置の数を生じ、合致する位置の数を比較枠中の位置の総数（すなわち枠のサイズ）により除算し、結果を１００により乗算して配列同一性のパーセンテージを生じることによって算出されうる。含まれるのは、本明細書に記載の任意の参照配列と少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、８６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するヌクレオチドおよびポリペプチドであり、典型的には、このポリペプチドバリアントは、参照ポリペプチドの少なくとも１つの生物活性を維持する。
【０１５９】
２つ以上のポリヌクレオチドまたはポリペプチドの間の配列関係を記載するために使用される用語としては、「参照配列」、「比較枠（comparison  window）」、「配列同一性」、「配列同一性のパーセンテージ」、および「実質的同一性」が挙げられる。「参照配列」は、長さにして少なくとも１２個、しかししばしば１５個から１８個、多くの場合に少なくとも２５個のモノマー単位であり、この単位にはヌクレオチドおよびアミノ酸残基が含まれる。２つのポリヌクレオチドはそれぞれ、（１）２つのポリヌクレオチドの間で類似性のある配列（すなわち完全なポリヌクレオチド配列の一部分のみ）と、（２）２つのポリヌクレオチドの間で多様性のある配列とを含みうることから、２つの（またはそれを超える）ポリヌクレオチドの間の配列比較は、典型的には、２つのポリヌクレオチドの配列を「比較枠」にわたって比較して、配列類似性のある局所的な領域を特定し比較することによって実施される。「比較枠」とは、少なくとも６つ、通常は約５０個から約１００個、さらに通常は約１００個から約１５０個の連続的な位置の概念上の区分を指し、その区分では、ある配列が同数の連続的な位置の参照配列と最適にアラインメントされた後に、それらの２つの配列が比較される。２つの配列の最適なアラインメントについて参照配列（付加または欠失を含まない）と比べると、比較枠は、約２０％以下の付加または欠失（すなわちギャップ）を含むことがある。比較枠をアラインメントするための配列の最適なアラインメントは、アルゴリズム（ウィスコンシン遺伝学ソフトウェアパッケージリリース７．０、遺伝学コンピュータグループ、５７５  サイエンスドライブ、マディソン、ウィスコンシン州、米国のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ）のコンピュータ制御の実装によって、または選択された任意の様々な方法によって生じる検証および最良のアラインメント（すなわち、比較枠にわたって最も高いパーセンテージの相同性を結果として生じる）によって、実施されうる。また、例えばAltschul  et  al.,  1997,  Nucl.  Acids  Res.  25:3389により開示されたような、ＢＬＡＳＴファミリーのプログラムを参照してもよい。配列解析の詳細な議論は、Ausubel  et  al.,  Current  Protocols  in  Molecular  Biology,  John  Wiley  &  Sons  Inc,  1994-1998,  Chapter  15のUnit  19.3に見出すことができる。
【０１６０】
本明細書に使用される際に、「単離ポリヌクレオチド」とは、天然に発生した状態で側面に配された配列から精製されているポリヌクレオチド、例えば、通常はその断片に隣接する配列から取り出されているＤＮＡ断片を指す。また、「単離ポリヌクレオチド」とは、相補的なＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、組換えＤＮＡ、または自然に存在せず人間の手によって作製されている他のポリヌクレオチドを指す。
【０１６１】
さらに、遺伝子コードの縮重性の結果として、本明細書に記載されるようなポリペプチドまたはそのバリアントの断片をコードする数多くのヌクレオチド配列があることが当業者によって認識されよう。これらのポリヌクレオチドのいくつかは、任意の生来の配列のヌクレオチド配列とは最小限の相同性を有する。それでもなお、具体的な実施形態では、コドン使用の差に起因して様々であるポリヌクレオチドが、例えばヒトおよび／または霊長類のコドン選択に最適化されたポリヌクレオチドが、特に想定される。
【０１６２】
ポリヌクレオチドは、当技術分野に公知であり利用可能である任意の種々のよく確立された手法を用いて、調製、操作、および／または発現することができる。所望のポリペプチドを発現するために、ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、適切なベクターに挿入することができる。
【０１６３】
Ｇ．組成物
本明細書で想定される組成物は、抗体または抗体断片およびその抗原結合断片、コンジュゲート、ポリペプチド、ポリヌクレオチドのうち１つまたは複数を含みうる。組成物としては医薬組成物が挙げられるがこれに限定されない。追加的な剤が組成物の活性成分の機能または活性に不利な影響を及ぼさない限り、組成物にやはり含まれうる他の構成成分には実質的に限定はない。
【０１６４】
具体的な実施形態では、本発明の組成物は、ある量の抗体またはその抗原結合断片またはコンジュゲートを含む。本明細書に使用される際に、用語「量」とは、標的ポリペプチドを結合するための「有効な量」または「有効量」の抗体を指す。
【０１６５】
組成物は、１つまたは複数の担体または賦形剤をさらに含みうる。
【０１６６】
本明細書で想定される組成物への組込みに適した担体の説明的な例としては、以下に限定されないが、リン酸、クエン酸、および他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸およびメチオニンを含めた抗酸化剤；保存剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロリド；ベンザルコニウムクロリド；ベンゼトニウムクロリド；フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール；メチルもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、もしくはデキストリン類を含めた単糖、二糖、および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属複合体（例えばＺｎ−タンパク質複合体）；ならびに／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤が挙げられる。
【０１６７】
また、許容可能な担体としては、以下に限定されないが、リン酸、クエン酸、および他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸およびメチオニンを含めた抗酸化剤；保存剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロリド；ベンザルコニウムクロリド；ベンゼトニウムクロリド；フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール；メチルもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、もしくはデキストリン類を含めた単糖、二糖、および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、またはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属複合体（例えばＺｎ−タンパク質複合体）；ならびに／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤が挙げられる。
【０１６８】
Ｈ．キット
様々な実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを結合する１つまたは複数の抗体またはその抗原結合断片と、抗体を使用して１つまたは複数の免疫エフェクター細胞または抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞上の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの発現を検出、決定、および／または測定するための指示書とを含むキットが提供される。
【０１６９】
具体的な実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを結合する１つまたは複数の抗体またはその抗原結合断片と、抗体を使用して１つまたは複数の免疫エフェクター細胞または抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞上の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの発現を検出、決定、測定、および／または計数するための指示書とを含むキットが提供される。
【０１７０】
様々な実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲに結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１〜３、９〜１１、もしくは１７〜１９に記載のＣＤＲＬ１〜ＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖配列、および／または配列番号４〜６、１２〜１４、もしくは２０〜２２に記載のＣＤＲＨ１〜ＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖配列を含む。
【０１７１】
一部の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７、１５、もしくは２３のうちいずれか１つに記載の可変軽鎖配列、および／または配列番号８、１６、もしくは２４のうちいずれか１つに記載の可変重鎖配列を含む。
【０１７２】
一部の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２５に記載の抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖ断片を結合する可変軽鎖配列および／または可変重鎖配列を含む。
【０１７３】
具体的な実施形態では、キットは、抗体または抗体断片と、検出可能な標識と、コンジュゲーションのための指示書とを含む。具体的な実施形態では、キットは、検出可能な標識にコンジュゲートされた抗体または抗体断片と、使用のための指示書とを含む。好適な実施形態では、検出可能な標識は直接的に検出可能である。さらに好適な一実施形態では、検出可能な標識は蛍光標識である。さらにいっそう好適な一実施形態では、検出可能な標識はＲＰＥである。
【０１７４】
Ｉ．方法
抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞活性は、免疫エフェクター細胞上の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの発現に部分的に関連する。抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの発現をｅｘ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏとｉｎ  ｖｉｖｏとの両方で正確に評価する能力が、薬剤製品の活性を評価するために、および患者内での抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞の生存および持続性を追跡するために必要である。
【０１７５】
具体的な実施形態では、１つまたは複数の抗体またはその抗原結合断片を用いる方法が提供される。本抗体は、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの発現を検出または測定するために使用される。本明細書で想定される抗体、断片、およびコンジュゲートは、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの発現の存在もしくはレベルおよび／または集団内の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ＋免疫エフェクター細胞の数を結合、検出、決定、特定、測定、定量、および／または計数するために使用される。
【０１７６】
様々な実施形態では、方法は、免疫エフェクター細胞上の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの発現を検出することを含む。免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞は、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの１つまたは複数のエピトープを結合する抗体またはその抗原結合断片に、その抗体が抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを結合して抗体：抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ複合体を形成するのに有効な量でかつ十分な時間にわたって接触される。
【０１７７】
具体的な実施形態では、方法は、免疫エフェクター細胞の集団内の１つまたは複数の免疫エフェクター細胞上の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの発現を検出することを含む。１つまたは複数の免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞は、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの１つまたは複数のエピトープを結合する抗体またはその抗原結合断片に、その抗体が抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを結合して抗体：抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ複合体を形成するのに有効な量でかつ十分な時間にわたって接触される。具体的な一実施形態では、免疫エフェクター細胞の少なくとも２５％は抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ＋である。別の実施形態では、免疫エフェクター細胞の少なくとも少なくとも５０％は抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ＋である。別の実施形態では、免疫エフェクター細胞の少なくとも少なくとも７５％は抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ＋である。
【０１７８】
特定の実施形態では、方法は、免疫エフェクター細胞上の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの発現の量を決定することを含む。免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞は、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの１つまたは複数のエピトープを結合する抗体またはその抗原結合断片に、その抗体が抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを結合して抗体：抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ複合体を形成するのに有効な量でかつ十分な時間にわたって接触される。抗体：抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ複合体の量は測定されて対照と比較される。
【０１７９】
一部の実施形態では、方法は、免疫エフェクター細胞の集団内の１つまたは複数の免疫エフェクター細胞上の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの発現の量を決定することを含む。１つまたは複数の免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞は、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの１つまたは複数のエピトープを結合する抗体またはその抗原結合断片に、その抗体が抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを結合して抗体：抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ複合体を形成するのに有効な量でかつ十分な時間にわたって接触される。抗体：抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ複合体の量は測定されて対照と比較される。
【０１８０】
具体的な実施形態では、方法は、免疫エフェクター細胞の集団内の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ＋免疫エフェクター細胞の数を決定することを含む。１つまたは複数の免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞は、ＣＡＲの抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖ部分の１つまたは複数のエピトープを結合する抗体またはその抗原結合断片に、その抗体が抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを結合して抗体：抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ複合体を形成するのに有効な量でかつ十分な時間にわたって接触される。抗体：抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ複合体を含む免疫エフェクター細胞は、次いで計数することができる。
【０１８１】
具体的な実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの発現または抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ＋Ｔ細胞を検出、決定、または計数する方法は、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ＋Ｔ細胞を投与された対象からの生体試料の単離を含む。具体的な実施形態では、試料は、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ＋Ｔ細胞を含有するかまたは含有する疑いがある。好適な実施形態では、試料は、アフェレーシス試料、白血球除去試料、末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、または腫瘍生検物である。
【０１８２】
具体的な実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを結合する本明細書で想定される抗体およびコンジュゲートを使用して、薬物動態、拡大、および／または持続が、対象中および／または１つまたは複数の時点で対象から採集された試料中の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ＋Ｔ細胞の量を検出することによって測定または評価されることを試験する。具体的な実施形態では、対象が抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ＋Ｔ細胞を投与された後、試料は、約２４時間、約４８時間、約７２時間、約４日間、約５日間、約６日間、約７日間、約１０日間、約１４日間、約２１日間、約３週間、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約６ヶ月間、約１年間、または毎週、毎月、もしくは毎年、対象から採集、単離、および／または摘出される。
【０１８３】
様々な実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲに結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１〜３、９〜１１、もしくは１７〜１９に記載のＣＤＲＬ１〜ＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖配列、および／または配列番号４〜６、１２〜１４、もしくは２０〜２２に記載のＣＤＲＨ１〜ＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖配列を含む。
【０１８４】
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７、１５、もしくは２３のうちいずれか１つに記載の可変軽鎖配列、および／または配列番号８、１６、または２４のうちいずれか１つに記載の可変重鎖配列を含む。
【０１８５】
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２５に記載の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを結合する可変軽鎖配列および／または可変重鎖配列を含む。
【０１８６】
具体的な実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの発現または抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ＋Ｔ細胞を検出、決定、または計数する方法は、検出可能な標識にコンジュゲートされた抗体または抗体断片の使用を含む。好適な実施形態では、検出可能な標識は直接的に検出可能である。さらに好適な一実施形態では、検出可能な標識は蛍光標識である。さらにいっそう好適な一実施形態では、検出可能な標識はＲＰＥである。
【０１８７】
抗体：抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ複合体の存在は、具体的な実施形態では、以下のアッセイのうち１つまたは複数を使用して、検出、決定、および／または計数することができる：免疫組織化学的検査、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、免疫吸着アッセイ、化学発光アッセイ、電気化学発光アッセイ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）ベースのバイオセンサー（例えばＢＩＡｃｏｒｅ）、蛍光顕微鏡観察、フローサイトメトリー、蛍光活性化細胞分取法（ＦＡＣＳ）、またはウェスタンブロット。
【０１８８】
好適な実施形態では、抗体：抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ複合体の存在は、フローサイトメトリーを用いて検出、決定、および／または計数される。さらに好適な一実施形態では、抗体：抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ複合体の存在は、ＦＡＣＳを用いて検出、決定、および／または計数される。
【０１８９】
具体的な実施形態では、１つまたは複数の免疫エフェクター細胞上の抗BCMA  CARのバックグラウンド発現のレベルが決定され、１つまたは複数の免疫エフェクター細胞上に測定された抗体：抗BCMA  CAR複合体の量から減算されるか、または測定を正規化するために使用される。
【０１９０】
本明細書に引用されたすべての刊行物、特許出願、および発行済みの特許は、それぞれの個別の刊行物、特許出願、または発行済みの特許が参照により具体的かつ個別に標示されるかのように、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１９１】
上述の発明は、理解を明確にすることを目的として、説明および例示によりいくらか詳細に記載されてきたとはいえ、添付の特許請求の範囲の趣旨および範囲から逸脱することなくある特定の変更および改変が上記に対し行われうることが、本発明の教示に照らして当業者に容易に明らかになるものとなる。以下の実施例は、説明のみを目的として提供され、限定を目的としない。当業者は、実質的に同様の結果を生じるために変更または改変できる重大ではない種々のパラメーターを容易に認識するものとなる。
【実施例】
【０１９２】
実施例１
抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲに対する抗体の評価
配列番号２５に記載の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ配列に対するマウスモノクローナル抗体を生成した。
【０１９３】
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、ＩＬ−２（セルジェニックス）とＣＤ３およびＣＤ２８に特異的な抗体（ミルテニーバイオテク）とを含有する培地にて、静置用フラスコで培養した。抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする２×１０８形質導入単位のレンチウイルスを、培養開始の翌日に添加した。全１０日間の培養の間、ＩＬ−２を含有する新鮮培地を添加することによって、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞を対数期に維持した。Ｔ細胞に、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（ＢＣＭＡ−０２）、ヒト化抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ（ＢＣＭＡ−０３）、または抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲを形質導入し、１０日間拡大した。配列番号２５に記載の抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖ配列に対する３つの抗体を用いて、培養終了時のＣＡＲの発現について、ＣＡＲ  Ｔ細胞を評価した。
【０１９４】
抗体クローン７Ｇ２．Ａ１．Ｂ２、１１Ｅ６．Ｇ２．Ｂ５、および１１Ｅ６．Ｇ７．Ｆ２を、フィコエリスリン（ＰＥ）にコンジュゲートした。１×１０６個の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞または非形質導入対照Ｔ細胞を、１μｇの抗体コンジュゲートを含む総量１００μＬ中にて４℃で２０分間インキュベートし、次いで洗浄して、１％パラホルムアルデヒド中で固定した。ＦＡＣＳ分析を試料に実施して、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ＋Ｔ細胞を検出し、決定し、計数した。すべての抗体コンジュゲートが約７０％の細胞上の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲの発現を検出した。図１。
【０１９５】
概して、以下の特許請求の範囲では、使用される用語は、本明細書および特許請求の範囲に開示された具体的な実施形態に特許請求の範囲を限定するものと解釈されるべきではないが、そのような特許請求の範囲の与えられた全範囲の等価物と併せてすべての可能な実施形態を含むものと解釈されるべきである。したがって、特許請求の範囲は本開示により限定されない。
【図１】
2021527408.tif 000003
【配列表】
2021527408000001.app
【国際調査報告】
2021527408.tif 000004
2021527408.tif 000005
2021527408.tif 000006