(57)【要約】  本開示は、有効用量のキメラ受容体（例えば、ＣＡＲ又はＴＣＲ）で遺伝子改変されたＴ細胞免疫療法薬を投与することを含む、悪性腫瘍を治療する方法を提供する。本開示の幾つかの態様は、注入前の腫瘍微小環境を特性評価し、Ｔ細胞免疫療法薬の有効用量を決定する方法に関する。【選択図】図１
2021521137.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者における悪性腫瘍を治療する方法であって、
（ａ）前記患者からの腫瘍生検を分析して、腫瘍微小環境を特性評価することと、
（ｂ）１つ以上のキメラ受容体を含むＴ細胞を有効用量、前記患者に投与することと、
を含み、前記有効用量は前記腫瘍微小環境の特性を使用して決定される、方法。
【請求項２】
前記腫瘍微小環境は、遺伝子発現プロファイリング、腫瘍内Ｔ細胞密度測定又はそれらの組み合わせを使用して特性評価される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記遺伝子発現プロファイリングは、特定の遺伝子パネルの発現レベルを測定することを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
ＣＤ３Ｇ、ＳＴＡＴ４、ＣＤ３Ｅ、ＣＤ３Ｄ、ＧＺＭＫ、ＧＺＭＭ、ＰＲＦ１、ＣＤ８Ａ、ＩＣＯＳ、ＣＸＣＬ１０、ＳＴＡＴ１、ＩＬ１５、ＣＣＲ２、ＣＣＬ２、ＩＲＦ１、ＴＢＸ２１、ＧＺＭＡ、ＣＸＣＲ３、ＧＺＭＢ、ＣＤ６９、ＣＸＣＬ１１及びそれらの組み合わせから選択される１つ以上の遺伝子の発現レベルを測定することを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
ＣＴＬＡ４、ＧＺＭＨ、ＣＤ８Ａ、ＰＤＣＤ１、ＣＤ３Ｇ、ＩＲＦ１、ＣＸ３ＣＬ１、ＴＮＦＲＳＦ９、ＣＤ３Ｅ、ＧＺＭＡ、ＣＸＣＬ１０、ＴＳＬＰ、ＲＥＮ、ＧＺＭＢ、ＴＮＦＲＳＦ１８、ＣＣＬ２、ＧＺＭＫ、ＣＸＣＬ１１、ＣＤ６９、ＣＤ２４７、ＣＣＬ５、ＳＴＡＴ４、ＣＤ２７４、ＧＮＬＹ、ＩＴＧＡＥ、ＬＡＧ３、ＩＬ１５、ＬＴＫ、ＰＲＦ１、ＣＤ３Ｄ、ＰＦ４、ＴＢＸ２１、ＩＣＯＳ、ＣＸＣＬ９、ＩＦＮＧ、ＶＥＧＦＡ、ＳＴＡＴ１、ＧＺＭＭ、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ２、ＩＬ１７Ａ、ＰＲＯＭ１及びそれらの組み合わせから選択される１つ以上の遺伝子の発現レベルを測定することを含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
ＰａｎＣａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ  Ｐａｎｅｌから選択される遺伝子の発現レベルを測定することを含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
Ｂ細胞マーカーの発現レベルを測定することを含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
Ｔ細胞マーカーの発現レベルを測定することを含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
自然免疫応答と関連性を有する遺伝子を含む特定の遺伝子パネルの発現レベルを測定することを含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記特定の遺伝子パネルは、細胞傷害性細胞、樹状細胞、マクロファージ又は顆粒球のマーカーを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記遺伝子発現プロファイル及び／又は前記腫瘍内Ｔ細胞密度に基づいて免疫スコアを決定することを更に含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記免疫スコアを使用して総用量を調整することを更に含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記有効用量は、体重１ｋｇ当たり少なくとも１×１０６個のＣＡＲ陽性生存Ｔ細胞を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記キメラ受容体は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記悪性腫瘍は、固形腫瘍、肉腫、癌腫、リンパ腫、多発性骨髄腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、形質転換後濾胞性リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）、慢性若しくは急性の白血病、急性骨髄白血病、慢性骨髄白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）（非Ｔ細胞ＡＬＬを含む）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、Ｔ細胞リンパ腫、１つ以上のＢ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、毛様細胞白血病、小細胞型若しくは大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ増殖性状態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、骨髄異形成及び骨髄異形成症候群、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞腫瘍、ワルデンストレームマクログロブリン血症、形質細胞増殖性障害、例えば、無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無痛性骨髄腫）、意義不明の単クローン性γグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、形質細胞腫（例えば、形質細胞異常増殖症、孤在性骨髄腫、孤在性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫、及び多発性形質細胞腫）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス、ＰＯＥＭＳ症候群（Ｃｒｏｗ−Ｆｕｋａｓｅ症候群、高月病、及びＰＥＰ症候群としても知られる）、又はそれらの組み合わせである、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記有効用量は、前記患者がキメラ受容体治療に応答する可能性を高めるように最適化される、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
患者がキメラ受容体治療に応答するかどうかを判定する方法であって、
（ａ）前記患者からの腫瘍生検を分析して、遺伝子発現プロファイルを使用して腫瘍微小環境を特性評価することと、
（ｂ）前記遺伝子発現プロファイルに基づいて免疫スコアを決定することと、
（ｃ）前記患者がキメラ受容体治療に応答するかどうかを前記免疫スコアに基づいて判定することと、
を含む、方法。
【請求項１９】
患者がキメラ受容体治療に応答するかどうか判定する方法であって、
（ａ）治療前に患者から腫瘍生検を取得することと、
（ｂ）前記腫瘍生検を分析して、腫瘍微小環境を特性評価することと、
（ｃ）前記患者がキメラ受容体治療に応答するかどうかを前記腫瘍微小環境の特性に基づいて判定することと、
を含む、方法。
【請求項２０】
患者における悪性腫瘍を治療する方法であって、
（ａ）キメラ受容体治療前に前記患者からの腫瘍生検を分析して、腫瘍微小環境を特性評価することと、
（ｂ）前記患者がキメラ受容体治療に応答するかどうかを前記腫瘍微小環境の特性に基づいて判定することと、
（ｃ）１つ以上のキメラ受容体を含むＴ細胞を有効用量、前記患者に投与することと、
を含み、前記有効用量は前記腫瘍微小環境の特性を使用して決定される、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年４月１２日付で出願された米国仮特許出願第６２／６５６，８２５号、２０１９年４月１日付で出願された米国仮特許出願第６２／８２７，７７０号及び２０１９年４月１０日付で出願された米国仮特許出願第６２／８３１，９４６号に対する優先権を主張し、これら各々の全体が引用することにより本明細書の一部をなす。
【０００２】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含み、その全体が引用することにより本明細書の一部をなす。２０１９年４月１１日付けで作製された上記ＡＳＣＩＩコピーの名前はＫ−１０６５＿０１＿ＳＬ．ｔｘｔであり、８キロバイトのサイズである。
【背景技術】
【０００３】
ヒト癌は、元は正常細胞で構成され、この正常細胞が遺伝的又はエピジェネティックな変換を受けて異常な癌細胞となる。そうすることで、癌細胞は、正常細胞によって発現されるものとは明確に異なるタンパク質及び他の抗原を発現し始める。これらの異常な腫瘍抗原は、身体の自然免疫系によって、癌細胞を特異的に標的とし死滅させるのに使用され得る。しかしながら、癌細胞は、Ｔリンパ球及びＢリンパ球等の免疫細胞が癌細胞を標的とすることに成功しないように様々な機構を利用する。
【０００４】
ヒトＴ細胞療法は、患者において癌細胞を標的とし、死滅させるために富化又は改変されたヒトＴ細胞に頼っている。Ｔ細胞が特定の癌細胞を標的とし死滅させる能力を増加するため、特定の標的癌細胞へとＴ細胞を方向づけるコンストラクトを発現するようＴ細胞を操作する方法が開発された。特定の腫瘍抗原と相互作用することができる結合ドメインを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）及び操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）は、Ｔ細胞が特定の腫瘍抗原を発現する癌細胞を標的とし、死滅させることを可能とする。
【発明の概要】
【０００５】
ＣＡＲ  Ｔ細胞注入前の腫瘍微小環境（ＴＭＥ）特性は臨床転帰に影響を及ぼし得る。本開示は、ＴＭＥの免疫関連遺伝子発現シグネチャ及び／又は腫瘍内Ｔ細胞密度を使用してＴＭＥを評価して転帰と関連付ける方法を提供する。
【０００６】
以下に記載される態様及び実施の形態のそれぞれは、文脈より別段の明確な指示がない限り、組み合わせることができる。
【０００７】
一態様では、本開示は、患者における悪性腫瘍を治療する方法であって、（ａ）前記患者からの腫瘍生検を分析して、腫瘍微小環境を特性評価することと、（ｂ）１つ以上のキメラ受容体を含むＴ細胞を有効用量、前記患者に投与することとを含み、前記有効用量は前記腫瘍微小環境の特性を使用して決定される、方法を提供する。
【０００８】
幾つかの実施の形態においては、腫瘍微小環境は、遺伝子発現プロファイリングを使用して特性評価される。幾つかの実施の形態においては、腫瘍微小環境は、腫瘍内Ｔ細胞密度に基づいて特性評価される。幾つかの実施の形態においては、腫瘍微小環境は、遺伝子発現プロファイリング及び腫瘍内Ｔ細胞密度を使用して特性評価される。
【０００９】
幾つかの実施の形態においては、遺伝子発現プロファイリングは、特定の遺伝子パネルの発現レベルを測定することを含む。幾つかの実施の形態においては、上記パネルは、ＣＤ３Ｇ、ＳＴＡＴ４、ＣＤ３Ｅ、ＣＤ３Ｄ、ＧＺＭＫ、ＧＺＭＭ、ＰＲＦ１、ＣＤ８Ａ、ＩＣＯＳ、ＣＸＣＬ１０、ＳＴＡＴ１、ＩＬ１５、ＣＣＲ２、ＣＣＬ２、ＩＲＦ１、ＴＢＸ２１、ＧＺＭＡ、ＣＸＣＲ３、ＧＺＭＢ、ＣＤ６９、ＣＸＣＬ１１及びそれらの組み合わせを含む。幾つかの実施の形態においては、上記パネルは、ＣＴＬＡ４、ＧＺＭＨ、ＣＤ８Ａ、ＰＤＣＤ１、ＣＤ３Ｇ、ＩＲＦ１、ＣＸ３ＣＬ１、ＴＮＦＲＳＦ９、ＣＤ３Ｅ、ＧＺＭＡ、ＣＸＣＬ１０、ＴＳＬＰ、ＲＥＮ、ＧＺＭＢ、ＴＮＦＲＳＦ１８、ＣＣＬ２、ＧＺＭＫ、ＣＸＣＬ１１、ＣＤ６９、ＣＤ２４７、ＣＣＬ５、ＳＴＡＴ４、ＣＤ２７４、ＧＮＬＹ、ＩＴＧＡＥ、ＬＡＧ３、ＩＬ１５、ＬＴＫ、ＰＲＦ１、ＣＤ３Ｄ、ＰＦ４、ＴＢＸ２１、ＩＣＯＳ、ＣＸＣＬ９、ＩＦＮＧ、ＶＥＧＦＡ、ＳＴＡＴ１、ＧＺＭＭ、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ２、ＩＬ１７Ａ、ＰＲＯＭ１及びそれらの組み合わせを含む。幾つかの実施の形態においては、上記パネルは、ＰａｎＣａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ  Ｐａｎｅｌを含む。
【００１０】
幾つかの実施の形態においては、上記方法は、ＣＤ３Ｇ、ＳＴＡＴ４、ＣＤ３Ｅ、ＣＤ３Ｄ、ＧＺＭＫ、ＧＺＭＭ、ＰＲＦ１、ＣＤ８Ａ、ＩＣＯＳ、ＣＸＣＬ１０、ＳＴＡＴ１、ＩＬ１５、ＣＣＲ２、ＣＣＬ２、ＩＲＦ１、ＴＢＸ２１、ＧＺＭＡ、ＣＸＣＲ３、ＧＺＭＢ、ＣＤ６９、ＣＸＣＬ１１及びそれらの組み合わせから選択される１つ以上の遺伝子の発現レベルを測定することを含む。
【００１１】
幾つかの実施の形態においては、上記方法は、ＣＴＬＡ４、ＧＺＭＨ、ＣＤ８Ａ、ＰＤＣＤ１、ＣＤ３Ｇ、ＩＲＦ１、ＣＸ３ＣＬ１、ＴＮＦＲＳＦ９、ＣＤ３Ｅ、ＧＺＭＡ、ＣＸＣＬ１０、ＴＳＬＰ、ＲＥＮ、ＧＺＭＢ、ＴＮＦＲＳＦ１８、ＣＣＬ２、ＧＺＭＫ、ＣＸＣＬ１１、ＣＤ６９、ＣＤ２４７、ＣＣＬ５、ＳＴＡＴ４、ＣＤ２７４、ＧＮＬＹ、ＩＴＧＡＥ、ＬＡＧ３、ＩＬ１５、ＬＴＫ、ＰＲＦ１、ＣＤ３Ｄ、ＰＦ４、ＴＢＸ２１、ＩＣＯＳ、ＣＸＣＬ９、ＩＦＮＧ、ＶＥＧＦＡ、ＳＴＡＴ１、ＧＺＭＭ、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ２、ＩＬ１７Ａ、ＰＲＯＭ１及びそれらの組み合わせから選択される１つ以上の遺伝子の発現レベルを測定することを含む。
【００１２】
幾つかの実施の形態においては、上記方法は、ＰａｎＣａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ  Ｐａｎｅｌから選択される遺伝子の発現レベルを測定することを含む。
【００１３】
幾つかの実施の形態においては、上記方法は、Ｂ細胞マーカーの発現レベルを測定することを含む。幾つかの実施の形態においては、Ｂ細胞マーカーは、ＢＬＫ、ＣＤ１９、ＣＲ２、ＭＳ４Ａ１、ＴＮＦＲＳＦ１７及びそれらの組み合わせから選択される。
【００１４】
幾つかの実施の形態においては、上記方法は、Ｔ細胞マーカーの発現レベルを測定することを含む。幾つかの実施の形態においては、Ｔ細胞マーカーは、ＣＤ２、ＣＤ２Ｅ、ＣＤ３Ｇ、ＣＤ６及びそれらの組み合わせから選択される。
【００１５】
幾つかの実施の形態においては、上記方法は、自然免疫応答と関連性を有する遺伝子を含む特定の遺伝子パネルの発現レベルを測定することを含む。幾つかの実施の形態においては、特定の遺伝子パネルは、細胞傷害性細胞、樹状細胞、マクロファージ、顆粒球及びそれらの組み合わせのマーカーを含む。
【００１６】
幾つかの実施の形態においては、特定の遺伝子パネルは、ＣＤ８、ＢＬＣ２及びそれらの組み合わせから選択される遺伝子を含む。
【００１７】
幾つかの実施の形態においては、特定の遺伝子パネルは、ＣＣＬ１２、ＣＣＬ１７及びそれらの組み合わせから選択される遺伝子を含む。
【００１８】
幾つかの実施の形態においては、特定の遺伝子パネルは、ＡＰＯＥ、ＣＣＬ７及びそれらの組み合わせから選択される遺伝子を含む。
【００１９】
幾つかの実施の形態においては、特定の遺伝子パネルは、ＣＭＡ１、ＣＳＦ３Ｒ及びそれらの組み合わせから選択される遺伝子を含む。
【００２０】
幾つかの実施の形態においては、上記方法は、ＣＴＬＡ４、ＣＤ３ｇ、ＣＤ３ｅ、ＣＤ２７、ＳＨ２Ｂ２、ＩＣＯＳＬ及びそれらの組み合わせから選択される１つ以上の遺伝子の発現レベルを測定することを含む。
【００２１】
幾つかの実施の形態においては、上記方法は、ＣＤ２７、ＳＨ２Ｂ２、ＩＣＯＳＬＧ、ＨＬＡ−ＤＱＡ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ１、ＭＡＧＥＢ２、ＰＲＡＭＥ、ＭＡＧＥＡ１、ＩＬ２２ＲＡ１、ＳＳＸ１、ＣＣＬ２０、ＮＥＦＬ、Ｃ９、ＧＺＭＭ、ＫＩＲ  Ａｃｔサブグループ２、ＨＬＡ−ＤＯＢ及びそれらの組み合わせから選択される１つ以上の遺伝子の発現レベルを測定することを含む。
【００２２】
幾つかの実施の形態においては、上記方法は、ＣＤ２７、ＳＨ２Ｂ２、ＩＣＯＳＬＧ及びそれらの組み合わせから選択される１つ以上の遺伝子の発現レベルを測定することを含む。
【００２３】
幾つかの実施の形態においては、上記方法は、ＨＬＡ−ＤＱＡ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ１、ＭＡＧＥＢ２、ＰＲＡＭＥ、ＭＡＧＥＡ１、ＩＬ２２ＲＡ１、ＳＳＸ１、ＣＣＬ２０、ＮＥＦＬ、Ｃ９、ＧＺＭＭ、ＫＩＲ  Ａｃｔサブグループ２、ＨＬＡ−ＤＯＢ及びそれらの組み合わせから選択される１つ以上の遺伝子の発現レベルを測定することを含む。
【００２４】
幾つかの実施の形態においては、上記方法は、例えば腫瘍生検の免疫組織化学的染色によって、組織微小環境におけるＴ細胞の密度（すなわち、腫瘍内Ｔ細胞密度）を測定することを含む。幾つかの実施の形態においては、上記方法は、組織微小環境におけるＣＤ３＋Ｔ細胞及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞の密度を測定することを含む。
【００２５】
幾つかの実施の形態においては、上記方法は、遺伝子発現プロファイルに基づいて免疫スコアを決定することを含む。幾つかの実施の形態においては、上記方法は、腫瘍内Ｔ細胞密度に基づいて免疫スコアを決定することを含む。幾つかの実施の形態においては、上記方法は、免疫スコアを使用してＣＡＲ−Ｔ細胞の総用量を調整することを含む。幾つかの実施の形態においては、上記方法は、免疫調節化合物又は免疫調節介入を提供して免疫スコアを増加させた後に、ＣＡＲ−Ｔ細胞を投与することを含む。
【００２６】
幾つかの実施の形態においては、前記有効用量は、体重１ｋｇ当たり少なくとも１×１０６個のＣＡＲ陽性生存Ｔ細胞を含む。
【００２７】
幾つかの実施の形態においては、キメラ受容体は、腫瘍抗原を標的とする。幾つかの実施の形態においては、キメラ受容体は、腫瘍関連表面抗原、例えば５Ｔ４、アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）、Ｂ７−１（ＣＤ８０）、Ｂ７−２（ＣＤ８６）、ＢＣＭＡ、Ｂ−ヒト絨毛膜性生殖腺刺激ホルモン、ＣＡ−１２５、癌胚抗原（ＣＥＡ）、癌胚抗原（ＣＥＡ）、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５６、ＣＤ８、ＣＬＬ−１、ｃ−Ｍｅｔ、ＣＭＶ特異抗原、ＣＳ−１、ＣＳＰＧ４、ＣＴＬＡ−４、ＤＬＬ３、ジシアロガングリオシドＧＤ２、膵管上皮ムチン、ＥＢＶ特異抗原、ＥＧＦＲ変異体ＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、ＥＬＦ２Ｍ、エンドグリン、エフリンＢ２、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）、上皮性腫瘍抗原、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、線維芽細胞関連タンパク質（ｆａｐ）、ＦＬＴ３、葉酸結合タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、細胞膠腫関連抗原、スフィンゴ糖脂質、ｇｐ３６、ＨＢＶ特異抗原、ＨＣＶ特異抗原、ＨＥＲ１−ＨＥＲ２、ＨＥＲ２−ＨＥＲ３の組み合わせ、ＨＥＲＶ−Ｋ、高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷ−ＭＡＡ）、ＨＩＶ−１型エンベロープ糖タンパク質ｇｐ４１、ＨＰＶ特異抗原、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＩＧＦＩ受容体、ＩＧＦ−ＩＩ、ＩＬ−１１Ｒアルファ、ＩＬ−１３Ｒ−ａ２、インフルエンザウイルス特異抗原、ＣＤ３８、インスリン増殖因子（ＩＧＦＩ）−１、腸カルボキシルエステラーゼ、カッパー鎖、ＬＡＧＡ−１ａ、ラムダ鎖、ラッサ熱ウイルス特異抗原、レクチン反応性ＡＦＰ、系譜特異又は組織特異抗原、例えばＣＤ３、ＭＡＧＥ、ＭＡＧＥ−Ａ１、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子、腫瘍特異的ペプチドエピトープを提示する主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子、Ｍ−ＣＳＦ、黒色腫関連抗原、メソテリン、メソテリン、ＭＮ−ＣＡ  ＩＸ、ＭＵＣ−１、ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２、変異ｐ５３、変異ｐ５３、変異ｒａｓ、好中球エラスターゼ、ＮＫＧ２Ｄ、Ｎｋｐ３０、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｐ５３、ＰＡＰ、プロスターゼ、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、前立腺癌腫瘍抗原−１（ＰＣＴＡ−１）、前立腺特異抗原タンパク質、ＳＴＥＡＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＰＳＭＡ、ＲＡＧＥ−１、ＲＯＲ１、ＲＵ１、ＲＵ２（ＡＳ）、表面接着分子、サバイビング（surviving）及びテロメラーゼ、ＴＡＧ−７２、フィブロネクチンのエクストラドメインＡ（ＥＤＡ）及びエクストラドメインＢ（ＥＤＢ）、並びにテネイシンＣのＡ１ドメイン（ＴｎＣ  Ａ１）、サイログロブリン、腫瘍間質抗原、血管内皮増殖因子受容体−２（ＶＥＧＦＲ２）、ウイルス特異表面抗原、例えばＨＩＶ特異抗原（例えば、ＨＩＶ  ｇｐ１２０）、並びにこれらの表面マーカーの任意の誘導体又は変異体から選択される腫瘍抗原を標的とする。
【００２８】
幾つかの実施の形態においては、キメラ受容体は、特異的にＣＤ１９を標的とする。
【００２９】
幾つかの実施の形態においては、前記キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。幾つかの実施の形態においては、前記キメラ受容体は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）である。
【００３０】
幾つかの実施の形態においては、前記悪性腫瘍は、固形腫瘍、肉腫、癌腫、リンパ腫、多発性骨髄腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣ：primary mediastinal large B cell lymphoma）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ：diffuse large B cell lymphoma）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、形質転換後濾胞性リンパ腫（transformed follicular lymphoma）、脾辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ：splenic marginal zone lymphoma）、慢性若しくは急性の白血病、急性骨髄白血病、慢性骨髄白血病（chronic myeloid leukemia）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）（非Ｔ細胞ＡＬＬを含む）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、Ｔ細胞リンパ腫、１つ以上のＢ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、毛様細胞白血病、小細胞型若しくは大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ増殖性状態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、骨髄異形成及び骨髄異形成症候群、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞腫瘍、ワルデンストレームマクログロブリン血症、形質細胞増殖性障害、例えば、無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無痛性骨髄腫）、意義不明の単クローン性γグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、形質細胞腫（例えば、形質細胞異常増殖症、孤在性骨髄腫、孤在性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫、及び多発性形質細胞腫）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス、ＰＯＥＭＳ症候群（Ｃｒｏｗ−Ｆｕｋａｓｅ症候群、高月病、及びＰＥＰ症候群としても知られる）、又はそれらの組み合わせである。
【００３１】
幾つかの実施の形態においては、悪性腫瘍は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、転移性黒色腫、形質転換後濾胞性リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、及び多発性骨髄腫である。
【００３２】
幾つかの実施の形態においては、有効用量は、患者が治療に応答する可能性を高めるように最適化される。
【００３３】
幾つかの実施の形態においては、腫瘍生検は、キメラ受容体療法による治療の前に患者から取得される。
【００３４】
一態様では、本開示は、患者がキメラ受容体治療に応答するかどうかを決定する方法であって、（ａ）前記患者からの腫瘍生検を分析して、遺伝子発現プロファイルを使用して腫瘍微小環境を特性評価することと、（ｂ）前記遺伝子発現プロファイルに基づいて免疫スコアを決定することと、（ｃ）前記患者がキメラ受容体治療に応答するかどうかを前記免疫スコアに基づいて決定することとを含む、方法を含む。
【００３５】
一態様では、本開示は、患者がキメラ受容体治療に応答するかどうかを決定する方法であって、（ａ）患者からの腫瘍生検を分析して、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ３＋Ｔ細胞及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞）の腫瘍内密度を定量することによって腫瘍微小環境を特性評価することと、（ｂ）腫瘍内Ｔ細胞密度に基づいて免疫スコアを決定することと、（ｃ）免疫スコアに基づいて患者がキメラ受容体治療に応答するかどうかを決定することとを含む、方法を含む。
【００３６】
一態様では、本開示は、患者における悪性腫瘍を治療する方法であって、（ａ）キメラ受容体治療前に前記患者からの腫瘍生検を分析して、腫瘍微小環境を特性評価することと、（ｂ）前記患者がキメラ受容体治療に応答するかどうかを前記腫瘍微小環境の特性に基づいて決定することと、（ｃ）１つ以上のキメラ受容体を含むＴ細胞を有効用量、前記患者に投与することとを含み、前記有効用量は前記腫瘍微小環境の特性を使用して決定される、方法を提供する。
【００３７】
幾つかの実施の形態においては、上記方法は、腫瘍微小環境の特性を使用して、追加の療法薬が臨床有効性を改善するかどうかを決定することを更に含む。幾つかの実施の形態においては、キメラ受容体療法薬は追加の療法薬と共に投与される。幾つかの実施の形態においては、追加の療法薬はキメラ受容体療法薬との併用で投与される。幾つかの実施の形態においては、追加の療法薬はキメラ受容体療法薬の前又は後に投与される。
【００３８】
幾つかの実施の形態においては、上記方法は、サイトカイン療法薬を投与することを更に含む。幾つかの実施の形態においては、サイトカイン療法薬はＩＬ−２又はＩＬ−１５である。
【００３９】
幾つかの実施の形態においては、上記方法は、刺激抗体を投与することを更に含む。幾つかの実施の形態においては、刺激抗体は抗４１ＢＢ又は抗ＯＸ−４０である。
【００４０】
幾つかの実施の形態においては、上記方法は、チェックポイント遮断療法薬を投与することを更に含む。幾つかの実施の形態においては、チェックポイント遮断療法薬はＣＴＬＡ４又はＰＤ−１を含む。
【００４１】
幾つかの実施の形態においては、上記方法は、自然免疫刺激剤を投与することを更に含む。幾つかの実施の形態においては、自然免疫刺激剤はＴＬＲアゴニスト又はＳＴＩＮＧアゴニストを含む。
【００４２】
幾つかの実施の形態においては、遺伝子発現プロファイリングは、増殖マーカー、炎症マーカー、免疫調節マーカー、エフェクター及び／又はケモカインの発現レベルを測定することを含む。幾つかの実施の形態においては、上記方法は、ＩＬ−６、ＣＲＰ、ＳＡＡ、ＩＬ−５、フェリチン、ＩＬ−１Ｒａ、ＩＬ−２Ｒα及びそれらの組み合わせから選択される１つ以上の遺伝子の発現レベルを測定することを含む。幾つかの実施の形態においては、上記方法は、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１０及びそれらの組み合わせから選択される１つ以上の遺伝子の発現レベルを測定することを含む。幾つかの実施の形態においては、上記方法は、ＩＬ−８、ＩＰ−１０、ＭＣＰ−１及びそれらの組み合わせから選択される１つ以上の遺伝子の発現レベルを測定することを含む。幾つかの実施の形態においては、上記方法は、グランザイムＢの発現レベルを測定することを含む。幾つかの実施の形態においては、上記方法は、ＣＤ３ε、ＣＤ２８及びＣＴＬＡ４の発現レベルを測定することを含む。幾つかの実施の形態においては、上記方法は、ＭＸ１、ＩＳＧ１５及びＭＹＤ８８の発現レベルを測定することを含む。幾つかの実施の形態においては、上記方法は、ＣＤ１９、ＣＤ７９Ｂ及びＰＡＸ５の発現レベルを測定することを含む。幾つかの実施の形態においては、上記方法は、ＰＤ−Ｌ１及び／又はＣＤ１９の発現レベルを測定することを含む。幾つかの実施の形態においては、腫瘍生検は、ＣＡＲ  Ｔ細胞療法による治療の前に取得される。幾つかの実施の形態においては、腫瘍生検は、ＣＡＲ  Ｔ細胞療法による治療の後に取得される。幾つかの実施の形態においては、上記方法は、ＣＡＲ  Ｔ細胞療法による治療の前に腫瘍生検を取得することと、ＣＡＲ  Ｔ細胞療法による治療の後に腫瘍生検を取得することとを含む。幾つかの実施の形態においては、腫瘍生検は、ＣＡＲ  Ｔ細胞療法による治療の７日後、１４日後、２１日後、又は２８日後に取得される。
【００４３】
図面は、説明を目的とするものにすぎず、限定するものではない。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の構成配置の概略図を示す図である。
【図２】アキシカブタゲン・シロロイセルを投与する患者のＺＵＭＡ−１臨床試験の概略図を示す図である。ＡＥは有害事象であり、ａｘｉ−ｃｅｌはアキシカブタゲン・シロロイセルであり、ＣＡＲはキメラ抗原受容体であり、ＣＲは完全奏効であり、ＣＲＳはサイトカイン放出症候群であり、ＤＬＢＣＬはびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫であり、ＮＥは神経学的事象であり、ＯＲＲは客観的奏効率であり、ＰＭＢＣＬは原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫であり、ＴＦＬは形質転換後濾胞性リンパ腫である。
【図３】ＺＵＭＡ−１臨床試験プロトコル及びペア生検のタイミングの概略図を示す図である。
【図４】腫瘍微小環境内の主要な免疫経路を評価するために使用されるＩｍｍｕｎｏｓｉｇｎ（商標）臨床研究アッセイパネルを示す図である。
【図５】図５Ａは、９ヶ月の最小追跡期間でアキシカブタゲン・シロロイセル（ａｘｉ−ｃｅｌ）で治療された２５人の患者からの試料に対して実施されたＩｍｍｕｎｏｓｉｇｎ（商標）２１スコアと臨床転帰との間の関連性を示す図である。その後、１人の患者が１２ヶ月の追跡期間で「ノンレスポンダー」から「レスポンダー」に変わった。図５Ｂは、高いベースラインＩｍｍｕｎｏｓｉｇｎ（商標）２１スコア及び低いベースラインＩｍｍｕｎｏｓｉｇｎ（商標）２１スコアを有するａｘｉ−ｃｅｌ治療に応答した患者の割合を示す図である。図５Ｃは、高いベースラインＩｍｍｕｎｏｓｉｇｎ（商標）２１スコア及び低いベースラインＩｍｍｕｎｏｓｉｇｎ（商標）２１スコアを有するａｘｉ−ｃｅｌ治療に応答しなかった患者の割合を示す図である。高い／低いＩｍｍｕｎｏｓｉｇｎ（商標）２１スコアのカットオフは、試料間で観察されるスコアの２５パーセンタイルとして定義した。図５Ｂ及び図５Ｃの点描は、低いＩｍｍｕｎｏｓｉｇｎ（商標）２１スコアを示している。
【図６】９ヶ月の最小追跡期間でアキシカブタゲン・シロロイセル（ａｘｉ−ｃｅｌ）で治療された２５人の患者からの試料に対して実施されたノンレスポンダーと比較したレスポンダーにおけるＩｍｍｕｎｏｓｉｇｎ（商標）２１遺伝子の発現における差異を示す図である。
【図７】図７Ａ〜図７Ｃは、９ヶ月の最小追跡期間でアキシカブタゲン・シロロイセル（ａｘｉ−ｃｅｌ）で治療された２５人の患者からの試料に対して実施された、事前に決められた４３個の免疫遺伝子パネルからのレスポンダー由来の腫瘍において上昇した上位３個の免疫環境遺伝子ＣＴＬＡ４（図７Ａ）、ＣＤ３γ（図７Ｂ）及びＣＤ３ε（図７Ｃ）の関連性を示す図である。
【図８】図８Ａは、治療された患者からの試料に対して実施された平均パーセンタイルのＩｍｍｕｎｏｓｃｏｒｅ（商標）と臨床転帰との間の関連性を示す図である。図８Ｂは、高いベースラインＩｍｍｕｎｏｓｃｏｒｅ（商標）を有した患者の間で観察された臨床転帰の割合を示す図である。図８Ｃは、低いベースラインＩｍｍｕｎｏｓｃｏｒｅ（商標）を有した患者の間で観察された臨床転帰の割合を示す図である。高い／低いＩｍｍｕｎｏｓｉｇｎ（商標）２１スコアのカットオフは、試料間で観察されるスコアの中央値として定義した。ＣＲは完全奏効であり、ＰＲは部分奏効であり、ＳＤは病勢安定であり、ＰＤは病勢進行である。
【図９】図９Ａ及び図９Ｂは、治療された患者由来のベースライン生検切片で完全奏効者及び完全奏効以外を示した患者の間での、ＣＤ３＋細胞及びＣＤ８＋細胞それぞれの密度を示す図である。
【図１０】治療された患者由来のベースライン生検から評価されたＩｍｍｕｎｏｓｉｇｎ（商標）２１スコアとＩｍｍｕｎｏｓｃｏｒｅ（商標）との間の相関関係のプロットを示す図である。
【図１１】ａｘｉ−ｃｅｌ治療の１年間の追跡期間での、Ｔ細胞関連遺伝子（ＣＤ３ε、ＣＤ２８及びＣＴＬＡ４）、自然免疫関連遺伝子（ＭＸ１、ＩＳＧ１５及びＭＹＤ８８）及びＢ細胞関連遺伝子（ＣＤ１９、ＣＤ７９Ｂ及びＰＡＸ５）のＴＭＥにおける治療前遺伝子発現分析並びに臨床転帰を示す図である。ＣＲは完全奏効であり、ＰＲは部分奏効であり、ＳＤは病勢安定であり、ＰＤは病勢進行である。
【図１２】免疫阻害チェックポイント（ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＬＡＧ３、ＴＮＦＲＳＦ１８、ＩＣＯＳ）、ＩＦＮ関連遺伝子（ＩＲＦ１、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ４、ＩＦＮγ）及びケモカイン（ＣＸＣＬ９、ＣＣＬ２、ＣＣＬ５）、エフェクター（ＣＤ８Ａ、ＧＮＬＹ、ＧＺＭＡ、ＧＺＭＭ、ＧＺＭＢ、ＧＺＭＨ）並びに増殖マーカーＩＬ−１５におけるベースラインと比較した相対変化を示す、ＣＡＲ−Ｔ治療の７日後〜２１日後のＴＭＥ遺伝子発現における倍率変化を示す図である。
【図１３】図１３Ａ及び図１３Ｂは、ＩＬ−１５（図１３Ａ）及びＰＤ−Ｌ１（図１３Ｂ）における差次的変化のｎａｎｏｓｔｒｉｎｇ分析を示す図である。Ｐｒｅ−Ｔｘは治療前であり、Ｗ１−２は１週目〜２週目であり、Ｗ４は４週目である。
【発明を実施するための形態】
【００４５】
本開示は、患者の生検の腫瘍微小環境の特性を使用して患者における悪性腫瘍を治療する方法に関する。本開示は、キメラ受容体治療の前に取得された患者生検の腫瘍微小環境の特性を使用して臨床転帰を予測することができるという驚くべき発見に部分的に基づいている。本明細書に記載されるように、キメラ受容体治療の前の腫瘍微小環境プロファイルを使用して、キメラ受容体（例えば、ＣＡＲ又はＴＣＲ）Ｔ細胞療法の臨床転帰に影響を与える有効用量が決定される。
【００４６】
定義
本発明がより容易に理解されるように、まず或る特定の用語を以下に定義する。以下の用語及び他の用語に対する更なる定義は、本明細書を通して記載される。
【００４７】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される、数量を特定していないもの（the singular forms "a," "an" and "the"）は、文脈より別段の明確な指示がない限り複数の指示対象を含む。
【００４８】
具体的に述べられない又は文脈より明らかでない限り、本明細書で使用される「又は」の用語は「又は」と「及び」の両方を含み、それらを包含すると理解される。
【００４９】
本明細書において使用される場合、「及び／又は」の用語は、２つの指定される特徴又は成分の各々ともう一方とを含む、又はもう一方を含まない具体的な開示として理解される。したがって、本明細書において「Ａ及び／又はＢ」等の句で使用される「及び／又は」の用語は、Ａ及びＢ；Ａ又はＢ；Ａ（単独）；並びにＢ（単独）を含むことが意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／又はＣ」等の句において使用される「及び／又は」の用語は、Ａ、Ｂ及びＣ；Ａ、Ｂ又はＣ；Ａ又はＣ；Ａ又はＢ；Ｂ又はＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；並びにＣ（単独）の態様の各々を包含することが意図される。
【００５０】
本明細書で使用される「例えば」及び「すなわち」の用語は、限定を意図せずに例として使用されるにすぎず、本明細書において明らかに列挙されるそれらの項目のみを指すものと解釈されるべきではない。
【００５１】
「以上」、「少なくとも」、「それよりも多く」等の用語、例えば「少なくとも１つ」は、限定されないが、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９又は１５０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、又は示される値よりも多い値を含むと理解される。また、任意のより大きな数、又はその間の分数も含まれる。
【００５２】
逆に、「以下」の用語は示される値よりも小さい各値を含む。例えば、「１００ヌクレオチド以下」は、１００個、９９個、９８個、９７個、９６個、９５個、９４個、９３個、９２個、９１個、９０個、８９個、８８個、８７個、８６個、８５個、８４個、８３個、８２個、８１個、８０個、７９個、７８個、７７個、７６個、７５個、７４個、７３個、７２個、７１個、７０個、６９個、６８個、６７個、６６個、６５個、６４個、６３個、６２個、６１個、６０個、５９個、５８個、５７個、５６個、５５個、５４個、５３個、５２個、５１個、５０個、４９個、４８個、４７個、４６個、４５個、４４個、４３個、４２個、４１個、４０個、３９個、３８個、３７個、３６個、３５個、３４個、３３個、３２個、３１個、３０個、２９個、２８個、２７個、２６個、２５個、２４個、２３個、２２個、２１個、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、１個及び０個のヌクレオチドを含む。また、任意のより小さな数、又はその間の分数も含まれる。
【００５３】
「複数」、「少なくとも２つ」、「２以上」、「少なくとも第２の」等の用語は、限定されないが、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９又は１５０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００以上を含むと理解される。また、任意のより大きな数、又はその間の分数も含まれる。
【００５４】
本明細書を通して、「含んでいる、含む（comprising）」の文言、又は「含む（comprises）」若しくは「含んでいる（comprising）」等の変化形は、示される要素、整数若しくは工程、又は要素、整数若しくは工程の群を含むことを含意するが、任意の他の要素、整数若しくは工程、又は要素、整数若しくは工程の群を排除しないと理解される。本明細書において「含んでいる、含む」の言葉と共に態様が記載される場合はいつでも、「からなる」及び／又は「から本質的になる」の用語で記載される他の類似の態様も提供されると理解される。
【００５５】
具体的に述べられておらず又は文脈より明らかでない限り、本明細書で使用される「約」の用語は、当業者によって決定される特定の値又は組成に対する許容可能な誤差範囲に含まれる値又は組成を指し、その値又は組成がどのように測定され又は決定されるのか、すなわち測定システムの制限に部分的に依存する。例えば、「約」又は「およそ」は、当該技術分野における１回の実施当たりの１以上の標準偏差の範囲内を意味し得る。「約」又は「およそ」は、最大１０％（すなわち±１０％）の範囲を意味し得る。したがって、「約」は、示される値よりも１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％、０．０１％、又は０．００１％大きい又は小さい範囲に含まれると理解され得る。例えば、約５ｍｇは、４．５ｍｇ〜５．５ｍｇの間の任意の量を含み得る。さらに、特に生物学的なシステム又はプロセスに関して、上記用語は、或る値の最大１０倍（up to an order of magnitude）又は最大５倍を意味する場合がある。特定の値又は組成が本開示で提供される場合、別段の指示がない限り、「約」又は「およそ」の意味は、その特定の値又は組成に対する許容可能な誤差の範囲に含まれるとされる。
【００５６】
本明細書に記載されるように、任意の濃度範囲、パーセンテージの範囲、比率範囲、又は整数の範囲は、別段の指示がない限り、述べられる範囲に含まれる任意の整数、また適切な場合には、その分数（或る整数の１０分の１、及び１００分の１等）の値を含むものと理解される。
【００５７】
本明細書で使用される単位、接頭辞及び記号は、それらの国際単位系（ＳＩ：Systeme International de Unites）の容認される形態で提示される。数値範囲は、その範囲を規定する数字を含む。
【００５８】
別段の規定がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、この開示が関係する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。例えば、Juo, "The Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology", 2nd ed., (2001), CRC Press、"The Dictionary of Cell & Molecular Biology", 5th ed., (2013), Academic Press、及び"The Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology", Cammack et al. eds., 2nd ed, (2006), Oxford University Pressは、この開示で使用される多くの用語の一般的な辞書を当業者に提供する。
【００５９】
「投与すること、投与する（Administering）」は、当業者に知られている様々な方法及び送達システムのいずれかを使用する、被験体に対する薬剤の物理的な導入を指す。本明細書に開示される製剤に対する例示的な投与経路として、静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、脊髄又は他の非経口的な（parenteral：腸管外）投与経路、例えば注射又は点滴による投与経路が挙げられる。本明細書で使用される「非経口投与」の句は、経腸及び局所の投与以外の、通常は注射による投与様式を意味し、限定されないが、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、リンパ管内、病巣内、関節腔内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、関節腔下、クモ膜下、脊髄内、硬膜外、及び胸骨内の注射及び点滴、また同様にｉｎ  ｖｉｖｏ電気穿孔を含む。幾つかの実施形態では、上記製剤は、非経口的ではない経路、例えば経口で投与される。他の非経口的ではない経路として、局所、表皮、又は粘膜の投与経路、例えば、鼻腔内、経膣的、直腸、舌下又は局所的なものが挙げられる。また、投与は、例えば１回、複数回、及び／又は１以上の延長された期間に亘って行われ得る。
【００６０】
「抗体」（Ａｂ）の用語は、限定されず、抗原に特異的に結合する糖タンパク質免疫グロブリンを含む。一般に、抗体は、ジスルフィド結合によって相互に連結された少なくとも２本の重（Ｈ）鎖及び２本の軽（Ｌ）鎖、又はそれらの抗原結合分子を含み得る。各Ｈ鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略記する）及び重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、３つの定常ドメイン、すなわちＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略記する）及び軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、１つの定常ドメイン、すなわちＣＬを含む。ＶＨ領域及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存される領域が介在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域に更に細分され得る。ＶＨ及びＶＬはそれぞれ、アミノ末端からカルボキシ末端にＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４の順で並ぶ、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲを含む。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。Ａｂの定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えばエフェクター細胞）及び古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）を含む、宿主の組織又は因子に対する免疫グロブリンの結合を媒介し得る。
【００６１】
抗体として、例えば、モノクローナル抗体、組み換えにより生成された抗体、単一特異的抗体、多重特異的抗体（二重特異的抗体を含む）、ヒト抗体、操作された抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、免疫グロブリン、合成抗体、２本の重鎖分子及び２本の軽鎖分子を含む四量体抗体、抗体軽鎖単量体、抗体重鎖単量体、抗体軽鎖二量体、抗体重鎖二量体、抗体軽鎖−抗体重鎖対、イントラボディ（intrabodies）、抗体融合体（本明細書では「抗体コンジュゲート」と称されることがある）、ヘテロコンジュゲート抗体、単一ドメイン抗体、一価抗体、単鎖抗体又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ラクダ化抗体、アフィボディ（affybodies）、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、ジスルフィド連結Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば抗−抗−Ｉｄ抗体を含む）、ミニボディ（minibodies）、ドメイン抗体、合成抗体（本明細書では「抗体模倣物」と称されることがある）、及び上記のいずれかの抗原結合フラグメントが挙げられ得る。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ポリクローナル抗体集団を指す。
【００６２】
「抗原結合分子」、「抗原結合部分」又は「抗体フラグメント」は、抗体の抗原結合部（例えばＣＤＲ）を含む任意の分子を指し、この分子は該抗体に由来する。抗原結合分子は、抗原相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み得る。抗体フラグメントの例として、限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフラグメント、ｄＡｂ、直鎖抗体、ｓｃＦｖ抗体、並びに抗原結合分子から形成される多重特異性抗体が挙げられる。ペプチボディ（Peptibodies）（すなわち、ペプチド結合ドメインを含むＦｃ融合分子）は、好適な抗原結合分子の別の例である。幾つかの実施形態では、抗原結合分子は腫瘍細胞上の抗原に結合する。幾つかの実施形態では、抗原結合分子は、過剰増殖性疾患（hyperproliferative disease）に関与する細胞上の抗原、又はウイルス若しくは細菌の抗原に結合する。幾つかの実施形態では、抗原結合分子はＣＤ１９に結合する。更なる実施形態では、抗原結合分子は、その１以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、抗原に特異的に結合する抗体フラグメントである。更なる実施形態では、抗原結合分子は単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。幾つかの実施形態では、抗原結合分子は、アビマー（avimers）を含む、又はそれからなる。
【００６３】
「抗原」は、免疫応答を誘発する、又は抗体若しくは抗原結合分子によって結合されることが可能な任意の分子を指す。免疫応答は、抗体産生若しくは特定の免疫適格細胞（immunologically-competent cells）の活性化のいずれか、又はそれらの両方を含み得る。当業者は、実質的に全てのタンパク質又はペプチドを含む任意の高分子が抗原としての役割を果たし得ることを容易に理解する。抗原は内因性に発現され得て、すなわちゲノムＤＮＡによって発現され得るか、又は組み換えによって発現され得る。抗原は、癌細胞等の或る特定の組織に特異的となり得るか、又は広く発現され得る。さらに、より大きな分子のフラグメントが抗原として作用し得る。幾つかの実施形態では、抗原は腫瘍抗原である。
【００６４】
「中和する、中和すること」の用語は、リガンドに結合し、そのリガンドの生物学的効果を妨げる又は減少させる抗原結合分子、ｓｃＦｖ、抗体、又はそのフラグメントを指す。幾つかの実施形態では、抗原結合分子、ｓｃＦｖ、抗体、又はそのフラグメントは、リガンド上の結合部位を直接遮断する、或いは間接的な手段（リガンドの構造の又はエネルギーの変更等）によってリガンドの結合能を変更する。幾つかの実施形態では、抗原結合分子、ｓｃＦｖ、抗体、又はそのフラグメントは、結合されるタンパク質が生体機能を実施するのを妨げる。
【００６５】
「自己」の用語は、後に再導入されることになっているのと同じ個体に由来する任意の材料を指す。例えば、本明細書に記載される操作された自己細胞療法（ｅＡＣＴ（商標））は、患者からのリンパ球の収集を含み、該リンパ球は、その後、例えばＣＡＲコンストラクトを発現するように操作した後、同じ患者に戻される（administered back）。
【００６６】
「同種異系」の用語は、一個体に由来する任意の材料を指し、該材料はその後、同種の別の個体に導入される（例えば同種異系Ｔ細胞移植）。
【００６７】
「形質導入」及び「形質導入された」の用語は、外来ＤＮＡがウイルスベクターによって細胞へと導入されるプロセスを指す（Jones et al., "Genetics: principles and analysis," Boston: Jones & Bartlett Publ. (1998)を参照されたい）。幾つかの実施形態では、ベクターは、レトロウイルスベクター、ＤＮＡベクター、ＲＮＡベクター、アデノウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、エプスタイン−バールウイルスベクター、パポバウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、アデノウイルス随伴ベクター、レンチウイルスベクター、又はそれらの任意の組み合わせである。
【００６８】
「癌」は、身体における異常な細胞の制御されていない成長を特徴とする、幅広い各種疾患のグループを指す。制御されていない細胞の分裂及び成長は、隣接する組織に侵入して、またリンパ系又は血流によって身体の離れた部分へと転移し得る、悪性腫瘍の形成をもたらす。「癌」又は「癌組織」は、腫瘍を含む場合がある。本明細書に開示される方法によって治療され得る癌の例として、限定されないが、リンパ腫、白血病、骨髄腫、及び他の白血球の悪性腫瘍（leukocyte malignancies）を含む免疫系の癌が挙げられる。幾つかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、例えば、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頚部癌、皮膚又は眼内の悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部の癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頚癌、膣癌、外陰癌、多発性骨髄腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、形質転換後濾胞性リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）、食道癌、小腸癌、内分泌系の癌、甲状腺癌、副甲状腺の癌、副腎の癌、軟組織の肉腫、尿道癌、陰茎癌、慢性又は急性の白血病、急性骨髄白血病、慢性骨髄白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）（非Ｔ細胞ＡＬＬを含む）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、幼少期の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓又は尿管の癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍（spinal axis tumor）、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、石綿によって誘導されるものを含む、環境によって誘導される癌、他のＢ細胞悪性腫瘍、及び上記癌の組み合わせに由来する腫瘍の腫瘍サイズを減少するため使用され得る。幾つかの実施形態では、癌は多発性骨髄腫である。特定の癌は、化学療法又は放射線療法に反応性となり得るが、そうでなければその癌は難治性となり得る。難治性癌は、外科的処置に適用できない癌を指し、その癌は最初に化学療法若しくは放射線療法に無反応であるか、又はその癌は経時的に無反応となるいずれかである。
【００６９】
本明細書に使用される「抗腫瘍効果」は、腫瘍体積の減少、腫瘍細胞数の減少、腫瘍細胞増殖の減少、転移の数の減少、全体生存期間若しくは無増悪生存期間の増加、平均余命の増加、又は腫瘍と関係する様々な生理学的症状の改善として提示され得る、生物学的効果を指す。また、抗腫瘍効果は、腫瘍の発生の予防、例えばワクチンを指す場合がある。
【００７０】
本明細書で使用される「サイトカイン」は、特異抗原との接触に反応して１つの細胞によって放出される非抗体タンパク質を指し、ここで、サイトカインは第２の細胞と相互作用して、第２の細胞における反応を媒介する。本明細書で使用される「サイトカイン」は、細胞間メディエーターとして別の細胞に対して作用する、１つの細胞集団によって放出されるタンパク質を指すことを意味する。サイトカインは、細胞によって内因性に発現され得るか、又は被験体に投与され得る。サイトカインは、マクロファージ、Ｂ細胞、Ｔ細胞、及び肥満細胞を含む免疫細胞によって放出されて、免疫応答を伝播し得る。サイトカインは、レシピエント細胞において様々な反応を誘導し得る。サイトカインは、ホメオスタシスサイトカイン（homeostatic cytokines）、ケモカイン、炎症誘発性サイトカイン、エフェクター及び急性期タンパク質を含み得る。例えば、インターロイキン（ＩＬ）７及びＩＬ−１５を含むホメオスタシスサイトカインは、免疫細胞の生存及び増殖を促進し、炎症誘発性サイトカインは炎症反応を促進し得る。ホメオスタシスサイトカインの例として、限定されないが、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ４０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１５及びインターフェロン（ＩＦＮ）ガンマが挙げられる。炎症誘発性サイトカインの例として、限定されないが、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、ＩＬ−１７ａ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−アルファ、ＴＮＦ−ベータ、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）２、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、可溶性細胞間接着分子１（ｓＩＣＡＭ−１）、可溶性血管接着分子１（ｓＶＣＡＭ−１）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ及び胎盤増殖因子（ＰＬＧＦ）が挙げられる。エフェクターの例として、限定されないが、グランザイムＡ、グランザイムＢ、可溶性Ｆａｓリガンド（ｓＦａｓＬ）及びパーフォリンが挙げられる。急性期タンパク質の例として、限定されないが、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）及び血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）が挙げられる。
【００７１】
「ケモカイン」は細胞走化性又は指向性運動を媒介するサイトカインの一種である。ケモカインの例として、限定されないが、ＩＬ−８、ＩＬ−１６、エオタキシン、エオタキシン−３、マクロファージ由来ケモカイン（ＭＤＣ又はＣＣＬ２２）、単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ−１又はＣＣＬ２）、ＭＣＰ−４、マクロファージ炎症性タンパク質１α（ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１ａ）、ＭＩＰ−１β（ＭＩＰ−１ｂ）、ガンマ誘導性タンパク質１０（ＩＰ−１０）、並びに胸腺及び活性化制御ケモカイン（ＴＡＲＣ又はＣＣＬ１７）が挙げられる。
【００７２】
本明細書で使用される場合に、「キメラ受容体」は、特定の分子を認識することが可能な操作された表面発現される分子を指す。特定の腫瘍抗原と相互作用することができる結合ドメインを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）及び操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）は、Ｔ細胞が特定の腫瘍抗原を発現する癌細胞を標的とし、死滅させることを可能とする。
【００７３】
「治療的有効量」、「有効用量」、「有効量」又は「治療的に有効な投薬量」の治療剤、例えば操作されたＣＡＲ  Ｔ細胞は、単独で又は別の治療剤と組み合わせて使用された場合に、疾患の発症から被験体を保護する、又は疾患症状の重症度の減少、疾患症状のない期間の頻度及び持続期間の増加、若しくは疾患の罹患に起因する機能障害若しくは身体障害の予防によって明示される疾患の退縮を促進する、任意の量である。治療剤の疾患の退縮を促進する能力は、熟練した医師に知られている様々な方法を使用して、例えば、臨床試験中のヒト被験体において、ヒトにおける効能を予測する動物モデル系において、又はｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイにおいて薬剤の活性をアッセイすることによって評価され得る。
【００７４】
本明細書で使用される「リンパ球」の用語は、ナチュラルキラー（ＮＫ：natural killer）細胞、Ｔ細胞、又はＢ細胞を含む。ＮＫ細胞は、生得免疫系の主な成分を占める細胞傷害性（細胞毒性）リンパ球の一種である。ＮＫ細胞は腫瘍及びウイルスによって感染された細胞を拒絶する。ＮＫ細胞は、アポトーシス又はプログラム細胞死のプロセスによって作用する。ＮＫ細胞は、細胞を死滅させるために活性化を必要としないことから、「ナチュラルキラー」と名付けられた。Ｔ細胞は、細胞媒介免疫（抗体が関与しない）において主な役割を果たす。そのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）は、他の種類のリンパ球からそれら自体を分化させる。免疫系の特殊化された器官である胸腺は、主としてＴ細胞の成熟を担う。６種類のＴ細胞、すなわち、ヘルパーＴ細胞（例えばＣＤ４＋細胞）、細胞傷害性Ｔ細胞（ＴＣ、細胞傷害性Ｔリンパ球、ＣＴＬ、Ｔキラー細胞、細胞溶解性Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞又はキラーＴ細胞としても知られる）、メモリーＴ細胞（（ｉ）ナイーブ細胞のようなステムメモリーＴＳＣＭ細胞は、ＣＤ４５ＲＯ−、ＣＣＲ７＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋（Ｌ−セレクチン）、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋及びＩＬ−７Ｒα＋であるが、それらは、大量のＣＤ９５、ＩＬ−２Ｒβ、ＣＸＣＲ３及びＬＦＡ−１も発現し、メモリー細胞に特有の多数の機能的な属性を示す；（ｉｉ）セントラルメモリーＴＣＭ細胞は、Ｌ−セレクチン及びＣＣＲ７を発現し、ＩＦＮγ又はＩＬ−４ではなくＩＬ−２を分泌する；並びに（ｉｉｉ）エフェクターメモリーＴＥＭ細胞はＬ−セレクチンもＣＣＲ７も発現しないものの、ＩＦＮγ及びＩＬ−４のようなエフェクターサイトカインを産生する）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ、サプレッサーＴ細胞又はＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞）、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ）及びガンマデルタＴ細胞が存在する。一方、Ｂ細胞は、液性免疫（抗体が関与する）で最も重要な役割を果たす。Ｂ細胞は抗体及び抗原を作製し、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の役割を行い、抗原の相互作用による活性化の後、メモリーＢ細胞となる。哺乳動物では、未成熟Ｂ細胞は、その名前が由来する骨髄で形成される。
【００７５】
「遺伝子操作された」又は「操作された」の用語は、限定されないが、コーディング領域若しくは非コーディング領域、若しくはそれらの一部分の欠失、又はコーディング領域若しくはその一部分の挿入を含む、細胞のゲノムを修飾する方法を指す。幾つかの実施形態では、修飾される細胞はリンパ球、例えば、患者又はドナーのいずれかから得ることができるＴ細胞である。Ｔ細胞は、例えば、細胞のゲノムに組み込まれる、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）等の外来コンストラクトを発現するように修飾され得る。
【００７６】
「免疫応答」は、侵入病原体、病原体に感染した細胞若しくは組織、癌性若しくは他の異常な細胞、又は自己免疫若しくは病理学的炎症の場合、正常なヒトの細胞若しくは組織の選択的な標的化、それらへの結合、それらに対する損傷、それらの破壊、及び／又は脊椎動物の身体からのそれらの排除をもたらす、免疫系の細胞（例えばＴリンパ球、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、樹状細胞、及び好中球）及びこれらの細胞のいずれか又は肝臓によって産生される可溶性高分子（Ａｂ、サイトカイン、及び補体を含む）の作用を指す。
【００７７】
「免疫療法」の用語は、免疫応答を誘導する、増強する、抑制する、或いは緩和することを含む方法による、疾患に冒された、又は疾患にかかる若しくは疾患の再発を患うリスクがある被験体の治療を指す。免疫療法の例として、限定されないが、Ｔ細胞療法が挙げられる。Ｔ細胞療法は、養子Ｔ細胞療法（adoptive T cell therapy）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）免疫療法、自己細胞治療、操作された自己細胞療法（ｅＡＣＴ（商標））、及び同種異系Ｔ細胞移植を含み得る。しかしながら、当業者は、本明細書に開示されるコンディショニング法（conditioning methods）が任意の移植Ｔ細胞療法の有効性を増強し得ることを認識するであろう。Ｔ細胞療法の例は、米国特許出願公開第２０１４／０１５４２２８号及び同第２００２／０００６４０９号、米国特許第７，７４１，４６５号、米国特許第６，３１９，４９４号、米国特許第５，７２８，３８８号及び国際公開第２００８／０８１０３５号に記載される。
【００７８】
免疫療法のＴ細胞は、当該技術分野において知られている任意の供給源に由来し得る。例えば、Ｔ細胞は、造血幹細胞集団からｉｎ  ｖｉｔｒｏで分化されてもよく、又はＴ細胞は被験体から得られてもよい。Ｔ細胞を、例えば末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位に由来する組織、腹水、胸水、脾臓組織及び腫瘍から得ることができる。さらに、Ｔ細胞は、当該技術分野において利用可能な１以上のＴ細胞株に由来してもよい。また、Ｔ細胞は、ＦＩＣＯＬＬ（商標）分離及び／又はアフェレーシス（apheresis）等の当業者に知られている任意の多くの技術を使用して被験体から収集された血液単位から得ることもできる。Ｔ細胞療法用のＴ細胞を単離する更なる方法は、米国特許出願公開第２０１３／０２８７７４８号に開示され、その全体が引用することにより本明細書の一部をなす。
【００７９】
「ｅＡＣＴ（商標）」と略記することができ、養子細胞移植としても知られる「操作された自己細胞療法」の用語は、患者自身のＴ細胞を収集し、その後、１以上の特定の腫瘍細胞又は悪性腫瘍の細胞表面上に発現される１以上の抗原を認識し、標的とするように遺伝的に変更するプロセスである。Ｔ細胞は、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作され得る。ＣＡＲ陽性（＋）Ｔ細胞は、少なくとも１つの共刺激ドメイン及び少なくとも１つの活性化ドメインを含む細胞内シグナル伝達部に連結された特定の腫瘍抗原に対する特異性を有する細胞外単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を発現するように操作される。ＣＡＲ  ｓｃＦｖは、例えば、全ての正常なＢ細胞と、限定されるものではないが、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、特段の記載がない限り、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、及び濾胞性リンパ腫から生ずるＤＬＢＣＬ、ＮＨＬ、ＣＬＬ、及び非Ｔ細胞ＡＬＬを含むＢ細胞悪性腫瘍とを含むＢ細胞系譜における細胞により発現される膜貫通タンパク質であるＣＤ１９を標的とするように設計することができる。ＣＡＲ  Ｔ細胞療法及びコンストラクトの例は、米国特許出願公開第２０１３／０２８７７４８号、同第２０１４／０２２７２３７号、同第２０１４／００９９３０９号、及び同第２０１４／００５０７０８号に記載され、これらの引用文献はそれらの全体が引用することにより本明細書の一部をなす。
【００８０】
本明細書で使用される「患者」は、癌（例えばリンパ腫又は白血病）に冒された任意のヒトを含む。「被験体」及び「患者」の用語は、本明細書では区別なく使用される。
【００８１】
本明細書で使用される「ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞」の用語は、ｅｘ  ｖｉｖｏで培養される任意の細胞を指す。特に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞はＴ細胞を含み得る。
【００８２】
「ペプチド」、「ポリペプチド」及び「タンパク質」の用語は区別なく使用され、ペプチド結合によって共有結合的に連結されたアミノ酸残基で構成される化合物を指す。タンパク質又はペプチドは、少なくとも２個のアミノ酸を含み、タンパク質又はペプチドの配列を含み得るアミノ酸の最大数に制限はない。ポリペプチドは、ペプチド結合によって互いにつながれた２個以上のアミノ酸を含む任意のペプチド又はタンパク質を含む。本明細書で使用されるように、上記用語はまた、当該技術分野において、例えばペプチド、オリゴペプチド及びオリゴマーと一般的に称される短い鎖と、当該技術分野において一般的にはタンパク質と称され、多くの種類が存在する、より長い鎖の両方を指す。「ポリペプチド」として、例えば、特に、生物学的に活性なフラグメント、実質的に相同性のポリペプチド、オリゴペプチド、ホモダイマー、ヘテロダイマー、ポリペプチドの変異体、改変ポリペプチド、誘導体、類縁体、融合タンパク質が挙げられる。ポリペプチドは、天然ペプチド、組み換えペプチド、合成ペプチド、又はそれらの組み合わせを含む。
【００８３】
本明細書で使用される「刺激」は、その同族のリガンドと刺激分子を結合することによって誘導される一次応答を指し、ここで、その結合はシグナル伝達事象を媒介する。「刺激分子」は、Ｔ細胞上の分子、例えば、抗原提示細胞上に存在する同族の刺激リガンドと特異的に結合するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）／ＣＤ３複合体を指す。「刺激リガンド」は、抗原提示細胞（例えば、ＡＰＣ、樹状細胞、Ｂ細胞等）上に存在する場合、Ｔ細胞上の刺激分子と特異的に結合することができ、それによって、限定されないがＴ細胞の活性化、免疫応答の開始、増殖等を含むＴ細胞による一次応答を媒介するリガンドである。刺激リガンドとして、限定されないが、抗ＣＤ３抗体、ペプチドで充填されたＭＨＣクラスＩ分子、スーパーアゴニスト抗ＣＤ２抗体、及びスーパーアゴニスト抗ＣＤ２８抗体が挙げられる。
【００８４】
本明細書で使用される「共刺激シグナル」は、ＴＣＲ／ＣＤ３ライゲーション等の一次シグナルと組み合わせて、限定されないがＴ細胞の増殖及び／又は主要な分子の上方制御若しくは下方制御等のＴ細胞の応答をもたらすシグナルを指す。
【００８５】
本明細書で使用される「共刺激リガンド」は、Ｔ細胞上の同族の共刺激分子を特異的に結合する抗原提示細胞上の分子を含む。共刺激リガンドの結合は、限定されないが、Ｔ細胞の増殖、活性化、分化等を含むＴ細胞応答を媒介するシグナルを提供する。共刺激リガンドは、一次シグナルに加えて、刺激分子によって、例えば、ペプチドがロードされた主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子とのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）／ＣＤ３複合体の結合によって提供されるシグナルを誘導する。共刺激リガンドとして、限定されないが、３／ＴＲ６、４−１ＢＢリガンド、Ｔｏｌｌリガンド受容体に結合するアゴニスト又は抗体、Ｂ７−１（ＣＤ８０）、Ｂ７−２（ＣＤ８６）、ＣＤ３０リガンド、ＣＤ４０、ＣＤ７、ＣＤ７０、ＣＤ８３、ヘルペスウイルスエントリーメディエーター（ＨＶＥＭ：herpes virus entry mediator）、ヒト白血球抗原Ｇ（ＨＬＡ−Ｇ）、ＩＬＴ４、免疫グロブリン様転写物（ＩＬＴ：immunoglobulin-like transcript）３、誘導性共刺激リガンド（ＩＣＯＳ−Ｌ）、細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）、Ｂ７−Ｈ３と特異的に結合するリガンド、リンフォトキシンベータ受容体、ＭＨＣクラスＩ鎖関連タンパク質Ａ（ＭＩＣＡ）、ＭＨＣクラスＩ鎖関連タンパク質Ｂ（ＭＩＣＢ）、ＯＸ４０リガンド、ＰＤ−Ｌ２、又はプログラム細胞死（ＰＤ）Ｌ１が挙げられ得る。共刺激リガンドとして、限定されず、４−１ＢＢ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ７、ＩＣＯＳ、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ナチュラルキラー細胞受容体Ｃ（ＮＫＧ２Ｃ）、ＯＸ４０、ＰＤ−１、又は腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１４（ＴＮＦＳＦ１４又はＬＩＧＨＴ）等のＴ細胞上に存在する共刺激分子と特異的に結合する抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８６】
「共刺激分子」は、共刺激リガンドと特異的に結合することにより、限定されないが増殖等のＴ細胞による共刺激応答を媒介する、Ｔ細胞上の同族の結合パートナーである。共刺激分子として、限定されないが、が挙げられ、「共刺激分子」は、共刺激リガンドと特異的に結合することにより、限定されないが増殖等のＴ細胞による共刺激応答を媒介する、Ｔ細胞上の同族の結合パートナーである。共刺激分子として、限定されないが、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、Ｂ７−Ｈ３、ＢＡＦＦＲ、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＢＴＬＡ、ＣＤ３３、ＣＤ４５、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＣＤ１６、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２、ＣＤ２２、ＣＤ２４７、ＣＤ２７、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３（アルファ；ベータ；デルタ；イプシロン；ガンマ；ゼータ）、ＣＤ３０、ＣＤ３７、ＣＤ４、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５、ＣＤ６４、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８０、ＣＤ８３リガンド、ＣＤ８４、ＣＤ８６、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＣＤ９、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、ＤＡＰ−１０、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、Ｆｃガンマ受容体、ＧＡＤＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＩＡ４、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＯＳ、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒアルファ、インテグリン、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＩＴＧＢ１、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＴ、ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−１、ＬＩＧＨＴ、ＬＩＧＨＴ（腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１４；ＴＮＦＳＦ１４）、ＬＴＢＲ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８））、ＭＨＣクラスＩ分子、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＯＸ４０、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＰＤ−１、ＰＳＧＬ１、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、シグナル伝達リンパ球活性化分子、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１；ＣＤ１５０；ＩＰＯ−３）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４；２Ｂ４）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ；Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ−７６、ＴＮＦ、ＴＮＦｒ、ＴＮＦＲ２、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＶＬＡ１若しくはＶＬＡ−６、又はそれらのフラグメント、短縮形（truncations）、若しくは組み合わせが挙げられる。
【００８７】
「減少する、減少させる（reducing）」及び「減じる（decreasing）」の用語は、本明細書において区別なく使用され、本来よりも少ない、あらゆる変化を示す。「減少する、減少させる」及び「減じる」は測定前と測定後の比較を必要とする、相対的な用語である。「減少する、減少させる」及び「減じる」は完全な枯渇を含む。
【００８８】
被験体の「治療（Treatment）」又は被験体を「治療する、治療すること（treating）」は、症状、合併症若しくは病状の発症、進行、発現、重症度若しくは再発、又は疾患と関連する生化学的指標の転換、緩和、改善、阻害、遅延又は予防の目的で、被験体に対して行われる任意の種類の処置若しくはプロセス、又は被験体に対する有効成分の投与を指す。幾つかの実施形態では、「治療」又は「治療する、治療すること」は部分寛解を含む。別の実施形態では、「治療」又は「治療する、治療すること」は完全寛解を含む。
【００８９】
本開示の様々な態様は、以下のサブセクションに更に詳細に記載される。
【００９０】
腫瘍微小環境（ＴＭＥ）の特性評価
本開示は、キメラ受容体療法薬（例えば、アキシカブタゲン・シロロイセル（ａｘｉ−ｃｅｌ））での治療の前に、遺伝子発現プロファイリング及び／又は腫瘍内Ｔ細胞密度測定を使用してＴＭＥを特性評価する方法を提供する。本明細書に記載されるように、予め決められた遺伝子セット（例えば、Ｉｍｍｕｎｏｓｉｇｎ（商標）２１、Ｐａｎ  Ｃａｎｃｅｒ）及び免疫スコア（例えば、Ｉｍｍｕｎｏｓｉｇｎ（商標）２１）及び／又は腫瘍内Ｔ細胞密度測定又は指標（例えば、Ｉｍｍｕｎｏｓｃｏｒｅ（商標））を利用するＴＭＥ特性は、キメラ受容体療法（例えば、アキシカブタゲン・シロロイセル（ａｘｉ−ｃｅｌ））の臨床転帰と関連性を有する。
【００９１】
患者の生検は、遺伝子発現プロファイリング（例えば、ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ（商標）を使用するデジタル遺伝子発現）を使用して腫瘍微小環境を分析するための出発材料として使用することができる。幾つかの実施形態においては、患者の生検は、キメラ受容体療法薬（例えば、アキシカブタゲン・シロロイセル（ａｘｉ−ｃｅｌ））による治療の前に取得される。
【００９２】
バイオインフォマティクス法を使用して、免疫スコア（単数又は複数）を生成して、ＴＭＥを特性評価することができる。幾つかの実施形態においては、免疫スコアは、Ｔ細胞傷害性（T cell cytotoxicity)、Ｔ細胞分化、Ｔ細胞誘引、Ｔ細胞接着を含む適応免疫と、免疫指向、血管新生抑制、免疫共阻害及び癌幹細胞を含む免疫抑制とに関する情報を提供する免疫関連遺伝子の尺度である。バイオインフォマティクス法には、Ｔ細胞特異的（エフェクターＴ細胞、Ｔｈ１）遺伝子、インターフェロン経路関連遺伝子、ケモカイン及び免疫チェックポイントも含まれ得る。
【００９３】
発現プロファイリングアッセイ（例えば、Ｉｍｍｕｎｏｓｉｇｎ（商標）臨床研究アッセイは、ｎＣｏｕｎｔｅｒ（商標）技術（ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ）を利用する）を使用して、マルチプレックス形式で複数の免疫遺伝子の遺伝子発現レベルを測定することができる。幾つかの実施形態においては、高い／低い免疫スコア（例えば、Ｉｍｍｕｎｏｓｉｇｎ（商標）２１スコア）のカットオフは、試料間で観察されるスコアの２５パーセンタイルとして定義され得る。幾つかの実施形態においては、高いスコアは、腫瘍応答に潜在的に関連性を有する免疫関連遺伝子の発現を示す。
【００９４】
幾つかの実施形態においては、免疫スコアは腫瘍内Ｔ細胞密度の尺度である。腫瘍内Ｔ細胞密度は、例えば、腫瘍微小環境におけるＣＤ３＋Ｔ細胞及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞等のＴ細胞を検出及び定量することによって測定することができる。例えば、腫瘍生検を切片化して、ＣＤ３及び／又はＣＤ８等のＴ細胞マーカーについて染色又は標識することができ、Ｔ細胞の相対的又は絶対的な存在量は、病理医によって定量され得る又は専用のデジタル病理学ソフトウェアを使用して測定され得る。幾つかの実施形態においては、高い／低い免疫スコア（例えば、Ｉｍｍｕｎｏｓｃｏｒｅ（商標））は、腫瘍内Ｔ細胞密度に基づいて割り当てられる。高い／低い免疫スコアの閾値は、例えば、試料間で観察される中央値スコアとして定義され得る。幾つかの実施形態においては、腫瘍内Ｔ細胞密度は、フローサイトメトリー及び／又はタンパク質ベースのアッセイ、例えばウエスタンブロッティング及びＥＬＩＳＡを使用して測定される。
【００９５】
発現分析及び腫瘍浸潤Ｔリンパ球分析及びスコアリングを使用して、ＴＭＥ特徴と応答との間の関連性を調べることができる。幾つかの実施形態においては、客観的応答（ＯＲ）は、改定された悪性リンパ腫のためのＩＷＧ応答基準（Cheson, 2007）に従って決定されると共に、悪性リンパ腫のためのＩＷＧ応答基準（Cheson et al. Journal of Clinical Oncology 32, no. 27 (September 2014) 3059-3067）によって決定される。幾つかの実施形態においては、応答の期間が評価される。幾つかの実施形態においては、Luganoの応答分類基準に従う研究者評価による無憎悪生存率（ＰＦＳ）が評価される。
【００９６】
キメラ抗原受容体及びＴ細胞受容体
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ又はＣＡＲ−Ｔ）は、遺伝子操作された受容体である。これらの操作された受容体は、当該技術分野で知られている技術によりＴ細胞を含む免疫細胞に容易に挿入され得て、その細胞によって発現され得る。ＣＡＲにより、単一の受容体は、特異抗原を認識するとともに、その抗原に結合した場合に免疫細胞を活性化させてその抗原を持っている細胞を攻撃して破壊するよう、プログラム化され得る。これらの抗原が腫瘍細胞上に存在する場合、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、腫瘍細胞を標的とし、死滅させることができる。キメラ抗原受容体は、共刺激（シグナル伝達）ドメインを含むことで、それらの効力が高められる。米国特許第７，７４１，４６５号及び同第６，３１９，４９４号、並びにKrause et al.及びFinney et al.（上記参照）、Song et al., Blood 119:696-706 (2012)、Kalos et al., Sci. Transl. Med. 3:95 (2011)、Porter et al., N. Engl. J. Med. 365:725-33 (2011)、及びGross et al., Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 56:59-83 (2016)を参照のこと。
【００９７】
幾つかの実施形態においては、短縮ヒンジドメイン（「ＴＨＤ」）を含む共刺激ドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、又はそれらのフラグメント等の免疫グロブリンファミリーのメンバーの幾つか又は全てを更に含む。
【００９８】
幾つかの実施形態においては、ＴＨＤは、ヒト完全ヒンジドメイン（「ＣＨＤ」）に由来する。その他の実施形態においては、ＴＨＤは、共刺激タンパク質の齧歯類、マウス、又は霊長類（例えば、非ヒト霊長類）ＣＨＤに由来する。幾つかの実施形態においては、ＴＨＤは、共刺激タンパク質のキメラＣＨＤに由来する。
【００９９】
本発明のＣＡＲ又はＴＣＲのための共刺激ドメインは、膜貫通ドメイン及び／又は細胞内シグナル伝達ドメインを更に含み得る。膜貫通ドメインは、ＣＡＲの細胞外ドメインに融合されるように設計され得る。膜貫通ドメインは、同様にＣＡＲの細胞内ドメインに融合され得る。幾つかの実施形態においては、ＣＡＲ中のドメインの１つと本来関連性がある膜貫通ドメインが使用される。幾つかの場合においては、膜貫通ドメインは、そのようなドメインが同じ又は異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインに結合することを避けることで、受容体複合体のその他のメンバーとの相互作用を最小限にするように、選択され得るか、又はアミノ酸置換により修飾され得る。膜貫通ドメインは、天然源又は合成源のいずれかに由来し得る。その起源が天然である場合に、上記ドメインは、任意の膜結合タンパク質又は膜貫通タンパク質に由来し得る。本発明の特定の使用の膜貫通領域は、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、活性化ＮＫ細胞受容体、免疫グロブリンタンパク質、Ｂ７−Ｈ３、ＢＡＦＦＲ、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＢＴＬＡ、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２、ＣＤ２４７、ＣＤ２７、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３０、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８４、ＣＤ８、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、サイトカイン受容体、ＤＡＰ−１０、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、Ｆｃガンマ受容体、ＧＡＤＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＩＡ４、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、インテグリン、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＩＴＧＢｌ、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＴ、ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−１、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、ＬＩＧＨＴ、ＬＴＢＲ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１；ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＭＨＣクラス１分子、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＯＸ−４０、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、プログラム細胞死−１（ＰＤ−１）、ＰＳＧＬ１、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１；ＣＤ１５０；ＩＰＯ−３）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４；２Ｂ４）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ；Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ−７６、ＴＮＦ受容体タンパク質、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＳＦ１４、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＶＬＡ１、若しくはＶＬＡ−６、又はそれらのフラグメント、短縮形、若しくはそれらの組み合わせに由来し（すなわち含み）得る。
【０１００】
任意に、短いリンカーは、ＣＡＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインのいずれか又は幾つかの間で結合を形成し得る。幾つかの実施形態においては、リンカーは、グリシン−グリシン−グリシン−グリシン−セリンの繰り返し（Ｇ４Ｓ）ｎ（配列番号２）又はＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）に由来し得る。幾つかの実施形態においては、リンカーは、３個〜２０個のアミノ酸、及びＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号１）と少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する。
【０１０１】
本明細書に記載されるリンカーは、ペプチドタグとしても使用され得る。リンカーペプチド配列は、対象となる１つ以上のタンパク質を結合するための任意の適切な長さの配列であり得て、好ましくは、連結するペプチドの一方又は両方の適切な折り畳み及び／又は機能及び／又は活性を可能にするように十分に柔軟となるように設計される。したがって、リンカーペプチドは、１０個以下、１１個以下、１２個以下、１３個以下、１４個以下、１５個以下、１６個以下、１７個以下、１８個以下、１９個以下、又は２０個以下のアミノ酸の長さを有し得る。幾つかの実施形態においては、リンカーペプチドは、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、又は少なくとも２０個のアミノ酸の長さを有し得る。幾つかの実施形態においては、リンカーは、少なくとも７個かつ２０個以下のアミノ酸、少なくとも７個かつ１９個以下のアミノ酸、少なくとも７個かつ１８個以下のアミノ酸、少なくとも７個かつ１７個以下のアミノ酸、少なくとも７個かつ１６個以下のアミノ酸、少なくとも７個かつ１５個以下のアミノ酸、少なくとも７個かつ１４個以下のアミノ酸、少なくとも７個かつ１３個以下のアミノ酸、少なくとも７個かつ１２個以下のアミノ酸、又は少なくとも７個かつ１１個以下のアミノ酸を有する。或る特定の実施形態においては、リンカーは、１５個〜１７個のアミノ酸を有し、特定の実施形態においては、１６個のアミノ酸を有する。幾つかの実施形態においては、リンカーは、１０個〜２０個のアミノ酸を有する。幾つかの実施形態においては、リンカーは、１４個〜１９個のアミノ酸を有する。幾つかの実施形態においては、リンカーは、１５個〜１７個のアミノ酸を有する。幾つかの実施形態においては、リンカーは、１５個又は１６個のアミノ酸を有する。幾つかの実施形態においては、リンカーは、１６個のアミノ酸を有する。幾つかの実施形態においては、リンカーは、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、又は２０個のアミノ酸を有する。
【０１０２】
幾つかの実施形態においては、スペーサードメインが使用される。幾つかの実施形態においては、スペーサードメインは、ＣＤ４、ＣＤ８ａ、ＣＤ８ｂ、ＣＤ２８、ＣＤ２８Ｔ、４−１ＢＢ、又は本明細書に記載されるその他の分子に由来する。幾つかの実施形態においては、スペーサードメインは、小分子の添加に際して発現を制御するために、化学的に誘導されたダイマライザーを含み得る。幾つかの実施形態においては、スペーサーは使用されない。
【０１０３】
本発明の操作されたＴ細胞の細胞内（シグナル伝達）ドメインは、活性化ドメインへのシグナル伝達をもたらし得て、次いでそれは免疫細胞の正常なエフェクター機能の少なくとも１つを活性化する。Ｔ細胞のエフェクター機能は、例えば、サイトカインの分泌を含む細胞溶解活性又はヘルパー活性であり得る。
【０１０４】
或る特定の実施形態においては、好適な細胞内シグナル伝達ドメインは、４−１ＢＢ／ＣＤ１３７、活性化ＮＫ細胞受容体、免疫グロブリンタンパク質、Ｂ７−Ｈ３、ＢＡＦＦＲ、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＢＴＬＡ、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２、ＣＤ２４７、ＣＤ２７、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３）、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３０、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８４、ＣＤ８、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ  ＡＭ、サイトカイン受容体、ＤＡＰ−１０、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、Ｆｃガンマ受容体、ＧＡＤＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＩＡ４、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、インテグリン、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＩＴＧＢｌ、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＴ、ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−１、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、ＬＩＧＨＴ、ＬＴＢＲ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、Ｌｙ１０８）、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１；ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＭＨＣクラス１分子、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＯＸ−４０、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、プログラム細胞死−１（ＰＤ−１）、ＰＳＧＬ１、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１；ＣＤ１５０；ＩＰＯ−３）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４；２Ｂ４）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ−７６、ＴＮＦ受容体タンパク質、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＳＦ１４、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＶＬＡ１、若しくはＶＬＡ−６、又はそれらのフラグメント、短縮形、若しくはそれらの組み合わせを包含する（すなわち含む）が、それらに限定されない。
【０１０５】
幾つかの実施形態においては、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、アキシカブタゲン・シロロイセル（ａｘｉ−ｃｅｌ）である。アキシカブタゲン・シロロイセル（ａｘｉ−ｃｅｌ）は、自家抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法薬である（図１）。アキシカブタゲン・シロロイセル（ａｘｉ−ｃｅｌ）（ＹＥＳＣＡＲＴＡ（商標））は、２回以上の事前の全身療法を受けた再発性又は難治性の大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の患者の治療のために米国食品医薬品局によって承認されている（Ｙｅｓｃａｒｔａ（アキシカブタゲン・シロロイセル）（添付文書）．カリフォルニア州サンタモニカ：Kite Pharma社；２０１７年）。
【０１０６】
ＴＣＲは、抗原反応性を伝えるために導入され得る。幾つかの実施形態においては、抗原反応性は、ペプチドのＭＨＣ提示により限定される。ＴＣＲは、α／βＴＣＲ、γ／δＴＣＲ等であり得る。幾つかの実施形態においては、ＴＣＲは、マウス定常鎖（２Ａ結合）を有するＨＰＶ−１６  Ｅ７  ＴＣＲである。幾つかの実施形態においては、それらの鎖は、ＩＲＥＳ又は任意の２Ａファミリーのメンバーの配列（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、Ｆ２Ａ等）によって連結され得る。幾つかの実施形態においては、ＴＣＲは、ＨＰＶ認識ＴＣＲ、又はその他のウイルス性反応性ＴＣＲ（例えば、ＥＢＶ、インフルエンザ等）である。幾つかの実施形態においては、癌反応性ＴＣＲ又は癌関連抗原反応性ＴＣＲが使用され得る（例えば、ＮＹＥＳＯ、ＭＡＲＴ１、ｇｐ１００等）。
【０１０７】
幾つかの実施形態においては、ＴＣＲは、正常／健康なペプチド反応性又はその他の抗原反応性／拘束性のＴＣＲである。幾つかの実施形態においては、ＴＣＲは、マウスＭＨＣ又はその他の非ヒトＭＨＣに対して反応性である。幾つかの実施形態においては、ＴＣＲは、クラスＩ拘束性ＴＣＲ又はクラスＩＩ拘束性ＴＣＲである。
【０１０８】
抗原結合分子
適切なＣＡＲは、抗原（例えば、細胞表面抗原）に結合するように、その標的となる抗原と相互作用する抗原結合分子を導入することによって操作され得る。幾つかの実施形態においては、抗原結合分子は、その抗体フラグメント、例えば１種以上の単鎖抗体フラグメント（「ｓｃＦｖ」）である。ｓｃＦｖは、互いに連結された抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域を有する単鎖抗体フラグメントである。米国特許第７，７４１，４６５号及び同第６，３１９，４９４号、並びにEshhar et al., Cancer Immunol Immunotherapy (1997) 45: 131-136を参照のこと。ｓｃＦｖは、親抗体の標的抗原と特異的に相互作用する能力を維持している。ｓｃＦｖは、キメラ抗原受容体において有用である。それというのも、ｓｃＦｖは、その他のＣＡＲ成分と一緒に単鎖の一部として発現されるように操作され得るからである。同上。Krause et al., J. Exp. Med., Volume 188, No. 4, 1998 (619-626)、Finney et al., Journal of Immunology, 1998, 161: 2791-2797も参照のこと。抗原結合分子は、典型的には、対象となる抗原を認識して結合することができるようにＣＡＲの細胞外部分の範囲内に含まれることを理解されたい。対象となる２つ以上の標的に特異性を有する二重特異性及び多重特異性のＣＡＲが、本発明の範囲内で考慮される。
【０１０９】
幾つかの実施形態においては、ポリヌクレオチドは、本発明のＴＨＤと、標的抗原に特異的に結合する抗原結合分子とを含むＣＡＲ又はＴＣＲをコードする。幾つかの実施形態においては、標的抗原は、腫瘍抗原である。幾つかの実施形態においては、抗原は、腫瘍関連表面抗原、例えば５Ｔ４、アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）、Ｂ７−１（ＣＤ８０）、Ｂ７−２（ＣＤ８６）、ＢＣＭＡ、Ｂ−ヒト絨毛膜性生殖腺刺激ホルモン、ＣＡ−１２５、癌胚抗原（ＣＥＡ）、癌胚抗原（ＣＥＡ）、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５６、ＣＤ８、ＣＬＬ−１、ｃ−Ｍｅｔ、ＣＭＶ特異抗原、ＣＳ−１、ＣＳＰＧ４、ＣＴＬＡ−４、ＤＬＬ３、ジシアロガングリオシドＧＤ２、膵管上皮ムチン、ＥＢＶ特異抗原、ＥＧＦＲ変異体ＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、ＥＬＦ２Ｍ、エンドグリン、エフリンＢ２、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）、上皮性腫瘍抗原、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、線維芽細胞関連タンパク質（ｆａｐ）、ＦＬＴ３、葉酸結合タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、細胞膠腫関連抗原、スフィンゴ糖脂質、ｇｐ３６、ＨＢＶ特異抗原、ＨＣＶ特異抗原、ＨＥＲ１−ＨＥＲ２、ＨＥＲ２−ＨＥＲ３の組み合わせ、ＨＥＲＶ−Ｋ、高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷ−ＭＡＡ）、ＨＩＶ−１型エンベロープ糖タンパク質ｇｐ４１、ＨＰＶ特異抗原、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＩＧＦＩ受容体、ＩＧＦ−ＩＩ、ＩＬ−１１Ｒアルファ、ＩＬ−１３Ｒ−ａ２、インフルエンザウイルス特異抗原、ＣＤ３８、インスリン増殖因子（ＩＧＦＩ）−１、腸カルボキシルエステラーゼ、カッパー鎖、ＬＡＧＡ−１ａ、ラムダ鎖、ラッサ熱ウイルス特異抗原、レクチン反応性ＡＦＰ、系譜特異又は組織特異抗原、例えばＣＤ３、ＭＡＧＥ、ＭＡＧＥ−Ａ１、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子、腫瘍特異的ペプチドエピトープを提示する主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子、Ｍ−ＣＳＦ、黒色腫関連抗原、メソテリン、ＭＮ−ＣＡ  ＩＸ、ＭＵＣ−１、ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２、変異ｐ５３、変異ｐ５３、変異ｒａｓ、好中球エラスターゼ、ＮＫＧ２Ｄ、Ｎｋｐ３０、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｐ５３、ＰＡＰ、プロスターゼ、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、前立腺癌腫瘍抗原−１（ＰＣＴＡ−１）、前立腺特異抗原タンパク質、ＳＴＥＡＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＰＳＭＡ、ＲＡＧＥ−１、ＲＯＲ１、ＲＵ１、ＲＵ２（ＡＳ）、表面接着分子、サバイビング及びテロメラーゼ、ＴＡＧ−７２、フィブロネクチンのエクストラドメインＡ（ＥＤＡ）及びエクストラドメインＢ（ＥＤＢ）、並びにテネイシンＣのＡ１ドメイン（ＴｎＣ  Ａ１）、サイログロブリン、腫瘍間質抗原、血管内皮増殖因子受容体−２（ＶＥＧＦＲ２）、ウイルス特異表面抗原、例えばＨＩＶ特異抗原（例えば、ＨＩＶ  ｇｐ１２０）、並びにこれらの表面マーカーの任意の誘導体又は変異体から選択される。
【０１１０】
操作されたＴ細胞及び使用
本開示の細胞は、被験体から得られるＴ細胞を通じて得ることができる。Ｔ細胞は、例えば末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位に由来する組織、腹水、胸水、脾臓組織、及び腫瘍から得られてもよい。さらに、Ｔ細胞は、当該技術分野において利用可能な１以上のＴ細胞株に由来し得る。また、Ｔ細胞は、ＦＩＣＯＬＬ（商標）分離及び／又はアフェレーシス等の当業者に知られている数多くの技術を使用して被験体から収集された血液単位から得られてもよい。幾つかの実施形態では、アフェレーシスによって収集された細胞を洗浄して血漿画分を除去し、後の処理に適切なバッファー又は培地に入れる。幾つかの実施形態では、細胞をＰＢＳで洗浄する。理解されるように、洗浄工程は、例えばＣｏｂｅ（商標）２９９１細胞処理装置、Ｂａｘｔｅｒ  ＣｙｔｏＭａｔｅ（商標）等の半自動フロースルー遠心分離機等を使用することによって使用され得る。幾つかの実施形態では、洗浄された細胞を１以上の生体適合性のバッファー、又はバッファーを含む若しくは含まない他の生理食塩水溶液に再懸濁する。幾つかの実施形態では、アフェレーシス試料の望ましくない成分が除去される。Ｔ細胞療法用にＴ細胞を単離する追加の方法は、米国特許出願公開第２０１３／０２８７７４８号に開示され、その全体が引用することにより本明細書の一部をなす。
【０１１１】
幾つかの実施形態では、Ｔ細胞は、例えば赤血球の溶解及びＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配による遠心分離を使用することによる単球の枯渇によってＰＢＭＣから単離される。幾つかの実施形態では、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋及びＣＤ４５ＲＯ＋のＴ細胞等のＴ細胞の特定の亜集団は、当該技術分野において知られている正又は負の選択技術によって更に単離される。例えば、負の選択によるＴ細胞集団の富化は、負に選択される細胞に特有の表面マーカーに対する抗体の組み合わせによって遂行され得る。幾つかの実施形態では、負に選択される細胞に存在する細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体のカクテルを使用する負の磁気免疫付着（negative magnetic immunoadherence）又はフローサイトメトリーによる細胞の選別及び／又は選択を使用することができる。例えば、負の選択によってＣＤ４＋細胞を富化するため、モノクローナル抗体カクテルは、典型的には、ＣＤ８、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ２０及びＨＬＡ−ＤＲに対する抗体を含む。幾つかの実施形態では、フローサイトメトリー及び細胞選別は、本開示における使用に対する目的の細胞集団を単離するために使用される。
【０１１２】
幾つかの実施形態では、ＰＢＭＣは、本明細書に記載される方法を使用して、免疫細胞（ＣＡＲ等）により遺伝子修飾に直接使用される。幾つかの実施形態では、ＰＢＭＣを単離した後、Ｔリンパ球を更に単離し、遺伝子修飾及び／又は拡大の前又は後のいずれかに、細胞傷害性Ｔリンパ球とヘルパーＴリンパ球の両方を、ナイーブ、メモリー、及びエフェクターのＴ細胞亜集団へと選別する。
【０１１３】
幾つかの実施形態では、ＣＤ８＋細胞は、これら各種のＣＤ８＋細胞と関連する細胞表面抗原を同定することによって、ナイーブ細胞、セントラルメモリー細胞、及びエフェクター細胞へと更に選別される。幾つかの実施形態では、セントラルメモリーＴ細胞の表現型マーカーの発現は、ＣＣＲ７、ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ６２Ｌ、及びＣＤ１２７の発現を含み、グランザイムＢに対して陰性である。幾つかの実施形態では、セントラルメモリーＴ細胞は、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＯ＋及びＣＤ６２Ｌ＋のＴ細胞である。幾つかの実施形態では、エフェクターＴ細胞は、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ６２Ｌ及びＣＤ１２７に対して陰性であり、グランザイムＢ及びパーフォリンに対して陽性である。幾つかの実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞は亜集団へと更に選別される。例えば、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞は、細胞表面抗原を有する細胞集団を同定することによって、ナイーブ細胞、セントラルメモリー細胞及びエフェクター細胞へと選別され得る。
【０１１４】
幾つかの実施形態では、免疫細胞、例えばＴ細胞は、単離に続いて、既知の方法を使用して遺伝子修飾されるか、又は遺伝子修飾に先だってｉｎ  ｖｉｔｒｏで免疫細胞が活性化され、拡大される（又は、前駆細胞の場合、分化される）。別の実施形態では、免疫細胞、例えばＴ細胞は、本明細書に記載されるキメラ抗原受容体によって遺伝子修飾され（例えば、ＣＡＲ又はＴＣＲをコードする１以上のヌクレオチド配列を含むウイルスベクターによって形質導入される）、次いでｉｎ  ｖｉｔｒｏで活性化及び／又は拡大される。Ｔ細胞を活性化及び拡大する方法は当該技術分野において知られており、例えば米国特許第６，９０５，８７４号、同第６，８６７，０４１号、及び同第６，７９７，５１４号、並びに国際公開第２０１２／０７９０００号に記載され、それらの内容は、それらの全体が引用することにより本明細書の一部をなす。一般的には、かかる方法は、ＰＢＭＣ又は単離されたＴ細胞と、一般的にはビーズ又は他の表面に付着された抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等の刺激物質及び共刺激物質とを、ＩＬ−２等の適切なサイトカインを含む培養培地中で接触させることを含む。同じビーズに付着された抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体は、「代理」抗原提示細胞（ＡＰＣ）としての役割を果たす。一例は、ヒトＴ細胞の生理学的な活性化に対するＣＤ３／ＣＤ２８活性化因子／刺激因子システムである、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）システムである。他の実施形態では、米国特許第６，０４０，１７７号及び同第５，８２７，６４２号、並びに国際公開第２０１２／１２９５１４号（それらの内容は、それらの全体が引用することにより本明細書の一部をなす）に記載されるような方法を使用して、フィーダー細胞、並びに適切な抗体及びサイトカインによって、Ｔ細胞は活性化され、刺激されて増殖する。
【０１１５】
幾つかの実施形態では、Ｔ細胞はドナー被験体から得られる。幾つかの実施形態では、ドナー被験体は、癌又は腫瘍に冒されたヒト患者である。幾つかの実施形態では、ドナー被験体は癌又は腫瘍に冒されていないヒト患者である。
【０１１６】
幾つかの実施形態では、上記組成物は、薬学的に許容可能な担体、希釈剤、可溶化剤、乳化剤、防腐剤、及び／又はアジュバントを含む。幾つかの実施形態では、上記組成物は賦形剤を含む。
【０１１７】
幾つかの実施形態では、上記組成物は、非経口的な送達に対し、吸入に対し、又は経口等の消化管による送達に対して選択される。かかる薬学的に許容可能な組成物の作製は、当業者の能力の範囲に含まれる。幾つかの実施形態では、バッファーを使用して上記組成物を生理学的ｐＨ又はわずかに低いｐＨ、典型的には約５〜約８の範囲のｐＨに維持する。幾つかの実施形態では、非経口投与が検討される場合、上記組成物は、薬学的に許容可能なビヒクル中、追加の治療剤と共に又はそれを伴わずに、本明細書に記載される組成物を含む、パイロジェンフリー（pyrogen-free）の非経口的に許容可能な水溶液の形態である。幾つかの実施形態では、非経口注射用のビヒクルは滅菌蒸留水であり、該蒸留水中において、少なくとも１つの追加の治療剤と共に又はそれを伴わずに、本明細書に記載される組成物が適切に保存される無菌の等張液として製剤化される。幾つかの実施形態では、上記作製は、所望の分子と、製品の制御放出又は持続放出を提供する、高分子化合物（ポリ乳酸又はポリグリコール酸等）、ビーズ、又はリポソームとの製剤化を含み、その後、デポー注射によって送達される。幾つかの実施形態では、所望の分子を導入するために、埋め込み可能な薬物送達デバイスが使用される。
【０１１８】
幾つかの実施形態では、癌の治療を、それを必要とする被験体において行う方法は、Ｔ細胞療法を含む。幾つかの実施形態では、本明細書に開示されるＴ細胞療法は操作された自己細胞療法（ｅＡＣＴ（商標））である。この実施形態によれば、上記方法は、患者から血液細胞を収集することを含み得る。単離された血液細胞（例えばＴ細胞）は、その後、本明細書に開示されるＣＡＲ又はＴＣＲを発現するように操作され得る。特定の実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＴＣＲ  Ｔ細胞は患者に投与される。幾つかの実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＴＣＲ  Ｔ細胞は、患者において腫瘍又は癌を治療する。幾つかの実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＴＣＲ  Ｔ細胞は、腫瘍又は癌のサイズを減少する。
【０１１９】
幾つかの実施形態では、Ｔ細胞療法における使用に対するドナーＴ細胞は、（例えば自己Ｔ細胞療法に対しては）患者から得られる。他の実施形態では、Ｔ細胞療法における使用に対するドナーＴ細胞は、患者でない被験体から得られる。
【０１２０】
幾つかの実施形態では、Ｔ細胞は治療的有効量で投与され得る。例えば、Ｔ細胞の治療的有効量は、少なくとも約１０４個の細胞、少なくとも約１０５個の細胞、少なくとも約１０６個の細胞、少なくとも約１０７個の細胞、少なくとも約１０８個の細胞、少なくとも約１０９個の細胞、又は少なくとも約１０１０個の細胞となり得る。別の実施形態では、Ｔ細胞の治療的有効量は、約１０４個の細胞、約１０５個の細胞、約１０６個の細胞、約１０７個の細胞、又は約１０８個の細胞である。幾つかの実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞の治療的有効量は、約２×１０６細胞／ｋｇ、約３×１０６細胞／ｋｇ、約４×１０６細胞／ｋｇ、約５×１０６細胞／ｋｇ、約６×１０６細胞／ｋｇ、約７×１０６細胞／ｋｇ、約８×１０６細胞／ｋｇ、約９×１０６細胞／ｋｇ、約１×１０７細胞／ｋｇ、約２×１０７細胞／ｋｇ、約３×１０７細胞／ｋｇ、約４×１０７細胞／ｋｇ、約５×１０７細胞／ｋｇ、約６×１０７細胞／ｋｇ、約７×１０７細胞／ｋｇ、約８×１０７細胞／ｋｇ、又は約９×１０７細胞／ｋｇである。
【０１２１】
幾つかの実施形態においては、治療的有効量のＣＡＲ陽性生存Ｔ細胞は、最大用量約１×１０８個のＣＡＲ陽性生存Ｔ細胞までの、体重１ｋｇ当たり約１×１０６個から約２×１０６個の間のＣＡＲ陽性生存Ｔ細胞である。
【０１２２】
治療方法
本明細書に開示される方法は、被験体において癌を治療するため、腫瘍のサイズを減少させるため、腫瘍細胞を死滅させるため、腫瘍細胞増殖を予防するため、腫瘍の成長を予防するため、患者から腫瘍を排除するため、腫瘍の再燃を予防するため、腫瘍転移を予防するため、患者において寛解を誘導するため、又はそれらの任意の組み合わせに使用され得る。幾つかの実施形態では、上記方法は完全奏効を誘導する。他の実施形態では、上記方法は部分奏効を誘導する。
【０１２３】
幾つかの実施形態においては、本開示は、治療前の腫瘍微小環境を分析することによって、Ｔ細胞療法の臨床有効性についての予測ツールを提供する。
【０１２４】
本発明の方法はまた、併用される又は逐次使用される追加の療法薬が、或る特定の腫瘍微小環境特性を有する被験体においてより有効であるかどうかの情報を与えるコンパニオン検査において使用され得る。幾つかの実施形態においては、追加の治療薬は、サイトカイン（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−１５）、刺激抗体（例えば、抗４１ＢＢ、抗ＯＸ−４０）、チェックポイント遮断療法薬（例えば、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−１）又は自然免疫刺激剤（例えば、ＴＬＲアゴニスト、ＳＴＩＮＧアゴニスト）であり得る。幾つかの実施形態においては、追加の治療薬は、Ｔ細胞動員ケモカイン（例えば、ＣＣＬ２、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ１７及びそれらの組み合わせ）及び／又はＴ細胞であり得る。幾つかの実施形態においては、追加の療法薬（単数又は複数）は、全身投与又は腫瘍内投与される。
【０１２５】
治療され得る癌は、血管新生化されていない、まだ実質的に血管新生化されていない、又は血管新生化された腫瘍を含む。また、癌は固形腫瘍又は非固形腫瘍を含み得る。幾つかの実施形態では、癌は血液の癌である。幾つかの実施形態では、癌は白血球の癌である。他の実施形態では、癌は形質細胞の癌である。幾つかの実施形態では、癌は白血病、リンパ腫又は骨髄腫である。幾つかの実施形態では、上記癌は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）（非Ｔ細胞ＡＬＬを含む）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、及び血球貪食リンパ組織球増多症（ＨＬＨ））、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄白血病（ＣＭＬ）、慢性若しくは急性の肉芽腫性疾患、慢性若しくは急性の白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、毛様細胞性白血病、血球貪食症候群（マクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ））、ホジキン病、大細胞肉芽腫（large cell granuloma）、白血球接着不全症、悪性リンパ増殖性状態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、意義不明の単クローン性γグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、多発性骨髄腫、脊髄形成異常及び骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、限定されないが急性骨髄白血病（ＡＭＬ）を含む骨髄疾患、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、形質細胞増殖性障害（例えば、無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無痛性骨髄腫））、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、形質細胞腫（例えば、形質細胞異常増殖症；孤立性骨髄腫；孤立性形質細胞腫；髄外性形質細胞腫；及び多発性形質細胞腫）、ＰＯＥＭＳ症候群（Ｃｒｏｗ−Ｆｕｋａｓｅ症候群、高月病、及びＰＥＰ症候群）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣ）、小細胞若しくは大細胞濾胞性リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、Ｔ細胞リンパ腫、形質転換後濾胞性リンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、又はそれらの組み合わせである。
【０１２６】
幾つかの実施形態では、癌は骨髄腫である。幾つかの実施形態では、癌は多発性骨髄腫である。幾つかの実施形態では、癌は白血病である。幾つかの実施形態では、癌は急性骨髄白血病である。
【０１２７】
幾つかの実施形態では、上記方法は化学療法剤を投与することを更に含む。幾つかの実施形態では、選択される化学療法剤は、リンパ枯渇（lymphodepleting）（プレコンディショニング）化学療法剤である。有益なプレコンディショニング治療のレジメンは、相関的な有益なバイオマーカーと共に、米国仮特許出願第６２／２６２，１４３号及び同第６２／１６７，７５０号に記載され、それらの全体が引用することにより本明細書の一部をなす。これらは、例えば、指定される有益な用量のシクロホスファミド（２００ｍｇ／ｍ２／日〜２０００ｍｇ／ｍ２／日）及び指定される用量のフルダラビン（２０ｍｇ／ｍ２／日〜９００ｍｇ／ｍ２／日）を患者に投与することを含むＴ細胞療法を必要とする患者をコンディショニングする方法を記載する。或る一つのかかる投薬レジメンは、治療的有効量の操作されたＴ細胞の患者への投与の前に、約５００ｍｇ／ｍ２／日のシクロホスファミド及び約６０ｍｇ／ｍ２／日のフルダラビンを３日間毎日患者に投与することを含む、患者を治療することを含む。
【０１２８】
幾つかの実施形態では、抗原結合分子、形質導入された（或いは操作された）細胞（ＣＡＲ又はＴＣＲ等）、及び化学療法剤は、各々、被験体における疾患又は状態を治療するのに有効な量で投与される。
【０１２９】
幾つかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞を含む組成物は、任意の数の化学療法剤と併せて投与され得る。化学療法剤の例として、チオテパ及びシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（商標））等のアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファン等のアルキルスルホン酸塩；ベンゾドーパ（benzodopa）、カルボコン、メツレドーパ（meturedopa）、及びウレドーパ（uredopa）等のアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド（triethylenethiophosphaoramide）、及びトリメチロロメラミン（trimethylolomelamine）のレジメ（resume）を含む、エチレンイミン及びメチラメラミン（methylamelamines）；クロラムブチル、クロルナファジン、コロホスファミド（cholophosphamide）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノベムビチン（novembichin）、フェネステリン（phenesterine）、プレドニムスチン（prednimustine）、トロホスファミド（trofosfamide）、ウラシルマスタード等のナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン（ranimustine）等のニトロソウレア；アクラシノマイシン（aclacinomysins）、アクチノマイシン、オースラマイシン（authramycin）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリチアマイシン、カラビシン（carabicin）、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（detorubicin）、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン（esorubicin）、イダルビシン、マルセロマイシン（marcellomycin）、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（potfiromycin）、ピューロマイシン、ケラマイシン（quelamycin）、ロドルビシン（rodorubicin）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン（zorubicin）等の抗生物質；メトトレキセート及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）等の代謝拮抗薬；デノプテリン、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキセート等の葉酸類縁体；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン（thiamiprine）、チオグアニン等のプリン類縁体；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、５−ＦＵ等のピリミジン類縁体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン等のアンドロゲン；アミノグルテチミド、マイトテイン、トリロスタン等の抗副腎剤；フロリン酸（frolinic acid）等の葉酸補液；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル（bestrabucil）；ビスアントレン；エダトラキサート（edatraxate）；デフォファミン（defofamine）；デメコルチン；ジアジコン；エルフォルミチン（elformithine）；酢酸エリプチニウム；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキウレア；レンティナン；ロニダミン；��トグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン（nitracrine）；ペントスタチン；フェナメット（phenamet）；ピラルビシン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（商標）；ラゾキサン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（gacytosine）；アラビノシッド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えばパクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）及びドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（商標）、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ）；クロラムブチル；ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキセート；シスプラチン及びカルボプラチン等の白金類縁体；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロン酸；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオミチン（ＤＭＦＯ）；Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（商標）（ベキサロテン）、Ｐａｎｒｅｔｉｎ（商標）（アリトレチノイン）等のレチノイン酸誘導体；ＯＮＴＡＫ（商標）（デニロイキンジフチトクス）；エスペラミシン；カペシタビン；並びに上記のいずれかの薬学的に許容可能な塩、酸又は誘導体が挙げられる。幾つかの実施形態では、本明細書に開示されるＣＡＲ及び／又はＴＣＲを発現する免疫エフェクター細胞を含む組成物は、腫瘍に対するホルモンの作用を調節又は阻害するように作用する抗ホルモン剤、例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害４（５）−イミダゾール、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン（keoxifene）、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、及びトレミフェン（フェアストン）を含む抗エストロゲン薬；並びにフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、リュープロリド及びゴセレリン等の抗アンドロゲン薬；並びに上記のいずれかの薬学的に許容可能な塩、酸又は誘導体と併せて投与され得る。また適切な場合には、限定されないが、ＣＨＯＰ、すなわち、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（商標））、ドキソルビシン（ヒドロキシドキソルビシン）、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（商標））及びプレドニゾンを含む化学療法剤の組み合わせが投与される。
【０１３０】
幾つかの実施形態では、化学療法剤は、操作された細胞又は核酸の投与と同時に又は投与の１週以内に投与される。他の実施形態では、化学療法剤は、操作された細胞又は核酸の投与の後、１週間〜４週間、すなわち１週間〜１ヶ月、１週間〜２ヶ月、１週間〜３ヶ月、１週間〜６ヶ月、１週間〜９ヶ月、又は１週間〜１２ヶ月投与される。幾つかの実施形態では、化学療法剤は、細胞又は核酸を投与する少なくとも１ヶ月前に投与される。幾つかの実施形態では、上記方法は、２以上の化学療法剤を投与することを更に含む。
【０１３１】
様々な追加の治療剤が、本明細書に記載される組成物と併せて使用され得る。例えば、有用な可能性がある追加の治療剤として、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ（商標））、ペンブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（商標））、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ（CureTech）、及びアテゾリズマブ（Roche）等のＰＤ−１阻害剤が挙げられる。
【０１３２】
本明細書に開示される組成物及び方法との併用に適している追加の治療剤として、限定されないが、イブルチニブ（ＩＭＢＲＵＶＩＣＡ（商標））、オファツムマブ（ＡＲＺＥＲＲＡ（商標））、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（商標））、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（商標））、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標））、トラスツズマブエムタンシン（ＫＡＤＣＹＬＡ（商標））、イマチニブ（ＧＬＥＥＶＥＣ（商標））、セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（商標））、パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（商標））、カツマキソマブ、イブリツモマブ、オファツムマブ、トシツモマブ、ブレンツキシマブ、アレムツズマブ、ゲムツズマブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、バンデタニブ、アファチニブ、ラパチニブ、ネラチニブ、アキシチニブ、マシチニブ、パゾパニブ、スニチニブ、ソラフェニブ、トセラニブ、レスタウルチニブ、アキシチニブ、セジラニブ、レンバチニブ、ニンテダニブ、パゾパニブ、レゴラフェニブ、セマクサニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、チボザニブ、トセラニブ、バンデタニブ、エントレクチニブ、カボザンチニブ、イマチニブ、ダサチニブ、ニロチニブ、ポナチニブ、ラドチニブ（radotinib）、ボスチニブ、レスタウルチニブ、ルキソリチニブ、パクリチニブ、コビメチニブ、セルメチニブ、トラメチニブ、ビニメチニブ、アレクチニブ、セリチニブ、クリゾチニブ、アフリベルセプト、アジポチド、デニロイキンジフチトクス、エベロリムス及びテムシロリムス等のｍＴＯＲ阻害剤、ソニデギブ及びビスモデギブ等のヘッジホッグ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤（パルボシクリブ）等のＣＤＫ阻害剤が挙げられる。
【０１３３】
幾つかの実施形態では、ＣＡＲ免疫細胞を有する組成物は、抗炎症剤と共に投与される。抗炎症剤又は抗炎症薬として、限定されないが、ステロイド及びグルココルチコイド（ベタメタゾン、ブデソニド、デキサメタゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロンを含む）、アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、メトトレキセート、スルファサラジン、レフルノミド、抗ＴＮＦ薬、シクロホスファミド、及びミコフェノール酸（mycophenolate）を含む非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）が挙げられ得る。例示的なＮＳＡＩＤとして、イブプロフェン、ナプロキセン、ナプロキセンナトリウム、Ｃｏｘ−２阻害剤、及びシアリレート（sialylates）が挙げられる。例示的な鎮痛剤として、アセトアミノフェン、オキシコドン、塩酸プロポキシフェンのトラマドールが挙げられる。例示的なグルココルチコイドとして、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、又はプレドニゾンが挙げられる。例示的な生物学的応答修飾物質として、細胞表面マーカー（例えばＣＤ４、ＣＤ５等）に対する分子、サイトカイン阻害剤（例えば、ＴＮＦアンタゴニスト（例えば、エタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（商標））、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（商標））及びインフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（商標）））、ケモカイン阻害剤、及び接着分子阻害剤が挙げられる。生物学的応答修飾物質は、分子の組み換え形態と並んで、モノクローナル抗体も含む。例示的なＤＭＡＲＤとして、アザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、メトトレキセート、ペニシラミン、レフルノミド、スルファサラジン、ヒドロキシクロロキン、金（経口（オーラノフィン）及び筋肉内）、及びミノサイクリンが挙げられる。
【０１３４】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される組成物は、サイトカインと併せて投与される。サイトカインの例は、リンホカイン、モノカイン及び従来のポリペプチドホルモンである。サイトカインの中でも、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモン及びウシ成長ホルモン等の成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）及び黄体形成ホルモン（ＬＨ）等の糖タンパク質ホルモン；肝臓増殖因子（ＨＧＦ）；線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；ミューラー阻害物質；マウス性腺刺激ホルモン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮細胞増殖因子；インテグリン；トロンボポイエチン（ＴＰＯ）；ＮＧＦ−ベータ等の神経成長因子（ＮＧＦ）；血小板増殖因子；ＴＧＦ−アルファ及びＴＧＦ−ベータ等のトランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）；インスリン様増殖因子Ｉ及びＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ、Ｅｐｏｇｅｎ（商標）、Ｐｒｏｃｒｉｔ（商標））；骨誘導因子；インターフェロン−アルファ、ベータ及びガンマ等のインターフェロン；マクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）；顆粒球マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；及び顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）等のコロニー刺激因子（ＣＳＦ）；ＩＬ−１、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２；ＩＬ−１５等のインターロイキン（ＩＬ）、ＴＮＦ−アルファ又はＴＮＦ−ベータ等の腫瘍壊死因子；並びにＬＩＦ及びｋｉｔリガンド（ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子が挙げられる。本明細書で使用されるサイトカインの用語は、天然起源の又は組み換え細胞培養物由来のタンパク質、及び本来の配列のサイトカインの生物学的に活性な等価物を含む。
【０１３５】
投与
幾つかの実施形態においては、（ａ）１つ以上のキメラ受容体を有する複数のＴ細胞を得ることと、（ｂ）有効用量の上記Ｔ細胞を患者に投与することとを含む方法において本明細書に記載される操作されたＴ細胞を使用することで、患者における悪性腫瘍が治療される。
【０１３６】
幾つかの実施形態においては、Ｔ細胞は治療的有効量で投与され得る。例えば、治療的有効量のＴ細胞は、少なくとも約１０４個の細胞、少なくとも約１０５個の細胞、少なくとも約１０６個の細胞、少なくとも約１０７個の細胞、少なくとも約１０８個の細胞、少なくとも約１０９個の細胞、又は少なくとも約１０１０個の細胞であり得る。別の実施形態では、治療的有効量のＴ細胞は、約１０４個の細胞、約１０５個の細胞、約１０６個の細胞、約１０７個の細胞、又は約１０８個の細胞である。幾つかの実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞の治療的有効量は、約２×１０６細胞／ｋｇ、約３×１０６細胞／ｋｇ、約４×１０６細胞／ｋｇ、約５×１０６細胞／ｋｇ、約６×１０６細胞／ｋｇ、約７×１０６細胞／ｋｇ、約８×１０６細胞／ｋｇ、約９×１０６細胞／ｋｇ、約１×１０７細胞／ｋｇ、約２×１０７細胞／ｋｇ、約３×１０７細胞／ｋｇ、約４×１０７細胞／ｋｇ、約５×１０７細胞／ｋｇ、約６×１０７細胞／ｋｇ、約７×１０７細胞／ｋｇ、約８×１０７細胞／ｋｇ、又は約９×１０７細胞／ｋｇである。
【０１３７】
幾つかの実施形態においては、治療的有効量のＣＡＲ陽性生存Ｔ細胞は、最大用量約１×１０８個のＣＡＲ陽性生存Ｔ細胞までの、体重１ｋｇ当たり約１×１０６個から約２×１０６個の間のＣＡＲ陽性生存Ｔ細胞である。
【０１３８】
モニタリング
幾つかの実施形態においては、キメラ受容体Ｔ細胞免疫療法薬の投与は、認可された医療機関で行われる。
【０１３９】
幾つかの実施形態においては、本明細書に開示される方法は、キメラ受容体Ｔ細胞免疫療法薬（例えば、アキシカブタゲン・シロロイセル（ａｘｉ−ｃｅｌ））の投与後に患者を、注入後に少なくとも毎日７日間にわたり認可された医療機関で、ＣＲＳ及び神経毒性の徴候及び症候についてモニタリングすることを含む。幾つかの実施形態においては、患者は、少なくとも３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間又は１４日間にわたり毎日モニタリングされる。
【０１４０】
幾つかの実施形態においては、患者は、認可された医療機関の近接範囲内で注入後に少なくとも４週間にわたって留まるよう指示される。幾つかの実施形態においては、患者は、認可された医療機関の近接範囲内で注入後に少なくとも１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間又は１０週間にわたって留まるよう指示される。
【０１４１】
臨床試験
ＺＵＭＡ−１（ＮＣＴ０２３４８２１６）は、難治性の侵攻性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の患者におけるアキシカブタゲン・シロロイセル（ａｘｉ−ｃｅｌ）の第１／２相多施設共同比較試験である（図２）（Neelapu SN, Locke LF, et al. N Engl J Med. 2017;377:2531-2544）。アキシカブタゲン・シロロイセル（ａｘｉ−ｃｅｌ）は、１５．４ヶ月の中央値追跡期間で奏効持続を維持した。１５．４ヶ月の中央値追跡期間でＺＵＭＡ−１においてアキシカブタゲン・シロロイセル（ａｘｉ−ｃｅｌ）で治療された難治性の大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の患者１０８人のうち、８２％が客観的奏効率（ＯＲＲ）を示し、５８％が完全奏効（ＣＲ）率を示し、奏効持続は４０％のＣＲを含めて４２％であった。サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）及び神経学的事象（ＮＥ）は可逆的であった（１３％がグレード３以上のＣＲＳ、２８％がグレード３以上のＮＥ、３例のグレード５の有害事象）。
【０１４２】
重度の有害反応の管理
幾つかの実施形態においては、上記方法は、有害反応の管理を含む。幾つかの実施形態においては、有害反応は、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）、神経毒性、過敏反応、重症感染、血球減少症、及び低ガンマグロブリン血症からなる群から選択される。
【０１４３】
幾つかの実施形態では、有害反応の徴候及び症候は、発熱、低血圧症、頻脈、低酸素症、及び悪寒からなる群から選択され、心不整脈（心房性細動及び心室頻拍を含む）、心停止、心不全、腎不全、毛細血管漏出症候群、低血圧症、低酸素症、臓器毒性、血球貪食性リンパ組織球症／マクロファージ活性化症候群（ＨＬＨ／ＭＡＳ）、発作、脳症、頭痛、振戦、眩暈、失語症、せん妄、不眠症、不安症、アナフィラキシー、発熱性好中球減少症、血小板減少症、好中球減少症、及び貧血症を含む。
【０１４４】
サイトカイン放出症候群
幾つかの実施形態においては、上記方法は、ＣＲＳを臨床症状に基づき特定することを含む。幾つかの実施形態においては、上記方法は、発熱、低酸素症、及び低血圧症のその他の原因を評価し、治療することを含む。グレード２以上のＣＲＳ（例えば、輸液反応性でない低血圧症又は酸素補給を必要とする低酸素症）を経験している患者は、連続的な心電図遠隔測定法及びパルスオキシメトリーを用いてモニタリングされるべきである。幾つかの実施形態においては、重度のＣＲＳを経験している患者については、心機能の評価のために心エコー図を実施することが検討される。重度又は生命を脅かすＣＲＳについては、集中治療の支持療法が検討される場合がある。
【０１４５】
幾つかの実施形態においては、上記方法は、患者を注入後に少なくとも毎日７日間にわたり認可された医療機関で、ＣＲＳの徴候及び症候についてモニタリングすることを含む。幾つかの実施形態においては、上記方法は、患者を注入後４週間にわたりＣＲＳの徴候又は症候についてモニタリングすることを含む。幾つかの実施形態においては、上記方法は、ＣＲＳの徴候又は症候が万一起こったらいつでも、直ちに医師の診察を受けるように患者に助言することを含む。幾つかの実施形態においては、上記方法は、ＣＲＳの最初の徴候が見られた時点で、示されたように支持療法、トシリズマブ又はトシリズマブ及びコルチコステロイドによる治療を開始することを含む。
【０１４６】
神経毒性
幾つかの実施形態においては、上記方法は、患者を神経毒性の徴候及び症候についてモニタリングすることを含む。幾つかの実施形態においては、上記方法は、神経症状のその他の原因を除外することを含む。グレード２以上の神経毒性を経験している患者は、連続的な心電図遠隔測定法及びパルスオキシメトリーを用いてモニタリングされるべきである。重度又は生命を脅かす神経毒性の場合には集中治療の支援療法が提供される。
【０１４７】
幾つかの実施形態においては、上記方法は、患者を注入後に少なくとも毎日７日間にわたり認可された医療機関で、神経毒性の徴候及び症候についてモニタリングすることを含む。幾つかの実施形態においては、上記方法は、患者を注入後４週間にわたり神経毒性の徴候又は症候についてモニタリングすることを含む。
【０１４８】
二次性悪性腫瘍
幾つかの実施形態においては、ＣＤ１９指向性遺伝子改変自己Ｔ細胞免疫療法で治療された患者は、二次性悪性腫瘍を発症する場合がある。幾つかの実施形態においては、上記方法は、二次性悪性腫瘍について生涯にわたりモニタリングすることを含む。
【０１４９】
本明細書で挙げられる全ての出版物、特許、及び特許出願は、それぞれの個々の出版物、特許、又は特許出願が、引用することにより本明細書の一部をなすと具体的に個別に示されるのと同じ程度で、引用することにより本明細書の一部をなす。しかしながら、本明細書における参考文献の引用は、そのような参考文献が本発明の先行技術であることの承認として解釈されるべきではない。引用することにより本明細書の一部をなす参考文献に示される定義又は用語のいずれかが、本明細書に示される用語及び考察と異なる限りにおいては、本明細書の用語及び定義が優先される。
【０１５０】
追加の実施形態
本開示の一態様は、ＣＡＲ−Ｔ細胞又は外因性ＴＣＲを発現するＴ細胞の投与（例えば、少なくとも１回の注入）の前に悪性腫瘍の１つ以上の部位での免疫関連遺伝子発現及び／又はＴ細胞密度（すなわち、腫瘍微小環境）を測定することを含む、悪性腫瘍を治療する方法に関する。幾つかの実施形態においては、上記測定は、化学療法的コンディショニング及び操作されたＴ細胞（例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞）の投与の前に実施される。
【０１５１】
幾つかの実施形態においては、上記測定は、ＩｍｍｕｎｏＳｉｇｎ（商標）２１又はＩｍｍｕｎｏｓｉｇｎ（商標）１５スコア等の免疫関連遺伝子発現に基づいて複合免疫スコアを決定することを含む。幾つかの実施形態においては、上記測定は、Ｉｍｍｕｎｏｓｃｏｒｅ（商標）等のＣＤ３＋Ｔ細胞及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞を含むＴ細胞の腫瘍内密度に基づいて免疫スコアを決定することを含む。幾つかの実施形態においては、上記測定は、被験体の免疫スコア（複数の場合もある）と予め決定された閾値との比較に基づいて、高い又は低い等の相対スコア（複数の場合もある）を決定すること及び割り当てることを更に含む。幾つかの実施形態においては、そのような予め決定された閾値は、操作されたＴ細胞による悪性腫瘍の治療に関して予後値を有するように決定される又は決定されている。
【０１５２】
幾つかの実施形態においては、開示された方法は、上記測定（複数の場合もある）に基づく治療最適化の工程を更に含む。例えば、幾つかの実施形態においては、操作されたＴ細胞（例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞）の投与の用量及び／又はスケジュールは、腫瘍微小環境の免疫スコア（複数の場合もある）に基づいて最適化される。例示的な実施形態においては、低いＩｍｍｕｎｏＳｉｇｎ（商標）２１スコア等の低い免疫スコアを有する被験体には、高い免疫スコアを有する被験体より高い用量のＣＡＲ−Ｔ細胞が投与される。幾つかの実施形態においては、低い免疫スコアを有する被験体には、高い免疫スコアを有する被験体よりも約２５％高い又は約５０％高い又は約１００％高い用量が投与される。
【０１５３】
付加的な例示的実施形態及び代替的な例示的実施形態においては、低い免疫スコアを有する被験体は、１回以上の追加のＣＡＲ−Ｔ細胞注入を受ける。幾つかの実施形態においては、低い治療前免疫スコアを有する被験体にＣＡＲ−Ｔ細胞の初回用量を投与し、治療応答を評価し、不完全奏効が観察されたら、追加のＴＭＥ免疫スコアの測定工程を実施する。幾つかの実施形態においては、初回投与後に被験体の免疫スコアが高ければ、ＣＡＲ−Ｔ細胞の追加の投与が行われる。
【０１５４】
幾つかの実施形態においては、開示された方法は、付加的に又は代替的に、低い免疫スコアを有する被験体をＣＡＲ−Ｔ投与前にそれらの免疫スコアを改善する目的で治療する「治療前」工程を含む。例えば、幾つかの実施形態においては、低い免疫スコアを有する被験体に、サイトカイン、ケモカイン又は免疫チェックポイント阻害剤等の１つ以上の免疫刺激剤が投与される。幾つかの実施形態においては、免疫スコアの追加の測定は治療前に実施される。
【０１５５】
幾つかの実施形態においては、治療オプションを評価するときに、ＣＡＲ−Ｔ療法に基づく完全奏効に関する高い免疫スコアの予後値が考慮される。例えば、幾つかの実施形態においては、高い免疫スコアを有する被験体は、低い免疫スコアを有する被験体よりも早期の治療ラインとしてＣＡＲ−Ｔの投与を受ける。
【０１５６】
本発明を、以下の実施例によって更に説明するが、実施例は、更なる限定として解釈されるべきではない。本出願全体を通して引用される全ての参考文献の内容は、引用することにより明確に本明細書の一部をなす。
【実施例】
【０１５７】
実施例１：ａｘｉ−ｃｅｌ応答の予後としてのベースラインＴＭＥ免疫遺伝子発現
アキシカブタゲン・シロロイセル（ａｘｉ−ｃｅｌ；ＹＥＳＣＡＲＴＡ（商標））は、２回以上の事前の全身療法を受けた再発性又は難治性の大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の患者の治療のために米国食品医薬品局及び欧州医薬品庁によって最近承認された自家抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法薬である。ａｘｉ−ｃｅｌ  ＣＡＲの構造は、図１に図示されている。
【０１５８】
ＺＵＭＡ−１（ＮＣＴ０２３４８２１６）は、難治性の侵攻性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の患者におけるアキシカブタゲン・シロロイセル（ａｘｉ−ｃｅｌ）の第１／２相多施設共同比較試験である（Neelapu SN, Locke LF, et al. N Engl J Med. 2017;377:2531-2544）。ＺＵＭＡ−１相及びコホートサイズは、図２に図示されている。患者には、両方の相で２．０×１０６個のＣＡＲ  Ｔ細胞／ｋｇを投与した。
【０１５９】
ＺＵＭＡ−１においてアキシカブタゲン・シロロイセル（ａｘｉ−ｃｅｌ）で治療された難治性の大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の患者１０８人のうち、全奏効率は８２％であり、完全奏効（ＣＲ）率は５８％であった。サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）及び神経学的事象（ＮＥ）は、ほとんど可逆的であった（１１％がグレード３以上のＣＲＳ、３２％がグレード３以上のＮＥ、４例のグレード５の有害事象（２例の非ａｘｉ−ｃｅｌ関連事象を含む））。１５．４ヶ月の中央値追跡期間で、奏効持続率は４０％のＣＲを含めて４２％であった。２７．１ヶ月の中央値追跡期間で、奏効持続率は３７％のＣＲを含めて３９％であった。
【０１６０】
ＺＵＭＡ−１の第２相の事後分析は、腫瘍免疫微小環境（ＴＭＥ）の主要な治療前特徴の関連性を調査するために設計された。９ヶ月の最小追跡期間でアキシカブタゲン・シロロイセル（ａｘｉ−ｃｅｌ）で治療された２５人の患者からのベースライン生検を分析した。表１は、患者及び腫瘍のベースライン特性及び治療結果を示している。
【０１６１】
【表１】
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【０１６２】
これらの２５人の患者の客観的奏効率は８０％であり、２０人がレスポンダーであり、５人がノンレスポンダーであった。その後のデータのカットオフ（最低１２ヶ月の追跡期間）において、１人の患者は後に１ヶ月目に「ノンレスポンダー」から「レスポンダー」に変わった。
【０１６３】
図３に示されるように、腫瘍生検はベースライン時及びアキシカブタゲン・シロロイセル（ａｘｉ−ｃｅｌ）投与後３週間以内に採取された。ベースラインの新鮮な凍結されたコア生検を、ｎＣｏｕｎｔｅｒ（商標）技術（ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ）を使用するＩｍｍｕｎｏｓｉｇｎ（商標）臨床研究アッセイで分析して、マルチプレックス形式で複数の免疫遺伝子の遺伝子発現レベルを測定した。このアッセイを、新鮮な凍結された腫瘍組織又はホルマリン固定された腫瘍組織からの最小量のＲＮＡを利用するために更に発展させた。予め決められたバイオインフォマティクス法及びカットオフを免疫介在性腫瘍退縮遺伝子（immune-mediated tumor regression genes）に適用して、Ｔ細胞傷害性(T cell cytotoxicity)、Ｔ細胞分化、Ｔ細胞誘引、Ｔ細胞接着を含む適応免疫と、免疫指向、血管新生抑制、免疫共阻害及び癌幹細胞を含む免疫抑制とを評価した（Ｉｍｍｕｎｏｓｉｇｎ（商標）；図４；Galon J, et al. Immunity. 2013;39:11-26；www.haliodx.com/clinical-research-services/immunosignr/）。バイオインフォマティクス法には、Ｔ細胞特異的（エフェクターＴ細胞、Ｔｈ１）遺伝子、インターフェロン経路関連遺伝子、ケモカイン及び免疫チェックポイントが含まれていた。高い／低いＩｍｍｕｎｏｓｉｇｎ（商標）２１スコアのカットオフは、試料間で観察されるスコアの２５パーセンタイルとして定義した。高いスコアは、腫瘍応答に潜在的に関連性を有する免疫関連遺伝子の発現を示す。
【０１６４】
発現分析及びスコアリングを使用して、ＴＭＥ特徴と応答との間の関連性を調べた。表２に示されるように、予め決められた遺伝子セットを使用するより広範な分析も適用した。Ｉｍｍｕｓｉｇｎ（商標）１５、Ｉｍｍｕｎｏｓｉｇｎ（商標）２１及びその他の遺伝子からなる予め決められた４３個の遺伝子セットと、ＰａｎＣａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ  Ｐａｎｅｌからの全ての７６３個の遺伝子が含まれていた（ｎＣｏｕｎｔｅｒ  ＰａｎＣａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ  Ｐａｎｅｌ．https://www.nanostring.com/products/gene-expression-panels/hallmarks-cancer-gene-expression-panel-collection/pancancer-immune-profiling-panel）。フィッシャーの直接確率検定及びウィルコクソン符号順位検定と共に偽発見率による多重検定補正（Benjamini-Hochberg）を使用した。
【０１６５】
【表２】
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【０１６６】
腫瘍微小環境（ＴＭＥ）の既存の免疫特徴は、アキシカブタゲン・シロロイセル（ａｘｉ−ｃｅｌ）への応答と関連性を有する。図５Ａに示されるように、ベースライン時のＴＭＥのＩｍｍｕｎｏｓｉｇｎ（商標）２１スコアは、レスポンダーにおいて９ヶ月以上の臨床追跡期間でノンレスポンダーと比較して上昇した（Ｐ＝０．０１２）。レスポンダーの８５％（１７人／２０人）は、高いＩｍｍｕｎｏｓｉｇｎ（商標）２１スコアを有し、ノンレスポンダーの８０％（４人／５人）は、低いＩｍｍｕｎｏｓｉｇｎ（商標）２１スコアを有した（図５Ｂ及び図５Ｃ）。１２ヶ月で遅延した応答が見られる患者を含む感度分析において、Ｉｍｍｕｎｏｓｉｇｎ（商標）２１と応答との間の関連性はＰ＝０．０５３を有した。
【０１６７】
レスポンダーにおいてベースライン時のＴＭＥでノンレスポンダーに対して上方調節された上位の免疫関連遺伝子には、ＣＴＬＡ４、ＣＤ３ｇ、ＣＤ３ｅ、ＣＤ２７、ＳＨ２Ｂ２及びＩＣＯＳＬが含まれていた。ＭＨＣクラスＩＩ遺伝子及び癌精巣抗原ＰＲＡＭＥ、ＭＡＧＥ、ＳＳＸを含む他の遺伝子の発現は、レスポンダーにおいてベースライン時のＴＭＥでノンレスポンダーと比較して相対的に減少した。びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫におけるＭＨＣクラスＩＩ発現の正の予後値に鑑みて、ＭＨＣクラスＩＩ遺伝子との関連性は意想外である（Rimsza LM, et al. Blood.2004;103:4251-4258）。拡張された７６３個の遺伝子のＰａｎＣａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ  ＰａｎｅｌからのレスポンダーにおけるＴＭＥでのノンレスポンダーと比較して発現の異なる追加の遺伝子を表３に示す。
【０１６８】
【表３】
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【０１６９】
実施例２：ａｘｉ−ｃｅｌ応答の予後としてのベースライン腫瘍内Ｔ細胞密度
ＺＵＭＡ−１の第２相の追加の事後分析は、腫瘍免疫微小環境（ＴＭＥ）の主要な治療前特徴、特にＣＤ３＋Ｔ細胞密度及びＣＤ８＋Ｔ細胞密度並びにＩｍｍｕｎｏｓｃｏｒｅ（商標）とａｘｉ−ｃｅｌへの応答及び免疫遺伝子発現（Ｉｍｍｕｎｏｓｉｇｎ（商標）２１を含む）との関連性を調査するために設計された。
【０１７０】
ＣＤ３＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞の密度（細胞／ｍｍ２）の免疫組織化学による分析のために、プレコンディショニング組織生検をホルマリン固定及びパラフィン包埋（ＦＦＰＥ）した。ＣＤ３及びＣＤ８染色を、Ｂｅｎｃｈｍａｒｋ（商標）ＸＴステーションを使用して２つの連続したＦＦＰＥスライス（４μｍ）で実施した。陽性細胞の染色密度は、専用のデジタル病理学ソフトウェアで測定した。
【０１７１】
Ｉｍｍｕｎｏｓｃｏｒｅ（商標）アッセイは、切除又は生検された癌試料のＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞及びＣＤ３＋Ｔ細胞の密度を測定し、ホルマリン固定されパラフィン包埋された組織スライドに対して実施される。治療前（化学療法的コンディショニング前）の腫瘍組織生検を、免疫組織化学によってＴ細胞サブセット（ＣＤ３＋、ＣＤ８＋）の密度（細胞／ｍｍ２）について分析した。ＣＤ３及びＣＤ８染色を、Ｂｅｎｃｈｍａｒｋ（商標）ＸＴステーションを使用して２つの連続したＦＦＰＥスライス（４μｍ）で実施した。陽性細胞の面積の測定は、専用のデジタル病理学ソフトウェアを使用して行った。各被験体について、２５個のベースライン生検試料についてのＣＤ３及びＣＤ８免疫組織化学的染色をスコアリングし、Galon et al., J Pathol. 232:199-209 (2014)に記載されるＨａｌｉｏＤｘアルゴリズム及び分析カットオフを用いてＩｍｍｕｎｏＳｃｏｒｅ（商標）（Ｔ細胞密度の数値指標）に変換した。観察されたスコアの中央値は、高いＩｍｍｕｎｏｓｃｏｒｅ（商標）及び低いＩｍｍｕｎｏｓｃｏｒｅ（商標）の閾値として定義され、ここで、高いＩｍｍｕｎｏｓｃｏｒｅは、相対的に高められた腫瘍内Ｔ細胞浸潤を表している。ウェルチのｔ検定を使用して、ＣＲを示す被験体の間でＩｍｍｕｎｏｓｃｏｒｅ（商標）、ＣＤ３レベル及びＣＤ８レベルを、部分奏効、病勢安定及び病勢進行を示す被験体と比較した。
【０１７２】
結果：より高い腫瘍内ＣＤ３＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞の密度と高いＩｍｍｕｎｏｓｃｏｒｅ（商標）（全て治療前に測定される）とを有する大部分の患者では、ＣＲが達成された（図８Ａ〜図８Ｃ）。全体として、より高い治療前Ｉｍｍｕｎｏｓｃｏｒｅ（商標）はＣＲの達成と関連性を有していた（Ｐ＝０．０４８；図８Ａ及び図８Ｂ）。ＣＤ３＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞の治療前の腫瘍内密度は、ＣＲの達成と正の関連を示した（それぞれＰ＝０．０２５及び０．０４９；図９Ａ及び図９Ｂ）。ＣＲが達成されなかった患者は、大部分が低い腫瘍内ＣＤ３＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞の密度と低いＩｍｍｕｎｏｓｃｏｒｅ（商標）とを示した（図８Ａ及び図８Ｃ）。
【０１７３】
同じ腫瘍生検において治療前に評価されたＩｍｍｕｎｏｓｃｏｒｅ（商標）及びＩｍｍｕｎｏｓｉｇｎ（商標）２１は８２％の一致を示したことから（９５％のＣＩ、６５〜９３；ｒ２＝０．４５１；図１０）、より高密度のＴ細胞浸潤と許容性の遺伝子シグネチャとの間の潜在的な関係が示唆される。
【０１７４】
実施例１及び実施例２からの知見により、ＣＡＲ  Ｔ細胞療法への応答における治療前のＴＭＥの重要な役割が示される。抗ＣＤ１９  ＣＡＲ  Ｔ療法は、低いＩｍｍｕｎｏｓｉｇｎ（商標）２１スコア又はＩｍｍｕｎｏｓｃｏｒｅ（商標）に関連性を有する予後不良を克服することができる。
【０１７５】
実施例３：腫瘍免疫微小環境
患者試料の更なる分析により、ＣＡＲ  Ｔ細胞の増殖が治療の２週間以内に起こり、免疫プログラムにおいてサイトカインの上昇を伴うことが分かった。薬力学的プロファイリングにより、増殖マーカー（ＩＬ−１５及びＩＬ−２）、炎症マーカー（ＩＬ−６、ＣＲＰ、ＳＡＡ、ＩＬ−５、フェリチン、ＩＬ−１Ｒａ、ＩＬ−２Ｒα）、免疫調節マーカー（ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１０）、ケモカイン（ＩＬ−８、ＩＰ−１０、ＭＣＰ−１）及びエフェクターマーカー（グランザイムＢ）においてベースラインを上回る急速な増加が示された。遺伝子発現分析は、治療前のＴ細胞関連遺伝子（ＣＤ３ε、ＣＤ２８及びＣＴＬＡ４）、自然免疫関連遺伝子（ＭＸ１、ＩＳＧ１５及びＭＹＤ８８）及びＢ細胞関連遺伝子（ＣＤ１９、ＣＤ７９Ｂ及びＰＡＸ５）が臨床転帰と相関し得ることを示唆している（図１１）。
【０１７６】
Ｚｕｍａ−１患者（治療後７日〜２１日）のＴＭＥにおいて、ＣＡＲ  Ｔ  ＲＮＡについてのｉｎ−ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）並びに国際公開第２０１８／０１３５６３号及び国際公開第２０１８／０５３７９０号に記載される別個のＣＡＲエピトープを認識する抗体を用いた免疫組織化学（ＩＨＣ）を使用して、ＣＡＲ  Ｔ細胞が検出された。治療前の腫瘍負荷量が減少した患者において、１年後の奏効持続率の増加が観察された。これらのデータは、腫瘍負荷量に相応するＣＡＲ  Ｔ細胞の生着が大きな腫瘍を克服し得ることを示唆している。ＣＡＲ  Ｔ細胞治療はＴＭＥの変化と関連性を有した。予め決められた４３個の免疫遺伝子パネルからの転写産物の分析により、治療の７日後〜２１日後に腫瘍において上方調節が示された。治療に応答して、免疫阻害チェックポイント（ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＬＡＧ３、ＴＮＦＲＳＦ１８、ＩＣＯＳ）、ＩＦＮ関連遺伝子（ＩＲＦ１、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ４、ＩＦＮγ）及びケモカイン（ＣＸＣＬ９、ＣＣＬ２、ＣＣＬ５）、エフェクター（ＣＤ８Ａ、ＧＮＬＹ、ＧＺＭＡ、ＧＺＭＭ、ＧＺＭＢ、ＧＺＭＨ）並びに増殖マーカーＩＬ−１５の増加が観察された（図１２）。ｎａｎｏｓｔｒｉｎｇ分析により、完全奏効又は部分奏効を示す被験体においてＩＬ−１５遺伝子及びＰＤ−Ｌ１遺伝子の発現の上昇が示された（図１３Ａ及び図１３Ｂ）。
【０１７７】
大細胞型リンパ腫及びＢ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｂ−ＡＬＬ）の患者からの生検を、ＣＤ１９及びＰＤ−Ｌ１の発現について評価した。Ａｘｉ−ｃｅｌ後に再発した被験体の少なくとも１／３は、ＣＤ１９発現に陰性の腫瘍を有した。進行時のＢ細胞及び免疫関連分子の分析により、ＣＤ１９＋腫瘍細胞又はＣＤ１９−腫瘍細胞による再発が確認された。ベースラインでは、評価可能な患者の９４％（１６人／１７人）がＣＤ１９陽性であった。２１人の評価可能な患者からの進行後の腫瘍生検は、３３％がＣＤ１９陰性であり、６２％がＰＤ−Ｌ１陽性であることを示した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２−１】
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【図１２−２】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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