(57)【要約】  本明細書には、インターロイキン（ＩＬ）１５コンジュゲート、および１つまたはそれ以上の症状の治療における使用が開示される。また、本明細書には、１つまたはそれ以上のＩＬ−１５コンジュゲートを含む医薬組成物およびキットも含めて開示される。【選択図】図９Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
修飾されたインターロイキン１５（ＩＬ−１５）ポリペプチドとインターロイキン１５受容体α（ＩＬ−１５Ｒα）との間の結合を減少させるが、インターロイキン１５受容体βγ（ＩＬ−１５Ｒβγ）シグナル伝達複合体との顕著な結合を保持してＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒβγ複合体を形成する、ポリペプチド上の位置の少なくとも１つの非天然アミノ酸を含む単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドであって、ＩＬ−１５Ｒαへの結合の減少が野生型ＩＬ−１５ポリペプチドとＩＬ−１５Ｒαとの間の結合と比較される前記ＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項２】
半減期を増大させるポリペプチド上の位置の少なくとも１つの非天然アミノ酸を含む単離および修飾されたインターロイキン１５（ＩＬ−１５）ポリペプチドであって、増大した半減期は野生型ＩＬ−１５タンパク質の半減期と比較される前記ＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項３】
修飾されたインターロイキン１５（ＩＬ−１５）ポリペプチドとインターロイキン１５受容体α（ＩＬ−１５Ｒα）との結合を減少させるが、インターロイキン１５受容体βγ（ＩＬ−１５Ｒβγ）シグナル伝達複合体との顕著なシグナル伝達効力を保持する、ポリペプチド上の位置の少なくとも１つの非天然アミノ酸を含む単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドであって、ＩＬ−１５Ｒαへの結合の減少は、野生型ＩＬ−１５ポリペプチドとＩＬ−１５Ｒαとの結合と比較される前記ＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項４】
シグナル伝達効力は、野生型ＩＬ−１５ポリペプチドとＩＬ−１５Ｒβγとの間のシグナル伝達効力と比較される、請求項３に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項５】
修飾されたＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒβγ複合体と野生型ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒβγ複合体との間の受容体シグナル伝達効力の差は、１０００倍未満、５００倍未満、２００倍未満、１００倍未満、５０倍未満、１０倍未満、５倍未満、４倍未満、３倍未満、２倍未満、または１倍未満である、請求項４に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項６】
修飾されたＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒβγ複合体と野生型ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒβγ複合体との間の受容体シグナル伝達効力の差は、１０倍超、２０倍超、３０倍超、４０倍超、５０倍超、１００倍超、２００倍超、３００倍超、４００倍超、または５００倍超である、請求項４に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項７】
少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｎ１、Ｗ２、Ｖ３、Ｎ４、Ｉ６、Ｓ７、Ｄ８、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｅ１３、Ｄ１４、Ｌ１５、Ｑ１７、Ｓ１８、Ｍ１９、Ｈ２０、Ｉ２１、Ｄ２２、Ａ２３、Ｔ２４、Ｌ２５、Ｙ２６、Ｅ２８、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｐ３３、Ｓ３４、Ｃ３５、Ｋ３６、Ｖ３７、Ｔ３８、Ｋ４１、Ｌ４４、Ｅ４６、Ｑ４８、Ｖ４９、Ｓ５１、Ｌ５２、Ｅ５３、Ｓ５４、Ｇ５５、Ｄ５６、Ａ５７、Ｓ５８、Ｈ６０、Ｄ６１、Ｔ６２、Ｖ６３、Ｅ６４、Ｎ６５、Ｉ６７、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｎ７１、Ｎ７２、Ｓ７３、Ｌ７４、Ｓ７５、Ｓ７６、Ｎ７７、Ｇ７８、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、Ｅ８２、Ｓ８３、Ｇ８４、Ｃ８５、Ｋ８６、Ｅ８７、Ｃ８８、Ｅ８９、Ｅ９０、Ｌ９１、Ｅ９２、Ｅ９３、Ｋ９４、Ｎ９５、Ｉ９６、Ｋ９７、Ｅ９８、Ｌ１００、Ｑ１０１、Ｓ１０２、Ｖ１０４、Ｈ１０５、Ｑ１０８、Ｍ１０９、Ｆ１１０、Ｉ１１１、Ｎ１１２、Ｔ１１３、およびＳ１１４から選択され、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項８】
少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、
Ｄ２２、Ａ２３、Ｔ２４、Ｌ２５、Ｙ２６、Ｌ４４、Ｅ４６、Ｑ４８、Ｖ４９、Ｅ５３、Ｅ８９、Ｅ９０、およびＥ９３（残基位置は配列番号１に示される位置に対応する）；
Ｙ２６、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｅ５３、およびＬ２５（残基位置は配列番号１に示される位置に対応する）；
Ａ２３、Ｔ２４、Ｅ８９、およびＥ９３（残基位置は配列番号１に示される位置に対応する）；
Ｄ２２、Ｌ４４、Ｑ４８、およびＥ９０（残基位置は配列番号１に示される位置に対応する）；
Ｌ２５、Ｅ５３、Ｎ７７、およびＳ８３（残基位置は配列番号１に示される位置に対応する）；または
Ｌ２５およびＥ５３（残基位置は配列番号１に示される位置に対応する）
から選択される、請求項１または３に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項９】
少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、
Ｅ１３、Ｄ１４、Ｌ１５、Ｑ１７、Ｓ１８、Ｍ１９、Ｈ２０、Ｉ２１、Ｓ３４、Ｃ３５、Ｋ３６、Ｖ３７、Ｔ３８、Ｋ４１、Ｌ４４、Ｓ５１、Ｌ５２、Ｓ５４、Ｇ５５、Ｄ５６、Ａ５７、Ｓ５８、Ｈ６０、Ｖ６３、Ｉ６７、Ｎ７１、Ｓ７３、Ｌ７４、Ｓ７５、Ｓ７６、Ｎ７７、Ｇ７８、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、Ｅ８２、Ｓ８３、Ｇ８４、Ｃ８５、Ｋ８６、Ｅ８７、Ｃ８８、Ｌ９１、Ｅ９２、Ｋ９４、Ｎ９５、Ｉ９６、Ｋ９７、Ｅ９８、Ｌ１００、Ｑ１０１、およびＦ１１０（残基位置は配列番号１に示される位置に対応する）；
Ｄ１４、Ｑ１７、Ｓ１８、Ｋ４１、Ｓ５１、Ｌ５２、Ｇ５５、Ｄ５６、Ａ５７、Ｓ５８、Ｓ７５、Ｓ７６、Ｎ７７、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、Ｓ８３、Ｇ８４、Ｅ９２、Ｋ９４、Ｎ９５、Ｋ９７、およびＥ９８（残基位置は配列番号１に示される位置に対応する）；
Ｅ１３、Ｌ１５、Ｍ１９、Ｈ２０、Ｋ３６、Ｖ３７、Ｔ３８、Ｓ５４、Ｈ６０、Ｉ６７、Ｎ７１、Ｇ７８、Ｋ８６、Ｅ８７、およびＱ１０１（残基位置は配列番号１に示される位置に対応する）；
Ｉ２１、Ｓ３４、Ｃ３５、Ｌ４４、Ｖ６３、Ｓ７３、Ｌ７４、Ｅ８２、Ｃ８５、Ｃ８８、Ｌ９１、Ｉ９６、Ｌ１００、およびＦ１１０（残基位置は配列番号１に示される位置に対応する）
から選択される、請求項２に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項１０】
少なくとも１つの非天然アミノ酸は、
・リジン類似体である；
・芳香族側鎖を含む；
・アジド基を含む；
・アルキン基を含む；または
・アルデヒドもしくはケトン基を含む
請求項１〜３のいずれか１項に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項１１】
少なくとも１つの非天然アミノ酸は芳香族側鎖を含まない、請求項１〜３のいずれか１項に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項１２】
少なくとも１つの非天然アミノ酸は、Ｎ６−アジドエトキシ−Ｌ−リジン（ＡｚＫ）、Ｎ６−プロパルギルエトキシ−Ｌ−リジン（ＰｒａＫ）、ＢＣＮ−Ｌ−リジン、ノルボルネンリジン、ＴＣＯ−リジン、メチルテトラジンリジン、アリルオキシカルボニルリジン、２−アミノ−８−オキソノナン酸、２−アミノ−８−オキソオクタン酸、ｐ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジドメチル−Ｌ−フェニルアラニン（ｐＡＭＦ）、ｐ−ヨード−Ｌ−フェニルアラニン、ｍ−アセチルフェニルアラニン、２−アミノ−８−オキソノナン酸、ｐ−プロパルギルオキシフェニルアラニン、ｐ−プロパルギル−フェニルアラニン、３−メチル−フェニルアラニン、Ｌ−Ｄｏｐａ、フッ化フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジド−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アシル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ベンゾイル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ブロモフェニルアラニン、ｐ−アミノ−Ｌ−フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｏ−アリルチロシン、Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン、Ｏ−４−アリル−Ｌ−チロシン、４−プロピル−Ｌ−チロシン、ホスホノチロシン、トリ−Ｏ−アセチル−ＧｌｃＮＡｃｐ−セリン、Ｌ−ホスホセリン、ホスホノセリン、Ｌ−３−（２−ナフチル）アラニン、２−アミノ−３−（（２−（（３−（ベンジルオキシ）−３−オキソプロピル）アミノ）エチル）セラニル）プロパン酸、２−アミノ−３−（フェニルセラニル）プロパン酸、またはセレノシステインを含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項１３】
少なくとも１つの非天然アミノ酸は、直交性ｔＲＮＡシンテターゼ／ｔＲＮＡ対によって、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドに組み込まれる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項１４】
直交性シンテターゼ／ｔＲＮＡ対の直交性ｔＲＮＡは、少なくとも１つの非天然核酸塩基を含む、請求項１３に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項１５】
直交性シンテターゼ／ｔＲＮＡ対の直交性ｔＲＮＡは非天然塩基対を含む、請求項１３に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項１６】
修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、少なくとも１つの非天然アミノ酸を介してコンジュゲート化部分に共有結合している、請求項１〜３のいずれか１項に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項１７】
コンジュゲート化部分は、水溶性ポリマー、脂質、タンパク質、またはペプチドを含む、請求項１６に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項１８】
水溶性ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（プロピレングリコール）（ＰＰＧ）、エチレングリコールとプロピレングリコールのコポリマー、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメチルアクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）、多糖、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（ＰＯＺ）、ポリ（Ｎ−アクリロイルモルホリン）、またはそれらの組み合わせを含む、請求項１７に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項１９】
水溶性ポリマーはＰＥＧ分子を含む、請求項１７に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項２０】
ＰＥＧ分子は直鎖状ＰＥＧである、請求項１９に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項２１】
ＰＥＧ分子は分枝状ＰＥＧである、請求項１９に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項２２】
水溶性ポリマーは多糖を含む、請求項１７に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項２３】
多糖は、デキストラン、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、ヒアルロン酸（ＨＡ）、アミロース、ヘパリン、ヘパラン硫酸（ＨＳ）、デキストリン、またはヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）を含む、請求項２２に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項２４】
脂質は脂肪酸を含む、請求項１７に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項２５】
脂肪酸は、約６〜約２６個の炭素原子、約６〜約２４個の炭素原子、約６〜約２２個の炭素原子、約６〜約２０個の炭素原子、約６〜約１８個の炭素原子、約２０〜約２６個の炭素原子、約１２〜約２６個の炭素原子、約１２〜約２４個の炭素原子、約１２〜約２２個の炭素原子、約１２〜約２０個の炭素原子、または約１２〜約１８個の炭素原子を含む、請求項２４に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項２６】
脂肪酸は飽和脂肪酸である、請求項２４に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項２７】
タンパク質は、アルブミン、トランスフェリン、またはトランスチレチンを含む、請求項１７に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項２８】
コンジュゲート化部分はＴＬＲアゴニストを含む、請求項１６に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項２９】
タンパク質は、抗体またはその結合断片を含む、請求項１７に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項３０】
抗体またはその結合断片は抗体のＦｃ部分を含む、請求項２９に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項３１】
ペプチドは、ＸＴＥＮペプチド、グリジンに富むホモアミノ酸ポリマー（ＨＡＰ）、ＰＡＳポリペプチド、エラスチン様ポリペプチド（ＥＬＰ）、ＣＴＰペプチド、またはゼラチン様タンパク質（ＧＬＫ）ポリマーを含む、請求項１７に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項３２】
コンジュゲート化部分は、リンカーを介して、修飾されたＩＬ−１５の少なくとも１つの非天然アミノ酸に間接的に結合している、請求項１６に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項３３】
リンカーは、ホモ二官能性リンカー、ヘテロ二官能性リンカー、ゼロ長リンカー、切断可能または切断不可能なジペプチドリンカー、マレイミド基、スペーサー、またはそれらの組み合わせを含む、請求項３２に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項３４】
修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、残基位置Ｎ７１、Ｎ７２、またはＮ７７での修飾をさらに含み、残基位置が配列番号１に示される位置に対応する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項３５】
修飾は、ＣＭＣ条件および／または効力を改善する、請求項３４に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項３６】
修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、残基Ｅ１３、Ｄ１４、Ｌ１５、Ｑ１７、Ｓ１８、Ｍ１９、Ｈ２０、Ｉ２１、Ｓ３４、Ｃ３５、Ｋ３６、Ｖ３７、Ｔ３８、Ｋ４１、Ｌ４４、Ｓ５１、Ｌ５２、Ｓ５４、Ｇ５５、Ｄ５６、Ａ５７、Ｓ５８、Ｈ６０、Ｖ６３、Ｉ６７、Ｎ７１、Ｓ７３、Ｌ７４、Ｓ７５、Ｓ７６、Ｎ７７、Ｇ７８、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、Ｅ８２、Ｓ８３、Ｇ８４、Ｃ８５、Ｋ８６、Ｅ８７、Ｃ８８、Ｌ９１、Ｅ９２、Ｋ９４、Ｎ９５、Ｉ９６、Ｋ９７、Ｅ９８、Ｌ１００、Ｑ１０１、またはＦ１１０をさらに含み、修飾は半減期の延長を改善する、請求項１または３に記載の単離および修飾されたＩＬ１５ポリペプチド。
【請求項３７】
修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、
残基Ｄ２２、Ａ２３、Ｔ２４、Ｌ２５、Ｙ２６、Ｌ４４、Ｅ４６、Ｑ４８、Ｖ４９、Ｅ５３、Ｅ８９、Ｅ９０、もしくはＥ９３（修飾はＩＬ−１５Ｒαとの相互作用を損なう）；
残基Ｎ１、Ｎ４、Ｓ７、Ｄ８、Ｋ１１、Ｄ６１、Ｔ６２、Ｅ６４、Ｎ６５、Ｉ６８、Ｌ６９、もしくはＮ７２（修飾はＩＬ−１５Ｒβとの相互作用を損なう）；
残基Ｖ３、Ｉ６、Ｋ１０、Ｅ２８、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｐ３３、Ｓ１０２、Ｖ１０４、Ｈ１０５、Ｑ１０８、Ｍ１０９、Ｉ１１１、Ｎ１１２、Ｔ１１３、もしくはＳ１１４（修飾はＩＬ−１５Ｒγとの相互作用を損なう）；または
それらの組合せ
で修飾をさらに含む、請求項２に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項３８】
修飾は、天然アミノ酸または非天然アミノ酸への変更である、請求項３６または３７に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項３９】
結合親和性の低下は、野生型ＩＬ−１５ポリペプチドと比較して、ＩＬ−１５Ｒαへの結合親和性の約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、または１００％の低下である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項４０】
結合親和性の低下は、野生型ＩＬ−１５ポリペプチドと比較して、ＩＬ−１５Ｒαに対して、約３分の１、４分の１、５分の１、６分の１、７分の１、８分の１、９分の１、１０分の１、またはそれ以下への低下である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項４１】
修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、
完全長ＩＬ−１５ポリペプチドの機能的に活性な断片；
組換えＩＬ−１５ポリペプチド；または
組換えヒトＩＬ−１５ポリペプチド
である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項４２】
修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、Ｎ末端欠失、Ｃ末端欠失、またはそれらの組み合わせを含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項４３】
Ｎ末端欠失は、Ｎ末端からの最初の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、または３０残基の欠失を含み、残基位置は、配列番号１の位置を基準にする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項４４】
Ｃ末端欠失は、Ｃ末端からの最後の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、またはそれ以上の残基の欠失を含み、残基位置は、配列番号１の位置を基準にする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項４５】
ＩＬ−１５Ｒαへの結合親和性の低下を伴う修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、ＣＤ８＋エフェクターナイーブおよび記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団、またはそれらの組み合わせを拡大することができる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項４６】
コンジュゲート化部分または非天然アミノ酸は、ＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒαとの結合を損なうかまたは遮断する、請求項１６に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項４７】
コンジュゲート化部分または非天然アミノ酸は半減期を延長するが、ＩＬ−１５とＩＬ−１５受容体との結合を損なわないかまたは遮断しない、請求項１６に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項４８】
コンジュゲート化部分または非天然アミノ酸は、ＩＬ−１５のＩＬ−１５Ｒβおよび／またはＩＬ−１５Ｒγへの結合を増加させる、請求項１６に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項４９】
ＩＬ−１５の増大した半減期は、野生型ＩＬ−１５の血漿半減期よりも少なくとも９０分、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１８時間、２４時間、３６時間、４８時間、３日、４日、５日、６日、７日、またはそれより長い、請求項１〜３のいずれか１項に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項５０】
ＩＬ−１５の増大した半減期は、約９０分、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１８時間、２４時間、３６時間、４８時間、３日、４日、５日、６日、または７日である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項５１】
修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドによるＩＬ−１５Ｒβγ複合体を介したＣＤ８＋エフェクターナイーブおよび記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、またはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団の活性化は、野生型ＩＬ−１５ポリペプチドと比較して、前記細胞集団の活性化の顕著な効力を保持する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項５２】
修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドのＩＬ−１５Ｒβγ複合体に対する受容体シグナル伝達効力は、ＩＬ−１５Ｒβγ複合体に対する野生型ＩＬ−１５ポリペプチドの受容体シグナル伝達効力よりも高い、請求項５１に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項５３】
修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドのＩＬ−１５Ｒβγ複合体に対する受容体シグナル伝達効力は、ＩＬ−１５Ｒβγ複合体に対する野生型ＩＬ−１５ポリペプチドの受容体シグナル伝達効力よりも低い、請求項５１に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項５４】
少なくとも１つの非天然アミノ酸を含む単離および修飾されたインターロイキン１５（ＩＬ−１５）ポリペプチドであって、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、インターロイキン２／インターロイキン１５受容体β（ＩＬ−２／ＩＬ−１５Ｒβ）、インターロイキン１５受容体γ（ＩＬ−１５Ｒγ）、またはそれらの組み合わせとの修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドの結合親和性を選択的に低下させるが、インターロイキン１５受容体α（ＩＬ−１５Ｒα）との相互作用に影響を及ぼさない残基位置にある、前記単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項５５】
修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、ＩＬ−１５Ｒβへの低下した結合親和性を有する、請求項５４に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項５６】
少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｎ１、Ｎ４、Ｓ７、Ｄ８、Ｋ１１、Ｄ６１、Ｔ６２、Ｅ６４、Ｎ６５、Ｉ６８、Ｌ６９、およびＮ７２から選択され、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する、請求項５５に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項５７】
少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、
Ｎ４、Ｓ７、Ｋ１１、およびＤ６１；
Ｄ８、Ｅ６４、Ｎ６５、Ｉ６８、およびＮ７２；または
Ｎ１、Ｔ６２、およびＬ６９
から選択される、請求項５５に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項５８】
修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、ＩＬ−１５Ｒγへの低下した結合親和性を有する、請求項５４に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項５９】
少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｖ３、Ｉ６、Ｋ１０、Ｅ２８、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｐ３３、Ｓ１０２、Ｖ１０４、Ｈ１０５、Ｑ１０８、Ｍ１０９、Ｉ１１１、Ｎ１１２、Ｔ１１３、およびＳ１１４から選択され、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する、請求項５８に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項６０】
少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、
Ｖ３、Ｋ１０、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｈ３２、Ｈ１０５、Ｑ１０８、Ｍ１０９、Ｉ１１１、Ｎ１１２、Ｔ１１３、およびＳ１１４；
Ｅ２８、Ｐ３３、Ｓ１０２、およびＶ１０４；または
ＩＶ６およびＶ３１
から選択される、請求項５８に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項６１】
修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、半減期の延長を改善するための修飾をさらに含む、請求項５４〜６０のいずれか１項に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項６２】
修飾は、残基位置Ｅ１３、Ｄ１４、Ｌ１５、Ｑ１７、Ｓ１８、Ｍ１９、Ｈ２０、Ｉ２１、Ｓ３４、Ｃ３５、Ｋ３６、Ｖ３７、Ｔ３８、Ｋ４１、Ｌ４４、Ｓ５１、Ｌ５２、Ｓ５４、Ｇ５５、Ｄ５６、Ａ５７、Ｓ５８、Ｈ６０、Ｖ６３、Ｉ６７、Ｎ７１、Ｓ７３、Ｌ７４、Ｓ７５、Ｓ７６、Ｎ７７、Ｇ７８、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、Ｅ８２、Ｓ８３、Ｇ８４、Ｃ８５、Ｋ８６、Ｅ８７、Ｃ８８、Ｌ９１、Ｅ９２、Ｋ９４、Ｎ９５、Ｉ９６、Ｋ９７、Ｅ９８、Ｌ１００、Ｑ１０１、またはＦ１１０であり、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する、請求項６１に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項６３】
修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、残基位置Ｎ７１、Ｎ７２、またはＮ７７での修飾をさらに含み、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する、請求項５４〜６２のいずれか１項に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項６４】
修飾は非天然アミノ酸への変更である、請求項６１〜６３のいずれか１項に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項６５】
修飾は天然アミノ酸への変更である、請求項６１〜６３のいずれか１項に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項６６】
修飾はＣＭＣ条件および／または効力を改善する、請求項６３に記載の単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。
【請求項６７】
インターロイキン１５（ＩＬ−１５）コンジュゲートであって、
単離および精製されたＩＬ−１５ポリペプチド；ならびに
アミノ酸残基の番号付けが配列番号１に対応する、Ｎ４、Ｅ４６、Ｄ６１、Ｅ６４、Ｎ６５、Ｉ６８およびＬ６９から選択されるアミノ酸位置で該単離および精製されたＩＬ−１５ポリペプチドに結合するコンジュゲート化部分
を含む前記ＩＬ−１５コンジュゲート。
【請求項６８】
アミノ酸残基はシステインまたはリジンに突然変異されている、請求項６７に記載のＩＬ−１５コンジュゲート。
【請求項６９】
Ｎ４、Ｅ４６、Ｎ６５、およびＬ６９から選択されるアミノ酸残基は、さらに非天然アミノ酸に突然変異されている、請求項６７に記載のＩＬ−１５コンジュゲート。
【請求項７０】
医薬組成物であって、
請求項１〜６６のいずれか１項に記載の修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドまたは請求項６７〜６９のいずれか１項に記載のＩＬ−１５コンジュゲート；および
薬学的に許容される賦形剤
を含む前記医薬組成物。
【請求項７１】
医薬組成物は非経口投与用に製剤化される、請求項７０に記載の医薬組成物。
【請求項７２】
それを必要とする対象における増殖性疾患または状態を治療する方法であって、請求項１〜６６のいずれか１項に記載される修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドまたは請求項６７〜６９のいずれか１項に記載されるＩＬ−１５コンジュゲートの治療的に有効な量を該対象に投与することを含む前記方法。
【請求項７３】
増殖性疾患または状態はがんである、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
がんは固形腫瘍がんである、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
固形腫瘍がんは、膀胱がん、骨がん、脳がん、乳がん、大腸がん、食道がん、眼がん、頭頸部がん、腎臓がん、肺がん、黒色腫、卵巣がん、膵臓がん、または前立腺がんである、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
がんは血液悪性腫瘍である、請求項７３に記載の方法。
【請求項７７】
血液悪性腫瘍は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、多発性骨髄腫、節外辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、節辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、非バーキット高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＬ）、免疫芽球性大細胞リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、脾臓辺縁帯リンパ腫、形質細胞骨髄腫、形質細胞腫、縦隔（胸腺）大Ｂ細胞リンパ腫、血管内大Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、またはリンパ腫様肉芽腫症である、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
追加の治療剤を投与する工程をさらに含む、請求項７２〜７７のいずれか１項記に記載の方法。
【請求項７９】
修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートおよび追加の治療剤は同時に投与される、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートおよび追加の治療剤は連続的に投与される、請求項７８に記載の方法。
【請求項８１】
修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、追加の治療剤の前に投与される、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、追加の治療剤の投与後に投与される、請求項８０に記載の方法。
【請求項８３】
対象はヒトである、請求項７２〜８２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８４】
エフェクターＴ（Ｔｅｆｆ）細胞、記憶Ｔ（Ｔｍｅｍ）細胞、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞集団を拡大させる方法であって、
ａ）細胞を請求項１〜６６のいずれか１項に記載の修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド、または請求項６７〜６９のいずれか１項に記載のＩＬ−１５コンジュゲートと接触させる工程；および
ｂ）ＩＬ−１５をＩＬ−１５ＲβおよびＩＬ−１５Ｒγサブユニットと相互作用させ、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒβγ複合体を形成させる工程
を含み、ＩＬ−１５コンジュゲートは、ＩＬ−１５Ｒαサブユニットへの低下した親和性を有し、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒβγ複合体は、Ｔｅｆｆ、Ｔｍｅｍ、およびＮＫ細胞の拡大を刺激する方法。
【請求項８５】
細胞は真核細胞である、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
細胞は哺乳動物細胞である、請求項８４または８５に記載の方法。
【請求項８７】
細胞はヒト細胞である、請求項８４〜８６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８８】
ＩＬ−１５コンジュゲートは、単離および精製されたＩＬ−１５ポリペプチド、ならびにＮ４、Ｅ４６、Ｎ６５、およびＬ６９から選択されるアミノ酸残基で該単離および精製されたＩＬ−１５ポリペプチドに結合するコンジュゲート化部分を含み、アミノ酸残基の番号付けは配列番号１に対応する、請求項８４〜８７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８９】
低下した親和性は、野生型ＩＬ−１５ポリペプチドと比較して、ＩＬ−１５Ｒαへの結合親和性の約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％の低下である、請求項８４〜８８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９０】
ＩＬ−１５Ｒαに対する低下した親和性は、野生型ＩＬ−１５ポリペプチドと比較して、約１分の１、２分の１、３分の１、４分の１、５分の１、６分の１、７分の１、８分の１、９分の１、１０分の１、またはそれ以下である、請求項８４〜８８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９１】
コンジュゲート化部分は、ＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒαとの結合を損なうかまたは遮断する、請求項８４〜９０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９２】
キットであって、請求項１〜６６のいずれか１項に記載の修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド、請求項６７〜６９のいずれか１項に記載のＩＬ−１５コンジュゲート、または請求項７０もしくは７１に記載の医薬組成物を含む前記キット。
【請求項９３】
キットであって、請求項１〜６６のいずれか１項に記載の修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドをコードするポリ核酸分子を含む前記キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
本出願は、２０１８年２月２６日に出願された米国仮特許出願第６２／６３５，１３３号の利益を主張し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
Ｔ細胞の別々の集団が、免疫ホメオスタシスおよび免疫寛容を維持するために免疫系を調節する。例えば、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞は、病的自己反応性を防ぐことによって免疫系による不適切な応答を防ぎ、一方、細胞傷害性Ｔ細胞は、感染細胞および／またはがん細胞を標的とし、破壊する。一部の実施形態では、Ｔ細胞の異なる集団の調節は、疾患または症状の治療のための選択肢を提供する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
本明細書には、特定の実施形態において、ＩＬ−１５コンジュゲート、およびがんの治療における使用が開示される。一部の実施形態では、本明細書には、ＩＬ−１５受容体とＩＬ−１５受容体との間の相互作用を調節して、特異的Ｔ細胞集団を刺激または拡大する方法もまた記載される。追加の場合において、本明細書には、さらに、本明細書に記載される１つまたはそれ以上のＩＬ−１５コンジュゲートを含む医薬組成物およびキットが記載される。
【０００４】
本明細書には、特定の実施形態において、少なくとも１つの翻訳後修飾された非天然アミノ酸を含む修飾されたインターロイキン１５（ＩＬ−１５）ポリペプチドが開示され、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドのインターロイキン１５受容体α（ＩＬ−１５Ｒα）との結合親和性を選択的に低下させる残基位置にあり、結合親和性の低下は、野生型ＩＬ−１５ポリペプチドとＩＬ−１５Ｒαとの間の結合親和性に相対的であり、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドのインターロイキン２／インターロイキン１５受容体βγ（ＩＬ−２／ＩＬ−１５Ｒβγ）との相互作用は、顕著な影響を受けない。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｎ１、Ｗ２、Ｖ３、Ｎ４、Ｉ６、Ｓ７、Ｄ８、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｅ１３、Ｄ１４、Ｌ１５、Ｑ１７、Ｓ１８、Ｍ１９、Ｈ２０、Ｉ２１、Ｄ２２、Ａ２３、Ｔ２４、Ｌ２５、Ｙ２６、Ｅ２８、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｐ３３、Ｓ３４、Ｃ３５、Ｋ３６、Ｖ３７、Ｔ３８、Ｋ４１、Ｌ４４、Ｅ４６、Ｑ４８、Ｖ４９、Ｓ５１、Ｌ５２、Ｅ５３、Ｓ５４、Ｇ５５、Ｄ５６、Ａ５７、Ｓ５８、Ｈ６０、Ｄ６１、Ｔ６２、Ｖ６３、Ｅ６４、Ｎ６５、Ｉ６７、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｎ７１、Ｎ７２、Ｓ７３、Ｌ７４、Ｓ７５、Ｓ７６、Ｎ７７、Ｇ７８、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、Ｅ８２、Ｓ８３、Ｇ８４、Ｃ８５、Ｋ８６、Ｅ８７、Ｃ８８、Ｅ８９、Ｅ９０、Ｌ９１、Ｅ９２、Ｅ９３、Ｋ９４、Ｎ９５、Ｉ９６、Ｋ９７、Ｅ９８、Ｌ１００、Ｑ１０１、Ｓ１０２、Ｖ１０４、Ｈ１０５、Ｑ１０８、Ｍ１０９、Ｆ１１０、Ｉ１１１、Ｎ１１２、Ｔ１１３、およびＳ１１４から選択され、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｄ２２、Ａ２３、Ｔ２４、Ｌ２５、Ｙ２６、Ｌ４４、Ｅ４６、Ｑ４８、Ｖ４９、Ｅ５３、Ｅ８９、Ｅ９０、およびＥ９３；Ｙ２６、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｅ５３、およびＬ２５；Ａ２３、Ｔ２４、Ｅ８９、およびＥ９３；Ｄ２２、Ｌ４４、Ｑ４８、およびＥ９０；Ｌ２５、Ｅ５３、Ｎ７７、およびＳ８３；またはＬ２５およびＥ５３から選択される。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｅ８９、Ｅ５３、Ｅ９３、Ｖ４９、Ｅ４６、Ｙ２６、Ｌ２５、Ｔ２４、Ａ２３、Ｄ２２、Ｉ２１、およびＬ５２から選択され、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｅ４６、Ｙ２６、Ｖ４９、Ｅ５３、Ｔ２４、Ｎ４、Ｋ１１、Ｎ６５、Ｌ６９、Ｓ１８、Ｈ２０、およびＳ８３から選択され、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｅ４６、Ｙ２６、Ｖ４９、Ｅ５３、およびＴ２４から選択され、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｅ５３、およびＴ２４から選択され、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｙ２６、Ｖ４９、Ｅ５３、およびＴ２４から選���され、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｖ４９、Ｅ５３、およびＴ２４から選択され、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｅ４６およびＹ２６から選択され、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｅ４６であり、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｙ２６であり、残基位置は、配列番号１に記載の位置に対応する。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｖ４９であり、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｅ５３であり、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｔ２４であり、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、Ｎ４、Ｋ１１、Ｎ６５、Ｌ６９、Ｓ１８、Ｈ２０、およびＳ８３から選択され、残基の位置は、配列番号１に示される位置に対応する。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、ｐ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ヨード−Ｌ−フェニルアラニン、Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン、ｐ−プロパルギルオキシフェニルアラニン、ｐ−プロパルギル−フェニルアラニン、Ｌ−３−（２−ナフチル）アラニン、３−メチル−フェニルアラニン、Ｏ−４−アリル−Ｌ−チロシン、４−プロピル−Ｌ−チロシン、トリ−Ｏ−アセチル−ＧｌｃＮＡｃｐ−セリン、Ｌ−Ｄｏｐａ、フッ素化フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジド−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アシル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ベンゾイル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−ホスホセリン、ホスホノセリン、ホスホノチロシン、ｐ−ブロモフェニルアラニン、ｐ−アミノ−Ｌ−フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、またはＮ６−（２−アジドエトキシ）−カルボニル−Ｌ−リジンを含む。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、図２Ｃに示される非天然アミノ酸を含む。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、直交性ｔＲＮＡシンテターゼ／ｔＲＮＡ対によって修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドに組み込まれる。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、少なくとも１つの非天然アミノ酸を介してコンジュゲート化部分にコンジュゲートされる。一部の実施形態では、コンジュゲート化部分は、水溶性ポリマー、タンパク質、またはポリペプチドを含む。一部の実施形態では、水溶性ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（プロピレングリコール）（ＰＰＧ）、エチレングリコールとプロピレングリコールのコポリマー、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（���ドロキシアルキルメタクリレート）、多糖、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（ＰＯＺ）、ポリ（Ｎ−アクリロイルモルホリン）、もしくはそれらの組み合わせ；または多糖を含む。一部の実施形態では、水溶性ポリマーはＰＥＧを含む。一部の実施形態では、ＰＥＧは直鎖状ＰＥＧまたは分枝状ＰＥＧである。一部の実施形態では、水溶性ポリマーはグリカンを含む。一部の実施形態では、多糖は、デキストラン、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、ヒアルロン酸（ＨＡ）、アミロース、ヘパリン、ヘパラン硫酸（ＨＳ）、デキストリン、またはヒドロキシエチル−デンプン（ＨＥＳ）を含む。一部の実施形態では、コンジュゲート化部分は、飽和脂肪酸を含む。一部の実施形態では、飽和脂肪酸は、ヘキサデカン酸、テトラデカン酸、または１５−アジドペンタデカン酸を含む。一部の実施形態では、タンパク質は、アルブミン、トランスフェリン、トランスチレチン、または抗体のＦｃ部分を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、ＸＴＥＮペプチド、グリジンに富むホモアミノ酸ポリマー（ＨＡＰ）、ＰＡＳポリペプチド、エラスチン様ポリペプチド（ＥＬＰ）、ＣＴＰペプチド、またはゼラチン様タンパク質（ＧＬＫ）ポリマーを含む。一部の実施形態では、コンジュゲート化部分は、修飾されたＩＬ−１５の少なくとも１つの非天然アミノ酸に直接結合される。一部の実施形態では、コンジュゲート化部分は、リンカーを介して、修飾されたＩＬ−１５の少なくとも１つの非天然アミノ酸に間接的に結合される。一部の実施形態では、リンカーは、ホモ二官能性リンカーを含む。一部の実施形態では、ホモ二官能性リンカーは、Ｌｏｍａｎｔ試薬ジチオビス（スクシンイミジルプロピオネート）ＤＳＰ、３’３’−ジチオビス（スルホスクシンイミジルプロピオネート）（ＤＴＳＳＰ）、ジスクシンイミジルスベレート（ＤＳＳ）、ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート（ＢＳ）、酒石酸ジスクシンイミジル（ＤＳＴ）、酒石酸ジスルホスクシンイミジル（スルホＤＳＴ）、エチレングリコビス（コハク酸スクシンイミジル）（ＥＧＳ）、グルタミン酸ジスクシンイミジル（ＤＳＧ）、炭酸Ｎ、Ｎ’−ジスクシンイミジル（ＤＳＣ）、アジピン酸ジメチル（ＤＭＡ）、ピメリミジン酸ジメチル（ＤＭＰ）、スベリミン酸ジメチル（ＤＭＳ）、ジメチル−３，３’−ジチオビスプロピオンイミデート（ＤＴＢＰ）、１，４−ジ−（３’−（２’−ピリジルジチオ）プロピオンアミド）ブタン（ＤＰＤＰＢ）、ビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、ハロゲン化アリール含有化合物（ＤＦＤＮＢ）、例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンまたは１，３−ジフルオロ−４，６−ジニトロベンゼン、４，４’−ジフルオロ−３，３’−ジニトロフェニルスルホン（ＤＦＤＮＰＳ）、ビス−［β−（４−アジドサリチルアミド）エチル］ジスルフィド（ＢＡＳＥＤ）、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテル、アジピン酸ジヒドラジド、カルボヒドラジド、ｏ−トルイジン、３，３’−ジメチルベンジジン、ベンジジン、α，α’−ｐ−ジアミノジフェニル、ジヨード−ｐ−キシレンスルホン酸、Ｎ��Ｎ’−エチレン−ビス（ヨードアセトアミド）、またはＮ，Ｎ’−ヘキサメチレン−ビス（ヨードアセトアミド）を含む。一部の実施形態では、リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーを含む。一部の実施形態では、ヘテロ二官能性リンカーは、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ｓＰＤＰ）、長鎖Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＬＣ−ｓＰＤＰ）、水溶性長鎖Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸（スルホ−ＬＣ−ｓＰＤＰ）、スクシンイミジルオキシカルボニル−α−メチル−α−（２−ピリジルジチオ）トルエン（ｓＭＰＴ）、スルホスクシンイミジル−６−［α−メチル−α−（２−ピリジルジチオ）トルアミド］ヘキサノエート（スルホ−ＬＣ−ｓＭＰＴ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ｓＭＣＣ）、スルホスクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（スルホ−ｓＭＣＣ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル（スルホ−ＭＢｓ）、Ｎ−スクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノベンゾエート（ｓＩＡＢ）、スルホスクシンイミジル（４−ヨードアセトイル）アミノベンゾエート（スルホ−ｓＩＡＢ）、スクシンイミジル−４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート（ｓＭＰＢ）、スルホスクシンイミジル−４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート（スルホ−ｓＭＰＢ）、Ｎ−（γ−マレイミドブチリルオキシ）スクシンイミドエステル（ＧＭＢ）、Ｎ−（γ−マレイミドブチリルオキシ）スルホスクシンイミドエステル（スルホ−ＧＭＢ）、スクシンイミジル６−（（ヨードアセチル）アミノ）ヘキサノエート（ｓＩＡＸ）、スクシンイミジル６−［６−（（（ヨードアセチル）アミノ）ヘキサノイル）アミノ］ヘキサノエート（ｓＩＡＸＸ）、スクシンイミジル４−（（（（ヨードアセチル）アミノ）メチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ｓＩＡＣ）、スクシンイミジル６−（（（（（４−ヨードアセチル）アミノ）メチル）シクロヘキサン−１−カルボニル）アミノ）ヘキサノエート（ｓＩＡＣＸ）、
ｐ−ニトロフェニルヨードアセテート（ＮＰＩＡ）、４−（４−Ｎ−マレイミドフェニル）ブタン酸ヒドラジド（ＭＰＢＨ）、４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシル−などのカルボニル反応性およびスルフヒドリル反応性架橋剤ヒドラジド−８（Ｍ２Ｃ２Ｈ）、３−（２−ピリジルジチオ）プロピオニルヒドラジド（ＰＤＰＨ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル−４−アジドサリチル酸（ＮＨｓ−ＡｓＡ）、Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミジル−４−アジドサリチル酸（スルホ−ＮＨｓ−ＡｓＡ）、スルホスクシンイミジル−（４−アジドサリチルアミド）ヘキサノエート（スルホ−ＮＨｓ−ＬＣ−ＡｓＡ）、スルホスクシンイミジル−２−（ｐ−アジドサリチルアミド）エチル−１，３’−ジチオプロピオネート（ｓＡｓＤ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル−４−アジドベンゾエート（ＨｓＡＢ）、Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミジル−４−アジドベンゾエート（スルホ−ＨｓＡＢ）、Ｎ−スクシンミジル−６−（４’−アジド−２’−ニトロフェニルアミノ）ヘキサノエート（ｓＡＮＰＡＨ）、スルホスクシンイミジル−６−（４’−アジド−２’−ニトロフェニルアミノ）ヘキサノエート（スルホ−ｓＡＮＰＡＨ）、Ｎ−５−アジド−２−ニトロベンゾイルオキシスクシンイミド（ＡＮＢ−ＮＯｓ）、スルホスクシンイミジル−２−（ｍ−アジド−ｏ−ニトロベンズアミド）−エチル−１，３’−ジチオプロピオネート（ｓＡＮＤ）、Ｎ−スクシンイミジル−４（４−アジドフェニル）１，３’−ジチオプロピオネート（ｓＡＤＰ）、Ｎ−スルホスクシンイミジル（４−アジドフェニル）−１，３’−ジチオプロピオネート（スルホ−ｓＡＤＰ）、スルホスクシンイミジル４−（ｐ−アジドフェニル）ブチレート（スルホ−ｓＡＰＢ）、スルホスクシンイミジル２−（７−アジド−４−メチルクマリン）−３−アセトアミド）エチル−１，３’−ジチオプロピオネート（ｓＡＥＤ）、スルホスクシンイミジル７−アジド−４−メチルクメイン−３−アセテート（スルホ−ｓＡＭＣＡ）、ｐ−ニトロフェニルジアゾピルベート（ｐＮＰＤＰ）、ｐ−ニトロフェニル−２−ジアゾ−３，３，３−トリフルオロプロピオン酸（ＰＮＰ−ＤＴＰ）、１−（ｐ−アジドサリチルアミド）−４−（ヨードアセトアミド）ブタン（ＡｓＩＢ）、Ｎ−［４−（ｐ−アジドサリチルアミド）ブチル］−３’−（２’−ピリジルジチオ）プロピオンアミド（ＡＰＤＰ）、ベンゾフェノン−４−ヨードアセトアミド、ｐ−アジドベンゾイルヒドラジド（ＡＢＨ）、４−（ｐ−アジドサリチルアミド）ブチルアミン（ＡｓＢＡ）、またはｐ−アジドフェニルグリオキサール（ＡＰＧ）を含む。一部の実施形態では、リンカーは、切断可能なまたは切断不可能なジペプチドリンカーを含む。一部の施形態では、ジペプチドリンカーは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ａｌａ、またはＶａｌ−Ｌｙｓを含む。一部の実施形態では、リンカーはマレイミド基を含む。一部の実施形態では、リンカーはスペーサーを含む。一部の実施形態では、スペーサーは、ｐ−アミノベンジルアルコール（ＰＡＢ）、ｐ−アミノベンゾキシオキシカルボニル（ＰＡＢＣ）、それらの誘導体もしくは類似体を含む。一部の実施形態では、コンジュゲート化部分は、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドの血清半減期を延長することができる。一部の実施形態では、結合親和性の低下は、野生型ＩＬ−１５ポリペプチドと比較して、ＩＬ−１１５αへの結合親和性の約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％の低下である。一部の実施形態では、ＩＬ−１５Ｒαへの結合親和性の低下は、野生型ＩＬ−１５ポリペプチドと比較して、約１分の１、２分の１、３分の１、４分の１、５分の１、６分の１、７分の１、８分の１、９分の１、１０分の１、またはそれ以下への低下である。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、全長ＩＬ−１５ポリペプチドの機能的に活性な断片である。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、組換えＩＬ−１５ポリペプチドである。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、組換えヒトＩＬ−１５ポリペプチドである。一部の実施形態では、ＩＬ−１５Ｒαへの結合親和性が低下した修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、エフェクターＴ（Ｔｅｆｆ）細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞集団を拡大することができる。
【０００５】
本明細書には、特定の実施形態において、翻訳後修飾された少なくとも１つの非天然アミノ酸を含む修飾されたインターロイキン１５（ＩＬ−１５）ポリペプチドが開示され、少なくとも１つの非天然アミノ酸が、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドのインターロイキン１５受容体α（ＩＬ−１５Ｒα）またはＩＬ−２／インターロイキン１５受容体βγ（ＩＬ−２／ＩＬ−１５Ｒβγ）との結合親和性に顕著な影響を及ぼさない。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、延長された半減期を含む。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｎ１、Ｗ２、Ｖ３、Ｎ４、Ｉ６、Ｓ７、Ｄ８、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｅ１３、Ｄ１４、Ｌ１５、Ｑ１７、Ｓ１８、Ｍ１９、Ｈ２０、Ｉ２１、Ｄ２２、Ａ２３、Ｔ２４、Ｌ２５、Ｙ２６、Ｅ２８、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｐ３３、Ｓ３４、Ｃ３５、Ｋ３６、Ｖ３７、Ｔ３８、Ｋ４１、Ｌ４４、Ｅ４６、Ｑ４８、Ｖ４９、Ｓ５１、Ｌ５２、Ｅ５３、Ｓ５４、Ｇ５５、Ｄ５６、Ａ５７、Ｓ５８、Ｈ６０、Ｄ６１、Ｔ６２、Ｖ６３、Ｅ６４、Ｎ６５、Ｉ６７、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｎ７１、Ｎ７２、Ｓ７３、Ｌ７４、Ｓ７５、Ｓ７６、Ｎ７７、Ｇ７８、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、Ｅ８２、Ｓ８３、Ｇ８４、Ｃ８５、Ｋ８６、Ｅ８７、Ｃ８８、Ｅ８９、Ｅ９０、Ｌ９１、Ｅ９２、Ｅ９３、Ｋ９４、Ｎ９５、Ｉ９６、Ｋ９７、Ｅ９８、Ｌ１００、Ｑ１０１、Ｓ１０２、Ｖ１０４、Ｈ１０５、Ｑ１０８、Ｍ１０９、Ｆ１１０、Ｉ１１１、Ｎ１１２、Ｔ１１３、およびＳ１１４から選択され、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｄ２２、Ａ２３、Ｔ２４、Ｌ２５、Ｙ２６、Ｌ４４、Ｅ４６、Ｑ４８、Ｖ４９、Ｅ５３、Ｅ８９、Ｅ９０、およびＥ９３；Ｙ２６、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｅ５３、およびＬ２５；Ａ２３、Ｔ２４、Ｅ８９、およびＥ９３；Ｄ２２、Ｌ４４、Ｑ４８、およびＥ９０；Ｌ２５、Ｅ５３、Ｎ７７、およびＳ８３；またはＬ２５およびＥ５３から選択される。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｍ１、Ｓ１８、Ｈ２０、Ｋ３６、Ｋ４１、Ｇ５５、Ｄ５６、Ｓ７５、Ｓ７６、Ｎ７７、Ｇ７８、Ｖ８０、Ｔ８１、Ｓ８３、およびＫ８６から選択され、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、ｐ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ヨード−Ｌ−フェニルアラニン、Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン、ｐ−プロパルギルオキシフェニルアラニン、ｐ−プロパルギル−フェニルアラニン、Ｌ−３−（２−ナフチル）アラニン、３−メチル−フェニルアラニン、Ｏ−４−アリル−Ｌ−チロシン、４−プロピル−Ｌ−チロシン、トリ−Ｏ−アセチル−ＧｌｃＮＡｃｐ−セリン、Ｌ−Ｄｏｐａ、フッ素化フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジド−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アシル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ベンゾイル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−ホスホセリン、ホスホノセリン、ホスホノチロシン、ｐ−ブロモフェニルアラニン、ｐ−アミノ−Ｌ−フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、またはＮ６−（２−アジドエトキシ）−カルボニル−Ｌ−リジンを含む。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、図２Ｃに示される非天然アミノ酸を含む。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、直交性ｔＲＮＡシンテターゼ／ｔＲＮＡ対によって修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドに組み込まれる。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、少なくとも１つの非天然アミノ酸を介してコンジュゲート化部分にコンジュゲートされる。一部の実施形態では、コンジュゲート化部分は、水溶性ポリマー、タンパク質、またはポリペプチドを含む。一部の実施形態では、水溶性ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（プロピレングリコール）（ＰＰＧ）、エチレングリコールとプロピレングリコールのコポリマー、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）、多糖、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（ＰＯＺ）、ポリ（Ｎ−アクリロイルモルホリン）、もしくはそれらの組み合わせ；または多糖を含む。一部の実施形態では、水溶性ポリマーはＰＥＧを含む。一部の実施形態では、ＰＥＧは直鎖状ＰＥＧまたは分枝状ＰＥＧである。一部の実施形態では、水溶性ポリマーはグリカンを含む。一部の実施形態では、多糖は、デキストラン、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、ヒアルロン酸（ＨＡ）、アミロース、ヘパリン、ヘパラン硫酸（ＨＳ）、デキストリン、またはヒドロキシエチル−デンプン（ＨＥＳ）を含む。一部の実施形態では、コンジュゲート化部分は、飽和脂肪酸を含む。一部の実施形態では、飽和脂肪酸は、ヘキサデカン酸、テトラデカン酸、または１５−アジドペンタデカン酸を含む。一部の実施形態では、タンパク質は、アルブミン、トランスフェリン、トランスチレチン、または抗体のＦｃ部分を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、ＸＴＥＮペプチド、グリジンに富むホモアミノ酸ポリマー（ＨＡＰ）、ＰＡＳポリペプチド、エラスチン様ポリペプチド（ＥＬＰ）、ＣＴＰペプチド、またはゼラチン様タンパク質（ＧＬＫ）ポリマーを含む。一部の実施形態では、コンジュゲート化部分は、修飾されたＩＬ−１５の少なくとも１つの非天然アミノ酸に直接結合される。一部の実施形態では、コンジュゲート化部分は、リンカーを介して、修飾されたＩＬ−１５の少なくとも１つの非天然アミノ酸に間接的に結合される。一部の実施形態では、リンカーは、ホモ二官能性リンカーを含む。一部の実施形態では、ホモ二官能性リンカーは、Ｌｏｍａｎｔ試薬ジチオビス（スクシンイミジルプロピオネート）ＤＳＰ、３’３’−ジチオビス（スルホスクシンイミジルプロピオネート）（ＤＴＳＳＰ）、ジスクシンイミジルスベレート（ＤＳＳ）、ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート（ＢＳ）、酒石酸ジスクシンイミジル（ＤＳＴ）、酒石酸ジスルホスクシンイミジル（スルホＤＳＴ）、エチレングリコビス（コハク酸スクシンイミジル）（ＥＧＳ）、グルタミン酸ジスクシンイミジル（ＤＳＧ）、炭酸Ｎ、Ｎ’−ジスクシンイミジル（ＤＳＣ）���アジピン酸ジメチル（ＤＭＡ）、ピメリミジン酸ジメチル（ＤＭＰ）、スベリミン酸ジメチル（ＤＭＳ）、ジメチル−３，３’−ジチオビスプロピオンイミデート（ＤＴＢＰ）、１，４−ジ−（３’−（２’−ピリジルジチオ）プロピオンアミド）ブタン（ＤＰＤＰＢ）、ビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、ハロゲン化アリール含有化合物（ＤＦＤＮＢ）、例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンまたは１，３−ジフルオロ−４，６−ジニトロベンゼン、４，４’−ジフルオロ−３，３’−ジニトロフェニルスルホン（ＤＦＤＮＰＳ）、ハロゲン化アリール含有化合物（ＤＦＤＮＢ）、例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンまたは１，３−ジフルオロ−４，６−ジニトロベンゼン、４，４’−ジフルオロ−３，３’−ジニトロフェニルスルホン（ＤＦＤＮＰＳ）、ビス−［β−（４−アジドサリチルアミド）エチル］ジスルフィド（ＢＡＳＥＤ）、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテル、アジピン酸ジヒドラジド、カルボヒドラジド、ｏ−トルイジン、３，３’−ジメチルベンジジン、ベンジジン、α，α’−ｐ−ジアミノジフェニル、ジヨード−ｐ−キシレンスルホン酸、Ｎ，Ｎ’−エチレン−ビス（ヨードアセトアミド）、またはＮ，Ｎ’−ヘキサメチレン−ビス（ヨードアセトアミド）を含む。一部の実施形態では、リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーを含む。一部の実施形態では、ヘテロ二官能性リンカーは、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ｓＰＤＰ）、長鎖Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＬＣ−ｓＰＤＰ）、水溶性長鎖Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸（スルホ−ＬＣ−ｓＰＤＰ）、スクシンイミジルオキシカルボニル−α−メチル−α−（２−ピリジルジチオ）トルエン（ｓＭＰＴ）、スルホスクシンイミジル−６−［α−メチル−α−（２−ピリジルジチオ）トルアミド］ヘキサノエート（スルホ−ＬＣ−ｓＭＰＴ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ｓＭＣＣ）、スルホスクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（スルホ−ｓＭＣＣ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル（スルホ−ＭＢｓ）、Ｎ−スクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノベンゾエート（ｓＩＡＢ）、スルホスクシンイミジル（４−ヨードアセトイル）アミノベンゾエート（スルホ−ｓＩＡＢ）、スクシンイミジル−４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート（ｓＭＰＢ）、スルホスクシンイミジル−４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート（スルホ−ｓＭＰＢ）、Ｎ−（γ−マレイミドブチリルオキシ）スクシンイミドエステル（ＧＭＢ）、Ｎ−（γ−マレイミドブチリルオキシ）スルホスクシンイミドエステル（スルホ−ＧＭＢ）、スクシンイミジル６−（（ヨードアセチル）アミノ）ヘキサノエート（ｓＩＡＸ）、スクシンイミジル６−［６−（（（ヨードアセチル）アミノ）ヘキサノイル）アミノ］ヘ���サノエート（ｓＩＡＸＸ）、スクシンイミジル４−（（（（ヨードアセチル）アミノ）メチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ｓＩＡＣ）、スクシンイミジル６−（（（（（４−ヨードアセチル）アミノ）メチル）シクロヘキサン−１−カルボニル）アミノ）ヘキサノエート（ｓＩＡＣＸ）、ｐ−ニトロフェニルヨードアセテート（ＮＰＩＡ）、４−（４−Ｎ−マレイミドフェニル）ブタン酸ヒドラジド（ＭＰＢＨ）、４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシル−などのカルボニル反応性およびスルフヒドリル反応性架橋剤ヒドラジド−８（Ｍ２Ｃ２Ｈ）、３−（２−ピリジルジチオ）プロピオニルヒドラジド（ＰＤＰＨ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル−４−アジドサリチル酸（ＮＨｓ−ＡｓＡ）、Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミジル−４−アジドサリチル酸（スルホ−ＮＨｓ−ＡｓＡ）、スルホスクシンイミジル−（４−アジドサリチルアミド）ヘキサノエート（スルホ−ＮＨｓ−ＬＣ−ＡｓＡ）、スルホスクシンイミジル−２−（ｐ−アジドサリチルアミド）エチル−１，３’−ジチオプロピオネート（ｓＡｓＤ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル−４−アジドベンゾエート（ＨｓＡＢ）、Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミジル−４−アジドベンゾエート（スルホ−ＨｓＡＢ）、Ｎ−スクシンミジル−６−（４’−アジド−２’−ニトロフェニルアミノ）ヘキサノエート（ｓＡＮＰＡＨ）、スルホスクシンイミジル−６−（４’−アジド−２’−ニトロフェニルアミノ）ヘキサノエート（スルホ−ｓＡＮＰＡＨ）、Ｎ−５−アジド−２−ニトロベンゾイルオキシスクシンイミド（ＡＮＢ−ＮＯｓ）、スルホスクシンイミジル−２−（ｍ−アジド−ｏ−ニトロベンズアミド）−エチル−１，３’−ジチオプロピオネート（ｓＡＮＤ）、Ｎ−スクシンイミジル−４（４−アジドフェニル）１，３’−ジチオプロピオネート（ｓＡＤＰ）、Ｎ−スルホスクシンイミジル（４−アジドフェニル）−１，３’−ジチオプロピオネート（スルホ−ｓＡＤＰ）、スルホスクシンイミジル４−（ｐ−アジドフェニル）ブチレート（スルホ−ｓＡＰＢ）、スルホスクシンイミジル２−（７−アジド−４−メチルクマリン）−３−アセトアミド）エチル−１，３’−ジチオプロピオネート（ｓＡＥＤ）、スルホスクシンイミジル７−アジド−４−メチルクメイン−３−アセテート（スルホ−ｓＡＭＣＡ）、
ｐ−ニトロフェニルジアゾピルベート（ｐＮＰＤＰ）、ｐ−ニトロフェニル−２−ジアゾ−３，３，３−トリフルオロプロピオン酸（ＰＮＰ−ＤＴＰ）、１−（ｐ−アジドサリチルアミド）−４−（ヨードアセトアミド）ブタン（ＡｓＩＢ）、Ｎ−［４−（ｐ−アジドサリチルアミド）ブチル］−３’−（２’−ピリジルジチオ）プロピオンアミド（ＡＰＤＰ）、ベンゾフェノン−４−ヨードアセトアミド、ｐ−アジドベンゾイルヒドラジド（ＡＢＨ）、４−（ｐ−アジドサリチルアミド）ブチルアミン（ＡｓＢＡ）、またはｐ−アジドフェニルグリオキサール（ＡＰＧ）を含む。一部の実施形態では、リンカーは、切断可能なまたは切断不可能なジペプチドリンカーを含む。一部の施形態では、ジペプチドリンカーは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ａｌａ、またはＶａｌ−Ｌｙｓを含む。一部の実施形態では、リンカーはマレイミド基を含む。一部の実施形態では、リンカーはスペーサーを含む。一部の実施形態では、スペーサーは、ｐ−アミノベンジルアルコール（ＰＡＢ）、ｐ−アミノベンゾキシオキシカルボニル（ＰＡＢＣ）、それらの誘導体もしくは類似体を含む。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、全長ＩＬ−１５ポリペプチドの機能的に活性な断片である。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、組換えＩＬ−１５ポリペプチドである。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、組換えヒトＩＬ−１５ポリペプチドである。一部の実施形態では、ＩＬ−１５Ｒαへの結合親和性が低下した修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、エフェクターＴ（Ｔｅｆｆ）細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞集団を拡大することができる。
【０００６】
本明細書には、特定の実施形態において、翻訳後修飾された少なくとも１つの非天然アミノ酸を含む修飾されたインターロイキン１５（ＩＬ−１５）ポリペプチドが開示され、少なくとも１つの非天然アミノ酸が、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドのインターロイキン２／インターロイキン１５受容体β（ＩＬ−２／ＩＬ−１５Ｒβ）との結合親和性を選択的に低下させるが、インターロイキン１５受容体α（ＩＬ−１５Ｒα）との相互作用に影響を及ぼさない残基位置にある。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｖ３、Ｉ６、Ｋ１０、Ｅ２８、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｐ３３、Ｓ１０２、Ｖ１０４、Ｈ１０５、Ｑ１０８、Ｍ１０９、Ｉ１１１、Ｎ１１２、Ｔ１１３、およびＳ１１４から選択され、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｖ３、Ｋ１０、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｈ３２、Ｈ１０５、Ｑ１０８、Ｍ１０９、Ｉ１１１、Ｎ１１２、Ｔ１１３、およびＳ１１４；Ｅ２８、Ｐ３３、Ｓ１０２、およびＶ１０４；またはＩ６およびＶ３１から選択される。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｎ１、Ｎ４、Ｓ７、Ｄ８、Ｋ１１、Ｄ６１、Ｔ６２、Ｅ６４、Ｎ６５、Ｉ６８、Ｌ６９、およびＮ７２から選択される。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｎ４、Ｓ７、Ｋ１１、およびＤ６１；Ｄ８、Ｅ６４、Ｎ６５、Ｉ６８、およびＮ７２；またはＮ１、Ｔ６２、およびＬ６９から選択される。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、ｐ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ヨード−Ｌ−フェニルアラニン、Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン、ｐ−プロパルギルオキシフェニルアラニン、ｐ−プロパルギル−フェニルアラニン、Ｌ−３−（２−ナフチル）アラニン、３−メチル−フェニルアラニン、Ｏ−４−アリル−Ｌ−チロシン、４−プロピル−Ｌ−チロシン、トリ−Ｏ−アセチル−ＧｌｃＮＡｃｐ−セリン、Ｌ−Ｄｏｐａ、フッ素化フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジド−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アシル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ベンゾイル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−ホスホセリン、ホスホノセリン、ホスホノチロシン、ｐ−ブロモフェニルアラニン、ｐ−アミノ−Ｌ−フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、またはＮ６−（２−アジドエトキシ）−カルボニル−Ｌ−リジンを含む。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、図１〜３に示される非天然アミノ酸を含む。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、直交性ｔＲＮＡシンテターゼ／ｔＲＮＡ対によって修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドに組み込まれる。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、少なくとも１つの非天然アミノ酸を介してコンジュゲート化部分にコンジュゲートされる。一部の実施形態では、コンジュゲート化部分は、水溶性ポリマー、タンパク質、またはポリペプチドを含む。一部の実施形態では、水溶性ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（プロピレングリコール）（ＰＰＧ）、エチレングリ���ールとプロピレングリコールのコポリマー、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）、多糖、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（ＰＯＺ）、ポリ（Ｎ−アクリロイルモルホリン）、もしくはそれらの組み合わせ；または多糖を含む。一部の実施形態では、水溶性ポリマーはＰＥＧを含む。一部の実施形態では、ＰＥＧは直鎖状ＰＥＧまたは分枝状ＰＥＧである。一部の実施形態では、水溶性ポリマーはグリカンを含む。一部の実施形態では、多糖は、デキストラン、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、ヒアルロン酸（ＨＡ）、アミロース、ヘパリン、ヘパラン硫酸（ＨＳ）、デキストリン、またはヒドロキシエチル−デンプン（ＨＥＳ）を含む。一部の実施形態では、コンジュゲート化部分は、飽和脂肪酸を含む。一部の実施形態では、飽和脂肪酸は、ヘキサデカン酸、テトラデカン酸、または１５−アジドペンタデカン酸を含む。一部の実施形態では、タンパク質は、アルブミン、トランスフェリン、トランスチレチン、または抗体のＦｃ部分を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、ＸＴＥＮペプチド、グリジンに富むホモアミノ酸ポリマー（ＨＡＰ）、ＰＡＳポリペプチド、エラスチン様ポリペプチド（ＥＬＰ）、ＣＴＰペプチド、またはゼラチン様タンパク質（ＧＬＫ）ポリマーを含む。一部の実施形態では、コンジュゲート化部分は、修飾されたＩＬ−１５の少なくとも１つの非天然アミノ酸に直接結合される。一部の実施形態では、コンジュゲート化部分は、リンカーを介して、修飾されたＩＬ−１５の少なくとも１つの非天然アミノ酸に間接的に結合される。一部の実施形態では、リンカーは、ホモ二官能性リンカーを含む。一部の実施形態では、ホモ二官能性リンカーは、Ｌｏｍａｎｔ試薬ジチオビス（スクシンイミジルプロピオネート）ＤＳＰ、３’３’−ジチオビス（スルホスクシンイミジルプロピオネート）（ＤＴＳＳＰ）、ジスクシンイミジルスベレート（ＤＳＳ）、ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート（ＢＳ）、酒石酸ジスクシンイミジル（ＤＳＴ）、酒石酸ジスルホスクシンイミジル（スルホＤＳＴ）、エチレングリコビス（コハク酸スクシンイミジル）（ＥＧＳ）、グルタミン酸ジスクシンイミジル（ＤＳＧ）、炭酸Ｎ、Ｎ’−ジスクシンイミジル（ＤＳＣ）、アジピン酸ジメチル（ＤＭＡ）、ピメリミジン酸ジメチル（ＤＭＰ）、スベリミン酸ジメチル（ＤＭＳ）、ジメチル−３，３’−ジチオビスプロピオンイミデート（ＤＴＢＰ）、１，４−ジ−（３’−（２’−ピリジルジチオ）プロピオンアミド）ブタン（ＤＰＤＰＢ）、ビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、ハロゲン化アリール含有化合物（ＤＦＤＮＢ）、例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンまたは１，３−ジフルオロ−４，６−ジニトロベンゼン、４，４’−ジフルオロ−３，３’−ジニトロフェニルスルホン（ＤＦＤＮＰＳ）、ビス−［β−（４−アジドサリチルアミド）エチル］ジスルフィド（ＢＡＳＥＤ）、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテル、アジピン酸ジヒドラジド、カルボヒドラジド、ｏ−トルイジン、３，３’−ジメチルベンジジン、ベンジジン、α，α’−ｐ−ジアミノジフェニル、ジヨード−ｐ−キシレンスルホン酸、Ｎ，Ｎ’−エチレン−ビス（ヨードアセトアミド）、またはＮ，Ｎ’−ヘキサメチレン−ビス（ヨードアセトアミド）を含む。一部の実施形態では、リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーを含む。一部の実施形態では、ヘテロ二官能性リンカーは、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ｓＰＤＰ）、長鎖Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＬＣ−ｓＰＤＰ）、水溶性長鎖Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸（スルホ−ＬＣ−ｓＰＤＰ）、スクシンイミジルオキシカルボニル−α−メチル−α−（２−ピリジルジチオ）トルエン（ｓＭＰＴ）、スルホスクシンイミジル−６−［α−メチル−α−（２−ピリジルジチオ）トルアミド］ヘキサノエート（スルホ−ＬＣ−ｓＭＰＴ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ｓＭＣＣ）、スルホスクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（スルホ−ｓＭＣＣ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル（スルホ−ＭＢｓ）、Ｎ−スクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノベンゾエート（ｓＩＡＢ）、スルホスクシンイミジル（４−ヨードアセトイル）アミノベンゾエート（スルホ−ｓＩＡＢ）、スクシンイミジル−４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート（ｓＭＰＢ）、スルホスクシンイミジル−４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート（スルホ−ｓＭＰＢ）、Ｎ−（γ−マレイミドブチリルオキシ）スクシンイミドエステル（ＧＭＢ）、Ｎ−（γ−マレイミドブチリルオキシ）スルホスクシンイミドエステル（スルホ−ＧＭＢ）、スクシンイミジル６−（（ヨードアセチル）アミノ）ヘキサノエート（ｓＩＡＸ）、スクシンイミジル６−［６−（（（ヨードアセチル）アミノ）ヘキサノイル）アミノ］ヘキサノエート（ｓＩＡＸＸ）、スクシンイミジル４−（（（（ヨードアセチル）アミノ）メチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ｓＩＡＣ）、スクシンイミジル６−（（（（（４−ヨードアセチル）アミノ）メチル）シクロヘキサン−１−カルボニル）アミノ）ヘキサノエート（ｓＩＡＣＸ）、ｐ−ニトロフェニルヨードアセテート（ＮＰＩＡ）、４−（４−Ｎ−マレイミドフェニル）ブタン酸ヒドラジド（ＭＰＢＨ）、４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシル−などのカルボニル反応性およびスルフヒドリル反応性架橋剤ヒドラジド−８（Ｍ２Ｃ２Ｈ）、３−（２−ピリジルジチオ）プロピオニルヒドラジド（ＰＤＰＨ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル−４−アジドサリチル酸（ＮＨｓ−ＡｓＡ）、Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミジル−４−アジドサリチル酸（スルホ−ＮＨｓ−ＡｓＡ）、スルホスクシンイミジル−（４−アジドサリチルアミド）ヘキサノエート（スルホ−ＮＨｓ−ＬＣ−ＡｓＡ）、スルホスクシン��ミジル−２−（ｐ−アジドサリチルアミド）エチル−１，３’−ジチオプロピオネート（ｓＡｓＤ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル−４−アジドベンゾエート（ＨｓＡＢ）、Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミジル−４−アジドベンゾエート（スルホ−ＨｓＡＢ）、Ｎ−スクシンミジル−６−（４’−アジド−２’−ニトロフェニルアミノ）ヘキサノエート（ｓＡＮＰＡＨ）、スルホスクシンイミジル−６−（４’−アジド−２’−ニトロフェニルアミノ）ヘキサノエート（スルホ−ｓＡＮＰＡＨ）、Ｎ−５−アジド−２−ニトロベンゾイルオキシスクシンイミド（ＡＮＢ−ＮＯｓ）、スルホスクシンイミジル−２−（ｍ−アジド−ｏ−ニトロベンズアミド）−エチル−１，３’−ジチオプロピオネート（ｓＡＮＤ）、Ｎ−スクシンイミジル−４（４−アジドフェニル）１，３’−ジチオプロピオネート（ｓＡＤＰ）、Ｎ−スルホスクシンイミジル（４−アジドフェニル）−１，３’−ジチオプロピオネート（スルホ−ｓＡＤＰ）、スルホスクシンイミジル４−（ｐ−アジドフェニル）ブチレート（スルホ−ｓＡＰＢ）、スルホスクシンイミジル２−（７−アジド−４−メチルクマリン）−３−アセトアミド）エチル−１，３’−ジチオプロピオネート（ｓＡＥＤ）、スルホスクシンイミジル７−アジド−４−メチルクメイン−３−アセテート（スルホ−ｓＡＭＣＡ）、ｐ−ニトロフェニルジアゾピルベート（ｐＮＰＤＰ）、ｐ−ニトロフェニル−２−ジアゾ−３，３，３−トリフルオロプロピオン酸（ＰＮＰ−ＤＴＰ）、１−（ｐ−アジドサリチルアミド）−４−（ヨードアセトアミド）ブタン（ＡｓＩＢ）、Ｎ−［４−（ｐ−アジドサリチルアミド）ブチル］−３’−（２’−ピリジルジチオ）プロピオンアミド（ＡＰＤＰ）、ベンゾフェノン−４−ヨードアセトアミド、ｐ−アジドベンゾイルヒドラジド（ＡＢＨ）、４−（ｐ−アジドサリチルアミド）ブチルアミン（ＡｓＢＡ）、またはｐ−アジドフェニルグリオキサール（ＡＰＧ）を含む。一部の実施形態では、リンカーは、切断可能なまたは切断不可能なジペプチドリンカーを含む。一部の施形態では、ジペプチドリンカーは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ａｌａ、またはＶａｌ−Ｌｙｓを含む。一部の実施形態では、リンカーはマレイミド基を含む。一部の実施形態では、リンカーはスペーサーを含む。
一部の実施形態では、スペーサーは、ｐ−アミノベンジルアルコール（ＰＡＢ）、ｐ−アミノベンゾキシオキシカルボニル（ＰＡＢＣ）、それらの誘導体もしくは類似体を含む。一部の実施形態では、コンジュゲート化部分は、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドの血清半減期を延長することができる。一部の実施形態では、結合親和性の低下は、野生型ＩＬ−１５ポリペプチドと比較して、ＩＬ−１５Ｒαへの結合親和性の約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％の低下である。一部の実施形態では、ＩＬ−１５Ｒαへの結合親和性の低下は、野生型ＩＬ−１５ポリペプチドと比較して、約１分の１、２分の１、３分の１、４分の１、５分の１、６分の１、７分の１、８分の１、９分の１、１０分の１、またはそれ以下への低下である。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、全長ＩＬ−１５ポリペプチドの機能的に活性な断片である。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、組換えＩＬ−１５ポリペプチドである。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、組換えヒトＩＬ−１５ポリペプチドである。一部の実施形態では、ＩＬ−１５Ｒαへの結合親和性が低下した修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、エフェクターＴ（Ｔｅｆｆ）細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞集団を拡大することができる。
【０００７】
本明細書には、特定の実施形態において、単離および精製されたインターロイキン１５（ＩＬ−１５）ポリペプチド；ならびにＮ４、Ｅ４６、Ｄ６１、Ｅ６４、Ｎ６５、Ｉ６８およびＬ６９から選択されるアミノ酸位置で単離および精製されたＩＬ−１５ポリペプチドに結合するコンジュゲート化部分を含むＩＬ−１５コンジュゲートが開示され、アミノ酸残基の番号付けは配列番号１に対応する。一部の実施形態では、アミノ酸位置はＮ４である。一部の実施形態では、アミノ酸位置はＥ４６である。一部の実施形態では、アミノ酸位置は、Ｄ６１である。一部の実施形態では、アミノ酸位置はＥ６４である。一部の実施形態では、アミノ酸位置はＮ６５である。一部の実施形態では、アミノ酸位置はＩ６８である。一部の実施形態では、アミノ酸位置はＬ６９である。一部の実施形態では、アミノ酸残基は、システインに突然変異される。一部の実施形態では、アミノ酸残基は、リジンに突然変異される。一部の実施形態では、Ｎ４、Ｅ４６、Ｎ６５、およびＬ６９から選択されるアミノ酸残基は、さらに非天然アミノ酸に突然変異される。一部の実施形態では、非天然アミノ酸は、ｐ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ヨード−Ｌ−フェニルアラニン、Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン、ｐ−プロパルギルオキシフェニルアラニン、ｐ−プロパルギル−フェニルアラニン、Ｌ−３−（２−ナフチル）アラニン、３−メチル−フェニルアラニン、Ｏ−４−アリル−Ｌ−チロシン、４−プロピル−Ｌ−チロシン、トリ−Ｏ−アセチル−ＧｌｃＮＡｃｐ−セリン、Ｌ−Ｄｏｐａ、フッ素化フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジド−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アシル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ベンゾイル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−ホスホセリン、ホスホノセリン、ホスホノチロシン、ｐ−ブロモフェニルアラニン、ｐ−アミノ−Ｌ−フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、またはＮ６−（２−アジドエトキシ）−カルボニル−Ｌ−リジンを含む。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、図２Ｃに示される非天然アミノ酸を含む。一部の実施形態では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、野生型ＩＬ−１５ポリペプチドと比較して、ＩＬ−１５受容体α（ＩＬ−１５Ｒα）サブユニットへの低下した親和性を有する。一部の実施形態では、低下した親和性は、野生型ＩＬ−１５ポリペプチドと比較して、ＩＬ−１５Ｒαへの結合親和性の約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％の低下である。一部の実施形態では、ＩＬ−１５Ｒαへの低下した親和性は、野生型ＩＬ−１５ポリペプチドと比較して、約１分の１、２分の１、３分の１、４分の１、５分の１、６分の１、７分の１、８分の１、９分の１、１０分の１、またはそれ以下である。一部の実施形態では、コンジュゲート化部分は、ＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒαとの結合を損なうかまたは遮断する。
【０００８】
本明細書には、特定の実施形態において、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲート；および薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物が開示される。一部の実施形態では、医薬組成物は、非経口投与のために製剤化される。
【０００９】
本明細書には、特定の実施形態において、それを必要とする対象における増殖性疾患または状態を治療する方法であって、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートの治療有効量を対象に投与することを含む方法が開示される。一部の実施形態では、増殖性疾患または状態はがんである。一部の実施形態では、がんは固形腫瘍がんである。一部の実施形態では、固形腫瘍がんは、膀胱がん、骨がん、脳がん、乳がん、大腸がん、食道がん、眼がん、頭頸部がん、腎臓がん、肺がん、黒色腫、卵巣がん、膵臓がん、または前立腺がんである。一部の実施形態では、がんは、血液学的悪性腫瘍である。一部の実施形態では、血液悪性腫瘍が、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、多発性骨髄腫、節外辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、節辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、非バーキット高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＬ）、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、脾臓辺縁帯リンパ腫、形質細胞骨髄腫、形質細胞腫、縦隔（胸腺）大Ｂ細胞リンパ腫、血管内大Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、またはリンパ腫様肉芽腫症である。一部の実施形態では、本方法は、追加の治療剤を投与することをさらに含む。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートおよび追加の治療剤は、同時に投与される。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートおよび追加の治療剤は、連続的に投与される。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、追加の治療剤の前に投与される。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、追加の治療剤の投与後に投与される。一部の実施形態では、対象はヒトである。
【００１０】
本明細書には、特定の実施形態において、エフェクターＴ（Ｔｅｆｆ）細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞集団を拡大する方法が開示され、方法は、（ａ）細胞を修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートと接触させること；および（ｂ）ＩＬ−１５をＩＬ−１５ＲβおよびＩＬ−１５Ｒγサブユニットと相互作用させて、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒβγ複合体を形成することを含み、ＩＬ−１５コンジュゲートは、ＩＬ−１５Ｒαサブユニットへの低下した親和性を有し、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒβγ複合体は、ＴｅｆｆおよびＮＫ細胞の拡大を刺激する。一部の実施形態では、細胞は真核細胞である。一部の実施形態では、細胞は哺乳動物細胞である。一部の実施形態では、細胞はヒト細胞である。一部の実施形態では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、単離および精製されたＩＬ−１５ポリペプチド、ならびにＮ４、Ｅ４６、Ｎ６５、およびＬ６９から選択されるアミノ酸残基で単離および精製されたＩＬ−２ポリペプチドに結合するコンジュゲート化部分を含み、アミノ酸残基の番号付けは配列番号１に対応する。一部の実施形態では、低下した親和性は、野生型ＩＬ−１５ポリペプチドと比較して、ＩＬ−１５Ｒαへの結合親和性における約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％の低下である。一部の実施形態では、ＩＬ−１５Ｒαへの低下した親和性は、野生型ＩＬ−１５ポリペプチドと比較して、約１分の１、２分の１、３分の１、４分の１、５分の１、６分の１、７分の１、８分の１、９分の１、１０分の１、またはそれ以下である。一部の実施形態では、コンジュゲート化部分は、ＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒαとの結合を損なうかまたは遮断する。
【００１１】
本明細書には、特定の実施形態において、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド、ＩＬ−１５コンジュゲート、または医薬組成物を含むキットが開示される。
【００１２】
本明細書には、特定の実施形態において、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５ポリペプチドをコードするポリ核酸分子を含むキットが開示される。
【００１３】
本開示の種々の態様は、添付の特許請求の範囲に詳細に記載される。本開示の特徴および利点のより良い理解は、本開示の原理が利用される例示的な実施形態を記載する以下の詳細な説明、およびその添付の図面を参照することによって得られる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】例示的な非天然アミノ酸を示す図である。この図は、Ｙｏｕｎｇら、「Ｂｅｙｏｎｄ  ｔｈｅ  ｃａｎｏｎｉｃａｌ  ２０  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄｓ：ｅｘｐａｎｄｉｎｇ  ｔｈｅ  ｇｅｎｅｔｉｃ  ｌｅｘｉｃｏｎ」、Ｊ．ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２８５巻（１５号）：１１０３９〜１１０４４頁（２０１０年）の図２から採用される。
【図２Ａ】例示的な非天然アミノ酸を示す図である。図２Ａは、例示的なリジン誘導体を示す。
【図２Ｂ】例示的な非天然アミノ酸を示す図である。図２Ｂは、例示的なフェニルアラニン誘導体を示す。
【図３Ａ】例示的な非天然アミノ酸を示す図である。これらの非天然アミノ酸（ＵＡＡ）はタンパク質に遺伝的にコードされている（図３Ａ−ＵＡＡ＃１−４２；図３Ｂ−ＵＡＡ＃４３−８９；図３Ｃ−ＵＡＡ＃９０−１２８；図３Ｄ−ＵＡＡ＃１２９−１６７。図３Ａ−図３Ｄは、Ｄｕｍａｓら、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０１５年、６巻、５０〜６９頁から採用される。
【図３Ｂ】例示的な非天然アミノ酸を示す図である。これらの非天然アミノ酸（ＵＡＡ）はタンパク質に遺伝的にコードされている（図３Ａ−ＵＡＡ＃１−４２；図３Ｂ−ＵＡＡ＃４３−８９；図３Ｃ−ＵＡＡ＃９０−１２８；図３Ｄ−ＵＡＡ＃１２９−１６７。図３Ａ−図３Ｄは、Ｄｕｍａｓら、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０１５年、６巻、５０〜６９頁から採用される。
【図３Ｃ】例示的な非天然アミノ酸を示す図である。これらの非天然アミノ酸（ＵＡＡ）はタンパク質に遺伝的にコードされている（図３Ａ−ＵＡＡ＃１−４２；図３Ｂ−ＵＡＡ＃４３−８９；図３Ｃ−ＵＡＡ＃９０−１２８；図３Ｄ−ＵＡＡ＃１２９−１６７。図３Ａ−図３Ｄは、Ｄｕｍａｓら、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０１５年、６巻、５０〜６９頁から採用される。
【図３Ｄ】例示的な非天然アミノ酸を示す図である。これらの非天然アミノ酸（ＵＡＡ）はタンパク質に遺伝的にコードされている（図３Ａ−ＵＡＡ＃１−４２；図３Ｂ−ＵＡＡ＃４３−８９；図３Ｃ−ＵＡＡ＃９０−１２８；図３Ｄ−ＵＡＡ＃１２９−１６７。図３Ａ−図３Ｄは、Ｄｕｍａｓら、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０１５年、６巻、５０〜６９頁から採用される。
【図４】陰イオン交換クロマトグラフィーのグラフを示す図である。
【図５】逆相クロマトグラフィーのグラフを示す図である。
【図６】ＣＴＬＬ２増殖アッセイにおける天然の効力を有する例示的なＩＬ−１５コンジュゲートのＥＣ５０値を示す図である。結果は、応答のパーセンテージとしてプロットされる。
【図７】ＣＴＬＬ２増殖アッセイにおける減少した効力を有する例示的なＩＬ−１５コンジュゲートのＥＣ５０値を示す図である。ここに示されるように、部位特異的ＰＥＧ化は、インビトロでの薬理学に寄与する。結果は、応答のパーセンテージとしてプロットされる。
【図８】異なるＰＥＧサイズにコンジュゲートされた例示的ＩＬ−１５のＥＣ５０値を示す図である。結果は、応答のパーセンテージとしてプロットされる。
【図９Ａ】ｒＨｕＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒαに結合するＩＬ−１５とコンジュゲートされた化合物に対する応答単位（ＲＵ、Ｙ軸）対時間（秒、Ｘ軸）を示す図である。図９Ａ：ｒＨｕＩＬ−１５；図９Ｂ：ＩＬ１５コンジュゲートＮ７７ＰＥＧ３０およびＳ８３ＰＥＧ３０；図９Ｃ：ＩＬ１５コンジュゲートＥ４６ＰＥＧ３０およびＥ５３ＰＥＧ３０。
【図９Ｂ】ｒＨｕＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒαに結合するＩＬ−１５とコンジュゲートされた化合物に対する応答単位（ＲＵ、Ｙ軸）対時間（秒、Ｘ軸）を示す図である。図９Ａ：ｒＨｕＩＬ−１５；図９Ｂ：ＩＬ１５コンジュゲートＮ７７ＰＥＧ３０およびＳ８３ＰＥＧ３０；図９Ｃ：ＩＬ１５コンジュゲートＥ４６ＰＥＧ３０およびＥ５３ＰＥＧ３０。
【図９Ｃ】ｒＨｕＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒαに結合するＩＬ−１５とコンジュゲートされた化合物に対する応答単位（ＲＵ、Ｙ軸）対時間（秒、Ｘ軸）を示す図である。図９Ａ：ｒＨｕＩＬ−１５；図９Ｂ：ＩＬ１５コンジュゲートＮ７７ＰＥＧ３０およびＳ８３ＰＥＧ３０；図９Ｃ：ＩＬ１５コンジュゲートＥ４６ＰＥＧ３０およびＥ５３ＰＥＧ３０。
【図１０】ｒＨｕＩＬ−１５、ＩＬ−１５ＲαおよびＩＬ−２Ｒβに結合するＩＬ−１５  Ｎ７７ＰＥＧ３０に対する応答単位（ＲＵ、Ｙ軸）対時間（秒、Ｘ軸）を示す図である。
【図１１】ｒＨｕＩＬ−１５、ＩＬ−１５ＲαおよびＩＬ−２Ｒβに結合するＩＬ−１５  Ｅ５３ＰＥＧ３０に対する応答単位（ＲＵ、Ｙ軸）対時間（秒、Ｘ軸）を示す図である。
【図１２】例示的なＩＬ−１５ＰＥＧコンジュゲートでの刺激時のＮＫおよびＣＤ８＋Ｔ細胞上のＳＴＡＴ５リン酸化を示す図である。図１２Ａおよび図１２Ｃ：半減期の延長（Ｓ８３ＰＥＧ３０およびＮ７７ＰＥＧ３０）；図１２Ｂおよび図１２Ｄ：ＩＬ−１５Ｒα（Ｖ４９ＰＥＧ３０、Ｅ５３ＰＥＧ３０およびＬ２５ＰＥＧ３０）との調節された相互作用。
【図１３】０．３ｍｇ／ｋｇでのｒＨｕＩＬ−１５、ＩＬ−１５  Ｓ８３ＰＥＧ３０、ＩＬ−１５  Ｖ４９ＰＥＧ３０  ＩＬ−１５  Ｌ２５  ＰＥＧ３０およびＩＬ−１５  Ｎ７７  ＰＥＧ３０の血漿中濃度プロファイルを示す図である。
【図１４】ｒＨｕＩＬ−１５またはＰＥＧ化された化合物が投薬されたマウスのＣＤ８＋Ｔ細胞（図１４Ａ）、ＣＤ８記憶細胞（図１４Ｂ）、ＮＫ細胞（図１４Ｃ）、およびＴｒｅｇ細胞（図１４Ｄ）におけるＳＴＡＴ５リン酸化のパーセンテージを示す図である。
【図１５】ＰＥＧ化された化合物が投薬された動物のＣＤ８＋Ｔ細胞（図１５Ａ）、ＮＫ細胞（図１５Ｂ）、ＣＤ８＋Ｔｍｅｍ細胞（図１５Ｃ）であるが、Ｔｒｅｇ細胞ではない（図１５Ｄ）における初期増殖分子マーカーＫｉ６７発現の増加を示す図である。
【図１６】ＣＤ８＋Ｔ細胞（図１６Ａ）、ＮＫ細胞（図１６Ｂ）、およびＣＤ８記憶Ｔ細胞（図１６Ｃ）の増殖の誘導を示す図である。
【図１７】マウスにおける、増加した用量のＩＬ−１５  Ｌ２５ＰＥＧ３０によるＮＫ細胞（図１７Ａ）およびＣＤ８＋Ｔ（図１７Ｂ）におけるＫｉ６７発現の増加を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
がんは、異常な細胞増殖を伴う複雑な疾患群であり、身体の他の部位に浸潤または転移する潜在力を有する。がんの駆動因子および経路を標的とする放射線療法および化学療法などのがん治療は成功する可能性がある。いくつかの例では、がん細胞は、これらの治療に適応することができ、このような治療の効能を制限する。免疫療法は、手術、化学療法、または放射線療法とは異なり、免疫系を刺激して腫瘍細胞を認識し死滅させる。
【００１６】
いくつかのサイトカインは、免疫応答を引き起こす能力があるので、免疫療法で使用される。しかしながら、サイトカインを利用した現在の免疫療法は、毒性および制御されない細胞増殖を含むいくつかの有害作用をもたらす。本明細書には、改善された治療および減少した有害事象をもたらす特異的Ｔ細胞およびＮＫ集団を刺激または拡大する能力を有する、がんの治療に使用するための修飾されたサイトカインまたはサイトカインコンジュゲートが提供される。
【００１７】
サイトカインには、細胞シグナル伝達タンパク質のファミリー、例えば、ケモカイン、インターフェロン、インターロイキン、リンホカイン、および腫瘍壊死因子が含まれる。サイトカインは、免疫細胞、例えば、マクロファージ、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球および肥満細胞、内皮細胞、線維芽細胞、および様々な間質細胞などによって生成される。いくつかの例では、サイトカインは、体液性免疫応答と細胞性免疫応答との間のバランスを調節する。
【００１８】
インターロイキンは、Ｔリンパ球およびＢリンパ球ならびに造血細胞の発生および分化を調節するシグナル伝達タンパク質である。インターロイキンは、ヘルパーＣＤ４  Ｔリンパ球、単球、マクロファージ、および内皮細胞によって生成される。場合によっては、約１５種類のインターロイキン、インターロイキン１〜１３、インターロイキン１５、およびインターロイキン１７が存在する。
【００１９】
インターロイキン−１５（ＩＬ−１５）は多面的サイトカインであり、その構造は１４〜１５ｋＤａの糖タンパク質である。ＩＬ−１５の転写、翻訳および分泌は、複数の複雑なメカニズムを介して調節される。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５受容体α（ＩＬ−１５Ｒα、ＣＤ２１５）タンパク質は、主に活性化単球および樹状細胞（ＤＣ）によって共発現される。ヘテロ二量体ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαの転写は、単球／ＤＣと１型もしくは２型インターフェロン（ＩＦＮ）またはＣＤ４０ライゲーション、またはＮＦ−ｋＢを活性化するＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）を介して作用する薬剤との相互作用に続いて起こる。さらに、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαタンパク質発現は、主に翻訳および分泌のレベルで制御される。
【００２０】
ＩＬ−１５は、固有のα鎖（ＩＬ−１５Ｒα）、ＩＬ−２（ＣＤ１２２）と共有βサブユニット（ＩＬ−１５Ｒβ、ＣＤ１３２）、およびいくつかのサイトカインと共有される共通γサブユニット（ＣＤ１３２；ＩＬ−１５Ｒγ）を含むヘテロ三量体受容体を介してシグナルを伝達する。ＩＬ−１５Ｒαは、ＩＬ−１５に対して高い親和性を有し、Ｋｄは約１０−１１Ｍである。
【００２１】
一部の実施形態では、ＩＬ−１５シグナル伝達は、Ｔ細胞応答を調節し、続いてがんの治療に利用される。一部の実施形態では、ＩＬ−１５シグナル伝達は、活性化ＣＤ４−ＣＤ８−、ＣＤ４＋ＣＤ８＋、ＣＤ４＋、ａｎｄＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖、および定義されたエフェクターＴ細胞サブセットにおけるそれらの分化をシミュレートするために利用される。一部の実施形態では、ＩＬ−１５シグナル伝達は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の生成および増殖をシミュレートするために利用される。一部の実施形態では、ＩＬ−１５シグナル伝達は、記憶ＣＤ８  Ｔ細胞、ナイーブＣＤ８  Ｔ細胞、およびＮＫ細胞の維持および生存を促進するために利用される。一部の実施形態では、ＩＬ−１５シグナル伝達は、記憶ＣＤ８  Ｔ細胞の形成を誘導するために利用される。一部の実施形態では、ＩＬ−１５シグナル伝達は、ＮＫ細胞標的特異的活性化のプライミングに利用される。一部の実施形態では、ＩＬ−１５シグナル伝達は、Ｔｒｅｇ拡大をもたらさない。
【００２２】
本明細書には、一部の実施形態では、Ｔ細胞応答を調節し、続いてがんを治療するための修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドが記載される。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、インターロイキン１５受容体α（ＩＬ−１５Ｒα）との結合の低下を含む。一部の実施形態では、結合親和性の低下は、野生型ＩＬ−１５ポリペプチドとＩＬ−１５Ｒαとの間の結合親和性に対して相対的である。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドとインターロイキン２／インターロイキン１５受容体βγ（ＩＬ−２／ＩＬ−１５Ｒβγ）との相互作用にほとんど影響を及ぼさないかまたは全く影響を及ぼさない。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドのＩＬ−１５ＲαおよびＩＬ−１５Ｒβγとの結合親和性にほとんど影響を及ぼさないかまたは全く影響を及ぼさない１つまたはそれ以上の修飾を含む。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、ＩＬ−２／ＩＬ−１５Ｒβγとの結合の低下を含み、ＩＬ−１５Ｒα相互作用は影響を受けない。
【００２３】
本明細書には、抗腫瘍応答を刺激する効力を有する、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートが記載される。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、改善された安全性プロファイルを有する。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、半減期を増加させるための部位特異的ＰＥＧ化を含む。一部の実施形態では、部位特異的ＰＥＧ化は、半減期を増加させ、生物学的活性にほとんど影響を及ぼさないかまたは全く影響を及ぼさない。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートのシグナル伝達は、ＩＬ−１５Ｒβγにバイアスされる。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、半減期を増加させ、毒性を減少させるための部位特異的ＰＥＧ化を含む。一部の実施形態では、部位特異的ＰＥＧ化は、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートのより少ない用量をもたらす。一部の実施形態では、毒性は、ＩＬ−１５Ｒα相互作用を遮断する修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートによって減少する。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートの活性は、腫瘍部位に限定される。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、ＩＬ−１５のトランス提示がナチュラルキラー（ＮＫ）細胞およびエフェクター細胞の増殖および機能に必要とされないように、部位特異的ＰＥＧ化を含む。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、クリアランスが阻害または妨げるような部位特異的ＰＥＧ化を含む。
【００２４】
修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドおよびＩＬ−１５コンジュゲート
本明細書には、一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドが記載される。いくつかの例では、修飾は、天然アミノ酸への変更である。いくつかの例では、修飾は非天然アミノ酸への変更である。いくつかの例では、本明細書には、少なくとも１つの非天然アミノ酸を含む、単離および修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドが記載される。いくつかの例では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、単離され精製された哺乳動物ＩＬ−１５、例えば、ヒトＩＬ−１５タンパク質である。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドは、ヒトＩＬ−１５タンパク質である。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号１または２と約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を含む。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号１または２の配列を含むかまたはそれからなる。
【００２５】
いくつかの例では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、切断された変異体である。いくつかの例では、切断はＮ末端欠失である。他の例では、切断はＣ末端欠失である。追加の例では、切断は、Ｎ末端とＣ末端の両方の欠失を含む。例えば、切断は、Ｎ末端もしくはＣ末端、または両方の末端からの少なくとももしくは約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０またはそれ以上の残基の欠失であり得る。場合によっては、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、少なくとももしくは約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０またはそれ以上の残基のＮ末端欠失を含む。場合によっては、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、少なくとももしくは約１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０残基のＮ末端欠失を含む。場合によっては、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、少なくともまたは約２残基のＮ末端欠失を含む。場合によっては、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、少なくともまたは約３残基のＮ末端欠失を含む。場合によっては、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、少なくともまたは約４残基のＮ末端欠失を含む。場合によっては、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、少なくともまたは約５残基のＮ末端欠失を含む。場合によっては、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、少なくともまたは約６残基のＮ末端欠失を含む。場合によっては、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、少なくともまたは約７残基のＮ末端欠失を含む。場合によっては、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、少なくともまたは約８残基のＮ末端欠失を含む。場合によっては、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、少なくともまたは約９残基のＮ末端欠失を含む。場合によっては、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、少なくともまたは約１０残基のＮ末端欠失を含む。
【００２６】
一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、機能的に活性な断片である。場合によっては、機能的に活性な断片は、ＩＬ−１５領域５〜１１４、１０〜１１４、１５〜１１４、２０〜１１４、１〜１１０、５〜１１０、１０〜１１０、１５〜１１０、２０〜１１０、１〜１０５、５〜１０５、１０〜１０５、１５〜１０５、２０〜１０５、１〜１００、５〜１００、１０〜１００、１５〜１００、または２０〜１００を含み、残基位置は、配列番号１の位置を基準にする。いくつかの例では、機能的に活性な断片は、ＩＬ−１５領域５〜１１４、１０〜１１４、１５〜１１４、または２０〜１１４を含み、残基の位置は、配列番号１の位置を基準にする。いくつかの例では、機能的に活性な断片は、ＩＬ−１５領域１〜１１０、５〜１１０、１０〜１１０、１５〜１１０、または２０〜１１０を含み、残基位置は、配列番号１の位置を基準にする。いくつかの例では、機能的に活性な断片は、ＩＬ−１５領域１〜１０５、５〜１０５、１０〜１０５、１５〜１０５、または２０〜１０５を含み、残基位置は、配列番号１の位置を基準にする。いくつかの例では、機能的に活性な断片は、ＩＬ−１５領域１〜１００、５〜１００、１０〜１００、１５〜１００、または２０〜１００を含み、残基位置は、配列番号１の位置を基準にする。
【００２７】
一部の実施形態では、機能的に活性なＩＬ−１５断片は、内部欠失を含む。場合によっては、内部欠失はループ領域を含む。場合によっては、内部欠失は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、またはそれ以上の残基の欠失を含む。
【００２８】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１５ポリペプチドは、少なくとも１つの非天然アミノ酸を含む。いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｎ１、Ｗ２、Ｖ３、Ｎ４、Ｉ６、Ｓ７、Ｄ８、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｅ１３、Ｄ１４、Ｌ１５、Ｑ１７、Ｓ１８、Ｍ１９、Ｈ２０、Ｉ２１、Ｄ２２、Ａ２３、Ｔ２４、Ｌ２５、Ｙ２６、Ｔ２７、Ｅ２８、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｐ３３、Ｓ３４、Ｃ３５、Ｋ３６、Ｖ３７、Ｔ３８、Ａ３９、Ｋ４１、Ｌ４４、Ｌ４５、Ｅ４６、Ｑ４８、Ｖ４９、Ｓ５１、Ｌ５２、Ｅ５３、Ｓ５４、Ｇ５５、Ｄ５６、Ａ５７、Ｓ５８、Ｈ６０、Ｄ６１、Ｔ６２、Ｖ６３、Ｅ６４、Ｎ６５、Ｉ６７、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｎ７１、Ｎ７２、Ｓ７３、Ｌ７４、Ｓ７５、Ｓ７６、Ｎ７７、Ｇ７８、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、Ｅ８２、Ｓ８３、Ｇ８４、Ｃ８５、Ｋ８６、Ｅ８７、Ｃ８８、Ｅ８９、Ｅ９０、Ｌ９１、Ｅ９２、Ｅ９３、Ｋ９４、Ｎ９５、Ｉ９６、Ｋ９７、Ｅ９８、Ｌ１００、Ｑ１０１、Ｓ１０２、Ｖ１０４、Ｈ１０５、Ｑ１０８、Ｍ１０９、Ｆ１１０、Ｉ１１１、Ｎ１１２、Ｔ１１３、およびＳ１１４から選択され、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｎ１、Ｗ２、Ｖ３、Ｎ４、Ｉ６、Ｓ７、Ｄ８、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｅ１３、Ｄ１４、Ｌ１５、Ｑ１７、Ｓ１８、Ｍ１９、Ｈ２０、Ｉ２１、Ｄ２２、Ａ２３、Ｔ２４、Ｌ２５、Ｙ２６、Ｅ２８、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｐ３３、Ｓ３４、Ｃ３５、Ｋ３６、Ｖ３７、Ｔ３８、Ｋ４１、Ｌ４４、Ｅ４６、Ｑ４８、Ｖ４９、Ｓ５１、Ｌ５２、Ｅ５３、Ｓ５４、Ｇ５５、Ｄ５６、Ａ５７、Ｓ５８、Ｈ６０、Ｄ６１、Ｔ６２、Ｖ６３、Ｅ６４、Ｎ６５、Ｉ６７、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｎ７１、Ｎ７２、Ｓ７３、Ｌ７４、Ｓ７５、Ｓ７６、Ｎ７７、Ｇ７８、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、Ｅ８２、Ｓ８３、Ｇ８４、Ｃ８５、Ｋ８６、Ｅ８７、Ｃ８８、Ｅ８９、Ｅ９０、Ｌ９１、Ｅ９２、Ｅ９３、Ｋ９４、Ｎ９５、Ｉ９６、Ｋ９７、Ｅ９８、Ｌ１００、Ｑ１０１、Ｓ１０２、Ｖ１０４、Ｈ１０５、Ｑ１０８、Ｍ１０９、Ｆ１１０、Ｉ１１１、Ｎ１１２、Ｔ１１３、およびＳ１１４から選択され、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｅ１３、Ｄ１４、Ｌ１５、Ｑ１７、Ｓ１８、Ｍ１９、Ｈ２０、Ｉ２１、Ｓ３４、Ｃ３５、Ｋ３６、Ｖ３７、Ｔ３８、Ｋ４１、Ｌ４４、Ｓ５１、Ｌ５２、Ｓ５４、Ｇ５５、Ｄ５６、Ａ５７、Ｓ５８、Ｈ６０、Ｖ６３、Ｉ６７、Ｎ７１、Ｓ７３、Ｌ７４、Ｓ７５、Ｓ７６、Ｎ７７、Ｇ７８、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、Ｅ８２、Ｓ８３、Ｇ８４、Ｃ８５、Ｋ８６、Ｅ８７、Ｃ８８、Ｌ９１、Ｅ９２、Ｋ９４、Ｎ９５、Ｉ９６、Ｋ９７、Ｅ９８、Ｌ１００、Ｑ１０１、およびＦ１１０から選択される。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｄ１４、Ｑ１７、Ｓ１８、Ｋ４１、Ｓ５１、Ｌ５２、Ｇ５５、Ｄ５６、Ａ５７、Ｓ５８、Ｓ７５、Ｓ７６、Ｎ７７、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、Ｓ８３、Ｇ８４、Ｅ９２、Ｋ９４、Ｋ９５、Ｋ９７、およびＥ９８から選択される。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｎ１、Ｎ４、Ｓ７、Ｄ８、Ｋ１１、Ｄ６１、Ｔ６２、Ｅ６４、Ｎ６５、Ｉ６８、Ｌ６９、およびＮ７２から選択される。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｖ３、Ｉ６、Ｋ１０、Ｅ２８、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｐ３３、Ｓ１０２、Ｖ１０４、Ｈ１０５、Ｑ１０８、Ｍ１０９、Ｉ１１１、Ｎ１１２、Ｔ１１３、およびＳ１１４から選択される。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｄ２２、Ａ２３、Ｔ２４、Ｌ２５、Ｙ２６、Ｌ４４、Ｅ４６、Ｑ４８、Ｖ４９、Ｅ５３、Ｅ８９、Ｅ９０、およびＥ９３から選択される。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｙ２６、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｅ５３、およびＬ２５から選択される。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｖ３、Ｋ１０、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｈ３２、Ｈ１０５、Ｑ１０８、Ｍ１０９、Ｉ１１１、Ｎ１１２、Ｔ１１３、およびＳ１１４から選択される。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｎ４、Ｓ７、Ｋ１１、およびＤ６１から選択される。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｌ２５、Ｅ５３、Ｎ７７、およびＳ８３から選択される。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｌ２５およびＥ５３から選択される。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｅ４６、Ｙ２６、Ｖ４９、Ｅ５３、Ｔ２４、Ｎ４、Ｋ１１、Ｎ６５、Ｌ６９、Ｓ１８、Ｈ２０、およびＳ８３から選択される。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｅ４６、Ｙ２６、Ｖ４９、Ｅ５３、およびＴ２４から選択される。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｅ５３、およびＴ２４から選択される。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｙ２６、Ｖ４９、Ｅ５３、およびＴ２４から選択される。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｖ４９、Ｅ５３、およびＴ２４から選択される。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｅ４６およびＹ２６から選択される。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｅ４６である。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｌ２５である。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｙ２６である。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｖ４９である。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｅ５３である。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｔ２４である。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｎ７７である。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｎ４、Ｋ１１、Ｎ６５、Ｌ６９、Ｓ１８、Ｈ２０、およびＳ８３から選択される。ＩＬ−１５の例示的なアミノ酸配列は、下記の表１に示される。
【００２９】
【表１】
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【００３０】
いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、Ｎ末端の近位に位置する。本明細書で使用される場合、近位とは、Ｎ末端残基から少なくとも１残基離れ、Ｎ末端残基から最大約５０残基離れて位置する残基を指す。場合によっては、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、Ｎ末端残基からの最初の１０、２０、３０、４０、または５０残基内に位置する。場合によっては、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、Ｎ末端残基からの最初の１０残基内に位置する。場合によっては、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、Ｎ末端残基からの最初の２０残基内に位置する。場合によっては、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、Ｎ末端残基からの最初の３０残基内に位置する。場合によっては、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、Ｎ末端残基からの最初の４０残基内に位置する。場合によっては、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、Ｎ末端残基からの最初の５０残基内に位置する。
【００３１】
いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、Ｎ末端残基である。
【００３２】
いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、Ｃ末端の近位に位置する。本明細書で使用される場合、近位とは、Ｃ末端残基から少なくとも１残基離れ、Ｃ末端残基から最大約５０残基離れて位置する残基を指す。場合によっては、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、Ｃ末端残基からの最初の１０、２０、３０、４０、または５０残基内に位置する。場合によっては、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、Ｃ末端残基からの最初の１０残基内に位置する。場合によっては、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、Ｃ末端残基からの最初の２０残基内に位置する。場合によっては、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、Ｃ末端残基からの最初の３０残基内に位置する。場合によっては、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、Ｃ末端残基からの最初の４０残基内に位置する。場合によっては、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、Ｃ末端残基からの最初の５０残基内に位置する。
【００３３】
いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、Ｃ末端残基である。
【００３４】
一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸を含む修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドであって、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置が、インターロイキン１５受容体α（ＩＬ−１５Ｒα）に対するＩＬ−１５ポリペプチドの結合親和性を選択的に低下させる残基位置にある、上記修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。一部の実施形態では、結合親和性の低下は、野生型ＩＬ−１５ポリペプチドとＩＬ−１５Ｒαとの間の結合親和性に対して相対的である。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドのＩＬ−１５Ｒαへの結合は、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドとインターロイキン２／インターロイキン１５受容体βγ（ＩＬ−２／ＩＬ−１５Ｒβγ）との相互作用に影響を与えず、または修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドとＩＬ−２／ＩＬ−１５Ｒβγとの相互作用を改善する。いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｄ２２、Ａ２３、Ｔ２４、Ｌ２５、Ｙ２６、Ｌ４４、Ｅ４６、Ｑ４８、Ｖ４９、Ｅ５３、Ｅ８９、Ｅ９０、およびＥ９３から選択され、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｙ２６、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｅ５３、およびＬ２５から選択され、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ａ２３、Ｔ２４、Ｅ８９、およびＥ９３から選択され、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｄ２２、Ｌ４４、Ｑ４８、およびＥ９０から選択され、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する。いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｙ２６である。いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｅ４６である。いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｖ４９である。いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｅ５３である。場合によっては、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｌ２５である。いくつかの例では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、ＰＥＧをさらに含む。場合によっては、ＰＥＧは、Ｄ２２、Ａ２３、Ｔ２４、Ｌ２５、Ｙ２６、Ｌ４４、Ｅ４６、Ｑ４８、Ｖ４９、Ｅ５３、Ｅ８９、Ｅ９０、およびＥ９３から選択される残基位置でコンジュゲートされる。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、半減期の増加のためにＰＥＧをさらに含む。場合によっては、ＰＥＧは、半減期の増加ために、Ｅ１３、Ｄ１４、Ｌ１５、Ｑ１７、Ｓ１８、Ｍ１９、Ｈ２０、Ｉ２１、Ｓ３４、Ｃ３５、Ｋ３６、Ｖ３７、Ｔ３８、Ｋ４１、Ｌ４４、Ｓ５１、Ｌ５２、Ｓ５４、Ｇ５５、Ｄ５６、Ａ５７、Ｓ５８、Ｈ６０、Ｖ６３、Ｉ６７、Ｎ７１、Ｓ７３、Ｌ７４、Ｓ７５、Ｓ７６、Ｎ７７、Ｇ７８、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、Ｅ８２、Ｓ８３、Ｇ８４、Ｃ８５、Ｋ８６、Ｅ８７、Ｃ８８、Ｌ９１、Ｅ９２、Ｋ９４、Ｎ９５、Ｉ９６、Ｋ９７、Ｅ９８、Ｌ１００、Ｑ１０１、およびＦ１１０から選択される残基位置でコンジュゲートされる。場合によっては、ＰＥＧは���Ｎ７１、Ｎ７２、およびＮ７７から選択される残基位置でコンジュゲートされる。場合によっては、ＰＥＧにコンジュゲートされた残基は、天然アミノ酸に突然変異される。他の場合には、ＰＥＧにコンジュゲートされた残基は、非天然アミノ酸に突然変異される。追加の場合において、Ｎ７１、Ｎ７２、またはＮ７７における突然変異は、ＣＭＣ条件（例えば、収率、純度、安定性、凝集の低下、および／またはタンパク質フォールディングの改善）、効力、またはそれらの組み合わせをさらに改善する。
【００３５】
いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸を含む修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドであって、少なくとも１つの非天然アミノ酸が、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドのＩＬ−２／ＩＬ−１５Ｒβ、ＩＬ−１５Ｒγ、またはそれらの組み合わせとの結合親和性を選択的に低下させる残基位置にある、上記修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５は、ＩＬ−１５Ｒαとの相互作用に対してほとんど影響を及ぼさないかまたは全く影響を及ぼさない。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｎ１、Ｖ３、Ｎ４、Ｉ６、Ｓ７、Ｄ８、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｅ２８、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｐ３３、Ｄ６１、Ｔ６２、Ｅ６４、Ｎ６５、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｎ７２、Ｓ１０２、Ｖ１０４、Ｈ１０５、Ｑ１０８、Ｍ１０９、Ｉ１１１、Ｎ１１２、Ｔ１１３、およびＳ１１４から選択され、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドのＩＬ−２／ＩＬ−１５Ｒβとの結合親和性を選択的に低下させる残基位置にある。いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｎ１、Ｎ４、Ｓ７、Ｄ８、Ｋ１１、Ｄ６１、Ｔ６２、Ｅ６４、Ｎ６５、Ｉ６８、Ｌ６９、およびＮ７２から選択され、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する。いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｎ４、Ｓ７、Ｋ１１、およびＤ６１から選択される。いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｄ８、Ｅ６４、Ｎ６５、Ｉ６８、およびＮ７２から選択される。いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｎ１、Ｔ６２、およびＬ６９から選択される。いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｎ４である。いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｓ７である。いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｋ１１である。いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｄ６１である。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドのＩＬ−２／ＩＬ−１５Ｒγとの結合親和性を選択的に低下させる残基位置にある。いくつかの例では少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｖ３、Ｉ６、Ｋ１０、Ｅ２８、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｐ３３、Ｓ１０２、Ｖ１０４、Ｈ１０５、Ｑ１０８、Ｍ１０９、Ｉ１１１、Ｎ１１２、Ｔ１１３、およびＳ１１４から選択され、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する。いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｖ３、Ｋ１０、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｈ３２、Ｈ１０５、Ｑ１０８、Ｍ１０９、Ｉ１１１、Ｎ１１２、Ｔ１１３、およびＳ１１４から選択される。いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｅ２８、Ｐ３３、Ｓ１０２、およびＶ１０４から選択される。いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｉ６およびＶ３１から選択される。いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ��の残基位置は、Ｖ３である。いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｋ１０である。いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｓ２９である。いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｄ３０である。いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｈ３２である。いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｈ１０５である。いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｑ１０８である。いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｍ１０９である。いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｉ１１１である。いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｎ１１２である。いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｔ１１３である。いくつかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｓ１１４である。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、ＰＥＧをさらに含む。場合によっては、ＰＥＧは、Ｎ１、Ｖ３、Ｎ４、Ｉ６、Ｓ７、Ｄ８、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｅ２８、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｐ３３、Ｄ６１、Ｔ６２、Ｅ６４、Ｎ６５、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｎ７２、Ｓ１０２、Ｖ１０４、Ｈ１０５、Ｑ１０８、Ｍ１０９、Ｉ１１１、Ｎ１１２、Ｔ１１３、およびＳ１１４から選択される残基位置でコンジュゲートされる。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、半減期の増加ためにＰＥＧをさらに含む。場合によっては、ＰＥＧは、半減期の増加のために、Ｅ１３、Ｄ１４、Ｌ１５、Ｑ１７、Ｓ１８、Ｍ１９、Ｈ２０、Ｉ２１、Ｓ３４、Ｃ３５、Ｋ３６、Ｖ３７、Ｔ３８、Ｋ４１、Ｌ４４、Ｓ５１、Ｌ５２、Ｓ５４、Ｇ５５、Ｄ５６、Ａ５７、Ｓ５８、Ｈ６０、Ｖ６３、Ｉ６７、Ｎ７１、Ｓ７３、Ｌ７４、Ｓ７５、Ｓ７６、Ｎ７７、Ｇ７８、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、Ｅ８２、Ｓ８３、Ｇ８４、Ｃ８５、Ｋ８６、Ｅ８７、Ｃ８８、Ｌ９１、Ｅ９２、Ｋ９４、Ｎ９５、Ｉ９６、Ｋ９７、Ｅ９８、Ｌ１００、Ｑ１０１、およびＦ１１０から選択される残基位置でコンジュゲートされる。場合によっては、ＰＥＧは、Ｎ７１、Ｎ７２、およびＮ７７から選択される残基位置でコンジュゲートされる。場合によっては、ＰＥＧにコンジュゲートされた残基は、天然アミノ酸に突然変異される。他の場合には、ＰＥＧにコンジュゲートされた残基は、非天然アミノ酸に突然変異される。追加の場合において、Ｎ７１、Ｎ７２、またはＮ７７における突然変異は、ＣＭＣ条件（例えば、収率、純度、安定性、凝集の低下、および／またはタンパク質フォールディングの改善）、効力、またはそれらの組み合わせをさらに改善する。
【００３６】
場合によっては、少なくとも１つの非天然アミノ酸を含む修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドであって、少なくとも１つの非天然アミノ酸が、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドのＩＬ−１５ＲαおよびＩＬ−１５Ｒβγとの結合親和性に影響しない残基位置にある、上記修飾されたＩＬ−１５ポリペプチド。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、半減期の増加ために、ＰＥＧをさらに含む。一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５は、生物学的活性に変化を伴わないＰＥＧを含む。一部の実施形態では、残基は、半減期の延長のために修飾される。場合によっては、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｅ１３、Ｄ１４、Ｌ１５、Ｑ１７、Ｓ１８、Ｍ１９、Ｈ２０、Ｉ２１、Ｓ３４、Ｃ３５、Ｋ３６、Ｖ３７、Ｔ３８、Ｋ４１、Ｌ４４、Ｓ５１、Ｌ５２、Ｓ５４、Ｇ５５、Ｄ５６、Ａ５７、Ｓ５８、Ｈ６０、Ｖ６３、Ｉ６７、Ｎ７１、Ｓ７３、Ｌ７４、Ｓ７５、Ｓ７６、Ｎ７７、Ｇ７８、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、Ｅ８２、Ｓ８３、Ｇ８４、Ｃ８５、Ｋ８６、Ｅ８７、Ｃ８８、Ｌ９１、Ｅ９２、Ｋ９４、Ｎ９５、Ｉ９６、Ｋ９７、Ｅ９８、Ｌ１００、Ｑ１０１、およびＦ１１０から選択され、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｄ１４、Ｑ１７、Ｓ１８、Ｋ４１、Ｓ５１、Ｌ５２、Ｇ５５、Ｄ５６、Ａ５７、Ｓ５８、Ｓ７５、Ｓ７６、Ｎ７７、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、Ｓ８３、Ｇ８４、Ｅ９２、Ｋ９４、Ｎ９５、Ｋ９７、およびＥ９８から選択され、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｅ１３、Ｌ１５、Ｍ１９、Ｈ２０、Ｋ３６、Ｖ３７、Ｔ３８、Ｓ５４、Ｈ６０、Ｉ６７、Ｎ７１、Ｇ７８、Ｋ８６、Ｅ８７、およびＱ１０１から選択され、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｉ２１、Ｓ３４、Ｃ３５、Ｌ４４、Ｖ６３、Ｓ７３、Ｌ７４、Ｅ８２、Ｃ８５、Ｃ８８、Ｌ９１、Ｉ９６、Ｌ１００、およびＦ１１０から選択され、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｎ７１、Ｎ７２、およびＮ７７から選択され、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｎ７７およびＳ８３から選択される。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｄ１４である。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｑ１７である。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｓ１８である。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｋ４１である。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｓ５１である。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｌ５２である。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｇ５５である。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｄ５６である。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ａ５７である。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｓ５８である。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｓ７５である。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｓ７６である。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｎ７７である。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｎ７９である。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｖ８０である。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｔ８１である。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｓ８３である。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｇ８４である。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｅ９２である。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｋ９４である。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｎ９５である。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｋ９７である。一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸の残基位置は、Ｅ９８である。場合によっては、Ｎ７１、Ｎ７２、またはＮ７７における突然変異は、天然アミノ酸への突然変異を含む。場合によっては、Ｎ７１、Ｎ７２、またはＮ７７における突然変異は、ＣＭＣ条件（例えば、収率、純度、安定性、凝集の低下、および／またはタンパク質フォールディングの改善）、効力、またはそれらの組み合わせをさらに改善する。
【００３７】
一部の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸を含むＩＬ−１５ポリペプチドは、ＩＬ−１５コンジュゲートを生成するために、コンジュゲート化部分にさらにコンジュゲートされる。場合によっては、少なくとも１つの非天然アミノ酸のアミノ酸位置は、Ｎ１、Ｗ２、Ｖ３、Ｎ４、Ｉ６、Ｓ７、Ｄ８、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｅ１３、Ｄ１４、Ｌ１５、Ｑ１７、Ｓ１８、Ｍ１９、Ｈ２０、Ｉ２１、Ｄ２２、Ａ２３、Ｔ２４、Ｌ２５、Ｙ２６、Ｔ２７、Ｅ２８、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｐ３３、Ｓ３４、Ｃ３５、Ｋ３６、Ｖ３７、Ｔ３８、Ａ３９、Ｋ４１、Ｌ４４、Ｌ４５、Ｅ４６、Ｑ４８、Ｖ４９、Ｓ５１、Ｌ５２、Ｅ５３、Ｓ５４、Ｇ５５、Ｄ５６、Ａ５７、Ｓ５８、Ｈ６０、Ｄ６１、Ｔ６２、Ｖ６３、Ｅ６４、Ｎ６５、Ｉ６７、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｎ７１、Ｎ７２、Ｓ７３、Ｌ７４、Ｓ７５、Ｓ７６、Ｎ７７、Ｇ７８、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、Ｅ８２、Ｓ８３、Ｇ８４、Ｃ８５、Ｋ８６、Ｅ８７、Ｃ８８、Ｅ８９、Ｅ９０、Ｌ９１、Ｅ９２、Ｅ９３、Ｋ９４、Ｎ９５、Ｉ９６、Ｋ９７、Ｅ９８、Ｌ１００、Ｑ１０１、Ｓ１０２、Ｖ１０４、Ｈ１０５、Ｑ１０８、Ｍ１０９、Ｆ１１０、Ｉ１１１、Ｎ１１２、Ｔ１１３、またはＳ１１４であり、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する。場合によっては、少なくとも１つの非天然アミノ酸のアミノ酸位置は、Ｎ１、Ｗ２、Ｖ３、Ｎ４、Ｉ６、Ｓ７、Ｄ８、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｅ１３、Ｄ１４、Ｌ１５、Ｑ１７、Ｓ１８、Ｍ１９、Ｈ２０、Ｉ２１、Ｄ２２、Ａ２３、Ｔ２４、Ｌ２５、Ｙ２６、Ｅ２８、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｐ３３、Ｓ３４、Ｃ３５、Ｋ３６、Ｖ３７、Ｔ３８、Ｋ４１、Ｌ４４、Ｅ４６、Ｑ４８、Ｖ４９、Ｓ５１、Ｌ５２、Ｅ５３、Ｓ５４、Ｇ５５、Ｄ５６、Ａ５７、Ｓ５８、Ｈ６０、Ｄ６１、Ｔ６２、Ｖ６３、Ｅ６４、Ｎ６５、Ｉ６７、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｎ７１、Ｎ７２、Ｓ７３、Ｌ７４、Ｓ７５、Ｓ７６、Ｎ７７、Ｇ７８、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、Ｅ８２、Ｓ８３、Ｇ８４、Ｃ８５、Ｋ８６、Ｅ８７、Ｃ８８、Ｅ８９、Ｅ９０、Ｌ９１、Ｅ９２、Ｅ９３、Ｋ９４、Ｎ９５、Ｉ９６、Ｋ９７、Ｅ９８、Ｌ１００、Ｑ１０１、Ｓ１０２、Ｖ１０４、Ｈ１０５、Ｑ１０８、Ｍ１０９、Ｆ１１０、Ｉ１１１、Ｎ１１２、Ｔ１１３、またはＳ１１４である。場合によっては、コンジュゲート化部分は、少なくとも１つの非天然アミノ酸に結合される。場合によっては、コンジュゲート化部分は、Ｎ末端またはＣ末端アミノ酸残基に結合される。いくつかの例では、コンジュゲート化部分は、少なくとも１つの非天然アミノ酸または末端残基に直接結合される。他の例では、コンジュゲート化部分は、下記に記載されるリンカーを介して、少なくとも１つの非天然アミノ酸または末端残基に間接的に結合される。
【００３８】
一部の実施形態では、野生型ＩＬ−１５ポリペプチドと比較して、ＩＬ−１５受容体α（ＩＬ−１５Ｒα）サブユニットに対するＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートの低下した親和性は、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％である。一部の実施形態では、低下した親和性は、約１０％である。一部の実施形態では、低下した親和性は、約２０％である。一部の実施形態では、低下した親和性は、約４０％である。一部の実施形態では、低下した親和性は、約５０％である。一部の実施形態では、低下した親和性は、約６０％である。一部の実施形態では、低下した親和性は、約８０％である。一部の実施形態では、低下した親和性は、約９０％である。一部の実施形態では、低下した親和性は、約９５％である。一部の実施形態では、低下した親和性は１００％である。
【００３９】
一部の実施形態では、野生型ＩＬ−１５ポリペプチドと比較して、ＩＬ−１５受容体α（ＩＬ−１５Ｒα）サブユニットに対するＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートの低下した親和性は、約１分の１、２分の１、３分の１、４分の１、５分の１、６分の１、７分の１、８分の１、９分の１、１０分の１、またはそれ以下である。一部の実施形態では、低下した親和性は、約１分の１である。一部の実施形態では、低下した親和性は、約２分の１である。一部の実施形態では、低下した親和性は、約４分の１である。一部の実施形態では、低下した親和性は、約５分の１である。一部の実施形態では、低下した親和性は、約６分の１である。一部の実施形態では、低下した親和性は、約８分の１である。一部の実施形態では、低下した親和性は、約１０分の１である。
【００４０】
一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、ＩＬ−１５Ｒαと相互作用しない。
【００４１】
一部の実施形態では、野生型ＩＬ−１５ポリペプチドと比較して、ＩＬ−２受容体（ＩＬ−２Ｒ）サブユニットに対するＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートの低下した親和性は、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％である。一部の実施形態では、ＩＬ−２Ｒサブユニットは、ＩＬ−２Ｒβγである。一部の実施形態では、低下した親和性は、約１０％である。一部の実施形態では、低下した親和性は、約２０％である。一部の実施形態では、低下した親和性は、約４０％である。一部の実施形態では、低下した親和性は、約５０％である。一部の実施形態では、低下した親和性は、約６０％である。一部の実施形態では、低下した親和性は、約８０％である。一部の実施形態では、低下した親和性は、約９０％である。一部の実施形態では、低下した親和性は、約９５％である。一部の実施形態では、低下した親和性は１００％である。
【００４２】
一部の実施形態では、野生型ＩＬ−１５ポリペプチドと比較して、ＩＬ−２受容体（ＩＬ−２Ｒ）サブユニットに対するＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートの低下した親和性は、約１分の１、２分の１、３分の１、４分の１、５分の１、６分の１、７分の１、８分の１、９分の１、１０分の１、またはそれ以下である。一部の実施形態では、ＩＬ−２Ｒサブユニットは、ＩＬ−２Ｒβγである。一部の実施形態では、低下した親和性は、約１分の１である。一部の実施形態では、低下した親和性は、約２分の１である。一部の実施形態では、低下した親和性は、約４分の１である。一部の実施形態では、低下した親和性は、約５分の１である。一部の実施形態では、低下した親和性は、約６分の１である。一部の実施形態では、低下した親和性は、約８分の１である。一部の実施形態では、低下した親和性は、約１０分の１である。
【００４３】
一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、ＩＬ−２Ｒαと相互作用しない。
【００４４】
一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、増大した半減期を有する。いくつかの例では、増大した半減期は、野生型ＩＬ−１５タンパク質または野生型ＩＬ−１５コンジュゲートの半減期と比較される。
【００４５】
場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートの増大した半減期は、野生型ＩＬ−１５タンパク質または野生型ＩＬ−１５コンジュゲートの半減期よりも少なくとも９０分、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１８時間、２４時間、３６時間、４８時間、３日、４日、５日、６日、７日、１０日、１２日、１４日、２１日、２８日、３０日、またはそれより長い。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートの増大した半減期は、野生型ＩＬ−１５タンパク質または野生型ＩＬ−１５コンジュゲートの半減期よりも少なくとも９０分またはそれより長い。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートの増大した半減期は、野生型ＩＬ−１５タンパク質または野生型ＩＬ−１５コンジュゲートの半減期よりも少なくとも２時間またはそれより長い。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートの増大した半減期は、野生型ＩＬ−１５タンパク質または野生型ＩＬ−１５コンジュゲートの半減期よりも少なくとも３時間またはそれより長い。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートの増大した半減期は、野生型ＩＬ−１５タンパク質または野生型ＩＬ−１５コンジュゲートの半減期よりも少なくとも４時間またはそれより長い。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートの増大した半減期は、野生型ＩＬ−１５タンパク質または野生型ＩＬ−１５コンジュゲートの半減期よりも少なくとも５時間またはそれより長い。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートの増大した半減期は、野生型ＩＬ−１５タンパク質または野生型ＩＬ−１５コンジュゲートの半減期よりも少なくとも６時間またはそれより長い。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートの増大した半減期は、野生型ＩＬ−１５タンパク質または野生型ＩＬ−１５コンジュゲートの半減期よりも少なくとも１０時間またはそれより長い。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートの増大した半減期は、野生型ＩＬ−１５タンパク質または野生型ＩＬ−１５コンジュゲートの半減期よりも少なくとも１２時間またはそれより長い。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートの増大した半減期は、野生型ＩＬ−１５タンパク質または野生型ＩＬ−１５コンジュゲートの半減期よりも少なくとも１８時間またはそれより長い。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートの増大した半減期は、野生型ＩＬ−１５タンパク質または野生型ＩＬ−１５コンジュゲートの半減期よりも少なくとも２４時間またはそれより長い。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートの増大した半減期は、野生型ＩＬ−１５タンパク質または野生型ＩＬ−１５コンジュゲートの半減期よりも少なくとも３６時間またはそれより長い。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートの増大した半減期は、野生型ＩＬ−１５タンパク質または野生型ＩＬ−１５コンジュゲートの半減期よりも少なくとも４８時間またはそれより長い。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートの増大した半減期は、野生型ＩＬ−１５タンパク質または野生型ＩＬ−１５コンジュゲートの半減期よりも少なくとも３日またはそれより長い。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートの増大した半減期は、野生型ＩＬ−１５タンパク質または野生型ＩＬ−１５コンジュゲートの半減期よりも少なくとも４日またはそれより長い。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートの増大した半減期は、野生型ＩＬ−１５タンパク質または野生型ＩＬ−１５コンジュゲートの半減期よりも少なくとも５日またはそれより長い。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートの増大した半減期は、野生型ＩＬ−１５タンパク質または野生型ＩＬ−１５コンジュゲートの半減期よりも少なくとも６日またはそれより長い。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートの増大した半減期は、野生型ＩＬ−１５タンパク質または野生型ＩＬ−１５コンジュゲートの半減期よりも少なくとも７日またはそれより長い。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートの増大した半減期は、野生型ＩＬ−１５タンパク質または野生型ＩＬ−１５コンジュゲートの半減期よりも少なくとも１０日またはそれより長い。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートの増大した半減期は、野生型ＩＬ−１５タンパク質または野生型ＩＬ−１５コンジュゲートの半減期よりも少なくとも１２日またはそれより長い。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートの増大した半減期は、野生型ＩＬ−１５タンパク質または野生型ＩＬ−１５コンジュゲートの半減期よりも少なくとも１４日またはそれより長い。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートの増大した半減期は、野生型ＩＬ−１５タンパク質または野生型ＩＬ−１５コンジュゲートの半減期よりも少なくとも２１日またはそれより長い。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートの増大した半減期は、野生型ＩＬ−１５タンパク質または野生型ＩＬ−１５コンジュゲートの半減期よりも少なくとも２８日またはそれより長い。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートの増大した半減期は、野生型ＩＬ−１５タンパク質または野生型ＩＬ−１５コンジュゲートの半減期よりも少なくとも３０日またはそれより長い。
【００４６】
場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートの増大した半減期は、野生型ＩＬ−１５タンパク質または野生型ＩＬ−１５コンジュゲートの半減期と比較して、約４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１８時間、２４時間、３６時間、４８時間、３日、４日、５日、６日、７日、１０日、１２日、１４日、２１日、２８日、または３０日である。場合によっては、生物学的に活性なＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、約９０分の増大した半減期を有する。場合によっては、生物学的に活性なＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、約２時間の増大した半減期を有する。場合によっては、生物学的に活性なＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、約３時間の増大した半減期を有する。場合によっては、生物学的に活性なＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、約４時間の増大した半減期を有する。場合によっては、生物学的に活性なＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、約５時間の増大した半減期を有する。場合によっては、生物学的に活性なＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、約６時間の増大した半減期を有する。場合によっては、生物学的に活性なＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、約７時間の増大した半減期を有する。場合によっては、生物学的に活性なＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、約８時間の増大した半減期を有する。場合によっては、生物学的に活性なＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、約９時間の増大した半減期を有する。場合によっては、生物学的に活性なＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、約１０時間の増大した半減期を有する。場合によっては、生物学的に活性なＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、約１１時間の増大した半減期を有する。場合によっては、生物学的に活性なＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、約１２時間の増大した半減期を有する。場合によっては、生物学的に活性なＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、約１８時間の増大した半減期を有する。場合によっては、生物学的に活性なＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、約２４時間の増大した半減期を有する。場合によっては、生物学的に活性なＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、約３６時間の増大した半減期を有する。場合によっては、生物学的に活性なＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、約４８時間の増大した半減期を有する。場合によっては、生物学的に活性なＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、約３日の増大した半減期を有する。場合によっては、生物学的に活性なＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、約４日の増大した半減期を有する。場合によっては、生物学的に活性なＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、約５日の増大した半減期を有する。場合によっては、生物学的に活性なＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、約６日の増大した半減期を有する。場合によっては、生物学的に活性なＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、約７日の増大した半減期を有する。場合によっては、生物学的に活性なＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、約１０日の増大した半減期を有する。場合によっては、生物学的に活性なＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、約１２日の増大した半減期を有する。場合によっては、生物学的に活性なＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、約１４日の増大した半減期を有する。場合によっては、生物学的に活性なＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、約２１日の増大した半減期を有する。場合によっては、生物学的に活性なＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、約２８日の増大した半減期を有する。場合によっては、生物学的に活性なＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートは、約３０日の増大した半減期を有する。
【００４７】
一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、インターロイキン１５受容体βγ（ＩＬ−１５Ｒβγ）シグナル伝達複合体との顕著なシグナル伝達効力を保持する。場合によっては、シグナル伝達効力は、野生型ＩＬ−１５ポリペプチドとＩＬ−１５Ｒβγとの間のシグナル伝達効力と比較される。場合によっては、修飾されたＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒβγ複合体と野生型ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒβγ複合体との間の受容体シグナル伝達効力の相違は、１０００倍未満、５００倍未満、２００倍未満、１００倍未満、５０倍未満、１０倍未満、５倍未満、４倍未満、３倍未満、２倍未満、または１倍未満である。場合によっては、修飾されたＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒβγ複合体と野生型ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒβγ複合体との間の受容体シグナル伝達効力の相違は、１０倍超、２０倍超、３０倍超、４０倍超、５０倍超、１００倍超、２００倍超、３００倍超、４００倍超、または５００倍超である。いくつかの例では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、部分アゴニスト、例えば、受容体（例えば、ＩＬ−１５βγシグナル伝達複合体）を活性化するが、完全アゴニストと比較して受容体において部分的な効能しか有しないアゴニストである。いくつかの例では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、完全アゴニスト、例えば、最大応答で受容体（例えば、ＩＬ−１５βγシグナル伝達複合体）を活性化するアゴニストである。
【００４８】
いくつかの例では、受容体シグナル伝達効力はＥＣ５０値によって測定される。いくつかの例では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、野生型ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒβγ複合体のＥＣ５０値より１０００倍未満、５００倍未満、２００倍未満、１００倍未満、５０倍未満、１０倍未満、５倍未満、４倍未満、３倍未満、２倍未満、または１倍未満の異なるＥＣ５０値を提供する。いくつかの例では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、野生型ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒβγ複合体のＥＣ５０値より１０倍超、２０倍超、３０倍超、４０倍超、５０倍超、１００倍超、２００倍超、３００倍超、４００倍超、または５００倍超の異なるＥＣ５０値を提供する。
【００４９】
いくつかの例では、受容体シグナル伝達効力はＥＤ５０値によって測定される。いくつかの例では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、野生型ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒβγ複合体のＥＣ５０値より１０００倍未満、５００倍未満、２００倍未満、１００倍未満、５０倍未満、１０倍未満、５倍未満、４倍未満、３倍未満、２倍未満、または１倍未満の異なるＥＤ５０値を提供する。いくつかの例では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、野生型ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒβγ複合体のＥＣ５０値より１０倍超、２０倍超、３０倍超、４０倍超、５０倍超、１００倍超、２００倍超、３００倍超、４００倍超、または５００倍超の異なるＥＤ５０値を提供する。
【００５０】
一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、化学、製造および品質管理（ＣＭＣ）段階の間、半減期を延長し、安定性を改善し、精製収率を改善し、純度を改善し、凝集を低下させ、タンパク質フォールディングを改善するため、またはそれらの組み合わせのために修飾される（例えば、ＰＥＧ化される）。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドは、アミノ酸位置Ｎ７１、Ｎ７２、またはＮ７７で修飾され、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドは、ＣＭＣ段階の間、半減期を延長し、安定性を改善し、精製収率を改善し、純度を改善し、凝集を低下させ、タンパク質フォールディングを改善するために、またはそれらの組み合わせのために、残基Ｎ７７において、例えば、ＰＥＧ化を介して修飾される。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドは、Ｎ１、Ｗ２、Ｖ３、Ｎ４、Ｉ６、Ｓ７、Ｄ８、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｅ１３、Ｄ１４、Ｌ１５、Ｑ１７、Ｓ１８、Ｍ１９、Ｈ２０、Ｉ２１、Ｄ２２、Ａ２３、Ｔ２４、Ｌ２５、Ｙ２６、Ｅ２８、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｐ３３、Ｓ３４、Ｃ３５、Ｋ３６、Ｖ３７、Ｔ３８、Ｋ４１、Ｌ４４、Ｅ４６、Ｑ４８、Ｖ４９、Ｓ５１、Ｌ５２、Ｅ５３、Ｓ５４、Ｇ５５、Ｄ５６、Ａ５７、Ｓ５８、Ｈ６０、Ｄ６１、Ｔ６２、Ｖ６３、Ｅ６４、Ｎ６５、Ｉ６７、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｎ７１、Ｎ７２、Ｓ７３、Ｌ７４、Ｓ７５、Ｓ７６、Ｎ７７、Ｇ７８、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、Ｅ８２、Ｓ８３、Ｇ８４、Ｃ８５、Ｋ８６、Ｅ８７、Ｃ８８、Ｅ８９、Ｅ９０、Ｌ９１、Ｅ９２、Ｅ９３、Ｋ９４、Ｎ９５、Ｉ９６、Ｋ９７、Ｅ９８、Ｌ１００、Ｑ１０１、Ｓ１０２、Ｖ１０４、Ｈ１０５、Ｑ１０８、Ｍ１０９、Ｆ１１０、Ｉ１１１、Ｎ１１２、Ｔ１１３、またはＳ１１４位でさらに修飾される。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドは、Ｄ２２、Ａ２３、Ｔ２４、Ｌ２５、Ｙ２６、Ｌ４４、Ｅ４６、Ｑ４８、Ｖ４９、Ｅ５３、Ｅ８９、Ｅ９０、またはＥ９３位でさらに修飾され、修飾はＩＬ−１５Ｒαとの相互作用を損なう。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドは、Ｎ１、Ｎ４、Ｓ７、Ｄ８、Ｋ１１、Ｄ６１、Ｔ６２、Ｅ６４、Ｎ６５、Ｉ６８、Ｌ６９またはＮ７２位でさらに修飾され、修飾はＩＬ−１５Ｒβとの相互作用を損なう。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドは、Ｖ３、Ｉ６、Ｋ１０、Ｅ２８、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｐ３３、Ｓ１０２、Ｖ１０４、Ｈ１０５、Ｑ１０８、Ｍ１０９、Ｉ１１１、Ｎ１１２、Ｔ１１３、またはＳ１１４位でさらに修飾され、修飾はＩＬ−１５Ｒγとの相互作用を損なう。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドは、Ｅ１３、Ｄ１４、Ｌ１５、Ｑ１７、Ｓ１８、Ｍ１９、Ｈ２０、Ｉ２１、Ｓ３４、Ｃ３５、Ｋ３６、Ｖ３７、Ｔ３８、Ｋ４１、Ｌ４４、Ｓ５１、Ｌ５２、Ｓ５４、Ｇ５５、Ｄ５６、Ａ５７、Ｓ５８、Ｈ６０、Ｖ６３、Ｉ６７、Ｎ７１、Ｓ７３、Ｌ７４、Ｓ７５、Ｓ７６、Ｎ７７、Ｇ７８、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、Ｅ８２、Ｓ８３、Ｇ８４、Ｃ８５、Ｋ８６、Ｅ８７、Ｃ８８、Ｌ９１、Ｅ９２、Ｋ９４、Ｎ９５、Ｉ９６、Ｋ９７、Ｅ９８、Ｌ１００、Ｑ１０１、またはＦ１１０位でさらに修飾され、修飾は半減期の延長を改善する。場合によっては、ＩＬ−１５ポリペプチドは、ＩＬ−１５Ｒαとの相互作用を損ない、ＩＬ−１５Ｒβとの相互作用を損ない、ＩＬ−１５Ｒγとの相互作用を損ない、半減期の延長を改善し、またはそれらの組み合わせのために、上記の１つまたはそれ以上の位置でさらに修飾される。
【００５１】
ＩＬ−１５コンジュゲート前駆体
本明細書には、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドを含むＩＬ−１５コンジュゲート前駆体が開示され、１つまたはそれ以上のアミノ酸が野生型アミノ酸から突然変異されている。このような前駆体は、疾患または状態の治療のために、しばしば、本明細書に開示される方法とともに使用される。一部の実施形態では、ＩＬ−１５前駆体はコンジュゲートされない。このような突然変異は、様々に、付加、欠失、または置換を含む。場合によっては、付加は、ＩＬ−１５ポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端、または内部領域における１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれ以上の残基の含有を含む。追加の場合において、欠失は、ＩＬ−１５ポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端、または内部領域からの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれ以上の残基の除去を含む。
【００５２】
天然アミノ酸および非天然アミノ酸
一部の実施形態では、本明細書に開示されるアミノ酸残基（例えば、ＩＬ−１５ポリペプチド内）は、コンジュゲート化部分に結合する（またはそれと反応する）前に、リジン、システイン、ヒスチジン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、スレオニン、またはチロシンに突然変異される。例えば、リジン、システイン、ヒスチジン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、スレオニン、またはチロシンの側鎖は、本明細書に開示されるコンジュゲート化部分に結合することができる。いくつかの例では、アミノ酸残基が、システイン、リジン、またはヒスチジンに突然変異される。場合によっては、アミノ酸残基が、システインに突然変異される。場合によっては、アミノ酸残基は、リジンに突然変異される。場合によっては、アミノ酸残基は、ヒスチジンに突然変異される。場合によっては、アミノ酸残基は、チロシンに突然変異される。場合によっては、アミノ酸残基は、トリプトファンに突然変異される。いくつかの例では、アミノ酸残基は、Ｎ末端またはＣ末端の近位に、Ｎ末端またはＣ末端に、または内部残基位置に位置する。いくつかの例では、アミノ酸残基は、Ｎ末端またはＣ末端残基であり、突然変異は、システインまたはリジンに対する。いくつかの例では、アミノ酸残基は、Ｎ末端残基またはＣ末端残基の近位（例えば、Ｎ末端残基またはＣ末端残基から５０、４０、３０、２０、または１０残基以内）に位置し、突然変異は、システインまたはリジンに対する。
【００５３】
いくつかの例では、アミノ酸残基は、Ｎ末端またはＣ末端残基に付加され、すなわち、ＩＬ−１５ポリペプチドは、Ｎ末端またはＣ末端のいずれかで追加のアミノ酸残基を含み、および追加のアミノ酸残基は、システインまたはリジンである。場合によっては、追加のアミノ酸残基はシステインである。場合によっては、追加のアミノ酸は、コンジュゲート化部分にコンジュゲートされる。
【００５４】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるアミノ酸残基（例えば、ＩＬ−１５ポリペプチド内）は、非天然アミノ酸に突然変異される。一部の実施形態では、非天然アミノ酸は、コンジュゲート化部分とコンジュゲートされない。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＩＬ−１５ポリペプチドは、非天然アミノ酸を含み、ＩＬ−１５は、タンパク質にコンジュゲートされ、結合点は、非天然アミノ酸ではない。
【００５５】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるアミノ酸残基（例えば、ＩＬ−１５ポリペプチド内）は、コンジュゲート化部分に結合する前に、非天然アミノ酸に突然変異される。場合によっては、非天然アミノ酸への突然変異は、免疫系の自己抗原応答を防ぎ、または最小限にする。本明細書で使用される場合、用語「非天然アミノ酸」は、タンパク質に天然に存在する２０個のアミノ酸以外のアミノ酸を指す。非天然アミノ酸の非制限的な例には、ｐ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ヨード−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−メトキシフェニルアラニン、Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン、ｐ−プロパルギルオキシフェニルアラニン、ｐ−プロパルギル−フェニルアラニン、Ｌ−３−（２−ナフチル）アラニン、３−メチル−フェニルアラニン、Ｏ−４−アリル−Ｌ−チロシン、４−プロピル−Ｌ−チロシン、トリ−Ｏ−アセチル−ＧｌｃＮＡｃｐ−セリン、Ｌ−Ｄｏｐａ、フッ素化フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジド−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アシル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ベンゾイル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ボロノフェニルアラニン、Ｏ−プロパルギルチロシン、Ｌ−ホスホセリン、ホスホノセリン、ホスホノチロシン、ｐ−ブロモフェニルアラニン、セレノシステイン、ｐ−アミノ−Ｌ−フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｎ６−［（２−アジドエトキシ）カルボニル］−Ｌ−リジン（ＡｚＫ）、チロシンアミノ酸の非天然類似体；グルタミンアミノ酸の非天然類似体；フェニルアラニンアミノ酸の非天然類似体；セリンアミノ酸の非天然類似体；スレオニンアミノ酸の非天然類似体；アルキル、アリール、アシル、アジド、シアノ、ハロ、ヒドラジン、ヒドラジド、ヒドロキシル、アルケニル、アルキニル、エーテル、チオール、スルホニル、セレノ、エステル、チオ酸、ホウ酸塩、ボロン酸塩、ホスホ、ホスホノ、ホスフィン、複素環、エノン、イミン、アルデヒド、ヒドロキシルアミン、ケト、またはアミノ置換アミノ酸、またはそれらの組み合わせ；光活性化可能な架橋剤を含むアミノ酸；スピン標識アミノ酸；蛍光アミノ酸；金属結合アミノ酸；金属含有アミノ酸；放射性アミノ酸；光ケージ化および／または光異性化可能なアミノ酸；ビオチンもしくはビオチン類似体を含むアミノ酸；ケト含有アミノ酸；ポリエチレングリコールまたはポリエーテルを含むアミノ酸；重原子置換アミノ酸；化学的に開裂可能なもしくは光開裂可能なアミノ酸；伸長した側鎖を有するアミノ酸；毒性基を含むアミノ酸；糖置換アミノ酸；炭素連結した糖含有アミノ酸；酸化還元活性アミノ酸；α−ヒドロキシ含有酸；アミノチオ酸；α，α二置換アミノ酸；β−アミノ酸；プロリンまたはヒスチジン以外の環状アミノ酸、およびフェニルアラニン、チロシンまたはトリプトファン以外の芳香族アミノ酸が含まれる。
【００５６】
一部の実施形態では、非天然アミノ酸は、選択的反応基、または標的ポリペプチドの部位選択的標識のための反応基を含む。いくつかの例では、化学反応は、生体直交性反応（例えば、生体適合性および選択的反応）である。場合によっては、化学は、Ｃｕ（Ｉ）触媒または「銅を含まない」アルキン−アジドトリアゾール生成反応、シュタウジンガーライゲーション、逆電子要求ドディールス・アルダー（ＩＥＤＤＡ）反応、「光クリック」化学反応、またはオレフィンメタセシスおよびＳｕｚｕｋｉ−Ｍｉｙａｕｒａまたはソノガシラ交差カップリングなどの金属媒介プロセスである。
【００５７】
一部の実施形態では、非天然アミノ酸は、光反応性基を含み、例えば、ＵＶとの照射時に架橋する。
【００５８】
一部の実施形態では、非天然アミノ酸は、光ケージ化アミノ酸を含む。
【００５９】
いくつかの例では、非天然アミノ酸は、パラ置換、メタ置換、またはオルト置換アミノ酸誘導体である。
【００６０】
いくつかの例では、非天然アミノ酸は、ｐ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジドメチル−Ｌ−フェニルアラニン（ｐＡＭＦ）、ｐ−ヨード−Ｌ−フェニルアラニン、Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン、ｐ−メトキシフェニルアラニン、ｐ−プロパルギルオキシフェニルアラニン、ｐ−プロパルギル−フェニルアラニン、Ｌ−３−（２−ナフチル）アラニン、３−メチル−フェニルアラニン、Ｏ−４−アリル−Ｌ−チロシン、４−プロピル−Ｌ−チロシン、トリ−Ｏ−アセチル−ＧｌｃＮＡｃｐ−セリン、Ｌ−Ｄｏｐａ、フッ素化フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジド−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アシル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ベンゾイル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−ホスホセリン、ホスホノセリン、ホスホノチロシン、ｐ−ブロモフェニルアラニン、ｐ−アミノ−Ｌ−フェニルアラニン、またはイソプロピル−Ｌ−フェニルアラニンを含む。
【００６１】
場合によっては、非天然アミノ酸は、３−アミノチロシン、３−ニトロチロシン、３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン、または３−ヨードチロシンである。
【００６２】
場合によっては、非天然アミノ酸は、フェニルセレノシステインである。
【００６３】
いくつかの例では、非天然アミノ酸は、ベンゾフェノン、ケトン、ヨウ化物、メトキシ、アセチル、ベンゾイル、またはフェニルアラニン誘導体を含有するアジドである。
【００６４】
いくつかの例では、非天然アミノ酸は、ベンゾフェノン、ケトン、ヨウ化物、メトキシ、アセチル、ベンゾイル、またはアジドを含有するリジン誘導体である。
【００６５】
いくつかの例では、非天然アミノ酸は、芳香族側鎖を含む。
【００６６】
いくつかの例では、非天然アミノ酸は、芳香族側鎖を含まない。
【００６７】
いくつかの例では、非天然アミノ酸は、アジド基を含む。
【００６８】
いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｍｉｃｈａｅｌ−アクセプタ基を含む。いくつかの例では、マイケル−アクセプタ基は、１，２−付加反応を介して共有結合を形成することができる不飽和部分を含む。いくつかの例では、マイケル−アクセプタ基は、電子欠損アルケンまたはアルキンを含む。いくつかの例では、マイケル−アクセプタ基には、限定されないが、α、β不飽和：ケトン、アルデヒド、スルホキシド、スルホン、ニトリル、イミン、または芳香族が含まれる。
【００６９】
いくつかの例では、非天然アミノ酸は、デヒドロアラニンである。
【００７０】
いくつかの例では、非天然アミノ酸は、アルデヒドまたはケトン基を含む。
【００７１】
いくつかの例では、非天然アミノ酸は、アルデヒドまたはケトン基を含むリジン誘導体である。
【００７２】
いくつかの例では、非天然アミノ酸は、ベータ、ガンマ、またはデルタ位置に１つまたはそれ以上のＯ、Ｎ、Ｓｅ、またはＳ原子を含むリジン誘導体である。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、ガンマ位置にＯ、Ｎ、Ｓｅ、またはＳ原子を含むリジン誘導体である。
【００７３】
いくつかの例では、非天然アミノ酸は、イプシロンＮ原子が酸素原子で置換されたリジン誘導体である。
【００７４】
いくつかの例では、非天然アミノ酸は、天然に存在する翻訳後修飾リジンではないリジン誘導体である。
【００７５】
いくつかの例では、非天然アミノ酸は、側鎖を含むアミノ酸であり、アルファ位からの６番目の原子はカルボニル基を含む。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、側鎖を含むアミノ酸であり、アルファ位からの６番目の原子はカルボニル基を含み、アルファ位からの５番目の原子は窒素である。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、側鎖を含むアミノ酸であり、アルファ位置からの７番目の原子は酸素原子である。
【００７６】
いくつかの例では、非天然アミノ酸は、セレンを含むセリン誘導体である。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、セレノセリン（２−アミノ−３−ヒドロセレノプロパン酸）である。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、２−アミノ−３−（（（２−（３−（ベンジルオキシ）−３−オキソプロピル）アミノ）エチル）セラニル）プロパン酸である。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、２−アミノ−３−（フェニルセラニル）プロパン酸である。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、セレンを含み、セレンの酸化は、アルケンを含む非天然アミノ酸の形成をもたらす。
【００７７】
いくつかの例では、非天然アミノ酸は、シクロオクチニル基を含む。
【００７８】
いくつかの例では、非天然アミノ酸は、トランスシクロテニル基を含む。
【００７９】
いくつかの例では、非天然アミノ酸は、ノルボルネニル基を含む。
【００８０】
いくつかの例では、非天然アミノ酸は、シクロプロペニル基を含む。
【００８１】
いくつかの例では、非天然アミノ酸は、ジアジリン基を含む。
【００８２】
いくつかの例では、非天然アミノ酸は、テトラジン基を含む。
【００８３】
いくつかの例では、非天然アミノ酸はリジン誘導体であり、側鎖窒素はカルバミル化される。いくつかの例では、非天然アミノ酸はリジン誘導体であり、側鎖窒素はアシル化される。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、２−アミノ−６−｛［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサン酸である。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、２−アミノ−６−｛［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサン酸である。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−Ｂｏｃ−Ｎ６−メチルリジンである。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−アセチルリジンである。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、ピロリジンである。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−トリフルオロアセチルリジンである。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、２−アミノ−６−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサン酸である。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、２−アミノ−６−｛［（ｐ−ヨードベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサン酸である。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、２−アミノ−６−｛［（ｐ−ニトロベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサン酸である。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−プロリルリジンである。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、２−アミノ−６−｛［（シクロペンチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサン酸である。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（シクロペンタンカルボニル）リジンである。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（テトラヒドロフラン−２−カルボニル）リジンである。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（３−エチニルテトラヒドロフラン−２−カルボニル）リジンである。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（（プロパ−２−ｙｎ−１−イルオキシ）カルボニル）リジンである。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、２−アミノ−６−｛［（２−アジドシクロペンチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサン酸である。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−［（２−アジドエトキシ）カルボニル］リジンである。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、２−アミノ−６−｛［（２−ニトロベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサン酸である。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、２−アミノ−６−｛［（２−シクロオクチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサン酸である。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（２−アミノブタ−３−イノイル）リジンである。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、２−アミノ−６−（（２−アミノブタ−３−イノイル）オキシ）ヘキサン酸である。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（アリルオキシカルボニル）リジンである。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（ブテニル−４−オキシカルボニル）リジンである。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（ペンテニル−５−オキシカルボニル）リジンである。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（（ブタ−３−ｙｎ−１−イルオキシ）カルボニル）−リジンである。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（（（ペンタ−４−ｙｎ−１−イルオキシ）カルボニル）−リジンである。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（チアゾリジン−４−カルボニル）リジンである。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、２−アミノ−８−オキソノナン酸である。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、２−アミノ−８−オキソオクタン酸である。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（２−オキソアセチル）リジンである。
【００８４】
いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−プロピオニルリジンである。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−ブチリルリジンである。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（ブタ−２−エノイル）リジンである。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（（ビシクロ［２．２．１］ヘプタ−５−エン−２−イルオキシ）カルボニル）リジンである。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（（スピロ［２．３］ヘキサ−１−エン−５−イルメトキシ）カルボニル）リジンである。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（（（４−（１−（トリフルオロメチル）シクロプロパ−２−エン−１−イル）ベンジル）オキシ）カルボニル）リジンである。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（（ビシクロ［２．２．１］ヘプタ−５−エン−２−イルメトキシ）カルボニル）リジンである。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、システイニルリジンである。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（（１−（６−ニトロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）エトキシ）カルボニル）リジンである。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（（２−（３−メチル−３Ｈ−ジアジリン−３−イル）エトキシ）カルボニル）リジンである。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（（３−（３−メチル−３Ｈ−ジアジリン−３−イル）プロポキシ）カルボニル）リジンである。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（（メタニトロベニルオキシ）Ｎ６−メチルカルボニル）リジンである。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（（ビシクロ［６．１．０］ノン４−ｙｎ−９−イルメトキシ）カルボニル）−リジンである。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（（シクロヘプト−３−エン−１−イルオキシ）カルボニル）−Ｌ−リジンである。
【００８５】
いくつかの例では、非天然アミノ酸は、２−アミノ−３−（（（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）メチル）セラニル）プロパン酸である。
【００８６】
一部の実施形態では、非天然アミノ酸は、別の用途で使用するアンバー、オパール、またはオーカー終止コドンによってＩＬ−１５ポリペプチドに組み込まれる。
【００８７】
一部の実施形態では、非天然アミノ酸は、４塩基コドンによってＩＬ−１５ポリペプチドに組み込まれる。
【００８８】
一部の実施形態では、非天然アミノ酸は、別の用途で使用する希少センスコドンまたは別の用途で使用するコモンセンスコドンによってＩＬ−１５ポリペプチドに組み込まれる。
【００８９】
一部の実施形態では、非天然アミノ酸は、非天然核酸を含む合成コドンによってＩＬ−１５ポリペプチドに組み込まれる。
【００９０】
いくつかの例では、非天然アミノ酸は、直交する修飾されたシンテターゼ／ｔＲＮＡ対によってＩＬ−１５に組み込まれる。このような直交した対は、ａ）他の内因性アミノ酸の非天然ｔＲＮＡ上への付加、およびｂ）非天然アミノ酸の他の内因性ｔＲＮＡ上への付加を最小限にしながら、非天然ｔＲＮＡに非天然アミノ酸を付加することができる非天然シンテターゼを含む。このような直交した対は、内因性シンテターゼによって他の内因性アミノ酸を付加されることを避けながら、非天然シンテターゼによる付加を受けることが可能なｔＲＮＡを含む。一部の実施形態では、このような対は、細菌、酵母、古細菌、またはヒト供給源などの種々の生物から同定される。一部の実施形態では、直交性シンテターゼ／ｔＲＮＡ対は、単一の生物由来の成分を含む。一部の実施形態では、直交性シンテターゼ／ｔＲＮＡ対は、２つの異なる生物由来の成分を含む。一部の実施形態では、直交性シンテターゼ／ｔＲＮＡ対、修飾前に２つの異なるアミノ酸の翻訳を促進する成分を含む。一部の実施形態では、直交性シンテターゼは、修飾されたアラニンシンテターゼである。一部の実施形態では、直交性シンテターゼは、修飾されたアルギニンシンテターゼである。一部の実施形態では、直交性シンテターゼは、修飾されたアスパラギンシンテターゼである。一部の実施形態では、直交性シンテターゼは、修飾されたアスパラギン酸シンテターゼである。一部の実施形態では、直交性シンテターゼは、修飾されたシステインシンテターゼである。一部の実施形態では、直交性シンテターゼは、修飾されたグルタミンシンテターゼである。一部の実施形態では、直交性シンテターゼは、修飾されたグルタミン酸シンテターゼである。一部の実施形態では、直交性シンテターゼは、修飾されたアラニングリジンである。一部の実施形態では、直交性シンテターゼは、修飾されたヒスチジンシンテターゼである。一部の実施形態では、直交性シンテターゼは、修飾されたロイシンシンテターゼである。一部の実施形態では、直交性シンテターゼは、修飾されたイソロイシンシンテターゼである。一部の実施形態では、直交性シンテターゼは、修飾されたリジンシンテターゼである。一部の実施形態では、直交性シンテターゼは、修飾されたメチオニンシンテターゼである。一部の実施形態では、直交性シンテターゼは、修飾されたフェニルアラニンシンテターゼである。一部の実施形態では、直交性シンテターゼは、修飾されたプロリンシンテターゼである。一部の実施形態では、直交性シンテターゼは、修飾されたセリンシンテターゼである。一部の実施形態では、直交性シンテターゼは、修飾されたスレオニンシンテターゼである。一部の実施形態では、直交性シンテターゼは、修飾されたトリプトファンシンテターゼである。一部の実施形態では、直交性シンテターゼは、修飾されたチロシンシンテターゼである。一部の実施形態では、直交性シンテターゼは、修飾されたバリンシンテターゼである。一部の実施形態では、直交性シンテターゼは、修飾されたホスホセリンシンテターゼである。一部の実施形態では、直交性ｔＲＮＡは、修飾されたアラニンｔＲＮＡである。一部の実施形態では、直交性ＲＮＡは、修飾されたアルギニンｔＲＮＡである。一部の実施形態では、直交ｔＲＮＡは、修飾されたアスパラギンｔＲＮＡである。一部の実施形態では、直交性ｔＲＮＡは、修飾されたアスパラギン酸ｔＲＮＡである。一部の実施形態では、直交性ｔＲＮＡは、修飾されたシステインｔＲＮＡである。一部の実施形態では、直交性ｔＲＮＡは、修飾されたグルタミンｔＲＮＡである。一部の実施形態では、直交性ｔＲＮＡは、修飾されたグルタミン酸ｔＲＮＡである。一部の実施形態では、直交性ｔＲＮＡは、修飾されたアラニングリジンである。一部の実施形態では、直交性ｔＲＮＡは、修飾されたヒスチジンｔＲＮＡである。一部の実施形態では、直交性ｔＲＮＡは、修飾されたロイシンｔＲＮＡである。一部の実施形態では、直交性ｔＲＮＡは、修飾されたイソロイシンｔＲＮＡである。一部の実施形態では、直交性ｔＲＮＡは、修飾されたリジンｔＲＮＡである。一部の実施形態では、直交性ｔＲＮＡは、修飾されたメチオニンｔＲＮＡである。一部の実施形態では、直交性ｔＲＮＡは、修飾されたフェニルアラニンｔＲＮＡである。一部の実施形態では、直交性ｔＲＮＡは、修飾されたプロリンｔＲＮＡである。一部の実施形態では、直交性ｔＲＮＡは、修飾されたセリンｔＲＮＡである。一部の実施形態では、直交性ｔＲＮＡは、修飾されたスレオニンｔＲＮＡである。一部の実施形態では、直交性ｔＲＮＡは、修飾されたトリプトファンｔＲＮＡである。一部の実施形態では、直交性ｔＲＮＡは、修飾されたチロシンｔＲＮＡである。一部の実施形態では、直交性ｔＲＮＡは、修飾されたバリンｔＲＮＡである。一部の実施形態では、直交性ｔＲＮＡは、修飾されたホスホセリンｔＲＮＡである。
【００９１】
一部の実施形態では、非天然アミノ酸は、アミノアシル（ａａＲＳまたはＲＳ）−ｔＲＮＡシンテターゼ−ｔＲＮＡ対によってＩＬ−１５ポリペプチドに組み込まれる。例示的なａａＲＳ−ｔＲＮＡ対には、限定されないが、メタノカルドコックス・ヤンナスキイ（Ｍｅｔｈａｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｊａｎｎａｓｃｈｉｉ）（Ｍｊ−Ｔｙｒ）ａＲＳ／ｔＲＮＡ対、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＴｙｒＲＳ（Ｅｃ−Ｔｙｒ）／バチルス・ステアロサーモフィラス（Ｂ．ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）ｔＲＮＡＣＵＡ対、大腸菌ＬｅｕＲＳ（Ｅｃ−Ｌｅｕ）／バチルス・ステアロサーモフィラスｔＲＮＡＣＵＡ対が含まれる。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｍｊ−ＴｙｒＲＳ／ｔＲＮＡ対によってサイトカイン（例えば、ＩＬポリペプチド）に組み込まれる。Ｍｊ−ＴｙｒＲＳ／ｔＲＮＡ対によって組み込むことができる例示的なＵＡＡとしては、限定されないが、パラ置換フェニルアラニン誘導体、例えば、ｐ−アミノフェニルアラニンおよびｐ−メトイフェニルアラニン；メタ置換チロシン誘導体、例えば、３−アミノチロシン、３−ニトロチロシン、３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン、および３−ヨードチロシン；フェニルセレノシステイン；ｐ−ボロノフェニルアラニン；およびｏ−ニトロベンジルチロシンが挙げられる。
【００９２】
いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｅｃ−Ｔｙｒ／ｔＲＮＡＣＵＡまたはＥｃ−Ｌｅｕ／ｔＲＮＡＣＵＡ対によってＩＬ−１５ポリペプチドに組み込まれる。Ｅｃ−Ｔｙｒ／ｔＲＮＡＣＵＡまたはＥｃ−Ｌｅｕ／ｔＲＮＡＣＵＡ対によって組み込まれ得る例示的なＵＡＡとしては、限定されないが、ベンゾフェノン、ケトン、ヨウ化物、またはアジド置換基を含むフェニルアラニン誘導体；Ｏ−プロパルギルチロシン；α−アミノカプリル酸、Ｏ−メチルチロシン、Ｏ−ニトロベンジルシステイン；および３−（ナフタレン−２−イルアミノ）−２−アミノ−プロパン酸が挙げられる。
【００９３】
いくつかの例では、非天然アミノ酸は、ピロリシルｔＲＮＡ対によってＩＬ−１５ポリペプチドに組み込まれる。場合によっては、ＰｙｌＲＳは、古細菌、例えば、メタン生成古細菌から得られる。場合によっては、ＰｙｌＲＳは、メタノサルキナ・バルケリ（Ｍｅｔｈａｎｏｓａｒｃｉｎａ  ｂａｒｋｅｒｉ）、メタノサルキナ・マゼイ（Ｍｅｔｈａｎｏｓａｒｃｉｎａ  ｍａｚｅｉ）、またはメタノサルキナ・アセチボランス（Ｍｅｔｈａｎｏｓａｒｃｉｎａ  ａｃｅｔｉｖｏｒａｎｓ）から得られる。ピロリシルｔＲＮＡ対によって組み込まれ得る例示的なＵＡＡとしては、限定されないが、アミドおよびカルバメート置換リジン、例えば、２−アミノ−６−（（（Ｒ）−テトラヒドロフラン−２−カルボキサミド）ヘキサン酸、Ｎ−ε−Ｄ−プロルイル−Ｌ−リジンおよびＮ−ε−シクロペンチルオキシカルボニル−Ｌ−リジン；Ｎ−ε−アクリロイル−Ｌ−リジン；Ｎ−ε−［（１−（６−ニトロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）エトキシ）カルボニル］−Ｌ−リジン；およびＮ−ε−（１−メチルシクロプロ−２−エンカルボキサミド）リジンが挙げられる。
【００９４】
いくつかの例では、米国特許第９，９８８，６１９号および米国特許第９，９３８，５１６号に開示されるシンテターゼによって、非天然アミノ酸はＩＬ−１５ポリペプチドに組み込まれる。このようなシンテターゼによって組込まれる例示的なＵＡＡとしては、パラ−メチルアジド−Ｌ−フェニルアラニン、アラルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアラルキル非天然アミノ酸、および他が挙げられる。一部の実施形態では、このようなＵＡＡは、ピリジル、ピラジニル、ピラゾリル、トリアゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、チオフェニル、または他の複素環を含む。一部の実施形態におけるこのようなアミノ酸は、アジド、テトラジン、または水溶性部分などのカップリングパートナーへのコンジュゲーションが可能な他の化学基を含む。一部の実施形態では、このようなシンテターゼを発現させ、使用して、インビボでＵＡＡをサイトカインに組み込む。一部の実施形態では、このようなシンテターゼを使用して、無細胞翻訳系を用いてＵＡＡをサイトカインに組み込む。
【００９５】
いくつかの例では、非天然アミノ酸は、天然に存在するシンテターゼによってＩＬ−１５ポリペプチドに組み込まれる。一部の実施形態では、非天然アミノ酸は、１つまたはそれ以上のアミノ酸に栄養要求性である生物によってサイトカインに組み込まれる。一部の実施形態では、栄養要求性アミノ酸に対応するシンテターゼは、対応するｔＲＮＡに非天然アミノ酸を付加することができる。一部の実施形態では、非天然アミノ酸は、セレノシステイン、またはその誘導体である。一部の実施形態では、非天然アミノ酸は、セレノメチオニン、またはその誘導体である。一部の実施形態では、非天然アミノ酸は、芳香族アミノ酸であり、芳香族アミノ酸は、ヨウ化物などのハロゲン化アリールを含む。実施形態では、非天然アミノ酸は、構造的に要求性栄養素アミノ酸に類似している。
【００９６】
いくつかの例では、非天然アミノ酸は、図１に示された非天然アミノ酸を含む。
【００９７】
いくつかの例では、非天然アミノ酸は、リジンもしくはフェニルアラニン誘導体または類似体を含む。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、リジン誘導体またはリジン類似体を含む。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、ピロリジン（Ｐｙｌ）を含む。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、フェニルアラニン誘導体またはフェニルアラニン類似体を含む。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、Ｗａｎら、「Ｐｙｒｒｏｌｙｓｙｌ−ｔＲＮＡ  ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ：  ａｎ  ｏｒｄｉｎａｒｙ  ｅｎｚｙｍｅ  ｂｕｔ  ａｎ  ｏｕｔｓｔａｎｄｉｎｇ  ｇｅｎｅｔｉｃ  ｃｏｄｅ  ｅｘｐａｎｓｉｏｎ  ｔｏｏｌ」、Ｂｉｏｃｈｅｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｅｔａ  １８４４巻（６号）：１０５９〜４０７０頁（２０１４年）に記載される非天然アミノ酸である。いくつかの例では、非天然アミノ酸は、図２（例えば、図２Ａおよび図２Ｂ）に示される非天然アミノ酸を含む。
【００９８】
一部の実施形態では、非天然アミノ酸は、図３Ａ〜図３Ｄに示される非天然アミノ酸を含む（Ｄｕｍａｓら、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、２０１５年、６巻、５０〜６９頁から採用される）。
【００９９】
一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドに組み込まれた非天然アミノ酸は、米国特許第９，８４０，４９３号；米国特許第９，６８２，９３４号；米国特許出願公開第２０１７／０２６０１３７号；米国特許第９，９３８，５１６号；または米国特許出願公開第２０１８／００８６７３４号に開示される。このようなシンテターゼによって組み込まれる例示的なＵＡＡとしては、パラ−メチルアジド−Ｌ−フェニルアラニン、アラルキル、ヘテロシクリル、およびヘテロアラルキル、およびリジン誘導体の非天然アミノ酸が挙げられる。一部の実施形態では、このようなＵＡＡは、ピリジル、ピラジニル、ピラゾリル、トリアゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、チオフェニル、または他の複素環を含む。一部の実施形態におけるこのようなアミノ酸は、アジド、テトラジン、または水溶性部分などのカップリングパートナーへのコンジュゲーションが可能な他の化学基を含む。一部の実施形態では、ＵＡＡは、アルキルリンカーを介して芳香族部分に結合したアジドを含む。一部の実施形態では、アルキルリンカーは、Ｃ１−Ｃ１０リンカーである。一部の実施形態では、ＵＡＡは、アルキルリンカーを介して芳香族部分に結合したテトラジンを含む。一部の実施形態では、ＵＡＡは、アミノ基を介して芳香族部分に結合したテトラジンを含む。一部の実施形態では、ＵＡＡは、アルキルアミノ基を介して芳香族部分に結合したテトラジンを含む。一部の実施形態では、ＵＡＡは、アルキル鎖を介してアミノ酸側鎖の末端窒素（例えば、リジン誘導体のＮ６、またはより短いアルキル側鎖を含む誘導体のＮ５、Ｎ４、もしくはＮ３）に結合したアジドを含む。一部の実施形態では、ＵＡＡは、アルキル鎖を介してアミノ酸側鎖の末端窒素に結合したテトラジンを含む。一部の実施形態では、ＵＡＡは、アルキルリンカーを介してアミドに結合したアジドまたはテトラジンを含む。一部の実施形態では、ＵＡＡは、３−アミノアラニン、セリン、リジン、またはそれらの誘導体のアジドまたはテトラジン含有カルバメートまたはアミドである。一部の実施形態では、このようなＵＡＡは、インビボでサイトカインに組み込まれる。一部の実施形態では、このようなＵＡＡは、無細胞系においてサイトカインに組み込まれる。
【０１００】
コンジュゲート化部分
特定の実施形態では、本明細書には、上述の１つまたはそれ以上の修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドに結合されるコンジュゲート化部分が開示される。一部の実施形態では、コンジュゲート化部分は、ＩＬ−１５とその受容体との相互作用を撹乱する分子である。一部の実施形態では、コンジュゲート化部分は、ＩＬ−１５に結合した場合、ＩＬ−１５コンジュゲートが免疫応答を調節することを可能にする任意の分子である。一部の実施形態では、コンジュゲート化部分は、共有結合を介してＩＬ−１５に結合される。いくつかの例では、本明細書に記載されるＩＬ−１５は、トリアゾール基を有するコンジュゲート化部分に結合される。いくつかの例では、本明細書に記載されるＩＬ−１５は、ジヒドロピリダジンまたはピリダジン基を有するコンジュゲート化部分に結合される。いくつかの例では、コンジュゲート化部分は、水溶性ポリマーを含む。他の例では、コンジュゲート化部分は、タンパク質またはその結合断片を含む。追加の例において、コンジュゲート化部分はペプチドを含む。追加の例において、コンジュゲート化部分は核酸を含む。追加の例において、コンジュゲート化部分は小分子を含む。追加の例において、コンジュゲート化部分は、バイオコンジュゲート（例えば、ＴＬＲアゴニスト、例えばＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、もしくはＴＬＲ９アゴニスト；または合成リガンド、例えばＰａｍ３Ｃｙｓ、ＣＦＡ、ＭＡＬＰ２、Ｐａｍ２Ｃｙｓ、ＦＳＬ−１、Ｈｉｂ−ＯＭＰＣ、ポリ  Ｉ：Ｃ、ポリＡ：Ｕ、ＡＧＰ、ＭＰＬ  Ａ、ＲＣ−５２９、ＭＤＦ２β、ＣＦＡ、もしくはフラジェリン）を含む。場合によっては、コンジュゲート化部分は、血清半減期を増加させ、および／または安定性を改善する。場合によっては、コンジュゲート化部分は、１つまたはそれ以上のサイトカイン受容体ドメインまたはサブユニットとのサイトカイン相互作用を減少させる。追加の場合において、コンジュゲート化部分は、ＩＬ−１５と、１つまたはそれ以上のＩＬ−１５ドメインもしくはサブユニットと、またはその同族受容体（単数または複数）との相互作用を遮断する。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１５コンジュゲートは、複数のコンジュゲート化部分を含む。一部の実施形態では、コンジュゲート化部分は、ＩＬ−１５ポリペプチド中の非天然または天然アミノ酸に結合される。一部の実施形態では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、天然アミノ酸に結合したコンジュゲート化部分を含む。一部の実施形態では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、サイトカインペプチド中の非天然アミノ酸に結合される。一部の実施形態では、コンジュゲート化部分は、ＩＬ−１５ポリペプチドのＮまたはＣ末端アミノ酸に結合される。種々の組み合わせ部位が本明細書に開示されており、例えば、第１のコンジュゲート化部分はＩＬ−１５ポリペプチド中の非天然または天然アミノ酸に結合され、第２のコンジュゲート化部分はＩＬ−１５ポリペプチドのＮまたはＣ末端アミノ酸に結合される。一部の実施形態では、単一のコンジュゲート化部分は、ＩＬ−１５ポリペプチドの複数の残基（例えば、ステープル）に結合される。一部の実施形態では、コンジュゲート化部分は、ＩＬ−１５ポリペプチドのＮとＣ末端アミノ酸の両方に結合される。
【０１０１】
水溶性ポリマー
一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲート化部分は、水溶性ポリマーである。一部の実施形態では、水溶性ポリマーは、非ペプチド性、非毒性、および生体適合性である。本明細書で使用される場合、物質は、生体組織（例えば、患者への投与）に関連する物質の単独でまたは他の物質（例えば、ＩＬ−１５部分などの活性剤）との使用に関連付けられる有益な効果が、臨床医、例えば、医師によって評価されるような任意の有害な効果を上回る場合、生体適合性とみなされる。一部の実施形態では、水溶性ポリマーは、さらに非免疫原性である。一部の実施形態では、物質は、インビボでの物質の意図された使用が望ましくない免疫応答（例えば、抗体の形成）を生じない場合、または免疫応答が生じた場合、このような応答が臨床医、例えば、医師、毒性学者、または臨床開発専門家によって評価されるように、臨床的に顕著または重要であるとみなされない場合、非免疫原性とみなされる。
【０１０２】
一部の実施形態では、水溶性ポリマーは、約２〜約３００末端を有するものとして特徴付けられる。例示的な水溶性ポリマーとしては、限定されないが、ポリ（アルキレングリコール）、例えば、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）、ポリ（プロピレングリコール）（「ＰＰＧ」）、エチレングリコールとプロピレングリコール等のコポリマー、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）、多糖、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（「ＰＯＺ」）（国際公開ＷＯ２００８／１０６１８６号に記載される）、ポリ（Ｎ−アクリロイルモルホリン）、および前述のいずれかの組み合わせが含まれる。
【０１０３】
一部の実施形態では、水溶性ポリマーは、特定の構造に限定されない。一部の実施形態では、水溶性ポリマーは、直鎖状（例えば、末端がキャップされた、例えば、アルコキシＰＥＧまたは二官能性ＰＥＧ）、分枝状または多腕状（例えば、フォーク状ＰＥＧ、またはポリオールコアに結合したＰＥＧ）、樹枝状（または星状）構造であり、各々は、１つまたはそれ以上の分解性連結を有するか否かを問わない。さらに、水溶性ポリマーの内部構造は、任意の数の異なる繰り返しパターンで組織化することができ、ホモポリマー、交互共重合体、ランダム共重合体、ブロック共重合体、交互トリポリマー、ランダムトリポリマー、およびブロックトリポリマーからなる群から選択することができる。
【０１０４】
一部の実施形態では、ＩＬ−２１コンジュゲート中の水溶性ポリマーの重量−平均分子量は、約１００ダルトン〜約１５０，０００ダルトンである。例示的な範囲としては、例えば、５，０００ダルトン〜約１００，０００ダルトンの範囲、約６，０００ダルトン〜約９，０００ダルトンの範囲、約１０，０００ダルトン〜約８５，０００ダルトンの範囲、約１０，０００ダルトン〜約８５，０００ダルトンの範囲、約２０，０００ダルトン〜約８５，０００ダルトンの範囲、約５３，０００ダルトン〜約８５，０００ダルトンの範囲、約２５，０００ダルトン〜約１２０，０００ダルトンの範囲、約２９，０００ダルトン〜ら約１２０，０００ダルトンの範囲、約３５，０００ダルトン〜約１２０，０００ダルトンの範囲、および約４０，０００ダルトン〜約１２０，０００ダルトンの範囲の重量−平均分子量が挙げられる。
【０１０５】
水溶性ポリマーに関する例示的な重量−平均分子量には、約１００ダルトン、約２００ダルトン、約３００ダルトン、約４００ダルトン、約５００ダルトン、約６００ダルトン、約７００ダルトン、約７５０ダルトン、約８００ダルトン、約９００ダルトン、約１，０００ダルトン、約１，５００ダルトン、約２，０００ダルトン、約２，２００ダルトン、約２，５００ダルトン、約３，０００ダルトン、約４，０００ダルトン、約４，４００ダルトン、約４，５００ダルトン、約５，０００ダルトン、約５，５００ダルトン、約６，０００ダルトン、約７，０００ダルトン、約７，５００ダルトン、約８，０００ダルトン、約９，０００ダルトン、約１０，０００ダルトン、約１１，０００ダルトン、約１２，０００ダルトン、約１３，０００ダルトン、約１４，０００ダルトン、約１５，０００ダルトン、約２０，０００ダルトン、約２２，５００ダルトン、約２５，０００ダルトン、約３０，０００ダルトン、約３５，０００ダルトン、約４０，０００ダルトン、約４５，０００ダルトン、約５０，０００ダルトン、約５５，０００ダルトン、約６０，０００ダルトン、約６５，０００ダルトン、約７０，０００ダルトン、および約７５，０００ダルトンが含まれる。前述のいずれかの総分子量を有する水溶性ポリマー（例えば、２つの２０，０００ダルトンのポリマーで構成される分岐状４０，０００ダルトン水溶性ポリマー）の分岐状バージョンもまた使用することができる。１つまたはそれ以上の実施形態では、コンジュゲートは、約６，０００ダルトン未満の重量平均分子量を有するＰＥＧと直接的または間接的に結合した任意のＰＥＧ部分を有しない。
【０１０６】
ＰＥＧは、典型的には、多数の（ＯＣＨ２ＣＨ２）モノマー［または（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）モノマー、ＰＥＧがどのように定義されるかに応じて］を含む。本明細書で使用される場合、繰り返し単位の数は、「（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ」の下付き文字「ｎ」によって同定される。したがって、（ｎ）の値は、典型的には、以下の範囲：２〜約３４００、約１００〜約２３００、約１００〜約２２７０、約１３６〜約２０５０、約２２５〜約１９３０、約４５０〜約１９３０、約１２００〜約１９３０、約５６８〜約２７２７、約６６０〜約２７３０、約７９５〜約２７３０、約９０９〜約２７３０、および約１，２００〜約１，９００の１つまたはそれ以上に含まれる。分子量が公知である任意の所与のポリマーについて、ポリマーの総重量−平均分子量を繰り返しモノマーの分子量で割ることによって、繰り返し単位の数（すなわち、「ｎ」）を決定することが可能である。
【０１０７】
一部の実施形態では、水溶性ポリマーは、末端キャップポリマー、すなわち、比較的不活性な基、例えば、低級Ｃ１−６アルコキシ基、またはヒドロキシル基でキャップされた少なくとも１つの末端を有するポリマーである。ポリマーがＰＥＧである場合、例えば、メトキシ−ＰＥＧ（一般的には、ｍＰＥＧと称される）を使用することができ、これは、ポリマーの一方の末端がメトキシ（−ＯＣＨ３）基であるＰＥＧの直鎖状形態であり、他方の末端は、ヒドロキシル、または場合により化学的に修飾される他の官能基である。
【０１０８】
一部の実施形態では、例示的な水溶性ポリマーとしては、限定されないが、Ｑｕａｎｔａ  Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ，Ｌｔｄ．からの直鎖状または分枝状の別個のＰＥＧ（ｄＰＥＧ）；Ｎｅｋｔａｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓからの直鎖状、分枝状またはフォーク状のＰＥＧ；ＪｅｎＫｅｍ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙからの直鎖状、分枝状またはＹ字のＰＥＧ誘導体が挙げられる。
【０１０９】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１５ポリペプチドは、ポリ（アルキレングリコール）、例えば、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）、ポリ（プロピレングリコール）（「ＰＰＧ」）、エチレングリコールとプロピレングリコール等のコポリマー、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）、多糖、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（「ＰＯＺ」）、ポリ（Ｎ−アクリロイルモルホリン）、およびそれらの組み合わせから選択される水溶性ポリマーにコンジュゲートされる。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、ＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ化された）にコンジュゲートされる。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、ＰＰＧにコンジュゲートされる。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、ＰＯＺにコンジュゲートされる。いくつかの例では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、ＰＶＰにコンジュゲートされる。
【０１１０】
いくつかの例では、水溶性ポリマーは、ポリグリセリン（ＰＧ）を含む。場合によっては、ポリグリセリンは、高分岐状ＰＧ（ＨＰＧ）（例えば、Ｉｍｒａｎら、「Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｈｉｇｈ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｗｅｉｇｈｔ  ｌｉｎｅａｒ  ａｎｄ  ｂｒａｎｃｈｅｄ  ｐｏｌｙｇｌｙｃｅｒｏｌｓ  ｏｎ  ｔｈｅｉｒ  ｂｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  ｂｉｏｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ」、Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ、３３巻：９１３５〜９１４７頁（２０１２年）に記載される）である。他の場合には、ポリグリセリンは直鎖状ＰＧ（ＬＰＧ）である。追加の場合において、ポリグリセリンは、中機能性ＰＧ、直鎖状−ブロック−超分岐状ＰＧ（例えば、Ｗｕｒｍら、「Ｓｑｕａｒｉｃ  ａｃｉｄ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ａ  ｌｉｂｒａｒｙ  ｏｆ  ｌｉｎｅａｒ  ａｎｄ  ｈｙｐｅｒｂｒａｎｃｈｅｄ  ｐｏｌｙ（ｇｌｙｃｅｒｏｌ）−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ」、Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ、１３巻：１１６１〜１１７１頁（２０１２年）に記載される）、または側鎖機能性ＰＧ（例えば、Ｌｉら、「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｌｉｎｅａｒ  ｐｏｌｙｅｔｈｅｒ  ｐｏｌｙｏｌ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ａｓ  ｎｅｗ  ｍａｔｅｒｉａｌｓ  ｆｏｒ  ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ」、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．、２０巻：７８０〜７８９頁（２００９年）に記載される）である。
【０１１１】
いくつかの例では、本明細書に記載されるＩＬ−１５ポリペプチドは、ＰＧ、例えば、ＨＰＧ、ＬＰＧ、中機能性ＰＧ、直鎖状−ブロック−超分岐状ＰＧ、または側鎖機能性ＰＧにコンジュゲートされる。
【０１１２】
一部の実施形態では、水溶性ポリマーは、分解性の合成ＰＥＧ代替物である。代表的な分解性の合成ＰＥＧ代替物としては、限定されないが、ポリ［オリゴ（エチレングリコール）メチルメタクリレート］（ＰＯＥＧＭＡ）；テレケリックまたは二末端官能化ＰＥＧベースのマクロモノマーの重合によって生じる骨格修飾されたＰＥＧ誘導体；ポリ［（エチレンオキシド）−ｃｏ−（メチレンエチレンオキシド）］［Ｐ（ＥＯ−ｃｏ−ＭＥＯ）］などの分解性連結を含むコモノマーを含むＰＥＧ誘導体、ＯＥＧＭＡと共重合された５，６−ベンゾ−２−メチレン−１，３−ジオキセパン（ＢＭＤＯ）、２−メチレン−１，３−ジオキセパン（ＭＤＯ）、および２−メチレン−４−フェニル−１，３−ジオキソラン（ＭＰＤＬ）などの環状ケテンアセタール；ポリ−（ε−カプロラクトン）−グラフト−ポリ（エチレンオキシド）（ＰＣＬ−ｇ−ＰＥＯ）が挙げられる。
【０１１３】
いくつかの例では、本明細書に記載されるＩＬ−１５ポリペプチドは、分解性の合成ＰＥＧ代替物、例えば、ＰＯＥＧＭ；テレケリックまたは二末端官能化ＰＥＧベースのマクロモノマーの重合により生じる骨格修飾されたＰＥＧ誘導体；Ｐ（ＥＯ−ｃｏ−ＭＥＯ）；ＯＥＧＭＡと共重合されるＢＭＤＯ、ＭＤＯおよびＭＰＤＬなどの環状ケテンアセタール；またはＰＣＬ−ｇ−ＰＥＯにコンジュゲートされる。
【０１１４】
一部の実施形態では、水溶性ポリマーは、ポリ（双性イオン）を含む。例示的なポリ（双性イオン）としては、限定されないが、ポリ（スルホベタインメタクリレート）（ＰＳＢＭＡ）、ポリ（カルボキシベタインメタクリレート）（ＰＣＢＭＡ）、およびポリ（２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン）（ＰＭＰＣ）が挙げられる。いくつかの例では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、ＰＳＢＭＡ、ＰＣＢＭＡ、またはＰＭＰＣなどのポリ（双性イオン）にコンジュゲートされる。
【０１１５】
一部の実施形態では、水溶性ポリマーは、ポリカーボネートを含む。例示的なポリカーボンとしては、限定されないが、ペンタフルオロフェニル５−メチル−２−オキソ−１，３−ジオキサン−５−カルボン酸塩（ＭＴＣ−ＯＣ６Ｆ５）が挙げられる。いくつかの例では、本明細書に記載されるＩＬ−１５ポリペプチドは、ＭＴＣ−ＯＣ６Ｆ５などのポリカーボネートにコンジュゲートされる。
【０１１６】
一部の実施形態では、水溶性ポリマーには、ポリマーハイブリッド、例えば、ポリカーボネート／ＰＥＧポリマーハイブリッド、ペプチド／タンパク質−ポリマーコンジュゲート、またはヒドロキシル含有および／もしくは双性イオン誘導体化ポリマー（例えば、ヒドロキシル含有および／もしくは双性イオン誘導体化ＰＥＧポリマー）が含まれる。いくつかの例では、本明細書に記載されるＩＬ−１５ポリペプチドは、ポリマーハイブリッド、例えば、ポリカーボネート／ＰＥＧポリマーハイブリッド、ペプチド／タンパク質−ポリマーコンジュゲート、またはヒドロキシル含有および／もしくは双性イオン誘導体化ポリマー（例えば、ヒドロキシル含有および／もしくは双性イオン誘導体化ＰＥＧポリマー）にコンジュゲートされる。
【０１１７】
一部の実施形態では、水溶性ポリマーは、多糖を含む。例示的な多糖には、限定されないが、デキストラン、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、ヒアルロン酸（ＨＡ）、アミロース、ヘパリン、ヘパラン硫酸（ＨＳ）、デキストリン、またはヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）が挙げられる。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、デキストランにコンジュゲートされる。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、ＰＳＡにコンジュゲートされる。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、ＨＡにコンジュゲートされる。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、アミロースにコンジュゲートされる。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、ヘパリンにコンジュゲートされる。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、ＨＳにコンジュゲートされる。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、デキストリンにコンジュゲートされる。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、ＨＥＳにコンジュゲートされる。
【０１１８】
一部の実施形態では、水溶性ポリマーは、グリカンを含む。例示的な種類のグリカンとしては、Ｎ−連結型グリカン、Ｏ−連結型グリカン、糖脂質、Ｏ−ＧｌｃＮＡｃ、およびグリコサミノグリカンが挙げられる。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、グリカンにコンジュゲートされる。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、Ｎ−連結型グリカンにコンジュゲートされる。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、Ｏ−連結型グリカンにコンジュゲートされる。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、糖脂質にコンジュゲートされる。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、Ｏ−ＧｌｃＮＡｃにコンジュゲートされる。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、グリコサミノグリカンにコンジュゲートされる。
【０１１９】
一部の実施形態では、水溶性ポリマーは、ポリオキサゾリンポリマーを含む。ポリオキサゾリンポリマーは、直鎖状合成ポリマーであり、ＰＥＧと同様に、低多分散性を含む。一部の実施形態では、ポリオキサゾリンポリマーは、平均分子量で特徴付けられる多分散性ポリオキサゾリンポリマーである。一部の実施形態では、ポリオキサゾリンポリマーの平均分子量には、例えば、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００、５５００、６０００、６５００、７０００、７５００、８０００、１０，０００、１２，０００、２０，０００、３５，０００、４０，０００、５０，０００、６０，０００、１００，０００、２００，０００、３００，０００、４００，０００、または５００，０００Ｄａが含まれる。一部の実施形態では、ポリオキサゾリンポリマーは、ポリ（２−メチル２−オキサゾリン）（ＰＭＯＺ）、ポリ（２−エチル２−オキサゾリン）（ＰＥＯＺ）、またはポリ（２−プロピル２−オキサゾリン）（ＰＰＯＺ）を含む。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、ポリオキサゾリンポリマーにコンジュゲートされる。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、ＰＭＯＺにコンジュゲートされる。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、ＰＥＯＺにコンジュゲートされる。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、ＰＰＯＺにコンジュゲートされる。
【０１２０】
一部の実施形態では、水溶性ポリマーは、ポリアクリル酸ポリマーを含む。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、ポリアクリル酸ポリマーにコンジュゲートされる。
【０１２１】
一部の実施形態では、水溶性ポリマーは、ポリアミンを含む。ポリアミンは、２つ以上の第一級アミノ基を含む有機ポリマーである。一部の実施形態では、ポリアミンは、分枝状ポリアミン、直鎖状ポリアミン、または環状ポリアミンを含む。一部の実施形態では、ポリアミンは、低分子量直鎖状ポリアミンである。例示的なポリアミンとしては、プトレシン、カダベリン、スペルミジン、スペルミン、エチレンジアミン、１，３−ジアミノプロパン、ヘキサメチレンジアミン、テトラエチルメチレンジアミン、およびピペラジンが挙げられる。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、ポリアミンにコンジュゲートされる。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、プトレシン、カダベリン、スペルミジン、スペルミン、エチレンジアミン、１，３−ジアミノプロパン、ヘキサメチレンジアミン、テトラエチルメチレンジアミン、またはピペラジンにコンジュゲートされる。
【０１２２】
脂質
一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲート化部分は、脂質である。いくつかの例では、脂質は脂肪酸である。場合によっては、脂肪酸は飽和脂肪酸である。他の場合には、脂肪酸は不飽和脂肪酸である。例示的な脂肪酸には、限定されないが、約６〜約２６個の炭素原子、約６〜約２４個の炭素原子、約６〜約２２個の炭素原子、約６〜約２０個の炭素原子、約６〜約１８個の炭素原子、約２０〜約２６個の炭素原子、約１２〜約２６個の炭素原子、約１２〜約２４個の炭素原子、約１２〜約２２個の炭素原子、約１２〜約２０個の炭素原子、または約１２〜約１８個の炭素原子を含む脂肪酸が含まれる。場合によっては、脂質は、１つまたはそれ以上の血清タンパク質に結合し、それによって血清の安定性および／または血清半減期を増加させる。
【０１２３】
一部の実施形態では、脂質は、本明細書に記載されるＩＬ−１５ポリペプチドにコンジュゲートされる。いくつかの例では、脂質は、脂肪酸、例えば、飽和脂肪酸または不飽和脂肪酸である。場合によっては、脂肪酸は、約６〜約２６個の炭素原子、約６〜約２４個の炭素原子、約６〜約２２個の炭素原子、約６〜約２０個の炭素原子、約６〜約１８個の炭素原子、約２０〜約２６個の炭素原子、約１２〜約２６個の炭素原子、約１２〜約２４個の炭素原子、約１２〜約２２個の炭素原子、約１２〜約２０個の炭素原子、または約１２〜約１８個の炭素原子である。場合によっては、脂肪酸は、長さが約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、または２６個である炭素原子を含む。場合によっては、脂肪酸は、カプロン酸（ヘキサン酸）、エナント酸（ヘプタン酸）、カプリル酸（オクタン酸）、ペラルゴン酸（ノナン酸）、カプリン酸（デカン酸）、ウンデシル酸（ウンデカン酸）、ラウリン酸（ドデカン酸）、トリデシル酸（トリデカン酸）、ミリスチン酸（テトラデカン酸）、ペンタデシル酸（ペンタデカン酸）、パルミチン酸（ヘキサデカン酸）、マルガリン酸（ヘプタデカン酸）、ステアリン酸（オクタデカン酸）、ノナデシル酸（ノナデカン酸）、アラキジン酸（エイコサン酸）、ヘネイコシル酸（ヘネイコサン酸）、ベヘン酸（ドコサン酸）、トリコシル酸（トリコサン酸）、リグノセリン酸（テトラコサン酸）、ペンタコシル酸（ペンタコサン酸）、またはセロチン酸（ヘキサコサン酸）が含まれる。
【０１２４】
一部の実施形態では、ＩＬ−１５脂質コンジュゲートは、血清安定性および／または血清半減期を増大させる。
【０１２５】
タンパク質
一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲート化部分は、タンパク質またはその結合断片である。例示的なタンパク質としては、アルブミン、トランスフェリン、またはトランスチレチンが挙げられる。一部の実施形態では、タンパク質またはその結合断片は、抗体またはその結合断片を含む。一部の実施形態では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、タンパク質またはその結合断片を含む。一部の実施形態では、タンパク質またはその結合断片を含むＩＬ−１５コンジュゲートは、増加した血清半減期および／または安定性を有する。一部の実施形態では、タンパク質またはその結合断片を含むＩＬ−１５コンジュゲートは、１つまたはそれ以上のＩＬ−１５Ｒ／ＩＬ−２Ｒサブユニットとの減少したＩＬ−１５相互作用を有する。追加の場合において、タンパク質またはその結合断片は、１つまたはそれ以上のＩＬ−１５Ｒ／ＩＬ−２ＲサブユニットとのＩＬ−１５相互作用を遮断する。
【０１２６】
一部の実施形態では、コンジュゲート化部分はアルブミンである。アルブミンは、水溶性球状タンパク質のファミリーである。血漿中によくみられ、全血漿タンパク質の約５５〜６０％を占める。ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）は、３次構造が３つのドメイン、ドメインＩ（アミノ酸残基１〜１９５）、ドメインＩＩ（アミノ酸残基１９６〜３８３）、およびドメインＩＩＩ（アミノ酸残基３８４〜５８５）に分割される５８５アミノ酸ポリペプチドである。各ドメインは、さらに、長鎖および中鎖脂肪酸、ビリルビン、もしくはヘミンなどの内因性リガンド、または複素環化合物もしくは芳香族化合物などの外因性化合物と可逆的または不可逆的に相互作用し得る結合部位を含む。
【０１２７】
一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、アルブミンにコンジュゲートされる。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）にコンジュゲートされる。追加の場合において、ＩＬ−１５ポリペプチドは、アルブミンの機能的断片にコンジュゲートされる。
【０１２８】
一部の実施形態では、コンジュゲート化部分はトランスフェリンである。トランスフェリンは、大きさが約８０ｋＤａである６７９アミノ酸ポリペプチドであり、一方がＮ末端ドメインに、他方がＣ末端ドメインにある２つのＦｅ３＋結合部位を含む。一部の実施形態では、ヒトトランスフェリンは、約７〜１２日の半減期を有する。
【０１２９】
一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、トランスフェリンにコンジュゲートされる。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、ヒトトランスフェリンにコンジュゲートされる。追加の場合において、ＩＬ−１５ポリペプチドは、トランスフェリンの機能的断片にコンジュゲートされる。
【０１３０】
一部の実施形態では、コンジュゲート化部分は、トランスチレチン（ＴＴＲ）である。トランスサイレチンは、血清および脳脊髄液に局在する輸送タンパク質であり、甲状腺ホルモンチロキシン（Ｔ４）、およびレチノールに結合したレチノール結合タンパク質を輸送する。
【０１３１】
一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、（その末端の１つを介して、または内部ヒンジ領域を介して）トランスチレチンにコンジュゲートされる。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、トランスチレチンの機能的断片にコンジュゲートされる。
【０１３２】
一部の実施形態では、コンジュゲート化部分は、抗体、またはその結合断片である。一部の実施形態では、抗体またはその結合断片は、ヒト化抗体もしくはその結合断片、マウス抗体もしくはその結合断片、キメラ抗体もしくはその結合断片、モノクローナル抗体もしくはその結合断片、一価Ｆａｂ’、二価Ｆａｂ２、Ｆ（ａｂ）’３断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ビス−ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ダイアボディ、ミニボディ、ナノボディ、トリアボディ、テトラボディ、ヒューマボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（ｄｓＦｖ）、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ＩｇＮＡＲ、ラクダ抗体もしくはその結合断片、二重特異性抗体もしくはその結合断片、またはその化学的に修飾された誘導体を含む。
【０１３３】
いくつかの例では、コンジュゲート化部分は、ｓｃＦｖ、ビス−ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ｄｓＦｖ、またはｓｄＡｂを含む。場合によっては、コンジュゲート化部分はｓｃＦｖを含む。場合によっては、コンジュゲート化部分はビス−ｓｃＦｖを含む。場合によっては、コンジュゲート化部分は（ｓｃＦｖ）２を含む。場合によっては、コンジュゲート化部分はｄｓＦｖを含む。場合によっては、コンジュゲート化部分はｓｄＡｂを含む。
【０１３４】
一部実施形態では、コンジュゲート化部分は、抗体のＦｃ部分、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、またはＩｇＤのＦｃ部分を含む。一部の実施形態では、部分は、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）のＦｃ部分を含む。
【０１３５】
一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、抗体またはその結合断片にコンジュゲートされる。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、ヒト化抗体もしくはその結合断片、マウス抗体もしくはその結合断片、キメラ抗体もしくはその結合断片、モノクローナル抗体もしくはその結合断片、一価Ｆａｂ’、二価Ｆａｂ２、Ｆ（ａｂ）’３断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ビス−ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ダイアボディ、ミニボディ、ナノボディ、トリアボディ、テトラボディ、ヒューマボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（ｄｓＦｖ）、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ＩｇＮＡＲ、ラクダ抗体もしくはその結合断片、二重特異性抗体もしくはその結合断片、またはその化学的に修飾された誘導体にコンジュゲートされる。追加の場合において、ＩＬ−１５ポリペプチドは、抗体のＦｃ部分にコンジュゲートされる。追加の場合において、ＩＬ−１５ポリペプチドは、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）のＦｃ部分にコンジュゲートされる。
【０１３６】
一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、水溶性ポリマー（例えば、ＰＥＧ）および抗体またはその結合断片にコンジュゲートされる。場合によっては、抗体またはその結合断片は、ヒト化抗体もしくはその結合断片、マウス抗体もしくはその結合断片、キメラ抗体もしくはその結合断片、モノクローナル抗体もしくはその結合断片、一価Ｆａｂ’、二価Ｆａｂ２、Ｆ（ａｂ）’３断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ビス−ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ダイアボディ、ミニボディ、ナノボディ、トリアボディ、テトラボディ、ヒューマボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（ｄｓＦｖ）、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ＩｇＮＡＲ、ラクダ抗体もしくはその結合断片、二重特異性抗体もしくはその結合断片、またはその化学的に修飾された誘導体を含む。場合によっては、抗体またはその結合断片は、ｓｃＦｖ、ビス−ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ｄｓＦｖ、またはｓｄＡｂを含む。場合によっては、抗体またはその結合断片は、ｓｃＦｖを含む。場合によっては、抗体またはその結合断片は、ＩＬ−１５コンジュゲートを目的の標的細胞に導き、水溶性ポリマーは安定性および／または血清半減期を増加させる。
【０１３７】
いくつかの例では、１つまたはそれ以上のＩＬ−１５ポリペプチド−水溶性ポリマー（例えば、ＰＥＧ）コンジュゲートは、抗体またはその結合断片にさらに結合される。いくつかの例では、ＩＬ−１５コンジュゲート対抗体の比は、約１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１１：１または１２：１である。場合によっては、ＩＬ−１５コンジュゲート対抗体の比は、約１：１である。他の場合には、ＩＬ−１５コンジュゲート対抗体の比は、約２：１、３：１、または４：１である。追加の場合において、ＩＬ−１５コンジュゲート対抗体の比は、約６：１以上である。
【０１３８】
一部の実施形態では、１つまたはそれ以上のＩＬ−１５ポリペプチド−水溶性ポリマー（例えば、ＰＥＧ）コンジュゲートは、抗体またはその結合断片に直接結合される。他の例では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、リンカーを用いて、抗体またはその結合断片に間接的に結合される。例示的なリンカーとしては、ホモ二官能性リンカー、ヘテロ二官能性リンカー、マレイミド系リンカー、ゼロトレースリンカー、自己不浸透性リンカー、スペーサーなどが挙げられる。
【０１３９】
一部の実施形態では、抗体またはその結合断片は、ＩＬ−１５ポリペプチド−水溶性ポリマー（例えば、ＰＥＧ）コンジュゲートのＩＬ−１５ポリペプチド部分に直接的または間接的に結合される。このような場合、ＩＬ−１５ポリペプチドへの抗体のコンジュゲーション部位は、ＩＬ−１５ポリペプチドとＩＬ−１５Ｒとの結合を妨げない部位にある。追加の場合において、ＩＬ−１５ポリペプチドへの抗体のコンジュゲーション部位は、ＩＬ−１５ポリペプチドのＩＬ−１５Ｒとの結合を部分的に遮断する部位にある。他の実施形態では、抗体またはその結合断片は、ＩＬ−１５ポリペプチド−水溶性ポリマー（例えば、ＰＥＧ）コンジュゲートの水溶性ポリマー部分に直接的または間接的に結合される。
【０１４０】
ペプチド
一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲート化部分は、ペプチドである。一部の実施形態では、ペプチドは、非構造化ペプチドである。一部の実施形態では、サイトカイン（例えば、インターロイキン、ＩＦＮ、またはＴＮＦ）ポリペプチドは、ペプチドにコンジュゲートされる。一部の実施形態では、ペプチドを含むＩＬ−１５コンジュゲートは、増加した血清半減期および／または安定性を有する。一部の実施形態では、ペプチドを含むＩＬ−１５コンジュゲートは、１つまたはそれ以上のＩＬ−１５Ｒサブユニットとの減少したＩＬ−１５相互作用を有する。追加の場合において、ペプチドは、１つまたはそれ以上のＩＬ−１５ＲサブユニットとのＩＬ−１５相互作用を遮断する。
【０１４１】
一部の実施形態では、コンジュゲート化部分は、ＸＴＥＮ（商標）ペプチド（Ａｍｕｎｉｘ  Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ  Ｉｎｃ．）であり、修飾は、ＸＴＥＮイル化と呼ばれる。ＸＴＥＮイル化は、目的のポリペプチドをコードする核酸と、ＸＴＥＮ（商標）ペプチド（Ａｍｕｎｉｘ  Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ  Ｉｎｃ．）をコードする核酸との遺伝的融合であり、６つのアミノ酸：Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、およびＴｈｒの異なるパーセンテージを含む長い非構造化親水性ペプチドである。一部の実施形態では、ＸＴＥＮ（商標）ペプチドは、目的のポリペプチドと組み合わせて、発現、遺伝的安定性、溶解性、凝集抵抗性、増大した半減期、増加された効力、および／または増加したインビトロ活性などの特性に基づいて選択される。一部の実施形態では、サイトカイン（例えば、インターロイキン、ＩＦＮ、またはＴＮＦ）ポリペプチドは、ＸＴＥＮペプチドにコンジュゲートされる。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、ＸＴＥＮペプチドにコンジュゲートされる。
【０１４２】
一部の実施形態では、コンジュゲート化部分は、グリジンに富むホモアミノ酸ポリマー（ＨＡＰ）であり、修飾は、ＨＡＰイル化と呼ばれる。ＨＡＰイル化は、目的とするポリペプチドをコードする核酸と、グリジンに富むホモアミノ酸ポリマー（ＨＡＰ）をコードする核酸との遺伝的融合である。一部の実施形態では、ＨＡＰポリマーは、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎ反復モチーフを含み、時には、長さは約５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、またはそれ以上の残基である。一部の実施形態では、サイトカイン（例えば、インターロイキン、ＩＦＮ、またはＴＮＦ）ポリペプチドは、ＨＡＰにコンジュゲートされる。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、ＨＡＰにコンジュゲートされる。
【０１４３】
一部の実施形態では、コンジュゲート化部分は、ＰＡＳポリペプチドであり、修飾はＰＡＳイル化と呼ばれる。ＰＡＳイル化は、目的のポリペプチドをコードする核酸とＰＡＳポリペプチドをコードする核酸との遺伝的融合である。ＰＡＳポリペプチドは、Ｐｒｏ、ＡｌａおよびＳｅｒ残基からなる親水性の非荷電ポリペプチドである。一部の実施形態では、ＰＡＳポリペプチドの長さは、少なくとも約１００、２００、３００、４００、５００または６００アミノ酸である。一部の実施形態では、サイトカイン（例えば、インターロイキン、ＩＦＮ、またはＴＮＦ）ポリペプチドは、ＰＡＳポリペプチドにコンジュゲートされる。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、ＰＡＳポリペプチドにコンジュゲートされる。
【０１４４】
一部の実施形態では、コンジュゲート化部分は、エラスチン様ポリペプチド（ＥＬＰ）であり、修飾は、ＥＬＰイル化と呼ばれる。ＥＬＰイル化は、目的とするポリペプチドをコードする核酸と、エラスチン様ポリペプチド（ＥＬＰ）をコードする核酸との遺伝的融合である。ＥＬＰは、ｘがプロリンを除く任意のアミノ酸であるＶＰＧｘＧ反復モチーフを含む。一部の実施形態では、サイトカイン（例えば、インターロイキン、ＩＦＮ、またはＴＮＦ）ポリペプチドは、ＥＬＰにコンジュゲートされる。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、ＥＬＰにコンジュゲートされる。
【０１４５】
一部の実施形態では、コンジュゲート化部分は、ＣＴＰペプチドである。ＣＴＰペプチドは、３１アミノ酸残基ペプチドＦＱＳＳＳＳ＊ＫＡＰＰＰＳ＊ＬＰＳＰＳ＊ＲＬＰＳＧＰＳ＊ＤＴＰＩＬＰＱを含み、Ｓ＊はＯ−グリコシル化部位（ＯＰＫＯ）を示す。一部の実施形態では、ＣＴＰペプチドは、サイトカインポリペプチド（例えば、ＩＬ−１５ポリペプチド）に遺伝的に融合される。一部の実施形態では、サイトカインポリペプチド（例えば、ＩＬ−１５ポリペプチド）は、ＣＴＰペプチドにコンジュゲートされる。
【０１４６】
一部の実施形態では、サイトカイン（例えば、ＩＬ−１５ポリペプチド）は、グルタミル化によって修飾される。グルタミル化（またはポリグルタミル化）は、グルタミン酸の可逆的翻訳後修飾であり、グルタミン酸のγ−カルボキシ基が、遊離グルタミン酸のアミノ基とペプチド様結合を形成し、α−カルボキシ基がポリグルタミン酸鎖に伸長する。
【０１４７】
一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、ゼラチン様タンパク質（ＧＬＫ）ポリマーによって修飾される。一部の実施形態では、ＧＬＫポリマーは、Ｇｌｙ−Ｘａａ−Ｙａａの複数の反復を含み、ＸａａおよびＹａａは、それぞれ、主にプロリンおよび４−ヒドロキシプロリンを含む。一部の実施形態では、ＧＬＫポリマーは、アミノ酸残基Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ、Ｑｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、およびＬｙｓをさらに含む。一部の実施形態では、ＧＬＫポリマーの長さは、約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１５０残基またはそれ以上である。
【０１４８】
追加のコンジュゲート化部分
一部の実施形態では、コンジュゲート化部分は、細胞外バイオマーカーを含む。一部の実施形態では、細胞外バイオマーカーは、腫瘍抗原である。一部の実施形態では、例示的な細胞外バイオマーカーとしては、ＣＤ１９、ＰＳＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ６、ＣＤ７０、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥｐｈＡ３、ＥｐＣＡＭ、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）、ＦＡＰ、ＦＲα、ＧＤ２、ＧＤ３、ルイス−Ｙ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＲＯＲ１、ＴＡＧ７２、ＶＥＧＦＲ２、ＣＤ１１、Ｇｒ−１、ＣＤ２０４、ＣＤ１６、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、およびＢ２２０が挙げられる。一部の実施形態では、コンジュゲート化部分は、ＩＬ−１５に結合させるかまたはコンジュゲートする。一部の実施形態では、コンジュゲート化部分は、例えば、ＩＬ−１５のＮ末端またはＣ末端で遺伝的に融合される。
【０１４９】
一部の実施形態では、コンジュゲート化部分は、翻訳後修飾からの分子を含む。一部の実施形態では、翻訳後修飾の例には、ミリストイル化、パルミトイル化、イソプレニル化（またはプレニル化）（例えば、ファルネシル化またはゲラニルゲラニル化）、グリピル化、アシル化（例えば、Ｏ−アシル化、Ｎ−アシル化、Ｓ−アシル化）、アルキル化（例えば、メチルまたはエチル基などのアルキル基の付加）、アミド化、グリコシル化、ヒドロキシル化、ヨード化、ヌクレオチド付加、酸化、リン酸化、スクシニル化、硫酸化、糖化、カルバミル化、グルタミル化、または脱アミド化が含まれる。一部の実施形態では、ＩＬ−１５は、ミリストイル化、パルミトイル化、イソプレニル化（またはプレニル化）（例えば、ファルネシル化またはゲラニルゲラニル化）、グリピル化、アシル化（例えば、Ｏ−アシル化、Ｎ−アシル化、Ｓ−アシル化）、アルキル化（例えば、メチルまたはエチル基などのアルキル基の付加）、アミド化、グリコシル化、ヒドロキシル化、ヨード化、ヌクレオチド付加、酸化、リン酸化、スクシニル化、硫酸化、糖化、カルバミル化、グルタミル化、または脱アミド化などの翻訳後修飾によって修飾される。
【０１５０】
リンカー
一部の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１５ポリペプチドにコンジュゲート化部分をコンジュゲートまたは結合させるための有用な官能性反応基は、例えば、ゼロまたは高次リンカーを含む。いくつかの例では、本明細書に記載されるインターロイキンに組み込まれた非天然アミノ酸は、官能性反応基を含む。いくつかの例では、リンカーは、本明細書に記載されるインターロイキンに組み込まれた非天然アミノ酸と反応する官能反応性基を含む。いくつかの例では、コンジュゲート化部分は、本明細書に記載されるインターロイキンに組み込まれた非天然アミノ酸と反応する官能反応基を含む。いくつかの例では、コンジュゲート化部分は、本明細書に記載されるリンカー（場合により、サイトカインペプチドに予め結合している）と反応する官能性反応基を含む。一部の実施形態では、リンカーは、本明細書に記載されるＩＬ−１５ポリペプチド中の天然アミノ酸と反応する反応基を含む。場合によっては、高次リンカーは、ホモ二官能性リンカーまたはヘテロ二官能性リンカーなどの二官能性リンカーを含む。例示的なホモ二官能性リンカーとしては、限定はされないが、Ｌｏｍａｎｔ試薬ジチオビス（プロピオン酸スクシンイミジル）ＤＳＰ、３’３’−ジチオビス（プロピオン酸スルホスクシンイミジル）（ＤＴＳＳＰ）、スベリン酸ジスクシンイミジル（ＤＳＳ）、スベリン酸ビス（スルホスクシンイミジル）（ＢＳ）、酒石酸ジスクシンイミジル（ＤＳＴ）、酒石酸ジスルホスクシンイミジル（スルホＤＳＴ）、エチレングリコビス（コハク酸スクシンイミジル）（ＥＧＳ）、炭酸ジスクシンイミジル（ＤＳＧ）、炭酸Ｎ，Ｎ’−ジスクシンイミジル（ＤＳＣ）、アジピン酸ジメチル（ＤＭＡ）、ピメリミジン酸ジメチル（ＤＭＰ）、スベリミン酸ジメチル（ＤＭＳ）、ジメチル−３，３’−ジチオビスプロピオンイミデート（ＤＴＢＰ）、１，４−ジ−３’−（２’−ピリジルジチオ）プロピオンアミド）ブタン（ＤＰＤＰＢ）、ビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、ハロゲン化アリール含有化合物（ＤＦＤＮＢ）、例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンもしくは１，３−ジフルオロ−４，６−ジニトロベンゼン、４，４’−ジフルオロ−３，３’−ジニトロフェニルスルホン（ＤＦＤＮＰＳ）、ビス−［β−（４−アジドサリチルアミド））エチル］ジスルフィド（ＢＡＳＥＤ）、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテル、アジピン酸ジヒドラジド、カルボヒドラジド、ｏ−トルイジン、３，３’−ジメチルベンジジン、ベンジジン、α，α’−ｐ−ジアミノジフェニル、ジヨード−ｐ−キシレンスルホン酸、Ｎ，Ｎ’−エチレン−ビス（ヨードアセトアミド）、またはＮ，Ｎ’−ヘキサメチレン−ビス（ヨードアセトアミド）が挙げられる。
【０１５１】
一部の実施形態では、二官能性リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーを含む。例示的なヘテロ二官能性リンカーには、限定されないが、アミン反応性およびスルフヒドリル架橋リンカー、例えば、プロピオン酸Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）（ｓＰＤＰ）、プロピオン酸長鎖Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）（ＬＣ−ｓＰＤＰ）、プロピオン酸水溶性長鎖Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）（スルホ−ＬＣ−ｓＰＤＰ）、スクシンイミジルオキシカルボニル−α−メチル−α−（２−ピリジルジチオ）トルエン（ｓＭＰＴ）、スルホスクシンイミジル−６−［α−メチル−α−（２−ピリジルジチオ）トルアミド］ヘキサノエート（スルホ−ＬＣ−ｓＭＰＴ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ｓＭＣＣ）、スルホスクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（スルホ−ｓＭＣＣ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢｓ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル（スルホ−ＭＢｓ）、Ｎ−スクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノ安息香酸塩（ｓＩＡＢ）、スルホスクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノ安息香酸塩（スルホ−ｓＩＡＢ）、スクシンイミジル−４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート（ｓＭＰＢ）、スルホスクシンイミジル−４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート（スルホ−ｓＭＰＢ）、Ｎ−（γ−マレイミドブチリルオキシ）スクシンイミドエステル（ＧＭＢ）、Ｎ−（γ−マレイミドブチリルオキシ）スルホスクシンイミドエステル（スルホ−ＧＭＢ）、スクシンイミジル６−（（ヨードアセチル）アミノ）ヘキサノエート（ｓＩＡＸ）、スクシンイミジル６−［６−（（（（ヨードアセチル）アミノ）ヘキサノイル）アミノ］ヘキサノエート（ｓＩＡＸＸ）、スクシンイミジル４−（（（（ヨードアセチル）アミノ）メチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ｓＩＡＣ）、スクシンイミジル６−（（（（４−ヨードアセチル）アミノ）メチル）シクロヘキサン−１−カルボニル）アミノ）ヘキサノエート（ｓＩＡＣＸ）、ｐ−ニトロフェニルヨードアセテート（ＮＰＩＡ）、カルボニル反応性およびスルフヒドリル反応性架橋リンカー、例えば、４−（４−Ｎ−マレイミドフェニル）ブタン酸ヒドラジド（ＭＰＢＨ）、４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシル−ヒドラジド−８（Ｍ２Ｃ２Ｈ）、３−（２−ピリジルジチオ）プロピオニルヒドラジド（ＰＤＰＨ）、アミン反応性および光反応性架橋リンカー、例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル−４−アジドサリチル酸（ＮＨｓ−ＡｓＡ）、Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミジル−４−アジドサリチル酸（スルホ−ＮＨｓ−ＡｓＡ）、スルホスクシンイミジル−（４−アジドサリチルアミド）ヘキサノエート（スルホ−ＮＨｓ−ＬＣ−ＡｓＡ）、スルホスクシンイミジル−２−（ｐ−アジドサリチルアミド）エチル−１，３’−ジチオプロピオネート（ｓＡｓＤ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル−４−アジドベンゾエート（ＨｓＡＢ）、Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミジル−４−アジドベンゾエート（スルホ−ＨｓＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジル−６−（４’−アジド−２’−ニトロフェニルアミノ）ヘキサノエート（ｓＡＮＰＡＨ）、スルホスクシンイミジル−６−（４’−アジド−２’−ニトロフェニルアミノ）ヘキサノエート（スルホ−ｓＡＮＰＡＨ）、Ｎ−５−アジド−２−ニトロベンゾイルオキシスクシンイミド（ＡＮＢ−ＮＯｓ）、スルホスクシンイミジル−２−（ｍ−アジド−ｏ−ニトロベンズアミド）−エチル−１，３’−ジチオプロピオネート（ｓＡＮＤ）、Ｎ−スクシンイミジル−４（４−アジドフェニル）１，３’−ジチオプロピオネート（ｓＡＤＰ）、Ｎ−スルホスクシンイミジル（４−アジドフェニル）−１，３’−ジチオプロピオネート（スルホ−ｓＡＤＰ）、スルホスクシンイミジル４−（ｐ−アジドフェニル）ブチレート（スルホ−ｓＡＰＢ）、スルホスクシンイミジル２−（７−アジド−４−メチルクマリン−３−アセトアミド）エチル−１，３’−ジチオプロピオネート（ｓＡＥＤ）、スルホスクシンイミジル７−アジド−４−メチルクメイン−３−アセテート（スルホ−ｓＡＭＣＡ）、ｐ−ニトロフェニルジアゾピルベート（ｐＮＰＤＰ）、ｐ−ニトロフェニル−２−ジアゾ−３，３，３−トリフルオロプロピオネート（ＰＮＰ−ＤＴＰ）、スルフヒドリル反応性および光反応性架橋リンカー、例えば、１−（ｐ−アジドサリチルアミド）−４−（ヨードアセトアミド）ブタン（ＡｓＩＢ）、Ｎ−［４−（ｐ−アジドサリチルアミド）ブチル］−３’−（２’−ピリジルジチオ）プロピオンアミド（ＡＰＤＰ）、ベンゾフェノン−４−ヨードアセトアミド、ベンゾフェノン−４−マレイミドカルボニル反応性および光反応性架橋リンカー、例えば、ｐ−アジドベンゾイルヒドラジド（ＡＢＨ）、カルボキシレート反応性および光反応性架橋リンカー、例えば、４−（ｐ−アジドサリチルアミド）ブチルアミン（ＡｓＢＡ）、およびアルギニン反応性および光反応性架橋リンカー、例えば、ｐ−アジドフェニルグリオキサール（ＡＰＧ）が含まれる。
【０１５２】
いくつかの例では、反応性官能基は、結合部分（例えば、コンジュゲート化部分またはＩＬ−１５上）に存在する求電子基に対して反応性である求核基を含む。例示的な求電子基には、カルボニル基、例えば、アルデヒド、ケトン、カルボン酸、エステル、アミド、エノン、ハロゲン化アシルまたは酸無水物が含まれる。一部の実施形態では、反応性官能基は、アルデヒドである。例示的な求核基には、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート、およびアリールヒドラジドが含まれる。一部の実施形態では、本明細書に記載されるインターロイキンに組み込まれる非天然アミノ酸は、求電子性基を含む。
【０１５３】
一部の実施形態では、リンカーは、切断可能なリンカーである。一部の実施形態では、切断可能なリンカーは、ジペプチドリンカーである。一部の実施形態では、ジペプチドリンカーは、バリン−シトルリン（Ｖａｌ−Ｃｉｔ）、フェニルアラニン−リジン（Ｐｈｅ−Ｌｙｓ）、バリン−アラニン（Ｖａｌ−Ａｌａ）およびバリン−リジン（Ｖａｌ−Ｌｙｓ）である。一部の実施形態では、ジペプチドリンカーは、バリン−シトルリンである。
【０１５４】
一部の実施形態では、リンカーは、例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０個、またはそれ以上のアミノ酸を含むペプチドリンカーである。いくつかの例では、ペプチドリンカーは、せいぜい２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０個、またはそれ以下のアミノ酸を含む。追加の場合において、ペプチドリンカーは、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０個のアミノ酸を含む。
【０１５５】
一部の実施形態では、リンカーは、自己免疫性リンカー部分を含む。一部の実施形態では、自己免疫性リンカー部分は、ｐ−アミノベンジルアルコール（ＰＡＢ）、ｐ−アミノベンジオキシカルボニル（ＰＡＢＣ）、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含む。一部の実施形態では、リンカーは、ジペプチドリンカー部分および自己免疫性リンカー部分を含む。一部の実施形態では、自己免疫性リンカー部分は、米国特許第９０８９６１４号、およびＷＩＰＯ出願公開第ＷＯ２０１５０３８４２６号に記載されているようなものである。
【０１５６】
一部の実施形態では、切断可能なリンカーは、グルクロニドである。一部の実施形態では、切断可能なリンカーは、酸切断可能なリンカーである。一部の実施形態では、酸切断可能なリンカーは、ヒドラジンである。一部の実施形態では、切断可能なリンカーは、還元性リンカーである。
【０１５７】
一部の実施形態では、リンカーは、マレイミド基を含む。いくつかの例では、マレイミド基は、マレイミドスペーサーとも呼ばれる。いくつかの例では、マレイミド基は、カプロン酸をさらに含み、マレイミドカプロイル（ｍｃ）を形成する。場合によっては、リンカーは、マレイミドカプロイル（ｍｃ）を含む。場合によっては、リンカーはマレイミドカプロイル（ｍｃ）である。他の例では、マレイミド基は、マレイミドメチル基、例えば、上記のスクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ｓＭＣＣ）、またはスルホスクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（スルホ−ｓＭＣＣ）を含む。
【０１５８】
一部の実施形態では、マレイミド基は、自己安定化マレイミドである。いくつかの例では、自己安定化マレイミドは、ジアミノプロピオン酸（ＤＰＲ）を利用して、マレイミドに隣接する塩基性アミノ基を組み込み、チオスクシンイミド環加水分解の分子内触媒を提供し、それにより、逆マイケル反応を介して脱離反応を受けるマレイミドを除去する。いくつかの例では、自己安定化マレイミドは、Ｌｙｏｎら、「Ｓｅｌｆ−ｈｙｄｒｏｌｙｚｉｎｇ  ｍａｌｅｉｍｉｄｅｓ  ｉｍｐｒｏｖｅ  ｔｈｅ  ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ」、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、３２巻（１０号）：１０５９〜１０６２頁（２０１４年）に記載されるマレイミド基である。いくつかの例では、リンカーは、自己安定化マレイミドを含む。いくつかの例では、リンカーは、自己安定化マレイミドである。
【０１５９】
コンジュゲーション化学
種々のコンジュゲーション反応を用いて、本明細書に記載されるＩＬ−１５ポリペプチドに組み込まれるリンカー、コンジュゲーション部分、および非天然アミノ酸をコンジュゲートする。このようなコンジュゲーション反応は、しばしば、「生体直交性」反応などの水性条件と適合する。一部の実施形態では、コンジュゲーション反応は、リンカー、コンジュゲーション部分、または非天然アミノ酸上に見出される触媒、光、または反応性化学基などの化学試薬によって媒介される。一部の実施形態では、コンジュゲーション反応は、酵素によって媒介される。一部の実施形態では、本明細書で使用されるコンジュゲーション反応は、Ｇｏｎｇ，Ｙ．、Ｐａｎ，Ｌ．、Ｔｅｔｔ．Ｌｅｔｔ．、２０１５年、５６巻、２１２３頁に記載されている。一部の実施形態では、本明細書で使用されるコンジュゲーション反応は、Ｃｈｅｎ，Ｘ．；Ｗｕ．Ｙ−Ｗ．、Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２０１６年、１４巻、５４１７頁に記載される。
【０１６０】
本明細書に記載される一部の実施形態では、コンジュゲーション反応は、ケトンまたはアルデヒドと求核剤との反応を含む。一部の実施形態では、コンジュゲーション反応は、ケトンとアミノキシ基との反応を含み、オキシムを形成する。一部の実施形態では、コンジュゲーション反応は、ケトンとアリールまたはヘテロアリールアミン基との反応を含み、イミンを形成する。一部の実施形態では、コンジュゲーション反応は、アルデヒドとアリールまたはヘテロアリールアミン基との反応を含み、イミンを形成する。一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、オキシムを介して結合されたリンカーまたはコンジュゲーション部分を含むＩＬ−１５ポリペプチドをもたらす。一部の実施形態では、コンジュゲーション反応は、アルデヒドまたはケトンとトリプタミン求核剤とのＰｉｃｔｅｔ−Ｓｐｅｎｇｌｅｒ反応を含む。一部の実施形態では、コンジュゲーション反応は、ヒドラジノ−Ｐｉｃｔｅｔ−Ｓｐｅｎｇｌｅｒ反応を含む。一部の実施形態では、コンジュゲーション反応は、Ｐｉｃｔｅｔ−Ｓｐｅｎｇｌｅｒライゲーションを含む。
【０１６１】
本明細書に記載される一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、アジドおよびホスフィンの反応（シュタウジンガーライゲーション）を含む。一部の実施形態では、ホスフィンは、アリールホスフィンである。一部の実施形態では、アリールホスフィンは、オルトエステル基を含む。一部の実施形態では、ホスフィンは、メチル２−（ジフェニルホスファニル）安息香酸エステルの構造を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、アリールアミドを介して結合されたリンカーまたはコンジュゲーション部分を含むＩＬ−１５ポリペプチドをもたらす。一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、アミドを介して結合されたリンカーまたはコンジュゲーション部分を含むＩＬ−１５ポリペプチドをもたらす。
【０１６２】
本明細書に記載される一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、１，３−双極性環状付加反応を含む。一部の実施形態では、１，３−双極性環状付加反応は、アジドとホスフィンとの反応（「クリック」反応）を含む。一部の実施形態では、コンジュゲーション反応は、銅によって触媒される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、トリアゾールを介して結合されたリンカーまたはコンジュゲーション部分を含むＩＬ−１５ポリペプチドをもたらす。一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、アジドと歪んだオレフィンとの反応を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、アジドと歪んだアルキンとの反応を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、アジドとシクロアルキン、例えば、ＯＣＴ、ＤＩＦＯ、ＤＩＦＢＯ、ＤＩＢＯ、ＢＡＲＡＣ、ＴＭＴＨ、または他の歪んだシクロアルキンとの反応を含み、その構造はＧｏｎｇ，Ｙ．、Ｐａｎ，Ｌ．、Ｔｅｔｔ．Ｌｅｔｔ．、２０１５年、５６巻、２１２３頁に示される。一部の実施形態では、１，３−双極子環状付加反応は、光（「光クリック」）によって触媒される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、末端アリル基とテトラゾールおよび光との反応を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、末端アルキニル基とテトラゾールおよび光との反応を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、Ｏ−アリルアミノ酸とテトラジンおよび光との反応を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、Ｏ−アリルチロシンとテトラジンおよび光との反応を含む。
【０１６３】
本明細書に記載される一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、ジエンおよびジエノフィルを含む逆電子需要付加環化反応を含む。一部の実施形態では、ジエンはテトラジンを含む。一部の実施形態では、ジエノフィルはアルケンを含む。一部の実施形態では、ジエノフィルはアルキンを含む。一部の実施形態では、アルキンは、歪んだアルキンである。一部の実施形態では、アルケンは、歪んだジエンである。一部の実施形態では、アルキンはトランス−シクロオクチンである。一部の実施形態では、アルキンはシクロオクテンである。一部の実施形態では、アルケンはシクロプロペンである。一部の実施形態では、アルケンはフルオロシクロプロペンである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、環中の２つの窒素原子を含む６員環複素環を介してリンカーまたはコンジュゲーション部分に結合したＩＬ−１５ポリペプチドの形成をもたらす。
【０１６４】
本明細書に記載される一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、オレフィンメタセシス反応を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、アルケンおよびアルキンとルテニウム触媒との反応を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、２つのアルケンとルテニウム触媒との反応を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、２つのアルキンとルテニウム触媒との反応を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、アルケンまたはアルキンと、ルテニウム触媒およびアリル基を含むアミノ酸との反応を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、アルケンまたはアルキンと、ルテニウム触媒およびアリルスルフィドまたはセレン化物を含むアミノ酸との反応を含む。一部の実施形態では、ルテニウム触媒は、Ｈｏｖｅｄａ−Ｇｒｕｂｂｓ第２世代触媒である。一部の実施形態では、オレフィンメタセシス反応は、１つまたはそれ以上の歪んだアルケンまたはアルキンの反応を含む。
【０１６５】
本明細書に記載される一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、（４＋２）環化付加反応とアルケンとの反応を含む。
【０１６６】
本明細書に記載される一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、交差カップリング反応を含む。一部の実施形態では、交差カップリング反応は、遷移金属触媒、例えば、イリジウム、金、ルテニウム、ロジウム、パラジウム、ニッケル、白金、または他の遷移金属触媒、および１つまたはそれ以上の配位子を含む。一部の実施形態では、遷移金属触媒は、水溶性である。本明細書に記載される一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、Ｓｕｚｕｋｉ−Ｍｉｙａｕｒａ交差カップリング反応を含む。本明細書に記載される一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、ハロゲン化アリール（またはトリフラート、またはトシレート）、アリールまたはボロン酸アルケニル、およびパラジウム触媒の反応を含む。本明細書に記載される一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、Ｓｏｎｏｇａｓｈｉｒａ交差カップリング反応を含む。本明細書に記載される一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、ハロゲン化アリール（またはトリフラート、またはトシレート）、アルキン、およびパラジウム触媒の反応を含む。一部の実施形態では、架橋結合反応は、炭素−炭素結合を介して、リンカーまたはコンジュゲート化部分のＩＬ−１５ポリペプチドへの結合をもたらす。
【０１６７】
本明細書に記載される一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、コンジュゲーション前の反応基の脱保護または「アンケージング」反応を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、光による反応基のアンケージング、続くコンジュゲーション反応を含む。一部の実施形態では、反応基は、１つまたはそれ以上のニトロ基を含むアラルキル部分で保護される。一部の実施形態では、反応基のアンケージングは、遊離アミン、硫化物、または他の反応基をもたらす。一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、遷移金属触媒による反応基のアンケージング、続くコンジュゲーション反応を含む。一部の実施形態では、遷移金属触媒は、パラジウムおよび１つまたはそれ以上の配位子を含む。一部の実施形態では、反応基は、アリル部分で保護される。一部の実施形態では、反応基は、アリルカルバメートで保護される。一部の実施形態では、反応基は、プロパルギル部分で保護される。一部の実施形態では、反応基は、プロパルギルカルバメートで保護される。一部の実施形態では、反応基は、ジエノフィルで保護され、ジエン（テトラジンなど）への曝露は、反応基の脱保護をもたらす。
【０１６８】
本明細書に記載される一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、リガンド指向性反応を含み、反応基に結合したリガンド（場合による）は、反応基とＩＬ−１５ポリペプチドとの間のコンジュゲーション部位を容易にする。一部の実施形態では、リガンドは、ＩＬ−１５ポリペプチドと反応基との反応中または反応後に切断される。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドのコンジュゲーション部位は、天然アミノ酸である。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドのコンジュゲーション部位は、リジン、システイン、またはセリンである。一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドのコンジュゲーション部位は、本明細書に記載される非天然アミノ酸である。一部の実施形態では、反応基は、電子不足アリール基またはヘテロアリール基などの脱離基を含む。一部の実施態様では、反応基は、ＩＬ−１５ポリペプチドによって置換される電子不足アルキル基などの脱離基を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、ラジカル捕捉剤とラジカル種との反応を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、酸化的ラジカル付加反応を含む。一部の実施形態では、ラジカル捕捉剤は、アリールアミンである。一部の実施形態では、ラジカル種は、チロシルラジカルである。一部の実施形態では、ラジカル種は、ルテニウム触媒（［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］など）および光によって生じる。
【０１６９】
酵素反応は、場合により、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応のために使用される。例示的な酵素的コンジュゲーションには、ＳｏｒｔＡ媒介コンジュゲーション、ＴＧｓ媒介コンジュゲーション、またはＦＧＥ媒介コンジュゲーションが含まれる。一部の実施形態では、本明細書に記載されるコンジュゲーション反応は、アミド結合を形成させるために、末端１−アミノ−２−チオ基とチオエステルとの天然タンパク質連結（ＮＰＬ）を含む。
【０１７０】
リンカーまたはコンジュゲート化部分をＩＬ−１５ポリペプチドと反応させるための種々のコンジュゲーション反応が本明細書中に記載され、ＩＬ−１５ポリペプチド中の天然（「カノニカル」）アミノ酸と反応が生じる。一部の実施形態では、天然アミノ酸は、野生型配列中に見出されるコンジュゲーション位置に見出されるか、または代わりに、その位置が突然変異されている。一部の実施形態では、コンジュゲーション反応は、ＩＬ−１５残基でのジスルフィド結合の形成を含む。一部の実施形態では、コンジュゲーション反応は、システインまたはリジンの１，４マイケル付加反応を含む。一部の実施形態では、コンジュゲーション反応は、ＩＬ−１５のシアノベンゾチアゾール連結を含む。一部の実施形態では、コンジュゲーション反応は、１，３−ジクロロ−２−プロピオンなどのアセトン部分との架橋を含む。一部の実施形態では、コンジュゲーション反応は、システインとＯ−メシチレンスルホニルヒドロキシルアミンとの反応によって形成されるデヒドロアラニンへの１，４マイケル付加を含む。一部の実施形態では、コンジュゲーション反応は、チロシンとトリアゾリンジオン（ＴＡＤ）またはＴＡＤ誘導体との反応を含む。一部の実施形態では、コンジュゲーション反応は、トリプトファンとロジウムカルベノイドとの反応を含む。
【０１７１】
使用方法
増殖性疾患または状態
一部の実施形態では、それを必要とする対象における増殖性疾患または状態を治療する方法であって、本明細書に記載されるＩＬ−１５コンジュゲートの治療有効量を対象に投与することを含む方法が本明細書に記載される。一部の実施形態では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、単離および精製されたＩＬ−１５ポリペプチドならびにコンジュゲート化部分を含み、ＩＬ−１５コンジュゲートは、野生型ＩＬ−１５ポリペプチドと比較して、ＩＬ−１５受容体α（ＩＬ−１５Ｒα）サブユニットへの低下した親和性を有する。一部の実施態様では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、単離および精製されたＩＬ−１５ポリペプチド；ならびにＮ１、Ｗ２、Ｖ３、Ｎ４、Ｉ６、Ｓ７、Ｄ８、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｅ１３、Ｄ１４、Ｌ１５、Ｑ１７、Ｓ１８、Ｍ１９、Ｈ２０、Ｉ２１、Ｄ２２、Ａ２３、Ｔ２４、Ｌ２５、Ｙ２６、Ｔ２７、Ｅ２８、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｐ３３、Ｓ３４、Ｃ３５、Ｋ３６、Ｖ３７、Ｔ３８、Ａ３９、Ｋ４１、Ｌ４４、Ｌ４５、Ｅ４６、Ｑ４８、Ｖ４９、Ｓ５１、Ｌ５２、Ｅ５３、Ｓ５４、Ｇ５５、Ｄ５６、Ａ５７、Ｓ５８、Ｈ６０、Ｄ６１、Ｔ６２、Ｖ６３、Ｅ６４、Ｎ６５、Ｉ６７、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｎ７１、Ｎ７２、Ｓ７３、Ｌ７４、Ｓ７５、Ｓ７６、Ｎ７７、Ｇ７８、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、Ｅ８２、Ｓ８３、Ｇ８４、Ｃ８５、Ｋ８６、Ｅ８７、Ｃ８８、Ｅ８９、Ｅ９０、Ｌ９１、Ｅ９２、Ｅ９３、Ｋ９４、Ｎ９５、Ｉ９６、Ｋ９７、Ｅ９８、Ｌ１００、Ｑ１０１、Ｓ１０２、Ｖ１０４、Ｈ１０５、Ｑ１０８、Ｍ１０９、Ｆ１１０、Ｉ１１１、Ｎ１１２、Ｔ１１３、およびＳ１１４から選択されるアミノ酸位置で単離および精製されたＩＬ−１５ポリペプチドに結合するコンジュゲート化部分を含み、アミノ酸残基の番号付けは配列番号１に対応する。一部の実施態様では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、単離および精製されたＩＬ−１５ポリペプチド；ならびにＮ１、Ｗ２、Ｖ３、Ｎ４、Ｉ６、Ｓ７、Ｄ８、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｅ１３、Ｄ１４、Ｌ１５、Ｑ１７、Ｓ１８、Ｍ１９、Ｈ２０、Ｉ２１、Ｄ２２、Ａ２３、Ｔ２４、Ｌ２５、Ｙ２６、Ｅ２８、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｐ３３、Ｓ３４、Ｃ３５、Ｋ３６、Ｖ３７、Ｔ３８、Ｋ４１、Ｌ４４、Ｅ４６、Ｑ４８、Ｖ４９、Ｓ５１、Ｌ５２、Ｅ５３、Ｓ５４、Ｇ５５、Ｄ５６、Ａ５７、Ｓ５８、Ｈ６０、Ｄ６１、Ｔ６２、Ｖ６３、Ｅ６４、Ｎ６５、Ｉ６７、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｎ７１、Ｎ７２、Ｓ７３、Ｌ７４、Ｓ７５、Ｓ７６、Ｎ７７、Ｇ７８、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、Ｅ８２、Ｓ８３、Ｇ８４、Ｃ８５、Ｋ８６、Ｅ８７、Ｃ８８、Ｅ８９、Ｅ９０、Ｌ９１、Ｅ９２、Ｅ９３、Ｋ９４、Ｎ９５、Ｉ９６、Ｋ９７、Ｅ９８、Ｌ１００、Ｑ１０１、Ｓ１０２、Ｖ１０４、Ｈ１０５、Ｑ１０８、Ｍ１０９、Ｆ１１０、Ｉ１１１、Ｎ１１２、Ｔ１１３、およびＳ１１４から選択されるアミノ酸位置で単離および精製されたＩＬ−１５ポリペプチドに結合するコンジュゲート化部分を含む。
【０１７２】
一部の実施形態では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、ＩＬ−１５ＲβおよびＩＬ−１５Ｒβγサブユニットと優先的に相互作用して、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒβγ複合体を形成する。一部の実施形態では、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒβγ複合体は、Ｔｅｆｆ細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔｅｆｆ細胞）および／またはＮＫ細胞の増殖を刺激および／または増大させる。追加の場合において、Ｔｅｆｆ細胞の拡大は、Ｔｅｆｆ：Ｔｒｅｇ比をＴｅｆｆ集団へと偏らせる。
【０１７３】
一部の実施形態では、増殖性疾患または状態はがんである。一部の実施形態では、がんは、固形腫瘍である。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１５コンジュゲートは、固形腫瘍を治療するために、それを必要とする対象に投与される。このような場合、対象は、膀胱がん、骨がん、脳がん、乳がん、大腸がん、食道がん、眼がん、頭頸部がん、腎臓がん、肺がん、黒色腫、卵巣がん、膵臓がん、または前立腺がんを有する。一部の実施形態では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、膀胱がんの治療のために対象に投与される。一部の実施形態では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、乳がんの治療のために対象に投与される。一部の実施形態では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、大腸がんの治療のために対象に投与される。一部の実施形態では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、食道がんの治療のために対象に投与される。一部の実施形態では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、頭頸部がんの治療のために対象に投与される。一部の実施形態では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、腎臓がんの治療のために対象に投与される。一部の実施形態では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、肺がんの治療のために対象に投与される。一部の実施形態では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、黒色腫の治療のために対象に投与される。一部の実施形態では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、卵巣がんの治療のために対象に投与される。一部の実施形態では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、膵臓がんの治療のために対象に投与される。一部の実施形態では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、前立腺がんの治療のために対象に投与される。一部の実施形態では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、転移性がんの治療のために対象に投与される。追加の場合において、ＩＬ−１５コンジュゲートは、再発性または難治性がんの治療のために対象に投与される。
【０１７４】
一部の実施形態では、がんは、血液学的悪性腫瘍である。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１５コンジュゲートは、血液学的悪性腫瘍を治療するために、それを必要とする対象に投与される。一部の実施形態では、対象は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、多発性骨髄腫、節外辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、節外辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、非バーキット高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＬ）、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、脾臓辺縁帯リンパ腫、形質細胞骨髄腫、形質細胞腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、またはリンパ腫様肉芽腫症を有する。一部の実施形態では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、ＣＬＬの治療のために対象に投与される。一部の実施形態では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、ＳＬＬの治療のために対象に投与される。一部の実施形態では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、ＦＬの治療のために対象に投与される。一部の実施形態では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、ＤＬＢＣＬの治療のために対象に投与される。一部の実施形態では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、ＭＣＬの治療のために対象に投与される。一部の実施形態では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症の治療のために対象に投与される。一部の実施形態では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、多発性骨髄腫の治療のために対象に投与される。一部の実施形態では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、バーキットリンパ腫の治療のために対象に投与される。一部の実施形態では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、転移性血液悪性腫瘍の治療のために対象に投与される。追加の場合において、ＩＬ−１５コンジュゲートは、再発性または難治性の血液悪性腫瘍の治療のために対象に投与される。
【０１７５】
一部の実施形態では、追加の治療剤が、対象にさらに投与される。一部の実施形態では、追加の治療剤は、ＩＬ−１５コンジュゲートと同時に投与される。他の場合には、追加の治療剤およびＩＬ−１５コンジュゲートは連続的に投与され、例えば、ＩＬ−１５コンジュゲートは、追加の治療剤に先立って投与されるか、またはＩＬ−１５コンジュゲートは、追加の治療剤の投与後に投与される。
【０１７６】
一部の実施形態では、追加の治療剤は、化学療法剤、免疫療法剤、標的療法、放射線療法、またはそれらの組み合わせを含む。例示的な追加の治療剤としては、限定されないが、アルキル化剤、例えば、アルトレタミン、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、ダカルバジン、ロムスチン、メルファラン、オキサラプラチン、テモゾロミド、またはチオテパ；代謝拮抗薬、例えば、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）、カペシタビン、シタラビン、フロクスウリジン、フルダラビン、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、メトトレキサート、またはペメトレキセド；アントラサイクリン、例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン；トポイソメラーゼＩ阻害剤、例えば、トポテカンまたはイリノテカン（ＣＰＴ−１１）；トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、例えば、エトポシド（ＶＰ−１６）、テニポシド、またはミトキサントロン；有糸分裂阻害剤、例えば、ドセタキセル、エストラムスチン、イクサベピロン、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、またはビノレルビン；またはコルチコステロイド、例えば、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン、またはデキサメタゾンが挙げられる。
【０１７７】
場合によっては、追加の治療剤は、第一選択療法を含む。本明細書で使用される場合、「第一選択療法」は、がんを有する対象に対する第一選択療法を含む。いくつかの例では、がんが原発がんまたは局所がんである。他の例では、がんは転移性または再発性のがんである。場合によっては、第一選択治療として化学療法が行われる。他の場合には、第一選択治療は、免疫療法、標的療法、または放射線療法である。当業者は、異なる第一選択治療が異なるタイプのがんに適用可能であることを容易に理解する。
【０１７８】
一部の実施形態では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、アルキル化剤、例えば、アルトレタミン、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、ダカルバジン、ロムスチン、メルファラン、オキサラプラチン、テモゾロミド、またはチオテパ；代謝拮抗薬、例えば、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）、カペシタビン、シタラビン、フロクスウリジン、フルダラビン、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、メトトレキサート、またはペメトレキセド；アントラサイクリン、例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン；トポイソメラーゼＩ阻害剤、例えば、トポテカンまたはイリノテカン（ＣＰＴ−１１）；トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、例えば、エトポシド（ＶＰ−１６）、テニポシド、またはミトキサントロン；有糸分裂阻害剤、例えば、ドセタキセル、エストラムスチン、イクサベピロン、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、またはビノレルビン；またはコルチコステロイド、例えば、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン、またはデキサメタゾンから選択される追加の治療剤とともに投与される。
【０１７９】
いくつかの例では、本明細書に記載されるＩＬ−１５コンジュゲートは、酵素ポリＡＤＰリボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）の阻害剤とともに投与される。例示的なＰＡＲＰ阻害剤としては、限定されないが、オラパリブ（ＡＺＤ−２２８１、Ｌｙｎｐａｒｚａ（登録商標）、Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａから）、ルカパリブ（ＰＦ−０１３６７３３８、Ｒｕｂｒａｃａ（登録商標）、Ｃｌｏｖｉｓ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙから）、ニラパリブ（ＭＫ−４８２７、Ｚｅｊｕｌａ（登録商標）、Ｔｅｓａｒｏから）、タラゾパリブ（ＢＭＮ−６７３、ＢｉｏＭａｒｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｃ．から）、ベリパリブ（ＡＢＴ−８８８、ＡｂｂＶｉｅから）、ＣＫ−１０２（以前のＣＥＰ  ９７２２、Ｔｅｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｌｔｄ．から）、Ｅ７０１６（Ｅｉｓａｉから）、イニパリブ（ＢＳＩ  ２０１、Ｓａｎｏｆｉから）、およびパミパリブ（ＢＧＢ−２９０、ＢｅｉＧｅｎｅから）が挙げられる。場合によっては、ＩＬ−１５コンジュゲートは、ＰＡＲＰ阻害剤、例えば、オラパリブ、ルカパリブ、ニラパリブ、タラゾパリブ、ベリパリブ、ＣＫ−１０２、Ｅ７０１６、イニパリブ、またはパミパリブと組み合わせて投与される。
【０１８０】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１５コンジュゲートは、チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）とともに投与される。例示的なＴＫＩには、限定されないが、アファチニブ、アレクチニブ、アキシチニブ、ボスチニブ、カボザンチニブ、セリチニブ、コビメチニブ、クリゾチニブ、ダブラフェニブ、ダサチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イブルチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レンバチニブ、ニロチニブ、ニンテダニブ、オシメルチニブ、パゾパニブ、ポナチニブ、レゴラフェニブ、ルキソリチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、トファシチニブ、およびバンデタニブが含まれる。
【０１８１】
いくつかの例では、本明細書に記載されるＩＬ−１５コンジュゲートは、免疫チェックポイント調節因子とともに投与される。例示的なチェックポイント調節因子は、以下を含む。
【０１８２】
ＰＤ−Ｌ１調節因子、例えば、ＧｅｎｅｎｔｅｃｈのＭＰＤＬ３２８０Ａ（ＲＧ７４４６）、Ｍｅｒｃｋ／ＰｆｉｚｅｒからのＡｖｅｌｕｍａｂ（Ｂａｖｅｎｃｉｏ）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａからのデュルバルマブ（Ｉｍｆｉｎｚｉ）、ＢｉｏＸｃｅｌｌからの抗マウスＰＤ−Ｌ１抗体クローン１０Ｆ．９Ｇ２（カタログ番号ＢＥ０１０１）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｅｙｅｒ’ｓ  Ｓｑｕｉｂｂからの抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体ＭＤＸ−１１０５（ＢＭＳ−９３５５９）、ＢＭＳ−９３５５９およびＢＭＳ−９８６１９２、ＸｙｔｏｍＸ  ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓからのＭＳＢ００１０７１８Ｃ、マウス抗ＰＤ−Ｌ１クローン２９Ｅ．２Ａ３、ＣＸ−０７２、Ｎｏｖａｒｔｉｓ  ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓからのＦＡＸ０５３、３Ｄ  ＭｅｄｉｃｉｎｅからのＫＮ０３５、Ｅｌｉ  ＬｉｌｌｙからのＬＹ３３０００５４、およびＡｓｔｒａＺｅｎｅｋａのＭＥＤＩ４７３６。
【０１８３】
ＰＤ−Ｌ２調節因子、例えば、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅのＡＭＰ−２２４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）、およびｒＨＩｇＭ１２Ｂ７。
【０１８４】
ＰＤ−１調節因子、例えば、ＢｉｏＸｃｅｌｌからの抗マウスＰＤ−１抗体クローンＪ４３（カタログ番号ＢＥ００３３−２）、ＢｉｏＸｃｅｌｌからの抗マウスＰＤ−１抗体クローンＲＭＰ−１４（カタログ番号ＢＥ０１４６）、マウス抗ＰＤ−１抗体クローンＥＨ１２、ＭｅｒｃｋのＭＫ−３４７５抗マウスＰＤ−１抗体（Ｋｅｙｔｒｕｄａ、ペンブロリズマブ、ラムブロリズマブ）、ＡＮＢ０１１として公知であるＡｎａｐｔｙｓＢｉｏの抗ＰＤ−１抗体、抗体ＭＤＸ−１  １０６（ＯＮＯ−４５３８）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  ＳｑｕｉｂｂのヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標）、ＢＭＳ−９３６５５８、ＭＤＸ１１０６）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａのＡＭＰ−５１４およびＡＭＰ−２２４、Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ／Ｉｎｎｏｖｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓからのシンチリマブ（ＩＢＩ−３０８）、ＡｇｅｎｕｓからのＡＧＥＮ  ２０３４、ＢｅｉＧｅｎｅからのＢＧＢ−Ａ３１７、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ  ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓからのＢ１−７５４０９１、ＣＢＴ  ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓからのＣＢＴ−５０１（ゲノリムズマブ）、ＩｎｃｙｔｅからのＩＮＣＳＨＲ１２１０、Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ＆ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔからのＪＮＪ−６３７２３２８３、ＭｅｄＩｍｍｕｎｅからのＭＥＤＩ０６８０、Ｎｏｖａｒｔｉｓ  ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓからのＰＤＲ００１、ＰｆｉｚｅｒからのＰＦ−０６８０１５９１、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓからのＲＥＧＮ２８１０、およびＣｕｒｅＴｅｃｈ  ＬｔｄからのＰｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ（ＣＴ−０１１）。
【０１８５】
ＣＴＬＡ−４調節因子、例えば、Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｅｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂの抗ＣＴＬＡ−４抗体イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）、ＭＤＸ−０１０、ＢＭＳ−７３４０１６およびＭＤＸ−１０１としても公知である）、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅからの抗ＣＴＬＡ４抗体クローン９Ｈ１０、Ｐｆｉｚｅｒのトレメリムマブ（ＣＰ−６７５，２０６、チシリムマブ）、ＡｇｅｎｕｓからのＡＧＥＮ  １８８４、およびＡｂｃａｍからの抗ＣＴＬＡ４抗体クローンＢＮＩ３。
【０１８６】
ＬＡＧ３調節因子、例えば、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅからの抗Ｌａｇ−３抗体クローンｅＢｉｏＣ９Ｂ７Ｗ（Ｃ９Ｂ７Ｗ）、ＬｉｆｅＳｐａｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓからの抗Ｌａｇ３抗体ＬＳ−Ｂ２２３７、Ｎｏｖａｒｔｉｓ  ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓからのＩＭＰ７０１およびＬＡＧ５２５、ＩｍｍｕｔｅｐからのＩＭＰ３２１（ＩｍｍｕＦａｃｔ）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂからの抗Ｌａｇ３抗体ＢＭＳ−９８６０１６、ＢＭＳ−９８６０１６、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓからのＲＥＧＮ３７６７、ならびにＬＡＧ−３キメラ抗体Ａ９Ｈ１２。
【０１８７】
Ｂ７−Ｈ３調節因子、例えば、ＭＧＡ２７１。
【０１８８】
ＫＩＲ調節因子、例えば、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂからのリリルマブ（ＩＰＨ２１０１）。
【０１８９】
ＣＤ１３７調節因子、例えば、ウレルマブ（ＢＭＳ−６６３５１３、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ＰＦ−０５０８２５６６（抗４−１ＢＢ、ＰＦ−２５６６、Ｐｆｉｚｅｒ）、またはＸｍＡｂ−５５９２（Ｘｅｎｃｏｒ）。
【０１９０】
ＰＳ調節因子、例えば、バビツキシマブ。
【０１９１】
ＯＸ４０調節因子、例えば、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  ＳｑｕｉｂｂからのＢＭＳ−９８６１７８、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅからのＧＳＫ３１７４９９８、ＡｇｅｎｕｓからのＩＮＣＡＧＮ１９４９、ＭｅｄＩｍｍｕｎｅからのＭＥＤＩ０５６２、ＰｆｉｚｅｒからのＰＦ−０４５１８６００、またはＧｅｎｔｅｃｈからのＲＧ７８８８。
【０１９２】
ＧＩＴＲ調節因子、例えば、Ｎｏｖａｒｔｉｓ  ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓからのＧＷＮ３２３、ＡｇｅｎｕｓからのＩＮＣＡＧＮ１８７６、またはＬｅａｐ  ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓからのＴＲＸ５１８。
【０１９３】
ＴＩＭ３調節因子、例えば、Ｎｏｖａｒｔｉｓ  ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓからのＭＢＧ４５３、またはＴＥＳＡＲＯからのＴＳＲ−０４２。
【０１９４】
ならびに調節因子、例えば、抗体またはその断片（例えば、モノクローナル抗体、ヒト、ヒト化、またはキメラ抗体）、ＲＮＡｉ分子、またはＣＤ５２、ＣＤ３０、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ（ＣＤ２７２）、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＬＡＩＲ１、ＴＩＧＨＴ、ＬＩＧＨＴ、ＤＲ３、ＣＤ２２６、ＣＤ２、もしくはＳＬＡＭに対する小分子。
【０１９５】
いくつかの例では、ＩＬ−１５コンジュゲートをペンブロリズマブ、ニボルマブ、トレメリムマブ、またはイピリムマブと組み合わせて投与する。
【０１９６】
いくつかの例では、本明細書に記載されるＩＬ−１５コンジュゲートは、アレムツズマブ、トラスツズマブ、イブリツモマブ・チウキセタン、ブレンツキシマブ・ベドチン、アド−トラスツズマブ・エムタンシン、またはブリナツムマブなどの抗体とともに投与される。
【０１９７】
いくつかの例では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、抗ＶＥＧＦＲ抗体から選択される追加の治療剤とともに投与される。例示的な抗ＶＥＧＦＲ抗体は、限定されないが、ベバシズマブまたはラムシルマブを含む。いくつかの例では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、追加の治療剤のＡＤＣＣ効果を増大させる。
【０１９８】
いくつかの例では、ＩＬ−１５コンジュゲートを、セツキシマブ、イムガツズマブ、マツズマブ（ＥＭＤ７２０００）、トムゾツキシマブ、またはパニツムマブから選択される追加の治療剤とともに投与する。いくつかの例では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、追加の治療剤のＡＤＣＣ効果を増大させる。
【０１９９】
いくつかの例では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、追加のサイトカイン（例えば、天然サイトカイン、またはＰＥＧ化および／または融合サイトカインなどの操作されたサイトカインのいずれか）から選択される追加の治療剤とともに投与される。いくつかの例では、追加のサイトカインは、Ｔエフェクター細胞の拡大および／または増殖を、増大するおよび／または相乗作用を与える。場合によっては、追加のサイトカインは、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、またはＴＮＦαを含む。場合によっては、追加のサイトカインはＩＬ−２である。場合によっては、追加のサイトカインはＩＬ−２１である。場合によっては、追加のサイトカインはＩＬ−１０である。場合によっては、追加のサイトカインはＴＮＦαである。
【０２００】
いくつかの例では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、受容体アゴニストから選択される追加の治療剤とともに投与される。いくつかの例では、受容体アゴニストは、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）リガンドを含む。場合によっては、ＴＬＲリガンドは、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、またはＴＬＲ９を含む。場合によっては、ＴＬＲリガンドは、合成リガンド、例えば、Ｐａｍ３Ｃｙｓ、ＣＦＡ、ＭＡＬＰ２、Ｐａｍ２Ｃｙｓ、ＦＳＬ−１、Ｈｉｂ−ＯＭＰＣ、ポリＩ：Ｃ、ポリＡ：Ｕ、ＡＧＰ、ＭＰＬ  Ａ、ＲＣ−５２９、ＭＤＦ２β、ＣＦＡ、またはフラジェリンを含む。場合によっては、ＩＬ−２１コンジュゲートは、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、およびＴＬＲ９から選択される１つまたはそれ以上のＴＬＲアゴニストとともに投与される。場合によっては、ＩＬ−１５コンジュゲートは、Ｐａｍ３Ｃｙｓ、ＣＦＡ、ＭＡＬＰ２、Ｐａｍ２Ｃｙｓ、ＦＳＬ−１、Ｈｉｂ−ＯＭＰＣ、ポリＩ：Ｃ、ポリＡ：Ｕ、ＡＧＰ、ＭＰＬ  Ａ、ＲＣ−５２９、ＭＤＦ２β、ＣＦＡ、およびフラジェリンカーら選択される１つまたはそれ以上のＴＬＲとともに投与される。
【０２０１】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１５コンジュゲートは、養子Ｔ細胞移植（ＡＣＴ）療法とともに使用される。一実施形態では、ＡＣＴは、例えば、抗腫瘍活性を有する、対象における自己Ｔリンパ球の同定、インビトロでの自己Ｔリンパ球の拡大、およびその後の対象への拡大されたＴリンパ球の再輸注を伴う。別の実施形態では、ＡＣＴは、例えば、抗腫瘍活性を有する同種Ｔリンパ球の使用、インビトロでのＴリンパ球の拡大、およびそれを必要とする対象への拡大された同種Ｔリンパ球のその後の輸注を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１５コンジュゲートは、ＡＣＴ療法の一部として、自己Ｔリンパ球とともに使用される。他の例では、本明細書に記載されるＩＬ−１５コンジュゲートは、ＡＣＴ療法の一部として、同種Ｔリンパ球とともに使用される。一部の実施形態では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、ＡＣＴ療法と同時に、それを必要とする対象に投与される。他の場合には、ＩＬ−１５コンジュゲートは、ＡＣＴ療法を必要とする対象に、ＡＣＴ療法とともに連続的に投与される。
【０２０２】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１５コンジュゲートは、自己および／または同種Ｔ細胞移植のエクスビボ活性化および／または拡大のために使用される。このような場合、ＩＬ−１５コンジュゲートは、自己Ｔ細胞および／または同種Ｔ細胞を含む試料を活性化および／または拡大するために使用され、ＩＬ−１５コンジュゲートは、それを必要とする対象に試料を投与する前に、場合により試料から除去される。
【０２０３】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１５コンジュゲートは、ワクチンとともに投与される。いくつかの例では、ＩＬ−２１コンジュゲートは、腫瘍崩壊性ウイルスと組み合わせて利用される。このような場合、ＩＬ−２１コンジュゲートは、免疫応答を調節するための刺激剤として作用する。いくつかの例では、ＩＬ−２１コンジュゲートは、アジュバント療法の一部として腫瘍崩壊性ウイルスとともに使用される。例示的な腫瘍崩壊性ウイルスには、Ｔ−Ｖｅｃ（Ａｍｇｅｎ）、Ｇ４７Δ（Ｔｏｄｏら）、ＪＸ−５９４（Ｓｉｌｌａｊｅｎ）、ＣＧ００７０（Ｃｏｌｄ  Ｇｅｎｅｓｙｓ）、およびＲｅｏｌｙｓｉｎ（Ｏｎｃｏｌｙｔｉｃｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）が含まれる。場合によっては、ＩＬ−２１コンジュゲートは、Ｔ−Ｖｅｃ、Ｇ４７Δ、ＪＸ−５９４、ＣＧ００７０、またはＲｅｏｌｙｓｉｎなどの腫瘍崩壊性ウイルスと組み合わせて使用される。
【０２０４】
一部の実施形態では、ＩＬ−１５コンジュゲートは、放射線療法と組み合わせて投与される。
【０２０５】
細胞集団の拡大の方法
一部の実施形態では、本明細書には、リンパ球集団、例えば、エフェクターＴ（Ｔｅｆｆ）細胞、記憶Ｔ（Ｔｍｅｍ）細胞、および／またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞集団を拡大する方法が追加的に記載される。一部の実施形態では、本方法は、本明細書に記載されるサイトカインコンジュゲートと細胞を接触させること、およびサイトカインをサイトカイン受容体と相互作用させて複合体を形成することを含み、複合体は、別個のリンパ球集団の拡大を刺激する。
【０２０６】
一部の実施形態では、エフェクターＴ（Ｔｅｆｆ）細胞、記憶Ｔ（Ｔｍｅｍ）細胞、および／またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞集団を拡大する方法であって、（ａ）細胞を修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートと接触させること、およびＩＬ−１５をＩＬ−１５ＲβおよびＩＬ−１５Ｒγサブユニットと相互作用させてＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒβγ複合体を形成することを含み、ＩＬ−１５コンジュゲートは、ＩＬ−１５Ｒαサブユニットへの低下した親和性を有し、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒβγ複合体はＴｅｆｆ、Ｔｍｅｍ、およびＮＫ細胞の拡大を刺激する。本明細書に記載されるように、一部の実施形態では、修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドは、Ｎ１、Ｗ２、Ｖ３、Ｎ４、Ｉ６、Ｓ７、Ｄ８、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｅ１３、Ｄ１４、Ｌ１５、Ｑ１７、Ｓ１８、Ｍ１９、Ｈ２０、Ｉ２１、Ｄ２２、Ａ２３、Ｔ２４、Ｌ２５、Ｙ２６、Ｔ２７、Ｅ２８、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｐ３３、Ｓ３４、Ｃ３５、Ｋ３６、Ｖ３７、Ｔ３８、Ａ３９、Ｋ４１、Ｌ４４、Ｌ４５、Ｅ４６、Ｑ４８、Ｖ４９、Ｓ５１、Ｌ５２、Ｅ５３、Ｓ５４、Ｇ５５、Ｄ５６、Ａ５７、Ｓ５８、Ｈ６０、Ｄ６１、Ｔ６２、Ｖ６３、Ｅ６４、Ｎ６５、Ｉ６７、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｎ７１、Ｎ７２、Ｓ７３、Ｌ７４、Ｓ７５、Ｓ７６、Ｎ７７、Ｇ７８、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、Ｅ８２、Ｓ８３、Ｇ８４、Ｃ８５、Ｋ８６、Ｅ８７、Ｃ８８、Ｅ８９、Ｅ９０、Ｌ９１、Ｅ９２、Ｅ９３、Ｋ９４、Ｎ９５、Ｉ９６、Ｋ９７、Ｅ９８、Ｌ１００、Ｑ１０１、Ｓ１０２、Ｖ１０４、Ｈ１０５、Ｑ１０８、Ｍ１０９、Ｆ１１０、Ｉ１１１、Ｎ１１２、Ｔ１１３、およびＳ１１４から選択される残基位置で少なくとも１つの翻訳後修飾された非天然アミノ酸を含み、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する。一部の実施形態では、残基位置は、Ｎ１、Ｗ２、Ｖ３、Ｎ４、Ｉ６、Ｓ７、Ｄ８、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｅ１３、Ｄ１４、Ｌ１５、Ｑ１７、Ｓ１８、Ｍ１９、Ｈ２０、Ｉ２１、Ｄ２２、Ａ２３、Ｔ２４、Ｌ２５、Ｙ２６、Ｅ２８、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｐ３３、Ｓ３４、Ｃ３５、Ｋ３６、Ｖ３７、Ｔ３８、Ｋ４１、Ｌ４４、Ｅ４６、Ｑ４８、Ｖ４９、Ｓ５１、Ｌ５２、Ｅ５３、Ｓ５４、Ｇ５５、Ｄ５６、Ａ５７、Ｓ５８、Ｈ６０、Ｄ６１、Ｔ６２、Ｖ６３、Ｅ６４、Ｎ６５、Ｉ６７、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｎ７１、Ｎ７２、Ｓ７３、Ｌ７４、Ｓ７５、Ｓ７６、Ｎ７７、Ｇ７８、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、Ｅ８２、Ｓ８３、Ｇ８４、Ｃ８５、Ｋ８６、Ｅ８７、Ｃ８８、Ｅ８９、Ｅ９０、Ｌ９１、Ｅ９２、Ｅ９３、Ｋ９４、Ｎ９５、Ｉ９６、Ｋ９７、Ｅ９８、Ｌ１００、Ｑ１０１、Ｓ１０２、Ｖ１０４、Ｈ１０５、Ｑ１０８、Ｍ１０９、Ｆ１１０、Ｉ１１１、Ｎ１１２、Ｔ１１３、およびＳ１１４から選択される。一部の実施形態では、残基位置は、Ｅ１３、Ｄ１４、Ｌ１５、Ｑ１７、Ｓ１８、Ｍ１９、Ｈ２０、Ｉ２１、Ｓ３４、Ｃ３５、Ｋ３６、Ｖ３７、Ｔ３８、Ｋ４１、Ｌ４４、Ｓ５１、Ｌ５２、Ｓ５４、Ｇ５５、Ｄ５６、Ａ５７、Ｓ５８、Ｈ６０、Ｖ６３、Ｉ６７、Ｎ７１、Ｓ７３、Ｌ７４、Ｓ７５、Ｓ７６、Ｎ７７、Ｇ７８、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、Ｅ８２、Ｓ８３、Ｇ８４、Ｃ８５、Ｋ８６、Ｅ８７、Ｃ���８、Ｌ９１、Ｅ９２、Ｋ９４、Ｎ９５、Ｉ９６、Ｋ９７、Ｅ９８、Ｌ１００、Ｑ１０１、およびＦ１１０から選択される。一部の実施形態では、残基位置は、Ｄ１４、Ｑ１７、Ｓ１８、Ｋ４１、Ｓ５１、Ｌ５２、Ｇ５５、Ｄ５６、Ａ５７、Ｓ５８、Ｓ７５、Ｓ７６、Ｎ７７、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、Ｓ８３、Ｇ８４、Ｅ９２、Ｋ９４、Ｋ９５、Ｋ９７、およびＥ９８から選択される。一部の実施形態では、残基位置は、Ｎ１、Ｎ４、Ｓ７、Ｄ８、Ｋ１１、Ｄ６１、Ｔ６２、Ｅ６４、Ｎ６５、Ｉ６８、Ｌ６９、およびＮ７２から選択される。一部の実施形態では、残基位置は、Ｖ３、Ｉ６、Ｋ１０、Ｅ２８、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｐ３３、Ｓ１０２、Ｖ１０４、Ｈ１０５、Ｑ１０８、Ｍ１０９、Ｉ１１１、Ｎ１１２、Ｔ１１３、およびＳ１１４から選択される。一部の実施形態では、残基位置は、Ｄ２２、Ａ２３、Ｔ２４、Ｌ２５、Ｙ２６、Ｌ４４、Ｅ４６、Ｑ４８、Ｖ４９、Ｅ５３、Ｅ８９、Ｅ９０、およびＥ９３から選択される。一部の実施形態では、残基位置は、Ｙ２６、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｅ５３、およびＬ２５から選択される。一部の実施形態では、残基位置は、Ｖ３、Ｋ１０、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｈ３２、Ｈ１０５、Ｑ１０８、Ｍ１０９、Ｉ１１１、Ｎ１１２、Ｔ１１３、およびＳ１１４から選択される。一部の実施形態では、残基位置は、Ｎ４、Ｓ７、Ｋ１１、およびＤ６１から選択される。一部の実施形態では、残基位置は、Ｌ２５、Ｅ５３、Ｎ７７、およびＳ８３から選択される。一部の実施形態では、残基位置は、Ｌ２５およびＥ５３から選択される。一部の実施形態では、残基位置は、Ｅ４６、Ｙ２６、Ｖ４９、Ｅ５３、Ｔ２４、Ｎ４、Ｋ１１、Ｎ６５、Ｌ６９、Ｓ１８、Ｈ２０、およびＳ８３から選択される。一部の実施形態では、残基位置は、Ｅ４６、Ｙ２６、Ｖ４９、Ｅ５３、およびＴ２４から選択される。一部の実施形態では、残基位置は、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｅ５３、およびＴ２４から選択される。一部の実施形態では、残基位置は、Ｙ２６、Ｖ４９、Ｅ５３、およびＴ２４から選択される。一部の実施形態では、残基位置は、Ｖ４９、Ｅ５３、およびＴ２４から選択される。一部の実施形態では、残基位置は、Ｅ４６およびＹ２６から選択される。一部の実施形態では、残基位置はＥ４６である。一部の実施形態では、残基位置はＬ２５である。一部の実施形態では、残基位置はＹ２６である。一部の実施形態では、残基位置はＶ４９である。一部の実施形態では、残基位置はＥ５３である。一部の実施形態では、残基位置はＴ２４である。一部の実施形態では、残基位置はＮ７７である。一部の実施形態では、残基位置はＳ８３である。
【０２０７】
本明細書に記載されるエフェクターＴ（Ｔｅｆｆ）細胞、記憶Ｔ（Ｔｍｅｍ）細胞、および／またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞集団を拡大する方法は、一部の実施形態では、細胞をＩＬ−１５コンジュゲートと接触させることを含む。本明細書に記載されるように、一部の実施形態では、インターロイキン１５（ＩＬ−１５）コンジュゲートは、単離および精製されたＩＬ−１５ポリペプチド；ならびにＮ１、Ｗ２、Ｖ３、Ｎ４、Ｉ６、Ｓ７、Ｄ８、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｅ１３、Ｄ１４、Ｌ１５、Ｑ１７、Ｓ１８、Ｍ１９、Ｈ２０、Ｉ２１、Ｄ２２、Ａ２３、Ｔ２４、Ｌ２５、Ｙ２６、Ｔ２７、Ｅ２８、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｐ３３、Ｓ３４、Ｃ３５、Ｋ３６、Ｖ３７、Ｔ３８、Ａ３９、Ｋ４１、Ｌ４４、Ｌ４５、Ｅ４６、Ｑ４８、Ｖ４９、Ｓ５１、Ｌ５２、Ｅ５３、Ｓ５４、Ｇ５５、Ｄ５６、Ａ５７、Ｓ５８、Ｈ６０、Ｄ６１、Ｔ６２、Ｖ６３、Ｅ６４、Ｎ６５、Ｉ６７、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｎ７１、Ｎ７２、Ｓ７３、Ｌ７４、Ｓ７５、Ｓ７６、Ｎ７７、Ｇ７８、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、Ｅ８２、Ｓ８３、Ｇ８４、Ｃ８５、Ｋ８６、Ｅ８７、Ｃ８８、Ｅ８９、Ｅ９０、Ｌ９１、Ｅ９２、Ｅ９３、Ｋ９４、Ｎ９５、Ｉ９６、Ｋ９７、Ｅ９８、Ｌ１００、Ｑ１０１、Ｓ１０２、Ｖ１０４、Ｈ１０５、Ｑ１０８、Ｍ１０９、Ｆ１１０、Ｉ１１１、Ｎ１１２、Ｔ１１３、およびＳ１１４から選択されるアミノ酸位置で単離および精製されたＩＬ−１５ポリペプチドに結合するコンジュゲート化部分を含み、残基位置は、配列番号１に示される位置に対応する。一部の実施形態では、残基位置は、Ｎ１、Ｗ２、Ｖ３、Ｎ４、Ｉ６、Ｓ７、Ｄ８、Ｋ１０、Ｋ１１、Ｅ１３、Ｄ１４、Ｌ１５、Ｑ１７、Ｓ１８、Ｍ１９、Ｈ２０、Ｉ２１、Ｄ２２、Ａ２３、Ｔ２４、Ｌ２５、Ｙ２６、Ｅ２８、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｐ３３、Ｓ３４、Ｃ３５、Ｋ３６、Ｖ３７、Ｔ３８、Ｋ４１、Ｌ４４、Ｅ４６、Ｑ４８、Ｖ４９、Ｓ５１、Ｌ５２、Ｅ５３、Ｓ５４、Ｇ５５、Ｄ５６、Ａ５７、Ｓ５８、Ｈ６０、Ｄ６１、Ｔ６２、Ｖ６３、Ｅ６４、Ｎ６５、Ｉ６７、Ｉ６８、Ｌ６９、Ｎ７１、Ｎ７２、Ｓ７３、Ｌ７４、Ｓ７５、Ｓ７６、Ｎ７７、Ｇ７８、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、Ｅ８２、Ｓ８３、Ｇ８４、Ｃ８５、Ｋ８６、Ｅ８７、Ｃ８８、Ｅ８９、Ｅ９０、Ｌ９１、Ｅ９２、Ｅ９３、Ｋ９４、Ｎ９５、Ｉ９６、Ｋ９７、Ｅ９８、Ｌ１００、Ｑ１０１、Ｓ１０２、Ｖ１０４、Ｈ１０５、Ｑ１０８、Ｍ１０９、Ｆ１１０、Ｉ１１１、Ｎ１１２、Ｔ１１３、およびＳ１１４から選択される。一部の実施形態では、残基位置は、Ｅ１３、Ｄ１４、Ｌ１５、Ｑ１７、Ｓ１８、Ｍ１９、Ｈ２０、Ｉ２１、Ｓ３４、Ｃ３５、Ｋ３６、Ｖ３７、Ｔ３８、Ｋ４１、Ｌ４４、Ｓ５１、Ｌ５２、Ｓ５４、Ｇ５５、Ｄ５６、Ａ５７、Ｓ５８、Ｈ６０、Ｖ６３、Ｉ６７、Ｎ７１、Ｓ７３、Ｌ７４、Ｓ７５、Ｓ７６、Ｎ７７、Ｇ７８、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、Ｅ８２、Ｓ８３、Ｇ８４、Ｃ８５、Ｋ８６、Ｅ８７、Ｃ８８、Ｌ９１、Ｅ９２、Ｋ９４、Ｎ９５、Ｉ９６、Ｋ９７、Ｅ９８、Ｌ１００、Ｑ１０１、およびＦ１１０から選択される。一部の実施形態では、残基位置は、Ｄ１４、Ｑ１７、Ｓ１８、Ｋ４１、Ｓ５１、Ｌ５２、Ｇ５５、Ｄ５６、Ａ５７、Ｓ５８、Ｓ７５、Ｓ７６、Ｎ７７、Ｎ７９、Ｖ８０、Ｔ８１、Ｓ８３、Ｇ８４、Ｅ９２、Ｋ９４、Ｋ９５、Ｋ９７、およびＥ９８から選択される。一部の実施形態では、残基位置は、Ｎ１、Ｎ４、Ｓ７、Ｄ８、Ｋ１１、Ｄ６１、Ｔ６２、Ｅ６４、Ｎ６５、Ｉ６８、Ｌ６９、およびＮ７２から選択される。一部の実施形態では、残基位置は、Ｖ３、Ｉ６、Ｋ１０、Ｅ２８、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｖ３１、Ｈ３２、Ｐ３３、Ｓ１０２、Ｖ１０４、Ｈ１０５、Ｑ１０８、Ｍ１０９、Ｉ１１１、Ｎ１１２、Ｔ１１３、およびＳ１１４から選択される。一部の実施形態では、残基位置は、Ｄ２２、Ａ２３、Ｔ２４、Ｌ２５、Ｙ２６、Ｌ４４、Ｅ４６、Ｑ４８、Ｖ４９、Ｅ５３、Ｅ８９、Ｅ９０、およびＥ９３から選択される。一部の実施形態では、残基位置は、Ｙ２６、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｅ５３、およびＬ２５から選択される。一部の実施形態では、残基位置は、Ｖ３、Ｋ１０、Ｓ２９、Ｄ３０、Ｈ３２、Ｈ１０５、Ｑ１０８、Ｍ１０９、Ｉ１１１、Ｎ１１２、Ｔ１１３、およびＳ１１４から選択される。一部の実施形態では、残基位置は、Ｎ４、Ｓ７、Ｋ１１、およびＤ６１から選択される。一部の実施形態では、残基位置は、Ｌ２５、Ｅ５３、Ｎ７７、およびＳ８３から選択される。一部の実施形態では、残基位置は、Ｌ２５およびＥ５３から選択される。一部の実施形態では、残基位置は、Ｅ４６、Ｙ２６、Ｖ４９、Ｅ５３、Ｔ２４、Ｎ４、Ｋ１１、Ｎ６５、Ｌ６９、Ｓ１８、Ｈ２０、およびＳ８３から選択される。一部の実施形態では、残基位置は、Ｅ４６、Ｙ２６、Ｖ４９、Ｅ５３、およびＴ２４から選択される。一部の実施形態では、残基位置は、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｅ５３、およびＴ２４から選択される。一部の実施形態では、残基位置は、Ｙ２６、Ｖ４９、Ｅ５３、およびＴ２４から選択される。一部の実施形態では、残基位置は、Ｖ４９、Ｅ５３、およびＴ２４から選択される。一部の実施形態では、残基位置は、Ｅ４６およびＹ２６から選択される。一部の実施形態では、残基位置はＥ４６である。一部の実施形態では、残基位置はＬ２５である。一部の実施形態では、残基位置はＹ２６である。一部の実施形態では、残基位置はＶ４９である。一部の実施形態では、残基位置はＥ５３である。一部の実施形態では、残基位置はＴ２４である。一部の実施形態では、残基位置はＮ７７である。一部の実施形態では、残基位置はＳ８３である。
【０２０８】
ＩＬ−１５ポリペプチド生成
一部の実施形態では、天然アミノ酸突然変異または非天然アミノ酸突然変異のいずれかを含む、本明細書中に記載されるＩＬ−１５ポリペプチドは、組換え的に生成されるか、または化学的に合成される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１５ポリペプチドは、組換え的に、例えば、宿主細胞系によって、または無細胞系において、生成される。
【０２０９】
一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、宿主細胞系を介して組換え的に生じる。一部の実施形態では、宿主細胞は、真核細胞（例えば、哺乳動物細胞、昆虫細胞、酵母細胞または植物細胞）、原核細胞（例えば、グラム陽性細菌またはグラム陰性細菌）、または古細菌細胞である。場合によっては、真核生物宿主細胞は、哺乳類宿主細胞である。場合によっては、哺乳動物宿主細胞は、安定な細胞株であるか、または、目的の遺伝物質を自身のゲノムに組み込んで、何世代にもわたる細胞分裂の後に遺伝物質の産物を発現する能力を有する細胞株である。他の場合には、哺乳動物宿主細胞は、一過性の細胞株であるか、または、目的の遺伝物質を自身のゲノムに組み込んでおらず、何世代にもわたる細胞分裂の後にも遺伝物質の産物を発現する能力を有しない細胞株である。
【０２１０】
例示的な哺乳動物宿主細胞としては、２９３Ｔ細胞株、２９３Ａ細胞株、２９３ＦＴ細胞株、２９３Ｆ細胞、２９３Ｈ細胞、Ａ５４９細胞、ＭＤＣＫ細胞、ＣＨＯＤＧ４４細胞、ＣＨＯ−Ｓ細胞、ＣＨＯ−Ｋ１細胞、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ（商標）細胞、Ｆｌｐ−Ｉｎ（商標）Ｔ−ＲＥｘ（商標）２９３細胞株、Ｆｌｐ−Ｉｎ（商標）−２９３細胞株、Ｆｌｐ−Ｉｎ（商標）−３Ｔ３細胞株、Ｆｌｐ−Ｉｎ（商標）−ＢＨＫ細胞株、Ｆｌｐ−Ｉｎ（商標）−ＣＨＯ細胞株、Ｆｌｐ−Ｉｎ（商標）−ＣＶ−１細胞株、Ｆｌｐ−Ｉｎ（商標）−Ｊｕｒｋａｔ細胞株、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３−Ｆ細胞、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＣＨＯ−Ｓ細胞、ＧｒｉｐＴｉｔｅ（商標）２９３ＭＳＲ細胞株、ＧＳ−ＣＨＯ細胞株、ＨｅｐａＲＧ（商標）細胞、Ｔ−ＲＥｘ（商標）Ｊｕｒｋａｔ細胞株、Ｐｅｒ．Ｃ６細胞、Ｔ−ＲＥｘ（商標）−２９３細胞株、Ｔ−ＲＥｘ（商標）−ＣＨＯ細胞株、およびＴ−ＲＥｘ（商標）−ＨｅＬａ細胞株が挙げられる。
【０２１１】
一部の実施形態では、真核生物宿主細胞は、昆虫宿主細胞である。例示的な昆虫宿主細胞としては、ショウジョウバエＳ２細胞、Ｓｆ９細胞、Ｓｆ２１細胞、Ｈｉｇｈ  Ｆｉｖｅ（商標）細胞、およびｅｘｐｒｅｓＳＦ＋（登録商標）細胞が挙げられる。
【０２１２】
一部の実施形態では、真核生物宿主細胞は、酵母宿主細胞である。例示的な酵母宿主細胞としては、ＧＳ１１５、ＫＭ７１Ｈ、ＳＭＤ１１６８、ＳＭＤ１１６８Ｈ、およびＸ−３３などのピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）酵母株、ならびにＩＮＶＳｃ１などのサッカロミケス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）酵母株が挙げられる。
【０２１３】
一部の実施形態では、真核生物宿主細胞は、植物宿主細胞である。一部の実施形態では、植物細胞は、藻類由来の細胞を含む。例示的な植物細胞株としては、コナミドリムシ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ  ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉ）１３７ｃ、またはシネココッカス・エロンガタス（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｌｏｎｇａｔｕｓ）ＰＰＣ  ７９４２由来の株が挙げられる。
【０２１４】
一部の実施形態では、宿主細胞は、原核生物宿主細胞である。例示的な原核宿主細胞としては、ＢＬ２１、Ｍａｃｈ１（商標）、ＤＨ１０Ｂ（商標）、ＴＯＰ１０、ＤＨ５α、ＤＨ１０Ｂａｃ（商標）、ＯｍｎｉＭａｘ（商標）、ＭｅｇａＸ（商標）、ＤＨ１２Ｓ（商標）、ＩＮＶ１１０、ＴＯＰ１０Ｆ’、ＩＮＶαＦ、ＴＯＰ１０／Ｐ３、ｃｃｄＢ  Ｓｕｒｖｉｖａｌ、ＰＩＲ１、ＰＩＲ２、Ｓｔｂｌ２（商標）、Ｓｔｂｌ３（商標）、またはＳｔｂｌ４（商標）が挙げられる。
【０２１５】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−１５ポリペプチドを生成するための適切なポリ核酸分子またはベクターは、真核生物または原核生物起源のいずれかに由来する任意の適切なベクターを含む。例示的なポリ核酸分子またはベクターは、細菌（例えば、大腸菌）、昆虫、酵母（例えば、ピキア・パストリス）、藻類、または哺乳動物起源由来のベクターを含む。細菌ベクターとしては、例えば、ｐＡＣＹＣ１７７、ｐＡＳＫ７５、ｐＢＡＤベクターシリーズ、ｐＢＡＤＭベクターシリーズ、ｐＥＴベクターシリーズ、ｐＥＴＭベクターシリーズ、ｐＧＥＸベクターシリーズ、ｐＨＡＴ、ｐＨＡＴ２、ｐＭａｌ−ｃ２、ｐＭａｌ−ｐ２、ｐＱＥ  ベクターシリーズ、ｐＲＳＥＴ  Ａ、ｐＲＳＥＴ  Ｂ、ｐＲＳＥＴ  Ｃ、ｐＴｒｃＨｉｓ２シリーズ、ｐＺＡ３１−Ｌｕｃ、ｐＺＥ２１−ＭＣＳ−１、ｐＦＬＡＧ  ＡＴＳ、ｐＦＬＡＧ  ＣＴＳ、ｐＦＬＡＧ  ＭＡＣ、ｐＦＬＡＧ  Ｓｈｉｆｔ−１２ｃ、ｐＴＡＣ−ＭＡＴ−１、ｐＦＬＡＧ  ＣＴＣ、またはｐＴＡＣ−ＭＡＴ−２が含まれる。
【０２１６】
昆虫ベクターとしては、例えば、ｐＦａｓｔＢａｃ１、ｐＦａｓｔＢａｃ  ＤＵＡＬ、ｐＦａｓｔＢａｃ  ＥＴ、ｐＦａｓｔＢａｃ  ＨＴａ、ｐＦａｓｔＢａｃ  ＨＴｂ、ｐＦａｓｔＢａｃ  ＨＴｃ、ｐＦａｓｔＢａｃ  Ｍ３０ａ、ｐＦａｓｔＢａｃｔ  Ｍ３０ｂ、ｐＦａｓｔＢａｃ、Ｍ３０ｃ、ｐＶＬ１３９２、ｐＶＬ１３９３、ｐＶＬ１３９３  Ｍ１０、ｐＶＬ１３９３  Ｍ１１、ｐＶＬ１３９３  Ｍ１２、ＦＬＡＧベクター、例えば、ｐＰｏｌｈ−ＦＬＡＧ１もしくはｐＰｏｌｈ−ＭＡＴ  ２、またはＭＡＴベクター、例えば、ｐＰｏｌｈ−ＭＡＴ１、もしくはｐＰｏｌｈ−ＭＡＴ２が挙げられる。
【０２１７】
酵母ベクターとしては、例えば、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ｐＤＥＳＴ（商標）１４ベクター、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ｐＤＥＳＴ（商標）１７ベクター、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ｐＤＥＳＴ（商標）２４ベクター、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ｐＹＥＳ−ＤＥＳＴ５２ベクター、ｐＢＡＤ−ＤＥＳＴ４９Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）デスティネーションベクター、ｐＡＯ８１５ピキアベクター、ｐＦＬＤ１ピキアパストリスベクター、ｐＧＡＰＺＡ、Ｂ、およびＣピキアパストリスベクター、ｐＰＩＣ３．５Ｋピキアベクター、ｐＰＩＣ６Ａ、Ｂ、およびＣピキアベクター、ｐＰＩＣ９Ｋピキアベクター、ｐＴＥＦ１／Ｚｅｏ、ｐＹＥＳ２／酵母ベクター、ｐＹＥＳ２／ＣＴ酵母ベクター、ｐＹＥＳ２／ＮＴＡ、Ｂ、およびＣ酵母ベクター、またはｐＹＥＳ３／ＣＴ酵母ベクターが挙げられる。
【０２１８】
藻類ベクターとしては、例えば、ｐＣｈｌａｍｙ−４ベクターまたはＭＣＳベクターが挙げられる。
【０２１９】
哺乳動物ベクターとしては、例えば、一過性発現ベクターまたは安定な発現ベクターが挙げられる。例示的な哺乳動物一過性発現ベクターとしては、ｐ３ｘＦＬＡＧ−ＣＭＶ  ８、ｐＦＬＡＧ−Ｍｙｃ−ＣＭＶ  １９、ｐＦＬＡＧ−Ｍｙｃ−ＣＭＶ  ２３、ｐＦＬＡＧ−ＣＭＶ  ２、ｐＦＬＡＧ−ＣＭＶ  ６ａ、ｂ、ｃ、ｐＦＬＡＧ−ＣＭＶ  ５．１、ｐＦＬＡＧ−ＣＭＶ  ５ａ、ｂ、ｃ、ｐ３ｘＦＬＡＧ−ＣＭＶ  ７．１、ｐＦＬＡＧ−ＣＭＶ  ２０、ｐ３ｘＦＬＡＧ−Ｍｙｃ−ＣＭＶ  ２４、ｐＣＭＶ−ＦＬＡＧ−ＭＡＴ１、ｐＣＭＶ−ＦＬＡＧ−ＭＡＴ２、ｐＢＩＣＥＰ−ＣＭＶ  ３、またはｐＢＩＣＥＰ−ＣＭＶ  ４が挙げられる。例示的な哺乳動物安定発現ベクターとしては、ｐＦＬＡＧ−ＣＭＶ  ３、ｐ３ｘＦＬＡＧ−ＣＭＶ  ９、ｐ３ｘＦＬＡＧ−ＣＭＶ  １３、ｐＦＬＡＧ−Ｍｙｃ−ＣＭＶ  ２１、ｐ３ｘＦＬＡＧ−Ｍｙｃ−ＣＭＶ  ２５、ｐＦＬＡＧ−ＣＭＶ  ４、ｐ３ｘＦＬＡＧ−ＣＭＶ  １０、ｐ３ｘＦＬＡＧ−ＣＭＶ  １４、ｐＦＬＡＧ−Ｍｙｃ−ＣＭＶ  ２２、ｐ３ｘＦＬＡＧ−Ｍｙｃ−ＣＭＶ  ２６、ｐＢＩＣＥＰ−ＣＭＶ  １、またはｐＢＩＣＥＰ−ＣＭＶ  ２が挙げられる。
【０２２０】
一部の実施形態では、無細胞系は、本明細書に記載されるＩＬ−１５ポリペプチドを生成するために使用される。一部の実施形態では、無細胞系は、細胞由来の細胞質および／または核成分の混合物（例えば、完全に精製された組換え成分または部分的に精製された成分で構成される）を含み、インビトロ核酸合成に適している。いくつかの例では、無細胞系は、原核細胞成分を利用する。他の例では、無細胞系は、真核細胞成分を利用する。核酸合成は、例えば、ショウジョウバエ細胞、アフリカツメガエル卵、古細菌、またはＨｅＬａ細胞に基づく無細胞系において得られる。例示的な無細胞系としては、大腸菌Ｓ３０抽出系、大腸菌Ｔ７  Ｓ３０系、またはＰＵＲＥｘｐｒｅｓｓ（登録商標）、ＸｐｒｅｓｓＣＦ、およびＸｐｒｅｓｓＣＦ＋が挙げられる。
【０２２１】
無細胞翻訳系は、プラスミド、ｍＲＮＡ、ＤＮＡ、ｔＲＮＡ、シンテターゼ、放出因子、リボソーム、シャペロンタンパク質、翻訳開始および伸長因子、天然および／もしくは非天然アミノ酸、ならびに／またはタンパク質発現に使用される他の成分などの成分を様々に含む。このような成分は、場合により、収率を改善し、合成速度を増加させ、タンパク質生成物の忠実度を増加させ、または非天然アミノ酸を組み込むように修飾される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるサイトカインは、米国特許第８，７７８，６３１号明細書；米国特許出願公開第２０１７／０２８３４６９号；米国特許出願公開第２０１８／００５１０６５号；米国特許出願公開第２０１４／０３１５２４５号；または米国特許第８，７７８，６３１号に記載される無細胞翻訳系を用いて合成される。一部の実施形態では、無細胞翻訳系は、修飾された放出因子、または１つもしくはそれ以上の放出因子を系から除去することさえも含む。一部の実施形態では、無細胞翻訳系は、減少したプロテアーゼ濃度を含む。一部の実施形態では、無細胞翻訳系は、非天然アミノ酸をコードするために使用される再割り当てされたコドンを有する修飾されたｔＲＮＡを含む。一部の実施形態では、非天然アミノ酸の組み込みのための本明細書に記載されるシンテターゼは、無細胞翻訳系において使用される。一部の実施形態では、ｔＲＮＡは、無細胞翻訳系に添加される前に、酵素的または化学的方法を用いて、非天然アミノ酸を予めロードされる。一部の実施形態では、無細胞翻訳系のための成分は、修飾された生物、例えば、修飾された細菌、酵母、または他の生物から得られる。
【０２２２】
一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、発現宿主系を介してまたは無細胞系を介して、環状順列形態として生じる。
【０２２３】
非天然アミノ酸を含むＩＬ−１５ポリペプチドの生成
本開示では、直交性または拡張された遺伝暗号を使用することができ、ＩＬ−１５ポリペプチドの核酸配列中に存在する１つまたはそれ以上の特異的コドンは、直交性ｔＲＮＡシンテターゼ／ｔＲＮＡ対を使用することによってＩＬ−１５に遺伝的に組み込まれ得るように、非天然アミノ酸をコードするように割り当てられる。直交性ｔＲＮＡシンテターゼ／ｔＲＮＡ対は、非天然アミノ酸をｔＲＮＡに付加することができ、コドンに応答してその非天然アミノ酸をポリペプチド鎖に組み込むことができる。
【０２２４】
一部の実施形態では、コドンは、コドンアンバー、オーカー、オパールまたは四重項コドンである。場合によっては、コドンは、非天然アミノ酸を運ぶために使われる直交性ｔＲＮＡに対応する。場合によっては、コドンはアンバーである。他の場合には、コドンは、直交性コドンである。
【０２２５】
いくつかの例では、コドンは四重項コドンであり、直交性リボソームｒｉｂｏ−Ｑ１によってデコードされる。場合によっては、四重項コドンは、Ｎｅｕｍａｎｎら、「Ｅｎｃｏｄｉｎｇ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｕｎｎａｔｕｒａｌ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄｓ  ｖｉａ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｑｕａｄｒｕｐｌｅｔ−ｄｅｃｏｄｉｎｇ  ｒｉｂｏｓｏｍｅ」、Ｎａｔｕｒｅ、４６４巻（７２８７号）：４４１〜４４４頁（２０１０年）に例示される通りである。
【０２２６】
いくつかの例では、本開示で使用されるコドンは、記録されたコドン、例えば、同義コドン、または代替コドンで置換される稀なコドンである。場合によっては、再コード化されたコドンは、Ｎａｐｏｌｉｔａｎｏら、「Ｅｍｅｒｇｅｎｔ  ｒｕｌｅｓ  ｆｏｒ  ｃｏｄｏｎ  ｃｈｏｉｃｅ  ｅｌｕｃｉｄａｔｅｄ  ｂｙ  ｅｄｉｔｉｎｇ  ｒａｒｅ  ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｃｏｄｏｎｓ  ｉｎ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ」、ＰＮＡＳ、１１３巻（３８号）：Ｅ５５８８〜５５９７頁（２０１６年）に記載される通りである。場合によっては、再コード化されたコドンは、Ｏｓｔｒｏｖら、「Ｄｅｓｉｇｎ，ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ａｎｄ  ｔｅｓｔｉｎｇ  ｔｏｗａｒｄ  ａ  ５７−ｃｏｄｏｎ  ｇｅｎｏｍｅ」、Ｓｃｉｅｎｃｅ、３５３巻（６３０１号）：８１９〜８２２頁（２０１６年）に記載される通りである。
【０２２７】
一部の実施形態では、１つまたはそれ以上の非天然アミノ酸のＩＬ−１５への組み込みを導く非天然核酸が利用される。例示的な非天然核酸としては、限定されないが、ウラシル−５−イル、ヒポキサンチン−９−イル（Ｉ）、２−アミノアデニン−９−イル、５−メチルシトシン（５−ｍｅ−ｃ）、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、アデニンおよびグアニンの６−メチルおよび他のアルキル誘導体、アデニンおよびグアニンの２−プロピルおよび他のアルキル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミンおよび２−チオシトシン、５−ハロウラシルおよびシトシン、５−プロピルウラシルおよびシトシン、６−アゾウラシル、シトシンおよびチミン、５−ウラシル（プソイドウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロ、８−アミノ、８−チオール、８−チオアルキル、８−ヒドロキシルおよび他の８−置換アデニンおよびグアニン、５−ハロ、特に５−ブロモ、５−トリフルオロメチルおよび他の５−置換ウラシルおよびシトシン、７−メチルグアニンおよび７−メチルアデニン、８−アザグアニンおよび８−アザアデニン、７−デアザグアニンおよび７−デアザアデニンならびに３−デアザグアニンおよび３−デアザアデニンが挙げられる。特定の非天然核酸、例えば、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジンおよびＮ−２置換プリン、Ｎ−６置換プリン、Ｏ−６置換プリン、２−アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシル、５−プロピニルシトシン、５−メチルシトシン、二重鎖形成の安定性を増加させるもの、ユニバーサル核酸、疎水性核酸、無差別核酸、サイズ拡大核酸、フッ素化核酸、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジンおよびＮ−２、Ｎ−６および０−６置換プリン、例えば、２−アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシルおよび５−プロピニルシトシン、５−メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃ）、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、６−メチル、アデニンおよびグアニンの他のアルキル誘導体、アデニンおよびグアニンの２−プロピルおよび他のアルキル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミンおよび２−チオシトシン、５−ハロウラシル、５−ハロシトシン、５−プロピニル（−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３）ウラシル、５−プロピニルシトシン、ピリミジン核酸の他のアルキニル誘導体、６−アゾウラシル、６−アゾシトシン、６−アゾチミン、５−ウラシル（プソイドウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロ、８−アミノ、８−チオール、８−チオアルキル、８−ヒドロキシルおよび他の８−置換アデニンおよびグアニン、５−ハロ、特に５−ブロモ、５−トリフルオロメチル、他の５−置換ウラシルおよびシトシン、７−メチルグアニン、７−メチルアデニン、２−Ｆ−アデニン、２−アミノ−アデニン、８−アザグアニン、８−アザアデニン、７−デアザグアニン、７−デアザアデニン、３−デアザグアニン、３−デアザアデニン、三環式ピリミジン、フェノキサジンシチジン（［５，４−ｂ］［１，４］ベンゾキサジン−２（３Ｈ）−オン）、フェノチアジンシチジン（１Ｈ−ピリミド［５，４−ｂ］［１，４］ベンゾチアジン−２（３Ｈ）−オン）、Ｇ−クランプ、フェノキサジンシチジン（例えば、９−（２−アミノエトキシ）−Ｈ−ピリミド［５，４−ｂ］［１，４］ベンゾキサジン−２（３Ｈ）−オン）、カルバゾールシチジン（２Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−２−オン）、ピリドインドールシチジン（Ｈ−ピリド［３’，２’：４，５］ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−オン）、プリンまたはピリミジン塩基が他の複素環で置換されているもの、７−デアザアデニン、７−デアザグアノシン、２−アミノピリジン、２−ピリドン、アザシトシン、５−ブロモシトシン、ブロモウラシル、５−クロロシトシン、塩素化シトシン、シクロシトシン、シトシンアラビノシド、５−フルオロシトシン、フルオロピリミジン、フルオロウラシル、５，６−ジヒドロシトシン、５−ヨードシトシン、ヒドロキシ尿素、ヨードウラシル、５−ニトロシトシン、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、５−フルオロウラシル、および５−ヨードウラシル、２−アミノ−アデニン、６−チオ−グアニン、２−チオ−チミン、４−チオ−チミン、５−プロピニル−ウラシル、４−チオ−ウラシル、Ｎ４−エチルシトシン、７−デアザグアニン、７−デアザ−８−アザグアニン、５−ヒドロキシシトシン、２’−デオキシウリジン、２−アミノ−２’−デオキシアデノシン、ならびに米国特許第３，６８７，８０８号；同第４，８４５，２０５号；同第４，９１０，３００号；同第４，９４８，８８２号；同第５，０９３，２３２号；同第５，１３０，３０２号；同第５，１３４，０６６号；同第５，１７５，２７３号；同第５，３６７，０６６号；同第５，４３２，２７２号；同第５，４５７，１８７号；同第５，４５９，２５５号；同第５，４８４，９０８号；同第５，５０２，１７７号；同第５，５２５，７１１号；同第５，５５２，５４０号；同第５，５８７，４６９号；同第５，５９４，１２１号；同第５，５９６，０９１号；同第５，６１４，６１７号；同第５，６４５，９８５号；同第５，６８１，９４１号；同第５，７５０，６９２号；同第５，７６３，５８８号；同第５，８３０，６５３号；および同第６，００５，０９６号；国際公開第ＷＯ９９／６２９２３号；Ｋａｎｄｉｍａｌｌａら、（２００１年）Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、９巻：８０７〜８１３頁；Ｔｈｅ  Ｃｏｎｃｉｓｅ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、Ｋｒｏｓｃｈｗｉｔｚ，Ｊ．Ｉ．編集、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、１９９０年、８５８〜８５９頁；Ｅｎｇｌｉｓｃｈら、Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ  Ｃｈｅｍｉｅ、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、１９９１年、３０巻、６１３頁；およびＳａｎｇｈｖｉ、Ｃｈａｐｔｅｒ  １５、Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｃｒｏｏｋｅａｎｄ  Ｌｅｂｌｅｕ編集、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、１９９３年、２７３〜２８８頁に記載されているもの。追加の塩基修飾は、例えば、米国特許第３，６８７，８０８号；Ｅｎｇｌｉｓｃｈら、Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ  Ｃｈｅｍｉｅ、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、１９９１年、３０巻、６１３頁；およびＳａｎｇｈｖｉ、Ｃｈａｐｔｅｒ  １５、Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓ���ａｒｃｈ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、２８９〜３０２頁、Ｃｒｏｏｋｅ  ａｎｄ  Ｌｅｂｌｅｕ編集、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、１９９３年に見出すことができる。
【０２２８】
種々の複素環塩基および種々の糖部分（および糖類似体）を含む非天然核酸が当該技術分野において入手可能であり、場合によっては、核酸は、天然に存在する核酸の主な５塩基成分以外の１つまたは複数の複素環塩基を含む。例えば、複素環塩基は、場合によっては、ウラシル−５−イル、シトシン−５−イル、アデニン−７−イル、アデニン−８−イル、グアニン−７−イル、グアニン−８−イル、４−アミノピロロ［２．３−ｄ］ピリミジン−５−イル、２−アミノ−４−オキソピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル、２−アミノ−４−オキソピロロ［２．３−ｄ］ピリミジン−３−イル基を含み、プリンは、９位を介して核酸の糖部分に、１位を介してピリミジンに、７位を介してピロロピリミジンに、および１位を介してピラゾロピリミジンに結合する。
【０２２９】
一部の実施形態では、ヌクレオチド類似体はまた、リン酸部分で修飾される。修飾されたリン酸部分には、限定されないが、２つのヌクレオチド間の連結において修飾を有するものを含み、例えば、ホスホロチオエート、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、メチルおよび３’−アルキレンホスホネートおよびキラルホスホネートを含む他のアルキルホスホネート、ホスフィネート、ホスホルアミデート、例えば、３’−アミノホスホルアミデートおよびアミノアルキルホスホルアミデート、チオノホスホルアミデート、チオノアルキルホスホオネート、チオノアルキルホスホトリエステル、およびボラノホスフェートが含まれる、２つのヌクレオチド間のこれらのリン酸または修飾されたリン酸連結は、３’−５’連結または２’−５’連結を介しており、連結は、３’−５’から５’−３’、または２’−５’から５’−２’などの逆極性を含むことが理解される。種々の塩、混合塩および遊離酸形態も含まれる。多数の米国特許は、修飾されたリン酸塩を含有するヌクレオチドの製造および使用方法を教示し、限定されないが、米国特許第３，６８７，８０８号；同第４，４６９，８６３号；同第４，４７６，３０１号；同第５，０２３，２４３号；同第５，１７７，１９６号；同第５，１８８，８９７号；同第５，２６４，４２３号；同第５，２７６，０１９号；同第５，２７８，３０２号；同第５，２８６，７１７号；同第５，３２１，１３１号；同第５，３９９，６７６号；同第５，４０５，９３９号；同第５，４５３，４９６号；同第５，４５５，２３３号；同第５，４６６，６７７号；同第５，４７６，９２５号；同第５，５１９，１２６号；同第５，５３６，８２１号；同第５，５４１，３０６号；同第５，５５０，１１１号；同第５，５６３，２５３号；同第５，５７１，７９９号；同第５，５８７，３６１号；および同第５，６２５，０５０号が挙げられる。
【０２３０】
一部の実施形態では、非天然核酸は、２’，３’−ジデオキシ−２’，３’−ジデヒドロ−ヌクレオシド（ＰＣＴ／ＵＳ２００２／００６４６０）、５’−置換ＤＮＡおよびＲＮＡ誘導体（ＰＣＴ／ＵＳ２００２／０３３９６１；Ｓａｈａら、Ｊ．Ｏｒｇ  Ｃｈｅｍ．、１９９５年、６０巻、７８８〜７８９頁；Ｗａｎｇら、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、１９９９年、９巻、８８５〜８９０頁；およびＭｉｋｈａｉｌｏｖら、Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ＆  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ、１９９１年、１０巻（１〜３号）、３３９〜３４３頁；Ｌｅｏｎｉｄら、１９９５年、１４巻（３〜５号）、９０１〜９０５頁；およびＥｐｐａｃｈｅｒら、Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ、２００４年、８７巻、３００４〜３０２０頁；ＰＣＴ／ＪＰ２０００／００４７２０；ＰＣＴ／ＪＰ２００３／００２３４２；ＰＣＴ／ＪＰ２００４／０１３２１６；ＰＣＴ／ＪＰ２００５／０２０４３５；ＰＣＴ／ＪＰ２００６／３１５４７９；ＰＣＴ／ＪＰ２００６／３２４４８４；ＰＣＴ／ＪＰ２００９／０５６７１８；ＰＣＴ／ＪＰ２０１０／０６７５６０）、または修飾塩基を有する一リン酸塩として作製された５’−置換モノマーが含まれる。
【０２３１】
一部の実施形態では、非天然核酸には、５’−ＣＨ２−置換２’−Ｏ−保護ヌクレオシド（Ｗｕら、Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ、２０００年、８３巻、１１２７〜１１４３頁、およびＷｕら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．、１９９９年、１０巻、９２１〜９２４頁）などの糖環（ＰＣＴ／ＵＳ９４／０２９９３）の５’位および２’位での修飾が含まれる。場合によっては、非天然核酸には、オリゴヌクレオチドへの組み込みのために製造されたアミド連結ヌクレオシド二量体が含まれ、二量体中の３’結連結ヌクレオシド（５’から３’）は、２’−ＯＣＨ３および５’−（Ｓ）−ＣＨ３を含む（Ｍｅｓｍａｅｋｅｒら、Ｓｙｎｌｅｔｔ、１９９７年、１２８７〜１２９０頁）。非天然核酸は、２’−置換５’−ＣＨ２（またはＯ）修飾ヌクレオシド（ＰＣＴ／ＵＳ９２／０１０２０）を含むことができる。非天然核酸は、５’−メチレンホスホネートＤＮＡおよびＲＮＡモノマー、および二量体を含むことができる（Ｂｏｈｒｉｎｇｅｒら、Ｔｅｔ．Ｌｅｔｔ．、１９９３年、３４巻、２７２３〜２７２６頁；Ｃｏｌｌｉｎｇｗｏｏｄら、Ｓｙｎｌｅｔｔ、１９９５年、７巻、７０３〜７０５頁；およびＨｕｔｔｅｒら、Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ、２００２年、８５巻、２７７７〜２８０６頁）。非天然核酸は、２’−置換（米国特許出願公開第２００６／０００７４０３５号）および他の修飾５’−ホスホネートモノマー（国際公開第ＷＯ１９９７／３５８６９号）を有する５’−ホスホネートモノマーを含むことができる。非天然核酸は、５’−修飾メチレンホスホネートモノマー（ＥＰ６１４９０７およびＥＰ６２９６３３）を含むことができる。非天然核酸は、５’および／または６’位にヒドロキシル基を含む５’または６’−ホスホネートリボヌクレオシドの類似体を含むことができる（Ｃｈｅｎら、Ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ，Ｓｕｌｆｕｒ  ａｎｄ  Ｓｉｌｉｃｏｎ、２００２年、７７７巻、１７８３〜１７８６頁；Ｊｕｎｇら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、２０００年、８巻、２５０１〜２５０９頁；Ｇａｌｌｉｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、２００７年、９２５〜９３３頁；およびＨａｍｐｔｏｎら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、１９７６年、１９巻（８号）、１０２９〜１０３３頁）。非天然核酸は、５’−ホスホネートデオキシリボヌクレオシドモノマーおよび５’−リン酸基を有する二量体を含むことができる（Ｎａｗｒｏｔら、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ、２００６年、１６巻（１号）、６８〜８２頁）。非天然核酸は、６’−ホスホネート基を有するヌクレオシドを含むことができ、５’または／および６’位は、置換されないか、またはチオ−ｔｅｒｔ−ブチル基（ＳＣ（ＣＨ３）３）（およびその類似体）；メチレンアミノ基（ＣＨ２ＮＨ２）（およびその類似体）もしくはシアノ基（ＣＮ）（およびその類似体）で置換されている（Ｆａｉｒｈｕｒｓｔら、Ｓｙｎｌｅｔｔ、２００１年、４巻、４６７〜４７２頁；Ｋａｐｐｌｅｒら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、１９８６年、２９巻、１０３０〜１０３８頁；Ｋａｐｐｌｅｒら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、１９８２年、２５巻、１１７９〜１１８４頁；Ｖｒｕｄｈ���ｌａら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、１９８７年、３０巻、８８８〜８９４頁；Ｈａｍｐｔｏｎら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、１９７６年、１９巻、１３７１〜１３７７頁；Ｇｅｚｅら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ、１９８３年、１０５巻（２６号）、７６３８〜７６４０頁；およびＨａｍｐｔｏｎら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ、１９７３年、９５巻（１３号）、４４０４〜４４１４頁）。
【０２３２】
一部の実施形態では、非天然核酸はまた、糖部分の修飾を含む。場合によっては、核酸は、糖基が修飾された１つまたはそれ以上のヌクレオシドを含む。このような糖修飾されたヌクレオシドは、増大したヌクレアーゼ安定性、増加した結合親和性、またはいくつかの他の有益な生物学的特性を付与し得る。特定の実施形態では、核酸は、化学的に修飾されたリボフラノース環部分を含む。化学的に修飾されたリボフラノース環の例としては、限定されないが、置換基（５’および／または２’置換基を含む）の付加；二環核酸（ＢＮＡ）を形成するための２つの環原子の架橋；リボシル環酸素原子のＳ、Ｎ（Ｒ）、またはＣ（Ｒ１）（Ｒ２）（Ｒ＝Ｈ、Ｃ１−Ｃ１２アルキルまたは保護基）での置換；およびそれらの組み合わせが挙げられる。化学的に修飾された糖の例は、国際公開第ＷＯ２００８／１０１１５７号、米国特許出願公開第２００５／０１３０９２３号、および国際公開第ＷＯ２００７／１３４１８１号に見出すことができる。
【０２３３】
いくつかの例では、修飾された核酸は、修飾された糖または糖類似体を含む。したがって、リボースおよびデオキシリボースに加えて、糖部分は、ペントース、デオキシペントース、ヘキソース、デオキシヘキソース、グルコース、アラビノース、キシロース、リキソース、または糖「類似体」シクロペンチル基であり得る。糖は、ピラノシルまたはフラノシル形であり得る。糖部分は、リボース、デオキシリボース、アラビノースまたは２’−Ｏ−アルキルリボースのフラノシドであり、糖は、［アルファ］または［ベータ］アノマ立体配置のいずれかで、それぞれの複素環塩基に結合される。糖修飾には、限定されないが、２’−アルコキシ−ＲＮＡ類似体、２’−アミノ−ＲＮＡ類似体、２’−フルオロ−ＤＮＡ、および２’−アルコキシ−またはアミノ−ＲＮＡ／ＤＮＡキメラが含まれる。例えば、糖修飾は、２’−Ｏ−メチル−ウリジンまたは２’−Ｏ−メチル−シチジンを含み得る。糖修飾には、２’−Ｏ−アルキル置換デオキシリボヌクレオシドおよび２’−Ｏ−エチレングリコール様リボヌクレオシドが含まれる。これらの糖または糖類似体、およびこのような糖または類似体が複素環塩基（核酸塩基）に結合しているそれぞれの「ヌクレオシド」の製造は公知である。また、糖修飾を行い、他の修飾と組み合わせることができる。
【０２３４】
糖部分への修飾には、リボースおよびデオキシリボースの天然修飾ならびに非天然修飾が含まれる。糖修飾には、限定されないが、２’位での以下の修飾が含まれる：ＯＨ；Ｆ；Ｏ−、Ｓ−またはＮ−アルキル；Ｏ−、Ｓ−またはＮ−アルケニル；Ｏ−、Ｓ−またはＮ−アルキニル；またはＯ−アルキル−Ｏ−アルキル（アルキル、アルケニルおよびアルキニルは、置換または非置換のＣ１〜Ｃ１０アルキル、またはＣ２〜Ｃ１０アルケニルおよびアルキニルであり得る）。また、２’糖修飾には、限定されておらず、−Ｏ［（ＣＨ２）ｎＯ］ｍＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＮＨ２、および−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＮ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３）］２（ｎおよびｍは、１〜約１０である）が含まれる。
【０２３５】
２’位における他の修飾には、限定されないが、Ｃ１〜Ｃ１０低級アルキル、置換された低級アルキル、アルカリル、アラルキル、Ｏ−アルカリル、Ｏ−アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ３、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３、ＮＨ２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換されたシリル、ＲＮＡ切断基、レポーター基、インターカレーター、オリゴヌクレオチドの薬物動態特性を改善するための基、またはオリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改善するための基、および同様の特性を有する他の置換基が含まれる。同様の修飾はまた、糖上の他の位置、特に、３’末端ヌクレオチド上の糖の３’位置で、または２’−５’連結オリゴヌクレオチド中の糖の５’位置、および５’末端ヌクレオチドの５’位置において行うことができる。また、修飾された糖には、ＣＨ２およびＳなどの架橋環酸素の修飾を含むものが含まれる。ヌクレオチド糖類似体はまた、ペントフラノシル糖の代わりにシクロブチル部分などの糖模倣体を有することができる。このような修飾された糖構造の製造を教示し、一連の塩基修飾を詳細に記載する多数の米国特許が存在し、例えば、米国特許第４，９８１，９５７号；同第５，１１８，８００号；同第５，３１９，０８０号；同第５，３５９，０４４号；同第５，３９３，８７８号；同第５，４４６，１３７号；同第５，４６６，７８６号；同第５，５１４，７８５号；同第５，５１９，１３４号；同第５，５６７，８１１号；同第５，５７６，４２７号；同第５，５９１，７２２号；同第５，５９７，９０９号；同第５，６１０，３００号；同第５，６２７，０５３号；同第５，６３９，８７３号；同第５，６４６，２６５号；同第５，６５８，８７３号；同第５，６７０，６３３号；同第４，８４５，２０５号；同第５，１３０，３０２号；同第５，１３４，０６６号；同第５，１７５，２７３号；同第５，３６７，０６６号；同第５，４３２，２７２号；同第５，４５７，１８７号；同第５，４５９，２５５号；同第５，４８４，９０８号；同第５，５０２，１７７号；同第５，５２５，７１１号；同第５，５５２，５４０号；同第５，５８７，４６９号；同第５，５９４，１２１，同第５，５９６，０９１号；同第５，６１４，６１７号；同第５，６８１，９４１号；および同第５，７００，９２０号が挙げられ、各々は参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。
【０２３６】
修飾された糖部分を有する核酸の例としては、限定されないが、５’−ビニル、５’−メチル（ＲまたはＳ）、４’−Ｓ、２’−Ｆ、２’−ＯＣＨ３、および２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３置換基を含む核酸が挙げられる。２’位の置換基はまた、アリル、アミノ、アジド、チオ、Ｏ−アリル、Ｏ−（Ｃ１−Ｃ１Ｏアルキル）、ＯＣＦ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）、およびＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）から選択することができ、各ＲｍおよびＲｎは、独立して、Ｈまたは置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ１Ｏアルキルである。
【０２３７】
特定の実施形態では、本明細書に記載される核酸は、１つまたはそれ以上の二環状核酸を含む。特定のこのような実施形態では、二環式核酸は、４’および２’リボシル環原子間の架橋を含む。特定の実施形態では、本明細書で提供される核酸は、１つまたはそれ以上の二環状核酸を含み、架橋は、４’から２’の二環状核酸を含む。このような４’から２’の二環式核酸の例としては、限定されないが、４’−（ＣＨ２）−Ｏ−２’（ＬＮＡ）；４’−（ＣＨ２）−Ｓ−２’；４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’（ＥＮＡ）；４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’および４’−ＣＨ（ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−２’、ならびにそれらの類似体（例えば、米国特許第７，３９９，８４５号を参照されたい）；４’−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ３）−Ｏ−２’およびその類似体（国際公開第ＷＯ２００９／００６４７８号、国際公開第ＷＯ２００８／１５０７２９号、米国特許出願公開第２００４／０１７１５７０号、米国特許第７，４２７，６７２号、Ｃｈａｔｔｏｐａｄｈｙａｙａら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、２００９年、７４巻、１１８〜１３４号および国際公開第ＷＯ２００８／１５４４０１号を参照されたい）。また、例えば、Ｓｉｎｇｈら、Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．、１９９８年、４巻、４５５〜４５６頁；Ｋｏｓｈｋｉｎら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、１９９８年、５４巻、３６０７〜３６３０頁；Ｗａｈｌｅｓｔｅｄｔら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、２０００年、９７巻、５６３３〜５６３８頁；Ｋｕｍａｒら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１９９８年、８巻、２２１９〜２２２２頁；Ｓｉｎｇｈら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、１９９８年、６３巻、１００３５〜１００３９頁；Ｓｒｉｖａｓｔａｖａら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、２００７年、１２９巻（２６号）８３６２〜８３７９頁；Ｅｌａｙａｄｉら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｉｎｖｅｎｓ．Ｄｒｕｇｓ、２００１年、２巻、５５８〜５６１頁；Ｂｒａａｓｃｈら、Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ、２００１年、８巻、１〜７頁；Ｏｒａｍら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．，２００１年、３巻、２３９〜２４３頁；米国特許第４，８４９，５１３号；同第５，０１５，７３３号；同第５，１１８，８００号；同第５，１１８，８０２号；同第７，０５３，２０７号；同第６，２６８，４９０号；同第６，７７０，７４８号；同第６，７９４，４９９号；同第７，０３４，１３３号；同第６，５２５，１９１号；同第６，６７０，４６１号；および同第７，３９９，８４５号；国際公開第ＷＯ２００４／１０６３５６号、同ＷＯ１９９４／１４２２６号、同第ＷＯ２００５／０２１５７０号、同第ＷＯ２００７／０９００７１号、および同第ＷＯ２００７／１３４１８１号；米国特許出願公開第２００４／０１７１５７０号、同第２００７／０２８７８３１号、および同第２００８／００３９６１８号；米国仮特許出願第６０／９８９，５７４号、同第６１／０２６，９９５号、同第６１／０２６，９９８号、同第６１／０５６，５６４号、同第６１／０８６，２３１号、同第６１／０９７，７８７号、および同第６１／０９９，８４４号；ならびに国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６４５９１号、同��ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６６１５４号、同第ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６８９２２号、および同第ＰＣＴ／ＤＫ９８／００３９３号を参照されたい。
【０２３８】
特定の実施形態では、核酸は、連結した核酸を含む。核酸は、任意の核酸間連結を用いて一緒に連結することができる。核酸間連結基の２つの主要なクラスは、リン原子の有無によって定義される。核酸間連結を含む代表的なリンとしては、限定されないが、ホスホジエステル、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、ホスホラミデート、およびホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）が挙げられる。代表的な非リン含有核酸連結基としては、限定されないが、メチレンメチルイミノ（−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｏ−ＣＨ２−）、チオジエステル（−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｓ−）、チオノカルバメート（−Ｏ−Ｃ（Ｏ）（ＮＨ）−Ｓ−）；シロキサン（−Ｏ−Ｓｉ（Ｈ）２−Ｏ−）；およびＮ，Ｎ＊−ジメチルヒドラジン（−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｎ（ＣＨ３））が挙げられる。特定の実施形態では、キラル原子を有する核酸間連結は、ラセミ混合物として、別個のエナンチオマー、例えば、アルキルホスホネートおよびホスホロチオエートとして製造することができる。非天然核酸は単一の修飾を含むことができる。非天然核酸は、１つの部分内または異なる部分間に複数の修飾を含有することができる。
【０２３９】
核酸に対する骨格リン酸修飾としては、限定されないが、メチルホスホネート、ホスホロチオエート、ホスホロアミデート（架橋または非架橋）、ホスホトリエステル、ホスホロジチオエート、ホスホジチオエート、およびボラノホスフェートが挙げられ、任意の組み合わせで使用することができる。他の非リン酸連結もまた使用することができる。
【０２４０】
特定の実施形態では、骨格修飾（例えば、メチルホスホネート、ホスホロチオエート、ホスホロアミデートおよびホスホロジチオエートヌクレオチド間連結）は、修飾された核酸に対して免疫調節活性を付与することができ、および／またはインビボでのそれらの安定性を増大させることができる。
【０２４１】
いくつかの例では、リン誘導体（または修飾されたリン酸基）は、糖または糖類似体部分に結合され、一リン酸、二リン酸、三リン酸、アルキルホスホネート、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロアミデートなどであり得る。修飾されたリン酸連結または非リン酸連結を含む例示的なポリヌクレオチドは、Ｐｅｙｒｏｔｔｅｓら、１９９６年、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、２４巻：１８４１〜１８４８頁；Ｃｈａｔｕｒｖｅｄｉら、１９９６年、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、２４巻：２３１８〜２３２３頁；およびＳｃｈｕｌｔｚら、（１９９６年）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、２４巻：２９６６〜２９７３頁；Ｍａｔｔｅｕｃｃｉ、１９９７年、「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ａｎａｌｏｇｓ：ａｎ  Ｏｖｅｒｖｉｅｗ」、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｓ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ、（Ｃｈａｄｗｉｃｋ  ａｎｄ  Ｃａｒｄｅｗ編集）、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ；Ｚｏｎ、１９９３年、「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ  Ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅｓ」、Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｆｏｒ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｓ、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、１６５〜１９０頁；Ｍｉｌｌｅｒら、１９７１年、ＪＡＣＳ、９３巻：６６５７〜６６６５頁；Ｊａｇｅｒら、１９８８年、Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２７巻：７２４７〜７２４６頁；Ｎｅｌｓｏｎら、１９９７年、ＪＯＣ、６２巻：７２７８〜７２８７頁；米国特許第５，４５３，４９６号；およびＭｉｃｋｌｅｆｉｅｌｄ、２００１年、Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、８巻：１１５７〜１１７９頁に見出すことができる。
【０２４２】
場合によっては、骨格修飾は、ホスホジエステル連結を、アニオン性、中性またはカチオン性基などの別の部分で置換することを含む。このような修飾の例としては、アニオン性ヌクレオシド間連結；Ｎ３’からＰ５’ホスホラミデート修飾；ボラノホスフェートＤＮＡ；プロオリゴヌクレオチド；メチホスホネートなどの中性ヌクレオシド間連結；アミド連結されたＤＮＡ；メチレン（メチルイミノ）連結；ホルマセタールおよびチオフォームアセタール連結；スルホニル基を含む骨格；モルホリノオリゴ；ペプチド核酸（ＰＮＡ）；および正に荷電したデオキシリボ核酸グアニジン（ＤＮＧ）オリゴ（Ｍｉｃｋｌｅｆｉｅｌｄ、２００１年、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、８巻：１１５７〜１１７９頁）が挙げられる。修飾核酸は、１つまたはそれ以上の修飾、例えば、ホスホジエステルおよびホスホロチオエート連結の組み合わせなどのリン酸連結の組み合わせを含む、キメラまたは混合骨格を含み得る。
【０２４３】
リン酸塩の置換基としては、例えば、短鎖アルキルもしくはシクロアルキルヌクレオシド間連結、混合ヘテロ原子およびアルキルもしくはシクロアルキルヌクレオシド間連結、または１つまたはそれ以上の短鎖ヘテロ原子もしくは複素環ヌクレオシド間連結が挙げられる。これらには、モルホリノ連結（ヌクレオシドの糖部分から部分的に形成される）；シロキサン骨格；スルフィド、スルホキシドおよびスルホン骨格；ホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格；メチレンホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格；アルケン含有骨格；スルファメート骨格；メチレンイミノおよびメチレンヒドラジノ骨格；スルホネートおよびスルホンアミド骨格；アミド骨格；ならびに混合Ｎ、Ｏ、ＳおよびＣＨ２構成部分を有する他のものが含まれる。多数の米国特許は、これらのタイプのリン酸塩置換を製造し、使用する方法を開示しており、限定されないが、米国特許第５，０３４，５０６号；同第５，１６６，３１５号；同第５，１８５，４４４号；同第５，２１４，１３４号；同第５，２１６，１４１号；同第５，２３５，０３３号；同第５，２６４，５６２号；同第５，２６４，５６４号；同第５，４０５，９３８号；同第５，４３４，２５７号；同第５，４６６，６７７号；同第５，４７０，９６７号；同第５，４８９，６７７号；同第５，５４１，３０７号；同第５，５６１，２２５号；同第５，５９６，０８６号；同第５，６０２，２４０号；同第５，６１０，２８９号；同第５，６０２，２４０号；同第５，６０８，０４６号；同第５，６１０，２８９号；同第５，６１８，７０４号；同第５，６２３，０７０号；同第５，６６３，３１２号；同第５，６３３，３６０号；同第５，６７７，４３７号；および同第５，６７７，４３９号が挙げられる。また、ヌクレオチドの糖とリン酸部分の両方が、例えば、アミド型連結（アミノエチルグリジン）（ＰＮＡ）によって置換されることもヌクレオチド置換において理解される。米国特許第５，５３９，０８２号；同第５，７１４，３３１号；および同第５，７１９，２６２号は、ＰＮＡ分子の作製法および使用法を教示しており、これらの各々は、参照により本明細書に組み込まれる。Ｎｉｅｌｓｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９１年、２５４巻、１４９７〜１５００頁も参照されたい。他のタイプの分子（コンジュゲート）をヌクレオチドまたはヌクレオチド類似体に連結させて、例えば、細胞取り込みを増大させることも可能である。コンジュゲートは、ヌクレオチドまたはヌクレオチド類似体に化学的に連結することができる。このようなコンジュゲートには、限定されないが、脂質部分、例えば、コレステロール部分（Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９８９年、８６巻、６５５３〜６５５６頁）、コール酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ．、１９９４年、４巻、１０５３〜１０６０頁）、チオエーテル、例えば、ヘキシル−Ｓ−トリチルチオール（Ｍａｎｏｈａｒａｎら、Ａｎｎ．ＫＹ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、１９９２年、６６０巻、３０６〜３０９頁；Ｍａｎｏｈａｒａｎら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ．、１９９３年、３巻、２７６５〜２７７０頁）、チオコレステロール（Ｏｂｅｒｈａｕｓｅｒら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、１９９２年、２０巻、５３３〜５３８頁）、脂肪族鎖、例えば、ドデカンジオールもしくはウンデシル残基（Ｓａｉｓｏｎ−Ｂｅｈｍｏａｒａｓら、ＥＭ５Ｏ  Ｊ、１９９１年、１０巻、１１１１〜１１１８頁；Ｋａｂａｎｏｖら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．、１９９０年、２５９巻、３２７〜３３０頁；Ｓｖｉｎａｒｃｈｕｋら、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ、１９９３年、７５巻、４９〜５４頁）、リン脂質、例えば、ジヘキサデシル−ｒａｃ−グリセリンもしくはトリエチルアンモニウム  １−ジ−Ｏ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロ−Ｓ−Ｈ−ホスホネート（Ｍａｎｏｈａｒａｎら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．、１９９５年、３６巻、３６５１〜３６５４頁；Ｓｈｅａら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、１９９０年、１８巻、３７７７〜３７８３頁）、ポリアミンもしくはポリエチレングリコール鎖（Ｍａｎｏｈａｒａｎら、Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ＆  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ、１９９５年、１４巻、９６９〜９７３頁）、またはアダマンタン酢酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．ら、１９９５年、３６巻、３６５１〜３６５４頁）、パルミチル部分（Ｍｉｓｈｒａら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ、１９９５年、１２６４巻、２２９〜２３７頁）、またはオクタデシルアミンもしくはヘキシルアミノ−カルボニル−オキシコレステロール部分（Ｃｒｏｏｋｅら、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．、１９９６年、２７７巻、９２３〜９３７頁）が含まれる。多数の米国特許は、このようなコンジュゲートの製造を教示し、限定されないが、米国特許第４，８２８，９７９号；同第４，９４８，８８２号；同第５，２１８，１０５号；同第５，５２５，４６５号；同第５，５４１，３１３号；同第５，５４５，７３０号；同第５，５５２，５３８号；同第５，５７８，７１７号、同第５，５８０，７３１号；同第５，５９１，５８４号；同第５，１０９，１２４号；同第５，１１８，８０２号；同第５，１３８，０４５号；同第５，４１４，０７７号；同第５，４８６，６０３号；同第５，５１２，４３９号；同第５，５７８，７１８号；同第５，６０８，０４６号；同第４，５８７，０４４号；同第４，６０５，７３５号；同第４，６６７，０２５号；同第４，７６２，７７９号；同第４，７８９，７３７号；同第４，８２４，９４１号；同第４，８３５，２６３号；同第４，８７６，３３５号；同第４，９０４，５８２号；同第４，９５８，０１３号；同第５，０８２，８３０号；同第５，１１２，９６３号；同第５，２１４，１３６号；同第５，１１２，９６３号；同第５，２１４，１３６号；同第５，２４５，０２２号；同第５，２５４，４６９号；同第５，２５８，５０６号；同第５，２６２，５３６号；同第５，２７２，２５０号；同第５，２９２，８７３号；同第５，３１７，０９８号；同第５，３７１，２４１号、同第５，３９１，７２３号；同第５，４１６，２０３号、同第５，４５１，４６３号；同第５，５１０，４７５号；同第５，５１２，６６７号；同第５，５１４，７８５号；同第５，５６５，５５２号；同第５，５６７，８１０号；同第５，５７４，１４２号；同第５，５８５，４８１号；同第５，５８７，３７１号；同第５，５９５，７２６号；同第５，５９７，６９６号；同第５，５９９，９２３号；同第５，５９９，９２８号および同第５，６８８，９４１号が含まれる。
【０２４４】
一部の実施形態では、非天然核酸は、さらに、非天然塩基対を形成する。インビボでの条件下で非天然ＤＮＡまたはＲＮＡ塩基対（ＵＢＰ）を形成することができる例示的な非天然ヌクレオチドには、限定されないが、５ＳＩＣＳ、ｄ５ＳＩＣＳ、ＮＡＭ、ｄＮａＭ、ＴＰＴ３ＴＰ、ｄＴＰＴ３ＴＰ、およびそれらの組み合わせが含まれる。一部の実施形態では、非天然ヌクレオチドは、以下を含む：
【化１】
2021514974.tif 000004
【０２４５】
一部の実施形態では、非天然塩基対は、Ｄｕｍａｓら、「Ｄｅｓｉｇｎｉｎｇ  ｌｏｇｉｃａｌ  ｃｏｄｏｎ  ｒｅａｓｓｉｇｎｍｅｎｔ−Ｅｘｐａｎｄｉｎｇ  ｔｈｅ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｉｎ  ｂｉｏｌｏｇｙ」、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、６巻：５０〜６９頁（２０１５年）に記載される非天然アミノ酸を生じる。
【０２４６】
本明細書に開示される構築物またはベクターが導入された宿主細胞は、ｔＲＮＡ、ｔＲＮＡシンテターゼおよび目的のタンパク質が生成されるように、適切な培地中で培養または維持される。培地はまた、目的のタンパク質が非天然アミノ酸（単数または複数）を組み込むように非天然アミノ酸（単数または複数）を含む。
【０２４７】
直交性ｔＲＮＡシンテターゼ／ｔＲＮＡ対は、非天然アミノ酸をｔＲＮＡに付加し、コドンに応答して非天然アミノ酸をポリペプチド鎖に組み込む。例示的なａａＲＳ−ｔＲＮＡ対としては、限定されないが、メタノカルドコックス・ヤンナスキイ（Ｍｅｔｈａｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｊａｎｎａｓｃｈｉｉ）（Ｍｊ−Ｔｙｒ）ａａＲＳ／ｔＲＮＡ対、大腸菌ＴｙｒＲＳ（Ｅｃ−Ｔｙｒ）／バチルス・ステアロサーモフィルス（Ｂ．ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）ｔＲＮＡＣＵＡ対、大腸菌ＬｅｕＲＳ（Ｅｃ−Ｌｅｕ）／バチルス・ステアロサーモフィルスｔＲＮＡＣＵＡ対、およびピロリシル−ｔＲＮＡ対が挙げられる。
【０２４８】
非天然アミノ酸（単数または複数）を含むＩＬ−１５ポリペプチドは、ｔＲＮＡおよびｔＲＮＡシンテターゼを含み、１つまたはそれ以上のインフレーム直交性（終止）コドンを有する目的の核酸配列を含む、本明細書に記載される核酸構築物を宿主細胞に導入することによって製造される。宿主細胞は、非天然アミノ酸（単数または複数）を含む生理的溶液に曝露され、その後、宿主細胞は、目的のタンパク質のコード配列の発現を可能にする条件下で維持される。非天然アミノ酸（単数または複数）は、コドンに応答してポリペプチド鎖に組み込まれる。例えば、１つまたはそれ以上の非天然アミノ酸がＩＬ−１５ポリペプチドに組み込まれる。あるいは、２つ以上の非天然アミノ酸が、タンパク質中の２つ以上の部位でＩＬ−１５ポリペプチドに組み込まれる。
【０２４９】
複数の非天然アミノ酸をＩＬ−１５ポリペプチドに組み込む場合、複数のコドンを所望の位置のコード核酸配列に組み込む必要があり、その結果、ｔＲＮＡシンテターゼ／ｔＲＮＡ対がコドン（単数または複数）に応答して非天然アミノ酸の組み込みを指示することができる。核酸をコードする少なくとも１、２、３、４個、またはそれ以上のコドンは、目的とする核酸配列に組み込まれ得る。
【０２５０】
単一のタンパク質に１を超えるタイプの非天然アミノ酸を組み込むことが望ましい場合、第２のまたはさらなる直交性ｔＲＮＡ−ｔＲＮＡシンテターゼ対を使用して、第２のまたはさらなる非天然アミノ酸を組み込むことができ；適切には、上記第２のまたはさらなる直交性ｔＲＮＡ−ｔＲＮＡシンテターゼ対は、目的のタンパク質をコードする核酸中の異なるコドンを認識し、その結果、２つ以上の非天然アミノ酸を、単一の製造工程において、タンパク質中の異なる定義された部位に特異的に組み込むことができる。特定の実施形態では、したがって、２つ以上の直交性ｔＲＮＡ−ｔＲＮＡシンテターゼ対を使用することができる。
【０２５１】
一旦、非天然アミノ酸（単数または複数）を組み込んだＩＬ−１５ポリペプチドが宿主細胞内に生成されると、それは、酵素的、化学的ならびに／または浸透圧的溶解および物理的破壊を含む、当該技術分野において公知である種々の技術によって、宿主細胞から抽出することができる。ＩＬ−１５ポリペプチドは、分取用クロマトグラフィー、アフィニティ精製または任意の他の適切な技術などの当該技術分野において公知である標準技術によって精製することができる。
【０２５２】
適切な宿主細胞としては、細菌細胞（例えば、大腸菌）が含まれ得るが、最も適切な宿主細胞は、真核細胞、例えば、昆虫細胞（例えば、キイロショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）などのショウジョウバエ）、酵母細胞、線虫（例えば、シノラブディス・エレガンス（Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ  ｅｌｅｇａｎｓ））、マウス（例えば、ハツカネズミ（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ））、または哺乳動物細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）もしくはＣＯＳ細胞、ヒト２９３Ｔ細胞、ＨｅＬａ細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、およびマウス赤白血病（ＭＥＬ）細胞）、もしくはヒト細胞または他の真核細胞である。他の適切な宿主細胞は、当業者に公知である。適切には、宿主細胞は、哺乳動物細胞、例えばヒト細胞、または昆虫細胞である。
【０２５３】
本発明の実施形態では一般的に使用される他の適切な宿主細胞は、実施例の節において言及されているものである。ベクターＤＮＡは、従来の形質転換またはトランスフェクション技術を介して宿主細胞に導入することができる。本明細書で使用される場合、用語「形質転換」および「トランスフェクション」は、リン酸カルシウムまたは塩化カルシウム共沈、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、リポフェクション、またはエレクトロポレーションを含む、宿主細胞に外来核酸分子（例えば、ＤＮＡ）を導入するための種々のよく知られた技術を指すことが意図される。宿主細胞を形質転換またはトランスフェクションするための適切な方法は、当該技術分野において周知である。
【０２５４】
細胞株を作製する場合、一般的に、安定した細胞系を製造することが好ましい。例えば、哺乳動物細胞の安定したトランスフェクションのためには、使用される発現ベクターおよびトランスフェクション技術に依存して、外来ＤＮＡがそのゲノムに組み込まれる細胞はごくわずかなことがあることが公知である。これらの組込み体を同定し、選択するために、選択マーカー（例えば、抗生物質に対する耐性）をコードする遺伝子を、一般的に、目的の遺伝子とともに宿主細胞に導入する。好ましい選択マーカーには、Ｇ４１８、ヒグロマイシン、またはメトトレキサートなどの薬物に対する耐性を付与するマーカーが含まれる。選択マーカーをコードする核酸分子は、同じベクター上の宿主細胞に導入することができ、または別のベクター上に導入することもできる。導入された核酸分子で安定にトランスフェクトされた細胞は、薬物選択によって同定することができる（例えば、選択マーカー遺伝子を組み込んだ細胞は生存し、一方、他の細胞は死滅する）。
【０２５５】
一実施形態では、本明細書に記載される構築物は、宿主細胞のゲノムに組み込まれる。安定した組込みの利点は、個々の細胞またはクローン間の均一性が達成されることである。別の利点は、最良の産生細胞の選択が行われる場合があることである。したがって、安定した細胞株を作製することが望ましい。別の実施形態では、本明細書に記載される構築物は、宿主細胞にトランスフェクトされる。構築物を宿主細胞にトランスフェクトする利点は、タンパク質収率が最大化されることである。一態様では、本明細書に記載される核酸構築物またはベクターを含む細胞が記載される。
【０２５６】
医薬組成物および製剤
一部の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物および製剤は、限定されないが、非経口、経口、または経皮投与経路を含む、複数の投与経路によって対象に投与される。場合によっては、非経口投与は、静脈内、皮下、筋肉内、脳内、鼻腔内、動脈内、関節内、皮内、硝子体内、骨内輸注、腹腔内、または髄腔内投与を含む。いくつかの例では、医薬組成物は、局所投与のために製剤化される。他の例では、医薬組成物は、全身投与のために製剤化される。
【０２５７】
一部の実施形態では、医薬製剤としては、限定されないが、水性液体分散液、自己乳化分散液、リポソーム分散液、エアロゾル、即放性製剤、制御放出製剤、遅延放出製剤、徐放性製剤、拍動性放出製剤、ならびに混合した即放性および制御放出製剤が挙げられる。
【０２５８】
一部の実施形態では、医薬製剤は、本明細書に開示される組成物との適合性に基づいて選択された担体または担体材料、および所望の投薬形態の放出プロファイル特性を含む。例示的な担体材料としては、例えば、結合剤、界面活性剤、可溶化剤、安定剤、潤滑剤、湿潤剤、希釈剤などが挙げられる。薬学的に適合可能な担体材料としては、限定されないが、アカシア、ゼラチン、コロイド状二酸化ケイ素、グリセロリン酸カルシウム、乳酸カルシウム、マルトデキストリン、グリセリン、ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピリドン（ＰＶＰ）、コレステロール、コレステロールエステル、カゼイン酸ナトリウム、大豆レシチン、タウロコール酸、ホスホチジルコリン、塩化ナトリウム、リン酸三カルシウム、リン酸二カリウム、セルロースおよびセルロースコンジュゲート、糖ナトリウムステアロイルラクチレート、カラゲナン、モノグリセリド、ジグリセリド、アルファ化デンプンなどが挙げられる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、Ｎｉｎｅｔｅｅｎｔｈ編集（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．：Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、１９９５年）、Ｈｏｏｖｅｒ，Ｊｏｈｎ  Ｅ．、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ、１９７５年、Ｌｉｂｅｒｍａｎ，Ｈ．Ａ．およびＬａｃｈｍａｎ，Ｌ．編集、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｃｋｅｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．、１９８０年、およびＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、第７版（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  １９９９年）を参照されたい。
【０２５９】
場合によっては、医薬組成物は、リポソームの脂質二重層に直接的または間接的に結合した複数のＩＬ−１５コンジュゲートを含む免疫リポソームとして製剤化される。例示的な脂質としては、限定されないが、脂肪酸；リン脂質；コレステロールなどのステロール；スフィンゴミエリンなどのスフィンゴ脂質；ガングリオシド、グロボシド、およびセレブロシドなどのスフィンゴ糖脂質；ステアリル、オレイル、およびリノレイルアミンなどの界面活性剤アミンが挙げられる。いくつかの例では、脂質はカチオン性脂質を含む。いくつかの例では、脂質はリン脂質を含む。例示的なリン脂質には、限定されないが、ホスファチジン酸（「ＰＡ」）、ホスファチジルコリン（「ＰＣ」）、ホスファチジルグリセリン（「ＰＧ」）、ホスファチジルエタノールアミン（「ＰＥ」）、ホスファチジルイノシトール（「ＰＩ」）、およびホスファチジルセリン（「ＰＳ」）、スフィンゴミエリン（脳スフィンゴミエリンを含む）、レシチン、リゾレシチン、リゾホスファチジルエタノールアミン、セレブロシド、ジアラキドイルホスファチジルコリン（「ＤＡＰＣ」）、ジデカノイル−Ｌ−アルファ−ホスファチジルコリン（「ＤＤＰＣ」）、ジエリドイルホスファチジルコリン（「ＤＥＰＣ」）、ジラウロイルホスファチジルコリン（「ＤＬＰＣ］）、リノレオイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルコリン（「ＤＭＰＣ」）、ジオレオイルホスファチジルコリン（「ＤＯＰＣ」）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（「ＤＰＰＣ」）、ジステアロイルホスファチジルコリン（「ＤＳＰＣ」）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ホスファチジルコリン（「ＰＯＰＣ」）、ジアラキドイルホスファチジルコリン（「ＤＡＰＧ」）、ジデカノイル−Ｌ−アルファ−ホスファチジルグリセリン（「ＤＤＰＧ」）、ジエライドイルホスファチジルグリセリン（「ＤＥＰＧ」）、ジラウロイルホスファチジルグリセリン（「ＤＬＰＧ」）、ジリノレオイルホスファチジルグリセリン、ジミリストイルホスファチジルグリセリン（「ＤＭＰＧ」）、ジオレオイルホスファチジルグリセリン（「ＤＯＰＧ」）、ジパルミトイルホスファチジルグリセリン（「ＤＰＰＧ」）、ジステアロイルホスファチジルグリセリン（「ＤＳＰＧ」）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ホスファチジルグリセリン（「ＰＯＰＧ」）、ジアラキドイルホスファチジルエタノールアミン（「ＤＡＰＥ」）、ジデカノイル−Ｌ−アルファ−ホスファチジルエタノールアミン（「ＤＤＰＥ」）、ジエライドイルホスファチジルエタノールアミン（「ＤＥＰＥ」）、ジラウロイルホスファチジルエタノールアミン（「ＤＬＰＥ」）、ジリノレオイルホスファチジルエタノールアミン、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（「ＤＭＰＥ」）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（「ＤＯＰＥ」）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（「ＤＰＰＥ」）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（「ＤＳＰＥ」）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ホスファチジルエタノールアミン（「ＰＯＰＥ」）、ジアラキドイルホスファチジルイノシトール（「ＤＡＰＩ」）、ジデカノイル−Ｌ−アルファ−ホスファチジルイノシトール（「ＤＤＰＩ」）、ジエラドイルホスファチジルイノシトール（「ＤＥＰＩ」）、ジラウロイルホスファチジルイノシトール（「ＤＬＰＩ」）、ジリノレオイルイチロイルホスファチジルイノシトール、ジミリストイルホスファチジルイノシトール（「ＤＭＰＩ」）、ジオレオイルホスファチジルイノシトール（「ＤＯＰＩ」）、ジパルミトイルホスファチジルイノシトール（「ＤＰＰＩ」）、ジステアロイルホスファチジルイノシトール（「ＤＳＰＩ」）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ホスファチドイリノシトール（「ＰＯＰＩ」）、ジアラキドイルホスファチジルセリン（「ＤＡＰＳ」）、ジデカノイル−Ｌ−アルファ−ホスファチジルセリン（「ＤＤＰＳ」）、ジエラドイルホスファチジルセリン（「ＤＥＰＳ」）、ジラウロイルホスファチジルセリン（「ＤＬＰＳ」）、ジリノレオイルホスファチジルセリン、ジミリストイルホスファチジルセリン（「ＤＭＰＳ」）、ジオレオイルホスファチジルセリン（「ＤＯＰＳ」）、ジパルミトイルホスファチジルセリン（「ＤＰＰＳ」）、ジステアロイルホスファチジルセリン（「ＤＳＰＳ」）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ホスファチジルセリン（「ＰＯＰＳ」）、ジアラキドイルスフィンゴミリン、ジデカノイルスフィンゴミエリン、ジエライドイルスフィンゴミエリン、ジラウロイルスフィンゴミエリン、ジリノレオイルスフィンゴミエリン、ジミリストイルスフィンゴミエリン、スフィンゴミエリン、ジオレオイルスフィンゴミエリン、ジパルミトイルスフィンゴミエリン、ジステアロイルスフィンゴミエリン、および１−パルミトイル−２−オレオイルスフィンゴミエリンが含まれる。
【０２６０】
一部の実施形態では、医薬製剤は、さらに、酢酸、ホウ酸、クエン酸、乳酸、リン酸および塩酸などの酸、水酸化ナトリウム、リン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウムおよびトリス−ヒドロキシメチルアミノメタンなどの塩基、ならびにクエン酸／デキストロース、重炭酸ナトリウムおよび塩化アンモニウムなどの緩衝剤を含むｐＨ調整剤または緩衝剤を含む。このような酸、塩基および緩衝液は、組成物のｐＨを許容範囲に維持するのに必要な量に含まれる。
【０２６１】
いくつかの例では、医薬製剤は、組成物の浸透圧を許容範囲内にするのに必要な量の１つまたはそれ以上の塩を含む。このような塩には、ナトリウム、カリウムまたはアンモニウムカチオンおよび塩化物、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、ホウ酸塩、リン酸塩、重炭酸塩、硫酸塩、チオ硫酸塩または重亜硫酸アニオンを有するものが含まれ、適切な塩には塩化ナトリウム、塩化カリウム、チオ硫酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウムおよび硫酸アンモニムが含まれる。
【０２６２】
一部の実施形態では、医薬製剤は、限定されないが、ポリペプチドの溶解度およびインビボ安定性を増加させるために、トレハロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、マルトース、グルコースのような糖、またはリン酸カリウム、クエン酸ナトリウム、硫酸アンモニウムのような塩、および／またはヘパリンのような他の薬剤を含む。
【０２６３】
一部の実施形態では、医薬製剤は、より安定な環境を提供することができるため、化合物を安定化するために使用される希釈剤をさらに含む。緩衝溶液に溶解された塩（ｐＨ制御または維持を提供することもできる）は、限定されないが、リン酸緩衝生理食塩水溶液を含む、当該技術分野における希釈剤として利用される。
【０２６４】
安定剤には、任意の酸化防止剤、緩衝剤、酸、保存剤などの化合物が含まれる。安定剤の例としては、Ｌ−アルギニン塩酸塩、トロメタミン、アルブミン（ヒト）、クエン酸、ベンジルアルコール、フェノール、二リン酸二ナトリウム二水和物、プロピレングリコール、メタクレゾールまたはｍ−クレゾール、酢酸亜鉛、ポリソルベート−２０もしくはＴｗｅｅｎ（登録商標）２０、またはトロメタモールが挙げられる。
【０２６５】
界面活性剤には、ラウリル硫酸ナトリウム、ドキュセートナトリウム、Ｔｗｅｅｎ６０または８０、トリアセチン、ビタミンＥ  ＴＰＧＳ、ソルビタンモノオレエート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ポリソルビタンモノオレエート、ポリソルベート、ポラキソマー、胆汁塩、モノステアリン酸グリセリン、エチレンオキシドとプロピレンオキシドのコポリマー、例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）などの化合物が含まれる。追加の界面活性剤としては、ポリオキシエチレン脂肪酸グリセリドおよび植物油、例えば、ポリオキシエチレン（６０）水素化ヒマシ油、ならびにポリオキシエチレンアルキルエーテルおよびアルキルフェニルエーテル、例えば、オクトキシノール１０、オクトキシノール４０が挙げられる。時折、界面活性剤は、物理的安定性を高めるため、または他の目的のために含まれる。
【０２６６】
治療レジメン
一部の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、治療用途のために投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は、１日１回、１日２回、１日３回またはそれ以上投与される。医薬組成物は、毎日（ｄａｉｌｙ）、毎日（ｅｖｅｒｙ  ｄａｙ）、隔日、週５日、週１回、隔週、月２週間、月３週間、月１回、月２回、月３回、またはそれ以上投与される。医薬組成物は、少なくとも１ヵ月、２ヵ月、３ヵ月、４ヵ月、５ヵ月、６ヵ月、７ヵ月、８ヵ月、９ヵ月、１０ヵ月、１１ヵ月、１２ヵ月、１８ヵ月、２年、３年、またはそれ以上投与される。
【０２６７】
患者の状態が改善された場合、医師の裁量により、組成物の投与を連続的に行うか、あるいは、投与される組成物の用量を一時的に減少させるか、または一定の時間（すなわち、「休薬期間」）一時的に停止させる。一部の実施形態では、休薬期間の長さは、２日〜１年の間で変化し、例としては、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１０日、１２日、１５日、２０日、２８日、３５日、５０日、７０日、１００日、１２０日、１５０日、１８０日、２００日、２５０日、２８０日、３００日、３２０日、３５０日、または３６５日が挙げられる。休薬期間中の用量の減少は、１０％〜１００％であり、例としては、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％が挙げられる。
【０２６８】
一旦、患者の状態の改善が見られると、必要に応じて維持用量が投与される。その後、症状の関数として、改善された疾患、障害または状態が保持されるレベルまで、投薬量または投薬頻度、またはその両方を減少させることができる。
【０２６９】
一部の実施形態では、このような量に対応する所与の薬剤の量は、特定の化合物、疾患の重症度、治療を必要とする対象または宿主の固有性（例えば、体重）などの要因に依存して変化するが、それにもかかわらず、例えば、投与される特定の薬剤、投与経路、および治療される対象または宿主を含む、ケースを取り巻く特定の状況に従って当該技術分野において公知である方法でルーチンに決定される。一部の実施形態では、所望の用量は、単回用量または同時に（または短期間にわたって）、または適切な間隔で、例えば、１日あたり２回、３回、４回またはそれ以上のサブ用量として投与される分割用量として都合よく示される。
【０２７０】
上記の範囲は、個々の治療レジメンに関する変数の数が多く、これらの推奨値からのかなりの逸脱が稀ではないことから、単に示唆的なものに過ぎない。このような投薬量は、多数の変数、限定されないが、使用される化合物の活性、治療される疾患または状態、投与の様式、個々の対象の要件、治療される疾患または状態の重症度、および医師の判断に応じて変更される。
【０２７１】
一部の実施形態では、このような治療レジメンの毒性および治療効力は、限定されないが、ＬＤ５０（集団の５０％に対する致死用量）およびＥＤ５０（集団の５０％において治療的に有効な用量）の決定を含む、細胞培養または実験動物における標準的な製薬手順によって決定される。毒性と治療効能の間の用量比は治療指数であり、ＬＤ５０とＥＤ５０の間の比として表される。高い治療指数を示す化合物が好ましい。細胞培養アッセイおよび動物試験から得られたデータは、ヒトにおいて使用するための投薬量範囲の製剤化に使用される。このような化合物の投薬量は、好ましくは、最小毒性でＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内にある。投薬量は、採用される投薬形態および利用される投与経路に依存して、この範囲内で変化する。
【０２７２】
キット／製造物
本明細書には、特定の実施形態において、本明細書に記載される１つまたはそれ以上の方法および組成物とともに使用するためのキットおよび製造物が開示される。このようなキットには、バイアル、チューブなどの１つまたはそれ以上の容器を受け入れるように区画化されたキャリア、パッケージ、または容器が含まれ、容器（単数または複数）の各々は、本明細書に記載される方法に使用される別個の要素のうちの１つを含む。適切な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、および試験管が挙げられる。一実施形態では、容器は、ガラスまたはプラスチックなどの種々の材料から形成される。
【０２７３】
本明細書で提供される製造物は、パッケージング材料を含む。医薬パッケージ材料の例としては、限定されないが、ブリスタパック、ボトル、チューブ、バッグ、容器、および選択された製剤ならびに意図された投与および処置の様式に適した任意のパッケージング材料が挙げられる。
【０２７４】
例えば、容器（単数または複数）は、ＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲートの送達を容易にするために、本明細書に開示される１つまたはそれ以上のＩＬ−１５ポリペプチドまたはＩＬ−１５コンジュゲート、および場合により、本明細書に記載される１つまたはそれ以上の医薬賦形剤を含む。このようなキットは、場合により、本明細書に記載される方法におけるその使用に関連する識別記述または標識または指示をさらに含む。
【０２７５】
キットは、典型的には、内容物および／または使用説明書を列挙した標識、および使用説明書を伴う添付文書を含む。典型的には、一組の説明書も含まれる。
【０２７６】
一実施形態では、標識は、容器上にあるかまたは容器に関連している。一実施形態では、標識を形成する文字（ｌｅｔｔｅｒ）、数字または他の文字（ｃｈａｒａｃｔｅｒ）が容器自体に取り付けられ、成形され、またはエッチングされる場合、標識は容器上にあり、標識は、例えば、パッケージ挿入物として、容器も保持するレセプタクルまたはキャリア内に存在する場合、容器に関連付けられる。一実施形態では、標識は、内容物が特定の治療用途に使用されるべきであることを示すために使用される。また、標識は、本明細書に記載される方法などの、内容物の使用のための指示を示す。
【０２７７】
特定の実施形態では、医薬組成物は、本明細書に提供される化合物を含有する１つまたはそれ以上の単位投与形態を含有するパックまたはディスペンサデバイス中に提供される。パックは、例えば、ブリスタパックなどの金属またはプラスチックホイルを含む。一実施形態では、パックまたはディスペンサデバイスは、投与のための指示書が付される。一実施形態では、パックまたはディスペンサにはまた、医薬品の製造、使用または販売を規制する政府機関によって規定される様式で容器に関連する通知も添付される。この通知は、ヒトまたは獣医学的投与のための医薬品の形態の当局による承認を反映するものである。このような通知は、例えば、米国食品医薬品局が承認した医薬品の標識または承認された製品の添付文書である。一実施形態では、相溶性の医薬担体中に製剤化された本明細書で提供される化合物を含む組成物もまた製造され、適切な容器に入れられ、指示された状態の処置のために標識される。
【０２７８】
特定の用語
別段の定義がない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、請求された主題事項が属する当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。詳細な説明は、例示的および説明的なものに過ぎず、請求された主題事項を限定するものではないことが理解されるべきである。本出願において、単数形の使用は、特に記述がない限り、複数形を含む。本明細書で使用されるように、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈による明確に別段の指定がない限り、複数の指示対象を含むことに留意されたい。本出願において、「または」の使用は、特に記述がない限り、「および／または」を意味する。さらに、用語「含んでいる」の使用、ならびに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、および「含んで（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」などの他の形態の使用は、限定するものではない。
【０２７９】
本発明の種々の特徴は、単一の実施形態との関連で説明することができるが、特徴は、別個にまたは任意の適切な組み合わせで提供することもできる。逆に、本発明は、明確化のために、別個の実施形態との関連で本明細書に記載されるが、本発明はまた、単一の実施形態で実施される。
【０２８０】
本明細書において、「一部の実施形態」、「実施形態」、「１つの実施形態」または「他の実施形態」というときは、実施形態に関連して記載された特定の特徴（ｆｅａｔｕｒｅ）、構造または特徴（ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ）が、少なくとも一部の実施形態に含まれるが、必ずしもすべての実施形態に含まれないことを意味する。
【０２８１】
本明細書で使用される場合、範囲および量は、特定の値または範囲として「約」として表すことができる。また、約には正確な量も含まれる。したがって、「約５μＬ」は、「約５μＬ」および「５μＬ」を意味する。一般的に、「約」という用語は、実験誤差内にあることが予想される量を含む。
【０２８２】
本明細書で使用される節の見出しは、組織上の目的のためのみであり、記載される主題を制限するものと解釈されるべきではない。
【０２８３】
本明細書で使用される場合、用語「個体（単数または複数）」、「対象（単数または複数）」および「患者（単数または複数）」は、任意の哺乳動物を意味する。一部の実施形態では、哺乳動物はヒトである。一部の実施形態では、哺乳動物はヒト以外である。いずれの用語も、医療従事者（例えば、医師、登録看護師、正看護師、医師の助手、用務員またはホスピス職員）の監督（例えば、常時または断続的）によって特徴付けられる状況を必要とせず、限定されない。
【０２８４】
本明細書で使用される場合、受容体結合に関して「顕著な」および「顕著に」という用語は、ＩＬ−１５ポリペプチドの標的受容体への結合に影響を与えるのに十分な変化を意味する。いくつかの例では、用語は、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、またはそれ以上の変化を指す。いくつかの例では、用語は、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍、またはそれ以上の変化を意味する。
【０２８５】
いくつかの例では、サイトカインシグナル伝達複合体を介した１つまたはそれ以上の細胞集団の活性化に関して「顕著に」という用語は、細胞集団を活性化するのに十分な変化を意味する。場合によっては、細胞集団を活性化する変化は、受容体シグナル伝達効力として測定される。このような場合には、ＥＣ５０値を示すことができる。他の場合には、ＥＤ５０値を提供し得る。追加の場合においては、サイトカインの濃度または用量を提供することができる。
【０２８６】
本明細書で使用される場合、用語「効力」は、標的効果を生じさせるのに必要なサイトカイン（例えば、ＩＬ−１５ポリペプチド）の量を指す。いくつかの例では、用語「効力」は、標的サイトカイン受容体（例えば、ＩＬ−１５受容体）を活性化するのに必要なサイトカイン（例えば、ＩＬ−１５ポリペプチド）の量を指す。他の例では、用語「効力」は、標的細胞集団を活性化するのに必要なサイトカイン（例えば、ＩＬ−１５ポリペプチド）の量を指す。場合によっては、効力は、ＥＤ５０（有効用量５０）、または最大効果の５０％を生じさせるのに必要な用量として測定される。他の場合には、効力は、ＥＣ５０（有効濃度５０）、または集団の５０％において標的効果を生じさせるのに必要な用量として測定される。
【０２８７】
本明細書で使用される場合、用語「腫瘍浸潤性免疫細胞（単数または複数）」とは、腫瘍細胞を含む領域（例えば、腫瘍微小環境）に浸潤した免疫細胞を指す。いくつかの例では、腫瘍浸潤性免疫細胞は、腫瘍細胞破壊、腫瘍細胞増殖の低下、腫瘍組織量の減少、またはそれらの組み合わせと関連する。いくつかの例では、腫瘍浸潤性免疫細胞は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を含む。いくつかの例では、腫瘍浸潤性免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、好中球、樹状細胞、肥満細胞、好酸球または好塩基球を含む。いくつかの例では、腫瘍浸潤性免疫細胞は、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞を含む。
【実施例】
【０２８８】
これらの実施例は、単に例示的な目的のために提供され、本明細書に提供される特許請求の範囲を限定するものではない。
【実施例１】
【０２８９】
修飾されたＩＬ−１５ポリペプチドの発現
修飾されたＩＬ−１６ポリペプチドを、３７℃、２５０ｒｐｍ、および５時間の誘導で増殖させた。培地成分は、表２に示す通りであった。
【０２９０】
【表２】
2021514974.tif 000005
【０２９１】
発現培養物が０．８５〜０．９のＯＤ６００に達した場合、培養物にＮａＭＴＰ（最終濃度２５０μＭ）、ＴＰＴ３ＴＰ（最終濃度２５μＭ）、およびアジド−リジン（最終濃度１５ｍＭ）を予備負荷した。リボヌクレオチドおよびアミノ酸による予備充填の約１５〜２０分後に、ＩＰＴＧを添加し、タンパク質を約５時間発現させた。
【０２９２】
封入体
細胞ペレットの回収に際して、ペレットを封入体のためにさらに処理した。簡単に説明すると、１Ｌの細胞ペレットを１０ｍｌの溶解緩衝液（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８．０；１５０ｍＭ  ＮａＣｌ；１ｍＭ  ＤＴＴ；およびプロテアーゼ阻害剤（１ペレット／５０ｍｌ））に再懸濁した。再懸濁後、１Ｌのペレットの体積を溶解緩衝液を用いて４５ｍｌに増加させ、マイクロフルイダイザーに２回通した。続いて、試料を５０ｍｌの遠心チューブに移し、１６ｋ  ｒｐｍで２０分間、４℃で遠心分離した。次に、ペレットを５ｍｌの溶解緩衝液中に再懸濁し、全体積を溶解緩衝液で３０ｍｌに増加させた。約１０％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を最終濃度０．５％になるように添加した。その後、溶液を１６ｋ  ｒｐｍで２０分間、４℃で遠心分離し、次に、ペレットを回収し、３０ｍｌの溶解緩衝液で３回洗浄した。針付き５ｍｌシリンジを用いて、各洗浄液で完全に再懸濁した。最終回転後、上清を捨て、ペレットをスナップ凍結して−８０℃で保存した。
【０２９３】
可溶化およびリフォールディング
約５ｍｌの可溶化緩衝液を封入体ペレットに加えた。再懸濁後、その体積を可溶化緩衝液中で３０ｍｌに増加させた。次に、試料を４℃で３０〜６０分間インキュベートした。その後、試料を２×５０ｍｌ遠心チューブ（１５ｍｌ／チューブ）に移し、１５ｍｌ希釈緩衝液を各チューブに加えた。次に、試料を緩衝液Ａ１中で４℃にて一晩透析し、続いて、Ａ２透析緩衝液、Ａ３透析緩衝液、Ａ４透析緩衝液、およびＡ５透析緩衝液で透析した。透析後、試料を４０００ｒｐｍで３０分間、４℃で遠心分離し、約５ｍｌに濃縮した。
【０２９４】
表３は可溶化緩衝液を示す。
【表３】
2021514974.tif 000006
【０２９５】
精製
試料を、最初に、１×ＰＢＳ溶出緩衝液を用いたＧＥ  ＨｉＬｏａｄ  １６／６００  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００ｐｇゲル濾過カラムで精製し、続いて、ＧＥ  ＨｉＴｒａｐＱ陰イオン交換カラムで精製して、遊離ＰＥＧを除去し、その後、２０カラム体積の３０％〜７０％溶出緩衝液の勾配溶出を用いた逆相クロマトグラフィーを行った。
【０２９６】
表４は、アニオン交換クロマトグラフィーに使用される緩衝液を示す。表５は、逆相クロマトグラフィーに使用される緩衝液を示す。
【０２９７】
【表４】
2021514974.tif 000007
【０２９８】
【表５】
2021514974.tif 000008
【０２９９】
図４は、アニオン交換クロマトグラフィーの実施例を示す。
【０３００】
図５は、逆相クロマトグラフィーの例示的な実施を示す。
【実施例２】
【０３０１】
天然または非ＩＬ−１５Ｒα結合のいずれかを有するＰＥＧ化ＩＬ−１５化合物の同定のための細胞ベースのスクリーニング
ＩＬ−１５／ヘテロ三量体受容体シグナル伝達複合体（ＰＤＢ：４ＧＳ７）の構造データを用いて、ヘテロ三量体受容体との天然の相互作用を保持するか、またはＩＬ−１５とＩＬ−１５受容体αサブユニット（ＩＬ−１５Ｒα）の相互作用を特異的に抑制するために、ｎＡＡ−ＰＥＧ化部位の設計の指針とした。例示的なＩＬ−１５コンジュゲートは、機能分析：Ｓ１８、Ａ２３、Ｔ２４、Ｌ２５、Ｙ２６、Ｅ４６、Ｖ４９、Ｌ５２、Ｅ５３、Ｎ７７、Ｓ８３、Ｅ８９、Ｅ９０に供された。ＩＬ−１５コンジュゲートを、大腸菌中の封入体として発現させ、安定な共有結合ｍＰＥＧ部分をＡｚＫに結合させるために、ＤＢＣＯ媒介銅不含クリック化学反応を用いてＩＬ−１５生成物を部位特異的にＰＥＧ化する前に、標準手順を用いて精製し、リフォールディングした。ＩＬ−１５コンジュゲートを、比色ＣＴＬＬ２増殖アッセイを用いて機能的活性についてスクリーニングした。ＣＴＬＬ２は、３つ全てのＩＬ−１５受容体サブユニットを発現し、増殖にＩＬ−２／ＩＬ−１５を必要とするマウスＴ細胞のサブクローンである。予備実験を行い、適切な用量−反応曲線のための最適な細胞密度、ＩＬ−１５標準またはＩＬ−１５コンジュゲートの範囲、ならびにインキュベーション時間を決定した。インハウス組換えヒトＩＬ−１５（ｒＨｕＩＬ−１５）を市販のＩＬ−１５標準（Ｒ＆Ｄ、カタログ＃２４７−ＩＬ）と比較した。定義された条件下では、市販のＩＬ−１５標準のＥＣ５０は、インハウスｒＨｕＩＬ−１５について約１０．７ｐＭおよび９．７ｐＭであった。
【０３０２】
表６は、ヘテロ三量体ＩＬ−１５受容体との天然の相互作用を保持するように設計された３０ｋＤａの直鎖状ＰＥＧ化ＩＬ−１５コンジュゲートに関するＥＣ５０データを示す。平均値に含まれる値の数を括弧で示す。結果は、３０ｋＤａのＰＥＧへのバイオコンジュゲーションが、天然ＩＬ−１５と比較して５分の１超に減少したＥＣ５０で、三量体受容体での効力を妨げないことを示した。
【０３０３】
【表６】
2021514974.tif 000009
【０３０４】
表７は、ＩＬ−１５とＩＬ−１５受容体αサブユニット（ＩＬ−１５Ｒα）の相互作用を特異的に抑制するように設計された３０ｋＤａの直鎖状および４０ｋＤａの分枝状ＰＥＧ化ＩＬ−１５コンジュゲートのＥＣ５０データを示す。平均値に含まれる値の数を括弧で示す。結果は、３０ｋＤａのＰＥＧへのバイオコンジュゲーションが、天然ＩＬ−１５と比較して三量体受容体での効力を減少させることを示した。直鎖状３０ｋＤａまたは分枝状４０ｋＤａのＰＥＧのＶ４９へのバイオコンジュゲーションは、ｒＨｕＩＬ−１５と比較して、三量体受容体への効力を中程度に減少させる（それぞれ、約６〜８分の１、８１４．４ｐｇ／ｍＬ〜１，０２９ｐｇ／ｍＬ対１２４．６２ｐｇ／ｍＬ）。さらに、Ｌ２５  ＰＥＧ３９の効力は、ｒＨｕＩＬ−１５と比較してより強く減少した（それぞれ、約５４分の１、６，８２７ｐｇ／ｍＬ対１２４．６２ｐｇ／ｍＬ）。
【０３０５】
【表７】
2021514974.tif 000010
【０３０６】
図６は、ＣＴＬＬ２増殖アッセイにおける天然の効力を有する例示的ＩＬ−１５コンジュゲートのＥＣ５０値を示す。結果は、応答のパーセンテージとしてプロットされる。
【０３０７】
図７は、例示的なＩＬ−１５コンジュゲートのＥＣ５０値を示す。ここに示されるように、部位特異的ＰＥＧ化は、インビトロでの薬理学に寄与する。結果は、応答のパーセンテージとしてプロットされる。
【０３０８】
図８は、異なるＰＥＧサイズにコンジュゲートされた例示的なＩＬ−１５のＥＣ５０値を示す。結果は、応答のパーセンテージとしてプロットされる。
【実施例３】
【０３０９】
ＰＥＧ化ＩＬ−１５とヒトＩＬ−１５受容体サブユニットの生化学的相互作用
ヒトＩＬ−１５受容体サブユニットとのＰＥＧ化ＩＬ−１５化合物相互作用の動態を、Ｂｉｏｆｉｚｉｋ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いて測定した。これらの研究のために、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ融合されたＩＬ−１５  Ｒα（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ＃１８３６６−Ｈ０２Ｈ、Ｒ＆Ｄ  ＃７１９４−ＩＲ）およびＩＬ−２  Ｒβ（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ＃１０６９６−Ｈ０２Ｈ）細胞外ドメインを、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ被覆されたＣＭ３またはＣＭ４センサーチップの表面に捕捉した。プロテインＡは、２５℃でＣＭ３チップ上に約１５００ＲＵの密度でのアミンカップリングによりカップリングされた。約４００ＲＵのＩＬ１５Ｒα−Ｆｃ融合物を、４分間の接触時間を用いて捕捉し、続いて、分析物注入前、２０分間の待ち時間により捕捉した。１００ｍＭリン酸を用いて注入間の表面の再生を行った。再生後の各サイクルに新鮮な受容体を捕捉した。これらの表面を２５℃で３回プローブした。典型的な実験では、最高濃度が５００ｎＭである分析物を１０用量注入した。場合によっては、高い濃度範囲が必要とされ、他ではより高用量が分析から除外された。
【０３１０】
ＩＬ２Ｒβへの化合物のより弱い結合のために、再生は必要ではなく、直交性結合研究は再生工程なしで実施された。約６００〜７００ＲＵのＩＬ２ＲβＦｃ融合物を、１〜２分間の接触時間を用いて、泳動緩衝液中のストックの１／１００希釈を用いて捕捉した。試験化合物については、最高濃度が１０００ｎＭである１０用量の分析物を注入した。生データは、化合物シグナルをブランク表面に対して補正し、タンパク質表面全体に緩衝液を注入する二重参照手順を用いて、Ｓｃｒｕｂｂｅｒ２プログラムの使用により分析された。表８〜１０を参照されたい。
【０３１１】
【表８】
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【０３１２】
【表９】
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【０３１３】
【表１０】
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【０３１４】
固定化ＩＬ−１５Ｒαを含有するセンサー表面では、天然ＩＬ−１５（ｒＨｕＩＬ−１５およびＲ＆Ｄからの市販ＩＬ−１５）は、迅速な会合および非常に遅い解離動力学を示し、非常に高い親和性結合を実証した（図９Ａ）。ＩＬ−１５受容体との相互作用を遮断することなく半減期を延長するように設計されたＩＬ−１５ＰＥＧ化変異体は、天然ＩＬ−１５と同様の結合動態を示す。サブユニットについての化合物間で観察されたＫＤのわずかな相違（ＩＬ−１５  Ｎ７７ＰＥＧ３０およびＩＬ−１５  Ｓ８３ＰＥＧ３０についてのＫＤはそれぞれ約１０分の１および約３分の１に低下した）は、遠隔結合表面におけるＰＥＧ化された化合物の低い拡散係数および顕著なＰＥＧ部分の非特異的遮蔽効果から予想される、ｒＨｕＩＬ−１５と比較した、ＩＬ−１５とコンジュゲートされた化合物のオン速度の低下によるものである（図９Ｂ）。対照的に、ＩＬ−１５  Ｅ４６ＰＥＧ３０は、遅い会合および遅い解離を伴ってＩＬ−１５  Ｒαと相互作用し、一方、ＩＬ−１５Ｅ３５ＰＥＧ３０は、速い会合および速い解離を示し（図９Ｃ）、これはＩＬ−１５Ｒα結合表面のＰＥＧ部分の特異的な局在化に起因している。
【０３１５】
固定化ＩＬ−２  Ｒβを含有する表面は、天然ＩＬ−１５と、天然受容体関与による半減期の延長のために設計された化合物との両方と同等の会合および解離応答を示した。ＰＥＧ部分がＩＬ−１５Ｒα結合表面に局在化する化合物は、ＩＬ−２Ｒβ表面への異なる結合動態を示す。ＩＬ−１５  Ｅ４６ＰＥＧ３０およびＩＬ−１５  Ｌ２５ＰＥＧは、これらの表面への約１０分の１および約３０分の１に減少した結合を示すが、ＩＬ−１５  Ｅ５３ＰＥＧ３０は、ＩＬ−２Ｒβへの「天然」結合を保持する。これらの結果は、ＰＥＧ部分の特異的な局在化がＩＬ−１５とその受容体との相互作用について異なるモダリティを付与することを示唆する。
【０３１６】
図９Ａ−図９Ｃは、ＩＬ−１５Ｒαに結合するＩＬ−１５とコンジュゲートされた化合物であるｒＨｕＩＬ−１５に対する応答単位（ＲＵ、Ｙ軸）対時間（秒、Ｘ軸）を示す。結合動態解析は、部位特異的ＰＥＧ化がＩＬ−１５Ｒαとの相互作用を調節することを確認する。
【０３１７】
図１０は、ＩＬ−１５ＲαおよびＩＬ−２Ｒβに結合するＩＬ−１５  Ｎ７７ＰＥＧ３０であるｒＨｕＩＬ−１５に対する応答単位（ＲＵ、Ｙ軸）対時間（秒、Ｘ軸）を示す。結合動態解析は、Ｎ７７位における部位特異的ＰＥＧ化が、ＩＬ−１５ＲαおよびＩＬ−２Ｒβとの天然の相互作用を保持することを確認する。
【０３１８】
図１１は、ＩＬ−１５ＲαおよびＩＬ−２Ｒβに結合するＩＬ−１５  Ｅ５３ＰＥＧ３０であるｒＨｕＩＬ−１５に対する応答単位（ＲＵ、Ｙ軸）対時間（秒、Ｘ軸）を示す。結合動態解析は、Ｅ５３位での部位特異的ＰＥＧ化が、ＩＬ−２Ｒβとの天然の相互作用を保持しつつ、ＩＬ−１５Ｒαへの結合を減少させることを確認する。
【実施例４】
【０３１９】
初代ヒト白血球減少系（ＬＲＳ）由来のＰＢＭＣ試料におけるＩＬ−１５ＰＥＧコンジュゲートのエクスビボ免疫応答プロファイリング
ＩＬ−１５ＰＥＧコンジュゲートの差次的受容体特異性が初代免疫細胞亜集団の活性化にどのように影響するかを決定するために、ヒトＬＲＳ由来の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）試料におけるリンパ球活性化の濃度−応答プロファイリングを、マルチカラーフローサイトメトリーを用いて行った。これらの試験は、ＰｒｉｍｉｔｙＢｉｏ  ＬＬＣ（Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ）で実施された。新鮮なＬＲＳ由来試料を、３０μｇ／ｍＬの最高濃度で開始する５倍希釈系列において、ｒＨｕＩＬ−１５または異なるＩＬ−１５ＰＥＧ化された化合物のいずれかで処理した。処理された細胞集団は、ＢＤ  Ｌｙｓｅ／Ｆｉｘ緩衝液を添加し、表１１に示す蛍光抗体パネルで染色する前に、３７℃で４５分間インキュベートされた。マルチカラーフローサイトメトリーを用いて、異なるＴ細胞およびＮＫ細胞サブセットにおけるｐＳＴＡＴ５活性化を検出および定量した。フローサイトメトリーデータを、濃度−応答モードでの異なるＴおよびＮＫ細胞サブセットの活性化、ｒＨｕＩＬ−１５またはＩＬ−１５ＰＥＧ化された化合物での処理後のｐＳＴＡＴ５蓄積を読み取るために分析した。
【０３２０】
【表１１】
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【０３２１】
ＮＫおよびエフェクターＴ細胞（ＣＤ３＋ＣＤ８＋）集団において、ＩＬ−１５  Ｎ７７ＰＥＧ３０およびＩＬ−１５  Ｓ８３ＰＥＧ３０は、ｒＨｕＩＬ−１５に対して効力を保持し、ｐＳＴＡＴ５生成のＥＣ５０値は、天然サイトカインの２倍以内であった。対照的に、ＣＤ８＋ＴおよびＮＫ細胞集団におけるＩＬ−１５  Ｌ２５ＰＥＧ３０のｐＳＴＡＴ５誘導のＥＣ５０値は、ｒＨｕＩＬ−１５と比較して、それぞれ約１４分の１および約１８分の１に減少した。ＩＬ−１５  Ｌ２５ＰＥＧ３０のＥＣ５０の実質的な上昇は、この位置でのＩＬ−１５のＰＥＧ化がＩＬ−１５受容体のアゴニズムを減少させることを示す。ＣＤ８＋ＴおよびＮＫ細胞集団におけるＩＬ−１５  Ｅ５３ＰＥＧ３０のｐＳＴＡＴ５誘導のＥＣ５０値は、ｒＨｕＩＬ−１５と比較して約２分の１に減少しただけであった。この化合物が、ＩＬ−１５Ｒαへの速い会合および速い解離結合動態が示すことを考慮する。
【０３２２】
表１２は、ｒＨｕＩＬ−１５またはＩＬ−１５コンジュゲートで処理されたヒトＬＲＳ試料におけるＳＴＡＴ５シグナル伝達（ＥＣ５０）の用量反応を示す。
【０３２３】
【表１２】
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【０３２４】
図１２Ａ−図１２Ｄは、例示的ＩＬ−１５ＰＥＧコンジュゲートによる刺激時のＮＫおよびＣＤ８＋Ｔ細胞上のＳＴＡＴ５リン酸化を示す。
【実施例５】
【０３２５】
例示的なＩＬ−１５コンジュゲートのインビボ薬理学研究
ナイーブ（Ｅ３８２６−Ｕ１８２１）Ｃ５７ＢＬ／６マウスを用いたＰＫ研究
マウスに、ｒＨｕＩＬ−１５およびＩＬ−１５コンジュゲートＳ８３−ＰＥＧ３０ｋＤａ、Ｖ４９−ＰＥＧ３０ｋＤａ、Ｌ２５−ＰＥＧ３０ｋＤａまたはＮ７７−ＰＥＧ３０ｋＤａのいずれかを０．３ｍｇ／Ｋｇで投薬した。血液は、以下の時間点：０．２５、０．５、２、８、２４、４８、７２、９６、１２０、１４４および１９２時間で採取された。
【０３２６】
表１３に実験設定を示す。各マウスは、ビヒクル、ｒＨｕＩＬ−１５、または３つのＩＬ−１５コンジュゲートのうちの１つのいずれかの単回ＩＶ用量を受けた。
【０３２７】
【表１３】
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【０３２８】
血漿由来試料中のｒＨｕＩＬ−１５、ＩＬ−１５ＰＥＧ化された化合物および内部標準の濃度を、ＥＬＩＳＡアッセイを用いて決定した。ＰＫデータ分析は、ＮＷ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ（Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）で実施された。ＰＫデータは、分析のためにＰｈｏｅｎｉｘ  ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ  ｖ６．４（Ｃｅｒｔａｒａ／Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）にインポートされた。群平均血漿濃度対時間データを、ＩＶボーラス投与モデルを用いて３コンパートメント法で分析した。
【０３２９】
表１４は、ｒＨｕＩＬ−１５と比較した、マウスにおけるＩＬ−１５コンジュゲートの延長された半減期を示す。
【０３３０】
【表１４】
2021514974.tif 000017
【０３３１】
図１３は、０．３ｍｇ／ｋｇでのｒＨｕＩＬ−１５、ＩＬ−１５  Ｓ８３ＰＥＧ３０、ＩＬ−１５  Ｖ４９ＰＥＧ３０、ＩＬ−１５  Ｎ７ＰＥＧ３０およびＩＬ−１５  Ｌ２５  ＰＥＧ３０の血漿濃度プロファイルを示す。
【０３３２】
予想されるように、ＰＥＧ化された化合物は、表１４に要約されるようにｒＨｕＩＬ−１５と比較して優れたＰＫプロファイルを示す。ＭＲＴ（平均滞留時間）は、被験物質分子が体内に滞留する平均時間を表し、ＰＫプロファイル全体を考慮する。ＰＥＧ化された化合物は、ｒＨｕＩＬ−１５と比較して、ＭＲＴにおける約５倍増加を示す。ＩＬ−１５  Ｓ１８ＰＥＧ３０は、ｒＨｕＩＬ−１５と比較して、約１５倍の拡張βｔ１／２（１５．８時間対１．０８時間）および約５９分の１に減少したＣＬ２（５．６８対３３３ｍＬ／ｈ／Ｋｇ）を示す。ＰＥＧ化された化合物の分布体積は、ｒＨｕＩＬ−１５と比較して減少したことから、ＰＥＧ化された化合物は大部分が全身循環内に分布することが示唆された。
【実施例６】
【０３３３】
末梢血コンパートメントにおける薬力学的観察
ナイーブ（Ｅ３８２６−Ｕ１８２１）Ｃ５７ＢＬ／６マウスを用いたＰＤ研究
【０３３４】
マウスに、ｒＨｕＩＬ−１５、ＩＬ−１５コンジュゲートＳ１８−ＰＥＧ  ３０ｋＤａ、ＩＬ−１５コンジュゲートＶ４９−ＰＥＧ  ３０ｋＤａまたはＩＬ−１５コンジュゲートＳ８３−ＰＥＧ  ３０ｋＤａのいずれかを０．１、０．３または１ｍｇ／Ｋｇで投薬した（表１０）。血液は、以下の時間点：０．２５、０．５、２、８、２４、４８、７２、９６、１２０、１４４および１９２時間で採取された。既知の短い半減期を考慮して、ｒＨｕＩＬ−１５についてさらに０．１３の時間点を含めた。ＰＤ読み出しには、細胞内ｐＳＴＡＴ５モニタリング、およびすべての時間点についてＣＤ８＋Ｔ細胞の表現型決定が含まれた。
【０３３５】
表１５に実験設定を示す。各マウスは、ビヒクル、ｒＨｕＩＬ−１５、または３つのＩＬ−１５コンジュゲートのうちの１つのいずれかの単回ＩＶ用量を受けた。
【０３３６】
【表１５】
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【０３３７】
ＳＴＡＴ５のリン酸化および細胞増殖の誘導（初期分子マーカーＫｉ−６７および細胞数）を薬力学的読み取りとして使用して、ＩＬ−１５  Ｓ１８ＰＥＧ３０、ＩＬ−１５  Ｖ４９ＰＥＧ３０およびＩＬ−１５  Ｌ２５  ＰＥＧ３０の薬理学的プロファイルを評価した。ＰＥＧ化された化合物を投薬されたマウスでは、ｐＳＴＡＴ５のより低いまたは同様の上昇が観察されたが、ＳＴＡＴ５のリン酸化は、より高い増殖につながり、ＮＫ細胞ならびにＣＤ８＋エフェクターおよび記憶Ｔ細胞を持続させた（投薬後の１〜７日目）が、Ｔｒｅｇ細胞はそうではなかった（図１４−１７）。
【０３３８】
図１４Ａ−図１４Ｄは、異なる末梢血細胞集団におけるｐＳＴＡＴ５％を示す。
【０３３９】
図１５Ａ−図１５Ｄは、ＰＥＧ化された化合物を投薬された動物における、ＣＤ８＋Ｔ、ＣＤ８＋ＴｍｅｍおよびＮＫ細胞における初期増殖分子マーカーＫｉ６７の増加した発現を示すが、Ｔｒｅｇ細胞は示さない。
【０３４０】
図１６Ａ−図１６Ｃは、ＰＥＧ化された化合物を投薬された動物における頑強な末梢ＣＤ８＋Ｔ、ＣＤ８＋ＴｍｅｍおよびＮＫ細胞を示すが、Ｔｒｅｇ細胞は示さない。
【０３４１】
図１７Ａ−図１７Ｂは、マウスにおけるＩＬ−１５  Ｌ２５ＰＥＧ３０化合物の増加した用量に伴うＣＤ８＋ＴおよびＮＫ細胞におけるＫｉ６７発現の増加を示す。
【０３４２】
本開示の好ましい実施形態を本明細書に示し、説明してきたが、このような実施形態が例示としてのみ提供されることは当業者には自明である。ここで、本開示から逸脱することなく、当業者は多数の変形、変化、および置換を想到するはずである。本明細書に記載される開示の実施形態に対する種々の代替物を、本開示を実施する際に使用することができることが理解されるべきである。以下の特許請求の範囲は、開示の範囲を定義し、これらの特許請求の範囲の範囲内の方法および構造、ならびにそれらの均等物がそれによってカバーされることが意図される。
【図１】
2021514974.tif 000019
【図２Ａ】
2021514974.tif 000020
【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
2021514974.tif 000022
【図３Ｂ】
2021514974.tif 000023
【図３Ｃ】
2021514974.tif 000024
【図３Ｄ】
2021514974.tif 000025
【図４】
2021514974.tif 000026
【図５】
2021514974.tif 000027
【図６】
2021514974.tif 000028
【図７】
2021514974.tif 000029
【図８】
2021514974.tif 000030
【図９Ａ】
2021514974.tif 000031
【図９Ｂ】
2021514974.tif 000032
【図９Ｃ】
2021514974.tif 000033
【図１０】
2021514974.tif 000034
【図１１】
2021514974.tif 000035
【図１２】
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【図１３】
2021514974.tif 000037
【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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