(57)【要約】  本明細書に記載されるのは、白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチドと、ＰＤ−１軸阻害剤との組み合わせを使用して、がんを治療する方法である。
2021521274.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
個体のがんを治療するための、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤と組み合わせた、白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合抗体の使用であって、ＬＩＦ結合抗体が、
ａ）配列番号１〜３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；
ｂ）配列番号４又は５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；
ｃ）配列番号６〜８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；
ｄ）配列番号９又は１０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；
ｅ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び
ｆ）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）
を含む、使用。
【請求項２】
前記ＬＩＦ結合抗体が、
ａ）配列番号１に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；
ｂ）配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；
ｃ）配列番号６に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；
ｄ）配列番号９に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；
ｅ）配列番号１１に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び
ｆ）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）
を含む、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記ＬＩＦ結合抗体が、
ａ）配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；
ｂ）配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；
ｃ）配列番号７に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；
ｄ）配列番号１０に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；
ｅ）配列番号１２に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び
ｆ）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）
を含む、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
前記ＬＩＦ結合抗体と、前記ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤とが、別個の製剤中で前記個体に投与される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
前記ＬＩＦ結合抗体と、及び前記ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤とが、同一製剤中で前記個体に投与される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
前記ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が前記個体に投与される前に、前記ＬＩＦ結合抗体が前記個体に投与される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７】
前記ＬＩＦ結合抗体が前記個体に投与される前に、前記ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が前記個体に投与される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
前記ＬＩＦ結合抗体が前記個体に投与されるのと同時に、前記ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が前記個体に投与される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
前記ＬＩＦ結合抗体がヒト化されている、請求項１〜８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０】
前記ＬＩＦ結合抗体が、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一である、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１】
前記ＶＨ配列が、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と同一であり、前記ＶＬ配列が、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と同一である、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
前記がんが、進行性固形腫瘍、神経膠芽腫、胃がん、皮膚がん、前立腺がん、膵臓がん、膵管腺がん、乳がん、精巣がん、甲状腺がん、頭頸部がん、肝臓がん、腎臓がん、食道がん、卵巣がん、結腸がん、肺がん、非小細胞肺がん、リンパ腫、軟部組織がん、又はそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３】
前記がんが、非小細胞肺がんを含む、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
前記がんが、膵管腺がんを含む、請求項１２に記載の使用。
【請求項１５】
前記がんが、以前にチェックポイント阻害剤で不成功裏に治療されたことがある、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１６】
前記がんが、以前にＬＩＦ結合抗体で不成功裏に治療されたことがある、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１７】
前記チェックポイント阻害剤が、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤である、請求項１５又は１６に記載の使用。
【請求項１８】
前記ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が、ＰＤ−１に結合する抗体又はその断片である、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１９】
個体のがんを治療するための、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤と組み合わせた、白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合抗体の使用であって、前記ＬＩＦ結合抗体が、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一である、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む、使用。
【請求項２０】
前記ＬＩＦ結合抗体と、前記ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤とが、別個の製剤中で前記個体に投与される、請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
前記ＬＩＦ結合抗体と、前記ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤とが、同一製剤中で前記個体に投与される、請求項１９に記載の使用。
【請求項２２】
前記ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が個体に投与される前に、前記ＬＩＦ結合抗体が個体に投与される、請求項１９又は２０に記載の使用。
【請求項２３】
前記ＬＩＦ結合抗体が前記個体に投与される前に、前記ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が前記個体に投与される、請求項１９又は２０に記載の使用。
【請求項２４】
前記ＬＩＦ結合抗体が前記個体に投与されるのと同時に、前記ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が前記個体に投与される、請求項１９〜２１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２５】
前記ＬＩＦ結合抗体がヒト化されている、請求項１９〜２４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２６】
前記ＶＨ配列が、配列番４２に記載されるアミノ酸配列と同一であり、前記ＶＬ配列が、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と同一である、請求項１９〜２５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２７】
前記がんが、進行性固形腫瘍、神経膠芽腫、胃がん、皮膚がん、前立腺がん、膵臓がん、膵管腺がん、乳がん、精巣がん、甲状腺がん、頭頸部がん、肝臓がん、腎臓がん、食道がん、卵巣がん、結腸がん、肺がん、非小細胞肺がん、リンパ腫、軟部組織がん、又はそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１９〜２６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２８】
前記がんが、非小細胞肺がんを含む、請求項２７に記載の使用。
【請求項２９】
前記がんが、膵管腺がんを含む、請求項２７に記載の使用。
【請求項３０】
前記がんが、以前にチェックポイント阻害剤で不成功裏に治療されたことがある、請求項１９〜２９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３１】
前記がんが、以前にＬＩＦ結合抗体で不成功裏に治療されたことがある、請求項１９〜３０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３２】
前記チェックポイント阻害剤が、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤である、請求項３０又は３１に記載の使用。
【請求項３３】
前記ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が、ＰＤ−１に結合する抗体又はその断片である、請求項１９〜３２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３４】
がんを有する個体に、
ａ）ｉ．配列番号１〜３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；
ｉｉ．配列番号４又は５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；
ｉｉｉ．配列番号６〜８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；
ｉｖ．配列番号９又は１０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；
ｖ．配列番号１１又は１２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び
ｖｉ．配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む、白血病抑制因子（ＬＩＦ）と特異的に結合する抗体（ｏｆ  ａｎ）と；
ｂ）ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤と
の組み合わせの有効量を投与するステップを含む、がんを有する個体を治療する方法。
【請求項３５】
前記ＬＩＦ結合抗体が、
ａ）配列番号１に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；
ｂ）配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；
ｃ）配列番号６に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；
ｄ）配列番号９に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；
ｅ）配列番号１１に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び
ｆ）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）
を含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＬＩＦ結合抗体が、
ａ）配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；
ｂ）配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；
ｃ）配列番号７に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；
ｄ）配列番号１０に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；
ｅ）配列番号１２に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び
ｆ）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）
を含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
前記ＬＩＦ結合抗体と、前記ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤とが、別個の製剤中で前記個体に投与される、請求項３４〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記ＬＩＦ結合抗体と、前記ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤とが、同一製剤中で前記個体に投与される、請求項３４〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が前記個体に投与される前に、前記ＬＩＦ結合抗体が前記個体に投与される、請求項３４〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記ＬＩＦ結合抗体が前記個体に投与される前に、前記ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が前記個体に投与される、請求項３４〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記ＬＩＦ結合抗体が前記個体に投与されるのと同時に、前記ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が前記個体に投与される、請求項３４〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記ＬＩＦ結合抗体がヒト化されている、請求項３４〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記ＬＩＦ結合抗体が、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一である、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む、請求項３４〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記ＶＨ配列が、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と同一であり、前記ＶＬ配列が、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と同一である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記がんが、進行性固形腫瘍、神経膠芽腫、胃がん、皮膚がん、前立腺がん、膵臓がん、膵管腺がん、乳がん、精巣がん、甲状腺がん、頭頸部がん、肝臓がん、腎臓がん、食道がん、卵巣がん、結腸がん、肺がん、非小細胞肺がん、リンパ腫、軟部組織がん、又はそれらの任意の組み合わせを含む、請求項３４〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記がんが、非小細胞肺がんを含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記がんが、膵管腺がんを含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項４８】
前記がんが、以前にチェックポイント阻害剤で不成功裏に治療されたことがある、請求項３４〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
前記がんが、以前にＬＩＦ結合抗体で不成功裏に治療されたことがある、請求項３４〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
前記チェックポイント阻害剤が、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤である、請求項４８又は４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が、ＰＤ−１に結合する抗体又はその断片である、請求項３４〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
前記抗体が、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ＡＭＰ−５１４、チスレリズマブ、スパルタリズマブ、又はそのＰＤ−１結合断片を含む、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記抗体が、ＰＤＬ−１又はＰＤＬ−２と特異的に結合する、請求項５１に記載の方法。
【請求項５４】
前記抗体が、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、又はＦＡＺ０５３、又はそのＰＤＬ−１又はＰＤＬ−２結合断片を含む、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２に結合するＦｃ融合タンパク質を含む、請求項３４〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
前記Ｆｃ融合タンパク質が、ＡＭＰ−２２４又はそのＰＤ−１結合断片を含む、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記ＰＤ−１、ＰＤＬ１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２の小分子阻害剤を含む、請求項３４〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２を通じたシグナル伝達の前記小分子阻害剤が、Ｎ−｛２−［（｛２−メトキシ−６−［（２−メチル［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メトキシ］ピリジン−３−イル｝メチル）アミノ］エチル｝アセトアミド（ＢＭＳ２０２）；（２−（（３−シアノベンジル）オキシ）−４−（（３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ダイオキシン−６−イル）−２−メチルベンジル）オキシ）−５−メチルベンジル）−Ｄ−セリン塩酸塩；（２Ｒ，４Ｒ）−１−（５−クロロ−２−（（３−シアノベンジル）オキシ）−４−（（３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ダイオキシン−６−イル）−２−メチルベンジル）オキシ）ベンジル）−４−ヒドロキシピロリジン−２−カルボン酸；３−（４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−１−フェニルインドール；３−（４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−１−フェニル−１ｈ−インドール；Ｌ−α−グルタミン、Ｎ２，Ｎ６−ビス（Ｌ−セリル−Ｌ−アスパラギニル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−セリル−Ｌ−α−グルタミル−Ｌ−セリル−Ｌ−フェニルアラニル）−Ｌ−リシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−バリル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−グルタミニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−リシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミニル−Ｌ−イソロイシル−Ｌ−リシル；（２Ｓ）−１−［［２，６−ジメトキシ−４−［（２−メチル［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メトキシ］フェニル］メチル］−２−ピペリジンカルボン酸；グリシンアミド、Ｎ−（２−メルカプトアセチル）−Ｌ−フェニルアラニル−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−ロイシル−Ｎ−メチルグリシル−Ｌ−トリプトフィル−Ｌ−セリル−Ｌ−トリプトフィル−Ｎ−メチル−Ｌ−ノルロイシル−Ｎ−メチル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−システイニル−、環式（１→１４）−チオエーテル；又はそれらの誘導体又は類似体の１つ又は複数（ｏｎ  ｏｒ  ｍｏｒｅ）を含む、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
がんを有する個体に、
ａ）ｉ．配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；及び
ｉｉ．配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一である、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、白血病抑制因子（ＬＩＦ）と特異的に結合する抗体（ｏｆ  ａｎ）と；
ｂ）ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤と
の組み合わせの有効量を投与するステップを含む、がんを有する個体を治療する方法。
【請求項６０】
前記ＶＨ配列が、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と同一であり、前記ＶＬ配列が、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と同一である、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記ＬＩＦ結合抗体と、前記ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤とが、別個の製剤中で前記個体に投与される、請求項５９又は６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記ＬＩＦ結合抗体と、前記ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤とが、同一製剤中で前記個体に投与される、請求項５９又は６０に記載の方法。
【請求項６３】
前記ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が前記個体に投与される前に、前記ＬＩＦ結合抗体が前記個体に投与される、請求項５９〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
前記ＬＩＦ結合抗体が前記個体に投与される前に、前記ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が前記個体に投与される、請求項５９〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
前記ＬＩＦ結合抗体が前記個体に投与されるのと同時に、前記ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が前記個体に投与される、請求項５９〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６６】
前記ＬＩＦ結合抗体がヒト化されている、請求項５９〜６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
前記がんが、進行性固形腫瘍、神経膠芽腫、胃がん、皮膚がん、前立腺がん、膵臓がん、膵管腺がん、乳がん、精巣がん、甲状腺がん、頭頸部がん、肝臓がん、腎臓がん、食道がん、卵巣がん、結腸がん、肺がん、非小細胞肺がん、リンパ腫、軟部組織がん、又はそれらの任意の組み合わせを含む、請求項５９〜６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
前記がんが、非小細胞肺がんを含む、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記がんが、膵管腺がんを含む、請求項６７に記載の方法。
【請求項７０】
前記がんが、以前にチェックポイント阻害剤で不成功裏に治療されたことがある、請求項５９〜６９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７１】
前記がんが、以前にＬＩＦ結合抗体で不成功裏に治療されたことがある、請求項５９〜６９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
前記チェックポイント阻害剤が、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤である、請求項７０又は７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が、ＰＤ−１に結合する抗体又はその断片である、請求項５９〜７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
前記抗体が、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ＡＭＰ−５１４、チスレリズマブ、スパルタリズマブ、又はそのＰＤ−１結合断片を含む、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記抗体が、ＰＤＬ−１又はＰＤＬ−２と特異的に結合する、請求項７３に記載の方法。
【請求項７６】
前記抗体が、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、又はＦＡＺ０５３、又はそのＰＤＬ−１又はＰＤＬ−２結合断片を含む、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２に結合するＦｃ融合タンパク質を含む、請求項５９〜７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７８】
前記Ｆｃ融合タンパク質が、ＡＭＰ−２２４又はそのＰＤ−１結合断片を含む、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記ＰＤ−１、ＰＤＬ１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２の小分子阻害剤を含む、請求項５９〜７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８０】
ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２を通じたシグナル伝達の前記小分子阻害剤が、Ｎ−｛２−［（｛２−メトキシ−６−［（２−メチル［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メトキシ］ピリジン−３−イル｝メチル）アミノ］エチル｝アセトアミド（ＢＭＳ２０２）；（２−（（３−シアノベンジル）オキシ）−４−（（３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ダイオキシン−６−イル）−２−メチルベンジル）オキシ）−５−メチルベンジル）−Ｄ−セリン塩酸塩；（２Ｒ，４Ｒ）−１−（５−クロロ−２−（（３−シアノベンジル）オキシ）−４−（（３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ダイオキシン−６−イル）−２−メチルベンジル）オキシ）ベンジル）−４−ヒドロキシピロリジン−２−カルボン酸；３−（４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−１−フェニルインドール；３−（４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−１−フェニル−１ｈ−インドール；Ｌ−α−グルタミン、Ｎ２，Ｎ６−ビス（Ｌ−セリル−Ｌ−アスパラギニル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−セリル−Ｌ−α−グルタミル−Ｌ−セリル−Ｌ−フェニルアラニル）−Ｌ−リシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−バリル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−グルタミニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−リシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミニル−Ｌ−イソロイシル−Ｌ−リシル；（２Ｓ）−１−［［２，６−ジメトキシ−４−［（２−メチル［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メトキシ］フェニル］メチル］−２−ピペリジンカルボン酸；グリシンアミド、Ｎ−（２−メルカプトアセチル）−Ｌ−フェニルアラニル−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−ロイシル−Ｎ−メチルグリシル−Ｌ−トリプトフィル−Ｌ−セリル−Ｌ−トリプトフィル−Ｎ−メチル−Ｌ−ノルロイシル−Ｎ−メチル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−システイニル−、環式（１→１４）−チオエーテル；又はそれらの誘導体又は類似体の１つ又は複数を含む、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記抗体が、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ＡＭＰ−５１４、チスレリズマブ、スパルタリズマブ、又はそのＰＤ−１結合断片を含む、請求項１８に記載の使用。
【請求項８２】
前記抗体が、ＰＤＬ−１又はＰＤＬ−２と特異的に結合する、請求項１８に記載の使用。
【請求項８３】
前記抗体が、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、又はＦＡＺ０５３、又はそのＰＤＬ−１又はＰＤＬ−２結合断片を含む、請求項８２に記載の使用。
【請求項８４】
前記ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２に結合するＦｃ融合タンパク質を含む、請求項１〜１７のいずれか１つの使用。
【請求項８５】
前記Ｆｃ融合タンパク質が、ＡＭＰ−２２４又はそのＰＤ−１結合断片を含む、請求項８４に記載の使用。
【請求項８６】
前記ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２の小分子阻害剤を含む、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８７】
ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２を通じたシグナル伝達の前記小分子阻害剤が、Ｎ−｛２−［（｛２−メトキシ−６−［（２−メチル［１，１’−ビフェニル］−３−ｙｌ）メトキシ］ピリジン−３−ｙｌ｝メチル）アミノ］エチル｝アセトアミド（ＢＭＳ２０２）；（２−（（３−シアノベンジル）オキシ）−４−（（３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ダイオキシン−６−ｙｌ）−２−メチルベンジル）オキシ）−５−メチルベンジル）−Ｄ−セリン塩酸塩；（２Ｒ，４Ｒ）−１−（５−クロロ−２−（（３−シアノベンジル）オキシ）−４−（（３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ダイオキシン−６−ｙｌ）−２−メチルベンジル）オキシ）ベンジル）−４−ヒドロキシピロリジン−２−カルボン酸；３−（４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン−２−ｙｌ）−１−フェニルインドール；３−（４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−１−フェニル−１ｈ−インドール；Ｌ−α−グルタミン、Ｎ２，Ｎ６−ビス（Ｌ−セリル−Ｌ−アスパラギニル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−セリル−Ｌ−α−グルタミル−Ｌ−セリル−Ｌ−フェニルアラニル）−Ｌ−リシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−バリル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−グルタミニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−リシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミニル−Ｌ−イソロイシル−Ｌ−リシル；（２Ｓ）−１−［［２，６−ジメトキシ−４−［（２−メチル［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メトキシ］フェニル］メチル］−２−ピペリジンカルボン酸；グリシンアミド、Ｎ−（２−メルカプトアセチル）−Ｌ−フェニルアラニル−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−ロイシル−Ｎ−メチルグリシル−Ｌ−トリプトフィル−Ｌ−セリル−Ｌ−トリプトフィル−Ｎ−メチル−Ｌ−ノルロイシル−Ｎ−メチル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−システイニル−、環式（１→１４）−チオエーテル；又はそれらの誘導体又は類似体の１つ又は複数を含む、請求項８６に記載の使用。
【請求項８８】
前記抗体が、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ＡＭＰ−５１４、チスレリズマブ、スパルタリズマブ、又はそのＰＤ−１結合断片を含む、請求項３３に記載の使用。
【請求項８９】
前記抗体が、ＰＤＬ−１又はＰＤＬ−２と特異的に結合する、請求項３３に記載の使用。
【請求項９０】
前記抗体が、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、又はＦＡＺ０５３、又はそのＰＤＬ−１又はＰＤＬ−２結合断片を含む、請求項８９に記載の使用。
【請求項９１】
前記ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２に結合するＦｃ融合タンパク質を含む、請求項１９〜３２のいずれか１つの使用。
【請求項９２】
前記Ｆｃ融合タンパク質が、ＡＭＰ−２２４又はそのＰＤ−１結合断片を含む、請求項９１に記載の使用。
【請求項９３】
前記ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２の小分子阻害剤を含む、請求項１９〜３２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９４】
ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２を通じたシグナル伝達の前記小分子阻害剤が、Ｎ−｛２−［（｛２−メトキシ−６−［（２−メチル［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メトキシ］ピリジン−３−イル｝メチル）アミノ］エチル｝アセトアミド（ＢＭＳ２０２）；（２−（（３−シアノベンジル）オキシ）−４−（（３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ダイオキシン−６−イル）−２−メチルベンジル）オキシ）−５−メチルベンジル）−Ｄ−セリン塩酸塩；（２Ｒ，４Ｒ）−１−（５−クロロ−２−（（３−シアノベンジル）オキシ）−４−（（３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ダイオキシン−６−イル）−２−メチルベンジル）オキシ）ベンジル）−４−ヒドロキシピロリジン−２−カルボン酸；３−（４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−１−フェニルインドール；３−（４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−１−フェニル−１ｈ−インドール；Ｌ−α−グルタミン、Ｎ２，Ｎ６−ビス（Ｌ−セリル−Ｌ−アスパラギニル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−セリル−Ｌ−α−グルタミル−Ｌ−セリル−Ｌ−フェニルアラニル）−Ｌ−リシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−バリル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−グルタミニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−リシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミニル−Ｌ−イソロイシル−Ｌ−リシル；（２Ｓ）−１−［［２，６−ジメトキシ−４−［（２−メチル［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メトキシ］フェニル］メチル］−２−ピペリジンカルボン酸；グリシンアミド、Ｎ−（２−メルカプトアセチル）−Ｌ−フェニルアラニル−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−ロイシル−Ｎ−メチルグリシル−Ｌ−トリプトフィル−Ｌ−セリル−Ｌ−トリプトフィル−Ｎ−メチル−Ｌ−ノルロイシル−Ｎ−メチル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−システイニル−、環式（１→１４）−チオエーテル；又はそれらの誘導体又は類似体の１つ又は複数を含む、請求項９３に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、それぞれその内容全体が参照により本明細書に援用される、２０１８年４月１２日に出願された欧州特許第１８３８２２４８．５号明細書、２０１８年５月１４日に出願された欧州特許第１８３８２３２６．９号明細書、２０１８年５月２５日に出願された欧州特許第１８３８２３６０．８号明細書、２０１９年２月２２日に出願された欧州特許第１９３８２１３２．９号明細書の優先権を主張する。
【０００２】
白血病抑制因子（ＬＩＦ）は、細胞分化の阻害をはじめとする様々な生物学的活性に関与する、インターロイキン６（ＩＬ−６）型サイトカインである。ヒトＬＩＦは、ｇｐ１３０とヘテロ二量体化した細胞表面ＬＩＦ受容体（ＬＩＦＲ又はＣＤ１１８）への結合を介して生物学的効果を発揮する、２０２アミノ酸のポリペプチドである。これは、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）及びヤヌス活性化キナーゼ（ＪＡＫ／ＳＴＡＴ）経路などの増殖促進シグナル伝達経路の活性化につながる。ＬＩＦの高発現レベル及び高血清レベルは、多くのタイプのがんの予後不良に関連することが実証されている。
【背景技術】
【０００３】
ＰＤ−１及びＣＤ２７９としても知られるプログラム細胞死タンパク質１は、活性化されたＴ細胞及びＢ細胞によって発現される細胞表面受容体であり、Ｔ細胞の炎症活動を抑制することによって、免疫系を下方制御し自己免疫寛容を促進する上で重要な役割を果たす。ＰＤ−１は、２つの異なるリガンドである、ＰＤＬ−１（ＣＤ２７４）及びＰＤＬ−２（ＣＤ２７３）に結合することが示されている。このＰＤ−１軸を通じたシグナル伝達は、免疫監視からの脱出を可能にすることによって、腫瘍増殖及び転移の重要な機序となる。最近では、多くの異なるタイプの腫瘍が、ＰＤＬ−１及びＰＤＬ−２を発現して免疫監視からの脱出を促進し、腫瘍の増殖及び転移の増加をもたらすことが示されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本明細書に記載されるのは、個体において、がん、腫瘍、又はその他の新生物を治療し又は予防するための方法である。物質の方法及び組成は、ＬＩＦ結合ポリペプチドとＰＤ−１軸阻害剤との組み合わせを含む。これらの方法は、ＬＩＦ活性に拮抗し又はそれを遮断する抗ＬＩＦ抗体と、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、及びＰＤＬ−２の結合活性又はシグナル伝達を妨害するポリペプチドとを利用してもよい。特定の実施形態では、ＰＤ−１軸阻害剤は、ＰＤ−１と、ＰＤＬ−１又はＰＤＬ−２とに結合し、それらの間の相互作用を阻害する。特に、これらの組み合わせは、抗ＬＩＦ抗体単独又はＰＤ−１軸阻害剤単独のどちらとの比較でも、驚くべき相乗効果を示す。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
一態様では、本明細書に記載されるのは、個体のがんを治療するための、ＰＤ−１（ＣＤ２７９）、ＰＤＬ−１（ＣＤ２７４）、又はＰＤＬ−２（ＣＤ−２７３）シグナル伝達阻害剤と組み合わせた、白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合抗体の使用であり、ＬＩＦ結合抗体は、（ａ）配列番号１〜３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｂ）配列番号４又は５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｃ）配列番号６〜８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｄ）配列番号９又は１０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｅ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｆ）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体と、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤とが、別個の製剤中で個体に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体と、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤とが、同一製剤中で個体に投与される。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が個体に投与される前に、ＬＩＦ結合抗体が個体に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体が個体に投与される前に、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が個体に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体が個体に投与されるのと同時に、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が個体に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体は、ヒト抗体フレームワーク領域に由来する、少なくとも１つのフレームワーク領域を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体はヒト化されている。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体は脱免疫化されている。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体は、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一である、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む。特定の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と同一であり；ＶＬは、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と同一である。特定の実施形態では、がんは、進行性固形腫瘍、神経膠芽腫、胃がん、皮膚がん、前立腺がん、膵臓がん、乳がん、精巣がん、甲状腺がん、頭頸部がん、肝臓がん、腎臓がん、食道がん、卵巣がん、結腸がん、肺がん、リンパ腫、軟部組織がん、又はそれらの任意の組み合わせを含む。特定の実施形態では、がんは非小細胞肺がんを含む。特定の実施形態では、がんは膵管腺がんを含む。特定の実施形態では、がんは以前にチェックポイント阻害剤で治療されている。特定の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤である。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤は、ＰＤ−１に結合する抗体又はその断片である。
【０００６】
一態様では、本明細書に記載されるのは、個体のがんを治療するための、ＰＤ−１（ＣＤ２７９）、ＰＤＬ−１（ＣＤ２７４）、又はＰＤＬ−２（ＣＤ−２７３）シグナル伝達阻害剤と組み合わせた、白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合抗体の使用であり、ＬＩＦ結合抗体は、（ａ）配列番号１に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｂ）配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｃ）配列番号６に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｄ）配列番号９に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；及び（ｅ）配列番号１１に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体と、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤とが、別個の製剤中で個体に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体と、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤とが、同一製剤中で個体に投与される。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が個体に投与される前に、ＬＩＦ結合抗体が個体に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体が個体に投与される前に、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が個体に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体が個体に投与されるのと同時に、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が個体に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体は、ヒト抗体フレームワーク領域に由来する、少なくとも１つのフレームワーク領域を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体はヒト化されている。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体は脱免疫化されている。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体は、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一である、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む。特定の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と同一であり；ＶＬは、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と同一である。特定の実施形態では、がんは、進行性固形腫瘍、神経膠芽腫、胃がん、皮膚がん、前立腺がん、膵臓がん、乳がん、精巣がん、甲状腺がん、頭頸部がん、肝臓がん、腎臓がん、食道がん、卵巣がん、結腸がん、肺がん、リンパ腫、軟部組織がん、又はそれらの任意の組み合わせを含む。特定の実施形態では、がんは非小細胞肺がんを含む。特定の実施形態では、がんは膵管腺がんを含む。特定の実施形態では、がんは以前にチェックポイント阻害剤で治療されている。特定の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤である。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤は、ＰＤ−１に結合する抗体又はその断片である。
【０００７】
一態様では、本明細書に記載されるのは、個体のがんを治療するための、ＰＤ−１（ＣＤ２７９）、ＰＤＬ−１（ＣＤ２７４）、又はＰＤＬ−２（ＣＤ−２７３）シグナル伝達阻害剤と組み合わせた、白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合抗体の使用であり、ＬＩＦ結合抗体は、（ａ）配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｂ）配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｃ）配列番号７に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｄ）配列番号１０に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｅ）配列番号１２に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｆ）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体と、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤とが、別個の製剤中で個体に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体と、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤とが、同一製剤中で個体に投与される。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が個体に投与される前に、ＬＩＦ結合抗体が個体に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体が個体に投与される前に、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が個体に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体が個体に投与されるのと同時に、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が個体に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体は、ヒト抗体フレームワーク領域に由来する、少なくとも１つのフレームワーク領域を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体はヒト化されている。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体は脱免疫化されている。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体は、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一である、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む。特定の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と同一であり；ＶＬは、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と同一である。特定の実施形態では、がんは、進行性固形腫瘍、神経膠芽腫、胃がん、皮膚がん、前立腺がん、膵臓がん、乳がん、精巣がん、甲状腺がん、頭頸部がん、肝臓がん、腎臓がん、食道がん、卵巣がん、結腸がん、肺がん、リンパ腫、軟部組織がん、又はそれらの任意の組み合わせを含む。特定の実施形態では、がんは非小細胞肺がんを含む。特定の実施形態では、がんは膵管腺がんを含む。特定の実施形態では、がんは以前にチェックポイント阻害剤で治療されている。特定の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤である。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤は、ＰＤ−１に結合する抗体又はその断片である。
【０００８】
一態様では、本明細書に記載されるのは、個体のがんを治療するための、ＰＤ−１（ＣＤ２７９）、ＰＤＬ−１（ＣＤ２７４）、又はＰＤＬ−２（ＣＤ−２７３）シグナル伝達阻害剤と組み合わせた、白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合抗体の使用であり、ＬＩＦ結合抗体は、（ａ）配列番号２に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｂ）配列番号４又は５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｃ）配列番号７に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｄ）配列番号９又は１０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｅ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｆ）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体と、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤とが、別個の製剤中で個体に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体と、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤とが、同一製剤中で個体に投与される。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が個体に投与される前に、ＬＩＦ結合抗体が個体に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体が個体に投与される前に、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が個体に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体が個体に投与されるのと同時に、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が個体に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体は、ヒト抗体フレームワーク領域に由来する、少なくとも１つのフレームワーク領域を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体はヒト化されている。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体は脱免疫化されている。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体は、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一である、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む。特定の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と同一であり；ＶＬは、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と同一である。特定の実施形態では、がんは、進行性固形腫瘍、神経膠芽腫、胃がん、皮膚がん、前立腺がん、膵臓がん、乳がん、精巣がん、甲状腺がん、頭頸部がん、肝臓がん、腎臓がん、食道がん、卵巣がん、結腸がん、肺がん、リンパ腫、軟部組織がん、又はそれらの任意の組み合わせを含む。特定の実施形態では、がんは非小細胞肺がんを含む。特定の実施形態では、がんは膵管腺がんを含む。特定の実施形態では、がんは以前にチェックポイント阻害剤で治療されている。特定の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤である。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤は、ＰＤ−１に結合する抗体又はその断片である。
【０００９】
一態様では、本明細書に記載されるのは、個体のがんを治療するための、ＰＤ−１（ＣＤ２７９）、ＰＤＬ−１（ＣＤ２７４）、又はＰＤＬ−２（ＣＤ−２７３）シグナル伝達阻害剤と組み合わせた、白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチドの使用である。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドと、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤とが、別個の製剤中で個体に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドと、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤とが、同一製剤中で個体に投与される。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が個体に投与される前に、ＬＩＦ結合ポリペプチドが個体に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドが個体に投与される前に、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が個体に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドが個体に投与されるのと同時に、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が個体に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、免疫グロブリン可変領域又は免疫グロブリン重鎖定常領域の断片を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、ＬＩＦと特異的に結合する抗体を含む。特定の実施形態では、抗体は、ヒト抗体フレームワーク領域に由来する少なくとも１つのフレームワーク領域を含む、ＬＩＦと特異的に結合する。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、ヒト化されている。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、脱免疫化されている。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、２つの免疫グロブリン重鎖と、２つの免疫グロブリン軽鎖とを含む。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、ＩｇＧ抗体である。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、単一ドメイン抗体、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又はナノボディである。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号１〜３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｂ）配列番号４又は５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｃ）配列番号６〜８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｄ）配列番号９又は１０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｅ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｆ）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号４１、４２、４４、又は６６のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）配列；及び（ｂ）配列番号４５〜４８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一であり；ＶＬ配列は、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である。特定の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と同一であり；ＶＬは、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と同一である。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号５７〜６０又は６７のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン重鎖配列；及び（ｂ）配列番号６１〜６４のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン軽鎖配列を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、約２００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、約１００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤は、抗体又はそのＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２結合断片を含む。特定の実施形態では、抗体はＰＤ−１と特異的に結合する。特定の実施形態では、抗体は、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ＡＭＰ−５１４、チスレリズマブ、スパルタリズマブ、又はそのＰＤ−１結合断片を含む。特定の実施形態では、抗体は、ＰＤＬ−１又はＰＤＬ−２と特異的に結合する。特定の実施形態では、抗体は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、又はＦＡＺ０５３、又はそのＰＤＬ−１又はＰＤｌ−２結合断片を含む。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２に結合するＦｃ融合タンパク質を含む。特定の実施形態では、Ｆｃ融合タンパク質は、ＡＭＰ−２２４又はそのＰＤ−１結合断片を含む。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２の小分子阻害剤を含む。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２を通じたシグナル伝達の小分子阻害剤は、Ｎ−｛２−［（｛２−メトキシ−６−［（２−メチル［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メトキシ］ピリジン−３−イル｝メチル）アミノ］エチル｝アセトアミド（ＢＭＳ２０２）；（２−（（３−シアノベンジル）オキシ）−４−（（３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ダイオキシン−６−イル）−２−メチルベンジル）オキシ）−５−メチルベンジル）−Ｄ−セリン塩酸塩；（２Ｒ，４Ｒ）−１−（５−クロロ−２−（（３−シアノベンジル）オキシ）−４−（（３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ダイオキシン−６−イル）−２−メチルベンジル）オキシ）ベンジル）−４−ヒドロキシピロリジン−２−カルボン酸；３−（４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−１−フェニルインドール；３−（４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−１−フェニル−１ｈ−インドール；Ｌ−α−グルタミン、Ｎ２，Ｎ６−ビス（Ｌ−セリル−Ｌ−アスパラギニル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−セリル−Ｌ−α−グルタミル−Ｌ−セリル−Ｌ−フェニルアラニル）−Ｌ−リシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−バリル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−グルタミニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−リシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミニル−Ｌ−イソロイシル−Ｌ−リシル；（２Ｓ）−１−［［２，６−ジメトキシ−４−［（２−メチル［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メトキシ］フェニル］メチル］−２−ピペリジンカルボン酸；グリシンアミド、Ｎ−（２−メルカプトアセチル）−Ｌ−フェニルアラニル−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−ロイシル−Ｎ−メチルグリシル−Ｌ−トリプトフィル−Ｌ−セリル−Ｌ−トリプトフィル−Ｎ−メチル−Ｌ−ノルロイシル−Ｎ−メチル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−システイニル−、環式（１→１４）−チオエーテル；又はそれらの誘導体又は類似体を含む。特定の実施形態では、がんは、進行性固形腫瘍、神経膠芽腫、胃がん、皮膚がん、前立腺がん、膵臓がん、乳がん、精巣がん、甲状腺がん、頭頸部がん、肝臓がん、腎臓がん、食道がん、卵巣がん、結腸がん、肺がん、リンパ腫、又は軟部組織がんを含む。特定の実施形態では、がんは、非小細胞肺がん、上皮性卵巣がん、又は膵腺がんを含む。特定の実施形態では、がんは、単剤療法で投与される、治療量のＬＩＦ結合ポリペプチドによる治療、又はＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤による治療に対して不応性である。
【００１０】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、個体のがんを治療するための、ＰＤ−１結合抗体と組み合わせた、白血病抑制因子（ＬＩＦ）と特異的に結合する抗体の使用であり、ＬＩＦ結合抗体は、（ａ）配列番号１〜３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｂ）配列番号４又は５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｃ）配列番号６〜８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｄ）配列番号９又は１０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｅ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｆ）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む。
【００１１】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、がんを有する個体に、（ａ）白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチド（ｏｆ  ａ）；及び（ｂ）ＰＤ−１（ＣＤ２７９）、ＰＤＬ−１（ＣＤ２７４）、又はＰＤＬ−２（ＣＤ２７３）シグナル伝達阻害剤の有効量を投与するステップを含む、がんを有する個体を治療する方法である。特定の実施形態では、方法は、がんを有する個体に、ＬＩＦ結合ポリペプチドの有効量を投与するステップを含む。特定の実施形態では、方法は、がんを有する個体に、ＰＤ−１阻害剤の有効量を投与するステップを含む。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、免疫グロブリン可変領域又は免疫グロブリン重鎖定常領域の断片を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、ＬＩＦと特異的に結合する抗体を含む。特定の実施形態では、抗体は、ヒト抗体フレームワーク領域に由来する少なくとも１つのフレームワーク領域を含む、ＬＩＦと特異的に結合する。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、ヒト化されている。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、脱免疫化されている。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、２つの免疫グロブリン重鎖と、２つの免疫グロブリン軽鎖とを含む。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、ＩｇＧ抗体である。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、単一ドメイン抗体、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又はナノボディである。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号１〜３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｂ）配列番号４又は５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｃ）配列番号６〜８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｄ）配列番号９又は１０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｅ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｆ）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号４１、４２、４４、又は６６のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）配列；及び（ｂ）配列番号４５〜４８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であり；ＶＬ配列は、配列番号���６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である。特定の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と同一であり；ＶＬは、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と同一である。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号５７〜６０又は６７のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン重鎖配列；及び：配列番号６１〜６４のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン軽鎖配列を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、約２００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、約１００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤は、抗体又はそのＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２結合断片を含む。特定の実施形態では、抗体はＰＤ−１と特異的に結合する。特定の実施形態では、抗体は、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ＡＭＰ−５１４、チスレリズマブ、スパルタリズマブ、又はそのＰＤ−１結合断片を含む。特定の実施形態では、抗体は、ＰＤＬ−１又はＰＤＬ−２と特異的に結合する。特定の実施形態では、抗体は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、又はＦＡＺ０５３、又はそのＰＤＬ−１又はＰＤＬ−２結合断片を含む。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２に結合するＦｃ融合タンパク質を含む。特定の実施形態では、Ｆｃ融合タンパク質は、ＡＭＰ−２２４又はそのＰＤ−１結合断片を含む。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２の小分子阻害剤を含む。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２を通じたシグナル伝達の小分子阻害剤は、Ｎ−｛２−［（｛２−メトキシ−６−［（２−メチル［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メトキシ］ピリジン−３−イル｝メチル）アミノ］エチル｝アセトアミド（ＢＭＳ２０２）；（２−（（３−シアノベンジル）オキシ）−４−（（３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ダイオキシン−６−イル）−２−メチルベンジル）オキシ）−５−メチルベンジル）−Ｄ−セリン塩酸塩；（２Ｒ，４Ｒ）−１−（５−クロロ−２−（（３−シアノベンジル）オキシ）−４−（（３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ダイオキシン−６−イル）−２−メチルベンジル）オキシ）ベンジル）−４−ヒドロキシピロリジン−２−カルボン酸；３−（４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−１−フェニルインドール；３−（４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−１−フェニル−１ｈ−インドール；Ｌ−α−グルタミン、Ｎ２，Ｎ６−ビス（Ｌ−セリル−Ｌ−アスパラギニ��−Ｌ−スレオニル−Ｌ−セリル−Ｌ−α−グルタミル−Ｌ−セリル−Ｌ−フェニルアラニル）−Ｌ−リシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−バリル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−グルタミニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−リシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミニル−Ｌ−イソロイシル−Ｌ−リシル；（２Ｓ）−１−［［２，６−ジメトキシ−４−［（２−メチル［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メトキシ］フェニル］メチル］−２−ピペリジンカルボン酸；グリシンアミド、Ｎ−（２−メルカプトアセチル）−Ｌ−フェニルアラニル−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−ロイシル−Ｎ−メチルグリシル−Ｌ−トリプトフィル−Ｌ−セリル−Ｌ−トリプトフィル−Ｎ−メチル−Ｌ−ノルロイシル−Ｎ−メチル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−システイニル−、環式（１→１４）−チオエーテル；又はそれらの誘導体又は類似体を含む。特定の実施形態では、がんは、進行性固形腫瘍、神経膠芽腫、胃がん、皮膚がん、前立腺がん、膵臓がん、乳がん、精巣がん、甲状腺がん、頭頸部がん、肝臓がん、腎臓がん、食道がん、卵巣がん、結腸がん、肺がん、リンパ腫、又は軟部組織がんを含む。特定の実施形態では、がんは、非小細胞肺がん、上皮性卵巣がん、又は膵腺がんを含む。特定の実施形態では、がんは、治療量のＬＩＦ結合ポリペプチド阻害剤による治療に対して不応性である。特定の実施形態では、がんは、治療量のＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤阻害剤（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ａｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ）による治療に対して不応性である。特定の実施形態では、白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチドと、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤とが、別々に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドと、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤とが、同時に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドと、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤とが、単一組成物中で投与される。
【００１２】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、がんを有する個体に、白血病抑制因子（ＬＩＦ）−結合ポリペプチドの有効量を投与するステップを含む、がんを有する個体を治療する方法であり、個体には、治療量のＰＤ−１（ＣＤ２７９）、ＰＤＬ−１（ＣＤ２７４）、又はＰＤＬ−２（ＣＤ−２７３）シグナル伝達阻害剤が投与されている。特定の実施形態では、方法はがんの増殖又は転移を阻害する。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、免疫グロブリン可変領域又は免疫グロブリン重鎖定常領域の断片を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、ＬＩＦと特異的に結合する抗体を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、ヒト免疫グロブリンフレームワーク領域に由来する、少なくとも１つのフレームワーク領域を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、ヒト化されている。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、脱免疫化されている。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、２つの免疫グロブリン重鎖と、２つの免疫グロブリン軽鎖とを含む。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、ＩｇＧ抗体である。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、単一ドメイン抗体、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又はナノボディである。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号１〜３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｂ）配列番号４又は５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｃ）配列番号６〜８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｄ）配列番号９又は１０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｅ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｆ）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号４１、４２、４４、又は６６のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）配列；及び（ｂ）配列番号４５〜４８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一であり；ＶＬ配列は、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である。特定の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と同一であり；ＶＬは、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と同一である。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号５７〜６０又は６７のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン重鎖配列；及び（ｂ）配列番号６１〜６４のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン軽鎖配列を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、約２００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、約１００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤は、抗体又はそのＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２結合断片を含む。特定の実施形態では、抗体はＰＤ−１と特異的に結合する。特定の実施形態では、抗体は、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ＡＭＰ−５１４、又はスパルタリズマブ、又はそのＰＤ−１結合断片を含む。特定の実施形態では、抗体は、ＰＤＬ−１又はＰＤＬ−２と特異的に結合する。特定の実施形態では、抗体は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、又はＦＡＺ０５３、又はそのＰＤＬ−１又はＰＤＬ−２結合断片を含む。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２に結合するＦｃ融合タンパク質を含む。特定の実施形態では、Ｆｃ融合タンパク質は、ＡＭＰ−２２４又はそのＰＤ−１結合断片を含む。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２の小分子阻害剤を含む。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２を通じたシグナル伝達の小分子阻害剤は、Ｎ−｛２−［（｛２−メトキシ−６−［（２−メチル［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メトキシ］ピリジン−３−イル｝メチル）アミノ］エチル｝アセトアミド（ＢＭＳ２０２）；（２−（（３−シアノベンジル）オキシ）−４−（（３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ダイオキシン−６−イル）−２−メチルベンジル）オキシ）−５−メチルベンジル）−Ｄ−セリン塩酸塩；（２Ｒ，４Ｒ）−１−（５−クロロ−２−（（３−シアノベンジル）オキシ）−４−（（３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ダイオキシン−６−イル）−２−メチルベンジル）オキシ）ベンジル）−４−ヒドロキシピロリジン−２−カルボン酸；３−（４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−１−フェニルインドール；３−（４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−１−フェニル−１ｈ−インドール；Ｌ−α−グルタミン、Ｎ２，Ｎ６−ビス（Ｌ−セリル−Ｌ−アスパラギニル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−セリル−Ｌ−α−グルタミル−Ｌ−セリル−Ｌ−フェニルアラニル）−Ｌ−リシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−アルギニル−��−バリル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−グルタミニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−リシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミニル−Ｌ−イソロイシル−Ｌ−リシル；（２Ｓ）−１−［［２，６−ジメトキシ−４−［（２−メチル［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メトキシ］フェニル］メチル］−２−ピペリジンカルボン酸；グリシンアミド、Ｎ−（２−メルカプトアセチル）−Ｌ−フェニルアラニル−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−ロイシル−Ｎ−メチルグリシル−Ｌ−トリプトフィル−Ｌ−セリル−Ｌ−トリプトフィル−Ｎ−メチル−Ｌ−ノルロイシル−Ｎ−メチル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−システイニル−、環式（１→１４）−チオエーテル；又はそれらの誘導体又は類似体を含む。特定の実施形態では、がんは、進行性固形腫瘍、神経膠芽腫、胃がん、皮膚がん、前立腺がん、膵臓がん、乳がん、精巣がん、甲状腺がん、頭頸部がん、肝臓がん、腎臓がん、食道がん、卵巣がん、結腸がん、肺がん、リンパ腫、又は軟部組織がんを含む。特定の実施形態では、がんは、非小細胞肺がん、上皮性卵巣がん、又は膵腺がんを含む。特定の実施形態では、がんは、治療量のＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤による治療に対して不応性である。
【００１３】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、がんを有する個体に、ＰＤ−１（ＣＤ２７９）、ＰＤＬ−１（ＣＤ２７４）、又はＰＤＬ−２（ＣＤ２７３）シグナル伝達阻害剤の有効量を投与するステップを含む、がんを有する個体を治療する方法であり、個体には、治療量の白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチドが投与されている。特定の実施形態では、方法は、がんの増殖又は転移を阻害する。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、免疫グロブリン可変領域又は免疫グロブリン重鎖定常領域の断片を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、ＬＩＦと特異的に結合する抗体を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、ヒト免疫グロブリンフレームワーク領域に由来する、少なくとも１つのフレームワーク領域を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、ヒト化されている。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、脱免疫化されている。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、２つの免疫グロブリン重鎖と、２つの免疫グロブリン軽鎖とを含む。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、ＩｇＧ抗体である。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、単一ドメイン抗体、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又はナノボディである。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号１〜３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｂ）配列番号４又は５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｃ）配列番号６〜８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｄ）配列番号９又は１０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｅ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｆ）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号４１、４２、４４、又は６６のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）配列；及び（ｂ）配列番号４５〜４８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であり；ＶＬ配列は、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である。特定の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と同一であり；ＶＬは、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と同一である。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号５７〜６０又は６７のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン重鎖配列；及び（ｂ）配列番号６１〜６４のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン軽鎖配列を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、約２００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、約１００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤は、抗体又はそのＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２結合断片を含む。特定の実施形態では、抗体はＰＤ−１と特異的に結合する。特定の実施形態では、抗体は、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ＡＭＰ−５１４、スパルタリズマブ、又はそのＰＤ−１結合断片を含む。特定の実施形態では、抗体は、ＰＤＬ−１又はＰＤＬ−２と特異的に結合する。特定の実施形態では、抗体は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、又はＦＡＺ０５３、又はそのＰＤＬ−１又はＰＤＬ−２結合断片を含む。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２に結合するＦｃ融合タンパク質を含む。特定の実施形態では、Ｆｃ融合タンパク質は、ＡＭＰ−２２４又はそのＰＤ−１結合断片を含む。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２の小分子阻害剤を含む。特定の実施形態では、ＰＤ−１（ＣＤ２７９）、ＰＤＬ−１（ＣＤ２７４）、又はＰＤＬ−２（ＣＤ２７３）を通じたシグナル伝達の小分子阻害剤は、Ｎ−｛２−［（｛２−メトキシ−６−［（２−メチル［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メトキシ］ピリジン−３−イル｝メチル）アミノ］エチル｝アセトアミド（ＢＭＳ２０２）；（２−（（３−シアノベンジル）オキシ）−４−（（３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ダイオキシン−６−イル）−２−メチルベンジル）オキシ）−５−メチルベンジル）−Ｄ−セリン塩酸塩；（２Ｒ，４Ｒ）−１−（５−クロロ−２−（（３−シアノベンジル）オキシ）−４−（（３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ダイオキシン−６−イル）−２−メチルベンジル）オキシ）ベンジル）−４−ヒドロキシピロリジン−２−カルボン酸；３−（４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−１−フェニルインドール；３−（４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−１−フェニル−１ｈ−インドール；Ｌ−α−グルタミン、Ｎ２，Ｎ６−ビス（Ｌ−セリル−Ｌ−アスパラギニル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−セリル−Ｌ−α−グルタミル−Ｌ−セリル−Ｌ−フェニルアラニ��）−Ｌ−リシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−バリル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−グルタミニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−リシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミニル−Ｌ−イソロイシル−Ｌ−リシル；（２Ｓ）−１−［［２，６−ジメトキシ−４−［（２−メチル［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メトキシ］フェニル］メチル］−２−ピペリジンカルボン酸；グリシンアミド、Ｎ−（２−メルカプトアセチル）−Ｌ−フェニルアラニル−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−ロイシル−Ｎ−メチルグリシル−Ｌ−トリプトフィル−Ｌ−セリル−Ｌ−トリプトフィル−Ｎ−メチル−Ｌ−ノルロイシル−Ｎ−メチル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−システイニル−、環式（１→１４）−チオエーテル；又はそれらの誘導体又は類似体を含む。特定の実施形態では、がんは、進行性固形腫瘍、神経膠芽腫、胃がん、皮膚がん、前立腺がん、膵臓がん、乳がん、精巣がん、甲状腺がん、頭頸部がん、肝臓がん、腎臓がん、食道がん、卵巣がん、結腸がん、肺がん、リンパ腫、又は軟部組織がんを含む。特定の実施形態では、がんは、非小細胞肺がん、上皮性卵巣がん、又は膵腺がんを含む。特定の実施形態では、がんは、治療量のＬＩＦ結合ポリペプチド阻害剤による治療に対して不応性である。
【００１４】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、がんを有する個体に、（ａ）（ｉ）配列番号１〜３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｉｉ）配列番号４又は５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｉｉｉ）配列番号６〜８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｉｖ）配列番号９又は１０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｖ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｖｉ）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む、白血病抑制因子（ＬＩＦ）と特異的に結合する抗体；及び（ｂ）（ｏｆ  ａ）ＰＤ−１結合抗体の有効量を投与するステップを含む、がんを有する個体を治療する方法である。
【００１５】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、（ａ）白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチド；及び（ｂ）ＰＤ−１（ＣＤ２７９）、ＰＤＬ−１（ＣＤ２７４）、又はＰＤＬ−２（ＣＤ２７３）シグナル伝達阻害剤を含むキットである。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、免疫グロブリン可変領域又は免疫グロブリン重鎖定常領域の断片を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、ＬＩＦと特異的に結合する抗体を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、ヒト免疫グロブリンフレームワーク領域に由来する、少なくとも１つのフレームワーク領域を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、ヒト化されている。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、脱免疫化されている。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、２つの免疫グロブリン重鎖と、２つの免疫グロブリン軽鎖とを含む。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、ＩｇＧ抗体である。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、単一ドメイン抗体、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又はナノボディである。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号１〜３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｂ）配列番号４又は５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｃ）配列番号６〜８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｄ）配列番号９又は１０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｅ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｆ）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号４１、４２、４４、又は６６のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）配列；及び（ｂ）配列番号４５〜４８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であり；ＶＬ配列は、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である。特定の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と同一であり；ＶＬは、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と同一である。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号５７〜６０又は６７のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン重鎖配列；及び（ｂ）配列番号６１〜６４のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン軽鎖配列を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、約２００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、約１００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤は、抗体又はその抗原結合断片を含む。特定の実施形態では、抗体はＰＤ−１と特異的に結合する。特定の実施形態では、抗体は、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ＡＭＰ−５１４、又はスパルタリズマブ、又はそのＰＤ−１結合断片を含む。特定の実施形態では、抗体は、ＰＤＬ−１又はＰＤＬ−２と特異的に結合する。特定の実施形態では、抗体は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、又はＦＡＺ０５３、又はそのＰＤＬ−１又はＰＤＬ−２結合断片を含む。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２に結合するＦｃ融合タンパク質を含む。特定の実施形態では、Ｆｃ融合タンパク質は、ＡＭＰ−２２４又はそのＰＤ−１結合断片を含む。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２の小分子阻害剤を含む。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２を通じたシグナル伝達の小分子阻害剤は、Ｎ−｛２−［（｛２−メトキシ−６−［（２−メチル［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メトキシ］ピリジン−３−イル｝メチル）アミノ］エチル｝アセトアミド（ＢＭＳ２０２）；（２−（（３−シアノベンジル）オキシ）−４−（（３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ダイオキシン−６−イル）−２−メチルベンジル）オキシ）−５−メチルベンジル）−Ｄ−セリン塩酸塩；（２Ｒ，４Ｒ）−１−（５−クロロ−２−（（３−シアノベンジル）オキシ）−４−（（３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ダイオキシン−６−イル）−２−メチルベンジル）オキシ）ベンジル）−４−ヒドロキシピロリジン−２−カルボン酸；３−（４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−１−フェニルインドール；３−（４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−１−フェニル−１ｈ−インドール；Ｌ−α−グルタミン、Ｎ２，Ｎ６−ビス（Ｌ−セリル−Ｌ−アスパラギニル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−セリル−Ｌ−α−グルタミル−Ｌ−セリル−Ｌ−フェニルアラニル）−Ｌ−リシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−バリル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−グルタミニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−リシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミニル−Ｌ−イソロイシル−Ｌ−リシル；��２Ｓ）−１−［［２，６−ジメトキシ−４−［（２−メチル［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メトキシ］フェニル］メチル］−２−ピペリジンカルボン酸；グリシンアミド、Ｎ−（２−メルカプトアセチル）−Ｌ−フェニルアラニル−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−ロイシル−Ｎ−メチルグリシル−Ｌ−トリプトフィル−Ｌ−セリル−Ｌ−トリプトフィル−Ｎ−メチル−Ｌ−ノルロイシル−Ｎ−メチル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−システイニル−、環式（１→１４）−チオエーテル；又はそれらの誘導体又は類似体を含む。特定の実施形態では、キットは、薬学的に許容可能な賦形剤、担体、又は希釈剤をさらに含む。
【００１６】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、（ａ）白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチド；及び（ｂ）ＰＤ−１（ＣＤ２７９）、ＰＤＬ−１（ＣＤ２７４）、又はＰＤＬ−２（ＣＤ２７３）シグナル伝達阻害剤を含む組成物である。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、免疫グロブリン可変領域又は免疫グロブリン重鎖定常領域の断片を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、ＬＩＦと特異的に結合する抗体を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、ヒト免疫グロブリンフレームワーク領域に由来する、少なくとも１つのフレームワーク領域を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、ヒト化されている。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、脱免疫化されている。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、２つの免疫グロブリン重鎖と、２つの免疫グロブリン軽鎖とを含む。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、ＩｇＧ抗体である。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、単一ドメイン抗体、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又はナノボディである。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号１〜３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｂ）配列番号４又は５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｃ）配列番号６〜８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｄ）配列番号９又は１０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｅ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｆ）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号４１、４２、４４、又は６６のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）配列；及び（ｂ）配列番号４５〜４８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であり；ＶＬ配列は、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である。特定の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と同一であり；ＶＬは、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と同一である。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、（ａ）配列番号５７〜６０又は６７のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン重鎖配列；及び（ｂ）配列番号６１〜６４のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン軽鎖配列を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、約２００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、約１００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤は、抗体又はそのＰＤ−１結合断片を含む。特定の実施形態では、抗体はＰＤ−１と特異的に結合する。特定の実施形態では、抗体は、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ＡＭＰ−５１４、又はスパルタリズマブ、又はそのＰＤ−１結合断片を含む。特定の実施形態では、抗体は、ＰＤＬ−１又はＰＤＬ−２と特異的に結合する。特定の実施形態では、抗体は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、又はＦＡＺ０５３、又はそのＰＤＬ−１又はＰＤＬ−２結合断片を含む。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２に結合するＦｃ融合タンパク質を含む。特定の実施形態では、Ｆｃ融合タンパク質は、ＡＭＰ−２２４又はそのＰＤ−１結合断片を含む。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２の小分子阻害剤を含む。特定の実施形態では、ＰＤ−１（ＣＤ２７９）、ＰＤＬ−１（ＣＤ２７４）、又はＰＤＬ−２（ＣＤ２７３）を通じたシグナル伝達の小分子阻害剤は、Ｎ−｛２−［（｛２−メトキシ−６−［（２−メチル［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メトキシ］ピリジン−３−イル｝メチル）アミノ］エチル｝アセトアミド（ＢＭＳ２０２）；（２−（（３−シアノベンジル）オキシ）−４−（（３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ダイオキシン−６−イル）−２−メチルベンジル）オキシ）−５−メチルベンジル）−Ｄ−セリン塩酸塩；（２Ｒ，４Ｒ）−１−（５−クロロ−２−（（３−シアノベンジル）オキシ）−４−（（３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ダイオキシン−６−イル）−２−メチルベンジル）オキシ）ベンジル）−４−ヒドロキシピロリジン−２−カルボン酸；３−（４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−１−フェニルインドール；３−（４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−１−フェニル−１ｈ−インドール；Ｌ−α−グルタミン、Ｎ２，Ｎ６−ビス（Ｌ−セリル−Ｌ−アスパラギニル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−セリル−Ｌ−α−グルタミル−Ｌ−セリル−Ｌ−フェニルアラニル）−Ｌ−リシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−バリル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−グルタミニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−リシル−Ｌ−アラニル−Ｌ��グルタミニル−Ｌ−イソロイシル−Ｌ−リシル；（２Ｓ）−１−［［２，６−ジメトキシ−４−［（２−メチル［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メトキシ］フェニル］メチル］−２−ピペリジンカルボン酸；グリシンアミド、Ｎ−（２−メルカプトアセチル）−Ｌ−フェニルアラニル−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−ロイシル−Ｎ−メチルグリシル−Ｌ−トリプトフィル−Ｌ−セリル−Ｌ−トリプトフィル−Ｎ−メチル−Ｌ−ノルロイシル−Ｎ−メチル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−システイニル−、環式（１→１４）−チオエーテル；又はそれらの誘導体又は類似体を含む。特定の実施形態では、組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤、担体、又は希釈剤をさらに含む。
【００１７】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、がんを有する個体に、（ａ）（ｉ）配列番号１〜３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｉｉ）配列番号４又は５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｉｉｉ）配列番号６〜８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｉｖ）配列番号９又は１０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｖ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｖｉ）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む、白血病抑制因子（ＬＩＦ）と特異的に結合する抗体（ｏｆ  ａｎ）と；ＰＤ−１又はＰＤＬ−１結合抗体との組み合わせの有効量を投与するステップを含む、がんを有する個体を治療する方法である。特定の実施形態では、方法は、がんを有する個体に、ＬＩＦと特異的に結合する抗体の有効量を投与するステップを含む。特定の実施形態では、方法は、がんを有する個体に、ＰＤ−１又はＰＤＬ−１結合抗体の有効量を投与するステップを含む。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体と、ＰＤ−１又はＰＤＬ−１結合抗体は、別々に投与される。特定の実施形態では、がんは、多形性膠芽腫（ＧＢＭ）、ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺がん）、卵巣がん、結腸直腸がん、甲状腺がん、又は膵臓がんである。
【００１８】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、がんを有する個体に、（ａ）（ｉ）配列番号１〜３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｉｉ）配列番号４又は５に記載されるアミノ酸配列のいずれか１つを含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｉｉｉ）配列番号６〜８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｉｖ）配列番号９又は１０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｖ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｖｉ）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む、白血病抑制因子（ＬＩＦ）と特異的に結合する抗体（ｏｆ  ａｎ）と；ＰＤ−１又はＰＤＬ−１結合抗体との組み合わせの有効量を投与するステップを含む、がんを有する個体において腫瘍促進性腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）を減少させる方法である。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体と、ＰＤ−１又はＰＤＬ−１結合抗体は、別々に投与される。特定の実施形態では、ＴＡＭは、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ２０６、及びＣＤ１６３からなるリストから選択される任意の１、２、又は３分子の細胞表面発現を示す。
【００１９】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、がんを有する個体に、（ａ）（ｉ）配列番号１〜３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｉｉ）配列番号４又は５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｉｉｉ）配列番号６〜８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｉｖ）配列番号９又は１０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｖ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｖｉ）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む、白血病抑制因子（ＬＩＦ）と特異的に結合する抗体（ｏｆ  ａｎ）と；ＰＤ−１又はＰＤＬ−１結合抗体との組み合わせの有効量を投与するステップを含む、がんを有する個体に免疫記憶を生成する方法である。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体と、ＰＤ−１又はＰＤＬ−１結合抗体は、別々に投与される。特定の実施形態では、免疫記憶は、ＣＤ８＋Ｔ細胞によって媒介される。特定の実施形態では、免疫記憶は、ＣＤ４＋Ｔ細胞によって媒介される。
【００２０】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、腫瘍に罹患した個体に、（ａ）（ｉ）配列番号１〜３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｉｉ）配列番号４又は５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｉｉｉ）配列番号６〜８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｉｖ）配列番号９又は１０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｖ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｖｉ）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む、白血病抑制因子（ＬＩＦ）と特異的に結合する抗体（ｏｆ  ａｎ）と；ＰＤ−１又はＰＤＬ−１結合抗体との組み合わせの有効量を投与するステップを含む、腫瘍中のＴリンパ球の量を増加させる方法である。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体と、ＰＤ−１又はＰＤＬ−１結合抗体は、別々に投与される。特定の実施形態では、Ｔリンパ球はＣＤ８＋Ｔ細胞を含む。特定の実施形態では、Ｔリンパ球はＣＤ４＋Ｔ細胞を含む。
【００２１】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、個体のがんを治療するための、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤と組み合わせた、白血病抑制因子（ＬＩＦ）−結合抗体の使用であり、ＬＩＦ結合抗体は、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）を含み；免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一である。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体と、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤とが、別個の製剤中で個体に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体と、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤とが、同一製剤中で個体に投与される。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が個体に投与される前に、ＬＩＦ結合抗体が個体に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体が個体に投与される前に、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が個体に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体が個体に投与されるのと同時に、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が個体に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体はヒト化されている。特定の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と同一であり；ＶＬは、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と同一である。特定の実施形態では、がんは、進行性固形腫瘍、神経膠芽腫、胃がん、皮膚がん、前立腺がん、膵臓がん、乳がん、精巣がん、甲状腺がん、頭頸部がん、肝臓がん、腎臓がん、食道がん、卵巣がん、結腸がん、肺がん、リンパ腫、軟部組織がん、又はそれらの任意の組み合わせを含む。特定の実施形態では、がんは、非小細胞肺がんを含む。特定の実施形態では、がんは、膵管腺がんを含む。特定の実施形態では、がんは、以前にチェックポイント阻害剤で治療されている。特定の実施形態では、がんは、以前にＬＩＦ抗体で治療されている。特定の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤である。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤は、ＰＤ−１に結合する抗体又はその断片である。
【００２２】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、がんを有する個体に、（ａ）（ｉ）配列番号１〜３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｉｉ）配列番号４又は５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｉｉｉ）配列番号６〜８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｉｖ）配列番号９又は１０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｖ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｖｉ）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む、白血病抑制因子（ＬＩＦ）と特異的に結合する抗体（ｏｆ  ａｎ）と；（ｂ）ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤との組み合わせの有効量を投与するステップを含む、がんを有する個体を治療する方法である。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体は、（ａ）配列番号１に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｂ）配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｃ）配列番号６に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｄ）配列番号９に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；及び（ｅ）配列番号１１に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体は、（ａ）配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｂ）配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｃ）配列番号７に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｄ）配列番号１０に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｅ）配列番号１２に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｆ）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体と、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤とが、別個の製剤中で個体に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体と、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤とが、同一製剤中で個体に投与される。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が個体に投与される前に、ＬＩＦ結合抗体が個体に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体が個体に投与される前に、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル���達阻害剤が個体に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体が個体に投与されるのと同時に、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が個体に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体はヒト化されている。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体は、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一である、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む。特定の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と同一であり；ＶＬは、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と同一である。特定の実施形態では、がんは、進行性固形腫瘍、神経膠芽腫、胃がん、皮膚がん、前立腺がん、膵臓がん、乳がん、精巣がん、甲状腺がん、頭頸部がん、肝臓がん、腎臓がん、食道がん、卵巣がん、結腸がん、肺がん、リンパ腫、軟部組織がん、又はそれらの任意の組み合わせを含む。特定の実施形態では、がんは、非小細胞肺がんを含む。特定の実施形態では、がんは、膵管腺がんを含む。特定の実施形態では、がんは、以前にチェックポイント阻害剤で治療されている。特定の実施形態では、がんは、以前にＬＩＦ抗体で治療されている。特定の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤である。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤は、ＰＤ−１に結合する抗体又はその断片である。特定の実施形態では、抗体は、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ＡＭＰ−５１４、チスレリズマブ、スパルタリズマブ、又はそのＰＤ−１結合断片を含む。特定の実施形態では、抗体は、ＰＤＬ−１又はＰＤＬ−２と特異的に結合する。特定の実施形態では、抗体は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、又はＦＡＺ０５３、又はそのＰＤＬ−１又はＰＤＬ−２結合断片を含む。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２に結合するＦｃ融合タンパク質を含む。特定の実施形態では、Ｆｃ融合タンパク質は、ＡＭＰ−２２４又はそのＰＤ−１結合断片を含む。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２の小分子阻害剤を含む。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２を通じたシグナル伝達の小分子阻害剤は、Ｎ−｛２−［（｛２−メトキシ−６−［（２−メチル［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メトキシ］ピリジン−３−イル｝メチル）アミノ］エチル｝アセトアミド（ＢＭＳ２０２）；（２−（（３−シアノベンジル）オキシ）−４−（（３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ダイオキシン−６−イル）−２−メチルベンジル）オキシ）−５−メチルベンジル）−Ｄ−セリン塩酸塩；（２Ｒ，４Ｒ）−１−（５−クロロ−２−（（３−シアノベンジル）オキシ）−４−（（３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ダイオキシン−６−イル）−２−メチルベンジル）オキシ）ベン���ル）−４−ヒドロキシピロリジン−２−カルボン酸；３−（４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−１−フェニルインドール；３−（４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−１−フェニル−１ｈ−インドール；Ｌ−α−グルタミン、Ｎ２，Ｎ６−ビス（Ｌ−セリル−Ｌ−アスパラギニル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−セリル−Ｌ−α−グルタミル−Ｌ−セリル−Ｌ−フェニルアラニル）−Ｌ−リシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−バリル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−グルタミニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−リシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミニル−Ｌ−イソロイシル−Ｌ−リシル；（２Ｓ）−１−［［２，６−ジメトキシ−４−［（２−メチル［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メトキシ］フェニル］メチル］−２−ピペリジンカルボン酸；グリシンアミド、Ｎ−（２−メルカプトアセチル）−Ｌ−フェニルアラニル−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−ロイシル−Ｎ−メチルグリシル−Ｌ−トリプトフィル−Ｌ−セリル−Ｌ−トリプトフィル−Ｎ−メチル−Ｌ−ノルロイシル−Ｎ−メチル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−システイニル−、環式（１→１４）−チオエーテル；又はそれらの誘導体又は類似体を含む。
【００２３】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、がんを有する個体に、（ａ）（ｉ）配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；及び（ｉｉ）配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一である、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、白血病抑制因子（ＬＩＦ）と特異的に結合する抗体（ｏｆ  ａｎ）と；（ｂ）ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤との組み合わせの有効量を投与するステップを含む、がんを有する個体を治療する方法である。特定の実施形態では、ＶＨ配列は、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と同一であり；ＶＬは、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と同一である。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体と、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤とが、別個の製剤中で個体に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体と、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤とが、同一製剤中で個体に投与される。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が個体に投与される前に、ＬＩＦ結合抗体が個体に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体が個体に投与される前に、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が個体に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体が個体に投与されるのと同時に、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が個体に投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体はヒト化されている。特定の実施形態では、がんは、進行性固形腫瘍、神経膠芽腫、胃がん、皮膚がん、前立腺がん、膵臓がん、乳がん、精巣がん、甲状腺がん、頭頸部がん、肝臓がん、腎臓がん、食道がん、卵巣がん、結腸がん、肺がん、リンパ腫、軟部組織がん、又はそれらの任意の組み合わせを含む。特定の実施形態では、がんは、非小細胞肺がんを含む。特定の実施形態では、がんは、膵管腺がんを含む。特定の実施形態では、がんは、以前にチェックポイント阻害剤で治療されている。特定の実施形態では、がんは、以前にＬＩＦ抗体で治療されている。特定の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤である。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤は、ＰＤ−１に結合する抗体又はその断片である。特定の実施形態では、抗体は、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ＡＭＰ−５１４、チスレリズマブ、スパルタリズマブ、又はそのＰＤ−１結合断片を含む。特定の実施形態では、抗体は、ＰＤＬ−１又はＰＤＬ−２と特異的に結合する。特定の実施形態では、抗体は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、又はＦＡＺ０５３、又はそのＰＤＬ−１又はＰＤＬ−２結合断片を含む。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２に結合するＦｃ融合タンパク質を含む。特定の実施形態では、Ｆｃ融合タンパク質は、ＡＭＰ−２２４又はそのＰＤ−１結合断片を含む。特定の実施形態では、ＰＤ���１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２の小分子阻害剤を含む。特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２を通じたシグナル伝達の小分子阻害剤は、Ｎ−｛２−［（｛２−メトキシ−６−［（２−メチル［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メトキシ］ピリジン−３−イル｝メチル）アミノ］エチル｝アセトアミド（ＢＭＳ２０２）；（２−（（３−シアノベンジル）オキシ）−４−（（３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ダイオキシン−６−イル）−２−メチルベンジル）オキシ）−５−メチルベンジル）−Ｄ−セリン塩酸塩；（２Ｒ，４Ｒ）−１−（５−クロロ−２−（（３−シアノベンジル）オキシ）−４−（（３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ダイオキシン−６−イル）−２−メチルベンジル）オキシ）ベンジル）−４−ヒドロキシピロリジン−２−カルボン酸；３−（４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−１−フェニルインドール；３−（４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−１−フェニル−１ｈ−インドール；Ｌ−α−グルタミン、Ｎ２，Ｎ６−ビス（Ｌ−セリル−Ｌ−アスパラギニル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−セリル−Ｌ−α−グルタミル−Ｌ−セリル−Ｌ−フェニルアラニル）−Ｌ−リシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−バリル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−グルタミニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−リシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミニル−Ｌ−イソロイシル−Ｌ−リシル；（２Ｓ）−１−［［２，６−ジメトキシ−４−［（２−メチル［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メトキシ］フェニル］メチル］−２−ピペリジンカルボン酸；グリシンアミド、Ｎ−（２−メルカプトアセチル）−Ｌ−フェニルアラニル−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−ロイシル−Ｎ−メチルグリシル−Ｌ−トリプトフィル−Ｌ−セリル−Ｌ−トリプトフィル−Ｎ−メチル−Ｌ−ノルロイシル−Ｎ−メチル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−システイニル−、環式（１→１４）−チオエーテル；又はそれらの誘導体又は類似体を含む。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】異なる抗ＬＩＦヒト化抗体のＬＩＦ誘導ＳＴＡＴ３リン酸化の阻害を示す、ウエスタンブロットを示す。
【図２Ａ−２Ｂ】ヒト化及び親５Ｄ８抗体によるＬＩＦ誘導ＳＴＡＴ３リン酸化の阻害を示す、ウエスタンブロットを示す。
【図３Ａ】ｈ５Ｄ８抗体を使用した、Ｕ−２５１細胞におけるＬＩＦ阻害のＩＣ５０を示す。
【図３Ｂ】内因性ＬＩＦ刺激条件下でのｐＳＴＡＴ３のｒ５Ｄ８及びｈ５Ｄ８阻害の代表的なＩＣ５０用量反応曲線を示す。示されるのは、代表的な曲線（ｎ＝１  ｈ５Ｄ８、ｎ＝２  ｒ５Ｄ８）である。
【図４】本開示に記載される異なるモノクローナル抗体のＬＩＦ誘導ＳＴＡＴ３リン酸化の阻害を示す、ウエスタンブロットを示す。
【図５】ヒト患者からの多形性膠芽腫（ＧＢＭ）、ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺がん）、卵巣がん、結腸直腸がん、及び膵臓腫瘍における、ＬＩＦ発現の免疫組織化学検査染色及び定量化を示す。バーは、平均＋／−ＳＥＭを表す。
【図６Ａ】ヒト化５Ｄ８抗体を使用して非小細胞肺がんのマウスモデルで実施された、実験を示すグラフである。
【図６Ｂ】ｒ５Ｄ８抗体を使用して非小細胞肺がんのマウスモデルで実施された、実験を示すグラフである。
【図７Ａ】ＧＢＭの同所性マウスモデルにおけるＵ２５１細胞の阻害に対する、ｒ５Ｄ８の効果を示す。示される定量化は、２６日目である。
【図７Ｂ】ルシフェラーゼを発現するヒトＵ２５１ＧＢＭ細胞を接種され、次に１００、２００、又は３００μｇのｈ５Ｄ８又はビヒクルで週２回処置されたマウスからのデータを示す。腫瘍サイズは、７日目に生物発光（Ｘｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳ  Ｓｐｅｃｔｒｕｍ）によって判定された。グラフは個々の腫瘍の測定値を示し、水平バーは平均±ＳＥＭを表示する。統計的有意性は、対応のない非パラメトリックマン・ホイットニーＵ検定を用いて計算された。
【図８Ａ】同系マウスモデルにおける卵巣がん細胞の増殖の阻害に対する、ｒ５Ｄ８の効果を示す。
【図８Ｂ】２５日目における腫瘍の個々の測定値を示す。
【図８Ｃ】ｈ５Ｄ８を２００μｇ／マウスで週２回投与した際における、腫瘍増殖の有意な減少を示す（ｐ＜０．０５）。記号は、平均＋ＳＥＭ、ビヒクルと比較した統計的有意性（対応のない非パラメトリックマン・ホイットニーＵ検定による）である。
【図９Ａ】同系マウスモデルにおける結腸直腸がん細胞の増殖の阻害に対する、ｒ５Ｄ８の効果を示す。
【図９Ｂ】１７日目における腫瘍の個々の測定値を示す。
【図１０Ａ】ＣＣＬ２２＋細胞の代表的な画像及び定量化と共に、ＧＢＭの同所性マウスモデルにおける、腫瘍部位へのマクロファージ浸潤の減少を示す。
【図１０Ｂ】ヒト器官型組織スライス培養モデルにおけるマクロファージ浸潤の減少を示す。示されるのは、代表的な画像（左側）及び定量化（右側）である。
【図１０Ｃ】ＣＣＬ２２＋細胞の代表的な画像及び定量化と共に、卵巣がんの同系マウスモデルにおける腫瘍部位へのマクロファージ浸潤の減少を示す。
【図１０Ｄ】ＣＣＬ２２＋細胞の代表的な画像及び定量化と共に、結腸直腸がんの同系マウスモデルにおける腫瘍部位へのマクロファージ浸潤の減少を示す。
【図１０Ｅ】２５日目（エンドポイント）における、ｈ５Ｄ８（１５ｍｇ／ｋｇ、２ＱＷ）で処置された腫瘍から採取された、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）の炎症性表現型を示す。処置された腫瘍のＴＡＭは、Ｍ１炎症誘発性表現型に向けて分極した。統計的有意性は、対応のないｔ検定によって判定された。
【図１０Ｆ】ＬＩＦノックダウン細胞の馴化培地で培養された単球の遺伝子発現データを示す。
【図１１Ａ】ｒ５Ｄ８による処置後の卵巣がんの同系マウスモデルにおける、非骨髄系エフェクター細胞の増加を示す。
【図１１Ｂ】ｒ５Ｄ８による処置後の結腸直腸がんの同系マウスモデルにおける、非骨髄系エフェクター細胞の増加を示す。
【図１１Ｃ】ｒ５Ｄ８による処置後のＮＳＣＬＣがんのマウスモデルにおける、ＣＤ４＋ＴＲＥＧ細胞の百分率の減少を示す。
【図１２】抗ＣＤ４及び抗ＣＤ８枯渇抗体の存在下又は非存在下において、腹腔内投与されたＰＢＳ（対照）又はｒ５Ｄ８で週２回処置された、ＣＴ２６腫瘍を有するマウスのデータを示す。グラフは、平均腫瘍体積＋ＳＥＭとして表される１３日目の個々の腫瘍測定を示す。統計学的差異群間は、対応のない非パラメトリックマン・ホイットニーＵ検定によって判定された。Ｒ５Ｄ８は、ＣＴ２６腫瘍の増殖を阻害した（＊ｐ＜０．０５）。ｒ５Ｄ８による腫瘍増殖阻害は、抗ＣＤ４及び抗ＣＤ８枯渇抗体の存在下で有意に減少した（＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。
【図１３Ａ】ｈ５Ｄ８  ＦａｂとＬＩＦとの複合体の共結晶構造の概要を図示する。ｇｐ１３０相互作用部位は、ＬＩＦの表面にマッピングされている（暗い網掛け）。
【図１３Ｂ】ＬＩＦとｈ５Ｄ８の間の詳細な相互作用を図示し、塩橋を形成する残基と、１００Å２を超える埋没表面積を有するｈ５Ｄ８残基とを示す。
【図１４Ａ】５つのｈ５Ｄ８  Ｆａｂ結晶構造の重ね合わせを図示し、異なる化学条件で結晶化されているにもかかわらず、高度な類似性が示される。
【図１４Ｂ】不対Ｃｙｓ１００によって媒介されるファンデルワールス相互作用の広範なネットワークを示す。この残基は整列しており、ＨＣＤＲ１とＨＣＤＲ３の立体配座の形成に関与し、望ましくないジスルフィドスクランブリングには関与しない。残基間の距離は破線で示され、標識される。
【図１５Ａ】ＥＬＩＳＡによるヒトＬＩＦへのｈ５Ｄ８  Ｃ１００変異体の結合を図示する。
【図１５Ｂ】ＥＬＩＳＡによるマウスＬＩＦへのｈ５Ｄ８  Ｃ１００変異体の結合を示す。
【図１６Ａ】Ｏｃｔｅｔによって、ｈ５Ｄ８がＬＩＦとＬＩＦＲの間の結合を遮断しないことを図示する。ｈ５Ｄ８のＬＩＦへの連続的な結合に、ＬＩＦＲが続く。
【図１６Ｂ−１６Ｃ】固定化ＬＩＦＲ又はｇｐ１３０に結合する、ＬＩＦ／ｍＡｂ複合体のＥＬＩＳＡ分析を描写する。種特異的ペルオキシダーゼ共役抗ＩｇＧ抗体（（−）及びｈ５Ｄ８では抗ヒト、ｒ５Ｄ８及びＢ０９では抗ラット）のシグナルは、固定化されたＬＩＦＲ（図１６Ｂ）又はｇｐ１３０（図１６Ｃ）で被覆されたプレートに結合した、ｍＡｂ／ＬＩＦ複合体の抗体部分を検出する。
【図１７Ａ−１７Ｂ】７２個の異なるヒト組織における、ＬＩＦ（図１６Ａ）又はＬＩＦＲ（図１６Ｂ）のｍＲＮＡ発現を描写する。
【図１８Ａ−１８Ｄ】抗ＰＤ−１で処置された腫瘍と比較して有意に遅い増殖が示される、ｈ５Ｄ８及び抗ＰＤ−１で処置されたＣＴ２６腫瘍を有するマウスからのデータを示す。同様の結果が、３つの独立したＣＴ２６有効性実験で得られた。１８Ａは腫瘍増殖の時間経過を示し、１８Ｂは２４日目の個々のデータ点を示す。マン・ホイットニー検定によって判定された統計的有意性。図１８Ｃは、ＣＴ２６又はＭＣ３８腫瘍を有する、抗ＰＤ１（ＲＭＰ１−１４）及びｈ５Ｄ８／抗ＰＤ１処置マウスのカプラン・マイヤー生存プロットを示す（抗ＰＤ１は１０日目に開始された）。下部、ＣＴ２６又はＭＣ３８腫瘍を有する、対照（ＩｇＧ）及びｈ５Ｄ８単剤治療マウスのカプラン・マイヤー生存プロット。腫瘍再移植後の長期腫瘍なしＣＴ２６生存者における、１８Ｄ腫瘍体積。
【図１９Ａ−１９Ｄ】ｈ５Ｄ８／抗ＰＤ−１で処置された腫瘍における、機能的ＣＤ８Ｔ細胞の豊富さを検出するフローサイトメトリー分析を示す。１９Ａは、腫瘍関連ペプチド（ＧＰ７０）に応答してＩＦＮγを産生する能力に基づいて定義された、ＣＤ８Ｔ細胞機能を示す。１９Ｂは、代表的なＦＡＣデータプロットを示す。有意性は、対応のないｔ検定によって判定された。１９Ｃは、左側に、治療に続くＣＴ２６腫瘍における、全ＣＤ４５＋免疫浸潤のＣＤ８＋ＴＩＬの頻度を示し（ｎ＝７／群）；右側に、ＣＴ２６腫瘍によって発現されたＭｕＬＶからのＨ２−Ｌｄ拘束性ｇｐ７０（アミノ酸４２３〜４３１；ＡＨ１）エピトープに対応するペプチドによる生体外刺激に続く、ＩＦＮ−γ＋ＣＤ８＋ＴＩＬの頻度（ｎ＝７／グループ）を示す。１９Ｄは、左側に、治療に続くＭＣ３８腫瘍における、全ＣＤ４５＋免疫浸潤のＣＤ８＋ＴＩＬの頻度を示す（ｎ＝６〜７／群）。右側、ＭＣ３８腫瘍によって発現されたＭｕＬＶからのＨ２−Ｋｂ拘束性ｐ１５ｅ（アミノ酸６０４〜６１１）エピトープに対応するペプチドによる生体外刺激に続く、ＩＦＮ−γ＋ＣＤ８＋ＴＩＬの頻度（ｎ＝６〜７／グループ）。
【図２０Ａ−２０Ｐ】ＬＩＦ遮断が、高レベルのＬＩＦを発現するＧＢＭ及び卵巣がんモデルにおいて、腫瘍増殖を減少させ、免疫細胞浸潤を制御することを示す。２０Ａは、２８個の異なる固形腫瘍にわたる、ＬＩＦ  ｍＲＮＡ発現（ｌｏｇ２  ＲＳＥＭ）の分布を示す。黒線は、低発現／バックグラウンドノイズの間の推定カットオフを表す。下側パネルは、免疫細胞型の遺伝子シグネチャのｓｓＧＳＥＡに基づく、ＬＩＦ発現とＴＡＭ及びＴｒｅｇの相対的な豊富さとの相関値（ピアソンＲ２値）を示す。相関値は、相関が有意な場合にのみ示される（補正Ｐ値＜０．１）。２０Ｂは、ＧＢＭ、前立腺腺がん（ＰＲＡＤ）、甲状腺がん（ＴＨＣＡ）、及び卵巣がん（ＯＶ）コホートにおける、ＴＡＭ及びＴｒｅｇのＬＩＦ発現と相対存在量さ（ｓｓＧＳＥＡは可視化の目的で０から１に再スケールされる）の線形回帰プロットを示す。陰影は、回帰推定値の信頼区間を表す。２０Ｃ、２０Ｈ、及び２０Ｋは、それぞれ、全流束（ｐ／ｓ）又は腹部容積（ｍｍ３）として測定された、ＧＬ２６１Ｎ（２０Ｃ）、ＲＣＡＳ（２０Ｈ）、及びＩＤ８（２０Ｋ）モデルの腫瘍増殖を示す。実験手順を表すスキームが示される。抗ＬＩＦ（ｒ５Ｄ８）又はイソタイプ対照（ＩｇＧ）処置は、手術当日（ＧＬ２６１Ｎ及びＲＣＡＳ）又は接種後１４日目（ｄｐｉ）に開始された（ＩＤ８）。２０Ｄ及び２０Ｌは、ＧＬ２６１Ｎ（２０Ｄ）腫瘍及びＩＤ８（２０Ｌ）腫瘍の代表的なｐ−ＳＴＡＴ３、Ｋｉ６７、ＣＣ３、及びＣＤ８のＩＨＣ染色百分率を示す。２０Ｅ〜２０Ｆ、２０Ｉ〜２０Ｊ、及び２０Ｍ〜２０Ｎは、フローサイトメトリーによって分析された、ＧＬ２６１Ｎ（２０Ｆ）、ＲＣＡＳ（２０Ｊ）、及びＩＤ８（２０Ｎ）のＣＤ１１ｂ＋Ｆ４／８０＋ＣＤ１６３＋ＣＤ２０６＋ＭＨＣＩＩｌｏｗＴＡＭ（２０Ｅ、２０Ｍ）、又はＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６Ｇ−Ｌｙ６Ｃ−ＣＤ１６３＋ＣＤ２０６＋ＭＨＣＩＩｌｏｗ（２０Ｉ）、及びＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＤ３＋ＣＤ８＋）百分率を示す。２０Ｇ及び２０Ｐは、抗ＬＩＦ（ｒ５Ｄ８）又はＩｇＧで処置された、ＧＬ２６１Ｎ（２０Ｇ）及びＩＤ８（２０Ｐ）モデルの全生存を示す。抗ＬＩＦ（ｒ５Ｄ８）又はＩｇＧ（２０Ｏ）で処置されたＩＤ８マウスの腹部容積の経時変化。データは、平均±ＳＥＭである。マン・ホイットニーＴ検定及び対数ランク検定による統計解析。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１。
【図２１Ａ−２１Ｇ】ＬＩＦが、ＴＡＭにおいてＣＸＣＬ９、ＣＣＬ２、ＣＤ２０６、及びＣＤ１６３を制御することを示す。２１Ａは、対照と対比して、抗ＬＩＦ（ｒ５Ｄ８）処置されたＩＤ８マウスから単離されたＣＤ１１ｂ＋細胞の示差的発現解析を示す。有意に（Ｑ値＜０．１）過剰発現した遺伝子及び有意に過小発現した遺伝子を表す、火山型プロット。示された遺伝子の発現値を表すヒートマップ、各列はサンプルを表し、各行は遺伝子を表す。最後の列は、遺伝子発現のｌｏｇ２  倍数変化（ｌｏｇ２  ＦＣ）を表す。２１Ｂは、抗ＬＩＦ（ｒ５Ｄ８）で処置された、又は未処置のＩＤ８及びＧＬ２６１Ｎ腫瘍からの単離ＣＤ１１ｂ＋細胞における、示された遺伝子に対するｍＲＮＡ発現を示す。２１Ｃは、抗ＬＩＦ（ｒ５Ｄ８）処置された又は未処置のＧＬ２６１Ｎ腫瘍からのＴＡＭ（ＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６Ｇ−Ｌｙ６Ｃ−）における、ＣＣＬ２＋及びＣＸＣＬ９＋の百分率及び平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示す。２１Ｄは、ＴＡＭマーカー陽性細胞に対する、二重陽性細胞の百分率を示す。ＣＸＣＬ９の定量化は、総細胞数に対する相対である。２１Ｅは、２０個のＧＢＭ腫瘍からの示されたマーカーの定量化を示す。Ｒ二乗係数（Ｒ２）によって、ＬＩＦ染色（ｙ軸）とＣＣＬ２、ＣＤ２０６、ＣＤ１６３、及びＣＸＣＬ９染色（ｘ軸）との相関が計算された。２１Ｆは、ＣＸＣＬ９−／−及びＣＣＬ２−／−マウス、又は示された抗体で処置されたマウスにおけるＧＬ２６１Ｎの腫瘍増殖を全流束（ｐ／ｓ）として示す。２１Ｇは、示された処置における腫瘍浸潤性ＣＤ８＋Ｔ細胞の倍数増加（ＦＩ）を示す。データは、平均±ＳＥＭである。マン・ホイットニーＴ検定による統計解析。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１。
【図２２Ａ−２２Ｈ】ＬＩＦがエピジェネティックなサイレンシングを通じてＣＸＣＬ９を抑制し、ＳＴＡＴ３の活性化を通じてＣＣＬ２を誘導することを示す。２２Ａ及び２２Ｂは、ＢＭＤＭにおける示された遺伝子のｑＲＴ−ＰＣＲ解析を示す。ＢＭＤＭは、２０ｎｇ／ｍｌのＬＩＦと共に７２時間プレインキュベートされ、次に５ｎｇ／ｍｌのＩＦＮγ又は１０μｇ／ｍｌのＩＬ４で６時間（２２Ａ）、又は０．１、０．５、１、及び５ｎｇ／ｍｌのＩＦＮγで２４時間（２２Ｂ）刺激された。２２Ｃは、２０ｎｇ／ｍｌのＬＩＦと共にプレインキュベートされ、次に０．１ｎｇ／ｍｌのＩＦＮγで２４時間刺激されたＢＭＤＭからのＣＸＣＬ９  ＥＬＩＳＡを示す。２２Ｄは、２０ｎｇ／ｍｌのＬＩＦと共に７２時間培養され、次に０．１ｎｇ／ｍｌのＩＦＮγと共に２４時間培養されたヒトＧＢＭからの、ヒトＣＤ１１ｂ＋選別細胞（７７％ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ１４＋、図２９Ａを参照されたい）からのＣＸＣＬ９  ＥＬＩＳＡを示す。２２Ｅは、２０ｎｇ／ｍｌのＬＩＦで７２時間処置されたＢＭＤＭにおいて実施された、トリメチルヒストンＨ３（Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３）、ＥＺＨ２、及びアセチルヒストン４（Ｈ４ａｃ）のＣｈＩＰを示す。スキームは、解析されたＣＸＣＬ９プロモーター領域を示す。２２Ｆは、２０ｎｇ／ｍｌのＬＩＦで６時間及び２４時間処置されたＢＭＤＭにおける、ＣＣＬ２  ＥＬＩＳＡ及びＣＣＬ２  ｍＲＮＡレベルを示す。２２Ｇは、２０ｎｇ／ｍｌのＬＩＦで１５分間刺激されたＢＭＤＭにおける、ｐ−ＳＴＡＴ３  ＣｈＩＰを示す。ＣＣＬ２プロモーター上のＳＴＡＴ結合部位（ＳＢＳ）概略図が描写される。データは平均±ＳＤであり、統計解析はスチューデントのｔ検定による。図２２Ｈは、Ｉｂａ１＋細胞に対する二重陽性細胞の百分率と、細胞の総数に対する１０μｇ／ｍｌの抗ＬＩＦ（ｒ５Ｄ８）と共に３日間インキュベートされたＧＢＭ器官型スライス（患者１、２、３）におけるＣＸＣＬ９＋細胞の百分率とを示す。データは、全患者平均±ＳＥＭである。マン・ホイットニーＴ検定による統計解析。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１。
【図２３Ａ−２３Ｉ】ＬＩＦ遮断が、ヒトＧＢＭにおいてＣＤ８＋Ｔ細胞の腫瘍浸潤を誘導し、その抗ＰＤ１との組み合わせが、腫瘍の退縮を促進することを示す。２３Ａは、ＧＢＭ患者由来の異種移植片及びヒト器官型モデルで実施された、実験手順の概略図である。２３Ｂは、抗ＬＩＦ（ｒ５Ｄ８）で７２時間処置され、次にＰＢＭＣと共に２４時間培養された器官型標本における、ＣＸＣＬ９及びＣＣＬ２  ｍＲＮＡ発現レベルを示す（患者４、５、６）。２３Ｃは、抗ＬＩＦ（ｒ５Ｄ８）で７２時間処置され、次にＰＢＭＣと共に４８時間培養された器官型組織において、フローサイトメトリーによって検出されたＣＤ８＋Ｔ浸潤細胞のＦＩを示す（患者４、５、６）。２３Ｄは、抗ＬＩＦ（ｒ５Ｄ８）及び／又は抗ＣＸＣＬ９で７２時間処置され、次にＰＢＭＣと共に４８時間培養されたＧＢＭ器官型組織において、フローサイトメトリーによって検出されたＣＤ８＋Ｔ浸潤細胞のＦＩを示す。２３Ｅは、ＮＳＧマウスにおける皮下移植ＧＢＭ標本へのＣＤ８＋Ｔ浸潤細胞を示す。棒グラフは、同じ動物の組織中でフローサイトメトリーによって検出されたＣＤ８＋Ｔ細胞と、血液中で検出されたＣＤ８＋Ｔ細胞との比率を表す。対応するＰＢＭＣを有する４人の患者（７、８、９、１０）は。２３Ｆは、抗ＬＩＦ（ｒ５Ｄ８）、抗ＰＤ１、又はその組み合わせで処置されたＧＬ２６１Ｎマウスの生存率を示す。カプラン・マイヤー曲線によって判定された全生存が示される。２３Ｇは、１３〜６ｄｐｉの間の腫瘍サイズの倍数変化として表される、処置されたＧＬ２６１Ｎモデルの腫瘍増殖を示す。２３Ｈは、抗ＬＩＦ（ｒ５Ｄ８）、抗ＰＤ１併用療法による完全な退縮を有する６匹のマウスに接種された、３×１０５個のＧＬ２６１Ｎ細胞の実験手順を表すスキームを示す。並行して１０匹の未感作マウスに、３×１０５個のＧＬ２６１Ｎ細胞が接種された。２３Ｉは、ＬＩＦ  ＣＤ８＋Ｔ細胞腫瘍浸潤の効果の概略図を示す。マン・ホイットニーＴ検定又は対数ランク検定による統計解析。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【図２４Ａ−２４Ｄ】腫瘍におけるＬＩＦ発現を示す。２４Ａでは、ＬＩＦ  ＩＨＣがヒトＧＢＭからの組織マイクロアレイで実施され、染色の程度がＨスコア法を用いて定量化された。２４Ｂは、１５人の患者の神経球培養物からの上清のＬＩＦ  ＥＬＩＳＡを示す。２４Ｃ及び２４Ｄは、ヒトＧＢＭ腫瘍（２４Ｃ）及びＧＬ２６１Ｎ腫瘍（２４Ｄ）から単離されたＣＤ４５＋及びＣＤ４５−細胞における、示された遺伝子のｑＲＴ−ＰＣＲ解析を示す。
【図２５Ａ−２５Ｊ】マウスモデルにおけるＬＩＦ遮断が、腫瘍増殖を阻害することを示す。２５Ａは、ＧＬ２６１、ＧＬ２６１Ｎ、及びＧＬ２６１Ｎ  ＣＲＩＳＰＲ／ＬＩＦ細胞で実施された、ＬＩＦのｑＲＴ−ＰＣＲ及びＥＬＩＳＡの結果を示す。２５Ｂは、ＧＬ２６１Ｎ及びＧＬ２６１Ｎ  ＣＲＩＳＰＲ／ＬＩＦを接種されたマウスにおける腫瘍増殖を１２ｄｐｉでの全流束（ｐ／ｓ）として示す。２５Ｃ及び２５Ｄは、ＩＤ８細胞が、ｐＬＫＯ．１又は２つの独立したｐＬＫＯ．１−ｓｈＬＩＦレンチウイルスに感染したことを示す。ＬＩＦ発現は、ｑＲＴ−ＰＣＲ及びＥＬＩＳＡによって判定された（２５Ｃ）。２５Ｄは、マウスの腹膜に接種されたＩＤ８細胞の結果を示す。処置スキームが示される。腹部容積（ｍｍ３）は、４０ｄｐｉで測定された。２５Ｅは、抗ＬＩＦ（ｒ５Ｄ８）又は対照ＩｇＧで処置されたマウスにおける、１２ｄｐｉのＧＬ２６１腫瘍増殖を示す。２５Ｆは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスと、２つの免疫不全モデルであるＮＯＤ  ＳＣＩＤ及びＲＡＧ１−／−に接種された、ＧＬ２６１Ｎ細胞の結果を示す。処置スキームが示される。腫瘍増殖は、１２ｄｐｉで測定された。２５Ｇ〜２５Ｊは、フローサイトメトリーによって判定され、ＧＬ２６１Ｎ（２５Ｇ−２５Ｈ）及びＩＤ８（２５Ｉ−２５Ｊ）腫瘍中のＣＤ４＋Ｔ細胞集団上でゲートされた、ＮＫ細胞（ＣＤ３３５＋）、及びＴｒｅｇ（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＦｏｘＰ３＋）の百分率を示す。データは、平均±ＳＥＭとして提示される。マン・ホイットニーＴ検定による統計解析。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１。
【図２６Ａ−２６Ｈ】抗ＬＩＦ（ｒ５Ｄ８）による処置時における、免疫細胞浸潤物の特性評価を示す。２６Ａは、ＧＬ２６１Ｎ腫瘍のＣＤ８＋Ｔ細胞集団におけるＧＺＭＡの百分率及びＭＦＩを示す。２６Ｂ及び２６Ｃは、ＧＬ２６１Ｎ（２６Ｂ）及びＩＤ８（２６Ｃ）モデルの腫瘍中のＰＤ１＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率を示す。２６Ｄは、抗ＬＩＦ（ｒ５Ｄ８）による処置に応答するＧＬ２６１Ｎ及びＲＣＡＳ腫瘍中の浸潤性ＴＡＭ（ＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６Ｇ−Ｌｙ６Ｃ−ＣＤ４９ｄ＋）の百分率を示す。フローサイトメトリーゲーティングストラテジーが示される。２６Ｅは、ＧＬ２６１Ｎ腫瘍において、ＭＨＣＩＩ発現によって判定された、樹状細胞集団（ＤＣ）（ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ１１ｃ＋ＭＨＣＩＩ＋）及び抗原提示を示す。２６Ｆは、ＧＬ２６１Ｎ腫瘍におけるＩＬ−１２及びＩＬ−１０のＥＬＩＳＡを示す。２６Ｇは、抗ＬＩＦ（ｒ５Ｄ８）で処置されたＧＬ２６１Ｎ腫瘍を有するマウスの８ｄｐｉの結果を示す。腫瘍体積は、全流束（ｐ／ｓ）として１３ｄｐｉで測定された。２６Ｈは、フローサイトメトリーによって判定された、腫瘍中のＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＤ３＋ＣＤ８＋）の百分率を示す。データは、平均±ＳＥＭとして提示される。マン・ホイットニーＴ検定による統計解析。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１。
【図２７Ａ】フローサイトメトリーによって判定された、ＴＡＭ（ＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６Ｇ−Ｌｙ６Ｃ−）及びＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＤ３＋ＣＤ８＋）集団における、ＣＣＲ２、ＣＸＣＲ３の百分率、及びＬＩＦＲ発現を示す。データは、平均±ＳＥＭとして提示される。マン・ホイットニーＴ検定による統計解析。＊Ｐ＜０．０５。
【図２７Ｂ】ＧＬ２６１Ｎ腫瘍から選別された、ＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６Ｇ−Ｌｙ６Ｃ−及びＣＤ１１ｂ−Ｌｙ６Ｇ−Ｌｙ６Ｃ−細胞における、示された遺伝子のｑＲＴ−ＰＣＲ解析を示す。
【図２８】ＧＢＭ及び卵巣がんにおける、ＬＩＦと、ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、及びＣＣＬ２発現との間の相関関係を示す。ＧＢＭ及び卵巣がん（ＯＶ）ＴＣＧＡ腫瘍コホートにおける、ＬＩＦと、ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、ＣＣＬ２発現（ｌｏｇ２  ＲＳＥＭ）との間の回帰プロット。
【図２９Ａ−２９Ｂ】は、マウス及びヒトマクロファージにおける、ＬＩＦによるＣＸＣＬ９の制御を示す。図２９Ａは、フローサイトメトリーによって判定された、培養中のＣＤ１１ｂ＋ＣＤ１４＋細胞を示す。データは、平均±ＳＤとして提示される。スチューデントのｔ検定による統計解析。＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１。図２９Ｂは、ＬＩＦ（２０ｎｇ／ｍｌ）と共に１８時間プレインキュベートされ、次に１μｇ／ｍｌのＬＰＳで６時間刺激されたＢＭＤＭを示す。
【図３０】図３０は、ＧＬ２６１Ｎ、ＲＣＡＳ、及びＩＤ８モデルにおける、抗ＬＩＦ（ｒ５Ｄ８）と抗ＰＤ１の併用療法に対する抗腫瘍応答を示す。図３０は、抗ＬＩＦ（ｒ５Ｄ８）及び／又は抗ＰＤ１で処置された、ＧＬ２６１Ｎ、ＲＣＡＳ、及びＩＤ８腫瘍を有するマウスを示す（処置スキームが示される）。腫瘍増殖は、全流束（ｐ／ｓ）（ＧＬ２６１Ｎ及びＲＣＡＳ）として、又は腹部容積（ｍｍ３）（ＩＤ８）として測定された。マン・ホイットニーＴ検定による統計解析。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
特に断りのない限り、本明細書で使用される全ての技術的用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書及び添付の特許請求範囲の用法では、内容上例外が明記されていない限り、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、指示対象の複数形を含む。本明細書における「又は」への言及は、別段の記載がない限り、「及び／又は」を包含することが意図される。
【００２６】
一態様では、本明細書に記載されるのは、個体のがんを治療するための、ＰＤ−１（ＣＤ２７９）、ＰＤＬ−１（ＣＤ２７４）、又はＰＤＬ−２（ＣＤ−２７３）シグナル伝達阻害剤と組み合わせた、白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチドの使用である。
【００２７】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、個体のがんを治療するためのＰＤ−１結合抗体と組み合わせた、白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合抗体の使用であり、ＬＩＦ結合抗体は、（ａ）配列番号１〜３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｂ）配列番号４又は５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｃ）配列番号６〜８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｄ）配列番号９又は１０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｅ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｆ）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む。
【００２８】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、がんを有する個体に、（ａ）白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチド；及び（ｂ）ＰＤ−１（ＣＤ２７９）、ＰＤＬ−１（ＣＤ２７４）、又はＰＤＬ−２（ＣＤ２７３）シグナル伝達の阻害剤の有効量を投与するステップを含む、がんを有する個体を治療する方法である。
【００２９】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、がんを有する個体に、白血病抑制因子（ＬＩＦ）−結合ポリペプチドの有効量を投与するステップを含む、がんを有する個体を治療する方法であり、個体には、治療量のＰＤ−１（ＣＤ２７９）、ＰＤＬ−１（ＣＤ２７４）、又はＰＤＬ−２（ＣＤ−２７３）シグナル伝達阻害剤が投与されている。
【００３０】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、がんを有する個体に、ＰＤ−１（ＣＤ２７９）、ＰＤＬ−１（ＣＤ２７４）、又はＰＤＬ−２（ＣＤ２７３）シグナル伝達阻害剤の有効量を投与するステップを含む、がんを有する個体を治療する方法であり、個体には、治療量の白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチドが投与されている。
【００３１】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、がんを有する個体に、（ａ）白血病抑制因子（ＬＩＦ）と特異的に結合する抗体（ｏｆ  ａｎ）と、（ｂ）ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤との組み合わせの有効量を投与するステップを含む、がんを有する個体の腫瘍中の腫瘍促進性腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）を減少させる方法である。
【００３２】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、がんを有する個体に、（ａ）白血病抑制因子（ＬＩＦ）と特異的に結合する抗体（ｏｆ  ａｎ）と、（ｂ）ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤との組み合わせの有効量を投与するステップを含む、がんを有する個体に免疫記憶を生成する方法である。
【００３３】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、腫瘍に罹患した個体に、（ａ）白血病抑制因子（ＬＩＦ）と特異的に結合する抗体（ｏｆ  ａｎ）と、（ｂ）ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤との組み合わせの有効量を投与するステップを含む、個体の腫瘍中のＴリンパ球の量を増加させる方法である。
【００３４】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、がんを有する個体に、（ａ）（ｉ）配列番号１〜３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｉｉ）配列番号４又は５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｉｉｉ）配列番号６〜８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｉｖ）配列番号９又は１０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｖ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｖｉ）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合抗体；及び（ｂ）ＰＤ−１結合抗体の有効量を投与するステップを含む、がんを有する個体を治療する方法である。
【００３５】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、（ａ）白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチド；及び（ｂ）ＰＤ−１（ＣＤ２７９）、ＰＤＬ−１（ＣＤ２７４）、又はＰＤＬ−２（ＣＤ２７３）シグナル伝達阻害剤を含むキットである。
【００３６】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、（ａ）白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチド；及び（ｂ）ＰＤ−１（ＣＤ２７９）、ＰＤＬ−１（ＣＤ２７４）、又はＰＤＬ−２（ＣＤ２７３）シグナル伝達阻害剤を含む組成物である。
【００３７】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、がんを有する個体に、（ａ）（ｉ）配列番号１〜３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｉｉ）配列番号４又は５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｉｉｉ）配列番号６〜８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｉｖ）配列番号９又は１０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｖ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｖｉ）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む、白血病抑制因子（ＬＩＦ）と特異的に結合する抗体（ｏｆ  ａｎ）と；ＰＤ−１軸阻害剤との組み合わせの有効量を投与するステップを含む、がんを有する個体において腫瘍促進性腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）を減少させる方法である。
【００３８】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、がんを有する個体に、（ａ）（ｉ）配列番号１〜３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｉｉ）配列番号４又は５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｉｉｉ）配列番号６〜８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｉｖ）配列番号９又は１０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｖ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｖｉ）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む、白血病抑制因子（ＬＩＦ）と特異的に結合する抗体（ｏｆ  ａｎ）と；ＰＤ−１軸阻害剤との組み合わせの有効量を投与するステップを含む、がんを有する個体に免疫記憶を生成する方法である。
【００３９】
別の態様では、本明細書に記載されるのは、腫瘍に罹患した個体に、（ａ）（ｉ）配列番号１〜３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；（ｉｉ）配列番号４又は５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；（ｉｉｉ）配列番号６〜８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；（ｉｖ）配列番号９又は１０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；（ｖ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び（ｖｉ）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む、白血病抑制因子（ＬＩＦ）と特異的に結合する抗体（ｏｆ  ａｎ）と；ＰＤ−１軸阻害剤との組み合わせの有効量を投与するステップを含む、腫瘍中のＴリンパ球の量を増加させる方法である。
【００４０】
本明細書の用法では、「個体」、「対象」、及び「患者」という用語は同義的に使用され、腫瘍、がん、又はその他の新生物に罹患していると診断され又は疑われるヒトが含まれる。個体はまた、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ブタ、ヒツジ、ウシ、ウマ、ヤギ、ラマ、アルパカ、又はヤクなどの哺乳動物も包含し得る。
【００４１】
本明細書の用法では、「約」という用語は、記載された量の１０％近辺の量を指す。
【００４２】
本明細書の用法では、「治療する（ｔｒｅａｔ）」又は「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、生理学的状態又は疾病状態に関連する、少なくとも１つの徴候又は症状を改善するように設計され、又は改善することを意図した個体の生理学的状態又は疾病状態に対する介入を指す。本明細書に記載されるがんの治療（ｔｒｅａｔ）又は治療（ｔｒｅａｔｉｎｇ）は、完全奏効、部分奏効、治療されているがん又は腫瘍の進行の遅延、腫瘍サイズ又は腫瘍量の減少、又は腫瘍又は腫瘍量の増殖遅延を誘発することを意図した介入を指す。治療はまた、がん又は腫瘍の転移又は悪性度を低下させることを意図した介入も指す。当業者は、疾患に罹患した個体の不均一な集団を考えると、全ての個体が所与の治療に対して等しく応答するとは限らず、又は全く応答しないとは限らないことを認識するであろう。それにもかかわらず、これらの個体は治療されたと見なされる。不成功裏の治療は、一般に疾患進行と、別の治療法による追加治療の必要性をもたらす。特定の態様では、本明細書に記載の抗体及び方法を用いてがんの寛解が維持され、又は治療されたがんと同一の、又はそれに関連する異なるがんの再発が予防され得る。
【００４３】
本明細書で使用されるように、用語「組合せ」又は「併用療法」は、組合せられる物質の並行投与又は組合せられる物質の順次投与のどちらかを指し得る。本明細書に記載されるように、組み合わせが物質の順次投与を指す場合、物質は任意の時間的順序で投与され得る。
【００４４】
「がん」及び「腫瘍」という用語は、細胞増殖の調節不全を特徴とする、哺乳類の生理学的状態に関連する。がんは、細胞群が、無制御な増殖又は望ましくない増殖を示す疾患の一種である。がん細胞は、その他の位置にも広がり得て、転移の形成につながり得る。体内のがん細胞の広がりは、例えば、リンパ液又は血液を介して起こり得る。無制御な増殖成、侵入、及び転移形成はまた、がんの悪性特性とも称される。これらの悪性特性は、典型的に侵襲又は転移しない良性腫瘍から、がんを区別する。
【００４５】
本明細書の用法では、「有効量」という用語は、哺乳類に投与された際に、生物学的効果をもたらす治療薬の量を指す。生物学的効果としては、受容体リガンド相互作用（例えば、ＬＩＦ−ＬＩＦＲ、ＰＤ−１−ＰＤＬ１／ＰＤＬ−２）の阻害又は遮断、シグナル伝達経路（例えば、ＳＴＡＴ３リン酸化）の阻害、腫瘍増殖の減少、腫瘍転移の減少、又は腫瘍を有する動物の生存期間の延長が挙げられるが、これらに限定されない。「治療量」は、治療効果を発揮するように計算された薬物の協調である。治療量は、個体の集団において治療応答を誘発できる、一連の用量を包含する。哺乳類は、ヒト個体であり得る。ヒト個体は、腫瘍に罹患しているか、又は腫瘍への罹患が疑われている。
【００４６】
本明細書の用法では、「チェックポイント阻害剤」は、生物においてＴ細胞の抗腫瘍／がん活性を負に制御する、生物によって産生される生体分子（「チェックポイント分子」）を阻害する薬物を指す。チェックポイント分子としては、限定することなく、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＰＤＬ−２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＶＩＳＴＡ、ＳＩＧＬＥＣ７、ＰＶＲ、ＴＩＧＩＴ、ＩＤＯ、ＫＩＲ、Ａ２ＡＲ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、及びＮＯＸ２が挙げられる。
【００４７】
本明細書の用法では、別段の指示がない限り、「抗体」という用語には、例えば、１つ又は複数のＣＤＲ領域を維持する断片などの、抗体の抗原結合断片、すなわち、完全長の抗体が結合する抗原と特異的に結合する能力を維持する抗体断片が含まれる。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片；二特異性抗体；直鎖抗体；重鎖抗体、例えば一本鎖可変領域断片（ｓｃＦｖ）などの一本鎖抗体分子、ナノボディ、及び二重特異性抗体などの、別個の特異性を有する抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられるが、これに限定されるものではない。特定の実施形態では、抗体は、抗体に対する個体の免疫応答を減少させるような様式でヒト化される。例えば、抗体は、例えば、ヒト定常領域を有する非ヒト可変領域などのキメラ、又は例えば、ヒト定常領域と可変領域フレームワーク配列とを有する非ヒトＣＤＲ領域などのグラフト化されたＣＤＲであってもよい。特定の実施形態では、抗体は、ヒト化後に脱免疫化される。脱免疫化は、抗体の定常領域にある１つ又は複数のＴ細胞エピトープを除去し又は変異させることを伴う。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、モノクローナルである。本明細書の用法では、「組換え抗体」は、２つの異なる生物種、又は２つの異なる起源に由来するアミノ酸配列を含む抗体であり、例えば、非ヒトＣＤＲとヒトフレームワーク又は定常領域とからなる、抗体などの合成分子を含む。特定の実施形態では、本発明の組換え抗体は、組換えＤＮＡ分子から生成され、又は合成される。
【００４８】
参照ポリペプチド又は抗体配列に対するパーセント（％）配列同一性は、配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入して、いかなる保存的置換も配列同一性の一部と見なすことなく、最大配列同一性百分率を達成した後に、参照ポリペプチド又は抗体配列中のアミノ酸残基と同一である、候補配列中のアミノ酸残基の百分率である。パーセントアミノ酸配列同一性を判定する目的でのアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して、既知の様々な方法で達成され得る。比較される配列の全長にわたる最大の整列を達成するのに必要なアルゴリズムをはじめとする、配列を整列させるための適切なパラメータは、判定され得る。しかし、本明細書の目的のためには、％アミノ酸配列同一性値が、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって作成され、ソースコードは、ワシントンＤ．Ｃ．，２０５５９の米国著作権局にユーザー文書と共に提出されており、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７の下に登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆ．から公的に入手可能であり、又はソースコードからコンパイルされてもよい。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、デジタルＵＮＩＸＶ  ４．０ＤをはじめとするＵＮＩＸオペレーティングシステムでの使用のために、コンパイルされなくてはならない。全ての配列比較パラメータはＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定され、変動しない。
【００４９】
ＡＬＩＧＮ−２がアミノ酸配列の比較に使用される状況では、所与のアミノ酸配列Ｂに対する、所与のアミノ酸配列Ｂとの、又は所与のアミノ酸配列Ｂと比較した、所与のアミノ酸配列Ａの％アミノ酸配列同一性（代案としては、それは、所与のアミノ酸配列Ｂに対する、所与のアミノ酸配列Ｂとの、又は所与のアミノ酸配列Ｂと比較した、特定の％アミノ酸配列同一性を有し又はそれを含む、所与のアミノ酸配列Ａとして表現され得る）は、分数Ｘ／Ｙの１００倍として計算され、式中、Ｘは、配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ−２によって、そのプログラムのＡとＢのアラインメントで完全一致としてスコア付けされたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂ中のアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、Ｂに対するＡの％アミノ酸配列同一性は、Ａに対するＢの％アミノ酸配列同一性と等しくないことが理解されるであろう。特に明記しない限り、本明細書で使用される全ての％アミノ酸配列同一性値は、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用して、先行段落に記載されるようにして得られる。
【００５０】
「エピトープ」という用語は、抗体などの抗原結合タンパク質によって結合され得る、任意の決定基を含む。エピトープは、その抗原を標的化する抗原結合タンパク質によって結合される抗原の領域であり、抗原がタンパク質である場合、抗原結合タンパク質に直接接触する特定のアミノ酸を含む。ほとんどの場合、エピトープはタンパク質上に存在するが、場合によっては、糖類又は脂質などのその他の種類の分子上に存在し得る。エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル又はスルホニル基などの分子の化学的に活性な表面グループを含み得て、特定の三次元構造特性及び／又は特定の電荷特性を有し得る。一般に、特定の標的抗原に特異的な抗体は、タンパク質及び／又は巨大分子の複雑な混合物中の標的抗原上のエピトープを優先的に認識するであろう。
【００５１】
本明細書の用法では、「ＴＡＭ」又は「腫瘍関連マクロファージ」という用語は、固形腫瘍の微小環境内に多数存在する、マクロファージ又は単球由来の免疫細胞を含む。ＴＡＭとしてはＣＤ１１ｂ＋、Ｌｙ６Ｇ−、Ｌｙ６Ｃ−、ＣＤ２０６＋、ＣＤ１６３＋、ＭＨＣＩＩｌｏｗ、ＣＤ４９ｄ＋を発現する細胞又はそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５２】
本明細書に記載される抗体の構造的属性
相補性決定領域（「ＣＤＲ」）は、抗体の抗原結合特異性に主に関与する免疫グロブリン（抗体）可変領域の一部である。ＣＤＲ領域は、抗体が同一標的又はエピトープに特異的に結合する場合でさえも、抗体ごとに大きく異なる。重鎖可変領域は、ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２、及びＶＨ−ＣＤＲ３と略記される３つのＣＤＲ領域を含み；軽鎖可変領域は、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２、及びＶＬ−ＣＤＲ３と略記される３つのＣＤＲ領域を含む。これらのＣＤＲ領域は、可変領域で連続して順序付けられ、ＣＤＲ１が最もＮ末端であり、ＣＤＲ３が最もＣ末端である。ＣＤＲの間には、構造に寄与し、ＣＤＲ領域よりもはるかに少ない変動性を示す、フレームワーク領域が散在する。重鎖可変領域は、ＶＨ−ＦＲ１、ＶＨ−ＦＲ２、ＶＨ−ＦＲ３、及びＶＨ−ＦＲ４と略記される４つのフレームワーク領域を含み；軽鎖可変領域は、ＶＬ−ＦＲ１、ＶＬ−ＦＲ２、ＶＬ−ＦＲ３、及びＶＬ−ＦＲ４と略記される４つのフレームワーク領域を含む。２つの重鎖と軽鎖を含む完全サイズの二価抗体は、３つの固有の重鎖ＣＤＲ及び３つの固有の軽鎖ＣＤＲがある１２のＣＤＲ；４つの固有の重鎖ＦＲ領域及び４つの固有の軽鎖ＦＲ領域がある１６のＦＲ領域を含む。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、最小限、３つの重鎖ＣＤＲを含む。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、最小限、３つの軽重鎖ＣＤＲを含む。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、最小限、３つの重鎖ＣＤＲ及び３つの軽鎖ＣＤＲを含む。所与のＣＤＲ又はＦＲの正確なアミノ酸配列境界は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１），“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（「Ｋａｂａｔ」番号付けスキーム）；Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）ＪＭＢ  ２７３，９２７−９４８（「Ｃｈｏｔｈｉａ」番号付けスキーム）；ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２−７４５（１９９６），“Ａｎｔｉｂｏｄｙ−ａｎｔｉｇｅｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ：Ｃｏｎｔａｃｔ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ａｎｄ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ  ｔｏｐｏｇｒａｐｈｙ，”（「Ｃｏｎｔａｃｔ」番号付けスキーム）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ  ｅｔ  ａｌ．，“ＩＭＧＴ  ｕｎｉｑｕｅ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ａｎｄ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｄｏｍａｉｎｓ  ａｎｄ  Ｉｇ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  Ｖ−ｌｉｋｅ  ｄｏｍａｉｎｓ，”Ｄｅｖ  Ｃｏｍｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００３  Ｊａｎ；２７（１）：５５−７７（「ＩＭＧＴ」番号付けスキーム）；及びＨｏｎｅｇｇｅｒ  Ａ  ａｎｄ  Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ  Ａ，“Ｙｅｔ  ａｎｏｔｈｅｒ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ  ｓｃｈｅｍｅ  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｄｏｍａｉｎｓ：ａｎ  ａｕｔｏｍａｔｉｃ  ｍｏｄｅｌｉｎｇ  ａｎｄ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｔｏｏｌ，”Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ，２００１  Ｊｕｎ  ��；３０９（３）：６５７−７０（「Ａｈｏ」番号付けスキーム）によって記載されるものをはじめとするいくつかの周知のスキームのいずれかを使用して容易に判定され得る。ＣＤＲは、本明細書ではＫａｂａｔ、ＩＭＧＴ、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けシステムである異なる番号付けシステム、又は３つの任意の組み合わせを使用して、提供される可変配列から識別される。所与のＣＤＲ又はＦＲの境界は、識別に用いられるスキーム次第で変動してもよい。例えば、Ｋａｂａｔスキームは構造アラインメントに基づくが、Ｃｈｏｔｈｉａスキームは構造情報に基づく。Ｋａｂａｔスキーム及びＣｈｏｔｈｉａスキームの双方の番号付けは、最も一般的な抗体領域の配列長に基づき、挿入は、例えば「３０ａ」などの挿入文字によって対応され、欠失は、いくつかの抗体に出現する。２つのスキームは、特定の挿入と欠失（「インデル」）を異なる位置に配置させることで、差示的番号付けをもたらす。接触スキームは複雑な結晶構造の解析に基づいており、多くの点でＣｈｏｔｈｉａ番号付けスキームに類似する。特定の（ｃｅｒｔａｎ）実施形態では、本開示のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ（ＫＡｂａｔ）法、ＩＭＧＴ法、Ｃｈｏｔｈｉａ法、又はそれらの任意の組み合わせによって判定される。
【００５３】
「可変領域」又は「可変ドメイン」という用語は、抗体の抗原への結合に関与する抗体の重鎖又は軽鎖のドメインを指す。ナイーブ抗体の重鎖及び軽鎖（それぞれ、ＶＨ及びＶＬ）の可変ドメインは、一般に類似した構造を有し、各ドメインは４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）及び３つのＣＤＲを含む。（例えば、Ｋｉｎｄｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｋｕｂｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ  ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，ｐａｇｅ  ９１（２００７）を参照されたい）。単一のＶＨ又はＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するのに十分であってもよい。さらに、抗原に結合する抗体からのＶＨ又はＶＬドメインを使用して、それぞれ、相補性ＶＬ又はＶＨドメインライブラリをスクリーニングし、特定の抗原に結合する抗体が単離されてもよい（例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０−８８７（１９９３）；Ｃｌａｒｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）を参照されたい）。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒト化されている。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、キメラである。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ラット起源の可変領域を含む。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ラット起源のＣＤＲを含む。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、マウス起源の可変領域を含む。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、マウス起源のＣＤＲを含む。
【００５４】
例えば、抗体親和性を改善するために、ＣＤＲを改変（例えば、置換）させてもよい。このような改変は、体細胞成熟中に高い変異率を有するＣＤＲをコード化するコドンで生じてもよく（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９−１９６（２００８）を参照されたい）、得られた変異型は、結合親和性について試験され得る。親和性成熟を用いて（例えば、誤りがちなＰＣＲ、鎖シャッフリング、ＣＤＲのランダム化、又はオリゴヌクレオチド指向性変異誘発を用いて）、抗体親和性が改善され得る（例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７（２００１）を参照されたい）。ＣＤＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング変異誘発又はモデル化を用いて、特異的に同定されてもよい（例えば、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５（１９８９）を参照されたい）。特にＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３が、しばしば標的化される。代案としては、又はそれに加えて、抗原−抗体複合体の結晶構造を解析して、抗体と抗原の間の接触点が同定される。このような接触残基及び隣接残基は、置換の候補として標的化又は排除されてもよい。変異型をスクリーニングして、所望の特性が含まれているかどうかが判定されてもよい。
【００５５】
特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、可変領域に加えて定常領域を含む。重鎖定常領域（ＣＨ）は、可変領域にとってＣ末端である、完全長重鎖ポリペプチドのＣ末端に位置する、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＨ４と略記される４つのドメインを含む。軽鎖定常領域（ＣＬ）は、ＣＨよりもはるかに小さく、可変領域にとってＣ末端である、完全長軽鎖ポリペプチドのＣ末端に位置する。定常領域は高度に保存されており、わずかに異なる機能と特性に関連する異なるイソタイプを含む。特定の実施形態では、定常領域は、標的抗原への抗体結合のために不必要である。特定の実施形態では、抗体の重鎖及び軽鎖双方の定常領域は、いずれも抗体結合のために不必要である。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、軽鎖定常領域、重鎖定常領域、又はその双方の１つ又は複数を欠く。ほとんどのモノクローナル抗体はＩｇＧイソタイプであり；それは、４つのサブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４にさらに分類される。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、任意のＩｇＧサブクラスを含む。特定の実施形態では、ＩｇＧサブクラスは、ＩｇＧ１を含む。特定の実施形態では、ＩｇＧサブクラスは、ＩｇＧ２を含む。特定の実施形態では、ＩｇＧサブクラスは、ＩｇＧ３を含む。特定の実施形態では、ＩｇＧサブクラスは、ＩｇＧ４を含む。
【００５６】
抗体は、補体及びＦｃ受容体への結合に関与する、断片結晶化可能領域（Ｆｃ領域）を含む。Ｆｃ領域は、抗体分子のＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＨ４領域を含む。抗体のＦｃ領域は、補体及び抗体依存性細胞細胞傷害性（ＡＤＣＣ）の活性化に関与する。Ｆｃ領域はまた、抗体の血清半減期にも寄与する。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体のＦｃ領域は、補体媒介性細胞溶解を促進する１つ又は複数の（ｏｎｅ  ｏｒｅ  ｍｏｒｅ）アミノ酸置換を含む。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体のＦｃ領域は、ＡＤＣＣを促進する１つ又は複数のアミノ酸置換を含む。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体のＦｃ領域は、補体媒介性細胞溶解を減少させる１つ又は複数のアミノ酸置換を含む。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体Ｆｃ領域は、Ｆｃ受容体への抗体の結合を増加させる１つ又は複数のアミノ酸置換を含む。特定の実施形態では、Ｆｃ受容体は、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、ＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）、又はそれらの任意の組み合わせを含む。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体のＦｃ領域は、抗体の血清半減期を延長する１つ又は複数のアミノ酸置換を含む。特定の実施形態では、抗体の血清半減期を延長する１つ又は複数のアミノ酸置換は、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する抗体の親和性を増加させる。
【００５７】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、全てではないがいくつかのエフェクター機能を有する変異型であり、これによって、生体内における抗体半減期が重要であるが、特定のエフェクター機能（補体及びＡＤＣＣなど）は不必要又は有害である用途のための、望ましい候補になる。生体外及び／又は生体内細胞傷害性アッセイ実施して、ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣ活性の減少／枯渇が確認され得る。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実施して、抗体がＦｃγＲ結合を欠いている（それ故にＡＤＣＣ活性を欠いている可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることが確実にされ得る。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するための生体外アッセイの非限定的例は、米国特許第５，５００，３６２号明細書及び米国特許第５，８２１，３３７号明細書に記載される。代案としては、非放射性アッセイ法が用いられてもよい（例えば、ＡＣＴＩ（商標）及びＣｙｔｏＴｏｘ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ）。このようなアッセイで有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）単球、マクロファージ、及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。
【００５８】
抗体は、延長された半減期と、新生児のＦｃ受容体（ＦｃＲｎ）への改善された結合とを有し得る（例えば、米国特許出願公開第２００５／００１４９３４号明細書を参照されたい）。このような抗体は、Ｆｃ領域のＦｃＲｎへの結合を改善する１つ又は複数の置換がその中にある、Ｆｃ領域を含み得て、ＥＵ番号付けシステムに準拠する、Ｆｃ領域残基２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、又は４３４に１つ又は複数の置換があるものが含まれる（例えば、米国特許第７，３７１，８２６号明細書を参照されたい）。Ｆｃ領域変異型のその他の例もまた想定される（例えば、Ｄｕｎｃａｎ  ＆  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：７３８−４０（１９８８）；米国特許第５，６４８，２６０号明細書及び米国特許第５，６２４，８２１号明細書；及び国際公開第９４／２９３５１号パンフレットを参照されたい）。
【００５９】
診療所で有用な抗体は、ヒト個体における免疫原性を低下させるために「ヒト化」されていることが多い。ヒト化抗体は、モノクローナル抗体療法の安全性と有効性を改善する。ヒト化の１つの一般的な方法は、任意の適切な動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター）においてモノクローナル抗体を生成し、定常領域をヒト定常領域で置き換えることであり、このようにして操作された抗体は、「キメラ」と称される。別の一般的な方法は、ヒトＶ−ＦＲで非ヒトＶ−ＦＲを置換する「ＣＤＲグラフト化」である。ＣＤＲグラフト化法では、ＣＤＲ領域を除く全ての残基は、ヒト起源である。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒト化されている。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、キメラである。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＣＤＲグラフト化されている。
【００６０】
ヒト化は一般に、抗体の全体的な親和性を低下させるか、又はほとんど影響を与えない。本明細書に記載されるのは、ヒト化後に、標的に対して予想外により大きな親和性を有する抗体である。特定の実施形態では、ヒト化は、抗体の親和性を１０％増加させる。特定の実施形態では、ヒト化は、抗体の親和性を２５％増加させる。特定の実施形態では、ヒト化は、抗体の親和性を３５％増加させる。特定の実施形態では、ヒト化は、抗体の親和性を５０％増加させる。特定の実施形態では、ヒト化は、抗体の親和性を６０％増加させる。特定の実施形態では、ヒト化は、抗体の親和性を７５％増加させる。特定の実施形態では、ヒト化は、抗体の親和性を１００％増加させる。親和性は、適切には表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いて測定される。特定の実施形態では、親和性は、グリコシル化ヒトＬＩＦを使用して測定される。特定の実施形態では、グリコシル化ヒトＬＩＦは、ＳＰＲチップの表面に固定化される。特定の実施形態では、抗体は、約３００ナノモル濃度未満、２００ナノモル濃度、１５０ナノモル濃度、１２５ナノモル濃度１００ナノモル濃度、９０ナノモル濃度、８０ナノモル濃度、７０ナノモル濃度、６０ナノモル濃度、５０ナノモル濃度、４０ナノモル濃度、又はそれ以下のＫＤで結合する。
【００６１】
本明細書に記載される組成物及び方法は、ＬＩＦ結合ポリペプチドとＰＤ−１軸阻害剤との組み合わせを含む。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、免疫グロブリン可変領域又は免疫グロブリン重鎖定常領域の断片を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、ＬＩＦと特異的に結合する抗体である。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体は、ヒト免疫グロブリンフレームワーク領域に由来する、少なくとも１つのフレームワーク領域を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、ヒト化されている。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、脱免疫化されている。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、２つの免疫グロブリン重鎖と、２つの免疫グロブリン軽鎖とを含む。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、ＩｇＧ抗体である。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、単一ドメイン抗体、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又はナノボディである。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体は、本明細書に記載されるｈ５Ｄ８抗体（配列番号４２及び配列番号４６）、又は重鎖システイン変異体（配列番号６６）、又はｈ５Ｄ８又はそのシステイン変異型のＣＤＲを保有する抗体である。
【００６２】
本明細書に記載される特定の実施形態では、ＰＤ−１阻害剤と組み合わせて利用又は投与される抗体は、ｈ５Ｄ８抗体である。ｈ５ｄ８抗体は、配列番号１〜３のいずれか１つに記載されるＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号４又は５のいずれか１つに記載されるＶＨ−ＣＤＲ２、及び配列番号６〜８のいずれか１つに記載されるＶＨ−ＣＤＲ３を含むＬＩＦと特異的に結合する。本明細書に記載される特定の実施形態では、ｈ５Ｄ８はＬＩＦと特異的に結合し、配列番号９又は１０のいずれか１つに記載されるＶＬ−ＣＤＲ１、配列番号１１又は１２に記載されるＶＬ−ＣＤＲ２、及び配列番１３に記載されるＶＬ−ＣＤＲ３を含む。本明細書に記載される特定の実施形態では、ｈ５Ｄ８はＬＩＦと特異的に結合し、配列番号１〜３のいずれか１つに記載されるＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号４又は５のいずれか１つに記載されるＶＨ−ＣＤＲ２、及び配列番号６〜８のいずれか１つに記載されるＶＨ−ＣＤＲ３配列番号９又は１０のいずれか１つに記載されるＶＬ−ＣＤＲ１、配列番号１１又は１２に記載されるＶＬ−ＣＤＲ２、及び配列番１３に記載されるＶＬ−ＣＤＲ３を含む。
【００６３】
特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号１４〜１７のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１８〜１９のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０〜２２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、又は配列番号２３〜２５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＨ−ＦＲ４領域アミノ酸配列を含む、１つ又は複数のヒト重鎖フレームワーク領域を含む。特定の実施形態では、１つ又は複数のヒト重鎖フレームワーク領域は、配列番号１５に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１９に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号２４に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＨ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号２６〜２９のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３０〜３３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３４〜３７のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、又は配列番号３８〜４０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む、１つ又は複数のヒト軽鎖フレームワーク領域を含む。特定の実施形態では、１つ又は複数のヒト軽鎖フレームワーク領域は、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、又は約９５％同一である、ＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３１に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３５に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号３８に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、１つ又は複数のヒト重鎖フレームワーク領域及び１つ又は複数のヒト軽鎖領域は、配列番号１５に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１９に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、配列番号２４に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＨ−ＦＲ４アミノ酸配列、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３１に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３５に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号３８に記載されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号１４〜１７のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１８〜１９のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０〜２２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、又は配列番号２３〜２５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ４領域アミノ酸配列を含む、１つ又は複数のヒト重鎖フレームワーク領域を含む。特定の実施形態では、１つ又は複数のヒト重鎖フレームワーク領域は、配列番号１５に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１９に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号２４に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号２６〜２９のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３０〜３３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３４〜３７のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、又は配列番号３８〜４０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む、１つ又は複数のヒト軽鎖フレームワーク領域を含む。特定の実施形態では、１つ又は複数のヒト軽鎖フレームワーク領域は、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３１に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３５に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号３８に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、１つ又は複数のヒト重鎖フレームワーク領域及び１つ又は複数のヒト軽鎖領域は、配列番号１５に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１９に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、配列番号２４に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ４アミノ酸配列、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３１に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３５に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号３８に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗体は、ヒトＬＩＦと特異的に結合する。
【００６４】
本明細書に記載されるｒ５Ｄ８抗体は、ヒトＬＩＦをコード化するＤＮＡで免疫化されたラットから生成された。ｒ５Ｄ８はクローニングされて配列決定され、（Ｋａｂａｔ及びＩＭＧＴ  ＣＤＲ番号付け法の組み合わせを用いる）配列番号１（ＧＦＴＦＳＨＡＷＭＨ）に対応するＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号４（ＱＩＫＡＫＳＤＤＹＡＴＹＹＡＥＳＶＫＧ）に対応するＶＨ−ＣＤＲ２、配列番号６（ＴＣＷＥＷＤＬＤＦ）に対応するＶＨ−ＣＤＲ３、配列番号９（ＲＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＨＴＹＬＮ）に対応するＶＬ−ＣＤＲ１、配列番号１１（ＳＶＳＮＬＥＳ）に対応するＶＬ−ＣＤＲ２、及び配列番号１３（ＭＱＡＴＨＡＰＰＹＴ）に対応するＶＬ−ＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。この抗体はＣＤＲグラフト化によってヒト化されており、ヒト化バージョンはｈ５Ｄ８と称される。
【００６５】
特定の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号１（ＧＦＴＦＳＨＡＷＭＨ）に記載されるものと少なくとも８０％又は９０％同一である、ＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号４（ＱＩＫＡＫＳＤＤＹＡＴＹＹＡＥＳＶＫＧ）に記載されるものと少なくとも８０％、９０％、又は９５％同一である、ＶＨ−ＣＤＲ２、及び配列番号６（ＴＣＷＥＷＤＬＤＦ）に記載されるものと少なくとも８０％又は９０％同一である、ＶＨ−ＣＤＲ３を含む、ＬＩＦと特異的に結合する抗体である。特定の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号９（ＲＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＨＴＹＬＮ）に記載されるものと少なくとも８０％又は９０％同一である、ＶＬ−ＣＤＲ１、配列番号１１（ＳＶＳＮＬＥＳ）に記載されるものと少なくとも８０％同一である、ＶＬ−ＣＤＲ２、及び配列番号１３（ＭＱＡＴＨＡＰＰＹＴ）に記載されるものと少なくとも８０％又は９０％同一である、ＶＬ−ＣＤＲ３を含む、ＬＩＦと特異的に結合する抗体である。特定の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号１（ＧＦＴＦＳＨＡＷＭＨ）に記載されるＶＨ−ＣＤＲ１、配列番号４（ＱＩＫＡＫＳＤＤＹＡＴＹＹＡＥＳＶＫＧ）に記載されるＶＨ−ＣＤＲ２、配列番号６（ＴＣＷＥＷＤＬＤＦ）に記載されるＶＨ−ＣＤＲ３、配列番号９（ＲＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＨＴＹＬＮ）に記載されるＶＬ−ＣＤＲ１、配列番号１１（ＳＶＳＮＬＥＳ）に記載されるＶＬ−ＣＤＲ２、及び配列番号１３（ＭＱＡＴＨＡＰＰＹＴ）に記載されるＶＬ−ＣＤＲ３を含む、ＬＩＦと特異的に結合する抗体である。特定の保存的アミノ酸置換が、本開示のＣＤＲのアミノ酸配列中で想定される。特定の実施形態では、抗体は、配列番号１、４、６、９、１１、及び１３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と、１、２、３、又は４アミノ酸とが異なるＣＤＲを含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号１、４、６、９、１１、及び１３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と、１、２、３、又は４アミノ酸とが異なるＣＤＲを含み、１０％、２０％、又は３０％を超えて結合親和性に影響を与えない。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号１４〜１７のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１８〜１９のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０〜２２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である、ＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、又は配列番号２３〜２５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＨ−ＦＲ４領域アミノ酸配列を含む、１つ又は複数のヒト重鎖フレームワーク領域を含む。特定の実施形態では、１つ又は複数のヒト重鎖フレームワーク領域は、配列番号１５に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１９に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号２４に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＨ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号２６〜２９のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３０〜３３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３４〜３７のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、又は配列番号３８〜４０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む、１つ又は複数のヒト軽鎖フレームワーク領域を含む。特定の実施形態では、１つ又は複数のヒト軽鎖フレームワーク領域は、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３１に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３５に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号３８に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、１つ又は複数のヒト重鎖フレームワーク領域及び１つ又は複数のヒト軽鎖領域は、配列番号１５に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、全てのＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１９に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、配列番号２４に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である、ＶＨ−ＦＲ４アミノ酸配列、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３１に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３５に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号３８に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗体は、ヒトＬＩＦと特異的に結合する。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号１４〜１７のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１８〜１９のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０〜２２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、又は配列番号２３〜２５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ４領域アミノ酸配列を含む、１つ又は複数のヒト重鎖フレームワーク領域を含む。特定の実施形態では、１つ又は複数のヒト重鎖フレームワーク領域は、配列番号１５に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１９に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号２４に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号２６〜２９のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３０〜３３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３４〜３７のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、又は配列番号３８〜４０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む、１つ又は複数のヒト軽鎖フレームワーク領域を含む。特定の実施形態では、１つ又は複数のヒト軽鎖フレームワーク領域は、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３１に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３５に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号３８に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、１つ又は複数のヒト重鎖フレームワーク領域及び１つ又は複数のヒト軽鎖領域は、配列番号１５に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１９に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、配列番号２４に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ４アミノ酸配列、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３１に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３５に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号３８に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗体は、ヒトＬＩＦと特異的に結合する。
【００６６】
特定の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号１（ＧＦＴＦＳＨＡＷＭＨ）に記載されるものと少なくとも８０％又は９０％同一である、ＶＨ−ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号４（ＱＩＫＡＫＳＤＤＹＡＴＹＹＡＥＳＶＫＧ）に記載されるものと少なくとも８０％、９０％、又は９５％同一である、ＶＨ−ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号８（ＴＳＷＥＷＤＬＤＦ）に記載されるものと少なくとも８０％又は９０％同一である、ＶＨ−ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、ＬＩＦと特異的に結合する抗体である。特定の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号９（ＲＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＨＴＹＬＮ）に記載されるものと少なくとも８０％又は９０％同一である、ＶＬ−ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１（ＳＶＳＮＬＥＳ）に記載されるものと少なくとも８０％同一である、ＶＬ−ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１３（ＭＱＡＴＨＡＰＰＹＴ）に記載されるものと少なくとも８０％又は９０％同一である、ＶＬ−ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、ＬＩＦと特異的に結合する抗体である。特定の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号：１（ＧＦＴＦＳＨＡＷＭＨ）に記載されるＶＨ−ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号４（ＱＩＫＡＫＳＤＤＹＡＴＹＹＡＥＳＶＫＧ）に記載されるＶＨ−ＣＤＲ２アミノ酸配列、配列番号８（ＴＳＷＥＷＤＬＤＦ）に記載されるＶＨ−ＣＤＲ３アミノ酸配列、配列番号９（ＲＳＳＱＳＬＬＤＳＤＧＨＴＹＬＮ）に記載されるＶＬ−ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１（ＳＶＳＮＬＥＳ）に記載されるＶＬ−ＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号１３（ＭＱＡＴＨＡＰＰＹＴ）に記載されるＶＬ−ＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、ＬＩＦと特異的に結合する抗体である。特定の保存的アミノ酸置換が、本開示のＣＤＲのアミノ酸配列中で想定される。特定の実施形態では、抗体は配列番号１、４、８、９、１１、及び１３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と、１、２、３、又は４アミノ酸とが異なるＣＤＲを含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号１、４、８、９、１１、及び１３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と、１、２、３、又は４アミノ酸とが異なるＣＤＲを含み、１０％、２０％、又は３０％を超えて結合親和性に影響を与えない。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号１４〜１７のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１８〜１９のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０〜２２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である、ＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、又は配列番号２３〜２５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＨ−ＦＲ４領域アミノ酸配列を含む、１つ又は複数のヒト重鎖フレームワーク領域を含む。特定の実施形態では、１つ又は複数のヒト重鎖フレームワーク領域は、配列番号１５に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１９に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号２４に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＨ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号２６〜２９のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３０〜３３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３４〜３７のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、又は配列番号３８〜４０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む、１つ又は複数のヒト軽鎖フレームワーク領域を含む。特定の実施形態では、１つ又は複数のヒト軽鎖フレームワーク領域は、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３１に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３５に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号３８に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である、ＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、１つ又は複数のヒト重鎖フレームワーク領域及び１つ又は複数のヒト軽鎖領域は、配列番号１５に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、全てのＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１９に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、配列番号２４に記載されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である、ＶＨ−ＦＲ４アミノ酸配列、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３１に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３５に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号３８に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、ＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗体は、ヒトＬＩＦと特異的に結合する。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号１４〜１７のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１８〜１９のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０〜２２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、又は配列番号２３〜２５のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ４領域アミノ酸配列を含む、１つ又は複数のヒト重鎖フレームワーク領域を含む。特定の実施形態では、１つ又は複数のヒト重鎖フレームワーク領域は、配列番号１５に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１９に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号２４に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号２６〜２９のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３０〜３３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３４〜３７のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、又は配列番号３８〜４０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む、１つ又は複数のヒト軽鎖フレームワーク領域を含む。特定の実施形態では、１つ又は複数のヒト軽鎖フレームワーク領域は、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３１に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３５に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号３８に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、１つ又は複数のヒト重鎖フレームワーク領域及び１つ又は複数のヒト軽鎖領域は、配列番号１５に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号１９に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号２０に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ３アミノ酸配列、配列番号２４に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＨ−ＦＲ４アミノ酸配列、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ１アミノ酸配列、配列番号３１に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ２アミノ酸配列、配列番号３５に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ３アミノ酸配列、及び配列番号３８に記載されるアミノ酸配列と同一である、ＶＬ−ＦＲ４アミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗体は、ヒトＬＩＦと特異的に結合する。
【００６７】
本明細書に記載される特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号４１、４２、及び４４のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一である、アミノ酸配列を含むヒト化重鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号４１、４２、及び４４のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含むヒト化重鎖可変領域を含み、ＬＩＦと特異的に結合する抗体である。特定の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号４５〜４８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一である、アミノ酸配列を含むヒト化軽鎖可変領域を含み、ＬＩＦと特異的に結合する抗体である。本明細書に記載される特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号４５〜４８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含むヒト化軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、ヒトＬＩＦと特異的に結合する。
【００６８】
本明細書に記載される特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一である、アミノ酸配列を含むヒト化重鎖可変領域と；配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一である、アミノ酸配列を含むヒト化軽鎖可変領域とを含む。特定の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列を含むヒト化重鎖可変領域と；配列番号４６に記載されるアミノ酸配列を含むヒト化軽鎖可変領域とを含み、ＬＩＦと特異的に結合する抗体である。
【００６９】
本明細書に記載される特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号６６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一である、アミノ酸配列を含むヒト化重鎖可変領域と；配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一である、アミノ酸配列を含むヒト化軽鎖可変領域とを含む。本明細書に記載される特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号６６に記載されるアミノ酸配列を含むヒト化重鎖可変領域と；配列番号４６に記載されるアミノ酸配列を含むヒト化軽鎖可変領域とを含む。
【００７０】
本明細書に記載される特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号５７〜６０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一である、アミノ酸配列を含むヒト化重鎖と；配列番号６１〜６４のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一である、アミノ酸配列を含むヒト化軽鎖とを含む。本明細書に記載される特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号５７〜６０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含むヒト化重鎖と；配列番号６１〜６４のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含むヒト化軽鎖とを含む。
【００７１】
本明細書に記載される特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号５８に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一である、アミノ酸配列を含むヒト化重鎖と；配列番号６２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一である、アミノ酸配列を含むヒト化軽鎖とを含む。本明細書に記載される特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号５８に記載されるアミノ酸配列を含むヒト化重鎖と、配列番号６２に記載されるアミノ酸配列を含むヒト化軽鎖とを含む。本明細書に記載される特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号６７に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一である、アミノ酸配列を含むヒト化重鎖と；配列番号６２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一である、アミノ酸配列を含むヒト化軽鎖とを含む。本明細書に記載される特定の実施形態では、ＬＩＦと特異的に結合する抗体は、配列番号６７に記載されるアミノ酸配列を含むヒト化重鎖と；配列番号６２に記載されるアミノ酸配列を含むヒト化軽鎖とを含む。
【００７２】
特定の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；配列番号７に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；配列番号９に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；及び配列番号１１に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む、白血病抑制因子（ＬＩＦ）と特異的に結合する組換え抗体である。
【００７３】
特定の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号２に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；配列番号６に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；配列番号１０に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；及び配列番号１２に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む、白血病抑制因子（ＬＩＦ）と特異的に結合する組換え抗体である。特定の保存的アミノ酸置換が、本開示のＣＤＲのアミノ酸配列中で想定される。特定の実施形態では、抗体は配列番号２、５、６、１０、１２、及び１３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と、１、２、３、又は４アミノ酸とが異なるＣＤＲを含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号２、５、６、１０、１２、及び１３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と、１、２、３、又は４アミノ酸とが異なるＣＤＲを含み、１０％、２０％、又は３０％を超えて結合親和性に影響を与えない。
【００７４】
特定の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；配列番号７に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；配列番号９に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；及び配列番号１１に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む、白血病抑制因子（ＬＩＦ）と特異的に結合する組換え抗体である。特定の保存的アミノ酸置換が、本開示のＣＤＲのアミノ酸配列中で想定される。特定の実施形態では、抗体は配列番号３、４、７、９、１１、及び１３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と、１、２、３、又は４アミノ酸とが異なるＣＤＲを含む。特定の実施形態では、抗体は、配列番号：３、４、７、９、１１、及び１３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と、１、２、３、又は４アミノ酸とが異なるＣＤＲを含み、１０％、２０％、又は３０％を超えて結合親和性に影響を与えない。
【００７５】
特定の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号４９〜５２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一である、アミノ酸配列を含むヒト化重鎖と；配列番号５３〜５６のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一である、アミノ酸配列を含むヒト化軽鎖とを含み、ＬＩＦと特異的に結合する抗体である。特定の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号４９〜５２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含むヒト化重鎖と；配列番号５３〜５６のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含むヒト化軽鎖とを含み、ＬＩＦと特異的に結合する抗体である。
【００７６】
特定の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号５０に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一である、アミノ酸配列を含むヒト化重鎖と；配列番号５４に記載される（ｉｎ  ｏｆ）アミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一である、アミノ酸配列を含むヒト化軽鎖とを含み、ＬＩＦと特異的に結合する抗体である。特定の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号５０に記載されるアミノ酸配列を含むヒト化重鎖と；配列番号５４のいずれか１つに（ａｎｙ  ｏｎｅ  ｏｆ）記載されるアミノ酸配列を含むヒト化軽鎖とを含む、ＬＩＦと特異的に結合する抗体である。
【００７７】
治療的に有用なＬＩＦ抗体に結合したエピトープ
本明細書に記載されるのは、結合するとＬＩＦの生物学的活性（例えば、ＳＴＡＴ３リン酸化）を阻害し、生体内で腫瘍増殖を阻害する、ヒトＬＩＦの固有のエピトープである。本明細書に記載されるエピトープは、ヒトＬＩＦタンパク質の２つの異なる位相ドメイン（αらせんＡ及びＣ）に存在する、２つの不連続な一連のアミノ酸（ヒトＬＩＦの残基１３〜残基３２及び残基１２０〜１３８）からなる。この結合は、弱い（ファンデルワールス引力）、中程度（水素結合）、及び強い（塩橋）相互作用の組み合わせである。特定の実施形態では、接触残基は、抗ＬＩＦ抗体上の残基と水素結合を形成する、ＬＩＦ上の残基である。特定の実施形態では、接触残基は、抗ＬＩＦ抗体上の残基と塩橋を形成する、ＬＩＦ上の残基である。特定の実施形態では、接触残基は、ファンデルワールス引力をもたらすＬＩＦ上の残基であり、抗ＬＩＦ抗体上の残基の少なくとも５、４、又は３Å以内にある。
【００７８】
特定の実施形態では、ＬＩＦ結合抗体及びＰＤ−１軸阻害剤からなる、本明細書に記載される方法及び組成物は、配列番号６８のＡ１３、Ｉ１４、Ｒ１５、Ｈ１６、Ｐ１７、Ｃ１８、Ｈ１９、Ｎ２０、Ｑ２５、Ｑ２９、Ｑ３２、Ｄ１２０、Ｒ１２３、Ｓ１２７、Ｎ１２８、Ｌ１３０、Ｃ１３１、Ｃ１３４、Ｓ１３５、又はＨ１３８残基の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０個のいずれかに結合する、単離抗体を含む。特定の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号６８のＡ１３、Ｉ１４、Ｒ１５、Ｈ１６、Ｐ１７、Ｃ１８、Ｈ１９、Ｎ２０、Ｑ２５、Ｑ２９、Ｑ３２、Ｄ１２０、Ｒ１２３、Ｓ１２７、Ｎ１２８、Ｌ１３０、Ｃ１３１、Ｃ１３４、Ｓ１３５、又はＨ１３８残基の全てに結合する単離抗体である。特定の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号６８のＡ１３、Ｉ１４、Ｒ１５、Ｈ１６、Ｐ１７、Ｃ１８、Ｈ１９、Ｎ２０、Ｑ２５、Ｑ２９、Ｑ３２、Ｄ１２０、Ｒ１２３、Ｓ１２７、Ｎ１２８、Ｌ１３０、Ｃ１３１、Ｃ１３４、Ｓ１３５、又はＨ１３８残基の全てに結合する単離抗体である。特定の実施形態では、抗体は、強い又は中程度の相互作用において抗体と関与する残基にのみ結合する。特定の実施形態では、抗体は、強い相互作用において抗体と関与する残基にのみ結合する。特定の実施形態では、抗体は、ＬＩＦのらせんＡ及びＣと相互作用する。特定の実施形態では、抗体は、ＬＩＦとｇｐ１３０との相互作用を遮断する。
【００７９】
特定の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号６８のＡ１３、Ｉ１４、Ｒ１５、Ｈ１６、Ｐ１７、Ｃ１８、Ｈ１９、Ｎ２０、Ｑ２５、Ｑ２９、Ｑ３２、Ｄ１２０、Ｒ１２３、Ｓ１２７、Ｎ１２８、Ｌ１３０、Ｃ１３１、Ｃ１３４、Ｓ１３５、又はＨ１３８残基の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０個のいずれかに結合する、配列番号１、４、６、９、１１、及び１３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を有する、ＣＤＲを含む抗体である。特定の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号６８のＡ１３、Ｉ１４、Ｒ１５、Ｈ１６、Ｐ１７、Ｃ１８、Ｈ１９、Ｎ２０、Ｑ２５、Ｑ２９、Ｑ３２、Ｄ１２０、Ｒ１２３、Ｓ１２７、Ｎ１２８、Ｌ１３０、Ｃ１３１、Ｃ１３４、Ｓ１３５、又はＨ１３８の全ての残基に結合する、配列番号１、４、６、９、１１、及び１３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を有する、ＣＤＲを含む抗体である。特定の実施形態では、抗体は、強い又は中程度の相互作用において抗体と関与する残基にのみ結合する。特定の実施形態では、抗体は、強い相互作用において抗体と関与する残基にのみ結合する。
【００８０】
特定の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号６８のＡ１３、Ｉ１４、Ｒ１５、Ｈ１６、Ｐ１７、Ｃ１８、Ｈ１９、Ｎ２０、Ｑ２５、Ｑ２９、Ｑ３２、Ｄ１２０、Ｒ１２３、Ｓ１２７、Ｎ１２８、Ｌ１３０、Ｃ１３１、Ｃ１３４、Ｓ１３５、又はＨ１３８残基の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０個のいずれかに結合する、配列番号１、４、８、９、１１、及び１３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を有する、ＣＤＲを含む抗体である。特定の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号６８のＡ１３、Ｉ１４、Ｒ１５、Ｈ１６、Ｐ１７、Ｃ１８、Ｈ１９、Ｎ２０、Ｑ２５、Ｑ２９、Ｑ３２、Ｄ１２０、Ｒ１２３、Ｓ１２７、Ｎ１２８、Ｌ１３０、Ｃ１３１、Ｃ１３４、Ｓ１３５、又はＨ１３８の全ての残基に結合する、配列番号１、４、８、９、１１、及び１３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を有する、ＣＤＲを含む抗体である。特定の実施形態では、抗体は、強い又は中程度の相互作用において抗体と関与する残基にのみ結合する。特定の実施形態では、抗体は、強い相互作用において抗体と関与する残基にのみ結合する。
【００８１】
特定の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号１、４、６、９、１１、及び１３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と、１、２、３、４、又は５アミノ酸とが異なるＣＤＲを含み、配列番号６８のＡ１３、Ｉ１４、Ｒ１５、Ｈ１６、Ｐ１７、Ｃ１８、Ｈ１９、Ｎ２０、Ｑ２５、Ｑ２９、Ｑ３２、Ｄ１２０、Ｒ１２３、Ｓ１２７、Ｎ１２８、Ｌ１３０、Ｃ１３１、Ｃ１３４、Ｓ１３５、又はＨ１３８残基の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０個のいずれかに結合する抗体である。特定の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号１、４、６、９、１１、及び１３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と、１、２、３、４、又は５アミノ酸とが異なるＣＤＲを含み、配列番号６８のＡ１３、Ｉ１４、Ｒ１５、Ｈ１６、Ｐ１７、Ｃ１８、Ｈ１９、Ｎ２０、Ｑ２５、Ｑ２９、Ｑ３２、Ｄ１２０、Ｒ１２３、Ｓ１２７、Ｎ１２８、Ｌ１３０、Ｃ１３１、Ｃ１３４、Ｓ１３５、又はＨ１３８の全ての残基に結合する抗体である。特定の実施形態では、抗体は、強い又は中程度の相互作用において抗体と関与する残基にのみ結合する。特定の実施形態では、抗体は、強い相互作用において抗体と関与する残基にのみ結合する。
【００８２】
特定の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号１、４、８、９、１１、及び１３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と、１、２、３、４、又は５アミノ酸とが異なるＣＤＲを含み、配列番号６８のＡ１３、Ｉ１４、Ｒ１５、Ｈ１６、Ｐ１７、Ｃ１８、Ｈ１９、Ｎ２０、Ｑ２５、Ｑ２９、Ｑ３２、Ｄ１２０、Ｒ１２３、Ｓ１２７、Ｎ１２８、Ｌ１３０、Ｃ１３１、Ｃ１３４、Ｓ１３５、又はＨ１３８残基の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０個のいずれかに結合する抗体である。特定の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号１、４、８、９、１１、及び１３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と、１、２、３、４、又は５アミノ酸とが異なるＣＤＲを含み、配列番号６８のＡ１３、Ｉ１４、Ｒ１５、Ｈ１６、Ｐ１７、Ｃ１８、Ｈ１９、Ｎ２０、Ｑ２５、Ｑ２９、Ｑ３２、Ｄ１２０、Ｒ１２３、Ｓ１２７、Ｎ１２８、Ｌ１３０、Ｃ１３１、Ｃ１３４、Ｓ１３５、又はＨ１３８の全ての残基に結合する抗体である。特定の実施形態では、抗体は、強い又は中程度の相互作用において抗体と関与する（ｔｈａｔ  ｔｈａｔ）残基にのみ結合する。特定の実施形態では、抗体は、強い相互作用において抗体と関与する（ｔｈａｔ  ｔｈａｔ）残基にのみ結合する。
【００８３】
特定の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一である、ヒト化重鎖可変領域アミノ酸配列と；配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一である、ヒト化軽鎖可変領域アミノ酸配列とを含み、配列番号６８のＡ１３、Ｉ１４、Ｒ１５、Ｈ１６、Ｐ１７、Ｃ１８、Ｈ１９、Ｎ２０、Ｑ２５、Ｑ２９、Ｑ３２、Ｄ１２０、Ｒ１２３、Ｓ１２７、Ｎ１２８、Ｌ１３０、Ｃ１３１、Ｃ１３４、Ｓ１３５、又はＨ１３８残基の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０個のいずれかに結合する、ＬＩＦと特異的に結合する抗体である。特定の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一である、ヒト化重鎖可変領域アミノ酸配列と；配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一である、ヒト化軽鎖可変領域アミノ酸配列とを含み、配列番号６８のＡ１３、Ｉ１４、Ｒ１５、Ｈ１６、Ｐ１７、Ｃ１８、Ｈ１９、Ｎ２０、Ｑ２５、Ｑ２９、Ｑ３２、Ｄ１２０、Ｒ１２３、Ｓ１２７、Ｎ１２８、Ｌ１３０、Ｃ１３１、Ｃ１３４、Ｓ１３５、又はＨ１３８の全ての残基に結合する、ＬＩＦと特異的に結合する抗体である。特定の実施形態では、抗体は、強い又は中程度の相互作用において抗体と関与する（ｔｈａｔ  ｔｈａｔ）残基にのみ結合する。特定の実施形態では、抗体は、強い相互作用において抗体と関与する（ｔｈａｔ  ｔｈａｔ）残基にのみ結合する。
【００８４】
特定の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号６６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一である、ヒト化重鎖可変領域アミノ酸配列と；配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一である、ヒト化軽鎖可変領域アミノ酸配列とを含み、配列番号６８のＡ１３、Ｉ１４、Ｒ１５、Ｈ１６、Ｐ１７、Ｃ１８、Ｈ１９、Ｎ２０、Ｑ２５、Ｑ２９、Ｑ３２、Ｄ１２０、Ｒ１２３、Ｓ１２７、Ｎ１２８、Ｌ１３０、Ｃ１３１、Ｃ１３４、Ｓ１３５、又はＨ１３８残基の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０個のいずれかに結合する、ＬＩＦと特異的に結合する抗体である。特定の実施形態では、本明細書に記載されるのは、配列番号６６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一である、ヒト化重鎖可変領域アミノ酸配列と；配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一である、ヒト化軽鎖可変領域アミノ酸配列とを含み、配列番号６８のＡ１３、Ｉ１４、Ｒ１５、Ｈ１６、Ｐ１７、Ｃ１８、Ｈ１９、Ｎ２０、Ｑ２５、Ｑ２９、Ｑ３２、Ｄ１２０、Ｒ１２３、Ｓ１２７、Ｎ１２８、Ｌ１３０、Ｃ１３１、Ｃ１３４、Ｓ１３５、又はＨ１３８の全ての残基に結合する、ＬＩＦと特異的に結合する抗体である。特定の実施形態では、抗体は、強い又は中程度の相互作用において抗体と関与する（ｔｈａｔ  ｔｈａｔ）残基にのみ結合する。特定の実施形態では、抗体は、強い相互作用において抗体と関与する（ｔｈａｔ  ｔｈａｔ）残基にのみ結合する。
【００８５】
特定の実施形態では，本明細書で開示される抗体は、細胞におけるＬＩＦシグナル伝達を阻害する。特定の実施形態では、Ｕ−２５１細胞における血清飢餓条件下での抗体の生物学的阻害のＩＣ５０は、約１００、７５、５０、４０、３０、２０、１０、５、又は１ナノモル濃度以下である。特定の実施形態では、Ｕ−２５１細胞における血清飢餓条件下での抗体の生物学的阻害のＩＣ５０は、約９００、８００、７００、６００、５００、４００、３００、２００、又は１００ナノモル濃度以下である。
【００８６】
特定の実施形態では、本明細書で開示される抗体は、ＬＩＦを発現する腫瘍及びがんを治療するのに有用である。特定の実施形態では、本開示の抗体で治療された個体は、ＬＩＦ陽性腫瘍／がんを有するとして治療のために選択されている。特定の実施形態では、腫瘍はＬＩＦ陽性であるか、又は上昇したレベルのＬＩＦを産生する。特定の実施形態では、ＬＩＦ陽性は、基準値又は一組の病理学的基準と比較して判定される。特定の実施形態では、ＬＩＦ陽性腫瘍は、腫瘍がそれに由来する非形質転換細胞よりも２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍又はそれを超えるＬＩＦを発現する。特定の実施形態では、腫瘍は、ＬＩＦの異所性発現を獲得している。ＬＩＦ陽性腫瘍は、例えば、抗ＬＩＦ抗体による免疫組織化学検査を使用して組織学的に；例えば、リアルタイムＰＣＲ又はＲＮＡ−ｓｅｑによるｍＲＮＡ定量などの一般に使用される分子生物学方法によって；又は例えば、ウエスタンブロット、フローサイトメトリー、ＥＬＩＳＡ、又は均一（ｈｏｍｏｇｅｎｏｕｓ）タンパク質定量アッセイ（例えば、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標））によるタンパク質定量によって、判定され得る。特定の実施形態では、抗体は、がんと診断された患者を治療するために使用され得る。特定の実施形態では、がんは、１つ又は複数のがん幹細胞を含み、又は１つ又は複数のがん幹細胞である。
【００８７】
特定の実施形態では、本明細書で開示される抗体は、ＬＩＦ受容体（ＣＤ１１８）を発現するがんにおいて腫瘍を治療するのに有用である。ＬＩＦ受容体陽性腫瘍は、病理組織診断又はフローサイトメトリーによって判定され得て、特定の実施形態では、イソタイプ対照の２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍又はそれを超えるＬＩＦ受容体抗体に結合する細胞を含む。特定の実施形態では、腫瘍は、ＬＩＦ受容体の異所性発現を獲得している。特定の実施形態では、がんはがん幹細胞である。特定の実施形態では、ＬＩＦ陽性腫瘍又はがんは、抗ＬＩＦ抗ＬＩＦ抗体（ａｎｔｉ−ＬＩＦ  ａｎ  ａｎｔｉ−ＬＩＦ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）を使用した免疫組織化学検査によって判定され得る。特定の実施形態では、ＬＩＦ陽性腫瘍は、ＬＩＦレベルが上位１０％、２０％、３０％、４０％、又は上位５０％である腫瘍のＩＨＣ分析によって判定される。
【００８８】
本明細書に記載される抗体は、多数の結果に影響を及ぼす。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、対照抗体（例えば、イソタイプ対照）と比較して、腫瘍モデルにおいて、腫瘍におけるＭ２マクロファージの存在を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又はそれを超えて減少させ得る。Ｍ２マクロファージは、ＩＨＣ切片のＣＣＬ２２及びＣＤ２０６の染色によって、又は腫瘍浸潤性免疫細胞又は骨髄性細胞のフローサイトメトリーによって、同定され得る。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、対照抗体（例えば、イソタイプ対照）と比較した場合、ｇｐ１３０腫瘍に対するＬＩＦの結合を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又はそれを超えて減少させ得る。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、対照抗体（例えば、イソタイプ対照）と比較して、ＬＩＦ応答性細胞株におけるＬＩＦシグナル伝達を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又はそれを超えて減少させ得る。ＬＩＦシグナル伝達は、例えば、リン酸化ＳＴＡＴ３（ＬＩＦシグナル伝達の下流標的）のウエスタンブロットによって測定され得る。本明細書の抗体はまた、その他のＩＬ−６ファミリーメンバーサイトカインと比較して、ＬＩＦに対して高度に特異的である。特定の実施形態では、抗体は、任意のその他のＩＬ−６ファミリーメンバーサイトカインよりも、約１０倍、約５０倍、又は約１００倍大きい親和性でヒトＬＩＦに結合する。特定の実施形態では、ＬＩＦ抗体は、哺乳類系で産生されるその他のＩＬ−６ファミリーメンバーサイトカインに結合しない。特定の実施形態では、抗体は、哺乳類系で産生されたオンコスタチンＭに結合しない。
【００８９】
特定の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチド及び抗体は、例えば、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内、腫瘍内、又は大脳内などの、抗体含有医薬組成物の投与に適した任意の経路によって投与され得る。特定の実施形態では、抗体は静脈内投与される。特定の実施形態では、抗体は、例えば、毎週、毎週２回、毎月、毎月２回などの適切な投与計画で投与される。特定の実施形態では、抗体は、３週間に１回投与される。抗体は、任意の治療的有効量で投与され得る。特定の実施形態では、治療的に許容される量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇである。特定の実施形態では、治療的に許容される量は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇである。特定の実施形態では、治療的に許容される量は、約５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇである。ＬＩＦ結合ポリペプチド又は抗体は、少なくとも約６０分間の時間をかけて静脈内投与され得る；ただし、この時間は、各個体の投与に妥当な条件に基づいて変動し得る。
【００９０】
ＰＤ−１軸阻害剤
ＰＤ−１軸は、それを介してＰＤ−１が、Ｔ細胞応答に対する抑制効果を発揮するシグナル伝達経路であり、ＰＤ−１とＰＤＬ−１又はＰＤＬ−２との相互作用を含む。本明細書に記載されるＬＩＦ結合ポリペプチド及び抗体は、ＰＤ−１軸阻害剤と組み合わせて、腫瘍、がん又はその他の新生物を治療するための方法で展開され得る。特定の実施形態では、本明細書に記載されるＬＩＦ結合ポリペプチド及び抗体は、がん、腫瘍、又はその他の新生物を治療するのに有用な医薬組成物中で、ＰＤ−１軸阻害剤と組み合わされ得る。本明細書に記載されるｈ５Ｄ８抗体は、ＰＤ−１軸阻害剤と組み合わせて、腫瘍、がん又はその他の新生物を治療する方法で展開され得る。特定の実施形態では、本明細書に記載されるｈ５Ｄ８抗体は、がん、腫瘍、又はその他の新生物を治療するのに有用な医薬組成物中で、ＰＤ−１軸阻害剤と組み合わされ得る。
【００９１】
ＰＤ−１軸阻害剤は、本明細書の組成物及び方法で利用され、ＰＤ−１（ＣＤ２７９）、ＰＤＬ−１（ＣＤ２７４）、又はＰＤＬ−２（ＣＤ２７３）を通じたシグナル伝達を阻害し得る。阻害剤は、抗体又は抗体断片、可溶性リガンド−Ｆｃ融合コンストラクト、又は小分子阻害剤であり得る。特定の実施形態では、ＰＤ−１軸阻害剤は、抗体又はそのＰＤ−１結合断片を含む。特定の実施形態では、ＰＤ−１（ＣＤ２７９）と特異的に結合する抗体又は抗原結合断片は、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ＡＭＰ−５１４、スパルタリズマブ、チスレリズマブ（ＢＧＢ−Ａ３１７）、ピジリズマブ、又はそのＰＤ−１（ＣＤ２７９）結合断片を含む。特定の実施形態では、ＰＤ−１軸阻害剤は、ＰＤ−Ｌ２Ｆｃ融合タンパク質（例えば、ＡＭＰ−２２４）である。特定の実施形態では、ＰＤ−１軸阻害剤は、ＰＤＬ−１（ＣＤ２７４）と特異的に結合する抗体又はＰＤＬ−１結合断片を含む。特定の実施形態では、ＰＤＬ−１（ＣＤ２７４）と特異的に結合する抗体又は抗原結合断片は、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４３７６）、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、又はＦＡＺ０５３、又はそのＰＤＬ−１（ＣＤ２７４）結合断片を含む。特定の実施形態では、ＰＤ−１軸阻害剤は、ＰＤＬ−２（ＣＤ２７３）と特異的に結合する抗体又はＰＤＬ−２結合断片を含む。
【００９２】
特定の実施形態では、ＰＤ−１軸阻害剤は、Ｎ−｛２−［（｛２−メトキシ−６−［（２−メチル［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メトキシ］ピリジン−３−イル｝メチル）アミノ］エチル｝アセトアミド（ＢＭＳ２０２）；（２−（（３−シアノベンジル）オキシ）−４−（（３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ダイオキシン−６−イル）−２−メチルベンジル）オキシ）−５−メチルベンジル）−Ｄ−セリン塩酸塩；（２Ｒ，４Ｒ）−１−（５−クロロ−２−（（３−シアノベンジル）オキシ）−４−（（３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ダイオキシン−６−イル）−２−メチルベンジル）オキシ）ベンジル）−４−ヒドロキシピロリジン−２−カルボン酸；３−（４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−１−フェニルインドール；３−（４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−１−フェニル−１ｈ−インドール；Ｌ−α−グルタミン、Ｎ２，Ｎ６−ビス（Ｌ−セリル−Ｌ−アスパラギニル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−セリル−Ｌ−α−グルタミル−Ｌ−セリル−Ｌ−フェニルアラニル）−Ｌ−リシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−バリル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−グルタミニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−リシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミニル−Ｌ−イソロイシル−Ｌ−リシル；（２Ｓ）−１−［［２，６−ジメトキシ−４−［（２−メチル［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メトキシ］フェニル］メチル］−２−ピペリジンカルボン酸；グリシンアミド、Ｎ−（２−メルカプトアセチル）−Ｌ−フェニルアラニル−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−ロイシル−Ｎ−メチルグリシル−Ｌ−トリプトフィル−Ｌ−セリル−Ｌ−トリプトフィル−Ｎ−メチル−Ｌ−ノルロイシル−Ｎ−メチル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−システイニル−、環式（１→１４）−チオエーテル；又はそれらの誘導体又は類似体などの１つ又は複数の（ｏｎ  ｏｒ  ｍｏｒｅ）の小分子阻害剤を含む。
【００９３】
特定の実施形態では、ＰＤ−１軸阻害剤は、例えば、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内、腫瘍内、大脳内、又は経口などの、小分子ポリペプチド又は抗体含有医薬組成物の投与に適した任意の経路によって投与され得る。特定の実施形態では、ＰＤ−１軸阻害抗体は静脈内投与される。特定の実施形態では、ＰＤ−１軸阻害抗体は、例えば、毎週、毎週２回、毎月、毎月２回、２週間に１回、３週間に１回、又は４週間に１回などの、適切な投与計画で投与される。抗体は、任意の治療的有効量で投与され得る。特定の実施形態では、治療的に許容される量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇである。特定の実施形態では、治療的に許容される量は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇである。特定の実施形態では、治療的に許容される量は、約５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇである。特定の実施形態では、治療的に許容される量は、約５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇである。特定の実施形態では、治療的に許容される量は、約５ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇである。特定の実施形態では、治療的に許容される量は、約５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、１６ｍｇ／ｋｇ、１７ｍｇ／ｋｇ、１８ｍｇ／ｋｇ、１９ｍｇ／ｋｇ、又は２０ｍｇ／ｋｇである。一例では、デュルバルマブは、２週間に１回約１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与され得る。
【００９４】
特定の実施形態では、ＰＤ−１軸阻害剤の個体への投与は、約１００ミリグラム〜約１０００ミリグラムの均一投与量レベルであり得る。特定の実施形態では、ＰＤ−１軸阻害剤の個体への投与は、約２００ミリグラム〜約８００ミリグラム、約２００ミリグラム〜約６００ミリグラム、約２００ミリグラム〜約５００ミリグラム、約３００ミリグラム〜約５００ミリグラムの均一投与量のレベルであり得る。特定の実施形態では、ＰＤ−１軸阻害剤の個体への投与は、約１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０又は１０００ミリグラムの均一投与量のレベルであり得る。特定の実施形態では、ＰＤ−１軸阻害剤の個体への投与は、単剤療法に適したレベルであり得る。例えば、ニボルマブは、２週間毎に約２４０ミリグラム、又は４週間毎に約４８０ミリグラムの投与量で投与され得る。別の例ではペンブロリズマブは、３週間に１回約２００ミリグラムで投与され得る。
【００９５】
ｈ５Ｄ８の用量
特定の実施形態では、ｈ５Ｄ８抗体は、例えば、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内、腫瘍内、又は大脳内などの抗体含有医薬組成物の投与に適した任意の経路によって投与され得る。特定の実施形態では、ｈ５Ｄ８は、静脈内投与される。特定の実施形態では、ｈ５Ｄ８は、例えば、毎週、毎週２回、毎月、毎月２回などの適切な投与計画で投与される。特定の実施形態では、ｈ５Ｄ８は、３週間に１回投与される。Ｈ５Ｄ８は、任意の治療的有効量で投与され得る。特定の実施形態では、治療的に許容される量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇである。特定の実施形態では、治療的に許容される量は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇである。特定の実施形態では、治療的に許容される量は、約５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇである。ｈ５Ｄ８抗体は、投与される個体の体重及び体質量に関係なく、均一用量で投与され得る。ｈ５Ｄ８抗体は、個体が少なくとも約３７．５キログラムの体質量を有するという条件で、投与される個体の体重及び体質量に関係なく、均一用量で投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、約７５ミリグラム〜約２０００ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、約２２５ミリグラム〜約２０００ミリグラム、約７５０ミリグラム〜約２０００ミリグラム、約１１２５ミリグラム〜約２０００ミリグラム、又は約１５００ミリグラム〜約２０００ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、約７５ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、約２２５ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、約７５０ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、約１１２５ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、約１５００ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、約２０００ミリグラムで投与され得る。
【００９６】
その他の用量のｈ５Ｄ８が想定される。ｈ５Ｄ８の均一用量は、約５０、１００、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、６００、６２５、６５０、６７５、７００、７２５、７７５、８００、８２５、８５０、８７５、９００、９２５、９５０、９７５、１０００、１０２５、１０５０、１０７５、１１００、１１５０、１１７５、１２００、１２２５、１２５０、１２７５、１３００、１３２５、１３５０、１３７５、１４００、１４２５、１４５０、１４７５、１５２５、１５５０、１５７５、１６００、１６２５、１６５０、１６７５、１７００、１７２５、１７５０、１７７５、１８００、１８２５、１８５０、１８７５、１９００、１９２５、１９５０、１９７５、２０２５、２０５０、２０７５、又は２１００ミリグラムで投与され得る。これらのいずれかの用量は、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、又は４週間に１回投与され得る。
【００９７】
ｈ５Ｄ８の均一用量は、１週間に１回約７５ミリグラム〜約２０００ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、１週間に１回約７５ミリグラム〜約１５００ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、１週間に１回約２２５ミリグラム〜約１５００ミリグラム、約７５０ミリグラム〜約１５００ミリグラム、約１１２５ミリグラム〜約１５００ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、１週間に１回約７５ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、１週間に１回約２２５ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、１週間に１回約７５０ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、１週間に１回約１１２５ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、１週間に１回約１５００ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、１週間に１回約２０００ミリグラムで投与され得る。
【００９８】
ｈ５Ｄ８の均一用量は、２週間に１回約７５ミリグラム〜約２０００ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、２週間に１回約７５ミリグラム〜約１５００ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、２週間に１回約２２５ミリグラム〜約１５００ミリグラム、約７５０ミリグラム〜約１５００ミリグラム、約１１２５ミリグラム〜約１５００ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、２週間に１回約７５ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、２週間に１回約２２５ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、２週間に１回約７５０ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、２週間に１回約１１２５ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、２週間に１回約１５００ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、２週間に１回約２０００ミリグラムで投与され得る。
【００９９】
ｈ５Ｄ８の均一用量は、３週間に１回約７５ミリグラム〜約２０００ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、３週間に１回約７５ミリグラム〜約１５００ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、３週間に１回約２２５ミリグラム〜約１５００ミリグラム、約７５０ミリグラム〜約１５００ミリグラム、約１１２５ミリグラム〜約１５００ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、３週間に１回約７５ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、３週間に１回約２２５ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、３週間に１回約７５０ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、３週間に１回約１１２５ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、３週間に１回約１５００ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、３週間に１回約２０００ミリグラムで投与され得る。
【０１００】
ｈ５Ｄ８の均一用量は、４週間に１回約７５ミリグラム〜約２０００ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、４週間に１回約７５ミリグラム〜約１５００ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、４週間に１回約２２５ミリグラム〜約１５００ミリグラム、約７５０ミリグラム〜約１５００ミリグラム、約１１２５ミリグラム〜約１５００ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、４週間に１回約７５ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、４週間に１回約２２５ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、４週間に１回約７５０ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、４週間に１回約１１２５ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、４週間に１回約１５００ミリグラムで投与され得る。ｈ５Ｄ８の均一用量は、４週間に１回約２０００ミリグラムで投与され得る。
【０１０１】
ｈ５Ｄ８抗体は、ｈ５Ｄ８抗体が投与される個体の体重又は体質量に基づいた用量で投与され得る。ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇで投与され得る。ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、約３ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、又は約２０ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇで投与され得る。ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、約１ｍｇ／ｋｇで投与され得る。ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、約３ｍｇ／ｋｇで投与され得る。ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、約１０ｍｇ／ｋｇで投与され得る。ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、約１５ｍｇ／ｋｇで投与され得る。ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、約２０ｍｇ／ｋｇで投与され得る。ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、約２５ｍｇ／ｋｇで投与され得る。
【０１０２】
ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、３週間に１回約１ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇで投与され得る。ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、１週間、２週間、３週間又は４週間に１回約３ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、又は約２０ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇで投与され得る。
【０１０３】
ｈ５Ｄ８のその他の体重調整用量が想定される。ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、約２ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、１６ｍｇ／ｋｇ、１７ｍｇ／ｋｇ、１８ｍｇ／ｋｇ、１９ｍｇ／ｋｇ、２１ｍｇ／ｋｇ、２２ｍｇ／ｋｇ、２３ｍｇ／ｋｇ、２４ｍｇ／ｋｇ、２６ｍｇ／ｋｇ、２７ｍｇ／ｋｇ、２８ｍｇ／ｋｇ、２９ｍｇ／ｋｇ、又は３０ｍｇ／ｋｇで投与され得る。これらのいずれかの用量は、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、又は４週間に１回投与され得る。
【０１０４】
ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、１週間に１回約１ｍｇ／ｋｇで投与され得る。ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、１週間に１回約３ｍｇ／ｋｇで投与され得る。ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、１週間に１回約１０ｍｇ／ｋｇで投与され得る。ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、１週間に１回約１５ｍｇ／ｋｇで投与され得る。ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、１週間に１回約２０ｍｇ／ｋｇで投与され得る。ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、１週間に１回約２５ｍｇ／ｋｇで投与され得る。
【０１０５】
ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、２週間に１回約１ｍｇ／ｋｇで投与され得る。ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、２週間に１回約３ｍｇ／ｋｇで投与され得る。ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、２週間に１回約１０ｍｇ／ｋｇで投与され得る。ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、２週間に１回約１５ｍｇ／ｋｇで投与され得る。ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、２週間に１回約２０ｍｇ／ｋｇで投与され得る。ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、２週間に１回約２５ｍｇ／ｋｇで投与され得る。
【０１０６】
ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、３週間に１回約１ｍｇ／ｋｇで投与され得る。ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、３週間に１回約３ｍｇ／ｋｇで投与され得る。ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、３週間に１回約１０ｍｇ／ｋｇで投与され得る。ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、３週間に１回約１５ｍｇ／ｋｇで投与され得る。ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、３週間に１回約２０ｍｇ／ｋｇで投与され得る。ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、３週間に１回約２５ｍｇ／ｋｇで投与され得る。
【０１０７】
ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、４週間に１回約１ｍｇ／ｋｇで投与され得る。ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、４週間に１回約３ｍｇ／ｋｇで投与され得る。ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、４週間に１回約１０ｍｇ／ｋｇで投与され得る。ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、４週間に１回約１５ｍｇ／ｋｇで投与され得る。ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、４週間に１回約２０ｍｇ／ｋｇで投与され得る。ｈ５Ｄ８の体重調整用量は、４週間に１回約２５ｍｇ／ｋｇで投与され得る。
【０１０８】
本明細書に詳述される用量のいずれも、少なくとも約６０分の時間をかけて静脈内投与され得る；ただし、この時間は、各個体の投与に妥当な条件に基づいて変動し得る。
【０１０９】
併用療法の投与スケジュール
ＬＩＦ結合ポリペプチドとＰＤ−１軸阻害剤からなる併用療法は、様々な方法で投与され得る。本発明のＬＩＦ結合ポリペプチドとＰＤ−１軸阻害剤は、同一スケジュールで同時に、又は異なるスケジュールで異なる時点で、投与され得る。同時に投与される場合、投与は、別個の製剤によるものでも、又はＬＩＦ結合ポリペプチドとＰＤ−１軸阻害剤との双方を含む単一製剤によるものであり得る。投与様式は混合され得て、例えば、ＰＤ−１軸阻害剤が経口又は非経口注射によって投与される一方で、ＬＩＦ結合ポリペプチドが静脈内投与され得る。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、静脈内、非経口的、皮下、腫瘍内、又は経口的に投与される。特定の実施形態では、ＰＤ−１軸阻害剤は、静脈内、非経口的、皮下、腫瘍内、又は経口的に投与される。
【０１１０】
同一スケジュールで個体に併用療法を投与する場合、ＬＩＦ結合ポリペプチド及びＰＤ−１軸阻害剤は、毎週１回、２週間に１回、３週間に１回、又は４週間に１回投与され得る。ＬＩＦ結合ポリペプチド及びＰＤ−１軸阻害剤は、別々に又は単一製剤として投与され得る。Ｈ５Ｄ８及びＰＤ−１軸阻害剤は、別々に又は単一製剤として投与され得る。
【０１１１】
異なるスケジュールで個体に併用療法を投与する場合、ＬＩＦ結合ポリペプチド及びＰＤ−１軸阻害剤は交互に投与され得る。特定の実施形態では、ＰＤ−１軸阻害剤は、ＬＩＦ結合（ｂｉｄｉｎｇ）ポリペプチドの投与前に、１回又は複数回個体に投与され得る。ＬＩＦ結合ポリペプチドは、ＰＤ−１軸阻害剤の投与の１日、２日、３日、４日、５日、又は６日以内に投与され得る。ＬＩＦ結合ポリペプチドは、ＰＤ−１軸阻害剤の投与の１週間、２週間、３週間、又は４週間以内に投与され得る。ｈ５Ｄ８抗体は、ＰＤ−１軸阻害剤の投与の１日、２日、３日、４日、５日、又は６日以内に投与され得る。ｈ５Ｄ８抗体は、ＰＤ−１軸阻害剤の投与の１週間、２週間、３週間、又は４週間以内に投与され得る。
【０１１２】
ＬＩＦ結合（ｂｉｄｉｎｇ）ポリペプチドは、ＰＤ−１軸阻害剤の投与の前に、個体に１回又は複数回投与され得る。特定の実施形態では、ＰＤ−１軸阻害剤は、ＬＩＦ結合ポリペプチドの投与の１日、２日、３日、４日、５日、又は６日以内に投与され得る。特定の実施形態では、ＰＤ−１軸阻害剤は、ＬＩＦ結合ポリペプチドの投与の１週間、２週間、３週間、又は４週間以内に投与され得る。特定の実施形態では、ＰＤ−１軸阻害剤は、ｈ５Ｄ８抗体の投与の１日、２日、３日、４日、５日、又は６日以内に投与され得る。特定の実施形態では、ＰＤ−１軸阻害剤は、ｈ５Ｄ８抗体の投与の１週間、２週間、３週間、又は４週間以内に投与され得る。
【０１１３】
特定の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、毎週１回個体に投与され得て、ＰＤ１−軸阻害剤は毎週、２週間毎、３週間毎又は４週間毎に個体に投与され得る。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、２週間に１回個体に投与され得て、ＰＤ１−軸阻害剤は毎週、２週間毎、３週間毎又は４週間毎に個体に投与され得る。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは３週間に１回個体に投与され得て、ＰＤ１−軸阻害剤は毎週、２週間毎、３週間毎又は４週間毎に個体に投与され得る。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは４週間に１回個体に投与され得て、ＰＤ１−軸阻害剤は毎週、２週間毎、３週間毎又は４週間毎に個体に投与され得る。特定の実施形態では、ＰＤ１−軸阻害剤は、毎週１回個体に投与され得て、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、毎週、２週間毎、３週間毎又は４週間毎に個体に投与され得る。特定の実施形態では、ＰＤ１−軸阻害剤は、２週間に１回個体に投与され得て（ｅ  ｃａｎ）、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、毎週、２週間毎、３週間毎又は４週間毎に個体に投与され得る。特定の実施形態では、ＰＤ１−軸阻害剤は、３週間に１回個体に投与され得て、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、毎週、２週間毎、３週間毎又は４週間毎に個体に投与され得る。特定の実施形態では、ＰＤ１−軸阻害剤は、４週間に１回個体に投与され得て、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、毎週、２週間毎、３週間毎又は４週間毎に個体に投与され得る。特定の実施形態では、ｈ５Ｄ８は、ＰＤ−１軸阻害剤の投与前に、１回又は複数回個体に投与され得る。特定の実施形態では、ｈ５Ｄ８は、毎週１回個体に投与され得て、ＰＤ１−軸阻害剤は毎週、２週間毎、３週間毎又は４週間毎に個体に投与され得る。特定の実施形態では、ｈ５Ｄ８は、２週間に１回個体に投与され得て、ＰＤ１−軸阻害剤は毎週、２週間毎、３週間毎又は４週間毎に個体に投与され得る。特定の実施形態では、ｈ５Ｄ８は、３週間に１回個体に投与され得て、ＰＤ１−軸阻害剤は毎週、２週間毎、３週間毎又は４週間毎に個体に投与され得る。特定の実施形態では、ｈ５Ｄ８は、４週間に１回個体に投与され得て、ＰＤ１−軸阻害剤は毎週、２週間毎、３週間毎又は４週間毎に個体に投与され得る。
【０１１４】
本開示による併用療法は、活性化成分（例えば、ＬＩＦ結合ポリペプチド及びＰＤ−１阻害剤）の片方又は双方が、それだけでは有効ではないが、併用療法の一部として投与された場合に有効である、組み合わせを含んでもよい。特定の実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、単剤療法では有効ではないが、ＬＩＦ結合ポリペプチドとの組み合わせで有効なレベルで投与される。特定の実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、単剤療法では有効ではないが、ｈ５Ｄ８抗体との組み合わせで有効なレベルで投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチドは、単剤療法では有効ではないが、ＰＤ−１阻害剤との組み合わせで有効なレベルで投与される。特定の実施形態では、ｈ５Ｄ８は、単剤療法では有効ではないが、ＰＤ−１阻害剤との組み合わせで有効なレベルで投与される。特定の実施形態では、ＬＩＦ結合ポリペプチド及びＰＤ−１阻害剤の双方が、単剤療法では有効ではないが、組み合わせで有効なレベルで投与される。特定の実施形態特定の実施形態では、ｈ５Ｄ８及びＰＤ−１阻害剤の双方が、単剤療法では有効ではないが、組み合わせで有効なレベルで投与される。
【０１１５】
治療適応症
特定の実施形態では、本明細書で開示されるのは、がん又は腫瘍の治療のために有用な方法及び組成物である。特定の実施形態では、がんは、乳房、心臓、肺、小腸、結腸、脾臓、腎臓、膀胱、頭部、頸部、卵巣、前立腺、脳、膵臓、皮膚、骨、骨髄、血液、胸腺、子宮、精巣、及び肝臓の腫瘍を含む。特定の実施形態では、本発明の抗体で治療され得る腫瘍は腺腫、腺がん、血管肉腫（ａｎｇｉｏｓａｒｃｏｍａ）、星状細胞腫、上皮性がん、胚細胞腫、神経膠芽腫、神経膠腫、血管内皮腫、血管肉腫（ｈｅｍａｎｇｉｏｓａｒｃｏｍａ）、血腫、肝芽細胞腫、白血病、リンパ腫、髄芽腫、黒色腫、神経芽腫、骨肉腫、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、肉腫奇形腫を含む。特定の実施形態では、腫瘍／がんは、末端黒子型黒色腫、日光角化症、腺がん、腺様嚢胞がん、腺腫、腺肉腫、腺扁平上皮がん、アストロサイト腫瘍、バルトリン腺がん、基底細胞がん、気管支腺がん、毛細血管カルチノイド、がん腫、がん肉腫、胆管がん、軟骨肉腫、嚢胞腺腫、内胚葉洞腫瘍、子宮内膜過形成、子宮内膜間質肉腫、類内膜腺がん、上衣肉腫、ユーイング（Ｓｗｉｎｇ’ｓ）肉腫、限局性結節性過形成、ガストリノーマ（ｇａｓｔｒｏｎｏｍａ）、生殖系列腫瘍、神経膠芽腫、グルカゴノーマ、血管芽細胞腫、血管内皮腫、血管腫、肝腺腫、肝臓腺腫症、肝細胞がん、インスリン炎（ｉｎｓｕｌｉｎｉｔｅ）、上皮内新生物、上皮内扁平上皮細胞新生物、浸潤性扁平上皮細胞がん、大細胞がん、脂肪肉腫、肺がん、リンパ芽球性白血病、リンパ球性白血病、平滑筋肉腫、黒色腫、悪性黒色腫、悪性中皮腫、神経鞘腫瘍、髄芽腫、髄上皮腫、中皮腫、粘液性類表皮腫、骨髄性白血病、神経芽腫、神経上皮腺がん、結節性黒色腫、骨肉腫、卵巣がん、乳頭状漿液性腺がん、下垂体腫瘍、プラズマ細胞腫、偽肉腫、前立腺がん、肺芽球腫、腎細胞がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、肉腫、漿液がん、扁平上皮細胞がん、小細胞がん、軟部組織がん、ソマトスタチン分泌腫瘍、扁平上皮がん、扁平上皮細胞がん、未分化がん、ぶどう膜黒色腫、疣状がん、膣／外陰がん、ＶＩＰ産生腫瘍（ＶＩＰｐｏｍａ）、及びウィルムス（Ｗｉｌｍ’ｓ）腫瘍の群から選択される。血管肉腫特定の実施形態では、腫瘍／がんは、脳がん、頭頸部がん、結腸直腸がん、急性骨髄性白血病、プレＢ細胞急性リンパ芽球性白血病、膀胱がん、好ましくはグレードＩＩ、ＩＩＩ又はＩＶの星状細胞腫である星状細胞腫、神経膠芽腫、多形性膠芽腫、小細胞がん、及び好ましくは非小細胞肺がんである非小細胞がん、肺腺がん、転移性黒色腫、アンドロゲン非依存性転移性前立腺がん、アンドロゲン依存性転移性前立腺がん、前立腺腺がん、及び好ましくは乳管がんである乳がん（ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ）、及び／又は乳がん（ｂｒｅａｓｔ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）を含む、１つ又は複数の本発明の抗体で治療される。特定の実施形態では、本開示の抗体で治療されるがんは、膠芽腫を含む。特定の実施形態では、本開示の１つ又は複数の抗体で治療されるがんは、膵臓がんを含む。特定の実施形態では、本開示の１つ又は複数の抗体で治療されるがんは、卵巣がんを含む。特定の実施形態では、本開示の１つ又は複数の抗体で治療されるがんは、肺がんを含む。特定の実施��態では、本開示の１つ又は複数の抗体で治療されるがんは、前立腺がんを含む。特定の実施形態では、本開示の１つ又は複数の抗体で治療されるがんは、結腸がんを含む。特定の実施形態では、治療されるがんは、神経膠芽腫、膵臓がん、卵巣がん、結腸がん、前立腺がん、又は肺がんを含む。特定の実施形態では、がんはその他の治療に対して不応性である。特定の実施形態では、治療されるがんは再発性である。特定の実施形態では、がんは、再発性／難治性の神経膠芽腫、膵臓がん、卵巣がん、結腸がん、前立腺がん、又は肺がんである。特定の実施形態では、がんは、進行性固形腫瘍、神経膠芽腫、胃がん、皮膚がん、前立腺がん、膵臓がん、乳がん、精巣がん、甲状腺がん、頭頸部がん、肝臓がん、腎臓がん、食道がん、卵巣がん、結腸がん、肺がん、リンパ腫、又は軟部組織がんを含む。特定の実施形態では、がんは、非小細胞肺がん、上皮性卵巣がん、又は膵腺がんを含む。特定の実施形態では、がんは、進行性固形腫瘍を含む。特定の実施形態では、個体は、単剤療法としてのＬＩＦ結合抗体による以前の治療に対して不応性である。特定の実施形態では、個体は、単剤療法としてのＰＤ−１軸阻害剤による以前の治療に対して不応性である。
【０１１６】
薬学的に許容可能な賦形剤、担体、及び希釈剤
特定の実施形態では、本開示のＰＤ−１軸阻害剤及びＬＩＦ結合ポリペプチドは、医薬組成物の構成成分である。特定の実施形態では、本開示のＰＤ−１軸阻害剤及びＬＩＦ結合ポリペプチドは、同一医薬組成物の構成成分である。特定の実施形態では、医薬組成物は、生理学的に適切な塩濃度（例えば、ＮａＣｌ）を含む。特定の実施形態では、医薬組成物は、約０．６％〜１．２％のＮａＣｌを含む。特定の実施形態では、医薬組成物は、約０．７％〜１．１％のＮａＣｌを含む。特定の実施形態では、医薬組成物は、約０．８％〜１．０％のＮａＣｌを含む。特定の実施形態では、医薬組成物は、約（ｂｅｔｗｅｅｎ  ａｂｏｕｔ）５％のデキストロースを含む。特定の実施形態では、医薬組成物は、例えば、酢酸、クエン酸、ヒスチジン、コハク酸、リン酸、炭酸水素塩、及びヒドロキシメチルアミノメタン（トリス）などの緩衝液；例えば、ポリソルベート８０（ツイーン８０）、ポリソルベート２０（ツイーン２０）、ポリソルベート、及びポロクサマー１８８などの界面活性剤；例えば、グルコース、デキストロース、マンノース、マンニトール、ソルビトール、スクロース、トレハロース、及びデキストラン４０などのポリオール／二糖／多糖；例えば、ヒスチジン、グリシン又はアルギニンなどのアミノ酸；例えば、アスコルビン酸、メチオニンなどの抗酸化剤；及び例えば、ＥＤＴＡ又はＥＧＴＡなどのキレート化剤の１つ又は複数をさらに含む。
【０１１７】
特定の実施形態では、本開示のＰＤ−１軸阻害剤、ＬＩＦ結合ポリペプチド、又はＰＤ−１軸阻害剤とＬＩＦ結合ポリペプチドの双方が、滅菌溶液中に懸濁されて投与される。特定の実施形態では、ＰＤ−１軸阻害剤及びＬＩＦ結合ポリペプチドが、同一溶液から投与される。特定の実施形態では、溶液は生理学的に適切な塩濃度（例えば、ＮａＣｌ）を含む。特定の実施形態では、溶液は、約０．６％〜１．２％のＮａＣｌを含む。特定の実施形態では、溶液は、約０．７％〜１．１％のＮａＣｌを含む。特定の実施形態では、溶液は、約０．８％〜１．０％のＮａＣｌを含む。特定の実施形態では、より高濃度の抗体ストック溶液が、約０．９％のＮａＣｌ中で希釈されてもよい。特定の実施形態では、溶液は、約０．９％のＮａＣｌを含む。特定の実施形態では、溶液は、例えば、酢酸、クエン酸、ヒスチジン、コハク酸、リン酸、炭酸水素塩、及びヒドロキシメチルアミノメタン（トリス）などの緩衝液；例えば、ポリソルベート８０（ツイーン８０）、ポリソルベート２０（ツイーン２０）、ポリソルベート、及びポロクサマー１８８などの界面活性剤；例えば、グルコース、デキストロース、マンノース、マンニトール、ソルビトール、スクロース、トレハロース、及びデキストラン４０、及びそれらの組み合わせなどのポリオール／二糖／多糖；例えば、ヒスチジン、グリシン又はアルギニンなどのアミノ酸；例えば、アスコルビン酸、メチオニン、及びそれらの組み合わせなどの抗酸化剤；及び例えば、ＥＤＴＡ又はＥＧＴＡなどのキレート化剤の１つ又は複数をさらに含む。特定の実施形態では、本開示のＰＤ−１軸阻害剤及びＬＩＦ結合ポリペプチドは、投与前に出荷／保存され、凍結乾燥され、再構成される。特定の実施形態では、凍結乾燥抗体製剤は、マンニトール、ソルビトール、スクロース、トレハロース、及びデキストラン４０、及びそれらの組み合わせを含む。特定の実施形態では、本開示の抗ＬＩＦ抗体は、使用の治療現場で希釈される濃縮原液として、出荷され保存され得る。特定の実施形態では、ストック溶液は、約２５ｍＭのヒスチジン、約６％のスクロース、約０．０１％のポリソルベート、及び約２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＩＦ抗体を含む。特定の実施形態では、溶液のｐＨは約６．０である。特定の実施形態では、個体に投与される形態は、約２５ｍＭのヒスチジン、約６％のスクロース、約０．０１％のポリソルベート８０、及び約２０ｍｇ／ｍＬのｈ５Ｄ８抗体を含む水溶液である。特定の実施形態では、溶液のｐＨは約６．０である。
【０１１８】
特定の実施形態では、本開示のＰＤ−１軸阻害剤及びＬＩＦ結合ポリペプチドは、滅菌溶液に懸濁されて投与される。特定の実施形態では、ＰＤ−１軸阻害剤及びＬＩＦ結合ポリペプチドが、同一溶液から投与される。特定の実施形態では、ＰＤ−１軸阻害剤及びＬＩＦ結合ポリペプチドは、別個の溶液から投与される。特定の実施形態では、溶液は生理学的に適切な塩濃度（例えば、ＮａＣｌ）を含む。特定の実施形態では、溶液は、約０．６％〜１．２％のＮａＣｌを含む。特定の実施形態では、溶液は、約０．７％〜１．１％のＮａＣｌを含む。特定の実施形態では、溶液は、約０．８％〜１．０％のＮａＣｌを含む。特定の実施形態では、より高濃度の抗体ストック溶液が、約０．９％のＮａＣｌ中で希釈されてもよい。特定の実施形態では、溶液は、約０．９％のＮａＣｌを含む。特定の実施形態では、溶液は、例えば、酢酸、クエン酸、ヒスチジン、コハク酸、リン酸、炭酸水素塩、及びヒドロキシメチルアミノメタン（トリス）などの緩衝液；例えば、ポリソルベート８０（ツイーン８０）、ポリソルベート２０（ツイーン２０）、ポリソルベート、及びポロクサマー１８８などの界面活性剤；例えば、グルコース、デキストロース、マンノース、マンニトール、ソルビトール、スクロース、トレハロース、及びデキストラン４０、及びそれらの組み合わせなどのポリオール／二糖／多糖；例えば、ヒスチジン、グリシン又はアルギニンなどのアミノ酸；例えば、アスコルビン酸、メチオニンなどの抗酸化剤；及び例えば、ＥＤＴＡ又はＥＧＴＡなどのキレート化剤の１つ又は複数をさらに含む。特定の実施形態では、本開示のＰＤ−１軸阻害剤及びＬＩＦ結合ポリペプチドは、投与前に出荷／保存され、凍結乾燥され、再構成される。特定の実施形態では、凍結乾燥抗体製剤は、マンニトール、ソルビトール、スクロース、トレハロース、及びデキストラン４０、及びそれらの組み合わせを含む。特定の実施形態では、本開示の抗ＬＩＦ抗体は、使用の治療現場で希釈される濃縮原液として、出荷され保存され得る。特定の実施形態では、ストック溶液は、約２５ｍＭのヒスチジン、約６％のスクロース、約０．０１％のポリソルベート、及び約２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＩＦ抗体を含む。特定の実施形態では、溶液のｐＨは約６．０である。特定の実施形態では、個体に投与される形態は、約２５ｍＭのヒスチジン、約６％のスクロース、約０．０１％のポリソルベート８０、及び約２０ｍｇ／ｍＬのｈ５Ｄ８抗体を含む水溶液である。特定の実施形態では、溶液のｐＨは約６．０である。
【０１１９】
また、本明細書には、本明細書に記載される併用療法を実施するためのキットも記載される。特定の実施形態では、キットは、ＬＩＦ結合ポリペプチド及びＰＤ−１軸阻害剤を含む。特定の実施形態では、キットは、ｈ５Ｄ８及びＰＤ−１軸阻害剤を含む。構成成分の片方又は双方は、凍結乾燥又は液体のどちらかの形態で、ガラス又はその他の適切な材料のバイアル内に含有され得る。
【０１２０】
本明細書に記載されるｈ５Ｄ８抗体は、約２０ｍｇ／ｍＬ濃度のｈ５Ｄ８抗体、約２５ｍＭのヒスチジン、約６％のスクロース、及び約０．０１％のポリソルベート８０を含む滅菌溶液が充填されたバイアルを含む、キットに含まれ得る。バイアルは、単回使用ガラスバイアルであり得る。単回使用ガラスバイアルは、約１０ミリリットルの約２０ｍｇ／ｍＬ濃度のｈ５Ｄ８抗体、約２５ｍＭのヒスチジン、約６％のスクロース、及び約０．０１％のポリソルベート８０で充填され得る。特定の実施形態では、溶液のｐＨは約６．０である。本明細書に記載されるｈ５Ｄ８抗体は、適切量の無菌希釈剤で再構成されると約２０ｍｇ／ｍＬ濃度のｈ５Ｄ８抗体をもたらすｈ５Ｄ８抗体、約２５ｍＭのヒスチジン、約６％のスクロース、及び約０．０１％のポリソルベート８０を含む凍結乾燥組成物で充填されたバイアルを含む、キットに含まれ得る。バイアルは、単回使用ガラスバイアルであり得る。
【０１２１】
本明細書に記載される抗体は、最終的に患者に送達される用量レベルに応じて、異なる様式での投与のために投与され又は調製され又は希釈され得る。これは、例えば、粒子状物質を減少させるために、例えば、患者の投与量の薬剤学的性質を最適化するために行い得る。Ｈ５Ｄ８は、患者に送達される最終的な用量に関係なく、約８ｍｇ／ｍＬの濃度で調製され得る。特定の実施形態では、ｈ５Ｄ８は、約１０、９、８、７、６、５又は４ｍｇ／ｍＬ以下のレベルで調製され得る。特定の実施形態では、ｈ５Ｄ８は、約１、２、３、４、５、６、又は７ｍｇ／ｍＬを超えるレベルで調製され得る。
【実施例】
【０１２２】
以下の例示的な実施例は、本明細書に記載される組成物及び方法の実施形態を代表するものであり、いかようにも制限を意図するものではない。
【０１２３】
実施例１−ＬＩＦに特異的なラット抗体の生成
ヒトＬＩＦのアミノ酸２３〜２０２をコード化するｃＤＮＡを発現プラスミド（Ａｌｄｅｖｒｏｎ  ＧｍｂＨ，Ｆｒｅｉｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）にクローニングした。粒子衝撃のためのハンドヘルド装置（「遺伝子銃」）を使用して、ＤＮＡ被覆された金粒子の皮内適用によって、実験用ラット（Ｗｉｓｔａｒ）のグループを免疫化した。一過性に形質移入されたＨＥＫ細胞の細胞表面発現は、ＬＩＦタンパク質のＮ末端に付加されたタグを認識する抗タグ抗体を使用して確認した。一連の免疫化後に血清サンプルを採取し、上記の発現プラスミドで一過性に形質移入されたＨＥＫ細胞について、フローサイトメトリーで試験した。抗体産生細胞を単離し、標準的な手順に従ってマウス骨髄腫細胞（Ａｇ８）と融合させた。上記のようにフローサイトメトリーアッセイでスクリーニングすることによって、ＬＩＦに特異的な抗体を産生するハイブリドーマを同定した。ＲＮＡ保護剤（ＲＮＡｌａｔｅｒ、カタログ番号ＡＭ７０２０、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製）を使用して、陽性ハイブリドーマ細胞の細胞ペレットを調製し、抗体の可変ドメインの配列決定のためにさらに処理した。
【０１２４】
実施例２−ＬＩＦに特異的なマウス抗体の生成
ヒトＬＩＦのアミノ酸２３〜２０２をコード化するｃＤＮＡを発現プラスミド（Ａｌｄｅｖｒｏｎ  ＧｍｂＨ，Ｆｒｅｉｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）にクローニングした。粒子衝撃のためのハンドヘルド装置（「遺伝子銃」）を使用して、ＤＮＡ被覆された金粒子の皮内適用によって、実験用マウス（ＮＭＲＩ）のグループを免疫化した。一過性に形質移入されたＨＥＫ細胞の細胞表面発現は、ＬＩＦタンパク質のＮ末端に付加されたタグを認識する抗タグ抗体を使用して確認した。一連の免疫化後に血清サンプルを採取し、上記の発現プラスミドで一過性に形質移入されたＨＥＫ細胞について、フローサイトメトリーで試験した。抗体産生細胞を単離し、標準的な手順に従ってマウス骨髄腫細胞（Ａｇ８）と融合させた。上記のようにフローサイトメトリーアッセイでスクリーニングすることによって、ＬＩＦに特異的な抗体を産生するハイブリドーマを同定した。ＲＮＡ保護剤（ＲＮＡｌａｔｅｒ、カタログ番号ＡＭ７０２０、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製）を使用して、陽性ハイブリドーマ細胞の細胞ペレットを調製し、抗体の可変ドメインの配列決定のためにさらに処理した。
【０１２５】
実施例３−ＬＩＦに特異的なラット抗体のヒト化
引き続くヒト化のために、ラット免疫（５Ｄ８）から１つのクローンを選択した。標準的なＣＤＲグラフト化法を使用して、ヒト化を実施した。重鎖及び軽鎖領域は、標準的な分子クローニング技術を用いて５Ｄ８ハイブリドーマからクローニングし、サンガー法によって配列決定した。次に、ヒト重鎖及び軽鎖可変配列に対してＢＬＡＳＴ検索を実施し、それぞれから４つの配列をヒト化のアクセプターフレームワークとして選択した。これらのアクセプターフレームワークを脱免疫化し、Ｔ細胞応答エピトープを除去した。４つの異なる重鎖アクセプターフレームワーク（Ｈ１〜Ｈ４）及び４つの異なる軽鎖フレームワーク（Ｌ１〜Ｌ４）に、５Ｄ８の重鎖及び軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３をクローニングした。次に、ＣＨＯ−Ｓ細胞（Ｓｅｌｅｘｉｓ）での発現；ＬＩＦ誘導ＳＴＡＴ３リン酸化の阻害；及び表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）による結合親和性について、１６個の異なる抗体を全て検査した。これらの実験は、表１に要約される。
【０１２６】
【表１】
2021521274.tif 000003
【０１２７】
１０日間の培養後、流加培養内のエルレンマイアーフラスコ（３×１０５個の細胞／ｍＬの播種、２００ｍＬの培養容積）で、形質移入された細胞の発現能を比較した。この時点で細胞を採取し、分泌された抗体をプロテインＡカラムを使用して精製し、次に定量化した。Ｈ３重鎖（配列番号４３）を使用したものを除いて、全てのヒト化抗体が発現された。Ｈ２及びＬ２可変領域は、その他の可変領域（配列番号４２及び配列番号４６）と比較して、良好に機能した。
【０１２８】
チロシン７０５におけるＬＩＦ誘導ＳＴＡＴ３リン酸化の阻害は、ウエスタンブロットによって判定した。６ウェルプレートに１０万個の細胞／ウェルの密度で、Ｕ２５１神経膠腫細胞を播種した。細胞は、任意の処理の前に２４時間完全培地中で培養し、その後、細胞を８時間血清飢餓状態にした。その後、１０μｇ／ｍｌの濃度で、示された抗体を有する細胞を一晩培養した。処理後、ホスファターゼ及びプロテアーゼ阻害剤を含有する放射免疫沈降アッセイ（ＲＩＰＡ）溶解緩衝液中でタンパク質を得て、定量化し（ＢＣＡタンパク質アッセイ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、ウエスタンブロットで使用した。ウエスタンブロットのために、５％の脱脂乾燥乳−ＴＢＳＴ中で膜を１時間ブロックし、一次抗体（ｐ−ＳＴＡＴ３、カタログ番号９１４５、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ；又はＳＴＡＴ３、カタログ番号９１３２、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）と共に一晩、又は３０分間（β−アクチンペルオキシダーゼ、カタログ番号Ａ３８５４、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）インキュベートした。次に、膜をＴＢＳＴで洗浄し、二次培養物と共にインキュベートし、再度洗浄した。タンパク質は、化学発光（ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ、カタログ番号３４０７６、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって検出した。これらの結果は図１に示される。ｐＳＴＡＴ３バンドがより濃いほど、阻害が少ない。５Ｄ８（非ヒト化ラット）、Ａ（Ｈ０Ｌ０）、Ｃ（Ｈ１Ｌ２）、Ｄ（Ｈ１Ｌ３）、及びＧ（Ｈ２Ｌ２）と標識されるレーンで、阻害が高く；Ｈ（Ｈ２Ｌ３）、Ｏ（Ｈ４Ｌ２）、及びＰ（Ｈ４Ｌ３）では、阻害は中程度であり；Ｂ（Ｈ１Ｌ１）、Ｅ（Ｈ１Ｌ４）、Ｆ（Ｈ２Ｌ１）、Ｉ（Ｈ２Ｌ４）、Ｎ（Ｈ４Ｌ１）、及びＱ（Ｈ４Ｌ４）では、阻害は不在であった。
【０１２９】
ＬＩＦ誘導ＳＴＡＴ３リン酸化の阻害を示した抗体は、次にＳＰＲで解析して結合親和性を判定した。簡潔に述べると、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）２００２装置を使用して、アミン結合したｈＬＩＦに対する、Ａ（Ｈ０Ｌ０）、Ｃ（Ｈ１Ｌ２）、Ｄ（Ｈ１Ｌ３）、及びＧ（Ｈ２Ｌ２）、Ｈ（Ｈ２Ｌ３）及びＯ（Ｈ４Ｌ２）ヒト化抗体の結合を観察した。運動定数及び親和性は、６つのリガンド濃度で全てのセンサーチップ表面上に生成された、全てのセンサーグラムの数学的センサーグラムフィッティング（ラングミュア相互作用モデル［Ａ＋Ｂ＝ＡＢ］）によって判定した。各濃度の最良適合曲線（最小カイ二乗）を用いて、運動定数及び親和性を計算した。表１を参照されたい。
【０１３０】
実験セットアップでは、分析物として二価の抗体を使用したので、ヒト化抗体の標的結合機序へのより詳細な洞察を得るために、最良適合センサーグラムもまた、二価分析物のフィッティングモデル［Ａ＋Ｂ＝ＡＢ；ＡＢ＋Ｂ＝ＡＢ２］に基づいて解析した。二価フィッティングモデルを用いた動的センサーグラム解析［Ａ＋Ｂ＝ＡＢ；ＡＢ＋Ｂ＝ＡＢ２］で、ｍＡｂサンプルの相対親和性ランキングを確認した。
【０１３１】
結合親和性が高く、バッチ培養からの収率が高いことから、より詳細な解析のために、Ｈ２及びＬ２を含むヒト化５Ｄ８を選択した。
【０１３２】
実施例４−クローン５Ｄ８のヒト化はＬＩＦへの結合を改善する
さらなる解析のために、Ｈ２Ｌ２クローン（ｈ５Ｄ８）を選択し、親ラット５Ｄ８（ｒ５Ｄ８）及びマウスクローン１Ｂ２への、ＳＰＲによる結合を比較した。１Ｂ２抗体は、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ（ａｎｄ）  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ（ＤＳＭ  ＡＣＣ３０５４）に寄託された、以前に開示されたマウス抗ＬＩＦ抗体であり、比較目的で含めた。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）及びＨＥＫ−２９３細胞からそれぞれ精製された、組換えヒトＬＩＦをリガンドとして使用した。ヒト又は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）起源のＬＩＦをアミンカップリング化学作用を用いてＢｉａｃｏｒｅ光学的センサーチップの表面に共有結合させ、結合親和性を運動定数から計算した。
【０１３３】
材料及び方法
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）からのヒトＬＩＦはＭｉｌｌｉｐｏｒｅから得た、参照ＬＩＦ１０１０；ＨＥＫ−２９３細胞からのヒトＬＩＦはＡＣＲＯ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓから得た、参照ＬＩＦ−Ｈ５２１ｂ。ＬＩＦは、Ｂｉａｃｏｒｅアミンカップリングキット（ＢＲ−１０００−５０；ＧＥ−Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｕｐｐｓａｌａ）を使用して、センサーチップに結合させた。サンプルは、ＣＭ５光学センサーチップ（ＢＲ−１０００−１２；ＧＥ−Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｕｐｐｓａｌａ）を使用して、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）２００２機器上で試験した。Ｂｉａｃｏｒｅ  ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液を装置の稼働中に使用した（ＢＲ−１００１−８８；ＧＥ−Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｕｐｐｓａｌａ）。ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ４．１ソフトウェアを使用して、結合センサーグラムの動態解析を実施した。運動定数及び親和性は、分析物濃度を上げながら全てのセンサーチップ表面上に生成された、全てのセンサーグラムの数学的センサーグラムフィッティング（ラングミュア相互作用モデル［Ａ＋Ｂ＝ＡＢ］）によって判定した。センサーグラムはまた、判定されたラングミュア抗体−標的親和性に対する二価の寄与（例えば、結合力の寄与）の推定値を生成するために、成分分析を含めた、二価分析物センサーグラムフィッティングモデル［Ａ＋Ｂ＝ＡＢ；ＡＢ＋Ｂ＝ＡＢ２］に基づいて解析した。各濃度の最良適合曲線（最小カイ二乗）を用いて、運動定数及び親和性を計算した。これらの親和性実験の要約は、表２（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）で産生されたヒトＬＩＦ）及び表３（ＨＥＫ２９３細胞で産生されたヒトＬＩＦ）に示される。
【０１３４】
【表２】
2021521274.tif 000004
【０１３５】
【表３】
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【０１３６】
この一組の実験からのラングミュア１：１センサーグラムフィッティングモデルは、ヒト化５Ｄ８（ｈ５Ｄ８）抗体が、マウス１Ｂ２及びｒ５Ｄ８よりもヒトＬＩＦに対して約１０〜２５倍高い親和性で結合することを示す。
【０１３７】
次に、ｈ５Ｄ８抗体を複数の生物種のＬＩＦに対してＳＰＲで試験した。ｈ５Ｄ８ＳＰＲ結合動態は、異なる生物種及び発現系に由来する組換えＬＩＦ分析物に対して実施した：ヒトＬＩＦ（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、ＨＥＫ２９３細胞）；マウスＬＩＦ（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、ＣＨＯ細胞）；ラットＬＩＦ（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ））；カニクイザルＬＩＦ（酵母、ＨＥＫ２９３細胞）。
【０１３８】
材料及び方法
ｈ５Ｄ８抗体は、非共有結合のＦｃ特異的捕捉によって、センサーチップ表面に固定化した。組換えＩｇ（Ｆｃ）特異的Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）プロテインＡ／Ｇを捕捉剤として使用し、ＬＩＦ分析物に対する抗ＬＩＦ抗体の立体的に一様で可撓性の提示を可能にした。ＬＩＦ分析物の起源は、次のようである：ヒトＬＩＦ（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）由来；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  ＬＩＦ１０５０）；ヒトＬＩＦ（ＨＥＫ由来、ＡＣＲＯ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ＬＩＦ−Ｈ５２１）；マウスＬＩＦ（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）；ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＮＦ−ＬＩＦ２０１０）；マウスＬＩＦ（ＣＨＯから；Ｒｅｐｒｏｋｉｎｅカタログ番号ＲＣＰ０９０５６）；サルＬＩＦ（酵母Ｋｉｎｇｆｉｓｈｅｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈカタログ番号ＲＰ１０７４Ｙ）；ＨＥＫ−２９３細胞において産生されたサルＬＩＦ。全体的に、ｈ５Ｄ８はいくつかの生物種のＬＩＦとの結合を示した。この親和性実験の概要は、表４に示される。
【０１３９】
【表４】
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【０１４０】
実施例５−ヒト化クローン５Ｄ８は生体外でＳＴＡＴ３のＬＩＦ誘導リン酸化を阻害する
ｈ５Ｄ８の生物学的活性を判定するために、ヒト化バージョン及び親バージョンをＬＩＦ活性化の細胞培養モデルで試験した。図２Ａは、神経膠腫細胞株をヒトＬＩＦと共にインキュベートした際に、ヒト化クローンがＳＴＡＴ３リン酸化（Ｔｙｒ  ７０５）の阻害の増加を提示したことを示す。図２Ｂは、図２Ａと同一設定で、ｈ５Ｄ８の抗体希釈度を変えて繰り返した実験を示す。
【０１４１】
材料及び方法
６ウェルプレートに１５万個の細胞／ウェルの密度で、Ｕ２５１神経膠腫細胞を播種した。細胞は、任意の処理の前に、完全培地中で２４時間培養した。その後、細胞を１０μｇ／ｍｌの濃度でｒ５Ｄ８抗ＬＩＦ抗体又はｈ５Ｄ８抗ＬＩＦ抗体で一晩処理し、又は処理しなかった（対照細胞）。
【０１４２】
処理後、ホスファターゼ及びプロテアーゼ阻害剤を含有する放射免疫沈降アッセイ（ＲＩＰＡ）溶解緩衝液中でタンパク質を得て、定量化し（ＢＣＡタンパク質アッセイ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、ウエスタンブロットで使用した。ウエスタンブロットのために、５％の脱脂乳−ＴＢＳＴ中で膜を１時間ブロックし、一次抗体（ｐ−ＳＴＡＴ３、カタログ番号９１４５、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ；又はＳＴＡＴ３、カタログ番号９１３２、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）と共に一晩、又は３０分間（β−アクチンペルオキシダーゼ、カタログ番号Ａ３８５４、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）インキュベートした。次に、膜をＴＢＳＴで洗浄し、必要に応じて二次抗体と共にインキュベートして、再度洗浄した。タンパク質は、化学発光（ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ、カタログ番号３４０７６、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって検出した。
【０１４３】
実施例６−Ｕ−２５１細胞におけるＬＩＦの内因性レベルに対するｈ５Ｄ８抗体処理のＩＣ５０値。
Ｕ−２５１細胞では、血清飢餓条件下におけるｈ５Ｄ８の生物学的阻害のためのＩＣ５０が、わずか４９０ピコモル濃度（図３Ａ）であることもまた解明された。代表的な結果、図３Ａ及び３Ｂ及び表５を参照されたい。
【０１４４】
【表５】
2021521274.tif 000007
【０１４５】
材料及び方法
Ｕ−２５１細胞は、６ｃｍプレート当たり６０万個の細胞（条件当たり）で播種した。細胞は、血清飢餓状態下（０．１％ＦＢＳ）で、対応する濃度のｈ５Ｄ８（滴定）で３７℃で一晩処理した。ｐＳＴＡＴ３の陽性対照として組換えＬＩＦ（Ｒ＆Ｄ、＃７７３４−ＬＦ／ＣＦ）を使用して、３７℃で１．７９ｎＭで１０分間細胞を刺激した。ｐＳＴＡＴ３の陰性対照として、ＪＡＫＩ阻害剤（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、＃４２００９９）を１μＭで、３７℃で３０分間使用した。次に、Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｍｕｌｔｉ−ＳｐｏｔアッセイシステムＴｏｔａｌ  ＳＴＡＴ３（カタログ番号Ｋ１５０ＳＮＤ−２）及びＰｈｏｓｐｈｏ−ＳＴＡＴ３（Ｔｙｒ７０５）（カタログ番号Ｋ１５０ＳＶＤ−２）キットのプロトコルに従って、溶解物のために細胞を氷上で採取し、ＭＳＤ  Ｍｅｓｏ  Ｓｅｃｔｏｒ  Ｓ６００によって、検出可能なタンパク質レベルを測定した。
【０１４６】
実施例７−ヒトＬＩＦに特異的に結合する追加的な（Ａｄｄｉｔｏｎａｌ）抗体
ヒトＬＩＦに特異的に結合するその他のラット抗体クローン（１０Ｇ７及び６Ｂ５）が同定され、それらの結合特性の要約は以下の表６に示され、クローン１Ｂ２が比較の役割を果たす。
【０１４７】
材料及び方法
組換えＬＩＦ標的タンパク質［ヒトＬＩＦ（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ））；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅカタログ番号ＬＩＦ  １０１０及びヒトＬＩＦ（ＨＥＫ２９３細胞）；ＡＣＲＯ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓカタログ番号ＬＩＦ−Ｈ５２１ｂ］を分析物として塗布して、ＣＭ５光学的センサーチップの表面上に固定化された、抗ＬＩＦモノクロナール抗体１Ｂ２、１０Ｇ７、及び６Ｂ５について、動態リアルタイム結合解析を実施した。
【０１４８】
包括的（センサグラムセットの同時フィッティング）並びに単曲線フィッティングアルゴリズムを適用して、ラングミュア１：１結合モデルを用いて、数学的センサーグラムフィッティングによって、運動定数及び親和性を得た。包括的適合の妥当性は、ｋｏｂｓ解析によって評価した。
【０１４９】
【表６】
2021521274.tif 000008
【０１５０】
実施例８−追加的な抗ＬＩＦ抗体は生体外でＳＴＡＴ３のＬＩＦ誘導リン酸化を阻害する
細胞培養におけるＳＴＡＴ３のＬＩＦ誘導リン酸化を阻害する能力について、追加的なクローンを試験した。図４に示されるように、クローン１０Ｇ７及び先に詳述したｒ５Ｄ８は、１Ｂ２クローンと比較して、ＬＩＦ誘導ＳＴＡＴ３リン酸化の高い阻害を示した。抗ＬＩＦポリクローナル抗血清（ｐｏｓ．）を陽性対照として含めた。６Ｂ５は阻害を示さなかったが、これは、この実験で使用された非グリコシル化ＬＩＦに対する６Ｂ５の結合の欠如の可能性によって、説明されてもよい。
【０１５１】
材料及び方法
６ウェルプレートに１５万個の細胞／ウェルの密度で、患者由来の神経膠腫細胞を播種した。細胞は、Ｂ２７（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ペニシリン／ストレプトマイシン及び増殖因子（２０ｎｇ／ｍｌのＥＧＦ及び２０ｎｇ／ｍｌのＦＧＦ−２［ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ］）を補充した、Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）からなるＧＢＭ培地中で、任意の処理の前に２４時間培養した。翌日、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）で産生された組換えＬＩＦによって、又は組換えＬＩＦと示された抗体との混合物によって（１０μｇ／ｍｌの抗体の最終濃度、及び２０ｎｇ／ｍｌの組換えＬＩＦの最終濃度）、細胞を１５分間処理し又は処理しなかった。処理後、ホスファターゼ及びプロテアーゼ阻害剤を含有する放射免疫沈降アッセイ（ＲＩＰＡ）溶解緩衝液中でタンパク質を得て、定量化し（ＢＣＡタンパク質アッセイ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、ウエスタンブロットで使用した。ウエスタンブロットのために、５％の脱脂乳−ＴＢＳＴ中で膜を１時間ブロックし、一次抗体（ｐ−ＳＴＡＴ３、カタログ番号９１４５、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）と共に一晩、又は３０分間（β−アクチン−ペルオキシダーゼ、カタログ番号Ａ３８５４、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）インキュベートした。次に、膜をＴＢＳＴで洗浄し、必要に応じて二次抗体と共にインキュベートして、再度洗浄した。タンパク質は、化学発光（ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ、カタログ番号３４０７６、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって検出した。
【０１５２】
実施例９−ＬＩＦは複数の腫瘍タイプにわたって高度に過剰発現される
免疫組織化学検査を複数のヒト腫瘍タイプ上で実施し、ＬＩＦ発現の程度を判定した。図５に示されるように、ＬＩＦは、多形性膠芽腫（ＧＢＭ）、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、卵巣がん、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、及び膵臓がんで高度に発現される。
【０１５３】
実施例１０−ヒト化クローンｈ５Ｄ８は非小細胞肺がんのマウスモデルにおける腫瘍増殖を阻害する
ヒト化５Ｄ８クローンが生体内でＬＩＦ陽性がんを阻害する能力を判定するために、この抗体を非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）のマウスモデルで試験した。図６Ａは、ビヒクル陰性対照と比較して、この抗体で処置されたマウスの腫瘍増殖の減少を示す。図６Ｂは、ｒ５Ｄ８バージョンを使用して生成されたデータを示す。
【０１５４】
材料及び方法
生体内生物発光をモニターするために、ホタルルシフェラーゼ遺伝子を発現するレンチウイルスで、ＬＩＦレベルの高いマウス非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）細胞株ＫＬＮ２０５を安定的に感染させた。マウスモデルを開発するために、肋間穿刺によって、８週齢の免疫適格性同系ＤＢＡ／２マウスの左肺に、５×１０５個のＫＬＮ２０５非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）細胞を同所性に移植した。対照ビヒクル又は１５ｍｇ／ｋｇ又は３０ｍｇ／ｋｇのｈ５Ｄ８抗体の週２回の腹腔内投与でマウスを処置し、腫瘍増殖を生物発光によってモニターした。生物発光イメージングのために、１〜２％吸入イソフルラン麻酔下で、マウスに０．２ｍＬの１５ｍｇ／ｍＬのＤ−ルシフェリンを腹腔内注射した。生物発光シグナルは、高感度冷却ＣＣＤカメラからなるＩＶＩＳシステム２０００シリーズ（Ｘｅｎｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用してモニターした。Ｌｉｖｉｎｇ  Ｉｍａｇｅソフトウェア（Ｘｅｎｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．）を使用して、イメージングデータをグリッド化し、各ボックス化された領域の全生物発光シグナルを統合した。データは、関心領域（ＲＯＩ）の全光子束放出量（光子／秒）を用いて解析した。結果は、ｈ５Ｄ８抗体による処置が、腫瘍退縮を促進することを実証する。データは、平均±ＳＥＭとして提示される。
【０１５５】
実施例１１−ｈ５Ｄ８は多形性膠芽腫のマウスモデルにおける腫瘍増殖を阻害する
ルシフェラーゼ発現ヒト細胞株Ｕ２５１を使用する同所性ＧＢＭ腫瘍モデルにおいて、ｒ５Ｄ８は、３００μｇのｒ５Ｄ８及びｈ５Ｄ８の腹腔内（ＩＰ）注射を週２回投与されたマウスで、腫瘍体積を有意に減少させた。この研究の結果は、図７Ａに示される（処置後２６日目の定量化）。この実験はまた、２００μｇ又は３００μｇで処置したヒト化ｈ５Ｄ８マウスを使用して実施され、７日間の処置後に統計的に有意な腫瘍の減少が示された。
【０１５６】
材料及び方法
ルシフェラーゼを安定して発現するＵ２５１細胞を採取してＰＢＳで洗浄し、４００ｇで５分間遠心分離してＰＢＳに再懸濁し、自動細胞計数器（Ｃｏｕｎｔｅｓｓ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で計数した。細胞を氷上に保ち、最適生存率を維持した。マウスにケタミン（Ｋｅｔｏｌａｒ５０（登録商標））／キシラシン（Ｒｏｍｐｕｎ（登録商標））を腹腔内投与して（それぞれ７５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ）麻酔した。各マウスを定位固定装置に注意深く入れて、固定した。頭部の毛を脱毛クリームで除去し、頭部の皮膚を外科用メスで切って頭蓋骨を露出させた。人字縫合の側方１．８ｍｍで前方１ｍｍの座標に、ドリルで慎重に小さな切開を行った。Ｈａｍｉｌｔｏｎ  ３０Ｇシリンジを使用して、５μＬの細胞を右側線条体に２．５ｍｍの深さで接種した。頭部切開をＨｉｓｔｏａｃｒｙｌ（Ｈｙｓｔｏａｃｒｙｌ）組織接着剤（Ｂｒａｕｎ）で閉鎖し、皮下鎮痛剤メロキシカム（Ｍｅｔａｃａｍ（登録商標））（１ｍｇ／ｋｇ）をマウスに注射した。各マウスに移植された最終的な細胞数は、３×１０５個であった。
【０１５７】
マウスを週２回腹腔内投与されるｈ５Ｄ８で処置した。処置は、腫瘍細胞接種の直後、０日目に開始した。マウスは、ｈ５Ｄ８又はビヒクル対照の合計２回の投与を受けた。
【０１５８】
体重及び腫瘍体積：体重を毎週２回測定し、７日目に生物発光によって腫瘍増殖を定量化した（Ｘｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳ  Ｓｐｅｃｔｒｕｍ）。生体内での生物発光活性を定量化するために、マウスをイソフルオランで麻酔し、ルシフェリン基質（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）（１６７μｇ／ｋｇ）を腹腔内注射した。
【０１５９】
生物発光（Ｘｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳ  Ｓｐｅｃｔｒｕｍ）によって判定される腫瘍サイズは、７日目に評価した。各処置群について、個々の腫瘍の測定値と平均±ＳＥＭを算出した。統計的有意性は、対応のない非パラメトリックマン・ホイットニーＵ検定によって判定した。
【０１６０】
実施例１２−ｈ５Ｄ８は卵巣がんのマウスモデルにおける腫瘍増殖を阻害する
ｒ５Ｄ８の有効性をその他の２つの同系腫瘍モデルで評価した。卵巣同所性腫瘍モデルＩＤ８では、３００μｇのｒ５Ｄの週２回の腹腔内投与は、腹部容積によって測定される腫瘍増殖を有意に阻害した（図８Ａ及び８Ｂ）。図８Ｃの結果は、ｈ５Ｄ８もまた、２００μｇ以上の用量で腫瘍体積を減少させたことを示す。
【０１６１】
材料及び方法
ＩＤ８細胞は、１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）（Ｇｉｂｃｏ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、４０Ｕ／ｍＬのペニシリン及び４０μｇ／ｍＬのストレプトマイシン（ＰｅｎＳｔｒｅｐ）（Ｇｉｂｃｏ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及び０．２５μｇ／ｍＬのプラスモシン（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）を補充した、ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）（Ｇｉｂｃｏ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で培養した。
【０１６２】
ＩＤ８細胞を採取してＰＢＳで洗浄し、４００ｇで５分間遠心分離し、ＰＢＳに再懸濁した。細胞を氷上に保ち最適な生存率を維持して、２００μＬの細胞懸濁液を２７Ｇ針で腹腔内注射した。マウスに移植された最終的な細胞数は、５×１０６個であった。
【０１６３】
マウスは、示されるように異なる用量で腹腔内投与されたｈ５Ｄ８で週２回処置した。体重を週２回測定し、キャリパー（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して腹囲を測定することで、腫瘍進行をモニターした。
【０１６４】
実施例１３−ｒ５Ｄ８は結腸直腸がんのマウスモデルにおける腫瘍増殖を阻害する
皮下結腸ＣＴ２６腫瘍を有するマウスにおいて、ｒ５Ｄ８（３００μｇの週２回腹腔内投与）は、腫瘍増殖を有意に阻害した（図９Ａ及び９Ｂ）。
【０１６５】
材料及び方法
ＣＴ２６細胞は、１０％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）、４０Ｕ／ｍＬのペニシリン及び４０μｇ／ｍＬのストレプトマイシン（ＰｅｎＳｔｒｅｐ）及び０．２５μｇ／ｍＬのプラスモシンを補充した、Ｒｏｓｗｅｌｌ  Ｐａｒｋ  Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ培地（ＲＰＭＩ［Ｇｉｂｃｏ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ］）中で培養した。
【０１６６】
ＣＴ２６細胞（８×１０５個）をトリプシン化してＰＢＳで洗浄し、４００ｇで５分間遠心分離して１００μＬのＰＢＳに再懸濁した。細胞を氷上に保って、細胞死を避けた。ＣＴ２６細胞は、２７Ｇ針を使用して皮下注射を介してマウスに投与した。
【０１６７】
３００μｇのｒ５Ｄ８、又はビヒクル対照は、ＣＴ２６細胞移植後の３日目から、週２回の腹腔内注射（ＩＰ）を介してマウスに投与した。
【０１６８】
体重及び腫瘍体積を週に３回測定した。キャリパー（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、腫瘍体積を測定した。
【０１６９】
実施例１４−ｒ５Ｄ８は腫瘍モデルにおける炎症性浸潤を減少させる
Ｕ２５１  ＧＢＭ同所性モデルでは、図１０Ａに示されるように、Ｍ２分極マクロファージのマーカーであるＣＣＬ２２の発現が、ｒ５Ｄ８で処置された腫瘍において有意に減少した。この知見はまた、図１０Ｂに示すように、３つの患者サンプルが処置後にＣＣＬ２２及びＣＤ２０６（ＭＲＣ１）発現（Ｍ２マクロファージのマーカーでもある）の有意な減少を示した、ｒ５Ｄ８を使用した生理学的に関連する器官型組織切片培養モデルにおいても確認された（ＭＲＣ１及びＣＣＬ２２の双方について、上側の対照と下側の処置を比較されたい）。さらに、ｒ５Ｄ８は、免疫適格性マウスの同系ＩＤ８（図１０Ｃ）及びＣＴ２６（図１０Ｄ）腫瘍において、ＣＣＬ２２＋Ｍ２マクロファージもまた減少させた。Ｈ５Ｄ８処置はまた、同系ＣＴ２６腫瘍モデルにおける免疫賦活性表現型に向けてマクロファージをプログラムした（図１０Ｅ）。ｈ５Ｄ８処置は、ＣＤ２０６陰性／ＭＨＣＩＩ陽性画分の増加によって示されるように、Ｍ１表現型のマクロファージを増加させ、ＣＤ２０６陽性／ＭＨＣＩＩ陰性画分の減少によって示されるように、Ｍ２表現型のマクロファージを減少させた。図１０Ｆは、ＬＩＦノックダウンを伴うＵ２５１細胞の馴化培地中で培養された単球からの遺伝子発現データを示す。ＭＲＣ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ１、及びＣＴＳＫ（三角形で示される）は全て、発現の有意な低下を示した。
【０１７０】
実施例１５−ｒ５Ｄ８は非骨髄系エフェクター細胞胞を増加させる
追加的な免疫機序を調べるために、腫瘍微小環境内のＴ細胞及びその他の非骨髄系性免疫エフェクター細胞に対する、ｒ５Ｄ８の効果を評価した。卵巣同所性ＩＤ８同系モデルにおいて、ｒ５Ｄ８処置は、図１１Ａに示されるように、腫瘍内ＮＫ細胞の増加と、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の合計及び活性化の増加とをもたらした。同様に、結腸同系ＣＴ２６腫瘍モデルにおいて、ｒ５Ｄ８は、図１１Ｂに示されるように、腫瘍内ＮＫ細胞を増加させ、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を増加させ、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋Ｔ−ｒｅｇ細胞を減少させる傾向にあった。ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋Ｔ−ｒｅｇ細胞の減少傾向はまた、図１１Ｃに示されるように、ｒ５Ｄ８処置に続いて同系同所性ＫＬＮ２０５腫瘍モデルにおいても観察された。Ｔ細胞が有効性を媒介する要件と一致して、ＣＴ２６モデルにおけるＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の枯渇は、図１２に示されるように、ｒ５Ｄ８の抗腫瘍有効性を阻害した。
【０１７１】
Ｔ細胞枯渇の材料及び方法
ＣＴ２６細胞は、１０％のウシ胎児血清（ＦＢＳ［Ｇｉｂｃｏ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ］）、４０Ｕ／ｍＬのペニシリン及び４０μｇ／ｍＬのストレプトマイシン（ＰｅｎＳｔｒｅｐ［Ｇｉｂｃｏ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ］）及び０．２５μｇ／ｍＬのプラスモシン（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）を補充した、ＲＰＭＩ培地（Ｇｉｂｃｏ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で培養した。ＣＴ２６細胞（５×１０５個）を採取してＰＢＳで洗浄し、４００ｇで５分間遠心分離して１００μＬのＰＢＳに再懸濁した。細胞を氷上に保って、細胞死を避けた。ＣＴ２６細胞は、２７Ｇシリンジを使用して皮下注射を介してマウスの両脇腹に投与した。マウスは、試験デザインに示されるように、ｒ５Ｄ８の腹腔内投与によって週２回処置した。ビヒクル対照（ＰＢＳ）、ラットｒ５Ｄ８、及び／又は抗ＣＤ４及び抗ＣＤ８は、研究デザインに記載されているように、週２回腹腔内注射（ＩＰ）を介してマウスに投与した。全ての抗体処置は、同時に投与した。
【０１７２】
実施例１６−ヒトＬＩＦと複合体形成したｈ５Ｄ８の結晶構造
ｈ５Ｄ８が結合したＬＩＦ上のエピトープを判定し、結合に関与するｈ５Ｄ８の残基を判定するために、ｈ５Ｄ８の結晶構造を３．１Åの分解能で解析した。共結晶構造は、ＬＩＦのＮ末端ループがｈ５Ｄ８の軽鎖可変領域と重鎖可変領域の間の中央に位置することを明らかにした（図１３Ａ）。さらに、ｈ５Ｄ８は、ＬＩＦのらせんＡ及びＣＣ上の残基と相互作用し、それによって不連続で高次構造的なエピトープを形成する。結合は、いくつかの塩架橋、Ｈ結合、及びファンデルワールス相互作用によって駆動される（表７、図１３Ｂ）。ＬＩＦのｈ５Ｄ８エピトープは、ｇｐ１３０との相互作用領域に及ぶ。Ｂｏｕｌａｎｇｅｒ，Ｍ．Ｊ．，Ｂａｎｋｏｖｉｃｈ，Ａ．Ｊ．，Ｋｏｒｔｅｍｍｅ，Ｔ．，Ｂａｋｅｒ，Ｄ．＆  Ｇａｒｃｉａ，Ｋ．Ｃ．Ｃｏｎｖｅｒｇｅｎｔ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｆｏｒ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｉｖｅｒｇｅｎｔ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｓｈａｒｅｄ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇｐ１３０．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｅｌｌ  １２，５７７−５８９（２００３）を参照されたい。結果は以下の表７に要約され、図１３に描写される。
【０１７３】
【表７】
2021521274.tif 000009
【０１７４】
【表８】
2021521274.tif 000010
【０１７５】
材料及び方法
ＬＩＦをＨＥＫ２９３Ｓ（Ｇｎｔ  Ｉ−／−）細胞で一過性に発現させ、Ｎｉ−ＮＴＡアフィニティークロマトグラフィーで精製し、２０ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ８．０及び１５０ｍＭのＮａＣｌ中でのゲル濾過クロマトグラフィーがそれに続いた。組換えｈ５Ｄ８  ＦａｂをＨＥＫ２９３Ｆ細胞で一過性に発現させ、ＫａｐｐａＳｅｌｅｃｔアフィニティークロマトグラフィーを使用して精製し、カチオン交換クロマトグラフィーがそれに続いた。精製されたｈ５Ｄ８  ＦａｂとＬＩＦを１：２．５のモル比で混合し、ＥｎｄｏＨを使用した脱グリコシル化の前に、室温で３０分間インキュベートした。引き続いて、ゲル濾過クロマトグラフィーを使用し、複合体を精製した。複合体化を２０ｍｇ／ｍＬに濃縮し、疎マトリックススクリーンを使用した結晶化試験のためにセットアップした。１９％（ｖ／ｖ）イソプロパノール、１９％（ｗ／ｖ）ＰＥＧ４０００、５％（ｖ／ｖ）グリセロール、０．０９５Ｍクエン酸ナトリウム、ｐＨ５．６を含む条件で、４℃で結晶を形成させた。この結晶をＣａｎａｄｉａｎ  Ｌｉｇｈｔ  Ｓｏｕｒｃｅ（ＣＬＳ）の０８ＩＤ−１ビームラインで、３．１Åの分解能で回折させた。Ｋａｂｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｘｄｓ．Ａｃｔａ  ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ．Ｓｅｃｔｉｏｎ  Ｄ，Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ  ６６，１２５−１３２（２０１０）に従って、ＸＤＳを使用してデータを収集し、処理してスケーリングした。ＭｃＣｏｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｈａｓｅｒ  ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃ  ｓｏｆｔｗａｒｅ．Ｊ  Ａｐｐｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  ４０，６５８−６７４（２００７）に従って、Ｐｈａｓｅｒを使用した分子置換によって、構造を決定した。Ｃｏｏｔ  ａｎｄ  ｐｈｅｎｉｘ．ｒｅｆｉｎｅを使用して、モデル構築及び精緻化を反復し、構造が許容可能なＲｗｏｒｋとＲｆｒｅｅに収束するまで精緻化した。Ｅｍｓｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｆｅａｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃｏｏｔ．Ａｃｔａ  ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ．Ｓｅｃｔｉｏｎ  Ｄ，Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ  ６６，４８６−５０１（２０１０）；及びＡｄａｍｓ，ｅｔ  ａｌ．ＰＨＥＮＩＸ：ａ  ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｐｙｔｈｏｎ−ｂａｓｅｄ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ．Ａｃｔａ  ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ．Ｓｅｃｔｉｏｎ  Ｄ，Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ  ６６，２１３−２２１（２０１０）ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙを参照されたい。図は、ＰｙＭＯＬ（Ｔｈｅ  ＰｙＭＯＬ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｒａｐｈｉｃｓ  Ｓｙｓｔｅｍ，Ｖｅｒｓｉｏｎ  ２．０  Ｓｃｈｒｏｄｉｎｇｅｒ，ＬＬＣ）で作成された。
【０１７６】
実施例１７−ｈ５Ｄ８はＬＩＦに対して高い特異性を有する
ｈ５Ｄ８のその他のＬＩＦファミリーメンバーへの結合を試験して、結合特異性を判定した。Ｏｃｔｅｔ９６解析を用いて、双方のタンパク質が大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）で産生された場合、ｈ５Ｄ８のヒトＬＩＦへの結合は、ＬＩＦの最も相同性の高いＩＬ−６ファミリーメンバーであるオンコスタチンＭ（ＯＳＭ）への結合よりもおよそ１００倍大きい。双方のタンパク質が哺乳類系で産生された場合、ｈ５Ｄ８はＯＳＭへの結合を示さない。データは、表８に要約される。
【０１７７】
【表９】
2021521274.tif 000011
【０１７８】
材料及び方法
Ｏｃｔｅｔ結合実験：試薬は、製造業者の提供するマニュアルに従って使用し調製した。Ｏｃｔｅｔ  Ｄａｔａ  Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎソフトウェアｖｅｒ．９．０．０．２６を使用して、次のように基本動態実験を実施した：センサー／プログラムの設定：ｉ）平衡化（６０秒間）；ｉｉ）負荷（１５秒間）；ｉｉｉ）ベースライン（６０秒間）；ｉｖ）結合（１８０秒間）；及びｖ）解離（６００秒間）。
【０１７９】
サイトカインに対するｈ５Ｄ８のＯｃｔｅｔ親和性：Ｏｃｔｅｔ  Ｄａｔａ  Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎソフトウェアｖｅｒ．９．０．０．２６を使用して、次のように基本動態実験を実施した：アミン反応性第２世代バイオセンサー（ＡＲ２Ｇ）は、水中で最低１５分間水和させた。バイオセンサーへのｈ５Ｄ８のアミン結合は、アミン結合第二世代キットを使用して、ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｎｏｔｅ  ２６（参考文献を参照されたい）に従って実施した。ディップステップは、３０℃、１００００ｒｐｍで次のように実施した：ｉ）水中で６０秒間の平衡化；ｉｉ）水中で２０ｍＭのＥＣＤ、１０ｍＭのスルホ−ＮＨＳで３００秒間の活性化；ｉｉｉ）１０ｍＭの酢酸ナトリウム、ｐＨ６．０中の１０μｇ／ｍｌのｈ５Ｄ８の６００秒間の固定化；ｉｖ）１Ｍのエタノールアミン、ｐＨ８．５中で３００秒間のクエンチ；ｖ）水中で１２０秒間のベースライン。次に、３０℃、１００００ｒｐｍで、以下の浸漬及び読み取りステップで動態実験を実施した：ｖｉ）１×動態緩衝液中での６０秒間のベースライン；ｖｉｉ）１×動態緩衝液中のサイトカインの適切な連続希釈液の１８０秒間の結合；ｖｉｉｉ）１×動態緩衝液中の３００秒間の解離；ｉｘ）それぞれ１０ｍＭグリシン、ｐＨ２．０と１×動態緩衝液との間で交互する３回の再生／中和サイクル（それぞれ５秒間で３サイクル）。再生に続いて、バイオセンサーは、その後続の結合解析で再利用した。
【０１８０】
哺乳類胞から産生されたヒト組換えＬＩＦは、ＡＣＲＯＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（ＬＩＦ−Ｈ５２１ｂ）からのものであり；哺乳類細胞で産生されたヒト組換えＯＳＭは、Ｒ＆Ｄ（８４７５−ＯＭ／ＣＦ）からのものであり；大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞で産生されたヒト組換えＯＳＭは、Ｒ＆Ｄ（２９５−ＯＭ−０５０／ＣＦ）からのものであった。
【０１８１】
実施例１８−ｈ５Ｄ８  ｆａｂの結晶構造
ｈ５Ｄ８  Ｆａｂの５つの結晶構造を幅広い化学的条件下で決定した。これらの構造の高分解能は、ＣＤＲ残基の立体配座が軽微な可撓性と関連しており、異なる化学環境下でも非常に類似していることを示す。この抗体のユニークな特徴は、可変重鎖領域の１００位の非標準的なシステインの存在である。構造解析は、システインが不対であり、溶媒にほとんどアクセスできないことを示す。
【０１８２】
そのＩｇＧのパパイン消化によってＨ５Ｄ８  Ｆａｂを得て、標準的なアフィニティ、イオン交換及びサイズクロマトグラフィー技術を用いた精製がそれに続いた。蒸気拡散法を用いて結晶を得て、分解能１．６５Å〜２．０Åの範囲で５つの結晶構造を決定できた。全ての構造は、５．６、６．０、６．５、７．５，及び８．５の５つの異なるｐＨレベルにわたる結晶化条件にもかかわらず、同じ結晶学的空間群で、同様の単位セル寸法（Ｐ２１２１２１、ａ約５３．８Å、ｂ約６６．５Å、ｃ約１４３．３Å）で解析した。したがって、これらの結晶構造は、結晶充填のアーチファクトに妨げられず、幅広い化学条件にわたるｈ５Ｄ８  Ｆａｂの三次元的性質を比較できるようにする。
【０１８３】
電子密度を全ての相補性決定領域（ＣＤＲ）残基で観測し、それを引き続いてモデル化した。注目すべきことに、ＬＣＤＲ１及びＨＣＤＲ２は細長い立体配座を取り、浅いＬＣＤＲ３及びＨＣＤＲ３領域と一緒になって、パラトープの中央に結合溝を形成していた（図１４Ａ）。５つの構造は全ての残基にわたり高度に類似しており、全原子の根平均二乗偏差は０．１９７Å〜０．３２７Åであった（図１４Ａ）。これらの結果は、ＣＤＲ残基の立体配座が、５．６〜８．５の範囲のｐＨレベル、及び１５０ｍＭ〜１Ｍの範囲のイオン強度をはじめとする、様々な化学環境で維持されることを示した。ｈ５Ｄ８パラトープの静電気表面の解析は、正及び負の帯電領域が等しく親水特性に寄与し、一般的な疎水性パッチがないことを明らかにした。ｈ５Ｄ８は、ＨＣＤＲ３の基部に非標準的なシステイン（Ｃｙｓ１００）があるという、珍しい特徴を有する。５つの構造全てにおいて、この遊離システインは秩序化されており、いかなるジスルフィドスクランブルも形成しない。さらに、それは、Ｃｙｓ付加（システイニル化）又はグルタチオン付加（グルタチオン化）によって修飾されず、重鎖のＬｅｕ４、Ｐｈｅ２７、Ｔｒｐ３３、Ｍｅｔ３４、Ｇｌｕ１０２、Ｌｅｕ１０５の主鎖及び側鎖原子との間で、ファンデルワールス相互作用（３．５〜４．３Åの距離）する（図１４Ｂ）。最後に、Ｃｙｓ１００は、ＣＤＲ１及びＨＣＤＲ３の立体配座の媒介に関与しているように見える、主に埋没した構造残基である。したがって、本発明者らの５つの結晶構造におけるこの領域の均一な配置によって観察されるように、これがその他のシステインとの反応性を持つ可能性は低い。
【０１８４】
材料及び方法
Ｈ５Ｄ８−１  ＩｇＧはＣａｔａｌｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓから入手し、２５ｍＭのヒスチジン、６％のスクロース、０．０１％のポリソルベート８０、ｐＨ６．０中で製剤化した。製剤化されたＩｇＧは、ＰＢＳ、１．２５ｍＭのＥＤＴＡ、１０ｍＭのシステイン中で、３７℃で１時間、１：１００μｇのパパイン（Ｓｉｇｍａ）で消化する前に、１０Ｋ  ＭＷＣＯ濃縮器（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用してＰＢＳに徹底的に緩衝液交換した。パパイン消化されたＩｇＧは、ＡＫＴＡ  Ｓｔａｒｔクロマトグラフィーシステム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、プロテインＡカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を通過させた。ｈ５Ｄ８  Ｆａｂを含有するプロテインＡ通過物を回収し、１０Ｋ  ＭＷＣＯ濃縮器（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して２０ｍＭの酢酸ナトリウム、ｐＨ５．６中に緩衝液交換した。得られたサンプルは、ＡＫＴＡ  Ｐｕｒｅクロマトグラフィーシステム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、Ｍｏｎｏ  Ｓカチオン交換カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上に負荷した。１Ｍの塩化カリウムの勾配での溶出によって優勢なｈ５Ｄ８  Ｆａｂピークを得て、それを２０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、１５０ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ８．０でのＳｕｐｅｒｄｅｘ  ２００増量ゲル濾過カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、回収、濃縮し、サイズが均一になるように精製した。ｈ５Ｄ８Ｆａｂの高純度は、還元条件及び非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥによって確認した。
【０１８５】
精製されたｈ５Ｄ８Ｆａｂは、１０Ｋ  ＭＷＣＯ濃縮器（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して、２５ｍｇ／ｍＬに濃縮した。Ｏｒｙｘ  ４ディスペンサー（Ｄｏｕｇｌａｓ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を使用して、２０℃で疎マトリックス９６条件の市販スクリーンＪＣＳＧ  ＴＯＰ９６（Ｒｉｇａｋｕ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ）及びＭＣＳＧ−１（Ａｎａｔｒａｃｅ）を使用した、蒸気拡散結晶化実験をセットアップした。以下の５つの結晶化条件で４日後に結晶を得て、収穫した：１）０．０８５Ｍのクエン酸ナトリウム、２５．５％（ｗ／ｖ）のＰＥＧ４０００、０．１７Ｍの酢酸アンモニウム、１５％（ｖ／ｖ）のグリセロール、ｐＨ５．６；２）０．１ＭのＭＥＳ、２０％（ｗ／ｖ）のＰＥＧ６０００、１Ｍの塩化リチウム、ｐＨ６．０；３）０．１ＭのＭＥＳ、２０％（ｗ／ｖ）のＰＥＧ４０００、０．６Ｍの塩化ナトリウム、ｐＨ６．５；４）０．０８５ＭのナトリウムＨＥＰＥＳ、１７％（ｗ／ｖ）のＰＥＧ４０００、８．５％（ｖ／ｖ）の２−プロパノール、１５％（ｖ／ｖ）のグリセロール、ｐＨ７．５；及び５）０．０８Ｍのトリス、２４％（ｗ／ｖ）のＰＥＧ４０００、０．１６Ｍの塩化マグネシウム、２０％（ｖ／ｖ）のグリセロール、ｐＨ８．５。液体窒素中でのフラッシュ凍結の前に、結晶を含有する母液に、必要に応じて５〜１５％（ｖ／ｖ）のグリセロール又は１０％（ｖ／ｖ）のエチレングリコールを補充した。結晶をＡｄｖａｎｃｅｄ  Ｐｈｏｔｏｎ  Ｓｏｕｒｃｅ、ビームライン２３−ＩＤ−ＤＤ（Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）でＸ線シンクロトロン放射に暴露させ、回折パターンをＰｉｌａｔｕｓ３  ６Ｍ検出器で記録した。データをＸＤＳで処理し、Ｐｈａｓｅｒを使用した分子置換によって構造を決定した。精緻化はＰＨＥＮＩＸで行い、反復モデル構築はＣｏｏｔで行った。図はＰｙＭＯＬで生成した。全てのソフトウェアは、ＳＢＧｒｉｄを介してアクセスした。
【０１８６】
実施例１９−ｈ５Ｄ８のシステイン１００における変異は結合を保存する
ｈ５Ｄ８の解析は、重鎖の可変領域の１００位（Ｃ１００）における遊離システイン残基を明らかにした。ヒト及びマウスのＬＩＦへの結合及び親和性を特性解析するために、Ｃ１００を各天然アミノ酸で置換することによって、Ｈ５Ｄ８変異型を生成した。ＥＬＩＳＡ及びＯｃｔｅｔアッセイを用いて、結合を特性解析した。結果は、表９に要約される。ＥＬＩＳＡ  ＥＣ５０曲線は、図１５に示される（図１５ＡヒトＬＩＦ及び図１５ＢマウスＬＩＦ）。
【０１８７】
【表１０】
2021521274.tif 000012
【０１８８】
材料及び方法
ＥＬＩＳＡ：ｈ５Ｄ８  Ｃ１００変異型のヒト及びマウスＬＩＦへの結合をＥＬＩＳＡによって判定した。組換えヒト又はマウスＬＩＦタンパク質をＭａｘｉｓｏｒｐ  ３８４ウェルプレート上に、１μｇ／ｍＬで一晩、４℃で被覆した。プレートを１×ブロック緩衝液で室温で２時間ブロックした。各ｈ５Ｄ８  Ｃ１００変異型の滴定物を添加し、室温で１時間結合させた。プレートをＰＢＳ＋０．０５％ツイーン２０で３回洗浄した。ＨＲＰ共役抗ヒトＩｇＧを添加し、室温で３０分間結合させた。プレートをＰＢＳ＋０．０５％ツイーン２０で３回洗浄し、１×ＴＭＢ基質を使用して展開した。反応を１ＭのＨＣｌで停止させ、４５０ｎｍでの吸光度を測定した。図の作成と非線形回帰解析は、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍを用いて実施した。
【０１８９】
Ｏｃｔｅｔ  ＲＥＤ９６：ヒト及びマウスのＬＩＦに対するｈ５Ｄ８  Ｃ１００変異型の親和性は、Ｏｃｔｅｔ  ＲＥＤ９６システムを使用してＢＬＩによって判定した。ｈ５Ｄ８  Ｃ１００変異型は、１×動態緩衝液中の３０秒間ベースラインに続いて、７．５μｇ／ｍＬで抗ヒトＦｃバイオセンサー上に負荷した。ヒト又はマウスＬＩＦタンパク質の滴定物は、負荷されたバイオセンサーに９０秒間結合させ、１×動態緩衝液中で３００秒間解離させた。ＫＤは、１：１包括的フィットモデルを用いて、データ解析ソフトによって計算した。
【０１９０】
実施例２０−ｈ５Ｄ８は、生体外でＬＩＦのｇｐ１３０への結合を遮断する
ｈ５Ｄ８がＬＩＦのＬＩＦＲへの結合を妨げたかどうかを判定するために、Ｏｃｔｅｔ  ＲＥＤ  ９６プラットフォームを用いた分子結合アッセイを実施した。Ｈ５Ｄ８は、抗ヒトＦｃキャプチャーによりＡＨＣバイオセンサーに上に負荷した。次に、バイオセンサーをＬＩＦに浸漬したところ、予想通り、結合が観察された（図１６Ａ、中央３分の１）。引き続いて、バイオセンサーを異なる濃度のＬＩＦＲに浸漬した。用量依存的結合が観察された（図１６Ａ、右側３分の１）。対照実験は、この結合がＬＩＦ特異的であり（未掲載）、ＬＩＦＲとｈ５Ｄ８又はバイオセンサーとの非特異的相互作用に起因するものではないことを実証した。
【０１９１】
ｈ５Ｄ８とＬＩＦの結合をさらに特性解析するために、一連のＥＬＩＳＡ結合実験を実施した。Ｈ５Ｄ８及びＬＩＦをプレインキュベートし、次に、組換えヒトＬＩＦＲ（ｈＬＩＦＲ）又はｇｐ１３０のどちらかで被覆されたプレートに導入した。ｈ５Ｄ８／ＬＩＦ複合体と被覆された基質との間の結合の欠如は、ｈ５Ｄ８が何らかの様式で、ＬＩＦの受容体への結合を妨害したことを示す。さらに、ＬＩＦに結合しなかった対照抗体（（−）で示されるイソタイプ対照）、又は既知の結合部位でＬＩＦに結合する対照抗体（Ｂ０９はｇｐ１３０又はＬＩＦＲのどちらともＬＩＦ結合について競合しない；ｒ５Ｄ８はｈ５Ｄ８のラット親バージョンである）もまた使用した。ＥＬＩＳＡの結果は、ｈ５Ｄ８／ＬＩＦ複合体が（ｒ５Ｄ８／ＬＩＦ複合体と同様に）ｈＬＩＦＲに結合できたことを実証し、これらの抗体がＬＩＦ／ＬＩＦＲ結合を妨げなかったことが示唆された（図１６Ａ）。対照的に、ｈ５Ｄ８／ＬＩＦ複合体（及びｒ５Ｄ８／ＬＩＦ複合体）は、組換えヒトｇｐ１３０と結合できなかった（図１６Ｂ）。これは、ＬＩＦがｈ５Ｄ８に結合すると、ＬＩＦのｇｐ１３０結合部位が影響を受けることを示唆した。
【０１９２】
実施例２１−ヒト組織におけるＬＩＦ及びＬＩＦＲ発現
ＬＩＦ及びＬＩＦＲの発現レベルを判定するために、多くの異なるタイプのヒト組織に対して、定量的リアルタイムＰＣＲを実施した。図１７Ａ及び１７Ｂに示される平均発現レベルは、１００ｎｇの全ＲＮＡ当たりのコピーとして与えられる。ほとんどの組織は、１００ｎｇの全ＲＮＡ当たり、少なくとも１００コピーを発現した。ＬＩＦ  ｍＲＮＡ発現は、ヒト脂肪組織（腸間膜−回腸［１］）、血管組織（脈絡叢［６］及び腸間膜［８］）、及び臍帯［６８］組織において最高であり；脳組織（皮質［２０］及び黒質［２８］）において最低であった。ＬＩＦＲ  ｍＲＮＡ発現は、ヒト脂肪組織（腸間膜−回腸［１］）、血管組織（肺［９］）、脳組織［１１−２８］、及び甲状腺［６６］組織において最高であり；ＰＢＭＣ［３１］において最低であった。カニクイザル組織におけるＬＩＦ及びＬＩＦＲ  ｍＲＮＡ発現レベルは、ヒト組織で観察されたものと類似しており、ＬＩＦ発現が脂肪組織で高く、ＬＩＦＲ発現は脂肪組織で高く、ＰＢＭＣで低かった（データ未掲載）。
【０１９３】
図１７Ａ及び図１７Ｂの組織番号付けは、次のとおり。１−脂肪（腸間膜−回腸）；２−副腎；３−膀胱；４−膀胱（膀胱三角）；５−血管（脳：中脳動脈）；６−血管（脈絡叢）；７−血管（冠動脈）；８−血管（腸間膜（結腸））；９−血管（肺）；１０−血管（腎臓）；１１−脳（小脳扁桃）；１２−脳（尾状核）；１３−脳（小脳）；１４脳−（皮質：前帯状回）；１５−脳（皮質：後帯状回）；１６−脳（皮質：正面−側方）；１７−脳（皮質：内側前頭）；１８−脳（皮質：後頭）；１９−脳（皮質：頭頂）；２０−脳（皮質：側頭）；２１−脳（背側縫線核）；２２−脳（海馬）；２３−脳（視床下部：前側）；２４−脳（視床下部：後側）；２５−脳（青斑核）；２６−脳（延髄）；２７−脳（側坐核）；２８−脳（黒質）；２９−乳房；３０−盲腸；３１−末梢血単核細胞（ＰＢＭＣｓ）；３２−結腸；３３−背根神経節（ｇａｎｌｉａ）（ＤＲＧ）；３４−十二指腸；３５−卵管；３６−胆嚢；３７−心臓（左心房）；３８−心臓（左心室）；３９−回腸；４０−空腸；４１−腎臓（皮質）；４２−腎臓（髄質）；４３−腎臓（骨盤）；４４−肝臓（実質）；４５−肝臓（気管支：一次）；４６−肝臓（気管支：三次）；４７−肺（実質）；４８−リンパ腺（扁桃）；４９−筋肉（骨格）；５０−食道；５１−卵巣；５２−膵臓；５３−松果体腺；５４−脳下垂体；５５−胎盤；５６−前立腺；５７−直腸；５８−皮膚（包皮）；６９−脊髄；６０−脾臓（実質）；６１−胃（幽門洞）；６２−胃（体部）；６３−胃（胃底）；６４−胃（幽門管）；６５−精巣；６６−甲状腺；６７−気管；６８−臍帯；６９−尿管；７０−子宮（子宮頸部）；７１−子宮（子宮筋層）；及び７２−輸精管。
【０１９４】
実施例２２−ｈ５Ｄ８及び抗ＰＤ−１抗体は結腸直腸がんのマウスモデルにおける腫瘍増殖を阻害する
同系ＣＴ２６及びＭＣ３８モデルにおいて、ｈ５Ｄ８の有効性をＰＤ−１阻害剤との組み合わせで評価した。図１８Ａ及び１８Ｂに示されるように、ＰＤ−１阻害剤とｈ５Ｄ８の組み合わせで処置されたマウスは、ＰＤ−１阻害剤単独又はｈ５Ｄ８単独で処置されたマウスと比較して、ＣＴ２６腫瘍増殖の減少を示した。ｈ５Ｄ８単剤療法による耐久性のある延命効果は観察されず（図１８Ｃ）、抗ＰＤ１療法ではまれにしか観察されなかった（図１８Ｃ）一方で、ｈ５Ｄ８と抗ＰＤ１の組み合わせは、処置されたＣＴ２６及びＭＣ３８腫瘍保持マウスのそれぞれ約４０％及び３０％において、長期延命効果もたらした（図１８Ｃ）。重要なことには、長期的に腫瘍のないＣＴ２６生存者は腫瘍再移植に抵抗性であり、長期持続適応免疫の獲得と一致していた（図１８Ｄ）。
【０１９５】
ｈ５Ｄ８とＰＤ−１阻害剤の組み合わせが、それによって腫瘍増殖に影響を及ぼす、追加的な免疫機構を調べるために、図１９Ａ及び１９Ｂに示されるように、浸潤製ＣＤ８Ｔ細胞の機能性に対する組み合わせの効果を評価した。ｈ５Ｄ８処置の単剤療法では、ＣＴ２６及びＭＣ３８腫瘍のどちらでも、それぞれＣＤ８  ＴＩＬの効果なしであるか、又はほんのわずかな増加が観察された。単剤療法としての抗ＰＤ１は、ＣＤ８  ＴＩＬに対してほとんど効果がなかったが、ｈ５Ｄ８との組み合わせは、ＣＴ２６及びＭＣ３８の双方の腫瘍においてＣＤ８  ＴＩＬの有意な増加をもたらし、組み合わせで観察された有効性の増加が、潜在的にＣＤ８  ＴＩＬの増加によって駆動されることが示唆された（図１９Ｃ及び１９Ｄ）。
【０１９６】
対照及び単剤処置群と比較して、ｈ５Ｄ８と抗ＰＤ１の組み合わせで処置されたマウスから採取された腫瘍は、ＣＤ８  ＴＩＬの増加を示しただけでなく、ＧＺＭＢ、Ｋｉ６７、及びＣＤ４４によって同定される、細胞溶解性、増殖性、及び抗原経験サブセットのそれぞれの増加もまた示した。併用療法を受けた腫瘍は、ＣＤ８／Ｔｒｅｇ、Ｍ１／Ｍ２、及びＣＤ８／ＣＤ１１ｂ比の増加もまた示し、抗腫瘍免疫に有利な腫瘍微小環境（ＴＭＥ）の強力な調節が実証された。これらのデータは、ＬＩＦがマクロファージの分極を抑制することによって、少なくともある程度ＴＭＥの抑制を駆動し、それが引き続いて宿主の抗腫瘍免疫を鈍らせることを支持する。ｈ５Ｄ８によるＬＩＦの阻害はこの効果を逆転させ、抗ＰＤ１療法などのＴ細胞促進療法と組み合わせることで、強力な抗腫瘍免疫を駆動し、がんのマウスモデルにおいて、持続性の延命効果を可能にする。
【０１９７】
抗ＰＤ１単剤療法又はｈ５Ｄ８及び抗ＰＤ１の組み合わせのどちらかで処置されたマウスから採取された腫瘍において、ＣＤ８  ＴＩＬが細胞毎に機能的に異なるかどうかを調べるために、腫瘍特異的抗原に反応してＣＤ８  ＴＩＬがＩＦＮγを産生する能力を調べた。抗ＰＤ１で、又はｈ５Ｄ８と抗ＰＤ１との組み合わせで処置されたＣＴ２６腫瘍から単離されたＣＤ８  ＴＩＬは、ＣＴ２６の免疫優勢拒絶反応抗原を含むＡＨ１ペプチド（ｇｐ７０；４２３〜４３１アミノ酸）によって生体外で刺激されたときに、機能に差がないことを示した（図１９Ｃ）。同様に、抗ＰＤ１で、又はｈ５Ｄ８と抗ＰＤ１との組み合わせで処置されたＭＣ３８腫瘍から単離されたＣＤ８  ＴＩＬもまた、免疫優性腫瘍抗原ペプチド（ｐ１５ｅ；６０４〜６１１アミノ酸）によって生体外で刺激されたときに、機能に差がないことを示し、組み合わせの有効性の増加が、細胞毎のＣＤ８  ＴＩＬ機能の増加ではなく、ＣＤ８  ＴＩＬ頻度の全体的な増加によって駆動されていることが示唆された。
【０１９８】
材料及び方法
ｈ５Ｄ８と、ＰＤ−１阻害剤である抗体クローンＲＭＰ１−１４（ＢｉｏＸＣｅｌｌ）とをそれぞれ１５ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇの用量で週２回投与し、キャリパーによる測定を通じて腫瘍体積をモニターした。
【０１９９】
実施例２３−ＬＩＦ、ＴＡＭ、及びＴｒｅｇ間の相関
がん免疫系に対するＬＩＦの効果は、がんゲノムアトラス（ＴＣＧＡ）から、２８種類の固形腫瘍にわたり、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）及び調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の相対存在量を測定することによって判定された。ＬＩＦと、ＴＡＭ及びＴｒｅｇとの間の有意な相関が、いくつかの腫瘍タイプにわたって観察された（図２０Ａ及び２０Ｂ）。神経膠芽腫（ＧＢＭ）、前立腺がん、甲状腺がん、及び卵巣がんは、ＬＩＦ、ＴＡＭ、及びＴｒｅｇの間で最も高い相関性を示し、サンプル間で高いＬＩＦ発現を示した４つの腫瘍タイプであった（図２０Ａ及び２０Ｂ）。ＧＢＭ腫瘍では、腫瘍細胞及び免疫細胞浸潤による広範なＬＩＦ発現が観察された（図２４）。
【０２００】
ヒトＧＢＭ及び卵巣がん（ＯＶ）のＴＣＧＡデータセットの双方の解析で、ＬＩＦと、ＣＣＬ２、ＣＤ１６３、及びＣＤ２０６との間に有意な正の相関が見られた（図２８）。ＬＩＦとＣＸＣＬ９の間に相関は観察されなかったが（データ未掲載）、腫瘍全体にわたりＣＸＣＬ９  ｍＲＮＡの比較的低いレベルが観察された。これらの結果は、２０人のＧＢＭ患者のコホートを解析し、腫瘍のＬＩＦ、ＣＸＣＬ９、ＣＣＬ２、ＣＤ１６３、及びＣＤ２０６  ＩＨＣを実施することによって、タンパク質レベルで検証した。ＬＩＦと、ＣＣＬ２、ＣＤ１６３、及びＣＤ２０６との間に、強い正の相関が観察された（図２１Ｅ）。ＣＸＣＬ９は孤立した細胞群で発現しており、腫瘍に存在する低レベルのＣＸＣＬ９  ｍＲＮＡが説明された。特に、ＣＸＣＬ９は、ヒトＧＢＭにおいてＬＩＦと逆の相関を示した（図２１Ｅ）。
【０２０１】
本明細書に記載される実施例は、ＬＩＦが、腫瘍促進性ＴＡＭの存在を促進する一方で、ＣＤ８＋Ｔ細胞の排除に重要な役割を果たすことをさらに描写する。高レベルのＬＩＦを発現する腫瘍におけるＬＩＦの遮断は、ＴＡＭにおけるＣＤ２０６、ＣＤ１６３、及びＣＣＬ２を減少させ、ＣＸＣＬ９発現を誘導することが観察された。ＬＩＦの遮断は、ＣＸＣＬ９のエピジェネティックサイレンシングを解除し、ＣＤ８＋Ｔ細胞腫瘍浸潤を始動させた。ＬＩＦ中和抗体とＰＤ１免疫チェックポイント阻害との組み合わせは、腫瘍退縮及び全生存増加を促進した。
【０２０２】
材料及び方法
がんゲノムアトラス（ＴＣＧＡ）、Ｆｉｒｅｂｒｏｗｓｅ  ｓｅｒｖｅｒ（ｆｉｒｅｂｒｏｗｓｅ．ｏｒｇ、バージョン２０１６＿０１＿２８）から、２８種の異なる固形腫瘍に罹患している９，４０３人の患者のＲＮＡ−ｓｅｑデータをダウンロードした。発現データ（ＲＳＥＭ）を全ての下流解析についてｌｏｇ２変換した。次に、関心のある４つの免疫集団であるＴＡＭ、Ｔｒｅｇ、ＣＤ４＋Ｔ細胞、及びＣＤ８＋Ｔ細胞の遺伝子シグネチャを取得した。次に、ＬＩＦ発現と４つの免疫集団の遺伝子シグネチャとの相関、及びＬＩＦと関心のある遺伝子のセットとの相関を計算した。
【０２０３】
実施例２４−ＧＬ２６１Ｎ、ＲＣＡＳ、及びＩＤ８モデルにおけるＬＩＦ機能を抑制する
がんにおけるＬＩＦの潜在的な免疫調節的役割について、ＧＢＭ及び卵巣がん（ＬＩＦがＴＡＭ及びＴｒｅｇと強く相関する腫瘍型）の免疫適格性マウスモデルにおいて検討した。ＧＢＭ細胞株ＧＬ２６１Ｎ（ＧＬ２６１細胞株の派生物）、ＧＦＡＰ−ｔｖ−ａＲＣＡＳ−ＰＤＧＦＡ、ｓｈｐ５３、ｓｈＮＦ１（ＲＣＡＳ）組換えモデル、及びマウスの脳（ＧＬ２６１Ｎ及びＲＣＡＳ）と腹膜（ＩＤ８）に腫瘍を生じさせた卵巣がん細胞株ＩＤ８は、高レベルのＬＩＦを発現することが確認された（図２５）。
【０２０４】
中和抗体を使用して、ＧＬ２６１Ｎ、ＲＣＡＳ、及びＩＤ８モデルにおけるＬＩＦ機能を抑制した。これらのモデルでは、腫瘍増殖の減少及び生存率の増加が観察された（図２０Ｃ、２０Ｇ、２０Ｈ、２０Ｋ、２０Ｐ）。ＬＩＦを発現しない腫瘍であるＧＬ２６１腫瘍モデルにおけるＬＩＦの遮断は、腫瘍の増殖を阻害しなかった（図２５Ｅ）。ＬＩＦに対する中和抗体は、これらの動物モデル（高ＬＩＦ発現に基づいて選択された）においてｐ−ＳＴＡＴ３レベルの著しい減少を誘導し、ＬＩＦがＪＡＫ−ＳＴＡＴ３経路を誘導する主なサイトカインであることが示された（図２０Ｄ及び２０Ｌ）。さらに、Ｋｉ６７陽性細胞の有意な減少は観察されなかった一方で、切断されたカスパーゼ３（ＣＣ３）の増加が観察され、ＬＩＦの遮断が腫瘍細胞死を誘導することが示唆された（図２０Ｄ、２０Ｌ）。
【０２０５】
材料及び方法
全ての動物実験は、欧州連合及び国内指令に合致して、Ｖａｌｌ  ｄ’Ｈｅｂｒｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＩｎｓｔｉｔｕｔｅのＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅのガイドラインに従って承認され、実施された。メスＣ５７ＢＬ／６及びＮＯＤＳＣＩＤは、Ｊａｎｖｉｅｒから購入した。脳腫瘍モデルでは、８週齢Ｃ５７ＢＬ／６マウスの右脳半球の線条体（人字縫合の１ｍｍ前側で人字縫合の１．８ｍｍ側方；脳実質内２．５ｍｍ）に、いずれもルシフェラーゼ発現を有する３×１０５個のＧＬ２６１Ｎ、ＧＬ２６１、又はＲＣＡＳ細胞を定位的に種した。卵巣腫瘍モデルでは、８週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスに、５×１０６個のＩＤ８卵巣がん細胞を腹腔内注射した。３００μｇ（ＩＤ８）又は６００μｇ（ＧＬ２６１Ｎ、ＧＬ２６１、及びＲＣＡＳ）の用量の抗ＬＩＦ又は対照ＩｇＧを週２回腹腔内投与した。さらに、２００μｇの用量のラット抗マウスＰＤ１遮断抗体（抗ＰＤ１、ＢｉｏＸＣｅｌｌ）、抗マウス／ヒト／ラットＣＣＬ２抗体（ＭＣＰ−１、ＢｉｏＸｃｅｌｌ）又は３μｇの抗マウスＣＸＣＬ９抗体（Ｒ＆Ｄ）を週２回腹腔内投与した。腫瘍進行は、体重によって、及び腹囲（ＩＤ８）によって、又はＸｅｎｏｇｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳ（登録商標）スペクトル（ＧＬ２６１Ｎ、ＧＬ２６１、及びＲＣＡＳ）を使用した生物発光測定によって、モニターした。マウスは、疾病や苦痛の臨床徴候（すなわち悪液質、食欲不振、又は呼吸数の増加）を示したとき、又は腫瘍が正常な身体機能を妨害し始めたときに安楽死させた。
【０２０６】
実施例２５−ＧＬ２６１Ｎ腫瘍の抗ＬＩＦ処置
免疫不全動物を使用して、抗ＬＩＦ処置に対する免疫系の役割を評価した。ＲＡＧ−／−又はＮＯＤ  ＳＣＩＤマウス（いずれも適応免疫応答を欠くマウスの系統）におけるＧＬ２６１Ｎ腫瘍の抗ＬＩＦによる処置は、腫瘍増殖に有意な影響を示さなかった（図２５Ｆ）。結果は、ＬＩＦの遮断に対する抗腫瘍反応が、主に適応免疫応答によって媒介されることを示した。
【０２０７】
材料及び方法
使用されたマウスが、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓからのＲＡＧ−／−、ＣＣＬ２−／−、及びＣＸＣＬ９−／−、そしてＣｈａｒｌｅｓ  ＲｉｖｅｒからのＮＯＤ  ＳＣＩＤγ（ＮＳＧ）であったことを除いて、実施例２４の方法を用いた。
【０２０８】
実施例２６−抗ＬＩＦ処置は腫瘍促進性ＴＡＭ数を減少させてＣＤ８＋Ｔ細胞腫瘍浸潤を増加させる
抗ＬＩＦ処置に対する免疫応答伴う分子機序は、腫瘍促進性ＴＡＭ（ＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６Ｇ−Ｌｙ６Ｃ−ＣＤ２０６＋ＣＤ１６３＋ＭＨＣＩＩｌｏｗ）数の減少（図２０Ｅ、２０Ｉ、２０Ｍ）、そして重要なことには、抗ＬＩＦでの処置時におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の腫瘍浸潤の同時の増加（図２０Ｄ、２０Ｆ、２０Ｊ、２０Ｌ、２０Ｎ）を観察することによって、さらに調べた。抗ＬＩＦで処置すると、Ｔｒｅｇ及びＮＫ細胞数は、それぞれ減少し増加した（図２５Ｇ〜２５Ｊ）。浸潤性ＣＤ８＋Ｔ細胞はＧＺＭＡを発現し、それらが細胞傷害効果を媒介することが示唆された（図２６Ａ）。さらに、ＣＤ８＋Ｔ細胞の区画は、ＰＤ１を発現した（図２６Ｂ、２６Ｃ）。動員された単球由来のＴＡＭ（ＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６Ｇ−Ｌｙ６Ｃ−ＣＤ４９ｄ＋）は、抗ＬＩＦに応答して減少し（図２６Ｄ）、樹状細胞集団（ＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ１１ｃ＋、ＭＨＣＩＩ＋）には大きな影響は見られず（図２６Ｅ）、組織内のＩＬ−１０又はＩＬ−１２のレベルにも大きな影響は見られなかった（図２６Ｆ）。
【０２０９】
材料及び方法
マウスを安楽死させ、腫瘍を単離した。ＧＬ２６１Ｎ及びＲＣＡＳ腫瘍を脳腫瘍解離キットで酵素的に消化し、ミエリンをミエリン除去ビーズＩＩ（全てＭｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃから）を使用して除去した。ＩＤ８腫瘍をマウス腫瘍解離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）で処理し、腹水を採取した。器官型モデルのヒトＧＢＭ検体及び患者由来の異種移植片は、ヒト腫瘍解離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）で酵素的に消化した。
【０２１０】
ＧＬ２６１Ｎ細胞懸濁液から、抗Ｌｙ６Ｃ−ＡＰＣ及び抗ＡＰＣマイクロビーズと抗Ｌｙ６Ｇマイクロビーズを使用してＬｙ６Ｇ＋とＬｙ６Ｃ＋集団を枯渇させ、次にＣＤ１１ｂ磁気ビーズを使用して、ＣＤ１１ｂ＋細胞の単離を実施した。ＣＤ４５＋細胞の単離は、抗マウスＣＤ４５磁気ビーズを使用して実施した。ＩＤ８細胞懸濁液から、抗ＣＤ１１ｂ磁気ビーズを使用してＣＤ１１ｂ＋細胞を単離した。最後に、器官型切片から、抗ヒトＣＤ４５磁気ビーズを使用してＣＤ４５＋細胞の単離を実施した。全ての単離手順は、製造会社の使用説明書に従って、ＭｕｌｔｉＭＡＣＳ  Ｃｅｌｌ２４  Ｓｅｐａｒａｔｏｒ  Ｐｌｕｓを使用して実施し、磁気ビーズはＭｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃから購入した。
【０２１１】
ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ３３５、ＣＤ１６３、ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＸＣＲ３（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＣＤ４５、ＣＤ８、Ｆ４／８０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ２０６、ＣＤ４９ｄ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＬＩＦＲ（Ｎｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）Ｌｙ６Ｇ、Ｌｙ６Ｃ、ＣＣＲ２、及びＰＤ１（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）に対するマウス抗体をフローサイトメトリーのために使用した。ＦｏｘＰ３、Ｇｒａｎｚｙｍｅ  Ａ（ＧＺＭＡ）、ＣＸＣＬ９（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、及びＣＣＬ２（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）の細胞内染色は、特異的染色セット（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して実施した。フローヒト試験では、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１４（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＣＤ４５、ＣＤ３、ＣＸＣＲ３（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、及びＣＤ８（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｇｅｎ）に対する抗体を使用した。場合によっては、サンプルを事前にＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ固定可能黄色死染キット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）と共にインキュベートして、生存率を判定した。白血球集団を確立するために、ヒトＧＢＭ器官型及び患者由来の異種移植片の陽性対照として、１０６個のＰＢＭＣ（「スパイクＰＢＭＣ」と称される）を対照サンプルに添加した。
【０２１２】
サンプルはＢＤ  ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（商標）細胞分析装置又はＮａｖｉｏｓ（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）で取得し、データはＦｌｏｗＪｏソフトウェアで解析した。
【０２１３】
実施例２７−ＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤はＬＩＦ遮断に対する抗腫瘍応答の結果ではない
腫瘍が確立されてから４日間マウスを抗ＬＩＦで処置する急性処置実験を実施することよって、ＬＩＦ媒介腫瘍免疫浸潤の制御が、抗腫瘍反応の原因であるのか又は結果であるのかを評価した。４日間の処置は腫瘍増殖には影響しなかったが（図２６Ｇ）、ＣＤ８＋Ｔ細胞腫瘍浸潤に関与するのには十分であった（図２６Ｈ）。これは、ＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤が、ＬＩＦの遮断に対する抗腫瘍応答の結果ではなかったことを示す。
【０２１４】
実施例２８−遺伝子応答妥当性検証
ＩＤ８マウスモデルからＣＤ１１ｂ＋細胞を単離し、細胞を抗ＬＩＦ抗体で処理し、トランスクリプトミクス解析を実施することにより、下方制御された発がん性表現型に関連する遺伝子を判定した。同定された遺伝子は、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ７、ＰＦ４、ＣＴＳＫ、ＣＤ２０６、及びＣＤ１６３であった。そして興味深いことに、ＣＸＣＬ９は上方制御された（図２１Ａ）。前述の遺伝子応答は、ＩＤ８及びＧＬ２６１Ｎモデルにおいて、ｑＲＴ−ＰＣＲによって検証された（図２１Ｂ）。
【０２１５】
ＣＸＣＬ９及びＣＣＬ２は、それぞれＣＤ８＋Ｔ細胞腫瘍浸潤、及びＴＡＭとＴｒｅｇの動員に重要なケモカインとして際立っていた。ＴＡＭ（ＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６Ｇ−Ｌｙ６Ｃ−）における、ＬＩＦの中和によるＣＸＣＬ９及びＣＣＬ２の制御が確認された（図２１Ｃ）。ＴＡＭの免疫染色及び単離は、ＴＡＭにおいてＣＸＣＬ９、ＣＣＬ２、ＣＤ２０６、及びびＣＤ１６３が主に発現され（図２１Ｄ）、抗ＬＩＦによる処置がそれらの発現を制御することを示した（図２１Ｃ、２１Ｄ）。ＣＸＣＲ３（ＣＸＣＬ９受容体）、ＣＣＲ２（ＣＣＬ２受容体）、及びＬＩＦＲは、ＴＡＭ及びＣＤ８＋Ｔ細胞（図２７Ａ）で発現される。ｑＲＴ−ＰＣＲ解析は、ＧＬ２６１Ｎ腫瘍から選別された、ＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６Ｇ−Ｌｙ６Ｃ−及びＣＤ１１ｂ−Ｌｙ６Ｇ−Ｌｙ６Ｃ−細胞における、ＣＤ１１ｂ及びＣＸＣＬ９  ｍＲＮＡの存在を定量化した。（図２７Ｂ）
【０２１６】
材料及び方法
ｍＲＮＡ抽出（ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ又はＭｉｃｒｏ  Ｋｉｔ、Ｑｉａｇｅｎ）、レトロトランスクリプション（ＢｉｏＲａｄからのｍＲＮＡ用ｉＳｃｒｉｐｔ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘ）のために細胞を溶解し、製造業者の推奨に従って、Ａｐｐｌｉｅｄ  ＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓのＴａｑｍａｎプローブを使用してｑＲＴ−ＰＣＲを実施した。パラフィン包埋切片については、高純度ＦＦＰＥＴ  ＲＮＡ単離キット（Ｒｏｃｈｅ）を使用して、製造会社の使用説明書に従ってＲＮＡを得た。反応は、ＣＦＸ３８４  Ｔｏｕｃｈ（商標）リアルタイムＰＣＲ検出システム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）において実行し、結果は、Ｃｔ法で計算された対照サンプルに対する倍数変化として表した。内部正規化対照として、マウス又はヒトＡＣＴＢ又はＧＡＰＤＨを使用した。
【０２１７】
ＲＮＡは、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘマイクロアレイプラットフォーム上で、Ｍｏｕｓｅ  Ｇｅｎｅ  ２．１  ＳＴを使用してアッセイした。次に、それをＲｏｂｕｓｔ−Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ  Ａｖｅｒａｇｅ（ＲＭＡ）に基づいて正規化した。ｌｉｍｍａ  Ｂｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒパッケージを使用して、対合サンプルを考慮し、ベイズ線形回帰を通じて、抗ＬＩＦ処置されたマウスにおいて示差的に発現される遺伝子を同定した。
【０２１８】
実施例２９−ＣＸＣＬ９ノックアウトマウス及びＣＣＬ２ノックアウトマウスにおける抗ＬＩＦ応答
ＣＸＣＬ９及びＣＣＬ２ノックアウトマウス（ＣＸＣＬ９−／−、ＣＣＬ２−／−）マウスモデルを用いて、ＬＩＦの発がん性機能におけるＣＸＣＬ９及びＣＣＬ２の制御との関連性を試験した。これらのマウスモデルにおける腫瘍は、ＣＸＣＬ９及びＣＣＬ２に対する遮断抗体で処置した。興味深いことに、ＬＩＦの阻害に対する抗腫瘍応答は、ＣＸＣＬ９−／−マウスでは鈍化したが、ＣＣＬ２−／−マウスでは鈍化しなかった（図２１Ｆ）。同様に、ＣＸＣＬ９中和抗体は抗ＬＩＦに対する抗がん応答を阻害したが、ＣＣＬ２抗体は阻害しなかった（図２１Ｆ）。これらの結果は、抗ＬＩＦ応答の主な媒介物が、ＣＸＣＬ９であることを示す。予想通り、ＣＸＣＬ９の遮断は、抗ＬＩＦに応答してＣＤ８＋Ｔ細胞腫瘍浸潤を減少させた（図２１Ｇ）。
【０２１９】
材料及び方法
スライドを脱パラフィン化し、水和させた。抗原検索は、ｐＨ６又はｐＨ９のクエン酸抗原賦活化溶液（ＤＡＫＯ）、１０分間の１０％ペルオキシダーゼ（Ｈ２Ｏ２）、室温で１時間のブロッキング液（２％ＢＳＡ）を使用して実施した。検出システムとして、製造業者の指示に従ってＥｎＶｉｓｉｏｎ  ＦＬＥＸ＋（ＤＡＫＯ）を使用し、ヘマトキシリン（ｈｅｍａｔｏｘｉｌｉｎ）による対比染色、脱水、及びマウンティング（ＤＰＸ）がそれに続いた。患者からのＧＢＭ腫瘍におけるＬＩＦ、ＣＣＣＬ２、ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、及びＣＸＣＬ９の染色の定量化をＨスコア（３×強染色の百分率＋２×中等度染色の百分率＋弱染色の百分率）として表したところ、０〜３００の範囲が得られた。ｐ−ＳＴＡＴ３、Ｋｉ６７、ＣＣ３、及びＣＤ８の定量化は、ＩｍａｇｅＪを使用して実施し、群当たり５匹のマウス毎に３つの異なる視野の細胞総数をカウントし、陽性細胞の百分率を算出した。グラフ中のデータは、平均値±ＳＥＭとして提示される。
【０２２０】
免疫組織化学的抗体：ヒトＬＩＦ（Ａｔｌａｓ；１：２００）、マウスＬＩＦ（ＡｂＣａｍ；１：２００）、マウスｐ−ＳＴＡＴ３（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ；１：５０）、マウスＫｉ６７（ＡｂＣａｍ；１：２００）、マウスＣｌｅａｖｅｄ−Ｃａｓｐａｓｅ３（ＣＣ３）（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ；１：５００）、マウスＣＤ８（Ｂｉｏｓｓ；１：２００）、ヒト／マウスＣＣＬ２（Ｎｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、１：２００）、ヒトＣＸＣＬ９（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｃｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；１：１００）、及びヒトＣＤ１６３（Ｌｅｉｃａ  Ｎｏｖａｃａｓｔｒａ；１：２００）。
【０２２１】
核をＤＡＰＩで対比染色し、レーザー走査型共焦点ＮＩＫＯＮ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  Ｔｉ顕微鏡を使用して画像を取得した。免疫蛍光の定量化はＩｍａｇｅＪを使用して実施し、群当たり３〜５匹の各マウス毎に２〜３つの異なる視野のＣＤ１１ｂ、Ｉｂａ１、又はＣＤ３について陽性である全て又は最大１００個の細胞をカウントして、Ｉｂａ１（ＧＬ２６１Ｎモデルのため）又はＣＤ６８／ＣＤ１１ｂ（ＩＤ８モデルのため）陽性集団内のＣＣＬ２、ＣＤ２０６、及びＣＤ１６３に対して陽性である細胞の百分率を算出した。ＣＸＣＬ９については、このサイトカインのシグナルで取り囲まれる細胞の百分率を全細胞集団内で算出した。器官型切片については、各患者（ｎ＝３）の３〜４つの視野を定量化した。器官型組織免疫蛍光については、条件毎に５つの異なるＺスタック画像をＦｉｇｈｉ−Ｉｍａｇｅ  Ｊソフトウェアによって処理した。ＣＤ８＋Ｔ細胞については、全集団間のＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率を算出した。グラフ中のデータは、平均±ＳＥＭで表される。
【０２２２】
免疫蛍光抗体：ヒト／マウスＣＣＬ２（Ｎｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、１：２００）、ヒト／マウスＣＤ１１ｂ（ＡｂＣａｍ；１：２０００）、ヒト／マウスＩｂａ１（Ｗａｋｏ；１：１０００）、マウスＣＤ６８（ＡｂＣａｍ；１：２００）、ヒト／マウスＣＤ２０６（Ａｂｃａｍ；１：５００）、マウスＣＤ１６３（Ａｂｃａｍ；１：２００）、ＣＸＣＬ９（マウスＮｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ１：２００；ヒトＴｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｃｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；１：２００）、及びヒトＣＤ８（ＤＡＫＯ；１：２００）。
【０２２３】
実施例３０−マウス骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）の初代培養におけるＬＩＦの効果
マウスＢＭＤＭの初代培養に対するＬＩＦの効果を試験して、マクロファージにおけるＬＩＦによるＣＸＣＬ９及びＣＣＬ２の制御に関与する分子機序を探究した。ＬＩＦは、ＢＭＤＭにおいてＩＦＮγ又はＩＬ４によって誘導された、いくつかのＭ１様及びＭ２様マーカーの発現を制御した（図２２Ａ）。ＢＭＤＭをＩＦＮγで処理した場合を除き、ＣＸＣＬ９発現は検出されなかった。組換えＬＩＦは、ｍＲＮＡレベルとタンパク質レベルの双方で、ＩＦＮγによるＣＸＣＬ９の誘導を抑制した（図２２Ｂ及び２２Ｃ）。ＣＸＣＬ９は、新鮮なヒトＧＢＭ腫瘍から得られた患者由来のＴＡＭ（ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ１４＋）において、ＩＦＮγ及びＬＩＦによっても制御された（図２２Ｄ及び２９Ａ）。これらの結果は、組換えＬＩＦが、ｍＲＮＡレベルとタンパク質レベルの双方で、ＬＰＳによるＣＸＣＬ９の誘導を抑制したことを観察することで、さらに検証された。（図２９Ｂ）。したがって、ＬＩＦはＣＸＣＬ９誘導のリプレッサーとしての機能を果たした。ＬＩＦで処理した際のＣＸＣＬ９プロモーターのｐ−ＳＴＡＴ３への結合は、観察されなかった（データ未掲載）。これと一致して、ＬＩＦ処置は、Ｈ３リジン２７トリメチル化（Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３）のレベルを増加させ、アセチル化Ｈ４（Ｈ４ａｃ）のレベルを減少させ、ＣＸＣＬ９プロモーター領域へのＥＺＨ２結合を増加させることが分かり、ＬＩＦがエピジェネティックなサイレンシングを通じて、ＣＸＣＬ９発現を制御することが示された（図２２Ｅ）。
【０２２４】
材料及び方法
骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）は、６〜１０週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスから得た。簡潔に述べると、２０％の熱不活化ＦＢＳと、マクロファージコロニー刺激因子の供給源としての３０％のＬ細胞熟成培地（ｃｍ）とを補充したＤＭＥＭ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で、骨髄前駆体を培養した。６日間の培養後に、分化したマクロファージを得た。Ｌ細胞ｃｍは、１０％の熱不活性化ＦＢＳ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充したＤＭＥＭ中で増殖させたＬ９２９細胞から得た。ヒトマクロファージは、ヒトＧＢＭ標本から単離した。簡潔に述べると、腫瘍解離キットで腫瘍組織を酵素的に消化し、ＣＤ１１ｂ磁気ビーズ及びＭｕｌｔｉＭＡＣＳ  Ｃｅｌｌ２４分離器Ｐｌｕｓ（全てＭｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃから）を使用して、ＣＤ１１ｂ＋細胞を単離した。得られたＣＤ１１ｂ＋細胞は、１０％の熱不活化ＦＢＳ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充したＲＰＭＩ培地中で培養した。組換えＬＩＦ、ＩＦＮγ、ＬＰＳ、及びＩＬ４は、それぞれ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ、Ｓｉｇｍａ、及びＣｒｅａｔｉｖｅ  ＢｉｏＭａｒｔから購入した。
【０２２５】
クロマチンの免疫沈降は、Ｕｐｓｔａｔｅ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）の標準プロトコルに従って行った。簡潔に述べると、１％のホルムアルデヒドを使用して、１．２×１０７個のＢＭＤＭを３７℃で１０分間固定して採取し、超音波分解して２００〜５００ｂｐのクロマチン断片を生成した。次に、２ｊ．ｔｇの抗ｐ−ＳＴＡＴ３（Ｔｙｒ７０５）抗体、抗トリメチルヒストンＨ３（Ｌｙｓ２７）（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）、抗アセチルＨ４（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）又は抗ＥＺＨ２（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して、２０ｊ．ｔｇの剪断されたクロマチンを一晩免疫沈降させた。２０ｊ．ｔｌのプロテインＧ磁気ビーズを使用して免疫複合体を回収して洗浄し、溶出させた。６５℃、４時間で架橋を逆転させ、ＱｉａｇｅｎからのＰＣＲ精製キットを使用して、免疫沈降ＤＮＡを回収した。関心のあるゲノム領域は、ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用したリアルタイム定量ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）によって同定した。
【０２２６】
実施例３−患者における免疫細胞腫瘍浸潤のＬＩＦ制御
実際のがん患者の腫瘍において、ＬＩＦがＣＸＣＬ９の抑制を通じて免疫細胞腫瘍浸潤を制御することを確認するために、患者から新鮮に入手されたＧＢＭ標本から器官型組織培養物を生成した。これらの器官型モデルは、患者の腫瘍の組織構造及びストロマ（免疫細胞を含む）を維持する腫瘍切片の短期培養を可能にする。腫瘍細胞が高レベルのＬＩＦを発現した３人の患者からの器官型組織培養物（図２２Ｈ）。Ｉｂａ１マーカーによって検出されたように、３つの全ての培養物でＴＡＭの大きな浸潤が存在し、ＴＡＭのほとんどは、ＣＣＬ２、ＣＤ１６３、及びＣＤ２０６を発現した。興味深いことに、ＬＩＦに対する中和抗体による器官型培養物の３日間の処置は、ＣＣＬ２、ＣＤ１６３、及びＣＤ２０６の減少とＣＸＣＬ９発現の増加を促進した（図２２Ｈ）。
【０２２７】
材料及び方法
ヒトＧＢＭ標本は、Ｖａｌｌ  ｄ’Ｈｅｂｒｏｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃ  Ｈｏｓｐｉｔａｌから入手した。臨床プロトコルは、全ての対象からインフォームドコンセントを得て、Ｖａｌｌ  ｄ’Ｈｅｂｒｏｎ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｂｏａｒｄ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ（ＣＥＩＣ）によって承認された。
【０２２８】
ＧＢＭ神経球は、以下に記載されるようにして生成した。簡潔に述べると、外科的切除後３０分以内に腫瘍サンプルを処理した。ヒトＧＢＭサンプルの細かく刻んだ断片は、ＰＢＳ中の２００Ｕ／ｍｌのコラゲナーゼＩ（Ｓｉｇｍａ）及び５００Ｕ／ｍｌのＤＮａｓｅＩ（Ｓｉｇｍａ）で、３７℃で１時間、絶えず激しく撹拌しながら消化した。単一細胞懸濁液を７０μｍの細胞ストレーナー（ＢＤ  Ｆａｌｃｏｎ）（ＢＤファルコン）を通して濾過し、ＰＢＳで洗浄した。最後に、細胞を再懸濁し、引き続いて、Ｂ２７、ペニシリン／ストレプトマイシン（全てライフテクノロジーズから）及び増殖因子（２０ｎｇ／ｍｌのＥＧＦ及び２０ｎｇ／ｍｌのＦＧＦ−２（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ））を補充した、Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ培地からなるＧＢＭ培地中で培養した。
【０２２９】
ＧＢＭ器官型切片培養物は、次のように生成した。切除後、外科標本を外科用メスで長さ５〜１０ｍｍ、幅１〜２ｍｍの長方形のブロックに切断し、６ウェルプレート内の０．４μｍ膜培養インサート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に個別に移し入れた。６ウェルプレートに挿入物を入れる前に、Ｂ２７（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、及び増殖因子（２０ｎｇ／ｍｌのＥＧＦ及び２０ｎｇ／ｍｌのＦＧＦ−２）（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ）を補充した、１．２ｍｌのＮｅｕｒｏｂａｓａｌ培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を各ウェルに入れた。培養は、定湿、９５％の空気、５％のＣＯ２で３７℃に保った。１日後、切片をラット抗ＬＩＦ遮断抗体又はその対応する正常ＩｇＧ（１０μｇ／ｍｌ）で３日間処理した。ＣＸＣＬ９遮断試験では、ヒトＣＸＣＬ９に対する中和マウスモノクローナル抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を１．５μｇ／ｍｌで培養物に添加した。場合によっては、０．１ｎｇ／ｍｌのヒトｒＩＦＮγ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を２４時間添加した。並行して、Ｌｙｍｐｈｏｓｅｐ（Ｂｉｏｗｅｓｔ）を使用して遠心分離密度分離によって、同一患者の全血から末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を得た。ＰＢＭＣは、使用するまで１０％の不活化ＦＢＳ及び１０％のＤＭＳＯを補充したＲＰＭＩ培地中で凍結保存した。免疫細胞浸潤アッセイのために、対照又は抗ＬＩＦ切片をＭａｔｒｉｇｅｌ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）中に包埋し、その後、完全ＲＰＭＩ培地中で２４ウェルプレートに１×１０６個のＰＢＭＣを添加した。さらに、上清を採取し、器官型切片をＭａｔｒｉｇｅｌから回収し、ＩＦ及びフローサイトメトリーのためにさらに処理した。いくつかの条件で、ＰＢＭＣを１０６個の細胞／ｍｌの濃度でＰＢＳで再懸濁し、５μＭのＣｅｌｌ  Ｔｒａｃｅ  ＣＦＳＥ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で２０分間インキュベートした。インキュベーション後、細胞をＲＰＭＩで洗浄し、Ｍａｔｒｉｇｅｌに包埋された切片に添加した。２４時間後、蛍光性のＰＢＭＣのＭａｔｒｉｇｅｌへの侵入を、各条件毎に５つの異なる領域で遊走する細胞をカウントすることによって、顕微鏡下で評価した。
【０２３０】
実施例３２−抗ＬＩＦによる処置は高レベルのＬＩＦを発現する腫瘍においてＣＸＣＬ９を増加させＣＣＬ２発現を減少させた
免疫細胞腫瘍浸潤に対するＬＩＦの影響を評価した。抗ＬＩＦ処置後、高レベルのＬＩＦを発現する腫瘍を有する３人の患者からの器官型切片を、同じ患者からの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）と共にインキュベートした（図２３Ａ）。抗ＬＩＦによる処置は、ＣＸＣＬ９を増加させ、ＣＣＬ２発現を減少させ（図２３Ｂ）、腫瘍標本周囲のＭａｔｒｉｇｅｌへの免疫細胞浸潤を誘導した（図２３Ｂ）。特に、ＣＤ８＋Ｔ細胞はＬＩＦ遮断時に腫瘍組織に動員され（図２３Ｂ、２３Ｃ）、ＣＸＣＬ９の中和によりＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤が阻止されたことから、この効果はＣＸＣＬ９に依存した（図２３Ｄ）。
【０２３１】
同様の結果は、生体内モデルの文脈において確認された。腫瘍がＬＩＦを高レベルで発現した４人の患者からの腫瘍断片をＮＳＧマウスに接種し、これらのマウスをＬＩＦ中和抗体で５日間処置した。次に、各患者のＰＢＭＣをマウスに接種した。興味深いことに、抗ＬＩＦで処置されたマウスは、ＣＤ８＋Ｔ細胞腫瘍浸潤の増加を示し、浸潤性ＣＤ８＋Ｔ細胞のほとんどは、ＣＸＣＬ９受容体であるＣＸＣＲ３を発現していた（図２３Ｅ）。
【０２３２】
実施例３３−ＰＤ１遮断による抗腫瘍応答の増加
顕性腫瘍を有するマウスモデルを抗ＬＩＦ及び抗ＰＤ１抗体で処置し、ＬＩＦ及びＰＤ１の遮断の組み合わせが、ＧＬ２６１Ｎ、ＲＣＡＳ、及びＩＤ８腫瘍におけるそれぞれの個々の処置と比較して、腫瘍増殖をさらに減少させることを観察した（図３０）。さらに、重要なことに、抗ＬＩＦと抗ＰＤ１の組み合わせ処置は、全生存期間を増加させ、腫瘍の退縮を誘導した（図２３Ｆ及び２３Ｇ）。
【０２３３】
完全な腫瘍退縮退縮を示すマウスを集め、３×１０５個の腫瘍細胞を再接種した。これらのマウスでは腫瘍が出現しなかった一方で、並行して同数の細胞を接種した未感作マウスでは腫瘍が急速に増殖した（図２３Ｈ）。この再挑戦実験の結果は、抗ＬＩＦと抗ＰＤ１による併用療法が、免疫記憶を生じさせたことを示した。
【０２３４】
請求された発明の実施形態
ここで、本明細書に記載される発明の特定の実施形態を記載する。
１．個体のがんを治療するための、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤と組み合わせた、白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチドの使用。
２．ＬＩＦ結合ポリペプチドと、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤とが、別個の製剤中で個体に投与される、実施形態１の使用。
３．ＬＩＦ結合ポリペプチドと、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤とが、同一製剤中で個体に投与される、実施形態１の使用。
４．ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が個体に投与される前に、ＬＩＦ結合ポリペプチドが個体に投与される、実施形態１又は２の使用。
５．ＬＩＦ結合ポリペプチドが個体に投与される前に、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が個体に投与される、実施形態１又は２の使用。
６．ＬＩＦ結合ポリペプチドが個体に投与されるのと同時に、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が個体に投与される、実施形態１又は２の使用。
７．ＬＩＦ結合ポリペプチドが、免疫グロブリン可変領域の断片、又は免疫グロブリン重鎖定常領域を含む、実施形態１〜６のいずれか１つの使用。
８．ＬＩＦ結合ポリペプチドが、ＬＩＦと特異的に結合する抗体を含む、実施形態１〜７のいずれか１つの使用。
９．ＬＩＦと特異的に結合する抗体が、ヒト抗体フレームワーク領域に由来する少なくとも１つのフレームワーク領域を含む、実施形態８の使用。
１０．ＬＩＦと特異的に結合する抗体がヒト化されている、実施形態８の使用。
１１．ＬＩＦと特異的に結合する抗体が脱免疫化されている、実施形態８の使用。
１２．ＬＩＦと特異的に結合する抗体が、２つの免疫グロブリン重鎖と、２つの免疫グロブリン軽鎖とを含む、実施形態８の使用。
１３．ＬＩＦと特異的に結合する抗体が、ＩｇＧ抗体である、実施形態８の使用。
１４．ＬＩＦと特異的に結合する抗体が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、単一ドメイン抗体、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又はナノボディである、実施形態８の使用。
１５．ＬＩＦと特異的に結合する抗体が、
ａ）配列番号１〜３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；
ｂ）配列番号４又は５に記載されるアミノ酸配列のいずれか１つを含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；
ｃ）配列番号６〜８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；
ｄ）配列番号９又は１０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；
ｅ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び
ｆ）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）
を含む、実施形態８〜１４のいずれか１つの使用。
１６．ＬＩＦと特異的に結合する抗体が、
ａ）配列番号４１、４２、４４、又は６６のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）配列；及び
ｂ）配列番号４５〜４８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）配列
を含む、実施形態８〜１５のいずれか１つの使用。
１７．ＶＨ配列が、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一であり；ＶＬ配列が、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である、実施形態１６の使用。
１８．ＶＨ配列が、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と同一であり、ＶＬ配列が、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と同一である、実施形態１７の使用。
１９．ＬＩＦと特異的に結合する抗体が、
ａ）配列番号５７〜６０又は６７のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン重鎖配列；及び
（ｂ）配列番号６１〜６４のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン軽鎖配列
を含む、実施形態８〜１５のいずれか１つの使用。
２０．ＬＩＦと特異的に結合する抗体が、約２００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する、実施形態８〜１９のいずれか１つの使用。
２１．ＬＩＦと特異的に結合する抗体が、約１００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する、実施形態８〜１９のいずれか１つの使用。
２２．ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が、抗体又はそのＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２結合断片を含む、実施形態８〜２１のいずれか１つの使用。
２３．抗体がＰＤ−１と特異的に結合する、実施形態２２の使用。
２４．抗体が、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ＡＭＰ−５１４、チスレリズマブ、スパルタリズマブ、又はそのＰＤ−１結合断片を含む、実施形態２２の使用。
２５．抗体が、ＰＤＬ−１又はＰＤＬ−２と特異的に結合する、実施形態２２の使用。
２６．抗体が、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、又はＦＡＺ０５３、又はそのＰＤＬ−１又はＰＤＬ−２結合断片を含む、実施形態２５の使用。
２７．ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２に結合するＦｃ融合タンパク質を含む、実施形態８〜１６のいずれか１つの使用。
２８．Ｆｃ融合タンパク質が、ＡＭＰ−２２４又はそのＰＤ−１結合断片を含む、実施形態２７の使用。
２９．ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２の小分子阻害剤を含む、実施形態１〜２８のいずれか１つの使用。
３０．ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２を通じたシグナル伝達の小分子阻害剤が、Ｎ−｛２−［（｛２−メトキシ−６−［（２−メチル［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メトキシ］ピリジン−３−イル｝メチル）アミノ］エチル｝アセトアミド（ＢＭＳ２０２）；（２−（（３−シアノベンジル）オキシ）−４−（（３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ダイオキシン−６−イル）−２−メチルベンジル）オキシ）−５−メチルベンジル）−Ｄ−セリン塩酸塩；（２Ｒ，４Ｒ）−１−（５−クロロ−２−（（３−シアノベンジル）オキシ）−４−（（３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ダイオキシン−６−イル）−２−メチルベンジル）オキシ）ベンジル）−４−ヒドロキシピロリジン−２−カルボン酸；３−（４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−１−フェニルインドール；３−（４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−１−フェニル−１ｈ−インドール；Ｌ−α−グルタミン、Ｎ２，Ｎ６−ビス（Ｌ−セリル−Ｌ−アスパラギニル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−セリル−Ｌ−α−グルタミル−Ｌ−セリル−Ｌ−フェニルアラニル）−Ｌ−リシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−バリル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−グルタミニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−リシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミニル−Ｌ−イソロイシル−Ｌ−リシル；（２Ｓ）−１−［［２，６−ジメトキシ−４−［（２−メチル［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メトキシ］フェニル］メチル］−２−ピペリジンカルボン酸；グリシンアミド、Ｎ−（２−メルカプトアセチル）−Ｌ−フェニルアラニル−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−ロイシル−Ｎ−メチルグリシル−Ｌ−トリプトフィル−Ｌ−セリル−Ｌ−トリプトフィル−Ｎ−メチル−Ｌ−ノルロイシル−Ｎ−メチル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−システイニル−、環式（１→１４）−チオエーテル；又はそれらの誘導体又は類似体を含む、実施形態２９の使用。
３１．がんが、進行性固形腫瘍、神経膠芽腫、胃がん、皮膚がん、前立腺がん、膵臓がん、乳がん、精巣がん、甲状腺がん、頭頸部がん、肝臓がん、腎臓がん、食道がん、卵巣がん、結腸がん、肺がん、リンパ腫、軟部組織がん、又はそれらの任意の組み合わせを含む、実施形態１〜３０のいずれか１つの使用。
３２．がんが、非小細胞肺がん、上皮性卵巣がん、又は膵管腺がんを含む、実施形態３１の使用。
３３．がんが、単剤療法として投与されるＬＩＦ結合ポリペプチド又はＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤の治療量による治療に対して不応性である、実施形態１〜３２のいずれか１つの使用。
３４．がんを有する個体に、
ａ）白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチドと；
ｂ）ＰＤ−１（ＣＤ２７９）、ＰＤＬ−１（ＣＤ２７４）、又はＰＤＬ−２（ＣＤ２７３）シグナル伝達阻害剤と
の組み合わせの有効量を投与するステップを含む、がんを有する個体を治療する方法。
３５．ＬＩＦ結合ポリペプチドと、ＰＤ−１（ＣＤ２７９）、ＰＤＬ−１（ＣＤ２７４）、又はＰＤＬ−２（ＣＤ２７３）シグナル伝達阻害剤とが、別々に投与される、実施施形態３４の方法。
３６．がんを有する個体に、ＬＩＦ結合ポリペプチドの有効量を投与するステップを含む、実施施形態３４の方法。
３７．がんを有する個体に、ＰＤ−１の阻害剤の有効量を投与するステップを含む、実施施形態３４の方法。
３８．ＬＩＦ結合ポリペプチドが、免疫グロブリン可変領域の断片、又は免疫グロブリン重鎖定常領域を含む、実施形態３４〜３７のいずれか１つの方法。
３９．ＬＩＦ結合ポリペプチドが、ＬＩＦと特異的に結合する抗体を含む、実施形態３４〜３７のいずれか１つの方法。
４０．ＬＩＦと特異的に結合する抗体が、ヒト抗体フレームワーク領域に由来する少なくとも１つのフレームワーク領域を含む、実施形態３９の方法。
４１．ＬＩＦと特異的に結合する抗体がヒト化されている、実施形態３９の方法。
４２．ＬＩＦと特異的に結合する抗体が脱免疫化されている、実施形態３９の方法。
４３．ＬＩＦと特異的に結合する抗体が、２つの免疫グロブリン重鎖と、２つの免疫グロブリン軽鎖とを含む、実施形態３９の方法。
４４．ＬＩＦと特異的に結合する抗体が、ＩｇＧ抗体である、実施形態３９の方法。
４５．ＬＩＦと特異的に結合する抗体が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、単一ドメイン抗体、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又はナノボディである、実施形態３９の方法。
４６．ＬＩＦと特異的に結合する抗体が、
ａ）配列番号１〜３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；
ｂ）配列番号４又は５に記載されるアミノ酸配列のいずれか１つを含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；
ｃ）配列番号６〜８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；
ｄ）配列番号９又は１０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；
ｅ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び
ｆ）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）
を含む、実施形態３９〜４５のいずれか１つの方法。
４７．ＬＩＦと特異的に結合する抗体が、
ａ）配列番号４１、４２、４４、又は６６のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）配列；及び
ｂ）配列番号４５〜４８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一のアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）配列
を含む、実施形態３９〜４６のいずれか１つの方法。
４８．ＶＨ配列が、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であり；ＶＬ配列が、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である、実施形態４７の使用。
４９．ＶＨ配列が、配列番号４２に記載されるアミノ酸配列と同一であり、ＶＬ配列が、配列番号４６に記載されるアミノ酸配列と同一である、実施形態４８の方法。
５０．ＬＩＦと特異的に結合する抗体が、
ａ）配列番号５７〜６０又は６７のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン重鎖配列；及び
ｂ）配列番号６１〜６４のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一のアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン軽鎖配列
を含む、実施形態３９〜４６のいずれか１つの方法。
５１．ＬＩＦと特異的に結合する抗体が、約２００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する、実施形態３９〜５０のいずれか１つの方法。
５２．ＬＩＦと特異的に結合する抗体が、約１００ピコモル濃度未満のＫＤで結合する、実施形態３９〜５０のいずれか１つの方法。
５３．ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が、抗体又はそのＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２結合断片を含む、実施形態３４〜５２のいずれか１つの方法。
５４．抗体がＰＤ−１と特異的に結合する、実施形態５３の方法。
５５．抗体が、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ＡＭＰ−５１４、チスレリズマブ、スパルタリズマブ、又はそのＰＤ−１結合断片を含む、実施形態５４の方法。
５６．抗体が、ＰＤＬ−１又はＰＤＬ−２と特異的に結合する、実施形態５３の方法。
５７．抗体が、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、又はＦＡＺ０５３、又はそのＰＤＬ−１又はＰＤＬ−２結合断片を含む、実施形態５６の方法。
５８．ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２に結合するＦｃ融合タンパク質を含む、実施形態３４〜５２のいずれか１つの方法。
５９．Ｆｃ融合タンパク質が、ＡＭＰ−２２４又はそのＰＤ−１結合断片を含む、実施形態５８の方法。
６０．ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤が、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２の小分子阻害剤を含む、実施形態３４〜５２のいずれか１つの方法。
６１．ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２を通じたシグナル伝達の小分子阻害剤が、Ｎ−｛２−［（｛２−メトキシ−６−［（２−メチル［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メトキシ］ピリジン−３−イル｝メチル）アミノ］エチル｝アセトアミド（ＢＭＳ２０２）；（２−（（３−シアノベンジル）オキシ）−４−（（３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ダイオキシン−６−イル）−２−メチルベンジル）オキシ）−５−メチルベンジル）−Ｄ−セリン塩酸塩；（２Ｒ，４Ｒ）−１−（５−クロロ−２−（（３−シアノベンジル）オキシ）−４−（（３−（２，３−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ダイオキシン−６−イル）−２−メチルベンジル）オキシ）ベンジル）−４−ヒドロキシピロリジン−２−カルボン酸；３−（４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−１−フェニルインドール；３−（４，６−ジクロロ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−１−フェニル−１ｈ−インドール；Ｌ−α−グルタミン、Ｎ２，Ｎ６−ビス（Ｌ−セリル−Ｌ−アスパラギニル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−セリル−Ｌ−α−グルタミル−Ｌ−セリル−Ｌ−フェニルアラニル）−Ｌ−リシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−バリル−Ｌ−スレオニル−Ｌ−グルタミニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−リシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミニル−Ｌ−イソロイシル−Ｌ−リシル；（２Ｓ）−１−［［２，６−ジメトキシ−４−［（２−メチル［１，１’−ビフェニル］−３−イル）メトキシ］フェニル］メチル］−２−ピペリジンカルボン酸；グリシンアミド、Ｎ−（２−メルカプトアセチル）−Ｌ−フェニルアラニル−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−ロイシル−Ｎ−メチルグリシル−Ｌ−トリプトフィル−Ｌ−セリル−Ｌ−トリプトフィル−Ｎ−メチル−Ｌ−ノルロイシル−Ｎ−メチル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−システイニル−、環式（１→１４）−チオエーテル；又はそれらの誘導体又は類似体の１つ又は複数を含む、実施形態６０の方法。
６２．がんが、進行性固形腫瘍、神経膠芽腫、胃がん、皮膚がん、前立腺がん、膵臓がん、乳がん、精巣がん、甲状腺がん、頭頸部がん、肝臓がん、腎臓がん、食道がん、卵巣がん、結腸がん、肺がん、リンパ腫、軟部組織がん、又はそれらの組み合わせを含む、実施形態３４〜６１のいずれか１つの方法。
６３．がんが、非小細胞肺がん、上皮性卵巣がん、又は膵腺がんを含む、実施形態６２の方法。
６４．がんが、治療量のＬＩＦ結合ポリペプチド阻害剤による治療に対して不応性である、実施形態３４〜６３のいずれか１つの方法。
６５．がんが、治療量のＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤阻害剤（ａｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ａｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ）による治療に対して不応性である、実施形態３４〜６３のいずれか１つの方法。
６６．白血病抑制因子（ＬＩＦ）結合ポリペプチドと、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤とが、別々に投与される、実施形態３４〜６５のいずれか１つの方法。
６７．ＬＩＦ結合ポリペプチドと、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤とが、同時に投与される、実施形態３４〜６５のいずれか１つの方法。
６８．ＬＩＦ結合ポリペプチドと、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、又はＰＤＬ−２シグナル伝達阻害剤とが、単一組成物中で投与される、実施形態３４〜６５のいずれか１つの方法。
６９．個体のがんを治療するための、ＰＤ−１又はＰＤＬ−１結合抗体と組み合わせた、白血病抑制因子（ＬＩＦ）と特異的に結合する抗体の使用であって、ＬＩＦ結合抗体は、
ａ）配列番号１〜３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；
ｂ）配列番号４又は５に記載されるアミノ酸配列のいずれか１つを含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；
ｃ）配列番号６〜８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＣＤＲ３）；
ｄ）配列番号９又は１０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；
ｅ）配列番号１１又は１２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び
ｆ）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）
を含む。
７０．がんを有する個体に、
ａ）ｉ．配列番号１〜３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；
ｉｉ．配列番号４又は５に記載されるアミノ酸配列のいずれか１つを含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；
ｉｉｉ．配列番号６〜８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＤＲ３）；
ｉｖ．配列番号９又は１０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；
ｖ．配列番号１１又は１２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び
ｖｉ．配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む、白血病抑制因子（ＬＩＦ）と特異的に結合する抗体（ｏｆ  ａｎ）と；
ｂ）ＰＤ−１又はＰＤＬ−１結合抗体と
の組み合わせの有効量を投与するステップを含む、がんを有する個体を治療する方法。
７１．がんを有する個体に、ＬＩＦと特異的に結合する抗体の有効量を投与するステップを含む、実施形態７０の方法。
７２．がんを有する個体に、ＰＤ−１又はＰＤＬ−１結合抗体の有効量を投与するステップを含む、実施形態７０の方法。
７３．ＬＩＦと特異的に結合する抗体と、ＰＤ−１又はＰＤＬ−１結合抗体とが、別々に投与される、実施形態７０〜７２のいずれか１つの方法。
７４．がんが、多形性膠芽腫（ＧＢＭ）、ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺がん）、卵巣がん、結腸直腸がん、甲状腺がん、膵臓がん、又はそれらの組み合わせである、実施形態７０〜７３のいずれか１つの方法。
７５．がんを有する個体に、
ａ）ｉ．配列番号１〜３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；
ｉｉ．配列番号４又は５に記載されるアミノ酸配列のいずれか１つを含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；
ｉｉｉ．配列番号６〜８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＤＲ３）；
ｉｖ．配列番号９又は１０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；
ｖ．配列番号１１又は１２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び
ｖｉ．配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む、白血病抑制因子（ＬＩＦ）と特異的に結合する抗体（ｏｆ  ａｎ）と；
ｂ）ＰＤ−１又はＰＤＬ−１結合抗体と
の組み合わせの有効量を投与するステップを含む、がんを有する個体の腫瘍内の腫瘍促進性腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）を減少させる方法。
７６．がんを有する個体に、ＬＩＦと特異的に結合する抗体の有効量を投与するステップを含む、実施形態７５の方法。
７７．がんを有する個体に、ＰＤ−１又はＰＤＬ−１結合抗体の有効量を投与するステップを含む、実施形態７５の方法。
７８．ＬＩＦと特異的に結合する抗体と、ＰＤ−１又はＰＤＬ−１結合抗体とが、別々に投与される、実施形態７５〜７７のいずれか１つの方法。
７９．ＴＡＭ細胞が、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ２０６、及びＣＤ１６３からなるリストから選択される、任意の１、２、又は３つの分子の表面発現を示す、実施形態７５〜７８のいずれか１つの方法。
８０．腫瘍が、肺腫瘍、脳腫瘍、膵臓腫瘍、乳房腫瘍、腎臓腫瘍、大腸腫瘍、卵巣腫瘍、又はそれらの組み合わせからなる、実施形態７５〜７８のいずれか１つの方法。
８１．がんを有する個体に、
ａ）ｉ．配列番号１〜３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；
ｉｉ．配列番号４又は５に記載されるアミノ酸配列のいずれか１つを含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；
ｉｉｉ．配列番号６〜８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＤＲ３）；
ｉｖ．配列番号９又は１０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；
ｖ．配列番号１１又は１２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び
ｖｉ．配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む、白血病抑制因子（ＬＩＦ）と特異的に結合する抗体（ｏｆ  ａｎ）と；
ｂ）ＰＤ−１又はＰＤＬ−１結合抗体と
の組み合わせの有効量を投与するステップを含む、がんを有する個体に免疫記憶を生成する方法。
８２．がんを有する個体に、ＬＩＦと特異的に結合する抗体の有効量を投与するステップを含む、実施形態８１の方法。
８３．がんを有する個体に、ＰＤ−１又はＰＤＬ−１結合抗体の有効量を投与するステップを含む、実施形態８１の方法。
８４．ＬＩＦと特異的に結合する抗体と、ＰＤ−１又はＰＤＬ−１結合抗体とが、別々に投与される、実施形態８１〜８３のいずれか１つの方法。
８５．免疫記憶が、ＣＤ８＋Ｔ細胞によって媒介される、実施形態８１〜８４のいずれか１つの方法。
８６．免疫記憶が、ＣＤ４＋Ｔ細胞によって媒介される、実施形態８１〜８４のいずれか１つの方法。
８７．腫瘍に罹患した個体に、
ａ）ｉ．配列番号１〜３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域１（ＶＨ−ＣＤＲ１）；
ｉｉ．配列番号４又は５に記載されるアミノ酸配列のいずれか１つを含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域２（ＶＨ−ＣＤＲ２）；
ｉｉｉ．配列番号６〜８のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖相補性決定領域３（ＶＨ−ＤＲ３）；
ｉｖ．配列番号９又は１０のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ−ＣＤＲ１）；
ｖ．配列番号１１又は１２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ−ＣＤＲ２）；及び
ｖｉ．配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ−ＣＤＲ３）を含む、白血病抑制因子（ＬＩＦ）と特異的に結合する抗体（ｏｆ  ａｎ）と；
ｂ）ＰＤ−１又はＰＤＬ−１結合抗体と
の組み合わせの有効量を投与するステップを含む、個体（ｉｎｄｕｖｉａｌ）の腫瘍中のＴリンパ球の量を増加させる方法。
８８．がんを有する個体に、ＬＩＦと特異的に結合する抗体の有効量を投与するステップを含む、実施形態８７の方法。
８９．がんを有する個体に、ＰＤ−１又はＰＤＬ−１結合抗体の有効量を投与するステップを含む、実施形態８７の方法。
９０．ＬＩＦと特異的に結合する抗体と、ＰＤ−１又はＰＤＬ−１結合抗体とが、別々に投与される、実施形態８７の方法。
９１．Ｔリンパ球がＣＤ８＋Ｔ細胞を含む、実施形態８７〜９０のいずれか１つの方法。
９２．Ｔリンパ球がＣＤ４＋Ｔ細胞を含む、実施形態８７〜９０のいずれか１つの方法。
９３．腫瘍が、肺腫瘍、脳腫瘍、膵臓腫瘍、乳房腫瘍、腎臓腫瘍、大腸腫瘍、卵巣腫瘍、又はそれらの組み合わせからなる、実施形態８７〜９０のいずれか１つの方法。
【０２３５】
本発明の好ましい実施形態が本明細書に示され説明されているが、このような実施形態は単なる例示として提供されることは、当業者には明らかであろう。本発明から逸脱することなく、当業者には、多数のバリエーション、変更、及び置き換えが可能である。本明細書に記載された本発明の実施形態に対する様々な代替物が、本発明の実施において用いられてもよいものと理解すべきである。
【０２３６】
本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、発行済み特許、及びその他の文書は、あたかも個々の刊行物、特許出願、発行済み特許、又はその他の文書が、その全体が参照により援用されることが具体的且つ個別に示されているかのように、参照により本明細書に援用される。参照により援用されたテキストに含まれる定義は、本開示の定義と矛盾する範囲で除外される。
【０２３７】
【表１１】
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【０２３８】
【表１２】
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【０２３９】
【表１３】
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【０２４０】
【表１４】
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【図１】
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【図２Ａ−２Ｂ】
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【図３Ａ−３Ｂ】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ−６Ｂ】
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【図７Ａ−７Ｂ】
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【図８Ａ−８Ｃ】
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【図９Ａ−９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ−１０Ｄ】
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【図１０Ｅ】
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【図１０Ｆ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１２】
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【図１３Ａ−１３Ｂ】
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【図１４Ａ−１４Ｂ】
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【図１５Ａ−１５Ｂ】
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【図１６Ａ−１６Ｃ】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１８Ａ−１８Ｂ】
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【図１８Ｃ−１８Ｄ】
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【図１９Ａ−１９Ｂ】
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【図１９Ｃ−１９Ｄ】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ−２０Ｃ】
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【図２０Ｄ−２０Ｅ】
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【図２０Ｆ−２０Ｇ】
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【図２０Ｈ−２０Ｉ】
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【図２０Ｊ−２０Ｋ】
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【図２０Ｌ−２０Ｍ】
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【図２０Ｎ−２０Ｏ】
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【図２０Ｐ】
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【図２１Ａ−２１Ｂ】
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【図２１Ｃ】
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【図２１Ｄ】
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【図２１Ｅ−２１Ｆ】
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【図２１Ｇ】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ−２２Ｃ】
2021521274.tif 000060
【図２２Ｄ−２２Ｅ】
2021521274.tif 000061
【図２２Ｆ−２２Ｇ】
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【図２２Ｈ】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２３Ｃ−２３Ｄ】
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【図２３Ｅ】
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【図２３Ｆ】
2021521274.tif 000068
【図２３Ｇ−２３Ｈ】
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【図２３Ｉ】
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【図２４Ａ−２４Ｂ】
2021521274.tif 000071
【図２４Ｃ−２４Ｄ】
2021521274.tif 000072
【図２５Ａ−２５Ｂ】
2021521274.tif 000073
【図２５Ｃ−２５Ｄ】
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【図２５Ｅ−２５Ｆ】
2021521274.tif 000075
【図２５Ｇ−２５Ｈ】
2021521274.tif 000076
【図２５Ｉ−２５Ｊ】
2021521274.tif 000077
【図２６Ａ−２６Ｂ】
2021521274.tif 000078
【図２６Ｃ−２６Ｄ】
2021521274.tif 000079
【図２６Ｅ−２６Ｆ】
2021521274.tif 000080
【図２６Ｇ−２６Ｈ】
2021521274.tif 000081
【図２７Ａ−２７Ｂ】
2021521274.tif 000082
【図２８】
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【図２９Ａ−２９Ｂ】
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【図３０】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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