(57)【要約】  本発明は、高次元ＬＣ−ＭＳデータを分析し、参照医薬品とジェネリック医薬品の類似性の程度を評価するための仮説検定アプローチを開発した。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
複雑な有機分子のサンプルを特徴付ける及び分類するための方法であって、マススペクトルを生成するために前記サンプルを質量分析にかけること、及び統計的手法を用いて前記マススペクラムを分析することを含み、前記統計的手法は、仮説検定である、
ことを特徴とする方法。
【請求項２】
前記複雑な有機分子は、ペプチド、ペプチド混合物、ポリペプチド混合物、タンパク質、タンパク質混合物、バイオ医薬品、バイオ後続医薬品、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、
ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記複雑な有機分子は、ポリペプチド混合物である、
ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記方法は、
（ａ）適切な酵素又は化学物質で前記サンプルをフラグメントに消化する又は分解すること、
（ｂ）前記質量分析によって前記フラグメントを直接分析して前記マススペクトルを生成すること、及び、
（ｃ）前記仮説検定によって前記マススペクトルを分析して異なるサンプルを分類する及び区別すること、
を含む、
ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記適切な酵素は、Ｌｙｓ−Ｃ、トリプシン、又は前記サンプルを消化可能な他の任意の酵素である、
ことを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記適切な酵素は、Ｌｙｓ−Ｃである、
ことを特徴とする請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記サンプルを分解するために使用される前記化学物質は、有機若しくは無機の酸又は塩基からなる群から選択される、
ことを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項８】
前記複雑な有機分子は、コポリマー混合物である、
ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記複雑な有機分子は、グラチラマーアセテートである、
ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記質量分析は、ＬＣ−ＭＳである、
ことを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項１１】
質量分析によってサンプルを分析する方法であって、
（ａ）ポリペプチドの混合物の標準及びポリペプチドの混合物のサンプルを提供すること、
（ｂ）前記サンプル及びポリペプチドの混合物の標準をそれぞれ適切な酵素又は化学物質で消化すること、
（ｃ）消化された前記ポリペプチドの混合物のサンプル及びポリペプチドの混合物の標準をそれぞれ直接質量分析にかけて２つのマススペクトルを生成すること、及び、
（ｄ）前記２つのマススペクルを仮説検定アプローチによって比較する及び分析すること、
を含む、方法。
【請求項１２】
前記ポリペプチドの混合物は、グラチラマーアセテートである、
ことを特徴とする請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記質量分析は、ＬＣ−ＭＳである、
ことを特徴とする請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
グラチラマーアセテートを含む医薬品又は医薬組成物を調製するためのプロセスであって、
（ａ）Ｌ−アラニンのＮ−カルボキシ無水物、Ｌ−グルタミン酸ｇ−ベンジル、トリフルオロ酢酸で保護されたＬ−リシン及びＬ−チロシンを重合して保護されたコポリマーを生成し、保護されたコポリマーを臭化水素酸と反応させてトリフルオロアセチルグラチラマーアセテートを形成し、前記トリフルオロアセチルグラチラマーアセテートをピペリジン水溶液で処理して試験サンプルグラチラマーアセテートを生成し、及び前記試験サンプルグラチラマーアセテートを精製するステップ、及び、
（ｂ）質量分析及び仮説検定アプローチを使用することによって、精製された前記グラチラマーアセテートの試験サンプル及びグラチラマーアセテートの参照標準を分析するステップ、
を含む、プロセス。
【請求項１５】
前記分析するステップは、
（１）前記試験サンプル及び参照標準をそれぞれ適切な酵素又は化学物質で消化すること、
（２）前記試験サンプル及び参照標準をそれぞれ直接質量分析にかけて２つのマススペクトルを生成すること、及び、
（３）仮説検定アプローチによって、前記２つのマススペクトルを比較及び分析して前記試験サンプル及び参照標準サンプル間の類似性を決定すること、
を含む、
ことを特徴とする請求項１４に記載のプロセス。
【請求項１６】
前記適切な酵素は、Ｌｙｓ−Ｃ、トリプシン、又は前記サンプルを消化可能な他の任意の酵素である、
ことを特徴とする請求項１５に記載のプロセス。
【請求項１７】
前記適切な酵素は、Ｌｙｓ−Ｃである、
ことを特徴とする請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記サンプルを分解するために使用される前記化学物質は、有機若しくは無機の酸又は塩基からなる群から選択される、
ことを特徴とする請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
前記質量分析は、ＬＣ−ＭＳである、
ことを特徴とする請求項１５に記載の方法。
【請求項２０】
前記試験サンプル及び前記標準サンプル間の類似性が受け入れられない場合、該方法は、重合条件を再調整し、再調整された条件下で重合を実施し、前記分析するステップを再度実施してグラチラマーアセテートが関連要件の下で前記参照標準と許容できる程度に類似していることを確認するステップを更に含む、
ことを特徴とする請求項１５に記載の方法。
【請求項２１】
前記関連要件は、政府当局又は営利団体によって作成される、
ことを特徴とする請求項２１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１８年９月３日に出願された米国仮特許出願番号第６２７２６３４２号（以後、ＵＳ６２７２６３４２）及び２０１９年８月２日に出願された米国（一般）特許出願番号第１６／５３０５４４号（以後、ＵＳ１６／５３０５４４）からの優先権を請求する。引用によって、ＵＳ６２７２６３４２及びＵＳ１６／５３０５４４の全体の開示を本明細書に取り込む。
【背景技術】
【０００２】
合成ポリペプチドの複雑な異種混合物であるグラチラマーアセテート（ＧＡ）は、若年成人の最も一般的な障害性神経疾患である再発寛解型多発性硬化症の治療のために、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）によって免疫調節薬として承認されている。
【０００３】
グラチラマーアセテート（ＧＡ）は、コパキソン（登録商標）（Teva Pharmaceutical Industries Ltd.、イスラエル）の活性成分であり、報告されている平均モル分率がそれぞれ０．１４１、０．４２７、０．０９５及び０．３３８である４つの天然アミノ酸のＬ−グルタミン酸、Ｌ−アラニン、Ｌ−チロシン及びＬ−リシンを含む合成ポリペプチドの酢酸塩を含む。コパキソン（登録商標）の平均分子量は、４，７００〜１１，０００ダルトンである。制御された臨床試験において、コパキソンが２年間で再発率を７５％減少させ、長期的な有効性、安全性、忍容性で多発性硬化症の障害の進行を大幅に遅らせることが実証された。コパキソンの広範な使用及び比較的高いコストから、価格の手頃さとこの薬へのアクセスとを向上させるために、ＧＡの他のジェネリック版を開発する必要性が高まっている。
【０００４】
ＧＡは、非生物学的複雑医薬品（ＮＢＣＤ）の１種である。長年にわたり、完全に識別及び特徴付け可能な、低分子医薬品のジェネリック版の開発のための強固な規制システムが、医薬品の同等性及び生物学的同等性の概念を使用して確立されてきた。しかしながら、生物学的製剤及びＮＢＣＤのための規制ポリシー及び分析アプローチは、いまだ開発中である。ＮＢＣＤは、通常、完全に特徴付けることができない合成された複雑なマクロ分子／混合物であるため、生物学的製剤についての「バイオ後続医薬品アプローチ」のように、参照リストに記載された医薬品を用いた「類似性」に基づいて評価することが示唆されてきた。
【０００５】
ＧＡには１０３６を超える可能な理論的な配列が存在するため、最新の分析技術を用いても、成分を識別することも定量化することも完全にはできない。それゆえ、２つのＧＡは「同一」と証明することができない。ゲル浸透クロマトグラフィによる分子量分布プロファイリング、キャピラリ電気泳動によるペプチドマッピング、エドマン分解によるＮ末端の相対アミノ酸レベル、円二色性による二次構造の特徴付け、及び逆相高速液体クロマトグラフィ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）によるタンパク質分解消化物プロファイリングを含む様々な化学分析が、ＧＡ医薬品を比較するために行われてきた。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、高次元ＬＣ−ＭＳデータを分析し、参照医薬品とジェネリック医薬品との間の類似性の程度を評価するための仮設検定アプローチを開発した。提案する仮設検定アプローチの１つの特徴は、２つのサンプル群間の全てのデータポイントにおける差異を考察する点にある。さらに、追加のリサンプリング技術により、サンプル数が少ない場合でも、強固な推定手順を導入することができる。これらの特徴付けは、このアプローチから得られる強固な結果につながる。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１ａ】図１ａは、コポリマー−１サンプルの１つのバッチの７個の複製サンプルのベースピーククロマトグラムを示す。
【図１ｂ】図１ｂは、ネガティブコントロールの１個のロットの７個の複製サンプルのベースピーククロマトグラムを示す。
【図１ｃ】図１ｃは、コパキソンの１０個のロットとコポリマー−１サンプルの１つのバッチのベースピーククロマトグラムを示す。
【図１ｄ】図１ｄは、コパキソンの１０個のロット及びネガティブコントロールの１個のロットのベースピーククロマトグラムを示す。クロマトグラムは、最初の７分におけるコパキソン及びネガティブコントロール間の複数の明確なピークを示す。
【図２ａ】図２ａは、コパキソンとコパキソンとを比較するための偏差平方和テスト手順から導かれる１０，０００ブートストラップ推定値の分布を示す。
【図２ｂ】図２ｂは、コパキソンとコポリマー−１とを比較するための偏差平方和テスト手順から導かれる１０，０００ブートストラップ推定値の分布を示す。
【図２ｃ】図２ｃは、コパキソンとネガティブコントロールとを比較するための偏差平方和テスト手順から導かれる１０，０００ブートストラップ推定値の分布を示す。
【０００８】
図２ａ〜図２ｃの破線は、９５パーセンタイル推定値を示し、実線は臨界値を示す。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本明細書で使用されている「仮説検定」の用語は、データのサンプルについて仮定された仮説が母集団全体に当てはまるかどうかを決定するために使用される統計的検定を指す。
【００１０】
本明細書で使用されている「複雑な非生物学的医薬品（ＮＢＣＤ）」は、以下の特性ａ）複雑で多数の密接に関連する構造を包含すること、ｂ）物理化学的分析によっては特性を完全に明らかにできないこと、ｃ）多数の構造全体が有効医薬成分であること、及びｄ）製品を再生産するためには一貫して厳格に管理された製造プロセスが不可欠であること、を備える医薬品の種類を指す。
【００１１】
本明細書で使用されている「ランダム共重合体医薬品」は、化学物質又はモノマーの反応速度論に基づいて、共重合体化プロセスから生成される医薬品を指す。
【００１２】
本明細書で使用されている「ポリペプチド混合物」は、様々なポリペプチドを含む混合物を指す。
【００１３】
本明細書で使用されている「コポリマー混合物」は、コポリマーを含む混合物を指す。
【００１４】
本明細書で使用されている「ポリペプチド」は、ペプチド（アミド）結合で結合されたアミノ酸モノマーの短鎖を備えるペプチドを指す。
【００１５】
本明細書で使用されている「複雑な有機分子」は、ポリマー状の分子を指す。挙げられている参照医薬品又はジェネリック版はＬｙｓ−Ｃで消化され、続いてＵＰＬＣ／ＨＩＬＩＣ−ＭＳ分析が行われる。Progenesis QIのようなプロテオミクスソフトウェアによって識別され、社内データベースの値と一致する可能性のあるＬＣ−ＭＳデータにおける特徴が、医薬品の潜在的な活性成分であると考慮され、更に、これらの高次元ＬＣ−ＭＳデータを処理可能であり、サンプル群間の類似性／相違性を評価可能な１つの開発された仮説検定アプローチ、偏差平方和テストに送られる。
【００１６】
本発明は、サンプル間の類似性を評価するための仮説検定アプローチを開発した。データポイントで仮説検定を実施する前に、ブートストラップのようなリサンプリング技術によってデータポイントをリサンプリングして、仮定の導出元のデータであって統計又は推定の安定性を評価するために一般的に使用されるデータを参照することによって、統計値が最も良く評価されることができるという仮定に基づいてデータポイントを再生成する。リサンプリングされたデータセットを得た後に２つのデータセットを比較するための統計的仮説検定を開発した。帰無仮説（Ｈ０）は、２つのデータセット間に差異があると仮定される。対立仮説（Ｈａ）は、２つのデータセット間に差異がないと仮定され、Ｈ０が棄却された場合と結論づける。この戦略は、ＬＣ−ＭＳデータに対して仮説検定を実施して、ペプチド医薬品のような２つのランダム共重合体医薬品間の潜在的な活性成分の類似性／相違性を判断することである。また、製造プロセスにおけるロット間のばらつきを迅速に確認するためにも使用できる。原則として、このアプローチは、多数の密接に関連する構造からなる同じ特徴付けを共有する非生物学的複合医薬品（ＮＢＣＤ）にも適用することができ、それらの特性は物理化学的分析によって完全に特徴付けることはできない。
【００１７】
ランダム共重合体医薬品は、ａ）複雑で多数の密接に関連する構造を包含すること、ｂ）物理化学的分析によって特性を完全に明らかにできないこと、ｃ）多数の構造の全体が有効医薬成分であること、ｄ）製品を再生産するためには一貫して厳密に管理された製造プロセスが不可欠であること、のように定義される非生物学的複合医薬品（ＮＢＣＤ）の１種に分類される。長年にわたり、完全に識別及び特徴付けられる小分子医薬品のジェネリック版を開発するための強固な規制システムが、医薬品の同等性及び生物学的同等性の概念を使用して確立されてきた。しかしながら、バイオ医薬品とＮＢＣＤとの規制方針と分析アプローチは開発中である。ＮＢＣＤは、ほとんどが合成された複雑な高分子／混合物であり、その全体的な化学構造を完全に特徴付けることができないため、バイオ医薬品の「バイオ後続医薬品アプローチ」のような参照リストに記載された医薬品との「類似性」に基づいて評価することが提案される。２つの共重合体医薬品が「同一」であると証明することはできない。ゲル浸透クロマトグラフィによる分子量分布プロファイリング、キャピラリ電気泳動によるペプチドマッピング、エドマン分解によるＮ末端での相対アミノ酸レベル、円二色性による二次構造の特徴付け、及び逆相高速液体クロマトグラフィ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）によるタンパク質分解消化物プロファイリングを含む様々な化学分析が、グラチラマーアセテート（ＧＡ）医薬品を比較するために実施された。最近、ＦＤＡ当局は、ＧＡ由来のペプチド鎖の複雑な混合物と非ＧＡ化合物との間の分析的差異を区別するため、質量分析を備える液体クロマトグラフィ（ＬＣ−ＭＳ）、核磁気共鳴（ＮＭＲ）、及びマルチアングル光散乱を備える非対称フィールドフローフラクショネーション（ＡＦＦＦ−ＭＡＬＳ）を含む分子フィンガープリンティングアプローチを提案した。この研究では、ＭＳ及びＡＦＦＦ−ＭＡＬＳデータに統計分析を適用することによって混合物の分析的差異を検出する方法の能力も評価した。しかしながら、そのアプローチでは、データポイントの数（２６６）が少なすぎて、ＦＤＡにより提案されているデータポイントの数（＞１０００）を満たさない。
【００１８】
（実施例１）
（サンプルの調製）
コポリマー−１（２０ｍｇ、Sigma-Aldrich社から購入（St. Louis、MO））又はＧＡ（２０ｍｇ、ScinoPharm Taiwan Ltd.）を１ｍＬのマンニトール（４０ｍｇ／ｍＬ）中にコパキソンと同じ濃度で溶解させ、該溶液の３０μＬからコポリマー−１又はＧＡの７個の複製サンプルを調製した。コパキソンの各ロットの３０μＬから１０のサンプルを調製した。消化のために、４５μＬの蒸留脱イオン水（ｄｄＨ２Ｏ）、１８μＬの重炭酸アンモニウム（２４ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ８．４０に調整）、及び１５μＬのＬｙｓ−Ｃ（０．２ｇ／Ｌ）を各サンプルに加えた。これらのサンプルを３７℃で１６時間、ウォーターバス中でインキュベートした。インキュベート後、１０μＬのトリフルオロ酢酸（０．１％、ｖ／ｖ）及び１１８μＬのアセトニトリル（１００％）を加えて、反応を停止させた。これらのサンプルは、孔径０．２２μｍの親水性ポリフッ化ビニリデンメンブレンフィルター（Millipore、Billerica、MA）でろ過した。ＵＰＬＣ−ＭＳ分析の前に、サンプルを−２０℃で保存した。
【００１９】
（実施例２）
（コポリマー−１サンプルから生成された高次元ＬＣ−ＭＳデータ）
コポリマー−１サンプルを含むコポリマー−１の２つの異なるソースからの７個の複製サンプルとネガティブコントロール（ＮＣ）のＬＣ／ＭＳデータは、どちらも類似しているように見え（図１ａのコポリマー−１サンプル及び１ｂネガティブコントロール）、個々の７つの複製サンプル間の優れた再現性を示す。コポリマー−１サンプルと１０個のロットのコパキソンとのＬＣ−ＭＳデータとを並べると、平均スコアは９５％を超え、コポリマー−１サンプルとコパキソンとが、類似する消化されたペプチド組成を有することを意味する。これは、これらの１１回の分析のＬＣ／ＭＳデータからも観察可能である（図１ｃ）。１０個のロットのコパキソンとネガティブコントロールの１つの複製とを比較すると、最初の７分間にいくつかの明確なピークが存在し（図１ｄ）、コポリマー−１はこの領域内にごくわずかなピークしか有さず、特定の消化されたペプチドがコパキソンだけで検出されたが、ネガティブコントロールでは検出されないことを示す。
【００２０】
（実施例３）
（仮説検定による類似性評価）
統計的仮説検定は、統計的推定の方法であり、２つ以上のデータセットの比較に共通して適用される。検定方式において、統計的仮説は、確率変数のセットを介してモデル化されたプロセスの観察の原理に基づく検定可能な仮説である。高次元ＬＣ−ＭＳデータを分析して、参照医薬品とジェネリック医薬品との間の類似性の程度を評価するための仮説検定アプローチを開発した。提案されている仮説検定アプローチの１つの特徴付けは、２つのサンプル群間の全てのデータポイントの差異を考察することである。
【００２１】
アプローチの実現可能性を最初に評価するため、１０個のロットのコパキソンを、それぞれ５個のロットを有する２つの群にランダムに分け、それらのデータポイントを開発された偏差平方和テストに使用した。
【数１】
2021535997.tif 000002
が０．００５６（ｐ値＜０．０１）は、Ｈ０が棄却され、異なるロットのコパキソンが有意に類似することを示す（図２ａ）。更に、偏差平方和テストをコパキソン及びコポリマー−１サンプルに適用し、推定された
【数２】
2021535997.tif 000003
は０．００２６（ｐ値＜０．０００１）（図２ｂ）であり、Ｈ０の棄却が導かれ、コパキソンとコポリマー−１サンプルの１つのバッチとが有意に類似することが示唆された。コパキソンとネガティブコントロールとを比較すると、推定された
【数３】
2021535997.tif 000004
は、臨界値より大きい０．０２９（ｐ値＝０．９９４）（図２ｃ）であり、Ｈ０を採択する結果となり、コパキソンとネガティブコントロールとの間に差異があることを主張する証拠があった。これらの結果は、開発された偏差平方和テストが、２つのコポリマー−１サンプル群間の類似性の評価に使用でき、ネカティブコントロールサンプルにより検証されたことを示した。
【００２２】
これらの実施例において示されているように、コパキソンとジェネリック医薬品の類似性の程度を統計的有意性を用いて評価するための多変量（高次元）ＬＣ−ＭＳデータでの仮説検定アプローチを開発した。統計的有意性は、確率で２つの群間の差異を決定するために使用される。換言すると、２つの群間のプロファイルの同一性を、ユーザー設定値に基づき決定することができる。
【００２３】
［付記］
［付記１］
複雑な有機分子のサンプルを特徴付ける及び分類するための方法であって、マススペクトルを生成するために前記サンプルを質量分析にかけること、及び統計的手法を用いて前記マススペクラムを分析することを含み、前記統計的手法は、仮説検定である、
ことを特徴とする方法。
【００２４】
［付記２］
前記複雑な有機分子は、ペプチド、ペプチド混合物、ポリペプチド混合物、タンパク質、タンパク質混合物、バイオ医薬品、バイオ後続医薬品、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、
ことを特徴とする付記１に記載の方法。
【００２５】
［付記３］
前記複雑な有機分子は、ポリペプチド混合物である、
ことを特徴とする付記１に記載の方法。
【００２６】
［付記４］
前記方法は、
（ａ）適切な酵素又は化学物質で前記サンプルをフラグメントに消化する又は分解すること、
（ｂ）前記質量分析によって前記フラグメントを直接分析して前記マススペクトルを生成すること、及び、
（ｃ）前記仮説検定によって前記マススペクトルを分析して異なるサンプルを分類する及び区別すること、
を含む、
ことを特徴とする付記１に記載の方法。
【００２７】
［付記５］
前記適切な酵素は、Ｌｙｓ−Ｃ、トリプシン、又は前記サンプルを消化可能な他の任意の酵素である、
ことを特徴とする付記４に記載の方法。
【００２８】
［付記６］
前記適切な酵素は、Ｌｙｓ−Ｃである、
ことを特徴とする付記５に記載の方法。
【００２９】
［付記７］
前記サンプルを分解するために使用される前記化学物質は、有機若しくは無機の酸又は塩基からなる群から選択される、
ことを特徴とする付記４に記載の方法。
【００３０】
［付記８］
前記複雑な有機分子は、コポリマー混合物である、
ことを特徴とする付記１に記載の方法。
【００３１】
［付記９］
前記複雑な有機分子は、グラチラマーアセテートである、
ことを特徴とする付記１に記載の方法。
【００３２】
［付記１０］
前記質量分析は、ＬＣ−ＭＳである、
ことを特徴とする付記４に記載の方法。
【００３３】
［付記１１］
質量分析によってサンプルを分析する方法であって、
（ａ）ポリペプチドの混合物の標準及びポリペプチドの混合物のサンプルを提供すること、
（ｂ）前記サンプル及びポリペプチドの混合物の標準をそれぞれ適切な酵素又は化学物質で消化すること、
（ｃ）消化された前記ポリペプチドの混合物のサンプル及びポリペプチドの混合物の標準をそれぞれ直接質量分析にかけて２つのマススペクトルを生成すること、及び、
（ｄ）前記２つのマススペクルを仮説検定アプローチによって比較する及び分析すること、
を含む、方法。
【００３４】
［付記１２］
前記ポリペプチドの混合物は、グラチラマーアセテートである、
ことを特徴とする付記１１に記載の方法。
【００３５】
［付記１３］
前記質量分析は、ＬＣ−ＭＳである、
ことを特徴とする付記１１に記載の方法。
【００３６】
［付記１４］
グラチラマーアセテートを含む医薬品又は医薬組成物を調製するためのプロセスであって、
（ａ）Ｌ−アラニンのＮ−カルボキシ無水物、Ｌ−グルタミン酸ｇ−ベンジル、トリフルオロ酢酸で保護されたＬ−リシン及びＬ−チロシンを重合して保護されたコポリマーを生成し、保護されたコポリマーを臭化水素酸と反応させてトリフルオロアセチルグラチラマーアセテートを形成し、前記トリフルオロアセチルグラチラマーアセテートをピペリジン水溶液で処理して試験サンプルグラチラマーアセテートを生成し、及び前記試験サンプルグラチラマーアセテートを精製するステップ、及び、
（ｂ）質量分析及び仮説検定アプローチを使用することによって、精製された前記グラチラマーアセテートの試験サンプル及びグラチラマーアセテートの参照標準を分析するステップ、
を含む、プロセス。
【００３７】
［付記１５］
前記分析するステップは、
（１）前記試験サンプル及び参照標準をそれぞれ適切な酵素又は化学物質で消化すること、
（２）前記試験サンプル及び参照標準をそれぞれ直接質量分析にかけて２つのマススペクトルを生成すること、及び、
（３）仮説検定アプローチによって、前記２つのマススペクトルを比較及び分析して前記試験サンプル及び参照標準サンプル間の類似性を決定すること、
を含む、
ことを特徴とする付記１４に記載のプロセス。
【００３８】
［付記１６］
前記適切な酵素は、Ｌｙｓ−Ｃ、トリプシン、又は前記サンプルを消化可能な他の任意の酵素である、
ことを特徴とする付記１５に記載のプロセス。
【００３９】
［付記１７］
前記適切な酵素は、Ｌｙｓ−Ｃである、
ことを特徴とする付記１５に記載の方法。
【００４０】
［付記１８］
前記サンプルを分解するために使用される前記化学物質は、有機若しくは無機の酸又は塩基からなる群から選択される、
ことを特徴とする付記１５に記載の方法。
【００４１】
［付記１９］
前記質量分析は、ＬＣ−ＭＳである、
ことを特徴とする付記１５に記載の方法。
【００４２】
［付記２０］
前記試験サンプル及び前記標準サンプル間の類似性が受け入れられない場合、該方法は、重合条件を再調整し、再調整された条件下で重合を実施し、前記分析するステップを再度実施してグラチラマーアセテートが関連要件の下で前記参照標準と許容できる程度に類似していることを確認するステップを更に含む、
ことを特徴とする付記１５に記載の方法。
【００４３】
［付記２１］
前記関連要件は、政府当局又は営利団体によって作成される、
ことを特徴とする付記２１に記載の方法。
【図１ａ】
2021535997.tif 000005
【図１ｂ】
2021535997.tif 000006
【図１ｃ】
2021535997.tif 000007
【図１ｄ】
2021535997.tif 000008
【図２ａ】
2021535997.tif 000009
【図２ｂ】
2021535997.tif 000010
【図２ｃ】
2021535997.tif 000011
【国際調査報告】
2021535997.tif 000012
2021535997.tif 000013