(57)【要約】  本開示は、対象におけるインスリン抵抗性を軽減又は治療するための組成物及び方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における耐糖能を改善するための方法であって、
ａ）ロイシンアミノ酸実体、
ｂ）アルギニンアミノ酸実体、
ｃ）グルタミンアミノ酸実体；及び
ｄ）Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）実体
を含む組成物を有効量で、それを必要とする前記対象に投与し、それによって、前記対象における耐糖能を改善することを含み；
ただし：
前記耐糖能は、肝臓の疾患又は障害、２型糖尿病、肥満、メタボリック・シンドローム、又は高いＢＭＩに関連していない、方法。
【請求項２】
対象におけるインスリン抵抗性を軽減するための方法であって、
ａ）ロイシンアミノ酸実体、
ｂ）アルギニンアミノ酸実体、
ｃ）グルタミンアミノ酸実体；及び
ｄ）Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）実体
を含む組成物を有効量で、それを必要とする前記対象に投与し、それによって、前記対象における前記インスリン抵抗性を軽減することを含み；
ただし：
前記インスリン抵抗性は、肝臓の疾患又は障害、２型糖尿病、肥満、メタボリック・シンドローム、又は高いＢＭＩに関連していない、方法。
【請求項３】
必要とする対象におけるインスリン抵抗性を治療する方法であって、
ａ）ロイシンアミノ酸実体、
ｂ）アルギニンアミノ酸実体、
ｃ）グルタミンアミノ酸実体；及び
ｄ）ＮＡＣ実体
を含む組成物を有効量で、前記対象に投与し、それによって、前記対象における前記インスリン抵抗性を治療することを含み；
ただし：
前記インスリン抵抗性は、肝臓の疾患又は障害、２型糖尿病、肥満、メタボリック・シンドローム、又は高いＢＭＩに関連していない、方法。
【請求項４】
対象における耐糖能を改善するのに使用するための組成物であって、
ａ）ロイシンアミノ酸実体、
ｂ）アルギニンアミノ酸実体、
ｃ）グルタミンアミノ酸実体；及び
ｄ）Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）実体
を含む組成物を有効量で含み；
ただし：
前記耐糖能は、肝臓の疾患又は障害、２型糖尿病、肥満、メタボリック・シンドローム、又は高いＢＭＩに関連していない、組成物。
【請求項５】
対象におけるインスリン抵抗性を軽減するのに使用するための組成物であって、
ａ）ロイシンアミノ酸実体、
ｂ）アルギニンアミノ酸実体、
ｃ）グルタミンアミノ酸実体；及び
ｄ）Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）実体
を含む組成物を有効量で含み；
ただし：
前記インスリン抵抗性は、肝臓の疾患又は障害、２型糖尿病、肥満、メタボリック・シンドローム、又は高いＢＭＩに関連していない、組成物。
【請求項６】
必要とする対象におけるインスリン抵抗性を治療するのに使用するための組成物であって、
ａ）ロイシンアミノ酸実体、
ｂ）アルギニン−アミノ酸実体、
ｃ）グルタミン−アミノ酸実体；及び
ｄ）ＮＡＣ実体
を含む組成物を有効量で含み；
ただし：
前記インスリン抵抗性は、肝臓の疾患又は障害、２型糖尿病、肥満、メタボリック・シンドローム、又は高いＢＭＩに関連していない、組成物。
【請求項７】
前記組成物の投与が、減少した遊離脂肪酸、低下した脂質代謝、増加したインスリン分泌、又は耐糖能異常の１つ、２つ、３つ、又はそれ以上（例えば、全て）から選択される代謝症状の改善をもたらす、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法、又は請求項４〜６のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項８】
前記対象が、インスリン抵抗性又は耐糖能異常の一方又は両方を有するか、又はインスリン抵抗性又は耐糖能異常の一方又は両方であると診断されている、請求項１〜３又は７のいずれか一項に記載の方法、又は請求項４〜７のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項９】
前記対象が、前糖尿病、腎不全を有するか、又は妊娠している、請求項１〜３、７、又は８のいずれか一項に記載の方法、又は請求項４〜８のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項１０】
前記対象が、心血管の疾患又は障害（例えば、高血圧症、脂質異常症、アテローム性動脈硬化症、若しくは閉塞性睡眠時無呼吸）、内分泌の疾患又は障害（例えば、多嚢胞性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）、甲状腺機能亢進症、クッシング病、クッシング症候群末端肥大症、若しくは褐色細胞腫）、又は遺伝性の疾患又は障害（例えば、ダウン症、ターナー症候群、クラインフェルター症候群、サラセミア、ヘモクロマトーシス、リポジストロフィー、早老症、ハンチントン舞踏病、フリードライヒ運動失調症、ローレンス・ムーン・ビードル症候群、１型糖原病、３型糖原病、若しくは遺伝性ミトコンドリア異常症）を有する、請求項１〜３又は７〜９のいずれか一項に記載の方法、又は請求項４〜９のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項１１】
前記対象が、癌又は認知症を有する、請求項１〜３又は７〜１０のいずれか一項に記載の方法、又は請求項４〜１０のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項１２】
前記癌が、結腸癌、子宮内膜癌、膵臓癌、腎細胞癌、又は乳癌から選択される、請求項１１に記載の方法、又は請求項１１に記載の使用のための組成物。
【請求項１３】
前記認知症が、アルツハイマー病又はレビー小体型認知症から選択される、請求項１１に記載の方法、又は請求項１１に記載の使用のための組成物。
【請求項１４】
前記対象が、重度インスリン抵抗性症候群（ＳＳＩＲ）に罹患している、請求項１〜３又は７〜１３のいずれか一項に記載の方法、又は請求項４〜１３のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項１５】
前記対象が、インスリン抵抗性の遺伝性障害を有する、請求項１〜３又は７〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記インスリン抵抗性の遺伝性障害が、ドナヒュー症候群、ラブソン・メンデンホール症候群、又はＡ型インスリン抵抗性から選択される、請求項１５に記載の方法、又は請求項１５に記載の使用のための組成物、又は請求項４〜１５のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項１７】
前記方法が、（ａ）体重；（ｂ）ＢＭＩ；（ｃ）ＨＯＭＡ−ＩＲ；（ｄ）高インスリン正常血糖クランプにおけるグルコース利用；（ｅ）エクスビボ骨格筋又は脂肪細胞調製物における２−デオキシグルコース取り込み；（ｆ）１８ＦＤＧ  ＰＥＴ；（ｇ）アディポネクチン；（ｈ）レチノール結合タンパク質４（ＲＢＰ４）；（ｉ）レジスチン；（ｊ）インスリン；（ｋ）グルコース；（ｌ）レプチン；又は（ｍ）脂肪細胞サイズのうちの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、又はそれ以上（例えば、全て）のレベルを決定することをさらに含む、請求項１〜３又は７〜１６のいずれか一項に記載の方法、又は請求項４〜１６のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項１８】
前記組成物が、（ｅ）イソロイシンアミノ酸実体又は（ｆ）バリンアミノ酸実体の一方又は両方をさらに含む、請求項１〜３又は７〜１７のいずれか一項に記載の方法、又は請求項４〜１７のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項１９】
前記組成物が、（ｇ）ヒスチジンアミノ酸実体、（ｈ）リジンアミノ酸実体、（ｉ）フェニルアラニンアミノ酸実体、又は（ｊ）トレオニンアミノ酸実体のうちの１つ、２つ、３つ、又はそれ以上（例えば、全て）をさらに含む、請求項１〜３又は７〜１８のいずれか一項に記載の方法、又は請求項４〜１８のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項２０】
（ａ）〜（ｄ）の総重量％が、前記組成物（例えば、乾燥形態で）中の他のアミノ酸実体成分、非アミノ酸実体タンパク質成分（例えば、ホエータンパク）、又は非タンパク質成分の１つ、２つ、又は３つの総重量％を超える、請求項１〜３又は７〜１９のいずれか一項に記載の方法、又は請求項４〜１９のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項２１】
前記組成物が、１８以下のアミノ酸実体の組合せを含む、請求項１〜３、又は７〜２０のいずれか一項に記載の方法、又は請求項４〜２０のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項２２】
前記組成物が、２０を超えるアミノ酸残基長のペプチド（例えば、ホエータンパク）を含まないか、又は２０を超えるアミノ酸残基長のペプチドが存在する場合、前記ペプチドは、前記組成物（例えば、乾燥形態で）の非アミノ酸実体タンパク質成分又は全成分の総重量の１０重量％未満で存在する、請求項１〜３、又は７〜２１のいずれか一項に記載の方法、又は請求項４〜２１のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項２３】
メチオニン、トリプトファン、バリン、又はシステインの１つ、２つ、３つ、又はそれ以上（例えば、全て）が、前記組成物に存在しないか、又は存在する場合、前記組成物（例えば、乾燥形態で）の総重量の１０重量％未満で存在する、請求項１〜３又は７〜２２のいずれか一項に記載の方法、又は請求項４〜２２のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項２４】
（ａ）〜（ｊ）の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、７つ、８つ、９つ、又はそれ以上（例えば、全て）が、表１から選択される、請求項１〜３又は７〜２３のいずれか一項に記載の方法、又は請求項４〜２３のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項２５】
前記ロイシンアミノ酸実体、前記アルギニンアミノ酸実体、前記グルタミンアミノ酸実体、及び前記ＮＡＣ−アミノ酸実体の重量比が、１＋／−２０％：１．５＋／−２０％：２＋／−２０％：０．１５＋／−２０％である、請求項１〜３又は７〜２４のいずれか一項に記載の方法、又は請求項４〜２４のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項２６】
前記ロイシンアミノ酸実体、前記イソロイシンアミノ酸実体、前記バリンアミノ酸実体、前記アルギニンアミノ酸実体、前記グルタミンアミノ酸実体、及び前記ＮＡＣ−アミノ酸実体の重量比が、１＋／−２０％：０．５＋／−２０％：０．５＋／−２０％：１．５＋／−２０％：２＋／−２０％：０．１５＋／−２０％である、請求項１８〜２５のいずれか一項に記載の方法、又は請求項１８〜２５のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項２７】
前記組成物が、以下を含み、
ａ）以下から選択されるロイシンアミノ酸実体：
ｉ）Ｌ−ロイシン若しくはその塩、
ｉｉ）Ｌ−ロイシンを含むジペプチド若しくはその塩、又はトリペプチド若しくはその塩、又は
ｉｉｉ）β−ヒドロキシ−β−メチルブチレート（ＨＭＢ）若しくはその塩；
ｂ）以下から選択されるアルギニンアミノ酸実体：
ｉ）Ｌ−アルギニン若しくはその塩、
ｉｉ）Ｌ−アルギニンを含むジペプチド若しくはその塩、又はトリペプチド若しくはその塩、
ｉｉｉ）クレアチン若しくはその塩、又は
ｉｖ）クレアチンを含むジペプチド若しくはその塩、又はトリペプチド若しくはその塩；
ｃ）前記グルタミンアミノ酸実体は、Ｌ−グルタミン若しくはその塩又はＬ−グルタミンを含むジペプチド若しくはその塩、又はトリペプチド若しくはその塩であり；及び
ｄ）前記ＮＡＣ実体は、ＮＡＣ若しくはその塩又はＮＡＣを含むジペプチド若しくはその塩である、請求項１〜３、又は７〜２４のいずれか一項に記載の方法、又は請求項４〜２７のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項２８】
前記組成物が、
ｅ）Ｌ−イソロイシン若しくはその塩又はＬ−イソロイシンを含むジペプチド若しくはその塩、又はトリペプチド若しくはその塩；又は
ｆ）Ｌ−バリン若しくはその塩又はＬ−バリンを含むジペプチド若しくはその塩、又はトリペプチド若しくはその塩
のうちの一方又は両方をさらに含む、請求項２７に記載の方法、又は請求項２７に記載の使用のための組成物。
【請求項２９】
前記組成物が、（ｇ）Ｌ−ヒスチジン若しくはその塩又はＬ−ヒスチジンを含むジペプチド若しくはその塩、又はトリペプチド若しくはその塩；（ｈ）Ｌ−リジン若しくはその塩又はＬ−リジンを含むジペプチド若しくはその塩、又はトリペプチド若しくはその塩；（ｉ）Ｌ−フェニルアラニン若しくはその塩又はＬ−フェニルアラニンを含むジペプチド若しくはその塩、又はトリペプチド若しくはその塩；又は（ｊ）Ｌ−トレオニン若しくはその塩又はＬ−トレオニンを含むジペプチド若しくはその塩、又はトリペプチド若しくはその塩のうちの１つ、２つ、３つ、又はそれ以上（例えば、全て）をさらに含む、請求項１〜３又は７〜２８のいずれか一項に記載の方法、又は請求項４〜２８のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項３０】
前記組成物が、以下を含み、
ａ）前記ロイシンアミノ酸実体は、Ｌ−ロイシン又はその塩であり；ｂ）前記アルギニンアミノ酸実体は、Ｌ−アルギニン又はその塩であり；ｃ）前記グルタミンアミノ酸実体は、Ｌ−グルタミン又はその塩であり；及びｄ）前記ＮＡＣ実体は、ＮＡＣ又はその塩である、請求項１〜３又は７〜２９のいずれか一項に記載の方法、又は請求項４〜２９のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項３１】
前記組成物が、薬学的に許容できる担体とともに製剤化される、請求項１〜３又は７〜３０のいずれか一項に記載の方法、又は請求項４〜３０のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項３２】
前記組成物が、食品組成物として製剤化される、請求項１〜３又は７〜３０のいずれか一項に記載の方法、又は請求項４〜１３のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［背景技術］
インスリン抵抗性は、通常、グルコースの取り込み及びその後の、グルコースの、グリコーゲンなどの貯蔵型への変換をもたらすホルモンに応答するインスリン感受性細胞の障害によって特徴付けられる深刻な健康問題である。インスリン抵抗性を有する個体では、脂質代謝の異常、特に、高い血中トリグリセリド及び低い高比重リポタンパクがあることが多い。２型糖尿病、前糖尿病、メタボリック・シンドローム、肥満、高血圧症、脂質異常症、多嚢胞性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）、及び甲状腺機能亢進症などの、様々な疾患及び障害が、インスリン抵抗性に関連している。インスリン抵抗性のための一次治療は、運動及び減量であるが、メトホルミンが、広く処方されている薬剤の１つである。しかしながら、メトホルミンは、他の副作用を引き起こすとともにビタミンＢ１２欠乏症を隠す（ｍａｓｋ）ことが知られている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００２】
利用可能な治療の制限を考えると、対象におけるインスリン抵抗性を軽減する薬剤、例えば、食品組成物及び治療薬が依然として必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００３】
対象、例えば、インスリン抵抗性疾患又は障害を有する対象におけるインスリン抵抗性又は耐糖能を改善するのに有用なアミノ酸実体を含む組成物が、本明細書において提供される。組成物は、それを必要とする対象（例えば、ヒト）におけるインスリン抵抗性を軽減及び／又は治療する（例えば、食い止める、軽減、改善、又は予防する）方法に使用され得る。本方法は、アミノ酸実体を含む組成物の投与の後、インスリン抵抗性の１つ又は複数の症状の改善について対象を監視することをさらに含み得る。
【０００４】
一態様において、本発明は、対象における耐糖能を改善するための方法であって、
ａ）ロイシンアミノ酸実体、
ｂ）アルギニンアミノ酸実体、
ｃ）グルタミンアミノ酸実体；及び
ｄ）Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）実体
を含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる組成物（例えば、活性部分）を有効量で、それを必要とする対象に投与し；
それによって、対象における耐糖能を改善することを含む方法を特徴とする。
【０００５】
ある実施形態において、耐糖能は、肝臓の疾患又は障害、２型糖尿病、肥満、メタボリック・シンドローム、又は高いＢＭＩに関連していない。
【０００６】
別の態様において、本発明は、対象におけるインスリン抵抗性を軽減するための方法であって、
ａ）ロイシンアミノ酸実体、
ｂ）アルギニンアミノ酸実体、
ｃ）グルタミンアミノ酸実体；及び
ｄ）Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）実体
を含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる組成物（例えば、活性部分）を有効量で、それを必要とする対象に投与し；
それによって、対象におけるインスリン抵抗性を軽減することを含む方法を特徴とする。
【０００７】
別の態様において、本発明は、必要とする対象におけるインスリン抵抗性を治療する方法であって、
ａ）ロイシンアミノ酸実体、
ｂ）アルギニンアミノ酸実体、
ｃ）グルタミンアミノ酸実体；及び
ｄ）ＮＡＣ実体
を含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる組成物（例えば、活性部分）を有効量で、対象に投与し；
それによって、対象におけるインスリン抵抗性を治療することを含む方法を特徴とする。
【０００８】
ある実施形態において、インスリン抵抗性は、肝臓の疾患又は障害、２型糖尿病、肥満、メタボリック・シンドローム、又は高いＢＭＩに関連している。
【０００９】
ある実施形態において、組成物の投与は、対象における代謝症状、例えば、減少した遊離脂肪酸、低下した脂質代謝、増加したインスリン分泌、又は耐糖能異常の１つ、２つ、３つ、又はそれ以上（例えば、全て）から選択される代謝症状の改善をもたらす。
【００１０】
ある実施形態において、組成物は、インスリン抵抗性を有する対象に投与される。特定の実施形態において、対象は、インスリン抵抗性であると診断されている。
【００１１】
ある実施形態において、組成物は、耐糖能異常（例えば、高血糖）を有する対象に投与される。
【００１２】
ある実施形態において、対象は、前糖尿病、２型糖尿病、又はメタボリック・シンドローム（Ｘ症候群）に罹患している。
【００１３】
ある実施形態において、対象は、過体重又は肥満である。
【００１４】
ある実施形態において、対象は、心血管の疾患又は障害を有する。特定の実施形態において、対象は、高血圧症、脂質異常症、アテローム性動脈硬化症、又は閉塞性睡眠時無呼吸から選択される心血管の疾患又は障害を有する。
【００１５】
ある実施形態において、対象は、内分泌の疾患又は障害を有する。特定の実施形態において、内分泌の疾患又は障害は、多嚢胞性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）、甲状腺機能亢進症、クッシング病、クッシング症候群、末端肥大症、又は褐色細胞腫から選択される。
【００１６】
ある実施形態において、対象は、妊娠している。
【００１７】
ある実施形態において、対象は、腎不全を有する。
【００１８】
ある実施形態において、対象は、遺伝性の疾患又は障害を有する。特定の実施形態において、対象は、ダウン症、ターナー症候群、クラインフェルター症候群、サラセミア、ヘモクロマトーシス、リポジストロフィー、早老症、ハンチントン舞踏病、筋強直性ジストロフィー、フリードライヒ運動失調症、ローレンス・ムーン・ビードル症候群、１型糖原病、３型糖原病、又は遺伝性ミトコンドリア異常症から選択される遺伝性の疾患又は障害を有する。
【００１９】
ある実施形態において、対象は、癌に罹患している。特定の実施形態において、癌は、結腸癌；子宮内膜癌；膵臓癌；腎細胞癌；又は乳癌から選択される。
【００２０】
ある実施形態において、対象は、認知症に罹患している。特定の実施形態において、認知症は、アルツハイマー病又はレビー小体型認知症から選択される。
【００２１】
ある実施形態において、対象は、重度インスリン抵抗性症候群（ＳＳＩＲ）に罹患している。特定の実施形態において、ＳＳＩＲは、リポジストロフィーに関連している。
【００２２】
ある実施形態において、対象は、インスリン抵抗性の遺伝性障害に罹患している。特定の実施形態において、インスリン抵抗性の遺伝性障害は、ドナヒュー症候群；ラブソン・メンデンホール症候群；又はＡ型インスリン抵抗性から選択される。
【００２３】
ある実施形態において、本方法は、（ａ）血漿中インスリン；（ｂ）血漿中グルコース；（ｃ）ＡＣＯＸ１；（ｄ）Ａｃｔａ２；（ｅ）血漿中アディポネクチン；（ｆ）アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）；（ｇ）アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）；（ｈ）カスパーゼ切断ケラチン１８断片（例えば、Ｍ３０及びＭ６５）；（ｇ）ＦＧＦ−２１；（ｉ）ヒドロキシプロリン；（ｊ）ＩＬ−１β；又は（ｋ）ＩＬ−２のうちの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又はそれ以上（例えば、全て）のレベルを決定することをさらに含む。
【００２４】
ある実施形態において、本方法は、（ａ）体重；（ｂ）ＢＭＩ；（ｃ）ＨＯＭＡ−ＩＲ；（ｄ）高インスリン正常血糖クランプにおけるグルコース利用；（ｅ）エクスビボ骨格筋又は脂肪細胞調製物における２−デオキシグルコース取り込み；（ｆ）１８ＦＤＧ  ＰＥＴ；（ｇ）アディポネクチン；（ｈ）レチノール結合タンパク質４（ＲＢＰ４）；（ｉ）レジスチン；（ｊ）インスリン；（ｋ）グルコース；（ｌ）レプチン；又は（ｍ）脂肪細胞サイズのうちの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、又はそれ以上（例えば、全て）のレベルを決定することをさらに含む。
【００２５】
ある実施形態において、組成物（例えば、活性部分）は、（ｅ）イソロイシンアミノ酸実体又は（ｆ）バリンアミノ酸実体の一方又は両方をさらに含む。
【００２６】
ある実施形態において、組成物（例えば、活性部分）は、（ｇ）ヒスチジンアミノ酸実体、（ｈ）リジンアミノ酸実体、（ｉ）フェニルアラニンアミノ酸実体、又は（ｊ）トレオニンアミノ酸実体のうちの１つ、２つ、３つ、又はそれ以上（例えば、全て）をさらに含む。
【００２７】
ある実施形態において、（ａ）〜（ｄ）、（ａ）〜（ｆ）、又は（ａ）〜（ｊ）の総重量％は、組成物（例えば、乾燥形態で）中の他のアミノ酸実体成分、非アミノ酸実体タンパク質成分（例えば、ホエータンパク）、又は非タンパク質成分の１つ、２つ、又は３つの総重量％を超え、例えば、（ａ）〜（ｄ）、（ａ）〜（ｆ）、又は（ａ）〜（ｊ）は、組成物（例えば、乾燥形態で）中のアミノ酸実体成分又は全成分の一方又は両方の総重量の少なくとも：５０重量％、７５重量％、又は９０重量％である。
【００２８】
ある実施形態において、組成物（例えば、活性部分）は、１８以下、１５以下、又は１０以下のアミノ酸実体の組合せを含み、例えば、組合せは、組成物（例えば、乾燥形態で）中のアミノ酸実体成分又は全成分の総重量の少なくとも：４２重量％、７５重量％、又は９０重量％を含む。
【００２９】
ある実施形態において、組成物は、２０を超えるアミノ酸残基長のペプチド（例えば、ホエータンパク）を含まないか、又は２０を超えるアミノ酸残基長のペプチドが存在する場合、ペプチドは、組成物（例えば、乾燥形態で）の非アミノ酸実体タンパク質成分又は全成分の総重量の１０重量％、１重量％、０．５重量％、０．１重量％、０．０５重量％、０．０１重量％、０．００１重量％未満、又はそれ以下で存在する。
【００３０】
ある実施形態において、メチオニン、トリプトファン、バリン、又はシステインの１つ、２つ、３つ、又はそれ以上（例えば、全て）が、組成物に存在しないか、又は存在する場合、例えば、組成物（例えば、乾燥形態で）中の全成分の総重量の１０重量％、１重量％、０．５重量％、０．１重量％、０．０５重量％、０．０１重量％、０．００１重量％未満、又はそれ以下で存在する。ある実施形態において、メチオニン、トリプトファン、バリン、又はシステインの１つ、２つ、３つ、又はそれ以上（例えば、全て）が、存在する場合、遊離形態で存在する。ある実施形態において、メチオニン、トリプトファン、バリン、又はシステインの１つ、２つ、３つ、又はそれ以上（例えば、全て）が、存在する場合、塩形態で存在する。
【００３１】
ある実施形態において、メチオニン、トリプトファン、バリン、又はシステインは、存在する場合、オリゴペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質中で存在してもよく、ただし、タンパク質は、無傷のタンパク質として存在するか又はタンパク質加水分解物として存在するかにかかわらず、ホエー、カゼイン、ラクトアルブミン、又は栄養補給食品、医療食、若しくは同様の製品として使用される任意の他のタンパク質でない。
【００３２】
ある実施形態において、（ａ）〜（ｊ）の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、７つ、８つ、９つ又はそれ以上（例えば、全て）が、表１から選択される。
【００３３】
ある実施形態において、ロイシンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ−アミノ酸実体の重量比は、１＋／−２０％：１．５＋／−２０％：２＋／−２０％：０．１５＋／−２０％である。ある実施形態において、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ−アミノ酸実体の重量比は、１＋／−２０％：０．５＋／−２０％：０．５＋／−２０％：１．５＋／−２０％：２＋／−２０％：０．１５＋／−２０％である。
【００３４】
ある実施形態において、組成物（例えば、活性部分）は、以下を含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなり、
ａ）以下から選択されるロイシンアミノ酸実体：ｉ）Ｌ−ロイシン若しくはその塩、ｉｉ）Ｌ−ロイシンを含むジペプチド若しくはその塩、又はトリペプチド若しくはその塩、又はｉｉｉ）β−ヒドロキシ−β−メチルブチレート（ＨＭＢ）若しくはその塩；
ｂ）以下から選択されるアルギニンアミノ酸実体：ｉ）Ｌ−アルギニン若しくはその塩、ｉｉ）Ｌ−アルギニンを含むジペプチド若しくはその塩、又はトリペプチド若しくはその塩、ｉｉｉ）クレアチン若しくはその塩、又はｉｖ）クレアチンを含むジペプチド若しくはその塩、又はトリペプチド若しくはその塩；
ｃ）グルタミンアミノ酸実体は、Ｌ−グルタミン若しくはその塩又はＬ−グルタミンを含むジペプチド若しくはその塩、又はトリペプチド若しくはその塩であり；
ｄ）ＮＡＣ実体は、ＮＡＣ若しくはその塩又はＮＡＣを含むジペプチド若しくはその塩である。
【００３５】
ある実施形態において、組成物（例えば、活性部分）は、ｅ）Ｌ−イソロイシン若しくはその塩又はＬ−イソロイシンを含むジペプチド若しくはその塩、又はトリペプチド若しくはその塩；又はｆ）Ｌ−バリン若しくはその塩又はＬ−バリンを含むジペプチド若しくはその塩、又はトリペプチド若しくはその塩のうちの一方又は両方をさらに含む。
【００３６】
ある実施形態において、組成物（例えば、活性部分）は、（ｇ）Ｌ−ヒスチジン若しくはその塩又はＬ−ヒスチジンを含むジペプチド若しくはその塩、又はトリペプチド若しくはその塩；（ｈ）Ｌ−リジン若しくはその塩又はＬ−リジンを含むジペプチド若しくはその塩、又はトリペプチド若しくはその塩；（ｉ）Ｌ−フェニルアラニン若しくはその塩又はＬ−フェニルアラニンを含むジペプチド若しくはその塩、又はトリペプチド若しくはその塩；又は（ｊ）Ｌ−トレオニン若しくはその塩又はＬ−トレオニンを含むジペプチド若しくはその塩、又はトリペプチド若しくはその塩のうちの１つ、２つ、３つ、又はそれ以上（例えば、全て）をさらに含む。
【００３７】
ある実施形態において、組成物（例えば、活性部分）は、以下を含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなり、
ａ）ロイシンアミノ酸実体は、Ｌ−ロイシン又はその塩であり；ｂ）アルギニンアミノ酸実体は、Ｌ−アルギニン又はその塩であり；ｃ）グルタミンアミノ酸実体は、Ｌ−グルタミン又はその塩であり；及びｄ）ＮＡＣ実体は、ＮＡＣ又はその塩である。
【００３８】
ある実施形態において、組成物（例えば、活性部分）は、以下を含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなり、
ａ）ロイシンアミノ酸実体は、Ｌ−ロイシン又はその塩であり；ｂ）アルギニンアミノ酸実体は、Ｌ−アルギニン又はその塩であり；ｃ）グルタミンアミノ酸実体は、Ｌ−グルタミン又はその塩であり；ｄ）ＮＡＣ実体は、ＮＡＣ又はその塩であり；ｅ）イソロイシンアミノ酸実体は、Ｌ−イソロイシン又はその塩であり；及びｆ）バリンアミノ酸実体は、Ｌ−バリン又はその塩である。
【００３９】
ある実施形態において、組成物（例えば、活性部分）は、以下を含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなり、
ａ）ロイシンアミノ酸実体は、Ｌ−ロイシン又はその塩であり；ｂ）アルギニンアミノ酸実体は、Ｌ−アルギニン又はその塩であり；ｃ）グルタミンアミノ酸実体は、Ｌ−グルタミン又はその塩であり；ｄ）ＮＡＣ実体は、ＮＡＣ又はその塩であり；ｅ）イソロイシンアミノ酸実体は、Ｌ−イソロイシン又はその塩であり；ｆ）バリンアミノ酸実体は、Ｌ−バリン又はその塩であり；（ｇ）Ｌ−ヒスチジン又はその塩；（ｈ）Ｌ−リジン又はその塩；（ｉ）Ｌ−フェニルアラニン又はその塩；又は（ｊ）Ｌ−トレオニン又はその塩である。
【００４０】
ある実施形態において、組成物（例えば、活性部分）は、薬学的に許容できる担体とともに製剤化される。
【００４１】
ある実施形態において、組成物（例えば、活性部分）は、食品組成物として製剤化される。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１Ａ】図１：ＳＴＡＭマウスモデル（図１Ａ）及びＦＡＴＺＯマウスモデル（図１Ｂ）において、ＮＡＦＬＤ活動性スコア、肝細胞風船様腫大、及び線維症に対するアミノ酸組成物（アミノ酸組成物Ａ−１）による処理の効果を示すグラフである。
【図１Ｂ】（上記の通り。）
【図２】ＳＴＡＭ及びＦＡＴＺＯマウスへのアミノ酸組成物の投与のための処理計画を示す概略図である。
【図３Ａ】図３：組織学を用いて決定される際の、ＮＡＦＬＤ活動性スコア（ＮＡＳ）、脂肪症、炎症、及び肝線維症に対する、アミノ酸組成物によるＳＴＡＭ及びＦＡＴＺＯマウスの処理の効果を示す一連のグラフ及び画像である。
【図３Ｂ】（上記の通り。）
【図３Ｃ】（上記の通り。）
【図３Ｄ】（上記の通り。）
【図３Ｅ】（上記の通り。）
【図４Ａ】図４：アミノ酸組成物で処理されたＳＴＡＭマウスの肝臓不飽和脂肪酸及びアシルカルニチンのレベルを示す画像である。
【図４Ｂ】（上記の通り。）
【図５】ＡＣＯＸ１の活性化を示すＳＴＡＭマウスにおけるアミノ酸組成物による処理の後の肝臓遺伝子発現パターンの遺伝子地図の画像である。
【図６Ａ】図６：抗炎症性ＩＬ−１０の上流のレギュレータ活性化（図６Ａ）；炎症性ＮＦ−ｋＢの阻害（図６Ｂ）、インターフェロン、ＩＬ−１ｂ、及びＩＬ−２（図６Ｃ）；並びに線維形成性ＴＧＦ−ｂシグナル伝達経路の抑制（図６Ｄ）を示すＳＴＡＭマウスにおけるアミノ酸組成物による処理の後の肝臓遺伝子発現パターンの遺伝子地図の画像である。
【図６Ｂ】（上記の通り。）
【図６Ｃ】（上記の通り。）
【図６Ｄ】（上記の通り。）
【図７】アミノ酸組成物による処理の後の、Ｃ−Ｃケモカイン受容体２型（ＣＣＲ２）及び５型（ＣＣＲ５）のリガンドであるＭＣＰ−１及びＭＩＰ−１タンパク質レベルを示す一連のグラフである。
【図８Ａ−Ｌ】ビヒクル対照（図８Ａ〜８Ｄ）、ＬＩＶＲＱＮＡＣアミノ酸組成物（図８Ｅ〜８Ｈ）、又は遊離脂肪酸及びＴＮＦα（ＦＦ＋ＴＮＦ；図８Ｉ〜８Ｌ）による処理の後の初代ヒト肝細胞における脂質蓄積を示す一連の顕微鏡画像である。
【図９】示されるアミノ酸組成物の投与後のＦＡＴＺＯマウスからの肝組織像（コラーゲン沈着のためのＨ＆Ｅ染色又はシリウスレッド染色）を示す一連の顕微鏡画像である。
【図１０】示されるアミノ酸組成物の投与後のＦＡＴＺＯマウスからの肝組織像を示す一連の顕微鏡画像である。
【図１１】示されるアミノ酸組成物の投与後のＦＡＴＺＯマウスからの固定した肝組織において観察される、ＮＡＦＬＤ活動性スコア（左上のパネル）、シリウスレッド染色（右上のパネル）、脂肪症レベル（左下のパネル）、炎症レベル（下の真ん中のパネル）及び肝細胞風船様腫大（右下のパネル）を示す一連のグラフである。
【図１２Ａ】図１２：グルコース（図１２Ａ）、インスリン（図１２Ｂ）、ＨＯＭＡ−ＩＲ（図１２Ｃ）、血漿中アディポネクチン（図１２Ｄ）、肝臓脂肪及び体重（図１２Ｅ）、及び血漿中β−ヒドロキシ酪酸（図１２Ｆ）のレベルに対する、アミノ酸組成物でヒト対象を処理する効果を示す一連のグラフである。
【図１２Ｂ】（上記の通り。）
【図１２Ｃ】（上記の通り。）
【図１２Ｄ】（上記の通り。）
【図１２Ｅ】（上記の通り。）
【図１２Ｆ】（上記の通り。）
【発明を実施するための形態】
【００４３】
１つには、アミノ酸実体を含む組成物（例えば、活性部分）及び有効量の組成物を投与することによってインスリン抵抗性を軽減する方法が、本明細書に記載される。組成物は、それを必要とする対象におけるインスリン抵抗性を治療又は予防するために投与され得る。組成物中のアミノ酸実体及びアミノ酸実体の相対量は、例えば、多くの生物学的、細胞、及び分子過程の調整を必要とする対象におけるインスリン抵抗性を軽減するために、注意深く選択されてきた。組成物は、インスリン抵抗性、グルコース恒常性、及び脂質代謝に関与するシグナル伝達経路の調節を最適化するために、グルコース及び脂質代謝に対する多経路の有益な効果を可能にする。特に、組成物は、グルコース利用を改善し、脂肪酸酸化を増加させ、インスリン感受性を増加させるように特異的に調整されてきた。
【００４４】
以下に詳細に記載される例において、本発明の組成物は、空腹時インスリン（低下した）、ＨＯＭＡ−ＩＲ（低下した）及びアディポネクチン（増加した）によって測定される際にインスリン感受性を改善し、βヒドロキシ酪酸（増加した）によって測定される際に脂肪酸酸化を増加させた。
【００４５】
定義
特許請求の範囲及び本明細書において使用される用語は、特に規定されない限り、以下に記載されるとおりに定義される。
【００４６】
本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用される際、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈上特に明記されない限り、複数の指示対象を含むことに留意されなければならない。
【００４７】
本明細書において使用される際、「アミノ酸実体」という用語は、遊離形態若しくは塩形態（又は両方）の左旋性（Ｌ）−アミノ酸、２０未満のアミノ酸残基のペプチド（例えば、オリゴペプチド、例えば、ジペプチド若しくはトリペプチド）のＬ−アミノ酸残基、アミノ酸の誘導体、アミノ酸の前駆体、又はアミノ酸の代謝産物を指す（例えば、表１を参照）。アミノ酸実体は、遊離Ｌ−アミノ酸の生物学的機能性をもたらすことが可能な、アミノ酸の誘導体、アミノ酸の前駆体、アミノ酸の代謝産物、又はアミノ酸の塩形態を含む。アミノ酸実体は、完全な（ｗｈｏｌｅ）又は修飾された形態、例えば、加水分解された形態のいずれかの、２０を超えるアミノ酸残基の天然ポリペプチド又はタンパク質を含まない。
【００４８】
アミノ酸の塩は、任意の摂取可能な塩を含む。医薬組成物については、組成物（例えば、活性部分）中に存在するアミノ酸の塩形態は、薬学的に許容できる塩であるべきである。特定の例において、塩形態は、アミノ酸の塩酸塩（ＨＣｌ）形態である。
【００４９】
ある実施形態において、アミノ酸実体の誘導体は、アミノ酸エステル（例えば、アミノ酸実体のアルキルエステル、例えば、エチルエステル若しくはメチルエステル）又はケト酸を含む。
【００５０】
【表１】
2021527671.tif 000002
【００５１】
【表２】
2021527671.tif 000003
【００５２】
「約」及び「およそ」は、一般に、測定の性質又は精度を所与として、測定される量に対する誤差の許容される程度を意味するものである。例示的な誤差の程度は、所与の値又は値の範囲の１５パーセント（％）以内、典型的に、１０％以内、より典型的に、５％以内である。
【００５３】
「アミノ酸」は、アミノ基（−ＮＨ２）、カルボン酸基（−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ）、及び中心の炭素原子を介して結合された側鎖を有する有機化合物を指し、必須及び非必須アミノ酸、並びに天然、非タンパク及び非天然アミノ酸を含む。
【００５４】
本明細書において使用される際、「活性部分」という用語は、全体として、本明細書に記載される生理学的効果、例えば、インスリン抵抗に対する効果を有する能力を有する４つ以上のアミノ酸実体の組合せを意味する。例えば、活性部分は、疾患又は障害に罹患した対象における代謝機能不全のバランスを調節し直すことができる。本発明の活性部分が、他の生物学的に有効な成分を含有し得る。ある例において、活性部分は、以下に詳細に記載される、４つ以上のアミノ酸実体の定義された組合せを含む。他の実施形態において、活性部分は、以下に詳細に記載される、アミノ酸実体の定義された組合せからなる。
【００５５】
個々のアミノ酸実体が、重量基準の量（例えば、グラムで）、アミノ酸実体の互いの重量比、モル基準の量、組成物の重量パーセント基準の量、組成物のモルパーセント基準の量、カロリー量、組成物へのカロリー寄与率パーセントなどとして示され得る様々な量又は比率で、組成物、例えば、活性部分中に存在する。一般に、本開示は、剤形におけるアミノ酸実体のグラム、組成物の重量に対するアミノ酸実体の重量パーセント、すなわち、組成物中に存在する全てのアミノ酸実体及び任意の他の生物学的に有効な成分の重量を、又は比率で提供する。ある実施形態において、組成物、例えば、活性部分は、薬学的に許容できる製剤（例えば、医薬品）として提供される。
【００５６】
本明細書において使用される際の「有効量」という用語は、治療される症状を軽減及び／又は病態を改善する（例えば、所望の臨床反応をもたらす）のに十分な、本発明の組成物、特に、本発明の医薬組成物における、本発明の有効成分の量を意味する。組成物において使用するための有効成分の有効量は、担当医の知識及び専門知識により、治療される具体的な病態、病態の重症度、治療期間、併用療法の性質、用いられる具体的な有効成分、用いられる具体的な薬学的に許容できる賦形剤及び／又は担体、及び類似の要因により変化するであろう。
【００５７】
本明細書に記載される「医薬組成物」は、少なくとも１つの「活性部分」及び薬学的に許容できる担体又は賦形剤を含む。ある実施形態において、医薬組成物は、治療薬として使用される。医薬品規格（ＧＭＰ；医薬品グレード成分）を満たす必要のない他の組成物が、栄養補給食品、医療食、又は栄養補助食品として使用され得、これらは、「消費者健康（ｃｏｎｓｕｍｅｒ  ｈｅａｌｔｈ）組成物」と呼ばれる。
【００５８】
本明細書において使用される際の「薬学的に許容できる」という用語は、妥当な医学的判断の範囲内で、妥当なリスク・ベネフィット比に見合って、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、又は他の問題若しくは合併症を伴わずに、ヒト及び動物の組織と接触した状態で使用するのに好適なアミノ酸、材料、賦形剤、組成物、及び／又は剤形を指す。特定の実施形態において、「薬学的に許容できる」は、検出可能な内毒素を含まないか、又は内毒素レベルが、医薬品中で許容できるレベル未満であることを意味する。
【００５９】
特定の実施形態において、「薬学的に許容できる」は、１つ又は複数の製品品質パラメータが、薬剤、医薬組成物、治療、又は他の治療薬のために許容できる範囲内であることを確実にするために、製薬業界又は製薬業界を規制する機関若しくは事業体（例えば、政府若しくは商業機関若しくは事業体）によって使用される規格を意味する。製品品質パラメータは、組成物；組成物の均一性；投与量；投与量の均一性；存在、非存在、及び／又は汚染物質若しくは不純物のレベル；及び無菌のレベル（例えば、微生物の存在、非存在及び／又はレベル）を含むがこれらに限定されない、製薬業界又は機関若しくは事業体、例えば、政府若しくは商業機関若しくは事業体によって規制される任意のパラメータであり得る。例示的な政府の規制機関としては、アメリカ食品医薬品局（Ｆｅｄｅｒａｌ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）（ＦＤＡ）、欧州医薬品庁（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ  Ａｇｅｎｃｙ）（ＥＭＡ）、スイスメディック（ＳｗｉｓｓＭｅｄｉｃ）、中華人民共和国国家食品薬品監督管理局（Ｃｈｉｎａ  Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）（ＣＦＤＡ）、又は医薬品医療機器総合機構（Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ａｇｅｎｃｙ）（ＰＭＤＡ）が挙げられる。
【００６０】
「薬学的に許容できる賦形剤」という用語は、生理学的に適合する、有効成分以外の、医薬製剤の成分を指す。薬学的に許容できる賦形剤としては、限定はされないが、緩衝剤、甘味料、分散促進剤、香味料、苦味マスキング剤、天然着色料、人工着色料、安定剤、溶媒、又は防腐剤が挙げられる。特定の実施形態において、薬学的に許容できる賦形剤は、クエン酸又はレシチンの一方又は両方を含む。
【００６１】
本明細書において使用される際の「非アミノ酸実体タンパク質成分」という用語は、ペプチド（例えば、ポリペプチド又はオリゴペプチド）、その断片、又は分解されたペプチドを指す。例示的な非アミノ酸実体タンパク質成分としては、限定はされないが、ホエータンパク、卵白タンパク質、大豆タンパク質、カゼイン、麻タンパク質、エンドウ豆タンパク質、玄米タンパク質、又はそれらの断片若しく分解されたペプチドのうちの１つ又は複数が挙げられる。
【００６２】
本明細書において使用される際の「非タンパク質成分」という用語は、タンパク質成分以外の組成物の任意の成分を指す。例示的な非タンパク質成分としては、限定はされないが、糖（例えば、単糖（例えば、デキストロース、グルコース、若しくはフルクトース）、二糖、オリゴ糖、若しくは多糖）；脂質（例えば、硫黄含有脂質（例えば、α−リポ酸）、長鎖トリグリセリド、ω３脂肪酸（例えば、ＥＰＡ、ＤＨＡ、ＳＴＡ、ＤＰＡ、若しくはＡＬＡ）、ω６脂肪酸（ＧＬＡ、ＤＧＬＡ、若しくはＬＡ）、中鎖トリグリセリド、若しくは中鎖脂肪酸）；ビタミン（例えば、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビオチン、若しくはパントテン酸）；ミネラル（亜鉛、セレン、鉄、銅、葉酸、リン、カリウム、マンガン、クロム、カルシウム、若しくはマグネシウム）；又はステロール（例えば、コレステロール）が挙げられる。
【００６３】
組成物、製剤又は生成物は、それが所望の臨床効果を提供する場合「治療薬」である。所望の臨床効果は、疾患の進行を低下させ、及び／又は疾患の１つ又は複数の症状を軽減することによって示され得る。
【００６４】
「単位用量」又は「単位投与量」は、特定の構造（例えば、カプセル殻など）中で、及び特定の用量に分配されて（例えば、複数のスティックパック中で）、有効成分及び非有効成分（賦形剤）の特定の混合物を含む、使用のために市販される形態における１つ又は複数の製剤を含む。
【００６５】
本明細書において使用される際、インスリン抵抗性の「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、又は「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、インスリン抵抗性を改善すること（例えば、インスリン抵抗性又はその臨床症状の少なくとも１つの発生を遅らせるか、停止させるか、又は軽減すること）；患者によって識別できないものを含む少なくとも１つの物理的パラメータを軽減又は改善すること；及び／又はインスリン抵抗性の開始又は発生又は進行を予防するか又は遅らせることを指す。
【００６６】
アミノ酸実体（例えば、活性部分）を含む組成物
本明細書に記載される本発明の組成物（例えば、活性部分）は、アミノ酸実体、例えば、表１に示されるアミノ酸実体を含む。
【００６７】
特定の実施形態において、ロイシンアミノ酸実体は、Ｌ−ロイシン、β−ヒドロキシ−β−メチルブチレート（ＨＭＢ）、オキソ−ロイシン（α−ケトイソカプロン酸（ＫＩＣ））、イソバレリル−ＣｏＡ、ｎ−アセチル−ロイシン、又はそれらの組合せから選択される。
【００６８】
特定の実施形態において、アルギニンアミノ酸実体は、Ｌ−アルギニン、クレアチン、アルギニノコハク酸、アスパルテート、グルタメート、アグマチン、Ｎ−アセチル−アルギニン、又はそれらの組合せから選択される。
【００６９】
特定の実施形態において、グルタミンアミノ酸実体は、Ｌ−グルタミン、グルタメート、カルバモイル−Ｐ、グルタメート、ｎ−アセチルグルタミン、又はそれらの組合せから選択される。
【００７０】
特定の実施形態において、ＮＡＣ−アミノ酸実体は、ＮＡＣ、アセチルセリン、シスタチオニン、シスタチオニン、ホモシステイン、グルタチオン、又はそれらの組合せから選択される。
【００７１】
特定の実施形態において、イソロイシンアミノ酸実体は、Ｌ−イソロイシン、２−オキソ−３−メチル−吉草酸（α−ケト−β−メチル吉草酸（ＫＭＶ））、メチルブチリル−ＣｏＡ、Ｎ−アセチル−イソロイシン、又はそれらの組合せから選択される。
【００７２】
特定の実施形態において、バリンアミノ酸実体は、Ｌ−バリン、２−オキソ−吉草酸（α−ケトイソ吉草酸（ＫＩＶ））、イソブチリル−ＣｏＡ、Ｎ−アセチル−バリン、又はそれらの組合せから選択される。
【００７３】
特定の実施形態において、ヒスチジンアミノ酸実体は、Ｌ−ヒスチジン、ヒスチジノール、ヒスチジナール、リボース−５−リン酸、カルノシン、ヒスタミン、ウロカニン酸、Ｎ−アセチル−ヒスチジン、又はそれらの組合せから選択される。
【００７４】
特定の実施形態において、リジンアミノ酸実体は、Ｌ−リジン、ジアミノピメリン酸、アスパルテート、トリメチルリジン、サッカロピン、Ｎ−アセチル−リジン、又はそれらの組合せから選択される。
【００７５】
特定の実施形態において、フェニルアラニンアミノ酸実体は、Ｌ−フェニルアラニン、フェニルピルビン酸、チロシン、Ｎ−アセチル−フェニルアラニン、又はそれらの組合せから選択される。
【００７６】
特定の実施形態において、トレオニンアミノ酸実体は、Ｌ−トレオニン、ホモセリン、Ｏ−ホスホホモセリン、オキソ酪酸、Ｎ−アセチル−トレオニン、又はそれらの組合せから選択される。
【００７７】
特定の実施形態において、セリンアミノ酸実体は、Ｌ−セリン、ホスホセリン、ｐ−ヒドロキシピルビン酸、グリシン、アセチルセリン、シスタチオニン、ホスファチジルセリン、又はそれらの組合せから選択される。ある実施形態において、セリンアミノ酸実体は、Ｌ−セリン又はＬ−グリシンから選択される。一実施形態において、セリンアミノ酸実体は、Ｌ−セリンである。別の実施形態において、セリンアミノ酸実体は、Ｌ−グリシンである。別の実施形態において、セリンアミノ酸実体は、Ｌ−グリシン及びＬ−セリンである（例えば、１：１の重量比におけるＬ−グリシン及びＬ−セリン）。
【００７８】
本明細書に記載される組成物は、Ｌ−セリン、Ｌ−グリシン、クレアチン、又はグルタチオンのうちの１つ、２つ、３つ又はそれ以上（例えば、全て）をさらに含み得る。ある実施形態において、組成物は、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体（例えば、Ｌ−グルタミン又はその塩）、ＮＡＣ実体、及びＬ−セリンを含む。ある実施形態において、組成物は、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体（例えば、Ｌ−グルタミン又はその塩）、ＮＡＣ実体、及びＬ−グリシンを含む。ある実施形態において、組成物は、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体（例えば、Ｌ−グルタミン又はその塩）、ＮＡＣ実体、Ｌ−グリシン、及びＬ−セリンを含む。
【００７９】
ある実施形態において、（ａ）〜（ｊ）の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、７つ、８つ、９つ又はそれ以上（例えば、全て）が、組成物中で遊離アミノ酸形態であり、例えば、アミノ酸実体成分又は全成分の総重量の少なくとも：４２重量％、７５重量％、９０重量％、又はそれ以上が、組成物（例えば、乾燥形態で）中で遊離アミノ酸形態の（ａ）〜（ｊ）の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、７つ、８つ、９つ又はそれ以上（例えば、全て）である。
【００８０】
ある実施形態において、（ａ）〜（ｊ）の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、７つ、８つ、９つ又はそれ以上（例えば、全て）が、組成物中で塩形態であり、例えば、アミノ酸実体成分又は全成分の総重量の少なくとも：０．０１重量％、０．１重量％、０．５重量％、１重量％、５重量％、若しくは１０重量％、又はそれ以上が、組成物中で塩形態の（ａ）〜（ｊ）の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、７つ、８つ、９つ又はそれ以上（例えば、全て）である。
【００８１】
ある実施形態において、（ａ）〜（ｊ）の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、７つ、８つ、９つ又はそれ以上（例えば、全て）が、例えば、組成物のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも：０．０１重量％、０．１重量％、０．５重量％、１重量％、５重量％、若しくは１０重量％、又はそれ以上の量で、ジペプチド又はトリペプチドの一部として提供される。
【００８２】
ある実施形態において、組成物（例えば、活性部分）は、脂肪酸酸化を促進すること、例えば、（例えば、ＳＴＡＭマウスモデル又はＦＡＴＺＯマウスモデルにおいて）不飽和脂肪酸のレベルを低下させるか又はアシルカルニチンのレベルを増加させるかの一方又は両方が可能である。特定の実施形態において、不飽和脂肪酸のレベルの低下は、例えば、実施例３において記載されるように測定される、表５３に示される変化のレベルの少なくとも２５％、４０％、又は５０％である。特定の実施形態において、アシルカルニチンのレベルの増加は、例えば、実施例３において記載されるように測定される、表５３に示される変化のレベルの少なくとも２５％、４０％、又は５０％である。
【００８３】
特定の実施形態において、組成物（例えば、活性部分）は、例えば、対照組成物（例えば、より低い濃度の組成物、ビヒクル対照（ＰＢＳ）、単一のアミノ酸実体、又はアミノ酸実体の組合せ）と比べて、例えば、実施例７において記載されるように、例えば、比色分析を用いて評価される際、例えば、少なくとも１５％、２０％、又は３０％だけ肝細胞におけるトリグリセリドレベルを低下させることが可能であるか、又は低下させる。
【００８４】
ｉ．量
組成物（例えば、活性部分）は、０．５ｇ＋／−２０％〜１０ｇ＋／−２０％のロイシンアミノ酸実体、１ｇ＋／−２０％〜１５ｇ＋／−２０％のアルギニンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−２０％〜２０ｇ＋／−２０％のグルタミンアミノ酸実体、及び０．１ｇ＋／−２０％〜５ｇ＋／−２０％のＮＡＣ実体を含み得る。
【００８５】
例示的な組成物は、１ｇのロイシンアミノ酸実体、０．５ｇのイソロイシンアミノ酸実体、０．５ｇのバリンアミノ酸実体、１．５ｇ又は１．８１ｇのアルギニンアミノ酸実体、２ｇのグルタミンアミノ酸実体、及び０．１５ｇのＮＡＣ実体（例えば、表３に示されるｇ／パケット）を含み得る。
【００８６】
【表３】
2021527671.tif 000004
【００８７】
ある実施形態において、組成物（例えば、活性部分）は、１ｇ＋／−２０％のロイシンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−２０％のイソロイシンアミノ酸実体、０．５＋／−２０％ｇのバリンアミノ酸実体、１．５ｇ＋／−２０％のアルギニンアミノ酸実体、２ｇ＋／−２０％のグルタミンアミノ酸実体、及び０．１５ｇ＋／−２０％のＮＡＣ実体を含む。ある実施形態において、組成物は、１ｇ＋／−１５％のロイシンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−１５％のイソロイシンアミノ酸実体、０．５＋／−１５％ｇのバリンアミノ酸実体、１．５ｇ＋／−１５％のアルギニンアミノ酸実体、２ｇ＋／−１５％のグルタミンアミノ酸実体、及び０．１５ｇ＋／−１５％のＮＡＣ実体を含む。ある実施形態において、組成物は、１ｇ＋／−１０％のロイシンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−１０％のイソロイシンアミノ酸実体、０．５＋／−１０％ｇのバリンアミノ酸実体、１．５ｇ＋／−１０％のアルギニンアミノ酸実体、２ｇ＋／−１０％のグルタミンアミノ酸実体、及び０．１５ｇ＋／−１０％のＮＡＣ実体を含む。ある実施形態において、組成物は、１ｇ＋／−５％のロイシンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−５％のイソロイシンアミノ酸実体、０．５＋／−５％ｇのバリンアミノ酸実体、１．５ｇ＋／−５％のアルギニンアミノ酸実体、２ｇ＋／−５％のグルタミンアミノ酸実体、及び０．１５ｇ＋／−５％のＮＡＣ実体を含む。ある実施形態において、組成物は、１ｇのロイシンアミノ酸実体、０．５ｇのイソロイシンアミノ酸実体、０．５ｇのバリンアミノ酸実体、１．５ｇ又は１．８１ｇのアルギニンアミノ酸実体、２ｇのグルタミンアミノ酸実体、及び０．１５ｇのＮＡＣ実体を含む。
【００８８】
ある実施形態において、組成物（例えば、活性部分）は、１ｇ＋／−２０％のロイシンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−２０％のイソロイシンアミノ酸実体、０．５＋／−２０％ｇのバリンアミノ酸実体、１．５ｇ＋／−２０％のアルギニンアミノ酸実体、２ｇ＋／−２０％のグルタミンアミノ酸実体、及び０．３ｇ＋／−２０％のＮＡＣ実体を含む。ある実施形態において、組成物は、１ｇ＋／−１５％のロイシンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−１５％のイソロイシンアミノ酸実体、０．５＋／−１５％ｇのバリンアミノ酸実体、１．５ｇ＋／−１５％のアルギニンアミノ酸実体、２ｇ＋／−１５％のグルタミンアミノ酸実体、及び０．３ｇ＋／−１５％のＮＡＣ実体を含む。ある実施形態において、組成物は、１ｇ＋／−１０％のロイシンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−１０％のイソロイシンアミノ酸実体、０．５＋／−１０％ｇのバリンアミノ酸実体、１．５ｇ＋／−１０％のアルギニンアミノ酸実体、２ｇ＋／−１０％のグルタミンアミノ酸実体、及び０．３ｇ＋／−１０％のＮＡＣ実体を含む。ある実施形態において、組成物は、１ｇ＋／−５％のロイシンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−５％のイソロイシンアミノ酸実体、０．５＋／−５％ｇのバリンアミノ酸実体、１．５ｇ＋／−５％のアルギニンアミノ酸実体、２ｇ＋／−５％のグルタミンアミノ酸実体、及び０．３ｇ＋／−５％のＮＡＣ実体を含む。ある実施形態において、組成物は、１ｇのロイシンアミノ酸実体、０．５ｇのイソロイシンアミノ酸実体、０．５ｇのバリンアミノ酸実体、１．５ｇ又は１．８１ｇのアルギニンアミノ酸実体、２ｇのグルタミンアミノ酸実体、及び０．３ｇのＮＡＣ実体を含む。
【００８９】
例示的な組成物は、１ｇのロイシンアミノ酸実体、０．５ｇのイソロイシンアミノ酸実体、０．５ｇのバリンアミノ酸実体、０．７５ｇ又は０．９０５ｇのアルギニンアミノ酸実体、２ｇのグルタミンアミノ酸実体、及び０．１５ｇのＮＡＣ実体（例えば、表４に示されるｇ／パケット）を含み得る。
【００９０】
【表４】
2021527671.tif 000005
【００９１】
ある実施形態において、組成物（例えば、活性部分）は、１ｇ＋／−２０％のロイシンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−２０％のイソロイシンアミノ酸実体、０．５＋／−２０％ｇのバリンアミノ酸実体、０．７５ｇ＋／−２０％のアルギニンアミノ酸実体、２ｇ＋／−２０％のグルタミンアミノ酸実体、及び０．１５ｇ＋／−２０％のＮＡＣ実体を含む。ある実施形態において、組成物は、１ｇ＋／−１５％のロイシンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−１５％のイソロイシンアミノ酸実体、０．５＋／−１５％ｇのバリンアミノ酸実体、０．７５ｇ＋／−１５％のアルギニンアミノ酸実体、２ｇ＋／−１５％のグルタミンアミノ酸実体、及び０．１５ｇ＋／−１５％のＮＡＣ実体を含む。ある実施形態において、組成物は、１ｇ＋／−１０％のロイシンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−１０％のイソロイシンアミノ酸実体、０．５＋／−１０％ｇのバリンアミノ酸実体、０．７５ｇ＋／−１０％のアルギニンアミノ酸実体、２ｇ＋／−１０％のグルタミンアミノ酸実体、及び０．１５ｇ＋／−１０％のＮＡＣ実体を含む。ある実施形態において、組成物は、１ｇ＋／−５％のロイシンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−５％のイソロイシンアミノ酸実体、０．５＋／−５％ｇのバリンアミノ酸実体、０．７５ｇ＋／−５％のアルギニンアミノ酸実体、２ｇ＋／−５％のグルタミンアミノ酸実体、及び０．１５ｇ＋／−５％のＮＡＣ実体を含む。ある実施形態において、組成物は、１ｇのロイシンアミノ酸実体、０．５ｇのイソロイシンアミノ酸実体、０．５ｇのバリンアミノ酸実体、０．７５ｇ又は０．９０５ｇのアルギニンアミノ酸実体、２ｇのグルタミンアミノ酸実体、及び０．１５ｇのＮＡＣ実体を含む。
【００９２】
ある実施形態において、組成物（例えば、活性部分）は、１ｇ＋／−２０％のロイシンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−２０％のイソロイシンアミノ酸実体、０．５＋／−２０％ｇのバリンアミノ酸実体、０．７５ｇ＋／−２０％のアルギニンアミノ酸実体、２ｇ＋／−２０％のグルタミンアミノ酸実体、及び０．３ｇ＋／−２０％のＮＡＣ実体を含む。ある実施形態において、組成物は、１ｇ＋／−１５％のロイシンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−１５％のイソロイシンアミノ酸実体、０．５＋／−１５％ｇのバリンアミノ酸実体、０．７５ｇ＋／−１５％のアルギニンアミノ酸実体、２ｇ＋／−１５％のグルタミンアミノ酸実体、及び０．３ｇ＋／−１５％のＮＡＣ実体を含む。ある実施形態において、組成物は、１ｇ＋／−１０％のロイシンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−１０％のイソロイシンアミノ酸実体、０．５＋／−１０％ｇのバリンアミノ酸実体、０．７５ｇ＋／−１０％のアルギニンアミノ酸実体、２ｇ＋／−１０％のグルタミンアミノ酸実体、及び０．３ｇ＋／−１０％のＮＡＣ実体を含む。ある実施形態において、組成物は、１ｇ＋／−５％のロイシンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−５％のイソロイシンアミノ酸実体、０．５＋／−５％ｇのバリンアミノ酸実体、０．７５ｇ＋／−５％のアルギニンアミノ酸実体、２ｇ＋／−５％のグルタミンアミノ酸実体、及び０．３ｇ＋／−５％のＮＡＣ実体を含む。ある実施形態において、組成物は、１ｇのロイシンアミノ酸実体、０．５ｇのイソロイシンアミノ酸実体、０．５ｇのバリンアミノ酸実体、０．７５ｇ又は０．９０５ｇのアルギニンアミノ酸実体、２ｇのグルタミンアミノ酸実体、及び０．３ｇのＮＡＣ実体を含む。
【００９３】
例示的な組成物は、１ｇのロイシンアミノ酸実体、０．５ｇのイソロイシンアミノ酸実体、０．２５ｇのバリンアミノ酸実体、０．７５ｇ又は０．９０５ｇのアルギニンアミノ酸実体、１ｇのグルタミンアミノ酸実体、及び０．２２５ｇのＮＡＣ実体（例えば、表５に示されるｇ／パケット）を含み得る。
【００９４】
【表５】
2021527671.tif 000006
【００９５】
ある実施形態において、組成物（例えば、活性部分）は、１ｇ＋／−２０％のロイシンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−２０％のイソロイシンアミノ酸実体、０．２５＋／−２０％ｇのバリンアミノ酸実体、０．７５ｇ＋／−２０％のアルギニンアミノ酸実体、１ｇ＋／−２０％のグルタミンアミノ酸実体、及び０．２２５ｇ＋／−２０％のＮＡＣ実体を含む。ある実施形態において、組成物は、１ｇ＋／−１５％のロイシンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−２０％のイソロイシンアミノ酸実体、０．２５＋／−２０％ｇのバリンアミノ酸実体、０．７５ｇ＋／−１５％のアルギニンアミノ酸実体、１ｇ＋／−１５％のグルタミンアミノ酸実体、及び０．２２５ｇ＋／−１５％のＮＡＣ実体を含む。ある実施形態において、組成物は、１ｇ＋／−１０％のロイシンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−２０％のイソロイシンアミノ酸実体、０．２５＋／−２０％ｇのバリンアミノ酸実体、０．７５ｇ＋／−１０％のアルギニンアミノ酸実体、１ｇ＋／−１０％のグルタミンアミノ酸実体、及び０．２２５ｇ＋／−１０％のＮＡＣ実体を含む。ある実施形態において、組成物は、１ｇ＋／−５％のロイシンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−２０％のイソロイシンアミノ酸実体、０．２５＋／−２０％ｇのバリンアミノ酸実体、０．７５ｇ＋／−５％のアルギニンアミノ酸実体、１ｇ＋／−５％のグルタミンアミノ酸実体、及び０．２２５ｇ＋／−５％のＮＡＣ実体を含む。例示的な組成物は、１ｇのロイシンアミノ酸実体、０．５ｇのイソロイシンアミノ酸実体、０．２５ｇのバリンアミノ酸実体、０．７５ｇ又は０．９０５ｇのアルギニンアミノ酸実体、１ｇのグルタミンアミノ酸実体、０．２２５ｇのＮＡＣ実体、及び１．５ｇのセリンアミノ酸実体（例えば、表６に示されるｇ／パケット）を含み得る。
【００９６】
【表６】
2021527671.tif 000007
【００９７】
ある実施形態において、組成物は、１ｇ＋／−２０％のロイシンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−２０％のイソロイシンアミノ酸実体、０．２５ｇ＋／−２０％のバリンアミノ酸実体、０．７５ｇ＋／−２０％のアルギニンアミノ酸実体、１ｇ＋／−２０％のグルタミンアミノ酸実体、０．２２５ｇ＋／−２０％のＮＡＣ−アミノ酸実体、及び１．５ｇ＋／−２０％のセリンアミノ酸実体を含む。ある実施形態において、組成物は、１ｇ＋／−１５％のロイシンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−１５％のイソロイシンアミノ酸実体、０．２５ｇ＋／−１５％のバリンアミノ酸実体、０．７５ｇ＋／−１５％のアルギニンアミノ酸実体、１ｇ＋／−１５％のグルタミンアミノ酸実体、０．２２５ｇ＋／−１５％のＮＡＣ−アミノ酸実体、及び１．５ｇ＋／−１５％のセリンアミノ酸実体を含む。ある実施形態において、組成物は、１ｇ＋／−１０％のロイシンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−１０％のイソロイシンアミノ酸実体、０．２５ｇ＋／−１０％のバリンアミノ酸実体、０．７５ｇ＋／−１０％のアルギニンアミノ酸実体、１ｇ＋／−１０％のグルタミンアミノ酸実体、０．２２５ｇ＋／−１０％のＮＡＣ−アミノ酸実体、及び１．５ｇ＋／−１０％のセリンアミノ酸実体を含む。ある実施形態において、組成物は、１ｇ＋／−５％のロイシンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−５％のイソロイシンアミノ酸実体、０．２５ｇ＋／−５％のバリンアミノ酸実体、０．７５ｇ＋／−５％のアルギニンアミノ酸実体、１ｇ＋／−５％のグルタミンアミノ酸実体、０．２２５ｇ＋／−５％のＮＡＣ−アミノ酸実体、及び１．５ｇ＋／−５％のセリンアミノ酸実体を含む。
【００９８】
例示的な組成物は、１ｇのロイシンアミノ酸実体、０．５ｇのイソロイシンアミノ酸実体、０．２５ｇのバリンアミノ酸実体、０．７５ｇ又は０．９０５ｇのアルギニンアミノ酸実体、１ｇのグルタミンアミノ酸実体、０．２２５ｇのＮＡＣ実体、及び１．６６７ｇのセリンアミノ酸実体（例えば、表７に示されるｇ／パケット）を含み得る。
【００９９】
【表７】
2021527671.tif 000008
【０１００】
ある実施形態において、組成物は、１ｇ＋／−２０％のロイシンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−２０％のイソロイシンアミノ酸実体、０．２５ｇ＋／−２０％のバリンアミノ酸実体、０．７５ｇ＋／−２０％のアルギニンアミノ酸実体、１ｇ＋／−２０％のグルタミンアミノ酸実体、０．２２５ｇ＋／−２０％のＮＡＣ−アミノ酸実体、及び１．６６７ｇ＋／−２０％のセリンアミノ酸実体を含む。ある実施形態において、組成物は、１ｇ＋／−１５％のロイシンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−１５％のイソロイシンアミノ酸実体、０．２５ｇ＋／−１５％のバリンアミノ酸実体、０．７５ｇ＋／−１５％のアルギニンアミノ酸実体、１ｇ＋／−１５％のグルタミンアミノ酸実体、０．２２５ｇ＋／−１５％のＮＡＣ−アミノ酸実体、及び１．６６７ｇ＋／−１５％のセリンアミノ酸実体を含む。ある実施形態において、組成物は、１ｇ＋／−１０％のロイシンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−１０％のイソロイシンアミノ酸実体、０．２５ｇ＋／−１０％のバリンアミノ酸実体、０．７５ｇ＋／−１０％のアルギニンアミノ酸実体、１ｇ＋／−１０％のグルタミンアミノ酸実体、０．２２５ｇ＋／−１０％のＮＡＣ−アミノ酸実体、及び１．６６７ｇ＋／−１０％のセリンアミノ酸実体を含む。ある実施形態において、組成物は、１ｇ＋／−５％のロイシンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−５％のイソロイシンアミノ酸実体、０．２５ｇ＋／−５％のバリンアミノ酸実体、０．７５ｇ＋／−５％のアルギニンアミノ酸実体、１ｇ＋／−５％のグルタミンアミノ酸実体、０．２２５ｇ＋／−５％のＮＡＣ−アミノ酸実体、及び１．６６７ｇ＋／−５％のセリンアミノ酸実体を含む。
【０１０１】
例示的な組成物は、１ｇのロイシンアミノ酸実体、０．５ｇのイソロイシンアミノ酸実体、０．５ｇのバリンアミノ酸実体、１．５ｇ又は１．８１ｇのアルギニンアミノ酸実体、１．３３ｇのグルタミンアミノ酸実体、０．１５ｇのＮＡＣ実体、０．０８ｇのヒスチジンアミノ酸実体、０．３５ｇのリジンアミノ酸実体、０．０８ｇのフェニルアラニンアミノ酸実体、及び０．１７ｇのトレオニンアミノ酸実体（例えば、表８に示されるｇ／パケット）を含み得る。
【０１０２】
【表８】
2021527671.tif 000009
【０１０３】
ある実施形態において、組成物は、１ｇ＋／−２０％のロイシンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−２０％のイソロイシンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−２０％のバリンアミノ酸実体、１．５ｇ又は１．８１ｇ＋／−２０％のアルギニンアミノ酸実体、１．３３ｇ＋／−２０％のグルタミンアミノ酸実体、０．１５ｇ＋／−２０％のＮＡＣ実体、０．０８ｇ＋／−２０％のヒスチジンアミノ酸実体、０．３５ｇ＋／−２０％のリジンアミノ酸実体、０．０８ｇ＋／−２０％のフェニルアラニンアミノ酸実体、及び０．１７ｇ＋／−２０％のトレオニンアミノ酸実体を含む。ある実施形態において、組成物は、１ｇ＋／−１５％のロイシンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−１５％のイソロイシンアミノ酸実体、０．５ｇ＋／−１５％のバリンアミノ酸実体、１．５ｇ又は１．８１ｇ＋／−１５％のアルギニンアミノ酸実体、１．３３ｇ＋／−１５％のグルタミンアミノ酸実体、０．１５ｇ＋／−１５％のＮＡＣ実体、０．０８ｇ＋／−１５％のヒスチジンアミノ酸実体、０．３５ｇ＋／−１５％のリジンアミノ酸実体、０．０８ｇ＋／−１５％のフェニルアラニンアミノ酸実体、及び０．１７ｇ＋／−１５％のトレオニンアミノ酸実体を含む。
【０１０４】
ｉｉ．比率
例示的な組成物は、１＋／−１５％：０．５＋／−１５％：０．５＋／−１５％：１．５＋／−１５％：２＋／−１５％：０．１５＋／−１５％又は１＋／−１５％：０．５＋／−１５％：０．５＋／−１５％：１．８１＋／−１５％：２＋／−１５％：０．１５＋／−１５％の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ−アミノ酸実体の重量（ｗｔ．）比を含み得る。ある実施形態において、組成物は、１＋／−１０％：０．５＋／−１０％：０．５＋／−１０％：１．５＋／−１０％：２＋／−１０％：０．１５＋／−１０％又は１＋／−１０％：０．５＋／−１０％：０．５＋／−１０％：１．８１＋／−１０％：２＋／−１０％：０．１５＋／−１０％の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ−アミノ酸実体の重量比を含む。ある実施形態において、組成物は、１＋／−５％：０．５＋／−５％：０．５＋／−５％：１．５＋／−５％：２＋／−５％：０．１５＋／−５％又は１＋／−５％：０．５＋／−５％：０．５＋／−５％：１．８１＋／−５％：２＋／−５％：０．１５＋／−５％の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ−アミノ酸実体の重量比を含む。ある実施形態において、組成物は、１：０．５：０．５：１．５：２：０．１５又は１：０．５：０．５：１．８１：２：０．１５の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ−アミノ酸実体の重量比を含む。
【０１０５】
例示的な組成物は、１＋／−２０％：０．５＋／−２０％：０．５＋／−２０％：１．５＋／−２０％：２＋／−２０％：０．３＋／−２０％又は１＋／−２０％：０．５＋／−２０％：０．５＋／−２０％：１．８１＋／−２０％：２＋／−２０％：０．３＋／−２０％の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ−アミノ酸実体の重量（ｗｔ．）比を含み得る。ある実施形態において、組成物は、１＋／−１５％：０．５＋／−１５％：０．５＋／−１５％：１．５＋／−１５％：２＋／−１５％：０．３＋／−１５％又は１＋／−１５％：０．５＋／−１５％：０．５＋／−１５％：１．８１＋／−１５％：２＋／−１５％：０．３＋／−１５％の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ−アミノ酸実体の重量比を含む。ある実施形態において、組成物は、１＋／−１０％：０．５＋／−１０％：０．５＋／−１０％：１．５＋／−１０％：２＋／−１０％：０．３＋／−１０％又は１＋／−１０％：０．５＋／−１０％：０．５＋／−１０％：１．８１＋／−１０％：２＋／−１０％：０．３＋／−１０％の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ−アミノ酸実体の重量比を含む。ある実施形態において、組成物は、１＋／−５％：０．５＋／−５％：０．５＋／−５％：１．５＋／−５％：２＋／−５％：０．３＋／−５％又は１＋／−５％：０．５＋／−５％：０．５＋／−５％：１．８１＋／−５％：２＋／−５％：０．３＋／−５％の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ−アミノ酸実体の重量比を含む。ある実施形態において、組成物は、１：０．５：０．５：１．５：２：０．３又は１：０．５：０．５：１．８１：２：０．３の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ−アミノ酸実体の重量比を含む。
【０１０６】
例示的な組成物は、１＋／−２０％：０．５＋／−２０％：０．５＋／−２０％：０．７５＋／−２０％：２＋／−２０％：０．１５＋／−２０％又は１＋／−２０％：０．５＋／−２０％：０．５＋／−２０％：０．９０５＋／−２０％：２＋／−２０％：０．１５＋／−２０％の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ−アミノ酸実体の重量（ｗｔ．）比を含み得る。ある実施形態において、組成物は、１＋／−１５％：０．５＋／−１５％：０．５＋／−１５％：０．７５＋／−１５％：２＋／−１５％：０．１５＋／−１５％又は１＋／−１５％：０．５＋／−１５％：０．５＋／−１５％：０．９０５＋／−１５％：２＋／−１５％：０．１５＋／−１５％の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ−アミノ酸実体の重量比を含む。ある実施形態において、組成物は、１＋／−１０％：０．５＋／−１０％：０．５＋／−１０％：０．７５＋／−１０％：２＋／−１０％：０．１５＋／−１０％又は１＋／−１０％：０．５＋／−１０％：０．５＋／−１０％：０．９０５＋／−１０％：２＋／−１０％：０．１５＋／−１０％の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ−アミノ酸実体の重量比を含む。ある実施形態において、組成物は、１＋／−５％：０．５＋／−５％：０．５＋／−５％：０．７５＋／−５％：２＋／−５％：０．１５＋／−５％又は１＋／−５％：０．５＋／−５％：０．５＋／−５％：０．９０５＋／−５％：２＋／−５％：０．１５＋／−５％の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ−アミノ酸実体の重量比を含む。ある実施形態において、組成物は、１：０．５：０．５：０．７５：２：０．１５又は１：０．５：０．５：０．９０５：２：０．１５の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ−アミノ酸実体の重量比を含む。
【０１０７】
例示的な組成物は、１＋／−２０％：０．５＋／−２０％：０．５＋／−２０％：０．７５＋／−２０％：２＋／−２０％：０．３＋／−２０％又は１＋／−２０％：０．５＋／−２０％：０．５＋／−２０％：０．９０５＋／−２０％：２＋／−２０％：０．３＋／−２０％の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ−アミノ酸実体の重量（ｗｔ．）比を含み得る。ある実施形態において、組成物は、１＋／−１５％：０．５＋／−１５％：０．５＋／−１５％：０．７５＋／−１５％：２＋／−１５％：０．３＋／−１５％又は１＋／−１５％：０．５＋／−１５％：０．５＋／−１５％：０．９０５＋／−１５％：２＋／−１５％：０．３＋／−１５％の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ−アミノ酸実体の重量比を含む。ある実施形態において、組成物は、１＋／−１０％：０．５＋／−１０％：０．５＋／−１０％：０．７５＋／−１０％：２＋／−１０％：０．３＋／−１０％又は１＋／−１０％：０．５＋／−１０％：０．５＋／−１０％：０．９０５＋／−１０％：２＋／−１０％：０．３＋／−１０％の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ−アミノ酸実体の重量比を含む。ある実施形態において、組成物は、１＋／−５％：０．５＋／−５％：０．５＋／−５％：０．７５＋／−５％：２＋／−５％：０．３＋／−５％又は１＋／−５％：０．５＋／−５％：０．５＋／−５％：０．９０５＋／−５％：２＋／−５％：０．３＋／−５％の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ−アミノ酸実体の重量比を含む。ある実施形態において、組成物は、１：０．５：０．５：０．７５：２：０．３又は１：０．５：０．５：０．９０５：２：０．３の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ−アミノ酸実体の重量比を含む。
【０１０８】
例示的な組成物は、１＋／−２０％：０．５＋／−２０％：０．２５＋／−２０％：０．７５＋／−２０％：１＋／−２０％：０．２２５＋／−２０％又は１＋／−２０％：０．５＋／−２０％：０．２５＋／−２０％：０．９０５＋／−２０％：１＋／−２０％：０．２２５＋／−２０％の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ−アミノ酸実体の重量（ｗｔ．）比を含み得る。ある実施形態において、組成物は、１＋／−１５％：０．５＋／−１５％：０．２５＋／−１５％：０．７５＋／−１５％：１＋／−１５％：０．２２５＋／−１５％又は１＋／−１５％：０．５＋／−１５％：０．２５＋／−１５％：０．９０５＋／−１５％：１＋／−１５％：０．２２５＋／−１５％の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ−アミノ酸実体の重量比を含む。ある実施形態において、組成物は、１＋／−１０％：０．５＋／−１０％：０．２５＋／−１０％：０．７５＋／−１０％：１＋／−１０％：０．２２５＋／−１０％又は１＋／−１０％：０．５＋／−１０％：０．２５＋／−１０％：０．９０５＋／−１０％：１＋／−１０％：０．２２５＋／−１０％の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ−アミノ酸実体の重量比を含む。ある実施形態において、組成物は、１＋／−５％：０．５＋／−５％：０．２５＋／−５％：０．７５＋／−５％：１＋／−５％：０．２２５＋／−５％又は１＋／−５％：０．５＋／−５％：０．２５＋／−５％：０．９０５＋／−５％：１＋／−５％：０．２２５＋／−５％の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ−アミノ酸実体の重量比を含む。ある実施形態において、組成物は、１：０．５：０．２５：０．７５：１：０．２２５又は１：０．５：０．２５：０．９０５：１：０．２２５の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ−アミノ酸実体の重量比を含む。
【０１０９】
アミノ酸実体を含む例示的な組成物は、１＋／−２０％：０．５＋／−２０％：０．２５＋／−２０％：０．７５＋／−２０％：１＋／−２０％：０．２２５＋／−２０％：１．５＋／−２０％又は１＋／−２０％：０．５＋／−２０％：０．２５＋／−２０％：０．９０５＋／−２０％：１＋／−２０％：０．２２５＋／−２０％：１．５＋／−２０％の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、ＮＡＣ−アミノ酸実体、及びセリンアミノ酸実体の重量（ｗｔ．）比を含み得る。ある実施形態において、組成物は、１＋／−１５％：０．５＋／−１５％：０．２５＋／−１５％：０．７５＋／−１５％：１＋／−１５％：０．２２５＋／−１５％：１．５＋／−１５％又は１＋／−１５％：０．５＋／−１５％：０．２５＋／−１５％：０．９０５＋／−１５％：１＋／−１５％：０．２２５＋／−１５％：１．５＋／−１５％の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、ＮＡＣ−アミノ酸実体、及びセリンアミノ酸実体の重量比を含む。ある実施形態において、組成物は、１＋／−１０％：０．５＋／−１０％：０．２５＋／−１０％：０．７５＋／−１０％：１＋／−１０％：０．２２５＋／−１０％：１．５＋／−１０％又は１＋／−１０％：０．５＋／−１０％：０．２５＋／−１０％：０．９０５＋／−１０％：１＋／−１０％：０．２２５＋／−１０％：１．５＋／−１０％の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、ＮＡＣ−アミノ酸実体、及びセリンアミノ酸実体の重量比を含む。ある実施形態において、組成物は、１＋／−５％：０．５＋／−５％：０．２５＋／−５％：０．７５＋／−５％：１＋／−５％：０．２２５＋／−５％：１．５＋／−５％又は１＋／−５％：０．５＋／−５％：０．２５＋／−５％：０．９０５＋／−５％：１＋／−５％：０．２２５＋／−５％：１．５＋／−５％の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、ＮＡＣ−アミノ酸実体、及びセリンアミノ酸実体の重量比を含む。ある実施形態において、組成物は、１：０．５：０．２５：０．７５：１：０．２２５：１．５又は１：０．５：０．２５：０．９０５：１：０．２２５：１．５の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、ＮＡＣ−アミノ酸実体、及びセリンアミノ酸実体の重量比を含む。
【０１１０】
例示的な組成物は、１＋／−２０％：０．５＋／−２０％：０．２５＋／−２０％：０．７５＋／−２０％：１＋／−２０％：０．２２５＋／−２０％：１．６６７＋／−２０％又は１＋／−２０％：０．５＋／−２０％：０．２５＋／−２０％：０．９０５＋／−２０％：１＋／−２０％：０．２２５＋／−２０％：１．６６７＋／−２０％の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、ＮＡＣ−アミノ酸実体、及びセリンアミノ酸実体の重量（ｗｔ．）比を含み得る。ある実施形態において、組成物は、１＋／−１５％：０．５＋／−１５％：０．２５＋／−１５％：０．７５＋／−１５％：１＋／−１５％：０．２２５＋／−１５％：１．６６７＋／−１５％又は１＋／−１５％：０．５＋／−１５％：０．２５＋／−１５％：０．９０５＋／−１５％：１＋／−１５％：０．２２５＋／−１５％：１．６６７＋／−１５％の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、ＮＡＣ−アミノ酸実体、及びセリンアミノ酸実体の重量比を含む。ある実施形態において、組成物は、１＋／−１０％：０．５＋／−１０％：０．２５＋／−１０％：０．７５＋／−１０％：１＋／−１０％：０．２２５＋／−１０％：１．６６７＋／−１０％又は１＋／−１０％：０．５＋／−１０％：０．２５＋／−１０％：０．９０５＋／−１０％：１＋／−１０％：０．２２５＋／−１０％：１．６６７＋／−１０％の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、ＮＡＣ−アミノ酸実体、及びセリンアミノ酸実体の重量比を含む。ある実施形態において、組成物は、１＋／−５％：０．５＋／−５％：０．２５＋／−５％：０．７５＋／−５％：１＋／−５％：０．２２５＋／−５％：１．６６７＋／−５％又は１＋／−５％：０．５＋／−５％：０．２５＋／−５％：０．９０５＋／−５％：１＋／−５％：０．２２５＋／−５％：１．６６７＋／−５％の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、ＮＡＣ−アミノ酸実体、及びセリンアミノ酸実体の重量比を含む。ある実施形態において、組成物は、１：０．５：０．２５：０．７５：１：０．２２５：１．６６７又は１：０．５：０．２５：０．９０５：１：０．２２５：１．６６７の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、ＮＡＣ−アミノ酸実体、及びセリンアミノ酸実体の重量比を含む。
【０１１１】
例示的な組成物は、２＋／−２０％：１＋／−２０％：１＋／−２０％：３．６２＋／−２０％：２．６６＋／−２０％：０．３＋／−２０％：０．１６＋／−２０％：０．７＋／−２０％：０．１６＋／−２０％：０．３４＋／−２０％又は２＋／−２０％：１＋／−２０％：１＋／−２０％：３＋／−２０％：２．６６＋／−２０％：０．３＋／−２０％：０．１６＋／−２０％：０．７＋／−２０％：０．１６＋／−２０％：０．３４＋／−２０％の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、ＮＡＣ−アミノ酸実体、ヒスチジンアミノ酸実体、リジンアミノ酸実体、フェニルアラニンアミノ酸実体、及びトレオニンアミノ酸実体の重量（ｗｔ．）比を含み得る。ある実施形態において、組成物は、２＋／−１５％：１＋／−１５％：１＋／−１５％：３．６２＋／−１５％：２．６６＋／−１５％：０．３＋／−１５％：０．１６＋／−１５％：０．７＋／−１５％：０．１６＋／−１５％：０．３４＋／−１５％又は２＋／−１５％：１＋／−１５％：１＋／−１５％：３＋／−１５％：２．６６＋／−１５％：０．３＋／−１５％：０．１６＋／−１５％：０．７＋／−１５％：０．１６＋／−１５％：０．３４＋／−１５％の、ロイシンアミノ酸実体、イソロイシンアミノ酸実体、バリンアミノ酸実体、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、ＮＡＣ−アミノ酸実体、ヒスチジンアミノ酸実体、リジンアミノ酸実体、フェニルアラニンアミノ酸実体、及びトレオニンアミノ酸実体の重量比を含む。
【０１１２】
ある実施形態において、組成物は、１０重量％＋／−１５％〜３０重量％＋／−１５％のロイシンアミノ酸実体、５重量％＋／−１５％〜１５重量％＋／−１５％のイソロイシンアミノ酸実体、５重量％＋／−１５％〜１５重量％＋／−１５％のバリンアミノ酸実体、１５重量％＋／−１５％〜４０重量％＋／−１５％のアルギニンアミノ酸実体、２０重量％＋／−１５％〜５０重量％＋／−１５％のグルタミンアミノ酸実体、及び１重量％＋／−１５％〜８重量％＋／−１５％のＮＡＣ実体を含む。
【０１１３】
ある実施形態において、組成物は、１０重量％＋／−１５％〜３０重量％＋／−１５％のロイシンアミノ酸実体を含む。ある実施形態において、組成物は、５重量％＋／−１５％〜１５重量％＋／−１５％のイソロイシンアミノ酸実体を含む。ある実施形態において、組成物は、５重量％＋／−１５％〜１５重量％＋／−１５％のバリンアミノ酸実体を含む。ある実施形態において、組成物は、１５重量％＋／−１５％〜４０重量％＋／−１５％のアルギニンアミノ酸実体を含む。ある実施形態において、組成物は、２０重量％＋／−１５％〜５０重量％＋／−１５％のグルタミンアミノ酸実体を含む。ある実施形態において、組成物は、１重量％＋／−１５％〜８重量％＋／−１５％のＮＡＣ実体を含む。
【０１１４】
ある実施形態において、組成物は、１６重量％＋／−１５％〜１８重量％＋／−１５％のロイシンアミノ酸実体、７重量％＋／−１５％〜９重量％＋／−１５％のイソロイシンアミノ酸実体、７重量％＋／−１５％〜９重量％＋／−１５％のバリンアミノ酸実体、２８重量％＋／−１５％〜３２重量％＋／−１５％のアルギニンアミノ酸実体、３１重量％＋／−１５％〜３４重量％＋／−１５％のグルタミンアミノ酸実体、及び１重量％＋／−１５％〜５重量％＋／−１５％のＮＡＣ実体を含む。
【０１１５】
ある実施形態において、組成物は、１６重量％＋／−１５％〜１８重量％＋／−１５％のロイシンアミノ酸実体を含む。ある実施形態において、組成物は、７重量％＋／−１５％〜９重量％＋／−１５％のイソロイシンアミノ酸実体を含む。ある実施形態において、組成物は、７重量％＋／−１５％〜９重量％＋／−１５％のバリンアミノ酸実体を含む。ある実施形態において、組成物は、２８重量％＋／−１５％〜３２重量％＋／−１５％のアルギニンアミノ酸実体を含む。ある実施形態において、組成物は、３１重量％＋／−１５％〜３４重量％＋／−１５％のグルタミンアミノ酸実体を含む。ある実施形態において、組成物は、１重量％＋／−１５％〜５重量％＋／−１５％のＮＡＣ実体を含む。
【０１１６】
ある実施形態において、組成物は、１６．８重量％＋／−１５％のロイシンアミノ酸実体、８．４重量％＋／−１５％のイソロイシンアミノ酸実体、８．４重量％＋／−１５％のバリンアミノ酸実体、３０．４重量％＋／−１５％のアルギニンアミノ酸実体、３３．６重量％＋／−１５％のグルタミンアミノ酸実体、及び２．５重量％＋／−１５％のＮＡＣ実体を含む。
【０１１７】
ｉｉｉ．アミノ酸実体の関係
ある実施形態において、組成物（例えば、活性部分）は、以下の特性の１つ又は複数を有し、
ａ）組成物中のＱ−アミノ酸実体の重量％が、Ｒ−アミノ酸実体の重量％より多く；
ｂ）組成物中のＱ−アミノ酸実体の重量％が、Ｌ−アミノ酸実体の重量％より多く；
ｃ）組成物中のＲ−アミノ酸実体の重量％が、Ｌ−アミノ酸実体の重量％より多く；又は
ｄ）（ａ）〜（ｃ）のうちの２つ又は３つの組合せである。
【０１１８】
ある実施形態において、組成物中のグルタミンアミノ酸実体の重量％は、アルギニンアミノ酸実体の重量％より多く、例えば、組成物中のグルタミンアミノ酸実体の重量％は、アルギニンアミノ酸実体の重量％より少なくとも５％多く、例えば、グルタミンアミノ酸実体の重量％は、アルギニンアミノ酸実体の重量％より少なくとも１０％又は２５％多い。
【０１１９】
ある実施形態において、組成物中のグルタミンアミノ酸実体の重量％は、ロイシンアミノ酸実体の重量％より多く、例えば、組成物中のグルタミンアミノ酸実体の重量％は、ロイシンアミノ酸実体の重量％より少なくとも２０％多く、例えば、組成物中のグルタミンアミノ酸実体の重量％は、ロイシンアミノ酸実体の重量％より少なくとも２５％又は５０％多い。
【０１２０】
ある実施形態において、組成物中のアルギニンアミノ酸実体の重量％は、ロイシンアミノ酸実体の重量％より多く、例えば、組成物中のアルギニンアミノ酸実体の重量％は、ロイシンアミノ酸実体の重量％より少なくとも１０％多く、例えば、組成物中のアルギニンアミノ酸実体の重量％は、ロイシンアミノ酸実体の重量％より少なくとも１５％又は３０％多い。
【０１２１】
ある実施形態において、組成物中のロイシンアミノ酸実体の重量％は、組成物中のイソロイシンアミノ酸実体の重量％より多く、例えば、組成物中のロイシンアミノ酸実体の重量％は、組成物中のイソロイシンアミノ酸実体の重量％より少なくとも２５重量％多い。
【０１２２】
ある実施形態において、組成物中のロイシンアミノ酸実体の重量％は、組成物中のバリンアミノ酸実体の重量％より多く、例えば、組成物中のロイシンアミノ酸実体の重量％は、組成物中のバリンアミノ酸実体の重量％より少なくとも２５重量％多い。
【０１２３】
ある実施形態において、アルギニンアミノ酸実体、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ実体の重量％は、組成物中のアミノ酸実体の少なくとも：５０重量％又は７０重量％であるが、組成物中のアミノ酸実体の９０重量％以下である。
【０１２４】
ある実施形態において、ＮＡＣ実体の重量％は、組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも：１重量％又は２重量％であるが、組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の１０重量％以下である。
【０１２５】
ある実施形態において、組み合わせたイソロイシンアミノ酸実体、及びバリンアミノ酸実体は、組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも：１５重量％、又は２０重量％であるが、組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の５０重量％以下である。
【０１２６】
ある実施形態において、グルタミンアミノ酸実体、及びＮＡＣ実体は、組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の少なくとも：４０重量％又は５０重量％であるが、組成物中のアミノ酸実体成分又は全成分の９０重量％以下である。
【０１２７】
ある実施形態において、組成物（例えば、活性部分）は、セリンアミノ酸実体をさらに含み、例えば、セリンアミノ酸実体は、組成物中の任意の他のアミノ酸実体成分より多い量で存在する。ある実施形態において、セリンアミノ酸実体の重量％は、組成物中のアミノ酸実体又は全成分の少なくとも２０重量％又はそれ以上である。
【０１２８】
ｉｖ．組成物から除外又は制限するアミノ酸分子
ある実施形態において、組成物は、卵白タンパク質、大豆タンパク質、カゼイン、麻タンパク質、エンドウ豆タンパク質、又は玄米タンパク質の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上（例えば、全て）から選択されるか又はそれらに由来する２０を超えるアミノ酸残基長のペプチド（例えば、タンパク質補充剤）を含まず、又はペプチドが存在する場合、ペプチドは、組成物（例えば、乾燥形態で）中の非アミノ酸実体タンパク質成分又は全成分の総重量の１０重量（ｗｔ．）５重量％、１重量％、０．１重量％、０．０５重量％、０．０１重量％未満で存在する。
【０１２９】
ある実施形態において、組成物は、３〜１９、３〜１５、又は３〜１０の異なるアミノ酸実体の組合せを含み、例えば、組合せは、組成物（例えば、乾燥形態で）中のアミノ酸実体成分又は全成分の総重量％の少なくとも：４２重量％、７５重量％、又は９０重量％を含む。
【０１３０】
ある実施形態において、ジペプチド若しくはその塩又はトリペプチド若しくはその塩は、組成物（例えば、乾燥形態で）中のアミノ酸実体成分又は全成分の総重量の１０重量％、０．５重量％、０．１重量％、０．０５重量％、０．０１重量％、０．００１重量％未満、又はそれ以下で存在する。
【０１３１】
ある実施形態において、組成物（例えば、乾燥形態で）中のアミノ酸実体成分の全グラムの少なくとも５０％、６０％、７０％、又はそれ以上は、（ａ）〜（ｊ）の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、７つ、８つ、９つ又はそれ以上（例えば、全て）からのものである。
【０１３２】
ある実施形態において、組成物（例えば、乾燥形態で）中のアミノ酸実体成分又は全成分からのカロリーの少なくとも：５０％、６０％、７０％、又はそれ以上は、（ａ）〜（ｊ）の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、７つ、８つ、９つ又はそれ以上（例えば、全て）からのものである。
【０１３３】
ある実施形態において、炭水化物（例えば、デキストロース、マルトデキストロース、スクロース、デキストリン、フルクトース、ガラクトース、グルコース、グリコーゲン、高フルクトースコーンシロップ、蜂蜜、イノシトール、転化糖、ラクトース、果糖、マルトース、糖蜜、サトウキビ、又はキシロースのうちの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、又は１８）が、組成物に存在しないか、又は存在する場合、例えば、組成物（乾燥形態で）の総重量の１０重量％、５重量％、１重量％、０．５重量％、０．１重量％、０．０５重量％、０．０１重量％、０．００１重量％未満、又はそれ以下で存在する。
【０１３４】
ある実施形態において、ビタミン（例えば、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、又はビタミンＤのうちの１、２、３、４、５、６、又は７つ）が、組成物に存在しないか、又は存在する場合、例えば、組成物（乾燥形態で）の総重量の１０重量％、５重量％、１重量％、０．５重量％、０．１重量％、０．０５重量％、０．０１重量％、０．００１重量％未満、又はそれ以下で存在する。
【０１３５】
ある実施形態において、硝酸塩又は亜硝酸塩の一方又は両方が、組成物に存在しないか、又は存在する場合、例えば、組成物（乾燥形態で）の総重量の１０重量％、５重量％、１重量％、０．５重量％、０．１重量％、０．０５重量％、０．０１重量％、０．００１重量％未満、又はそれ以下で存在する。
【０１３６】
ある実施形態において、４−ヒドロキシイソロイシンが、組成物に存在しないか、又は存在する場合、例えば、組成物（乾燥形態で）の総重量の１０重量％、５重量％、１重量％、０．５重量％、０．１重量％、０．０５重量％、０．０１重量％、０．００１重量％未満、又はそれ以下で存在する。
【０１３７】
ある実施形態において、プロバイオティック（例えば、バチルスプロバイオティック（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ））が、組成物に存在しないか、又は存在する場合、例えば、組成物（乾燥形態で）の総重量の１０重量％、５重量％、１重量％、０．５重量％、０．１重量％、０．０５重量％、０．０１重量％、０．００１重量％未満、又はそれ以下で存在する。
【０１３８】
ある実施形態において、酢酸フェニルが、組成物に存在しないか、又は存在する場合、例えば、組成物（乾燥形態で）の総重量の１０重量％、５重量％、１重量％、０．５重量％、０．１重量％、０．０５重量％、０．０１重量％、０．００１重量％未満、又はそれ以下で存在する。
【０１３９】
ある実施形態において、ゼラチン（例えば、ゼラチンカプセル）が、組成物に存在しないか、又は存在する場合、例えば、組成物（乾燥形態で）の総重量の１０重量％、５重量％、１重量％、０．５重量％、０．１重量％、０．０５重量％、０．０１重量％、０．００１重量％未満、又はそれ以下で存在する。
【０１４０】
ある実施形態において、Ｓ−アリルシステイン、Ｓ−アリルメルカプトシステイン、又はフルクトシル−アルギニンのうちの１、２、又は３つが、組成物に存在しないか、又は存在する場合、例えば、組成物（乾燥形態で）の総重量の１０重量％、５重量％、１重量％、０．５重量％、０．１重量％、０．０５重量％、０．０１重量％、０．００１重量％未満、又はそれ以下で存在する。
【０１４１】
使用、例えば、治療の方法
本明細書に記載される本発明の組成物（例えば、活性部分）は、対象におけるインスリン抵抗性を改善又は軽減する、例えば、インスリン抵抗性を治療又は予防するために投与され得る。組成物は、例えば、インスリン抵抗性を有する患者における耐糖能異常を改善するために投与され得る。組成物は、インスリン抵抗性又は耐糖能異常の一方又は両方を有する対象を治療するために、本明細書に記載される投与計画にしたがって投与され得る。
【０１４２】
本開示は、インスリン抵抗性又は耐糖能異常を改善又は軽減するための方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に開示される組成物（例えば、活性部分）を有効量で投与することを含む方法を特徴とする。本方法は、対象におけるインスリン抵抗性又は耐糖能異常を軽減又は阻害するのに十分な量の本明細書に記載される組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む。
【０１４３】
ある実施形態において、本明細書に記載される組成物（例えば、活性部分）は、対象におけるインスリン抵抗性又は耐糖能異常の一方又は両方を治療する（例えば、食い止める、軽減、改善、又は予防する）際の薬剤として使用するためのものである。ある実施形態において、本明細書に記載される組成物（例えば、活性部分）は、対象におけるインスリン抵抗性又は耐糖能異常の一方又は両方を治療する（例えば、食い止める、軽減、改善、又は予防する）ための薬剤の製造に使用するためのものである。
【０１４４】
ある実施形態において、対象は、インスリン抵抗性を有するか、又はインスリン抵抗性であると診断されている。ある実施形態において、対象は、耐糖能異常を有するか、又は耐糖能異常（例えば、高血糖）であると診断されている。
【０１４５】
ある実施形態において、対象はヒトである。ある実施形態において、対象は、組成物による以前の治療を受けたことがない（例えば、未処理の対象）。
【０１４６】
特定の実施形態において、組成物の投与は、増加した遊離脂肪酸代謝、増加した脂質代謝、減少したインスリン分泌、又は増加した耐糖能の１つ、２つ、３つ、又はそれ以上（例えば、全て）をもたらす。特定の実施形態において、組成物の投与は、増加した白色脂肪組織のブラウニングをもたらす。特定の実施形態において、組成物の投与は、軽減された脂肪症（例えば、大滴性脂肪変性又は小滴性脂肪変性）をもたらす。特定の実施形態において、組成物の投与は、例えば、不飽和脂肪酸レベル又はアシルカルニチンレベルの一方又は両方を低下させることによって、脂肪酸酸化を促進する。
【０１４７】
ある実施形態において、対象は、過体重又は肥満である。特定の実施形態において、対象は、肥満又は過体重であることがリスク因子である疾患に罹患しているか、又は罹患するリスクがあり得る。ある実施形態において、組成物は、対象の減量を促進する。ある実施形態において、インスリン抵抗性又は耐糖能の一方又は両方の改善は、対象の生存期間を延長させる。
【０１４８】
本明細書に記載される組成物で治療され得る例示的な疾患及び障害としては、限定はされないが、前糖尿病；２型糖尿病；メタボリック・シンドローム；心血管の疾患又は障害、例えば、高血圧症、脂質異常症、アテローム性動脈硬化症、若しくは閉塞性睡眠時無呼吸；内分泌の疾患又は障害、例えば、多嚢胞性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）、甲状腺機能亢進症、クッシング病、クッシング症候群、末端肥大症、若しくは褐色細胞腫；遺伝性の疾患又は障害、例えば、ダウン症、ターナー症候群、クラインフェルター症候群、サラセミア、ヘモクロマトーシス、リポジストロフィー、早老症、ハンチントン舞踏病、フリードライヒ運動失調症、ローレンス・ムーン・ビードル症候群、１型糖原病、３型糖原病、若しくは遺伝性ミトコンドリア異常症；腎不全；妊娠；癌、例えば、結腸癌、子宮内膜癌、膵臓癌、腎細胞癌、若しくは乳癌；認知症、例えば、アルツハイマー病又はレビー小体型認知症；筋強直性ジストロフィー；重度インスリン抵抗性症候群（ＳＳＩＲ）；又はインスリン抵抗性の遺伝性障害、例えば、ドナヒュー症候群、ラブソン・メンデンホール症候群、若しくはＡ型インスリン抵抗性が挙げられる。
【０１４９】
ある実施形態において、インスリン抵抗性又は耐糖能は、肝臓の疾患又は障害、例えば、非アルコール性脂肪肝（ＮＡＦＬ）、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、アルコール性脂肪肝疾患（ＡＦＬＤ）、アルコール性脂肪性肝炎（ＡＳＨ）、又は肝硬変から選択される肝臓の疾患又は障害に関連している。
【０１５０】
ある実施形態において、インスリン抵抗性又は耐糖能は、肝臓の疾患又は障害、例えば、非アルコール性脂肪肝（ＮＡＦＬ）、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、アルコール性脂肪肝疾患（ＡＦＬＤ）、アルコール性脂肪性肝炎（ＡＳＨ）、又は肝硬変から選択される肝臓の疾患又は障害に関連していない。
【０１５１】
ある実施形態において、インスリン抵抗性又は耐糖能は、筋肉の疾患又は障害に関連していない。
【０１５２】
投与計画
組成物（例えば、活性部分）は、インスリン抵抗性を軽減若しくは治療又は耐糖能を改善するために、本明細書に記載される投与計画にしたがって投与され得る。例えば、組成物は、１日に２ｇ＋／−２０％ｇ〜１日に９０ｇ＋／−２０％ｇ（例えば、１日に７２ｇ＋／−２０％の総アミノ酸実体）の用量で、例えば、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、１３週間、１４週間、１５週間、１６週間、又はそれより長い治療期間にわたって、対象に投与され得る。
【０１５３】
ある実施形態において、組成物は、単回又は複数回投与計画のいずれかで、対象（例えば、インスリン抵抗性を有する対象）に提供され得る。ある実施形態において、用量は、１日２回、１日３回、１日４回、１日５回、１日６回、１日７回、又はそれ以上で投与される。特定の実施形態において、組成物は、１日１回、２回、又は３回投与される。ある実施形態において、組成物は、少なくとも２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、又は２週間にわたって投与される。ある実施形態において、組成物は、長期間に（例えば、３０日間超、例えば、３１日間、４０日間、５０日間、６０日間、３ヶ月間、６ヶ月間、９ヶ月間、１年間、２年間、又は３年間）投与される。
【０１５４】
ある実施形態において、組成物は、食事前に投与される。他の実施形態において、組成物は、食事と同時に投与される。他の実施形態において、組成物は、食後に投与される。
【０１５５】
組成物は、対象（例えば、ｖを有する対象）におけるインスリン抵抗性を改善又は軽減するために、２時間置き、３時間置き、４時間置き、５時間置き、６時間置き、７時間置き、８時間置き、９時間置き、又は１０時間置きに投与され得る。
【０１５６】
ある実施形態において、組成物は、４つのスティックパックを含み、例えば、各スティックパックは、本明細書に記載される組成物に含まれる各アミノ酸実体の量の２５％＋／−１５％を含む。特定の実施形態において、４つのスティックパックは、１日３回投与される。ある実施形態において、組成物は、３つのスティックパックを含み、例えば、各スティックパックは、本明細書に記載される組成物に含まれる各アミノ酸実体の量の３３．３％＋／−１５％を含む。特定の実施形態において、３つのスティックパックは、１日３回投与される。
【０１５７】
ある実施形態において、組成物は、例えば、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、１日５回、又は１日６回（例えば、１日３回）、約２ｇ＋／−２０％〜５０ｇ＋／−２０％の総アミノ酸実体の用量で投与される。特定の実施形態において、組成物は、１日３回、２ｇ＋／−２０％〜１０ｇ＋／−２０％の総アミノ酸実体、例えば、１日３回、８ｇ＋／−２０％又は１０ｇ＋／−２０％の総アミノ酸実体の用量で投与される。特定の実施形態において、組成物は、１日３回、１０ｇ＋／−２０％〜２０ｇ＋／−２０％の総アミノ酸実体、例えば、１日３回、１１ｇ＋／−２０％、１２ｇ＋／−２０％、１５ｇ＋／−２０％、１６ｇ＋／−２０％、又は２０ｇ＋／−２０％の総アミノ酸実体の用量で投与される。特定の実施形態において、組成物は、１日３回、２０ｇ＋／−２０％〜３０ｇ＋／−２０％の総アミノ酸実体、例えば、１日３回、２１ｇ＋／−２０％、２２ｇ＋／−２０％、２３ｇ＋／−２０％、又は２４ｇ＋／−２０％の総アミノ酸実体の用量で投与される。
【０１５８】
活性部分及び医薬組成物の製造
本開示は、上記の発明の組成物（例えば、活性部分）を製造又は作製する方法を特徴とする。組成物を作製するのに使用されるアミノ酸実体は、分散及び／又は可溶化を補助するために、凝集され、及び／又はインスタント化され得る（ｉｎｓｔａｎｔｉｚｅｄ）。
【０１５９】
組成物は、以下の供給源からのアミノ酸実体を用いて作製され得るか、又は他の供給源が使用され得る：例えば、ＦＵＳＩ−ＢＣＡＡ（商標）インスタント化ブレンド（Ｉｎｓｔａｎｔｉｚｅｄ  Ｂｌｅｎｄ）（２：１：１の重量比でＬ−ロイシン、Ｌ−イソロイシン及びＬ−バリン）、インスタント化Ｌ−ロイシン、及び他の酸が、味の素株式会社（Ａｊｉｎｏｍｏｔｏ  Ｃｏ．，Ｉｎｃ．）から入手可能である。医薬品グレードのアミノ酸実体原料が、医薬品アミノ酸実体製品の製造に使用され得る。食品（又は栄養補助食品）グレードのアミノ酸実体原料が、食品アミノ酸実体製品の製造に使用され得る。
【０１６０】
本開示の組成物を製造するために、以下の一般的な工程が使用され得る：出発材料（個々のアミノ酸実体及び賦形剤）が、混合ユニット中で混合され、続いて、混合均一性及びアミノ酸含量が確認され、混合された粉末がスティックパック又は他の単位剤形へと充填され得る。スティックパック又は他の単位剤形の内容物は、経口投与のために使用時に水中に分散され得る。
【０１６１】
本発明の栄養補助食品及び医学的栄養組成物は、経口投与に好適な形態である。
【０１６２】
原料、例えば、医薬品グレードアミノ酸実体及び／又は賦形剤を、組成物に組み合わせるとき、汚染物質が、組成物中に存在し得る。組成物が、汚染物質を実質的に含まない（例えば、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１、０．１、０．０１、又は０．００１％（ｗ／ｗ）未満を含む）場合、組成物は、汚染のレベルの基準を満たす。ある実施形態において、本明細書の方法において記載される組成物は、汚染物質を含まない。汚染物質は、組成物中に意図的に存在しない何らかの物質（例えば、医薬品グレードアミノ酸実体及び賦形剤、例えば、経口投与成分は、意図的に存在し得る）又は組成物の製品品質パラメータ（例えば、対象における副作用、減少した効力、減少した安定性／貯蔵期間、変色、匂い、不快な味、不快な質感／口当たり、又は組成物の成分の分離の増加）に悪影響を与える何らかの物質を含む。ある実施形態において、汚染物質は、微生物、内毒素、金属、又はそれらの組合せを含む。ある実施形態において、例えば、組成物の各部分の金属、レシチン、コリン、内毒素、微生物、又は他の汚染物質（例えば、原料からの汚染物質）による汚染のレベルが、食品中で許容されるレベル未満である。
【０１６３】
賦形剤
本開示のアミノ酸組成物は、１つ又は複数の賦形剤とともに配合又は製剤化され得る。好適な賦形剤の非限定的な例としては、味物質、香料、緩衝剤、保存料、安定剤、結合剤、圧密剤（ｃｏｍｐａｃｔｉｏｎ  ａｇｅｎｔ）、潤滑剤、分散促進剤、崩壊剤、香味料、甘味料、及び着色剤が挙げられる。
【０１６４】
ある実施形態において、賦形剤は、緩衝剤を含む。好適な緩衝剤の非限定的な例としては、クエン酸、クエン酸ナトリウム、炭酸マグネシウム、重炭酸マグネシウム、炭酸カルシウム、及び重炭酸カルシウムが挙げられる。
【０１６５】
ある実施形態において、賦形剤は、保存料を含む。好適な保存料の非限定的な例としては、酸化防止剤、例えばα−トコフェロール及びアスコルベート、並びに抗菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、及びフェノールが挙げられる。
【０１６６】
ある実施形態において、組成物は、賦形剤として結合剤を含む。好適な結合剤の非限定的な例としては、でんぷん、アルファでんぷん、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、セルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、ポリアクリルアミド、ポリビニルオキソアゾリドン（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｏｘｏａｚｏｌｉｄｏｎｅ）、ポリビニルアルコール、Ｃ１２〜Ｃ１８脂肪酸アルコール、ポリエチレングリコール、ポリオール、サッカリド、オリゴ糖、及びそれらの組合せが挙げられる。
【０１６７】
ある実施形態において、組成物は、賦形剤として潤滑剤を含む。好適な潤滑剤の非限定的な例としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、硬化植物油、ステロテックス（ｓｔｅｒｏｔｅｘ）、モノステアリン酸ポリオキシエチレン、タルク、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム、及び軽油が挙げられる。
【０１６８】
ある実施形態において、組成物は、賦形剤として分散促進剤を含む。好適な分散剤の非限定的な例としては、でんぷん、アルギン酸、ポリビニルピロリドン、グアーガム、カオリン、キサンタンガム、ベントナイト、精製木材セルロース、デンプングリコール酸ナトリウム、イソアモルファスシリケート（ｉｓｏａｍｏｒｐｈｏｕｓ  ｓｉｌｉｃａｔｅ）、及び高ＨＬＢ乳化剤界面活性剤としての微結晶性セルロースが挙げられる。
【０１６９】
ある実施形態において、組成物は、賦形剤として崩壊剤を含む。ある実施形態において、崩壊剤は、非発泡性崩壊剤である。好適な非発泡性崩壊剤の非限定的な例としては、でんぷん（トウモロコシでんぷん、ジャガイモデンプン、それらのアルファ化及び加工でんぷんなど）、甘味料、例えばベントナイトなどの粘土、微結晶性セルロース、アルギン酸塩、デンプングリコール酸ナトリウム、ガム（寒天、グアー、イナゴマメ、カラヤ、ペクチン、及びトラガカントなど）が挙げられる。ある実施形態において、崩壊剤は、発泡性崩壊剤である。好適な発泡性崩壊剤の非限定的な例としては、クエン酸と組み合わされた炭酸水素ナトリウム、及び酒石酸と組み合わされた炭酸水素ナトリウムが挙げられる。
【０１７０】
ある実施形態において、賦形剤は、香味料を含む。香味料は、合成香味油及び香味芳香族化合物；天然油；植物、葉、花、及び果実からの抽出物；並びにそれらの組合せから選択され得る。ある実施形態において、香味料は、ケイ皮油；ウインターグリーン油；ペパーミント油；クローバー油；干し草油（ｈａｙ  ｏｉｌ）；アニス油；ユーカリ；バニラ；レモン油、オレンジ油、ブドウ及びグレープフルーツ油などの柑橘類油；並びにリンゴ、モモ、セイヨウナシ、イチゴ、ラズベリー、サクランボ、プラム、パイナップル、及びアンズを含む果実エキスから選択される。
【０１７１】
ある実施形態において、賦形剤は、甘味料を含む。好適な甘味料の非限定的な例としては、グルコース（コーンシロップ）、デキストロース、転化糖、フルクトース、及びそれらの混合物（担体として使用されない場合）；サッカリン及びナトリウム塩などのその様々な塩；アスパルテームなどのジペプチド甘味料；ジヒドロカルコン化合物、グリチルリチン；ステビア（Ｓｔｅｖｉａ  Ｒｅｂａｕｄｉａｎａ）（ステビオシド）；スクラロースなどのスクロースのクロロ誘導体；及びソルビトール、マンニトール、キシリトールなどの糖アルコールが挙げられる。水素化でんぷん加水分解物及び合成甘味料３，６−ジヒドロ−６−メチル−１，２，３−オキサチアジン−４−オン−２，２−ジオキシド、特に、カリウム塩（アセスルファム−Ｋ）、並びにそのナトリウム塩及びカルシウム塩も考えられる。
【０１７２】
ある実施形態において、組成物は、着色剤を含む。好適な着色剤の非限定的な例としては、食品、医薬品、及び化粧品用着色剤（ＦＤ＆Ｃ）、医薬品及び化粧品用着色剤（Ｄ＆Ｃ）、並びに外用医薬品及び化粧品用着色剤（Ｅｘｔ．Ｄ＆Ｃ）が挙げられる。着色剤は、染料又はそれらの対応するレーキとして使用され得る。
【０１７３】
特定の賦形剤は、クエン酸、レシチン、（例えばＡｌｃｏｌｅｃ  Ｆ１００）、甘味料（例えばスクラロース、微粉化スクラロースＮＦ、アセスルファムカリウム（例えばＡｃｅ−Ｋ））、分散促進剤（例えばキサンタンガム（例えばＴｉｃａｘａｎ  Ｒａｐｉｄ−３））、香味料（例えばバニラカスタード＃４３０６、Ｎａｔ  Ｏｒａｎｇｅ  ＷＯＮＦ  ＃１３２６、ライム８６５．００３２Ｕ、及びレモン８６２．２１６９Ｕ）、苦味マスキング剤（例えば９３６．２１６０Ｕ）、及び天然又は人工着色料（例えばＦＤ＆Ｃ  Ｙｅｌｌｏｗ  ６）のうちの１つ又は複数を含み得る。各スティックパックの例示的な成分含量が、表９に示される。
【０１７４】
【表９】
2021527671.tif 000010
【０１７５】
別の実施形態において、賦形剤は、クエン酸、甘味料（例えば、スクラロース）、キサンタンガム、香料剤（例えば、バニラカスタード＃４０３６）、香味料（例えば、ナットオレンジ（Ｎａｔ  ｏｒａｎｇｅ）ＷＯＮＦ  ＃１３６２）、及び着色剤（例えば、ＦＤ＆Ｃ  Ｙｅｌｌｏｗ  ６）に限定され、例えば、賦形剤は、レシチンを特に除外する（表１０）。
【０１７６】
【表１０】
2021527671.tif 000011
【０１７７】
食品組成物
アミノ酸実体を含む組成物（例えば、活性部分）は、例えば、医療食、機能性食品、又は栄養補助食品から選択される食品組成物として製剤化され、使用され得る。このような実施形態において、原料及び最終生成物は、食品の基準を満たすべきである。
【０１７８】
本明細書に開示される態様及び実施形態のいずれかの組成物は、例えば、医療食、機能性食品、又は栄養補助食品から選択される食品組成物として使用するためのものであり得る。ある実施形態において、食品組成物は、組成物を対象に投与することを含む方法において使用するためのものである。組成物は、インスリン抵抗性を改善又は軽減する目的のために食品組成物において使用するためのものであり得る。
【０１７９】
ある実施形態において、食品組成物は、医療食、機能性食品、又は栄養補助食品から選択される。ある実施形態において、組成物は、本明細書に記載される組成物を含む、栄養補給食品、食品製剤、機能性食品、医療食、食品、又は飲料の形態である。ある実施形態において、（例えば、インスリン抵抗性を有する対象における）インスリン抵抗性又は耐糖能の管理に使用するための、本明細書に記載される組成物を含む、栄養補給食品、食品製剤、機能性食品、医療食、食品、又は飲料。
【０１８０】
本開示は、インスリン抵抗性又は耐糖能を改善する方法であって、有効量の本明細書に記載される食品組成物を対象に投与することを含む方法を特徴とする。
【０１８１】
本開示は、インスリン抵抗性を有する対象（例えば、本明細書に記載される疾患又は障害を有する対象）に栄養補給又は栄養補助を提供する方法であって、有効量の本明細書に記載される組成物を対象に投与することを含む方法を特徴とする。
【０１８２】
本開示は、インスリン抵抗性の管理を助ける栄養補給又は栄養補助を提供する方法であって、有効量の本明細書に記載される組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を特徴とする。
【０１８３】
ある実施形態において、対象は、インスリン抵抗性を有するか、又はインスリン抵抗性であると診断されている。他の実施形態において、対象は、インスリン抵抗性を有さない。
【０１８４】
さらに、組成物は、対象（例えば、インスリン抵抗性を有さない対象）の食事の管理の方法に使用され得る。
【０１８５】
ある実施形態において、対象は、前糖尿病、２型糖尿病、又はメタボリック・シンドローム（Ｘ症候群）に罹患している。ある実施形態において、対象は、過体重又は肥満である。
【０１８６】
ある実施形態において、対象は、心血管の疾患又は障害を有する。特定の実施形態において、対象は、高血圧症、脂質異常症、アテローム性動脈硬化症、又は閉塞性睡眠時無呼吸を有する。
【０１８７】
ある実施形態において、対象は、内分泌障害を有する。特定の実施形態において、内分泌障害は、多嚢胞性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）、甲状腺機能亢進症、クッシング病、クッシング症候群、末端肥大症、又は褐色細胞腫から選択される。
【０１８８】
ある実施形態において、対象は、妊娠している。
【０１８９】
ある実施形態において、対象は、腎不全を有する。
【０１９０】
ある実施形態において、対象は、遺伝性の疾患又は障害を有する。特定の実施形態において、対象は、ダウン症、ターナー症候群、クラインフェルター症候群、サラセミア、ヘモクロマトーシス、リポジストロフィー、早老症、ハンチントン舞踏病、筋強直性ジストロフィー、フリードライヒ運動失調症、ローレンス・ムーン・ビードル症候群、１及び３型糖原病、又は遺伝性ミトコンドリア異常症から選択される遺伝性の疾患又は障害を有する。
【０１９１】
ある実施形態において、対象は、癌に罹患している。特定の実施形態において、癌は、結腸癌、子宮内膜癌、膵臓癌、腎細胞癌、又は乳癌から選択される。
【０１９２】
ある実施形態において、対象は、認知症に罹患している。特定の実施形態において、認知症は、アルツハイマー病又はレビー小体型認知症から選択される。
【０１９３】
ある実施形態において、対象は、重度インスリン抵抗性症候群（ＳＳＩＲ）に罹患している。特定の実施形態において、ＳＳＩＲは、リポジストロフィーに関連している。
【０１９４】
ある実施形態において、対象は、インスリン抵抗性の遺伝性障害を有する。特定の実施形態において、インスリン抵抗性の遺伝性障害は、ドナヒュー症候群、ラブソン・メンデンホール症候群、又はＡ型インスリン抵抗性から選択される。
【０１９５】
バイオマーカー
本明細書に開示される方法のいずれかは、本明細書に記載される本発明の組成物（例えば、活性部分）を、インスリン抵抗性を有する対象（例えば、インスリン抵抗性を有する対象）に投与することの有効性を評価又は監視することを含み得る。値が治療の有効性の指標であるように、組成物に有効性の値を取得することを含む。
【０１９６】
ある実施形態において、対象は、例えば、インスリン抵抗性を有さない健常な対象と比べて、増加したレベルのｐｒｏＣ３を示す。ある実施形態において、対象は、例えば、インスリン抵抗性を有さない健常な対象と比べて、増加したレベルのＡＬＴを示す。ある実施形態において、対象は、例えば、インスリン抵抗性を有さない健常な対象と比べて、増加したレベルのＡＳＴを示す。ある実施形態において、対象は、例えば、インスリン抵抗性を有さない健常な対象と比べて、増加したレベルのＴＩＭＰ（例えば、ＴＩＭＰ１又はＴＩＭＰ２）を示す。ある実施形態において、対象は、例えば、インスリン抵抗性を有さない健常な対象と比べて、増加したレベルのＣｏｌ１ａ１を示す。ある実施形態において、対象は、例えば、インスリン抵抗性を有さない健常な対象と比べて、増加したレベルのＡｃｔａ２を示す。ある実施形態において、対象は、例えば、インスリン抵抗性を有さない健常な対象と比べて、増加したレベルのヒドロキシプロリンを示す。
【０１９７】
ある実施形態において、対象への本明細書に記載される投与計画における組成物（例えば、活性部分）の投与は、以下：（ａ）ＩＩＩ型コラーゲンのＮ末端断片（ｐｒｏＣ３）；（ｂ）メタロプロテイナーゼの組織阻害剤（ＴＩＭＰ）タンパク質；例えば、ＴＩＭＰ１又はＴＩＭＰ２；（ｃ）Ｃｏｌ１ａ１；（ｄ）Ａｃｔａ２；（ｅ）ＡＬＴ；（ｆ）ＡＳＴ；（ｇ）ヒドロキシプロリン；（ｈ）ＴＧＦ−ｂ；（ｉ）ＭＣＰ−１；（ｊ）ＭＩＰ−１；（ｋ）コラーゲン、例えば、Ｉ及びＩＩＩ型コラーゲン；（ｌ）α−平滑筋アクチン（αＳＭＡ）；（ｍ）ＰＩＩＩＮＰ；又は（ｏ）トリグリセリドのうちの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、又はそれ以上（例えば、全て）のレベル又は活性を低下させる。
【実施例】
【０１９８】
以下の実施例が、本発明の理解を助けるために記載されるが、決して本発明の範囲を限定することは意図されず、限定するように解釈されるべきではない。
【０１９９】
実施例１．アミノ酸組成物Ａ−１による治療的処理が、前臨床動物モデルにおいて経口耐糖能を改善する。
アミノ酸組成物Ａ−１及びメトホルミンを、遺伝性肥満であるＢ６．Ｃｇ−Ｌｅｐｏｂ／Ｊ（ｏｂ／ｏｂ）マウスモデルにおける耐糖能に作用するそれらの能力について試験した（Ｍａｉｄａ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．，２０１０，ＰＭＩＤ：２０９７２５３３）。
【０２００】
モデルの説明
Ｂ６．Ｃｇ−Ｌｅｐｏｂ／Ｊ（ｏｂ／ｏｂ）マウスは、レプチン（Ｌｅｐ）遺伝子の自然突然変異を有する。ｏｂ／ｏｂマウスは、過食症、肥満、及びメタボリック・シンドローム／Ｔ２ＤＭ様症状、例えば高血糖、高インスリン血症、及びインスリン抵抗性を示す。ｏｂ／ｏｂマウスは、腸バリア機能の低下、腸内微生物の移行（ｇｕｔ  ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ）、及び肝星細胞の炎症性、線維形成性表現型を有する（Ｂｒｕｎ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，ＰＭＩＤ：１７０２３５５４）。ｏｂ／ｏｂマウスは、ヒトの老化の作用と同様に、大腿四頭筋における骨格筋低形成を発生させる（Ｈａｍｒｉｃｋ  ＭＷ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，ＰＭＩＤ：１５００３７８５）。ｏｂ／ｏｂマウスは、グルコース及びインスリンに対する不耐性を示す。メトホルミンは、血漿中グルコース（Ｃｏｏｌ  Ｂ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂ  ２００６，ＰＭＩＤ：１６７５３５７６）、肝臓トリグリセリドを低下させ、ｏｂ／ｏｂマウスにおけるＮＡＦＬＤを食い止める（Ｌｉｎ  ＨＺ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，ＰＭＩＤ：１０９７３３１９；Ｃｏｏｌ  Ｂ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂ  ２００６，ＰＭＩＤ：１６７５３５７６）。単回投与のメトホルミン処理は、Ｃ５７／ＢＬ６における血糖を低下させ、耐糖能（ＯＧＴＴ）を改善する。
【０２０１】
実験計画
８週齢の雄ｏｂ／ｏｂマウスに、被験物質（アミノ酸組成物Ａ−１及びメトホルミン）の処理、その後、３日目に経口耐糖能試験（ＯＧＴＴ）を行った。マウスを、−１日目に体重及び非空腹時血糖によって無作為に分けた。体重を、１日目、２日目、及び３日目のＡＭの投与前の朝に毎日記録した。被験物質を、１０ｍｌ／ｋｇで強制経口投与によって投与した。被験物質の投与量を、１日体重に基づいて計算した。処理スケジュール及び用量が、以下の節に列挙される（表３４）。ＡＭの用量を０７００に投与し、ＰＭの用量を１８００に投与した。経口耐糖能試験（ＯＧＴＴ）を、３日目に、６時間の絶食後に行った。
【０２０２】
【表１１】
2021527671.tif 000012
【０２０３】
ベースライングルコース及び生化学（インスリン、トリグリセリド及びコレステロール）
マウスを、ＯＧＴＴ試験前の６時間にわたって絶食させた。３日目の０７００時に食事を除去し；絶食中、水を与えた。血液試料を、ベースライングルコース及び血液生化学（インスリン、トリグリセリド、及びコレステロール）のために、（ＯＧＴＴに対して）−３０分の時点で尾切断又は顔穿刺によりＫ２ＥＤＴＡ管中に採取した。血糖を、血糖値測定器（ＳＤＩ  ＳｔａｔＳｔｒｉｐ  Ｘｐｒｅｓｓ又は同等物）によって測定した。血漿をＫ２ＥＤＴＡ中に採取し、−８０℃で保存した。
【０２０４】
経口耐糖能試験（ＯＧＴＴ）
マウスを、−３０分の時点でベースライングルコース及び血漿のために出血させた。次に、被験物質を、−３０分の時点で強制経口投与によって投与した。グルコースを、２．０ｇ／ｋｇ体重の投与量で経口（Ｐ．Ｏ．）投与した。血糖値を、グルコース注入の直前の０分の時点で、次に、その後１５、３０、６０、１２０及び２４０分の時点で測定した（以下の表３５中で０．２５、０．５、１、２、及び４時間として示される）。
【０２０５】
結果が、表３５に示される。データは、平均±標準偏差（ｓｔｄｅｖ）である。（ダネットの多重比較によるｐ値：ビヒクル対照と比較して＊＊ｐ＜０．００５；ビヒクル対照と比較して＊＊＊ｐ＜０．００１；ビヒクル対照と比較して＊＊＊＊ｐ＜０．０００５）。
【０２０６】
結果
【０２０７】
【表１２】
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【０２０８】
概要
アミノ酸組成物Ａ−１による処理が、経口グルコース負荷時の血糖クリアランスの改善によって示されるように、経口耐糖能の改善をもたらした。さらに、アミノ酸組成物Ａ−１による３日の処理は、ｏｂ／ｏｂマウスにおいてベースライン血糖を変化させなかった（表３６）。
【０２０９】
【表１３】
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【０２１０】
実施例２：前臨床動物モデルにおけるアミノ酸組成物Ａ−１によるＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、及びＨＣＣの治療的処理
アミノ酸組成物Ａ−１及びオベチコール酸（６α−エチル−ケノデオキシコール酸；「ＯＣＡ」）を、ＳＴＡＭ（商標）モデルにおけるＮＡＳＨを治療するそれらの能力について試験した（Ｓｔｅｌｉｃ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ＆  Ｃｏ．，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ；Ｓａｉｔｏ  Ｋ．ｅｔ  ａｌ．，２０１５  Ｓｃｉ  Ｒｅｐ  ５：１２４６６）。標準食を与えられた正常なＣ５７ＢＬ／６マウス及びビヒクル処理ＳＴＡＭ（商標）マウスの２つのさらなる群が、対照として含まれていた。処理又はビヒクルを与えられる全ての動物を、６週間から開始して９週齢まで処理した。化合物を、１０ｍｌ／ｋｇの用量体積で、強制経口投与によって投与した。アミノ酸組成物Ａ−１を、１５００ｍｇ／ｋｇの用量で１日２回投与し、ＯＣＡを、３０ｍｇ／ｋｇの用量で１日１回投与した。
【０２１１】
ＳＴＡＭ（商標）マウスモデルの説明
ＳＴＡＭ（商標）は、ＳＭＣ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．によって開発された、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）及び肝細胞癌（ＨＣＣ）のモデルであり、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを用いた薬品及び食事介入の組合せによって作成されている（Ｓａｉｔｏ  Ｋ．ｅｔ  ａｌ．，２０１５  Ｓｃｉ  Ｒｅｐ  ５：１２４６６）。マウスは、出生時に低用量のストレプトゾトシンで処理され、４週間から開始して高脂肪食を与えられる。脂肪肝のエビデンスが、５週間までに存在し、続いて、７週間までにＮＡＳＨ及び９週間までに線維症のエビデンスが存在する。
【０２１２】
ＮＡＳＨの誘導
出生の２日後の２００μｇのストレプトゾトシン（ＳＴＺ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，ＵＳＡ）溶液の単回皮下注射、及び４週齢後の高脂肪食（ＨＦＤ、５７ｋｃａｌ％の脂肪、Ｃａｔ＃  ＨＦＤ３２、日本クレア（ＣＬＥＡ  Ｊａｐａｎ）、日本）の供給によって、ＮＡＳＨを、５３匹の雄マウスにおいて誘導した。
【０２１３】
医薬品投与の経路、投与溶液の調製、投与溶液の投与及び投与用量の投与用量
アミノ酸組成物Ａ−１、ＯＣＡ及びビヒクル（後述される）を、１０ｍＬ／ｋｇの体積で経口経路によって投与した。アミノ酸組成物Ａ−１を、脱イオン水中で１５０ｍｇ／ｍｌ（１０倍）になるまで可溶化した。ＯＣＡ（Ａｄｖａｎｃｅｄ  ＣｈｅｍＢｌｏｃｋｓ  Ｉｎｃ．）を、水中０．５％のメチルセルロース中で、３ｍｇ／ｍｌ（１０倍）になるまで再懸濁させた。アミノ酸組成物Ａ−１を、１日２回（９ａｍ及び７ｐｍ）、１５００ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。ＯＣＡを、１日１回（９ａｍ）、３０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。
【０２１４】
組織学的分析
群２（ビヒクル）、３（アミノ酸組成物Ａ−１）及び４（ＯＣＡ）のマウスからの肝臓試料を、以下のアッセイに使用した。ＨＥ染色のため、ブアン液中で予め固定され、リリー・マイヤーヘマトキシリン液（武藤化学株式会社（Ｍｕｔｏ  Ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）、日本）及びエオシン溶液（和光純薬工業（Ｗａｋｏ  Ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ））で染色された肝臓組織のパラフィンブロックから切片を切り取った。ＮＡＦＬＤ活動性スコア（ＮＡＳ）を、Ｋｌｅｉｎｅｒの基準（Ｋｌｅｉｎｅｒ  Ｄ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２００５；４１：１３１３）にしたがって計算した。
【０２１５】
実験計画
試験群
群１：ＳＴＺ：ＳＴＺを前投与された１０匹の新生マウスに、９週齢まで処理なしで通常の食事を自由に与えた。
群２：ビヒクル：１０匹のＮＡＳＨマウスに、６〜９週齢で、１日２回（９ａｍ及び７ｐｍ）、１０ｍＬ／ｋｇの体積のビヒクル（１０％のリン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．２）を経口投与した。
群３：アミノ酸組成物Ａ−１：１０匹のＮＡＳＨマウスに、６〜９週齢で、１日２回（９ａｍ及び７ｐｍ）、１５００ｍｇ／ｋｇの用量のアミノ酸組成物Ａ−１を補充した潅注用水を経口投与した。
群４：ＯＣＡ：１０匹のＮＡＳＨマウスに、６〜９週齢で、１日１回（９ａｍ）、３０ｍｇ／ｋｇの用量のＯＣＡを補充した０．５％のメチルセルロースを経口投与した。
群５：正常：１０匹の正常なマウスに、９週齢まで処理なしで通常の食事を自由に与えた。
群６：ＨＦＤ：１０匹の正常なマウスに、９週齢まで処理なしで高脂肪食を自由に与えた。
【０２１６】
組織学的結果：ＨＥ染色、ＮＡＦＬＤ活動性スコア及びα−平滑筋アクチン染色
非アルコール性脂肪肝疾患活動性スコア
非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）活動性スコアを、各動物からのＨ＆Ｅ染色された肝臓切片の組織学的分析及び等級付けによって評価した。このスコアは、脂肪症（０〜３）、炎症（０〜２）、及び肝細胞風船様腫大（０〜２）の程度を等級付けする３つの個々のスコアの合計である。全ての組織を、Ｋｌｅｉｎｅｒらの採点基準（Ｋｌｅｉｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ．２００５；４１（６）：１３１３−２１）を用いて等級付けした。結果が、表３７に示される。データは、平均±標準偏差（ｓｔｄｅｖ）である。標準食を与えられた正常なＣ５７ＢＬ／６マウスは、０＋／−０の平均スコアを有していた。ビヒクル処理ＳＴＡＭ（商標）マウスは、４．７＋／−０．６７の平均スコアを有していた。アミノ酸組成物Ａ−１処理マウスは、３．１＋／−０．７４の平均スコアを有していた。ＯＣＡ処理マウスは、２．９＋／−０．７４の平均スコアを有していた。アミノ酸組成物Ａ−１及びＯＣＡの両方は、ダネットの多重比較検定を用いて比較したとき、ＮＡＦＬＤ活動性スコアについてビヒクルと統計的に異なっていた（アミノ酸組成物Ａ−１  ｐ＝０．０００１、ＯＣＡ  ｐ＝０．０００１）。
【０２１７】
同様に、アミノ酸組成物Ａ−１処理マウスは、１．６＋／−０．５２のビヒクル処理ＳＴＡＭ（商標）マウスの平均肝細胞風船様腫大スコア、及び０．３＋／−０．４８のＯＣＡ処理マウスの平均肝細胞風船様腫大スコアと比較して、０．４＋／−０．５２の平均肝細胞風船様腫大スコアを示した。アミノ酸組成物Ａ−１及びＯＣＡの両方は、ダネットの多重比較検定を用いて比較したとき、肝細胞風船様腫大スコアについてビヒクルと統計的に異なっていた（アミノ酸組成物Ａ−１  ｐ＝０．０００１、ＯＣＡ  ｐ＝０．０００１）。生データが、表３７〜４０に示される。
【０２１８】
【表１４】
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【０２１９】
【表１５】
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【０２２０】
【表１６】
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【０２２１】
【表１７】
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【０２２２】
線維症：シリウスレッド染色の結果
線維症を、各動物からの染色された肝臓切片からのシリウスレッド陽性染色細胞面積の分析によって評価した。画像を、線維症の指標として使用される陽性染色面積のパーセントを用いて定量化した。この分析の結果が、表３９に示される。データは、平均±標準偏差（ｓｔｄｅｖ）である。標準食を与えられた正常なＣ５７ＢＬ／６マウスは、０．２８６＋／−０．０９の平均陽性面積を有していた。ビヒクル処理ＳＴＡＭ（商標）マウスは、１．１＋／−０．２６の平均陽性面積を有していた。アミノ酸組成物Ａ−１処理マウスは、０．８２８＋／−０．３３の平均陽性面積を有していた。ＯＣＡ処理マウスは、０．７７６＋／−０．２５の平均スコアを有していた。アミノ酸組成物Ａ−１及びＯＣＡは、ダネットの多重比較検定を用いて比較したとき、ビヒクルと統計的に異なっていた（アミノ酸組成物Ａ−１  ｐ＝０．００４９４、ＯＣＡ  ｐ＜０．０１６）。生データが、表４１に示される。
【０２２３】
【表１８】
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【０２２４】
アミノ酸組成物Ａ−１による処理の後のＳＴＡＭマウスモデルにおけるＮＡＦＬＤ活動性スコア、肝細胞風船様腫大、及び線維症の統計的に有意な改善（図１Ａ）と同様に、アミノ酸組成物Ａ−１による処理の後の高脂肪、高フルクトース及びコレステロール食（ＨＦＦＣ）マウスモデルにおいて、ＮＡＦＬＤ活動性スコア、肝細胞風船様腫大、及び線維症の統計的に有意な改善が決定された（図１Ｂ）。
【０２２５】
α−平滑筋アクチン（α−ＳＭＡ）染色の結果
全てのマウスの肝臓切片を、活性化された肝星細胞を同定するために、マーカーα−平滑筋アクチン（αＳＭＡ）について染色した。画像を、星細胞活性化の指標として使用される陽性染色面積のパーセントを用いて定量化した。結果が、表４２に示される。データは、平均±標準偏差（ｓｔｄｅｖ）であり；ｐ値が、片側Ｔ検定によって、ビヒクル処理ＳＴＡＭマウス対照と比較される。
【０２２６】
標準食を与えられた正常なＣ５７ＢＬ／６マウスは、０．６８２＋／−０．２６の平均陽性面積を有していた。ビヒクル処理ＳＴＡＭ（商標）マウスは、２．１２８＋／−０．５０の平均陽性面積を有していた。アミノ酸組成物Ａ−１処理マウスは、１．６５７＋／−０．８４の平均陽性面積を有していた。ＯＣＡ処理マウスは、１．５６２＋／−０．３１の平均スコアを有していた。
【０２２７】
【表１９】
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【０２２８】
概要
アミノ酸組成物Ａ−１による処理が、ＮＡＦＬＤ活動性スコア（ＮＡＳ）の有意な減少（平均ＮＡＳ：２．９＋／−０．７４のＯＣＡ処理マウス平均スコアと比較して、アミノ酸組成物Ａ−１について３．１＋／−０．７４対４．７＋／−０．６７のビヒクル処理ＳＴＡＭ（商標）マウス平均スコア）によって示されるように、ＯＣＡ（ＮＡＳＨの治療について、Ｉｎｔｅｒｃｅｐｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．によって現在臨床試験中である）によるファルネソイドＸ受容体（ＦＸＲ）阻害と同等のレベルまでＮＡＳＨ重症度を有意に低下させ、肝星細胞活性化（平均αＳＭＡ陽性染色面積：１．５６２＋／−０．３１のＯＣＡ処理マウス平均面積と比較して、アミノ酸組成物Ａ−１について１．６５７＋／−０．８４対２．１２８＋／−０．５０のビヒクル処理ＳＴＡＭ（商標）マウス平均面積）の下方制御によって示されるように、線維症の発生を有意に低下させた。
【０２２９】
【表２０】
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【０２３０】
【表２１】
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【０２３１】
【表２２】
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【０２３２】
【表２３】
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【０２３３】
【表２４】
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【０２３４】
【表２５】
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【０２３５】
実施例３：アミノ酸組成物による処理が、脂質代謝、炎症、及び線維症に影響を与えることによって、２匹のげっ歯類モデルにおけるＮＡＳＨ進行を改善する。
アミノ酸組成物は、ＮＡＳＨを安全且つ有効に治療するために疾患病状の複数の機構を同時に標的にするように製剤化される（表５２）。本明細書に記載されるように、アミノ酸組成物の有効性を、ＮＡＳＨの２匹の確立されたマウスモデルにおいて試験して、ＮＡＳＨ及び関連疾患に関連する兆候及び症状に対するアミノ酸組成物の影響を決定した。
【０２３６】
【表２６】
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【０２３７】
動物実験
ＳＴＡＭ（商標）マウスは、ＳＭＣ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．によって開発された、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）及び肝細胞癌（ＨＣＣ）のモデルである。脂肪肝のエビデンスが、５週齢までに存在し、続いて、７週齢までにＮＡＳＨ、及び９週齢までに線維症のエビデンスが存在する。出生の２日後に低用量のストレプトゾトシンを投与し、４週齢から開始して高脂肪食（５７％ｋｃａｌの脂肪、ＨＦＤ３２、日本クレア（ＣＬＥＡ  Ｊａｐａｎ，Ｉｎｃ．））を与えたＣ５７ＢＬ／６マウスにおいて、雄ＳＴＡＭマウスを作成した（全体が参照により本明細書に援用される；Ｓａｉｔｏ  Ｋ．ｅｔ  ａｌ．，２０１５  Ｓｃｉ  Ｒｅｐ  ５：１２４６６）。アミノ酸組成物を、６週齢から開始して３週間にわたって、１日２回、１．６ｍ／ｋｇの用量でＳＴＡＭマウスに投与した。ビヒクル処理ＳＴＡＭマウスの１つの群が、対照として含まれていた。非絶食マウスを、９週齢で安楽死させた。血漿及び肝臓試料を、さらなる分析のために採取した（図２）。
【０２３８】
ＦＡＴＺＯ（商標）マウスは、Ｃｒｏｗｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃによって開発された、肥満、メタボリック・シンドローム、及びＮＡＳＨの、近交系のポリジーンモデルである（全体が参照により本明細書に援用される；Ｐｅｔｅｒｓｏｎ  ＲＧ．Ｅｔ  ａｌ．，２０１７  ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ）。雄ＦＡＴＺＯマウスに、６週齢から開始して、高脂肪、フルクトース、及びコレステロール（ＨＦＦＣ）食（４０％ｋｃａｌの脂肪、Ｄ１２０７９Ｂ、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ，Ｉｎｃ．及び飲料水中５％のフルクトース）を与えて、ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨを誘導した。脂肪肝のエビデンスが、誘導の４週間後までに存在し、続いて、誘導の１６週間後までにＮＡＳＨ及び誘導の２０週間後までに線維症のエビデンスが存在する。設計されたアミノ酸組成物を、誘導の１６週間後から開始して、４週間にわたって１日２回、３．０ｇ／ｋｇの用量で投与した（図２）。ビヒクル処理ＦＡＴＺＯマウスの１つの群が、対照として含まれていた。非絶食マウスを、誘導の２０週間後の時点で安楽死させた。血漿及び肝臓試料を、さらなる分析のために採取した。
【０２３９】
組織学的分析
Ａｐｅｒｉｏ  ＳｃａｎＳｃｏｐｅ  ＣＳホールスライドデジタルイメージングシステム（Ｖｉｓｔａ，ＣＡ）を、Ｈ＆Ｅ、Ｐｉｃｒｉｃシリウスレッド、ＳＭＡ、Ｆ４／８０におけるイメージングに使用した。画像を、ホールスライドから獲得した。
【０２４０】
肝臓を、ＮＡＳＨ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｎｅｔｗｏｒｋ（ＣＲＮ）肝臓組織学的採点システムを用いて、サンプルＩＤを知らされていない獣医病理学者によって評価した（全体が参照により本明細書に援用される、Ｋｌｅｉｎｅｒ  ＤＥ，ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＮＡＳＨ  ＣＲＮ  Ｓｃｏｒｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍは、脂肪症、小葉炎症、肝細胞風船様腫大、変性、及び線維症の進行を評価する。各事例の肝臓の１つの断面を、ＮＡＳＨスコアシステムを用いて分析した。脂肪症、小葉炎症、及び線維症の進行を、０〜３の尺度で評価した。肝細胞風船様変性を、０〜２の尺度で評価した。
【０２４１】
Ａｐｅｒｉｏ  Ａｕｔｏｍａｔｉｃ  Ｉｍａｇｅ  ＱｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎのＰｏｓｉｔｉｖｅ  Ｐｉｘｅｌ  Ｃｏｕｎｔアルゴリズムを用いて、走査されたスライド画像中に存在する特定の染色のパーセンテージを定量化した。色の範囲（色相及び彩度の範囲）並びに３つの輝度範囲（弱、ポジティブ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ）、及び強）をマスクし、評価した。アルゴリズムは、３つのさらなる量：平均輝度、強／総数の比率、及び弱いポジティブピクセルの平均輝度とともに、各輝度範囲における数及び輝度の総和を計数した。
【０２４２】
特定のポジティブピクセルアルゴリズムを、シリウスレッド及びオイルレッドＯ肝臓切片をイメージングするのに使用した。ポジティブピクセルアルゴリズムは、オレンジ色と青色を区別するように調節された。通常の「色相値」（０．１〜０．９６）及び「彩度」（０．０４〜０．２９）からの変更が、シリウスレッド評価のためになされた。血管系及び人工物は、分析から除外された。
【０２４３】
肝臓トリグリセリド及びコレステロール測定
肝臓総脂質抽出物を、Ｆｏｌｃｈの方法によって得た（全体が参照により本明細書に援用される；Ｆｏｌｃｈ  Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９５７；２２６：４９７）。肝臓試料を、クロロホルム−メタノール（２：１、ｖ／ｖ）中で均質化し、室温で一晩インキュベートした。クロロホルム−メタノール−水（８：４：３、ｖ／ｖ／ｖ）での洗浄の後、抽出物を、蒸発乾固させ、イソプロパノールに溶解させた。肝臓トリグリセリド及びコレステロール含量を、それぞれトリグリセリドＥ−試験及びコレステロールＥ−試験によって測定した。
【０２４４】
遺伝子発現分析
肝臓ＲＮＡ試料を、Ｉｌｌｕｍｉｎａ  ＴｒｕＳｅｑ  Ｓｔｒａｎｄｅｄ  ｍＲＮＡ試料調製キット（Ｉｌｌｕｍｉｎａ  ＃  ＲＳ−１２２−２１０３）を用いてｃＤＮＡライブラリーに変換した。トランスクリプトームを、Ｑ２  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ（Ｍｏｒｒｉｓｖｉｌｌｅ，ＮＣ）において分析した。ＲＮＡ  Ｓｅｑデータを正規化し、Ｉｎｇｅｎｕｉｔｙ  Ｐａｔｈｗａｙ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（ＱＩＡＧＥＮ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ）を用いて分析した。ヒトＮＡＦＬＤに変換可能であるため、経路レベルでのマウス肝臓遺伝子発現に焦点を合わせた（全体が参照により本明細書に援用される、Ｔｅｕｆｅｌ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，２０１６）。
【０２４５】
代謝分析
キャピラリー電気泳動飛行時間型質量分析法（ＣＥ−ＴＯＦＭＳ）及びＬＣ−ＴＯＦＭＳプラットフォームの両方に基づいた代謝プロファイルを、ヒューマン・メタボローム・テクノロジーズ（Ｈｕｍａｎ  Ｍｅｔａｂｏｌｏｍｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）（山形、日本）において行った。試料中の代謝産物を、移動時間及びｍ／ｚ比を認証標準と比較することによって同定し、それらのピーク面積を認証標準のものと比較することによって定量化した。
【０２４６】
肝臓サイトカイン／ケモカイン測定
肝臓におけるＩＬ−１ｂ、ＭＣＰ−１、及びＭＩＰ−１タンパク質のレベルを、多重ＥＬＩＳＡ  Ａｓｓａｙ（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ）を用いて定量化した。
【０２４７】
アミノ酸組成物は、ＳＴＡＭ及びＦＡＴＺＯマウスの両方において肝細胞風船様腫大及び線維症を改善する。
アミノ酸組成物による処理は、ＳＴＡＭ及びＦＡＴＺＯマウスの両方においてＮＡＦＬＤ活動性スコア（ＮＡＳ）を有意に低下させた（図３Ａ）。アミノ酸組成物による処理はまた、ＳＴＡＭマウスにおいて肝細胞風船様腫大を有意に軽減した（図３Ｂ）。脂肪症及び炎症のスコアは、組織学的指標によれば、アミノ酸組成物によるＳＴＡＭマウスの処理によって変化されなかった。シリウスレッド陽性の、線維症領域は、ＳＴＡＭマウスをアミノ酸組成物で処理することによって有意に低下された一方、オイルレッドＯ領域は、ＳＴＡＭマウスをアミノ酸組成物で処理することによって変化されなかった（図３Ｃ）。肝臓トリグリセリド及びコレステロールレベルは変化されなかった。
【０２４８】
アミノ酸組成物による処理はまた、ＦＡＴＺＯマウスにおいて肝細胞風船様腫大を有意に軽減した（図３Ｄ）。脂肪症及び炎症並びに肝臓トリグリセリド及びコレステロールレベルのスコアは、アミノ酸組成物処理で処理されたＦＡＴＺＯマウスにおいて変化されなかった。シリウスレッド陽性の、線維症領域は、アミノ酸組成物によるＦＡＴＺＯマウスの処理によって有意に低下された一方、オイルレッドＯ領域は、アミノ酸組成物処理によるＦＡＴＺＯマウスの処理によって変化されなかった（図３Ｅ）。
【０２４９】
アミノ酸組成物は、脂肪酸酸化を促進する
ＮＡＦＬＤは、肝臓脂質蓄積によって特徴付けられる。肝臓トリグリセリドは、脂肪酸酸化及びトリグリセリドリッチリポタンパク質の分泌による除去に対する、デノボ脂質生成による取得と血漿からの非エステル化脂肪酸の取り込みとの間の正確なバランスに起因する（全体が参照により本明細書に援用される、Ｋａｗａｎｏ  Ｙ，Ｃｏｈｅｎ  ＤＥ，Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．２０１３）。対照マウスと比較して、ＳＴＡＭマウスは、より多い肝臓不飽和脂肪酸を有しており、これは、アミノ酸組成物による処理によって減少された（図４Ａ及び表５３）。ＳＴＡＭマウスにおける肝臓アシルカルニチンは、アミノ酸組成物による処理によって増加され、これは、脂肪酸β−酸化の促進を示唆している（図４Ｂ及び表５３）。
【０２５０】
【表２７】
2021527671.tif 000028
【０２５１】
アミノ酸組成物による処理によって影響される肝臓中の差次的遺伝子発現パターンは、Ｉｎｇｅｎｕｉｔｙ  Ｐａｔｈｗａｙ  Ａｎａｌｙｓｉｓによって開発された上流レギュレータシステム生物学知識ベースフレームワーク（ｕｐｓｔｒｅａｍ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ｋｎｏｗｌｅｄｇｅｂａｓｅ  ｆｒａｍｅｗｏｒｋ）の文脈において解釈された。計算されたｚスコアは、遺伝子発現パターンが、上流レギュレータとしてペルオキシソーム脂肪酸酸化をコードする、ＡＣＯＸ１の活性化と一致することを示した（図５及び表５４）。
【０２５２】
【表２８】
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【０２５３】
アミノ酸組成物は、炎症経路を抑える。
炎症は、ＮＡＳＨの「セカンドヒット（ｓｅｃｏｎｄ−ｈｉｔ）」である。アミノ酸組成物による処理の結果としての肝臓中の差次的遺伝子発現パターンにより、抗炎症性ＩＬ−１０の上流のレギュレータ活性化（図６Ａ）及び炎症性ＮＦ−ｋＢの阻害（図６Ｂ及び表３０）、インターフェロン、ＩＬ−１ｂ、及びＩＬ−２（図６Ｃ及び表５５）に関連するＩＰＡ分析内のｚスコアが得られた。タンパク質レベルにおいて、アミノ酸組成物による処理は、それぞれＣ−Ｃケモカイン受容体２型（ＣＣＲ２）及び５型（ＣＣＲ５）のリガンドである肝臓ＭＣＰ−１及びＭＩＰ−１を有意に下方制御した（図７）。したがって、アミノ酸組成物による処理は、抗炎症状態へと免疫系を抑制し、それにより、ＮＡＳＨの進行を抑え得る。
【０２５４】
【表２９】
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【０２５５】
【表３０】
2021527671.tif 000031
【０２５６】
アミノ酸組成物は、線維成長経路を防止する。
線維症は、代謝調節異常、炎症、及び細胞死などの、いくつかの生物学的過程の中心である。肝細胞内の脂質蓄積及び慢性炎症は、肝星細胞の線維形成性活性化を誘導する（全体が参照により本明細書に援用される、Ｗｏｂｓｅｒ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．２００９）。アミノ酸組成物による処理から得られる肝臓遺伝子発現パターンは、線維形成性ＴＧＦ−ｂシグナル伝達経路の抑制と一致していた（図６Ｄ）。
【０２５７】
増加するエビデンスは、ＣＣＲ２／ＣＣＲ５及びＭＣＰ−１／ＭＩＰ−１を含むそれらのリガンドが、肝臓組織損傷後の線維症の原因となるマクロファージ動員及び肝星細胞活性化を促進することを示唆する（全体が参照により本明細書に援用される、Ｌｅｆｅｂｖｒｅ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ２０１６）。アミノ酸組成物は、減少する肝臓ＴＧＦ−ｂシグナル伝達並びにＭＣＰ−１及びＭＩＰ−１タンパク質によって、ＮＡＳＨのＳＴＡＭモデルにおける強力な抗線維化活性を示した（図７）。
【０２５８】
結論
アミノ酸組成物は、ＮＡＳの改善並びに肝細胞風船様腫大及び線維症の改善を含む、ＮＡＳＨのＳＴＡＭ及びＦＡＴＺＯマウスモデルの両方における一貫した疾患修飾活性を示した。アミノ酸組成物の活性は、少なくとも部分的に、脂肪酸酸化の増加、主要なサイトカインのレベルの低下並びに肝臓炎症及び線維症に関連する転写経路によって駆動されるようである。
【０２５９】
実施例４：脂肪症及び炎症の肝細胞モデル
肝細胞脂肪毒性は、酸化的ストレス及び小胞体（ＥＲ）ストレスによる肝細胞障害の中心的な駆動因子であるようである。肝細胞における脂肪症（脂質蓄積）及び炎症に影響を与えるアミノ酸の能力を、ヒト初代肝細胞（Ｌｏｎｚａ，ＴＲＬ）を用いて評価した。
【０２６０】
細胞播種及び維持
２人の健常なヒトドナーからの初代肝細胞ロット番号を、１０％の熱で不活性化したＦＢＳ（Ａｔｌａｎｔａ  Ｂｉｏ）、２ｍＭのＧｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ）及び０．２％のＰｒｉｍｏｃｉｎ（ＩｎＶｉｖｏＧｅｎ）を補充した肝細胞平板培養培地（ウイリアムＥ培地（Ｇｉｂｃｏ）中で、９６ウェル光学的マイクロプレート（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）中で、６ｅ０４細胞の密度で、０日目に播種し、３７℃、５％のＣＯ２で６時間インキュベートした。６時間後、細胞を２回洗浄し、２ｍＭのＧｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ）及び１×ペニシリン／ストレプトマイシンを補充した肝細胞用規定培地（Ｃｏｒｎｉｎｇ）を用いて、３７℃、５％のＣＯ２で一晩インキュベートした。１日目に、細胞を２回洗浄し、上述されるのと同じ条件で、肝細胞培地中で、２４時間インキュベートした。
【０２６１】
アミノ酸前処理
２日目に、細胞を、ＤＰＢＳ  １×（Ｇｉｂｃｏ）で２回洗浄し、血液中の平均生理学的濃度に基づいた所定の特別なアミノ酸濃度を含むアミノ酸不含ＷＥＭ（ＵＳ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）中で維持した。値は、Ｈｕｍａｎ  Ｍｅｔａｂｏｌｏｍｅ  Ｄａｔａｂａｓｅにおいて公開されている（全体が参照により本明細書に援用される；Ｗｉｓｈａｒｔ  ＤＳ，Ｔｚｕｒ  Ｄ，Ｋｎｏｘ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．，ＨＭＤＢ：ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｅｔａｂｏｌｏｍｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２００７  Ｊａｎ；３５（Ｄａｔａｂａｓｅ  ｉｓｓｕｅ）：Ｄ５２１−６．１７２０２１６８）。この特別な培地には、１１ｍＭのグルコース、０．２７２ｍＭのピルビン酸ナトリウム、及び様々な範囲の濃度における所定のアミノ酸組成物（すなわち、ビヒクル、ＬＩＶＲＱ＋Ｎ−アセチルシステイン、ＬＩＶＲＱ、ＲＱ＋Ｎ−アセチルシステイン、Ｎ−アセチルシステイン単独、ＬＩＶ、又は個別に、Ｌ−ロイシン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−バリン、Ｌ−アルギニン、Ｌ−グルタミン、及びＬ−システイン）の用量曲線が補充されている。細胞を、３７℃、５％のＣＯ２で２４時間にわたってこの規定培地中で維持した。
【０２６２】
遊離脂肪酸及び様々なアミノ酸の組合せによる併用治療
前処理の後、細胞を、１ｎｇ／ｍｌのＴＮＦ−α（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）又はビヒクルを補充した２：１（オレエート：パルミテート）の比率を有する２５０ｕＭの遊離脂肪酸（ＦＦＡ）に曝した。細胞を、３７℃、５％のＣＯ２で２４時間にわたって、ＦＦＡ混合物及び様々なアミノ酸の組合せとともにインキュベートした。２４時間のインキュベーションの後、培地を、サイトカイン分析のために除去し、同じ刺激条件及びアミノ酸濃度を含む新鮮な培地に交換した。細胞を、さらに４８時間、合計で７２時間のＦＦＡ及びＴＮＦα刺激のためにインキュベートした。
【０２６３】
ＥＬＩＳＡによる２４時間後のサイトカイン分析
ヒトＣＣＬ２（ＭＣＰ−１）を、１×Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｄｉｌｕｅｎｔ（Ｒｅａｇｅｎｔ  Ａｎｃｉｌｌａｒｙ  Ｋｉｔ  ２，Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）中１／５又は１／１０の希釈で、ＥＬＩＳＡ（ヒトＣＣＫ２／ＭＣＰ−１  ＤｕｏＳｅｔ  ＥＬＩＳＡ，Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）によって測定した。データを、後述される蛍光顕微鏡法においてＨｏｅｃｈｓｔ  ３３４２（Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）によって染色される核数によって決定される特定のウェル当たりの細胞密度に対して正規化した。
【０２６４】
蛍光顕微鏡法による７２時間後の細胞内脂質蓄積の分析
７２時間後、細胞を、１００ｕｌのＰＢＳ  １×（Ｇｉｂｃｏ）中で２回洗浄し、４％のパラホルムアルデヒドで固定し、ＰＢＳ  １×（１００ｕｌ）で２回洗浄した。固定の後、脂質を、１０００倍に希釈されたＨＣＳ  ＬｉｐｉｄＴＯＸ  Ｒｅｄ  Ｎｅｕｔｒａｌ（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で染色し、核を、４ｕｇ／ｍｌに希釈されたＨｏｅｃｈｓｔ  ３３４２（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で染色した。ＬｉｐｉｄＴＯＸ（商標）中性脂質染色は、ハイコンテントイメージャー（ｈｉｇｈ  ｃｏｎｔｅｎｔ  ｉｍａｇｅｒ）（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて蛍光顕微鏡法によって検出された中性脂質滴に対する非常に高い親和性を有する。
【０２６５】
結果
脂質蓄積及び脂肪症表現型
健常なドナーからの初代ヒト肝細胞が、低いレベルの脂質蓄積を有することが分かった（図８Ａ〜８Ｄ）。遊離脂肪酸（ＦＦ）＋ＴＮＦαによる細胞の処理は、大滴性脂肪変性表現型を有する脂質蓄積を誘導した（図８Ｉ〜８Ｌ）。ＬＩＶＲＱＮＡＣによる処理は、肝細胞表現型を、大滴性脂肪変性から小滴性脂肪変性へと変化させた（図８Ｅ〜８Ｈ）。
【０２６６】
ＭＣＰ１／ＣＣＬ２分泌
表５６〜５９は、２人の健常なドナー（表５６及び５７のドナー１、並びに表５８及び５９のドナー２）からの初代ヒト肝細胞におけるＭＣＰ１／ＣＣＬ２のベースライン減算した分泌を示す。ＬＩＶＲＱＮＡＣ、ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｇ、ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｓ、ＬＩＶＲＱ及びＲＱＮＡＣは、両方のドナーにおいてＭＣＰ１／ＣＣＬ２分泌を有意に減少させた。しかしながら、組合せＬＩＶは、ドナーの一方のみにおいてＭＣＰ１／ＣＣＬ２分泌を有意に増加させた。ＬＩＶの組合せへのアルギニン（Ｒ）及びグルタミン（Ｑ）の添加が、ＬＩＶ単独と比較して、両方のドナーにおいてＭＣＰ１／ＣＣＬ２の分泌を減少させた。個別に、Ｎ−アセチルシステイン及びグルタミンが、ＭＣＰ１／ＣＣＬ２分泌を有意に減少させることが示される一方、アルギニンは、ＭＣＰ１分泌を増加させた。イソロイシン、ロイシン及びバリンは、ＭＣＰ１／ＣＣＬ２分泌に対する影響を与えなかった。
【０２６７】
【表３１】
2021527671.tif 000032
【０２６８】
【表３２】
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【０２６９】
【表３３】
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【０２７０】
【表３４】
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【０２７１】
実施例５．アミノ酸組成物による、マウスモデルのＮＡＳＨの処理
マウスでのＮＡＳＨの誘導
一例において、ＦＡＴＺＯマウスモデルにおける肥満、代謝に起因する非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）におけるＬＩＶＲＱＮＡＣ及び関連するアミノ酸組成物の影響を調べた。
【０２７２】
マウスでのＮＡＳＨの誘導
１６週間の誘導期中に、飲料水（ＷＤＦ）中５％のフルクトースを補充した西洋型食（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔ  ＃  Ｄ１２０７９Ｂ；脂肪４０％ｋｃａｌ、タンパク質１７％ｋｃａｌ、炭水化物４３％ｋｃａｌ）によって、ＮＡＳＨを、６０匹の雄ＦＡＴＺＯマウスにおいて誘導した。食事及び水は、自由に摂取可能であった。同腹子対照雄ＦＡＴＺＯマウスには、対照食（ｎ＝６、Ｐｕｒｉｎａ  ＃  ５００８；脂肪１７％ｋｃａｌ、タンパク質２７％ｋｃａｌ、炭水化物５６％ｋｃａｌ）を与え、滅菌水を、対照目的で提供した。マウスを、マイクロアイソレータを備えたプラスチックのケージ中で飼育した。滅菌した寝床を、週に１回交換した。マウスを、１つのケージにつき３匹飼育し、試験期間を通して１２時間の明サイクルで維持した。室温を毎日監視し、２２〜２５℃に維持した。体重を、誘導期中に毎週記録した。
【０２７３】
試験計画
１６週間の食事誘導の後、６匹のマウスは、対照食（群１、対照）のままであった一方、６０匹の誘導マウスは、以下の処理への割り当てのために体重及び血漿グルコース（ｆｅｄ）について無作為化された。ＦＡＴＺＯマウスに、４週間にわたる西洋型食ＮＡＳＨ誘導後１６週間の時点から開始して、被験物質を投与した。被験物質を、強制経口投与によって投与した。動物を、西洋型食ＮＡＳＨ誘導後２０週間の時点で安楽死させ、組織を分析のために採取した。
【０２７４】
【表３５】
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【０２７５】
被験物質
ＬＩＶＲＱＮＡＣ、ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｇ、ＬＲＱＮＡＣ、及びＯＣＡ（Ａｄｖａｎｃｅｄ  ＣｈｅｍＢｌｏｃｋｓ，Ｉｎｃ．）、賦形剤（ｉｎｃｉｐｉｅｎｔ）、及び潅注用水を、Ａｘｃｅｌｌａ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｉｎｃ．によって提供した。０．５％のメチルセルロースは、ＣｒｏｗｎＢｉｏ，Ｉｎｃ．によって提供された。投与溶液を、付属書（Ａｐｐｅｎｄｉｘ）１にしたがって調製した。ＴＡ化合物（アミノ酸組成物）は、潅注用水（Ｂａｘｔｅｒ  ＃  ２７Ｆ７１１４）並びに賦形剤０．１２５％のキサンタンガム、１．５ｍＭのラウリル硫酸ナトリウム及び０．２８％のレシチン中で毎日新たに製剤化されるアミノ酸ブレンドであった。オベチコール酸（ＯＣＡ）を、潅注用水中０．５％のメチルセルロース中で懸濁させた。全ての被験物質を、冷蔵保存した。ＴＡ化合物は、スポンサーによって凍結粉末で提供された。投与を４週間にわたって続けた。
【０２７６】
ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｇ及びＬＲＱＮＡＣのロイシン投与量を、ＬＩＶＲＱＮＡＣのものに適合させた。
【０２７７】
【表３６】
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【０２７８】
【表３７】
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【０２７９】
ＬＩＶＲＱＮＡＣ、ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｇ、ＬＲＱＮＡＣ、ＯＣＡ及びビヒクルを、試験全体を通して１０ｍＬ／ｋｇの体積で、強制経口投与によって投与した。投与量を、一日体重によって計算した。ＬＩＶＲＱＮＡＣ、ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｇ、ＬＲＱＮＡＣ、及びビヒクルを、１日２回（ＢＩＤ）投与した一方、ＯＣＡを、午前中に１日１回（ＱＤ）投与した。マウスは、１日１回（ＱＤ）ＯＣＡ、及び１日１回（ＱＤ）１つのビヒクルを投与されている。用量を、４週間にわたって、強制経口投与によって０７００及び１８００に投与した。
【０２８０】
体重及び血糖
生存率、臨床兆候及び行動を毎日監視した。体重を、投与期間の間、毎日記録した。血液試料を、グルコース測定（ＳｔａｔＳｔｒｉｐ血糖値測定器）のために、尾切断によって毎週ＡＭ（０７００）に採取した。
【０２８１】
部検及び試料採取
動物に、ＣＯ２吸入により麻酔をかけ、安楽死のために心穿刺によって放血させた。末梢血試料（Ｋ２ＥＤＴＡ）を、終了時に、麻酔された動物において心穿刺によって取得した。試料は、Ａｘｃｅｌｌａ  Ｈｅａｌｔｈに、凍結された状態で提供された。臓器重量（肝臓全体、生殖腺脂肪パッド（ｇｏｎａｄａｌ  ｆａｔ  ｐａｄ））を記録した。膵臓、及び小腸及び生殖腺脂肪パッドを、１０％の緩衝ホルマリン中で固定し、プロトコルにおいて指示どおりに調製した。また、小腸、生殖腺脂肪パッド及び肝臓の切片を、液体窒素中で急速凍結させ、スポンサーに輸送した。
【０２８２】
組織学的分析
肝臓組織を、２４時間にわたって４℃で、ブアン液、続いて標準的な濃度のアルコールの浴、次にキシレン中で固定して、パラフィン包埋のための組織を調製した。パラフィンに包埋され、冷却された後、５ミクロンの切片を切断し、慣例的なＨ＆Ｅ及びピクリン酸シリウスレッドで染色した。肝臓の右葉及び左葉の両方の切片を、オイルレッド−）染色を用いた脂質含量の分析のためにＯＣＴ中で凍結させた。Ａｐｅｒｉｏホールスライドデジタルイメージングシステム（Ｓｃａｎ  Ｓｃｏｐｅ  ＣＳ，Ｖｉｓｔａ，ＣＡ）を、イメージングに使用した。全てのスライドを２０倍でイメージングした。走査時間は、１．５分から２．２５分の最大時間までの範囲であった。全画像を収納し、それらのＳｐｅｃｔｒｕｍソフトウェアシステムに保存し、画像をホールスライドから撮影した。
【０２８３】
肝臓を、採点のためのＮＡＳＨ肝臓基準を用いて評価した。このマウス試験では、各事例の肝臓の１つの断面を、ＮＡＳＨスコアシステムを用いて分析した。公開されたＮＡＳＨ  ＣＲＮ  Ｓｃｏｒｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍによれば、この採点システムは、ＮＡＦＬＤ活動性スコア（ＮＡＳ）、線維症段階及びパターン認識によるＮＡＳＨの同定を含む。ＮＡＳは、０〜８の範囲であり得、Ｈ＆Ｅ染色された切片からの脂肪症（０〜３）、小葉炎症（０〜３）及び肝細胞風船様腫大（０〜２）のスコアの合計によって計算される。線維症を、ピクロシリウスレッド染色されたスライドから採点した（０〜４）。ＮＡＳＨシステムを、ヒト肝臓１８ゲージ生検に使用した。脂肪症、小葉炎症、肝細胞．肝細胞風船様変性、線維症、ＮＡＳ及びパターン認識によるＮＡＳＨの存在を、組織的に評価した。この試験では、この試験において１匹のマウスにつき肝臓の１つの全断面積を評価した。これは、１８ゲージヒト肝生検のサイズの約１５倍である。病理学的スコアを、０、＋１、＋２、又は＋３として決定した。病変を、場所（門脈周囲、小葉中心、及び中間帯）及び脂肪蓄積（限局性、門脈周囲、及び／又は小葉中心）について採点した。スコアの他の部分は、病変の分布：限局性、多発性及び／又は広範性であった。また、病変の軽度、中等度及び重症度。これらのパラメータが、全ＮＡＳＨスコアを構成していた。
【０２８４】
全ての免疫組織化学的染色工程を、自動免疫染色装置（ａｕｔｏｍａｔｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｔａｉｎｅｒ）においてＤａｋｏ  ＦＬＥＸ  ＳＹＳＴＥＭを用いて行い；インキュベーションを、室温で行い、トリス緩衝生理食塩水及び０．０５％のＴｗｅｅｎ  ２０、ｐＨ７．４（ＴＢＳ−Ｄａｋｏ  Ｃｏｒｐ．）を、全ての洗浄剤及び希釈剤に使用した。十分な洗浄を、各インキュベーション後に行った。一次抗体は、抗マウスＳＭＡ、Ｆ４／８０、Ｍａｃ−２、及びピクリン酸シリウスレッドを含んでいた。対照切片を、一次抗体と同じ濃度を用いてアイソタイプコントロールで処理して、染色特異性を確認した。
【０２８５】
白色脂肪組織（ＷＡＴ）脂肪細胞サイズを、Ｈ＆Ｅで染色された切片から分析した。Ａｐｅｒｉｏ  Ｉｍａｇｅ  Ｓｃｏｐｅアプリケーションを用いて、各組織標本の３つの局部的な領域（組織の縁部、血管領域を囲んでいない組織、血管領域を囲んでいる組織）を、この領域の大きい順に１０の脂肪細胞の面積を測定することによって評価した。各組織内で、各領域の１０のホットスポットを定量化し（ｕｍ２）、平均した。
【０２８６】
膵臓β島細胞を、免疫組織化学的染色によって同定した。
【０２８７】
画像分析
Ａｐｅｒｉｏ  Ａｕｔｏｍａｔｉｃ  Ｉｍａｇｅ  Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎが、免疫組織化学的染色、オイルレッドＯ、及びシリウスレッド染色のポジティブピクセルを定量化するのに用いられた。Ｐｏｓｉｔｉｖｅ  Ｐｉｘｅｌ  Ｃｏｕｎｔアルゴリズムを用いて、走査されたスライド画像中に存在する特定の染色のパーセンテージを定量化した。色の範囲（色相及び彩度の範囲）及び３つの輝度範囲（弱、ポジティブ、及び強）をマスクし、評価した。アルゴリズムは、３つのさらなる量：平均輝度、強／総数の比率、及び弱いポジティブピクセルの平均輝度とともに、各輝度範囲における数及び輝度の総和を計数した。ポジティブピクセルアルゴリズムは、オレンジ色と青色を区別するように調節された。通常の「色相値」（０．１〜０．９６）及び「彩度」（０．０４〜０．２９）からの変更が、シリウスレッド評価のためになされた。血管系及び人工物は、分析から除外された。
【０２８８】
肝臓遺伝子発現分析
ＭＣＰ−１及びＭＩＰ−１ａの肝臓遺伝子発現を、定量ＰＣＲによって測定した。
【０２８９】
肝臓サイトカイン及びケモカイン測定
肝臓ＩＬ−１ｂ、ＭＣＰ−１、及びＭＩＰ−１タンパク質レベルを、多重ＥＬＩＳＡアッセイ（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ）を用いて定量化した。
【０２９０】
統計的分析
肝臓組織学的スコアの統計的分析を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｉｎｃ．，ＵＳＡ）においてボンフェローニの多重比較検定を用いて行った。Ｐ値＜０．０５は、統計的に有意であると見なされた。結果を、平均±ＳＥＭとして表した。群２（ビヒクル）と、以下の群；群３（ＬＩＶＲＱＮＡＣ  １，５００ｍｇ／ｋｇ）、群４（ＬＩＶＲＱＮＡＣ  ３，０００ｍｇ／ｋｇ）、群５（ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｇ、３，８８５ｍｇ／ｋｇ）、及び（ＬＲＱＮＡＣ、２，４６９ｍｇ／ｋｇ）との間で、比較を行った。
【０２９１】
体重及び肝臓重量
１６週間にわたって、フルクトース（ＷＤＦ）を補充した西洋型食を供給することにより、対照を供給された動物と比較して、体重に対する有意な効果を誘発した。試験薬剤の投与の前に、ＷＤＦを供給された動物は、対照食を供給された動物と比較して、有意に重かった（４７．６±０．４５対４３．９±１．０３ｇ；ｐ＜０．０１）。
【０２９２】
体重は、全ての処理群においてベースライン値と比較して減少し；ビヒクルと比較して体重減少の有意差はなかった（対照、ビヒクル、ＬＩＶＲＱＮＡＣ（１５００ｍｇ／ｋｇ）、ＬＩＶＲＱＮＡＣ（３０００ｍｇ／ｋｇ）、ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｇ、ＬＲＱＮＡＣ、及びＯＣＡについてそれぞれ、−７．６±０．９、−６．９±１．３、−６．８±１．４、−５．７±１．２、−６．４±１．０、−４．７±１．６及び−３．９±１．５％；ｐ＜０．４９９２）。
【０２９３】
肝臓重量（％体重）は、対照食と比較してＷＤＦを供給されたビヒクル処理動物において有意に多かったが（７．２２±０．３対５．０５±０．２４％；ｐ＜０．０００１）；ＷＤＦを供給された動物において、ビヒクルと比較して有意な効果は、いずれの処理群においても示されなかった（ビヒクル、ＬＩＶＲＱＮＡＣ（１５００ｍｇ／ｋｇ）、ＬＩＶＲＱＮＡＣ（３０００ｍｇ／ｋｇ）、ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｇ、ＬＲＱＮＡＣ、及びＯＣＡについてそれぞれ、７．２２±０３、７．１４±０．３、７．１９±０．２６、６．６９±０．１８、７．０２±０．５及び６．８１±０．２；ｐ＜０．７４５０）。
【０２９４】
血糖
１６週間にわたってフルクトース（ＷＤＦ）を補充した西洋型食を供給することにより、対照を供給された動物と比較して血糖に対する有意な効果を誘発した。試験薬剤の投与の前に、ＷＤＦを供給された動物は、対照食を供給された動物と比較して、グルコースを有意に低下させた（１６０．０±３．０１対２１８．３±２８．６ｍｇ／ｄＬ；ｐ＜０．０００１）。
【０２９５】
血糖は、ベースラインで対照動物においてより高かったが、化合物投与の４週間中、比較的安定したままであった。投与期間にわたって平均した場合、いずれの処理群についてもビヒクルと比較して平均血糖の有意差はなかった（対照、ビヒクル、ＬＩＶＲＱＮＡＣ（１５００ｍｇ／ｋｇ）、ＬＩＶＲＱＮＡＣ（３０００ｍｇ／ｋｇ）、ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｇ、ＬＲＱＮＡＣ、及びＯＣＡについてそれぞれ、１６６．０±９．７、１５７．１±４．６、１５４．６±２．３、１５９．４±３．８、１５５．５±３．８、１５３．６±３．０及び１６９．７±６．３ｍｇ／ｄＬ；ｐ＜０．１５８７）。
【０２９６】
肝臓トリグリセリド及びコレステロール
肝臓トリグリセリド及びコレステロール含量は、対照食を供給されたビヒクル処理動物と比較して、ＷＤＦ供給後に同様に上昇された（肝臓トリグリセリドｐ＜０．００４０；肝臓コレステロール：ｐ＜０．０００１）。ＷＤＦを供給された動物の中でも、いずれの処理群についてもビヒクルと比較した際に、肝臓トリグリセリドの有意差はなかった（ｐ＜０．１２０６）。ＯＣＡが、ビヒクルと比較して３２％だけ肝臓コレステロール含量を減少させた一方（ｐ＜０．０５）、いずれのアミノ酸組成物処理群も、ＷＤＦ供給ビヒクル群と比較して肝臓コレステロールに影響を与えなかった。
【０２９７】
【表３８】
2021527671.tif 000039
【０２９８】
肝組織像
対照食を供給されたＦＡＴＺＯマウスは、軽度の脂肪症を発症し、炎症、肝細胞風船様腫大、又は線維症を発症しなかった（図９）。ＷＤＦを供給され、且つビヒクルで処理されたＦＡＴＺＯマウスは、重篤な脂肪症、軽度の炎症、肝細胞風船様腫大、及び線維症を発症した。ビヒクル群における主に大滴性（ｍａｃｒｏｖｅｓｉｃｕｌａｒ）脂肪症と対照的に、主に小滴性（ｍｉｃｒｏｖｅｓｉｃｕｌａｒ）及び低下した大滴性脂肪症の混合が、図１０に示されるように、ＬＩＶＲＱＮＡＣ、ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｇ及びＬＲＱＮＡＣ群において観察された。
【０２９９】
ＮＡＦＬＤ活動性スコアは、固定した肝組織における脂肪症（０〜３）、炎症（０〜３）、及び肝細胞風船様腫大（０〜２）の組織学的採点から計算される。ＷＤＦを供給された動物において、全てのアミノ酸組成物処理は、ビヒクル処理群と比較して、ＮＡＳの有意な軽減をもたらした（図１１）。ＬＩＶＲＱＮＡＣ及びアミノ酸組成物処理は、ビヒクルと比較して、肝臓脂肪症を軽減したが、ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｇ及びＬＲＱＮＡＣのみが統計的有意性（ｐ＜０．０５）に達した一方、ＬＩＶＲＱＮＡＣは達しなかった（ＬＩＶＲＱＮＡＣ  ３．０ｇ／ｋｇ、ｐ＝０．１２）。全てのアミノ酸組成物処理は、脂肪毒性及び細胞死のバイオマーカーである、肝細胞風船様腫大を有意に緩和した。アミノ酸組成物処理は、肝臓炎症を有意に変化させなかった。結論として、肝臓病変のアミノ酸組成物に関連する改善は、主に、肝細胞風船様腫大の緩和に起因している。
【０３００】
ビヒクルと比較して、ＮＡＳスコア及びＮＡＳ構成要素に対するＯＣＡの有意な効果はなかった。
【０３０１】
【表３９】
2021527671.tif 000040
【０３０２】
ビヒクル処理動物からの肝臓は、軽度の線維症；０．８±０．１のスコアを示した。ＬＩＶＲＱＮＡＣ（１５００ｍｇ／ｋｇ）で処理された動物からの肝臓のみが、ビヒクル処理群と比較した際に、線維症の有意な軽減（０．２±０．１対０．８±０．１、ｐ＜０．０１）を示したが、ＬＩＶＲＱＮＡＣ（３０００ｍｇ／ｋｇ）、ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｇ又はＬＲＱＮＡＣでの処理に関しては示さなかった。シリウスレッドコラーゲン染色は、全てのアミノ酸組成物処理が、ビヒクルと比較して、コラーゲン沈着を有意に低下させたことを示した（ＬＩＶＲＱＮＡＣ  １５００ｍｇ／ｋｇ、ｐ＜０．０１；ＬＩＶＲＱＮＡＣ  ３０００ｍｇ／ｋｇ、ｐ＜０．０１；ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｇ、ｐ＝０．０９；ＬＲＱＮＡＣ、ｐ＜０．０５）。ＯＣＡは、肝線維症スコア又はシリウスレッドコラーゲン染色面積に影響を与えなかった。
【０３０３】
【表４０】
2021527671.tif 000041
【０３０４】
肝臓トリグリセリドレベルと一致して、アミノ酸組成物処理は、ビヒクル群と比較して、肝臓オイルレッドＯ染色面積を変化させなかった。ＯＣＡは、オイルレッドＯ染色面積を減少させた（ｐ＜０．０５）。
【０３０５】
【表４１】
2021527671.tif 000042
【０３０６】
肝臓遺伝子発現
ＭＣＰ−１（ＣＣＬ２）及びＭＩＰ−１ａ（ＣＣＬ３）は、マクロファージ及び好中球動員によって肝臓炎症を媒介する炎症性ケモカインである。ＭＣＰ−１及びＭＩＰ−１ａは、ＮＡＳＨにおける肝線維症を治療するための有望な治療標的である、それぞれＣＣＲ２及びＣＣＲ５のリガンドである。肝臓におけるＭＣＰ−１及びＭＩＰ−１ａ  ＲＮＡ発現レベルは、表７４及び７５に示されるように、対照食を供給されたマウスと比較して、ＷＤＦを供給されたマウスにおいて有意に上方制御された。
【０３０７】
【表４２】
2021527671.tif 000043
【０３０８】
【表４３】
2021527671.tif 000044
【０３０９】
ＬＩＶＲＱＮＡＣ及びＬＲＱＮＡＣ処理は、ビヒクル群と比較して、肝臓ＭＣＰ−１及びＭＩＰ−１ａ  ＲＮＡ発現を有意に変化させなかった。ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｇ処理は、ビヒクル群（ｐ＝０．０５４）及びＬＩＶＲＱＮＡＣ群（ｐ＜０．０５）と比較して、肝臓ＭＣＰ−１  ＲＮＡ発現をわずかに低下させた。同様に、ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｇ処理は、ビヒクル群と比較して、肝臓ＭＣＰ−１  ＲＮＡ発現をわずかに低下させたが、差は有意でなかった（ｐ＝０．１９）及びＬＩＶＲＱＮＡＣ群（ｐ＜０．０５）。
【０３１０】
肝臓ケモカイン及びサイトカイン
ＲＮＡデータと一致して、肝臓ＭＣＰ−１及びＭＩＰ−１ａタンパク質レベルは、表７６及び７７に示されるように、対照食を供給されたマウスと比較して、ＷＤＦを供給されたマウスにおいて上昇された。
【０３１１】
【表４４】
2021527671.tif 000045
【０３１２】
【表４５】
2021527671.tif 000046
【０３１３】
肝臓ＭＣＰ−１及びＭＩＰ−１ａタンパク質レベルも、表７８及び７９に示されるように、ＲＮＡ発現レベルと正に相関していた。
【０３１４】
【表４６】
2021527671.tif 000047
【０３１５】
【表４７】
2021527671.tif 000048
【０３１６】
ＬＩＶＲＱＮＡＣ及びＬＲＱＮＡＣ処理は、ビヒクル群と比較して、肝臓ＭＣＰ−１及びＭＩＰ−１ａタンパク質レベルを有意に変化させなかった。ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｇ処理は、ＬＩＶＲＱＮＡＣ群と比較して、肝臓ＭＣＰ−１（ｐ＝０．０９５）及びＭＩＰ−１ａ（ｐ＜０．０５）タンパク質レベルをわずかに低下させた。さらに、肝臓ＭＣＰ−１及びＭＩＰ−１ａタンパク質レベルは、表８０に示されるように、正に相関していた。
【０３１７】
【表４８】
2021527671.tif 000049
【０３１８】
肝臓における炎症性サイトカインＩＬ−１ｂ、ＩＬ−６、ＴＮＦａ、及びＣＸＣＬ１タンパク質レベルは、表８１〜８４に示されるように、対照食を供給されたマウスと比較して、ＷＤＦを供給されたマウスにおいて上昇された。
【０３１９】
【表４９】
2021527671.tif 000050
【０３２０】
【表５０】
2021527671.tif 000051
【０３２１】
【表５１】
2021527671.tif 000052
【０３２２】
【表５２】
2021527671.tif 000053
【０３２３】
ＬＩＶＲＱＮＡＣ、ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｇ、及びＬＲＱＮＡＣ処理は、ビヒクルと比較して、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−６、ＴＮＦａ、及びＣＸＣＬ１タンパク質レベルを有意に変化させなかった。肝臓ＴＮＦａレベルは、ＬＩＶＲＱＮＡＣと比較して、ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｇ処理によって低下された。
【０３２４】
概要
臨床的観察に基づいて、ＷＤＦを供給されたＦＡＴＺＯマウスは、対照食を供給されたマウスより体重を増加させた。食事摂取状態の血糖値は、体重変化の差にもかかわらず、ＷＤＦを供給されたマウスと対照食を供給されたマウスとの間で同等であった。全ての処理は、ＦＡＴＺＯマウスにおいて良好な忍容性を示した。ＷＤＦを供給されたマウス及び対照食を供給されたマウスは両方とも、治療期間中に体重を減少させ、これは、１日２回の強制経口投与による被験物質又はビヒクルの投与に関連するストレスに起因し得る。
【０３２５】
ＮＡＳは、主に肝細胞風船様腫大スコアに起因して、ビヒクルと比較して、全てのアミノ酸組成物処理群において有意に緩和された。肝細胞風船様腫大は、全てのアミノ酸組成物処理群において有意に軽減された。脂肪症は、ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｇ及びＬＲＱＮＡＣ処理群において有意に軽減された。ＬＩＶＲＱＮＡＣも、脂肪症を低下させたが、差は有意でなかった。炎症は、アミノ酸組成物処理によって影響されなかった。ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｇ及びＬＲＱＮＡＣ処理群における脂肪症スコアの組織学的改善にもかかわらず、肝臓トリグリセリド、コレステロール、及びオイルレッドＯ染色は、アミノ酸組成物処理によって変化されないままであった。組織学的及び生化学的データと一致して、デノボ脂質生成酵素ＦＡＳＮ及びＡＣＡＣＡ  ＲＮＡレベルは、アミノ酸組成物処理によって影響されなかった。
【０３２６】
肝臓トリグリセリドレベルは、アミノ酸組成物処理によって影響されなかったが、肝細胞脂肪症の特徴は、アミノ酸組成物処理により変化された。ＷＤＦを供給されたマウス（ビヒクル群）の肝臓は、主に、大滴性脂肪症を示した。対照的に、大滴性脂肪症は減少され、全てのアミノ酸組成物処理群において小滴性及び大滴性脂肪症の混合であった。大滴性ないし小滴性脂肪症表現型におけるアミノ酸組成物の生物学的意味及び機構は、さらに調査する価値がある。
【０３２７】
ＮＡＦＬＤのＦＡＴＺＯモデルにおける肝線維症スコアは、高用量ではなく低用量でのＬＩＶＲＱＮＡＣ処理によって有意に緩和された。ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｇ及びＬＲＱＮＡＣは、線維症に対する効果を与えなかった。それにもかかわらず、シリウスレッドコラーゲン染色は、ＬＩＶＲＱＮＡＣ、ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｇ及びＬＲＱＮＡＣが、肝臓におけるコラーゲン沈着を有意に減少させたことを示した。
【０３２８】
肝臓炎症スコアと一致して、炎症性ケモカインＭＣＰ−１及びＭＩＰ−１ａ及びサイトカインＩＬ−１ｂ、ＩＬ−６、ＴＮＦａ、及びＣＸＣＬ１の肝臓ＲＮＡ及びタンパク質レベルは、アミノ酸組成物処理によって有意に影響されなかった。ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｇ（ＬＩＶＲＱＮＡＣ及びグリシンに相当する）処理が、ＬＩＶＲＱＮＡＣと比較して、肝臓ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１ａ、及びＴＮＦａを低下させたことに留意することは興味深い。
【０３２９】
炎症に関連して増加した肝臓の酸化的ストレスが、ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨの間で観察された。グルタチオン（ＧＳＨ）は、活性酸素種を抑え得る、極めて重要な内因性酸化防止剤である。グリシン及びその直接の代謝前駆体であるセリンは、ＧＳＨ生合成の基質である。したがって、セリン及び／又はグリシン補給は、ＧＳＨを補充するのを助け、ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨを改善する。ＬＩＶＲＱＮＡＣＧ処理は、肝臓における炎症ケモカイン及びサイトカインを低下させ、これは、グリシン又はセリンの補給が、ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨにおいて有益であることを示唆している。
【０３３０】
結論として、ＦＡＴＺＯマウスにおいて試験される３つ全てのアミノ酸組成物（ＬＩＶＲＱＮＡＣ、ＬＩＶＲＱＮＡＣ＋Ｇ及びＬＲＱＮＡＣ）は、ＮＡＦＬＤ活動性スコア、肝細胞風船様腫大、及び線維症を緩和する。これらのアミノ酸組成物は、ＮＡＳＨを治療するのに使用され得る。グリシン含有アミノ酸組成物は、肝臓炎症をさらに軽減することができ、これにより、肝線維症の軽減をもたらす。
【０３３１】
実施例６．アミノ酸組成物による対象の処理
本明細書に記載される試験は、２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）及び非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）に罹患した対象への、アミノ酸を含む組成物の投与を特徴とする。このプレＩＮＤ及びＩＲＢ承認試験の目的は、投与の６週間及び１２週間後に、インスリン感受性、グルコース及び脂質代謝の様々なマーカーを調べることによって、アミノ酸組成物の安全性及び忍容性並びにヒト生理学の構造及び機能に対するその影響を決定することであった。組成物は、１日３回の４つのスティックパックの投与（例えば、１日に合計で約７２ｇ、又は約２４ｇを１日３回）のために、スティックパケット当たり、約１ｇのＬ−ロイシン、約０．５ｇのＬ−イソロイシン、約０．５ｇのＬ−バリン、約１．５ｇのＬ−アルギニン（又は１．８１ｇのＬ−アルギニンＨＣｌ）、約２．０ｇのＬ−グルタミン、及び約０．１５ｇのＮ−アセチルシステインを含んでいた。
【０３３２】
この試験において、対象に、１２週間にわたって１日３回、アミノ酸組成物を与えた。アミノ酸を、１２オンスの水に溶解されるべき粉末形態で提供した。参加者に、１２週間の試験期間にわたってアミノ酸組成物を与えた。
【０３３３】
この試験の主要評価項目は、安全性及び忍容性であった。二次評価項目は、代謝、炎症及び線維症に関連するバイオマーカーによって、ヒト生理学に対する影響を調べることであった。評価を、ベースライン（１日目）、試験の６週、及び１２週の時点で行った。
【０３３４】
対象を選択するための主要な基準は、以下を含んでいた：１８歳以上７０歳以下の男性又は女性；書面によるインフォームド・コンセントを提供する意思があり、提供できる；スクリーニングの時点で６．５％以上及び１０％未満のＴ２ＤＭ又はヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）の病歴；以下の基準の１つによる脂肪肝疾患の実証：ａ．以下の方法の少なくとも１つによって３か月のスクリーニング中に確認された脂肪症の前歴：８％以上のＰＤＦＦを有するＭＲＩによる肝臓脂肪；３００ｄＢ／ｍ以上の制御減衰パラメータ（Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ａｔｔｅｎｕａｔｉｏｎ  Ｐａｒａｍｅｔｅｒ）を有するフィブロスキャン（Ｆｉｂｒｏｓｃａｎ）；グレードＩを超える非ＮＡＳＨ  ＮＡＦＬＤ脂肪症を示す肝臓生検。患者が、（４ａに示されるように）３か月のスクリーニング中に脂肪症のこの実証された前歴を有さない場合、１０％以上の肝臓脂肪スコアが、下式を用いて、スクリーニング時に実証されなければならない：
予測される肝臓脂肪パーセント＝１０＾（−０．８０５＋（０．２８２＊メタボリック・シンドローム［あり＝１／なし＝０］）＋（０．０７８＊２型糖尿病［あり＝２／なし＝０］）＋（０．５２５＊ｌｏｇ１０（インスリンｍＵ／Ｌ））＋（０．５２１＊ｌｏｇ１０（ＡＳＴ  Ｕ／Ｌ））−（０．４５４＊ｌｏｇ１０（ＡＳＴ／ＡＬＴ））３４
注記：インスリン、ＡＬＴ及びＡＳＴは、空腹時の血清試料において測定されるべきである。対象は、大きな体重の変動がなく、スクリーニング前の３か月以内に、運動、食事及び生活様式の一定の習慣がなければならず、すなわち、対象は、スクリーニングの時点で、過去３か月間にわたって体重の±３％以内であるべきである。スクリーニングの時点で３２ｋｇ／ｍ２以上のボディマス指数（ＢＭＩ）。ＭＲＩ機器が４５ｋｇ／ｍ２以上のＢＭＩを有する患者に対応できない部位については、４０〜４５ｋｇ／ｍ２の上限が適用され得る。対象は、スクリーニング前の少なくとも３か月間にわたってグルコースを低下させる薬剤（メトホルミン、スルホニル尿素、ジペプチジルペプチダーゼ−４［ＤＰＰ−４］阻害剤、ナトリウム−グルコース共輸送体２［ＳＧＬＴ２］阻害剤、又は長時間作用型基礎インスリンを含み得る）の一定の用量を継続し、試験期間にわたってそれらの薬剤の予測される用量の調節なしに同じ薬剤を服用し続ける予定でなければならない。除外される糖尿病関連の薬剤の詳細な一覧については、以下のセクション８を参照されたい。対象が、高血圧治療薬（例えば、β遮断薬、ヒドロクロロチアジド、ＡＣＥ阻害剤、アンジオテンシン受容体遮断薬）、脂質異常症のための薬剤（例えば、スタチン、フィブラート系薬）、及び甲状腺機能低下症のための薬剤（例えば、レボチロキシン）で同時に治療される場合、スクリーニング前の少なくとも３か月間にわたってこれらの薬剤の一定の用量及び投与計画を継続しており、試験期間にわたってそれらの薬剤の予測される用量の調節なしに同じ薬剤を服用し続ける予定である限り、その対象は試験に含まれ得る。対象は、ビタミン補充剤（例えば、マルチビタミン；ビタミンＥ＜４００ＩＵ／日）を服用し続けていてもよい。しかしながら、対象は、試験期間にわたって予測される用量の調節なしにスクリーニング前の少なくとも３か月間にわたってこれらのビタミン補充剤の一定の用量及び投与計画を継続していなければならない。妊娠の可能性がある女性対象は、スクリーニングの時点で血清妊娠検査陰性を有さなければならず、全試験期間中及び治験薬の最後の投与の後３０日間にわたって、異性との性交渉の際に極めて有効な避妊方法に同意し、使用しなければならない。妊娠の可能性は、無月経の期間を有する、子宮摘出、両側卵巣摘出を受けていないか、若しくは卵巣不全が医学的に確認されていない女性対象、又は５０歳未満の女性を指す。
【０３３５】
インスリン感受性、グルコース及び脂質代謝
ＬＩＶＲＱＮＡＣは、減少した空腹時グルコース（図１２Ａ）、空腹時インスリン（図１２Ｂ）及びＨＯＭＡ−ＩＲ（図１２Ｃ）、及びインスリン感受性のバイオマーカーである血漿中アディポネクチンの１２週目の時点での増加（図１２Ｄ）によって示されるように、主に、インスリン感受性を改善することによってグルコース恒常性を改善する。値は、平均＋／−ＳＥＭである。対象の数は、示される通りである。
【０３３６】
肝臓脂肪、体重及び脂肪酸酸化
ＬＩＶＲＱＮＡＣは、脂肪酸化を増加させる一方、肝臓脂肪を減少させ、体重の変化はない。
【０３３７】
ベースラインから６及び１２週までの肝臓脂肪（％）の平均変化をＭＲＩ−ＰＤＦＦによって測定し、ベースラインから６及び１２週までの体重（ｋｇ）の平均変化を測定し、平均レベル＋／−ＳＥＭが、図１２Ｅに示される。βヒドロキシ酪酸の血漿中レベルを測定し、平均レベル＋／−ＳＥＭが、図１２Ｆに示される。図１２Ｅは、投与期間中（最大で１２週間）の体重の有意な変化を示さないが、１２週の時点で、１日目（ベースライン）レベルと比較して肝臓脂肪レベルの低下を示した。さらに、アミノ酸組成物による処理は、β−ヒドロキシ酪酸のレベルを増加させた（図１２Ｆ、ｍｇ／ｄｌ、平均＋／−ＳＥＭ）。したがって、ＬＩＶＲＱＮＡＣは、β−ヒドロキシ酪酸の増加によって示されるように、脂肪酸酸化を増加させながら、体重を減少させずに肝臓脂肪を減少させた。
【０３３８】
この試験からの知見は、アミノ酸組成物が、好ましい安全性及び忍容性プロファイルを有し、インスリン抵抗性、グルコース恒常性の改善、及び脂質代謝の改善に関連するヒト身体の構造及び機能についてのバイオマーカーに影響を与えることを裏付けている。
【０３３９】
実施例７．トリグリセリドレベルを測定するための肝細胞モデル
肝細胞の細胞質におけるトリグリセリド（ＴＧ）蓄積は、ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨの特徴である。トリグリセリドレベルを低下させるアミノ酸の組合せＬ−ロイシン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−バリン、Ｌ−アルギニン、Ｌ−グルタミン、及びＮ−アセチルシステイン（ＬＩＶＲＱＮＡＣ）の能力を、ヒト初代肝細胞（Ｌｏｎｚａ，ＴＲＬ）を用いて評価した。
【０３４０】
細胞播種及び維持
２人の健常なヒトドナーからの初代肝細胞を、１０％の熱で不活性化したＦＢＳ（Ａｔｌａｎｔａ  Ｂｉｏ）、２ｍＭのＧｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ）、及び０．２％のＰｒｉｍｏｃｉｎ（ＩｎＶｉｖｏＧｅｎ）を補充した肝細胞平板培養培地（ウイリアムＥ培地（Ｇｉｂｃｏ）中で、２４ウェルコラーゲン被覆プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）中で、３．５ｅ０５細胞の密度で、０日目に播種し、３７℃、５％のＣＯ２で６時間インキュベートした。６時間後、細胞を２回洗浄し、３７℃、５％のＣＯ２で一晩インキュベートした。１日目に、細胞を２回洗浄し、２ｍＭのＧｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ）、及び１×ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）を補充した肝細胞用規定培地（Ｃｏｒｎｉｎｇ）を用いて、３７℃、５％のＣＯ２で２４時間インキュベートした。
【０３４１】
アミノ酸前処理
２日目に、細胞を、ＤＰＢＳ  １×（Ｇｉｂｃｏ）で２回洗浄し、
ａ．  １１ｍＭのグルコース（Ｓｉｇｍａ）、０．２７２ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ）、１×Ｐ／Ｓ（Ｇｉｂｃｏ）を補充した、血液中の平均生理学的濃度に基づいた所定の特別なアミノ酸濃度を含有するアミノ酸不含ＷＥＭ（ＵＳ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）；又は
ｂ．  ３０倍の所定のアミノ酸組成物ＬＩＶＲＱＮＡＣの１つの濃度を有する、上述される同じ培地
の中で維持した。
【０３４２】
細胞を、３７℃、５％のＣＯ２で２４時間にわたって規定培地（ａ．及びｂ．）中で維持した。
【０３４３】
遊離脂肪酸及びＬＩＶＲＱＮＡＣによる併用治療
２４時間の前処理の後、細胞を、上述される同じ培地中で維持し、１ｎｇ／ｍｌのＴＮＦ−α（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）又はビヒクルを補充した２：１（オレエート：パルミテート）の比率を有する２５０ｕＭの遊離脂肪酸（ＦＦＡ）に曝した。細胞を、遊離脂肪酸混合物（ＦＦＡ＋ＴＮＦα）±ＬＩＶＲＱＮＡＣとともに、最初の２４時間後に培地を交換しながら、３７℃、５％のＣＯ２で７２時間インキュベートした。
【０３４４】
７２時間後の細胞内トリグリセリドレベル
７２時間後、細胞を、冷ＰＢＳ  １×（Ｇｉｂｃｏ）で１回洗浄し、こすり取り、７５ｕｌの標準的な希釈剤（Ｃａｙｍａｎ）中に収集した。収集された細胞を、２５００ｒｐｍの速度で１分間ボルテックスした後、１分間ずつ２回の超音波処理（Ｅｌｍａｓｏｎｉｃ  ｓｏｎｉｃａｔｏｒ）を行った。４℃で１０分間にわたる１０００ｒｐｍでの遠心分離の後、上清を、トリグリセリド分析のために収集した。細胞内トリグリセリドレベルを、トリグリセリド比色分析キット（Ｃａｙｍａｎ）を用いて、製造業者の勧告にしたがって評価した。データを、ビシンコニン酸タンパク質アッセイキット（Ｓｉｇｍａ）を用いて、タンパク質の総量に対して正規化した。
【０３４５】
表８５は、遊離脂肪酸混合物（ＦＦＡ＋ＴＮＦα）＋ＦＦＡ＋ＴＮＦαベースライン（ＬＩＶＲＱＮＡＣ１倍）に対して正規化されたＬＩＶＲＱＮＡＣ（３０倍）で処理された２人の健常なドナーからの初代ヒト肝細胞におけるトリグリセリドレベルの倍率変化を示す。ｔ検定によって計算される統計的有意性は、ＬＩＶＲＱＮＡＣ３０倍による処理が、初代ヒト肝細胞の細胞質におけるトリグリセリドレベルを有意に低下させたことを示した。
【０３４６】
【表５３】
2021527671.tif 000054
【０３４７】
本発明は、好ましい実施形態及び様々な代替的な実施形態を参照して、具体的に示され、記載されているが、形態及び詳細の様々な変更が、本発明の趣旨及び範囲を逸脱せずに行われ得ることが、関連技術の当業者によって理解されるであろう。
【０３４８】
本明細書の本文内に引用される全ての参照文献、発行特許及び特許出願は、あらゆる目的のために、全体が参照により本明細書に援用される。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
2021527671.tif 000059
【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図３Ｅ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
2021527671.tif 000064
【図５】
2021527671.tif 000065
【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
2021527671.tif 000067
【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
2021527671.tif 000069
【図７】
2021527671.tif 000070
【図８Ａ−Ｌ】
2021527671.tif 000071
【図９】
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【図１０】
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【図１１】
2021527671.tif 000074
【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１２Ｄ】
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【図１２Ｅ】
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【図１２Ｆ】
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【国際調査報告】
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