(57)【要約】  本発明の主題は、補体−アナフィラトキシン  Ｃ５ａおよび／またはＣ３ａおよび／またはＣ４ａに結合し、それによってＣ５ａおよび／またはＣ３ａおよび／またはＣ４ａの活性を阻害する、眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬、たとえばタンパク質またはタンパク質断片である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
補体−アナフィラトキシンＣ５ａおよび／またはＣ３ａおよび／またはＣ４ａに結合し、それによって好ましくはＣ５ａおよび／またはＣ３ａおよび／またはＣ４ａの活性を阻害する、眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
【請求項２】
前記吸着薬は、タンパク質またはその断片、ペプチド、非ＩｇＧスキャフォールド、アプタマー、オリゴヌクレオチド、抗体または抗体様タンパク質、ペプチド模倣薬またはその断片を含む群から選択される、請求項１に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
【請求項３】
前記吸着薬は、創傷の治癒、特に角膜の創傷の治癒を促進するために投与される、請求項１または２に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
【請求項４】
前記吸着薬は、配列番号：２０または配列番号：２１で示されるアミノ酸配列を有する補体成分Ｃ５ａタンパク質のいくつかの重複ペプチド断片に結合しうる、ここで重複は抗体、抗体様タンパク質、または吸着薬および特定のペプチド断片の標的アミノ酸配列の重複を意味する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
【請求項５】
前記吸着薬は、配列番号：２２〜３４によるアミノ酸配列を有するタンパク質の断片内のエピトープまたは断片と重複するエピトープでのみＣ５ａに結合しうる、請求項４に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
【請求項６】
前記吸着薬は、配列番号：３５〜４０（配列番号：３５：  Ｘ1Ｘ2ＥＴＣＥＸ3ＲＸ4、配列番号：３６：  Ｘ5Ｘ6ＫＸ7Ｘ8Ｘ9Ｌ、および配列番号：３７：  Ｘ5Ｘ6ＫＸ7Ｘ8Ｘ9Ｉ）によるアミノ酸配列によって形成されるＣ５ａのエピトープにも結合しうる、ここでＸ1はＮ、Ｈ、Ｄ、Ｆ、Ｋ、Ｙ、およびＴからなる群から選択され；Ｘ2はＤ、Ｌ、Ｙ、およびＨからなる群から選択され；Ｘ3はＱ、Ｅ、およびＫからなる群から選択され；Ｘ4はＡ、Ｖ、およびＬからなる群から選択され；Ｘ5はＳ、Ｈ、Ｐ、およびＮからなる群から選択され；Ｘ6はＨおよびＮからなる群から選択され；Ｘ7はＤ、Ｎ、Ｈ、Ｐ、およびＧからなる群から選択され；Ｘ8はＭ、Ｌ、Ｉ、およびＶからなる群から選択され；およびＸ9はＱ、Ｌ、およびＩからなる群から選択される、請求項４に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
【請求項７】
前記吸着薬は、配列番号：４３で示されるアミノ酸配列を有する補体成分Ｃ３ａタンパク質のいくつかの重複ペプチド断片に結合しうる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
【請求項８】
前記吸着薬はまた、配列番号：４４〜４７によるアミノ酸配列を有するタンパク質の断片内のエピトープまたは断片と重複するエピトープでのみヒトＣ３ａに結合しうる、請求項７に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
【請求項９】
前記吸着薬は、配列番号：４８または配列番号：４９で示されるアミノ酸配列を有する補体成分Ｃ４ａタンパク質のいくつかの重複ペプチド断片に結合しうる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
【請求項１０】
前記吸着薬はまた、配列番号：５０によるアミノ酸配列を有するタンパク質の断片内のエピトープまたは断片と重複するエピトープでのみヒトＣ４ａに結合しうる、請求項９に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
【請求項１１】
前記吸着薬は、抗体または抗体様タンパク質である、請求項１〜１０に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
【請求項１２】
前記吸着薬はアプタマーである、請求項１〜１０に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
【請求項１３】
前記吸着薬はアプタマーであり、ここで前記アプタマーは配列番号：４１に開示されているようなＲＮＡおよび／またはＤＮＡからなる核酸分子に関連しうる、請求項１２に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
【請求項１４】
前記吸着薬はアプタマーであり、ここで前記アプタマーは配列番号：４１に開示されているようなＲＮＡおよび／またはＤＮＡからなる核酸分子に関連しうる、およびここで前記アプタマーは配列番号：４２からなるＣ５ａ上の結合部位に結合する、請求項１３に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
【請求項１５】
前記吸着薬は配列番号：１に記載のヒトＣ５Ｌ２タンパク質、配列番号：１のヒトＣ５Ｌ２タンパク質の全長アミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるタンパク質／ペプチドまたは断片、配列番号：２に記載のヒトＣ５ａＲ１タンパク質、配列番号：２のヒトＣ５ａＲ１タンパク質の全長アミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片、配列番号：３に記載のヒトＣ３ａＲタンパク質、配列番号：３のヒトＣ３ａＲタンパク質の全長アミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片、配列番号：４に記載のマウスＣ５Ｌ２タンパク質、配列番号：４のマウスＣ５Ｌ２タンパク質の全長アミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片、配列番号：５に記載のマウスＣ５ａＲ１タンパク質、配列番号：５のマウスＣ５ａＲ１タンパク質の全長アミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片、配列番号：６に記載のマウスＣ３ａＲタンパク質、および配列番号：６のマウスＣ３ａＲタンパク質の全長アミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片、を含む群から選択されるタンパク質またはタンパク質断片である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
【請求項１６】
前記吸着薬はタンパク質／ペプチドまたはタンパク質断片であり、配列番号：７に記載のアミノ酸配列、配列番号：８に記載のアミノ酸配列、配列番号：９に記載のアミノ酸配列、配列番号：１０に記載のアミノ酸配列、配列番号：１１に記載のアミノ酸配列、配列番号：１２に記載のアミノ酸配列、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列、配列番号：１４に記載のアミノ酸配列、配列番号：１５に記載のアミノ酸配列、配列番号：１６に記載のアミノ酸配列、配列番号：１７に記載のアミノ酸配列、および配列番号：７〜１７に記載のアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片、を含む群から選択される少なくとも一つの保存領域を含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
【請求項１７】
前記吸着薬はタンパク質／ペプチドまたはタンパク質断片であり、配列番号：７に記載のアミノ酸配列、配列番号：８に記載のアミノ酸配列、配列番号：９に記載のアミノ酸配列、配列番号：１０に記載のアミノ酸配列、配列番号：１１に記載のアミノ酸配列、配列番号：１２に記載のアミノ酸配列、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列、配列番号：１４に記載のアミノ酸配列、配列番号：１５に記載のアミノ酸配列、配列番号：１６に記載のアミノ酸配列、配列番号：１７に記載のアミノ酸配列、および配列番号：７〜１７に記載のアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片、を含む群から選択される少なくとも二つの保存領域を含む、請求項１６に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
【請求項１８】
前記吸着薬はタンパク質／ペプチドまたはタンパク質断片であり、配列番号：１８に記載のアミノ酸配列および配列番号：１９に記載のアミノ酸配列を含む群から選択される少なくとも一つの保存領域を含む、請求項１５〜１７のいずれか一項に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
【請求項１９】
眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の、少なくとも二つの吸着薬、好ましくはタンパク質またはタンパク質断片を含む組成物。
【請求項２０】
眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の、少なくとも三つのタンパク質またはタンパク質断片を含む組成物。
【請求項２１】
眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の吸着薬または請求項１９または２０に記載の組成物を含む、医薬組成物。
【請求項２２】
前記対象は、結膜炎および結膜瘢痕（眼類天疱瘡を含む）、強膜炎および上強膜炎、角膜潰瘍による角膜瘢痕および混濁、角結膜炎、角膜炎、水疱性角膜症、角膜変性症、虹彩毛様体炎ならびに虹彩および毛様体の癒着、脈絡網膜炎（ｃｈｏｒｉｏｒｅｔｉｎａｌ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）または変性または出血または破裂または血管新生に起因する脈絡網膜瘢痕／線維症、線維性硝子体網膜症（ｆｉｂｒｏｔｉｃ  ｖｉｔｒｅｏｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｉｅｓ）、たとえば増殖性硝子体網膜症、未熟児網膜症および糖尿病性網膜症；脈絡膜血管新生および黄斑変性症、続発性緑内障、眼内炎、および眼科手術または眼球内異物を含む外傷後の創傷治癒障害および線維症、を含む群から選択される疾患に罹患している、対象の治療における使用のための、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の吸着薬、または請求項１９または２０に記載の組成物、または請求項２１の医薬組成物。
【請求項２３】
前記対象は、（特発性）肺線維症、皮膚ケロイド形成、強皮症、骨髄線維症、腎臓線維症、膵臓線維症、および心臓線維症、ならびに（非）アルコール性脂肪性肝炎、糸球体腎炎、および（ＡＮＣＡ関連）血管炎における線維症を含む群から選択される疾患に罹患している、対象の治療における使用のための、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の吸着薬、または請求項１９または２０に記載の組成物、または請求項２１の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の主題は、補体−アナフィラトキシン  Ｃ５ａおよび／またはＣ３ａおよび／またはＣ４ａに結合し、それによってＣ５ａおよび／またはＣ３ａおよび／またはＣ４ａの活性を阻害する、眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬、たとえばタンパク質またはタンパク質断片またはペプチドである。
【背景技術】
【０００２】
先行技術
視力の深刻な喪失に関連する変性眼疾患は、誤った血管新生または創傷治癒／線維化の結果であることが非常に多い（Ｆｒｉｅｄｌａｎｄｅｒ  Ｍ．  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．  ２００７）。
【０００３】
血管眼疾患の治療は、深い研究および抗ＶＥＧＦ治療薬（血管内皮増殖因子、ＶＥＧＦ）の導入によって大幅に改善されたが(Ｌｉｍ  ＬＳ  ｅｔ  ａｌ．  Ｌａｎｃｅｔ  ２０１２；  Ｆｅｉｇｌ  Ｂ．  Ｐｒｏｇ  Ｒｅｔｉｎ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ  ２００９；  Ｊｏｕｓｓｅｎ  ＡＭ  ｅｔ  ａｌ．  ＦＡＳＥＢ  Ｊ  ２００４）、線維性眼疾患の治療は、治療アプローチにおいてまだ欠けている。
【０００４】
誤った創傷治癒および線維化は、特に角膜に最も関連性がある。角膜線維症は、視力を実質的に妨げる光透過性の喪失をもたらし、影響を受けた眼の失明をもたらす可能性がある。角膜瘢痕は、角膜ヘルペス感染、微生物性角膜炎、機械的または化学的病変（ｍｅｃｈａｎｉｃ  ｏｒ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｆｆｅｃｔｉｏｎ）、間質性角膜症、内皮代償不全または角膜移植片不全による持続性角膜浮腫（ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｅｄｅｍａ）に基づいて生じる可能性がある。今日、ほとんどの場合、全層角膜移植（ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）は視力を回復するための唯一の治療選択肢である。この点に関して、コンタクトレンズまたは角膜レーザー屈折矯正手術に起因する、角膜線維症に関連する、行われた角膜移植の数および重度の角膜合併症の数が増加している。上記にもかかわらず、角膜病変を伴う、関連する眼の外傷に苦しむ生涯のリスクは２０％を占める（Ｌｊｕｂｉｍｏｖ  ＡＶ  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｇ  Ｒｅｔｉｎ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ  ２０１５）。眼の線維形成を阻害する現在の治療オプションは非常に限られており、主にコルチコステロイドおよびシクロスポリンＡ（ＣＳＡ）に関連する。どちらの物質も非特異的な有効性を有しており、様々な副作用を伴う。この点で、コルチコステロイドは、白内障の発症および眼圧上昇を誘発するだけでなく、全身性の有害事象、たとえばクッシング症候群および血液パラメーター（ブドウ糖）の変化も引き起こす。ＣＳＡは作用の発現が遅く、通常は反応が遅すぎて線維症を予防できないため、ＣＳＡは急性治療には適していない。その局所投与は目の刺痛および発赤を伴い、全身性の有害事象、特に動脈性高血圧も引き起こす。
【０００５】
しかしながら、この治療上のジレンマは、上記の例で述べたように、角膜だけでなく、しかし、この治療上のジレンマは、上記の例で述べたように角膜だけでなく、結膜、強膜、虹彩、線維柱帯網、硝子体、網膜、脈絡膜、および視神経乳頭で発生する眼の線維芽細胞および筋線維芽細胞を含む、眼疾患における誤った（ｍｉｓｌｅｄ）創傷治癒および瘢痕化の様々な状態での組織線維症にも関連している。さらに、線維芽細胞の活性化および／または分化に関連する、線維症および瘢痕化に関与する基本的な病態生理学的プロセスは、同様に、肺、肝臓、腎臓、膵臓、心臓、皮膚、および血管系の線維性疾患に関連している。このような背景に対して、眼の線維症および上位の線維性状態の治療のための新規の治療オプションの確立は、臨床的にかなり重要である。
【０００６】
生理学的創傷治癒は、いくつかの組織プロセスに介入し、細胞移動および／または形質転換、増殖、および細胞外マトリックスの調節のシーケンスに従う（Ｌｊｕｂｉｍｏｖ  ＡＶ  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｇ  Ｒｅｔｉｎ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ  ２０１５）；一方、活性化線維芽細胞および筋線維芽細胞は主要なメディエーターである（Ｇａｂｂｉａｎｉ  Ｇ．，  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  ２００３）。創傷治癒の通常の過程で、可逆的なタンパク質沈着が細胞外マトリックス内に蓄積される（Ｗｙｎｎ  ＴＡ  ｅｔ  ａｌ．  ＮＡＴ  Ｍｅｄ  ２０１２）。しかし、線維化促進カスケードおよび線維化抑制カスケードの調節不全によって引き起こされる線維性リモデリングの状況では、永続的な筋線維芽細胞の活性化が出現し、マトリックスタンパク質、たとえばコラーゲン、フィブロネクチン、プロテオグリカンの恒常的な不可逆的な沈着につながる可能性がある（Ｍｅｄｚｈｉｔｏｖ  Ｒ．  Ｃｅｌｌ  ２０１０；  Ｗｙｎｎ  ＴＡ，  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．  ２００８）。
【０００７】
前述のことに基づいて、筋線維芽細胞の阻害およびそれらの活性化は、創傷治癒プロセスを通常のクリアランスメカニズムに選択的に向け、それによって組織の線維症および瘢痕化を予防しうる。しかし、眼の筋線維芽細胞の抑制に関しては、眼の解剖学的特殊性を考慮する必要がある。第一に、血液眼関門（ｂｌｏｏｄ−ｏｃｕｌａｒ  ｂａｒｒｉｅｒ）は、全身的に適用される阻害剤／調節剤、特にタンパク質／ペプチドに基づくものの有効性を妨げる。第二に、直接投与（たとえば、点眼薬の形での局所投与）は、治療されることを意図されている組織への阻害剤／調節剤の浸透を必要とする。したがって、阻害剤／調節剤は、結膜、強膜、虹彩、線維柱帯網、硝子体、網膜、脈絡膜、さらには視神経乳頭に浸透するくらい小さい必要がある。分子量２８〜６７  ｋＤａのタンパク質は、角膜上皮が無傷の状態で角膜を貫通して前房に入ることができるが、分子量６０〜９０  ｋＤａのタンパク質は、角膜上皮の除去後に角膜を貫通して前房に入ることができる（Ｔｈｉｅｌ  ＭＡ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００２）。モノクローナル抗体（抗ＶＥＧＦ抗体、ベバシズマブ：１４９  ｋＤａ）等の特定の阻害剤の従来の治療アプローチは、これらの条件を満たさない。
【発明の概要】
【０００８】
本発明の目的は、先行技術の方法の欠点を克服する、眼の創傷または線維症を有する対象の治療を提供することであった。
【０００９】
したがって、本発明の目的は、線維芽細胞／筋線維芽細胞の活性化および／または分化転換のプロセスを阻害する、すなわち、少なくとも本質的に線維芽細胞／筋線維芽細胞の活性化および／または分化転換のプロセスを阻害し、好ましくは９０  ｋＤａ未満、好ましくは８０  ｋＤａ以下、好ましくは７０  ｋＤａ以下、より好ましくは６０  ｋＤａ以下、より好ましくは５０  ｋＤａ以下、より好ましくは４５  ｋＤａ以下、より好ましくは４０  ｋＤａ以下、さらにより好ましくは３５  ｋＤａ以下、さらにより好ましくは３０  ｋＤａ以下、さらにより好ましくは２５  ｋＤａ以下、さらにより好ましくは２０  ｋＤａ以下、さらにより好ましくは１５  ｋＤａ以下、およびさらにより好ましくは１０  ｋＤａ以下の分子量を有する物質を提供することである。
【００１０】
本発明の主題は、補体−アナフィラトキシン  Ｃ５ａおよび／またはＣ３ａおよび／またはＣ４ａに結合し、好ましくはそれによってＣ５ａおよび／またはＣ３ａおよび／またはＣ４ａの活性を阻害する、眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬、具体的にはタンパク質またはタンパク質断片である。
【００１１】
Ｃ５ａおよび／またはＣ３ａおよび／またはＣ４ａの活性を阻害することは、Ｃ５ａおよび／またはＣ３ａおよび／またはＣ４ａに結合することによって、Ｃ５ａおよび／またはＣ３ａおよび／またはＣ４ａの活性を本質的に阻害することを意味する。
【００１２】
本発明の主題は、眼の創傷または線維症を有する対象の治療に使用するための吸着薬であり、ここで上記吸着薬は、創傷治癒、特に角膜創傷治癒を促進するために投与される。
【００１３】
吸着薬は、タンパク質またはその断片、ペプチド、非ＩｇＧスキャフォールド、特にアプタマー、オリゴヌクレオチド、抗体または抗体様タンパク質、ペプチド模倣薬を含む群から選択してもよい。
【００１４】
上記のような抗体、抗体様タンパク質、または吸着薬は、補体成分Ｃ５ａタンパク質のいくつかの重複するペプチド断片（たとえば、配列番号：２０または配列番号：２１で示されるアミノ酸配列を有するヒトＣ５ａタンパク質のいくつかの重複する断片）に結合しうる。ここで、重複は、屋体、抗体様タンパク質、または吸着薬の標的アミノ酸配列と特定のペプチド断片の重複を意味する。抗体、抗体様タンパク質、または吸着薬はまた、配列番号：２２〜３４によるアミノ酸配列を有するタンパク質の断片内のエピトープまたは断片と重複するエピトープでのみヒトＣ５ａに結合しうる（たとえば、Ｃｏｏｋｅｔａｌ．  （２０１０）  Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔ  Ｄ６６：１９０−１９７を参照のこと、また米国特許出願第２０１６／０１５９８９２号に記載されている通り）。さらに、抗体、抗体様タンパク質、または吸着薬はまた、配列番号：３５〜４０（配列番号：３５：  Ｘ1Ｘ2ＥＴＣＥＸ3ＲＸ4、配列番号：３６：  Ｘ5Ｘ6ＫＸ7Ｘ8Ｘ9Ｌ、および配列番号：３７：  Ｘ5Ｘ6ＫＸ7Ｘ8Ｘ9Ｉ）によるアミノ酸配列によって形成されるＣ５ａのエピトープにも結合しうる。ここでＸ1はＮ、Ｈ、Ｄ、Ｆ、Ｋ、Ｙ、およびＴからなる群から選択され；Ｘ2はＤ、Ｌ、Ｙ、およびＨからなる群から選択され；Ｘ3はＱ、Ｅ、およびＫからなる群から選択され；Ｘ4はＡ、Ｖ、およびＬからなる群から選択され；Ｘ5はＳ、Ｈ、Ｐ、およびＮからなる群から選択され；Ｘ6はＨおよびＮからなる群から選択され；Ｘ7はＤ、Ｎ、Ｈ、Ｐ、およびＧからなる群から選択され；Ｘ8はＭ、Ｌ、Ｉ、およびＶからなる群から選択され；およびＸ9はＱ、Ｌ、およびＩからなる群から選択される（米国特許出願第２０１２／０２３１００８号、米国特許出願第２０１７／０００２０６７号、国際公開第２０１１／０６３９８０号、および米国特許第８８０２０９６号）。
【００１５】
上記のような抗体、抗体様タンパク質、または吸着薬は、補体成分Ｃ３ａタンパク質のいくつかの重複ペプチド断片（たとえば、配列番号：４３で示されるアミノ酸配列を有するヒトＣ３ａタンパク質のいくつかの重複する断片）に結合しうる。抗体、抗体様タンパク質、または吸着薬はまた、配列番号：４４〜４７によるアミノ酸配列を有するタンパク質の断片内のエピトープまたは断片と重複するエピトープでのみヒトＣ３ａに結合しうる（たとえば、Ｈｕｇｌｉ  ＴＥ．  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．  １９７５；  Ｈｕｇｌｉ  ＴＥ  ｅｔ  ａｌ．  ＰＮＡＳ  １９７７；  Ｐａｙａｎ  Ｄ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．  １９８２を参照のこと）。
【００１６】
上記のような抗体、抗体様タンパク質、または吸着薬は、補体成分Ｃ４ａタンパク質のいくつかの重複ペプチド断片（たとえば、配列番号：４８または配列番号：４９で示されるアミノ酸配列を有するヒトＣ４ａタンパク質のいくつかの重複する断片）に結合しうる。抗体、抗体様タンパク質、または吸着薬はまた、配列番号：５０によるアミノ酸配列を有するタンパク質の断片内のエピトープまたは断片と重複するエピトープでのみヒトＣ４ａに結合しうる（たとえば、Ｙｕ  ＣＹ  ｅｔ  ａｌ．  ＥＭＢＯ  Ｊ．  １９８６；  Ｎｅｔｔｅｓｈｅｉｍ  Ｄ．Ｇ．  ｅｔ  ａｌ．  ＰＮＡＳ  １９８８を参照のこと）。
【００１７】
ペプチドは、一方の酸のカルボキシル基が他方のアミノ基に結合している少なくとも二つのアミノ酸からなる化合物として定義され、ペプチド合成によって作成することができる。したがって、本発明について定義されるように、ペプチドは、２〜５０アミノ酸を有してもよい。本発明の定義によれば、タンパク質は５０を超えるアミノ酸を含む。
【００１８】
タンパク質は、二つ以上のペプチドのタンパク質ライゲーション、組換え発現、またはタンパク質生合成によって作成できるペプチド結合によって連結された、アミノ酸またはペプチドの一つまたは複数の鎖からなる高分子として定義される。
【００１９】
タンパク質断片は、鋳型として機能したタンパク質に由来するアミノ酸配列のセクションとして定義される。
【００２０】
本発明による抗体は、抗原に特異的に結合する免疫グロブリン遺伝子によって実質的にコードされる一つまたは複数のポリペプチドを含むタンパク質である。認識されている免疫グロブリン遺伝子は、カッパ、ラムダ、アルファ（ＩｇＡ）、ガンマ（ＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3、ＩｇＧ4）、デルタ（ＩｇＤ）、イプシロン（ＩｇＥ）、およびミュー（ＩｇＭ）定常領域遺伝子、ならびに種々の免疫グロブリン可変領域遺伝子を含む。全長の免疫グロブリン軽鎖は、一般に約２５  ｋＤａまたは２１４アミノ酸の長さである。全長の免疫グロブリン重鎖は、一般に、約５０  ｋＤａまたは４４６アミノ酸の長さである。軽鎖は、ＮＨ２末端の可変領域遺伝子（長さ約１１０アミノ酸）およびＣＯＯＨ末端のカッパまたはラムダ定常領域遺伝子によってコードされている。重鎖は、可変領域遺伝子（長さ約１１６アミノ酸）および他の定常領域遺伝子の一つによって同様にコードされている。
【００２１】
抗体の基本的な構造単位は、一般に、免疫グロブリン鎖の２つの同一のペアからなる四量体であり、各ペアは１つの軽鎖と１つの重鎖を有する。各ペアでは、軽鎖および重鎖の可変領域が抗原に結合し、定常領域がエフェクター機能を仲介する。免疫グロブリンはまた、たとえば、Ｆｖ、Ｆａｂ、および（Ｆａｂ’）2、ならびに二機能性ハイブリッド抗体および一本鎖（たとえば、Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １７：１０５，１９８７；  Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．，  ８５：５８７９−５８８３，  １９８８；  Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６，  １９８８；  Ｈｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  Ｂｅｎｊａｍｉｎ，  Ｎ．Ｙ．，  ２ｎｄ  ｅｄ．，  １９８４；  Ｈｕｎｋａｐｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｈｏｏｄ，  Ｎａｔｕｒｅ  ３２３：１５−１６，１９８６）に存在する。免疫グロブリン軽鎖または重鎖可変領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）とも呼ばれる３つの超可変領域によって割り込まれたフレームワーク領域を含む（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｅ．  Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  １９８３を参照のこと）。上記のように、ＣＤＲは主に抗原のエピトープへの結合に関与する。免疫複合体は、抗原に特異的に結合した、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体等の抗体、または機能的抗体断片である。
【００２２】
キメラ抗体は、その軽鎖遺伝子および重鎖遺伝子は典型的には遺伝子工学によって、異なる種に属する免疫グロブリン可変領域および定常領域遺伝子から構築される。たとえば、マウスモノクローナル抗体由来の遺伝子の可変セグメントをヒト定常セグメント、たとえばカッパおよびガンマ１またはガンマ３に連結することができる。一つの例では、治療的キメラ抗体は、したがってマウス抗体由来の可変領域または抗原結合領域およびヒト抗体由来の定常領域またはエフェクター領域で構成されるハイブリッドタンパク質であるが、一方で他の哺乳動物を使用してもよく、または可変領域は分子技術によって作成してもよい。キメラ抗体の作製方法は、当技術分野で周知であり、たとえば米国特許第５，８０７，７１５号を参照されたい。「ヒト化」免疫グロブリンは、ヒトのフレームワーク領域および非ヒト（たとえば、マウス、ラット、または合成）免疫グロブリン由来の一つまたは複数のＣＤＲを含む免疫グロブリンである。ＣＤＲを提供する非ヒト免疫グロブリンを「ドナー」と名付け、フレームワークを提供するヒト免疫グロブリンを「アクセプター」と名付ける。一つの実施形態では、ヒト化免疫グロブリンのすべてのＣＤＲはドナー免疫グロブリン由来である。定常領域は存在する必要はないが、存在する場合、それらはヒト免疫グロブリン定常領域と実質的に同一でなければならない、すなわち、少なくとも約８５〜９０％、たとえば約９５％以上同一でなければならない。したがって、おそらくＣＤＲを除いて、ヒト化免疫グロブリンのすべての部分は、天然のヒト免疫グロブリン配列の対応する部分と実質的に同一である。「ヒト化抗体」は、ヒト化軽鎖およびヒト化重鎖免疫グロブリンを含む抗体である。ヒト化抗体は、ＣＤＲを提供するドナー抗体と同じ抗原に結合する。ヒト化免疫グロブリンまたは抗体のアクセプターフレームワークは、ドナーフレームワークから取られたアミノ酸による限られた数の置換を有してもよい。ヒト化抗体または他のモノクローナル抗体は、追加の保存的アミノ酸置換を有してもよく、これは、抗原結合または他の免疫グロブリン機能に実質的に影響を及ぼさない。例示的な保存的置換は、ｇｌｙ、ａｌａ；ｖａｌ、ｉｌｅ、ｌｅｕ；ａｓｐ、ｇｌｕ；ａｓｎ、ｇｌｎ；ｓｅｒ、ｔｈｒ；ｌｙｓ、ａｒｇ；およびｐｈｅ、ｔｙｒ等のものである。ヒト化免疫グロブリンは、遺伝子工学によって構築することができる（たとえば、米国特許第５，５８５，０８９号を参照のこと）。ヒト抗体は、軽鎖および重鎖遺伝子がヒト由来である抗体である。ヒト抗体は、当技術分野で知られている方法を使用して生成することができる。ヒト抗体は、所望の抗体を分泌するヒトＢ細胞を不死化することによって産生することができる。不死化は、たとえば、ＥＢＶ感染によって、またはヒトＢ細胞を骨髄腫またはハイブリドーマ細胞と融合させてトリオーマ細胞（ｔｒｉｏｍａ  ｃｅｌｌ）を産生することによって達成することができる。ヒト抗体は、ファージディスプレイ法によっても産生すること（たとえば、Ｄｏｗｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ＰＣＴ公開番号ＷＯ９１／１７２７１号；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，  ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／００１０４７号;およびＷｉｎｔｅｒ，  ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／２０７９１号を参照のこと）、またはヒトコンビナトリアルモノクローナル抗体ライブラリーから選択すること（（ＭｏｒｐｈｏｓｙｓのＷｅｂサイトを参照）ができる。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子を保有するトランスジェニック動物を使用することによっても調製することができる（たとえば、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ＰＣＴ公開番号ＷＯ９３／１２２２７号；およびＫｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ，  ＰＣＴ公開番号ＷＯ９１／１０７４１号を参照）。
【００２３】
したがって、本発明による抗体は、当技術分野で知られているフォーマットを有しうる。例としては、ヒト抗体、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体（ＣＤＲ−ｇｒａｆｔｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）がある。好ましい実施形態では、本発明による抗体は、たとえばＦａｂミニボディ、一本鎖Ｆａｂ抗体、エピトープタグを有する一価Ｆａｂ抗体、たとえばＦａｂ−Ｖ５Ｓｘ２を含むがこれらに限定されない、たとえば化学的に結合した抗体（断片抗原結合）のような少なくとも重鎖および／または軽鎖のＦ可変領域を含む組換えにより産生された抗体、たとえばＩｇＧ（典型的な全長免疫グロブリン）または抗体断片；ＣＨ３ドメインで二量化した二価Ｆａｂ（ミニ抗体）；たとえば異種ドメインの助けを借りて多量体化を介して、たとえばｄＨＬＸドメインの二量体化を介して形成される二価のＦａｂまたは多価のＦａｂ、たとえばＦａｂ−ｄＨＬＸ−ＦＳｘ２；Ｆ（ａｂ‘)２−断片，  ｓｃＦｖ断片、多量体化多価または／および多重特異性ｓｃＦｖ断片、二価および／または二重特異性ダイアボディ、ＢＩＴＥ（登録商標）（二重特異性細胞誘導［ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｅｎｇａｇｅｒ］）、三機能性抗体、多価抗体、たとえばＧとは異なるクラス由来のもの；単一ドメイン抗体、たとえばラクダまたは魚の免疫グロブリンに由来するナノボディおよびその他多数である。
【００２４】
抗体に加えて、他の生体高分子スキャフォールドは、標的分子を複合化することが当技術分野で周知であり、高度に標的特異的な生体高分子の生成に使用されてきた。例としては、アプタマー、シュピーゲルマー（ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒ）、アンチカリン（ａｎｔｉｃａｌｉｎ）、コノトキシンがある。
【００２５】
好ましい実施形態では、抗体フォーマットはＦｖ断片、ｓｃＦｖ断片、Ｆａｂ断片、ｓｃＦａｂ断片、（Ｆａｂ）２断片、およびｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質を含む群から選択される。別の好ましい実施形態では、抗体フォーマットはｓｃＦａｂ断片、Ｆａｂ断片、ｓｃＦｖ断片、およびそれらの生物学的利用能が最適化されたコンジュゲート、たとえば、ＰＥＧ化断片を含む群から選択される。一つの特定のフォーマットはｓｃＦａｂフォーマットである。
【００２６】
非Ｉｇスキャフォールドはタンパク質スキャフォールドであってもよく、それらはリガンドまたは抗原に結合することができるので抗体模倣物として使用されうる。非Ｉｇスキャフォールドは、テトラネクチンベースの非Ｉｇスキャフォールド（たとえば、米国特許出願第２０１０／００２８９９５号に記載）、フィブロネクチンスキャフォールド（たとえば、欧州特許第１２６６  ０２５号に記載）；リポカリンベースのスキャフォールド（たとえば、国際公開第２０１１／１５４４２０号に記載）、ユビキチンスキャフォールド（たとえば国際公開第２０１１／０７３２１４号に記載）、転移スキャフォールド（例えば米国特許出願第２００４／００２３３３４号に記載）、プロテインＡスキャフォールド（たとえば欧州特許第２２３１８６０号に記載）、アンキリンリピートベースのスキャフォールド（たとえば国際公開第２０１０／０６０７４８号に記載）、微小タンパク質（ｍｉｃｒｏｐｒｏｔｅｉｎ）、好ましくはシスチンノットを形成する微小タンパク質）スキャフォールド（たとえば欧州特許第２３１４３０８号に記載）、Ｆｙｎ  ＳＨ３ドメインベースのスキャフォールド（たとえば国際公開第２０１１／０２３６８５号に記載）、ＥＧＦＲ−Ａ−ドメインベースのスキャフォールド（たとえば国際公開第２００５／０４０２２９号に記載）、およびクニッツドメインベースのスキャフォールド（たとえば、欧州特許第１９４１８６７号に記載）を含む群から選択してもよい。
【００２７】
非免疫グロブリン（日ＩｇＧ）スキャフォールドは小さい抗体代替物として定義されている。アプタマーは特定の標的に結合する分子として定義され、ＲＮＡおよび／またはＤＮＡおよび／またはアミノ酸（ペプチド）で構成されていてもよい。
【００２８】
アプタマーは、たとえば配列番号：４１（５’−ＧＣＧＡＵ  Ｇ（ｄＵ）ＧＧＵ  ＧＧＵ（ｄＧ）（ｄＡ）  ＡＧＧＧＵ  ＵＧＵＵＧ  ＧＧ（ｄＵ）Ｇ（ｄＵ）  ＣＧＡＣＧ  ＣＡ（ｄＣ）ＧＣ−３）に開示されているように、ＲＮＡおよび／またはＤＮＡからなる核酸分子と関連していてもよく、および米国特許出願第２０１２／００６５２５４号に記載されているように、Ｃ５ａに結合することができるが、Ｃ５ａの結合部位は配列番号：４２（Ｙａｔｉｍｅ  Ｌ．  ｅｔ  ａｌ．  ＮＡＴ  Ｃｏｍｍｕｎ．  ２０１５を参照）を含むＣ５ａアミノ酸配列を含む。
【００２９】
本発明による本発明の抗体の一つの実施形態は、以下のように生成することができる：
Ｂａｌｂ／ｃマウスを０日目と１４日目に抗原−１００  μｇペプチド−ＢＳＡコンジュゲート（ＢＳＡ＝ウシ血清アルブミン）で免疫し（１００  μｌの完全フロイントアジュバントに乳化）、２１日目と２８日目に５０  μｇ（１００  μｌの不完全フロイントアジュバントに）免疫した。
【００３０】
免疫したマウスの脾細胞および骨髄腫細胞株ＳＰ２／０の細胞を、１  ｍｌの５０％ポリエチレングリコールと３７℃で３０秒間融合させた。洗浄後、細胞を９６ウェル細胞培養プレートに播種した。ハイブリッドクローンを、ＨＡＴ培地（２０％ウシ胎児血清およびＨＡＴ培地サプリメントを添加したＲＰＭＩ（Ｒｏｓｗｅｌｌ  Ｐａｒｋ  Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）１６４０培地）で増殖させることにより選択した。２週間後、ＨＡＴ培地をＨＡＴ培地に３回継代した後、通常の細胞培養培地に戻す。
【００３１】
細胞培養上清を、融合の３週間後に抗原特異的ＩｇＧ抗体について一次スクリーニングした。陽性の試験した微小培養物（ｍｉｃｒｏｃｕｌｔｕｒｅ）を、増殖のために２４ウェルプレートに移した。再試験後、選択した培養物を限界希釈法を使用してクローン化し、再クローン化し、アイソタイプを決定した（Ｌａｎｅ，  Ｒ．Ｄ．  （１９８５）．  Ａ  ｓｈｏｒｔ−ｄｕｒａｔｉｏｎ  ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｆｕｓｉｏｎ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ  ｆｏｒ  ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ  ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈ．  ８１：  ２２３−２２８；  Ｚｉｅｇｌｅｒ，  Ｂ．  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）  Ｇｌｕｔａｍａｔｅ  ｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ  （ＧＡＤ）  ｉｓ  ｎｏｔ  ｄｅｔｅｃｔａｂｌｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｏｆ  ｒａｔ  ｉｓｌｅｔ  ｃｅｌｌｓ  ｅｘａｍｉｎｅｄ  ｂｙ  ｃｙｔｏｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｙ  ａｎｄ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ＧＡＤ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  Ｈｏｒｍ．  Ｍｅｔａｂ．  Ｒｅｓ．  ２８：  １１−１５も参照）。
【００３２】
抗体は、以下の手順に従ってファージディスプレイによって生成することができる：
ペプチドに対する組換え一本鎖Ｆ可変領域（ｓｃＦｖ）の単離には、ヒトナイーブ抗体遺伝子ライブラリーＨＡＬ７／８を使用した。抗体遺伝子ライブラリーを、２つの異なるスペーサーを介してペプチド配列に連結されたビオチンタグを含むペプチドの使用を含むパンニング戦略でスクリーニングした。非特異的結合抗原およびストレプトアビジン結合抗原を使用したパンニングラウンドの混合物を使用して、非特異的結合剤のバックグラウンドを最小化した。３回目のパンニングで溶出したファージは、Ｅ．ｃｏｌｉ株を発現するモノクローナルｓｃＦｖの生成に使用した。これらのクローン株の培養由来の上清を、抗原ＥＬＩＳＡ試験に直接使用した（Ｈｕｓｔ，  Ｍ．，  Ｍｅｙｅｒ，  Ｔ．，  Ｖｏｅｄｉｓｃｈ，  Ｂ．，  Ｒｕｅｌｋｅｒ，  Ｔ．，  Ｔｈｉｅ，  Ｈ．，  Ｅｌ−Ｇｈｅｚａｌ，  Ａ．，  Ｋｉｒｓｃｈ，  Ｍ．Ｉ．，  Ｓｃｈｕｅｔｔｅ，  Ｍ．，  Ｈｅｌｍｓｉｎｇ，  Ｓ．，  Ｍｅｉｅｒ，  Ｄ．，  Ｓｃｈｉｒｒｍａｎｎ，  Ｔ．，  Ｄｕｅｂｅｌ，  Ｓ．，  ２０１１．  Ａ  ｈｕｍａｎ  ｓｃＦｖ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｐｉｐｅｌｉｎｅ  ｆｏｒ  ｐｒｏｔｅｏｍｅ  ｒｅｓｅａｒｃｈ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １５２，  １５９−１７０；  Ｓｃｈｕｅｔｔｅ，  Ｍ．，  Ｔｈｕｌｌｉｅｒ，  Ｐ．，  Ｐｅｌａｔ，  Ｔ．，  Ｗｅｚｌｅｒ，  Ｘ．，  Ｒｏｓｅｎｓｔｏｃｋ，  Ｐ．，  Ｈｉｎｚ，  Ｄ．，  Ｋｉｒｓｃｈ，  Ｍ．Ｉ．，Ｈａｓｅｎｂｅｒｇ，  Ｍ．，  Ｆｒａｎｋ，  Ｒ．，  Ｓｃｈｉｒｒｍａｎｎ，  Ｔ．，  Ｇｕｎｚｅｒ，  Ｍ．，  Ｈｕｓｔ，  Ｍ．，  Ｄｕｅｂｅｌ，  Ｓ．，  ２００９．  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｐｕｔａｔｉｖｅ  Ｃｒｆ  ｓｐｌｉｃｅ  ｖａｒｉａｎｔ  ａｎｄ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ．  ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ４，  ｅ６６２５を参照）
【００３３】
マウス抗体のヒト化は以下の手順に従って行われた：
マウス由来の抗体をヒト化するために、フレームワーク領域（ＦＲ）と相補性決定領域（ＣＤＲ）および抗原との構造的相互作用のために抗体配列を分析する。構造モデリングに基づいて、ヒト由来の適切なＦＲを選択し、マウスＣＤＲ配列をヒトＦＲに移植する。ＣＤＲまたはＦＲのアミノ酸配列のバリエーションを導入して、ＦＲ配列の種の切り替えによって廃止された構造的相互作用を回復することができる。この構造的相互作用の回復は、ファージディスプレイライブラリーを使用するランダムアプローチによって、または分子モデリングによって導かれる指向的アプローチ（ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ａｐｐｒｏａｃｈ）によって達成されうる（Ａｌｍａｇｒｏ  ＪＣ，  Ｆｒａｎｓｓｏｎ  J．，  ２００８．  Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．  Ｆｒｏｎｔ  Ｂｉｏｓｃｉ．  ２００８  Ｊａｎ  １；１３：１６１９−３３を参照）。
【００３４】
好ましい実施形態では、抗体フォーマットはＦｖ断片、ｓｃＦｖ断片、Ｆａｂ断片、ｓｃＦａｂ断片、Ｆ（ａｂ）2断片、およびｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質を含む群から選択される。別の好ましい実施形態では、抗体フォーマットは、ｓｃＦａｂ断片、Ｆａｂ断片、ｓｃＦｖ断片、およびそれらの生物学的利用能が最適化されたコンジュゲート、たとえば、ＰＥＧ化断片を含む群から選択される。最も好ましいフォーマットの一つはｓｃＦａｂフォーマットである。
【００３５】
本発明の一つの実施形態では、上記吸着薬、たとえば本発明によるタンパク質またはそのタンパク質断片は、Ｃ５ａおよびＣ３ａに結合し、それにより、Ｃ５ａおよびＣ３ａの活性を阻害する。
【００３６】
本発明の一つの実施形態では、上記吸着薬、たとえば本発明によるタンパク質またはそのタンパク質断片は、Ｃ５ａおよびＣ４ａに結合し、それにより、Ｃ５ａおよびＣ４ａの活性を阻害する。
【００３７】
本発明の一つの実施形態では、上記吸着薬、たとえば本発明によるタンパク質またはそのタンパク質断片は、Ｃ３ａおよびＣ４ａに結合し、それにより、Ｃ３ａおよびＣ４ａの活性を阻害する。
【００３８】
本発明の一つの実施形態では、上記吸着薬、たとえば本発明によるタンパク質またはそのタンパク質断片は、Ｃ５ａおよびＣ３ａおよびＣ４ａに結合し、それにより、Ｃ５ａおよびＣ３ａおよびＣ４ａの活性を阻害する。
【００３９】
本発明の一つの特定の実施形態では、上記吸着薬、たとえばタンパク質またはタンパク質断片は、可溶性の補体受容体タンパク質またはタンパク質断片である。本発明の一つの特定の実施形態では、上記タンパク質またはタンパク質断片／ペプチドは組換え可溶性補体受容体タンパク質または合成タンパク質断片／ペプチドである。
【００４０】
可溶性受容体は、受容体の細胞外部分として定義されている（Ｆｉｓｃｈｅｒ  ＤＧ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９３）。Ｃ３ａの場合はＣ３ａアナフィラトキシン走化性受容体（Ｃ３ａＲ１）の細胞外部分であり、Ｃ５ａの場合はＣ５ａアナフィラトキシン走化性受容体１および／または２（Ｃ５ａＲ１／ＣＤ８８およびＣ５ａＲ２／Ｃ５Ｌ２）の細胞外部分である。別個の特定のＣ４ａ受容体は知られていないため、Ｃ４ａの場合、それはＣ３ａアナフィラトキシン走化性受容体（Ｃ３ａＲ１）および／またはＣ５ａアナフィラトキシン走化性受容体１および／または２（Ｃ５ａＲ１／ＣＤ８８およびＣ５ａＲ２／Ｃ５Ｌ２）の細胞外部分である。
【００４１】
本発明の一つの実施形態では、上記吸着薬、たとえば本発明によるタンパク質またはそのタンパク質断片は、補体−アナフィラトキシンＣ５ａおよび／またはＣ３ａおよび／またはＣ４ａに特異的に結合する。
【００４２】
アナフィラトキシン走化性受容体（Ｃ３ａＲ１、Ｃ５ａＲ１／ＣＤ８８、およびＣ５ａＲ２／Ｃ５Ｌ２）の、それらの主要なリガンド（それぞれＣ３ａ、およびＣ５ａ）に対する受容体／リガンド結合親和性および他のすべてのアナフィラトキシン（Ｃ３ａ、Ｃ４ａ、Ｃ５ａ）に対する交差反応性は既知の技術水準である（Ｃａｉｎ  ＳＡ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．  ２００２，  Ｋａｌａｎｔ  Ｄ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２００３，  Ｏｋｉｎａｇａ  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２００３）。アナフィラトキシン走化性受容体の、主に細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインに寄与するアミノ酸配列内の関連するリガンド結合部位が研究されており、したがって、既知の技術水準である。
【００４３】
Ｃ３ａＲ１に関しては、大きな細胞外ループ２ドメインがリガンド結合に重要な役割を果たすことが研究によって示されている；さらに、荷電した膜貫通残基Ａｒｇ１６１、Ａｒｇ３４０、およびＡｓｐ４１７は、リガンドエフェクター結合および／またはシグナルカップリングに必須である（Ｓｕｎ  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．  １９９９）。
【００４４】
配列番号：１７に示されるアミノ酸配列は、ヒトＣ３ａＲ１（配列番号：３）のＡｒｇ３４０を含む大きな細胞外ループ２の断片であるアミノ酸３３２〜３４１をカバーし、これはマウスＣ３ａＲ１（配列番号：６）の対応するアミノ酸配列の対応するアミノ酸配列と９０％の同一性を有する。
【００４５】
ヒトＣ３ａの受容体結合部位は十分に研究されており、Ｓｕｎらによって以下のように要約されている（Ｓｕｎ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．  １９９９）：  ヒトＣ３ａは７７個のアミノ酸で構成されている。Ｃ３ａの三次元構造は、Ｃ末端のフレキシブルな不規則構造を有する３つのジスルフィド結合によって共有結合した４つの密に詰まったアルファヘリックスの大きな球状コアで構成されている（Ｈｕｂｅｒ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．  Ｈｏｐｐｅ  Ｓｅｙｌｅｒ’ｓ  Ｚ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．  １９８０）。Ｃ３ａのＣ末端領域は、疑似ベータターンで折りたたまれ、ＮＭＲ研究（Ｃｈａｚｉｎ  ＷＪ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９８８）によると、隣接するアルファヘリックスセグメントによって安定化される。Ｃ３ａのＣ末端２１残基断片（すなわち、Ｃ３ａ  ５７−７７）は、天然分子のすべての生物活性を保持することが示されている（Ｌｕ  ＺＸ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．  １９８４，  Ｅｍｂｅｒ  ＪＡ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９９１）。Ｃ３ａの合成ペプチドアナログは、Ｃ３ａの主要なエフェクター結合部位が不規則なＣ末端領域（ＬＧＬＡＲ配列）に存在することを示した（Ｃａｐｏｒａｌｅ  ＬＨ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．  １９８０，  Ｕｎｓｏｎ  ＣＧ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９８４）。
【００４６】
一つの実施形態では、本発明の主題である吸着剤は、上記不規則なＣ３ａのＣ末端２１残基断片と結合することができる。
【００４７】
Ｃ５ａＲ１／ＣＤ８８に関しては、細胞外Ｎ末端がリガンド結合において重要な役割を果たし、特にアミノ酸２〜２２内の５つのアスパラギン酸がリガンドエフェクター結合に必須であり、それによってＣ５ａの総結合エネルギーの少なくとも４５％に寄与していること（ＤｅＭａｒｔｉｎｏ  ＪＡ．  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．  １９９４）、および細胞外ループ２および３ドメインは、Ｃ５ａのＣ末端と相互作用するリガンドエフェクター結合に関連していること（Ｓｉｃｉｌｉａｎｏ  ＳＪ  ｅｔ  ａｌ．  ＰＮＡＳ．  １９９４，  Ｍｏｎｋ  ＰＮ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．  １９９５）を示している。さらに、Ｔｙｒ１１およびＴｙｒ１４は翻訳後硫酸化されており、これはＣ５ａＲ１がＣ５ａに結合するために重要である（Ｆａｒｚａｎ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．  ２００１）。Ｃ５ａアナフィラトキシン走化性受容体の既知の結合部位、機能、および構造は、包括的なレビューに要約されている（Ｍｏｎｋ  ＰＮ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ２００７）。
【００４８】
配列番号：１５に示されるアミノ酸配列は、ヒトＣ５ａＲ１（配列番号：２）の２つのアスパラギン酸を含むＮ末端断片であるアミノ酸１９〜２７をカバーし、同様に配列番号：１６に示されるアミノ酸配列はマウスＣ５ａＲ１（配列番号：５）の２つのアスパラギン酸を含むＮ末端断片であるアミノ酸１８〜２６をカバーする。
【００４９】
ヒトＣ５ａの受容体結合部位は、以下のようにＭｏｎｋらにより詳細に研究され、要約された（Ｍｏｎｋ  ＰＮ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ２００７）：  ヒトＣ５ａは、生物活性に必須ではないがｉｎ  ｖｉｖｏでＣ５ａ活性を調節する可能性が非常に高いＮ結合型炭水化物部分を有するＡｓｎ６４を含む７４アミノ酸で構成されている。ヒトＣ５ａの溶液構造（Ｚｈａｎｇ  Ｘ  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  １９９７；  Ｚｕｉｄｅｒｗｅｇ  ＥＲ  ａｎｄ  Ｆｅｓｉｋ  ＳＷ．  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９８９；  Ｚｕｉｄｅｒｗｅｇ  ＥＲ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９８９）は、逆平行の４−ヘリックスバンドル（残基１〜６３）、３つのジスルフィド結合（Ｃｙｓ２１〜Ｃｙｓ４７、Ｃｙｓ２２〜Ｃｙｓ５４、Ｃｙｓ３４〜Ｃｙｓ５５）によって安定化され、ループセグメント１３−１７、２７−３３、および４０−４５によって連結されている４つの異なるヘリックスセグメント（４−１２、１８−２６、３２−３９、４６−６３）を有する。６３残基のヘリックスバンドル断片はカチオン性が高く、細胞表面に高い親和性を与える。Ｃ末端残基６９〜７４も、短いループによって４−ヘリックスバンドルに連結された、かさ高いヘリックスターンを形成する。Ｃ５ａ  １〜７４のＮ末端ジスルフィドの前のジスルフィド結合を還元するか、または残基を選択的に除去すると、機能が大幅に低下する。Ｃ末端ペンタペプチドを欠くフラグメントＣ５ａ  １−６９は細胞に結合するが、アゴニスト活性はなく、親和性を与えるＮ末端ヘリックスバンドルと一致するが、Ｃ末端のみが受容体活性化ドメインである。ループ１（４つのＬｙｓ残基１２、１４、１９、２０を含む残基Ｃ５ａ  １２〜２０）、ループ３（Ｃ５ａ  ３９−４６）、およびＣ末端６〜８残基（特にＡｒｇ７４）は、Ｃ５ａ受容体（Ｃ５ａＲ）への結合およびアゴニスト効力に重要である。Ｃ５ａに対する中和抗体は、Ｌｙｓ２０〜Ａｒｇ３７領域が受容体結合に重要であることを示している。
【００５０】
一つの実施形態では、本発明の主題である吸着薬は、上記Ｃ５ａのＬｙｓ２０〜Ａｒｇ３７領域に結合することができる。
【００５１】
Ｃ５ａＲ２／Ｃ５Ｌ２に関しては、研究は（Ｃ５ａＲ１／ＣＤ８８と同様に）、産生アミノ酸に隣接している硫酸化Ｔｙｒ残基を含む細胞外Ｎ末端がリガンド結合において重要な役割を果たすことを示している。さらに、両方の受容体（Ｃ５ａＲ１／ＣＤ８８およびＣ５ａＲ２／Ｃ５Ｌ２）はそれらの細胞外および膜貫通ドメインの荷電残基および疎水性残基が類似しており、これは類似のリガンド結合モードを示唆している（Ｆａｒｚａｎ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．  ２００１，  Ｏｋｉｎａｇａ  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２００３，  Ｇａｏ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．  ＦＡＳＥＢ  Ｊ．  ２００５，  Ｓｃｏｌａ  ＡＭ．  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．  ２００７）。Ｃ５Ｌ２は、Ｃ３ａＲ１と同様の親和性で、Ｃ５ａの結合部位とは異なるＣ３ａおよびＣ４ａに結合でき、これにより、Ｃ５Ｌ２は異なる補体−アナフィラトキシンに同時に結合できる。
【００５２】
配列番号：７に示されるアミノ酸配列は、ヒトＣ５ａＲ２（配列番号：１）の膜貫通ドメイン１の断片であるアミノ酸４６〜５９をカバーし、これは対応するアミノ酸４８〜６１と７９％の同一性を有し、ヒトＣ５ａＲ１（配列番号：２）の受容体／リガンド結合において重要な役割を果たす（Ｍｏｎｋ  ＰＮ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ２００７）と考えられているＧｌｙ５１、Ａｓｎ５５、およびＶａｌ５８を含む。
【００５３】
配列番号：８に示されるアミノ酸配列は、ヒトＣ５ａＲ２（配列番号：１）の膜貫通ドメイン２の断片であるアミノ酸７９〜８８をカバーし、これは対応するアミノ酸８１〜９０と７０％の同一性を有し、ヒトＣ３ａＲ１（配列番号：３）の受容体／リガンド結合において重要な役割を果たす（Ｓｕｎ  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．  １９９９）と考えられているＡｓｐ６８を含む。
【００５４】
配列番号：９に示されるアミノ酸配列は、ヒトＣ５ａＲ２（配列番号：１）の膜貫通ドメイン３の断片であるアミノ酸１１８〜１２６をカバーし、これは対応するアミノ酸１２０〜１２８と８９％の同一性を有し、ヒトＣ５ａＲ１（配列番号：２）の受容体／リガンド結合において重要な役割を果たす（Ｍｏｎｋ  ＰＮ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ２００７）と考えられているＳｅｒ１２３およびＬｅｕ１２６を含む。
【００５５】
配列番号：１０に示されるアミノ酸配列は、ヒトＣ５ａＲ２（配列番号：１）の膜貫通ドメイン４の断片であるアミノ酸１６１〜１６９をカバーし、これは対応するアミノ酸１６３〜１７１と８９％の同一性を有し、ヒトＣ５ａＲ１（配列番号：２）の受容体／リガンド結合において重要な役割を果たす（Ｍｏｎｋ  ＰＮ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ２００７）と考えられているＬｅｕ１６６、Ｔｈｒ１６８、Ｖａｌ１６９、Ｐｒｏ１７０、およびＳｅｒ１７１を含む。
【００５６】
配列番号：１１に示されるアミノ酸配列は、ヒトＣ５ａＲ２（配列番号：１）の膜貫通ドメイン６の断片であるアミノ酸２４２〜２４９をカバーし、これは対応するアミノ酸２５１〜２５８と６３％の同一性を有し、ヒトＣ５ａＲ１（配列番号：２）の受容体／リガンド結合において重要な役割を果たす（Ｍｏｎｋ  ＰＮ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ２００７）と考えられているＰｈｅ２５１を含み、ヒトＣ３ａＲ１（配列番号：３）の受容体／リガンド結合において重要な役割を果たす（Ｓｕｎ  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．  １９９９）と考えられているＨｉｓ３９４に隣接する対応するアミノ酸３８６〜３９３と７５％の同一性を有する。
【００５７】
配列番号：１２に示されるアミノ酸配列は、ヒトＣ５ａＲ２（配列番号：１）の細胞外ループ１ドメインの断片であるアミノ酸９８〜１０３をカバーし、これは対応するアミノ酸１００〜１０５と６７％の同一性を有し、ヒトＣ５ａＲ１（配列番号：２）の受容体／リガンド結合において重要な役割を果たす（Ｍｏｎｋ  ＰＮ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ２００７）と考えられているＴｒｐ１０２、Ｐｈｅ１０４、およびＧｌｙ１０５を含み、ヒトＣ３ａＲ１（配列番号：３）の細胞外ループ１ドメインの断片である、対応するアミノ酸８６〜９１と８３％の同一性を有する、
【００５８】
配列番号：１３に示されるアミノ酸配列は、ヒトＣ５ａＲ２（配列番号：１）の細胞外Ｎ末端ドメインの断片であるアミノ酸１３〜２３をカバーし、これはマウスＣ５ａＲ２（配列番号：４）の対応するアミノ酸３３〜４３（配列番号：１４）と８２％の同一性を有し、受容体／リガンド結合に重要であるＴｙｒ１４を含む。
【００５９】
用語「特異的結合」は、解離定数が１  ｍＭ以下、好ましくは１００  μＭ以下、好ましくは５０  μＭ以下、好ましくは３０  μＭ以下、好ましくは２０  μＭ以下、好ましくは１０  μＭ以下、好ましくは５  μＭ以下、より好ましくは１  μＭ以下、より好ましくは９００  ｎＭ以下、より好ましくは８００  ｎＭ以下、より好ましくは７００  ｎＭ以下、より好ましくは６００  ｎＭ以下、より好ましくは５００  ｎＭ以下、より好ましくは４００  ｎＭ以下、より好ましくは３００  ｎＭ以下、より好ましくは２００  ｎＭ以下、さらにより好ましくは１００  ｎＭ以下、さらにより好ましくは９０  ｎＭ以下、さらにより好ましくは８０  ｎＭ以下、さらにより好ましくは７０  ｎＭ以下、さらにより好ましくは６０  ｎＭ以下、さらにより好ましくは５０  ｎＭ以下、さらにより好ましくは４０  ｎＭ以下、さらにより好ましくは３０  ｎＭ以下、さらにより好ましくは２０  ｎＭ以下、およびさらにより好ましくは１０  ｎＭ以下のタンパク質−リガンド結合親和性として定義され、放射性リガンド結合アッセイ（Ｃａｉｎ  ＳＡ，  Ｍｏｎｋ  ＰＮ，  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．  ２００２）または表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ）（Ｃｏｌｌｅｙ  ＣＳ  ｅｔ  ａｌ．  ＭＡｂｓ．  ２０１８、米国特許出願第２０１２／００６５２５４号に記載のとおり）、またはＥＬＩＳＡベースの結合アッセイ（Ｍｉｃｈｅｌｆｅｌｄｅｒ  Ｓ．，  Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ．  ２０１８）によって決定される。放射性リガンド結合アッセイは、Ｋａｌａｎｔ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２００３に記載されているように、放射性標識リガンド競合受容体結合アッセイであってもよく、ここで上記放射性標識リガンド競合受容体結合アッセイは補体受容体Ｃ５ａＲ１（Ｋａｌａｎｔ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２００３ではＣＤ８８と呼ばれる）、Ｃ３ａＲ、またはＣ５Ｌ２（本発明の配列番号：１、２、および３）と培養系におけるアナフィラトキシンＣ３ａ、Ｃ４ａ、またはＣ５ａとの間の結合親和性を決定する。上記アッセイにおいて、受容体に結合した放射性標識されたＣ３ａ、Ｃ４ａまたはＣ５ａは、標識されていないＣ３ａ、Ｃ４ａまたはＣ５ａの濃度を増加させることを使用して競合的に置換された。標識されていないＣ３ａ、Ｃ４ａまたはＣ５ａとは異なる非標識化合物が、本発明の吸着薬の使用を含む、受容体結合放射性標識Ｃ３ａ、Ｃ４ａまたはＣ５ａの置換について試験できることが当業者に知られている。
【００６０】
本発明によるタンパク質またはタンパク質断片／ペプチド、非ＩｇＧスキャフォールド、アプタマー、オリゴヌクレオチド、抗体または抗体様タンパク質、ペプチド模倣薬、またはその断片に関する用語「活性を阻害する」は、Ｃ５ａおよび／またはＣ３ａおよび／またはＣ４ａ刺激の存在下で線維芽細胞／筋線維芽細胞の活性化および／または分化転換のプロセスを阻害する特性を指す。この目的のために、ウシ胎児血清を含まないＤＭＥＭ（ダルベッコ改変イーグル培地）増殖培地中で０．１  μｇ／ｍｌの濃度のＣ３ａおよび／またはＣ４ａおよび／またはＣ５ａとともに２４時間インキュベートした線維芽細胞（たとえば、ヒト角膜角質細胞）（「刺激対照」）を、同一条件下であるが本発明によるタンパク質またはタンパク質断片／ペプチド、非ＩｇＧスキャフォールド、アプタマー、オリゴヌクレオチド、抗体または抗体様タンパク質、ペプチド模倣薬、またはそれらの断片を添加してインキュベートされた線維芽細胞と比較し、その有効性を試験するものとする（「阻害対照」）。刺激後、単層線維芽細胞培養物中の筋線維芽細胞の割合（パーセンテージで示される）は、抗ａＳＭＡ抗体を使用したアルファ平滑筋アクチン（ａＳＭＡ）免疫細胞化学染色によって決定される。これにより、筋線維芽細胞は、細胞質内のａＳＭＡに対して陽性に染色される細胞として明らかになる。本発明によるタンパク質またはタンパク質断片／ペプチド、非ＩｇＧスキャフォールド、アプタマー、オリゴヌクレオチド、抗体または抗体様タンパク質、ペプチド模倣薬、またはそれらの断片は、最適な条件および濃度を考慮して、「阻害対照」における筋線維芽細胞の割合を、「刺激対照」における筋線維芽細胞の割合と比較して、好ましくは少なくとも１０％、より好ましくは少なくとも２０％、さらにより好ましくは少なくとも２５％、さらにより好ましくは少なくとも３０％、さらにより好ましくは少なくとも３５％、さらにより好ましくは少なくとも４０％、さらにより好ましくは少なくとも４５％、さらにより好ましくは少なくとも５０％、さらにより好ましくは少なくとも５５％、さらにより好ましくは少なくとも６０％、およびさらにより好ましくは少なくとも６５％、減少させることができる場合、筋線維芽細胞活性化の「活性を阻害する」ことによって、有効であると定義される。
【００６１】
本発明の一つの実施形態では、上記吸着薬は、タンパク質またはタンパク質断片であり、配列番号：１に記載のヒトＣ５Ｌ２タンパク質、配列番号：１に記載のヒトＣ５Ｌ２タンパク質の全長アミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片、配列番号：２に記載のヒトＣ５ａＲ１タンパク質、配列番号：２に記載のヒトＣ５ａＲ１タンパク質の全長アミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片、配列番号：３に記載のヒトＣ３ａＲタンパク質、配列番号：３に記載のヒトＣ３ａＲタンパク質の全長アミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片、配列番号：４に記載のマウスＣ５Ｌ２タンパク質、配列番号：４に記載のマウスＣ５Ｌ２タンパク質の全長アミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片、配列番号：５に記載のマウスＣ５ａＲ１タンパク質、配列番号：５に記載のマウスＣ５ａＲ１タンパク質の全長アミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片、、配列番号：６に記載のマウスＣ３ａＲタンパク質および配列番号：６に記載のマウスＣ３ａＲタンパク質の全長アミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片を含む群から選択される。
【００６２】
本発明の特定の実施形態では、それぞれの完全長アミノ酸配列との同一性は、少なくとも６５％、または少なくとも７０％、または少なくとも７５％、または少なくとも８０％、または少なくとも８５％、または少なくとも９０％、または少なくとも９５％、または少なくとも９７％、または少なくとも９８％、または少なくとも９９％である。
【００６３】
一つの実施形態では、全長組換えヒトＣ５ａアナフィラトキシン走化性受容体２（ｒｈＣ５ＡＲ２／ｒｈＣ５Ｌ２）はコムギ胚芽で産生することができる（ａｂ１５３２９１；  Ａｂｃａｍ；  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）。
【００６４】
別の実施形態では、細胞膜上に位置する全長組換えヒトＣ５ａアナフィラトキシン走化性受容体１（ｒｈＣ５ＡＲ１）はコムギ胚芽で産生することができ（ａｂ１５７９８９；  Ａｂｃａｍ；  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）、硫酸化によって翻訳後修飾できる。
【００６５】
別の実施形態では、細胞膜上に位置する全長組換えヒトＣ３ａアナフィラトキシン走化性受容体（ｒｈＣ３ＡＲ）はコムギ胚芽で産生することができ（ａｂ１５２２４９；  Ａｂｃａｍ；  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）、Ｔｙｒ１７４を硫酸化することができる。
【００６６】
２つのアミノ酸配列間の同一性の程度は、ＦＡＳＴＡ（Ｌｉｐｍａｎ  ＤＪ  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９８５，  Ｐｅａｒｓｏｎ  ＷＲ  ｅｔ  ａｌ．  ＰＮＡＳ  １９８８）やｂａｓｉｃ  ｌｏｃａｌ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ｓｅａｒｃｈ  ｔｏｏｌ（ＢＬＡＳＴ）（Ｌｏｂｏ  Ｉ．  Ｎａｔｕｒｅ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ  ２００８）等の発見的アルゴリズムの結果として定義される。試験されるタンパク質／ペプチドまたはタンパク質断片が配列番号：１〜１７と同一である（それぞれ１００％同一性のＢＬＡＳＴ結果を有する）、または同一の断片を含む（それぞれ１００％同一性のＢＬＡＳＴ結果を有する）場合、配列番号：１〜１７に対する試験されるべきタンパク質／ペプチドまたはタンパク質断片の同一性は１００％である。
【００６７】
本発明の一つの実施形態では、上記タンパク質またはタンパク質断片は、配列番号：７に記載のアミノ酸配列、配列番号：８に記載のアミノ酸配列、配列番号：９に記載のアミノ酸配列、配列番号：１０に記載のアミノ酸配列、配列番号：１１に記載のアミノ酸配列、配列番号：１２に記載のアミノ酸配列、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列、配列番号：１４に記載のアミノ酸配列、配列番号：１５に記載のアミノ酸配列、配列番号：１６に記載のアミノ酸配列、配列番号：１７に記載のアミノ酸配列、および配列番号：１〜１７に記載のアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片を含む群から選択される、少なくとも一つの保存領域を含む。
【００６８】
本発明の一つの実施形態では、上記タンパク質またはタンパク質断片は、配列番号：７に記載のアミノ酸配列、配列番号：８に記載のアミノ酸配列、配列番号：９に記載のアミノ酸配列、配列番号：１０に記載のアミノ酸配列、配列番号：１１に記載のアミノ酸配列、配列番号：１２に記載のアミノ酸配列、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列、配列番号：１４に記載のアミノ酸配列、配列番号：１５に記載のアミノ酸配列、配列番号：１６に記載のアミノ酸配列、配列番号：１７に記載のアミノ酸配列、および配列番号：１〜１７に記載のアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片を含む群から選択される、少なくとも二つの保存領域を含む。
【００６９】
本発明の別の実施形態では、上記タンパク質またはタンパク質断片は、前述の保存領域の少なくとも三つ、または前述の保存領域の少なくとも四つ、または前述の保存領域の少なくとも五つ、または前述の保存領域の少なくとも六つを含む。
【００７０】
本発明の一つの実施形態では、保存領域は、配列番号：１〜１７に記載の前述のアミノ酸のいずれか一つと少なくとも少なくとも６５％、または少なくとも７５％、または少なくとも８０％、または少なくとも８５％、または少なくとも９０％、または少なくとも９５％、または少なくとも９７％、または少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を示す。
【００７１】
表１は、ヒトおよびマウスＣ５Ｌ２、Ｃ５ＡＲ１、およびＣ３ＡＲに特徴的な保存配列断片（配列番号：１〜１７）の対応するアミノ酸配列間で、ＢＬＡＳＴによって決定された配列同一性の概要を提供する。
【００７２】
【表１】
2021527679.tif 000002
【００７３】
本発明の主題は、眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための本発明による少なくとも一つの吸着薬、たとえば一つのタンパク質またはタンパク質断片を含む組成物である。
【００７４】
本発明の主題は、眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための本発明による少なくとも二つの吸着薬、たとえば二つのタンパク質／ペプチドまたはタンパク質断片を含む組成物である。
【００７５】
本発明の主題は、眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための本発明による少なくとも三つの吸着薬、たとえばタンパク質／ペプチドまたはタンパク質断片を含む組成物である。明確さの目的で、ここで表現「眼の創傷および／または線維症」中の単語「線維症」は、用語「線維症」の一般的定義を指し、眼の線維症のみに限定されないことが理解される。ここで表現「眼の創傷および／または線維症」および「線維症および／または眼の創傷」は本明細書において互換的に使用することができる。
【００７６】
一つの吸着薬、たとえばタンパク質またはタンパク質断片は、Ｃ５ａおよび／またはＣ３ａおよび／またはＣ４ａに対する一つまたは複数の結合部位を含んでもよい。表１によると、結合部位の数は、配列番号：１〜１７から選択される含まれる配列数に応じて変わりうる。
【００７７】
これに関して、一つ以上の吸着薬、たとえば配列番号：１〜１７を含むタンパク質／ペプチドまたはタンパク質断片を含む組成物は、Ｃ３ａ、Ｃ４ａ、およびＣ５ａ依存性活性に対する阻害効果を拡大する。特に、主にＣ３ａ結合部分、たとえば配列番号：８、１２、および１８に由来するタンパク質またはタンパク質断片と、主にＣ５ａ結合部分、たとえば配列番号：７、９、１０、１１、１３、１４、１５、および１６に由来するタンパク質またはタンパク質断片の組み合わせは、特に重要である。
【００７８】
本発明の主題は、眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための本発明による吸着薬、たとえばタンパク質またはタンパク質断片、または本発明による組成物を含む医薬組成物である。
【００７９】
本発明の吸着薬は、吸着薬の生物学的安定性および／または半減期を改変するためにＰＥＧ化、または同等の方法で改変されていてもよい。ＰＥＧ化は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ、薬局ではマクロゴールと呼ばれる）ポリマー鎖が、分子およびマクロ構造、たとえば薬物、治療様タンパク質または小胞に共有結合および非共有結合の両方で結合または融合（ａｍａｌｇａｍａｔｉｏｎ）するプロセスであり、その結果ＰＥＧ化（ペグ化）と呼ばれる。ＰＥＧ化は、ＰＥＧの反応性誘導体を標的分子とともにインキュベートすることによって定型的に達成される。薬物または治療様タンパク質へのＰＥＧの共有結合は、宿主の免疫系から薬剤を「マスク」し（免疫原性と抗原性を低下させ）、その流体力学的大きさ（溶液中の大きさ）を増加させ、腎クリアランスを低下させることによって循環時間を延長する。
【００８０】
本発明の吸着薬は、吸着薬の実際の構造を改変し、その機能または安定性を高めるために、とりわけ、糖、脂肪酸、リン酸基（ホスホリル基、リン酸化）、ヒドロキシル基、メチル基（タンパク質のメチル化）、ユビキチン（タンパク質のユビキチン化）を含む翻訳後または合成後の修飾を受けてもよい。これらの修飾は、吸着剤のアミノ（アミノ末端）およびカルボキシル末端（カルボキシル末端）の両方、ならびにタンパク質内のアミノ酸側鎖（アミノ酸）に対して行うことができ、可逆的および／または不可逆的であってもよい。
【００８１】
さらに、主題は、本発明による吸着薬のプロドラッグである。プロドラッグは、投与後に薬理学的に活性な薬物に代謝される（すなわち、体内で変換される）医薬または化合物である。不活性プロドラッグは、体内で活性型に代謝される薬理学的に不活性な医薬である。薬物を直接投与する代わりに、対応するプロドラッグを使用して、薬の吸収、分配、代謝、および排泄の方法を改良することができる。
【００８２】
本発明の一つの実施形態では、上記医薬組成物は局所投与用であり、すなわち局所投与される。
【００８３】
本発明の一つの実施形態では、前記医薬組成物は、眼内投与用であり、すなわち、眼内投与される。
【００８４】
本発明の一つの実施形態では、前記医薬組成物は、硝子体内投与用であり、すなわち、硝子体内投与される。
【００８５】
本発明の一つの実施形態では、前記医薬組成物は、結膜下投与用であり、すなわち、結膜下投与される。
【００８６】
本発明の一つの実施形態では、前記医薬組成物は、血管内／静脈内投与用であり、すなわち、血管内／静脈内に投与される。
【００８７】
本発明の一つの実施形態は、対象の治療における使用のための、本発明による吸着剤、たとえばタンパク質またはタンパク質断片、または本発明による組成物、または本発明による医薬組成物であって、ここで該対象は、結膜炎および結膜瘢痕（眼類天疱瘡を含む）、強膜炎および上強膜炎、角膜潰瘍による角膜瘢痕および混濁、角結膜炎、角膜炎、水疱性角膜症、角膜変性症、虹彩毛様体炎ならびに虹彩および毛様体の癒着、脈絡網膜炎（ｃｈｏｒｉｏｒｅｔｉｎａｌ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）または変性または出血または破裂または血管新生に起因する脈絡網膜瘢痕／線維症、線維性硝子体網膜症（ｆｉｂｒｏｔｉｃ  ｖｉｔｒｅｏｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｉｅｓ）、たとえば増殖性硝子体網膜症、未熟児網膜症および糖尿病性網膜症；脈絡膜血管新生および黄斑変性症、続発性緑内障、眼内炎、および眼科手術または眼球内異物を含む外傷後の創傷治癒障害および線維症を含む群から選択される疾患に罹患している。
【００８８】
本発明の一つの実施形態は、対象の治療における使用のための、本発明による吸着剤、たとえばタンパク質／ペプチドまたはタンパク質断片、または本発明による組成物、または本発明による医薬組成物であって、ここで該対象は角膜線維症に罹患している。
【００８９】
本発明の一つの実施形態は、対象の治療における使用のための、本発明による吸着剤、たとえばタンパク質／ペプチドまたはタンパク質断片、または本発明による組成物、または本発明による医薬組成物であって、ここで該対象は脈絡網膜線維症に罹患している。
【００９０】
本発明の一つの実施形態は、対象の治療における使用のための、本発明による吸着剤、たとえばタンパク質／ペプチドまたはタンパク質断片、または本発明による組成物、または本発明による医薬組成物であって、ここで該対象は眼科手術または外傷後の創傷治癒障害および線維症に罹患している。
【００９１】
本発明の一つの実施形態は、対象の治療における使用のための、本発明による吸着剤、たとえばタンパク質またはタンパク質断片、または本発明による組成物、または本発明による医薬組成物であって、ここで該対象は、（特発性）肺線維症、皮膚ケロイド形成、強皮症、骨髄線維症、腎臓線維症、膵臓線維症、および心臓線維症、ならびに（非）アルコール性脂肪性肝炎、糸球体腎炎、および（ＡＮＣＡ関連）血管炎における線維症を含む群から選択される疾患に罹患している。
【００９２】
本発明の一つの実施形態は、対象の治療における使用のための、本発明による吸着剤、たとえばタンパク質またはタンパク質断片、または本発明による組成物、または本発明による医薬組成物であって、ここで該対象は、肺線維症に罹患している。
【００９３】
本発明の一つの実施形態は、対象の治療における使用のための、本発明による吸着剤、たとえばタンパク質またはタンパク質断片、または本発明による組成物、または本発明による医薬組成物であって、ここで該対象は、糸球体腎炎および／または腎臓線維症による線維症に罹患している。
【００９４】
本発明の一つの実施形態は、対象の治療における使用のための、本発明による吸着剤、たとえばタンパク質またはタンパク質断片、または本発明による組成物、または本発明による医薬組成物であって、ここで該対象は、脂肪性肝炎および／または肝線維症に罹患している。
【００９５】
以下の実施形態は、本発明の主題である：
１．  眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための、補体−アナフィラトキシンＣ５ａおよび／またはＣ３ａおよび／またはＣ４ａに結合し、それによって好ましくはＣ５ａおよび／またはＣ３ａおよび／またはＣ４ａの活性を阻害する、吸着薬。
２．  上記吸着薬は、タンパク質またはその断片、ペプチド、非ＩｇＧスキャフォールド、アプタマー、オリゴヌクレオチド、抗体または抗体様タンパク質、ペプチド模倣薬またはその断片を含む群から選択される、実施形態１に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
３．  上記吸着薬は、タンパク質またはその断片である、実施形態１または２に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
４．  上記吸着薬は、創傷治癒、特に角膜の創傷治癒を促進するために投与される、実施形態１〜３のいずれか一つに記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
５．  上記吸着薬は、Ｃ５ａおよびＣ３ａに結合して、それにより、基本的に（essentially）Ｃ５ａおよびＣ３ａの活性を阻害する、実施形態１〜４のいずれか一つに記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
６．  上記吸着薬は、Ｃ５ａおよびＣ４ａに結合して、それにより、基本的に（essentially）Ｃ５ａおよびＣ４ａの活性を阻害する、実施形態１〜５のいずれか一つに記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
７．  上記吸着薬は、Ｃ３ａおよびＣ４ａに結合して、それにより、基本的に（essentially）Ｃ３ａおよびＣ４ａの活性を阻害する、実施形態１〜６のいずれか一つに記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
８．  上記吸着薬は、Ｃ５ａおよびＣ３ａおよびＣ４ａに結合して、それにより、基本的に（essentially）Ｃ５ａおよびＣ３ａおよびＣ４ａの活性を阻害する、実施形態１〜７のいずれか一つに記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
９．  上記吸着薬は、配列番号：１に記載のヒトＣ５Ｌ２タンパク質、配列番号：１のヒトＣ５Ｌ２タンパク質の全長アミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるタンパク質／ペプチドまたは断片、配列番号：２に記載のヒトＣ５ａＲ１タンパク質、配列番号：２のヒトＣ５ａＲ１タンパク質の全長アミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片、配列番号：３に記載のヒトＣ３ａＲタンパク質、配列番号：３のヒトＣ３ａＲタンパク質の全長アミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片、配列番号：４に記載のマウスＣ５Ｌ２タンパク質、配列番号：４のマウスＣ５Ｌ２タンパク質の全長アミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片、配列番号：５に記載のマウスＣ５ａＲ１タンパク質、配列番号：５のマウスＣ５ａＲ１タンパク質の全長アミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片、配列番号：６に記載のマウスＣ３ａＲタンパク質、および配列番号：６のマウスＣ３ａＲタンパク質の全長アミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片を含む群から選択されるタンパク質またはタンパク質断片である、実施形態１〜８のいずれか一つに記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
１０．  上記吸着薬は、タンパク質／ペプチドまたはタンパク質断片であり、配列番号：７に記載のアミノ酸配列、配列番号：８に記載のアミノ酸配列、配列番号：９に記載のアミノ酸配列、配列番号：１０に記載のアミノ酸配列、配列番号：１１に記載のアミノ酸配列、配列番号：１２に記載のアミノ酸配列、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列、配列番号：１４に記載のアミノ酸配列、配列番号：１５に記載のアミノ酸配列、配列番号：１６に記載のアミノ酸配列、配列番号：１７に記載のアミノ酸配列、および配列番号：７〜１７に記載のアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片、を含む群から選択される少なくとも一つの保存領域を含む、実施形態１〜９のいずれか一つに記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
１１．  上記吸着薬は、タンパク質／ペプチドまたはタンパク質断片であり、配列番号：７に記載のアミノ酸配列、配列番号：８に記載のアミノ酸配列、配列番号：９に記載のアミノ酸配列、配列番号：１０に記載のアミノ酸配列、配列番号：１１に記載のアミノ酸配列、配列番号：１２に記載のアミノ酸配列、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列、配列番号：１４に記載のアミノ酸配列、配列番号：１５に記載のアミノ酸配列、配列番号：１６に記載のアミノ酸配列、配列番号：１７に記載のアミノ酸配列、配列番号：７〜１７に記載のアミノ酸配列のいずれ一つと少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片、を含む群から選択される少なくとも二つの保存領域を含む、実施形態１０に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
１２．  眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための実施形態１〜１１のいずれか一つに記載の少なくとも二つの吸着薬、好ましくはタンパク質またはタンパク質断片を含む組成物。
１３．  眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための実施形態１〜９のいずれか一つに記載の少なくとも三つのタンパク質またはタンパク質断片を含む組成物。
１４．  眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための、実施形態１〜１１のいずれか一つに記載の吸着薬を含む医薬組成物、または実施形態１２もしくは１３に記載の組成物。
１５．  上記医薬組成物は、担体および／または賦形剤および／または安定剤をさらに含む、実施形態１４に記載の医薬組成物。
１６．  局所投与のための実施形態１４または１５に記載の医薬組成物。
１７．  がん内投与のための実施形態１４または１５に記載の医薬組成物。
１８．  硝子体内投与（ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌｅｒ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ）のための実施形態１４または１５に記載の医薬組成物。
１９．  結膜下投与（ｓｕｂｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖａｌｅｒ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ）のための実施形態１４または１５に記載の医薬組成物。
２０．  上記対象は、結膜炎および結膜瘢痕（眼類天疱瘡を含む）、強膜炎および上強膜炎、角膜潰瘍による角膜瘢痕および混濁、角結膜炎、角膜炎、水疱性角膜症、角膜変性症、虹彩毛様体炎ならびに虹彩および毛様体の癒着、脈絡網膜炎（ｃｈｏｒｉｏｒｅｔｉｎａｌ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）または変性または出血または破裂または血管新生に起因する脈絡網膜瘢痕／線維症、線維性硝子体網膜症（ｆｉｂｒｏｔｉｃ  ｖｉｔｒｅｏｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｉｅｓ）、たとえば増殖性硝子体網膜症、未熟児網膜症および糖尿病性網膜症；脈絡膜血管新生および黄斑変性症、続発性緑内障、眼内炎、および眼科手術または眼球内異物を含む外傷後の創傷治癒障害および線維症を含む群から選択される疾患に罹患している、対象の治療における使用のための実施形態１〜１１のいずれか一つに記載の吸着薬または実施形態１２または１３に記載の組成物または実施形態１４〜１９のいずれか一つに記載の医薬組成物。
２１．  上記対象は、（特発性）肺線維症、皮膚ケロイド形成、強皮症、骨髄線維症、腎臓線維症、膵臓線維症、および心臓線維症、ならびに（非）アルコール性脂肪性肝炎、糸球体腎炎、および（ＡＮＣＡ関連）血管炎における線維症を含む群から選択される疾患に罹患している、対象の治療における使用のための実施形態１〜１１のいずれか一つに記載の吸着薬または実施形態１２または１３に記載の組成物または実施形態１４〜１９のいずれか一つに記載の医薬組成物。
【００９６】
以下の実施形態は、本発明の主題である：
１．  眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための、補体−アナフィラトキシンＣ５ａおよび／またはＣ３ａおよび／またはＣ４ａに結合し、それによって好ましくはＣ５ａおよび／またはＣ３ａおよび／またはＣ４ａの活性を阻害する、吸着薬。
２．  上記吸着薬は、タンパク質またはその断片、ペプチド、非ＩｇＧスキャフォールド、アプタマー、オリゴヌクレオチド、抗体または抗体様タンパク質、ペプチド模倣薬またはその断片を含む群から選択される、請求項１に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
３．  上記吸着薬は、タンパク質またはその断片である、請求項１または２に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
４．  上記吸着薬は、創傷治癒、特に角膜の創傷治癒を促進するために投与される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
５．  上記吸着薬は、Ｃ５ａおよびＣ３ａに結合して、それにより、基本的に（essentially）Ｃ５ａおよびＣ３ａの活性を阻害する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
６．  上記吸着薬は、Ｃ５ａおよびＣ４ａに結合して、それにより、基本的に（essentially）Ｃ５ａおよびＣ４ａの活性を阻害する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
７．  上記吸着薬は、Ｃ３ａおよびＣ４ａに結合して、それにより、基本的に（essentially）Ｃ３ａおよびＣ４ａの活性を阻害する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
８．  上記吸着薬は、Ｃ５ａおよびＣ３ａおよびＣ４ａに結合して、それにより、基本的に（essentially）Ｃ５ａおよびＣ３ａおよびＣ４ａの活性を阻害する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
９．  上記吸着薬は、配列番号：２０または配列番号：２１で示されるアミノ酸配列を有する補体成分Ｃ５ａタンパク質のいくつかの重複ペプチド断片に結合しうる、ここで重複は抗体、抗体様タンパク質、または吸着薬および特定のペプチド断片の標的アミノ酸配列の重複を意味する、請求項１〜６または８のいずれか一項に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
１０．  上記吸着薬は、配列番号：２２〜３４によるアミノ酸配列を有するタンパク質の断片内のエピトープまたは断片と重複するエピトープでのみＣ５ａに結合しうる、請求項９に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
１１．  上記吸着薬は、配列番号：３５〜４０（配列番号：３５：  Ｘ1Ｘ2ＥＴＣＥＸ3ＲＸ4、配列番号：３６：  Ｘ5Ｘ6ＫＸ7Ｘ8Ｘ9Ｌ、および配列番号：３７：  Ｘ5Ｘ6ＫＸ7Ｘ8Ｘ9Ｉ）によるアミノ酸配列によって形成されるＣ５ａのエピトープにも結合しうる、ここでＸ1はＮ、Ｈ、Ｄ、Ｆ、Ｋ、Ｙ、およびＴからなる群から選択され；Ｘ2はＤ、Ｌ、Ｙ、およびＨからなる群から選択され；Ｘ3はＱ、Ｅ、およびＫからなる群から選択され；Ｘ4はＡ、Ｖ、およびＬからなる群から選択され；Ｘ5はＳ、Ｈ、Ｐ、およびＮからなる群から選択され；Ｘ6はＨおよびＮからなる群から選択され；Ｘ7はＤ、Ｎ、Ｈ、Ｐ、およびＧからなる群から選択され；Ｘ8はＭ、Ｌ、Ｉ、およびＶからなる群から選択され；およびＸ9はＱ、Ｌ、およびＩからなる群から選択される、請求項９に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
１２．  上記吸着薬は、配列番号：４３で示されるアミノ酸配列を有する補体成分Ｃ３ａタンパク質のいくつかの重複ペプチド断片に結合しうる、請求項１〜５、７、または８のいずれか一項に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
１３．  上記吸着薬はまた、配列番号：４４〜４７によるアミノ酸配列を有するタンパク質の断片内のエピトープまたは断片と重複するエピトープでのみヒトＣ３ａに結合しうる、請求項１２に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
１４．  上記吸着薬は、配列番号：４８または配列番号：４９で示されるアミノ酸配列を有する補体成分Ｃ４ａタンパク質のいくつかの重複ペプチド断片に結合しうる、請求項１〜４または６〜８のいずれか一項に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
１５．  上記吸着薬はまた、配列番号：５０によるアミノ酸配列を有するタンパク質の断片内のエピトープまたは断片と重複するエピトープでのみヒトＣ４ａに結合しうる、請求項１３に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
１６．  上記吸着薬は、抗体または抗体様タンパク質である、請求項１〜１５に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
１７．  上記吸着薬はアプタマーである、請求項１〜１５に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
１８．  上記吸着薬はアプタマーであり、ここで上記アプタマーは配列番号：４１に開示されているようなＲＮＡおよび／またはＤＮＡからなる核酸分子に関連しうる、請求項１７に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
１９．  上記吸着薬はアプタマーであり、ここで上記アプタマーは配列番号：４１に開示されているようなＲＮＡおよび／またはＤＮＡからなる核酸分子に関連しうる、およびここで上記アプタマーは配列番号：４２からなるＣ５ａ上の結合部位に結合する、請求項１８に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
２０．  上記吸着薬は配列番号：１に記載のヒトＣ５Ｌ２タンパク質、配列番号：１のヒトＣ５Ｌ２タンパク質の全長アミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるタンパク質／ペプチドまたは断片、配列番号：２に記載のヒトＣ５ａＲ１タンパク質、配列番号：２のヒトＣ５ａＲ１タンパク質の全長アミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片、配列番号：３に記載のヒトＣ３ａＲタンパク質、配列番号：３のヒトＣ３ａＲタンパク質の全長アミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片、配列番号：４に記載のマウスＣ５Ｌ２タンパク質、配列番号：４のマウスＣ５Ｌ２タンパク質の全長アミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片、配列番号：５に記載のマウスＣ５ａＲ１タンパク質、配列番号：５のマウスＣ５ａＲ１タンパク質の全長アミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片、配列番号：６に記載のマウスＣ３ａＲタンパク質、および配列番号：６のマウスＣ３ａＲタンパク質の全長アミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片、を含む群から選択されるタンパク質またはタンパク質断片である、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
２１．  上記吸着薬はタンパク質／ペプチドまたはタンパク質断片であり、配列番号：７に記載のアミノ酸配列、配列番号：８に記載のアミノ酸配列、配列番号：９に記載のアミノ酸配列、配列番号：１０に記載のアミノ酸配列、配列番号：１１に記載のアミノ酸配列、配列番号：１２に記載のアミノ酸配列、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列、配列番号：１４に記載のアミノ酸配列、配列番号：１５に記載のアミノ酸配列、配列番号：１６に記載のアミノ酸配列、配列番号：１７に記載のアミノ酸配列、および配列番号：７〜１７に記載のアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片、を含む群から選択される少なくとも一つの保存領域を含む、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
２２．  上記吸着薬はタンパク質／ペプチドまたはタンパク質断片であり、配列番号：７に記載のアミノ酸配列、配列番号：８に記載のアミノ酸配列、配列番号：９に記載のアミノ酸配列、配列番号：１０に記載のアミノ酸配列、配列番号：１１に記載のアミノ酸配列、配列番号：１２に記載のアミノ酸配列、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列、配列番号：１４に記載のアミノ酸配列、配列番号：１５に記載のアミノ酸配列、配列番号：１６に記載のアミノ酸配列、配列番号：１７に記載のアミノ酸配列、および配列番号：７〜１７に記載のアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片、を含む群から選択される少なくとも二つの保存領域を含む、請求項２１に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
２３．  上記吸着薬を介したＣ３ａおよび／またはＣ４ａおよび／またはＣ５ａの阻害は、細胞活性化アッセイ、好ましくは、線維芽細胞／筋線維芽細胞活性化および／または分化転換アッセイによって決定されうる、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
２４．  上記吸着薬を介したＣ３ａおよび／またはＣ４ａおよび／またはＣ５ａの阻害は、細胞活性化アッセイ、好ましくは、線維芽細胞／筋線維芽細胞活性化および／または分化転換アッセイによって決定されうる、およびここでタンパク質またはタンパク質断片／ペプチド、非ＩｇＧスキャフォールド、アプタマー、抗体またはその断片から選択される上記吸着薬は、筋線維芽細胞活性化の活性を好ましくは少なくとも１０％、より好ましくは少なくとも２０％、さらにより好ましくは少なくとも２５％、さらにより好ましくは少なくとも３０％、さらにより好ましくは少なくとも３５％、さらにより好ましくは少なくとも４０％、さらにより好ましくは少なくとも４５％、さらにより好ましくは少なくとも５０％、さらにより好ましくは少なくとも５５％、さらにより好ましくは少なくとも６０％、およびさらにより好ましくは少なくとも６５％、阻害することによって有効である、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
２５．  上記吸着薬は、少なくとも本質的に線維芽細胞／筋線維芽細胞の活性化および／または分化転換のプロセスを阻害し、好ましくは９０  ｋＤａ未満、好ましくは８０  ｋＤａ以下、好ましくは７０  ｋＤａ以下、より好ましくは６０  ｋＤａ以下、より好ましくは５０  ｋＤａ以下、より好ましくは４５  ｋＤａ以下、より好ましくは４０  ｋＤａ以下、さらにより好ましくは３５  ｋＤａ以下、さらにより好ましくは３０  ｋＤａ以下、さらにより好ましくは２５  ｋＤａ以下、さらにより好ましくは２０  ｋＤａ以下、さらにより好ましくは１５  ｋＤａ以下、およびさらにより好ましくは１０  ｋＤａ以下の分子量を有する、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
２６．  眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の少なくとも二つの吸着薬、好ましくはタンパク質またはタンパク質断片を含む、組成物。
２７．  眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の少なくとも三つの吸着薬、好ましくはタンパク質またはタンパク質断片を含む、組成物。
２８．  眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の吸着薬、または請求項２６または２７に記載の組成物を含む医薬組成物。
２９．  上記対象は、結膜炎および結膜瘢痕（眼類天疱瘡を含む）、強膜炎および上強膜炎、角膜潰瘍による角膜瘢痕および混濁、角結膜炎、角膜炎、水疱性角膜症、角膜変性症、虹彩毛様体炎ならびに虹彩および毛様体の癒着、脈絡網膜炎（ｃｈｏｒｉｏｒｅｔｉｎａｌ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）または変性または出血または破裂または血管新生に起因する脈絡網膜瘢痕／線維症、線維性硝子体網膜症（ｆｉｂｒｏｔｉｃ  ｖｉｔｒｅｏｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｉｅｓ）、たとえば増殖性硝子体網膜症、未熟児網膜症および糖尿病性網膜症；脈絡膜血管新生および黄斑変性症、続発性緑内障、眼内炎、および眼科手術または眼球内異物を含む外傷後の創傷治癒障害および線維症、を含む群から選択される疾患に罹患している、対象の治療における使用のための、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の吸着薬、または請求項２５または２６に記載の組成物、または請求項２８の医薬組成物。
３０．  上記対象は、（特発性）肺線維症、皮膚ケロイド形成、強皮症、骨髄線維症、腎臓線維症、膵臓線維症、および心臓線維症、ならびに（非）アルコール性脂肪性肝炎、糸球体腎炎、および（ＡＮＣＡ関連）血管炎における線維症を含む群から選択される疾患に罹患している、対象の治療における使用のための、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の吸着薬、または請求項２６または２７に記載の組成物、または請求項２８の医薬組成物。
３１．  上記対象は、肺線維症に罹患している、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の吸着薬、または請求項２６または２７に記載の組成物、または請求項２８の医薬組成物。
３２．  上記対象は角膜線維症に罹患している、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の吸着薬、または請求項２６または２７に記載の組成物、または請求項２８の医薬組成物。
３３．  上記対象は脈絡網膜線維症に罹患している、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の吸着薬、または請求項２６または２７に記載の組成物、または請求項２８の医薬組成物。
３４．  上記対象は糸球体腎炎および／または腎臓線維症による線維症に罹患している、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の吸着薬、または請求項２６または２７に記載の組成物、または請求項２８の医薬組成物。
３５．  上記対象は脂肪性肝炎および／または肝線維症に罹患している、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の吸着薬、または請求項２６または２７に記載の組成物、または請求項２８の医薬組成物。
【００９７】
以下の実施形態は、本発明の主題である：
１．  眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための、補体−アナフィラトキシンＣ５ａおよび／またはＣ３ａおよび／またはＣ４ａに結合し、それによって好ましくはＣ５ａおよび／またはＣ３ａおよび／またはＣ４ａの活性を阻害する、吸着薬。
２．  上記吸着薬は、タンパク質またはその断片、ペプチド、非ＩｇＧスキャフォールド、アプタマー、オリゴヌクレオチド、抗体または抗体様タンパク質、ペプチド模倣薬またはその断片を含む群から選択される、請求項１に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
３．  上記吸着薬は、創傷治癒、特に角膜の創傷治癒を促進するために投与される、請求項１または２に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
４．  上記吸着薬は、配列番号：２０または配列番号：２１で示されるアミノ酸配列を有する補体成分Ｃ５ａタンパク質のいくつかの重複ペプチド断片に結合しうる、ここで重複は抗体、抗体様タンパク質、または吸着薬および特定のペプチド断片の標的アミノ酸配列の重複を意味する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
５．  上記吸着薬は、配列番号：２２〜３４によるアミノ酸配列を有するタンパク質の断片内のエピトープまたは断片と重複するエピトープでのみＣ５ａに結合しうる、請求項４に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
６．  上記吸着薬は、配列番号：３５〜４０（配列番号：３５：  Ｘ1Ｘ2ＥＴＣＥＸ3ＲＸ4、配列番号：３６：  Ｘ5Ｘ6ＫＸ7Ｘ8Ｘ9Ｌ、および配列番号：３７：  Ｘ5Ｘ6ＫＸ7Ｘ8Ｘ9Ｉ）によるアミノ酸配列によって形成されるＣ５ａのエピトープにも結合しうる、ここでＸ1はＮ、Ｈ、Ｄ、Ｆ、Ｋ、Ｙ、およびＴからなる群から選択され；Ｘ2はＤ、Ｌ、Ｙ、およびＨからなる群から選択され；Ｘ3はＱ、Ｅ、およびＫからなる群から選択され；Ｘ4はＡ、Ｖ、およびＬからなる群から選択され；Ｘ5はＳ、Ｈ、Ｐ、およびＮからなる群から選択され；Ｘ6はＨおよびＮからなる群から選択され；Ｘ7はＤ、Ｎ、Ｈ、Ｐ、およびＧからなる群から選択され；Ｘ8はＭ、Ｌ、Ｉ、およびＶからなる群から選択され；およびＸ9はＱ、Ｌ、およびＩからなる群から選択される、請求項４に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
７．  上記吸着薬は、配列番号：４３で示されるアミノ酸配列を有する補体成分Ｃ３ａタンパク質のいくつかの重複ペプチド断片に結合しうる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
８．  上記吸着薬はまた、配列番号：４４〜４７によるアミノ酸配列を有するタンパク質の断片内のエピトープまたは断片と重複するエピトープでのみヒトＣ３ａに結合しうる、請求項７に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
９．  上記吸着薬は、配列番号：４８または配列番号：４９で示されるアミノ酸配列を有する補体成分Ｃ４ａタンパク質のいくつかの重複ペプチド断片に結合しうる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
１０．  上記吸着薬はまた、配列番号：５０によるアミノ酸配列を有するタンパク質の断片内のエピトープまたは断片と重複するエピトープでのみヒトＣ４ａに結合しうる、請求項９に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
１１．  上記吸着薬は、抗体または抗体様タンパク質である、請求項１〜１０に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
１２．  上記吸着薬はアプタマーである、請求項１〜１０に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
１３．  上記吸着薬はアプタマーであり、ここで上記アプタマーは配列番号：４１に開示されているようなＲＮＡおよび／またはＤＮＡからなる核酸分子に関連しうる、請求項１２に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
１４．  上記吸着薬はアプタマーであり、ここで上記アプタマーは配列番号：４１に開示されているようなＲＮＡおよび／またはＤＮＡからなる核酸分子に関連しうる、およびここで上記アプタマーは配列番号：４２からなるＣ５ａ上の結合部位に結合する、請求項１３に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
１５．  上記吸着薬は配列番号：１に記載のヒトＣ５Ｌ２タンパク質、配列番号：１のヒトＣ５Ｌ２タンパク質の全長アミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるタンパク質／ペプチドまたは断片、配列番号：２に記載のヒトＣ５ａＲ１タンパク質、配列番号：２のヒトＣ５ａＲ１タンパク質の全長アミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片、配列番号：３に記載のヒトＣ３ａＲタンパク質、配列番号：３のヒトＣ３ａＲタンパク質の全長アミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片、配列番号：４に記載のマウスＣ５Ｌ２タンパク質、配列番号：４のマウスＣ５Ｌ２タンパク質の全長アミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片、配列番号：５に記載のマウスＣ５ａＲ１タンパク質、配列番号：５のマウスＣ５ａＲ１タンパク質の全長アミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片、配列番号：６に記載のマウスＣ３ａＲタンパク質、および配列番号：６のマウスＣ３ａＲタンパク質の全長アミノ酸配列と少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片、を含む群から選択されるタンパク質またはタンパク質断片である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
１６．  上記吸着薬はタンパク質／ペプチドまたはタンパク質断片であり、配列番号：７に記載のアミノ酸配列、配列番号：８に記載のアミノ酸配列、配列番号：９に記載のアミノ酸配列、配列番号：１０に記載のアミノ酸配列、配列番号：１１に記載のアミノ酸配列、配列番号：１２に記載のアミノ酸配列、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列、配列番号：１４に記載のアミノ酸配列、配列番号：１５に記載のアミノ酸配列、配列番号：１６に記載のアミノ酸配列、配列番号：１７に記載のアミノ酸配列、および配列番号：７〜１７に記載のアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片、を含む群から選択される少なくとも一つの保存領域を含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
１７．  上記吸着薬はタンパク質／ペプチドまたはタンパク質断片であり、配列番号：７に記載のアミノ酸配列、配列番号：８に記載のアミノ酸配列、配列番号：９に記載のアミノ酸配列、配列番号：１０に記載のアミノ酸配列、配列番号：１１に記載のアミノ酸配列、配列番号：１２に記載のアミノ酸配列、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列、配列番号：１４に記載のアミノ酸配列、配列番号：１５に記載のアミノ酸配列、配列番号：１６に記載のアミノ酸配列、配列番号：１７に記載のアミノ酸配列、および配列番号：７〜１７に記載のアミノ酸配列のいずれか一つと少なくとも６０％同一であるタンパク質または断片、を含む群から選択される少なくとも二つの保存領域を含む、請求項１６に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
１８．  上記吸着薬はタンパク質／ペプチドまたはタンパク質断片であり、配列番号：１８に記載のアミノ酸配列および配列番号：１９に記載のアミノ酸配列を含む群から選択される少なくとも一つの保存領域を含む、請求項１５〜１７のいずれか一項に記載の眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための吸着薬。
１９．  眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の、少なくとも二つの吸着薬、好ましくはタンパク質またはタンパク質断片を含む組成物。
２０．  眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の、少なくとも三つのタンパク質またはタンパク質断片を含む組成物。
２１．  眼の創傷および／または線維症を有する対象の治療における使用のための、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の吸着薬または請求項１９または２０に記載の組成物を含む、医薬組成物。
２２．  上記対象は、結膜炎および結膜瘢痕（眼類天疱瘡を含む）、強膜炎および上強膜炎、角膜潰瘍による角膜瘢痕および混濁、角結膜炎、角膜炎、水疱性角膜症、角膜変性症、虹彩毛様体炎ならびに虹彩および毛様体の癒着、脈絡網膜炎（ｃｈｏｒｉｏｒｅｔｉｎａｌ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）または変性または出血または破裂または血管新生に起因する脈絡網膜瘢痕／線維症、線維性硝子体網膜症（ｆｉｂｒｏｔｉｃ  ｖｉｔｒｅｏｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｉｅｓ）、たとえば増殖性硝子体網膜症、未熟児網膜症および糖尿病性網膜症；脈絡膜血管新生および黄斑変性症、続発性緑内障、眼内炎、および眼科手術または眼球内異物を含む外傷後の創傷治癒障害および線維症、を含む群から選択される疾患に罹患している、対象の治療における使用のための、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の吸着薬、または請求項１９または２０に記載の組成物、または請求項２１の医薬組成物。
２３．  上記対象は、（特発性）肺線維症、皮膚ケロイド形成、強皮症、骨髄線維症、腎臓線維症、膵臓線維症、および心臓線維症、ならびに（非）アルコール性脂肪性肝炎、糸球体腎炎、および（ＡＮＣＡ関連）血管炎における線維症を含む群から選択される疾患に罹患している、対象の治療における使用のための、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の吸着薬、または請求項１９または２０に記載の組成物、または請求項２１の医薬組成物。
【図面の簡単な説明】
【００９８】
【図１】図１は、ヒト角膜実質細胞を使用した、ヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片（ｈＣ５Ｌ２）によるＣ３ａを介した筋線維芽細胞の活性化を阻害する効果を示す。
【図２】図２は、ヒト角膜実質細胞を使用した、ヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片（ｈＣ５Ｌ２）によるＣ５ａを介した筋線維芽細胞の活性化を阻害する効果を示す。
【図３】図３は、ヒト角膜実質細胞を使用した、ヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片（ｈＣ５Ｌ２）によるＣ５ａおよびＣ３ａを介した筋線維芽細胞の活性化を阻害する効果を示す。
【図４】図４は、ヒト角膜実質細胞を使用した、マウスＣ５Ｌ２タンパク質断片（ｍＣ５Ｌ２）によるＣ３ａを介した筋線維芽細胞の活性化を阻害する効果を示す。
【図５】図５は、ヒト角膜実質細胞を使用した、マウスＣ５Ｌ２タンパク質断片（ｍＣ５Ｌ２）によるＣ５ａを介した筋線維芽細胞の活性化を阻害する効果を示す。
【図６】図６は、ヒト角膜実質細胞を使用した、マウスＣ５Ｌ２タンパク質断片（ｍＣ５Ｌ２）によるＣ５ａおよびＣ３ａを介した筋線維芽細胞の活性化を阻害する効果を示す。
【図７】図７は、ヒト角膜実質細胞を使用した、ウシ胎児血清（ＦＣＳ）の存在下での筋線維芽細胞に対するヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片濃度の効果を示す。
【図８】図８は、ヒト角膜実質細胞を使用した、ウシ胎児血清（ＦＣＳ）の存在下での筋線維芽細胞に対するマウスＣ５Ｌ２タンパク質断片濃度の効果を示す。
【図９】図９は、ヒト角膜実質細胞を使用した、ウシ胎児血清の不存在下での筋線維芽細胞に対するヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片濃度の効果を示す。
【図１０】図１０は、ヒト角膜実質細胞を使用した、ウシ胎児血清の不存在下での筋線維芽細胞に対するマウスＣ５Ｌ２タンパク質断片濃度の効果を示す。
【図１１】図１１は、ヒト肺胞基底上皮細胞を使用した、ヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片（ｈＣ５Ｌ２）によるＣ３ａを介した筋線維芽細胞の活性化を阻害する効果を示す。
【図１２】図１２は、ヒト肺胞基底上皮細胞を使用した、ヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片（ｈＣ５Ｌ２）によるＣ５ａを介した筋線維芽細胞の活性化を阻害する効果を示す。
【図１３】図１３は、ヒト肺胞基底上皮細胞を使用した、ヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片（ｈＣ５Ｌ２）によるＣ５ａおよびＣ３ａを介した筋線維芽細胞の活性化を阻害する効果を示す。
【図１４】図１４は、ヒト肺胞基底上皮細胞を使用した、ウシ胎児血清（ＦＣＳ）の存在下での筋線維芽細胞に対するヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片濃度の効果を示す。
【図１５】図１５は、ヒト角膜実質細胞を使用した、全長の組換えヒトＣ５ａアナフィラトキシン走化性受容体２（ｒｈＣ５ＡＲ２／ｒｈＣ５Ｌ２）によるＣ３ａを介した筋線維芽細胞の活性化を阻害する効果を示す。
【図１６】図１６は、ヒト角膜実質細胞を使用した、全長の組換えヒトＣ５ａアナフィラトキシン走化性受容体２（ｒｈＣ５ＡＲ２／ｒｈＣ５Ｌ２）によるＣ５ａを介した筋線維芽細胞の活性化を阻害する効果を示す。
【図１７】図１７は、ヒト角膜実質細胞を使用した、全長の組換えヒトＣ５ａアナフィラトキシン走化性受容体２（ｒｈＣ５ＡＲ２／ｒｈＣ５Ｌ２）によるＣ３ａおよびＣ５ａを介した筋線維芽細胞の活性化を阻害する効果を示す。
【図１８】図１８は、ヒト角膜実質細胞を使用した、ウシ胎児血清（ＦＣＳ）の存在下での筋線維芽細胞に対する全長の組換えヒトＣ５ａアナフィラトキシン走化性受容体２（ｒｈＣ５ＡＲ２／ｒｈＣ５Ｌ２）濃度の効果を示す。
【図１９】図１９は、ヒト角膜実質細胞を使用した、ウシ胎児血清（ＦＣＳ）の不存在下での筋線維芽細胞に対する全長の組換えヒトＣ５ａアナフィラトキシン走化性受容体２（ｒｈＣ５ＡＲ２／ｒｈＣ５Ｌ２）濃度の効果を示す。
【図２０】図２０は、ヒト角膜実質細胞を使用した、全長の組換えヒトＣ５ａアナフィラトキシン走化性受容体１（ｒｈＣ５ＡＲ１）によるＣ３ａを介した筋線維芽細胞の活性化を阻害する効果を示す。
【図２１】図２１は、ヒト角膜実質細胞を使用した、全長の組換えヒトＣ５ａアナフィラトキシン走化性受容体１（ｒｈＣ５ＡＲ１）によるＣ５ａを介した筋線維芽細胞の活性化を阻害する効果を示す。
【図２２】図２２は、ヒト角膜実質細胞を使用した、全長の組換えヒトＣ５ａアナフィラトキシン走化性受容体１（ｒｈＣ５ＡＲ１）によるＣ３ａおよびＣ５ａを介した筋線維芽細胞の活性化を阻害する効果を示す。
【図２３】図２３は、ヒト角膜実質細胞を使用した、ウシ胎児血清（ＦＣＳ）の存在下での筋線維芽細胞に対する全長の組換えヒトＣ５ａアナフィラトキシン走化性受容体１（ｒｈＣ５ＡＲ１）濃度の効果を示す。
【図２４】図２４は、ヒト角膜実質細胞を使用した、ウシ胎児血清（ＦＣＳ）の不存在下での筋線維芽細胞に対する全長の組換えヒトＣ５ａアナフィラトキシン走化性受容体１（ｒｈＣ５ＡＲ１）濃度の効果を示す。
【図２５】図２５は、ヒト角膜実質細胞を使用した、全長の組換えヒトＣ３ａアナフィラトキシン走化性受容体（ｒｈＣ３ＡＲ）によるＣ３ａを介した筋線維芽細胞の活性化を阻害する効果を示す。
【図２６】図２６は、ヒト角膜実質細胞を使用した、全長の組換えヒトＣ３ａアナフィラトキシン走化性受容体（ｒｈＣ３ＡＲ）によるＣ５ａを介した筋線維芽細胞の活性化を阻害する効果を示す。
【図２７】図２７は、ヒト角膜実質細胞を使用した、全長の組換えヒトＣ３ａアナフィラトキシン走化性受容体（ｒｈＣ３ＡＲ）によるＣ３ａおよびＣ５ａを介した筋線維芽細胞の活性化を阻害する効果を示す。
【図２８】図２８は、ヒト角膜実質細胞を使用した、ウシ胎児血清（ＦＣＳ）の存在下での筋線維芽細胞に対する全長の組換えヒトＣ３ａアナフィラトキシン走化性受容体１（ｒｈＣ３ＡＲ）濃度の効果を示す。
【図２９】図２９は、ヒト角膜実質細胞を使用した、ウシ胎児血清（ＦＣＳ）の不存在下での筋線維芽細胞に対する全長の組換えヒトＣ３ａアナフィラトキシン走化性受容体１（ｒｈＣ３ＡＲ）濃度の効果を示す。
【図３０】図３０は、ヒト角膜実質細胞を使用した、ヒトＣ５ａに結合するＲＮＡ／ＤＮＡアプタマーによるＣ３ａを介した筋線維芽細胞の活性化を阻害する効果を示す。
【図３１】図３１は、ヒト角膜実質細胞を使用した、ヒトＣ５ａに結合するＲＮＡ／ＤＮＡアプタマーによるＣ５ａを介した筋線維芽細胞の活性化を阻害する効果を示す。
【図３２】図３２は、ヒト角膜実質細胞を使用した、ヒトＣ５ａに結合するＲＮＡ／ＤＮＡアプタマーによるＣ３ａおよびＣ５ａを介した筋線維芽細胞の活性化を阻害する効果を示す。
【図３３】図３３は、ヒト角膜実質細胞を使用した、ウシ胎児血清（ＦＣＳ）の存在下での筋線維芽細胞に対するヒトＣ５ａに結合するＲＮＡ／ＤＮＡアプタマー濃度の効果を示す。
【図３４】図３４は、ヒト角膜実質細胞を使用した、ウシ胎児血清（ＦＣＳ）の不存在下での筋線維芽細胞に対するヒトＣ５ａに結合するＲＮＡ／ＤＮＡアプタマー濃度の効果を示す。
【図３５】図３５は、ヒト角膜実質細胞を使用した、ヒトＣ５ａに結合する抗体（抗体  ２５０５６５）によるＣ３ａ、Ｃ５ａ、またはＣ３ａおよびＣ５ａを介した筋線維芽細胞の活性化を阻害する効果を示す。
【図３６】図３６は、ヒト角膜実質細胞を使用した、ヒトＣ５ａに結合する抗体（抗体  ３０８７３３）によるＣ３ａ、Ｃ５ａ、またはＣ３ａおよびＣ５ａを介した筋線維芽細胞の活性化を阻害する効果を示す。
【図３７】図３７は、ヒト角膜実質細胞を使用した、ヒトＣ３ａに結合する抗体（抗体  ｓｃ２８２９４）によるＣ３ａ、Ｃ５ａ、またはＣ３ａおよびＣ５ａを介した筋線維芽細胞の活性化を阻害する効果を示す。
【図３８】図３８は、ヒト角膜実質細胞を使用した、ヒトＣ３ａに結合する抗体（抗体  ＨＭ１０７２）によるＣ３ａ、Ｃ５ａ、またはＣ３ａおよびＣ５ａを介した筋線維芽細胞の活性化を阻害する効果を示す。
【図３９】図３９は、マウスＣ５Ｌ２タンパク質断片（ｍＣ５Ｌ２）の存在下または非存在下における、角膜アルカリ熱傷の２０日後の角膜アルカリ熱傷マウスモデルにおける線維症評価スコアを示す。
【図４０】図４０は、マウスＣ５Ｌ２タンパク質断片（ｍＣ５Ｌ２）の存在下または非存在下における、角膜アルカリ熱傷の２０日後の角膜アルカリ熱傷マウスモデルにおけるＣｏｗｅｌｌ線維症スコアの項目を示す。
【発明を実施するための形態】
【００９９】
実施例１
ヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片は、Ｃ３ａによって活性化された筋線維芽細胞の阻害を引き起こす
【０１００】
眼の創傷または線維症を有する対象の治療における、配列番号：１８によるヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片（ｈＣ５Ｌ２）の潜在的な機能的役割を探索するために、Ｃ３ａ活性化筋線維芽細胞に対するその存在の影響を研究した。ヒト角膜実質細胞をヒトＣ３ａで２４時間刺激し、活性化された筋線維芽細胞に関して評価した（図１）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ウシ胎児血清）を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト角膜実質細胞を使用した。図１に示すように、Ｃ３ａ  ０．１  μｇ／ｍｌは、参照群（無血清：１０±１１％；  ＦＣＳ：１６±１４％；  それぞれｐ＜０．００１およびｐ＜０．００１）と比較して、筋線維芽細胞の有意な活性化（ａＳＭＡ陽性細胞で測定、７４±２２％）を引き起こした。ヒト角膜実質細胞から得られ、遺伝子発現Ｃｌａｒｉｏｍ  Ｓヒトマイクロアレイから生成された、ヒトＣ３ａ  ０．１  μｇ／ｍｌ、およびウシ胎児血清を含まないＤＭＥＭ増殖培地（無血清対照）で２４時間インキュベートした後に発現レベルが異なる（倍率変化：≧２または≦−２）遺伝子のリストを表２に示す。Ｃ３ａ活性化筋線維芽細胞と比較して、ヒトＣ３ａおよびヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片の存在下でのインキュベーションにより、有意な減少が見られた（ｈＣ５Ｌ２  ０．１  μｇ／ｍｌ：  １６±９％；  ｈＣ５Ｌ２  ０．２  μｇ／ｍｌ：  １７±１１％；  ｈＣ５Ｌ２  ０．３  μｇ／ｍｌ：  ８±７％）（それぞれｐ＜０．００１、ｐ＜０．００１、およびｐ＜０．００１）。ヒト角膜実質細胞から得られ、遺伝子発現Ｃｌａｒｉｏｍ  Ｓヒトマイクロアレイから生成された、ヒトＣ３ａ  ０．１  μｇ／ｍｌ、および配列番号：１８によるヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片  ０．３  μｇ／ｍｌを伴うヒトＣ３ａ  ０．１  μｇ／ｍｌで２４時間インキュベートした後に発現レベルが異なる（倍率変化：≧２または≦−２）遺伝子のリストを表５に示す。したがって、ヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片は、Ｃ３ａによって活性化された筋線維芽細胞の阻害を引き起こす原因であった。バー＝平均の標準誤差。
【０１０１】
実施例２
ヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片は、Ｃ５ａによって活性化された筋線維芽細胞の阻害を引き起こす
【０１０２】
眼の創傷または線維症を有する対象の治療における、配列番号：１８によるヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片（ｈＣ５Ｌ２）の潜在的な機能的役割を探索するために、Ｃ５ａ活性化筋線維芽細胞に対するその存在の影響を研究した。ヒト角膜実質細胞をヒトＣ５ａで２４時間刺激し、活性化された筋線維芽細胞に関して評価した（図２）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ウシ胎児血清）を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト角膜実質細胞を使用した。図２に示すように、Ｃ５ａ  ０．１  μｇ／ｍｌは、参照群（無血清：１０±１１％；  ＦＣＳ：１６±１４％；  それぞれｐ＜０．００１およびｐ＜０．００１）と比較して、筋線維芽細胞の有意な活性化（ａＳＭＡ陽性細胞で測定、７７±２３％）を引き起こした。ヒト角膜実質細胞から得られ、遺伝子発現Ｃｌａｒｉｏｍ  Ｓヒトマイクロアレイから生成された、ヒトＣ５ａ  ０．１  μｇ／ｍｌ、およびウシ胎児血清を含まないＤＭＥＭ増殖培地（無血清対照）で２４時間インキュベートした後に発現レベルが異なる（倍率変化：≧２または≦−２）遺伝子のリストを表３に示す。Ｃ５ａ活性化筋線維芽細胞と比較して、ヒトＣ５ａおよびヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片の存在下でのインキュベーションにより、活性化筋線維芽細胞の有意な減少が見られた（ｈＣ５Ｌ２  ０．１  μｇ／ｍｌ：  ４１±２２％；  ｈＣ５Ｌ２  ０．２  μｇ／ｍｌ：  ２６±２６％；  ｈＣ５Ｌ２  ０．３  μｇ／ｍｌ：  ７±７％）（それぞれｐ＝０．００１、ｐ＜０．００１、およびｐ＜０．００１）。ヒト角膜実質細胞から得られ、遺伝子発現Ｃｌａｒｉｏｍ  Ｓヒトマイクロアレイから生成された、ヒトＣ５ａ  ０．１  μｇ／ｍｌ、および配列番号：１８によるヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片  ０．３  μｇ／ｍｌを伴うヒトＣ５ａ  ０．１  μｇ／ｍｌで２４時間インキュベートした後に発現レベルが異なる（倍率変化：≧２または≦−２）遺伝子のリストを表６に示す。したがって、ヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片は、Ｃ５ａによって活性化された筋線維芽細胞の阻害を引き起こす原因であった。バー＝平均の標準誤差。
【０１０３】
実施例３
ヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片は、Ｃ５ａおよびＣ３ａによって活性化された筋線維芽細胞の阻害を引き起こす
【０１０４】
眼の創傷または線維症を有する対象の治療における、配列番号：１８によるヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片の潜在的な機能的役割を探索するために、Ｃ５ａ／Ｃ３ａ活性化筋線維芽細胞に対するその存在の影響を研究した。ヒト角膜実質細胞をそれぞれヒトＣ５ａおよびヒトＣ３ａで２４時間刺激し、活性化された筋線維芽細胞に関して評価した（図３）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ウシ胎児血清）を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト角膜実質細胞を使用した。図３に示すように、Ｃ５ａおよびＣ３ａは、どちらも０．１  μｇ／ｍｌの濃度で、参照群（無血清：１０±１１％；  ＦＣＳ：１６±１４％；  それぞれｐ＜０．００１およびｐ＜０．００１）と比較して、筋線維芽細胞の有意な活性化（ａＳＭＡ陽性細胞で測定、８７±１１％）を引き起こした。ヒト角膜実質細胞から得られ、遺伝子発現Ｃｌａｒｉｏｍ  Ｓヒトマイクロアレイから生成された、どちらも  ０．１  μｇ／ｍｌの濃度のヒトＣ３ａおよびヒトＣ５ａ、およびウシ胎児血清を含まないＤＭＥＭ増殖培地（無血清対照）で２４時間インキュベートした後に発現レベルが異なる（倍率変化：≧２または≦−２）遺伝子のリストを表４に示す。Ｃ５ａおよびＣ３ａ活性化筋線維芽細胞と比較して、ヒトＣ３ａ、Ｃ５ａおよびヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片の存在下でのインキュベーションにより、活性化筋線維芽細胞の有意な減少が見られた（ｈＣ５Ｌ２  ０．１  μｇ／ｍｌ：  ２３±１４％；  ｈＣ５Ｌ２  ０．２  μｇ／ｍｌ：  １６±１２％；  ｈＣ５Ｌ２  ０．３  μｇ／ｍｌ：  ６±６％）（それぞれｐ＜０．００１、ｐ＜０．００１、およびｐ＜０．００１）。ヒト角膜実質細胞から得られ、遺伝子発現Ｃｌａｒｉｏｍ  Ｓヒトマイクロアレイから生成された、ヒトＣ３ａおよびＣ５、いずれも０．１  μｇ／ｍｌ、および配列番号：１８によるヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片  ０．３  μｇ／ｍｌを伴うヒトＣ３ａおよびＣ５、いずれも０．１  μｇ／ｍｌで２４時間インキュベートした後に発現レベルが異なる（倍率変化：≧２または≦−２）遺伝子のリストを表７に示す。したがって、ヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片は、Ｃ５ａおよびＣ３ａによって活性化された筋線維芽細胞の阻害を引き起こす原因であった。バー＝平均の標準誤差。
【０１０５】
実施例４
マウスＣ５Ｌ２タンパク質断片は、Ｃ３ａによって活性化された筋線維芽細胞の阻害を引き起こす
【０１０６】
眼の創傷または線維症を有する対象の治療における、配列番号：１９によるマウスＣ５Ｌ２タンパク質断片（ｍＣ５Ｌ２）の潜在的な機能的役割を探索するために、Ｃ３ａ活性化筋線維芽細胞に対するその存在の影響を研究した。ヒト角膜実質細胞をヒトＣ３ａで２４時間刺激し、活性化された筋線維芽細胞に関して評価した（図４）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ウシ胎児血清）を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト角膜実質細胞を使用した。図４に示すように、Ｃ３ａ  ０．１  μｇ／ｍｌは、参照群（無血清：１０±１１％；  ＦＣＳ：１６±１４％；  それぞれｐ＜０．００１およびｐ＜０．００１）と比較して、筋線維芽細胞の有意な活性化（ａＳＭＡ陽性細胞で測定、７４±２２％）を引き起こした。Ｃ３ａ活性化筋線維芽細胞と比較して、Ｃ３ａおよびマウスＣ５Ｌ２タンパク質断片の存在下でのインキュベーションにより、活性化筋線維芽細胞の有意な減少が見られた（ｍＣ５Ｌ２  ０．１  μｇ／ｍｌ：  ３１±１３％；  ｍＣ５Ｌ２  ０．２  μｇ／ｍｌ：  １６±１０％；  ｍＣ５Ｌ２  ０．３  μｇ／ｍｌ：  ２１±１３％）（それぞれｐ＜０．００１、ｐ＜０．００１、およびｐ＜０．００１）。したがって、マウスＣ５Ｌ２タンパク質断片は、Ｃ３ａによって活性化された筋線維芽細胞の阻害を引き起こす原因であった。バー＝平均の標準誤差。
【０１０７】
実施例５
マウスＣ５Ｌ２タンパク質断片は、Ｃ５ａによって活性化された筋線維芽細胞の阻害を引き起こす
【０１０８】
眼の創傷または線維症を有する対象の治療における、配列番号：１９によるマウスＣ５Ｌ２タンパク質断片（ｍＣ５Ｌ２）の潜在的な機能的役割を探索するために、Ｃ５ａ活性化筋線維芽細胞に対するその存在の影響を研究した。ヒト角膜実質細胞をヒトＣ５ａで２４時間刺激し、活性化された筋線維芽細胞に関して評価した（図５）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ウシ胎児血清）を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト角膜実質細胞を使用した。図５に示すように、Ｃ５ａ  ０．１  μｇ／ｍｌは、参照群（無血清：１０±１１％；  ＦＣＳ：１６±１４％；  それぞれｐ＜０．００１およびｐ＜０．００１）と比較して、筋線維芽細胞の有意な活性化（ａＳＭＡ陽性細胞で測定、７７±２３％）を引き起こした。Ｃ５ａ活性化筋線維芽細胞と比較して、Ｃ５ａおよびマウスＣ５Ｌ２タンパク質断片の存在下でのインキュベーションにより、活性化筋線維芽細胞の有意な減少が見られた（ｍＣ５Ｌ２  ０．１  μｇ／ｍｌ：  ３３±１８％；  ｍＣ５Ｌ２  ０．２  μｇ／ｍｌ：  ２０±１９％；  ｍＣ５Ｌ２  ０．３  μｇ／ｍｌ：  ２０±１０％）（それぞれｐ＜０．００１、ｐ＜０．００１、およびｐ＜０．００１）。したがって、マウスＣ５Ｌ２タンパク質断片は、Ｃ５ａによって活性化された筋線維芽細胞の阻害を引き起こす原因であった。バー＝平均の標準誤差。
【０１０９】
実施例６
マウスＣ５Ｌ２タンパク質断片は、Ｃ５ａおよびＣ３ａによって活性化された筋線維芽細胞の阻害を引き起こす
【０１１０】
眼の創傷または線維症を有する対象の治療における、配列番号：１９によるマウスＣ５Ｌ２タンパク質断片（ｍＣ５Ｌ２）の潜在的な機能的役割を探索するために、Ｃ５ａ／Ｃ３ａ活性化筋線維芽細胞に対するその存在の影響を研究した。ヒト角膜実質細胞をそれぞれヒトＣ５ａおよびヒトＣ３ａで２４時間刺激し、活性化された筋線維芽細胞に関して評価した（図６）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ウシ胎児血清）を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト角膜実質細胞を使用した。図６に示すように、Ｃ５ａおよびＣ３ａは、どちらも０．１  μｇ／ｍｌの濃度で、参照群（無血清：１０±１１％；  ＦＣＳ：１６±１４％；  それぞれｐ＜０．００１およびｐ＜０．００１）と比較して、筋線維芽細胞の有意な活性化（ａＳＭＡ陽性細胞で測定、８７±１１％）を引き起こした。Ｃ５ａおよびＣ３ａ活性化筋線維芽細胞と比較して、ヒトＣ３ａ、Ｃ５ａおよびマウスＣ５Ｌ２タンパク質断片の存在下でのインキュベーションにより、活性化筋線維芽細胞の有意な減少が見られた（ｍＣ５Ｌ２  ０．１  μｇ／ｍｌ：  １７±１０％；  ｍＣ５Ｌ２  ０．２  μｇ／ｍｌ：  １１±１２％；  ｍＣ５Ｌ２  ０．３  μｇ／ｍｌ：  １３±１１％）（それぞれｐ＜０．００１、ｐ＜０．００１、およびｐ＜０．００１）。したがって、マウスＣ５Ｌ２タンパク質断片は、Ｃ５ａおよびＣ３ａによって活性化された筋線維芽細胞の阻害を引き起こす原因であった。バー＝平均の標準誤差。
【０１１１】
実施例７
ウシ胎児血清の存在下での筋線維芽細胞に対するヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片濃度の影響
【０１１２】
眼の創傷または線維症を有する対象の治療における、配列番号：１８によるヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片（ｈＣ５Ｌ２）の潜在的な機能的役割を探索するために、筋線維芽細胞に対するその濃度の影響を研究した。ヒト角膜実質細胞を１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ウシ胎児血清）および異なる濃度のヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片を含むＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートした（図７）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト角膜実質細胞を使用した（無血清：１０±１１％；  ＦＣＳ：１６±１４％）。図７に示すように、ヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片は、低濃度で筋線維芽細胞の活性化にわずかなプラス効果を有することが明らかになった（ｈＣ５Ｌ２  ０．０５  μｇ／ｍｌ：  １９±１５％；  ｈＣ５Ｌ２  ０．１  μｇ／ｍｌ：  ２４±２１％；  ｈＣ５Ｌ２  ０．２  μｇ／ｍｌ：  １６±１２％）が、一方、高濃度で筋線維芽細胞の阻害が観察された（ｈＣ５Ｌ２  ０．３  μｇ／ｍｌ：  １１±１０％）。それでも、１０％ＦＣＳで培養されたヒト角膜実質細胞と比較して、差はわずかなままであった（それぞれ、ｐ＝０．５５４、ｐ＝０．１３６、ｐ＝０．９１８、およびｐ＝０．３４５）。
【０１１３】
実施例８
ウシ胎児血清の存在下での筋線維芽細胞に対するマウスＣ５Ｌ２タンパク質断片濃度の影響
【０１１４】
眼の創傷または線維症を有する対象の治療における、配列番号：１９によるマウスＣ５Ｌ２タンパク質断片（ｍＣ５Ｌ２）の潜在的な機能的役割を探索するために、筋線維芽細胞に対するその濃度の影響を研究した。ヒト角膜実質細胞を１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ウシ胎児血清）および異なる濃度のマウスＣ５Ｌ２タンパク質断片を含むＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートした（図８）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト角膜実質細胞を使用した（無血清：１０±１１％；  ＦＣＳ：１６±１４％）。図８に示すように、マウスＣ５Ｌ２タンパク質断片は、低濃度で筋線維芽細胞の活性化にわずかなプラス効果を有することが明らかになった（ｍＣ５Ｌ２  ０．０５  μｇ／ｍｌ：  １１±６％；  ｍＣ５Ｌ２  ０．１  μｇ／ｍｌ：  １９±１５％；  ｍＣ５Ｌ２  ０．２  μｇ／ｍｌ：  １１±１２％）が、一方、高濃度で筋線維芽細胞の阻害が観察された（ｍＣ５Ｌ２  ０．３  μｇ／ｍｌ：  １１±７％）。それでも、１０％ＦＣＳで培養されたヒト角膜実質細胞と比較して、差はわずかなままであった（それぞれ、ｐ＝０．１０１、ｐ＝０．５８０、ｐ＝０．２９３、およびｐ＝０．２７７）。
【０１１５】
実施例９
ウシ胎児血清の不存在下での筋線維芽細胞に対するヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片濃度の影響
【０１１６】
眼の創傷または線維症を有する対象の治療における、配列番号：１８によるヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片（ｈＣ５Ｌ２）の潜在的な機能的役割を探索するために、筋線維芽細胞に対するその濃度の影響を研究した。ヒト角膜実質細胞を、ウシ胎児血清を含まない、および異なる濃度のヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片を含むＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートした（図９）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ウシ胎児血清）を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト角膜実質細胞を使用した（無血清：１０±１１％；  ＦＣＳ：１６±１４％）。図９に示すように、ヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片は、ＦＣＳを含まないＤＭＥＭでインキュベートしたヒト角膜実質細胞（無血清対照）と比較して、低濃度で筋線維芽細胞の活性化にわずかなプラス効果を有することが明らかになった（ｈＣ５Ｌ２  ０．０５  μｇ／ｍｌ：  ２３±１５％；  ｈＣ５Ｌ２  ０．１  μｇ／ｍｌ：  １９±１１％；  それぞれ、ｐ＝０．００５およびｐ＝０．０３９）が、一方、高濃度で筋線維芽細胞の阻害が観察され、かつ無血清対照と比較して差異を示さなかった（ｈＣ５Ｌ５  ０．２  μｇ／ｍｌ：  １７±１６％；  ｈＣ５Ｌ２  ０．３  μｇ／ｍｌ：  それぞれ、９±８％；  ｐ＝０．１５０、およびｐ＝０．７５５）。ヒト角膜実質細胞から得られ、遺伝子発現Ｃｌａｒｉｏｍ  Ｓヒトマイクロアレイから生成された、配列番号：１８によるヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片  ０．３  μｇ／ｍｌおよびウシ胎児血清を含まないＤＭＥＭ増殖培地（無血清対照）で２４時間インキュベートした後に発現レベルが異なる（倍率変化：≧２または≦−２）遺伝子のリストを表８に示す。
【０１１７】
実施例１０
ウシ胎児血清の不存在下での筋線維芽細胞に対するマウスＣ５Ｌ２タンパク質断片濃度の影響
【０１１８】
眼の創傷または線維症を有する対象の治療における、配列番号：１９によるマウスＣ５Ｌ２タンパク質断片（ｍＣ５Ｌ２）の潜在的な機能的役割を探索するために、筋線維芽細胞に対するその濃度の影響を研究した。ヒト角膜実質細胞を、ウシ胎児血清を含まない、および異なる濃度のマウスＣ５Ｌ２タンパク質断片を含むＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートした（図１０）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ウシ胎児血清）を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト角膜実質細胞を使用した（無血清：１０±１１％；  ＦＣＳ：１６±１４％）。図１０に示すように、マウスＣ５Ｌ２タンパク質断片は、ＦＣＳを含まないＤＭＥＭでインキュベートしたヒト角膜実質細胞（無血清対照）と比較して、低濃度で筋線維芽細胞の活性化にわずかなプラス効果を有することが明らかになった（ｍＣ５Ｌ２  ０．０５  μｇ／ｍｌ：  ２３±１３％；  ｍＣ５Ｌ２  ０．１  μｇ／ｍｌ：  ２２±１７％；  それぞれ、ｐ＝０．００３およびｐ＝０．００９）が、一方、高濃度で筋線維芽細胞の阻害が観察され、かつ無血清対照と比較して差異を示さなかった（ｈＣ５Ｌ２  ０．２  μｇ／ｍｌ：  １８±１０％；  ｈＣ５Ｌ２  ０．３  μｇ／ｍｌ：  ９±７％；  それぞれ、ｐ＝０．０６４およびｐ＝０．６４７）。
【０１１９】
実施例１１
ヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片は、Ｃ３ａによって活性化された筋線維芽細胞の阻害を引き起こす
【０１２０】
肺線維症を有する対象の治療における、配列番号：１８によるヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片（ｈＣ５Ｌ２）の潜在的な機能的役割を探索するために、Ｃ３ａ活性化筋線維芽細胞に対するその存在の影響を研究した。ヒト肺胞基底上皮細胞（Ａ５４９細胞）をヒトＣ３ａで２４時間刺激し、活性化された筋線維芽細胞に関して評価した（図１１）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ウシ胎児血清）を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト肺胞基底上皮細胞（Ａ５４９細胞）を使用した。図１１に示すように、Ｃ３ａ  ０．１  μｇ／ｍｌは、参照群（無血清：１６±１６％；  ＦＣＳ：  ３９±２１％；  それぞれｐ＜０．００１およびｐ＜０．００１）と比較して、筋線維芽細胞の有意な活性化（ａＳＭＡ陽性細胞で測定、８７±６％）を引き起こした。Ｃ３ａ活性化筋線維芽細胞と比較して、ヒトＣ３ａおよびヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片の存在下でのインキュベーションにより、有意な減少が見られた（ｈＣ５Ｌ２  ０．１  μｇ／ｍｌ：  ５５±１９％；  ｈＣ５Ｌ２  ０．２  μｇ／ｍｌ：  ５±６％；  ｈＣ５Ｌ２  ０．３  μｇ／ｍｌ：  ８±１２％）（それぞれｐ＝０．００１、ｐ＜０．００１、およびｐ＜０．００１）。図１１に示すように、筋線維芽細胞の活性化に対するヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片の固有の効果は、無血清対照と比較して差異を示さなかった（ｈＣ５Ｌ２  ０．３  μｇ／ｍｌ：  ９±１１％；  ｐ＝０．２５０）。したがって、ヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片は、Ｃ３ａによって活性化された筋線維芽細胞の阻害を引き起こす原因であった。バー＝平均の標準誤差。
【０１２１】
実施例１２
ヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片は、Ｃ５ａによって活性化された筋線維芽細胞の阻害を引き起こす
【０１２２】
肺線維症を有する対象の治療における、配列番号：１８によるヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片（ｈＣ５Ｌ２）の潜在的な機能的役割を探索するために、Ｃ５ａ活性化筋線維芽細胞に対するその存在の影響を研究した。ヒト肺胞基底上皮細胞（Ａ５４９細胞）をヒトＣ５ａで２４時間刺激し、活性化された筋線維芽細胞に関して評価した（図１２）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ウシ胎児血清）を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト肺胞基底上皮細胞（Ａ５４９細胞）を使用した。図１２に示すように、Ｃ５ａ  ０．１  μｇ／ｍｌは、参照群（無血清：１６±１６％；  ＦＣＳ：  ３９±２１％；  それぞれｐ＜０．００１およびｐ＜０．００１）と比較して、筋線維芽細胞の有意な活性化（ａＳＭＡ陽性細胞で測定、８３±１０％）を引き起こした。Ｃ５ａ活性化筋線維芽細胞と比較して、ヒトＣ５ａおよびヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片の存在下でのインキュベーションにより、有意な減少が見られた（ｈＣ５Ｌ２  ０．１  μｇ／ｍｌ：  ３±４％；  ｈＣ５Ｌ２  ０．２  μｇ／ｍｌ：  １１±１３％；  ｈＣ５Ｌ２  ０．３  μｇ／ｍｌ：  １０±１０％）（それぞれｐ＜０．００１、ｐ＜０．００１、およびｐ＜０．００１）。図１２に示すように、筋線維芽細胞の活性化に対するヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片の固有の効果は、無血清対照と比較して差異を示さなかった（ｈＣ５Ｌ２  ０．３  μｇ／ｍｌ：  ９±１１％；  ｐ＝０．２５０）。したがって、ヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片は、Ｃ５ａによって活性化された筋線維芽細胞の阻害を引き起こす原因であった。バー＝平均の標準誤差。
【０１２３】
実施例１３
ヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片は、Ｃ５ａおよびＣ３ａによって活性化された筋線維芽細胞の阻害を引き起こす
【０１２４】
肺線維症を有する対象の治療における、配列番号：１８によるヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片（ｈＣ５Ｌ２）の潜在的な機能的役割を探索するために、Ｃ５ａ／Ｃ３ａ活性化筋線維芽細胞に対するその存在の影響を研究した。ヒト肺胞基底上皮細胞（Ａ５４９細胞）をヒトＣ５ａおよびヒトＣ３ａで２４時間刺激し、活性化された筋線維芽細胞に関して評価した（図１３）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ウシ胎児血清）を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト肺胞基底上皮細胞（Ａ５４９細胞）を使用した。図１３に示すように、Ｃ５ａおよびＣ３ａは、どちらも０．１  μｇ／ｍｌの濃度で、参照群（無血清：１６±１６％；  ＦＣＳ：３９±２１％；  それぞれｐ＜０．００１およびｐ＜０．００１）と比較して、筋線維芽細胞の有意な活性化（ａＳＭＡ陽性細胞で測定、９０±１０％）を引き起こした。Ｃ５ａおよびＣ３ａ活性化筋線維芽細胞と比較して、ヒトＣ３ａ、Ｃ５ａ、およびヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片の存在下でのインキュベーションにより、有意な減少が見られた（ｈＣ５Ｌ２  ０．１  μｇ／ｍｌ：  ４４±３７％；  ｈＣ５Ｌ２  ０．２  μｇ／ｍｌ：  ２１±２５％；  ｈＣ５Ｌ２  ０．３  μｇ／ｍｌ：  １６±１４％）（それぞれｐ＝０．００６、ｐ＜０．００１、およびｐ＜０．００１）。図１３に示すように、筋線維芽細胞の活性化に対するヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片の固有の効果は、無血清対照と比較して差異を示さなかった（ｈＣ５Ｌ２  ０．３  μｇ／ｍｌ：  ９±１１％；  ｐ＝０．２５０）。したがって、ヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片は、Ｃ５ａおよびＣ３ａによって活性化された筋線維芽細胞の阻害を引き起こす原因であった。バー＝平均の標準誤差。
【０１２５】
実施例１４
ウシ胎児血清の存在下でヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片は筋線維芽細胞の阻害を引き起こす
【０１２６】
肺線維症を有する対象の治療における、配列番号：１８によるヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片（ｈＣ５Ｌ２）の潜在的な機能的役割を探索するために、筋線維芽細胞に対するその濃度の影響を研究した。ヒト肺胞基底上皮細胞（Ａ５４９細胞）を１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ウシ胎児血清）、および異なる濃度のヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片を含むＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートした（図１４）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれウシ胎児血清を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト肺胞基底上皮細胞（Ａ５４９細胞）を使用した（無血清：１６±１６％；  ＦＣＳ：３９±２１％）。図１４に示すように、ヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片は、低濃度で筋線維芽細胞の活性化にわずかなプラス効果を有することが明らかになった（ｈＣ５Ｌ２  ０．０５  μｇ／ｍｌ：  ３０±３４％、およびｈＣ５Ｌ２  ０．１  μｇ／ｍｌ：  ２２±１８％）が、一方、高濃度で筋線維芽細胞の阻害が観察された（ｈＣ５Ｌ２  ０．２  μｇ／ｍｌ：  １４±９％、およびｈＣ５Ｌ２  ０．３  μｇ／ｍｌ：  １０±１５％）。それでも、１０％ＦＣＳで培養されたヒト角膜実質細胞と比較して、差はわずかなままであった（それぞれ、ｐ＝０．２６８、ｐ＝０．３６０、ｐ＝０．６９３、およびｐ＝０．３９０）。図１４に示すように、筋線維芽細胞の活性化に対するヒトＣ５Ｌ２タンパク質断片の固有の効果は、無血清対照と比較して差異を示さなかった（ｈＣ５Ｌ２  ０．３  μｇ／ｍｌ：  ９±１１％；  ｐ＝０．２５０）。
【０１２７】
実施例１５
完全長の組換えヒトＣ５ａアナフィラトキシン走化性受容体２（ｒｈＣ５ＡＲ２／ｒｈＣ５Ｌ２）タンパク質は、Ｃ３ａによって活性化される筋線維芽細胞の阻害を引き起こす
【０１２８】
眼の創傷または線維症を有する対象の治療における、配列番号：１によるｒｈＣ５Ｌ２タンパク質の潜在的な機能的役割を探索するために、Ｃ３ａ活性化筋線維芽細胞に対するその存在の影響を研究した。ヒト角膜実質細胞をヒトＣ３ａで２４時間刺激し、活性化された筋線維芽細胞に関して評価した（図１５）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ウシ胎児血清）を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト角膜実質細胞を使用した。図１５に示すように、Ｃ３ａ  ０．１  μｇ／ｍｌは、参照群（無血清：１１±１４％；  ＦＣＳ：２０±１９％；  それぞれｐ＜０．００１およびｐ＜０．００１）と比較して、筋線維芽細胞の有意な活性化（ａＳＭＡ陽性細胞で測定、７４±２２％）を引き起こした。Ｃ３ａ活性化筋線維芽細胞と比較して、ヒトＣ３ａ、およびヒトｒｈＣ５Ｌ２タンパク質の存在下でのインキュベーションにより、有意な減少が見られた（ｒｈＣ５Ｌ２  ０．１  μｇ／ｍｌ：  １３±１７％；  ｒｈＣ５Ｌ２  ０．２  μｇ／ｍｌ：  ２０±９％；  ｒｈＣ５Ｌ２  ０．３  μｇ／ｍｌ：  ２４±２１％；  ｒｈＣ５Ｌ２  ０．５  μｇ／ｍｌ：  ３４±２０％）（それぞれｐ＜０．００１、ｐ＜０．００１、およびｐ＜０．００１）。したがって、ｒｈＣ５Ｌ２タンパク質は、Ｃ３ａによって活性化された筋線維芽細胞の阻害を引き起こす原因であった。バー＝平均の標準誤差。
【０１２９】
実施例１６
完全長の組換えヒトＣ５ａアナフィラトキシン走化性受容体２（ｒｈＣ５ＡＲ２／ｒｈＣ５Ｌ２）タンパク質は、Ｃ５ａによって活性化される筋線維芽細胞の阻害を引き起こす
【０１３０】
眼の創傷または線維症を有する対象の治療における、配列番号：１によるｒｈＣ５Ｌ２タンパク質の潜在的な機能的役割を探索するために、Ｃ５ａ活性化筋線維芽細胞に対するその存在の影響を研究した。ヒト角膜実質細胞をヒトＣ５ａで２４時間刺激し、活性化された筋線維芽細胞に関して評価した（図１６）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ウシ胎児血清）を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト角膜実質細胞を使用した。図１６に示すように、Ｃ５ａ  ０．１  μｇ／ｍｌは、参照群（無血清：１１±１４％；  ＦＣＳ：２０±１９％；  それぞれｐ＜０．００１およびｐ＜０．００１）と比較して、筋線維芽細胞の有意な活性化（ａＳＭＡ陽性細胞で測定、７７±２３％）を引き起こした。Ｃ５ａ活性化筋線維芽細胞と比較して、ヒトＣ５ａ、およびヒトｒｈＣ５Ｌ２タンパク質の存在下でのインキュベーションにより、有意な減少が見られた（ｒｈＣ５Ｌ２ ０．１  μｇ／ｍｌ：  １１±７％；  ｒｈＣ５Ｌ２  ０．２  μｇ／ｍｌ：  ２４±１１％；  ｒｈＣ５Ｌ２  ０．３  μｇ／ｍｌ：  ２６±１４％；  ｒｈＣ５Ｌ２  ０．５  μｇ／ｍｌ：  ３２±１５％）（それぞれｐ＜０．００１、ｐ＜０．００１、およびｐ＜０．００１）。したがって、ｒｈＣ５Ｌ２タンパク質は、Ｃ５ａによって活性化された筋線維芽細胞の阻害を引き起こす原因であった。バー＝平均の標準誤差。
【０１３１】
実施例１７
完全長の組換えヒトＣ５ａアナフィラトキシン走化性受容体２（ｒｈＣ５ＡＲ２／ｒｈＣ５Ｌ２）タンパク質は、Ｃ５ａおよびＣ３ａによって活性化される筋線維芽細胞の阻害を引き起こす
【０１３２】
眼の創傷または線維症を有する対象の治療における、配列番号：１によるｒｈＣ５Ｌ２タンパク質の潜在的な機能的役割を探索するために、Ｃ５ａ／Ｃ３ａ活性化筋線維芽細胞に対するその存在の影響を研究した。ヒト角膜実質細胞をヒトＣ５ａおよびヒトＣ３ａで２４時間刺激し、活性化された筋線維芽細胞に関して評価した（図１７）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ウシ胎児血清）を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト角膜実質細胞を使用した。図１７に示すように、Ｃ５ａおよびＣ３ａは、どちらも０．１  μｇ／ｍｌの濃度で、参照群（無血清：１１±１４％；  ＦＣＳ：２０±１９％；  それぞれｐ＜０．００１およびｐ＜０．００１）と比較して、筋線維芽細胞の有意な活性化（ａＳＭＡ陽性細胞で測定、８８±１１％）を引き起こした。Ｃ５ａおよびＣ３ａ活性化筋線維芽細胞と比較して、ヒトＣ３ａ、Ｃ５ａ、およびヒトｒｈＣ５Ｌ２タンパク質の存在下でのインキュベーションにより、有意な減少が見られた（ｒｈＣ５Ｌ２  ０．１  μｇ／ｍｌ：  ２４±１５％；  ｒｈＣ５Ｌ２  ０．２  μｇ／ｍｌ：  ２６±１８％；  ｒｈＣ５Ｌ２  ０．３  μｇ／ｍｌ：  ３３±２３％；  ｒｈＣ５Ｌ２  ０．５  μｇ／ｍｌ：  ４０±１６％）（それぞれｐ＜０．００１、ｐ＜０．００１、およびｐ＜０．００１）。したがって、ｒｈＣ５Ｌ２タンパク質は、Ｃ５ａおよびＣ３ａによって活性化された筋線維芽細胞の阻害を引き起こす原因であった。バー＝平均の標準誤差。
【０１３３】
実施例１８
ウシ胎児血清の存在下での筋線維芽細胞に対する完全長組換えヒトＣ５ａアナフィラトキシン走化性受容体２（ｒｈＣ５ＡＲ２／ｒｈＣ５Ｌ２）タンパク質濃度の影響
【０１３４】
眼の創傷または線維症を有する対象の治療における、配列番号：１によるｒｈＣ５Ｌ２タンパク質の潜在的な機能的役割を探索するために、筋線維芽細胞に対するその濃度の影響を研究した。ヒト角膜実質細胞を１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ウシ胎児血清）および異なる濃度のヒトｒｈＣ５Ｌ２タンパク質を含むＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートした（図１８）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト角膜実質細胞を使用した（無血清：１１±１４％；  ＦＣＳ：２０±１９％）。図１８に示すように、ヒトｒｈＣ５Ｌ２タンパク質は、すべての濃度で筋線維芽細胞の活性化にプラス効果を有することが明らかになった（ｒｈＣ５Ｌ２  ０．１  μｇ／ｍｌ：  ３３±２２％；  ｒｈＣ５Ｌ２  ０．２  μｇ／ｍｌ：  ２０±２４％；  ｒｈＣ５Ｌ２  ０．３  μｇ／ｍｌ：  ４１±３０％；  ｒｈＣ５Ｌ２  ０．５  μｇ／ｍｌ：  ４８±３３％）。１０％ＦＣＳで培養されたヒト角膜実質細胞と比較して、差はｒｈＣ５Ｌ２濃度０．１  μｇ／ｍｌおよび０．５  μｇ／ｍｌで有意であった（それぞれ、ｐ＝０．０４６、ｐ＝０．１１８、ｐ＝０．０７０、およびｐ＝０．０３３）。
【０１３５】
実施例１９
ウシ胎児血清の不存在下での筋線維芽細胞に対する完全長組換えヒトＣ５ａアナフィラトキシン走化性受容体２（ｒｈＣ５ＡＲ２／ｒｈＣ５Ｌ２）タンパク質濃度の影響
【０１３６】
眼の創傷または線維症を有する対象の治療における、配列番号：１によるｒｈＣ５Ｌ２タンパク質の潜在的な機能的役割を探索するために、筋線維芽細胞に対するその濃度の影響を研究した。ヒト角膜実質細胞をウシ胎児血清を含まない、および異なる濃度のヒトｒｈＣ５Ｌ２タンパク質を含むＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートした（図１９）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト角膜実質細胞を使用した（無血清：１１±１４％；  ＦＣＳ：２０±１９％）。図１９に示すように、ヒトｒｈＣ５Ｌ２タンパク質は、ＦＣＳを含まないＤＭＥＭでインキュベートしたヒト角膜実質細胞（無血清対照）と比較して、すべての濃度で筋線維芽細胞の活性化にプラス効果を有することが明らかになった（ｒｈＣ５Ｌ２  ０．１  μｇ／ｍｌ：  １４±１７％；  ｒｈＣ５Ｌ２  ０．２  μｇ／ｍｌ：  ２８±３８％；  ｒｈＣ５Ｌ２  ０．３  μｇ／ｍｌ：  ３６±１４％；  ｒｈＣ５Ｌ２  ０．５  μｇ／ｍｌ：  ３９±２４％）。無血清対照ヒト角膜実質細胞と比較して、差はｒｈＣ５Ｌ２濃度０．３  μｇ／ｍｌおよび０．５  μｇ／ｍｌで有意であった（それぞれ、ｐ＝０．５０１、ｐ＝０．２２４、ｐ＜０．００１、およびｐ＝０．００７）。
【０１３７】
実施例２０
完全長の組換えヒトＣ５ａアナフィラトキシン走化性受容体１（ｒｈＣ５ＡＲ１）タンパク質は、Ｃ３ａによって活性化される筋線維芽細胞の阻害を引き起こす
【０１３８】
眼の創傷または線維症を有する対象の治療における、配列番号：２によるｒｈＣ５ＡＲ１タンパク質の潜在的な機能的役割を探索するために、Ｃ３ａ活性化筋線維芽細胞に対するその存在の影響を研究した。ヒト角膜実質細胞をヒトＣ３ａで２４時間刺激し、活性化された筋線維芽細胞に関して評価した（図２０）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ウシ胎児血清）を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト角膜実質細胞を使用した。図２０に示すように、Ｃ３ａ  ０．１  μｇ／ｍｌは、参照群（無血清：１１±１４％；  ＦＣＳ：２０±１９％；  それぞれｐ＜０．００１およびｐ＜０．００１）と比較して、筋線維芽細胞の有意な活性化（ａＳＭＡ陽性細胞で測定、７４±２２％）を引き起こした。Ｃ３ａ活性化筋線維芽細胞と比較して、ヒトＣ３ａ、およびヒトｒｈＣ５ＡＲ１タンパク質の存在下でのインキュベーションにより、有意な減少が見られた（ｒｈＣ５ＡＲ１  ０．１  μｇ／ｍｌ：  ３±７％；  ｒｈＣ５ＡＲ１  ０．２  μｇ／ｍｌ：  ３±４％；  ｒｈＣ５ＡＲ１  ０．３  μｇ／ｍｌ：  ３６±１４％；  ｒｈＣ５ＡＲ１  ０．５  μｇ／ｍｌ：  ４２±２４％）（それぞれｐ＜０．００１、ｐ＜０．００１、ｐ＜０．００１、およびｐ＝０．００５）。したがって、ｒｈＣ５ＡＲ１タンパク質は、Ｃ３ａによって活性化された筋線維芽細胞の阻害を引き起こす原因であった。バー＝平均の標準誤差。
【０１３９】
実施例２１
完全長の組換えヒトＣ５ａアナフィラトキシン走化性受容体１（ｒｈＣ５ＡＲ１）タンパク質は、Ｃ５ａによって活性化される筋線維芽細胞の阻害を引き起こす
【０１４０】
眼の創傷または線維症を有する対象の治療における、配列番号：２によるｒｈＣ５ＡＲ１タンパク質の潜在的な機能的役割を探索するために、Ｃ５ａ活性化筋線維芽細胞に対するその存在の影響を研究した。ヒト角膜実質細胞をヒトＣ５ａで２４時間刺激し、活性化された筋線維芽細胞に関して評価した（図２１）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ウシ胎児血清）を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト角膜実質細胞を使用した。図２１に示すように、Ｃ５ａ  ０．１  μｇ／ｍｌは、参照群（無血清：１１±１４％；  ＦＣＳ：２０±１９％；  それぞれｐ＜０．００１およびｐ＜０．００１）と比較して、筋線維芽細胞の有意な活性化（ａＳＭＡ陽性細胞で測定、７７±２３％）を引き起こした。Ｃ５ａ活性化筋線維芽細胞と比較して、ヒトＣ５ａ、およびヒトｒｈＣ５ＡＲ１タンパク質の存在下でのインキュベーションにより、有意な減少が見られた（ｒｈＣ５ＡＲ１  ０．１  μｇ／ｍｌ：  ３±４％；  ｒｈＣ５ＡＲ１  ０．２  μｇ／ｍｌ：  ５±７％；  ｒｈＣ５ＡＲ１  ０．３  μｇ／ｍｌ：  １８±２３％；  ｒｈＣ５ＡＲ１  ０．５  μｇ／ｍｌ：  ３９±２９％）（それぞれｐ＜０．００１、ｐ＜０．００１、ｐ＜０．００１、およびｐ＝０．００１）。したがって、ｒｈＣ５ＡＲ１タンパク質は、Ｃ５ａによって活性化された筋線維芽細胞の阻害を引き起こす原因であった。バー＝平均の標準誤差。
【０１４１】
実施例２２
完全長の組換えヒトＣ５ａアナフィラトキシン走化性受容体１（ｒｈＣ５ＡＲ１）タンパク質は、Ｃ５ａおよびＣ３ａによって活性化される筋線維芽細胞の阻害を引き起こす
【０１４２】
眼の創傷または線維症を有する対象の治療における、配列番号：２によるｒｈＣ５ＡＲ１タンパク質の潜在的な機能的役割を探索するために、Ｃ５ａ／Ｃ３ａ活性化筋線維芽細胞に対するその存在の影響を研究した。ヒト角膜実質細胞をヒトＣ５ａおよびヒトＣ３ａで２４時間刺激し、活性化された筋線維芽細胞に関して評価した（図２２）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ウシ胎児血清）を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト角膜実質細胞を使用した。図２２に示すように、Ｃ５ａおよびＣ３ａは、どちらも０．１  μｇ／ｍｌの濃度で、参照群（無血清：１１±１４％；  ＦＣＳ：２０±１９％；  それぞれｐ＜０．００１およびｐ＜０．００１）と比較して、筋線維芽細胞の有意な活性化（ａＳＭＡ陽性細胞で測定、８８±１１％）を引き起こした。Ｃ５ａおよびＣ３ａ活性化筋線維芽細胞と比較して、ヒトＣ３ａ、Ｃ５ａ、およびヒトｒｈＣ５ＡＲ１タンパク質の存在下でのインキュベーションにより、有意な減少が見られた（ｒｈＣ５ＡＲ１  ０．１  μｇ／ｍｌ：  ５±７％；  ｒｈＣ５ＡＲ１  ０．２  μｇ／ｍｌ：  １８±２１％；  ｒｈＣ５ＡＲ１  ０．３  μｇ／ｍｌ：  ３３±１９％；  ｒｈＣ５ＡＲ１  ０．５  μｇ／ｍｌ：  ３８±２４％）（それぞれｐ＜０．００１、ｐ＜０．００１、ｐ＜０．００１、およびｐ＜０．００１）。したがって、ｒｈＣ５ＡＲ１タンパク質は、Ｃ５ａおよびＣ３ａによって活性化された筋線維芽細胞の阻害を引き起こす原因であった。バー＝平均の標準誤差。
【０１４３】
実施例２３
ウシ胎児血清の存在下での筋線維芽細胞に対する完全長組換えヒトＣ５ａアナフィラトキシン走化性受容体１（ｒｈＣ５ＡＲ１）タンパク質濃度の影響
【０１４４】
眼の創傷または線維症を有する対象の治療における、配列番号：２によるｒｈＣ５ＡＲ１タンパク質の潜在的な機能的役割を探索するために、筋線維芽細胞に対するその濃度の影響を研究した。ヒト角膜実質細胞を１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ウシ胎児血清）および異なる濃度のヒトｒｈＣ５ＡＲ１タンパク質を含むＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートした（図２３）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト角膜実質細胞を使用した（無血清：１１±１４％；  ＦＣＳ：２０±１９％）。図２３に示すように、ヒトｒｈＣ５ＡＲ１タンパク質は、すべての濃度で筋線維芽細胞の活性化にプラス効果を有することが明らかになった（ｒｈＣ５ＡＲ１  ０．１  μｇ／ｍｌ：  ６０±２９％；  ｒｈＣ５ＡＲ１  ０．２  μｇ／ｍｌ：  ５０±２３％；  ｒｈＣ５ＡＲ１  ０．３  μｇ／ｍｌ：  ５４±２７％；  ｒｈＣ５ＡＲ１  ０．５  μｇ／ｍｌ：  ６４±２４％）。１０％ＦＣＳで培養されたヒト角膜実質細胞と比較して、差は有意であった（それぞれ、ｐ＝０．００３、ｐ＜０．００１、ｐ＜０．００１、およびｐ＜０．００１）。
【０１４５】
実施例２４
ウシ胎児血清の不存在下での筋線維芽細胞に対する完全長組換えヒトＣ５ａアナフィラトキシン走化性受容体１（ｒｈＣ５ＡＲ１）タンパク質濃度の影響
【０１４６】
眼の創傷または線維症を有する対象の治療における、配列番号：２によるｒｈＣ５ＡＲ１タンパク質の潜在的な機能的役割を探索するために、筋線維芽細胞に対するその濃度の影響を研究した。ヒト角膜実質細胞をウシ胎児血清を含まない、および異なる濃度のヒトｒｈＣ５ＡＲ１タンパク質を含むＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートした（図２４）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト角膜実質細胞を使用した（無血清：１１±１４％；  ＦＣＳ：２０±１９％）。図２４に示すように、ヒトｒｈＣ５ＡＲ１タンパク質は、ＦＣＳを含まないＤＭＥＭでインキュベートしたヒト角膜実質細胞（無血清対照）と比較して、すべての濃度で筋線維芽細胞の活性化にプラス効果を有することが明らかになった（ｒｈＣ５ＡＲ１  ０．１  μｇ／ｍｌ：  ３７±２６％；  ｒｈＣ５ＡＲ１  ０．２  μｇ／ｍｌ：  ３４±２２％；  ｒｈＣ５ＡＲ１  ０．３  μｇ／ｍｌ：  ４３±２０％；  ｒｈＣ５ＡＲ１  ０．５  μｇ／ｍｌ：  ５２±１１％）。無血清対照ヒト角膜実質細胞と比較して、差は有意であった（それぞれ、ｐ＝０．０１７、ｐ＝０．０１２、ｐ＜０．００１、およびｐ＜０．００１）。
【０１４７】
実施例２５
完全長の組換えヒトＣ３ａアナフィラトキシン走化性受容体（ｒｈＣ３ＡＲ）タンパク質は、Ｃ３ａによって活性化される筋線維芽細胞の阻害を引き起こす
【０１４８】
眼の創傷または線維症を有する対象の治療における、配列番号：３によるｒｈＣ３ＡＲタンパク質の潜在的な機能的役割を探索するために、Ｃ３ａ活性化筋線維芽細胞に対するその存在の影響を研究した。ヒト角膜実質細胞をヒトＣ３ａで２４時間刺激し、活性化された筋線維芽細胞に関して評価した（図２５）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ウシ胎児血清）を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト角膜実質細胞を使用した。図２５に示すように、Ｃ３ａ  ０．１  μｇ／ｍｌは、参照群（無血清：１１±１４％；  ＦＣＳ：２０±１９％；  それぞれｐ＜０．００１およびｐ＜０．００１）と比較して、筋線維芽細胞の有意な活性化（ａＳＭＡ陽性細胞で測定、７４±２２％）を引き起こした。Ｃ３ａ活性化筋線維芽細胞と比較して、ヒトＣ３ａ、およびヒトｒｈＣ３ＡＲタンパク質の存在下でのインキュベーションにより、有意な減少が見られた（ｒｈＣ３ＡＲ  ０．１  μｇ／ｍｌ：  １３±１９％；  ｒｈＣ３ＡＲ  ０．２  μｇ／ｍｌ：  ３６±１４％； ｒｈＣ３ＡＲ  ０．３  μｇ／ｍｌ：  ５０±２２％；  ｒｈＣ３ＡＲ  ０．５  μｇ／ｍｌ：  ６８±２２％）（それぞれｐ＜０．００１、ｐ＜０．００１、ｐ＝０．０２３、およびｐ＝０．５４７）。したがって、ｒｈＣ３ＡＲタンパク質は、０．１  μｇ／ｍｌ、０．２  μｇ／ｍｌ、および０．３  μｇ／ｍｌの濃度で、Ｃ３ａによって活性化された筋線維芽細胞の阻害を引き起こす原因であった。バー＝平均の標準誤差。
【０１４９】
実施例２６
完全長の組換えヒトＣ３ａアナフィラトキシン走化性受容体（ｒｈＣ３ＡＲ）タンパク質は、Ｃ５ａによって活性化される筋線維芽細胞の阻害を引き起こす
【０１５０】
眼の創傷または線維症を有する対象の治療における、配列番号：３によるｒｈＣ３ＡＲタンパク質の潜在的な機能的役割を探索するために、Ｃ５ａ活性化筋線維芽細胞に対するその存在の影響を研究した。ヒト角膜実質細胞をヒトＣ５ａで２４時間刺激し、活性化された筋線維芽細胞に関して評価した（図２６）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ウシ胎児血清）を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト角膜実質細胞を使用した。図２６に示すように、Ｃ５ａ  ０．１  μｇ／ｍｌは、参照群（無血清：１１±１４％；  ＦＣＳ：２０±１９％；  それぞれｐ＜０．００１およびｐ＜０．００１）と比較して、筋線維芽細胞の有意な活性化（ａＳＭＡ陽性細胞で測定、７７±２３％）を引き起こした。Ｃ５ａ活性化筋線維芽細胞と比較して、ヒトＣ５ａ、およびヒトｒｈＣ３ＡＲタンパク質の存在下でのインキュベーションにより、有意な減少が見られた（ｒｈＣ３ＡＲ  ０．１  μｇ／ｍｌ：  ４４±２０％；  ｒｈＣ３ＡＲ  ０．２  μｇ／ｍｌ：  ４３±１９％；  ｒｈＣ３ＡＲ  ０．３  μｇ／ｍｌ：  ６０±２８％；  ｒｈＣ３ＡＲ  ０．５  μｇ／ｍｌ：  ７０±１８％）（それぞれｐ＝０．００１、ｐ＝０．００１、ｐ＝０．０１０３、およびｐ＝０．４６０）。したがって、ｒｈＣ３ＡＲタンパク質は、０．１  μｇ／ｍｌ、および０．２  μｇ／ｍｌの濃度で、Ｃ５ａによって活性化された筋線維芽細胞の阻害を引き起こす原因であった。バー＝平均の標準誤差。
【０１５１】
実施例２７
完全長の組換えヒトＣ３ａアナフィラトキシン走化性受容体（ｒｈＣ３ＡＲ）タンパク質は、Ｃ５ａおよびＣ３ａによって活性化される筋線維芽細胞の阻害を引き起こす
【０１５２】
眼の創傷または線維症を有する対象の治療における、配列番号：３によるｒｈＣ３ＡＲタンパク質の潜在的な機能的役割を探索するために、Ｃ５ａ／Ｃ３ａ活性化筋線維芽細胞に対するその存在の影響を研究した。ヒト角膜実質細胞をヒトＣ５ａおよびヒトＣ３ａで２４時間刺激し、活性化された筋線維芽細胞に関して評価した（図２７）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ウシ胎児血清）を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト角膜実質細胞を使用した。図２７に示すように、Ｃ５ａおよびＣ３ａは、どちらも０．１  μｇ／ｍｌの濃度で、参照群（無血清：１１±１４％；  ＦＣＳ：２０±１９％；  それぞれｐ＜０．００１およびｐ＜０．００１）と比較して、筋線維芽細胞の有意な活性化（ａＳＭＡ陽性細胞で測定、８８±１１％）を引き起こした。Ｃ５ａおよびＣ３ａ活性化筋線維芽細胞と比較して、ヒトＣ３ａ、Ｃ５ａ、およびヒトｒｈＣ３ＡＲタンパク質の存在下でのインキュベーションにより、有意な減少が見られた（ｒｈＣ３ＡＲ  ０．１  μｇ／ｍｌ：  ３４±１６％；  ｒｈＣ３ＡＲ  ０．２  μｇ／ｍｌ：  ６１±２４％；  ｒｈＣ３ＡＲ  ０．３  μｇ／ｍｌ：  ６１±２３％；  ｒｈＣ３ＡＲ  ０．５  μｇ／ｍｌ：  ６７±２４％）（それぞれｐ＜０．００１、ｐ＝０．０１２、ｐ＝０．００６、およびｐ＝０．０４４）。したがって、ｒｈＣ３ＡＲタンパク質は、Ｃ５ａおよびＣ３ａによって活性化された筋線維芽細胞の阻害を引き起こす原因であった。バー＝平均の標準誤差。
【０１５３】
実施例２８
ウシ胎児血清の存在下での筋線維芽細胞に対する完全長の組換えヒトＣ３ａアナフィラトキシン走化性受容体（ｒｈＣ３ＡＲ）タンパク質濃度の影響
【０１５４】
眼の創傷または線維症を有する対象の治療における、配列番号：３によるｒｈＣ３ＡＲタンパク質の潜在的な機能的役割を探索するために、筋線維芽細胞に対するその濃度の影響を研究した。ヒト角膜実質細胞を１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ウシ胎児血清）および異なる濃度のヒトｒｈＣ３ＡＲタンパク質を含むＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートした（図２８）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト角膜実質細胞を使用した（無血清：１１±１４％；  ＦＣＳ：２０±１９％）。図２８に示すように、ヒトｒｈＣ３ＡＲタンパク質は、すべての濃度で筋線維芽細胞の活性化にプラス効果を有することが明らかになった（ｒｈＣ３ＡＲ  ０．１  μｇ／ｍｌ：  ７７±２１％；  ｒｈＣ３ＡＲ  ０．２  μｇ／ｍｌ：  ７７±３１％；  ｒｈＣ３ＡＲ  ０．３  μｇ／ｍｌ：  ７６±２５％；  ｒｈＣ３ＡＲ  ０．５  μｇ／ｍｌ：  ７２±１９％）。１０％ＦＣＳで培養されたヒト角膜実質細胞と比較して、差は有意であった（それぞれ、ｐ＜０．００１、ｐ＜０．００１、ｐ＜０．００１、およびｐ＜０．００１）。
【０１５５】
実施例２９
ウシ胎児血清の不存在下での筋線維芽細胞に対する完全長の組換えヒトＣ３ａアナフィラトキシン走化性受容体（ｒｈＣ３ＡＲ）タンパク質濃度の影響
【０１５６】
眼の創傷または線維症を有する対象の治療における、配列番号：３によるｒｈＣ３ＡＲタンパク質の潜在的な機能的役割を探索するために、筋線維芽細胞に対するその濃度の影響を研究した。ヒト角膜実質細胞をウシ胎児血清を含まない、および異なる濃度のヒトｒｈＣ３ＡＲタンパク質を含むＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートした（図２９）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト角膜実質細胞を使用した（無血清：１１±１４％；  ＦＣＳ：２０±１９％）。図２９に示すように、ヒトｒｈＣ３ＡＲタンパク質は、ＦＣＳを含まないＤＭＥＭでインキュベートしたヒト角膜実質細胞（無血清対照）と比較して、すべての濃度で筋線維芽細胞の活性化にプラス効果を有することが明らかになった（ｒｈＣ３ＡＲ  ０．１  μｇ／ｍｌ：  ２７±２９％；  ｒｈＣ３ＡＲ  ０．２  μｇ／ｍｌ：  ３１±３５％；  ｒｈＣ３ＡＲ  ０．３  μｇ／ｍｌ：  ３４±２７％；  ｒｈＣ３ＡＲ  ０．５  μｇ／ｍｌ：  ５０±２９％）。無血清対照ヒト角膜実質細胞と比較して、差は有意であった（それぞれ、ｐ＝０．１３６、ｐ＝０．１１４、ｐ＝０．０２８、およびｐ＝０．００４）。
【０１５７】
実施例３０
ヒトＣ５ａに結合するＲＮＡ／ＤＮＡアプタマーは、Ｃ３ａによって活性化される筋線維芽細胞の阻害を引き起こす
【０１５８】
眼の創傷または線維症を有する対象の治療における、配列番号：４１によるＣ５ａ結合部位を含む、ヒトＣ５ａに結合するＬ−ＲＮＡ／Ｌ−ＤＮＡアプタマー（Ｃ５ａアプタマー）の潜在的な機能的役割を探索するために、Ｃ３ａ活性化筋線維芽細胞に対するその存在の影響を研究した。ヒト角膜実質細胞をヒトＣ３ａで２４時間刺激し、活性化された筋線維芽細胞に関して評価した（図３０）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ウシ胎児血清）を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト角膜実質細胞を使用した。図３０に示すように、Ｃ３ａ  ０．１  μｇ／ｍｌは、参照群（無血清：１１±１４％；  ＦＣＳ：２０±１９％；  それぞれｐ＜０．００１およびｐ＜０．００１）と比較して、筋線維芽細胞の有意な活性化（ａＳＭＡ陽性細胞で測定、７４±２２％）を引き起こした。Ｃ３ａ活性化筋線維芽細胞と比較して、ヒトＣ３ａ、およびＣ５ａアプタマーの存在下でのインキュベーションにより、有意な減少が見られた（Ｃ５ａアプタマー  １  μｇ／ｍｌ：  ６５±２０％；  Ｃ５ａアプタマー  ２  μｇ／ｍｌ：  ５５±３１％；  Ｃ５ａアプタマー  ３  μｇ／ｍｌ：  ４７±２５％；  Ｃ５ａアプタマー  ５  μｇ／ｍｌ：  ５１±１６％）（それぞれｐ＝０．３５６、ｐ＝０．１１２、ｐ＝０．０１７、およびｐ＝０．０１７）。したがって、Ｃ５ａアプタマーは、３  μｇ／ｍｌ、および５  μｇ／ｍｌの濃度で、Ｃ３ａによって活性化された筋線維芽細胞の阻害を引き起こす原因であった。バー＝平均の標準誤差。
【０１５９】
実施例３１
ヒトＣ５ａに結合するＲＮＡ／ＤＮＡアプタマーは、Ｃ５ａによって活性化される筋線維芽細胞の阻害を引き起こす
【０１６０】
眼の創傷または線維症を有する対象の治療における、配列番号：４１によるＣ５ａ結合部位を含む、ヒトＣ５ａに結合するＬ−ＲＮＡ／Ｌ−ＤＮＡアプタマー（Ｃ５ａアプタマー）の潜在的な機能的役割を探索するために、Ｃ５ａ活性化筋線維芽細胞に対するその存在の影響を研究した。ヒト角膜実質細胞をヒトＣ５ａで２４時間刺激し、活性化された筋線維芽細胞に関して評価した（図３１）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ウシ胎児血清）を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト角膜実質細胞を使用した。図３１に示すように、Ｃ５ａ  ０．１  μｇ／ｍｌは、参照群（無血清：１１±１４％；  ＦＣＳ：２０±１９％；  それぞれｐ＜０．００１およびｐ＜０．００１）と比較して、筋線維芽細胞の有意な活性化（ａＳＭＡ陽性細胞で測定、７７±２３％）を引き起こした。Ｃ５ａ活性化筋線維芽細胞と比較して、ヒトＣ５ａ、およびＣ５ａアプタマーの存在下でのインキュベーションにより、有意な減少が見られた（Ｃ5ａアプタマー  １  μｇ／ｍｌ：  ３１±３３％；  Ｃ5ａアプタマー  ２  μｇ／ｍｌ：  ３３±３５％；  Ｃ５ａアプタマー  ３  μｇ／ｍｌ：  ２９±２７％；  Ｃ５ａアプタマー  ５  μｇ／ｍｌ：  ３４±２７％）（それぞれｐ＜０．００１、ｐ＜０．００１、ｐ＜０．０１、およびｐ＜０．０１）。したがって、Ｃ５ａアプタマーは、Ｃ５ａによって活性化された筋線維芽細胞の阻害を引き起こす原因であった。バー＝平均の標準誤差。
【０１６１】
実施例３２
ヒトＣ５ａに結合するＲＮＡ／ＤＮＡアプタマーは、Ｃ５ａおよびＣ３ａによって活性化される筋線維芽細胞の阻害を引き起こす
【０１６２】
眼の創傷または線維症を有する対象の治療における、配列番号：４１によるＣ５ａ結合部位を含む、ヒトＣ５ａに結合するＬ−ＲＮＡ／Ｌ−ＤＮＡアプタマー（Ｃ５ａアプタマー）の潜在的な機能的役割を探索するために、Ｃ５ａ／Ｃ３ａ活性化筋線維芽細胞に対するその存在の影響を研究した。ヒト角膜実質細胞をヒトＣ５ａおよびヒトＣ３ａで２４時間刺激し、活性化された筋線維芽細胞に関して評価した（図３２）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ウシ胎児血清）を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト角膜実質細胞を使用した。図３２に示すように、Ｃ５ａおよびＣ３ａは、どちらも０．１  μｇ／ｍｌの濃度で、参照群（無血清：１１±１４％；  ＦＣＳ：２０±１９％；  それぞれｐ＜０．００１およびｐ＜０．００１）と比較して、筋線維芽細胞の有意な活性化（ａＳＭＡ陽性細胞で測定、８８±１１％）を引き起こした。Ｃ５ａおよびＣ３ａ活性化筋線維芽細胞と比較して、ヒトＣ３ａ、Ｃ５ａ、およびヒトｒｈＣ３ＡＲタンパク質の存在下でのインキュベーションにより、有意な減少が見られた（Ｃ5ａアプタマー  １  μｇ／ｍｌ：  ８４±１３％；  Ｃ5ａアプタマー  ２  μｇ／ｍｌ：  ８４±１３％；  Ｃ5ａアプタマー  ３  μｇ／ｍｌ：  ６２±２１％；Ｃ５ａアプタマー  ５  μｇ／ｍｌ：  ４９±３３％）（それぞれｐ＝０．５１９、ｐ＝０．４９５、ｐ＝０．００５、およびｐ＝０．００７）。したがって、Ｃ５ａアプタマーは、Ｃ５ａおよびＣ３ａによって活性化された筋線維芽細胞の阻害を引き起こす原因であった。バー＝平均の標準誤差。
【０１６３】
実施例３３
ウシ胎児血清の存在下での筋線維芽細胞に対するヒトＣ５ａに結合するＲＮＡ／ＤＮＡアプタマー濃度の影響
【０１６４】
眼の創傷または線維症を有する対象の治療における、配列番号：４１によるＣ５ａ結合部位を含む、ヒトＣ５ａに結合するＬ−ＲＮＡ／Ｌ−ＤＮＡアプタマー（Ｃ５ａアプタマー）の潜在的な機能的役割を探索するために、筋線維芽細胞に対するその濃度の影響を研究した。ヒト角膜実質細胞を１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ウシ胎児血清）および異なる濃度のＣ５ａアプタマーを含むＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートした（図３３）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト角膜実質細胞を使用した（無血清：１１±１４％；  ＦＣＳ：２０±１９％）。図３３に示すように、Ｃ５ａアプタマーは、すべての濃度で筋線維芽細胞の活性化にプラス効果を有することが明らかになった（Ｃ５ａアプタマー  １  μｇ／ｍｌ：  ３８±１４％；  Ｃ５ａアプタマー  ２  μｇ／ｍｌ：  ４１±１９％；  Ｃ５ａアプタマー  ３  μｇ／ｍｌ：  ５１±３２％；  Ｃ５ａアプタマー  ５  μｇ／ｍｌ：  ７３±３４％）。１０％ＦＣＳで培養されたヒト角膜実質細胞と比較して、差は有意であった（それぞれ、ｐ＝０．００５、ｐ＝０．００１、ｐ＝０．０２０、およびｐ＝０．００１）。
【０１６５】
実施例３４
ウシ胎児血清の不存在下での筋線維芽細胞に対するヒトＣ５ａに結合するＲＮＡ／ＤＮＡアプタマー濃度の影響
【０１６６】
眼の創傷または線維症を有する対象の治療における、配列番号：４１によるＣ５ａ結合部位を含む、ヒトＣ５ａに結合するＬ−ＲＮＡ／Ｌ−ＤＮＡアプタマー（Ｃ５ａアプタマー）の潜在的な機能的役割を探索するために、筋線維芽細胞に対するその濃度の影響を研究した。ヒト角膜実質細胞をウシ胎児血清を含まない、および異なる濃度のＣ５ａアプタマーを含むＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートした（図３４）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト角膜実質細胞を使用した（無血清：１１±１４％；  ＦＣＳ：２０±１９％）。図３４に示すように、Ｃ５ａアプタマーは、ＦＣＳを含まないＤＭＥＭでインキュベートしたヒト角膜実質細胞（無血清対照）と比較して、すべての濃度で筋線維芽細胞の活性化にわずかなプラス効果を有することが明らかになった（Ｃ５ａアプタマー  １  μｇ／ｍｌ：  １７±１４％；  Ｃ５ａアプタマー  ２  μｇ／ｍｌ：  １３±１０％；  Ｃ５ａアプタマー  ３  μｇ／ｍｌ：  １１±８％；  Ｃ５ａアプタマー  ５  μｇ／ｍｌ：  ５±４％）。しかしながら、無血清対照ヒト角膜実質細胞と比較して、差は有意でなかった（それぞれ、ｐ＝０．２１９、ｐ＝０．６２９、ｐ＝０．９８３、およびｐ＝０．２７０）。
【０１６７】
実施例３５
ヒトＣ５ａに結合する抗体は、Ｃ５ａによって活性化される筋線維芽細胞の阻害を引き起こすが、Ｃ３ａ、またはＣ３ａおよびＣ５ａの組み合わせによって活性化される筋線維芽細胞の阻害を引き起こさない
【０１６８】
眼の創傷または線維症を有する対象の治療における、ヒトＣ５ａに結合する抗体（Ｃ５ａ  Ａｂ）の潜在的な機能的役割を探索するために、Ｃ３ａ、Ｃ５ａ、およびＣ５ａ／Ｃ３ａ活性化筋線維芽細胞に対するその存在の影響を研究した。さらに、ウシ胎児血清を含むおよび含まない筋線維芽細胞に対するその濃度の影響も研究した。
【０１６９】
研究した抗体は、配列番号：２０のアミノ酸２３〜７４内の配列に対応する、ヒト補体Ｃ５アイソフォーム１プレプロタンパク質（アクセッション番号：ＮＰ＿００１７２６）のアミノ酸７００〜７５５内の配列に対して産生された、ポリクローナルウサギ免疫グロブリンＧ抗体２５０５６５（Ａｂｂｉｏｔｅｃ；  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＵＳＡ）；ヒト補体Ｃ５アイソフォーム１プレプロタンパク質（アクセッション番号：ＮＰ＿００１７２６）のアミノ酸１２７５〜１２９０内の配列に対して産生された、ポリクローナルウサギ免疫グロブリンＧ抗体３０８７３３（Ｂｉｏｒｂｙｔ；  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ）であった。
【０１７０】
ヒト角膜実質細胞をヒトＣ３ａ、ヒトＣ５ａ、およびヒトＣ５ａ／Ｃ３ａの組み合わせで２４時間刺激し、活性化された筋線維芽細胞に関して評価した（図３５および３６）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ウシ胎児血清）を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト角膜実質細胞を使用した。図３５および３６に示すように、Ｃ３ａ、Ｃ５ａ、およびＣ５ａ／Ｃ３ａは、参照群（無血清：１１±１４％；  ＦＣＳ：２０±１９％；  ｐ値＜０．００１）と比較して、筋線維芽細胞の有意な活性化（ａＳＭＡ陽性細胞で測定、Ｃ３ａ  ０．１  μｇ／ｍｌ  ７４±２２％；Ｃ５ａ  ０．１  μｇ／ｍｌ：  ７７±２３％；  Ｃ５ａ  ０．１  μｇ／ｍｌおよびＣ３ａ  ０．１  μｇ／ｍｌ：  ８８±１１％）を引き起こした。Ｃ３ａ活性化筋線維芽細胞と比較して、ヒトＣ３ａ、およびＣ５ａ抗体の存在下でのインキュベーションにより、有意な減少は見られなかった（Ｃ５ａ  Ａｂ  （２５０５６５）  ５  μｇ／ｍｌ：  ７８±１４％；  Ｃ５ａ  Ａｂ  （３０８７３３）  ５  μｇ／ｍｌ：  ５０±４２％）（それぞれｐ＝０．６４５、ｐ＝０．１５５）。Ｃ５ａ活性化筋線維芽細胞と比較して、ヒトＣ５ａ、およびＣ５ａ抗体の存在下でのインキュベーションにより、有意な減少が見られた（Ｃ５ａ  Ａｂ  （２５０５６５）  ５  μｇ／ｍｌ：  ３０±３１％；  Ｃ５ａ  Ａｂ  （３０８７３３）  ５  μｇ／ｍｌ： ２９±３１％）（それぞれ、ｐ＜０．００１、ｐ＜０．００１）。Ｃ５ａおよびＣ３ａ活性化筋線維芽細胞と比較して、ヒトＣ３ａ、Ｃ５ａ、およびＣ５ａ抗体の存在下でのインキュベーションにより、有意な減少は見られなかった（Ｃ５ａ  Ａｂ  （２５０５６５）  ５  μｇ／ｍｌ：  ９５±６％；  Ｃ５ａ  Ａｂ  （３０８７３３）  ５  μｇ／ｍｌ：  ７６±３０％）（それぞれ、ｐ＝０．０７９，ｐ＝０．２９４）。図３５および３６に示すように、Ｃ５ａ抗体は、１０％ＦＣＳの存在下で筋線維芽細胞の活性化にプラス効果を有することが明らかになった（Ｃ５ａ  Ａｂ  （２５０５６５）  ５  μｇ／ｍｌ：  ４９±２９％；  Ｃ５ａ  Ａｂ  （３０８７３３）  ５  μｇ／ｍｌ：  ５３±２３％）。１０％ＦＣＳで培養されたヒト角膜実質細胞と比較して、差は有意であった（それぞれ、ｐ＜０．００１、ｐ＝０．００２）。図３５および３６に示すように、Ｃ５ａ抗体は、ＦＣＳを含まないＤＭＥＭでインキュベートしたヒト角膜実質細胞（無血清対照）と比較して、すべての濃度で筋線維芽細胞の活性化にプラス効果を有することが明らかになった（Ｃ５ａ  Ａｂ  （２５０５６５）  ５  μｇ／ｍｌ：  ３２±２５％；  Ｃ５ａ  Ａｂ  （３０８７３３）  ５  μｇ／ｍｌ：  ５４±４２％）。無血清対照ヒト角膜実質細胞と比較して、差は有意であった（それぞれ、ｐ＝０．０３４、ｐ＝０．０１６）。したがって、Ｃ５ａ抗体２５０５６５（Ａｂｂｉｏｔｅｃ）、および３０８７３３（Ｂｉｏｒｂｙｔ）は、５  μｇ／ｍｌの濃度で、Ｃ３ａ、またはＣ３ａおよびＣ５ａの組み合わせによってではなく、Ｃ５ａによって活性化された筋線維芽細胞の阻害を引き起��す原因であった。バー＝平均の標準誤差。
【０１７１】
実施例３６
ヒトＣ３ａに結合する抗体は、Ｃ３ａによって活性化される筋線維芽細胞の阻害を引き起こすが、Ｃ５ａ、またはＣ３ａおよびＣ５ａの組み合わせによって活性化される筋線維芽細胞の阻害を引き起こさない
【０１７２】
眼の創傷または線維症を有する対象の治療における、ヒトＣ３ａに結合する抗体（Ｃ３ａ  ｍＡｂ）の潜在的な機能的役割を探索するために、Ｃ３ａ、Ｃ５ａ、およびＣ５ａ／Ｃ３ａ活性化筋線維芽細胞に対するその存在の影響を研究した。さらに、ウシ胎児血清を含むおよび含まない筋線維芽細胞に対するその濃度の影響も研究した。
【０１７３】
研究した抗体は、配列番号：４３をカバーする、ヒト補体Ｃ３プレプロタンパク質（アクセッション番号：ＮＰ＿００００５５．２）のアミノ酸５４１〜８４０内の配列に対して産生された、モノクローナルマウス免疫グロブリンＧ1（カッパ軽鎖）抗体ｓｃ２８２９４（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；  Ｄａｌｌａｓ，  ＵＳＡ）；およびマウスＣ５タンパク質（Ｍａｓｔｅｌｌｏｓ  Ｄ  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００４による参照による明細書）の配列に対して産生されたモノクローナルマウス免疫グロブリンＧ2a抗体ＨＭ１０７２（Ｈｙｃｕｌｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈ；  Ｕｄｅｎ，  Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ)であった。
【０１７４】
ヒト角膜実質細胞をヒトＣ３ａ、ヒトＣ５ａ、およびヒトＣ５ａ／Ｃ３ａの組み合わせで２４時間刺激し、活性化された筋線維芽細胞に関して評価した（図３７および３８）。活性化された筋線維芽細胞の検出には、ａＳＭＡ抗体、ならびに細胞外マトリックスのマーカーとしてのビメンチン抗体を使用した。参照群として、それぞれ１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、ウシ胎児血清）を含むおよび含まないＤＭＥＭ増殖培地で２４時間インキュベートしたヒト角膜実質細胞を使用した。図３７および３８に示すように、Ｃ３ａ、Ｃ５ａ、およびＣ５ａ／Ｃ３ａは、参照群（無血清：１１±１４％；  ＦＣＳ：２０±１９％；  ｐ値＜０．００１）と比較して、筋線維芽細胞の有意な活性化（ａＳＭＡ陽性細胞で測定、Ｃ３ａ  ０．１  μｇ／ｍｌ  ７４±２２％；Ｃ５ａ  ０．１  μｇ／ｍｌ：  ７７±２３％；  Ｃ５ａ  ０．１  μｇ／ｍｌおよびＣ３ａ  ０．１  μｇ／ｍｌ：  ８８±１１％）を引き起こした。Ｃ３ａ活性化筋線維芽細胞と比較して、ヒトＣ３ａ、およびＣ３ａ抗体の存在下でのインキュベーションにより、有意な減少が見られた（Ｃ３ａ  ｍＡｂ  （ｓｃ２８２９４）  ５  μｇ／ｍｌ：  １５±２５％；  Ｃ３ａ  ｍＡｂ  （ＨＭ１０７２）  ５  μｇ／ｍｌ：  ２１±２３％）（それぞれｐ＜０．００１、ｐ＜０．００１）。Ｃ５ａ活性化筋線維芽細胞と比較して、ヒトＣ５ａ、およびＣ５３抗体の存在下でのインキュベーションにより、有意な減少は見られなかった（Ｃ３ａ  ｍＡｂ  （ｓｃ２８２９４）  ５  μｇ／ｍｌ：  ８９±１４％；  Ｃ３ａ  ｍＡｂ  （ＨＭ１０７２）  ５  μｇ／ｍｌ：  ７５±２２％）（それぞれ、ｐ＝０．１６７、ｐ＝０．８５５）。Ｃ５ａおよびＣ３ａ活性化筋線維芽細胞と比較して、ヒトＣ３ａ、Ｃ５ａ、およびＣ３ａ抗体の存在下でのインキュベーションにより、有意な減少は見られなかった（Ｃ３ａ  ｍＡｂ  （ｓｃ２８２９４）  ５  μｇ／ｍｌ：  ７６±２２%；  Ｃ３ａ  ｍＡｂ  （ＨＭ１０７２）  ５  μｇ／ｍｌ：  ９４±１３％）（それぞれ、ｐ＝０．１６５、ｐ＝０．３０１）。図３７および３８に示すように、Ｃ３ａ抗体は、１０％ＦＣＳの存在下で筋線維芽細胞の活性化にプラス効果を有することが明らかになった（Ｃ３ａ  ｍＡｂ  （ｓｃ２８２９４）  ５  μｇ／ｍｌ：  ６１±２９％；  Ｃ３ａ  ｍＡｂ  （ＨＭ１０７２）  ５  μｇ／ｍｌ：  ２７±１６％）。１０％ＦＣＳで培養されたヒト角膜実質細胞と比較して、Ｃ３ａ  ｍＡｂ（ｓｃ２８２９４）  ５  μｇ／ｍｌに対して差は有意であった（それぞれ、ｐ＝０．００２、ｐ＝０．２４１）。図３７および３８に示すように、Ｃ３ａ抗体は、ＦＣＳを含まないＤＭＥＭでインキュベートしたヒト角膜実質細胞（無血清対照）と比較して、すべての濃度で筋線維芽細胞の活性化にプラス効果を有することが明らかになった（Ｃ３ａ  ｍＡｂ  （ｓｃ２８２９４）  ５  μｇ／ｍｌ：  ４２±３５％；  Ｃ３ａ  ｍＡｂ  （ＨＭ１０７２）  ５  μｇ／ｍｌ：  ２４±１６％）。無血清対照ヒト角膜実質細胞と比較して、差は有意であった（それぞれ、ｐ＜０．００１、ｐ＝０．００７）。したがって、Ｃ３ａ抗体ｓｃ２８２９４（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ)、およびＨＭ１０７２（Ｈｙｃｕｌｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）は、５  μｇ／ｍｌの濃度で、Ｃ５ａ、またはＣ３ａおよびＣ５ａの組み合わせによってではなく、Ｃ３ａによって活性化された筋線維芽細胞の阻害を引き起こす原因であった。バー＝平均の標準誤差。
【０１７５】
実施例３７
マウスＣ５Ｌ２タンパク質断片は、マウスにおいて角膜のアルカリ熱傷後の角膜線維症の形成を減少させる
【０１７６】
眼の創傷または線維症を有する対象の治療における、配列番号：１９によるマウスＣ５Ｌ２タンパク質断片（ｍＣ５Ｌ２）の潜在的な機能的役割を探索するために、その存在の影響をｉｎ  ｖｉｖｏ角膜アルカリ熱傷マウスモデルで研究した。Ｃ５７／ＢＬ６マウス（６〜８週齢）を、腹腔内全身麻酔下での角膜アルカリ熱傷の標準化されたマウスモデルに従って処理した（Ｓａｉｋａ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  ２００５）。２  μｌの１Ｍ  ＮａＯＨ（水酸化ナトリウム）を浸した直径１．５  ｍｍの濾紙を、立体顕微鏡視下で、右マウスの眼の角膜中央に２分間置き、角膜のアルカリ熱傷を誘発した。角膜アルカリ熱傷の直後に、処理した眼は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）および０．３％オフロキサシン軟膏（２、４、６および８日目）（ＰＢＳ／対照群）、またはＰＢＳおよび０．３％オフロキサシン軟膏（２、４、６および８日目）および１．５  μｇ／ｍｌ  ｍＣ５Ｌ２点眼薬を1日５回（追跡期間全体中）のいずれかを受けた（ｍＣ５Ｌ２伴うＰＢＳ群）。
【０１７７】
「ＰＢＳ／対照群」および「ｍＣ５Ｌ２伴うＰＢＳ群」の創傷治癒治癒の経過を、遺伝子発現によって角膜アルカリ熱傷の５、１０、および２０日後に調べた。マウス角膜実質細胞から得られ、遺伝子発現Ｃｌａｒｉｏｍ  Ｓマウスマイクロアレイから生成された、「ＰＢＳ／対照」と「ｍＣ５Ｌ２を伴うＰＢＳ」群との間で発現レベルが異なる遺伝子のリストを表９（５日目）、表１０（１０日目）、および表１１（２０日目）に示す。角膜アルカリ熱傷後１０日目に最も強い遺伝子発現の差が観察されたため、発現差のある遺伝子に対する１００の最も重要な機能アノテーションを表１２に示す。したがって、マウスＣ５Ｌ２タンパク質断片（ｍＣ５Ｌ２）が、とりわけ、細胞外マトリックス組織化、コラーゲン代謝プロセス、成長因子に対する細胞応答、形質転換成長因子ベータ（受容体）シグナル伝達および平滑筋細胞分化の遺伝子発現に影響を与えることにより、マウスの角膜アルカリ熱傷後の創傷治癒および線維形成に影響を及ぼした。
【０１７８】
角膜アルカリ熱傷の２０日後の角膜線維症の臨床症状は、Ｃｏｗｅｌｌ  （Ｃｏｗｅｌｌ  ＢＡ  ｅｔ  ａｌ．  ＩＬＡＲ  Ｊ  １９９９）、ＭｃＤｏｎａｌｄ  （ＭｃＤｏｎａｌｄ  ＴＯ  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｙｅ  ｉｒｒｉｔａｔｉｏｎ  １９９７，  ｐ５７９−５８２：  Ｍａｒｚｕｌｌｉ  ＦＮ  ｅｔ  ａｌ．  Ｄｅｒｍａｔｏｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ）、およびＤｒｅｗ  （Ｄｒｅｗ  ＡＦ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．  ２０００）に従って確立された角膜線維症評価システムを使用して評価した。Ｃｏｗｅｌｌスコアは、線維症の面積（０：なし、１：１〜２５％、２：２６〜５０％、３：５１〜７５％、４：７６〜１００％）、混濁の密度（０：透明、１：わずかな曇り、瞳孔と虹彩の詳細が識別可能、２：曇り、しかし虹彩と瞳孔の輪郭は見えるまま、３：曇り、混濁は均一ではない、４：均一な混濁）、および表面の規則性（０：滑らか、１：わずかな表面の不規則性、２：粗い表面、いくらかの腫脹、３：顕著な腫脹、クレーターまたはデスメ膜瘤形成、4：穿孔または深刻なデスメ膜瘤）の評価の合計である。ＭｃＤｏｎａｌｄ−（Ｓｈａｄｄｕｃｋ）スコアは、角膜の透明度の評価である（０：可視病変なし、１：ある程度の透明度の喪失。下にある構造は拡散照明で明瞭に見える、２：中程度の透明度の喪失。拡散照明では下にある構造はほとんど見えないが、それでも検査および評価が可能である、３：透明度の深刻な喪失。拡散照明では、下にある構造は病変を通して見たときに見えず、それらの評価は正常に機能しない）。Ｄｒｅｗヘイズスコアは、角膜ヘイズの評価である（０：完全な透明度、１／２：最小ヘイズ、１：軽度のヘイズ、２：顕著なヘイズ、３：前房と虹彩の完全な不明瞭化）。「ＰＢＳ／対照」および「ｍＣ５Ｌ２を伴うＰＢＳ」群の角膜アルカリ熱傷の２０日後の角膜線維症のＣｏｗｅｌｌ、ＭｃＤｏｎａｌｄ、およびＤｒｅｗによる評価スコアを図３９に示す。マウスＣ５Ｌ２タンパク質断片（ｍＣ５Ｌ２）による治療は、ＰＢＳ処理対照(それぞれ、Ｃｏｗｅｌｌ：  ６．４±０．８、ＭｃＤｏｎａｌｄ：  ２．４±０．５、Ｄｒｅｗ：  ２．４±０．５；  ｐ＝０．００７、ｐ＝０．００３、およびｐ＝０．０１１）と比較して、スコアが大幅に低下した（Ｃｏｗｅｌｌ：  ４．５±１．５、ＭｃＤｏｎａｌｄ：  １．４±０．５、Ｄｒｅｗ：  １．５±０．８）。Ｃｏｗｅｌｌスコアの項目に関しては、図４０に示すように、ＰＢＳで治療した対照と比較して、ｍＣ５Ｌ２で治療すると、混濁の面積および密度が大幅に減少した（線維症の面積：２．９±１．０対３．８±０．４、ｐ＝０．０３５；混濁の密度：１．５±０．７対２．６±０．８、ｐ＝０．００９）、ただし表面の規則性はない（表面の規則性：０．０±０．０対０．０±０．０、ｐ＝１．０００）。したがって、マウスＣ５Ｌ２タンパク質断片（ｍＣ５Ｌ２）は、マウスのアルカリ熱傷後の角膜線維症の抑制を引き起こし、その結果、混濁の密度が低下し、ヘイズが減少し、角膜の透明度が高くなり、線維化面積が小さくなった。バー=平均の標準誤差。
【０１７９】
角膜アルカリ熱傷の２０日後の「ＰＢＳ／対照」および「ｍＣ５Ｌ２を伴うＰＢＳ」群の創傷治癒および線維症をタンパク質発現によって調べた。マウス角膜から得られ、「ＰＢＳ／対照」群と「ｍＣ５Ｌ２を伴うＰＢＳ」群間で、タンパク質発現ｓｃｉｏＤｉｓｃｏｖｅｒ抗体マイクロアレイから生成された差次的に発現するタンパク質のリストを表１３に示す。差次的に発現するタンパク質の機能アノテーションタンパク質を表１４に示す。したがって、マウスＣ５Ｌ２タンパク質断片（ｍＣ５Ｌ２）は、特に創傷への応答、免疫系プロセス、コラーゲンの異化過程、ならびに細胞外マトリックスの分解と組織化のタンパク質発現に影響を与えることにより、マウスの角膜アルカリ熱傷後の創傷治癒および線維形成に影響を及ぼした。要約すると、マウスＣ５Ｌ２タンパク質断片（ｍＣ５Ｌ２）は、表１２および１４に示すように、多様な生物学的プロセスを介在させることにより、マウスの角膜アルカリ熱傷後の線維症の抑制を引き起こし、その結果、角膜上の線維症の面積が小さくなり、混濁が減少した。
【０１８０】
【表２−１】
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【表２−２】
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【表２−３】
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【０１８１】
【表３−１】
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【表３−２】
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【表３−３】
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【０１８２】
【表４−１】
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【表４−２】
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【表４−３】
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【表４−４】
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【０１８３】
【表５−１】
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【表５−２】
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【表５−３】
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【０１８４】
【表６−１】
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【表６−２】
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【表６−３】
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【０１８５】
【表７−１】
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【表７−２】
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【０１８６】
【表８−１】
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【表８−２】
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【０１８７】
【表９−１】
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【表９−２】
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【０１８８】
【表１０−１】
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【表１０−２】
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【表１０−３】
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【０１８９】
【表１１】
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【０１９０】
【表１２−１】
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【表１２−２】
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【表１２−３】
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【表１２−４】
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【表１２−５】
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【表１２−６】
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【表１２−７】
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【０１９１】
【表１３−１】
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【表１３−２】
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【０１９２】
【表１４−１】
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【表１４−２】
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【表１４−３】
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【表１４−４】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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