(57)【要約】    本発明は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＦｃ融合タンパク質およびＰＤ−１抗原結合ドメインを含む、新規ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質に関する。ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質を患者に投与してがんを治療することができる。  【選択図】図１
2021521784.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／ＲαヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質であって、
ａ）Ｎ末端からＣ末端に向けて、
ｉ）ＩＬ−１５受容体アルファ（ＩＬ−１５Ｒα）ｓｕｓｈｉドメイン、
ｉｉ）第１のドメインリンカー、
ｉｉｉ）バリアントＩＬ−１５ドメイン、および
ｉｖ）第２のドメインリンカー、および
ｖ）ＣＨ２−ＣＨ３を含む第１のバリアントＦｃドメインを含む第１のモノマーと、
ｂ）Ｎ末端からＣ末端に向けて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む重鎖を含む第２のモノマーであって、前記ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２のモノマーと、
ｃ）ＶＬ−ＣＬを含む軽鎖とを含み、
前記ＶＨおよびＶＬは、ヒトＰＤ−１に結合する抗原結合ドメインを形成し、ＸＥＮＰ２２５５３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３、ＸＥＮＰ２５８０６（配列番号５７８〜５７９）からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４（配列番号１８６〜１８７）、ＸＥＮＰ２５８１２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８（配列番号５８４）、ＸＥＮＰ２５８１３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８（配列番号５８５）、ＸＥＮＰ２５８１９からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２（配列番号５９１）、ＸＥＮＰ２６９４０からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２（配列番号６４２および１１０３）、ＸＥＮＰ２８０２６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０（配列番号７０８および１１６９）、ならびにＸＥＮＰ２８６５２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２（配列番号７１９および１１８０）からなる対から選択される配列を有し、
前記第１のバリアントＦｃドメインおよび前記第２のバリアントＦｃドメインが、ＥＵ付番に従って、それぞれＳ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ２６７Ｋ／ＬＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、およびＫ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑからなる群から選択される一組のアミノ酸置換を有する、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／ＲαヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質。
【請求項２】
前記第１のバリアントＦｃドメインおよび／または前記第２のバリアントＦｃドメインが、ＥＵ付番に従って、Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含むアミノ酸置換を有する、請求項１に記載のヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質。
【請求項３】
前記第１のバリアントＦｃドメインおよび前記バリアント第２のＦｃドメインがそれぞれ、ＥＵ付番に従って、Ｇ２３６Ｒ／Ｌ３２８Ｒ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ／Ａ３２７Ｇ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ／Ａ３２７Ｇ、およびＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌからなる群から選択されるアミノ酸置換を有する、請求項１または２に記載のヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質。
【請求項４】
前記第１のバリアントＦｃドメインおよび前記第２のバリアントＦｃドメインはそれぞれ、ＥＵ付番に従って、アミノ酸置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載のヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質。
【請求項５】
前記バリアントＩＬ−１５ドメインが配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載のヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質。
【請求項６】
前記バリアントＩＬ−１５ドメインが、配列番号２のアミノ酸配列と、Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ、およびＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄからなる群から選択されるアミノ酸置換とを含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載のヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質。
【請求項７】
前記ＩＬ−１５Ｒα  ｓｕｓｈｉドメインが、配列番号４のアミノ酸配列を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載のヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質。
【請求項８】
配列番号９２５、９２６、および１２１６に記載のＸＥＮＰ２９４８２、配列番号７０〜３７２に記載のＸＥＮＰ２５９３７、ならびに図１２６Ａ（配列番号９２５〜９２９）、図１２６Ｂ（配列番号９３０〜９３５）、図１２６Ｃ（配列番号９３６〜９４１）、図１２６Ｄ（配列番号９４２〜９４７）、図１２７Ａ（配列番号９４８〜９５３）、図１２７Ｂ（配列番号９５４〜９５９）、図１２７Ｃ（配列番号９６０〜９６５）、図１２７Ｄ（配列番号９６６〜９７１）、図１２８Ａ（配列番号９７２〜９７７）、図１２８Ｂ（配列番号９７８〜９８３）、図１２８Ｃ（配列番号９８４〜９８９）、図１２８Ｄ（配列番号９９０〜９９５）、図１２８Ｅ（配列番号９９６〜１００１）、図１２８Ｆ（配列番号１００２〜１００７）、図１２８Ｇ（配列番号１００８〜１０１３）、図１２８Ｈ（配列番号１０１４〜１０１９）、図１２８Ｉ（配列番号１０２０〜１０２５）、図１２８Ｊ（配列番号１０２６〜１０３１）、図１２８Ｋ（配列番号１０３２〜１０３５）、図１２８Ｌ（配列番号１０３６〜１０４１）に示されるいずれか１つからなる群から選択される、請求項１〜７のいずれか１項に記載のヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質。
【請求項９】
核酸組成物であって、
ａ）請求項１〜８のいずれか１項に記載のヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質の前記第１のモノマーをコードする第１の核酸と、
ｂ）請求項１〜８のいずれか１項に記載のヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質の前記第２のモノマーをコードする第２の核酸と、
ｃ）請求項１〜８のいずれか１項に記載のヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質の前記軽鎖をコードする第３の核酸と、をそれぞれ含む、核酸組成物。
【請求項１０】
発現ベクター組成物であって、
ａ）請求項９に記載の第１の核酸を含む第１の発現ベクターと、
ｂ）請求項９に記載の第２の核酸を含む第２の発現ベクターと、
ｃ）請求項９に記載の第３の核酸を含む第３の発現ベクターと、を含む、発現ベクター組成物。
【請求項１１】
請求項９に記載の核酸組成物、または請求項１０に記載の発現ベクター組成物を含む、宿主細胞。
【請求項１２】
請求項１〜８のいずれか１項に記載のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／ＲαヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質を産生する方法であって、請求項１１に記載の宿主細胞を、前記ヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質が発現する適切な条件下で培養することと、前記タンパク質を回収することと、を含む、方法。
【請求項１３】
配列番号９２５、９２６、および１２１６に記載のＸＥＮＰ２９４８２、配列番号３７０〜３７２に記載のＸＥＮＰ２５９３７、ならびに図１２６Ａ（配列番号９２５〜９２９）、図１２６Ｂ（配列番号９３０〜９３５）、図１２６Ｃ（配列番号９３６〜９４１）、図１２６Ｄ（配列番号９４２〜９４７）、図１２７Ａ（配列番号９４８〜９５３）、図１２７Ｂ（配列番号９５４〜９５９）、図１２７Ｃ（配列番号９６０〜９６５）、図１２７Ｄ（配列番号９６６〜９７１）、図１２８Ａ（配列番号９７２〜９７７）、図１２８Ｂ（配列番号９７８〜９８３）、図１２８Ｃ（配列番号９８４〜９８９）、図１２８Ｄ（配列番号９９０〜９９５）、図１２８Ｅ（配列番号９９６〜１００１）、図１２８Ｆ（配列番号１００２〜１００７）、図１２８Ｇ（配列番号１００８〜１０１３）、図１２８Ｈ（配列番号１０１４〜１０１９）、図１２８Ｉ（配列番号１０２０〜１０２５）、図１２８Ｊ（配列番号１０２６〜１０３１）、図１２８Ｋ（配列番号１０３２〜１０３５）、図１２８Ｌ（配列番号１０３６〜１０４１）に示されるいずれか１つからなる群から選択される、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／ＲαヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質。
【請求項１４】
がんを治療することを必要とする患者においてがんを治療する方法であって、治療有効量の請求項１〜８および１３のいずれか１項に記載のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／ＲαヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質を前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項１５】
治療有効量のチェックポイント遮断抗体を投与することをさらに含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記チェックポイント遮断抗体が、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＬＡＧ３抗体、および抗ＣＴＬＡ−４抗体からなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ、アベルマブ、またはダルバルマブ（ｄｕｒｂａｌｕｍａｂ）である、請求項１６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
この出願は、２０１８年４月１８日に出願された米国仮出願第６２／６５９，５７１号の優先権を主張し、その開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
ＩＬ−２およびＩＬ−１５などのサイトカインは、Ｂ細胞、Ｔ細胞、およびＮＫ細胞の増殖および分化を補助する機能を持つ。両サイトカインは、２つの共通の受容体、共通のガンマ鎖（γｃ、ＣＤ１３２）、およびＩＬ−２受容体ベータ鎖（ＩＬ−２Ｒβ、ＣＤ１２２）、ならびに各サイトカインに固有のアルファ鎖である、ＩＬ−２受容体アルファ（ＩＬ−２Ｒα、ＣＤ２５）またはＩＬ−１５受容体アルファ（ＩＬ−１５Ｒα、ＣＤ２１５）からなるトリマー複合体への結合によってその細胞シグナル伝達機能を発揮する。両サイトカインは腫瘍学において潜在的に価値のある治療薬と考えられており、ＩＬ−２は転移性腎細胞癌および悪性黒色腫の患者に使用することが承認されている。現在、いくつかの臨床試験が進行中であるが、組み換えＩＬ−１５の承認された用途はない。しかしながら、有望な薬物として、両方のサイトカインは、半減期を数分単位で測定して、非常に速いクリアランスに悩まされている。ＩＬ−２免疫療法は、速いクリアランスを克服するために高用量で投与された場合、全身毒性と関連している。このような全身毒性は、最近の臨床治験においてＩＬ−１５免疫療法でも報告されている（Ｇｕｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１５，１９５（５）：２３５３−６４）。
【０００３】
ＰＤ−１などの免疫チェックポイントタンパク質は、Ｔ細胞の活性化に続いて上方制御され、ＰＤ−Ｌ１などの免疫チェックポイントリガンドに結合すると、活性化されたＴ細胞を枯渇させることによって自己免疫を排除する。しかしながら、免疫チェックポイントタンパク質は腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）でも上方制御され、免疫チェックポイントリガンドは腫瘍細胞で過剰発現し、腫瘍細胞による免疫逃避に寄与する。
【０００４】
高用量を必要とせず、全身毒性を回避するために腫瘍を標的化するサイトカインを用いた治療戦略のための腫瘍治療における満たされていない必要性が残存している。本発明は、安全性プロファイルを改善するために、ＴＩＬの強化された半減期およびより選択的な標的化を有するＰＤ−１標的化ＩＬ−１５融合タンパク質（図２）を提供することによってこの必要性に対処する。
【発明の概要】
【０００５】
本発明は、新規のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／ＲαヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質、それらの使用、およびヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質を作製する方法に関し、以下を含む：
【０００６】
したがって、いくつかの態様では、本発明は、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／ＲαヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質を提供する。この態様では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／ＲαヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質は、
（ａ）Ｎ末端からＣ末端に向けて、
（ｉ）ＩＬ−１５受容体アルファ（ＩＬ−１５Ｒα）ｓｕｓｈｉドメイン、
（ｉｉ）第１のドメインリンカー、
（ｉｉｉ）バリアントＩＬ−１５ドメイン、および
（ｉｖ）第２のドメインリンカー、および
（ｖ）ＣＨ２−ＣＨ３を含む第１のバリアントＦｃドメインを含む第１のモノマーと、
ｂ）Ｎ末端からＣ末端に向けて、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む重鎖を含む第２のモノマーであって、ＣＨ２−ＣＨ３が第２のバリアントＦｃドメインである、第２のモノマーと、
（ｃ）ＶＬ−ＣＬを含む軽鎖とを含み、
上記ＶＨおよびＶＬは、ヒトＰＤ−１に結合する抗原結合ドメインを形成し、ＸＥＮＰ２２５５３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３（配列番号１８６および１８７）、ＸＥＮＰ２５８０６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４（配列番号５７８〜５７）、ＸＥＮＰ２５８１２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８（配列番号５８４）、ＸＥＮＰ２５８１３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８（配列番号５８５）、ＸＥＮＰ２５８１９からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２（配列番号５９１）、ＸＥＮＰ２６９４０からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２（配列番号６４２および１１０３）、ＸＥＮＰ２８０２６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０（配列番号７０８および１１６９）、ならびにＸＥＮＰ２８６５２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２（配列番号７１９および１１８０）からなる対から選択される配列を有し、
上記第１のバリアントＦｃドメインおよび上記第２のバリアントＦｃドメインが、ＥＵ付番に従って、それぞれＳ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ２６７Ｋ／ＬＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、およびＫ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑからなる群から選択される一組のアミノ酸置換を有する。
【０００７】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／ＲαヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質の第１のバリアントＦｃドメインおよび／または第２のバリアントＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含むアミノ酸置換を有する。
【０００８】
いくつかの実施形態では、第１のバリアントおよびバリアント第２のＦｃドメインはそれぞれ、ＥＵ付番に従って、Ｇ２３６Ｒ／Ｌ３２８Ｒ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ／Ａ３２７Ｇ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ／Ａ３２７ＧおよびＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌからなる群から選択されるアミノ酸置換を有する。
【０００９】
いくつかの実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインおよび第２のバリアントＦｃドメインはそれぞれ、ＥＵ付番に従って、アミノ酸置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを有する。
【００１０】
いくつかの実施形態では、バリアントＩＬ−１５ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、バリアントＩＬ−１５ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列と、Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ、およびＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄからなる群から選択されるアミノ酸置換と、を含む。
【００１１】
いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５Ｒα  ｓｕｓｈｉドメインは、配列番号４のアミノ酸配列を含む。
【００１２】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／ＲαヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質は、配列番号９２５、９２６、および１２１６に記載のＸＥＮＰ２９４８２、配列番号３７０〜３７２に記載のＸＥＮＰ２５９３７、ならびに図１２６Ａ（配列番号９２５〜９２９）、図１２６Ｂ（配列番号９３０〜９３５）、図１２６Ｃ（配列番号９３６〜９４１）、図１２６Ｄ（配列番号９４２〜９４７）、図１２７Ａ（配列番号９４８〜９５３）、図１２７Ｂ（配列番号９５４〜９５９）、図１２７Ｃ（配列番号９６０〜９６５）、図１２７Ｄ（配列番号９６６〜９７１）、図１２８Ａ（配列番号９７２〜９７７）、図１２８Ｂ（配列番号９７８〜９８３）、図１２８Ｃ（配列番号９８４〜９８９）、図１２８Ｄ（配列番号９９０〜９９５）、図１２８Ｅ（配列番号９９６〜１００１）、図１２８Ｆ（配列番号１００２〜１００７）、図１２８Ｇ（配列番号１００８〜１０１３）、図１２８Ｈ（配列番号１０１４〜１０１９）、図１２８Ｉ（配列番号１０２０〜１０２５）、図１２８Ｊ（配列番号１０２６〜１０３１）、図１２８Ｋ（配列番号１０３２〜１０３５）、図１２８Ｌ（配列番号１０３６〜１０４１）に示されるいずれか１つからなる群から選択される。
【００１３】
さらなる態様では、本明細書に提供されるのは、
（ａ）Ｎ末端からＣ末端に向けて、
（ｉ）ＩＬ−１５受容体アルファ（ＩＬ−１５Ｒα）ｓｕｓｈｉドメイン、
（ｉｉ）第１のドメインリンカー、
（ｉｉｉ）バリアントＩＬ−１５ドメイン、
（ｉｖ）第２のドメインリンカー、および
（ｖ）ＣＨ２−ＣＨ３を含む第１のバリアントＦｃドメイン、を含む第１のモノマーと、
（ｂ）Ｎ末端からＣ末端に向けて、
（ｉ）ヒトＰＤ−１に結合する一本鎖Ｆｖドメイン（ｓｃＦｖ）であって、
（１）可変重鎖ドメイン（ＶＨ）、
（２）ｓｃＦｖリンカー、および
（３）可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）、を含む、一本鎖Ｆｖドメインと、
（ｉｉ）第２のバリアントＦｃドメインと、を含む第２のモノマーと、を含む、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／ＲαヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質であり、
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３は、ＸＥＮＰ２２５３８からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３（配列番号４１７）、ＸＥＮＰ２５８０６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４（配列番号５７８〜５７９）、ＸＥＮＰ２５８１２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８（配列番号５８４）、ＸＥＮＰ２５８１３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８（配列番号５８５）、ＸＥＮＰ２５８１９からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２（配列番号５９１）、ＸＥＮＰ２６９４０からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２（配列番号６４２および１１０３）、ＸＥＮＰ２８０２６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０（配列番号７０８および１１６９）、ならびにＸＥＮＰ２８６５２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２（配列番号７１９および１１８０）からのＣＤＲからなる群から選択され、
上記第１のバリアントＦｃドメインおよび上記第２のバリアントＦｃドメインが、ＥＵ付番に従って、それぞれＳ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ２６７Ｋ／ＬＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、およびＫ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑからなる群から選択される一組のアミノ酸置換を有する。
【００１４】
いくつかの実施形態では、第２のモノマーのＶＨおよびＶＬは、ＸＥＮＰ２２５３８からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３（配列番号４１７）、ＸＥＮＰ２５８０６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４（配列番号５７８〜５７９）、ＸＥＮＰ２５８１２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８（配列番号５８４）、ＸＥＮＰ２５８１３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８（配列番号５８５）、ＸＥＮＰ２５８１９からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２（配列番号５９１）、ＸＥＮＰ２６９４０からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２（配列番号６４２および１１０３）、ＸＥＮＰ２８０２６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０（配列番号７０８および１１６９）、ならびにＸＥＮＰ２８６５２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２（配列番号７１９および１１８０）からなる対から選択される。
【００１５】
いくつかの実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインおよび第２のバリアントＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含む追加の一組のアミノ酸置換を有する。
【００１６】
いくつかの実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインおよびバリアント第２のＦｃドメインはそれぞれ、ＥＵ付番に従って、Ｇ２３６Ｒ／Ｌ３２８Ｒ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ／Ａ３２７Ｇ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ／Ａ３２７ＧおよびＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌからなる追加の一組のアミノ酸置換を有する。
【００１７】
いくつかの実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインおよび第２のバリアントＦｃドメインはそれぞれ、ＥＵ付番に従って、追加のアミノ酸置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを有する。
【００１８】
いくつかの実施形態では、バリアントＩＬ−１５ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、バリアントＩＬ−１５ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列と、Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ、およびＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄからなる群から選択されるアミノ酸置換と、を含む。
【００１９】
いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５Ｒα  ｓｕｓｈｉドメインは、配列番号４のアミノ酸配列を有する。
いくつかの実施形態では、第１のモノマーは、配列番号４のＩＬ−１５Ｒα  ｓｕｓｈｉドメインと、Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ、およびＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄからなる群から選択されるアミノ酸置換を有する配列番号２のバリアントＩＬ−１５ドメインと、を含み、ｓｃＦｖは、ＸＥＮＰ２５８０６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４（配列番号５７８〜５７９）、ＸＥＮＰ２５８１２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８（配列番号５８４）、ＸＥＮＰ２５８１３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８（配列番号５８５）、ＸＥＮＰ２５８１９からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２（配列番号５９１）、ＸＥＮＰ２６９４０からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２（配列番号６４２および１１０３）、ＸＥＮＰ２８０２６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０（配列番号７０８および１１６９）、ならびにＸＥＮＰ２８６５２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２（配列番号７１９および１１８０）からなる対から選択されるＶＨおよびＶＬを含む。
【００２０】
他の態様では、本明細書で提供されるのは、本明細書で概説される任意のヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質の第１のモノマーをコードする核酸組成物である。また、本明細書で提供されるのは、本明細書で概説される任意のヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質の第２のモノマーをコードする核酸組成物である。また、提供されるのは、本明細書に概説される任意のヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質の軽鎖をコードする核酸組成物である。
【００２１】
いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、本明細書に記載の第１のモノマーのいずれか１つをコードする核酸組成物のいずれかを含む発現ベクターである。また、本明細書で提供されるのは、本明細書に記載の第２のモノマーのいずれか１つをコードする核酸組成物のいずれかを含む発現ベクターである。また、本明細書で提供されるのは、ヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質のＶＬおよびＶＨがヒトＰＤ−１に結合するように、本明細書に記載の軽鎖のいずれか１つをコードする核酸組成物のいずれかを含む発現ベクターである。
【００２２】
本明細書で提供されるのは、本明細書に記載の核酸組成物の１つ以上を含む発現ベクターである。本明細書で提供されるのは、１つ以上の発現ベクターを含む宿主細胞である。
【００２３】
いくつかの態様では、本明細書に提供されるのは、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／ＲαヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質を産生する方法であって、ヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質が発現する適切な条件下で本明細書に記載の宿主細胞を培養することと、タンパク質を回収することとを含む、方法である。
【００２４】
いくつかの態様では、本発明は、配列番号９２５、９２６、および１２１６に記載のＸＥＮＰ２９４８２、配列番号３７０〜３７２に記載のＸＥＮＰ２５９３７、および図１２６Ａ（配列番号９２５〜９２９）、図１２６Ｂ（配列番号９３０〜９３５）、図１２６Ｃ（配列番号９３６〜９４１）、図１２６Ｄ（配列番号９４２〜９４７）、図１２７Ａ（配列番号９４８〜９５３）、図１２７Ｂ（配列番号９５４〜９５９）、図１２７Ｃ（配列番号９６０〜９６５）、図１２７Ｄ（配列番号９６６〜９７１）、図１２８Ａ（配列番号９７２〜９７７）、図１２８Ｂ（配列番号９７８〜９８３）、図１２８Ｃ（配列番号９８４〜９８９）、図１２８Ｄ（配列番号９９０〜９９５）、図１２８Ｅ（配列番号９９６〜１００１）、図１２８Ｆ（配列番号１００２〜１００７）、図１２８Ｇ（配列番号１００８〜１０１３）、図１２８Ｈ（配列番号１０１４〜１０１９）、図１２８Ｉ（配列番号１０２０〜１０２５）、図１２８Ｊ（配列番号１０２６〜１０３１）、図１２８Ｋ（配列番号１０３２〜１０３５）、図１２８Ｌ（配列番号１０３６〜１０４１）に示されるいずれか１つからなる群から選択される、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／ＲαヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質を提供する。
【００２５】
他の態様では、本発明は、配列番号９２５、９２６、および１２１６に記載のＸＥＮＰ２９４８２、配列番号３７０〜３７２に記載のＸＥＮＰ２５９３７、および図１２６Ａ（配列番号９２５〜９２９）、図１２６Ｂ（配列番号９３０〜９３５）、図１２６Ｃ（配列番号９３６〜９４１）、図１２６Ｄ（配列番号９４２〜９４７）、図１２７Ａ（配列番号９４８〜９５３）、図１２７Ｂ（配列番号９５４〜９５９）、図１２７Ｃ（配列番号９６０〜９６５）、図１２７Ｄ（配列番号９６６〜９７１）、図１２８Ａ（配列番号９７２〜９７７）、図１２８Ｂ（配列番号９７８〜９８３）、図１２８Ｃ（配列番号９８４〜９８９）、図１２８Ｄ（配列番号９９０〜９９５）、図１２８Ｅ（配列番号９９６〜１００１）、図１２８Ｆ（配列番号１００２〜１００７）、図１２８Ｇ（配列番号１００８〜１０１３）、図１２８Ｈ（配列番号１０１４〜１０１９）、図１２８Ｉ（配列番号１０２０〜１０２５）、図１２８Ｊ（配列番号１０２６〜１０３１）、図１２８Ｋ（配列番号１０３２〜１０３５）、図１２８Ｌ（配列番号１０３６〜１０４１）に示されるいずれか１つからなる群から選択される、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／ＲαヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質と、薬学的に許容される担体と、を含む、医薬組成物を提供する。
【００２６】
特定の態様では、本発明は、がんを治療することを必要とする患者においてがんを治療する方法であって、治療有効量の、本明細書に記載のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／ＲαヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質のいずれか１つ、またはその医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。
【００２７】
いくつかの実施形態では、この方法はまた、治療有効量のチェックポイント遮断抗体を投与することを含む。
【００２８】
いくつかの実施形態では、チェックポイント遮断抗体は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＬＡＧ３抗体、および抗ＣＴＬＡ−４抗体からなる群から選択される。
【００２９】
いくつかの実施形態では、上記抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、またはピジリズマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ、アベルマブ、またはダルバルマブである。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】ＩＬ−１５と、その受容体であるＩＬ−１５Ｒα（ＣＤ２１５）、ＩＬ−１５Ｒβ（ＣＤ１２２）、および共通のガンマ鎖（ＣＤ１３２）との複合体の構造を示す。
【図２】ＰＤ−１を発現する腫瘍反応性腫瘍浸潤リンパ球に対するＰＤ−１標的ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の選択性を示す。
【図３Ａ−Ｂ】ＩＬ−１５およびその受容体の配列を示す。
【図４Ａ−Ｅ】（スキューおよびｐＩバリアントを含む）Ｆｃヘテロダイマー化バリアントセットの有用な対を示す。対応する「モノマー２」バリアントが存在しないバリアントがあり、これらはいずれのモノマーでも単独で使用できるｐＩバリアントである。
【図５】等価バリアント抗体定常領域およびそれらのそれぞれの置換の一覧を示す。ｐＩ＿（−）は低ｐＩバリアントを示し、ｐＩ＿（＋）は高ｐＩバリアントを示す。これらは、任意選択でかつ独立して、本発明の他のヘテロダイマー化バリアント（および本明細書に概説されているように他のバリアントの種類）と組み合わせることができる。
【図６】ＦｃγＲ結合を除去した有用な除去バリアントを示す（しばしば「ノックアウト」または「ＫＯ」バリアントと呼ばれる）。一般に、除去バリアントは両方のモノマーに見られるが、場合によっては、それらは一方のモノマーのみにあってもよい。
【図７Ａ−Ｅ】本発明のＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の「非サイトカイン」構成要素の特に有用な実施形態を示す。
【図８Ａ−Ｆ】本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の「非サイトカイン」／「非Ｆｖ」構成要素の特に有用な実施形態を示す。
【図９】ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質に使用するためのいくつかの例示的な可変長リンカーを示す。いくつかの実施形態では、これらのリンカーは、ＩＬ−１５および／またはＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）のＣ末端をＦｃ領域のＮ末端に連結するのに使用される。いくつかの実施形態では、これらのリンカーは、ＩＬ−１５をＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）に融合するのに使用される。
【図１０】構成要素として、１つ以上のｓｃＦｖを利用するヘテロダイマー抗体のｐＩを増加または減少するのに使用されるいくつかの荷電ｓｃＦｖリンカーを示す。（＋Ｈ）正のリンカーは、本明細書において特に使用される。単一電荷を有する単一の先行技術ｓｃＦｖリンカーは、Ｗｈｉｔｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ６（８）：９８９−９９５（１９９３）からの「Ｗｈｉｔｌｏｗ」と称される。このリンカーは、ｓｃＦｖにおける凝集を減少させ、タンパク質分解安定性を高めるために使用されたことに留意すべきである。
【図１１Ａ−Ｄ】サイトカイン配列（例えば、ＩＬ−１５および／またはＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ））を含まない、ヒトＩｇＧ１に基づくいくつかの有用なＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃフォーマット骨格の配列を示す。これらの骨格はまた、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃタンパク質の特定の実施形態において使用され得ることに留意することが重要である。骨格１はヒトＩｇＧ１（３５６Ｅ／３５８Ｍアロタイプ）に基づき、両方の鎖にＣ２２０Ｓ、鎖にＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント、Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアントを含み、両方の鎖にＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０ＳのスキューバリアントおよびＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋの除去バリアントを有する。骨格２はヒトＩｇＧ１（３５６Ｅ／３５８Ｍアロタイプ）に基づき、両方の鎖にＣ２２０Ｓ、鎖にＳ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント、Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアントを含み、両方の鎖にＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０ＳのスキューバリアントおよびＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋの除去バリアントを有する。骨格３はヒトＩｇＧ１（３５６Ｅ／３５８Ｍアロタイプ）に基づき、両方の鎖にＣ２２０Ｓ、鎖にＳ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント、Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアントを含み、両方の鎖にＬ３６８Ｅ／Ｋ３７０ＳのスキューバリアントおよびＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋの除去バリアントを有する。骨格４はヒトＩｇＧ１（３５６Ｅ／３５８Ｍアロタイプ）に基づき、両方の鎖にＣ２２０Ｓ、鎖にＤ４０１Ｋ：Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ／Ｔ４１１Ｅのスキューバリアント、Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアントを含み、両方の鎖にＫ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ／Ｔ４１１ＥのスキューバリアントおよびＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋの除去バリアントを有する。骨格５はヒトＩｇＧ１（３５６Ｄ／３５８Ｌアロタイプ）に基づき、両方の鎖にＣ２２０Ｓ、鎖にＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント、Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアントを含み、両方の鎖にＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０ＳのスキューバリアントおよびＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋの除去バリアントを有する。骨格６はヒトＩｇＧ１（３５６Ｅ／３５８Ｍアロタイプ）に基づき、両方の鎖にＣ２２０Ｓ、鎖にＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント、Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアントを含み、両方の鎖にＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋの除去バリアントを有し、さらに両方の鎖にＮ２９７Ａバリアントを有する。骨格７は、変異がＮ２９７Ｓであることを除いて６と同一である。骨格６および７の代替フォーマットは、両方の鎖において除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを除外することができる。骨格８はヒトＩｇＧ４に基づき、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント、鎖にＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアントを含み、両方の鎖にＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０ＳのスキューバリアントおよびＳ２２８Ｐ（ＥＵ付番によるもので、これはＫａｂａｔではＳ２４１Ｐである）バリアントを有し、これは当技術分野で既知のとおり、Ｆａｂアーム交換を除去する。骨格９はヒトＩｇＧ２に基づき、鎖にＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント、Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアントを含み、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアントを有する。骨格１０はヒトＩｇＧ２に基づき、鎖にＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント、Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアントを含み、両方の鎖にＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓスキューバリアント、およびＳ２６７Ｋバリアントを含む。骨格１１は、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４ＳのＸｔｅｎｄ変異を含むことを除いて、骨格１と同一である。骨格１２はヒトＩｇＧ１（３５６Ｅ／３５８Ｍアロタイプ）に基づき、両方の同一の鎖にＣ２２０Ｓ、両方の同一の鎖にＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋの除去バリアントを含む。骨格１３はヒトＩｇＧ１（３５６Ｅ／３５８Ｍアロタイプ）に基づき、両方の鎖にＣ２２０Ｓ、鎖にＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント、Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２９Ｒ／Ｎ２７６ＫのｐＩバリアントを含み、両方の鎖にＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑのスキューバリアント、およびＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋの除去バリアントを有する。
【００３１】
当業者には理解され、以下に概説されるように、これらの配列は、図２２および３６に概略的に示されるように、ＩＬ−１５／Ｒα−ヘテロＦｃ、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα、およびｓｃＩＬ−１５／Ｒαを含むがこれらに限定されない、本明細書に概説される任意のＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）対とともに用いられ得る。さらに、任意のＩＬ−１５および／またはＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）バリアントを、任意の組み合わせでこれらの図１１Ａ〜１１Ｄの骨格に組み込むことができる。
【００３２】
これらの骨格の各々内に含まれるのは、列挙された配列に対して（本明細書で定義されるように）９０％、９５％、９８％、および９９％同一であり、かつ／または（当業者には理解されるように、親のヒトＩｇＧ１（または骨格に基づいてＩｇＧ２もしくはＩｇＧ４）と比べていくつかのアミノ酸修飾を既に含む図の「親」と比べて）１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０の追加のアミノ酸置換を含む配列である。すなわち、列挙された骨格は、図１１Ａ〜１１Ｄの骨格内に含まれるスキューバリアント、ｐＩバリアント、および除去バリアントに加えて、追加のアミノ酸修飾（一般にアミノ酸置換）を含み得る。
【図１２】サイトカイン配列（例えば、ＩＬ−１５および／またはＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ））またはＶＨを含まず、さらに図１３に示す軽鎖骨格を除く、ヒトＩｇＧ１に基づくいくつかの有用なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体フォーマット骨格の配列を示す。骨格１はヒトＩｇＧ１（３５６Ｅ／３５８Ｍアロタイプ）に基づき鎖にＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント、Ｃ２２０Ｓ、およびＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアントを含み、両方の鎖にＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０ＳのスキューバリアントおよびＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋの除去バリアントを有する。骨格２はヒトＩｇＧ１（３５６Ｅ／３５８Ｍアロタイプ）に基づき、鎖にＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント、Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアントを含み、鎖にＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント、Ｃ２２０Ｓ、両方の鎖にＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑのバリアント、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋの除去バリアントを有する。骨格３はヒトＩｇＧ１（３５６Ｅ／３５８Ｍアロタイプ）に基づき、鎖にＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント、Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアントを含み、鎖にＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント、Ｑ１９６Ｋ／Ｉ１９９Ｔ／Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６ＫのｐＩバリアントを有し、両方の鎖にＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑのバリアント、およびＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋの除去バリアントを有する。
【００３３】
特定の実施形態では、これらの配列は、３５６Ｄ／３５８Ｌアロタイプのものであり得る。他の実施形態では、これらの配列は、Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｓ置換のいずれかを含み得る。いくつかの他の実施形態では、これらの配列はＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４ＳのＸｔｅｎｄ変異を含み得る。さらに他の実施形態では、これらの配列は代わりにヒトＩｇＧ４に基づくことができ、当技術分野で既知のように両方の鎖にＦａｂアーム交換を除去するＳ２２８Ｐ（ＥＵ付番、ＫａｂａｔではＳ２４１Ｐである）バリアントを含む。なおさらなる実施形態では、これらの配列は代わりにヒトＩｇＧ２に基づき得る。さらに、これらの配列は、代わりに、図４Ａ〜４Ｅ、５、および６に示す他のスキューバリアント、ｐＩバリアント、および除去バリアントを利用し得る。
【００３４】
当業者には理解され、以下に概説されるように、これらの配列は、図６５Ａ〜６５Ｋに概略的に示されるように、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα、およびｄｓＩＬ−１５Ｒαを含むがこれらに限定されない、本明細書に概説される任意のＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）対とともに用いられ得る。さらに当業者には理解されそして以下に概説されるように、任意のＩＬ−１５および／またはＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）バリアントがこれらの骨格に組み込まれ得る。さらに、当業者には理解され、以下に概説されるように、これらの配列は、ｓｃＦｖまたはＦａｂのいずれかを含む、本明細書に概説された任意のＶＨおよびＶＬ対とともに使用することができる。
【００３５】
これらの骨格の各々内に含まれるのは、列挙された配列に対して（本明細書で定義されるように）９０％、９５％、９８％、および９９％同一であり、および／または（当業者には理解されるように、親のヒトＩｇＧ１（または骨格に基づいてＩｇＧ２もしくはＩｇＧ４）と比べていくつかのアミノ酸修飾を既に含む図の「親」と比べて、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０の追加のアミノ酸置換を含む配列である。すなわち、列挙された骨格は、この図の骨格内に含まれるスキューバリアント、ｐＩバリアント、および除去バリアントに加えて、追加のアミノ酸修飾（一般にアミノ酸置換）を含み得る。
【図１３】本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質に使用される軽鎖の「非Ｆｖ」骨格（すなわち、定常軽鎖）を示す。
【図１４】例示的な抗ＰＤ−１結合ドメインの可変領域配列を示す。ＣＤＲには下線が付されている。本明細書中に記されそして本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表１に示されるように用いられる付番によってわずかに異なり得、したがって、下線が付されたＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶＨおよびＶＬドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。さらに、図中のすべての配列に関して、これらのＶＨおよびＶＬ配列は、ｓｃＦｖフォーマットまたはＦａｂフォーマットのいずれかで使用することができる。
【図１５Ａ−Ｆ】本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質において使用され得る追加のＰＤ−１−３  ＡＢＤの可変領域を示す。ＣＤＲには下線が付されている。本明細書中に記されそして本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表１に示されるように用いられる付番によってわずかに異なり得、したがって、下線が付されたＣＤＲのみならず、他の付番システムを使用したＶＨおよびＶＬドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。さらに、図中の全ての配列に関して、これらのＶＨおよびＶＬ配列はｓｃＦｖフォーマットまたはＦａｂフォーマットのいずれかで使用することができる。
【図１６】重鎖にＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ置換を有する、ハイブリドーマクローン１Ｃ１１およびヒトＩｇＧ１の可変領域に基づくキメラ抗ＰＤ−１抗体、ＸＥＮＰ２１５７５の配列を示す。ＣＤＲは太字であり、スラッシュは可変ドメインの境界を示す。本明細書中に記されそして本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表１に示されるように用いられる付番によってわずかに異なり得、したがって、下線が付されたＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶＨおよびＶＬドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。
【図１７】抗ＰＤ−１クローン１Ｃ１１による、ＰＤ−１でトランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｔ細胞におけるＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用の遮断を示す。
【図１８】ＳＥＢ刺激Ｔ細胞への、抗ＰＤ−１クローン１Ｃ１１の結合を示す。
【図１９Ａ−Ｂ】ヒトＰＢＭＣのＳＥＢ刺激および抗ＰＤ−１クローン１Ｃ１１による処理後のサイトカイン放出アッセイ（図１９Ａ：ＩＬ−２、図１９Ｂ：ＩＦＮγ）を示す。
【図２０Ａ−Ｃ】重鎖にＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ置換を有するヒトＩｇＧ１フォーマットの、二価抗体としての抗ＰＤ−１クローン１Ｃ１１の例示的なヒト化バリアントの配列を示す。ＣＤＲは太字であり、スラッシュは可変ドメインの境界を示す。本明細書中に記されそして本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表１に示されるように用いられる付番によってわずかに異なり得、したがって、太字のＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶＨおよびＶＬドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。当業者には理解されるように、ＶＨおよびＶＬドメインは、本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質において使用するために、ＦａｂまたはｓｃＦｖとしてフォーマットすることができる。
【図２１】Ｏｃｔｅｔ（および関連するセンサグラム）によって決定されたＰＤ−１に対するＸＥＮＰ２２５５３の親和性を示す。
【図２２Ａ−Ｇ】本発明のＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のいくつかのフォーマットを示す。ＩＬ−１５ＲαヘテロダイマーＦｃ融合体または「ＩＬ−１５／Ｒα−ヘテロＦｃ」（図２２Ａ）は、ヘテロダイマーＦｃの一方側に組み換えで融合されたＩＬ−１５、およびヘテロダイマーＦｃの他方側に組み換えで融合されたＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）を含む。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）は、Ｆｃ領域のＣ末端とＮ末端との間に可変長Ｇｌｙ−Ｓｅｒリンカーを有し得る。一本鎖ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体または「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ」（図２２Ｂ）は、可変長リンカーによってＩＬ−１５に融合したＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）を含み（「一本鎖」ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）複合体または「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」と呼ばれる）、これは次いでヘテロダイマーＦｃ領域のＮ末端に融合され、分子の他方側は「Ｆｃのみ」または「空のＦｃ」である。非共有結合のＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃまたは「ｎｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ」（図２２Ｃ）はヘテロダイマーＦｃに融合したＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）を含むが、ＩＬ−１５は非共有結合のＩＬ−１５／Ｒα複合体が形成されるように別々にトランスフェクトされ、分子の他方側は「Ｆｃのみ」または「空のＦｃ」である。二価非共有結合のＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体または「二価ｎｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ」（図２２Ｄ）はホモダイマーＦｃ領域のＮ末端に融合したＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）を含むが、ＩＬ−１５は非共有結合のＩＬ−１５／Ｒα複合体が形成されるように別々にトランスフェクトされる。二価一本鎖ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体または「二価ｓｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ」（図２２Ｅ）は、可変長リンカーによってＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）に融合したＩＬ−１５を含み（「一本鎖」ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）複合体または「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」と呼ばれる）、次いでこれをホモダイマーＦｃ領域のＮ末端に融合させる。Ｆｃ非共有結合のＩＬ−１５／Ｒα融合体または「Ｆｃ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」（図２２Ｆ）はヘテロダイマーＦｃ領域のＣ末端に融合したＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）を含むが、ＩＬ−１５は非共有結合のＩＬ−１５／Ｒα複合体が形成されるように別々にトランスフェクトされ、分子の他方側は「Ｆｃのみ」または「空のＦｃ」である。Ｆｃ−一本鎖ＩＬ−１５／Ｒα融合体または「Ｆｃ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」（図２２Ｇ）は、可変長リンカーによってＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）に融合したＩＬ−１５を含み（「一本鎖」ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）複合体または「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」と呼ばれる）、これは次いでヘテロダイマーＦｃ領域のＣ末端に融合され、分子の他方側は「Ｆｃのみ」または「空のＦｃ」である。
【図２３】「ＩＬ−１５／ＲαヘテロＦｃ」フォーマットの例示的なＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２０８１８およびＸＥＮＰ２１４７５の配列を示す。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および１０に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。
【図２４】「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ」フォーマットの例示的なＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２１４７８の配列を示す。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および１０に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。
【図２５Ａ−Ｂ】「ｎｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ」フォーマットの例示的なＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２１４７９、ＸＥＮＰ２２３６６およびＸＥＮＰ２４３４８の配列を示す。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および１０に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。
【図２６】「二価ｎｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ」フォーマットの例示的なＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２１９７８の配列を示す。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および１０に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。
【図２７】「二価ｓｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ」フォーマットの例示的なＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の配列を示す。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および１０に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。
【図２８】「Ｆｃ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットの例示的なＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２２６３７の配列を示す。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および１０に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。
【図２９】「Ｆｃ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットの例示的なＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の配列を示す。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および１０に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。
【図３０Ａ−Ｃ】ＦＡＣＳにより測定したＫｉ６７発現に基づく異なるリンカー長を有するフォーマットＡの例示的なＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質による、（図３０Ａ）ＮＫ（ＣＤ５６＋／ＣＤ１６＋）細胞、（図３０Ｂ）ＣＤ４＋Ｔ細胞、および（図３０Ｃ）ＣＤ８＋細胞の増殖の誘導を示す。
【図３１Ａ−Ｃ】ＦＡＣＳにより測定したＫｉ６７発現に基づくｓｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃフォーマット（ＸＥＮＰ２１４７８）およびｎｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃフォーマット（ＸＥＮＰ２１４７９）の例示的なＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質による、（図３１Ａ）ＮＫ（ＣＤ５６＋／ＣＤ１６＋）細胞、（図３１Ｂ）ＣＤ４＋Ｔ細胞、および（図３１Ｃ）ＣＤ８＋細胞の増殖の誘導を示す。
【図３２】操作されたジスルフィド結合対の位置を示すＩＬ−１５／Ｒαヘテロダイマーの構造モデルを示す。
【図３３】システイン残基を操作するための足場として機能するＣ末端のさらなる残基によって操作された例示的なＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）バリアントの配列を示す。
【図３４】システインによって操作されたＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）バリアントと共有ジスルフィド結合を形成するために、システインによって操作された例示的なＩＬ−１５バリアントの配列を示す。
【図３５】システインによって操作されたＩＬ−１５バリアントと共有ジスルフィド結合を形成するために、システインによって操作された例示的なＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）バリアントの配列を示す。
【図３６Ａ−Ｄ】操作されたジスルフィド結合を有する本発明のＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のさらなるフォーマットを示す。ジスルフィド結合したＩＬ−１５ヘテロダイマーＦｃ融合体または「ｄｓＩＬ−１５／Ｒα−ヘテロＦｃ」）（図３６Ａ）は「ＩＬ−１５／Ｒα−ヘテロＦｃ」と同一であるが、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）およびＩＬ−１５は操作されたシステインの結果としてさらに共有結合している。ジスルフィド結合したＩＬ−１５／ＲαＦｃ融合体または「ｄｓＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ」（図３６Ｂ）は「ｎｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ」と同一であるが、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）およびＩＬ−１５は操作されたシステインの結果としてさらに共有結合している。二価ジスルフィド結合したＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃまたは「二価ｄｓＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ」（図３６Ｃ）は、「二価ｎｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ」と同一であるが、操作されたシステインの結果としてＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）およびＩＬ−１５はさらに共有結合している。Ｆｃ−ジスルフィド結合したＩＬ−１５／Ｒα融合体または「Ｆｃ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」（図３６Ｄ）は「Ｆｃ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」と同一であるが、操作されたシステインの結果としてＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）およびＩＬ−１５がさらに共有結合している。
【図３７Ａ−Ｂ】「ｄｓＩＬ−１５／Ｒα−ヘテロＦｃ」フォーマットの例示的なＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２２０１３、ＸＥＮＰ２２０１４、ＸＥＮＰ２２０１５、およびＸＥＮＰ２２０１７の配列を示す。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。
【図３８Ａ−Ｂ】「ｄｓＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ」フォーマットの例示的なＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２２３５７、ＸＥＮＰ２２３５８、ＸＥＮＰ２２３５９、ＸＥＮＰ２２６８４、およびＸＥＮＰ２２３６１の配列を示す。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および１０に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。
【図３９】「二価ｄｓＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ」フォーマットの例示的なＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２２６３４、ＸＥＮＰ２２６３５、およびＸＥＮＰ２２６３６の配列を示す。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および図１０に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。
【図４０】「Ｆｃ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットの例示的なＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２２６３９およびＸＥＮＰ２２６４０の配列を示す。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および１０に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。
【図４１】ＣＥＦによって決定される操作されたジスルフィド結合がある場合とない場合の例示的なＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の純度および均質性を示す。
【図４２】操作されたジスルフィド結合を有するかまたは有さない例示的なＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質によるＡ）ＮＫ（ＣＤ５６＋／ＣＤ１６＋）細胞、Ｂ）ＣＤ８＋Ｔ細胞、およびＣ）ＣＤ４＋Ｔ細胞の、ＦＡＣＳにより測定されるＫｉ６７発現に基づく増殖の誘導を示す。
【図４３】ＩＬ−１５Ｒα、ＩＬ−２Ｒβ、および共通のγ鎖と複合体を形成したＩＬ−１５の構造を示す。効力を低減するために設計された置換の位置が示されている。
【図４４】効力を低減するために操作された例示的なＩＬ−１５バリアントの配列を示す。列挙された配列と（本明細書で定義されるように）９０、９５、９８および９９％同一であり、かつ／または１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の追加のアミノ酸置換を含む配列がこれらのバリアントＩＬ−１５配列のそれぞれに含まれる。非限定的な例において、列挙された配列は、実施例３Ｂに記載されるように共有ジスルフィド結合の形成に寄与するものなどの追加のアミノ酸修飾を含み得る。
【図４５Ａ−Ｄ】効力を低減するために操作された「ＩＬ−１５／Ｒα−ヘテロＦｃ」フォーマットの例示的なＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２２８２１、ＸＥＮＰ２２８２２、ＸＥＮＰ２３５５４、ＸＥＮＰ２３５５７、ＸＥＮＰ２３５６１、ＸＥＮＰ２４０１８、ＸＥＮＰ２４０１９、ＸＥＮＰ２４０４５、ＸＥＮＰ２４０５１、およびＸＥＮＰ２４０５２の配列を示す。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および１０に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。
【図４６Ａ−Ｃ】効力を低減するために操作された「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ」フォーマットの例示的なＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２４０１５、ＸＥＮＰ２４０５０、ＸＥＮＰ２４４７５、ＸＥＮＰ２４４７６、ＸＥＮＰ２４４７８、ＸＥＮＰ２４４７９、およびＸＥＮＰ２４４８１の配列を示す。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および１０に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。
【図４７Ａ−Ｂ】効力低下のために操作された「ｎｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ」フォーマットの例示的なＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２４３４９、ＸＥＮＰ２４８９０、およびＸＥＮＰ２５１３８の配列を示す。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および図１０に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。
【図４８】効力を低減するために操作された例示的なｎｃＩＬ−１５／Ｒαヘテロダイマーである、ＸＥＮＰ２２８０１およびＸＥＮＰ２２８０２の配列を示す。これらの配列は、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）のＣ末端におけるポリヒスチジン（Ｈｉｓ×６またはＨＨＨＨＨＨ）Ｃ末端タグを使用して生成されたことに注目することが重要である。
【図４９】効力低下のために操作された「二価ｎｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ」フォーマットの例示的なＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２４３４２の配列を示す。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および図１０に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。
【図５０】効力低下のために操作された「ｄｓＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ」フォーマットの例示的なＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２３４７２およびＸＥＮＰ２３４７３の配列を示す。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および１０に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。
【図５１】バリアントＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質によるＡ）ＮＫ細胞、Ｂ）ＣＤ８＋（ＣＤ４５ＲＡ−）Ｔ細胞、およびＣ）ＣＤ４＋（ＣＤ４５ＲＡ−）Ｔ細胞の、ＦＡＣＳにより測定されるＫｉ６７発現に基づく増殖の誘導を示す。
【図５２】バリアントＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質によるＮＫ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を誘導するＥＣ５０、およびＸＥＮＰ２０８１８に対するＥＣ５０の倍率低下を示す。
【図５３Ａ−Ｃ】図５６に示されている実験のためのリンパ球および亜集団のゲーティングを示す。図５３Ａは、ゲートされたリンパ球集団を示す。図５３ＢはＣＤ３陰性およびＣＤ３陽性亜集団を示す。図５３Ｃは、ＣＤ３陰性細胞のＣＤ１６陰性およびＣＤ１６陽性の亜集団を示す。
【図５４Ａ−Ｃ】図５６に示されている実験のためのＣＤ３＋リンパ球亜集団のゲーティングを示す。図５４Ａは、ＣＤ３＋Ｔ細胞のＣＤ４＋、ＣＤ８＋、およびγδＴ細胞の亜集団を示す。図５４Ｂは、ＣＤ４＋Ｔ細胞のＣＤ４５ＲＡ（−）およびＣＤ４５ＲＡ（＋）の亜集団を示す。図５４Ｃは、ＣＤ８＋Ｔ細胞のＣＤ４５ＲＡ（−）およびＣＤ４５ＲＡ（＋）の亜集団を示す。
【図５５Ａ−Ｂ】ヒトＰＢＭＣとＸＥＮＰ２２８２１とのインキュベーション前（図５５Ａ）および後（図５５Ｂ）のＣＤ６９およびＣＤ２５の発現を示す。
【図５６Ａ−Ｄ】指定のバリアントＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質とともに４日間インキュベートしたヒトＰＢＭＣにおける細胞増殖を示す。図５６Ａ〜５６Ｃは、増殖しているＮＫ細胞（ＣＤ３−ＣＤ１６＋）（図５６Ａ）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＤ３＋ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＡ−）（図５６Ｂ）、およびＣＤ４＋Ｔ細胞（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ−）の割合を示す（図５６Ｃ）。図５６Ｄは、対照（ＸＥＮＰ２０８１８）に対する様々なＩＬ１５／ＩＬ１５ＲαＦｃヘテロダイマーのＥＣ５０の倍率変化を示す。
【図５７Ａ−Ｄ】指定のバリアントＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質とともに３日間インキュベートしたヒトＰＢＭＣにおける細胞増殖を示す。図５７Ａ〜Ｃは、増殖中のＣＤ８＋（ＣＤ４５ＲＡ−）Ｔ細胞（図５７Ａ）、ＣＤ４＋（ＣＤ４５ＲＡ−）Ｔ細胞（図５７Ｂ）、γδＴ細胞（図５７Ｃ）、およびＮＫ細胞（図５７Ｄ）の割合を示す。
【図５８Ａ−Ｃ】追加のＩＬ−１５／Ｒαバリアントでの処理後の（図５８Ａ）ＣＤ８＋Ｔ細胞、（図５８Ｂ）ＣＤ４＋Ｔ細胞、および（図５８Ｃ）ＮＫ細胞でのＫｉ６７発現の割合を示す。
【図５９Ａ−Ｅ】ＩＬ−１５／Ｒαバリアントでの処理後の（図５９Ａ）ＣＤ８＋（ＣＤ４５ＲＡ−）Ｔ細胞、（図５９Ｂ）ＣＤ４＋（ＣＤ４５ＲＡ−）Ｔ細胞、（図５９Ｃ）γδＴ細胞、（図５９Ｄ）ＮＫ（ＣＤ１６＋ＣＤ８α−）細胞、および（図５９Ｅ）ＮＫ（ＣＤ５６＋ＣＤ８α−）細胞上のＫｉ６７発現の割合を示す。
【図６０Ａ−Ｅ】ＩＬ−１５／Ｒαバリアントでの処理後の（図６０Ａ）ＣＤ８＋（ＣＤ４５ＲＡ−）Ｔ細胞、（図６０Ｂ）ＣＤ４＋（ＣＤ４５ＲＡ−）Ｔ細胞、（図６０Ｃ）γδＴ細胞、（図６０Ｄ）ＮＫ（ＣＤ１６＋ＣＤ８α−）細胞、および（図６０Ｅ）ＮＫ（ＣＤ５６＋ＣＤ８α−）細胞上のＫｉ６７発現の割合を示す。
【図６１Ａ−Ｄ】追加のＩＬ−１５／Ｒαバリアントでの処理後の（図６１Ａ）ＣＤ８＋Ｔ細胞、（図６１Ｂ）ＣＤ４＋Ｔ細胞、（図６１Ｃ）γδＴ細胞、および（図６１Ｄ）ＮＫ（ＣＤ１６＋）細胞上のＫｉ６７発現の割合を示す。
【図６２Ａ−Ｄ】追加のＩＬ−１５／Ｒαバリアントでの処理後の（図６２Ａ）ＣＤ８＋Ｔ細胞、（図６２Ｂ）ＣＤ４＋Ｔ細胞、（図６２Ｃ）γδＴ細胞、および（図６２Ｄ）ＮＫ（ＣＤ１６＋）細胞上のＫｉ６７発現の割合を示す。
【図６３】Ｃ５７ＢＬ／６マウスでの０．１ｍｇ／ｋｇの単回投与での様々なＩＬ−１５／ＲαＦｃ融合タンパク質または対照のＩＶ−ＴＶ投与時のＰＫを示す。
【図６４】効力低下のために操作されたＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質による処理後の半減期とＮＫ細胞の効力の相関を示す。
【図６５Ａ−Ｋ】本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のいくつかのフォーマットを示す。「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖ」フォーマット（図６５Ａ）は、可変長リンカーによってＩＬ−１５に融合したＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）を含み（「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」と呼ばれる）、これは次いでヘテロダイマーＦｃ領域のＮ末端に融合し、ｓｃＦｖはヘテロダイマーＦｃの他方側に融合している。「ｓｃＦｖ×ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマット（図６５Ｂ）は、ヘテロダイマーＦｃ領域のＮ末端に融合したｓｃＦｖを含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）はヘテロダイマーＦｃの他方側に融合するが、ＩＬ−１５は非共有結合のＩＬ−１５／Ｒα複合体が形成されるように別々にトランスフェクトされる。「ｓｃＦｖ×ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマット（図６５Ｃ）は、「ｓｃＦｖ×ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットと同一であるが、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）およびＩＬ−１５は操作されたシステインの結果として共有結合している。「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂ」フォーマット（図６５Ｄ）は、可変長リンカーによってＩＬ−１５に融合したＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）を含み（「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」と呼ばれる）、これは次いでヘテロダイマーＦｃ領域のＮ末端に融合し、可変重鎖（ＶＨ）はヘテロダイマーＦｃの他方側に融合するが、対応する軽鎖はＶＨを含むＦａｂを形成するように別々にトランスフェクトされる。「ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂ」フォーマット（図６５Ｅ）は、ヘテロダイマーＦｃ領域のＮ末端に融合したＶＨを含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）はヘテロダイマーＦｃの他方側に融合するが、対応する軽鎖はＶＨを含むＦａｂを形成するように別々にトランスフェクトされ、一方、ＩＬ−１５は非共有結合のＩＬ−１５／Ｒα複合体が形成されるように別々にトランスフェクトされる。「ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂ」フォーマット（図６５Ｆ）は、「ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂ」フォーマットと同一であるが、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）およびＩＬ−１５は操作されたシステインの結果として共有結合している。「ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマット（図６５Ｇ）は、第１のおよび第２のヘテロダイマーＦｃのＮ末端に融合したＶＨを含み、ＩＬ−１５はＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）に融合し、これは次いでさらにヘテロダイマーＦｃ領域の一方のＣ末端に融合するが、対応する軽鎖はＶＨを含むＦａｂを形成するように別々にトランスフェクトされる。「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマット（図６５Ｈ）は、第１のおよび第２のヘテロダイマーＦｃのＮ末端に融合したＶＨを含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）はヘテロダイマーＦｃ領域の一方のＣ末端に融合するが、対応する軽鎖はＶＨを含むＦａｂを形成するように別々にトランスフェクトされ、ＩＬ−１５は非共有結合のＩＬ−１５／Ｒα複合体が形成されるように別々にトランスフェクトされる。「ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマット（図６５Ｉ）は、「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットと同一であるが、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）およびＩＬ−１５は操作されたシステインの結果として共有結合している。「セントラル−ＩＬ��１５／Ｒα」フォーマット（図６５Ｊ）は、ＩＬ−１５（ヘテロダイマーＦｃの一方側にさらに融合する）のＮ末端に組み換えで融合したＶＨと、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）（ヘテロダイマーＦｃの他方側にさらに融合する）のＮ末端に組み換えで融合したＶＨとを含むが、対応する軽鎖はＶＨを含むＦａｂを形成するように別々にトランスフェクトされる。「セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマット（図６５Ｋ）は、ＩＬ−１５（ヘテロダイマーＦｃの一方側にさらに融合される）に融合したＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）のＮ末端に融合したＶＨと、ヘテロダイマーＦｃの他方側に融合したＶＨとを含むが、対応する軽鎖はＶＨを含むＦａｂを形成するように別々にトランスフェクトされる。
【図６６】「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖ」フォーマットの例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２１４８０の配列を示す。ＣＤＲは太字で示されている。本明細書中に記され、また本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表１に示されるように用いられる付番によってわずかに異なり得、したがって、太字のＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶＨおよびＶＬドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および１０に示す他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、可変領域、および定常／Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。
【図６７】「ｓｃＦｖ×ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットの例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の配列を示す。ＣＤＲは太字で示されている。本明細書中に記され、また本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表１に示されるように用いられる付番によってわずかに異なり得、したがって、太字のＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶＨおよびＶＬドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および１０に示す他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、可変領域、および定常／Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。
【図６８】は、「ｓｃＦｖ×ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットの例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の配列を示す。ＣＤＲは太字で示されている。本明細書中に記され、また本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表１に示されるように用いられる付番によってわずかに異なり得、したがって、太字のＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶＨおよびＶＬドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および１０に示す他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、可変領域、および定常Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。
【図６９Ａ−Ｃ】「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂ」フォーマットの例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の配列を示す。ＣＤＲは太字で示されている。本明細書中に記され、また本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表１に示されるように用いられる付番によってわずかに異なり得、したがって、太字のＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶＨおよびＶＬドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および１０に示す他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、可変領域、および定常Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。
【図７０】「Ｆａｂ×ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットの例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２２１１２の配列を示す。ＣＤＲは太字で示されている。本明細書中に記され、また本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表１に示されるように用いられる付番によってわずかに異なり得、したがって、太字のＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶＨおよびＶＬドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および１０に示す他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、可変領域、および定常Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。
【図７１】「Ｆａｂ×ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットの例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２２６４１の配列を示す。ＣＤＲは太字で示されている。本明細書中に記され、また本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表１に示されるように用いられる付番によってわずかに異なり得、したがって、太字のＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶＨおよびＶＬドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および１０に示す他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、可変領域、および定常／Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。
【図７２Ａ−Ｂ】「ｍＡｂ×ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットの例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の配列を示す。ＣＤＲは太字で示されている。本明細書中に記され、また本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表１に示されるように用いられる付番によってわずかに異なり得、したがって、太字のＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶＨおよびＶＬドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および１０に示す他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、可変領域、および定常／Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。
【図７３Ａ−Ｂ】「ｍＡｂ×ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットの例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２２６４２およびＸＥＮＰ２２６４３の配列を示す。ＣＤＲは太字で示されている。本明細書中に記され、また本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表１に示されるように用いられる付番によってわずかに異なり得、したがって、太字のＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶＨおよびＶＬドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および１０に示す他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、可変領域、および定常／Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。
【図７４】「ｍＡｂ×ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットの例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２２６４４およびＸＥＮＰ２２６４５の配列を示す。ＣＤＲは太字で示されている。本明細書中に記され、また本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表１に示されるように用いられる付番によってわずかに異なり得、したがって、太字のＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶＨおよびＶＬドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および１０に示す他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、可変領域、および定常／Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。
【図７５】は、「セントラルＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットの例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の配列を示す。ＣＤＲは太字で示されている。本明細書中に記され、また本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表１に示されるように用いられる付番によってわずかに異なり得、したがって、太字のＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶＨおよびＶＬドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および１０に示す他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、可変領域、および定常／Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。
【図７６】「セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットの例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の配列を示す。ＣＤＲは太字で示されている。本明細書中に記され、また本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表１に示されるように用いられる付番によってわずかに異なり得、したがって、太字のＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶＨおよびＶＬドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および１０に示す他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、可変領域、および定常／Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。
【図７７Ａ−Ｆ】例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質ＸＥＮＰ２１４８０のデータを提示する。図７７Ａは、例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質ＸＥＮＰ２１４８０のフォーマットを示す。図７７Ｂは、ＳＥＣによって決定されたＸＥＮＰ２１４８０の純度と均一性を示す。図７７Ｃは、ＣＥＦによって決定されたＸＥＮＰ２１４８０の純度と均一性を示す。図７７Ｄは、Ｏｃｔｅｔによって決定されたＩＬ−２Ｒβに対するＸＥＮＰ２１４８０の親和性を示す。図７７Ｅは、Ｏｃｔｅｔによって決定されたＰＤ−１に対するＸＥＮＰ２１４８０の親和性を示す。図７７Ｆは、ＤＳＦによって決定されたＸＥＮＰ２１４８０の安定性を示す。
【図７８Ａ−Ｂ】ＸＥＮＰ２５８５０の２つのバッチのＩＬ−２Ｒβ：共通ガンマ鎖複合体（図７８Ａ）およびＰＤ−１（図７８Ｂ）への結合を確認するためのＯｃｔｅｔ実験からのセンサグラムを示す。
【図７９Ａ−Ｃ】例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質および対照によるＮＫ（ＣＤ５６＋／ＣＤ１６＋）細胞（図７９Ａ）、ＣＤ４＋Ｔ細胞（図７９Ｂ）、およびＣＤ８＋Ｔ細胞（図７９Ｃ）の増殖の誘導を示す。
【図８０】ＳＥＢ刺激ＰＢＭＣアッセイにおける例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質およびＰＢＳに対する対照によるＩＬ−２分泌の増強を示す。
【図８１】例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質ＸＥＮＰ２５８５０および対照による処理後のｈｕＰＢＭＣ移植マウスの血清中の４、７および１１日目のＩＦＮγレベルを示す。
【図８２Ａ−Ｃ】例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質ＸＥＮＰ２５８５０および対照による治療後のｈｕＰＢＭＣ移植マウスの全血における４日目（図８２Ａ）、７日目（図８２Ｂ）、および１１日目（図８２Ｃ）のＣＤ８＋Ｔ細胞数を示す。
【図８３Ａ−Ｃ】例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質ＸＥＮＰ２５８５０および対照による治療後のｈｕＰＢＭＣ移植マウスの全血における４日目（図８３Ａ）、７日目（図８３Ｂ）、および１１日目（図８３Ｃ）のＣＤ４＋Ｔ細胞数を示す。
【図８４Ａ−Ｃ】例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質ＸＥＮＰ２５８５０および対照による治療後のｈｕＰＢＭＣ移植マウスの全血における４日目（図８４Ａ）、７日目（図８４Ａ）、および１１日目（図８４Ａ）のＣＤ４５＋細胞数を示す。
【図８５Ａ−Ｃ】例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質および対照による治療後４日目（図８５Ａ）、７日目（図８５Ｂ）、および１１日目（図８５Ｃ）のｈｕＰＢＭＣ移植マウスの初期体重のパーセンテージとして体重を示す。各点は単一のＮＳＧマウスを表す。体重が初期体重の７０％を下回ったマウスを安楽死させた。死亡したマウスは７０％として表される。
【図８６】除去バリアント（Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、「ＩｇＧ１＿ＰＶＡ＿／Ｓ２６７ｋ」）を有する二価の抗ＰＤ−１  ｍＡｂであるＸＥＮＰ１６４３２の配列を示す。ＣＤＲには下線が付されている。本明細書中に記されそして本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表１に示されるように用いられる付番によってわずかに異なり得、したがって、下線が付されたＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶＨおよびＶＬドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。
【図８７】重鎖にＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ置換を有する、ヒトＩｇＧ１フォーマットの抗ＰＤ−１クローン１Ｃ１１ワンアーム抗体（ＸＥＮＰ２５９５１）の例示的ヒト化バリアントの配列を示す。ＣＤＲは太字であり、スラッシュは可変ドメインの境界を示す。本明細書中に記されそして本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表１に示されるように用いられる付番によってわずかに異なり得、したがって、下線が付されたＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶＨおよびＶＬドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。当業者には理解されるように、ＶＨおよびＶＬドメインは、本発明のＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ヘテロダイマータンパク質において使用するために、ＦａｂまたはｓｃＦｖとしてフォーマットすることができる。
【図８８Ａ−Ｃ】示された試験品での処置後４日目（図８８Ａ）、７日目（図８８Ｂ）、および１１日目（図８８Ｃ）のＮＳＧマウスにおけるＣＤ４５＋細胞数を示す。
【図８９Ａ−Ｃ】示された試験品での処置後４日目（図８９Ａ）、７日目（図８９Ｂ）、および１１日目（図８９Ｃ）のＮＳＧマウスにおけるＣＤ３＋細胞数を示す。
【図９０Ａ−Ｃ】ＸＥＮＰ２４０５０（０．６１ｍｇ／ｋｇ）、ＸＥＮＰ２５９５１（０．８２ｍｇ／ｋｇ）、ＸＥＮＰ２５９５１（０．８２ｍｇ／ｋｇ）＋ＸＥＮＰ２４０５０（０．６１ｍｇ／ｋｇ）、またはＸＥＮＰ２５８５０（１．０ｍｇ／ｋｇ）による処理後の４日目（図９０Ａ）、７日目（図９０Ｂ）、および１１日目（図９０Ｃ）のＮＳＧマウスのＣＤ４＋細胞数を示す。
【図９１Ａ−Ｃ】示された試験品での処置後４日目（図９１Ａ）、７日目（図９１Ｂ）、および１１日目（図９１Ｃ）のＮＳＧマウスにおけるＣＤ８＋細胞数を示す。
【図９２Ａ−Ｈ】ＸＥＮＰ２０８１８（ＷＴ  ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ）、ＸＥＮＰ２４０５０（例示的な低下した効力のＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ）、およびＸＥＮＰ２５８５０（例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合）による、ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ２５−（図９２Ａ）、ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ２５＋（図９２Ｂ）、ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ−ＣＤ２５＋（図９２Ｃ）、ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ−ＣＤ２５−（図９２Ｄ）、ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ２５−（図９２Ｅ）、ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ２５＋（図９２Ｆ）、ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＡ−ＣＤ２５＋（図９２Ｇ）、およびＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＡ−ＣＤ２５−（図９２Ｈ）におけるＳＴＡＴ５リン酸化の誘導を示す。新鮮な細胞は点線で示され、活性化された細胞は実線で示される。新鮮な細胞は全てＣＤ２５−である。
【図９３Ａ−Ｔ】抗ＰＤ−１クローン１Ｃ１１の例示的なｓｃＦｖバリアントの配列を示す。ｓｃＦｖバリアント名は太字であり、ＣＤＲは下線が付され、ｓｃＦｖリンカーは二重下線が付され（配列中、ｓｃＦｖリンカーは正に荷電したｓｃＦｖ（ＧＫＰＧＳ）４リンカーであるが、当業者には理解されるように、このリンカーは、図９および図１０におけるもののようではあるがこれらに限定されない、無荷電または負に荷電したリンカーを含む他のリンカーによって置き換えることができる）、スラッシュは可変ドメインの境界を示す。本明細書中に記されそして本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表１に示されるように用いられる付番によってわずかに異なり得、したがって、下線が付されたＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶＨおよびＶＬドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。さらに、命名規則は、Ｎ末端からＣ末端に向かってｓｃＦｖの方向を示しており、この図の一部の配列はＶＨ−ｓｃＦｖリンカー−ＶＬ（ＮからＣ末端に向かって）として配向されているが、一部はＶＬ−ｓｃＦｖリンカー−ＶＨ（ＮからＣ末端に向かって）として配向されている。当業者には理解されるように、これらの配列は、ここでのそれらの描写から反対方向で使用することもできる。さらに、当業者には理解されるように、ＶＨおよびＶＬドメインは、ＦａｂまたはｓｃＦｖとしてフォーマットすることができる。さらに、各ＣＤＲには配列表に独自の配列番号または配列の識別子を有し、各々のＶＨおよびＶＬドメインには配列表に独自の配列番号または配列識別子を有する。
【図９４Ａ−ＡＰ】クローン１Ｃ１１に基づく例示的なバリアント抗ＰＤ−１  ｍＡｂの配列を示す。バリアント抗ＰＤ−１  ｍＡｂ名は太字であり、ＣＤＲは下線が付され、スラッシュは可変ドメインの境界を示す。本明細書中に記されそして本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表１に示されるように用いられる付番によってわずかに異なり得、したがって、下線が付されたＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶＨおよびＶＬドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。当業者には理解されるように、ＶＨおよびＶＬドメインは、ＦａｂまたはｓｃＦｖとしてフォーマットすることができる。さらに、各ＣＤＲには配列表に独自の配列番号または配列の識別子を有し、各々のＶＨおよびＶＬドメインには配列表に独自の配列番号または配列識別子を有する。
【図９５Ａ−Ｊ】ＸＥＮＰ２２５５３の重鎖に基づくバリアント重鎖の配列を示す。可変重鎖名は太字であり、ＣＤＲには下線が付される。本明細書中に記されそして本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表１に示されるように用いられる付番によってわずかに異なり得、したがって、下線が付されたＣＤＲのみならず、ＶＨドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。当業者には理解されるように、ＶＨドメインはＦａｂまたはｓｃＦｖにて使用することができる。さらに、各ＣＤＲには配列表に独自の配列番号または配列の識別子を有し、各ＶＨドメインには配列表に独自の配列番号または配列識別子を有する。
【図９６Ａ−Ｆ】ＸＥＮＰ２２５５３の軽鎖に基づくバリアント軽鎖の配列を示す。可変軽鎖名は太字であり、ＣＤＲには下線が付される。本明細書中に記されそして本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表１に示されるように用いられる付番によってわずかに異なり得、したがって、下線が付されたＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶＬドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。当業者には理解されるように、ＶＬドメインはＦａｂまたはｓｃＦｖにて使用することができる。さらに、各ＣＤＲには配列表に独自の配列番号または配列の識別子を有し、各ＶＬドメインには配列表に独自の配列番号または配列識別子を有する。
【図９７Ａ−Ｐ】ＤＳＦによって決定されたバリアント抗ＰＤ−１  ｓｃＦｖの安定性、ならびにＯｃｔｅｔによって決定されたバリアントｓｃＦｖからのＶＨ／ＶＬに基づく、抗ＰＤ−１  ｍＡｂの平衡解離定数（ＫＤ）、会合速度（ｋａ）、解離速度（ｋｄ）を示す。ｓｃＦｖのＸＥＮＰは太字で、完全長ｍＡｂのＸＥＮＰは括弧内に示す。
【図９８】Ｏｃｔｅｔによって決定されたバリアント抗ＰＤ−１  ｍＡｂの平衡解離定数（ＫＤ）、会合速度（ｋａ）、および解離速度（ｋｄ）を示す。
【図９９】Ｏｃｔｅｔによって決定されたバリアント抗ＰＤ−１  ｍＡｂの平衡解離定数（ＫＤ）、会合速度（ｋａ）、および解離速度（ｋｄ）を示す。
【図１００】Ｏｃｔｅｔによって決定されたヒトＰＤ−１に対する抗ＰＤ−１  １Ｃ１１バリアントの親和性／解離定数（ＫＤ）、会合速度（ｋａ）、および解離速度（ｋｄ）を示す。
【図１０１】Ｏｃｔｅｔによって決定されたヒトＰＤ−１に対する抗ＰＤ−１  １Ｃ１１バリアントの親和性／解離定数（ＫＤ）、会合速度（ｋａ）、および解離速度（ｋｄ）を示す。
【図１０２】Ｏｃｔｅｔによって決定されたヒトＰＤ−１に対する抗ＰＤ−１  １Ｃ１１バリアントの親和性／解離定数（ＫＤ）、会合速度（ｋａ）、および解離速度（ｋｄ）を示す。
【図１０３】Ｏｃｔｅｔによって決定されたヒトＰＤ−１に対する抗ＰＤ−１  １Ｃ１１バリアントの親和性／解離定数（ＫＤ）、会合速度（ｋａ）、および解離速度（ｋｄ）を示す。
【図１０４】Ｏｃｔｅｔによって決定されたヒトＰＤ−１およびカニクイザルＰＤ−１に対する抗ＰＤ−１  １Ｃ１１バリアントの親和性／解離定数（ＫＤ）、会合速度（ｋａ）、および解離速度（ｋｄ）を示す。
【図１０５Ａ−Ｅ】Ｏｃｔｅｔによって決定されたバリアント抗ＰＤ−１  ｍＡｂの平衡解離定数（ＫＤ）、会合速度（ｋａ）、および解離速度（ｋｄ）を示す。図９５Ａ〜図９５Ｊおよび図９６Ａ〜図９６Ｆに示すように、バリアントは重鎖および軽鎖ＸｅｎＤによって定義される。
【図１０６】Ｏｃｔｅｔによって決定されたバリアント抗ＰＤ−１  ｍＡｂの平衡解離定数（ＫＤ）、会合速度（ｋａ）、および解離速度（ｋｄ）を示す。図９５Ａ〜図９５Ｊおよび図９６Ａ〜図９６Ｆに示すように、バリアントは重鎖および軽鎖ＸｅｎＤによって定義される。
【図１０７】Ｂｉａｃｏｒｅによって決定された抗ＰＤ−１  １Ｃ１１バリアントの親和性（ＫＤ）を示す。
【図１０８】親和性が最適化された抗ＰＤ−１  １Ｃ１１バリアントのＳＥＢ刺激Ｔ細胞への結合を示す。
【図１０９Ａ−Ｄ】親和性が最適化されたＰＤ−１標的化アームを含む例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合の配列を示す。ＣＤＲは太字で示されている。本明細書中に記され、また本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表１に示されるように用いられる付番によってわずかに異なり得、したがって、太字のＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶＨおよびＶＬドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および１０に示す他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、可変領域、および定常／Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。
【図１１０Ａ−Ｂ】増殖細胞のパーセンテージ（ＣＦＳＥ希釈に基づいて決定される）によって示される、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体（および対照）によるＡ）ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＢ）ＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖の誘導を示す。データは、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体が、非標的化ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）／Ｒα−Ｆｃ融合体（ならびに対照のＲＳＶ標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体）と比較して、ＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖を誘導するのにより強力であることを示す。特に、より親和性の高いＰＤ−１結合ドメインを有するＸＥＮＰ２９１５９は、ＣＤ８＋およびＣＤ４＋Ｔ細胞の両方の増殖においてＸＥＮＰ２５８５０（ならびにＸＥＮＰ２４３０６およびＸＥＮＰ２６００７）よりも強力であった。
【図１１１Ａ−Ｂ】増殖細胞のパーセンテージ（ＣＦＳＥ希釈に基づいて決定される）によって示される、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体（および対照）によるＡ）ＣＤ８メモリーＴ細胞およびＢ）ＣＤ８ナイーブＴ細胞の増殖の誘導を示す。データは、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体が、非標的化ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）／Ｒα−Ｆｃ融合体（ならびに対照のＲＳＶ標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体）と比較して、ＣＤ８メモリーＴ細胞の増殖を誘導するのにより強力であることを示す。特に、より親和性の高いＰＤ−１結合ドメインを有するＸＥＮＰ２９１５９は、ＣＤ８メモリーＴ細胞の増殖においてＸＥＮＰ２５８５０よりも強力であった。
【図１１２Ａ−Ｂ】細胞数によって示される、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体（および対照）によるＡ）ＣＤ８メモリーＴ細胞およびＢ）ＣＤ８ナイーブＴ細胞の増殖の誘導を示す。
【図１１３Ａ−Ｂ】増殖細胞のパーセンテージ（ＣＦＳＥ希釈に基づいて決定される）によって示される、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体（および対照）によるＡ）ＣＤ４メモリーＴ細胞およびＢ）ＣＤ４ナイーブＴ細胞の増殖の誘導を示す。データは、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体が、非標的化ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）／Ｒα−Ｆｃ融合体（ならびに対照のＲＳＶ標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体）と比較して、ＣＤ４メモリーＴ細胞の増殖を誘導するのにより強力であることを示す。特に、より親和性の高いＰＤ−１結合ドメインを有するＸＥＮＰ２９１５９は、ＣＤ４メモリーＴ細胞の増殖においてＸＥＮＰ２５８５０よりも強力であった。
【図１１４Ａ−Ｂ】細胞数によって示される、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体（および対照）によるＡ）ＣＤ４メモリーＴ細胞およびＢ）ＣＤ４ナイーブＴ細胞の増殖の誘導を示す。データは、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体が、非標的化ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）／Ｒα−Ｆｃ融合体（ならびに対照のＲＳＶ標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体）と比較して、ＣＤ４メモリーＴ細胞の増殖においてより強力であることを示す。特に、より親和性の高いＰＤ−１結合ドメインを有するＸＥＮＰ２９１５９は、ＣＤ４メモリーＴ細胞の増殖においてＸＥＮＰ２５８５０よりも強力であった。
【図１１５Ａ−Ｂ】Ａ）増殖細胞のパーセンテージ（ＣＦＳＥ希釈に基づいて決定される）によって、およびＢ）細胞数によって示される、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体（および対照）によるＮＫ細胞の増殖の誘導を示す。
【図１１６Ａ−Ｄ】ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体（および対照）とのインキュベーション後の、Ａ）ＣＤ２５を発現するＣＤ８メモリーＴ細胞の割合、Ｂ）ＣＤ２５を発現するＣＤ８ナイーブＴ細胞の割合、Ｃ）ＣＤ２５を発現するＣＤ４メモリーＴ細胞の割合、およびＤ）ＣＤ２５を発現するＣＤ４ナイーブＴ細胞の割合によって示されるときの、Ｔ細胞の活性化を示す。データは、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体が、非標的化ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）／Ｒα−Ｆｃ融合体（および対照のＲＳＶ標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合）と比較して、ＣＤ８＋およびＣＤ４＋Ｔ細胞上のＣＤ２５をより強力に上方制御するように見えることを示す。
【図１１７Ａ−Ｄ】ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体（および対照）とのインキュベーション後の、Ａ）ＣＤ８メモリーＴ細胞上のＨＬＡ−ＤＲ  ＭＦＩ、Ｂ）ＨＬＡ−ＤＲを発現するＣＤ８メモリーＴ細胞のパーセンテージ、Ｃ）ＣＤ８ナイーブＴ細胞上のＨＬＡ−ＤＲ  ＭＦＩ、およびＤ）ＨＬＡ−ＤＲを発現するＣＤ８ナイーブＴ細胞の割合によって示されるときの、ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化を示す。
【図１１８Ａ−Ｄ】ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体（および対照）とのインキュベーション後の、Ａ）ＣＤ４メモリーＴ細胞上のＨＬＡ−ＤＲ  ＭＦＩ、Ｂ）ＨＬＡ−ＤＲを発現するＣＤ４メモリーＴ細胞のパーセンテージ、Ｃ）ＣＤ４ナイーブＴ細胞上のＨＬＡ−ＤＲＭＦＩ、およびＤ）ＨＬＡ−ＤＲを発現するＣＤ４ナイーブＴ細胞のパーセンテージによって示されるときの、ＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化を示す。
【図１１９】野生型ＩＬ−１５およびＸｔｅｎｄ  Ｆｃ（Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ）バリアントを含むＩＬ−１５／Ｒα−ヘテロＦｃ融合体であるＸＥＮＰ２２８５３の配列を示す。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および図１０に示す他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、および定常／Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。
【図１２０】ＩＬ−１５（Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）バリアントおよびＸｔｅｎｄ  Ｆｃ（Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ）バリアントを含むＩＬ−１５／Ｒα−ヘテロＦｃ融合体であるＸＥＮＰ４１１３の配列を示す。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および図１０に示す他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、および定常／Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。
【図１２１】ＩＬ−１５（Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）バリアントおよびＸｔｅｎｄ  Ｆｃ（Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ）バリアントを含むｓｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体であるＸＥＮＰ２４２９４の配列を示す。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および図１０に示す他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、および定常／Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。
【図１２２】ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）バリアントおよびＸｔｅｎｄ  Ｆｃ（Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ）置換を含むＩＬ−１５／Ｒα−ヘテロＦｃ融合体であるＸＥＮＰ２４３０６の配列を示す。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および図１０に示す他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、および定常／Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。
【図１２３】示された相対濃度での初回投与後のカニクイザルにおける示された試験品の経時的な血清濃度を示す。
【図１２４Ａ−Ｃ】追加のＩＬ−１５効力バリアントを含む例示的なｓｃＩＬ−１５  ／Ｒα−Ｆｃ融合の配列を示す。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および１０に示す他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、可変領域、および定常／Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。さらに、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の各構成要素は、配列表において独自の配列番号を有する。
【図１２５Ａ−Ｇ】Ａ）ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ−、Ｂ）ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ＋、Ｃ）ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＡ−、Ｄ）ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＡ＋、Ｅ）ＣＤ１６＋のＮＫ細胞、Ｆ）ＣＤ５６＋ＮＫ細胞、およびＧ）γδ細胞の、ＰＢＭＣを示された試験品と３日間インキュベートした後のＫｉ６７発現のパーセンテージを示す。
【図１２６Ａ−Ｄ】ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ）バリアントを含む例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合の配列を示す。ＣＤＲは太字で示されている。本明細書中に記され、また本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表１に示されるように用いられる付番によってわずかに異なり得、したがって、太字のＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶＨおよびＶＬドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および１０に示す他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、可変領域、および定常／Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。さらに、各ＣＤＲには配列表に独自の配列番号を有し、各ＶＬドメインには配列表に独自の配列番号を有する。
【図１２７Ａ−Ｄ】ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）バリアントを含む例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合の配列を示す。ＣＤＲは太字で示されている。本明細書中に記され、また本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表１に示されるように用いられる付番によってわずかに異なり得、したがって、太字のＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶＨおよびＶＬドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および１０に示す他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、可変領域、および定常／Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。さらに、各ＣＤＲには配列表に独自の配列番号を有し、各ＶＬドメインには配列表に独自の配列番号を有する。
【図１２８Ａ−Ｌ】血清半減期を増加させるＸｔｅｎｄ（Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ）地下を含む例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合の配列を示す。ＣＤＲは太字で示されている。本明細書中に記され、また本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表１に示されるように用いられる付番によってわずかに異なり得、したがって、太字のＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶＨおよびＶＬドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および１０に示す他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、可変領域、および定常／Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。本明細書に示される配列のいずれも、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ置換を含んでも除外してもよいことに留意されたい。さらに、各ＣＤＲには配列表に独自の配列番号を有し、各ＶＬドメインには配列表に独自の配列番号を有する。
【図１２９Ａ−Ｂ】ＸＥＮＰ２６００７、ＸＥＮＰ２９４８１、およびＸＥＮＰ３０４３２、対照のＲＳＶ標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体の配列を示す。ＣＤＲには下線が付されている。本明細書中に記され、また本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表１に示されるように用いられる付番によってわずかに異なり得、したがって、太字のＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶＨおよびＶＬドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）は斜体で示され、リンカーには二重下線が付され（しかし、当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図９および１０に示す他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒα、リンカー、可変領域、および定常／Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。さらに、各ＣＤＲには配列表に独自の配列番号を有し、各ＶＬドメインには配列表に独自の配列番号を有する。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
Ｉ．資料の組み込み
Ａ．図および説明文
２０１８年４月１８日に出願された米国仮出願第６２／６５９，５７１号、２０１７年１０月１６日に出願された国際出願ＷＯ２０１８／０７１９１８、および２０１７年１０月１６日に出願された米国特許出願第２０１８／０１１８８２８号の全ての図面、付随する説明、および配列（それらの識別子および／または説明とともに）は、全て、参照によりその全体、特にそこに示されるアミノ酸配列が明示的かつ独立して本明細書に組み込まれる。
【００３７】
追加のＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質は、例えば、同時に出願された「ＩＬ−１５／ＩＬ−Ｒａ  Ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｉｃ  Ｆｃ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｎｄ  Ｕｓｅｓ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」という名称の米国仮出願、２０１６年１０月１４日に出願された米国仮出願第６２／４０８，６５５号、２０１６年１１月１日に出願された米国仮出願第６２／４１６，０８７号、２０１７年１月６日に出願された米国仮出願第６２／４４３，４６５、２０１７年３月２８日に出願された米国仮出願第６２／４７７，９２６号、２０１７年１０月１６日に出願された米国特許出願第１５／７８５，４０１号、および２０１７年１０月１６日に出願されたＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０５６８２９に詳述され、参照によりその全体、特にその中の図、説明および特許請求の範囲が明示的に本明細書に組み込まれる。
【００３８】
追加のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、例えば、２０１６年１０月１４日に出願された米国仮出願第６２／４０８，６５５号、２０１６年１１月１日に出願された米国仮出願第６２／４１６，０８７号、２０１７年１月６日に出願された米国仮出願第６２／４４３，４６５、２０１７年３月２８日に出願された米国仮出願第６２／４７７，９２６号、２０１７年１０月１６日に出願された米国特許出願第１５／７８５，３９３号、および２０１７年１０月１６日に出願されたＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０５６８２６に詳述され、参照によりその全体、特にその中の図、説明および特許請求の範囲が明示的に本明細書に組み込まれる。
【００３９】
Ｂ．配列
以下のように添付の配列表を参照する：ＡＢＤとしての使用に適した抗ＰＤ−１配列は、図９３Ａ〜９３ＳのＰＤ−１  ｓｃＦｖ配列の配列番号（その中のＦｖ配列は、ｓｃＦｖとしてフォーマットすることができる）、および図９４Ａ〜９４ＡＰのＰＤ−１  Ｆａｂ配列の配列番号を含む（その中のＦａｂ配列は、ｓｃＦｖとしてフォーマットすることができる）。当業者から理解されるように、これらの配列識別子は、配列識別子から明らかであるように、可変重鎖および軽鎖について「対」になる。
【００４０】
ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質での使用に適したＩＬ−１５配列には、図３Ａのヒト成熟ＩＬ−１５の配列番号、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有する図３Ａのヒト成熟ＩＬ−１５の配列番号、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有する図３Ａのヒト成熟ＩＬ−１５の配列番号、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有する図３Ａのヒト成熟ＩＬ−１５の配列番号が含まれる。いくつかの実施形態では、本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のＩＬ−１５は、Ｎ１Ｄ、Ｎ４Ｄ、Ｄ８Ｎ、Ｄ３０Ｎ、Ｄ６１Ｎ、Ｅ６４Ｑ、Ｎ６５Ｄ、Ｑ１０８Ｅ、および図４４Ａ〜４４Ｃに示されているものと対応する配列識別子からなる群からされる１つ以上のアミノ酸置換を有する図３Ａのヒト成熟ＩＬ−１５の配列番号を含む。ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質での使用に適したＩＬ−１５Ｒα配列には、図３ＡのヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインの配列番号が含まれる。
【００４１】
Ｃ．命名法
本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、いくつかのフォーマットで列挙されている。いくつかの場合、各ポリペプチドには固有の「ＸＥＮＰ」番号（もしくは場合によっては、「ＸＥＮＣＳ」番号）が付与されるが、当技術分野で理解されるように、より長い配列はより短い配列を含み得る。これらのＸＥＮＰ番号は、配列表ならびに識別子にあり、図で使用される。さらに、３つの構成要素を含む１つの分子は、複数の配列識別子を生成する。例えば、Ｆａｂモノマーのリストは全長配列、可変重鎖配列、および可変重鎖配列の３つのＣＤＲを有し、軽鎖は全長配列、可変軽鎖配列、および可変軽鎖配列の３つのＣＤＲを有し、ｓｃＦｖ−Ｆｃドメインは、全長配列、ｓｃＦｖ配列、可変軽鎖配列、３つの軽ＣＤＲ、ｓｃＦｖリンカー、可変重鎖配列、および３つの重ＣＤＲを有する。場合によっては、本明細書でｓｃＦｖドメインを有する分子は、単一の荷電ｓｃＦｖリンカー（＋Ｈ）を使用するが、他のものを使用することができる。さらに、特定の可変ドメインの命名法では、「Ｈｘ．ｘｘ＿Ｌｙ．ｙｙ」タイプのフォーマットが使用され、番号は特定の可変鎖配列の一意の識別子である。したがって、ＸＥＮＰ２５９３７のＦａｂ側の可変ドメインは、「１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３」であり、これは、可変重鎖ドメインＨ３が軽鎖ドメインＬ３と組み合わされたことを示す。ＸＥＮＰ２５８１２などのｓｃＦｖ配列の場合、「１Ｃ１１＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８」という指定は、可変重鎖ドメインＨ３．２４０が軽鎖ドメインＬ３．１４８と組み合わされ、Ｎ末端からＣ末端に向けてｖｈ−リンカー−ｖｌの向きであることを示す。重可変ドメインと軽可変ドメインの同一の配列を持つが逆順のこの分子は、「１Ｃ１１＿Ｌ３．１４８＿  Ｈ３．２４０」と名付けられる。同様に、配列表および図から明らかなように、異なる構築物は重鎖および軽鎖を「混合および適合」し得る。
【００４２】
ＩＩ．定義
本出願をより完全に理解できるようにするため、いくつかの定義を以下に示す。そのような定義は、文法的同等物を包含することを意図する。
【００４３】
本明細書において「除去」とは、活性の低下または排除を意味する。したがって、例えば、「ＦｃγＲ結合を除去する」とは、Ｆｃ領域アミノ酸バリアントが、その特定のバリアントを含まないＦｃ領域と比較して５０％未満の開始結合を有することを意味し、７０−８０−９０−９５−９８％未満の活性喪失が好ましく、一般に、活性はＢｉａｃｏｒｅアッセイにおいて検出可能な活性のレベル未満である。ＦｃγＲ結合の除去において特に有用なものを、図６に示す。しかしながら、他に断らない限り、本発明のＦｃモノマーはＦｃＲｎ受容体への結合を保持している。
【００４４】
本明細書で使用される「ＡＤＣＣ」または「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」とは、ＦｃγＲを発現する非特異的細胞傷害性細胞が標的細胞上の結合抗体を認識し、続いて標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介反応を意味する。ＡＤＣＣは、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合と相関し、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合の増加はＡＤＣＣ活性の増加をもたらす。本明細書で論じるように、本発明の多くの実施形態はＡＤＣＣ活性を完全に除去する。
【００４５】
本明細書で用いられる「ＡＤＣＰ」または抗体依存性細胞媒介食作用とは、ＦｃγＲを発現する非特異的細胞傷害性細胞が標的細胞上の連結抗体を認識し、続いて標的細胞の食作用を引き起こす細胞媒介反応を意味する。
【００４６】
本明細書において「抗原結合ドメイン」または「ＡＢＤ」とは、ポリペプチド配列の一部として存在する場合、本明細書で考察される標的抗原と特異的に結合する６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のセットを意味する。したがって、「チェックポイント抗原結合ドメイン」は、本明細書に概説されるようにチェックポイント抗原に結合する。当該技術分野で知られているように、これらのＣＤＲは、可変重鎖ＣＤＲ（ｖｈＣＤＲまたはＶＨＣＤＲ）の第１のセットおよび可変軽鎖ＣＤＲの第２のセット（ｖｌＣＤＲまたはＶＬＣＤＲ）として一般に存在し、各々が３つのＣＤＲ、すなわち重鎖についてｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、ｖｈＣＤＲ３、軽鎖についてｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２およびｖｌＣＤＲ３を含む。ＣＤＲは、可変重および可変軽ドメインにそれぞれ存在し、一緒になってＦｖ領域を形成する。したがって、いくつかの場合において、抗原結合ドメインの６つのＣＤＲには、可変重および可変軽鎖が寄与する。「Ｆａｂ」フォーマットにおいて、６つのＣＤＲのセットには、２つの異なるポリペプチド配列、すなわち可変重鎖ドメイン（ｖｈまたはＶＨ、ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２およびｖｈＣＤＲ３を含む）および可変軽鎖ドメイン（ｖｌまたはＶＬ、ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２およびｖｌＣＤＲ３を含む）が寄与し、このうちｖｈドメインのＣ末端が重鎖のＣＨ１ドメインのＮ末端に結合し、ｖｌドメインのＣ末端が定常軽鎖ドメインのＮ末端に結合している（したがって、軽鎖を形成する）。ｓｃＦｖフォーマットでは、ｖｈおよびｖｌドメインは、一般に本明細書に概説されているようなリンカーの使用によって、単一のポリペプチド配列に共有結合され、それは（Ｎ末端から開始して）ｖｈ−リンカー−ｖｌまたはｖｌ−リンカー−ｖｈのいずれかであり得、前者が一般的に好まれる（使用されるフォーマット（例えば、ＵＳ６２／３５３，５１１の図１からのもの）に応じて、両側の任意選択のドメインリンカーを含む）。
【００４７】
本明細書における「修飾」とは、ポリペプチド配列におけるアミノ酸の置換、挿入、および／もしくは欠失、またはタンパク質に化学的に連結された部分への改変を意味する。例えば、修飾は、タンパク質に結合した改変された炭水化物またはＰＥＧ構造であってもよい。本明細書における「アミノ酸修飾」は、ポリペプチド配列中のアミノ酸の置換、挿入、および／または欠失を意味する。明確にするために、別段の記載がない限り、アミノ酸修飾は常に、ＤＮＡによってコードされるアミノ酸、例えば、ＤＮＡおよびＲＮＡ中にコドンを有する２０個のアミノ酸に対するものである。
【００４８】
本明細書における「アミノ酸置換」または「置換」は、親ポリペプチド配列中の特定の位置のアミノ酸を異なるアミノ酸で置換することを意味する。特に、いくつかの実施形態では、置換は、特定の位置で天然に存在しない（生物内で天然に存在しないか、またはいずれの生物中にも存在しないかのいずれか）アミノ酸に対するものである。例えば、置換Ｅ２７２Ｙは、２７２位のグルタミン酸がチロシンで置換されているバリアントポリペプチド、この場合はＦｃバリアントを指す。明確にするために、核酸コード配列を変化させるが、出発アミノ酸を変化させない（例えば、宿主生物発現レベルを上昇させるためにＣＧＧ（アルギニンをコードする）をＣＧＡ（なおもアルギニンをコードする）に交換する）ように操作されたタンパク質は、「アミノ酸置換」ではなく、すなわち、同一のタンパク質をコードする新たな遺伝子の創出にもかかわらず、タンパク質は、それが開始する特定の位置に同一のアミノ酸を有する場合、それはアミノ酸置換ではない。
【００４９】
本明細書で使用される「アミノ酸挿入」または「挿入」は、親ポリペプチド配列の特定の位置にアミノ酸配列を付加することを意味する。例えば、−２３３Ｅまたは２３３Ｅは、２３３位の後、および２３４位の前のグルタミン酸の挿入を示す。さらに、−２３３ＡＤＥまたはＡ２３３ＡＤＥは、２３３位の後、かつ２３４位の前のＡｌａＡｓｐＧｌｕの挿入を示す。
【００５０】
本明細書で使用される「アミノ酸欠失」または「欠失」は、親ポリペプチド配列中の特定の位置でアミノ酸配列を除去することを意味する。例えば、Ｅ２３３−またはＥ２３３＃、Ｅ２３３（）またはＥ２３３ｄｅｌは、２３３位のグルタミン酸の欠失を示す。さらに、ＥＤＡ２３３−またはＥＤＡ２３３＃は、２３３位で始まる配列ＧｌｕＡｓｐＡｌａの欠失を示す。
【００５１】
本明細書で使用される「バリアントタンパク質」または「タンパク質バリアント」または「バリアント」とは、少なくとも１つのアミノ酸修飾に基づいて親タンパク質のそれとは異なるタンパク質を意味する。タンパク質バリアントは、タンパク質自体、タンパク質を含む組成物、またはそれをコードするアミノ配列を指し得る。好ましくは、タンパク質バリアントは、親タンパク質と比較して少なくとも１つのアミノ酸修飾、例えば、親と比較して約１〜約７０個のアミノ酸修飾、好ましくは約１〜約５個のアミノ酸修飾を有する。以下に記載するように、いくつかの実施形態では、親ポリペプチド、例えばＦｃ親ポリペプチドは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４由来のＦｃ領域などのヒト野生型配列であるが、バリアントを有するヒト配列もまた、「親ポリペプチド」としての役割を果たすことができ、例えば、ＩｇＧ１／２ハイブリッドを含めることができる。本明細書のタンパク質バリアントの配列は、好ましくは、親タンパク質配列と少なくとも約８０％の同一性、最も好ましくは少なくとも約９０％の同一性、より好ましくは少なくとも約９５−９８−９９％の同一性を有する。バリアントタンパク質は、バリアントタンパク質それ自体、タンパク質バリアントを含む組成物、またはそれをコードするＤＮＡ配列を指すことができる。
【００５２】
したがって、本明細書で使用される「抗体バリアント」または「バリアント抗体」とは、少なくとも１つのアミノ酸修飾に基づいて親抗体とは異なる抗体を意味し、本明細書で使用される「ＩｇＧバリアント」または「バリアントＩｇＧ」とは、少なくとも１つのアミノ酸修飾に基づいて親ＩｇＧ（ここでも、多くの場合はヒトＩｇＧに由来）とは異なる抗体を意味し、本明細書で使用される「免疫グロブリンバリアント」または「バリアント免疫グロブリン」とは、少なくとも１つのアミノ酸修飾に基づいて親免疫グロブリン配列のそれとは異なる免疫グロブリン配列を意味する。本明細書で使用される「Ｆｃバリアント」または「バリアントＦｃ」は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のＦｃドメインと比較してアミノ酸修飾を含むタンパク質を意味する。本発明のＦｃバリアントは、それらを構成するアミノ酸修飾に従って定義される。したがって、例えば、Ｎ４３４Ｓまたは４３４Ｓは、親Ｆｃポリペプチドに対して４３４位に置換セリンを有するＦｃバリアントであり、ここで付番はＥＵインデックスに従う。同様に、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓは、親Ｆｃポリペプチドに対して置換Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓを有するＦｃバリアントを定義する。ＷＴアミノ酸の同一性は特定されていなくてもよく、その場合、前述のバリアントは４２８Ｌ／４３４Ｓと呼ばれる。置換が提供される順序は任意であり、すなわち、例えば４２８Ｌ／４３４ＳはＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓと同一のＦｃバリアントなどである。抗体に関連する本発明において論じられる全ての位置について、特に明記しない限り、アミノ酸位置の付番はＥＵインデックスに従う。ＥＵインデックス、またはＫａｂａｔもしくはＥＵ付番スキームと同様のＥＵインデックスは、ＥＵ抗体の付番を指す（Ｅｄｅｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ，１９６９，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ６３：７８−８５、参照により全体が本明細書に組み込まれる）。修飾は、付加、欠失、または置換でよい。置換には、天然に存在するアミノ酸および場合によっては合成アミノ酸が含まれ得る。例としては、ＵＳ６，５８６，２０７、ＷＯ９８／４８０３２、ＷＯ０３／０７３２３８、ＵＳ２００４／０２１４９８８Ａ１、ＷＯ０５／３５７２７Ａ２、ＷＯ０５／７４５２４Ａ２、Ｊ．Ｗ．Ｃｈｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２），Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  １２４：９０２６−９０２７、Ｊ．Ｗ．Ｃｈｉｎ，＆  Ｐ．Ｇ．Ｓｃｈｕｌｔｚ，（２００２），ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ  １１：１１３５−１１３７、Ｊ．Ｗ．Ｃｈｉｎ，ｅｔ  ａｌ．，（２００２），ＰＩＣＡＳ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  ９９：１１０２０−１１０２４、およびＬ．Ｗａｎｇ，＆Ｐ．Ｇ．Ｓｃｈｕｌｔｚ，（２００２），Ｃｈｅｍ．１−１０が含まれ、参照により全体が組み込まれる。
【００５３】
本明細書で使用される場合、本明細書における「タンパク質」は、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、およびペプチドを含む、少なくとも２つの共有結合したアミノ酸を意味する。さらに、ポリペプチドには、１つ以上の側鎖または末端の合成誘導体化、グリコシル化、ＰＥＧ化、円順列、環化、他の分子へのリンカー、タンパク質またはタンパク質ドメインへの融合、およびペプチドタグまたは標識の付加が含まれ得る。
【００５４】
「残基」とは、本明細書で使用されるとき、タンパク質における位置およびその関連するアミノ酸素性を意味する。例えば、アスパラギン２９７（Ａｓｎ２９７またはＮ２９７とも称される）は、ヒト抗体ＩｇＧ１中の２９７位の残基である。
【００５５】
本明細書で使用される「Ｆａｂ」または「Ｆａｂ領域」とは、ＶＨ、ＣＨ１、ＶＬ、およびＣＬ免疫グロブリンドメインを含むポリペプチドを意味する。Ｆａｂは、単離におけるこの領域、または、全長抗体に関連するこの領域、抗体断片、またはＦａｂ融合タンパク質を指し得る。Ｆａｂの関連で、Ｆａｂは、ＣＨ１およびＣＬドメインに加えてＦｖ領域を含む。
【００５６】
本明細書で使用される「Ｆｖ」または「Ｆｖ断片」または「Ｆｖ領域」とは、単一抗体のＶＬおよびＶＨドメインを含むポリペプチドを意味する。当業者には理解されるように、これらは一般に、２つの鎖で構成されているか、または組み合わさって（一般に、本明細書で論じられるようなリンカーによって）、ｓｃＦｖを形成することができる。
【００５７】
本明細書における「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」は概して、本明細書で論じられるｓｃＦｖリンカーを使用してｓｃＦｖまたはｓｃＦｖドメインを形成する、可変軽鎖ドメインに共有結合した可変重鎖ドメインを意味する。ｓｃＦｖドメインは、Ｎ末端からＣ末端に向かって（ｖｈ−リンカー−ｖｌまたはｖｌ−リンカー−ｖｈ）のいずれの向きにもあり得る。配列表および図に示す配列では、ｖｈおよびｖｌドメインの順序が名前に示される。例えば、Ｈ．Ｘ＿Ｌ．Ｙは、Ｎ末端からＣ末端方向に、ｖｈ−リンカー−ｖｌ、およびＬ．Ｙ＿Ｈ．Ｘがｖｌ−リンカー−ｖｈであることを意味する。
【００５８】
本明細書で使用される「ＩｇＧサブクラス修飾」または「アイソタイプ修飾」とは、１つのＩｇＧアイソタイプの１つのアミノ酸を、異なる、整合したＩｇＧアイソタイプの対応するアミノ酸に変換するアミノ酸修飾を意味する。例えば、ＥＵ位置２９６においてＩｇＧ１はチロシンを含み、ＩｇＧ２はフェニルアラニンを含むので、ＩｇＧ２におけるＦ２９６Ｙ置換は、ＩｇＧサブクラス修飾であると考えられる。
【００５９】
本明細書で使用される「天然に存在しない修飾」とは、アイソタイプ性ではないアミノ酸修飾を意味する。例えば、ＩｇＧのうちのいずれも４３４位にセリンを含まないので、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４（またはそれらのハイブリッド）における置換４３４Ｓは、天然に生じない修飾であると見なされる。
【００６０】
本明細書で使用される「アミノ酸」および「アミノ酸同一性」は、ＤＮＡおよびＲＮＡによってコードされている２０種の天然に存在するアミノ酸のうちの１つを意味する。
【００６１】
本明細書で使用される「エフェクター機能」とは、抗体Ｆｃ領域とＦｃ受容体またはリガンドとの相互作用から生じる生化学的事象を意味する。エフェクター機能には、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、およびＣＤＣが含まれるが、これらに限定されない。
【００６２】
本明細書で使用される「ＩｇＧ  Ｆｃリガンド」とは、ＩｇＧ抗体のＦｃ領域と結合してＦｃ／Ｆｃリガンド複合体を形成する任意の生物由来の分子、好ましくはポリペプチドを意味する。Ｆｃリガンドには、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ、ＦｃＲｎ、Ｃ１ｑ、Ｃ３、マンナン結合レクチン、マンノース受容体、ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌプロテインＡ、ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌプロテインＧ、およびウイルスＦｃγＲが含まれるが、これらに限定されない。Ｆｃリガンドにはまた、ＦｃγＲと相同なＦｃ受容体のファミリーである、Ｆｃ受容体相同体（ＦｃＲＨ）が含まれる（Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ１９０：１２３−１３６（参照により全体が組み込まれる））。Ｆｃリガンドは、Ｆｃに結合する未発見の分子を含み得る。特定のＩｇＧ  Ｆｃリガンドは、ＦｃＲｎおよびＦｃガンマ受容体である。本明細書で使用される「Ｆｃリガンド」とは、抗体のＦｃ領域と結合してＦｃ／Ｆｃリガンド複合体を形成する任意の生物由来の分子、好ましくはポリペプチドを意味する。
【００６３】
本明細書で使用される「Ｆｃガンマ受容体」、「ＦｃγＲ」、または「ＦｃガンマＲ」とは、ＩｇＧ抗体Ｆｃ領域に結合し、かつＦｃγＲ遺伝子によってコードされるタンパク質ファミリーの任意のメンバーを意味する。ヒトにおいて、このファミリーには、アイソフォームであるＦｃγＲＩａ、ＦｃγＲＩｂ、およびＦｃγＲＩｃを含むＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）；アイソフォームであるＦｃγＲＩＩａ（アロタイプであるＨ１３１およびＲ１３１を含む）、ＦｃγＲＩＩｂ（ＦｃγＲＩＩｂ−１およびＦｃγＲＩＩｂ−２を含む）、ならびにＦｃγＲＩＩｃを含むＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）；ならびにアイソフォームであるＦｃγＲＩＩＩａ（アロタイプであるＶ１５８およびＦ１５８を含む）、ならびにＦｃγＲＩＩＩｂ（アロタイプであるＦｃγＲＩＩｂ−ＮＡ１およびＦｃγＲＩＩｂ−ＮＡ２を含む）を含むＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）（参照により全体が組み込まれるＪｅｆｆｅｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ  ８２：５７−６５）、ならびに任意の発見されていないヒトＦｃγＲまたはＦｃγＲアイソフォームもしくはアロタイプが含まれるが、これらに限定されない。ＦｃγＲは、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、およびサルを含むが、これらに限定されない任意の生物由来であり得る。マウスＦｃγＲには、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）、およびＦｃγＲＩＩＩ−２（ＣＤ１６−２）、ならびに任意の未発見のマウスＦｃγＲまたはＦｃγＲアイソフォームもしくはアロタイプが含まれるが、これらに限定されない。
【００６４】
本明細書で使用される「ＦｃＲｎ」または「新生児Ｆｃ受容体」とは、ＩｇＧ抗体のＦｃ領域に結合し、少なくとも部分的にＦｃＲｎ遺伝子によってコードされるタンパク質を意味する。ＦｃＲｎは、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、およびサルを含むが、これらに限定されない任意の生物由来であり得る。当該技術分野において既知のように、機能的ＦｃＲｎタンパク質は、しばしば重鎖および軽鎖と称される２つのポリペプチドを含む。軽鎖はβ−２−ミクログロブリンであり、重鎖はＦｃＲｎ遺伝子によってコードされている。本明細書において別段の記載がない限り、ＦｃＲｎまたはＦｃＲｎタンパク質は、ＦｃＲｎ重鎖とβ−２−ミクログロブリンとの複合体を指す。ＦｃＲｎ受容体への結合を増加させるために、そしていくつかの場合には血清半減期を増加させるために使用される様々なＦｃＲｎバリアントが使用できる。一般に、別段の記載がない限り、本発明のＦｃモノマーは、ＦｃＲｎ受容体への結合を保持する（そして、下記のように、ＦｃＲｎ受容体への結合を増大させるためのアミノ酸バリアントを含み得る）。
【００６５】
本明細書で使用される「親ポリペプチド」とは、バリアントを生成するようにその後修飾される出発ポリペプチドを意味する。親ポリペプチドは、天然に存在するポリペプチド、または天然に存在するポリペプチドのバリアントもしくは改変されたバージョンであってもよい。親ポリペプチドとは、ポリペプチド自体、親ポリペプチドを含む組成物、またはそれをコードするアミノ酸配列を指し得る。したがって、本明細書で使用される「親免疫グロブリン」とは、バリアントを生成するように修飾される非修飾免疫グロブリンポリペプチドを意味し、本明細書で使用される「親抗体」とは、バリアント抗体を生成するように修飾される非修飾抗体を意味する。「親抗体」には、以下に概説するように、既知の市販の組み換えで産生した抗体が含まれることに注意すべきである。
【００６６】
本明細書で使用されるとき、「Ｆｃ」または「Ｆｃ領域」または「Ｆｃドメイン」とは、第１の定常領域免疫グロブリンドメイン（例えば、ＣＨ１）を除く抗体の定常領域、および場合によってはヒンジの一部を含む、ポリペプチドを意味する。このため、Ｆｃは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメイン（例えば、ＣＨ２とＣＨ３）、ＩｇＥおよびＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメイン、およびこれらのドメインに対する可動性ヒンジＮ末端を指す。ＩｇＡおよびＩｇＭの場合、ＦｃはＪ鎖を含んでもよい。ＩｇＧの場合は、Ｆｃドメインは、免疫グロブリンドメインＣγ２およびＣγ３（Ｃγ２およびＣγ３）、ならびにＣγ１（Ｃγ１）とＣγ２（Ｃγ２）との間の下部ヒンジ領域を含む。Ｆｃ領域の境界は異なり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、そのカルボキシ末端に残基Ｃ２２６またはＰ２３０を含むものと定義され、ここでの付番はＫａｂａｔと同様のＥＵインデックスに従う。いくつかの実施形態では、以下でより詳細に説明されるように、例えば、１つ以上のＦｃγＲ受容体またはＦｃＲｎ受容体との結合を変化させるために、Ｆｃ領域に対してアミノ酸修飾が行われる。
【００６７】
本明細書における「重鎖定常領域」とは、抗体のＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３部分を意味する。
【００６８】
本明細書における「Ｆｃ融合タンパク質」または「イムノアドヘシン」とは、一般に（任意選択で本明細書に記載されるようなリンカー部分を介して）異なるタンパク質、例えば本明細書に記載されるようなＩＬ−１５および／またはＩＬ−１５Ｒに連結したＦｃ領域を含むタンパク質を意味する。いくつかの場合では、２つのＦｃ融合タンパク質がホモダイマーＦｃ融合タンパク質またはヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質を形成することができ、後者が好ましい。場合によっては、ヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質の一方のモノマーは、Ｆｃドメインのみ（例えば、空のＦｃドメイン）を含み、他方のモノマーは、バリアントＦｃドメインおよび受容体、リガンド、または他の結合パートナーなどのタンパク質ドメインを含むＦｃ融合体である。
【００６９】
本明細書で使用される「位置」は、タンパク質の配列中の場所を意味する。位置は、順番に付番されるか、または確立されたフォーマット、例えば、抗体付番のためのＥＵインデックスによって付番されてもよい。
【００７０】
本明細書中の本発明のヘテロダイマー抗体のモノマーに関連して「撚り度（ｓｔｒａｎｄｅｄｎｅｓｓ）」は、「マッチ」する２本鎖ＤＮＡと同様に、「マッチ」してヘテロダイマーを形成する能力を保持するようにヘテロダイマー化バリアントを各モノマーに組み込むことを意味する。例えば、いくつかのｐＩバリアントがモノマーＡへと操作される（例えば、ｐＩをより高くする）場合、同様に利用され得る「電荷対」である立体バリアントはｐＩバリアントを妨害せず、例えば、ｐＩを高くした電荷バリアントが同一の「鎖」または「モノマー」に置かれ、両方の機能を保持する。同様に、以下により詳細に概説されるように、対のセットになる「スキュー」バリアントついて、当業者は、対の１つのセットを組み入れる鎖またはモノマーがどちらに入るかを決定する際に、同様にスキューのｐＩを使用してｐＩ分離を最大化するようにｐＩを考慮する。
【００７１】
本明細書で使用される「標的抗原」とは、所与の抗体の可変領域が特異的に結合する分子を意味する。標的抗原は、タンパク質、炭水化物、脂質、または他の化合物であってもよい。多数の好適な標的抗原が以下に記載されている。
【００７２】
「標的細胞」は、本明細書で使用されるとき、標的抗原を発現する細胞を意味する。
【００７３】
本明細書で使用される「可変領域」とは、κ、λ、および重鎖免疫グロブリン遺伝子座をそれぞれ構成するＶκ、Ｖλ、および／またはＶＨ遺伝子のいずれかによって実質的にコードされる１つ以上のＩｇドメインを含む免疫グロブリンの領域を意味する。
【００７４】
本明細書における「野生型またはＷＴ」とは、対立遺伝子変異を含む、天然に見出されるアミノ酸配列またはヌクレオチド配列を意味する。ＷＴタンパク質は、意図的に修飾されていないアミノ酸配列またはヌクレオチド配列を有する。
【００７５】
本発明の二重特異性ヘテロダイマータンパク質は一般に、単離されているか、または組換え体である。本明細書に開示される様々なポリペプチドを説明するために使用されるとき、「単離された」とは、それが発現された細胞または細胞培養物から特定および分離および／または回収されたポリペプチドを意味する。通常、単離されたポリペプチドは、少なくとも１つの精製ステップによって調製される。「単離されたタンパク質」とは、異なる結合特異性を有する他のタンパク質を実質的に含まないタンパク質を指す。「組換え体」は、外来性宿主細胞において組換え核酸技術を用いてタンパク質が生成されることを意味する。
【００７６】
タンパク質配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、最大の配列同一性パーセントを達成するために配列を整合し、必要ならギャップを導入した後の、特定の（親）配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義され、そして配列同一性の一部としていかなる保存的置換も考慮しない。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するためのアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に利用可能なコンピューターソフトウェアを使用して、当技術分野の範囲内である様々な方法で達成できる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大の整合を達成するために必要とされる任意のアルゴリズムを含む、整合を測定するための適切なパラメータを決定することができる。１つの特定のプログラムは、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１６０２４４５２５号の段落番号［０２７９］〜［０２８０］に概説されているＡＬＩＧＮ−２プログラムである。
【００７７】
本発明のアミノ酸配列（「本発明の配列」）と親アミノ酸配列との間の同一性の程度は、「本発明の配列」の長さまたは親配列の長さのうちの短い方で割った、２つの配列の整合における正確な一致の数として計算される。結果は同一性パーセントで表される。
【００７８】
ある実施形態では、２つ以上のアミノ酸配列は少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％同一である。ある実施形態では、２つ以上のアミノ酸配列は少なくとも９５％、９７％、９８％、９９％、さらには１００％まで同一である。
【００７９】
特定の抗原またはエピトープへの「特異的結合」もしくはそれら「に特異的に結合する」またはそれら「に対して特異的である」とは、非特異的相互作用と測定可能に異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、一般に結合活性を有しない類似の構造の分子である対照分子の結合と比較した分子の結合を決定することによって、測定することができる。例えば、特異的結合は、標的と類似の対照分子との競合によって決定することができる。
【００８０】
特定の抗原またはエピトープに対する特異的結合は、例えば、抗原またはエピトープに対して少なくとも約１０−４Ｍ、少なくとも約１０−５Ｍ、少なくとも約１０−６Ｍ、少なくとも約１０−７Ｍ、少なくとも約１０−８Ｍ、少なくとも約１０−９Ｍ、代替的に少なくとも約１０−１０Ｍ、少なくとも約１０−１１Ｍ、少なくとも約１０−１２Ｍ、またはそれ以上のＫＤを有する抗体によって示され得、ＫＤとは特定の抗体−抗原相互作用の解離速度を指す。典型的には、抗原に特異的に結合する抗体は、抗原またはエピトープと比べて、対照分子に対して２０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍、５，０００倍、１０，０００倍、またはそれを超えて大きいＫＤを有することになる。
【００８１】
また、特定の抗原またはエピトープへの特異的結合は、例えば、抗原またはエピトープに対するＫＡまたはＫａが、対照と比べて、そのエピトープに対して少なくとも２０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍、５，０００倍、１０，０００倍、またはそれを超えて大きい抗体によって示され得、ＫＡまたはＫａは、特定の抗体−抗原相互作用の会合速度を指す。結合親和性は一般に、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイを用いて測定される。
【００８２】
ＩＩＩ．導入
本発明は、チェックポイント阻害剤ＰＤ−１抗原に結合することができ、そして共通のガンマ鎖（γｃ、ＣＤ１３２）および／またはＩｌ−２受容体β鎖（ＩＬ−２Ｒβ、ＣＤ１２２）と複合体形成することができる標的化ヘテロダイマー融合タンパク質を提供する。一般に、本発明のヘテロダイマー融合タンパク質は、３つの機能的構成要素：本明細書で一般に「ＩＬ−１５複合体」と呼ばれるＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）構成要素、抗ＰＤ−１構成要素、およびＦｃ構成要素を有し、各々が異なる形態をとることができ、各々が任意の構成で他の構成要素と組み合わせることができる。ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−１５Ｒαに共有結合したＩＬ−１５タンパク質、およびＦｃドメインを含み得る。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５タンパク質およびＩＬ−１５Ｒαタンパク質は非共有結合している。
【００８３】
図に示されるように、ＩＬ−１５複合体はいくつかの形態をとることができる。上述のように、ＩＬ−１５タンパク質それ自体は、ＩＬ−１５Ｒαタンパク質と複合体を形成するときよりも安定性が低い。当該技術分野において既知であるように、ＩＬ−１５Ｒαタンパク質は「ｓｕｓｈｉドメイン」を含み、これはＩＬ−１５結合活性を保持する受容体の最も短い領域である。したがって、全ＩＬ−１５Ｒαタンパク質を含むヘテロダイマー融合タンパク質を作製することができるが、本明細書における好ましい実施形態は、ｓｕｓｈｉドメインのみを使用する複合体を含み、その配列を図に示す。
【００８４】
したがって、本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／ＲαヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質のＩＬ−１５複合体は、一般に、ヒト成熟ＩＬ−１５タンパク質（ヒト成熟ＩＬ−１５タンパク質バリアントを含む）およびＩＬ−１５Ｒαのｓｕｓｈｉドメインを含む（特に断りのない限り、全長配列が使用されている場合、「ＩＬ−１５Ｒα」、「ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）」、および「ｓｕｓｈｉ」は全体を通して互換可能に使用される）。この複合体は複数の異なるフォーマとで使用できる。図２２Ａ、２２Ｃ、２２Ｄ、および２２Ｆに示されるように、ＩＬ−１５タンパク質およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）は、共有結合的に付着しているのではなく、むしろ通常のリガンド−リガンド相互作用によって自己集合している。本明細書でより十分に説明されるように、Ｆｃドメインに共有結合的に連結されるのはＩＬ−１５バリアントまたはＩＬ−１５Ｒα  ｓｕｓｈｉドメインのいずれかであり得る（一般に任意選択のドメインリンカーを使用する）。フォーマットのアミノ酸配列は、図２３（「ＩＬ−１５／Ｒα−ヘテロＦｃ」フォーマット）、図２４（「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ」フォーマット）、図２５Ａ〜２５Ｂ（「ｎｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ」フォーマット）、図２６（「二価ｎｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ」フォーマット）、図２７（「二価ｓｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ」フォーマット）、図２８（「Ｆｃ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマット）、および図２９（「Ｆｃ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマット）に示される。代替的に、それらは、概して図２２Ｂ、２２Ｅ、および２２Ｇに示されるように、ドメインリンカーを使用して共有結合することができる。図２２Ｅは、ｓｕｓｈｉドメインをＮ末端ドメインとして示すが、これは逆にすることもできる。最後に、ＩＬ−１５ドメインまたはＩＬ−１５Ｒα  ｓｕｓｈｉドメインの各々は、システインアミノ酸を含むよう操作でき、同様に、概して図３６Ａ、３６Ｂ、３６Ｃ、および３６Ｄに示されるように、Ｆｃドメインに（任意のドメインリンカーを用いて）共有結合しているＩＬ−１５ドメインまたはＩＬ−１５Ｒα  ｓｕｓｈｉドメインのいずれかとともに複合体を形成するようにできる。フォーマットのアミノ酸配列は、図３７Ａ−３７Ｂ（「ｄｓＩＬ−１５／Ｒα−ヘテロＦｃ」フォーマット）、図３８Ａ−３８Ｂ（「ｄｓＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ」フォーマット）、図３９（「二価ｄｓＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ」フォーマット）、および図４０（「Ｆｃ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマット）に提示される。
【００８５】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα  Ｆｃ融合タンパク質は、それらの親構築物と比較して低下した効力を示すように操作されている。例えば、１つ以上のアミノ酸置換は、ＩＬ−１５／Ｒα複合体のヒト成熟ＩＬ−１５タンパク質のアミノ酸配列に導入することができる。いくつかの実施形態では、本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα  Ｆｃ融合タンパク質は、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５タンパク質バリアントを含む。特定の実施形態では、本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα  Ｆｃ融合タンパク質は、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５タンパク質バリアントを含む。特定の実施形態では、いくつかの実施形態では、本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα  Ｆｃ融合タンパク質は、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５タンパク質バリアントを含む。効力が低下したＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／ＲαＦｃ融合タンパク質およびそのアミノ酸配列の例示的な実施形態を図４５Ａ〜４５Ｄ、４６Ａ〜４６Ｃ、４７Ａ〜４７Ｂ、４８、４９、５０、１２６、および１２７に提示する。
【００８６】
Ａ．  ＰＤ−１抗原結合ドメイン
本発明の抗ＰＤ−１抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）（例えば、抗ＰＤ−１構成要素）は、概して、ヒトＰＤ−１に結合することができる、Ｆｖドメインを形成する６個のＣＤＲのセットおよび／または可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインである。本明細書に示されるように、抗ＰＤ−１  ＡＢＤはｓｃＦｖの形態であり得、ここでｖｈドメインおよびｖｌドメインはｓｃＦｖリンカーを使用して結合され、これは任意選択で荷電されたｓｃＦｖリンカーであり得る。当業者には理解されるように、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向けて、Ｎ−ｖｈ−ｓｃＦｖリンカー−ｖｌ−Ｃとして、またはＮ−ｖｌ−ｓｃＦｖリンカー−ｖｈ−Ｃとして、組み立てることができ、ｓｃＦｖドメインのＣ末端は概してヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３  Ｆｃドメインに連結する。適切なＦｖ（ＣＤＲセットおよび可変重鎖／可変軽鎖ドメインを含む）は、ｓｃＦｖフォーマットで使用することができ、またはＦａｂフォーマットは、図面に示され、かつ２０１８年１１月８日に出願されたＷＯ２０１７／２１８７０７およびＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０５９８８７に開示されており、全体として、特に抗ＰＤ−１配列を表す図面、説明、および配列識別子について、本明細書に明示的に組み込まれる。いくつかの実施形態では、本発明のＰＤ−１  ＡＢＤは、図面、具体的には図９３Ａ〜９３Ｓおよび９４Ａ〜９４ＡＰに示される１Ｃ１１クローンに基づく。いくつかの実施形態では、本発明のＰＤ−１  ＡＢＤは、図９６Ａ〜９６Ｆに示される１Ｃ１１クローン（ＸＥＮＰ２２５５３）の重鎖に基づくバリアント重鎖に基づく。いくつかの実施形態では、本発明のＰＤ−１  ＡＢＤは、図９７Ａ〜９７Ｑに示される１Ｃ１１クローン（ＸＥＮＰ２２５５３）の軽鎖に基づくバリアント軽鎖に基づく。
【００８７】
有用な実施形態では、本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα  Ｆｃ融合タンパク質は、ヒトＰＤ−１に対するＡＢＤを含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１への結合を与える６つのＣＤＲは、図９３Ａ〜９３Ｓおよび９４Ａ〜９４ＡＰのいずれかに示されているものから選択される。
【００８８】
いくつかの実施形態では、本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα  Ｆｃ融合タンパク質は、ｓｃＦｖフォーマットにおけるヒトＰＤ−１へのＡＢＤを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＰＤ−１に対するＡＢＤは、ＰＤ−１への結合を与える６つのＣＤＲを含み、図９３Ａ〜９３Ｓのいずれかに示されるもの、または図９３Ａ〜９３Ｓの任意のＡＢＤのＶＨおよびＶＬドメインから選択される。
【００８９】
特定の実施形態では、本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα  Ｆｃ融合タンパク質は、ＦａｂフォーマットのヒトＰＤ−１に対するＡＢＤを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＰＤ−１に対するＡＢＤは、ＰＤ−１への結合を与える６つのＣＤＲを含み、図９４Ａ〜９４ＡＰのいずれかに示されるもの、または図９４Ａ〜９４ＡＰの任意のＡＢＤのＶＨおよびＶＬドメインから選択される。当業者から理解されるように、これらの配列識別子は、配列識別子から明らかであるように、可変重鎖および軽鎖について「対」になる。
【００９０】
特定の実施形態では、本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα  Ｆｃ融合タンパク質は、ヒトＰＤ−１に対するＡＢＤを含む。場合によっては、ＡＢＤの可変重鎖ドメインのＣＤＲは、図９５Ａ〜９５Ｊのいずれかに示されるものから選択され、ＡＢＤの可変軽鎖ドメインのＣＤＲは、図９６Ａ〜９６Ｆのいずれかに示されるものから選択される。
【００９１】
ヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖＡＢＤを有する多くの実施形態で特に使用されるのは、配列番号５７８〜５７９を含む、図９３Ｒに示されるＸＥＮＰ２５８０６  １Ｃ１１  ［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４のＡＢＤである。したがって、ＸＥＮＰ２５８０６（配列番号５７８〜５７９）からの６つのＣＤＲならびに／またはＶＨおよびＶＬドメインが、本発明の構築物において使用され得る。
【００９２】
ヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖＡＢＤを有する多くの実施形態で特に使用されるのは、配列番号５８４を含む、図９３Ｒに示されるＸＥＮＰ２５８１２  １Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８のＡＢＤである。したがって、ＸＥＮＰ２５８１２（配列番号５８４）からの６つのＣＤＲならびに／またはＶＨおよびＶＬドメインが、本発明の構築物において使用され得る。
【００９３】
ヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖＡＢＤを有する多くの実施形態で特に使用されるのは、配列番号５８５を含む、図９３Ｒに示されるＸＥＮＰ２５８１３  １Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８のＡＢＤである。したがって、ＸＥＮＰ２５８１３（配列番号５８５）からの６つのＣＤＲならびに／またはＶＨおよびＶＬドメインが、本発明の構築物において使用され得る。
【００９４】
ヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖＡＢＤを有する多くの実施形態で特に使用されるのは、配列番号５９１を含む、図９３Ｓに示されるＸＥＮＰ２５８１９  １Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２のＡＢＤである。したがって、ＸＥＮＰ２５８１９（配列番号５９１）からの６つのＣＤＲならびに／またはＶＨおよびＶＬドメインが、本発明の構築物において使用され得る。
【００９５】
ヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖＡＢＤを有する多くの実施形態で特に使用されるのは、配列番号６４２および１１０３を含む、図９４Ｎに示されるＸＥＮＰ２６９４０  １Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２のＡＢＤである。したがって、ＸＥＮＰ２６９４０（配列番号６４２および１１０３）からの６つのＣＤＲならびに／またはＶＨおよびＶＬドメインが、本発明の構築物において使用され得る。
【００９６】
ヒトＰＤ−１に対するＦａｂ  ＡＢＤを有する多くの実施形態で特に使用されるのは、配列番号７０８および１１６９を含む、図９４ＡＥに示されるＸＥＮＰ２８０２６  １Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０のＡＢＤである。したがって、ＸＥＮＰ２８０２６（配列番号７０８および１１６９）からの６つのＣＤＲならびに／またはＶＨおよびＶＬドメインが、本発明の構築物において使用され得る。
【００９７】
ヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖＡＢＤを有する多くの実施形態で特に使用されるのは、配列番号７１９および１１８０を含む、図９４ＡＧに示されるＸＥＮＰ２８６５２  １Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２のＡＢＤである。したがって、ＸＥＮＰ２８６５２（配列番号７１９および１１８０）からの６つのＣＤＲならびに／またはＶＨおよびＶＬドメインが、本発明の構築物において使用され得る。
【００９８】
Ｂ．Ｆｃドメイン
本発明のＦｃドメイン構成要素は本明細書に記載の通りであり、それは概して、スキューバリアントおよび／または任意選択のｐＩバリアントを含み、および／または除去バリアントが本明細書において概説される。
【００９９】
Ｆｃドメインは、ＩｇＧ  Ｆｃドメイン、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４  Ｆｃドメインから誘導することができ、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインが本発明において特に使用される。以下は、本発明の二重特異性ヘテロダイマータンパク質のＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαＦｃ融合モノマーおよびチェックポイント抗体断片に有用なＦｃドメインを記載する。
【０１００】
各鎖のカルボキシ末端部分は、主にエフェクター機能を担う定常領域を規定し、Ｋａｂａｔらは、重鎖および軽鎖の可変領域の多数の一次配列を収集した。配列の保存の程度に基づき、Ｋａｂａｔらは、個々の一次配列をＣＤＲおよびフレームワークに分類し、そのリストを作成した（参照により全体が組み込まれるＳＥＱＵＥＮＣＥＳ  ＯＦ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬ  ＩＮＴＥＲＥＳＴ，５ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｎｏ．９１−３２４２，Ｅ．Ａ．Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．を参照されたい）。本明細書全体を通して、Ｋａｂａｔ付番系は概して、可変ドメイン内の残基（およそ、軽鎖可変領域の残基１〜１０７および重鎖可変領域の残基１〜１１３）を参照するときに使用され、ＥＵ付番系は、Ｆｃ領域に対するものである（例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，上述（１９９１）を参照）。
【０１０１】
免疫グロブリンのＩｇＧサブクラスには、重鎖においていくつかの免疫グロブリンドメインがある。本明細書の「免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメイン」とは、明確に異なる三次構造を有する免疫グロブリンの領域を意味する。定常重（ＣＨ）ドメインおよびヒンジドメインを含む重鎖ドメインが本発明における関心対象である。ＩｇＧ抗体の関連において、ＩｇＧアイソタイプは、各々、３つのＣＨ領域を有する。したがって、ＩｇＧの関連における「ＣＨ」ドメインは以下の通りである。「ＣＨ１」は、Ｋａｂａｔと同様のＥＵインデックスに従って１１８〜２２０位を指す。「ＣＨ２」は、Ｋａｂａｔと同様のＥＵインデックスに従って２３７〜３４０位を指し、「ＣＨ３」は、Ｋａｂａｔと同様のＥＵインデックスに従って３４１〜４４７位を指す。本明細書において示され、以下に記載されるように、ｐＩバリアントは、ＣＨ領域、および以下に論じられるように、ヒンジ領域のうちの１つ以上に存在し得る。
【０１０２】
重鎖のＩｇドメインの別の種類は、ヒンジ領域である。本明細書において、「ヒンジ」または「ヒンジ領域」または「抗体ヒンジ領域」または「免疫グロブリンヒンジ領域」とは、抗体の第１および第２の定常ドメイン間のアミノ酸を含む可動性ポリペプチドを意味する。構造に関して、ＩｇＧ  ＣＨ１ドメインはＥＵの２２０位で終了し、ＩｇＧ  ＣＨ２ドメインは残基ＥＵの２３７位で開始する。したがって、ＩｇＧについては、抗体ヒンジは、位置２２１（ＩｇＧ１中のＤ２２１）から２３６（ＩｇＧ１中のＧ２３６）を含むように本明細書で定義され、付番は、Ｋａｂａｔと同様にＥＵインデックスに従う。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域に関連して、下側ヒンジが含まれ、「下側ヒンジ」は一般に位置２２６または２３０を指す。本明細書に記載のとおり、ｐＩバリアントはヒンジ領域にも同様に作製することができる。
【０１０３】
したがって、本発明は、異なる抗体ドメイン、例えば異なるＦｃドメインを提供する。本明細書中に記載され、当技術分野において既知のとおり、本発明のヘテロダイマータンパク質は異なるドメインを含み、これもまた重複し得る。これらのドメインは、Ｆｃドメイン、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ヒンジドメイン、重定常ドメイン（ＣＨ１−ヒンジ−ＦｃドメインまたはＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）を含むが、これらに限定されない。
【０１０４】
したがって、「Ｆｃドメイン」は、−ＣＨ２−ＣＨ３ドメイン、および任意選択でヒンジドメインを含み、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４由来であり得る。ＩｇＧ１に由来する場合、Ｆｃドメインは、例えばアミノ酸置換４２７Ｌ／４３４Ｓを含むバリアントヒトＩｇＧ１ドメインであり得る。さらに、バリアントＩｇＧ１  Ｆｃドメインは、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ置換などの除去バリアントを含んでもよい。
【０１０５】
本明細書のいくつかの実施形態では、タンパク質断片、例えばＩＬ−１５またはＩＬ−１５ＲαがＦｃドメインに結合している場合、Ｆｃドメインのヒンジの全部または一部に結合しているのはＩＬ−１５またはＩＬ−１５Ｒα構築物のＣ末端であり、例えば、それは一般にヒンジの始まりである配列ＥＰＫＳに結合している。他の実施形態では、タンパク質断片、例えば、ＩＬ−１５またはＩＬ−１５ＲαがＦｃドメインに結合しているとき、それは、ＩＬ−１５またはＩＬ−１５Ｒα構築物のＣ末端であり、ＦｃドメインのＣＨ１ドメインに結合している。
【０１０６】
本明細書に概説したＦｃドメインタンパク質の構築物および配列のいくつかにおいて、ＩＬ−１５またはＩＬ−１５Ｒαタンパク質断片のＣ末端はドメインリンカーのＮ末端に結合し、そのＣ末端は定常ＦｃドメインのＮ末端に結合している（Ｎ−ＩＬ−１５またはＩＬ−１５Ｒαタンパク質断片−リンカー−Ｆｃドメイン−Ｃ）が、これはスイッチできる（Ｎ−Ｆｃドメイン−リンカー−ＩＬ−１５またはＩＬ−１５Ｒαタンパク質断片−Ｃ）。本明細書に概説される他の構築物および配列において、第１のタンパク質断片のＣ末端は、場合によりドメインリンカーを介して、第２のタンパク質断片のＮ末端に結合し、第２のタンパク質断片のＣ末端は、場合によりドメインリンカーを介して定常ＦｃドメインのＮ末端に結合する。本明細書に概説されるさらに他の構築物および配列において、第１のタンパク質断片または第２のタンパク質断片に結合していない定常Ｆｃドメインが提供される。ヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質は、本明細書に記載の２つ以上の例示的なモノマーＦｃドメインタンパク質を含み得る。
【０１０７】
いくつかの実施形態では、リンカーは、本明細書に概説される任意の２つのドメインをともに連結するために使用される「ドメインリンカー」であり、そのいくつかを図９に示す。任意の好適なリンカーを使用することができるが、多くの実施形態は、例えば、ｎが少なくとも１（一般に１〜２〜３〜４〜５）の整数である、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（配列番号１２１７）、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１２１８）、および（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１２１９）を含むグリシン−セリンポリマー、ならびに各ドメインがその生物学的機能を保持できるように十分な長さおよび柔軟性を有する２つのドメインの組み換え結合を可能にする任意のペプチド配列を利用する。いくつかの場合において、以下に概説するように、「撚り度」に注意を払って、荷電ドメインリンカーである。
【０１０８】
一実施形態では、ヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質は、それがｐＩ操作などのヘテロダイマーを生成するように操作することができる少なくとも２つの定常ドメインを含む。使用され得る他のＦｃドメインは、ｐＩ操作された本発明のＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、およびヒンジドメインのうちの１つ以上を含む断片を含む。特に、図２１および図６４に示すフォーマットは、ヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質であり、これは、以下により完全に記載されるように、このタンパク質が、ヘテロダイマーＦｃドメインに自己集合した２つの結合したＦｃ配列および少なくとも１つのタンパク質断片（例えば、１つ、２つまたはそれ以上のタンパク質断片）を有することを意味する。いくつかの場合では、第１のタンパク質断片は第１のＦｃ配列に連結し、そして第２のタンパク質断片は第２のＦｃ配列に連結する。他の場合では、第１のタンパク質断片は第１のＦｃ配列に連結しており、第１のタンパク質断片はＦｃ配列に連結していない第２のタンパク質断片に非共有結合的に付着している。いくつかの場合では、ヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質は、第１のＦｃ配列に連結している第２のタンパク質断片に連結している第１のタンパク質断片、および第１または第２のタンパク質断片のいずれにも連結していない第２のＦｃ配列を含む。
【０１０９】
したがって、いくつかの実施形態では、本発明は、自己組織化してヘテロダイマーＦｃドメイン融合ポリペプチドを形成する、２つの異なる重鎖バリアントＦｃ配列の使用に依存するヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質を提供する。
【０１１０】
本発明は、１つ以上の結合パートナー、リガンド、または受容体への結合を可能にするヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質を提供するための新規構築物に関する。ヘテロダイマーＦｃ構築物は、抗体の重鎖の２つのＦｃドメイン、例えば、「ダイマー」に組み立てられる２つの「モノマー」の自己組織化の性質に基づく。ヘテロダイマーＦｃ融合体は、以下でさらに詳しく説明するとおり、各モノマーのアミノ酸配列を変えることによって作製される。したがって、本発明は概して、結合パートナー（複数可）またはリガンド（複数可）または受容体（複数可）をいくつかの方法で共結合することができるヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質の生成に関し、ヘテロダイマー形成を促進するために、かつ／またはホモダイマーよりもヘテロダイマーの精製を容易にするために、各鎖で異なる定常領域中のアミノ酸バリアントに依存している。
【０１１１】
本発明のヘテロダイマーを生成するために使用することができるいくつかの機序が存在する。さらに、当業者には理解されるように、これらの機序を組み合わせて高いヘテロダイマー化を確実にすることができる。したがって、ヘテロダイマーの産生をもたらすアミノ酸バリアントは、「ヘテロダイマー化バリアント」と称される。後述するように、ヘテロダイマー化バリアントは、ヘテロダイマーからのホモダイマーの精製を可能にする立体バリアント（例えば、後述の「ノブアンドホール」または「スキュー」バリアントおよび「電荷対」バリアント）ならびに「ｐＩバリアント」を含み得る。一般にＷＯ２０１４／１４５８０６に記載されたように、その全体が参照により本明細書に組み込まれ、具体的には以下で「ヘテロダイマー化バリアント」の考察について本明細書に援用されるように、ヘテロダイマー化の有用な機序には「ノブアンドホール」（「ＫＩＨ」、本明細書において時折「スキュー」バリアントとして（ＷＯ２０１４／１４５８０６中の考察を参照）、「ＷＯ２０１４／１４５８０６に記載されているような「静電ステアリング」または「電荷対」、ＷＯ２０１４／１４５８０６に記載されるようなｐＩバリアント、およびＷＯ２０１４／１４５８０６および以下に概説されているような一般的なさらなるＦｃバリアントが含まれる。
【０１１２】
本発明において、ヘテロダイマー抗体の精製を容易にすることができるいくつかの基本的な機序が存在し、その１つは、各モノマーが異なるｐＩを有することによって、Ａ−Ａ、Ａ−ＢおよびＢ−Ｂダイマータンパク質の等電点精製が可能になるｐＩバリアントの使用に依存する。代替的に、いくつかのフォーマットはまた、サイズに基づいて分離することも可能にする。以下にさらに概説するように、ホモダイマーよりもヘテロダイマーの形成を「スキューさせる」ことも可能である。したがって、立体的ヘテロダイマー化バリアントおよびｐＩバリアントまたは電荷対バリアントの組み合わせは、本発明において特に使用される。
【０１１３】
一般に、本発明において特に使用される実施形態は、２つのモノマー間のｐＩ差を増加させる、ｐＩバリアントと組み合わせた、ホモダイマー形成に対するヘテロダイマー形成を促進するスキューバリアントを含むバリアントのセットに依存する。
【０１１４】
さらに、以下により完全に概説されるように、ヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質のフォーマットに応じて、ｐＩバリアントはモノマーの定常ドメインおよび／またはＦｃドメイン内に含まれるか、またはドメインリンカーが使用されるかのいずれかであり得る。すなわち、本発明は、一方または両方のモノマー上にあるｐＩバリアント、および／または荷電ドメインリンカーも提供する。さらに、代替の機能性のためのさらなるアミノ酸操作もまた、Ｆｃ、ＦｃＲｎ、およびＫＯバリアントなどのｐＩ変化を付与し得る。
【０１１５】
ヘテロダイマータンパク質の精製を可能にするための分離機序としてｐＩを利用する本発明においては、アミノ酸バリアントを一方または両方のモノマーのポリペプチドに導入することができ、すなわち、モノマーの一方（本明細書では簡単のために「モノマーＡ」と呼ぶ）のｐＩをモノマーＢと異なるように操作でき、または、モノマーＡとＢの両方の変化を、モノマーＡのｐＩを増加させ、モノマーＢのｐＩを減少させるように改変できる。論じられるように、いずれかまたは両方のモノマーのｐＩ変化は、荷電残基を除去または付加することによって（例えば中性アミノ酸を正または負に荷電したアミノ酸残基で置換する、例えばグリシンからグルタミン酸）、正または負から反対の電荷への荷電残基の変更によって（例えばアスパラギン酸からリジンへ）、または荷電残基の中性残基への変更によって（例えば電荷の消失、リジンからセリン）、実施することができる。いくつかのこれらのバリアントを図に示す。
【０１１６】
したがって、本発明のこの実施形態は、ヘテロダイマーをホモダイマーから分離することができるように、少なくとも１つのモノマーに十分なｐＩの変化を生じさせることを提供する。当業者には理解されるように、そして以下にさらに論じるように、これは、「野生型」重鎖定常領域およびそのｐＩ（ｗｔＡ−＋ＢまたはｗｔＡ−−Ｂ）を増加または減少させるように操作されたバリアント領域を使用することによって、または一方の領域を増加して他方の領域を減少させることによって（Ａ＋−Ｂ−またはＡ−  Ｂ＋）、実施できる。
【０１１７】
したがって、一般に、本発明のいくつかの実施形態の構成要素は、ダイマータンパク質のモノマーの両方ではないにしても少なくとも１つの等電点（ｐＩ）を、アミノ酸置換（「ｐＩバリアント」または「ｐＩ置換」）をモノマーの一方または両方に組み込むことによって変化させることを目的とする定常領域におけるアミノ酸バリアントである。本明細書中に示されるように、２つのホモダイマーからのヘテロダイマーの分離は、２つのモノマーのｐＩが０．１ｐＨ単位とわずかに異なる場合に達成でき、０．２、０．３、０．４、および０．５以上異なるものがすべて本発明において使用される。
【０１１８】
当業者には理解されるように、良好な分離を得るために各モノマーまたは両方のモノマー（複数可）に含まれるべきｐＩバリアントの数は、構成要素の出発ｐＩに部分的に依存するであろう。当該技術分野において知られているように、異なるＦｃは、本発明において利用される異なる出発ｐＩを有するであろう。一般に、本明細書に概説されるように、ｐＩは、少なくとも約０．１ｌｏｇの各モノマーの総ｐＩ差をもたらすように操作され、本明細書に概説されるように０．２〜０．５が好ましい。
【０１１９】
当業者には理解されるように、良好な分離を得るために各モノマーまたは両方のモノマー（複数可）に含まれるべきｐＩバリアントの数は、構成要素の出発ｐＩに部分的に依存するであろう。すなわち、どのモノマーを操作するか、またはどの「方向」（例えば、より陽性またはより陰性）かを決定するために、Ｆｃドメインの配列、場合によっては、Ｆｃドメインに連結するタンパク質ドメイン（複数可）が計算され、そこから決定がなされる。当技術分野において既知のとおり、異なるＦｃドメインおよび／またはタンパク質ドメインは、本発明において利用される異なる出発ｐＩを有するであろう。一般に、本明細書に概説されるように、ｐＩは、少なくとも約０．１ｌｏｇの各モノマーの総ｐＩ差をもたらすように操作され、本明細書に概説されるように０．２〜０．５が好ましい。
【０１２０】
さらに、当業者には理解され、本明細書に概説されるように、いくつかの実施形態では、ヘテロダイマーはサイズに基づいてホモダイマーから分離することができる。図に示されるように、例えば、フォーマットのいくつかは、サイズに基づいてヘテロダイマーおよびホモダイマーの分離を可能にする。
【０１２１】
ｐＩバリアントを使用してヘテロダイマー化を達成する場合、Ｆｃドメイン（複数可）の定常領域（複数可）を使用することによって、ヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質を設計および精製するためのよりモジュール方式のアプローチが提供される。したがって、いくつかの実施形態では、ヘテロダイマー化バリアント（スキューバリアントおよび精製ヘテロダイマー化バリアントを含む）を操作しなければならない。さらに、いくつかの実施形態では、ｐＩバリアントから生じる免疫原性の可能性は、顕著な免疫原性を導入することなくｐＩが変化するように、異なるＩｇＧアイソタイプからのｐＩバリアントを移入することによって顕著に低下する。したがって、解決されるべきさらなる問題は、高いヒト配列含有量を有する低ｐＩの定常ドメインの解明、例えば、任意の特定の位置における非ヒト残基の最小化または回避である。
【０１２２】
このｐＩ操作で起こり得る副次的な利益はまた、血清半減期の延長およびＦｃＲｎ結合の増加である。すなわち、ＵＳ８，６３７，６４１（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているように、抗体定常ドメイン（抗体およびＦｃ融合体に見られるものを含む）のｐＩを低下させるとインビボでより長い血清保持をもたらし得る。血清半減期を延長するためのこれらのｐＩバリアントはまた、精製のためのｐＩ変化を促進する。
【０１２３】
さらに、ヘテロダイマー化バリアントのｐＩバリアントは、ホモダイマーが存在するとき、排除、最小化、および区別する能力が顕著であるので、Ｆｃ融合タンパク質の分析および品質管理プロセスにさらなる利益を与える。同様に、ヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質の製造の再現性を確実に試験する能力は重要である。
【０１２４】
Ｃ．ヘテロダイマー化バリアント
本発明は、ヘテロダイマー形成および／またはホモダイマーからの精製を可能にするためにヘテロダイマー化バリアントを利用する、様々なフォーマットのヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質を含む、ヘテロダイマータンパク質を提供する。ヘテロダイマー融合構築物は、２つのＦｃドメイン、例えば、「ダイマー」に組み立てられる２つの「モノマー」の自己組織化の性質に基づく。
【０１２５】
ヘテロダイマー化スキューバリアントのセットのいくつかの好適な対がある。これらのバリアントは、「セット」の「対」になる。すなわち、一方のセットの対が第１のモノマーに組み込まれ、他のセットの対が第２のモノマーに組み込まれる。注目すべきは、これらのセットは、一方のモノマー上の残基と他方のモノマー上の残基との間で一対一の対応関係を有する「ノブインホール」バリアントとして必ずしも振舞わないことであり、すなわち、これらのセットの対は、ヘテロダイマー形成を促進し、ホモダイマー形成を妨げる２つのモノマー間の境界面を形成し、生物学的条件下で自発的に形成するヘテロダイマーの割合を予想の５０％（２５％ホモダイマーＡ／Ａ：５０％ヘテロダイマーＡ／Ｂ：２５％ホモダイマーＢ／Ｂ）ではなく９０％以上にする。
【０１２６】
Ｄ．立体バリアント
いくつかの実施形態では、ヘテロダイマーの形成は、立体バリアントの付加によって促進され得る。すなわち、各重鎖中のアミノ酸を変えることによって、異なる重鎖が会合して同一のＦｃアミノ酸配列を有するホモダイマーを形成するよりもヘテロダイマー構造を形成する可能性が高い。好適な立体バリアントは、ＵＳ２０１６／０３５５６０８の図２９に含まれており、それらの全ては、参照によりその全体が本明細書に組み込まれ、同様に図１Ａ〜１Ｅにも含まれる。
【０１２７】
１つの機序は、当該技術分野において一般的に「ノブアンドホール」と呼ばれ、ヘテロダイマー形成を有利にし、ホモダイマー形成を不利にする立体効果をもたらすアミノ酸操作を指し、任意選択で使用することもできる。これは、ときに「ノブアンドホール」と呼ばれ、Ｒｉｄｇｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ９（７）：６１７（１９９６）、Ａｔｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９９７  ２７０：２６、米国特許第８，２１６，８０５号に記載されるようなものであり、それらの全ては、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。これらの図は、「ノブアンドホール」に依存するいくつかの「モノマーＡ−モノマーＢ」対を特定する。さらに、Ｍｅｒｃｈａｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１６：６７７（１９９８）に記載されているように、これらの「ノブアンドホール（ｋｎｏｂｓ  ａｎｄ  ｈｏｌｅ）」変異は、ヘテロダイマー化に対するスキュー形成へのジスルフィド結合と組み合わせることができる。
【０１２８】
ヘテロダイマーの生成に使用される追加の機序は、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＧｕｎａｓｅｋａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８５（２５）：１９６３７（２０１０）に記載されているように、時折「静電ステアリング」と称される。これは、本明細書において、時折「電荷対」と称される。この実施形態では、静電学を使用して、ヘテロダイマー化に向けて形成をスキューさせる。当業者には理解されるように、これらは、ｐＩ、すなわち精製にも影響を及ぼす可能性があり、したがって場合によってはｐＩバリアントと見なすこともできる。しかしながら、これらはヘテロダイマー化を強制するために生成され、精製手段として使用されなかったので、それらは「立体バリアント」として分類される。これらには、Ｄ２２１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｋ４０９Ｒと対になったＤ２２１Ｅ／Ｐ２２８Ｅ／Ｌ３６８Ｅ（例えば、これらは「モノマーの対応セット」である）、およびＣ２２０Ｒ／Ｅ２２４Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｋ４０９Ｒと対になったＣ２２０Ｅ／Ｐ２２８Ｅ／３６８Ｅが含まれるがこれらに限定されない。
【０１２９】
さらなるモノマーＡおよびモノマーＢのバリアントは、本明細書に概説されるｐＩバリアントまたは参照によりそれらの全てが本明細書に明示的に組み込まれるＵＳ２０１２／０１４９８７６の図３７に示される他の立体バリアントなどの他のバリアントと、任意の量で任意選択で独立して組み合わせることができる。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、本明細書に概説される立体バリアントは、任意のｐＩバリアント（またはＦｃバリアント、ＦｃＲｎバリアントなどの他のバリアント）を一方または両方のモノマーに任意選択的にかつ独立して組み込むことができ、本発明のタンパク質に独立してかつ任意選択的に含むかまたは除外することができる。
【０１３１】
好適なスキューバリアントの一覧を図４Ａ〜４Ｃに示す。多くの実施形態において特に有用であるのは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、およびＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ：Ｔ３６６Ｗ（任意選択的に架橋ジスルフィドＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ／Ｙ３４９Ｃ：Ｔ３６６Ｗ／Ｓ３５４Ｃを含む）を含むがこれらに限定されないセットの対である。命名法に関して、対「Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ」は、一方のモノマーが二重バリアントセットＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを有し、他方が二重バリアントセットＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを有することを意味し、上述のように、これらの対の「鎖性（ｓｔｒａｎｄｅｄｎｅｓｓ）」は出発ｐＩに依存する。
【０１３２】
Ｅ．ヘテロダイマーのｐＩ（等電点）バリアント
一般に、当業者には理解されるように、ｐＩバリアントには２つの一般的なカテゴリーがある：タンパク質のｐＩを増加させるもの（塩基性変化）とタンパク質のｐＩを減少させるもの（酸性変化）。本明細書中に記載されるように、これらのバリアントの全ての組み合わせがなされ得る：一方のモノマーは野生型、または野生型と顕著に異なるｐＩを示さないバリアントであり得、他方がより塩基性またはより酸性のいずれかであり得る。代替的に、各モノマーは、１つがより塩基性に、１つがより酸性へと変化する。
【０１３３】
ｐＩバリアントの好ましい組み合わせはＵＳ２０１６／０３５５６０８の図３０に示されており、そのすべてはその全体が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に概説し、図に示すように、これらの変化はＩｇＧ１と比較して示されているが、すべてのアイソタイプをこのように変更することができ、アイソタイプハイブリッドも同様である。重鎖定常ドメインがＩｇＧ２〜４に由来する場合、Ｒ１３３ＥおよびＲ１３３Ｑもまた使用され得る。
【０１３４】
一実施形態では、Ｆｃモノマーの１つがＣＨ１ドメインを含む場合、ｐＩバリアントの好ましい組み合わせは、２０８Ｄ／２９５Ｅ／３８４Ｄ／４１８Ｅ／４２１Ｄバリアント（ヒトＩｇＧ１と比較するときＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ）を含む１つのモノマーを有する。いくつかの例では、第２のモノマーは、（ＧＫＰＧＳ）４を含む、正荷電ドメインリンカーを含む。場合によっては、第１のモノマーは２０８位を含むＣＨ１ドメインを含む。したがって、ＣＨ１ドメインを含まない構築物（例えば、ドメインの１つにＣＨ１ドメインを利用しないヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質の場合）において、好ましい負のｐＩバリアントＦｃセットは、２９５Ｅ／３８４Ｄ／４１８Ｅ／４２１Ｄバリアント（ヒトＩｇＧ１と比較するときＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ）を含む。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、変異は、位置２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２３３、２３４、２３５、および２３６を含む、Ｆｃドメインのヒンジドメインでなされる。２３３〜２３６における変化は、ＩｇＧ２骨格における（３２７Ａとともに）エフェクター機能を増加させるためになされ得ることに留意されたい。したがって、ｐＩ変異、特に置換は、本発明で使用されている１、２、３、４または５個の変異によって位置２２１〜２２５の１つ以上で行うことができる。同様に、すべての可能な組み合わせが、単独で、または他のドメイン中の他のｐＩバリアントとともに企図されている。
【０１３６】
ヒンジドメインのｐＩを低下させるのに使用される具体的な置換としては、２２１位の欠失、２２２位の非天然バリンまたはトレオニン、２２３位の欠失、２２４位の非天然グルタミン酸、２２５位の欠失、２３５位の欠失、および２３６位の欠失または非天然アラニンが含まれるがこれらに限定されない。場合によっては、ヒンジドメインにおいてはｐＩ置換のみが行われ、他の例では、これらの置換（複数可）は他のドメイン内の他のｐＩバリアントに任意の組み合わせで加えられる。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、位置２７４、２９６、３００、３０９、３２０、３２２、３２６、３２７、３３４、および３３９を含む変異をＣＨ２領域内に生じさせることができる。同様に、これら１０個の位置の全ての可能な組み合わせを作ることができ、例えば、ｐＩ抗体は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のＣＨ２のｐＩ置換を有していてもよい。
【０１３８】
ＣＨ２ドメインのｐＩを低下させるのに使用される具体的な置換としては、２７４位の非天然グルタミンまたはグルタミン酸、２９６位の非天然フェニルアラニン、３００位の非天然フェニルアラニン、３０９位の非天然バリン、３２０位の非天然グルタミン酸、３２２位の非天然グルタミン酸、３２６位の非天然グルタミン酸、３２７位の非天然グリシン、３３４位の天然グルタミン酸、３３９位の非天然トレオニン、およびＣＨ２内および他のドメインとのすべての可能な組み合わせが含まれるがこれらに限定されない。
【０１３９】
この実施形態では、変異は位置３５５、３５９、３６２、３８４、３８９、３９２、３９７、４１８、４１９、４４４および４４７から独立して任意選択的に選択され得る。ＣＨ３ドメインのｐＩを低下させるのに使用される具体的な置換としては、３５５位の非天然グルタミンまたはグルタミン酸、３８４位の非天然セリン、３９２位の非天然アスパラギンまたはグルタミン酸、３９７位の非天然メチオニン、４１９位の非天然グルタミン酸、３５９位の非天然グルタミン酸、３６２位の非天然グルタミン酸、３８９位の非天然グルタミン酸、４１８位の非天然グルタミン酸、４４４位の非天然グルタミン酸、および４４７位の欠失または非天然アスパラギン酸が含まれるがこれらに限定されない。ｐＩバリアントの例示的な実施形態は図５を含む図面に提示されている。
【０１４０】
Ｆ．アイソタイプバリアント
さらに、本発明の多くの実施形態は、あるＩｇＧアイソタイプから別のＩｇＧアイソタイプへの特定の位置でのｐＩアミノ酸の「移入」に依存し、したがって、バリアントに望ましくない免疫原性が導入される可能性を低減または排除する。これらのいくつかは、参照により本明細書に組み込まれている、ＵＳ２０１４／０３７００１３の図２１に示されている。すなわち、ＩｇＧ１は、高いエフェクター機能を含む様々な理由から治療用抗体の一般的なアイソタイプである。しかしながら、ＩｇＧ１の重定常領域は、ＩｇＧ２のそれよりも高いｐＩを有する（８．１０対７．３１）。特定の位置でＩｇＧ２残基をＩｇＧ１骨格に導入することによって、得られるモノマーのｐＩは低下（または上昇）し、さらにより長い血清半減期を示す。例えば、ＩｇＧ１は１３７位にグリシン（ｐＩ５．９７）を有し、ＩｇＧ２はグルタミン酸（ｐＩ３．２２）を有し、グルタミン酸を移入すると、得られるタンパク質のｐＩに影響を与える。以下に記載されるように、バリアントＦｃ融合タンパク質のｐＩに顕著な影響を与えるためには、一般にいくつかのアミノ酸置換が必要とされる。しかしながら、ＩｇＧ２分子中の変化でさえも血清半減期の増加を可能にすることが以下に論じられるように留意されるべきである。
【０１４１】
他の実施形態では、非アイソタイプのアミノ酸変化を行って、（例えば、高ｐＩのアミノ酸から低ｐＩのアミノ酸へと変化させることによって）得られるタンパク質の全体的な荷電状態を低下させるか、または以下でさらに詳細に説明する安定性などのための構造の調整を可能にする。
【０１４２】
さらに、重定常ドメインと軽定常ドメインの両方をｐＩ操作することによって、ヘテロダイマーの各モノマーにおける顕著な変化を見ることができる。本明細書で論じるように、２つのモノマーのｐＩが少なくとも０．５だけ異なることは、イオン交換クロマトグラフィーもしくは等電点電気泳動、または等電点に感受性の他の方法による分離を可能にし得る。
【０１４３】
Ｇ．ｐＩの計算
各モノマーのｐＩは、バリアント重鎖定常ドメインのｐＩおよび全モノマーのｐＩに依存し、バリアント重鎖定常ドメインおよび融合パートナーを含み得る。したがって、いくつかの実施形態では、ｐＩの変化は、ＵＳ２０１４／０３７００１３の図１９のチャートを用いて、バリアント重鎖定常ドメインに基づいて計算される。本明細書で論じるように、どのモノマーを操作するかは概して、各モノマーの固有のｐＩによって決定される。
【０１４４】
Ｈ．より良好なＦｃＲｎインビボ結合を付与するｐＩバリアント
ｐＩバリアントがモノマーのｐＩを減少させる場合、それらはインビボでの血清保持を改善するというさらなる利点を有することができる。
【０１４５】
まだ検討中ではあるが、エンドソーム内のｐＨ６でＦｃＲｎに結合するとＦｃが隔離されるため、Ｆｃ領域はインビボでより長い半減期を有すると考えられている（Ｇｈｅｔｉｅ  ａｎｄ  Ｗａｒｄ，１９９７  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ１８（１２）：５９２−５９８、全体が参照により組み込まれる）。次いでエンドソーム区画はＦｃを細胞表面にリサイクルする。区画が細胞外空間に開くと、約７．４のより高いｐＨが、血中へのＦｃの放出を誘導する。マウスにおいて、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａらは、ｐＨ６およびｐＨ７．４でのＦｃＲｎ結合が増加したＦｃ変異体は、実際に血清濃度の低下および野生型Ｆｃと同一の半減期を有することを示した（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：５１７１−５１８０、参照によりその全体が組み込まれる）。ｐＨ７．４でのＦｃＲｎに対するＦｃの親和性の増加は、血中へのＦｃの放出を妨げると考えられる。したがって、インビボでのＦｃの半減期を増加させるＦｃ変異は、理想的には、より高いｐＨでのＦｃの放出をなお可能にしながら、より低いｐＨでのＦｃＲｎ結合を増加させる。アミノ酸ヒスチジンは、６．０〜７．４のｐＨ範囲でその荷電状態を変化させる。それ故、Ｆｃ／ＦｃＲｎ複合体中の重要な位置にＨｉｓ残基を見出すことは驚くべきことではない。
【０１４６】
ｐＩバリアントの例示的な実施形態は図５を含む図面に提示されている。
【０１４７】
Ｉ．追加の機能性のための追加のＦｃバリアント
ｐＩアミノ酸バリアントに加えて、１つ以上のＦｃγＲ受容体への結合の改変、ＦｃＲｎ受容体への結合の改変などを含むがこれらに限定されない、様々な理由で実施することができるいくつかの有用なＦｃアミノ酸修飾が存在する。
【０１４８】
したがって、本発明のタンパク質は、ｐＩバリアントおよび立体バリアントを含む、本明細書に概説したヘテロダイマー化バリアントを含むアミノ酸修飾を含むことができる。バリアントの各セットは独立して任意選択的に特定のヘテロダイマータンパク質に含み得るかまたはそれから除外し得る。
【０１４９】
Ｊ．ＦｃγＲバリアント
ＦｃγＲ受容体のうちの１つ以上への結合を改変するために実施され得るいくつかの有用なＦｃ置換が存在する。結合の増加ならびに結合の減少をもたらす置換が有用であり得る。例えば、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合の増加は、一般に、ＡＤＣＣ（抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性、すなわち、ＦｃγＲを発現する非特異的細胞傷害性細胞が標的細胞上の結合抗体を認識し、その後、標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介性反応）の増加をもたらすことが知られている。同様に、いくつかの状況下では、ＦｃγＲＩＩｂ（抑制性受容体）への結合の減少も有益であり得る。本発明で使用されるアミノ酸置換には、ＵＳＳＮ１１／１２４，６２０（特に図４１）、ＵＳＳＮ１１／１７４，２８７、ＵＳＳＮ１１／３９６，４９５、ＵＳＳＮ１１／５３８，４０６に列挙されるものが含まれ、それらのすべてはその全体が、具体的にはそこで開示されるバリアントが参照により、明示的に本明細書に組み込まれる。使用される特定のバリアントには、２３６Ａ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、３３２Ｅ、３３２Ｄ、２３９Ｄ／３３２Ｅ、２６７Ｄ、２６７Ｅ、３２８Ｆ、２６７Ｅ／３２８Ｆ、２３６Ａ／３３２Ｅ、２３９Ｄ／３３２Ｅ／３３０Ｙ、２３９Ｄ、３３２Ｅ／３３０Ｌ、２４３Ａ、２４３Ｌ、２６４Ａ、２６４Ｖ、および２９９Ｔが含まれるがこれらに限定されない。
【０１５０】
さらに、ＦｃγＲＩＩｃに対する親和性を増加させるアミノ酸置換もまた、本明細書に概説されるＦｃドメインバリアントに含まれ得る。例えば、ＵＳＳＮ１１／１２４，６２０およびＵＳＳＮ１４／５７８，３０５に記載される置換は有用である。
【０１５１】
さらに、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＵＳＳＮ１２／３４１，７６９に具体的に開示されているように、４３４Ｓ、４３４Ａ、４２８Ｌ、３０８Ｆ、２５９Ｉ、４２８Ｌ／４３４Ｓ、２５９Ｉ／３０８Ｆ、４３６Ｉ／４２８Ｌ、４３６ＩまたはＶ／４３４Ｓ、４３６Ｖ／４２８Ｌ、および２５９Ｉ／３０８Ｆ／４２８Ｌを含むがこれらに限定されない、ＦｃＲｎ受容体への結合の増加および血清半減期の増加に使用される追加のＦｃ置換が存在する。
【０１５２】
Ｋ．除去バリアント
同様に、機能性バリアントの別のカテゴリーは「ＦｃγＲ除去バリアント」または「Ｆｃノックアウト（ＦｃＫＯまたはＫＯ）」バリアントである。これらの実施形態では、いくつかの治療用途のために、さらなる作用機序を回避するために、１つ以上または全てのＦｃγ受容体（例えば、ＦｃγＲ１、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａなど）へのＦｃドメインの正常な結合を低減または除去することが望ましい。これは、例えば、多くの実施形態では、特に、Ｆｃドメインのうちの１つが１つ以上のＦｃγ受容体除去バリアントを含むように、ＦＣγＲＩＩＩａ連結を除去してＡＤＣＣ活性を排除または顕著に減少させることが望ましい二重特異性免疫調節抗体の使用においてである。これらの除去バリアントは、全て参照により全体が本明細書に組み込まれるＵＳＳＮ１５／１４１，３５０の図３１に示されており、ＥＵインデックスに従って、Ｇ２３６Ｒ／Ｌ３２８Ｒ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ／Ａ３２７Ｇ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ／Ａ３２７Ｇ、およびＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌからなる群から選択される除去バリアントを用いる好ましい態様で、各々が独立して任意選択で含まれても除外されてもよい。本明細書で言及される除去バリアントは、ＦｃγＲ結合を除去するが、ＦｃＲｎ結合を除去しないことに留意されたい。
【０１５３】
Ｌ。ヘテロダイマーとＦｃバリアントとの組み合わせ
当業者には理解されるように、列挙されたヘテロダイマー化バリアント（スキューバリアントおよび／またはｐＩバリアントを含む）はすべて、それらの「鎖性（ｓｔｒａｎｄｅｄｎｅｓｓ）」または「モノマー分割」を保持する限り、任意の方法で任意選択的にかつ独立して組み合わせることができる。さらに、これらのバリアントはすべて、ヘテロダイマー化フォーマットのいずれにも組み合わせることができる。
【０１５４】
ｐＩバリアントの場合、特に使用される実施形態が図面に示されているが、精製を促進するために２つのモノマー間のｐＩの差異を変えるという基本的な規則に従って、他の組み合わせを生成できる。
【０１５５】
さらに、ヘテロダイマー化バリアント、スキュー、およびｐＩのいずれも、本明細書で一般的に概説されるように、Ｆｃ除去バリアント、Ｆｃバリアント、ＦｃＲｎバリアントと、独立して任意選択的に組み合わせることができる。
【０１５６】
さらに、モノマーＦｃドメインは、Ｃ２２０Ｓ／Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０ＳまたはＣ２２０Ｓ／Ｓ２６７Ｋ／Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含むアミノ酸置換のセットを含み得る。
【０１５７】
さらに、ヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質は、スキューバリアント（例えば、ＵＳＳＮ１５／１４１，３５０号の図１Ａ〜１Ｃに示されるようなアミノ酸置換の一組、それらの全ては参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を含むことができ、特に有用なスキューバリアントは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ：Ｔ３６６ＷおよびＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ／Ｙ３４９Ｃ：Ｔ３６６Ｗ／Ｓ３５４Ｃからなる群から選択され、任意選択で除去バリアント、任意選択で荷電したドメインリンカーを含むことができ、重鎖はｐＩバリアントを含む。
【０１５８】
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、２３６Ｒ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、２４３Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｖ２５９Ｉ、２６７Ｄ、２６７Ｅ、２９８Ａ、Ｖ３０８Ｆ、３２８Ｆ、３２８Ｒ、３３０Ｌ、３３２Ｄ、３３２Ｅ、Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｓ、２３６Ｒ／３２８Ｒ、２３９Ｄ／３３２Ｅ、Ｍ４２８Ｌ、２３６Ｒ／３２８Ｆ、Ｖ２５９Ｉ／Ｖ３０８Ｆ、２６７Ｅ／３２８Ｆ、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ、Ｙ４３６Ｉ／Ｍ４２８Ｌ、Ｙ４３６Ｖ／Ｍ４２８Ｌ、Ｙ４３６Ｉ／Ｎ４３４Ｓ、Ｙ４３６Ｖ／Ｎ４３４Ｓ、２３９Ｄ／３３２Ｅ／３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ、Ｖ２５９Ｉ／Ｖ３０８Ｆ／Ｍ４２８Ｌ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、Ｇ２３６Ｒ／Ｌ３２８Ｒ、およびＰＶＡ／Ｓ２６７Ｋからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。いくつかの場合では、Ｆｃドメインはアミノ酸置換２３９Ｄ／３３２Ｅを含む。他の場合において、Ｆｃドメインはアミノ酸置換Ｇ２３６Ｒ／Ｌ３２８ＲまたはＰＶＡ／Ｓ２６７Ｋを含む。
【０１５９】
一実施形態では、本発明で使用されるスキューおよびｐＩバリアントの特定の組み合わせは、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ：Ｔ３６６Ｗ（任意選択で、架橋ジスルフィドＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ／Ｙ３４９Ｃ：Ｔ３６６Ｗ／Ｓ３５４Ｃを含む）であり、一方のモノマーがＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４８１Ｄを含み他方が正に荷電したドメインリンカーである。当技術分野において理解されるように、「ノブインホール」バリアントはｐＩを変化させず、したがってどちらのモノマーにも使用することができる。
【０１６０】
Ｆｃダイマー化バリアントセット（スキューおよびｐＩバリアントを含む）の有用な対を図４Ａ〜４Ｅに示す。さらなるｐＩバリアントを図５に提示する。有用な除去バリアントを図６に提示する。本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の非サイトカイン成分の有用な実施形態を図７Ａ〜７Ｅおよび８Ａ〜８Ｆに提示する。さらに、有用なＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃフォーマットの骨格は、ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン配列を含まない、ヒトＩｇＧ１に基づく。
【０１６１】
ＩＶ．本発明の有用なフォーマット
図６５Ａ〜６５Ｋに示されるように、本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質（ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロダイマータンパク質またはヘテロダイマー融合タンパク質とも呼ばれる）には多くの有用なフォーマットがある。一般に、本発明のヘテロダイマー融合タンパク質は、３つの機能的構成要素：ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）構成要素、抗ＰＤ−１構成要素、およびＦｃ構成要素を有し、本明細書で概説されるように各々が異なる形態をとることができ、各々が任意の構成で他の構成要素と組み合わせることができる。
【０１６２】
Ｆｃ成分の第１および第２のＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、ａ）Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ２６７Ｋ／ＬＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、ｂ）Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｃ）Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、ｄ）Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、ｅ）Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、ｆ）Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、およびｇ）Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑからなる群から選択される一組のアミノ酸置換を有することができる。
【０１６３】
場合によっては、第１および第２のＦｃドメインには、それぞれ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを有する。特定の例では、第１および第２のＦｃドメインには、それぞれ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを有する。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、第１のおよび／または第２のＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含む追加の一組のアミノ酸置換を有する。
【０１６５】
任意選択的に、第１のおよび／または第２のＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、Ｇ２３６Ｒ／Ｌ３２８Ｒ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ／Ａ３２７Ｇ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ／Ａ３２７Ｇ、およびＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌからなる追加の一組のアミノ酸置換を有する。
任意選択で、第１および／または第２のＦｃドメインは、半減期延長のためにＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを有する。いくつかの実施形態では、第１および／または第２のＦｃドメインは、半減期延長のために４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを有する。いくつかの実施形態では、第１および第２のＦｃドメインはそれぞれ、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを有する。
【０１６６】
Ａ．ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖ
一実施形態は図６５Ａに示されており、２つのモノマーを含む。これは一般に「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖ」と呼ばれ、「ｓｃ」は「一本鎖」を表し、共有結合リンカーを用いたＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒαｓｕｓｈｉドメインの結合を指す。「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖ」フォーマット（図６５Ａを参照されたい）は、可変長リンカーによってヒト成熟ＩＬ−１５に融合されたヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインを含み（「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」と呼ばれる）、これは次いで、第１のＦｃモノマーのＮ末端に融合され、ｓｃＦｖは第２のＦｃモノマーのＮ末端に融合される。いくつかの実施形態では、第２のＦｃモノマーは、ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３の全部または一部を含む。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、第１のモノマーは、Ｎ末端からＣ末端に向けて、ヒトＩＬ−１５Ｒα  ｓｕｓｈｉドメイン−ドメインリンカー−ヒトＩＬ−１５−任意選択のドメインリンカー−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、第２のモノマーは、ｖｈ−ｓｃＦｖリンカー−ｖｌ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３またはｖｌ−ｓｃＦｖリンカー−ｖｈ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、どちらの方向でもよく、ドメインリンカーをヒンジの代わりに使用することができる。この実施形態のためのＦｃバリアントのそのような組み合わせは、図８Ａおよび８Ｂに見られる。
【０１６８】
図９３Ａ〜９３Ｓ、図９４Ａ〜９４ＡＰ、図９５Ａ〜９５Ｊ、および図９６Ａ〜９６Ｆに記されそして本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表１に示されるように用いられる付番によってわずかに異なり得、したがって、下線が付されたＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶＨおよびＶＬドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。さらに、各ＣＤＲには独自の配列番号または配列の識別子を有し、各々のＶＨおよびＶＬドメインには配列表に独自の配列番号または配列識別子を有する。
【０１６９】
ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、一実施形態は、配列識別子を含む図６６に示されるように、配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。ＸＥＮＰ２１４８０などのｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットの例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のアミノ酸配列を図６６に提示する。ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、一実施形態は、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの実施形態は、図６６に示されるような配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、一実施形態は、図６６に示されるような配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ａのフォーマットで利用し、例えば、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ（ｓｃＦｖ−Ｆｃモノマーにおいて）およびＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ（ＩＬ−１５複合モノマーにおいて）、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ（ＩＬ−１５複合体側において）、両方のモノマー除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋに、および任意選択で両側に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。
【０１７０】
ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、一実施形態は、図９３Ａに示されるようなＸＥＮＰ２２５３８の１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３からの可変重鎖および可変軽鎖の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、一実施形態は、図９３Ａに示されるような配列ＸＥＮＰ２２５３８の１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ａのフォーマットで利用する。一実施形態は、配列識別子を含む、図９３Ａ〜図９３Ｓに示されるような１Ｃ１１  ［ＰＤ−１］  ＿Ｈ３Ｌ３のｓｃＦｖバリアントの配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。一実施形態は、配列識別子を含む図９５Ａ〜図９５Ｊに示される１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のバリアントの可変重鎖配列と、配列識別子を含む図９６Ａ〜図９６Ｆに示される１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のバリアントの可変軽鎖配列と、を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖ融合タンパク質の抗ＰＤ−１  ＡＢＤは、配列識別子を含む図９５Ａ〜図９５Ｊに示される１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のバリアントの可変重鎖配列のＣＤＲと、配列識別子を含む図９６Ａ〜図９６Ｆに示されている１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のバリアントの可変軽鎖配列のＣＤＲと、を含む。
【０１７１】
ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖ融合タンパク質のいくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１  ｓｃＦｖは、図９３Ａ〜９３Ｓに示されるＸＥＮＰまたは対応する配列番号のいずれか１つのＡＢＤの配列を利用する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１  ｓｃＦｖは、対応する配列番号を含む、ＸＥＮＰ２２５３８、ＸＥＮＰ２３５７７、ＸＥＮＰ２３５７９、ＸＥＮＰ２３５８９、ＸＥＮＰ２３６０１、ＸＥＮＰ２３６０５、ＸＥＮＰ２３６０９、ＸＥＮＰ２３６１５、ＸＥＮＰ２３６１６、ＸＥＮＰ２３６２４、ＸＥＮＰ２３６２６、ＸＥＮＰ２３６２８、ＸＥＮＰ２３６２９、ＸＥＮＰ２３６３３、ＸＥＮＰ２３６３６、ＸＥＮＰ２３６４０、ＸＥＮＰ２３７５５、ＸＥＮＰ２３７５８、ＸＥＮＰ２３７６０、ＸＥＮＰ２３７６５、ＸＥＮＰ２３７７０、ＸＥＮＰ２３７７６、ＸＥＮＰ２３７７９、ＸＥＮＰ２３７８０、ＸＥＮＰ２３７８１、ＸＥＮＰ２３７８９、ＸＥＮＰ２３７９３、ＸＥＮＰ２３７９６、ＸＥＮＰ２３８１１、ＸＥＮＰ２４２０１、ＸＥＮＰ２４２０７、ＸＥＮＰ２４２０８、ＸＥＮＰ２４２０９、ＸＥＮＰ２４２１０、ＸＥＮＰ２４２１１、ＸＥＮＰ２４２１２、ＸＥＮＰ２４２１３、ＸＥＮＰ２４２１４、ＸＥＮＰ２４２１５、ＸＥＮＰ２４２１６、ＸＥＮＰ２４２１７、ＸＥＮＰ２４２１８、ＸＥＮＰ２４２２１、ＸＥＮＰ２４２２２、ＸＥＮＰ２４２２６、ＸＥＮＰ２４２２７、ＸＥＮＰ２４２２８、ＸＥＮＰ２４２４７、ＸＥＮＰ４２４５０、ＸＥＮＰ２４２５４、ＸＥＮＰ２４２５６、ＸＥＮＰ２４２６３、ＸＥＮＰ２４２６６、ＸＥＮＰ２４２６７、ＸＥＮＰ２４２６８、ＸＥＮＰ２４２７０、ＸＥＮＰ２４２７４、ＸＥＮＰ２４２７８、ＸＥＮＰ２４２７９、ＸＥＮＰ２４２８７、ＸＥＮＰ２４２９１、ＸＥＮＰ２４３７２、ＸＥＮＰ２４３７３、ＸＥＮＰ２４３７４、ＸＥＮＰ２４３７５、ＸＥＮＰ２４３７６、ＸＥＮＰ２４３７７、ＸＥＮＰ２４３７８、ＸＥＮＰ２４３７９、ＸＥＮＰ２４３８０、ＸＥＮＰ２４３８１、ＸＥＮＰ２４３８２、ＸＥＮＰ２４４１４、ＸＥＮＰ２４４１５、ＸＥＮＰ２４４１６、ＸＥＮＰ２４４１７、ＸＥＮＰ２４４１８、ＸＥＮＰ２４４１９、ＸＥＮＰ２４４２０、ＸＥＮＰ２４４２１、ＸＥＮＰ２４４２２、ＸＥＮＰ２４４２３、ＸＥＮＰ２４４２４、ＸＥＮＰ２４４２５、ＸＥＮＰ２４４２６、ＸＥＮＰ２４４２７、ＸＥＮＰ２４４２８、ＸＥＮＰ２４４２９、ＸＥＮＰ２４４３０、ＸＥＮＰ２４４３１、ＸＥＮＰ２４４３２、ＸＥＮＰ２４４３３、ＸＥＮＰ２４４３４、ＸＥＮＰ２４４３５、ＸＥＮＰ２４４３６、ＸＥＮＰ２４４３７、ＸＥＮＰ２４４３８、ＸＥＮＰ２４４３９、ＸＥＮＰ２４４４０、ＸＥＮＰ２４４４１、ＸＥＮＰ２４４４２、ＸＥＮＰ２４４４３、ＸＥＮＰ２４８２７、ＸＥＮＰ２４８２８、ＸＥＮＰ２４８２９、ＸＥＮＰ２４８３０、ＸＥＮＰ２４８３１、ＸＥＮＰ２４８３２、ＸＥＮＰ２４８３３、ＸＥＮＰ２４８３４、ＸＥＮＰ２４８３５、ＸＥＮＰ２４８３６、ＸＥＮＰ２４８３７、ＸＥＮＰ２４８３８、ＸＥＮＰ２４８３９、ＸＥＮＰ２４８４０、ＸＥＮＰ２４８４１、ＸＥＮＰ２４８４２、ＸＥＮＰ２４８４３、ＸＥＮＰ２４８４４、ＸＥＮＰ２４８４５、ＸＥＮＰ２４８４６、ＸＥＮＰ２４８４７、ＸＥＮＰ２���８４８、ＸＥＮＰ２４８４９、ＸＥＮＰ２４８５０、ＸＥＮＰ２４８５１、ＸＥＮＰ２４８５２、ＸＥＮＰ２４８５３、ＸＥＮＰ２４８５４、ＸＥＮＰ２４８５５、ＸＥＮＰ２４８５６、ＸＥＮＰ２４８５７、ＸＥＮＰ２４８５８、ＸＥＮＰ２５２９５、ＸＥＮＰ２５２９６、ＸＥＮＰ２５３０１、ＸＥＮＰ２３５０２、ＸＥＮＰ２５３０３、ＸＥＮＰ２５３０４、ＸＥＮＰ２５３０５、ＸＥＮＰ２５３０６、ＸＥＮＰ２５３０７、ＸＥＮＰ２５３０８、ＸＥＮＰ２５３０９、ＸＥＮＰ２５３１０、ＸＥＮＰ２５３１１、ＸＥＮＰ２５３１２、ＸＥＮＰ２５３１３、ＸＥＮＰ２５３１４、ＸＥＮＰ２５３１５、ＸＥＮＰ２５３１６、ＸＥＮＰ２５３１７、ＸＥＮＰ２５３１８、ＸＥＮＰ２５３１９、ＸＥＮＰ２５３２０、ＸＥＮＰ２５３２１、ＸＥＮＰ２５８０２、ＸＥＮＰ２５８０３、ＸＥＮＰ２５８０４、ＸＥＮＰ２５８０５、ＸＥＮＰ２５８０６、ＸＥＮＰ２５８０７、ＸＥＮＰ２５８０８、ＸＥＮＰ２５８０９、ＸＥＮＰ２５８１０、ＸＥＮＰ２５８１１、ＸＥＮＰ２５８１２、ＸＥＮＰ２５８１３、ＸＥＮＰ２５８１４、ＸＥＮＰ２５８１５、ＸＥＮＰ２５８１６、ＸＥＮＰ２５８１７、ＸＥＮＰ２５８１８、およびＸＥＮＰ２５８１９からなる群から選択されるＡＢＤの配列を有する。
【０１７２】
いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットは、配列番号を含む図９３Ｒに示される、ＸＥＮＰ２５８０６または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤを利用する。換言すると、ＸＥＮＰ２５８０６からの６つのＣＤＲおよび／またはＶＨおよびＶＬドメインは、例示的なｓｃＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ｓｃＦｖフォーマットで使用することができる。
【０１７３】
特定の実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットは、配列番号を含む図９３Ｒに示される、ＸＥＮＰ２５８１２または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤを利用する。換言すると、ＸＥＮＰ２５８１２からの６つのＣＤＲおよび／またはＶＨおよびＶＬドメインは、例示的なｓｃＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ｓｃＦｖフォーマットで使用することができる。
【０１７４】
特定の実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットは、配列番号を含む図９３Ｒに示される、ＸＥＮＰ２５８１３または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤを利用する。換言すると、ＸＥＮＰ２５８１３からの６つのＣＤＲおよび／またはＶＨおよびＶＬドメインは、例示的なｓｃＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ｓｃＦｖフォーマットで使用することができる。
【０１７５】
他の実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットは、配列番号を含む図９３Ｓに示される、ＸＥＮＰ２５８１９または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤを利用する。換言すると、ＸＥＮＰ２５８１９からの６つのＣＤＲおよび／またはＶＨおよびＶＬドメインは、例示的なｓｃＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ｓｃＦｖフォーマットで使用することができる。
【０１７６】
ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、配列番号を含む図６９Ａに示されるようなＸＥＮＰ２２０２２の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５）を利用する。ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図６９Ｃに示されるようなＸＥＮＰ２５８５０の鎖２のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）を利用する。ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、別の好ましい実施形態は、図１２６Ａに示されるようなＸＥＮＰ２９４８２の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ）を利用する。ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、別の好ましい実施形態は、図１２４Ｃに示されるようなＸＥＮＰ２９２８６の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）を利用する。
【０１７７】
ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図６６に示されるような配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤおよび図６９Ａに示されるようなＸＥＮＰ２２０２２の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５）を利用する。場合によっては、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ｓｃＦｖ  Ｆｃ融合タンパク質は、図６６に示されるような配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９を持つ抗ＰＤ−１  ＡＢＤおよび図６９Ｃに示すようなＸＥＮＰ２５８５０の鎖２のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）を含む。他の例では、Ｆｃ融合タンパク質は、図６６に示されるような配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤおよび図１２６Ａに示すようなＸＥＮＰ２９４８２の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ）を含む。場合によっては、Ｆｃ融合タンパク質は、図６６に示されるような配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９を持つ抗ＰＤ−１  ＡＢＤと図１２４Ｃに示すようなＸＥＮＰ２９２８６のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）を含む。
【０１７８】
ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ｓｃＦｖフォーマットでは、いくつかの実施形態において、図９３Ａに示されるようなＸＥＮＰ２２５３８の配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３を有する抗ＰＤ−１ＡＢＤおよび図６９Ａに示すようなＸＥＮＰ２２０２２の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５）を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ｓｃＦｖ  Ｆｃ融合タンパク質は、図９３Ａに示されるようなＸＥＮＰ２２５３８の配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤおよび図６９Ｃに示されるようなＸＥＮＰ２５８５０の鎖２のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）を含む。他の実施形態では、そのようなＦｃ融合タンパク質は、図９３Ａに示されるようなＸＥＮＰ２２５３８の配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤおよび図１２６Ａに示されるようなＸＥＮＰ２９４８２の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ）を含む。特定の実施形態では、そのようなＦｃ融合タンパク質は、図９３Ａに示されるようなＸＥＮＰ２２５３８の配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３を持つ抗ＰＤ−１  ＡＢＤおよび図１２４Ｃに示されるようなＸＥＮＰ２９２８６の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）を含む。
【０１７９】
ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ｓｃＦｖフォーマットでは、いくつかの実施形態は、図９５Ａ−図９５Ｊに示されるような、１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のバリアントの可変重鎖配列および図９６Ａ〜図９６Ｆに示されるような１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のバリアントの可変軽鎖配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図６９Ａに示されるようなＸＥＮＰ２２０２２の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５）を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１  ｓｃＦｖ  Ｆｃ融合タンパク質は、図９５Ａ〜図９５Ｊに示されるような１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のバリアントの可変重鎖配列および図９６Ａ〜図９６Ｆに示されるような１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のバリアントの可変軽鎖配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ならびに図６９Ｃに示されるようなＸＥＮＰ２５８５０の鎖２のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）を含む。他の実施形態では、そのようなＦｃ融合タンパク質は、図９５Ａ〜図９５Ｊに示されるような１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のバリアントの可変重鎖配列および図９６Ａ〜図９６Ｆに示されるような１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のバリアントの可変軽鎖配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ならびに図１２６Ａに示されるようなＸＥＮＰ２９４８２の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメインリンカー−ＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ）を含む。いくつかの実施形態ではそのような融合タンパク質は、図９５Ａ−図９５Ｊに示されるような、１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のバリアントの可変重鎖配列および図９６Ａ〜図９６Ｆに示されるような１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のバリアントの可変軽鎖配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図１２４Ｃに示されるようなＸＥＮＰ２９２８６の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）を含む。
【０１８０】
ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ｓｃＦｖフォーマットでは、いくつかの実施形態は、図９３Ｒに示すようなＸＥＮＰ２５８０６または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４の配列を有する抗ＰＤ−１ＡＢＤおよび図６９Ａに示すようなＸＥＮＰ２２０２２の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５）を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ｓｃＦｖ  Ｆｃ融合タンパク質は、図９３Ｒに示すようなＸＥＮＰ２５８０６または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤおよび図６９Ｃに示すようなＸＥＮＰ２５８５０の鎖２のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）を含む。いくつかの実施形態では、そのようなＦｃ融合タンパク質は、図９３Ｒに示すようなＸＥＮＰ２５８０６または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤおよび図１２６Ａに示すようなＸＥＮＰ２９４８２の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ）を含む。いくつかの実施形態では、そのようなＦｃ融合タンパク質は、図９３Ｒに示すようなＸＥＮＰ２５８０６または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４の配列を持つ抗ＰＤ−１  ＡＢＤおよび図１２４Ｃに示すようなＸＥＮＰ２９２８６の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）を含む。
【０１８１】
ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ｓｃＦｖフォーマットでは、いくつかの実施形態は、図９３Ｒに示すようなＸＥＮＰ２５８１２または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８の配列を有する抗ＰＤ−１ＡＢＤおよび図６９Ａに示すようなＸＥＮＰ２２０２２の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５）を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ｓｃＦｖ  Ｆｃ融合タンパク質は、図９３Ｒに示すようなＸＥＮＰ２５８１２または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤおよび図６９Ｃに示すようなＸＥＮＰ２５８５０の鎖２のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）を含む。いくつかの実施形態では、そのようなＦｃ融合タンパク質は、図９３Ｒに示されるように、ＸＥＮＰ２５８１２または１Ｃ１１  ［ＰＤ−１］  ＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤおよびＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメインリンカー）を含む。  −図１２６Ａに示すＸＥＮＰ２９４８２のチェーン１のＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ  ／  Ｎ６５Ｄ）。いくつかの実施形態では、そのようなＦｃ融合タンパク質は、図９３Ｒに示すようなＸＥＮＰ２５８１２または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８の配列を持つ抗ＰＤ−１  ＡＢＤおよび図１２４Ｃに示すようなＸＥＮＰ２９２８６の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）を含む。
【０１８２】
ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ｓｃＦｖフォーマットでは、いくつかの実施形態は、図９３Ｒに示すようなＸＥＮＰ２５８１３または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８の配列を有する抗ＰＤ−１ＡＢＤおよび図６９Ａに示すようなＸＥＮＰ２２０２２の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５）を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ｓｃＦｖ  Ｆｃ融合タンパク質は、図９３Ｒに示すようなＸＥＮＰ２５８１３または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤおよび図６９Ｃに示すようなＸＥＮＰ２５８５０の鎖２のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）を含む。いくつかの実施形態では、そのようなＦｃ融合タンパク質は、図９３Ｒに示されるように、ＸＥＮＰ２５８１３または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤおよび図１２６Ａに示されるＸＥＮＰ２９４８２の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ）を含む。いくつかの実施形態では、そのようなＦｃ融合タンパク質は、図９３Ｒに示すようなＸＥＮＰ２５８１３または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８の配列を持つ抗ＰＤ−１  ＡＢＤおよび図１２４Ｃに示すようなＸＥＮＰ２９２８６の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）を含む。
【０１８３】
ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ｓｃＦｖフォーマットでは、いくつかの実施形態は、図９３Ｓに示すようなＸＥＮＰ２５８１９または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２の配列を有する抗ＰＤ−１ＡＢＤおよび図６９Ａに示すようなＸＥＮＰ２２０２２の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５）を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ｓｃＦｖ  Ｆｃ融合タンパク質は、図９３Ｓに示すようなＸＥＮＰ２５８１９または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤおよび図６９Ｃに示すようなＸＥＮＰ２５８５０の鎖２のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）を含む。いくつかの実施形態では、そのようなＦｃ融合タンパク質は、図９３Ｓに示されるように、ＸＥＮＰ２５８１９または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤおよび図１２６Ａに示されるＸＥＮＰ２９４８２の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ）を含む。いくつかの実施形態では、そのようなＦｃ融合タンパク質は、図９３Ｓに示すような配列ＸＥＮＰ２５８１９または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２を持つ抗ＰＤ−１  ＡＢＤおよび図１２４Ｃに示すようなＸＥＮＰ２９２８６の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）を含む。
【０１８４】
ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２のＶＨおよびＶＬの配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図６９Ａに示されるようなＸＥＮＰ２２０２２の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５）を利用する。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２のＶＨおよびＶＬの配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図６９Ｃに示されるようなＸＥＮＰ２５８５０の鎖２のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２のＶＨおよびＶＬの配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図１２６Ａに示されるようなＸＥＮＰ２９４８２の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ）を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２のＶＨおよびＶＬの配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図１２４Ｃに示されるようなＸＥＮＰ２９２８６の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）を含む。
【０１８５】
ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０のＶＨおよびＶＬの配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図６９Ａに示されるようなＸＥＮＰ２２０２２の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５）を利用する。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０のＶＨおよびＶＬの配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図６９Ｃに示されるようなＸＥＮＰ２５８５０の鎖２のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０のＶＨおよびＶＬの配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図１２６Ａに示されるようなＸＥＮＰ２９４８２の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ）を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０のＶＨおよびＶＬの配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図１２４Ｃに示されるようなＸＥＮＰ２９２８６の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）を含む。
【０１８６】
ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２のＶＨおよびＶＬの配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図６９Ａに示されるようなＸＥＮＰ２２０２２の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５）を利用する。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２のＶＨおよびＶＬの配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図６９Ｃに示されるようなＸＥＮＰ２５８５０の鎖２のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２のＶＨおよびＶＬの配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図１２６Ａに示されるようなＸＥＮＰ２９４８２の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ）を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２のＶＨおよびＶＬの配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図１２４Ｃに示されるようなＸＥＮＰ２９２８６の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）を含む。
【０１８７】
Ｂ．ｓｃＦｖ×ｎｃＩＬ−１５／Ｒα
この実施形態は、図６５Ｂに示され、３つのモノマーを含む。これは一般に「ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖ」または「ｓｃＦｖ×ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」と呼ばれ、「ｎｃ」はＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα  ｓｕｓｈｉドメインの自己組織化非共有結合を指す「非共有」を表す。「ｓｃＦｖ×ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマット（図６５Ｂを参照されたい）は、第１のＦｃモノマーのＮ末端に融合したｓｃＦｖと、第２のＦｃモノマーに融合したヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）を含み、一方でヒト成熟ＩＬ−１５（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントなど）は、非共有結合のＩＬ−１５／Ｒα複合体が形成されるように別々にトランスフェクトされる。
【０１８８】
いくつかの実施形態では、第１のモノマーは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ｓｕｓｈｉドメイン−ドメインリンカー−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、第２のモノマーは、ｖｈ−ｓｃＦｖリンカー−ｖｌ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３またはｖｌ−ｓｃＦｖリンカー−ｖｈ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含むが、いずれの方向にも、ドメインリンカーをヒンジの代わりに置換することができる。第３のモノマーは成熟ＩＬ−１５ドメインである。この実施形態のためのバリアントの好ましい組み合わせは、図８Ａおよび８Ｂに見られる。
【０１８９】
ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図６６に示されるような配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。ｓｃＦｖ×ｎｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットの例示的なＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ヘテロダイマータンパク質のアミノ酸配列を図６７に提示する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１  ＡＢＤは、図６７の鎖１に示されるように、配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９＿ｓｃＦｖを有する。
【０１９０】
ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図６６に示されるような配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖのフォーマットで、１つの好ましい実施形態は、図６６に示されるような配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ｂのフォーマットで利用し、例えば、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ（ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）−Ｆｃモノマーにおいて）およびＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ（ｓｃＦｖ−Ｆｃモノマーにおいて）、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ（ｓｃＦｖ−Ｆｃモノマーにおいて）、両方のモノマーの除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋに、および任意選択で両側に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図６６に示されるような配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ｂのフォーマットで利用する。
【０１９１】
ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図９３Ａに示されるようなＸＥＮＰ２２５３８の１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３からの可変重鎖および可変軽鎖の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図９３Ａに示されるようなＸＥＮＰ２２５３８の配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ｂのフォーマットで利用し、例えば、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ（ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）−Ｆｃモノマーにおいて）およびＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ（ｓｃＦｖ−Ｆｃモノマーにおいて）、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ（ｓｃＦｖ−Ｆｃモノマーにおいて）、両方のモノマー除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋに、および任意選択で両側に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図９３Ａに示されるようなＸＥＮＰ２２５３８の配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ｂのフォーマットで利用する。ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図９３Ａ〜図９３Ｓに示されるような１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のｓｃＦｖバリアントの配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットでは、１つの好ましい実施形態は、図９５Ａ〜図９５Ｊに示される１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のバリアントの可変重鎖配列と、図９６Ａ〜図９６Ｆに示される１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のバリアントの可変軽鎖配列と、を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。
【０１９２】
いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットは、図９３Ｒに示される、ＸＥＮＰ２５８０６または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤを利用する。換言すると、ＸＥＮＰ２５８０６からの６つのＣＤＲおよび／またはＶＨおよびＶＬドメインは、例示的なｎｃＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ｓｃＦｖフォーマットで使用することができる。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットは、図９３Ｒに示されるようなＸＥＮＰ２５８０６または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤを図８Ｂのフォーマットで利用し、例えば、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ（ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）−Ｆｃモノマーにおいて）およびＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ（ｓｃＦｖ−Ｆｃモノマーにおいて）、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ（ｓｃＦｖ−Ｆｃモノマーにおいて）、両方のモノマー除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋに、および任意選択で両側に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。
【０１９３】
特定の実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットは、図９３Ｒに示される、ＸＥＮＰ２５８１２または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤを利用する。換言すると、ＸＥＮＰ２５８１２からの６つのＣＤＲおよび／またはＶＨおよびＶＬドメインは、例示的なｎｃＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ｓｃＦｖフォーマットで使用することができる。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットは、図９３Ｒに示されるようなＸＥＮＰ２５８１２または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８抗ＰＤ−１のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤを図８Ｂのフォーマットで利用し、例えば、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ（ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）−Ｆｃモノマーにおいて）およびＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ（ｓｃＦｖ−Ｆｃモノマーにおいて）、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ（ｓｃＦｖ−Ｆｃモノマーにおいて）、両方のモノマー除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋに、および任意選択で両側に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。
【０１９４】
特定の実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットは、図９３Ｒに示される、ＸＥＮＰ２５８１３または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤを利用する。換言すると、ＸＥＮＰ２５８１３からの６つのＣＤＲおよび／またはＶＨおよびＶＬドメインは、例示的なｎｃＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ｓｃＦｖフォーマットで使用することができる。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットは、図９３Ｒに示されるようなＸＥＮＰ２５８１３または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦＶ  ＡＢＤを図８Ｂのフォーマットで利用し、例えば、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ（ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）−Ｆｃモノマーにおいて）およびＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ（ｓｃＦｖ−Ｆｃモノマーにおいて）、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ（ｓｃＦｖ−Ｆｃモノマーにおいて）、両方のモノマー除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋに、および任意選択で両側に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。
【０１９５】
他の実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットは、図９３Ｓに示される、ＸＥＮＰ２５８１９または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤを利用する。換言すると、ＸＥＮＰ２５８１９からの６つのＣＤＲおよび／またはＶＨおよびＶＬドメインは、例示的なｎｃＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ｓｃＦｖフォーマットで使用することができる。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットは、図９３Ｓに示されるようなＸＥＮＰ２５８１９または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤを図８Ｂのフォーマットで利用し、例えば、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ（ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）−Ｆｃモノマーにおいて）およびＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ（ｓｃＦｖ−Ｆｃモノマーにおいて）、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ（ｓｃＦｖ−Ｆｃモノマーにおいて）、両方のモノマー除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋに、および任意選択で両側に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、本明細書に概説されるｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖ融合タンパク質のいずれかの抗ＰＤ−１ｓｃＦｖは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０もしくは１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２のＶＨおよびＶＬの配列、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６もしくは１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０のＶＨおよびＶＬの配列、または図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２もしくは１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２のＶＨおよびＶＬの配列を含む。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインおよびヒト成熟ＩＬ−１５を含む。特定の実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインおよびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。特定の実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインおよびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。特定の実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインおよびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０１９８】
ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図９３Ａに示されるようなＸＥＮＰ２２５３８の１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３からの可変重鎖および可変軽鎖の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図９３Ａに示されるようなＸＥＮＰ２２５３８の配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ｂのフォーマットで利用し、例えば、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ（ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）−Ｆｃモノマーにおいて）およびＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ（ｓｃＦｖ−Ｆｃモノマーにおいて）、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ（ｓｃＦｖ−Ｆｃモノマーにおいて）、両方のモノマー除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋに、および任意選択で両側に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図９３Ａに示されるようなＸＥＮＰ２２５３８の配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ｂのフォーマットで利用する。ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図９３Ａ〜図９３Ｓに示されるような１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のｓｃＦｖバリアントの配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットでは、１つの好ましい実施形態は、図９５Ａ〜図９５Ｊに示される１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のバリアントの可変重鎖配列と、図９６Ａ〜図９６Ｆに示される１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のバリアントの可変軽鎖配列と、を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインおよびヒト成熟ＩＬ−１５を含む。特定の実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインおよびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。特定の実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインおよびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。特定の実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインおよびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０１９９】
ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図９３Ａ〜図９３Ｓに示されるような１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のｓｃＦｖバリアントの配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびヒト成熟ＩＬ−１５（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントなど）を利用する。特定の実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９３Ａ〜図９３Ｓに示されるような１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のｓｃＦｖバリアント、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。特定の実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９３Ａ〜図９３Ｓに示されるような１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のｓｃＦｖバリアント、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。特定の実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９３Ａ〜図９３Ｓに示されるような１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のｓｃＦｖバリアント、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０２００】
いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットは、図９３Ｒに示されるようなＸＥＮＰ２５８０６または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびヒト成熟ＩＬ−１５（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントなど）を利用する。特定の実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９３Ｒに示されるようなＸＥＮＰ２５８０６または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。特定の実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９３Ｒに示されるようなＸＥＮＰ２５８０６または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。特定の実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９３Ｒに示されるようなＸＥＮＰ２５８０６または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０２０１】
特定の実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットは、図９３Ｒに示されるようなＸＥＮＰ２５８１２または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびヒト成熟ＩＬ−１５（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントなど）を利用する。特定の実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９３Ｒに示されるようなＸＥＮＰ２５８１２または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。特定の実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９３Ｒに示されるようなＸＥＮＰ２５８１２または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。特定の実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９３Ｒに示されるようなＸＥＮＰ２５８１２または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０２０２】
特定の実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットは、図９３Ｒに示されるようなＸＥＮＰ２５８１３または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびヒト成熟ＩＬ−１５（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントなど）を利用する。特定の実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９３Ｒに示されるようなＸＥＮＰ２５８１３または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。特定の実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９３Ｒに示されるようなＸＥＮＰ２５８１３または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。特定の実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９３Ｒに示されるようなＸＥＮＰ２５８１３または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０２０３】
他の実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットは、図９３Ｓに示されるようなＸＥＮＰ２５８１９または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびヒト成熟ＩＬ−１５（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントなど）を利用する。特定の実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９３Ｓに示されるようなＸＥＮＰ２５８１９または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。特定の実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９３Ｓに示されるようなＸＥＮＰ２５８１９または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。特定の実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９３Ｓに示されるようなＸＥＮＰ２５８１９または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０２０４】
Ｃ．ｓｃＦｖ×ｄｓＩＬ−１５／Ｒα
この実施形態は、図６５Ｃに示され、３つのモノマーを含む。これは一般に「ｓｃＦｖ×ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」または「ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖ」と呼ばれ、「ｄｓ」は「ジスルフィド」を表す。「ｓｃＦｖ×ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマット（図６５Ｃ）は、「ｓｃＦｖ×ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットと同一であるが、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）およびＩＬ−１５は操作されたシステインの結果として共有結合している。「ｓｃＦｖ×ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットは、第１のＦｃモノマーのＮ末端に融合したｓｃＦｖと、第２のＦｃモノマーに融合したヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）を含み、一方でヒト成熟ＩＬ−１５（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントなど）は、共有結合したＩＬ−１５／Ｒα複合体が形成されるように別々にトランスフェクトされる。
【０２０５】
いくつかの実施形態では、第１のモノマーは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ｓｕｓｈｉドメイン−ドメインリンカー−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ｓｕｓｈｉドメインが操作されたシステイン残基を有し、第２のモノマーは、ｖｈ−ｓｃＦｖリンカー−ｖｌ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３またはｖｌ−ｓｃＦｖリンカー−ｖｈ−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含むが、いずれの方向にも、ドメインリンカーをヒンジの代わりに置換することができる。第３のモノマーは、システインバリアントアミノ酸を有するようにも操作されたＩＬ−１５ドメインであり、それにより、ｓｕｓｈｉドメインとＩＬ−１５ドメインとの間にジスルフィド架橋を形成することが可能になる。この実施形態のためのバリアントの好ましい組み合わせは、図８Ａおよび８Ｂに見られる。
【０２０６】
ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図６６に示されるような配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。ｓｃＦｖ×ｄｓＩＬ−１５／Ｒαフォーマットの例示的なＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ヘテロダイマータンパク質のアミノ酸配列を図６８に提示する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１  ＡＢＤは、図６６の鎖１に示されるように、配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９＿ｓｃＦｖを含む。
【０２０７】
ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および図６６に示されるような配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖのフォーマットで、１つの好ましい実施形態は、図６６に示されるような配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ｂのフォーマットで利用し、例えば、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ（ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）−Ｆｃモノマーにおいて）およびＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ（ｓｃＦｖ−Ｆｃモノマーにおいて）、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ（ｓｃＦｖ−Ｆｃモノマーにおいて）、両方のモノマーの除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋに、および任意選択で両側に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図６６に示されるような配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ｂのフォーマットで利用する。
【０２０８】
ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図９３Ａに示されるような配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図９３Ａに示されるような配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ｂのフォーマットで利用し、例えば、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ（ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）−Ｆｃモノマーにおいて）およびＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ（ｓｃＦｖ−Ｆｃモノマーにおいて）、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ（ｓｃＦｖ−Ｆｃモノマーにおいて）、両方のモノマー除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋに、および任意選択で両側に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図９３Ａに示されるような配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ｂのフォーマットで利用する。
【０２０９】
ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図９３Ａに示されるようなＸＥＮＰ２２５３８の１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３からの可変重鎖および可変軽鎖の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図９３Ａに示されるようなＸＥＮＰ２２５３８の配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ｂのフォーマットで利用し、例えば、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ（ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）−Ｆｃモノマーにおいて）およびＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ（ｓｃＦｖ−Ｆｃモノマーにおいて）、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ（ｓｃＦｖ−Ｆｃモノマーにおいて）、両方のモノマー除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋに、および任意選択で両側に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図９３Ａに示されるようなＸＥＮＰ２２５３８の配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ｂのフォーマットで利用する。ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図９３Ａ〜図９３Ｓに示されるような１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のｓｃＦｖバリアントの配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットでは、１つの好ましい実施形態は、図９５Ａ〜図９５Ｊに示される１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のバリアントの可変重鎖配列と、図９６Ａ〜図９６Ｆに示される１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のバリアントの可変軽鎖配列と、を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。
【０２１０】
いくつかの実施形態では、ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットは、図９３Ｒに示されるようなＸＥＮＰ２５８０６または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤを図８Ｂのフォーマットで利用し、例えば、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ（ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）−Ｆｃモノマーにおいて）およびＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ（ｓｃＦｖ−Ｆｃモノマーにおいて）、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ（ｓｃＦｖ−Ｆｃモノマーにおいて）、両方のモノマー除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋに、および任意選択で両側に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。換言すると、ＸＥＮＰ２５８０６からの６つのＣＤＲおよび／またはＶＨおよびＶＬドメインは、例示的なｄｓＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ｓｃＦｖフォーマットで使用することができる。
【０２１１】
特定の実施形態では、ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットは、図９３Ｒに示される、ＸＥＮＰ２５８１２または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤを利用する。換言すると、ＸＥＮＰ２５８１２からの６つのＣＤＲおよび／またはＶＨおよびＶＬドメインは、例示的なｄｓＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ｓｃＦｖフォーマットで使用することができる。
【０２１２】
特定の実施形態では、ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットは、図９３Ｒに示されるようなＸＥＮＰ２５８１３または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦＶ  ＡＢＤを図８Ｂのフォーマットで利用し、例えば、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ（ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）−Ｆｃモノマーにおいて）およびＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ（ｓｃＦｖ−Ｆｃモノマーにおいて）、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ（ｓｃＦｖ−Ｆｃモノマーにおいて）、両方のモノマー除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋに、および任意選択で両側に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。換言すると、ＸＥＮＰ２５８１３からの６つのＣＤＲおよび／またはＶＨおよびＶＬドメインは、例示的なｄｓＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ｓｃＦｖフォーマットで使用することができる。
【０２１３】
他の実施形態では、ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットは、図９３Ｓに示されるようなＸＥＮＰ２５８１９または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤを図８Ｂのフォーマットで利用し、例えば、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ（ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）−Ｆｃモノマーにおいて）およびＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ（ｓｃＦｖ−Ｆｃモノマーにおいて）、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ（ｓｃＦｖ−Ｆｃモノマーにおいて）、両方のモノマー除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋに、および任意選択で両側に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。換言すると、ＸＥＮＰ２５８１９からの６つのＣＤＲおよび／またはＶＨおよびＶＬドメインは、例示的なｄｓＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ｓｃＦｖフォーマットで使用することができる。
【０２１４】
ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図９３Ａ〜図９３Ｓに示されるような１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のｓｃＦｖバリアントの配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびヒト成熟ＩＬ−１５（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントなど）を利用する。特定の実施形態では、ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９３Ａ〜図９３Ｓに示されるような１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のｓｃＦｖバリアント、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。特定の実施形態では、ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９３Ａ〜図９３Ｓに示されるような１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のｓｃＦｖバリアント、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。特定の実施形態では、ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９３Ａ〜図９３Ｓに示されるような１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のｓｃＦｖバリアント、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０２１５】
ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットでは、１つの好ましい実施形態は、図９５Ａ〜図９５Ｊに示される１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のバリアントの可変重鎖配列と、図９６Ａ〜図９６Ｆに示される１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のバリアントの可変軽鎖配列と、を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびヒト成熟ＩＬ−１５（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントなど）を利用する。いくつかの実施形態では、ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９５Ａ〜図９５Ｊに示されるような１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のバリアントの可変重鎖配列および図９６Ａ〜図９６Ｆに示されるような１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のバリアントの可変軽鎖配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。特定の実施形態では、ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９５Ａ〜図９５Ｊに示されるような１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のバリアントの可変重鎖配列および図９６Ａ〜図９６Ｆに示されるような１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のバリアントの可変軽鎖を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。特定の実施形態では、ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９５Ａ〜図９５Ｊに示される１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のバリアントの可変重鎖配列と、図９６Ａ〜図９６Ｆに示される１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３のバリアントの可変軽鎖配列と、を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０２１６】
いくつかの実施形態では、ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットは、図９３Ｒに示されるようなＸＥＮＰ２５８０６または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを利用する。特定の実施形態では、ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９３Ｒに示されるようなＸＥＮＰ２５８０６または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。特定の実施形態では、ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９３Ｒに示されるようなＸＥＮＰ２５８０６または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。特定の実施形態では、ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９３Ｒに示されるようなＸＥＮＰ２５８０６または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０２１７】
特定の実施形態では、ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットは、図９３Ｒに示されるようなＸＥＮＰ２５８１２または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを利用する。特定の実施形態では、ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９３Ｒに示されるようなＸＥＮＰ２５８１２または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。特定の実施形態では、ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９３Ｒに示されるようなＸＥＮＰ２５８１２または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。特定の実施形態では、ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９３Ｒに示されるようなＸＥＮＰ２５８１２または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０２１８】
特定の実施形態では、ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットは、図９３Ｒに示されるようなＸＥＮＰ２５８１３または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを利用する。特定の実施形態では、ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９３Ｒに示されるようなＸＥＮＰ２５８１３または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。特定の実施形態では、ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９３Ｒに示されるようなＸＥＮＰ２５８１３または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。特定の実施形態では、ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９３Ｒに示されるようなＸＥＮＰ２５８１３または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０２１９】
他の実施形態では、ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットは、図９３Ｓに示されるようなＸＥＮＰ２５８１９または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを利用する。特定の実施形態では、ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９３Ｓに示されるようなＸＥＮＰ２５８１９または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。特定の実施形態では、ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９３Ｓに示されるようなＸＥＮＰ２５８１９または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。特定の実施形態では、ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖは、図９３Ｓに示されるようなＸＥＮＰ２５８１９または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２のＡＢＤの配列を有するヒトＰＤ−１に対するｓｃＦｖ  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０２２０】
いくつかの実施形態では、本明細書に概説されるｄｓＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖ融合タンパク質のいずれかの抗ＰＤ−１ｓｃＦｖは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０もしくは１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２のＶＨおよびＶＬの配列、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６もしくは１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０のＶＨおよびＶＬの配列、または図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２もしくは１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２のＶＨおよびＶＬの配列を含む。
【０２２１】
Ｄ．ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂ
この実施形態は、図６５Ｄに示され、３つのモノマーを含む。これは、一般に、互換可能に使用されるように「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂ」または「Ｆａｂ×ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」と呼ばれ、「ｓｃ」は「一本鎖」を表す。「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂ」フォーマット（図６５Ｄ）は、可変長リンカーによってＩＬ−１５に融合したＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）を含み（「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」と呼ばれる）、これは次いで第１のＦｃモノマーのＮ末端に融合し、可変重鎖（ＶＨ）は第２のＦｃモノマーの他方側に融合するが、対応する軽鎖はＶＨを含むＦａｂを形成するように別々にトランスフェクトされる。
【０２２２】
図９４Ａ〜９４ＡＰ、図９５Ａ〜９５Ｊ、図９６Ａ〜９６Ｆ、図１２６Ａ〜１２６Ｄ、図１２７Ａ〜１２７Ｄ、および図１２８Ａ〜１２８Ｌに記され、そして本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表１に示されるように用いられる付番によってわずかに異なり得、したがって、太字とされたＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶＨおよびＶＬドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。さらに、各ＣＤＲには独自の配列番号または配列の識別子を有し、各々のＶＨおよびＶＬドメインには配列表に独自の配列番号または配列識別子を有する。
【０２２３】
いくつかの実施形態では、第１のモノマーは、Ｎ末端からＣ末端に、ヒトＩＬ−１５Ｒα  ｓｕｓｈｉドメイン−ドメインリンカー−ヒト成熟ＩＬ−１５−任意選択のドメインリンカー−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、第２のモノマーは、重鎖、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む。第３のモノマーは軽鎖、ＶＬ−ＣＬである。この実施形態のためのＦｃバリアントの好ましい組み合わせは、図８Ｃに見られる。
【０２２４】
いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマットの例示的なＰＤ−１標的化×ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、ＸＥＮＰ２２０２２、ＸＥＮＰ２５８４９、ＸＥＮＰ２４５３５、ＸＥＮＰ２４５３６、ＸＥＮＰ２５８５０、およびＸＥＮＰ２５９３７のアミノ酸配列を含み、図６９Ａ〜６９Ｃに提示される。
【０２２５】
いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ（第２のモノマーまたは重鎖−Ｆｃモノマー上）およびＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ（第１のモノマーまたはＩＬ−１５複合体−Ｆｃモノマー上）、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ（ＩＬ−１５複合体側）、両方のモノマーの除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、および任意選択で両側の４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを含む。ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。
【０２２６】
ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１４に示されるように、配列１Ｇ６＿Ｈ１．２７９＿Ｌ１．１９４を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１  ＡＢＤは、１Ｇ６＿Ｈ１．２７９＿Ｌ１．１９４のＣＤＲおよび／またはＶＨおよびＶＬドメインを有する。ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂのフォーマットで、１つの好ましい実施形態は、図１４に示されるような配列１Ｇ６＿Ｈ１．２７９＿Ｌ１．１９４を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ｃのフォーマットで利用し、例えば、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ（ＩＬ−１５複合体Ｆｃ−モノマー上）およびＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ（重鎖−Ｆｃモノマー上）、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ（ＩＬ−１５複合体側において）、両方のモノマーの除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋに、および任意選択で両側に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１４に示されるような配列１Ｇ６＿Ｈ１．２７９＿Ｌ１．１９４を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ｃのフォーマットで利用する。ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１４に示されるような配列１Ｇ６＿Ｈ１．２７９＿Ｌ１．１９４を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。
【０２２７】
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１  Ｆａｂは、図６９ＡのＸＥＮＰ２２０２２の鎖２に示される配列１Ｇ６＿Ｈ１．２７８［ＰＤ−１］およびＸＥＮＰ２２０２２の鎖３に示される１Ｇ６＿Ｌ１．１８８［ＰＤ−１］を利用する。特定の実施形態では、抗ＰＤ−１  Ｆａｂは、図６９ＡのＸＥＮＰ２５８４９の鎖１に示される配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３およびＸＥＮＰ２５８４９の鎖３に示される１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｌ３を利用する。他の実施形態では、抗ＰＤ−１  Ｆａｂは、図６９ＢのＸＥＮＰ２４５３５の鎖１に示される配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３およびＸＥＮＰ２４５３５の鎖３に示される１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｌ３を利用する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１  Ｆａｂは、図６９ＢのＸＥＮＰ２４５３６の鎖１に示される配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３およびＸＥＮＰ２４５３６の鎖３に示される１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｌ３を利用する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１  Ｆａｂは、図６９ＣのＸＥＮＰ２５８５０の鎖１に示される配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３およびＸＥＮＰ２５８５０の鎖３に示される１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｌ３を利用する。特定の実施形態では、抗ＰＤ−１  Ｆａｂは、図６９ＣのＸＥＮＰ２５９３５７の鎖１に示される配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３およびＸＥＮＰ２５９３７の鎖３に示される１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｌ３を利用する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１  Ｆａｂは、図９４Ａに示されるようなＸＥＮＰ２２５５３または１Ｃ１１＿Ｈ３Ｌ３の配列を利用する。場合によっては、抗ＰＤ−１  Ｆａｂは、ＸＥＮＰ２２５５３または１Ｃ１１＿Ｈ３Ｌ３のＣＤＲおよび／またはＶＨおよびＶＬドメインを利用する。ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図９４に示されるような配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂのフォーマットで、１つの好ましい実施形態は、図９４に示されるような配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ｃのフォーマットで利用し、例えば、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ（ＩＬ−１５複合体Ｆｃ−モノマー上）およびＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ（重鎖−Ｆｃモノマー上）、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ（ＩＬ−１５複合体側において）、両方のモノマーの除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋに、および任意選択で両側に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。
【０２２８】
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１  Ｆａｂは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を利用する。場合によっては、抗ＰＤ−１  Ｆａｂは、ＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２のＣＤＲおよび／またはＶＨおよびＶＬドメインを利用する。ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、ＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂのフォーマットで、１つの好ましい実施形態は、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ｃのフォーマットで利用し、例えば、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ（ＩＬ−１５複合体Ｆｃ−モノマー上）およびＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ（重鎖−Ｆｃモノマー上）、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ（ＩＬ−１５複合体側において）、両方のモノマーの除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋに、および任意選択で両側に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ｃのフォーマットで利用する。ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。
【０２２９】
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１  Ｆａｂは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を利用する。場合によっては、抗ＰＤ−１  Ｆａｂは、ＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０のＣＤＲおよび／またはＶＨおよびＶＬドメインを利用する。ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、配列１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂのフォーマットで、１つの好ましい実施形態は、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ｃのフォーマットで利用し、例えば、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ（ＩＬ−１５複合体Ｆｃ−モノマー上）およびＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ（重鎖−Ｆｃモノマー上）、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ（ＩＬ−１５複合体側において）、両方のモノマーの除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋに、および任意選択で両側に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ｃのフォーマットで利用する。ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。
【０２３０】
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１  Ｆａｂは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を利用する。場合によっては、抗ＰＤ−１  Ｆａｂは、ＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２のＣＤＲおよび／またはＶＨおよびＶＬドメインを利用する。ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、ＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂのフォーマットで、１つの好ましい実施形態は、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ｃのフォーマットで利用し、例えば、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ（ＩＬ−１５複合体Ｆｃ−モノマー上）およびＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ（重鎖−Ｆｃモノマー上）、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ（ＩＬ−１５複合体側において）、両方のモノマーの除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋに、および任意選択で両側に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ｃのフォーマットで利用する。ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。
【０２３１】
一実施形態では、抗ＰＤ−１  Ｆａｂは、図９４Ａ〜９４ＡＰに示されるようなＸＥＮＰまたは対応する配列番号識別子のうちのいずれか１つの配列を利用する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１  Ｆａｂは、対応する配列番号識別子を含む、ＸＥＮＰ２２５５３、ＸＥＮＰ２５３３８、ＸＥＮＰ２５３３９、ＸＥＮＰ２６３２１、ＸＥＮＰ２６３２２、ＸＥＮＰ２６３２３、ＸＥＮＰ２６３２４、ＸＥＮＰ２６３２５、ＸＥＮＰ２６３２６、ＸＥＮＰ２６３２７、ＸＥＮＰ２６３２８、ＸＥＮＰ２６３２９、ＸＥＮＰ２６３３０、ＸＥＮＰ２６３３１、ＸＥＮＰ２６３３２、ＸＥＮＰ２６３３３、ＸＥＮＰ２６３３４、ＸＥＮＰ２６３３５、ＸＥＮＰ２６３３６、ＸＥＮＰ２６３３７、ＸＥＮＰ２６３３８、ＸＥＮＰ２６３３９、ＸＥＮＰ２６３４０、ＸＥＮＰ２６３４１、ＸＥＮＰ２６３４２、ＸＥＮＰ２６３４３、ＸＥＮＰ２６３４４、ＸＥＮＰ２６９１７、ＸＥＮＰ２６９１８、ＸＥＮＰ２６９１９、ＸＥＮＰ２６９２０、ＸＥＮＰ２６９２１、ＸＥＮＰ２６９２２、ＸＥＮＰ２６９２３、ＸＥＮＰ２６９２４、ＸＥＮＰ２６９２５、ＸＥＮＰ２６９２６、ＸＥＮＰ２６９２７、ＸＥＮＰ２６９２８、ＸＥＮＰ２６９２９、ＸＥＮＰ２６９３０、ＸＥＮＰ２６９３１、ＸＥＮＰ２６９３２、ＸＥＮＰ２６９３３、ＸＥＮＰ２６９３４、ＸＥＮＰ２６９３５、ＸＥＮＰ２６９３６、ＸＥＮＰ２６９３７、ＸＥＮＰ２６９３８、ＸＥＮＰ２６９３９、ＸＥＮＰ２６９４０、ＸＥＮＰ２６９４１、ＸＥＮＰ２６９４２、ＸＥＮＰ２６９４３、ＸＥＮＰ２６９４４、ＸＥＮＰ２６９４５、ＸＥＮＰ２６９４６、ＸＥＮＰ２６９４７、ＸＥＮＰ２６９４９、ＸＥＮＰ２６９５０、ＸＥＮＰ２６９５１、ＸＥＮＰ２６９５２、ＸＥＮＰ２６９５３、ＸＥＮＰ２６９５４、ＸＥＮＰ２６９５５、ＸＥＮＰ２７６４３、ＸＥＮＰ２７６４４、ＸＥＮＰ２７６４５、ＸＥＮＰ２７６４６、ＸＥＮＰ２７６４７、ＸＥＮＰ４７６４８、ＸＥＮＰ２７６４９、ＸＥＮＰ２７６５０、ＸＥＮＰ２７６５１、ＸＥＮＰ２７６５２、ＸＥＮＰ２７８３９、ＸＥＮＰ２７８４０、ＸＥＮＰ２７８４１、ＸＥＮＰ２７８４２、ＸＥＮＰ２７８４３、ＸＥＮＰ２７８４４、ＸＥＮＰ２７８４５、ＸＥＮＰ２７８４６、ＸＥＮＰ２７８４７、ＸＥＮＰ２７８４８、ＸＥＮＰ２７８４９、ＸＥＮＰ２７８５０、ＸＥＮＰ２７８５１、ＸＥＮＰ２７８５２、ＸＥＮＰ２７８５３、ＸＥＮＰ２７８５４、ＸＥＮＰ２７８５５、ＸＥＮＰ２７８５６、ＸＥＮＰ２７８５７、ＸＥＮＰ２７８５８、ＸＥＮＰ２７８５９、ＸＥＮＰ２７８６０、ＸＥＮＰ２７８６１、ＸＥＮＰ２７８６２、ＸＥＮＰ２７８６３、ＸＥＮＰ２７８６４、ＸＥＮＰ２７８６５、ＸＥＮＰ２７８６６、ＸＥＮＰ２７８６７、ＸＥＮＰ２７８６８、ＸＥＮＰ２７８６９、ＸＥＮＰ２７８７０、ＸＥＮＰ２７８７１、ＸＥＮＰ２７８７２、ＸＥＮＰ２７９５９、ＸＥＮＰ２７９６０、ＸＥＮＰ２７９６１、ＸＥＮＰ２７９６２、ＸＥＮＰ２７９６３、ＸＥＮＰ２８０２４、ＸＥＮＰ２８０２５、ＸＥＮＰ２８０２６、ＸＥＮＰ２８０２７、ＸＥＮＰ２８０２８、ＸＥＮＰ２８０２９、ＸＥＮＰ２８０３０、ＸＥＮＰ２８０３１、ＸＥＮＰ２８０３２、ＸＥＮＰ２８０３３、ＸＥＮＰ２８０３４、ＸＥＮＰ��８０３５、ＸＥＮＰ２８６５１、ＸＥＮＰ２８６５２、ＸＥＮＰ２８６５３、ＸＥＮＰ２８６５４、ＸＥＮＰ２８６５５、ＸＥＮＰ２８６５６、ＸＥＮＰ２８６５７、ＸＥＮＰ２８６５８、ＸＥＮＰ２８６５９、ＸＥＮＰ２９０２９、ＸＥＮＰ２９０３０、ＸＥＮＰ２９０３１、ＸＥＮＰ２９０３２、ＸＥＮＰ２９０３３、ＸＥＮＰ２９０３４、ＸＥＮＰ２９０３５、ＸＥＮＰ２９０３６、ＸＥＮＰ２９０３７、ＸＥＮＰ２９０３８、ＸＥＮＰ２９０３９、ＸＥＮＰ２９０４０、ＸＥＮＰ２９０４１、ＸＥＮＰ２９０４２、ＸＥＮＰ２９０４３、ＸＥＮＰ２９０４４、ＸＥＮＰ２９０４５、ＸＥＮＰ２９０４６、ＸＥＮＰ２９０４７、ＸＥＮＰ２９０４８、ＸＥＮＰ２９０４９、ＸＥＮＰ２９０５０、ＸＥＮＰ２９０５１、ＸＥＮＰ２９０５２、ＸＥＮＰ２９０５３、ＸＥＮＰ２９０５４、ＸＥＮＰ２９０５５、およびＸＥＮＰ２９０５６からなる群から選択されるＡＢＤの配列を有する。
【０２３２】
別の実施形態では、抗ＰＤ−１  Ｆａｂは、図９５Ａ〜９５Ｊに示されるようなＸｅｎＤまたは対応する配列番号識別子のうちのいずれか１つの可変重鎖配列および図９６Ａ〜９６Ｆに示されるようなＸｅｎＤまたは対応する配列番号識別子のうちのいずれか１つの可変軽鎖配列を利用する。場合によっては、可変重鎖の配列は、対応する配列番号識別子を含む、ＸｅｎＤ１７４７８、ＸｅｎＤ１８５７６、ＸｅｎＤ２２０９７、ＸｅｎＤ２２０９８、ＸｅｎＤ２２０９９、ＸｅｎＤ２２１００、ＸｅｎＤ２２１０１、ＸｅｎＤ２２１０２、ＸｅｎＤ２２１０３、ＸｅｎＤ２２１０４、ＸｅｎＤ２２１０５、ＸｅｎＤ２２１０６、ＸｅｎＤ２２１０７、ＸｅｎＤ２２１０８、ＸｅｎＤ２２１０９、ＸｅｎＤ２２１１０、ＸｅｎＤ２２１１１、ＸｅｎＤ２２１１２、ＸｅｎＤ２２１１３、ＸｅｎＤ２２１１４、ＸｅｎＤ２２１１５、ＸｅｎＤ２２１１６、ＸｅｎＤ２２１１７、ＸｅｎＤ２２１１８、ＸｅｎＤ２２１１９、ＸｅｎＤ２２１２０、ＸｅｎＤ２２１２１、ＸｅｎＤ２２１２２、ＸｅｎＤ２２１２３、ＸｅｎＤ２２１２４、ＸｅｎＤ２２１２５、ＸｅｎＤ２２１２６、ＸｅｎＤ２２１２７、ＸｅｎＤ２２１２８、ＸｅｎＤ２２１２９、ＸｅｎＤ２２１３０、ＸｅｎＤ２２１３１、ＸｅｎＤ２２１３２、ＸｅｎＤ２２１３３、ＸｅｎＤ２２１３４、ＸｅｎＤ２２１３５、ＸｅｎＤ２２１３６、ＸｅｎＤ２２１３７、ＸｅｎＤ２２１３８、ＸｅｎＤ２２１３９、ＸｅｎＤ２２１４０、ＸｅｎＤ２２１４１、ＸｅｎＤ２２１４２、ＸｅｎＤ２２１４３、ＸｅｎＤ２２１４４、ＸｅｎＤ２２１４５、ＸｅｎＤ２２１４６、ＸｅｎＤ２２１４７、ＸｅｎＤ２２１４８、ＸｅｎＤ２２１４９、ＸｅｎＤ２２１５０、ＸｅｎＤ２２１５０、ＸｅｎＤ２２１５２、ＸｅｎＤ２２１５３、ＸｅｎＤ２２１５４、ＸｅｎＤ２２１５５、ＸｅｎＤ２２１５６、ＸｅｎＤ２２１５７、ＸｅｎＤ２２１５８、ＸｅｎＤ２２１５９、ＸｅｎＤ２２１６０、ＸｅｎＤ２２１６１、およびＸｅｎＤ２２１６２からなる群から選択される。場合によっては、可変軽鎖の配列は、対応する配列番号識別子を含む、図９６のＸｅｎＤ１７４８２、ＸｅｎＤ１８４７２、ＸｅｎＤ２２１６３、ＸｅｎＤ２２１６４、ＸｅｎＤ２２１６５、ＸｅｎＤ２２１６６、ＸｅｎＤ２２１６７、ＸｅｎＤ２２１６８、ＸｅｎＤ２２１６９、ＸｅｎＤ２２１７０、ＸｅｎＤ２２１５７、ＸｅｎＤ２２１５８、ＸｅｎＤ２２１５９、ＸｅｎＤ２２１６１、ＸｅｎＤ２２１６２、ＸｅｎＤ２２１７１、ＸｅｎＤ２２１７２、ＸｅｎＤ２２１７３、ＸｅｎＤ２２１７４、ＸｅｎＤ２２１７５、ＸｅｎＤ２２１７６、ＸｅｎＤ２２１７７、ＸｅｎＤ２２１７８、ＸｅｎＤ２２１７９、ＸｅｎＤ２２１８０、ＸｅｎＤ２２１８１、ＸｅｎＤ２２１８２、ＸｅｎＤ２２１８３、ＸｅｎＤ２２１８４、ＸｅｎＤ２２１８５、ＸｅｎＤ２２１８６、ＸｅｎＤ２２１８４、ＸｅｎＤ２２１８５、ＸｅｎＤ２２１８６、ＸｅｎＤ２２１８７、ＸｅｎＤ２２１８８、ＸｅｎＤ２２１８９、ＸｅｎＤ２２１９０、ＸｅｎＤ２２１９１、ＸｅｎＤ２２１９２、ＸｅｎＤ２２１９３、ＸｅｎＤ２２１９４、ＸｅｎＤ２２１９５、ＸｅｎＤ２２１９６、ＸｅｎＤ２２１９７、ＸｅｎＤ２２１９８、ＸｅｎＤ２２１９９、Ｘ���ｎＤ２２２００、ＸｅｎＤ２２２０１、ＸｅｎＤ２２２０２、ＸｅｎＤ２２２０３、ＸｅｎＤ２２２０４、ＸｅｎＤ２２２０５、ＸｅｎＤ２２２０６、ＸｅｎＤ２２２０７、ＸｅｎＤ２２２０８、ＸｅｎＤ２２２０９、ＸｅｎＤ２２２１０、ＸｅｎＤ２２２１１、ＸｅｎＤ２２２１２、ＸｅｎＤ２２２１３、ＸｅｎＤ２２２１４、ＸｅｎＤ２２２１５、ＸｅｎＤ２２２１６、ＸｅｎＤ２２２１７、ＸｅｎＤ２２２１８、ＸｅｎＤ２２２１９、ＸｅｎＤ２２２２０、ＸｅｎＤ２２２２１、ＸｅｎＤ２２２２２、およびＸｅｎＤ２２２２３からなる群から選択される。
【０２３３】
ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１４に示されるような１Ｇ６＿Ｈ１．２７９＿Ｌ１．１９４（１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９）の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図６９Ａに示されるようなＸＥＮＰ２２０２２の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５）を利用する。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図１４に示されるような１Ｇ６＿Ｈ１．２７９＿Ｌ１．１９４（１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９）の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図６９Ｃに示されるようなＸＥＮＰ２５８５０の鎖２のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図１４に示されるような１Ｇ６＿Ｈ１．２７９＿Ｌ１．１９４（１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９）の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図１２６Ａに示されるようなＸＥＮＰ２９４８２の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ）を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図１４に示されるような１Ｇ６＿Ｈ１．２７９＿Ｌ１．１９４（１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９）の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図１２４Ｃに示されるようなコンストラクトの鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）を含む。
【０２３４】
ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図９４Ａに示されるような１Ｃ１１＿Ｈ３Ｌ３の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤおよび図６９Ａに示されるようなＸＥＮＰ２２０２２の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５）を利用する。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４Ａに示されるような１Ｃ１１＿Ｈ３Ｌ３の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図６９Ｃに示されるようなＸＥＮＰ２５８５０の鎖２のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４Ａに示されるような１Ｃ１１＿Ｈ３Ｌ３の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図１２６Ａに示されるようなＸＥＮＰ２９４８２の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ）を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４Ａに示されるような１Ｃ１１＿Ｈ３Ｌ３の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図１２４Ｃに示されるようなＸＥＮＰ２９２８６の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）を含む。
【０２３５】
ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図６９Ａに示されるようなＸＥＮＰ２２０２２の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５）を利用する。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図６９Ｃに示されるようなＸＥＮＰ２５８５０の鎖２のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図１２６Ａに示されるようなＸＥＮＰ２９４８２の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ）を含む。ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図１２４Ｃに示されるようなＸＥＮＰ２９２８６の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）を利用する。
【０２３６】
ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図６９Ａに示されるようなＸＥＮＰ２２０２２の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５）を利用する。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図６９Ｃに示されるようなＸＥＮＰ２５８５０の鎖２のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図１２６Ａに示されるようなＸＥＮＰ２９４８２の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ）を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図１２４Ｃに示されるようなＸＥＮＰ２９２８６の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）を含む。
【０２３７】
ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図６９Ａに示されるようなＸＥＮＰ２２０２２の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５）を利用する。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図６９Ｃに示されるようなＸＥＮＰ２５８５０の鎖２のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図１２６Ａに示されるようなＸＥＮＰ２９４８２の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ）を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図１２４Ｃに示されるようなＸＥＮＰ２９２８６の鎖１のＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）を含む。
【０２３８】
いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマットの抗ＰＤ−１  Ｆａｂは、図９３Ｒに示すようなＸＥＮＰ２５８０６または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４の重鎖および軽鎖の配列、図９３Ｒに示すようなＸＥＮＰ２５８１２または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８のＡＢＤの重鎖および軽鎖の配列、図９３Ｒに示すようなＸＥＮＰ２５８１３または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８の重鎖および軽鎖の配列、図９３Ｓに示すようなＸＥＮＰ２５８１９または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２の重鎖および軽鎖の配列を有する。
【０２３９】
Ｅ．  ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂ
この実施形態は、図６５Ｅに示され、３つのモノマーを含む。これは、一般に、互換可能に使用されるように「ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂ」または「Ｆａｂ×ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」と呼ばれ、「ｎｃ」はＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒα  ｓｕｓｈｉドメインの自己組織化非共有結合を指す「非共有」を表す。ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマット（図６５Ｅを参照）は、ヘテロダイマーＦｃ領域のＮ末端に融合したＶＨを含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）はヘテロダイマーＦｃの他方側に融合するが、対応する軽鎖はＶＨを含むＦａｂを形成するように別々にトランスフェクトされ、一方、ＩＬ−１５は非共有結合のＩＬ−１５／Ｒα複合体が形成されるように別々にトランスフェクトされる。ＸＥＮＰ２２１１２などのＦａｂ×ｎｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットの例示的なＰＤ−１標的化×ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のアミノ酸配列を図７０に提示する。
【０２４０】
いくつかの実施形態では、第１のモノマーは、Ｎ末端からＣ末端に、ＩＬ−１５Ｒα  ｓｕｓｈｉドメイン−任意選択のドメインリンカー−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、第２のモノマーは、重鎖、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む。第３のモノマーはＩＬ−１５ドメインである。この実施形態のためのＦｃバリアントの好ましい組み合わせは、図８Ｄに見られる。
【０２４１】
ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１４に示されるように、配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂのフォーマットで、１つの好ましい実施形態は、図１４に示されるような配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９（１Ｇ６＿Ｈ１．２７９＿Ｌ１．１９４）を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ｄのフォーマットで利用し、例えば、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ（重鎖−Ｆｃ−モノマー上）およびＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ（ｓｕｓｈｉドメイン−Ｆｃモノマー上）、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ（重鎖−Ｆｃモノマー上）、両方のモノマーの除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋに、および任意選択で両側に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。
【０２４２】
ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図２０Ｃに示されるような配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂのフォーマットで、１つの好ましい実施形態は、図２０Ｃに示されるような配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ｄのフォーマットで利用し、例えば、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ（重鎖−Ｆｃ−モノマー上）およびＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ（ｓｕｓｈｉドメイン−Ｆｃモノマー上）、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ（重鎖−Ｆｃ−モノマー上）、両方のモノマーの除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋに、および任意選択で両側に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。
【０２４３】
いくつかの実施形態では、本発明のｎｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびヒト成熟ＩＬ−１５（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む）を含む。いくつかの実施形態では、本発明のｎｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０２４４】
いくつかの実施形態では、本発明のｎｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびヒト成熟ＩＬ−１５（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む）を含む。いくつかの実施形態では、本発明のｎｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０２４５】
いくつかの実施形態では、本発明のｎｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびヒト成熟ＩＬ−１５（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む）を含む。いくつかの実施形態では、本発明のｎｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０２４６】
いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマットの抗ＰＤ−１  Ｆａｂは、図９３Ｒに示すようなＸＥＮＰ２５８０６または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４の重鎖および軽鎖の配列、図９３Ｒに示すようなＸＥＮＰ２５８１２または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８のＡＢＤの重鎖および軽鎖の配列、図９３Ｒに示すようなＸＥＮＰ２５８１３または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８の重鎖および軽鎖の配列、図９３Ｓに示すようなＸＥＮＰ２５８１９または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２の重鎖および軽鎖の配列を有する。
【０２４７】
Ｆ．  ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂ
この実施形態は、図６５Ｆに示され、３つのモノマーを含む。これは、一般に、互換可能に使用されるように「ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂ」または「Ｆａｂ×ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」と呼ばれ、「ｄｓ」はＩＬ−１５とｓｕｓｈｉドメインの自己組織化非共有結合を指す「ジスルフィド」を表す。ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマット（図６５Ｆを参照）は、「ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂ」フォーマットと同一であるが、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）およびＩＬ−１５は操作されたシステインの結果として共有結合している。ＸＥＮＰ２２６４１などのＦａｂ×ｄｓＩＬ−１５／Ｒαフォーマットの例示的なＰＤ−１標的化×ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のアミノ酸配列を図７１に提示する。
【０２４８】
いくつかの実施形態では、第１のモノマーは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ｓｕｓｈｉドメイン−ドメインリンカー−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、ｓｕｓｈｉドメインがシステイン残基を含むよう操作されており、第２のモノマーは、重鎖、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む。第３のモノマーは、天然の細胞条件下でジスルフィド架橋が形成されるようにシステイン残基を有するように操作されたＩＬ−１５ドメインである。この実施形態のためのバリアントの好ましい組み合わせは、ＷＯ２０１８／０７１９１８の図７に見られる。
【０２４９】
ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１４に示されるように、配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂのフォーマットで、１つの好ましい実施形態は、図１４に示されるような配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９（１Ｇ６＿Ｈ１．２７９＿Ｌ１．１９４）を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ｄのフォーマットで利用し、例えば、スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ（重鎖−Ｆｃ−モノマー上）およびＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ（ＩＬ−１５複合体−Ｆｃモノマー上）、ｐＩバリアントＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ（重鎖−Ｆｃモノマー上）、両方のモノマーの除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋに、および任意選択で両側に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。
【０２５０】
ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図２０Ｃに示されるような配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図２０Ｃに示されるような配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ｄのフォーマットで利用する。
【０２５１】
いくつかの実施形態では、本発明のｄｓＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを含む。いくつかの実施形態では、本発明のｄｓＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを含む。いくつかの実施形態では、本発明のｄｓＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを含む。
【０２５２】
いくつかの実施形態では、本発明のｄｓＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびヒト成熟ＩＬ−１５（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む）を含む。いくつかの実施形態では、本発明のｄｓＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０２５３】
いくつかの実施形態では、本発明のｄｓＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびヒト成熟ＩＬ−１５（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む）を含む。いくつかの実施形態では、本発明のｄｓＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０２５４】
いくつかの実施形態では、本発明のｄｓＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびヒト成熟ＩＬ−１５（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む）を含む。いくつかの実施形態では、本発明のｄｓＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０２５５】
いくつかの実施形態では、ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマットの抗ＰＤ−１  Ｆａｂは、図９３Ｒに示すようなＸＥＮＰ２５８０６または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４の重鎖および軽鎖の配列、図９３Ｒに示すようなＸＥＮＰ２５８１２または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８のＡＢＤの重鎖および軽鎖の配列、図９３Ｒに示すようなＸＥＮＰ２５８１３または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８の重鎖および軽鎖の配列、図９３Ｓに示すようなＸＥＮＰ２５８１９または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２の重鎖および軽鎖の配列を有する。
【０２５６】
Ｇ．ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα
この実施形態は、図６５Ｇに示され、３つのモノマーを含む（しかし融合タンパク質はテトラマーである）。これは一般に「ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」と呼ばれ、「ｓｃ」は「一本鎖」を表す。ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマット（図６５Ｇを参照）は、第１のおよび第２のヘテロダイマーＦｃのＮ末端に融合したＶＨを含み、ＩＬ−１５はＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）に融合し、これは次いでさらにヘテロダイマーＦｃ領域の一方のＣ末端に融合するが、対応する軽鎖はＶＨを含むＦａｂを形成するように別々にトランスフェクトされる。ｍＡｂ×ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットの例示的なＰＤ−１標的化×ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のアミノ酸配列を図７２Ａ〜７２Ｂに提示する。
【０２５７】
いくつかの実施形態では、第１のモノマーは、重鎖、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む。第２のモノマーは、ｓｃＩＬ−１５複合体を有する重鎖、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−ドメインリンカー−ＩＬ−１５Ｒα  ｓｕｓｈｉドメイン−ドメインリンカー−ＩＬ−１５を含む。第３の（および第４の）モノマーは軽鎖、ＶＬ−ＣＬである。これは一般に「ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」と呼ばれ、「ｓｃ」は「一本鎖」を表す。
【０２５８】
ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１４に示されるような配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１４に示されるような配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ａ〜８Ｆの有用なフォーマットで利用する。
【０２５９】
ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図２０Ｃに示されるような配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。
【０２６０】
ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図２０Ｃに示されるような配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図２０Ｃに示されるような配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ａ〜８Ｆの有用なフォーマットで利用する。
【０２６１】
いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、本明細書に記載の抗ＰＤ−１  ＡＢＤのいずれかを含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９３Ｒに示すようなＸＥＮＰ２５８０６または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４の重鎖および軽鎖の配列、図９３Ｒに示すようなＸＥＮＰ２５８１２または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８のＡＢＤの重鎖および軽鎖の配列、図９３Ｒに示すようなＸＥＮＰ２５８１３または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８の重鎖および軽鎖の配列、図９３Ｓに示すようなＸＥＮＰ２５８１９または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２の重鎖および軽鎖の配列を含む、抗ＰＤ−１  ＡＢＤを含む。いくつかの実施形態では、本発明のｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを含む。
【０２６２】
ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットでは、１つの好ましい実施形態は、本明細書に記載のＩＬ−１５複合体配列のうちのいずれかを利用する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５複合体は、Ｎ末端からＣ末端に向けて、ヒトＩＬ−１５Ｒαｓｕｓｈｉドメイン、ドメインリンカー、およびヒト成熟ＩＬ−１５ドメイン（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む）を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５複合体は、Ｎ末端からＣ末端に向けて、ヒトＩＬ−１５Ｒαｓｕｓｈｉドメイン、ドメインリンカー、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５複合体は、Ｎ末端からＣ末端に向けて、ヒトＩＬ−１５Ｒαｓｕｓｈｉドメイン、ドメインリンカー、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５複合体は、Ｎ末端からＣ末端に向けて、ヒトＩＬ−１５Ｒαｓｕｓｈｉドメイン、ドメインリンカー、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０２６３】
ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図９４Ａに示されるような１Ｃ１１＿Ｈ３Ｌ３の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤおよび図６９Ａに示されるようなＸＥＮＰ２２０２２の鎖１におけるようなＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５）を利用する。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４Ａに示されるような１Ｃ１１＿Ｈ３Ｌ３の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図６９Ｃに示されるようなＸＥＮＰ２５８５０の鎖２におけるようなＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４Ａに示されるような１Ｃ１１＿Ｈ３Ｌ３の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図１２６Ａに示されるようなＸＥＮＰ２９４８２の鎖１におけるようなＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４Ａに示されるような１Ｃ１１＿Ｈ３Ｌ３の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤならびに図１２４Ｃに示されるようなＸＥＮＰ２９２８６の鎖１におけるようなＩＬ−１５複合体（ｓｕｓｈｉドメイン−リンカー−ＩＬ−１５バリアントＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）を含む。
【０２６４】
いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．１３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびヒト成熟ＩＬ−１５（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０２６５】
いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびヒト成熟ＩＬ−１５（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０２６６】
いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびヒト成熟ＩＬ−１５（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０２６７】
Ｈ．ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα
この実施形態は、図６５Ｈに示され、４つのモノマーを含む（しかしヘテロダイマー融合タンパク質はペンタマーである）。これは一般に「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」と呼ばれ、「ｎｃ」は「非共有結合」を表す。ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマット（図６５Ｈ）は、第１のおよび第２のヘテロダイマーＦｃのＮ末端に融合したＶＨを含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）はヘテロダイマーＦｃ領域の一方のＣ末端に融合するが、対応する軽鎖はＶＨを含むＦａｂを形成するように別々にトランスフェクトされ、ＩＬ−１５は非共有結合のＩＬ−１５／Ｒα複合体が形成されるように別々にトランスフェクトされる。ＸＥＮＰ２２６４２およびＸＥＮＰ２２６４３などのｍＡｂ×ｎｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットの例示的なＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ヘテロダイマータンパク質のアミノ酸配列を図７３Ａ〜７３Ｂに提示する。
【０２６８】
いくつかの実施形態では、第１のモノマーは、重鎖、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む。第２のモノマーは、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインを有する重鎖、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−ドメインリンカー−ｓｕｓｈｉドメインを含む。第３のモノマーはＩＬ−１５ドメインである。第４の（および第５の）モノマーは軽鎖、ＶＬ−ＣＬである。この実施形態のためのＦｃバリアントの好ましい組み合わせは、図８Ａ−８Ｆに見られる。
【０２６９】
ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１４に示されるような配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１４に示されるような配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ａ〜８Ｆの有用なフォーマットで利用する。
【０２７０】
ＭＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図２０Ｃに示されるような配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。
【０２７１】
ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図２０Ｃに示されるような配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図２０Ｃに示されるような配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ａ〜８Ｆの有用なフォーマットで利用する。
【０２７２】
いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαは、本明細書に記載の抗ＰＤ−１  ＡＢＤのいずれかを含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９３Ｒに示すようなＸＥＮＰ２５８０６または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４の重鎖および軽鎖の配列、図９３Ｒに示すようなＸＥＮＰ２５８１２または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８のＡＢＤの重鎖および軽鎖の配列、図９３Ｒに示すようなＸＥＮＰ２５８１３または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８の重鎖および軽鎖の配列、図９３Ｓに示すようなＸＥＮＰ２５８１９または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２の重鎖および軽鎖の配列を含む、抗ＰＤ−１  ＡＢＤを含む。いくつかの実施形態では、本発明のｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＧに示されるような配列ＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを含む。
【０２７３】
ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットでは、１つの好ましい実施形態は、本明細書に記載のＩＬ−１５複合体配列のうちのいずれかを利用する。
【０２７４】
ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットでは、１つの好ましい実施形態は、本明細書に記載のＩＬ−１５複合体配列のうちのいずれかを利用する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５複合体は、ヒトＩＬ−１５Ｒαｓｕｓｈｉドメインおよびヒト成熟ＩＬ−１５ドメイン（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む）を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５複合体は、ヒトＩＬ−１５Ｒαｓｕｓｈｉドメインおよびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５複合体は、ヒトＩＬ−１５Ｒαｓｕｓｈｉドメインおよびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５複合体は、ヒトＩＬ−１５Ｒαｓｕｓｈｉドメインおよびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０２７５】
いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびヒト成熟ＩＬ−１５（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０２７６】
いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびヒト成熟ＩＬ−１５（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０２７７】
いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびヒト成熟ＩＬ−１５（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０２７８】
Ｉ．ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα
この実施形態は、図６５Ｉに示され、４つのモノマーを含む（しかしヘテロダイマー融合タンパク質はペンタマーである）。これは一般に「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」と呼ばれ、「ｎｃ」は「非共有結合」を表す。ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマット（図６５Ｈを参照）は、第１のおよび第２のヘテロダイマーＦｃのＮ末端に融合したＶＨを含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）はヘテロダイマーＦｃ領域の一方のＣ末端に融合するが、対応する軽鎖はＶＨを含むＦａｂを形成するように別々にトランスフェクトされ、ＩＬ−１５は非共有結合のＩＬ−１５／Ｒα複合体が形成されるように別々にトランスフェクトされる。ＸＥＮＰ２２６４４およびＸＥＮＰ２２６４５などのｍＡｂ×ｄｓＩＬ−１５／Ｒαフォーマットの例示的なＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ヘテロダイマータンパク質のアミノ酸配列を図７４Ａ〜７４Ｂに提示する。
【０２７９】
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１  ＡＢＤは、図７４Ａおよび７４Ｂの鎖２および鎖３に示されるような配列ニボルマブ＿Ｈ０を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１  ＡＢＤは、図７４Ａおよび７４Ｂの鎖４に示されるような配列ニボルマブ＿Ｌ０を含む。
【０２８０】
第１のモノマーは、重鎖、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む。第２のモノマーは、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインを有する重鎖、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３−ドメインリンカー−ｓｕｓｈｉドメインを含み、ｓｕｓｈｉドメインがシステイン残基を含むように操作されている。第３のモノマーは、ＩＬ−１５複合体が生理学的条件下で形成されるようにシステイン残基を含むように操作されたＩＬ−１５ドメインである。第４の（および第５の）モノマーは軽鎖、ＶＬ−ＣＬである。この実施形態のためのＦｃバリアントの有用な組み合わせは、図８Ａ−８Ｆに見られる。
【０２８１】
ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１４に示されるような配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。
【０２８２】
ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαは、図１４に示されるような配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９およびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαは、図１４に示されるような配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ａ〜８Ｆの有用なフォーマットで含む。
【０２８３】
ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図２０Ｃに示されるような配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。
【０２８４】
いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαは、図２０Ｃに示されるような配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３およびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを含む。ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図２０Ｃに示されるような配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ａ〜８Ｆの有用なフォーマットで利用する。
【０２８５】
いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαは、本明細書に記載の抗ＰＤ−１  ＡＢＤのいずれかを含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαは、図９３Ｒに示すようなＸＥＮＰ２５８０６または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４の重鎖および軽鎖の配列、図９３Ｒに示すようなＸＥＮＰ２５８１２または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８のＡＢＤの重鎖および軽鎖の配列、図９３Ｒに示すようなＸＥＮＰ２５８１３または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８の重鎖および軽鎖の配列、図９３Ｓに示すようなＸＥＮＰ２５８１９または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２の重鎖および軽鎖の配列を含む、抗ＰＤ−１  ＡＢＤを含む。いくつかの実施形態では、本発明のｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを含む。
【０２８６】
ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαフォーマットでは、１つの好ましい実施形態は、本明細書に記載のＩＬ−１５複合体配列のうちのいずれかを利用する。ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαフォーマットでは、１つの好ましい実施形態は、本明細書に記載のＩＬ−１５複合体配列のうちのいずれかを利用する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５複合体は、ヒトＩＬ−１５Ｒαｓｕｓｈｉドメインおよびヒト成熟ＩＬ−１５ドメイン（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む）を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５複合体は、ヒトＩＬ−１５Ｒαｓｕｓｈｉドメインおよびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５複合体は、ヒトＩＬ−１５Ｒαｓｕｓｈｉドメインおよびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５複合体は、ヒトＩＬ−１５Ｒαｓｕｓｈｉドメインおよびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０２８７】
いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびヒト成熟ＩＬ−１５（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０２８８】
いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびヒト成熟ＩＬ−１５（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＥに示されるような配列ＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＥに示されるような配列ＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＥに示されるような配列ＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０２８９】
いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびヒト成熟ＩＬ−１５（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０２９０】
Ｊ．セントラル−ＩＬ−１５／Ｒα
この実施形態は、図６５Ｊに示され、テトラマーを形成する４つのモノマーを含む。これは一般に「ｃｅｎｔｒａｌ−ＩＬ−１５／Ｒα」と呼ばれる。セントラル−ＩＬ−１５／Ｒαフォーマット（図６５Ｊを参照）は、ＩＬ−１５（ヘテロダイマーＦｃの一方側にさらに融合する）のＮ末端に組み換えで融合したＶＨと、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）（ヘテロダイマーＦｃの他方側にさらに融合する）のＮ末端に組み換えで融合したＶＨとを含むが、対応する軽鎖はＶＨを含むＦａｂを形成するように別々にトランスフェクトされる。セントラル−ＩＬ−１５／Ｒαフォーマットの例示的なＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ヘテロダイマータンパク質のアミノ酸配列を図７５に提示する。
【０２９１】
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１  ＡＢＤは、図７５の鎖１および鎖２に示されるような配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１  ＡＢＤは、図７５の鎖３に示されるような配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｌ３を含む。
【０２９２】
セントラル−ＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１４に示されるような配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。
【０２９３】
ｃｅｎｔｒａｌ−ＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。いくつかの実施形態では、セントラルＩＬ−１５／Ｒαは、図１４に示されるような配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９およびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを含む。いくつかの実施形態では、ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαは、図１４に示されるような配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ａ〜８Ｆの有用なフォーマットで含む。
【０２９４】
セントラル−ＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図２０Ｃに示されるような配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。
【０２９５】
いくつかの実施形態では、セントラルＩＬ−１５／Ｒαは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。いくつかの実施形態では、セントラルＩＬ−１５／Ｒαは、図２０Ｃに示されるような配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３およびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを含む。セントラル−ＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図２０Ｃに示されるような配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ａ〜８Ｆの有用なフォーマットで利用する。
【０２９６】
いくつかの実施形態では、セントラルＩＬ−１５／Ｒαは、本明細書に記載の抗ＰＤ−１  ＡＢＤのいずれかを含む。いくつかの実施形態では、セントラルＩＬ−１５／Ｒαは、図９３Ｒに示すようなＸＥＮＰ２５８０６または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４の重鎖および軽鎖の配列、図９３Ｒに示すようなＸＥＮＰ２５８１２または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８のＡＢＤの重鎖および軽鎖の配列、図９３Ｒに示すようなＸＥＮＰ２５８１３または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８の重鎖および軽鎖の配列、図９３Ｓに示すようなＸＥＮＰ２５８１９または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２の重鎖および軽鎖の配列を含む、抗ＰＤ−１  ＡＢＤを含む。いくつかの実施形態では、セントラル−ＩＬ−１５／Ｒαは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを含む。いくつかの実施形態では、セントラル−ＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを含む。いくつかの実施形態ではセントラル−ＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを含む。
【０２９７】
セントラル−ＩＬ−１５／Ｒαフォーマットでは、１つの好ましい実施形態は、本明細書に記載のＩＬ−１５複合体配列のうちのいずれかを利用する。セントラル−ＩＬ−１５／Ｒαフォーマットでは、１つの好ましい実施形態は、本明細書に記載のＩＬ−１５複合体配列のうちのいずれかを利用する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５複合体は、ヒトＩＬ−１５Ｒαｓｕｓｈｉドメインおよびヒト成熟ＩＬ−１５ドメイン（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む）を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５複合体は、ヒトＩＬ−１５Ｒαｓｕｓｈｉドメインおよびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５複合体は、ヒトＩＬ−１５Ｒαｓｕｓｈｉドメインおよびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５複合体は、ヒトＩＬ−１５Ｒαｓｕｓｈｉドメインおよびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０２９８】
いくつかの実施形態では、セントラルＩＬ−１５／Ｒαは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびヒト成熟ＩＬ−１５（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む）を含む。いくつかの実施形態では、セントラルＩＬ−１５／Ｒαは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、セントラルＩＬ−１５／Ｒαは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、セントラルＩＬ−１５／Ｒαは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０２９９】
いくつかの実施形態では、セントラルＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびヒト成熟ＩＬ−１５（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む）を含む。いくつかの実施形態では、セントラルＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、セントラルＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、セントラルＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０３００】
いくつかの実施形態では、セントラルＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびヒト成熟ＩＬ−１５（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む）を含む。いくつかの実施形態では、セントラルＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＧに示されるような配列ＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、セントラルＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、セントラルＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０３０１】
Ｋ．セントラルｓｃＩＬ−１５／Ｒα
この実施形態は図６４Ｋに示されており、そしてテトラマーを形成する４つのモノマーを含む。これは一般に「セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」と呼ばれ、「ｓｃ」は「一本鎖」を表す。セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマット（図６５Ｋを参照）は、ＩＬ−１５（ヘテロダイマーＦｃの一方側にさらに融合される）に融合したＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）のＮ末端に融合したＶＨと、ヘテロダイマーＦｃの他方側に融合したＶＨとを含むが、対応する軽鎖はＶＨを含むＦａｂを形成するように別々にトランスフェクトされる。セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットの例示的なＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１ヘテロダイマータンパク質のアミノ酸配列を図７６に提示する。
【０３０２】
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１  ＡＢＤは、図７６の鎖１および鎖２に示されるような配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１  ＡＢＤは、図７６の鎖３に示されるような配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｌ３を含む。
【０３０３】
第１のモノマーは、ＶＨ−ＣＨ１−［任意選択のドメインリンカー］−ｓｕｓｈｉドメイン−ドメインリンカー−ＩＬ−１５−［任意選択のドメインリンカー］−ＣＨ２−ＣＨ３を含み、第２の任意選択のドメインリンカーはしばしばヒンジドメインである。第２のモノマーは、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む。第３の（および第４の）モノマーは軽鎖、ＶＬ−ＣＬである。この実施形態のためのバリアントの好ましい組み合わせは、図８Ａ〜８Ｆに見られる。
【０３０４】
セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図１４に示されるような配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。
【０３０５】
ｃｅｎｔｒａｌ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。いくつかの実施形態では、セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図１４に示されるような配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９およびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを含む。いくつかの実施形態では、セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図１４に示されるような配列１Ｇ６＿Ｌ１．１９４＿Ｈ１．２７９を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ａ〜８Ｆの有用なフォーマットで含む。
【０３０６】
セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図２０Ｃに示されるような配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを利用する。
【０３０７】
いくつかの実施形態では、セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む。いくつかの実施形態では、セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図２０Ｃに示されるような配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３およびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを含む。セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットにおいて、１つの好ましい実施形態は、図２０Ｃに示されるような配列１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを図８Ａ〜８Ｆの有用なフォーマットで利用する。
【０３０８】
いくつかの実施形態では、セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、本明細書に記載の抗ＰＤ−１  ＡＢＤのいずれかを含む。いくつかの実施形態では、セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９３Ｒに示されるようなＸＥＮＰ２５８０６または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４の重鎖および軽鎖の配列、図９３Ｒに示されるようなＸＥＮＰ２５８１２または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８のＡＢＤの重鎖および軽鎖の配列、図９３Ｒに示されるようなＸＥＮＰ２５８１３または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８の重鎖および軽鎖の配列、図９３Ｓに示されるようなＸＥＮＰ２５８１９または１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２の重鎖および軽鎖の配列を含む、抗ＰＤ−１  ＡＢＤを含む。いくつかの実施形態では、セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図」９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを含む。いくつかの実施形態では、セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを含む。いくつかの実施形態では、セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤを含む。
【０３０９】
セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマットでは、１つの好ましい実施形態は、本明細書に記載のＩＬ−１５複合体配列のうちのいずれかを利用する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５複合体は、Ｎ末端からＣ末端に向けて、ヒトＩＬ−１５Ｒαｓｕｓｈｉドメイン、ドメインリンカー、およびヒト成熟ＩＬ−１５ドメイン（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む）を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５複合体は、Ｎ末端からＣ末端に向けて、ヒトＩＬ−１５Ｒαｓｕｓｈｉドメイン、ドメインリンカー、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５複合体は、Ｎ末端からＣ末端に向けて、ヒトＩＬ−１５Ｒαｓｕｓｈｉドメイン、ドメインリンカー、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５複合体は、Ｎ末端からＣ末端に向けて、ヒトＩＬ−１５Ｒαｓｕｓｈｉドメイン、ドメインリンカー、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０３１０】
いくつかの実施形態では、セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびヒト成熟ＩＬ−１５（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む）を含む。いくつかの実施形態では、セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４Ｎに示されるようなＸＥＮＰ２６９４０または１Ｃ１１＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０３１１】
いくつかの実施形態では、セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびヒト成熟ＩＬ−１５（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む）を含む。いくつかの実施形態では、セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＥに示されるようなＸＥＮＰ２８０２６または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０３１２】
いくつかの実施形態では、セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびヒト成熟ＩＬ−１５（ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む）を含む。いくつかの実施形態では、セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。いくつかの実施形態では、セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαは、図９４ＡＧに示されるようなＸＥＮＰ２８６５２または１Ｃ１１＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２の配列を有する抗ＰＤ−１  ＡＢＤ、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒト成熟ＩＬ−１５バリアントを含む。
【０３１３】
Ｖ．ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合モノマー
本発明のＦｃ融合タンパク質は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５受容体アルファ（ＩＬ−１５Ｒα）−Ｆｃ融合モノマーを含み、２０１６年１０月１４日に出願されたＷＯ２０１８／１７１９１８、ＷＯ２０１８／０７１９１９、ＵＳ２０１８／０１１８８０５、ＵＳ２０１８／０１１８８２８、ＵＳＳＮ６２／４０８，６５５、２０１７年１月６日に出願されたＵＳＳＮ６２／４４３，４６５、および２０１７年３月２８日に出願されたＵＳＳＮ６２／４７７，９２６を参照し、これらの全ての内容は、特にそれらに概説された図面、図面の説明、配列について、参照により本願に組み込まれる。
【０３１４】
いくつかの実施形態では、ヒトＩＬ−１５タンパク質は、ＮＣＢＩ基準配列番号ＮＰ＿０００５７６．１または配列番号１に示すアミノ酸配列を有する。いくつかの場合では、ヒトＩＬ−１５のコード配列を、ＮＣＢＩ基準配列番号ＮＭ＿０００５８５に示す。本明細書に概説されるＦｃ融合ヘテロダイマータンパク質の例示的なＩＬ−１５タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列または配列番号１のアミノ酸４９〜１６２を有し得る。
【０３１５】
配列番号１は、ＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳである。
【０３１６】
配列番号２は、ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳである。
【０３１７】
いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５タンパク質は、配列番号２に対して少なくとも９０％、例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列ならびにＣ４２Ｓ、Ｌ４５Ｃ、Ｑ４８Ｃ、Ｖ４９Ｃ、Ｌ５２Ｃ、Ｅ５３Ｃ、Ｅ８７Ｃ、およびＥ８９Ｃからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５タンパク質は、Ｎ１Ｄ、Ｎ４Ｄ、Ｄ８Ｎ、Ｄ３０Ｎ、Ｄ６１Ｎ、Ｅ６４Ｑ、Ｎ６５Ｄ、およびＱ１０８Ｅからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を有する。Ｆｃ融合タンパク質のＩＬ−１５タンパク質は、１、２、３、４、５、６、７、８、９個、またはそれ以上のアミノ酸置換を有することができる。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列ならびにＮ１Ｄ、Ｎ４Ｄ、Ｄ８Ｎ、Ｄ３０Ｎ、Ｄ６１Ｎ、Ｅ６４Ｑ、Ｎ６５Ｄ、およびＱ１０８Ｅからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を有する。他の実施形態では、アミノ酸置換はＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄである。他の実施形態では、アミノ酸置換はＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄである。いくつかの事例においては、アミノ酸置換はＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄである。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５タンパク質は、配列番号２およびＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ置換に対して少なくとも９７％または９８％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５タンパク質は、配列番号２およびＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ置換に対して少なくとも９７％または９８％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５タンパク質は、配列番号２およびＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ置換に対して少なくとも９６％または９７％の配列同一性を有する。
【０３１８】
いくつかの実施形態では、ヒトＩＬ−１５受容体α（ＩＬ−１５Ｒα）タンパク質は、ＮＣＢＩ基準配列番号ＮＰ＿００２１８０．１または配列番号３に示したアミノ酸配列を有する。いくつかの場合では、ヒトＩＬ−１５Ｒαのコード配列を、ＮＣＢＩ基準配列番号ＮＭ＿００２１８９．３に示す。本明細書に概説されるＦｃ融合ヘテロダイマータンパク質の例示的なＩＬ−１５Ｒαタンパク質は、配列番号３のｓｕｓｈｉドメイン（例えば、配列番号３のアミノ酸３１〜９５）、換言すると、配列番号４のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなることができる。
【０３１９】
配列番号３は、ＭＡＰＲＲＡＲＧＣＲＴＬＧＬＰＡＬＬＬＬＬＬＬＲＰＰＡＴＲＧＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰＳＴＶＴＴＡＧＶＴＰＱＰＥＳＬＳＰＳＧＫＥＰＡＡＳＳＰＳＳＮＮＴＡＡＴＴＡＡＩＶＰＧＳＱＬＭＰＳＫＳＰＳＴＧＴＴＥＩＳＳＨＥＳＳＨＧＴＰＳＱＴＴＡＫＮＷＥＬＴＡＳＡＳＨＱＰＰＧＶＹＰＱＧＨＳＤＴＴＶＡＩＳＴＳＴＶＬＬＣＧＬＳＡＶＳＬＬＡＣＹＬＫＳＲＱＴＰＰＬＡＳＶＥＭＥＡＭＥＡＬＰＶＴＷＧＴＳＳＲＤＥＤＬＥＮＣＳＨＨＬである。
【０３２０】
配列番号４は、ＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲである。
【０３２１】
いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５Ｒαタンパク質は、配列番号４のアミノ酸配列ならびにＤ９６、Ｐ９７、Ａ９８、Ｄ９６／Ｐ９７、Ｄ９６／Ｃ９７、Ｄ９６／Ｐ９７／Ａ９８、Ｄ９６／Ｐ９７／Ｃ９８、およびＤ９６／Ｃ９７／Ａ９８からなる群から選択されるアミノ酸挿入を有し、アミノ酸位置は完全長ヒトＩＬ−１５Ｒαタンパク質または配列番号３に対してである。例えば、Ｄ（例えばＡｓｐ）、Ｐ（例えばＰｒｏ）、Ａ（例えばＡｌａ）、ＤＰ（例えばＡｓｐ−Ｐｒｏ）、ＤＣ（例えばＡｓｐ−Ｃｙｓ）、ＤＰＡ（例えば、Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ａｌａ）、ＤＰＣ（例えば、Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ）、またはＤＣＡ（例えば、Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ａｌａ）のようなアミノ酸（複数可）は、配列番号４のＩＬ−１５Ｒαタンパク質のＣ末端に付加され得る。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５Ｒαタンパク質は、配列番号４のアミノ酸配列ならびにＫ３４Ｃ、Ａ３７Ｃ、Ｇ３８Ｃ、Ｓ４０Ｃ、およびＬ４２Ｃからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を有し、ここでアミノ酸位置は配列番号４に対してである。ＩＬ−１５Ｒαタンパク質は、１、２、３、４、５、６、７、８、またはそれ以上のアミノ酸変異（例えば、置換、挿入および／または欠失）を有することができる。
【０３２２】
ＶＩ．ドメインリンカー
いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５タンパク質はＦｃドメインのＮ末端に結合しており、ＩＬ−１５Ｒαタンパク質はＩＬ−１５タンパク質のＮ末端に結合している。他の実施形態では、ＩＬ−１５Ｒαタンパク質はＦｃドメインのＮ末端に結合しており、ＩＬ−１５Ｒαタンパク質はＩＬ−１５タンパク質に非共有結合している。さらに他の実施形態では、ＩＬ−１５Ｒαタンパク質はＦｃドメインのＣ末端に結合しており、ＩＬ−１５Ｒαタンパク質はＩＬ−１５タンパク質に非共有結合している。
【０３２３】
いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５タンパク質およびＩＬ−１５Ｒαタンパク質はリンカーを介してともに結合している（例えば、「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマット）。任意選択で、タンパク質はリンカーを介して結合せず、本明細書に概説されるように天然の自己集合またはジスルフィド結合のいずれかを利用する。他の態様において、ＩＬ−１５タンパク質およびＩＬ−１５Ｒαタンパク質は非共有結合している。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５タンパク質はリンカーを介してＦｃドメインに結合している。特定の実施形態では、ＩＬ−１５タンパク質は、例えばリンカーを有さずに直接Ｆｃドメインに結合している。特定の実施形態では、ＩＬ−１５タンパク質は、ヒンジ領域またはその断片を介してＦｃドメインに結合している。他の実施形態では、ＩＬ−１５Ｒαタンパク質はリンカーを介してＦｃドメインに結合している。他の実施形態では、ＩＬ−１５Ｒαタンパク質は、例えばリンカーを有さずに直接Ｆｃドメインに結合している。特定の実施形態では、ＩＬ−１５Ｒαタンパク質はヒンジ領域またはその断片を介してＦｃドメインに結合している。任意選択的に、リンカーは、ＩＬ−１５タンパク質またはＩＬ−１５Ｒαタンパク質をＦｃドメインに結合するためには使用されない。
【０３２４】
いくつかの場合では、ＰＤ−１  ＡＢＤはドメインリンカーなどのリンカーを介してＦｃドメインのＮ末端に共有結合している。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１  ＡＢＤは、例えばリンカーを有さずに直接Ｆｃドメインに結合している。特定の実施形態では、ＰＤ−１  ＡＢＤは、ヒンジ領域またはその断片を介してＦｃドメインに結合している。
【０３２５】
いくつかの実施形態では、リンカーは、本明細書に概説される任意の２つのドメインをともに連結するために使用される「ドメインリンカー」である。任意の好適なリンカーを使用することができるが、多くの実施形態は、例えば、ｎが少なくとも１（一般に１〜２〜３〜４〜５）の整数である、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎ、および（ＧＧＧＳ）ｎを含むグリシン−セリンポリマー、ならびに各ドメインがその生物学的機能を保持できるように十分な長さおよび柔軟性を有する２つのドメインの組み換え結合を可能にする任意のペプチド配列を利用する。場合によっては、以下に概説する「鎖性（ｓｔｒａｎｄｅｄｎｅｓｓ）」に注意を払って、荷電ドメインリンカーは、本明細書において考察し図９および１０に示すように使用することができる。
【０３２６】
ＶＩＩ．ＰＤ−１抗体モノマー
本発明は、ＰＤ−１およびＩＬ−２Ｒβおよび共通のガンマ鎖（γｃ、ＣＤ１３２）を発現する細胞に結合する二重特異性ヘテロダイマータンパク質の生成に関する。二重特異性ヘテロダイマータンパク質は、免疫チェックポイント抗原に結合することができる任意の有用な抗体フォーマットの抗体モノマーを含み得る。いくつかの実施形態では、抗体モノマーは、Ｆｃドメインに連結したＦａｂまたはｓｃＦｖを含む。いくつかの場合では、ＰＤ−１抗体モノマーは抗ＰＤ１（ＶＨ）−ＣＨ１−Ｆｃおよび抗ＰＤ−１  ＶＬ−Ｃκを含む。いくつかの場合において、ＰＤ−１抗体モノマーは抗ＰＤ−１  ｓｃＦｖ−Ｆｃを含む。
【０３２７】
いくつかの実施形態では、本発明のヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質のＰＤ−１標的化アームは、ＸＥＮＰ２２５５３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３、ＸＥＮＰ２５８０６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４、ＸＥＮＰ２５８１２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８、ＸＥＮＰ２５８１３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８、ＸＥＮＰ２５８１９からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２、ＸＥＮＰ２６９４０からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２、ＸＥＮＰ２８０２６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０、およびＸＥＮＰ２８６５２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２からなる群のＣＤＲから選択されるＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤ２、およびＶＨＣＤＲ３の配列は、図９５Ａ〜９５Ｊに示される配列、および対応する配列識別子から選択される。いくつかの実施形態では、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤ２、およびＶＨＣＤＲ３の配列は、図９６Ａ〜９６Ｆに示される配列、および対応する配列識別子から選択される。
【０３２８】
いくつかの実施形態では、本発明のヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質のＰＤ−１標的化アームは、ＸＥＮＰ２２５５３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３、ＸＥＮＰ２５８０６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４、ＸＥＮＰ２５８１２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８、ＸＥＮＰ２５８１３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８、ＸＥＮＰ２５８１９からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２、ＸＥＮＰ２６９４０からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２、ＸＥＮＰ２８０２６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０、およびＸＥＮＰ２８６５２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２からなる群から選択される対からの可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化アームの可変重鎖ドメインは、ＸＥＮＰ２２５５３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３、ＸＥＮＰ２５８０６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４、ＸＥＮＰ２５８１２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８、ＸＥＮＰ２５８１３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８、ＸＥＮＰ２５８１９からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２、ＸＥＮＰ２６９４０からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２、ＸＥＮＰ２８０２６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０、ＸＥＮＰ２８６５２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２、および対応する配列識別子からの対からなる群から選択される可変軽鎖ドメインの配列に対し、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を有するＰＤ−１標的化アームの可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインの配列に対し、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を有する。
【０３２９】
追加の例示的な抗体断片の例示的な実施形態は、ＸＥＮＰ２１４８０（鎖２、図６５Ａ）、ＸＥＮＰ２２０２２（鎖２および３、図６５Ｄ）、ＸＥＮＰ２２１１２（鎖１および４、図６５Ｅ）、ＸＥＮＰ２２６４１（鎖１および３、図６５Ｆ）、ＸＥＮＰ２２６４２（鎖１〜３、図６５Ｈ）、およびＸＥＮＰ２２６４４（鎖１〜３、図６５Ｉ）に提示される。
【０３３０】
ＡＢＤは、ＦａｂフォーマットまたはｓｃＦｖフォーマットなどの様々なフォーマットであり得る。本発明で使用するための例示的なＡＢＤは、ＷＯ２０１７／２１８７０７およびＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０５９８８７に開示されており、図、図の説明、および配列表を含む内容は、全ての目的のためにその全体が本明細書に組み込まれる。
【０３３１】
場合によっては、ＰＤ−１に結合する適切なＡＢＤは、ＵＳ２０１８／０１１８８３６の図１１および１２、ならびに本明細書の図１３および図１４および配列番号に概説されているものに示されている。当業者には理解されるように、好適なＡＢＤは、下線が付されているものとしてか、または、上述されるような、異なる付番スキームが使用される場合、ＵＳ２０１８／０１１８８３６の図１１および１２のｖｈおよびｖｌの配列内の他の整合を使用して同定されるＣＤＲかのいずれかとして、本明細書の図に描かれているような６個のＣＤＲのセットを含み得る。好適なＡＢＤはまた、ｓｃＦｖまたはＦａｂとして使用される、これらの図に示されるようなｖｈおよびｖｌの全体の配列をも含み得る。特定のｓｃＦｖ配列は、特定の荷電リンカーとともに、ＵＳ２０１８／０１１８８３６の図１１に示されているが、図７に示されているものなどの他のリンカーも使用することができる。ＰＤ−１に対するＦｖを含む本明細書中の実施形態の多くにおいて、ＰＤ−１に結合するのはｓｃＦｖモノマーである。ＵＳ２０１８／０１１８８３６では、図１１は好ましいｓｃＦｖ配列を示し、図１２は好適なＦａｂ配列を示すが、本明細書で論じるように、ｖｈおよびｖｌはいずれかの構成でも使用できる。
【０３３２】
Ｂ．抗体
以下で考察するように、「抗体」という用語は全般的に使用される。本発明で使用される抗体は、本明細書に記載されているようにいくつかのフォーマットをとることができ、本明細書に記載され図に示される従来の抗体、および抗体誘導体、断片および模倣物を含む。本発明は、チェックポイント抗原結合ドメインおよびＦｃドメインを含む抗体融合タンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、抗体融合タンパク質は、本明細書に記載のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃタンパク質と二重特異性ヘテロダイマータンパク質を形成する。他の実施形態では、抗体融合タンパク質は、チェックポイント抗原結合ドメインおよびＦｃドメインを含む別の抗体融合タンパク質と二重特異性ヘテロダイマータンパク質を形成する。そのようなＰＤ−１標的化ヘテロダイマータンパク質の実施形態には、ＸＥＮＰ２１４８０、ＸＥＮＰ２２０２２、ＸＥＮＰ２２１１２、ＸＥＮＰ２２６４１、ＸＥＮＰ２２６４２、ＸＥＮＰ２２６４４、ＸＥＮＰ２５８５０、およびＸＥＮＰ２５９３７が含まれるが、これらに限定されない。
【０３３３】
従来の抗体構造単位は、典型的にはテトラマーを含む。各テトラマーは、典型的には、２本の同一のポリペプチド鎖対からなり、各対は、１本の「軽」鎖（典型的には、約２５ｋＤａの分子量）と、１本の「重」鎖（典型的には、約５０〜７０ｋＤａの分子量）とを有する。ヒト軽鎖は、カッパ軽鎖およびラムダ軽鎖として分類される。本発明は概して、ＩｇＧクラスに基づく抗体または抗体断片（抗体モノマー）に関し、これは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含むがこれらに限定されない、いくつかのサブクラスを有する。一般に、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４が、ＩｇＧ３よりも頻繁に使用される。ＩｇＧ１は、３５６（ＤまたはＥ）および３５８（ＬまたはＭ）で多型を有する異なるアロタイプを有することに留意すべきである。本明細書に図示される配列は３５６Ｄ／３５８Ｍアロタイプを使用するが、他のアロタイプが本明細書に含まれる。すなわち、本明細書に含まれるＩｇＧ１  Ｆｃドメインを含む任意の配列は、３５６Ｄ／３５８Ｍアロタイプの代わりに３５６Ｅ／３５８Ｌを有することができる。
【０３３４】
さらに、本明細書中の配列の多くは、位置２２０の少なくとも１つのシステインをセリンで置換したものであり、これは一般に、本明細書に記載の配列の大部分について「ｓｃＦｖモノマー」側にあるが、ジスルフィド形成を減少させるために「Ｆａｂモノマー」側、またはその両方にすることもできる。本明細書中の配列内に具体的に含まれるのは、これらのシステインの一方または両方が置換されたもの（Ｃ２２０Ｓ）である。
【０３３５】
したがって、本明細書で使用されるとき、「アイソタイプ」は、それらの定常領域の化学的および抗原的特徴によって定義される免疫グロブリンの任意のサブクラスを意味する。治療用抗体は、アイソタイプおよび／またはサブクラスのハイブリッドも含み得ることを理解されたい。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、ＵＳ２００９／０１６３６９９に示されるように、本発明は、ＩｇＧ１／Ｇ２ハイブリッドのｐＩ工学を包含する。
【０３３６】
各鎖のアミノ末端部分は、「Ｆｖドメイン」または「Ｆｖ領域」として当該技術分野および本明細書では一般に称される、抗原認識に主に関与する約１００〜１１０またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含む。可変領域において、重鎖および軽鎖のＶドメインの各々について３つのループが集約されて、抗原結合部位を形成する。ループの各々は、相補性決定領域（これ以降「ＣＤＲ」と称される）と称され、ここではアミノ酸配列における変形が最も顕著である。「可変」とは、可変領域のある特定のセグメントが抗体間で配列において大きく異なるという事実を指す。可変領域内の可変性は均一に分布していない。その代わり、Ｖ領域は、各々が９〜１５アミノ酸長またはそれ以上長い「超可変領域」と称される極可変性のより短い領域によって隔てられた１５〜３０のアミノ酸のフレームワーク領域（ＦＲ）と称される比較的不変の区間からなる。
【０３３７】
各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端へとＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４の順序で配列された３つの超可変領域（「相補性決定領域」、「ＣＤＲ」）および４つのＦＲで構成される。
【０３３８】
超可変領域は、一般に、軽鎖可変領域においておよそ、アミノ酸残基２４〜３４（ＬＣＤＲ１、「Ｌ」は軽鎖を表す）、５０〜５６（ＬＣＤＲ２）、および８９〜９７（ＬＣＤＲ３）、ならびに重鎖可変領域においてはおよそ約３１〜３５Ｂ（ＨＣＤＲ１、「Ｈ」は重鎖を表す）、５０〜６５（ＨＣＤＲ２）、および９５〜１０２（ＨＣＤＲ３）からのアミノ酸残基（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，ＳＥＱＵＥＮＣＥＳ  ＯＦ  ＰＲＯＴＥＩＮＳ  ＯＦ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬ  ＩＮＴＥＲＥＳＴ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））ならびに／または超可変ループを形成する残基（例えば、軽鎖可変領域における残基２６〜３２（ＬＣＤＲ１）、５０〜５２（ＬＣＤＲ２）、および９１〜９６（ＬＣＤＲ３）、ならびに重鎖可変領域における２６〜３２（ＨＣＤＲ１）、５３〜５５（ＨＣＤＲ２）、および９６−１０１（ＨＣＤＲ３）を包含する（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ  （１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７）。本発明の特定のＣＤＲを以下に記載する。
【０３３９】
当業者には理解されるように、ＣＤＲの正確な付番および配置は、異なる付番システムで異なり得る。しかしながら、可変重鎖および／または可変軽鎖配列の開示は、関連する（固有の）ＣＤＲの開示を含むことが理解されるべきである。したがって、各可変重領域の開示は、ｖｈＣＤＲ（例えば、ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、およびｖｈＣＤＲ３）の開示であり、各可変軽領域の開示は、ｖｌＣＤＲ（例えば、ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、およびｖｌＣＤＲ３）の開示である。
【０３４０】
ＣＤＲ付番の有用な比較は以下のとおりであり、Ｌａｆｒａｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７（１）：５５−７７（２００３）を参照されたい。
【表１】
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【０３４１】
本明細書全体を通して、Ｋａｂａｔ付番系は一般に、可変ドメイン内の残基（およそ、軽鎖可変領域の残基１〜１０７および重鎖可変領域の残基１〜１１３）を参照するときに使用され、ＥＵ付番系は、Ｆｃ領域に対するものである（例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．、上述（１９９１））。
【０３４２】
本発明は、多数の異なるＣＤＲセットを提供する。この場合において、「完全ＣＤＲセット」は、３つの可変軽鎖および３つの可変重鎖ＣＤＲ、例えばｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、ｖｌＣＤＲ３、ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、およびｖｈＣＤＲ３を含む。これらは、それぞれより大きな可変軽または可変重鎖ドメインの一部であり得る。さらに、本明細書により完全に概説されているように、可変重および可変軽鎖ドメインは、重鎖および軽鎖が使用されるとき（例えば、Ｆａｂが使用されるとき）には別個のポリペプチド鎖上に、またはｓｃＦｖ配列の場合には単一ポリペプチド鎖上にあり得る。
【０３４３】
ＣＤＲは、抗原結合の形成、またはより具体的には、抗体のエピトープ結合部位の形成に寄与する。「エピトープ」とは、パラトープとして知られている抗体分子の可変領域内の特異的抗原結合部位と相互作用する決定基を指す。エピトープは、アミノ酸または糖側鎖などの分子の群分けであり、通常、特異的構造特性、ならびに特異的電荷特性を有する。単一抗原が、２つ以上のエピトープを有してもよい。
【０３４４】
エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基（エピトープの免疫優性構成要素とも称される）および結合に直接関与しない他のアミノ酸残基、例えば、特異的抗原結合ペプチドによって効果的に遮断されるアミノ酸残基、換言すると、特異的抗原結合ペプチドのフットプリント内にあるアミノ酸残基を含み得る。
【０３４５】
エピトープは、立体配座または直線状のいずれかであってもよい。立体配座エピトープは、直線状のポリペプチド鎖の異なるセグメントからのアミノ酸の空間的な並置によって作り出される。直線状エピトープは、ポリペプチド鎖内の隣接アミノ酸残基によって作り出されるものである。立体配座エピトープおよび非立体配座エピトープは、変性溶媒の存在下で前者への結合は失われるが、後者への結合は失われないという点で区別され得る。
【０３４６】
エピトープは、典型的には、固有の空間立体構造内に、少なくとも３個、より一般的には、少なくとも５個、または８〜１０個のアミノ酸を含む。同一のエピトープを認識する抗体は、ある抗体の別の抗体の標的抗原への結合を遮断する能力、例えば、「ビニング」を示す単純な免疫アッセイにおいて検証され得る。以下に概説するように、本発明は、列挙された抗原結合ドメインおよび本明細書の抗体を含むだけでなく、列挙された抗原結合ドメインによって結合されるエピトープとの結合について競合するものも含む。
【０３４７】
各鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能に主に関与する定常領域を定義する。Ｋａｂａｔらは、重鎖および軽鎖の可変領域の多数の一次配列を収集した。配列の保存の程度に基づき、Ｋａｂａｔらは、個々の一次配列をＣＤＲおよびフレームワークに分類し、そのリストを作成した（参照により全体が組み込まれるＳＥＱＵＥＮＣＥＳ  ＯＦ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬ  ＩＮＴＥＲＥＳＴ，５ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｎｏ．９１−３２４２，Ｅ．Ａ．Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．を参照されたい）。
【０３４８】
免疫グロブリンのＩｇＧサブクラスには、重鎖においていくつかの免疫グロブリンドメインがある。本明細書の「免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメイン」とは、明確に異なる三次構造を有する免疫グロブリンの領域を意味する。定常重（ＣＨ）ドメインおよびヒンジドメインを含む重鎖ドメインが本発明における関心対象である。ＩｇＧ抗体の関連において、ＩｇＧアイソタイプは、各々、３つのＣＨ領域を有する。したがって、ＩｇＧの関連における「ＣＨ」ドメインは以下の通りである。「ＣＨ１」は、Ｋａｂａｔと同様のＥＵインデックスに従って１１８〜２２０位を指す。「ＣＨ２」は、Ｋａｂａｔと同様のＥＵインデックスに従って２３７〜３４０位を指し、「ＣＨ３」は、Ｋａｂａｔと同様のＥＵインデックスに従って３４１〜４４７位を指す。本明細書において示され、以下に記載されるように、ｐＩバリアントは、ＣＨ領域、および以下に論じられるように、ヒンジ領域のうちの１つ以上に存在し得る。
【０３４９】
重鎖のＩｇドメインの別の種類は、ヒンジ領域である。本明細書において、「ヒンジ」または「ヒンジ領域」または「抗体ヒンジ領域」または「免疫グロブリンヒンジ領域」とは、抗体の第１および第２の定常ドメイン間のアミノ酸を含む可動性ポリペプチドを意味する。構造に関して、ＩｇＧ  ＣＨ１ドメインはＥＵの２２０位で終了し、ＩｇＧ  ＣＨ２ドメインは残基ＥＵの２３７位で開始する。したがって、ＩｇＧについては、抗体ヒンジは、位置２２１（ＩｇＧ１中のＤ２２１）から２３６（ＩｇＧ１中のＧ２３６）を含むように本明細書で定義され、付番は、Ｋａｂａｔと同様にＥＵインデックスに従う。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域に関連して、下側ヒンジが含まれ、「下側ヒンジ」は一般に位置２２６または２３０を指す。本明細書に記載のとおり、ｐＩバリアントはヒンジ領域にも同様に作製することができる。
【０３５０】
軽鎖は、一般に、可変軽鎖ドメイン（軽鎖ＣＤＲを含み、可変重鎖ドメインとともにＦｖ領域を形成する）、および定常軽領域（しばしばＣＬまたはＣκと称される）の２つのドメインを含む。
【０３５１】
上に概説される追加の置換のための別の目的とする領域は、Ｆｃ領域である。
【０３５２】
本明細書中に記載され、当技術分野において既知のとおり、本発明のＡＢＤは、重鎖および軽鎖内に異なるドメインを含み、これもまた重複し得る。これらのドメインは、Ｆｃドメイン、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ヒンジドメイン、重鎖定常ドメイン（ＣＨ１−ヒンジ−ＦｃドメインまたはＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）、可変重鎖ドメイン、可変軽鎖ドメイン、軽鎖定常ドメイン、Ｆａｂドメイン、およびｓｃＦｖドメインを含むが、これらに限定されない。
【０３５３】
したがって、「Ｆｃドメイン」は、−ＣＨ２−ＣＨ３ドメイン、および場合によりヒンジドメインを含む。本明細書の実施形態では、ｓｃＦｖがＦｃドメインに結合しているとき、Ｆｃドメインのヒンジの全部または一部に結合しているのはｓｃＦｖ構築物のＣ末端であり、例えば、それは一般にヒンジの始まりである配列ＥＰＫＳ（配列番号１２２０）に結合している。重鎖は、可変重鎖ドメインおよび定常ドメインを含み、これは、ＣＨ１−任意選択的なＣＨ２−ＣＨ３を含むヒンジ−Ｆｃドメインを含む。軽鎖は、可変軽鎖および軽鎖定常ドメインを含む。ｓｃＦｖは、可変重鎖、ｓｃＦｖリンカー、および可変軽鎖ドメインを含む。本明細書に概説した構築物および配列のほとんどにおいて、可変軽鎖のＣ末端はｓｃＦｖリンカーのＮ末端に結合し、そのＣ末端は可変重鎖のＮ末端に結合している（Ｎ−ｖｈ−リンカー−ｖｌ−Ｃ）が、これは切り替えることができる（Ｎ−ｖｌ−リンカー−ｖｈ−Ｃ）。
【０３５４】
本発明のいくつかの実施形態は、少なくとも１つのｓｃＦｖドメインを含み、それは天然に生じないが、ｓｃＦｖリンカーによってともに連結した可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインとを一般に含む。本明細書に概説されるように、ｓｃＦｖドメインは、一般に、ＶＨ−ｓｃＦｖリンカー−ＶＬとしてＮ末端からＣ末端に向かう向きとされているが、これは、ｓｃＦｖドメイン（または、Ｆａｂ由来のＶＨおよびＶＬ配列を使用して構築されたドメイン）のいずれに関しても、フォーマットに応じて一方または両方の端部に任意選択のリンカーを用いて、ＶＬ−ｓｃＦｖリンカー−ＶＨへと逆転させることができる（全体的にＵＳ６２／３５３，５１１の図４Ａ〜４Ｂを参照）。
【０３５５】
本明細書に示されるように、組換え技術によって生成される従来のペプチド結合を含めて、使用され得る好適なｓｃＦｖリンカーは、ある数存在する。リンカーペプチドは、主に、以下のアミノ酸残基：Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、またはＴｈｒを含み得る。リンカーペプチドは、それらが所望の活性を保持するように互いに対して正しい立体配座をとるような方法で２つの分子を結合させるのに十分な長さを有するべきである。一実施形態では、リンカーは、約１〜５０アミノ酸長、好ましくは約１〜３０アミノ酸長である。一実施形態では、１〜２０アミノ酸長のリンカーが使用され得、いくつかの実施形態において、約５〜約１０アミノ酸が使用されている。有用なリンカーには、例えば、ｎが少なくとも１つの整数（一般に３〜４）である（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎ、および（ＧＧＧＳ）ｎ、グリシン−アラニンポリマー、アラニン−セリンポリマー、ならびに他の可動性リンカーを含むグリシンセリンポリマーが含まれる。代替的に、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、またはポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとのコポリマーを含むがこれらに限定されない様々な非タンパク質性ポリマーが、リンカーとして有用であり得、すなわちリンカーとして有用であり得る。
【０３５６】
他のリンカー配列は、任意の長さのＣＬ／ＣＨ１ドメインの任意の配列を含むが、ＣＬ／ＣＨ１ドメインの全ての残基を含まない場合があり、例えば、ＣＬ／ＣＨ１ドメインの最初の５〜１２アミノ酸残基である。リンカーは、免疫グロブリン軽鎖、例えば、ＣκまたはＣλに由来し得る。リンカーは、例えば、Ｃγ１、Ｃγ２、Ｃγ３、Ｃγ４、Ｃα１、Ｃα２、Ｃδ、Ｃε、およびＣμを含む任意のアイソタイプの免疫グロブリン重鎖に由来し得る。リンカー配列はまた、Ｉｇ様タンパク質（例えば、ＴＣＲ、ＦｃＲ、ＫＩＲ）、ヒンジ領域由来配列、および他のタンパク質由来の他の天然配列などの他のタンパク質に由来してもよい。
【０３５７】
いくつかの実施形態では、リンカーは、本明細書に概説される任意の２つのドメインをともに連結するために使用される「ドメインリンカー」である。任意の好適なリンカーを使用することができるが、多くの実施形態は、例えば、ｎが少なくとも１（および一般に３〜４〜５）である、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎ、および（ＧＧＧＳ）ｎを含むグリシン−セリンポリマー、ならびに各ドメインがその生物学的機能を保持できるように十分な長さおよび柔軟性を有する２つのドメインの組換え結合を可能にする任意のペプチド配列を利用する。。場合によっては、以下に概説する「鎖性（ｓｔｒａｎｄｅｄｎｅｓｓ）」に注意を払って、ｓｃＦｖリンカーのいくつかの実施形態において使用されるように、荷電ドメインリンカーを使用することができる。
【０３５８】
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖリンカーは、荷電ｓｃＦｖリンカーであり、そのいくつかは図１０に示されている。したがって、本発明はさらに、第１のモノマーと第２のモノマー（例えば、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαモノマーとＰＤ−１  ＡＢＤモノマー）との間のｐＩの分離を促進するための荷電ｓｃＦｖリンカーを提供する。すなわち、正または負のいずれかの荷電ｓｃＦｖリンカー（または異なるモノマー上にｓｃＦｖを使用する足場の場合は両方）を組み込むことによって、これは、Ｆｃドメインをさらに変化させることなく、荷電リンカーを含むモノマーのｐＩを変えることを可能にする。これらの荷電リンカーは、標準的なリンカーを含む任意のｓｃＦｖ中に置換することができる。また、当業者には理解されるように、ｐＩの所望の変化に従って、荷電ｓｃＦｖリンカーが正しい「鎖」またはモノマー上に使用される。例えば、本明細書で論じられるように、トリプルＦフォーマットヘテロダイマー抗体を作製するために、所望の抗原結合ドメインのそれぞれについてのＦｖ領域の元のｐＩが計算され、そしてｓｃＦｖを作製するために１つが選択され、ｐＩに応じて、正または負のリンカーのいずれかが選択される。
【０３５９】
荷電ドメインリンカーも同様に、本発明のモノマーのｐＩ分離を増加させるために使用することができ、したがって、図１０に含まれるものは、リンカーが利用される、本明細書の任意の実施形態で使用することができる。
【０３６０】
一実施形態では、抗体は、それがｐＩ工学などのヘテロダイマーを生成するように操作することができる少なくとも１つの定常ドメインを含む限り、抗体断片である。使用され得る他の抗体断片は、ｐＩ操作された本発明のＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ヒンジおよびＣＬドメインのうちの１つ以上を含む断片を含む。特に、図６５Ａ〜６５Ｋに示すフォーマットは、「二重特異性ヘテロダイマー融合タンパク質」と呼ばれるＰＤ−１標的化ヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質であり、タンパク質が、ヘテロダイマーＦｃドメインに自己集合した少なくとも２つの関連Ｆｃ配列、およびＦａｂとしてまたはｓｃＦｖとしてであれ少なくとも１つのＦｖ領域を有することを意味する。
【０３６１】
Ｃ．キメラおよびヒト化抗体
いくつかの実施形態では、本明細書の抗体は、異なる種由来の混合物、例えばキメラ抗体および／またはヒト化抗体に由来し得る。一般に、「キメラ抗体」と「ヒト化抗体」の両方は、２つ以上の種由来の領域を組み合わせる抗体を指す。例えば、「キメラ抗体」は伝統的に、マウス（または場合によってはラット）由来の可変領域（複数可）およびヒト由来の定常領域（複数可）を含む。「ヒト化抗体」は一般に、可変ドメインフレームワーク領域がヒト抗体に見出される配列でスワップされた、非ヒト抗体を指す。一般に、ヒト化抗体において、ＣＤＲを除く抗体全体は、ヒト由来のポリヌクレオチドによってコードされるか、またはそのＣＤＲ内を除いてそのような抗体と同一である。非ヒト生物を起源とする核酸によって一部またはすべてがコードされるＣＤＲを、ヒト抗体可変領域のベータシートフレームワークにグラフティングして、その特異性がグラフティングされたＣＤＲによって決定される抗体を作製する。そのような抗体の生成は、例えば、ＷＯ９２／１１０１８、Ｊｏｎｅｓ，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ３２１：５２２−５２５、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６に記載され、参照により全体が組み込まれる。選択されたアクセプターフレームワーク残基の、対応するドナー残基への「逆変異」が、最初の移植された構築物において失われた親和性を回復するためにしばしば必要とされる（ＵＳ５５３０１０１、ＵＳ５５８５０８９、ＵＳ５６９３７６１、ＵＳ５６９３７６２、ＵＳ６１８０３７０、ＵＳ５８５９２０５、ＵＳ５８２１３３７、ＵＳ６０５４２９７、ＵＳ６４０７２１３、参照により全体が組み込まれる）。ヒト化抗体はまた、最適には、免疫グロブリン定常領域、典型的にはヒト免疫グロブリンの免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部分、通常は全部を含み、したがって典型的にはヒトＦｃ領域を含むであろう。ヒト化抗体はまた、遺伝子操作された免疫系を有するマウスを用いて生成され得る。Ｒｏｑｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２０：６３９−６５４、参照により全体が本明細書に組み込まれる。非ヒト抗体をヒト化および再形成するための様々な技法および方法は、当技術分野で周知である（参照により全体が組み込まれる、Ｔｓｕｒｕｓｈｉｔａ  ＆  Ｖａｓｑｕｅｚ，２００４，Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｂ  Ｃｅｌｌｓ，５３３−５４５，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（ＵＳＡ）、およびそこで引用される参考文献を参照されたい）。ヒト化方法には、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ，ＵＳＡ  ８６：１００２９−３３、Ｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：１０２９−１０３５、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ  Ｎａ���ｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ８９：４２８５−９，Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７（２０）：４５９３−９、Ｇｏｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８８：４１８１−４１８５、Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ  １１：３２１−８に記載される方法が含まれ、参照により全体が組み込まれる。ヒト化、または非ヒト抗体の可変領域の免疫原性を低下させる他の方法には、例えば、参照により全体が組み込まれるＲｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：９６９−９７３に記載されているような表面再構成法が含まれ得る。特定の実施形態では、本発明の抗体は、特定の生殖細胞系列重鎖免疫グロブリン遺伝子由来の重鎖可変領域および／または特定の生殖細胞系列軽鎖免疫グロブリン遺伝子由来の軽鎖可変領域を含む。例えば、そのような抗体は、特定の生殖細胞系列配列「の産物」であるまたはそれ「に由来する」重鎖または軽鎖可変領域を含むヒト抗体を含み得るかまたはそれからなり得る。ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列「の産物」であるまたはそれ「に由来する」ヒト抗体は、ヒト抗体のアミノ酸配列をヒト生殖細胞系列免疫グロブリンのアミノ酸配列と比較することと、ヒト抗体の配列に最も近い配列である（すなわち、最も高い同一性％）ヒト生殖細胞系列免疫グロブリンを選択することとによって、そのようなものとして特定され得る。特定のヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列「の産物」であるまたはそれ「に由来する」ヒト抗体は、例えば、天然に生じる体細胞変異または部位特異的変異の意図的導入に起因して、生殖細胞系列配列と比較してアミノ酸の相違を含み得る。しかしながら、ヒト化抗体は、典型的には、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列とアミノ酸配列において少なくとも９０％同一であり、他の種の生殖細胞系列免疫グロブリンアミノ酸配列（例えば、マウス生殖細胞系列配列）と比較したときに、抗体をヒト配列に由来するものとして特定するアミノ酸残基を含む。ある特定の場合には、ヒト化抗体は、生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と、アミノ酸配列において少なくとも９５、９６、９７、９８もしくは９９％、または少なくとも９６％、９７％、９８％、または９９％までも同一であり得る。典型的には、特定のヒト生殖細胞系配列に由来するヒト化抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と１０〜２０個以下のアミノ酸差しか示さない（本明細書中の任意のスキューバリアント、ｐＩバリアント、および除去バリアントの導入前、すなわち、本発明のバリアントの導入前は、バリアントの数は一般に少ない）。ある特定の場合には、ヒト化抗体は、生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列とは５個以下、またはさらには４、３、２、もしくは１個以下のアミノ酸差しか示さない場合がある（同様に、本明細書における任意のスキューバリアント、ｐＩバリアント、および除去バリアントの導入前、すなわち、本発明のバリアントの導入前は、���リアントの数は一般に少ない）。一実施形態では、親抗体は、当技術分野で既知のとおり、親和性成熟されたものである。構造に基づく方法が、例えば、ＵＳ７，６５７，３８０に記載されているように、ヒト化および親和性成熟のために用いられ得る。Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９４：１５１−１６２；Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（１６）：１０６７８−１０６８４；Ｒｏｓｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１（３７）：２２６１１−２２６１８；Ｒａｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：８９１０−８９１５；Ｋｒａｕｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  １６（１０）：７５３−７５９に記載される方法を含むがこれらに限定されない選択に基づく方法が抗体可変領域のヒト化および／または親和性成熟のために使用でき、これらは全て参照により本明細書に組み込まれる。他のヒト化方法は、ＣＤＲの部分のみを移植することを含んでもよく、これには、参照によりすべての内容が組み込まれる、ＵＳＳＮ０９／８１０，５１０、Ｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９−１１２５、Ｄｅ  Ｐａｓｃａｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：３０７６−３０８４に記載される方法が含まれるがこれらに限定されない。
【０３６２】
ＶＩＩＩ．本発明の有用な実施形態
当業者には理解され、以下でより詳細に説明するように、概して図６５Ａ〜６５Ｋに示すように、本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃヘテロダイマー融合タンパク質は、多種多様な立体配置をとることができる。例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のアミノ酸配列は、図６６、６７、６８、６９Ａ、６９Ｂ、６９Ｃ、７０、７１、７２Ａ、７２Ｂ、７３Ａ、７３Ｂ、７４Ａ、７４Ｂ、７５、７６、１２６Ａ〜１２６Ｄ、１２７Ａ〜１２７Ｄ、および１２８Ａ〜１２８Ｌに提示されている。
【０３６３】
本明細書で提供されるのは、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ＦａｂフォーマットのＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、以下を含む：（ａ）Ｎ末端からＣ末端に向けて、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、ドメインリンカー、ヒト成熟ＩＬ−１５バリアント、ドメインリンカー、およびＣＨ２−ＣＨ３を含む第１のＦｃバリアントドメインを含む、第１のモノマー、（ｂ）Ｎ末端からＣ末端に向けて、第２のモノマーのＣＨ２−ＣＨ３が第２のＦｃバリアントドメインであるようなＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む重鎖を含む第２のモノマー、（ｃ）ＶＨおよびＶＬがヒトＰＤ−１に結合する抗原結合ドメインを形成するようなＶＬ−ＣＬを含む軽鎖。いくつかの実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、ＸＥＮＰ２２５５３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３、ＸＥＮＰ２５８０６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４、ＸＥＮＰ２５８１２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８、ＸＥＮＰ２５８１３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８、ＸＥＮＰ２５８１９からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２、ＸＥＮＰ２６９４０からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２、ＸＥＮＰ２８０２６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０、およびＸＥＮＰ２８６５２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２からなる対の群から選択される。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインのＶＨおよびＶＬの配列は、図９３Ａ〜９３Ｓおよび図９４Ａ〜９４ＡＰ、ならびに対応する配列識別子に示されている。
【０３６４】
いくつかの実施形態では、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインは、配列番号４である。いくつかの実施形態では、ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントは、配列番号２である。いくつかの実施形態では、ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有する配列番号２である。特定の実施形態では、ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有する配列番号２である。いくつかの実施形態では、ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有する配列番号２である。
【０３６５】
いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂフォーマットの第１のＦｃバリアントドメインは、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、およびＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、および任意選択のＭ２４８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含み、第２のＦｃバリアントドメインは、アミノ酸置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、およびＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、および任意選択のＭ２４８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含む。
【０３６６】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、以下を含む：Ｎ末端からＣ末端に向けて、配列番号４のヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、ドメインリンカー、Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ置換を有する配列番号２のヒト成熟ＩＬ−１５バリアント、およびアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、および任意選択のＭ２４８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含む第１のＦｃバリアントドメインを含む第１のモノマー；ＣＨ２−ＣＨ３がアミノ酸置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、および任意選択のＭ２４８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含む第２のＦｃバリアントドメインである、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む重鎖を含む第２のモノマー；ならびにＶＬ−ＣＬを含み、ＶＨおよびＶＬが、ＸＥＮＰ２２５５３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３からのものである軽鎖。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のＶＨおよびＶＬは、ＸＥＮＰ２５８０６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４からのものである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のＶＨおよびＶＬは、ＸＥＮＰ２５８１２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８からのものである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のＶＨは、ＸＥＮＰ２５８１３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８からのものである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のＶＨおよびＶＬは、ＸＥＮＰ２５８１９からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２からのものである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のＶＨおよびＶＬは、ＸＥＮＰ２６９４０からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２からのものである。いくつかの実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、ＸＥＮＰ２８０２６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０からのものである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のＶＨおよびＶＬは、ＸＥＮＰ２８６５２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２からのものである。当業者から理解されるように、ｓｃＦｖの可変の重鎖ドメインおよび軽鎖ドメインは、配列識別子および対応する図９３Ａ〜９３Ｓおよび図９４Ａ〜９４ＡＰから明らかであるように、「対」でもたらされる。場合によっては、第１のＦｃバリアントドメインはＣＨ２−ＣＨ３を含む。他の例では、第１のＦｃバリアントドメインは、ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントドメイン（例えば、第１および／または第２のＦｃバリアントドメイン）は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４のＦｃドメインからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩ��Ｇ４のＦｃドメインからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントドメインは、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインからなる群から選択される。
【０３６７】
他の実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、以下を含む：Ｎ末端からＣ末端に向けて、配列番号４のヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、ドメインリンカー、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ置換を有する配列番号２のヒト成熟ＩＬ−１５バリアント、およびアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、および任意選択のＭ２４８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含む第１のＦｃバリアントドメインを含む第１のモノマー；ＣＨ２−ＣＨ３がアミノ酸置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、および任意選択のＭ２４８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含む第２のＦｃバリアントドメインである、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む重鎖を含む第２のモノマー；ならびにＶＬ−ＣＬを含み、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のＶＨおよびＶＬが、ＸＥＮＰ２２５５３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３からのものである軽鎖。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のＶＨおよびＶＬは、ＸＥＮＰ２５８０６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４からのものである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のＶＨおよびＶＬは、ＸＥＮＰ２５８１２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８からのものである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のＶＨおよびＶＬは、ＸＥＮＰ２５８１３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８からのものである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のＶＨおよびＶＬは、ＸＥＮＰ２５８１９からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２からのものである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のＶＨおよびＶＬは、ＸＥＮＰ２６９４０からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２からのものである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のＶＨおよびＶＬは、ＸＥＮＰ２８０２６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０からのものである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のＶＨおよびＶＬは、ＸＥＮＰ２８６５２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２からのものである。当業者から理解されるように、ｓｃＦｖの可変の重鎖ドメインおよび軽鎖ドメインは、配列識別子および対応する図９３Ａ〜９３Ｓおよび図９４Ａ〜９４ＡＰから明らかであるように、「対」でもたらされる。場合によっては、第１のＦｃバリアントドメインはＣＨ２−ＣＨ３を含む。他の例では、第１のＦｃバリアントドメインは、ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントドメイン（例えば、第１および／または第２のＦｃバリアントドメイン）は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４のＦｃドメイン���らなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４のＦｃドメインからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントドメインは、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインからなる群から選択される。
【０３６８】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、以下を含む：Ｎ末端からＣ末端に向けて、配列番号４のヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、ドメインリンカー、Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ置換を有する配列番号２のヒト成熟ＩＬ−１５バリアント、およびアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、および任意選択のＭ２４８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含む第１のＦｃバリアントドメインを含む第１のモノマー；ＣＨ２−ＣＨ３がアミノ酸置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、および任意選択のＭ２４８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含む第２のＦｃバリアントドメインである、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む重鎖を含む第２のモノマー；ならびにＶＬ−ＣＬを含み、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のＶＨおよびＶＬが、ＸＥＮＰ２２５５３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３からのものである軽鎖。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のＶＨおよびＶＬは、ＸＥＮＰ２５８０６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４からのものである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のＶＨおよびＶＬは、ＸＥＮＰ２５８１２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８からのものである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のＶＨおよびＶＬは、ＸＥＮＰ２５８１３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８からのものである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のＶＨおよびＶＬは、ＸＥＮＰ２５８１９からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２からのものである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のＶＨおよびＶＬは、ＸＥＮＰ２６９４０からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２からのものである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のＶＨおよびＶＬは、ＸＥＮＰ２８０２６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０からのものである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のＶＨおよびＶＬは、ＸＥＮＰ２８６５２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２からのものである。当業者から理解されるように、ｓｃＦｖの可変の重鎖ドメインおよび軽鎖ドメインは、配列識別子および対応する図９３Ａ〜９３Ｓおよび図９４Ａ〜９４ＡＰから明らかであるように、「対」でもたらされる。場合によっては、第１のＦｃバリアントドメインはＣＨ２−ＣＨ３を含む。他の例では、第１のＦｃバリアントドメインは、ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントドメイン（例えば、第１および／または第２のＦｃバリアントドメイン）は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ���のＦｃドメインからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４のＦｃドメインからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントドメインは、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインからなる群から選択される。
【０３６９】
いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×抗ＰＤ−１  Ｆａｂは、図１２６Ａ〜１２６Ｄ、図１２７Ａ〜１２７Ｋ、図１２８Ａ〜１２８Ｌ、ならびに配列表の対応する配列識別子および配列番号に示されている。
【０３７０】
本明細書で提供されるのは、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットのＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、以下を含む：（ａ）Ｎ末端からＣ末端に向けて、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、ドメインリンカー、ヒト成熟ＩＬ−１５バリアント、オプションのドメインリンカー、およびＣＨ２−ＣＨ３を含む第１のＦｃバリアントドメインを含む、第１のモノマー、（ｂ）Ｎ末端からＣ末端に向けて、ｓｃＦｖが可変重鎖ドメイン（ＶＨ）、ｓｃＦｖリンカー、および可変軽ドメイン（ＶＬ）を含むようにされた（例えば、場合によっては、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向けて、ＶＨ−ｓｃＦｖリンカー−ＶＬを含むか、または他の場合において、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向けて、ＶＬ−ｓｃＦｖリンカー−ＶＨを含む）ヒトＰＤ−１に結合するｓｃＦｖドメインを含む第２のモノマー、ならびに第２のＦｃバリアントドメイン。いくつかの実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、ＸＥＮＰ２２５５３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３、ＸＥＮＰ２５８０６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４、ＸＥＮＰ２５８１２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８、ＸＥＮＰ２５８１３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８、ＸＥＮＰ２５８１９からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２、ＸＥＮＰ２６９４０からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２、ＸＥＮＰ２８０２６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０、およびＸＥＮＰ２８６５２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２からなる対の群から選択される。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインのＶＨおよびＶＬの配列は、図９３Ａ〜９３Ｓおよび図９４Ａ〜９４ＡＰ、ならびに対応する配列識別子に示されている。
【０３７１】
いくつかの実施形態では、ヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメインは、配列番号４である。いくつかの実施形態では、ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントは、配列番号２である。いくつかの実施形態では、ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有する配列番号２である。特定の実施形態では、ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有する配列番号２である。いくつかの実施形態では、ヒト成熟ＩＬ−１５バリアントは、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有する配列番号２である。
【０３７２】
いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットの第１のＦｃバリアントドメインは、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、およびＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、および任意選択のＭ２４８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含み、第２のＦｃバリアントドメインは、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、およびＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、および任意選択のＭ２４８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含む。
【０３７３】
特定の実施形態では、ＰＤ−１−標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、以下を含む：Ｎ末端からＣ末端に向けて、配列番号４のヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、ドメインリンカー、配列番号２のヒト成熟ＩＬ−１５バリアント、任意選択のドメインリンカー、およびアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、および任意選択のＭ２４８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含む第１のＦｃバリアントドメインを含む第１のモノマー；抗ＰＤ−１  ｓｃＦｖならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、および任意選択の、Ｍ２４８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含む第２のＦｃバリアントドメインを含む第２のモノマー。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１  ｓｃＦｖは、ＸＥＮＰ２２５５３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３からのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＸＥＮＰ２５８０６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４からのものである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＸＥＮＰ２５８１２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８からのものである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＸＥＮＰ２５８１３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８からのものである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＸＥＮＰ２５８１９からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２からのものである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＸＥＮＰ２６９４０からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２からのものである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＸＥＮＰ２８０２６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０からのものである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＸＥＮＰ２８６５２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２からのものである。当業者から理解されるように、ｓｃＦｖの可変の重鎖ドメインおよび軽鎖ドメインのＣＤＲは、配列識別子から明らかであるように、「対」でもたらされる。場合によっては、第１のＦｃバリアントドメインはＣＨ２−ＣＨ３を含む。他の例では、第１のＦｃバリアントドメインは、ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントドメイン（例えば、第１および／または第２のＦｃバリアントドメイン）は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４のＦｃドメインからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４のＦｃドメインからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントドメインは、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインからなる群から選択される。
【０３７４】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１−標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、以下を含む：Ｎ末端からＣ末端に向けて、配列番号４のヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、ドメインリンカー、Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ置換を有する配列番号２のヒト成熟ＩＬ−１５バリアント、任意選択のドメインリンカー、およびアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、および任意選択のＭ２４８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含む第１のＦｃバリアントドメインを含む第１のモノマー；抗ＰＤ−１  ｓｃＦＶならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、および任意選択のＭ２４８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含む第２のＦｃバリアントドメインを含む第２のモノマー。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１  ｓｃＦｖは、ＸＥＮＰ２２５５３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３からのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＸＥＮＰ２５８０６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４からのものである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＸＥＮＰ２５８１２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８からのものである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＸＥＮＰ２５８１３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８からのものである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＸＥＮＰ２５８１９からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２からのものである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＸＥＮＰ２６９４０からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２からのものである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＸＥＮＰ２８０２６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０からのものである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＸＥＮＰ２８６５２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２からのものである。当業者から理解されるように、ｓｃＦｖの可変の重鎖ドメインおよび軽鎖ドメインのＣＤＲは、配列識別子から明らかであるように、「対」でもたらされる。場合によっては、第１のＦｃバリアントドメインはＣＨ２−ＣＨ３を含む。他の例では、第１のＦｃバリアントドメインは、ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントドメイン（例えば、第１および／または第２のＦｃバリアントドメイン）は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４のＦｃドメインからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４のＦｃドメインからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントドメインは、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインからなる群から選択される。
【０３７５】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１−標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、以下を含む：Ｎ末端からＣ末端に向けて、配列番号４のヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、ドメインリンカー、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ置換を有する配列番号２のヒト成熟ＩＬ−１５バリアント、任意選択のドメインリンカー、およびアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、および任意選択のＭ２４８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含む第１のＦｃバリアントドメインを含む第１のモノマー；抗ＰＤ−１  ｓｃＦＶならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、および任意選択のＭ２４８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含む第２のＦｃバリアントドメインを含む第２のモノマー。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１  ｓｃＦｖは、ＸＥＮＰ２２５５３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３からのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＸＥＮＰ２５８０６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４からのものである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＸＥＮＰ２５８１２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８からのものである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＸＥＮＰ２５８１３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８からのものである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＸＥＮＰ２５８１９からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２からのものである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＸＥＮＰ２６９４０からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２からのものである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＸＥＮＰ２８０２６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０からのものである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＸＥＮＰ２８６５２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２からのものである。当業者から理解されるように、ｓｃＦｖの可変の重鎖ドメインおよび軽鎖ドメインのＣＤＲは、配列識別子から明らかであるように、「対」でもたらされる。場合によっては、第１のＦｃバリアントドメインはＣＨ２−ＣＨ３を含む。他の例では、第１のＦｃバリアントドメインは、ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントドメイン（例えば、第１および／または第２のＦｃバリアントドメイン）は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４のＦｃドメインからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４のＦｃドメインからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントドメインは、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインからなる群から選択される。
【０３７６】
特定の実施形態では、ＰＤ−１−標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、以下を含む：Ｎ末端からＣ末端に向けて、配列番号４のヒトＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）ドメイン、ドメインリンカー、Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ置換を有する配列番号２のヒト成熟ＩＬ−１５バリアント、任意選択のドメインリンカー、およびアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、および任意選択のＭ２４８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含む第１のＦｃバリアントドメインを含む第１のモノマー；抗ＰＤ−１  ｓｃＦｖ、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、および任意選択のＭ２４８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含む第２のＦｃバリアントドメインを含む第２のモノマー。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１  ｓｃＦｖは、ＸＥＮＰ２２５５３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３からのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＸＥＮＰ２５８０６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４からのものである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＸＥＮＰ２５８１２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８からのものである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＸＥＮＰ２５８１３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８からのものである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＸＥＮＰ２５８１９からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２からのものである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＸＥＮＰ２６９４０からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２からのものである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＸＥＮＰ２８０２６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０からのものである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＸＥＮＰ２８６５２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２からのものである。当業者から理解されるように、ｓｃＦｖの可変の重鎖ドメインおよび軽鎖ドメインのＣＤＲは、配列識別子から明らかであるように、「対」でもたらされる。場合によっては、第１のＦｃバリアントドメインはＣＨ２−ＣＨ３を含む。他の例では、第１のＦｃバリアントドメインは、ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントドメイン（例えば、第１および／または第２のＦｃバリアントドメイン）は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４のＦｃドメインからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４のＦｃドメインからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントドメインは、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインからなる群から選択される。
【０３７７】
いくつかの実施形態では、本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、患者、例えば、がんを有するヒト患者に投与される。
【０３７８】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、本発明の第１のモノマーをコードする核酸および本発明の第２のモノマーをコードする核酸を含む核酸組成物である。
【０３７９】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、本発明の第１のモノマーをコードする核酸を含む発現ベクターである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、本発明の第２のモノマーをコードする核酸を含む発現ベクターである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、第１のモノマーをコードする核酸および第２のモノマーをコードする核酸を含む発現ベクターである。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、本明細書に記載の発現ベクターのうちの１つ以上を含む。
【０３８０】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、本発明の第１のモノマーをコードする核酸、本発明の第２のモノマーをコードする核酸、および軽鎖をコードする核酸を含む核酸組成物であり、例えば、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のＶＨおよびＶＬは、ＰＤ−１に結合できるようにされる。
【０３８１】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、第１のモノマーをコードする核酸を含む発現ベクターである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、第２のモノマーをコードする核酸を含む発現ベクターである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、第１のモノマーをコードする核酸および第２のモノマーをコードする核酸を含む発現ベクターである。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、軽鎖をコードする核酸を含む発現ベクターであり、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のＶＨおよびＶＬは、ＰＤ−１に結合することができるようにされる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、第１のモノマーをコードする核酸および軽鎖をコードする核酸を含む発現ベクターである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、第２のモノマーをコードする核酸および軽鎖をコードする核酸を含む発現ベクターである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、第１のモノマーをコードする核酸、第２のモノマーをコードする核酸、および軽鎖をコードする核酸を含む発現ベクターである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書に記載される１つ以上の発現ベクターを含む宿主細胞である。
【０３８２】
本明細書で提供されるのは、本明細書に概説されるＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のいずれか１つを作製する方法であって、細胞がＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質を発現するような細胞培養条件下などの条件下で宿主細胞を培養することと、融合タンパク質を回収することとを含む、方法である。
【０３８３】
本明細書で提供されるのは、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質を患者に投与することを含む、患者のがんを治療する方法である。
【０３８４】
ＩＸ．本発明の他の実施形態
当業者には理解され、以下でより詳細に説明するように、概して図６５Ａ〜６５Ｋに示すように、本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃヘテロダイマー融合タンパク質は、多種多様な立体配置をとることができる。例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のアミノ酸配列は、図６６、６７、６８、６９Ａ、６９Ｂ、６９Ｃ、７０、７１、７２Ａ、７２Ｂ、７３Ａ、７３Ｂ、７４Ａ、７４Ｂ、７５、７６、１２６Ａ〜１２６Ｄ、１２７Ａ〜１２７Ｄ、および１２８Ａ〜１２８Ｌに提示されている。
【０３８５】
本発明は、融合タンパク質と抗体融合タンパク質とを含むＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質を提供する。融合タンパク質は、第１のタンパク質ドメイン、第２のタンパク質ドメイン、および第１のＦｃドメインを含む。いくつかの場合では、第１のタンパク質ドメインが第１のドメインリンカーを用いて第２タンパク質ドメインのＮ末端に共有結合し、第２のタンパク質ドメインが第２のドメインリンカーを用いて第１のＦｃドメインのＮ末端に共有結合し、第１のタンパク質ドメインがＩＬ−１５Ｒαタンパク質を含み、第２のタンパク質ドメインがＩＬ−１５タンパク質を含む。抗体融合タンパク質はＰＤ−１抗原結合ドメインおよび第２のＦｃドメインを含み、ＰＤ−１抗原結合ドメインが第２のＦｃドメインのＮ末端に共有結合し、ＰＤ−１抗原結合ドメインが単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）またはＦａｂ断片である。いくつかの実施形態では、第１および第２のＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ２６７Ｋ／ＬＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、およびＫ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑからなる群から選択されるアミノ酸置換のセットを有する。いくつかの例では、第１および／または第２のＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含む追加の一組のアミノ酸置換を有する。いくつかの場合では、第１および／または第２のＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、Ｇ２３６Ｒ／Ｌ３２８Ｒ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ／Ａ３２７Ｇ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ／Ａ３２７ＧおよびＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌからなる追加の一組のアミノ酸置換を有する。
【０３８６】
いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５タンパク質は、全長ヒトＩＬ−１５および成熟ヒトＩＬ−１５からなる群から選択されるポリペプチド配列を有し、ＩＬ−１５Ｒαタンパク質は、全長ヒトＩＬ−１５ＲαおよびヒトＩＬ−１５Ｒαのｓｕｓｈｉドメインからなる群から選択されるポリペプチド配列を有する。Ｆｃ融合タンパク質のＩＬ−１５タンパク質は、１、２、３、４、５、６、７、８、または９個のアミノ酸置換を有することができる。いくつかの実施形態では、Ｆｃ融合タンパク質のヒトＩＬ−１５タンパク質はアミノ酸置換Ｎ４Ｄを有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃ融合タンパク質のヒトＩＬ−１５タンパク質は、アミノ酸置換Ｎ６５Ｄを有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃ融合タンパク質のヒトＩＬ−１５タンパク質は、Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄのアミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃ融合タンパク質のヒトＩＬ−１５タンパク質は、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有する。ＩＬ−１５タンパク質およびＩＬ−１５Ｒαタンパク質が、それぞれ、Ｅ８７Ｃ：Ｄ９６／Ｐ９７／Ｃ９８、Ｅ８７Ｃ：Ｄ９６／Ｃ９７／Ａ９８、Ｖ４９Ｃ：Ｓ４０Ｃ、Ｌ５２Ｃ：Ｓ４０Ｃ、Ｅ８９Ｃ：Ｋ３４Ｃ、Ｑ４８Ｃ：Ｇ３８Ｃ、Ｅ５３Ｃ：Ｌ４２Ｃ、Ｃ４２Ｓ：Ａ３７Ｃ、およびＬ４５Ｃ：Ａ３７Ｃからなる群から選択されるアミノ酸置換のセットを有し得る。
【０３８７】
いくつかの実施形態では、第１のタンパク質ドメインは、第１のドメインリンカーを用いずに第１のＦｃドメインのＮ末端に直接共有結合し、および／または、第２のタンパク質ドメインは、第２のドメインリンカーを用いずに第２のＦｃドメインのＮ末端に直接共有結合する。
【０３８８】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１抗原結合ドメインのＶＨおよびＶＬは、ＸＥＮＰ２２５５３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３、ＸＥＮＰ２５８０６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４、ＸＥＮＰ２５８１２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８、ＸＥＮＰ２５８１３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８、ＸＥＮＰ２５８１９からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２、ＸＥＮＰ２６９４０からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２、ＸＥＮＰ２８０２６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０、およびＸＥＮＰ２８６５２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２からなる対の群から選択される。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１抗原結合ドメインのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３は、ＸＥＮＰ２２５５３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３Ｌ３、ＸＥＮＰ２５８０６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２３４＿Ｌ３．１４４、ＸＥＮＰ２５８１２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４０＿Ｌ３．１４８、ＸＥＮＰ２５８１３からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．１４８、ＸＥＮＰ２５８１９からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．２４１＿Ｌ３．９２、ＸＥＮＰ２６９４０からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３０３＿Ｌ３．１５２、ＸＥＮＰ２８０２６からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０、およびＸＥＮＰ２８６５２からの１Ｃ１１［ＰＤ−１］＿Ｈ３．３２８＿Ｌ３．１５２からなる群のＣＤＲから選択される。いくつかの実施形態では、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤ２、およびＶＨＣＤＲ３の配列は、図９５Ａ〜９５Ｊに示される配列、および対応する配列識別子から選択される。いくつかの実施形態では、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤ２、およびＶＨＣＤＲ３の配列は、図９６Ａ〜９６Ｆに示される配列、および対応する配列識別子から選択される。
【０３８９】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、ヘテロダイマーＦｃポリペプチドの第１のＮ末端に融合される可変長リンカーによってＩＬ−１５タンパク質に融合されたＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）タンパク質、ならびにヘテロダイマーＦｃポリペプチドの第２のＦｃドメインのＮ末端に融合した抗ＰＤ−１  ｓｃＦｖを含む（「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖ」フォーマットおよび図６５Ａを参照されたい）。場合によっては、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質はＸＥＮＰ２１４８０である。特定の例において、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、各Ｆｃモノマーにアミノ酸置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＸＥＮＰ２１４８０のバリアントである。
【０３９０】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、ヘテロダイマーＦｃポリペプチドの第１のＮ末端に融合される可変長リンカーによってＩＬ−１５タンパク質に融合されたＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）タンパク質、ならびにヘテロダイマーＦｃポリペプチドの第２のＦｃドメインのＮ末端に融合した抗ＰＤ−１抗体の可変重鎖（ＶＨ）を含む。抗ＰＤ−１抗体の対応する可変軽鎖（ＶＬ）は別々にトランスフェクトされ（例えば、導入され）、ヘテロダイマーＦｃポリペプチドに融合したＶＨと抗ＰＤ−１  Ｆａｂを形成する（「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂ」フォーマットおよび図６５Ｄを参照されたい）。場合によっては、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５  ／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、ＸＥＮＰ２２０２２、ＸＥＮＰ２５８４９、ＸＥＮＰ２４５３５、ＸＥＮＰ２４５３６、ＸＥＮＰ２５８５０、およびＸＥＮＰ２５９３７からなる群から選択される。
【０３９１】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、ヘテロダイマーＦｃポリペプチドの第１のＦｃドメインのＮ末端に融合された抗ＰＤ−１抗体の可変重鎖（ＶＨ）、ならびにヘテロダイマーＦｃの第２のＦｃドメインのＮ末端に融合したＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）タンパク質を含む。抗ＰＤ−１抗体の対応する可変軽鎖（ＶＬ）は別々にトランスフェクトすることができ、ヘテロダイマーＦｃポリペプチドに融合したＶＨとＦａｂを形成する。ＩＬ−１５タンパク質は別々にトランスフェクト（例えば、導入）することができ、非共有結合のＩＬ−１５／Ｒα複合体は、ヘテロダイマーＦｃポリペプチドに融合したＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）タンパク質と形成される（「Ｆａｂ×ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットおよび図６５Ｅを参照されたい）。場合によっては、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質はＸＥＮＰ２２１１２からなる群から選択される。
【０３９２】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、ヘテロダイマーＦｃポリペプチドの第１のＦｃドメインのＮ末端に融合された抗ＰＤ−１抗体の可変重鎖（ＶＨ）、ならびにヘテロダイマーＦｃの第２のＦｃドメインのＮ末端に融合した、１つ以上の操作されたシステイン置換を含むＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）タンパク質を含む。抗ＰＤ−１抗体の対応する可変軽鎖（ＶＬ）は別々にトランスフェクト（例えば、導入）することができ、ヘテロダイマーＦｃポリペプチドに融合したＶＨとＦａｂを形成する。１つ以上の操作されたシステイン置換を含むＩＬ−１５タンパク質は、別々にトランスフェクト（例えば、導入）することができ、ＩＬ−１５／Ｒα複合体は、ヘテロダイマーＦｃポリペプチドに融合したＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）タンパク質とのジスルフィド結合を介して形成される（「ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂ」フォーマットおよび図６５Ｆを参照されたい）。場合によっては、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質はＸＥＮＰ２２６４１からなる群から選択される。
【０３９３】
特定の実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、ヘテロダイマーＦｃポリペプチドの第１のＦｃドメインのＮ末端に融合された抗ＰＤ−１抗体の第１の可変重鎖（ＶＨ）、ヘテロダイマーＦｃポリペプチドの第２のＦｃドメインのＮ末端に融合した抗ＰＤ−１抗体の第２の可変重鎖（ＶＨ）、およびヘテロダイマーＦｃ領域の第１のＦｃドメインまたは第２のＦｃドメインのいずれかのＣ末端に融合したＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）タンパク質を含む。抗ＰＤ−１抗体の対応する可変軽鎖（ＶＬ）をトランスフェクト（例えば、導入）して、ヘテロダイマーＦｃポリペプチドの抗ＰＤ−１抗体の第１の可変重鎖（ＶＨ）とともに第１のＦａｂを、およびヘテロダイマーＦｃポリペプチドの抗ＰＤ−１抗体の第２の可変重鎖（ＶＨ）とともに第２のＦａｂを形成することができる。ＩＬ−１５タンパク質は別々にトランスフェクト（例えば、導入）することができ、非共有結合のＩＬ−１５／Ｒα複合体は、ヘテロダイマーＦｃポリペプチドに融合したＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）タンパク質と形成される（「ｍＡｂ×ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットおよび図６５Ｈを参照されたい）。場合によっては、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質はＸＥＮＰ２２６４２およびＸＥＮＰ２２６４３からなる群から選択される。
【０３９４】
特定の実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、ヘテロダイマーＦｃポリペプチドの第１のＦｃドメインのＮ末端に融合された抗ＰＤ−１抗体の第１の可変重鎖（ＶＨ）、ヘテロダイマーＦｃポリペプチドの第２のＦｃドメインのＮ末端に融合した抗ＰＤ−１抗体の第２の可変重鎖（ＶＨ）、およびヘテロダイマーＦｃ領域の第１のＦｃドメインまたは第２のＦｃドメインのいずれかのＣ末端に融合した、１つ以上の操作されたシステイン置換を含むＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）タンパク質を含む。抗ＰＤ−１抗体の対応する可変軽鎖（ＶＬ）をトランスフェクト（例えば、導入）して、ヘテロダイマーＦｃポリペプチドの抗ＰＤ−１抗体の第１の可変重鎖（ＶＨ）とともに第１のＦａｂを、およびヘテロダイマーＦｃポリペプチドの抗ＰＤ−１抗体の第２の可変重鎖（ＶＨ）とともに第２のＦａｂを形成することができる。１つ以上の操作されたシステイン置換を含むＩＬ−１５タンパク質は、別々にトランスフェクト（例えば、導入）することができ、ＩＬ−１５／Ｒα複合体は、ヘテロダイマーＦｃポリペプチドに融合したＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）タンパク質とのジスルフィド結合を介して形成される（「ｍＡｂ×ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットおよび図６５Ｈを参照されたい）。場合によっては、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質はＸＥＮＰ２２６４４およびＸＥＮＰ２２６４５からなる群から選択される。
【０３９５】
本明細書に記載のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸組成物も提供される。いくつかの例において、発現ベクターは本明細書に記載の１つ以上の核酸組成物を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で概説した１つまたは２つの発現ベクターを含む宿主細胞が提供される。
【０３９６】
本明細書で提供されるのは、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のＰＤ−１標的化アームとして使用することができるＰＤ−１抗原結合ドメイン（ＰＤ−１  ＡＤＢ）または抗ＰＤ−１抗体の例示的な実施形態である（例えば、実施例１を参照されたい）。
【０３９７】
本明細書で提供されるのは、ＩＬ−１５タンパク質の１つ以上の操作されたアミノ酸置換を有するＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質はまた、ＩＬ−１５／Ｒαインターフェースでの１つ以上の操作されたシステイン修飾を含む（例えば、実施例２を参照されたい）。このようなＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、ＮＫ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、およびＣＤ４＋Ｔ細胞を含む免疫細胞の増殖を誘導または促進することができる。特に、ＩＬ−１５Ｆｃ側にリンカーを持たない（例えば、ヒンジ領域のみ）融合タンパク質を含むＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃは、より弱い増殖活性を示した。
【０３９８】
本明細書で提供されるのは、より低い効力、増加した薬物動態、および／または増加した血清半減期を有するＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質である。本明細書に記載のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、親構築物と比較してそれらの効力を低下させるように操作された（実施例２および図４４Ａ〜４４Ｃ、４５Ａ〜４５Ｄ、４７Ａ〜４７Ｂ、５１Ａ〜５１Ｃ、５２、５３Ａ〜５３Ｃなどであるがこれらに限定されない図を参照されたい）。いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換は、ＩＬ−１５／Ｒα複合体および／またはヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質のＦｃドメイン（複数可）に導入された。いくつかの実施形態では、対照構築物（例えば、親構築物）と比較して効力が低下したＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、実質的により長い血清半様を有する。特定の実施形態では、血清半減期は、１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍またはそれ以上増加した。
【０３９９】
本明細書で提供されるのは、対照の効力を低下させるように設計されたｓｃＩＬ−１５／Ｒα−ＦｃヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質と抗ＰＤ−１抗体の組み合わせ療法と比較して動物モデル（例えば、ヒトＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウス）においてＧＶＨＤを増強したＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質である。例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の投与は、ＩＬ−１５およびＰＤ−１遮断の組み合わせと比較してより大きな効果をもたらした。
【０４００】
本明細書に記載のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、活性化リンパ球、活性化Ｔ細胞（例えば、活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞および活性化ＣＤ８＋細胞）、および活性化腫瘍浸潤リンパ球を含むがこれらに限定されない免疫細胞においてＳＴＡＴ５リン酸化を誘導することができる。
【０４０１】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／ＲαヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質は、ＸＥＮＰ２２０２２、ＸＥＮＰ２５８４９、ＸＥＮＰ２４５３５、ＸＥＮＰ２４５３６、ＸＥＮＰ２５８５０、およびＸＥＮＰ２５９３７からなる群から選択される。特定の実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、ＸＥＮＰ２５８５０およびＸＥＮＰ２５９３７からなる群から選択される。
【０４０２】
いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、ＸＥＮＰ２２０２２、ＸＥＮＰ２５８４９、ＸＥＮＰ２４５３５、ＸＥＮＰ２４５３６、ＸＥＮＰ２５８５０、およびＸＥＮＰ２５９３７からなる群から選択されるＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／ＲαヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質と、薬学的に許容される担体と、を含む医薬組成物である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／ＲαヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質は、ＸＥＮＰ２５８５０およびＸＥＮＰ２５９３７からなる群から選択される。
【０４０３】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、本明細書に記載のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／ＲαヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質のうちのいずれか１つと、薬学的に許容される担体と、を含む医薬組成物である。
【０４０４】
いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、がんの治療を必要とする患者においてがんを治療する方法であって、治療有効量の、本明細書に記載のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／ＲαヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質のいずれか１つ、または本明細書に記載の医薬組成物のいずれか１つを上記患者に投与することを含む、方法である。
【０４０５】
いくつかの実施形態では、この方法はまた、治療有効量のチェックポイント遮断抗体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント遮断抗体は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＬＡＧ３抗体、および抗ＣＴＬＡ−４抗体から選択される。特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、またはピジリズマブである。特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ、アベルマブ、またはダルバルマブである。
【０４０６】
Ｘ．本発明の核酸
本発明はさらに、本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／ＲαヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質をコードする核酸組成物（または、モノマーＦｃドメインタンパク質の場合はそれらをコードする核酸）も提供する。
【０４０７】
当業者には理解されるように、核酸組成物はＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のフォーマットに依存するだろう。したがって、例えば、フォーマットが３つのアミノ酸配列を必要とするとき、３つの核酸配列を発現のために１つ以上の発現ベクターに組み込むことができる。同様に、いくつかのフォーマットは２つの核酸のみを必要とし、同様に、それらを１つまたは２つの発現ベクターに組み込むことができる。
【０４０８】
当該技術分野において既知であるように、本発明の構成要素をコードする核酸は、当該技術分野において既知であるように、そして本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα  Ｆｃ融合タンパク質を産生するために使用される宿主細胞に応じた発現ベクターに組み込まれ得る。一般に、核酸は任意の数の調節エレメント（プロモーター、複製起点、選択可能マーカー、リボソーム結合部位、インデューサーなど）に作動可能に連結されている。発現ベクターは、染色体外ベクターまたは組み込みベクターであり得る。
【０４０９】
次いで、本発明の核酸および／または発現ベクターを、哺乳動物細胞、細菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞および／または真菌細胞を含む当該技術分野で周知の任意の数の異なる種類の宿主細胞に形質転換するが、哺乳動物細胞（例えばＣＨＯ細胞）が、多くの実施形態において使用される。
【０４１０】
いくつかの実施形態では、各モノマー、またはＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の構成要素をコードする核酸は、フォーマットに応じて適用可能なように、それぞれ一般に異なるまたは同じプロモーター制御下で単一の発現ベクター内に含まれる。本発明において特に使用される実施形態では、これら２つまたは３つの核酸の各々は異なる発現ベクターに含まれる。
【０４１１】
本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／ＲαヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質は、当該技術分野において周知のように、発現ベクター（複数可）を含む宿主細胞を培養することによって作製される。一旦製造されると、イオン交換クロマトグラフィーステップを含む従来の融合タンパク質または抗体精製ステップが実施される。本明細書で論じるように、２つのモノマーのｐＩが少なくとも０．５だけ異なることは、イオン交換クロマトグラフィーもしくは等電点電気泳動、または等電点に感受性の他の方法による分離を可能にし得る。すなわち、各モノマー異なるｐＩを有し、かつヘテロダイマーも異なるｐＩを有するようになるように各モノマーの等電点（ｐＩ）を変化させるｐＩ置換を含むことによって、ヘテロダイマーの等電点精製（例えば、陰イオン交換カラム、陽イオン交換カラム）を促進する。これらの置換はまた、精製後の任意の混入したホモダイマーの特定およびモニタリングにも役立つ（例えば、ＩＥＦゲル、ｃＩＥＦ、および分析用ＩＥＸカラム）。
【０４１２】
ＸＩ．ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の生物学的および生化学的機能性
一般に、本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、がんを有する患者に投与され、そして有効性は、本明細書中に記載されるようないくつかの方法で評価される。このため、がん量、腫瘍のサイズ、転移の存在または程度の評価などの、有効性の標準的なアッセイを実行し得るが、免疫腫瘍学的治療もまた免疫状態評価に基づいて評価され得る。これは、インビトロアッセイおよびインビボアッセイの両方を含むいくつかの方法で行うことができる。例えば、腫瘍量、サイズ、侵襲性、ＬＮ関与、転移などといった「古典的な」測定と併せて、免疫状態（例えば、ｉｐｉ治療後のＩＣＯＳ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の存在）の変化の評価を実施することができる。このため、以下のいずれかまたは全てを評価することができる：ＣＤ４＋Ｔ細胞活性化もしくは増殖、ＣＤ８＋Ｔ（ＣＴＬ）細胞活性化もしくは増殖、ＣＤ８＋Ｔ細胞媒介性細胞傷害性活性および／もしくはＣＴＬ媒介性細胞枯渇、ＮＫ細胞活性およびＮＫ媒介性細胞枯渇に対するＰＶＲＩＧの阻害効果、Ｔｒｅｇ細胞分化および増殖ならびにＴｒｅｇ細胞もしくは骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）媒介性免疫抑制もしくは免疫耐性に対するＰＶＲＩＧの増強効果、ならびに／または免疫細胞による炎症性サイトカイン産生、例えば、Ｔ細胞もしくは他の免疫細胞によるＩＬ−２、ＩＦＮ−γもしくはＴＮＦ−α産生に対するＰＶＲＩＧの影響。
【０４１３】
いくつかの実施形態では、治療の評価は、例えば、ＣＦＳＥ希釈法、免疫エフェクター細胞のＫｉ６７細胞内染色、および３Ｈ−チミジン取り込み法を使用して、免疫細胞増殖を評価することによって実施される。
【０４１４】
いくつかの実施形態では、治療の評価は、ＣＤ２５、ＣＤ６９、ＣＤ１３７、ＩＣＯＳ、ＰＤ１、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、およびＣＤ１０７Ａの表面発現によって測定される細胞脱顆粒のうちの１つ以上を含む、遺伝子発現の増加または活性化関連マーカーの増加したタンパク質レベルを評価することによって行われる。
【０４１５】
一般に、遺伝子発現アッセイは、当該技術分野で既知であるように行われる。
【０４１６】
一般に、タンパク質発現測定も同様に、当該技術分野で知られているように実施される。
【０４１７】
いくつかの実施形態では、治療の評価は、酵素活性（プロテアーゼ活性を含む）、細胞膜透過性、細胞接着、ＡＴＰ産生、補酵素産生、およびヌクレオチド取り込み活性などの多数の細胞パラメータを推測することを通した標的細胞生存検出によって測定される細胞傷害性活性を評価することによって行なわれる。これらのアッセイの具体的な例としては、トリパンブルーまたはＰＩ染色、５１Ｃｒまたは３５Ｓ放出法、ＬＤＨ活性、ＭＴＴおよび／またはＷＳＴアッセイ、カルセイン−ＡＭアッセイ、発光系アッセイ、ならびに他のものが含まれるが、これらに限定されない。
【０４１８】
いくつかの実施形態では、治療の評価は、サイトカイン産生によって測定されるＴ細胞活性を評価することによって行われ、周知の技法を使用して、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ２、ＩＬ６、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ１０、ＩＬ１３を含むがこれらに限定されないサイトカインを使用して、培養上清液中で細胞内のいずれかで測定する。
【０４１９】
したがって、治療の評価は、以下のうちの１つ以上を評価するアッセイを使用して行うことができる：（ｉ）免疫応答を増加させる、（ｉｉ）αβおよび／またはγδ  Ｔ細胞の活性化を増加させる、（ｉｉｉ）細胞傷害性Ｔ細胞活性を増加させる、（ｉｖ）ＮＫおよび／またはＮＫＴ細胞活性を増加させる、（ｖ）αβおよび／またはγδ  Ｔ細胞抑制を軽減させる、（ｖｉ）炎症促進性サイトカイン分泌を増加させる、（ｖｉｉ）ＩＬ−２分泌を増加させる；（ｖｉｉｉ）インターフェロン−γ産生を増加させる、（ｉｘ）Ｔｈ１応答を増加させる、（ｘ）Ｔｈ２応答を減少させる、（ｘｉ）調節Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の少なくとも１つの細胞数および／または活性化を減少させるかまたは排除する。
【０４２０】
Ａ．  有効性を測定するためのアッセイ
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化は、当該技術分野において既知のように、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイを使用して評価される。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４２１】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、異なる因子のリン酸化または脱リン酸化によって、または他の翻訳後修飾を測定することによって測定される、免疫応答の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４２２】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または増殖によって、または例えば、ＣＤ１３７、ＣＤ１０７ａ、ＰＤ−１などのような活性化マーカーの発現の変化によって測定される、αβおよび／またはγδ  Ｔ細胞の活性化の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４２３】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、がん細胞のような標的細胞の直接的な殺傷によって、またはサイトカイン分泌によって、または増殖によって、または例えば、ＣＤ１３７、ＣＤ１０７ａ、ＰＤ−１などのような活性化マーカーの発現の変化によって測定される、細胞傷害性Ｔ細胞活性の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４２４】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、がん細胞のような標的細胞の直接殺傷によって、またはサイトカイン分泌によって、またはＣＤ１０７ａなどの例のような活性化マーカーの発現の変化によって測定される、ＮＫおよび／またはＮＫＴ細胞活性の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４２５】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または増殖によって、または例えば、ＣＤ１３７、ＣＤ１０７ａ、ＰＤ−１などのような活性化マーカーの発現の変化によって測定される、αβおよび／またはγδ  Ｔ細胞抑制の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４２６】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、ＥＬＩＳＡによって、またはＬｕｍｉｎｅｘによって、またはマルチプレックスビーズ系方法によって、または細胞内染色およびＦＡＣＳ分析によって、またはＡｌｉｓｐｏｔなどによって測定される、炎症促進性サイトカイン分泌の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４２７】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、ＥＬＩＳＡによって、またはＬｕｍｉｎｅｘによって、またはＭｕｌｔｉｐｌｅｘビーズに基づく方法によって、または細胞内染色およびＦＡＣＳ解析によって、またはＡｌｉｓｐｏｔなどによって測定されるＩＬ−２分泌の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４２８】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、ＥＬＩＳＡによって、またはＬｕｍｉｎｅｘによって、またはＭｕｌｔｉｐｌｅｘビーズ系方法によって、または細胞内染色およびＦＡＣＳ解析によって、またはＡｌｉｓｐｏｔなどによって測定されるインターフェロン−γ産生の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４２９】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または活性化マーカーの発現の変化によって測定される、Ｔｈ１応答の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４３０】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または活性化マーカーの発現の変化によって測定される、Ｔｈ２応答の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４３１】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、フローサイトメトリーによって、またはＩＨＣによって測定される調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）のうちの少なくとも１つの細胞数および／または活性の増加または減少を測定する。応答の減少は免疫刺激活性を示す。適切な減少は、以下に概説する増加の場合と同じである。
【０４３２】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、フローサイトメトリーによって、またはＩＨＣによって測定される、Ｍ２マクロファージ細胞数の増加または減少を測定する。応答の減少は免疫刺激活性を示す。適切な減少は、以下に概説する増加の場合と同じである。
【０４３３】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または活性化マーカーの発現の変化によって測定される、Ｍ２マクロファージ腫瘍形成促進活性の増加または減少を測定する。応答の減少は免疫刺激活性を示す。適切な減少は、以下に概説する増加の場合と同じである。
【０４３４】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、フローサイトメトリーによって、またはＩＨＣによって測定される、Ｎ２好中球増加の増加または減少を測定する。応答の減少は免疫刺激活性を示す。適切な減少は、以下に概説する増加の場合と同じである。
【０４３５】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または活性化マーカーの発現の変化によって測定されるＮ２好中球腫瘍形成促進活性の増加または減少を測定する。応答の減少は免疫刺激活性を示す。適切な減少は、以下に概説する増加の場合と同じである。
【０４３６】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または増殖によって、または例えば、ＣＤ１３７、ＣＤ１０７ａ、ＰＤ１等のような活性化マーカーの発現の変化によって測定される、Ｔ細胞活性化の阻害の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４３７】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、標的細胞、例えばがん細胞の直接的な殺傷によって、またはサイトカイン分泌によって、または増殖によって、または例えば、ＣＤ１３７、ＣＤ１０７ａ、ＰＤ１等のような活性化マーカーの発現の変化によって測定される、ＣＴＬ活性化の阻害の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４３８】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、活性化マーカーの発現の変化によって測定される、αβおよび／またはγδ  Ｔ細胞枯渇の増加または減少を測定する。応答の減少は免疫刺激活性を示す。適切な減少は、以下に概説する増加の場合と同じである。
【０４３９】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または増殖によって、またはＣＤ１３７、ＣＤ１０７ａ、ＰＤ１などの例のような活性化マーカーの発現の変化によって測定される、αβおよび／またはγδ  Ｔ細胞応答の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４４０】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または増殖によって、または例えば、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７などのような活性化マーカーの発現の変化によって測定される、抗原特異的メモリー応答の刺激の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。。
【０４４１】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えばＭＴＴ、Ｃｒ放出、カルサインＡＭなどの細胞傷害性アッセイによって、または例えばＣＦＳＥ希釈もしくはヨウ化プロピジウム染色などのようなフローサイトメトリー系アッセイによって測定される、がん細胞のアポトーシスまたは溶解の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４４２】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えばＭＴＴ、Ｃｒ放出、カルサインＡＭなどの細胞傷害性アッセイによって、または例えばＣＦＳＥ希釈もしくはヨウ化プロピジウム染色などのようなフローサイトメトリーに基づくアッセイによって測定される、がん細胞の細胞傷害性または細胞増殖抑制性の効果の刺激の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４４３】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えばＭＴＴ、Ｃｒ放出、カルサインＡＭなどの細胞傷害性アッセイによって、または例えばＣＦＳＥ希釈もしくはヨウ化プロピジウム染色などのようなフローサイトメトリー系アッセイによって測定される、がん細胞の直接殺傷の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４４４】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイ測定は、例えば、サイトカイン分泌によって、または増殖によって、または活性化マーカーの発現の変化によって測定される、Ｔｈ１７活性の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４４５】
一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、例えばＭＴＴ、Ｃｒ放出、カルサインＡＭなどの細胞傷害性アッセイによって、または例えばＣＦＳＥ希釈もしくはヨウ化プロピジウム染色などのようなフローサイトメトリーに基づくアッセイによって測定される、補体依存性細胞傷害性および／または抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性の誘導の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。
【０４４６】
一実施形態では、Ｔ細胞活性化は、例えば、がん細胞のような標的細胞の直接殺傷によって、またはサイトカイン分泌によって、または増殖によって、またはＣＤ１３７、ＣＤ１０７ａ、ＰＤ１などの例のような活性化マーカーの発現の変化によって測定される。Ｔ細胞については、増殖、活性化の細胞表面マーカー（例えば、ＣＤ２５、ＣＤ６９、ＣＤ１３７、ＰＤ１）、細胞傷害性（標的細胞を殺傷する能力）、およびサイトカイン産生（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＦＮγ、ＴＮＦ−ａ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１７Ａ）の増加が、がん細胞殺傷の増強と一致する免疫調節を示し得る。
【０４４７】
一実施形態では、ＮＫ細胞活性化は、例えば、標的細胞、例えばがん細胞の直接的な殺傷によって、またはサイトカイン分泌によって、または例えばＣＤ１０７ａなどのような活性化マーカーの発現の変化によって測定される。ＮＫ細胞については、増殖、細胞傷害性（標的細胞を殺傷し、ＣＤ１０７ａ、グランザイム、およびパーフォリン発現を増加させる能力）、サイトカイン産生（例えば、ＩＦＮγおよびＴＮＦ）、および細胞表面受容体発現（例えば、ＣＤ２５）の増加が、がん細胞の強化された殺傷と一致する免疫調節の指標となり得る。
【０４４８】
一実施形態では、γδ  Ｔ細胞活性化は、例えば、サイトカイン分泌によって、または増殖によって、または活性化マーカーの発現の変化によって測定される。
【０４４９】
一実施形態では、Ｔｈ１細胞活性化は、例えば、サイトカイン分泌によって、または活性化マーカーの発現の変化によって測定される。
【０４５０】
活性または応答の適切な増加（または減少、上で概説したように適切なもの）は、基準試料または対照試料のいずれか、例えば、本発明の抗ＰＶＲＩＧ抗体を含まない試験試料におけるシグナルと比べて、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９８〜９９％パーセントの増加である。同様に、参照対象または対照試料と比較して、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍または５倍の増加が有効性を示す。
【０４５１】
ＸＩＩ．チェックポイント遮断抗体
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、ＰＤ−１阻害剤、ＴＩＭ３阻害剤、ＣＴＬＡ４阻害剤、ＰＤ−Ｌ１阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＬＡＧ３阻害剤、またはそれらの組み合わせなどであるがこれらに限定されないチェックポイント遮断抗体を含む他の治療薬と組み合わされる。
【０４５２】
Ａ．抗ＰＤ１抗体
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、チェックポイント遮断抗体、例えば、抗ＰＤ−１抗体と組み合わせて、がんを有する対象に投与することができる。場合によっては、抗ＰＤ−１抗体にはＸＥＮＰ１３４３２（エフェクター機能が除去されたニボルマブに基づく二価の抗ＰＤ−１ｍＡｂが含まれる。ＸＥＮＰ１３４３２のアミノ酸配列を図８６に示す。その他の場合、抗ＰＤ−１抗体にはＸＥＮＰ２５９５１（ＸＥＮＰ２５８５０からのＰＤ−１標的化アームに基づく一価の抗ＰＤ−１Ｆａｂ−Ｆｃ、ＸＥＮＰ２５９５１のアミノ酸配列を図８７に示す）が含まれる。
【０４５３】
例示的な非限定的な抗ＰＤ−１抗体分子は、参照によりその全体が組み込まれる、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｔｏ  ＰＤ−１  ａｎｄ  Ｕｓｅｓ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」という名称の、２０１５年７月３０日に公開されたＵＳ２０１５／０２１０７６９に開示されている。
【０４５４】
一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、少なくとも１つまたは２つの重鎖可変ドメイン（任意選択で定常領域を含む）、少なくとも１つまたは２つの軽鎖可変ドメイン（任意選択で定常領域を含む）、またはその両方を含み、ＢＡＰ０４９−Ｃｌｏｎｅ−Ａ、ＢＡＰ０４９−Ｃｌｏｎｅ−Ｂ、ＢＡＰ０４９−Ｃｌｏｎｅ−Ｃ、ＢＡＰ０４９−Ｃｌｏｎｅ−Ｄ、またはＢＡＰ０４９−Ｃｌｏｎｅ−Ｅのアミノ酸配列、ＵＳ２０１５／０２１０７６９の表１に記載されているか、または表１のヌクレオチド配列によってコードされているようなもの、または、前述の配列のいずれかと実質的に同一の配列（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上同一）の配列を含む。抗ＰＤ−１抗体分子は、任意選択で、ＵＳ２０１５／０２１０７６９の表４に示されているように、重鎖、軽鎖、またはその両方からのリーダー配列、またはそれと実質的に同一の配列を含む。
【０４５５】
さらに別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載の抗体、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−Ｃｌｏｎｅ−Ａ、ＢＡＰ０４９−Ｃｌｏｎｅ−Ｂ、ＢＡＰ０４９−Ｃｌｏｎｅ−Ｃ、ＢＡＰ０４９−Ｃｌｏｎｅ−Ｄ、またはＢＡＰ０４９−Ｃｌｏｎｅ−Ｅのいずれかから選択される抗体；または表１に記載されているか、または表１のヌクレオチド配列によってコードされているもの、または、前述の配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一）の配列の重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、または３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【０４５６】
さらに別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＵＳ  ２０１５／０２１０７６９の表１に示されるか、または表１に示すヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲ（または集合的に全てのＣＤＲ）を含む。一実施形態では、１つ以上のＣＤＲ（または集合的に全てのＣＤＲ）は、表１に示されるかまたは表１に示すヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列に対して、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ以上の変化、例えば、アミノ酸置換または欠失を有する。
【０４５７】
さらに別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＵＳ  ２０１５／０２１０７６９の表１に示されるか、または表１に示すヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲ（または集合的に全てのＣＤＲ）を含む。一実施形態では、１つ以上のＣＤＲ（または集合的に全てのＣＤＲ）は、表１に示されるかまたは表１に示すヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列に対して、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ以上の変化、例えば、アミノ酸置換または欠失を有する。特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、軽鎖ＣＤＲにおける置換、例えば、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３における１つ以上の置換を含む。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、軽鎖可変領域の位置１０２での軽鎖ＣＤＲ３の置換、例えば、システインからチロシンへの置換、または表１による軽鎖可変領域（例えば、マウスまたはキメラの場合は配列番号１６または２４、未修飾；または改変された配列の場合は、配列番号３４、４２、４６、５４、５８、６２、６６、７０、７４、または７８のいずれか）の位置１０２でのシステインからセリン残基への置換を含む。
【０４５８】
別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＵＳ２０１５／０２１０７６９の表１に示されるか、または表１に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む、重鎖および軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つのＣＤＲ（または集合的に全てのＣＤＲ）を含む。一実施形態では、１つ以上のＣＤＲ（または集合的に全てのＣＤＲ）は、表１に示されるかまたは表１のヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列に対して、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ以上の変化、例えば、アミノ酸置換または欠失を有する。
【０４５９】
一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は以下を含む：
【０４６０】
（ａ）配列番号４のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；配列番号１３のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３３のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）、この各々はＵＳ２０１５／０２１０７６９の表１に開示されている、
【０４６１】
（ｂ）配列番号１から選択されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ；配列番号１０のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３２のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ、この各々はＵＳ２０１５／０２１０７６９の表１に開示されている、
【０４６２】
（ｃ）配列番号２２４のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ；配列番号１３のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３３のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ、この各々はＵＳ２０１５／０２１０７６９の表１に開示されている、または
【０４６３】
（ａ）配列番号２２４のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ；配列番号１０のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３２のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ、この各々はＵＳ２０１５／０２１０７６９の表１に開示されている。
【０４６４】
別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、（ｉ）配列番号１、配列番号４、または配列番号２２４から選択されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２または配列番号５のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；および（ｉｉ）配列番号１０または配列番号１３のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１または配列番号１４のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３２または配列番号３３のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）、この各々はＵＳ２０１５／０２１０７６９の表１に開示されている。
【０４６５】
他の実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、またはピジリズマブから選択される抗ＰＤ−１抗体である。
【０４６６】
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体はニボルマブである。ニボルマブの別名には、ＭＤＸ−１１０６、ＭＤＸ−１１０６−０４、ＯＮＯ−４５３８、またはＢＭＳ−９３６５５８が含まれる。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ（ＣＡＳ登録番号：９４６４１４−９４−４）である。ニボルマブは、ＰＤ１を特異的にブロックする完全ヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体である。ニボルマブ（クローン５Ｃ４）およびＰＤ１に特異的に結合する他のヒトモノクローナル抗体は、ＵＳ８，００８，４４９およびＷＯ２００６／１２１１６８に開示されている。一実施形態では、ＰＤ−１の阻害剤はニボルマブであり、本明細書に開示される配列（またはそれと実質的に同一または類似の配列、例えば、指定された配列と少なくとも８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一の配列）を有する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ペンブロリズマブである。ペンブロリズマブは（ランブロリズマブ、ＭＫ−３４７５、ＭＫ０３４７５、ＳＣＨ−９００４７５、またはＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）と呼ばれる；Ｍｅｒｃｋ）は、ＰＤ−１に結合するヒト化ＩｇＧ４のモノクローナル抗体である。ペンブロリズマブおよび他のヒト化抗ＰＤ−１抗体は、Ｈａｍｉｄ，Ｏ．ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３６９  （２）：１３４−４４、ＵＳ８，３５４，５０９、およびＷＯ２００９／１１４３３５に開示されている。
【０４６７】
一実施形態では、ＰＤ−１の阻害剤は、例えば、ＵＳ８，３５４，５０９およびＷＯ２００９／１１４３３５に開示され、本明細書に開示される配列（またはそれと実質的に同一または類似の配列、例えば、指定された配列と少なくとも８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一の配列）を有する。
【０４６８】
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ピジリズマブである。ピジリズマブ（ＣＴ−０１１、Ｃｕｒｅ  Ｔｅｃｈ）は、ＰＤ１に結合するヒト化ＩｇＧ１ｋモノクローナル抗体である。ピジリズマブおよび他のヒト化抗ＰＤ−１モノクローナル抗体は、ＵＳ８，７４７，８４７およびＷＯ２００９／１０１６１１に開示されている。
【０４６９】
他の抗ＰＤ１抗体には、とりわけ、ＡＭＰ５１４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）、例えば、ＵＳ８，６０９，０８９、ＵＳ２０１０／０２８３３０、および／またはＵＳ２０１２／０１１４６４９に開示されている抗ＰＤ１抗体が含まれる。
【０４７０】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、イムノアドヘシン（例えば、定常領域（例えば、免疫グロブリン配列のＦｃ領域）に融合されたＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２の細胞外またはＰＤ−１結合部分を含む免疫アドヘシン）である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、ＡＭＰ−２２４（Ｂ７−ＤＣＩｇ；Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ；例えば、ＷＯ２０１０／０２７８２７およびＷＯ２０１１／０６６３４２に開示される）であり、ＰＤ−１とＢ７−Ｈ１の間の相互作用を遮断するＰＤ−Ｌ２  Ｆｃ融合可溶性受容体である。
【０４７１】
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質と組み合わせて使用され得る。現在ＦＤＡが承認している２つの抗体、ペンブロリズマブとニボリズマブを含むがこれらに限定されないいくつかの抗ＰＤ−１抗体、およびチスレリズマブ、Ｓｙｍ０２１、ＲＥＧＮ２８１０（Ｒｅｎｇｅｎｅｒｏｎによって開発）、ＪＮＪ−６３７２３２８３（Ｊ  ａｎｄ  Ｊによって開発）、ＳＨＲ−１２１０、ピジリズマブ、ＡＭＰ−２２４、ＭＥＤＩｏ６８０、ＰＤＲ００１、およびＣＴ−００１、ならびに参照により明示的に組み込まれる、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｈｅｍａｔ．＆Ｏｎｃｏｌ．２０１７）１０：１３６に概説される他のものを含むがこれらに限定されない、現在臨床試験中のものが存在する。
【０４７２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、ＰＤ−１阻害剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体）と組み合わせて使用することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質（例えば、ＸＥＮＰ２５９３７およびＸＥＮＰ２５８５０）は、抗ＰＤ−１抗体と組み合わせて投与される。
【０４７３】
Ｂ．抗ＴＩＭ３抗体
例示的な非限定的な抗ＴＩＭ−３抗体分子は、参照によりその全体が組み込まれる、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｔｏ  ＴＩＭ−３  ａｎｄ  Ｕｓｅｓ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」という名称の、２０１５年８月６日に公開されたＵＳ２０１５／０２１８２７４に開示されている。
【０４７４】
一実施形態では、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、少なくとも１つまたは２つの重鎖可変ドメイン（任意選択で定常領域を含む）、少なくとも１つまたは２つの軽鎖可変ドメイン（任意選択で定常領域を含む）、またはその両方を含み、ＡＢＴＩＭ３、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０１、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０２、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０３、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０４、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０５、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０６、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０７、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０８、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０９、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１０、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１１、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１２、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１３、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１４、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１５、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１６、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１７、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１８、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１９、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ２０、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ２１、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ２２、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ２３のアミノ酸配列、ＵＳ２０１５／０２１８２７４の表１〜４に記載されているか、または表１〜４のヌクレオチド配列によってコードされているようなもの、または、前述の配列のいずれかと実質的に同一の配列（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上同一）の配列を含む。抗ＴＩＭ−３抗体分子は、任意選択で、ＵＳ２０１５／０２１８２７４に示されているように、重鎖、軽鎖、またはその両方からのリーダー配列、またはそれと実質的に同一の配列を含む。
【０４７５】
さらに別の実施形態では、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、本明細書に記載の抗体、ＡＢＴＩＭ３、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０１、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０２、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０３、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０４、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０５、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０６、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０７、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０８、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０９、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１０、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１１、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１２、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１３、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１４、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１５、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１６、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１７、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１８、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１９、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ２０、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ２１、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ２２、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ２３のいずれかから選択される抗体；またはＵＳ２０１５／０２１８２７４の表１〜４に記載されているか、または表１〜４のヌクレオチド配列によってコードされているもの、または、前述の配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一）の配列の重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、または３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【０４７６】
さらに別の実施形態では、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、ＵＳ２０１５／０２１８２７４の表１〜４に示されるか、または表１〜４に示すヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲ（または集合的に全てのＣＤＲ）を含む。一実施形態では、１つ以上のＣＤＲ（または集合的に全てのＣＤＲ）は、表１〜４に示されるかまたは表１〜４に示すヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列に対して、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ以上の変化、例えば、アミノ酸置換または欠失を有する。
【０４７７】
さらに別の実施形態では、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、ＵＳ２０１５／０２１８２７４の表１〜４に示されるか、または表１〜４に示すヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲ（または集合的に全てのＣＤＲ）を含む。一実施形態では、１つ以上のＣＤＲ（または集合的に全てのＣＤＲ）は、表１〜４に示されるかまたは表１〜４に示すヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列に対して、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ以上の変化、例えば、アミノ酸置換または欠失を有する。特定の実施形態では、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、軽鎖ＣＤＲにおける置換、例えば、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３における１つ以上の置換を含む。
【０４７８】
別の実施形態では、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、ＵＳ２０１５／０２１８２７４の表１〜４に示されるか、または表１〜４に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む、重鎖および軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つのＣＤＲ（または集合的に全てのＣＤＲ）を含む。一実施形態では、１つ以上のＣＤＲ（または集合的に全てのＣＤＲ）は、表１〜４に示されるかまたは表１〜４に示すヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列に対して、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ以上の変化、例えば、アミノ酸置換または欠失を有する。
【０４７９】
一実施形態では、抗ＴＩＭ−３抗体分子は以下を含む：
（ａ）配列番号９から選択されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１０のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号５のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むを含む重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに、配列番号１２のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号１４のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）、この各々は、ＵＳ２０１５／０２１８２７４の表１〜４に開示されている、
（ｂ）配列番号３から選択されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号４のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号５のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ；配列番号６のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号８のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ、この各々はＵＳ２０１５／０２１８２７４の表１〜４に開示されている、
（ｃ）配列番号９から選択されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２５のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号５のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ；配列番号１２のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号１４のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ、この各々はＵＳ２０１５／０２１８２７４の表１〜４に開示されている、
（ｄ）配列番号３から選択されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２４のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号５のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ；配列番号６のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号８のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ、この各々はＵＳ２０１５／０２１８２７４の表１〜４に開示されている、
（ｅ）配列番号９から選択されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号３１のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号５のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ；配列番号１２のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号１４のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ、この各々はＵＳ２０１５／０２１８２７４の表１〜４に開示されている、または
（ｆ）配列番号３から選択されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号３０のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号５のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ；配列番号６のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号８のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ、この各々はＵＳ２０１５／０２１８２７４の表１〜４に開示されている。
【０４８０】
例示的な抗ＴＩＭ−３抗体は、米国特許出願第８，５５２，１５６号、ＷＯ２０１１／１５５６０７、ＥＰ２５８１１１３、および米国特許出願公開第２０１４／０４４７２８号に開示されている。
【０４８１】
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＭ−３抗体は、本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質と組み合わせて使用され得る。ＭＢＧ４５３およびＴＳＲ−０２２を含むがこれらに限定されない、臨床開発中のいくつかのＴＩＭ−３抗体がある。
【０４８２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、ＴＩＭ−３阻害剤（例えば、抗ＴＩＭ３抗体）と組み合わせて使用することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＴＩＭ３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質（例えば、ＸＥＮＰ２５９３７およびＸＥＮＰ２５８５０）は、抗ＰＤ−１抗体と組み合わせて投与される。
【０４８３】
Ｃ．抗ＣＴＬＡ４抗体
例示的な抗ＣＴＬＡ４抗体には、トレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒから入手可能なＩｇＧ２モノクローナル抗体、以前はチシリムマブ、ＣＰ−６７５，２０６として知られていた）、およびｄｉｍ（ＣＴＬＡ−４抗体、ＭＤＸ−０１０、ＣＡＳ番号４７７２０２−００−９としても知られている）が含まれる。他の例示的な抗ＣＴＬＡ−４抗体は、例えば、米国特許第５，８１１，０９７号に開示されている。
【０４８４】
一実施形態では、抗ＣＴＬＡ４抗体は、例えば、米国特許第５，８１１，０９７号、米国特許第７，６０５，２３８号、ＷＯ００／３２２３１、およびＷＯ９７／２０５７４に開示されるイピリムマブであり、本明細書に開示される配列（またはそれと実質的に同一または類似の配列、例えば、指定された配列と少なくとも８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一である配列）を有する。
【０４８５】
一実施形態では、抗ＣＴＬＡ４抗体は、例えば、ＵＳ６，６８２，７３６およびＷＯ００／３７５０４に開示されるトレメリムマブであり、本明細書に開示される配列（またはそれと実質的に同一または類似の配列、例えば、指定された配列と少なくとも８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一である配列）を有する。
【０４８６】
いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質と組み合わせて使用され得る。したがって、本明細書に概説されるような組み合わせ療法で使用するのに適した抗ＣＴＬＡ−４抗体には、現在ＦＤＡが承認した抗体イピリムマブが、およびＣＰ−６７５，２０６およびＡＧＥＮ−１８８４を含むさらにいくつかのものが含まれるが、これらに限定されない。
【０４８７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＴＬＡ−４標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、ＣＴＬＡ−４阻害剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体）と組み合わせて使用することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＣＴＬＡ−４標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質（例えば、ＸＥＮＰ２５９３７およびＸＥＮＰ２５８５０）は、抗ＰＤ−１抗体と組み合わせて投与される。
【０４８８】
Ｄ．抗ＰＤ−Ｌ１抗体
例示的な非限定的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、参照によりその全体が組み込まれる、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｔｏ  ＰＤ−Ｌ１  ａｎｄ  Ｕｓｅｓ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」という名称の、２０１６年４月２１日に公開されたＵＳ２０１６／０１０８１２３に開示されている。
【０４８９】
一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、少なくとも１つまたは２つの重鎖可変ドメイン（任意選択で定常領域を含む）、少なくとも１つまたは２つの軽鎖可変ドメイン（任意選択で定常領域を含む）、またはその両方を含み、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ１７、ＢＡＰ０５８−Ｃｌｏｎｅ−Ｋ、ＢＡＰ０５８−Ｃｌｏｎｅ−Ｌ、ＢＡＰ０５８−Ｃｌｏｎｅ−Ｍ、ＢＡＰ０５８−Ｃｌｏｎｅ−Ｎ、またはＢＡＰ０５８−Ｃｌｏｎｅ−Ｏのアミノ酸配列、ＵＳ２０１６／０１０８１２３の表１に記載されているか、または表１のヌクレオチド配列によってコードされているようなもの、または、前述の配列のいずれかと実質的に同一の配列（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上同一）の配列を含む。
【０４９０】
さらに別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、本明細書に記載の抗体、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０５８−ｈｕｍ１７、ＢＡＰ０５８−Ｃｌｏｎｅ−Ｋ、ＢＡＰ０５８−Ｃｌｏｎｅ−Ｌ、ＢＡＰ０５８−Ｃｌｏｎｅ−Ｍ、ＢＡＰ０５８−Ｃｌｏｎｅ−Ｎ、またはＢＡＰ０５８−Ｃｌｏｎｅ−Ｏのいずれかから選択される抗体；またはＵＳ２０１６／０１０８１２３の表１に記載されているか、または表１のヌクレオチド配列によってコードされているもの、または、前述の配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一）の配列の重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、または３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【０４９１】
さらに別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、ＵＳ２０１６／０１０８１２３の表１に示されるか、または表１に示すヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲ（または集合的に全てのＣＤＲ）を含む。一実施形態では、１つ以上のＣＤＲ（または集合的に全てのＣＤＲ）は、表１に示されるかまたは表１に示すヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列に対して、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ以上の変化、例えば、アミノ酸置換または欠失を有する。
【０４９２】
さらに別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、ＵＳ２０１６／０１０８１２３の表１に示されるか、または表１に示すヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲ（または集合的に全てのＣＤＲ）を含む。一実施形態では、１つ以上のＣＤＲ（または集合的に全てのＣＤＲ）は、表１に示されるかまたは表１に示すヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列に対して、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ以上の変化、例えば、アミノ酸置換または欠失を有する。特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、軽鎖ＣＤＲにおける置換、例えば、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３における１つ以上の置換を含む。
【０４９３】
別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、表１に示されるか、またはＵＳ２０１６／０１０８１２３の表１に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む、重鎖および軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つのＣＤＲ（または集合的に全てのＣＤＲ）を含む。一実施形態では、１つ以上のＣＤＲ（または集合的に全てのＣＤＲ）は、表１に示されるかまたは表１に示すヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列に対して、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ以上の変化、例えば、アミノ酸置換または欠失を有する。
【０４９４】
一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は以下を含む：
（ｉ）配列番号１、配列番号４、または配列番号１９５から選択されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、この各々は、ＵＳ２０１６／０１０８１２３の表１に開示されている、
（ｉｉ）配列番号９のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１０のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号１１のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）、この各々は、ＵＳ２０１６／０１０８１２３の表１に開示されている。
【０４９５】
別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は以下を含む：
（ｉ）配列番号１、配列番号４、または配列番号１９５から選択されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、この各々は、ＵＳ２０１６／０１０８１２３の表１に開示されている、
（ｉｉ）配列番号１２のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号１４のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）、この各々は、ＵＳ２０１６／０１０８１２３の表１に開示されている。
【０４９６】
一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、配列番号１のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、配列番号４のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列を含む。さらに別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、配列番号１９５のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列を含み、この各々は、ＵＳ２０１６／０１０８１２３の表１に開示されている。
【０４９７】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は抗体分子である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ−４７３６、ＭＳＢ−００１０７１８Ｃ、ＭＤＸ−１１０５、アテゾリズマブ、ダルバルマブ、アベルマブ、またはＢＭＳ９３６５５９から選択される。
【０４９８】
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、アテゾリズマブである。アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０ＡおよびＡｔｅｚｏ（登録商標）；Ｒｏｃｈｅとも呼ばれる）は、ＰＤ−Ｌ１に結合するモノクローナル抗体である。アテゾリズマブおよび他のヒト化抗ＰＤ−Ｌ１抗体はＵＳ８，２１７，１４９に開示されており、本明細書に開示される配列（またはそれと実質的に同一または類似の配列、例えば、指定された配列と少なくとも８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一である配列）を有する。
【０４９９】
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体はアベルマブである。アベルマブ（Ａ０９−２４６−２；Ｍｅｒｃｋ  Ｓｅｒｏｎｏとも呼ばれる）は、ＰＤ−Ｌ１に結合するモノクローナル抗体である。アベルマブおよび他のヒト化抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＵＳ９，３２４，２９８およびＷＯ２０１３／０７９１７４に開示され、本明細書に開示される配列（またはそれと実質的に同一または類似の配列、例えば、指定された配列と少なくとも８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一である配列）を有する。
【０５００】
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、デュルバルマブである。デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６；ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａとも呼ばれる）は、ＰＤ−Ｌ１に結合するモノクローナル抗体である。デュルバルマブおよび他のヒト化抗ＰＤ−Ｌ１抗体はＵＳ８，７７９，１０８に開示されており、本明細書に開示される配列（またはそれと実質的に同一または類似の配列、例えば、指定された配列と少なくとも８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一である配列）を有する。
【０５０１】
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＢＭＳ−９３６５５９である。ＢＭＳ−９３６５５９（ＭＤＸ−１１０５；ＢＭＳとも呼ばれる）は、ＰＤ−Ｌ１に結合するモノクローナル抗体である。ＢＭＳ−９３６５５９および他のヒト化抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＵＳ７，９４３，７４３およびＷＯ２００７／００５８７４に開示され、本明細書に開示される配列（またはそれと実質的に同一または類似の配列、例えば、指定された配列と少なくとも８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一である配列）を有する。
【０５０２】
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質と組み合わせて使用され得る。現在ＦＤＡが承認している３つの抗体、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、およびＬＹ３３００００５４とＣＳ１００１を含むがこれらに限定されない現在臨床試験中の抗体、ならびにＬｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｈｅｍａｔ．＆  Ｏｎｃｏｌ．（２０１７）１０：１３６に概説されるいくつかの抗ＰＤ−Ｌ１抗体が存在し、その中の抗体は、参照により明示的に組み込まれる。
【０５０３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰＤ−Ｌ１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体）と組み合わせて使用することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＰＤ−Ｌ１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質（例えば、ＸＥＮＰ２５９３７およびＸＥＮＰ２５８５０）は、抗ＰＤ−１抗体と組み合わせて投与される。
【０５０４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２阻害剤（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体）と組み合わせて使用することができる。
【０５０５】
Ｅ．抗ＴＩＧＩＴ抗体
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体はＯＭＰ−３１３Ｍ３２である。ＯＭＰ−３１３Ｍ３２（ＯｎｃｏＭｅｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）は、ＴＩＧＩＴに結合するモノクローナル抗体である。ＯＭＰ−３１３Ｍ３２および他のヒト化抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＵＳ２０１６／０３７６３６５およびＷＯ２０１６／１９１６４３に開示され、本明細書に開示される配列（またはそれと実質的に同一または類似の配列、例えば、指定された配列と少なくとも８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一である配列）を有する。
【０５０６】
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体はＢＭＳ−９８６２０７である。ＢＭＳ−９８６２０７（ＯＮＯ−４６８６；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂとも呼ばれる）は、ＴＩＧＩＴに結合するモノクローナル抗体である。ＢＭＳ−９８６２０７および他のヒト化抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＵＳ２０１６／０１７６９６３およびＷＯ２０１６／１０６３０２に開示され、本明細書に開示される配列（またはそれと実質的に同一または類似の配列、例えば、指定された配列と少なくとも８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一である配列）を有する。
【０５０７】
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体はＭＴＩＧ７１９２である。ＭＴＩＧ７１９２（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）は、ＴＩＧＩＴに結合するモノクローナル抗体である。ＭＴＩＧ７１９２および他のヒト化抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＵＳ２０１７／０８８６１３、ＷＯ２０１７／０５３７４８およびＷＯ２０１６／０１１２６４に開示され、本明細書に開示される配列（またはそれと実質的に同一または類似の配列、例えば、指定された配列と少なくとも８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一である配列）を有する。
【０５０８】
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質と組み合わせて使用され得る。臨床開発中のいくつかのＴＩＧＩＴ抗体、ＢＭＳ−９８６２０７、ＯＭＰ−３１３Ｍ３２、およびＭＴＩＧ７１９２Ａがある。
【０５０９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、ＴＩＧＩＴ阻害剤（例えば、抗ＴＩＧＩＴ抗体）と組み合わせて使用することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質（例えば、ＸＥＮＰ２５９３７およびＸＥＮＰ２５８５０）は、抗ＴＩＧＩＴ抗体と組み合わせて投与される。
【０５１０】
Ｆ．抗ＬＡＧ−３抗体
例示的な非限定的な抗ＬＡＧ−３抗体分子は、参照によりその全体が組み込まれる、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｔｏ  ＬＡＧ−３  ａｎｄ  Ｕｓｅｓ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」という名称の、２０１５年９月１７日に公開されたＵＳ２０１５／０２５９４２０に開示されている。
【０５１１】
一実施形態では、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１７、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１８、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１９、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ２０、ｈｕＢＡＰ０５０（Ｓｅｒ）（例えば、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０１−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０２−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０３−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０４−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０５−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０６−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０７−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０８−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０９−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１０−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１１−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１２−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１３−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１４−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１５−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１８−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１９−Ｓｅｒ、またはＢＡＰ０５０−ｈｕｍ２０−Ｓｅｒ）、ＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−Ｆ、ＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−Ｇ、ＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−Ｈ、ＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−Ｉ、またはＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−Ｊ、またはＵＳ２０１５／０２５９４２０の表１に記載されているか、または表１のヌクレオチド配列によってコードされているか、または、前述の配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一）の配列のうちの任意のアミノ酸配列を含む、少なくとも１つまたは２つの重鎖可変ドメイン（任意選択で定常領域を含む）、少なくとも１つまたは２つの軽鎖可変ドメイン（任意選択で定常領域を含む）、またはその両方を含む。
【０５１２】
さらに別の実施形態では、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、例えば、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１７、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１８、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１９、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ２０、ｈｕＢＡＰ０５０（Ｓｅｒ）（例えば、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０１−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０２−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０３−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０４−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０５−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０６−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０７−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０８−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０９−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１０−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１１−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１２−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１３−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１４−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１５−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１８−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１９−Ｓｅｒ、またはＢＡＰ０５０−ｈｕｍ２０−Ｓｅｒ）、ＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−Ｆ、ＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−Ｇ、ＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−Ｈ、ＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−Ｉ、またはＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−Ｊ、またはＵＳ２０１５／０２５９４２０の表１に記載されているか、または表１のヌクレオチド配列によってコードされているか、または、前述の配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一）の配列のうちの任意のアミノ酸配列の、本明細書に記載の抗体の重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、または３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【０５１３】
さらに別の実施形態では、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、ＵＳ  ２０１５／０２５９４２０の表１に示されるか、または表１に示すヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲ（または集合的に全てのＣＤＲ）を含む。一実施形態では、１つ以上のＣＤＲ（または集合的に全てのＣＤＲ）は、表１に示されるかまたは表１に示すヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列に対して、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ以上の変化、例えば、アミノ酸置換または欠失を有する。
【０５１４】
さらに別の実施形態では、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、ＵＳ２０１５／０２５９４２０の表１に示されるか、または表１に示すヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲ（または集合的に全てのＣＤＲ）を含む。一実施形態では、１つ以上のＣＤＲ（または集合的に全てのＣＤＲ）は、表１に示されるかまたは表１に示すヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列に対して、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ以上の変化、例えば、アミノ酸置換または欠失を有する。特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子は、軽鎖ＣＤＲにおける置換、例えば、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３における１つ以上の置換を含む。
【０５１５】
別の実施形態では、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、表１に示されるか、またはＵＳ２０１５／０２５９４２０の表１に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む、重鎖および軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つのＣＤＲ（または集合的に全てのＣＤＲ）を含む。一実施形態では、１つ以上のＣＤＲ（または集合的に全てのＣＤＲ）は、表１に示されるかまたは表１に示すヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列に対して、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ以上の変化、例えば、アミノ酸置換または欠失を有する。
【０５１６】
一実施形態では、抗ＬＡＧ−３抗体分子は以下を含む：
（ｉ）配列番号１、配列番号４、または配列番号２８６から選択されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、この各々は、ＵＳ２０１５／０２５９４２０の表１に開示されている、
（ｉｉ）配列番号１０のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号１２のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）、この各々は、ＵＳ２０１５／０２５９４２０の表１に開示されている。
【０５１７】
別の実施形態では、抗ＬＡＧ−３抗体分子は以下を含む：
（ｉ）配列番号１、配列番号４、または配列番号２８６から選択されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、この各々は、ＵＳ２０１５／０２５９４２０の表１に開示されている、
（ｉｉ）配列番号１３のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号１５のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）、この各々は、ＵＳ２０１５／０２５９４２０の表１に開示されている。
【０５１８】
一実施形態では、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、配列番号１のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、配列番号４のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列を含む。さらに別の実施形態では、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、配列番号２８６のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列を含み、この各々は、ＵＳ２０１５／０２５９４２０の表１に開示されている。
【０５１９】
いくつかの実施形態では、抗ＬＡＧ−３抗体は、ＢＭＳ−９８６０１６である。ＢＭＳ−９８６０１６（ＢＭＳ９８６０１６；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂとも呼ばれる）は、ＬＡＧ−３に結合するモノクローナル抗体である。ＢＭＳ−９８６０１６および他のヒト化抗ＬＡＧ−３抗体は、ＵＳ２０１１／０１５０８９２、ＷＯ２０１０／０１９５７０、およびＷＯ２０１４／００８２１８に開示されている。
【０５２０】
いくつかの実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体は、ＬＡＧ５２５である。ＬＡＧ５２５（ＩＭＰ７０１；Ｎｏｖａｒｔｉｓとも呼ばれる）は、ＬＡＧ３に結合するモノクローナル抗体である。ＬＡＧ５２５および他のヒト化抗ＬＡＧ３抗体は、ＵＳ９，２４４，０５９およびＷＯ２００８／１３２６０１に開示され、本明細書に開示される配列（またはそれと実質的に同一または類似の配列、例えば、指定された配列と少なくとも８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一である配列）を有する。
【０５２１】
他の例示的な抗ＬＡＧ−３抗体は、例えば、ＵＳ２０１１／１５０８９２およびＵＳ２０１８／０６６０５４に開示されている。
【０５２２】
いくつかの実施形態では、抗ＬＡＧ−３抗体は、本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質と組み合わせて使用され得る。ＲｅｇｅｎｅｒｏｎによるＲＥＧＮ３７６７およびＴＳＲ−０３３（Ｔｅｓａｒｏ）を含む、臨床開発中のいくつかの抗ＬＡＧ−３抗体がありまる。
【０５２３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、ＬＡＧ阻害剤（例えば、抗ＬＡＧ−３抗体）と組み合わせて使用することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のＬＡＧ３標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質（例えば、ＸＥＮＰ２５９３７およびＸＥＮＰ２５８５０）は、抗ＰＤ−１抗体と組み合わせて投与される。
【０５２４】
ＸＩＩＩ．組み合わせ療法
いくつかの態様では、本明細書に記載のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、別の治療薬と組み合わせて投与される。本明細書で使用される「組み合わせて」投与されるとは、対象が障害に苦しんでいる過程で２つ（またはそれ以上）の異なる治療が対象に提供されることを意味し、例えば、対象が障害があると診断された後に、障害が治癒もしくは解消される前、または他の理由で治療が中止される前に、２つ以上の治療が提供される。いくつかの実施形態では、１つの治療の送達は、第２の治療の送達が開始されたときにまだ起こっているので、投与に関して重複がある。これは、本明細書では「同時」または「同時送達」と呼ばれることもある。他の実施形態では、一方の治療の送達は、他方の治療の送達が始まる前に終了する。いずれかの場合のいくつかの実施形態では、治療は、併用投与のためにより効果的である。例えば、第２の治療はより効果的であり、例えば、第２の治療がより少なくて同等の効果が見られるか、または第２の治療が第１の治療の非存在下で投与された場合に見られるよりも症状を大幅に軽減するか、または同様の状況が第１の治療で見られる。いくつかの実施形態では、送達は、症状の減少、または障害に関連する他のパラメータが、他方の非存在下で送達された一方の治療で観察されるものよりも大きいようなものである。２つの治療の効果は、部分的に相加的、完全に相加的、または相加的より大きくあり得る。送達は、送達された第１の治療の効果が、第２の治療が送達されたときに依然として検出可能であるようなものであり得る。
【０５２５】
本明細書に記載のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質（ＸＥＮＰ２５９３７およびＸＥＮＰ２５８５０などであるがこれらに限定されない）ならびに少なくとも１つの追加の治療薬は、同じまたは別々の組成物で同時に、または逐次的に投与することができる。逐次的な投与の場合、本明細書に記載のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質を１番目に投与し、追加の薬剤を２番目に投与するか、または投与の順序を逆にすることができる。
【０５２６】
本明細書に記載のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質および／または他の治療薬、手順またはモダリティは、活動性の高い障害の期間中、または寛解期間または活動性の低い疾患の期間中に投与することができる。ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、他の治療の前、治療と同時に、治療後、または障害の寛解中に投与することができる。
【０５２７】
組み合わせて投与される場合、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質（ＸＥＮＰ２５９３７およびＸＥＮＰ２５８５０などであるが、これらに限定されない）ならびに追加の薬剤（例えば、第２または第３の薬剤）、または全てが個別に使用される、例えば単剤療法として使用される各薬剤の量または投与量よりも少ないかまたは同じ量または投与量で投与できる。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質、追加の薬剤（例えば、第２または第３の薬剤）、または全ての投与量または投与量は、個別に使用される、例えば単剤療法として使用される各薬剤の量または投与量よりも、より少ない（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％低い）。他の実施形態では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質、追加の薬剤（例えば、第２または第３の薬剤）、または全ての、所望の効果（例えば、がんの治療）をもたらす量または投与量は、同じ治療効果を達成するために必要とされる個別に使用される、例えば単剤療法として使用される量または投与量よりも低い（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％低い）。
【０５２８】
さらなる態様では、本明細書に記載されるＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質（ＸＥＮＰ２５９３７およびＸＥＮＰ２５８５０などであるが、これらに限定されない）は、化学療法、放射線、免疫抑制剤、例えば、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノラート、およびＦＫ５０６など、チェックポイント阻害剤に対する抗体、または他の免疫除去剤、例えば、ＣＡＭＰＡＴＨ、他の抗体療法、サイトキサン、フルダラビン、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１６５、サイトカイン、および照射、Ｉｚｕｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．２００８  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ  １０８：９６３−９７１に記載されているようなペプチドワクチンと組み合わせた治療レジメンで使用され得る。
【０５２９】
特定の例において、本発明の化合物は、他の抗がん剤、抗アレルギー剤、抗悪心剤（または制吐剤）、鎮痛剤、細胞保護剤、およびそれらの組み合わせなどの他の治療薬と組み合わされる。
【０５３０】
一実施形態では、本明細書に記載のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質（ＸＥＮＰ２５９３７およびＸＥＮＰ２５８５０などであるが、これらに限定されない）は、化学療法剤と組み合わせて使用することができる。例示的な化学療法剤には、アントラサイクリン（例えば、イブルチニブ、ダウノルビシン、ドキソルビシン（例えば、リポソームドキソルビシン））、アントラセンジオン誘導体（例えば、ミトキサントロン）、ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン）、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、ダカルバジン、メルファラン、イフォスファミド、テモゾロミド）、免疫細胞抗体（例えば、アレムツザマブ、ゲムツズマブ、リツキシマブ、オファツムマブ、トシツモマブ、ブレンツキシマブ）、代謝拮抗剤（例えば、葉酸拮抗薬、シタラビン、ピリミジン類似体、プリン類似体およびアデノシンデアミナーゼ阻害剤（例えば、フルダラビン）を含む）、ｍＴＯＲ阻害剤、ＴＮＦＲグルココルチコイド誘導ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）アゴニスト、プロテアソーム阻害剤（例えば、アクラシノマイシンＡ、グリオトキシンまたはボルテゾミブ）、サリドマイドまたはサリドマイド誘導体（例えば、レナリドマイド）などの免疫調節剤誘導体、イブルチニブ（例えば、インブルビカ）などのキナーゼ阻害剤、コルチコステロイド（例えば、デキサメタゾン、プレドニソン）、およびエトポシド（例えば、ＶＰ−１６）を含むかまたは含まないＣＶＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、およびプレドニゾンの組み合わせ）、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ヒドロキシダウノルビシン、Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標）（ビンクリスチン）、およびプレドニゾンの組み合わせ）、シクロホスファミドとペントスタチンの組み合わせ、クロラムブシルとプレドニソンの組み合わせ、フルダラビンとシクロホスファミドの組み合わせ、または塩酸メクロレタミン（例えば、Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ）、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、メトトレキサート、オキサリプラチン、またはシタラビン（ａｒａ−Ｃ）などの別の薬剤が含まれる。
【０５３１】
組み合わせ療法での使用が検討されている一般的な化学療法剤には、アナストロゾール（Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標））、ビカルタミド（Ｃａｓｏｄｅｘ（登録商標））、硫酸ブレオマイシン（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））、ブスルファン（Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））、ブスルファン注射（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標））、カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ（登録商標））、Ｎ４−ペントキシカルボニル−５−デオキシ−５−フルオロシチジン、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））、クラドリビン（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）またはＮｅｏｓａｒ（登録商標））、シタラビン、シトシンアラビノシド（Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標））、シタラビンリポソーム注射（ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））、ダクチノマイシン（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ  Ｄ、Ｃｏｓｍｅｇａｎ）、塩酸ダウノルビシン（Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））、クエン酸ダウノルビシンリポソーム注射（ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））、デキサメタゾン、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、塩酸ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ｒｕｂｅｘ（登録商標））、エトポシド（Ｖｅｐｅｓｉｄ（登録商標））、リン酸フルダラビン（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標））、５−フルオロウラシル（Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標）、Ｅｆｕｄｅｘ（登録商標））、フルタミド（Ｅｕｌｅｘｉｎ（登録商標））、テザシチビン、ゲムシタビン（ジフルオロデオキシシチジン）、ヒドロキシ尿素（Ｈｙｄｒｅａ（登録商標））、イダルビシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標））、イフォスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））、イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標））、Ｌ−アスパラギナーゼ（ＥＬＳＰＡＲ（登録商標））、ロイコボリンカルシウム、メルファラン（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））、６−メルカプトプリン（Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（登録商標））、メトトレキサート（Ｆｏｌｅｘ（登録商標））、ミトキサントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））、マイロターグ、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、フェニックス（Ｙｔｔｒｉｕｍ９０／ＭＸ−ＤＴＰＡ）、ペントスタチン、カルムスチンインプラントを含むポリフェプロサン２０（Ｇｌｉａｄｅｌ（登録商標））、クエン酸タモキシフェン（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（登録商標））、テニポシド（Ｖｕｍｏｎ（登録商標））、６−チオグアニン、チオテパ、チラパザミン（Ｔｉｒａｚｏｎｅ（登録商標））、注射用塩酸トポテカン（Ｈｙｃａｍｐｔｉｎ（登録商標））、ビンブラスチン（Ｖｅｌｂａｎ（登録商標））、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））、およびビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））が含まれる。
【０５３２】
ＸＩＶ．治療
一旦生成されると、本発明の組成物は、一般に、本発明のヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質の結合Ｔ細胞活を用いて性化を促進すること（例えば、Ｔ細胞はもはや抑制されない）による、がん治療によって、いくつかの腫瘍学適用に使用される。
【０５３３】
したがって、本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質組成物はこれらのがんの治療に使用される。
【０５３４】
Ａ．インビボ投与用のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質組成物
本発明に従って使用される抗体の製剤は、所望の純度の抗体を任意選択の薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定化剤と混合することによって、保存のために、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で調製される（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．［１９８０］に概説されるように）。許容される担体、緩衝剤、賦形剤、または安定剤は、使用される投薬量および濃度において、レシピエントに対して非毒性でありリン酸、クエン酸、および他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、またはベンジルアルコール；メチルまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、リジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、またはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；および／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含む。
【０５３５】
Ｂ．投与様式
本明細書に開示されるＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質および本発明の化学療法剤は、ボーラスとしての静脈内投与またはある期間にわたる持続注入などの公知の方法に従って対象に投与される。
【０５３６】
Ｃ．治療法
本発明の方法において、治療は、疾患または病状に関して肯定的な治療応答を提供するために使用される。「肯定的な治療応答」は、疾患もしくは病状の改善、および／または疾患または病状に関連する症状の改善を意図する。例えば、肯定的な治療応答は、疾患における以下の改善のうちの１つ以上を指し得る：（１）腫瘍細胞の数の減少、（２）腫瘍細胞死の増加、（３）腫瘍細胞の生存の阻害、（５）腫瘍増殖の阻害（すなわち、ある程度の減速、好ましくは停止）、（６）患者生存率の増加、および（７）疾患または病状に関連する１つ以上の症状からのいくらかの解放。
【０５３７】
任意の所与の疾患または病状における肯定的な治療応答は、その疾患または病状に特有の標準化された応答基準によって決定され得る。腫瘍応答は、磁気共鳴画像（ＭＲＩ）スキャン、Ｘ線撮影、コンピューター断層撮影（ＣＴ）スキャン、骨スキャン撮影、内視鏡検査、ならびに骨髄穿刺（ＢＭＡ）および循環中の腫瘍細胞の計数を含む腫瘍生検サンプリングなどのスクリーニング技法を使用して、腫瘍形態（すなわち、全身腫瘍組織量、腫瘍サイズなど）の変化について評価され得る。
【０５３８】
これらの肯定的な治療応答に加えて、治療を受けている対象は、疾患に関連する症状の改善の有益な効果を経験し得る。
【０５３９】
本発明に従う治療には、使用される医薬品の「治療有効量」が含まれる。「治療有効量」は、所望の治療結果を達成するために、必要な投薬量および期間で有効な量をいう。
【０５４０】
治療有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別、および体重、ならびに個体において所望の応答を誘発する薬剤の能力などの因子によって異なり得る。治療有効量はまた、抗体または抗体部分のいずれの毒性または有害な効果よりも治療上有益な効果が勝る量である。
【０５４１】
腫瘍療法のための「治療有効量」は、疾患の進行を安定化する能力によっても測定することができる。がんを阻害する化合物の能力は、ヒト腫瘍における有効性を予測する動物モデル系において評価してもよい。
【０５４２】
あるいは、組成物のこの特性は、当業者に知られているインビトロアッセイによって、化合物が細胞増殖を阻害するか、またはアポトーシスを誘導する能力を検査することによって評価してもよい。治療有効量の治療用化合物は、腫瘍サイズを減少させるか、さもなければ対象の症状を軽減し得る。当業者であれば、対象のサイズ、対象の症状の重症度、および選択される特定の組成物または投与経路などの因子に基づいて、そのような量を決定することができるであろう。
【０５４３】
投薬レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するように調節される。例えば、単回のボーラスを投与してもよく、いくつかの分割用量を経時的に投与してもよく、または治療状況の緊急性によって示されるように用量を比例して減少または増加させてもよい。非経口組成物は、投与の容易性および投薬量の均一性のために、単位剤形で処方され得る。本明細書で使用される単位剤形は、治療される対象のための単一投薬量として好適な物理的に別個の単位を指し、各単位は、必要とされる薬学的担体に関連して所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を含有する。
【０５４４】
本発明の単位剤形形態の仕様は、（ａ）活性化合物の固有の特徴および達成すべき特定の治療効果、ならびに（ｂ）個体における感受性の治療に対してそのような活性化合物を調合する分野に付いて回る制限に影響され、またそれらに直接的に依存する。
【０５４５】
本発明で使用されるＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の効率的な投薬量および投薬レジメンは、治療される疾患または病態に依存し、当業者によって決定され得る。
【０５４６】
本発明で使用されるＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の治療有効量の例示的かつ非限定的な範囲は、約０．１〜１００ｍｇ／ｋｇである。
【０５４７】
すべての引用文献は、本明細書にそれらの全体が参照により明示的に組み込まれる。
【０５４８】
本発明の特定の実施形態を例示の目的で上述のように説明してきたが、添付の特許請求の範囲に記載の本発明から逸脱することなく詳細の多数の変形をなし得ることが当業者には理解されよう。
【実施例】
【０５４９】
本発明を説明するために実施例を以下に提供する。これらの実施例は、本発明を任意の特定の用途または動作理論に限定することを意味するものではない。本発明で論じられるすべての定常領域位置について、付番は、Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ、参照により全体が組み込まれる）と同様のＥＵインデックスに従う。抗体の技術分野の当業者は、この規則が免疫グロブリン配列の特定の領域における非連続的な付番からなり、免疫グロブリンファミリーにおける保存された位置への標準的な基準を可能にすることを理解するであろう。したがって、ＥＵインデックスによって定義されるような任意の所与の免疫グロブリンの位置は必ずしもその連続配列に対応しない。
【０５５０】
一般的および具体的な科学技術は、米国特許出願公開第２０１５／０３０７６２９号、同第２０１４／０２８８２７５号、およびＷＯ２０１４／１４５８０６に概説されており、それらは全て、特にその中に概説されている技術に関して、参照によりそれらの全体が明示的に組み込まれる。２０１６年１１月１日に出願された米国特許出願第６２，４１６，０８７号の実施例１および２は、対応する図も含めて、それらの全体が参照により明示的に組み込まれる。
【０５５１】
ＸＶ．  実施例１：抗ＰＤ−１  ＡＢＤ
Ａ．１Ａ：例示的な抗ＰＤ−１  ＡＢＤ
ＰＤ−１に結合する抗原結合ドメインの例は、ＷＯ２０１７／２１８７０７に記載されており、参照により本明細書に組み込まれ、例えば、その可変ドメインの例示的な配列は図１４に示される。本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質で使用され得るＰＤ−１ＡＢＤの追加の非限定的な例を図１５に示す。
【０５５２】
Ｂ．１Ｂ：抗ＰＤ−１クローン１Ｃ１１の生成
１．１Ｂ（ａ）：抗ＰＤ−１ハイブリドーマの生成およびスクリーニング
さらなるＰＤ−１標的化アームの本発明のＰＤ−標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質を開発するために、モノクローナル抗体を、それらの標準法およびラピッドプライム法によって、ＩｍｍｕｎｏＰｒｅｃｉｓｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｌｔｄ．によってハイブリドーマ技術によって最初に作成した。標準法では、抗原（複数可）を３匹のＢＡＬＢ／ｃマウスに注射した。ハイブリドーマ生成のために犠牲にされる７〜１０日前に、免疫されたマウスは抗原追加免疫を受けた。抗体力価を抗原に対するＥＬＩＳＡによって評価し、そして最も応答のよいマウスを融合のために選択する。最後の抗原追加免疫は融合の４日前に与えられた。マウス由来のリンパ球をプールし、精製し、次いでＳＰ２／０骨髄腫細胞と融合させた。融合細胞をＨＡＴ選択的シングルステップクローニング培地上で１０〜１２日間増殖させ、その時点でハイブリドーマはスクリーニングの準備ができていた。ラピッドプライム法では、抗原（複数可）を３匹のＢＡＬＢ／ｃマウスに注射した。１９日後、全てのマウス由来のリンパ球をプールし、精製し、次いでＳＰ２／０骨髄腫細胞と融合させた。融合細胞をＨＡＴ選択的シングルステップクローニング培地上で１０〜１２日間増殖させ、その時点でハイブリドーマはスクリーニングの準備ができていた。使用した抗原（複数可）は、ヒトＰＤ−１のマウスＦｃ融合体（ｈｕＰＤ−１−ｍＦｃ）、カニクイザルＰＤ−１のマウスＦｃ融合体（ｃｙｎｏＰＤ−１−ｍＦｃ）、Ｈｉｓタグ付きヒトＰＤ−１（ｈｕＰＤ−１−Ｈｉｓ）、Ｈｉｓタグ付きカニクイザルＰＤ−１（ｃｙｎｏＰＤ−１−Ｈｉｓ）またはそれらの混合物であった。
【０５５３】
上述のようにして生成した抗ＰＤ−１ハイブリドーマクローンを、Ｏｃｔｅｔ、ＢｉｏＬａｙｅｒ干渉法（ＢＬＩ）に基づく方法を用いて２回のスクリーニングにかけた。Ｏｃｔｅｔの実験ステップは、一般的に以下を含んでいた：固定化（バイオセンサ上へのリガンドまたは試験物質の捕捉）、会合（対応する試験物質またはリガンドの連続希釈物を含むウェルへのリガンドまたは試験物質をコーティングしたバイオセンサの浸漬）、および試験物質の親和性を決定するための解離（緩衝液を含むウェルにバイオセンサを戻すこと）。緩衝液のみを含む参照ウェルもまた、データ処理中のバックグラウンド補正のための方法に含まれた。
【０５５４】
１回目のラウンドでは、抗マウスＦｃ（ＡＭＣ）バイオセンサを用いてクローンを５００ｎＭの二価ヒトおよびカニクイザルＰＤ−１−Ｆｃ−Ｈｉｓに浸漬して捕捉した。２回目のラウンドでは、１回目のラウンドで同定された、ヒトとカニクイザルのＰＤ−１の両方に陽性のクローンをＡＭＣバイオセンサに捕捉し、５００ｎＭの一価ヒトとカニクイザルのＰＤ−１−Ｈｉｓに浸した。
【０５５５】
２．１Ｂ（ｂ）：クローン１Ｃ１１の分析
実施例１Ｂ（ａ）で同定された１つのハイブリドーマクローンはクローン１Ｃ１１であった。ハイブリドーマクローン１Ｃ１１のＶＨおよびＶＬをコードするＤＮＡを遺伝子合成によって生成し、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ置換を有するヒトＩｇＧ１定常領域を含む発現ベクターｐＴＴ５に標準的な分子生物学技術を用いてサブクローニングしてＸＥＮＰ２１５７５を生成し、その配列を図１６に示す。
１Ｂ（ｂ）（ｉ）：クローン１Ｃ１１によるＰＤ−Ｌ１遮断
【０５５６】
チェックポイント受容体／リガンド相互作用の遮断はＴ細胞活性化に必要である。細胞結合アッセイにおいてＸＥＮＰ２１５７５の遮断能力を調べた。ＰＤ−１を発現するようにトランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、ＸＥＮＰ２１５７５、および対照抗体とともにインキュベートした。インキュベーション後、ＰＤ−Ｌ１のマウスＦｃ融合体を添加してインキュベートした。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞へのＰＤ−Ｌ１−ｍＦｃの結合を抗マウスＩｇＧ二次抗体で検出し、そのデータを図１７に示す。
１Ｂ（ｂ）（ｉｉ）：クローン１Ｃ１１のＴ細胞表面結合
【０５５７】
Ｔ細胞への抗ＰＤ−１クローン１Ｃ１１の結合をＳＥＢ刺激ＰＢＭＣアッセイで測定した。ブドウ球菌エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）は、ＰＤ−１などのチェックポイント受容体の発現を含む、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を介した活性化によって達成されるのと同様にＴ細胞の活性化および増殖を引き起こす超抗原である。ヒトＰＢＭＣを１００ｎｇ／ｍＬで３日間刺激した。刺激後、ＰＢＭＣを示された濃度の指示された試験物質とともに４℃で３０分間インキュベートした。ＰＢＭＣを抗ＣＤ３−ＦＩＴＣ（ＵＣＨＴ１）およびヒト免疫グロブリンκ軽鎖のためのＡＰＣ標識抗体で染色した。ＦＩＴＣ＋細胞上のＡＰＣ  ＭＦＩによって示されるような試験物質のＴ細胞への結合を図１８に示す。
１Ｂ（ｂ）（ｉｉｉ）：クローン１Ｃ１１によるＴ細胞活性化
【０５５８】
サイトカイン分泌によって示されるように、クローン１Ｃ１１によるＴ細胞活性化を、ＳＥＢ刺激ＰＢＭＣアッセイにおいて調べた。ヒトＰＢＭＣを５００ｎｇ／ｍＬのＳＥＢで２日間刺激した。次いで細胞を培地中で２回洗浄し、示された試験物質の示された量と組み合わせた５００ｎｇ／ｍＬのＳＥＢで２４時間刺激した。次いで上清を細胞によってＩＬ−２およびＩＦＮγについてアッセイし、そのデータを図１９Ａ〜１９Ｂに示す。
【０５５９】
３．１Ｂ（ｃ）：クローン１Ｃ１１のヒト化
クローン１Ｃ１１は、ストリング含有量最適化を用いてヒト化した（例えば、２０１０年２月２日に発行された米国特許第７，６５７，３８０号を参照）。重鎖および軽鎖をコードするＤＮＡを遺伝子合成によって生成し、そして標準的な分子生物学技術を用いて発現ベクターｐＴＴ５にサブクローニングした。二価抗体フォーマットのクローン１Ｃ１１の例示的ヒト化バリアントの配列を図２０Ａ〜２０Ｃに示す。
【０５６０】
ＸＥＮＰ２２５５３の親和性は、概して実施例１Ｂ（ａ）に記載されているように、Ｏｃｔｅｔを用いて決定した。特に、抗ヒトＦｃ（ＡＨＣ）バイオセンサを使用して、試験物質を複数濃度のヒスチジンタグ付きＰＤ−１に浸漬して捕捉した。親和性の結果および対応するセンサグラムを図２１に示す。
【０５６１】
ＸＶＩ．実施例２：ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ
Ａ．２Ａ：ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の操作
ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαヘテロダイマーの短い半減期に対処するために、発明者らは、産生の促進および複合体のＦｃＲｎ媒介リサイクルの促進および半減期の延長を目的として、Ｆｃ融合体としてＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）複合体（以下、「ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質」と呼ぶ）を生成した。
【０５６２】
ＩＬ−１５またはＩＬ−１５Ｒαｓｕｓｈｉドメインをコードするプラスミドを、標準的な遺伝子合成、続いてＦｃ融合パートナー（例えば、図８Ａ〜図８Ｆに示す定常領域）を含むｐＴＴ５発現ベクターへのサブクローニングによって構築した。例示的なＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質フォーマットの略図を図２２Ａ〜２２図Ｇに示す。
【０５６３】
ＩＬ−１５／ＲαヘテロＦｃフォーマット（図２２Ａ）の例示的タンパク質には、ＸＥＮＰ２０８１８およびＸＥＮＰ２１４７５が含まれ、その配列を図２３に示す。ｓｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃフォーマット（図２２Ｂ）の例示的タンパク質はＸＥＮＰ２１４７８であり、その配列は図２４に示す。ｎｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃフォーマット（図２２Ｃ）の例示的タンパク質には、ＸＥＮＰ２１４７９、ＸＥＮＰ２２３６６、およびＸＥＮＰ２４３４８が含まれ、それらの配列を図２５Ａ〜２５Ｂに示す。二価ｎｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃフォーマットの（図２２Ｄ）の例示的タンパク質はＸＥＮＰ２１９７８であり、その配列は図２６に示す。二価ｓｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃフォーマット（図２２Ｅ）の例示的タンパク質の配列を図２７に示す。Ｆｃ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマット（図２２Ｆ）の例示的タンパク質はＸＥＮＰ２２６３７であり、その配列は図２８に示す。Ｆｃ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒαフォーマット（図２２Ｇ）の例示的タンパク質の配列を図２９に示す。
【０５６４】
タンパク質は、ＨＥＫ２９３Ｅ細胞における一過性トランスフェクションによって産生され、プロテインＡクロマトグラフィー（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）および陰イオン交換クロマトグラフィー（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８．５と１Ｍ  ＮａＣｌを含む５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８．５との５〜４０％勾配によるＨｉＴｒａｐＱ  ５ｍＬカラム）を含む二段階精製プロセスによって精製された。
【０５６５】
上述のような様々なフォーマットのＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質を細胞増殖アッセイで試験した。ヒトＰＢＭＣを指定濃度で試験物質を用いて処理した。処理の４日後、ＰＢＭＣを抗ＣＤ８−ＦＩＴＣ（ＲＰＡ−Ｔ８）、抗ＣＤ４−ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５（ＯＫＴ４）、抗ＣＤ２７−ＰＥ（Ｍ−Ｔ２７１）、抗ＣＤ５６−ＢＶ４２１（５．１Ｈ１１）、抗ＣＤ１６−ＢＶ４２１（３Ｇ８）、および抗ＣＤ４５ＲＡ−ＢＶ６０５（Ｈｉ１００）で染色し、以下の細胞型についてゲートした：ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、およびＮＫ細胞（ＣＤ５６＋／ＣＤ１６＋）。Ｋｉ６７は細胞増殖と厳密に関連するタンパク質であり、そして細胞内Ｋｉ６７についての染色は抗Ｋｉ６７−ＡＰＣ（Ｋｉ−６７）およびＦｏｘｐ３／転写因子染色緩衝液セット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，Ｍａｓｓ）を使用して実施された。上述の細胞型に対するＫｉ６７の割合を、ＦＡＣＳを使用して測定した（図３０Ａ〜３０Ｃおよび３１Ａ〜３１Ｃに示す）。様々なＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質はＣＤ８＋Ｔ細胞およびＮＫ細胞の強い増殖を誘導した。特に、増殖活性の差異は、ＩＬ−１５−Ｆｃ側のリンカーの長さに依存していた。特に、ＸＥＮＰ２１４７１、ＸＥＮＰ２１４７４、およびＸＥＮＰ２１４７５を含む、リンカーを有さない（ヒンジのみ）構築物は、より弱い増殖活性を示した。
【０５６６】
Ｂ．２Ｂ：操作されたジスルフィド結合を有するＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質
ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の安定性をさらに向上させ、半減期を延ばすために、ＩＬ−１５／Ｒα界面においてジスルフィド結合を操作した。ＩＬ−１５／Ｒα複合体の結晶構造を調べることによって、およびＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ  Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ（ＭＯＥ、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ，Ｍｏｎｔｒｅａｌ，Ｑｕｅｂｅｃ，Ｃａｎａｄａ）ソフトウェアを用いてモデリングすることによって、図３２に示されるように、共有ジスルフィド結合を形成するためにシステインで置換し得るＩＬ−１５／Ｒα界面の残基を予測した。さらに、ＩＬ−１５Ｒαのｓｕｓｈｉドメインに続く３個までのアミノ酸を、操作するシステインの足場としてＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）のＣ末端に付加した（その例示的な配列を図３３に示す）。システインで操作された例示的なＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）バリアントの配列をそれぞれ図３４および図３５に示す。
【０５６７】
ＩＬ−１５またはＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）をコードするプラスミドを、標準的な遺伝子合成、続いてＦｃ融合パートナー（例えば、図１１Ａ〜１１Ｃに示す定常領域）を含むｐＴＴ５発現ベクターへのサブクローニングによって構築した。上述のように同定された残基を、標準的な変異導入技術によってシステインで置換した。操作されたジスルフィド結合を有するＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の略図を図３６Ａ〜図３６Ｄに示す。
【０５６８】
ｄｓＩＬ−１５／Ｒα−ヘテロＦｃフォーマット（図３６Ａ）の例示的タンパク質には、ＸＥＮＰ２２０１３、ＸＥＮＰ２２０１４、ＸＥＮＰ２２０１５、およびＸＥＮＰ２２０１７が含まれ、それらの配列を図３７Ａ〜３７Ｂ示す。ｄｓＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃフォーマット（図３６Ｂ）の例示的タンパク質には、ＸＥＮＰ２２３５７、ＸＥＮＰ２２３５８、ＸＥＮＰ２２３５９、ＸＥＮＰ２２６８４、およびＸＥＮＰ２２３６１が含まれ、それらの配列を図３８Ａ〜３８Ｂに示す。二価ｄｓＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃフォーマット（図３６Ｃ）の例示的タンパク質には、ＸＥＮＰ２２６３４、ＸＥＮＰ２２６３５、およびＸＥＮＰ２２６３６が含まれ、それらの配列を図３９に示す。Ｆｃ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒαフォーマット（図３６Ｄ）の例示的タンパク質には、ＸＥＮＰ２２６３９およびＸＥＮＰ２２６４０が含まれ、それらの配列を図４０に示す。
【０５６９】
タンパク質は、ＨＥＫ２９３Ｅ細胞における一過性トランスフェクションによって産生され、プロテインＡクロマトグラフィー（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）および陰イオン交換クロマトグラフィー（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８．５と１Ｍ  ＮａＣｌを含む５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８．５との５〜４０％勾配によるＨｉＴｒａｐＱ  ５ｍＬカラム）を含む二段階精製プロセスによって精製された。
【０５７０】
タンパク質が精製された後、それらは純度および均質性についてキャピラリー等電点電気泳動（ＣＥＦ）によって分析された。製造者の使用説明書を使用して実施したＰｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  Ａｓｓａｙ  ＬａｂＣｈｉｐおよびＰｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  Ａｓｓａｙ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｋｉｔを使用するＬａｂＣｈｉｐ  ＧＸＩＩ  Ｔｏｕｃｈ  ＨＴ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，Ｍａｓｓ）を使用してＣＥＦを実施した。試料は、一方を還元下（ジチオトレイトールを用いて）、他方を非還元条件下で二重に試験した。変性非還元ＣＥＦによって示されるように、多くのジスルフィド結合が正しく形成され、操作されたジスルフィド結合を含まない対照と比較した場合、共有結合複合体のより大きい分子量が観察され得る（図４１）。
【０５７１】
次いでタンパク質を細胞増殖アッセイで試験した。ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質（操作されたジスルフィド結合を有するかまたは有さない）または対照をＰＢＭＣとともに４日間インキュベートした。インキュベーション後、ＰＢＭＣを抗ＣＤ４−ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５（ＲＰＡ−Ｔ４）、抗ＣＤ８−ＦＩＴＣ（ＲＰＡ−Ｔ８）、抗ＣＤ４５ＲＡ−ＢＶ５１０（ＨＩ１００）、抗ＣＤ１６−ＢＶ４２１（３Ｇ８）、抗ＣＤ５６−ＢＶ４２１（ＨＣＤ５６）、抗ＣＤ２７−ＰＥ（Ｏ３２３）、および抗Ｋｉ６７−ＡＰＣ（Ｋｉ−６７）で染色して様々な細胞集団をマークし、概して実施例２Ａに記載されるようにＦＡＣＳによって分析した。Ｋｉ６７発現によって示されるＮＫ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、およびＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を図４２Ａ〜４２Ｃに示す。ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質およびＩＬ−１５対照のそれぞれが、ＮＫ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、およびＣＤ４＋Ｔ細胞の強い増殖を誘導した。
【０５７２】
Ｃ．２Ｃ：より低い効力およびＰＫおよび半減期を増加させるために操作されたＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質
ＰＫをさらに改善しそして半減期を延長するために、我々はＩＬ−１５の効力を減少させることが抗原シンクを減少させ、そしてそれ故、半減期を増加させるであろうと推論した。ＩＬ−１５：ＩＬ−２ＲβおよびＩＬ−１５：共通のガンマ鎖界面の結晶構造を調べることによって、ならびにＭＯＥソフトウェアを使用してモデリングすることによって、効力を低減するために置換され得るこれらの界面における残基を予測した。図４３は、（免疫原性のリスクを低減するために）等価置換を操作した予測された残基の位置を示すＩＬ−１５：受容体複合体の構造モデルを示す。効力を低減するために操作された例示的なＩＬ−１５バリアントの配列を図４４Ａ〜図４４Ｃに示す。
【０５７３】
ＩＬ−１５またはＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）をコードするプラスミドを、標準的な遺伝子合成、続いてＦｃ融合パートナー（例えば、図１１に示す定常領域）を含むｐＴＴ５発現ベクターへのサブクローニングによって構築した。上述のように同定された置換を、標準的な変異導入技術によって組み込んだ。効力低下のために操作された「ＩＬ−１５／ＲαヘテロＦｃ」フォーマットの例示的なＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の配列を図４５Ａ〜４５Ｄに示す。効力低下のために操作された「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ」フォーマットの例示的なＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の配列を図４６Ａ〜４６Ｃに示す。効力を低減するために操作された「ｎｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ」フォーマットの例示的なＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の配列を図４７Ａ〜図４７Ｂに示す。効力低下のために操作された例示的なｎｃＩＬ−１５／Ｒαヘテロダイマーの配列を図４８に示す。効力低下のために操作された「二価ｎｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ」フォーマットの例示的なＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の配列を図４９に示す。効力低下のために操作された「ｄｓＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ」フォーマットの例示的なＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の配列を図５０に示す。タンパク質は、ＨＥＫ２９３Ｅ細胞における一過性トランスフェクションによって産生され、プロテインＡクロマトグラフィー（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）および陰イオン交換クロマトグラフィー（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８．５と１Ｍ  ＮａＣｌを含む５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８．５との５〜４０％勾配によるＨｉＴｒａｐＱ  ５ｍＬカラム）を含む二段階精製プロセスによって精製された。
【０５７４】
Ｄ．図２Ｃ（ａ）：効力を低減するために操作されたバリアントＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のインビトロ活性
バリアントＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質をいくつかの細胞増殖アッセイで試験した。
【０５７５】
最初の細胞増殖アッセイでは、ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質（操作された置換を有する場合または有さない場合）または対照をＰＢＭＣとともに４日間インキュベートした。インキュベーション後、ＰＢＭＣを抗ＣＤ４−Ｅｖｏｌｖｅ６０５（ＳＫ−３）、抗ＣＤ８−ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５（ＲＰＡ−Ｔ８）、抗ＣＤ４５ＲＡ−ＡＰＣ／Ｃｙ７（ＨＩ１００）、抗ＣＤ１６−ｅＦｌｕｏｒ４５０（ＣＢ１６）、抗ＣＤ５６−ｅＦｌｕｏｒ４５０（ＴＵＬＹ５６）、抗ＣＤ３−ＦＩＴＣ（ＯＫＴ３）、および抗Ｋｉ６７−ＡＰＣ（Ｋｉ−６７）で染色して様々な細胞集団をマークし、概して実施例２Ａに記載されるようにＦＡＣＳによって分析した。Ｋｉ６７発現によって示されるＮＫ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、およびＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖を図５１Ａ〜図５１Ｃおよび５２に示す。ほとんどのＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は各細胞集団の増殖を誘導したが、活性は特定の操作された置換に依存して変化した。
【０５７６】
第２の細胞増殖アッセイでは、ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質（操作された置換を有する場合または有さない場合）をＰＢＭＣとともに３日間インキュベートした。インキュベーション後、ＰＢＭＣを抗ＣＤ３−ＦＩＴＣ（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ４−Ｅｖｏｌｖｅ  ６０４（ＳＫ−３）、抗ＣＤ８−ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５（ＲＰＡ−Ｔ８）、抗ＣＤ１６−ｅＦｌｕｏｒ４５０（ＣＢ１６）、抗ＣＤ５６−ｅＦｌｕｏｒ４５０（ＴＵＬＹ５６）、抗ＣＤ２７−ＰＥ（Ｏ３２３）、抗ＣＤ４５ＲＡ−ＡＰＣ／Ｃｙ７（ＨＩ１００）および抗Ｋｉ６７−ＡＰＣ（２０Ｒａｊ１）抗体で染色して様々な細胞集団をマークした。図５３Ａ〜５３Ｃおよび５４Ａ〜５４Ｃは、ＦＡＣＳによるＸＥＮＰ２２８２１とのインキュベーション後の様々な細胞集団の選択を表す。リンパ球を最初に側方散乱（ＳＳＣ）および前方散乱（ＦＳＣ）に基づいてゲートした（図５３Ａ）。次にリンパ球をＣＤ３発現に基づいてゲートした（図５３Ｂ）。ＣＤ３発現について陰性の細胞をさらにＣＤ１６発現に基づいてゲートしてＮＫ細胞（ＣＤ１６＋）を同定した（図５３Ｃ）。ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、およびγδＴ細胞（ＣＤ３＋ＣＤ４−ＣＤ８−）を同定するために、ＣＤ３＋Ｔ細胞をＣＤ４およびＣＤ８発現に基づいてさらにゲートした（図５４Ａ）。図５４Ｂ〜図５４Ｃにそれぞれ示されるように、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞をＣＤ４５ＲＡ発現についてゲートした。最後に、様々な細胞集団の増殖を、Ｋｉ６７発現の割合に基づいて決定し、データを図５６Ａ〜５６Ｄに示す。ＮＫおよびＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質に対してＣＤ４＋Ｔ細胞よりも感受性であり、そして上述のように、増殖活性は特定の操作された置換に応じて変化した。図５６Ｄは、対照ＸＥＮＰ２０８１８に対する様々なＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のＥＣ５０の倍率変化を示す。図５５ＡおよびＢは、ＰＢＭＣとＸＥＮＰ２２８２１とのインキュベーション前後のＣＤ６９およびＣＤ２５（Ｔ細胞活性化マーカー）の発現についてゲートすることによって、ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質による処理後のリンパ球の活性化をさらに示す。
【０５７７】
第３の実験において、追加のバリアントＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質をヒトＰＢＭＣとともに３７℃で３日間インキュベートした。インキュベーション後、ＰＢＭＣを抗ＣＤ３−ＦＩＴＣ（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ４−ＳＢ６００（ＳＫ−３）、抗ＣＤ８−ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５（ＲＰＡ−Ｔ８）、抗ＣＤ４５ＲＡ−ＡＰＣ／Ｃｙ７（ＨＩ１００）、抗ＣＤ１６−ｅＦｌｕｏｒ４５０（ＣＢ１６）、抗ＣＤ２５−ＰＥ（Ｍ−Ａ２５１）、および抗Ｋｉ６７−ＡＰＣ（Ｋｉ−６７）で染色して様々な細胞集団をマークし、概して実施例２Ａに記載されるようにＦＡＣＳによって分析した。Ｋｉ６７発現によって示されるＣＤ８＋（ＣＤ４５ＲＡ−）Ｔ細胞、ＣＤ４＋（ＣＤ４５ＲＡ−）Ｔ細胞、γδＴ細胞、およびＮＫ細胞の増殖を図５７Ａ〜５７Ｄに示す。
【０５７８】
第４の実験において、ヒトＰＢＭＣを示された濃度の追加のＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃバリアントとともに３日間インキュベートした。インキュベーション後、ＰＢＭＣを抗ＣＤ３−ＦＩＴＣ（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ４（ＳＢ６００）、抗ＣＤ８−ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５（ＲＰＡ−Ｔ８）、抗ＣＤ１６−ｅＦｌｕｏｒ４５０（ＣＢ１６）、抗ＣＤ２５−ＰＥ（Ｍ−Ａ２５１）、抗ＣＤ４５ＲＡ−ＡＰＣ／Ｃｙ７（ＨＩ１００）、および抗Ｋｉ６７−ＡＰＣ（Ｋｉ６７）で染色し、概して実施例２Ａに記載されるようにＦＡＣＳによって分析した。処理後のＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、およびＮＫ細胞に対するＫｉ６７の割合を図５８Ａ〜図５８Ｃに示す。
【０５７９】
第５の実験において、バリアントＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質をヒトＰＢＭＣとともに３７℃で３日間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を抗ＣＤ３−ＰＥ（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ４−ＦＩＴＣ（ＲＰＡ−Ｔ４）、抗ＣＤ８α−ＢＶ５１０（ＳＫ１）、抗ＣＤ８β−ＡＰＣ（２ＳＴ８．５Ｈ７）、抗ＣＤ１６−ＢＶ４２１（３Ｇ８）、抗ＣＤ２５−ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５（Ｍ−Ａ２５１）、抗ＣＤ４５ＲＡ−ＡＰＣ／Ｃｙ７（ＨＩ１００）、抗ＣＤ５６−ＢＶ６０５（ＮＣＡＭ１６．２）、および抗Ｋｉ６７−ＰＥ／Ｃｙ７（Ｋｉ−６７）で染色し、概して実施例２Ａに記載されるようにＦＡＣＳによって分析した。ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、およびＮＫ細胞に対するＫｉ６７の割合を図５９Ａ〜図５９Ｅに示す。
【０５８０】
第６の実験において、バリアントＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質をヒトＰＢＭＣとともに３７℃で３日間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を抗ＣＤ３−ＰＥ（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ４−ＦＩＴＣ（ＲＰＡ−Ｔ４）、抗ＣＤ８α−ＢＶ５１０（ＳＫ１）、抗ＣＤ８β−ＡＰＣ（ＳＩＤＩ８ＢＥＥ）、抗ＣＤ１６−ＢＶ４２１（３Ｇ８）、抗ＣＤ２５−ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５（Ｍ−Ａ２５１）、抗ＣＤ４５ＲＡ−ＡＰＣ／Ｃｙ７（ＨＩ１００）、抗ＣＤ５６−ＢＶ６０５（ＮＣＡＭ１６．２）、および抗Ｋｉ６７−ＰＥ／Ｃｙ７（Ｋｉ−６７）で染色し、概して実施例２Ａに記載されるようにＦＡＣＳによって分析した。ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、およびＮＫ細胞に対するＫｉ６７の割合を図６０Ａ〜図６０Ｅに示す。
【０５８１】
第７の実験において、バリアントＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質を示された濃度でヒトＰＢＭＣとともに３７℃で３日間インキュベートした。インキュベーション後、ＰＢＭＣを抗ＣＤ３−ＰＥ（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ４−ＦＩＴＣ（ＲＰＡ−Ｔ４）、抗ＣＤ８−ＡＰＣ（ＲＰＡ−Ｔ８）、抗ＣＤ１６−ＢＶ６０５（３Ｇ８）、抗ＣＤ２５−ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５（Ｍ−Ａ２５１）、抗ＣＤ４５ＲＡ−ＡＰＣ／Ｆｉｒｅ７５０（ＨＩ１００）および抗Ｋｉ６７−ＰＥ／Ｃｙ７（Ｋｉ−６７）で染色し、概して実施例２Ａに記載されるようにＦＡＣＳによって分析した。ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、およびＮＫ（ＣＤ１６＋）細胞に対するＫｉ６７の割合を図６１Ａ〜６１Ｄに示す。データは、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質ＸＥＮＰ２１４７９がＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＮＫ（ＣＤ１６＋）細胞、およびγδＴ細胞の増殖の最も強力な誘導因子であることを示している。各ｓｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、増殖を誘導することにおいてＸＥＮＰ２１４７９よりも効力が弱かったが、差異はリンカーの長さと特定の操作された置換の両方に依存していた。
【０５８２】
第８の実験において、バリアントＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質を指定濃度でヒトＰＢＭＣとともに３７℃で３日間インキュベートした。インキュベーション後、ＰＢＭＣを抗ＣＤ３−ＰＥ（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ４−ＦＩＴＣ（ＲＰＡ−Ｔ４）、抗ＣＤ８−ＡＰＣ（ＲＰＡ−Ｔ８）、抗ＣＤ１６−ＢＶ６０５（３Ｇ８）、抗ＣＤ２５−ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５（Ｍ−Ａ２５１）、抗ＣＤ４５ＲＡ−ＡＰＣ／Ｆｉｒｅ７５０（ＨＩ１００）および抗Ｋｉ６７−ＰＥ／Ｃｙ７（Ｋｉ−６７）で染色し、概して実施例２Ａに記載されるようにＦＡＣＳによって分析した。ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、およびＮＫ（ＣＤ１６＋）細胞に対するＫｉ６７の割合を、それぞれ図６２Ａ〜６２Ｄに示す。上述のように、データは、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質ＸＥＮＰ２１４７９がＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＮＫ（ＣＤ１６＋）細胞、およびγδＴ細胞の増殖の最も強力な誘導因子であることを示している。特に、ｎｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃフォーマット（ＸＥＮＰ２４３４９）へのＱ１０８Ｅ置換の導入は、野生型（ＸＥＮＰ２１４７９）と比較してその増殖活性を劇的に減少させる。
【０５８３】
Ｅ．図２Ｃ（ｂ）：効力を低減するために操作されたＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質のＰＫ
効力を低減するために操作されたＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質が半減期およびＰＫを改善したかどうかを調べるために、我々はＣ５７ＢＬ／６マウスにおけるＰＫ研究においてこれらのバリアントを調べた。０日目に、２コホートのマウス（１コホートあたり試験試料あたり５匹のマウス）にＩＶ−ＴＶによって０．１ｍｇ／ｋｇの示された試験試料を投与した。投与６０分後に、次いでコホート１では２、４、および７日目、そしてコホート２では１、３、および８日目に血清を採取した。ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の血清レベルは、サンドイッチＥＬＩＳＡにおいて抗ＩＬ−１５および抗ＩＬ−１５Ｒα抗体を用いて決定した。結果を図６３に示す。図６４は、試験物質の効力と半減期の間の相関関係を示す。効力が低下したバリアントは実質的により長い半減期を示した。特に、半減期は、野生型対照ＸＥＮＰ２０８１８の０．５日と比較して、約９日まで改善された（ＸＥＮＰ２２８２１およびＸＥＮＰ２２８２２を参照）。
【０５８４】
ＸＶＩＩ．実施例３：ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体
Ａ．３Ａ：ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体の生成と物理的特性評価
ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒαｓｕｓｈｉドメイン、または抗ＰＤ−１可変領域をコードするプラスミドを、標準的な遺伝子合成、続いてＦｃ融合パートナーを含むｐＴＴ５発現ベクター（例えば、図１２に示す定常領域）へのサブクローニングによって構築した。例示的ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体の略図を図６５Ａ〜図６５Ｋに示す。
【０５８５】
「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖ」フォーマット（図６５Ａ）は、可変長リンカーによってＩＬ−１５に融合したＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）を含み（「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」と呼ばれる）、これは次いでヘテロダイマーＦｃ領域のＮ末端に融合し、ｓｃＦｖはヘテロダイマーＦｃの他方側に融合している。このフォーマットの例示的なタンパク質の配列を図６６に示す。
【０５８６】
「ｓｃＦｖ×ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマット（図６５Ｂ）は、ヘテロダイマーＦｃ領域のＮ末端に融合したｓｃＦｖを含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）はヘテロダイマーＦｃの他方側に融合するが、ＩＬ−１５は非共有結合のＩＬ−１５／Ｒα複合体が形成されるように別々にトランスフェクトされる。このフォーマットの例示的なタンパク質の配列を図６７に示す。
【０５８７】
「ｓｃＦｖ×ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマット（図６５Ｃ）は、「ｓｃＦｖ×ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットと同一であるが、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）およびＩＬ−１５は操作されたシステインの結果として共有結合している。このフォーマットの例示的なタンパク質の配列を図６８に示す。
【０５８８】
「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂ」フォーマット（図６５Ｄ）は、可変長リンカーによってＩＬ−１５に融合したＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）を含み（「ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」と呼ばれる）、これは次いでヘテロダイマーＦｃ領域のＮ末端に融合し、可変重鎖（ＶＨ）はヘテロダイマーＦｃの他方側に融合するが、対応する軽鎖はＶＨを含むＦａｂを形成するように別々にトランスフェクトされる。このフォーマットの例示的なタンパク質の配列を図６９Ａ〜図６９Ｄに示す。
【０５８９】
「ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂ」フォーマット（図６５Ｅ）は、ヘテロダイマーＦｃ領域のＮ末端に融合したＶＨを含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）はヘテロダイマーＦｃの他方側に融合するが、対応する軽鎖はＶＨを含むＦａｂを形成するように別々にトランスフェクトされ、一方、ＩＬ−１５は非共有結合のＩＬ−１５／Ｒα複合体が形成されるように別々にトランスフェクトされる。このフォーマットの例示的なタンパク質の配列を図７０に示す。
【０５９０】
「ｄｓＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂ」フォーマット（図６５Ｆ）は、「ｎｃＩＬ−１５／Ｒα×Ｆａｂ」フォーマットと同一であるが、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）およびＩＬ−１５は操作されたシステインの結果として共有結合している。このフォーマットの例示的なタンパク質の配列を図７１に示す。
【０５９１】
「ｍＡｂ−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマット（図６５Ｇ）は、第１のおよび第２のヘテロダイマーＦｃのＮ末端に融合したＶＨを含み、ＩＬ−１５はＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）に融合し、これは次いでさらにヘテロダイマーＦｃ領域の一方のＣ末端に融合するが、対応する軽鎖はＶＨを含むＦａｂを形成するように別々にトランスフェクトされる。このフォーマットの例示的なタンパク質の配列を図７２に示す。
【０５９２】
「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマット（図６５Ｈ）は、第１のおよび第２のヘテロダイマーＦｃのＮ末端に融合したＶＨを含み、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）はヘテロダイマーＦｃ領域の一方のＣ末端に融合するが、対応する軽鎖はＶＨを含むＦａｂを形成するように別々にトランスフェクトされ、ＩＬ−１５は非共有結合のＩＬ−１５／Ｒα複合体が形成されるように別々にトランスフェクトされる。このフォーマットの例示的なタンパク質の配列を図７３に示す。
【０５９３】
「ｍＡｂ−ｄｓＩＬ−１５／Ｒα」フォーマット（図６５Ｉ）は、「ｍＡｂ−ｎｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマットと同一であるが、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）およびＩＬ−１５は操作されたシステインの結果として共有結合している。このフォーマットの例示的なタンパク質の配列を図７４に示す。
【０５９４】
「セントラル−ＩＬ−１５／Ｒα」フォーマット（図６５Ｊ）は、ＩＬ−１５（ヘテロダイマーＦｃの一方側にさらに融合する）のＮ末端に組み換えで融合したＶＨと、ＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）（ヘテロダイマーＦｃの他方側にさらに融合する）のＮ末端に組み換えで融合したＶＨとを含むが、対応する軽鎖はＶＨを含むＦａｂを形成するように別々にトランスフェクトされる。このフォーマットの例示的なタンパク質の配列を図７５に示す。
【０５９５】
「セントラル−ｓｃＩＬ−１５／Ｒα」フォーマット（図６５Ｋ）は、ＩＬ−１５（ヘテロダイマーＦｃの一方側にさらに融合される）に融合したＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）のＮ末端に融合したＶＨと、ヘテロダイマーＦｃの他方側に融合したＶＨとを含むが、対応する軽鎖はＶＨを含むＦａｂを形成するように別々にトランスフェクトされる。このフォーマットの例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の配列を図７６に示す。
【０５９６】
ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質を、純度および均一性についてサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）およびキャピラリー等電点電気泳動（ＣＥＦ）によって分析した。
【０５９７】
タンパク質をＳＥＣを用いて分析してそれらのサイズ（すなわち流体力学的容積）を測定し、精製試料の非変性の挙動を決定する。分析は、Ａｇｉｌｅｎｔ  １２００高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）システムで実施した。４℃で２５分間、移動相として１×ＰＢＳ、ｐＨ７．４を１．０ｍＬ／分で用いて、２８０ｎＭのＵＶ検出波長で、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ（商標）２００  １０／３００ＧＬカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）に試料を注入した。Ａｇｉｌｅｎｔ  ＯｐｅｎＬａｂクロマトグラフィーデータシステム（ＣＤＳ）ＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  ＡＩＣバージョンＣ．０１．０７を使用して分析を実施した。ＩＬ−１５／Ｒα×ｓｃＦｖフォーマットにおける例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質ＸＥＮＰ２１４８０のクロマトグラムを図７７Ｂに示す。
【０５９８】
製造者の使用説明書を使用して実施したＰｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  Ａｓｓａｙ  ＬａｂＣｈｉｐおよびＰｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  Ａｓｓａｙ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｋｉｔを使用するＬａｂＣｈｉｐ  ＧＸＩＩ  Ｔｏｕｃｈ  ＨＴ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，Ｍａｓｓ）を使用するＣＥＦによってタンパク質を電気泳動的に分析した。試料は、一方を還元下（ジチオトレイトールを用いて）、他方を非還元条件下で二重に試験した。ＸＥＮＰ２１４８０のゲル画像を図７７Ｃに示す。
【０５９９】
ＩＬ−２ＲβおよびＰＤ−１に対するヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質の親和性スクリーニングは、概して実施例１Ｂ（ａ）に記載されているようにＯｃｔｅｔを用いて実施した。最初のスクリーニングでは、抗ヒトＦｃ（ＡＨＣ）バイオセンサを使用して試験試料を捕捉し、次いでＫＤ決定のために複数濃度のＩＬ−２Ｒβ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，Ｍｉｎｎ）またはヒスチジンタグ付きＰＤ−１に浸漬した。ＸＥＮＰ２１４８０についての親和性の結果および対応するセンサグラムを図７７Ｄ〜７７Ｅに示す。第２のスクリーニングでは、ＨＩＳ１Ｋバイオセンサを使用して、ヒスチジンタグ付きＩＬ−２Ｒβ：共通のガンマ鎖複合体−Ｆｃ融合体またはヒスチジンタグ付きＰＤ−１−Ｆｃ融合体のいずれかを捕捉し、次いで２つの異なるバッチのＸＥＮＰ２５８５０に浸漬し、それらのセンサグラムを図７８Ａ〜図７８Ｂに示す。
【０６００】
ヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質の安定性は、示差走査蛍光光度法（ＤＳＦ）を用いて評価した。ＤＳＦ実験は、Ｂｉｏ−Ｒａｄ  ＣＦＸ  Ｃｏｎｎｅｃｔ  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍを用いて実施した。タンパク質をＳＹＰＲＯオレンジ蛍光色素と混合し、ＰＢＳで０．２ｍｇ／ｍＬに希釈した。ＳＹＰＲＯオレンジの最終濃度は１０倍であった。２５℃で最初の１０分間のインキュベーション期間の後、タンパク質を１℃／分の加熱速度で２５℃から９５℃に加熱した。蛍光測定は３０秒ごとに行った。溶融温度（Ｔｍ）は機器のソフトウェアを用いて計算した。ＸＥＮＰ２１４８０についての安定性の結果および対応する融解曲線を図７７Ｆに示す。
【０６０１】
Ｂ．３Ｂ：細胞増殖アッセイにおけるＰＤ−１標的ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体の活性
例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質ＸＥＮＰ２１４８０および対照を細胞増殖アッセイで試験した。ヒトＰＢＭＣを指定濃度で試験物質を用いて処理した。処理の４日後、ＰＢＭＣを抗ＣＤ８−ＦＩＴＣ（ＲＰＡ−Ｔ８）、抗ＣＤ４−ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５（ＯＫＴ４）、抗ＣＤ２７−ＰＥ（Ｍ−Ｔ２７１）、抗ＣＤ５６−ＢＶ４２１（５．１Ｈ１１）、抗ＣＤ１６−ＢＶ４２１（３Ｇ８）、および抗ＣＤ４５ＲＡ−ＢＶ６０５（Ｈｉ１００）で染色し、以下の細胞型についてゲートした：ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、およびＮＫ細胞（ＣＤ５６＋／ＣＤ１６＋）。Ｋｉ６７は細胞増殖と厳密に関連するタンパク質であり、そして細胞内Ｋｉ６７についての染色は抗Ｋｉ６７−ＡＰＣ（Ｋｉ−６７）およびＦｏｘｐ３／転写因子染色緩衝液セット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，Ｍａｓｓ）を使用して実施された。上記の細胞型に対するＫｉ６７の割合をＦＡＣＳを用いて測定した（図７９Ａ〜図７９Ｃに示す）。
【０６０２】
Ｃ．３Ｃ：ＳＥＢ刺激ＰＢＭＣアッセイにおけるＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質の活性
複数のドナー由来のヒトＰＢＭＣを、２０μｇ／ｍＬのＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質または対照と組み合わせた１０ｎｇ／ｍＬのＳＥＢで７２時間刺激した。処理後、上清を回収してＩＬ−２についてアッセイし、そのデータを図８０に示す。
【０６０３】
Ｄ．３Ｄ：ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体は、ヒトＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスの生着と疾患活動性を増強する
例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質を、メスのＮＳＧ（ＮＯＤ−ＳＣＩＤ−ガンマ）免疫不全マウスにおいて実施された移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）モデルにおいて評価した。ＮＳＧマウスにヒトＰＢＭＣを注射すると、ヒトＰＢＭＣはマウス細胞に対して自己免疫応答を引き起こす。ヒトＰＢＭＣを注射したＮＳＧマウスに続くＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体の処理は、移植されたＴ細胞を増殖させて、移植を増強する。
【０６０４】
第１の試験において、−８日目に１０００万個のヒトＰＢＭＣをＩＶ−ＯＳＰによってＮＳＧマウスに移植し、続いて０日目に示された濃度で示された試験試料を投与した。ＩＦＮγレベルならびにヒトＣＤ４５＋リンパ球、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞数を４、７および１１日目に測定した。図８１は、４、７、および１１日目のマウス血清中のＩＦＮγレベルを示す。図８２Ａ〜図８２Ｃはそれぞれ、４、７、および１１日目のＣＤ８＋Ｔ細胞数を示す。図８３Ａ〜図８３Ｃはそれぞれ、４、７、および１１日目のＣＤ４＋Ｔ細胞数を示す。図８４Ａ〜図８４Ｃはそれぞれ、４、７、および１１日目のＣＤ４５＋細胞数を示す。マウスの体重も４、７、および１１日目に測定し、図８５Ａ〜図８５Ｃに初期体重の割合として示した。
【０６０５】
２番目の研究では、７日目に１，０００万個のヒトＰＢＭＣをＩＶ−ＯＳＰを介してＮＳＧマウスに移植し、０日目と１９日目に次の試験品を指定の濃度で投与した：ＸＥＮＰ１６４３２（ニボルマブに基づくエフェクター機能を除去した二価抗ＰＤ−１  ｍＡｂ）、図８６に示す配列、３．０ｍｇ／ｋｇ、ＸＥＮＰ２４０５０（０．６１ｍｇ／ｋｇ）、ＸＥＮＰ２５９５１（ＸＥＮＰ２５８５０のＰＤ−１標的化アームに基づく一価抗ＰＤ−１  Ｆａｂ−Ｆｃ、図８７に示配列、０．８２ｍｇ／ｋｇ）、ＸＥＮＰ２５９５１と組み合わせたＸＥＮＰ２４０５０（それぞれ、０．６１および０．８２  ｍｇ／ｋｇ）、ならびにＸＥＮＰ２５８５０（１．０ｍｇ／ｋｇ）。細胞数は４、７、および１１日目に測定され、ＣＤ４５＋細胞、ＣＤ３＋細胞、ＣＤ４＋細胞、およびＣＤ８＋細胞についてそれぞれ図８８〜図９１に示す。データは、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体が７日目までにＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、およびＣＤ８＋細胞数を増加させたことを示しており、ＧＶＨＤの増強を示している。特に、ＸＥＮＰ２５８５０はＸＥＮＰ２５９５１と組み合わせたＸＥＮＰ２４０５０よりもはるかに大きな程度でＧＶＨＤを強化した。これは、増強されたＧＶＨＤが、ＩＬ−１５とＰＤ−１遮断の単なる複合効果ではなく、ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体のＰＤ−１標的化に起因することを示している。
【０６０６】
Ｅ．３Ｅ：本発明のＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質は、活性化リンパ球を優先的に増殖させる
サイトカインがその受容体に結合した後、受容体に関連するヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）がＳＴＡＴタンパク質をリン酸化し、ＳＴＡＴタンパク質が核に移行してさらに下流のプロセスを調節する。したがって、ＳＴＡＴタンパク質（特に、ＳＴＡＴ５ａおよびＳＴＡＴ５ｂを含むＳＴＡＴ５）のリン酸化は、ＩＬ−１５がその受容体に結合することによって引き起こされる最も初期のシグナル伝達現象の１つである。したがって、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体が様々な細胞タイプでＳＴＡＴ５リン酸化を誘導する能力を調べた。
【０６０７】
この実験では、新鮮なＰＢＭＣと活性化されたＰＢＭＣの両方を使用した。腫瘍環境で活性化リンパ球の代理として使用される活性化ＰＢＭＣは、新鮮なＰＢＭＣを１００ｎｇ／ｍＬのプレート結合抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）で２日間刺激することによって調製した。新鮮な活性化ＰＢＭＣを、指定の濃度の次の試験品とともに３７℃で１５分間インキュベートした：ＸＥＮＰ２０８１８（ＷＴ  ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ）、ＸＥＮＰ２４０５０（例示的な効力の低下したＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ）、およびＸＥＮＰ２５８５０（例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体）。インキュベーション後の様々な細胞集団をゲートするために、ＰＢＭＣを室温で３０〜４５分間、抗ＣＤ３−ＢＵＶ３９５（ＵＣＨＴ１）、抗ＣＤ４−ＢＶ６０５（ＲＰＡ−Ｔ４）、および抗ＣＤ８−Ａｌｅｘａ７００（ＳＫ１）で染色した。細胞を洗浄し、予め冷却した（−２０℃）９０％メタノールとともに２０〜６０分間インキュベートした。メタノールインキュベーション後、細胞を再度洗浄し、抗ＣＤ２５−ＢＶ４２１（Ｍ−Ａ２５１）、抗ＣＤ４５ＲＡ−ＢＶ５１０（ＨＩ１００）、および抗ｐＳＴＡＴ５−Ａｌｅｘａ６４７（ｐＹ６８７）で染色し、様々な細胞集団およびＳＴＡＴ５リン酸化を標識した。様々なＣＤ８＋およびＣＤ４＋のＴ細胞集団におけるＳＴＡＴ５リン酸化の誘導を示すデータは、図９２Ａ〜図９２Ｈに示す。特に、データは、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質（ＸＥＮＰ２５８５０）が、活性化ＰＢＭＣからのＴ細胞に対する効果の増加を示した（ＰＤ−１発現の増加による）一方で、場合によっては、同等の非標的化効力の低下したＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体（ＸＥＮＰ２４０５０）と比較して、新鮮なＰＢＭＣからのＴ細胞への効果の低下をしめした。これは、臨床環境では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体が、ＰＤ−１の発現が高い腫瘍環境で活性化された腫瘍浸潤リンパ球に対して選択的であることを示唆している。
【０６０８】
ＸＶＩＩＩ．実施例４：ＰＤ−１親和性が調整されたＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体
Ａ．４Ａ：親和性操作したＰＤ−１標的化アーム
次に、ＰＤ−１標的化アームの親和性を最適化しようとした。抗ＰＤ−１クローン１Ｃ１１ヒト化バリアントＨ３Ｌ３（ＸＥＮＰ２２５５３のように）の可変領域に基づいて、ｓｃＦｖｓ（その配列を図９３Ａ〜図９３Ｔに示す）に関連した、二価ｍＡｂ（その配列を図９４Ａ〜図９４ＡＰに示す）に関連した、ならびに可変重鎖および可変軽鎖（その配列を、それぞれ図９５Ａ〜図９５Ｊおよび図９６Ａ〜図９６Ｆに示す）に関連した、バリアントのライブラリを生成した。
【０６０９】
バリアントの親和性を決定するために、ｓｃＦｖからの可変領域を、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ置換を有する二価ＩｇＧ１のＦａｂとしてフォーマットした。重鎖および軽鎖をコードするＤＮＡを遺伝子合成によって生成し、そして標準的な分子生物学技術を用いてＩｇＧ１定常領域を含むｐＴＴ５発現ベクターにサブクローニングした。ＨＥＫ２９３Ｅ細胞に一時的にトランスフェクトした。上清の親和性スクリーニングは、Ｏｃｔｅｔを使用して行った。抗ヒトＦｃ（ＡＨＣ）バイオセンサを使用して、各上清の１：２希釈を２．０ｎｍの密度まで捕捉し、ＫＤ決定のためにＰＤ−１−Ｈｉｓに浸漬した。親和性の結果を、図９７Ａ〜図９７Ｑに示す。
【０６１０】
二価ｍＡｂライブラリからのバリアントの親和性スクリーニングも、上述のようにＯｃｔｅｔを使用した多くの実験で実行され、その結果を図９８〜図１０４に示す。
【０６１１】
二価ＩｇＧ１フォーマットでフォーマットされた可変重鎖および可変軽鎖バリアントの組み合わせに基づくバリアントの親和性スクリーニングもまた、上述のようにＯｃｔｅｔを使用したいくつかの実験で実行され、その結果を図１０５Ａ〜図１０５Ｅおよび図１０６に示す。
【０６１２】
選択した１Ｃ１１バリアント（およびニボルマブ（ＸＥＮＰ１６４３２）およびペンブロリズマブ（ＸＥＮＰ２１４６１）に基づく対照ｍＡｂ）の親和性スクリーニングも、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）ベースの技術であるＢｉａｃｏｒｅを使用して決定した。Ｂｉａｃｏｒｅの実験手順には、一般的に次のものが含まれた：固定化（センサチップへのリガンドの捕捉）、会合（センサチップ上での様々な濃度の検体の流れ）、および試験物質の親和性を決定するための解離（センサチップ上を流れる緩衝液）。緩衝液のみを含む参照流れもまた、データ処理中のバックグラウンド補正のための方法に含まれた。結合親和性と速度定数は、１：１結合モデルを使用して処理されたデータを分析することにより得られた。特に、抗ＰＤ−１  ｍＡｂがプロテインＡセンサチップに捕捉させ、次に複数の濃度のヒスチジンタグ付きヒトＰＤ−１またはヒスチジンタグ付きカニクイザルＰＤ−１がセンサチップ上に流された。得られた解離定数（ＫＤ）を図１０７に示す。
【０６１３】
最終的に、親和性最適化１Ｃ１１バリアントのＴ細胞表面結合を調査した。Ｔ細胞への親和性最適化１Ｃ１１バリアントの結合は、ＳＥＢ刺激ＰＢＭＣアッセイで測定された。ヒトＰＢＭＣを５００ｎｇ／ｍＬのＳＥＢで３日間刺激した。刺激後、ＰＢＭＣを示された濃度の指示された試験物質とともに３０分間インキュベートした。ＰＢＭＣを抗ＣＤ３−ＦＩＴＣ（ＵＣＨＴ１）およびヒトＦｃのためのＡ６４７標識抗体で染色した。ＦＩＴＣ＋細胞上のＡ６４７  ＭＦＩによって示されるような試験物質のＴ細胞への結合を図１０８に示す。
【０６１４】
Ｂ．４Ｂ：ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体の活性はＰＤ−１親和性と相関する
実施例３Ａに概して記載されているように親和性操作されたＰＤ−１標的化アームを含む例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体を操作および産生し、その配列を図１０９Ａ〜図１０９Ｄに示し、それらの活性を調査した。
【０６１５】
ヒトＰＢＭＣを５００ｎｇ／ｍｌのプレート結合抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）で４８時間刺激し、ＣＦＳＥで標識し、次の試験品とともに３７℃で４日間インキュベートした：ＸＥＮＰ２５８５０（１Ｃ１１＿Ｈ３Ｌ３に基づくＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体）、ＸＥＮＰ２９１５９（親和性成熟１Ｃ１１＿Ｈ３．３２９＿Ｌ３．２２０に基づくＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体）、ＸＥＮＰ２４３０６（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ  ＩＬ−１５バリアントを含む対照の非標的化ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）／Ｒα−Ｆｃ融体）、およびＸＥＮＰ２６００７（Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ  ＩＬ−１５バリアントを有する対照のＲＳＶ標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体）。細胞を次の抗体：抗ＬＡＧ−３−ＰＥ（３ＤＳ２２３Ｈ）、抗ＣＤ８−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５（ＳＫ１）、抗ＣＤ３−ＰＥ−Ｃｙ７（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ４５ＲＯ−ＡＰＣ−Ｆｉｒｅ７５０（ＵＣＨＬ１）、抗ＨＬＡ−ＤＲ−Ａｌｅｘａ７００（Ｌ２４３）、抗ＣＤ１６−ＢＶ６０５（３Ｇ６）、抗ＣＤ５６−ＢＶ６０５（ＨＣＤ５６）、抗ＣＤ２５−ＢＶ７１１（Ｍ−Ａ２５１）、抗ＣＤ４５ＲＡ−ＢＶ７８５（ＨＩ１００）、抗ＣＤ４−ＢＵＶ３９５（ＳＫ３）、およびＺｏｍｂｉｅ  Ａｑｕａ−ＢＶ５１０−ＢＶ５１０で染色し、様々な細胞集団のフローによって分析された。
【０６１６】
ＣＦＳＥ希釈（死細胞を除外するＺｏｍｂｉｅ  Ａｑｕａ）に基づいて、様々なＴ細胞およびＮＫ細胞集団の増殖を調査した。そのデータを図１１０Ａ〜図１１０Ｂ、図１１１Ａ〜図１１１Ｂ、図１１２Ａ〜図１１２Ｂ、図１１３Ａ〜図１１３Ｂ、図１１４Ａ〜図１１４Ｂ、図１１５Ａ〜図１１５Ｂに示す。データは、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体が、非標的化ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）／Ｒα−Ｆｃ融合体（ならびに対照のＲＳＶ標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体）と比較して、ＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖を誘導するのにはるかにより強力であることを示す。特に、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体はメモリーＴ細胞を優先的に標的とし、臨床環境では、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合が腫瘍環境における活性化腫瘍浸潤リンパ球に選択的であることを示唆する。
【０６１７】
また、ＣＤ２５（後期Ｔ細胞活性化マーカー）およびＨＬＡ−ＤＲ（別の活性化マーカー）の発現に基づいて、様々なＴ細胞集団の活性化を調査した。そのデータを図１１６Ａ〜図１１６Ｄ、図１１７Ａ〜図１１７Ｄ、および図１１８Ａ〜図１１８Ｄに示す。データは、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体が、概して、非標的化ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）／Ｒα−Ｆｃ融合体（および、対照のＲＳＶ標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体）と比較して、様々なＴ細胞集団の活性化を誘導するのにより強力であるように見えることを示す。
【０６１８】
まとめると、データは、ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体の活性がＰＤ−１親和性と相関していることを示す。例えば、図１１０Ａ〜図１１０Ｄに示されるように、ＸＥＮＰ２９１５９（親和性が強化されたＰＤ−１標的化アームを有する）は、ＸＥＮＰ２５８５０よりも強力にＣＤ８＋とＣＤ４＋のＴ細胞の両方の増殖を誘導する。
【０６１９】
ＸＩＸ．実施例５：ＩＬ−１５効力が調整されたＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体
Ａ．５Ａ：ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ）バリアント
ＸｔｅｎｄによるＩＬ−１５−Ｆｃ効力バリアントの薬物動態を調査する研究では、カニクイザルに、ＸＥＮＰ２２８５３（ＷＴ  ＩＬ−１５／Ｒα−ヘテロＦｃとＸｔｅｎｄ；配列を図１１９に示す）、ＸＥＮＰ２４３０６（ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）／Ｒα−ヘテロＦｃとＸｔｅｎｄ；配列を図１２２に示す）、ＸＥＮＰ２４１１３（ＩＬ−１５（Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）／Ｒα−ヘテロＦｃとＸｔｅｎｄ；配列を図１２０に示す）、ＸＥＮＰ２４２９４（ｓｃＩＬ−１５（Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）／Ｒα−ＦｃとＸｔｅｎｄ；配列を図１２１に示す）を、初回の単回静脈内（ｉ．ｖ．）用量を様々な濃度で投与した。
【０６２０】
図１２３は、初回投与後の経時的な試験品の血清濃度を示す。予想通り、Ｘｔｅｎｄ置換に加えて効力バリアントを組み込むと（ＸＥＮＰ２４３０６およびＸＥＮＰ２４１１３のように）、ＩＬ−１５−Ｆｃ融合体の薬物動態が大幅に改善される（ＸＥＮＰ２２５８３と比較して）。しかしながら、予期せぬことに、ＩＬ−１５／Ｒα−ヘテロＦｃ融合体ＸＥＮＰ２４１１３およびｓｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体ＸＥＮＰ２４２９４（同じＩＬ−１５（Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）効力バリアントを有する）は、ＸＥＮＰ２４３０６と比較して薬物動態の低下を示した。これは、薬物動態の低下が、ＩＬ−１５−Ｆｃ融合体のフォーマットではなく、特定のＩＬ−１５効力バリアントによるものであることを示唆している。ＸＥＮＰ２４１１３およびＸＥＮＰ２４２９４の薬物動態の低下は、ＩＬ−１５（Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）バリアントを有するＩＬ−１５−Ｆｃ融合体が、ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）バリアントを有するＩＬ−１５−Ｆｃ融合体よりも大きいインビトロ効力を有していたという以前の発見に基づいて予想されていたが、薬物動態の低下は、効力の増加に予想外に不相応であった。したがって、本発明のＬＡＧ−３標的化ＩＬ−１５−Ｆｃ融合体で使用するための代替のＩＬ−１５効力バリアントを同定しようとした。
【０６２１】
ＩＬ−１５（Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）は、ＣＤ１２２への結合を担当するＩＬ−１５インターフェースで両方の置換を有し、ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）はＩＬ−１５：ＣＤ１２２インターフェースで２つの置換（Ｅ６４ＱとＮ６５Ｄ）と、ＣＤ１３２への結合を担当するＩＬ−１５インターフェースでの１つの置換（Ｄ３０Ｎ）とを有することに留意されたい。したがって、ＩＬ−１５：ＣＤ１３２インターフェースでの改変が、ＸＥＮＰ２４３０６で観察された優れた薬物動態に寄与する可能性があると考えられた。特に、ＩＬ−１５（Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）バリアントとＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ）バリアントを含むｓｃＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体は、図１２５に示されるように、インビトロで非常に類似した効力を示すことが実証された。上述を考慮して、本発明者らは、ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ）バリアントを含む例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５−Ｆｃ融合体を考案し、その配列を図１２６Ａ〜図１２６Ｄに示す。また、ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ）バリアントを含む対照のＲＳＶ標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合タンパク質ＸＥＮＰ２９４８１を生成し、その配列を図１２９Ａ〜図１２９Ｂに示す。
【０６２２】
Ｂ．５Ｂ：ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）バリアント
ＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体は、ＰＤ−１標的化アームを介して腫瘍環境を標的とすることを目的として設計されたが、サイトカイン部分は腫瘍部位に到達する前にシグナル伝達することができ、全身傷害性に寄与し得る。したがって、本発明者らは、実施例２Ｃおよび図１２５に示されるように、活性を劇的に低下させたＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）バリアントとのＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体を構築することにより、ＩＬ−１５効力をさらに低下させようとした。ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）バリアントを含む例示的なＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体の配列を図１２７Ａ〜図１２７Ｄに示す。さらに、腫瘍環境外でのＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）バリアントを含むＰＤ−１標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体の挙動の調査の代理として機能するための、ＩＬ−１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）バリアント（その配列を図１２９Ａ〜図１２９Ｂに示す）を含むＲＳＶ標的化ＩＬ−１５／Ｒα−Ｆｃ融合体であるＸＥＮＰ３０４３２を構築した。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図４Ｅ】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図７Ｅ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図８Ｅ】
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【図８Ｆ】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１１Ｄ】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【図１５Ｄ】
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【図１５Ｅ】
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【図１５Ｆ】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【図２０Ｃ】
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【図２１】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２２Ｃ】
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【図２２Ｄ】
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【図２２Ｅ】
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【図２２Ｆ】
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【図２２Ｇ】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５Ａ】
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【図２５Ｂ】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０Ａ】
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【図３０Ｂ】
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【図３０Ｃ】
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【図３１Ａ】
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【図３１Ｂ】
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【図３１Ｃ】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６Ａ】
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【図３６Ｂ】
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【図３６Ｃ】
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【図３６Ｄ】
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【図３７Ａ】
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【図３７Ｂ】
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【図３８Ａ】
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【図３８Ｂ】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２Ａ】
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【図４２Ｂ】
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【図４２Ｃ】
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【図４３】
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【図４４Ａ】
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【図４４Ｂ】
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【図４４Ｃ】
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【図４５Ａ】
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【図４５Ｂ】
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【図４５Ｃ】
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【図４５Ｄ】
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【図４６Ａ】
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【図４６Ｂ】
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【図４６Ｃ】
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【図４７Ａ】
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【図４７Ｂ】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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【図５１Ａ】
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【図５１Ｂ】
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【図５１Ｃ】
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【図５２】
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【図５３Ａ】
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【図５３Ｂ】
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【図５３Ｃ】
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【図５４Ａ】
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【図５４Ｂ】
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【図５４Ｃ】
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【図５５Ａ】
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【図５５Ｂ】
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【図５６Ａ】
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【図５６Ｂ】
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【図５６Ｃ】
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【図５６Ｄ】
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【図５７Ａ】
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【図５７Ｂ】
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【図５７Ｃ】
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【図５７Ｄ】
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【図５８Ａ】
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【図５８Ｂ】
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【図５８Ｃ】
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【図５９Ａ】
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【図５９Ｂ】
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【図５９Ｃ】
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【図５９Ｄ】
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【図５９Ｅ】
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【図６０Ａ】
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【図６０Ｂ】
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【図６０Ｃ】
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【図６０Ｄ】
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【図６０Ｅ】
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【図６１Ａ】
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【図６１Ｂ】
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【図６１Ｃ】
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【図６１Ｄ】
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【図６２Ａ】
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【図６２Ｂ】
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【図６２Ｃ】
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【図６２Ｄ】
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【図６３】
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【図６４】
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【図６５Ａ】
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【図６５Ｂ】
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【図６５Ｃ】
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【図６５Ｄ】
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【図６５Ｅ】
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【図６５Ｆ】
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【図６５Ｇ】
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【図６５Ｈ】
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【図６５Ｋ】
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【図６６】
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【図６７】
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【図６８】
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【図６９Ａ】
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【図６９Ｂ】
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【図６９Ｃ】
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【図７０】
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【図７１】
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【図７２Ａ】
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【図７２Ｂ】
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【図７３Ａ】
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【図７３Ｂ】
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【図７４Ａ】
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【図７４Ｂ】
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【図７５】
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【図７６】
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【図７７Ａ】
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【図７７Ｂ】
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【図７７Ｃ】
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【図７７Ｄ】
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【図７７Ｅ】
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【図７７Ｆ】
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【図７８Ａ】
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【図７８Ｂ】
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【図７９Ａ】
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【図７９Ｂ】
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【図７９Ｃ】
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【図８０】
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【図８１】
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【図８２Ａ】
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【図８２Ｂ】
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【図８２Ｃ】
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【図８３Ａ】
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【図８３Ｂ】
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【図８３Ｃ】
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【図８４Ａ】
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【図８４Ｂ】
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【図８４Ｃ】
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【図８５Ａ】
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【図８５Ｂ】
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【図８５Ｃ】
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【図８６】
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【図８７】
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【図８８Ａ】
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【図８８Ｂ】
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【図８８Ｃ】
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【図８９Ａ】
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【図８９Ｂ】
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【図８９Ｃ】
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【図９０Ａ】
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【図９０Ｂ】
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【図９０Ｃ】
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【図９１Ａ】
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【図９１Ｂ】
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【図９１Ｃ】
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【図９２Ａ】
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【図９２Ｂ】
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【図９２Ｃ】
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【図９２Ｄ】
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【図９２Ｅ】
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【図９２Ｆ】
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【図９２Ｇ】
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【図９２Ｈ】
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【図９３Ａ】
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【図９３Ｃ】
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【図９３Ｄ】
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【図９３Ｅ】
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【図９３Ｆ】
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【図９３Ｇ】
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【図９３Ｈ】
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【図９３Ｍ】
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【図９３Ｎ】
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【図９３Ｐ】
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【図９３Ｑ】
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【図９３Ｒ】
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【図９３Ｓ】
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【図９４Ａ】
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【図９４Ｂ】
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【図９４Ｃ】
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【図９４Ｄ】
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【図９４Ｅ】
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【図９４Ｆ】
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【図９４Ｇ】
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【図９４Ｈ】
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【図９４Ｉ】
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【図９４Ｊ】
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【図９４Ｋ】
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【図９４Ｍ】
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【図９４Ｎ】
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【図９４Ｏ】
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【図９４Ｐ】
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【図９４Ｑ】
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【図９４Ｒ】
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【図９４Ｓ】
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【図９４Ｔ】
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【図９４Ｕ】
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【図９４Ｖ】
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【図９４Ｗ】
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【図９４Ｘ】
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【図９４Ｙ】
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【図９４Ｚ】
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【図９４ＡＡ】
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【図９４ＡＢ】
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【図９４ＡＣ】
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【図９４ＡＤ】
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【図９４ＡＥ】
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【図９４ＡＦ】
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【図９４ＡＧ】
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【図９４ＡＨ】
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【図９４ＡＩ】
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【図９４ＡＪ】
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【図９４ＡＫ】
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【図９４ＡＬ】
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【図９４ＡＭ】
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【図９４ＡＮ】
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【図９４ＡＯ】
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【図９４ＡＰ】
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【図９５Ａ】
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【図９５Ｂ】
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【図９５Ｃ】
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【図９５Ｄ】
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【図９５Ｅ】
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【図９５Ｆ】
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【図９５Ｇ】
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【図９５Ｈ】
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【図９５Ｉ】
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【図９５Ｊ】
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【図９６Ａ】
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【図９６Ｂ】
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【図９６Ｃ】
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【図９６Ｄ】
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【図９６Ｅ】
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【図９６Ｆ】
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【図９７Ａ】
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【図９７Ｂ】
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【図９７Ｃ】
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【図９７Ｄ】
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【図９７Ｅ】
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【図９７Ｆ】
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【図９７Ｇ】
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【図９７Ｈ】
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【図９７Ｉ】
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【図９７Ｊ】
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【図９７Ｋ】
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【図９７Ｌ】
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【図９７Ｍ】
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【図９７Ｎ】
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【図９７Ｏ】
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【図９７Ｐ】
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【図９７Ｑ】
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【図９８】
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【図９９】
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【図１００】
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【図１０１】
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【図１０２】
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【図１０３】
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【図１０４】
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【図１０５Ａ】
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【図１０５Ｂ】
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【図１０５Ｃ】
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【図１０５Ｄ】
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【図１０５Ｅ】
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【図１０６】
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【図１０７】
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【図１０８】
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【図１０９Ａ】
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【図１０９Ｂ】
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【図１０９Ｃ】
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【図１０９Ｄ】
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【図１１０Ａ】
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【図１１０Ｂ】
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【図１１１Ａ】
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【図１１１Ｂ】
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【図１１２Ａ】
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【図１１２Ｂ】
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【図１１３Ａ】
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【図１１３Ｂ】
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【図１１４Ａ】
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【図１１４Ｂ】
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【図１１５Ａ】
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【図１１５Ｂ】
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【図１１６Ａ】
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【図１１６Ｂ】
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【図１１６Ｃ】
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【図１１６Ｄ】
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【図１１７Ａ】
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【図１１７Ｂ】
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【図１１７Ｃ】
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【図１１７Ｄ】
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【図１１８Ａ】
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【図１１８Ｂ】
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【図１１８Ｃ】
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【図１１８Ｄ】
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【図１１９】
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【図１２０】
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【図１２１】
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【図１２２】
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【図１２３】
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【図１２４Ａ】
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【図１２４Ｂ】
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【図１２４Ｃ】
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【図１２５Ａ】
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【図１２５Ｂ】
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【図１２５Ｃ】
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【図１２５Ｄ】
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【図１２５Ｅ】
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【図１２５Ｆ】
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【図１２５Ｇ】
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【図１２６Ａ】
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【図１２６Ｂ】
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【図１２６Ｃ】
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【図１２６Ｄ】
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【図１２７Ａ】
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【図１２７Ｂ】
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【図１２７Ｃ】
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【図１２７Ｄ】
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【図１２８Ａ】
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【図１２８Ｂ】
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【図１２８Ｃ】
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【図１２８Ｄ】
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【図１２８Ｅ】
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【図１２８Ｆ】
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【図１２８Ｇ】
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【図１２８Ｈ】
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【図１２８Ｉ】
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【図１２８Ｊ】
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【図１２８Ｋ】
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【図１２８Ｌ】
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【図１２９Ａ】
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【図１２９Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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2021521784.tif 000397
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