(57)【要約】本発明は、慢性肝疾患、特に非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を好中球エラスターゼ阻害薬で処置するための方法に関する。本発明はさらに、好中球エラスターゼ阻害薬を含む医薬組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
処置を必要とする患者に、治療有効量の（４Ｓ）−４−［４−シアノ−２−（メチルスルホニル）フェニル］−３，６−ジメチル−２−オキソ−１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボニトリルまたはその薬学的に許容される塩、多形体、溶媒和物、もしくは塩の溶媒和物を投与することを含む、慢性肝疾患を処置する方法。
【請求項２】
前記慢性肝疾患が非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記慢性肝疾患が非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記治療有効量が１日１回１ｍｇ、２ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、または２０ｍｇの投薬量を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
さらに、１種または複数の追加の治療薬を投与することを含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記追加の治療薬が好中球エラスターゼ阻害薬である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記好中球エラスターゼ阻害薬がシルベスタットまたはアヴェレスタットである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記追加の治療薬が、好中球エラスターゼの阻害以外の機構によりＮＡＦＬＤまたはＮＡＳＨを処置または寛解する、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
前記追加の治療薬がＧＦＴ５０５、セラデルパル、セニクリビロク、ＧＳ−０９７６、ＧＳ−９６７４、セロンセルチブ、またはオベチコール酸である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記追加の治療薬が抗糖尿病薬である、請求項５に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗糖尿病薬がピオグリタゾン、ロシグリタゾン、リラグルチド、デュラグルチド、セマグルチド、カナグリフロジン、エンパグリフロジン、ルセオグリフロジン、またはイプラグリフロジンである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
（４Ｓ）−４−［４−シアノ−２−（メチルスルホニル）フェニル］−３，６−ジメチル−２−オキソ−１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボニトリルまたはその薬学的に許容される塩、多形体、溶媒和物、もしくは塩の溶媒和物と、薬学的に許容される担体とを含む、慢性肝疾患を処置するための医薬組成物。
【請求項１３】
錠剤として製剤化されている、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記錠剤が（４Ｓ）−４−［４−シアノ−２−（メチルスルホニル）フェニル］−３，６−ジメチル−２−オキソ−１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボニトリルまたはその薬学的に許容される塩、多形体、溶媒和物、もしくは塩の溶媒和物と、１種または複数の希釈剤、崩壊剤、界面活性剤または滑沢剤とを含む、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
１ｍｇ、２ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、または２０ｍｇの（４Ｓ）−４−［４−シアノ−２−（メチルスルホニル）フェニル］−３，６−ジメチル−２−オキソ−１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボニトリルまたはその薬学的に許容される塩、多形体、溶媒和物、もしくは塩の溶媒和物を含む、請求項１２〜１４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
慢性肝疾患の処置を必要とする患者において該疾患を処置する方法であって、前記患者に治療有効量の請求項１２〜１５のいずれか１項に記載の組成物を投与することを含む、方法。
【請求項１７】
前記慢性肝疾患がＮＡＦＬＤである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記慢性肝疾患がＮＡＳＨである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記医薬組成物が１ｍｇ、２ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、または２０ｍｇの（４Ｓ）−４−［４−シアノ−２−（メチルスルホニル）フェニル］−３，６−ジメチル−２−オキソ−１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボニトリルまたはその薬学的に許容される塩、多形体、溶媒和物、もしくは塩の溶媒和物を含む、請求項１６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、非仮出願であり、米国特許法第１１９条（ｅ）の下に、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる２０１８年４月２４日出願の仮出願第６２／６６２，０７４号に対する優先権を主張する。
【０００２】
本発明は、慢性肝疾患、特に非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を好中球エラスターゼ阻害薬で処置するための方法に関する。本発明はさらに、好中球エラスターゼ阻害薬を含む医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）は、肝細胞脂肪症から非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を経て、線維症、及び不可逆的硬変にまで及ぶ徐々に重篤となる肝臓障害の群を指す。肥満及び糖尿病の流行と並行して、ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨは今や、西洋社会において慢性肝疾患の最も多い原因であり、次の１０〜２０年以内に肝臓移植の主要な原因となる可能性がある（Ｓｔａｅｌｓ，  Ｂ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，  ２０１３，  ５８：１９４１−１９５２；Ｃｈａｒｌｔｏｎ，  Ｍ．  Ｒ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，  ２０１１，  １４１：１２４９−１２５３）。インスリン抵抗性及びその結果生じる肝脂質蓄積（脂肪症）が、ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨにおける一次的な病態生理学傷害であると広く考えられており、肝臓細胞損傷（脂肪性肝炎）及び線維症をもたらす炎症は、ＮＡＦＬＤからＮＡＳＨへ、そして最終的には硬変となる疾患進行を特徴づける重要な追加の病態生理学傷害であると考えられる（Ｃｈａｌａｓａｎｉ，  Ｎ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，  ２０１２，  ５５（６）：２００５−２０２３；Ａｎｄｅｒｓｏｎ，  Ｎ．  ａｎｄ  Ｂｏｒｌａｋ，  Ｊ．，  Ｐｈａｒｍａｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，  ２００８，  ６０：３１１−３５７）。
【０００４】
現在、ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨのための承認された治療法は存在しない。これらの状態が３５年以上前に最初に記載されたこと、及び全世界の研究者が１５年以上にわたってこれらの疾患の病態生理及び診断を集中的に研究していることを考慮すると、この状況は意外である（Ｒａｔｚｕｉ，  Ｖ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，  ２０１５，  ６２：Ｓ６５−Ｓ７５）。Ｒａｔｚｕｉ  ｅｔ  ａｌ．は、脂肪肝が糖尿病患者において観察される良性状態と歴史的に判断され、その結果、医薬研究が抗糖尿病薬に集中したと推測している（Ｒａｔｚｕｉ  ２０１５）。ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨのより深刻な作用が今では認められており、これらの疾患の発病率が上昇していることを考慮して、安全かつ有効な処置が必要とされている。
【発明の概要】
【０００５】
一態様では、本発明は、慢性肝疾患を処置する方法であって、治療有効量の（４Ｓ）−４−［４−シアノ−２−（メチルスルホニル）フェニル］−３，６−ジメチル−２−オキソ−１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボニトリルまたはその薬学的に許容される塩、多形体、溶媒和物、もしくは塩の溶媒和物を、処置を必要とする患者に投与することを含む上記方法を提供する。一実施形態では、慢性肝疾患は非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）である。別の実施形態では、慢性肝疾患は非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である。さらなる一実施形態では、治療有効量は、１日１回１ｍｇ、２ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、または２０ｍｇの投薬量を含む。別の実施形態では、慢性肝疾患を処置する方法はさらに、１種または複数の追加の治療薬を投与することを含む。一実施形態では、追加の治療薬は好中球エラスターゼ阻害薬である。さらなる一実施形態では、好中球エラスターゼ阻害薬はシルベスタットまたはアヴェレスタット（ａｖｅｌｅｓｔａｔ）である。別の実施形態では、追加の治療薬は、好中球エラスターゼの阻害とは別の機構によりＮＡＦＬＤまたはＮＡＳＨを処置または寛解する。さらなる一実施形態では、追加の治療薬は、ＧＦＴ５０５、セラデルパル、セニクリビロク、ＧＳ−０９７６、ＧＳ−９６７４、セロンセルチブ、またはオベチコール酸である。別の実施形態では、追加の治療薬は抗糖尿病薬である。さらなる一実施形態では、抗糖尿病薬は、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン、リラグルチド、デュラグルチド、セマグルチド、カナグリフロジン、エンパグリフロジン、ルセオグリフロジン、またはイプラグリフロジンである。
【０００６】
別の態様では、本発明は、（４Ｓ）−４−［４−シアノ−２−（メチルスルホニル）フェニル］−３，６−ジメチル−２−オキソ−１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボニトリルまたはその薬学的に許容される塩、多形体、溶媒和物、もしくは塩の溶媒和物と、薬学的に許容される担体とを含む、慢性肝疾患を処置するための医薬組成物を提供する。一実施形態では、上記医薬組成物は錠剤として製剤化されている。別の実施形態では、上記錠剤は、（４Ｓ）−４−［４−シアノ−２−（メチルスルホニル）フェニル］−３，６−ジメチル−２−オキソ−１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボニトリルまたはその薬学的に許容される塩、多形体、溶媒和物、もしくは塩の溶媒和物と、１種または複数の希釈剤、崩壊剤、界面活性剤または滑沢剤とを含む。さらなる一実施形態では、上記医薬組成物は、（４Ｓ）−４−［４−シアノ−２−（メチルスルホニル）フェニル］−３，６−ジメチル−２−オキソ−１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボニトリルまたはその薬学的に許容される塩、多形体、溶媒和物、もしくは塩の溶媒和物１ｍｇ、２ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、または２０ｍｇを含む。
【０００７】
別の態様では、本発明は、そのような処置を必要とする患者において慢性肝疾患を処置する方法であって、上記患者に、治療有効量の（４Ｓ）−４−［４−シアノ−２−（メチルスルホニル）フェニル］−３，６−ジメチル−２−オキソ−１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボニトリルまたはその薬学的に許容される塩、多形体、溶媒和物、もしくは塩の溶媒和物と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を投与することを含む上記方法を提供する。一実施形態では、慢性肝疾患はＮＡＦＬＤである。別の実施形態では、慢性肝疾患はＮＡＳＨである。さらなる一実施形態では、上記医薬組成物は（４Ｓ）−４−［４−シアノ−２−（メチルスルホニル）フェニル］−３，６−ジメチル−２−オキソ−１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボニトリルまたはその薬学的に許容される塩、多形体、溶媒和物、もしくは塩の溶媒和物１ｍｇ、２ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、または２０ｍｇを含む。
【０００８】
本発明の他の目的は、当業者には、次の説明及び特許請求の範囲を読むことで明らかであり得る。
【０００９】
本発明の新規特徴は、添付の特許請求の範囲において詳細に記載する。本発明の原理を利用する例示的実施形態を記述する次の詳細な説明、及び添付の図面を参照することで、本発明の特徴及び利点のより良好な理解が得られるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】米国特許第８，２８８，４０２号（Ｖｏｎ  Ｎｕｓｓｂａｕｍ）に記載のとおりの（４Ｓ）−４−［４−シアノ−２−（メチルスルホニル）フェニル］−３，６−ジメチル−２−オキソ−１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボニトリルの全合成が示されている。反応スキームは次のとおりである：Ｖｏｎ  Ｎｕｓｓｂａｕｍ特許のスキーム６ならびに実施例１Ａ、２Ａ方法Ｂ、及び３Ａ方法Ｂ及び４Ａ方法Ｂにおける式（ＩＩ）の化合物から式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）及び（Ｖ）の化合物を経て式（ＶＩ）の化合物に至る反応シークエンス；Ｖｏｎ  Ｎｕｓｓｂａｕｍ特許のスキーム１ならびに実施例３及び４における式（ＶＩ）の化合物から式（ＩＸ）の化合物を経て式（Ｘ）の化合物に至る反応シークエンス；ならびにＶｏｎ  Ｎｕｓｓｂａｕｍ特許のスキーム２ならびに実施例５Ａ、５及び６における式（Ｘ）の化合物から式（ＸＩ）及び（ＸＩＩ）の化合物を経て（ＸＩＩＩ）の化合物に至る反応シークエンス。式（Ｉ）の化合物（本明細書の化合物１）の合成は、Ｖｏｎ  Ｎｕｓｓｂａｕｍ特許の実施例３３方法Ｂに記載されている。
【００１１】
【図２Ａ】ロシグリタゾン、３ｍｇ／ｋｇの化合物１、１５ｍｇ／ｋｇの化合物１、またはビヒクルでの６週間の処置中のＤＩＯ（食事性肥満）マウスの体重変化が示されている。４つの処置群について体重（グラム）が処置日数に対してプロットされている。
【図２Ｂ】ロシグリタゾン、３ｍｇ／ｋｇの化合物１、１５ｍｇ／ｋｇの化合物１、またはビヒクルでの６週間の処置中のＤＩＯ（食事性肥満）マウスの体重変化が示されている。４つの処置群についての最終体重をグラフで描写する。
【図２Ｃ】ロシグリタゾン、３ｍｇ／ｋｇの化合物１、１５ｍｇ／ｋｇの化合物１、またはビヒクルでの６週間の処置中のＤＩＯ（食事性肥満）マウスの体重変化が示されている。４つの処置群について体重（パーセンテージ）が処置日数に対してプロットされている。
【図２Ｄ】ロシグリタゾン、３ｍｇ／ｋｇの化合物１、１５ｍｇ／ｋｇの化合物１、またはビヒクルでの６週間の処置中のＤＩＯ（食事性肥満）マウスの体重変化が示されている。４つの処置群についての体重増加率のパーセンテージをグラフで描写する。
【００１２】
【図３Ａ】ロシグリタゾン、３ｍｇ／ｋｇの化合物１、１５ｍｇ／ｋｇの化合物１、またはビヒクルでの６週間の処置中のＤＩＯマウスでのグルコース処分曲線が示されている。４つの処置群についての処置前日（−１日目）に決定されたグルコース攻撃の経口投与後のグルコース処分曲線を示す。
【図３Ｂ】ロシグリタゾン、３ｍｇ／ｋｇの化合物１、１５ｍｇ／ｋｇの化合物１、またはビヒクルでの６週間の処置中のＤＩＯマウスでのグルコース処分曲線が示されている。４つの処置群についての処置４週間後（２８日目）のグルコース処分曲線を示す。
【図３Ｃ】ロシグリタゾン、３ｍｇ／ｋｇの化合物１、１５ｍｇ／ｋｇの化合物１、またはビヒクルでの６週間の処置中のＤＩＯマウスでのグルコース処分曲線が示されている。４つの処置群についての処置６週間後（４２日目）のグルコース処分曲線を示す。
【図３Ｄ】４つの処置群についての処置前（−１日目）及び処置後（２８日目及び４２日目）の増分グルコースＡＵＣをグラフで描写する。
【００１３】
【図４】ロシグリタゾン、３ｍｇ／ｋｇの化合物１、１５ｍｇ／ｋｇの化合物１、またはビヒクルでの６週間の処置中のＤＩＯマウスについての空腹時血清インスリンレベルの変化が示されている：Ａ）４つの処置群について血清インスリン（ｎｇ／ｍｌ）が処置日数に対してプロットされている；Ｂ）研究終了時の４つの処置群についての空腹時血清インスリンレベルをグラフで描写する。
【００１４】
【図５】３ｍｇ／ｋｇの化合物１、１５ｍｇ／ｋｇの化合物１、またはビヒクルでの６週間の処置後のＤＩＯマウスについての終末の肝臓及び精巣上体脂肪重量の比較が示されている：Ａ）４つの処置群についての、体重に対するパーセンテージとして表されている終末の肝臓重量をグラフ描写する；Ｂ）４つの処置群についての、体重に対するパーセンテージとして表されている終末精巣上体脂肪重量をグラフ描写する。
【００１５】
【図６】１５ｍｇ／ｋｇの化合物１、３０ｍｇ／ｋｇの化合物１、またはビヒクルでの４週間の処置中のＤＩＯマウスの体重変化が示されている：Ａ）３つの処置群について体重（グラム）が処置日数に対してプロットされている；Ｂ）３つの処置群について体重変化（パーセンテージ）が処置日数に対してプロットされている。
【００１６】
【図７】１５ｍｇ／ｋｇの化合物１、３０ｍｇ／ｋｇの化合物１、またはビヒクルでの４週間の処置後のＤＩＯマウスについての経口耐糖試験（ＯＧＴＴ）からのグルコース処分曲線が示されている：Ａ）３つの処置群についての処置から４週間後２８日目のグルコース処分曲線；Ｂ）３つの処置群についての処置前−１日目及び処置から４週間後２８日目でのグルコースＡＵＣのグラフ描写を示す。
【００１７】
【図８】１５ｍｇ／ｋｇの化合物１、３０ｍｇ／ｋｇの化合物１、またはビヒクルでの４週間の処置後２９日目のＤＩＯマウスについての空腹時血清インスリンレベル（ｎｇ／ｍｌ）が示されている。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本出願の範囲は添付の特許請求の範囲及びそれらの均等物によりのみ限定されることとなるので、本出願は、記載の特定の方法または具体的な組成物に限定されない。本明細書で使用される専門用語は、特定の実施形態を記載することを目的としたものにすぎず、限定することを意図したものではないことも理解されるべきである。
【００１９】
別段に定義しない限り、本明細書で使用するすべての技術及び科学用語は、本出願が属する当業者が一般に理解する意味と同じ意味を有する。本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎｄ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が別段に明確に規定しない限り、複数の指示物を含むことは特記されるべきである。
【００２０】
次では、ある特定の好ましい処置方法、化合物及びこれらの化合物を投与する方法について詳細に言及する。本発明は、それらの好ましい化合物及び方法に限定されず、むしろ、本明細書から発行される特許請求の範囲により規定される。
【００２１】
序文
本発明は、化合物１（４Ｓ）−４−［４−シアノ−２−（メチルスルホニル）フェニル］−３，６−ジメチル−２−オキソ−１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボニトリルまたはその薬学的に許容される塩、多形体、溶媒和物、もしくは塩の溶媒和物を使用して、慢性肝疾患、特に非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を処置するための方法を提供する。本発明はまた、ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨの処置において使用するために適切な化合物１の医薬組成物を提供する。
【００２２】
化合物１は、強力な好中球エラスターゼ（ＮＥ）阻害薬として以前に開示されている（Ｎａｇｅｌｓｃｈｍｉｔｚ，  Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｊ．，  ２０１４，  ４４，  Ｓｕｐｐｌ．  ５８，  Ａｂｓｔｒａｃｔ  ｎｏ．  ３４１６）。これは、マウス好中球エラスターゼ（Ｋｉ［Ｍ］＝８．０×１０−１１）についてよりも、ヒト好中球エラスターゼ（Ｋｉ［Ｍ］＝８．０×１０−１１）についてほぼ１００倍選択的である（Ｖｏｎ  Ｎｕｓｓｂａｕｍ，  Ｆ．，  ｅｔ  ａｌ．，  ＣｈｅｍＭｅｄＣｈｅｍ．，  ２０１５，  １０：１１６３−１１７３）。ヒト好中球エラスターゼ（ｈＮＥ、ＮＥ）は、炎症中に好中球により分泌される非常に活性なセリンプロテアーゼである。これは、ヒト白血球エラスターゼとしても公知である（ＨＬＥ、ＥＣ  ３．４．２１．３７）。このタンパク質分解酵素は、多形核白血球（ＰＭＮ白血球）のアズール親和性顆粒中で見出される。細胞内エラスターゼは、食作用により取り込まれた外来粒子を破壊することにより、病原体に対する防御において重要な役割を果たす（Ｎａｇｅｌｓｃｈｍｉｔｚ、２０１４年）。高度に活性なタンパク質分解酵素は、タンパク質のエラスチン、コラーゲン及びフィブロネクチンなどの多数の結合組織タンパク質を破壊し得る。エラスチンは、肺及び動脈においてなど、高い弾性を示すすべての組織種において高濃度で生じる。ＮＥはまた、炎症プロセスの重要な調節物質である。過剰なｈＮＥ活性は、気管支拡張症、ＣＯＰＤ及び肺高血圧のような炎症性肺疾患の病因に関係している。
【００２３】
化合物１は、様々な肺疾患のための処置として、かつ慢性創傷を処置するために、いくつかの特許及び出願（それらの開示が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８，２８８，４０２号；米国特許第８，８８９，７００号；米国特許第９，１７４，９９７号；ＰＣＴ公報ＷＯ２０１７／０８１０４４）において開示されている。
【００２４】
ＢＡＹ８５−８５０１としても公知の化合物１の安全性及び忍容性は、いくつかのヒト治験において評価されている。２つの第１相（健康な被験者での単回投与研究）、１つの第１相（健康な被験者での複数回投与研究）、及び１つの第２ａ相（非嚢胞性線維症気管支拡張症（ｎＣＦ  ＢＥ）の被験者での複数回の投与研究）を含む４つの臨床研究は、経口液剤及び／または即時放出（ＩＲ）錠剤として投与された化合物１の安全性、薬物動態（ＰＫ）、及び薬力学（ＰＤ）を評価している。３つの第１相研究に参加した健康な被験者では、最大１ｍｇの用量で最大１４日間にわたって投与された単回及び繰り返しの化合物１処置は、安全で、かつ忍容性が良好であった。第１相研究で報告された有害事象（ＡＥ）は一般に、軽度で、治験薬の投与とは関連がなく、重篤なＡＥ（ＳＡＥ）は報告されなかった。試験薬誘導実験室またはＥＣＧ異常についての安全性シグナルは観察されなかった（Ｎａｇｌｅｓｃｈｍｉｔｚ，  Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｊ．，  ２０１４，  ４４：３４１６；Ｎａｇｅｌｓｃｈｍｉｔｚ，  Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｊ．，  ２０１４，  ４４：Ｐ１５１１を参照されたい）。
【００２５】
非ＣＦ  ＢＥの被験者での多施設共同、第２ａ相、無作為化二重盲検プラセボ対照研究は、化合物１の２８日間経口投与を使用して行われた（ｗｗｗ．ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ；識別子：ＮＣＴ０１８１８５４４）。９４人の患者（平均年齢６６歳、男性５３％）が処置に無作為化され、４５人の患者がＩＲ錠剤として投与される化合物１の１．０ｍｇ経口用量を与えられた。薬物は一般に、２８日間にわたって安全で、かつ忍容性が良好であった。化合物１及びプラセボを与えられた被験者での安全性の結果は一般に、同様であった。ＡＥは一般に、重症度において軽度または中等度であり、治験薬の投与とは関連がなく、試験薬とプラセボとの間で差はなかった。ＳＡＥの発生率及びＡＥによる治験薬の投与の中止例は少なく、治験責任医師によると、ＳＡＥは薬物に起因するものではなかった。試験薬誘導実験室パラメーターまたはＥＣＧ作用についての安全性シグナルは観察されなかった（Ｗａｔｚ，  Ｈ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｊ．，  ２０１６，  ４８：ＰＡ４０８８を参照されたい）。
【００２６】
化学的説明
化合物１である（４Ｓ）−４−［４−シアノ−２−（メチルスルホニル）フェニル］−３，６−ジメチル−２−オキソ−１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボニトリルは次の化学構造を有する：
【化１】
2021522247.tif 000002
別法では、化合物１は、（４Ｓ）−４−［４−シアノ−２−（メチルスルホニル）フェニル］−１，２，３，４−テトラヒドロ−３，６−ジメチル−２−オキソ−１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−５−ピリミジンカルボニトリルと名付けられることもある。化合物１は一般に、文献ではＢＡＹ８５−８５０１として公知である。化合物１についてのこれらの呼称のいずれも互換的に使用され得、同じ意味を有することは理解される。
【００２７】
化合物１及びその塩、多形体、溶媒和物、または塩の溶媒和物は、様々な立体異性体の形態で、すなわち、立体配置異性体の形態で、または適切な場合、立体配座異性体（エナンチオマー及び／またはアトロプ異性体を含むジアステレオマー）としても存在し得る。したがって、化合物１は、エナンチオマー及びジアステレオマー、ならびにそれらのそれぞれの混合物も指す。立体異性的に純粋な成分を、そのようなエナンチオマー及び／またはジアステレオマーの混合物から既知の方法で単離することができる。化合物１は、任意の可能な互変異性型も包含する。
【００２８】
化合物１は、これに限定されないが、複数の結晶形、非結晶アモルファス形、及び多形体を含む複数の物理的形態で存在し得る。一般に、全ての物理的形態は、本明細書で企図される使用に関して均等であり、本開示の範囲内に包括されることが意図されている。多形性とは、結晶格子を持つ分子の構造配列及び／またはコンフォメーションが異なる可能性のある、２つ以上の結晶形で存在する分子の能力を指す。多形構造は同じ化学組成を有するが、異なる格子構造及び／またはコンフォメーションが、溶解性、安定性、融点、密度、生物学的利用能など、異なる物理的、化学的、または薬理学的特性をもたらし得る。非晶質形は、定義される結晶構造を有さない。化合物１のすべての多形体及び他の物理的形態は、本明細書で企図される使用に関して同等であり、本発明の範囲内に包括されることが意図されている。
【００２９】
本発明の目的に好ましい塩は、化合物１の生理学的に許容される塩である。また、それ自体は医薬用途には不適切であるが、例えば、本発明による化合物の単離または精製に使用できる塩も包含される。塩は、これに限定されないが、複数の結晶形、非結晶アモルファス形、及び多形体を含む、複数の物理的形態で存在し得る。
【００３０】
化合物１の生理学的に許容される塩には、鉱酸、カルボン酸及びスルホン酸の酸付加塩、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、ギ酸、フマル酸、マレイン酸及び安息香酸の塩が含まれる。化合物１の生理学的に許容される塩には、例として、かつ好ましくは、アルカリ金属塩（例えばナトリウム塩及びカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えばカルシウム塩及びマグネシウム塩）ならびにアンモニアまたは例として、かつ好ましくは、エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、ジメチルアミノエタノール、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、アルギニン、リシン、エチレンジアミン及びＮ−メチルピペリジンなどの１〜１６個の炭素原子を有する有機アミンから誘導されるアンモニウム塩などの従来の塩基の塩も含まれる。
【００３１】
溶媒和物は、本発明の目的では、固体または液体状態で、溶媒分子との配位により錯体を形成する、本発明による化合物１のそれらの形態を指す。溶媒和物は、これに限定されないが、複数の結晶形態、非結晶アモルファス形態、及び多形を含む、複数の物理的形態で存在し得る。溶媒和物はまた、化合物１の薬学的に許容される塩と共に形成され得る。水和物は、水との配位が起こる特定の形態の溶媒和物である。これに限定されないが、１，４−ジオキサン、１−プロパノール、１−ブタノール、１，２−ジメトキシエタン、２−エトキシエタノール、２−メトキシエタノール、２−メチル−１−プロパノール、２−メチルテトラヒドロフラン、３−メチル−１−ブタノール、酢酸、アセトン、アセトニトリル、アニソール、ブチルアセタート、クロロベンゼン、クメン、ジメチルスルホキシド、エタノール、酢酸エチル、エチルエーテル、ギ酸エチル、エチレングリコール、ギ酸、ヘプタン、イソブチルアセタート、イソプロピルエーテル、酢酸イソプロピル、メタノール、酢酸メチル、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、Ｎ−メチルピロリドン、ｔｅｒｔ−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、テトラヒドロフラン及びトルエンを含む様々な有機溶媒が、化合物１と共に溶媒和物を形成し得る。
【００３２】
化学合成
化合物１である（４Ｓ）−４−［４−シアノ−２−（メチルスルホニル）フェニル］−３，６−ジメチル−２−オキソ−１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボニトリルは、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＶｏｎ  Ｎｕｓｓｂａｕｍ  ｅｔ  ａｌ．米国特許第８，２８８，４０２号）に記載のとおり調製することができる。別法では、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１８／００７２６８５号に記載のとおりのＳｃｈｉｒｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．の方法を使用することもできる。
【００３３】
Ｎｕｓｓｂａｕｍ  ｅｔ  ａｌ．の方法は米国特許第８，２８８，４０２号に示されている。３−フルオロ−４−メチルベンゾニトリルから出発して、化合物１は、１０ステップで理論量の４．４５％の総収率で生成される。図１に、合成の中間ステップが詳細に示されている。最後のステップは、Ｎ−メチル化、それに続くカラムクロマトグラフィーである。Ｓ−エナンチオマーは、クロマトグラフィー画分の濃縮により、アモルファス固体として得られる。合成のさらなる詳細は、Ｖｏｎ  Ｎｕｓｓｂａｕｍ  ｅｔ  ａｌ．の特許の実施例３３において見出すことができる。
【００３４】
Ｓｃｈｒｉｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．は、米国特許出願公開第２０１８／００７２６８５号に提示のスキームに図示されているとおり、改良された化合物１の合成を提供している。改良された方法は、２つのバリアントで利用可能であり、方法バリアント（Ａ）は、８つのステップで（米国特許出願公開第２０１８／００７２６８５号のスキーム７、２及び３を参照されたい）、中間体のクロマトグラフィー精製を伴わずに理論量の１７％超の全体収率で化合物１をもたらす。方法バリアント（Ｂ）（米国特許出願公開第２０１８／００７２６８５号のスキーム７、４、５及び６を参照されたい）は、９つのステップで、同様に中間体のクロマトグラフィー精製を伴わずに、米国特許出願公開第２０１８／００７２６８５号に詳述されているとおり、反応管理に応じた全体収率で化合物１をもたらす。
【００３５】
化合物１は白色から黄色の固体で、２３２℃の融点を有する。これは中性であると考えられており、容易に塩を形成しない。化合物１は、通常の貯蔵条件下では吸湿性ではない。化合物１は水に実際的に不溶性であり、エタノールに非常にわずかに可溶性であり、アセトンに可溶性である。
【００３６】
医薬組成物
（４Ｓ）−４−［４−シアノ−２−（メチルスルホニル）フェニル］−３，６−ジメチル−２−オキソ−１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボニトリル（化合物１）またはその薬学的に許容される塩、多形体、溶媒和物、もしくは塩の溶媒和物を活性成分として含有する組成物が、慢性肝疾患を処置するために有利に使用され得る。化合物１またはその薬学的に許容される塩、多形体、溶媒和物、もしくは塩の溶媒和物を単独で投与することは可能であるが、これを製剤として提供することが好ましい。組成物または剤形を、単独で、または１つまたは複数の希釈剤、崩壊剤、界面活性剤または滑沢剤を含む他の薬剤と組み合わせて投与または適用することができる。製剤はまた、別の薬学的に活性な薬剤と組み合わせて、化合物１を患者に送達してもよい。
【００３７】
本明細書で使用する場合の「組成物」という用語は、規定の成分を所定の量または割合で含む生成物、さらには規定の量での規定の成分の組み合わせから直接的または間接的に得られる任意の生成物を包含することが意図されている。医薬組成物に関するこの用語は、１種または複数の活性成分と、不活性な成分を含む任意選択の薬学的に許容される担体とを含む生成物、さらには、任意の２種以上の成分の組み合わせ、錯化もしくは凝集から、または上記成分の１種または複数の解離から、または上記成分の１種または複数の他の種類の反応または相互作用から直接的または間接的に得られる任意の生成物を包含することが意図されている。一般に、医薬組成物は、活性成分を液体担体もしくは微粉化固体担体、またはそれらの両方と均一かつ密接に混和し、次いで、必要に応じて生成物を所望の製剤に成形することにより調製される。医薬組成物には、活性目的化合物が、疾患のプロセスまたは容態に対して所望の効果を生み出すのに十分な量で含まれる。したがって、本発明の医薬組成物は、本発明の化合物と薬学的に許容される担体とを混合することにより作製される任意の組成物を包含する。上記組成物は、それぞれ、従来の混合、顆粒化、またはコーティング方法に従って調製され、活性成分０．１〜７５％、好ましくは１〜５０％を含有する。
【００３８】
「薬学的に許容される」は、担体、希釈剤、または添加剤が、製剤の他の成分と適合性でなければならず、そのレシピエントにとって有害ではないことを意味する。経口使用が意図される医薬組成物は、医薬組成物の製造者にとって当技術分野で既知の任意の方法に従って調製することができ、そのような組成物は、薬学的に優れていて味の良い製剤を提供するために、甘味剤、香味剤、着色剤、及び防腐剤から選択される１種または複数の薬剤を含有してもよい。
【００３９】
錠剤は、これに限定されないが、希釈剤、崩壊剤、界面活性剤及び滑沢剤を含む、錠剤の製造に適切な非毒性の薬学的に許容される添加剤と混合された活性成分を含有する。これらの添加剤は例えば、不活性な希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウム；顆粒化及び崩壊剤、例えば、トウモロコシデンプン、またはアルギン酸；結合剤、例えば、デンプン、ゼラチンまたはアラビアゴム、及び滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクであってよい。錠剤はコーティングされていなくてもよいし、または消化管での崩壊及び吸収を遅延させ、それにより、長期にわたる持続作用を得るための公知の技術によりコーティングされていてもよい。錠剤は、活性成分を任意選択で１種または複数の薬学的に許容される成分と共に圧縮または成形することにより作製することができる。圧縮された錠剤は、適切な機械内で、任意選択で結合剤、滑沢剤、不活性な希釈剤、界面活性剤、または分配剤と混合された、粉末または顆粒などの自由流動形態の活性成分を圧縮することにより調製することができる。成形された錠剤は、適切な機械内で、不活性な液体希釈剤で湿らせた粉末化活性成分及び適切な担体の混合物を成形することにより作製することができる。錠剤は、下の実施例に記載されているとおりに、またはその全体が参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ出願ＷＯ２０１７／０８１０４４（Ｍａｙ  ｅｔ  ａｌ．）に記載されているとおりに調製することができる。
【００４０】
経口使用のための組成物は、活性成分が不活性な固体希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムもしくはカオリンと混合されている硬質ゼラチンカプセル剤として、または活性成分が水または油性媒体、例えばラッカセイ油、流動パラフィン、もしくはオリブ油と混合されている軟質ゼラチンカプセル剤として提供することもできる。特に、本発明の医薬組成物は、活性成分が液体及び半固体賦形剤のある特定の組み合わせ中で溶液となっている液体充填カプセル剤形を含み得る。
【００４１】
経口投与用の組成物を、水性懸濁液の製造に適した賦形剤と混合された活性成分を含有する水性懸濁液として製剤化することもできる。油性懸濁液は、活性成分を適切な油に懸濁することにより製剤化することができる。水中油型エマルジョンも使用することができる。水の添加により水性懸濁液を調製するために適切な分散性粉末及び顆粒は、分散もしくは湿潤剤、懸濁剤、及び１種または複数の防腐剤と混合された活性成分を提供する。化合物１の経口懸濁液は、ＰＣＴ出願ＷＯ２０１７／０８１０４４（Ｍａｙ  ｅｔ  ａｌ．）に記載のとおりに調製することができる。
【００４２】
本発明の活性成分は、経口即時放出（ＩＲ）製剤または持続放出製剤で投与することができる。「持続放出」は、薬剤の従来の製剤の経口投与により達成されるものと比較して、長期間にわたって全身性血液循環において治療量の薬剤またはその活性代謝物を達成するのに有効な速度で剤形から活性薬剤を放出することを指す。薬剤の放出は、長期間にわたって、例えば、少なくとも６時間にわたって、少なくとも８時間にわたって、少なくとも１２時間にわたって、または少なくとも２４時間にわたって起こる。
【００４３】
化合物１は、静脈内（ｉ．ｖ．）注入により投与することができる。静脈内投与に適した化合物１の溶液は、ＰＣＴ公開出願ＷＯ２０１７／０８１０４４（Ｍａｙ  ｅｔ  ａｌ．）に記載されているとおりに調製することができる。
【００４４】
Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  （２１ｓｔ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，  ２００５）に記載されているとおり、適切な局所製剤及び剤形には、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、ローション剤、ペースト剤などが含まれる。軟膏剤は、典型的にはワセリンまたは他の石油誘導体をベースとする半固体製剤である。当業者には理解されるであろうとおり、使用される具体的な軟膏基剤は、最適な薬物送達を提供し、好ましくは、他の所望の特性、例えば、エモリエンシーなども提供するものである。クリーム剤は、粘稠性液体または水中油型もしくは油中水型のいずれかの半固体乳剤である。クリーム基剤は水洗可能であり、油相、乳化剤、水相を含む。「内部」相とも呼ばれる油相は一般に、ワセリンと、セチルまたはステアリルアルコールなどの脂肪アルコールから構成される。水相は通常、必ずしもそうではないが、体積が油相よりも多く、一般に保湿剤を含む。クリーム製剤中の乳化剤は一般に、非イオン性、アニオン性、カチオン性、または両性の界面活性剤である。ゲル剤は半固体の懸濁液タイプの系である。単相ゲルは、担体液体全体に実質的に均一に分布した有機高分子（ポリマー）を含み、これは典型的には、水性であるが、好ましくは、エタノールまたはイソプロパノールなどのアルコール、及び任意選択で油も含む。均一なゲル剤を調製するために、アルコールまたはグリセリンなどの分散剤を添加することができるか、またはゲル化剤を粉砕、機械的混合もしくは撹拌、またはそれらの組み合わせにより分散させることができる。ローション剤は、摩擦なしに皮膚表面に塗布される製剤であり、典型的には、活性剤を含む固体粒子が水またはアルコール基剤中に存在する液体または半液体の製剤である。ローション剤は通常、細かく分割された固形物の懸濁液であり、典型的には、より良好な分散液を生成するための懸濁化剤、さらには活性剤を局所化して皮膚と接触させて保持するのに有用な化合物を含む。ペースト剤は、活性剤が適切な基剤に懸濁されている半固体剤形である。基剤の性質に応じて、ペースト剤は油脂ペースト剤と単相水性ゲルから作られたペースト剤とに区別される。
【００４５】
当業者に公知の様々な添加剤を局所製剤に含めることができる。例えば、比較的少量のアルコールを含む溶媒を使用して、特定の薬物物質を可溶化することができる。他の任意選択の添加剤には、乳白剤、酸化防止剤、芳香剤、着色剤、ゲル化剤、増粘剤、安定剤、界面活性剤などが含まれる。貯蔵時の腐敗を防ぐために、すなわち酵母やカビなどの微生物の増殖を阻害するために、抗菌剤などの他の薬剤を添加することもできる。皮膚または粘膜組織を通る浸透速度が異常に低い薬物では、製剤に浸透促進剤を含めることが望ましいことがある。製剤はまた、剤形の薬物、増強剤、または他の成分に起因する皮膚刺激または皮膚損傷の可能性を最小化または排除するための刺激緩和添加剤を含んでもよい。製剤はまた、エーテル生理学的に許容される賦形剤または他の少量の添加剤、例えば、芳香剤、染料、乳化剤、緩衝剤、冷却剤（例えば、メントール）、抗生物質、安定剤などを含んでもよい。場合により、１つの構成成分が複数の機能を果たすことがあり得る。
【００４６】
局所製剤中の活性薬剤の濃度は大きく変動し得、処置される疾患または容態、活性薬剤の性質及び活性、所望の作用、起こり得る有害反応、意図されている標的に到達する活性薬剤の能力及び速度、ならびに患者及び医師の特定の知識内の他の因子を含む様々な因子に依存することとなる。製剤は典型的に、活性薬剤０．１重量％〜５０重量％、好ましくは活性薬剤０．１重量％〜５重量％、最適には活性薬剤５重量％〜２０重量％を含有するであろう。
【００４７】
本発明の医薬組成物は、筋肉内または皮下注射を介して投与するためのデポー製剤として製剤化することができる。デポー製剤は、活性成分の効率的で、忍容性が高く、持続放出または遅延放出の組成物であり、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、または少なくとも６週間以上などの数週間にわたって治療的に有効である。活性薬剤に加えて、界面活性剤、可溶化剤、乳化剤、防腐剤、等張剤、分散剤、湿潤剤、充填剤、溶媒、緩衝剤、安定剤、滑沢剤、及び増粘剤を含む追加の成分を本発明のデポー製剤で使用することができる。追加の成分の組み合わせも使用することができる。デポー製剤中の活性成分の量は、処置される慢性肝疾患の重症度に依存することとなる。
【００４８】
本発明の組成物は単位剤形で提供することができ、薬学の分野で周知の方法のいずれかにより調製することができる。「単位剤形」という用語は、すべての活性成分と不活性成分が適切なシステムで組み合わされ、患者または患者に薬物を投与する人がそこに含まれる全用量で単一の容器またはパッケージを開けることができ、２つ以上の容器またはパッケージからのいずれかの成分を一緒に混合する必要がない単一用量を意味すると解釈される。単位剤形の典型的な例は、経口投与用の錠剤またはカプセル剤である。単位剤形のこれらの例は、決して限定することを意図するものではなく、単に単位剤形の薬局技術における典型的な例を表すことを意図している。
【００４９】
本発明の組成物をまた、キットとして提示することもでき、それにより、活性または不活性成分、担体、希釈剤などであり得る２つ以上の成分が、患者または患者に薬物を投与する人による実際の剤形の調製のための指示書と共に提供される。そのようなキットを、そこに含まれるすべての必要な材料及び成分と共に提供してもよいし、またはそれらは、患者または患者に薬物を投与する人により独立して入手されなければならない材料または構成成分を使用または製造するための指示書を含んでもよい。
【００５０】
ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨ
非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）は本質的に、脂肪が肝臓に蓄積している状態（脂肪症）である。この用語は、単純な脂肪症から非アルコール性脂肪性肝炎、線維症、肝硬変までの疾患の進行スペクトラムをカバーしている。非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）は、肝臓の炎症及び肝細胞傷害（脂肪性肝炎）と共存する脂肪症（肝臓の脂質蓄積）の存在として定義される。ＮＡＳＨは、肝障害が発生したＮＡＦＬＤのより進行した形態であり、単純な良性脂肪症が線維症及び肝硬変に進展し、肝細胞癌の発症を含む末期肝疾患につながり得る（Ｓｔａｅｌｓ，  Ｂ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，  ２０１３，  ５８：１９４１−１９５２）。
【００５１】
ＮＡＦＬＤは、全世界で最も多い肝疾患の形態であり、西欧人口では１５％〜３０％の有病率であり、肝臓内のトリグリセリドの蓄積により引き起こされる。しかしながら、有病率は過体重集団では５８％、肥満集団では９８％に上昇する。ＮＡＦＬＤの成人の４分の１超は、血清アミノトランスフェラーゼレベルの上昇と肝障害の他の特定可能な原因の欠如に基づき、ＮＡＳＨを患っていると推定されている。ＮＡＳＨの確定診断は現在、肝細胞における脂肪蓄積（脂肪症）だけでなく、肝細胞の損傷や死、炎症細胞の蓄積に関する組織学的証拠に基づく。ＮＡＳＨを伴う肝臓は、孤立した脂肪症の肝臓よりも損傷を受けているため、ＮＡＳＨは、孤立した脂肪症よりも進行性の肝線維症及び最終的な肝関連の病気や死につながる可能性が高くなる（Ｄｉｅｈｌ，  Ａ．Ｍ．  ａｎｄ  Ｄａｙ，  Ｃ．，  Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．，  ２０１７，  ３７７：２０６３−７２）。
【００５２】
いくつかの研究は、肥満が慢性脂肪組織の炎症に関連していることを示唆しており、脂肪組織は、肥満の初期段階でリンパ球、肥満細胞、天然キラー細胞、好中球などの炎症誘発性細胞により浸潤されることが示されている（Ｅｌｇａｚａｒ−Ｃａｒｍｏｎ，  Ｖ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  ２００８，  ４９：１８９４−１９０３；Ｆｅｕｅｒｅｒ，  Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  ２００９，  １５：９３０−９３９；Ｌｉｕ，  Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  ２００９，  １７（８）：９４０−９４６；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ，  Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  ２００９，  １５（８）：９１４−９２１；Ｗｅｉｓｂｅｒｇ，  Ｓ．  Ｐ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．，  ２００３，  １１２：１７９６−１８０８；Ｗｉｎｅｒ，  Ｄ．Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  ２０１１，  １７（５）：６１０−６１８；ａｎｄ  Ｘｕ，  Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．，  ２００３，  １１２：１８２１−１８３０）。脂肪炎症はまた、インスリン抵抗性の発生にもつながっている（Ｏｕｃｈｉ，  Ｎ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  ２０１１，  １１：８５−９７；Ｏｓｂｏｒｎ，  Ｏ．  ａｎｄ  Ｏｌｅｆｓｋｙ，  Ｊ．  Ｍ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  ２０１２，  １８（３）：３６３−３７４；ａｎｄ  Ｓｕｎ，  Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｎｕｌ．  Ｒｅｖ  Ｎｕｔｒ．，  ２０１２，  ３２：２６１−２８６）。次いで、インスリン抵抗性は独立して、炎症誘発性及び線維化促進性の状態に寄与し、ＮＡＳＨ／ＮＡＦＬＤをもたらす。好中球は肥満を特徴付ける炎症に関与し、ＮＥは脂肪組織と肝臓の炎症の好中球媒介調節を変調するために重要である。ＮＥ阻害薬として、化合物１は、ＮＡＳＨ／ＮＡＦＬＤの処置において有用なインスリン感作物質と抗炎症作用の両方を示すことが期待される（Ｔａｌｕｋｄａｒ，  Ｓ．，  Ｏｌｅｆｓｋｙ，  Ｊ．  Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  ２０１２，  １８（９）：１４０７−１４１２）。
【００５３】
組換えマウスＮＥで処置されたマウスはグルコース不耐性を示すが、高脂肪食（ＨＦＤ）を給餌されたれたＮＥノックアウトマウス（ＮＥＫＯ）は、野生型対照と比較して保護された表現型、すなわち、体重増加の減少、低い白色脂肪組織及び肝臓重量、高い耐糖能、低い空腹時インスリン濃度、高い肝臓及び脂肪組織のインスリン感受性、ならびに脂肪及び肝臓の好中球浸潤の減少を示した（Ｔａｌｕｋｄａｒ，  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１２）。同じ研究で、ＮＥ阻害薬ＧＷ３１１６１６ＡでのＨＦＤマウスの処置はまた、正常な表現型を保護し、耐糖能を改善し、クランプ／トレーサー研究においてブドウ糖における末梢及び肝臓のインスリン感受性の増加を示した。同様に、Ｍａｎｓｕｙ−Ａｕｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．は、ＮＥヌル（Ｅｌａ２−／−）マウス及びＡ１ＡＴトランスジェニックマウスが、高脂肪食（ＨＦＤ）誘導体重増加、インスリン抵抗性、炎症、脂肪肝に対して抵抗性があることを見出した。ＮＥ阻害薬のＧＷ３１１６１６Ａは、ＨＦＤ給餌マウスにおいてインスリン抵抗性及び体重増加を逆転させた  （Ｍａｎｓｕｙ−Ａｕｂｅｒｔ，  Ｖ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，  ２０１３，  １７：５３４−５４８）。
【００５４】
さらに、ＮＥがインスリン抵抗性を媒介する機構が解明されている。肝臓好中球浸潤及びその結果生じるＮＥ活性がＨＦＤ給餌マウスでは上昇し（Ｔａｌｕｋｄａｒ，２０１２）、これはＮＡＳＨの肥満患者の肝臓における観察と一致する（Ｒｅｎｓｅｎ，  Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐａｔｈｏｌ．，  ２００９，  １７５：１４７３−１４８２）。より具体的には、門脈炎症性浸潤における好中球の存在は、ＮＡＳＨへのヒト疾患の進行と相関する（Ｇａｄｄ，  Ｖ．Ｌ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，  ２０１４，  ５９（４）：１３９３−１４０５）。この観察と一致して、好中球とリンパ球との比が、ＮＡＦＬＤの患者においてＮＡＳＨ及び進行線維症を予測するための有望な新規バイオマーカーとして提案されている（Ａｌｋｈｏｕｒｉ，  Ｎ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｌｉｖｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，  ２０１２，  ３２（２）：２９７−３０２）。ＮＥでの肝細胞の処置は、細胞のインスリン抵抗性につながる。細胞外ＮＥは、細胞内空間に入り、インスリン受容体基質１（Ｉｒｓ１）の分解を媒介することが示されている（Ｈｏｕｇｈｔｏｎ，  Ａ．  Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．，  ２０１０，  １６（２）：２１９−２２３；Ｈｏｕｇｈｔｏｎ，  Ａ．  Ｍ．，  Ｃｅｌｌ  Ｃｙｃｌｅ，  ２０１０，  ９（９）：１７３２−１７３７）。インスリン反応研究において、ＷＴ対照と比較してＡｋｔリン酸化が増加することにより明らか証拠付けられたとおり、ＮＥＫＯ動物はインスリンシグナル伝達の測定値が高いことが示されている（Ｔａｌｕｋｄａｒ２０１２）。逆に、組換えＮＥの投与は、マウス肝臓及び脂肪組織、ならびに初代マウス及びヒト肝細胞における基礎及びインスリン刺激Ｉｒｓ１及びｐ−Ａｋｔシグナル伝達の減少をもたらし、インスリンがグルカゴン刺激肝細胞グルコース出力を阻害する能力を妨げた。
【００５５】
現在までに、ヒト治験により、提案されたいずれのＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨの処置の有効性も証明されていない。しかしながら、これらの疾患を模倣する多くの動物モデルは開発されている。肥満とＮＡＦＬＤとの間の強い関連性が、ＮＡＳＨの病因と天然履歴を模倣するさまざまな食事性肥満（ＤＩＯ）げっ歯類モデルの開発に拍車をかけている。さまざまな系統のマウスが、高脂肪、高コレステロール（肥満誘発性）の食事を給餌されたときにＮＡＳＨに対してさまざまな感受性を示す。最も多く使用される株は、肥満誘発性の食餌に対して高い感受性を示すＣ５７ＢＬ／６マウスである。これらのマウスはまた、一般的に使用されるＢＡＬＢ／ｃ及びＣ３Ｈ／ＨｅＮマウスと比較して、食事性肝壊死性炎症及び線維症を発症し易い。Ｈａｎｓｅｎ，  Ｈ．  Ｈ．，  ｅｔ  ａｌ．  （Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔｏｄａｙ，  ２０１７，  ２２（１１）：１７０７−１７１８．）を参照されたい。
【００５６】
Ｚａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．は、高脂肪、高コレステロール食を給餌されたＣ５７ＢＬ／６ＪアポＥ−／−マウスにおいて、好中球及びＮＥ阻害薬シベレスタットの役割を調査した（Ｚａｎｇ，  Ｓ．  Ｆ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ，  ２０１５，  ７３（２）：４７９−４８７；Ｚａｎｇ，  Ｓ．  Ｆ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ｊ．  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，  ２０１７，  ２５（５）：３７１−３７６））。同じ研究グループが、好中球エラスターゼ及びその天然阻害薬であるα１−アンチトリプシン（Ａ１ＡＴ）の不均衡、ならびに罹患患者と正常患者におけるＮＡＦＬＤの組織学的進行を研究した。彼らは、ＮＥ：Ａ１ＡＴ比の上昇がＮＡＳＨ患者の肝臓の炎症と緊密に関連していることを発見した（Ｚａｎｇ，  Ｓ．  Ｆ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｘｐｅｒ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，  ２０１６，  ４３（１）：１３−２１）。
【００５７】
治療投与と投与量
化合物１の「投与」または「投与すること」という用語は、処置を必要とする個体に、（４Ｓ）−４−［４−シアノ−２−（メチルスルホニル）フェニル］−３，６−ジメチル−２−オキソ−１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボニトリルまたは塩、溶媒和物、塩の溶媒和物、または多形体を、これに限定されないが、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、懸濁剤などの経口剤形を含む、治療上有用な形態及び治療有効量で、その個体の身体に導入することができる形態で与えることを意味すると理解されるべきである。
【００５８】
慢性肝疾患を「処置する」、「処置すること」及び「処置」という用語はすべて、慢性肝疾患の症状または徴候の頻度を減らす（それらを完全に排除することを含む）、慢性肝疾患の発生を回避する、及び／または慢性肝疾患の症状や兆候の重症度を軽減することを指す。「慢性肝疾患」という用語には、これに限定されないが、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）が含まれる。
【００５９】
「治療有効量」という用語は、記載された病状を処置するための適切な組成物及び適切な剤形中の十分な量の化合物１を指す。「治療有効量」は、化合物、慢性肝疾患をもたらしている状態の重症度、及び処置される患者の年齢、体重などに依存して変化するであろう。
【００６０】
慢性肝疾患を処置するための本方法は、そのような処置を必要とする患者への化合物１、または化合物１または塩、溶媒和物、塩の溶媒和物、もしくは多形体を含む医薬組成物の投与を必要とする。上記化合物及び／または医薬組成物は、好ましくは経口投与される。様々な送達システムが公知であり（例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセル、カプセルなどへの封入）、化合物１及び／または組成物を投与するために使用することができる。上記化合物及び／または医薬組成物を即時放出（ＩＲ）または持続放出剤形を介して送達してもよい。
【００６１】
患者の慢性肝疾患の処置に有効である化合物１、その薬学的に許容される塩、多形体、溶媒和物、または塩の溶媒和物の量は疾患の特定の性質に依存し、当技術分野で公知の標準的な臨床技術により決定することができる。加えて、最適な投与量範囲を特定するのを助けるために、インビトロまたはインビボアッセイを任意選択で使用することができる。任意の特定の個体での特定の用量レベルは、組成物の活性、年齢、体重、全身の身体的及び精神的健康、遺伝的要因、環境の影響、性別、食事、投与時間、投与経路、排泄測度、ならびに処置される溶剤の重症度を含む様々な因子に依存する。
【００６２】
好ましくは、剤形は、患者に１日３回、２回、または１回投与されるように適合される。より好ましくは、治療有効量を１日１回服用する。別法では、用量を１日おき、３日おき、４日おき、または週に１回服用することもできる。投与を単独で、または他の薬物と組み合わせて与えてもよく、かつ慢性肝疾患の有効な処置に必要とされる限り、継続してよい。
【００６３】
化合物１を、１種または複数の追加の治療薬と組み合わせて投与してもよい。一実施形態では、化合物１を、他のＮＥ阻害薬と共に投与することができる。そのようなＮＥ阻害薬には、これに限定されないが、シルベスタット（ＯＮＯ−５０４６；Ｅｌａｓｐｏｌ（登録商標）；Ｏｎｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）；内因性セリンプロテアーゼ阻害薬（ＳＥＲＰＩＮ）；アルファ−１アンチトリプシン（ＡＡＴ）；エラフィン（Ｔｉｐｒｅｌｅｓｔａｔ；Ｐｒｏｔｅｏ，Ｉｎｃ．）；アルファ−１プロテアーゼ阻害薬（アルファ−１  ＰＩ；Ｐｒｏｌａｓｔｉｎ（登録商標）、ＧｒｉｆｏｌｓＵＳＡ；Ｚｅｍａｉｒａ（登録商標）、ＣＬＳ  Ｂｅｈｒｉｎｇ  ＬＬＣ；Ａｒａｌａｓｔ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ）；ＭＲ−８８９（ミデスタイン）；ＧＷ３１１６１６Ａ（ＧｌａｘｏＷｅｌｌｃｏｍｅ）；ＧＷ４７５１５１（ＧｌａｘｏＷｅｌｌｃｏｍｅ）；１，２，５−チアゾリジン−３−オン（ＩＣＩ  ２００，８８０）；ＡＸ−９６５７；フレセレスト（ｆｒｅｓｅｌｅｓｔ）（ＯＮＯ−６８１８；Ｔｏｃｒｉｓ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）；アヴェレスタット（ＡＺＤ９６６８；ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；及びＢＡＹ−６７８（Ｔｏｃｒｉｓ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）が含まれる。
【００６４】
別の実施形態では、化合物１を、好中球エラスターゼの阻害以外の機構を介してＮＡＦＬＤまたはＮＡＳＨを処置または寛解する別の１種または複数の薬剤と組み合わせて投与してもよい。そのような治療薬には、これに限定されないが、Ｅｌａｆｉｂｒａｎｏｒ（登録商標）（ＧＦＴ５０５；Ｇｅｎｆｉｔ）、ＰＰＡＲアルファ及びデルタアゴニスト；セラデルパル（ＭＢＸ−８０２５；Ｃｙｍａｂａｙ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、選択的ＰＰＡＲデルタアゴニスト；Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅ（登録商標）（オベチコール酸；Ｉｎｔｅｒｃｅｐｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）、ファルネソイドＸ受容体アゴニスト；Ａｒａｍａｃｈｏｌ（商標）（Ｇａｌｍｅｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ステアロイルＣｏＡデサチュラーゼ−１阻害薬；セニクリビロク（ＣＶＣ；Ａｌｌｅｒｇａｎ）、ＣＣＲ２及びＣＣＲ５ケモカイン阻害薬；エイコサペンタン酸（ＥＰＡ−Ｅ、Ｍｏｃｈｉｄａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）、ＲＯＳ産生の阻害；エムリカサン（Ｃｏｎａｔｕｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）、カスパーゼ阻害薬；Ｃｒｅｓｔｏｒ（登録商標）（ロスバスタチン；ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＧＲ−ＭＤ−０２（Ｇａｌｅｃｔｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ガレクチン−３阻害薬；ＧＳ−０９７６（Ｇｉｌｅａｄ）、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ阻害薬；セロンセルチブ（ＧＳ−４９９７；Ｇｉｌｅａｄ）、ＡＳＫ１阻害薬；ＧＳ−６６２４（シムツズマブ、Ｇｉｌｅａｄ）、ＬＯＸＬ２の阻害薬；ＧＳ−９６７４（Ｇｉｌｅａｄ）、ファルネソイドＸ受容体アゴニスト；ＬＪＮ４５２及びＬＭＢ７６３（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ファルネソイドＸ受容体アゴニスト；Ｌｉｐｉｔｏｒ（登録商標）（アトルバスタチン、Ｐｆｉｚｅｒ）、脂質低下薬；ＭＧＬ−３１９６（Ｍａｄｒｉｇａｌ）、選択的甲状腺ホルモン受容体−ベータアゴニスト；ＢＭＳ−９８６０３６（Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ペグ化ＦＧＦ２１；ＮＧＭ２８２（ＮＧＭ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ヒトＦＧＦ１９の非腫瘍発生性類似体；Ｐｒａｖａｃｏｌ（登録商標）（プラバスタチン、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）脂質低下薬；Ｐｒｏｃｙｓｂｉ（登録商標）（酒石酸水素システアミン、Ｈｏｒｉｚｏｎ）；ＴＥＲＮ−１０１（Ｔｅｒｎｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｃ．）、ファルネソイドＸ受容体（ＦＸＲ）アゴニスト；ＴＥＲＮ−２０１（Ｔｅｒｎｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｃ．）、セミカルバジド感受性アミンオキシダーゼ（ＳＳＡＯ）阻害薬；チペルカスト（ＭＮ−００１；ＭｅｄｉｃｉＮｏｖａ，Ｉｎｃ．）、ロイコトリエン（ＬＴ）受容体アンタゴニスト；ボリキシバット（ＳＨＰ−６２６；Ｓｈｉｒｅ）、回腸胆汁酸ナトリウム共輸送体阻害薬；及びＸｅｎｉｃａｌ（登録商標）（オルリスタット、Ｒｏｃｈｅ）、脂質低下薬が含まれる。
【００６５】
慢性肝疾患ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨは多くの場合に、糖尿病に罹患している患者で発生する。したがって、化合物１を、糖尿病を処置する、またはその作用を寛解することが意図されていて、インスリンまたはその誘導体以外である薬物と組み合わせて投与することは、特にそれらの薬剤がＮＡＦＬＤまたはＮＡＳＨの処置においても有効性を示すならば、特に適切であり得る。一実施形態では、適切な抗糖尿病薬には、これに限定されないが、リラグルチド（例えば、Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ製のＶｉｃｔｏｚａ（登録商標）；Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ製のＳａｘｅｎｄａ（登録商標））；デュラグルチド（Ｔｒｕｌｉｃｉｔｙ（登録商標）；Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）；アカルボース（Ｐｒｅｃｏｓｅ（登録商標）；Ｂａｙｅｒ）；アルビグルチド（Ｔａｎｚｅｕｍ（登録商標）；ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）；アログリプチン（Ｎｅｓｉｎａ（登録商標）；Ｔａｋｅｄａ）；ブロモクリプチンメシラート（Ｃｙｃｌｏｓｅｔ（登録商標）；Ｓａｌｉｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；カナグリフォジン（Ｉｎｖｏｋａｎａ（登録商標）；Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；ダパグリフロジン（Ｆａｒｘｉｇａ（登録商標）；ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；エンパグリフロジン（Ｊａｒｄｉａｎｃｅ（登録商標）；Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）；イプラグリフロジン（Ｓｕｇｌａｔ（登録商標）；Ａｓｔｅｌｌａｓ  Ｐｈａｒｍａ）；グリメピリド（Ａｍａｒｙｌ（登録商標）；Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）；グリブリド（ＤｉａＢｅｔａ（登録商標）；Ｓａｎｏｆｉ−Ａｄｖｅｎｔｉｓ）；ルセオグリフロジン（Ｌｕｓｅｆｉ（登録商標）；Ｔａｉｓｈｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；メトホルミン；ミグリトール（Ｇｌｙｓｅｔ（登録商標）；Ｐｆｉｚｅｒ）；プロブコール；レパグリニド（Ｐｒａｎｄｉｎ（登録商標）；Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）；ピオグリタゾン（Ａｃｔｏｓ（登録商標））；ロシグリタゾン（Ａｖａｎｄｉａ（登録商標））；サクサグリプチン（Ｏｎｇｌｙｚａ（登録商標）；ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；セマグルチド（Ｏｚｅｍｐｉｃ（登録商標）；Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）；及びシタグリプチン（Ｊａｎｕｖｉａ（登録商標）；Ｍｅｒｃｋ）が含まれる。
【００６６】
経口投与のための化合物１の投与量範囲は、特定の投与頻度にわたって投与される薬物の総量に関して記載され得る。上記の因子に応じて、一定量の活性成分を適切に１日１回または複数回投与することができる。例えば、用量は、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、またはそれ以上服用することができる。適切な投与量は、１日１回または複数回で０．１ｍｇから１００ｍｇの範囲であり、好ましくは１ｍｇから２０ｍｇの範囲である。適切な投与量は典型的には、１日１回または複数回で０．１０ｍｇ、０．１５ｍｇ、０．２０ｍｇ、０．２５ｍｇ、０．５ｍｇ、０．７５ｍｇ、１ｍｇ、２ｍｇ、２．５ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、または１００ｍｇである。好ましくは１ｍｇ、２ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇまたは２０ｍｇの用量が１日１回投与される。
【００６７】
別法では、経口投与のための化合物１の投与量範囲は、体重依存性投与量に関して記載され得る。適切な用量は一般に、１日に１回または複数回で体重１キログラムあたり薬物０．００１ｍｇから１ｍｇ（ｍｇ／ｋｇ）である。適切な体重依存の投与量は典型的に、１日１回または複数回で０．００１ｍｇ／ｋｇ、０．００１５ｍｇ／ｋｇ、０．００２ｍｇ／ｋｇ、０．００２５ｍｇ／ｋｇ、０．００５ｍｇ／ｋｇ、０．００７５ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０２ｍｇ／ｋｇ、０．０２５ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．０４ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０６ｍｇ／ｋｇ、０．０７ｍｇ／ｋｇ、０．０８ｍｇ／ｋｇ、０．０９ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇまたは１ｍｇ／ｋｇ、好ましくは１日に１回で０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０２ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、または０．２ｍｇ／ｋｇである。投与量範囲は、当業者に公知の方法により容易に決定され得る。例えば、単一剤形を作製するために担体材料と組み合わせることができる活性成分の量は、処置される患者及び特定の投与方法に応じて変わり得る。
【００６８】
治療効果の決定
本発明の方法及び組成物の有効性は、当業者に公知の慢性肝疾患の実験動物モデルで試験することができる。特に、上記のＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨの食事性肥満（ＤＩＯ）げっ歯類モデルが適切である。これらのモデルは典型的に、肥満誘発性の食餌に対して高い感受性を示すＣ５７ＢＬ／６マウスを利用する。これらのマウスはまた、ヒトの同じ状態と同様に、食事性肝壊死性炎症及び線維症を発症し易い。Ｈａｎｓｅｎ，  Ｈ．  Ｈ．，  ｅｔ  ａｌ．  （Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔｏｄａｙ，  ２０１７，  ２２（１１）：１７０７−１７１８．）を参照されたい。
【００６９】
例えば、あるモデルでは、ＤＩＯマウスに化合物１を毎日強制経口投与（ＱＤまたはＢＩＤ）で投与する。マッチした対照ＤＩＯマウスはビヒクルのみを与えられる。動物を、体重及び他のパラメーターのモニタリングを含め、数週間から数ヶ月の範囲の期間にわたって観察する。マウスを人道的に犠牲にし、最終血液サンプルを収集し、肝臓及び他の臓器を２つの群のマウスでの違いについて調べる。肝酵素、血漿脂質、さまざまなマーカー遺伝子の発現、炎症のマーカー、及び線維症形成の程度を含むＮＡＦＬＤアクティブスコアを含む、多くのパラメーターを比較することができる。
【００７０】
慢性肝疾患の処置における本発明の方法及び組成物の有効性は、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）及び他の国際機関により定められた適切な基準及び倫理的ガイドラインの下で実施されるヒト治験において評価することもできる。典型的には健康なボランティアで実施される第１相治験で薬物の一般的な安全性と薬物動態が決定された後に、処置されるべき容態または標的疾患を有する患者における薬物の安全性と有効性を評価する第２相試験が実施される。典型的には、そのような試験は二重盲検法であり、対照され、用量設定試験であってよい。第３相の研究では、安全性に関するより多くの情報を収集し、特定の投与量で標的集団を研究し、任意選択で上記薬物を他の薬物と組み合わせて使用することにより、有効性を証明することを試みる。
【００７１】
下記の実施例は、例示であって、限定するために示されているものではない。
【実施例】
【００７２】
実施例１：錠剤の調製
化合物１である（４Ｓ）−４−［４−シアノ−２−（メチルスルホニル）フェニル］−３，６−ジメチル−２−オキソ−１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボニトリルを経口使用のための錠剤として製剤化することができる。これらの錠剤の製造では、標準的な製薬プロセス技術を利用する。以下の例のすべての不活性医薬品成分は、記載のとおり米国薬局方（ＵＳＰ）、国民医薬品集（ＮＦ）、欧州薬局方（Ｐｈ．Ｅｕｒ．）及び／または日本薬局方（Ｐｈ．Ｊａｐ．）の要件に従っており、示された標準に指定の各成分のモノグラフに従って試験及び公開される。バッチサイズは、特定の臨床目的に必要な量に従って異なる。下の２つの例は、例示的投与量の定性的／定量的組成を示しており、例示を目的とするものである。追加の投与量サイズ及びバッチ量が本発明により企図されることが理解される。
【００７３】
実施例１ａ：０．５ｍｇ錠の調製
０．５ｍｇ経口錠剤のバッチ組成を表１に示す。
表１
【表１】
2021522247.tif 000003
１バルク中の精製水は、製造プロセス中に除去される溶媒として使用される。
２含有物：ヒプロメロース１５  ｃＰ、Ｐｈ．Ｅｕｒ．、ＮＦ、Ｐｈ．Ｊａｐ；マクロゴール、Ｐｈ．Ｅｕｒ．、ＵＳＰ、Ｐｈ．Ｊａｐ．；二酸化チタン、Ｐｈ．Ｅｕｒ．、Ｄｉｒｅｃｔｉｖｅ  ９５／４５／ＥＣ、ＵＳＰ、Ｐｈ．Ｊａｐ．
【００７４】
表１に指定された量を使用して、微粉化された化合物１、クロスカルメロースナトリウム及びラクトース一水和物を流動床造粒機で混合する。ヒドロキシプロピルセルロースの水溶液を顆粒化液として添加する。顆粒化、乾燥、粉砕及びスクリーニングの後、顆粒外ステアリン酸マグネシウムを添加する。最終ブレンドを錠剤に圧縮し、質量、厚さ、及び破砕に対する耐性の均一性について試験する。錠剤を、水中のＯｐａｄｒｙ（商標）の溶液でコーティングする。コーティングされた錠剤を、欠陥がないか視覚的に検査する。目に見えるコーティング欠陥を有する錠剤を除去する。
【００７５】
例１ｂ：１及び５ｍｇ錠剤の調製
１ｍｇ及び５ｍｇ経口錠剤のバッチ組成をそれぞれ表２及び３に示す。
表２
【表２】
2021522247.tif 000004
１バルク中の精製水は、製造プロセス中に除去される溶媒として使用される。
２含有物：ポリビニルアルコール、Ｐｈ．Ｅｕｒ．、ＵＳＰ、ＦＣＣ、Ｐｈ．Ｊａｐ．；マクロゴール、Ｐｈ．Ｅｕｒ．、ＵＳＰ、ＦＣＣ、ＪＥＣＦＡ、Ｐｈ．Ｊａｐ．；二酸化チタン、Ｐｈ．Ｅｕｒ．、ＵＳＰ、ＦＣＣ、Ｐｈ．Ｊａｐ．、Ｃｈｐ，  ＧＢ；タルク、ＵＳＰ、ＦＣＣ、Ｐｈ．Ｅｕｒ．、Ｐｈ．Ｊａｐ．、ＪＥＣＦＡ。
表３
【表３】
2021522247.tif 000005
１バルク中の精製水は、製造プロセス中に除去される溶媒として使用される。
２含有物：ポリビニルアルコール、Ｐｈ．Ｅｕｒ．、ＵＳＰ、ＦＣＣ、Ｐｈ．Ｊａｐ．；マクロゴール、Ｐｈ．Ｅｕｒ．、ＵＳＰ、ＦＣＣ、ＪＥＣＦＡ、Ｐｈ．Ｊａｐ．；二酸化チタン、Ｐｈ．Ｅｕｒ．、ＵＳＰ、ＦＣＣ、Ｐｈ．Ｊａｐ．、Ｃｈｐ、ＧＢ；タルク、ＵＳＰ、ＦＣＣ、Ｐｈ．Ｅｕｒ．、Ｐｈ．Ｊａｐ．、ＪＥＣＦＡ．
【００７６】
表２及び３に指定された量を使用して、微粉化された化合物１、クロスカルメロースナトリウム及びラクトース一水和物を高剪断造粒機で混合する。ヒドロキシプロピルセルロースの水溶液を顆粒化液として添加する。顆粒化、乾燥、粉砕及びスクリーニングの後、顆粒外微結晶性セルロース及びステアリン酸マグネシウムを添加し、ステアリン酸マグネシウムの添加前にブレンドの均一性を試験する。最終ブレンドを錠剤に圧縮し、質量、厚さ、及び破砕に対する耐性の均一性について試験する。錠剤を、水中のＯｐａｄｒｙ（商標）ＩＩの溶液でコーティングする。コーティングされた錠剤を、欠陥がないか視覚的に検査する。目に見えるコーティング欠陥を有する錠剤を除去する。
【００７７】
実施例２：ＤＩＯマウスにおける耐糖能に対する化合物１の作用
方法
雄のＤＩＯ（食事性肥満）マウス（Ｃ５７ＢＬ／６ＮＴａｃ  ＤＩＯ  ＭＰＦ、ｎ＝３５）をＴａｃｏｎｉｃ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｒｅｎｓｓｅｌａｅｒ、ＮＹ）から購入した。ＤＩＯマウスを、雄のＣ５７ＢＬ／６マウスに６〜１６週齢から高脂肪食（ＨＦＤ、Ｄ１２４９２；Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ，  ＮＪ）を給餌することにより調製した。研究期間を通じて、１２時間の光サイクルを維持した。室温を毎日モニターし、２２〜２５℃に維持した。ＤＩＯマウスを個別に飼育し、７日間の施設順化期間中及び研究期間を通じてＨＦＤで維持した。順応期間中には、すべてのマウスにビヒクル（５％ＤＭＳＯ／３％エタノール／９２％ラッカセイ油）を１日１回投与した。
【００７８】
７日間の施設順応後に、ＤＩＯマウスを、体重及び空腹時（６時間）血糖に基づき８匹ずつの４つの群に無作為化し、ビヒクル、ロシグリタゾン３０ｍｇ／ｋｇ／日、または３．０ｍｇ／ｋｇ／日もしくは１５ｍｇ／ｋｇ／日の化合物１を投与するために割り当てた。化合物を、６週間にわたって強制経口投与により１日１回午前中に投与した。投与体積を研究を通じて５ｍｌ／ｋｇに維持した。化合物１を粉末形態で提供し、毎週新たに製剤化した。ロシグリタゾン（ロット＃ＦＯＪ４０７）はＣＢＩＮにより提供され；ロシグリタゾンも毎週新たに製剤化された。ロシグリタゾン（Ａｖａｎｄｉａ（登録商標））は、チアゾリジンジオンクラスの抗糖尿病薬である。
【００７９】
最初の投与後７日目、１４日目、２１日目、及び３５日目に、テールクリップにより、非空腹時血糖値の測定（ＳｔａｔＳｔｒｉｐ（登録商標）；Ｎｏｖａ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ，  Ｗａｌｔｈａｍ，  ＭＡ）のために、食後動物から全血を毎週採取した。基線時及びその後は毎週、グルコース測定前に体重を記録した。基線（−１日目）、その後は２８日目及び４２日目に、絶食マウスで経口耐糖能試験を実施した。ロシグリタゾンまたは化合物１を絶食期間に入って１時間で投与した。６時間の絶食期間の終了時に、マウスをグルコース攻撃した（２ｇ／ｋｇ、１０ｍｌ／ｋｇ、強制経口投与による）。血液サンプルをテールクリップにより、ＳｔａｔＳｔｒｉｐによる血糖値の評価のために、グルコース負荷の０、２０、４０、６０、９０、及び１２０分後に得た。血清インスリンを、ＯＧＴＴの時間０の血液サンプルから、Ｍｏｕｓｅ／Ｒａｔ  Ｉｎｓｕｌｉｎ  Ｋｉｔ  （ＭＳＤ  ＃Ｋ１５２ＢＺＣ；Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，  Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，  ＭＤ）を使用して測定した。
【００８０】
ＣＯ２吸入と気胸の誘導を使用して、動物を終了させた。各処置群からの４匹のマウスは投与後０．５時間目に犠牲にし、４匹は投与後４時間目に犠牲にした。終末の血液サンプル（Ｋ２ＥＤＴＡ）を心臓穿刺により採取し、化合物濃度を決定するために血漿に処理した。臓器重量（肝臓、精巣上体脂肪）を記録した。
【００８１】
結果
すべてのデータを、群平均±ＳＥＭとして表す。ＪＭＰ（ＳＡＳソフトウェア）を使用して、データを解析した。すべての正規化を、最終体重を使用して計算した。割り当てられたすべての動物が研究を完了した。３ｍｇ／ｋｇで化合物１を投与された１匹の動物が、いくつかの測定パラメーターについて外れ値として同定され（マハラノビス、Ｔ２）、すべての解析から除外された。各動物に対応する０、３０、６０、９０、及び１２０分の時点の間の台形面積の合計を合計して、ＯＧＴＴデータからグルコースの曲線下面積（ＡＵＣ）を得た。ビヒクルと比較した処置作用を、一元配置分散分析を使用して決定し（＊，ｐ＜０．０５）、必要に応じて、ダネット検定を続けた。
【００８２】
体重
１８週齢のＤＩＯマウスの体重は平均４２．５±０．４ｇであり、基線時ではどの処置群でもビヒクルと比較して有意な差はなかった（ビヒクル、ロシグリタゾン、ならびにそれぞれ３及び１５ｍｇ／ｋｇの化合物１で４２．２±０．７、４２．８±１．０、４２．８±１．１、４２．８±１．０）。図２Ａに示されているとおり、６週間の研究中、すべての処置群で、基線と比較して体重が増加した。ロシグリタゾンを投与されたマウスは、ビヒクルで処置された動物よりも、６週間の処置後に有意に重かった（４９．４±０．７対５５．０±１．４ｇ）。図２Ｂに示されているとおり、研究の終了時に、ビヒクルと比較して、体重に対する化合物１の統計的に有意な効果は認められなかったが（ビヒクルならびにそれぞれ３及び１５ｍｇ／ｋｇの化合物１で４９．４±０．７、４９．８±０．９及び４７．３±１．１ｇ）、１５ｍｇ／ｋｇの化合物１は、ビヒクルと比較して有意に低い体重増加率を示した（ビヒクル及び化合物１でそれぞれ１４±１．８％及び６．９±１．８％）。図２Ｃ及び２Ｄを参照されたい。
【００８３】
血糖値
１８週齢のマウスの血糖値（絶食）は平均１６３．１±３．９であり、研究開始時にはビヒクルと比較して有意な差はなかった（ビヒクル、ロシグリタゾン、ならびに３及び１５ｍｇ／ｋｇの化合物１でそれぞれ１６３．０±１２．７、１６４．０±４．０、１６０．３±５．７及び１６４．６±７．３ｍｇ／ｄＬ）。研究が進むにつれて、空腹時血糖は、ビヒクル処置マウスを含むすべての処置群において基線値と比較して減少した。ロシグリタゾン処置マウスの空腹時血糖値は、６週間の処置後に基線と比較して２３％減少した（１６４．０±４から１２５．８±４．８ｍｇ／ｄＬへ）；しかしながら、３５日目の食後グルコースはビヒクルと比較して有意には異ならなかった（１３４．５±６．９対１２５．５±４．５ｍｇ／ｄＬ）。空腹時血糖値は、６週間の処置後に化合物１処置マウスで、１５ｍｇ／ｋｇの用量では基線から１１％減少した。同様に、３５日目の食後グルコースは、いずれの化合物１処置群でも、ビヒクルと比較して有意には異ならなかった（ビヒクルならびに３及び１５ｍｇ／ｋｇの化合物１でそれぞれ１３４．５±６．９、１２８．３±３．４及び１３４．９±４．７ｍｇ／ｄＬ）。
【００８４】
ＯＧＴＴ
ビヒクル、ロシグリタゾン、及び化合物１処置マウスでのグルコース処分曲線を、図３Ａに示されているとおり基線で重ね合わせたところ、図３Ｄに示されているとおり、群間でグルコースＡＵＣに有意な差は認められなかった（ビヒクル、ロシグリタゾン、ならびに３及び１５ｍｇ／ｋｇの化合物１でそれぞれ３４．１２±３．３、３７．６±２．６、３６．３±２．０、及び３４．４±２．２ｍｇ／ｄＬ・ｍｉｎ×１０３ｍｇ／ｋｇ）。図３Ｂに示されているとおり、２８日間の処置後、ロシグリタゾンと両方の化合物１処置群で、ビヒクルと比較するとグルコース処分曲線の変化が明らかであり；図３Ｄに示されているとおり、２８日目のグルコースＡＵＣは、ロシグリタゾン及び両方の化合物１処置群で、ビヒクルと比較して有意に低かった（ビヒクル、ロシグリタゾン、ならびに３及び１５ｍｇ／ｋｇの化合物１でそれぞれ２７．９±１．１、２０．７±０．４、２４．０±０．９及び２２．７±０．７ｍｇ／ｄＬ・分×１０３ｍｇ／ｋｇ）。グルコース処分曲線に対するロシグリタゾンの作用は４２日目でも明らかなままであるが、図３Ｃに示されているとおり、この時点ではそれらの曲線がビヒクルに近づいているので、化合物１の応答は一時的であるようである。実際に、ロシグリタゾンでのグルコースＡＵＣは、ビヒクルと比較して有意に低いままであるが（２７．８±１．２対２０．１±０．５ｍｇ／ｄＬ／分×１０３）、図３Ｄに示されているとおり、ビヒクルと比較した化合物１処置の有意性は失われた（ビヒクル、ならびに３及び１５ｍｇ／ｋｇ／日の化合物１でそれぞれ２７．８±１．２、２８．６±０．７及び２６．３±１．１ｍｇ／ｄＬ／分×１０３ｍｇ／ｋｇ／日）。
【００８５】
４２日目のグルコースＡＵＣは、ロシグリタゾン（４４．９±３．９％）、３ｍｇ／ｋｇの化合物１（２０．０±４．５％）及び１５ｍｇ／ｋｇの化合物１（−２１．９±５．０％）で、基線値と比較して減少を示した。ビヒクル処置動物における基線からのＡＵＣの減少は１２．６±１０．３％であった。この作用は、ロシグリタゾン処置動物でのみ、ビヒクルと比較して有意であった。
【００８６】
空腹時血清インスリン
空腹時血清インスリンは、１８週齢のＤＩＯマウでは基線時で平均４．７±０．４ｎｇ／ｍｌであった；図４Ａに示されているとおり、基線時の処置群間では、空腹時インスリンに差は認められなかった（ビヒクル、ロシグリタゾン、ならびに３及び１５ｍｇ／ｋｇの化合物１でそれぞれ４．４４±０．８、５．２±１．１、３．５±０．５及び５．４±１．０ｎｇ／ｍｌ）。４２日目に、空腹時インスリンレベルは、ロシグリタゾンを投与されたマウスではビヒクルと比較して有意に低かった（８．２±１．５対１．３±０．１ｎｇ／ｍｌ）。インスリンレベルは、低用量の化合物１では、ビヒクルと比較して高く（８．２±１．５対１１．８±１．３ｎｇ／ｍｌ）、高用量の化合物１で処置された動物では、ビヒクルと比較して低かったが（８．２±１．５対５．９±１．５ｎｇ／ｍｌ）、これらの作用は、図４Ｂに示されているとおり、ビヒクルと比較して有意ではなかった。
【００８７】
臓器の重量
肝臓の重量（体重％）は、３ｍｇ／ｋｇの化合物１を投与されたマウスにおいて、ビヒクルと比較して有意に高かった（５．６±０．２対６．８±０．３％）。図５Ａに示されているとおり、ビヒクルと比較して、肝臓重量に対する他の有意な作用は認められなかった（ビヒクル、ロシグリタゾン及び１５ｍｇ／ｋｇの化合物１でそれぞれ５．６±０．２、５．０±０．２及び６．４±０．２％）。図５Ｂに示されているとおり、ビヒクルと比較して、精巣上体脂肪重量に対する有意な作用は認められなかった（ビヒクル、ロシグリタゾンならびに３及び１５ｍｇ／ｋｇの化合物１でそれぞれ３．４±０．３、３．７±０．２、３．１±０．３及び３．５±０．２％）。
【００８８】
概要
臨床観察に基づき、化合物１（３〜１５ｍｇ／ｋｇ／日）は一般的に、忍容性が良好であった。処置の６週間後、ロシグリタゾンを投与された動物は、体重増加及びインスリン感作に対する既知の作用と一致して、ビヒクル処置マウスと比較して重く、インスリンレベルが低く、グルコース処分が改善された。空腹時血糖値は研究期間を通じて、ロシグリタゾン及び１５ｍｇ／ｋｇの化合物１により減少し、食後血糖はすべての群で有意差を示さなかった。化合物１は、高用量で体重増加を減少させ、グルコースの取り扱い及び処分における一時的な改善が、３及び１５ｍｇ／ｋｇの化合物１の投与後に認められた。
【００８９】
実施例３：肥満のＤＩＯマウスモデルにおける化合物１の効果
方法
雄のＤＩＯマウス（Ｃ５７ＢＬ／６ＮＴａｃ  ＤＩＯ  ＭＰＦ、ｎ＝２４）をＴａｃｏｎｉｃ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｒｅｎｓｓｅｌａｅｒ、ＮＹ）から購入した。ＤＩＯマウスをＴａｃｏｎｉｃで、雄のＣ５７ＢＬ／６マウスに６週齢から高脂肪食（ＨＦＤ、Ｄ１２４９２）を給餌することにより調製した。マウスは１７週齢で研究施設に到着し、研究の終了時までＨＦＤで維持された。研究期間中、午前６時から午後６時までの１２時間の光サイクルを維持した。室温を毎日モニターし、２２〜２５℃に維持した。ＤＩＯマウスを個別に飼育し、７日間の施設順化期間中及び研究期間を通じてＨＦＤで維持した。順応期間中には、すべてのマウスにビヒクル（５％ＤＭＳＯ／３％エタノール／９２％ラッカセイ油）を１日１回投与した。
【００９０】
７日間の施設順応後に、ＤＩＯマウスを体重及び空腹時（６時間）血糖に基づき８匹ずつの３つの群に無作為化し、ビヒクル、３．０ｍｇ／ｋｇ／日または１５ｍｇ／ｋｇ／日の化合物１を投与するために割り当てた。表４に示されているとおり、化合物を午前（午前６時から午前８時）と少なくともその８時間後の投与との１日２回、強制経口投与により４週間にわたって投与した。投与体積は研究を通じて５ｍｌ／ｋｇに維持した。化合物１は粉末形態で提供され、毎週月曜日、水曜日、及び金曜日に新鮮なビヒクル溶液で新たに製剤化された。
表４
【表４】
2021522247.tif 000006
【００９１】
７日目、１４日目、及び２１日目に、最初の午前の投与の直前にテールクリップにより、非空腹時血糖値の測定（ＳｔａｔＳｔｒｉｐ）のために食後動物から全血を毎週採取した。基線時及びその後は毎週、グルコース測定前に体重を記録した。
【００９２】
基線（−１日目）及び２８日目に、絶食（０６００−１２００）マウスで経口耐糖能試験（ＯＧＴＴ）を実施した。化合物１を、絶食期間に入って１時間、午前７時頃に投与した。６時間の絶食期間の終了時に、マウスをグルコース攻撃し（２ｇ／ｋｇ、１０ｍｌ／ｋｇ、強制経口投与による）、血液サンプルをテールクリップにより、ＳｔａｔＳｔｒｉｐによる血糖値の評価のために、グルコース負荷の０、２０、４０、６０、９０、及び１２０分後に採取した。ｍｏｕｓｅ／Ｒａｔ  Ｉｎｓｕｌｉｎ  Ｋｉｔ（ＭＳＤ  ＃Ｋ１５２ＢＺＣ）を使用して、血清インスリンを、−１日目と２９日目の６時間絶食血液サンプルから測定した。
【００９３】
ＣＯ２吸入と気胸の誘導を使用して、動物を終了させた。化合物濃度を決定するために、すべての動物を投与後４時間目に犠牲にした。終末の血液サンプル（Ｋ２ＥＤＴＡ）を心臓穿刺により得、血漿に処理した。
【００９４】
結果
すべてのデータを、群平均±ＳＥＭとして表す。Ｐｒｉｓｍ  ７．０（Ｇｒａｐｈｐａｄソフトウェア）を使用して、データを解析した。すべての正規化を、最終体重を使用して計算した。割り当てられたすべての動物が研究を完了した。各動物に対応する０、２０、４０、６０、９０、及び１２０分の時点の間の台形面積の合計を合計して、ＯＧＴＴデータからグルコースの曲線下面積（ＡＵＣ）を取得しました。ビヒクルと比較した処置作用を、一元配置分散分析を使用して決定し（＊，ｐ＜０．０５；＊＊，Ｐ＜０．０１）必要に応じて、ダネットの検定を続けた。
【００９５】
体重
１８週齢のＤＩＯマウスの体重は平均４４．８±０．４ｇであり、基線時ではどの処置群でもビヒクルと比較して有意な差はなかった（ビヒクル、１５及び３０ｍｇ／ｋｇの化合物１でそれぞれ４４．７±０．９、４４．８±０．７及び４４．８±０．７）。図６Ａに示されているとおり、４週間の研究中、すべての処置群で、基線と比較して体重が増加した。研究の終了時に、ビヒクルと比較して、体重に対する化合物１の統計的に有意な作用は認められなかったが（ビヒクル及び１５及び３０ｍｇ／ｋｇの化合物１でそれぞれ４８．８±０．９、４７．５±１．３及び４６．０±１．２ｇ）、図６Ｂに示されているとおり、３０ｍｇ／ｋｇの化合物１は、４週間の投与後に、ビヒクルと比較して有意に低い体重増加率を示した（研究の終了時にビヒクル、１５及び３０ｍｇ／ｋｇの化合物１でそれぞれ９．２±２．０％、５．９±１．６％及び２．８±２．３％）。
【００９６】
血糖値
１８週齢のマウスの血糖値（絶食）は平均１７８．４±４．２ｍｇ／ｄＬであり、試験開始時にはビヒクルと比較して有意な差はなかった（ビヒクルならびに１５及び３０ｍｇ／ｋｇの化合物１でそれぞれ１８２．９±９．１、１８５．１±８．３、及び１８０．１±７．０）。研究が進むにつれて、ビヒクル処置マウスを含むすべての処置群において、血糖は基線値と比較して減少した。全研究期間中、すべての治療群で、血糖値に有意な差は見出されなかった（２８日目でビヒクルならびに１５及び３０ｍｇ／ｋｇの化合物１でそれぞれ１４３．０±７．１、１５１．９±６．１、及び１３７．３±４．１ｍｇ／ｄＬ）。
【００９７】
ＯＧＴＴ
ビヒクル及び化合物１で処置されたマウスのグルコース処分曲線を基線で重ね合わせると、グループ間でグルコースＡＵＣに有意な差は認められなかった（ビヒクルならびに１５及び３０ｍｇ／ｋｇの化合物１でそれぞれ３３．０±２．５、３３．８±０．９及び３２．８±１．８ｍｇ／ｄＬ・分×１０３ｍｇ／ｋｇ）。図７Ａに示されているとおり、２８日間の処置後、ビヒクルと比較したグルコース処分曲線のピーク変化が、両方の化合物１処置群について明らかである。しかしながら、２８日目のグルコースＡＵＣは、両方の化合物１処置群についてビヒクルと比較して有意な差がなかった（ビヒクルならびに１５及び３０ｍｇ／ｋｇの化合物１でそれぞれ２５．５±１．４、２４．７±１．９及び２２．４±１．０ｍｇ／ｄＬ・分×１０３ｍｇ／ｋｇ）。
【００９８】
空腹時血清インスリン
図８に示されているとおり空腹時血清インスリンは基線時に１８週齢のＤＩＯマウスで平均５．３±０．５ｎｇ／ｍｌであった：基線時の処置群間で空腹時インスリンに差は認められなかった（ビヒクルならびに１５及び３０ｍｇ／ｋｇの化合物１でそれぞれ６．１±０．６、７．０±１．１及び４．９±０．６ｎｇ／ｍｌ）。２８日目に、ビヒクル群が増加を示したときに、両方の化合物１群で処置されたマウスにおいて空腹時インスリンレベルが減少した（ビヒクルならびに１５及び３０ｍｇ／ｋｇの化合物１でそれぞれ７．７±１．６、５．８±１．４及び４．０±０．３ｎｇ／ｍｌ）。３０ｍｇ／ｋｇの化合物１で処置されたマウスの空腹時血清インスリンは、ビヒクルで処置されたマウスと比較して有意に低かった。
【００９９】
概要
この研究では、化合物１（１５〜３０ｍｇ／ｋｇ／日）は一般的に忍容性が良好であった。４週間の処置中に、１５ｍｇ／ｋｇ及び３０ｍｇ／ｋｇの化合物１で処置されたマウスは両方とも、ビヒクル処置マウスと比較して、より少ない体重増加であった。この傾向は、３週間以上にわたって３０ｍｇ／ｋｇの化合物１で処置されたマウスで統計的に有意である。
【０１００】
研究期間を通じて、すべての群で血糖値が低下し、この低下はすべての群間で有意な差を示さなかった。４週間の処置後のＯＧＴＴ処分曲線は、１５ｍｇ／ｋｇ及び３０ｍｇ／ｋｇの化合物１で処置された両方のマウスでピークの減少を示した。したがって、ビヒクル処置マウスと比較して、これらの２つの処置群では、わずかに減少したＯＧＴＴ  ＡＵＣが存在した。しかしながら、基線と比較したビヒクル群でのＯＧＴＴ  ＡＵＣの同様の減少のため、ＯＧＴＴ  ＡＵＣのこれらの減少はいずれも統計的に有意ではない。すべての群が、基線と比較してＯＧＴＴ  ＡＵＣの有意な減少を示した。
【０１０１】
化合物１は、ビヒクル処置マウスと比較して、空腹時血清インスリンを減少させる傾向があった。３０ｍｇ／ｋｇの化合物１で処置されたマウスの血清インスリンレベルは、処置の２８日目のビヒクル処置マウスよりも有意に低かった。
【０１０２】
実施例４：健康な患者における化合物１の第１相臨床試験
研究の説明
健康な被験者における化合物１の安全性、忍容性、及び薬物動態（ＰＫ）を評価するために設計した、第１相、単一施設、無作為化、二重盲検、プラセボ対照の単一上昇用量（ＳＡＤ）研究を、ヘルシンキ宣言に端を発する倫理原則である良き臨床上の基準（Ｇｏｏｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ；ＧＣＰ）、及びその他すべての適用可能な法律、規則、規制に従って実施した。
【０１０３】
各用量コホート内で、被験者を３：１の比（活性が６、プラセボが２）で無作為化して、化合物１またはプラセボのいずれかを投与した。スクリーニングに続いて、被験者に治験薬の単回投与を投与し、診療期間中及び外来患者のフォローアップ期間中にモニターした。ＰＫ及び安全性評価を収集するために、被験者を、研究−２日目から７日目は研究サイトに拘束した。研究７日目に研究サイトから退院した後、被験者は研究１４、２１、２８、及び３５日目に研究サイトに戻った。
【０１０４】
結果
合計３６人の被験者が化合物１（１〜４０ｍｇの範囲の用量で）を投与され、１２人の被験者がプラセボを投与された。無作為化された元の４８人の被験者のうち、３人は管理上の理由で中止された。用量漸増審査委員会は、各コホートから入手可能なすべての安全性及びＰＫデータを評価し、それぞれの場合に用量漸増が適切であることに同意した（計画された最大用量４０ｍｇまで）。
【０１０５】
処置に起因する有害事象（ＴＥＡＥ）の全体的な分布は、各処置群で同等であり、２９％（４８人中１４人）の被験者が１つ以上の有害事象（ＡＥ）を経験した。身体系によるＡＥの発生に顕著な違いはなく、用量の明確な関係もなかった。化合物１の被験者のＡＥ率は、対照（プラセボ）の被験者よりもやや低かった。他のどのＡＥよりも多くの被験者が経験した頭痛は、１人の化合物１被験者でのみ観察された。重篤なＡＥはなく、中止や死亡もなかった。実験室の安全性評価（臨床化学及び血液学）に対する化合物１の明確な影響はなかった。
【０１０６】
化合物１のＰＫは、用量に比例して曝露量（ＡＵＣ及びＣｍａｘ）が増加すると、良好に作動すると考えられた。観察されたＰＫは、化合物１の１日１回の投与を支持するであろう。
【０１０７】
実施例５：肥満患者における化合物１の第１相臨床試験
過体重または肥満であるがそれ以外は健康な被験者における化合物１の安全性、忍容性、及び薬物動態（ＰＫ）を評価するために設計した、第１相、単一施設、無作為化、二重盲検、プラセボ対照の複数上昇用量（ＭＡＤ）試験を、ヘルシンキ宣言に端を発する倫理原則である良き臨床上の基準（Ｇｏｏｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ；ＧＣＰ）、米国連邦規制コード（ＵＳ  ＣＦＲ）のタイトル２１、パート５０（被験者保護）、及び５６（治験審査委員会）、及び３１２（新薬治験開始新生）、及び調和国際会議（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ  ｏｎ  Ｈａｒｍｏｎｉｚａｔｉｏｎ）Ｅ６（良き臨床上のガイドライン；Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ  ｆｏｒ  Ｇｏｏｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ）（ＩＣＨ  Ｅ６  Ｒ２）ならびにその他すべての適用可能な法律、規則、規制に従って実施した。
【０１０８】
各漸増用量コホート内及び全体で、被験者を４：１の比（コホートあたり活性が８、プラセボが２）で無作為化して、化合物１またはプラセボのいずれかを投与した。スクリーニングと無作為化に続いて、被験者は４週間、治験薬で毎日処置され、参加の過程で部分的に診療所に拘束される。ＰＫ及び安全性評価を収集するために、被験者を、研究−２日目から７日目は研究サイトに拘束する。研究７日目に研究サイトから退院した後、被験者は自宅で治験薬投与を継続し、研究日１１、１４、１８、２１、２３（±１日）に外来研究訪問のために研究サイトに戻る。その後、被験者は、研究２８日目の最終用量投与を含め、研究２７日から研究３３日まで拘束される。フォローアップ訪問は、研究日４２（±２日）及び５６（±２日）に行われる。
【０１０９】
それぞれ１０人の被験者からなる５つの漸増用量コホート（１ｍｇから２０ｍｇ）が計画される。開始用量について許容可能な安全倍数を確保することに加えて、用量漸増は、２８日間の反復投与犬毒性試験における中枢神経系（ＣＮＳ）血管周囲炎／血管炎の有害所見についてＮＯＡＥＬ曝露に対して５倍未満の安全倍数でヒトへの暴露をもたらすと（先行コホートから入手可能なすべてのｐＫデータの解析に基づき）予測されるいずれの用量にも進まない。
【０１１０】
コホートは独立して登録され、順次実施され、連続するコホートへの投与は最低５週間の間隔で開始される。少なくとも主任または副治験責任医師とスポンサー医療モニターで構成される用量漸増審査委員会は、各コホートから入手可能なすべての暫定安全性及びＰＫデータを盲検法で評価し、用量漸増の適切性を決定し、その後、必要に応じて、あらゆる用量制限毒性（ＤＬＴ）を確認するために、個々の被験者の処置割り当てを盲検解除することができる。活性薬物を投与されている被験者の同じコホート内で２つ以上のＤＬＴが発生した場合、用量漸増を停止してもよいし、中間用量を試験してもよい。ＤＬＴにより用量漸増が停止した場合、最大耐量（ＭＴＤ）は、中間用量が同じアルゴリズムで後で試験されない限り、前のコホートの用量により定義される。薬物ＰＫのレビューに基づき、用量漸増を停止することもある（例えば、連続する用量コホート間で曝露が増加しない場合）。特に、用量漸増は、２８日間の反復投与犬毒性試験において（中枢神経系（ＣＮＳ）血管周囲炎／血管炎の有害所見について）ＮＯＡＥＬ曝露に対して５倍未満の安全倍数で暴露をもたらすと（利用可能なすべての以前のＰＫの分析に基づき）予測されるいずれかの用量に、またはそれを超えて進むことはない。
【０１１１】
適切な場合、ＡＥ／ＳＡＥ、身体検査所見、臨床検査パラメーター、バイタルサイン、及びＥＣＧを含むすべての利用可能な安全性データの収集に基づき、ＭＴＤを含む安全性と忍容性の解釈を評価する。
【０１１２】
研究パラメーターを表５に要約する。
表５
【表５】
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【０１１３】
ＮＡＦＬＤまたはＮＡＳＨ患者の治療における化合物１の有効性を試験するために、臨床開発の段階に適した設計の追加の臨床試験を実施することができる。活性成分の異なる投与量レベルを利用するか、または最適な投与量もしくは投与スケジュールを区別するために、さらなる試験を実施することができる。さらに、高齢者、小児、または糖尿病もしくは他の病的状態の患者などの特定の集団における薬物の有効性を、同様の方法で実施される追加の治験で決定することができる。
【０１１４】
本明細書に記述されるすべての刊行物及び特許出願は、それぞれ個別の刊行物または特許出願が参照により組み込まれると明確かつ個別に示されているのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１１５】
前述から、本発明の具体的な実施形態を例示の目的で本明細書に記載してきたが、本発明の意図及び範囲から逸脱することなく、種々の変更がなされ得ることは理解されるであろう。したがって、本発明は、添付の特許請求の範囲による場合を除いて限定されない。
【図１】
2021522247.tif 000008
【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
2021522247.tif 000015
【図３Ｄ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
2021522247.tif 000019
【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
2021522247.tif 000022
2021522247.tif 000023