(57)【要約】免疫アジュバントとしての使用のための腫瘍溶解性ウイルスが本明細書に記載される。腫瘍溶解性ウイルス及び少なくとも１つの抗原ペプチドを、後者が前者によってコードされずに、投与するステップによって、哺乳動物対象において抗原タンパク質への免疫応答を補助する方法が提供される。ウイルスが抗原タンパク質をコードする必要性を伴わずに、治療は、容易に個別化又は製剤化され得る。ウイルスは、弱毒化又は不活性化されてもよい。プライムが少なくとも１つの抗原タンパク質を含み、ブーストがウイルス及び少なくとも１つの抗原タンパク質を含み、プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質及びブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質が同じ少なくとも１つの腫瘍関連抗原に基づき、ブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質がブーストのウイルスによってコードされていない、腫瘍に対するプライム：ブースト治療も提供される。【選択図】図１１
2021514381.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ．哺乳動物において免疫応答を生じさせることができる少なくとも１つの抗原タンパク質を含むプライムを投与すること；及び
ｂ．哺乳動物において免疫応答を誘導するように製剤化された、腫瘍溶解性ウイルス及び少なくとも１つの抗原タンパク質を含むブーストを投与すること
を含む、哺乳動物対象において免疫応答を誘導することに使用するための方法であって、
前記プライムの前記少なくとも１つの抗原タンパク質及び前記ブーストの前記少なくとも１つの抗原タンパク質が同じ腫瘍抗原由来であり、
前記ブーストの前記少なくとも１つの抗原タンパク質が前記ブーストの前記ウイルスによってコードされていない、方法。
【請求項２】
前記プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質のアミノ酸配列と前記ブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質のアミノ酸配列とが、少なくとも７０％同一である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質のアミノ酸配列と前記ブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質のアミノ酸配列とが、少なくとも８０％同一である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質のアミノ酸配列と前記ブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質のアミノ酸配列とが、少なくとも９０％同一である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質のアミノ酸配列と前記ブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質のアミノ酸配列とが、同一である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ａ．前記プライムの前記少なくとも１つの抗原タンパク質が複数の抗原タンパク質を含み、前記ブーストの前記少なくとも１つの抗原タンパク質が複数の抗原タンパク質を含み、そのそれぞれが前記ブーストの前記ウイルスによってコードされておらず、
ｂ．前記プライムの前記複数の抗原タンパク質及び前記ブーストの前記複数の抗原タンパク質が同じ複数の腫瘍関連抗原に基づく、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記プライムの前記複数の抗原タンパク質と前記ブーストの前記複数の抗原タンパク質とが同一である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記ブーストの前記ウイルスが腫瘍溶解性ウイルスである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記ブーストの前記ウイルスがラブドウイルスである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ラブドウイルスがマラバウイルスである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記マラバウイルスがＭＧ１である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ブーストの前記ウイルスがアデノウイルス、ワクシニアウイルス又は水疱性口内炎ウイルスである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記ブーストが静脈内、筋肉内又は腫瘍内投与のために製剤化されている、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記プライムが静脈内、筋肉内又は腫瘍内投与のために製剤化されている、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ブーストの前記ウイルスが不活性化されている、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記ブーストの前記ウイルスがＵＶで不活性化されている、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記プライムが非ウイルス性アジュバントをさらに含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記プライムがウイルスをさらに含み、前記プライムの前記ウイルスが前記ブーストの前記ウイルスと免疫学的に異なる、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記プライムの前記ウイルスがアデノウイルスである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記プライムの前記ウイルスが不活性化されている、請求項１７〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記プライムの前記ウイルスがＵＶで不活性化されている、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
哺乳動物対象において免疫応答を誘導することにおける使用のためのプライム：ブーストワクチンであって、
ａ．前記プライムが、哺乳動物において免疫応答を生じさせることができる少なくとも１つの抗原タンパク質を含み；
ｂ．前記ブーストが、哺乳動物において免疫応答を誘導するように製剤化された腫瘍溶解性ウイルス及び少なくとも１つの抗原タンパク質を含み；
前記プライムの前記少なくとも１つの抗原タンパク質及び前記ブーストの前記少なくとも１つの抗原タンパク質が同じ腫瘍抗原由来であり、
前記ブーストの前記少なくとも１つの抗原タンパク質が前記ブーストの前記ウイルスによってコードされていない、使用のためのプライム：ブーストワクチン。
【請求項２３】
前記プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質のアミノ酸配列と前記ブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質のアミノ酸配列とが、少なくとも７０％同一である、請求項２２に記載の使用のためのプライム：ブーストワクチン。
【請求項２４】
前記プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質のアミノ酸配列と前記ブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質のアミノ酸配列とが、少なくとも８０％同一である、請求項２３に記載の使用のためのプライム：ブーストワクチン。
【請求項２５】
前記プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質のアミノ酸配列と前記ブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質のアミノ酸配列とが、少なくとも９０％同一である、請求項２４に記載の使用のためのプライム：ブーストワクチン。
【請求項２６】
前記プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質のアミノ酸配列と前記ブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質のアミノ酸配列とが、同一である、請求項２５に記載の使用のためのプライム：ブーストワクチン。
【請求項２７】
ａ．前記プライムの前記少なくとも１つの抗原タンパク質が複数の抗原タンパク質を含み、前記ブーストの前記少なくとも１つの抗原タンパク質が複数の抗原タンパク質を含み、そのそれぞれが前記ブーストの前記ウイルスによってコードされておらず、
ｂ．前記プライムの前記複数の抗原タンパク質及び前記ブーストの前記複数の抗原タンパク質が同じ複数の腫瘍関連抗原に基づく、請求項２２に記載の使用のためのプライム：ブーストワクチン。
【請求項２８】
前記プライムの前記複数の抗原タンパク質と前記ブーストの前記複数の抗原タンパク質とが、同一である、請求項２７に記載の使用のためのプライム：ブーストワクチン。
【請求項２９】
前記ブーストの前記ウイルスが腫瘍溶解性ウイルスである、請求項２２〜２８のいずれか一項に記載の使用のためのプライム：ブーストワクチン。
【請求項３０】
前記ブーストのウイルスがラブドウイルスである、請求項２９に記載の使用のためのプライム：ブーストワクチン。
【請求項３１】
前記ラブドウイルスがマラバウイルスである、請求項３０に記載の使用のためのプライム：ブーストワクチン。
【請求項３２】
前記マラバウイルスがＭＧ１である、請求項３１に記載の使用のためのプライム：ブーストワクチン。
【請求項３３】
前記ブーストの前記ウイルスがアデノウイルス、ワクシニアウイルス又は水疱性口内炎ウイルスである、請求項２２〜２８のいずれか一項に記載の使用のためのプライム：ブーストワクチン。
【請求項３４】
前記ブーストが静脈内、筋肉内又は腫瘍内投与のために製剤化されている、請求項２２〜３３のいずれか一項に記載の使用のためのプライム：ブーストワクチン。
【請求項３５】
前記プライムが静脈内、筋肉内又は腫瘍内投与のために製剤化されている、請求項２２〜３４のいずれか一項に記載の使用のためのプライム：ブーストワクチン。
【請求項３６】
前記ブーストの前記ウイルスが不活性化されている、請求項２２〜３４のいずれか一項に記載の使用のためのプライム：ブーストワクチン。
【請求項３７】
前記ブーストの前記ウイルスがＵＶで不活性化されている、請求項３６に記載の使用のためのプライム：ブーストワクチン。
【請求項３８】
前記プライムが非ウイルス性アジュバントをさらに含む、請求項２２〜３７のいずれか一項に記載の使用のためのプライム：ブーストワクチン。
【請求項３９】
前記プライムがウイルスをさらに含み、前記プライムの前記ウイルスが前記ブーストの前記ウイルスと免疫学的に異なる、請求項２２〜３８のいずれか一項に記載の使用のためのプライム：ブーストワクチン。
【請求項４０】
前記プライムの前記ウイルスがアデノウイルスである、請求項２２〜３９のいずれか一項に記載の使用のためのプライム：ブーストワクチン。
【請求項４１】
ａ．哺乳動物において免疫応答を生じさせることができる少なくとも１つの抗原タンパク質を含むプライム；及び
ｂ．哺乳動物において免疫応答を誘導するように製剤化された腫瘍溶解性ウイルス及び少なくとも１つの抗原タンパク質を含むブースト
を含む、哺乳動物対象において免疫応答を誘導することにおける使用のためのキットであって、
前記プライムの前記少なくとも１つの抗原タンパク質及び前記ブーストの前記少なくとも１つの抗原タンパク質が同じ腫瘍抗原由来であり、
前記ブーストの前記少なくとも１つの抗原タンパク質が前記ブーストの前記ウイルスによってコードされていない、キット。
【請求項４２】
前記プライムの前記少なくとも１つの抗原タンパク質と前記ブーストの前記少なくとも１つの抗原タンパク質とが同じである、請求項４１に記載のキット。
【請求項４３】
ａ．前記プライムの前記少なくとも１つの抗原タンパク質が複数の抗原タンパク質を含み、前記ブーストの前記少なくとも１つの抗原タンパク質が複数の抗原タンパク質を含み、そのそれぞれが前記ブーストの前記ウイルスによってコードされておらず、
ｂ．前記プライムの前記複数の抗原タンパク質及び前記ブーストの前記複数の抗原タンパク質が同じ複数の腫瘍関連抗原に基づく、請求項４１に記載のキット。
【請求項４４】
前記プライムの前記複数の抗原タンパク質と前記ブーストの前記複数の抗原タンパク質とが同じである、請求項４３に記載のキット。
【請求項４５】
前記ブーストの前記ウイルスが腫瘍溶解性ウイルスである、請求項４１〜４４のいずれか一項に記載のキット。
【請求項４６】
前記腫瘍溶解性ウイルスがラブドウイルスである、請求項４５に記載のキット。
【請求項４７】
前記ラブドウイルスが、マラバウイルス又はその操作されたバリアントである、請求項４６に記載のキット。
【請求項４８】
前記マラバウイルスがＭＧ１である、請求項４７に記載のキット。
【請求項４９】
前記ブーストの前記ウイルスがアデノウイルス、ワクシニアウイルス又は水疱性口内炎ウイルスである、請求項４１〜４４のいずれか一項に記載のキット。
【請求項５０】
前記ブーストが静脈内、筋肉内又は腫瘍内投与のために製剤化されている、請求項４１〜４９のいずれか一項に記載のキット。
【請求項５１】
前記プライムが静脈内、筋肉内又は腫瘍内投与のために製剤化されている、請求項４１〜５０のいずれか一項に記載のキット。
【請求項５２】
前記ブーストの前記ウイルスが不活性化されている、請求項４１〜５１のいずれか一項に記載のキット。
【請求項５３】
前記ブーストの前記ウイルスがＵＶで不活性化されている、請求項５２に記載のキット。
【請求項５４】
前記プライムが非ウイルス性アジュバントをさらに含む、請求項４１〜５３のいずれか一項に記載のキット。
【請求項５５】
前記プライムがウイルスをさらに含み、前記プライムの前記ウイルスが前記ブーストの前記ウイルスと免疫学的に異なる、請求項４１〜５４のいずれか一項に記載のキット。
【請求項５６】
前記プライムの前記ウイルスがアデノウイルスである、請求項５５に記載のキット。
【請求項５７】
前記プライムの前記少なくとも１つの抗原タンパク質が前記プライムの前記ウイルスによってコードされていない、請求項４１〜５６のいずれか一項に記載のキット。
【請求項５８】
前記プライムの前記ウイルスが不活性化されている、請求項４１〜５７のいずれか一項に記載のキット。
【請求項５９】
前記プライムの前記ウイルスがＵＶで不活性化されている、請求項５８に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
[0001]本開示は、免疫応答を増強するためのアジュバントに関する。さらに詳細には、本開示は、アジュバントとしての腫瘍溶解性ウイルスに関する。
【背景技術】
【０００２】
[0002]病原体及び疾患細胞は、免疫系によって検出され、標的化され得る抗原を含み、それにより免疫原性ワクチン及び免疫療法が挙げられる免疫ベースの治療への基礎を提供する。がん処置の観点から、例えば免疫治療は、がん細胞が認識され、標的化され得る分子をそれらの細胞表面にしばしば有するという事実に基づく。
【０００３】
[0003]ウイルスは、がん治療においても、疾患細胞を直接殺すそれらの能力の一部に関して、使用されている。例えば、腫瘍溶解性ウイルス（ＯＶ）は、悪性細胞に特異的に感染し、複製し及び殺し、罹患していない正常組織をそのままにする。いくつかのＯＶは、種々の新生物の処置について臨床評価の進行した段階に達している（Ｒｕｓｓｅｌｌ  ＳＪ．ら、（２０１２）Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ３０：６５８〜６７０）。水疱性口内炎ウイルス（ｖｅｓｉｃｕｌａｒ  ｓｔｏｍａｔｉｔｉｓ  ｖｉｒｕｓ）（ＶＳＶ）に加えて（Ｓｔｏｊｄｌ  ＤＦ．ら、（２０００）Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ６：８２１〜８２５；Ｓｔｏｊｄｌ  ＤＦ．ら、（２００３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ４：２６３〜２７５）、腫瘍溶解性活性を提示する他のラブドウイルスが近年記載されている（Ｂｒｕｎ  Ｊ．ら、（２０１０）Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  １８：１４４０〜１４４９；Ｍａｈｏｎｅｙ  ＤＪ．ら、（２０１１）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２０：４４３〜４５６）。それらの中で、非ＶＳＶマラバウイルスは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで最も幅広い腫瘍指向性（oncotropism）を示した（ＷＯ２００９／０１６４３３）。腫瘍選択性が改善され、正常細胞における病原性が低減された変異体マラバウイルスは、操作された。弱毒化株は、Ｇタンパク質（Ｑ２４２Ｒ）及びＭタンパク質（Ｌ１２３Ｗ）変異の両方を含有する二重変異体株である。ｉｎ  ｖｉｖｏでは、ＭＧ１又はマラバＭＧ１と呼ばれるこの弱毒化株は、弱毒化ＶＳＶ、ＶＳＶΔＭ５１よりも優れた治療有効性を有して、マウスでの異種移植及び同系腫瘍モデルにおいて強力な抗腫瘍活性を実証した（ＷＯ２０１１／０７０４４０）。
【０００４】
[0004]種々の戦略がＯＶ誘導抗腫瘍免疫を改善するために開発されている（Ｐｏｌ  Ｊ．ら、（２０１２）Ｖｉｒｕｓ  Ａｄａｐｔａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ４：１〜２１）。戦略は、ＯＶそれ自体の腫瘍溶解性活性、及び腫瘍関連抗原への免疫を生じる能力の両方の有利点を利用する。１つの戦略は、腫瘍溶解性ワクチンと定義され、ＯＶ由来の腫瘍抗原を発現することからなる（Ｒｕｓｓｅｌｌ  ＳＪ．ら、（２０１２）Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ３０：６５８〜６７０）。以前、ＶＳＶががんワクチンベクターとしても使用され得ることが実証された（Ｂｒｉｄｌｅ  ＢＷ．ら、（２０１０）Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  １８４：４２６９〜４２７５）。マウスメラノーマモデルを処置する異種プライム：ブースト設定に適用された場合、ＶＳＶ−ヒトドパクロムトートメラーゼ（ｈＤＣＴ）腫瘍溶解性ワクチンは、ＤＣＴへの腫瘍特異的免疫の増加だけでなく、抗ウイルス獲得免疫の随伴する低減も誘導した。結果として、治療有効性は、中央値及び長期生存率の両方の増加を伴って劇的に改善された（ＷＯ２０１０／１０５３４７）。３つの特異的プライム：ブースト併用療法が国際出願ＰＣＴ／ＣＡ２０１４／０５０１１８に開示されている。併用療法は、抗原として：ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）Ｅ６／Ｅ７融合タンパク質、前立腺（ｈｕＳＴＥＡＰ）タンパク質のヒト６回膜貫通上皮抗原、又はがん精巣抗原１をコードするレンチウイルス；及び同じ抗原をコードするマラバＭＧ１ウイルスを含む。国際出願ＰＣＴ／ＣＡ２０１４／０５０１１８は、抗原としてＭＡＧＥＡ３をコードするアデノウイルス、及び同じ抗原をコードするマラバＭＧ１ウイルスを使用するプライム：ブースト併用療法も開示している。国際出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１７／０００６２２は、悪性細胞に感染し、複製し、殺す腫瘍溶解性ウイルスを含む、併用プライム：ブースト治療を開示している。ウイルスは、腫瘍関連抗原に基づく抗原タンパク質をコードし、発現するように操作される。抗原タンパク質は、（ｉ）免疫を生じさせ、（ｉｉ）治療効果をもたらす免疫応答を誘導する。
【０００５】
[0005]標的にさらに容易に適用され、及び／又は個別化を受け入れ易い治療を提供することは望ましい。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
[0006]次の概要は、本明細書に記載される１つ又は複数の発明を読者に紹介することを目的とするが、それらのいずれか１つを定義するためではない。
【０００７】
[0007]先のアプローチの少なくとも１つの不利益を除く又は軽減することは、本開示の目的である。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
[0008]腫瘍溶解性ウイルスが、アジュバントとして作用できることが驚くべきことに見出された。本開示の著者らは、哺乳動物に投与された腫瘍溶解性ウイルスが、ウイルスによってコードされていない投与された抗原タンパク質への免疫応答を補助できることを見出した。このため本開示による治療は、ウイルスコード抗原を必要としない。プライム：ブースト治療の観点から、例えば、プライム、ブースト又は両方は、ウイルス及び、別々の非ウイルスコード抗原タンパク質を含むことができる。これらの結果は、コードされる抗原のウイルス発現が抗原タンパク質への免疫応答の刺激のために重要であると以前考えられていたことから、予想外である。抗原タンパク質をコードする腫瘍溶解性ウイルスの改変の必要なく、治療は、さまざまな標的に、例えば合成ペプチドを使用してさらに適合され得る。それらは、例えば所与の腫瘍の腫瘍関連抗原を標的化するために、さらに容易に個別化され得る。
【０００９】
[0009]一態様では、哺乳動物対象において免疫応答を誘導することにおける使用のための併用プライム：ブースト治療であって、プライムは、哺乳動物において免疫応答を生じるように製剤化された少なくとも１つの抗原タンパク質を含み、ブーストは、哺乳動物において免疫応答を誘導するように製剤化されたウイルス及び少なくとも１つの抗原タンパク質を含み；プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質及びブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質は、同じ少なくとも１つの腫瘍関連抗原に基づいており、ブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質はブーストのウイルスによってコードされていない、治療が提供される。
【００１０】
[0010]一態様では、併用プライム：ブースト処置中の哺乳動物対象において免疫応答を誘導することにおける使用のためのプライム又はブーストを含む組成物であって、プライムは、哺乳動物において免疫応答を生じるように製剤化された少なくとも１つの抗原タンパク質を含み、ブーストは、哺乳動物において免疫応答を誘導するように製剤化されたウイルス及び少なくとも１つの抗原タンパク質を含み；プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質及びブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質は、同じ少なくとも１つの腫瘍関連抗原に基づいており、ブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質はブーストのウイルスによってコードされていない、組成物が提供される。
【００１１】
[0011]一態様では、併用プライム：ブースト処置中の哺乳動物対象において免疫応答を誘導することにおける使用のためのプライムを含む組成物であって、プライムは、哺乳動物において免疫応答を生じるように製剤化された少なくとも１つの抗原タンパク質を含み、ブーストは、哺乳動物において免疫応答を誘導するように製剤化されたウイルス及び少なくとも１つの抗原タンパク質を含み；プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質及びブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質は、同じ少なくとも１つの腫瘍関連抗原に基づいており、ブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質はブーストのウイルスによってコードされていない、組成物が提供される。
【００１２】
[0012]一態様では、併用プライム：ブースト処置中の哺乳動物対象において免疫応答を誘導することにおける使用のためのブーストを含む組成物であって、プライムは、哺乳動物において免疫応答を生じるように製剤化された少なくとも１つの抗原タンパク質を含み、ブーストは、哺乳動物において免疫応答を誘導するように製剤化されたウイルス及び少なくとも１つの抗原タンパク質を含み；プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質及びブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質は、同じ少なくとも１つの腫瘍関連抗原に基づいており、ブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質はブーストのウイルスによってコードされていない、組成物が提供される。
【００１３】
[0013]別の態様では、哺乳動物において免疫応答を生じるように製剤化された少なくとも１つの抗原タンパク質を含むプライム；並びに哺乳動物において免疫応答を誘導するように製剤化されたウイルス及び少なくとも１つの抗原タンパク質を含むブーストを含む、哺乳動物対象において免疫応答を誘導することにおける使用のためのキットであって、プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質及びブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質は、同じ少なくとも１つの腫瘍関連抗原に基づいており、ブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質はブーストのウイルスによってコードされていない、キットが提供される。
【００１４】
[0014]別の態様では、哺乳動物対象における腫瘍の処置のための本明細書に記載される併用プライム：ブースト治療の使用が提供される。
【００１５】
[0015]別の態様では、哺乳動物対象における腫瘍の処置における使用のための本明細書に記載される併用プライム：ブースト治療が提供される。
【００１６】
[0016]別の態様では、本明細書に記載される併用プライム：ブースト治療を対象に投与するステップを含む、哺乳動物対象において腫瘍を処置する方法が提供される。
【００１７】
[0017]別の態様では、ブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質を合成すること、及び併用プライム：ブースト治療を産生することを含む、本明細書に記載される併用プライム：ブースト治療を産生するための方法が提供される。
【００１８】
[0018]別の態様では、プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質を合成すること、及び併用プライム：ブースト治療を産生することを含む、本明細書に記載される併用プライム：ブースト治療を産生するための方法が提供される。
【００１９】
[0019]別の態様では、哺乳動物対象において免疫応答を誘導するための腫瘍溶解性ウイルス及び少なくとも１つの抗原タンパク質の使用であって、少なくとも１つの抗原タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルスによってコードされていない、使用が提供される。
【００２０】
[0020]別の態様では、哺乳動物対象において少なくとも１つの抗原タンパク質への免疫応答を補助する腫瘍溶解性ウイルスの使用であって、少なくとも１つの抗原タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルスによってコードされていない、使用が提供される。
【００２１】
[0021]別の態様では、腫瘍溶解性ウイルス及び少なくとも１つの抗原タンパク質を対象に投与することを含む、哺乳動物対象において少なくとも１つの抗原タンパク質への免疫応答を補助する方法であって、少なくとも１つの抗原タンパク質はウイルスによってコードされていない、方法が提供される。
【００２２】
[0022]別の態様では、腫瘍溶解性ウイルス及び少なくとも１つの抗原タンパク質を含む免疫原性組成物、少なくとも１つの抗原タンパク質は腫瘍溶解性ウイルスによってコードされていない、組成物が提供される。
【００２３】
[0023]本開示の他の態様及び特性は、添付の図と合わせて次の具体的な実施形態の記載を検討することにより当業者に明らかになる。
【００２４】
[0024]本開示の実施形態は、添付の図を参照して例示の方法によってのみここに記載される。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】実験において使用される処置スケジュールの模式図である。
【図２】ＤＣＴペプチドを発現するアデノウイルス（Ａｄ）（「Ａｄ−ＤＣＴ」と称される）を用いてプライムされ、ＤＣＴペプチドを発現するマラバウイルスＭＧ１（「ＭＲＢ−ＤＣＴ」と称される、「−」はウイルスでのコードを示す）又はＤＣＴペプチドを同時投与してＭＲＢ（「ＭＲＢ＋ＤＣＴ」と称される、「＋」はウイルスによってコードされていない又はその一部でないペプチドの同時投与を示す）を用いてブーストされたマウスから２１日目に採取された脾細胞のＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴ分析を示す図である。
【図３】Ａｄ−ＤＣＴがＤＣＴへの免疫応答を単独で誘導し（左から２番目の群）、ＭＲＢ＋ＤＣＴによってＭＲＢ−ＤＣＴ（最後の群）に匹敵するレベルにブーストされることを示す図である。
【図４】図３においてと同じ実験からのフローサイトメトリー分析を示す図である。
【図５】異なる経路−静脈内（ＩＶ）、腫瘍内（ＩＴ）又は筋肉内（ＩＭ）を使用して、Ａｄ−ＤＣＴを用いてプライムされ、ＤＣＴペプチドを同時投与してＭＲＢを用いてブーストされたマウスから２１日目に採取された脾細胞のＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴ分析を示す図である。
【図６】Ａｄ−ＤＣＴを用いてプライムされ、ＤＣＴペプチドを同時投与してＭＲＢ又はＵＶ不活性化ＭＲＢ（ＵＶＭＲＢ）のいずれかを用いてブーストされたマウスから２１日目に採取された脾細胞のＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴ分析を示す図である。
【図７】Ａｄ−ＤＣＴを用いてプライムされ、ＤＣＴペプチドを同時投与してＶＶ、ＶＳＶ又はＭＶのいずれかを用いてブーストされたマウスから２１日目に採取された脾細胞のＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴ分析を示す図である。
【図８】ＤＣＴペプチドを同時投与してＡｄ−ＤＣＴ又はＡｄ又はポリＩ：Ｃのいずれかを用いてプライムされた（すべてＩＭ）マウスから１４日目に採取された脾細胞のＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴ分析を示す図である。
【図９】Ａｄ−ＤＣＴを用いてプライムされ、ＭＲＢ−ＤＣＴ又はＤＣＴペプチドを同時投与してＭＲＢを用いてブーストされたマウスから２１日目に採取された脾細胞のＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴ分析を示す図である。
【図１０】ＭＲＢ、ＭＲＢ−Ｏｖａ又はＯｖａペプチドを同時投与してＭＲＢを用いてプライムされたマウスから１４日目に採取された脾細胞のＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴ分析を示す図である。
【図１１】ＤＣＴペプチドと共に又は用いずにＡｄ−Ｏｖａを用いてプライムされ、ＤＣＴペプチドと共に又は用いずにＭＲＢ−Ｏｖａを用いてブーストされたマウスから２１日目に採取された脾細胞のＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴ分析を示す図である。
【図１２】確定された皮下Ｂ１６Ｆ１０−Ｏｖａ腫瘍を有し、ポリＩ：Ｃ及び表示のペプチドを用いて７及び１４日目にＩＭ処置されたマウスについての結果を示す図である。
【図１３】確定された皮下ＣＴ２６腫瘍を有し、ポリＩ：Ｃ及び表示のペプチドを用いて７及び１４日目にＩＭ処置されたマウスについての結果を示す図である。
【図１４】ＤＣＴペプチドと共にポリＩ：Ｃ又はＭＲＢを用いて（ＳＣ及びＩＶ）プライムされたマウスから１４日目に採取された脾細胞のＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴ分析を示す図である。
【図１５】表示のＢ１６Ｍｕｔペプチドと共にポリＩ：Ｃ（ＳＣ）又はＭＲＢ（ＩＶ）を用いてプライムされたマウスから１４日目に採取された脾細胞のＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴ分析を示す図である。
【図１６】ＭＲＢが、免疫プライミング又はブースティングのためのアジュバントとして使用され得るが、両方はできないことを示す図である。ＤＣＴペプチドと共にＡｄ−ＤＣＴ又はＭＲＢを用いてプライムされ、ＤＣＴペプチドを同時投与してＭＲＢを用いてブーストされたマウスから２１日目に採取された脾細胞のＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴ分析の結果を示す。
【図１７】ペプチドと共にＩＭ又はＳＣ投与された場合に、ポリＩ：Ｃがより強い免疫応答を誘導することを示す図である。次の異なる経路（ＩＰ、ＩＶ、ＩＭ又はＳＣ）によりＤＣＴペプチドを同時投与して、ポリＩ：Ｃを用いてプライムされたマウスから１４日目に採取された脾細胞のＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴ分析の結果を示す。
【図１８】Ａｄ−ＤＣＴ又はＤＣＴペプチドを同時投与してＤＣＴを同時投与してＡｄ又はＡｄ−Ｏｖａ又はＯｖａペプチドを同時投与してＡｄを用いてプライムされ（７日目）、ＭＲＢ−ＤＣＴ又はＤＣＴペプチドを同時投与してＭＲＢ又はＭＲＢ−Ｏｖａ又はＯｖａペプチドを同時投与してＭＲＢを用いてブーストされた（１４日目）マウスから２１日目に採取された脾細胞のＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴ分析の結果を示す図である。
【図１９】Ａｄ又はＤＣＴペプチドを同時投与してＡｄを用いてプライムされ（７日目）、ＭＲＢ又はＤＣＴペプチドを同時投与してＭＲＢを用いてブーストされた（１４日目）マウスの生存分析を示す図である。
【図２０】Ａｄ又はミュータノーム（mutanome）ペプチド（Ｂ１６Ｍｕｔ２０、Ｂ１６Ｍｕｔ３０、Ｂ１６Ｍｕｔ４４及びＢ１６Ｍｕｔ４８）と共にＡｄを用いてプライムされ（７日目）、ＭＲＢ又はミュータノームペプチド（Ｂ１６Ｍｕｔ２０、Ｂ１６Ｍｕｔ３０、Ｂ１６Ｍｕｔ４４及びＢ１６Ｍｕｔ４８）を同時投与してＭＲＢを用いてブーストされた（１４日目）マウスの生存分析を示す図である。
【図２１】Ａｄ又はミュータノームペプチド（ＣＴ２６Ｍｕｔ２０、ＣＴ２６Ｍｕｔ２７及びＣＴ２６Ｍｕｔ３７）と共にＡｄを用いてプライムされ（７日目）、ＭＲＢ又はミュータノームペプチド（ＣＴ２６Ｍｕｔ２０、ＣＴ２６Ｍｕｔ２７及びＣＴ２６Ｍｕｔ３７）を同時投与してＭＲＢを用いてブーストされた（１４日目）マウスの腫瘍増殖分析を示す図である。
【図２２】図２１における実験についての生存分析を示す図である。Ａｄ又はミュータノームペプチド（ＣＴ２６Ｍｕｔ２０、ＣＴ２６Ｍｕｔ２７及びＣＴ２６Ｍｕｔ３７）と共にＡｄを用いてプライムされ（７日目）、ＭＲＢ又はミュータノームペプチド（ＣＴ２６Ｍｕｔ２０、ＣＴ２６Ｍｕｔ２７及びＣＴ２６Ｍｕｔ３７）を同時投与してＭＲＢを用いてブーストされた（１４日目）マウスの生存率を示す。
【図２３】Ａｄ−Ｏｖａ又はミュータノームペプチド（Ｂ１６Ｍｕｔ２０、Ｂ１６Ｍｕｔ３０、Ｂ１６Ｍｕｔ４４及びＢ１６Ｍｕｔ４８）と共にＡｄ−Ｏｖａを用いてプライムされ（７日目）、ＭＲＢ−Ｏｖａ又はミュータノームペプチド（Ｂ１６Ｍｕｔ２０、Ｂ１６Ｍｕｔ３０、Ｂ１６Ｍｕｔ４４及びＢ１６Ｍｕｔ４８）を同時投与してＭＲＢ−Ｏｖａを用いてブーストされた（１４日目）マウスの腫瘍増殖分析を示す図である。
【図２４】図２３における実験についての生存分析を示す図である。Ａｄ−Ｏｖａ又はミュータノームペプチド（Ｂ１６Ｍｕｔ２０、Ｂ１６Ｍｕｔ３０、Ｂ１６Ｍｕｔ４４及びＢ１６Ｍｕｔ４８）と共にＡｄ−Ｏｖａを用いてプライムされ（７日目）、ＭＲＢ−Ｏｖａ又はミュータノームペプチド（Ｂ１６Ｍｕｔ２０、Ｂ１６Ｍｕｔ３０、Ｂ１６Ｍｕｔ４４及びＢ１６Ｍｕｔ４８）を同時投与してＭＲＢ−Ｏｖａを用いてブーストされた（１４日目）マウスの生存率を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
[0049]本開示は、免疫アジュバントとしての使用のための腫瘍溶解性ウイルスを提供する。一般に、腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルスによってコードされていない抗原タンパク質への免疫応答を補助することができる。プライム：ブースト治療の観点から、（１）プライムは、抗原タンパク質を含み、（２）ブーストは、ウイルス及びウイルスによってコードされていない抗原タンパク質を含み、プライムの抗原タンパク質及びブーストの抗原タンパク質は同じ抗原に基づく。抗原タンパク質がウイルスによってコードされていないという事実は、治療が容易に適合され得る、容易に個別化され得る、又は容易に製剤化され得ることを意味する。
【００２７】
[0050]がんについての併用プライム：ブースト治療
【００２８】
[0051]一態様では、哺乳動物対象において免疫応答を誘導することにおける使用のための併用プライム：ブースト治療であって、プライムは、哺乳動物において免疫応答を生じるように製剤化された少なくとも１つの抗原タンパク質を含み；ブーストは、哺乳動物において免疫応答を誘導するために製剤化されたウイルス及び少なくとも１つの抗原タンパク質を含み；プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質及びブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質は、同じ少なくとも１つの腫瘍関連抗原に基づいており、ブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質は、ブーストのウイルスによってコードされていない、治療が提供される。
【００２９】
[0052]本開示の観点では、「併用プライム：ブースト治療」は、（１）プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質並びに（２）ブーストのウイルス及び少なくとも１つの抗原タンパク質が、プライム：ブースト処置として投与される治療を指すと理解されるべきである。プライムが最初に投与され、ブーストは、哺乳動物において免疫応答が生じた後だけに投与されることから、プライム及びブーストは、物理的に一緒に提供又は包装される必要はない。一部の例では、併用は、プライムの１つのパッケージ（又は複数のパッケージ）及びブーストの１つのパッケージ（又は複数のパッケージ）の形態で、病院又は診療所のなどの医療機関に提供されてもよい。パッケージは、異なる時期に提供されてもよい。他の例では、併用は、プライム及びブーストの両方を含むパッケージの形態で、病院又は診療所のなどの医療機関に提供される。併用プライム：ブースト治療は、併用プライム：ブーストワクチンとも称され得る。
【００３０】
[0053]本明細書において使用される場合、用語「哺乳動物」は、ヒト及び非ヒト哺乳動物を指す。一実施形態では、哺乳動物はヒトであってもよい。
【００３１】
[0054]用語「抗原タンパク質」によって、生物学的に重要な免疫応答を誘発できる免疫原性（抗原）配列を含む任意のペプチドが意味される。
【００３２】
[0055]「腫瘍関連抗原」によって、腫瘍細胞に関連し、健康な細胞又は対応する健康な細胞において（適用又は要求事項に応じて）存在しない又はあまり豊富でない任意の免疫原が意味される。例えば腫瘍関連抗原は、生物の文脈では、腫瘍細胞に特有である場合がある。
【００３３】
[0056]本明細書において使用される場合「ウイルスによってコードされない」によって、ブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質が、ブーストのウイルスの核酸配列の転写及び翻訳によって産生されないことが意味される。同じことが、プライムが、ウイルス及びプライムのウイルスによってコードされないプライムの少なくとも１つの抗原タンパク質を含む実施形態において、用語がプライムに関係する場合に、適用される。これは、各場合において、改変又は操作されたウイルスを排除しないことは理解される。ある特定の実施形態では、抗原タンパク質は、ウイルス粒子の一部ではない。ある特定の実施形態では、抗原タンパク質は、ウイルス粒子に付着、コンジュゲート又は他に物理的に結合されていない。これにより、抗原タンパク質とウイルス粒子との間に共有結合がないことが意味される。一部の実施形態では、抗原タンパク質は、ウイルス粒子に物理的に会合されていない。物理的に会合は、この文脈では、非共有結合的相互作用を指す。
【００３４】
[0057]「同じ少なくとも１つの腫瘍関連抗原に基づく」によって、プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質及びブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質が、同じ腫瘍関連抗原への免疫反応を誘発する配列をそれぞれ含むように設計又は選択されることが意味される。これを達成するために、プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質とブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質とが正確に同じである必要はないことは理解される。例えば、それらは、腫瘍関連抗原に対応する配列、又は腫瘍関連抗原への免疫反応を誘発するように設計された配列を含む重複セグメントと部分的に重複する配列を含むペプチドであってもよく、それにより、同じ抗原への有効なプライム及びブーストが達成できるようにする。しかし、一実施形態では、プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質とブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質とは同じである。
【００３５】
[0058]一実施形態では、少なくとも１つの腫瘍関連抗原は、哺乳動物対象の腫瘍のミュータノームに基づく。
【００３６】
[0059]「ミュータノーム」によって、対象に特異的である一連の抗原をコードする、個々の哺乳動物の腫瘍特異的変更及び変異の集合体を意味する。これらは、複数の患者由来の腫瘍において発現される「共有」抗原とは異なり、典型的には正常な、非変異自己タンパク質である。ミュータノームコードペプチドは、それらに対する胸腺寛容性（thymic tolerance）を欠いていることからより活発なＴ細胞応答を惹起でき、変異遺伝子産生物が腫瘍においてだけ発現されることから、この免疫は腫瘍に限定され得る（Ｏｖｅｒｗｉｊｋら、：Ｍｉｎｉｎｇ  ｔｈｅ  ｍｕｔａｎｏｍｅ：ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ  ｈｉｇｈｌｙ  ｐｅｒｓｏｎａｌｉｚｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｔｕｍｏｕｒｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｆｏｒ  ＩｍｍｕｎｏＴｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  ２０１３  １：１１）。ミュータノームは、所与の腫瘍について、例えば次世代配列決定によって、容易に決定され得る。
【００３７】
[0060]一実施形態では、プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質は複数の抗原タンパク質を含み、ブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質は複数の抗原タンパク質を含み、そのそれぞれはブーストのウイルスによってコードされておらず、プライムの複数の抗原タンパク質及びブーストの複数の抗原タンパク質は、同じ複数の腫瘍関連抗原に基づく。
【００３８】
[0061]「同じ複数の腫瘍関連抗原に基づく」によって、複数の各腫瘍関連抗原について、その腫瘍関連抗原に対してプライム中に少なくとも１つの抗原タンパク質及びブースト中に少なくとも１つの抗原タンパク質があり、標的化される各腫瘍関連抗原は、プライム／ブースト抗原タンパク質の少なくとも１つの対応する対を有することは理解される。上記のとおり、プライムの複数の抗原タンパク質及びブーストの複数の抗原タンパク質が同じである必要はなく、プライム及びブースト由来の抗原タンパク質の対は、正確に同じでなくても、同じ腫瘍関連抗原への免疫応答を誘発できることは理解される。例えば、対は、腫瘍関連抗原に対応する配列、又は腫瘍関連抗原への免疫応答を誘発するように設計された配列を含む重複セグメントと部分的に重複していてもよい。しかし、一実施形態では、プライムの複数の抗原タンパク質とブーストの複数の抗原タンパク質とは同じである。
【００３９】
[0062]一実施形態では、複数の腫瘍関連抗原は、哺乳動物対象の腫瘍のミュータノームに基づく。
【００４０】
[0063]一実施形態では、ブーストのウイルスは、腫瘍溶解性ウイルスである。
【００４１】
[0064]「腫瘍溶解性ウイルス」によって、活動性の場合に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏで、複製し、腫瘍細胞を殺すことが示された多数のウイルスのいずれか１つが意味される。これらのウイルスは、天然の腫瘍溶解性ウイルス、又は腫瘍溶解性活性を生じる又は改善するように改変されたウイルスであってもよい。本明細書で使用される場合、ある特定の実施形態では、用語は、目的に適している腫瘍溶解性ウイルスの弱毒化、複製欠損、不活性化、操作された又は他に改変された形態を包含し得る。したがって、一部の実施形態では、記載の目的のために「腫瘍溶解性ウイルス」と呼ばれるものが、実際には腫瘍溶解性活性を保持していない場合があることは理解される。不活性化ウイルスの使用は、活動性又は「生きている」ウイルスを投与することが望ましくない場合では望ましい可能性がある。
【００４２】
[0065]一実施形態では、ブーストのウイルスは、ラブドウイルスである。
【００４３】
[0066]「ラブドウイルス」として、とりわけ、次の１つ又は複数のウイルス又はそれらのバリアントが挙げられる：カラジャスウイルス（Carajas virus）、チャンディプラウイルス、コカルウイルス（Cocalvirus）、イスファハンウイルス（Isfahan virus）、ピリウイルス（Piry virus）、水疱性口内炎アラゴアスウイルス（Vesicularstomatitis Alagoas virus）、BeAn 157575ウイルス、ボテケウイルス（Boteke virus）、カルチャキウイルス（Calchaqui virus）、エルウイルスアメリカン（Eel virus American）、グレイロッジウイルス（Gray Lodgevirus）、ユロナウイルス（Jurona virus）、クラマスウイルス（Klamath virus）、クワッタウイルス（Kwatta virus）、ラジョアウイルス（La Joya virus）、マルパイススプリングウイルス（Malpais Springvirus）、マウントエルゴンコウモリウイルス（Mount Elgon bat virus）、ペリネトウイルス（Perinet virus）、ツパイアウイルス、ファーミントン（Farmington）、バヒアグランデウイルス（Bahia Grande virus）、ミュアスプリングスウイルス（MuirSprings virus）、リードランチウイルス（Reed Ranch virus）、ハートパークウイルス（Hart Park virus）、フランダースウイルス（Flanders virus）、カメセウイルス（Kamese virus）、モスケイロウイルス（Mosqueiro virus）、モスリルウイルス（Mossuril virus）、バルールウイルス（Barur virus）、フクオカウイルス（Fukuoka virus）、ケルンキャニオンウイルス（Kern Canyonvirus）、ヌコルビソンウイルス（Nkolbisson virus）、ルダンテックウイルス（Le Dantec virus）、キューラリバウイルス（Keuraliba virus）、コネチカットウイルス（Connecticut virus）、ニューミントウイルス（New Mintovirus）、ソウグラスウイルス（Sawgrass virus）、チャコウイルス（Chaco virus）、セナマドレイラウイルス（Sena Madureiravirus）、ティンボウイルス（Timbo virus）、アルムピワァーウイルス（Almpiwar virus）、アルアクウイルス（Aruac virus）、バンゴランウイルス（Bangoran virus）、ビンボウイルス（Bimbo virus）、ビベンアームウイルス（Bivens Arm virus）、ブルークラブウイルス（Blue crab virus）、チャールビルウイルス（Charleville virus）、コアスタルプレインウイルス（CoastalPlains virus）、ダクアーク７２９２ウイルス（DakArK 7292 virus）、エントアメーバウイルス、ガルバウイルス（Garba virus）、ゴサスウイルス（Gossas virus）、ハンプティードゥーウイルス（Humpty Doo virus）、ジョインジャカカウイルス（Joinjakakavirus）、カンナマンガラムウイルス（Kannamangalam virus）、コロンゴウイルス（Kolongo virus）、コールピンヤウイルス（Koolpinyah virus）、コトンコンウイルス（Kotonkon virus）、ランジャウイルス（Landjia virus）、マニトバウイルス（Manitoba virus）、マルコウイルス（Marco virus）、ナソウルウイルス（Nasoule virus）、ナバロウイルス（Navarro virus）、ヌガインガンウイルス（Ngaingan virus）、オークベールウイルス（Oak- Vale virus）、オボジャングウイルス（Obodhiang virus）、オイタウイルス（Oita virus）、オウアンゴウイルス（Ouango virus）、パリークリークウイルス（Parry Creek virus）、リオグランデシクリッドウイルス（Rio Grande cichlid virus）、サンジンバウイルス（Sandjimbavirus）、シグマウイルス（Sigma virus）、スリプルウイルス（Sripur virus）、スゥイートウォーターブランチウイルス（SweetwaterBranch virus）、チブロガルガンウイルス（Tibrogargan virus）、キシブレマウイルス（Xiburema virus）、ヤタウイルス（Yata virus）、ロードアイランド（Rhode Island）、アデレードリバーウイルス（Adelaide Rivervirus）、ベリマーウイルス（Berrimah virus）、キンバレーウイルス（Kimberley virus）又はウシ流行熱ウイルス。ある特定の態様では、ラブドウイルスは、ジマラブドウイルス（昆虫及び哺乳動物細胞の両方に感染できるラブドウイルスとして定義される）の上位群を指す場合がある。
【００４４】
[0067]一実施形態では、ラブドウイルスは、マラバウイルス又はその操作されたバリアントである。
【００４５】
[0068]「操作されたバリアント」は、遺伝的に、例えば組換えＤＮＡ技術によって、改変されたウイルスと理解される。かかるウイルスは、野生型ウイルスと比較して、例えば、変異、挿入、欠失又は再構成を含む場合がある。
【００４６】
[0069]一実施形態では、ブーストのウイルスは、弱毒化されている。
【００４７】
[0070]「弱毒化」ウイルスは、病原性が低減されているが、いまだ生存可能な（又は「生きている」）ものである。
【００４８】
[0071]一実施形態では、ブーストのウイルスは、複製欠損である。
【００４９】
[0072]一実施形態では、弱毒化ウイルスは、アミノ酸２４２が変異されているマラバＧタンパク質及びアミノ酸１２３が変異されているマラバＭタンパク質を含む弱毒化マラバウイルスである。一実施形態では、Ｇタンパク質のアミノ酸２４２はアルギニン（Ｑ２４２Ｒ）であり、Ｍタンパク質のアミノ酸１２３はトリプトファン（Ｌ１２３Ｗ）である。マラバＭタンパク質の一例は、参照により本明細書に組み込まれる国際出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１０／００３３９６に記載されており、配列番号４と称されている。マラバＧタンパク質の一例は、国際出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１０／００３３９６に記載されており、配列番号５と称されている。一実施形態では、ブーストのウイルスは、国際出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１０／００３３９６に記載されているマラバ二重変異体（「マラバＤＭ」）である。一実施形態では、ブーストのウイルスは、参照により本明細書に組み込まれる国際出願ＰＣＴ／ＣＡ２０１４／０５０１１８に記載されている「マラバＭＧ１」である。
【００５０】
[0073]一実施形態では、ブーストのウイルスは、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、麻疹ウイルス又は水疱性口内炎ウイルスである。
【００５１】
[0074]一実施形態では、ブーストのウイルスは、アデノウイルス、ワクシニアウイルス又は水疱性口内炎ウイルスである。
【００５２】
[0075]一実施形態では、ブーストは、静脈内、筋肉内又は腫瘍内投与のために製剤化される。
【００５３】
[0076]一実施形態では、プライムは、静脈内、筋肉内又は腫瘍内投与のために製剤化される。
【００５４】
[0077]一実施形態では、ブーストのウイルスは、不活性化されている。一実施形態では、ブーストのウイルスは、ＵＶで不活性化されている。
【００５５】
[0078]一実施形態では、プライムは、非ウイルス性免疫アジュバントをさらに含む。
【００５６】
[0079]「免疫アジュバント」は、抗原への免疫応答を増強する、及び／又は、それを望ましい免疫応答に向けてモジュレートする分子と理解される。一例は、ポリＩ：Ｃである。
【００５７】
[0080]一実施形態では、プライムは、ウイルスをさらに含み、プライムのウイルスは、ブーストのウイルスとは免疫学的に異なる。
【００５８】
[0081]「免疫学的に異なる」によって、ウイルスが互いに交差反応する抗血清を産生しないことが理解される。プライム及びブーストにおける免疫学的に異なるウイルスの使用は、プライム及びブーストによって一般に標的化される標的抗原への有効なプライム／ブースト応答を可能にする。プライムとブーストとのウイルスが免疫学的に異なる限り、プライムのウイルスは、ブーストのウイルスについて上に記載された選択肢のいずれか１つであってもよい。
【００５９】
[0082]一実施形態では、プライムのウイルスは、アデノウイルスである。プライムのウイルスは、腫瘍選択的であってもよい。例えば、プライムのアデノウイルスは、ウイルスをｐ５３不活性化に感受性にする欠失をＥ１及びＥ３に含む場合がある。多数の腫瘍がｐ５３を欠いていることから、かかる改変は、ウイルスを効果的に腫瘍特異的に、それにより腫瘍溶解性にする。一実施形態では、アデノウイルスは、血清型５のものである。
【００６０】
[0083]プライムのウイルスは、プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質をコードする場合がある。複数の抗原タンパク質がプライムにおいて使用される場合、それらの一部又はすべては、プライムのウイルスによってコードされていてもよい。例えば、プライムのウイルスは、各型が抗原タンパク質の１つをコードするように操作されている、複数のウイルス型を含む場合がある。しかし、一実施形態では、プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質は、プライムのウイルスによってコードされていない。複数の抗原タンパク質が使用される場合、一実施形態では、それらのいずれも、プライムのウイルスによってコードされていない。
【００６１】
[0084]一実施形態では、プライムのウイルスは、弱毒化されていてもよい。一実施形態では、プライムのウイルスは不活性化されている。一実施形態では、プライムのウイルスは、ＵＶ不活性化されている。
【００６２】
[0085]一実施形態では、プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質は、合成ペプチドを含む。一実施形態では、プライムの合成ペプチドは、合成長鎖ペプチド（synthetic long peptide）（ＳＬＰ）である。プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質は、アミノ酸長８〜２５０であってもよい。この範囲内で、それは、アミノ酸長少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０又は少なくとも５０であってもよい。これらすべての適用可能な範囲のなかでも、アミノ酸長は、２００未満、１５０未満、１２５未満、１００未満、７５未満、５０未満、４０未満又は３０未満であってもよい。述べられた上限及び下限の任意の組合せが予測される。
【００６３】
[0086]一実施形態では、ブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質は、合成ペプチドを含む。一実施形態では、ブーストの合成ペプチドは、合成長鎖ペプチド（ＳＬＰ）である。ブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質は、アミノ酸長８〜２５０であってもよい。この範囲内で、それは、アミノ酸長少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０又は少なくとも５０であってもよい。これらのすべての適用可能な範囲を含んで、アミノ酸長２００未満、１５０未満、１２５未満、１００未満、７５未満、５０未満、４０未満又は３０未満であってもよい。述べられた上限及び下限の任意の組合せが予測される。
【００６４】
[0087]併用プライム：ブースト治療は、最初のウイルスを投与することによって哺乳動物において生じた腫瘍関連抗原タンパク質へのプライム免疫応答を増加させるシクロホスファミド（ＣＰＡ）などの免疫増強化合物をさらに含む場合がある。シクロホスファミドは、腫瘍関連抗原タンパク質に対する免疫応答の増強をもたらすことができる化学治療剤である。
【００６５】
[0088]使用のための組成物
【００６６】
[0089]一態様では、併用プライム：ブースト処置中の哺乳動物対象において免疫応答を誘導することにおける使用のためのプライム又はブーストを含む組成物であって、プライムは、哺乳動物において免疫応答を生じるように製剤化された少なくとも１つの抗原タンパク質を含み；ブーストは、哺乳動物において免疫応答を誘導するように製剤化されたウイルス及び少なくとも１つの抗原タンパク質を含み；プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質及びブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質は、同じ少なくとも１つの腫瘍関連抗原に基づき、ブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質は、ブーストのウイルスによってコードされていない、組成物が提供される。
【００６７】
[0090]一態様では、併用プライム：ブースト処置中の哺乳動物対象において免疫応答を誘導することにおける使用のためのプライムを含む組成物であって、プライムは、哺乳動物において免疫応答を生じるように製剤化された少なくとも１つの抗原タンパク質を含み；ブーストは、哺乳動物において免疫応答を誘導するように製剤化されたウイルス及び少なくとも１つの抗原タンパク質を含み；プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質及びブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質は、同じ少なくとも１つの腫瘍関連抗原に基づき、ブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質は、ブーストのウイルスによってコードされていない、組成物が提供される。
【００６８】
[0091]一態様では、併用プライム：ブースト処置中の哺乳動物対象において免疫応答を誘導することにおける使用のためのブーストを含む組成物であって、プライムは、哺乳動物において免疫応答を生じるように製剤化された少なくとも１つの抗原タンパク質を含み；ブーストは、哺乳動物において免疫応答を誘導するように製剤化されたウイルス及び少なくとも１つの抗原タンパク質を含み；プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質及びブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質は、同じ少なくとも１つの腫瘍関連抗原に基づき、ブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質は、ブーストのウイルスによってコードされていない、組成物が提供される。
【００６９】
[0092]一実施形態では、プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質とブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質とは同じである。
【００７０】
[0093]一実施形態では、少なくとも１つの腫瘍関連抗原は、哺乳動物対象の腫瘍のミュータノームに基づく。
【００７１】
[0094]一実施形態では、プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質は複数の抗原タンパク質を含み、ブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質は複数の抗原タンパク質を含み、そのそれぞれは、ブーストのウイルスによってコードされておらず、プライムの複数の抗原タンパク質及びブーストの複数の抗原タンパク質は、同じ複数の腫瘍関連抗原に基づく。
【００７２】
[0095]一実施形態では、プライムの複数の抗原タンパク質とブーストの複数の抗原タンパク質とは同じである。
【００７３】
[0096]一実施形態では、複数の腫瘍関連抗原は、哺乳動物対象の腫瘍のミュータノームに基づく。
【００７４】
[0097]一実施形態では、ブーストのウイルスは、腫瘍溶解性ウイルスである。
【００７５】
[0098]一実施形態では、ブーストのウイルスは、ラブドウイルスである。
【００７６】
[0099]一実施形態では、ラブドウイルスは、マラバウイルス又はその操作されたバリアントである。
【００７７】
[00100]一実施形態では、ブーストのウイルスは、弱毒化されている。
【００７８】
[00101]一実施形態では、ブーストのウイルスは、複製欠損である。
【００７９】
[00102]一実施形態では、弱毒化ウイルスは、アミノ酸２４２が変異されているマラバＧタンパク質及びアミノ酸１２３が変異されているマラバＭタンパク質を含む弱毒化マラバウイルスである。一実施形態では、Ｇタンパク質のアミノ酸２４２はアルギニン（Ｑ２４２Ｒ）であり、Ｍタンパク質のアミノ酸１２３はトリプトファン（Ｌ１２３Ｗ）である。マラバＭタンパク質の一例は、参照により本明細書に組み込まれる国際出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１０／００３３９６に記載されており、配列番号４と称されている。マラバＧタンパク質の一例は、国際出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１０／００３３９６に記載されており、配列番号５と称されている。一実施形態では、ブーストのウイルスは、国際出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１０／００３３９６に記載されているマラバ二重変異体（「マラバＤＭ」）である。一実施形態では、ブーストのウイルスは、参照により本明細書に組み込まれる国際出願ＰＣＴ／ＣＡ２０１４／０５０１１８に記載されている「マラバＭＧ１」である。
【００８０】
[00103]一実施形態では、ブーストのウイルスは、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、麻疹ウイルス又は水疱性口内炎ウイルスである。
【００８１】
[00104]一実施形態では、ブーストのウイルスは、アデノウイルス、ワクシニアウイルス又は水疱性口内炎ウイルスである。
【００８２】
[00105]一実施形態では、ブーストは、静脈内、筋肉内又は腫瘍内投与のために製剤化される。
【００８３】
[00106]一実施形態では、プライムは、静脈内、筋肉内又は腫瘍内投与のために製剤化される。
【００８４】
[00107]一実施形態では、ブーストのウイルスは、不活性化されている。一実施形態では、ブーストのウイルスは、ＵＶで不活性化されている。
【００８５】
[00108]一実施形態では、プライムは、非ウイルス性免疫アジュバントをさらに含む。一例は、ポリＩ：Ｃである。
【００８６】
[00109]一実施形態では、プライムは、ウイルスをさらに含み、プライムのウイルスは、ブーストのウイルスとは免疫学的に異なる。
【００８７】
[00110]一実施形態では、プライムのウイルスは、アデノウイルスである。プライムのウイルスは、腫瘍選択的であってもよい。例えば、プライムのアデノウイルスは、ウイルスをｐ５３不活性化に感受性にする欠失をＥ１及びＥ３に含む場合がある。多数の腫瘍がｐ５３を欠いていることから、かかる改変は、ウイルスを効果的に腫瘍特異的に、それにより腫瘍溶解性にする。一実施形態では、アデノウイルスは、血清型５のものである。
【００８８】
[00111]プライムのウイルスは、プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質をコードする場合がある。複数の抗原タンパク質がプライムにおいて使用される場合、その一部又はすべては、プライムのウイルスによってコードされていてもよい。例えば、プライムのウイルスは、各型が抗原タンパク質の１つをコードするように操作されている、複数のウイルス型を含む場合がある。しかし、一実施形態では、プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質は、プライムのウイルスによってコードされていない。複数の抗原タンパク質が使用される場合、一実施形態では、それらのいずれも、プライムのウイルスによってコードされていない。
【００８９】
[00112]一実施形態では、プライムのウイルスは、弱毒化されていてもよい。一実施形態では、プライムのウイルスは不活性化されている。一実施形態では、プライムのウイルスは、ＵＶで不活性化されている。
【００９０】
[00113]一実施形態では、プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質は、合成ペプチドを含む。一実施形態では、プライムの合成ペプチドは、合成長鎖ペプチド（ＳＬＰ）である。プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質は、アミノ酸長８〜２５０であってもよい。この範囲内で、それは、アミノ酸長少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０又は少なくとも５０であってもよい。これらすべての適用可能な範囲のなかでも、アミノ酸長は、２００未満、１５０未満、１２５未満、１００未満、７５未満、５０未満、４０未満又は３０未満であってもよい。述べられた上限及び下限の任意の組合せが予測される。
【００９１】
[00114]一実施形態では、ブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質は、合成ペプチドを含む。一実施形態では、ブーストの合成ペプチドは、合成長鎖ペプチド（ＳＬＰ）である。ブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質は、アミノ酸長８〜２５０であってもよい。この範囲内で、それは、アミノ酸長少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０又は少なくとも５０であってもよい。これらのすべての適用可能な範囲を含んで、アミノ酸長２００未満、１５０未満、１２５未満、１００未満、７５未満、５０未満、４０未満又は３０未満であってもよい。述べられた上限及び下限の任意の組合せが予測される。
【００９２】
[00115]使用のための組成物は、最初のウイルスを投与することによって哺乳動物において生じた腫瘍関連抗原タンパク質へのプライム免疫応答を増加させるシクロホスファミド（ＣＰＡ）などの免疫増強化合物をさらに含む場合がある。シクロホスファミドは、腫瘍関連抗原タンパク質に対する免疫応答の増強をもたらすことができる化学治療剤である。
【００９３】
[00116]ある特定の実施形態では、抗原タンパク質は、ウイルス粒子に付着、コンジュゲート又は他に物理的に結合されていない。一部の実施形態では、抗原タンパク質は、ウイルス粒子に物理的に会合されていない。
【００９４】
[00117]腫瘍への免疫応答を誘導するためのキット
【００９５】
[00118]一態様では、哺乳動物において免疫応答を生じるように製剤化された少なくとも１つの抗原タンパク質を含むプライム；哺乳動物において免疫応答を誘導するように製剤化されたウイルス及び少なくとも１つの抗原タンパク質を含むブーストを含む、哺乳動物対象において免疫応答を誘導することにおける使用のためのキットであって、プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質及びブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質は、同じ少なくとも１つの腫瘍関連抗原に基づき、ブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質は、ブーストのウイルスによってコードされていない、キットが提供される。
【００９６】
[00119]一実施形態では、哺乳動物はヒトであってもよい。
【００９７】
[00120]一実施形態では、プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質とブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質とは同じである。
【００９８】
[00121]一実施形態では、少なくとも１つの腫瘍関連抗原は、哺乳動物対象の腫瘍のミュータノームに基づく。
【００９９】
[00122]一実施形態では、プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質は複数の抗原タンパク質を含み、ブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質は複数の抗原タンパク質を含み、そのそれぞれは、ブーストのウイルスによってコードされておらず、プライムの複数の抗原タンパク質及びブーストの複数の抗原タンパク質は、同じ複数の腫瘍関連抗原に基づく。上記のとおり、プライムの複数の抗原タンパク質及びブーストの複数の抗原タンパク質が同じである必要はなく、プライム及びブースト由来の抗原タンパク質の対は、同じでなくても、同じ腫瘍関連抗原への免疫応答を誘発できることは理解される。例えば、対は、腫瘍関連抗原に対応する配列、又は腫瘍関連抗原への免疫応答を誘発するように設計された配列を含む重複セグメントと部分的に重複していてもよい。しかし、一実施形態では、プライムの複数の抗原タンパク質とブーストの複数の抗原タンパク質とは同じである。
【０１００】
[00123]一実施形態では、複数の腫瘍関連抗原は、哺乳動物対象の腫瘍のミュータノームに基づく。
【０１０１】
[00124]一実施形態では、ブーストのウイルスは、腫瘍溶解性ウイルスである。
【０１０２】
[00125]一実施形態では、ブーストのウイルスは、ラブドウイルスである。ラブドウイルスは、上に列挙されたもののいずれかであってもよい。
【０１０３】
[00126]一実施形態では、ラブドウイルスは、マラバウイルス又はその操作されたバリアントである。
【０１０４】
[00127]一実施形態では、ブーストのウイルスは、弱毒化ウイルスである。
【０１０５】
[00128]一実施形態では、弱毒化ウイルスは、アミノ酸２４２が変異されているマラバＧタンパク質及びアミノ酸１２３が変異されているマラバＭタンパク質を含む弱毒化マラバウイルスである。一実施形態では、Ｇタンパク質のアミノ酸２４２はアルギニン（Ｑ２４２Ｒ）であり、Ｍタンパク質のアミノ酸１２３はトリプトファン（Ｌ１２３Ｗ）である。マラバＭタンパク質の一例は、国際出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１０／００３３９６に記載されており、配列番号４と称されている。マラバＧタンパク質の一例は、国際出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１０／００３３９６に記載されており、配列番号５と称されている。一実施形態では、ブーストのウイルスは、国際出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１０／００３３９６に記載されているマラバ二重変異体（「マラバＤＭ」）である。一実施形態では、ブーストのウイルスは、国際出願ＰＣＴ／ＣＡ２０１４／０５０１１８に記載されている「マラバＭＧ１」である。
【０１０６】
[00129]一実施形態では、ブーストのウイルスは、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、麻疹ウイルス又は水疱性口内炎ウイルスである。
【０１０７】
[00130]一実施形態では、ブーストのウイルスは、アデノウイルス、ワクシニアウイルス又は水疱性口内炎ウイルスである。
【０１０８】
[00131]一実施形態では、ブーストは、静脈内、筋肉内又は腫瘍内投与のために製剤化される。
【０１０９】
[00132]一実施形態では、プライムは、静脈内、筋肉内又は腫瘍内投与のために製剤化される。
【０１１０】
[00133]一実施形態では、ブーストのウイルスは、不活性化されている。一実施形態では、ブーストのウイルスは、ＵＶで不活性化されている。
【０１１１】
[00134]一実施形態では、プライムは、非ウイルス性アジュバントをさらに含む。
【０１１２】
[00135]一実施形態では、プライムは、ウイルスをさらに含み、プライムのウイルスは、ブーストのウイルスとは免疫学的に異なる。
【０１１３】
[00136]一実施形態では、プライムのウイルスは、アデノウイルスである。プライムのウイルスは、腫瘍選択的であってもよい。例えば、プライムのアデノウイルスは、ウイルスをｐ５３不活性化に感受性にする欠失をＥ１及びＥ３に含む場合がある。多数の腫瘍がｐ５３を欠いていることから、かかる改変は、ウイルスを効果的に腫瘍特異的に、それにより腫瘍溶解性にする。
【０１１４】
[00137]プライムのウイルスは、プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質をコードする場合がある。複数の抗原タンパク質がプライムにおいて使用される場合、その一部又はすべては、プライムのウイルスによってコードされていてもよい。例えば、プライムのウイルスは、各型が抗原タンパク質の１つをコードするように操作されている、複数のウイルス型を含む場合がある。しかし、一実施形態では、プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質は、プライムのウイルスによってコードされていない。複数の抗原タンパク質が使用される場合、一実施形態では、それらのいずれも、プライムのウイルスによってコードされていない。
【０１１５】
[00138]一実施形態では、プライムのウイルスは、弱毒化されていてもよい。一実施形態では、プライムのウイルスが不活性化されている。一実施形態では、プライムのウイルスは、ＵＶで不活性化されている。
【０１１６】
[00139]一実施形態では、プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質は、合成ペプチドを含む。一実施形態では、プライムの合成ペプチドは、合成長鎖ペプチド（ＳＬＰ）である。プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質は、アミノ酸長８〜２５０であってもよい。この範囲内で、それは、アミノ酸長少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０又は少なくとも５０であってもよい。これらすべての適用可能な範囲のなかでも、アミノ酸長は、２００未満、１５０未満、１２５未満、１００未満、７５未満、５０未満、４０未満又は３０未満であってもよい。述べられた上限及び下限の任意の組合せが予測される。
【０１１７】
[00140]一実施形態では、ブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質は、合成ペプチドを含む。一実施形態では、ブーストの合成ペプチドは、合成長鎖ペプチド（ＳＬＰ）である。プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質は、アミノ酸長８〜２５０であってもよい。この範囲内で、それは、アミノ酸長少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０又は少なくとも５０であってもよい。これらのすべての適用可能な範囲を含んで、アミノ酸長２００未満、１５０未満、１２５未満、１００未満、７５未満、５０未満、４０未満又は３０未満であってもよい。述べられた上限及び下限の任意の組合せが予測される。
【０１１８】
[00141]キットは、最初のウイルスを投与することによって哺乳動物において生じた腫瘍関連抗原タンパク質へのプライム免疫応答を増加させるシクロホスファミド（ＣＰＡ）などの免疫増強化合物をさらに含む場合がある。シクロホスファミドは、腫瘍関連抗原タンパク質に対する免疫応答の増強をもたらすことができる化学治療剤である。
【０１１９】
[00142]ある特定の実施形態では、抗原タンパク質は、ウイルス粒子に付着、コンジュゲート又は他に物理的に結合されていない。一部の実施形態では、抗原タンパク質は、ウイルス粒子に物理的に会合されていない。
【０１２０】
[00143]がんのための治療用プライム：ブースト使用及び方法
【０１２１】
[00144]一態様では、哺乳動物対象における腫瘍の処置のための本明細書に記載される併用プライム：ブースト治療の使用が提供される。
【０１２２】
[00145]一態様では、哺乳動物対象における腫瘍の処置における使用のための本明細書に記載される併用プライム：ブースト治療が提供される。
【０１２３】
[00146]一態様では、対象に本明細書に記載される併用プライム：ブーストを投与することを含む、哺乳動物対象における腫瘍を処置する方法が提供される。
【０１２４】
[00147]一態様では、哺乳動物対象における腫瘍の処置のための、上に定義される、使用のための組成物の使用が提供される。
【０１２５】
[00148]一態様では、哺乳動物対象における腫瘍の処置における、上に定義される、使用のための組成物が提供される。
【０１２６】
[00149]産生方法
【０１２７】
[00150]一態様では、ブーストの少なくとも１つの抗原タンパク質を合成すること、及び併用プライム：ブースト治療を産生することを含む、本明細書に記載される併用プライム：ブースト治療を産生するための方法が提供される。
【０１２８】
[00151]一態様では、プライムの少なくとも１つの抗原タンパク質を合成すること、及び併用プライム：ブースト治療を産生することを含む、本明細書に記載される併用プライム：ブースト治療を産生するための方法が提供される。
【０１２９】
[00152]一実施形態では、合成するステップは、長鎖ペプチド合成を含む。
【０１３０】
[00153]一実施形態では、方法は、合成するステップに先立って、哺乳動物対象の腫瘍のミュータノームに基づいて少なくとも１つの腫瘍関連抗原を選択することをさらに含む。
【０１３１】
[00154]一実施形態では、方法は、固有のペプチドを決定するために、対象についてのミュータノームを決定することも含む場合がある。決定されると、一部の実施形態は、ミュータノームから標的ペプチドを選択することを含む。一部の実施形態は、例えば予測される抗原性に基づいて、最適な標的を予測することを含む。
【０１３２】
[00155]免疫応答を補助するための使用
【０１３３】
[00156]一態様では、哺乳動物対象において免疫応答を誘導するための腫瘍溶解性ウイルス及び少なくとも１つの抗原タンパク質の使用であって、少なくとも１つの抗原タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルスによってコードされていない、使用が提供される。
【０１３４】
[00157]一態様では、哺乳動物対象において免疫応答を誘導することにおける使用のための腫瘍溶解性ウイルス及び少なくとも１つの抗原タンパク質であって、少なくとも１つの抗原タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルスによってコードされていない、が提供される。
【０１３５】
[00158]一態様では、哺乳動物対象において少なくとも１つの抗原タンパク質への免疫応答を補助するための腫瘍溶解性ウイルスの使用であって、少なくとも１つの抗原タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルスによってコードされていない、使用が提供される。
【０１３６】
[00159]一態様では、哺乳動物対象において少なくとも１つの抗原タンパク質への免疫応答を補助することにおける使用のための腫瘍溶解性ウイルスであって、少なくとも１つの抗原タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルスによってコードされていない、腫瘍溶解性ウイルスが提供される。
【０１３７】
[00160]一実施形態では、哺乳動物はヒトである。
【０１３８】
[00161]一実施形態では、免疫応答は、治療免疫応答である。
【０１３９】
[00162]一実施形態では、哺乳動物対象は、少なくとも１つの抗原タンパク質への既存免疫を有する。
【０１４０】
[00163]「既存免疫」は、特定の抗原に対して未処置でなく、それに以前曝露されたことがある対象として理解される。これは、例えば対象を抗原を用いてプライミングすることによって生じる場合がある。抗原が対象に存在するために、対象が低レベルの免疫を有することからも生じる場合もある。例えば、がんの観点から、腫瘍関連抗原が腫瘍によって発現されるために、対象は、低いレベルの事前免疫を有する場合がある。
【０１４１】
[00164]一実施形態では、少なくとも１つの抗原タンパク質は、少なくとも１つの腫瘍関連抗原に基づく。
【０１４２】
[00165]一実施形態では、少なくとも１つの腫瘍関連抗原は、哺乳動物対象の腫瘍のミュータノームに基づく。
【０１４３】
[00166]一実施形態では、少なくとも１つの抗原タンパク質は、複数の抗原タンパク質を含む。
【０１４４】
[00167]一実施形態では、複数の抗原タンパク質は、哺乳動物対象の腫瘍のミュータノームに基づく。
【０１４５】
[00168]一実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスはラブドウイルスである。ラブドウイルスは、上に列挙されたもののいずれかであってもよい。
【０１４６】
[00169]一実施形態では、ラブドウイルスは、マラバウイルス又はその操作されたバリアントである。
【０１４７】
[00170]一実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、弱毒化ウイルスである。
【０１４８】
[00171]一実施形態では、弱毒化ウイルスは、アミノ酸２４２が変異されているマラバＧタンパク質及びアミノ酸１２３が変異されているマラバＭタンパク質を含む弱毒化マラバウイルスである。一実施形態では、Ｇタンパク質のアミノ酸２４２はアルギニン（Ｑ２４２Ｒ）であり、Ｍタンパク質のアミノ酸１２３はトリプトファン（Ｌ１２３Ｗ）である。マラバＭタンパク質の一例は、国際出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１０／００３３９６に記載されており、配列番号４と称されている。マラバＧタンパク質の一例は、国際出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１０／００３３９６に記載されており、配列番号５と称されている。一実施形態では、ブーストのウイルスは、国際出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１０／００３３９６に記載されているマラバ二重変異体（「マラバＤＭ」）である。一実施形態では、ブーストのウイルスは、国際出願ＰＣＴ／ＣＡ２０１４／０５０１１８に記載されている「マラバＭＧ１」である。
【０１４９】
[00172]一実施形態では、ウイルスは、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、麻疹ウイルス又は水疱性口内炎ウイルスである。
【０１５０】
[00173]一実施形態では、ブーストのウイルスは、アデノウイルス、ワクシニアウイルス又は水疱性口内炎ウイルスである。
【０１５１】
[00174]一実施形態では、ウイルス及び少なくとも１つの抗原タンパク質は、静脈内、筋肉内又は腫瘍内投与のために製剤化される。
【０１５２】
[00175]一実施形態では、ウイルスは、不活性化されている。
【０１５３】
[00176]一実施形態では、ウイルスは、ＵＶで不活性化されている。
【０１５４】
[00177]一実施形態では、少なくとも１つの抗原タンパク質は、合成ペプチドを含む。一実施形態では、合成ペプチドは、長鎖合成ペプチドを含む。少なくとも１つの抗原タンパク質は、アミノ酸長８〜２５０であってもよい。この範囲内で、それは、アミノ酸長少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０又は少なくとも５０であってもよい。これらすべての適用可能な範囲のなかでも、アミノ酸長は、２００未満、１５０未満、１２５未満、１００未満、７５未満、５０未満、４０未満又は３０未満であってもよい。述べられた上限及び下限の任意の組合せが予測される。
【０１５５】
[00178]補助方法
【０１５６】
[00179]一態様では、腫瘍溶解性ウイルス及び少なくとも１つの抗原タンパク質を対象に投与することを含む、哺乳動物対象において少なくとも１つの抗原タンパク質への免疫応答を補助する方法であって、少なくとも１つの抗原タンパク質は、腫瘍溶解性ウイルスによってコードされていない、方法が提供される。
【０１５７】
[00180]一実施形態では、哺乳動物はヒトである。
【０１５８】
[00181]一実施形態では、投与するステップは、同時投与を含む。
【０１５９】
[00182]一実施形態では、免疫応答は治療免疫応答である。
【０１６０】
[00183]一実施形態では、哺乳動物対象は、少なくとも１つの抗原タンパク質への既存免疫を有する。
【０１６１】
[00184]一実施形態では、少なくとも１つの抗原タンパク質は、少なくとも１つの腫瘍関連抗原に基づく。
【０１６２】
[00185]一実施形態では、少なくとも１つの腫瘍関連抗原は、哺乳動物対象の腫瘍のミュータノームに基づく。
【０１６３】
[00186]一実施形態では、少なくとも１つの抗原タンパク質は、複数の抗原タンパク質を含む。
【０１６４】
[00187]一実施形態では、複数の抗原タンパク質は、哺乳動物対象の腫瘍のミュータノームに基づく。
【０１６５】
[00188]一実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、ラブドウイルスである。ラブドウイルスは、上に列挙されたもののいずれかであってもよい。
【０１６６】
[00189]一実施形態では、ラブドウイルスは、マラバウイルス又はその操作されたバリアントである。
【０１６７】
[00190]一実施形態では、ウイルスは弱毒化ウイルスである。
【０１６８】
[00191]一実施形態では、弱毒化ウイルスは、アミノ酸２４２が変異されているマラバＧタンパク質及びアミノ酸１２３が変異されているマラバＭタンパク質を含む弱毒化マラバウイルスである。一実施形態では、Ｇタンパク質のアミノ酸２４２はアルギニン（Ｑ２４２Ｒ）であり、Ｍタンパク質のアミノ酸１２３はトリプトファン（Ｌ１２３Ｗ）である。マラバＭタンパク質の一例は、国際出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１０／００３３９６に記載されており、配列番号４と称されている。マラバＧタンパク質の一例は、国際出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１０／００３３９６に記載されており、配列番号５と称されている。一実施形態では、ブーストのウイルスは、国際出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１０／００３３９６に記載されているマラバ二重変異体（「マラバＤＭ」）である。一実施形態では、ブーストのウイルスは、国際出願ＰＣＴ／ＣＡ２０１４／０５０１１８に記載されている「マラバＭＧ１」である。
【０１６９】
[00192]一実施形態では、ウイルスは、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、麻疹ウイルス又は水疱性口内炎ウイルスである。
【０１７０】
[00193]一実施形態では、ブーストのウイルスは、アデノウイルス、ワクシニアウイルス又は水疱性口内炎ウイルスである。
【０１７１】
[00194]一実施形態では、投与するステップは、静脈内、筋肉内又は腫瘍内である。
【０１７２】
[00195]一実施形態では、ウイルスは、不活性化されている。
【０１７３】
[00196]一実施形態では、ウイルスは、ＵＶで不活性化されている。
【０１７４】
[00197]一実施形態では、少なくとも１つの抗原タンパク質は、合成ペプチドを含む。一実施形態では、合成ペプチドは、長鎖合成ペプチドを含む。少なくとも１つの抗原タンパク質は、アミノ酸長８〜２５０であってもよい。この範囲内で、それは、アミノ酸長少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０又は少なくとも５０であってもよい。これらすべての適用可能な範囲のなかでも、アミノ酸長は、２００未満、１５０未満、１２５未満、１００未満、７５未満、５０未満、４０未満又は３０未満であってもよい。述べられた上限及び下限の任意の組合せが予測される。
【０１７５】
[00198]免疫原性組成物
【０１７６】
[00199]一態様では、腫瘍溶解性ウイルス及び少なくとも１つの抗原タンパク質を含む免疫原性組成物であって、少なくとも１つの抗原タンパク質は腫瘍溶解性ウイルスによってコードされていない、免疫原性組成物が提供される。
【０１７７】
[00200]一実施形態では、少なくとも１つの抗原タンパク質は、少なくとも１つの腫瘍関連抗原に基づく。
【０１７８】
[00201]一実施形態では、少なくとも１つの腫瘍関連抗原は、哺乳動物対象の腫瘍のミュータノームに基づく。
【０１７９】
[00202]一実施形態では、少なくとも１つの抗原タンパク質は、複数の抗原タンパク質を含む。
【０１８０】
[00203]一実施形態では、複数の抗原タンパク質は、哺乳動物対象の腫瘍のミュータノームに基づく。
【０１８１】
[00204]一実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、ラブドウイルスである。ラブドウイルスは、上に列挙されたもののいずれかであってもよい。
【０１８２】
[00205]一実施形態では、ラブドウイルスは、マラバウイルス又はその操作されたバリアントである。
【０１８３】
[00206]一実施形態では、ウイルスは、弱毒化ウイルスである。
【０１８４】
[00207]一実施形態では、弱毒化ウイルスは、アミノ酸２４２が変異されているマラバＧタンパク質及びアミノ酸１２３が変異されているマラバＭタンパク質を含む弱毒化マラバウイルスである。一実施形態では、Ｇタンパク質のアミノ酸２４２はアルギニン（Ｑ２４２Ｒ）であり、Ｍタンパク質のアミノ酸１２３はトリプトファン（Ｌ１２３Ｗ）である。マラバＭタンパク質の一例は、国際出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１０／００３３９６に記載されており、配列番号４と称されている。マラバＧタンパク質の一例は、国際出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１０／００３３９６に記載されており、配列番号５と称されている。一実施形態では、ブーストのウイルスは、国際出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１０／００３３９６に記載されているマラバ二重変異体（「マラバＤＭ」）である。一実施形態では、ブーストのウイルスは、国際出願ＰＣＴ／ＣＡ２０１４／０５０１１８に記載されている「マラバＭＧ１」である。
【０１８５】
[00208]一実施形態では、ウイルスは、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、麻疹ウイルス又は水疱性口内炎ウイルスである。
【０１８６】
[00209]一実施形態では、ブーストのウイルスは、アデノウイルス、ワクシニアウイルス又は水疱性口内炎ウイルスである。
【０１８７】
[00210]一実施形態では、ウイルスは、不活性化されている。
【０１８８】
[00211]一実施形態では、ウイルスは、ＵＶで不活性化されている。
【０１８９】
[00212]一実施形態では、少なくとも１つの抗原タンパク質は、合成ペプチドを含む。一実施形態では、合成ペプチドは、長鎖合成ペプチドを含む。少なくとも１つの抗原タンパク質は、アミノ酸長８〜２５０であってもよい。この範囲内で、それは、アミノ酸長少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０又は少なくとも５０であってもよい。これらすべての適用可能な範囲のなかでも、アミノ酸長は、２００未満、１５０未満、１２５未満、１００未満、７５未満、５０未満、４０未満又は３０未満であってもよい。述べられた上限及び下限の任意の組合せが予測される。
【実施例】
【０１９０】
[00214]材料及び方法
【０１９１】
[00215]細胞株及び培養
【０１９２】
[00216]オボアルブミンを安定に発現しているＢ１６Ｆ１０をＲｅｂｅｃｃａ  Ａｕｅｒ博士から得た。Ｖｅｒｏ、ＨＥＫ  ２９３Ｔ及びＨｅＬａ細胞をＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）からすべて得た。細胞株を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）（Ｓｉｇｍａ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）を補充したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｅｌｌｇｒｏ）で維持し、３７℃、５％ＣＯ２で培養した。
【０１９３】
[00217]ウイルス、産生及び定量
【０１９４】
[00218]この研究で使用したマラバ（ＭＲＢ）ウイルスは、臨床候補バリアントＭＧ１であり、続く本文における「ＭＲＢ」への言及は、ＭＧ１を意味するとして理解されるべきである。この研究で使用した水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）は、変異体Δ５１である。ＶＳＶ及びＭＲＢの産生及び精製：Ｖｅｒｏ細胞を、培養物上清の採取、ろ過［０．２２μｍボトルトップフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）］及び遠心分離（９０分間、３０１００ｇ）の前に０．０１の感染多重度（ＭＯＩ）で２４時間感染させた。沈殿物をダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｅｌｌｇｒｏ）に再懸濁し、−８０℃で保存した。ウイルス力価をプラークアッセイによって決定した。簡潔には、系列希釈した試料を単層のＶｅｒｏ細胞に移し、１時間インキュベートし、次に１０％ＦＢＳを補充した０．５％アガロース／ＤＭＥＭを用いて重層した。２４時間後にプラークを計数した。
【０１９５】
[00219]この研究で使用したアデノウイルス（Ａｄ）（Ａｄ、Ａｄ−Ｏｖａ及びＡｄ−ＤＣＴ）は、Ｂ．Ｌｉｃｈｔｙからすべて得た（すべて血清型Ｅ５）。Ａｄの産生及び精製：ＨＥＫ  ２９３Ｔ細胞を、２％ＦＢＳを補充したＤＭＥＭ中で１のＭＯＩで４８時間感染させた。次いで感染細胞を回収し、沈殿物を３サイクル凍結融解した。次いでデブリを遠心分離によって除去し、清明化した上清を塩化セシウムグラジエント（１．４ｇ／ｃｍ３  ＣｓＣｌ〜１．２ｇ／ｃｍ３  ＣｓＣｌ）上で２８０００ｒｍｐ、３．５時間、４℃で遠心分離した。次にＡｄ粒子に対応するバンドを抽出し、ウイルスを−２０℃で保存した。ウイルス力価をＡｄｅｎｏ−Ｘラピッドタイターキットを製造者のプロトコール（Ｔａｋａｒａ）に従って使用して得た。
【０１９６】
[00220]この研究で使用したワクシニアウイルス（ＶＶ）は、野生型コペンハーゲン株である。
【０１９７】
[00221]この研究で使用し、ＧＦＰを発現する麻疹ウイルス（ＭＶ）（シュワーツ株）は、寛大にもＧｕｙ  Ｕｎｇｅｒｅｃｈｔｓ博士から贈られたものであった。
【０１９８】
[00222]照射されたウイルス
【０１９９】
[00223]マラバは、以前の記載（３５）のとおりスペクトロリンカーＸＬ−１０００  ＵＶクロスリンカー（Ｓｐｅｃｔｒｏｌｉｎｋｅｒ  ＸＬ−１０００  ＵＶ  ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｅｒ）を使用する１２０  ｍＪ／ｃｍ２、２分間への曝露によってＵＶ不活性化した。
【０２００】
[00224]フローサイトメトリー
【０２０１】
[00225]脾臓を採取し、ＡＣＫ溶解緩衝液を使用する赤血球の溶解前に７０μｍストレーナー（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を通してすりつぶし、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ、３％ＦＢＳ）に再懸濁した。脾細胞をｅｘ−ｖｉｖｏで２μｇ／ｍＬの対応するペプチドを使用して再刺激し、１時間後にゴルジプラグ（ｇｏｌｇｉ−ｐｌｕｇ）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を混合物に加え、さらに５時間サイトカイン分泌を妨げた。細胞をＣＤ４５、ＣＤ３、ＣＤ８、ＴＮＦα及びＩＦＮγ抗体（すべてＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅから）を使用して染色した。細胞内染色を細胞の固定及び透過処理で実施した（細胞内固定及び透過化バッファーセット（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用）。フローサイトメトリー分析をＬＳＲフォルテッサ（Ｆｏｒｔｅｓｓａ）フローサイトメーター（ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で実施した。
【０２０２】
[00226]ペプチド
【０２０３】
[00227]すべてのペプチドはＢｉｏｍｅｒ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから得た、表１に示すアミノ酸配列を有する。
【０２０４】
【表１】
2021514381.tif 000003
【０２０５】
[00228]ＥＬＩＳＰＯＴ
【０２０６】
[00229]マウスＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴ（ＭａｂＴｅｃｈ）を最後の免疫化の７日後に抽出した脾細胞を使用して、製造者のプロトコールに従って実施した。インキュベーションを２４時間、無血清ＤＭＥＭ中で再刺激のために２μｇ／ｍＬのペプチドを使用して実施した。
【０２０７】
[00230]ｉｎ  ｖｉｖｏ実験及び腫瘍モデル
【０２０８】
[00231]すべての実験は、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｏｔｔａｗａ  ＡＣＶＳガイドラインに従って実施した。皮下腫瘍モデル：１０６又は１０５個のＢ１６Ｆ１０−Ｏｖａ細胞を、ＳＣ及び肺がんモデルのためにそれぞれ６〜８週齢のメスＣ５７／Ｂｌ６マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の左側腹部に又はＩＶ注射した。ＣＴ２６  ＳＣ腫瘍モデルについて、細胞１０６個をＢａｌｂ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の左側腹部に注射した。Ａｄ（１×１０８ＰＦＵ）を四頭筋に筋肉内投与し、ＭＲＢ、ＶＳＶ、ＭＶ及びＶＶ（すべて１×１０８ＰＦＵの用量）をマウスの尾静脈を介して静脈内投与（他に特に示さない限り）した。ポリＩ：ＣはＩｎｖｉｖｏｇｅｎから購入し、免疫化あたり、動物あたり用量５０ｕｇを使用した。ペプチド（１００ｕｇ／マウス／免疫化）を合計１００ｕＬでの注射の前にさまざまなウイルスと又はポリＩ：Ｃと予め混合した。免疫プライミング及びブースティングを腫瘍接種後７日目及び１４日目に実施し、免疫分析を最後の免疫化の７日後に実施した。いくつかのペプチドを使用する実験のために（図２０〜２４）、合計用量１００ｕｇのペプチドを免疫化あたりに使用した。有効性実験のために、腫瘍を電子キャリパーを使用して経時的に測定した。
【０２０９】
[00232]結果及び考察
【０２１０】
[00233]これらの実験では、ＭＲＢはＭＧ１を表している。行ったすべての実験は、腫瘍保有動物である。プライムは、７日目の免疫化として理解され、ブーストは１４日目に実施した。
【０２１１】
[00234]結果は免疫応答を刺激するために抗原タンパク質がウイルスによってコードされている必要はないことを示している。
【０２１２】
[00235]ウイルスは、免疫ブースティングのためのアジュバントとして使用することができる。
【０２１３】
[00236]図１は、この研究において使用した処置スケジュールの模式図を示している。
【０２１４】
[00237]図２は、ＤＣＴペプチドを発現するアデノウイルス（Ａｄ）（「Ａｄ−ＤＣＴ」と称される）を用いてプライムし、ＤＣＴペプチドを発現するマラバウイルスＭＧ１（「ＭＲＢ−ＤＣＴ」と称される）又はＤＣＴペプチドと同時投与してＭＲＢ（「ＭＲＢ＋ＤＣＴ」と称される、「＋」はウイルスによってコードされていない又はその一部でないペプチドの同時投与を示す）を用いてブーストしたマウスから２１日目に採取した脾細胞のＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴ分析を示している。
【０２１５】
[00238]図２の結果は、Ａｄ−ＤＣＴが単独でＤＣＴへの免疫応答を誘導することを示している（左から２番目の群）。ＭＲＢ＋ＤＣＴを使用する免疫ブースティング（一番右側の群）は、この免疫応答をＭＲＢ−ＤＣＴに匹敵するレベルに改善する（左から３番目の群）。したがって図２は、ＭＲＢ＋ＤＣＴが異種ウイルスプライムブースト設定においてブーストとしてＭＲＢ−ＤＣＴと同様に良好であることを示している。ＭＲＢコード抗原ペプチドに対する必要性はない。他に示さない限り、統計は、条件「再刺激なし」と「ＤＣＴ再刺激」との間の比較を指す。ＮＳ：ｐ＞０．０５、＊＊＊：ｐ＜０．００１（対応のない複数の両側ｔ検定）
【０２１６】
[00239]図３は、Ａｄ−Ｏｖａを用いてプライムし、ＭＲＢ−Ｏｖａを用いて又はＯｖａペプチドを同時投与してＭＲＢ（ＭＲＢ＋Ｏｖａ）を用いてブーストした、マウスから２１日目に採取した脾細胞のＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴ分析を示している。結果は、Ａｄ−Ｏｖａが単独でＯｖａへの免疫応答を誘導する（左から２番目の群）ことを示している。この免疫応答は、Ｏｖａペプチド単独のＩＶ注射によってブーストできなかった（左から３番目の群）。ＭＲＢ−Ｏｖａを使用する免疫ブースティングは、この免疫応答（最後の群）を、Ｏｖａペプチドを同時投与したＭＲＢ（左から４番目の群）に匹敵するレベルに改善する。図３は、ＭＲＢ＋Ｏｖａが異種ウイルスプライムブースト設定におけるブーストとしてＭＲＢ−Ｏｖａと同様に良好であることを示しており、図２でのＤＣＴにおける上の結果を確認している。他に示さない限り、統計は、条件「再刺激なし」と「Ｏｖａ再刺激」との間の比較を指す。ＮＳ：ｐ＞０．０５、＊＊＊：ｐ＜０．００１（対応のない複数の両側ｔ検定）
【０２１７】
[00240]図４は、図３においてと同じ実験からのフローサイトメトリー分析を示している。再度結果は、Ａｄ−Ｏｖａが単独でＯｖａへの免疫応答を誘導する（左から２番目の群）ことを示している。この免疫応答は、Ｏｖａペプチド単独のＩＶ注射によってブーストされ得なかった（左から３番目の群）。ＭＲＢ−Ｏｖａを使用する免疫ブースティングは、この免疫応答（最後の群）を、Ｏｖａを同時投与したＭＲＢ（左から４番目の群）に匹敵するレベルに改善する。したがって図４は、ＭＲＢ＋Ｏｖａが異種ウイルスプライムブースト設定におけるブーストとしてＭＲＢ−Ｏｖａと同様に良好であることを確認している（ＤＣＴについて見られた結果を別のペプチドの観点から再度確認している）。他に示さない限り、統計は、条件「再刺激なし」と「Ｏｖａ再刺激」との間の比較を指す。ＮＳ：ｐ＞０．０５、＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１（対応のない複数の両側ｔ検定）
【０２１８】
[00241]図５は、異なる経路（ＩＶ、ＩＴ又はＩＭ）を使用して、Ａｄ−ＤＣＴを用いてプライムし、ＤＣＴペプチドを同時投与してＭＲＢを用いてブーストしたマウスから２１日目に採取した脾細胞のＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴ分析を示している。結果は、すべての投与の経路のＭＲＢ＋ペプチドが同等の免疫応答を誘導することを示している。他に示さない限り、統計は、条件「再刺激なし」と「ＤＣＴ再刺激」との間の比較を指す。ＮＳ：ｐ＞０．０５、＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１（対応のない複数の両側ｔ検定）
【０２１９】
[00242]図６は、Ａｄ−ＤＣＴを用いてプライムし、ＤＣＴペプチドを同時投与してＭＲＢ又はＵＶ不活性化ＭＲＢ（ＵＶＭＲＢ）のいずれかを用いてブーストしたマウスから２１日目に採取した脾細胞のＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴ分析を示す図である。結果は、ＭＲＢ（左から３番目の群）及びＵＶ不活性化ＭＲＢ（ＵＶＭＲＢ）（最も右の群）の両方が同等の免疫ブースティングをもたらしたことを示している。したがって図６は、アジュバント設定において抗原特異的免疫応答をブーストするためにＭＲＢが複製する（又は腫瘍溶解性である）必要は無いことを示している。他に示さない限り、統計は、条件「再刺激なし」と「ＤＣＴ再刺激」との間の比較を指す。ＮＳ：ｐ＞０．０５、＊：ｐ＜０．０５、＊＊＊：ｐ＜０．００１（対応のない複数の両側ｔ検定）
【０２２０】
[00243]他の腫瘍溶解性ウイルス（ＯＶ）も免疫プライミング又はブースティングのためにアジュバントとして使用され得る。
【０２２１】
[00244]図７は、Ａｄ−ＤＣＴを用いてプライムし、ＤＣＴペプチドを同時投与してＶＶ、ＶＳＶ又はＭＶのいずれかを用いてブーストしたマウスから２１日目に採取した脾細胞のＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴ分析を示している。結果は、Ａｄ−ＤＣＴが単独でＤＣＴへの免疫応答を誘導する（左から２番目の群）ことを示している。この免疫応答は、ＤＣＴペプチドと合わせたＶＶ（左から３番目の群）又はＶＳＶ（左から４番目の群）の同時投与によって効率的にブーストされ得るが、ＭＶ（最後の群）ではされない。この図は、ＶＳＶ及びＶＶも免疫ブースティングのためのアジュバントとして使用され得ることを示している。統計は、条件「再刺激なし」と「ＤＣＴ再刺激」との間の比較を指す。ＮＳ：ｐ＞０．０５、＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１（対応のない複数の両側ｔ検定）
【０２２２】
[00245]図８は、Ａｄ−ＤＣＴ又は、ＤＣＴペプチドを同時投与してＡｄ若しくはポリＩ：Ｃを用いてプライムした（すべてＩＭ）マウスから１４日目に採取した脾細胞のＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴ分析を示している。結果は、Ａｄ（左から３番目の群）又はポリＩ：Ｃ（最後の群）とのＤＣＴペプチドの同時投与が、Ａｄ−ＤＣＴ（左から２番目の群）と同等のプライミング効率を与えること示している。この図は、Ａｄがプライム抗腫瘍免疫へのアジュバントとして使用され得ることを示している。統計は、条件「再刺激なし」と「ＤＣＴ再刺激」との間の比較を指す。ＮＳ：ｐ＞０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１（対応のない複数の両側ｔ検定）。
【０２２３】
[00246]図９は、Ａｄ−ＤＣＴを用いてプライムし、ＭＲＢ−ＤＣＴ又はＤＣＴペプチドを同時投与してＭＲＢを用いてブーストしたマウスから２１日目に採取した脾細胞のＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴ分析を示している。結果は、ＭＲＢ（左から４番目の群）とのＤＣＴペプチドの同時投与は、先行する免疫プライミングの非存在でＤＣＴ特異的免疫応答を誘導できるが、ＭＲＢ−ＤＣＴ（左から３番目の群）ではできないことを示している。この図は、ＭＲＢも抗腫瘍免疫をプライムするためのアジュバントとして使用できることを示している。統計は、条件「再刺激なし」と「ＤＣＴ再刺激」との間の比較を指す。ＮＳ：ｐ＞０．０５、＊＊＊：ｐ＜０．００１（対応のない複数の両側ｔ検定）
【０２２４】
[00247]図１０は、ＭＲＢ、ＭＲＢ−Ｏｖａ又はＯｖａペプチドを同時投与してＭＲＢを用いてプライムしたマウスから１４日目に採取した脾細胞のＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴ分析を示している。結果は、ＭＲＢとのＯｖａペプチドの同時投与（左から３番目の群）だけが先行する免疫プライミングの非存在でＯｖａ特異的免疫を誘導できることを示している。この図は、ＭＲＢも抗腫瘍免疫をプライムするためのアジュバントとして使用できることを示している。統計は、条件「再刺激なし」と「Ｏｖａ再刺激」との間の比較を指す。ＮＳ：ｐ＞０．０５、＊：ｐ＜０．０５（対応のない複数の両側ｔ検定）
【０２２５】
[00248]ＭＲＢは、ミュータノームエピトープと共にアジュバントとして使用され得る。
【０２２６】
[00249]図１１は、ＤＣＴペプチドと共に又は用いずにＡｄ−Ｏｖａを用いてプライムし、ＤＣＴペプチドと共に又は用いずにＭＲＢ−Ｏｖａを用いてブーストしたマウスから２１日目に採取した脾細胞のＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴ分析を示している。結果は、ペプチドの同時投与がコードされた抗原（Ｏｖａ）に対して誘導された免疫応答を損なわない（最後の群対２番目の群）ことを示している。同様に、Ａｄ−Ｏｖａ及びＭＲＢ−Ｏｖａの両方とのＤＣＴペプチドの同時投与は、ＤＣＴ免疫応答の誘導を可能にし（最後の群）、有効な免疫応答が、プライムウイルス又はブーストウイルスのいずれによってもコードされていないペプチドに生成され得ることを示している。図１１は、抗原をコードしているＡｄ及びＭＲＢプラットホームが、抗腫瘍免疫をプライム及びブーストするための追加的ペプチドと共に使用され得ることも示している。統計は、条件「再刺激なし」と「ペプチド再刺激」との間の比較を指す。ＮＳ：ｐ＞０．０５、＊＊＊：ｐ＜０．００１（対応のない複数の両側ｔ検定）
【０２２７】
[00250]図１２は、確定された皮下Ｂ１６Ｆ１０−Ｏｖａ腫瘍を有し、ポリＩ：Ｃ及び表示のペプチドを用いて７及び１４日目にＩＭ処置したマウスについての結果を示している。腫瘍を２１日目に測定した。腫瘍体積は、対照マウス（ポリＩ：Ｃだけで処置）の平均腫瘍体積との比較である。結果は、Ｂ１６Ｍｕｔ−２０、−３０、−４４及び４８が治療効果を有することを示している。ＮＳ：ｐ＞０．０５、＊＊＊：ｐ＜０．００１（対応のない複数の両側ｔ検定）
【０２２８】
[00251]図１３は、確定された皮下ＣＴ２６腫瘍を有し、ポリＩ：Ｃ及び表示のペプチドを用いて７及び１４日目にＩＭ処置されたマウスについての結果を示している。腫瘍を２１日目に測定した。腫瘍体積は、対照マウス（ポリＩ：Ｃだけで処置）の平均腫瘍体積との比較である。結果は、ＣＴ２６Ｍｕｔ−０２、−２７及び３７が治療効果を有することを示している。ＮＳ：ｐ＞０．０５、＊：ｐ＜０．０５（対応のない複数の両側ｔ検定）
【０２２９】
[00252]図１４は、ＤＣＴペプチドと共にポリＩ：Ｃ又はＭＲＢを用いてプライムした（ＳＣ及びＩＶ）マウスから１４日目に採取した脾細胞のＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴ分析を示している。結果は、すべての経路及びアジュバントがＤＣＴ特異的免疫応答を誘導できたことを示している。重要なことに、最良の投与の経路は、ポリＩ：Ｃ（第１の群）についてはＳＣであり、ＭＲＢ（最後の群）についてはＩＶであった。注目すべきことに、ポリＩ：Ｃ  ＳＣ（第１の群）の免疫プライミング活性をＭＲＢ  ＩＶ（最後の群）と比較した場合に統計的差異はなかった。この図は、ＭＲＢ  ＩＶが、ポリＩ：Ｃ  ＳＣと同様にアジュバントとして良好であることを示している。他に示さない限り、統計は、条件「再刺激なし」と「ＤＣＴ再刺激」との間の比較を指す。ＮＳ：ｐ＞０．０５、＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１（対応のない複数の両側ｔ検定）
【０２３０】
[00253]図１５は、表示のＢ１６Ｍｕｔ  ペプチドと共にポリＩ：Ｃ（ＳＣ）又はＭＲＢ（ＩＶ）を用いてプライムしたマウスから１４日目に採取した脾細胞のＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴ  分析を示している。結果は、検査したすべてのＢ１６Ｍｕｔペプチドについて、ＭＲＢ  ＩＶ（２番目の群）がペプチド特異的免疫応答を誘導することにポリＩ：Ｃ  ＳＣ（第１の群）と同様に効率的であることを示している。この図は、ＭＲＢ  ＩＶがポリＩ：Ｃ  ＳＣと同様にアジュバントとして良好であることを確認している。統計は、条件「再刺激なし」と「ペプチド再刺激」との間の比較を指す。ＮＳ：ｐ＞０．０５、＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１（対応のない複数の両側ｔ検定）
【０２３１】
[00254]図１６は、ＭＲＢが、免疫プライミング又はブースティングのためのアジュバントとして使用され得るが、両方はできないことを示している。Ａｄ−ＤＣＴ又はＤＣＴペプチドと共にＭＲＢを用いてプライムし、ＤＣＴペプチドを同時投与してＭＲＢを用いてブーストしたマウスから２１日目に採取した脾細胞のＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴ分析の結果を示している。結果は、ＤＣＴペプチドを同時投与したＭＲＢが先行する免疫プライミングの非存在でＤＣＴ特異的免疫応答を引き起こすことができる（左から２番目及び３番目の群）ことを再度示している。重要なことに、ペプチドと合わせたＭＲＢの反復投与（７及び１４日目）（左から４番目の群）は、単回投与と比較してＤＣＴ特異的免疫応答を改善しない（左から２番目及び３番目の群）。この図は、ＭＲＢ及びペプチドの単回注射が抗原特異的免疫を誘導することに複数回注射と同様に効率的であることを示している。他に示さない限り、統計は、条件「再刺激なし」と「ＤＣＴ再刺激」との間の比較を指す。ＮＳ：ｐ＞０．０５、＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１（対応のない複数の両側ｔ検定）
【０２３２】
[00255]図１７は、ペプチドと共にＩＭ又はＳＣ投与された場合に、ポリＩ：Ｃがより強い免疫応答を誘導することを示している。次の異なる経路（ＩＰ、ＩＶ、ＩＭ又はＳＣ）によりＤＣＴペプチドを同時投与して、ポリＩ：Ｃを用いてプライムしたマウスから１４日目に採取した脾細胞のＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴ分析の結果を示している。結果はすべての投与の経路のポリＩ：Ｃ及びペプチドがＤＣＴ特異的免疫を誘導することを示している。同様に、最良の結果は、ＩＭ（左から４番目の群）又はＳＣ（最後の群）の投与の経路を使用して得られた。この図は、ポリＩ：Ｃについての投与の最良の経路がＩＭ及びＳＣであることを示している。統計は、条件「再刺激なし」と「ＤＣＴ再刺激」との間の比較を指す。ＮＳ：ｐ＞０．０５、＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１（対応のない複数の両側ｔ検定）
【０２３３】
[00256]図１８は、Ａｄ及びＭＲＢの両方が、異種ウイルスプライムブースト設定においてアジュバントとして使用され得ることを示している。Ａｄ−ＤＣＴ又はＤＣＴペプチドと共にＡｄを用いてプライムし（７日目）、ＭＲＢ−ＤＣＴ又はＤＣＴペプチドを同時投与してＭＲＢを用いてブーストした（１４日目）マウスから２１日目に採取した脾細胞のＩＦＮγ  ＥＬＩＳＰＯＴ分析の結果を示す図である（左グラフ）。右グラフは、ＤＣＴモデルの代わりにＯｖａモデルを用いた実験の反復である。結果は、ＤＣＴ又はＯｖａペプチドと同時投与されたＡｄ及びＭＲＢが、ＤＣＴ又はＯｖａをコードする、Ａｄ及びＭＲＢと同様に効率的に抗原特異的免疫応答を引き起こすことができることを示している。統計は、条件「再刺激なし」と「再刺激」との間の比較を指す。＊＊＊：ｐ＜０．００１（対応のない複数の両側ｔ検定）
【０２３４】
[00257]図１９は、Ａｄ及びＭＲＢの両方が、異種ウイルスプライムブースト設定においてアジュバントとして使用され得、延命効果を与え得ることを示している。Ａｄ又はＤＣＴペプチドと共にＡｄを用いてプライムし（７日目）、ＭＲＢ又はＤＣＴペプチドを同時投与してＭＲＢを用いてブーストした（１４日目）マウスの生存分析を示している。結果は、ＤＣＴペプチドと同時投与したＡｄ及びＭＲＢが動物の生存を延長し、３０％のマウスを治癒できることを示している。統計：ｐ＞０．０５、＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１（マンテルコックス検定）
【０２３５】
[00258]図２０は、Ａｄ及びＭＲＢの両方が、腫瘍特異的変異を標的化する異種ウイルスプライムブースト設定においてアジュバントとして使用され得、Ｂ１６Ｆ１０肺がんモデルに延命効果を与え得ることを示している。Ａｄ又はミュータノームペプチド（Ｂ１６Ｍｕｔ２０、Ｂ１６Ｍｕｔ３０、Ｂ１６Ｍｕｔ４４及びＢ１６Ｍｕｔ４８）と共にＡｄを用いてプライムし（７日目）、ＭＲＢ又はミュータノームペプチド（Ｂ１６Ｍｕｔ２０、Ｂ１６Ｍｕｔ３０、Ｂ１６Ｍｕｔ４４及びＢ１６Ｍｕｔ４８）と同時投与してＭＲＢを用いてブーストした（１４日目）マウスの生存分析を示している。結果は、ミュータノームペプチドと同時投与したＡｄ及びＭＲＢは、動物の生存を延長でき、２０％のマウスを治癒できることを示している。統計：ＮＳ：ｐ＞０．０５、＊＊＊：ｐ＜０．００１（マンテルコックス検定）
【０２３６】
[00259]図２１は、Ａｄ及びＭＲＢの両方が、腫瘍特異的変異を標的化する異種ウイルスプライムブースト設定においてアジュバントとして使用され得、ＣＴ２６  ＳＣモデルに延命効果を与え得ることを示している。Ａｄ又はミュータノームペプチド（ＣＴ２６Ｍｕｔ２０、ＣＴ２６Ｍｕｔ２７及びＣＴ２６Ｍｕｔ３７）と共にＡｄを用いてプライムし（７日目）、ＭＲＢ又はミュータノームペプチド（ＣＴ２６Ｍｕｔ２０、ＣＴ２６Ｍｕｔ２７及びＣＴ２６Ｍｕｔ３７）を同時投与してＭＲＢを用いてブーストした（１４日目）マウスの腫瘍増殖分析を示す。結果は、ミュータノームペプチドと同時投与したＡｄ及びＭＲＢがＳＣ腫瘍の増殖を制御できることを示している。統計：ＮＳ：ｐ＞０．０５、＊＊＊：ｐ＜０．００１（対応のない両側ｔ検定）
【０２３７】
[00260]図２２は、Ａｄ及びＭＲＢの両方が腫瘍特異的変異を標的化する異種ウイルスプライムブースト設定においてアジュバントとして使用され得、ＣＴ２６  ＳＣモデルに延命効果を与え得ることを示している。これは、図２１の実験についての生存分析を示す。Ａｄ又はミュータノームペプチド（ＣＴ２６Ｍｕｔ２０、ＣＴ２６Ｍｕｔ２７及びＣＴ２６Ｍｕｔ３７）と共にＡｄを用いてプライムし（７日目）、ＭＲＢ又はミュータノームペプチド（ＣＴ２６Ｍｕｔ２０、ＣＴ２６Ｍｕｔ２７及びＣＴ２６Ｍｕｔ３７）を同時投与してＭＲＢを用いてブーストした（１４日目）マウスの生存率を示す。結果は、ミュータノームペプチドと同時投与されたＡｄ及びＭＲＢが動物の生存を延長でき、２０％を超えるマウスを治癒できることを示している。統計：ＮＳ：ｐ＞０．０５、＊＊＊：ｐ＜０．００１（マンテルコックス検定）
【０２３８】
[00261]図２３は、ＯｖａをコードしているＡｄ及びＭＲＢの両方が腫瘍特異的変異を標的化する異種ウイルスプライムブースト設定においてアジュバントとして使用され得、Ｂ１６Ｆ１０−Ｏｖａ  ＳＣモデルに延命効果を与え得ることを示している。Ａｄ−Ｏｖａ又はミュータノームペプチド（Ｂ１６Ｍｕｔ２０、Ｂ１６Ｍｕｔ３０、Ｂ１６Ｍｕｔ４４及びＢ１６Ｍｕｔ４８）と共にＡｄ−Ｏｖａを用いてプライムし（７日目）、ＭＲＢ−Ｏｖａ又はミュータノームペプチド（Ｂ１６Ｍｕｔ２０、Ｂ１６Ｍｕｔ３０、Ｂ１６Ｍｕｔ４４及びＢ１６Ｍｕｔ４８）を同時投与してＭＲＢ−Ｏｖａを用いてブーストした（１４日目）マウスの腫瘍増殖分析を示す。結果は、ミュータノームペプチドを同時投与したＡｄ−Ｏｖａ及びＭＲＢ−ＯｖａがＳＣ腫瘍の増殖を制御できることを示している。統計：＊：ｐ＜０．０５、＊＊＊：ｐ＜０．００１（対応のない両側ｔ検定）
【０２３９】
[00262]図２４は、Ａｄ−Ｏｖａ及びＭＲＢ−Ｏｖａの両方が腫瘍特異的変異を標的化する異種ウイルスプライムブースト設定においてアジュバントとして使用され得、Ｂ１６Ｆ１０−Ｏｖａ  ＳＣモデルに延命効果を与え得ることを示している。これは、図２３の実験についての生存分析である。Ａｄ−Ｏｖａ又はミュータノームペプチド（Ｂ１６Ｍｕｔ２０、Ｂ１６Ｍｕｔ３０、Ｂ１６Ｍｕｔ４４及びＢ１６Ｍｕｔ４８）と共にＡｄ−Ｏｖａを用いてプライムし（７日目）、ＭＲＢ−Ｏｖａ又はミュータノームペプチド（Ｂ１６Ｍｕｔ２０、Ｂ１６Ｍｕｔ３０、Ｂ１６Ｍｕｔ４４及びＢ１６Ｍｕｔ４８）を同時投与してＭＲＢ−Ｏｖａを用いてブーストした（１４日目）マウスの生存率を示す。結果は、ミュータノームペプチドを同時投与したＡｄ−Ｏｖａ及びＭＲＢ−Ｏｖａが延命効果を与え得ることを示している。統計：＊＊＊：ｐ＜０．００１（マンテルコックス検定）
【０２４０】
[00263]先の記載において、説明の目的のために、実施形態の完全な理解を提供するための多くの詳細が記載されている。しかし、これらの具体的な詳細が要求されないことは当業者に明らかである。他の場合では、十分周知の電気的構造及び回路は、理解を不明瞭にしないためにブロック図の形態で示される。例えば、具体的な詳細は、本明細書に記載される実施形態がソフトウェアルーチン、ハードウエア回路、ファームウエア又はこれらの組合せとして実装されるかどうかについては、提供されない。
【０２４１】
[00264]本開示の実施形態は、機械可読媒体（コンピューター可読媒体、プロセッサー可読媒体又は、そこで具現化されるコンピューター可読プログラムコードを有するコンピューター使用可能媒体とも称される）に保存されるコンピュータープログラム製品として表され得る。機械可読媒体は、ディスケット、コンパクトディスク読み出し専用メモリー（ＣＤ−ＲＯＭ）、メモリーデバイス（揮発性又は非揮発性）若しくは同様のストレージ機構を含む、磁気的、光学的又は電気的保存媒体を含む、任意の好適な有形の非一時的な媒体であり得る。機械可読媒体は、実行する場合に、本開示の実施形態による方法におけるステップを実施するためのプロセッサーをもたらす、種々のセットの命令、符号系列、構成情報又は他のデータを含有することができる。当業者は、記載されているインプリメンテーションを実装するために必要な他の命令及び演算も機械可読媒体に保存され得ることを理解する。機械可読媒体に保存されている命令は、プロセッサー又は他の好適な処理デバイスによって実行され得、記載されているタスクを実施するために回路とインターフェースできる。
【０２４２】
[00265]上に記載される実施形態は、例である目的だけである。変更、改変及び変動は当業者によって具体的な実施形態にもたらされ得る。特許請求の範囲は、本明細書に記載される具体的な実施形態によって限定されるべきでなく、明細書全体と一致する様式で解釈されるべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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