(57)【要約】  本発明は、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を処置するための組成物及び方法を提供する。本発明は、ＢＣＭＡに特異的なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、それをコードするベクター及びＢＣＭＡ  ＣＡＲを含む組換えＴ細胞にも関する。本発明は、ＢＣＭＡ結合ドメインを含むＣＡＲを発現する遺伝子改変Ｔ細胞を投与する方法も含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする単離核酸分子であって、前記ＣＡＲは、抗ＢＣＭＡ結合ドメイン（例えば、ヒト抗ＢＣＭＡ結合ドメイン）、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）並びに軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、
（ｉ）それぞれ配列番号８６、１３０、８８、９５、１３１及び１３２；
（ｉｉ）それぞれ配列番号４４、４５、８４、５４、５５及び５６；又は
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号１７９、１８０、１８１、１４７、１８２及び１８３
のアミノ酸配列を含む、単離核酸分子。
【請求項２】
抗ＢＣＭＡ結合ドメイン（例えば、ヒト抗ＢＣＭＡ結合ドメイン）、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む単離ＣＡＲであって、前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）を含み、前記ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、
（ｉ）それぞれ配列番号８６、１３０、８８、９５、１３１及び１３２；
（ｉｉ）それぞれ配列番号４４、４５、８４、５４、５５及び５６；又は
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号１７９、１８０、１８１、１４７、１８２及び１８３
のアミノ酸配列を含む、単離ＣＡＲ。
【請求項３】
前記ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号８６、１３０、８８、９５、１３１及び１３２のアミノ酸配列を含む、請求項１又は２に記載の単離核酸分子又はＣＡＲ。
【請求項４】
前記ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、
（ｉ）それぞれ配列番号８６、８７、８８、９５、９６及び９７；
（ｉｉ）それぞれ配列番号８６、１０９、８８、９５、１１４及び１１５；又は
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号８６、１０９、８８、９５、１１４及び９７
のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の単離核酸分子又はＣＡＲ。
【請求項５】
前記ＶＨは、配列番号９３若しくは１１２のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３又は４に記載の単離核酸分子又はＣＡＲ。
【請求項６】
前記ＶＨをコードする核酸配列を含み、前記核酸配列は、配列番号２６０、９４若しくは１１３の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項３〜５のいずれか一項に記載の単離核酸分子。
【請求項７】
前記ＶＬは、配列番号１０２、１１８若しくは１２４のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３〜６のいずれか一項に記載の単離核酸分子又はＣＡＲ。
【請求項８】
前記ＶＬをコードする核酸配列を含み、前記核酸配列は、配列番号２６１、１０３、１１９若しくは１２５の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項３〜７のいずれか一項に記載の単離核酸分子。
【請求項９】
前記ＶＨ及びＶＬは、
（ｉ）それぞれ配列番号９３及び１０２；
（ｉｉ）それぞれ配列番号１１２及び１１８；又は
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号１１２及び１２４
のアミノ酸配列を含む、請求項３〜８のいずれか一項に記載の単離核酸分子又はＣＡＲ。
【請求項１０】
前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、配列番号１０５、１２０若しくは１２６のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む、請求項３〜９のいずれか一項に記載の単離核酸分子又はＣＡＲ。
【請求項１１】
前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、ｓｃＦｖを含み、前記核酸分子は、前記ｓｃＦｖをコードする核酸配列を含み、前記核酸配列は、配列番号２５３、１０６、１２１若しくは１２７の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の単離核酸分子。
【請求項１２】
前記ＣＡＲは、配列番号１０７、１２２若しくは１２８のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３〜１１のいずれか一項に記載の単離核酸分子又はＣＡＲ。
【請求項１３】
配列番号２５９、２５８、１０８、１２３若しくは１２９の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項３〜１２のいずれか一項に記載の単離核酸分子。
【請求項１４】
前記ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号４４、４５、８４、５４、５５及び５６のアミノ酸配列を含む、請求項１又は２に記載の単離核酸分子又はＣＡＲ。
【請求項１５】
前記ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、
（ｉ）それぞれ配列番号４４、４５、７６、５４、５５及び５６；
（ｉｉ）それぞれ配列番号４４、４５、４６、５４、５５及び５６；又は
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号４４、４５、６８、５４、５５及び５６
のアミノ酸配列を含む、請求項１４に記載の単離核酸分子又はＣＡＲ。
【請求項１６】
前記ＶＨは、配列番号７８、５２若しくは７０のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１４又は１５に記載の単離核酸分子又はＣＡＲ。
【請求項１７】
前記ＶＨをコードする核酸配列を含み、前記核酸配列は、配列番号７９、５３若しくは７１の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項１４〜１６のいずれか一項に記載の単離核酸分子。
【請求項１８】
前記ＶＬは、配列番号６１のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１４〜１７のいずれか一項に記載の単離核酸分子又はＣＡＲ。
【請求項１９】
前記ＶＬをコードする核酸配列を含み、前記核酸配列は、配列番号６２の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項１４〜１８のいずれか一項に記載の単離核酸分子。
【請求項２０】
前記ＶＨ及びＶＬは、
（ｉ）それぞれ配列番号７８及び６１；
（ｉｉ）それぞれ配列番号５２及び６１；又は
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号７０及び６１
のアミノ酸配列を含む、請求項１４〜１９のいずれか一項に記載の単離核酸分子又はＣＡＲ。
【請求項２１】
前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、配列番号８０、６４若しくは７２のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む、請求項１４〜２０のいずれか一項に記載の単離核酸分子又はＣＡＲ。
【請求項２２】
前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、ｓｃＦｖを含み、前記核酸分子は、前記ｓｃＦｖをコードする核酸配列を含み、前記核酸配列は、配列番号８１、６５若しくは７３の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項１４〜２１のいずれか一項に記載の単離核酸分子。
【請求項２３】
前記ＣＡＲは、配列番号８２、６６若しくは７４のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１４〜２２のいずれか一項に記載の単離核酸分子又はＣＡＲ。
【請求項２４】
配列番号８３、６７若しくは７５の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項１４〜２３のいずれか一項に記載の単離核酸分子。
【請求項２５】
前記ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１７９、１８０、１８１、１４７、１８２及び１８３のアミノ酸配列を含む、請求項１又は２に記載の単離核酸分子又はＣＡＲ。
【請求項２６】
前記ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、
（ｉ）それぞれ配列番号１３７、１３８、１３９、１４７、１４８及び１４９；又は
（ｉｉ）それぞれ配列番号１６０、１６１、１６２、１４７、１７０及び１７１
のアミノ酸配列を含む、請求項２５に記載の単離核酸分子又はＣＡＲ。
【請求項２７】
前記ＶＨは、配列番号１４５若しくは１６８のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２５又は２６に記載の単離核酸分子又はＣＡＲ。
【請求項２８】
前記ＶＨをコードする核酸配列を含み、前記核酸配列は、配列番号１４６若しくは１６９の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項２５〜２７のいずれか一項に記載の単離核酸分子。
【請求項２９】
前記ＶＬは、配列番号１５４若しくは１７３のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２５〜２８のいずれか一項に記載の単離核酸分子又はＣＡＲ。
【請求項３０】
前記ＶＬをコードする核酸配列を含み、前記核酸配列は、配列番号１５５若しくは１７４の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項２５〜２９のいずれか一項に記載の単離核酸分子。
【請求項３１】
前記ＶＨ及びＶＬは、
（ｉ）それぞれ配列番号１４５及び１５４；又は
（ｉｉ）それぞれ配列番号１６８及び１７３
のアミノ酸配列を含む、請求項２５〜３０のいずれか一項に記載の単離核酸分子又はＣＡＲ。
【請求項３２】
前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、配列番号１５６若しくは１７５のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む、請求項２５〜３１のいずれか一項に記載の単離核酸分子又はＣＡＲ。
【請求項３３】
前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、ｓｃＦｖを含み、前記核酸分子は、前記ｓｃＦｖをコードする核酸配列を含み、前記核酸配列は、配列番号１５７若しくは１７６の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項２５〜３２のいずれか一項に記載の単離核酸分子。
【請求項３４】
前記ＣＡＲは、配列番号１５８若しくは１７７のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２５〜３３のいずれか一項に記載の単離核酸分子又はＣＡＲ。
【請求項３５】
配列番号１５９若しくは１７８の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項２５〜３４のいずれか一項に記載の単離核酸分子。
【請求項３６】
前記ＶＨ及びＶＬは、リンカーによって接続され、任意選択により、前記リンカーは、配列番号６３又は１０４のアミノ酸配列を含む、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の単離核酸分子又はＣＡＲ。
【請求項３７】
（ｉ）前記膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖若しくはゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７又はＣＤ１５４から選択されるタンパク質の膜貫通ドメインを含むか；
（ｉｉ）前記膜貫通ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか；又は
（ｉｉｉ）前記核酸分子は、前記膜貫通ドメインをコードする核酸配列を含み、前記核酸配列は、配列番号１７の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の単離核酸分子又はＣＡＲ。
【請求項３８】
前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、膜貫通ドメインにヒンジ領域によって接続され、任意選択により、
（ｉ）前記ヒンジ領域は、配列番号２、３若しくは４のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか；又は
（ｉｉ）前記核酸分子は、前記ヒンジ領域をコードする核酸配列を含み、前記核酸配列は、配列番号１３、１４若しくは１５の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の単離核酸分子又はＣＡＲ。
【請求項３９】
前記細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達ドメインを含み、任意選択により、
（ｉ）前記一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ、ＴＣＲゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＦｃεＲＩ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２又はＣＤ６６ｄに由来する機能的シグナル伝達ドメインを含むか；
（ｉｉ）前記一次シグナル伝達ドメインは、配列番号９若しくは１０のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか；又は
（ｉｉｉ）前記核酸分子は、前記一次シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列を含み、前記核酸配列は、配列番号２０、配列番号２１若しくは配列番号２５６の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項１〜３８のいずれか一項に記載の単離核酸分子又はＣＡＲ。
【請求項４０】
前記細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激シグナル伝達ドメインを含み、任意選択により、
（ｉ）前記共刺激シグナル伝達ドメインは、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ性活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、Ｂ７−Ｈ３、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒアルファ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２８−ＯＸ４０、ＣＤ２８−４−１ＢＢ又はＣＤ８３と特異的に結合するリガンドに由来する機能的シグナル伝達ドメインを含むか；
（ｉｉ）前記共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか；又は
（ｉｉｉ）前記核酸分子は、前記共刺激シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列を含み、前記核酸配列は、配列番号１８若しくは配列番号２５５の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の単離核酸分子又はＣＡＲ。
【請求項４１】
前記細胞内シグナル伝達ドメインは、４−１ＢＢに由来する機能的シグナル伝達ドメイン及びＣＤ３ゼータに由来する機能的シグナル伝達ドメインを含み、任意選択により、前記細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）及び配列番号９若しくは１０のアミノ酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列）を含み、任意選択により、前記細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列及び配列番号９又は１０のアミノ酸配列を含む、請求項１〜４０のいずれか一項に記載の単離核酸分子又はＣＡＲ。
【請求項４２】
前記ＣＡＲは、配列番号１のアミノ酸配列を含むリーダー配列を更に含む、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の単離核酸分子又はＣＡＲ。
【請求項４３】
前記ＣＡＲは、以下の特性：
（ｉ）前記ＣＡＲは、細胞（例えば、Ｔ細胞）で発現される場合、例えば実施例１に記載されるＪＮＬスクリーニングレポーターアッセイによって測定され、例えば図１Ａ又は１Ｃに関して実施例１に記載される方法を使用して評価されるとき、ＢＣＭＡ発現細胞の存在下で前記細胞におけるＮＦＡＴシグナル伝達を活性化すること；
（ｉｉ）前記ＣＡＲは、細胞（例えば、Ｔ細胞）で発現される場合、例えば図３Ａに関して実施例１に記載される方法を使用して評価されるとき、ＢＣＭＡ発現細胞の細胞毒性を誘導すること；及び
（ｉｉｉ）前記ＣＡＲは、細胞（例えば、Ｔ細胞）で発現される場合、例えば図３Ｃに関して実施例１に記載される方法を使用して評価されるとき、ＢＣＭＡ発現細胞の存在下で前記細胞におけるサイトカイン（例えば、ＩＦＮ−γ）の発現を誘導すること
の１つ以上（例えば、１つ、２つ又は全て）を含む、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の単離核酸分子又はＣＡＲ。
【請求項４４】
請求項１又は３〜４３のいずれか一項に記載の核酸分子によってコードされる単離ポリペプチド分子。
【請求項４５】
重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）並びに軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＢＣＭＡ結合ドメインであって、前記ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、
（ｉ）それぞれ配列番号８６、１３０、８８、９５、１３１及び１３２；
（ｉｉ）それぞれ配列番号４４、４５、８４、５４、５５及び５６；又は
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号１７９、１８０、１８１、１４７、１８２及び１８３
のアミノ酸配列を含む、抗ＢＣＭＡ結合ドメイン。
【請求項４６】
前記ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、
（ｉ）それぞれ配列番号８６、８７、８８、９５、９６及び９７；
（ｉｉ）それぞれ配列番号４４、４５、７６、５４、５５及び５６；
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号８６、１０９、８８、９５、１１４及び１１５；
（ｉｖ）それぞれ配列番号８６、１０９、８８、９５、１１４及び９７；
（ｖ）それぞれ配列番号４４、４５、４６、５４、５５及び５６；
（ｖｉ）それぞれ配列番号４４、４５、６８、５４、５５及び５６；
（ｖｉｉ）それぞれ配列番号１３７、１３８、１３９、１４７、１４８及び１４９；又は
（ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号１６０、１６１、１６２、１４７、１７０及び１７１
のアミノ酸配列を含む、請求項４５に記載の抗ＢＣＭＡ結合ドメイン。
【請求項４７】
前記ＶＨ及びＶＬは、
（ｉ）それぞれ配列番号９３及び１０２；
（ｉｉ）それぞれ配列番号７８及び６１；
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号１１２及び１１８；
（ｉｖ）それぞれ配列番号１１２及び１２４；
（ｖ）それぞれ配列番号５２及び６１；
（ｖｉ）それぞれ配列番号７０及び６１；
（ｖｉｉ）それぞれ配列番号１４５及び１５４；又は
（ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号１６８及び１７３
のアミノ酸配列を含む、請求項４５又は４６に記載の抗ＢＣＭＡ結合ドメイン。
【請求項４８】
請求項１若しくは３〜４３のいずれか一項に記載の核酸分子又は請求項２〜５、７、９、１０、１２、１４〜１６、１８、２０、２１、２３、２５〜２７、２９、３１、３２、３４若しくは３６〜４３のいずれか一項に記載のＣＡＲをコードする核酸分子を含むベクターであって、任意選択により、ＤＮＡベクター、ＲＮＡベクター、プラスミド、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター又はレトロウイルスベクターから選択されるベクター。
【請求項４９】
配列番号１１の核酸配列を含むＥＦ−１プロモーターを更に含む、請求項４８に記載のベクター。
【請求項５０】
請求項１若しくは３〜４３のいずれか一項に記載の核酸分子、請求項２〜５、７、９、１０、１２、１４〜１６、１８、２０、２１、２３、２５〜２７、２９、３１、３２、３４若しくは３６〜４３のいずれか一項に記載のＣＡＲ、請求項４４に記載のポリペプチド分子又は請求項４８若しくは４９に記載のベクターを含む細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）
【請求項５１】
細胞を作製する方法であって、請求項４８又は４９に記載のベクターで細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を形質導入することを含む方法。
【請求項５２】
ＲＮＡ操作細胞を作製する方法であって、インビトロで転写されたＲＮＡ又は合成ＲＮＡを細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）に導入することを含み、前記ＲＮＡは、請求項１若しくは３〜４３のいずれか一項に記載の核酸分子又は請求項２〜５、７、９、１０、１２、１４〜１６、１８、２０、２１、２３、２５〜２７、２９、３１、３２、３４若しくは３６〜４３のいずれか一項に記載のＣＡＲをコードする核酸分子を含む、方法。
【請求項５３】
対象において抗腫瘍免疫を提供する方法であって、前記対象に、請求項５０に記載の細胞の有効量を投与することを含む方法。
【請求項５４】
ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法であって、前記対象に、請求項５０に記載の細胞の有効量を投与することを含む方法。
【請求項５５】
前記細胞は、自己Ｔ細胞又は同種異系Ｔ細胞である、請求項５３又は５４に記載の方法。
【請求項５６】
ＢＣＭＡ発現に関連する前記疾患は、
（ｉ）癌若しくは悪性腫瘍又は骨髄異形成、骨髄異形成症候群若しくは前白血病の１つ以上から選択される前癌状態、又は
（ｉｉ）ＢＣＭＡの発現に関連する非癌関連適応症
である、請求項５４又は５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記疾患は、血液癌又は固形癌である、請求項５４〜５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
前記疾患は、急性白血病、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、有毛細胞白血病、小細胞型又は大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ増殖性疾患、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽細胞リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、前立腺癌（例えば、去勢抵抗性若しくは治療抵抗性の前立腺癌又は転移性前立腺癌）、膵臓癌、肺癌、形質細胞増殖性障害（例えば、無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無痛性骨髄腫）、意義不明の単クローン性高ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、形質細胞腫（例えば、形質細胞異常増殖症、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外形質細胞腫及び多発性形質細胞腫）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス又はＰＯＥＭＳ症候群（クロウ・深瀬症候群、高月病及びＰＥＰ症候群としても知られる））或いはそれらの組み合わせから選択される、請求項５４〜５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
前記疾患は、多発性骨髄腫である、請求項５４〜５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
前記対象に第２の治療剤を投与することを更に含み、任意選択により、前記第２の治療剤は、
（ｉ）ＰＤ−１阻害剤であって、任意選択により、ＰＤＲ００１、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０、ＲＥＧＮ２８１０、ＴＳＲ−０４２、ＰＦ−０６８０１５９１及びＡＭＰ−２２４からなる群から選択されるＰＤ−１阻害剤；
（ｉｉ）ＰＤ−Ｌ１阻害剤であって、任意選択により、ＦＡＺ０５３、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ及びＢＭＳ−９３６５５９からなる群から選択されるＰＤ−Ｌ１阻害剤；
（ｉｉｉ）ＬＡＧ−３阻害剤であって、任意選択により、ＬＡＧ５２５、ＢＭＳ−９８６０１６、ＴＳＲ−０３３、ＭＫ−４２８０及びＲＥＧＮ３７６７からなる群から選択されるＬＡＧ−３阻害剤；
（ｉｖ）ＴＩＭ−３阻害剤であって、任意選択により、ＭＢＧ４５３、ＴＳＲ−０２２及びＬＹ３３２１３６７からなる群から選択されるＴＩＭ−３阻害剤；
（ｖ）ＣＴＬＡ−４阻害剤であって、任意選択により、イピリムマブ又はトレメリムマブであるＣＴＬＡ−４阻害剤；
（ｖｉ）インターロイキン−１５（ＩＬ−１５）ポリペプチド、インターロイキン−１５受容体アルファ（ＩＬ−１５Ｒａ）ポリペプチド又はＩＬ−１５ポリペプチド及びＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの両方の組み合わせ、例えばｈｅｔＩＬ−１５；
（ｖｉｉ）インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）ポリペプチド；又は
（ｖｉｉｉ）ｍＴＯＲ阻害剤であって、任意選択により、ＲＡＤ００１又はラパマイシンであるｍＴＯＲ阻害剤
から選択される、請求項５３〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本願は、その内容が全体として参照により本明細書に組み込まれる、２０１８年６月１３日に出願された米国特許出願第６２／６８４，６２８号明細書及び２０１９年４月１２日に出願された米国特許出願第６２／８３２，９９１号明細書に対する優先権を主張する。
【０００２】
配列表
本願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０１９年６月１１日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、Ｎ２０６７−７１５５ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、サイズが２２８，６０４バイトである。
【０００３】
本発明は、概して、Ｂ細胞成熟抗原タンパク質（ＢＣＭＡ）の発現に関連する疾患を処置するための、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）は、腫瘍壊死ファミリー受容体（ＴＮＦＲ）メンバーが発現するＢ細胞系統の細胞である。ＢＣＭＡの発現は、最終分化したＢ細胞で最も高くなる。ＢＣＭＡは、長期の体液性免疫を維持するために形質細胞の生存を媒介することに関与する。ＢＣＭＡの発現は、近年、多くの癌、自己免疫疾患及び感染性疾患に関連付けられている。ＢＣＭＡの発現の増加を有する癌には、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫、様々な白血病並びに神経膠芽腫などのいくつかの血液癌が含まれる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
一態様において、本発明は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする単離核酸分子を特徴とし、ここで、ＣＡＲは、抗ＢＣＭＡ結合ドメイン（例えば、ヒト抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えば本明細書に記載のヒト抗ＢＣＭＡ結合ドメイン）、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
【０００６】
別の態様において、本発明は、単離ＣＡＲを提供し、ここで、ＣＡＲは、抗ＢＣＭＡ結合ドメイン（例えば、ヒト抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えば本明細書に記載のヒト抗ＢＣＭＡ結合ドメイン）、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
【０００７】
いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメイン（例えば、ヒト抗ＢＣＭＡ結合ドメイン）は、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ結合ドメインの重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）の１つ以上（例えば、３つ全て）並びに／又は本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ結合ドメインの軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）の１つ以上（例えば、３つ全て）を含む。いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、本明細書（例えば、表２、６又は１０）に記載の重鎖可変領域及び／又は本明細書（例えば、表２、６又は１０）に記載の軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、表２、６又は１０のアミノ酸配列の軽鎖及び重鎖を含むｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、本明細書（例えば、表２、６又は１０）に記載のｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、本明細書（例えば、表２、６又は１０）に開示されるＣＡＲ配列を含む。
【０００８】
いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、表２〜１３に記載される任意の抗ＢＭＣＡ重鎖結合ドメインアミノ酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列）のいずれかのＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、表２〜１３に記載される任意の抗ＢＭＣＡ軽鎖結合ドメインアミノ酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列）のいずれかのＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３を含む。
【０００９】
いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３は、表３〜５（例えば、表３〜５の単一の列）に記載されるＨＣ  ＣＤＲ配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列）である。いくつかの実施形態において、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、表３〜５（例えば、表３〜５の単一の列）に記載されるＬＣ  ＣＤＲ配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列）である。いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号４４、４５及び８４のアミノ酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列）を含む。いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３は、（ｉ）それぞれ配列番号４４、４５及び４６のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えないアミノ酸配列；（ｉｉ）それぞれ配列番号４４、４５及び６８のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えないアミノ酸配列；又は（ｉｉｉ）それぞれ配列番号４４、４５及び７６のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えないアミノ酸配列を含む。
【００１０】
いくつかの実施形態において、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号５４、５５及び５６のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えないアミノ酸配列を含む。
【００１１】
いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、（ｉ）それぞれ配列番号４４、４５、４６、５４、５５及び５６又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列；（ｉｉ）それぞれ配列番号４４、４５、６８、５４、５５及び５６又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列；又は（ｉｉｉ）それぞれ配列番号４４、４５、７６、５４、５５及び５６又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列のアミノ酸配列を含む。
【００１２】
いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、配列番号５２、７０若しくは７８のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。
【００１３】
いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、ＶＨを含み、核酸分子は、ＶＨをコードする核酸配列を含み、核酸配列は、配列番号５３、７１若しくは７９の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
【００１４】
いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、配列番号６１のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【００１５】
いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、ＶＬを含み、核酸分子は、ＶＬをコードする核酸配列を含み、核酸配列は、配列番号６２の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
【００１６】
いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、ＶＨ及びＶＬを含み、ＶＨ及びＶＬは、（ｉ）それぞれ配列番号５２及び６１又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列、（ｉｉ）それぞれ配列番号７０及び６１又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列、又は（ｉｉｉ）それぞれ配列番号７８及び６１又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列を含む。
【００１７】
いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、配列番号６４、７２若しくは８０のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列を含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む。いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含み、核酸分子は、ｓｃＦｖをコードする核酸配列を含み、核酸配列は、配列番号６５、７３若しくは８１の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
【００１８】
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６６、７４若しくは８２のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、核酸分子は、配列番号６７、７５若しくは８３の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
【００１９】
いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３は、表７〜９（例えば、表７〜９の単一の列）に記載されるＨＣ  ＣＤＲ配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列）である。いくつかの実施形態において、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、表７〜９（例えば、表７〜９の単一の列）に記載されるＬＣ  ＣＤＲ配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列）である。
【００２０】
いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号８６、１３０及び８８のアミノ酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列）を含む。いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３は、（ｉ）それぞれ配列番号８６、８７及び８８のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えないアミノ酸配列；（ｉｉ）それぞれ配列番号８６、１０９及び８８のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えないアミノ酸配列；又は（ｉｉｉ）それぞれ配列番号８６、１０９及び８８のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えないアミノ酸配列を含む。
【００２１】
いくつかの実施形態において、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号９５、１３１及び１３２のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えないアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、（ｉ）それぞれ配列番号９５、９６及び９７のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えないアミノ酸配列；（ｉｉ）それぞれ配列番号９５、１１４及び１１５のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えないアミノ酸配列；又は（ｉｉｉ）それぞれ配列番号９５、１１４及び９７のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えないアミノ酸配列を含む。
【００２２】
いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、（ｉ）それぞれ配列番号８６、８７、８８、９５、９６及び９７又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列；（ｉｉ）それぞれ配列番号８６、１０９、８８、９５、１１４及び１１５又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列；又は（ｉｉｉ）それぞれ配列番号８６、１０９、８８、９５、１１４及び９７又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列のアミノ酸配列を含む。
【００２３】
いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、配列番号９３若しくは１１２のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、ＶＨを含み、核酸分子は、ＶＨをコードする核酸配列を含み、核酸配列は、配列番号２６０、９４若しくは１１３の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
【００２４】
いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、配列番号１０２、１１８若しくは１２４のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、ＶＬを含み、核酸分子は、ＶＬをコードする核酸配列を含み、核酸配列は、配列番号２６１、１０３、１１９若しくは１２５の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
【００２５】
いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、ＶＨ及びＶＬを含み、ＶＨ及びＶＬは、（ｉ）それぞれ配列番号９３及び１０２又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列、（ｉｉ）それぞれ配列番号１１２及び１１８又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列、又は（ｉｉｉ）それぞれ配列番号１１２及び１２４又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列を含む。
【００２６】
いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、配列番号１０５、１２０若しくは１２６のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列を含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む。いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含み、核酸分子は、ｓｃＦｖをコードする核酸配列を含み、核酸配列は、配列番号２５３、１０６、１２１若しくは１２７の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
【００２７】
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号１０７、１２２若しくは１２８のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、核酸分子は、配列番号２５９、１０８、１２３若しくは１２９の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、核酸分子は、配列番号２５８の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
【００２８】
いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３は、表１１〜１３（例えば、表１１〜１３の単一の列）に記載されるＨＣ  ＣＤＲ配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列）である。いくつかの実施形態において、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、表１１〜１３（例えば、表１１〜１３の単一の列）に記載されるＬＣ  ＣＤＲ配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列）である。
【００２９】
いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１７９、１８０及び１８１のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３は、（ｉ）それぞれ配列番号１３７、１３８及び１３９のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えないアミノ酸配列；又は（ｉｉ）それぞれ配列番号１６０、１６１及び１６２のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えないアミノ酸配列を含む。
【００３０】
いくつかの実施形態において、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１４７、１８２及び１８３のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えないアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、（ｉ）それぞれ配列番号１４７、１４８及び１４９のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えないアミノ酸配列；又は（ｉｉ）それぞれ配列番号１４７、１７０及び１７１のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えないアミノ酸配列を含む。
【００３１】
いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、（ｉ）それぞれ配列番号１３７、１３８、１３９、１４７、１４８及び１４９又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列；又は（ｉｉ）それぞれ配列番号１６０、１６１、１６２、１４７、１７０及び１７１又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列のアミノ酸配列を含む。
【００３２】
いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、配列番号１４５若しくは１６８のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、ＶＨを含み、核酸分子は、ＶＨをコードする核酸配列を含み、核酸配列は、配列番号１４６若しくは１６９の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
【００３３】
いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、配列番号１５４若しくは１７３のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、ＶＬを含み、核酸分子は、ＶＬをコードする核酸配列を含み、核酸配列は、配列番号１５５若しくは１７４の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
【００３４】
いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、ＶＨ及びＶＬを含み、ＶＨ及びＶＬは、（ｉ）それぞれ配列番号１４５及び１５４又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列、又は（ｉｉ）それぞれ配列番号１６８及び１７３又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列を含む。
【００３５】
いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、配列番号１５６若しくは１７５のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列を含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む。いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含み、核酸分子は、ｓｃＦｖをコードする核酸配列を含み、核酸配列は、配列番号１５７若しくは１７６の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
【００３６】
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号１５８若しくは１７７のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、核酸分子は、配列番号１５９若しくは１７８の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
【００３７】
いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、ＶＨ及びＶＬを含み、ＶＨ及びＶＬは、リンカー、例えば本明細書に記載のリンカーによって接続され、任意選択により、リンカーは、配列番号６３若しくは１０４のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００３８】
いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖又はゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７及びＣＤ１５４から選択されるタンパク質の膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、核酸分子は、膜貫通ドメインをコードする核酸配列を含み、核酸配列は、配列番号１７の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
【００３９】
いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、膜貫通ドメインにヒンジ領域によって接続される。いくつかの実施形態において、ヒンジ領域は、配列番号２、３若しくは４のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、核酸分子は、ヒンジ領域をコードする核酸配列を含み、核酸配列は、配列番号１３、１４若しくは１５の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
【００４０】
いくつかの実施形態において、膜貫通ドメイン及びヒンジ領域は、配列番号２０２のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、膜貫通ドメイン及びヒンジ領域は、配列番号２５４の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列によってコードされる。
【００４１】
いくつかの実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達ドメイン、例えば本明細書に記載の一次シグナル伝達ドメインを含み、任意選択により、一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ、ＴＣＲゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＦｃεＲＩ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２又はＣＤ６６ｄに由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、一次シグナル伝達ドメインは、配列番号９若しくは１０のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、核酸分子は、一次シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列を含み、核酸配列は、配列番号２０若しくは２１の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、核酸分子は、一次シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列を含み、核酸配列は、配列番号２５６の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
【００４２】
いくつかの実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激シグナル伝達ドメイン、例えば本明細書に記載の共刺激シグナル伝達ドメインを含み、任意選択により、共刺激シグナル伝達ドメインは、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ性活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、Ｂ７−Ｈ３、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒアルファ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２８−ＯＸ４０、ＣＤ２８−４−１ＢＢ又はＣＤ８３と特異的に結合するリガンドに由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、核酸分子は、共刺激シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列を含み、核酸配列は、配列番号１８の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、核酸分子は、共刺激シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列を含み、核酸配列は、配列番号２５５の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
【００４３】
いくつかの実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、４−１ＢＢに由来する機能的シグナル伝達ドメイン及びＣＤ３ゼータに由来する機能的シグナル伝達ドメインを含み、任意選択により、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列）及び配列番号９若しくは１０のアミノ酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列）を含み、任意選択により、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列及び配列番号９又は１０のアミノ酸配列を含む。
【００４４】
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号１のアミノ酸配列を含むリーダー配列を更に含む。
【００４５】
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、以下の特性：（ｉ）ＣＡＲは、細胞（例えば、Ｔ細胞）で発現される場合、例えば実施例１に記載されるＪＮＬスクリーニングレポーターアッセイによって測定され、例えば図１Ａ又は１Ｃに関して実施例１に記載される方法を使用して評価されるとき、ＢＣＭＡ発現細胞の存在下で細胞におけるＮＦＡＴシグナル伝達を活性化すること；（ｉｉ）ＣＡＲは、細胞（例えば、Ｔ細胞）で発現される場合、例えば図３Ａに関して実施例１に記載される方法を使用して評価されるとき、ＢＣＭＡ発現細胞の細胞毒性を誘導すること；及び（ｉｉｉ）ＣＡＲは、細胞（例えば、Ｔ細胞）で発現される場合、例えば図３Ｃに関して実施例１に記載される方法を使用して評価されるとき、ＢＣＭＡ発現細胞の存在下で細胞におけるサイトカイン（例えば、ＩＦＮ−γ）の発現を誘導することの１つ以上（例えば、１つ、２つ又は全て）を含む。
【００４６】
別の態様において、本発明は、重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）並びに軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＢＣＭＡ結合ドメインを提供し、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、本明細書に開示されるＣＤＲアミノ酸配列を含む。
【００４７】
いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３は、表３〜５（例えば、表３〜５の単一の列）に記載されるＨＣ  ＣＤＲ配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列）である。いくつかの実施形態において、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、表３〜５（例えば、表３〜５の単一の列）に記載されるＬＣ  ＣＤＲ配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列）である。いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号４４、４５及び８４のアミノ酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列）を含む。いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３は、（ｉ）それぞれ配列番号４４、４５及び４６のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えないアミノ酸配列；（ｉｉ）それぞれ配列番号４４、４５及び６８のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えないアミノ酸配列；又は（ｉｉｉ）それぞれ配列番号４４、４５及び７６のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えないアミノ酸配列を含む。
【００４８】
いくつかの実施形態において、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号５４、５５及び５６のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えないアミノ酸配列を含む。
【００４９】
いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、（ｉ）それぞれ配列番号４４、４５、４６、５４、５５及び５６又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列；（ｉｉ）それぞれ配列番号４４、４５、６８、５４、５５及び５６又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列；又は（ｉｉｉ）それぞれ配列番号４４、４５、７６、５４、５５及び５６又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列のアミノ酸配列を含む。
【００５０】
いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、配列番号５２、７０若しくは７８のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。
【００５１】
いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、ＶＨを含み、核酸分子は、ＶＨをコードする核酸配列を含み、核酸配列は、配列番号５３、７１若しくは７９の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
【００５２】
いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、配列番号６１のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【００５３】
いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、ＶＬを含み、核酸分子は、ＶＬをコードする核酸配列を含み、核酸配列は、配列番号６２の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
【００５４】
いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、ＶＨ及びＶＬを含み、ＶＨ及びＶＬは、（ｉ）それぞれ配列番号５２及び６１又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列、（ｉｉ）それぞれ配列番号７０及び６１又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列、又は（ｉｉｉ）それぞれ配列番号７８及び６１又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列を含む。
【００５５】
いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３は、表７〜９（例えば、表７〜９の単一の列）に記載されるＨＣ  ＣＤＲ配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列）である。いくつかの実施形態において、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、表７〜９（例えば、表７〜９の単一の列）に記載されるＬＣ  ＣＤＲ配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列）である。
【００５６】
いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号８６、１３０及び８８のアミノ酸配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列）を含む。いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３は、（ｉ）それぞれ配列番号８６、８７及び８８のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えないアミノ酸配列；（ｉｉ）それぞれ配列番号８６、１０９及び８８のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えないアミノ酸配列；又は（ｉｉｉ）それぞれ配列番号８６、１０９及び８８のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えないアミノ酸配列を含む。
【００５７】
いくつかの実施形態において、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号９５、１３１及び１３２のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えないアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、（ｉ）それぞれ配列番号９５、９６及び９７のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えないアミノ酸配列；（ｉｉ）それぞれ配列番号９５、１１４及び１１５のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えないアミノ酸配列；又は（ｉｉｉ）それぞれ配列番号９５、１１４及び９７のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えないアミノ酸配列を含む。
【００５８】
いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、（ｉ）それぞれ配列番号８６、８７、８８、９５、９６及び９７又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列；（ｉｉ）それぞれ配列番号８６、１０９、８８、９５、１１４及び１１５又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列；又は（ｉｉｉ）それぞれ配列番号８６、１０９、８８、９５、１１４及び９７又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列のアミノ酸配列を含む。
【００５９】
いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、配列番号９３若しくは１１２のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、ＶＨを含み、核酸分子は、ＶＨをコードする核酸配列を含み、核酸配列は、配列番号２６０、９４若しくは１１３の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
【００６０】
いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、配列番号１０２、１１８若しくは１２４のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、ＶＬを含み、核酸分子は、ＶＬをコードする核酸配列を含み、核酸配列は、配列番号２６１、１０３、１１９若しくは１２５の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
【００６１】
いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、ＶＨ及びＶＬを含み、ＶＨ及びＶＬは、（ｉ）それぞれ配列番号９３及び１０２又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列、（ｉｉ）それぞれ配列番号１１２及び１１８又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列、又は（ｉｉｉ）それぞれ配列番号１１２及び１２４又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列を含む。
【００６２】
いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３は、表１１〜１３（例えば、表１１〜１３の単一の列）に記載されるＨＣ  ＣＤＲ配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列）である。いくつかの実施形態において、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、表１１〜１３（例えば、表１１〜１３の単一の列）に記載されるＬＣ  ＣＤＲ配列（又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列）である。
【００６３】
いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１７９、１８０及び１８１のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３は、（ｉ）それぞれ配列番号１３７、１３８及び１３９のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えないアミノ酸配列；又は（ｉｉ）それぞれ配列番号１６０、１６１及び１６２のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えないアミノ酸配列を含む。
【００６４】
いくつかの実施形態において、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１４７、１８２及び１８３のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えないアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、（ｉ）それぞれ配列番号１４７、１４８及び１４９のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えないアミノ酸配列；又は（ｉｉ）それぞれ配列番号１４７、１７０及び１７１のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えないアミノ酸配列を含む。
【００６５】
いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、（ｉ）それぞれ配列番号１３７、１３８、１３９、１４７、１４８及び１４９又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列；又は（ｉｉ）それぞれ配列番号１６０、１６１、１６２、１４７、１７０及び１７１又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が７、６又は５つを超えない配列のアミノ酸配列を含む。
【００６６】
いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、配列番号１４５若しくは１６８のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、ＶＨを含み、核酸分子は、ＶＨをコードする核酸配列を含み、核酸配列は、配列番号１４６若しくは１６９の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
【００６７】
いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、配列番号１５４若しくは１７３のアミノ酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、ＶＬを含み、核酸分子は、ＶＬをコードする核酸配列を含み、核酸配列は、配列番号１５５若しくは１７４の核酸配列又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する核酸配列を含む。
【００６８】
いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、ＶＨ及びＶＬを含み、ＶＨ及びＶＬは、（ｉ）それぞれ配列番号１４５及び１５４又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列、又は（ｉｉ）それぞれ配列番号１６８及び１７３又はそれと少なくとも約８５％、９０％、９５％若しくは９９％の配列同一性を有する配列或いは少なくとも１、２又は３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０又は１０を超えないアミノ酸配列を含む。
【００６９】
一態様において、本発明は、本明細書に記載の核酸分子によってコードされる単離ポリペプチド分子を提供する。一態様において、本発明は、本明細書に記載の核酸分子又は本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸分子を含むベクターを提供する。いくつかの実施形態において、ベクターは、ＤＮＡベクター、ＲＮＡベクター、プラスミド、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター又はレトロウイルスベクターから選択される。いくつかの実施形態において、ベクターは、配列番号１１の核酸配列を含むＥＦ−１プロモーターを含む。一態様において、本発明は、本明細書に記載の核酸分子、本明細書に記載のＣＡＲ、本明細書に記載のポリペプチド分子又は本明細書に記載のベクターを含む細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を提供する。いくつかの実施形態において、細胞は、細胞内シグナル伝達ドメインからの陽性シグナルを含む第２のポリペプチドに関連する、阻害分子の少なくとも一部を含む第１のポリペプチドを含む阻害剤を更に発現し、任意選択により、阻害剤は、ＰＤ−１の少なくとも一部を含む第１のポリペプチドと、共刺激ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む第２のポリペプチドとを含む。
【００７０】
一態様において、本発明は、細胞を作製する方法であって、本明細書に記載のベクターで細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を形質導入することを含む方法を提供する。一態様において、本発明は、ＲＮＡ操作細胞を作製する方法であって、インビトロで転写されたＲＮＡ又は合成ＲＮＡを細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）に導入することを含む方法を提供し、ここで、ＲＮＡは、本明細書に記載の核酸分子又は本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸分子を含む。
【００７１】
一態様において、本発明は、対象において抗腫瘍免疫を提供する方法であって、対象に、本明細書に記載の細胞の有効量を投与することを含む方法を提供する。一態様において、本発明は、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患を有する対象を処置する方法であって、対象に、本明細書に記載の細胞の有効量を投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態において、細胞は、自己Ｔ細胞又は同種異系Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患は、（ｉ）癌若しくは悪性腫瘍又は骨髄異形成、骨髄異形成症候群若しくは前白血病の１つ以上から選択される前癌状態、又は（ｉｉ）ＢＣＭＡの発現に関連する非癌関連適応症である。いくつかの実施形態において、疾患は、血液癌又は固形癌である。いくつかの実施形態において、疾患は、急性白血病、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、有毛細胞白血病、小細胞型又は大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ増殖性疾患、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽細胞リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、前立腺癌（例えば、去勢抵抗性若しくは治療抵抗性の前立腺癌又は転移性前立腺癌）、膵臓癌、肺癌、形質細胞増殖性障害（例えば、無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無痛性骨髄腫）、意義不明の単クローン性高ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、形質細胞腫（例えば、形質細胞異常増殖症、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外形質細胞腫及び多発性形質細胞腫）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス又はＰＯＥＭＳ症候群（クロウ・深瀬症候群、高月病及びＰＥＰ症候群としても知られる））或いはそれらの組み合わせから選択される。いくつかの実施形態において、疾患は、多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態において、方法は、対象に第２の治療剤を投与することを更に含む。いくつかの実施形態において、第２の治療剤は、ＰＤ−１阻害剤であり、任意選択により、ＰＤ−１阻害剤は、ＰＤＲ００１、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０、ＲＥＧＮ２８１０、ＴＳＲ−０４２、ＰＦ−０６８０１５９１及びＡＭＰ−２２４からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、第２の治療剤は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤であり、任意選択により、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、ＦＡＺ０５３、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ及びＢＭＳ−９３６５５９からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、第２の治療剤は、ＬＡＧ−３阻害剤であり、任意選択により、ＬＡＧ−３阻害剤は、ＬＡＧ５２５、ＢＭＳ−９８６０１６、ＴＳＲ−０３３、ＭＫ−４２８０及びＲＥＧＮ３７６７からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、第２の治療剤は、ＴＩＭ−３阻害剤であり、任意選択により、ＴＩＭ−３阻害剤は、ＭＢＧ４５３、ＴＳＲ−０２２及びＬＹ３３２１３６７からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、第２の治療剤は、ＣＴＬＡ−４阻害剤であり、任意選択により、ＣＴＬＡ−４阻害剤は、イピリムマブ又はトレメリムマブである。いくつかの実施形態において、第２の治療剤は、インターロイキン−１５（ＩＬ−１５）ポリペプチド、インターロイキン−１５受容体アルファ（ＩＬ−１５Ｒａ）ポリペプチド又はＩＬ−１５ポリペプチド及びＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの両方の組み合わせ、例えばｈｅｔＩＬ−１５である。いくつかの実施形態において、第２の治療剤は、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）ポリペプチドである。いくつかの実施形態において、第２の治療剤は、ｍＴＯＲ阻害剤であり、任意選択により、ｍＴＯＲ阻害剤は、ＲＡＤ００１又はラパマイシンである。
【００７２】
本明細書に開示される抗ＢＣＭＡ結合ドメイン及びそのような抗ＢＣＭＡ結合ドメインを含むＣＡＲは、以前の抗ＢＣＭＡ結合ドメイン及びそれらを含むＣＡＲよりも改善された特性、例えば増加したＢＣＭＡへの結合親和性、細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）における増加したＣＡＲ発現レベル並びに／又は増強された細胞毒性及び／若しくは細胞（例えば、Ｔ細胞若しくはＮＫ細胞）のサイトカイン産生を媒介する能力を有する。
【００７３】
特に定義しない限り、本明細書で使用される全ての科学技術用語は、本発明が属する技術分野の当業者が一般に理解するのと同じ意味を有する。本発明の実施又は試験では、本明細書に記載されるものと同様の又は均等な方法及び材料を使用し得るが、好適な方法及び材料を以下に記載する。本明細書において言及される刊行物、特許出願、特許及び他の参考文献の全ては、全体として参照により援用される。加えて、材料、方法及び例は、例示に過ぎず、限定することを意図するものではない。見出し、副見出し又は番号若しくは文字が振られた要素、例えば（ａ）、（ｂ）、（ｉ）等は、単に読み易いように提供される。本明細書で見出し又は番号若しくは文字が振られた要素を使用しても、ステップ若しくは要素がアルファベット順に実施される必要はなく、又はステップ若しくは要素が必ず互いに別個のものである必要はない。本発明の他の特徴、目的及び利点は、説明及び図面並びに特許請求の範囲から明らかとなるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００７４】
【図１Ａ−１Ｈ】自動システムを使用したＪｕｒｋａｔ  ＮＦＡＴルシフェラーゼ（ＪＮＬ）レポーターアッセイを使用して、ＢＣＭＡ  ＣＡＲの機能を試験した。ＣＡＲクローンは、抗原依存性活性についてＪＮＬレポーターアッセイで評価された。示されたＣＡＲクローンを含有するＪＮＬ細胞又は非形質導入ＪＮＬ細胞（ＵＴＤ）を培地のみで（図１Ｇ及び１Ｈ）又は標的細胞株（ＢＣＭＡ陽性細胞株としてのＫＭＳ１１（図１Ａ及び１Ｃ）及びＢＣＭＡ陰性細胞株としてのＮＡＬＭ６（図１Ｅ及び１Ｆ））と異なる比率で共培養し、ルシフェラーゼ活性を発光強度として測定した。抗原発現細胞の存在下で発光強度がＵＴＤ細胞のレベルの２倍を超えた場合、クローンは、活性であると見なされた。発光の読み取りは、ＣＡＲ刺激の直接測定である。図１Ｂ及び１Ｄは、ヒト組換え（ｒ）ＢＣＭＡ＿Ｆｃ−ＡＦ６４７を使用したフローサイトメトリーによって検出されたＪＮＬ細胞上のＢＣＭＡ  ＣＡＲの発現レベルを示すグラフである。１ｘ又は２ｘプラットフォームは、ウイルス産生のために播種された４０，０００のＨ２９３細胞又は８０，０００のＨ２９３細胞を示していた。
【図２】初代ヒトＴ細胞上のＢＣＭＡ  ＣＡＲの発現レベル。細胞をヒトｒＢＣＭＡ＿Ｆｃ−ＡＦ６４７試薬で染色し、フローサイトメトリーでアッセイした。ＣＡＲ＋細胞及びＭＦＩのパーセンテージは、細胞培養の５日目及び９日目についてグラフに示される。データは、表１７に概括され、これは、それぞれのＣＡＲについて達成されたウイルス力価を含む。
【図３Ａ−３Ｃ】示されたＣＡＲを発現するＴ細胞が細胞溶解及びサイトカイン産生を媒介する能力を、ホタルルシフェラーゼを発現するＫＭＳ１１標的細胞株（ＫＭＳ１１−ｌｕｃ）に対して評価した。図３Ａ：ＣＡＲＴ細胞は、示されたＥ：Ｔ比でＫＭＳ１１−ｌｕｃ標的細胞と共培養された。％細胞死滅は、エフェクターＴ細胞を有しない標的細胞（対照）と、エフェクターＴ細胞を有する標的細胞（実施例）との間のルシフェラーゼシグナルの差によって決定され、対照のパーセントとして表された。ＵＴＤは、非形質導入Ｔ細胞を表す。図３Ｂ：ＢＣＭＡ陰性系統ＮＡＬＭ６について、バックグラウンド死滅が観察された。図３Ｃ：ＩＦＮγは、これらの共培養システムから２４時間後にＥ：Ｔ比２．５で収集された上清のＭＳＤによって測定された。全てのデータは、平均＋／−標準偏差として表される。
【発明を実施するための形態】
【００７５】
定義
特に定義されない限り、本明細書で使用される全ての科学技術用語は、本発明が関係する技術分野の当業者が一般に理解するのと同じ意味を有する。
【００７６】
用語「１つの（ａ）」及び「１つの（ａｎ）」は、その冠詞の文法上の指示対象の１つ又は１つより多い（即ち少なくとも１つ）を指す。例として、「要素」は、１つの要素又は１つより多い要素を意味する。
【００７７】
用語「約」は、量、時間的な継続期間などの計測可能な値を参照するとき、指定される値から±２０％又は一部の例では±１０％、又は一部の例では±５％、又は一部の例では±１％、又は一部の例では±０．１％の変動が、かかる変動が本開示の方法の実施に適切であるものとして包含されることを意味する。
【００７８】
本発明の組成物及び方法は、特定の配列又はそれと実質的に同一若しくは類似の配列、例えば特定の配列と少なくとも８５％、９０％若しくは９５％同一であるか又はそれを超えて同一である配列を有するポリペプチド及び核酸を包含する。アミノ酸配列に関連して、「実質的に同一」という用語は、本明細書では、第１及び第２のアミノ酸配列が共通の構造ドメイン及び／又は共通の機能的活性を有することができるように、第２のアミノ酸配列の整列したアミノ酸残基と、ｉ）同一であるか、又はｉｉ）その保存的置換である、十分又は最小の数のアミノ酸残基を含有する第１のアミノ酸配列、例えば参照配列、例えば本明細書で提供される配列に対して少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有する共通の構造ドメインを含有するアミノ酸配列を指すために使用される。
【００７９】
ヌクレオチド配列に関連して、「実質的に同一」という用語は、本明細書では、第１及び第２のヌクレオチド配列が、共通の機能的活性を有するポリペプチドをコードするか、又は共通の構造ポリペプチドドメイン若しくは共通の機能的ポリペプチド活性をコードするように、第２の核酸配列の整列したヌクレオチドと同一である、十分又は最小の数のヌクレオチドを含有する第１の核酸配列、例えば参照配列、例えば本明細書で提供される配列に対して少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を指すために使用される。
【００８０】
「変異体」という用語は、参照アミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有するか、又は実質的に同一のヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドを指す。いくつかの実施形態において、変異体は、機能的変異体である。
【００８１】
「機能的変異体」という用語は、参照アミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有するか、又は実質的に同一のヌクレオチド配列によってコードされ、参照アミノ酸配列の１つ以上の活性を有することができる、ポリペプチドを指す。
【００８２】
本明細書で使用される場合、「ＢＣＭＡ」という用語は、Ｂ細胞成熟抗原を指す。ＢＣＭＡ（ＴＮＦＲＳＦ１７、ＢＣＭ又はＣＤ２６９としても知られる）は、腫瘍壊死受容体（ＴＮＦＲ）ファミリーのメンバーであり、最終分化したＢ細胞、例えばメモリーＢ細胞及び形質細胞上に主に発現する。そのリガンドは、ＴＮＦファミリーのＢ細胞アクティベータ（ＢＡＦＦ）及び増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）と呼ばれる。ＢＣＭＡは、長期の体液性免疫を維持するために形質細胞の生存を媒介することに関与する。ＢＣＭＡの遺伝子は、第１６染色体上にコードされ、１８４アミノ酸のタンパク質（ＮＰ＿００１１８３．２）をコードする、９９４ヌクレオチド長の一次ｍＲＮＡ転写産物（ＮＣＢＩ受託番号ＮＭ＿００１１９２．２）を産生する。ＢＣＭＡ遺伝子座に由来する第２のアンチセンス転写物が説明されており、これは、ＢＣＭＡ発現の調節における役割を果たし得る。（Ｌａａｂｉ  Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１９９４，２２：１１４７−１１５４）。更なる転写変異体は、意義不明で説明されている（Ｓｍｉｒｎｏｖａ  ＡＳ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００８，４５（４）：１１７９−１１８３。ＴＶ４としても知られる第２のアイソフォームが同定されている（Ｕｎｉｐｒｏｔ識別子Ｑ０２２２３−２）。本明細書で使用される場合、「ＢＣＭＡ」は、野生型全長ＢＣＭＡの変異、例えば点変異、フラグメント、挿入、欠失及びスプライス変異体を含むタンパク質を含む。
【００８３】
用語「キメラ抗原受容体」又は代わりに「ＣＡＲ」は、少なくとも、細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、以下に定義するとおりの刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞質シグナル伝達ドメイン（本明細書では「細胞内シグナル伝達ドメイン」とも称される）とを含む組換えポリペプチドコンストラクトを指す。一部の実施形態において、ＣＡＲポリペプチドコンストラクトのドメインは、同じポリペプチド鎖にあり、例えばキメラ融合タンパク質を含む。一部の実施形態において、ＣＡＲポリペプチドコンストラクトのドメインは、互いに連続しておらず、例えば本明細書に記載されるとおりのＲＣＡＲに提供されるように、例えば異なるポリペプチド鎖にある。
【００８４】
一態様において、細胞質シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３−ゼータの一次シグナル伝達ドメイン）を含む。一態様において、細胞質シグナル伝達ドメインは、以下に定義するとおりの少なくとも１つの共刺激分子に由来する１つ以上の機能性シグナル伝達ドメインを更に含む。一態様において、共刺激分子は、４１ＢＢ（即ちＣＤ１３７）、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ及び／又はＣＤ２８から選択される。一態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメインと、膜貫通ドメインと、刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ融合タンパク質を含む。一態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメインと、膜貫通ドメインと、共刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメイン及び刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ融合タンパク質を含む。一態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメインと、膜貫通ドメインと、１つ以上の共刺激分子に由来する２つの機能性シグナル伝達ドメイン及び刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ融合タンパク質を含む。一態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメインと、膜貫通ドメインと、１つ以上の共刺激分子に由来する少なくとも２つの機能性シグナル伝達ドメイン及び刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ融合タンパク質を含む。一態様において、ＣＡＲは、ＣＡＲ融合タンパク質のアミノ末端（Ｎ−ｔｅｒ）に任意選択のリーダー配列を含む。一態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメインのＮ末端にリーダー配列を更に含み、リーダー配列は、任意選択により、細胞プロセシング及びＣＡＲの細胞膜局在化中に抗原認識ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）から切断される。
【００８５】
特定の腫瘍マーカーＸ（ここで、Ｘは、本明細書に記載されるような腫瘍マーカーであり得る）を標的とする、抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体又はＴＣＲ（例えば、ＴＣＲアルファ結合ドメイン又はＴＣＲベータ結合ドメイン））を含むＣＡＲは、ＸＣＡＲとも称される。例えば、ＢＣＭＡを標的とする抗原結合ドメインを含むＣＡＲは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲと称される。ＣＡＲは、任意の細胞、例えば本明細書に記載の免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）で発現させることができる。
【００８６】
用語「シグナル伝達ドメイン」は、二次メッセンジャーを生成するか又はかかるメッセンジャーに応答してエフェクターとして機能することにより定義されたシグナル伝達経路を介して細胞活性を調節するように細胞内で情報を伝えることにより機能するタンパク質の機能性の一部分を指す。
【００８７】
用語「抗体」は、本明細書で使用されるとき、抗原と特異的に結合する免疫グロブリン分子に由来するタンパク質又はポリペプチド配列を指す。抗体は、ポリクローナル又はモノクローナル、多重鎖又は単鎖又はインタクトな免疫グロブリンであり得、且つ天然の供給源又は組換え供給源に由来し得る。抗体は、免疫グロブリン分子の四量体であり得る。
【００８８】
用語「抗体フラグメント」は、インタクトな抗体又はその組換え変異体の少なくとも一部分を指し、且つ抗原などの標的に対する抗体フラグメントの認識及び特異的結合をもたらすのに十分である、インタクトな抗体の抗原結合ドメイン、例えば抗原決定可変領域を指す。抗体フラグメントの例としては、限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖフラグメント、ｓｃＦｖ抗体フラグメント、線状抗体、ｓｄＡｂなどのシングルドメイン抗体（ＶＬ又はＶＨのいずれか）、ラクダ科動物ＶＨＨドメイン及びヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つ以上、例えば２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメントなどの抗体フラグメントで形成された多重特異性分子及び結合された抗体の２つ以上、例えば２つの単離されたＣＤＲ又は他のエピトープ結合フラグメントが挙げられる。抗体フラグメントは、シングルドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、ナノボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ−ＮＡＲ及びビス−ｓｃＦｖにも取り込まれ得る（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｈｕｄｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３：１１２６−１１３６，２００５を参照されたい）。抗体フラグメントは、フィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ３）などのポリペプチドをベースとする足場にもグラフトされ得る（フィブロネクチンポリペプチドミニボディについて記載している米国特許第６，７０３，１９９号明細書を参照されたい）。
【００８９】
用語「ｓｃＦｖ」は、軽鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体フラグメントと、重鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体フラグメントとを含む融合タンパク質を指し、軽鎖及び重鎖可変領域は、短い可動性ポリペプチドリンカーによって近接して連結されており、単鎖ポリペプチドとして発現することが可能であり、及びｓｃＦｖは、その由来であるインタクトな抗体の特異性を保持している。指定されない限り、本明細書で使用されるとき、ｓｃＦｖは、ＶＬ及びＶＨ可変領域を例えばポリペプチドのＮ端側及びＣ端側末端に対していずれの順序でも有し得、ｓｃＦｖは、ＶＬ−リンカー−ＶＨを含み得るか又はＶＨ−リンカー−ＶＬを含み得る。
【００９０】
用語「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」は、本明細書で使用されるとき、抗原特異性及び結合親和性を付与する抗体可変領域内にあるアミノ酸の配列を指す。例えば、一般に、各重鎖可変領域に３つのＣＤＲ（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３）及び各軽鎖可変領域に３つのＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３）がある。所与のＣＤＲの正確なアミノ酸配列境界は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１），“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（「Ｋａｂａｔ」付番スキーム）、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）ＪＭＢ  ２７３，９２７−９４８（「Ｃｈｏｔｈｉａ」付番スキーム）又はこれらの組み合わせを含め、幾つもの周知のスキームのいずれかを用いて決定することができる。Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａ付番スキームの組み合わせでは、一部の実施形態において、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ又は両方の一部であるアミノ酸残基に対応する。
【００９１】
抗体又はその抗体フラグメントを含む本発明のＣＡＲ組成物の一部分は、例えば、種々の形態で存在し得、抗原結合ドメインは、例えば、シングルドメイン抗体フラグメント（ｓｄＡｂ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）又は例えばヒト若しくはヒト化抗体を含むポリペプチド鎖の一部として発現する（Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｈｏｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３；Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６）。一態様において、本発明のＣＡＲ組成物の抗原結合ドメインは、抗体フラグメントを含む。更なる態様において、ＣＡＲは、ｓｃＦｖを含む抗体フラグメントを含む。
【００９２】
本明細書で使用されるとき、用語「結合ドメイン」又は「抗体分子」（本明細書では「抗標的結合ドメイン」とも称される）は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変ドメイン配列を含むタンパク質、例えば免疫グロブリン鎖又はそのフラグメントを指す。用語「結合ドメイン」又は「抗体分子」は、抗体及び抗体フラグメントを包含する。ある実施形態において、抗体分子は、多重特異性抗体分子であり、例えば、これは、複数個の免疫グロブリン可変ドメイン配列を含み、ここで、複数個のうちの第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列が第１のエピトープに対する結合特異性を有し、複数個のうちの第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列が第２のエピトープに対する結合特異性を有する。ある実施形態において、多重特異性抗体分子は、二重特異性抗体分子である。二重特異性抗体は、２つ以下の抗原に対して特異性を有する。二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有する第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列及び第２のエピトープに対して結合特異性を有する第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列によって特徴付けられる。
【００９３】
用語「抗体重鎖」は、その天然に存在するコンホメーションをとる抗体分子に存在する２種類のポリペプチド鎖の大きい方を指し、通常、これが抗体の属するクラスを決定する。
【００９４】
用語「抗体軽鎖」は、その天然に存在するコンホメーションをとる抗体分子に存在する２種類のポリペプチド鎖の小さい方を指す。カッパ（κ）及びラムダ（λ）軽鎖が２つの主要な抗体軽鎖アイソタイプを指す。
【００９５】
用語「組換え抗体」は、例えば、バクテリオファージ又は酵母発現システムによって発現される抗体など、組換えＤＮＡ技術を用いて作成される抗体を指す。この用語は、抗体をコードするＤＮＡ分子であって、抗体タンパク質を発現するＤＮＡ分子又はその抗体を指定するアミノ酸配列の合成によって作成された抗体を意味するとも解釈されるべきであり、ＤＮＡ又はアミノ酸配列は、当技術分野において利用可能な周知の組換えＤＮＡ又はアミノ酸配列技術を用いて得られたものである。
【００９６】
用語「抗原」又は「Ａｇ」は、免疫応答を引き起こす分子を指す。この免疫応答には、抗体産生又は特異的免疫適格細胞の活性化のいずれか又は両方が含まれ得る。当業者は、任意の巨大分子が、事実上あらゆるタンパク質又はペプチドを含め、抗原となり得ることを理解するであろう。更に、抗原は、組換えＤＮＡ又はゲノムＤＮＡに由来し得る。当業者は、従って、免疫応答を生じさせるタンパク質をコードするヌクレオチド配列又は部分的ヌクレオチド配列を含む任意のＤＮＡが、その用語が本明細書において使用されるとおりの「抗原」をコードすることを理解するであろう。更に、当業者は、抗原がある遺伝子の完全長ヌクレオチド配列によってのみコードされる必要はないことを理解するであろう。本発明には、限定されないが、２つ以上の遺伝子の部分的ヌクレオチド配列の使用が含まれること及びそれらのヌクレオチド配列が所望の免疫応答を生じさせるポリペプチドをコードするように様々な組み合わせで配列されることが容易に明らかである。更に、当業者は、抗原が「遺伝子」によってコードされる必要は全くないことを理解するであろう。抗原は、合成して作成され得るか、又は生体試料から得られ得るか、又はポリペプチド以外の巨大分子である可能性もあることが容易に明らかである。かかる生体試料には、限定されないが、組織試料、腫瘍試料、細胞又は体液が他の生物学的成分と共に含まれ得る。
【００９７】
用語「抗腫瘍効果」は、限定されないが、例えば腫瘍容積の減少、腫瘍細胞数の減少、転移数の減少、平均余命の増加、腫瘍細胞増殖の減少、腫瘍細胞生存の減少又は癌性病態に関連する様々な生理学的症状の改善を含め、様々な手段によって明らかになり得る生物学的効果を指す。「抗腫瘍効果」は、そもそも腫瘍の発生を防ぐことにおける本発明のペプチド、ポリヌクレオチド、細胞及び抗体の能力によっても明らかになり得る。
【００９８】
用語「抗癌効果」は、限定されないが、例えば腫瘍容積の減少、癌細胞数の減少、転移数の減少、平均余命の増加、癌細胞増殖の減少、癌細胞生存の減少又は癌性病態に関連する様々な生理学的症状の改善を含め、様々な手段によって明らかになり得る生物学的効果を指す。「抗癌効果」は、そもそも癌の発生を防ぐことにおけるペプチド、ポリヌクレオチド、細胞及び抗体の能力によっても明らかになり得る。用語「抗腫瘍効果」は、限定されないが、例えば腫瘍容積の減少、腫瘍細胞数の減少、腫瘍細胞増殖の減少又は腫瘍細胞生存の減少を含め、様々な手段によって明らかになり得る生物学的効果を指す。用語「自己」は、同じ個体に由来する任意の材料であって、後にその個体に再導入されることになる材料を指す。
【００９９】
用語「同種異系」は、材料が導入される個体と同じ種の異なる動物に由来する任意の材料を指す。２つ以上の個体は、１つ以上の遺伝子座の遺伝子が同一でないとき、互いに同種異系であると言われる。一部の態様において、同じ種の個体からの同種異系材料は、抗原的に相互作用するのに十分に遺伝的に異なり得る。
【０１００】
用語「異種」は、異なる種の動物に由来する移植片を指す。
【０１０１】
用語「アフェレーシス」は、本明細書で使用されるとき、ドナー又は患者の血液をドナー又は患者から取り出し、装置に通過させて１つ又は複数の選択された特定の構成成分を選り除き、残りを例えば返血法によってドナー又は患者の循環に戻すという当技術分野で認められている体外プロセスを指す。従って、「アフェレーシス試料」に関連して、アフェレーシスを用いて得られる試料を指す。
【０１０２】
用語「癌」は、異常細胞の急激な無制御の成長によって特徴付けられる疾患を指す。癌細胞は、局所的に又は血流及びリンパ系を通じて体の他の部位に広がり得る。様々な癌の例が本明細書に記載され、限定されないが、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮頸癌、皮膚癌、膵癌、結腸直腸癌、腎癌、肝癌、脳癌、リンパ腫、白血病、肺癌などが挙げられる。本明細書に記載の方法によって処置される好ましい癌には、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫又は非ホジキンリンパ腫が含まれる。
【０１０３】
用語「腫瘍」及び「癌」は、本明細書では同義的に使用され、例えば、両方の用語とも固形及び液性、例えばびまん性又は循環性腫瘍を包含する。本明細書で使用されるとき、用語「癌」又は「腫瘍」は、前癌性並びに悪性の癌及び腫瘍を含む。
【０１０４】
「由来する」は、この用語が本明細書で使用されるとき、第１の分子と第２の分子との間の関係を指す。これは、概して、第１の分子と第２の分子との間の構造的類似性に言及するものであり、第２の分子に由来する第１の分子に関する方法又は供給源を限定することを含意又は包含しない。例えば、ＣＤ３ゼータ分子に由来する細胞内シグナル伝達ドメインの場合、細胞内シグナル伝達ドメインは、求められる機能、即ち適切な条件下でシグナルを生成する能力を有するような十分なＣＤ３ゼータ構造を保持している。これは、細胞内シグナル伝達ドメインの特定の作製方法に限定することを含意又は包含せず、例えば細胞内シグナル伝達ドメインを提供するためにＣＤ３ゼータ配列で開始して不要な配列を欠失させるか、又は突然変異を付与して細胞内シグナル伝達ドメインに至らせなければならないことを意味しない。
【０１０５】
語句「ＢＣＭＡの発現に関連する疾患」には、限定されないが、例えば癌若しくは悪性腫瘍などの増殖性疾患又は骨髄形成異常、骨髄異形成症候群若しくは前白血病などの前癌病態を含めた、ＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）を発現する細胞に関連する疾患又はＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）を発現する細胞に関連する病態又はＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）を発現する細胞に関連する非癌関連徴候が含まれる。誤解を避けるため、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患には、例えばＢＣＭＡを標的とする分子、例えば本明細書に記載されるＢＣＭＡ阻害薬による治療によってＢＣＭＡ発現が下方制御されているため、現在ではＢＣＭＡを発現しないが、かつてはＢＣＭＡを発現した細胞に関連する病態が含まれ得る。一態様において、ＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）の発現に関連する癌は、血液癌である。一態様において、血液癌は、白血病又はリンパ腫である。一態様において、ＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）の発現に関連する癌は、分化型形質細胞Ｂ細胞の悪性腫瘍である。一態様において、ＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）の発現に関連する癌には、限定されないが、例えばＢ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）を例えば含むがそれに限定されない１つ以上の急性白血病、慢性骨髄球性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を例えば含むがそれに限定されない１つ以上の慢性白血病を含めた癌及び悪性腫瘍が含まれる。ＢＭＣＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）の発現に関連する更なる癌又は血液学的病態は、限定されないが、例えばＢ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞型又は大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ球増殖性病態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症及び骨髄性血球細胞の無効な産生（又は異形成）によってまとめられる様々な血液学的病態の群である「前白血病」などを含む。一部の実施形態において、癌は、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫又は膠芽腫である。実施形態において、ＢＣＭＡの発現に関連する疾患には、形質細胞増殖性障害、例えば無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無痛性骨髄腫）、意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、形質細胞腫（例えば、形質細胞異常増殖症、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫及び多発性形質細胞腫）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス及びＰＯＥＭＳ症候群（クロウ・深瀬症候群、高月病及びＰＥＰ症候群としても知られる）が含まれる。ＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）発現の発現に関連する更なる疾患には、限定されないが、例えばＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）の発現に関連する非定型の及び／又は非古典的な癌、悪性腫瘍、前癌病態又は増殖性疾患、例えば本明細書に記載される癌、例えば前立腺癌（例えば、去勢抵抗性若しくは療法抵抗性前立腺癌又は転移性前立腺癌）、膵癌又は肺癌が含まれる。
【０１０６】
ＢＣＭＡ（例えば、野生型又は突然変異体ＢＣＭＡ）に関連する非癌関連病態には、ウイルス感染症、例えばＨＩＶ、真菌感染症、例えばＣ．ネオフォルマンス（Ｃ．ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、自己免疫疾患、例えば関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ又はループス）、尋常性天疱瘡及びシェーグレン症候群、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、粘膜免疫に関連する移植関連アロ特異的免疫障害及び体液性免疫が重要な場合の生物製剤（例えば、第ＶＩＩＩ因子）に対する望ましくない免疫応答が含まれる。実施形態において、ＢＣＭＡの発現に伴う非癌関連徴候には、限定されないが、例えば自己免疫疾患（例えば、ループス）、炎症性障害（アレルギー及び喘息）及び移植が含まれる。一部の実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、腫瘍抗原をコードするｍＲＮＡを発現するか、又はいずれかの時点で発現した。ある実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、腫瘍抗原タンパク質（例えば、野生型又は突然変異体）を産生し、腫瘍抗原タンパク質は、正常レベル又は低下したレベルで存在し得る。ある実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、一時的に検出可能なレベルの腫瘍抗原タンパク質を産生したが、続いて検出可能な腫瘍抗原タンパク質を実質的に産生しなくなった。
【０１０７】
用語「保存的配列改変」は、そのアミノ酸配列を含む抗体又は抗体フラグメントの結合特性が大きい影響又は変化を被ることのないアミノ酸改変を指す。かかる保存的改変には、アミノ酸置換、付加及び欠失が含まれる。改変は、部位特異的突然変異誘発及びＰＣＲ媒介性突然変異誘発など、当技術分野において公知の標準技法によって本発明の抗体又は抗体フラグメントに導入することができる。保存的置換は、アミノ酸残基が同様の側鎖を有するアミノ酸残基に置き換えられるものである。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野において定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分枝側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が含まれる。従って、本発明のＣＡＲ内の１つ以上のアミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリーからの他のアミノ酸残基に置き換えることができ、及び変化したＣＡＲは、本明細書に記載される機能アッセイを用いて試験することができる。
【０１０８】
用語「刺激」は、刺激分子（例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体）がそのコグネイトリガンドと結合して、それにより、限定されないが、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体を介したシグナル伝達など、シグナル伝達イベントを媒介することによって生じる一次応答を指す。刺激は、ＴＧＦ−βの下方制御など、ある種の分子の発現の変化及び／又は細胞骨格構造の認識などを媒介することができる。
【０１０９】
用語「刺激分子」は、Ｔ細胞シグナル伝達経路の少なくとも一部の側面について刺激的方法でＴＣＲ複合体の一次活性化を調節する１つ又は複数の一次細胞質シグナル伝達配列を提供するＴ細胞によって発現される分子を指す。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ内のＩＴＡＭ含有ドメインは、内因性ＴＣＲ複合体とは独立して、一次ＴＣＲのシグナル伝達を再現する。一態様において、一次シグナルは、例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体とペプチドが負荷されたＭＨＣ分子との結合によって惹起され、これは、限定されないが、増殖、活性化、分化などを含めたＴ細胞応答の媒介につながる。刺激的方法で機能する一次細胞質シグナル伝達配列（「一次シグナル伝達ドメイン」とも称される）は、免疫受容活性化チロシンモチーフ又はＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含み得る。本発明において特に有用であるＩＴＡＭ含有一次細胞質シグナル伝達配列の例には、ＴＣＲゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（「ＩＣＯＳ」としても知られる）、ＦｃεＲＩ及びＣＤ６６ｄ、ＤＡＰ１０及びＤＡＰ１２に由来するものが含まれるが、これらに限定されない。本発明の特定のＣＡＲにおいて、本発明の任意の１つ以上のＣＡＲにおける細胞内シグナル伝達ドメインは、細胞内シグナル伝達配列、例えばＣＤ３ゼータの一次シグナル伝達配列を含む。用語「抗原提示細胞」又は「ＡＰＣ」は、その表面上に主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）と複合体化した外来抗原を提示するアクセサリー細胞などの免疫系細胞（例えば、Ｂ細胞、樹状細胞など）を指す。Ｔ細胞は、そのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を用いてこうした複合体を認識し得る。ＡＰＣは、抗原をプロセシングしてそれをＴ細胞に提示する。
【０１１０】
「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、この用語が本明細書で使用されるとき、分子の細胞内部分を指す。実施形態において、細胞内シグナルドメインはエフェクター機能シグナルを伝達し、細胞が特化した機能を果たすように仕向ける。細胞内シグナル伝達ドメイン全体が用いられ得るが、多くの場合、鎖全体を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインのトランケートされた一部分が使用される範囲で、かかるトランケートされた一部分がエフェクター機能シグナルを伝達する限り、それがインタクトな鎖の代わりに使用され得る。従って、用語の細胞内シグナル伝達ドメインは、エフェクター機能シグナルを伝達するのに十分な細胞内シグナル伝達ドメインの任意のトランケートされた一部分を含むことが意図される。
【０１１１】
細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲ含有細胞、例えばＣＡＲＴ細胞の免疫エフェクター機能を促進するシグナルを生成する。免疫エフェクター機能（例えば、ＣＡＲＴ細胞におけるもの）の例には、サイトカインの分泌を含む細胞溶解活性及びヘルパー活性が含まれる。
【０１１２】
ある実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメインを含み得る。例示的一次細胞内シグナル伝達ドメインには、一次刺激又は抗原依存性刺激に関与する分子に由来するものが含まれる。ある実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激細胞内ドメインを含み得る。例示的共刺激細胞内シグナル伝達ドメインには、共刺激シグナル又は抗原非依存性刺激に関与する分子に由来するものが含まれる。例えば、ＣＡＲＴの場合、一次細胞内シグナル伝達ドメインがＴ細胞受容体の細胞質配列を含むことができ、及び共刺激細胞内シグナル伝達ドメインが共受容体又は共刺激分子からの細胞質配列を含むことができる。
【０１１３】
一次細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容活性化チロシンモチーフ又はＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含むことができる。ＩＴＡＭを含む一次細胞質シグナル伝達配列の例には、限定されないが、ＣＤ３ゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３ベータ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（「ＩＣＯＳ」としても知られる）、ＦｃεＲＩ、ＣＤ６６ｄ、ＤＡＰ１０及びＤＡＰ１２に由来するものが含まれる。
【０１１４】
「ゼータ」又は代替的に「ゼータ鎖」、「ＣＤ３ゼータ」若しくは「ＴＣＲゼータ」という用語は、ＣＤ２４７を指す。Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ受託番号Ｐ２０９６３は、例示的なヒトＣＤ３ゼータアミノ酸配列を提供する。「ゼータ刺激ドメイン」又は代替的に「ＣＤ３ゼータ刺激ドメイン」若しくは「ＴＣＲゼータ刺激ドメイン」は、ＣＤ３ゼータの刺激ドメイン又はその変異体（例えば、変異、例えば点変異、フラグメント、挿入又は欠失を有する分子）を指す。いくつかの実施形態において、ゼータの細胞質ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＢＡＧ３６６６４．１の残基５２〜１６４又はその変異体（例えば、変異、例えば点変異、フラグメント、挿入又は欠失を有する分子）を含む。いくつかの実施形態において、「ゼータ刺激ドメイン」又は「ＣＤ３ゼータ刺激ドメイン」は、配列番号９若しくは１０として提供される配列又はその変異体（例えば、変異、例えば点変異、フラグメント、挿入又は欠失を有する分子）を指す。
【０１１５】
用語「共刺激分子」は、共刺激リガンドに特異的に結合して、それにより、限定されないが増殖など、Ｔ細胞による共刺激応答を媒介するＴ細胞上のコグネイト結合パートナーを指す。共刺激分子は、効率的な免疫応答に必要である、抗原受容体又はそのリガンド以外の細胞表面分子である。共刺激分子には、限定されないが、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒアルファ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２８−ＯＸ４０、ＣＤ２８−４−１ＢＢ及びＣＤ８３に特異的に結合するリガンドが含まれる。
【０１１６】
共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内部分を指す。
【０１１７】
細胞内シグナル伝達ドメインは、その由来である分子の細胞内部分全体、又は天然の細胞内シグナル伝達ドメイン全体、又はその機能性フラグメントを含み得る。
【０１１８】
「４−１ＢＢ」という用語は、ＣＤ１３７又は腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー９を指す。Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ受託番号Ｐ２０９６３は、例示的なヒト４−１ＢＢアミノ酸配列を提供する。「４−１ＢＢ共刺激ドメイン」は、４−１ＢＢの共刺激ドメイン又はその変異体（例えば、変異、例えば点変異、フラグメント、挿入又は欠失を有する分子）を指す。いくつかの実施形態において、「４−１ＢＢ共刺激ドメイン」は、配列番号７として提供される配列又はその変異体（例えば、変異、例えば点変異、フラグメント、挿入又は欠失を有する分子）を指す。
【０１１９】
「免疫エフェクター細胞」は、この用語が本明細書で使用されるとき、免疫応答、例えば免疫エフェクター応答の促進に関与する細胞を指す。免疫エフェクター細胞の例としては、Ｔ細胞、例えばα／β  Ｔ細胞及びγ／δ  Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、肥満細胞及び骨髄由来食細胞が挙げられる。
【０１２０】
「免疫エフェクター機能又は免疫エフェクター応答」は、この用語が本明細書で使用されるとき、標的細胞の免疫攻撃を亢進させる又は促進する例えば免疫エフェクター細胞の機能又は応答を指す。例えば、免疫エフェクター機能又は応答は、標的細胞の死滅又は成長若しくは増殖阻害を促進するＴ細胞又はＮＫ細胞の特性を指す。Ｔ細胞の場合、一次刺激及び共刺激が免疫エフェクター機能又は応答の例である。
【０１２１】
用語「エフェクター機能」は、細胞の特化した機能を指す。例えば、Ｔ細胞のエフェクター機能は、細胞溶解活性又はサイトカインの分泌を含めたヘルパー活性であり得る。
【０１２２】
用語「コードする」は、定義付けられたヌクレオチド配列（例えば、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ及びｍＲＮＡ）又は定義付けられたアミノ酸配列のいずれかを有する生物学的過程における他のポリマー及び巨大分子の合成の鋳型としての役割を果たす、遺伝子、ｃＤＮＡ又はｍＲＮＡなど、ポリヌクレオチド内の特異的ヌクレオチド配列の固有の特性及びそれによってもたらされる生物学的特性を指す。従って、遺伝子、ｃＤＮＡ又はＲＮＡは、その遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写及び翻訳によって細胞又は他の生体系のタンパク質が産生される場合にタンパク質をコードする。そのヌクレオチド配列がｍＲＮＡ配列と同一の且つ通常配列表に提供されるものであるコード鎖及び遺伝子又はｃＤＮＡの転写鋳型として使用される非コード鎖の両方は、その遺伝子のｃＤＮＡのタンパク質又は他の産物をコードすると称することができる。
【０１２３】
特記されない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、互いの縮重バージョンであり、同じアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列の全てを含む。タンパク質又はＲＮＡをコードするヌクレオチド配列という語句には、そのタンパク質をコードするヌクレオチド配列が何らかのバージョンで１つ又は複数のイントロンを含み得る限りにおいて、イントロンも含まれ得る。
【０１２４】
用語「有効量」又は「治療有効量」は、本明細書では同義的に使用され、本明細書に記載されるとおりの化合物、製剤、材料又は組成物が特定の生物学的結果を達成するのに有効な量を指す。
【０１２５】
用語「内因性」は、生物、細胞、組織又は系由来の又はその内部で産生される任意の材料を指す。
【０１２６】
用語「外因性」は、生物、細胞、組織又は系の外側から導入されるか又はその外側で産生される任意の材料を指す。
【０１２７】
「発現」という用語は、特定のヌクレオチド配列の転写及び／又は翻訳を指す。いくつかの実施形態において、発現は、細胞に導入されたｍＲＮＡの翻訳を含む。
【０１２８】
用語「トランスファーベクター」は、単離核酸を含む組成物であって、細胞内部への単離核酸の送達に使用し得る組成物を指す。当技術分野では、限定されないが、線状ポリヌクレオチド、イオン性又は両親媒性化合物に関連するポリヌクレオチド、プラスミド及びウイルスを含め、多くのベクターが公知である。従って、用語「トランスファーベクター」には自己複製プラスミド又はウイルスが含まれる。この用語は、例えば、ポリリジン化合物、リポソームなど、細胞への核酸のトランスファーを促進する非プラスミド及び非ウイルス化合物も更に含むものと解釈されなければならない。ウイルストランスファーベクターの例としては、限定されないが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクターなどが挙げられる。
【０１２９】
用語「発現ベクター」は、発現させるヌクレオチド配列に作動可能に連結した発現制御配列を含む組換えポリヌクレオチドを含むベクターを指す。発現ベクターは、発現に十分なシス作用エレメントを含み、他の発現用エレメントは、宿主細胞によって供給されるか、又はインビトロ発現系に供給され得る。発現ベクターには、組換えポリヌクレオチドを組み込むコスミド、プラスミド（例えば、ネイキッド又はリポソームに含まれる）及びウイルス（例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス及びアデノ随伴ウイルス）を含め、当技術分野において公知のもの全てが含まれる。
【０１３０】
用語「レンチウイルス」は、レトロウイルス科（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）の属を指す。レンチウイルスは、非分裂細胞を感染させることができる点でレトロウイルスの中でユニークであり、レンチウイルスは、宿主細胞のＤＮＡに多量の遺伝情報を送達することができ、そのため、遺伝子デリバリーベクターの最も効率的な方法の１つである。ＨＩＶ、ＳＩＶ及びＦＩＶは、全てレンチウイルスの例である。
【０１３１】
用語「レンチウイルスベクター」は、特に、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１７（８）：１４５３−１４６４（２００９）に提供されるとおりの自己不活性化レンチウイルスベクターを含め、レンチウイルスゲノムの少なくとも一部分に由来するベクターを指す。臨床で使用し得るレンチウイルスベクターの他の例としては、限定されないが、例えばＯｘｆｏｒｄ  ＢｉｏＭｅｄｉｃａからのＬＥＮＴＩＶＥＣＴＯＲ（登録商標）遺伝子デリバリー技術、ＬｅｎｔｉｇｅｎからのＬＥＮＴＩＭＡＸ（商標）ベクターシステムなどが挙げられる。非臨床タイプのレンチウイルスベクターも利用可能であり、当業者に公知であろう。
【０１３２】
用語「相同」又は「同一性」は、２つのポリマー分子間、例えば２つのＤＮＡ分子又は２つのＲＮＡ分子など、２つの核酸分子間又は２つのポリペプチド分子間におけるサブユニット配列同一性を指す。２つの分子の両方におけるサブユニット位置が同じ単量体サブユニットによって占有されるとき、例えば、２つのＤＮＡ分子の各々の位置がアデニンによって占有される場合、それらは、その位置で相同又は同一である。２つの配列間の相同性は、一致する位置又は相同な位置の数の直接の関数である。例えば、２つの配列における位置の半分（例えば、１０サブユニット長のポリマーにおける５個の位置）が相同である場合、それらの２つの配列は、５０％相同である。位置の９０％（例えば、１０個中９個）が一致するか又は相同である場合、それらの２つの配列は、９０％相同である。
【０１３３】
「ヒト化」形態の非ヒト（例えば、マウス）抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖又はそのフラグメント（抗体のＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２又は他の抗原結合部分配列など）である。ほとんどの場合、ヒト化抗体及びその抗体フラグメントは、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体又は抗体フラグメント）においてレシピエントの相補決定領域（ＣＤＲ）からの残基が所望の特異性、親和性及び能力を有するマウス、ラット又はウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基に置き換えられているものである。一部の例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が対応する非ヒト残基に置き換えられる。更に、ヒト化抗体／抗体フラグメントは、レシピエント抗体にも、移入されるＣＤＲ又はフレームワーク配列にも見られない残基を含むことができる。これらの改変は抗体又は抗体フラグメントの性能を更に精緻化及び最適化し得る。一般に、ヒト化抗体又はその抗体フラグメントは、少なくとも１つ及び典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むことになり、ＣＤＲ領域の全て又は実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、且つＦＲ領域の全て又は大部分がヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体又は抗体フラグメントは、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンのＦｃの少なくとも一部分も含むことができる。更なる詳細については、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５，１９８６；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２９，１９８８；Ｐｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３−５９６，１９９２を参照されたい。
【０１３４】
「完全にヒト」は、分子全体がヒト起源であるか、又はヒト形態の抗体又は免疫グロブリンと同一のアミノ酸配列からなる抗体又は抗体フラグメントなどの免疫グロブリンを指す。
【０１３５】
用語「単離されている」は、自然状態から改変されているか又は取り出されていることを意味する。例えば、生きている動物に天然に存在する核酸又はペプチドは、「単離されている」のではないが、その自然状態の共存する材料から部分的又は完全に分離された同じ核酸又はペプチドは、「単離されている」。単離核酸又はタンパク質は、実質的に精製された形態で存在することができるか、又は例えば宿主細胞など、非天然環境中に存在することができる。
【０１３６】
本発明との関連において、一般的に存在する核酸塩基に関して以下の略称が使用される。「Ａ」は、アデノシンを指し、「Ｃ」は、シトシンを指し、「Ｇ」は、グアノシンを指し、「Ｔ」は、チミジンを指し、及び「Ｕ」は、ウリジンを指す。
【０１３７】
用語「作動可能に連結された」又は「転写制御」は、調節配列と異種核酸配列との間における後者の発現をもたらす機能的な連結を指す。例えば、第１の核酸配列が第２の核酸配列と機能的に関係した状態に置かれているとき、第１の核酸配列は、第２の核酸配列と作動可能に連結されている。例えば、プロモーターがコード配列の転写又は発現に影響を及ぼす場合、プロモーターは、コード配列に作動可能に連結されている。作動可能に連結されるＤＮＡ配列は、互いに連続し得、例えば２つのタンパク質コード領域をつなぎ合わせる必要がある場合、同じリーディングフレーム内にある。
【０１３８】
免疫原性組成物の「非経口」投与という用語は、例えば、皮下（ｓ．ｃ．）、静脈内（ｉ．ｖ．）、筋肉内（ｉ．ｍ．）、又は胸骨内注射、腫瘍内、又は輸注技法を含む。
【０１３９】
「核酸」、「核酸分子」、「ポリヌクレオチド」又は「ポリヌクレオチド分子」という用語は、一本鎖又は二本鎖の形態のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）又はリボ核酸（ＲＮＡ）及びそれらのポリマーを指す。特に限定されない限り、この用語は、参照核酸と同様の結合特性を有し、天然に存在するヌクレオチドと同様の方法で代謝される、天然ヌクレオチドの既知の類似体を含有する核酸を包含する。いくつかの実施形態において、「核酸」、「核酸分子」、「ポリヌクレオチド」又は「ポリヌクレオチド分子」は、ヌクレオチド／ヌクレオシド誘導体又は類似体を含む。特に明記しない限り、特定の核酸配列は、その保存的に修飾された変異体（例えば、縮重コドン置換、例えば保存的置換）、対立遺伝子、オルソログ、ＳＮＰ及び相補的配列並びに明示的に示された配列も暗黙的に包含する。具体的には、縮重コドン置換、例えば保存的置換は、１つ以上の選択された（又は全ての）コドンの第３位が混合塩基及び／又はデオキシイノシン残基で置換された配列を生成することによって達成され得る（Ｂａｔｚｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．１９：５０８１（１９９１）；Ｏｈｔｓｕｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５−２６０８（１９８５）；及びＲｏｓｓｏｌｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ  ８：９１−９８（１９９４））。
【０１４０】
用語「ペプチド」、「ポリペプチド」及び「タンパク質」は、同義的に使用され、ペプチド結合によって共有結合的に連結したアミノ酸残基で構成される化合物を指す。タンパク質又はペプチドは、少なくとも２つのアミノ酸を含有しなければならず、タンパク質の配列又はペプチドの配列を含むことのできるアミノ酸の最大数に制限はない。ポリペプチドは、互いにペプチド結合によってつなぎ合わされた２つ以上のアミノ酸を含む任意のペプチド又はタンパク質を含む。本明細書で使用されるとき、この用語は、当技術分野では一般に例えばペプチド、オリゴペプチド及びオリゴマーとも称される短鎖と、当技術分野では概してタンパク質と称される、多数の種類があるより長い鎖との両方を指す。「ポリペプチド」には、例えば、生物学的に活性なフラグメント、実質的に相同なポリペプチド、オリゴペプチド、ホモ二量体、ヘテロ二量体、ポリペプチドの変異体、修飾ポリペプチド、誘導体、類似体、融合タンパク質が特に含まれる。ポリペプチドには、天然ペプチド、組換えペプチド又はこれらの組み合わせが含まれる。
【０１４１】
用語「プロモーター」は、ポリヌクレオチド配列の特異的転写を開始させるのに必要である、細胞の合成機構又は導入された合成機構によって認識されるＤＮＡ配列を指す。
【０１４２】
用語「プロモーター／調節配列」は、そのプロモーター／調節配列に作動可能に連結された遺伝子産物の発現に必要な核酸配列を指す。一部の例では、この配列は、コアプロモーター配列であり得、他の例では、この配列は、エンハンサー配列及び遺伝子産物の発現に必要な他の調節エレメントも含み得る。プロモーター／調節配列は、例えば、遺伝子産物を組織特異的に発現するものであり得る。
【０１４３】
用語「構成的」プロモーターは、遺伝子産物をコードするか又はそれを指定するポリヌクレオチドと作動可能に連結されているとき、細胞のほとんど又は全ての生理条件下で細胞において遺伝子産物の産生を生じさせるヌクレオチド配列を指す。
【０１４４】
用語「誘導性」プロモーターは、遺伝子産物をコードするか又はそれを指定するポリヌクレオチドと作動可能に連結されているとき、実質的にプロモーターに対応する誘発物質が細胞に存在する場合に限り細胞において遺伝子産物の産生を生じさせるヌクレオチド配列を指す。
【０１４５】
用語「組織特異的」プロモーターは、遺伝子をコードするか又はそれによって指定されるポリヌクレオチドと作動可能に連結されているとき、実質的に細胞がプロモーターに対応する組織型の細胞である場合に限り細胞において遺伝子産物の産生を生じさせるヌクレオチド配列を指す。
【０１４６】
用語「癌関連抗原」又は「腫瘍抗原」は、同義的に、癌細胞の表面上に、完全に又は代わりにフラグメント（例えば、ＭＨＣ／ペプチド）として発現する分子（典型的にはタンパク質、炭水化物又は脂質）であって、癌細胞への薬理学的薬剤の優先的なターゲティングに有用な分子を指す。一部の実施形態において、腫瘍抗原は、正常細胞及び癌細胞の両方が発現するマーカー、例えば系列マーカー、例えばＢ細胞上のＣＤ１９である。一部の実施形態において、腫瘍抗原は、正常細胞と比較して癌細胞で過剰発現する（例えば、正常細胞と比較して１倍の過剰発現、２倍の過剰発現、３倍の過剰発現又はそれを超える）細胞表面分子である。一部の実施形態において、腫瘍抗原は、癌細胞で不適切に合成される細胞表面分子、例えば正常細胞に発現する分子と比較して欠失、付加又は突然変異を含む分子である。一部の実施形態において、腫瘍抗原は癌細胞の細胞表面にのみ、完全に又は代わりにフラグメント（例えば、ＭＨＣ／ペプチド）として発現することになり、正常細胞の表面に合成されないか又は発現しない。一部の実施形態において、本発明のＣＡＲは、ＭＨＣ提示ペプチドに結合する抗原結合ドメイン（例えば、抗体又は抗体フラグメント）を含むＣＡＲを含む。通常、内因性タンパク質に由来するペプチドは、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩ分子のポケットに嵌まり、ＣＤ８＋  Ｔリンパ球上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）によって認識される。ＭＨＣクラスＩ複合体は、あらゆる有核細胞によって構成的に発現される。癌では、ウイルス特異的及び／又は腫瘍特異的ペプチド／ＭＨＣ複合体が免疫療法用のユニークなクラスの細胞表面標的となる。ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）−Ａ１又はＨＬＡ−Ａ２のコンテクストでウイルス又は腫瘍抗原由来のペプチドを標的とするＴＣＲ様抗体が記載されている（例えば、Ｓａｓｔｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ．２０１１  ８５（５）：１９３５−１９４２；Ｓｅｒｇｅｅｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２０１１  １１７（１６）：４２６２−４２７２；Ｖｅｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０１０  １８４（４）：２１５６−２１６５；Ｗｉｌｌｅｍｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ２００１  ８（２１）：１６０１−１６０８；Ｄａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ２０１３  ５（１７６）：１７６ｒａ３３；Ｔａｓｓｅｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ２０１２  １９（２）：８４−１００を参照されたい）。例えば、ＴＣＲ様抗体は、ヒトｓｃＦｖファージディスプレイライブラリなど、ライブラリのスクリーニングによって同定することができる。
【０１４７】
「腫瘍支持抗原」又は「癌支持抗原」という用語は、互換的に、それ自体癌性ではないが、例えば増殖又は生存、例えば免疫細胞に対する抵抗性を促進することにより、癌細胞を支持する、細胞の表面に発現される分子（典型的には、タンパク質、炭水化物又は脂質）を指す。この型の例示的な細胞は、間質細胞及び骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）を含む。腫瘍支持抗原自体は、抗原が癌細胞を支持する細胞上に存在する限り、腫瘍細胞を支持する役割を果たさなくてもよい。
【０１４８】
用語「可動性ポリペプチドリンカー」又は「リンカー」は、ｓｃＦｖとの関連で使用されるとき、可変重鎖領域と可変軽鎖領域とを共に連結するために単独又は組み合わせで使用されるグリシン及び／又はセリン残基などのアミノ酸からなるペプチドリンカーを指す。一部の実施形態において、可動性ポリペプチドリンカーは、Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカーであり、アミノ酸配列（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎは、１以上の正の整数、例えばｎ＝１、ｎ＝２、ｎ＝３、ｎ＝４、ｎ＝５及びｎ＝６、ｎ＝７、ｎ＝８、ｎ＝９及びｎ＝１０である）（配列番号４２）を含む。一部の実施形態において、可動性ポリペプチドリンカーには、限定されないが、（Ｇｌｙ４  Ｓｅｒ）４（配列番号２７）又は（Ｇｌｙ４  Ｓｅｒ）３（配列番号２８）が含まれる。別の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ２Ｓｅｒ）、（ＧｌｙＳｅｒ）又は（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）（配列番号２９）の複数の繰り返しを含む。また、国際公開第２０１２／１３８４７５号パンフレット（参照により本明細書に援用される）に記載されるリンカーも本発明の範囲内に含まれる。
【０１４９】
本明細書で使用されるとき、５’キャップ（ＲＮＡキャップ、ＲＮＡ７−メチルグアノシンキャップ又はＲＮＡ  ｍ７Ｇキャップとも称される）は、転写開始直後に真核生物メッセンジャーＲＮＡの「前」又は５’末端に付加された修飾グアニンヌクレオチドである。５’キャップは、１番目の転写ヌクレオチドに連結される末端基からなる。その存在は、リボソームによる認識及びＲＮアーゼからの保護に重要である。キャップ付加は転写と結び付いており、それぞれが他方に影響を与えるようにして同時転写的に起こる。転写開始直後、合成されているｍＲＮＡの５’末端に、ＲＮＡポリメラーゼに関連するキャップ合成複合体が結合する。この酵素複合体は、ｍＲＮＡキャッピングに必要な化学反応を触媒する。合成は、多段階生化学反応として進行する。キャッピング部分は、ｍＲＮＡのその安定性又は翻訳効率などの機能を調整するために改変することができる。
【０１５０】
本明細書で使用されるとき、「インビトロ転写ＲＮＡ」は、インビトロ合成されたＲＮＡ、好ましくはｍＲＮＡを指す。概して、インビトロ転写ＲＮＡは、インビトロ転写ベクターから作成される。インビトロ転写ベクターは、インビトロ転写ＲＮＡの作成に使用される鋳型を含む。
【０１５１】
本明細書で使用されるとき、「ポリ（Ａ）」は、ポリアデニル化によってｍＲＮＡに付加される一連のアデノシンである。一過性発現用のコンストラクトの好ましい実施形態において、ポリＡは、５０〜５０００（配列番号３０）、好ましくは６４より多く、より好ましくは１００より多く、最も好ましくは３００又は４００より多い。ポリ（Ａ）配列は、局在性、安定性又は翻訳効率などのｍＲＮＡ機能を調整するために化学的又は酵素的に改変することができる。
【０１５２】
本明細書で使用されるとき、「ポリアデニル化」は、メッセンジャーＲＮＡ分子へのポリアデニリル部分又はその改変変異体の共有結合を指す。真核生物では、ほとんどのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）分子が３’末端でポリアデニル化される。３’ポリ（Ａ）テイルは、酵素、ポリアデニル酸ポリメラーゼの作用によってｍＲＮＡ前駆体に付加されるアデニンヌクレオチドの長い配列（多くの場合に数百個）である。高等真核生物では、ポリ（Ａ）テイルは、特異的配列、ポリアデニル化シグナルを含む転写物に付加される。ポリ（Ａ）テイル及びそれに結合したタンパク質は、ｍＲＮＡをエキソヌクレアーゼによる分解から保護するのに役立つ。ポリアデニル化は、転写終結、ｍＲＮＡの核外移行及び翻訳にも重要である。ポリアデニル化は、ＤＮＡからＲＮＡへの転写直後に核内で起こるが、更に後に細胞質でも起こり得る。転写が終結した後、ＲＮＡポリメラーゼに関連するエンドヌクレアーゼ複合体の作用によってｍＲＮＡ鎖が切断される。切断部位は、通常、切断部位近傍の塩基配列ＡＡＵＡＡＡの存在によって特徴付けられる。ｍＲＮＡが切断された後、切断部位の遊離３’末端にアデノシン残基が付加される。
【０１５３】
本明細書で使用されるとき、「一過性」は、数時間、数日間又は数週間の期間にわたる組み込まれないトランス遺伝子の発現を指し、この発現期間は、宿主細胞においてゲノムに組み込まれた場合又は安定プラスミドレプリコン中に含まれている場合の遺伝子の発現期間よりも短い。
【０１５４】
本明細書で使用されるとき、用語「治療する」、「治療」及び「治療している」は、１つ以上の療法（例えば、本発明のＣＡＲなどの１つ以上の療法剤）の投与によってもたらされる増殖性障害の進行、重症度及び／又は持続期間の低減又は改善又は増殖性障害の１つ以上の症状（好ましくは１つ以上の認識し得る症状）の改善を指す。具体的な実施形態において、用語「治療する」、「治療」及び「治療している」は、患者には必ずしも認識できない、腫瘍の成長などの増殖性障害の少なくとも１つの計測可能な理学的パラメータの改善を指す。他の実施形態において用語「治療する」、「治療」及び「治療している」は、増殖性障害の進行の物理的な、例えば認識し得る症状の安定化による阻害、生理学的な、例えば理学的パラメータの安定化による阻害のいずれか又は両方を指す。他の実施形態において用語「治療する」、「治療」及び「治療している」は、腫瘍サイズ又は癌性細胞数の低減又は安定化を指す。
【０１５５】
用語「シグナル伝達経路」は、細胞のある部分から細胞の別の部分へのシグナルの伝達において役割を果たす種々のシグナル伝達分子間の生化学的関係を指す。語句「細胞表面受容体」は、シグナルを受け取り、且つ細胞の膜を越えてシグナルを伝える能力を有する分子及び分子複合体を含む。
【０１５６】
用語「対象」は、免疫応答を生じさせることのできる生きている生物（例えば、哺乳類、ヒト）を含むことが意図される。
【０１５７】
用語の「実質的に精製された」細胞は、他の細胞型を本質的に含まない細胞を指す。実質的に精製された細胞とは、その天然に存在する状態でそれが通常結び付いている他の細胞型と分離されている細胞も指す。一部の例では、実質的に精製された細胞集団とは、均質な細胞集団を指す。他の例では、この用語は、単に、その自然状態でそれが天然に結び付いている細胞から分離されている細胞を指す。一部の態様において、これらの細胞は、インビトロで培養される。他の態様において、これら細胞は、インビトロで培養されない。
【０１５８】
用語「療法的」とは、本明細書で使用されるとき、治療を意味する。療法的効果は疾患状態の低減、抑制、寛解又は根絶によって達成される。
【０１５９】
用語「予防」は、本明細書で使用されるとき、疾患又は疾患状態の予防又はそれに対する予防的治療を意味する。
【０１６０】
本発明に関連して、「腫瘍抗原」、又は「過剰増殖性障害抗原」、又は「過剰増殖性障害に関連する抗原」は、特定の過剰増殖性障害に共通する抗原を指す。特定の態様において、本発明の過剰増殖性障害抗原は、原発性又は転移性黒色腫、胸腺腫、リンパ腫、肉腫、肺癌、肝臓癌、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、白血病、子宮癌、子宮頸癌、膀胱癌、腎臓癌及び乳癌、前立腺癌（例えば、去勢抵抗性若しくは治療抵抗性の前立腺癌又は転移性前立腺癌）などの腺癌、卵巣癌、膵臓癌など、又は形質細胞増殖性障害、例えば無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無痛性骨髄腫）、意義不明の単クローン性高ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、形質細胞腫（例えば、形質細胞異常増殖症、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外形質細胞腫及び多発性形質細胞腫）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス及びＰＯＥＭＳ症候群（クロウ・深瀬症候群、高月病及びＰＥＰ症候群としても知られる）を含むが、これらに限定されない癌に由来する。
【０１６１】
用語「トランスフェクトされた」、又は「形質転換された」、又は「形質導入された」は、外因性核酸を宿主細胞に移入させるか又は導入するプロセスを指す。「トランスフェクトされた」、又は「形質転換された」、又は「形質導入された」細胞は、外因性核酸をトランスフェクト、形質転換又は形質導入されたものである。細胞には初代対象細胞及びその子孫が含まれる。
【０１６２】
用語「特異的に結合する」は、試料中に存在するコグネイト結合パートナー（例えば、Ｔ細胞上に存在する刺激及び／又は共刺激分子）タンパク質を認識し、結合する抗体又はリガンドであって、しかし、試料中の他の分子は、実質的に認識又は結合しない、抗体又はリガンドを指す。
【０１６３】
本明細書で使用されるとおりの「調節可能なキメラ抗原受容体（ＲＣＡＲ）」は、免疫エフェクター細胞内にあるとき、標的細胞、典型的には癌細胞に対する特異性及び細胞内シグナル生成を細胞に付与するポリペプチドの組、最も単純な実施形態では典型的には２つのポリペプチドを指す。一部の実施形態において、ＲＣＡＲは、少なくとも、細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、ＣＡＲ分子に関連して本明細書に定義されるとおりの刺激分子及び／又は共刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞質シグナル伝達ドメイン（本明細書では「細胞内シグナル伝達ドメイン」とも称される）とを含む。一部の実施形態において、ＲＣＡＲのポリペプチドの組は、互いに連続しておらず、例えば異なるポリペプチド鎖にある。一部の実施形態において、ＲＣＡＲは、二量化スイッチを含み、このスイッチは、二量化分子の存在を受けてポリペプチドを互いにカップリングすることができ、例えば抗原結合ドメインを細胞内シグナル伝達ドメインにカップリングすることができる。一部の実施形態において、ＲＣＡＲは、本明細書に記載されるとおりの細胞（例えば、免疫エフェクター細胞）、例えばＲＣＡＲ発現細胞（本明細書では「ＲＣＡＲＸ細胞」とも称される）に発現する。ある実施形態において、ＲＣＡＲＸ細胞は、Ｔ細胞であり、ＲＣＡＲＴ細胞と称される。ある実施形態において、ＲＣＡＲＸ細胞は、ＮＫ細胞であり、ＲＣＡＲＮ細胞と称される。ＲＣＡＲは、ＲＣＡＲ発現細胞に標的細胞、典型的には癌細胞に対する特異性及び調節可能な細胞内シグナル生成又は増殖を付与することができ、これがＲＣＡＲ発現細胞の免疫エフェクター特性を最適化し得る。実施形態において、ＲＣＡＲ細胞は、抗原結合ドメインによって結合される抗原を含む標的細胞に対する特異性を付与するために、少なくとも一部には抗原結合ドメインに依存する。
【０１６４】
「膜アンカー」又は「膜繋留ドメイン」は、この用語が本明細書で使用されるとき、細胞外又は細胞内ドメインを細胞膜にアンカリングするのに十分なポリペプチド又は部分、例えばミリストイル基を指す。
【０１６５】
「スイッチドメイン」は、この用語が本明細書で例えばＲＣＡＲに言及する場合に使用されるとき、二量化分子の存在下で別のスイッチドメインと会合する実体、典型的にはポリペプチドベースの実体を指す。この会合の結果、第１のスイッチドメインに連結、例えば融合した第１の実体と、第２のスイッチドメインに連結、例えば融合した第２の実体との機能的カップリングが生じる。第１及び第２のスイッチドメインは、まとめて二量化スイッチと称される。実施形態において、第１及び第２のスイッチドメインは、互いに同じであり、例えば、これらは、同じ一次アミノ酸配列を有するポリペプチドであり、まとめてホモ二量化スイッチと称される。実施形態において、第１及び第２のスイッチドメインは、互いに異なり、例えば、これらは、異なる一次アミノ酸配列を有するポリペプチドであり、まとめてヘテロ二量化スイッチと称される。実施形態において、スイッチは、細胞内である。実施形態において、スイッチは、細胞外である。実施形態において、スイッチドメインは、ポリペプチドベースの実体、例えばＦＫＢＰ又はＦＲＢベースであり、二量化分子は、小分子、例えばラパログである。実施形態において、スイッチドメインは、ポリペプチドベースの実体、例えばｍｙｃペプチドに結合するｓｃＦｖであり、二量化分子は、ポリペプチド、そのフラグメント又はポリペプチドの多量体、例えば１つ以上のｍｙｃ  ｓｃＦｖに結合するｍｙｃリガンド又はｍｙｃリガンドの多量体である。実施形態において、スイッチドメインは、ポリペプチドベースの実体、例えばｍｙｃ受容体であり、二量化分子は、抗体又はそのフラグメント、例えばｍｙｃ抗体である。
【０１６６】
「二量化分子」は、この用語が本明細書で例えばＲＣＡＲに言及する場合に使用されるとき、第１のスイッチドメインと第２のスイッチドメインとの会合を促進する分子を指す。実施形態において、二量化分子は、対象に天然に存在しないか、又は有意な二量化をもたらし得る濃度で存在しない。実施形態において、二量化分子は、小分子、例えばラパマイシン又はラパログ、例えばＲＡＤ００１である。
【０１６７】
用語「低免疫増強用量」は、ｍＴＯＲ阻害薬、例えばアロステリックｍＴＯＲ阻害薬、例えばＲＡＤ００１又はラパマイシン又は触媒ｍＴＯＲ阻害薬と併せて使用されるとき、例えばＰ７０  Ｓ６キナーゼ活性の阻害によって測定したときのｍＴＯＲ活性を、完全ではないが、部分的に阻害するｍＴＯＲ阻害薬の用量を指す。ｍＴＯＲ活性の、例えばＰ７０  Ｓ６キナーゼの阻害による評価方法は、本明細書で考察される。用量は、完全な免疫抑制をもたらすには不十分であるが、免疫応答を増強するには十分である。ある実施形態において、ｍＴＯＲ阻害薬の低免疫増強用量は、ＰＤ−１陽性Ｔ細胞の数の減少及び／又はＰＤ−１陰性Ｔ細胞の数の増加又はＰＤ−１陰性Ｔ細胞／ＰＤ−１陽性Ｔ細胞の比の増加をもたらす。ある実施形態において、ｍＴＯＲ阻害薬の低免疫増強用量は、ナイーブＴ細胞の数の増加をもたらす。ある実施形態において、ｍＴＯＲ阻害薬の低免疫増強用量は、以下の１つ以上をもたらす：
例えば、メモリーＴ細胞上、例えばメモリーＴ細胞前駆体上の、以下のマーカー：ＣＤ６２Ｌｈｉｇｈ、ＣＤ１２７ｈｉｇｈ、ＣＤ２７＋及びＢＣＬ２の１つ以上の発現の増加、
例えば、メモリーＴ細胞上、例えばメモリーＴ細胞前駆体上の、ＫＬＲＧ１の発現の減少、及び
メモリーＴ細胞前駆体、例えば以下の特性：ＣＤ６２Ｌｈｉｇｈの増加、ＣＤ１２７ｈｉｇｈの増加、ＣＤ２７＋の増加、ＫＬＲＧ１の減少及びＢＣＬ２の増加のいずれか１つ又は組み合わせを有する細胞の数の増加。
ここで、上記に記載される変化のいずれも、例えば未治療対象と比較したとき、例えば少なくとも一過性に起こる。
【０１６８】
「不応性」は、本明細書で使用されるとき、治療に応答しない疾患、例えば癌を指す。実施形態において、不応性癌は、治療の開始前又は開始時点で治療に抵抗性であり得る。他の実施形態において、不応性癌は、治療中に抵抗性になり得る。不応性癌は、抵抗性癌とも称される。
【０１６９】
「再発した」又は「再発する」は、本明細書で使用されるとき、改善又は応答期間後、例えば療法、例えば癌療法の前治療後における疾患（例えば、癌）又は癌などの疾患の徴候及び症状の再来又は再出現を指す。初期応答期間は、特定の閾値を下回る、例えば２０％、１％、１０％、５％、４％、３％、２％又は１％を下回るレベルの癌細胞を伴い得る。再出現は、特定の閾値を上回る、例えば２０％、１％、１０％、５％、４％、３％、２％又は１％を上回るレベルの癌細胞を含み得る。例えば、例としてＢ−ＡＬＬのコンテクストにおいて、再出現は、例えば、完全奏効後の血液、骨髄（＞５％）又は任意の髄外部位における芽球の再出現を含み得る。これに関連して、完全奏効は、＜５％ＢＭ芽球を含み得る。より一般的には、ある実施形態において、応答（例えば、完全奏効又は部分奏効）は、検出可能なＭＲＤ（微小残存病変）が存在しないことを含み得る。ある実施形態において、初期応答期間は、少なくとも１、２、３、４、５若しくは６日、少なくとも１、２、３若しくは４週間、少なくとも１、２、３、４、６、８、１０若しくは１２ヵ月又は少なくとも１、２、３、４若しくは５年続く。
【０１７０】
範囲：本開示全体を通じて、本発明の様々な態様が範囲の形式で提示され得る。範囲の形式での記載は、単に便宜上及び簡潔にするためのものであり、本発明の範囲に対する確固たる限定と解釈されてはならないことが理解されるべきである。従って、範囲の記載は、具体的に開示される全ての可能な部分範囲並びにその範囲内にある個々の数値を有すると考えられなければならない。例えば、１〜６などの範囲の記載は、１〜３、１〜４、１〜５、２〜４、２〜６、３〜６などの具体的に開示される部分範囲並びにその範囲内にある個々の数値、例えば１、２、２．７、３、４、５、５．３及び６を有すると考えられなければならない。別の例として、９５〜９９％の同一性などの範囲は、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するものを含み、且つ９６〜９９％、９６〜９８％、９６〜９７％、９７〜９９％、９７〜９８％及び９８〜９９％の同一性などの部分範囲を含む。これは、範囲の幅に関わらず適用される。
【０１７１】
「遺伝子編集系」は、この用語が本明細書で使用される場合、前記系により標的とされる遺伝子ＤＮＡの部位又はその近辺の１つ以上の核酸の改変、例えば欠失を導き及び実施する系、例えば１つ以上の分子を指す。遺伝子編集系は、当技術分野において公知であり、以下でより十分に記載する。
【０１７２】
本明細書で使用する「組み合わせて」投与するとは、２つ（以上）の異なる処置を、対象が障害を患っている過程中に対象に送達することを意味し、例えば２つ以上の処置を、対象が障害と診断された後且つ障害が治癒又は撲滅される前又は処置が他の理由で中止される前に送達される。いくつかの実施形態において、投与期間の重複があるように、一方の処置の送達は、第２の処置の送達開始時に依然として行われている。これは、本明細書では「同時（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ）」又は「同時（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ）送達」ということがある。他の実施形態において、一方の処置の送達は、他の処置の送達が始まる前に終わる。いずれかの場合のいくつかの実施形態において、処置は、組み合わせ投与のためにより有効である。例えば、第２の処置は、より有効である、例えば等しい効果が少ない第２の処置で見られるか、又は第２の処置が、第２の処置を第１の処置の非存在下で投与したときに見られるよりも大きい程度で症状を軽減するか又は第１の処置で同様の状況が見られる。いくつかの実施形態において、送達は、障害と関係する症状又は他のパラメータの減少が、他方の処置の非存在下で一方の処置の送達で観察されるより大きい。２処置の効果は、一部相加的、完全相加的又は相加的より大きいものであり得る。送達は、送達した第１の処置の効果が第２の処置の送達時になお検出可能であるようなものであり得る。
【０１７３】
本明細書の組成物及び方法の様々な態様を以下で更に詳細に説明する。更なる定義は、本明細書全体に記載されている。
【０１７４】
説明
ＢＣＭＡキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する細胞、例えばＣＡＲＴ−ＢＣＭＡを使用した、物質の組成物及び癌などの疾患の処置のための使用方法が本明細書に提供される。
【０１７５】
一態様において、本発明は、ＣＡＲを発現するように操作された細胞（例えば、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞）を提供し、ＣＡＲＴ細胞（「ＣＡＲＴ」）又はＣＡＲ  ＮＫ細胞は、抗腫瘍特性を呈する。一態様において、細胞がＣＡＲで形質転換され、ＣＡＲが細胞表面上に発現する。一部の実施形態において、細胞（例えば、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞）は、ＣＡＲをコードするウイルスベクターで形質導入される。一部の実施形態において、ウイルスベクターは、レトロウイルスベクターである。一部の実施形態において、ウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである。一部のかかる実施形態において、細胞は、ＣＡＲを安定に発現し得る。別の実施形態において、細胞（例えば、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞）は、ＣＡＲをコードする核酸、例えばｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ＤＮＡをトランスフェクトされる。一部のかかる実施形態において、細胞は、ＣＡＲを一過性に発現し得る。
【０１７６】
一態様において、本発明のＣＡＲは、特異的抗体の抗原結合ドメインを細胞内シグナル伝達分子と組み合わせる。例えば、いくつかの態様において、細胞内シグナル伝達分子は、ＣＤ３−ゼータ鎖、４−１ＢＢ及びＣＤ２８シグナル伝達モジュール並びにそれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない。一態様において、抗原結合ドメインは、ＢＣＭＡに結合する。
【０１７７】
更に、本発明は、疾患の中でも特に、ＢＣＭＡを発現する細胞又は組織が関わる癌又は任意の悪性腫瘍又は自己免疫疾患を治療するためのＢＣＭＡ  ＣＡＲ組成物及び薬剤又は方法におけるその使用を提供する。
【０１７８】
一態様において、本発明のＣＡＲは、ＢＣＭＡ発現正常細胞の根絶に使用することができ、従って細胞移植前の細胞コンディショニング療法としての使用に適用可能である。一態様において、ＢＣＭＡ発現正常細胞は、ＢＣＭＡ発現正常幹細胞であり、細胞移植は、幹細胞移植である。
【０１７９】
一態様において、本発明は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作された細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を提供し、ここで、ＣＡＲ  Ｔ細胞（「ＣＡＲＴ」）又はＣＡＲ  ＮＫ細胞は抗腫瘍特性を示す。好ましい抗原は、ＢＣＭＡである。一態様において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ヒト抗ＢＣＭＡ抗体フラグメントを含む。一態様において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含むヒト抗ＢＣＭＡ抗体フラグメントを含む。従って、本発明は、ヒト抗ＢＣＭＡ結合ドメインを含み、細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞に操作されたＢＣＭＡ−ＣＡＲ及び養子治療のためのその使用方法を提供する。
【０１８０】
一態様において、ＢＣＭＡ−ＣＡＲは、例えば、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ゼータシグナルドメイン及びこれらの任意の組み合わせの群から選択される少なくとも１つの細胞内ドメインを含む。一態様において、ＢＣＭＡ−ＣＡＲは、少なくとも１つの細胞内シグナル伝達ドメインを含み、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）又はＣＤ２８以外の１つ以上の共刺激分子からのものである。
【０１８１】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
本発明は、抗ＢＣＭＡ結合ドメイン（例えば、本明細書に記載されるようなヒト抗ＢＣＭＡ結合ドメイン）、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲ（例えば、ＣＡＲポリペプチド）を提供し、ここで、前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、表２〜１３に列挙される任意の抗ＢＭＣＡ重鎖結合ドメインアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）を含む。ＣＡＲの抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、表２〜１３に列挙される任意の抗ＢＭＣＡ軽鎖結合ドメインアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）を更に含み得る。
【０１８２】
本発明は、本明細書に記載されるようなＣＡＲをコードする、例えば抗ＢＣＭＡ結合ドメイン（例えば、本明細書に記載されるようなヒト抗ＢＣＭＡ結合ドメイン）、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲをコードする核酸分子も提供し、ここで、前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、表２〜１３に列挙される任意の抗ＢＭＣＡ重鎖結合ドメインアミノ酸配列のＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態において、コードされたＣＡＲの抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、表２〜１３に列挙される任意の抗ＢＭＣＡ軽鎖結合ドメインアミノ酸配列のＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３を更に含み得る。
【０１８３】
一態様において、例示的なＢＣＭＡ  ＣＡＲ構築物は、任意のリーダー配列、細胞外抗原結合ドメイン、ヒンジ、膜貫通ドメイン及び細胞内刺激性ドメインを含む。例示的なリーダー配列は、配列番号１として提供される。リーダー配列をコードする例示的な核酸配列は、配列番号１２として提供される。例示的なヒンジ／スペーサー配列は、配列番号２、３、４又は５として提供される。例示的な膜貫通ドメイン配列は、配列番号６として提供される。例示的な４−１ＢＢタンパク質の細胞内シグナル伝達ドメインの配列は、配列番号７として提供される。例示的なＣＤ２７の細胞内シグナル伝達ドメインの配列は、配列番号８として提供される。例示的なＣＤ３ゼータドメイン配列は、配列番号９又は１０として提供される。特定の実施形態において、ドメインは、単一融合タンパク質を形成するように同じリーディングフレームに隣接するかその中にある。他の実施形態において、ドメインは、例えば、本明細書に記載のようなＲＣＡＲ分子におけるような別々のポリペプチドにある。
【０１８４】
ＣＡＲ構築物は、次の配列の１つ以上を有するＧｌｙ／Ｓｅｒリンカーを含み得る：ＧＧＧＧＳ（配列番号２５）；１〜６「Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ」反復単位を含む、例えばＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ  ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ  ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２６）；ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ  ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２７）；ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ  ＧＧＧＧＳ（配列番号２８）；ＧＧＧＳ（配列番号２９）；又は１〜１０「Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｓｅｒ」反復単位を含む、例えばＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧ  ＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳ  ＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧ  ＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号４２）。
【０１８５】
実施形態において、ＣＡＲ構築物は、ポリＡ配列、例えば５０〜５０００又は１００〜５０００アデニン（それぞれ配列番号３０及び３３）を含む配列（例えば、配列番号３０、配列番号３３、配列番号３４又は配列番号３５）又は５０〜５０００チミン（配列番号３２）を含む配列（例えば、配列番号３１、配列番号３２）を含む。代替的に、ＣＡＲ構築物は、例えば、配列ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧを含むリンカーを含み得る（配列番号４３）。
【０１８６】
特定の実施形態において、全長ＢＣＭＡ  ＣＡＲ分子は、表２〜１３に提供されるＲ１Ｂ６、Ｒ１Ｆ２、Ｒ１Ｇ５、ＰＩ６１、Ｂ６１−０２、Ｂ６１−１０、Ｈｙ０３若しくはＨｙ５２又はそれと実質的に（例えば、９５〜９９％）同一である配列のアミノ酸配列を含むか、又はそのヌクレオチド配列によってコードされる。特定の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ分子又は抗ＢＣＭＡ抗原結合ドメインは、表２、６及び１０に提供されるＲ１Ｂ６、Ｒ１Ｆ２、Ｒ１Ｇ５、ＰＩ６１、Ｂ６１−０２、Ｂ６１−１０、Ｈｙ０３若しくはＨｙ５２又はそれと実質的に（例えば、９５〜９９％）同一である配列のｓｃＦｖアミノ酸配列を含む。特定の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ分子又は抗ＢＣＭＡ抗原結合ドメインは、表２、６及び１０に提供されるＲ１Ｂ６、Ｒ１Ｆ２、Ｒ１Ｇ５、ＰＩ６１、Ｂ６１−０２、Ｂ６１−１０、Ｈｙ０３若しくはＨｙ５２又はそれと実質的に（例えば、９５〜９９％）同一である配列の重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ分子又は抗ＢＣＭＡ抗原結合ドメインは、表２〜１３に提供されるＲ１Ｂ６、Ｒ１Ｆ２、Ｒ１Ｇ５、ＰＩ６１、Ｂ６１−０２、Ｂ６１−１０、Ｈｙ０３若しくはＨｙ５２又はそれと実質的に（例えば、９５〜９９％）同一である配列の重鎖可変領域（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及び／又はＨＣＤＲ３）からの１つ、２つ又は３つのＣＤＲ及び／又は軽鎖可変領域（例えば、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／又はＬＣＤＲ３）からの１つ、２つ又は３つのＣＤＲを含む。
【０１８７】
本明細書に記載のＣＡＲ分子の一部となり得る様々な成分の非限定的な例の配列を表１に列挙する。表中、「ａａ」は、アミノ酸を表し、「ｎａ」は、対応するペプチドをコードする核酸を表す。
【０１８８】
【表１】
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【０１８９】
【表２】
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【０１９０】
【表３】
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【０１９１】
【表４】
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【０１９２】
【表５】
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【０１９３】
【表６】
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【０１９４】
ＣＡＲ抗原結合ドメイン
一態様において、抗原結合ドメインを含むＣＡＲの一部分は、腫瘍抗原、例えば本明細書に記載される腫瘍抗原を標的とする抗原結合ドメインを含む。一態様において、本発明のＣＡＲは、ＢＣＭＡ（例えば、ヒトＢＣＭＡ）に特異的に結合する結合ドメインを含む。
【０１９５】
抗原結合ドメインは、限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体及びその機能性フラグメント、例えば、限定されないが、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及びラクダ科動物由来ナノボディの可変ドメイン（ＶＨＨ）などのシングルドメイン抗体及び組換えフィブロネクチンドメインなど、抗原結合ドメインとして機能することが当技術分野において公知の代替的足場を含め、抗原に結合する任意のタンパク質であり得る。
【０１９６】
例示的な抗ＢＣＭＡ結合ドメインアミノ酸配列を表２〜１３に提供する。一態様において、抗原結合ドメインは、ヒト抗体又はヒト抗体フラグメントを含む。いくつかの実施形態において、ヒト抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、本明細書（例えば、表２〜１３）に記載のヒト抗ＢＣＭＡ結合ドメインのＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３の１つ以上（例えば、３つ全て）並びに／又は本明細書（例えば、表２〜１３）に記載のヒト抗ＢＣＭＡ結合ドメインのＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３の１つ以上（例えば、３つ全て）を含む。いくつかの一実施形態において、ヒト抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、本明細書（例えば、表２、６及び１０）に記載のヒトＶＬ及び／又は本明細書（例えば、表２、６及び１０）に記載のヒトＶＨを含む。いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、表２、６及び１０のアミノ酸配列のＶＬ及びＶＨを含むｓｃＦｖである。一実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、表２、６及び１０に提供するアミノ酸配列の少なくとも１、２若しくは３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０若しくは１０を超えないアミノ酸配列又は表２、６及び１０のアミノ酸配列と９５〜９９％の同一性を有する配列を含むＶＬ；及び／又は表２、６及び１０に提供するアミノ酸配列の少なくとも１、２若しくは３修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するが、修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）が３０、２０若しくは１０を超えないアミノ酸配列又は表２、６及び１０のアミノ酸配列と９５〜９９％の同一性を有する配列を含むＶＨを含む。
【０１９７】
【表７】
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【０１９８】
【表８】
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【０１９９】
【表９】
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【０２００】
【表１０】
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【０２０１】
【表１１】
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【０２０２】
【表１２】
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【０２０３】
【表１３】
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【０２０４】
【表１４】
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【０２０５】
【表１５】
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【０２０６】
【表１６】
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【０２０７】
【表１７】
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【０２０８】
【表１８】
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【０２０９】
【表１９】
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【０２１０】
【表２０】
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【０２１１】
【表２１】
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【０２１２】
【表２２】
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【０２１３】
【表２３】
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【０２１４】
【表２４】
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【０２１５】
【表２５】
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【０２１６】
【表２６】
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【０２１７】
【表２７】
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【０２１８】
【表２８】
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【０２１９】
【表２９】
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【０２２０】
【表３０】
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【０２２１】
【表３１】
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【０２２２】
【表３２】
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【０２２３】
【表３３】
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【０２２４】
【表３４】
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【０２２５】
【表３５】
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【０２２６】
【表３６】
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【０２２７】
【表３７】
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【０２２８】
【表３８】
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【０２２９】
【表３９】
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【０２３０】
【表４０】
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【０２３１】
【表４１】
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【０２３２】
【表４２】
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【０２３３】
【表４３】
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【０２３４】
【表４４】
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【０２３５】
【表４５】
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【０２３６】
【表４６】
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【０２３７】
いくつかの実施形態において、ヒト抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３を含む。
【０２３８】
特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ分子又は本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、
（１）以下から選択される１つ、２つ又は３つの軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ：
（ｉ）配列番号５４のＬＣ  ＣＤＲ１、配列番号５５のＬＣ  ＣＤＲ２及び配列番号５６のＬＣ  ＣＤＲ３；及び／又は
（２）以下の１つからの１つ、２つ又は３つの重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ：
（ｉ）配列番号４４のＨＣ  ＣＤＲ１、配列番号４５のＨＣ  ＣＤＲ２及び配列番号８４のＨＣ  ＣＤＲ３；
（ｉｉ）配列番号４４のＨＣ  ＣＤＲ１、配列番号４５のＨＣ  ＣＤＲ２及び配列番号４６のＨＣ  ＣＤＲ３；
（ｉｉｉ）配列番号４４のＨＣ  ＣＤＲ１、配列番号４５のＨＣ  ＣＤＲ２及び配列番号６８のＨＣ  ＣＤＲ３；又は
（ｉｖ）配列番号４４のＨＣ  ＣＤＲ１、配列番号４５のＨＣ  ＣＤＲ２及び配列番号７６のＨＣ  ＣＤＲ３
を含む。
【０２３９】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ分子又は本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、
（１）以下の１つからの１つ、２つ又は３つの軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ：
（ｉ）配列番号９５のＬＣ  ＣＤＲ１、配列番号１３１のＬＣ  ＣＤＲ２及び配列番号１３２のＬＣ  ＣＤＲ３；
（ｉｉ）配列番号９５のＬＣ  ＣＤＲ１、配列番号９６のＬＣ  ＣＤＲ２及び配列番号９７のＬＣ  ＣＤＲ３；
（ｉｉｉ）配列番号９５のＬＣ  ＣＤＲ１、配列番号１１４のＬＣ  ＣＤＲ２及び配列番号１１５のＬＣ  ＣＤＲ３；又は
（ｉｖ）配列番号９５のＬＣ  ＣＤＲ１、配列番号１１４のＬＣ  ＣＤＲ２及び配列番号９７のＬＣ  ＣＤＲ３；及び／又は
（２）以下の１つからの１つ、２つ又は３つの重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ：
（ｉ）配列番号８６のＨＣ  ＣＤＲ１、配列番号１３０のＨＣ  ＣＤＲ２及び配列番号８８のＨＣ  ＣＤＲ３；
（ｉｉ）配列番号８６のＨＣ  ＣＤＲ１、配列番号８７のＨＣ  ＣＤＲ２及び配列番号８８のＨＣ  ＣＤＲ３；又は
（ｉｉｉ）配列番号８６のＨＣ  ＣＤＲ１、配列番号１０９のＨＣ  ＣＤＲ２及び配列番号８８のＨＣ  ＣＤＲ３
を含む。
【０２４０】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ分子又は本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、
（１）以下の１つからの１つ、２つ又は３つの軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ：
（ｉ）配列番号１４７のＬＣ  ＣＤＲ１、配列番号１８２のＬＣ  ＣＤＲ２及び配列番号１８３のＬＣ  ＣＤＲ３；
（ｉｉ）配列番号１４７のＬＣ  ＣＤＲ１、配列番号１４８のＬＣ  ＣＤＲ２及び配列番号１４９のＬＣ  ＣＤＲ３；又は
（ｉｉｉ）配列番号１４７のＬＣ  ＣＤＲ１、配列番号１７０のＬＣ  ＣＤＲ２及び配列番号１７１のＬＣ  ＣＤＲ３；及び／又は
（２）以下の１つからの１つ、２つ又は３つの重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ：
（ｉ）配列番号１７９のＨＣ  ＣＤＲ１、配列番号１８０のＨＣ  ＣＤＲ２及び配列番号１８１のＨＣ  ＣＤＲ３；
（ｉｉ）配列番号１３７のＨＣ  ＣＤＲ１、配列番号１３８のＨＣ  ＣＤＲ２及び配列番号１３９のＨＣ  ＣＤＲ３；又は
（ｉｉｉ）配列番号１６０のＨＣ  ＣＤＲ１、配列番号１６１のＨＣ  ＣＤＲ２及び配列番号１６２のＨＣ  ＣＤＲ３
を含む。
【０２４１】
いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号４４、４５、８４、５４、５５及び５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号４４、４５、４６、５４、５５及び５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号４４、４５、６８、５４、５５及び５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号４４、４５、７６、５４、５５及び５６のアミノ酸配列を含む。
【０２４２】
いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号４７、４８、８４、５７、５８及び５９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号４７、４８、４６、５７、５８及び５９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号４７、４８、６８、５７、５８及び５９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号４７、４８、７６、５７、５８及び５９のアミノ酸配列を含む。
【０２４３】
いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号４９、５０、８５、６０、５８及び５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号４９、５０、５１、６０、５８及び５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号４９、５０、６９、６０、５８及び５６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号４９、５０、７７、６０、５８及び５６のアミノ酸配列を含む。
【０２４４】
いくつかの実施形態において、ヒト抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、ＶＨ（例えば、本明細書に記載のＶＨ）及びＶＬ（例えば、本明細書に記載のＶＬ）を含むｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨは、リンカー、例えば本明細書に記載のリンカー、例えば表１に記載のリンカーを介してＶＬに結合される。いくつかの実施形態において、ヒト抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎリンカー（ここで、ｎは、１、２、３、４、５又は６、好ましくは３又は４である）（配列番号２６）を含む。ｓｃＦｖの軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、例えば、下記方向のいずれでもあり得る：軽鎖可変領域−リンカー−重鎖可変領域又は重鎖可変領域−リンカー−軽鎖可変領域。
【０２４５】
一態様において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、フラグメント、例えば単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。一態様において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、Ｆｖ、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）２又は二機能性（例えば、二特異性）ハイブリッド抗体（例えば、Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７，１０５（１９８７））である。一態様において、本発明の抗体及びそのフラグメントは、野生型の親和性又は増強した親和性でＢＣＭＡタンパク質に結合する。
【０２４６】
ある例において、ｓｃＦｖは、当技術分野で知られる方法により製造できる（例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６及びＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３を参照されたい）。ＳｃＦｖ分子は、可動性ポリペプチドリンカーを使用して、ＶＨ領域とＶＬ領域とを一緒に連結することにより産生できる。ｓｃＦｖ分子は、最適長及び／又はアミノ酸組成を有するリンカー（例えば、Ｓｅｒ−Ｇｌｙリンカー）を含む。リンカー長は、ｓｃＦｖの可変領域がどのように折りたたまれ、相互作用するかに大きく影響し得る。実際、短ポリペプチドリンカーを用いる場合（例えば、５〜１０アミノ酸）、鎖内折りたたみは、阻止される。鎖内折りたたみは、２可変領域が一体となって機能的エピトープ結合部位を形成させるためにも必要である。リンカー方向及びサイズの例は、例えば、参照により本明細書に組み込まれるＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．１９９３  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：６４４４−６４４８、米国特許出願公開第２００５／０１００５４３号明細書、同第２００５／０１７５６０６号明細書、同第２００７／００１４７９４号明細書及び国際公開第２００６／０２０２５８号パンフレット及び国際公開第２００７／０２４７１５号パンフレットを参照されたい。
【０２４７】
ｓｃＦｖは、そのＶＬ領域とＶＨ領域との間に少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０又はそれを超えるアミノ酸残基のリンカーを含み得る。リンカー配列は、あらゆる天然に存在するアミノ酸を含み得る。一実施形態において、リンカー配列は、アミノ酸グリシン及びセリンを含む。別の実施形態において、リンカー配列は、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎ（ここで、ｎは、１以上の正の整数である）などの一連のグリシン及びセリン反復を含む（配列番号２５）。いくつかの実施形態において、リンカーは（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４（配列番号２７）又は（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号２８）であり得る。リンカー長の変動は、活性を維持又は増強し、活性試験において優れた有効性を生じ得る。
【０２４８】
膜貫通ドメイン
膜貫通ドメインに関して、種々の実施形態において、ＣＡＲは、ＣＡＲの細胞外ドメインに結合する膜貫通ドメインを含むように設計できる。膜貫通ドメインは、膜貫通領域に隣接した１つ以上の更なるアミノ酸、例えば膜貫通が由来するタンパク質の細胞外領域と関連する１つ以上のアミノ酸（例えば、細胞外領域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０から最大１５アミノ酸）及び／又は膜貫通タンパク質が由来するタンパク質の細胞内領域と関連する１つ以上の更なるアミノ酸（例えば、細胞内領域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０から最大１５アミノ酸）を含み得る。一態様において、膜貫通ドメインは、ＣＡＲの他のドメインと結合するものである。ある例において、膜貫通ドメインは、このようなドメインが、同一又は異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインと結合するのを避けるように、例えば受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小化するように選択又はアミノ酸置換による修飾ができる。一態様において、膜貫通ドメインは、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲＴ細胞）表面上の別のＣＡＲとホモ二量体化できる。異なる態様において、膜貫通ドメインのアミノ酸配列は、同じＣＡＲ発現細胞、例えばＣＡＲＴに存在する天然結合パートナーの結合ドメインとの相互作用を最小化するように修飾又は置換され得る。
【０２４９】
膜貫通ドメインは、天然由来又は組み換え源由来であり得る。源が天然であるとき、ドメインは、あらゆる膜結合又は膜貫通タンパク質由来であり得る。一態様において、膜貫通ドメインは、ＣＡＲが標的に結合したときには常に細胞内ドメインにシグナル伝達できる。本発明において特に有用な膜貫通ドメインは、例えば、Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖又はゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８（例えば、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ）、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４の少なくとも膜貫通領域を含み得る。いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインは、少なくとも共刺激分子（例えば、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ性活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒアルファ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンド）の膜貫通領域を含み得る。
【０２５０】
ある例において、膜貫通ドメインは、ヒンジ、例えばヒトタンパク質からのヒンジを介してＣＡＲの細胞外領域、例えばＣＡＲの抗原結合ドメインに結合できる。例えば、いくつかの実施形態において、ヒンジは、ヒトＩｇ（免疫グロブリン）ヒンジ、例えばＩｇＧ４ヒンジ又はＣＤ８ａヒンジであり得る。いくつかの実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、配列番号２のアミノ酸配列を含む（例えば、これからなる）。一態様において、膜貫通ドメインは、配列番号６の膜貫通ドメインを含む（例えば、これからなる）。
【０２５１】
一態様において、ヒンジ又はスペーサーは、ＩｇＧ４ヒンジを含む。例えば、いくつかの実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、配列番号３のヒンジを含む。いくつかの実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、配列番号１４のヌクレオチド配列によってコードされるヒンジを含む。
【０２５２】
一態様において、ヒンジ又はスペーサーは、ＩｇＤヒンジを含む。例えば、いくつかの実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、配列番号４のアミノ酸配列のヒンジを含む。いくつかの実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、配列番号１５のヌクレオチド配列によってコードされるヒンジを含む。
【０２５３】
一態様において、膜貫通ドメインは、組み換えであり得、その場合、ロイシン及びバリンなどの疎水性残基を優勢に含む。一態様において、フェニルアラニン、トリプトファン及びバリンのトリプレットを組み換え膜貫通ドメインの各末端に見ることができる。
【０２５４】
任意選択により、２〜１０アミノ酸長の短オリゴ又はポリペプチドリンカーがＣＡＲの膜貫通ドメインと細胞質領域との間に結合を形成し得る。グリシン−セリンダブレットは、特に適当なリンカーを提供する。例えば、一態様において、リンカーは、配列番号５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、リンカーは、配列番号１６のヌクレオチド配列によりコードされる。
【０２５５】
一態様において、ヒンジ又はスペーサーは、ＫＩＲ２ＤＳ２ヒンジを含む。
【０２５６】
細胞質ドメイン
本発明のＣＡＲの細胞質ドメイン又は領域は、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。細胞内シグナル伝達ドメインは、一般的に、ＣＡＲが導入されている免疫細胞の正常エフェクター機能の少なくとも１つの活性化の原因である。
【０２５７】
本発明のＣＡＲにおいて使用する細胞内シグナル伝達ドメインの例は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）及び抗原受容体結合後にシグナル伝達を開始するために協調して機能する共受容体の細胞質配列並びにこれらのあらゆる誘導体又は変異体及び同じ機能的能力を有するあらゆる組み換え配列を含む。
【０２５８】
ＴＣＲ単独により産生されたシグナルは、Ｔ細胞の完全活性化に不十分であり、二次及び／又は共刺激性シグナルも必要であることが知られる。従って、Ｔ細胞活性化は、２つの異なるクラスの細胞質シグナル伝達配列が介在するということができる：ＴＣＲ（初代細胞内シグナル伝達ドメイン）を介して抗原依存性一次活性化を開始するもの及び二次又は共刺激性シグナル（二次細胞質ドメイン、例えば共刺激ドメイン）を提供するように抗原非依存的方法で作用するもの。
【０２５９】
一次シグナル伝達ドメインは、ＴＣＲ複合体の一次活性化を刺激性方向又は阻害性方向のいずれかで制御する。刺激性方向で作用する初代細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ又はＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含み得る。
【０２６０】
本発明において特に有用であるＩＴＡＭ含有初代細胞内シグナル伝達ドメインの例は、ＴＣＲゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（「ＩＣＯＳ」としても知られる）、ＦｃεＲＩ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２及びＣＤ６６ｄのものを含む。いくつかの実施形態において、本発明のＣＡＲは、細胞内シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ゼータの一次シグナル伝達ドメインを含む。
【０２６１】
いくつかの実施形態において、一次シグナル伝達ドメインは、天然ＩＴＡＭドメインと比較して改変された（例えば、増加又は減少した）活性を有する修飾ＩＴＡＭドメイン、例えば変異ＩＴＡＭドメインを含む。いくつかの実施形態において、一次シグナル伝達ドメインは、修飾ＩＴＡＭ含有初代細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば最適化及び／又は切断されたＩＴＡＭ含有初代細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、一次シグナル伝達ドメインは、１、２、３、４つ又はそれを超えるＩＴＡＭモチーフを含む。
【０２６２】
本発明で特に有用である初代細胞内シグナル伝達ドメインを含む分子の更なる例は、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２及びＣＤ３２のものを含む。
【０２６３】
ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインをそれ自体で含むことができるか、又は本発明のＣＡＲに関連して有用な任意の他の所望の細胞内シグナル伝達ドメインと組み合わせ得る。例えば、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ゼータ鎖部分及び共刺激性シグナル伝達ドメインを含み得る。共刺激性シグナル伝達ドメインは、共刺激性分子の細胞内ドメインを含むＣＡＲの部分を指す。共刺激性分子は、リンパ球の抗原に対する効率的応答に必要な抗原受容体又はそのリガンド以外の細胞表面分子である。このような分子の例は、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ性活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒアルファ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ及びＣＤ８３などと特異的に結合するリガンドを含む。例えば、ＣＤ２７共刺激は、インビトロでヒトＣＡＲＴ細胞の増殖、エフェクター機能及び生存を増強し、インビボでヒトＴ細胞残留性及び抗腫瘍活性を増強することが示されている（Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２０１２；１１９（３）：６９６−７０６）。本発明のＣＡＲの細胞質部分内の細胞内シグナル伝達配列は、互いに無作為に又は特定の順序で連結し得る。任意選択により、例えば２〜１０アミノ酸（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０アミノ酸）長の短オリゴ又はポリペプチドリンカーは、細胞内シグナル伝達配列間に結合を形成し得る。いくつかの実施形態において、グリシン−セリンダブレットを適当なリンカーとして使用できる。いくつかの実施��態において、単一アミノ酸、例えばアラニン、グリシンを適当なリンカーとして使用できる。
【０２６４】
一態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、２つ以上、例えば２、３、４、５つ又はそれを超える共刺激性シグナル伝達ドメインを含むように設計される。一実施形態において、２つ以上、例えば２、３、４、５つ又はそれを超える共刺激性シグナル伝達ドメインは、リンカー分子、例えば本明細書に記載のリンカー分子により分けられる。いくつかの実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、２つの共刺激性シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、リンカー分子は、グリシン残基である。いくつかの実施形態において、リンカーは、アラニン残基である。
【０２６５】
一態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータのシグナル伝達ドメイン及びＣＤ２８のシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータのシグナル伝達ドメイン及び４−１ＢＢのシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一態様において、４−１ＢＢのシグナル伝達ドメインは、配列番号７のシグナル伝達ドメインである。一態様において、ＣＤ３ゼータのシグナル伝達ドメインは、配列番号９（変異体ＣＤ３ゼータ）又は配列番号１０（野生型ヒトＣＤ３ゼータ）のシグナル伝達ドメインである。
【０２６６】
一態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータのシグナル伝達ドメイン及びＣＤ２７のシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一態様において、ＣＤ２７のシグナル伝達ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含む。一態様において、ＣＤ２７のシグナル伝達ドメインは、配列番号１９の核酸配列によりコードされる。
【０２６７】
一態様において、細胞内は、ＣＤ３ゼータのシグナル伝達ドメイン及びＣＤ２８のシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一態様において、ＣＤ２８のシグナル伝達ドメインは、配列番号３６のアミノ酸配列を含む。一態様において、ＣＤ２８のシグナル伝達ドメインは、配列番号３７の核酸配列によりコードされる。
【０２６８】
一態様において、細胞内は、ＣＤ３ゼータのシグナル伝達ドメイン及びＩＣＯＳのシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一態様において、ＩＣＯＳのシグナル伝達ドメインは、配列番号３８のアミノ酸配列を含む。一態様において、ＩＣＯＳのシグナル伝達ドメインは、配列番号３９の核酸配列によりコードされる。
【０２６９】
ＣＡＲの構成
多特異性ＣＡＲ
一実施形態において、本発明のＣＡＲは、多特異性ＣＡＲである。いくつかの実施形態において、多特異性ＣＡＲは、二特異性ＣＡＲである。いくつかの実施形態において、二特異性ＣＡＲは、二特異性抗体分子である抗原結合ドメインを含む。二特異性抗体分子は、第１エピトープに対する結合特異性を有する第１免疫グロブリン可変ドメイン配列及び第２エピトープに対する結合特異性を有する第２免疫グロブリン可変ドメイン配列により特徴付けられる。一実施形態において、第１及び第２エピトープは、同じ抗原、例えば同じタンパク質（又は多量体タンパク質のサブユニット）である。一実施形態において、第１及び第２エピトープは、重複する。一実施形態において、第１及び第２エピトープは、重複しない。一実施形態において、第１及び第２エピトープは、異なる抗原、例えば異なるタンパク質（又は多量体タンパク質の異なるサブユニット）にある。一実施形態において、二特異性抗体分子は、第１エピトープに結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列及び軽鎖可変ドメイン配列並びに第２エピトープに結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列及び軽鎖可変ドメイン配列を含む。一実施形態において、二特異性抗体分子は、第１エピトープに結合特異性を有する半抗体及び第２エピトープに結合特異性を有する半抗体を含む。一実施形態において、二特異性抗体分子は、第１エピトープに結合特異性を有する半抗体又はそのフラグメント及び第２エピトープに結合特異性を有する半抗体又はそのフラグメントを含む。一実施形態において、二特異性抗体分子は、第１エピトープに結合特異性を有するｓｃＦｖ又はそのフラグメント及び第２エピトープに結合特異性を有するｓｃＦｖ又はそのフラグメントを含む。
【０２７０】
特定の実施形態において、本発明のＣＡＲは、多特異性（例えば、二特異性又は三特異性）抗体分子である抗原結合ドメインを含む。二特異性又はヘテロ二量体抗体分子を産生するためのプロトコルは、当技術分野で知られており、例えば米国特許第５７３１１６８号明細書に記載の「ノブインアホール」アプローチ；例えば、国際公開第０９／０８９００４号パンフレット、国際公開第０６／１０６９０５号パンフレット及び国際公開第２０１０／１２９３０４号パンフレットに記載のような静電的ステアリングＦｃ対形成；例えば、国際公開第０７／１１０２０５号パンフレットに記載のような鎖交換操作ドメイン（ＳＥＥＤ）ヘテロ二量体形成；例えば、国際公開第０８／１１９３５３号パンフレット、国際公開第２０１１／１３１７４６号パンフレット及び国際公開第２０１３／０６０８６７号パンフレットに記載のようなＦａｂアーム交換；例えば、米国特許第４４３３０５９号明細書に記載のような、例えばアミン反応性基及びスルフヒドリル反応性基を有するヘテロ二官能性試薬を使用して二特異性構造を製造するための、抗体架橋結合による二重抗体コンジュゲート；例えば、米国特許第４４４４８７８号明細書に記載のような、２つの鎖間のジスルフィド結合の還元及び酸化のサイクルを経る異なる抗体からの半抗体（重−軽鎖対又はＦａｂ）の組み換えにより産生する二特異性抗体決定基；例えば、米国特許第５２７３７４３号明細書に記載のような、三機能性抗体、スルフヒドリル反応性基により架橋された３Ｆａｂ’フラグメント；例えば、米国特許第５５３４２５４号明細書に記載のような、生合成結合タンパク質、例えばＣ末端テイル、好ましくはジスルフィド又はアミン反応性化学架橋結合により架橋されたｓｃＦｖの対；例えば、米国特許第５５８２９９６号明細書に記載のような、二機能性抗体、例えば置換された定常ドメインを有する、ロイシンジッパー（例えば、ｃ−ｆｏｓ及びｃ−ｊｕｎ）により二量体化された異なる結合特性を有するＦａｂフラグメント；例えば、米国特許第５５９１８２８号明細書に記載のような、二特異性及びオリゴ特異性一価及びオリゴ価受容体、例えば一方の抗体のＣＨ１領域と他方の典型的には軽鎖を伴う抗体のＶＨ領域との間のポリペプチドスペーサーを経て連結した２つの抗体（２つのＦａｂフラグメント）のＶＨ−ＣＨ１領域；例えば、米国特許第５６３５６０２号明細書に記載のような、二特異性ＤＮＡ−抗体コンジュゲート、例えば二本鎖切片のＤＮＡを経た抗体又はＦａｂフラグメントの架橋；例えば、米国特許第５６３７４８１号明細書に記載のような、二特異性融合タンパク質、例えば親水性らせん状ペプチドリンカーを間に含み、完全定常領域を含む、２つのｓｃＦｖを含む発現構築物；例えば、米国特許第５８３７２４２号明細書に記載のような、多価及び多特異性結合タンパク質、例えばＩｇ重鎖可変領域の結合領域を有する第１ドメイン及びＩｇ軽鎖可変領域の結合領域を有する第２ドメインを有し、一般に二特異性抗体（二特異性、三特異性、四特異性の分子を作るための高次構造も包含される）と呼ばれるポリペプチドの二量体；例えば、米国特許第５８３７８２１号明細書に記載のような、二特異性／多価分子を形成するように二量体化できる、ペプチドスペーサーで抗体ヒンジ領域及びＣＨ３領域に更に結合された、連結ＶＬ鎖及びＶＨ鎖を有するミニボディ構築物；二特異性抗体を形成するように二量体を形成できる、いずれかの方向で短ペプチドリンカー（例えば、５つ又は１０のアミノ酸）により、又はリンカーなしで連結されたＶＨ及びＶＬドメイン；例えば、米国特許第５８４４０９４号明細書に記載のような三量体及び四量体；例えば、米国特許第５８６４０１９号明細書に記載のような、一連のＦＶ（又はｓｃＦｖ）を形成するように更にＶＬドメインと結合した、Ｃ末端で架橋可能基とのペプチド結合により連結した一連のＶＨドメイン（又はファミリーメンバーにおけるＶＬドメイン）；及び例えば、米国特許第５８６９６２０号明細書に記載のような、ｓｃＦＶ又は二特異性抗体形態の両方を使用して、例えばホモ二価、ヘテロ二価、三価及び四価構造を形成するように非共有又は化学架橋により多価構造に合わさっている、ペプチドリンカーにより連結したＶＨドメイン及びＶＬドメインの両方を有する一本鎖結合ポリペプチドを例えば含むが、これらに限定されない。多特異性及び二特異性分子並びにそれを製造するための更なる例は、例えば、米国特許第５９１０５７３号明細書、米国特許第５９３２４４８号明細書、米国特許第５９５９０８３号明細書、米国特許第５９８９８３０号明細書、米国特許第６００５０７９号明細書、米国特許第６２３９２５９号明細書、米国特許第６２９４３５３号明細書、米国特許第６３３３３９６号明細書、米国特許第６４７６１９８号明細書、米国特許第６５１１６６３号明細書、米国特許第６６７０４５３号明細書、米国特許第６７４３８９６号明細書、米国特許第６８０９１８５号明細書、米国特許第６８３３４４１号明細書、米国特許第７１２９３３０号明細書、米国特許第７１８３０７６号明細書、米国特許第７５２１０５６号明細書、米国特許第７５２７７８７号明細書、米国特許第７５３４８６６号明細書、米国特許第７６１２１８１号明細書、米国特許出願公開第２００２００４５８７Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００２０７６４０６Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００２１０３３４５Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００３２０７３４６Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００３２１１０７８Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００４２１９６４３Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００４２２０３８８Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００４２４２８４７Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５００３４０３Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５００４３５２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５０６９５５２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５０７９１７０Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５１００５４３Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５１３６０４９Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５１３６０５１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５１６３７８２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００５２６６４２５Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００６０８３７４７Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００６１２０９６０Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００６２０４４９３Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００６２６３３６７Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００７００４９０９Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００７０８７３８１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００７１２８１５０Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００７１４１０４９Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００７１５４９０１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００７２７４９８５Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００８０５０３７０Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００８０６９８２０Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００８１５２６４５Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００８１７１８５５Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００８２４１８８４Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００８２５４５１２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００８２６０７３８Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９１３０１０６Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９１４８９０５Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９１５５２７５Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９１６２３５９Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９１６２３６０Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９１７５８５１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９１７５８６７Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９２３２８１１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９２３４１０５Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９２６３３９２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２００９２７４６４９Ａ１号明細書、欧州特許第３４６０８７Ａ２号明細書、国際公開第０００６６０５Ａ２号パンフレット、国際公開第０２０７２６３５Ａ２号パンフレット、国際公開第０４０８１０５１Ａ１号パンフレット、国際公開第０６０２０２５８Ａ２号パンフレット、国際公開第２００７０４４８８７Ａ２号パンフレット、国際公開第２００７０９５３３８Ａ２号パンフレット、国際公開第２００７１３７７６０Ａ２号パンフレット、国際公開第２００８１１９３５３Ａ１号パンフレット、国際公開第２００９０２１７５４Ａ２号パンフレット、国際公開第２００９０６８６３０Ａ１号パンフレット、国際公開第９１０３４９３Ａ１号パンフレット、国際公開第９３２３５３７Ａ１号パンフレット、国際公開第９４０９１３１Ａ１号パンフレット、国際公開第９４１２６２５Ａ２号パンフレット、国際公開第９５０９９１７Ａ１号パンフレット、国際公開第９６３７６２１Ａ２号パンフレット、国際公開第９９６４４６０Ａ１号パンフレットに見ることができる。上に引用した出願の内容は、参照によりその全体が本明細書に援用される。
【０２７１】
二特異性抗体分子の各抗体又は抗体フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）内において、ＶＨは、ＶＬの上流又は下流にあり得る。一実施形態において、上流抗体又は抗体フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＬ（ＶＬ１）の上流のそのＶＨ（ＶＨ１）と共に配置され、下流抗体又は抗体フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＬ（ＶＬ２）の上流のそのＶＨ（ＶＨ２）と共に配置され、その結果、全体的二特異性抗体分子は、配置ＶＨ１−ＶＬ１−ＶＬ２−ＶＨ２を有する。他の実施形態において、上流抗体又は抗体フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＨ（ＶＨ１）の上流のそのＶＬ（ＶＬ１）と共に配置され、下流抗体又は抗体フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＨ（ＶＨ２）の上流のそのＶＬ（ＶＬ２）と共に配置され、その結果、全体的二特異性抗体分子は、配置ＶＬ１−ＶＨ１−ＶＨ２−ＶＬ２を有する。任意選択により、リンカーは、２つの抗体又は抗体フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）間、例えば構築物がＶＨ１−ＶＬ１−ＶＬ２−ＶＨ２として配列される場合にＶＬ１とＶＬ２との間又は構築物がＶＬ１−ＶＨ１−ＶＨ２−ＶＬ２として配置される場合にＶＨ１とＶＨ２との間に配置される。リンカーは、本明細書に記載のリンカー、例えば（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎリンカー（配列番号２６）（式中、ｎは、１、２、３、４、５又は６、好ましくは４である）であり得る。一般に、２つのｓｃＦｖ間のリンカーは、２つのｓｃＦｖのドメイン間の誤対合を避けるのに十分長くなければならない。任意選択により、リンカーは、第１のｓｃＦｖのＶＬとＶＨとの間に配置される。任意選択により、リンカーは、第２のｓｃＦｖのＶＬとＶＨとの間に配置される。複数リンカーを有する構築物において、リンカーの任意の２つ以上は、同じであるか又は異なり得る。従って、一実施形態において、二特異性ＣＡＲは、本明細書に記載のような配置でＶＬ、ＶＨ及び任意選択により１つ以上のリンカーを含む。
【０２７２】
一態様において、二特異性抗体分子は、第１免疫グロブリン可変ドメイン配列、例えばｓｃＦｖにより特徴付けられ、これは、ＢＣＭＡに結合特異性を有し、例えば本明細書に記載のような、例えば表２、６及び１０に記載するようなｓｃＦｖを含むか又は本明細書に記載のＢＣＭＡ  ｓｃＦｖからの軽鎖ＣＤＲ及び／又は重鎖ＣＤＲ及び第２エピトープに対する結合特異性を有する第２免疫グロブリン可変ドメイン配列を異なる抗原に含む。いくつかの態様において、第２免疫グロブリン可変ドメイン配列は、ＡＭＬ細胞上に発現された抗原、例えばＢＣＭＡ以外の抗原に結合特異性を有する。例えば、第２免疫グロブリン可変ドメイン配列は、ＣＤ１２３に対する結合特異性を有する。別の例として、第２免疫グロブリン可変ドメイン配列は、ＣＬＬ−１に対する結合特異性を有する。別の例として、第２免疫グロブリン可変ドメイン配列は、ＣＤ３４に対する結合特異性を有する。別の例として、第２免疫グロブリン可変ドメイン配列は、ＦＬＴ３に対する結合特異性を有する。例えば、第２免疫グロブリン可変ドメイン配列は、葉酸受容体βに対する結合特異性を有する。いくつかの態様において、第２免疫グロブリン可変ドメイン配列は、Ｂ細胞に発現される抗原、例えばＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３、ＦＬＴ−３、ＲＯＲ１、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ又はＣＤ７９ａに対する結合特異性を有する。
【０２７３】
キメラＴＣＲ
一態様において、本発明の抗ＢＣＭＡ抗体及び抗体フラグメント（例えば、表２、６及び１０に開示されるもの）を、ＢＣＭＡに特異的に結合するキメラＴＣＲを作るために、Ｔ細胞受容体（「ＴＣＲ」）鎖の１つ以上の定常ドメイン、例えばＴＣＲアルファ又はＴＣＲベータ鎖に移植できる。理論に拘束されるものではないが、キメラＴＣＲは、抗原結合によりＴＣＲ複合体を経てシグナル伝達すると考えられる。例えば、本明細書に開示するようなＢＣＭＡ  ｓｃＦｖを、ＴＣＲ鎖、例えばＴＣＲアルファ鎖及び／又はＴＣＲベータ鎖の定常ドメイン、例えば少なくとも細胞外定常ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインの部分に移植できる。別の例として、ＢＣＭＡ抗体フラグメント、例えば本明細書に記載されるようなＶＬドメインをＴＣＲアルファ鎖の定常ドメインに移植でき、ＢＣＭＡ抗体フラグメント、例えば本明細書に記載されるようなＶＨドメインをＴＣＲベータ鎖の定常ドメインに移植できる（又は代替的にＶＬドメインをＴＣＲベータ鎖の定常ドメインに移植し得、ＶＨドメインをＴＣＲアルファ鎖に移植し得る）。別の例として、抗ＢＣＭＡ抗体又は抗体フラグメントのＣＤＲ、例えば表２〜１３に記載されるような抗ＢＣＭＡ抗体又は抗体フラグメントのＣＤＲは、ＢＣＭＡに特異的に結合するキメラＴＣＲを作るために、ＴＣＲアルファ鎖及び／又はベータ鎖に移植され得る。例えば、本明細書に開示のＬＣＤＲをＴＣＲアルファ鎖の可変ドメインに移植し得、本明細書に開示のＨＣＤＲをＴＣＲベータ鎖の可変ドメインに移植し得るか、又はその逆も可能である。このようなキメラＴＣＲは、当技術分野で公知の方法により産生され得る（例えば、Ｗｉｌｌｅｍｓｅｎ  ＲＡ  ｅｔ  ａｌ，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ２０００；７：１３６９−１３７７；Ｚｈａｎｇ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ２００４；１１：４８７−４９６；Ａｇｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．２０１２  Ａｐｒ；１９（４）：３６５−７４）。
【０２７４】
更なる実施形態
一態様において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、第２のＣＡＲ、例えば同じ標的（ＢＣＭＡ）又は異なる標的（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０若しくはＣＳ−１又は他の多発性骨髄腫標的、例えばカッパ軽鎖、ＣＤ１３８、ルイスＹ抗原若しくはＣＤ３８（Ｇａｒｆａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１４，１７（９１）：３７−４６））に対する、例えば第２のＣＡＲの異なる抗原結合ドメインを更に含み得る。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、第１の抗原を標的とし、共刺激性シグナル伝達ドメインを有するが、一次シグナル伝達ドメインを有しない細胞内シグナル伝達ドメインを含む第１のＣＡＲ及び第２の異なる抗原を標的とし、一次シグナル伝達ドメインを有するが、共刺激性シグナル伝達ドメインを有しない細胞内シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲを含む。理論に拘束されることを望まないが、第１のＣＡＲへの共刺激性シグナル伝達ドメイン、例えば４−１ＢＢ、ＣＤ２８、ＣＤ２７  ＩＣＯＳ又はＯＸ−４０及び一次シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ゼータの第２のＣＡＲへの配置は、両方の標的が発現される細胞に対してＣＡＲ活性を制限し得る。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、ＢＣＭＡ結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び共刺激ドメインを含む第１のＢＣＭＡ  ＣＡＲ及びＢＣＭＡ以外の抗原（例えば、白血病又はリンパ腫細胞に発現される抗原、例えばＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＳ−１、カッパ軽鎖、ＣＤ１３９、ルイスＹ抗原又はＣＤ３８）を標的とし、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲを含む。別の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、ＢＣＭＡ結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む第１のＢＣＭＡ  ＣＡＲ及びＢＣＭＡ以外の抗原（例えば、白血病又はリンパ腫細胞に発現される抗原、例えばＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＳ−１、カッパ軽鎖、ＣＤ１３９、ルイスＹ抗原又はＣＤ３８）を標的とし、抗原に対する抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び共刺激性シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲを含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、本明細書に記載のＢＣＭＡ  ＣＡＲ及びＣＤ１９を標的とするＣＡＲ（ＣＤ１９  ＣＡＲ）を含む。
【０２７５】
いくつかの実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、本明細書に記載のＢＣＭＡ  ＣＡＲ及び阻害性ＣＡＲを含む。いくつかの実施形態において、阻害性ＣＡＲは、正常細胞で見られるが、癌細胞で見られない抗原と結合する抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、阻害性ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び阻害分子の細胞内ドメインを含む。例えば、阻害性ＣＡＲの細胞内ドメインは、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦＲベータの細胞内ドメインであり得る。
【０２７６】
一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞が２つ以上の異なるＣＡＲを含むとき、種々のＣＡＲの抗原結合ドメインは、抗原結合ドメインが互いに相互作用しないようなものである。例えば、第１及び第２のＣＡＲを発現する細胞は、第２のＣＡＲの抗原結合ドメイン、例えばＶＨＨである第２のＣＡＲの抗原結合ドメインと結合を形成しない、例えばフラグメント、例えばｓｃＦｖとしての第１のＣＡＲの抗原結合ドメインを有し得る。
【０２７７】
一実施形態において、抗原結合ドメインは、単一ドメイン抗原結合（ＳＤＡＢ）分子を含み、相補的決定領域が単一ドメインポリペプチドの一部である分子を含む。例は、重鎖可変ドメイン、軽鎖を天然に欠く結合分子、慣用の４鎖抗体由来の単一ドメイン、操作されたドメイン及び抗体由来のもの以外の単一ドメインスキャフォールドを含むが、これらに限定されない。ＳＤＡＢ分子は、当技術分野の又は将来的な単一ドメイン分子であり得る。ＳＤＡＢ分子は、マウス、ヒト、ラクダ、ラマ、ヤツメウナギ、魚類、サメ、ヤギ、ウサギ及びウシを含むが、これらに限定されない任意の種由来であり得る。この用語は、ラクダ科（Ｃａｍｅｌｉｄａｅ）及びサメ以外の種由来の天然に存在する単一ドメイン抗体分子も含む。
【０２７８】
一態様において、ＳＤＡＢ分子は、例えば、サメの血清に見られる新規抗原受容体（ＮＡＲ）として知られる免疫グロブリンアイソタイプ由来であるような、魚類で見られる免疫グロブリンの可変領域に由来し得る。ＮＡＲ（「ＩｇＮＡＲ」）の可変領域由来の単一ドメイン分子を製造する方法は、国際公開第０３／０１４１６１号パンフレット及びＳｔｒｅｌｔｓｏｖ（２００５）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．１４：２９０１−２９０９に記載されている。
【０２７９】
別の態様によると、ＳＤＡＢ分子は、軽鎖を欠く重鎖として知られる天然に存在する単一ドメイン抗原結合分子である。このような単一ドメイン分子は、例えば、国際公開第９４０４６７８号パンフレット及びＨａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ  ３６３：４４６−４４８に記載されている。明確化するために、天然に軽鎖を欠く重鎖分子由来のこの可変ドメインは、ここでは、４鎖免疫グロブリンの慣用のＶＨと区別するためにＶＨＨ又はナノボディとして知られている。このようなＶＨＨ分子は、ラクダ科（Ｃａｍｅｌｉｄａｅ）種、例えばラクダ、ラマ、ヒトコブラクダ、アルパカ及びグアナコ由来であり得る。ラクダ科（Ｃａｍｅｌｉｄａｅ）以外の他の種は、天然に軽鎖を欠く重鎖分子を産生し得、このようなＶＨＨは、本発明の範囲内である。
【０２８０】
ＳＤＡＢ分子は、組み換え、ＣＤＲ移植、ヒト化、ラクダ化、脱免疫化及び／又はインビトロ産生され得る（例えば、ファージディスプレイにより選択）。
【０２８１】
受容体の抗原結合ドメイン間を相互作用する抗原結合ドメインを含む複数のキメラ膜包埋受容体を有する細胞は、例えば、抗原結合ドメインの１つ以上がその同族抗原に結合することを阻止するため、望ましくない可能性があることも判明した。従って、本明細書に開示されるのは、このような相互作用を最小化する、抗原結合ドメインを含む第１及び第２の天然に存在しないキメラ膜包埋受容体を有する細胞である。また、本明細書に開示されるのは、このような相互作用を最小化する抗原結合ドメインを含む第１及び第２の天然に存在しないキメラ膜包埋受容体をコードする核酸並びにこのような細胞及び核酸を製造及び使用する方法である。一実施形態において、前記第１及び第２の天然に存在しないキメラ膜包埋受容体の抗原結合ドメインの一方は、ｓｃＦｖを含み、他方は、単一ＶＨドメイン、例えばラクダ科、サメ若しくはヤツメウナギ単一ＶＨドメイン又はヒト若しくはマウス配列由来の単一ＶＨドメインを含む。
【０２８２】
一実施形態において、本発明は、第１及び第２のＣＡＲを含み、ここで、前記第１のＣＡＲ及び前記第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、可変軽ドメイン及び可変重ドメインを含まない。一実施形態において、前記第１のＣＡＲ及び前記第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖであり、他方は、ｓｃＦｖではない。一実施形態において、前記第１のＣＡＲ及び前記第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、単一ＶＨドメイン、例えばラクダ科、サメ若しくはヤツメウナギ単一ＶＨドメイン又はヒト若しくはマウス配列由来の単一ＶＨドメインを含む。一実施形態において、前記第１のＣＡＲ及び前記第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ナノボディを含む。一実施形態において、前記第１のＣＡＲ及び前記第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ラクダ科ＶＨＨドメインを含む。
【０２８３】
一実施形態において、前記第１のＣＡＲ及び前記第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含み、他方は、単一ＶＨドメイン、例えばラクダ科、サメ若しくはヤツメウナギ単一ＶＨドメイン又はヒト若しくはマウス配列由来の単一ＶＨドメインを含む。一実施形態において、前記第１のＣＡＲ及び前記第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含み、他方は、ナノボディを含む。一実施形態において、前記第１のＣＡＲ及び前記第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含み、他方は、ラクダ科ＶＨＨドメインを含む。
【０２８４】
一実施形態において、細胞の表面上に存在するとき、前記第１のＣＡＲの抗原結合ドメインのその同族抗原への結合は、前記第２のＣＡＲの存在により実質的に低減されない。一実施形態において、前記第２のＣＡＲの存在下の前記第１のＣＡＲの抗原結合ドメインのその同族抗原への結合は、前記第２のＣＡＲの非存在下の前記第１のＣＡＲの抗原結合ドメインのその同族抗原への結合の８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。
【０２８５】
一実施形態において、細胞の表面上に存在するとき、前記第１のＣＡＲ及び前記第２のＣＡＲの抗原結合ドメインは、両方がｓｃＦｖ抗原結合ドメインである場合より少なく互いに結合する。一実施形態において、前記第１のＣＡＲ及び前記第２のＣＡＲの抗原結合ドメインは、両方がｓｃＦｖ抗原結合ドメインである場合より８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％少なく互いに結合する。
【０２８６】
別の態様において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、別の薬剤、例えばＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤を更に発現できる。例えば、一部の実施形態において、薬剤は、阻害分子を阻害する薬剤、例えば本明細書に記載の薬剤であり得る。阻害分子、例えばＰＤ１は、ＣＡＲ発現細胞が免疫エフェクター応答を開始する能力を減少させ得る。阻害分子の例は、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦＲβを含む。一部の実施形態において、阻害分子を阻害する薬剤は、細胞に正のシグナルを提供する第２のポリペプチド、例えば本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメインに結合した第１のポリペプチド、例えば阻害分子を含む。一部の実施形態において、薬剤は、例えば、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦβ又はこれらのいずれかのフラグメント（例えば、これらのいずれかの少なくとも細胞外ドメインの部分）などの阻害分子の第１のポリペプチド及び本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、共刺激ドメイン（例えば、本明細書に記載のような例えば４１ＢＢ、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ又はＣＤ２８）及び／又は一次シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載のＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを含む）である第２のポリペプチドを含む。一部の実施形態において、薬剤は、ＰＤ１又はそのフラグメント（例えば、ＰＤ１の少なくとも細胞外ドメインの部分）の第１のポリペプチド並びに本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載のＣＤ２８シグナル伝達ドメイン及び／又は本明細書に記載のＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン）の第２のポリペプチドを含む。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、例えば、参照によりその全体が本明細書に援用される国際公開第２０１３／０１９６１５号パンフレットに記載のようなスイッチ共刺激性受容体を含む。ＰＤ１は、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ及びＢＴＬＡも含む受容体のＣＤ２８ファミリーの阻害性メンバーである。ＰＤ−１は、活性化Ｂ細胞、Ｔ細胞及び骨髄細胞に発現される（Ａｇａｔａ  ｅｔ  ａｌ．１９９６  Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  ８：７６５−７５）。ＰＤ１に対する２リガンド、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２は、ＰＤ１への結合によりＴ細胞活性化を下方制御することが示されている（Ｆｒｅｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．２０００  Ｊ  ���ｘｐ  Ｍｅｄ  １９２：１０２７−３４；Ｌａｔｃｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．２００１  Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２：２６１−８；Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２００２  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３２：６３４−４３）。ＰＤ−Ｌ１は、ヒト癌において豊富である（Ｄｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．２００３  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  ８１：２８１−７；Ｂｌａｎｋ  ｅｔ  ａｌ．２００５  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ５４：３０７−３１４；Ｋｏｎｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．２００４  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １０：５０９４）。免疫抑制は、ＰＤ１とＰＤ−Ｌ１との局所相互作用の阻害により逆転できる。
【０２８７】
一部の実施形態において、阻害分子、例えばプログラム細胞死１（ＰＤ１）の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含む薬剤を膜貫通ドメイン及び４１ＢＢ及びＣＤ３ゼータなどの細胞内シグナル伝達ドメインに融合できる（本明細書ではＰＤ１  ＣＡＲと称する）。一部の実施形態において、ＰＤ１  ＣＡＲは、本明細書に記載のＢＣＭＡ  ＣＡＲと組み合わせで使用したとき、ＣＡＲ発現細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞の残留性を改善する。一部の実施形態において、ＣＡＲは、配列番号２４において下線で示すＰＤ１の細胞外ドメインを含むＰＤ１  ＣＡＲである。一部の実施形態において、ＰＤ１  ＣＡＲは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。
【０２８８】
いくつかの実施形態において、ＰＤ１  ＣＡＲは、下記アミノ酸配列を含む（配列番号２２）。
【０２８９】
いくつかの実施形態において、薬剤は、ＰＤ１  ＣＡＲ、例えば本明細書に記載のＰＤ１  ＣＡＲをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＰＤ１  ＣＡＲの核酸配列は、配列番号２３として提供され、ＰＤ１  ＥＣＤには下線が付されている。
【０２９０】
別の態様において、本発明は、ＣＡＲ発現細胞、例えばＣＡＲＴ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞の集団を提供する。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の集団は、種々のＣＡＲを発現する細胞の混合物を含む。例えば、いくつかの実施形態において、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲＴ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）の集団は、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ結合ドメインを有するＣＡＲを発現する第１の細胞及び異なる抗ＢＣＭＡ結合ドメインを有するＣＡＲを発現する第２の細胞、例えば第１の細胞によって発現されるＣＡＲの抗ＢＣＭＡ結合ドメインと異なる、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ結合ドメインを含み得る。別の例として、ＣＡＲ発現細胞の集団は、例えば、本明細書に記載のような、抗ＢＣＭＡ結合ドメインを含むＣＡＲを発現する第１の細胞及びＢＣＭＡ以外の標的（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＳ−１、カッパ軽鎖、ＣＤ１３９、ルイスＹ抗原又はＣＤ３８）に対する抗原結合ドメインを含むＣＡＲを発現する第２の細胞を含み得る。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の集団は、例えば、本明細書に記載のような、抗ＢＣＭＡ結合ドメインを含むＣＡＲを発現する第１の細胞及びＣＤ１９を標的とする抗原結合ドメインを含むＣＡＲ（ＣＤ１９  ＣＡＲ）を発現する第２の細胞を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の集団は、例えば、初代細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを発現する第１の細胞及び二次シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを発現する第２の細胞を含む。
【０２９１】
別の態様において、本発明は細胞の集団を提供し、ここで、集団内の少なくとも１つの細胞は、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡドメインを有するＣＡＲを発現し、第２の細胞は、別の薬剤、例えばＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤を発現する。例えば、いくつかの実施形態において、薬剤は、阻害分子を阻害する薬剤であり得る。阻害分子は、例えば、いくつかの実施形態において、ＣＡＲ発現細胞が免疫エフェクター応答を開始する能力を減少させ得る。阻害分子の例は、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦＲベータを含む。いくつかの実施形態において、阻害分子を阻害する薬剤は、細胞に正のシグナルを提供する第２のポリペプチド、例えば本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメインに結合した、第１のポリペプチド、例えば阻害分子を含む。一部の実施形態において、薬剤は、例えば、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦβ又はこれらのいずれかのフラグメント（例えば、これらのいずれかの少なくとも細胞外ドメインの部分）などの阻害分子の第１のポリペプチド及び本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、共刺激ドメイン（例えば、本明細書に記載のような例えば４１ＢＢ、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ又はＣＤ２８）及び／又は一次シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載のＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを含む）である第２のポリペプチドを含む。一部の実施形態において、薬剤は、ＰＤ１又はそのフラグメント（例えば、ＰＤ１の少なくとも細胞外ドメインの部分）の第１のポリペプチド及び本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメインの第２のポリペプチド（例えば、本明細書に記載のＣＤ２８シグナル伝達ドメイン及び／又は本明細書に記載のＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン）を含む。
【０２９２】
一態様において、本発明は、別の薬剤、例えば本明細書に記載のキナーゼ阻害剤などのキナーゼ阻害剤と組み合わせて、ＣＡＲ発現細胞集団（例えば、ＣＡＲＴ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）、例えば種々のＣＡＲを発現する細胞の混合物を投与することを含む方法を提供する。別の態様において、本発明は、集団内の少なくとも１つの細胞が本明細書に記載のような抗癌関連抗原結合ドメインを有するＣＡＲを発現し、第２の細胞が別の薬剤、例えばＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤を発現する細胞集団を別の薬剤、例えば本明細書に記載のキナーゼ阻害剤などのキナーゼ阻害剤と組み合わせて投与することを含む方法を提供する。
【０２９３】
ナチュラルキラー細胞受容体（ＮＫＲ）ＣＡＲ
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ分子は、ナチュラルキラー細胞受容体（ＮＫＲ）の１つ以上の成分を含み、それによりＮＫＲ−ＣＡＲを形成する。ＮＫＲ成分は、次のナチュラルキラー細胞受容体のいずれかに由来する膜貫通ドメイン、ヒンジドメイン又は細胞質ドメインであり得る：キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、例えばＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２／Ｌ３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ、ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２、ＫＩＲ２ＤＳ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＤＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＬ１／Ｓ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ３ＤＬ３、ＫＩＲ２ＤＰ１及びＫＩＲ３ＤＰ１；天然細胞傷害性受容体（ＮＣＲ）、例えばＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６；免疫細胞受容体のシグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭ）ファミリー、例えばＣＤ４８、ＣＤ２２９、２Ｂ４、ＣＤ８４、ＮＴＢ−Ａ、ＣＲＡＣＣ、ＢＬＡＭＥ及びＣＤ２Ｆ−１０；Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）、例えばＣＤ１６及びＣＤ６４；及びＬｙ４９受容体、例えばＬＹ４９Ａ、ＬＹ４９Ｃ。本明細書に記載のＮＫＲ−ＣＡＲ分子は、アダプター分子又は細胞内シグナル伝達ドメイン、例えばＤＡＰ１２と相互作用し得る。ＮＫＲ要素を含むＣＡＲ分子の例示的な配置及び配列は、国際公開第２０１４／１４５２５２号パンフレットに記載され、その内容が参照により本明細書に援用される。
【０２９４】
キメラ抗原受容体を制御するための戦略
ＣＡＲ活性が制御され得る多くの方法がある。一実施形態において、ＣＡＲ活性が制御できる制御可能ＣＡＲ（ＲＣＡＲ）は、ＣＡＲ治療の安全性及び有効性を最適化するために望ましい。例えば、例として二量体化ドメインに融合した、カスパーゼを使用するアポトーシスの誘導（例えば、Ｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．２０１１  Ｎｏｖ．３；３６５（１８）：１６７３−１６８３を参照されたい）を本発明のＣＡＲ治療における安全スイッチとして使用できる。別の例において、ＣＡＲ発現細胞は、誘導性カスパーゼ−９（ｉＣａｓｐａｓｅ−９）分子も発現でき、これは、二量体化因子薬物（例えば、ｒｉｍｉｄｕｃｉｄ（ＡＰ１９０３（Ｂｅｌｌｉｃｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）又はＡＰ２０１８７（Ａｒｉａｄ）とも呼ばれる）の投与により、細胞のカスパーゼ−９活性化及びアポトーシスに至る。ｉＣａｓｐａｓｅ−９分子は、二量体化（ＣＩＤ）結合ドメインの化学誘導因子を含み、これは、ＣＩＤの存在下で二量体化に介在する。これは、ＣＡＲ発現細胞の誘導的及び選択的枯渇に至る。ある場合、ｉＣａｓｐａｓｅ−９分子は、ＣＡＲコードベクターと別の核酸分子によりコードされる。ある場合、ｉＣａｓｐａｓｅ−９分子は、ＣＡＲコードベクターと同じ核酸分子によりコードされる。ｉＣａｓｐａｓｅ−９は、ＣＡＲ発現細胞の何らかの毒性を避けるための安全スイッチを提供できる。例えば、Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．２００８；１５（１０）：６６７−７５；Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄ．Ｎｏ．ＮＣＴ０２１０７９６３；及びＤｉ  Ｓｔａｓｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．２０１１；３６５：１６７３−８３を参照されたい。
【０２９５】
本発明のＣＡＲ治療を制御するための代替的戦略は、例えば、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の誘発により、例えばＣＡＲ発現細胞を消失させることにより、ＣＡＲ活性の脱活性化又は遮断する小分子又は抗体の利用を含む。例えば、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、細胞死、例えばＡＤＣＣ又は補体誘導性細胞死を誘発できる分子により認識される抗原も発現し得る。例えば、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、抗体又は抗体フラグメントにより標的化され得る受容体も発現し得る。このような受容体の例は、ＥｐＣＡＭ、ＶＥＧＦＲ、インテグリン（例えば、インテグリンανβ３、α４、αΙ３／４β３、α４β７、α５β１、ανβ３、αν）、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバー（例えば、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２）、ＰＤＧＦ受容体、インターフェロン受容体、葉酸受容体、ＧＰＮＭＢ、ＩＣＡＭ−１、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＥＡ、ＣＡ−１２５、ＭＵＣ１、ＴＡＧ−７２、ＩＬ−６受容体、５Ｔ４、ＧＤ２、ＧＤ３、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ１１、ＣＤ１１ａ／ＬＦＡ−１、ＣＤ１５、ＣＤ１８／ＩＴＧＢ２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３／ｌｇＥ受容体、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４１、ＣＤ４４、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１２５、ＣＤ１４７／ベイシジン、ＣＤ１５２／ＣＴＬＡ−４、ＣＤ１５４／ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ１９５／ＣＣＲ５、ＣＤ３１９／ＳＬＡＭＦ７、及びＥＧＦＲ並びにその切断バージョン（例えば、１つ以上の細胞外エピトープを保持するが、細胞質ドメイン内の１つ以上の領域を欠くバージョン）を含む。例えば、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、シグナル伝達能力を欠くが、ＡＤＣＣを誘発できる分子、例えばセツキシマブ（アービタックス（登録商標））により認識されるエピトープを保持する切断型上皮細胞増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）も発現し、その結果、セツキシマブの投与がＡＤＣＣ及び続くＣＡＲ発現細胞の枯渇を誘発する（例えば、国際公開第２０１１／０５６８９４号パンフレット及びＪｏｎｎａｌａｇａｄｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．２０１３；２０（８）８５３−８６０を参照されたい）。別の戦略は、例えば、ＡＤＣＣによりＣＡＲ発現細胞の選択的枯渇をもたらす、リツキシマブに結合する、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞におけるＣＤ３２及びＣＤ２０抗原の両方からの標的エピトープをあわせる、高度に小型のマーカー／自殺遺伝子の発現を含む（例えば、Ｐｈｉｌｉｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２０１４；１２４（８）１２７７−１２８７を参照されたい）。本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を枯渇させる他の方法は、例えば、ＡＤＣＣ誘発により、破壊するために成熟リンパ球、例えばＣＡＲ発現細胞に選択的に結合し、標的とするモノクローナル抗ＣＤ５２抗体であるＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標）の投与を含む。他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、ＣＡＲリガンド、例えば抗イディオタイプ抗体を使用して選択的に標的化され得る。一実施形態において、抗イディオタイプ抗体は、エフェクター細胞活性、例えばＡＤＣＣ又はＡＤＣ活性を引き起こし、それによりＣＡＲ発現細胞数を減らすことができる。他の実施形態において、ＣＡＲリガンド、例えば抗イディオタイプ抗体は、細胞致死を誘発する薬剤、例えばトキシンに結合させ、それによりＣＡＲ発現細胞数を減らすことができる。代わりに、ＣＡＲ分子自体、下記のように、活性が制御され得る、例えば活性化又は遮断され得るように配置できる。
【０２９６】
一部の実施形態において、ＲＣＡＲは、本明細書に記載の標準的ＣＡＲの要素、例えば抗原結合ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインが別々のポリペプチド又はメンバーに配置された、一連の典型的には最も単純な実施形態において２つのポリペプチドを含む。一部の実施形態において、一連のポリペプチドは、二量体化分子の存在下で互いにポリペプチドを結合できる、例えば抗原結合ドメインを細胞内シグナル伝達ドメインに結合できる二量体化スイッチを含む。このような制御可能ＣＡＲの更なる記載及び例示的な配置は、本明細書及び参照により本明細書にその全体が援用される国際公開第２０１５／０９０２２９号パンフレットに提供される。
【０２９７】
一実施形態において、ＲＣＡＲは、２つポリペプチド又はメンバーを含む：１）例えば、本明細書に記載の初代細胞内シグナル伝達ドメイン及び第１のスイッチドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン；２）例えば、本明細書に記載のような腫瘍抗原を標的化する抗原結合ドメイン及び第２のスイッチドメインを含む抗原結合メンバー。任意選択により、ＲＣＡＲは、本明細書に記載の膜貫通ドメインを含む。一実施形態において、膜貫通ドメインは、細胞内シグナル伝達メンバー上、抗原結合メンバー上又は両方の上に配置できる。（特に断らない限り、ＲＣＡＲのメンバー又は要素が本明細書に記載されるものであるとき、順番は記載したとおりであり得るが、他の順番も同様に含まれる。換言すると、一実施形態において、順番は、本書に記載のとおりであるが、他の実施形態において、順番は、異なり得る。例えば、膜貫通領域の一端の要素の順番は、例と異なり得、例えば、細胞内シグナル伝達ドメインに対するスイッチドメインの配置は、異なり、例えば逆であり得る）。
【０２９８】
一実施形態において、第１及び第２のスイッチドメインは、細胞内又は細胞外二量体化スイッチを形成できる。一実施形態において、二量体化スイッチは、例えば、第１及び第２のスイッチドメインが同一であるホモ二量体化スイッチ又は例えば第１及び第２のスイッチドメインが互いに異なるヘテロ二量体化スイッチであり得る。
【０２９９】
実施形態において、ＲＣＡＲは、「多スイッチ」を含み得る。多スイッチは、ヘテロ二量体化スイッチドメイン又はホモ二量体化スイッチドメインを含み得る。多スイッチは、複数の、例えば２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０のスイッチドメインを独立して第１のメンバー、例えば抗原結合メンバー及び第２のメンバー、例えば細胞内シグナル伝達メンバー上に含む。一実施形態において、第１のメンバーは、複数の第１のスイッチドメイン、例えばＦＫＢＰベースのスイッチドメインを含み得、第２のメンバーは、複数の第２のスイッチドメイン、例えばＦＲＢベースのスイッチドメインを含み得る。一実施形態において、第１のメンバーは、第１及び第２のスイッチドメイン、例えばＦＫＢＰベースのスイッチドメイン及びＦＲＢベースのスイッチドメインを含み得、第２のメンバーは、第１及び第２のスイッチドメイン、例えばＦＫＢＰベースのスイッチドメイン及びＦＲＢベースのスイッチドメインを含み得る。
【０３００】
一実施形態において、細胞内シグナル伝達メンバーは、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば初代細胞内シグナル伝達ドメイン及び１つ以上の共刺激性シグナル伝達ドメインを含む。
【０３０１】
一実施形態において、抗原結合メンバーは、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば１つ以上の共刺激性シグナル伝達ドメインを含み得る。一実施形態において、抗原結合メンバーは、複数の、例えば２つ又は３つの例えば４−１ＢＢ、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ及びＯＸ４０から選択される、本明細書に記載の共刺激性シグナル伝達ドメインを含み、一実施形態において、初代細胞内シグナル伝達ドメインを含まない。一実施形態において、抗原結合メンバーは、細胞外から細胞内方向で次の共刺激性シグナル伝達ドメインを含む：４−１ＢＢ−ＣＤ２７；４１−ＢＢ−ＣＤ２７；ＣＤ２７−４−１ＢＢ；４−１ＢＢ−ＣＤ２８；ＣＤ２８−４−１ＢＢ；ＯＸ４０−ＣＤ２８；ＣＤ２８−ＯＸ４０；ＣＤ２８−４−１ＢＢ；又は４−１ＢＢ−ＣＤ２８。このような実施形態において、細胞内結合メンバーは、ＣＤ３ゼータドメインを含む。このような実施形態において、ＲＣＡＲは、（１）抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び２つの共刺激ドメイン及び第１のスイッチドメインを含む抗原結合メンバー；及び（２）膜貫通ドメイン又は膜繋留ドメイン及び少なくとも１つの初代細胞内シグナル伝達ドメイン及び第２のスイッチドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
【０３０２】
ある態様は、抗原結合メンバーがＣＡＲ細胞表面に繋留されていないＲＣＡＲを提供する。これは、細胞内シグナル伝達メンバーを有する細胞が、細胞を、抗原結合メンバーをコードする配列で形質転換する必要なく１つ以上の抗原結合ドメインと好都合に対合することを可能とする。このような実施形態において、ＲＣＡＲは、１）第１のスイッチドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば初代細胞内シグナル伝達ドメイン及び第１のスイッチドメインを含む細胞内シグナル伝達メンバー；及び２）抗原結合ドメイン及び第２のスイッチドメインを含む抗原結合メンバーを含み、ここで、抗原結合メンバーは、膜貫通ドメイン又は膜繋留ドメインを含まず、任意選択により細胞内シグナル伝達ドメインを含まない。一実施形態において、ＲＣＡＲは、３）第２の抗原結合ドメイン、例えば抗原結合ドメインにより結合されるのと異なる抗原に結合する第２の抗原結合ドメイン；及び第２のスイッチドメインを含む第２の抗原結合メンバーを更に含み得る。
【０３０３】
抗原結合メンバーが二特異性活性化及びターゲティング能を含むＲＣＡＲも本明細書で提供される。この実施形態において、抗原結合メンバーは、複数の、例えば２つ、３つ、４つ又は５つの抗原結合ドメイン、例えばｓｃＦｖを含み得、ここで、各原結合ドメインは、標的抗原、例えば異なる抗原又は同じ抗原、例えば同じ抗原の同一又は異なるエピトープに結合する。一実施形態において、複数の抗原結合ドメインは、タンデムであり、任意選択により、リンカー又はヒンジ領域が抗原結合ドメインの各々の間に配置される。適当なリンカー及びヒンジ領域は、本明細書に記載される。
【０３０４】
ある態様は、増殖のスイッチングが可能な配置を有するＲＣＡＲを提供する。この実施形態において、ＲＣＡＲは、１）任意選択により、膜貫通ドメイン又は膜繋留ドメイン；例えば、４−１ＢＢ、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ及びＯＸ４０及びスイッチドメインから選択される１つ以上の共刺激性シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達メンバー；及び２）抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び初代細胞内シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ゼータドメインを含む抗原結合メンバーを含み、ここで、抗原結合メンバーは、スイッチドメインを含まないか、又は細胞内シグナル伝達メンバー上のスイッチドメインと二量体化するスイッチドメインを含まない。一実施形態において、抗原結合メンバーは、共刺激性シグナル伝達ドメインを含まない。一実施形態において、細胞内シグナル伝達メンバーは、ホモ二量体化スイッチからのスイッチドメインを含む。一実施形態において、細胞内シグナル伝達メンバーは、ヘテロ二量体化スイッチの第１のスイッチドメインを含み、ＲＣＡＲは、ヘテロ二量体化スイッチの第２のスイッチドメインを含む第２の細胞内シグナル伝達メンバーを含む。このような実施形態において、第２の細胞内シグナル伝達メンバーは、細胞内シグナル伝達メンバーと同じ細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、二量体化スイッチは、細胞内である。一実施形態において、二量体化スイッチは、細胞外である。
【０３０５】
本明細書に記載のＲＣＡＲ配置のいずれかにおいて、第１及び第２のスイッチドメインは、本明細書に記載のようなＦＫＢＰ−ＦＲＢベースのスイッチを含む。
【０３０６】
また本明細書で提供されるのは、本明細書に記載のＲＣＡＲを含む細胞である。ＲＣＡＲを発現するように操作したあらゆる細胞をＲＣＡＲＸ細胞として使用できる。一実施形態において、ＲＣＡＲＸ細胞は、Ｔ細胞であり、ＲＣＡＲＴ細胞と称する。一実施形態において、ＲＣＡＲＸ細胞は、ＮＫ細胞であり、ＲＣＡＲＮ細胞と称する。
【０３０７】
ＲＣＡＲコード化配列を含む核酸及びベクターも本明細書で提供される。ＲＣＡＲの種々の要素をコードする配列は、同じ核酸分子、例えば同じプラスミド又はベクター、例えばウイルスベクター、例えばレンチウイルスベクターに配置できる。一実施形態において、（ｉ）抗原結合メンバーをコードする配列及び（ｉｉ）細胞内シグナル伝達メンバーをコードする配列は、同じ核酸、例えばベクターに存在できる。対応するタンパク質の産生は、例えば、別々のプロモーターの使用により又はバイシストロニック転写産物（これは、単一翻訳産物の開裂又は２つの別々のタンパク質産物の翻訳により２つのタンパク質の産生を生じ得る）の使用により達成できる。一実施形態において、開裂可能ペプチドをコードする配列、例えばＰ２Ａ又はＦ２Ａ配列を（ｉ）と（ｉｉ）との間に配置する。一実施形態において、ＩＲＥＳ、例えばＥＭＣＶ又はＥＶ７１  ＩＲＥＳをコードする配列を（ｉ）と（ｉｉ）との間に配置する。これらの実施形態において、（ｉ）及び（ｉｉ）は、単一ＲＮＡとして転写される。一実施形態において、（ｉ）及び（ｉｉ）が別々のｍＲＮＡとして転写されるように、第１プロモーターは、（ｉ）に操作可能に連結し、第２プロモーターは、（ｉｉ）に操作可能に連結する。
【０３０８】
代わりに、ＲＣＡＲの種々の要素をコードする配列を種々の核酸分子、例えば異なるプラスミド又はベクター、例えばウイルスベクター、例えばレンチウイルスベクターに配置できる。例えば、（ｉ）抗原結合メンバーをコードする配列を第１核酸、例えば第１ベクターに配置でき、（ｉｉ）細胞内シグナル伝達メンバーをコードする配列は、第２核酸、例えば第２ベクターに存在できる。
【０３０９】
二量体化スイッチ
二量体化スイッチは、非共有又は共有であり得る。非共有二量体化スイッチにおいて、二量体化分子は、スイッチドメイン間の非共有相互作用を促進する。共有二量体化スイッチにおいて、二量体化分子は、スイッチドメイン間の共有相互作用を促進する。
【０３１０】
一実施形態において、ＲＣＡＲは、ＦＫＢＰ／ＦＲＡＰ又はＦＫＢＰ／ＦＲＢベースの二量体化スイッチを含む。ＦＫＢＰ１２（ＦＫＢＰ又はＦＫ５０６結合タンパク質）は、天然産物免疫抑制剤、ラパマイシンのための最初の細胞内標的としての役割を果たす豊富な細胞質タンパク質である。ラパマイシンは、ＦＫＢＰ及び大ＰＩ３ＫホモログＦＲＡＰ（ＲＡＦＴ、ｍＴＯＲ）に結合する。ＦＲＢは、ＦＫＢＰ−ラパマイシン複合体の結合のために十分であるＦＲＡＰの９３アミノ酸部分である（Ｃｈｅｎ，Ｊ．，Ｚｈｅｎｇ，Ｘ．Ｆ．，Ｂｒｏｗｎ，Ｅ．Ｊ．＆Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，Ｓ．Ｌ．（１９９５）Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎ  １１−ｋＤａ  ＦＫＢＰ１２−ｒａｐａｍｙｃｉｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｄｏｍａｉｎ  ｗｉｔｈｉｎ  ｔｈｅ  ２８９−ｋＤａ  ＦＫＢＰ１２−ｒａｐａｍｙｃｉｎ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｓｅｒｉｎｅ  ｒｅｓｉｄｕｅ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  ９２：４９４７−５１．）。
【０３１１】
実施形態において、ＦＫＢＰ／ＦＲＡＰ、例えばＦＫＢＰ／ＦＲＢベースのスイッチは、二量体化分子、例えばラパマイシン又はラパマイシン類似体を使用できる。
【０３１２】
ＦＫＢＰの例示的なアミノ酸配列は、次のとおりである。
【化１】
2021526814.tif 000048
【０３１３】
実施形態において、ＦＫＢＰスイッチドメインは、ラパマイシン又はラパログの存在下でＦＲＢ又はそのフラグメント又は類似体と結合する能力を有するＦＫＢＰのフラグメントを含み得る。いくつかの実施形態において、ＦＫＢＰスイッチドメインは、以下のアミノ酸配列を含む。
【化２】
2021526814.tif 000049
【０３１４】
ＦＲＢのアミノ酸配列は、次のとおりである。
【化３】
2021526814.tif 000050
【０３１５】
本明細書で使用する用語「ＦＫＢＰ／ＦＲＡＰ、例えばＦＫＢＰ／ＦＲＢベースのスイッチ」は、ラパマイシン又はラパログ、例えばＲＡＤ００１の存在下でＦＲＢ又はそのフラグメント若しくは類似体と結合する能力を有するＦＫＢＰフラグメント又はその類似体を含み、配列番号２７５又は２７６のＦＫＢＰ配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するか、又は３０、２５、２０、１５、１０、５つ、４つ、３つ、２つ又は１つのアミノ酸残基を超えて異ならない第１のスイッチドメイン；及びラパマイシン又はラパログの存在下でＦＲＢ又はそのフラグメント若しくは類似体と結合する能力を有するＦＲＢフラグメント又はその類似体を含み、配列番号２７７のＦＲＢ配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するか、又は３０、２５、２０、１５、１０、５つ、４つ、３つ、２つ又は１つのアミノ酸残基を超えて異ならない第２のスイッチドメインを含む二量体化スイッチを指す。一実施形態において、本明細書に記載のＲＣＡＲは、配列番号２７５（又は配列番号５８９）に開示するアミノ酸残基を含む１スイッチドメイン及び配列番号２７７に開示するアミノ酸残基を含む１スイッチドメインを含む。
【０３１６】
実施形態において、ＦＫＢＰ／ＦＲＢ二量体化スイッチは、ＦＲＢベースのスイッチドメイン、例えば修飾ＦＲＢスイッチドメイン、ＦＫＢＰベースのスイッチドメイン及び二量体化分子、例えばラパマイシン又はラパログ、例えばＲＡＤ００１間の複合体形成が変えられた、例えば増強された修飾ＦＲＢスイッチドメインを含む。一実施形態において、修飾ＦＲＢスイッチドメインは、アミノ酸位置Ｌ２０３１、Ｅ２０３２、Ｓ２０３５、Ｒ２０３６、Ｆ２０３９、Ｇ２０４０、Ｔ２０９８、Ｗ２１０１、Ｄ２１０２、Ｙ２１０５及びＦ２１０８から選択される１つ以上、例えば２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０又はそれを超える変異を含み、ここで、野生型アミノ酸は、任意の他の天然に存在するアミノ酸へ変異されている。一実施形態において、変異体ＦＲＢは、Ｅ２０３２に変異を含み、ここで、Ｅ２０３２は、フェニルアラニン（Ｅ２０３２Ｆ）、メチオニン（Ｅ２０３２Ｍ）、アルギニン（Ｅ２０３２Ｒ）、バリン（Ｅ２０３２Ｖ）、チロシン（Ｅ２０３２Ｙ）、イソロイシン（Ｅ２０３２Ｉ）、例えば配列番号２７８又はロイシン（Ｅ２０３２Ｌ）、例えば配列番号２７９に変異されている。一実施形態において、変異体ＦＲＢは、Ｔ２０９８に変異を含み、ここで、Ｔ２０９８は、フェニルアラニン（Ｔ２０９８Ｆ）又はロイシン（Ｔ２０９８Ｌ）、例えば配列番号２８０に変異されている。一実施形態において、変異体ＦＲＢは、Ｅ２０３２及びＴ２０９８に変異を含み、ここで、Ｅ２０３２は、任意のアミノ酸に変異され、Ｔ２０９８は、任意のアミノ酸に変異され、例えば配列番号２８１である。一実施形態において、変異体ＦＲＢは、Ｅ２０３２Ｉ及びＴ２０９８Ｌ変異を含み、例えば配列番号２８２である。一実施形態において、変異体ＦＲＢは、Ｅ２０３２Ｌ及びＴ２０９８Ｌ変異を含み、例えば配列番号２８３である。
【０３１７】
【表４７】
2021526814.tif 000051
【０３１８】
他の適当な二量体化スイッチは、ＧｙｒＢ−ＧｙｒＢベースの二量体化スイッチ、ジベレリンベースの二量体化スイッチ、タグ／バインダー二量体化スイッチ及びハロタグ／ｓｎａｐタグ二量体化スイッチを含む。本明細書に提供する手引きに従い、このようなスイッチ及び関連する二量体化分子は、当業者に明らかである。
【０３１９】
二量体化分子
スイッチドメイン間の結合は、二量体化分子により促進される。二量体化分子存在下でのスイッチドメイン間の相互作用又は結合は、第１のスイッチドメインに結合、例えば融合したポリペプチドと、第２のスイッチドメインに結合、例えば融合したポリペプチドとの間のシグナル伝達を可能にする。非律速レベルの二量体化分子存在下で本明細書に記載のシステムにおいて測定して、シグナル伝達は、１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、２倍、５倍、１０倍、５０倍、１００倍増加する。
【０３２０】
ラパマイシン及びラパマイシン類似体（ラパログと称される場合もある）、例えばＲＡＤ００１は、本明細書に記載のＦＫＢＰ／ＦＲＢベースの二量体化スイッチにおける二量体化分子として使用できる。一実施形態において、二量体化分子は、ラパマイシン（シロリムス）、ＲＡＤ００１（エベロリムス）、ゾタロリムス、テムシロリムス、ＡＰ−２３５７３（リダフォロリムス）、バイオリムス及びＡＰ２１９６７から選択できる。ＦＫＢＰ／ＦＲＢベースの二量体化スイッチで使用するのに適する更なるラパマイシン類似体は、「併用療法」と題される節又は「低い免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤との組み合わせ」と題される節に更に記載する。
【０３２１】
スプリットＣＡＲ
一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、スプリットＣＡＲを使用する。スプリットＣＡＲアプローチは、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１４／０５５４４２号パンフレット及び国際公開第２０１４／０５５６５７号パンフレットにより詳細に記載されている。簡潔には、スプリットＣＡＲ系は、第１の抗原結合ドメイン及び共刺激ドメイン（例えば、４１ＢＢ）を有する第１のＣＡＲを発現する細胞を含み、細胞は、第２の抗原結合ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ゼータ）を有する第２のＣＡＲも発現する。細胞が第１の抗原に遭遇したとき、共刺激ドメインが活性化され、細胞が増殖する。細胞が第２の抗原に遭遇したとき、細胞内シグナル伝達ドメインが活性化され、殺細胞活性が開始される。従って、ＣＡＲ発現細胞は、両方の抗原の存在下でのみ完全活性化される。実施形態において、第１の抗原結合ドメインは、ＢＣＭＡを認識し、例えば本明細書に記載の抗原結合ドメインを含み、第２の抗原結合ドメインは、急性骨髄白血病細胞で発現される抗原、例えばＣＤ１２３、ＣＬＬ−１、ＣＤ３４、ＦＬＴ３又は葉酸受容体ベータを認識する。実施形態において、第１の抗原結合ドメインは、ＢＣＭＡを認識し、例えば本明細書に記載の抗原結合ドメインを含み、第２の抗原結合ドメインは、Ｂ細胞で発現される抗原、例えばＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３、ＦＬＴ−３、ＲＯＲ１、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ又はＣＤ７９ａを認識する。
【０３２２】
安定性及び変異
抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えばｓｃＦｖ分子（例えば、可溶性ｓｃＦｖ）の安定性を、慣用の対照ｓｃＦｖ分子又は完全長抗体の生物物理学的特性（例えば、熱安定性）を参照して評価できる。
【０３２３】
抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えばｓｃＦｖの改善した熱安定性は、続いて、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ構築物全体に貢献し、ＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ構築物の治療的性質の改善に至る。抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えばｓｃＦｖの熱安定性は、慣用の抗体と比較して少なくとも約２℃又は３℃改善され得る。いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えばｓｃＦｖは、慣用の抗体に対して１℃改善された熱安定性を有する。別の実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えばｓｃＦｖは、慣用の抗体に対して２℃改善された熱安定性を有する。別の実施形態において、ｓｃＦｖは、慣用の抗体に対して４℃、５℃、６℃、７℃、８℃、９℃、１０℃、１１℃、１２℃、１３℃、１４℃、１５℃改善された熱安定性を有する。比較は、例えば、本明細書に開示されるｓｃＦｖ分子とｓｃＦｖ  ＶＨ及びＶＬが由来する抗体のｓｃＦｖ分子又はＦａｂフラグメントとの間でなされ得る。熱安定性を、当技術分野で知られる方法を使用して測定できる。例えば、いくつかの実施形態において、Ｔｍを測定できる。Ｔｍを測定する方法及びタンパク質安定性を決定する他の方法は、下に更に詳細に記載する。
【０３２４】
ｓｃＦｖの変異（可溶性ｓｃＦｖのヒト化又は直接変異誘発により生じる）は、ｓｃＦｖの安定性を変化させ、ｓｃＦｖ及びＣＡＲＴ３３構築物の全体的安定性を改善する。ヒトｓｃＦｖの安定性は、Ｔｍ、変性温度及び凝集温度などの尺度を使用して、マウスｓｃＦｖと比較することができる。
【０３２５】
変異体ｓｃＦｖの結合能は、実施例に記載のアッセイを使用して決定できる。
【０３２６】
いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えばｓｃＦｖは、変異ｓｃＦｖがＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ構築物の安定性改善を提供するように、ヒト化過程に由来する少なくとも１つの変異を含む。別の実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えばｓｃＦｖは、変異ｓｃＦｖがＣＡＲＴ−ＢＣＭＡ構築物の安定性改善を提供するように、ヒト化過程に由来する少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０変異を含む。
【０３２７】
タンパク質安定性を評価する方法
抗原結合ドメインの安定性は、例えば、下記の方法を使用して評価され得る。このような方法は、最小安定ドメインが最初に変性するか又は協調的に変性する多ドメイン単位（例えば、単一変性遷移を示す多ドメインタンパク質）の全体的安定性閾値を制限する、複数熱的変性遷移の決定を可能にする。最小安定ドメインを多数の更なる方法で同定できる。変異誘発を、いずれのドメインが全体的安定性を制限するか探索するために実施できる。更に、多ドメインタンパク質のプロテアーゼ抵抗性を、最小安定ドメインが本質的に変性することが知られる条件下でＤＳＣ又は他の分光学的方法により実施できる（Ｆｏｎｔａｎａ，ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｆｏｌｄ．Ｄｅｓ．，２：Ｒ１７−２６；Ｄｉｍａｓｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３９３：６７２−６９２）。最小安定ドメインが同定されたら、このドメインをコードする配列（又はその部分）を本方法における試験配列として用い得る。
【０３２８】
ａ）熱安定性
組成物の熱安定性を、当技術分野で知られる多数の非限定的生物物理学的又は生化学的技術を使用して分析し得る。特定の実施形態において、熱安定性を分析的分光により評価する。
【０３２９】
分析的分光法の例は、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）である。ＤＳＣは、大部分のタンパク質又はタンパク質ドメインの変性に付随する熱吸収性に感受性である熱量計を用いる（例えば、Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｒｕｉｚ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２７：１６４８−５２，１９８８を参照されたい）。タンパク質の熱安定性を決定するために、タンパク質サンプルを熱量計に入れ、Ｆａｂ又はｓｃＦｖが変性するまで温度を上げる。タンパク質が変性する温度が全体的タンパク質安定性の指標である。
【０３３０】
分析的分光法の別の例は、円二色性（ＣＤ）分光である。ＣＤ分光測定は、組成物の光学活性を温度上昇の関数として測定する。円二色性（ＣＤ）分光は、構造的不斉に起因する左手側偏光対右手側偏光の吸収の差異を測定する。障害された又は変性した構造は、規則正しい又は折りたたまれた構造と極めて異なるＣＤスペクトルをもたらす。ＣＤスペクトルは、温度上昇の変性効果に対するタンパク質の感受性を反映し、従ってタンパク質熱安定性の指標である（ｖａｎ  Ｍｉｅｒｌｏ  ａｎｄ  Ｓｔｅｅｍｓｍａ，Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，７９（３）：２８１−９８，２０００を参照されたい）。
【０３３１】
熱安定性を測定するための分析的分光法の別の例は、蛍光発光分光である（ｖａｎ  Ｍｉｅｒｌｏ  ａｎｄ  Ｓｔｅｅｍｓｍａ，上掲を参照されたい）。熱安定性を測定するための分析的分光法の更に別の例は、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光である（例えば、ｖａｎ  Ｍｉｅｒｌｏ  ａｎｄ  Ｓｔｅｅｍｓｍａ，上掲を参照されたい）。
【０３３２】
組成物の熱安定性は、生化学的に測定できる。熱安定性を評価するための生化学的方法の例は、熱負荷アッセイである。「熱負荷アッセイ」において、組成物を、設定した一定期間、一定範囲の高温に付す。例えば、いくつかの実施形態において、試験ｓｃＦｖ分子又はｓｃＦｖ分子を含む分子を例えば１〜１．５時間、一定範囲の温度上昇に付す。その後、タンパク質の活性を、関連する生化学的アッセイによりアッセイする。例えば、タンパク質が結合タンパク質（例えば、ｓｃＦｖ又はｓｃＦｖ含有ポリペプチド）である場合、結合タンパク質の結合活性を機能的又は定量的ＥＬＩＳＡにより決定できる。
【０３３３】
このようなアッセイは、ハイスループット形式で実施でき、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）及びハイスループットスクリーニングを使用する実施例に開示のものである。抗ＢＣＭＡ結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ変異体）のライブラリは、当技術分野で公知の方法を使用して作成され得る。抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えばｓｃＦｖの発現が誘導され得、抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えばｓｃＦｖは、熱負荷に供され得る。負荷試験サンプルは、結合についてアッセイでき、安定である抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えばｓｃＦｖは、スケールアップされ、更に特徴付けされ得る。
【０３３４】
熱安定性を、上記技術のいずれかを使用して、組成物の融解温度（Ｔｍ）を測定することにより評価する（例えば、分析的分光技術）。融解温度は、組成物の分子の５０％が折りたたまれた状態である、温度遷移曲線の中点の温度である（例えば、Ｄｉｍａｓｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｊ．Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．３９３：６７２−６９２を参照されたい）。いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えばｓｃＦｖのＴｍ値は、約４０℃、４１℃、４２℃、４３℃、４４℃、４５℃、４６℃、４７℃、４８℃、４９℃、５０℃、５１℃、５２℃、５３℃、５４℃、５５℃、５６℃、５７℃、５８℃、５９℃、６０℃、６１℃、６２℃、６３℃、６４℃、６５℃、６６℃、６７℃、６８℃、６９℃、７０℃、７１℃、７２℃、７３℃、７４℃、７５℃、７６℃、７７℃、７８℃、７９℃、８０℃、８１℃、８２℃、８３℃、８４℃、８５℃、８６℃、８７℃、８８℃、８９℃、９０℃、９１℃、９２℃、９３℃、９４℃、９５℃、９６℃、９７℃、９８℃、９９℃、１００℃である。いくつかの実施形態において、ＩｇＧのＴｍ値は、約４０℃、４１℃、４２℃、４３℃、４４℃、４５℃、４６℃、４７℃、４８℃、４９℃、５０℃、５１℃、５２℃、５３℃、５４℃、５５℃、５６℃、５７℃、５８℃、５９℃、６０℃、６１℃、６２℃、６３℃、６４℃、６５℃、６６℃、６７℃、６８℃、６９℃、７０℃、７１℃、７２℃、７３℃、７４℃、７５℃、７６℃、７７℃、７８℃、７９℃、８０℃、８１℃、８２℃、８３℃、８４℃、８５℃、８６℃、８７℃、８８℃、８９℃、９０℃、９１℃、９２℃、９３℃、９４℃、９５℃、９６℃、９７℃、９８℃、９９℃、１００℃である。いくつかの実施形態において、多価抗体のＴｍ値は、約４０℃、４１℃、４２℃、４３℃、４４℃、４５℃、４６℃、４７℃、４８℃、４９℃、５０℃、５１℃、５２℃、５３℃、５４℃、５５℃、５６℃、５７℃、５８℃、５９℃、６０℃、６１℃、６２℃、６３℃、６４℃、６５℃、６６℃、６７℃、６８℃、６９℃、７０℃、７１℃、７２℃、７３℃、７４℃、７５℃、７６℃、７７℃、７８℃、７９℃、８０℃、８１℃、８２℃、８３℃、８４℃、８５℃、８６℃、８７℃、８８℃、８９℃、９０℃、９１℃、９２℃、９３℃、９４℃、９５℃、９６℃、９７℃、９８℃、９９℃、１００℃である。
【０３３５】
熱安定性は、分析的熱量測定技術（例えば、ＤＳＣ）を使用して組成物の比熱又は熱容量（Ｃｐ）を測定することによっても評価する。組成物の比熱は、１ｍｏｌの水の温度を１℃上げるのに必要なエネルギー（例えば、ｋｃａｌ／ｍｏｌで）である。大きいＣｐは、変性又は不活性タンパク質組成物の特徴である。組成物の熱容量（ΔＣｐ）の変化を温度遷移前後の組成物の比熱の決定により測定する。熱安定性は、変性のギブズ自由エネルギー（ΔＧ）、変性のエンタルピー（ΔＨ）又は変性のエントロピー（ΔＳ）を含む熱力学的安定性の他のパラメータの測定又は決定によっても評価され得る。上記生化学的アッセイ（例えば、熱負荷アッセイ）の１つ以上を使用して、組成物の５０％がその活性（例えば、結合活性）を保持する温度（即ちＴＣ値）を決定する。
【０３３６】
更に、抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えばｓｃＦｖへの変異は、未変異の抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えばｓｃＦｖと比較して、抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えばｓｃＦｖの熱安定性を変化させる。ヒト又はヒト化抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えばｓｃＦｖがＢＣＭＡ構築物に組み込まれる場合、抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えばヒト化ｓｃＦｖは、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ構築物全体に熱安定性を与える。いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えばｓｃＦｖは、抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えばｓｃＦｖに熱安定性を与える単一の変異を含む。別の実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えばｓｃＦｖは、抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えばｓｃＦｖに熱安定性を与える複数の変異を含む。いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えばｓｃＦｖにおける複数の変異は、抗ＢＣＭＡ結合ドメイン、例えばｓｃＦｖの熱安定性に対して相加効果を有する。
【０３３７】
ｂ）凝集％
組成物の安定性は、その凝集傾向の測定により決定できる。凝集は、多数の非限定的生化学的又は生物物理学的技術により測定できる。例えば、組成物の凝集は、クロマトグラフィー、例えばサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を使用して評価し得る。ＳＥＣは、サイズに基づき分子を分ける。カラムを、イオン及び小分子を内側に入れるが、大きいものが入れないポリマーゲルの半固体ビーズで満たす。タンパク質組成物をカラムの上部に適用したとき、小型の折りたたまれたタンパク質（即ち非凝集タンパク質）は、大タンパク質凝集が利用可能であるより大量の溶媒に分散される。その結果、大きい凝集体は、カラムをより速く移動し、この方法で混合物をその要素に分離又は分画できる。各フラクションは、ゲルから溶出するに連れて別々に定量できる（例えば、光散乱による）。従って、組成物の凝集％を、フラクションの濃度と、ゲルに適用したタンパク質の総濃度との比較により決定できる。安定組成物は、本質的に単一フラクションとしてカラムから溶出し、溶出プロファイル又はクロマトグラムにおいて本質的に単一ピークとして見える。
【０３３８】
ｃ）結合親和性
組成物の安定性をその標的結合親和性の決定により評価できる。決定結合親和性のための広範な方法が当技術分野で知られる。結合親和性を決定するための方法の例は、表面プラズモン共鳴を用いる。表面プラズモン共鳴は、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅシステム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ  ａｎｄ  Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）を使用する、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化の検出により実時間生体分子特異的相互作用の分析を可能にする光学的現象である。更なる記載については、Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｕ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ａｎｎ．Ｂｉｏｌ．Ｃｌｉｎ．５１：１９−２６；Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｕ．，ｉ（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １１：６２０−６２７；Ｊｏｈｎｓｓｏｎ，Ｂ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．８：１２５−１３１；及びＪｏｈｎｎｓｏｎ，Ｂ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８：２６８−２７７を参照されたい。
【０３３９】
一態様において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、本明細書に記載の抗原結合ドメインアミノ酸配列と相同であるアミノ酸配列を含み、抗原結合ドメインは、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体フラグメントの所望の機能的特性を保持する。特定の一態様において、本発明のＣＡＲ組成物は、抗体フラグメントを含む。更なる態様において、その抗体フラグメントは、ｓｃＦｖを含む。
【０３４０】
種々の態様において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、一方又は両方の可変領域（例えば、ＶＨ及び／又はＶＬ）内、例えば１つ以上のＣＤＲ領域内及び／又は１つ以上のフレームワーク領域の１つ以上のアミノ酸の修飾により操作される。特定の一態様において、本発明のＣＡＲ組成物は、抗体フラグメントを含む。更なる態様において、その抗体フラグメントは、ｓｃＦｖを含む。
【０３４１】
本発明の抗体又は抗体フラグメントは、アミノ酸配列が（例えば、野生型から）異なるように更に修飾され得るが、所望の活性は、修飾されないことが当業者に理解される。例えば、更なるヌクレオチド置換、例えばアミノ酸置換をもたらす保存的置換、例えば「非必須」アミノ酸残基での保存的置換をタンパク質に対して行い得る。例えば、分子における非必須アミノ酸残基を同じ側鎖ファミリーからの別のアミノ酸残基で置き換え得る。別の実施形態において、一連のアミノ酸を、側鎖ファミリーメンバーの順番及び／又は組成が異なる構造的に類似する一連のもので置き換えることができ、例えばアミノ酸残基が類似側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられた保存的置換をなし得る。
【０３４２】
塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非電荷極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分枝側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含む、類似側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野で定義されている。
【０３４３】
２つ以上の核酸又はポリペプチド配列に関連して、同一性パーセントは、同じである２つ以上の配列を指す。２配列は、次の配列比較アルゴリズムの１つを使用して測定される又は手動アラインメント及び目視により、比較窓又は指定領域にわたり、最大対応を比較及びアラインしたとき、同じであるアミノ酸残基又はヌクレオチドの特定パーセントを有する場合、「実質的に同一」である（特定領域又は特定されていないとき、配列全体にわたり、例えば６０％の同一性、任意選択により７０％、７１％。７２％。７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性）。任意選択により、同一性は、少なくとも約５０ヌクレオチド（又は１０アミノ酸）長の領域又はより好ましくは１００〜５００又は１０００又はそれを超えるヌクレオチド（又は２０、５０、２００又はそれを超えるアミノ酸）長の領域にわたり同一性が存在する。
【０３４４】
配列比較のために、典型的には１配列が対照配列としての役割を果たし、それに対して試験配列を比較する。配列比較アルゴリズムを使用するとき、試験及び対照配列をコンピューターに入力し、必要に応じて部分配列座標を指定し、配列アルゴリズムプログラムパラメータを指定する。デフォルトプログラムパラメータを使用できるか又は代替パラメータを指定できる。次いで、配列比較アルゴリズムは、プログラムパラメータに基づき、対照配列に対する試験配列の配列同一性パーセントを計算する。比較のために配列をアラインメントする方法は、当技術分野で周知である。比較のための配列の最適アラインメントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ，（１９７０）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２ｃの局所相同性アルゴリズム、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３の相同性アラインメントアルゴリズム、Ｐｅａｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：２４４４のサーチのための類似法、これらのアルゴリズムのコンピューターによる実行（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ及びＴＦＡＳＴＡ）又は手動アラインメント及び目視（例えば、Ｂｒｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，（２００３）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙを参照されたい）により実施できる。
【０３４５】
配列同一性及び配列類似性パーセントの決定に適するアルゴリズムの２つの例は、ＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ  ２．０アルゴリズムであり、これらは、それぞれＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７７）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２；及びＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０に記載されている。ＢＬＡＳＴ解析を実施するためのソフトウエアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎから公的に入手可能である。
【０３４６】
２アミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＰＡＭ１２０荷重残基表、ギャップ長ペナルティ１２及びギャップペナルティ４を使用して、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に取り込まれているＥ．Ｍｅｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒ，（（１９８８）Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．４：１１−１７）アルゴリズムを使用しても決定できる。加えて、２アミノ酸配列間の同一性パーセントは、Ｂｌｏｓｓｏｍ  ６２マトリックス又はＰＡＭ２５０マトリックス及びギャップ荷重１６、１４、１２、１０、８、６又は４及び長さ荷重１、２、３、４、５又は６を使用する、ＧＣＧソフトウエアパッケージ（ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで利用可能）のＧＡＰプログラムに取り込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ（（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４−４５３）アルゴリズムを使用して決定できる。
【０３４７】
一態様において、本発明は、機能的に均等な分子を産生する出発抗体又はフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）アミノ酸配列の修飾を企図する。例えば、ＣＡＲに含まれる抗ＢＣＭＡ結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＨ又はＶＬは、抗ＢＣＭＡ結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）の出発ＶＨ又はＶＬフレームワーク領域の少なくとも約７０％、７１％。７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を保持するように修飾することができる。本発明は、機能的に均等な分子を産生するための、ＣＡＲ構築物全体の修飾、例えばＣＡＲ構築物における種々のドメインの１つ以上のアミノ酸配列における修飾を企図する。ＣＡＲ構築物は、出発ＣＡＲ構築物の少なくとも約７０％、７１％。７２％。７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を保持するように修飾され得る。
【０３４８】
ＣＡＲをコードする核酸構築物
本発明は、本明細書に記載の１つ以上のＣＡＲ構築物をコードする核酸分子も提供する。一態様において、核酸分子は、メッセンジャーＲＮＡ転写物として提供される。一態様において、核酸分子は、ＤＮＡ構築物として提供される。
【０３４９】
従って、一態様において、本発明は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする単離核酸分子に関し、ここで、ＣＡＲは、抗ＢＣＭＡ結合ドメイン（例えば、ヒト抗ＢＣＭＡ結合ドメイン）、膜貫通ドメイン並びに刺激ドメイン、例えば共刺激シグナル伝達ドメイン及び／又は一次シグナル伝達ドメイン、例えばゼータ鎖を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ結合ドメイン又はそれを９５〜９９％同定する配列である。いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖又はゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７及びＣＤ１５４からなる群から選択されるタンパク質の膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、膜貫通ドメインにヒンジ領域、例えば本明細書に記載のヒンジによって接続される。いくつかの実施形態において、単離核酸分子は、一次シグナル伝達ドメインをコードする配列を更に含む。いくつかの実施形態において、一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ、ＴＣＲゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＦｃεＲＩ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２又はＣＤ６６ｄに由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、単離核酸分子は、共刺激ドメインをコードする配列を更に含む。一部の実施形態において、共刺激性ドメインは、例えば、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ性活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒアルファ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、���ＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドからなる群から選択されるタンパク質の機能的シグナル伝達ドメインである。
【０３５０】
別の態様において、本発明は、配列番号１のリーダー配列を含むＣＡＲ構築物をコードする単離核酸分子に関する。
【０３５１】
別の態様において、本発明は、核酸分子によりコードされる単離ポリペプチド分子に関する。
【０３５２】
所望の分子をコードする核酸配列は、標準技術を使用して、例えば遺伝子を発現する細胞からのライブラリのスクリーニングにより、それを含むことが知られるベクターからの遺伝子を誘導化することにより又はそれを含むことが知られる細胞及び組織から直接単離することによるような、組み換え当技術分野で知られる方法を使用して得ることができる。代わりに、目的の遺伝子をクローン化ではなく合成により産生できる。
【０３５３】
本発明は、本発明のＤＮＡが挿入されているベクターも提供する。レンチウイルスなどのレトロウイルス由来のベクターは、それらが導入遺伝子の長期の安定した組込み及び娘細胞への伝播を可能にするため、長期遺伝子導入を達成するのに適するツールである。レンチウイルスベクターは、肝細胞などの非増殖細胞を形質導入できる点で、マウス白血病ウイルスなどのオンコ−レトロウイルス由来のベクターを超える更なる利点を有する。更に低免疫原性であるという付加的利点も有する。レトロウイルスベクターは、例えば、ガンマレトロウイルスベクターでもあり得る。ガンマレトロウイルスベクターは、例えば、プロモーター、パッケージングシグナル（ψ）、プライマー結合部位（ＰＢＳ）、１つ以上の（例えば、２）末端反復配列（ＬＴＲ）及び目的の導入遺伝子、例えばＣＡＲをコードする遺伝子を含み得る。ガンマレトロウイルスベクターは、ｇａｇ、ｐｏｌ及びｅｎｖなどのウイルス構造的遺伝子を欠き得る。例示的なガンマレトロウイルスベクターは、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）、脾フォーカス形成ウイルス（ＳＦＦＶ）及び骨髄増殖性肉腫ウイルス（ＭＰＳＶ）及びそれら由来のベクターを含む。他のガンマレトロウイルスベクターは、例えば、Ｔｏｂｉａｓ  Ｍａｅｔｚｉｇ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｇａｍｍａｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ  Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ”Ｖｉｒｕｓｅｓ．２０１１  Ｊｕｎ；３（６）：６７７−７１３に記載される。
【０３５４】
別の実施形態において、所望の本発明のＣＡＲをコードする核酸を含むベクターは、アデノウイルスベクター（Ａ５／３５）である。別の実施形態において、ＣＡＲをコードする核酸の発現は、ｓｌｅｅｐｉｎｇ  ｂｅａｕｔｙ、ＣＲＩＳＰＲ、ＣＡＳ９及び亜鉛フィンガーヌクレアーゼなどのトランスポゾンを使用して達成できる。参照により本明細書に包含される下記のＪｕｎｅ  ｅｔ  ａｌ．２００９  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ９．１０：７０４−７１６を参照されたい。
【０３５５】
概説すると、ＣＡＲをコードする天然又は合成核酸の発現は、典型的には、ＣＡＲポリペプチドをコードする核酸又はその一部をプロモーターに操作可能に連結させ、その構築物を発現ベクターに取り込むことにより達成される。ベクターは、真核生物での複製及び組込みに適し得る。典型的クローニングベクターは、所望の核酸配列の発現の制御に有用な転写及び翻訳ターミネーター、開始配列及びプロモーターを含む。
【０３５６】
本発明の構築物の発現は、標準遺伝子送達プロトコルを使用する核酸免疫化及び遺伝子治療にも使用し得る。遺伝子送達のための方法が当技術分野で知られている。例えば、参照によりその全体が本明細書に援用される米国特許第５，３９９，３４６号明細書、同第５，５８０，８５９号明細書、同第５，５８９，４６６号明細書を参照されたい。別の実施形態において、本発明は、遺伝子治療ベクターを提供する。
【０３５７】
核酸は、多数のタイプのベクターにクローン化できる。例えば、核酸は、プラスミド、ファージミド、ファージ誘導体、動物ウイルス及びコスミドを含むが、これらに限定されないベクターにクローン化できる。特に興味深いベクターは、発現ベクター、複製ベクター、プローブ産生ベクター及びシークエンシングベクターを含む。
【０３５８】
更に、発現ベクターは、ウイルスベクターの形態で細胞に提供され得る。ウイルスベクター技術は、当技術分野で周知であり、例えばＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ，ｖｏｌｕｍｅｓ  １  −４，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ及び他のウイルス学及び分子生物学マニュアルに記載されている。ベクターとして有用なウイルスは、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス及びレンチウイルスを含むが、これらに限定されない。一般に、適当なベクターは、少なくとも１生物で機能的な複製起点、プロモーター配列、便利な制限エンドヌクレアーゼ部位及び１つ以上の選択可能マーカーを含む（例えば、国際公開第０１／９６５８４号パンフレット；国際公開第０１／２９０５８号パンフレット；及び米国特許第６，３２６，１９３号明細書）。
【０３５９】
多数のウイルスベースの系が哺乳動物細胞への遺伝子移入のために開発されている。例えば、レトロウイルスは、遺伝子送達系のための簡便なプラットフォームを提供する。選択した遺伝子を、当技術分野で知られる技術を使用して、ベクターに挿入し、レトロウイルス粒子に包装できる。次いで、組み換えウイルスが単離され、対象の細胞にインビボ又はエクスビボで送達され得る。多数のレトロウイルス系が当技術分野で知られている。一実施形態において、アデノウイルスベクターを使用する。多数のアデノウイルスベクターが当技術分野で知られている。一部の実施形態において、レンチウイルスベクターを使用する。
【０３６０】
更なるプロモーター要素、例えばエンハンサーは、転写開始の頻度を制御する。典型的には、これらは、開始部位の上流３０〜１１０ｂｐの領域に位置するが、多数のプロモーターが同様に開始部位の下流に機能的要素を含むことが示されている。プロモーター要素間の空間は、多くの場合、可動性であり、そのため、要素が互いに逆になったとき又は移動したときにプロモーター機能が保持される。チミジンキナーゼ（ｔｋ）プロモーターにおいて、プロモーター要素間の空間は、活性が落ち始める前、５０ｂｐ離れるまで増加し得る。プロモーターにより、個々の要素は、転写を活性化するために協調的又は独立的に機能できるように見える。
【０３６１】
哺乳動物Ｔ細胞においてＣＡＲ導入遺伝子の発現ができるプロモーターの例は、ＥＦ１ａプロモーターである。天然ＥＦ１ａプロモーターは、アミノアシルｔＲＮＡのリボソームへの酵素送達を担う伸長因子−１複合体のαサブユニットの発現を駆動する。ＥＦ１ａプロモーターは、哺乳動物発現プラスミドで広く使用されており、レンチウイルスベクターにクローン化された導入遺伝子からＣＡＲ発現を駆動するのに有効であることが示されている。例えば、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１７（８）：１４５３−１４６４（２００９）を参照されたい。一態様において、ＥＦ１ａプロモーターは、配列番号１１として提供される配列を含む。
【０３６２】
プロモーターの別の例は、最初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配列である。このプロモーター配列は、それに操作可能に連結したあらゆるポリヌクレオチド配列の高レベルの発現を駆動できる強い構成的プロモーター配列である。しかしながら、サルウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、マウス乳房腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーター、ＭｏＭｕＬＶプロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、エプスタイン・バーウイルス最初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーターを含むが、これらに限定されない他の構成的プロモーター配列並びにアクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、伸長因子−１αプロモーター、ヘモグロビンプロモーター及びクレアチンキナーゼプロモーターなど、しかし、これらに限定されないヒト遺伝子プロモーターも使用し得る。更に、本発明は、構成的プロモーターの使用に限定すべきではない。誘導性プロモーターも本発明の一部であるとして意図される。誘導性プロモーターの使用は、操作可能に連結したポリヌクレオチド配列の発現を、発現が望まれるときに活性化し、発現が望まれないときに遮断することができる分子スイッチを提供する。誘導性プロモーターの例は、メタロチオネインプロモーター、グルココルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーター及びテトラサイクリンプロモーターを含むが、これらに限定されない。
【０３６３】
プロモーターの別の例は、ホスホグリセラートキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターである。実施形態において、切断ＰＧＫプロモーター（例えば、野生型ＰＧＫプロモーター配列と比較したとき、１つ以上、例えば１つ、２つ、５つ、１０、１００、２００、３００又は４００のヌクレオチド欠失を有するＰＧＫプロモーター）が望ましいことがある。ＰＧＫプロモーター例のヌクレオチド配列を下に提供する。
ＷＴ  ＰＧＫプロモーター
【化４】
2021526814.tif 000052
例示的な切断型ＰＧＫプロモーター：
ＰＧＫ１００：
【化５】
2021526814.tif 000053
ＰＧＫ２００：
【化６】
2021526814.tif 000054
ＰＧＫ３００：
【化７】
2021526814.tif 000055
ＰＧＫ４００：
【化８】
2021526814.tif 000056
【０３６４】
ベクターは、例えば、分泌を促進するためのシグナル配列、ポリアデニル化シグナル及び転写ターミネーター（例えば、ウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）遺伝子から）、エピソーム複製及び原核生物における複製を可能にする要素（例えば、ＳＶ４０起源及びＣｏｌＥ１又は当技術分野で知られる他のもの）及び／又は選択を可能にする要素（例えば、アンピシリン耐性遺伝子及び／又はゼオシンマーカー）も含み得る。
【０３６５】
ＣＡＲポリペプチド又はその一部の発現を評価するために、細胞に導入する発現ベクター遺伝子導入又はウイルスベクターによる感染が探求される細胞集団から発現細胞から発現細胞の同定及び選択を容易にするために、選択可能マーカー遺伝子又はレポーター遺伝子又は両方を含み得る。他の態様において、選択可能マーカーは、ＤＮＡの別の断面に担持され、共トランスフェクション法において使用される。選択可能マーカー及びレポーター遺伝子のいずれも、宿主細胞における発現が可能であるように適切な制御配列が隣接し得る。有用な選択可能マーカーは、例えば、ｎｅｏなどの抗生物質耐性遺伝子を含む。
【０３６６】
レポーター遺伝子は、恐らく遺伝子導入されている細胞を同定し、制御配列の機能性を評価するために使用される。一般に、レポーター遺伝子は、レシピエント生物又は組織に存在又は発現されず、発現がある容易に検出可能な特性、例えば酵素活性により顕在化されるポリペプチドをコードする遺伝子である。レポーター遺伝子の発現を、ＤＮＡがレシピエント細胞に導入されてから適当な時間後にアッセイする。適当なレポーター遺伝子は、ルシフェラーゼ、β−ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、分泌型アルカリホスファターゼ又は緑色蛍光タンパク質遺伝子をコードする遺伝子を含み得る（例えば、Ｕｉ−Ｔｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０００  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ４７９：７９−８２）。適当な発現系は、周知であり、既知技術により製造できるか又は商業的に入手できる。一般に、レポーター遺伝子の最高レベルの発現を示す最小５’フランキング領域を有する構築物をプロモーターとして同定する。このようなプロモーター領域は、レポーター遺伝子に連結し、プロモーター駆動転写を調節する能力について薬剤を評価するのに使用され得る。
【０３６７】
いくつかの実施形態において、ベクターは、第２のＣＡＲをコードする核酸を更に含み得る。いくつかの実施形態において、第２のＣＡＲは、例えば、ＣＤ１２３、ＣＤ３４、ＣＬＬ−１、葉酸受容体ベータ若しくはＦＬＴ３など、急性骨髄白血病細胞に発現される標的；又はＢ細胞上に発現される標的、例えばＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３、ＦＬＴ−３、ＲＯＲ１、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ若しくはＣＤ７９ａに対する抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ベクターは、第１の抗原に特異的に結合し、共刺激性シグナル伝達ドメインを有するが、一次シグナル伝達ドメインを有しない細胞内シグナル伝達ドメインを含む、第１のＣＡＲをコードする核酸配列を含み、第２の異なる抗原に特異的に結合し、一次シグナル伝達ドメインを有するが、共刺激性シグナル伝達ドメインを有しない細胞内シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲをコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ベクターは、ＢＣＭＡ結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び共刺激ドメインを含む第１のＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸及びＢＣＭＡ以外の抗原（例えば、ＡＭＬ細胞に発現される抗原、例えばＣＤ１２３、ＣＤ３４、ＣＬＬ−１、葉酸受容体ベータ若しくはＦＬＴ３；又はＢ細胞上に発現される抗原、例えばＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３、ＦＬＴ−３、ＲＯＲ１、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ若しくはＣＤ７９ａ）を標的とし、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲをコードする核酸を含む。別の実施形態において、ベクターは、ＢＣＭＡ結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む第１のＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸及びＢＣＭＡ以外の抗原（例えば、ＡＭＬ細胞に発現される抗原、例えばＣＤ１２３、ＣＤ３４、ＣＬＬ−１、葉酸受容体ベータ若しくはＦＬＴ３；又はＢ細胞上に発現される抗原、例えばＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３、ＦＬＴ−３、ＲＯＲ１、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ若しくはＣＤ７９ａ）に特異的に結合し、抗原に対する抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び共刺激性シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲをコードする核酸を含む。
【０３６８】
一部の実施形態において、ベクターは、本明細書に記載のＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードする核酸及び阻害性ＣＡＲをコードする核酸を含む。一部の実施形態において、阻害性ＣＡＲは、正常細胞、例えばまたＢＣＭＡを発現する正常細胞で見られるが、癌細胞で見られない抗原と結合する抗原結合ドメインを含む。一部の実施形態において、阻害性ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び阻害分子の細胞内ドメインを含む。例えば、阻害性ＣＡＲの細胞内ドメインは、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦＲβの細胞内ドメインであり得る。
【０３６９】
実施形態において、ベクターは、ＣＡＲをコードする２つ以上の核酸配列、例えば本明細書に記載のＢＣＭＡ  ＣＡＲ及び第２のＣＡＲ、例えば阻害性ＣＡＲ又はＢＣＭＡ以外の抗原（例えば、ＡＭＬ細胞に発現する抗原、例えばＣＤ１２３、ＣＬＬ−１、ＣＤ３４、ＦＬＴ３若しくは葉酸受容体ベータ；又は抗原発現Ｂ細胞、例えばＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３４、ＣＤ１２３、ＦＬＴ−３、ＲＯＲ１、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１７９ｂ又はＣＤ７９ａ）に特異的に結合するＣＡＲを含み得る。このような実施形態において、２つ以上のＣＡＲをコードする核酸配列は、同じフレームにおいて単一核分子により且つ単一のポリペプチド鎖としてコード化される。この態様において、２つ以上のＣＡＲは、例えば、１つ以上のペプチド開裂部位により分けられ得る（例えば、自己開裂部位又は細胞内プロテアーゼのための基質）。ペプチド開裂部位の例は、次のものを含み、ここで、ＧＳＧ残基は、任意選択である。
Ｔ２Ａ：（ＧＳＧ）Ｅ  Ｇ  Ｒ  Ｇ  Ｓ  Ｌ  Ｌ  Ｔ  Ｃ  Ｇ  Ｄ  Ｖ  Ｅ  Ｅ  Ｎ  Ｐ  Ｇ  Ｐ（配列番号１９４）
Ｐ２Ａ：（ＧＳＧ）Ａ  Ｔ  Ｎ  Ｆ  Ｓ  Ｌ  Ｌ  Ｋ  Ｑ  Ａ  Ｇ  Ｄ  Ｖ  Ｅ  Ｅ  Ｎ  Ｐ  Ｇ  Ｐ（配列番号１９５）
Ｅ２Ａ：（ＧＳＧ）Ｑ  Ｃ  Ｔ  Ｎ  Ｙ  Ａ  Ｌ  Ｌ  Ｋ  Ｌ  Ａ  Ｇ  Ｄ  Ｖ  Ｅ  Ｓ  Ｎ  Ｐ  Ｇ  Ｐ（配列番号１９６）
Ｆ２Ａ：（ＧＳＧ）Ｖ  Ｋ  Ｑ  Ｔ  Ｌ  Ｎ  Ｆ  Ｄ  Ｌ  Ｌ  Ｋ  Ｌ  Ａ  Ｇ  Ｄ  Ｖ  Ｅ  Ｓ  Ｎ  Ｐ  Ｇ  Ｐ（配列番号１９７）
【０３７０】
細胞に遺伝子を導入し、発現させる方法は、当技術分野で知られている。発現ベクターに関連して、ベクターは、当技術分野の任意の方法により、宿主細胞、例えば哺乳動物、細菌、酵母又は昆虫細胞に容易に導入できる。例えば、発現ベクターは、物理的、化学的又は生物学的手段により、宿主細胞に移入され得る。
【０３７１】
宿主細胞にポリヌクレオチドを導入するための物理的方法は、リン酸カルシウム沈殿、リポフェクション、微粒子銃、微量注入、エレクトロポレーションなどを含む。ベクター及び／又は外来性核酸を含む細胞を産生する方法は、当技術分野で周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ，ｖｏｌｕｍｅｓ  １−４，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹを参照されたい）。宿主細胞へのポリヌクレオチドの導入に好ましい方法は、リン酸カルシウムトランスフェクションである。
【０３７２】
宿主細胞に目的のポリヌクレオチドを導入するための生物学的方法は、ＤＮＡ及びＲＮＡベクターの使用を含む。ウイルスベクター、特にレトロウイルスベクターは、哺乳動物、例えばヒト細胞への遺伝子挿入に最も広く使用される方法となってきている。他のウイルスベクターは、レンチウイルス、ポックスウイルス、単純ヘルペスウイルスＩ、アデノウイルス及びアデノ関連ウイルスなどに由来し得る。例えば、米国特許第５，３５０，６７４号明細書及び同第５，５８５，３６２号明細書を参照されたい。
【０３７３】
宿主細胞にポリヌクレオチドを導入するための化学的手段は、巨大分子複合体、ナノカプセル、マイクロスフェア、ビーズ及び水中油型エマルジョン、ミセル、混合ミセル及びリポソームを含む脂質ベースの系などのコロイド分散体系を含む。インビトロ及びインビボで送達媒体として使用するための代表的コロイド系は、リポソーム（例えば、人工膜小胞）である。標的化ナノ粒子又は他の適当なサブミクロンサイズの送達系を用いるポリヌクレオチドの送達など、最新式の核酸の標的化送達の他の方法が利用可能である。
【０３７４】
非ウイルス送達系を利用する場合、代表的送達媒体は、リポソームである。脂質製剤の使用は、宿主細胞への核酸の導入のために意図される（インビトロ、エクスビボ又はインビボ）。別の態様において、核酸は、脂質と結合され得る。脂質と結合した核酸は、リポソームの水性内部への被包、リポソームの脂質二重層内への分散、リポソームとオリゴヌクレオチドの両方と結合する連結分子を介するリポソームへの結合、リポソームへの封入、リポソームとの複合体化、脂質含有溶液への分散、脂質との混合、脂質との組み合わせ、脂質中の懸濁液としての包含、ミセル内への包含又は複合体化又は他の方法で脂質と結合する。脂質、脂質／ＤＮＡ又は脂質／発現ベクター結合組成物は、溶液中の何らかの特定の構造に限定されない。例えば、それらは、二重層構造において、ミセルとして又は「崩壊」構造を有して存在し得る。それらは、単に溶液に分散され、恐らくサイズ又は形状が均一ではない凝集体も形成し得る。脂質は、天然に存在する又は合成脂質であり得る脂肪物質である。例えば、脂質は、細胞質に天然に生じる脂肪滴並びに脂肪酸、アルコール、アミン、アミノアルコール及びアルデヒドなどの長鎖脂肪族炭化水素を含む化合物群及びその誘導体を含む。
【０３７５】
使用に適する脂質は、商業的供給源から得ることができる。例えば、ジミリスチルホスファチジルコリン（「ＤＭＰＣ」）は、Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯから得ることができ、リン酸ジセチル（「ＤＣＰ」）は、Ｋ＆Ｋ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，ＮＹ）から得ることができ；コレステロール（「Ｃｈｏｉ」）は、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ−Ｂｅｈｒｉｎｇから得ることができ、ジミリスチルホスファチジルグリセロール（「ＤＭＰＧ」）及び他の脂質は、Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ，Ｉｎｃ．（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ．）から得ることができる。クロロホルム又はクロロホルム／メタノール中の脂質の原液を約−２０℃で保存できる。クロロホルムを、メタノールよりも容易に揮発するために唯一の溶媒として使用する。「リポソーム」は、封入された脂質二重層又は凝集体の産生により形成される多様な単及び多層状脂質媒体を包含する一般的用語である。リポソームは、リン脂質二重層膜及び内部水性媒体を伴う小胞構造を有することにより特徴付けられ得る。多層状リポソームは、水性媒体により分離された、複数の脂質層を有する。それらは、リン脂質が過剰の水溶液に懸濁されたときに自然に形成される。脂質要素は、閉構造形成前に自己凝集し、水及び溶解した溶質を脂質二重層の間に封入する（Ｇｈｏｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１  Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ  ５：５０５−１０）。しかしながら、通常の小胞構造と異なる構造を溶液で有する組成物も包含される。例えば、脂質は、ミセル構造であるか又は単に脂質分子の不均一凝集体として存在すると考えられ得る。リポフェクタミン−核酸複合体も考慮される。
【０３７６】
外来性核酸を宿主細胞に導入するか又はそうでなければ細胞を本発明の阻害剤に曝す方法に関係なく、宿主細胞における組み換えＤＮＡ配列の存在を確認するために多様なアッセイを行い得る。このようなアッセイは、例えば、サザン及びノーザンブロッティング、ＲＴ−ＰＣＲ及びＰＣＲなどの当業者に周知の「分子生物学的」アッセイ、薬剤の同定に使用するための、例えば免疫学的手段（ＥＬＩＳＡ及びウェスタンブロット）により、特定のペプチドの存在又は不在を検出するような「生化学的」アッセイ又は本発明の範囲内に入る本明細書に記載のアッセイを含む。
【０３７７】
本発明は、ＣＡＲコード化核酸分子を含むベクターを更に提供する。一態様において、ＣＡＲベクターを細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞に直接形質導入し得る。一態様において、ベクターは、クローニング又は発現ベクター、例えば１つ以上のプラスミド（例えば、発現プラスミド、クローニングベクター、ミニサークル、ミニベクター、二重微小染色体）、レトロウイルス及びレンチウイルスベクター構築物を含むが、これらに限定されないベクターである。一態様において、ベクターは、哺乳動物Ｔ細胞又はＮＫ細胞においてＣＡＲ構築物の発現ができる。一態様において、哺乳動物Ｔ細胞は、ヒトＴ細胞である。一態様において、哺乳動物ＮＫ細胞は、ヒトＮＫ細胞である。
【０３７８】
ＲＮＡトランスフェクション
インビトロで転写されたＲＮＡ  ＣＡＲを産生する方法が本明細書に開示される。本発明は、細胞に直接トランスフェクトできるＲＮＡ構築物をコードするＣＡＲも含む。トランスフェクションに使用するためのｍＲＮＡを産生する方法は、特異的に設計したプライマーを用いる鋳型のインビトロ転写（ＩＶＴ）、続くポリＡ付加を含み、３’及び５’非翻訳配列（「ＵＴＲ」）、５’キャップ及び／又は配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、発現される核酸及びポリＡテイルを含む構築物、典型的には５０〜２０００塩基長（配列番号３５）を産生し得る。このように産生されたＲＮＡは、異なる種の細胞において効率的にトランスフェクトされ得る。一態様において、鋳型は、ＣＡＲの配列を含む。
【０３７９】
一態様において、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲは、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）によってコードされている。一態様において、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードするｍＲＮＡは、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲＴ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）の産生のために、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞に導入される。
【０３８０】
いくつかの実施形態において、インビトロ転写ＲＮＡ  ＣＡＲを一過性トランスフェクションの形態で細胞に導入できる。ＲＮＡは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）産生鋳型を使用するインビトロ転写により産生される。任意の供給源からの目的のＤＮＡを、適切なプライマー及びＲＮＡポリメラーゼを使用してインビトロｍＲＮＡ合成のための鋳型にＰＣＲにより直接変換できる。ＤＮＡの供給源は、例えば、ゲノムＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ファージＤＮＡ、ｃＤＮＡ、合成ＤＮＡ配列又はＤＮＡのあらゆる他の適切な供給源であり得る。インビトロ転写のための所望の鋳型は、本発明のＣＡＲである。例えば、ＲＮＡ  ＣＡＲの鋳型は、抗腫瘍抗体の単鎖可変ドメインを含む細胞外領域；ヒンジ領域、膜貫通ドメイン（例えば、ＣＤ８ａの膜貫通ドメイン）；並びに細胞内シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３−ゼータのシグナル伝達ドメイン及び４−１ＢＢのシグナル伝達ドメインを含むものを含む細胞質領域を含む。
【０３８１】
いくつかの実施形態において、ＰＣＲに使用するＤＮＡは、オープンリーディングフレームを含む。ＤＮＡは、生物のゲノムからの天然に存在するＤＮＡ配列由来であり得る。いくつかの実施形態において、核酸は、５’及び／又は３’非翻訳領域（ＵＴＲ）のいくらか又は全てを含み得る。核酸は、エクソン及びイントロンを含み得る。いくつかの実施形態において、ＰＣＲに使用するＤＮＡは、ヒト核酸配列である。別の実施形態において、ＰＣＲに使用するＤＮＡは、５’及び３’ＵＴＲを含むヒト核酸配列である。ＤＮＡは、代替的に、天然に存在する生物で通常発現されない人工ＤＮＡ配列であり得る。例示的な人工ＤＮＡ配列は、融合タンパク質をコードするオープンリーディングフレームを形成するように一緒にライゲートされた遺伝子の部分を含むものである。一緒にライゲートされたＤＮＡの部分は、単一生物由来又は２つ以上の生物由来であり得る。
【０３８２】
ＰＣＲを使用して、トランスフェクションに使用するｍＲＮＡのインビトロ転写のための鋳型を産生する。ＰＣＲを実施する方法は、当技術分野で周知である。ＰＣＲにおいて使用するプライマーは、ＰＣＲのための鋳型として使用するＤＮＡの領域に実質的に相補的である領域を有するように設計する。本明細書で使用する「実質的に相補的」は、プライマー配列の残基の大部分又は全てが相補的である又は１つ以上の塩基が非相補的又はミスマッチである、ヌクレオチドの配列を指す。実質的に相補的な配列は、ＰＣＲに使用するアニーリング条件下において、意図されるＤＮＡ標的とアニール又はハイブリダイズできる。プライマーは、ＤＮＡ鋳型の任意の部分と実質的に相補的であるように設計できる。例えば、プライマーは、５’及び３’ＵＴＲを含む、細胞において通常転写される（オープンリーディングフレーム）核酸の部分を増幅するように設計できる。プライマーは、目的の特定のドメインをコードする核酸の部分を増幅するようにも設計できる。いくつかの実施形態において、プライマーは、５’及び３’ＵＴＲの全て又は一部を含むヒトｃＤＮＡのコーディング領域を増幅するように設計される。ＰＣＲに有用なプライマーは、当技術分野で周知の合成法により産生できる。「フォワードプライマー」は、増幅するＤＮＡ配列の上流であるＤＮＡ鋳型上にヌクレオチドに対して実質的に相補的であるヌクレオチドの領域を含むプライマーである。「上流」は、コード鎖に対して、増幅するＤＮＡ配列に対する５位を指すために本明細書で使用する。「リバースプライマー」は、増幅するＤＮＡ配列の下流である、二本鎖ＤＮＡ鋳型に対して実質的に相補的なヌクレオチドの領域を含むプライマーである。「下流」は、コード鎖に対して、増幅するＤＮＡ配列に対する３’位を指すために本明細書で使用する。
【０３８３】
ＰＣＲに有用なあらゆるＤＮＡポリメラーゼを本明細書に開示する方法で使用できる。試薬及びポリメラーゼは、多数の業者から市販されている。
【０３８４】
安定性及び／又は翻訳効率を促進する能力を有する化学構造も使用し得る。ＲＮＡは、好ましくは、５’及び３’ＵＴＲを有する。いくつかの実施形態において、５’ＵＴＲは、１〜３０００ヌクレオチド長である。コーディング領域に付加する５’及び３’ＵＴＲ配列の長さは、ＵＴＲの異なる領域をアニールするＰＣＲのためのプライマーの設計を含むが、これに限定されない、異なる方法により変わり得る。このアプローチを使用して、当業者は、転写ＲＮＡのトランスフェクション後、最適翻訳効率を達成するのに必要な５’及び３’ＵＴＲ長を修飾できる。
【０３８５】
５’及び３’ＵＴＲは、目的の核酸のための天然に存在する、内在性５’及び３’ＵＴＲであり得る。代替的に、目的の核酸に対して内在性ではないＵＴＲ配列を、フォワード及びリバースプライマーへのＵＴＲ配列の取り込みにより又は鋳型の任意の他の修飾により付加できる。目的の核酸に対して内在性ではないＵＴＲ配列の使用は、ＲＮＡの安定性及び／又は翻訳効率の修飾のために有用であり得る。例えば、３’ＵＴＲ配列のＡＵリッチ要素は、ｍＲＮＡの安定性を低下させることが知られる。従って、３’ＵＴＲを、当技術分野で周知であるＵＴＲの特性に基づき、転写されたＲＮＡの安定性を増加するように選択及び設計できる。
【０３８６】
いくつかの実施形態において、５’ＵＴＲは、内在性核酸のＫｏｚａｋ配列を含み得る。代替的に、目的の核酸に対して内在性ではない５’ＵＴＲを上記のようにＰＣＲにより付加するとき、コンセンサスＫｏｚａｋ配列を５’ＵＴＲ配列の付加により再設計できる。Ｋｏｚａｋ配列は、あるＲＮＡ転写物の翻訳効率を上げることはできるが、効率的翻訳を可能とするために全ＲＮＡで必要であるように見えない。多くのｍＲＮＡについてのＫｏｚａｋ配列に対する必要性は、当技術分野で公知である。他の実施形態において、５’ＵＴＲは、ＲＮＡゲノムが細胞で安定であるＲＮＡウイルスの５’ＵＴＲであり得る。他の実施形態において、種々のヌクレオチド類似体を、ｍＲＮＡのエキソヌクレアーゼ分解を妨害するために３’又は５’ＵＴＲにおいて使用できる。
【０３８７】
遺伝子クローニングの必要性なしにＤＮＡ鋳型からのＲＮＡの合成を可能にするために、転写のプロモーターは、転写する配列の上流のＤＮＡ鋳型に結合すべきである。ＲＮＡポリメラーゼのプロモーターとして機能する配列がフォワードプライマーの５’末端に付加されたとき、ＲＮＡポリメラーゼプロモーターは、転写されるオープンリーディングフレームの上流のＰＣＲ産物に取り込まれる。好ましい一実施形態において、プロモーターは、本明細書の他の箇所に記載するようなＴ７ポリメラーゼプロモーターである。他の有用なプロモーターは、Ｔ３及びＳＰ６  ＲＮＡポリメラーゼプロモーターを含むが、これらに限定されない。Ｔ７、Ｔ３及びＳＰ６プロモーターのコンセンサスヌクレオチド配列が当技術分野で公知である。
【０３８８】
好ましい一実施形態において、ｍＲＮＡは、リボソーム結合、翻訳開始及び細胞におけるｍＲＮＡの安定性を決定する、５’末端及び３’ポリ（Ａ）テイルの両方にキャップを有する。環状ＤＮＡ鋳型、例えばプラスミドＤＮＡ上で、ＲＮＡポリメラーゼは両者真核細胞における発現に適しない長いコンカテマー産物を産生する。３’ＵＴＲの末端で直線化されたプラスミドＤＮＡの転写は、転写後ポリアデニル化されても、真核トランスフェクションに有効でない正常サイズのｍＲＮＡを生じる。
【０３８９】
直鎖状ＤＮＡ鋳型で、ファージＴ７  ＲＮＡポリメラーゼは両者鋳型の最後の塩基を越えて転写物の３’末端を伸長できる（Ｓｃｈｅｎｂｏｒｎ  ａｎｄ  Ｍｉｅｒｅｎｄｏｒｆ，Ｎｕｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１３：６２２３−３６（１９８５）；Ｎａｃｈｅｖａ  ａｎｄ  Ｂｅｒｚａｌ−Ｈｅｒｒａｎｚ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２７０：１４８５−６５（２００３））。
【０３９０】
ＤＮＡ鋳型へのポリＡ／Ｔ伸長の組込みの慣用法は、分子クローニングである。しかしながら、プラスミドＤＮＡに統合されたポリＡ／Ｔ配列は、プラスミド不安定性を生じ得、これは、細菌細胞から得たプラスミドＤＮＡ鋳型が多くの場合に欠失及び他の異常で高度に汚染されている理由である。これにより、クローニング工程が困難で時間がかかるだけでなく、多くの場合に信頼できないものとなる。これは、クローニングを伴わないポリＡ／Ｔ  ３’ストレッチを有するＤＮＡ鋳型の産生を可能にする方法が非常に望ましい理由である。
【０３９１】
転写ＤＮＡ鋳型のポリＡ／Ｔセグメントは、１００ＴテイルなどのポリＴテイルを含むリバースプライマーを使用するＰＣＲ中（配列番号３１）（サイズは５０〜５０００Ｔであり得る（配列番号３２））又はＤＮＡライゲーション又はインビトロ組み換えを含むが、これらに限定されない任意の他の方法によりＰＣＲ後に産生できる。ポリ（Ａ）テイルはまた、ＲＮＡに安定性を提供し、その分解を減らす。一般に、ポリ（Ａ）テイルの長さは、転写されたＲＮＡの安定性と正に相関する。いくつかの実施形態において、ポリ（Ａ）テイルは、１００〜５０００アデノシンである（配列番号３３）。
【０３９２】
ＲＮＡのポリ（Ａ）テイルは、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ポリＡポリメラーゼ（Ｅ−ＰＡＰ）のなどのポリ（Ａ）ポリメラーゼの使用により、インビトロ転写後更に伸長できる。いくつかの実施形態において、ポリ（Ａ）テイルの１００ヌクレオチドから３００〜４００ヌクレオチドへの長さの延長（配列番号３４）は、ＲＮＡの翻訳効率の約２倍増加を生じる。更に、３’末端への異なる化学基の付加は、ｍＲＮＡ安定性を増加させ得る。このような結合は、修飾／人工ヌクレオチド、アプタマー及び他の化合物を含み得る。例えば、ＡＴＰ類似体は、ポリ（Ａ）ポリメラーゼを使用してポリ（Ａ）テイルに取り込まれ得る。ＡＴＰ類似体は、ＲＮＡの安定性を更に高め得る。
【０３９３】
５’キャップもＲＮＡ分子に安定性を提供する。好ましい一実施形態において、本明細書に開示する方法により産生されたＲＮＡは、５’キャップを含む。５’キャップは、当技術分野で公知であり、本明細書に記載の技術を使用して提供される（Ｃｏｕｇｏｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．，２９：４３６−４４４（２００１）；Ｓｔｅｐｉｎｓｋｉ，ｅｔ  ａｌ．，ＲＮＡ，７：１４６８−９５（２００１）；Ｅｌａｎｇｏ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，３３０：９５８−９６６（２００５））。
【０３９４】
本明細書に開示する方法により産生されたＲＮＡは、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列も含み得る。ＩＲＥＳ配列は、ｍＲＮＡへのキャップ非依存的リボソーム結合を開始し、翻訳開始を促進するあらゆるウイルス、染色体又は人工設計配列であり得る。糖、ペプチド、脂質、タンパク質、抗酸化剤及び界面活性剤などの細胞透過性及び生存能を促進する因子を含有し得る、細胞エレクトロポレーションに適した任意の溶質が含まれ得る。
【０３９５】
ＲＮＡを、多数の異なる方法、例えば商業的に利用可能な方法のいずれかを使用して標的細胞に導入でき、これは、エレクトロポレーション（Ａｍａｘａ  Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ−ＩＩ（Ａｍａｘａ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｃｏｌｏｇｎｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ））、（ＥＣＭ  ８３０（ＢＴＸ）（Ｈａｒｖａｒｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓ．）又はＧｅｎｅ  Ｐｕｌｓｅｒ  ＩＩ（ＢｉｏＲａｄ，Ｄｅｎｖｅｒ，Ｃｏｌｏ．）、Ｍｕｌｔｉｐｏｒａｔｏｒ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｔ，Ｈａｍｂｕｒｇ  Ｇｅｒｍａｎｙ）、リポフェクションを使用するカチオン性リポソーム媒介トランスフェクション、ポリマー封入、ペプチド媒介トランスフェクション又は「遺伝子銃」などの微粒子銃粒子送達系（例えば、Ｎｉｓｈｉｋａｗａ，ｅｔ  ａｌ．Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．，１２（８）：８６１−７０（２００１）を参照されたい）を含むが、これらに限定されない。
【０３９６】
非ウイルス送達方法
いくつかの態様において、非ウイルス方法を使用して、本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸を細胞又は組織又は対象に送達できる。
【０３９７】
一実施形態において、非ウイルス方法は、トランスポゾン（転位因子とも呼ばれる）の使用を含む。いくつかの実施形態において、トランスポゾンは、ゲノムの位置にそれ自体挿入できるＤＮＡ片、例えば自己複製性であり、そのコピーをゲノムに挿入することができるＤＮＡ片又は長い核酸の外にスプライシングされ、ゲノムの別の場所に挿入されることができるＤＮＡ片である。例えば、トランスポゾンは、転位のための逆位反復フランキング遺伝子からなるＤＮＡ配列を含む。
【０３９８】
例示的なトランスポゾンを使用する核酸送達法は、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポゾン系（ＳＢＴＳ）及びｐｉｇｇｙＢａｃ（ＰＢ）トランスポゾン系を含む。例えば、Ａｒｏｎｏｖｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．２０．Ｒ１（２０１１）：Ｒ１４−２０；Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１５（２００８）：２９６１−２９７１；Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１６（２００８）：５８０−５８９；Ｇｒａｂｕｎｄｚｉｊａ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１８（２０１０）：１２００−１２０９；Ｋｅｂｒｉａｅｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．１２２．２１（２０１３）：１６６；Ｗｉｌｌｉａｍｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １６．９（２００８）：１５１５−１６；Ｂｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｔｏｃ．２．１２（２００７）：３１５３−６５；及びＤｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ．１２２．３（２００５）：４７３−８３（これらは、全て参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
【０３９９】
ＳＢＴＳは、２つの成分：１）導入遺伝子を含むトランスポゾン及び２）トランスポサーゼ酵素の供給源を含む。トランスポサーゼは、担体プラスミド（又は他のドナーＤＮＡ）から宿主細胞染色体／ゲノムなどの標的ＤＮＡにトランスポゾンを転位できる。例えば、トランスポサーゼは、担体プラスミド／ドナーＤＮＡに結合し、トランスポゾン（導入遺伝子含有）をプラスミドの外に切り出し、宿主細胞のゲノムに入れる。例えば、Ａｒｏｎｏｖｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．上掲を参照されたい。
【０４００】
例示的なトランスポゾンは、ｐＴ２ベースのトランスポゾンを含む。例えば、全て参照により本明細書に組み込まれるＧｒａｂｕｎｄｚｉｊａ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．４１．３（２０１３）：１８２９−４７；及びＳｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６８．８（２００８）：２９６１−２９７１を参照されたい。例示的なトランスポサーゼは、Ｔｃ１／ｍａｒｉｎｅｒ型トランスポサーゼ、例えばＳＢ１０トランスポサーゼ又はＳＢ１１トランスポサーゼを含む（例えば、サイトメガロウイルスプロモーターから発現できる、機能亢進トランスポサーゼ）。例えば、全て参照により本明細書に組み込まれるＡｒｏｎｏｖｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．；Ｋｅｂｒｉａｅｉ  ｅｔ  ａｌ．；及びＧｒａｂｕｎｄｚｉｊａ  ｅｔ  ａｌ．を参照されたい。
【０４０１】
ＳＢＴＳの使用は、導入遺伝子、例えば本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸の効率的組込み及び発現を可能にする。例えば、ＳＢＴＳなどのトランスポゾン系を使用する、本明細書に記載のＣＡＲを安定に発現する細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞を産生する方法が本明細書に提供される。
【０４０２】
本明細書に記載の方法により、ある実施形態において、ＳＢＴＳ成分を含む１つ以上の核酸、例えばプラスミドが細胞に送達される（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）。例えば、核酸は、核酸（例えば、プラスミドＤＮＡ）送達の標準法、例えば本明細書に記載の方法、例えばエレクトロポレーション、トランスフェクション又はリポフェクションにより送達される。いくつかの実施形態において、核酸は、導入遺伝子、例えば本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸を含むトランスポゾンを含む。いくつかの実施形態において、核酸は、導入遺伝子（例えば、本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸）を含むトランスポゾン並びにトランスポサーゼ酵素をコードする核酸配列を含む。他の実施形態において、例えばデュアルプラスミド系、例えば第１のプラスミドが導入遺伝子を含むトランスポゾンを含み、第２のプラスミドがトランスポサーゼ酵素をコードする核酸配列を含む２核酸の系が提供される。例えば、第１及び第２の核酸は、宿主細胞に共送達される。
【０４０３】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲを発現する細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞は、ヌクレアーゼ（例えば、亜鉛フィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写アクティベータ様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系又は操作されたメガヌクレアーゼ再操作ホーミングエンドヌクレアーゼ）を使用する、ＳＢＴＳ及び遺伝子編集を用いる遺伝子挿入の組み合わせを使用して産生される。
【０４０４】
いくつかの実施形態において、非ウイルス送達方法の使用は、細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞の再プログラミング及び対象への細胞の直接注入を可能にする。非ウイルスベクターの利点は、患者集団に見合うために必要な十分量の産生が容易且つ比較的安価であること、保存中の安定性及び免疫原性の欠如を含むが、これらに限定されない。
【０４０５】
細胞の供給源
増殖及び遺伝的改変又は他の改変前に細胞、例えば免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の供給源を対象から得ることができる。用語「対象」は、免疫応答が惹起できる生存生物（例えば、哺乳動物）を含むことを意図する。対象の例は、ヒト、イヌ、ネコ、マウス、ラット及びそれらのトランスジェニック種を含む。Ｔ細胞は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位からの組織、腹水、胸水、脾臓組織及び腫瘍を含む多数の供給源から得ることができる。
【０４０６】
本発明の一態様において、当技術分野で利用可能な任意の数の免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）系を使用し得る。本発明の一態様において、Ｔ細胞を、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）分離など、当業者に知られるあらゆる技術を使用して、対象から採取した血液の単位から得ることができる。ある好ましい態様において、個体の循環血液からの細胞をアフェレーシスにより得る。アフェレーシス産物は、典型的にはＴ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球を含むリンパ球、赤血球及び血小板を含む。一態様において、アフェレーシスにより採取した細胞は、血漿画分を除去するために洗浄し、細胞を続くプロセシング過程のために適切な緩衝液又は媒体に入れる。本発明の一態様において、細胞をリン酸緩衝化食塩水（ＰＢＳ）で洗浄する。別の態様において、洗浄溶液は、カルシウムを欠き、マグネシウムを欠き得るか、又は全てではないにしても多くの二価カチオンを欠き得る。
【０４０７】
カルシウム非存在下の初期活性化過程は、活性化の増強に至り得る。当業者に容易に認識されるように、洗浄工程は、製造業者の指示に従う半自動化「フロースルー」遠心分離（例えば、Ｃｏｂｅ  ２９９１  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｃｅｓｓｏｒ、Ｂａｘｔｅｒ  ＣｙｔｏＭａｔｅ又はＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ  Ｃｅｌｌ  Ｓａｖｅｒ  ５）により達成され得る。洗浄後、細胞を、例えば無Ｃａ、無ＭｇＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ  Ａ又は他の緩衝剤を含む又は含まない食塩水溶液など、多様な生体適合性緩衝液に再懸濁し得る。代わりに、アフェレーシス試料の望ましくない要素を除去し、細胞を培養培地に直接再懸濁し得る。
【０４０８】
本願の方法は、５％以下、例えば２％の、ヒトＡＢ血清を含む培養培地条件を利用でき、既知培養培地条件及び組成物、例えばＳｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｅｘ  ｖｉｖｏ  ｅｘｐａｎｓｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｆｏｒ  ａｄｏｐｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｕｓｉｎｇ  ｔｈｅ  ｎｏｖｅｌ  Ｘｅｎｏ−ｆｒｅｅ  ＣＴＳ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｃｅｌｌ  Ｓｅｒｕｍ  Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ”Ｃｌｉｎｉｃａｌ＆Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２０１５）４，ｅ３１；ｄｏｉ：１０．１０３８／ｃｔｉ．２０１４．３１に記載のものを用い得ることが認識される。
【０４０９】
一態様において、Ｔ細胞は、赤血球を溶解し、例えばＰＥＲＣＯＬＬＴＭ勾配による遠心分離又は向流遠心溶出法により単球を枯渇させることにより、末梢血リンパ球から単離する。ＣＤ３＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋及びＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞などのＴ細胞の特異的下位集団を陽性又は陰性選択技術により更に単離し得る。例えば、一態様において、Ｔ細胞を、所望のＴ細胞の陽性選択に十分な時間、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ−４５０  ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｔなどの抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（例えば、３ｘ２８）コンジュゲートビーズとインキュベーションすることにより単離する。一態様において、時間は、約３０分である。更なる態様において、時間は、３０分〜３６時間又はそれより長い範囲及びその間の任意の整数値である。更なる態様において、時間は、少なくとも１時間、２時間、３時間、４時間、５時間又は６時間である。別の好ましい態様において、時間は、１０〜２４時間である。一態様において、インキュベーション時間は、２４時間である。腫瘍組織又は免疫不全状態個体から腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）を単離するような、他の細胞型と比較してＴ細胞が少ないあらゆる状況において、Ｔ細胞を単離するために長いインキュベーション時間が使用され得る。更に、長いインキュベーション時間の使用は、ＣＤ８＋Ｔ細胞の捕獲効率を高め得る。そのため、単にＴ細胞をＣＤ３／ＣＤ２８ビーズと結合させる時間を短くするか若しくは長くし、且つ／又はビーズ対Ｔ細胞比を増加若しくは減少させる（更に本明細書に記載のとおり）ことにより、Ｔ細胞の亜集団は、培養開始時又は工程中の他の時点で優先的に選択され得る。更に、ビーズ又は他の表面上の抗ＣＤ３及び／又は抗ＣＤ２８抗体比を増加又は減少させることにより、Ｔ細胞の亜集団は、培養開始時又は工程中の他の時点で優先的に選択され得る。複数回の選択も本発明で使用できることを当業者は認識する。一態様において、選択過程を実施し、「未選択」細胞を活性化及び増殖過程で使用することが望ましいことがある。「未選択」細胞も更なる選択に付され得る。
【０４１０】
陰性選択によるＴ細胞集団富化は、陰性に選択される細胞に独特な表面マーカーを指向する抗体の組み合わせにより達成できる。１つの方法は、陰性に選択される細胞に存在する細胞表面マーカーを指向するモノクローナル抗体のカクテルを使用する陰性磁気免疫粘着又はフローサイトメトリーによる細胞選別及び／又は選択である。例えば、陰性選択によりＣＤ４＋細胞を富化するために、モノクローナル抗体カクテルは、典型的にはＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲ及びＣＤ８に対する抗体を含む。一態様において、典型的にはＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＧＩＴＲ＋及びＦｏｘＰ３＋を発現する制御性Ｔ細胞について富化又は陽性選択することが望ましいことがある。代わりに、一態様において、Ｔ制御性細胞を抗Ｃ２５コンジュゲートビーズ又は他の類似選択法により枯渇させる。
【０４１１】
本明細書に記載の方法は、例えば、本明細書に記載の、例えば陰性選択技術を使用する、例えばＴ制御性細胞枯渇集団、ＣＤ２５＋枯渇細胞である、免疫エフェクター細胞の特異的亜集団、例えばＴ細胞の選択を含み得る。好ましくは、Ｔ制御性枯渇細胞集団は、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％、１％未満のＣＤ２５＋細胞を含む。
【０４１２】
一部の実施形態において、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋Ｔ細胞を、抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメント又はＣＤ２５結合リガンド、ＩＬ−２を使用して集団から除去する。一部の実施形態において、抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメント又はＣＤ２５結合リガンドを基質、例えばビーズにコンジュゲートするか又は他に基質、例えばビーズ上に被覆させる。一部の実施形態において、抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメントを本明細書に記載の基質にコンジュゲートさせる。
【０４１３】
一部の実施形態において、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋Ｔ細胞を、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ（商標）からのＣＤ２５枯渇剤を使用して集団から除去する。一部の実施形態において、細胞対ＣＤ２５枯渇剤の比は、１ｅ７細胞対２０μＬ、又は１ｅ７細胞対１５μＬ、又は１ｅ７細胞対１０μＬ、又は１ｅ７細胞対５μＬ、又は１ｅ７細胞対２．５μＬ、又は１ｅ７細胞対１．２５μＬである。一部の実施形態において、例えばＴ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋枯渇のために５億細胞／ｍｌを使用する。更なる態様において、６億、７億、８億又は９億細胞／ｍｌの細胞濃度を使用する。
【０４１４】
一部の実施形態において、枯渇すべき免疫エフェクター細胞集団は、約６×１０９ＣＤ２５＋Ｔ細胞を含む。他の態様において、枯渇すべき免疫エフェクター細胞集団は、約１×１０９〜１×１０１０（及びその間の任意の整数値）ＣＤ２５＋Ｔ細胞を含む。一部の実施形態において、得られたＴ制御性枯渇細胞集団は、２×１０９Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋細胞又はそれ未満（例えば、１×１０９、５×１０８、１×１０８、５×１０７、１×１０７又はそれ未満のＣＤ２５＋細胞）を含む。
【０４１５】
一部の実施形態において、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋細胞を、例えばチュービング１６２−０１など、枯渇チュービングセットと共にＣｌｉｎｉＭＡＣ系を使用して集団から除去する。一部の実施形態において、ＣｌｉｎｉＭＡＣ系を例えばＤＥＰＬＥＴＩＯＮ２．１などの枯渇設定において動かす。
【０４１６】
特定の理論に拘束されることを望まないが、アフェレーシス前又はＣＡＲ発現細胞産物の製造中の対象における免疫細胞の負のレギュレーターのレベルの減少（例えば、望まない免疫細胞、例えばＴＲＥＧ細胞の数の減少）は、対象の再発リスクを減らし得る。例えば、ＴＲＥＧ細胞を枯渇する方法は、当技術分野で知られている。例えば、ＴＲＥＧ細胞を減少させる方法は、シクロホスファミド、抗ＧＩＴＲ抗体（抗ＧＩＴＲ本明細書に記載の抗体）、ＣＤ２５枯渇及びそれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない。
【０４１７】
一実施形態において、製造法は、ＣＡＲ発現細胞製造前のＴＲＥＧ細胞の数の減少（例えば、枯渇）を含む。例えば、製造法は、例えば、試料、例えばアフェレーシス試料を抗ＧＩＴＲ抗体及び／又は抗ＣＤ２５抗体（又はそのフラグメント又はＣＤ２５結合リガンド）と接触させ、ＣＡＲ発現細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）産物の製造前にＴＲＥＧ細胞を枯渇させることを含む。
【０４１８】
一実施形態において、対象は、ＣＡＲ発現細胞産物製造のための細胞採取前にＴＲＥＧ細胞を減らす１つ以上の治療で前処置されており、それにより対象がＣＡＲ発現細胞処置を再び必要とするリスクを軽減する。一実施形態において、ＴＲＥＧ細胞を低減する方法は、対象へのシクロホスファミド、抗ＧＩＴＲ抗体、ＣＤ２５枯渇又はこれらの組み合わせの１つ以上の投与を含むが、これらに限定されない。シクロホスファミド、抗ＧＩＴＲ抗体、ＣＤ２５枯渇又はこれらの組み合わせの１つ以上の投与は、ＣＡＲ発現細胞産物注入前、注入中又は注入後に行われ得る。
【０４１９】
一実施形態において、対象は、ＣＡＲ発現細胞産物製造のための細胞の採取前にシクロホスファミドで前処置され、それにより対象がＣＡＲ発現細胞処置を再発するリスクを軽減する。一実施形態において、対象は、ＣＡＲ発現細胞産物製造のための細胞の採取前に抗ＧＩＴＲ抗体で前処置され、それにより対象がＣＡＲ発現細胞処置を再発するリスクを軽減する。
【０４２０】
一部の実施形態において、除去すべき細胞集団は、制御性Ｔ細胞又は腫瘍細胞ではなく、ＣＡＲＴ細胞の増殖及び／又は機能に他に負に影響する細胞、例えばＣＤ１４、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ１５又は潜在的免疫抑制性細胞により発現される他のマーカーを発現する細胞である。一部の実施形態において、このような細胞は、制御性Ｔ細胞及び／又は腫瘍細胞と同時に、又は前記枯渇後に、又は別の順番で除去することが意図される。
【０４２１】
本明細書に記載の方法は、２つ以上の選択工程、例えば２つ以上の枯渇工程を含み得る。陰性選択によるＴ細胞集団の富化は、例えば、陰性に選択される細胞に独特な表面マーカーを指向する抗体の組み合わせにより達成できる。１つの方法は、陰性に選択される細胞に存在する細胞表面マーカーを指向するモノクローナル抗体のカクテルを使用する陰性磁気免疫粘着又はフローサイトメトリーによる細胞選別及び／又は選択である。例えば、陰性選択によりＣＤ４＋細胞を富化するために、モノクローナル抗体カクテルは、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲ及びＣＤ８に対する抗体を含み得る。
【０４２２】
本明細書に記載の方法は、腫瘍抗原、例えばＣＤ２５を含まない腫瘍抗原、例えばＣＤ１９、ＣＤ３０、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ２０、ＣＤ１４又はＣＤ１１ｂを発現する細胞集団からの除去を更に含み、それによりＣＡＲ、例えば本明細書に記載のＣＡＲの発現に適するＴ制御性枯渇、例えばＣＤ２５＋枯渇及び腫瘍抗原枯渇細胞集団を提供する。一部の実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、Ｔ制御性、例えばＣＤ２５＋細胞と同時に除去される。例えば、抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメント及び抗腫瘍抗原抗体又はそのフラグメントを同じ基質、例えばビーズに結合でき、これを細胞の除去に使用できるか、又は抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメント及び抗腫瘍抗原抗体又はそのフラグメントを別のビーズに結合でき、その混合物を細胞の除去に使用できる。他の実施形態において、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋細胞の除去及び腫瘍抗原発現細胞の除去は、逐次的であり、例えばいずれの順番でも生じ得る。
【０４２３】
チェックポイント阻害剤、例えば本明細書に記載のチェックポイント阻害剤を発現する細胞、例えばＰＤ１＋細胞、ＬＡＧ３＋細胞及びＴＩＭ３＋細胞の１つ以上の集団からの除去を含み、それによりＴ制御性枯渇、例えばＣＤ２５＋枯渇細胞及びチェックポイント阻害剤枯渇細胞、例えばＰＤ１＋、ＬＡＧ３＋及び／又はＴＩＭ３＋枯渇細胞集団を提供する方法も提供される。例示的なチェックポイント阻害剤は、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦＲベータを含む。実施形態において、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ１又はＰＤ−Ｌ１である。いくつかの実施形態において、チェックポイント阻害剤発現細胞は、Ｔ制御性、例えばＣＤ２５＋細胞と同時に除去される。例えば、抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメント及び抗チェックポイント阻害剤抗体又はそのフラグメントを同じビーズに結合でき、それを細胞の除去に使用できるか、又は抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメント及び抗チェックポイント阻害剤抗体又はそのフラグメントを別のビーズに結合でき、その混合物を細胞の除去に使用できる。他の実施形態において、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋細胞の除去及びチェックポイント阻害剤発現細胞の除去は、逐次的であり、例えばいずれ順序でも生じ得る。
【０４２４】
一部の実施形態において、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦα、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、グランザイムＢ及びパーフォリン又は他の適切な分子、例えば他のサイトカインの１つ以上を発現するＴ細胞集団を選択できる。細胞発現についてスクリーニングする方法は、例えば、国際公開第２０１３／１２６７１２号パンフレットに記載する方法により決定できる。
【０４２５】
陽性又は陰性選択により所望の細胞集団を単離するために、細胞及び表面（例えば、ビーズなどの粒子）の濃度は、変わり得る。一態様において、細胞とビーズとの最大接触を確実にするために、ビーズと細胞とを一緒に混合する体積を有意に低下させる（例えば、細胞濃度を増加させる）ことが望まれ得る。例えば、一態様において、２０億細胞／ｍｌの濃度を使用する。一態様において、１０億細胞／ｍｌの濃度を使用する。更なる態様において、１億細胞／ｍｌ超を使用する。更なる態様において、１０００万、１５００万、２０００万、２５００万、３０００万、３５００万、４０００万、４５００万又は５０００万細胞／ｍｌの細胞濃度を使用する。更なる態様において、細胞の７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万又は１億細胞／ｍｌの濃度を使用する。更なる態様において、１億２５００万又は１億５０００万細胞／ｍｌの濃度を使用できる。高濃度を使用して細胞収率、細胞活性化及び細胞増殖を増加できる。更に、高細胞濃度の使用は、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞などの目的の標的抗原を弱く発現し得る細胞の又は多くの腫瘍細胞が存在する試料（例えば、白血病性血液、腫瘍組織など）からのより効率的な捕獲を可能にする。このような細胞集団は、治療的価値を有し得、取得することが望ましい。例えば、高濃度細胞の使用は、通常ＣＤ２８発現が弱いＣＤ８＋Ｔ細胞のより効率的な選択を可能にする。
【０４２６】
関連する態様において、低濃度の細胞を使用することが望ましいことがある。Ｔ細胞と表面（例えば、ビーズなどの粒子）との混合物を有意に希釈することにより、粒子と細胞との相互作用が最小化される。これは、粒子に結合する所望の抗原を高量で発現する細胞で選択する。例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、高レベルのＣＤ２８を発現し、希釈濃度でＣＤ８＋Ｔ細胞より効率的に捕獲される。一態様において、使用する細胞の濃度は５×１０ｅ６／ｍｌである。他の態様において、使用する濃度は約１×１０５／ｍｌ〜１×１０６／ｍｌ及びその間の任意の整数値であり得る。
【０４２７】
他の態様において、細胞を、種々の長さの時間、種々の速度で２〜１０℃又は室温においてローテータでインキュベートし得る。
【０４２８】
刺激のためのＴ細胞は、洗浄工程後にも凍結され得る。理論に拘束されることを望まないが、凍結と続く解凍工程は、細胞集団から顆粒球及びある程度単球を除去することにより、より均一な産物を提供する。血漿及び血小板を除去する洗浄工程後、細胞を凍結溶液に懸濁し得る。多くの凍結溶液及びパラメータが当技術分野で知られ、これに関連して有用であるが、ある方法は、２０％ＤＭＳＯ及び８％ヒト血清アルブミンを含むＰＢＳ又は１０％Ｄｅｘｔｒａｎ  ４０及び５％デキストロース、２０％ヒト血清アルブミン及び７．５％ＤＭＳＯ又は３１．２５％Ｐｌａｓｍａｌｙｔｅ−Ａ、３１．２５％デキストロース５％、０．４５％ＮａＣｌ、１０％Ｄｅｘｔｒａｎ  ４０及び５％デキストロース、２０％ヒト血清アルブミン及び７．５％ＤＭＳＯを含む培養培地又は例えばＨｅｓｐａｎ及びＰｌａｓｍａＬｙｔｅ  Ａを含む他の適当な細胞凍結媒体を使用し、次いで細胞を１°／分の速度で−８０℃に凍結し、気相の液体窒素貯蔵タンクに保存する。制御凍結の他の方法並びに直接−２０℃又は液体窒素の非制御凍結も使用できる。
【０４２９】
一態様において、凍結保存細胞を本明細書に記載のように解凍し、洗浄し、本発明の方法を使用する活性化前に室温で１時間休息させる。
【０４３０】
本発明に関連して、本明細書に記載の増殖細胞が必要となり得る時点の前の期間における対象からの血液試料又はアフェレーシス産物の収集も企図されている。従って、増殖する細胞の供給源を必要な任意の時点で採取でき、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞などの所望の細胞を、本明細書に記載のものなどの細胞療法、例えばＴ細胞治療からの利益があるであろう任意の数の疾患及び状態について、細胞療法、例えばＴ細胞治療におけるその後の使用のために単離及び凍結できる。一態様において、血液試料又はアフェレーシスを一般に健常対象から採取する。一態様において、血液試料又はアフェレーシスを、一般に、疾患を発症するリスクにあるが、依然として疾患を発症していない健常対象から採取し、目的の細胞をその後の使用のために単離及び凍結する。一態様において、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）をその後の時点で増殖、凍結及び使用し得る。一態様において、試料を、本明細書に記載の特定の疾患の診断の直後に、しかし、何らかの処置前に患者から採取する。更なる態様において、ナタリズマブ、エファリズマブ、抗ウイルス剤、化学療法剤、放射線、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノレート及びＦＫ５０６などの免疫抑制剤、ＣＡＭＰＡＴＨ、抗ＣＤ３抗体、シトキサン、フルダラビン、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８及び照射などの抗体又は他の免疫除去剤による処置を含むが、これらに限定されない、任意の数の関連する処置モダリティの前に対象からの血液試料又はアフェレーシスから細胞を単離する。
【０４３１】
本発明の更なる態様において、Ｔ細胞を、対象に機能的Ｔ細胞を残す処置後、患者から直接得る。ある癌処置、特に免疫系を損傷させる薬物での処置後、処置の直後、患者が、通常、その処置から回復するまでの間、得られるＴ細胞の品質がエクスビボで増殖する能力について最適であり得るか又は改善され得ることが観察されている。同様に、本明細書に記載の方法を使用するエクスビボ操作後、これらの細胞は、生着及びインビボ増殖増強について好ましい状態であり得る。そのため、本発明に関連して、Ｔ細胞、樹状細胞又は造血細胞系統の他の細胞を含む血液細胞をこの回復期に採取することが企図される。更に、一態様において、可動化（例えば、ＧＭ−ＣＳＦでの可動化）及びコンディショニングレジメンを使用して、特定の細胞型の再増殖、再循環、再生及び／又は増殖に好都合である条件を、特に治療後の定められた時間枠中に対象に形成できる。細胞型の例は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞及び免疫系の他の細胞を含む。
【０４３２】
一部の実施形態において、免疫エフェクターＣＡＲ分子を発現する細胞、例えば本明細書に記載のＣＡＲ分子は、低い免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤を受けた対象から得る。一実施形態において、ＣＡＲを発現するように操作される免疫エフェクター細胞集団、例えばＴ細胞を、対象又は対象から採取したＰＤ１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞のレベル又はＰＤ１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞／ＰＤ１陽性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の比が少なくとも一過性に増加するように、低い免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤の投薬から十分な時間後又は十分な用量の後に採取する。
【０４３３】
他の実施形態において、ＣＡＲを発現するように操作されているか又は操作する免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞集団を、ＰＤ１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の数を増やすか又はＰＤ１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞／ＰＤ１陽性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の比を増やす量のｍＴＯＲ阻害剤と接触させることにより、エクスビボで処理できる。
【０４３４】
一部の実施形態において、Ｔ細胞集団は、ジアシルグリセロールキナーゼ（ＤＧＫ）欠損である。ＤＧＫ欠損細胞は、ＤＧＫ  ＲＮＡ又はタンパク質を発現しないか、又はＤＧＫ活性が低下した又は阻害された細胞である。ＤＧＫ欠損細胞は、ＤＧＫ発現を低減又は阻止するための遺伝的方法、例えばＲＮＡ干渉剤、例えばｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡの投与により産生できる。代わりに、ＤＧＫ欠損細胞は、本明細書に記載のＤＧＫ阻害剤での処置により産生できる。
【０４３５】
一部の実施形態において、Ｔ細胞集団は、イカロス欠損である。イカロス欠損細胞は、イカロスＲＮＡ又はタンパク質を発現しないか、又はイカロス活性が低下した又は阻害された細胞を含み、イカロス欠損細胞は、イカロス発現を低減又は阻止するための遺伝的方法、例えばＲＮＡ干渉剤、例えばｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡの投与により産生できる。代わりに、イカロス欠損細胞は、イカロス阻害剤、例えばレナリドマイドでの処置により産生できる。
【０４３６】
実施形態において、Ｔ細胞集団は、ＤＧＫ欠損及びイカロス欠損であり、例えばＤＧＫ及びイカロスを発現しないか、又はＤＧＫ及びイカロス活性が低下又は阻害されている。このようなＤＧＫ及びイカロス欠損細胞は、本明細書に記載の方法のいずれかにより産生できる。
【０４３７】
一実施形態において、ＮＫ細胞を対象から得る。別の実施形態において、ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞株、例えばＮＫ−９２細胞株（Ｃｏｎｋｗｅｓｔ）である。
【０４３８】
同種ＣＡＲ
本明細書に記載の実施形態において、免疫エフェクター細胞は、同種免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞であり得る。例えば、細胞は、同種Ｔ細胞、例えば機能的Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）及び／又はヒト白血球抗原（ＨＬＡ）、例えばＨＬＡクラスＩ及び／又はＨＬＡクラスＩＩの発現を欠く同種Ｔ細胞である。
【０４３９】
機能的ＴＣＲを欠くＴ細胞は、例えば、その表面に何ら機能的ＴＣＲを発現しないように操作され、機能的ＴＣＲを含む１つ以上のサブユニットを発現しないように操作され（例えば、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ、ＴＣＲデルタ、ＴＣＲイプシロン及び／又はＴＣＲゼータの発現がない（又は発現の減少を示す）ように操作される）、又はその表面に微少の機能的ＴＣＲを産生するように操作され得る。代わりに、Ｔ細胞は、例えば、ＴＣＲのサブユニットの１つ以上の変異した又は切断型の発現により、実質的に障害されたＴＣＲを発現し得る。用語「実質的に障害されたＴＣＲ」は、このＴＣＲが宿主で有害な免疫反応を惹起しないことを意味する。
【０４４０】
本明細書に記載のＴ細胞は、例えば、その表面に機能的ＨＬＡを発現しないように操作され得る。例えば、本明細書に記載のＴ細胞は、細胞表面発現ＨＬＡ、例えばＨＬＡクラス１及び／又はＨＬＡクラスＩＩが下方制御されるように操作され得る。いくつかの態様において、ＨＬＡの下方制御は、β−２ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）の発現の減少又は排除を伴い得る。一実部の施形態において、Ｔ細胞は、機能的ＴＣＲ及び機能的ＨＬＡ、例えばＨＬＡクラスＩ及び／又はＨＬＡクラスＩＩを欠き得る。
【０４４１】
機能的ＴＣＲ及び／又はＨＬＡの発現を欠く修飾Ｔ細胞は、ＴＣＲ又はＨＬＡの１つ以上のサブユニットのノックアウト又はノックダウンを含む任意の適当な手段により得ることができる。例えば、Ｔ細胞は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、群生性等間隔短回文反復配列（ＣＲＩＳＰＲ）転写アクティベータ様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）又は亜鉛フィンガーエンドヌクレアーゼ（ＺＦＮ）を使用したＴＣＲ及び／又はＨＬＡのノックダウンを含み得る。
【０４４２】
一部の実施形態において、同種細胞は、阻害性分子、例えば本明細書に記載の方法のいずれかによって操作された細胞を発現しないか又は低レベルで発現する細胞であり得る。例えば、細胞は、例えば、ＣＡＲ発現細胞が免疫エフェクター応答を開始する能力を低下できる、阻害分子を発現しないか又は阻害分子を低レベルで発現する細胞であり得る。阻害分子の例は、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦＲβを含む。ＤＮＡ、ＲＮＡ又はタンパク質レベルでの阻害による阻害分子の阻害は、ＣＡＲ発現細胞性能を最適化できる。実施形態において、例えば本明細書に記載の阻害性核酸、例えば阻害性核酸、例えばｄｓＲＮＡ、例えばｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡ、群生性等間隔短回文反復配列（ＣＲＩＳＰＲ）、転写アクティベータ様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）又は亜鉛フィンガーエンドヌクレアーゼ（ＺＦＮ）を使用できる。
【０４４３】
ＴＣＲ又はＨＬＡを阻害するためのｓｉＲＮＡ及びｓｈＲＮＡ
一実施形態において、ＴＣＲ発現及び／又はＨＬＡ発現を、細胞、例えばＴ細胞におけるＴＣＲ、及び／又はＨＬＡ、及び／又は本明細書に記載の阻害分子（例えば、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦＲβ）をコードする核酸を標的とするｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡを使用して阻害できる。
【０４４４】
Ｔ細胞におけるｓｉＲＮＡ及びｓｈＲＮＡの発現は、例えば、レンチウイルス発現系などの任意の慣用の発現系を使用して達成できる。
【０４４５】
ＴＣＲの要素の発現を下方制御する代表的ｓｈＲＮＡは、例えば、米国特許出願公開第２０１２／０３２１６６７号明細書に記載されている。ＨＬＡクラスＩ及び／又はＨＬＡクラスＩＩ遺伝子の発現を下方制御する代表的ｓｉＲＮＡ及びｓｈＲＮＡは、例えば、米国特許出願公開第２００７／００３６７７３号明細書に開示されている。
【０４４６】
ＴＣＲ又はＨＬＡを阻害するためのＣＲＩＳＰＲ
本明細書で使用する「ＣＲＩＳＰＲ」、又は「ＴＣＲ及び／又はＨＬＡに対するＣＲＩＳＰＲ」、又は「ＴＣＲ及び／又はＨＬＡを阻害するためのＣＲＩＳＰＲ」は、一連の群生性等間隔短回文反復配列又はこのような一連の反復を含む系を指す。本明細書で使用する「Ｃａｓ」は、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質を指す。「ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ」系は、ＴＣＲ及び／又はＨＬＡ遺伝子及び／又は本明細書に記載の阻害分子（例えば、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦＲβ）の発現抑制又は変異に使用できる、ＣＲＩＳＰＲ及びＣａｓ由来の系を指す。
【０４４７】
天然に存在するＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系は、配列決定された真正細菌ゲノムの約４０％及び配列決定された古細菌の９０％に見られる。Ｇｒｉｓｓａ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）ＢＭＣ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ８：１７２。この系は、プラスミド及びファージなどの外来遺伝的要素に対する抵抗性を付与する１種の原核生物免疫系であり、後天性免疫の形態を提供する。Ｂａｒｒａｎｇｏｕ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３１５：１７０９−１７１２；Ｍａｒｒａｇｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２２：１８４３−１８４５。
【０４４８】
ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系は、マウス又は霊長類などの真核生物における遺伝子エディティング（特定の遺伝子のサイレンシング、増強又は変更）に使用するために改変されている。Ｗｉｅｄｅｎｈｅｆｔ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｎａｔｕｒｅ  ４８２：３３１−８。これは、真核細胞に、特別に設計したＣＲＩＳＰＲ及び１つ以上の適切なＣａｓを含むプラスミドを導入することにより達成される。
【０４４９】
ＣＲＩＳＰＲ座位と呼ばれることもあるＣＲＩＳＰＲ配列は、交互の反復及びスペーサーを含む。天然に存在するＣＲＩＳＰＲにおいて、スペーサーは、通常細菌に対して外来であるプラスミド又はファージ配列などの配列を含み、ＴＣＲ及び／又はＨＬＡ  ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系において、スペーサーは、ＴＣＲ又はＨＬＡ遺伝子配列に由来する。
【０４５０】
ＣＲＩＳＰＲ座位からのＲＮＡは、構成的に発現され、Ｃａｓタンパク質により小ＲＮＡに加工される。これらは、反復配列が隣接したスペーサーを含む。ＲＮＡは、他のＣａｓタンパク質をＲＮＡ又はＤＮＡレベルで外来性遺伝的要素に対して発現抑制するように導く。Ｈｏｒｖａｔｈ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２７：１６７−１７０；Ｍａｋａｒｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｄｉｒｅｃｔ  １：７。スペーサーは、そのため、ｓｉＲＮＡに類似して、ＲＮＡ分子の鋳型としての役割を果たす。Ｐｅｎｎｉｓｉ（２０１３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４１：８３３−８３６。
【０４５１】
多くの異なるタイプの細菌で自然に生じるように、ＣＲＩＳＰＲの正確な配置及び構造、Ｃａｓ遺伝子の機能及び数及びそれらの産物は、種毎にいくぶん異なる。Ｈａｆｔ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）ＰＬｏＳ  Ｃｏｍｐｕｔ．Ｂｉｏｌ．１：ｅ６０；Ｋｕｎｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｇｅｎｏｍｅ  Ｂｉｏｌ．８：Ｒ６１；Ｍｏｊｉｃａ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．６０：１７４−１８２；Ｂｏｌｏｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１５１：２５５１−２５６１；Ｐｏｕｒｃｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１５１：６５３−６６３；及びＳｔｅｒｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｔｒｅｎｄｓ．Ｇｅｎｅｔ．２８：３３５−３４０。例えば、Ｃｓｅ（Ｃａｓサブタイプ、大腸菌）タンパク質（例えば、ＣａｓＡ）は、機能的複合体、Ｃａｓｃａｄｅを形成し、これは、ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡ転写物を、Ｃａｓｃａｄｅが保持するスペーサー−反復単位に加工する。Ｂｒｏｕｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２１：９６０−９６４。他の原核生物において、Ｃａｓ６は、ＣＲＩＳＰＲ転写物を加工する。大腸菌におけるＣＲＩＳＰＲベースのファージ不活性化は、Ｃａｓｃａｄｅ及びＣａｓ３を必要とするが、Ｃａｓ１又はＣａｓ２を必要としない。パイロコッカス・フリオサス（Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆｕｒｉｏｓｕｓ）及び他の原核生物におけるＣｍｒ（Ｃａｓ  ＲＡＭＰモジュール）タンパク質は、小ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡと機能的複合体を形成し、これは相補的標的ＲＮＡを認識し、開裂する。より単純なＣＲＩＳＰＲ系は、二重らせんの各鎖のための２活性切断部位を有するヌクレアーゼであるタンパク質Ｃａｓ９に依存する。Ｃａｓ９と修飾ＣＲＩＳＰＲ座位ＲＮＡの組み合わせを遺伝子エディティングのための系に使用できる。Ｐｅｎｎｉｓｉ（２０１３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４１：８３３−８３６。
【０４５２】
ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系を使用して、ＴＣＲ及び／又はＨＬＡ遺伝子を編集でき、（塩基対の付加又は欠失）又は未成熟終止を導入でき、これは、そうしてＴＣＲ及び／又はＨＬＡの発現を減少させる。代わりに、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系をＲＮＡ干渉のように使用し、ＴＣＲ及び／又はＨＬＡ遺伝子を可逆性形式でオフにできる。哺乳動物細胞において、例えば、ＲＮＡは、Ｃａｓタンパク質をＴＣＲ及び／又はＨＬＡプロモーターに導くことができ、ＲＮＡポリメラーゼを立体的に遮断する。
【０４５３】
当技術分野で知られる技術、例えば米国特許出願公開第２０１４００６８７９７号明細書及びＣｏｎｇ（２０１３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３３９：８１９−８２３に記載のものを使用して、ＴＣＲ及び／又はＨＬＡを阻害する人工ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系を産生できる。例えば、Ｔｓａｉ（２０１４）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，３２：６  ５６９−５７６、米国特許第８，８７１，４４５号明細書；同第８，８６５，４０６号明細書；同第８，７９５，９６５号明細書；同第８，７７１，９４５号明細書；及び同第８，６９７，３５９号明細書に記載されるもののような、ＴＣＲ及び／又はＨＬＡを阻害する当技術分野で知られる他の人工ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系も産生できる。
【０４５４】
ＴＣＲ及び／又はＨＬＡを阻害するためのＴＡＬＥＮ
「ＴＡＬＥＮ」、又は「ＨＬＡ及び／又はＴＣＲに対するＴＡＬＥＮ」、又は「ＨＬＡ及び／又はＴＣＲを阻害するためのＴＡＬＥＮ」は、ＨＬＡ、及び／又はＴＣＲ遺伝子、及び／又は本明細書に記載の阻害分子（例えば、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦＲβ）の編集に使用できる人工ヌクレアーゼである転写アクティベータ様エフェクターヌクレアーゼを指す。
【０４５５】
ＴＡＬＥＮは、ＴＡＬエフェクターＤＮＡ結合ドメインとＤＮＡ開裂ドメインを融合することにより人工的に産生される。転写アクティベータ様効果（ＴＡＬＥ）は、ＨＬＡ又はＴＣＲ遺伝子の部分を含む、任意の所望のＤＮＡ配列に結合するように操作できる。操作されたＴＡＬＥとＤＮＡ開裂ドメインを合わせることにより、ＨＬＡ又はＴＣＲ配列を含む、任意の所望のＤＮＡ配列に特異的な制限酵素を産生できる。次いで、これらを細胞に導入でき、そこで、それらは、ゲノムエディティングのために使用され得る。Ｂｏｃｈ（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１３５−６；及びＢｏｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２６：１５０９−１２；Ｍｏｓｃｏｕ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２６：３５０１。
【０４５６】
ＴＡＬＥは、ザントモナス細菌により分泌されるタンパク質である。ＤＮＡ結合ドメインは、１２番目及び１３番目のアミノ酸以外、反復した高度に保存的な３３〜３４アミノ酸配列を含む。これらの２箇所は、高度に可変であり、特定のヌクレオチド認識と強い相関を示す。それらは、従って、所望のＤＮＡ配列と結合するように操作され得る。
【０４５７】
ＴＡＬＥＮを産生するために、ＴＡＬＥタンパク質を、野生型又は変異ＦｏｋＩエンドヌクレアーゼであるヌクレアーゼ（Ｎ）と融合する。ＴＡＬＥＮにおいて使用するために、ＦｏｋＩについていくつかの変異が行われており、これらは、例えば、開裂特異性又は活性の改善を含む。Ｃｅｒｍａｋ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３９：ｅ８２；Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１４３−８；Ｈｏｃｋｅｍｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：７３１−７３４；Ｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３３３：３０７；Ｄｏｙｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ８：７４−７９；Ｓｚｃｚｅｐｅｋ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２５：７８６−７９３；及びＧｕｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２００：９６。
【０４５８】
ＦｏｋＩドメインは、二量体として機能し、適切な配向及び間隔を有する標的ゲノムにおける部位のための独特なＤＮＡ結合ドメインを有する２つの構築物を必要とする。ＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメインとＦｏｋＩ開裂ドメインとの間のアミノ酸残基数及び２の個々のＴＡＬＥＮ結合部位の間の塩基数の両方が高レベルの活性を達成するために重要なパラメータであると考えられる。Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１４３−８。
【０４５９】
ＨＬＡ又はＴＣＲ  ＴＡＬＥＮを細胞内で使用して二重鎖切断（ＤＳＢ）を産生できる。変異は、修復機構が切断を非相同末端結合により不適切に修復する場合、切断部位に導入できる。例えば、不適切な修復は、フレームシフト変異を導入し得る。代わりに、外来ＤＮＡをＴＡＬＥＮと共に細胞に導入でき、外来ＤＮＡの配列及び染色体配列により、この方法は、ＨＬＡ又はＴＣＲ遺伝子における欠損の補正、又はｗｔ  ＨＬＡ、又はＴＣＲ遺伝子におけるこのような欠損の導入に使用でき、そうしてＨＬＡ又はＴＣＲの発現を減少させる。
【０４６０】
ＨＬＡ又はＴＣＲにおける配列に特異的なＴＡＬＥＮは、モジュラー要素を使用する多様なスキームを含む、当技術分野で知られる任意の方法を使用して構築できる。Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１４９−５３；Ｇｅｉｂｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ６：ｅ１９５０９。
【０４６１】
ＨＬＡ及び／又はＴＣＲを阻害するための亜鉛フィンガーヌクレアーゼ
「ＺＦＮ」、又は「亜鉛フィンガーヌクレアーゼ」、又は「ＨＬＡ及び／又はＴＣＲに対するＺＦＮ」、又は「ＨＬＡ及び／又はＴＣＲを阻害するためのＺＦＮ」は、ＨＬＡ及び／又はＴＣＲ遺伝子及び／又は本明細書に記載の阻害分子（例えば、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦＲβ）の編集に使用できる人工ヌクレアーゼである亜鉛フィンガーヌクレアーゼを指す。
【０４６２】
ＴＡＬＥＮと同様、ＺＦＮは、ＤＮＡ結合ドメインに融合したＦｏｋＩヌクレアーゼドメイン（又はその誘導体）を含む。ＺＦＮの場合、ＤＮＡ結合ドメインは、１つ以上の亜鉛フィンガーを含む。Ｃａｒｒｏｌｌ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  １８８：７７３−７８２；及びＫｉｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：１１５６−１１６０。
【０４６３】
亜鉛フィンガーは、１つ以上の亜鉛イオンにより安定化される小タンパク質構造モチーフである。亜鉛フィンガーは、例えば、Ｃｙｓ２Ｈｉｓ２を含むことができ、約３ｂｐ配列を認識できる。既知特異性の多様な亜鉛フィンガーを合わせて、約６ｂｐ、９ｂｐ、１２ｂｐ、１５ｂｐ又は１８ｂｐ配列を認識する多フィンガーポリペプチドを産生できる。ファージディスプレイ、酵母ワンハイブリッド系、細菌ワンハイブリッド及びツーハイブリッド系及び哺乳動物細胞を含む、特異的配列を認識する亜鉛フィンガー（及びそれらの組み合わせ）を産生するための多様な選択及びモジュラーアセンブリー技術が利用可能である。
【０４６４】
ＴＡＬＥＮと同様、ＺＦＮは、ＤＮＡを開裂するために二量体化しなければならない。そのため、ＺＦＮの対が非パリンドロームＤＮＡ部位を標的とすることが必要である。２の各々のＺＦＮは、そのヌクレアーゼが適切に離れて、ＤＮＡの逆の鎖に結合しなければならない。Ｂｉｔｉｎａｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：１０５７０−５。
【０４６５】
またＴＡＬＥＮと同様、ＺＦＮは、ＤＮＡに二重鎖切断を創製でき、これは、不適切に修復された場合にフレームシフト変異を創製でき、細胞におけるＨＬＡ及び／又はＴＣＲの発現及び量の減少に至る。ＺＦＮは、ＨＬＡ又はＴＣＲ遺伝子における変異のために相同組換えとも使用できる。
【０４６６】
ＨＬＡ及び／又はＴＣＲにおける配列に特異的なＺＦＮは、当技術分野で知られる任意の方法を使用して構築できる。例えば、Ｐｒｏｖａｓｉ（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．１８：８０７−８１５；Ｔｏｒｉｋａｉ（２０１３）Ｂｌｏｏｄ  １２２：１３４１−１３４９；Ｃａｔｈｏｍｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１６：１２００−７；Ｇｕｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４００：９６；米国特許出願公開第２０１１／０１５８９５７号明細書；及び米国特許出願公開第２０１２／００６０２３０号明細書を参照されたい。
【０４６７】
テロメラーゼ発現
何らかの特定の理論に拘束されることを望まないが、一実施形態において、治療的Ｔ細胞は、Ｔ細胞における短縮されたテロメアのために患者における残留性が短く、従って、テロメラーゼ遺伝子を用いるトランスフェクションは、Ｔ細胞のテロメアを延長し、患者におけるＴ細胞の残留性を改善し得る。Ｃａｒｌ  Ｊｕｎｅ，“Ａｄｏｐｔｉｖｅ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｌｉｎｉｃ”，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，１１７：１４６６−１４７６（２００７）を参照されたい。そのため、一実施形態において、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞、異所性にテロメラーゼサブユニット、例えばテロメラーゼの触媒的サブユニット、例えばＴＥＲＴ、例えばｈＴＥＲＴを発現する。いくつかの態様において、本開示は、細胞をテロメラーゼサブユニット、例えばテロメラーゼの触媒的サブユニット、例えばＴＥＲＴ、例えばｈＴＥＲＴをコードする核酸と接触させることを含む、ＣＡＲ発現細胞を産生する方法を提供する。細胞を、ＣＡＲをコードする構築物と接触させる前に、同時に又は後に核酸と接触させ得る。
【０４６８】
一態様において、本開示は、免疫エフェクター細胞集団（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を製造する方法に関する。一実施形態において、本方法は、免疫エフェクター細胞集団（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を提供し、免疫エフェクター細胞集団を、ＣＡＲをコードする核酸と接触させ、免疫エフェクター細胞集団をテロメラーゼサブユニット、例えばｈＴＥＲＴをコードする核酸と、ＣＡＲ及びテロメラーゼ発現を可能とする条件下で接触させることを含む。
【０４６９】
一実施形態において、テロメラーゼサブユニットをコードする核酸は、ＤＮＡである。一実施形態において、テロメラーゼサブユニットをコードする核酸は、テロメラーゼサブユニットの発現を駆動できるプロモーターを含む。
【０４７０】
一実施形態において、ｈＴＥＲＴは、以下のようにＧｅｎＢａｎｋ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ＩＤ  ＡＡＣ５１７２４．１のアミノ酸配列を有する（Ｍｅｙｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，“ｈＥＳＴ２，ｔｈｅ  Ｐｕｔａｔｉｖｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ  Ｃａｔａｌｙｔｉｃ  Ｓｕｂｕｎｉｔ  Ｇｅｎｅ，Ｉｓ  Ｕｐ−Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｉｎ  Ｔｕｍｏｒ  Ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｄｕｒｉｎｇ  Ｉｍｍｏｒｔａｌｉｚａｔｉｏｎ”Ｃｅｌｌ  Ｖｏｌｕｍｅ  ９０，Ｉｓｓｕｅ  ４，２２  Ａｕｇｕｓｔ  １９９７，Ｐａｇｅｓ  ７８５−７９５）。
【化９】
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【０４７１】
一実施形態において、ｈＴＥＲＴは、配列番号２８４の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６＾、９７％、９８％又は９９％同一の配列を有する。一実施形態において、ｈＴＥＲＴは、配列番号２８４の配列を有する。一実施形態において、ｈＴＥＲＴは、Ｎ末端、Ｃ末端又は両方に欠失（例えば、５、１０、１５、２０又は３０アミノ酸以下）を含む。一実施形態において、ｈＴＥＲＴは、Ｎ末端、Ｃ末端又は両方にトランスジェニックアミノ酸配列（例えば、５、１０、１５、２０又は３０アミノ酸以下）を含む。
【０４７２】
Ｔ細胞の活性化及び増殖
Ｔ細胞は、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号明細書；同第６，５３４，０５５号明細書；同第６，９０５，６８０号明細書；同第６，６９２，９６４号明細書；同第５，８５８，３５８号明細書；同第６，８８７，４６６号明細書；同第６，９０５，６８１号明細書；同第７，１４４，５７５号明細書；同第７，０６７，３１８号明細書；同第７，１７２，８６９号明細書；同第７，２３２，５６６号明細書；同第７，１７５，８４３号明細書；同第５，８８３，２２３号明細書；同第６，９０５，８７４号明細書；同第６，７９７，５１４号明細書；同第６，８６７，０４１号明細書；及び米国特許出願公開第２００６０１２１００５号明細書に記載する方法を使用して、一般的に活性化及び増殖できる。
【０４７３】
一般に、本発明のＴ細胞を、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体結合シグナルを刺激する薬剤が結合したその表面とＴ細胞の表面上の共刺激性分子を刺激するリガンドを接触させることにより増殖できる。特に、Ｔ細胞集団は、表面上に固定された抗ＣＤ３抗体若しくはその抗原結合フラグメント又は抗ＣＤ２抗体との接触又はカルシウムイオノフォアと組み合わせたタンパク質キナーゼＣアクティベータ（例えば、ブリオスタチン）との接触により、本明細書に記載のように刺激し得る。Ｔ細胞表面上のアクセサリー分子の共刺激のために、アクセサリー分子と結合するリガンドを使用する。例えば、Ｔ細胞集団を、Ｔ細胞の増殖刺激に適する条件下で抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体と接触させ得る。ＣＤ４＋Ｔ細胞又はＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を刺激するために、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体を使用できる。抗ＣＤ２８抗体の例は、９．３、Ｂ−Ｔ３、ＸＲ−ＣＤ２８を含み（Ｄｉａｃｌｏｎｅ，Ｂｅｓａｎｃｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ）、当技術分野で一般に知られる他の方法のように使用できる（Ｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｐｒｏｃ．３０（８）：３９７５−３９７７，１９９８；Ｈａａｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９０（９）：１３１９１３２８，１９９９；Ｇａｒｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈ．２２７（１−２）：５３−６３，１９９９）。
【０４７４】
一態様において、Ｔ細胞のための一次刺激シグナル及び共刺激シグナルは、異なるプロトコルにより提供され得る。例えば、各シグナルを提供する薬剤は、溶液中でも表面と結合し得る。表面に結合しているとき、薬剤は、同じ表面（即ち「シス」形態）又は別の表面（即ち「トランス」形態）に結合し得る。代わりに、一方の薬剤が表面に結合し、他方が溶液にあり得る。一態様において、共刺激シグナルを提供する薬剤は、細胞表面に結合し、一次活性化シグナルを提供する薬剤は、溶液中であるか又は表面と結合する。一態様において、両剤は、溶液中にあり得る。一態様において、薬剤は、不溶性形態であり、Ｆｃ受容体又は抗体又は薬剤と結合する他の結合剤を発現する細胞などの表面に架橋され得る。この点に関して、例えば本発明におけるＴ細胞の活性化及び増殖のために意図される人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）について、米国特許出願公開第２００４０１０１５１９号明細書及び同第２００６００３４８１０号明細書を参照されたい。
【０４７５】
一態様において、２剤は、ビーズに、同じビーズ、即ち「シス」又は別のビーズ、即ち「トランス」で固定化される。例として、一次活性化シグナルを提供する薬剤は、抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合フラグメントであり、共刺激シグナルを提供する薬剤は、抗ＣＤ２８抗体又はその抗原結合フラグメントであり、両剤は、均等な分子量で同じビーズに共固定化される。一態様において、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖及びＴ細胞増殖のためのビーズに結合した１：１比の各抗体を使用する。本発明の一態様において、１：１比を使用して観察された増殖と比較して、Ｔ細胞増殖の増殖が観察されるように、ビーズに結合した抗ＣＤ３：ＣＤ２８抗体の比を使用する。特定の一態様において、１：１比を使用して観察された増殖と比較して約１〜約３倍増加が観察される。一態様において、ビーズに結合したＣＤ３：ＣＤ２８抗体比は、１００：１〜１：１００及びその間の全ての整数値の範囲である。本発明の一態様において、抗ＣＤ３抗体より多くの抗ＣＤ２８抗体が粒子に結合しており、即ちＣＤ３：ＣＤ２８比が１未満である。本発明の一態様において、ビーズに結合した抗ＣＤ２８抗体対抗ＣＤ３抗体比は、２：１より大きい。特定の一態様において、ビーズに結合した１：１００  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。一態様において、ビーズに結合した１：７５  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。更なる態様において、ビーズに結合した１：５０  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。一態様において、ビーズに結合した１：３０  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。ある好ましい態様において、ビーズに結合した１：１０  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。一態様において、ビーズに結合した１：３  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。更なる態様において、ビーズに結合した３：１  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。
【０４７６】
１：５００〜５００：１及びその間の任意の整数値の粒子対細胞比をＴ細胞又は他の標的細胞の刺激のために使用し得る。当業者に容易に認識され得るように、粒子対細胞比は、標的細胞に対する粒子径に依存し得る。例えば、小さいサイズのビーズは、少ない細胞にのみ結合でき、大きいビーズは、多く結合できる。一態様において、細胞対粒子比は、１：１００〜１００：１及びその間の任意の整数値の範囲であり、更なる態様において１：９〜９：１及びその間の任意の整数値からなる比をＴ細胞刺激に使用し得る。Ｔ細胞刺激をもたらす抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８結合粒子対Ｔ細胞の比は、上記のように変わり得るが、しかしながら、ある好ましい値は、１：１００、１：５０、１：４０、１：３０、１：２０、１：１０、１：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３、１：２、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１及び１５：１を含み、１つの好ましい比は少なくとも１：１粒子対Ｔ細胞である。一態様において、１：１以下の粒子対細胞比を使用する。特定の一態様において、好ましい粒子：細胞比は、１：５である。更なる態様において、粒子対細胞比は、刺激の日により変わり得る。例えば、一態様において、粒子対細胞比は、１日目は１：１〜１０：１であり、更なる粒子をその後１０日目まで連日又は隔日で細胞に添加し、最終比１：１〜１：１０である（添加の比の細胞数に基づく）。特定の一態様において、粒子対細胞比は、刺激１日目に１：１であり、刺激３日目及び５日目に１：５に調節する。一態様において、粒子を、１日目の１：１及び刺激３日目及び５日目の１：５の最終比に基づき、連日又は隔日で添加する。一態様において、粒子対細胞比は、刺激１日目は２：１であり、刺激３日目及び５日目に１：１０に調節する。一態様において、粒子を、１日目の１：１及び３日目及び５日目の１：１０の最終比に基づき、連日又は隔日で添加する。当業者は、多様な他の比が本発明における使用に適し得ることを認識する。特に、比は、粒子径並びに細胞サイズ及びタイプによる。一態様において、使用するための最も典型的な比は、１日目の１：１、２：１及び３：１付近である。
【０４７７】
本発明の更なる態様において、Ｔ細胞などの細胞を薬剤被覆ビーズと組み合わせ、ビーズ及び細胞をその後分離し、次いで細胞を培養する。異なる態様において、培養前に薬剤被覆ビーズ及び細胞を分離するが、一緒に培養する。更なる態様において、ビーズ及び細胞を磁気力などの力の適用によりまず濃縮し、細胞表面マーカーのライゲーションを増加させ、それにより細胞刺激を誘導する。
【０４７８】
例として、細胞表面タンパク質を、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８が結合した常磁性ビーズ（３ｘ２８ビーズ）とＴ細胞を接触させることにより、ライゲートし得る。一態様において、細胞（例えば、１０４〜１０９Ｔ細胞）及びビーズ（例えば、ＤＹＮＡビーズＳ（登録商標）Ｍ−４５０  ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｔ常磁性ビーズを１：１比）を緩衝液、例えばＰＢＳ（カルシウム及びマグネシウムなどの二価カチオンなし）中で合わせる。再び、任意の細胞濃度を使用し得ることが当業者に容易に認識され得る。例えば、標的細胞は、試料中で極めて稀であり、試料の０．０１％のみが含まれるか又は試料全体（即ち１００％）が目的の標的細胞で構成され得る。従って、あらゆる細胞数が本発明に関連して一体となる。一態様において、細胞と粒子との最大接触を確実にするために、粒子及び細胞を混合する体積を有意に減少させる（即ち細胞の濃度を高める）ことが望ましいことがある。例えば、一態様において、約１００億細胞／ｍｌ、９０億／ｍｌ、８０億／ｍｌ、７０億／ｍｌ、６０億／ｍｌ、５０億／ｍｌ又は２０億細胞／ｍｌの濃度を使用する。一態様において、１億細胞／ｍｌ超を使用する。更なる態様において、１０００万、１５００万、２０００万、２５００万、３０００万、３５００万、４０００万、４５００万又は５０００万細胞／ｍｌの細胞濃度を使用する。更なる態様において、細胞の７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万又は１億細胞／ｍｌの濃度を使用する。更なる態様において、１億２５００万又は１億５０００万細胞／ｍｌの濃度を使用できる。高濃度を使用して、細胞収率、細胞活性化及び細胞増殖を増加できる。更に、高細胞濃度の使用は、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞などの目的の標的抗原を弱く発現し得る細胞のより効率的な捕獲を可能にする。このような細胞集団は、治療的価値を有し得、且つ特定の態様では得ることが望ましいであろう。例えば、高濃度細胞の使用は、通常、ＣＤ２８発現が弱いＣＤ８＋Ｔ細胞のより効率的な選択を可能にする。
【０４７９】
一部の実施形態において、ＣＡＲ、例えば本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸が形質導入された細胞を例えば本明細書に記載の方法により増殖する。一部の実施形態において、細胞を数時間（例えば、約２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１５時間、１８時間、２１時間）〜約１４日（例えば、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日又は１４日）の期間の培養により増殖する。一部の実施形態において、細胞は、４〜９日の期間増殖される。一部の実施形態において、細胞は、８日以下、例えば７日、６日又は５日の期間増殖される。一部の実施形態において、細胞、例えば本明細書に記載のＢＣＭＡ  ＣＡＲ細胞は、５日の培養により増殖され、得られた細胞は、同じ培養条件において９日間培養で増殖された同じ細胞よりも強力である。効力は、例えば、多様なＴ細胞機能、例えば増殖、標的細胞死、サイトカイン産生、活性化、遊走又はそれらの組み合わせにより規定され得る。一部の実施形態において、５日増殖された細胞、例えば本明細書に記載のＢＣＭＡ  ＣＡＲ細胞は、同じ培養条件下において９日間培養で増殖された同じ細胞と比較して、抗原刺激による細胞倍加の少なくとも１倍、２倍、３倍又は４倍増加を示す。一部の実施形態において、細胞、例えば本明細書に記載のＢＣＭＡ  ＣＡＲを発現する細胞は、５日の培養により増殖され、得られた細胞は、同じ培養条件下において９日間培養で増殖された同じ細胞と比較して、高い炎症誘発性サイトカイン産生、例えばＩＦＮ−γ及び／又はＧＭ−ＣＳＦレベルを示す。一部の実施形態において、５日増殖された細胞、例えば本明細書に記載のＢＣＭＡ  ＣＡＲ細胞は、同じ培養条件下において９日間培養で増殖された同じ細胞と比較して、炎症誘発性サイトカイン産生、例えばＩＦＮ−γ及び／又はＧＭ−ＣＳＦレベルのｐｇ／ｍｌで少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍又はそれを超えて増加する。
【０４８０】
本発明の一態様において、混合物を数時間（約３時間）〜約１４日又はその間の任意の時間的整数値だけ培養し得る。一態様において、混合物を２１日培養し得る。本発明の一態様において、ビーズ及びＴ細胞を一緒に約８日培養する。一態様において、ビーズ及びＴ細胞を一緒に２〜３日培養する。Ｔ細胞の培養期間が６０日以上となり得るような数サイクルの刺激も望まれ得る。Ｔ細胞培養に適する条件は、血清（例えば、胎児ウシ又はヒト血清）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、インスリン、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＴＧＦβ及びＴＮＦ−α又は当業者に知られる細胞増殖のための任意の他の添加剤を含む、増殖及び生存能に必要な因子を含み得る、適切な培地（例えば、最小必須培地又はＲＰＭＩ培地１６４０又はＸ−ｖｉｖｏ  １５（Ｌｏｎｚａ））を含む。細胞の増殖のための他の添加剤は、界面活性剤、プラスマネート、及びＮ−アセチル−システイン、及び２−メルカプトエタノールなどの還元剤を含むが、これらに限定されない。培地は、無血清又は適切な量の血清（又は血漿）が添加されたか、又は規定されたセットのホルモン及び／又はＴ細胞の増殖及び拡大に十分な量のサイトカインが添加されたＲＰＭＩ  １６４０、ＡＩＭ−Ｖ、ＤＭＥＭ、ＭＥＭ、α−ＭＥＭ、Ｆ−１２、Ｘ−Ｖｉｖｏ１５及びＸ−Ｖｉｖｏ２０、Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒを含み得る。抗生物質、例えばペニシリン及びストレプトマイシンは、実験的培養においてのみ包含され、対象に注入すべき細胞の培養に含まれない。標的細胞は、増殖を支持するのに必要な条件、例えば適切な温度（例えば、３７℃）及び雰囲気（例えば、空気＋５％ＣＯ２）で維持される。
【０４８１】
一部の実施形態において、細胞は、例えば、フローサイトメトリーなどの本明細書に記載の方法により測定して、１４日の増殖期間にわたり、細胞の少なくとも２００倍（例えば、２００倍、２５０倍、３００倍、３５０倍）増加をもたらす１つ以上のインターロイキンを含む適切な培地（例えば、本明細書に記載の培地）で増殖させる。一部の実施形態において、細胞は、ＩＬ−１５及び／又はＩＬ−７（例えば、ＩＬ−１５及びＩＬ−７）の存在下で増殖させる。
【０４８２】
実施形態において、本明細書に記載の方法、例えばＣＡＲ発現細胞製造法は、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋Ｔ細胞を、例えば抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメント又はＣＤ２５結合リガンド、ＩＬ−２を使用して細胞集団から除去することを含む。細胞集団からＴ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋Ｔ細胞を除去する方法は、本明細書に記載される。実施形態において、方法、例えば製造法は、細胞集団（例えば、ＣＤ２５＋Ｔ細胞などのＴ制御性細胞が枯渇されている細胞集団；又は抗ＣＤ２５抗体、そのフラグメント又はＣＤ２５結合リガンドと前に接触された細胞集団）とＩＬ−１５及び／又はＩＬ−７との接触を更に含む。例えば、細胞集団（例えば、抗ＣＤ２５抗体、そのフラグメント又はＣＤ２５結合リガンドと先に接触されている）をＩＬ−１５及び／又はＩＬ−７の存在下で増殖させる。
【０４８３】
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、インターロイキン−１５（ＩＬ−１５）ポリペプチド、インターロイキン−１５受容体アルファ（ＩＬ−１５Ｒａ）ポリペプチド又はＩＬ−１５ポリペプチドとＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの組み合わせ、例えばｈｅｔＩＬ−１５を含む組成物とＣＡＲ発現細胞の製造中に例えばエクスビボで接触させることを含む。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＣＡＲ発現細胞の製造中に例えばエクスビボで、ＩＬ−１５ポリペプチドを含む組成物と接触させる。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＣＡＲ発現細胞の製造中に例えばエクスビボで、ＩＬ−１５ポリペプチド及びＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの両方の組み合わせを含む組成物と接触させる。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＣＡＲ発現細胞の製造中に例えばエクスビボで、ｈｅｔＩＬ−１５を含む組成物と接触させる。
【０４８４】
一部の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、エクスビボ増殖中、ｈｅｔＩＬ−１５を含む組成物と接触させる。一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、エクスビボ増殖中、ＩＬ−１５ポリペプチドを含む組成物と接触させる。一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、エクスビボ増殖中、ＩＬ−１５ポリペプチド及びＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの両方を含む組成物と接触させる。一部の実施形態において、接触は、リンパ球亜集団、例えばＣＤ８＋Ｔ細胞の生存及び増殖をもたらす。
【０４８５】
種々の刺激時間に曝されているＴ細胞は、異なる特徴を示し得る。例えば、典型的な血液又はアフェレーシスした末梢血単核細胞産物は、細胞毒性又はサプレッサーＴ細胞集団（ＴＣ、ＣＤ８＋）より大きいヘルパーＴ細胞集団（ＴＨ、ＣＤ４＋）を有する。ＣＤ３及びＣＤ２８受容体での刺激によるＴ細胞のエクスビボ増殖は、約８〜９日目前まで主にＴＨ細胞からなるＴ細胞集団を産生するが、約８〜９日目後、Ｔ細胞集団は、徐々に大きくなるＴＣ細胞集団を含む。従って、処置の目的により、主にＴＨ細胞を含むＴ細胞集団を対象に注入することは有利であり得る。同様に、ＴＣ細胞の抗原特異的サブセットが単離されている場合、このサブセットを大きい程度まで増殖させることが有利であり得る。
【０４８６】
更に、ＣＤ４及びＣＤ８マーカーに加えて、他の表現型マーカーは、細胞増殖過程の経過中、有意に、しかし、主に再現性よく変化する。そうして、このような再現性は、特定の目的のために活性化Ｔ細胞産物をもたらす能力を可能とする。
【０４８７】
ＢＣＭＡ  ＣＡＲが構築されると、適切なインビトロ及び動物モデルにおける抗原刺激後にＴ細胞を増殖させる能力、再刺激の非存在下でのＴ細胞増殖の持続及び抗癌活性など、しかし、これらに限定されない分子の活性を評価するために種々のアッセイが使用され得る。ＢＣＭＡ  ＣＡＲの効果を評価するためのアッセイは、以下に更に詳細に記載する。
【０４８８】
初代Ｔ細胞におけるＣＡＲ発現のウェスタンブロット分析を、単量体及び二量体の存在を検出するために使用できる。例えば、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １７（８）：１４５３−１４６４（２００９）を参照されたい。極めて簡潔には、ＣＡＲを発現するＴ細胞（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の１：１混合物）をインビトロで１０日超増殖させ、続いて溶解及び還元条件下のＳＤＳ−ＰＡＧＥを行う。全長ＴＣＲ−ゼータ細胞質ドメイン及び内因性ＴＣＲ−ゼータ鎖を含むＣＡＲを、ＴＣＲ−ゼータ鎖に対する抗体を使用するウェスタンブロッティングにより検出する。同じＴ細胞サブセットを、共有結合性二量体形成の評価を可能とするために非還元条件下のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析に使用する。
【０４８９】
抗原刺激後のＣＡＲ＋Ｔ細胞のインビトロ増殖をフローサイトメトリーにより測定できる。例えば、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の混合物をαＣＤ３／αＣＤ２８  ａＡＰＣで刺激し、続いて分析すべきプロモーターの制御下において、ＧＦＰを発現するレンチウイルスベクターで形質導入する。代表的プロモーターは、ＣＭＶ  ＩＥ遺伝子、ＥＦ−１α、ユビキチンＣ又はホスホグリセロキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターを含む。ＧＦＰ蛍光を、ＣＤ４＋及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞サブセットの培養６日目にフローサイトメトリーにより評価する。例えば、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １７（８）：１４５３−１４６４（２００９）を参照されたい。代わりに、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の混合物を０日目にαＣＤ３／αＣＤ２８被覆磁気ビーズで刺激し、２Ａリボソームスキッピング配列を使用するＣＡＲとｅＧＦＰを発現するバイシストロニックレンチウイルスベクターを使用して、１日目にＣＡＲを形質導入する。培養物は、洗浄後、多発性骨髄腫細胞株又はＫ５６２−ＢＣＭＡなどのＢＣＭＡ発現細胞で再刺激される。外来性ＩＬ−２を、１００ＩＵ／ｍｌを隔日で培養物に添加する。ＧＦＰ＋Ｔ細胞を、ビーズベースの計数を使用するフローサイトメトリーにより数える。例えば、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １７（８）：１４５３−１４６４（２００９）を参照されたい。
【０４９０】
再刺激非存在下の持続するＣＡＲ＋Ｔ細胞増殖も測定できる。例えば、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １７（８）：１４５３−１４６４（２００９）を参照されたい。簡潔には、平均Ｔ細胞体積（ｆｌ）を、０日目のαＣＤ３／αＣＤ２８被覆磁気ビーズでの刺激及び１日目の記載するＣＡＲの形質導入後、培養８日目にＣｏｕｌｔｅｒ  Ｍｕｌｔｉｓｉｚｅｒ  ＩＩＩ粒子カウンター、Ｎｅｘｃｅｌｏｍ  Ｃｅｌｌｏｍｅｔｅｒ  Ｖｉｓｉｏｎ又はＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｓｃｅｐｔｅｒを使用して測定する。
【０４９１】
動物モデルも、ＣＡＲＴ活性の測定に使用できる。例えば、免疫不全マウスにおける初代ヒト多発性骨髄腫を処置するための、ヒトＢＣＭＡ特異的ＣＡＲ＋Ｔ細胞を使用する異種移植モデルを使用できる。例えば、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １７（８）：１４５３−１４６４（２００９）を参照されたい。極めて簡潔には、ＭＭ確立後、マウスを処置群に無作為化する。異なる数のＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ細胞を、ＭＭを担持する免疫不全マウスに注射することができる。動物は、１週間間隔で疾患の進行及び腫瘍負荷について評価される。ログランク検定を使用して、群の生存曲線を比較する。更に、免疫不全マウスへのＴ細胞注射４週間後の絶対的末梢血ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞数も分析し得る。マウスに、多発性骨髄腫細胞を注射し、３週間後、例えばｅＧＦＰに連結したＣＡＲをコードするバイシストロニックレンチウイルスベクターにより、ＢＣＭＡ  ＣＡＲを発現するように操作されたＴ細胞を注射する。Ｔ細胞を、注入ＧＦＰ＋Ｔ細胞の４５〜５０％に、注射前に偽形質導入細胞と混合することにより標準化し、フローサイトメトリーにより確認する。動物を１週間間隔で白血病について評価する。ＣＡＲ＋Ｔ細胞群の生存曲線を、ログランク検定を使用して比較する。
【０４９２】
細胞増殖及びサイトカイン産生の評価は、例えば、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １７（８）：１４５３−１４６４（２００９）に以前に記載されている。簡潔には、ＣＡＲを介した増殖の評価は、マイクロタイタープレートにおいて、洗浄したＴ細胞を、ＢＣＭＡを発現するＫ５６２細胞と混合することによって実施されるか、又は他のＢＣＭＡ発現骨髄腫細胞は、使用前にガンマ線を照射される。抗ＣＤ３（クローンＯＫＴ３）及び抗ＣＤ２８（クローン９．３）モノクローナル抗体を、これらのシグナルがエクスビボでの長期ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を支持するため、刺激Ｔ細胞増殖について陽性対照として役立つＫＴ３２−ＢＢＬ細胞の培養物に添加する。Ｔ細胞を、製造者により記載のとおりＣｏｕｎｔＢｒｉｇｈｔ（商標）蛍光ビーズ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）及びフローサイトメトリーを使用して培養において数える。ＣＡＲ＋Ｔ細胞を、ｅＧＦＰ−２Ａ連結ＣＡＲ発現レンチウイルスベクターで操作されたＴ細胞を使用するＧＦＰ発現により同定する。ＧＦＰを発現しないＣＡＲ＋Ｔ細胞について、ＣＡＲ＋Ｔ細胞をビオチニル化組み換えＢＣＭＡタンパク質及び二次アビジン−ＰＥコンジュゲートにより検出する。Ｔ細胞のＣＤ４＋及びＣＤ８＋発現も、特異的モノクローナル抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して同時に検出する。サイトカイン測定を、製造業者の指示に従ってヒトＴＨ１／ＴＨ２サイトカイン細胞数測定ビーズアレイキット（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を使用して再刺激２４時間後に回収した上清で実施する。ＦＡＣＳｃａｌｉｂｕｒフローサイトメーターを使用して蛍光を評価し、データを製造業者の指示に従って分析する。
【０４９３】
細胞毒性を標準的５１Ｃｒ放出アッセイにより評価できる。例えば、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １７（８）：１４５３−１４６４（２００９）を参照されたい。簡潔には、標的細胞（例えば、ＢＣＭＡを発現するＫ５６２株及び初代多発性骨髄腫細胞）に５１Ｃｒ（ＮａＣｒＯ４として、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｎｕｃｌｅａｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）を３７℃で２時間、頻繁に撹拌しながら充填し、完全ＲＰＭＩで２回洗浄し、マイクロタイタープレートに播種する。エフェクターＴ細胞をウェル中で完全ＲＰＭＩ中に標的細胞と種々のエフェクター細胞：標的細胞（Ｅ：Ｔ）比で混合する。更なる培地のみ（自発的放出、ＳＲ）又はｔｒｉｔｏｎ−Ｘ  １００洗剤１％溶液（全放出、ＴＲ）を含むウェルも調製する。３７℃で４時間のインキュベーション後、各ウェルから上清を回収する。放出された５１Ｃｒを、次いでガンマ粒子カウンター（Ｐａｃｋａｒｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｃｏ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を使用して測定する。各条件を少なくとも３回行い、溶解のパーセントを式：溶解％＝（ＥＲ−ＳＲ）／（ＴＲ−ＳＲ）（式中、ＥＲは、各実験条件で放出された平均５１Ｃｒを示す）を使用して計算する。
【０４９４】
造影技術を使用して、腫瘍担持動物モデルにおけるＣＡＲの特異的輸送及び増殖を評価できる。このようなアッセイは、例えば、Ｂａｒｒｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ２２：１５７５−１５８６（２０１１）に記載されている。簡潔には、ＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γｃ−／−（ＮＳＧ）マウス又は他の免疫不全に多発性骨髄腫細胞をＩＶ注射し、７日後、ＣＡＲ構築物でエレクトロポレーションから４時間後にＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ細胞を注射する。Ｔ細胞は、ホタルルシフェラーゼを発現するようにレンチウイルス構築物で安定にトランスフェクトされ、マウスをバイオルミネセンスについて造影する。代わりに、多発性骨髄腫異種移植モデルにおけるＣＡＲ＋Ｔ細胞の単回注射の治療有効性及び特異性を次のように測定できる。ＮＳＧマウスに、ホタルルシフェラーゼを安定に発現するように形質導入した多発性骨髄腫細胞を注射し、続いて７日後にＢＣＭＡ  ＣＡＲ構築物で電気穿孔したＴ細胞を１回尾静脈注射する。動物を注射後の種々の時点で造影する。例えば、５日目（処置２日前）及び８日目（ＣＡＲ＋ＰＢＬ後２４時間）に代表的マウスにおけるホタルルシフェラーゼ陽性腫瘍の光子密度ヒートマップを作成できる。
【０４９５】
ここに開示する方法の代わりに又はこれと組み合わせて、ＣＡＲリガンドの使用を含む、ＣＡＲ発現細胞（例えば、インビトロ又はインビボ（例えば、臨床モニタリング））、免疫細胞増殖及び／又は活性化及び／又はＣＡＲ特異的選択の１つ以上の検出及び／又は定量のための方法及び組成物が開示される。１つの例示的実施形態において、ＣＡＲリガンドは、ＣＡＲ分子に結合する、例えばＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインに結合する抗体である（例えば、抗原結合ドメインに結合する抗体、例えば抗イディオタイプ抗体；又は細胞外結合ドメインの定常領域に結合する抗体）。他の実施形態において、ＣＡＲリガンドは、ＣＡＲ抗原分子である（例えば、本明細書に記載のようなＣＡＲ抗原分子）。
【０４９６】
一態様において、ＣＡＲ発現細胞を検出及び／又は定量する方法が開示される。例えば、ＣＡＲリガンドは、インビトロ又はインビボでＣＡＲ発現細胞の検出及び／又は定量に使用できる（例えば、患者におけるＣＡＲ発現細胞の臨床モニタリング又は患者への投薬）。方法は、ＣＡＲリガンド（任意選択により、標識ＣＡＲリガンド、例えばタグ、ビーズ、放射活性又は蛍光標識を含むＣＡＲリガンド）を提供すること；ＣＡＲ発現細胞を取得すること（例えば、製造試料又は臨床試料などのＣＡＲ発現細胞含有試料の取得）；ＣＡＲ発現細胞とＣＡＲリガンドとを、結合が生じる条件下で接触させ、それにより存在するＣＡＲ発現細胞のレベル（例えば、量）を検出することを含む。ＣＡＲ発現細胞とＣＡＲリガンドとの結合は、ＦＡＣＳ、ＥＬＩＳＡなどのような標準技術を使用して検出できる。
【０４９７】
別の態様において、増殖及び／又は活性化細胞（例えば、免疫エフェクター細胞）を増殖する方法が開示される。方法は、ＣＡＲ発現細胞（例えば、第１のＣＡＲ発現細胞又は一過性に発現されるＣＡＲ細胞）を提供すること；前記ＣＡＲ発現細胞とＣＡＲリガンド、例えば本明細書に記載のようなＣＡＲリガンドとを、免疫細胞増殖及び／又は増殖が生じる条件下で接触させ、それにより活性化及び／又は増殖集団を産生することを含む。
【０４９８】
一実施形態において、ＣＡＲリガンドが存在する（例えば、基質、例えば天然に存在しない基質に固定化又は結合される）。一実施形態において、基質は、非細胞基質である。非細胞基質は、例えば、プレート（例えば、マイクロタイタープレート）、膜（例えば、ニトロセルロース膜）、マトリックス、チップ又はビーズから選択される固体支持体であり得る。実施形態において、ＣＡＲリガンドは、基質に存在する（例えば、基質表面上）。ＣＡＲリガンドを基質に共有非共有（例えば、架橋）により固定、結合又は会合させ得る。一部の実施形態において、ＣＡＲリガンドは、ビーズに結合（例えば、共有結合）する。前記実施形態において、免疫細胞集団をインビトロ又はエクスビボで増殖できる。方法は、例えば、本明細書に記載の方法のいずれかを使用して、ＣＡＲ分子のリガンド存在下で免疫細胞集団を培養することを更に含み得る。
【０４９９】
他の実施形態において、細胞を増殖及び／又は活性化する方法は、更に第２の刺激性分子、例えばＣＤ２８の添加を含む。例えば、ＣＡＲリガンド及び第２の刺激性分子を基質、例えば１つ以上のビーズに固定し、それにより細胞増殖及び／又は活性化を増加させ得る。
【０５００】
更に別の態様において、ＣＡＲ発現細胞を選択又は富化する方法を提供する。方法は、ＣＡＲ発現細胞と本明細書に記載のようなＣＡＲリガンドを接触させ、ＣＡＲリガンドの結合に基づいて細胞を選択することを含む。
【０５０１】
更に他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞を枯渇、減少及び／又は死滅する方法が提供される。方法は、ＣＡＲ発現細胞と本明細書に記載のようなＣＡＲリガンドとを接触させ、且つ細胞をＣＡＲリガンドの結合に基づいてターゲティングし、それによりＣＡＲ発現細胞の数を減らす及び／又は殺傷することを含む。一部の実施形態において、ＣＡＲリガンドは、毒性剤と結合する（例えば、トキシン又は細胞除去剤）。別の実施形態において、抗イディオタイプ抗体は、エフェクター細胞活性、例えばＡＤＣＣ又はＡＤＣ活性を生じ得る。
【０５０２】
本明細書に開示する方法において使用できる例示的な抗ＣＡＲ抗体は、例えば、国際公開第２０１４／１９０２７３号パンフレット及びＪｅｎａ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＣＡＲ）−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｏ  Ｄｅｔｅｃｔ  ＣＤ１９−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌｓ”，ＰＬＯＳ  Ｍａｒｃｈ  ２０１３  ８：３  ｅ５７８３８に記載され、その内容が参照により本明細書に援用される。一部の実施形態において、抗イディオタイプ抗体分子は、抗ＣＤ１９抗体分子、例えば抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを認識する。例えば、抗イディオタイプ抗体分子は、Ｊｅｎａ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬＯＳ  Ｍａｒｃｈ  ２０１３  ８：３  ｅ５７８３８に記載のＣＤ１９特異的ＣＡＲ  ｍＡｂクローン番号１３６．２０．１と結合について競合でき；ＣＤ１９特異的ＣＡＲ  ｍＡｂクローン番号１３６．２０．１と同じＣＤＲ（例えば、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義又はＫａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａ定義の組み合わせを使用して１つ以上、例えば全てのＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＣＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２及びＶＬ  ＣＤＲ３）を有し得；ＣＤ１９特異的ＣＡＲ  ｍＡｂクローン番号１３６．２０．１のような１つ以上の（例えば、２）可変領域を有し得るか又はＣＤ１９特異的ＣＡＲ  ｍＡｂクローン番号１３６．２０．１を含み得る。一実施形態において、抗イディオタイプ抗体は、Ｊｅｎａ  ｅｔ  ａｌ．に記載の方法により製造した。別の実施形態において、抗イディオタイプ抗体分子は、国際公開第２０１４／１９０２７３号パンフレットに記載の抗イディオタイプ抗体分子である。一実施形態において、抗イディオタイプ抗体分子は、１３６．２０．１などの国際公開第２０１４／１９０２７３号パンフレットに記載の抗体分子と同じＣＤＲ（例えば、１つ以上、例えば全てのＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＣＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２及びＶＬ  ＣＤＲ３）を有し；国際公開第２０１４／１９０２７３号パンフレットの抗体分子の１つ以上の（例えば、２）可変領域を有し得るか又は１３６．２０．１などの国際公開第２０１４／１９０２７３号パンフレットに記載の抗体分子を含み得る。他の実施形態において、抗ＣＡＲ抗体は、例えば、国際公開第２０１４／１９０２７３号パンフレットに記載のようなＣＡＲ分子の細胞外結合ドメインの定常領域に結合する。一実施形態において、抗ＣＡＲ抗体は、ＣＡＲ分子の細胞外結合ドメインの定常領域、例えば重鎖定常領域（例えば、ＣＨ２−ＣＨ３ヒンジ領域）又は軽鎖定常領域に結合する。例えば、一実施形態において、抗ＣＡＲ抗体は、国際公開第２０１４／１９０２７３号パンフレットに記載の２Ｄ３モノクローナル抗体と結合について競合し、２Ｄ３と同じＣＤＲ（例えば、１つ以上、例えば全てのＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＣＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２及びＶＬ  ＣＤＲ３）を有するか、又は２Ｄ３の１つ以上の（例えば、２）可変領域を有するか、又は国際公開第２０１４／１９０２７３号パンフレットに記載のような２Ｄ３を含む。
【０５０３】
いくつかの態様及び実施形態において、本明細書における組成物及び方法は、例えば、その全体が参照により本明細書に援用される、２０１４年７月３１日出願の米国特許出願第６２／０３１，６９９号明細書に記載のようなＴ細胞の特定のサブセットのために最適化される。一実施形態において、Ｔ細胞の最適化サブセットは、対照Ｔ細胞、例えば同じ構築物を発現する異なるタイプ（例えば、ＣＤ８＋又はＣＤ４＋）のＴ細胞と比較して残留性の増強を示す。
【０５０４】
一実施形態において、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、本明細書に記載のＣＡＲを含み、そのＣＡＲは、ＣＤ４＋Ｔ細胞に適する（例えば、最適化、例えば残留性の増強に至る）細胞内シグナル伝達ドメイン、例えばＩＣＯＳドメインを含む。一実施形態において、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、本明細書に記載のＣＡＲを含み、そのＣＡＲは、ＣＤ８＋Ｔ細胞に適する（例えば、最適化、例えば残留性の増強に至る）細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば４−１ＢＢドメイン、ＣＤ２８ドメイン又はＩＣＯＳドメイン以外の共刺激ドメインを含む。一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲは、本明細書に記載の抗原結合ドメインを含み、例えばＢＣＭＡを標的化する抗原結合ドメインを含むＣＡＲ、例えば表２、６又は１０のＣＡＲである。
【０５０５】
一態様において、本明細書に記載されるのは、対象、例えば癌を有する対象を処置する方法である。方法は、前記対象に、有効量の、
１）ＣＡＲを含むＣＤ４＋Ｔ細胞（ＣＡＲＣＤ４＋）であって、
抗原結合ドメイン、例えば本明細書に記載の抗原結合ドメイン、例えばＢＣＭＡを標的化する抗原結合ドメイン、例えば表２、６又は１０の抗原結合ドメイン、
膜貫通ドメイン、及び
細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば第１の共刺激ドメイン、例えばＩＣＯＳドメイン
を含むＣＤ４＋Ｔ細胞（ＣＡＲＣＤ４＋）、及び
２）ＣＡＲを含むＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＡＲＣＤ８＋）であって、
抗原結合ドメイン、例えば本明細書に記載の抗原結合ドメイン、例えばＢＣＭＡを標的化する抗原結合ドメイン、例えば表２、６又は１０の抗原結合ドメイン、
膜貫通ドメイン、及び
細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば第２の共刺激ドメイン、例えば４−１ＢＢドメイン、ＣＤ２８ドメイン又はＩＣＯＳドメイン以外の別の共刺激ドメイン
を含むＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＡＲＣＤ８＋）
を投与することを含み、ここで、ＣＡＲＣＤ４＋とＣＡＲＣＤ８＋とは、互いに異なる。
【０５０６】
任意選択により、方法は、
３）ＣＡＲを含む第２のＣＤ８＋Ｔ細胞（第２のＣＡＲＣＤ８＋）であって、
抗原結合ドメイン、例えば本明細書に記載の抗原結合ドメイン、ＢＣＭＡを標的化する抗原結合ドメイン、例えば表２、６又は１０の抗原結合ドメイン、
膜貫通ドメイン、及び
第２のＣＡＲＣＤ８＋が、ＣＡＲＣＤ８＋上に存在しない細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば共刺激シグナル伝達ドメインを含み、任意選択により、ＩＣＯＳシグナル伝達ドメインを含まない、細胞内シグナル伝達ドメイン
を含むＣＤ８＋Ｔ細胞（第２のＣＡＲＣＤ８＋）を投与することを含む。
【０５０７】
本明細書の実施例の項に記載のもの並びに当技術分野で公知のものを含む他のアッセイも本発明のＢＣＭＡ  ＣＡＲ構築物の評価に使用できる。
【０５０８】
治療適用
ＢＣＭＡ関連疾患及び／又は障害
一態様において、本発明は、ＢＣＭＡの発現と関連する疾患を処置する方法を提供する。一態様において、本発明は、疾患を処置する方法を提供し、ここで、腫瘍の一部がＢＣＭＡに対して陰性であり、腫瘍の一部がＢＣＭＡに対して陽性である。例えば、本発明のＣＡＲは、ＢＣＭＡの発現の上昇と関連する疾患の処置を受けている対象の処置に有用であり、ＢＣＭＡのレベルの上昇に対する処置を受けている対象は、ＢＣＭＡのレベルの上昇と関連する疾患を示す。実施形態において、本発明のＣＡＲは、ＢＣＭＡの発現と関連する疾患の処置を受けている対象の処置に有用であり、ＢＣＭＡの発現に関する処置を受けている対象は、ＢＣＭＡの発現と関連する疾患を示す。
【０５０９】
いくつかの実施形態において、本発明は、疾患を処置する方法を提供し、ここで、ＢＣＭＡは、正常細胞及び癌細胞の両方で発現されるが、正常細胞ではより低いレベルで発現される。いくつかの実施形態において、方法は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲがＢＣＭＡを発現する癌細胞に結合して死滅させることができる親和性で結合する、本発明のＣＡＲを選択することを更に含むが、ＢＣＭＡを発現する正常細胞の３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％未満又はそれを下回るもの（例えば、本明細書に記載のアッセイにより測定される）が死滅する。例えば、Ｃｒ５１  ＣＴＬに基づくフローサイトメトリーなどの死滅アッセイを使用することができる。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲは、標的抗原について、１０−４Ｍ〜１０−８Ｍ、例えば１０−５Ｍ〜１０−７Ｍ、例えば１０−６Ｍ又は１０−７Ｍの結合親和性ＫＤを有する抗原結合ドメインを有する。いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ抗原結合ドメインは、参照抗体、例えば本明細書に記載の抗体より少なくとも５倍、１０倍、２０倍、３０倍、５０倍、１００倍又は１，０００倍小さい結合親和性を有する。
【０５１０】
一態様において、本発明は、哺乳動物免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞における発現のために、プロモーターと操作可能に連結したＢＣＭＡ  ＣＡＲを含むベクターに関する。一態様において、本発明は、ＢＣＭＡ発現腫瘍の処置における使用のためのＢＣＭＡ  ＣＡＲを発現する組換え免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞を提供し、ここで、ＢＣＭＡ  ＣＡＲを発現する組換え免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）と呼ばれる。一態様において、本発明のＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）は、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）が腫瘍細胞を標的とし、腫瘍の増殖が阻害されるように、腫瘍細胞を、その表面に発現された少なくとも１つの本発明のＢＣＭＡ  ＣＡＲと接触させることができる。
【０５１１】
一態様において、本発明は、ＢＣＭＡ発現腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であって、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）が抗原に応答して活性化し、癌細胞を標的とし、腫瘍の増殖が阻害されるように、腫瘍細胞を、本発明のＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）と接触させることを含む方法に関する。
【０５１２】
一態様において、本発明は、対象における癌を処置する方法に関する。この方法は、癌が対象において処置されるように、対象に本発明のＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を投与することを含む。本発明のＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）により処置可能な癌の例は、ＢＣＭＡの発現と関連する癌である。
【０５１３】
本発明は、ある種の細胞治療を含み、ここで、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝的に修飾され、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）は、それを必要とするレシピエントに注入される。注入された細胞は、レシピエントにおいて腫瘍細胞を殺傷することができる。抗体療法と異なり、ＣＡＲ修飾細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞は、インビボで複製でき、持続した腫瘍制御をもたらし得る長期残留性をもたらす。種々の態様において、患者に投与された細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）又はその子孫は、患者において、患者に細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を投与した後に少なくとも４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１３ヶ月、１４ヶ月、１５ヶ月、１６ヶ月、１７ヶ月、１８ヶ月、１９ヶ月、２０ヶ月、２１ヶ月、２２ヶ月、２３ヶ月、２年、３年、４年又は５年持続する。
【０５１４】
本発明は、ある種の細胞治療も含み、ここで、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を一過性に発現するように、例えばインビトロ転写ＲＮＡにより修飾され、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）は、それを必要とするレシピエントに注入される。注入された細胞は、レシピエントで腫瘍細胞を殺傷することができる。そのため、種々の態様において、患者に投与した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）は、患者に免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の投与後、１ヶ月、例えば３週間、２週間、１週間未満持続する。
【０５１５】
何らかの特定の理論に拘束されないが、ＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）により惹起される抗腫瘍免疫応答は、能動的又は受動的免疫応答であり得るか又は代わりに直接的対間接的免疫応答によるものであり得る。一態様において、ＣＡＲ形質導入免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）は、ＢＣＭＡを発現するヒト癌細胞に応答して特定の炎症誘発性サイトカイン分泌及び強力な細胞溶解性活性を示し、可溶性ＢＣＭＡ阻害に抵抗し、バイスタンダー細胞死に介在し、確立されたヒト腫瘍の退縮に介在する。例えば、ＢＣＭＡ発現腫瘍の不均一な場における抗原低腫瘍細胞は、近辺の抗原陽性癌細胞に対して先に反応している癌関連抗原のＢＣＭＡ再指向免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）による間接的破壊を受け得る。
【０５１６】
一態様において、本発明の完全ヒトＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）は、哺乳動物におけるエクスビボ免疫化及び／又はインビボ治療のための１種のワクチンである。一態様において、哺乳動物は、ヒトである。
【０５１７】
エクスビボ免疫化に関して、次の少なくとも１つは、哺乳動物に細胞を投与する前にインビトロで起こる。ｉ）細胞の増殖、ｉｉ）細胞へのＣＡＲをコードする核酸の導入又はｉｉｉ）細胞の凍結保存。
【０５１８】
エクスビボ過程は、当技術分野で周知であり、下により詳細に記載する。簡潔には、細胞を哺乳動物（例えば、ヒト）から単離し、本明細書に記載するＣＡＲを発現するベクターで遺伝的に改変（即ちインビトロで形質導入又はトランスフェクト）される。ＣＡＲ修飾細胞を哺乳動物レシピエントに投与して、治療効果を提供できる。哺乳動物レシピエントは、ヒトであり得、ＣＡＲ修飾細胞は、レシピエントに対して自己であり得る。代わりに、細胞は、レシピエントに対して同種、同系又は異種であり得る。
【０５１９】
参照により本明細書に援用される米国特許第５，１９９，９４２号明細書に記載する造血幹細胞及び前駆細胞のエクスビボ増殖のための方法を本発明の細胞に適用できる。他の適当な方法は、当技術分野で知られ、従って、本発明は、細胞のエクスビボ増殖の特定の方法に限定されない。簡潔には、Ｔ細胞のエクスビボ培養及び増殖は、（１）哺乳動物からの採取した末梢血又は髄外植体からのＣＤ３４＋造血幹細胞及び前駆細胞回収、及び（２）エクスビボでのこのような細胞の増殖を含む。米国特許第５，１９９，９４２号明細書に記載される細胞増殖因子に加えて、ｆｌｔ３Ｌ、ＩＬ−１、ＩＬ−３及びｃ−ｋｉｔリガンドなどの他の因子を細胞の培養及び増殖に使用できる。
【０５２０】
エクスビボ免疫化の点で細胞ベースのワクチンを使用するのに加えて、本発明は、患者における抗原に対する免疫応答を惹起するための、インビボ免疫化のための組成物及び方法も提供する。
【０５２１】
一般に、本明細書に記載のような細胞活性化及び増殖は、免疫不全状態である個体で惹起する疾患の処置及び予防に利用し得る。特に、本発明のＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を、ＢＣＭＡの発現と関連する疾患、障害及び状態の処置に使用する。特定の態様において、本発明の細胞は、ＢＣＭＡの発現と関連する疾患、障害及び状態を発症するリスクのある患者の処置に使用される。従って、本発明は、ＢＣＭＡの発現と関連する疾患、障害及び状態の処置又は予防のための方法であって、それを必要とする対象に本発明のＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の治療有効量を投与することを含む方法を提供する。
【０５２２】
一態様において、本発明のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲＴ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を、癌又は悪性腫瘍などの増殖性疾患又は脊髄形成異常症の処置に使用し得、骨髄異形成症候群又は前白血病状態などの前癌状態である。一態様において、癌は、血液癌である。血液癌状態は、白血病及び血液、骨髄及びリンパ系に影響する悪性リンパ増殖状態などの種類の癌である。一態様において、血液癌は、白血病又は血液学的である。ＢＣＭＡに関連する疾患又は障害の例は、多発性骨髄腫（ＭＭとしても知られる）である（Ｃｌａｕｄｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２００２，１００（６）：２１７５−８６；及びＮｏｖａｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２００４，１０３（２）：６８９−９４を参照されたい）。形質細胞骨髄腫又はカーラー病としても知られる多発性骨髄腫は、骨髄に異常又は悪性の形質Ｂ細胞が蓄積することを特徴とする癌である。多くの場合、癌細胞は、隣接する骨に侵入し、骨格構造を破壊し、骨痛及び骨折を引き起こす。骨髄腫の症例の大半は、悪性形質細胞のクローン増殖によって過剰に産生される異常な免疫グロブリンであるパラプロテイン（Ｍタンパク質又は骨髄腫タンパク質としても知られる）の産生も特徴とする。３０ｇ／Ｌを超える血清パラプロテインレベルは、国際骨髄腫ワーキンググループ（ＩＭＷＧ）の診断基準によると、多発性骨髄腫の診断となる（Ｋｙｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００９），Ｌｅｕｋｅｍｉａ．２３：３−９を参照されたい）。多発性骨髄腫の他の症状又は徴候には、腎機能の低下又は腎不全、骨病変、貧血、高カルシウム血症及び神経学的症状が含まれる。
【０５２３】
多発性骨髄腫を他の形質細胞増殖性障害と区別する基準は、国際骨髄腫ワーキンググループによって確立されている（Ｋｙｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００９），Ｌｅｕｋｅｍｉａ．２３：３−９を参照されたい）。次の３つの基準全てが満たされなければならない：
−  クローン骨髄形質細胞≧１０％
−  血清及び／又は尿中モノクローナルタンパク質の存在（真の非分泌性多発性骨髄腫の患者を除く）
−  基礎形質細胞増殖障害に起因する末端器官損傷のエビデンス、具体的には、
○高カルシウム血症：血清カルシウム≧１１．５ｍｇ／１００  ｍｌ
○腎不全：血清クレアチニン＞１．７３ｍｍｏｌ／ｌ
○貧血：ヘモグロビン値が正常値の下限を２ｇ／１００ｍｌを超えて下回るか、又はヘモグロビン値＜１０ｇ／１００ｍｌである、正色素性、正球性
○骨病変：溶解性病変、重度の骨減少症又は病的骨折。
【０５２４】
本明細書に記載の組成物及び方法によって処置することができる他の形質細胞増殖性障害には、無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無痛性骨髄腫）、意義不明の単クローン性高ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、形質細胞腫（例えば、形質細胞異常増殖症、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外形質細胞腫及び多発性形質細胞腫）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス及びＰＯＥＭＳ症候群（クロウ・深瀬症候群、高月病及びＰＥＰ症候群としても知られる）が含まれるが、これらに限定されない。
【０５２５】
多発性骨髄腫の病期分類には、２つの病期分類システム：国際病期分類システム（ＩＳＳ）（Ｇｒｅｉｐｐ  ｅｔ  ａｌ．（２００５），Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２３（１５）：３４１２−３４２０を参照されたい）及びＤｕｒｉｅ−Ｓａｌｍｏｎ病期分類システム（ＤＳＳ）（Ｄｕｒｉｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９７５），Ｃａｎｃｅｒ  ３６（３）：８４２−８５４を参照されたい）が使用される。２つの病期分類を以下の表に概括する。
【０５２６】
【表４８】
2021526814.tif 000058
【０５２７】
＊Ｄｕｒｉｅ−Ｓａｌｍｏｎ病期分類システムには、腎機能の状態を指定する下位分類も含まれる。「Ａ」又は「Ｂ」の指定は、ステージ番号の後に追加され、ここで、「Ａ」は、比較的正常な腎機能（血清クレアチニン値＜２．０ｍｇ／ｄＬ）を示し、Ｂは、異常な腎機能（血清クレアチニン値＞２．０ｍｇ／ｄＬ）を示す。
【０５２８】
多発性骨髄腫の第３の病期分類システムは、改訂国際病期分類システム（Ｒ−ＩＳＳ）と称される（Ｐａｌｕｍｂｏ  Ａ，Ａｖｅｔ−Ｌｏｉｓｅａｕ  Ｈ，Ｏｌｉｖａ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｏｎｃｏｌｏｇｙ：ｏｆｆｉｃｉａｌ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２０１５；３３：２８６３−９を参照されたく、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。Ｒ−ＩＳＳステージＩには、ＩＳＳステージＩ（血清β２−ミクログロブリンレベル＜３．５ｍｇ／Ｌ及び血清アルブミンレベル≧３．５ｇ／ｄＬ）、高リスクＣＡなし［ｄｅｌ（１７ｐ）及び／又はｔ（４；１４）及び／又はｔ（１４；１６）］及び正常なＬＤＨレベル（正常範囲の上限未満）が含まれる。Ｒ−ＩＳＳステージＩＩＩには、ＩＳＳステージＩＩＩ（血清β２−ミクログロブリンレベル＞５．５  ｍｇ／Ｌ）及び高リスクＣＡ又は高ＬＤＨレベルが含まれる。Ｒ−ＩＳＳステージＩＩには、他の全ての可能な組み合わせが含まれる。
【０５２９】
患者の応答は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＫｕｍａｒ  Ｓ，Ｐａｉｖａ  Ｂ，Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ＫＣ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｙｅｌｏｍａ  Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ  ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ａｎｄ  ｍｉｎｉｍａｌ  ｒｅｓｉｄｕａｌ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ．Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ；１７（８）：ｅ３２８−ｅ３４６に開示される、ＩＭＷＧ２０１６の基準に基づいて決定できる。表１６は、応答評価のためのＩＭＷＧ２０１６基準を提供する。
【０５３０】
【表４９】
2021526814.tif 000059
【０５３１】
【表５０】
2021526814.tif 000060
【０５３２】
【表５１】
2021526814.tif 000061
【０５３３】
【表５２】
2021526814.tif 000062
【０５３４】
多発性骨髄腫及び関連疾患の標準処置には、化学療法、幹細胞移植（自己又は同種異系）、放射線療法及び他の薬物療法が含まれる。頻繁に使用される抗骨髄腫薬には、アルキル化剤（例えば、ベンダムスチン、シクロホスファミド、メルファラン）、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ）、コルチコステロイド（例えば、デキサメタゾン、プレドニゾン）、免疫調節剤（例えば、サリドマイド、レナリドマイド、Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（登録商標））又はそれらの任意の組み合わせが含まれる。ビホスホネート薬は、骨量減少を防ぐために、頻繁に標準的な抗ＭＭ処置と組み合わせても投与される。６５〜７０歳を超える患者は、幹細胞移植の候補になる可能性が低い。いくつかの場合、二重自己幹細胞移植は、最初の移植に対する反応が最適以下の６０歳未満の患者にとっての選択肢である。本発明の組成物及び方法は、多発性骨髄腫に対して現在処方されている処置のいずれかと組み合わせて投与され得る。
【０５３５】
ＢＣＭＡに関連する疾患又は障害の別の例は、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫である（Ｃｈｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２００７，１０９（２）：７２９−３９；Ｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００４，１７２（５）：３２６８−７９を参照されたい）。
【０５３６】
ホジキン病としても知られるホジキンリンパ腫（ＨＬ）は、白血球又はリンパ球に由来するリンパ系の癌である。リンパ腫を構成する異常細胞は、リード・シュテルンベルグ細胞と呼ばれる。ホジキンリンパ腫では、癌は、あるリンパ節群から別のリンパ節群に広がる。ホジキンリンパ腫は、リード・シュテルンベルグ細胞の形態及びリード・シュテルンベルグ胞周辺の細胞組成（リンパ節生検で測定）に基づいて、４つの病理学的サブタイプ：結節性硬化性ＨＬ、混合細胞性サブタイプ、リンパ球豊富型又はリンパ球優位型、リンパ球枯渇型に下位分類できる。いくつかのホジキンリンパ腫は、結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫である可能性もあり、特定されていない可能性もある。ホジキンリンパ腫の症状及び徴候は、首、腋窩又は鼠径部のリンパ節の無痛性の腫れ、発熱、寝汗、体重減少、疲労、そう痒又は腹痛が含まれる。
【０５３７】
非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）は、ホジキンリンパ腫以外の任意の種類のリンパ腫を含む多様な血液癌の群を含む。非ホジキンリンパ腫のサブタイプは、主に細胞形態、染色体異常及び表面マーカーによって分類される。ＮＨＬサブタイプ（又はＮＨＬ関連癌）は、限定されないが、バーキットリンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病（Ｂ−ＰＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）（例えば、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫及び原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫）、濾胞性リンパ腫（例えば、濾胞中心リンパ腫、濾胞性小開裂細胞）、有毛細胞白血病、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫（バーキット様）、リンパ形質細胞性リンパ腫（ワルデンシュトレームマクログロブリン血症）、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（例えば、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫又は粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾臓辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫）、形質細胞腫／骨髄腫、前駆Ｂリンパ芽球性白血病／リンパ腫（ＰＢ−ＬＢＬ／Ｌ）、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫、原発性眼内リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）などのＢ細胞リンパ腫；並びに限定されないが、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病（例えば、くすぶり型、慢性、急性及びリンパ腫性）、血管中心性リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（菌状息肉腫、セザリー症候群など）、節外ナチュラルキラー／Ｔ細胞リンパ腫（鼻型）、腸疾患型腸Ｔ細胞リンパ腫、大顆粒リンパ球性白血病、前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫／白血病（Ｔ−ＬＢＬ／Ｌ）、Ｔ細胞慢性リンパ性白血病／前リンパ球性白血病（Ｔ−ＣＬＬ／ＰＬＬ）及び不特定型末梢Ｔ細胞リンパ腫などのＴ細胞リンパ腫を含む。ホジキンリンパ腫の症状及び徴候は、首、腋窩又は鼠径部のリンパ節の無痛性の腫れ、発熱、寝汗、体重減少、疲労、そう痒、腹痛、咳又は胸痛が含まれる。
【０５３８】
病期分類は、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫の両方について同じであり、体内の癌細胞の広がりの程度を指す。ステージＩでは、リンパ腫細胞は、１つのリンパ節群に存在する。ステージＩＩでは、リンパ腫細胞は、少なくとも２つのリンパ節群に存在するが、両方の群は、横隔膜の同じ側又は組織又は臓器の一部及び横隔膜の同じ側にあるその臓器の近くのリンパ節に存在する。ステージＩＩＩでは、リンパ腫細胞は、横隔膜の両側のリンパ節又はこれらのリンパ節群の近くの組織又は臓器の一部又は脾臓に存在する。ステージＩＶでは、リンパ腫細胞が少なくとも１つの臓器又は組織のいくつかの部分に見られるか、又はリンパ腫細胞が横隔膜の反対側の臓器及びリンパ節に見られる。ローマ数字の病期分類の指定に加えて、病期は、Ａ、Ｂ、Ｅ及びＳの文字で表すこともでき、ここで、Ａは、症状を有しない患者を指し、Ｂは、症状を有する患者を指し、Ｅは、リンパ系外の組織にリンパ腫が見られる患者を指し、Ｓは、脾臓にリンパ腫が見られる患者を指す。
【０５３９】
ホジキンリンパ腫は、通常、放射線療法、化学療法又は造血幹細胞移植で処置される。非ホジキンリンパ腫の最も一般的な療法は、Ｒ−ＣＨＯＰであり、これは、４つの異なる化学療法（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレニゾロン）及びリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））からなる。ＮＨＬの処置に一般的に使用される他の療法には、他の化学療法剤、放射線療法、幹細胞移植（自己又は同種異系骨髄移植）又は免疫療法などの生物学的療法が含まれる。生物学的治療剤の他の例には、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））、エプラツズマブ（ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ（登録商標））及びアレムツズマブ（ＭａｂＣａｍｐａｔｈ（登録商標））が含まれるが、これらに限定されない。本発明の組成物及び方法は、ホジキンリンパ腫又は非ホジキンリンパ腫に対して現在処方されている処置のいずれかと組み合わせて投与され得る。
【０５４０】
ＢＣＭＡの発現は、リンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）としても知られるワルデンシュトレームマクログロブリン血症（ＷＭ）にも関連している。（Ｅｌｓａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２００６，１０７（７）：２８８２−８を参照されたい）。ワルデンシュトレームマクログロブリン血症は、以前には多発性骨髄腫に関連していると考えられていたが、最近では非ホジキンリンパ腫のサブタイプとして分類されている。ＷＭは、無制御のＢ細胞リンパ球増殖を特徴とし、貧血及び過剰量のパラプロテイン又は免疫グロブリンＭ（ＩｇＭ）の産生を引き起こし、これは、血液濃度を高め、過粘稠度症候群を引き起こす。ＷＭの他の症状又は徴候には、発熱、寝汗、疲労、貧血、体重減少、リンパ節腫脹若しくは脾腫、かすみ目、めまい、鼻血、歯茎の出血、異常な打撲傷、腎機能障害若しくは不全、アミロイドーシス又は末梢神経障害が含まれる。
【０５４１】
ＷＭの標準処置は、特にリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））による化学療法からなる。クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｎｅｏｓａｒ（登録商標））、フルダラビン（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標））、クラドリビン（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（登録商標））、ビンクリスチン及び／又はサリドマイドなどの他の化学療法薬を組み合わせて使用することができる。プレドニゾンなどのコルチコステロイドも化学療法と組み合わせて投与することができる。プラズマフェレーシス又は血漿交換は、血液からパラプロテインを除去することによっていくつかの症状を緩和するために、患者の処置全体を通して一般的に使用される。いくつかの場合、幹細胞移植は、一部の患者にとっての選択肢である。
【０５４２】
ＢＣＭＡに関連する疾患又は障害の別の例は、脳腫瘍である。具体的には、ＢＣＭＡの発現は、星状細胞腫又は神経膠芽腫と関連付けられている（Ｄｅｓｈａｙｅｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．２００４，２３（１７）：３００５−１２，Ｐｅｌｅｋａｎｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．２０１３，８（１２）：ｅ８３２５０を参照されたい）。星状細胞腫は、脳内のグリア細胞の一種である星状細胞から発生する腫瘍である。神経膠芽腫（多形神経膠芽腫又はＧＢＭとしても知られる）は、星状細胞腫の最も悪性の形態であり、脳腫瘍の最も進行した病期（ＩＶ期）と考えられている。神経膠芽腫には、２つの変種：巨大細胞膠芽腫及び神経膠肉腫がある。他の星状細胞腫には、若年性毛様細胞性星状細胞腫（ＪＰＡ）、線維性星状細胞腫、多形性黄色星状細胞腫（ＰＸＡ）、胚芽異形成性神経上皮腫瘍（ＤＮＥＴ）及び未分化星状細胞腫（ＡＡ）が含まれる。
【０５４３】
神経膠芽腫又は星状細胞腫に関連する症状又は徴候には、脳内圧の上昇、頭痛、発作、記憶喪失、行動の変化、体の片側の動き又は感覚の喪失、言語機能障害、認知障害、視覚障害、悪心、嘔吐及び腕又は脚の脱力が含まれる。
【０５４４】
腫瘍の外科的除去（又は切除）は、正常な周囲の脳への損傷を与えることなく又は最小限の損傷で可能な限り多くの神経膠腫を除去するための標準処置である。放射線療法及び／又は化学療法は、手術後、残っている癌細胞又は衛星病巣からの再発性疾患を抑制及び遅らせるためによく使用される。放射線療法には、全脳放射線療法（従来の外部ビーム放射線）、標的化三次元原体放射線療法及び標的化放射性核種が含まれる。神経膠芽腫の処置に一般的に使用される化学療法剤には、テモゾロミド、ゲフィチニブ又はエルロチニブ及びシスプラチンが含まれる。ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））などの血管新生阻害剤も化学療法及び／又は放射線療法と組み合わせて一般的に使用される。
【０５４５】
支持的処置はまた、神経学的症状を緩和し、神経学的機能を改善するために頻繁に使用され、本明細書に記載の癌療法のいずれかと組み合わせて投与される。主な支持剤には、抗けいれん薬及びコルチコステロイドが含まれる。従って、本発明の組成物及び方法は、神経膠芽腫又は星状細胞腫を処置するための標準処置又は支持的処置のいずれかと組み合わせて使用され得る。
【０５４６】
ＢＣＭＡ発現に関連する非癌関連疾患及び障害も、本明細書に開示される組成物及び方法によって処置することができる。ＢＣＭＡの発現に関連する非癌関連疾患及び障害の例には、ウイルス感染症；例えば、ＨＩＶ、真菌感染症、例えばクリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃ．ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）；過敏性腸疾患；潰瘍性大腸炎及び粘膜免疫に関連する障害が含まれるが、これらに限定されない。
【０５４７】
本発明のＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞、（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を、単独で或いは希釈剤及び／若しくはＩＬ−２又は他のサイトカイン若しくは細胞集団などの他の成分と組み合わせて医薬組成物として投与し得る。
【０５４８】
本発明は、癌を処置するための組成物及び方法を提供する。一態様において、癌は、血液癌であり、血液癌が白血病又はリンパ腫であるものを含むが、これらに限定されない。一態様において、本発明のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲＴ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を使用して、これらに限定されないが、例えば、これらに限定されないが、例えばＢ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）を含む急性白血病；これらに限定されないが、例えば慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を含む１つ以上の慢性白血病；これらに限定されないが、例えばＢ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞の新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリーセル白血病、小細胞型又は大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性のリンパ増殖性状態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、脊髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽細胞リンパ腫、形質細胞様樹状細胞の新生物、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症及び骨髄の血液細胞の無効な産生（又は異形成）を併せ持つ血液学的な状態の多様な集合体である「前白血病状態」などを含む更なる血液癌又は血液学的状態などの癌及び悪性腫瘍を処置し得る。更に、ＢＣＭＡの発現と関連する疾患は、例えば、非定型及び／又は非古典的な癌、悪性腫瘍、前癌状態又はＢＣＭＡを発現する増殖性疾患を含むが、これらに限定されない。
【０５４９】
実施形態において、本明細書に記載の組成物は、形質細胞増殖性障害、例えば無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無痛性骨髄腫）、意義不明の単クローン性高ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、形質細胞腫（例えば、形質細胞異常増殖症、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外形質細胞腫及び多発性形質細胞腫）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス及びＰＯＥＭＳ症候群（クロウ・深瀬症候群、高月病及びＰＥＰ症候群としても知られる）を含むが、これらに限定されない疾患を処置するために使用することができる。
【０５５０】
実施形態において、本明細書に記載の組成物は、癌、例えば本明細書に記載の癌、例えば前立腺癌（例えば、去勢抵抗性若しくは治療抵抗性の前立腺癌又は転移性前立腺癌）、膵臓癌又は肺癌を含むが、これらに限定されない疾患を処置するために使用することができる。
【０５５１】
本発明は、ＢＣＭＡ発現細胞集団の増殖を阻害するか又はそれを減少させる方法も提供し、本方法は、ＢＭＣＡ発現細胞を含む細胞集団を、ＢＣＭＡ発現細胞に結合する本発明の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ細胞又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）と接触させることを含む。特定の態様において、本発明は、ＢＣＭＡを発現する癌細胞の集団の増殖を阻害するか又はそれを減少させる方法を提供し、本方法は、ＢＣＭＡ発現癌細胞集団を、ＢＣＭＡ発現細胞に結合する本発明の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ細胞又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）と接触させることを含む。一態様において、本発明は、ＢＣＭＡを発現する癌細胞の集団の増殖を阻害するか又はそれを減少させる方法を提供し、本方法は、ＢＭＣＡ発現癌細胞集団を、ＢＣＭＡ発現細胞に結合する本発明の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ細胞又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）と接触させることを含む。特定の態様において、本発明の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ細胞又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）は、細胞及び／又は癌細胞の含量、数、量又はパーセンテージを、陰性対照と比較して、骨髄性白血病又はＢＣＭＡ発現細胞と関連する別の癌を有する対象又は動物モデルで少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６５％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９５％又は少なくとも９９％減少させる。一態様において、対象は、ヒトである。
【０５５２】
本発明は、ＢＣＭＡ発現細胞に関連する疾患（例えば、ＢＣＭＡを発現する血液癌又は非定型癌）を予防、処置及び／又は管理する方法も提供し、本方法は、ＢＣＭＡ発現細胞に結合する本発明の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ細胞又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を、必要とする対象に投与することを含む。一態様において、対象は、ヒトである。ＢＣＭＡ発現細胞に関連する障害の非限定的な例には、ウイルス又は真菌感染症及び粘膜免疫に関連する障害が含まれる。
【０５５３】
本発明は、ＢＣＭＡ発現細胞に関連する疾患を予防、処置及び／又は管理する方法も提供し、本方法は、ＢＣＭＡ発現細胞に結合する本発明の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ細胞又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を、必要とする対象に投与することを含む。一態様において、対象は、ヒトである。
【０５５４】
本発明は、ＢＣＭＡ発現細胞に関連する癌の再発を予防する方法を提供し、本方法は、ＢＣＭＡ発現細胞に結合する本発明の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ細胞又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に投与することを含む。一態様において、方法は、それを必要とする対象に、ＢＣＭＡ発現細胞と結合する有効量の本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ細胞又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を有効量の別の治療と組み合わせて投与することを含む。
【０５５５】
組み合わせ療法
本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、他の公知の薬剤及び療法と組み合わせて使用され得る。
【０５５６】
本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞及び少なくとも１つの更なる治療剤を同時に、同じ又は別の組成物で又は逐次的に投与できる。逐次投与について、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をまず投与し得、更なる薬剤を次に投与し得るか、又は投与の順番が逆であり得る。
【０５５７】
ＣＡＲ治療及び／又は他の治療剤、方法又はモダリティを活動性障害の期間又は寛解又は低活動性疾患の期間に投与できる。ＣＡＲ治療を他の処置の処置前、処置と同時、処置後又は障害の寛解中に投与できる。
【０５５８】
組み合わせて投与するとき、ＣＡＲ治療及び更なる薬剤（例えば、第２又は第三の薬剤）又は全てを、個々に、例えば単剤療法として使用する各薬剤の量又は投与より高い、低い又は同じ量又は用量で投与できる。一実施形態において、ＣＡＲ治療、更なる薬剤（例えば、第２又は第三薬剤）又は全ての投与される量又は用量は、個々に、例えば単剤療法として使用する各薬剤の量又は用量より低い（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％又は少なくとも５０％）。他の実施形態において、所望の効果（例えば、癌の処置）を生じるＣＡＲ治療、更なる薬剤（例えば、第２又は第三薬剤）又は全ての投与される量又は用量は、同じ治療効果を達成するのに必要である、個々に、例えば単剤療法として使用する各薬剤の量又は用量より低い（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％又は少なくとも５０％低い）。
【０５５９】
更なる態様において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、処置レジメンにおいて、手術、化学療法、放射線、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノレート、ＦＫ５０６などの免疫抑制剤、抗体又はＣＡＭＰＡＴＨ、抗ＣＤ３抗体などの他の免疫除去剤若しくは他の抗体療法、サイトキシン、フルダラビン、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８、サイトカイン及び照射、Ｉｚｕｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．２００８  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ  １０８：９６３−９７１に記載されるものなどのペプチドワクチンと組み合わせて使用され得る。
【０５６０】
ある例において、本発明の化合物を他の抗癌剤、抗アレルギー剤、制吐剤（又は制吐剤）、鎮痛剤、細胞保護剤及びこれらの組み合わせなどの他の治療剤と組み合わせる。
【０５６１】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の第１のＣＡＲ発現細胞、例えば本明細書に記載のＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞は、第２のＣＡＲ発現細胞と組み合わせて使用され得る。いくつかの実施形態において、第２のＣＡＲ発現細胞は、異なる抗ＢＭＣＡ結合ドメイン、例えば第１のＣＡＲ発現細胞によって発現されるＣＡＲの抗ＢＣＭＡ結合ドメインと異なる、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ結合ドメインを有するＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態において、第２のＣＡＲ発現細胞は、ＢＣＭＡ以外の抗原（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＳ−１、カッパ軽鎖、ＣＤ１３９、ルイスＹ抗原又はＣＤ３８）を標的とする抗原結合ドメインを含むＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の第１のＣＡＲ発現細胞、例えば本明細書に記載のＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞は、ＣＤ１９  ＣＡＲを含む第２のＣＡＲ発現細胞と組み合わせて使用される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞は、本明細書に記載のＢＣＭＡ関連癌、例えば多発性骨髄腫を処置するために、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞と組み合わせて使用される。いくつかの実施形態において、多発性骨髄腫は、ＣＤ１９陰性であり、例えばＣＤ１９陰性表現型を有する腫瘍性形質細胞の大部分（例えば、少なくとも９８％、９９％、９９．５％、９９．９％又は９９．９５％）を有し、これは、例えばフローサイトメトリー、ＲＴ−ＰＣＲ又はフローサイトメトリー及びＲＴ−ＰＣＲの両方で検出される。ＣＤ１９  ＣＡＲは、ＣＤ１９陰性多発性骨髄腫に対しても有効である。理論に拘束されることを望まないが、ＣＤ１９  ＣＡＲは、本明細書に記載のアッセイの検出閾値を下回るレベルのＣＤ１９を発現する細胞を標的とすることにより又は腫瘍性細胞をサポートする非腫瘍性細胞を標的とすることにより、腫瘍性細胞の小さいが重要なＣＤ１９陽性集団に作用し得る。実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲは、Ｂ細胞、例えばＢ制御性Ｂ細胞を除去することができる。
【０５６２】
例えば、いくつかの実施形態において、本明細書に記載の第１のＣＡＲ発現細胞、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞及び本明細書に記載の第２のＣＡＲ発現細胞、例えばＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞は、同じ組成物中に調製され、同時に投与される。別の実施形態において、本明細書に記載の第１のＣＡＲ発現細胞、例えばＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞及び本明細書に記載の第２のＣＡＲ発現細胞、例えばＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞は、別個の組成物中に調製され、別個の組成物は同時に又は連続して投与される。ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞と第２のＣＡＲ発現細胞を別個の組成物中に調製する場合、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞を最初に投与でき、第２のＣＡＲ発現細胞を２番目に投与できるか、又は投与の順番を逆にできる。
【０５６３】
いくつかの実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲは、ＣＤ１９  ＣＡＲ、例えば２０１４年３月１５日に出願された国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレット（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載のヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ又はそれと少なくとも９５％、例えば９５〜９９％同一の配列である。いくつかの実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲ構築物は、ＰＣＴ国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレット（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に提供されるＣＡＲ１９構築物又はそれと少なくとも９５％、例えば９５〜９９％同一の配列である。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ１９結合ドメインは、国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレットに記載のｓｃＦｖ又はそれと少なくとも９５％、例えば９５〜９９％同一の配列である。
【０５６４】
実施形態において、第１のＣＡＲ発現細胞が対象に投与され、第２のＣＡＲ発現細胞が対象に投与される。実施形態において、第１のＣＡＲ発現細胞は、ＣＤ２７共刺激ドメイン及びＣＤ３ゼータ（変異型又は野生型）一次シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲ（例えば、ＢＣＭＡ又はＣＤ１９  ＣＡＲ）を含む。実施形態において、第２のＣＡＲ発現細胞は、４−１ＢＢ共刺激ドメイン及びＣＤ３ゼータ（変異型又は野生型）一次シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲ（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ）を含む。理論に拘束されることを望まないが、実施形態において、第１のＣＡＲ発現細胞は、第２のＣＡＲ発現細胞よりも毒性が低く、腫瘍を減量するために使用することができる。
【０５６５】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を化学療法剤と組み合わせて使用できる。例示的な化学療法剤は、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン（例えば、リポソームドキソルビシン））、ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン）、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、ダカルバジン、メルファラン、イホスファミド、テモゾロミド）、免疫細胞抗体（例えば、アレムツズマブ、ゲムツズマブ、リツキシマブ、トシツモマブ）、代謝拮抗剤（例えば、葉酸アンタゴニスト、ピリミジン類似体、プリン類似体及びアデノシンデアミナーゼ阻害剤（例えば、フルダラビン））、ｍＴＯＲ阻害剤、ＴＮＦＲグルココルチコイド誘発ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）アゴニスト、プロテアソーム阻害剤（例えば、アクラシノマイシンＡ、グリオトキシン又はボルテゾミブ）、サリドマイド又はサリドマイド誘導体（例えば、レナリドマイド）などの免疫調節剤を含む。
【０５６６】
併用療法における使用が企図される一般的化学療法剤は、アナストロゾール（アリミデックス（登録商標））、ビカルタミド（カソデックス（登録商標））、硫酸ブレオマイシン（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））、ブスルファン（マイレラン（登録商標））、ブスルファン注（ブスルフェクス（登録商標））、カペシタビン（ゼローダ（登録商標））、Ｎ４−ペントキシカルボニル−５−デオキシ−５−フルオロシチジン、カルボプラチン（パラプラチン（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、クロラムブシル（リューケラン（登録商標））、シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））、クラドリビン（ロイスタチン（登録商標））、シクロホスファミド（シトキサン（登録商標）又はＮｅｏｓａｒ（登録商標））、シタラビン、シトシンアラビノシド（Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標））、シタラビンリポソーム注射（ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ、Ｃｏｓｍｅｇａｎ）、塩酸ダウノルビシン（Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））、クエン酸ダウノルビシンリポソーム注射（ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））、デキサメサゾン、ドセタキセル（タキソテール（登録商標））、塩酸ドキソルビシン（アドリアマイシン（登録商標）、Ｒｕｂｅｘ（登録商標））、エトポシド（ベプシド（登録商標））、リン酸フルダラビン（フルダラ（登録商標））、５−フルオロウラシル（アドルシル（登録商標）、エフデックス（登録商標））、フルタミド（Ｅｕｌｅｘｉｎ（登録商標））、テザシチビン、ゲムシタビン（ジフルオロデオキシシチジン）、ヒドロキシ尿素（ハイドレア（登録商標））、イダルビシン（イダマイシン（登録商標））、イホスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））、イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標））、Ｌ−アスパラギナーゼ（ＥＬＳＰＡＲ（登録商標））、ロイコボリンカルシウム、メルファラン（アルケラン（登録商標））、６−メルカプトプリン（ピュリネソール（登録商標））、メトトレキサート（Ｆｏｌｅｘ（登録商標））、ミトキサントロン（ノバントロン（登録商標））、マイロターグ、パクリタキセル（タキソール（登録商標））、ｐｈｏｅｎｉｘ（イットリウム９０／ＭＸ−ＤＴＰＡ）、ペントスタチン、ポリフェプロザン２０とカルムスチンインプラント（グリアデル（登録商標））、クエン酸タモキシフェン（ノルバデックス（登録商標））、テニポシド（Ｖｕｍｏｎ（登録商標））、６−チオグアニン、チオテパ、チラパザミン（Ｔｉｒａｚｏｎｅ（登録商標））、注射用塩酸トポテカン（ハイカムチン（登録商標））、ビンブラスチン（Ｖｅｌｂａｎ（登録商標））、ビンクリスチン（オンコビン（登録商標））及びビノレルビン（ナベルビン（登録商標））を含む。
【０５６７】
本発明の化合物との組み合わせのための特に興味深い抗癌剤は、アントラサイクリン；アルキル化剤；代謝拮抗剤；カルシウム依存性ホスファターゼカルシニューリン又はｐ７０Ｓ６キナーゼＦＫ５０６）を阻害する又はｐ７０Ｓ６キナーゼを阻害する薬剤；ｍＴＯＲ阻害剤；免疫調節剤；アントラサイクリン；ビンカアルカロイド；プロテオソーム阻害剤；ＧＩＴＲアゴニストタンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤；ＣＤＫ４キナーゼ阻害剤；ＢＴＫ阻害剤；ＭＫＮキナーゼ阻害剤；ＤＧＫキナーゼ阻害剤；又は腫瘍溶解性ウイルスを含む。
【０５６８】
例示的なアルキル化剤は、窒素マスタード、エチレンイミン誘導体、アルキルスルホネート、ニトロソウレア類及びトリアゼン）：ウラシルマスタード（アミノウラシルマスタード（登録商標）、Ｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎａｃｉｌ（登録商標）、Ｄｅｍｅｔｈｙｌｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｄｅｓｍｅｔｈｙｌｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｈａｅｍａｎｔｈａｍｉｎｅ（登録商標）、Ｎｏｒｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌ  ｎｉｔｒｏｇｅｎ  ｍｕｓｔａｒｄ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌｌｏｓｔ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌｍｏｓｔａｚａ（登録商標）、ウラムスチン（登録商標）、ウラムスチン（登録商標））、クロルメチン（Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標））、シクロホスファミド（シトキサン（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、Ｃｌａｆｅｎ（登録商標）、エンドキサン（登録商標）、Ｐｒｏｃｙｔｏｘ（登録商標）、Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ（商標））、イホスファミド（Ｍｉｔｏｘａｎａ（登録商標））、メルファラン（アルケラン（登録商標））、クロラムブシル（リューケラン（登録商標））、ピポブロマン（Ａｍｅｄｅｌ（登録商標）、Ｖｅｒｃｙｔｅ（登録商標））、トリエチレンメラミン（ヘメル（登録商標）、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標）、Ｈｅｘａｓｔａｔ（登録商標））、トリエチレンチオホスホロアミン、テモゾロミド（テモダール（登録商標））、チオテパ（Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標））、ブスルファン（Ｂｕｓｉｌｖｅｘ（登録商標）、マイレラン（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、ロムスチン（ＣｅｅＮＵ（登録商標））、ストレプトゾシン（Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標））及びダカルバジン（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））を含むが、これらに限定されない。アルキル化剤の更なる例は、オキサリプラチン（エロキサチン（登録商標））；テモゾロミド（テモダール（登録商標）及びテモダール（登録商標））；ダクチノマイシン（別名アクチノマイシン−Ｄ、Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（登録商標））；メルファラン（別名Ｌ−ＰＡＭ、Ｌ−サルコリシン及びフェニルアラニンマスタード、アルケラン（登録商標））；アルトレタミン（別名ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標））；カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））；ベンダムスチン（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標））；ブスルファン（ブスルフェクス（登録商標）及びマイレラン（登録商標））；カルボプラチン（パラプラチン（登録商標））；ロムスチン（別名ＣＣＮＵ、ＣｅｅＮＵ（登録商標））；シスプラチン（別名ＣＤＤＰ、Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）及びＰｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）−ＡＱ）；クロラムブシル（リューケラン（登録商標））；シクロホスファミド（シトキサン（登録商標）及びＮｅｏｓａｒ（登録商標））；ダカルバジン（別名ＤＴＩＣ、ＤＩＣ及びイミダゾールカルボキサミド、ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））；アルトレタミン（別名ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標））；イホスファミド（Ｉｆｅｘ（登録商標））；Ｐｒｅｄｎｕｍｕｓｔｉｎｅ；プロカルバジン（Ｍａｔｕｌａｎｅ（登録商標））；メクロレタミン（別名窒素マスタード、ムスチン及び塩酸メクロロエタミン、Ｍｕｓｔ��ｒｇｅｎ（登録商標））；ストレプトゾシン（Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標））；チオテパ（別名チオホスホアミド、ＴＥＳＰＡ及びＴＳＰＡ、Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標））；シクロホスファミド（エンドキサン（登録商標）、シトキサン（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、Ｐｒｏｃｙｔｏｘ（登録商標）、Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ（登録商標））；及びベンダムスチンＨＣｌ（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標））を含むが、これらに限定されない。
【０５６９】
例示的なｍＴＯＲ阻害剤は、例えば、テムシロリムス；リダフォロリムス（以前はデフェロリムスとして既知、（１Ｒ，２Ｒ，４Ｓ）−４−［（２Ｒ）−２−［（１Ｒ，９Ｓ，１２Ｓ，１５Ｒ，１６Ｅ，１８Ｒ，１９Ｒ，２１Ｒ，２３Ｓ，２４Ｅ，２６Ｅ，２８Ｚ，３０Ｓ，３２Ｓ，３５Ｒ）−１，１８−ジヒドロキシ−１９，３０−ジメトキシ−１５，１７，２１，２３，２９，３５−ヘキサメチル−２，３，１０，１４，２０−ペンタオキソ−１１，３６−ジオキサ−４−アザトリシクロ［３０．３．１．０４，９］ヘキサトリアコンタ−１６，２４，２６，２８−テトラエン−１２−イル］プロピル］−２−メトキシシクロヘキシルジメチルホスフィネート、ＡＰ２３５７３及びＭＫ８６６９としても知られ、国際公開第０３／０６４３８３号パンフレットに記載）；エベロリムス（アフィニトール（登録商標）又はＲＡＤ００１）；ラパマイシン（ＡＹ２２９８９、シロリムス（登録商標））；シマピモド（ＣＡＳ  １６４３０１−５１−３）；エムシロリムス、（５−｛２，４−ビス［（３Ｓ）−３−メチルモルホリン−４−イル］ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル｝−２−メトキシフェニル）メタノール（ＡＺＤ８０５５）；２−アミノ−８−［トランス−４−（２−ヒドロキシエトキシ）シクロヘキシル］−６−（６−メトキシ−３−ピリジニル）−４−メチル−ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（ＰＦ０４６９１５０２、ＣＡＳ  １０１３１０１−３６−４）；及びＮ２−［１，４−ジオキソ−４−［［４−（４−オキソ−８−フェニル−４Ｈ−１−ベンゾピラン−２−イル）モルホリニウム−４−イル］メトキシ］ブチル］−Ｌ−アルギニルグリシル−Ｌ−α−アスパルチルＬ−セリン−（配列番号２８５）、分子内塩（ＳＦ１１２６、ＣＡＳ  ９３６４８７−６７−１）及びＸＬ７６５を含む。
【０５７０】
例示的な免疫調節剤は、例えば、アフツズマブ（Ｒｏｃｈｅ（登録商標）から入手可能）；ペグフィルグラスチム（Ｎｅｕｌａｓｔａ（登録商標））；レナリドマイド（ＣＣ−５０１３、レブリミド（登録商標））；サリドマイド（サロミド（登録商標））、アクチミド（ＣＣ４０４７）；及びＩＲＸ−２（インターロイキン１、インターロイキン２及びインターフェロンγを含むヒトサイトカイン混合物、ＣＡＳ  ９５１２０９−７１−５、ＩＲＸ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓから入手可能）を含む。
【０５７１】
例示的なアントラサイクリンは、例えば、ドキソルビシン（アドリアマイシン（登録商標）及びＲｕｂｅｘ（登録商標））；ブレオマイシン（ｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））；ダウノルビシン（塩酸ダウノルビシン、ダウノマイシン及び塩酸ルビドマイシン、Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））；ダウノルビシンリポソーム（クエン酸ダウノルビシンリポソーム、ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））；ミトキサントロン（ＤＨＡＤ、ノバントロン（登録商標））；エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（商標））；イダルビシン（イダマイシン（登録商標）、イダマイシンＰＦＳ（登録商標））；マイトマイシンＣ（ムタマイシン（登録商標））；ゲルダナマイシン；ハービマイシン；ラビドマイシン；及びデスアセチルラビドマイシンを含む。
【０５７２】
例示的なビンカアルカロイドは、例えば、酒石酸ビノレルビン（ナベルビン（登録商標））、ビンクリスチン（オンコビン（登録商標））及びビンデシン（Ｅｌｄｉｓｉｎｅ（登録商標）））；ビンブラスチン（別名硫酸ビンブラスチン、ビンカロイコブラスチン及びＶＬＢ、Ａｌｋａｂａｎ−ＡＱ（登録商標）及びＶｅｌｂａｎ（登録商標））；及びビノレルビン（ナベルビン（登録商標））を含む。
【０５７３】
例示的なプロテオソーム阻害剤は、ボルテゾミブ（ベルケイド（登録商標））；カーフィルゾミブ（ＰＸ−１７１−００７、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）−ペンタンアミド）；マリゾミブ（ＮＰＩ−００５２）；イキサゾミブクエン酸エステル（ＭＬＮ−９７０８）；デランゾミブ（ＣＥＰ−１８７７０）；及びＯ−メチル−Ｎ−［（２−メチル−５−チアゾリル）カルボニル］−Ｌ−セリル−Ｏ−メチル−Ｎ−［（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−２−メチル−２−オキシラニル］−２−オキソ−１−（フェニルメチル）エチル］−Ｌ−セリンアミド（ＯＮＸ−０９１２）を含む。
【０５７４】
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をフルダラビン、シクロホスファミド及び／又はリツキシマブと組み合わせて対象に投与する。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をフルダラビン、シクロホスファミド及びリツキシマブ（ＦＣＲ）と組み合わせて対象に投与する。実施形態において、対象は、ＣＬＬを有する。例えば、対象は、染色体１７の短腕に欠失を有する（例えば、白血病性細胞におけるｄｅｌ（１７ｐ））。他の例において、対象は、ｄｅｌ（１７ｐ）を有しない。実施形態において、対象は、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＩｇＶＨ）遺伝子に変異を含む白血病性細胞を含む。他の実施形態において、対象は、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＩｇＶＨ）遺伝子に変異を含む白血病性細胞を含まない。実施形態において、フルダラビンを約１０〜５０ｍｇ／ｍ２（例えば、約１０〜１５、１５〜２０、２０〜２５、２５〜３０、３０〜３５、３５〜４０、４０〜４５又は４５〜５０ｍｇ／ｍ２）の用量で例えば静脈内に投与する。実施形態において、シクロホスファミドを約２００〜３００ｍｇ／ｍ２（例えば、約２００〜２２５、２２５〜２５０、２５０〜２７５又は２７５〜３００ｍｇ／ｍ２）の用量で例えば静脈内に投与する。実施形態において、リツキシマブを約４００〜６００ｍｇ／ｍ２（例えば、４００〜４５０、４５０〜５００、５００〜５５０又は５５０〜６００ｍｇ／ｍ２）の用量で例えば静脈内に投与する。
【０５７５】
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をベンダムスチン及びリツキシマブと組み合わせて対象に投与する。実施形態において、対象は、ＣＬＬを有する。例えば、対象は、染色体１７の短腕に欠失を有する（例えば、白血病性細胞におけるｄｅｌ（１７ｐ））。他の例において、対象は、ｄｅｌ（１７ｐ）を有しない。実施形態において、対象は、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＩｇＶＨ）遺伝子に変異を含む白血病性細胞を含む。他の実施形態において、対象は、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＩｇＶＨ）遺伝子に変異を含む白血病性細胞を含まない。実施形態において、ベンダムスチンを約７０〜１１０ｍｇ／ｍ２（例えば、７０〜８０、８０〜９０、９０〜１００又は１００〜１１０ｍｇ／ｍ２）の用量で例えば静脈内に投与する。実施形態において、リツキシマブを約４００〜６００ｍｇ／ｍ２（例えば、４００〜４５０、４５０〜５００、５００〜５５０又は５５０〜６００ｍｇ／ｍ２）の用量で例えば静脈内に投与する。
【０５７６】
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をリツキシマブ、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及び／又はコルチコステロイド（例えば、プレドニゾン）と組み合わせて対象に投与する。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をリツキシマブ、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾン（Ｒ−ＣＨＯＰ）と組み合わせて対象に投与する。実施形態において、対象は、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）を有する。実施形態において、対象は、巨大腫瘤がない限局したステージのＤＬＢＣＬ（例えば、７ｃｍ未満のサイズ／直径の腫瘍を含む）を有する。実施形態において、対象は、Ｒ−ＣＨＯＰと組み合わせて放射線で処置される。例えば、対象に、Ｒ−ＣＨＯＰ（例えば、１〜６サイクル、例えば１、２、３、４、５又は６サイクルのＲ−ＣＨＯＰ）、続いて放射線を投与する。ある場合、対象に、放射線後、Ｒ−ＣＨＯＰ（例えば、１〜６サイクル、例えば１、２、３、４、５又は６サイクルのＲ−ＣＨＯＰ）を投与する。
【０５７７】
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をエトポシド、プレドニゾン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、ドキソルビシン及び／又はリツキシマブと組み合わせて対象に投与する。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をエトポシド、プレドニゾン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、ドキソルビシン及びリツキシマブ（ＥＰＯＣＨ−Ｒ）と組み合わせて対象に投与する。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を用量調節ＥＰＯＣＨ−Ｒ（ＤＡ−ＥＰＯＣＨ−Ｒ）と組み合わせて対象に投与する。実施形態において、対象は、Ｂ細胞リンパ腫、例えばＭｙｃ再配列侵襲性Ｂ細胞リンパ腫を有する。
【０５７８】
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をリツキシマブ及び／又はレナリドマイドと組み合わせて対象に投与する。レナリドマイド（（ＲＳ）−３−（４−アミノ−１−オキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオン）は、免疫調節剤である。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をリツキシマブ及びレナリドマイドと組み合わせて対象に投与する。実施形態において、対象は、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）又はマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）を有する。実施形態において、対象は、ＦＬを有し、癌治療剤で先に処置されていない。実施形態において、レナリドマイドを約１０〜２０ｍｇ（例えば、１０〜１５ｍｇ又は１５〜２０ｍｇ）の用量で例えば連日投与する。実施形態において、リツキシマブを約３５０〜５５０ｍｇ／ｍ２（例えば、３５０〜３７５、３７５〜４００、４００〜４２５、４２５〜４５０、４５０〜４７５又は４７５〜５００ｍｇ／ｍ２）の用量で例えば静脈内投与する。
【０５７９】
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をブレンツキシマブと組み合わせて対象に投与する。ブレンツキシマブは、抗ＣＤ３０抗体及びモノメチルオーリスタチンＥの抗体−薬物コンジュゲートである。実施形態において、対象は、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、例えば再発性又は難治性ＨＬを有する。実施形態において、対象は、ＣＤ３０＋  ＨＬを含む。実施形態において、対象は、自己幹細胞移植（ＡＳＣＴ）を受けている。実施形態において、対象は、ＡＳＣＴを受けていない。実施形態において、ブレンツキシマブを約１〜３ｍｇ／ｋｇ（例えば、約１〜１．５ｍｇ／ｋｇ、１．５〜２ｍｇ／ｋｇ、２〜２．５ｍｇ／ｋｇ又は２．５〜３ｍｇ／ｋｇ）で例えば静脈内に例えば３週間毎に投与する。
【０５８０】
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をブレンツキシマブ及びダカルバジン又はブレンツキシマブとベンダムスチンとの組み合わせと組み合わせて対象に投与する。ダカルバジンは、化学名５−（３，３−ジメチル−１−トリアゼニル）イミダゾール−４−カルボキサミドを有するアルキル化剤である。ベンダムスチンは、化学名４−［５−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−１−メチルベンズイミダゾール−２−イル］ブタン酸を有するアルキル化剤である。実施形態において、対象は、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）を有する。実施形態において、対象は、癌治療剤で先に処置されていない。実施形態において、対象は、少なくとも６０歳、例えば６０歳、６５歳、７０歳、７５歳、８０歳、８５歳又はそれを超える。実施形態において、ダカルバジンを約３００〜４５０ｍｇ／ｍ２（例えば、約３００〜３２５ｍｇ／ｍ２、３２５〜３５０ｍｇ／ｍ２、３５０〜３７５ｍｇ／ｍ２、３７５〜４００ｍｇ／ｍ２、４００〜４２５ｍｇ／ｍ２又は４２５〜４５０ｍｇ／ｍ２）の用量で例えば静脈内に投与する。実施形態において、ベンダムスチンを約７５〜１２５ｍｇ／ｍ２（例えば、７５〜１００ｍｇ／ｍ２又は１００〜１２５ｍｇ／ｍ２、例えば約９０ｍｇ／ｍ２）の用量で例えば静脈内に投与する。実施形態において、ブレンツキシマブを約１〜３ｍｇ／ｋｇ（例えば、約１〜１．５ｍｇ／ｋｇ、１．５〜２ｍｇ／ｋｇ、２〜２．５ｍｇ／ｋｇ又は２．５〜３ｍｇ／ｋｇ）で例えば静脈内に例えば３週間毎に投与する。
【０５８１】
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を対象にＣＤ２０阻害剤、例えば抗ＣＤ２０抗体（例えば、抗ＣＤ２０単又は二特異的抗体）又はそのフラグメントと組み合わせて投与する。例示的な抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブ、オファツムマブ、オクレリズマブ、ベルツズマブ、オビヌツズマブ、ＴＲＵ−０１５（Ｔｒｕｂｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、オカラツズマブ及びＰｒｏ１３１９２１（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）を含むが、これらに限定されない。例えば、Ｌｉｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ．９５．１（２０１０）：１３５−４３を参照されたい。
【０５８２】
一実施形態において、抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブを含む。リツキシマブは、例えば、ｗｗｗ．ａｃｃｅｓｓｄａｔａ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｄｒｕｇｓａｔｆｄａ＿ｄｏｃｓ／ｌａｂｅｌ／２０１０／１０３７０５ｓ５３１１ｌｂｌ．ｐｄｆに記載のように、ＣＤ２０に結合し、ＣＤ２０発現細胞の細胞溶解を起こすキメラマウス／ヒトモノクローナル抗体ＩｇＧ１カッパである。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をリツキシマブと組み合わせて対象に投与する。実施形態において、対象は、ＣＬＬ又はＳＬＬを有する。
【０５８３】
一実施形態において、リツキシマブを静脈内に例えば静脈内点滴として投与する。例えば、各点滴は、約５００〜２０００ｍｇ（例えば、約５００〜５５０ｍｇ、５５０〜６００ｍｇ、６００〜６５０ｍｇ、６５０〜７００ｍｇ、７００〜７５０ｍｇ、７５０〜８００ｍｇ、８００〜８５０ｍｇ、８５０〜９００ｍｇ、９００〜９５０ｍｇ、９５０〜１０００ｍｇ、１０００〜１１００ｍｇ、１１００〜１２００ｍｇ、１２００〜１３００ｍｇ、１３００〜１４００ｍｇ、１４００〜１５００ｍｇ、１５００〜１６００ｍｇ、１６００〜１７００ｍｇ、１７００〜１８００ｍｇ、１８００〜１９００ｍｇ又は１９００〜２０００ｍｇ）のリツキシマブを提供する。一実施形態において、リツキシマブを１５０ｍｇ／ｍ２〜７５０ｍｇ／ｍ２、例えば約１５０〜１７５ｍｇ／ｍ２、１７５〜２００ｍｇ／ｍ２、２００〜２２５ｍｇ／ｍ２、２２５〜２５０ｍｇ／ｍ２、２５０〜３００ｍｇ／ｍ２、３００〜３２５ｍｇ／ｍ２、３２５〜３５０ｍｇ／ｍ２、３５０〜３７５ｍｇ／ｍ２、３７５〜４００ｍｇ／ｍ２、４００〜４２５ｍｇ／ｍ２、４２５〜４５０ｍｇ／ｍ２、４５０〜４７５ｍｇ／ｍ２、４７５〜５００ｍｇ／ｍ２、５００〜５２５ｍｇ／ｍ２、５２５〜５５０ｍｇ／ｍ２、５５０〜５７５ｍｇ／ｍ２、５７５〜６００ｍｇ／ｍ２、６００〜６２５ｍｇ／ｍ２、６２５〜６５０ｍｇ／ｍ２、６５０〜６７５ｍｇ／ｍ２又は６７５〜７００ｍｇ／ｍ２の用量で投与し、ここで、ｍ２は、対象の体表面積を示す。一実施形態において、リツキシマブを少なくとも４日、例えば４日、７日、１４日、２１日、２８日、３５日又はそれを超える投薬間隔で投与する。例えば、リツキシマブを少なくとも０．５週間、例えば０．５週間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間又はそれを超える投薬間隔で投与する。一実施形態において、リツキシマブを一定期間、例えば少なくとも２週間、例えば少なくとも２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、１３週間、１４週間、１５週間、１６週間、１７週間、１８週間、１９週間、２０週間又はそれより長く、本明細書に記載の用量及び投薬間隔で投与する。例えば、リツキシマブを本明細書に記載の用量及び投薬間隔で１処置サイクル当たり計少なくとも４回の投与で投与する（例えば、１処置サイクル当たり少なくとも４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６回又はそれを超える投与）。
【０５８４】
一実施形態において、抗ＣＤ２０抗体は、オファツムマブを含む。オファツムマブは、分子量約１４９ｋＤａを有する抗ＣＤ２０  ＩｇＧ１κヒトモノクローナル抗体である。例えば、オファツムマブは、トランスジェニックマウス及びハイブリドーマ技術を使用して産生し、組み換えマウス細胞株（ＮＳ０）から発現及び精製する。例えば、ｗｗｗ．ａｃｃｅｓｓｄａｔａ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｄｒｕｇｓａｔｆｄａ＿ｄｏｃｓ／ｌａｂｅｌ／２００９／１２５３２６ｌｂｌ．ｐｄｆ；及びＣｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  ｎｕｍｂｅｒ  ＮＣＴ０１３６３１２８、ＮＣＴ０１５１５１７６、ＮＣＴ０１６２６３５２及びＮＣＴ０１３９７５９１を参照されたい。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をオファツムマブと組み合わせて対象に投与する。実施形態において、対象は、ＣＬＬ又はＳＬＬを有する。
【０５８５】
一実施形態において、オファツムマブを静脈内点滴として投与する。例えば、各点滴は、約１５０〜３０００ｍｇ（例えば、約１５０〜２００ｍｇ、２００〜２５０ｍｇ、２５０〜３００ｍｇ、３００〜３５０ｍｇ、３５０〜４００ｍｇ、４００〜４５０ｍｇ、４５０〜５００ｍｇ、５００〜５５０ｍｇ、５５０〜６００ｍｇ、６００〜６５０ｍｇ、６５０〜７００ｍｇ、７００〜７５０ｍｇ、７５０〜８００ｍｇ、８００〜８５０ｍｇ、８５０〜９００ｍｇ、９００〜９５０ｍｇ、９５０〜１０００ｍｇ、１０００〜１２００ｍｇ、１２００〜１４００ｍｇ、１４００〜１６００ｍｇ、１６００〜１８００ｍｇ、１８００〜２０００ｍｇ、２０００〜２２００ｍｇ、２２００〜２４００ｍｇ、２４００〜２６００ｍｇ、２６００〜２８００ｍｇ又は２８００〜３０００ｍｇ）のオファツムマブを投与する。実施形態において、オファツムマブを約３００ｍｇの出発用量、続いて２０００ｍｇ、例えば約１１用量で例えば２４週間投与する。一実施形態において、オファツムマブを少なくとも４日、例えば４日、７日、１４日、２１日、２８日、３５日又はそれを超える投薬間隔で投与する。例えば、オファツムマブを少なくとも１週間、例えば１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、２４週間、２６週間、２８週間、２０週間、２２週間、２４週間、２６週間、２８週間、３０週間又はそれを超える投薬間隔で投与する。一実施形態において、オファツムマブを一定期間、例えば少なくとも１週間、例えば１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、１３週間、１４週間、１５週間、１６週間、１７週間、１８週間、１９週間、２０週間、２２週間、２４週間、２６週間、２８週間、３０週間、４０週間、５０週間、６０週間若しくはそれを超えるか、又は１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月若しくはそれを超えるか、又は１年、２年、３年、４年、５年若しくはそれを超えて、本明細書に記載の用量及び投薬間隔で投与する。例えば、オファツムマブを１処置サイクル当たり計少なくとも２用量において本明細書に記載の用量及び投薬間隔で投与する（例えば、１処置サイクル当たり少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１８、２０又はそれを超える用量）。
【０５８６】
ある場合、抗ＣＤ２０抗体は、オクレリズマブを含む。オクレリズマブは、例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌｓ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｎｏｓ．ＮＣＴ０００７７８７０、ＮＣＴ０１４１２３３３、ＮＣＴ００７７９２２０、ＮＣＴ００６７３９２０、ＮＣＴ０１１９４５７０及びＫａｐｐｏｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｌａｎｃｅｔ．１９．３７８（２０１１）：１７７９−８７に記載のようなヒト化抗ＣＤ２０モノクローナル抗体である。
【０５８７】
ある場合、抗ＣＤ２０抗体は、ベルツズマブを含む。ベルツズマブは、ＣＤ２０に対するヒト化モノクローナル抗体である。例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｎｏ．ＮＣＴ００５４７０６６、ＮＣＴ００５４６７９３、ＮＣＴ０１１０１５８１及びＧｏｌｄｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｌｅｕｋ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ．５１（５）（２０１０）：７４７−５５を参照されたい。
【０５８８】
ある場合、抗ＣＤ２０抗体は、ＧＡ１０１を含む。ＧＡ１０１（オビヌツズマブ又はＲＯ５０７２７５９とも称する）は、ヒト化及び糖鎖改変抗ＣＤ２０モノクローナル抗体である。例えば、Ｒｏｂａｋ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ．１０．６（２００９）：５８８−９６；Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｎｕｍｂｅｒｓ：ＮＣＴ０１９９５６６９、ＮＣＴ０１８８９７９７、ＮＣＴ０２２２９４２２及びＮＣＴ０１４１４２０５；並びにｗｗｗ．ａｃｃｅｓｓｄａｔａ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｄｒｕｇｓａｔｆｄａ＿ｄｏｃｓ／ｌａｂｅｌ／２０１３／１２５４８６ｓ０００ｌｂｌ．ｐｄｆを参照されたい。
【０５８９】
ある場合、抗ＣＤ２０抗体は、ＡＭＥ−１３３ｖを含む。ＡＭＥ−１３３ｖ（ＬＹ２４６９２９８又はオカラツズマブとも称する）は、リツキシマブと比較してＦｃγＲＩＩＩａ受容体に対する親和性が増加し、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性が増強された、ＣＤ２０に対するヒト化ＩｇＧ１モノクローナル抗体である。例えば、Ｒｏｂａｋ  ｅｔ  ａｌ．ＢｉｏＤｒｕｇｓ  ２５．１（２０１１）：１３−２５；及びＦｏｒｅｒｏ−Ｔｏｒｒｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１８．５（２０１２）：１３９５−４０３を参照されたい。
【０５９０】
ある場合、抗ＣＤ２０抗体は、ＰＲＯ１３１９２１を含む。ＰＲＯ１３１９２１は、リツキシマブと比較してＦｃγＲＩＩＩａへの結合が良好であり、ＡＤＣＣが増強されるように操作されたヒト化抗ＣＤ２０モノクローナル抗体である。例えば、Ｒｏｂａｋ  ｅｔ  ａｌ．ＢｉｏＤｒｕｇｓ  ２５．１（２０１１）：１３−２５；及びＣａｓｕｌｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４．１（２０１４）：３７−４６；及びＣｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｎｏ．ＮＣＴ００４５２１２７を参照されたい。
【０５９１】
ある場合、抗ＣＤ２０抗体は、ＴＲＵ−０１５を含む。ＴＲＵ−０１５は、ＣＤ２０に対する抗体のドメイン由来の抗ＣＤ２０融合タンパク質である。ＴＲＵ−０１５は、モノクローナル抗体より小さいが、Ｆｃ介在エフェクター機能を保持する。例えば、Ｒｏｂａｋ  ｅｔ  ａｌ．ＢｉｏＤｒｕｇｓ  ２５．１（２０１１）：１３−２５を参照されたい。ＴＲＵ−０１５は、ヒトＩｇＧ１ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインに連結した抗ＣＤ２０一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含むが、ＣＨ１及びＣＬドメインを欠く。
【０５９２】
一実施形態において、本明細書に記載の抗ＣＤ２０抗体を治療剤、例えば本明細書に記載の化学療法剤（例えば、シトキサン、フルダラビン、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、デメチル化剤、ペプチドワクチン、抗腫瘍抗生物質、チロシンキナーゼ阻害剤、アルキル化剤、抗微小管又は有糸分裂阻害剤）、抗アレルギー剤、制吐剤（又は制吐剤）、鎮痛剤又は細胞保護的薬剤にコンジュゲート又は他の方法で結合する。
【０５９３】
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＢ細胞リンパ腫２（ＢＣＬ−２）阻害剤（例えば、ＡＢＴ−１９９又はＧＤＣ−０１９９とも称されるベネトクラクス）及び／又はリツキシマブと組み合わせて対象に投与する。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をベネトクラクス及びリツキシマブと組み合わせて対象に投与する。ベネトクラクスは、抗アポトーシスタンパク質、ＢＣＬ−２を阻害する小分子である。ベネトクラクス（４−（４−｛［２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロｈｅｘ−１−エン−１−イル］メチル｝ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（｛３−ニトロ−４−［（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルメチル）アミノ］フェニル｝スルホニル）−２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）ベンズアミド）の構造を下に示す。
【化１０】
2021526814.tif 000063
【０５９４】
実施形態において、対象は、ＣＬＬを有する。実施形態において、対象は、再発したＣＬＬを有し、例えば、対象は、先に癌治療を投与されている。実施形態において、ベネトクラクスを約１５〜６００ｍｇ（例えば、１５〜２０ｍｇ、２０〜５０ｍｇ、５０〜７５ｍｇ、７５〜１００ｍｇ、１００〜２００ｍｇ、２００〜３００ｍｇ、３００〜４００ｍｇ、４００〜５００ｍｇ又は５００〜６００ｍｇ）で例えば連日投与する。実施形態において、リツキシマブを約３５０〜５５０ｍｇ／ｍ２（例えば、３５０〜３７５ｍｇ／ｍ２、３７５〜４００ｍｇ／ｍ２、４００〜４２５ｍｇ／ｍ２、４２５〜４５０ｍｇ／ｍ２、４５０〜４７５ｍｇ／ｍ２又は４７５〜５００ｍｇ／ｍ２）で例えば静脈内に例えば毎月投与する。
【０５９５】
理論に拘束されるものではないが、いくつかの癌において、Ｂ細胞（例えば、Ｂ制御性細胞）がＴ細胞を抑制し得ると考えられる。更に、オキシプラチンとＢ細胞枯渇剤との組み合わせは、対象における腫瘍サイズを縮小し、且つ／又は腫瘍を排除し得ると考えられる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ）は、Ｂ細胞枯渇剤（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞、ＣＤ２０  ＣＡＲ発現細胞、リツキシマブ、オクレリズマブ、エプラツズマブ又はベリムマブ）及びオキシプラチンと組み合わせて投与される。実施形態において、癌細胞は、ＣＤ１９陰性若しくはＣＤ１９陽性又はＢＣＭＡ陰性若しくはＢＭＣＡ陽性であり得る。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ）は、癌、例えば本明細書に記載の癌、例えば固形癌、例えば前立腺癌、膵臓癌又は肺癌を処置するためのＢ細胞枯渇剤及びオキシプラチンと組み合わせて投与される。
【０５９６】
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ）は、対象におけるＢ細胞（例えば、形質細胞様の表現型を有するＢ細胞、例えばＢＣＭＡ、ＣＤ１９及び／又はＣＤ２０を発現するもの）を枯渇させ得る。実施形態において、Ｂ細胞は、ＣＤ１９陰性若しくはＣＤ１９陽性又はＢＣＭＡ陰性若しくはＢＭＣＡ陽性であり得る。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ）は、オキシプラチンと組み合わせて投与される。実施形態において、オキシプラチンと組み合わせて投与される本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、癌、例えば固形癌、例えば前立腺癌、膵臓癌又は肺癌を処置するために使用される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、腫瘍溶解性ウイルスと組み合わせて投与される。実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、癌細胞内で選択的に複製し、その死を誘発するか又は増殖を遅延することができる。ある場合、腫瘍溶解性ウイルスは、非癌細胞に効果を有しないか又は効果が最小である。腫瘍溶解性ウイルスは、腫瘍溶解性アデノウイルス、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルス、腫瘍溶解性レトロウイルス、腫瘍溶解性パルボウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、腫瘍溶解性シンドビスウイルス、腫瘍溶解性インフルエンザウイルス又は腫瘍溶解性ＲＮＡウイルス（例えば、腫瘍溶解性レオウイルス、腫瘍溶解性ニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）、腫瘍溶解性麻疹ウイルス又は腫瘍溶解性水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ））を含むが、これらに限定されない。
【０５９７】
一実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、その全体が参照により本明細書に援用される米国特許出願公開第２０１０／０１７８６８４Ａ１号明細書に記載のウイルス、例えば組み換え腫瘍溶解性ウイルスである。一実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、例えば、その全体が参照により本明細書に援用される米国特許出願公開第２０１０／０１７８６８４Ａ１号明細書に記載のような、免疫又は炎症性応答の阻害剤をコードする核酸配列（例えば、異種核酸配列）を含む。実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルス、例えば腫瘍溶解性ＮＤＶは、アポトーシス促進性タンパク質（例えば、アポプチン）、サイトカイン（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ、インターフェロン−γ、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、腫瘍壊死因子−α）、免疫グロブリン（例えば、ＥＤ−Ｂフィブロネクチンに対する抗体）、腫瘍関連抗原、二特異性アダプタータンパク質（例えば、ＮＤＶ  ＨＮタンパク質及びＣＤ３又はＣＤ２８などのＴ細胞共刺激性受容体に対する二特異性抗体又は抗体フラグメント；又はヒトＩＬ−２及びＮＤＶ  ＨＮタンパク質に対する一本鎖抗体の融合タンパク質）を含む。例えば、参照によりその全体が本明細書に援用されるＺａｍａｒｉｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｆｕｔｕｒｅ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．７．３（２０１２）：３４７−６７を参照されたい。一実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、参照によりそれぞれその全体が本明細書に援用される米国特許第８５９１８８１Ｂ２号明細書、米国特許出願公開第２０１２／０１２２１８５Ａ１号明細書又は米国特許出願公開第２０１４／０２７１６７７Ａ１号明細書に記載のキメラ腫瘍溶解性ＮＤＶである。
【０５９８】
一実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、排他的に癌細胞において複製するよう設計された条件的複製アデノウイルス（ＣＲＡｄ）である。例えば、Ａｌｅｍａｎｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１８（２０００）：７２３−２７を参照されたい。一実施形態において、腫瘍溶解性アデノウイルスは、その全体が参照により本明細書に援用されるＡｌｅｍａｎｙ  ｅｔ  ａｌ．の７２５ページの表１に記載のものを含む。
【０５９９】
例示的な腫瘍溶解性ウイルスは、次のものを含むが、これらに限定されない。
Ｂ群腫瘍溶解性アデノウイルス（ＣｏｌｏＡｄ１）（ＰｓｉＯｘｕｓ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  Ｌｔｄ．）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０２０５３２２０を参照されたい）；
顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）を含むアデノウイルスであるＯＮＣＯＳ−１０２（以前はＣＧＴＧ−１０２と呼ばれた）（Ｏｎｃｏｓ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０１５９８１２９を参照されたい）；
ヒトＰＨ２０ヒアルロニダーゼをコードする遺伝的に改変された腫瘍溶解性ヒトアデノウイルスであるＶＣＮ−０１（ＶＣＮ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓ．Ｌ．）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒｓ：ＮＣＴ０２０４５６０２及びＮＣＴ０２０４５５８９を参照されたい）；
網膜芽細胞腫／Ｅ２Ｆ経路の脱制御を伴い癌細胞で選択的に複製するように改変されている野生型ヒトアデノウイルス血清型５（Ｈａｄ５）由来のウイルスである条件的複製アデノウイルスＩＣＯＶＩＲ−５（Ｉｎｓｔｉｔｕｔ  Ｃａｔａｌａ  ｄ’Ｏｎｃｏｌｏｇｉａ）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０１８６４７５９を参照されたい）；
ＩＣＯＶＩＲ５、腫瘍溶解性アデノウイルスで感染させた骨髄由来自己間葉性幹細胞（ＭＳＣ）を含むＣｅｌｙｖｉｒ（Ｈｏｓｐｉｔａｌ  Ｉｎｆａｎｔｉｌ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｒｉｏ  Ｎｉｎｏ  Ｊｅｓｕｓ，Ｍａｄｒｉｄ，Ｓｐａｉｎ／Ｒａｍｏｎ  Ａｌｅｍａｎｙ）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０１８４４６６１を参照されたい）；
ヒトＥ２Ｆ−１プロモーターが必須Ｅ１ａウイルス遺伝子の発現を駆動し、それによりＲｂ経路欠損腫瘍細胞に対するウイルス複製及び細胞毒性を制限する、条件複製腫瘍溶解性血清型５アデノウイルス（Ａｄ５）であるＣＧ００７０（Ｃｏｌｄ  Ｇｅｎｅｓｙｓ，Ｉｎｃ．）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０２１４３８０４を参照されたい）；又は
網膜芽細胞腫（Ｒｂ）経路欠損細胞で選択的に複製し、ある種のＲＧＤ結合インテグリンをより効率的に発現する細胞に感染するように操作されているアデノウイルスであるＤＮＸ−２４０１（以前はデルタ−２４−ＲＧＤと称された）（Ｃｌｉｎｉｃａ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｄａｄ  ｄｅ  Ｎａｖａｒｒａ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｄａｄ  ｄｅ  Ｎａｖａｒｒａ／ＤＮＡｔｒｉｘ，Ｉｎｃ．）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０１９５６７３４を参照されたい）。
【０６００】
一実施形態において、本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルスを注射、例えば皮下、動脈内、静脈内、筋肉内、髄腔内又は腹腔内注射により投与する。実施形態において、本明細書に記載の腫瘍溶解性ウイルスを腫瘍内、経皮、経粘膜、経口、鼻腔内又は肺投与により投与する。
【０６０１】
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲを発現する細胞を、Ｔｒｅｇ細胞集団を減少させる分子と組み合わせて対象に投与する。Ｔｒｅｇ細胞数を減らす（例えば、枯渇させる）方法は、当技術分野で知られ、例えばＣＤ２５枯渇、シクロホスファミド投与、ＧＩＴＲ機能改変を含む。理論に拘束されることを望まないが、アフェレーシス前又は本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞投与前に対象におけるＴｒｅｇ細胞数を減らすことは、腫瘍微小環境における望まない免疫細胞（例えば、Ｔｒｅｇ）の数を減らし、対象の再発のリスクを減らすと考えられる。いくつかの実施形態において、本発明に記載のＣＡＲ発現細胞は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を枯渇させるＧＩＴＲアゴニスト及び／又はＧＩＴＲ抗体などのＧＩＴＲを標的とし、且つ／又はＧＩＴＲ機能を調節する分子と組み合わせて対象に投与される。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲを発現する細胞を対象にシクロホスファミドと組み合わせて投与する。一部の実施形態において、ＧＩＴＲ結合分子及び／又はＧＩＴＲ機能を調節する分子（例えば、ＧＩＴＲアゴニスト及び／又はＴｒｅｇ枯渇ＧＩＴＲ抗体）をＣＡＲ発現細胞の前に投与する。例えば、一部の実施形態において、ＧＩＴＲアゴニストを細胞のアフェレーシス前に投与できる。実施形態において、シクロホスファミドをＣＡＲ発現細胞の投与（例えば、注入又は再注入）前又は細胞のアフェレーシス前に対象に投与する。実施形態において、シクロホスファミド及び抗ＧＩＴＲ抗体をＣＡＲ発現細胞の投与（例えば、注入又は再注入）前又は細胞のアフェレーシス前に対象に投与する。一部の実施形態において、対象は、癌（例えば、固形癌又は多発性骨髄腫、ＡＬＬ若しくはＣＬＬなどの血液癌）を有する。一実施形態において、対象は、ＣＬＬを有する。実施形態において、対象は、多発性骨髄腫を有する。実施形態において、対象は、固形癌、例えば本明細書に記載の固形癌を有する。例示的なＧＩＴＲアゴニストは、例えば、米国特許第６，１１１，０９０号明細書、欧州特許第０９０５０５Ｂ１号明細書、米国特許第８，５８６，０２３号明細書、国際公開第２０１０／００３１１８号パンフレット及び同２０１１／０９０７５４号パンフレットに記載のＧＩＴＲ融合タンパク質又は例えば米国特許第７，０２５，９６２号明細書、欧州特許第１９４７１８３Ｂ１号明細書、米国特許第７，８１２，１３５号明細書、米国特許第８，３８８，９６７号明細書、米国特許第８，５９１，８８６号明細書、欧州特許第１８６６３３９号明細書、国際公開第２０１１／０２８６８３号パンフレット、国際公開第２０１３／０３９９５４号パンフレット、国際公開第２００５／００７１９０号パンフレット、国際公開第２００７／１３３８２２号パンフレット、国際公開第２００５／０５５８０８号パンフレット、国際公開第９９／４０１９６号パンフレット、国際公開第２００１／０３７２０号パンフレット、国際公開第９９／２０７５８号パンフレット、国際公開第２００６／０８３２８９号パンフレット、国際公開第２００５／１１５４５１号パンフレット、米国特許第７，６１８，６３２号明細書及び国際公開第２０１１／０５１７２６号パンフレットに記載のような抗ＧＩＴＲ抗体など、例えばＧＩＴＲ融合タンパク質及び抗ＧＩＴＲ抗体（例えば、二価抗ＧＩＴＲ抗体）を含む。
【０６０２】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をｍＴＯＲ阻害剤、例えば本明細書に記載のｍＴＯＲ阻害剤、例えばエベロリムスなどのラパログと組み合わせて対象に投与する。いくつかの実施形態において、ｍＴＯＲ阻害剤をＣＡＲ発現細胞の前に投与する。例えば、いくつかの実施形態において、ｍＴＯＲ阻害剤を細胞のアフェレーシス前に投与できる。
【０６０３】
一部の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＧＩＴＲアゴニスト、例えば本明細書に記載のＧＩＴＲアゴニストと組み合わせて対象に投与する。一部の実施形態において、ＧＩＴＲアゴニストをＣＡＲ発現細胞の前に投与する。例えば、一部の実施形態において、ＧＩＴＲアゴニストを細胞のアフェレーシス前に投与できる。
【０６０４】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をタンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤、例えば本明細書に記載のタンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤と組み合わせて対象に投与する。いくつかの実施形態において、タンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤は、ＳＨＰ−１阻害剤、例えばスチボグルコン酸ナトリウムなど、例えば本明細書に記載のＳＨＰ−１阻害剤である。いくつかの実施形態において、タンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤は、ＳＨＰ−２阻害剤である。
【０６０５】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をキナーゼ阻害剤と組み合わせて使用できる。いくつかの実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＣＤＫ４阻害剤、例えば本明細書に記載のＣＤＫ４阻害剤、例えば６−アセチル−８−シクロペンチル−５−メチル−２−（５−ピペラジン−１−イル−ピリジン−２−イルアミノ）−８Ｈ−ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、ヒドロクロライド（パルボシクリブ又はＰＤ０３３２９９１とも呼ばれる）など、例えばＣＤＫ４／６阻害剤である。いくつかの実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＢＴＫ阻害剤、例えばイブルチニブなど、例えば本明細書に記載のＢＴＫ阻害剤である。いくつかの実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシン、ラパマイシン類似体、ＯＳＩ−０２７など、例えば本明細書に記載のｍＴＯＲ阻害剤である。ｍＴＯＲ阻害剤は、例えば、ｍＴＯＲＣ１阻害剤及び／又はｍＴＯＲＣ２阻害剤、例えば本明細書に記載のｍＴＯＲＣ１阻害剤及び／又はｍＴＯＲＣ２阻害剤であり得る。いくつかの実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＭＮＫ阻害剤、例えば４−アミノ−５−（４−フルオロアニリノ）−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンなど、例えば本明細書に記載のＭＮＫ阻害剤である。ＭＮＫ阻害剤は、例えば、ＭＮＫ１ａ、ＭＮＫ１ｂ、ＭＮＫ２ａ及び／又はＭＮＫ２ｂ阻害剤であり得る。いくつかの実施形態において、キナーゼ阻害剤は、例えば、ＰＦ−０４６９５１０２など、本明細書に記載のデュアルＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤である。いくつかの実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＤＧＫ阻害剤、例えばＤＧＫｉｎｈ１（Ｄ５９１９）又はＤＧＫｉｎｈ２（Ｄ５７９４）など、例えば本明細書に記載のＤＧＫ阻害剤である。
【０６０６】
一部の実施形態において、キナーゼ阻害剤は、アロイシンＡ；フラボピリドール又はＨＭＲ−１２７５、２−（２−クロロフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−［（３Ｓ，４Ｒ）−３−ヒドロキシ−１−メチル−４−ピペリジニル］−４−クロメノン；クリゾチニブ（ＰＦ−０２３４１０６６；２−（２−クロロフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−［（２Ｒ，３Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）−１−メチル−３−ピロリジニル］−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン、ヒドロクロライド（Ｐ２７６−００）；１−メチル−５−［［２−［５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−４−ピリジニル］オキシ］−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−アミン（ＲＡＦ２６５）；インジスラム（Ｅ７０７０）；ロスコビチン（ＣＹＣ２０２）；パルボシクリブ（ＰＤ０３３２９９１）；ジナシクリブ（ＳＣＨ７２７９６５）；Ｎ−［５−［［（５−ｔｅｒｔ−ブチルオキサゾール−２−イル）メチル］チオ］チアゾール−２−イル］ピペリジン−４−カルボキサミド（ＢＭＳ  ３８７０３２）；４−［［９−クロロ−７−（２，６−ジフルオロフェニル）−５Ｈ−ピリミド［５，４−ｄ］［２］ベンズアゼピン−２−イル］アミノ］−安息香酸（ＭＬＮ８０５４）；５−［３−（４，６−ジフルオロ−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イル］−Ｎ−エチル−４−メチル−３−ピリジンメタンアミン（ＡＧ−０２４３２２）；４−（２，６−ジクロロベンゾイルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸Ｎ−（ピペリジン−４−イル）アミド（ＡＴ７５１９）；４−［２−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］−Ｎ−［４−（メチルスルホニル）フェニル］−２−ピリミジンアミン（ＡＺＤ５４３８）；及びＸＬ２８１（ＢＭＳ９０８６６２）から選択されるＣＤＫ４阻害剤である。
【０６０７】
一部の実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＣＤＫ４阻害剤、例えばパルボシクリブ（ＰＤ０３３２９９１）であり、パルボシクリブを一定期間にわたり１日約５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１０５ｍｇ、１１０ｍｇ、１１５ｍｇ、１２０ｍｇ、１２５ｍｇ、１３０ｍｇ、１３５ｍｇ（例えば、７５ｍｇ、１００ｍｇ又は１２５ｍｇ）の用量で例えば２８日サイクルの１４〜２１日間連日又は２１日サイクルの７〜１２日間連日投与する。一部の実施形態において、１サイクル、２サイクル、３サイクル、４サイクル、５サイクル、６サイクル、７サイクル、８サイクル、９サイクル、１０サイクル、１１サイクル、１２サイクル又はそれを超えるパルボシクリブを投与する。
【０６０８】
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をサイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）４又は６阻害剤、例えば本明細書に記載のＣＤＫ４阻害剤又はＣＤＫ６阻害剤と組み合わせて対象に投与する。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＣＤＫ４／６阻害剤（例えば、ＣＤＫ４及びＣＤＫ６の両方を標的とする阻害剤）、例えば本明細書に記載のＣＤＫ４／６阻害剤と組み合わせて対象に投与する。一実施形態において、対象は、ＭＣＬを有する。ＭＣＬは、現在利用可能な治療にはほとんど応答せず、即ち本質的に不治の侵襲性癌である。ＭＣＬの多くの症例において、サイクリンＤ１（ＣＤＫ４／６のレギュレーター）がＭＣＬ細胞で発現される（例えば、免疫グロブリン及びサイクリンＤ１遺伝子が関与する染色体転座のため）。そのため、理論に拘束されないが、ＭＣＬ細胞は、高特異性（即ち正常免疫細胞に対する最小限の影響）でＣＤＫ４／６阻害に高度に感受性であると考えられる。ＣＤＫ４／６阻害剤単独でＭＣＬの処置にいくぶん有効性を有しているが、部分的寛解のみが達成され、高再発率である。例示的なＣＤＫ４／６阻害剤は、ＬＥＥ０１１（リボシクリブ）であり、その構造を下に示す。
【化１１】
2021526814.tif 000064
【０６０９】
理論に拘束されないが、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞及びＣＤＫ４／６阻害剤（例えば、ＬＥＥ０１１又は他の本明細書に記載のＣＤＫ４／６阻害剤）の投与は、例えば、ＣＤＫ４／６阻害剤単独と比較して高い応答性、例えば高い寛解率及び／又は低い再発率を達成すると考えられる。
【０６１０】
いくつかの実施形態において、キナーゼ阻害剤は、イブルチニブ（ＰＣＩ−３２７６５）；ＧＤＣ−０８３４；ＲＮ−４８６；ＣＧＩ−５６０；ＣＧＩ−１７６４；ＨＭ−７１２２４；ＣＣ−２９２；ＯＮＯ−４０５９；ＣＮＸ−７７４；及びＬＦＭ−Ａ１３から選択されるＢＴＫ阻害剤である。好ましい実施形態において、ＢＴＫ阻害剤は、インターロイキン−２−誘導性キナーゼ（ＩＴＫ）のキナーゼ活性を低減又は阻害せず、ＧＤＣ−０８３４；ＲＮ−４８６；ＣＧＩ−５６０；ＣＧＩ−１７６４；ＨＭ−７１２２４；ＣＣ−２９２；ＯＮＯ−４０５９；ＣＮＸ−７７４；及びＬＦＭ−Ａ１３から選択される。
【０６１１】
いくつかの実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＢＴＫ阻害剤、例えばイブルチニブ（ＰＣＩ−３２７６５）である。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＢＴＫ阻害剤（例えば、イブルチニブ）と組み合わせて対象に投与する。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をイブルチニブ（ＰＣＩ−３２７６５とも称す）と組み合わせて対象に投与する。イブルチニブ（１−［（３Ｒ）−３−［４−アミノ−３−（４−フェノキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル］ピペリジン−１−イル］プロプ−２−エン−１−オン）の構造を以下に示す。
【化１２】
2021526814.tif 000065
【０６１２】
実施形態において、対象は、ＣＬＬ、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）又は小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）を有する。例えば、対象は、染色体１７の短腕に欠失を有する（例えば、白血病性細胞におけるｄｅｌ（１７ｐ））。他の例において、対象は、ｄｅｌ（１７ｐ）を有しない。実施形態において、対象は、再発したＣＬＬ又はＳＬＬを有し、例えば、対象は、先に癌治療を投与されている（例えば、先に１、２、３又は４つの事前の癌治療を投与されている）。実施形態において、対象は、難治性ＣＬＬ又はＳＬＬを有する。他の実施形態において、対象は、濾胞性リンパ腫、例えば再発性又は難治性濾胞性リンパ腫を有する。いくつかの実施形態において、イブルチニブを約３００〜６００ｍｇ／日（例えば、約３００〜３５０、３５０〜４００、４００〜４５０、４５０〜５００、５００〜５５０又は５５０〜６００ｍｇ／日、例えば約４２０ｍｇ／日又は約５６０ｍｇ／日）の用量で例えば経口により投与する。実施形態において、イブルチニブを約２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４２０ｍｇ、４４０ｍｇ、４６０ｍｇ、４８０ｍｇ、５００ｍｇ、５２０ｍｇ、５４０ｍｇ、５６０ｍｇ、５８０ｍｇ、６００ｍｇ（例えば、２５０ｍｇ、４２０ｍｇ又は５６０ｍｇ）の用量で連日一定期間、例えば２１日サイクルで連日又は２８日サイクルで連日投与する。いくつかの実施形態において、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２サイクル又はそれを超えるイブルチニブを投与する。一実施形態において、イブルチニブをリツキシマブと組み合わせて投与する。例えば、Ｂｕｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｉｂｒｕｔｉｎｉｂ  Ｉｎ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  Ｗｉｔｈ  Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ（ｉＲ）Ｉｓ  Ｗｅｌｌ  Ｔｏｌｅｒａｔｅｄ  ａｎｄ  Ｉｎｄｕｃｅｓ  ａ  Ｈｉｇｈ  Ｒａｔｅ  Ｏｆ  Ｄｕｒａｂｌｅ  Ｒｅｍｉｓｓｉｏｎｓ  Ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  Ｗｉｔｈ  Ｈｉｇｈ−Ｒｉｓｋ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ（ＣＬＬ）：Ｎｅｗ，Ｕｐｄａｔｅｄ  Ｒｅｓｕｌｔｓ  Ｏｆ  ａ  Ｐｈａｓｅ  ＩＩ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｎ  ４０  Ｐａｔｉｅｎｔｓ，Ａｂｓｔｒａｃｔ  ６７５  ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ  ａｔ  ５５ｔｈ  ＡＳＨ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  ａｎｄ  Ｅｘｐｏｓｉｔｉｏｎ，Ｎｅｗ  Ｏｒｌｅａｎｓ，ＬＡ  ７−１０  Ｄｅｃを参照されたい。理論にされるものではないが、イブルチニブの添加はＴ細胞増殖性応答を増強し、Ｔ細胞をＴ−ヘルパー−２（Ｔｈ２）からＴ−ヘルパー−１（Ｔｈ１）表現型にシフトさせ得ると考えられる。Ｔｈ１及びＴｈ２は、ヘルパーＴ細胞の表現型であり、Ｔｈ１とＴｈ２で異なる免疫応答経路を指向する。Ｔｈ１表現型は、例えば、細胞内病原体／ウイルス又は癌性細胞などの細胞を死傷するための、炎症誘発性応答又は自己免疫性応答永続化と関連する。Ｔｈ２表現型は、好酸球蓄積及び抗炎症性応答と関連する。
【０６１３】
本明細書における方法、使用及び組成物の一実施形態において、ＢＴＫ阻害剤は、参照によりその全体を本明細書に組み込まれる国際公開第２０１５／０７９４１７号パンフレットに記載のＢＴＫ阻害剤である。例えば、一実施形態において、ＢＴＫ阻害剤は、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩である。
【化１３】
2021526814.tif 000066
（式中、
Ｒ１は水素、任意選択によりヒドロキシで置換され得るＣ１−Ｃ６アルキルであり；
Ｒ２は水素又はハロゲンであり；
Ｒ３は水素又はハロゲンであり；
Ｒ４は水素であり、
Ｒ５は水素又はハロゲンであり；
又はＲ４とＲ５は互いに結合し、結合、−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−；−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ−；又は−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−を意味し；
Ｒ６及びＲ７は互いに独立してＨ、任意選択によりヒドロキシで置換され得るＣ１−Ｃ６アルキル、任意選択によりハロゲン又はヒドロキシ又はハロゲンで置換され得るＣ３−Ｃ６シクロアルキルを表し；
Ｒ８、Ｒ９、Ｒ、Ｒ’、Ｒ１０及びＲ１１は互いに独立してＨ又は任意選択によりＣ１−Ｃ６アルコキシで置換され得るＣ１−Ｃ６アルキルを表すか；又はＲ８、Ｒ９、Ｒ、Ｒ’、Ｒ１０及びＲ１１の任意の２個は、それらが結合している炭素原子と一体となって３〜６員飽和炭素環式環を形成し得；
Ｒ１２は水素又は任意選択によりハロゲン若しくはＣ１−Ｃ６アルコキシで置換され得るＣ１−Ｃ６アルキルであり；
又はＲ１２とＲ８、Ｒ９、Ｒ、Ｒ’、Ｒ１０又はＲ１１のいずれか１つは、それらが結合している原子と一体となって、４員、５員、６員又は７員アザシクロ環を形成し得、その環は、任意選択によりハロゲン、シアノ、ヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ６アルキル又はＣ１−Ｃ６アルコキシで置換され得；
ｎは０又は１であり；
Ｒ１３は任意選択によりＣ１−Ｃ６アルキルで置換され得るＣ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ又は任意選択によりＣ１−Ｃ６アルキル若しくはＣ１−Ｃ６アルコキシで置換され得るＮ，Ｎ−ジ−Ｃ１−Ｃ６アルキルアミノＣ２−Ｃ６アルキニル；又は任意選択によりＣ１−Ｃ６アルキルで置換され得るＣ２−Ｃ６アルキレニルオキシドである）。
【０６１４】
いくつかの実施形態において、式ＩのＢＴＫ阻害剤は、Ｎ−（３−（５−（（１−アクリロイルアゼチジン−３−イル）オキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；（Ｅ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（（１−（ブタ−２−エノイル）アゼチジン−３−イル）オキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（（１−プロピオロイルアゼチジン−３−イル）オキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（（１−（ブタ−２−イノイル）アゼチジン−３−イル）オキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（３−（５−（（１−アクリロイルピペリジン−４−イル）オキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（２−（Ｎ−メチルアクリルアミド）エトキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；（Ｅ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（２−（Ｎ−メチルブタ−２−エンアミド）エトキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（２−（Ｎ−メチルプロピオルアミド）エトキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；（Ｅ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（２−（４−メトキシ−Ｎ−メチルブタ−２−エンアミド）エトキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（２−（Ｎ−メチルブタ−２−インアミド）エトキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（２−（（４−アミノ−６−（３−（４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）ピリミジン−５−イル）オキシ）エチル）−Ｎ−メチルオキシラン−２−カルボキサミド；Ｎ−（２−（（４−アミノ−６−（３−（６−シクロプロピル−８−フルオロ−１−オキソイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）フェニル）ピリミジン−５−イル）オキシ）エチル）−Ｎ−メチルアクリルアミド；Ｎ−（３−（５−（２−アクリルアミドエトキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（２−（Ｎ−エチルアクリルアミド）エトキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（２−（Ｎ−（２−フルオロエチル）アクリルアミド）エトキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（３−（５−（（１−アクリルアミドシクロプロピル）メトキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；（Ｓ）−Ｎ−（３−（５−（２−アクリルアミドプロポキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（２−（ブタ−２−インアミド）プロポキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（２−（Ｎ−メチルアクリルアミド）プロポキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（２−（Ｎ−メチルブタ−２−インアミド）プロポキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（３−（Ｎ−メチルアクリルアミド）プロポキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；（Ｓ）−Ｎ−（３−（５−（（１−アクリロイルピロリジン−２−イル）メトキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（（１−（ブタ−２−イノイル）ピロリジン−２−イル）メトキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；（Ｓ）−２−（３−（５−（（１−アクリロイルピロリジン−２−イル）メトキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６−シクロプロピル−３，４−ジヒドロイソキノリン−１（２Ｈ）−オン；Ｎ−（２−（（４−アミノ−６−（３−（６−シクロプロピル−１−オキソ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−５−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）ピリミジン−５−イル）オキシ）エチル）−Ｎ−メチルアクリルアミド；Ｎ−（３−（５−（（（２Ｓ，４Ｒ）−１−アクリロイル−４−メトキシピロリジン−２−イル）メトキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（（（２Ｓ，４Ｒ）−１−（ブタ−２−イノイル）−４−メトキシピロリジン−２−イル）メトキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；２−（３−（５−（（（２Ｓ，４Ｒ）−１−アクリロイル−４−メトキシピロリジン−２−イル）メトキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６−シクロプロピル−３，４−ジヒドロイソキノリン−１（２Ｈ）−オン；Ｎ−（３−（５−（（（２Ｓ，４Ｓ）−１−アクリロイル−４−メトキシピロリジン−２−イル）メトキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（（（２Ｓ，４Ｓ）−１−（ブタ−２−イノイル）−４−メトキシピロリジン−２−イル）メトキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（３−（５−（（（２Ｓ，４Ｒ）−１−アクリロイル−４−フルオロピロリジン−２−イル）メトキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（（（２Ｓ，４Ｒ）−１−（ブタ−２−イノイル）−４−フルオロピロリジン−２−イル）メトキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；（Ｓ）−Ｎ−（３−（５−（（１−アクリロイルアゼチジン−２−イル）メトキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；（Ｓ）−Ｎ−（３−（６−アミノ−５−（（１−プロピオロイルアゼチジン−２−イル）メトキシ）ピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；（Ｓ）−２−（３−（５−（（１−アクリロイルアゼチジン−２−イル）メトキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６−シクロプロピル−３，４−ジヒドロイソキノリン−１（２Ｈ）−オン；（Ｒ）−Ｎ−（３−（５−（（１−アクリロイルアゼチジン−２−イル）メトキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；（Ｒ）−Ｎ−（３−（５−（（１−アクリロイルピペリジン−３−イル）メトキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（３−（５−（（（２Ｒ，３Ｓ）−１−アクリロイル−３−メトキシピロリジン−２−イル）メトキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−（３−（５−（（（２Ｓ，４Ｒ）−１−アクリロイル−４−シアノピロリジン−２−イル）メトキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；又はＮ−（３−（５−（（（２Ｓ，４Ｓ）−１−アクリロイル−４−シアノピロリジン−２−イル）メトキシ）−６−アミノピリミジン−４−イル）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミドから選択される。
【０６１５】
特に断らない限り、上記式ＩのＢＴＫ阻害剤で使用した化学的用語は、参照によりその全体を本明細書に組み込まれる国際公開第２０１５／０７９４１７号パンフレットに示す意味に従い使用する。
【０６１６】
一部の実施形態において、キナーゼ阻害剤は、テムシロリムス；リダフォロリムス（１Ｒ，２Ｒ，４Ｓ）−４−［（２Ｒ）−２−［（１Ｒ，９Ｓ，１２Ｓ，１５Ｒ，１６Ｅ，１８Ｒ，１９Ｒ，２１Ｒ、２３Ｓ，２４Ｅ，２６Ｅ，２８Ｚ，３０Ｓ，３２Ｓ，３５Ｒ）−１，１８−ジヒドロキシ−１９，３０−ジメトキシ−１５，１７，２１，２３、２９，３５−ヘキサメチル−２，３，１０，１４，２０−ペンタオキソ−１１，３６−ジオキサ−４−アザトリシクロ［３０．３．１．０４，９］ヘキサトリアコンタ−１６，２４，２６，２８−テトラエン−１２−イル］プロピル］−２−メトキシシクロヘキシルジメチルホスフィネート、ＡＰ２３５７３及びＭＫ８６６９としても知られる；エベロリムス（ＲＡＤ００１）；ラパマイシン（ＡＹ２２９８９）；セマピモド；（５−｛２，４−ビス［（３Ｓ）−３−メチルモルホリン−４−イル］ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル｝−２−メトキシフェニル）メタノール（ＡＺＤ８０５５）；２−アミノ−８−［トランス−４−（２−ヒドロキシエトキシ）シクロヘキシル］−６−（６−メトキシ−３−ピリジニル）−４−メチル−ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（ＰＦ０４６９１５０２）；及びＮ２−［１，４−ジオキソ−４−［［４−（４−オキソ−８−フェニル−４Ｈ−１−ベンゾピラン−２−イル）モルホリニウム−４−イル］メトキシ］ブチル］−Ｌ−アルギニルグリシル−Ｌ−α−アスパルチルＬ−セリン−（配列番号２８５）、分子内塩（ＳＦ１１２６）；及びＸＬ７６５から選択されるｍＴＯＲ阻害剤である。
【０６１７】
一部の実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシンであり、ラパマイシンを約３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ（例えば、６ｍｇ）の用量で連日、一定期間、例えば２１日サイクルで連日又は２８日サイクルで連日投与する。一部の実施形態において、１サイクル、２サイクル、３サイクル、４サイクル、５サイクル、６サイクル、７サイクル、８サイクル、９サイクル、１０サイクル、１１サイクル、１２サイクル又はそれを超えるラパマイシンを投与する。一部の実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ｍＴＯＲ阻害剤、例えばエベロリムスであり、エベロリムスを一定期間にわたり１日約２ｍｇ、２．５ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ、１１ｍｇ、１２ｍｇ、１３ｍｇ、１４ｍｇ、１５ｍｇ（例えば、１０ｍｇ）の用量において例えば２８日サイクルで連日投与する。一部の実施形態において、１サイクル、２サイクル、３サイクル、４サイクル、５サイクル、６サイクル、７サイクル、８サイクル、９サイクル、１０サイクル、１１サイクル、１２サイクル又はそれを超えるエベロリムスを投与する。
【０６１８】
一部の実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＣＧＰ０５２０８８；４−アミノ−３−（ｐ−フルオロフェニルアミノ）−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン（ＣＧＰ５７３８０）；セルコスポラミド；ＥＴＣ−１７８０４４５〜２；及び４−アミノ−５−（４−フルオロアニリノ）−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンから選択されるＭＮＫ阻害剤である。
【０６１９】
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤（例えば、本明細書に記載のＰＩ３Ｋ阻害剤、例えばイデラリシブ又はドゥベリシブ）及び／又はリツキシマブと組み合わせて対象に投与する。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をイデラリシブ及びリツキシマブと組み合わせて対象に投与する。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をドゥベリシブ及びリツキシマブと組み合わせて対象に投与する。イデラリシブ（ＧＳ−１１０１又はＣＡＬ−１０１とも呼ばれる；Ｇｉｌｅａｄ）は、ＰＩ３Ｋのデルタアイソフォームを遮断する小分子である。イデラリシブ（５−フルオロ−３−フェニル−２−［（１Ｓ）−１−（７Ｈ−プリン−６−イルアミノ）プロピル］−４（３Ｈ）−キナゾリノン）の構造を以下に示す。
【化１４】
2021526814.tif 000067
【０６２０】
デュベリシブ（ＩＰＩ−１４５とも呼ばれる；Ｉｎｆｉｎｉｔｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ａｎｄ  Ａｂｂｖｉｅ）は、ＰＩ３Ｋ−δ、γを遮断する小分子である。一実施形態において、デュベリシブ（８−クロロ−２−フェニル−３−［（１Ｓ）−１−（９Ｈ−プリン−６−イルアミノ）エチル）−１（２Ｈ）−イソキノリノン）の構造を以下に示す。
【化１５】
2021526814.tif 000068
【０６２１】
実施形態において、対象は、ＣＬＬを有する。実施形態において、対象は、再発したＣＬＬを有し、例えば、対象は、先に癌治療を投与されている（例えば、先に抗ＣＤ２０抗体を投与されているか又は先にイブルチニブを投与されている）。例えば、対象は、染色体１７の短腕に欠失を有する（例えば、白血病性細胞におけるｄｅｌ（１７ｐ））。他の例において、対象は、ｄｅｌ（１７ｐ）を有しない。実施形態において、対象は、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＩｇＶＨ）遺伝子に変異を含む白血病性細胞を含む。他の実施形態において、対象は、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＩｇＶＨ）に変異を含む白血病性細胞を含まない。実施形態において、対象は、染色体１１の長腕に欠失を有する（ｄｅｌ（１１ｑ））。他の実施形態において、対象は、ｄｅｌ（１１ｑ）を有しない。実施形態において、イデラリシブを約１００〜４００ｍｇ（例えば、１００〜１２５ｍｇ、１２５〜１５０ｍｇ、１５０〜１７５ｍｇ、１７５〜２００ｍｇ、２００〜２２５ｍｇ、２２５〜２５０ｍｇ、２５０〜２７５ｍｇ、２７５〜３００ｍｇ、３２５〜３５０ｍｇ、３５０〜３７５ｍｇ又は３７５〜４００ｍｇ）で例えばＢＩＤ投与する。実施形態において、ドゥベリシブを約１５〜１００ｍｇ（例えば、約１５〜２５、２５〜５０、５０〜７５又は７５〜１００ｍｇ）で例えば１日２回投与する。実施形態において、リツキシマブを約３５０〜５５０ｍｇ／ｍ２（例えば、３５０〜３７５ｍｇ／ｍ２、３７５〜４００ｍｇ／ｍ２、４００〜４２５ｍｇ／ｍ２、４２５〜４５０ｍｇ／ｍ２、４５０〜４７５ｍｇ／ｍ２又は４７５〜５００ｍｇ／ｍ２）で例えば静脈内投与する。
【０６２２】
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）阻害剤と組み合わせて対象に投与する。例示的なＡＬＫキナーゼは、クリゾチニブ（Ｐｆｉｚｅｒ）、セリチニブ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、アレクチニブ（中外）、ブリガチニブ（ＡＰ２６１１３とも呼ばれる；Ａｒｉａｄ）、エントレクチニブ（Ｉｇｎｙｔａ）、ＰＦ−０６４６３９２２（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＴＳＲ−０１１（Ｔｅｓａｒｏ）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｎｏ．ＮＣＴ０２０４８４８８を参照されたい）、ＣＥＰ−３７４４０（Ｔｅｖａ）及びＸ−３９６（Ｘｃｏｖｅｒｙ）を含む。一実施形態において、対象は、固形癌、例えば本明細書に記載の固形癌、例えば肺癌を有する。
【０６２３】
クリゾチニブの化学名は、３−［（１Ｒ）−１−（２，６−ジクロロ−３−フルオロフェニル）エトキシ］−５−（１−ピペリジン−４−イルピラゾール−４−イル）ピリジン−２−アミンである。セリチニブの化学名は、５−クロロ−Ｎ２−［２−イソプロポキシ−５−メチル−４−（４−ピペリジニル）フェニル］−Ｎ４−［２−（イソプロピルスルホニル）フェニル］−２，４−ピリミジンジアミンである。アレクチニブの化学名は、９−エチル−６，６−ジメチル−８−（４−モルホリノピペリジン−１−イル）−１１−オキソ−６，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［ｂ］カルバゾール−３−カルボニトリルである。ブリガチニブの化学名は、５−クロロ−Ｎ２−｛４−［４−（ジメチルアミノ）−１−ピペリジニル］−２−メトキシフェニル｝−Ｎ４−［２−（ジメチルホスホリル）フェニル］−２，４−ピリミジンジアミンである。エントレクチニブの化学名は、Ｎ−（５−（３，５−ジフルオロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４−（４−メチルピペラジン−１−イル）−２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）アミノ）ベンズアミドである。ＰＦ−０６４６３９２２の化学名は、（１０Ｒ）−７−アミノ−１２−フルオロ−２，１０，１６−トリメチル−１５−オキソ−１０，１５，１６，１７−テトラヒドロ−２Ｈ−８，４−（メテノ）ピラゾロ［４，３−ｈ］［２，５，１１］−ベンズオキサジアザシクロテトラデシン−３−カルボニトリルである。ＣＥＰ−３７４４０の化学名は、（Ｓ）−２−（（５−クロロ−２−（（６−（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル）−１−メトキシ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）アミノ）ピリミジン−４−イル）アミノ）−Ｎ−メチルベンズアミドである。Ｘ−３９６の化学名は、（Ｒ）−６−アミノ−５−（１−（２，６−ジクロロ−３−フルオロフェニル）エトキシ）−Ｎ−（４−（４−メチルピペラジン−１−カルボニル）フェニル）ピリダジン−３−カルボキサミドである。
【０６２４】
いくつかの実施形態において、キナーゼ阻害剤は、２−アミノ−８−［ｔｒａｎｓ−４−（２−ヒドロキシエトキシ）シクロヘキシル］−６−（６−メトキシ−３−ピリジニル）−４−メチル−ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（ＰＦ−０４６９１５０２）；Ｎ−［４−［［４−（ジメチルアミノ）−１−ピペリジニル］カルボニル］フェニル］−Ｎ’−［４−（４，６−ジ−４−モルホリニル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素（ＰＦ−０５２１２３８４、ＰＫＩ−５８７）；２−メチル−２−｛４−［３−メチル−２−オキソ−８−（キノリン−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］フェニル｝プロパンニトリル（ＢＥＺ−２３５）；アピトリシブ（ＧＤＣ−０９８０、ＲＧ７４２２）；２，４−ジフルオロ−Ｎ−｛２−（メチルオキシ）−５−［４−（４−ピリダジニル）−６−キノリニル］−３−ピリジニル｝ベンゼンスルホンアミド（ＧＳＫ２１２６４５８）；８−（６−メトキシピリジン−３−イル）−３−メチル−１−（４−（ピペラジン−１−イル）−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２（３Ｈ）−オンマレイン酸（ＮＶＰ−ＢＧＴ２２６）；３−［４−（４−モルホリニルピリド［３’，２’：４，５］フロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２−イル］フェノール（ＰＩ−１０３）；５−（９−イソプロピル−８−メチル−２−モルホリノ−９Ｈ−プリン−６−イル）ピリミジン−２−アミン（ＶＳ−５５８４、ＳＢ２３４３）；及びＮ−［２−［（３，５−ジメトキシフェニル）アミノ］キノキサリン−３−イル］−４−［（４−メチル−３−メトキシフェニル）カルボニル］アミノフェニルスルホンアミド（ＸＬ７６５）から選択されるデュアルホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）及びｍＴＯＲ阻害剤である。
【０６２５】
カルシウム依存的ホスファターゼカルシニューリンを阻害する（シクロスポリン及びＦＫ５０６）又は増殖因子誘発シグナル伝達に重要であるｐ７０Ｓ６キナーゼを阻害する薬物（ラパマイシン）（Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ６６：８０７−８１５，１９９１；Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎ．７３：３１６−３２１，１９９１；Ｂｉｅｒｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎ．５：７６３−７７３，１９９３）も使用できる。更なる態様において、本発明の細胞組成物を、骨髄移植、フルダラビンなどの化学療法剤、体外照射療法（ＸＲＴ）、シクロホスファミド及び／又はＯＫＴ３又はＣＡＭＰＡＴＨなどの抗体を使用するＴ細胞除去療法と組み合わせて（例えば、その前に、それと同時に又はその後に）患者に投与し得る。一態様において、本発明の細胞組成物を、ＣＤ２０と反応する薬剤、例えばリツキサンなどのＢ細胞除去療法後に投与する。例えば、一部の実施形態において、対象を高用量化学療法剤と続く末梢血幹細胞移植の標準的処置に付す。一実施形態において、移植後、対象は、本発明の増殖した免疫細胞の注入を受ける。更なる実施形態において、増殖細胞を手術前又は後に投与する。
【０６２６】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をビホスホネート、例えばパミドロネート（Ａｒｅｄｉａ（登録商標））；ゾレドロン酸又はゾレドロネート（Ｚｏｍｅｔａ（登録商標）、Ｚｏｍｅｒａ（登録商標）、Ａｃｌａｓｔａ（登録商標）又はＲｅｃｌａｓｔ（登録商標））；アレンドロネート（Ｆｏｓａｍａｘ（登録商標））；リセドロネート（Ａｃｔｏｎｅｌ（登録商標））；イバンドロネート（Ｂｏｎｉｖａ（登録商標））；クロドロネート（Ｂｏｎｅｆｏｓ（登録商標））；エチドロネート（Ｄｉｄｒｏｎｅｌ（登録商標））；チルドロネート（Ｓｋｅｌｉｄ（登録商標））；パミドロネート（Ａｒｅｄｉａ（登録商標））；ネリドロネート（Ｎｅｒｉｘｉａ（登録商標））；ストロンチウムラネレート（Ｓｔｒｏｎｔｉｕｎ  ｒａｎｅｌａｔｅ）（Ｐｒｏｔｅｌｏｓ（登録商標）又はＰｒｏｔｏｓ（登録商標））；及びテリパラチド（Ｆｏｒｔｅｏ（登録商標））と組み合わせて対象に投与する。
【０６２７】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をコルチコステロイド、例えばデキサメサゾン（例えば、Ｄｅｃａｄｒｏｎ（登録商標））、ベクロメタゾン（例えば、Ｂｅｃｌｏｖｅｎｔ（登録商標））、ヒドロコルチゾン（コルチゾン、ヒドロコルチゾンナトリウムスクシネート、ヒドロコルチゾンナトリウムホスフェートとしても知られ、商品名Ａｌａ−Ｃｏｒｔ（登録商標）、ヒドロコルチゾンホスフェート、Ｓｏｌｕ−Ｃｏｒｔｅｆ（登録商標）、Ｈｙｄｒｏｃｏｒｔ  Ａｃｅｔａｔｅ（登録商標）及びＬａｎａｃｏｒｔ（登録商標）として販売）、プレドニゾロン（商品名Ｄｅｌｔａ−Ｃｏｒｔｅｌ（登録商標）、Ｏｒａｐｒｅｄ（登録商標）、Ｐｅｄｉａｐｒｅｄ（登録商標）及びＰｒｅｌｏｎｅ（登録商標）として販売）、プレドニゾン（商品名Ｄｅｌｔａｓｏｎｅ（登録商標）、Ｌｉｑｕｉｄ  Ｒｅｄ（登録商標）、Ｍｅｔｉｃｏｒｔｅｎ（登録商標）及びＯｒａｓｏｎｅ（登録商標）として販売）、メチルプレドニゾロン（６−メチルプレドニゾロン、メチルプレドニゾロンアセテート、メチルプレドニゾロンナトリウムスクシネートとしても知られ、商品名Ｄｕｒａｌｏｎｅ（登録商標）、Ｍｅｄｒａｌｏｎｅ（登録商標）、Ｍｅｄｒｏｌ（登録商標）、Ｍ−Ｐｒｅｄｎｉｓｏｌ（登録商標）及びＳｏｌｕ−Ｍｅｄｒｏｌ（登録商標）として販売）；ジフェンヒドラミン（例えば、Ｂｅｎａｄｒｙｌ（登録商標））、ヒドロキシジン及びシプロヘプタジンなどの抗ヒスタミン剤；及びベータ−アドレナリン受容体アゴニスト、アルブテロール（例えば、Ｐｒｏｖｅｎｔｉｌ（登録商標））及びテルブタリン（Ｂｒｅｔｈｉｎｅ（登録商標））などの気管支拡張剤と組み合わせて対象に投与する。
【０６２８】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を免疫調節剤、例えばアフツズマブ（Ｒｏｃｈｅ（登録商標）から入手可能）；ペグフィルグラスチム（Ｎｅｕｌａｓｔａ（登録商標））；レナリドマイド（ＣＣ−５０１３、レブリミド（登録商標））；サリドマイド（Ｔｈａｌｏｍｉｄ（登録商標））、ａｃｔｉｍｉｄ（ＣＣ４０４７）；及びＩＲＸ−２（インターロイキン１、インターロイキン２及びインターフェロンγを含むヒトサイトカイン混合物、ＣＡＳ  ９５１２０９−７１−５、ＩＲＸ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓから入手可能）と組み合わせて対象に投与する。
【０６２９】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をプロテアソーム阻害剤、例えばボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））；クエン酸イキサゾミブ（ＭＬＮ９７０８、ＣＡＳ  １２０１９０２−８０−８）；ダノプレビル（ＲＧ７２２７、ＣＡＳ  ８５０８７６−８８−９）；イキサゾミブ（ＭＬＮ２２３８、ＣＡＳ  １０７２８３３−７７−２）；及び（Ｓ）−Ｎ−［（フェニルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−ロイシル−Ｎ−（１−ホルミル−３−メチルブチル）−Ｌ−ロイシンアミド（ＭＧ−１３２、ＣＡＳ１３３４０７−８２−６）と組み合わせて対象に投与する。
【０６３０】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）受容体、例えばベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））、アキシチニブ（Ｉｎｌｙｔａ（登録商標））；ブリバニブアラニネート（ＢＭＳ−５８２６６４、（Ｓ）−（（Ｒ）−１−（４−（４−フルオロ−２−メチル−１Ｈ−インドール−５−イルオキシ）−５−メチルピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−６−イルオキシ）プロパン−２−イル）２−アミノプロパノエート）；ソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標））；パゾパニブ（Ｖｏｔｒｉｅｎｔ（登録商標））；リンゴ酸スニチニブ（Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標））；セディラニブ（ＡＺＤ２１７１、ＣＡＳ  ２８８３８３−２０−１）；Ｖａｒｇａｔｅｆ（ＢＩＢＦ１１２０、ＣＡＳ  ９２８３２６−８３−４）；フォレチニブ（ＧＳＫ１３６３０８９）；テラチニブ（ＢＡＹ５７−９３５２、ＣＡＳ  ３３２０１２−４０−５）；アパチニブ（ＹＮ９６８Ｄ１、ＣＡＳ  ８１１８０３−０５−１）；イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））；ポナチニブ（ＡＰ２４５３４、ＣＡＳ  ９４３３１９−７０−８）；チボザニブ（ＡＶ９５１、ＣＡＳ  ４７５１０８−１８−０）；レゴラフェニブ（ＢＡＹ７３−４５０６、ＣＡＳ  ７５５０３７−０３−７）；バタラニブ二塩酸塩（ＰＴＫ７８７、ＣＡＳ  ２１２１４１−５１−０）；ブリバニブ（ＢＭＳ−５４０２１５、ＣＡＳ  ６４９７３５−４６−６）；バンデタニブ（Ｃａｐｒｅｌｓａ（登録商標）又はＡＺＤ６４７４）；モテサニブ二リン酸塩（ＡＭＧ７０６、ＣＡＳ  ８５７８７６−３０−３、Ｎ−（２，３−ジヒドロ−３，３−ジメチル−１Ｈ−インドール−６−イル）−２−［（４−ピリジニルメチル）アミノ］−３−ピリジンカルボキサミド、ＰＣＴ国際公開第０２／０６６４７０号パンフレットに記載）；ドビチニブ二乳酸塩（ＴＫＩ２５８、ＣＡＳ  ８５２４３３−８４−２）；リンファニブ（ＡＢＴ８６９、ＣＡＳ  ７９６９６７−１６−３）；カボザンチニブ（ＸＬ１８４、ＣＡＳ  ８４９２１７−６８−１）；レスタウルチニブ（ＣＡＳ  １１１３５８−８８−４）；Ｎ−［５−［［［５−（１，１−ジメチルエチル）−２−オキサゾリル］メチル］チオ］−２−チアゾリル］−４−ピペリジンカルボキサミド（ＢＭＳ３８７０３、ＣＡＳ  ３４５６２７−８０−７）；（３Ｒ，４Ｒ）−４−アミノ−１−（（４−（（３−メトキシフェニル）アミノ）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−５−イル）メチル）ピペリジン−３−オール（ＢＭＳ６９０５１４）；Ｎ−（３，４−ジクロロ−２−フルオロフェニル）−６−メトキシ−７−［［（３ａα、５β、６ａα）−オクタヒドロ−２−メチルシクロペンタ［ｃ］ピロール−５−イル］メトキシ］−４−キナゾリンアミン（ＸＬ６４７、ＣＡＳ  ７８１６１３−２３−８）；４−メチル−３−［［１−メチル−６−（３−ピリジニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イル］アミノ］−Ｎ−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−ベンズアミド（ＢＨＧ７１２、ＣＡＳ  ９４０３１０−８５−０）；及びアフリベルセプト（Ｅｙｌｅａ（登録商標））と組み合わせて対象に投与する。
【０６３１】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＣＤ２０抗体又はそのコンジュゲート、例えばリツキシマブ（Ｒｉｕｘａｎ（登録商標）及びＭａｂＴｈｅｒａ（登録商標））；及びトシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））；及びオファツムマブ（Ａｒｚｅｒｒａ（登録商標））、イブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））；及びトシツモマブと組み合わせて対象に投与する。
【０６３２】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を抗けいれん薬、例えば抗けいれん薬（抗てんかん薬又は抗発作薬）：アルデヒド、例えばパラアルデヒド；芳香族アリルアルコール、例えばスチリペントール（Ｄｉａｃｏｍｉｔ（登録商標））；バルビツレート、例えばフェノバルビタール（Ｌｕｍｉｎａｌ（登録商標））、メチルフェノバルビタール（Ｍｅｂａｒａｌ（登録商標））、バルベキサクロン（Ｍａｌｉａｓｉｎ（登録商標））、ベンゾジアゼピン、例えばクロバザム（Ｏｎｆｉ（登録商標））、クロナゼパム（Ｋｌｏｎｏｐｉｎ（登録商標））、クロラゼペート（Ｔｒａｎｘｅｎｅ（登録商標）及びＮｏｖｏ−Ｃｌｏｐａｔｅ（登録商標））、ジアゼパム（Ｖａｌｉｕｍ（登録商標）、Ｌｅｍｂｒｏｌ（登録商標）、Ｄｉａｓｔａｔ（登録商標））、ミダゾラム（Ｖｅｒｓｅｄ（登録商標））、ロラゼパム（Ａｔｉｖａｎ（登録商標）及びＯｒｆｉｄａｌ（登録商標））、ニトラゼパム（Ａｌｏｄｏｒｍ（登録商標）、Ａｒｅｍ（登録商標）、Ｉｎｓｏｍａ（登録商標））、テマゼパム（ｒｅｓｔｏｒｉｌ（登録商標）、Ｎｏｒｍｉｓｏｎ（登録商標））、ニメツェパム（Ｅｒｉｍｉｎ（登録商標））、臭化物、例えば臭化カリウム；カルバメート、例えばフェルバメート（Ｆｅｌｂａｔｏｌ（登録商標））；カルボキサミド、例えばカルバマゼピン（Ｔｅｇｒｅｔｏｌ（登録商標）、Ｅｑｕｅｔｒｏ（登録商標））、オキシカルバゼピン（Ｔｒｉｌｅｐｔａｌ（登録商標）、Ｏｘｃａｒｂ（登録商標））、酢酸エスリカルバゼピン（Ａｐｔｉｏｍ（登録商標））；脂肪酸、例えばバルプロエート（バルプロ酸、バルプロ酸ナトリウム、ジバルプロエックスナトリウム）、ビガバトリン（Ｓａｂｒｉｌ（登録商標））、プロガビド（Ｇａｂｒｅｎ（登録商標））、チアガビン（Ｇａｂｉｔｒｉｌ（登録商標））；フルクトース誘導体、例えばトピラメート（Ｔｏｐａｍａｘ（登録商標））；ＧＡＢＡ類似体、例えばガバペンチン（Ｎｅｕｒｏｎｔｉｎ（登録商標））、プレガバリン（Ｌｙｒｉｃａ（登録商標））；ヒダントイン、例えばエトトイン（Ｐｅｇａｎｏｎｅ（登録商標））、フェニトイン（Ｄｉｌａｎｔｉｎ（登録商標））、メフェニトイン（Ｍｅｓａｎｔｏｉｎ（登録商標））、フォスフェニトイン（Ｃｅｒｅｂｙｘ（登録商標）、Ｐｒｏｄｉｌａｎｔｉｎ（登録商標））；オキサゾリジンジオン、例えばパラメタジオン（Ｐａｒａｄｉｏｎｅ（登録商標））、トリメタジオン（Ｔｒｉｄｉｏｎｅ（登録商標））；プロピオネート、例えばベクラミド（Ｃｈｏｒａｃｏｎ（登録商標）、Ｈｉｂｉｃｏｎ（登録商標）、Ｐｏｓｅｄｒｉｎｅ（登録商標））；ピリミジンジオン、例えばプリミドン（Ｍｙｓｏｌｉｎｅ（登録商標））；ピロリジン、例えばブリバラセタム、レベチラセタム、セレトラセタム（Ｋｅｐｐｒａ（登録商標））；スクシンイミド、例えばエトスクシミド（Ｚａｒｏｎｔｉｎ（登録商標））、フェンスクシミド（Ｍｉｌｏｎｔｉｎ（登録商標））、メスクシミド（Ｃｅｌｏｎｔｉｎ（登録商標）、Ｐｅｔｉｎｕｔｉｎ（登録商標））；スルホンアミド、例えばアセタゾラミド（Ｄｉａｍｏｘ（登録商標））、スルチアム（Ｏｓｐｏｌｏｔ（登録商標））、メタゾラミド（Ｎｅｐｔａｚａｎｅ（登録商標））、ゾニサミド（Ｚｏｎｅｇｒａｎ（登録商標））；トリアジン、例えばラモトリジン（Ｌａｍｉｃｔａｌ（登録商標））；尿素、例えばフェネツリド、フェナセミド（フェヌロン（登録商標））；バルプロイルアミド（バルプロ酸のアミド誘導体）、例えばバルプロミド（Ｄｅｐａｍｉｄｅ（登録商標））、バルノクタミド；ＡＭＰＡ受容体アンタゴニスト、例えばペランパネル（Ｆｙｃｏｍｐａ（登録商標））と組み合わせて対象に投与する。
【０６３３】
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤と組み合わせて対象に投与する。ＩＤＯは、アミノ酸、Ｌ−トリプトファンのキヌレニンへの分解を触媒する酵素である。多くの癌、例えば前立腺癌、結腸直腸癌、膵臓癌、子宮頸癌、胃癌、卵巣癌、頭部癌及び肺癌がＩＤＯを過発現する。ｐＤＣ、マクロファージ及び樹状細胞（ＤＣ）がＩＤＯを発現できる。理論に拘束されないが、Ｌ−トリプトファンの減少（例えば、ＩＤＯによる触媒）は、Ｔ細胞アネルギー及びアポトーシスの誘発による免疫抑制性環境をもたらすと考えられる。そのため、理論に拘束されないが、ＩＤＯ阻害剤は、例えば、ＣＡＲ発現免疫細胞の抑制又は死を減少させることにより、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞の効果を増強できると考えられる。実施形態において、対象は、固形腫瘍、例えば本明細書に記載の固形腫瘍、例えば前立腺癌、結腸直腸癌、膵臓癌、子宮頸癌、胃癌、卵巣癌、頭部癌又は肺癌を有する。例示的なＩＤＯ阻害剤は、１−メチル−トリプトファン、インドキシモド（ＮｅｗＬｉｎｋ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｎｏｓ．ＮＣＴ０１１９１２１６；ＮＣＴ０１７９２０５０を参照されたい）及びＩＮＣＢ０２４３６０（Ｉｎｃｙｔｅ  Ｃｏｒｐ．）（例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｎｏｓ．ＮＣＴ０１６０４８８９；ＮＣＴ０１６８５２５５を参照されたい）を含むが、これらに限定されない。
【０６３４】
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）のモジュレーターと組み合わせて対象に投与する。ＭＤＳＣは、末梢及び多くの固形腫瘍の腫瘍部位に蓄積する。これらの細胞は、Ｔ細胞応答を抑制し、それによりＣＡＲ発現細胞療法の効果を障害する。理論にされるものではないが、ＭＤＳＣモジュレーター投与は、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞の効果を増強すると考えられる。一実施形態において、対象は、固形腫瘍、例えば本明細書に記載の固形腫瘍、例えば神経膠芽腫を有する。例示的なＭＤＳＣのモジュレーターは、ＭＣＳ１１０及びＢＬＺ９４５を含むが、これらに限定されない。ＭＣＳ１１０は、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）に対するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。例えば、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｎｏ．ＮＣＴ００７５７７５７を参照されたい。ＢＬＺ９４５は、コロニー刺激因子１受容体（ＣＳＦ１Ｒ）の小分子阻害剤である。例えば、Ｐｙｏｎｔｅｃｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１９（２０１３）：１２６４−７２を参照されたい。ＢＬＺ９４５の構造を下に示す。
【化１６】
2021526814.tif 000069
【０６３５】
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＣＤ１９  ＣＡＲＴ細胞（例えば、ＣＴＬ０１９、例えば参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレットに記載のもの）と組み合わせて対象に投与する。実施形態において、対象は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、例えばＣＤ１９陽性ＡＭＬ又はＣＤ１９陰性ＡＭＬを有する。実施形態において、対象は、ＣＤ１９＋リンパ腫、例えばＣＤ１９＋非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ＣＤ１９＋ＦＬ又はＣＤ１９＋ＤＬＢＣＬを有する。実施形態において、対象は、再発性又は難治性ＣＤ１９＋リンパ腫を有する。実施形態において、リンパ球枯渇性化学療法剤をＣＤ１９  ＣＡＲＴ細胞の投与前に、それと同時に又はその後に投与（例えば、注入）する。一例において、リンパ球枯渇性化学療法剤をＣＤ１９  ＣＡＲＴ細胞の投与前に対象に投与する。例えば、リンパ球枯渇性化学療法剤は、ＣＤ１９  ＣＡＲＴ細胞注入の１〜４日（例えば、１日、２日、３日又は４日）前に終わる。実施形態において、複数用量のＣＤ１９  ＣＡＲＴ細胞を例えば本明細書に記載のように投与する。例えば、単一用量は、約５×１０８個のＣＤ１９  ＣＡＲＴ細胞を含む。実施形態において、リンパ球枯渇性化学療法剤を、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞、例えば非ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞の投与（例えば、注入）前に、それと同時に又はその後に対象に投与する。実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲＴを、非ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞、例えば本明細書に記載の非ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞の投与（例えば、注入）前に、それと同時に又はその後に対象に投与する。
【０６３６】
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、ＢＣＭＡの発現と関係する疾患、例えば本明細書に記載の癌の処置のために、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞、例えば参照により本明細書に援用される国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレットに記載のような例えばＣＴＬ０１９と組み合わせて対象に投与する。理論に拘束されないが、ＣＡＲ発現細胞と組み合わせたＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞の投与は、初期細胞系統癌細胞、例えば癌幹細胞を標的とすることにより、免疫応答を調節することにより、制御性Ｂ細胞を枯渇することにより及び／又は腫瘍微小環境を改善することにより、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞の効果を改善すると考えられる。例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞は、初期細胞系統マーカー、例えば癌幹細胞及びＣＤ１９発現細胞を発現する癌細胞を標的とするのに対し、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、後期細胞系統マーカー、例えばＢＣＭＡを発現する癌細胞を標的とする。この前処理アプローチは、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞の効果を改善できる。このような実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞を、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞の投与（例えば、注入）前に、それと同時に又はその後に投与する。
【０６３７】
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、ＣＤ１９を標的とするＣＡＲ、例えばＣＤ１９  ＣＡＲも発現する。一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲを発現する細胞及びＣＤ１９  ＣＡＲを、本明細書に記載の癌、例えばＡＭＬの処置ために対象に投与する。一実施形態において、一方又は両方のＣＡＲ分子の配置は、初代細胞内シグナル伝達ドメイン及び共刺激性シグナル伝達ドメインを含む。別の実施形態において、一方又は両方のＣＡＲ分子の配置は、初代細胞内シグナル伝達ドメイン及び２つ以上、例えば２つ、３つ、４つ若しくは５つ又はそれを超える共刺激性シグナル伝達ドメインを含む。このような実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ分子及びＣＤ１９  ＣＡＲは、同一若しくは異なる初代細胞内シグナル伝達ドメイン、同一若しくは異なる共刺激性シグナル伝達ドメイン又は同数若しくは異なる数の共刺激性シグナル伝達ドメインを有し得る。代わりに、本明細書に記載のＣＡＲ及びＣＤ１９  ＣＡＲは、スプリットＣＡＲとして配置され、そこで、ＣＡＲ分子の一方は、抗原結合ドメイン及び共刺激ドメイン（例えば、４−１ＢＢ）を含み、他のＣＡＲ分子は、抗原結合ドメイン及び初代細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ゼータ）を含む。
【０６３８】
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をインターロイキン−１５（ＩＬ−１５）ポリペプチド、インターロイキン−１５受容体アルファ（ＩＬ−１５Ｒａ）ポリペプチド又はＩＬ−１５ポリペプチド及びＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの両方の組み合わせ、例えばｈｅｔＩＬ−１５（Ａｄｍｕｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＬＬＣ）と組み合わせて対象に投与する。ｈｅｔＩＬ−１５は、ＩＬ−１５及びＩＬ−１５Ｒａのヘテロ二量体非共有複合体である。ｈｅｔＩＬ−１５は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８，１２４，０８４号明細書、米国特許出願公開第２０１２／０１７７５９８号明細書、米国特許出願公開第２００９／００８２２９９号明細書、米国特許出願公開第２０１２／０１４１４１３号明細書及び米国特許出願公開第２０１１／００８１３１１号明細書に記載されている。実施形態において、ｈｅｔ−ＩＬ−１５を皮下投与する。実施形態において、対象は、癌、例えば固形癌、例えば黒色腫又は結腸癌を有する。実施形態において、対象は、転移癌を有する。
【０６３９】
いくつかの実施形態において、対象は、ＣＡＲ発現細胞の投与に関連する副作用を低減又は緩和する薬剤を投与することができる。ＣＡＲ発現細胞の投与に付随する副作用は、ＣＲＳ及びマクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ）とも呼ばれる血液貪食リンパ組織球増多症（ＨＬＨ）を含むが、これらに限定されない。ＣＲＳの症状は、高熱、悪心、一過性低血圧、低酸素症などを含む。ＣＲＳは、発熱、疲労、食欲不振、筋肉痛、関節痛、悪心、嘔吐、頭痛などの臨床的体質的徴候及び症状を含み得る。ＣＲＳは、発疹などの臨床皮膚徴候及び症状を含み得る。ＣＲＳは、悪心、嘔吐及び下痢などの臨床的消化器徴候及び症状を含み得る。ＣＲＳは、頻呼吸及び低酸素血症などの臨床的呼吸器徴候及び症状を含み得る。ＣＲＳは、頻脈、脈圧の増大、低血圧、心拍出量の増加（早期）及び心拍出量の低下（後期）などの臨床的心血管徴候及び症状を含み得る。ＣＲＳは、凝固兆候及びｄ−二量体増加、出血の有無にかかわらず低フィブリノーゲン血などの症状を含み得る。ＣＲＳは、高窒素血症などの臨床腎徴候及び症状を含み得る。ＣＲＳは、高トランスアミナーゼ血症及び高ビリルビン血症などの臨床肝徴候及び症状を含み得る。ＣＲＳは、頭痛、精神状態の変化、混乱、せん妄、単語発見困難又はフランク失語、幻覚、振戦、ジメトリア、異常歩行、発作などの臨床的神経徴候及び症状を含み得る。
【０６４０】
従って、本明細書に記載の方法は、対象に本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を投与し、更にＣＡＲ発現細胞処置に由来する可溶性因子のレベル増加を管理する１つ以上の薬剤の投与を含み得る。いくつかの実施形態において、対象で増加し得る可溶性因子は、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦα、ＩＬ−２及びＩＬ−６の１つ以上である。一実施形態において、対象において増加する因子は、ＩＬ−１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０、ＩＬ−８、ＩＬ−５及びフラクタルカインの１つ以上である。従って、これらの副作用を処置するために投与する薬剤は、これらの可溶性因子の１つ以上を中和する薬剤であり得る。いくつかの実施形態において、これらの可溶性形態の１つ以上を中和する薬剤は、抗体又は抗体フラグメントである。このような薬剤の例は、ステロイド（例えば、コルチコステロイド）、ＴＮＦα阻害剤及びＩＬ−６阻害剤を含むが、これらに限定されない。ＴＮＦα阻害剤の例は、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴール及びゴリムマブなどの抗ＴＮＦα抗体分子である。ＴＮＦα阻害剤の別の例は、エタネルセプトなどの融合タンパク質である。小分子ＴＮＦα阻害剤は、キサンチン誘導体（例えば、ペントキシフィリン）及びブプロピオンを含むが、これらに限定されない。ＩＬ−６阻害剤の例は、トシリズマブ（ｔｏｃ）、サリルマブ、エルシリモマブ、ＣＮＴＯ  ３２８、ＡＬＤ５１８／ＢＭＳ−９４５４２９、ＣＮＴＯ  １３６、ＣＰＳＩ−２３６４、ＣＤＰ６０３８、ＶＸ３０、ＡＲＧＸ−１０９、ＦＥ３０１及びＦＭ１０１などの抗ＩＬ−６抗体分子である。いくつかの実施形態において、抗ＩＬ−６抗体分子は、トシリズマブである。ＩＬ−１Ｒベースの阻害剤の例は、アナキンラである。
【０６４１】
一実施形態において、対象にとりわけ例えばメチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾンなどのコルチコステロイドを投与する。
【０６４２】
一実施形態において、対象に例えばノルエピネフリン、ドーパミン、フェニレフリン、エピネフリン、バソプレシン又はこれらの組み合わせなどの昇圧剤を投与する。
【０６４３】
一実施形態において、対象に解熱剤を投与できる。一実施形態において、対象に鎮痛剤を投与できる。
【０６４４】
いくつかの実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞の脳への輸送を防止する薬剤、例えばナタリズマブ（ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標））を対象に投与することができる。ＢＣＭＡ発現、例えばそのスプライス変異体は、脳のいくつかの部分、例えば小脳又は延髄で検出されている。特定の理論に拘束されるものではないが、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞の脳への輸送を防止することは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞がＢＣＭＡ発現脳組織と相互作用すること又はそれに作用することを防止するために好ましい。
【０６４５】
いくつかの実施形態において、対象に、ＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤を投与できる。例えば、いくつかの実施形態において、薬剤は、阻害分子を阻害する薬剤であり得、例えば、薬剤は、チェックポイント阻害剤である。阻害分子、例えばプログラム細胞死１（ＰＤ１）は、いくつかの実施形態において、ＣＡＲ発現細胞が免疫エフェクター応答を開始する能力を減少させ得る。阻害分子の例は、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７−Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４又はＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン及びＴＧＦＲベータを含む。ＤＮＡ、ＲＮＡ又はタンパク質レベルでの阻害による、阻害分子の阻害はＣＡＲ発現細胞性能を最適化できる。実施形態において、例えば本明細書に記載のような阻害性核酸、例えば阻害性核酸、例えばｄｓＲＮＡ、例えばｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡ、群生性等間隔短回文反復配列（ＣＲＩＳＰＲ）、転写−アクティベータ様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）又は亜鉛フィンガーエンドヌクレアーゼ（ＺＦＮ）を使用して、ＣＡＲ発現細胞の阻害分子の発現を阻害できる。一実施形態において、阻害剤は、ｓｈＲＮＡである。一実施形態において、阻害分子は、ＣＡＲ発現細胞内で阻害される。これらの実施形態において、阻害分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をＣＡＲの成分、例えば成分全部をコードする核酸と連結する。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、阻害分子の阻害剤と組み合わせて、例えばチェックポイント阻害剤と組み合わせて、例えばＰＤ１及び／又はＰＤ−Ｌ１の阻害剤と組み合わせて投与される。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、ＰＤ１の阻害剤と組み合わせて投与される。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、ＰＤ−Ｌ１の阻害剤と組み合わせて投与される。
【０６４６】
一実施形態において、Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードする核酸分子を、Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子が発現、例えばＣＡＲ発現細胞内で発現されるように、プロモーター、例えばＨ１又はＵ６駆動プロモーターに操作可能に連結する。例えば、Ｔｉｓｃｏｒｎｉａ  Ｇ．，“Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｓｉＲＮＡ，”Ｃｈａｐｔｅｒ  ３，ｉｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ：Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＤＮＡ  ａｎｄ  ＲＮＡ（ｅｄｓ．Ｆｒｉｅｄｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｒｏｓｓｉ）を参照されたい。Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，ＵＳＡ，２００７；Ｂｒｕｍｍｅｌｋａｍｐ  ＴＲ，ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９６：５５０−５５３；Ｍｉｙａｇｉｓｈｉ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９：４９７−５００。一実施形態において、Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードする核酸分子は、ＣＡＲの成分、例えば要素の全てをコードする核酸分子を含む同じベクター、例えばレンチウイルスベクター上に存在する。このような実施形態において、Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードする核酸分子は、ＣＡＲの成分、例えば要素の全てをコードする核酸において５’又は３’に位置するベクター、例えばレンチウイルスベクターに位置する。Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードする核酸分子は、ＣＡＲの成分、例えば要素の全てをコードする核酸と同一又は異なる方向で転写され得る。一実施形態において、Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードする核酸分子は、ＣＡＲの成分、例えば要素の全てをコードする核酸分子を含むベクター以外のベクターに存在する。一実施形態において、Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードする核酸分子は、ＣＡＲ発現細胞内で一過性に発現される。一実施形態において、Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードする核酸分子は、ＣＡＲ発現細胞のゲノムに安定に統合される。
【０６４７】
Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する分子の発現の阻害に有用なｄｓＲＮＡ分子の例であり、ここで、Ｔ細胞機能を調節又は制御、例えば阻害する分子がＰＤ−１であるものを下に提供する。
【０６４８】
いくつかの実施形態において、阻害シグナルの阻害剤は、例えば、阻害分子と結合する抗体又は抗体フラグメントであり得る。例えば、薬剤は、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２又はＣＴＬＡ４に結合する抗体又は抗体フラグメントであり得る（例えば、イピリムマブ（ＭＤＸ−０１０及びＭＤＸ−１０１とも称し、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）として市販；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ；トレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒから入手可能なＩｇＧ２モノクローナル抗体、以前にはチシリムマブ、ＣＰ−６７５，２０６として既知。））。一実施形態において、薬剤は、ＴＩＭ３に結合する抗体又は抗体フラグメントである。一実施形態において、薬剤は、ＬＡＧ３に結合する抗体又は抗体フラグメントである。実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤、例えば阻害分子の阻害剤を同種異系ＣＡＲ、例えば同種異系本明細書に記載のＣＡＲと組み合わせて投与する（例えば、本明細書における同種異系ＣＡＲに記載）。
【０６４９】
ＰＤ１は、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ及びＢＴＬＡも含む受容体のＣＤ２８ファミリーの阻害性メンバーである。ＰＤ−１は、活性化Ｂ細胞、Ｔ細胞及び骨髄細胞に発現される（Ａｇａｔａ  ｅｔ  ａｌ．１９９６  Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  ８：７６５−７５）。ＰＤ１に対する２リガンド、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２は、ＰＤ１への結合によりＴ細胞活性化を下方制御することが示されている（Ｆｒｅｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．２０００  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １９２：１０２７−３４；Ｌａｔｃｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．２００１  Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２：２６１−８；Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２００２  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３２：６３４−４３）。ＰＤ−Ｌ１は、ヒト癌において豊富である（Ｄｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．２００３  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  ８１：２８１−７；Ｂｌａｎｋ  ｅｔ  ａｌ．２００５  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ５４：３０７−３１４；Ｋｏｎｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．２００４  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １０：５０９４）。免疫抑制は、ＰＤ１とＰＤ−Ｌ１との局所相互作用の阻害により逆転できる。ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２の抗体、抗体フラグメント及び他の阻害剤は、当技術分野で入手可能であり、本発明のＣＡＲと組み合わせて使用され得る。例えば、ニボルマブ（ＢＭＳ−９３６５５８又はＭＤＸ１１０６とも称す；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）は、ＰＤ１を特異的に遮断する完全ヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体である。ＰＤ１に特異的に結合するニボルマブ（クローン５Ｃ４）及び他のヒトモノクローナル抗体は、米国特許第８，００８，４４９号明細書及び国際公開第２００６／１２１１６８号パンフレットに開示されている。ピジリズマブ（ＣＴ−０１１；Ｃｕｒｅ  Ｔｅｃｈ）は、ＰＤ１に結合するヒト化ＩｇＧ１ｋモノクローナル抗体である。ピジリズマブ及び他のヒト化抗ＰＤ１モノクローナル抗体は、国際公開第２００９／１０１６１１号パンフレットに開示されている。ペンブロリズマブ（以前にはランブロリズマブとして知られ、ＭＫ０３４７５とも称される；Ｍｅｒｃｋ）は、ＰＤ１に結合するヒト化ＩｇＧ４モノクローナル抗体である。ペンブロリズマブ及び他のヒト化抗ＰＤ１抗体は、米国特許第８，３５４，５０９号及び国際公開第２００９／１１４３３５号パンフレットに開示される。ＭＥＤＩ４７３６（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）は、ＰＤＬ１と結合し、リガンドとＰＤ１の相互作用を阻害するヒトモノクローナル抗体である。ＭＤＰＬ３２８０Ａ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）は、ＰＤ−Ｌ１に結合するヒトＦｃ最適化ＩｇＧ１モノクローナル抗体である。ＰＤ−Ｌ１に対するＭＤＰＬ３２８０Ａ及び他のヒトモノクローナル抗体は、米国特許第７，９４３，７４３号明細書及び米国特許出願公開第２０１２００３９９０６号明細書に開示されている。他の抗ＰＤ−Ｌ１結合剤は、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０（重鎖及び軽鎖可変領域は、国際公開第２０１０／０７７６３４号パンフレットの配列番号２０及び２１に示される）及びＭＤＸ−１  １０５（別名ＢＭＳ−９３６５５９及び例えば、国際公開第２００７／００５８７４号パンフレットに開示される抗ＰＤ−Ｌ１結合剤）を含む��ＡＭＰ−２２４（Ｂ７−ＤＣＩｇ；Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ；例えば、国際公開第２０１０／０２７８２７号パンフレット及び国際公開第２０１１／０６６３４２号パンフレットに開示）は、ＰＤ１とＢ７−Ｈ１の相互作用を遮断するＰＤ−Ｌ２  Ｆｃ融合可溶性受容体である。他の抗ＰＤ１抗体は、とりわけ、ＡＭＰ  ５１４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）、例えば米国特許第８，６０９，０８９号明細書、米国特許出願公開第２０１００２８３３０号明細書及び／又は米国特許出願公開第２０１２０１１４６４９号明細書に開示の抗ＰＤ１抗体を含む。
【０６５０】
ＴＩＭ３（Ｔ細胞免疫グロブリン−３）も、特にＩＦＮ−ｇ分泌ＣＤ４＋Ｔヘルパー１及びＣＤ８＋Ｔ細胞毒性１細胞において、Ｔ細胞機能を負に制御し、Ｔ細胞疲弊に重要な役割を有する。ＴＩＭ３とそのリガンド、例えばガレクチン−９（Ｇａｌ９）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）及びＨＭＧＢ１の相互作用の阻害は免疫応答を高め得る。ＴＩＭ３及びそのリガンドの抗体、抗体フラグメント及び他の阻害剤は、当技術分野で利用可能であり、本明細書に記載のＣＤ１９又はＢＣＭＡ  ＣＡＲと組み合わせて使用し得る。例えば、ＴＩＭ３を標的とする抗体、抗体フラグメント、小分子又はペプチド阻害剤は、そのリガンドとの相互作用を阻害するためにＴＩＭ３のＩｇＶドメインに結合する。ＴＩＭ３を阻害する抗体及びペプチドは、国際公開第２０１３／００６４９０号パンフレット及び米国特許出願公開第２０１００２４７５２１号明細書に開示されている。他の抗ＴＩＭ３抗体は、ＲＭＴ３−２３のヒト化バージョン（Ｎｇｉｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，７１：３５４０−３５５１に開示）及びクローン８Ｂ．２Ｃ１２（Ｍｏｎｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｎａｔｕｒｅ，４１５：５３６−５４１に開示）を含む。ＴＩＭ３及びＰＤ−１を阻害する二特異性抗体は米国特許出願公開第２０１３０１５６７７４号明細書に開示されている。
【０６５１】
他の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤は、ＣＥＡＣＡＭ阻害剤（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５阻害剤）である。いくつかの実施形態において、ＣＥＡＣＡＭの阻害剤は、抗ＣＥＡＣＡＭ抗体分子である。例示的な抗ＣＥＡＣＡＭ−１抗体は、国際公開第２０１０／１２５５７１号パンフレット、国際公開第２０１３／０８２３６６号パンフレット、国際公開第２０１４／０５９２５１号パンフレット及び国際公開第２０１４／０２２３３２号パンフレットに記載され、例えばモノクローナル抗体３４Ｂ１、２６Ｈ７及び５Ｆ４；又は例えば米国特許出願公開第２００４／００４７８５８号明細書、米国特許第７，１３２，２５５号明細書及び国際公開第９９／０５２５５２号パンフレットに記載のようなその組み換え形態である。他の実施形態において、抗ＣＥＡＣＡＭ抗体は、例えば、Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．２０１０  Ｓｅｐ  ２；５（９）．ｐｉｉ：ｅ１２５２９（ＤＯＩ：１０：１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．００２１１４６）に記載のようにＣＥＡＣＡＭ−５と結合するか、又は例えば国際公開第２０１３／０５４３３１号パンフレット及び米国特許出願公開第２０１４／０２７１６１８号明細書に記載のようにＣＥＡＣＡＭ−１及びＣＥＡＣＡＭ−５と交差反応する。
【０６５２】
理論に拘束されることを望まないが、ＣＥＡＣＡＭ−１及びＣＥＡＣＡＭ−５などの癌胎児性抗原細胞接着分子（ＣＥＡＣＡＭ）は、少なくとも部分的に抗腫瘍免疫応答の阻害を媒介すると考えられる（例えば、Ｍａｒｋｅｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００２  Ｍａｒ  １５；１６８（６）：２８０３−１０；Ｍａｒｋｅｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００６  Ｎｏｖ  １；１７７（９）：６０６２−７１；Ｍａｒｋｅｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２００９  Ｆｅｂ；１２６（２）：１８６−２００；Ｍａｒｋｅｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０１０  Ｆｅｂ；５９（２）：２１５−３０；Ｏｒｔｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．２０１２  Ｊｕｎ；１１（６）：１３００−１０；Ｓｔｅｒｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００５  Ｊｕｎ  １；１７４（１１）：６６９２−７０１；Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．２０１０  Ｓｅｐ  ２；５（９）．ｐｉｉ：ｅ１２５２９を参照されたい）。例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１は、ＴＩＭ−３のヘテロ親和性リガンドとして且つＴＩＭ−３媒介Ｔ細胞耐容性及び疲弊に役割を有するとして記載されている（例えば、国際公開第２０１４／０２２３３２号パンフレット；Ｈｕａｎｇ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｎａｔｕｒｅ  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１３８４８を参照されたい）。実施形態において、ＣＥＡＣＡＭ−１及びＴＩＭ−３の共遮断は、異種移植結腸直腸癌モデルにおいて抗腫瘍免疫応答を増強することが示されている（例えば、国際公開第２０１４／０２２３３２号パンフレット；Ｈｕａｎｇ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）、上掲を参照されたい）。他の実施形態において、ＣＥＡＣＡＭ−１及びＰＤ−１の共遮断は、例えば、国際公開第２０１４／０５９２５１号パンフレットに記載されるようにＴ細胞耐容性を減少させる。そのため、ＣＥＡＣＡＭ阻害剤を、本明細書に記載の他の免疫調節剤（例えば、抗ＰＤ−１及び／又は抗ＴＩＭ−３阻害剤）と使用して、癌、例えば黒色腫、肺癌（例えば、ＮＳＣＬＣ）、膀胱癌、結腸癌、卵巣癌及び本明細書に記載の他の癌に対する免疫応答を増強させ得る。
【０６５３】
ＬＡＧ−３（リンパ球活性化遺伝子−３又はＣＤ２２３）は、ＣＤ８＋Ｔ細胞疲弊に役割を有することが示されている、活性化Ｔ細胞及びＢ細胞に発現される細胞表面分子である。ＬＡＧ３及びそのリガンドの抗体、抗体フラグメント及び他の阻害剤は、当技術分野で利用可能であり、本明細書に記載のＣＤ１９又はＢＣＭＡ  ＣＡＲと組み合わせて使用し得る。例えば、ＢＭＳ−９８６０１６（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂ）は、ＬＡＧ３を標的とするモノクローナル抗体である。ＩＭＰ７０１（Ｉｍｍｕｔｅｐ）は、アンタゴニストＬＡＧ−３抗体であり、ＩＭＰ７３１（Ｉｍｍｕｔｅｐ及びＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）は、枯渇性ＬＡＧ−３抗体である。他のＬＡＧ−３阻害剤は、ＬＡＧ３の可溶性部分とＭＨＣクラスＩＩ分子のＩｇの組み換え融合タンパク質であり、抗原提示細胞（ＡＰＣ）を活性化するＩＭＰ３２１（Ｉｍｍｕｔｅｐ）を含む。他の抗体は、例えば、国際公開第２０１０／０１９５７０号パンフレットに開示されている。
【０６５４】
一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤は、例えば、第１のドメイン及び第２のドメインを含む融合タンパク質であり得、第１のドメインは、阻害分子又はそのフラグメントであり、第２のドメインは、陽性シグナルと関連するポリペプチド、例えば本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドである。一実施形態において、陽性シグナルと結合するポリペプチドは、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＩＣＯＳの共刺激ドメイン、例えばＣＤ２８、ＣＤ２７及び／又はＩＣＯＳの細胞内シグナル伝達ドメイン及び／又は例えば本明細書に記載の例えばＣＤ３ゼータの一次シグナル伝達ドメインを含み得る。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、ＣＡＲを発現するのと同じ細胞により発現される。別の実施形態において、融合タンパク質は、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲを発現しない細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞により発現される。
【０６５５】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤は、ｍｉＲ−１７−９２である。
【０６５６】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲの活性を増強する薬剤は、サイトカインである。サイトカインは、Ｔ細胞増殖、分化、生存及び恒常性に関連する重要な機能を有する。本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を受ける対象に投与できるサイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８及びＩＬ−２１又はこれらの組み合わせを含む。好ましい実施形態において、投与するサイトカインは、ＩＬ−７、ＩＬ−１５又はＩＬ−２１又はこれらの組み合わせである。サイトカインを、１日１回又は１日１回を超えて、例えば１日２回、１日３回又は１日４回投与できる。サイトカインを、１日を超えて投与でき、例えばサイトカインを２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間又は４週間投与する。例えば、サイトカインを１日１回、７日間投与する。
【０６５７】
実施形態において、サイトカインをＣＡＲ発現Ｔ細胞と組み合わせて投与する。サイトカインをＣＡＲ発現Ｔ細胞と同時に又は一緒に投与でき、例えば同じ日に投与する。サイトカインをＣＡＲ発現Ｔ細胞と同じ医薬組成物に製剤するか、又は別の医薬組成物に製剤し得る。代替的に、サイトカインをＣＡＲ発現Ｔ細胞の投与後間もなく、例えばＣＡＲ発現Ｔ細胞投与１日、２日、３日、４日、５日、６日又は７日後に投与し得る。１日を超える投薬レジメンでサイトカインを投与する実施形態において、サイトカイン投薬レジメンの１日目は、ＣＡＲ発現Ｔ細胞の投与と同じ日であり得るか、又はサイトカイン投薬レジメンの１日目は、ＣＡＲ発現Ｔ細胞の投与１日、２日、３日、４日、５日、６日又は７日後であり得る。いくつかの実施形態において、１日目にＣＡＲ発現Ｔ細胞を対象に投与し、２日目にサイトカインを１日１回、翌７日間投与する。好ましい実施形態において、ＣＡＲ発現Ｔ細胞と組み合わせて投与するサイトカインは、ＩＬ−７、ＩＬ−１５又はＩＬ−２１である。
【０６５８】
他の実施形態において、サイトカインを、ＣＡＲ発現細胞の投与から一定期間後、例えばＣＡＲ発現細胞の投与から少なくとも２週間、３週間、４週間、６週間、８週間、１０週間、１２週間、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月又は１年又はそれを超えて後に投与する。いくつかの実施形態において、サイトカインを、ＣＡＲ発現細胞に対する対象の応答の評価後に投与する。例えば、対象に本明細書に記載の用量及びレジメンに従い、ＣＡＲ発現細胞を投与する。ＣＡＲ発現細胞治療に対する対象の応答を、腫瘍増殖阻止、循環腫瘍細胞減少又は腫瘍退縮を含む、本明細書に記載の方法のいずれかを使用して、ＣＡＲ発現細胞の投与２週間、３週間、４週間、６週間、８週間、１０週間、１２週間、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月又は１年又はそれを超えて後に評価する。ＣＡＲ発現細胞治療に対して十分な応答を示さない対象にサイトカインを投与し得る。ＣＡＲ発現細胞治療に対して応答が最適以下である対象へのサイトカインの投与は、ＣＡＲ発現細胞有効性又は抗癌活性を改善する。好ましい実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の投与後に投与するサイトカインは、ＩＬ−７である。
【０６５９】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞は、低い免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤と組み合わせて使用することができる。本明細書に記載の方法は、低い免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤、例えばＲＡＤ００１などのラパログを含むアロステリックｍＴＯＲ阻害剤を使用する。低い免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤の投与（例えば、それ自体、免疫系を完全に抑制するには不十分であるが、免疫機能の改善に十分である用量）は、対象における免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＣＡＲ発現細胞の性能を最適化できる。ｍＴＯＲ阻害を測定する方法、用量、処置レジメン及び適当な医薬組成物は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１５／０１２４００３６号明細書に記載される。ＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞をｍＴＯＲ阻害剤と組み合わせる方法については、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１６００４６７２４号明細書の段落［０８２６］〜［０８６１］を参照されたい。
【０６６０】
ＣＡＲ有効性又は試料適性を評価するための方法及びバイオマーカー
別の態様において、本発明は、対象（例えば、癌を有する対象、例えば血液癌）におけるＣＡＲ発現細胞療法（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ治療）の有効性又はＣＡＲ治療（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ治療）のための試料（例えば、アフェレーシス試料）の適性を評価又はモニタリングする方法に関する。方法は、ＣＡＲ治療又は試料適性に対する有効性の値を得ることを含み、ここで、前記値は、ＣＡＲ発現細胞療法の有効性又は適性の指標である。
【０６６１】
実施形態において、ＣＡＲ療法に対する有効性の値又はサンプルの適合性は、以下の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ又はそれを超える（全て）の尺度を含む：
（ｉ）サンプル（例えば、アフェレーシスサンプル又は製造されたＣＡＲ発現細胞産物サンプル）中の休止ＴＥＦＦ細胞、休止ＴＲＥＧ細胞、より若いＴ細胞（例えば、より若いＣＤ４若しくはＣＤ８細胞又はガンマ／デルタＴ細胞）若しくは初期メモリーＴ細胞又はそれらの組み合わせの１つ、２つ、３つ又はそれを超える数（例えば、全て）のレベル又は活性；
（ｉｉ）サンプル（例えば、アフェレーシスサンプル又は製造されたＣＡＲ発現細胞産物サンプル）中の活性化ＴＥＦＦ細胞、活性化ＴＲＥＧ細胞、より古いＴ細胞（例えば、より古いＣＤ４若しくはＣＤ８細胞）若しくは後期メモリーＴ細胞又はそれらの組み合わせの１つ、２つ、３つ又はそれを超える数（例えば、全て）のレベル又は活性；
（ｉｉｉ）サンプル（例えば、アフェレーシスサンプル又は製造されたＣＡＲ発現細胞産物サンプル）中の免疫細胞枯渇マーカー、例えば１つ、２つ又はそれを超える数の免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＴＩＭ−３及び／又はＬＡＧ−３）のレベル又は活性。いくつかの実施形態において、免疫細胞は、枯渇した表現型を有し、例えば少なくとも２つの枯渇マーカーを共発現し、例えばＰＤ−１及びＴＩＭ−３を共発現する。他の実施形態において、免疫細胞は、枯渇した表現型を有し、例えば少なくとも２つの枯渇マーカーを共発現し、例えばＰＤ−１及びＬＡＧ−３を共発現する；
（ｉｖ）サンプル（例えば、アフェレーシスサンプル又は製造されたＣＡＲ発現細胞産物サンプル）中の、例えばＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞集団における、ＣＤ２７及び／又はＣＤ４５ＲＯ−（例えば、ＣＤ２７＋ＣＤ４５ＲＯ−）免疫エフェクター細胞のレベル又は活性；
（ｖ）ＣＣＬ２０、ＩＬ−１７ａ及び／又はＩＬ−６、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、ＣＤ５７、ＣＤ２７、ＣＤ１２２、ＣＤ６２Ｌ、ＫＬＲＧ１から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、１０個、２０個又はそれを超える数のバイオマーカーのレベル又は活性；
（ｖｉ）ＣＡＲ発現細胞産物サンプル、例えばＢＣＭＡ発現細胞産物サンプルにおける、サイトカインレベル又は活性（例えば、サイトカインレパートリーの質）；又は
（ｖｉｉ）製造されたＣＡＲ発現細胞産物サンプルにおけるＣＡＲ発現細胞の形質導入効率。
【０６６２】
本明細書に開示される方法のいずれかのいくつかの実施形態において、ＣＡＲ発現細胞療法は、複数（例えば、集団）のＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞、例えば複数（例えば、集団）のＴ細胞又はＮＫ細胞又はそれらの組み合わせを含む。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞療法は、ＢＣＭＡＣＡＲ療法である。
【０６６３】
本明細書に開示される方法のいずれかのいくつかの実施形態において、（ｉ）〜（ｖｉｉ）の１つ以上の尺度は、対象から取得されたアフェレーシスサンプルから得られる。アフェレーシスサンプルは、注入又は再注入の前に評価できる。
【０６６４】
本明細書に開示される方法のいずれかのいくつかの実施形態において、（ｉ）〜（ｖｉｉ）の１つ以上の尺度は、製造されたＣＡＲ発現細胞産物サンプル、例えばＢＣＭＡＣＡＲ発現細胞産物サンプルから得られる。製造されたＣＡＲ発現細胞産物は、注入又は再注入前に評価することができる。
【０６６５】
本明細書に開示される方法のいずれかのいくつかの実施形態において、対象は、ＣＡＲ発現細胞療法を受ける前、受けている間又は受けた後に評価される。
【０６６６】
本明細書に開示される方法のいずれかのいくつかの実施形態において、（ｉ）〜（ｖｉｉ）の１つ以上の尺度は、遺伝子発現、フローサイトメトリー又はタンパク質発現の１つ以上のプロファイルを評価する。
【０６６７】
本明細書に開示される方法のいずれかのいくつかの実施形態において、方法は、（ｉ）〜（ｖｉｉ）の１つ以上の尺度に基づいて、対象を応答者、非応答者、再発者又は非再発者として認識することを更に含む。
【０６６８】
本明細書に開示される方法のいずれかのいくつかの実施形態において、応答者（例えば、完全応答者）は、非応答者と比較して、ＧＺＭＫ、ＰＰＦ１ＢＰ２又はナイーブＴ細胞の１つ、２つ又はそれを超える数（全て）の、より高いレベル又は活性を有するか又はそれを有すると認識される。
【０６６９】
本明細書に開示される方法のいずれかのいくつかの実施形態において、非応答者は、応答者と比較して、ＩＬ２２、ＩＬ−２ＲＡ、ＩＬ−２１、ＩＲＦ８、ＩＬ８、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ２２、エフェクターＴ細胞又は制御性Ｔ細胞の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ又はそれを超える数（例えば、全て）のより高いレベル又は活性を有するか又は有すると認識される。
【０６７０】
一実施形態において、再発者は、非再発者と比較して、以下の遺伝子：ＭＩＲ１９９Ａ１、ＭＩＲ１２０３、ｕｃ０２１ｏｖｐ、ＩＴＭ２Ｃ及びＨＬＡ−ＤＱＢ１の１つ以上（例えば、２つ、３つ、４つ又は全て）の発現レベルの増加及び／又は非再発者と比較して、以下の遺伝子：ＰＰＩＡＬ４Ｄ、ＴＴＴＹ１０、ＴＸＬＮＧ２Ｐ、ＭＩＲ４６５０−１、ＫＤＭ５Ｄ、ＵＳＰ９Ｙ、ＰＲＫＹ、ＲＰＳ４Ｙ２、ＲＰＳ４Ｙ１、ＮＣＲＮＡ００１８５、ＳＵＬＴ１Ｅ１及びＥＩＦ１ＡＹの１つ以上（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個、１１個又は全て）の発現レベルの減少を有するか又はそれを有すると認識される患者である。
【０６７１】
本明細書に開示される方法のいずれかのいくつかの実施形態において、完全応答者は、参照値、例えばＣＤ８＋Ｔ細胞の非応答者のパーセンテージと比較して、より大きい、例えば統計的に有意に大きいパーセンテージのＣＤ８＋Ｔ細胞を有するか又はそれを有すると認識される。
【０６７２】
本明細書に開示される方法のいずれかのいくつかの実施形態において、完全応答者は、参照値、例えば非応答者のＣＤ２７＋ＣＤ４５ＲＯ−免疫エフェクター細胞数と比較して、例えばＣＤ８＋集団において、より大きいパーセンテージのＣＤ２７＋ＣＤ４５ＲＯ−免疫エフェクター細胞を有するか又はそれを有すると認識される。
【０６７３】
本明細書に開示される方法のいずれかのいくつかの実施形態において、完全応答者又は部分的応答者は、参照値、例えばＣＤ４＋Ｔ細胞の非応答者のパーセンテージと比較して、より大きい、例えば統計的に有意に大きいパーセンテージのＣＤ４＋Ｔ細胞を有するか又はそれを有すると認識される。
【０６７４】
本明細書に開示される方法のいずれかのいくつかの実施形態において、完全応答者は、参照値、例えば非応答者の休止ＴＥＦＦ細胞、休止ＴＲＥＧ細胞、より若いＴ細胞（例えば、より若いＣＤ４若しくはＣＤ８細胞）又は初期メモリーＴ細胞数と比較して、より大きいパーセンテージの休止ＴＥＦＦ細胞、休止ＴＲＥＧ細胞、より若いＴ細胞（例えば、より若いＣＤ４若しくはＣＤ８細胞又はガンマ／デルタＴ細胞）若しくは初期メモリーＴ細胞又はそれらの組み合わせの１つ、２つ、３つ又はそれを超える数（例えば、全て）を有するか又はそれを有すると認識される。
【０６７５】
本明細書に開示される方法のいずれかのいくつかの実施形態において、非応答者は、参照値、例えば応答者の活性化ＴＥＦＦ細胞、活性化ＴＲＥＧ細胞、より古いＴ細胞（例えば、より古いＣＤ４若しくはＣＤ８細胞）又は後期メモリーＴ細胞数と比較して、より大きいパーセンテージの活性化ＴＥＦＦ細胞、活性化ＴＲＥＧ細胞、より古いＴ細胞（例えば、より古いＣＤ４若しくはＣＤ８細胞）若しくは後期メモリーＴ細胞又はそれらの組み合わせの１つ、２つ、３つ又はそれを超える数（例えば、全て）を有するか又はそれを有すると認識される。
【０６７６】
本明細書に開示される方法のいずれかのいくつかの実施形態において、非応答者は、より大きいパーセンテージの免疫細胞枯渇マーカー、例えば１つ、２つ又はそれを超える数の免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＴＩＭ−３及び／又はＬＡＧ−３）を有するか又はそれを有すると認識される。いくつかの実施形態において、非応答者は、応答者からのＰＤ−１又はＬＡＧ−３を発現する免疫エフェクター細胞のパーセンテージと比較して、より大きいパーセンテージのＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１又はＬＡＧ−３を発現する免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞）（例えば、ＣＡＲ発現ＣＤ４＋細胞及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞）を有するか又はそれを有すると認識される。
【０６７７】
いくつかの実施形態において、非応答者は、より大きいパーセンテージの、枯渇した表現型を有する免疫細胞、例えば少なくとも２つの枯渇マーカーを共発現する、例えばＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１及び／又はＴＩＭ−３を共発現する免疫細胞を有するか又はそれを有すると認識される。他の実施形態において、非応答者は、より大きいパーセンテージの、枯渇した表現型を有する免疫細胞、例えば少なくとも２つの枯渇マーカーを共発現する、例えばＰＤ−１及びＬＡＧ−３を共発現する免疫細胞を有するか又はそれを有すると認識される。
【０６７８】
本明細書に開示される方法のいずれかのいくつかの実施形態において、非応答者は、ＣＡＲ発現細胞療法に対する応答者（例えば、完全応答者）と比較して、ＣＡＲ発現細胞集団（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋細胞集団）における、より大きいパーセンテージのＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１＋／ＬＡＧ−３＋細胞を有するか又はそれを有すると認識される。
【０６７９】
本明細書に開示される方法のいずれかのいくつかの実施形態において、部分的応答者は、ＣＡＲ発現細胞集団（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋細胞集団）において、応答者より高いパーセンテージのＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１＋／ＬＡＧ−３＋細胞を有するか又はそれを有すると認識される。
【０６８０】
本明細書に開示される方法のいずれかのいくつかの実施形態において、非応答者は、ＰＤ１／ＰＤ−Ｌ１＋ＣＡＲ＋の表現型の枯渇及びＣＡＲ発現細胞集団（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋細胞集団）におけるＬＡＧ３の共発現を有するか又はそれを有すると認識される。
【０６８１】
本明細書に開示される方法のいずれかのいくつかの実施形態において、非応答者は、応答者（例えば、完全応答者）と比較して、ＣＡＲ発現細胞集団（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋細胞集団）における、より大きいパーセンテージのＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１＋／ＴＩＭ−３＋細胞を有するか又はそれを有すると認識される。
【０６８２】
本明細書に開示される方法のいずれかのいくつかの実施形態において、部分的応答者は、ＣＡＲ発現細胞集団（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ＋細胞集団）において、応答者より高いパーセンテージのＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１＋／ＴＩＭ−３＋細胞を有するか又はそれを有すると認識される。
【０６８３】
本明細書に開示される方法のいずれかのいくつかの実施形態において、アフェレーシスサンプル中のＣＤ８＋ＣＤ２７＋ＣＤ４５ＲＯ−Ｔ細胞の存在は、ＣＡＲ発現細胞療法（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ療法）に対する対象の応答の正の予測因子である。
【０６８４】
本明細書に開示される方法のいずれかのいくつかの実施形態において、アフェレーシスサンプル中のＰＤ１＋ＣＡＲ＋及びＬＡＧ３＋又はＴＩＭ３＋Ｔ細胞の高いパーセンテージは、ＣＡＲ発現細胞療法（例えば、ＢＣＭＡＣＡＲ療法）に対する対象の応答の予後不良の予測因子である。
【０６８５】
本明細書に開示される方法のいずれかのいくつかの実施形態において、応答者（例えば、完全又は部分的応答者）は、以下のプロファイルの１つ、２つ、３つ又はそれを超える数（又は全て）を有する：
（ｉ）参照値、例えば非応答者のＣＤ２７＋免疫エフェクター細胞数と比較して、より大きい数のＣＤ２７＋免疫エフェクター細胞を有する；
（ｉｉ）（ｉ）は、参照値、例えば非応答者のＣＤ８＋Ｔ細胞数と比較して、より大きい数のＣＤ８＋Ｔ細胞を有する；
（ｉｉｉ）参照値、例えば１つ以上のチェックポイント阻害剤を発現する非応答者の細胞数と比較して、より小さい数の、例えばＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３若しくはＫＬＲＧ−１又はそれらの組み合わせから選択される１つ以上のチェックポイント阻害剤を有する；又は
（ｉｖ）参照値、例えば休止ＴＥＦＦ細胞、休止ＴＲＥＧ細胞、ナイーブＣＤ４細胞、未刺激のメモリー細胞又は初期メモリーＴ細胞の非応答者数と比較して、より大きい数の、１つ、２つ、３つ、４つ又はそれを超える数（全て）の休止ＴＥＦＦ細胞、休止ＴＲＥＧ細胞、ナイーブＣＤ４細胞、未刺激のメモリー細胞若しくは初期メモリーＴ細胞又はそれらの組み合わせを有する。
【０６８６】
本明細書に開示される方法のいずれかのいくつかの実施形態において、（ｖｉ）のサイトカインレベル又は活性は、サイトカインＣＣＬ２０／ＭＩＰ３ａ、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ６、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγ、ＩＬ１０、ＩＬ１３、ＩＬ２、ＩＬ２１、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ９、ＴＮＦα又はそれらの組み合わせの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ又はそれを超える数（又は全て）から選択される。サイトカインは、ＩＬ−１７ａ、ＣＣＬ２０、ＩＬ２、ＩＬ６又はＴＮＦａの１つ、２つ、３つ、４つ又はそれを超える数（全て）から選択することができる。いくつかの実施形態において、サイトカインのレベル又は活性の増加は、ＩＬ−１７ａ及びＣＣＬ２０の一方又は両方から選択され、応答性の増加又は再発の減少を示す。
【０６８７】
本明細書に開示される方法のいずれかのいくつかの実施形態において、（ｖｉｉ）における１５％以上の形質導入効率は、応答性の増加又は再発の減少を示す。
【０６８８】
本明細書に開示される方法のいずれかのいくつかの実施形態において、（ｖｉｉ）における１５％未満の形質導入効率は、応答性の減少又は再発の増加を示す。
【０６８９】
実施形態において、本明細書の方法によって認識された応答者、非応答者、再発者又は非再発者は、臨床基準に従って更に評価することができる。例えば、完全応答者は、疾患（例えば、癌）を有するか又はそれを有する対象として認識され、処置に対する完全応答、例えば完全寛解を示す。完全応答は、本明細書に記載されるように、例えばＮＣＣＮ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ（登録商標）又はＣｈｅｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  １７：１２４４（１９９９）及びＣｈｅｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｒｅｖｉｓｅｄ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  Ｍａｌｉｇｎａｎｔ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ”，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２５：５７９−５８６（２００７）（これらは、両方とも参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を使用して認識され得る。部分的応答者は、疾患（例えば、癌）を有するか又はそれを有する対象として識別され、処置に対する部分的応答、例えば部分的寛解を示す。部分的応答は、例えば、ＮＣＣＮ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ（登録商標）又は本明細書に記載されているようなＣｈｅｓｏｎ基準を使用して同定され得る。非応答者は、疾患（例えば、癌）を有するか又はそれを有する対象として識別され、処置に応答を示さず、例えば、患者は、安定した疾患又は進行性の疾患を有する。非応答者は、例えば、ＮＣＣＮ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ（登録商標）又は本明細書に記載されているようなＣｈｅｓｏｎ基準を使用して同定され得る。
【０６９０】
代替的に又は本明細書に開示される方法と組み合わせて、前記値に応答して、以下の１つ、２つ、３つ、４つ又はそれを超える数を実施する：
ＣＡＲ発現細胞療法を例えば応答者又は非再発者に投与すること；
ＣＡＲ発現細胞療法の変更された投与量を投与したこと；
ＣＡＲ発現細胞療法のスケジュール又は時間経過を変更すること；
ＣＡＲ発現細胞療法と組み合わせた更なる薬剤、例えばチェックポイント阻害剤、例えば本明細書に記載のチェックポイント阻害剤を例えば非応答者又は部分的応答者に投与すること；
ＣＡＲ発現細胞療法による処置前に、対象におけるより若いＴ細胞の数を増加させる療法を非応答者又は部分的応答者に投与すること；
ＣＡＲ発現細胞療法の製造プロセスを変更すること、例えばＣＡＲをコードする核酸を導入する前により若いＴ細胞を濃縮すること又は形質導入効率を、例えば非応答者又は部分的応答者として認識された対象について高めること；
代替療法を例えば非応答者又は部分的応答者又は再発者に対して投与すること；又は
対象が非応答者又は再発者であるか又はそう認識された場合、ＴＲＥＧ細胞集団及び／又はＴＲＥＧ遺伝子シグネチャーを例えばＣＤ２５枯渇、シクロホスファミド、抗ＧＩＴＲ抗体又はそれらの組み合わせの投与の１つ以上によって減少させること。
【０６９１】
特定の実施形態において、対象は、抗ＧＩＴＲ抗体で前処置される。特定の実施形態において、対象は、注入又は再注入前に抗ＧＩＴＲ抗体で処置される。
【０６９２】
バイオポリマー送達方法
一実施形態において、本明細書に開示する１つ以上のＣＡＲ発現細胞をバイオポリマー足場、例えばバイオポリマーインプラントにより対象に投与又は送達し得る。バイオポリマーをバイオポリマー足場、例えばバイオポリマーインプラントにより対象に投与又は送達し得る。バイオポリマー足場は、生体適合性（例えば、炎症性若しくは免疫応答を実質的に誘発しない）及び／又は天然に存在し得るか若しくは合成である生分解性ポリマーを含む。
【０６９３】
適当なバイオポリマーの例は、寒天、アガロース、アルギン酸、アルギン酸／リン酸カルシウムセメント（ＣＰＣ）、β−ガラクトシダーゼ（β−ＧＡＬ）、（１，２，３，４，６−ペンタアセチルａ−Ｄ−ガラクトース）、セルロース、キチン、キトサン、コラーゲン、エラスチン、ゼラチン、ヒアルロン酸コラーゲン、ヒドロキシアパタイト、ポリ（３−ヒドロキシブチレート−コ−３−ヒドロキシ−ヘキサノエート）（ＰＨＢＨＨｘ）、ポリ（ラクチド）、ポリ（カプロラクトン）（ＰＣＬ）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧ）、ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリプロピレンオキシド（ＰＰＯ）、ポリビニルアルコール）（ＰＶＡ）、絹、大豆タンパク質及び大豆タンパク質単離体の、単独で又は任意の他のポリマー組成物とのあらゆる濃度及びあらゆる比での混合物を含むが、これらに限定されない。バイオポリマーは、接着又は遊走促進分子、例えばリンパ球のコラーゲン受容体に結合するコラーゲン模倣ペプチド及び／又は送達する細胞の送達、増殖又は機能、例えば抗癌活性を増強する刺激分子で増強又は改変され得る。バイオポリマー足場は、注射可能な例えばゲル又は半固体又は固体組成物であり得る。
【０６９４】
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、対象への送達前にバイオポリマー足場上に播種する。実施形態において、バイオポリマー足場は、例えば、足場のバイオポリマーに取り込まれた又はコンジュゲートされた、更に本明細書に記載の１つ以上の更なる治療剤（例えば、別のＣＡＲ発現細胞、抗体又は小分子）又はＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤を含む。実施形態において、バイオポリマー足場を例えば腫瘍内に注射するか、又は腫瘍若しくは抗腫瘍効果を仲介するのに十分に腫瘍に近位に外科的にインプラントする。バイオポリマー組成物及びその送達のための方法の更なる例は、Ｓｔｅｐｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１５，３３：９７−１０１；及び国際公開第２０１４／１１０５９１号パンフレットに記載される。
【０６９５】
医薬組成物及び処置
本発明の医薬組成物は、本明細書に記載のように、ＣＡＲ発現細胞、例えば複数のＣＡＲ発現細胞を１つ以上の薬学的に又は生理学的に許容される担体、希釈剤又は添加物と組み合わせて含む。このような組成物は、中性緩衝化食塩水、リン酸緩衝化食塩水などの緩衝液；グルコース、マンノース、スクロース又はデキストラン、マンニトールなどの炭水化物；タンパク質；グリシンなどのポリペプチド又はアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡ又はグルタチオンなどのキレート剤；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；及び防腐剤を含み得る。本発明の組成物は、１つの態様において静脈内投与用に製剤される。
【０６９６】
本発明の医薬組成物を、処置する（又は予防する）疾患に適する方法で投与し得る。投与の量及び頻度は、患者の状態及び患者の疾患のタイプ及び重症度などの因子により決定されるが、適切な用量は、臨床試験により決定され得る。
【０６９７】
一部の実施形態において、医薬組成物は、例えば、エンドトキシン、マイコプラズマ、複製可能レンチウイルス（ＲＣＬ）、ｐ２４、ＶＳＶ−Ｇ核酸、ＨＩＶ  ｇａｇ、残留抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８被覆ビーズ、マウス抗体、貯留ヒト血清、ウシ血清アルブミン、ウシ血清、培養培地要素、ベクターパッケージング細胞又はプラスミド成分、細菌及び真菌からなる群から選択される汚染物が実質的になく、例えば検出可能なレベルで存在しない。一部の実施形態において、細菌は、アルガリゲネス・フェカリス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ）、ナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）、シュードモナス・エルジノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、ストレプトコッカス・ニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）及びストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ａ群からなる群から選択される少なくとも１つである。
【０６９８】
「免疫学的に有効量」、「抗腫瘍有効量」、「腫瘍阻害有効量」又は「治療量」が示されるとき、本発明の組成物の投与すべき正確な量は、年齢、体重、腫瘍サイズ、感染の程度又は転移及び患者（対象）の状態の個体差を考慮して医師が決定できる。本明細書に記載の免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を含む医薬組成物を、１０４〜１０９細胞／ｋｇ体重、いくつかの例において１０５〜１０６細胞／ｋｇ体重の範囲の用量（これらの範囲内の全整数値を含む）で投与し得ると一般に述べることができる。Ｔ細胞組成物をまたこの用量で複数回投与し得る。細胞を、免疫療法において一般に知られる注入技術を使用して投与できる（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇ．Ｊ．ｏｆ  Ｍｅｄ．３１９：１６７６，１９８８を参照されたい）。
【０６９９】
一態様において、活性化Ｔ細胞を対象に投与し、続いて血液を採り（又はアフェレーシスを実施し）、本発明に従ってそれからのＴ細胞を活性化し、これらの活性化し、且つ増殖させたＴ細胞を患者に再注入することが望ましいことがある。この過程を数週間毎に複数回実施できる。一態様において、Ｔ細胞を、１０ｃｃ〜４００ｃｃの採血した血液から活性化できる。一態様において、Ｔ細胞を、２０ｃｃ、３０ｃｃ、４０ｃｃ、５０ｃｃ、６０ｃｃ、７０ｃｃ、８０ｃｃ、９０ｃｃ又は１００ｃｃの採血した血液から活性化する。
【０７００】
対象組成物の投与は、エアロゾル吸入、注射、摂取、輸注、留置又は移植を含む任意の簡便な方法により実施し得る。本明細書に記載の組成物を患者に経動脈的に、皮下に、皮内に、腫瘍内に、節内に、髄内に、筋肉内に、静脈内（ｉ．ｖ．）注射により又は腹腔内に投与し得る。１つの態様において、本発明のＣＡＲ発現細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）組成物を患者に皮内又は皮下注射により投与する。１つの態様において、本発明のＴ細胞組成物をｉ．ｖ．注射により投与する。ＣＡＲ発現細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の組成物を腫瘍、リンパ節又は感染部位に直接注射し得る。
【０７０１】
特定の例示的態様において、対象は、白血球を採取し、エクスビボで富化又は枯渇させて、目的の細胞、例えば免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を選択及び／又は単離する白血球除去を受け得る。これらの免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）単離体を当技術分野で知られる方法により増殖させ、１つ以上の本発明のＣＡＲ構築物が導入され、それにより本発明のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）が創製されるように処理し得る。処置を必要とする対象を、その後、高用量の化学療法剤と続く末梢血幹細胞移植の標準的処置に付し得る。一態様において、移植後又は移植と同時に、対象は、増殖させた本発明のＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の注入を受ける。更なる態様において、増殖細胞を手術前又は後に投与する。
【０７０２】
実施形態において、リンパ枯渇は、例えば、本明細書に記載のＣＡＲ（例えば、本明細書に記載のＢＣＭＡ結合ＣＡＲ）を発現する１つ以上の細胞を投与する前に対象に対して実施される。実施形態において、リンパ枯渇は、メルファラン、サイトキサン、シクロホスファミド及びフルダラビンの１つ以上を投与することを含む。
【０７０３】
患者に投与すべき上記処置の用量は、処置する状態の正確な性質及び処置のレシピエントにより変わる。ヒト投与のためのスケーリングは、当技術分野で認識されている習慣に従って実施できる。ＣＡＭＰＡＴＨの用量は、例えば、概して成人患者に１〜約１００ｍｇの範囲であり、通常、連日で１〜３０日の期間にわたって投与する。好ましい１日用量は、１〜１０ｍｇ／日であるが、いくつかの例において最大４０ｍｇ／日までの高用量を使用し得る（米国特許６，１２０，７６６号明細書に記載）。
【０７０４】
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、例えば、インビトロ転写を使用して免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）に導入され、対象（例えば、ヒト）は、本発明のＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の初期投与と、その後の本発明のＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の１回以上の投与とを受け、ここで、その後の１回以上の投与は、先の投与後、１５日、例えば１４日、１３日、１２日、１１日、１０日、９日、８日、７日、６日、５日、４日、３日又は２日以内に行う。いくつかの実施形態において、本発明のＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の１回を超える投与を対象（例えば、ヒト）に１週間あたりで行い、例えば本発明のＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を１週間あたり２回、３回又は４回投与する。いくつかの実施形態において、対象（例えば、ヒト対象）は、ＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の１週間あたり１回を超える投与を受け（例えば、１週間当たり２回、３回又は４回投与）（本明細書ではサイクルとも称される）、続いて１週間、ＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を投与されず、その後、ＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の１回以上の更なる投与（例えば、１週間あたりでＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の１回を超える投与）を対象に投与する。別の実施形態において、対象（例えば、ヒト対象）は、ＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の１回を超えるサイクルを受け、各サイクル間の期間は、１０日、９日、８日、７日、６日、５日、４日又は３日より短い。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を隔日で１週間あたり３回投与する。いくつかの実施形態において、本発明のＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）は、少なくとも２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間又はそれを超えて投与される。
【０７０５】
一態様において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ又はＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）は、レンチウイルスなどのレンチウイルスウイルスベクターを使用して産生される。この方法で産生したＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲＴ又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）は、安定なＣＡＲ発現を有する。
【０７０６】
一態様において、ＣＡＲ発現細胞、例えばＣＡＲＴを、ガンマレトロウイルスベクター、例えば本明細書に記載のガンマレトロウイルスベクターなどのウイルスベクターを使用して産生する。これらのベクターを使用して産生されたＣＡＲＴは、安定なＣＡＲ発現を有し得る。
【０７０７】
一態様において、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲＴ又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）は、形質導入４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日後、ＣＡＲベクターを一過性に発現する。ＣＡＲの一過性発現は、ＲＮＡ  ＣＡＲベクター送達により行われ得る。一態様において、ＣＡＲ  ＲＮＡをエレクトロポーテーションによって細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）に形質導入する。
【０７０８】
一過性に発現するＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲＴ又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）（特にマウスｓｃＦｖ担持ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲＴ又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）を伴う）を使用して処置される患者で生じ得る可能性のある問題は、複数処置後のアナフィラキシーである。
【０７０９】
この理論に拘束されることを望まないが、このようなアナフィラキシー応答は、液性抗ＣＡＲ応答を発達させる患者、即ち抗ＩｇＥアイソタイプを有する抗ＣＡＲ抗体が原因であると考えられる。細胞を産生する患者の抗体は、抗原への暴露の１０〜１４日の中断があるとき、ＩｇＧアイソタイプ（これはアナフィラキシーを生じない）からＩｇＥアイソタイプへのクラススイッチを受けると考えられる。
【０７１０】
患者が一過性ＣＡＲ治療（例えば、ＲＮＡ形質導入により完成されたものなど）中に抗ＣＡＲ抗体応答を産生する高リスクにある場合、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲＴ細胞又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞）注入中断は、１０〜１４日を超えて継続してはならない。
【実施例】
【０７１１】
本発明を、次の実験的実施例を参照して更に詳細に記載する。これらの実施例は、説明のみを目的として提供し、特に断らない限り限定を意図しない。従って、本発明は、決して次の実施例に限定されると解釈してはならず、むしろ本明細書に提供する教示の結果として明らかとなる任意且つ全ての変形形態を含むと解釈すべきである。
【０７１２】
更に記載しなくとも、当業者は、前の記載及び次の説明的実施例を使用して、本発明の化合物を製造及び利用し、本願発明方法を実施できると考える。次の作業実施例は、本発明の多様な態様を特に示すものであり、本開示を限定するものと解釈されるべきでない。
【０７１３】
実施例１：ヒトＢＣＭＡ  ＣＡＲのインビトロ特性評価
完全ヒト単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）のセットは、ＣＤ３ゼータ鎖及び４−１ＢＢ刺激分子を伴うレンチウイルスＣＡＲ発現ベクターにクローン化された：Ｒ１Ｂ６、Ｒ１Ｆ２、Ｒ１Ｇ５、ＰＩ６１、Ｂ６１−１０、Ｂ６１−０２、Ｈｙ０３及びＨｙ５２。構築物は、最初に自動細胞レポーターアッセイを使用してスクリーニングされ、その後、初代Ｔ細胞での発現並びにＢＣＭＡ発現（「ＢＣＭＡ＋」又は「ＢＣＭＡ陽性」）標的に対するエフェクターＴ細胞応答（「ＢＣＭＡ  ＣＡＲＴ」又は「ＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞」）の量及び質に基づいて最適なクローンが選択された。エフェクターＴ細胞の応答には、細胞の拡大、増殖、倍増、サイトカイン産生及び標的細胞の死滅又は細胞溶解活性（脱顆粒）が含まれるが、これらに限定されない。
【０７１４】
ＢＣＭＡ  ＣＡＲレンチウイルスの生成
レンチウイルス導入ベクターをコードする上記の全てのｓｃＦｖを使用して、ＶＳＶｇシュードタイプレンチウイルス粒子にパッケージされたゲノム材料を産生した。ＣＡＲをコードするレンチウイルス導入ベクターＤＮＡを、リポフェクタミン試薬と組み合わせて３つのパッケージング成分ＶＳＶｇ、ｇａｇ／ｐｏｌ及びｒｅｖと混合して、Ｌｅｎｔｉ−Ｘ  ２９３Ｔ細胞（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）をトランスフェクトし、その１２〜１８時間後に培地を交換した。培地交換の３０時間後、培地を収集し、ろ過し、−８０℃で保存した。
【０７１５】
自動システムを使用したＢＣＭＡ  ＣＡＲ  ＪＮＬ及びＪＮＬスクリーニングレポーターアッセイ
レポーターアッセイでは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲをコードするレンチウイルスを、ＨＥＫ２９３細胞で２つの異なる細胞密度（４０，０００細胞（１ｘＨ２９３）又は８０，０００細胞（２ｘＨ２９３））で、９６ウェルプレートで自動化された小規模な方法で生成し、ここで、トランスフェクションの４８時間後にウイルスを含有する上清を回収し、Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞レポーター細胞株の形質導入のために、凍結せず新鮮に使用した。Ｊｕｒｋａｔ  ＮＦＡＴルシフェラーゼ（ＪＮＬ）レポーター細胞株は、急性Ｔ細胞白血病株Ｊｕｒｋａｔに基づく。この株は、活性化Ｔ細胞の核因子（ＮＦＡＴ）応答エレメントの制御下でルシフェラーゼを発現するように修飾された。ＢＣＭＡ  ＣＡＲによる形質導入では、１０，０００ＪＮＬ細胞／ウェルの９６ウェルプレートに、５０μｌの新鮮な４５μｍろ過ウイルス含有上清を形質導入した。標的細胞と共培養する前にプレートを５日間培養した。
【０７１６】
ＪＮＬ細胞を活性化するＢＣＭＡ  ＣＡＲの機能的能力を評価するために、それらを異なるエフェクター対標的細胞比（Ｅ：Ｔ比）で標的癌細胞と共培養し、ルシフェラーゼ発現を定量化することによってそれらの活性化を読み取った。ｓｃＦｖベースのＣＡＲ  Ｒ１Ｂ６、Ｒ１Ｆ２、Ｒ１Ｇ５、ＰＩ６１、Ｂ６１−１０、Ｂ６１−０２、Ｈｙ０３及びＨｙ５２が評価された。ＣＤ１９  ＪＮＬ  ＣＡＲ細胞を標的特異的対照として使用し、標的細胞を含まない培地のみを陰性対照として機能した。
【０７１７】
上記の５日間形質導入されたＪＮＬ  ＣＡＲ細胞は、ＢＣＭＡ陽性多発性骨髄腫（ＭＭ）細胞株ＫＭＳ１１又は急性リンパ性白血病細胞株であるＮＡＬＭ６と共培養され、ＢＣＭＡ陰性対照として機能した。残りのＪＮＬ  ＣＡＲ  Ｔ細胞は、フローサイトメトリーによってＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現について評価された。共培養は、エフェクターと標的（Ｅ：Ｔ）の比を４：１、２：１、１：１及び０．５：１で、３８４ウェルプレートに設定し、２４時間インキュベートし、その後、活性化されたＪＮＬ  ＣＡＲ  Ｔ細胞によるルシフェラーゼの発現は、Ｂｒｉｇｈｔ−Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）によって定量化された。各ウェルから放出された光（発光）の量は、それぞれのＣＡＲによるＪＮＬ活性化の直接読み取りであった。ＪＮＬ細胞は、発光レベルがＵＴＤ細胞の２倍以上である場合に活性化されたと見なされた。ＢＣＭＡ＋ＫＭＳ１１細胞株は、Ｒ１Ｂ６、Ｒ１Ｆ２、Ｒ１Ｇ５、ＰＩ６１、Ｂ６１−１０、Ｂ６１−０２、Ｈｙ０３及びＨｙ５２を発現するＪＮＬ細胞の活性化をもたらした（図１Ａ及び１Ｃ）。ＢＣＭＡ  ＣＡＲのいずれも、ＢＣＭＡ陰性系統ＮＡＬＭ６による活性化を示さなかった（図１Ｅ及び１Ｆ）。標的細胞を含まない培地のみでは、試験したＣＡＲ形質導入ＪＮＬは、いずれも活性化しなかった（図１Ｇ及び１Ｈ）。ＦＡＣＳ分析は、形質導入されたＪＮＬにおけるＢＣＭＡ−ＣＡＲ発現が様々な程度で検出されたことを示した。ＣＡＲ％は、一般に、最も活性なＪＮＬ  ＣＡＲＴにおけるＫＭＳ１１細胞によるＪＮＬ活性化と正の相関がある（図１Ｂ及び１Ｄ）。
【０７１８】
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞の生成
以下の８つのＣＡＲが初代Ｔ細胞におけるＣＡＲの発現、安定性及び有効性の分析のために選択された：Ｒ１Ｂ６、Ｒ１Ｆ２、Ｒ１Ｇ５、ＰＩ６１、Ｂ６１−１０、Ｂ６１−０２、Ｈｙ０３及びＨｙ５２。ＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＣＤ３＋Ｔ細胞のネガティブ選択によってＴ細胞（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋リンパ球）が得られた健康なアフェレーシスされたドナーからの血液から出発して生成された。これらの細胞は、Ｔ細胞培地（ＲＰＭＩ１６４０、１０％熱不活化ウシ胎児血清（ＦＣＳ）、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１ｘペニシリン／ストレプトマイシン、１００μＭ非必須アミノ酸、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ及び５５μＭ  ２−メルカプトエタノール）中、１：３（Ｔ細胞対ビーズ）の比率でのＣＤ３／ＣＤ２８ビーズ（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）Ｈｕｍａｎ  Ｔ−ＥｘｐａｎｄｅｒＣＤ３／ＣＤ２８、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）の添加によって活性化された。Ｔ細胞は、３７℃、５％ＣＯ２で、２４ウェルプレートの１ウェルあたり１ｍＬの培地中、０．５×１０６個のＴ細胞で培養した。２４時間後、Ｔ細胞がブラスティングしているとき、Ｔ細胞に感染多重度（ＭＯＩ）５でＢＣＭＡ  ＣＡＲウイルスを形質導入した。Ｔ細胞は対数増殖パターンで分裂し始め、これを１ｍＬあたりの細胞数を測定することによってモニターし、Ｔ細胞を２日ごとに新鮮な培地で希釈し、ビーズを取り除き、９日目に更なる分析のために回収した。Ｔ細胞のアリコートを染色して、ＦＡＣＳ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ（ＢＤ）で５日目及び９日目にフローサイトメトリーによってＣＡＲ発現を測定した。全てのＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｔ細胞は、研究グレード（即ち臨床グレードでない）の製造条件下で産生された。
【０７１９】
ＢＣＭＡ−ＣＡＲ表面発現及びその安定性は、ｒＢＣＭＡ＿Ｆｃ−ＡＦ６４７染色細胞のフローサイトメトリー分析を使用して５日目及び９日目にＣＡＲ％及びＭＦＩ（平均蛍光強度）を測定することによって評価された（図２及び表１７）。９日目の最終産物におけるＢＣＭＡ  ＣＡＲの発現は、構築物ごとに異なり、１８％から４２．４％の範囲であり、ＭＦＩは、６７２〜５２３８の範囲である。ＰＡＬＬＡＳ由来のクローンＲ１Ｆ２、Ｒ１Ｂ６及びＲ１Ｇ５並びにハイブリドーマクローンＨｙ０３からの構築物は、５日目から９日目まで約３０％〜５０％のＣＡＲの損失を示す一方、ＰＩ６１、Ｂ６１−１０及び−０２並びにＨｙ５２は、ＣＡＲ発現のパーセンテージに関して比較的安定しているが、全てのＣＡＲ構築物は５日目から９日目までＭＦＩの減少を示し、これは、恐らく、９日目の休止段階でのＴ細胞のサイズがより小さかったためである。ＣＡＲ  Ｔ細胞培養物の細胞数は、非形質導入Ｔ細胞（「ＵＴＤ」）と比較した場合、細胞が正常に増殖する能力に対するＢＣＭＡ  ＣＡＲを担持するヒトｓｃＦｖの検出可能な負の効果がないことを示した。
【０７２０】
【表５３】
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【０７２１】
ＢＣＭＡ  ＣＡＲリダイレクトＴ細胞の機能性の評価
ＢＣＭＡ  ＣＡＲ−Ｔ細胞の機能的能力を評価するために、ＢＣＭＡ陽性及び陰性の癌株との共培養を設定した。ＣＡＲ−Ｔ細胞を解凍し、計数し、標的細胞と共培養して、それらの死滅能力及びサイトカインの分泌を読み取った。ＢＣＭＡ  ＣＡＲクローンＲ１Ｂ６、Ｒ１Ｆ２、Ｒ１Ｇ５、Ｂ６１−０２、Ｂ６１−１０、ＰＩ６１、Ｈｙ０３及びＨｙ５２が試験された。非形質導入Ｔ細胞（ＵＴＤ）は、非標的化Ｔ細胞対照として使用した。
【０７２２】
ＣＡＲＴ細胞の死滅は、ＣＡＲＴ細胞をＫＭＳ１１−Ｌｕｃ及びＮＡＬＭ６−Ｌｕｃ標的細胞と、異なるＥ：Ｔ比で２０時間共培養することによって実施された。ＣＡＲ  Ｔ細胞集団は、プレーティング前にＣＡＲ陽性細胞の同等のパーセンテージに正規化された。サイトカインＩＦＮγは、Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ；Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）を使用して、エフェクター対標的比２．５：１での、標的細胞とＣＡＲ−Ｔ細胞の２０時間の共培養物からの上清で測定され、各サイトカインについての結果は、既知の基準を使用してｐｇ／ｍｌで計算された。全てのアッセイは、ドナー細胞の単一の供給源から繰り返して実施された。死滅データは、全てのＢＣＭＡ  ＣＡＲクローンがＫＭＳ１１癌細胞を効果的に死滅させることを示している（図３Ａ）。対照標的細胞ＮＡＬＭ６は、これらのＢＣＭＡ特異的ＣＡＲのいずれによっても死滅されなかった（図３Ｂ）。ＫＭＳ１１と培養された場合にＩＦＮ−γを産生するこれらのＣＡＲの能力も試験した（図３Ｃ）。ＢＣＭＡ  ＣＡＲ  Ｒ１Ｆ２、Ｒ１Ｇ５及びＰＩ６１により、ＩＦＮ−γが最も多く産生された。対照ＮＡＬＭ６細胞への曝露後にＢＣＭＡ  ＣＡＲＴによって産生されたサイトカインのレベルは、低く（図３Ｃ）、これは、ＢＣＭＡ  ＣＡＲによる非特異的な活性化がないことを示している。
【０７２３】
結論
新しいＢＣＭＡ結合ｓｃＦｖは、ＣＡＲ  Ｔ細胞との関連で試験した。８つのＣＡＲがＪＮＬレポーターアッセイ及び初代Ｔ細胞でアッセイされた：Ｒ１Ｂ６、Ｒ１Ｆ２、Ｒ１Ｇ５、Ｂ６１−０２、Ｂ６１−１０、ＰＩ６１、Ｈｙ０３及びＨｙ５２。８つのＣＡＲ−Ｔ細胞全てが標的特異的な死滅を示した。Ｒ１Ｆ２、Ｒ１Ｇ５又はＰＩ６１を発現するＴ細胞は、標的細胞の存在下で最高量のＩＦＮ−γを産生した。全体として、初代Ｔ細胞へのＢＣＭＡ  ＣＡＲの導入は、抗ＢＣＭＡ  ＣＡＲ反応性を誘導したが、オフターゲットの機能を誘導しなかった。
【０７２４】
均等物
本明細書に引用するそれぞれの及び全ての特許、特許出願及び刊行物の開示は、その全体が参照により本明細書に援用される。本発明は、具体的態様を参照して開示しているが、本発明の他の態様及び変形形態は、本発明の真の趣旨及び範囲から逸脱することなく他の当業者によって考案され得ることが明らかである。下記の特許請求の範囲は、全てのこのような態様及び均等な変形形態を含むと解釈されることを意図する。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図１−３】
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【図１−４】
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【図２】
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【図３−１】
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【図３−２】
2021526814.tif 000077
【図３−３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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