(57)【要約】本発明は、ＪＡＫキナーゼ阻害剤として有用な、式（Ｉ）：【化６６】2021535174.tif 000075［ここで、変数は明細書で定義されている］の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を提供する。本発明はまた、そのような化合物を含む薬学的組成物、および呼吸器疾患を処置するためにそのような化合物を使用する方法を提供する。本発明はまた、哺乳動物において呼吸器疾患、特に喘息およびＣＬＡＤを処置する方法も提供し、この方法は、哺乳動物に治療有効量の本発明の化合物または薬学的組成物を投与することを含む。
2021535174.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物：
【化５７】
2021535174.tif 000066
［式中、
Ａは、２個の窒素原子を含む６員〜７員の単環式ヘテロシクリル環であり、この際Ａは窒素原子を介して（Ｉ）のカルボニル基に結合しており、Ａは１〜３個のＲ２基で置換されており、必要に応じて２個のＲ２基はＡと−（ＣＨ２）−架橋環を形成しているか；あるいは
Ａはピロリジニルであり、前記ピロリジニルは窒素原子を介して（Ｉ）のカルボニル基に結合しており、前記ピロリジニルはＮＲ３Ｒ４で置換されており；
Ｒ１は、Ｃ１−３アルキルであり；
各Ｒ２は独立に、必要に応じて−ＯＨで置換されているＣ１−３アルキルであり；
Ｒ３はＣ１−３アルキルであり；
Ｒ４はＣ１−３アルキルである］
またはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項２】
式（Ｉ’）：
【化５８】
2021535174.tif 000067
を有する、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項３】
Ｒ１がメチル、プロピル、およびイソプロピルからなる群から選択される、請求項１または２のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項４】
Ａが、ピペラジニル、２，５−ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタニル、および１，４−ジアザシクロヘプタニルからなる群から選択され、その各々が１または２個のＲ２基で置換されており、各Ｒ２が独立に、必要に応じて−ＯＨで置換されているＣ１−３アルキルであるか、または、ＡがＮＲ３Ｒ４で置換されているピロリジニルであり、Ｒ３がＣ１−３アルキルであり、Ｒ４がＣ１−３アルキルである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項５】
Ａが、
【化５９】
2021535174.tif 000068
［式中、Ｒ２は、必要に応じて−ＯＨで置換されているＣ１−３アルキルであり、Ｒ３は、Ｃ１−３アルキルであり、Ｒ４は、Ｃ１−３アルキルである］
からなる群から選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項６】
式：
【化６０】
2021535174.tif 000069
の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項７】
式：
【化６１】
2021535174.tif 000070
の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項８】
式：
【化６２】
2021535174.tif 000071
の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項９】
式：
【化６３】
2021535174.tif 000072
の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項１０】
式：
【化６４】
2021535174.tif 000073
の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項１１】
式：
【化６５】
2021535174.tif 000074
の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物および薬学的に許容され得る担体を含む薬学的組成物。
【請求項１３】
哺乳動物の呼吸器疾患の処置における使用のための、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１４】
前記呼吸器疾患が、喘息、慢性閉塞性肺疾患、嚢胞性線維症、肺臓炎、特発性肺線維症、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、気管支炎、気腫、閉塞性細気管支炎、サルコイドーシス、好酸球性疾患、蠕虫感染症、肺動脈性肺高血圧症、リンパ脈管筋腫症、気管支拡張症、浸潤性肺疾患、薬剤誘発性肺臓炎、真菌誘発性肺臓炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、過敏性肺臓炎、多発性血管炎を伴う好酸球性肉芽腫症、特発性急性好酸球性肺炎、特発性慢性好酸球性肺炎、好酸球増加症候群、レフレル症候群、閉塞性細気管支炎性器質化肺炎、肺移植片対宿主病、および免疫チェックポイント阻害剤誘発性肺臓炎からなる群から選択される、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
前記呼吸器疾患が、喘息または慢性閉塞性肺疾患である、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１６】
哺乳動物の肺移植拒絶の処置における使用のための、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１７】
前記肺移植拒絶が、原発性移植片機能不全、器質化肺炎、急性拒絶、リンパ球性細気管支炎、および慢性肺同種移植片機能不全からなる群から選択される、請求項１６に記載の化合物。
【請求項１８】
前記肺移植拒絶が急性肺移植拒絶である請求項１６に記載の化合物。
【請求項１９】
前記肺移植拒絶が慢性肺同種移植片機能不全である請求項１６に記載の化合物。
【請求項２０】
前記肺移植拒絶が、閉塞性細気管支炎、拘束性慢性肺同種移植片機能不全、および好中球性同種移植片機能不全からなる群から選択される、請求項１６に記載の化合物。
【請求項２１】
哺乳動物の呼吸器疾患の処置のための医薬の製造のための、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項２２】
前記呼吸器疾患が、喘息、慢性閉塞性肺疾患、嚢胞性線維症、肺臓炎、特発性肺線維症、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、気管支炎、気腫、閉塞性細気管支炎、サルコイドーシス、好酸球性疾患、蠕虫感染症、肺動脈性肺高血圧症、リンパ脈管筋腫症、気管支拡張症、浸潤性肺疾患、薬剤誘発性肺臓炎、真菌誘発性肺臓炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、過敏性肺臓炎、多発性血管炎を伴う好酸球性肉芽腫症、特発性急性好酸球性肺炎、特発性慢性好酸球性肺炎、好酸球増加症候群、レフレル症候群、閉塞性細気管支炎性器質化肺炎、肺移植片対宿主病、および免疫チェックポイント阻害剤誘発性肺臓炎からなる群から選択される、請求項２１に記載の使用。
【請求項２３】
前記呼吸器疾患が、喘息または慢性閉塞性肺疾患である、請求項２１に記載の使用。
【請求項２４】
哺乳動物の肺移植拒絶の処置のための医薬の製造のための、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項２５】
前記肺移植拒絶が、原発性移植片機能不全、器質化肺炎、急性拒絶、リンパ球性細気管支炎、および慢性肺同種移植片機能不全からなる群から選択される、請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
前記肺移植拒絶が急性肺移植拒絶である請求項２４に記載の使用。
【請求項２７】
前記肺移植拒絶が慢性肺同種移植片機能不全である請求項２４に記載の使用。
【請求項２８】
前記肺移植拒絶が、閉塞性細気管支炎、拘束性慢性肺同種移植片機能不全、および好中球性同種移植片機能不全からなる群から選択される、請求項２４に記載の使用。
【請求項２９】
哺乳動物において呼吸器疾患を処置する方法であって、前記方法が、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物および薬学的に許容され得る担体を含む薬学的組成物を前記哺乳動物に投与することを含む方法。
【請求項３０】
前記呼吸器疾患が、喘息、慢性閉塞性肺疾患、嚢胞性線維症、肺臓炎、特発性肺線維症、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、気管支炎、気腫、閉塞性細気管支炎、サルコイドーシス、好酸球性疾患、蠕虫感染症、肺動脈性肺高血圧症、リンパ脈管筋腫症、気管支拡張症、浸潤性肺疾患、薬剤誘発性肺臓炎、真菌誘発性肺臓炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、過敏性肺臓炎、多発性血管炎を伴う好酸球性肉芽腫症、特発性急性好酸球性肺炎、特発性慢性好酸球性肺炎、好酸球増加症候群、レフレル症候群、閉塞性細気管支炎性器質化肺炎、肺移植片対宿主病、および免疫チェックポイント阻害剤誘発性肺臓炎からなる群から選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記呼吸器疾患が、喘息または慢性閉塞性肺疾患である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
哺乳動物において肺移植拒絶を処置する方法であって、前記方法が、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物および薬学的に許容され得る担体を含む薬学的組成物を前記哺乳動物に投与することを含む方法。
【請求項３３】
前記肺移植拒絶が、原発性移植片機能不全、器質化肺炎、急性拒絶、リンパ球性細気管支炎、および慢性肺同種移植片機能不全からなる群から選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記肺移植拒絶が急性肺移植拒絶である請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
前記肺移植拒絶が慢性肺同種移植片機能不全である請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】
前記肺移植拒絶が、閉塞性細気管支炎、拘束性慢性肺同種移植片機能不全、および好中球性同種移植片機能不全からなる群から選択される、請求項３２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＪＡＫキナーゼ阻害剤として有用な化合物に関する。本発明はまた、そのような化合物を含む薬学的組成物、および呼吸器疾患を処置するためにそのような化合物を使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
喘息は、予防法または治療法が存在しない気道の慢性疾患である。この疾患は、そのすべてが気流制限の一因である、気道の炎症、線維症、応答性亢進およびリモデリングを特徴とする。世界中で推定３億人が喘息に罹患しており、喘息を有する人の数は、２０２５年までに１億人超増加すると推定されている。米国では、喘息は人口の約６％から８％が患っており、国内で最も一般的な慢性疾患の１つとなっている。ほとんどの患者は、ロイコトリエン修飾因子および／または長時間作用型βアゴニストと併用され得る吸入コルチコステロイドの使用によって喘息症状の制御を達成することができるが、その疾患が従来の治療法によって制御されない、重度の喘息を有する患者のサブセットがまだある。重度の持続性喘息は、高用量の吸入コルチコステロイドでも依然として制御されない疾患として定義されている。重症の喘息患者は喘息患者全体の約５％を占めると推定されているが、罹患率と死亡率のリスクが高く、喘息患者の間で医療資源利用の不均衡な割合を占めている。これらの患者を処置する新規治療法のニーズが残っている。
【０００３】
サイトカインは、細胞間シグナル伝達分子であり、ケモカイン、インターフェロン、インターロイキン、リンホカイン、および腫瘍壊死因子がそれに含まれる。サイトカインは正常な細胞増殖および免疫調節に非常に重要であるが、免疫介在性疾患を促進し、悪性細胞の成長の一因にもなる。多くのサイトカインのレベルの上昇は、喘息の炎症の病態に関与している。例えば、インターロイキン（ＩＬ）−５、および１３を標的とする抗体に基づく治療法は、重症喘息患者のサブセットにおいて臨床的利益をもたらすことが示されている。喘息炎症に関与するサイトカインの中でも、多くのものが、チロシンキナーゼのヤヌスファミリー（ＪＡＫ）に依存するシグナル伝達経路によって作用し、それはシグナル伝達性転写因子（ＳＴＡＴ）ファミリーの転写因子を通じてシグナルを伝達する。ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路を通じてシグナルを伝達する、喘息炎症に関わるサイトカインには、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−９、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３、ＩＬ−２３、ＩＬ−３１、ＩＬ−２７、胸腺間質性リンホポエチン（ＴＳＬＰ）、インターフェロン−γ（ＩＦＮγ）および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）が含まれる。
【０００４】
ＪＡＫファミリーは、４つのメンバー、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、およびチロシンキナーゼ２（ＴＹＫ２）を含む。サイトカインとＪＡＫ依存性サイトカイン受容体の結合は受容体二量体化を誘導し、それによりＪＡＫキナーゼのチロシン残基がリン酸化され、ＪＡＫ活性化がもたらされる。次に、リン酸化されたＪＡＫは、様々なＳＴＡＴタンパク質に結合してリン酸化し、そのタンパク質が二量体化し、細胞核内に取り込まれ、遺伝子転写を直接調節し、他の作用の中でも、炎症性疾患に関連する下流の作用をもたらす。ＪＡＫは通常、ホモ二量体またはヘテロ二量体としてサイトカイン受容体と対で会合する。特定のサイトカインは特定のＪＡＫ対形成に関連している。ＪＡＫファミリーの４つのメンバーの各々が、喘息炎症に関連するサイトカインのうちの少なくとも１つのシグナル伝達に関わっている。その結果、ＪＡＫファミリーのすべてのメンバーに対して汎活性を持つ化学阻害剤は、重度の喘息に寄与する広範囲の炎症誘発性経路を調節する可能性があり得る。
【０００５】
しかし、そのような阻害剤の幅広い抗炎症効果が、正常な免疫細胞機能を抑制し得、感染リスクの増加をもたらす可能性があり得る。感染リスクの増加の証拠は、関節リウマチの処置のために経口投与されるＪＡＫ阻害剤トファシチニブで観察されている。喘息では、炎症は気道に局在する。気道の炎症は、喘息に加えてその他の呼吸器疾患の特徴である。慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症（ＣＦ）、肺臓炎、間質性肺疾患（特発性肺線維症を含む）、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症状群、気管支炎、気腫、およびサルコイドーシスも気道疾患であり、その病態生理学は、ＪＡＫシグナル伝達サイトカインに関係していると考えられている。吸入による肺へのＪＡＫ阻害剤の局所投与は、強力な抗サイトカイン剤を作用部位に直接送達することによって治療上有効である可能性を提供し、全身曝露を制限し、したがって有害な全身免疫抑制の可能性を制限する。呼吸器疾患の処置のための肺への局所投与に適した強力なＪＡＫ阻害剤に対するニーズがまだ残っている。
【０００６】
ＪＡＫ−シグナル伝達サイトカインも、多くの免疫プロセスの中心となる免疫細胞のサブタイプであるＴ細胞の活性化において主要な役割を果たす。病理学的Ｔ細胞の活性化は、複数の呼吸器疾患の病因において重要である。自己反応性Ｔ細胞は、閉塞性細気管支炎性器質化肺炎（ＣＯＳとも呼ばれる）において役割を果たす。ＣＯＳと同様に、肺移植拒絶の病因は、移植されたドナー肺によるレシピエントのＴ細胞の異常なＴ細胞活性化に関連している。肺移植拒絶は、原発性移植片機能不全（ＰＧＤ）、器質化肺炎（ＯＰ）、急性拒絶（ＡＲ）またはリンパ球性細気管支炎（ＬＢ）として早期に発生するか、または肺移植の数年後に慢性肺同種移植片機能不全（ＣＬＡＤ）として発生することがある。ＣＬＡＤは以前には閉塞性細気管支炎（ＢＯ）として知られていたが、現在は、ＢＯ、拘束型ＣＬＡＤ（ｒＣＬＡＤまたはＲＡＳ）および好中球性同種移植片機能不全をはじめとする様々な病理学的徴候を有する可能性のある症候群とみなされている。慢性肺同種移植片機能不全（ＣＬＡＤ）は、移植された肺の機能を徐々に失わせるので、肺移植レシピエントの長期管理に大きな課題がある（Ｇａｕｔｈｉｅｒら，Ｃｕｒｒ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．Ｒｅｐ．，２０１６，３（３），１８５−１９１）。ＣＬＡＤは処置への反応性が悪いため、この症状を予防または処置することができる有効な化合物に対する必要性が残っている。数種のＪＡＫ依存性サイトカイン、例えばＩＦＮγおよびＩＬ−５などは、ＣＬＡＤおよび肺移植拒絶において上方調節される（Ｂｅｒａｓｔｅｇｕｉら，Ｃｌｉｎ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２０１７，３１，ｅ１２８９８）。さらに、ＪＡＫ依存性ＩＦＮシグナル伝達の下流にあるＣＸＣＬ９およびＣＸＣＬ１０などのＣＸＣＲ３ケモカインの肺レベルが高いことは、肺移植患者の予後の悪化と関連している（Ｓｈｉｎｏら，ＰＬＯＳ  Ｏｎｅ，２０１７，１２（７），ｅ０１８０２８１）。全身のＪＡＫ阻害は、腎臓移植拒絶において効果的であることが示された（Ｖｉｃｅｎｔｉら，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，２０１２，１２，２４４６−５６）。そのため、ＪＡＫ阻害剤は、肺移植拒絶およびＣＬＡＤを処置または予防するのに効果的である可能性がある。肺移植拒絶の基準として記載されているものと同様のＴ細胞活性化イベントも、造血幹細胞移植後に生じ得る肺移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の主な促進剤と考えられている。肺ＧＶＨＤは、ＣＬＡＤと同様に慢性進行性の症状であり、極めて結果が悪く、現在承認されている処置法はない。救済療法として全身ＪＡＫ阻害剤ルキソリチニブを投与されたステロイド抵抗性の急性または慢性ＧＶＨＤ患者９５名のレトロスペクティブな多施設調査研究により、肺ＧＶＨＤ患者を含む大多数の患者においてルキソリチニブに対する完全または部分的応答が実証された（Ｚｅｉｓｅｒら，Ｌｅｕｋｅｍｉａ，２０１５，２９，１０，２０６２−６８）。全身性ＪＡＫ阻害は重大な有害イベントおよび小さい治療係数に関連しているので、肺移植拒絶または肺ＧＶＨＤを予防および／または処置するための、吸入されて肺に直接作用する非全身性ＪＡＫ阻害剤に対する必要性がまだある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｇａｕｔｈｉｅｒら，Ｃｕｒｒ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．Ｒｅｐ．，２０１６，３（３），１８５−１９１
【非特許文献２】Ｂｅｒａｓｔｅｇｕｉら，Ｃｌｉｎ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２０１７，３１，ｅ１２８９８
【非特許文献３】Ｓｈｉｎｏら，ＰＬＯＳ  Ｏｎｅ，２０１７，１２（７），ｅ０１８０２８１
【非特許文献４】Ｖｉｃｅｎｔｉら，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，２０１２，１２，２４４６−５６
【非特許文献５】Ｚｅｉｓｅｒら，Ｌｅｕｋｅｍｉａ，２０１５，２９，１０，２０６２−６８
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
一態様では、本発明は、ＪＡＫキナーゼ阻害剤としての活性を有する新規化合物を提供する。
【０００９】
したがって、本発明は、式（Ｉ）の化合物：
【化１】
2021535174.tif 000003
［式中、
Ａは、２個の窒素原子を含む６員〜７員の単環式ヘテロシクリル環であり、この際Ａは窒素原子を介して（Ｉ）のカルボニル基に結合しており、Ａは１〜３個のＲ２基で置換されており、必要に応じて２個のＲ２基はＡと−（ＣＨ２）−架橋環を形成しているか；あるいは
Ａはピロリジニルであり、前記ピロリジニルは窒素原子を介して（Ｉ）のカルボニル基に結合しており、前記ピロリジニルはＮＲ３Ｒ４で置換されており；
Ｒ１は、Ｃ１−３アルキルであり；
各Ｒ２は独立に、必要に応じて−ＯＨで置換されているＣ１−３アルキルであり；
Ｒ３はＣ１−３アルキルであり；
Ｒ４はＣ１−３アルキルである］
またはその薬学的に許容され得る塩を提供する。
【００１０】
本発明はまた、本発明の化合物および薬学的に許容され得る担体を含む薬学的組成物を提供する。
【００１１】
本発明はまた、哺乳動物において呼吸器疾患、特に喘息またはＣＬＡＤを処置する方法も提供し、この方法は、哺乳動物に治療有効量の本発明の化合物または薬学的組成物を投与することを含む。
【００１２】
本発明はまた、医学療法で使用するための本明細書に記載の本発明の化合物、および哺乳動物において呼吸器疾患を処置するための製剤または医薬の製造における本発明の化合物の使用も提供する。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
一実施形態では、本発明は、ＪＡＫキナーゼ阻害剤としての活性を有する新規化合物を提供する。したがって、本発明は、式（Ｉ）の化合物：
【化２】
2021535174.tif 000004
［式中、
Ａは、２個の窒素原子を含む６員〜７員の単環式ヘテロシクリル環であり、この際Ａは窒素原子を介して（Ｉ）のカルボニル基に結合しており、Ａは１〜３個のＲ２基で置換されており、必要に応じて２個のＲ２基はＡと−（ＣＨ２）−架橋環を形成しているか；あるいは
Ａはピロリジニルであり、前記ピロリジニルは窒素原子を介して（Ｉ）のカルボニル基に結合しており、前記ピロリジニルはＮＲ３Ｒ４で置換されており；
Ｒ１は、Ｃ１−３アルキルであり；
各Ｒ２は独立に、必要に応じて−ＯＨで置換されているＣ１−３アルキルであり；
Ｒ３はＣ１−３アルキルであり；
Ｒ４はＣ１−３アルキルである］
またはその薬学的に許容され得る塩を提供する。
【００１４】
いくつかの実施形態では、化合物（Ｉ）は式（Ｉ’）：
【化３】
2021535174.tif 000005
を有する。
【００１５】
いくつかの実施形態では、Ｒ１がメチル、プロピル、およびイソプロピルからなる群から選択される。
【００１６】
いくつかの実施形態では、Ａが、ピペラジニル、２，５−ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタニル、および１，４−ジアザシクロヘプタニルからなる群から選択され、その各々が１または２個のＲ２基で置換されており、各Ｒ２が独立に、必要に応じて−ＯＨで置換されているＣ１−３アルキルであるか、または、ＡがＮＲ３Ｒ４で置換されているピロリジニルであり、Ｒ３がＣ１−３アルキルであり、Ｒ４がＣ１−３アルキルである。
【００１７】
いくつかの実施形態では、Ａが、
【化４】
2021535174.tif 000006
［式中、Ｒ２は、必要に応じて−ＯＨで置換されているＣ１−３アルキルであり、Ｒ３は、Ｃ１−３アルキルであり、Ｒ４は、Ｃ１−３アルキルである］
からなる群から選択される。
【００１８】
もう一つの実施形態では、本発明は、式：
【化５】
2021535174.tif 000007
の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を提供する。
【００１９】
もう一つの実施形態では、本発明は、式：
【化６】
2021535174.tif 000008
の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を提供する。
【００２０】
もう一つの実施形態では、本発明は、式：
【化７】
2021535174.tif 000009
の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を提供する。
【００２１】
もう一つの実施形態では、本発明は、式：
【化８】
2021535174.tif 000010
の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を提供する。
【００２２】
もう一つの実施形態では、本発明は、式：
【化９】
2021535174.tif 000011
の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を提供する。
【００２３】
もう一つの実施形態では、本発明は、式：
【化１０】
2021535174.tif 000012
の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を提供する。
【００２４】
もう一つの実施形態では、本開示は、式（ＩＩ）：
【化１１】
2021535174.tif 000013
［式中、
Ｒ１は、Ｃ１−３アルキルであり；
Ａ１は、
【化１２】
2021535174.tif 000014
（式中、Ｒ２は、必要に応じて−ＯＨで置換されているＣ１−３アルキルである）
からなる群から選択される］の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を提供する。
【００２５】
いくつかの実施形態では、式（ＩＩ）の化合物は、式（ＩＩ’）：
【化１３】
2021535174.tif 000015
を有する。
【００２６】
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、メチルおよびプロピルからなる群から選択される。
【００２７】
いくつかの実施形態では、Ａ１は、
【化１４】
2021535174.tif 000016
からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、Ａ１は、
【化１５】
2021535174.tif 000017
からなる群から選択され、
Ｒ１は、メチルおよびプロピルからなる群から選択される。
もう一つの実施形態では、本開示は、式（ＩＩＩ）の化合物：
【化１６】
2021535174.tif 000018
［式中、
Ｒ１は、Ｃ１−３アルキルであり；
Ａ２は、
【化１７】
2021535174.tif 000019
（式中、各Ｒ２は、独立に、必要に応じて−ＯＨで置換されているＣ１−３アルキルであり、Ｒ３は、Ｃ１−３アルキルであり、Ｒ４はＣ１−３アルキルである）
からなる群から選択される］の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を提供する。
【００２８】
いくつかの実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物は、式（ＩＩＩ’）：
【化１８】
2021535174.tif 000020
を有する。
【００２９】
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、メチル、イソプロピルおよびプロピルからなる群から選択される。
【００３０】
いくつかの実施形態では、Ａ２は、
【化１９】
2021535174.tif 000021
からなる群から選択される。
【００３１】
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、メチル、イソプロピルおよびプロピルからなる群から選択され、Ａ２は、
【化２０】
2021535174.tif 000022
からなる群から選択される。
【００３２】
もう一つの実施形態では、本開示は、式（ＩＶ）の化合物：
【化２１】
2021535174.tif 000023
［式中、
Ｒ１は、Ｃ１−３アルキルであり；
Ａ３は、
【化２２】
2021535174.tif 000024
（式中、各Ｒ２は、独立に、必要に応じて−ＯＨで置換されているＣ１−３アルキルであり、Ｒ３は、Ｃ１−３アルキルであり、Ｒ４はＣ１−３アルキルである）
からなる群から選択される］の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を提供する。
【００３３】
いくつかの実施形態では、式（ＩＶ）の化合物は、式（ＩＶ’）：
【化２３】
2021535174.tif 000025
を有する。
【００３４】
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、メチル、イソプロピルおよびプロピルからなる群から選択される。
【００３５】
いくつかの実施形態では、Ａ３は、
【化２４】
2021535174.tif 000026
からなる群から選択される。
【００３６】
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、メチル、イソプロピルおよびプロピルからなる群から選択され、Ａ３は、
【化２５】
2021535174.tif 000027
からなる群から選択される。
さらに、テトラヒドロイミダゾピリジン部分のイミダゾ部分は、本開示の化合物の断片について下に示される互変異性型で存在する。
【化２６】
2021535174.tif 000028
【００３７】
ＩＵＰＡＣ規則によれば、これらの表現は、イミダゾール部分の原子の異なる番号付けを生じさせる：（１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン（構造Ａ）と（１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン（構造Ｂ）。構造は、ある特定の形態として示されているかまたは命名されているが、本発明は、それらの互変異性体も含むことが理解される。
【００３８】
本開示の化合物は、１つまたはそれを超えるキラル中心を含み得るので、そのような化合物（およびそれらの中間体）は、ラセミ混合物；純粋な立体異性体（すなわち、エナンチオマーまたはジアステレオマー）；立体異性体富化混合物などとして存在し得る。キラル中心に明確な立体化学なしに本明細書中に示されているまたは命名されているキラル化合物は、別段示されない限り、未確定の立体中心において存在し得る任意のまたはすべての立体異性体バリエーションを含むことを意図されている。特定の立体異性体の描写または呼称は、別段示されない限り、少量の他の立体異性体も存在し得ることの理解とともに、示されている立体中心が、指定の立体化学を有することを意味しているが、但し、描写されたまたは命名された化合物の有用性は、別の立体異性体の存在によって排除されない。
【００３９】
本開示の化合物はまた、いくつかの塩基性基（例えば、アミノ基）を含んでいてもよく、したがって、そのような化合物は、遊離塩基として、またはモノプロトン化塩の形態、ジプロトン化塩の形態、トリプロトン化塩の形態、もしくはそれらの混合物のようなさまざまな塩の形態で存在することができる。このような形態はすべて、特に明記しない限り、本発明の範囲内に含まれる。
【００４０】
本発明は、式（Ｉ）、（Ｉ’）、（ＩＩ）、（ＩＩ’）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ’）、（ＩＶ）および（ＩＶ’）の同位体で標識された化合物、すなわち、１つまたは複数の原子が、同じ原子番号を有するが自然界で優勢である原子質量とは異なる原子質量を有する原子で置き換えられているかまたは富化されている式（Ｉ）、（Ｉ’）、（ＩＩ）、（ＩＩ’）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ’）、（ＩＶ）および（ＩＶ’）の化合物も含む。式（Ｉ）、（Ｉ’）、（ＩＩ）、（ＩＩ’）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ’）、（ＩＶ）および（ＩＶ’）の化合物に組み込まれ得る同位体の例としては、２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１３Ｎ、１５Ｎ、１５Ｏ、１７Ｏ、および１８Ｏが挙げられるが、これらに限定されない。トリチウムまたは炭素−１４に富化した式（Ｉ）、（Ｉ’）、（ＩＩ）、（ＩＩ’）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ’）、（ＩＶ）および（ＩＶ’）の化合物が特に興味深く、それらの化合物は、例えば、組織分布研究において使用され得る。また、特に代謝部位においてジュウテリウムに富化した式（Ｉ）、（Ｉ’）、（ＩＩ）、（ＩＩ’）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ’）、（ＩＶ）および（ＩＶ’）の化合物も特に興味深く、それらの化合物は、より高い代謝的安定性を有すると予想される。さらに、陽電子放出同位体（例えば、１１Ｃ、１５Ｏおよび１３Ｎ）に富化した式（Ｉ）、（Ｉ’）、（ＩＩ）、（ＩＩ’）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ’）、（ＩＶ）および（ＩＶ’）の化合物も特に興味深く、それらの化合物は、例えば、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）研究において使用され得る。
【００４１】
定義
様々な態様および実施形態を含む本発明を説明する際、以下の用語は、別段示されない限り、以下の意味を有する。
【００４２】
用語「アルキル」は、直鎖もしくは分枝鎖またはそれらの組み合わせであり得る一価の飽和炭化水素基を意味する。別段定義されない限り、そのようなアルキル基は、代表的には、１〜１０個の炭素原子を含む。代表的なアルキル基の例としては、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、ｎ−プロピル（ｎ−Ｐｒ）または（ｎＰｒ）、イソプロピル（ｉ−Ｐｒ）または（ｉＰｒ）、ｎ−ブチル（ｎ−Ｂｕ）または（ｎＢｕ）、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル（ｔ−Ｂｕ）または（ｔＢｕ）、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、２，２−ジメチルプロピル、２−メチルブチル、３−メチルブチル、２−エチルブチル、２，２−ジメチルペンチル、２−プロピルペンチルなどが挙げられる。
【００４３】
具体的な数の炭素原子が、特定の用語に対して意図されているとき、炭素原子の数は、その用語の前に示される。例えば、用語「Ｃ１−３アルキル」は、１〜３個の炭素原子を有するアルキル基を意味し、ここで、それらの炭素原子は、直鎖または分枝鎖の配置を含む化学的に許容され得る任意の配置で存在する。
【００４４】
用語「シクロアルキル」は、単環式または多環式であり得る一価の飽和炭素環式基を意味する。別段定義されない限り、そのようなシクロアルキル基は、代表的には、３〜１０個の炭素原子を含む。代表的なシクロアルキル基の例としては、シクロプロピル（ｃＰｒ）、シクロブチル（ｃＢｕ）、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、アダマンチルなどが挙げられる。
【００４５】
用語「ｃプロピル（ｃｐｒｏｐｙｌ）」は、シクロプロピルを意味する。
【００４６】
用語「ヘテロシクリル」、「複素環式」または「複素環式環」は、合計３〜１０個の環原子を有する一価の飽和または部分不飽和の環式の非芳香族基を意味し、ここで、その環は、２〜９個の炭素環原子、ならびに窒素、酸素および硫黄から選択される１〜４個の環ヘテロ原子を含む。複素環式基は、単環式または多環式（すなわち、縮合または架橋）であり得る。代表的なヘテロシクリル基の例としては、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、イミダゾリジニル、モルホリニル、チオモルホリル、インドリン−３−イル、２−イミダゾリニル、テトラヒドロピラニル、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−２−イル、キヌクリジニル、７−アザノルボルナニル、ノルトロパニルなどが挙げられ、ここで、結合点は、任意の利用可能な炭素または窒素環原子に存在する。状況によって複素環式基の結合点が明らかである場合、そのような基は、代わりに、無価種、すなわち、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、イミダゾール、テトラヒドロピランなどと称され得る。
【００４７】
用語「ハロ」は、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードを意味する。
【００４８】
用語「治療有効量」は、処置を必要とする患者に投与されたとき、処置をもたらすのに十分な量を意味する。
【００４９】
用語「処置すること」または「処置」とは、患者（特にヒト）において処置される医学的症状、疾患または障害（例えば、呼吸器疾患）を予防、改善または抑制すること；あるいは、医学的症状、疾患または障害の症状を緩和することを意味する。
【００５０】
用語「薬学的に許容され得る塩」は、患者または哺乳動物（例えば、ヒト）への投与が許容され得る塩（例えば、所与の投与レジメンについて許容され得る哺乳動物の安全性を有する塩）を意味する。代表的な薬学的に許容され得る塩としては、酢酸、アスコルビン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、エジシル酸（ｅｄｉｓｙｌｉｃ）、フマル酸、ゲンチシン酸、グルコン酸、グルクロン酸（ｇｌｕｃｏｒｏｎｉｃ）、グルタミン酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、粘液酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ナフタレン−２，６−ジスルホン酸、ニコチン酸、硝酸、オロチン酸、パモ酸、パントテン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸およびキシナホ酸（ｘｉｎａｆｏｉｃ  ａｃｉｄ）などの塩が挙げられる。
【００５１】
用語「その塩」は、酸の水素がカチオン（例えば、金属カチオンまたは有機カチオンなど）によって置き換えられたときに形成される化合物を意味する。例えば、カチオンは、プロトン化型の式（Ｉ）、（Ｉ’）、（ＩＩ）、（ＩＩ’）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ’）、（ＩＶ）または（ＩＶ’）の化合物、すなわち、１つまたはそれを超えるアミノ基が酸によってプロトン化されている形態であり得る。代表的には、塩は、薬学的に許容され得る塩であるが、これは、患者への投与が意図されていない中間体化合物の塩には求められない。
【００５２】
一般的な合成手順
本発明の化合物およびそれらの中間体は、商業的に入手可能なまたは日常的に調製される出発物質および試薬を使用して、以下の一般的な方法および手順に従って調製され得る。以下のスキームにおいて使用される置換基および変数（例えば、Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３など）は、別段示されない限り、本明細書中の他の箇所に定義される意味と同じ意味を有する。さらに、酸性または塩基性の原子または官能基を有する化合物は、別段示されない限り、塩として使用され得るかまたは生成され得る（場合によっては、特定の反応において塩を使用するためには、その反応を行う前に、日常的な手順を使用して、その塩から非塩形態、例えば、遊離塩基に変換することが必要である）。
【００５３】
本発明の特定の実施形態が、以下の手順に示され得るかまたは記載され得るが、当業者は、本発明の他の実施形態または態様も、そのような手順を用いて、または当業者に公知の他の方法、試薬および出発物質を用いて、調製され得ることを認識する。特に、本発明の化合物は、反応体が異なる順序で混和されることにより最終生成物を生成する途中で異なる中間体が提供される種々のプロセス経路によって調製され得ることが認識される。
【００５４】
本発明の最終化合物を調製する一般的な方法は、以下のスキームに示される。
【化２７】
2021535174.tif 000029
【００５５】
還元剤の存在下、化合物Ｋ−１８をケトンまたはアルデヒドと反応させて、式Ｋ−１９の化合物を得る。次に、化合物Ｋ−１９を、典型的なアミド結合形成条件下、アミンＡと反応させて、化合物（Ｉ）を得る。一般に、カルボン酸は、過剰な塩基の存在下、約１〜約４当量のアミンＡと接触させる。アミド結合形成反応は、カップリング剤、例えばＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）または当技術分野で公知の他のアミドカップリング剤などを利用することがある。ヒドラジンを加えて、望ましくない副生成物を切断することができる。反応は、一般に室温で約５分〜約２４時間、または反応が実質的に終了するまで行われる。
【００５６】
薬学的組成物
本発明の化合物およびそれらの薬学的に許容され得る塩は、通常、薬学的組成物または製剤の形態で使用される。そのような薬学的組成物は、吸入によって有利に患者に投与され得る。さらに、薬学的組成物は、任意の許容され得る投与経路によって投与されてよく、その投与経路としては、経口、直腸、経鼻、局所（経皮を含む）、および非経口的な投与形式が挙げられるがこれらに限定されない。
【００５７】
したがって、その組成物の態様の一つにおいて、本発明は、薬学的に許容され得る担体または賦形剤と、式（Ｉ）、（Ｉ’）、（ＩＩ）、（ＩＩ’）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ’）、（ＩＶ）または（ＩＶ’）の化合物を含む薬学的組成物に関し、ここで、上記に定義される、「式（Ｉ）、（Ｉ’）、（ＩＩ）、（ＩＩ’）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ’）、（ＩＶ）または（ＩＶ’）の化合物」とは、式（Ｉ）、（Ｉ’）、（ＩＩ）、（ＩＩ’）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ’）、（ＩＶ）または（ＩＶ’）の化合物あるいはその薬学的に許容され得る塩を意味する。場合により、そのような薬学的組成物は、必要に応じて他の治療薬および／または配合剤を含んでもよい。組成物およびその使用を考察する際、「本発明の化合物」は、本明細書において「活性剤」と呼ばれることもある。本明細書において使用される場合、用語「本発明の化合物」は、式（Ｉ）によって包含されるすべての化合物、ならびに式（Ｉ）に具体化される種、およびその薬学的に許容され得る塩を含むことを意図する。
【００５８】
本発明の薬学的組成物は、通常、治療有効量の本発明の化合物を含む。しかしながら、薬学的組成物は、治療有効量より多い、すなわち、大量の組成物または治療有効量より少ない、すなわち、治療有効量を達成するための複数回投与のためにデザインされた個別の単位用量を含むことがあることを当業者は認識する。
【００５９】
一般に、そのような薬学的組成物は、約０．０１〜約９５重量％の活性剤を含む；それには、例えば約０．０５〜約３０重量％；および約０．１％〜約１０重量％の活性剤が含まれる。
【００６０】
任意の従来のキャリアまたは賦形剤を、本発明の薬学的組成物において使用してもよい。特定のキャリアもしくは賦形剤、またはキャリアもしくは賦形剤の組み合わせの選択は、特定の患者を処置するために用いられる投与様式、または病状もしくは疾患状態のタイプに依存する。この点において、特定の投与様式に対して好適な薬学的組成物の調製法は、十分に薬学分野の当業者の技術の範囲内である。さらに、本発明の薬学的組成物において使用されるキャリアまたは賦形剤は、商業的に入手可能である。さらなる例証として、従来の製剤化の手法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｈｉｔｅ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（２０００）；およびＨ．Ｃ．Ａｎｓｅｌら、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｈｉｔｅ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９９９）に記載されている。
【００６１】
薬学的に許容され得るキャリアとして機能し得る材料の代表例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：糖（例えば、ラクトース、グルコースおよびスクロース）；デンプン（例えば、トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプン）；セルロース（例えば、微結晶性セルロース）およびその誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース）；トラガント末；麦芽；ゼラチン；タルク；賦形剤（例えば、カカオバターおよび坐剤ろう）；油（例えば、落花生油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油およびダイズ油）；グリコール（例えば、プロピレングリコール）；ポリオール（例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコール）；エステル（例えば、オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル）；寒天；緩衝剤（例えば、水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム）；アルギン酸；発熱物質非含有水；等張食塩水；リンガー溶液；エチルアルコール；リン酸緩衝液；および薬学的組成物において使用される他の無毒性の適合性物質。
【００６２】
薬学的組成物は、代表的には、活性な作用物質を薬学的に許容され得るキャリアおよび１つまたはそれを超える必要に応じた成分と十分かつ完全に混合または混和することによって調製される。次いで、得られた均一に混和された混合物は、従来の手順および器具を用いて、錠剤、カプセル剤、丸剤などに成形または充填され得る。
【００６３】
一態様では、薬学的組成物は吸入投与に適している。吸入投与のための薬学的組成物は、一般にエアゾールまたは粉末の形態である。そのような組成物は、通常、吸入器送達装置、例えば乾燥粉末式吸入器（ＤＰＩ）、定量吸入器（ＭＤＩ）、ネブライザー吸入器、または同様の送達装置などを使用して投与される。
【００６４】
特定の実施形態では、薬学的組成物は、乾燥粉末式吸入器を使用して吸入によって投与される。そのような乾燥粉末式吸入器は、一般に、吸気の間に患者の気流に分散する流動性粉末として薬学的組成物を投与する。流動性粉末組成物を実現するために、治療薬は一般にラクトース、デンプン、マンニトール、デキストロース、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリラクチド−ｃｏ−グリコリド（ＰＬＧＡ）またはその組み合わせなどの適した賦形剤とともに配合される。一般に、治療薬は、吸入に適した組成物を形成するために微粒子化され、適した担体と組み合わされる。
【００６５】
乾燥粉末式吸入器で用いる代表的な薬学的組成物は、微粉化形態のラクトースと本発明の化合物を含む。そのような乾燥粉末組成物は、例えば、乾式粉砕ラクトースを治療薬と組み合わせた後、成分をドライブレンドすることによって作製することができる。次に、組成物は、一般に、乾燥粉末ディスペンサー、または乾燥粉末送達装置で使用するための吸入カートリッジもしくはカプセルに充填される。
【００６６】
吸入による治療薬の投与に適した乾燥粉末式吸入器送達装置は、当技術分野において記載されており、そのような装置の例は商業的に入手可能である。例えば、代表的な乾燥粉末式吸入器送達装置または製品としては、Ａｅｏｌｉｚｅｒ（ノバルティス）；Ａｉｒｍａｘ（ＩＶＡＸ）；ＣｌｉｃｋＨａｌｅｒ（Ｉｎｎｏｖａｔａ  Ｂｉｏｍｅｄ）；Ｄｉｓｋｈａｌｅｒ（グラクソスミスクライン）；Ｄｉｓｋｕｓ／Ａｃｃｕｈａｌｅｒ（グラクソスミスクライン）；Ｅｌｌｉｐｔａ（グラクソスミスクライン）；Ｅａｓｙｈａｌｅｒ（Ｏｒｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａ）；Ｅｃｌｉｐｓｅ（アベンティス）；ＦｌｏｗＣａｐｓ（Ｈｏｖｉｏｎｅ）；Ｈａｎｄｉｈａｌｅｒ（ベーリンガーインゲルハイム）；Ｐｕｌｖｉｎａｌ（Ｃｈｉｅｓｉ）；Ｒｏｔａｈａｌｅｒ（グラクソスミスクライン）；ＳｋｙｅＨａｌｅｒ／Ｃｅｒｔｉｈａｌｅｒ（ＳｋｙｅＰｈａｒｍａ）；Ｔｗｉｓｔｈａｌｅｒ（シェリング・プラウ）；Ｔｕｒｂｕｈａｌｅｒ（アストラゼネカ）；Ｕｌｔｒａｈａｌｅｒ（アベンティス）；などが挙げられる。
【００６７】
もう一つの特定の実施形態では、薬学的組成物は、定量吸入器を使用して吸入によって投与される。そのような定量吸入器は、一般に、圧縮された高圧ガスを用いて、測定された量の治療薬を放出する。したがって、定量吸入器を使用して投与される薬学的組成物は、一般に、治療薬の溶液または懸濁液を液化高圧ガス中に含む。任意の適した液化高圧ガスが用いられてよく、それにはヒドロフルオロアルカン（ＨＦＡ）、例えば１，１，１，２−テトラフルオロエタン（ＨＦＡ  １３４ａ）および１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロ−ｎ−プロパン、（ＨＦＡ  ２２７）など；ならびにクロロフルオロカーボン、例えばＣＣｌ３Ｆなどが含まれる。特定の実施形態では、高圧ガスはヒドロフルオロアルカンである。一部の実施形態では、ヒドロフルオロアルカン製剤は、共溶媒、例えばエタノールまたはペンタンなど、ならびに／あるいは界面活性剤、例えばソルビタントリオレエート、オレイン酸、レシチン、およびグリセリンなどを含む。
【００６８】
定量吸入器で用いる代表的な薬学的組成物は、約０．０１％〜約５重量％の本発明の化合物；約０％〜約２０重量％のエタノール；および約０％〜約５重量％の界面活性剤を含み；残りはＨＦＡ高圧ガスである。そのような組成物は、一般に、冷却したかまたは加圧したヒドロフルオロアルカンを、治療薬、エタノール（存在する場合）および界面活性剤（存在する場合）を含有する、適した容器に添加することによって調製される。懸濁液を調製するには、治療薬を微粉化した後、高圧ガスと組み合わせる。次に、一般に定量吸入装置の一部を形成するエアゾール缶に組成物を充填する。
【００６９】
吸入による治療薬の投与に適した定量吸入装置は、当技術分野において記載されており、そのような装置の例は商業的に入手可能である。例えば、代表的な定量吸入装置または製品としては、ＡｅｒｏＢｉｄ  Ｉｎｈａｌｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｆｏｒｅｓｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；Ａｔｒｏｖｅｎｔ  Ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ  Ａｅｒｏｓｏｌ（ベーリンガーインゲルハイム）；Ｆｌｏｖｅｎｔ（グラクソスミスクライン）；Ｍａｘａｉｒ  Ｉｎｈａｌｅｒ（３Ｍ）；Ｐｒｏｖｅｎｔｉｌ  Ｉｎｈａｌｅｒ（シェリング）；Ｓｅｒｅｖｅｎｔ  Ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ  Ａｅｒｏｓｏｌ（グラクソスミスクライン）；などが挙げられる。
【００７０】
もう一つの特定の態様では、薬学的組成物は、ネブライザー吸入器を使用する吸入によって投与される。そのようなネブライザー装置は、一般に、患者の気道に運ばれるミストとして薬学的組成物を噴霧させる高速の空気の流れを生成する。したがって、ネブライザー吸入器で用いるために配合される場合、治療薬は、溶液を形成するために適した担体に溶解させることができる。あるいは、治療薬を微粉化するかまたはナノ粉砕し、適した担体と組み合わせて懸濁液を形成することができる。
【００７１】
ネブライザー吸入器で用いる代表的な薬学的組成物は、約０．０５μｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの本発明の化合物と、噴霧製剤に適合する賦形剤を含む溶液または懸濁液を含む。一実施形態では、溶液のｐＨは約３〜約８である。
【００７２】
吸入による治療薬の投与に適したネブライザー装置は、当技術分野において記載されており、そのような装置の例は商業的に入手可能である。例えば、代表的なネブライザー装置または製品としては、Ｒｅｓｐｉｍａｔ  Ｓｏｆｔｍｉｓｔ  Ｉｎｈａｌａｌｅｒ（ベーリンガーインゲルハイム）；ｔｈｅ  ＡＥＲｘ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｒａｄｉｇｍ  Ｃｏｒｐ．）；ｔｈｅ  ＰＡＲＩ  ＬＣ  Ｐｌｕｓ  Ｒｅｕｓａｂｌｅ  Ｎｅｂｕｌｉｚｅｒ（Ｐａｒｉ  ＧｍｂＨ）；などが挙げられる。
【００７３】
さらにもう一つの態様では、本発明の薬学的組成物は、その代わりに、経口投与を意図した剤形に調製されてよい。経口投与に好適な薬学的組成物は、カプセル剤、錠剤、丸剤、舐剤、カシェ剤、糖衣錠、散剤、顆粒剤の形態であり得るか；または水性もしくは非水性液体における溶液または懸濁液として存在し得るか；または水中油型もしくは油中水型の液体エマルジョンとして存在し得るか；またはエリキシル剤もしくはシロップ剤などとして存在し得；それらの各々は、所定の量の本開示の化合物を活性成分として含んでいる。
【００７４】
固体剤形での経口投与を目的とする場合、本発明の薬学的組成物は、一般に、活性剤と、１または複数の薬学的に許容され得る担体、例えばクエン酸ナトリウムまたは第二リン酸カルシウムなどを含むことになる。場合により、またはその代わりに、そのような固体剤形は、充填剤または増量剤、結合剤、保水剤、溶解遅延剤、吸収促進剤、湿潤剤、吸収剤、滑沢剤、着色剤、および緩衝剤を含むこともある。離型剤、湿潤剤、コーティング剤、甘味料、香味料および香料、保存剤ならびに酸化防止剤も、本開示の薬学的組成物に存在し得る。
【００７５】
代替製剤には、制御放出製剤、経口投与用の液体剤形、経皮パッチ、および非経口製剤も含まれてもよい。そのような代替製剤の従来の賦形剤および調製方法は、例えば、上記のＲｅｍｉｎｇｔｏｎによる参考文献に記載されている。
【００７６】
以下の限定されない例は、本発明の代表的な薬学的組成物を示す。
【００７７】
乾燥粉末組成物
式（Ｉ）の微粉化された化合物（１ｇ）を、粉砕されたラクトース（２５ｇ）とブレンドする。次に、このブレンドした混合物を、用量あたり約０．１ｍｇ〜約４ｍｇの式（Ｉ）の化合物を提供するために十分な量で、剥離可能なブリスター包装の個々のブリスターに充填する。ブリスターの内容物を、乾燥粉末式吸入器を使用して投与する。
【００７８】
乾燥粉末組成物
式（Ｉ）の微粉化された化合物（１ｇ）を、粉砕されたラクトース（２０ｇ）とブレンドして、化合物と粉砕されたラクトースの重量比が１：２０のバルク組成物を形成する。ブレンドされた組成物を、用量あたり約０．１ｍｇ〜約４ｍｇの式（Ｉ）の化合物を送達可能な乾燥粉末吸入装置に詰め込む。
【００７９】
定量吸入器用組成物
式（Ｉ）の微粉化された化合物（１０ｇ）を、レシチン（０．２ｇ）を脱塩水（２００ｍＬ）に溶解することによって調製した溶液に分散させる。得られた懸濁液を噴霧乾燥させた後、微粉化して、平均直径約１．５μｍ未満の粒子を含む微粉化された組成物を形成する。次に、加圧した１，１，１，２−テトラフルオロエタンを、定量噴霧式吸入器によって投与された場合に、用量あたり約０．１ｍｇ〜約４ｍｇの式（Ｉ）の化合物を提供するために十分な量で含有する定量吸入器のカートリッジに微粉化された組成物を充填する。
【００８０】
ネブライザー組成物
式（Ｉ）の化合物（２５ｍｇ）を１．５〜２．５当量の塩酸を含む溶液に溶解し、続いて水酸化ナトリウムを添加してｐＨを３．５〜５．５およびグリセロールの３重量％に調整する。すべての成分が溶解するまで溶液をよく撹拌する。用量あたり約０．１ｍｇ〜約４ｍｇの式（Ｉ）の化合物を提供するネブライザー装置を使用して溶液を投与する。
【００８１】
有用性
本発明のＪＡＫ阻害剤は、気道の炎症性および線維性疾患の処置のために設計されている。特に、本発明の化合物は、全身的な曝露を制限しつつ、強力な抗サイトカイン剤を肺の呼吸器疾患の作用部位に直接送達できるように設計されている。
【００８２】
本発明の化合物は、酵素のＪＡＫファミリー：ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、およびＴＹＫ２の強力な阻害剤であることが示された。その上、化合物は、炎症促進性および線維化促進性サイトカインの強力な阻害を示した。ＪＡＫ阻害剤の幅広い抗炎症作用は、正常な免疫細胞機能を抑制し得、感染リスクの増加をもたらす可能性があり得ることが認識されている。したがって、本発明の化合物は、肺から血漿への吸収を制限し、よって、免疫抑制のリスクを最小限に抑えるように最適化されている。
【００８３】
下記の実験項に記載されるように、代表的化合物の吸収および分布は、前臨床アッセイでプロファイルされている。化合物１〜６をマウスで試験したところ、投与後５時間で、肺組織で濃度が高く、血漿への吸収が低いことが示された。本発明の化合物は、マウス肺組織において炎症促進性サイトカインＩＬ−１３の作用を阻害することが示された。具体的には、この化合物は、肺組織におけるＳＴＡＴ６のＩＬ−１３誘導性リン酸化の阻害を実証した。これは、生体内での局所肺ＪＡＫ標的結合の証拠をもたらす。この作用は、炎症促進性サイトカインＩＬ−１３を試験化合物の投与の４時間後に投与した場合に観察されており、肺における著しい保持のさらなる証拠を提供する。
【００８４】
試験した化合物は、細胞レベルでの強力な阻害活性と肺組織での有意な保持性の両方を示すことが示されている。本発明者らによる広範な検討により、細胞レベルで強力な化合物または肺で有意な保持性を示す化合物を特定することは可能であるが、両方の望ましい特性を同時に示す化合物を発見することははるかに困難であることが判明した。
【００８５】
ＪＡＫ阻害剤の抗炎症活性は、喘息の前臨床モデルにおいて強く実証されている（Ｍａｌａｖｉｙａら、Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ，２０１０，１０，８２９，−８３６；Ｍａｔｓｕｎａｇａら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ，２０１１，４０４，２６１−２６７；Ｋｕｄｌａｃｚら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２００８，５８２，１５４−１６１）。ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路を通じてシグナルを伝達する、喘息炎症に関わるサイトカインには、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−９、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３、ＩＬ−２３、ＩＬ−３１、ＩＬ−２７、胸腺間質性リンホポエチン（ＴＳＬＰ）、インターフェロン−γ（ＩＦＮγ）および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）が含まれる。したがって、本発明の化合物は、炎症性呼吸器障害、特に喘息の処置に有用であることが予期される。肺の炎症および線維症は、喘息に加えてその他の呼吸器疾患、例えば慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症（ＣＦ）、肺臓炎、間質性肺疾患（特発性肺線維症を含む）、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症状群、気管支炎、気腫、閉塞性細気管支炎、およびサルコイドーシスなどの特徴である。そのため、本発明の化合物は、慢性閉塞性肺疾患、嚢胞性線維症、肺臓炎、間質性肺疾患（特発性肺線維症を含む）、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症状群、気管支炎、気腫、閉塞性細気管支炎、およびサルコイドーシスの処置にも有用であると予期される。
【００８６】
対応するフルオロ類似体（化合物Ｃ−１、Ｃ−２、Ｃ−３、Ｃ−４、Ｃ−５およびＣ−６）と比較した場合、化合物１〜６は同様のＪＡＫ活性を有することが示されている。しかし、アッセイ５で示されたように、それらは有意に少ない硫酸化代謝をもたらすという利点を有する。硫酸化代謝は肺で起こり、活性な親化合物の曝露が急速に減少する可能性があり得るため、これは重要である。
【００８７】
本開示の化合物は、炎症に関連するサイトカインの阻害を示した。したがって、本開示の化合物は、以下に詳述するように、ある特定の呼吸器疾患の処置に有用である可能性が高い。
【００８８】
好酸球性気道炎症は、総称して好酸球性肺疾患と呼ばれる疾患の１つの特性である（Ｃｏｔｔｉｎら，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｓｔ．Ｍｅｄ．，２０１６，３７（３），５３５−５６）。好酸球性疾患は、ＩＬ−４、ＩＬ−１３およびＩＬ−５のシグナル伝達に関連している。好酸球性肺疾患には、感染症（特に蠕虫性感染症）、薬剤誘発性肺臓炎（例えば、抗生物質、フェニトイン、またはｌ−トリプトファンなどの治療薬によって誘発される）、真菌誘発性肺臓炎（例えば、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症）、過敏性肺臓炎および、多発性血管炎を伴う好酸球性肉芽腫症（以前はチャーグ・ストラウス症候群として知られていた）が含まれる。病因が不明な好酸球性肺疾患には、特発性急性好酸球性肺炎、特発性慢性好酸球性肺炎、好酸球増加症候群、およびレフレル症候群が含まれる。
【００８９】
ＩＬ−６遺伝子の多型は、ＩＬ−６レベルの上昇と、肺動脈性肺高血圧症（ＰＡＨ）を発症するリスクの増加に関連している（Ｆａｎｇら，Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ．，２０１７，１１（３），１７１−１７７）。ＰＡＨにおけるＩＬ−６の役割を裏付けるように、ＩＬ−６受容体鎖ｇｐ１３０の阻害は、ＰＡＨのラットモデルで疾患を寛解させた。（Ｈｕａｎｇら，Ｃａｎ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．，２０１６，３２（１１），１３５６．ｅ１−１３５６．ｅ１０）。
【００９０】
ＩＦＮγ、ＩＬ−１２およびＩＬ−６などのサイトカインは、サルコイドーシス、およびリンパ脈管筋腫症などのさまざまな非アレルギー性肺疾患に関与している（Ｅｌ−Ｈａｓｈｅｍｉｔｅら，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２００５，３３，２２７−２３０、およびＥｌ−Ｈａｓｈｅｍｉｔｅら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，２００４，６４，３４３６−３４４３）。本発明の化合物は、ＩＦＮγシグナル伝達を阻害することも示されている。
【００９１】
気管支拡張症および浸潤性肺疾患は、慢性好中球性炎症に関連する疾患である。
【００９２】
病理学的Ｔ細胞の活性化は、複数の呼吸器疾患の病因において重要である。自己反応性Ｔ細胞は、閉塞性細気管支炎性器質化肺炎（ＣＯＳとも呼ばれる）において役割を果たす。ＣＯＳと同様に、肺移植拒絶の病因は、移植されたドナー肺によるレシピエントＴ細胞の異常なＴ細胞活性化に関連している。肺移植拒絶は、原発性移植片機能不全（ＰＧＤ）、器質化肺炎（ＯＰ）、急性拒絶（ＡＲ）またはリンパ球性細気管支炎（ＬＢ）として早期に発生するか、または肺移植の数年後に慢性肺同種移植片機能不全（ＣＬＡＤ）として発生することがある。ＣＬＡＤは以前には閉塞性細気管支炎（ＢＯ）として知られていたが、現在は、ＢＯ、拘束型ＣＬＡＤ（ｒＣＬＡＤまたはＲＡＳ）および好中球性同種移植片機能不全をはじめとする様々な病理学的徴候を有する可能性のある症候群とみなされている。慢性肺同種移植片機能不全（ＣＬＡＤ）は、移植された肺の機能を徐々に失わせるので、肺移植レシピエントの長期管理に大きな課題がある（Ｇａｕｔｈｉｅｒら，Ｃｕｒｒ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．Ｒｅｐ．，２０１６，３（３），１８５−１９１）。ＣＬＡＤは処置への反応性が悪いため、この症状を予防または処置することができる有効な化合物に対する必要性が残っている。数種のＪＡＫ依存性サイトカイン、例えばＩＦＮγおよびＩＬ−５などは、ＣＬＡＤおよび肺移植拒絶において上方調節される（Ｂｅｒａｓｔｅｇｕｉら，Ｃｌｉｎ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２０１７，３１，ｅ１２８９８）。さらに、ＪＡＫ依存性ＩＦＮシグナル伝達の下流にあるＣＸＣＬ９およびＣＸＣＬ１０などのＣＸＣＲ３ケモカインの肺レベルが高いことは、肺移植患者の予後の悪化と関連している（Ｓｈｉｎｏら，ＰＬＯＳ  Ｏｎｅ，２０１７，１２（７），ｅ０１８０２８１）。全身のＪＡＫ阻害は、腎臓移植拒絶において効果的であることが示された（Ｖｉｃｅｎｔｉら，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，２０１２，１２，２４４６−５６）。そのため、ＪＡＫ阻害剤は、肺移植拒絶およびＣＬＡＤを処置または予防するのに効果的である可能性がある。肺移植拒絶の基準として記載されているものと同様のＴ細胞活性化イベントも、造血幹細胞移植後に生じ得る肺移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の主な促進剤と考えられている。肺ＧＶＨＤは、ＣＬＡＤと同様に慢性進行性の症状であり、極めて結果が悪く、現在承認されている処置法はない。救済療法として全身ＪＡＫ阻害剤ルキソリチニブを投与されたステロイド抵抗性の急性または慢性ＧＶＨＤ患者９５名のレトロスペクティブな多施設調査研究により、肺ＧＶＨＤ患者を含む大多数の患者においてルキソリチニブに対する完全または部分的応答が実証された（Ｚｅｉｓｅｒら，Ｌｅｕｋｅｍｉａ，２０１５，２９，１０，２０６２−６８）。全身性ＪＡＫ阻害は重大な有害イベントおよび小さい治療係数に関連しているので、肺移植拒絶または肺ＧＶＨＤを予防および／または処置するための、吸入されて肺に直接作用する非全身性ＪＡＫ阻害剤に対する必要性がまだある。本開示の化合物は、このニーズに対応するために必要な特性を有する。最近になって、免疫チェックポイント阻害剤が肺臓炎を誘発し、別のＴ細胞介在性��疾患が免疫チェックポイント阻害剤の使用の増加とともに現れた。これらのＴ細胞刺激剤で処置されたがん患者では、致死的な肺臓炎を発症する可能性がある。
【００９３】
そのため、一態様では、本発明は、哺乳動物（例えば、ヒト）において呼吸器疾患を処置する方法を提供し、前記方法は、治療有効量の本開示の化合物、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいは、薬学的に許容され得る担体と本発明の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を含む薬学的組成物を哺乳動物に投与することを含む。
【００９４】
一態様では、呼吸器疾患は、喘息、慢性閉塞性肺疾患、嚢胞性線維症、肺臓炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症（ＣＦ）、肺臓炎、間質性肺疾患（特発性肺線維症を含む）、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症状群、気管支炎、気腫、閉塞性細気管支炎、またはサルコイドーシスである。もう一つの態様では、呼吸器疾患は喘息または慢性閉塞性肺疾患である。
【００９５】
一態様では、呼吸器疾患は、肺感染症、好酸球性疾患、蠕虫感染症、肺動脈性肺高血圧症、サルコイドーシス、リンパ脈管筋腫症、気管支拡張症、浸潤性肺疾患、薬剤誘発性肺臓炎、真菌誘発性肺臓炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、過敏性肺臓炎、多発性血管炎を伴う好酸球性肉芽腫症、特発性急性好酸球性肺炎、特発性慢性好酸球性肺炎、好酸球増加症候群、レフレル症候群、閉塞性細気管支炎性器質化肺炎、急性および慢性の肺移植拒絶（ＰＧＤ、ＯＰ、ＬＢ、ＡＲおよびＣＬＡＤ、ＢＯ、拘束性ＣＬＡＤおよび好中球性同種移植片機能不全を含む）、肺移植片対宿主病  閉塞性細気管支炎性器質化肺炎、肺動脈性肺高血圧症、気管支拡張症、または免疫チェックポイント阻害剤誘発性肺臓炎である。
【００９６】
本発明は、哺乳動物において喘息を処置する方法をさらに提供し、前記方法は、治療有効量の本開示の化合物、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいは、薬学的に許容され得る担体と本開示の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を含む薬学的組成物を哺乳動物に投与することを含む。
【００９７】
喘息を処置するために使用される場合、本開示の化合物は、一般に、１日１回または１日複数回投与されるが、その他の投与形態を使用してもよい。活性剤の用量あたりに投与される量または一日に投与される総量は、一般に、処置される症状、選択された投与経路、投与される実際の化合物とその相対的活性、個々の患者の年齢、体重、および応答、患者の症状の重症度などを含む関連する状況を考慮して、医師が決定する。
【００９８】
本発明は、哺乳動物において呼吸器疾患（本明細書に記載される疾患を含むが、これに限定されない）を処置する方法をさらに提供し、前記方法は、治療有効量の本開示の化合物、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいは、薬学的に許容され得る担体と本開示の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を含む薬学的組成物を哺乳動物に投与することを含む。
【００９９】
呼吸器疾患（本明細書に記載される疾患を含むが、これに限定されない）を処置するために使用される場合、本開示の化合物は、一般に、１日１回または１日複数回投与されるが、その他の投与形態を使用してもよい。活性剤の用量あたりに投与される量または一日に投与される総量は、一般に、処置される症状、選択された投与経路、投与される実際の化合物とその相対的活性、個々の患者の年齢、体重、および応答、患者の症状の重症度などを含む関連する状況を考慮して、医師が決定する。
【０１００】
ＪＡＫ阻害剤として、本開示の化合物は、他の多様な疾患にも有用であり得る。本開示の化合物は、種々の胃腸炎症性適応症に有用であり得、それらの適応症としては、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎（直腸Ｓ状結腸炎、汎大腸炎、潰瘍性直腸炎および左側大腸炎）、クローン病、コラーゲン蓄積大腸炎、リンパ球性大腸炎、ベーチェット病、セリアック病、免疫チェックポイント阻害剤によって誘発される大腸炎、回腸炎、好酸球性食道炎、移植片対宿主病関連大腸炎および感染性大腸炎が挙げられるが、これらに限定されない。潰瘍性大腸炎（Ｒｅｉｍｕｎｄら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９６，１６，１４４−１５０）、クローン病（Ｗｏｙｗｏｄｔら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，１９９９，１１，２６７−２７６）、コラーゲン蓄積大腸炎（Ｋｕｍａｗａｔら、Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２０１３，５５，３５５−３６４）、リンパ球性大腸炎（Ｋｕｍａｗａｔら、２０１３）、好酸球性食道炎（Ｗｅｉｎｂｒａｎｄ−Ｇｏｉｃｈｂｅｒｇら、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ，２０１３，５６，２４９−２６０）、移植片対宿主病関連大腸炎（Ｃｏｇｈｉｌｌら、Ｂｌｏｏｄ，２００１，１１７，３２６８−３２７６）、感染性大腸炎（Ｓｔａｌｌｍａｃｈら、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  Ｄｉｓ，２００４，１９，３０８−３１５）、ベーチェット病（Ｚｈｏｕら、Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ  Ｒｅｖ，２０１２，１１，６９９−７０４）、セリアック病（ｄｅ  Ｎｉｔｔｏら、Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２００９，１５，４６０９−４６１４）、免疫チェックポイント阻害剤によって誘発される大腸炎（例えば、ＣＴＬＡ−４阻害剤によって誘発される大腸炎；（Ｙａｎｏら、Ｊ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ  Ｍｅｄ，２０１４，１２，１９１）ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤によって誘発される大腸炎）および回腸炎（Ｙａｍａｍｏｔｏら、Ｄｉｇ  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓ，２００８，４０，２５３−２５９）は、ある特定の炎症促進性サイトカインのレベルの上昇を特徴とする。多くの炎症促進性サイトカインが、ＪＡＫの活性化を介してシグナル伝達するので、本願に記載される化合物は、炎症を軽減することおよび症候の軽減を提供することができ得る。特に、本開示の化合物は、潰瘍性大腸炎の緩解の誘導および維持、ならびにクローン病、免疫チェックポイント阻害剤によって誘発される大腸炎および移植片対宿主病における胃腸の有害作用の処置に有用であり得る。そのため、一態様では、本開示は、哺乳動物（例えば、ヒト）において胃腸の炎症性疾患を処置する方法を提供し、前記方法は、本開示の化合物、またはその薬学的に許容され得る塩、あるいは、薬学的に許容され得る担体と本開示の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を含む薬学的組成物を哺乳動物に投与することを含む。
【０１０１】
アトピー性皮膚炎及び他の炎症性皮膚疾患は、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路に依存する炎症促進性サイトカインの増加に関連している。したがって、本開示の化合物またはその薬学的に許容され得る塩もしくはその結晶形態は、いくつかの皮膚炎症性症状または皮膚そう痒性症状（アトピー性皮膚炎、円形脱毛症、白斑、乾癬、皮膚筋炎、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（Ｎｅｔｃｈｉｐｏｒｏｕｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｃｙｃｌｅ．２０１４；１３，３３３１−３３３５）およびサブタイプ（セザリー症候群、菌状息肉症、パジェット様細網症、肉芽腫様弛緩皮膚、リンパ腫様丘疹症、慢性苔癬状粃糠疹、急性苔癬状痘瘡状粃糠疹、ＣＤ３０＋皮膚Ｔ細胞リンパ腫、続発性皮膚ＣＤ３０陽性大細胞リンパ腫、非菌状息肉症ＣＤ３０陰性皮膚大Ｔ細胞リンパ腫、多形性Ｔ細胞リンパ腫、レナートリンパ腫、皮下Ｔ細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫、芽球型ＮＫ細胞リンパ腫）、結節性痒疹、扁平苔癬、原発性限局性皮膚アミロイドーシス、水疱性類天疱瘡、移植片対宿主病の皮膚発現、類天疱瘡、円板状狼瘡、環状肉芽腫、慢性単純性苔癬、外陰部／陰嚢／肛門周囲のそう痒、硬化性苔癬、帯状疱疹後神経痛かゆみ、毛孔性扁平苔癬、脱毛性毛包炎（ｆｏｌｉｃｕｌｉｔｉｓ  ｄｅｃａｌｖａｎｓ）が挙げられるが、これらに限定されない）において有益であり得る。特に、アトピー性皮膚炎（Ｂａｏら、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ，２０１３，２，ｅ２４１３７）、円形脱毛症（Ｘｉｎｇら、Ｎａｔ  Ｍｅｄ．２０１４，２０，１０４３−１０４９）、白斑（Ｃｒａｉｇｌｏｗら、ＪＡＭＡ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２０１５，１５１，１１１０−１１１２）、結節性痒疹（Ｓｏｎｋｏｌｙら、Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００６，１１７，４１１−４１７）、扁平苔癬（Ｗｅｌｚ−Ｋｕｂｉａｋら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ．２０１５，ＩＤ：８５４７４７）、原発性限局性皮膚アミロイドーシス（Ｔａｎａｋａら、Ｂｒ  Ｊ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２００９，１６１，１２１７−１２２４）、水疱性類天疱瘡（Ｆｅｌｉｃｉａｎｉら、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９９，１２，５５−６１）および移植片対宿主病の皮膚発現（Ｏｋｉｙａｍａら、Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２０１４，１３４，９９２−１０００）は、ＪＡＫの活性化を介してシグナル伝達するある特定のサイトカインの増加を特徴とする。したがって、本開示の化合物または薬学的に許容され得るその塩は、これらのサイトカインによって引き起こされる関連する皮膚の炎症またはそう痒症を軽減することができ得る。特に、本開示の化合物または薬学的に許容され得るその塩は、アトピー性皮膚炎および他の炎症性皮膚疾患の処置に有用であると予想され得る。そのため、一態様では、本開示は、哺乳動物（例えば、ヒト）において炎症性皮膚疾患を処置する方法を提供し、前記方法は、本開示の化合物、またはその薬学的に許容され得る塩、および薬学的担体を含む薬学的組成物を哺乳動物の皮膚に塗布することを含む。一態様では、炎症性皮膚疾患はアトピー性皮膚炎である。
【０１０２】
多数の眼疾患が、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路に依存する炎症促進性サイトカインの上昇に関連することが示されている。したがって、本開示の化合物またはその薬学的に許容され得る塩は、いくつかの眼疾患（ブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、眼乾燥症、加齢性黄斑変性、およびアトピー性角結膜炎が挙げられるが、これらに限定されない）の処置に有用であり得る。特に、ブドウ膜炎（Ｈｏｒａｉ  ａｎｄ  Ｃａｓｐｉ，Ｊ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ，２０１１，３１，７３３−７４４）、糖尿病性網膜症（Ａｂｃｏｕｗｅｒ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１３，Ｓｕｐｐｌ  １，１−１２）、糖尿病性黄斑浮腫（Ｓｏｈｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｐｔｈａｍｏｌｏｇｙ，２０１１，１５２，６８６−６９４）、眼乾燥症（Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ，Ａｒｃｈ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ，２０１２，１３０，９０−１００）、および加齢性黄斑変性（Ｋｎｉｃｋｅｌｂｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｉｎｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｃｌｉｎ，２０１５，５５（３），６３−７８）は、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路を介してシグナル伝達する一定の炎症促進性サイトカインの上昇を特徴とする。したがって、本開示の化合物またはその薬学的に許容され得る塩は、関連する眼炎症を軽減し、疾患の進行を逆行させるか、症状を緩和することができ得る。したがって、１つの態様において、本開示は、哺乳動物の眼疾患を処置する方法であって、本開示の化合物またはその薬学的に許容され得る塩、および薬学的キャリアを含む薬学的組成物を哺乳動物の眼に投与する工程を含む、方法を提供する。１つの態様において、眼疾患は、ブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、眼乾燥症、加齢性黄斑変性、またはアトピー性角結膜炎である。１つの態様において、本方法は、本開示の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を硝子体内注射によって投与する工程を含む。本開示の化合物、またはその薬学的に許容され得る塩は、眼疾患に有用な１またはそれを超える化合物と併用されてもよい。
【０１０３】
本開示の化合物またはその薬学的に許容され得る塩はまた、他の炎症性疾患、自己免疫疾患、または癌などの他の疾患を処置するのに有用であり得る。本開示の化合物またはその薬学的に許容され得る塩は、関節炎、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、移植片拒絶、眼球乾燥、乾癬性関節炎、糖尿病、インスリン依存性糖尿病、運動ニューロン疾患、骨髄異形成症候群、疼痛、筋肉減少、悪液質、敗血症性ショック、全身性エリテマトーデス、白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、強直性脊椎炎、骨髄線維症、Ｂ細胞リンパ腫、肝細胞癌、ホジキン病、乳癌、多発性骨髄腫、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、卵巣明細胞癌、卵巣腫瘍、膵臓腫瘍、真性赤血球増加症、シェーグレン症候群、軟部組織肉腫、肉腫、脾腫、Ｔ細胞リンパ腫、および重症型サラセミアのうちの１または複数の処置に有用であり得る。
【０１０４】
併用療法
本開示の化合物またはその薬学的に許容され得る塩は、疾患を処置するために同じ機構または異なる機構によって作用する１またはそれを超える薬剤と併用されてもよい。異なる薬剤は、別々の組成物または同じ組成物中で、連続してまたは同時に投与されてよい。併用療法に有用なクラスの薬剤としては、β２アドレナリン受容体アゴニスト、ムスカリン性受容体アンタゴニスト、グルココルチコイドアゴニスト、Ｇタンパク質共役受容体−４４アンタゴニスト、ロイコトリエンＤ４アンタゴニスト、ムスカリンＭ３受容体アンタゴニスト、ヒスタミンＨ１受容体アンタゴニスト、免疫グロブリンＥアンタゴニスト、ＰＤＥ４阻害剤、ＩＬ−４アンタゴニスト、ムスカリンＭ１受容体アンタゴニスト、ヒスタミン受容体アンタゴニスト、ＩＬ−１３アンタゴニスト、ＩＬ−５アンタゴニスト、５−リポキシゲナーゼ阻害剤、βアドレナリン受容体アゴニスト、ＣＣＲ３ケモカインアンタゴニスト、ＣＦＴＲ刺激剤、免疫グロブリンモジュレーター、インターロイキン３３リガンド阻害剤、ＰＤＥ３阻害剤、ホスホイノシチド−３キナーゼδ阻害剤、トロンボキサンＡ２アンタゴニスト、エラスターゼ阻害剤、Ｋｉｔチロシンキナーゼ阻害剤、ロイコトリエンＥ４アンタゴニスト、ロイコトリエンアンタゴニスト、ＰＧＤ２アンタゴニスト、ＴＮＦαリガンド阻害剤、ＴＮＦ結合剤、補体カスケード阻害剤、エオタキシンリガンド阻害剤、グルタチオンレダクターゼ阻害剤、ヒスタミンＨ４受容体アンタゴニスト、ＩＬ−６アンタゴニスト、ＩＬ２遺伝子刺激剤、免疫グロブリンガンマＦｃ受容体ＩＩＢモジュレーター、インターフェロンガンマリガンド、インターロイキン１３リガンド阻害剤、インターロイキン１７リガンド阻害剤、Ｌ−セレクチンアンタゴニスト、白血球エラスターゼ阻害剤、ロイコトリエンＣ４アンタゴニスト、ロイコトリエンＣ４シンターゼ阻害剤、膜銅アミンオキシダーゼ阻害剤（ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｃｏｐｐｅｒ  ａｍｉｎｅ  ｏｘｉｄａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）、メタロプロテアーゼ−１２阻害剤、メタロプロテアーゼ−９阻害剤、ダニアレルゲンモジュレーター、ムスカリン性受容体モジュレーター、ニコチン性アセチルコリン受容体アゴニスト、核内因子カッパＢ阻害剤、ｐ−セレクチンアンタゴニスト、ＰＤＥ５阻害剤、ＰＤＧＦ受容体アンタゴニスト、ホスホイノシチド−３キナーゼガンマ阻害剤、ＴＬＲ−７アゴニスト、ＴＮＦアンタゴニスト、Ａｂｌチロシンキナーゼ阻害剤、アセチルコリン受容体アンタゴニスト、酸性哺乳類キチナーゼ阻害剤、ＡＣＴＨ受容体アゴニスト、アクチン重合モジュレーター、アデノシンＡ１受容体アンタゴニスト、アデニル酸シクラーゼ刺激剤、アドレナリン受容体アンタゴニスト、副腎皮質刺激ホルモンリガンド、アルコールデヒドロゲナーゼ５阻害剤、α１抗トリプシン刺激剤、α１プロテイナーゼ阻害剤、アンドロゲン受容体モジュレーター、アンジオテンシン変換酵素２刺激剤、ＡＮＰアゴニスト、Ｂｃｒタンパク質阻害剤、β１アドレナリン受容体アンタゴニスト、β２アドレナリン受容体アンタゴニスト、β２アドレナリン受容体モジュレーター、βアミロイドモジュレーター、ＢＭＰ１０遺伝子阻害剤、ＢＭＰ１５遺伝子阻害剤、カルシウムチ��ネル阻害剤、カテプシンＧ阻害剤、ＣＣＬ２６遺伝子阻害剤、ＣＣＲ３ケモカインモジュレーター、ＣＣＲ４ケモカインアンタゴニスト、細胞接着分子阻害剤、シャペロニン刺激剤、キチナーゼ阻害剤、コラーゲンＩアンタゴニスト、補体Ｃ３阻害剤、ＣＳＦ−１アンタゴニスト、ＣＸＣＲ２ケモカインアンタゴニスト、サイトカイン受容体共通β鎖モジュレーター、細胞傷害性Ｔリンパ球タンパク質−４刺激剤、デオキシリボヌクレアーゼＩ刺激剤、デオキシリボヌクレアーゼ刺激剤、ジペプチジルペプチダーゼＩ阻害剤、ＤＮＡジャイレース阻害剤、ＤＰプロスタノイド受容体モジュレーター、Ｅ−セレクチンアンタゴニスト、ＥＧＦＲファミリーチロシンキナーゼ受容体阻害剤、エラスチンモジュレーター、エンドセリンＥＴ−Ａアンタゴニスト、エンドセリンＥＴ−Ｂアンタゴニスト、エポキシドヒドロラーゼ阻害剤、ＦＧＦ３受容体アンタゴニスト、Ｆｙｎチロシンキナーゼ阻害剤、ＧＡＴＡ３転写因子阻害剤、グルコシルセラミダーゼモジュレーター、グルタミン酸受容体モジュレーター、ＧＭ−ＣＳＦリガンド阻害剤、グアニル酸シクラーゼ刺激剤、Ｈ＋Ｋ＋ＡＴＰアーゼ阻害剤、ヘモグロビンモジュレーター、ヘパリンアゴニスト、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤、ヒストン脱アセチル化酵素−２刺激剤、ＨＭＧ  ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、Ｉ−カッパＢキナーゼベータ阻害剤、ＩＣＡＭ１遺伝子阻害剤、ＩＬ−１７アンタゴニスト、ＩＬ−１７受容体モジュレーター、ＩＬ−２３アンタゴニスト、ＩＬ−４受容体モジュレーター、免疫グロブリンＧモジュレーター、免疫グロブリンＧ１アゴニスト、免疫グロブリンＧ１モジュレーター、免疫グロブリンイプシロンＦｃ受容体ＩＡアンタゴニスト、免疫グロブリンγＦｃ受容体ＩＩＢアンタゴニスト、免疫グロブリンカッパモジュレーター、インスリン抵抗性改善薬、インターフェロンβリガンド、インターロイキン１様受容体アンタゴニスト、インターロイキン１８リガンド阻害剤、インターロイキン受容体１７Ａアンタゴニスト、インターロイキン−１βリガンド阻害剤、インターロイキン−５リガンド阻害剤、インターロイキン−６リガンド阻害剤、ＫＣＮＡ電位依存性カリウムチャネル−３阻害剤、Ｋｉｔリガンド阻害剤、ラミニン−５アゴニスト、ロイコトリエンＣｙｓＬＴ１受容体アンタゴニスト、ロイコトリエンＣｙｓＬＴ２受容体アンタゴニスト、ＬＯＸＬ２遺伝子阻害剤、Ｌｙｎチロシンキナーゼ阻害剤、ＭＡＲＣＫＳタンパク質阻害剤、ＭＤＲ関連タンパク質４阻害剤、メタロプロテアーゼ−２モジュレーター、メタロプロテアーゼ−９モジュレーター、鉱質コルチコイド受容体アンタゴニスト、ムスカリンＭ２受容体アンタゴニスト、ムスカリンＭ４受容体アンタゴニスト、ムスカリンＭ５受容体アンタゴニスト、ナトリウム利尿ペプチド受容体Ａアゴニスト、ナチュラルキラー細胞受容体モジュレーター、ニコチン性ＡＣｈ受容体α７サブユニット刺激因子、ＮＫ細胞受容体モジュレーター、核内因子カッパＢモジュレーター、オピオイド増殖因子受容体アゴニスト、Ｐ糖タンパク質阻害剤、Ｐ２Ｘ３プリン受容体アンタゴニスト、ｐ３８ＭＡＰキナーゼ阻害剤、ペプチダーゼ１モジュレーター、ホスホリパーゼＡ２阻害剤、ホスホリパ��ゼＣ阻害剤、プラスミノゲン活性化因子阻害剤１阻害剤、血小板活性化因子受容体アンタゴニスト、ＰＰＡＲガンマアゴニスト、プロスタサイクリンアゴニスト、タンパク質チロシンキナーゼ阻害剤、ＳＨ２ドメインイノシトールホスファターゼ１刺激剤、シグナル伝達阻害剤、ナトリウムチャネル阻害剤、ＳＴＡＴ−３モジュレーター、幹細胞抗原−１阻害剤、スーパーオキシドジスムターゼモジュレーター、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ２８阻害剤、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ８阻害剤、ＴＧＦβアゴニスト、ＴＧＦβアンタゴニスト、トロンボキサンシンセターゼ阻害剤、胸腺間質性リンホプロテイン（ｔｈｙｍｉｃ  ｓｔｒｏｍａｌ  ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｔｅｉｎ）リガンド阻害剤、サイモシンアゴニスト、サイモシンβ４リガンド、ＴＬＲ−８アゴニスト、ＴＬＲ−９アゴニスト、ＴＬＲ９遺伝子刺激剤、トポイソメラーゼＩＶ阻害剤、トロポニンＩ骨格筋速筋刺激剤、トロポニンＴ骨格筋速筋刺激剤、Ｉ型ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、ＩＩ型ＴＮＦ受容体モジュレーター、イオンチャネルモジュレーター、子宮グロビン刺激剤、およびＶＩＰアゴニストが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０５】
本発明のＪＡＫ阻害剤化合物と併用され得る具体的な薬剤としては、ロシプトル酢酸塩、ウメクリジニウム臭化物、セクキヌマブ、メテンケファリン酢酸塩、トリデカクチド（ｔｒｉｄｅｃａｃｔｉｄｅ）酢酸塩、プロピオン酸フルチカゾン、α−シクロデキストリン安定化スルホラファン、テゼペルマブ、フロ酸モメタゾン、ＢＩ−１４６７３３５、デュピルマブ、アクリジニウム、フォルモテロール、ＡＺＤ−１４１９、ＨＩ−１６４０Ｖ、リビパンセル、ＣＭＰ−００１、マンニトール、ＡＮＢ−０２０、オマリズマブ、トレガリズマブ（ｔｒｅｇａｌｉｚｕｍａｂ）、Ｍｉｔｉｚａｘ、ベンラリズマブ、ゴリムマブ、ロフルミラスト、イマチニブ、ＲＥＧＮ−３５００、マシチニブ、アプレミラスト、ＲＰＬ−５５４、Ａｃｔｉｍｍｕｎｅ、アダリムマブ、ルパタジン、パログレリル、ＭＫ−１０２９、プロピオン酸ベクロメタゾン、フマル酸フォルモテロール、モガムリズマブ、セラトロダスト、ＵＣＢ−４１４４、ネミラリシブ、ＣＫ−２１２７１０７、フェビピプラント、ダニリキシン、ボセンタン、アバタセプト、ＥＣ−１８、デュベリシブ、ドシパルスタット（ｄｏｃｉｐａｒｓｔａｔ）、シプロフロキサシン、サルブタモールＨＦＡ、エルドステイン、ＰｒＥＰ−００１、ネドクロミル、ＣＤＸ−０１５８、サルブタモール、エノボサルム、Ｒ−ＴＰＲ−０２２、レンジルマブ（ｌｅｎｚｉｌｕｍａｂ）、フロ酸フルチカゾン、ビランテロールトリフェニル酢酸塩、プロピオン酸フルチカゾン、サルメテロール、ＰＴ−００７、ＰＲＳ−０６０、レメステムセル−Ｌ、シトルリン、ＲＰＣ−４０４６、酸化窒素、ＤＳ−１０２、ゲリリムズマブ（ｇｅｒｉｌｉｍｚｕｍａｂ）、Ａｃｔａｉｒ、フロ酸フルチカゾン、ウメクリジニウム、ビランテロール、ＡＧ−ＮＰＰ７０９、Ｇａｍｕｎｅｘ、インフリキシマブ、Ａｍｐｉｏｎ、アクマピモド（ａｃｕｍａｐｉｍｏｄ）、カナキヌマブ、ＩＮＳ−１００７、ＣＹＰ−００１、シルクマブ、プロピオン酸フルチカゾン、メポリズマブ、ピタバスタチン、ソリスロマイシン、エタネルセプト、アイバカフトール、アナキンラ、ＭＰＣ−３００−ＩＶ、グリコピロニウム臭化物、アクリジニウム臭化物、ＦＰ−０２５、リサンキズマブ、グリコピロニウム、フマル酸フォルモテロール、Ａｄｉｐｏｃｅｌｌ、ＹＰＬ−００１、チオトロピウム臭化物、グリコピロニウム臭化物、インダカテロールマレイン酸塩、アンデカリキシマブ、オロダテロール、エソメプラゾール、ダストダニワクチン、ヨモギ花粉アレルゲンワクチン、バモロロン、ゲファピキサント（ｇｅｆａｐｉｘａｎｔ）、レベフェナシン、ゲフィチニブ、ＲｅＪｏｉｎ、チペルカスト（ｔｉｐｅｌｕｋａｓｔ）、ベドラドリン、ＳＣＭ−ＣＧＨ、ＳＨＰ−６５２、ＲＮＳ−６０、ブロダルマブ、ＢＩＯ−１１００６、ウメクリジニウム臭化物、ビランテロールトリフェニル酢酸塩、臭化イプラトロピウム、トラロキヌマブ、ＰＵＲ−１８００、ＶＸ−５６１、ＶＸ−３７１、オロパタジン、ツロブテロール、フマル酸フォルモテロール、トリアムシノロンアセトニド、レスリズマブ、サルメテロールキシナホ酸塩、プロピオン酸フルチカゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、フマル酸フォルモテロール、���オトロピウム臭化物、リゲリズマブ、ＲＵＴＩ、ベルティリムマブ、オマリズマブ、グリコピロニウム臭化物、ＳＥＮＳ−１１１、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ＣＨＦ−５９９２、ＬＴ−４００１、インダカテロール、グリコピロニウム臭化物、フロ酸モメタゾン、フェキソフェナジン、グリコピロニウム臭化物、アジスロマイシン、ＡＺＤ−７５９４、フォルモテロール、ＣＨＦ−６００１、バテフェンテロール、ＯＡＴＤ−０１、オロダテロール、ＣＪＭ−１１２、ロシグリタゾン、サルメテロール、セチピプラント、吸入インターフェロンβ、ＡＺＤ−８８７１、プレカナチド、フルチカゾン、サルメテロール、エイコサペンタエン酸モノグリセリド、レブリキズマブ、ＲＧ−６１４９、ＱＢＫＰＮ、モメタゾン、インダカテロール、ＡＺＤ−９８９８、ピルビン酸ナトリウム、ジレウトン、ＣＧ−２０１、イミダフェナシン、ＣＮＴＯ−６７８５、ＣＬＢＳ−０３、モメタゾン、ＲＧＮ−１３７、プロカテロール、フォルモテロール、ＣＣＩ−１５１０６、ＰＯＬ−６０１４、インダカテロール、ベクロメタゾン、ＭＶ−１３０、ＧＣ−１１１２、Ａｌｌｅｒｇｏｖａｃデポ、ＭＥＤＩ−３５０６、ＱＢＷ−２５１、ＺＰＬ−３８９、ウデナフィル、ＧＳＫ−３７７２８４７、レボセチリジン、ＡＸＰ−１２７５、ＡＤＣ−３６８０、チマピプラント（ｔｉｍａｐｉｐｒａｎｔ）、アベジテロール、ＡＺＤ−７５９４、臭化イプラトロピウム、硫酸サルブタモール、タデキニグアルファ、ＡＣＴ−７７４３１２、ドルナーゼアルファ、イロプロスト、バテフェンテロール、フロ酸フルチカゾン、アリカホルセン、シクレソニド、エメラミド、アルフォルモテロール、ＳＢ−０１０、Ｏｚａｇｒｅｌ、ＢＴＴ−１０２３、Ｄｅｃｔｒｅｋｕｍａｂ、レブアルブテロール、プランルカスト、ヒアルロン酸、ＧＳＫ−２２９２７６７、フォルモテロール、ＮＯＶ−１４、Ｌｕｃｉｎａｃｔａｎｔ、サルブタモール、プレドニゾロン、エバスチン、デキサメタゾンシペシル酸エステル、ＧＳＫ−２５８６８８１、ＢＩ−４４３６５１、ＧＳＫ−２２５６２９４、ＶＲ−１７９、ＶＲ−０９６、ｈｄｍ−ＡＳＩＴ＋、ブデソニド、ＧＳＫ−２２４５０３５、ＶＴＸ−１４６３、Ｅｍｅｄａｓｔｉｎｅ、デクスプラミペキソール、レブアルブテロール、Ｎ−６０２２、リン酸デキサメタゾンナトリウム、ＰＩＮ−２０１１０４、ＯＰＫ−００１８、ＴＥＶ−４８１０７、スプラタスト、ＢＩ−１０６０４６９、Ｇｅｍｉｌｕｋａｓｔ、インターフェロンγ、ダラザチド、ビラスチン、プロピオン酸フルチカゾン、サルメテロールキシナホ酸塩、ＲＰ−３１２８、臭化ベンシクロキジウム、レスリズマブ、ＰＢＦ−６８０、ＣＲＴＨ２アンタゴニスト、Ｐｒａｎｌｕｋａｓｔ、サルメテロールキシナホ酸塩、プロピオン酸フルチカゾン、臭化チオトロピウム一水和物、マシルカスト、ＲＧ−７９９０、Ｄｏｘｏｆｙｌｌｉｎｅ、アベジテロール、グリコピロニウム臭化物、ＴＥＶ−４６０１７、ＡＳＭ−０２４、プロピオン酸フルチカゾン、グリコピロニウム臭化物、サルメテロールキシナホ酸塩、サルブタモール、ＴＡ−２７０、フルニソリド、ナトリウムクロモグリケート（ｓｏｄｉｕｍ  ｃｈｒｏｍｏｇｌｙｃａｔｅ）、Ｅｐｓｉ���ｇａｍ、ＺＰＬ−５２１、サルブタモール、アビプタジル、ＴＲＮ−１５７、ザフィルルカスト、Ｓｔｅｍｐｅｕｃｅｌ、ペミロラストナトリウム、ナドロール、プロピオン酸フルチカゾン＋サルメテロールキシナホ酸塩、ＲＶ−１７２９、硫酸サルブタモール、二酸化炭素＋パーフルオロオクチルブロミド、ＡＰＬ−１、デクトレクマブ＋ＶＡＫ−６９４、リジンアセチルサリチル酸、ジレウトン、ＴＲ−４、ヒト同種脂肪由来間葉系前駆細胞治療、ＭＥＤＩ−９３１４、ＰＬ−３９９４、ＨＭＰ−３０１、ＴＤ−５４７１、ＮＫＴＴ−１２０、ペミロラスト、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、トランチンテロール、アルファルミノール一ナトリウム、ＩＭＤ−１０４１、ＡＭ−２１１、ＴＢＳ−５、ＡＲＲＹ−５０２、セラトロダスト、組換えミジスマーゼ、ＡＳＭ−８、デフラザコート、バンブテロール、ＲＢｘ−１００１７６０９、イプラトロピウム＋フェノテロール、フルチカゾン＋フォルモテロール、エピナスチン、ＷＩＮ−９０１Ｘ、ＶＡＬＥＲＧＥＮ−ＤＳ、ＯｌｉｇｏＧ−ＣＯＰＤ−５／２０、ツロブテロール、ｏｘｉｓ  Ｔｕｒｂｕｈａｌｅｒ、ＤＳＰ−３０２５、ＡＳＭ−０２４、ミゾラスチン、ブデソニド＋サルメテロール、ＬＨ−０１１、ＡＸＰ−Ｅ、ヒスタミンヒト免疫グロブリン、ＹＨＤ−００１、テオフィリン、アンブロキソール＋エルドステイン、ラマトロバン、モンテルカスト、プランルカスト、ＡＧ−１３２１００１、ツロブテロール、イプラトロピウム＋サルブタモール、トラニラスト、メチルプレドニゾロンスレプタネート、コルホルシンダロパート、レピリナスト、およびドキソフィリンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０６】
また、本明細書では、本開示の化合物またはその薬学的に許容され得る塩および１またはそれを超える他の治療薬を含む薬学的組成物が提供される。治療薬は、上記で指定された薬剤のクラスおよび上記の特定の薬剤のリストから選択されてよい。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、肺への送達に適している。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、吸入または噴霧投与に適している。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、乾燥粉末または液体組成物である。
【０１０７】
さらに、一方法態様では、本開示は、本開示の化合物またはその薬学的に許容され得る塩および１またはそれを超える他の治療薬を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物の疾患または障害を処置する方法を提供する。
【０１０８】
併用療法で使用される場合、薬剤は、単一の薬学的組成物に処方されてもよく、または薬剤は、同じまたは異なる投与経路によって、同時にまたは別々の時間に投与される別個の組成物で提供されてもよい。このような組成物は、別々に包装されてもよいし、キットとして一緒に包装されてもよい。キット内の２またはそれを超える治療薬は、同じ投与経路によって投与されても、異なる投与経路によって投与されてもよい。
【実施例】
【０１０９】
実施例
以下の合成および生物学の実施例は、本発明を例証するために提供されるのであって、決して本発明の範囲を限定すると解釈されるべきでない。下記の実施例では、以下の省略形は、別段示されない限り、以下の意味を有する。下記に定義されない省略形は、それらの一般に認められている意味を有する。
ＡＣＮ＝アセトニトリル
ＤＣＭ＝ジクロロメタン
ＤＩＰＥＡ＝Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル
ｈ＝時間
ＨＡＴＵ＝Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＩＰＡ＝イソプロピルアルコール
ＩＰＡｃ＝イソプロピルアセテート
ＭｅＯＨ＝メタノール
ｍｉｎ＝分
Ｐｄ（ＰＰｈ３）４＝テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）
ＲＴ＝室温
ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン
ビス（ピナコラト）ジボロン＝４，４，５，５，４’，４’，５’，５’−オクタメチル−［２，２’］ビ［［１，３，２］ジオキサボロラニル］
【０１１０】
試薬および溶媒は、商業的供給業者（Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｆｌｕｋａ、Ｓｉｇｍａなど）から購入し、さらに精製せずに使用した。反応混合物の進行は、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、分析用高速液体クロマトグラフィー（ａｎａｌ．ＨＰＬＣ）および質量分析法によってモニターした。反応混合物は、各反応において具体的に記載されるようにワークアップした；通常、それらは、抽出および他の精製方法（例えば、温度依存性および溶媒依存性の結晶化および沈殿）によって精製した。さらに、反応混合物は、代表的にはＣ１８またはＢＤＳカラムパッキングおよび従来の溶離剤を用いる、カラムクロマトグラフィーまたは分取ＨＰＬＣによって通例のように精製した。代表的な分取ＨＰＬＣ条件は、下記に記載される。
【０１１１】
反応生成物の特徴付けは、質量分析法および１Ｈ−ＮＭＲ分光法によって通例のように行った。ＮＭＲ解析の場合、サンプルを重水素化溶媒（例えば、ＣＤ３ＯＤ、ＣＤＣｌ３またはｄ６−ＤＭＳＯ）に溶解し、標準的な観測条件下でＶａｒｉａｎ  Ｇｅｍｉｎｉ  ２０００装置（４００ＭＨｚ）を用いて１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを取得した。化合物の質量分析同定は、自動精製システムに連結された、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）のモデルＡＰＩ  １５０  ＥＸ装置またはＷａｔｅｒｓ（Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）の３１００装置を用いるエレクトロスプレーイオン化法（ＥＳＭＳ）によって行った。
分取ＨＰＬＣ条件
カラム：Ｃ１８、５μｍ  ２１．２×１５０ｍｍまたはＣ１８、５μｍ  ２１×２５０ｍｍまたはＣ１４  ５μｍ  ２１×１５０ｍｍ
カラム温度：室温
流速：２０．０ｍＬ／分
移動相：Ａ＝水＋０．０５％ＴＦＡ
Ｂ＝ＡＣＮ＋０．０５％ＴＦＡ、
注入体積：（１００〜１５００μＬ）
検出器の波長：２１４ｎｍ
【０１１２】
粗化合物を約５０ｍｇ／ｍＬで１：１水：酢酸に溶解した。４分間の分析スケールの試験ランを、２．１×５０ｍｍＣ１８カラムを用いて行った後、１５または２０分間の分取スケールのランを、分析スケールの試験ランの％Ｂ保持に基づくグラジエントを伴う１００μＬの注入を用いて行った。正確な勾配は試料に依存した。最適な分離のために、近接して流れる不純物を含む試料を２１×２５０ｍｍ  Ｃ１８カラムおよび／または２１×１５０ｍｍ  Ｃ１４カラムでチェックした。所望の生成物を含有する画分を質量分析によって特定した。
【０１１３】
調製１：４−（ベンジルオキシ）−２−エチルフェニル）トリフルオロ−λ４−ボラン，カリウム塩Ｉ−５
【化２８】
2021535174.tif 000030
（ａ）１−（ベンジルオキシ）−３−エチルベンゼン（Ｉ−２）
３−エチルフェノール（Ｉ−１）（２５．０ｇ、２０４．０ｍｍｏｌ）のＡＣＮ（２５０ｍＬ、１０体積）中の撹拌溶液に、炭酸カリウム（４２．０ｇ、３０６ｍｍｏｌ）を室温で加えた。得られた反応塊を室温で１５分間撹拌し、続いて臭化ベンジル（２４．０ｍＬ、２０４ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。得られた反応混合物を室温で６時間撹拌した。反応の完了後（ＴＬＣでモニター）、得られた反応塊を水（１．０Ｌ）に注ぎ、続いてＥｔＯＡｃ（２ｘ２Ｌ）で化合物を抽出した。合わせた有機物を冷水、ブライン溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。次に、粗生成物を２％ＥｔＯＡｃを含むヘキサンの溶離液を使用するシリカゲル（１００〜２００Ｍ）でのカラムクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物（Ｉ−２）を淡黄色の油状化合物として得た（３５．０ｇ、８１％）。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  クロロホルム−ｄ）  δ  ７．４６−７．４４  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．３９  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ７．３４−７．３１  （ｍ，  １Ｈ），  ７．２１  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ），  ６．８６−６．８０  （ｍ，  ３Ｈ），  ５．０７  （ｓ，  ２Ｈ），  ２．６４  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  ２Ｈ），  １．２４  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  ３Ｈ）．
【０１１４】
（ｂ）４−（ベンジルオキシ）−１−ブロモ−２−エチルベンゼン（Ｉ−３）
１−（ベンジルオキシ）−３−エチルベンゼン（Ｉ−２）（３５．０ｇ、１６４ｍｍｏｌ）のＡＣＮ（５２５ｍＬ、１５体積）中の氷冷撹拌溶液に、Ｎ−ブロモスクシンイミド（３２．０ｇ、１８１ｍｍｏｌ）を１５分間にわたり少量ずつ加えた。得られた反応混合物を、それから１時間室温で撹拌した。反応の完了後（ＴＬＣでモニター）、得られた反応塊を氷冷水（１．５０Ｌ）に注ぎ、続いてＥｔＯＡｃ（２×１Ｌ）で化合物を抽出した。合わせた有機物を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させて、粗生成物を得た。粗材料にｎ−ヘキサン（２５０ｍＬ）を加えてスラリーにし、続いて半融漏斗で濾過した。母液を減圧下で蒸発させて、所望の生成物Ｉ−３を淡黄色の油状化合物として得た（４２．０ｇ、８７％）。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  クロロホルム−ｄ）  δ  ７．５２−７．２９  （ｍ，  ７Ｈ），  ６．８８  （ｓ，  １Ｈ），  ６．６８  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６．０  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．０４  （ｓ，  ２Ｈ），  ２．６９  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  ２Ｈ），  １．２０  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ，  ３Ｈ）．
【０１１５】
（ｃ）２−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチルフェニル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（Ｉ−４）
４−（ベンジルオキシ）−１−ブロモ−２−エチルベンゼン（Ｉ−３）（４２．０ｇ、１４４ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（４４．０ｇ、１７３ｍｍｏｌ）、および酢酸カリウム（２８ｇ、２８８ｍｍｏｌ）のジオキサン（４４０ｍＬ）中の撹拌溶液を、Ｎ２（ｇ）を１５分間パージすることにより脱気し、続いてＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）．ＤＣＭ錯体（１１．０ｇ、１５ｍｍｏｌ）を加えた。得られた反応混合物を、それから１６時間、８０℃まで加熱した。反応の完了後（ＴＬＣでモニター）、反応塊をセライト床で濾過し、母液を減圧下で蒸発させて、粗生成物を得た。粗残渣を、１％ＥｔＯＡｃを含むヘキサンの溶離液を使用することによるシリカゲル（１００〜２００Ｍ）でのカラムクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物（Ｉ−４）を淡黄色の油状化合物として得た（３２．０ｇ、６６％）。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  クロロホルム−ｄ）  δ  ７．７４  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．４５−７．３６  （ｍ，  ５Ｈ），  ６．８４−６．７８  （ｍ，  ２Ｈ），  ５．０８  （ｓ，  ２Ｈ），  ２．９１  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ），  １．３３  （ｓ，  １２Ｈ），  １．１９  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  ３Ｈ）．
【０１１６】
（ｄ）（４−（ベンジルオキシ）−２−エチルフェニル）トリフルオロ−λ４−ボラン，カリウム塩（Ｉ−５）
化合物２−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチルフェニル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（Ｉ−４）（２０ｇ、５９．０ｍｍｏｌ）のアセトン：メタノール（２００ｍＬ、１：１比、１０体積）中の撹拌溶液に、フッ化水素カリウムの３Ｍ溶液（２３．０ｇ、２９５ｍｍｏｌ、９８．０ｍＬの水に溶解）を加えた。得られた反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応の完了後（ＴＬＣでモニター）、得られた反応塊を減圧下で蒸発させた。このようにして得た固体を水（１００ｍＬ）に取り、室温で３０分間撹拌した。得られた反応塊を半融漏斗で濾過し、ｎ−ヘキサンで洗浄し、減圧下で乾燥させて、所望の生成物（Ｉ−５）を白色固体として得た（１４．０ｇ、７４％）。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  クロロホルム−ｄ）  δ  ７．４３  （ｄ，  Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ７．３７  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ７．３０  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．２２  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ），  ６．５８  （ｓ，  １Ｈ），  ６．５３  （ｄ，  Ｊ  ＝  ７．９  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．００  （ｓ，  ２Ｈ），  ２．６５  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ，  ２Ｈ），  １．０７  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ，  ３Ｈ）．
【０１１７】
調製２：６−ベンジル５−（ｔｅｒｔ−ブチル）（Ｓ）−３−ベンジル−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（Ｉ−１１）
【化２９】
2021535174.tif 000031
（ａ）（Ｓ）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，塩酸塩（Ｉ−７）
Ｌ−ヒスチジン（Ｉ−６）（５．０ｋｇ、３２．１４ｍｏｌ）の水（４０Ｌ、８体積）中の氷冷撹拌懸濁液に、濃塩酸（３．９３Ｌ、３３．７５ｍｏｌ）を加え、続いてホルムアルデヒド（５．５０Ｌ、６７．５ｍｏｌ、３７％水溶液）を滴下して加えた。得られた溶液を同じ温度で３０分間撹拌し、次いで８０℃で８時間加熱した。反応の進行はＬＣＭＳでモニターした。水を減圧下で除去して粗生成物を得、得られた粗生成物をトルエン（２０Ｌ）中で２時間撹拌した。有機物を減圧下で除去して過剰の水を除去し、化合物を共沸乾燥させた。次に、得られた材料をジエチルエーテル（２０Ｌ）に取り、２時間撹拌した。次に、固体材料を濾過し、風乾させて、所望の生成物（Ｉ−７）をオフホワイト固体として得た（６．５０Ｋｇ、８５％）。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  Ｄ２Ｏ）  δ  ８．６９  （ｓ，  １Ｈ），  ４．５６  （ｄ，  Ｊ  ＝  １５．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．４２  （ｄ，  Ｊ  ＝  １５．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．２０  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ５．５，  ５．２  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．４２  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ５．０，  １７．０  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．１１  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  １０．２，  １６．８  Ｈｚ，  １Ｈ）．
【０１１８】
（ｂ）（Ｓ）−３，５−ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸（Ｉ−８）
（Ｓ）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸二塩酸塩（Ｉ−７）（６．１０Ｋｇ、２５．４０ｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（４８Ｌ、８体積）および水（４８Ｌ、８体積）中の氷冷撹拌溶液に、トリエチルアミン（１２．３６Ｌ、８９ｍｏｌ）を滴下して加え、続いて二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１８．０７Ｌ、７８．７４ｍｏｌ、５Ｌの１，４−ジオキサンに溶解）を３０分間にわたって加えた。得られた反応混合物を室温でそれから１６時間撹拌した。反応の完了後（ＴＬＣおよびＬＣＭＳでモニター）、黄色がかった反応混合物を水（１０Ｌ）で希釈し、ジエチルエーテル（２×１０Ｌ）およびＥｔＯＡｃ（２×７．５０Ｌ）で連続して洗浄した。有機相を廃棄した。水層を冷却し、６Ｎ  ＨＣｌ溶液でｐＨを約３にした；水相をＥｔＯＡｃ（３×１０Ｌ）で抽出した。合わせた有機物をブライン溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。油状残渣を３０％  ＥｔＯＡｃ：ヘキサンから結晶化させて、所望の生成物（Ｉ−８）をオフホワイトの固体として得た（５．１Ｋｇ、５５％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１７Ｈ２５Ｎ３Ｏ６の計算値３６８．１８、実測値３６８．２１。
【０１１９】
（ｃ）６−ベンジル３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−３，５，６（４Ｈ）−トリカルボキシレート（Ｉ−９）
（Ｓ）−３，５−ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸（Ｉ−８）（５．１Ｋｇ、１３．８８ｍｏｌ）のＤＣＭ（５１Ｌ、１０体積）中の氷冷溶液に、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（４１．０Ｌ、８体積）、ヨウ化テトラブチルアンモニウム（５．１３Ｋｇ、１３．８８ｍｏｌ）および臭化ベンジル（２．４７Ｌ、２０．８２ｍｏｌ）順次加えた。得られた反応混合物を室温でそれから１６時間撹拌した。反応の完了後（ＴＬＣおよびＬＣＭＳでモニター）、二相溶液を分離した。水層をＤＣＭ（３×１０Ｌ）で抽出した。合わせた有機物をブライン溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得、これを４０％ＥｔＯＡｃを含むヘキサンの溶離液を使用するシリカゲル（１００〜２００Ｍ）によるカラムクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物（Ｉ−９）を粘稠性油状物質として得た（４．５０Ｋｇ、７２％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ２４Ｈ３１Ｎ３Ｏ６の計算値４５８．２２、実測値４５８．６０。
【０１２０】
（ｄ）６−ベンジル５−（ｔｅｒｔ−ブチル）（Ｓ）−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（Ｉ−１０）
６−ベンジル３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−３，５，６（４Ｈ）−トリカルボキシレート（Ｉ−９）（４．５０Ｋｇ、９．８４ｍｏｌ）のＩＰＡ（４５Ｌ、１０体積）中の氷冷溶液に、水酸化アンモニウム（３６Ｌ、８体積）を滴下して加えた。得られた反応混合物を室温でそれから１６時間さらに撹拌した。反応の完了後（ＴＬＣおよびＬＣＭＳでモニター）、得られた混合物を水（２５Ｌ）で希釈し、続いてＥｔＯＡｃ（３×２０Ｌ）で抽出した。合わせた有機物をブライン溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得、これを２％ＭｅＯＨを含むＤＣＭの溶離液を使用するシリカゲル（１００〜２００Ｍ）によるカラムクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物（Ｉ−１０）を濃厚な粘稠性油状物質として得た（２．７０Ｋｇ、７７％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１９Ｈ２３Ｎ３Ｏ４の計算値３５８．１７、実測値３５８．３３。
【０１２１】
（ｅ）６−ベンジル５−（ｔｅｒｔ−ブチル）（Ｓ）−３−ベンジル−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（Ｉ−１１）
６−ベンジル５−（ｔｅｒｔ−ブチル）（Ｓ）−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（Ｉ−１０）（２．７０ｋｇ、７．５５ｍｏｌ）のＤＣＭ（３２．４Ｌ、１２体積）中の氷冷溶液に、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（２４．３Ｌ、９体積）を加え、続いてヨウ化テトラブチルアンモニウム（２．８０Ｋｇ、７．５５ｍｏｌ）および臭化ベンジル（０．９９Ｌ、８．３１ｍｏｌ）を順次加えた。得られた反応混合物を室温でそれから２時間撹拌した。反応の完了後（ＴＬＣおよびＬＣＭＳでモニター）、二相溶液を分離した。水層をＤＣＭ（３×１０Ｌ）で抽出した。合わせた有機物をブライン溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得、これを４０％ＥｔＯＡｃを含むヘキサンの溶離液を使用するシリカゲル（１００〜２００Ｍ）でのカラムクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物（Ｉ−１１）を粘稠性油状物質として得た（１．７０Ｋｇ、６３％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ２６Ｈ２９Ｎ３Ｏ４の計算値４４８．２２、実測値４４８．２０。
【０１２２】
調製３：６−ベンジル５−（ｔｅｒｔ−ブチル）（Ｓ）−３−ベンジル−２−（６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチルフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（Ｉ−１６）
【化３０】
2021535174.tif 000032
（ａ）４−ブロモ−２−フルオロベンゾイルクロリド（Ｉ−１３）
４−ブロモ−２−フルオロ安息香酸（Ｉ−１２）（１．２５Ｋｇ、５．７１ｍｏｌ）のＤＣＭ（１２．５Ｌ、１５体積）中の氷冷撹拌溶液に、塩化オキサリル（０．９８Ｌ、１１．４２ｍｏｌ）を滴下して加えた。得られた反応混合物を同じ温度で１０分間撹拌した。次に、ＤＭＦ（１５０ｍＬ）を反応混合物に滴下して加えた。得られた反応塊を室温まで温め、２時間撹拌した。反応の完了後（ＴＬＣでモニター）、過剰の塩化オキサリルを、窒素雰囲気下、減圧下で除去して粗生成物（Ｉ−１３）を得（１．０８Ｋｇ、８０％）、これをさらに精製せずに次のステップで使用した。
【０１２３】
（ｂ）６−ベンジル５−（ｔｅｒｔ−ブチル）（Ｓ）−３−ベンジル−２−（４−ブロモ−２−フルオロベンゾイル）−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（Ｉ−１４）
６−ベンジル５−（ｔｅｒｔ−ブチル）（Ｓ）−３−ベンジル−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（Ｉ−１１）（１．７０Ｋｇ、３．８０ｍｏｌ）のＡＣＮ（１３．６Ｌ、８体積）中の撹拌溶液に、トリエチルアミン（２．１１Ｌ、１５．２ｍｏｌ）を加え、続いて４−ブロモ−２−フルオロベンゾイルクロリド（Ｉ−１３）（１．０８Ｋｇ、３．４ＬのＡＣＮ中４．５６ｍｏｌ、２体積）を室温で加えた。添加の完了後、得られた反応混合物の色は淡黄色から褐色に変わった。得られた反応混合物を同じ温度で３０分間撹拌し、反応の進行をＴＬＣでモニターした。得られた反応混合物を氷冷水（１０Ｌ）でクエンチし、続いてＥｔＯＡｃ（３×５Ｌ）で抽出し、合わせた有機物をブライン溶液で洗浄した。有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得、これを２０％ＥｔＯＡｃを含むヘキサンの溶離液を使用するシリカゲル（１００〜２００Ｍ）でのカラムクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物（Ｉ−１４）を得た（１．７４Ｋｇ、７１％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ３３Ｈ３１ＢｒＦＮ３Ｏ５の計算値６４８．１４、実測値６４８．２０。
【０１２４】
（ｃ）６−ベンジル５−（ｔｅｒｔ−ブチル）（Ｓ）−３−ベンジル−２−（６−ブロモ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（Ｉ−１５）
６−ベンジル５−（ｔｅｒｔ−ブチル）（Ｓ）−３−ベンジル−２−（４−ブロモ−２−フルオロベンゾイル）−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（Ｉ−１４）（１．７４Ｋｇ、２．６８ｍｏｌ）のＴＨＦ（２６．０Ｌ、１５体積）中の撹拌溶液に、ヒドラジン水和物（０．７０５Ｌ、１３．４ｍｏｌ）を室温で加えた。得られた反応混合物を、６０℃で３時間加熱した。反応の完了後（ＴＬＣでモニター）、得られた反応塊を氷冷水（１０Ｌ）に注ぎ、続いてＥｔＯＡｃ（３×１０Ｌ）で化合物を抽出した。合わせた有機物をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させて粗生成物を得、これを、２０％ＥｔＯＡｃを含むヘキサンの溶離液を使用するシリカゲル（１００〜２００Ｍ）でのカラムクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物（Ｉ−１５）をオフホワイト固体として得た（１．１２Ｋｇ、６５％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ３３Ｈ３２ＢｒＮ５Ｏ４の計算値６４２．１６、実測値６４２．２１。
【０１２５】
（ｄ）６−ベンジル５−（ｔｅｒｔ−ブチル）（Ｓ）−３−ベンジル−２−（６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチルフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（Ｉ−１６）
ビス（ピナコラト）ジボロン（２５０ｇ、９８４ｍｍｏｌ）を、フッ化物化学を使用して事前にエッチングした５Ｌの３口単層フラスコ（ｓｉｎｇｌｅ  ｗａｌｌｅｄ  ｆｌａｓｋ）に、プロパン−２−オール（１．８８２Ｌ、２．４６Ｅ＋０４ｍｍｏｌ）とともに装入し、混合物を完全に溶解するまで撹拌した。溶解は吸熱性であった（−４℃）。フッ化物化学を使用して事前にエッチングした４Ｌエルレンマイヤーフラスコ内で、フッ化カリウムフッ化水素酸塩（５３８ｇ、６８９１ｍｍｏｌ）を水（２．３０６Ｌ、１．２８Ｅ＋０５ｍｍｏｌ）に溶解して３Ｍ溶液を形成した。溶解は吸熱性であった（−１２℃）。次に、溶液を濾過して、少量の不溶性材料をフッ化カリウムフッ化水素酸塩から除去した。両方の溶液が完全に溶解したら、エルレンマイヤーフラスコの内容物を１５分にわたり少量ずつ単層フラスコに装入した。中程度の発熱が観察された（＋１０℃）。溶液は添加中に濃厚で半透明の灰色のスラリーになり、内容物が十分に混合されるように撹拌が増やされた。混合物を１．５時間撹拌した後、粗いフリットガラス漏斗（４Ｌ、事前にエッチング済）に通して濾過した。濾過が完了するまでに３０〜４５分かかった。透明な二相の濾液を廃棄した。白色の固体をフィルター上で１０分間乾燥させた（ケーキの亀裂が観察された）。固体を洗浄した５Ｌの３口単層フラスコに戻し、水（１．３３Ｌ、７．３８Ｅ＋０４ｍｍｏｌ）再びスラリーにした。スラリーを２時間撹拌し、その後スラリーは透明で均質なヒドロゲルを形成した。溶液をさらに１時間撹拌し、その後すぐに４Ｌの粗いガラス漏斗（事前にエッチング済）を使用して固体／ゲルを濾過した。固形物をフィルター上で３０分間乾燥させた。固体を洗浄した５Ｌの３口単層フラスコに戻し、アセトン（１．０８４Ｌ、１．４８Ｅ＋０４ｍｍｏｌ）で再びスラリーにした。白色／灰色のスラリーを１時間撹拌した後、４Ｌの粗いガラス漏斗（事前にエッチング済）で濾過した。濾過が完了するまで２０分かかり、その後漏斗上でさらに１時間乾燥させた。この間、固体を時々かき混ぜて均一な乾燥を確保した。フィルター上で乾燥させた後に、薄白色の粉末が残った。固体を真空下５５℃で２０時間、ゆっくりと窒素を入れながら乾燥させて、ふわふわした白色の固体を得た（２００．３ｇを回収）。
【０１２６】
６−ベンジル５−（ｔｅｒｔ−ブチル）（Ｓ）−３−ベンジル−２−（６−ブロモ−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（Ｉ−１５）（１０．０ｇ、１６．０ｍｍｏｌ）の２−メチルテトラヒドロフラン（１００ｍＬ、１０体積）中の撹拌溶液に、（４−（ベンジルオキシ）−２−エチルフェニル）トリフルオロ−λ４−ボラン，カリウム塩（Ｉ−５）（８．０ｇ、２０ｍｍｏｌ）、および上記で得られたふわふわした白色の固体（０．２０ｇ）を加えた。得られた反応混合物を窒素ガスで３０分間脱気した。この溶液に、調製した炭酸セシウムの水溶液（２０．０ｇ、水６０ｍＬ中６２．０ｍｍｏｌ、６体積）を加えた。得られた反応混合物をさらに１５分間脱気し、続いてビス（ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（４−ジメチルアミノフェニル）ホスフィン）ジクロロパラジウム（ＩＩ）（０．６６ｇ、０．９３ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を真空下で排気し、窒素で流した。得られた反応混合物を、１１０℃で２０時間加熱した。反応の完了後（ＴＬＣおよびＬＣＭＳでモニター）、得られた反応混合物を室温まで冷却し、セライト床で濾過した後、ＥｔＯＡｃ（３×０．５Ｌ）でさらに洗浄した。合わせた有機物を１Ｎ水酸化ナトリウム溶液（３×０．５Ｌ）で洗浄した。次に、合わせた有機物をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させて粗生成物を得、これを、２０％ＥｔＯＡｃを含むヘキサンの溶離液を使用するシリカゲル（１００〜２００Ｍ）でのカラムクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物（Ｉ−１６）を（Ｎ−ベンジル位置異性体の混合物として）淡黄色の固体として得た（８．０ｇ、６６％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ４８Ｈ４７Ｎ５Ｏ５の計算値７７４．３６、実測値７７４．５９。
【０１２７】
調製４：（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，塩酸塩（Ｉ−１８）
【化３１】
2021535174.tif 000033
（ａ）ベンジル（Ｓ）−３−ベンジル−２−（６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチルフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボンキシレート，塩酸塩（Ｉ−１７）
６−ベンジル５−（ｔｅｒｔ−ブチル）（Ｓ）−３−ベンジル−２−（６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチルフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（Ｉ−１６）（１．０ｇ、１．２９２ｍｍｏｌ）をジオキサン（８ｍＬ）および水（１．５ｍＬ）に溶解し、次いでジオキサン中４Ｍの塩化水素溶液（７ｍＬ、２８．０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で３時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。次に、反応混合物を凍結し、凍結乾燥し、粗生成物（Ｉ−１７）を次の反応で直接使用した（定量的収量を想定）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ４３Ｈ３９Ｎ５Ｏ３の計算値６７４．３１、実測値６７４．３。
【０１２８】
（ｂ）（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，塩酸塩（Ｉ−１８）
ベンジル（Ｓ）−３−ベンジル−２−（６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチルフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボキシレート、塩酸塩（Ｉ−１７）（０．９１８ｇ、１．２９２ｍｍｏｌ）を、２−プロパノール（１５ｍＬ）、水中５Ｍの塩化水素溶液（０．２５８ｍＬ、１．２９２ｍｍｏｌ）、および水（０．２５ｍＬ）に５０℃で溶解し、次いで炭素上１０重量％のパラジウム、５０％の水（０．１３８ｇ、０．０６５ｍｍｏｌ）を加えた。次に、反応フラスコを窒素でパージし、水素バルーンを取り付け、反応混合物を５０℃で４日間撹拌し、必要に応じて水素バルーンを補充した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。次に、すべての固体を濾過により除去し、得られた溶液を濃縮した。残渣を１：１のＡＣＮ／水に溶解し、凍結し、凍結乾燥した。得られた粉末（Ｉ−１８）を、さらに精製せずに使用した（定量的収量を想定）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ２２Ｈ２１Ｎ５Ｏ３の計算値４０４．１７、実測値４０４．２。
【０１２９】
調製５：（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸（Ｉ−１９）
【化３２】
2021535174.tif 000034
（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＨＣｌ（Ｉ−１８）（０．２５ｇ、０．５６８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２．５ｍＬ）およびアセトン（２．５ｍＬ）に懸濁し、次に酢酸（０．０９８ｍＬ、１．７０５ｍｍｏｌ）およびシアノ水素化ホウ素ナトリウム（０．１７９ｇ、２．８４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で２４時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。反応混合物を濃縮し、次に粗生成物を逆相クロマトグラフィー（５〜７０％ＡＣＮ／水の勾配、５０ｇ  Ｃ１８ａｑカラム）により精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（１４９ｍｇ、収率４７％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ２５Ｈ２７Ｎ５Ｏ３の計算値４４６．２１、実測値４４６．３。
【０１３０】
調製６：（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−プロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸（Ｉ−２０）
【化３３】
2021535174.tif 000035
（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＨＣｌ（Ｉ−１８）（０．１６０ｇ、０．３６４ｍｍｏｌ）およびプロピオンアルデヒド（０．０３９ｍＬ、０．５４６ｍｍｏｌ）をメタノール（３．０ｍＬ）に溶解し、次にシアノ水素化ホウ素ナトリウム（０．０６９ｇ、１．０９１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で２４時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。反応混合物を濃縮し、粗生成物を逆相クロマトグラフィー（５〜７０％ＡＣＮ／水の勾配、５０ｇ  Ｃ１８カラム）により精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（７８ｍｇ、収率３８％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ２５Ｈ２７Ｎ５Ｏ３の計算値４４６．２１、実測値４４６．３。
【０１３１】
調製７：（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸（Ｉ−２１）
【化３４】
2021535174.tif 000036
（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＨＣｌ（Ｉ−１８）（０．１６０ｇ、０．３６４ｍｍｏｌ）および水中３７重量％のホルムアルデヒドの溶液（０．０３２ｍＬ、０．４３６ｍｍｏｌ）をメタノール（３．０ｍＬ）に溶解し、次にシアノ水素化ホウ素ナトリウム（０．０６９ｇ、１．０９１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で４時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。水素化ホウ素ナトリウム（１４ｍｇ、０．３６４ｍｍｏｌ）を加えて、過剰なホルムアルデヒドをクエンチし、次に反応混合物を濃縮した。粗生成物を逆相クロマトグラフィー（５〜７０％ＡＣＮ／水の勾配、５０ｇ  Ｃ１８カラム）により精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（１１０ｍｇ、収率５７％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ２３Ｈ２３Ｎ５Ｏ３の計算値４１８．１８、実測値４１８．２。
【０１３２】
調製８：（Ｒ）−２−（３−メチルピペラジン−１−イル）エタン−１−オール，二塩酸塩（Ｉ−２４）
【化３５】
2021535174.tif 000037
（ａ）ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−４−（２−ヒドロキシエチル）−２−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（Ｉ−２３）
（Ｒ）−１−ｂｏｃ−２−メチル−ピペラジン（０．２ｇ、０．９９９ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．６９８ｍＬ、３．９９ｍｍｏｌ）、および２−ブロモエタノール（０．０８５ｍＬ、１．１９８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解し、反応混合物を６０℃で１６時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。反応混合物を濃縮した後、１０ｍＬのジエチルエーテルを残渣に加えた。残留ゲルが消失し、固体が形成されるまで、溶液を超音波処理した。次に、エーテル溶液をデカントして固体から流去した。その後固体を次の反応で直接使用した（定量的収量を想定）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１２Ｈ２４Ｎ２Ｏ３の計算値２４５．１８、実測値２４５．４。
【０１３３】
（ｂ）（Ｒ）−２−（３−メチルピペラジン−１−イル）エタン−１−オール，二塩酸塩（Ｉ−２４）
ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−４−（２−ヒドロキシエチル）−２−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（０．２４４ｇ、０．９９９ｍｍｏｌ）をジオキサン（３．０ｍＬ）および水（０．５ｍＬ）に溶解し、次に、ジオキサン中４Ｍの塩化水素溶液（２．０ｍＬ、６５．８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で３時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。反応混合物を凍結し、凍結乾燥し、得られた生成物を精製を行わずに使用した（定量的収量を想定）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ７Ｈ１６Ｎ２Ｏの計算値１４５．１３、実測値１４５．４。
【０１３４】
実施例１：（Ｓ）−（２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−プロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル）メタノン
【化３６】
2021535174.tif 000038
（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−プロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＴＦＡ（Ｉ−２０）（４０ｍｇ、０．０７１ｍｍｏｌ）、ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン（０．０１８ｍＬ、０．１４３ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（０．０２５ｍＬ、０．１４３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．５ｍＬ）に溶解し、次にＨＡＴＵ（４０．８ｍｇ、０．１０７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で３時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。ヒドラジン（０．０１１ｍＬ、０．３５７ｍｍｏｌ）を加えて望ましくない副生成物を切断した後、溶液を室温で１０分間撹拌した。次に、反応混合物を濃縮し、粗生成物を分取ＨＰＬＣ（５〜７０％ＡＣＮ／水の勾配、Ｃ１８カラム）により精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（３１ｍｇ、収率５６％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ３１Ｈ３９Ｎ７Ｏ３の計算値５５８．３１、実測値５５８．３。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １３．１０  （ｓ，  １Ｈ），  １２．２７  （ｄ，  Ｊ  ＝  ４８．９２  Ｈｚ，  １Ｈ），  ９．４０  （ｓ，  １Ｈ），  ８．２８  （ｔ，  Ｊ  ＝  ８．１０  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．３０  （ｓ，  １Ｈ），  ７．０４  （ｍ，  ２Ｈ），  ６．７１  （ｄ，  Ｊ  ＝  ２．４６  Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．６４  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ２．５０，  ８．２３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．４４  （ｔ，  Ｊ  ＝  ５．３１  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．１１  （ｑ，  Ｊ  ＝  ５．２６，  ２Ｈ），  ３．９６  （ｍ，  １Ｈ），  ３．８６−３．５２  （ｍ，  ６Ｈ），  ３．４９  （ｑ，  Ｊ  ＝  ６．０１  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ２．９５  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．４８  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．４８  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ２．４２−２．２１  （ｍ，  ４Ｈ），  ２．３７  （ｔ，  Ｊ  ＝  ６．２０  Ｈｚ，  ２Ｈ），  １．４２  （ｍ，  ２Ｈ），  １．００  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．５２  Ｈｚ，  ３Ｈ），  ０．８１  （ｍ，  ３Ｈ）．  
【０１３５】
実施例２：（（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−プロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）（（１Ｓ，４Ｓ）−５−メチル−２，５−ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル）メタノン
【化３７】
2021535174.tif 000039
（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−プロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＴＦＡ（Ｉ−２０）（４０ｍｇ、０．０７１ｍｍｏｌ）、（１Ｓ，４Ｓ）−５−メチル−２，５−ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン二臭化水素酸塩（２９．４ｍｇ、０．１０７ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（０．０６２ｍＬ、０．３５７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．５ｍＬ）に溶解し、次にＨＡＴＵ（４０．８ｍｇ、０．１０７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で３時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。ヒドラジン（０．０１１ｍＬ、０．３５７ｍｍｏｌ）を加えて望ましくない副生成物を切断した後、溶液を室温で１０分間撹拌した。次に、反応混合物を濃縮し、粗生成物を分取ＨＰＬＣ（５〜７０％ＡＣＮ／水の勾配、Ｃ１８カラム）により精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（３２ｍｇ、収率５９％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ３１Ｈ３７Ｎ７Ｏ２の計算値５４０．３０、実測値５４０．３。
【０１３６】
実施例３：（（Ｓ）−２，４−ジメチルピペラジン−１−イル）（（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン
【化３８】
2021535174.tif 000040
（ａ）ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボニル）−３−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（Ｉ−２５）
（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＴＦＡ（Ｉ−２１）（５５ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−４−ｎ−ｂｏｃ−２−メチルピペラジン（４１．５ｍｇ、０．２０７ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（０．０３６ｍＬ、０．２０７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．５ｍＬ）に溶解し、次にＨＡＴＵ（５９．０ｍｇ、０．１５５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１６時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。ヒドラジン（０．０１６ｍＬ、０．５１７ｍｍｏｌ）を加えて望ましくない副生成物を切断した後、反応混合物を室温で１０分間撹拌した。次に、反応混合物を濃縮し、粗生成物を逆走クロマトグラフィー（５〜７０％ＡＣＮ／水の勾配、５０ｇ  Ｃ１８カラム）により精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（５４ｍｇ、収率７２％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ３３Ｈ４１Ｎ７Ｏ４の計算値６００．３３、実測値６００．３。
【０１３７】
（ｂ）（（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）（（Ｓ）−２−メチルピペラジン−１−イル）メタノン（Ｉ−２６）
ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボニル）−３−メチルピペラジン−１−カルボキシレート，ＴＦＡ（Ｉ−２５）（０．１２６ｇ、０．１７７ｍｍｏｌ）をジオキサン（１．５ｍＬ）および水（０．３ｍＬ）に溶解し、次に、ジオキサン中４Ｍの塩化水素溶液（１．５ｍＬ、６．００ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で２時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。反応混合物を凍結し、凍結乾燥し（ｌｙｏｐｈｉｌｚｅｄ）、得られた粉末を次の反応で直接使用した（定量的収量を想定）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ２８Ｈ３３Ｎ７Ｏ２の計算値５００．２７、実測値５００．３。
【０１３８】
（ｃ）（（Ｓ）−２，４−ジメチルピペラジン−１−イル）（（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン
（（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）（（Ｓ）−２−メチルピペラジン−１−イル）メタノン，二塩酸塩（０．１０１ｇ、０．１７６ｍｍｏｌ）および水中３７重量％のホルムアルデヒドの溶液（０．０１６ｍＬ、０．２１２ｍｍｏｌ）をメタノール（３．０ｍＬ）に溶解した後、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（０．０５５ｇ、０．８８２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１６時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。水素化ホウ素ナトリウム（７ｍｇ、０．１７６ｍｍｏｌ）を加えて、残っているホルムアルデヒドをクエンチした。反応混合物を濃縮し、次に粗生成物を分取ＨＰＬＣ（５〜６０％ＡＣＮ／水の勾配、Ｃ１８カラム）により精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（２８ｍｇ、収率２１％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ２９Ｈ３５Ｎ７Ｏ２の計算値５１４．２９、実測値５１４．３。
【０１３９】
実施例４：（Ｓ）−（２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）（４−メチル−１，４−ジアゼパン−１−イル）メタノン
【化３９】
2021535174.tif 000041
（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＴＦＡ（Ｉ−１９）（５０ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）、１−メチルホモピペラジン（０．０２２ｍＬ、０．１７９ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（０．０３１ｍＬ、０．１７９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．５ｍＬ）に溶解し、次にＨＡＴＵ（５１．０ｍｇ、０．１３４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で３時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。ヒドラジン（０．０１４ｍＬ、０．４４７ｍｍｏｌ）を加えて望ましくない副生成物を切断し、溶液を室温で１０分間撹拌した。次に、反応混合物を濃縮し、粗生成物を分取ＨＰＬＣ（２〜７０％ＡＣＮ／水の勾配、Ｃ１８カラム）により精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（２９ｍｇ、収率４２％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ３１Ｈ３９Ｎ７Ｏ２の計算値５４２．３２、実測値５４２．３。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １３．０８  （ｓ，  １Ｈ），  １２．２１  （ｄ，  Ｊ  ＝  ２９．９  Ｈｚ，  １Ｈ），  ９．４０  （ｓ，  １Ｈ），  ８．２７  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．３３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．３０  （ｓ，  １Ｈ），  ７．０４  （ｔ，  Ｊ  ＝  ８．０５，  ２Ｈ），  ６．７１  （ｄ，  Ｊ  ＝  ２．５３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．６４  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ２．５４，  ８．２３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．１１  （ｍ，  ３Ｈ），  ３．９１−３．５２  （ｍ，  ６Ｈ），  ２．９７  （ｍ，  １Ｈ），  ２．９１−２．５３  （ｍ，  ４Ｈ），  ２．４９  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．４６，  ２Ｈ），  ２．２３  （ｄ，  Ｊ  ＝  １３．９  Ｈｚ，  ３Ｈ），  １．７６  （ｍ，  ２Ｈ），  １．０  （ｍ，  ９Ｈ）．
【０１４０】
実施例５：（（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）（（Ｒ）−４−（２−ヒドロキシエチル）−２−メチルピペラジン−１−イル）メタノン
【化４０】
2021535174.tif 000042
（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＴＦＡ（Ｉ−２１）（５５ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）、（Ｒ）−２−（３−メチルピペラジン−１−イル）エタン−１−オール，二塩酸塩（Ｉ−２４）（３３．７ｍｇ、０．１５５ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（０．０９０ｍＬ、０．５１７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．５ｍＬ）に溶解し、次にＨＡＴＵ（５９．０ｍｇ、０．１５５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１６時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。ヒドラジン（０．０１６ｍＬ、０．５１７ｍｍｏｌ）を加えて望ましくない副生成物を切断した後、反応混合物を室温で１０分間撹拌した。次に、反応混合物を濃縮し、粗生成物を分取ＨＰＬＣ（５〜７０％ＡＣＮ／水の勾配、Ｃ１８カラム）により精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（２２ｍｇ、収率２８％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ３０Ｈ３７Ｎ７Ｏ３の計算値５４４．３０、実測値５４４．３。
【０１４１】
実施例６：（（Ｓ）−３−（ジメチルアミノ）ピロリジン−１−イル）（（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン
【化４１】
2021535174.tif 000043
（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＴＦＡ（Ｉ−１９）（５０ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−（−）−３−（ジメチルアミノ）ピロリジン（０．０２３ｍＬ、０．１７９ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（０．０３１ｍＬ、０．１７９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．５ｍＬ）に溶解し、次にＨＡＴＵ（５１．０ｍｇ、０．１３４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で３時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。ヒドラジン（０．０１４ｍＬ、０．４４７ｍｍｏｌ）を加えて望ましくない副生成物を切断し、溶液を室温で１０分間撹拌した。次に、反応混合物を濃縮し、粗生成物を分取ＨＰＬＣ（５〜７０％ＡＣＮ／水の勾配、Ｃ１８カラム）により精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（３７ｍｇ、収率５３％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ３１Ｈ３９Ｎ７Ｏ２の計算値５４２．３２、実測値５４２．３。
【０１４２】
調製９：２−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン
【化４２】
2021535174.tif 000044
（ａ）１−（ベンジルオキシ）−４−ブロモ−５−エチル−２−フルオロベンゼン
４−ブロモ−５−エチル−２−フルオロフェノール（２０ｇ、９１０．３２ｍｍｏｌ）のＡＣＮ（２５０ｍＬ）中の溶液に、Ｋ２ＣＯ３（３１．５５ｇ、２２８．３ｍｍｏｌ）を加え、続いて臭化ベンジル（１３．１０ｍＬ、１０９．５８ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。得られた反応混合物を８０℃で２時間撹拌した。水層をＥｔＯＡｃで抽出し（３回）、合わせ、ブラインで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で蒸発させて、表題中間体を淡黄色の油性液体として得た（２５ｇ、収率８９％）。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ，  クロロホルム−ｄ）  δ  ７．４８  −  ７．３０  （ｍ，  ５Ｈ），  ７．２７  （ｄ，  Ｊ  ＝  １０．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．８７  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．７  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．１２  （ｓ，  ２Ｈ），  ２．６６  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ，  ２Ｈ），  １．１６  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ，  ３Ｈ）．
【０１４３】
（ｂ）２−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン
前のステップの生成物（１２．５ｇ、４０．４５ｍｍｏｌ）のジオキサン（１００ｍＬ）中の溶液に、ビス（ピナコラト）ジボロン（１５．４０ｇ、６０．６７ｍｍｏｌ）およびＫＯＡｃ（１１．９ｇ、１２１．３５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を窒素で１５分間パージし、続いてジクロロメタンとの錯体である［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（１．６５ｇ、２．０２３ｍｍｏｌ）を加えた。得られた反応混合物を撹拌し、１１０℃で３時間加熱し、セライトに通して濾過し、残渣をＥｔＯＡｃで洗浄した。濾液を過剰のＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で希釈し、水（１００ｍＬ）と、それに続いてブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空濃縮して粗生成物を得、これを３〜５％ＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶離する（１００〜２００）シリカゲルでのカラムクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物をオフホワイト固体として得た（９．５０ｇ、収率６６％）。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  クロロホルム−ｄ）  δ  ７．５４  −  ７．２７  （ｍ，  ６Ｈ），  ６．８１  （ｄ，  Ｊ  ＝  ７．９  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．１６  （ｓ，  ２Ｈ），  ２．８４  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ，  ２Ｈ），  １．３２  （ｓ，  １２Ｈ），  １．１４  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ，  ３Ｈ）．
【０１４４】
調製１０：６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−３−（トリメチルスタンニル）−１Ｈ−インダゾール
【化４３】
2021535174.tif 000045
（ａ）６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール
６−ブロモ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール（５０ｇ、１７８．５７ｍｍｏｌ）および２−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（７６．３ｇ、２１４．２９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ：Ｈ２Ｏ（４８０：１２０ｍＬ）中の溶液に、Ｋ３ＰＯ４（９４．６４ｇ、４４６．８６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を窒素で１５分間脱気した後、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２触媒（６．２６ｇ、８．９３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を再び窒素で５分間脱気し、撹拌し、および１００〜１１０℃で５時間加熱した。反応混合物をセライトに通して濾過し、残渣をＥｔＯＡｃで洗浄した。濾液をＥｔＯＡｃで希釈し、冷水およびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空濃縮して粗生成物を得、これをフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、表題中間体を白色固体として得た（６５ｇ、収率８６％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ２７Ｈ２７ＦＮ２Ｏ２の計算値４３１．２１、実測値４３１．４６。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  クロロホルム−ｄ）  δ  ８．０６  −  ７．９８  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．７０  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．２  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．５１  −  ７．３２  （ｍ，  ５Ｈ），  ７．０８  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ８０９．６，  ８．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．０３  （ｄ，  Ｊ  ＝  １１．９  Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．９５  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．７６  −  ５．６４  （ｍ，  １Ｈ），  ５．２０  （ｓ，  ２Ｈ），  ４．０４  （ｄ，  Ｊ  ＝  １０．１  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．７２  （ｔ，  Ｊ  ＝  ９．７  Ｈｚ，  １Ｈ），  ２．５２  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ２．２２  −  ２．０２  （ｍ，  ３Ｈ），  １．８０  −  １．７１  （ｍ，  ３Ｈ），  １．０６  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ，  ３Ｈ）．
【０１４５】
（ｂ）６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−１Ｈ−インダゾール
前のステップの生成物（６５ｇ、１５１．１６ｍｍｏｌ）のメタノール（７００ｍＬ）中の溶液に、濃ＨＣｌ（１２０ｍＬ）を加え、得られた溶液を６０〜６５℃で３時間加熱し、ＲＴに冷却し、真空濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液および水で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空濃縮して表題中間体を白色固体として得た（５２ｇ、９９％（粗製））。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  クロロホルム−ｄ）  δ  ８．１３  （ｓ，  １Ｈ），  ７．７７  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．５９  −  ７．３０  （ｍ，  ６Ｈ），  ７．１０  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．０１  （ｄ，  Ｊ  ＝  １１．８  Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．９６  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．２１  （ｓ，  ２Ｈ），  ２．５３  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ，  ２Ｈ），  １．０５  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ，  ３Ｈ）．
【０１４６】
（ｃ）６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−３−ヨード−１Ｈ−インダゾール
６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−１Ｈ−インダゾール（５６ｇ、１６１．１８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４００ｍＬ）中の溶液に、ＫＯＨ（３６．２ｇ、６４７．３９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５分間撹拌した。ヨウ素（８２．２ｇ、３２３．６９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１００ｍＬ）中の溶液を０℃でゆっくりと加え、ＲＴで３０分間撹拌し、水（３×１５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×２００ｍＬ）で抽出した。有機層を飽和メタ重亜硫酸ナトリウム水溶液（３×２００ｍＬ）、水（４００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗生成物を得、これをフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、表題中間体を茶色がかった半固体として得た（６４ｇ、収率８４％）。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  クロロホルム−ｄ）  δ  １０．４９  （ｓ，  １Ｈ），  ７．５７  −  ７．３２  （ｍ，  ７Ｈ），  ７．１６  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．０４  −  ６．９１  （ｍ，  ２Ｈ），  ５．２０  （ｓ，  ２Ｈ），  ２．５１  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ，  ２Ｈ），  １．０４  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ，  ３Ｈ）．
【０１４７】
（ｄ）６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−３−ヨード−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール
前のステップの生成物（６０ｇ、１２７．１２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（７００ｍＬ）中の氷冷溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸（４．８４ｇ、２５．４２３ｍｍｏｌ）を加え、それに続いて３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン（１７．４３ｍＬ、１９０．６８ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。反応混合物をＲＴで一晩撹拌し、ＤＣＭで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液およびブラインで洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗生成物を得、これをフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）で精製して表題中間体をオフホワイトの固体として得た（６４ｇ、収率９１％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ２７Ｈ２６ＦＩＮ２Ｏ２の計算値５５７．１０、実測値５５７．３０。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  クロロホルム−ｄ）  δ  ７．５６  −  ７．３１  （ｍ，  ７Ｈ），  ７．１４  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．０１  （ｄ，  Ｊ  ＝  １１．８  Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．９５  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．６８  （ｄ，  Ｊ  ＝  ９．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．２０  （ｓ，  ２Ｈ），  ４．０８  −  ３．９９  （ｍ，  １Ｈ），  ３．７７  −  ３．６４  （ｍ，  １Ｈ），  ２．５０  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ２．２３  −  １．９７  （ｍ，  ３Ｈ），  １．８１  −  １．６８  （ｍ，  ３Ｈ），  １．０６  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ，  ３Ｈ）．
【０１４８】
（ｅ）６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−３−（トリメチルスタンニル）−１Ｈ−インダゾール
６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−３−ヨード−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール（２０ｇ、３５．９７ｍｍｏｌ）のトルエン（１５０ｍＬ）中の溶液に、ヘキサメチル二スズ（９．２ｍＬ、４３．１７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を窒素で２０分間脱気し、それに続いてテトラキス（２．０ｇ、１．８０ｍｍｏｌ）を加えた後、１００℃で２時間撹拌し、ＲＴに冷却し、セライトに通して濾過し、残渣をＥｔＯＡｃで洗浄した。濾液を濃縮し、２〜５％ＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶離する（中性アルミナでの）カラムクロマトグラフィーで精製して表題化合物を得た（１７．５０ｇ、収率８２％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ３０Ｈ３５ＦＮ２Ｏ２Ｓｎの計算値５９５．１７、５９３．１７、実測値５９５．４９、５９３．５５。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  クロロホルム−ｄ）  δ  ７．６８  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．５７  −  ７．２９  （ｍ，  ６Ｈ），  ７．１３  −  ７．００  （ｍ，  ２Ｈ），  ６．９６  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ５．８１  −  ５．６８  （ｍ，  １Ｈ），  ５．２１  （ｓ，  ２Ｈ），  ４．１３  −  ４．００  （ｍ，  １Ｈ），  ３．８１  −  ３．６６  （ｍ，  １Ｈ），  ２．５４  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．３  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ２．２３  −  ２．００  （ｍ，  ２Ｈ），  １．８７  −  １．５９  （ｍ，  ４Ｈ），  １．０８  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ，  ３Ｈ），  ０．４７  （ｓ，  ９Ｈ）．
【０１４９】
調製１１：５−（ｔｅｒｔ−ブチル）６−メチル（Ｓ）−２−ヨード−３−（（２−トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート
【化４４】
2021535174.tif 000046
（ａ）（Ｓ）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸
Ｌ−ヒスチジン（５０ｇ、３２２．２４ｍｍｏｌ）の水（４２０ｍＬ）中の撹拌懸濁液に濃ＨＣｌ（２９ｍＬ）を０℃で滴下して加え、続いてホルムアルデヒド（５５ｍＬ、６７６．７２ｍｍｏｌ）を０℃で一度に加えた。得られた反応混合物を３０分間撹拌した後、７５℃で６時間加熱し、濃縮した。得られた粗生成物をジエチルエーテルと一緒に２時間撹拌し、濾過し、ＩＰＡ：ＴＨＦ（１００：３００ｍＬ）で洗浄して、表題中間体のＨＣｌ塩をオフホワイトの固体として得た（７５ｇ、収率９９％（粗製））。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ７Ｈ９Ｎ３Ｏ２の計算値１６８．０７、実測値１６８．１７。
【０１５０】
（ｂ）メチル（Ｓ）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボキシレート
前のステップの生成物（７５．０ｇ、３１２．５ｍｍｏｌ）のメタノール（１５００ｍＬ）中の撹拌溶液に、ＳＯＣｌ２（４５．６ｍＬ、６２５ｍｍｏｌ）を０℃で滴下し、ＲＴで１６時間撹拌した後、還流（７０℃）まで１時間加熱した。溶媒を蒸留により除去し、粗生成物をメタノールで、続いてジエチルエーテルでトリチュレートして、表題中間体の粗ＨＣｌ塩をオフホワイトの固体として得た（８０ｇの粗生成物）。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ９．０５  （ｓ，  １Ｈ），  ４．７１  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ９．４，  ５．２  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．３６  （ｄ，  Ｊ  ＝  １５．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．３０  （ｄ，  Ｊ  ＝  １５．６  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．８２  （ｓ，  ３Ｈ），  ３．４４  −  ３．２１  （ｍ，  ２Ｈ）．
【０１５１】
（ｃ）５−（ｔｅｒｔ−ブチル）６−メチル（Ｓ）−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート
前のステップの生成物（８０．０ｇ、３１４．９６ｍｍｏｌ）のメタノール（１０００ｍＬ）中の撹拌溶液に、ＤＩＰＥＡ（２８２ｍＬ、１５７４ｍｍｏｌ）を加え、それに続いて二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１７２ｍＬ、７８７．４８ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物をＲＴで１６時間撹拌し、次に液体のＮＨ３（１５０ｍＬ、水中２５％）を加え、反応混合物を再び１６時間ＲＴで撹拌し、メタノールを蒸留により除去し、残渣をＤＣＭ（３×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、５％ＭｅＯＨ：ＤＣＭで溶離するフラッシュクロマトグラフィー（１００〜２００メッシュシリカゲル）により精製して、表題中間体を得た（４１ｇ、収率４６％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１３Ｈ１９Ｎ３Ｏ４の計算値２８２．１４、実測値２８２．２１。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １１．８５  （ｓ，  １Ｈ），  ７．５０  （ｓ，  １Ｈ），  ５．１８  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ４９．３，  ５．１  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．５１  （ｔ，  Ｊ  ＝  １４．２  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．０９  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ４３．９，  １６．１  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．５９  （ｓ，  ３Ｈ），  ３．０８  （ｄ，  Ｊ  ＝  １５．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ２．９４  （ｄ，  Ｊ  ＝  １５．１  Ｈｚ，  １Ｈ），  １．４５  （ｓ，  ９Ｈ）．
【０１５２】
（ｄ）５−（ｔｅｒｔ−ブチル）６−メチル（Ｓ）−２−ヨード−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート
前のステップの生成物（４１．０ｇ、１４５．９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５００ｍＬ）中の溶液に、Ｎ−ヨードスクシンイミド（６６．０ｇ、２９１．８ｍｍｏｌ）を０℃で加え、得られた溶液をＲＴで４時間撹拌し、水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機部分を１０％チオ硫酸ナトリウム溶液（３×２００ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して、表題化合物６０ｇ（粗製）を得、これをさらに精製せずに次のステップで使用した。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１３Ｈ１８ＩＮ３Ｏ４の計算値４０８．０３、実測値４０８．３１。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １２．４８  （ｓ，  １Ｈ），  ５．３４  −  ４．９７  （ｍ，  １Ｈ），  ４．６７  −  ４．３５  （ｍ，  １Ｈ），  ４．１２  −  ３．９５  （ｍ，  １Ｈ），  ３．６０  （ｓ，  ３Ｈ），  ３．１４  −  ２．８２  （ｍ，  ２Ｈ），  １．４４  （ｓ，  ９Ｈ）．
【０１５３】
（ｅ）５−（ｔｅｒｔ−ブチル）６−メチル（Ｓ）−２−ヨード−３−（（２−トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート
５−（ｔｅｒｔ−ブチル）６−メチル（Ｓ）−２−ヨード−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（４０ｇ、０．０９８ｍｏｌ）のＤＭＦ（１５０ｍＬ）中の撹拌溶液に、ＤＩＰＥＡ（３５．１ｍＬ、０．１９ｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物を１０分間撹拌した後、２−（トリメチルシリル）−エトキシメチルクロリド（１９．１ｍＬ、０．１０ｍｏｌ）を０℃で滴下して加えた。得られた反応混合物をＲＴで３時間撹拌した。４時間後、冷水を加え、反応混合物をＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、２０〜３５％ＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶離するフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して、表題生成物を淡黄色の粘稠性液体（２７ｇ）として得た。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ１９Ｈ３２ＩＮ３Ｏ５Ｓｉの計算値５３８．１２、実測値５３８．４２。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ５．３３  −  ５．０４  （ｍ，  ３Ｈ），  ４．７９  −  ４．５６  （ｍ，  １Ｈ），  ４．５４  −  ４．１４  （ｍ，  １Ｈ），  ３．６０  （ｓ，  ３Ｈ），  ３．４７  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．８  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ３．３１  −  ３．１６  （ｍ，  １Ｈ），  ２．９７  （ｔ，  Ｊ  ＝  １８．９  Ｈｚ，  １Ｈ），  １．４４  （ｓ，  ９Ｈ），  ０．９２  −  ０．７４  （ｍ，  ２Ｈ），  −０．０３  （ｓ，  ９Ｈ）．
【０１５４】
調製１２：（６Ｓ）−５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−３−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸
【化４５】
2021535174.tif 000047
（ａ）５−（ｔｅｒｔ−ブチル）６−メチル（６Ｓ）−２−（６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−３−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート
５−（ｔｅｒｔ−ブチル）６−メチル（Ｓ）−２−ヨード−３−（（２−トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート（１７．０ｇ、３１．６５ｍｍｏｌ）のトルエン（５００ｍＬ）中の撹拌溶液に、６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−３−（トリメチルスタンニル）−１Ｈ−インダゾール（２０ｇ、３４．８２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物をアルゴンで１５分間パージし、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（３．６ｇ、３．１６ｍｍｏｌ）およびヨウ化銅（１．２０ｇ、６．３３ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１２０℃で１６時間撹拌した。反応混合物をセライトに通して濾過し、濾液を減圧下で濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｒｅｄｉｓｅｐ８０ｇカラム、ＤＣＭで１０分間溶離、その後ヘキサン中１５〜２０％ＥｔＯＡｃで溶離）で精製して、表題中間体を黄色い固体として得た（１５．１０ｇ、収率５８％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ４６Ｈ５８ＦＮ５Ｏ７Ｓｉの計算値８４０．４１、実測値８４０．５４。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  クロロホルム−ｄ）  δ  ８．４３  （ｓ，  １Ｈ），  ７．５４  −  ７．３３  （ｍ，  ６Ｈ），  ７．２０  （ｓ，  １Ｈ），  ７．０５  （ｄ，  Ｊ  ＝  １１．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．９５  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．０９  −  ５．６９  （ｍ，  ３Ｈ），  ５．５９  −  ５．３６  （ｍ，  １Ｈ），  ５．２０  （ｓ，  ２Ｈ），  ４．９７  −  ４．８０  （ｍ，  １Ｈ），  ４．１２  −  ３．９０  （ｍ，  １Ｈ），  ３．６８  （ｓ，  ３Ｈ），  ３．５７  −  ３．４７  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．４０  （ｄ，  １Ｈ），  ３．２１  −  ３．０５  （ｍ，  １Ｈ），  ２．７４  −  ２．３４  （ｍ，  ４Ｈ），  ２．２５  −  ２．０７  （ｍ，  ２Ｈ），  １．９４  −  １．６５  （ｍ，  ４Ｈ），  １．５４  （ｓ，  ９Ｈ），  １．１２  −  ０．９９  （ｍ，  ３Ｈ），  ０．９１  −  ０．７５  （ｍ，  ２Ｈ），  −０．１２  （ｓ，  ９Ｈ）．
【０１５５】
（ｂ）６−ベンジル５−（ｔｅｒｔ−ブチル）（６Ｓ）−２−（６−（４−（ベンジルオキシ）−２−エチル−５−フルオロフェニル）−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−３−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−３，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５，６−ジカルボキシレート
丸底フラスコに、トルエン（４００ｍＬ）中の前のステップの生成物（１５．０ｇ、１７．８５ｍｍｏｌ）、ベンジルアルコール（４６．３ｍＬ）およびＴｉ（ＯＥｔ）４（７．１５ｍＬ、３５．７０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を４８時間激しく還流させ（１４０℃）、水で希釈し、でＤＣＭ抽出した。懸濁液を濾過し、濾液をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｒｅｄｉｓｅｐ８０ｇカラム、ヘキサン中０〜５％ＥｔＯＡｃ）で２０分間精製して、過剰のベンジルアルコールを除去し、次いでヘキサン中１０〜１５％ＥｔＯＡｃで溶離させて表題中間体を得た。１Ｈ  ＮＭＲは構造と一致している。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ５２Ｈ６２ＦＮ５Ｏ７Ｓｉの計算値９１６．４４、実測値９１６．８６。
【０１５６】
（ｃ）（６Ｓ）−５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−３−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸
前のステップの生成物（２１．０ｇ、２２．９２ｍｍｏｌ）の１：１のＩＰＡ：ＴＨＦ（４００ｍＬ）中の撹拌溶液に、Ｐｄ（ＯＨ）２（５．０ｇ）を加えた。反応混合物を、水素バルーン下、ＲＴで１６時間撹拌し、セライトに通して濾過し、減圧下で濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｒｅｄｉｓｅｐ８０ｇカラム、ヘキサン中２５〜４０％ＥｔＯＡｃで溶離）により精製して表題化合物（６．１ｇ、８．２９ｍｍｏｌ）をオフホワイト固体として得た）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ３８Ｈ５０ＦＮ５Ｏ７Ｓｉの計算値７３６．３５、実測値７３６．５。１Ｈ  ＮＭＲは構造と一致している。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ３８Ｈ５０ＦＮ５Ｏ７Ｓｉの計算値７３６．３５、実測値７３６．５。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １２．９４  （ｓ，  １Ｈ），  ９．８６  （ｓ，  １Ｈ），  ８．３４  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．６６  （ｓ，  １Ｈ），  ７．２０  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．７  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．０３  （ｄ，  Ｊ  ＝  １１．８  Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．９３  （ｄ，  Ｊ  ＝  ９．１  Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．１１  −  ５．７７  （ｍ，  ３Ｈ），  ５．３３  −  ５．０６  （ｍ，  １Ｈ），  ４．８７  −  ４．５６  （ｍ，  １Ｈ），  ４．５２  −  ４．１４  （ｍ，  １Ｈ），  ３．９７  −  ３．６９  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．５３  −  ３．４０  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．２３  −  ３．１１  （ｍ，  １Ｈ），  ３．１１  −  ２．９３  （ｍ，  １Ｈ），  ２．４７  −  ２．４４  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．１３  −  １．９６  （ｍ，  ２Ｈ），  １．６８  （ｄ，  Ｊ  ＝  ７０．９  Ｈｚ，  ４Ｈ），  １．４８  （ｓ，  ９Ｈ），  １．０２  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ，  ３Ｈ），  ０．８６  −  ０．６８  （ｍ，  ２Ｈ），  −０．１７  （ｓ，  ９Ｈ）．
【０１５７】
調製１３：（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸
【化４６】
2021535174.tif 000048
（６Ｓ）−５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−３−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）−メチル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸（５．７ｇ、７．７５ｍｍｏｌ）の５：１のジオキサン：水（６０ｍＬ）中の撹拌溶液に、濃ＨＣｌ（２０ｍＬ）を０℃で滴下して加えた。反応混合物を温め、９０℃で１６時間撹拌し、真空下で蒸留して粗残渣を得、これを冷やしたジエチルエーテルおよびアセトニトリルで順次トリチュレートして、表題化合物のＨＣｌ塩（３．６ｇ、収率９５％）を淡褐色の固体として得た。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋Ｃ２２Ｈ２０ＦＮ５Ｏ３の計算値４２２．１６、実測値４２２．２４。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  Ｄ２Ｏ／ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ８．２２  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．４９  （ｓ，  １Ｈ），  ７．１９  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．１  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ６．９９  （ｄ，  Ｊ  ＝  １１．９  Ｈｚ，  １  Ｈ），  ６．９１  （ｄ，  Ｊ  ＝  ９．０  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．５６  −  ４．５１  （ｍ，  １Ｈ），  ４．３６  （ｄ，  Ｊ  ＝  １５．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．３０  （ｄ，  Ｊ  ＝  １５．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．３５  −  ３．２５  （ｍ，  １Ｈ），  ３．１５  −  ３．０５  （ｍ，  １Ｈ），  ２．４  −  ２．５５  （ｍ，  ２Ｈ），  ０．９７  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ，  ３Ｈ）．
【０１５８】
調製１４：（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−プロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸
【化４７】
2021535174.tif 000049
（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＨＣｌ（４００ｍｇ、０．８７４ｍｍｏｌ）およびプロピオンアルデヒド（０．０９５ｍＬ、１．３１０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（７ｍＬ）中の溶液に、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（１６５ｍｇ、２．６２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物をＲＴで一晩撹拌した。水素化ホウ素ナトリウム（３３ｍｇ、０．８７４ｍｍｏｌ）を加え、溶液を濃縮し、分取ＨＰＬＣにより精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（１７９ｍｇ、収率３７％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ２５Ｈ２６ＦＮ５Ｏ３の計算値４６４．２０、実測値４６４．５。
【０１５９】
調製１５：（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸
【化４８】
2021535174.tif 000050
（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＨＣｌ（４００ｍｇ、０．８７４ｍｍｏｌ）、アセトン（０．１９２ｍＬ、２．６２ｍｍｏｌ）、および酢酸（０．１５０ｍＬ、２．６２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（７ｍＬ）中の溶液に、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（２７４ｍｇ、４．３７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物をＲＴで一晩撹拌した。水素化ホウ素ナトリウム（３３ｍｇ、０．８７４ｍｍｏｌ）を加え、溶液を濃縮し、分取ＨＰＬＣにより精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（１１５ｍｇ、収率２３％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ２５Ｈ２６ＦＮ５Ｏ３の計算値４６４．２０、実測値４６４．５。
【０１６０】
調製１６：（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸
【化４９】
2021535174.tif 000051
（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＨＣｌ（８’）（３００ｍｇ、０．６５５ｍｍｏｌ）および水中３７重量％ホルムアルデヒド（０．０５９ｍＬ、０．７８６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中の溶液に、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（１６５ｍｇ、２．６２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物をＲＴで一晩撹拌した。水素化ホウ素ナトリウム（２５ｍｇ、０．６５５ｍｍｏｌ）を加え、溶液を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（１００ｇカラム、５〜７５％ＡＣＮ／水）により精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（８５ｍｇ、収率２４％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ２３Ｈ２２ＦＮ５Ｏ３の計算値４３６．１７、実測値４３６．４５。
【０１６１】
実施例７：（Ｓ）−（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−プロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル）メタノン  Ｃ−１
【化５０】
2021535174.tif 000052
（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−プロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＴＦＡ（３０ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）、２（ピペラジン−１−イル）エタノール，２ＨＣｌ（０．１９ｍＬ、０．１５６ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（０．０２７ｍＬ、０．１５６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．５ｍＬ）中の溶液に、ＨＡＴＵ（２９．６ｍｇ、０．０７８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物をＲＴで一晩撹拌した。ヒドラジン（５当量）を加え、反応混合物を濃縮し、分取ＨＰＬＣにより精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（１５．４ｍｇ、収率３７％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ３１Ｈ３８ＦＮ７Ｏ３の計算値５７６．３０、実測値５７６．２。
【０１６２】
実施例８：（（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−プロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）（（１Ｓ，４Ｓ）−５−メチル−２，５−ジアザビシクロ−［２．２．１］ヘプタン−２−イル）メタノン  Ｃ−２
【化５１】
2021535174.tif 000053
（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−プロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＴＦＡ（３０ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）、（１Ｓ，４Ｓ）−５−メチル−２，５−ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン二臭化水素酸塩（４２．７ｍｇ、０．１５６ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（０．０６４ｍＬ、０．３６４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．５ｍＬ）中の溶液に、ＨＡＴＵ（２９．６ｍｇ、０．０７８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物をＲＴで一晩撹拌した。ヒドラジン（５当量）を加え、反応混合物を濃縮し、分取ＨＰＬＣにより精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（２７ｍｇ、収率６６％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ３１Ｈ３６ＦＮ７Ｏ２の計算値５５８．２９、実測値５５８．３。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  メタノール−ｄ４）  δ  ８．１７  （ｄｔ，  １Ｈ），  ７．５９  −  ７．５０  （ｍ，  １Ｈ），  ７．３２  （ｄｄ，  １Ｈ），  ６．９５  （ｄ，  １Ｈ），  ６．９０  （ｄ，  １Ｈ），  ５．０３  −  ４．９１  （ｍ，２Ｈ），  ４．５６  −  ４．３４  （ｍ，  ２Ｈ），  ４．３０  −  ３．８８  （ｍ，  ４Ｈ），  ３．７６  −  ３．５５  （ｍ，  １Ｈ），  ３．２８  −  ３．１０  （ｍ，  １Ｈ），  ３．１０  −  ２．９６  （ｍ，  ４Ｈ），  ２．８１  −  ２．６２  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．５３  （ｑ，  ２Ｈ），  ２．４７  −  ２．３３  （ｍ，  １Ｈ），  ２．３１  −  ２．１４  （ｍ，  １Ｈ），  １．７９  −  １．５７  （ｍ，  ２Ｈ），  １．０７  （ｔ，  ３Ｈ），  ０．９７  （ｔｄ，  ３Ｈ）．
【０１６３】
実施例９：（（Ｓ）−２，４−ジメチルピペラジン−１−イル）（（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン  Ｃ−３
【化５２】
2021535174.tif 000054
（ａ）ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボニル）−３−メチルピペラジン−１−カルボキシレート
（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸（０．１２０ｇ、０．２７６ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−４−ｎ−ｂｏｃ−２−メチルピペラジン（０．１１０ｇ、０．５５１ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（０．０９６ｍＬ、０．５５１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３．０ｍＬ）に溶解し、次にＨＡＴＵ（０．１５７ｇ、０．４１３ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１６時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。ヒドラジン（０．０４３ｍＬ、１．３７８ｍｍｏｌ）を加えて望ましくない副生成物を切断した後、反応混合物を室温で１０分間撹拌した。次に、反応混合物を濃縮し、粗生成物を逆走クロマトグラフィー（５〜７０％ＡＣＮ／水の勾配、５０ｇ  Ｃ１８カラム）により精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（１２６ｍｇ、収率６２％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ３３Ｈ４０ＦＮ７Ｏ４の計算値６１８．３２、実測値６１８．３。
【０１６４】
（ｂ）（（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）（（Ｓ）−２−メチルピペラジン−１−イル）メタノン
ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボニル）−３−メチルピペラジン−１−カルボキシレート，ＴＦＡ（０．１２６ｇ、０．１７２ｍｍｏｌ）をジオキサン（１．５ｍＬ）および水（０．３ｍＬ）に溶解し、次にジオキサン中４Ｍの塩酸（１．５ｍＬ、４９．４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。反応混合物を凍結し、凍結乾燥し、得られた粉末を次の反応で直接使用した（定量的収量を想定）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ２８Ｈ３２ＦＮ７Ｏ２の計算値５１８．２６、実測値５１８．３。
【０１６５】
（ｃ）（（Ｓ）−２，４−ジメチルピペラジン−１−イル）（（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン
（（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）（（Ｓ）−２−メチルピペラジン−１−イル）メタノン，二塩酸塩（０．１０２ｇ、０．１７３ｍｍｏｌ）および水中３７重量％のホルムアルデヒドの溶液（０．０１５ｍＬ、０．２０７ｍｍｏｌ）をメタノール（３．０ｍＬ）に溶解し、次にシアノ水素化ホウ素ナトリウム（０．０５４ｇ、０．８６４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で２０時間撹拌した（反応の進行はＬＣＭＳでモニターした）。水素化ホウ素ナトリウム（７ｍｇ、０．１７３ｍｍｏｌ）を加えて、残っているホルムアルデヒドをクエンチした。反応混合物を濃縮し、次に粗生成物を分取ＨＰＬＣ（５〜６０％ＡＣＮ／水の勾配、Ｃ１８カラム）により精製して、表題化合物をＴＦＡ塩として得た（５９ｍｇ、収率４５％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ２９Ｈ３４ＦＮ７Ｏ２の計算値５３２．２８、実測値５３２．３。
【０１６６】
実施例１０：（Ｓ）−（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）（４−メチル−１，４−ジアゼパン−１−イル）メタノン  Ｃ−４
【化５３】
2021535174.tif 000055
（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＴＦＡ（３０ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）、１−メチルホモピペラジン（０．０１９ｍＬ、０．１５６ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（０．０３６ｍＬ、０．２０８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）中の溶液に、ＨＡＴＵ（２９．６ｍｇ、０．０７８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物をＲＴで３時間撹拌した。ヒドラジン（５当量）を加え、反応混合物をＲＴで１０分間撹拌し、濃縮し、分取ＨＰＬＣにより精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（２６．９ｍｇ、収率６６％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ３１Ｈ３８ＦＮ７Ｏ２の計算値５６０．３１、実測値５６０．２。
【０１６７】
実施例１１：（（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）（（Ｒ）−４−（２−ヒドロキシエチル）−２−メチル−ピペラジン−１−イル）メタノン  Ｃ−５
【化５４】
2021535174.tif 000056
（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＴＦＡ（３０ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）、（Ｒ）−２−（３−メチルピペラジン−１−イル）エタノール，２ＨＣｌ（３５．６ｍｇ、０．１６４ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（０．０５７ｍＬ、０．３２８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）中の溶液に、ＨＡＴＵ（３１．１ｍｇ、０．０８２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物をＲＴで一晩撹拌した。ヒドラジン（８．５７μＬ、０．２７３ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を濃縮し、分取ＨＰＬＣにより精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（１５．６ｍｇ、収率３６％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ３０Ｈ３６ＦＮ７Ｏ３の計算値５６２．２９、実測値５６２．２。
【０１６８】
実施例１２：（（Ｓ）−３−（ジメチルアミノ）ピロリジン−１−イル）（（Ｓ）−５−エチル−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン  Ｃ−６
【化５５】
2021535174.tif 000057
（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＴＦＡ（１７９ｍｇ、０．３１０ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルピロリジン−３−アミン（０．０７９ｍＬ、０．６２０ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（０．１６２ｍＬ、０．９３０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（１７７ｍｇ、０．４６５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物をＲＴで一晩撹拌した。ヒドラジン（５当量）を加え、反応混合物を濃縮し、分取ＨＰＬＣにより精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（１０７ｍｇ、収率４４％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ３１Ｈ３８ＦＮ７Ｏ２の計算値５６０．３１、実測値５６０．２。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  メタノール−ｄ４）  δ  ８．２１  （ｄ，  １Ｈ），  ７．５０  （ｓ，  １Ｈ），  ７．２６  （ｄ，  １Ｈ），  ６．９４  （ｄ，  １Ｈ），  ６．９０  （ｄ，  １Ｈ），  ４．８３  −  ４．６６  （ｍ，  １Ｈ），  ４．４８  −  ４．２５  （ｍ，  ２Ｈ），  ４．２３  −  ４．１２  （ｍ，  １Ｈ），  ４．１２  −  ３．９３  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．９３  −  ３．６３  （ｍ，  ３Ｈ），  ３．６２  −  ３．４８  （ｍ，  １Ｈ），  ３．２６  −  ３．０９  （ｍ，  １Ｈ），  ２．９８  （ｄ，  ６Ｈ），  ２．６７  −  ２．５７  （ｍ，  １Ｈ），  ２．５３  （ｑ，  ２Ｈ），  ２．４４  −  ２．１２  （ｍ，  １Ｈ），  １．４１  （ｔ，  ３Ｈ），  １．３１  （ｄ，  ３Ｈ），  １．０５  （ｔ，  ３Ｈ）．
【０１６９】
実施例１３：（Ｓ）−（３−（ジメチルアミノ）アゼチジン−１−イル）（２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−イル）メタノン  Ｄ−１
【化５６】
2021535174.tif 000058
（Ｓ）−２−（６−（２−エチル−５−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−インダゾール−３−イル）−５−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−６−カルボン酸，ＴＦＡ（１７９ｍｇ、０．３１０ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアゼチジン−３−アミン，２ＨＣｌ（１０７ｍｇ、０．４６５ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（０．１６２ｍＬ、０．９３０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４ｍＬ）中の溶液に、ＨＡＴＵ（１７７ｍｇ、０．４６５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物をＲＴで一晩撹拌した。ヒドラジン（５当量）を加え、反応混合物を濃縮し、分取ＨＰＬＣにより精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（６３ｍｇ、収率２６％）。（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋  Ｃ３０Ｈ３６ＦＮ７Ｏ２の計算値５４６．２９、実測値５４６．７。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ９．９０  （ｓ，  １Ｈ），  ８．２９  （ｄｄ，  １Ｈ），  ７．３４  （ｓ，  １Ｈ），  ７．０７  （ｄ，  １Ｈ），  ７．０１  （ｄ，  １Ｈ），  ６．８９  （ｄ，  １Ｈ），  ４．３５  −  ４．１８  （ｍ，  １Ｈ），  ４．１１  −  ３．９４  （ｍ，  １Ｈ），  ３．９４  −  ３．７３  （ｍ，  ３Ｈ），  ３．７０  −  ３．５７  （ｍ，  ２Ｈ），  ３．０６  −  ２．９４  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．８７  −  ２．６６  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．４８  −  ２．４０  （ｍ，  ２Ｈ），  ２．１３  −  ２．００  （ｍ，  ６Ｈ），  １．０７  （ｔ，  ３Ｈ），  １．０３  −  ０．９３  （ｍ，  ６Ｈ）．
【０１７０】
生物学的アッセイ
本発明の化合物を、以下の生物学的アッセイのうちの１つまたはそれを超えるアッセイにおいて特徴付けた。
【０１７１】
アッセイ１：生化学的ＪＡＫキナーゼアッセイ
４つのＬａｎｔｈａＳｃｒｅｅｎ  ＪＡＫ生化学的アッセイのパネル（ＪＡＫ１、２、３およびＴｙｋ２）を、通常のキナーゼ反応緩衝液（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．５、０．０１％Ｂｒｉｊ−３５、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２および１ｍＭ  ＥＧＴＡ）に含めた。組換えＧＳＴタグ化ＪＡＫ酵素およびＧＦＰタグ化ＳＴＡＴ１ペプチド基質をＬｉｆｅ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手した。
【０１７２】
段階希釈した化合物を、それらの４つのＪＡＫ酵素の各々および基質とともに、白色３８４ウェルマイクロプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）において周囲温度で１時間プレインキュベートした。続いて、ＡＴＰを加えて、１％ＤＭＳＯを含む１０μＬの総体積でキナーゼ反応を開始した。ＪＡＫ１、２、３およびＴｙｋ２に対する最終的な酵素濃度は、それぞれ４．２ｎＭ、０．１ｎＭ、１ｎＭおよび０．２５ｎＭであり；使用された対応するＫｍ  ＡＴＰ濃度は、２５μＭ、３μＭ、１．６μＭおよび１０μＭであり；基質濃度は、４つすべてのアッセイについて２００ｎＭである。キナーゼ反応を周囲温度で１時間進めた後、ＴＲ−ＦＲＥＴ希釈緩衝液（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中のＥＤＴＡ（最終濃度１０ｍＭ）およびＴｂ−抗ｐＳＴＡＴ１（ｐＴｙｒ７０１）抗体（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，最終濃度２ｎＭ）の１０μＬ調製物を加えた。そのプレートを周囲温度で１時間インキュベートした後、ＥｎＶｉｓｉｏｎリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）において読み出した。発光シグナル比（Ｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｒａｔｉｏ  ｓｉｇｎａｌｓ）（５２０ｎｍ／４９５ｎｍ）を記録し、それを用いて、ＤＭＳＯに基づくパーセント阻害値およびバックグラウンドコントロールを算出した。
【０１７３】
用量反応解析の場合、パーセント阻害のデータを化合物の濃度に対してプロットし、Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いて、４パラメータのロバストな適合モデルからＩＣ５０値を決定した。結果は、ｐＩＣ５０（ＩＣ５０の対数に負号をつけたもの）として表され、続いてＣｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ式を用いてｐＫｉ（解離定数Ｋｉの対数に負号をつけたもの）に変換した。
【０１７４】
４つのＪＡＫアッセイのそれぞれにおいてより低いＫｉ値またはより高いｐＫｉ値を有する試験化合物は、ＪＡＫ活性のより大きな阻害を示す。
【０１７５】
アッセイ２：Ｔａｌｌ−１  Ｔ細胞におけるＩＬ−２刺激ｐＳＴＡＴ５の阻害
Ｔａｌｌ−１ヒトＴ細胞株（ＤＳＭＺ）におけるインターロイキン−２（ＩＬ−２）刺激ＳＴＡＴ５リン酸化の阻害に対する試験化合物の効力を、ＡｌｐｈａＬｉｓａを使用して測定した。ＩＬ−２はＪＡＫ１／３を介してシグナル伝達するので、このアッセイによりＪＡＫ１／３細胞効力の尺度を提供する。
【０１７６】
リン酸化ＳＴＡＴ５を、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ  ＳｕｒｅＦｉｒｅ  Ｕｌｔｒａ  ｐＳＴＡＴ５（Ｔｙｒ６９４／６９９）キット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）によって測定した。
【０１７７】
Ｔａｌｌ−１細胞株由来のヒトＴ細胞を、３７℃、５％ＣＯ２加湿恒温器において、１５％熱失活ウシ胎児血清（ＦＢＳ，Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２ｍＭ  Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、および１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）が補充されたＲＰＭＩ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で培養した。化合物をＤＭＳＯで段階希釈し、空のウェルに音響学的に分注した。アッセイ培地（１０％ＦＢＳ（ＡＴＣＣ）が補充された無フェノールレッドＤＭＥＭ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ））を分注し（４μＬ／ウェル）、プレートを９００ｒｐｍで１０分間振盪した。細胞を、アッセイ培地（４μＬ／ウェル）中に４５，０００細胞／ウェルで播種し、３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートした後、予め加温したアッセイ培地（４μＬ）中にＩＬ−２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；最終濃度３００ｎｇ／ｍＬ）を３０分間加えた。サイトカイン刺激の後、細胞を、１×ＰｈｏｓＳｔｏｐおよびＣｏｍｐｌｅｔｅ  ｔａｂｌｅｔ（Ｒｏｃｈｅ）を含む６ｕｌの３×ＡｌｐｈａＬｉｓａ溶解緩衝液（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で溶解した。ライセートを、室温（ＲＴ）にて９００ｒｐｍで１０分間振盪した。リン酸化ＳＴＡＴ５を、ｐＳＴＡＴ５  ＡｌｐｈａＬｉｓａキット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）によって計測した。新たに調製したアクセプタービーズ混合物を、緑色フィルタリングした１００ｌｕｘ未満の光の下でライセート（５μＬ）上に分注した。プレートを９００ｒｐｍで２分間振盪し、短時間遠沈し、ＲＴの暗所で２時間インキュベートした。ドナービーズを、緑色フィルタリングした１００ｌｕｘ未満の光の下で分注した（５μＬ）。プレートを９００ｒｐｍで２分間振盪し、短時間遠沈し、ＲＴの暗所で一晩インキュベートした。ルミネセンスを、ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を用いて緑色フィルタリングした１００ｌｕｘ未満の光の下で６８９ｎｍでの励起および５７０ｎｍでの発光を使用して測定した。
【０１７８】
試験化合物のＩＬ−２に応答する阻害性効力を測定するために、ヒトＴ細胞株におけるｐＳＴＡＴ５に結合したビーズの平均発光強度を計測した。化合物濃度に対するシグナル強度の阻害曲線の解析から、ＩＣ５０値を決定した。データは、ｐＩＣ５０（負の常用対数ＩＣ５０）値（平均値±標準偏差）として表される。
インビトロアッセイの結果
【表１−１】
2021535174.tif 000059
【表１−２】
2021535174.tif 000060
【０１７９】
アッセイ３：肺組織におけるＩＬ−１３誘導性ｐＳＴＡＴ６誘導のマウス（Ｍｕｒｉｎｅ））（マウス（Ｍｏｕｓｅ））モデル
ＩＬ−１３は喘息の病態生理学の基礎となる重要なサイトカインである（Ｋｕｄｌａｃｚら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２００８，５８２，１５４−１６１）。ＩＬ−１３は、キナーゼのヤヌスファミリー（ＪＡＫ）のメンバーを活性化する細胞表面受容体に結合し、それは次にＳＴＡＴ６をリン酸化し、その後さらなる転写経路を活性化する。記載されるモデルでは、ある用量のＩＬ−１３をマウスの肺に局所送達してＳＴＡＴ６のリン酸化（ｐＳＴＡＴ６）を誘導し、次にこれをエンドポイントとして測定した。
【０１８０】
ハーランから入手した成体Ｂａｌｂ／ｃマウスをアッセイに使用した。試験当日、動物をイソフルランで軽く麻酔し、ビヒクルまたは試験化合物（１ｍｇ／ｍＬ、数回の呼吸で総体積５０μＬ）を経口吸引で投与した。動物を投与後横臥位に置き、麻酔から完全に回復するのをモニターした後、ホームケージに戻した。４時間後、動物を再度短時間麻酔し、経口吸引によりビヒクルまたはＩＬ−１３のいずれか（送達された総用量０．０３μｇ、総体積５０μＬ）を負荷した後、麻酔から回復するのをモニターしてホームケージに戻した。ビヒクルまたはＩＬ−１３投与の１時間後、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）ＳｕｒｅＦｉｒｅ（登録商標）Ｕｌｔｒａ（商標）ＨＶ  ｐ−ＳＴＡＴ６（Ｔｙｒ６４１）アッセイキットを使用する肺ホモジネート中のｐＳＴＡＴ６検出と、肺と血漿の両方の総薬物濃度分析の両方のために、全血と肺を収集した。血液試料を４℃で約１２，０００ｒｐｍで４分間遠心分離（エッペンドルフ遠心分離機、５８０４Ｒ）して血漿を収集した。肺をＤＰＢＳ（ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水）ですすぎ、パッドで乾燥させ、急速凍結し、秤量し、ＨＰＬＣ水中の０．１％ギ酸に１：３に希釈してホモジナイズした。試験化合物の血漿および肺のレベルは、試験マトリックスの標準曲線に構築された分析標準に対するＬＣ−ＭＳ解析によって決定された。肺と血漿の比は、５時間での肺濃度（ｎｇ／ｇ）と血漿濃度（ｎｇ／ｍＬ）の比と決定された。
【０１８１】
モデルの活性は、ビヒクルで処理されてＩＬ−１３を負荷された対照動物と比較した、５時間で処理動物の肺に存在するｐＳＴＡＴ６のレベルの低下によって証明される。ビヒクルで処理されてＩＬ−１３を負荷された対照動物と、ビヒクルで処理されてビヒクルを負荷された対照動物の違いは、任意の所与実験においてそれぞれ０％および１００％の阻害効果となった。アッセイで試験された化合物は、以下に記載されているように、ＩＬ−１３負荷後５時間でＳＴＡＴ６リン酸化の阻害を示した。
【表２】
2021535174.tif 000061
【０１８２】
マウス肺において試験した化合物の有意な濃度の観察により、ＩＬ−１３誘導ｐＳＴＡＴ６誘導の観察された阻害が試験化合物の活性の結果であることが確認された。５時間の肺と血漿の比は、マウスにおいて化合物１〜６が血漿中の曝露よりも肺において有意に多くの曝露を示したことを示した。
【０１８３】
アッセイ４：ヒト末梢血単核細胞におけるＴＳＬＰ誘発ＴＡＲＣ放出の阻害
胸腺間質性リンホポエチン（ＴＳＬＰ）と、胸腺および活性化制御ケモカイン（ＴＡＲＣ）は、喘息の気道に過剰発現し、疾患の重症度と相関している。肺では、アレルゲンやウイルス感染に反応して、ＴＳＬＰが気管支上皮細胞から放出されることがある。ＴＳＬＰは、上皮細胞、内皮細胞、好中球、マクロファージ、および肥満細胞をはじめとする幅広い組織および細胞種に見出されるＩＬ−７Ｒα／ＴＳＬＰＲヘテロ二量体を通してシグナルを伝達する。ＴＳＬＰがその受容体に結合すると、コンフォメーション変化が誘発され、ＪＡＫ１とＪＡＫ２が活性化されて、ＳＴＡＴ３およびＳＴＡＴ５をはじめとするさまざまな転写因子がリン酸化される。免疫細胞では、これは細胞内イベントのカスケードを引き起こし、細胞増殖、抗アポトーシス、樹状細胞の遊走、ならびにＴｈ２サイトカインおよびケモカインの産生がもたらされる。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）では、ＴＳＬＰは、骨髄樹状細胞を活性化してＴ細胞を誘引および刺激する（化学誘引物質ＴＡＲＣによって媒介されるプロセスである）ことにより、炎症促進作用を示す。
【０１８４】
このアッセイでは、ＴＳＬＰ刺激がＰＢＭＣからのＴＡＲＣ放出を誘発すること、および、この応答が化合物による処理によって用量依存的に減衰することが示された。試験化合物の効力を、ＴＡＲＣ放出の阻害について測定した。
【０１８５】
３〜５人のドナーからのＰＢＭＣアリコート（事前に全血から単離し、アリコートを−８０℃で凍結）を３７℃で解凍し、５０ｍＬファルコンチューブ内の４０ｍＬの予熱済、滅菌濾過済の完全ＲＰＭＩ培地に滴下して加えた。細胞をペレット化し、完全培地に２．２４×１０６細胞／ｍＬで再懸濁した。細胞を、ウェルあたり８５μＬ（１９０，０００細胞）で組織培養処理した９６ウェル平底マイクロプレートに播種した。細胞を３７℃、５％ＣＯ２で１時間静置した。
【０１８６】
化合物は、ＤＭＳＯ中の１０ｍＭ保存液として受け取った。３．７倍段階希釈を行って、ＤＭＳＯ中の９濃度の試験化合物を最終アッセイ試験濃度の３００倍で生成した。１５０倍の中間希釈は完全培地で行い、０．２％ＤＭＳＯで最終アッセイ試験濃度の２倍の濃度の化合物を生成した。１時間の休止期間の後、９５μＬの２Ｘ化合物をＰＢＭＣの各ウェルに添加し、最終アッセイ濃度範囲を３３．３３μＭから０．９５μＭにした。完全培地中の０．２％ＤＭＳＯ９５μＬを未処理の対照ウェルに加えた。刺激の前に、細胞を化合物で１時間、３７℃、５％ＣＯ２で前処理した。
【０１８７】
組換えヒトＴＳＬＰタンパク質を０．１％ＢＳＡを含む無菌ＤＰＢＳで１０μｇ／ｍＬに再構成し、−２０℃でアリコートで保存した。使用直前にアリコートを解凍し、完全培地中で最終アッセイ濃度の２０倍に調製した。１０μＬの２０倍のＴＳＬＰをＰＢＭＣの各ウェルに加えて最終アッセイ濃度を１０ｎｇ／ｍＬにした。１０μＬの完全培地を未刺激の対照ウェルに加えた。化合物の存在下、４８時間、３７℃、５％ＣＯ２で細胞を刺激した。
【０１８８】
刺激後、細胞培養上清を採取し、製造者の指示に従ってＨｕｍａｎ  ＣＣＬ１７／ＴＡＲＣ  Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＃ＤＤＮ００）を用いて、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）によりＴＡＲＣレベルを検出した。
【０１８９】
用量反応分析では、各ドナーの反応率値に対してｌｏｇ［試験化合物（Ｍ）］をプロットし、可変勾配を伴う４パラメータのシグモイド型用量反応アルゴリズムを使用するＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアによる非直線回帰分析を使用してＩＣ５０値を決定した。データは、個々のドナーのｐＩＣ５０値から計算され、小数点以下第１位に丸められた平均ｐＩＣ５０（１０を底とする負の対数ＩＣ５０）値として表される。元の化合物およびそれらのデスフルオロ修飾類似体による阻害の効力値を表３に要約する。
【表３】
2021535174.tif 000062
【０１９０】
アッセイ５：肺Ｓ９代謝
化合物１〜６およびＣ−１〜Ｃ−６のインビトロ代謝安定性を、ヒト肺Ｓ９画分（１μＭ化合物；１ｍｇ／ｍＬ  Ｓ９タンパク質）で評価した。０、１５、３０、および６０分後のサンプルを高分解能ＬＣ−ＭＳ／ＭＳで親化合物について分析した。ヒト由来の肺Ｓ９画分（ロット１４１０２４５）を、ＸｅｎｏＴｅｃｈ  ＬＬＣ（Ｌｅｎｅｘａ、ＫＳ）から購入した。ＮＡＤＰＨ（シグマ・アルドリッチ、Ｎ１６３０）および３−ホスホアデノシン５−ホスホ硫酸塩（ＰＡＰＳ）（シグマ・アルドリッチ、Ａ１６５１）は、シグマ・アルドリッチ（ミズーリ州セントルイス）から購入した。アセトニトリルおよび水は、ＶＷＲ（Ｒａｄｎｏｒ、ＰＡ）より入手し、ＨＰＬＣグレードまたはそれ以上であった。ラロキシフェンおよびギ酸はシグマ・アルドリッチ（ミズーリ州セントルイス）から購入した。肺Ｓ９のインキュベーションを９６ウェルポリプロピレンプレートで３７℃の水浴中で行った。肺Ｓ９溶液は、１ｍＭ  ＮＡＤＰＨ（シグマ−アルドリッチ、ミズーリ州セントルイス）、３ｍＭ塩化マグネシウム（シグマ・アルドリッチ、Ｍ１０２８）を補充した、ｐＨ７．４に緩衝したリン酸カリウム１００ｍＭ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｗｏｂｕｒｎ、ＭＡ）からなり、１００μＭ  ＰＡＰＳ（シグマ−アルドリッチ、ミズーリ州セントルイス）補因子の存在下、最終インキュベーションタンパク質濃度は１ｍｇ／ｍＬであった。ラロキシフェン（ｎ＝１）および化合物（ｎ＝１）の１０ｍＭ  ＤＭＳＯ保存液を緩衝液で希釈し、１μＭの基質濃度（０．００１％  ＤＭＳＯ  ｖ／ｖ）になるようにインキュベーションに添加した。インキュベーション体積は、４００μＬからなり、時間点は、７０μＬのアリコートを取り出すことにより、０、１５、３０、および６０分に取り、および１４０μＬアセトニトリル（０％ギ酸）に希釈した。すべてのサンプルを５℃で１０分間２２５０ｇで遠心分離した。遠心分離したサンプルから上清（５０μＬ）を取り出し、内部標準を含むＨＰＬＣ水１００μＬに希釈した。サンプルをＤｉｏｎｅｘ  Ｕｌｔｉｍａｔｅ  ３０００オートサンプラーに流し、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｑ−Ｅｘａｃｔｉｖｅ高分解能質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）をフルスキャンモードでＡｔｌａｎｔｉｓ  Ｔ３カラム３μＭ−２．１×５０ｍｍ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｉｎｃ．、１８６００３７１７）と組み合わせて使用して分析した。移動相Ａは、水＋０．２％ギ酸からなり、移動相Ｂは、アセトニトリル＋０．２％ギ酸からなった。ピーク積分は、Ｇｕｂｂｓ  ＧＭＳＵソフトウェア（Ｇｕｂｂｓ  Ｉｎｃ．、ジョージア州アルファレッタ）を使用して達成された。各サンプルについて、分析物のピーク面積を内部標準のピーク面積で除算することにより、ピーク面積比を計算した。各インキュベーションについて、各ｔ０での分析物のピーク面積比を１００％に設定し、６０分のサンプルから得たピーク面積比を対応するｔ０に対する残留率に変換した。硫酸塩代謝産物形成の判定は、過去の内部データに基づいて、各親化合物のＯ−硫酸塩代謝物に対応する親イオンチャネルの早期溶出ピークを観察することによって定性的に行われた。アッセイの結果は表４に要約されている（ｎ＝２反復）。
【表４−１】
2021535174.tif 000063
【表４−２】
2021535174.tif 000064
【０１９１】
その対応するフルオロ類似体（化合物Ｃ−１〜Ｃ−６）と比較すると、化合物１〜６は、肺Ｓ９フラクションにおける硫酸化代謝を大幅に低下させた。
【０１９２】
アッセイ６：マウスの血漿および肺における薬物動態
試験化合物の血漿および肺濃度ならびにその比率は、以下の方法で決定された。チャールズ・リバー・ラボラトリーズから入手したＢＡＬＢ／ｃマウスをアッセイに使用した。試験化合物を、０．２ｍｇ／ｍＬの濃度でｐＨ４クエン酸緩衝液中の２０％プロピレングリコールに個別に配合し、５０μＬの投与溶液を経口吸引によりマウスの気管に導入した。投与後の様々な時点（一般に０．１６７、２、６、２４時間）に、血液試料を心臓穿刺により取り出し、無傷の肺をマウスから切除した。血液試料を４℃で約１２，０００ｒｐｍで４分間遠心分離（エッペンドルフ遠心分離機、５８０４Ｒ）して血漿を収集した。肺をパッドで乾燥させ、秤量し、滅菌水に１：３に希釈してホモジナイズした。試験化合物の血漿および肺の濃度は、試験マトリックスの標準曲線に構築された分析標準に対するＬＣ−ＭＳ解析によって決定された。肺／血漿比は、肺ＡＵＣ（μｇ時／ｇ）と血漿ＡＵＣ（μｇ時／ｍＬ）の比として決定された。このＡＵＣは、時間に対する試験化合物濃度の曲線下面積として慣習的に定義されている。
【表５】
2021535174.tif 000065
【０１９３】
アッセイ７：ＩＬ−５媒介性好酸球生存アッセイ
ＩＬ−５媒介性好酸球生存に対する試験化合物の効力は、ヒト全血（ＡｌｌＣｅｌｌｓ）から単離したヒト好酸球で測定することができる。ＩＬ−５はＪＡＫを通じてシグナルを伝達するので、このアッセイはＪＡＫの細胞効力の尺度を提供する。
【０１９４】
ヒト好酸球を、健康なドナーの新鮮なヒト全血（ＡｌｌＣｅｌｌｓ）から単離する。血液を０．９％塩化ナトリウム溶液（シグマ−アルドリッチ）中４．５％デキストラン（シグマ−アルドリッチ）と混合する。赤血球を３５分間沈降させる。白血球に富む上層を取り出し、フィコール−Ｐａｑｕｅ（ＧＥヘルスケア）の上で層状にし、６００ｇで３０分間遠心分離する。血漿および単核細胞層を取り出した後、顆粒球層を水で溶解して、混入している赤血球を除去する。ヒト好酸球単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して好酸球をさらに精製する。精製された好酸球の一部を抗ＣＤ１６  ＦＩＴＣ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）とともに暗所で４℃で１０分間インキュベートする。ＬＳＲＩＩフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して純度を分析する。
【０１９５】
細胞を、３７℃、５％ＣＯ２加湿インキュベーター内で、１０％熱失活ウシ胎仔血清（ＦＢＳ、ライフテクノロジーズ）、２ｍＭ  Ｇｌｕｔａｍａｘ（ライフテクノロジーズ）、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ライフテクノロジーズ）および１Ｘ  Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（ライフテクノロジーズ）を補充したＲＰＭＩ１６４０（ライフテクノロジーズ）で培養する。細胞を１０，０００細胞／ウェルで培地（５０μＬ）に播種する。プレートを３００ｇで５分間遠心分離し、上清を除去する。化合物をＤＭＳＯで段階希釈し、次に培地でさらに５００倍に希釈して最終アッセイ濃度の２倍とする。試験化合物（５０μＬ／ウェル）を細胞に添加し、３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートし、続いて７２時間予め温めたアッセイ培地（５０μＬ）にＩＬ−５（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；最終濃度１ｎｇ／ｍＬおよび１０ｐｇ／ｍｌ）を添加する。
【０１９６】
サイトカイン刺激後、細胞を３００ｇで５分間遠心分離し、冷ＤＰＢＳ（ライフテクノロジーズ）で２回洗浄する。生存力およびアポトーシスを評価するために、細胞をヨウ化プロピジウム（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）およびＡＰＣ  Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）とともにインキュベートし、ＬＳＲＩＩフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して分析する。ＩＣ５０値は、化合物濃度に対する細胞生存率パーセントの生存率曲線の解析から決定される。データはｐＩＣ５０（１０を底とする負の対数ＩＣ５０）値として表される。
【０１９７】
アッセイ８：ヒト３Ｄ気道培養物におけるＩＦＮγおよびＩＬ−２７誘導性ケモカインＣＸＣＬ９およびＣＸＣＬ１０の阻害
ＥｐｉＡｉｒｗａｙ組織培養をＭａｔｔｅｋから入手できる（ＡＩＲ−１００）。培養物は喘息ドナーから得られたものである。細胞培養インサートにおいて、ヒト由来気管／気管支上皮細胞を多孔質膜支持体上で増殖および分化させ、細胞の下の温められた培地と上の気体の試験雰囲気を有する気液界面を可能にする。組織を３７℃、５％ＣＯ２加湿インキュベーター内の維持培地（Ｍａｔｔｅｋ、ＡＩＲ−１００−ＭＭ）で培養する。４人のドナーを試験できる。０日目に、組織培養物を１０μＭ、１μＭおよび／または０．１μＭの試験化合物で処理する。化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、シグマ）に希釈して最終濃度０．１％とする。０．１％のＤＭＳＯをビヒクル対照として使用できる。試験化合物を培養物とともに５％ＣＯ２、３７℃で１時間インキュベートし、続いて最終濃度１００ｎｇ／ｍＬでＩＦＮγ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）またはＩＬ−２７（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を含有する、予め温めた培地を添加する。組織培養を８日間維持する。培地は２日おきに化合物およびＩＦＮγまたはＩＬ−２７を含有する新鮮な培地と交換する。８日目に、組織培養物および上清を分析のために回収する。上清試料を、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ−１０）およびＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）についてｌｕｍｉｎｅｘ分析（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用してアッセイする。データは阻害％＋／−標準偏差（±ＳＴＤＶ）として表される。パーセント阻害は、ビヒクル処理細胞と比較した、ＩＦＮγまたはＩＬ−２７誘導性ＣＸＣＬ１０またはＣＸＣＬ９分泌に対する化合物阻害性効力によって決定する。データは３人または４人のドナーの平均である。
【０１９８】
アッセイ９：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ヒトＰＢＭＣにおけるＩＬ−２／抗ＣＤ３刺激ＩＦＮγの阻害
インターロイキン−２（ＩＬ−２）／抗ＣＤ３で刺激したインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の阻害についての試験化合物の効力は、ヒト全血（スタンフォード血液センター）から単離したヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）において測定することができる。ＩＬ−２はＪＡＫを通じてシグナルを伝達するので、このアッセイはＪＡＫの細胞効力の尺度を提供する。
【０１９９】
（１）ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、フィコール勾配を用いて健康なドナーのヒト全血から単離する。細胞を、３７℃、５％ＣＯ２加湿インキュベーター内で、１０％熱失活ウシ胎仔血清（ＦＢＳ、ライフテクノロジーズ）、２ｍＭ  Ｇｌｕｔａｍａｘ（ライフテクノロジーズ）、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ライフテクノロジーズ）および１Ｘ  Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（ライフテクノロジーズ）を補充したＲＰＭＩ（ライフテクノロジーズ）で培養する。細胞を２００，０００細胞／ウェルで培地（５０μＬ）に播種し、１時間培養する。化合物をＤＭＳＯで段階希釈し、次に培地でさらに５００倍（最終アッセイ濃度の２倍）に希釈する。試験化合物（１００μＬ／ウェル）を細胞に添加し、３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートし、続いて２４時間予め温めたアッセイ培地（５０μＬ）にＩＬ−２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；最終濃度１００ｎｇ／ｍＬ）および抗ＣＤ３（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；最終濃度１μｇ／ｍＬ）を添加する。
【０２００】
（２）サイトカイン刺激後、細胞を５００ｇで５分間遠心分離し、上清を除去し、−８０℃で凍結させる。ＩＬ−２／抗ＣＤ３に応答する試験化合物の阻害性効力を決定するために、上清のＩＦＮγ濃度をＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）によって測定する。ＩＣ５０値は、化合物濃度に対するＩＦＮγの濃度の阻害曲線の解析から決定される。データはｐＩＣ５０（１０を底とする負の対数ＩＣ５０）値として表される。
【０２０１】
アッセイ１０：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＩＬ−２刺激ｐＳＴＡＴ５の阻害
インターロイキン−２（ＩＬ−２）／抗ＣＤ３で刺激したＳＴＡＴ５のリン酸化の阻害についての試験化合物の効力は、フローサイトメトリーを用いてヒト全血（スタンフォード血液センター）から単離したヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）のＣＤ４陽性（ＣＤ４＋）Ｔ細胞において測定することができる。ＩＬ−２はＪＡＫを通じてシグナルを伝達するので、このアッセイはＪＡＫの細胞効力の尺度を提供する。
【０２０２】
ＣＤ４＋Ｔ細胞を、フィコエリスロビリン（ＰＥ）結合抗ＣＤ４抗体（クローンＲＰＡ−Ｔ４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して特定し、一方、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７結合抗ｐＳＴＡＴ５抗体（ｐＹ６９４、Ｃｌｏｎｅ４７、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してＳＴＡＴ５リン酸化を検出する。
【０２０３】
（１）抗ＣＤ３によるサイトカイン刺激を２４時間の代わりに３０分間実施することを除いて、アッセイ９の段落（１）のプロトコールに従う。
【０２０４】
（２）サイトカイン刺激の後、細胞を予め温めた固定液（２００μＬ；ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で３７℃、５％ＣＯ２で１０分間固定し、ＤＰＢＳ緩衝液（１ｍＬ、ライフテクノロジーズ）で２回洗浄し、氷冷Ｐｅｒｍ  Ｂｕｆｆｅｒ  ＩＩＩ（１０００μＬ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に４℃で３０分間再懸濁する。細胞をＤＰＢＳ（ＦＡＣＳ緩衝液）中２％ＦＢＳで２回洗浄し、次に抗ＣＤ４  ＰＥ（１：５０希釈）および抗ＣＤ３  抗ＣＤ３Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７（１：５希釈）を含有するＦＡＣＳ緩衝液（１００μＬ）に暗所で室温で６０分間再懸濁する。インキュベーション後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後に、ＬＳＲＩＩフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて分析する。ＩＬ−２／抗ＣＤ３に応答する試験化合物の阻害性効力を決定するために、ｐＳＴＡＴ５の蛍光強度中央値（ＭＦＩ）をＣＤ４＋Ｔ細胞で測定する。ＩＣ５０値は、化合物濃度に対するＭＦＩの阻害曲線の解析から決定される。データはｐＩＣ５０（１０を底とする負の対数ＩＣ５０）値として表される。
【０２０５】
アッセイ１１：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ−４刺激ｐＳＴＡＴ６の阻害
インターロイキン−４（ＩＬ−４）で刺激したＳＴＡＴ６のリン酸化の阻害についての試験化合物の効力は、フローサイトメトリーを用いてヒト全血（スタンフォード血液センター）から単離したヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）のＣＤ３陽性（ＣＤ３＋）Ｔ細胞において測定することができる。ＩＬ−４はＪＡＫを通じてシグナルを伝達するので、このアッセイはＪＡＫの細胞効力の尺度を提供する。
【０２０６】
ＣＤ３＋Ｔ細胞を、フィコエリスロビリン（ＰＥ）結合抗ＣＤ３抗体（クローンＵＣＨＴ１、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して特定し、一方、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７結合抗ｐＳＴＡＴ６抗体（ｐＹ６４１、Ｃｌｏｎｅ１８／Ｐ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してＳＴＡＴ６リン酸化を検出する。
【０２０７】
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、アッセイ９および１０と同様に健康なドナーのヒト全血から単離する。細胞を２５０，０００細胞／ウェルで培地（２００μＬ）に播種し、１時間培養し、次に、様々な濃度の試験化合物を含有するアッセイ培地（５０μＬ）（０．１％ウシ血清アルブミン（シグマ）、２ｍＭ  Ｇｌｕｔａｍａｘ、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳおよび１Ｘ  Ｐｅｎｓｔｒｅｐを補充したＲＰＭＩ）に再懸濁する。化合物をＤＭＳＯで段階希釈し、次にアッセイ培地でさらに５００倍（最終アッセイ濃度の２倍）に希釈した。試験化合物（５０μＬ）を細胞とともに３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートし、続いて３０分間予め温めたアッセイ培地にＩＬ−４（５０μＬ）（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；最終濃度２０ｎｇ／ｍＬ）を添加する。サイトカイン刺激の後、細胞を予め温めた固定液（１００μＬ）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で３７℃、５％ＣＯ２で１０分間固定し、ＦＡＣＳ緩衝液（１ｍＬ）（ＤＰＢＳ中２％ＦＢＳ）で２回洗浄し、氷冷Ｐｅｒｍ  Ｂｕｆｆｅｒ  ＩＩＩ（１０００μＬ）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に４℃で３０分間再懸濁する。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、次に抗ＣＤ３  ＰＥ（１：５０希釈）および抗ｐＳＴＡＴ６  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７（１：５希釈）を含有するＦＡＣＳ緩衝液（１００μＬ）に暗所で室温で６０分間再懸濁する。インキュベーション後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後に、ＬＳＲＩＩフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて分析する。
【０２０８】
ＩＬ−４に応答する試験化合物の阻害性効力を決定するために、ｐＳＴＡＴ６の蛍光強度中央値（ＭＦＩ）をＣＤ３＋Ｔ細胞で測定する。ＩＣ５０値は、化合物濃度に対するＭＦＩの阻害曲線の解析から決定される。データはｐＩＣ５０（１０を底とする負の対数ＩＣ５０）として表される。
【０２０９】
アッセイ１２：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ−６刺激ｐＳＴＡＴ３の阻害
アッセイ１１のプロトコールに類似したプロトコールを使用して、インターロイケン（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｅｎ）−６（ＩＬ−６）で刺激したＳＴＡＴ３のリン酸化の阻害についての試験化合物の効力を決定することができる。Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７結合抗ｐＳＴＡＴ３抗体（ｐＹ７０５、Ｃｌｏｎｅ４／Ｐ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してＳＴＡＴ３リン酸化を検出する。
【０２１０】
アッセイ１３：肺のＡｌｔｅｒｎａｒｉａ  ａｌｔｅｒｎａｔａ誘導性好酸球性炎症のマウスモデル
気道好酸球増加症は、ヒトの喘息の特徴である。Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ａｌｔｅｒｎａｔａは、ヒトにおいて喘息を悪化させ得、マウスの肺において好酸球性炎症を誘発する真菌のエアロアレルゲンである。（Ｈａｖａｕｘら、Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００５  Ｆｅｂ；１３９（２）：１７９−８８）。マウスにおいて、アルテルナリアが肺において組織常在性２型自然リンパ球系細胞を間接的に活性化し、この細胞がＪＡＫ依存性サイトカインに応答し（例えば、ＩＬ−２およびＩＬ−７）、放出し（例えば、ＩＬ−５およびＩＬ−１３）、好酸球性炎症を調整することが実証されている（Ｂａｒｔｅｍｅｓら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１２  Ｆｅｂ  １；１８８（３）：１５０３−１３）。
【０２１１】
Ｔａｃｏｎｉｃより入手した７〜９週齢の雄Ｃ５７マウスを試験に使用することができる。試験当日、動物をイソフルランで軽く麻酔し、ビヒクルまたは試験化合物（０．０３〜１．０ｍｇ／ｍＬ、数回の呼吸で総体積５０μＬ）を中咽頭吸引で投与する。動物を投与後横臥位に置き、麻酔から完全に回復するのをモニターした後、ホームケージに戻す。１時間後、動物を再度短時間麻酔し、ビヒクルまたはアルテルナリア抽出物（送達された総抽出物２００μｇ、総体積５０μＬ）を中咽頭吸引で負荷した後、麻酔から回復するのをモニターしてホームケージに戻す。アルテルナリア投与の４８時間後、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）を回収し、Ａｄｖｉａ  １２０  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｓｉｅｍｅｎｓ）を使用してＢＡＬＦ中の好酸球を計数する。モデルの活性は、ビヒクルで処理されてアルテナリアを負荷された対照動物と比較し、４８時間の時点で処理動物のＢＡＬＦに存在する好酸球のレベルの低下によって証明される。データは、ビヒクルで処理されてアルテルナリアを負荷されたＢＡＬＦ好酸球の応答のパーセント阻害として表される。パーセント阻害を計算するため、各条件のＢＡＬＦ好酸球の数を、平均ビヒクル処理アルテルナリア負荷ＢＡＬＦ好酸球のパーセントに変換し、１００パーセントから引く。
【０２１２】
アッセイ１４：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ＩＦＮγ誘導性ｐＳＴＡＴ１の阻害
インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）で刺激したＳＴＡＴ１のリン酸化の阻害についての試験化合物の効力を、フローサイトメトリーを用いてヒト全血（スタンフォード血液センター）から得たＣＤ１４陽性（ＣＤ１４＋）単球において測定した。ＩＦＮγはＪＡＫを通じてシグナルを伝達するので、このアッセイはＪＡＫの細胞効力の尺度を提供する。
【０２１３】
単球を、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）結合抗ＣＤ１４抗体（クローンＲＭ０５２、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して特定し、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７結合抗ｐＳＴＡＴ１抗体（ｐＹ７０１、Ｃｌｏｎｅ４ａ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してＳＴＡＴ１リン酸化を検出した。
【０２１４】
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、フィコール勾配を用いて健康なドナーのヒト全血から単離した。細胞を、３７℃、５％ＣＯ２加湿インキュベーター内で、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ、ライフテクノロジーズ）、２ｍＭ  Ｇｌｕｔａｍａｘ（ライフテクノロジーズ）、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ライフテクノロジーズ）および１Ｘ  Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（ライフテクノロジーズ）を補充したＲＰＭＩ（ライフテクノロジーズ）で培養した。細胞を２５０，０００細胞／ウェルで培地（２００μＬ）に播種し、２時間培養し、様々な濃度の試験化合物を含有するアッセイ培地（５０μＬ）（０．１％ウシ血清アルブミン（シグマ）、２ｍＭ  Ｇｌｕｔａｍａｘ、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳおよび１Ｘ  Ｐｅｎｓｔｒｅｐを補充したＲＰＭＩ）に再懸濁した。化合物をＤＭＳＯで段階希釈し、次いで、最終ＤＭＳＯ濃度が０．１％になるようにさらに培地で１０００倍希釈した。試験化合物の希釈液を細胞とともに３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートし、続いて最終濃度０．６ｎｇ／ｍＬで培地（５０μＬ）に３０分間予め温めたＩＦＮγ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を添加した。サイトカイン刺激の後、細胞を予め温めた固定液（１００μＬ）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で３７℃、５％ＣＯ２で１０分間固定し、ＦＡＣＳ緩衝液（１ｍＬ）（ＰＢＳ中１％ＢＳＡ）で２回洗浄し、１：１０  抗ＣＤ１４  ＦＩＴＣ：ＦＡＣＳ緩衝液（１００μＬ）に再懸濁し、４℃で１５分間インキュベートした。細胞を１回洗浄し、次に氷冷Ｐｅｒｍ  Ｂｕｆｆｅｒ  ＩＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）（１００μＬ）に４℃で３０分間再懸濁した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、次に１：１０抗ｐＳＴＡＴ１  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７：ＦＡＣＳ緩衝液（１００μＬ）に暗所で室温で３０分間再懸濁し、ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、ＭＡＣＳＱｕａｎｔフローサイトメーター（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を用いて分析した。
【０２１５】
試験化合物の阻害性効力を決定するために、ｐＳＴＡＴ１の蛍光強度中央値（ＭＦＩ）をＣＤ１４＋単球で測定した。ＩＣ５０値は、化合物濃度に対するＭＦＩの阻害曲線の解析から決定した。データはｐＩＣ５０（１０を底とする負の対数ＩＣ５０）値として表される。化合物４はこのアッセイで７．３のｐＩＣ５０値を示した。
【０２１６】
アッセイ１５：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ＧＭ−ＣＳＦ誘導性ｐＳＴＡＴ５の阻害
顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）で刺激したＳＴＡＴ５のリン酸化の阻害についての試験化合物の効力を、フローサイトメトリーを用いてヒト全血（スタンフォード血液センター）から得たＣＤ１４陽性（ＣＤ１４＋）単球において測定した。ＧＭ−ＣＳＦはＪＡＫを通じてシグナルを伝達するので、このアッセイはＪＡＫの細胞効力の尺度を提供する。
【０２１７】
単球を、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）結合抗ＣＤ１４抗体（クローンＲＭ０５２、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して特定し、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７結合抗ｐＳＴＡＴ５抗体（ｐＹ６９４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してＳＴＡＴ５リン酸化を検出した。
【０２１８】
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、フィコール勾配を用いて健康なドナーのヒト全血から単離した。細胞を、３７℃、５％ＣＯ２加湿インキュベーター内で、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ、ライフテクノロジーズ）、２ｍＭ  Ｇｌｕｔａｍａｘ（ライフテクノロジーズ）、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ライフテクノロジーズ）および１Ｘ  Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（ライフテクノロジーズ）を補充したＲＰＭＩ（ライフテクノロジーズ）で培養した。細胞を２５０，０００細胞／ウェルで培地（２００μＬ）に播種し、２時間培養し、様々な濃度の試験化合物を含有するアッセイ培地（５０μＬ）（０．１％ウシ血清アルブミン（シグマ）、２ｍＭ  Ｇｌｕｔａｍａｘ、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳおよび１Ｘ  Ｐｅｎｓｔｒｅｐを補充したＲＰＭＩ）に再懸濁した。化合物をＤＭＳＯで段階希釈し、次いで、最終ＤＭＳＯ濃度が０．１％になるようにさらに培地で１０００倍希釈した。試験化合物の希釈液を細胞とともに３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートし、続いて最終濃度０．３ｎｇ／ｍＬで培地（５０μＬ）に１５分間予め温めたＧＭ−ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を添加した。サイトカイン刺激の後、細胞を予め温めた固定液（１００μＬ）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で３７℃、５％ＣＯ２で１０分間固定し、ＦＡＣＳ緩衝液（１ｍＬ）（ＰＢＳ中１％ＢＳＡ）で２回洗浄し、１：１０  抗ＣＤ１４  ＦＩＴＣ：ＦＡＣＳ緩衝液（１００μＬ）に再懸濁し、４℃で１５分間インキュベートした。細胞を１回洗浄し、次に氷冷Ｐｅｒｍ  Ｂｕｆｆｅｒ  ＩＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）（１００μＬ）に４℃で３０分間再懸濁した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、次に１：１０抗ｐＳＴＡＴ１  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７：ＦＡＣＳ緩衝液（１００μＬ）に暗所で室温で３０分間再懸濁し、ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、ＭＡＣＳＱｕａｎｔフローサイトメーター（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を用いて分析した。
【０２１９】
試験化合物の阻害性効力を決定するために、ｐＳＴＡＴ５の蛍光強度中央値（ＭＦＩ）をＣＤ１４＋単球で測定した。ＩＣ５０値は、化合物濃度に対するＭＦＩの阻害曲線の解析から決定した。データはｐＩＣ５０（１０を底とする負の対数ＩＣ５０）値として表される。化合物１はこのアッセイで６．７のｐＩＣ５０値を示した。化合物４はこのアッセイで６．７のｐＩＣ５０値を示した。
【０２２０】
アッセイ１６：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ＩＬ−１２誘導性ｐＳＴＡＴ４の阻害
インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）で刺激したＳＴＡＴ４のリン酸化の阻害についての試験化合物の効力を、フローサイトメトリーを用いてヒト全血（スタンフォード血液センター）から得たＣＤ３陽性（ＣＤ３＋）Ｔ細胞において測定した。ＩＬ−１２はＪＡＫを通じてシグナルを伝達するので、このアッセイはＪＡＫの細胞効力の尺度を提供する。
【０２２１】
ＣＤ３＋Ｔ細胞を、フィコエリトリン（ＰＥ）結合抗ＣＤ３抗体（クローンＵＣＨＴ１、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して特定し、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７結合抗ｐＳＴＡＴ４抗体（クローン３８／ｐ−Ｓｔａｔ４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してＳＴＡＴ４リン酸化を検出した。
【０２２２】
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、フィコール勾配を用いて健康なドナーのヒト全血から単離した。細胞を、３７℃、５％ＣＯ２加湿インキュベーター内で、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ、ライフテクノロジーズ）、２ｍＭ  Ｇｌｕｔａｍａｘ（ライフテクノロジーズ）、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ライフテクノロジーズ）、１Ｘ  Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（ライフテクノロジーズ）、プレート結合精製抗ＣＤ３抗体（５μｇ／ｍｌ、クローンＵＣＨＴ１、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）および可溶性抗ＣＤ２８抗体（１μｇ／ｍｌ、クローンＣＤ２８．２、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を補充したＲＰＭＩ（ライフテクノロジーズ）で３日間培養した。細胞を回収し、培地で洗浄した後、インターロイキン−２（ＩＬ−２、１０ｎｇ／ｍｌ、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を含む培地に再懸濁した。細胞を、３７℃、５％ＣＯ２加湿インキュベーターで３日間培養した。細胞を回収し、ＲＰＭＩで洗浄し、２５０，０００細胞／ウェルで培地（２００μＬ）に播種し、２時間培養し、様々な濃度の試験化合物を含有するアッセイ培地（５０μＬ）（０．１％ウシ血清アルブミン（シグマ）、２ｍＭ  Ｇｌｕｔａｍａｘ、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳおよび１Ｘ  Ｐｅｎｓｔｒｅｐを補充したＲＰＭＩ）に再懸濁した。化合物をＤＭＳＯで段階希釈し、次いで、最終ＤＭＳＯ濃度が０．１％になるようにさらに培地で１０００倍希釈した。試験化合物の希釈液を細胞とともに３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートし、続いて最終濃度１０ｎｇ／ｍＬで培地（５０μＬ）に３０分間予め温めたＩＬ−１２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を添加した。サイトカイン刺激の後、細胞を予め温めた固定液（１００μＬ）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で３７℃、５％ＣＯ２で１０分間固定し、ＦＡＣＳ緩衝液（１ｍＬ）（ＰＢＳ中１％ＢＳＡ）で２回洗浄し、氷冷Ｐｅｒｍ  Ｂｕｆｆｅｒ  ＩＩＩ（１０００μＬ）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に４℃で３０分間再懸濁した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、次に抗ＣＤ３  ＰＥ（１：５０希釈）および抗ｐＳＴＡＴ４  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７（１：１０希釈）を含有するＦＡＣＳ緩衝液（１００μＬ）に暗所で室温で４５分間再懸濁した。インキュベーション後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後に、ＭＡＣＳＱｕａｎｔフローサイトメーター（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を用いて分析した。試験化合物の阻害性効力を決定するために、ｐＳＴＡＴ４の蛍光強度中央値（ＭＦＩ）をＣＤ３＋Ｔ細胞で測定した。ＩＣ５０値は、化合物濃度に対するＭＦＩの阻害曲線の解析から決定した。データはｐＩＣ５０（１０を底とする負の対数ＩＣ５０）値として表される。化合物１はこのアッセイで６．２のｐＩＣ５０値を示した。化合物４はこのアッセイで６．０のｐＩＣ５０値を示した。
【０２２３】
結晶構造
ヒトＪＡＫ１に結合した化合物Ｄ−１の共結晶構造を、２．２８Åの分解能で得た。リガンドはＡＴＰ結合部位に結合することが観察された。ドナー原子とアクセプター原子の間の３．５Åまたはそれ未満の距離に基づいて、７つの特定の水素結合相互作用が特定された。特に、Ｄ−１の化合物の環外アミドのカルボニルとＪＡＫ１のＡｒｇ８７９の側鎖との間に水素結合相互作用が確認された。同様の相互作用は、本発明の化合物についても予想することができる。以前のモデリング研究では、この相互作用は、他のチロシンキナーゼよりもＪＡＫ１に選択性を与える方法として提案されていた。なぜなら、他の密接に関連するキナーゼ（ＴＲＫＡ、ＶＥＧＦＲ、ＡＢＬ１など）は、同等の位置にアルギニン残基を持たないからである。結晶構造における水素結合相互作用の観察された結果と、環外アミドを持たないシリーズと比較して改善されたキノーム選択性により、この設計仮説が検証される。
【０２２４】
本発明は、その特定の態様または実施形態を参照して説明してきたが、本発明の真の趣旨および範囲から逸脱することなく、様々な変更が行われ得、等価物で置換され得ることが当業者によって理解される。さらに、適用される特許法および規則によって認められる限りにおいて、本明細書に引用されたすべての刊行物、特許および特許出願は、各文書が個別に参照により本明細書中に援用されるのと同程度に、その全体が参照により本明細書に援用される。
【国際調査報告】
2021535174.tif 000076
2021535174.tif 000077