(57)【要約】  本開示は、脂質マイクロバブルまたはリポソーム中に自己集合する脂質プロドラッグの合成および使用を記載する。プロドラッグ負荷マイクロバブルまたはリポソームは、外部の刺激を使用して、例えば超音波の波を使用して細胞内で活性化することができる。
2021521279.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）プロドラッグを含む表面層であって、プロドラッグが、リン脂質に共有結合的にコンジュゲートされている治療剤を含む、表面層；および
ｂ）コアであって、表面層が囲むコア
を含む、脂質ベース担体。
【請求項２】
マイクロバブルである、請求項１に記載の脂質ベース担体。
【請求項３】
表面層が脂質単層である、請求項１に記載の脂質ベース担体。
【請求項４】
コアがガスである、請求項１に記載の脂質ベース担体。
【請求項５】
ガスが六フッ化硫黄（ＳＦ6）である、請求項４に記載の脂質ベース担体。
【請求項６】
コアが固体である、請求項１に記載の脂質ベース担体。
【請求項７】
固体が金属である、請求項６に記載の脂質ベース担体。
【請求項８】
固体が半導体である、請求項６に記載の脂質ベース担体。
【請求項９】
コアが液体である、請求項１に記載の脂質ベース担体。
【請求項１０】
コアが有機材料である、請求項１に記載の脂質ベース担体。
【請求項１１】
コアが無機材料である、請求項１に記載の脂質ベース担体。
【請求項１２】
コアが水溶液である、請求項１に記載の脂質ベース担体。
【請求項１３】
リポソームである、請求項１に記載の脂質ベース担体。
【請求項１４】
表面層が脂質二重層である、請求項１に記載の脂質ベース担体。
【請求項１５】
約７０ｎｍ〜約９００ｎｍの直径を有する、請求項１に記載の脂質ベース担体。
【請求項１６】
プロドラッグが、約１ｍｏｌ％〜約１００ｍｏｌ％の量で存在する、請求項１に記載の脂質ベース担体。
【請求項１７】
リン脂質が２尾部化リン脂質である、請求項１に記載の脂質ベース担体。
【請求項１８】
リン脂質が、約１０個の炭素原子〜約２４個の炭素原子を含む疎水性尾部を含む、請求項１に記載の脂質ベース担体。
【請求項１９】
リン脂質が、約１６個の炭素原子を含む疎水性尾部を含む、請求項１に記載の脂質ベース担体。
【請求項２０】
治療剤が抗がん剤である、請求項１に記載の脂質ベース担体。
【請求項２１】
抗がん剤がトポテカンである、請求項２０に記載の脂質ベース担体。
【請求項２２】
抗がん剤がシタラビンである、請求項２０に記載の脂質ベース担体。
【請求項２３】
治療剤が、式：
【化１】
2021521279.tif 000015
の化合物である、請求項１に記載の脂質ベース担体。
【請求項２４】
治療剤が、式：
【化２】
2021521279.tif 000016
の化合物である、請求項１に記載の脂質ベース担体。
【請求項２５】
治療剤が抗ウイルス剤である、請求項１に記載の脂質ベース担体。
【請求項２６】
治療剤が抗細菌剤である、請求項１に記載の脂質ベース担体。
【請求項２７】
治療剤が神経伝達物質である、請求項１に記載の脂質ベース担体。
【請求項２８】
治療剤がタンパク質である、請求項１に記載の脂質ベース担体。
【請求項２９】
治療剤が生物剤である、請求項１に記載の脂質ベース担体。
【請求項３０】
治療剤がゲムシタビンである、請求項１に記載の脂質ベース担体。
【請求項３１】
治療剤がキレート化剤である、請求項１に記載の脂質ベース担体。
【請求項３２】
表面層が、ＤＰＰＣをさらに含む、請求項１に記載の脂質ベース担体。
【請求項３３】
表面層が、ＤＰＰＡをさらに含む、請求項１に記載の脂質ベース担体。
【請求項３４】
表面層が、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００をさらに含む、請求項１に記載の脂質ベース担体。
【請求項３５】
表面層が、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ５０００をさらに含む、請求項１に記載の脂質ベース担体。
【請求項３６】
リン脂質が活性化リン脂質である、請求項１に記載の脂質ベース担体。
【請求項３７】
活性化リン脂質がＧｌｕ−リン脂質である、請求項３６に記載の脂質ベース担体。
【請求項３８】
活性化リン脂質がＮＨＳ−リン脂質である、請求項３６に記載の脂質ベース担体。
【請求項３９】
活性化リン脂質がＰＤＰ−リン脂質である、請求項３６に記載の脂質ベース担体。
【請求項４０】
活性化リン脂質がＭＡＬ−リン脂質である、請求項３６に記載の脂質ベース担体。
【請求項４１】
活性化リン脂質がＮＢＤ−リン脂質である、請求項３６に記載の脂質ベース担体。
【請求項４２】
Ｇｌｕ−リン脂質がＤＰＰＥ−Ｇｌｕである、請求項３７に記載の脂質ベース担体。
【請求項４３】
治療剤が、エステル結合によってリン脂質に共有結合的にコンジュゲートされている、請求項１に記載の脂質ベース担体。
【請求項４４】
治療剤が、アミド結合によってリン脂質に共有結合的にコンジュゲートされている、請求項１に記載の脂質ベース担体。
【請求項４５】
状態を処置する方法であって、該方法が、脂質ベース担体の治療有効量を、それを必要とする対象に投与することを含み、該脂質ベース担体が：
ａ）プロドラッグを含む表面層であって、プロドラッグが、リン脂質に共有結合的にコンジュゲートされている治療剤を含む、表面層；および
ｂ）コアであって、表面層が囲むコア
を含む、方法。
【請求項４６】
脂質ベース担体がマイクロバブルである、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
表面層が脂質単層である、請求項４５に記載の方法。
【請求項４８】
コアがガスである、請求項４５に記載の方法。
【請求項４９】
ガスが六フッ化硫黄（ＳＦ6）である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
コアが固体である、請求項４５に記載の方法。
【請求項５１】
固体が金属である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
固体が半導体である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５３】
コアが液体である、請求項４５に記載の方法。
【請求項５４】
コアが有機材料である、請求項４５に記載の方法。
【請求項５５】
コアが無機材料である、請求項４５に記載の方法。
【請求項５６】
コアが水溶液である、請求項４５に記載の方法。
【請求項５７】
脂質ベース担体がリポソームである、請求項４５に記載の方法。
【請求項５８】
表面層が脂質二重層である、請求項４５に記載の方法。
【請求項５９】
脂質ベース担体が、約７０ｎｍ〜約９００ｎｍの直径を有する、請求項４５に記載の方法。
【請求項６０】
プロドラッグが、約１ｍｏｌ％〜約１００ｍｏｌ％の量で存在する、請求項４５に記載の方法。
【請求項６１】
リン脂質が２尾部化リン脂質である、請求項４５に記載の方法。
【請求項６２】
リン脂質が、約１０個の炭素原子〜約２４個の炭素原子を含む疎水性尾部を含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項６３】
リン脂質が、約１６個の炭素原子を含む疎水性尾部を含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項６４】
治療剤が抗がん剤である、請求項４５に記載の方法。
【請求項６５】
抗がん剤がトポテカンである、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
抗がん剤がシタラビンである、請求項６４に記載の方法。
【請求項６７】
治療剤が、式：
【化３】
2021521279.tif 000017
の化合物である、請求項４５に記載の方法。
【請求項６８】
治療剤が、式：
【化４】
2021521279.tif 000018
の化合物である、請求項４５に記載の方法。
【請求項６９】
治療剤が抗ウイルス剤である、請求項４５に記載の方法。
【請求項７０】
治療剤が抗細菌剤である、請求項４５に記載の方法。
【請求項７１】
治療剤が神経伝達物質である、請求項４５に記載の方法。
【請求項７２】
治療剤がタンパク質である、請求項４５に記載の方法。
【請求項７３】
治療剤が生物剤である、請求項４５に記載の方法。
【請求項７４】
治療剤がゲムシタビンである、請求項４５に記載の方法。
【請求項７５】
治療剤がキレート化剤である、請求項４５に記載の方法。
【請求項７６】
表面層が、ＤＰＰＣをさらに含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項７７】
表面層が、ＤＰＰＡをさらに含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項７８】
表面層が、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００をさらに含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項７９】
表面層が、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ５０００をさらに含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項８０】
リン脂質が活性化リン脂質である、請求項４５に記載の方法。
【請求項８１】
活性化リン脂質がＧｌｕ−リン脂質である、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
活性化リン脂質がＮＨＳ−リン脂質である、請求項８０に記載の方法。
【請求項８３】
活性化リン脂質がＰＤＰ−リン脂質である、請求項８０に記載の方法。
【請求項８４】
活性化リン脂質がＭＡＬ−リン脂質である、請求項８０に記載の方法。
【請求項８５】
活性化リン脂質がＮＢＤ−リン脂質である、請求項８０に記載の方法。
【請求項８６】
Ｇｌｕ−リン脂質がＤＰＰＥ−Ｇｌｕである、請求項８１に記載の方法。
【請求項８７】
治療剤が、エステル結合によってリン脂質に共有結合的にコンジュゲートされている、請求項４５に記載の方法。
【請求項８８】
治療剤が、アミド結合によってリン脂質に共有結合的にコンジュゲートされている、請求項４５に記載の方法。
【請求項８９】
体外トリガーを対象に適用することをさらに含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項９０】
体外トリガーが超音波周波数である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
超音波周波数が約１ＭＨｚ〜約２０ＭＨｚである、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
体外トリガーが光である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９３】
光が、約４００ｎｍ〜約１４００ｎｍの波長を有する、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
体外トリガーが電場である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９５】
体外トリガーが磁場である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９６】
磁場が、約０．２Ｔ〜約７Ｔの強度を有する、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
体外トリガーがパルスで適用される、請求項８９に記載の方法。
【請求項９８】
投与が静脈内である、請求項４５に記載の方法。
【請求項９９】
投与が腫瘍内である、請求項４５に記載の方法。
【請求項１００】
投与が皮下である、請求項４５に記載の方法。
【請求項１０１】
投与が動脈内である、請求項４５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
この出願は、２０１８年４月１１日に出願された米国仮出願第６２／６５６，０３５号の利益を主張し、これを参照によりそれ全体で本明細書に組み込む。
政府の権利
この発明は、国立衛生研究所によって認可番号Ｐ２０  ＧＭ１０３４５１およびＰ２０  ＲＲ０１６４８０の下にて合衆国政府の支持でなされた。
【背景技術】
【０００２】
天然または合成化学療法剤は、難水溶性、不安定性、不十分な部位特異性、一般的毒性、または製剤の課題により、しばしば実験室および臨床試験に失敗する。リポソームは、少なくとも１つの脂質二重層を有する球状小胞である。リポソームは、栄養素および薬学的薬物の投与のためのビヒクルとして使用することができる。薬物の生物学的利用能および部位特異性は、リポソーム媒介薬物送達を介して改善することができる。
参照による組み込み
該明細書において引用されている各特許、公報および非特許文献は、各々が参照により個々に組み込まれているかのように、本明細書によって参照によりそれ全体で組み込まれる。
【発明の概要】
【０００３】
一部の実施形態において、本開示は、ａ）プロドラッグを含む表面層であって、プロドラッグが、リン脂質に共有結合的にコンジュゲートされている治療剤を含む、表面層；およびｂ）コアであって、表面層が囲むコアを含む、脂質ベース担体を提供する。
一部の実施形態において、本開示は、状態を処置する方法であって、該方法が、治療有効量の脂質ベース担体を、それを必要とする対象に投与することを含み、該脂質ベース担体が：ａ）プロドラッグを含む表面層であって、プロドラッグが、リン脂質に共有結合的にコンジュゲートされている治療剤を含む、表面層；およびｂ）コアであって、表面層が囲むコアを含む、方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【０００４】
【図１】シタラビンがリン脂質にコンジュゲートされることができるスキームを例示する図である。
【図２】パネルＡは、プロドラッグの合成、プロドラッグ負荷リポソームの自己集合体、および細胞をインビトロで処置するためのリポソームの使用を例示する図である。パネルＢは、プロドラッグ負荷マイクロバブルの使用、およびインビトロにおける標的化薬物送達のための超音波曝露を示す図である。
【図３】体外トリガーとして超音波を利用する、マイクロバブルでの処理の略図を示す図である。
【図４】シタラビンおよびトポテカンをリン脂質にカップリングするために使用される合成経路を例示する図である。
【図５】増加する濃度とともに２Ｔ−Ｐ負荷リポソームの示差走査熱量測定曲線を示す図である。
【図６】増加する濃度とともにＰ負荷リポソームの示差走査熱量測定曲線を示す図である。
【図７】パネルＡは、２Ｔ−Ｐの押し出し前後の、リポソーム内の薬物組み込みを示す図である。パネルＢは、２Ｔ−Ｎの押し出し前後の、リポソーム内の薬物組み込みを示す図である。
【図８】パネルＡは、２Ｔ−Ｐ負荷リポソームが３週の期間の全体にわたって安定したままであったことを示す図である。パネルＢは、Ｐ負荷リポソームが３週の期間の全体にわたって安定であったことを示す図である。パネルＣは、２Ｔ−Ｎ負荷リポソームが３週の期間の全体にわたって安定したままであったことを示す図である。パネルＤは、Ｎ負荷リポソームが３週の期間の全体にわたって安定したままであったことを示す図である。
【図９】２Ｔ−Ｔの押し出し前後の、リポソーム内の薬物組み込みを示す図である。
【図１０】押し出し前（ｐｒｅ−ｅｘ）および押し出し後（ｐｏｓｔ−ｅｘ）の、２Ｔ−Ｔの変動する量とともにリポソームのサイズ分布曲線を示す図である。
【図１１】押し出し前後の、２Ｔ−Ｔの変動する量とともにリポソーム集団（図１０を参照されたい）の平均直径を示す図である。
【図１２】押し出し前（＿ｐｒｅ）および押し出し後（＿ｐｏｓｔ）の、２Ｔ−Ｃの変動する量とともにリポソームのサイズ分布曲線を示す図である。
【図１３】押し出し前後の、２Ｔ−Ｃの変動する量とともにリポソーム集団（図１２を参照されたい）の平均直径を示す図である。
【図１４】遊離Ｔ（トポテカン）の毒性と対比した２Ｔ−Ｔ負荷リポソームの細胞毒性を示す図である。
【図１５】遊離Ｃ（シタラビン）の毒性と対比した２Ｔ−Ｃ負荷リポソームの細胞毒性を示す図である。
【図１６】プロドラッグ負荷マイクロバブルのインビトロ超音波トリガー送達を示す図である。
【図１７】ブタ肝臓エステラーゼを用いる処置の有無における、異なる時点での２Ｔ−Ｎ負荷リポソームの蛍光スペクトルを示す図である。
【図１８】ブタ肝臓エステラーゼを用いる処置の有無における、異なる時点での空のリポソームの蛍光スペクトルを示す図である。
【図１９】ブタ肝臓エステラーゼを用いる処置の有無における、異なる時点でのＰＢＳ溶液の蛍光スペクトルを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０００５】
多くの有望な天然または合成化学療法剤は、難水溶性、不安定性、不十分な部位特異性、一般的毒性、または製剤の課題により、実験室および臨床試験に失敗する。脂質ベース担体、例えばリポソーム、ナノ液滴またはマイクロバブルは、栄養素および薬学的薬物の投与のためのビヒクルとして使用することができ、治療剤の生物学的利用能および部位特異性を著しく改善することができる。
【０００６】
リポソームは、少なくとも１つの脂質二重層を有する球状小胞である。リポソームは、脂質二重層の形態における疎水性膜によって囲まれたコア（例えば、水溶液コア）を有する。リポソームの主要な型は、いくつかの層状相脂質二重層を有する多層状小胞（ＭＬＶ）、１つの脂質二重層を有する小さい単層リポソーム小胞（ＳＵＶ）、大単層小胞（ＬＵＶ）、および渦巻状小胞である。分子（例えば、治療剤）を作用部位に送達するため、リポソームの脂質二重層は、細胞膜など他の二重層と融合することができる。リポソームは、食事もしくは栄養サプリメントの担体または標的化薬物送達のための担体として使用することができる。
【０００７】
マイクロバブルは、直径が典型的に０．５μｍ〜１０μｍ間の小さなガス充填バブルである。マイクロバブルのコアはガス状であり、これは例えば、ポリマー、脂質、リポポリマー、タンパク質、界面活性剤またはその組合せで構成されるシェルによって囲まれている。マイクロバブルは、医用画像化における造影剤としておよび標的化薬物送達のための担体として使用される。マイクロバブルは、超音波走査において使用される高い周波数で激しく共鳴し、体組織よりも有効に強い超音波の波を反射する。マイクロバブルは、赤血球とおよそ同じサイズであり、血管中で同様のレオロジーを呈し、器官または腫瘍における血流を測定するために使用することができる。
ナノ液滴は、マイクロバブルよりも小さい、小さな液体充填バブルである。一部の実施形態において、ナノ液滴のシェルは、例えば、脂質またはリン脂質を含む。ナノ液滴は、容易に蒸発する液体を充填することができる。ナノ液滴の液体コアの蒸発で、ナノ液滴はマイクロバブルに移動する。ナノ液滴において利用される液体コアの非限定的な例としては、ペルフルオロカーボンおよびペルフルオロブタンが挙げられる。
【０００８】
本開示は、一連の脂質プロドラッグの開発および使用、脂質ベース担体内での脂質プロドラッグの分子相互作用、ならびに超音波を使用するインビトロおよびインビボでの脂質プロドラッグの効力を記載する。脂質ベース担体の非限定的な例としては、リポソームおよびマイクロバブルが挙げられる。本明細書に記載されている合成戦略は、強力な脂質プロドラッグがリポソームおよびマイクロバブルなどの脂質ベース担体中に負荷されて、プロドラッグ負荷脂質ベース担体（ＰＬＬＢＣ）を形成することを可能にする。一部の実施形態において、ＰＬＬＢＣは、超音波造影剤として使用することができ、標的（例えば、悪性の腫瘍）のリアルタイム可視化および標的部位での造影剤の到着を可能にする部位対象治療のために超音波とカップリングさせることができる。
脂質プロドラッグは、脂質ベース薬物担体、標的化送達戦略、および超音波媒介技法を利用して、以下によって、より良好な性能を達成することができる：１）薬物ペイロードを増加させること；２）ビヒクル自己集合体に伴う精製および可溶性の課題を最小化すること；３）ビヒクルからの早期の薬物放出を防止すること；４）超音波イメージングで活性化されたままでいること、および標的細胞に近接して薬物を置く治療的技法；ならびに５）一旦細胞内で急速に切断されると薬物効力を維持すること。立体的に障害を受けていない切断可能なエステル結合を介する脂質および薬物のコンジュゲーションは、薬物が、超音波によって活性化された担体中に高濃度で自己集合することを可能にし；細胞内取込みで、強力なおよび速効性の薬物を放出する。
【０００９】
本明細書に記載されている脂質プロドラッグおよび方法は、切除不可能な膵臓、肝臓および脳の腫瘍などの腫瘍を標的化するために使用することができる。一部の実施形態において、本明細書に記載されているプロドラッグおよび方法は、対象の間質マトリクスを標的化することによって膵臓がんを処置するために使用することができる。一部の実施形態において、本明細書に記載されている方法は、毒性または可溶性の課題を有する薬物のために使用することができる。一部の実施形態において、標的リガンドが、本明細書に記載されているマイクロバブルシェルに付加され得る。
【００１０】
脂質プロドラッグ
一部の実施形態において、本開示は、最初に脂質ベース担体（例えば、リポソーム、ナノ液滴またはマイクロバブル）中に自己集合し、次いで、外部の刺激を用いる堆積後に細胞内で活性化されるまで不活性のままであることができる脂質プロドラッグを記載する。一部の実施形態において、本明細書に記載されている合成手法は、立体的に障害を受けていないヒドロキシル基付着部位を有する治療剤に、活性化リン脂質を付着させる。この構造は、エステル化を介する単純なコンジュゲーションを可能にする。一部の実施形態において、本明細書に記載されている合成手法は、立体的に障害を受けていないアミン基付着部位を有する治療剤に、活性化リン脂質を付着させる。この構造は、アミド化を介する単純なコンジュゲーションを可能にする。活性化リン脂質への治療剤のコンジュゲーションに続いて、酵素反応切断は、生物学的環境において切断を引き起こすことができる。
【００１１】
本開示は、脂質ベース担体中に薬物を挿入するための方法も記載する。脂質ベース担体の非限定的な例としては、リポソーム、ナノ液滴およびマイクロバブルが挙げられる。一部の実施形態において、本開示は、ＦＤＡ承認薬物、またはよく特徴付けられているが可溶性の課題もしくは極端な効力により臨床的適用において限定される薬物を利用する。脂質ベース担体中に負荷させることを容易にするため、薬物は、活性化リン脂質に付着されて、プロドラッグを形成することができる。プロドラッグは次いで、例えば自己集合体によって脂質ベース担体中に組み込まれて、ＰＬＬＢＣを形成することができる。本開示のＰＬＬＢＣ（例えば、リポソーム、ナノ液滴またはマイクロバブル）は、治療剤、例えば、抗ウイルス剤、抗細菌剤、抗がん剤、神経伝達物質、タンパク質、皮膚科薬剤、化粧薬剤、キレート化剤または生物剤を含むことができる。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣは、プロドラッグの組合せを含む。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣは、染料分子を含む。
【００１２】
リポソーム、ナノ液滴またはマイクロバブルなどの本開示のＰＬＬＢＣは、コア材料を囲むことができる。コア材料の非限定的な例としては、ガス、例えば六フッ化硫黄（ＳＦ6）またはペルフルオロプロパン；固体、例えば窒化チタン、超常磁性酸化鉄、金、銀、鉄、銅、亜鉛、チタン、白金、ガドリニウムおよびパラジウム；半導体、例えばシリカ；無機材料；有機材料；水溶液；ならびに液体、例えばペルフルオロカーボンおよびペルフルオロブタンが挙げられる。
【００１３】
本開示のＰＬＬＢＣは、抗ウイルス剤を含むことができる。抗ウイルス剤は、症状および感染性を最小化し、疾病の持続期間を短くすることができる。本開示のＰＬＬＢＣは、宿主細胞へのウイルスの付着および侵入、核酸の放出、ウイルスゲノムの複製、ウイルスｍＲＮＡの翻訳、ウイルス構成成分の集合または宿主細胞からの新たなウイルスの放出を阻害する抗ウイルス剤を含むことができる。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣは、抗ウイルス剤、例えば、アマンタジン、ヌクレオシド類似体（例えば、アシクロビル、ガンシクロビル、ホスカルネット）、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤（ＮＲＴＩ；例えば、ラミブジン）、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤（例えば、ネビラピン、エファビレンツ）、インターフェロンアルファ、プロテアーゼ阻害剤（例えば、ボセプレビル）またはノイラミニダーゼ阻害剤（例えば、オセルタミビル）を含むことができる。
【００１４】
一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣは、インフルエンザウイルスに対する抗ウイルス剤、例えばイオンチャネル遮断薬（例えば、アマンタジン、リマンタジン）またはノイラミニダーゼ阻害剤（例えば、オセルタミビルまたはザナミビル）を含むことができる。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣは、ヘルペスウイルスに対する抗ウイルス剤、例えばグアノシン類似体（例えば、アシクロビル、ペンシクロビル、バラシクロビル、ファムシクロビル、ガンシクロビル、バルガンシクロビル）または直接的なウイルスＤＮＡポリメラーゼ阻害剤（例えば、ホスカルネット、シドホビル）を含むことができる。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣは、ＢおよびＣ型肝炎に対する抗ウイルス剤、例えばヌクレオチド類似体（例えば、テノホビル、アデホビル、ラミブジン、エンテカビル、テルビブジン）、細胞間および細胞内機序を介する抗ウイルス剤および免疫調節剤（例えば、ＰＥＧ−インターフェロン−アルファ）、グアノシン類似体（例えば、リババリン）、プロテアーゼ阻害剤（例えば、シメプレビル）、非ヌクレオシドポリメラーゼ（ＮＳ５Ａ）阻害剤（例えば、レジパスビル、ベルパタスビル）または非ヌクレオシドポリメラーゼ（ＮＳ５Ｂ）阻害剤（例えば、ソホスブビル）を含むことができる。
【００１５】
本開示のＰＬＬＢＣは、抗細菌剤、例えばアニリド、キノロン、スルホンアミド、ペニシリン、タンパク質合成阻害剤（例えばマクロライド、リンコマイシン系抗生剤、テトラサイクリン）、ビグアナイド、ビスフェノール、ハロフェノール、フェノール、クレゾール、または第４級アンモニウム化合物を含むことができる。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣは、トリクロカルバン、クロルヘキシジン、アレキシジン、ポリマー性ビグアニド、ヘキサクロロフェン、ｐ−クロロ−ｍ−キシレノール（ＰＣＭＸ）、フェノール、クレゾール、セトリミド、塩化ベンザルコニウム、ノルフロキサシン（ｎｏｒｆｌａｘａｃｉｎ）、ポリミキシンＢ、オキサシリン、ジクロキサシリン（ｄｉｃｌｏｘａｃｃｉｌｉｎ）、テトラサイクリン、バンコマイシン、ペニシリン、リファマイシン、リピアルマイシン（ｌｉｐｉａｒｍｙｃｉｎｄ）、ストレプトマイシン、アンホテリシンＢ、セファロスポリンまたは塩化セチルピリジニウムを含むことができる。
【００１６】
本開示のＰＬＬＢＣは、抗がん剤を含むことができる。抗がん剤の非限定的な例としては、多官能性アルキル化剤、アルキル化剤、プリンアンタゴニスト、ピリミジンアンタゴニスト、植物アルカロイド、抗生物質、ホルモン剤、または他の抗がん薬が挙げられる。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣは、抗がん剤、例えばポドフィロトキシン（Ｐ）、７−（３，５−ジブロモフェニル）−２−ヒドロキシ−７，１１−ジヒドロベンゾ［ｈ］−フロ［３，４−ｂ］キノリン−８（１０Ｈ）−オン（Ｎ）、シクロホスファミド、イホスファミド（ｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、メクロロエタミン、メルファラン（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））、クロランブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（商標））、チオテパ（thiopeta）（Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標））、ブスルファン（Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、プロカルバジン（Ｍａｔｕｌａｎｅ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、アルトレタミン（Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標））、シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））、メトトレキセート、メルカプトプリン（６−ＭＰ）、チオグアニン（６−ＴＧ）、リン酸フルダラビン、クラドリビン（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（登録商標））、ペントスタチン（Ｎｉｐｅｎｔ（登録商標））、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シタラビン（Ａｒａ−Ｃ）、アザシチジン、ビンブラスチン（Ｖｅｌｂａｎ（登録商標））、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））、エトポシド（ＶＰ−１６、ＶｅＰｅ−ｓｉｄ（登録商標））、テニポシド（Ｖｕｍｏｎ（登録商標））、トポテカン（Ｈｙｃａｍｔｉｎ（登録商標））、イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標））、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン、ダウノルビシン）、ダクチノマイシン（Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（登録商標））、イダルビシン（ｉｄａｒｕｂｉｎｃｉｎ）（Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標））、プリカマイシン（Ｍｉｔｈｒａｍｙｃｉｎ（登録商標））、マイトマイシン（Ｍｕｔａｍｙｃｉｎ（登録商標））、ブレオマイシン（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））、タモキシフェン（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（登録商標））、フルタミド（Ｅｕｌｅｘｉｎ（登録商標））、ゴナドトロピン放出ホルモンアゴニスト（例えば、リュープロリド、ゴセレリン）、アロマターゼ阻害剤（例えば、アミノグルテチミド、アナストロゾール（Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標））、アムサクリン、ゲムシタビン、メルファラン（ｍｅｌｐｈｅｌａｎ）、メトトレキセート、ヒドロキシ尿素（Ｈｙｄｒｅａ（登録商標））、アスパラギナーゼ（Ｅｌ−ｓｐａｒ（登録商標））、ミトキサントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））、ミトタン、レチノイン酸誘導体、骨髄成長因子またはアミホスチン（ａｍｉｎｆｏｓｔｉｎｅ）を含むことができる。
【００１７】
本開示のＰＬＬＢＣは、神経伝達物質を含むことができる。神経伝達物質の非限定的な例としては、アミノ酸、ガス状伝達物質、モノアミン、微量アミン、ペプチド、プリン類、または他の神経伝達物質が挙げられる。一部の実施形態において、本開示のリポソーム、ナノ液滴またはマイクロバブルは、神経伝達物質、例えば、グルタメート、アスパルテート、Ｄ−セリン、γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）、グリシン、ドーパミン、ノルエピネフリン、エピネフリン、ヒスタミン、セロトニン、フェネチルアミン、Ｎ−メチルフェネチルアミン、チラミン、３−ヨードチロナミン、オクトパミン、トリプタミン、オキシトシン、ソマトスタチン、物質Ｐ、コカインおよびアンフェタミン調節転写物、オピオイドペプチド、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）、アデノシン、アセチルコリン（ＡＣｈ）、ならびにアナンダミドを含むことができる。
【００１８】
本開示のＰＬＬＢＣは、タンパク質または生物剤を含むことができる。タンパク質または生物剤の非限定的な例としては、ペプチド；ペプチド断片；抗体、例えば二価の抗体、一価の抗体、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体；抗体断片；ならびにナノボディが挙げられる。
【００１９】
合成の方法
本開示は、リポソーム、ナノ液滴またはマイクロバブルなどＰＬＬＢＣを合成する方法を記載する。プロドラッグ負荷リポソームまたはマイクロバブルは、それぞれの脂質層中に治療剤を含むことができる。本開示のプロドラッグ負荷リポソームは、リポソームの脂質二重層中に治療剤を含むことができ、本開示のプロドラッグ負荷マイクロバブルは、マイクロバブルの脂質単層中に治療剤を含むことができる。
【００２０】
一部の実施形態において、ＰＬＬＢＣは、脂質ベース担体の脂質シェル中に脂質プロドラッグを組み込むことによって生成することができる。一部の実施形態において、脂質ベース担体の脂質シェル中に脂質プロドラッグを組み込むことで、漏出を排除し、脂質ベース担体に薬物を共有結合で結合し、１つの用量にて二重標的化戦略を送達することができる。一部の実施形態において、脂質ベース担体の脂質シェル中に脂質プロドラッグを組み込むことで、薬物の薬物動態（ＰＫ）または薬力学（ＰＤ）に影響することができる。
【００２１】
一部の実施形態において、自己集合体は、脂質ベース担体の脂質シェルにプロドラッグを組み込むために使用される。一部の実施形態において、脂質ベース担体の脂質シェル中にプロドラッグを組み込むことで、対象中へのプロドラッグの投与の前の精製ステップを最小化または排除することができる。一部の実施形態において、プロドラッグ負荷マイクロバブルは、遠心分離を使用して投与の前にプロドラッグ負荷リポソームから分離させることができる。一部の実施形態において、脂質ベース担体の脂質シェル中にプロドラッグを組み込むことで、対象への全身的用量を最小化しながら対象内の興味対象の部位に送達される薬物の量を増加させることができる。
【００２２】
本開示のＰＬＬＢＣ（例えば、リポソーム、ナノ液滴またはマイクロバブル）は、リン脂質への薬物分子または治療剤のコンジュゲーションによって生成される溶液プロドラッグを使用して集合させることができる。薬物分子または治療剤は、活性化リン脂質、例えば、マレイミド（ＭＡＬ）リン脂質、活性化カルボン酸（ＮＨＳ）−リン脂質、グルタリル（Ｇｌｕ）−リン脂質、７−ニトロベンズ−２−オキサ−１，３−ジアゾール−４−イル（ＮＢＤ）−リン脂質、またはジチオピリジン（ｄｉｔｈｉｏｐｙｒｉｄｉｎｌ）（ＰＤＰ）−リン脂質にコンジュゲートすることができる。一部の実施形態において、薬物分子は、ＭＡＬリン脂質、例えばＮ−（３−マレイミド−１−オキソプロピル）−Ｌ−α−ホスファチジルエタノールアミン、ジステアロイル（ＤＳＰＥ−ＭＡＬ）；Ｎ−（３−マレイミド−１−オキソプロピル）−Ｌ−α−ホスファチジルエタノールアミン、ジミリストイル（ＤＭＰＥ−ＭＡＬ）；Ｎ−（３−マレイミド−１−オキソプロピル）−Ｌ−α−ホスファチジルエタノールアミン、１−パルミトイル−２−オレオイル（ＰＯＰＥ−ＭＡＬ）；またはＮ−（３−マレイミド−１−オキソプロピル）−Ｌ−α−ホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイル（ＤＰＰＥ−ＭＡＬ）にコンジュゲートされている。一部の実施形態において、薬物分子は、ＮＨＳ−リン脂質、例えばＮ−（スクシンイミジルオキシ−グルタリル）−Ｌ−α−ホスファチジルエタノールアミン、ジステアロイル（ＤＳＰＥ−ＮＨＳ）；Ｎ−（スクシンイミジルオキシ−グルタリル）−Ｌ−α−ホスファチジルエタノールアミン、ジオレオイル（ドープ−ＮＨＳ）；Ｎ−（スクシンイミジルオキシ−グルタリル）−Ｌ−α−ホスファチジルエタノールアミン、１−パルミトイル−２−オレオイル（ＰＯＰＥ−ＮＨＳ）；Ｎ−（スクシンイミジルオキシ−グルタリル）−Ｌ−α−ホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイル（ＤＰＰＥ−ＮＨＳ）；またはＮ−（スクシンイミジルオキシ−グルタリル）−Ｌ−α−ホスファチジルエタノールアミン、ジミリストイル（ＤＭＰＥ−ＮＨＳ）にコンジュゲートされている。
【００２３】
一部の実施形態において、薬物分子は、Ｇｌｕ−リン脂質、例えばＮ−グルタリル−Ｌ−α−ホスファチジルエタノールアミン、ジステアロイル（ＤＳＰＥ−Ｇｌｕ）；Ｎ−グルタリル−Ｌ−α−ホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイル（ＤＰＰＥ−Ｇｌｕ）；Ｎ−グルタリル−Ｌ−α−ホスファチジルエタノールアミン、ジミリストイル（ＤＭＰＥ−Ｇｌｕ）；Ｎ−グルタリル−Ｌ−α−ホスファチジルエタノールアミン、ジオレオイル（ドープ−Ｇｌｕ）；またはＮ−グルタリル−Ｌ−α−ホスファチジルエタノールアミン、１−パルミトイル−２−オレオイル（ＰＯＰＥ−Ｇｌｕ）にコンジュゲートされている。一部の実施形態において、薬物分子は、ＰＤＰ−リン脂質、例えばＮ−［３−（２−ピリジニルジチオ）−１−オキソプロピル］−Ｌ−α−ホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイル（ＤＰＰＥ−ＰＤＰ）にコンジュゲートされている。
【００２４】
スキーム１は、薬物コンジュゲートリン脂質を合成することによってプロドラッグを生成するために使用することができる合成スキームの非限定的な例を示している。一部の実施形態において、プロドラッグは、リポソーム、ナノ液滴またはマイクロバブルなどの本開示のＰＬＬＢＣを集合させる際に使用される。プロドラッグを生成するため、ヒドロキシル基、アミノ（アミド）基、カルボキシル基またはメルカプト基を含む薬物分子または治療剤は、脱水剤および求核触媒の存在下で活性化リン脂質にコンジュゲートされる。一部の実施形態において、活性化リン脂質は、Ｇｌｕ−リン脂質、例えば、ＤＰＰＥ−Ｇｌｕである。一部の実施形態において、脱水剤はＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（dicylohexylcarbodiimide）（ＤＣＣ）であり、求核触媒は４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）である。
【００２５】
【化１】
2021521279.tif 000003
【００２６】
脂質プロドラッグは、飽和脂肪酸または不飽和脂肪酸を含む疎水性尾部を有することができる。一部の実施形態において、プロドラッグは、二重尾部化されている。一部の実施形態において、プロドラッグ分子は、直鎖アルキレン部分である飽和脂肪酸を含む疎水性尾部を有する。一部の実施形態において、プロドラッグ分子は、直鎖アルケニレン部分である不飽和脂肪酸を含む疎水性尾部を有する。一部の実施形態において、各Ｒ1およびＲ2は−（ＣＨ2）n−であり、ここで、ｎは約５〜約２４である。一部の実施形態において、各Ｒ1およびＲ2は−（ＣＨ2）n−であり、ここで、ｎは１０である。一部の実施形態において、各Ｒ1およびＲ2は−（ＣＨ2）n−であり、ここで、ｎは１２である。一部の実施形態において、各Ｒ1およびＲ2は−（ＣＨ2）n−であり、ここで、ｎは２０である。
【００２７】
追加の合成スキームも、薬物コンジュゲートリン脂質を合成することによってプロドラッグを生成するために使用することができる。一部の実施形態において、シタラビンなどの治療剤は、図１に示されている通りにアミド結合またはエステル結合のいずれかを介してリン脂質にコンジュゲートすることができる。
本開示のプロドラッグ溶液は、プロドラッグ負荷リポソームを集合させるために使用することができる。プロドラッグ負荷リポソームは、薬物コンジュゲートリン脂質（即ちプロドラッグ）の溶液をリン脂質溶液およびＰＥＧ化リン脂質溶液と混合および超音波処理することによって集合させることができる。
【００２８】
本開示のプロドラッグ溶液は、プロドラッグ負荷マイクロバブルを集合させるために使用することができる。プロドラッグ負荷マイクロバブルは、薬物コンジュゲートリン脂質（即ちプロドラッグ）の溶液をリン脂質溶液およびＰＥＧ化リン脂質溶液と混合および超音波処理すること、ならびに結果として得られた溶液をガスでパージしてマイクロバブルのガス状コアを形成することによって、集合させることができる。
【００２９】
一部の実施形態において、薬物負荷脂質担体、例えば薬物負荷リポソームまたは薬物負荷マイクロバブルを集合させるために使用されるＰＥＧ化リン脂質溶液は、例えば、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（メトキシ（ポリエチレングリコール）アンモニウム塩）、ＤＰＰＥ−ＰＥＧ（（Ｎ−（メチルポリオキシエチレンオキシカルボニル）−１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（メトキシ（ポリエチレングリコール）アンモニウム塩）、ＤＭＰＥ−ＰＥＧ（Ｎ−（メチルポリオキシエチレンオキシカルボニル）−１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（メトキシ（ポリエチレングリコール）アンモニウム塩）、またはその任意の組合せを含む。一部の実施形態において、薬物負荷脂質担体、例えば薬物負荷リポソームまたは薬物負荷マイクロバブルを集合させるために使用されるＰＥＧ化リン脂質溶液は、例えば、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（メトキシ（ポリエチレングリコール）２０００）アンモニウム塩）、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ５０００（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（メトキシ（ポリエチレングリコール）５０００）アンモニウム塩）、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００カルボン酸（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［カルボキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（ナトリウム塩））、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ５０００ＤＢＣＯ（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−ｎ−［ジベンゾシクロオクチル（ポリエチレングリコール）−５０００］（アンモニウム塩））、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ５０００アミン（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［アミノ（ポリエチレングリコール）−５０００］（アンモニウム塩））、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ５０００マレイミド（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［マレイミド（ポリエチレングリコール）−５０００］（アンモニウム塩））、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００−ＴＭＳ（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［１０−（トリメトキシシリル）ウンデカンアミド（ポリエチレングリコール）−２０００］（トリエチルアンモニウム塩））、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ５０００アジド（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［アジド（ポリエチレングリコール）−５０００］（アンモニウム塩））、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００−スクエア（ｓｑｕａｒｅ）（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［スクエア（ポリエチレングリコール）−２０００］（ナトリウム塩））、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００−ＤＢＣＯ（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［ジベンゾシクロオクチル（ポリエチレングリコール）−２０００］（アンモニウム塩））、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００アジド（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［アジド（ポリエチレングリコール）−２０００］（アンモニウム塩））、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００ビオチン（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［ビオチニル（ポリエチレングリコール）−２０００］（アンモニウム塩））、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００アミン（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［アミノ（ポリエチレングリコール）−２０００］（アンモニウム塩））、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００ＰＤＰ（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［ＰＤＰ（ポリエチレングリコール）−２０００］（アンモニウム塩））、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００マレイミド（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［マレイミド（ポリエチレングリコール）−２０００］（アンモニウム塩））、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００フォレート（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［フォレート（ポリエチレングリコール）−２０００］（アンモニウム塩））、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ５０００フォレート（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［フォレート（ポリエチレングリコール）−５０００］（アンモニウム塩））、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００シアヌル（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［シアヌル（ポリエチレングリコール）−２０００］（アンモニウム塩））、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００スクシニル（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［スクシニル（ポリエチレングリコール）−２０００］（アンモニウム塩））、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００−Ｎ−シアニン５、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００−Ｎ−シアニン７、ビス−ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［アジド（ポリエチレングリコール）−２０００（アンモニウム塩）、ＤＭＰＥ−ＰＥＧ２００（Ｎ−（メチルポリオキシエチレンオキシカルボニル）−１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（メトキシ（ポリエチレングリコール）２０００）アンモニウム塩））、ＤＭＰＥ−ＰＥＧ５０００（Ｎ−（メチルポリオキシエチレンオキシカルボニル）−１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（メトキシ（ポリエチレングリコール）５０００）アンモニウム塩））、ＤＰＰＥ−ＰＥＧ２０００（Ｎ−（メチルポリオキシエチレンオキシカルボニル）−１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（メトキシ（ポリエチレングリコール）２０００）アンモニウム塩））、ＤＰＰＥ−ＰＥＧ５０００（Ｎ−（メチルポリオキシエチレンオキシカルボニル）−１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（メトキシ（ポリエチレングリコール）５０００）アンモニウム塩））、メトキシ−ＰＥＧ脂質、例えば、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）］（アンモニウム塩）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）］（アンモニウム塩）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）］（アンモニウム塩）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）］（アンモニウム塩）を、３５０、５５０、７５０、１０００、２０００、３０００または５０００ダルトンのメトキシ−ＰＥＧ質量で；またはその任意の組合せを含む。
【００３０】
一部の実施形態において、リポソーム、ナノ液滴またはマイクロバブルなどの薬物負荷脂質ベース担体を集合させるために使用することができる本開示のリン脂質溶液は、天然リン脂質誘導体、例えば、卵ホスファチジルコリン（ＰＣ）、卵ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ダイズＰＣ、水素化ダイズＰＣ、またはスフィンゴミエリンを含む。一部の実施形態において、本開示のリポソーム、ナノ液滴またはマイクロバブルなどの薬物負荷脂質ベース担体を集合させるために使用されるリン脂質溶液は、合成リン脂質誘導体、例えば、ホスファチジン酸（例えば、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスフェート（ＤＭＰＡ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスフェート（ＤＰＰＡ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスフェート（ＤＳＰＡ））、ホスファチジルコリン（例えば、１，２−ジデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＤＰＣ）、１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２−ジエルコイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＥＰＣ））、ホスファチジルグリセロール（例えば、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）（ＤＭＰＧ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）（ＤＰＰＧ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）（ＤＳＰＧ）、２−オレオイル−１−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）（ＰＯＰＧ））、ホスファチジルエタノールアミン（例えば、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ドープ））、ホスファチジルセリン（例えば、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホセリン（ＤＯＰＳ））、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰｔｄＣｈｏ）、１−ステアロイル−２−［（Ｅ）−４−（４−（（４−ブチルフェニル）ジアゼニル）フェニル）ブタノイル］−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１−ステアロイル−２−［（Ｅ）−４−（４−（（４−ブチルフェニル）ジアゼニル）フェニル）ブタノイル］−ｓｎ−グリセロール、１−ステアロイル−２−［（Ｅ）−４−（４−（（４−ブチルフェニル）ジアゼニル）フェニル）ブタノイル］−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、Ｎ−［（Ｅ）−４−（４−（（４−ブチルフェニル）ジアゼニル）フェニル）ブタノイル］−Ｄ−エリトロ−スフィンゴシルホスホリルコリン、（Ｅ）−４−（４−（（４−ブチルフェニル）ジアゼニル）フェニル）−Ｎ−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）ブタンアミド、４−ブチル−アゾ−４：０−酸−１、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−ジエチレントリアミンペンタ酢酸（ガドリニウム塩）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−ジエチレントリアミンペンタ酢酸（ガドリニウム塩）、ビス（１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン）−Ｎ−Ｎ’−ジエチレントリアミンペンタ酢酸（ガドリニウム塩）、ビス（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン）−Ｎ−Ｎ’−ジエチレントリアミンペンタ酢酸（ガドリニウム塩）、ビス（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン）−Ｎ−Ｎ’−ジエチレントリアミンペンタ酢酸（ガドリニウム塩）、ポリグリセリン−リン脂質、官能化リン脂質、または末端活性化リン脂質またはその薬学的に許容される塩である。一部の実施形態において、リポソーム、ナノ液滴またはマイクロバブルなどの薬物負荷脂質ベース担体を集合させるために使用することができる本開示のリン脂質溶液は、上記のリン脂質のいずれかの組合せを含む。
【００３１】
脂質ベース担体製剤の特徴
サイズ：一部の実施形態において、本開示の脂質ベース担体（例えば、リポソーム、ナノ液滴またはマイクロバブル）は、約７０ｎｍ〜約１０μｍの直径を有することができる。一部の実施形態において、本開示の脂質ベース担体は、約７０ｎｍ〜約１００ｎｍ、約７０ｎｍ〜約１５０ｎｍ、約７０ｎｍ〜約２００ｎｍ、約７０ｎｍ〜約２５０ｎｍ、約７０ｎｍ〜約３００ｎｍ、約７０ｎｍ〜約３５０ｎｍ、約７０ｎｍ〜約４００ｎｍ、約７０ｎｍ〜約４５０ｎｍ、約７０ｎｍ〜約５００ｎｍ、約７０ｎｍ〜約５５０ｎｍ、約７０ｎｍ〜約６００ｎｍ、約７０ｎｍ〜約９００ｎｍ、約７０ｎｍ〜約１μｍ、約７０ｎｍ〜約５μｍ、約７０ｎｍ〜約１０μｍ、約１００ｎｍ〜約１５０ｎｍ、約１００ｎｍ〜約２００ｎｍ、約１００ｎｍ〜約２５０ｎｍ、約１００ｎｍ〜約３００ｎｍ、約１００ｎｍ〜約３５０ｎｍ、約１００ｎｍ〜約４００ｎｍ、約１００ｎｍ〜約４５０ｎｍ、約１００ｎｍ〜約５００ｎｍ、約１００ｎｍ〜約５５０ｎｍ、約１００ｎｍ〜約６００ｎｍ、約１００ｎｍ〜約９００ｎｍ、約１００ｎｍ〜約１μｍ、約１００ｎｍ〜約５μｍ、約１００ｎｍ〜約１０μｍ、約１５０ｎｍ〜約２００ｎｍ、約１５０ｎｍ〜約２５０ｎｍ、約１５０ｎｍ〜約３００ｎｍ、約１５０ｎｍ〜約３５０ｎｍ、約１５０ｎｍ〜約４００ｎｍ、約１５０ｎｍ〜約４５０ｎｍ、約１５０ｎｍ〜約５００ｎｍ、約１５０ｎｍ〜約５５０ｎｍ、約１５０ｎｍ〜約６００ｎｍ、約１５０ｎｍ〜約９００ｎｍ、約１５０ｎｍ〜約１μｍ、約１５０ｎｍ〜約５μｍ、約１５０ｎｍ〜約１０μｍ、約２００ｎｍ〜約２５０ｎｍ、約２００ｎｍ〜約３００ｎｍ、約２００ｎｍ〜約３５０ｎｍ、約２００ｎｍ〜約４００ｎｍ、約２００ｎｍ〜約４５０ｎｍ、約２００ｎｍ〜約５００ｎｍ、約２００ｎｍ〜約５５０ｎｍ、約２００ｎｍ〜約６００ｎｍ、約２００ｎｍ〜約９００ｎｍ、約２００ｎｍ〜約１μｍ、約２００ｎｍ〜約５μｍ、約２００〜約１０μｍ、約２５０ｎｍ〜約３００ｎｍ、
【００３２】
約２５０ｎｍ〜約３５０ｎｍ、約２５０ｎｍ〜約４００ｎｍ、約２５０ｎｍ〜約４５０ｎｍ、約２５０ｎｍ〜約５００ｎｍ、約２５０ｎｍ〜約５５０ｎｍ、約２５０ｎｍ〜約６００ｎｍ、約２５０ｎｍ〜約９００ｎｍ、約２５０ｎｍ〜約１μｍ、約２５０ｎｍ〜約５μｍ、約２５０ｎｍ〜約１０μｍ、約３００ｎｍ〜約３５０ｎｍ、約３００ｎｍ〜約４００ｎｍ、約３００ｎｍ〜約４５０ｎｍ、約３００ｎｍ〜約５００ｎｍ、約３００ｎｍ〜約５５０ｎｍ、約３００ｎｍ〜約６００ｎｍ、約３００ｎｍ〜約９００ｎｍ、約３００ｎｍ〜約１μｍ、約３００ｎｍ〜約５μｍ、約３００ｎｍ〜約１０μｍ、約３５０ｎｍ〜約４００ｎｍ、約３５０ｎｍ〜約４５０ｎｍ、約３５０ｎｍ〜約５００ｎｍ、約３５０ｎｍ〜約５５０ｎｍ、約３５０ｎｍ〜約６００ｎｍ、約３５０ｎｍ〜約９００ｎｍ、約３５０ｎｍ〜約１μｍ  約３５０ｎｍ〜約５μｍ、約３５０ｎｍ〜約１０μｍ、約４００ｎｍ〜約４５０ｎｍ、約４００ｎｍ〜約５００ｎｍ、約４００ｎｍ〜約５５０ｎｍ、約４００ｎｍ〜約６００ｎｍ、約４００ｎｍ〜約９００ｎｍ、約４００ｎｍ〜約１μｍ、約４００ｎｍ〜約５μｍ、約４００ｎｍ〜約１０μｍ、約４５０ｎｍ〜約５００ｎｍ、約４５０ｎｍ〜約５５０ｎｍ、約４５０ｎｍ〜約６００ｎｍ、約４５０ｎｍ〜約９００ｎｍ、約４５０ｎｍ〜約１μｍ、約４５０ｎｍ〜約５μｍ、約４５０ｎｍ〜約１０μｍ、約５００ｎｍ〜約５５０ｎｍ、約５００ｎｍ〜約６００ｎｍ、約５００ｎｍ〜約９００ｎｍ、約５００ｎｍ〜約１μｍ、約５００ｎｍ〜約５μｍ、約５００ｎｍ〜約１０μｍ、約５５０ｎｍ〜約６００ｎｍ、約５５０ｎｍ〜約９００ｎｍ、約５５０ｎｍ〜約１μｍ、約５５０ｎｍ〜約５μｍ、約５５０ｎｍ〜約１０μｍ、約６００ｎｍ〜約９００ｎｍ、約６００ｎｍ〜約１μｍ、約６００ｎｍ〜約５μｍ、約６００ｎｍ〜約１０μｍ、約９００ｎｍ〜約１μｍ、約９００ｎｍ〜約５μｍ、約９００ｎｍ〜約１０μｍ、約１μｍ〜約５μｍ、約１μｍ〜約１０μｍ、または約５μｍ〜約１０μｍの直径を有することができる。一部の実施形態において、本開示の脂質ベース担体は、約７０ｎｍ、約１００ｎｍ、約１５０ｎｍ、約２００ｎｍ、約２５０ｎｍ、約３００ｎｍ、約３５０ｎｍ、約４００ｎｍ、約４５０ｎｍ、約５００ｎｍ、約５５０ｎｍ、約６００ｎｍ、約９００ｎｍ、約１μｍ、約５μｍまたは約１０μｍの直径を有することができる。一部の実施形態において、本開示の脂質ベース担体は、少なくとも約７０ｎｍ、約１００ｎｍ、約１５０ｎｍ、約２００ｎｍ、約２５０ｎｍ、約３００ｎｍ、約３５０ｎｍ、約４００ｎｍ、約４５０ｎｍ、約５００ｎｍ、約５５０ｎｍ、約６００ｎｍ、約９００ｎｍ、約１μｍまたは約５μｍの直径を有することができる。一部の実施形態において、本開示の脂質ベース担体は、多くとも約１００ｎｍ、約１５０ｎｍ、約２００ｎｍ、約２５０ｎｍ、約３００ｎｍ、約３５０ｎｍ、約４００ｎｍ、約４５０ｎｍ、約５００ｎｍ、約５５０ｎｍ、約６００ｎｍ、約９００ｎｍ、約１μｍ、約５μｍまたは約１０μｍの直径を有することができる。
【００３３】
本開示の脂質ベース担体（例えば、リポソーム、ナノ液滴またはマイクロバブル）は、製剤の一部であってよい。一部の実施形態において、本開示の製剤は、約７０ｎｍ〜約１０μｍの平均粒子径を有する脂質ベース担体を含有することができる。一部の実施形態において、本開示の製剤は、約７０ｎｍ〜約１００ｎｍ、約７０ｎｍ〜約１５０ｎｍ、約７０ｎｍ〜約２００ｎｍ、約７０ｎｍ〜約２５０ｎｍ、約７０ｎｍ〜約３００ｎｍ、約７０ｎｍ〜約３５０ｎｍ、約７０ｎｍ〜約４００ｎｍ、約７０ｎｍ〜約４５０ｎｍ、約７０ｎｍ〜約５００ｎｍ、約７０ｎｍ〜約５５０ｎｍ、約７０ｎｍ〜約６００ｎｍ、約７０ｎｍ〜約９００ｎｍ、約７０ｎｍ〜約１μｍ、約７０ｎｍ〜約５μｍ、約７０ｎｍ〜約１０μｍ、約１００ｎｍ〜約１５０ｎｍ、約１００ｎｍ〜約２００ｎｍ、約１００ｎｍ〜約２５０ｎｍ、約１００ｎｍ〜約３００ｎｍ、約１００ｎｍ〜約３５０ｎｍ、約１００ｎｍ〜約４００ｎｍ、約１００ｎｍ〜約４５０ｎｍ、約１００ｎｍ〜約５００ｎｍ、約１００ｎｍ〜約５５０ｎｍ、約１００ｎｍ〜約６００ｎｍ、約１００ｎｍ〜約９００ｎｍ、約１００ｎｍ〜約１μｍ、約１００ｎｍ〜約５μｍ、約１００ｎｍ〜約１０μｍ、約１５０ｎｍ〜約２００ｎｍ、約１５０ｎｍ〜約２５０ｎｍ、約１５０ｎｍ〜約３００ｎｍ、約１５０ｎｍ〜約３５０ｎｍ、約１５０ｎｍ〜約４００ｎｍ、約１５０ｎｍ〜約４５０ｎｍ、約１５０ｎｍ〜約５００ｎｍ、約１５０ｎｍ〜約５５０ｎｍ、約１５０ｎｍ〜約６００ｎｍ、約１５０ｎｍ〜約９００ｎｍ、約１５０ｎｍ〜約１μｍ、約１５０ｎｍ〜約５μｍ、約１５０ｎｍ〜約１０μｍ、約２００ｎｍ〜約２５０ｎｍ、約２００ｎｍ〜約３００ｎｍ、約２００ｎｍ〜約３５０ｎｍ、約２００ｎｍ〜約４００ｎｍ、約２００ｎｍ〜約４５０ｎｍ、約２００ｎｍ〜約５００ｎｍ、約２００ｎｍ〜約５５０ｎｍ、約２００ｎｍ〜約６００ｎｍ、約２００ｎｍ〜約９００ｎｍ、約２００ｎｍ〜約１μｍ、約２００ｎｍ〜約５μｍ、約２００〜約１０μｍ、約２５０ｎｍ〜約３００ｎｍ、約２５０ｎｍ〜約３５０ｎｍ、約２５０ｎｍ〜約４００ｎｍ、約２５０ｎｍ〜約４５０ｎｍ、約２５０ｎｍ〜約５００ｎｍ、約２５０ｎｍ〜約５５０ｎｍ、約２５０ｎｍ〜約６００ｎｍ、約２５０ｎｍ〜約９００ｎｍ、約２５０ｎｍ〜約１μｍ、約２５０ｎｍ〜約５μｍ、約２５０ｎｍ〜約１０μｍ、約３００ｎｍ〜約３５０ｎｍ、約３００ｎｍ〜約４００ｎｍ、約３００ｎｍ〜約４５０ｎｍ、約３００ｎｍ〜約５００ｎｍ、約３００ｎｍ〜約５５０ｎｍ、約３００ｎｍ〜約６００ｎｍ、約３００ｎｍ〜約９００ｎｍ、約３００ｎｍ〜約１μｍ、約３００ｎｍ〜約５μｍ、約３００ｎｍ〜約１０μｍ、約３５０ｎｍ〜約４００ｎｍ、約３５０ｎｍ〜約４５０ｎｍ、約３５０ｎｍ〜約５００ｎｍ、約３５０ｎｍ〜約５５０ｎｍ、約３５０ｎｍ〜約６００ｎｍ、約３５０ｎｍ〜約９００ｎｍ、約３５０ｎｍ〜約１μｍｍ  約３５０ｎｍ〜約５μｍ、約３５０ｎｍ〜約１０μｍ、約４００ｎｍ〜約４５０ｎｍ、約４００ｎｍ〜約５００ｎｍ、約４００ｎｍ〜約５５０ｎｍ、約４００ｎｍ〜約６００ｎｍ、約４００ｎｍ〜約９００ｎｍ、約４００ｎｍ〜約１μｍ、約４００ｎｍ〜約５μｍ、約４００ｎｍ〜約１０μｍ、約４５０ｎｍ〜約５０��ｎｍ、約４５０ｎｍ〜約５５０ｎｍ、約４５０ｎｍ〜約６００ｎｍ、約４５０ｎｍ〜約９００ｎｍ、約４５０ｎｍ〜約１μｍ、約４５０ｎｍ〜約５μｍ、約４５０ｎｍ〜約１０μｍ、約５００ｎｍ〜約５５０ｎｍ、約５００ｎｍ〜約６００ｎｍ、約５００ｎｍ〜約９００ｎｍ、約５００ｎｍ〜約１μｍ、約５００ｎｍ〜約５μｍ、約５００ｎｍ〜約１０μｍ、約５５０ｎｍ〜約６００ｎｍ、約５５０ｎｍ〜約９００ｎｍ、約５５０ｎｍ〜約１μｍ、約５５０ｎｍ〜約５μｍ、約５５０ｎｍ〜約１０μｍ、約６００ｎｍ〜約９００ｎｍ、約６００ｎｍ〜約１μｍ、約６００ｎｍ〜約５μｍ、約６００ｎｍ〜約１０μｍ、約９００ｎｍ〜約１μｍ、約９００ｎｍ〜約５μｍ、約９００ｎｍ〜約１０μｍ、約１μｍ〜約５μｍ、約１μｍ〜約１０μｍ、または約５μｍ〜約１０μｍの平均粒子径を有する脂質ベース担体を含有することができる。一部の実施形態において、本開示の製剤は、約７０ｎｍ、約１００ｎｍ、約１５０ｎｍ、約２００ｎｍ、約２５０ｎｍ、約３００ｎｍ、約３５０ｎｍ、約４００ｎｍ、約４５０ｎｍ、約５００ｎｍ、約５５０ｎｍ、約６００ｎｍ、約９００ｎｍ、約１μｍ、約５μｍまたは約１０μｍの平均粒子径を有する脂質ベース担体を含有することができる。一部の実施形態において、本開示の製剤は、少なくとも約７０ｎｍ、約１００ｎｍ、約１５０ｎｍ、約２００ｎｍ、約２５０ｎｍ、約３００ｎｍ、約３５０ｎｍ、約４００ｎｍ、約４５０ｎｍ、約５００ｎｍ、約５５０ｎｍ、約６００ｎｍ、約９００ｎｍ、約１μｍまたは約５μｍの平均粒子径を有する脂質ベース担体を含有することができる。一部の実施形態において、本開示の製剤は、多くとも約１００ｎｍ、約１５０ｎｍ、約２００ｎｍ、約２５０ｎｍ、約３００ｎｍ、約３５０ｎｍ、約４００ｎｍ、約４５０ｎｍ、約５００ｎｍ、約５５０ｎｍ、約６００ｎｍ、約９００ｎｍ、約１μｍ、約５μｍまたは約１０μｍの平均粒子径を有する脂質ベース担体を含有することができる。
【００３４】
負荷能力：脂質ベース担体（例えば、リポソーム、ナノ液滴またはマイクロバブル）の負荷能力は、脂質ベース担体の単位質量当たりで負荷される治療剤（例えば、プロドラッグ）の量である。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣは、約０％〜約９９％の負荷能力を有する。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣは、約０％〜約５％、約０％〜約１０％、約０％〜約１５％、約０％〜約２０％、約０％〜約３０％、約０％〜約４０％、約０％〜約５０％、約０％〜約７５％、約０％〜約９０％、約０％〜約９５％、約０％〜約９９％、約５％〜約１０％、約５％〜約１５％、約５％〜約２０％、約５％〜約３０％、約５％〜約４０％、約５％〜約５０％、約５％〜約７５％、約５％〜約９０％、約５％〜約９５％、約５％〜約９９％、約１０％〜約１５％、約１０％〜約２０％、約１０％〜約３０％、約１０％〜約４０％、約１０％〜約５０％、約１０％〜約７５％、約１０％〜約９０％、約１０％〜約９５％、約１０％〜約９９％、約１５％〜約２０％、約１５％〜約３０％、約１５％〜約４０％、約１５％〜約５０％、約１５％〜約７５％、約１５％〜約９０％、約１５％〜約９５％、約１５％〜約９９％、約２０％〜約３０％、約２０％〜約４０％、約２０％〜約５０％、約２０％〜約７５％、約２０％〜約９０％、約２０％〜約９５％、約２０％〜約９９％、約３０％〜約４０％、約３０％〜約５０％、約３０％〜約７５％、約３０％〜約９０％、約３０％〜約９５％、約３０％〜約９９％、約４０％〜約５０％、約４０％〜約７５％、約４０％〜約９０％、約４０％〜約９５％、約４０％〜約９９％、約５０％〜約７５％、約５０％〜約９０％、約５０％〜約９５％、約５０％〜約９９％、約７５％〜約９０％、約７５％〜約９５％、約７５％〜約９９％、約９０％〜約９５％、約９０％〜約９９％、または約９５％〜約９９％の負荷能力を有する。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣは、約０％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約７５％、約９０％、約９５％または約９９％の負荷能力を有する。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣは、少なくとも約０％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約７５％、約９０％または約９５％の負荷能力を有する。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣは、多くとも約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約７５％、約９０％、約９５％または約９９％の負荷能力を有する。
【００３５】
脂質ベース担体（例えば、リポソーム、ナノ液滴またはマイクロバブル）の製剤の負荷能力は、製剤における脂質ベース担体の単位質量当たりの製剤の脂質ベース担体中に負荷される治療剤（例えば、プロドラッグ）の量である。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣの製剤は、約０％〜約９９％の負荷能力を有する。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣの製剤は、約０％〜約５％、約０％〜約１０％、約０％〜約１５％、約０％〜約２０％、約０％〜約３０％、約０％〜約４０％、約０％〜約５０％、約０％〜約７５％、約０％〜約９０％、約０％〜約９５％、約０％〜約９９％、約５％〜約１０％、約５％〜約１５％、約５％〜約２０％、約５％〜約３０％、約５％〜約４０％、約５％〜約５０％、約５％〜約７５％、約５％〜約９０％、約５％〜約９５％、約５％〜約９９％、約１０％〜約１５％、約１０％〜約２０％、約１０％〜約３０％、約１０％〜約４０％、約１０％〜約５０％、約１０％〜約７５％、約１０％〜約９０％、約１０％〜約９５％、約１０％〜約９９％、約１５％〜約２０％、約１５％〜約３０％、約１５％〜約４０％、約１５％〜約５０％、約１５％〜約７５％、約１５％〜約９０％、約１５％〜約９５％、約１５％〜約９９％、約２０％〜約３０％、約２０％〜約４０％、約２０％〜約５０％、約２０％〜約７５％、約２０％〜約９０％、約２０％〜約９５％、約２０％〜約９９％、約３０％〜約４０％、約３０％〜約５０％、約３０％〜約７５％、約３０％〜約９０％、約３０％〜約９５％、約３０％〜約９９％、約４０％〜約５０％、約４０％〜約７５％、約４０％〜約９０％、約４０％〜約９５％、約４０％〜約９９％、約５０％〜約７５％、約５０％〜約９０％、約５０％〜約９５％、約５０％〜約９９％、約７５％〜約９０％、約７５％〜約９５％、約７５％〜約９９％、約９０％〜約９５％、約９０％〜約９９％、または約９５％〜約９９％の負荷能力を有する。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣの製剤は、約０％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約７５％、約９０％、約９５％または約９９％の負荷能力を有する。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣの製剤は、少なくとも約０％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約７５％、約９０％または約９５％の負荷能力を有する。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣの製剤は、多くとも約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約７５％、約９０％、約９５％または約９９％の負荷能力を有する。
【００３６】
プロドラッグ組み込み：リポソーム、ナノ液滴またはマイクロバブルなどの本開示のＰＬＬＢＣ中へのプロドラッグ組み込みは、総リン脂質１モル当たりのプロドラッグのモルに関して測定することができる（ｍｏｌ％）。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣ中へのプロドラッグ組み込みは、約１ｍｏｌ％〜約１００ｍｏｌ％であってよい。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣ中へのプロドラッグ組み込みは、約１ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％〜約２０ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％〜約４０ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％〜約５０ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％〜約７０ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％〜約８０ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％〜約９０ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％〜約１００ｍｏｌ％、約１０ｍｏｌ％〜約２０ｍｏｌ％、約１０ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％、約１０ｍｏｌ％〜約４０ｍｏｌ％、約１０ｍｏｌ％〜約５０ｍｏｌ％、約１０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％、約１０ｍｏｌ％〜約７０ｍｏｌ％、約１０ｍｏｌ％〜約８０ｍｏｌ％、約１０ｍｏｌ％〜約９０ｍｏｌ％、約１０ｍｏｌ％〜約１００ｍｏｌ％、約２０ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％、約２０ｍｏｌ％〜約４０ｍｏｌ％、約２０ｍｏｌ％〜約５０ｍｏｌ％、約２０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％、約２０ｍｏｌ％〜約７０ｍｏｌ％、約２０ｍｏｌ％〜約８０ｍｏｌ％、約２０ｍｏｌ％〜約９０ｍｏｌ％、約２０ｍｏｌ％〜約１００ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％〜約４０ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％〜約５０ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％〜約７０ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％〜約８０ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％〜約９０ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％〜約１００ｍｏｌ％、約４０ｍｏｌ％〜約５０ｍｏｌ％、約４０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％、約４０ｍｏｌ％〜約７０ｍｏｌ％、約４０ｍｏｌ％〜約８０ｍｏｌ％、約４０ｍｏｌ％〜約９０ｍｏｌ％、約４０ｍｏｌ％〜約１００ｍｏｌ％、約５０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％、約５０ｍｏｌ％〜約７０ｍｏｌ％、約５０ｍｏｌ％〜約８０ｍｏｌ％、約５０ｍｏｌ％〜約９０ｍｏｌ％、約５０ｍｏｌ％〜約１００ｍｏｌ％、約６０ｍｏｌ％〜約７０ｍｏｌ％、約６０ｍｏｌ％〜約８０ｍｏｌ％、約６０ｍｏｌ％〜約９０ｍｏｌ％、約６０ｍｏｌ％〜約１００ｍｏｌ％、約７０ｍｏｌ％〜約８０ｍｏｌ％、約７０ｍｏｌ％〜約９０ｍｏｌ％、約７０ｍｏｌ％〜約１００ｍｏｌ％、約８０ｍｏｌ％〜約９０ｍｏｌ％、約８０ｍｏｌ％〜約１００ｍｏｌ％、または約９０ｍｏｌ％〜約１００ｍｏｌ％であってよい。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣ中へのプロドラッグ組み込みは、約１ｍｏｌ％、約１０ｍｏｌ％、約２０ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％、約４０ｍｏｌ％、約５０ｍｏｌ％、約６０ｍｏｌ％、約７０ｍｏｌ％、約８０ｍｏｌ％、約９０ｍｏｌ％または約１００ｍｏｌ％であり得る。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣ中へのプロドラッグ組み込みは、少なくとも約１ｍｏｌ％、約１０ｍｏｌ％、約２０ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％、約４０ｍｏｌ％、約５０ｍｏｌ％、約６０ｍｏｌ％、約７０ｍｏｌ％、約８０ｍｏｌ％または約９０ｍｏｌ％であり得る。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣ中へのプロドラッグ組み込みは、多くとも約１０ｍｏｌ％、約２０ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％、約４０ｍｏｌ％、約５０ｍｏｌ％、約６０ｍｏｌ％、約７０ｍｏｌ％、約８０ｍｏｌ％、約９０ｍｏｌ％または約１００ｍｏｌ％であり得る。
【００３７】
安定性：一定のサイズを維持するためのリポソーム、ナノ液滴またはマイクロバブルなどのＰＬＬＢＣの能力は、安定性の尺度である。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣ（例えば、リポソーム、ナノ液滴またはマイクロバブル）は、約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約８日、約９日、約１０日、約１１日、約１２日、約１３日、約１４日、１５日、約１６日、約１７日、約１８日、約１９日、約２０日、約２１日、約２２日、約２３日、約２４日、約２５日、約２６日、約２７日、約２８日、約２９日、約１カ月、約２カ月、約３カ月、約４カ月、約５カ月、約６カ月、約７カ月、約８カ月、約９カ月、約１０カ月、約１１カ月、約１年または約５年の間安定である。
【００３８】
合成および自己集合体
図２は、ＰＬＬＢＣの非限定的な例を表している。図２パネルＡは、プロドラッグの合成、プロドラッグ負荷リポソームの自己集合、および細胞をインビトロで処置するためのリポソームの使用を例示している。図２パネルＢは、プロドラッグ負荷マイクロバブルの使用およびインビトロにおける標的化薬物送達のための超音波曝露を示している。
投与のモード
リポソームおよびマイクロバブルなどの本開示のＰＬＬＢＣは、状態を処置するための単一または複数用量で投与することができる。本開示のＰＬＬＢＣの投与は、例えば静脈内、動脈内、皮下、筋肉内、経口、非経口、眼科的、皮下、経皮、経鼻、腟内および局所的投与を含めて、様々な形態および経路によって起こり得る。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣは、局所に、例えば、直接的に器官中への注射を介して投与することができる。
【００３９】
投与の量および頻度
リポソームおよびマイクロバブルなどの本開示のＰＬＬＢＣの製剤は、正確な投与量の単回投与に適当な単位剤形で調製することができる。単位剤形において、本開示のＰＬＬＢＣの製剤は、適切な分量のプロドラッグを含有する単位用量に分割される。単位投与量は、個別の分量の製剤を含有するパッケージの形態であってよい。非限定的な例は、バイアルまたはアンプル中の液体である。水性懸濁液組成物は、単一用量用の再閉不可能な容器にパッケージ化することができる。多用量用の再閉可能な容器は、例えば保存料との組合せで使用することができる。非経口注射のための製剤は、単位剤形、例えばアンプル中でまたは保存料との多用量容器中で提示することができる。
【００４０】
本開示のＰＬＬＢＣは、単位剤形で製剤中に、約０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬの範囲で存在することができる。本開示のＰＬＬＢＣは、単位剤形で製剤中に、約０ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬ、約０ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約０ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約０ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約０ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約０ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約０ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬ、約０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、約０ｍｇ／ｍＬ〜約３００ｍｇ／ｍＬ、約０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約３００ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約３００ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ〜約３００ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約３００ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約３００ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約３００ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ〜約３００ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ〜約３００ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ〜約３００ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬ、または約３００ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬの範囲で存在することができる。本開示のＰＬＬＢＣは、単位剤形で製剤中に、約０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ、約３００ｍｇ／ｍＬまたは約４００ｍｇ／ｍＬの範囲で存在することができる。本開示のＰＬＬＢＣは、単位剤形で製剤中に、少なくとも約０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬまたは約３００ｍｇ／ｍＬの範囲で存在することができる。本開示のＰＬＬＢＣは、単位剤形で製剤中に、多くとも約５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ、約３００ｍｇ／ｍＬまたは約４００ｍｇ／ｍＬの範囲で存在することができる。
【００４１】
リポソーム、ナノ液滴またはマイクロバブルなどの本開示のＰＬＬＢＣの投与量レベルは、例えば、用いられるＰＬＬＢＣの活性、投与の経路、投与の時間、排泄の速度、プロドラッグの代謝、処置の持続期間、プロドラッグ化合物、ＰＬＬＢＣとの組合せで使用される化合物および／または材料、処置されている対象の年齢、性別、体重、状態、全般的な健康および前の医療歴を含めて、様々な因子に依存し得る。投与量値は、処置される状態の重症度とともに変動することもできる。任意の特別な対象のため、特定の投与レジメンは、個々の必要性、および組成物を投与するまたは組成物の投与を監督する人の専門的判断に従って、時間をかけて調整することができる。
【００４２】
一部の実施形態において、用量は、対象の体重によって除算されたプロドラッグの量、例えば、対象体重１キログラム当たりのプロドラッグのミリグラムに関して表示することができる。一部の実施形態において、用量は、約５ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇ〜約２０００ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約８００ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ〜約４００ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇ〜約３００ｍｇ／ｋｇ、または約１５０ｍｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇを範囲とする量で投与される。
【００４３】
一部の実施形態において、用量は、対象体重１キログラム当たりのＰＬＬＢＣ（例えば、リポソーム、ナノ液滴またはマイクロバブル）の量に関して表示することができる。一部の実施形態において、用量は、約５ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇ〜約２０００ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約８００ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ〜約４００ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇ〜約３００ｍｇ／ｋｇ、または約１５０ｍｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇを範囲とする量で投与される。
【００４４】
組合せ処置
一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣは、複数のプロドラッグを含む。プロドラッグの組合せを含むＰＬＬＢＣの投与は、相乗効果を有することができる。相乗作用は、複数のプロドラッグを含むＰＬＬＢＣの投与が、単一のプロドラッグを含有するＰＬＬＢＣを投与する個々の効果の和よりも大きい全体的な効果を有することができるという所見を指すことができる。相乗作用は、単一のプロドラッグを有するＰＬＬＢＣは効果をほとんどまたは全く生じさせないが、複数のプロドラッグを有するＰＬＬＢＣは、第２のプロドラッグを単独で有するＰＬＬＢＣによって生じされる効果よりも大きい効果を生じさせるという所見も指すことができる。相乗作用は、複数のプロドラッグを有するＰＬＬＢＣの対象への投与が、単一のプロドラッグを有するＰＬＬＢＣの投与と比較して対象における副作用を低減するという所見も指すことができる。
【００４５】
一部の実施形態において、異なるプロドラッグを負荷された脂質ベース担体は、組合せで対象に投与することができる。ＰＬＬＢＣ（例えば、リポソーム、ナノ液滴またはマイクロバブル）の組合せの投与は、相乗効果を有することができる。相乗作用は、２つのプロドラッグ負荷脂質ベース担体の組合せが、２つの個々の効果の和よりも大きい全体的な効果を有することができるという所見を指すことができる。相乗作用は、単一のＰＬＬＢＣは効果をほとんどまたは全く生じさせないが、第２のＰＬＬＢＣとともに投与される場合に、単独で第２のＰＬＬＢＣによって生じされる効果よりも大きい効果を生じさせるという所見も指すことができる。相乗作用は、組合せでの２つのＰＬＬＢＣの対象へ投与が、ＰＬＬＢＣの単独での投与と比較して、対象における副作用を低減するという所見も指すことができる。異なるＰＬＬＢＣの投与は、同じまたは異なる投与経路を介して同時にまたは逐次に起こり得る。
【００４６】
標的部位でのプロドラッグ活性のトリガー
一部の実施形態において、リポソーム、ナノ液滴またはマイクロバブルなどの本開示のＰＬＬＢＣは、対象における標的部位にプロドラッグを送達することができる。標的部位は、例えば、局在化感染の部位、がん性病変、非がん性病変、転移病変、前がん性病変、腫瘍、器官、または特定の細胞型、例えば赤血球、白血球細胞、好中球、マクロファージもしくはニューロンであってよい。標的部位へのプロドラッグの送達は、例えば、状態を有効に処置するのに必要とされる用量を減少させること、プロドラッグの有効性を増加させること、または対象においてプロドラッグによって引き起こされる副作用を減少させることができる。一部の実施形態において、ＰＬＬＢＣの一部として標的部位に存在するプロドラッグは、体外トリガーの非存在下で不活性なままであることができる。体外トリガーの存在で、ＰＬＬＢＣがトリガーされて、プロドラッグが放出および活性化されるのを引き起こすことができる。体外トリガーの非限定的な例としては、超音波、磁場、電場、光波および放射線が挙げられる。体外トリガーとして超音波を利用するマイクロバブルでの処置の略図は、図３に示されている
【００４７】
超音波は、ヒトの聴覚の可聴上限よりも高い周波数を有する音波である。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣ（例えば、リポソーム、マイクロバブルまたはナノ液滴）は、約１ＭＨｚ〜約２０ＭＨｚの超音波周波数を使用してトリガーすることができる。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣは、約１ＭＨｚ〜約２ＭＨｚ、約１ＭＨｚ〜約３ＭＨｚ、約１ＭＨｚ〜約４ＭＨｚ、約１ＭＨｚ〜約５ＭＨｚ、約１ＭＨｚ〜約６ＭＨｚ、約１ＭＨｚ〜約７ＭＨｚ、約１ＭＨｚ〜約８ＭＨｚ、約１ＭＨｚ〜約９ＭＨｚ、約１ＭＨｚ〜約１０ＭＨｚ、約１ＭＨｚ〜約１５ＭＨｚ、約１ＭＨｚ〜約２０ＭＨｚ、約２ＭＨｚ〜約３ＭＨｚ、約２ＭＨｚ〜約４ＭＨｚ、約２ＭＨｚ〜約５ＭＨｚ、約２ＭＨｚ〜約６ＭＨｚ、約２ＭＨｚ〜約７ＭＨｚ、約２ＭＨｚ〜約８ＭＨｚ、約２ＭＨｚ〜約９ＭＨｚ、約２ＭＨｚ〜約１０ＭＨｚ、約２ＭＨｚ〜約１５ＭＨｚ、約２ＭＨｚ〜約２０ＭＨｚ、約３ＭＨｚ〜約４ＭＨｚ、約３ＭＨｚ〜約５ＭＨｚ、約３ＭＨｚ〜約６ＭＨｚ、約３ＭＨｚ〜約７ＭＨｚ、約３ＭＨｚ〜約８ＭＨｚ、約３ＭＨｚ〜約９ＭＨｚ、約３ＭＨｚ〜約１０ＭＨｚ、約３ＭＨｚ〜約１５ＭＨｚ、約３ＭＨｚ〜約２０ＭＨｚ、約４ＭＨｚ〜約５ＭＨｚ、約４ＭＨｚ〜約６ＭＨｚ、約４ＭＨｚ〜約７ＭＨｚ、約４ＭＨｚ〜約８ＭＨｚ、約４ＭＨｚ〜約９ＭＨｚ、約４ＭＨｚ〜約１０ＭＨｚ、約４ＭＨｚ〜約１５ＭＨｚ、約４ＭＨｚ〜約２０ＭＨｚ、約５ＭＨｚ〜約６ＭＨｚ、約５ＭＨｚ〜約７ＭＨｚ、約５ＭＨｚ〜約８ＭＨｚ、約５ＭＨｚ〜約９ＭＨｚ、約５ＭＨｚ〜約１０ＭＨｚ、約５ＭＨｚ〜約１５ＭＨｚ、約５ＭＨｚ〜約２０ＭＨｚ、約６ＭＨｚ〜約７ＭＨｚ、約６ＭＨｚ〜約８ＭＨｚ、約６ＭＨｚ〜約９ＭＨｚ、約６ＭＨｚ〜約１０ＭＨｚ、約６ＭＨｚ〜約１５ＭＨｚ、約６ＭＨｚ〜約２０ＭＨｚ、約７ＭＨｚ〜約８ＭＨｚ、約７ＭＨｚ〜約９ＭＨｚ、約７ＭＨｚ〜約１０ＭＨｚ、約７ＭＨｚ〜約１５ＭＨｚ、約７ＭＨｚ〜約２０ＭＨｚ、約８ＭＨｚ〜約９ＭＨｚ、約８ＭＨｚ〜約１０ＭＨｚ、約８ＭＨｚ〜約１５ＭＨｚ、約８ＭＨｚ〜約２０ＭＨｚ、約９ＭＨｚ〜約１０ＭＨｚ、約９ＭＨｚ〜約１５ＭＨｚ、約９ＭＨｚ〜約２０ＭＨｚ、約１０ＭＨｚ〜約１５ＭＨｚ、約１０ＭＨｚ〜約２０ＭＨｚ、または約１５ＭＨｚ〜約２０ＭＨｚの超音波周波数を使用してトリガーすることができる。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣは、約１ＭＨｚ、約２ＭＨｚ、約３ＭＨｚ、約４ＭＨｚ、約５ＭＨｚ、約６ＭＨｚ、約７ＭＨｚ、約８ＭＨｚ、約９ＭＨｚ、約１０ＭＨｚ、約１５ＭＨｚまたは約２０ＭＨｚの超音波周波数を使用してトリガーすることができる。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣは、少なくとも約１ＭＨｚ、約２ＭＨｚ、約３ＭＨｚ、約４ＭＨｚ、約５ＭＨｚ、約６ＭＨｚ、約７ＭＨｚ、約８ＭＨｚ、約９ＭＨｚ、約１０ＭＨｚまたは約１５ＭＨｚの超音波周波数を使用してトリガーすることができる。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣは、多くとも約２ＭＨｚ、約３ＭＨｚ、約４ＭＨｚ、約５ＭＨｚ、約６ＭＨｚ、約７ＭＨｚ、約８ＭＨｚ、約９ＭＨｚ、約１０ＭＨｚ、約１５ＭＨｚまたは約２０ＭＨｚの超音波周波数を使用してトリガーすることができる。
【００４８】
一部の実施形態において、超音波の波は、ＰＬＬＢＣに作用する圧力を生じさせることができる。一部の実施形態において、この圧力は、約２５ｋＰａ〜約２．５ＭＰａの圧力である。一部の実施形態において、圧力は、約２５ｋＰａ〜約３００ｋＰａの圧力である。一部の実施形態において、圧力は、約１ＭＰａ〜約２．５ＭＰａの圧力である。
【００４９】
一部の実施形態において、光が使用されて、リポソーム、ナノ液滴またはマイクロバブルなどのＰＬＬＢＣをトリガーすることができる。一部の実施形態において、光は、レーザーパルスの形態である。一部の実施形態において、光の波長は、約４００ｎｍ〜約１，４００ｎｍであり得る。一部の実施形態において、光の波長は、約４００ｎｍ〜約４５０ｎｍ、約４００ｎｍ〜約５００ｎｍ、約４００ｎｍ〜約５５０ｎｍ、約４００ｎｍ〜約６００ｎｍ、約４００ｎｍ〜約６５０ｎｍ、約４００ｎｍ〜約７００ｎｍ、約４００ｎｍ〜約７５０ｎｍ、約４００ｎｍ〜約８００ｎｍ、約４００ｎｍ〜約９００ｎｍ、約４００ｎｍ〜約１，０００ｎｍ、約４００ｎｍ〜約１，４００ｎｍ、約４５０ｎｍ〜約５００ｎｍ、約４５０ｎｍ〜約５５０ｎｍ、約４５０ｎｍ〜約６００ｎｍ、約４５０ｎｍ〜約６５０ｎｍ、約４５０ｎｍ〜約７００ｎｍ、約４５０ｎｍ〜約７５０ｎｍ、約４５０ｎｍ〜約８００ｎｍ、約４５０ｎｍ〜約９００ｎｍ、約４５０ｎｍ〜約１，０００ｎｍ、約４５０ｎｍ〜約１，４００ｎｍ、約５００ｎｍ〜約５５０ｎｍ、約５００ｎｍ〜約６００ｎｍ、約５００ｎｍ〜約６５０ｎｍ、約５００ｎｍ〜約７００ｎｍ、約５００ｎｍ〜約７５０ｎｍ、約５００ｎｍ〜約８００ｎｍ、約５００ｎｍ〜約９００ｎｍ、約５００ｎｍ〜約１，０００ｎｍ、約５００ｎｍ〜約１，４００ｎｍ、約５５０ｎｍ〜約６００ｎｍ、約５５０ｎｍ〜約６５０ｎｍ、約５５０ｎｍ〜約７００ｎｍ、約５５０ｎｍ〜約７５０ｎｍ、約５５０ｎｍ〜約８００ｎｍ、約５５０ｎｍ〜約９００ｎｍ、約５５０ｎｍ〜約１，０００ｎｍ、約５５０ｎｍ〜約１，４００ｎｍ、約６００ｎｍ〜約６５０ｎｍ、約６００ｎｍ〜約７００ｎｍ、約６００ｎｍ〜約７５０ｎｍ、約６００ｎｍ〜約８００ｎｍ、約６００ｎｍ〜約９００ｎｍ、約６００ｎｍ〜約１，０００ｎｍ、約６００ｎｍ〜約１，４００ｎｍ、約６５０ｎｍ〜約７００ｎｍ、約６５０ｎｍ〜約７５０ｎｍ、約６５０ｎｍ〜約８００ｎｍ、約６５０ｎｍ〜約９００ｎｍ、約６５０ｎｍ〜約１，０００ｎｍ、約６５０ｎｍ〜約１，４００ｎｍ、約７００ｎｍ〜約７５０ｎｍ、約７００ｎｍ〜約８００ｎｍ、約７００ｎｍ〜約９００ｎｍ、約７００ｎｍ〜約１，０００ｎｍ、約７００ｎｍ〜約１，４００ｎｍ、約７５０ｎｍ〜約８００ｎｍ、約７５０ｎｍ〜約９００ｎｍ、約７５０ｎｍ〜約１，０００ｎｍ、約７５０ｎｍ〜約１，４００ｎｍ、約８００ｎｍ〜約９００ｎｍ、約８００ｎｍ〜約１，０００ｎｍ、約８００ｎｍ〜約１，４００ｎｍ、約９００ｎｍ〜約１，０００ｎｍ、約９００ｎｍ〜約１，４００ｎｍ、または約１，０００ｎｍ〜約１，４００ｎｍであり得る。一部の実施形態において、光の波長は、約４００ｎｍ、約４５０ｎｍ、約５００ｎｍ、約５５０ｎｍ、約６００ｎｍ、約６５０ｎｍ、約７００ｎｍ、約７５０ｎｍ、約８００ｎｍ、約９００ｎｍ、約１，０００ｎｍまたは約１，４００ｎｍであり得る。一部の実施形態において、光の波長は、少なくとも約４００ｎｍ、約４５０ｎｍ、約５００ｎｍ、約５５０ｎｍ、約６００ｎｍ、約６５０ｎｍ、約７００ｎｍ、約７５０ｎｍ、約８００ｎｍ、約９００ｎｍ、または約１，０００ｎｍであり得る。一部の実施形態において、光の波長は、多くとも約４５０ｎｍ、約５００ｎｍ、約５５０ｎｍ、約６００ｎｍ、約６５０ｎｍ、約７００ｎｍ、約７５０ｎｍ、約８００ｎｍ、約９００ｎｍ、約１，０００ｎｍまたは約１，４００ｎｍであり得る。
【００５０】
一部の実施形態において、磁場が使用されて、リポソーム、ナノ液滴またはマイクロバブルなどのＰＬＬＢＣをトリガーすることができる。一部の実施形態において、磁場強度は、０．２Ｔ〜約７Ｔである。一部の実施形態において、磁場強度は、約０．２Ｔ〜約０．５Ｔ、約０．２Ｔ〜約１Ｔ、約０．２Ｔ〜約１．５Ｔ、約０．２Ｔ〜約２Ｔ、約０．２Ｔ〜約３Ｔ、約０．２Ｔ〜約４Ｔ、約０．２Ｔ〜約５Ｔ、約０．２Ｔ〜約６Ｔ、約０．２Ｔ〜約７Ｔ、約０．５Ｔ〜約１Ｔ、約０．５Ｔ〜約１．５Ｔ、約０．５Ｔ〜約２Ｔ、約０．５Ｔ〜約３Ｔ、約０．５Ｔ〜約４Ｔ、約０．５Ｔ〜約５Ｔ、約０．５Ｔ〜約６Ｔ、約０．５Ｔ〜約７Ｔ、約１Ｔ〜約１．５Ｔ、約１Ｔ〜約２Ｔ、約１Ｔ〜約３Ｔ、約１Ｔ〜約４Ｔ、約１Ｔ〜約５Ｔ、約１Ｔ〜約６Ｔ、約１Ｔ〜約７Ｔ、約１．５Ｔ〜約２Ｔ、約１．５Ｔ〜約３Ｔ、約１．５Ｔ〜約４Ｔ、約１．５Ｔ〜約５Ｔ、約１．５Ｔ〜約６Ｔ、約１．５Ｔ〜約７Ｔ、約２Ｔ〜約３Ｔ、約２Ｔ〜約４Ｔ、約２Ｔ〜約５Ｔ、約２Ｔ〜約６Ｔ、約２Ｔ〜約７Ｔ、約３Ｔ〜約４Ｔ、約３Ｔ〜約５Ｔ、約３Ｔ〜約６Ｔ、約３Ｔ〜約７Ｔ、約４Ｔ〜約５Ｔ、約４Ｔ〜約６Ｔ、約４Ｔ〜約７Ｔ、約５Ｔ〜約６Ｔ、約５Ｔ〜約７Ｔ、または約６Ｔ〜約７Ｔである。一部の実施形態において、磁場強度は、約０．２Ｔ、約０．５Ｔ、約１Ｔ、約１．５Ｔ、約２Ｔ、約３Ｔ、約４Ｔ、約５Ｔ、約６Ｔまたは約７Ｔである。一部の実施形態において、磁場強度は、少なくとも約０．２Ｔ、約０．５Ｔ、約１Ｔ、約１．５Ｔ、約２Ｔ、約３Ｔ、約４Ｔ、約５Ｔまたは約６Ｔである。一部の実施形態において、磁場強度は、多くとも約０．５Ｔ、約１Ｔ、約１．５Ｔ、約２Ｔ、約３Ｔ、約４Ｔ、約５Ｔ、約６Ｔまたは約７Ｔである。
【００５１】
体外トリガーが対象に適用される時間の量は、変動することができる。一部の実施形態において、体外トリガーは、約１秒、約２秒、約３秒、約４秒、約５秒、約１０秒、約３０秒、約１分、約５分、約１５分、約３０分、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間または約１２時間の間適用される。一部の実施形態において、体外トリガーは、約１秒〜約３０秒、約１分〜約３０分、または約１時間〜約６時間、または約６時間〜約１２時間の間適用される。
【００５２】
一部の実施形態において、体外トリガーは、パルスで対象に適用される。一部の実施形態において、体外トリガーは、２〜１００パルスで適用される。一部の実施形態において、体外トリガーは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００パルスで適用することができる。一部の実施形態において、体外トリガーは、１００パルス超で適用される。一部の実施形態において、体外トリガーの各パルスは、約１秒、約２秒、約３秒、約４秒、約５秒、約１０秒、約３０秒、約１分、約５分、約１５分、約３０分、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間または約１２時間の間適用される。一部の実施形態において、体外トリガーのパルスは、約１秒〜約３０秒、約１分〜約３０分、または約１時間〜約６時間、または約６時間〜約１２時間の間適用される。
【００５３】
造影剤
一部の実施形態において、リポソーム、ナノ液滴またはマイクロバブルなどの本開示のＰＬＬＢＣは、造影剤として作用する。造影剤は、超音波画像化などの画像化技術を改善することができる。超音波画像化は、携帯可能であり、リアルタイムの画像化フィードバックを提供し、イオン化放射線リスクがない。マイクロバブルなどの超音波造影剤は、超音波に対して非線形的に応答し、心臓病学における画像化のための高いシグナル対ノイズ比を提供する。リアルタイムにてマイクロバブルで標的化組織部域を可視化するという超音波の能力は、例えば腫瘍寸法、脈管構造および血流の測定を可能にすることができる。
【００５４】
状態の処置
本開示の、リポソーム、ナノ液滴またはマイクロバブルなどのＰＬＬＢＣは、状態を処置、防止または診断するために使用することができる。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣが使用されて、状態、例えば、がん、ウイルス感染、細菌感染、炎症性障害または神経学的障害を処置、防止または診断することができる。
【００５５】
本開示のＰＬＬＢＣ（例えば、リポソーム、ナノ液滴またはマイクロバブル）は、がんを処置、防止または診断するために使用することができる。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣが使用されて、がん、例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄球性白血病（ＡＭＬ）、副腎皮質癌腫、カポジ肉腫（軟組織肉腫）、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、肛門がん、消化管カルチノイド腫瘍、星状細胞腫、非定型奇形／ラブドイド腫瘍、基底細胞癌腫、胆管がん、膀胱がん、骨がん、脳腫瘍、乳がん、気管支の腫瘍、バーキットリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、カルチノイド腫瘍、心臓腫瘍、胚性腫瘍、生殖細胞腫瘍、子宮頸がん、胆管腺癌腫、脊索腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性の骨髄増殖性新生物、結腸直腸がん、頭蓋咽頭腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、腺管上皮内癌腫（ＤＣＩＳ）、子宮内膜がん（子宮がん）、上衣細胞腫、食道がん、感覚神経芽細胞腫（頭頸部がん）、ユーイング肉腫、頭蓋外生殖細胞腫瘍、眼球内黒色腫、網膜芽細胞腫、卵管がん、骨の繊維状組織球腫、骨肉腫、胆嚢がん、消化管カルチノイド腫瘍、消化管ストロマ腫瘍（ＧＩＳＴ）、性腺外生殖細胞腫瘍、卵巣生殖細胞腫瘍、精巣がん、妊娠性絨毛性疾患、ヘアリー細胞白血病、頭頸部がん、肝細胞（肝臓）がん、組織球症、下咽頭がん、眼球内黒色腫、島細胞腫瘍、膵臓神経内分泌腫瘍、腎臓（腎細胞）がん、ランゲルハンス細胞組織球症、喉頭がん、唇および口腔がん、肝臓がん、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、リンパ腫、骨の悪性線維性組織球腫、骨肉腫、黒色腫、メルケル細胞癌腫、中皮腫、転移性がん、転移性扁平頸部がん、正中管癌腫、口腔がん、多発性内分泌腫瘍症症候群、多発性骨髄腫、菌状息肉症（リンパ腫）、鼻腔および副鼻腔がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓がん、膵臓神経内分泌腫瘍、乳頭腫症、傍神経節腫、副甲状腺がん、陰茎がん、咽頭がん、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、胸膜肺芽細胞腫、原発性腹膜がん、前立腺がん、直腸がん、横紋筋肉腫、唾液腺がん、血管腫瘍、セザリー症候群（リンパ腫）、小腸がん、軟組織肉腫、Ｔ細胞リンパ腫、精巣がん、咽頭がん、上咽頭がん、中咽頭がん、下咽頭がん、胸腺腫および胸腺癌腫、甲状腺がん、尿道がん、子宮肉腫、腟内がん、血管腫瘍、外陰部がん、またはウィルムス腫瘍を処置することができる。
【００５６】
本開示のＰＬＬＢＣ（例えば、リポソーム、ナノ液滴またはマイクロバブル）は、ウイルス感染を処置、防止または診断するために使用することができる。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣが使用されて、呼吸器ウイルス感染、例えばインフルエンザ、呼吸器シンシチウムウイルス感染、アデノウイルス感染、パラインフルエンザウイルス感染、または重症急性呼吸症候群（ＳＡＲＳ）を処置することができる。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣが使用されて、消化管ウイルス感染、例えば、ノロウイルス感染、ロタウイルス感染、アデノウイルス感染、またはアストロウイルス感染を処置することができる。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣが使用されて、発疹ウイルス感染、例えば、麻疹、風疹、水痘、帯状疱疹、バラ疹、天然痘、第五疾患、またはチクングニアウイルス感染を処置することができる。一部の実施形態において、本開示のリポソーム、ナノ液滴またはマイクロバブルが使用されて、肝ウイルス感染、例えばＡ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎またはＥ型肝炎を処置することができる。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣが使用されて、皮膚ウイルス感染、例えば、疣贅（例えば、生殖器疣贅）、口腔ヘルペス、生殖器ヘルペス、または伝染性軟属腫を処置することができる。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣが使用されて、出血性ウイルス疾患、例えば、エボラ、ラッサ熱、デング熱発熱、黄熱病、マールブルグ出血熱、またはクリミア−コンゴ出血熱を処置することができる。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣが使用されて、神経ウイルス感染、例えば、ポリオ、ウイルス性髄膜炎、ウイルス性脳炎、または狂犬病を処置することができる。
【００５７】
本開示のＰＬＬＢＣ（例えば、リポソーム、ナノ液滴またはマイクロバブル）は、細菌感染を処置、防止または診断するために使用することができる。一部の実施形態において、本開示のＰＬＬＢＣが使用されて、細菌感染、例えば、Staphylococcus aureus、staphylococcus epidermis、Staphylococcus saprophyticus、Streptococcus pyogenous、Streptococcus agalactiae、Streptococcus bovis、Streptococcus pneumoniae、Viridians streptococci、Bacillus anthracis、Bacillus cereus、Clostridium tetani、Clostridium botulinum、Clostridium perfringens、Clostridium difficile、Corynebacterium diphtheriae、Listeria monocytogenes、Neisseria menigitidis、Neisseria gonorrhoeae、大腸菌（Escherichia coli）、Salmonella typhi、Shigella (細菌性赤痢)、Vibrio cholerae, Campylobacter jejuni、またはHelicobacter pyloriを処置または防止することができる。
【実施例】
【００５８】
（実施例１）
合成方法
スキーム１は、２種の化学療法化合物（ＰおよびＮと示される）を、２つのリン脂質鎖を含有するリンカーにカップリングするために使用される合成経路を記載している。
【化２】
2021521279.tif 000004
【００５９】
親化合物（０．２４ｍｍｏｌ、１当量）、ＤＣＣ（０．７３ｍｍｏｌ、３当量）、ＤＰＰＥ−Ｇｌｕ（０．２４ｍｍｏｌ、１当量）およびＤＭＡＰ（０．０４８ｍｍｏｌ、０．４当量）の混合物を１０ｍＬのフラスコに添加した。５．５ｍＬの乾燥ＴＨＦをフラスコに窒素雰囲気下で添加した。反応混合物を室温で２４時間の間撹拌した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）プレートを使用して、反応をモニタリングし、全てのフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｋｉｅｓｅｌゲル６０、２３０〜４００のメッシュ）をガイドした。高分解能質量分光分析法を使用して、プロドラッグの化学構造を検証した。各プロドラッグの疎水性脂肪酸は、親油性薬物送達ビヒクルの脂質層内に組み込むためのアンカーとして働いた。
【００６０】
ナトリウム２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロピル（２−（５−オキソ−５−（（（５Ｓ，５ａＳ，８ａＳ，９Ｓ）−８−オキソ−９−（３，４，５−トリメトキシフェニル）−５，５ａ，６，８，８ａ，９−ヘキサヒドロフロ［３’，４’：６，７］ナフサ［２，３−ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）オキシ）ペンタンアミド）エチル）ホスフェート（２Ｔ−Ｐ）。白色の固体として２８．６％の収率、ｍｐ＝６０℃（ＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨ＝７／１）。1H NMR (CDCl3- d6) 6.83 (s, 1H), 6.53 (s, 1H), 6.39 (s, 2H), 5.98 (s, 2H), 5.91 (d, J=7.04 Hz, 1H), 5.26 (s, 1H) , 4.58 (d, J=3.32, 1H), 4.37 (s, 2H), 4.23-4.15 (m, 2H), 3.94 (s, 4H), 3.79 (d, J=19.2 Hz, 9H), 3.50 (s, 2H), 2.89-2.82 (m, 2H), 2.56-2.50 (m, 2H), 2.35-2.19 (m, 6H), 2.12-2.01 (m, 7H), 1.31 (s, 48H), 0.91-0.88 (m, 6H); 13C NMR (CDCl3- d6) 173.8, 152.6, 148.1, 147.5, 134.9, 132.4, 108.2, 101.7, 60.7, 56.2, 38.7, 34.5, 34.3, 33.5, 31.9, 29.8, 29.7, 29.4, 25, 24.9, 22.7, 14.1.
【００６１】
ナトリウム２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロピル（２−（５−（（７−（３，５−ジブロモフェニル）−８−オキソ−７，８，１０，１１−テトラヒドロベンゾ［ｈ］フロ［３，４−ｂ］キノリン−２−イル）オキシ）−５−オキソペンタンアミド）エチル）ホスフェート（２Ｔ−Ｎ）。油として２５．６％の収率、（ＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨ＝７／１）。1H NMR (CDCl3- d6) 10.56 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.89 (d, J=6.88 Hz, 1H); 7.72 (d, J=8.96 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.37-7.29 (m, 3H), 7.19 (d, J=8.8 Hz, 1H), 6.96 (d, J=8.36, 1H), 6.38 (d, J=7.08 Hz, 1H), 5.25 (s, 1H), 5.13-4.99 (m, 3H), 4.34 (d, J= , 1H), 4.02-4.01 (m, 5H), 3.51 (d, J=14.08 Hz, 2H), 3.05 (s, 3H), 2.69 (s, 2H), 2.41 (s, 2H), 2.23 (d, J=6Hz, 4H), 2.09 (s, 2H), 1.31-1.21 (m, 46H) 0.91-0.89 (m, 6H); 13C NMR (CDCl3- d6) 173.6, 173.4, 173.2, 173.2, 172.4 158.9, 156.6, 149.8, 148.8, 139.7, 132.4, 131.9, 131.2, 130.2, 129.6, 128.0, 123.7, 123.1, 121.6, 118.6, 106.4, 96.1, 66.5, 64.5, 62.5, 40.9, 39.8, 34.9, 34.2, 34.0, 32.7, 31.9, 29.7, 29.7, 29.6, 29.6, 29.4, 29.4, 29.2, 29.1, 24.9, 24.8, 22.7, 20.9, 14.1.
【００６２】
図１および図４は、トポテカンおよびシタラビンをリン脂質にカップリングするために使用される合成経路を例示している。アミノ付着（シタラビン）またはヒドロキシル付着（シタラビン、トポテカン）のいずれかを介して、リン脂質コンジュゲーションを実施することで、２尾部化トポテカン（２Ｔ−Ｔ）または２尾部化シタラビン（２Ｔ−Ｃ）を生成した。薄層クロマトグラフィーを使用して反応進行をチェックし、３：１のＣＨ2Ｃｌ2：ＭｅＯＨ（２Ｔ−Ｃ、ＮＨ2）、１：１のＣＨ2Ｃｌ2：ＭｅＯＨ（２Ｔ−Ｃ、ＯＨ）、および４：１のＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ（２Ｔ−Ｔ）を使用するクロマトグラフィー分離を介してプロドラッグを精製した。1ＨおよびＣ13核磁気共鳴分光法（ＮＭＲ）を介してプロドラッグの構造を検証し、収率が２Ｔ−Ｃ（アミノ）については２３％、２Ｔ−Ｃ（ＯＨ）については７％、および２Ｔ−Ｔについては１９％であると見出された。
【００６３】
【化３】
2021521279.tif 000005
【００６４】
（実施例２）
リポソーム懸濁液
１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）のクロロホルム溶液；１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（メトキシ（ポリエチレングリコール）２０００）アンモニウム塩（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００）；およびクロロホルム中のプロドラッグ溶液を所望のｍｏｌ％で使用して、リポソームプロドラッグ負荷脂質フィルムを調製した。脂質混合物を次いで、窒素ガス下にておよびさらに真空下にて５０℃で２時間の間乾燥させた。プロドラッグ富化脂質フィルムを１×リン酸緩衝液生理食塩水（ＰＢＳ）溶液の０．５ｍＬのアリコート中に、超音波処理浴を使用して３０分間５０℃で再懸濁することで、ＰＢＳリポソーム懸濁液１ｍＬ当たり１ｍｇの脂質を提供した。
【００６５】
（実施例３）
マイクロバブル懸濁液
２Ｔ−Ｎ負荷マイクロバブルを生成するため、１，２−ジパルミトイル（ｄｉｐａｌｍｉｔｏｌｙ）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）のクロロホルム溶液；１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスフェート（ｐｈｏｐｈａｔｅ）（一ナトリウム塩）（ＤＰＰＡ）；１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（フォレート（ポリエチレングリコール）−５０００）（アンモニウム塩）（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ５０００）；およびクロロホルム中のプロドラッグ溶液を所望のｍｏｌ％で使用して、２Ｔ−Ｎプロドラッグ負荷脂質フィルムを生成した。脂質混合物を次いで窒素ガス下にて乾燥させ、さらに真空下にて５０℃で２時間の間乾燥させた。プロドラッグ富化脂質フィルムを（８０体積％の０．１Ｍトリス、１０体積％のグリセリン、１０体積％のプロピレングリコール）トリス緩衝液の１．５ｍＬのアリコート中に、超音波処理浴を使用して３０分間５０℃で再懸濁し、トリス緩衝液リポソーム懸濁液１．５ｍＬ当たり１．５ｍｇの脂質をもたらした。密閉後、各バイアルを１０ｍＬの六フッ化硫黄（ＳＦ6）でパージした。機械的振盪器を使用して、バイアルを４５秒間振盪することで、マイクロバブルをリポソーム懸濁液から形成した。
【００６６】
（実施例４）
ナノ液滴懸濁液
ＤＳＰＣ：ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００を形成し、ペルフルオロブタンでナノ液滴（ＮＤ）を発生させるために使用した。マイクロバブル含有バイアルを５℃のＣＯ2／イソプロパノール浴中に浸し、２７Ｇの針で通気し、次いで、およそ３０ｍＬの空気（部屋から）で加圧した。バイアル含有量および浴の温度を観察することによって、脂質の凍結を防止した。
【００６７】
（実施例５）
示差走査熱量測定
各化合物についてＰＢＳ  １ｍＬ当たり２０ｍｇの脂質を使用し、増加するプロドラッグ濃度で押し出しなく、プロドラッグ負荷リポソーム（ＰＬＬ）試料を調製した。脱イオン水を較正標準として使用した。各リポソーム懸濁液から１０μＬを移し、アルミニウムＤＳＣパン中に密閉した。ＤＳＣ測定を室温で行い、試料を次いで、５℃／分で１５℃〜５５℃に加熱した。
図５は、増加する濃度とともに２Ｔ−Ｐ負荷リポソームの示差走査熱量測定曲線を示している。図６は、増加する濃度とともにＰ負荷リポソームの示差走査熱量測定曲線を示している。
【００６８】
ＤＳＣは、混合分子および組成物とリポソーム二重層との相溶性を決定することによってリポソームのような脂質薬物送達システムを設計するのに有用な熱分析技法である。変動するプロドラッグ濃度でのリポソームのサーモトロピック挙動は、分子の挿入が相転移温度を改変するかどうかを決定するために測定される。前相転移をＰＥＧ−２０００によってマスクした。空のリポソームと比較して、ＰＬＬ（２Ｔ−Ｐおよび２Ｔ−Ｎ；０〜３７ｍｏｌ％）サーモグラムは、増加するプロドラッグ組成物とともに緩減少する相転移温度を示した。Ｐ負荷およびＮ負荷リポソーム（０〜３１ｍｏｌ％）サーモグラムは、吸熱ピークの減少がほとんどから全くなく相転移温度を維持した。２Ｔ−Ｐおよび２Ｔ−Ｎ負荷リポソームの吸熱ピークの減少は、二重層中のプロドラッグの存在に起因する脂質−脂質相互作用の変化を実証した。Ｐは、薬物組み込みに対応する１３ｍｏｌ％で相転移のわずかな変化をもたらした（図７パネルＡおよび図７パネルＢ）。濃度が増加するにつれて、相転移は空のリポソームの相転移に戻った。より高い濃度のＰは、リポソームの二重層中に封入されているＰの代わりにミセルの形成をもたらした。Ｎは、相転移温度を低減しなかった。ＤＳＣ分析のために使用された全てのリポソーム懸濁液を、ナトリウム緩衝液の代わりに脱イオン水中で調製することで、所望されない相互作用を防止した。試料を押し出さなかった。
【００６９】
（実施例６）
リポソーム粒子サイズ分布および安定性アッセイ
動的光散乱（ＤＬＳ）を介して、リポソームサイズ分布を特徴付けた。リポソーム懸濁液を含有する使い捨てポリスチレンサイジングキュベットで、測定を行った。報告されているＤＬＳ測定は、３つの個々に調製されたリポソーム試料の平均である。
【００７０】
（実施例７）
２Ｔ−Ｐおよび２Ｔ−Ｎ組み込み効率測定
ＵＶ−Ｖｉｓ分光光度法；（２Ｔ−Ｐ：２９２ｎｍ；２Ｔ−Ｎ：２８５ｎｍ）を使用して、リポソームにおける親化合物およびプロドラッグ濃度を決定した。０ｍｏｌ％〜５０ｍｏｌ％の間で変動する濃度で、ＰＬＬを調製した。脂質量は、５０ｍｏｌ％未満の試料について依然として同等であった。２００ｎｍの細孔膜を介して合計１１回の通過で、各試料を押し出した。押し出し前後のリポソームをＤＭＳＯ（リポソーム懸濁液／ＤＭＳＯ、１：９、ｖ／ｖ）中の溶解によって破裂させた。試料を石英キュベットの中で分析した。以下のパラメータを使用した：走査速度：１２０ｎｍ／分；帯域幅：２ｎｍ；積分時間：０．１５秒；データ区間：０．３０ｎｍ；開始波長：５００ｎｍ；端波長：１９０ｎｍ。
ＮおよびＰ（スキーム１）は、両親媒性尾部（２Ｔ−Ｐおよび２Ｔ−Ｎ）を含有するために変更された疎水性化合物であり、ＵＶ−Ｖｉｓを使用して特徴付けすることができるリポソーム内のそれらの組み込みを変更する。この技法は、試料表面を介して、減少する透過率を測定する。変動する濃度でのリポソームの吸収（組み込まれなかった材料の除去後）は、どのくらいの薬物がリポソームに組み込まれるかを算出するために使用することができる。
【００７１】
図７パネルＡは、２Ｔ−Ｐの押し出し前後のリポソーム内の薬物組み込みを示している。図７パネルＢは、２Ｔ−Ｎの押し出し前後のリポソーム内の薬物組み込みを示している。リポソームの薬物組み込み限度を算出したところ、親化合物については＜１０ｍｏｌ％であり、プロドラッグについては４０ｍｏｌ％ほどであった。親化合物最大測定負荷は低かった（例えば、Ｐについては約１１ｍｏｌ％およびＮについては約１．１ｍｏｌ％）。
リポソーム溶液を膜に通過させることで、組み込まれなかった分子を除去した。試料を押し出し前後に分析した。両プロドラッグは２Ｔ−Ｎで高い負荷能力を達成し、９６％負荷能力を維持した（図６）。５０ｍｏｌ％を超えて、組み込みは、さらなる押し出しの不能により達成できなかった。高い標準偏差は、リポソーム内の非組み込み薬物分子に起因するリポソームの不安定性を示している。
【００７２】
動的光散乱（ＤＬＳ）を使用して時間をかけて、親化合物およびプロドラッグ負荷リポソームのサイズ分布をモニタリングした。図８パネルＡは、２Ｔ−Ｐ負荷リポソームが３週の期間の全体にわたって安定したままであったことを示している。図８パネルＢは、Ｐ負荷リポソームが３週の期間の全体にわたって安定であったことを示している。図８パネルＣは、２Ｔ−Ｎ負荷リポソームが３週の期間の全体にわたって安定したままであったことを示している。図８パネルＤは、Ｎ負荷リポソームが３週の期間の全体にわたって安定したままであったことを示している。強力な薬物をリン脂質尾部にコンジュゲートすることで、リポソームの高い負荷効率、安定性、保持、および標的化送達をもたらした。
Ｐ負荷リポソームおよびＮ負荷リポソーム濃度は、初期の薬物量を反映し、押し出し後の最終の薬物保持を反映せず、１５ｍｏｌ％を超えなかった（図７パネルＡおよび図７パネルＢ）。
【００７３】
プロドラッグ負荷リポソームサイズ分布は、プロドラッグが最小の漏出でリポソーム内に残ったことを実証した。押し出しが、過剰の非組み込み薬物粒子の存在により完了するのが不可能になった場合、完全飽和が観察された。負荷効率およびカプセル化安定性の両方を増加させることで、化学分解を最小化し、親油性ビヒクル中の実現可能なプロドラッグを可能にする。可溶性は、親水性尾部を付加することおよび疎水性薬物を親油性プロドラッグに変換するによって増加された。変換は、高い封入、低い漏出、および化学的安定性をもたらした。
【００７４】
（実施例８）
リポソーム中の２Ｔ−Ｔ組み込み
２Ｔ−Ｔリポソームを２Ｔ−Ｔの増加する濃度で生成し、押出機に通過させることで、任意の非組み込み２Ｔ−Ｔをリポソーム溶液から除去した。２００ｎｍ〜５００ｎｍの走査範囲、２ｎｍの帯域幅、３０秒の積分時間、０．５ｎｍのデータ区間、および１００ｎｍ／分の走査速度を用いるＵＶ−ｖｉｓ分光法を使用して、押し出しの前後両方で、リポソーム溶液を分析した。図９および表１において見ることができる通り、押し出し後に存在する２Ｔ−Ｔの量は、押し出し前の薬物濃度と同様であり、最小のプロドラッグ損失を示している。組み込み限度を最大７０ｍｏｌ％（１４７ｕＭ）まで分析した。
【００７５】
押し出し前後の両方でのＤＬＳ測定を介して、２Ｔ−Ｔリポソームのサイズ分布を特徴付けた。リポソーム直径の標準偏差は、押し出し後のほうが低かった。この結果は、リポソームの単分散集団の増加を示した。様々な濃度の２Ｔ−Ｔで負荷された２Ｔ−Ｔリポソームのサイズ分布は、表２および図１０〜１１で見ることができる。
【００７６】
【表１】
2021521279.tif 000006
【表２】
2021521279.tif 000007
【００７７】
（実施例９）
２Ｔ−Ｃリポソームサイズ分布
２Ｔ−Ｃリポソームを２Ｔ−Ｃの増加する濃度で生成し、押出機に通過させることで、任意の非組み込み２Ｔ−Ｃをリポソーム溶液から除去した。押し出し前後の両方でＤＬＳ測定を介して、２Ｔ−Ｃリポソームのサイズ分布を特徴付けた。リポソーム直径の標準偏差は、押し出し後のほうが低かった。この結果は、リポソームの単分散集団の増加を示した。様々な濃度の２Ｔ−Ｃで負荷された２Ｔ−Ｃリポソームのサイズ分布は、表３および図１２〜１３で見ることができる。
【００７８】
【表３】
2021521279.tif 000008
【００７９】
（実施例１０）
細胞培養
１０％のＦＢＳ、１００ｍｇ／ＬのペニシリンＧ、および１００ｍｇ／Ｌのストレプトマイシンが補充されているＤＭＥＭ中で、ヒト子宮頸がん（ＡＴＣＣ  Ｓ３）（ＨｅＬａ）細胞を培養した。１．０ｍＭのピルビン酸ナトリウム、１％のＧｌｕｔａＭａｘ−１、１００μｇ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン、および１０％のＦＢＳが補充されたＤＭＥＭ中で、ヒト乳癌腫（ＭＣＦ−７）細胞を培養した。５％のＣＯ2を有する加湿雰囲気中にて３７℃で、細胞をインキュベートした。５％のＦＢＳ、上皮成長因子（２０ｎｇ／ｍＬ）、ヒドロコルチゾン（０．５ｕｇ／ｍＬ）、コレラ毒素（１００ｎｇ／ｍＬ）、インスリン（１０ｕｇ／ｍＬ）、およびＰｅｎＳｔｒｅｐが補充されたＲＰＭＩ中で、ＭＣＦ１０Ａ細胞を培養した。
【００８０】
（実施例１１）
２Ｔ−Ｐおよび２Ｔ−Ｎプロドラッグ負荷リポソームのインビトロ細胞毒性
９６ウェルプレート中４，０００細胞／ウェル（ＨｅＬａ、ＭＣＦ７、ＭＣＦ１０ａ）で、細胞を播種し、２４時間の間３７℃および５％のＣＯ2でインキュベートした。インキュベーションに続いて、培地を交換し、細胞をＰＬＬ処置群および親化合物処置群に並列して分割した。２体積％のＰＬＬ懸濁液（プロドラッグ／脂質、０．２ｍｏｌ％）または１μＭの親化合物のいずれかで始まる２倍希釈系列のＰＬＬで、細胞を処置した。ＰＬＬ基陽性対照は以下の通りであった：非処置、空のリポソーム（薬物なし、２体積％）、および酸化フェニルアルシン（ＰＡＯ）。親化合物群陽性対照は以下の通りであった：非処置、ＤＭＳＯおよびＰＡＯ。インキュベーションの４８時間後に、２０μＬの３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ、５ｍｇ／ｍＬ）を各ウェルに添加し、ウェルを２時間の間インキュベートした。培地を１００μＬのＤＭＳＯと交換し、ホルマザン結晶を溶解させた。マイクロプレートリーダーを使用して、５９５ｎｍでの吸光度を測定した。実験を４つのレプリケートで行い、２回反復した。
【００８１】
ＨｅＬａ、ＭＣＦ−７およびＭＣＦ１０Ａ細胞株について標準的なＭＴＴアッセイを使用して、プロドラッグ負荷リポソーム（２０ｍｏｌ％）および親化合物の細胞毒性を検査した。２Ｔ−Ｎ負荷リポソームは効力を維持し、他方、２Ｔ−Ｐ負荷リポソームは活性を失った。活性の低減は、２Ｔ−Ｐリポソーム構造内の立体障害に起因した。対照として、正常の乳房細胞株を研究することで、細胞をプロドラッグ負荷リポソームおよび親化合物負荷リポソームに曝露した場合のがん細胞分化を検証した。２Ｔ−Ｐ負荷リポソームの毒性は、親化合物Ｐと比較して、試験された全ての細胞株において有意に低減された。２Ｔ−Ｎ負荷リポソームは、ＨｅＬａ細胞（０．０２０μＭ）内で効力を維持したが、ＭＣＦ７（０．０３８μＭ）細胞において効力の低減を呈した。ＭＣＦ１０Ａ細胞における２Ｔ−Ｎ負荷リポソームの効力は、実質的に（１．１０５μＭ）減少された。表４は、遊離親化合物またはプロドラッグ組み込みリポソームを用いる処置の４８時間後のＨｅＬａ、ＭＣＦ−７およびＭＣＦ１０Ａ細胞株の細胞生存能データを示している。
【表４】
2021521279.tif 000009
【００８２】
（実施例１２）
２Ｔ−Ｔおよび２Ｔ−Ｃプロドラッグ負荷リポソームのインビトロ細胞毒性
２Ｔ−Ｔプロドラッグ負荷リポソームの細胞毒性を判定するため、ＨｅＬａ細胞を異なる濃度のトポテカンまたは２Ｔ−Ｔ負荷リポソームに７２時間の間曝露した。７２時間のインキュベーション期間後、ＭＴＴアッセイを介して細胞生存能を判定した。図１４において見ることができる通り、遊離トポテカンのＩＣ50は、５１±１ｎＭであることが見出され、一方、２Ｔ−ＴリポソームのＩＣ50は、２６３±４３０ｎＭであった。
【００８３】
２Ｔ−Ｃプロドラッグ負荷リポソームの細胞毒性を判定するため、ＨｅＬａ細胞を異なる濃度のシタラビンまたは２Ｔ−Ｃ（ＮＨ2付着）負荷リポソームに４８時間の間曝露した。４８時間のインキュベーション期間後、ＭＴＴアッセイを介して細胞生存能を判定した。図１５において見ることができる通り、遊離シタラビンのＩＣ50は、４．４５±６．２９μＭであると見出され、一方、２Ｔ−ＣリポソームのＩＣ50は、４８．５４±１７．８９μＭであった。
【００８４】
（実施例１３）
インビトロ超音波
０ｍｏｌ％および２０ｍｏｌ％のプロドラッグ濃度で発生させたマイクロバブルを遠心分離によって０．３ｒｃｆで１０分間精製した。上澄み（マイクロバブル）およびリポソームを分離させた。上澄みを培養培地中にて血清で１２時間の間インキュベートし、再び遠心分離で回転させた。ＨｅＬａ細胞を６ウェルプレート中のカバーガラス上に１２０，０００細胞／ウェルで播種した。一旦コンフルエントな細胞が観察されると、カバーガラスを、細胞プレートチャンバー中に２μＬのマイクロバブル：３ｍＬの培地と接触させて設置した。チャンバーを別のカバーガラスで密閉し、超音波チャンバーに入れ、１８パルスの超音波に曝露した。カバーガラスを次いで、直ちに培地で３回洗浄することで、過剰のマイクロバブルを除去した。インキュベーションの２０時間後に、顕微鏡を使用して明視野で、細胞プレートを画像化した。非処置を対照として使用し、反転させた細胞プレートを使用して、超音波曝露の非存在下で０ｍｏｌ％および２０ｍｏｌ％のプロドラッグ負荷マイクロバブルとの接触を容易にした。
【００８５】
集中的な薬物放出のため、超音波を使用して、プロドラッグをマイクロバブル中に組み込んだ。図１６は、プロドラッグ負荷マイクロバブルのインビトロ超音波トリガー送達を示している。マイクロバブルを精製し、血清中でインキュベートし、再び精製した後に試験した。マイクロバブルは血清で分離しなかった。超音波を使用する局在化マイクロバブル送達のインビトロ細胞毒性は、２Ｔ−Ｎ注入マイクロバブルの、局在化されるとともに超音波トリガーされた送達を検証した。空のマイクロバブルおよびプロドラッグ負荷マイクロバブルを、超音波なしの対照のためのＨｅＬａ細胞と接触させて置くことで、超音波を使用する局在化を確認した（図１６、左のカラム）。空のおよび２Ｔ−Ｐ負荷マイクロバブルならびに超音波処理細胞は、超音波曝露および超音波非曝露部域において依然としてコンフルエントであった。２Ｔ−Ｎ負荷マイクロバブルおよび超音波処理細胞は、超音波曝露部域において減少したが、超音波非曝露部域において依然としてコンフルエントであった。
【００８６】
（実施例１４）
酵素アッセイ
蛍光分光光度計を使用して、酵素的切断を定性的に測定した。ブタ肝臓エステラーゼを１×ＰＢＳ中で濃縮ストック溶液から１．２×１０-7Ｍに希釈し、−２０℃で貯蔵した。時間ゼロで、１００μＬの空のまたはＰＬＬを１００μＬのキュベットに入れ、５μＬのエステラーゼを添加した。溶液を蛍光分光光度計で直ちに測定した。試料を再び６０分で測定した。以下のパラメータを使用した：培地走査速度、２秒の応答時間、１ｎｍの試料採取区間、３ｎｍの励起スリット幅、２０ｎｍの発光スリット幅、高感受性、２５０ｎｍの励起波長、および２８０ｎｍ〜６００ｎｍの発光範囲。
【００８７】
図１７は、ブタ肝臓エステラーゼを用いる処置の有無において異なる時点での２Ｔ−Ｎ負荷リポソームの蛍光スペクトルを示している。表５は、エステラーゼ処置に続く空のおよび２Ｔ−Ｎリポソームのサイズの変化を示している。図１８は、ブタ肝臓エステラーゼを用いる処置の有無における異なる時点での空のリポソームの蛍光スペクトルを示している。図１９は、ブタ肝臓エステラーゼを用いる処置の有無における異なる時点でのＰＢＳ溶液の蛍光スペクトルを示している。
【表５】
2021521279.tif 000010
【００８８】
実施形態
以下の非限定的な実施形態は、本発明の例示的な例を提供しているが、本発明の範疇を限定するものでない。
実施形態１．ａ）プロドラッグを含む表面層であって、プロドラッグが、リン脂質に共有結合的にコンジュゲートされている治療剤を含む、表面層；およびｂ）コアであって、表面層が囲むコアを含む、脂質ベース担体。
実施形態２．マイクロバブルである、実施形態１の脂質ベース担体。
実施形態３．表面層が脂質単層である、実施形態１または２の脂質ベース担体。
実施形態４．コアがガスである、実施形態１〜３のいずれか１つの脂質ベース担体。
実施形態５．ガスが六フッ化硫黄（ＳＦ6）である、実施形態４の脂質ベース担体。
実施形態６．コアが固体である、実施形態１または３の脂質ベース担体。
実施形態７．固体が金属である、実施形態６の脂質ベース担体。
実施形態８．固体が半導体である、実施形態６の脂質ベース担体。
実施形態９．コアが液体である、実施形態１または３の脂質ベース担体。
実施形態１０．コアが有機材料である、実施形態１〜３のいずれか１つの脂質ベース担体。
実施形態１１．コアが無機材料である、実施形態１〜３のいずれか１つの脂質ベース担体。
実施形態１２．コアが水溶液である、実施形態１または３の脂質ベース担体。
実施形態１３．リポソームである、実施形態１または４〜１２のいずれか１つの脂質ベース担体。
実施形態１４．表面層が脂質二重層である、実施形態１、２または４〜１３のいずれか１つの脂質ベース担体。
実施形態１５．約７０ｎｍ〜約９００ｎｍの直径を有する、実施形態１〜１４のいずれか１つの脂質ベース担体。
実施形態１６．プロドラッグが、約１ｍｏｌ％〜約１００ｍｏｌ％の量で存在する、実施形態１〜１５のいずれか１つの脂質ベース担体。
実施形態１７．リン脂質が２尾部化リン脂質である、実施形態１〜１６のいずれか１つの脂質ベース担体。
実施形態１８．リン脂質が、約１０個の炭素原子〜約２４個の炭素原子を含む疎水性尾部を含む、実施形態１〜１７のいずれか１つの脂質ベース担体。
実施形態１９．リン脂質が、約１６個の炭素原子を含む疎水性尾部を含む、実施形態１〜１８のいずれか１つの脂質ベース担体。
実施形態２０．治療剤が抗がん剤である、実施形態１〜１９のいずれか１つの脂質ベース担体。
実施形態２１．抗がん剤がトポテカンである、実施形態２０の脂質ベース担体。
実施形態２２．抗がん剤がシタラビンである、実施形態２０の脂質ベース担体。
【００８９】
実施形態２３．治療剤が、式：
【化４】
2021521279.tif 000011
の化合物である、実施形態１〜１９のいずれか１つの脂質ベース担体。
【００９０】
実施形態２４．治療剤が、式：
【化５】
2021521279.tif 000012
の化合物である、実施形態１〜１９のいずれか１つの脂質ベース担体。
実施形態２５．治療剤が抗ウイルス剤である、実施形態１〜１９のいずれか１つの脂質ベース担体。
実施形態２６．治療剤が抗細菌剤である、実施形態１〜１９のいずれか１つの脂質ベース担体
実施形態２７．治療剤が神経伝達物質である、実施形態１〜１９のいずれか１つの脂質ベース担体。
実施形態２８．治療剤がタンパク質である、実施形態１〜１９のいずれか１つの脂質ベース担体。
実施形態２９．治療剤が生物剤である、実施形態１〜１９のいずれか１つの脂質ベース担体。
実施形態３０．治療剤がゲムシタビンである、実施形態１〜１９のいずれか１つの脂質ベース担体。
実施形態３１．治療剤がキレート化剤である、実施形態１〜１９のいずれか１つの脂質ベース担体。
実施形態３２．表面層が、ＤＰＰＣをさらに含む、実施形態１〜３１のいずれか１つの脂質ベース担体。
実施形態３３．表面層が、ＤＰＰＡをさらに含む、実施形態１〜３２のいずれか１つの脂質ベース担体。
実施形態３４．表面層が、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００をさらに含む、実施形態１〜３３のいずれか１つの脂質ベース担体。
実施形態３５．表面層が、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ５０００をさらに含む、実施形態１〜３４のいずれか１つの脂質ベース担体。
実施形態３６．リン脂質が活性化リン脂質である、実施形態１〜３５のいずれか１つの脂質ベース担体。
実施形態３７．活性化リン脂質がＧｌｕ−リン脂質である、実施形態３６の脂質ベース担体。
実施形態３８．活性化リン脂質がＮＨＳ−リン脂質である、実施形態３６の脂質ベース担体。
実施形態３９．活性化リン脂質がＰＤＰ−リン脂質である、実施形態３６の脂質ベース担体。
実施形態４０．活性化リン脂質がＭＡＬ−リン脂質である、実施形態３６の脂質ベース担体。
実施形態４１．活性化リン脂質がＮＢＤ−リン脂質である、実施形態３６の脂質ベース担体。
実施形態４２．Ｇｌｕ−リン脂質がＤＰＰＥ−Ｇｌｕである、実施形態３７の脂質ベース担体。
実施形態４３．治療剤が、エステル結合によってリン脂質に共有結合的にコンジュゲートされている、実施形態１〜４２のいずれか１つの脂質ベース担体。
実施形態４４．治療剤が、アミド結合によってリン脂質に共有結合的にコンジュゲートされている、実施形態１〜４２のいずれか１つの脂質ベース担体。
【００９１】
実施形態４５．状態を処置する方法であって、該方法が、脂質ベース担体の治療有効量を、それを必要とする対象に投与することを含み、該脂質ベース担体が：ａ）はプロドラッグを含む表面層であって、プロドラッグが、リン脂質に共有結合的にコンジュゲートされている治療剤を含む、表面層；およびｂ）コアであって、表面層が囲むコアを含む、方法。
実施形態４６．脂質ベース担体がマイクロバブルである、実施形態４５の方法。
実施形態４７．表面層が脂質単層である、実施形態４５または４６の方法。
実施形態４８．コアがガスである、実施形態４５〜４７のいずれか１つの方法。
実施形態４９．ガスが六フッ化硫黄（ＳＦ6）である、実施形態４８の方法。
実施形態５０．コアが固体である、実施形態４５または４７の方法。
実施形態５１．固体が金属である、実施形態５０の方法。
実施形態５２．固体が半導体である、実施形態５０の方法。
実施形態５３．コアが液体である、実施形態４５または４７の方法。
実施形態５４．コアが有機材料である、実施形態４５〜４７のいずれか１つの方法。
実施形態５５．コアが無機材料である、実施形態４５〜４７のいずれか１つの方法。
実施形態５６．コアが水溶液である、実施形態４５または４７の方法。
実施形態５７．脂質ベース担体がリポソームである、実施形態４５または４８〜５６のいずれか１つの方法。
実施形態５８．表面層が脂質二重層である、実施形態４５、４６または４８〜５７のいずれか１つの方法。
実施形態５９．脂質ベース担体が、約７０ｎｍ〜約９００ｎｍの直径を有する、実施形態４５〜５８のいずれか１つの方法。
実施形態６０．プロドラッグが、約１ｍｏｌ％〜約１００ｍｏｌ％の量で存在する、実施形態４５〜５９のいずれか１つの方法。
実施形態６１．リン脂質が２尾部化リン脂質である、実施形態４５〜６０のいずれか１つの方法。
実施形態６２．リン脂質が、約１０個の炭素原子〜約２４個の炭素原子を含む疎水性尾部を含む、実施形態４５〜６１のいずれか１つの方法。
実施形態６３．リン脂質が、約１６個の炭素原子を含む疎水性尾部を含む、実施形態４５〜６２のいずれか１つの方法。
実施形態６４．治療剤が抗がん剤である、実施形態４５〜６３のいずれか１つの方法。
実施形態６５．抗がん剤がトポテカンである、実施形態６４の方法。
実施形態６６．抗がん剤がシタラビンである、実施形態６４の方法。
【００９２】
実施形態６７．治療剤が、式：
【化６】
2021521279.tif 000013
の化合物である、実施形態４５〜６３のいずれか１つの方法。
【００９３】
実施形態６８．治療剤が、式：
【化７】
2021521279.tif 000014
の化合物である、実施形態４５〜６３のいずれか１つの方法。
実施形態６９．治療剤が抗ウイルス剤である、実施形態４５〜６３のいずれか１つの方法。
実施形態７０．治療剤が抗細菌剤である、実施形態４５〜６３のいずれか１つの方法。
実施形態７１．治療剤が神経伝達物質である、実施形態４５〜６３のいずれか１つの方法。
実施形態７２．治療剤がタンパク質である、実施形態４５〜６３のいずれか１つの方法。
実施形態７３．治療剤が生物剤である、実施形態４５〜６３のいずれか１つの方法。
実施形態７４．治療剤がゲムシタビンである、実施形態４５〜６３のいずれか１つの方法。
実施形態７５．治療剤がキレート化剤である、実施形態４５〜６３のいずれか１つの方法。
実施形態７６．表面層が、ＤＰＰＣをさらに含む、実施形態４５〜７５のいずれか１つの方法。
実施形態７７．表面層が、ＤＰＰＡをさらに含む、実施形態４５〜７６のいずれか１つの方法。
実施形態７８．表面層が、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００をさらに含む、実施形態４５〜７７のいずれか１つの方法。
実施形態７９．表面層が、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ５０００をさらに含む、実施形態４５〜７８のいずれか１つの方法。
実施形態８０．リン脂質が活性化リン脂質である、実施形態４５〜７９のいずれか１つの方法。
実施形態８１．活性化リン脂質がＧｌｕ−リン脂質である、実施形態８０の方法。
実施形態８２．活性化リン脂質がＮＨＳ−リン脂質である、実施形態８０の方法。
実施形態８３．活性化リン脂質がＰＤＰ−リン脂質である、実施形態８０の方法。
実施形態８４．活性化リン脂質がＭＡＬ−リン脂質である、実施形態８０の方法。
実施形態８５．活性化リン脂質がＮＢＤ−リン脂質である、実施形態８０の方法。
実施形態８６．Ｇｌｕ−リン脂質がＤＰＰＥ−Ｇｌｕである、実施形態８１の方法。
実施形態８７．治療剤が、エステル結合によってリン脂質に共有結合的にコンジュゲートされている、実施形態４５〜８６のいずれか１つの方法。
【００９４】
実施形態８８．治療剤が、アミド結合によってリン脂質に共有結合的にコンジュゲートされている、実施形態４５〜８６のいずれか１つの方法。
実施形態８９．体外トリガーを対象に適用することをさらに含む、実施形態４５〜８９のいずれか１つの方法。
実施形態９０．体外トリガーが超音波周波数である、実施形態８９の方法。
実施形態９１．超音波周波数が約１ＭＨｚ〜約２０ＭＨｚである、実施形態９０の方法。
実施形態９２．体外トリガーが光である、実施形態８９の方法。
実施形態９３．光が、約４００ｎｍ〜約１４００ｎｍの波長を有する、実施形態９２の方法。
実施形態９４．体外トリガーが電場である、実施形態８９の方法。
実施形態９５．体外トリガーが磁場である、実施形態８９の方法。
実施形態９６．磁場が、約０．２Ｔ〜約７Ｔの強度を有する、実施形態９５の方法。
実施形態９７．体外トリガーがパルスで適用される、実施形態８９〜９６のいずれか１つの方法。
実施形態９８．投与が静脈内である、実施形態４５〜９７のいずれか１つの方法。
実施形態９９．投与が腫瘍内である、実施形態４５〜９７のいずれか１つの方法。
実施形態１００．投与が皮下である、実施形態４５〜９７のいずれか１つの方法。
実施形態１０１．投与が動脈内である、実施形態４５〜９７のいずれか１つの方法。
【図１】
2021521279.tif 000019
【図２】
2021521279.tif 000020
【図３】
2021521279.tif 000021
【図４】
2021521279.tif 000022
【図５】
2021521279.tif 000023
【図６】
2021521279.tif 000024
【図７】
2021521279.tif 000025
【図８】
2021521279.tif 000026
【図９】
2021521279.tif 000027
【図１０】
2021521279.tif 000028
【図１１】
2021521279.tif 000029
【図１２】
2021521279.tif 000030
【図１３】
2021521279.tif 000031
【図１４】
2021521279.tif 000032
【図１５】
2021521279.tif 000033
【図１６】
2021521279.tif 000034
【図１７】
2021521279.tif 000035
【図１８】
2021521279.tif 000036
【図１９】
2021521279.tif 000037
【国際調査報告】
2021521279.tif 000038
2021521279.tif 000039
2021521279.tif 000040