(57)【要約】本発明は、抗体薬物コンジュゲートのための投薬レジメン、並びに造血細胞（例えば、造血幹細胞等）、免疫細胞又はがん細胞が発現する抗原に結合することができる抗体薬物コンジュゲート(ADC)を投与することによる、とりわけ、自己免疫疾患、がん、及び移植片対宿主病(GvHD)のような種々の疾患及び症状に、罹患しているか又はリスクがある患者へ、前記投薬レジメンを処方する方法、に関する。【選択図】図１
2021526525.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト患者におけるターゲット細胞の集団を減少させる方法、ここで、前記方法は、以下の工程を含む投薬レジメンを含む：
(a)1日目に抗体薬物コンジュゲート(ADC)の第1の用量を前記患者に投与すること；及び
(b)第1の用量後に前記ADCの第2の用量を前記患者に投与すること；
ここで、前記ADCは、リンカーを介してアマトキシンにコンジュゲートした抗体又はその抗原結合フラグメントを含む、
ここで、前記ADCは細胞表面マーカーに対して特異的である、及び
ここで、前記投薬レジメンは、ヒト患者において、前記ターゲット細胞の集団の減少を誘導する。
【請求項２】
請求項1に記載の方法、ここで、前記第1の用量が、約2〜12 mgのADC、約2〜11 mgのADC、約2〜10 mgのADC、約2〜9 mgのADC、約2〜8 mgのADC、約2〜7 mgのADC、約2〜6 mgのADC、約2~5 mgのADC、約2〜4 mgのADC、及び約2〜3 mgのADCからなる群より選択される。
【請求項３】
請求項1に記載の方法、ここで、前記第1の用量が、約1.9~11.5 mgのADCを含む。
【請求項４】
請求項1に記載の方法、ここで、前記第2の用量が、前記第1の用量の10重量%以内である、又はここで、前記第2の用量が前記第1の用量と同じである。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した後1〜24時間の間に投与する。
【請求項６】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した後1〜12日の間に投与する。
【請求項７】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記ターゲット細胞が幹細胞である。
【請求項８】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記ターゲット細胞が免疫細胞である。
【請求項９】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記ターゲット細胞が疾患を引き起こす細胞である。
【請求項１０】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法、ここで、細胞マーカーが、CD117、CD45、CD2、CD5、CD252、及びCD137からなる群より選択される。
【請求項１１】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号(SEQ ID NO)：106に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：107に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【請求項１２】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号(SEQ ID NO)：150に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：151に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【請求項１３】
ヒト患者におけるターゲット細胞の集団を減少させる方法、ここで、前記方法は、以下の工程を含む投薬レジメンを含む：
(a)1日目に抗体薬物コンジュゲート(ADC)の第1の用量を前記患者に投与すること、
ここで、前記第1の用量は、約0.3 mg/kg、約0.6 mg/kg、約0.03~0.29 mg/kgのADC、約0.03~0.25 mg/kgのADC、約0.03~0.20 mg/kgのADC、約0.03~0.15 mg/kgのADC、約0.03~0.10 mg/kgのADC、約0.05~0.10 mg/kgのADC、及び約0.05~0.07 mg/kgのADC；並びに
(b)前記第1の用量後に、前記ADCの第2の用量を前記患者に投与すること；
ここで、前記ADCは、リンカーを介してアマトキシンにコンジュゲートした抗体又はその抗原結合フラグメントを含む、
ここで、前記ADCは細胞表面マーカーに対して特異的である、及び
ここで、前記投薬レジメンは、ヒト患者において、前記ターゲット細胞の集団の減少を誘導する。
【請求項１４】
請求項１３に記載の方法、ここで、前記第1の用量が約0.03~0.29 mg/kgである。
【請求項１５】
請求項１３に記載の方法、ここで、前記第1の用量が約0.03~0.19 mg/kgのADCを含む。
【請求項１６】
請求項１３に記載の方法、ここで、前記第2の用量が前記第1の用量の10重量%以内である、又はここで、前記第2の用量が前記第1の用量と同じ重量である。
【請求項１７】
請求項１３〜１６のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した後1~24時間の間に投与する。
【請求項１８】
請求項１３〜１６のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した後1~12日の間に投与する。
【請求項１９】
請求項１３〜１６のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記ターゲット細胞が幹細胞である。
【請求項２０】
請求項１３〜１６のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記ターゲット細胞が免疫細胞である。
【請求項２１】
請求項１３〜１６のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記ターゲット細胞が疾患を引き起こす細胞である。
【請求項２２】
請求項１３〜１６のいずれか一項に記載の方法、ここで、細胞マーカーが、CD117、CD45、CD2、CD5、CD252、及びCD137からなる群より選択される。
【請求項２３】
請求項１３〜１６のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号(SEQ ID NO)：106に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：107に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【請求項２４】
請求項１３〜１６のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号(SEQ ID NO)：150に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：151に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【請求項２５】
移植コンディショニングのために、ヒト患者におけるターゲット細胞の集団を減少させる方法、ここで、前記方法は、以下の工程を含む投薬レジメンを含む： 
(a)1日目に抗体薬物コンジュゲート(ADC)の第1の用量を前記患者に投与すること；及び
(b)第1の用量後に前記ADCの第2の用量を前記患者に投与すること；
ここで、前記ADCは、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗体又はその抗原結合フラグメントを含む、
ここで、前記ADCは、CD117、CD45、CD137、CD2、CD252又はCD5から選択される細胞表面マーカーに特異的である、及び
ここで、前記投薬レジメンは、移植コンディショニングのために、ヒト患者におけるターゲット細胞の集団の減少を誘導する。
【請求項２６】
請求項２５に記載の方法、ここで、前記細胞毒素は、抗有糸分裂薬剤又はRNAポリメラーゼ阻害剤である。
【請求項２７】
請求項２６に記載の方法、ここで、前記RNAポリメラーゼ阻害剤がアマトキシンである。
【請求項２８】
請求項１〜２４又は２６のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記RNAポリメラーゼ阻害剤がアマニチンである。
【請求項２９】
請求項２８に記載の方法、ここで、前記アマニチンが、α-アマニチン、β-アマニチン、γ-アマニチン、ε-アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、及びプロアマヌリンからなる群より選択される。
【請求項３０】
請求項２７に記載の方法、ここで、前記アマトキシンが、式(I)で表される
【化１】
2021526525.tif 000075
ここで、R1はH、OH、ORA、又はORCである；
R2はH、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、任意選択的に置換された5員ヘテロシクロルアルキル基を形成する；
R3はH、RC、又はRDである；
R4、R5、R6, 及びR7は、それぞれ独立してH、OH、ORC、ORD、RC、又はRDである；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、又はNRCRDである；
R9はH、OH、ORC、又はORDである；
Xは-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；
RCは-L-Zである；
RDは、置換されたC1-C6アルキル、置換されたC1-C6ヘテロアルキル、置換されたC2-C6アルケニル、置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、置換されたC2-C6アルキニル、置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、置換されたシクロアルキル、置換されたヘテロシクロアルキル、置換されたアリール、又は置換されたヘテロアリールである；
Lは、リンカーを含むペプチドである；及び、
Zは、L上に存在する反応性置換基と、前記抗体、又はその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的な部分構造である。
【請求項３１】
請求項２５に記載の方法、ここで、前記細胞毒素がPBD、メイタンシン又はアウリスタチンである。
【請求項３２】
請求項３１に記載の方法、ここで、前記アウリスタチンが、モノメチル・アウリスタチンF(MMAF)又はモノメチル・アウリスタチンE(MMAE)である。
【請求項３３】
請求項２５〜３２のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記HSCの細胞表面マーカーがCD117である。
【請求項３４】
請求項３３に記載の方法、ここで、前記抗体がCD117に結合する、並びに
a)  配列番号(SEQ ID NO)：106に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：107に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む；又は
b)  配列番号(SEQ ID NO)：150に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：151に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【請求項３５】
請求項１、１３、又は２５のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記抗体が、D265C変異(EUインデックスによる)を含むFc領域を含む。
【請求項３６】
請求項３５に記載の方法、ここで、前記抗体がH435A変異(EUインデックスによる)を含む。
【請求項３７】
請求項１〜３６のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記ADCのリンカーが、N-ベータ-マレイミドプロピル-Val-Ala-パラ-アミノベンジル(BMP-Val-Ala-PAB)である。
【請求項３８】
請求項１、１３、又は２５のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約1時間後に投与する。
【請求項３９】
請求項１、１３、又は２５のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約2時間後に投与する。
【請求項４０】
請求項１、１３、又は２５のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約3時間後に投与する。
【請求項４１】
請求項１、１３、又は２５のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約4時間後に投与する。
【請求項４２】
請求項１、１３、又は２５のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約5時間後に投与する。
【請求項４３】
請求項１、１３、又は２５のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約6時間後に投与する。
【請求項４４】
請求項１、１３、又は２５のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約7時間後に投与する。
【請求項４５】
請求項１、１３、又は２５のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約8時間後に投与する。
【請求項４６】
請求項１、１３、又は２５のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約1日後に投与する。
【請求項４７】
請求項１、１３、又は２５のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約2日後に投与する。
【請求項４８】
請求項１、１３、又は２５のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約3日後に投与する。
【請求項４９】
請求項１、１３、又は２５のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記患者は,
前記ADCが前記患者の血中から実質的にクリアランスされたときに、幹細胞移植を更に受ける。
【請求項５０】
請求項１、１３、又は２５のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記ADCを投与するための投薬レジメンが、本質的に工程a)及びb)からなる。
【請求項５１】
前記ヒト患者に細胞移植を施すことを更に含む、請求項１、１３、又は２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
請求項５１に記載の方法、ここで、前記細胞移植が造血幹細胞(HSC)移植である。
【請求項５３】
請求項１、１３、又は２５のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記方法が非-骨髄除去性である。
【請求項５４】
請求項１、１３、又は２５のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記患者から決定される肝臓マーカーが毒性レベルに達しない。
【請求項５５】
請求項５４に記載の方法、ここで、前記肝臓マーカーが、AST、ALT、又はLDHである。
【請求項５６】
請求項１、１３、又は２５のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記患者から決定される肝臓マーカーが、前記第1の用量を投与した後、5~7日間、上昇する。
【請求項５７】
請求項１、１３、又は２５のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記患者から決定される肝臓マーカーが、前記第1の用量を投与した後、6日間、上昇する。
【請求項５８】
請求項１、１３、又は２５のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記患者の血中AST、ALT、又はLDHレベルのうちの少なくとも1つが、前記患者に対する、前記第1の用量の投与と前記第1の用量の投与後14日との間に、毒性レベルに達しない。
【請求項５９】
請求項５６〜５８のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記肝臓マーカーがASTである。
【請求項６０】
ヒト患者におけるターゲット細胞の集団を減少させる方法、ここで、前記方法は、以下の工程を含む投薬レジメンを含む：
抗体薬物コンジュゲート(ADC)の第2の用量を、前記患者に、前記ADCの第1の用量を投与した後、1~14日以内に、前記患者に投与すること；
ここで、前記ADCは、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗体又はその抗原結合フラグメントを含む；
ここで、前記ADCは細胞表面マーカーに特異的である；
ここで、前記投薬レジメンは、ヒト患者において、前記ターゲット細胞の集団の減少を誘導する；並びに
前記患者の血中AST、ALT、又はLDHレベルの少なくとも1つが、前記患者に対する、前記第1の用量の投与と前記第1の用量の投与後14日との間に、毒性レベルに達しない。
【請求項６１】
ヒト患者におけるターゲット細胞の集団を減少させる方法、ここで、前記方法は、以下の工程を含む投薬レジメンを含む：
抗体薬物コンジュゲート(ADC)の第2の用量を、前記患者に、前記ADCの第1の用量を投与した後、1~14日以内に、前記患者に投与すること；
ここで、前記ADCは、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗体又はその抗原結合フラグメントを含む；
ここで、前記ADCは細胞表面マーカーに特異的である；
ここで、前記投薬レジメンは、ヒト患者において、前記ターゲット細胞の集団の減少を誘導する；並びに
前記患者の血中AST、ALT、又はLDHレベルの少なくとも1つが、前記患者に対する、前記第1の用量の投与と前記第1の用量の投与後14日との間に、正常レベルの3倍よりも大きく上昇しない。
【請求項６２】
請求項６０又は６１に記載の方法、ここで、前記細胞毒素が抗有糸分裂薬剤又はRNAポリメラーゼ阻害剤である。
【請求項６３】
請求項６２に記載の方法、ここで、前記RNAポリメラーゼ阻害剤がアマトキシンである。
【請求項６４】
請求項６３に記載の方法、ここで、前記アマトキシンが、式(I)で表される
【化２】
2021526525.tif 000076
ここで、R1はH、OH、ORA、又はORCである；
R2はH、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、任意選択的に置換された5員ヘテロシクロルアルキル基を形成する；
R3はH、RC、又はRDである；
R4、R5、R6, 及びR7は、それぞれ独立してH、OH、ORC、ORD、RC、又はRDである；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、又はNRCRDである；
R9はH、OH、ORC、又はORDである；
Xは-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；
RCは-L-Zである；
RDは、置換されたC1-C6アルキル、置換されたC1-C6ヘテロアルキル、置換されたC2-C6アルケニル、置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、置換されたC2-C6アルキニル、置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、置換されたシクロアルキル、置換されたヘテロシクロアルキル、置換されたアリール、又は置換されたヘテロアリールである；
Lは、リンカーを含むペプチドである；及び、
Zは、L上に存在する反応性置換基と、前記抗体、又はその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的な部分構造である。
【請求項６５】
請求項６０又は６１に記載の方法、ここで、前記細胞毒素がPBD、メイタンシン又はアウリスタチンである。
【請求項６６】
請求項６５に記載の方法、ここで、前記アウリスタチンが、モノメチル・アウリスタチンF(MMAF)又はモノメチル・アウリスタチンE(MMAE)である。
【請求項６７】
請求項６０〜６６のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記細胞表面マーカーが、CD117、CD45、CD137、CD2、CD252、又はCD5である。
【請求項６８】
請求項６７に記載の方法、ここで、前記抗体がCD117に結合する、並びに
a)  配列番号(SEQ ID NO)：106に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：107に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む；又は
b)  配列番号(SEQ ID NO)：150に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：151に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【請求項６９】
請求項６０〜６８のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記抗体が、D265C変異(EUインデックスによる)を含むFc領域を含む。
【請求項７０】
請求項６９に記載の方法、ここで、前記抗体がH435A変異(EUインデックスによる)を含む。
【請求項７１】
請求項６０〜７０のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記ADCのリンカーが、N-ベータ-マレイミドプロピル-Val-Ala-パラ-アミノベンジル(BMP-Val-Ala-PAB)である。
【請求項７２】
請求項６０〜７１のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約1時間後に投与する；前記第1の用量を投与した約2時間後に投与する；前記第1の用量を投与した約３時間後に投与する；前記第1の用量を投与した約1日後に投与する；前記第1の用量を投与した約2日後に投与する；又は前記第1の用量を投与した約3日後に投与する。
【請求項７３】
請求項６０〜７２のいずれか一項に記載の方法、ここで、前記患者は,前記ADCが前記患者の血中から実質的にクリアランスされたときに、幹細胞移植を更に受ける。
【請求項７４】
請求項７３に記載の方法、ここで、前記細胞移植が造血幹細胞(HSC)移植である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願の相互参照］
本出願は、2018年6月7日に出願された米国仮出願第62/682,154号、及び2019年5月1日に出願された米国仮出願第62/841,702号に対して、優先権を主張する。
【背景技術】
【０００２】
医学技術の進歩にもかかわらず、外因性の造血幹細胞が生着するのを促進すること、並びに、とりわけ、造血システムの病態（例えば、特定の血液細胞の疾患等）、代謝障害、がん、及び自己免疫症状を予防又は治療すること、に対する需要が依然として存在する。抗体薬物コンジュゲート(ADC)の投与は、大きな治療可能性を有し得るが、臨床において、それらを使用することを妨げてきた制約は、前記薬物の有効性に伴う毒性に関連した合併症であった。現在までのほとんどのADCは、腫瘍細胞を死滅させることによってがんを治療するために使用されている。幹細胞移植と組み合わせたコンディショニング療法のためにADCを使用することは、毒性及び有効性を含む特有の課題を提示する。更に、移植した細胞を前記患者の体内に生着させる前に、前記ターゲット細胞を除去するタイム・ウィンドウの間、前記ADCは有効でなければならない。現在、外因性の造血幹細胞グラフトが生着するのを促進するための、並びに様々な疾患及び症状（例えば、自己免疫疾患、がん、及び移植片対宿主病(Graft-versus-Host-Disease(GvHD))）に罹患しているか又はリスクがある患者を、予防又は治療するための、方法において使用するための、ADCの投薬レジメンが必要とされている。
【発明の概要】
【０００３】
外因性の造血幹細胞グラフトが生着するのを促進するための、並びに様々な疾患及び症状（例えば、自己免疫疾患、がん、及び移植片対宿主病(Graft-versus-Host-Disease(GvHD))）に罹患しているか又はリスクがある患者を治療するための、抗体薬物コンジュゲート(ADC)投薬レジメンを含む、組成物及び方法を、本明細書に記載する。本明細書が開示する方法は、ADCが対象に対する毒性を低減しながら内因性細胞を除去するのに効果的であるようなコンディショニングをするために、ADC（例えば、抗CD117 ADC）を投与する、という複雑な課題に対処する。
【０００４】
ある実施形態では、本方法は、ヒト患者におけるターゲット細胞の集団を減少させる方法を提供する、ここで、前記方法は、1日目に抗体薬物コンジュゲート(ADC)の第1の用量を前記患者に投与すること；及び前記第1の用量の後に、前記ADCの第2の用量を前記患者に投与すること；ここで、前記ADCは、リンカーを介してアマトキシンにコンジュゲートした抗体又はその抗原結合フラグメントを含む、ここで、前記ADCは細胞表面マーカーに対して特異的である、及びここで、前記投薬レジメンは、ヒト患者において、前記ターゲット細胞の集団の減少を誘導する、を含む。ある実施形態では、前記第1の用量が、約2〜12 mgのADC、約2〜11 mgのADC、約2〜10 mgのADC、約2〜9 mgのADC、約2〜8 mgのADC、約2〜7 mgのADC、約2〜6 mgのADC、約2〜5 mgのADC、約2〜4 mgのADC、及び約2〜3 mgのADCからなる群より選択される。別の実施形態では、前記第1の用量が、約1.9〜11.5 mgのADCを含む。更に別の実施形態では、前記第2の用量が、前記第1の用量の10重量%以内である。別の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した後1〜24時間の間に投与する。別の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した後1〜12日の間に投与する。別の実施形態では、前記ターゲット細胞が幹細胞である。更に別の実施形態では、ターゲット細胞が免疫細胞である。別の実施形態では、前記ターゲット細胞が疾患を引き起こす細胞である。更に別の実施形態では、前記細胞マーカーがCD117、CD45、CD2、CD5、CD252、CD134、及びCD137からなる群より選択される。
【０００５】
ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：10のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：11のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：12のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：13のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：14のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：15のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：16のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：17のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：18のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：19のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：20のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：21のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：22のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：23のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：24のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：25のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：26のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：27のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：28のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：29のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：30のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：31のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：32のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：33のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：34のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：35のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：36のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：37のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：38のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：39のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：40のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：41のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開���する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：42のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：43のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：34のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：44のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：45のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：46のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：47のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：48のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：49のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：50のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：51のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：52のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：53のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：54のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：55のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：56のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：57のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：58のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：59のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：60のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：61のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：62のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：63のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：52のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法���おいて使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：64のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：65のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：66のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：67のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：68のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：69のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：70のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：71のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：72のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：73のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：74のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：75のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：76のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：77のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：78のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：79のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：80のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：81のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：82のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：83のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：84のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：85のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：86のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：87のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：88のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：89のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：90のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：91のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：92のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：93のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：98のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：99のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：101のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：102のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：104のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：105のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：105のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：106のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：107のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：114のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：115のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：106のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：119のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：121のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：119のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：123のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：117のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：124のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：125のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：125のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：126のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：124のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：127のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：124のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：128のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：150のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：151のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：158のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：159のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：165のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：159のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：168のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：159のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：171のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：159のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：173アミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：174のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：180のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：174のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：183のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：151のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：186のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：151のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態��は、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：189のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：151のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。
【０００６】
ある実施形態では、US 2019-0153114 A1に記載されるように（これは、その全体が参照により取り込まれる）、本明細書中で開示する方法において使用するADCは, 抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含む。別の実施形態では、US 2019-0144558 A1に記載されるように（これは、その全体が参照により取り込まれる）、本明細書中で開示する方法において使用するADCは, 抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含む。
【０００７】
ある実施形態では、本発明は、ヒト患者におけるターゲット細胞の集団を減少させる方法、を提供する。ここで、前記方法は、以下の工程を含む投薬レジメンを含む、1日目に抗体薬物コンジュゲート(ADC)の第1の用量を前記患者に投与すること；及び前記第1の用量の後に、前記ADCの第2の用量を前記患者に投与すること；ここで、前記ADCは、リンカーを介してアマトキシンにコンジュゲートした抗体又はその抗原結合フラグメントを含む、ここで、前記ADCは細胞表面マーカーに対して特異的である、及びここで、前記投薬レジメンは、ヒト患者において、前記ターゲット細胞の集団の減少を誘導する。ある実施形態では、前記第1の用量は、約0.03〜0.29 mg/kgのADC、約0.03〜0.25 mg/kgのADC、約0.03〜0.20 mg/kgのADC、約0.03〜0.15 mg/kgのADC、約0.03〜0.10 mg/kgのADC、約0.05〜0.10 mg/kgのADC、及び約0.05〜0.07 mg/kgのADCからなる群より選択される。別の実施形態では、前記第1の用量が約0.03〜0.19 mg/kgのADCを含む。更に別の実施形態では、前記第2の用量は、前記第1の用量の10重量%以内である。或いは、前記第1及び第2の用量は、同じ用量（同じ固定した用量又は同じmg/kgの計算による同じ用量のどちらか）であることがある。
【０００８】
別の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した後1〜24時間の間に投与する。更に別の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した後1〜12日の間に投与する。別の実施形態では、前記ターゲット細胞は幹細胞である。他の実施形態では、前記ターゲット細胞は免疫細胞である。別の実施形態では、前記ターゲット細胞が疾患を引き起こす細胞である。別の実施形態では、前記細胞マーカーがCD117、CD45、CD2、CD5、及びCD137からなる群より選択される。
【０００９】
ある実施形態では、本発明は、移植コンディショニングのための、ヒト患者におけるターゲット細胞の集団を減少させる方法、を提供する。ここで、前記方法は、1日目に抗体薬物コンジュゲート(ADC)の第1の用量を前記患者に投与すること；及び前記第1の用量の後に、前記ADCの第2の用量を前記患者に投与すること；ここで、前記ADCは、リンカーを介してアマトキシンにコンジュゲートした抗体又はその抗原結合フラグメントを含む、ここで、前記ADCは細胞表面マーカーに対して特異的である、及びここで、前記投薬レジメンは、移植コンディショニングのために、ヒト患者において、前記ターゲット細胞の集団の減少を誘導する。毒素は、抗有糸分裂薬剤又はRNAポリメラーゼ阻害剤である。別の実施形態では、前記RNAポリメラーゼ阻害剤がアマトキシンである。別の実施形態では、前記RNAポリメラーゼ阻害剤がアマニチンである。別の実施形態では、前記アマニチンが、α-アマニチン、β-アマニチン、γ-アマニチン、ε-アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、及びプロアマヌリンからなる群より選択される。更に別の実施形態では、前記アマトキシンが、式(I)で表される
【化１】
2021526525.tif 000003
ここで、R1はH、OH、ORA、又はORCである；
R2はH、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、任意選択的に置換された5員ヘテロシクロルアルキル基を形成する；
R3はH、RC、又はRDである；
R4、R5、R6、及びR7は、それぞれ独立してH、OH、ORC、ORD、RC、又はRDである；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、又はNRCRDである；
R9はH、OH、ORC、又はORDである；
Xは-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；
RCは-L-Zである；
RDは、置換されたC1-C6アルキル、置換されたC1-C6ヘテロアルキル、置換されたC2-C6アルケニル、置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、置換されたC2-C6アルキニル、置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、置換されたシクロアルキル、置換されたヘテロシクロアルキル、置換されたアリール、又は置換されたヘテロアリールである；
Lは、リンカーを含むペプチドである；及び、
Zは、L上に存在する反応性置換基と、抗CD137抗体、又はその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的な部分構造である。別の実施形態では、前記抗有糸分裂薬剤はメイタンシン又はアウリスタチンである。別の実施形態では、前記アウリスタチンが、モノメチル・アウリスタチンF(MMAF)又はモノメチル・アウリスタチンE(MMAE)である。別の実施形態では、前記ADCのリンカーが、N-ベータ-マレイミドプロピル-Val-Ala-パラ-アミノベンジル(BMP-Val-Ala-PAB)である。別の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約1時間後に投与する。別の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約2時間後に投与する。別の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約3時間後に投与する。別の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約4時間後に投与する。別の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約5時間後に投与する。別の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約6時間後に投与する。別の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約7時間後に投与する。別の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約8時間後に投与する。別の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約1日後に投与する。別の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約2日後に投与する。別の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約3日後に投与する。
【００１０】
ある実施形態では、本発明は、ヒト患者におけるターゲット細胞の集団を減少させる方法、を提供する。ここで、前記方法は、以下の工程を含む投薬レジメンを含む：(a)1日目に抗体薬物コンジュゲート(ADC)の第1の用量を前記患者に投与すること；及び(b)前記第1の用量の後に、前記ADCの第2の用量を前記患者に投与すること；ここで、前記ADCは、リンカーを介して細胞毒素（例、アマトキシン）にコンジュゲートした抗体又はその抗原結合フラグメントを含む、ここで、前記ADCは細胞表面マーカーに対して特異的である、及びここで、前記投薬レジメンは、ヒト患者において、前記ターゲット細胞の集団の減少を誘導する。ある実施形態では、前記第1の用量が、約2〜12 mgのADC、約2〜11 mgのADC、約2〜10 mgのADC、約2〜9 mgのADC、約2〜8 mgのADC、約2〜7 mgのADC、約2〜6 mgのADC、約2〜5 mgのADC、約2〜4 mgのADC、及び約2〜3 mgのADCからなる群より選択される。別の実施形態では、前記第1の用量が、約1.9〜11.5 mgのADCを含む。いくつかの実施形態では、前記第2の用量が、前記第1の用量の10重量%以内である、又はここで、前記第2の用量が前記第1の用量と同じである。更に他の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した後1〜24時間の間に投与する。他の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した後1〜12日の間に投与する。別の実施形態では、前記ターゲット細胞が幹細胞である。別の実施形態では、前記ターゲット細胞が免疫細胞である。更に別の実施形態では、前記ターゲット細胞が疾患を引き起こす細胞である。ある特定の実施形態では、細胞マーカーが、CD117、CD45、CD2、CD5、CD252、CD134、及びCD137からなる群より選択される。別の実施形態では、前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号(SEQ ID NO)：106に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：107に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。更に別の実施形態では、前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号(SEQ ID NO)：150に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：151に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００１１】
ある実施形態では、本発明は、ヒト患者におけるターゲット細胞の集団を減少させる方法、を提供する。ここで、前記方法は、以下の工程を含む投薬レジメンを含む：(a)1日目に抗体薬物コンジュゲート(ADC)の第1の用量を前記患者に投与すること、ここで、前記第1の用量は、約0.03〜0.29 mg/kgのADC、約0.03〜0.25 mg/kgのADC、約0.03〜0.20 mg/kgのADC、約0.03〜0.15 mg/kgのADC、約0.03〜0.10 mg/kgのADC、約0.05〜0.10 mg/kgのADC、及び約0.05〜0.07 mg/kgのADC、からなる群より選択される；並びに(b)前記第1の用量の後に、前記ADCの第2の用量を前記患者に投与すること；ここで、前記ADCは、リンカーを介して細胞毒素（例、アマトキシン）にコンジュゲートした抗体又はその抗原結合フラグメントを含む、ここで、前記ADCは細胞表面マーカーに対して特異的である、及びここで、前記投薬レジメンは、ヒト患者において、前記ターゲット細胞の集団の減少を誘導する。ある実施形態では、前記第1の用量が約0.03〜0.29 mg/kgである。別の実施形態では、前記第1の用量が約0.03〜0.19 mg/kgのADCを含む。別の実施形態では、前記第2の用量が前記第1の用量の10重量%以内である、又はここで、前記第2の用量が前記第1の用量と同じ重量である。更に別の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した後1〜24時間の間に投与する。いくつかの実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した後1〜12日の間に投与する。別の実施形態では、前記ターゲット細胞が幹細胞である。別の実施形態では、前記ターゲット細胞が免疫細胞である。更に別の実施形態では、前記ターゲット細胞が疾患を引き起こす細胞である。ある特定の実施形態では、細胞マーカーが、CD117、CD45、CD2、CD5、CD252、及びCD137からなる群より選択される。更に別の実施形態では、前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号(SEQ ID NO)：106に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：107に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号(SEQ ID NO)：150に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：151に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００１２】
ある実施形態では、本発明は、ヒト患者におけるターゲット細胞の集団を減少させる方法、を提供する。ここで、前記方法は、以下の工程を含む投薬レジメンを含む：(a)抗体薬物コンジュゲート(ADC)の第2の用量を、前記患者に、前記ADCの第1の用量を投与した後、1〜14日以内に、前記患者に投与すること；ここで、前記ADCは、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗体又はその抗原結合フラグメントを含む；ここで、前記ADCは細胞表面マーカーに特異的である；ここで、前記投薬レジメンは、ヒト患者において、前記ターゲット細胞の集団の減少を誘導する；並びに前記患者の血中AST、ALT、又はLDHレベルの少なくとも1つが、前記患者に対する、前記第1の用量の投与と前記第1の用量の投与後14日との間に、毒性レベルに達しない。
【００１３】
ある実施形態では、本発明は、ヒト患者におけるターゲット細胞の集団を減少させる方法、を提供する。ここで、前記方法は、以下の工程を含む投薬レジメンを含む：抗体薬物コンジュゲート(ADC)の第2の用量を、前記患者に、前記ADCの第1の用量を投与した後、1〜14日以内に、前記患者に投与すること；ここで、前記ADCは、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗体又はその抗原結合フラグメントを含む；ここで、前記ADCは細胞表面マーカーに特異的である；ここで、前記投薬レジメンは、ヒト患者において、前記ターゲット細胞の集団の減少を誘導する；並びに前記患者の血中AST、ALT、又はLDHレベルの少なくとも1つが、前記患者に対する、前記第1の用量の投与と前記第1の用量の投与後14日との間に、正常レベルの3倍よりも大きく上昇しない。
【００１４】
ある実施形態では、本発明は、移植コンディショニングのための、ヒト患者におけるターゲット細胞の集団を減少させる方法、を提供する。ここで、前記方法は、以下の工程を含む投薬レジメンを含む：(a)1日目に抗体薬物コンジュゲート(ADC)の第1の用量を前記患者に投与すること；及び(b)前記第1の用量の後に、前記ADCの第2の用量を前記患者に投与すること；ここで、前記ADCは、リンカーを介してアマトキシンにコンジュゲートした抗体又はその抗原結合フラグメントを含む、ここで、前記ADCは、CD117、CD45、CD137、CD2、CD252、又はCD5から選択される細胞表面マーカーに対して特異的である、及びここで、前記投薬レジメンは、移植コンディショニングのための、ヒト患者において、前記ターゲット細胞の集団の減少を誘導する。ある実施形態では、前記毒素が抗有糸分裂薬剤又はRNAポリメラーゼ阻害剤である。いくつかの実施形態では、前記RNAポリメラーゼ阻害剤がアマトキシンである。更に別の実施形態では、前記RNAポリメラーゼ阻害剤がアマニチンである。いくつかの実施形態では、前記アマニチンが、α-アマニチン、β-アマニチン、γ-アマニチン、ε-アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、及びプロアマヌリンからなる群より選択される。更に別の実施形態では、前記アマトキシンが、式(I)で表される
【化２】
2021526525.tif 000004
ここで、R1はH、OH、ORA、又はORCである；
R2はH、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、任意選択的に置換された5員ヘテロシクロルアルキル基を形成する；
R3はH、RC、又はRDである；
R4、R5、R6、及びR7は、それぞれ独立してH、OH、ORC、ORD、RC、又はRDである；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、又はNRCRDである；
R9はH、OH、ORC、又はORDである；
Xは-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；
RCは-L-Zである；
RDは、置換されたC1-C6アルキル、置換されたC1-C6ヘテロアルキル、置換されたC2-C6アルケニル、置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、置換されたC2-C6アルキニル、置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、置換されたシクロアルキル、置換されたヘテロシクロアルキル、置換されたアリール、又は置換されたヘテロアリールである；
Lは、リンカーを含むペプチドである；及び、
Zは、L上に存在する反応性置換基と、抗体、又はその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的な部分構造である。
【００１５】
ある実施形態では、前記細胞毒素がPBDである。
【００１６】
いくつかの実施形態では、前記抗有糸分裂薬剤がメイタンシン又はアウリスタチンである。更に別の実施形態では、前記アウリスタチンがモノメチル・アウリスタチンF(MMAF)又はモノメチル・アウリスタチンE(MMAE)である。いくつかの実施形態では、HSCの細胞表面マーカーがCD117である。いくつかの実施形態では、前記抗体はCD117に結合する、並びにa)配列番号(SEQ ID NO)：106に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：107に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む；又はb)配列番号(SEQ ID NO)：150に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：151に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。他の実施形態では、前記抗体が、D265C変異(EUインデックスによる)を含むFc領域を含む。いくつかの実施形態では、前記抗体がH435A変異(EUインデックスによる)を含む。他の実施形態では、前記ADCのリンカーが、N-ベータ-マレイミドプロピル-Val-Ala-パラ-アミノベンジル(BMP-Val-Ala-PAB)である。いくつかの実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約1時間後に投与する。いくつかの実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約2時間後に投与する。いくつかの実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約3時間後に投与する。他の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約4時間後に投与する。いくつかの実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約5時間後に投与する。いくつかの実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約6時間後に投与する。いくつかの実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約7時間後に投与する。他の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約8時間後に投与する。いくつかの実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約1日後に投与する。いくつかの実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約2日後に投与する。いくつかの実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約3日後に投与する。前記患者は、前記ADCが前記患者の血中から実質的にクリアランスされたときに、幹細胞移植を更に受ける。いくつかの実施形態では、前記ADCを投与するための投薬レジメンは、本質的に工程a)及びb)からなる。
【００１７】
更に他の実施形態では、前記方法は、前記ヒト患者に細胞移植を施すことを更に含む。
【００１８】
いくつかの実施形態では、前記細胞移植は造血幹細胞(HSC)移植である。更に他の実施形態では、前記方法が非-骨髄除去性である。
【００１９】
いくつかの実施形態では、患者サンプルから決定される肝臓マーカーが毒性レベルに達しない。いくつかの実施形態では、患者サンプルから決定される肝臓マーカーが正常レベル(例えば、基準範囲)を超えて上昇しない、正常レベルの1.5倍を超えて上昇しない、正常レベルの3倍を超えて上昇しない、正常レベルの5倍を超えて上昇しない、又は正常レベルの10倍を超えて上昇しない。いくつかの実施形態では、前記肝臓マーカーが、AST、LDH、又はALTである。別の実施形態では、前記患者から決定される肝臓マーカーが、前記第1の用量を投与した後、7日間だけ、上昇する。他の実施形態では、前記患者から決定される肝臓マーカーが、前記第1の用量を投与した後、6日間だけ、上昇する。いくつかの実施形態では、前記患者から決定される肝臓マーカーが、前記第1の用量を投与した後、5日間だけ、上昇する。いくつかの実施形態では、前記肝臓マーカーが、AST、ALT、又はLDHである。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】図１は、種々の用量のADC 1抗体薬物コンジュゲート(ADC)の初回用量を投与した後の日数を横軸とした、コントロール(即ち、PBS及びアイソタイプADCコントロール)に対する、網状赤血球の数(109/μL)を検出するアッセイの結果をグラフで示す。図１中の破線の水平線は、網状赤血球の数の正常範囲を表す。
【図２】図２は、種々の用量のADC 1抗体薬物コンジュゲート(ADC) の初回用量を投与した後の日数を横軸とした、コントロール(即ち、PBS及びアイソタイプADCコントロール)に対する、血小板の数(103/μL)を検出するアッセイの結果をグラフで示す。図２中の破線の水平線は、血小板の数の正常範囲を表す。
【図３】図３Ａ〜３Ｃは、種々の用量のADC 1抗体薬物コンジュゲート(ADC) の初回用量を投与した後の日数を横軸とした、コントロール(即ち、PBS及びアイソタイプADCコントロール)に対する、(図３Ａ)血漿アラニン・アミノトランスアミナーゼ(ALT；単位U/L)、(図３Ｂ)血漿乳酸デヒドロゲナーゼ(LDH；単位U/L)、及び(図３Ｃ)血漿アスパラギン酸アミノトランスアミナーゼ(AST；単位U/L)のレベルを検出するアッセイの結果をグラフで示す。図３Ａ、３Ｂ、及び３Ｃ中の破線の水平線は、それぞれ、ALT、LDH、及びASTレベルの正常範囲を表す。  図３Ｄは、種々の用量のADC 1（半減期の速い抗体薬物コンジュゲート）で処置した後の、骨髄における造血幹細胞数及び前駆細胞数を、野生型半減期のADC 1及び種々のコントロールと比較して、グラフで示す。図３Ｄに記載される実験において、骨髄穿刺液を、単回用量については15日目に、複数回用量(即ち、0.1 mg/kg、Q3Dx2(0.1/0.1))については18日目に、採取した。  図３Ｅは、ADC 1で処置した後の、骨髄における造血幹細胞の減少及び前駆細胞の減少を、種々のコントロールと比較して、グラフで示す。図３Ｅに記載される実験において、骨髄穿刺液を、単回用量については15日目に、複数回用量については18日目に、採取した。  図３Ｆは、時間(時間(hours))を横軸にした、様々な用量のADC 1の投与後のADC 1の血漿濃度を、グラフで示す。
【図４】図４Ａは、種々の用量のADC 2抗体薬物コンジュゲート(ADC) 及び1用量のADC 3の初回用量を投与した後の日数を横軸とした、網状赤血球の数(109/μL)を検出するアッセイの結果をグラフで示す。図４Ａ中の破線の水平線は、網状赤血球の数の正常範囲を表す。  図４Ｂは、種々の用量のADC 2及びADC 3の初回用量を投与した後の日数を横軸とした、血漿アスパラギン酸アミノトランスアミナーゼ(AST；単位U/L)のレベルを検出するアッセイの結果をグラフで示す。図４Ｂ中の破線の水平線は、ASTレベルの正常範囲を表す。  図４Ｃは、種々の用量のADC 2及びADC 3の投与後の、時間(時間(hours))を横軸にした、ADC 2及びADC 3の血漿中濃度を、グラフで示す。
【図５】図５は、式(Z'-L-D)の例示的な化合物を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
［詳細な説明］
本発明は、抗体薬物コンジュゲートの投薬レジメン、並びに造血細胞（例えば、造血幹細胞、免疫細胞又はがん細胞）が発現する抗原に結合することができる抗体薬物コンジュゲート(ADC)を投与することによって、様々な疾患及び症状（例えば、とりわけ、自己免疫疾患、がん、及び移植片対宿主病(GvHD)など）に罹患しているか又はリスクがある患者へ、前記投薬レジメンを処方する方法、を提供する。
【００２２】
［定義］
本明細書中で使用される場合、用語「約」は、記載される値より10%の範囲内で高い又は低い値をいう。
【００２３】
本明細書中で使用される場合、用語「アマトキシン」は、Amanita phalloidesキノコによって産生されるペプチドのアマトキシン・ファミリーのメンバー、又はそのバリアント若しくは誘導体（例えば、RNAポリメラーゼII活性を阻害し得るそのバリアント若しくは誘導体）のことをいう。本明細書に記載される組成物及び方法と併用して有用なアマトキシンには、例えば、限定されるものではないが、式(II)、(III)、(IIIa)及び(IIIb)の化合物（例、α-アマニチン、β-アマニチン、γ-アマニチン、ε-アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、又はプロアマヌリン等）のような化合物が含まれる。本明細書に記載するように、アマトキシンを、例えば、リンカー部分(L)を介して、抗体、又はその抗原結合フラグメントにコンジュゲートさせることがある（これにより、ADCを形成する)。このようなプロセスに有用な、例示的なアマトキシンをコンジュゲートさせる方法及びリンカーを以下に記載する。前記組成物及び方法による、抗体、又は抗原結合フラグメントへのコンジュゲートに有用な、例示的なリンカー含有アマトキシンもまた、本明細書に記載する。
【００２４】
本明細書中で使用される場合、用語「コンジュゲート」又は「抗体薬物コンジュゲート」又は「ADC」は、細胞毒素にコンジュゲートした抗体をいう。ADCは、抗体、又はその抗原結合フラグメントのようなある分子の反応性官能基と、本明細書に記載する細胞毒素のような別の分子の適切な反応性官能基との化学結合によって形成される。コンジュゲートは、互いに結合した2つの分子間（例、抗体と細胞毒素の間）に、リンカーを含むことがある。コンジュゲートの形成に用いることができるリンカーの例には、ペプチド含有リンカー（例えば、天然に存在する又は天然に存在しないアミノ酸、例えば、D-アミノ酸を含有するリンカー）が含まれる。リンカーを、本明細書中に記載する、及び当該技術分野で公知の、種々のストラテジーを使用して調製することがある。その中の反応性成分に依存して、リンカーを、例えば、酵素的加水分解、光分解、酸性条件下での加水分解、塩基性条件下での加水分解、酸化、ジスルフィド還元、求核切断、又は有機金属切断によって、切断することがある(例えば、Lericheら、Bioorg.Med.Chem.,20:571-582,2012を参照のこと)。
【００２５】
本明細書中で使用される場合、用語「抗体」は、特定の抗原に特異的に結合するか、又は特定の抗原と免疫学的に反応性である免疫グロブリン分子をいう。抗体としては、限定されるものではないが、所望の抗原結合活性を示しさえすれば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、マルチスペシフィック抗体（例、バイスペシフィック抗体）、及び抗体フラグメント、が挙げられる。
【００２６】
一般に、抗体は、抗原結合領域を含む重鎖及び軽鎖を含む。それぞれの重鎖は、重鎖可変領域(本明細書では、HCVR又はVHと略す)及び重鎖定常領域から構成される。前記重鎖定常領域は、3つのドメイン（CH1、CH2及びCH3）から構成される。それぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域(本明細書では、LCVR又はVLと略す)及び軽鎖定常領域から構成される。前記軽鎖定常領域は、1つのドメイン（CL）から構成される。前記VH及びVL領域を、相補性決定領域(CDR)と呼ばれる超可変性の領域に更に細分化することができ、より保存された領域(フレームワーク領域(FR)と呼ばれる)が点在する。各VH及びVLは、3つのCDR及び4つのFRから構成され、アミノ末端からカルボキシル末端に向かって、以下の順序で配列する：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。前記重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。前記抗体の定常領域は、前記免疫グロブリンが宿主の組織又は因子（例えば、免疫システムの種々の細胞(例、エフェクター細胞)及び古典的補体システムの第1の構成要素(CIq)等）に結合することを、仲立ちすることがある。
【００２７】
本明細書で使用される場合、「インタクト(intact)」又は「全長」抗体は、ジスルフィド結合によって相互接続した2つの重(H)鎖ポリペプチド及び2つの軽(L)鎖ポリペプチドを有する抗体を指す。それぞれの重鎖は、重鎖可変領域(本明細書では、HCVR又はVHと略す)及び重鎖定常領域から構成される。前記重鎖定常領域は、3つのドメイン（CH1、CH2及びCH3）から構成される。それぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域(本明細書では、LCVR又はVLと略す)及び軽鎖定常領域から構成される。前記軽鎖定常領域は、1つのドメイン（CL）から構成される。前記VH及びVL領域を、相補性決定領域(CDR)と呼ばれる超可変性の領域に更に細分化することができ、より保存された領域(フレームワーク領域(FR)と呼ばれる)が点在する。各VH及びVLは、3つのCDR及び4つのFRから構成され、アミノ末端からカルボキシル末端に向かって、以下の順序で配列する：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。前記重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。前記抗体の定常領域は、前記免疫グロブリンが宿主の組織又は因子（例えば、免疫システムの種々の細胞(例、エフェクター細胞)及び古典的補体システムの第1の構成要素(CIq)等）に結合することを、仲立ちすることがある。
【００２８】
本明細書中で使用される場合、用語「相補性決定領域」(CDR)は、抗体の軽鎖及び重鎖可変ドメインの両方に見出される超可変領域のことをいう。可変ドメインのより高度に保存された部分は、骨格領域(FR)と呼ばれる。抗体の超可変領域を表すアミノ酸の位置は、文脈及び当該技術分野で公知の種々の定義に依存して、変化することがある。可変ドメイン内のいくつかの位置は、これらの位置が、ある組の基準の下では超可変領域内にあると見なされることがあり、一方、別の組の基準の下では超可変領域外にあると見なされることがある、という点において、ハイブリッド超可変位置と見なされることがある。これらの位置の1つ以上はまた、拡張超可変領域において見出されることもある。本明細書に記載する抗体は、これらのハイブリッド超可変位置に、修飾を含むことがある。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ、主にβ-シート構造をとり、3つのCDRによって連結した（CDRは、β-シート構造を連結し、場合によってはその一部を形成する）、4つの骨格領域を含む。各々の鎖中のCDRは、FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4の順序で、骨格領域と近接して一緒にまとまり、そして他の抗体鎖由来のCDRと共に、抗体のターゲット結合部位の形成に寄与する(Kabatら、Sequences of Proteins of Immunological Interest、National Institute of Health、Bethesda、MD、1987を参照のこと)。ある特定の実施形態では、免疫グロブリンのアミノ酸残基の番号付けは、特に断らない限り、Kabatらの免疫グロブリンのアミノ酸残基の番号付けシステムに従って行う(しかし、限定されるものではないが、IMGT及びChothia等を含む、任意の抗体の番号付けスキームを利用することがある)。
【００２９】
本明細書中で使用される場合、用語「抗原結合フラグメント」は、ターゲット抗原に特異的に結合する作用能を保持する抗体の1つ以上のフラグメントをいう。抗体の抗原結合機能は、全長抗体のフラグメントによって果たされ得る。前記抗体フラグメントは、例えば、Fab、F(ab')2、scFv、ダイアボディ、トリアボディ、アフィボディ、ナノボディ、アプタマー、又はドメイン抗体であることがある。抗体の「抗原結合フラグメント」という用語に包含される結合フラグメントの例としては、限定されるものではないが、以下が挙げられる：(i)Fabフラグメント、VL、VH、CL及びCH1ドメインからなる一価フラグメント；(ii)F(ab')2フラグメント、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結した、2つのFabフラグメントを含む二価フラグメント；(iii)VH及びCH1ドメインからなるFdフラグメント；(iv)抗体の単一アームのVL及びVHドメインからなるFvフラグメント；(v) VH及びVLドメインを含むdAb；(vi) VHドメインからなるdAbフラグメント(例えば、Wardら、Nature 341:544-546、1989を参照のこと)；(vii) VH又はVLドメインからなるdAb；(viii)単離した相補性決定領域(CDR)；並びに(ix)合成リンカーによって任意選択的に連結することがある2つ以上(例えば、2つ、3つ、4つ、5つ、又は6つ)の単離したCDRの組み合わせ。更に、Fvフラグメントの2つのドメイン（VL及びVH）は、別々の遺伝子によってコードされているが、それらを、組換え方法を使用することで、リンカーによって連結して、単一タンパク質鎖（VL及びVH領域が対になって一価分子を形成する）とすることができる(単鎖Fv(scFv)として公知である；例えば、Bird et al., Science 242:423-426, 1988 及び Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883, 1988を参照のこと)。これらの抗体フラグメントを、当業者に公知の従来の技術を使用して入手することができ、及び前記フラグメントを、インタクトな抗体と同じ様式で有用性についてスクリーニングすることができる。抗原結合フラグメントを、組換えDNA技術、インタクトな免疫グロブリンの酵素的な又は化学的な切断によって、又は、ある場合には、当該技術分野で公知の化学的ペプチド合成手順によって、産生することができる。
【００３０】
本明細書中で使用される場合、「抗CD117抗体」又は「CD117に結合する抗体」という用語は、その抗体がCD117（例、ヒトCD117(hCD117)）をターゲティングする診断薬剤及び／又は治療薬剤として有用であるように、充分な親和性でCD117に結合することができる抗体のことをいう。ヒトCD117のアミノ酸配列は、配列番号(SEQ ID NO)：232に記載されている。
【００３１】
本明細書中で使用される場合、「抗CD137抗体」又は「CD137に結合する抗体」という用語は、その抗体がCD137（例、ヒトCD137(hCD137)）をターゲティングする診断薬剤及び／又は治療薬剤として有用であるように、充分な親和性でCD137に結合することができる抗体のことをいう。ヒトCD137のアミノ酸配列は、配列番号(SEQ ID NO)：233に記載されている。
【００３２】
本明細書中で使用される場合、「抗CD45抗体」又は「CD45に結合する抗体」という用語は、その抗体がCD45（例、ヒトCD45(hCD45)）をターゲティングする診断薬剤及び／又は治療薬剤として有用であるように、充分な親和性でCD45に結合することができる抗体のことをいう。様々なヒトCD45アイソフォームのアミノ酸配列は、配列番号(SEQ ID NO)：236（即ち、CD45ROアイソフォーム）、配列番号(SEQ ID NO)：237（即ち、CD45RAアイソフォーム）、配列番号(SEQ ID NO)：238（即ち、CD45RBアイソフォーム）、及び配列番号(SEQ ID NO)：239（即ち、CD45RCアイソフォーム）に記載されている。
【００３３】
本明細書中で使用される場合、「抗CD5抗体」又は「CD5に結合する抗体」という用語は、その抗体がCD5（例、ヒトCD5(hCD5)）をターゲティングする診断薬剤及び／又は治療薬剤として有用であるように、充分な親和性でCD5に結合することができる抗体のことをいう。ヒトCD5のアミノ酸配列は、配列番号(SEQ ID NO)：234に記載されている。
【００３４】
本明細書中で使用される場合、「抗CD2抗体」又は「CD2に結合する抗体」という用語は、その抗体がCD2（例、ヒトCD2(hCD2)）をターゲティングする診断薬剤及び／又は治療薬剤として有用であるように、充分な親和性でCD2に結合することができる抗体のことをいう。ヒトCD2のアミノ酸配列は、配列番号(SEQ ID NO)：235に記載されている。
【００３５】
本明細書中で使用される場合、用語「コンディショニングをする」及び「コンディショニング」は、移植物（例、造血幹細胞(HSC)を含む移植物）を受けるために、患者に対して準備をするプロセスのことをいう。このような処置によって、造血幹細胞移植物の生着は促進される(例えば、コンディショニング処置及び続いて行った造血幹細胞移植の後に、患者から単離した血液サンプル内の生存可能な造血幹細胞の量が持続的に増大していることから推測される)。本明細書に記載する方法に従って、造血幹細胞が発現する抗原に結合し得るADCを患者に投与することによって、造血幹細胞移植療法のために、前記患者をコンディショニングすることがある。本明細書に記載するように、前記抗体を、ADCを形成するように、細胞毒素に共有結合的にコンジュゲートさせることがある。上記の抗原の1つ以上に結合し得る、ADCを、造血幹細胞移植療法を必要とする患者に投与することは、例えば、内因性の造血幹細胞を選択的に減少させて、それによって、外因性の造血幹細胞移植物によって埋められる空きを生成することによって、造血幹細胞グラフトの生着を促進することがある。
【００３６】
本明細書中で使用される用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指す。即ち、例えば、天然に存在する変異を含むか、又はモノクローナル抗体調製物を産生する間に生じる、可能性のあるバリアント抗体を除いて（このようなバリアントは、一般に、少量で存在する）、前記集団を含む個々の抗体は、同一である及び／又は同じエピトープに結合する。異なる決定基(エピトープ)に対して向けられた異なる抗体を典型的には含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物のそれぞれのモノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して向けられる。従って、「モノクローナル」という修飾語は、抗体の実質的に均一な集団から得られるものとしての、前記抗体の特徴を示し、任意の特定の方法により抗体を産生することを必要とするものとして解釈されるべきではない。
【００３７】
本明細書中で使用される場合、「CRU(競合的再定植ユニット(competitive repopulating unit))」は、in vivo移植後に検出され得る、長期生着する幹細胞に関する測定の単位のことをいう。
【００３８】
本明細書中で使用される場合、用語「ドナー」は、レシピエントに細胞又はその子孫を投与する前に、1つ以上の細胞を単離したヒト又は動物を指す。1つ以上の細胞は、例えば、造血幹細胞の集団であることがある。
【００３９】
本明細書中で使用される場合、用語「内因性」は、ヒト患者のような特定の生物に天然に見出される分子、細胞、組織、又は臓器(例えば、造血幹細胞、又は巨核球、血小板(thrombocyte)、血小板(platelet)、赤血球、マスト細胞、骨髄芽球(myeoblast)，好塩基球、好中球、好酸球、ミクログリア細胞、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラル・キラー細胞、T-リンパ球、又はB-リンパ球のような造血系列の細胞)のような物質を記載する。
【００４０】
本明細書中で使用される場合、用語「生着能力(engraftment potential)」は、造血幹細胞及び造血前駆細胞が組織に再定殖する能力を指すために使用され、そのような細胞が自然に循環しているか、又は移植によって提供されるかに関わらない。前記用語は、細胞の組織ホーミング及び注目する組織内への細胞のコロニー形成のような、生着を取り巻くか、又は生着に至るすべての事象を包含する。生着の効率又は生着の割合は、当業者に公知の任意の臨床的に許容されるパラメータを用いて評価又は定量することができ、例えば、競合的再定植ユニット(competitive repopulating unit)(CRU)を評価すること；幹細胞がホーミングした、コロニー形成をした、又は生着した組織において、マーカーが取り込まれること若しくは発現すること；又は、疾患の進行、造血幹細胞及び造血前駆細胞の生存、若しくはレシピエントの生存により、対象の進行を評価すること、が含まれることがある。生着は、移植後の末梢血中の白血球細胞数を測定することによっても判定することができる。生着は、骨髄吸引サンプルにおけるドナー細胞による骨髄細胞の回収率を測定することによって評価することもできる。
【００４１】
本明細書中で使用される場合、用語「外因性」は、ヒト患者のような特定の生物に天然に見出されない分子、細胞、組織、又は臓器(例えば、造血幹細胞、又は巨核球、血小板(thrombocyte)、血小板(platelet)、赤血球、マスト細胞、骨髄芽球(myeoblast)，好塩基球、好中球、好酸球、ミクログリア細胞、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラル・キラー細胞、T-リンパ球、又はB-リンパ球のような造血系列の細胞)のような物質を記載する。外因性物質には、外部供給源から生物に又はそこから抽出した培養物に提供されるものが含まれる。
【００４２】
本明細書中で使用される場合、用語「造血幹細胞」(「HSC」)とは、自己複製する能力、及び顆粒球(例えば、前骨髄球、好中球，好酸球、好塩基球)、赤血球(例えば、網状赤血球、赤血球)、血小板(例えば、巨核芽球、血小板(platelet)産生巨核球、血小板(platelets))、単球(例えば、単球、マクロファージ)、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、及びリンパ球(例えば、NK細胞、B-細胞及びT-細胞)を含むがこれらに限定されない多様な系列を含む成熟血液細胞に分化する能力、を有する未成熟血液細胞をいう。そのような細胞は、CD34+細胞を含むことがある。CD34+細胞は、CD34細胞表面マーカーを発現する未成熟細胞である。
【００４３】
本明細書中で使用される場合、用語「造血幹細胞の機能的な可能性」は、1)多能性（これは、限定されるものではないが、顆粒球（例えば、前骨髄球、好中球，好酸球、好塩基球)、赤血球(例えば、網状赤血球、赤血球)、血小板(例えば、巨核芽球、血小板(platelet)産生巨核球、血小板(platelets))、単球(例えば、単球、マクロファージ)、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、及びリンパ球(例えば、NK細胞、B細胞及びT細胞)等を含む、複数の様々な血液系列に分化する能力を指す）、2)自己複製（これは、母細胞と同等の潜在能力を有する娘細胞を生じさせる造血幹細胞の能力を指す、更に、この能力は消耗することなく個々の生存期間を通して繰り返し起こりうる）、並びに3)造血幹細胞又はその子孫が、移植レシピエントに再導入され、造血幹細胞ニッチにホーミングし、生産的で持続的な造血を再確立する作用能、を含む、造血幹細胞の機能的な特性を指す。
【００４４】
本明細書中で使用される場合、用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する抗体を含むことが意図される。ヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされていないアミノ酸残基(例えば、in vitroでのランダムな若しくは部位特異的な変異誘発によって導入される変異、又はin vivoでの遺伝子再構成若しくは体細胞変異によって導入される変異)を含むことがある。しかし、本明細書中で使用される場合、用語「ヒト抗体」に、マウス等の別の哺乳動物種の生殖系列に由来するCDR配列をヒトの骨格配列上に移植した抗体が含まれることを、意図していない。ヒト抗体を、ヒト細胞において(例えば、組換え発現によって)、又は機能的に再構成したヒト免疫グロブリン(例えば、重鎖及び／又は軽鎖)遺伝子を発現し得る非ヒト動物又は原核若しくは真核細胞によって、産生することがある。ヒト抗体が一本鎖抗体である場合、それは天然のヒト抗体には見出されないリンカー・ペプチドを含むことがある。例えば、Fvは、2個〜約8個のグリシン又は他のアミノ酸残基のようなリンカー・ペプチドを含むことがあり、リンカーは前記重鎖の可変領域及び前記軽鎖の可変領域を連結する。このようなリンカー・ペプチドは、ヒト起源であると見なされる。ヒト抗体を、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリを使用するファージ・ディスプレイ法を含む、当該技術分野で公知の種々の方法によって作製することがある。ヒト抗体はまた、機能的な内因性の免疫グロブリンを発現することができないが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現することができるトランスジェニック・マウスを使用して産生することもある(例えば、PCT公開番号WO 1998/24893; WO 1992/01047; WO 1996/34096; WO 1996/33735;米国特許第5,413,923号;第5,625,126号;第5,633,425号;第5,569,825号;第5,661,016号;第5,545,806号;第5,814,318号;第5,885,793号;第5,916,771号;及び第5,939,598号を参照のこと)。
【００４５】
本明細書中で使用される場合、造血幹細胞移植を「必要とする」患者は、1種以上の血液細胞の型に欠陥又は欠損を示す患者、並びに本明細書に記載する、幹細胞障害、自己免疫疾患、がん、又は他の病態を有する患者を含む。造血幹細胞は、一般に、1)多能性、従って、限定されるものではないが、顆粒球（例えば、前骨髄球、好中球，好酸球、好塩基球)、赤血球(例えば、網状赤血球、赤血球)、血小板(例えば、巨核芽球、血小板(platelet)産生巨核球、血小板(platelets))、単球(例えば、単球、マクロファージ)、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、及びリンパ球(例えば、NK細胞、B細胞及びT細胞)等を含む、複数の様々な血液系列に分化することができる、2)自己複製、従って、母細胞と同等の潜在能力を有する娘細胞を生じさせることができる、並びに3)移植レシピエントに再導入され、造血幹細胞ニッチにホーミングし、生産的で持続的な造血を再確立する作用能、を示す。従って、造血幹細胞を、in vivoで、欠陥のある又は欠損した細胞の集団を再構成するために、造血系列の1種以上の細胞型において欠陥のある又は欠損した患者に投与することがある。例えば、前記患者は、がんに罹患していることがあり、前記欠損は、がん性細胞集団を選択的に又は非特異的に減少させる化学療法剤又は他の薬剤を投与することによって引き起こされることがある。更に、又はその代替として、前記患者は鎌状赤血球貧血、サラセミア、ファンコニー貧血、再生不良性貧血、及びウィスコット‐アルドリッチ症候群等の異常ヘモグロビン症(例えば、非悪性異常ヘモグロビン症)に罹患していることがある。前記対象は、アデノシン・デアミナーゼ重度複合免疫不全症(ADA SCID)、HIV/AIDS、異染性白質ジストロフィー、ダイアモンド‐ブラックファン貧血、及びシュワックマン‐ダイアモンド症候群に罹患している対象であることがある。前記対象は遺伝性の血液障害(例えば、鎌状赤血球貧血)又は自己免疫疾患を有するか、又はその影響を受けていることがある。更に、又はその代替として、前記対象は、神経芽細胞腫又は血液がん等の悪性腫瘍を有するか、又はその影響を受けていることがある。例えば、前記対象は、白血病、リンパ腫又は骨髄腫を有していることがある。いくつかの実施形態では、前記対象は、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫又は非ホジキン・リンパ腫(non-Hodgkin’s lymphoma)を有する。いくつかの実施形態では、前記対象は骨髄異形成症候群を有する。いくつかの実施形態では、前記対象は、強皮症、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、クローン病、I型糖尿病等の自己免疫疾患、又は本明細書に記載の別の自己免疫性の病態を有する。いくつかの実施形態では、前記対象は、キメラ抗原レセプターT-細胞(CART)療法を必要とする。いくつかの実施形態では、前記対象は、代謝性貯蔵障害を有するか、又は影響を受けている。前記対象は、グリコーゲン蓄積症、ムコ多糖症、ゴーシェ病、ハーラー病、スフィンゴ脂質症、異染性白質ジストロフィー、から選択される代謝性障害、又は本明細書に開示される治療及び療法から恩恵を得ることができる任意の他の疾患又は障害（限定されるものではないが、重度複合免疫不全症、ウィスコット���アルドリッチ症候群、高免疫グロブリンM症候群、チェディアック‐東病、遺伝性リンパ組織球症、大理石骨病、骨形成不全症、貯蔵疾患、サラセミア・メジャー、鎌状赤血球症、全身性硬化症、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、若年性関節リウマチ）、並びに"Bone Marrow Transplantation for Non-Malignant disease"、ASH Education Book、1:319-338(2000)（この開示は、造血幹細胞移植療物を投与する療法によって治療される可能性のある病態に関するものであり、その全体が本明細書に参照により取り込まれる）に記載されている疾患又は障害、に罹患している、又は影響を受けていることがある。更に又は代わりに、造血幹細胞移植を「必要とする」患者は、前述の病態のうちの1種に罹患している又は罹患していない患者（それにもかかわらず、巨核球、血小板(thrombocyte)、血小板(platelet)、赤血球、マスト細胞、骨髄芽球、好塩基球、好中球、好酸球、ミクログリア、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラル・キラー細胞、Tリンパ球、及びBリンパ球等の造血系列内の1種以上の内因性の細胞型のレベルの低下(例えば、他の健康な対象のレベルと比較して)を示す）であることがある。当業者の中のある者は、例えば、当該技術分野で公知の他の手順の中でも特に、フロー・サイトメトリー及び蛍光活性化細胞選別(FACS)方法によって、前記の細胞型又は他の血液細胞の型のうちの1種以上のもののレベルが、他の健康な対象に対して低下しているかどうかを容易に決定することができる。
【００４６】
本明細書で使用される場合、用語「レシピエント」は、造血幹細胞の集団を含む移植物等の移植物を受ける患者を指す。レシピエントに投与される移植細胞は、例えば、自家、同系、又は同種細胞であることがある。
【００４７】
本明細書中で使用される場合、用語「サンプル」は、対象から採取された検体(例えば、血液、血液成分(例えば、血清又は血漿)、尿、唾液、羊水、脳脊髄液、組織(例えば、胎盤又は真皮)、膵液、絨毛膜絨毛サンプル、及び細胞)を指す。
【００４８】
本明細書中で使用される場合、用語「scFv」は、抗体由来の重鎖の可変ドメインと軽鎖の可変ドメインとが結合して1本の鎖を形成している、単鎖Fv抗体を指す。scFvフラグメントは、リンカーによって分離された、抗体軽鎖の可変領域(VL) (例えば、CDR-L1、CDR-L2、及び／又はCDR-L3)及び抗体重鎖の可変領域(VH) (例えば、CDR-H1、CDR-H2、及び／又はCDR-H3)を含む単一のポリペプチド鎖を含む。scFvフラグメントのVL領域及びVH領域を連結するリンカーは、タンパク質を構成するアミノ酸から構成されるペプチド・リンカーであることがある。
【００４９】
本明細書中で使用される場合、用語「対象」及び「患者」は、本明細書に記載する場合、特定の疾患又は症状に対して治療を受ける、ヒトのような生物をいう。例えば、ヒト患者のような患者は、外因性の造血幹細胞の生着を促進させるために、造血幹細胞移植療法の前に治療を受けることがある。
【００５０】
本明細書中で使用される場合、語句「血液から実質的にクリアランスされる」は、治療薬剤を患者に投与した後の時点であって、前記患者から単離された血液サンプル中の前記治療薬剤の濃度が、前記治療薬剤を従来の方法によって検出できないようなものである場合(例えば、前記治療薬剤が、前記治療薬剤を検出するために使用されるデバイス又はアッセイのノイズ閾値を超えて検出できないような場合)のことをいう。当該技術分野で知られている、様々な技法（当該技術分野で知られている又は本明細書に記載されているELISAベースの検出アッセイなど）を使用して、抗体、抗体フラグメント、及びタンパク質リガンドを検出することがある。抗体、又は抗体フラグメントを検出するために使用され得る更なるアッセイには、とりわけ当該技術分野で公知の、免疫沈降法及びイムノブロット・アッセイが含まれる。
【００５１】
本明細書中で使用される場合、語句「幹細胞障害」は、対象のターゲット組織をコンディショニングすることによって、及び／又はターゲット組織中の内因性の幹細胞集団を除去することによって(例えば、対象の骨髄組織から内因性の造血幹細胞集団又は造血前駆細胞集団を除去することによって)、及び／又は対象のターゲット組織中に幹細胞を生着させる又は移植することによって、治療又は治癒され得る任意の疾患、障害、又は症状を広く指す。例えば、I型糖尿病は、造血幹細胞移植によって治癒されることが示されており、本明細書に記載の組成物及び方法に従ってコンディショニングすることから恩恵を得ることができる。本明細書に記載する組成物及び方法を使用して治療され得る更なる障害には、限定されるものではないが、鎌状赤血球貧血、サラセミア、ファンコニー貧血、再生不良性貧血、ウィスコット‐アルドリッチ症候群、ADA SCID、HIV/AIDS、異染性白質ジストロフィー、ダイアモンド‐ブラックファン貧血、及びシュワックマン‐ダイアモンド症候群が挙げられる。本明細書に記載される患者コンディショニング及び／又は造血幹細胞移植の方法を用いて治療することができる更なる疾患には、遺伝性血液疾患(例えば、鎌状赤血球貧血)及び強皮症、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、及びクローン病等の自己免疫疾患が含まれる。本明細書に記載するコンディショニング及び／又は移植方法を使用して治療され得る更なる疾患には、悪性腫瘍(例えば、神経芽細胞腫)、又は血液がん(例えば、白血病、リンパ腫、及び骨髄腫)が含まれる。例えば、前記がんは、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、又は非ホジキン・リンパ腫(non-Hodgkin’s lymphoma)であることがある。本明細書に記載のコンディショニング及び／又は移植方法を用いて治療可能な更なる疾患には、骨髄異形成症候群が含まれる。いくつかの実施形態では、前記対象は、代謝性貯蔵障害を有するか、又はそれによって影響を受けている。例えば、前記対象は、グリコーゲン蓄積症、ムコ多糖症、ゴーシェ病、ハーラー病、スフィンゴ脂質症、異染性白質ジストロフィー、から選択される代謝性障害、又は本明細書に開示される治療及び療法から恩恵を受けることができる任意の他の疾患又は障害（限定されるものではないが、重度複合免疫不全症、ウィスコット‐アルドリッチ症候群、高免疫グロブリンM(IgM)症候群、チェディアック‐東病、遺伝性リンパ組織球症、大理石骨病、骨形成不全症、貯蔵疾患、サラセミア・メジャー、鎌状赤血球症、全身性硬化症、全身性エリテマトーデス(systemic lupus erythematosus)、多発性硬化症、若年性関節リウマチ）、並びに"Bone Marrow Transplantation for Non-Malignant disease"、ASH Education Book、1:319-338(2000)（この開示は、造血幹細胞移植療物を投与する療法によって治療される可能性のある病態に関するものであり、その全体が本明細書に参照により取り込まれる）に記載されている疾患又は障害、に罹患している、又は影響を受けていることがある。
【００５２】
本明細書中で使用される場合、用語「治療する」又は「治療」は、疾患症状の重篤度及び／又は頻度を減少させること、疾患症状及び／又は前記症状の根本的な原因を取り除くこと、疾患症状及び／又はその根本的な原因の頻度又は可能性を減少させること、並びに疾患によって直接的又は間接的に引き起こされる損傷を改善又は修復することをいう。有益な又は所望の臨床的な結果としては、限定されるものではないが、本明細書に記載されるような抗体コンディショニング療法及び続いて行う造血幹細胞移植療法後の、患者において外因性の造血細胞の生着が促進されることが含まれる。更なる有益な結果には、造血幹細胞移植を必要としている患者において、コンディショニング療法及び続いて外因性の造血幹細胞グラフトを前記患者に投与した後、造血幹細胞の細胞数が増加すること又は相対濃度が増加すること、が含まれる。本明細書に記載される療法の有益な結果にはまた、コンディショニング療法及び続いて行う造血幹細胞移植療法の後、造血系列の1種以上の細胞（巨核球、血小板(thrombocyte)、血小板(platelet)、赤血球、マスト細胞、骨髄芽球、好塩基球、好中球、好酸球、ミクログリア細胞、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラル・キラー細胞、Tリンパ球、又はBリンパ球等）の細胞数が増加すること又は相対濃度が増加すること、が含まれることもある。更なる有益な結果には、がん細胞又は自己免疫細胞の集団等の、疾患を引き起こす細胞集団の量が減少することが含まれることがある。本発明の方法が障害を予防することを対象とする限り、用語「予防する」は、疾患の状態が完全に阻止されることを必要としないことが理解される。むしろ、本明細書中で使用される場合、予防するという用語は、疾患に感受性がある集団を同定し、疾患の発症前に本発明の化合物を投与すること等を、当業者ができることをいう。前記用語は、疾患の状態が完全に回避されることを意味するものではない。
【００５３】
本明細書中で使用される場合、「最大血漿濃度」又は「Cmax」は、対象(例えば、非ヒト霊長類)の血漿中の物質(例えば、本明細書に記載する場合、抗体又はADC)に関する、前記対象に前記物質を投与した後での、最大の観察濃度を意味する。
【００５４】
本明細書中で使用される場合、「曲線下面積」又は「AUC」は、血漿中の物質(例えば、本明細書に記載する場合、抗体又はADC)の濃度の経時変化をプロットした際の、曲線下面積である。AUCは、時間間隔の中で、瞬間的な濃度を積分した尺度とすることがあり、質量×時間／体積の単位を有する。AUCは、典型的には非コンパートメント方法(例えば、線状又は線状ログなどの台形方法)によって、又はコンパートメント方法によって計算する。AUCは、通常、0 〜無限大の時間間隔に対して求められ、他の時間間隔は表記する(たとえば、t1 及びt2 が開始時刻及び終了時刻の時間間隔である場合、AUC(t1, t2))。従って、本明細書で使用される場合、「AUC(0-inf)」は、t=0から、無限期間にわたるAUCを指す。
【００５５】
本明細書中で使用される場合、「Tmax」は、対象(例えば、非ヒト霊長類)の血漿中の物質が、前記対象に前記物質を投与した後に、最大濃度に到達するのに観察された時間をいう。
【００５６】
本明細書で使用される用語「アシル」は、-C(=O)Rを指す、ここで、本明細書で定義されるように、RはH(「アルデヒド」)、C1-C12アルキル、C2-C12アルケニル、C2-C12アルキニル、C3-C7カルボシクリル、C6-C20アリール、5-10員ヘテロアリール、又は5-10員ヘテロシクリルである。非限定的な例としては、ホルミル、アセチル、プロパノイル、ベンゾイル、及びアクリロイルが挙げられる。
【００５７】
本明細書で使用される用語「C1-C12アルキル」は、1〜12個の炭素原子を有する直鎖又は分岐の飽和炭化水素を指す。代表的なC1-C12アルキル基としては、限定されるものではないが、-メチル、-エチル、-n-プロピル、-n-ブチル、-n-ペンチル、及び-n-ヘキシルが挙げられる；一方、分岐C1-C12アルキルとしては、限定されるものではないが、-イソプロピル、-sec-ブチル、-イソブチル、-tert-ブチル、-イソペンチル、及び2-メチルブチルが挙げられる。C1-C12のアルキル基は、置換されていない、又は置換されていることがある。
【００５８】
本明細書で使用される用語「アルケニル」は、不飽和の少なくとも1つの部位、即ち、炭素-炭素、sp2二重結合、を有する、通常の、第2級の、又は第3級の炭素原子を含むC2-C12炭化水素を指す。例としては、限定されるものではないが、以下が挙げられる：エチレン又はビニル、-アリル、-1-ブテニル、-2-ブテニル、-イソブチレニル、-1-ペンテニル、-2-ペンテニル、-3-メチル-1-ブテニル、-2-メチル-2-ブテニル、-2,3-ジメチル-2-ブテニルなどが挙げられる。アルケニル基は、置換されていない、又は置換されていることがある。
【００５９】
本明細書で使用される「アルキニル」は、不飽和の少なくとも1つの部位、即ち、炭素-炭素、sp三重結合を有する、通常の、第2級の、又は第3級の炭素原子を含むC2-C12炭化水素を指す。例としては、限定されるものではないが、アセチレン及びプロパルギルが挙げられる。アルキニル基は、置換されていない、又は置換されていることがある。
【００６０】
本明細書で使用される「アリール」は、C6-C20炭素環芳香族基を指す。アリール基の例としては、限定されるものではないが、フェニル、ナフチル及びアントラセニルが挙げられる。アリール基は、置換されていない、又は置換されていることがある。
【００６１】
本明細書で使用される「アリールアルキル」は、炭素原子（典型的には末端又はsp3炭素原子）に結合した水素原子の1つがアリール・ラジカルで置換されている、非環状アルキル・ラジカルを指す。代表的なアリールアルキル基としては、限定されるものではないが、ベンジル、2-フェニルエタン-1-イル、2-フェニルエテン-1-イル、ナフチルメチル、2-ナフチルエタン-1-イル、2-ナフチルエテン-1-イル、ナフトベンジル、2-ナフトフェニルエタン-1-イルなどが挙げられる。前記アリールアルキル基は6〜20個の炭素原子を含み、例えば、アリールアルキル基のアルキル部分（例えば、アルカニル、アルケニル又はアルキニル基等が挙げられる）は1〜6個の炭素原子であり、アリール部分は5〜14個の炭素原子である。アルカリル基は、置換されていない、又は置換されていることがある。
【００６２】
本明細書で使用される「シクロアルキル」は、飽和炭素環ラジカルを指し、これは単環式又は二環式であることがある。シクロアルキル基は、単環として3〜7個の炭素原子を有する環、又は二環として7〜12個の炭素原子を有する環を含む。単環式シクロアルキル基の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、及びシクロオクチルが挙げられる。シクロアルキル基は、置換されていない、又は置換されていることがある。
【００６３】
本明細書で使用される「シクロアルケニル」は不飽和炭素環ラジカルを指し、これは単環式でも二環式でもよい。シクロアルケニル基は、単環として3〜6個の炭素原子を有する環、又は二環として7〜12個の炭素原子を有する環を含む。単環式シクロアルケニル基の例としては、1-シクロペント-1-エニル、1-シクロペント-2-エニル、1-シクロペント-3-エニル、1-シクロヘキサ-1-エニル、1-シクロヘキサ-2-エニル、及び1-シクロヘキサ-3-エニルが挙げられる。シクロアルケニル基は、置換されていない、又は置換されていることがある。
【００６４】
本明細書で使用される「ヘテロアラルキル」は、炭素原子（典型的には末端又はsp3炭素原子）に結合した水素原子の1つがヘテロアリール・ラジカルで置換されている、非環状アルキル・ラジカルを指す。典型的なヘテロアリールアルキル基としては、限定されるものではないが、2-ベンズイミダゾリルメチル、2-フリルエチル等が挙げられる。前記ヘテロアリールアルキル基は6〜20個の炭素原子を含み、例えば、ヘテロアリールアルキル基のアルキル部分(アルカニル、アルケニル又はアルキニル基等が挙げられる)は1〜6個の炭素原子である、並びにヘテロアリール部分は5〜14個の炭素原子である並びにN、O、P、及びSから選択される1〜3個のヘテロ原子である。前記ヘテロアリールアルキル基のヘテロアリール部分は、3〜7個の環員を有する単環(2〜6個の炭素原子)であることがある、又は7〜10個の環員を有する二環(4〜9個の炭素原子並びにN、O、P、及びSから選択される1〜3個のヘテロ原子)であることがある、例えば：二環[4,5]、[5,5]、[5,6]、又は[6,6]システム。
【００６５】
本明細書で使用される「ヘテロアリール」及び「ヘテロシクロアルキル」は、それぞれ芳香族又は非芳香族環システムを指し、ここで1つ以上の環原子は、ヘテロ原子、例えば窒素、酸素、及び硫黄である。ヘテロアリール又はヘテロシクロアルキル・ラジカルは、2〜20個の炭素原子及びN、O、P、及びSから選択される1〜3個のヘテロ原子を含む。ヘテロアリール又はヘテロシクロアルキルは、3〜7個の環員を有する単環(2〜6個の炭素原子並びにN、O、P、及びSから選択される1〜3個のヘテロ原子)であることがある、又は7〜10個の環員を有する二環(4〜9個の炭素原子並びにN、O、P、及びSから選択される1〜3個のヘテロ原子)であることがある、例えば：二環[4,5]、[5,5]、[5,6]、又は[6,6]システム。ヘテロアリール及びヘテロシクロアルキルは、置換されていない、又は置換されていることがある。
【００６６】
ヘテロアリール及びヘテロシクロアルキル基は、Paquette, Leo A.; "Principles of Modern Heterocyclic Chemistry" (W. A. Benjamin, New York, 1968), 特に1, 3, 4, 6, 7, 及び 9章; "The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs" (John Wiley & Sons, New York, 1950 to present), 特に Volumes 13, 14, 16, 19, 及び 28; 並びに J. Am. Chem. Soc. (1960) 82:5566、に記載されている。
【００６７】
ヘテロアリール基の例としては、例えば、限定されるものではないが、ピリジル、チアゾリル、テトラヒドロチオフェニル、ピリミジニル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、テトラゾリル、ベンゾフラニル、チアナフタレニル、インドリル、インドレニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、イソキサゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、インドリジニル、イソインドリル、3H-インドリル、1H-インダゾリル、プリニル、4H-キノリジニル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、4aH-カルバゾリル、カルバゾリル、フェナントリジニル、アクリジニル、ピリミジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フラザニル、フェノキサジニル、イソクロマニル、クロマニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、及びイサチノイルが挙げられる。
【００６８】
ヘテロシクロアルキルの例としては、例えば、限定されるものではないが、ジヒドロピリジル、テトラヒドロピリジル(ピペリジル)、テトラヒドロチオフェニル、ピペリジニル、4-ピペリドニル、ピロリジニル、2-ピロリドニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、ビス-テトラヒドロピラニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、オクタヒドロイソキノリニル、ピペラジニル、キヌクリジニル、及びモルホリニルが挙げられる。
【００６９】
限定ではなく例として、炭素結合ヘテロアリール類及びヘテロシクロアルキル類は、ピリジンの2、3、4、5、若しくは6位、ピリダジンの3、4、5、若しくは6位、ピリミジンの2、4、5、若しくは6位、ピラジンの2、3、5、若しくは6位、フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロール若しくはテトラヒドロピロールの2、3、4、若しくは5位、オキサゾール、イミダゾール若しくはチアゾールの2、4、若しくは5位、イソオキサゾール、ピラゾール、若しくはイソチアゾールの3、4、若しくは5位、アジリジンの2、若しくは3位、アゼチジンの2、3若しくは4位、キノリンの2、3、4、5、6、7、若しくは8位、又はイソキノリンの1、3、4、5、6、7、若しくは8位、で結合する。更に典型的には、炭素結合ヘテロシクリルとしては、2-ピリジル、3-ピリジル、4-ピリジル、5-ピリジル、6-ピリジル、3-ピリダジニル、4-ピリダジニル、5-ピリダジニル、6-ピリダジニル、2-ピリミジニル、4-ピリミジニル、5-ピリミジニル、6-ピリミジニル、2-ピラジニル、3-ピラジニル、5-ピラジニル、6-ピラジニル、2-チアゾリル、4-チアゾリル、又は5-チアゾリルが挙げられる。
【００７０】
限定ではなく例として、窒素結合ヘテロアリール類及びヘテロシクロアルキル類は、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、2-ピロリン、3-ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、2-イミダゾリン、3-イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、2-ピラゾリン、3-ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン、1H-インダゾールの1位で、イソインドール又はイソインドリンの2位、モルホリンの4位、及びカルバゾール又はベータ・カルボリンの9位、に結合している。更に典型的には、窒素結合ヘテロ環としては、1-アジリジル、1-アゼチジル(1-azetedyl)、1-ピロリル、1-イミダゾリル、1-ピラゾリル、及び1-ピペリジニルが挙げられる。
【００７１】
本明細書で使用される、並びに上記のアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクリルなどのいずれかに適用される、「置換された」とは1個以上の水素原子がそれぞれ独立して置換基で置換されていることを意味する。典型的な置換基には、限定されるものではないが、-X, -R, -OH, -OR, -SH, -SR, NH2, -NHR, -N(R)2, -N+(R)3, -CX3, -CN, -OCN, -SCN, -NCO, -NCS, -NO, -NO2, -N3, -NC(=O)H, -NC(=O)R,  -C(=O)H, -C(=O)R, -C(=O)NH2,  -C(=O)N(R)2, -SO3-, -SO3H, -S(=O)2R, -OS(=O)2OR, -S(=O)2NH2, -S(=O)2N(R)2, -S(=O)R, -OP(=O)(OH)2, -OP(=O)(OR)2, -P(=O)(OR)2, -PO3, -PO3H2, -C(=O)X, -C(=S)R, -CO2H, -CO2R, -CO2-, -C(=S)OR, -C(=O)SR, -C(=S)SR, -C(=O)NH2, -C(=O)N(R)2, -C(=S)NH2, -C(=S)N(R)2, -C(=NH)NH2, 及び -C(=NR)N(R)2、が含まれる；ここで、各Xは、F、Cl、Br、及びIから、それぞれの場合について独立に選択される；及び、各Rは、C1-C12アルキル、C6-C20アリール、C3-C14ヘテロシクロアルキル又はヘテロアリール、保護基及びプロドラック部分から、それぞれの場合について独立に選択される。基が「任意選択的に置換される」と記載されている場合はどんな場合でも、その基は、それぞれの場合について独立に、1個以上の上記の置換基で置換されることがある。
【００７２】
あるラジカルの命名規則には、状況に応じて、モノ-ラジカル又はジ-ラジカルの何れかが含まれうることを理解しておく必要がある。例えば、置換基が分子の残りの部分への2つの結合の位置を必要とする場合、前記置換基はジ-ラジカルであると理解される。例えば、2点の結合の位置を必要とするアルキルとして識別される置換基には、-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-、等のジ-ラジカルが含まれる。他のラジカル命名規則は、前記ラジカルが「アルキレン」、「アルケニレン」、「アリーレン」、「ヘテロシクロアルキレン」等のようなジ-ラジカルであることを明確に示す。
【００７３】
置換基がジ-ラジカルとして示される(即ち、分子の残りの部分への2つの結合の位置を有する)場合はどれでも、前記置換基は、別段の指示がない限り、任意の方向性配置で結合することができることを理解されたい。
【００７４】
抗体薬物コンジュゲート(ADC)を使用したコンディショニング方法
本明細書に記載の抗体薬物コンジュゲート(ADC)を、幹細胞移植前にコンディショニングをするために、ヒト患者(例えば、がん、自己免疫疾患に罹患している、造血幹細胞移植治療を必要とする、又はGvHDの危険性があるヒト患者)に投与することがある。本明細書に記載する方法を、毒性及び重篤な有害事象を減少させるが、コンディショニング剤としては依然として有効であるコンディショニング投薬レジメンにおいて、ADCをヒト患者に送達するために使用することがある。以下の実施例に記載するように、ADC用量を2つ以上の用量に分割することによって(本明細書中で「複数回用量」と呼ぶか、又は互換的に「分割用量」と呼ぶ)、前記ADCが治療(例えば、コンディショニング)に関して有効なままである一方、毒性を減少させることができる。ある実施形態では、本発明の投薬レジメンにおける送達毎の用量は、ほぼ同じである。
【００７５】
以下のセクションは、造血幹細胞が生着するのを促進するために、移植（例えば、造血幹細胞移植）を必要とする患者に投与することができるADC、並びに造血幹細胞移植の前に患者にそのような治療薬を投与する方法についての説明を提供する。
【００７６】
造血幹細胞移植前のコンディショニング療法の場合、前記ADCを、外因性の造血幹細胞移植を施す前、例えば、1時間〜1週間(例えば、1時間、2時間、3時間、4時間、5時間、6時間、7時間、8時間、9時間、10時間、11時間、12時間、13時間、14時間、15時間、16時間、17時間、18時間、19時間、20時間、21時間、22時間、23時間、24時間、2日、3日、4日、5日、6日、若しくは7日)又はそれ以上の、外因性の造血幹細胞移植の生着が最適に促進される時間に、患者に投与することがある。
【００７７】
本明細書で開示する方法によれば、前記ADCを、コンディショニング療法において、適時に分離した2つの用量で、ヒト患者に投与する。ある実施形態では、第1の用量を1日目に投与する、及び前記第1の用量を投与してから約1時間、約2時間、約3時間、約4時間、約5時間、約6時間、約7時間、約8時間、約9時間、約10時間、約11時間、又は約12時間後に第2の用量を投与する。別の実施形態では、第1の用量を1日目に投与する、及び第2の用量を投薬レジメンの2日目、3日目、4日目、5日目、6日目、7日目、8日目、9日目、10日目、11日目、又は12日目に投与する。
【００７８】
ADCの用量は、固定用量(mg)又は重量ベース用量(mg/kg)のいずれか、又はそれらの組み合わせであることがある。例えば、ADCの用量は、0.03〜0.29 mg/kg、約0.03〜0.25 mg/kg、約0.03〜0.20 mg/kg、約0.03〜0.15 mg/kg、約0.03〜0.10 mg/kg、約0.05〜0.10 mg/kg、又は約0.05〜0.07 mg/kgであることがある。他の実施形態では、対象に投与されるADCの用量は、約0.03〜0.6 mg/kg；約0.03〜0.55 mg/kg；約0.03〜0.5 mg/kg； 約0.03〜0.45 mg/kg；約0.03〜0.4 mg/kg；約0.03〜0.35 mg/kg；約0.03〜0.3 mg/kg；約0.03〜0.25 mg/kg；約0.03〜0.2 mg/kg；約0.03〜0.15 mg/kg；約0.03〜0.1 mg/kg；約0.1〜0.6 mg/kg；約0.1〜0.55 mg/kg；約0.1〜0.5 mg/kg；約0.1〜0.45 mg/kg；約0.1〜0.4 mg/kg；約0.1〜0.35 mg/kg；約0.1〜0.3 mg/kg；約0.1〜0.25 mg/kg；約0.1〜0.2 mg/kg；約0.1〜0.15 mg/kg；約0.15〜0.6 mg/kg；約0.15〜0.55 mg/kg；約0.15〜0.5 mg/kg；約0.15〜0.45 mg/kg；約0.15〜0.4 mg/kg；約0.15〜0.35 mg/kg；約0.15〜0.3 mg/kg；約0.15〜0.25 mg/kg；又は約0.15〜0.2 mg/kgである。
【００７９】
ある実施形態では、ADCの用量は、約1 mg/kgである。ある実施形態では、ADCの用量は、約0.01〜1 mg/kg；約0.01〜0.95 mg/kg；約0.01〜0.9 mg/kg；約0.01〜0.85 mg/kg；約0.01〜0.8 mg/kg；約0.01〜0.75 mg/kg；約0.01〜0.7 mg/kg；約0.01〜0.65 mg/kg；約0.01〜0.6 mg/kg；約0.01〜0.55 mg/kg；約0.01〜0.5 mg/kg；約0.01〜0.45 mg/kg；約0.01〜0.4 mg/kg；約0.01〜0.35 mg/kg；約0.01〜0.2 mg/kg；約0.01〜0.15 mg/kg；約0.01〜0.1 mg/kg；又は約0.01〜0.05 mg/kgである。
【００８０】
ある実施形態では、ADCの用量は、約2 mg/kgである。ある実施形態では、ADCの用量は、約0.01〜2 mg/kg；約0.01〜1.8 mg/kg；約0.01〜1.6 mg/kg；約0.01〜1.4 mg/kg；又は約0.01〜1.2 mg/kgである。ある実施形態では、ADCの用量は、約0.05〜2 mg/kg；約0.05〜1.8 mg/kg；約0.05〜1.6 mg/kg；約0.05〜1.4 mg/kg；又は約0.05〜1.2 mg/kgである。
【００８１】
ある実施形態では、ADCの用量は、約3 mg/kgである。ある実施形態では、ADCの用量は、約0.01〜3 mg/kg；約0.01〜2.8 mg/kg；約0.01〜2.6 mg/kg；約0.01〜2.4 mg/kg；又は約0.01〜2.2 mg/kgである。ある実施形態では、ADCの用量は、約0.05〜3 mg/kg；約0.05〜2.8 mg/kg；約0.05〜2.6 mg/kg；約0.05〜2.4 mg/kg；又は約0.05〜2.2 mg/kgである。
【００８２】
ある実施形態では、ADCの用量は、約4 mg/kgである。ある実施形態では、ADCの用量は、約0.01〜4 mg/kg；約0.01〜3.8 mg/kg；約0.01〜3.6 mg/kg；約0.01〜3.4 mg/kg；又は約0.01〜3.2 mg/kgである。ある実施形態では、ADCの用量は、約0.05〜4 mg/kg；約0.05〜3.8 mg/kg；約0.05〜3.6 mg/kg；約0.05〜3.4 mg/kg；又は約0.05〜3.2 mg/kgである。
【００８３】
ある実施形態では、ADCの用量は、約5 mg/kgである。ある実施形態では、ADCの用量は、約0.01〜5 mg/kg；約0.01〜4.8 mg/kg；約0.01〜4.6 mg/kg；約0.01〜4.4 mg/kg；又は約0.01〜4.2 mg/kgである。ある実施形態では、ADCの用量は、約0.05〜5 mg/kg；約0.05〜4.8 mg/kg；約0.05〜4.6 mg/kg；約0.05〜4.4 mg/kg；又は約0.05〜4.2 mg/kgである。
【００８４】
ある実施形態では、ADCの用量は、約0.2〜0.8 mg/kgである。ある実施形態では、ADCの用量は、約0.2〜0.7 mg/kg；約0.2〜0.6 mg/kg；約0.3〜0.7 mg/kg；又は約0.3〜0.6 mg/kgである。
【００８５】
ある実施形態では、ADCの用量は、約0.01 mg/kg；約0.02 mg/kg；約0.03 mg/kg；約0.04 mg/kg；約0.05 mg/kg；約0.06 mg/kg；約0.07 mg/kg；約0.08 mg/kg；約0.09 mg/kg；約0.1 mg/kg；約0.15 mg/kg；約0.2 mg/kg；約0.25 mg/kg；約0.3 mg/kg；約0.35 mg/kg；約0.4 mg/kg；約0.45 mg/kg；約0.5 mg/kg；約0.55 mg/kg；約0.6 mg/kg；約0.65 mg/kg；約0.7 mg/kg；約0.75 mg/kg；約0.8 mg/kg；約0.85 mg/kg；約0.9 mg/kg；約0.95 mg/kg；約1 mg/kg；約1.5 mg/kg；約2 mg/kg；約2.5 mg/kg；約3 mg/kg；約3.5 mg/kg；約4 mg/kg；約4.5 mg/kg；又は約5 mg/kgである。
【００８６】
ある実施形態では、ADCを患者に約0.1 mg/kgの用量で投与する。ある実施形態では、ADCを患者に約0.3 mg/kgの用量で投与する。ADCを患者に約0.6 mg/kgの用量で投与する。ADCを患者に約1.0 mg/kgの用量で投与する。
【００８７】
更に別の実施形態では、ADCをヒト患者に、約2〜12 mg、約2〜11 mg、約2〜10 mg、約2〜9 mg、約2〜8 mg、約2〜7 mg、約2〜6 mg、約2〜5 mg、約2〜4 mg、又は 2〜3 mgの固定用量で投与する。ある実施形態では、ADCの用量は、約1 mg、約1.5 mg、約2 mg、約2.5 mg、約3 mg、約3.5 mg、約4 mg、約4.5 mg、約5 mg、約5.5 mg、約6 mg、約6.5 mg、約7 mg、約7.5 mg、約8 mg、約8.5 mg、約9 mg、約9.5 mg、約10 mg、約10.5 mg、約11 mg、約11.5 mg、又は約12 mgである。ある実施形態では、ADCの用量は、約0.01 mg、約0.02 mg、約0.03 mg、約0.04 mg、約0.05 mg、約0.06 mg、約0.07 mg、約0.08 mg、約0.09 mg、約1 mg、約1.5 mg、約2 mg、約2.5 mg、約3 mg、約3.5 mg、約4 mg、約4.5 mg、約5 mgである。上述の用量の範囲は、ここに開示した方法に使用することができる用量の量に含まれる。
【００８８】
ある実施形態では、前記投薬レジメンは、1日目及び3日目に0.1 mg/kgのADCを投与することを含む。別の実施形態では、前記投薬レジメンは、1日目及び3日目に0.2 mg/kgのADCを投与することを含む。別の実施形態では、前記投薬レジメンは、1日目及び3日目に0.3 mg/kgのADCを投与することを含む。更に別の実施形態では、前記投薬レジメンは、1日目に0.3 mg/kgのADCを投与すること、及び3日目に0.2 mg/kgのADCを投与することを含む。或いは、前記投薬レジメンは、約0.1 mg/kg Q3D x 2；又は約0.3 mg/kg Q3D x 2；又は約0.6 mg/kg Q3D x 2の投与を含む。
【００８９】
また、本発明の投薬レジメンで使用する用量を、当該技術分野で知られている標準方法(例えば、U.S. Department of Health and Human Services Food and Drug Administration Center for Drug Evaluation and Research (CDER). “Guidance for Industry Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers.” July 2005; http://www.fda.gov/cder/guidance/index.htm)を用いて、本明細書の実施例に記載したサルでの用量から計算することもできる。例えば、いくつかの実施形態では、ヒト等価用量(human equivalent dose (HED)を、換算係数を用いて動物での用量データから導き出すことがある。ある非限定的な例として、Nair and Jacob, J. Basic Clin. Pharma. (2016) 7:27-31は、動物種間での用量の外挿方法を開示する。例えば、ある非限定的な例において、HEDを、アカゲザルサルでの用量に約0.324を乗じることによって、アカゲザルサルでの用量から導き出すことがある。別の非限定的な例では、HEDを、マウスでの用量に約0.081を乗じることによって、マウスでの用量から導き出すことがある。
【００９０】
AUC、Cmax及びTmaxのような薬力学的パラメータもまた、本発明を特徴付けるために使用することがある。当業者は、本明細書に記載される薬物動態学的(例えば、限定されるものではないが、AUC、Cmax 及びTmax)パラメータを測定する及び計算するための様々な方法を理解するであろう。更に、当業者は、本明細書に記載される薬物動態学的パラメータを、統計的に比較する(例えば、限定されるものではないが、ベースラインから治療後までの変化を比較する、及び／又は治療群間を比較する)、及び／又は解析する様々な方法を理解するであろう。
【００９１】
ある実施形態では、本明細書に記載する方法において使用するためのADC投薬レジメンを提供する、ここで、前記投薬レジメンは、当業者の中のある者が知る方法によって決定する場合に、1〜500 μg/mL 時間の間のAUC(0-inf)値を提供する。ある実施形態では、前記投薬レジメンは、当業者の中のある者が知る方法によって決定する場合に、約1-50 μg/mL 時間の間の、約50-100 μg/mL 時間の間の、約100-150 μg/mL 時間の間の、約150-200 μg/mL 時間の間の、約200-250 μg/mL 時間の間の、約250-300 μg/mL 時間の間の、約300-350 μg/mL 時間の間の、約350-400 μg/mL 時間の間の、約400-450 μg/mL 時間の間の、約450-500 μg/mL 時間の間の、AUC(0-inf)値を提供する。別の実施形態では、前記投薬レジメンは、当業者の中のある者が知る方法によって決定する場合に、限定されるものではないが、約10 μg/mL 時間、約20 μg/mL 時間、約30 μg/mL 時間、約40 μg/mL 時間、約50 μg/mL 時間、約60 μg/mL 時間、約70 μg/mL 時間、約80 μg/mL 時間、約90 μg/mL 時間、約100 μg/mL 時間、約110 μg/mL 時間、約120 μg/mL 時間、約130 μg/mL 時間、約140 μg/mL 時間、約150 μg/mL 時間、約160 μg/mL 時間、約170 μg/mL 時間、約180 μg/mL 時間、約190 μg/mL 時間、約200 μg/mL 時間、約210 μg/mL 時間、約220 μg/mL 時間、約230 μg/mL 時間、約240 μg/mL 時間、約250 μg/mL 時間、約260 μg/mL 時間、約270 μg/mL 時間、約280 μg/mL 時間、約290 μg/mL 時間、約300 μg/mL 時間、約310 μg/mL 時間、約320 μg/mL 時間、約330 μg/mL 時間、約340 μg/mL 時間、約350 μg/mL 時間、約360 μg/mL 時間、約370 μg/mL 時間、約380 μg/mL 時間、約390 μg/mL 時間、約400 μg/mL 時間、約410 μg/mL 時間、約420 μg/mL 時間、約430 μg/mL 時間、約440 μg/mL 時間、約450 μg/mL 時間、約460 μg/mL 時間、約470 μg/mL 時間、約480 μg/mL 時間、約490 μg/mL 時間、約500 μg/mL 時間、等のAUC(0-inf)値を提供する。別の実施形態では、これらの値及び範囲は全て±10%であってもよい。
【００９２】
別の実施形態では、本明細書に記載する方法において使用するためのADC投薬レジメンを提供する、ここで、前記投薬レジメンは、当業者の中のある者が知る方法によって決定する場合に、0.1〜20 μg/mLの間のCmax値を提供する。ある実施形態では、前記投薬レジメンは、当業者の中のある者が知る方法によって決定する場合に、約0.1-0.5 μg/mLの間の、約0.5-1.0 μg/mLの間の、約1.0-1.5 μg/mLの間の、約1.5-2.0 μg/mLの間の、約2.0-2.5 μg/mLの間の、約2.5-3.0 μg/mLの間の、約3.0-3.5 μg/mLの間の、約3.5-4.0 μg/mLの間の、約4.0-4.5 μg/mLの間の、約4.5-5.0 μg/mLの間の、約5.0-5.5 μg/mLの間の、約5.5-6.0 μg/mLの間の、約6.0-6.5 μg/mLの間の、約6.5-7.0 μg/mLの間の、約7.0-7.5 μg/mLの間の、約7.5-8.0 μg/mLの間の、約8.0-8.5 μg/mLの間の、約8.5-9.0 μg/mLの間の、約9.0-9.5 μg/mLの間の、約9.5-10.0 μg/mLの間の、約10.0-10.5 μg/mLの間の、約10.5-11.0 μg/mLの間の、約11.0-11.5 μg/mLの間の、約11.5-12.0 μg/mLの間の、約12.0-12.5 μg/mLの間の、約12.5-13.0 μg/mLの間の、約13.0-13.5 μg/mLの間の、約13.5-14.0 μg/mLの間の、約14.0-14.5 μg/mLの間の、約14.5-15.0 μg/mLの間の、約15.0-15.5 μg/mLの間の、約15.5-16.0 μg/mLの間の、約16.0-16.5 μg/mLの間の、約16.5-17.0 μg/mLの間の、約17.0-17.5 μg/mLの間の、約18.5-19.0 μg/mLの間の、約19.0-19.5 μg/mLの間の、約19.5-20.0 μg/mLの間の、Cmax値を提供する。別の実施形態では、前記投薬レジメンは、当業者の中のある者が知る方法によって決定する場合に、限定されるものではないが、約0.1 μg/mL、約0.5 μg/mL、約1.0 μg/mL、約1.5 μg/mL、約2.0 μg/mL、約2.5 μg/mL、約3.0 μg/mL、約3.5 μg/mL、約4.0 μg/mL、約4.5 μg/mL、約5.0 μg/mL、約5.5 μg/mL、約6.0 μg/mL、約6.5 μg/mL、約7.0 μg/mL、約7.5 μg/mL、約8.0 μg/mL、約8.5 μg/mL、約9.0 μg/mL、約9.5 μg/mL、約10.0 μg/mL、約10.5 μg/mL、約11.0 μg/mL、約11.5 μg/mL、約12.0 μg/mL、約12.5 μg/mL、約13.0 μg/mL、約13.5 μg/mL、約14.0 μg/mL、約14.5 μg/mL、約15.0 μg/mL、約15.5 μg/mL、約16.0 μg/mL、約16.5 μg/mL、約17.0 μg/mL、約17.5 μg/mL、約18.0 μg/mL、約18.5 μg/mL、約19.0 μg/mL、約19.5 μg/mL、約20.0 μg/mL、等のCmax値を提供する。別の実施形態では、これらの値及び範囲は全て±10%であってもよい。
【００９３】
別の実施形態では、本明細書に記載する方法において使用するための抗体又はADC投薬レジメンを提供する、ここで、前記投薬レジメンは、AUC(0-inf)値(又は範囲)及びCmax値(又は範囲)の両方を提供する、前記値を特徴とし、及び値の範囲は上述される。
【００９４】
ある実施形態では、本発明は、このように、T細胞が発現する抗原に結合することができるADCを投与することによって、移植した造血幹細胞の生着を促進する組成物及び方法を提供する。この投与によって、CD4+及びCD8+ T細胞のような内因性のT細胞の集団が選択的に減少することがある。このようにT細胞を選択的に減少させることによって、次に、外因性(例えば、自家、同種、又は同系)の造血幹細胞グラフトを移植した後のグラフト拒絶を防止することができる。例えば、本明細書に記載する場合、ADCを使用して、CD4+及び／又はCD8+ T細胞を選択的に減少させることにより、移植した造血幹細胞グラフトに対して生じることがあるT細胞媒介免疫反応を、減弱させることができる。本発明は、造血幹細胞移植治療を必要とする患者に、一定の低毒性プロトコルに従って、ADCを、移植した造血幹細胞の生存及び生着能を促進させるために、並びに前記患者に対するADCの毒性を減少させるために、投与することができるという知見に、部分的に、基づいている。
【００９５】
本明細書に記載するADCを投与することにより造血幹細胞移植物が生着することを、種々の実験的な測定において、明らかにすることができる。例えば、移植した造血幹細胞が生着することを、本明細書に記載する、抗原に結合することができる抗体又はその抗原結合フラグメントを投与した後、及びその後に造血幹細胞移植を施した後に、患者の骨髄内に存在する競合的再定植ユニット(competitive repopulating unit)(CRU)の量を評価することによって、評価することがある。更に、蛍光の、発色の、又は発光の産物を生じる化学反応を触媒する酵素などのレポータ遺伝子をベクターの中に組み込ませて、このベクターをドナー(donor)の造血幹細胞にトランスフェクトし、続いて、骨髄などの造血幹細胞がホーミングした組織中における対応するシグナルをモニタリングすることによって、造血幹細胞移植の生着を観察することができる。また、例えば、当技術分野で知られている蛍光活性化細胞選別(fluorescence activated cell sorting)(FACS)解析方法によって決定するように、造血幹細胞及び前駆細胞の量及び生存を調べることによって、造血幹細胞の生着を観察することもできる。移植後の期間中の末梢血における白血球細胞数を測定することによって、及び／又は骨髄穿刺サンプルにおいてドナー(donor)細胞により骨髄細胞が回復したことを測定することによって、生着したことを決定することもできる。
【００９６】
本明細書に記載する場合、ADCを含む医薬製剤は、このようなADCを、1種以上の任意選択的な薬学的に許容可能な担体と混合することによって(Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition、Osol、AEd.(1980))、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で、調製される。薬学的に許容可能な担体は、一般に、使用する用量及び濃度で、レシピエントに対して無毒性であり、これには、限定されるものではないが、以下が含まれる：リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸等のバッファー；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；保存剤（塩化オクタデシルジメチルベンジル・アンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル若しくはベンジル・アルコール；メチル若しくはプロピルパラベン等のアルキル・パラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；3-ペンタノール；及びm-クレゾール等）；低分子量(約10残基未満)ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、若しくは免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、若しくはリジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、若しくはデキストリンなどの他の炭水化物；EDTAなどのキレート剤；ショ糖、マンニトール、トレハロース、若しくはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成性対イオン；金属複合体（例えば、Zn-タンパク質複合体）；並びに／又はポリエチレン・グリコール（PEG）などの非イオン性界面活性剤。 
【００９７】
本明細書に記載する理由により、効率的に、オン-ターゲットで細胞を減少させること(例えば、網状赤血球、血小板(platelets)、及び／又は造血幹細胞並びに前駆体細胞)、有意なオフ-ターゲットな毒性(例えば、ある特定の肝臓タンパク質のレベルが有意に増加すること)を最小限にすること、の両方を可能にする、コンディショニング療法(例えば、造血幹細胞移植前のコンディショニング)の適切な投薬スキームを達成することは、特に速い(即ち、短い)半減期のADCを使用する場合は、難しい。この問題は、コンディショニング療法の適切な投薬スキームが有効であるには、より低いADCの最大血漿濃度で、充分な期間にわたって同様のオン-ターゲットの暴露を維持することが必要になること、を考えると、更に複雑になり、ターゲット・レセプターが細胞内部に移行すること及びADCから細胞毒素が離れる速度により、更に複雑になる可能性がある問題、を考えると、更に複雑になる。
【００９８】
ある実施形態では、本明細書中で開示する方法は、コンディショニングのためにADCを受ける患者において、肝毒性を最小限に抑える。例えば、ある特定の実施形態では、本明細書中で開示する方法によって、24時間、48時間、72時間、又は96時間を超えて、前記患者において、肝臓のマーカー・レベルが、既知の毒性レベル未満に留まるようになる。他の実施形態では、本明細書中で開示する方法によって、24時間、48時間、72時間、又は96時間を超えて、前記患者において、肝臓のマーカー・レベルが、基準範囲内に留まるようになる。ある特定の実施形態では、本明細書中で開示する方法によって、肝臓のマーカー・レベルの上昇が、24時間、48時間、72時間、又は96時間を超えて、基準範囲より1.5倍以下、基準範囲より3倍以下、基準範囲より5倍以下、又は基準範囲より10倍以下、になる。毒性試験に使用することがある肝臓のマーカーの例としては、アラニン・アミノトランスアミナーゼ(ALT)、乳酸脱水素酵素(LDH)、及びアスパラギン酸アミノトランスアミナーゼ(AST)等が挙げられる。ある特定の実施形態では、本明細書に記載するような(即ち、単回用量の代わりに2回用量で投与する)ADCを投与することによって、肝臓のマーカー(例えば、AST、LDH、及び／又はALT)は一過的に増加する。いくつかの例では、毒性を示す肝臓のマーカーは高レベルに達することがあるが、ある特定の期間（例えば、約12時間、約18時間、約24時間、約36時間、約48時間、約72時間、約3日、約3.5日、約4日、約4.5日、約5日、約5.5日、約6日、約6.5日、約7日、約7.5日、又は1週間未満）の範囲内であり、前記肝臓のマーカー・レベルは、肝毒性に関連しない正常レベルに戻る。例えば、ヒト(平均的な成人男性)において、ALTの正常な非毒性レベルは1リットル当たり7〜55単位(U/L)であり；ASTの正常な非毒性レベルは8〜48U/Lである。ある特定の実施形態では、患者の血中AST、ALT、又はLDHレベルの少なくとも1つは、前記患者に、第1の用量のADCを投与することと前記第1の用量を投与した14日後との間に、毒性レベルに達しない。例えば、前記患者に第1の用量を投与し、続いて、前記第1の用量を投与してから例えば5、10、又は14日以内に、第2の用量、第3の用量、第4の用量、又はそれより大きい数の用量を投与することがある。しかし、前記患者の血中AST、ALT、又はLDHレベルの少なくとも1つは、前記患者に、第1の用量のADCを投与することと前記第1の用量を投与した14日後との間に、毒性レベルに達しない。
【００９９】
ある特定の実施形態では、前記患者の血中AST、ALT、又はLDHレベルの少なくとも1つは、正常レベルを超えて上昇せず、正常レベルを1.5倍を超えて上昇せず、正常レベルを3倍を超えて上昇せず、正常レベルを5倍を超えて上昇せず、又は正常レベルを10倍を超えて上昇しない。
【０１００】
本発明は、造血細胞(例えば、造血幹細胞、免疫細胞又はがん細胞)が発現する抗原に結合することができるADCを使用して、有害事象及び毒性を減少させる投薬レジメンを包含する。このような抗原の例としては、限定されるものではないが、CD117、CD2、CD5、CD45、CD252、CD134、及びCD137が挙げられる。
【０１０１】
抗CD117抗体
ある実施形態では、本明細書中で開示する方法は、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗CD117抗体を含む抗CD117 ADCを投与することを含む。本明細書中で開示する抗体、又はその抗原結合フラグメントは、GNNK+ CD117のようなCD117に結合することができ、治療薬剤として使用して、(i)CD117+細胞を特徴とするがん及び自己免疫疾患を直接的に治療する、及び(ii)移植療法を必要とする患者において、移植された造血幹細胞の生着を促進する。これらの治療活性は、例えば、がん細胞、自己免疫細胞、又は造血幹細胞のような細胞の表面に発現しているCD117(例えば、GNNK+ CD117)に、抗CD117抗体、又はその抗原結合フラグメントが結合すること、続いて、細胞死を誘導すること、に起因する。内因性の造血幹細胞を減少させることにより、移植した造血幹細胞がホーミングすることができるニッチが提供され、その後、生産的な造血が確立される。このようにして、移植した造血幹細胞は、本明細書に記載の幹細胞障害に罹患しているヒト患者等の患者に、うまく生着することができる。
【０１０２】
ヒトCD117(c-Kitとも呼ばれる、mRNA NCBI参照配列: NM_000222.2、タンパク質NCBI参照配列: NP_000213.1（即ち、配列番号(SEQ ID No): 232を参照）)に結合することができる抗体及び抗原結合フラグメント(GNNK+CD117に結合することができる抗体及び抗原結合フラグメントを含む)を、造血幹細胞移植療法に向けて患者をコンディショニングするために、本明細書に記載する組成物及び方法と組み合わせて使用することがある。集団のかなりの割合で存在する、CD117のコーディング領域又は細胞外ドメインに影響を及ぼす多型は、現在のところ、腫瘍以外の適応症ではよく知られていない。CD117には少なくとも4種類のアイソフォームが同定されており、腫瘍細胞では、更なるアイソフォームが発現している可能性がある。CD117アイソフォームのうち2つは、タンパク質の細胞内ドメインに局在し、2つは外側の膜近傍領域に存在する。2つの細胞外アイソフォーム、GNNK+とGNNK-は、4アミノ酸配列が存在する(GNNK+)又は存在しない(GNNK-)点で異なる。これらのアイソフォームはリガンド(SCF)に対して同じ親和性を有することが報告されているが、GNNK-アイソフォームへのリガンド結合は、細胞内部への取り込み及び分解を増大させることが報告されている。GNNK+アイソフォームを、GNNK+及びGNNK-タンパク質を含むこのアイソフォームに対して生成される抗体として、CD117に結合し得る抗体を生成するための免疫原として使用することがある。
【０１０３】
ある実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物(ADCを含む)に使用することができる抗CD117抗体は、抗体77(Ab77)である。抗体77(Ab77)の重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)： 9として以下に提供する。
【化３】
2021526525.tif 000005
【０１０４】
Ab77のVH CDRアミノ酸配列を上記に下線で示し、以下の通りである：
TYWIG (VH CDR1; SEQ ID NO: 94); IIYPGDSDTRYSPSFQG (VH CDR2; SEQ ID NO: 2); 及び HGRGYNGYEGAFDI (VH CDR3; SEQ ID NO: 3)。
【０１０５】
Ab77の軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)：93として以下に提供する。
【化４】
2021526525.tif 000006
【０１０６】
Ab77のVL CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである： 
RASQGVISALA (VL CDR1; SEQ ID NO: 95); DASILES (VL CDR2; SEQ ID NO: 96); 及び QQFNSYPLT (VL CDR3; SEQ ID NO: 97)。
【０１０７】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物(ADCを含む)に使用することができる抗CD117抗体は、抗体79(Ab79)である。Ab79の重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)： 9として以下に提供する。
【化５】
2021526525.tif 000007
【０１０８】
Ab79のVH CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである：
TYWIG (VH CDR1; SEQ ID NO: 94); IIYPGDSDTRYSPSFQG (VH CDR2; SEQ ID NO: 2); 及び HGRGYNGYEGAFDI (VH CDR3; SEQ ID NO: 3)。
【０１０９】
Ab79の軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を、以下の配列番号(SEQ ID NO)： 99として以下に提供する。
【化６】
2021526525.tif 000008
【０１１０】
Ab79のVL CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである： 
RASQGVGSALA (VL CDR1; SEQ ID NO: 100); DASILES (VL CDR2; SEQ ID NO: 96); 及び QQFNSYPLT (VL CDR3; SEQ ID NO: 97)。
【０１１１】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物(ADCを含む)に使用することができる抗CD117抗体は、抗体81(Ab81)である。Ab81の重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)： 9として以下に提供する。
【化７】
2021526525.tif 000009
【０１１２】
Ab81のVH CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである：
TYWIG (VH CDR1; SEQ ID NO: 94); IIYPGDSDTRYSPSFQG (VH CDR2; SEQ ID NO: 2); 及び HGRGYNGYEGAFDI (VH CDR3; SEQ ID NO: 3)。
【０１１３】
Ab81の軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)：102として以下に提供する。
【化８】
2021526525.tif 000010
【０１１４】
Ab81のVL CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである： RASQGVISALA (VL CDR1; SEQ ID NO: 95); DASTLES (VL CDR2; SEQ ID NO: 103); 及びQQFNSYPLT (VL CDR3; SEQ ID NO: 97)。
【０１１５】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物(ADCを含む)に使用することができる抗CD117抗体は、抗体85(Ab85)である。Ab85の重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)：106として以下に提供する。
【化９】
2021526525.tif 000011
【０１１６】
Ab85のVH CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである：
NYWIG (VH CDR1; SEQ ID NO: 108); IINPRDSDTRYRPSFQG (VH CDR2; SEQ ID NO: 109); 及び HGRGYEGYEGAFDI (VH CDR3; SEQ ID NO: 110)。
【０１１７】
Ab85の軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)：107として以下に提供する。
【化１０】
2021526525.tif 000012
【０１１８】
Ab85のVL CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである： 
RSSQGIRSDLG(VL CDR1；配列番号(SEQ ID NO)：111)； DASNLET(VL CDR2；配列番号(SEQ ID NO)：112)；及びQQANGFPLT(VL CDR3；配列番号(SEQ ID NO)：113)。
【０１１９】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物(ADCを含む)に使用することができる抗CD117抗体は、抗体86(Ab86)である。Ab86の重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)：114として以下に提供する。
【化１１】
2021526525.tif 000013
【０１２０】
Ab86のVH CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである： 
NYWIG(VH CDR1；配列番号(SEQ ID NO)：108)；IIYPGDSDIRYSPSLQG(VH CDR2；配列番号(SEQ ID NO)：116)；及びHGRGYNGYEGAFDI(VH CDR3；配列番号(SEQ ID NO)： 3)。
【０１２１】
Ab86の軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)：115として以下に提供する。
【化１２】
2021526525.tif 000014
【０１２２】
Ab86のVL CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである： 
RASQGIGDSLA(VL CDR1；配列番号(SEQ ID NO)：117)； DASNLET(VL CDR2；配列番号(SEQ ID NO)：112)；及びQQLNGYPIT(VL CDR3；配列番号(SEQ ID NO)：118)。
【０１２３】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物(ADCを含む)に使用することができる抗CD117抗体は、抗体87(Ab87)である。Ab87の重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)：106として以下に提供する。
【化１３】
2021526525.tif 000015
【０１２４】
Ab87のVH CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである： 
NYWIG(VH CDR1；配列番号(SEQ ID NO)：108)；IINPRDSDTRYRPSFQG(VH CDR2；配列番号(SEQ ID NO)：109)；及びHGRGYEGYEGAFDI(VH CDR3；配列番号(SEQ ID NO)：110)。
【０１２５】
Ab87の軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)：119として以下に提供する。
【化１４】
2021526525.tif 000016
【０１２６】
Ab87のVL CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである： 
RASQGIRNDLG(VL CDR1；配列番号(SEQ ID NO)：120)； DASSLES(VL CDR2；配列番号(SEQ ID NO)： 5)；及びQQLNGYPIT(VL CDR3；配列番号(SEQ ID NO)：118)。
【０１２７】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物(ADCを含む)に使用することができる抗CD117抗体は、抗体88(Ab88)である。Ab88の重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)：121として以下に提供する。
【化１５】
2021526525.tif 000017
【０１２８】
Ab88のVH CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである： 
NYWIG(VH CDR1；配列番号(SEQ ID NO)：108)；IIYPGDSLTRYSPSFQG(VH CDR2；配列番号(SEQ ID NO)：122)；及びHGRGYNGYEGAFDI(VH CDR3；配列番号(SEQ ID NO)： 3)。
【０１２９】
Ab88の軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)：119として以下に提供する。
【化１６】
2021526525.tif 000018
【０１３０】
Ab88のVL CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである：
RASQGIRNDLG(VL CDR1；配列番号(SEQ ID NO)：120)； DASSLES(VL CDR2；配列番号(SEQ ID NO)： 5)；及びQQLNGYPIT(VL CDR3；配列番号(SEQ ID NO)：118)。
【０１３１】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物(ADCを含む)に使用することができる抗CD117抗体は、抗体89(Ab89)である。Ab89の重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)：123として以下に提供する。
【化１７】
2021526525.tif 000019
【０１３２】
Ab89のVH CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである： NYWIG(VH CDR1；配列番号(SEQ ID NO)：108)；IIYPGDSDTRYSPSFQG(VH CDR2；配列番号(SEQ ID NO)： 2)；及びHGRGYNGYEGAFDI(VH CDR3；配列番号(SEQ ID NO)： 3)。
【０１３３】
Ab89の軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)：115として以下に提供する。
【化１８】
2021526525.tif 000020
【０１３４】
Ab89のVL CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである： 
RASQGIGDSLA(VL CDR1；配列番号(SEQ ID NO)：117)； DASNLET(VL CDR2；配列番号(SEQ ID NO)：112)；及びQQLNGYPIT(VL CDR3；配列番号(SEQ ID NO)：118)。
【０１３５】
以下の抗体もまた、好ましい抗CD117抗体として同定した： HC-245/LC-245(即ち、Ab245)、HC-246/LC-246(即ち、Ab246)、HC-247/LC-247(即ち、Ab247)、HC-248/LC-248(即ち、Ab248)、及びHC-249/LC-249(即ち、Ab249)。
【０１３６】
【表１】
2021526525.tif 000021
【０１３７】
本明細書に記載する患者コンディショニング方法と併せて使用することがある、更なる抗CD117抗体としては、例えば、ヒト化SR-1抗体を記載する米国特許第7,915,391号；例えば、抗CD117 A3C6E2抗体を記載する米国特許第5,808,002号；並びに例えば、ヒトCD117のPro317、Asn320、Glu329、Val331、Asp332、Lus358、Glue360、Glue376、His378、及び／又はThr380を含むエピトープに結合する抗CD117抗体を記載する、WO 2015/050959に記載されるもの；並びに、例えば、以下のCDR配列を有する抗CD117抗体CK6を記載するUS2012/0288506(米国特許第8,552,157号としても公開される)に記載されるものが挙げられる：
アミノ酸配列SYWIG(配列番号(SEQ ID NO)：1)を有するCDR-H1；
アミノ酸配列IIYPGDSDTRYSPSFQG(配列番号(SEQ ID NO)： 2)を有するCDR-H2；
アミノ酸配列HGRGYNGYEGAFDI(配列番号(SEQ ID NO)： 3)を有するCDR-H3；
アミノ酸配列RASQGISSALA(配列番号(SEQ ID NO)： 4)を有するCDR-L1；
アミノ酸配列DASSLES(配列番号(SEQ ID NO)： 5)を有するCDR-L2；及び
アミノ酸配列CQQFNSYPLT(配列番号(SEQ ID NO)： 6)を有するCDR-L3。
【０１３８】
抗CD137抗体
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、ヒトCD137の細胞外ドメインに特異的に結合する抗体又はそのフラグメントを含むADCを含む。ヒトCD137の細胞外ドメインであって、以下のアミノ酸配列を有する：
【化１９】
2021526525.tif 000022
【０１３９】
ある実施形態では、本明細書が開示する方法は、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗CD137抗体を含む抗CD137 ADCを投与することを含む。例えば、CD137に結合することができるADCを治療薬剤として使用して、同種移植を受けたヒト患者中の同種反応性T細胞を減少させることができる。更に、CD137に結合することができる抗体及びその抗原結合フラグメントを治療薬剤として使用して、GvHDに罹患している又はGvHDのリスクがある患者において、GvHDのリスクを予防する又は低減することができる、ということが発見された。CD137は4-1BBとも呼ばれる。
【０１４０】
T細胞はCD137を発現することが示されている（この抗原は、共刺激分子の膜貫通TNFレセプター・スーパーファミリーであり、種々の造血細胞上で発現し、T細胞の活性化を促進し、並びにT細胞の増殖及び生存を調節する）（例えば、Cannons et al., J. Immunol. 167:1313-1324, 2001を参照のこと、この開示は、T細胞によるCD137の発現に関連するので、参照により本明細書中に取り込まれる）。抗体、その抗原結合フラグメント、及びリガンドを、当技術分野で公知であり、及び本明細書に記載する技術（例えば、免疫化、計算モデル化技術、及びin vitro選択方法（例えば、以下に記載されるファージ・ディスプレイ及び細胞ベースのディスプレイのプラットフォーム等））を使用して、同定することがある。
【０１４１】
ある実施形態では、本明細書に記載する方法において使用することがある抗CD137抗体は、マウス抗CD137抗体BBK2(Thermo Fisher； MS621PABX)又はBBK2抗体に対応する抗原結合領域を含む抗CD137抗体である。前記BBK2抗体(BBK-2抗体又は抗4-1BB抗体とも呼ばれる)は、ヒト4-1BB組換えタンパク質(4-1BBはCD137としても知られる)の外部ドメインに結合するマウス・モノクローナル抗体(IgG1、カッパ)である。ある特定の実施形態では、本発明の方法及び組成物は、BBK2抗体の結合領域(例えば、CDR)を含む抗CD137抗体を含む。別の実施形態では、本発明の方法及び組成物は、前記BBK2抗体がCD137上のそのエピトープに結合することを競合的に阻害する抗体を含む。ある特定の実施形態では、前記抗CD137抗体は、ヒト化BBK2又はキメラBBK2である。
【０１４２】
ある実施形態では、本明細書に記載の方法は、BBK2の可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含むキメラ抗CD137(ch-BBK2)抗体を含む。ある特定の実施形態では、キメラBBK2抗体は、ヒト定常領域を含むIgG1抗体である。ch-BBK2の重鎖アミノ酸配列を配列番号(SEQ ID NO)： 214に記載し、ch-BBK2の軽鎖アミノ酸配列を配列番号(SEQ ID NO)： 215に記載する。重鎖及び軽鎖配列のそれぞれのCDR領域(CDR1、CDR2、及びCDR3)を、以下に太字で記載する。可変領域をイタリック体で示す。
【化２０】
2021526525.tif 000023
【化２１】
2021526525.tif 000024
【０１４３】
前記のCDR領域(及びBBK2抗体)は、Lee et al. (2002) European J of Immunogenetics29(5):449-452に記載されている。従って、ある実施形態では、抗CD137抗体BBK2(ch-BBK2を含む)のVH CDRアミノ酸配列は、以下の通りである： SGYTFTSYW(VH CDR1；配列番号(SEQ ID NO)： 252)； NIYPSDSYT(VH CDR2；配列番号(SEQ ID NO)： 253)及びTRNGVEGYPHYYAME(VH CDR3；配列番号(SEQ ID NO)： 254)。抗CD137抗体BBK2(ch-BBK2を含む)のVL CDRアミノ酸配列は、以下の通りである： SQDLSNH(VL CDR1；配列番号(SEQ ID NO)： 255)； YYTS(VL CDR2；配列番号(SEQ ID NO)： 256)及びCQQGYTLPY(VL CDR3；配列番号(SEQ ID NO)： 257)。
【０１４４】
あるいは、BBK2のCDR領域がKabat番号付けに従って定義することができる。Kabat番号付けによって定義されるようなCDRを、重鎖配列及び軽鎖配列の各々について、以下に記載する(以下に太字で記載する)。BBK2の可変領域をイタリック体で示す。
【化２２】
2021526525.tif 000025
(配列番号(SEQ ID NO)：214；ch-BK2重鎖)
【化２３】
2021526525.tif 000026
(配列番号(SEQ ID NO)：215；ch-BK2軽鎖)
【０１４５】
従って、ある実施形態では、抗CD137抗体BBK2(ch-BBK2を含む)のVH CDRアミノ酸配列は、以下のとおりである。SYWIN(VH CDR1；配列番号(SEQ ID NO)： 218)； NIYPSDSYTNYNQKFKD(VH CDR2；配列番号(SEQ ID NO)： 219)及びNGVEGYPHYYAMEY(VH CDR3；配列番号(SEQ ID NO)： 220)、及び抗CD137抗体BBK2(ch-BBK2を含む)のVL CDRアミノ酸配列は、以下のとおりである： RASQDLSNHLY(VL CDR1；配列番号(SEQ ID NO)： 221)； YTSRLHS(VL CDR2；配列番号(SEQ ID NO)： 222)及びQQGYTLPYT(VL CDR3；配列番号(SEQ ID NO)： 223)。
【０１４６】
BBK2の重鎖可変領域は、
【化２４】
2021526525.tif 000027
(配列番号(SEQ ID NO)：216)
【０１４７】
BBK2の軽鎖可変領域は、
【化２５】
2021526525.tif 000028
(配列番号(SEQ ID NO)：217)
抗CD137抗体(抗CD137 ADCを含む)は、上記の重鎖及び軽鎖可変領域アミノ酸配列を含むことがある。
【０１４８】
ある実施形態では、抗CD137抗体、例えばキメラ(ch-BBK2)抗体又はヒト化BBK2抗体は、BBK2重鎖CDRを含む重鎖可変領域を含む、及びBBK2軽鎖CDRを含む軽鎖可変領域を含む。
【０１４９】
ある実施形態では、抗CD137抗体、例えばキメラ(ch-BBK2)抗体又はキメラBBK2抗体は、BBK2重鎖CDRを含む重鎖可変領域を含む、及びBBK2軽鎖CDRを含む軽鎖可変領域を含む。
【０１５０】
従って、BBK2、ヒト化BBK2、又はキメラBBK2抗体を、本明細書に記載する抗CD137 ADC及び方法において使用することがある。これらの抗体の各々は、当技術分野で公知の方法及び本明細書に記載する方法を使用して、以下に記載する細胞毒素のいずれかにコンジュゲートすることがある。
【０１５１】
抗CD5抗体
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、ヒトCD5に特異的に結合する抗体又はそのフラグメントを含むADCを含む。ヒトCD5は、LEU1又はT1とも呼ばれる。ヒトCD5は、胸腺細胞、Tリンパ球及びBリンパ球のサブセットの表面にみられるI型膜貫通糖タンパク質である。ヒトCD5の2つのアイソフォームが同定されている。アイソフォーム1は438アミノ酸を含み、Jones. et al. (1988) Nature 323 (6086), 346-349に記載されている、及び以下である(NCBI 参照配列： NP_001333385.1)：
【化２６】
2021526525.tif 000029
(配列番号(SEQ ID NO)：234)
【０１５２】
ある実施形態では、本明細書中に開示する方法は、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗CD5抗体を含む抗CD5 ADCを投与することを含む。従って、抗CD5 ADCをコンディショニング薬剤として使用して、移植療法を必要とする患者において、免疫細胞が媒介する移植片拒絶の可能性を予防する、又は減少させることにより、移植した造血幹細胞が生着することを促進する。例えば、抗CD5 ADCは、非自己の造血幹細胞抗原（例えば、造血幹細胞グラフトが発現する非自己のMHC抗原等）と交差反応する、及び免疫反応を開始する免疫細胞（例えば、T細胞、B細胞、又はNK細胞等）が発現する、細胞表面のCD5と結合することができる。抗体及び抗原結合フラグメントが、造血幹細胞に特異的なCD5+免疫細胞にこのように結合することは、例えば、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity)によって、又は前記抗体若しくはその抗原結合フラグメントにコンジュゲートした細胞毒素剤の作用によって、その結合した免疫細胞の死を誘導する。このようにして、非自己の造血幹細胞と交差反応するCD5+免疫細胞の集団が減少することにより、入ってくるグラフトに対する免疫反応を開始するレシピエント(recipient)の免疫システムの能力が弱まり、造血幹細胞移植の生着は、それを必要とする患者におけて、容易になる。このようにして、本明細書に記載する幹細胞障害、がん、自己免疫疾患、又は他の血液疾患に罹患している患者は、対象において欠陥がある及び／又は欠損している細胞の系統を再定植させるために、造血幹細胞移植を前記対象に施すように、治療を受けることがある。前記対象は、例えば、がん性細胞を根絶する目的で対象に処方したが、その過程において、同様に、正常な造血細胞も減少させてしまう化学療法によって、細胞の集団が欠損することがある。
【０１５３】
ある実施形態では、本明細書に記載する方法において使用することがある抗CD5抗体は、抗体5D7v(Ab5D7v)である。Ab5D7vの重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列を以下に提供する。
【化２７】
2021526525.tif 000030
【０１５４】
Ab5D7vのVH CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである： FSLSTSGMG(VH CDR1；配列番号(SEQ ID NO)： 226)； WWDDD(VH CDR2；配列番号(SEQ ID NO)： 227)；及びRRATGTGFDY(VH CDR3；配列番号(SEQ ID NO)： 228)。
【０１５５】
Ab5D7vの軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を以下に示す：
【化２８】
2021526525.tif 000031
【０１５６】
Ab5D7vのVL CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである： QDVGTA(VL CDR1；配列番号(SEQ ID NO)： 229)； WTSTRHT(VL CDR2；配列番号(SEQ ID NO)： 230)；及びYNSYNT(VL CDR3；配列番号(SEQ ID NO)： 231)。
【０１５７】
別の実施形態では、本明細書に記載する方法及び組成物(ADCを含む)において使用することがある抗CD5抗体は、5D7抗体である（例えば、米国特許出願公開第20080254027A1号を参照のこと、この開示は、本明細書に参照により取り込まれる）。別の実施形態では、本明細書に記載する方法及び組成物(ADCを含む)において使用することがある抗CD5抗体は、5D7抗体のバリアントである（例えば、米国特許出願公開第20080254027A1号を参照のこと、この開示は、本明細書に参照により取り込まれる）。
【０１５８】
抗CD2抗体
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、ヒトCD2に特異的に結合する抗体又はそのフラグメントを含むADCを含む。ヒトCD2は、T-細胞表面抗原T11/Leu-5、T11、CD2抗原(p50)、及びヒツジ赤血球細胞レセプター(SRBC)とも呼ばれる。CD2はT細胞上に発現する。ヒトCD2の2つのアイソフォームが同定されている。アイソフォーム1は、Seed, B. et al. (1987) 84: 3365-69 (Sewell et al. (1986) 83: 8718-22も参照) に記載されている351個のアミノ酸を含有する、及び以下である (NCBI 参照配列: NP_001758.2):
【化２９】
2021526525.tif 000032
【０１５９】
CD2の第2のアイソフォームは、377アミノ酸であり、本明細書中でNCBI参照配列： NP_001315538.1として特定する。
【０１６０】
ある実施形態では、本明細書が開示する方法は、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗CD2抗体を含む抗CD2 ADCを投与することを含む。CD2と結合することができるADCを治療薬剤として使用して、免疫細胞を介したグラフト拒絶反応の可能性を予防する又は減少させることにより、移植療法を必要とする患者において、移植した造血幹細胞が生着することを促進させる。例えば、抗CD2 ADCは、1種以上の非自己の造血幹細胞抗原（例えば、造血幹細胞が発現する1種以上の非自己のMHC抗原等）、と交差反応する及び、に対して免疫反応を開始する、免疫細胞（例えば、T細胞又はNK細胞等）が発現する、細胞表面のCD2に結合することができる。そのような抗体及び抗原結合フラグメントが、造血幹細胞に特異的なCD2+免疫細胞にこのように結合することは、例えば、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity)によって、又は前記抗体若しくはその抗原結合フラグメントにコンジュゲートした細胞毒素剤の作用によって、その結合した免疫細胞の死を誘導する。このようにして、非自己の造血幹細胞と交差反応するCD2+免疫細胞の集団が減少することにより、入ってくるグラフトに対する免疫反応を開始するレシピエント(recipient)の免疫システムの能力が弱まり、造血幹細胞移植の生着は、それを必要とする患者におけて、容易になる。このようにして、本明細書に記載する幹細胞障害、がん、自己免疫疾患、又は他の血液疾患に罹患している患者は、対象において欠陥がある及び／又は欠損している細胞の系統を再定植させるために、造血幹細胞移植を前記対象に施すように、治療を受けることがある。前記対象は、例えば、がん性細胞を根絶する目的で対象に処方したが、その過程において、同様に、正常な造血細胞も減少させてしまう化学療法によって、細胞の集団が欠損することがある。
【０１６１】
ある実施形態では、本明細書に記載する方法において使用するADCは、本明細書に記載する抗CD2抗体を含むことがある。例えば、ある実施形態では、抗CD2抗体は、以下に提供するような重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列及び軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を含む：
AbA抗CD2(VH)アミノ酸配列
【化３０】
2021526525.tif 000033
(配列番号(SEQ ID NO)： 240)
AbA抗CD2(VL)アミノ酸配列
【化３１】
2021526525.tif 000034
(配列番号(SEQ ID NO)： 241)
【０１６２】
別の実施形態では、前記抗CD2抗体は、以下に提供するような重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列及び軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を含む：
AbB抗CD2(VH)アミノ酸配列
【化３２】
2021526525.tif 000035
(配列番号(SEQ ID NO)： 242)
AbB抗CD2(VL)アミノ酸配列
【化３３】
2021526525.tif 000036
(配列番号(SEQ ID NO)： 243)
【０１６３】
別の実施形態では、前記抗CD2抗体は、以下に提供するような重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列及び軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を含む：
AbC抗CD2(VH)アミノ酸配列
【化３４】
2021526525.tif 000037
(配列番号(SEQ ID NO)： 244)
AbC抗CD2(VL)アミノ酸配列
【化３５】
2021526525.tif 000038
(配列番号(SEQ ID NO)： 245)
【０１６４】
別の実施形態では、前記抗CD2抗体は、以下に提供するような重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列及び軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を含む：
AbD抗CD2(VH)アミノ酸配列
【化３６】
2021526525.tif 000039
(配列番号(SEQ ID NO)： 246)
AbD抗CD2(VL)アミノ酸配列
【化３７】
2021526525.tif 000040
(配列番号(SEQ ID NO)： 247)
【０１６５】
抗CD45抗体
ヒトCD45(mRNA NCBI参照配列： NM_080921.3、タンパク質NCBI参照配列： NP_563578.2)に結合することができる抗体及び抗原結合フラグメント (アイソフォームCD45ROに結合することができるものを含む)を、本明細書中で開示する組成物及び方法と併せて使用して、例えば、造血幹細胞移植療法を必要とする患者における造血幹細胞グラフトの生着を促進させることがある。CD45の複数のアイソフォームは、一次転写産物中の34個のエキソンの選択的スプライシングから生じる。エクソン4、5、6、及び7（可能性有り）のスプライシングによって、複数のCD45のバリエーションが生じる。以下に述べるCD45アイソフォームでは選択的なエキソンの発現が観察される。
【０１６６】
【表２】
2021526525.tif 000041
【０１６７】
選択的スプライシングによって、CD45タンパク質の様々なアイソフォーム(例えば、CD45RA、CD45RAB、CD45RABC)で発現する、個々のエキソン又はエキソンの組合せがもたらされる。対照的に、CD45ROは、エクソン4〜6の発現を欠き、エクソン1〜3及び7〜34の組合せから生成される。エクソン7も前記タンパク質から排除され、エクソン1〜3及び8〜34が一緒にスプライシングされるというエビデンスがある。E3-8と名づけられたこのタンパク質は、mRNAレベルでは検出されているが、現在のところフロー・サイトメトリーによっては同定されていない。
【０１６８】
CD45ROは、現在、造血幹細胞で発現する唯一の既知のCD45アイソフォームである。CD45RA及びCD45RABCは、検出されていないか、造血器幹細胞の表現型から除外されている。CD45RBは胎児の造血幹細胞に発現しているが、成人の骨髄造血幹細胞には存在しないという、マウスで行われた研究からのエビデンスがある。特に、CD45RCには、アジア人集団内で認められる、エクソン6の多型が高い割合である(CD45RCのエクソン6の多型は、日本人集団の約25%に認められる)。この多型によって、CD45ROの高発現及びCD45RA、CD45RB、及びCD45RCのレベルの低下がもたらされる。更に、CD45RAバリアント(例えば、CD45RAB及びCD45RAC等)は、自己免疫疾患と関連しているエクソン4の多型を示す。
【０１６９】
造血幹細胞上にCD45ROが存在すること、及び他の免疫細胞(例えば、T及びBリンパ球サブセット並びに種々の骨髄性細胞等)上のCD45ROの発現が比較的限定的であることによって、CD45ROは、造血幹細胞移植を必要とする患者へのコンディショニング療法のための、特に非情に適したターゲットになる。CD45ROは、エキソン4、5、及び6の発現を欠くのみであるので、免疫原としてそれを使用することは、パンCD45Ab及びCD45RO特異的な抗体をスクリーニングすることを可能にする。こうして、ある実施形態では、本明細書中で開示する方法において使用する抗CD45 ADCは、ヒトCD45ROに特異的に結合する。
【０１７０】
本明細書に記載する患者コンディショニング方法と共に使用することがある抗CD45抗体は、抗CD45抗体、及びその抗原結合部分を含む。抗体の抗原結合部分は当該分野で周知であり、前記抗体の抗原結合領域に基づいて容易に構築することができる。例示的な実施形態では、本明細書に記載のコンディショニング方法と併せて使用する抗CD45抗体は、モノクローナル抗体若しくはその抗原結合フラグメント、ポリクローナル抗体若しくはその抗原結合フラグメント、ヒト化抗体若しくはその抗原結合フラグメント、完全ヒト抗体若しくはその抗原結合フラグメント、キメラ抗体若しくはその抗原結合フラグメント、バイスペシフィック抗体(bispecific antibody)若しくはその抗原結合フラグメント、二重可変免疫グロブリン・ドメイン、一本鎖Fv分子(scFv)、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体様タンパク質スキャッフォルド、Fvフラグメント、Fabフラグメント、F(ab')2分子、又はタンデムdi-scFv、であることがある。本明細書に記載するADC又は方法において全体的に又は部分的に使用することがある例示的な抗CD45抗体を、以下で提供する。
【０１７１】
ある実施形態では、抗CD45抗体は、BIOLEGEND(登録商標)(カリフォルニア州サンディエゴ)から購入可能なクローンHI30である、若しくはそれに由来する、又はそれらのヒト化バリアントである。抗体のヒト化は、非ヒト抗体の骨格残基及び定常領域残基を、当技術分野で公知の手順に従って(例えば、以下の実施例7に記載されるように)生殖系列ヒト抗体のもので置換することによって行うことができる。本明細書に記載する方法と併せて使用することがある、更なる抗CD45抗体としては、抗CD45抗体ab10558, EP322Y, MEM-28, ab10559, 0.N.125, F10-89-4, HIe-1, 2B11, YTH24.5, PD7/26/16, F10-89-4, 1B7, ab154885, B-A11, phosphor S1007, ab170444, EP350, Y321, GA90, D3/9, X1 6/99, 及び LT45（これらはABCAM(登録商標)(ケンブリッジ、MA)から購入可能である）、又はそれらのヒト化バリアント、が挙げられる。本明細書に記載する患者コンディショニング手順と併せて使用することがある、更なる抗CD45抗体としては、抗CD45抗体HPA000440（これは、SIGMA-ALDRICH(登録商標)(セント・ルイス、MO)から購入可能である）、及びそのヒト化バリアントが挙げられる。本明細書に記載する患者コンディショニング方法と併せて使用することがある、更なる抗CD45抗体としては、マウス・モノクローナル抗体BC8（これは、例えば、Matthews et al., Blood 78:1864-1874, 1991に記載されていて、この開示は、抗CD45抗体に関するものとして、本明細書に参照により取り込まれる）、並びにそのヒト化バリアントが挙げられる。本明細書に記載する方法と併せて使用することがある更なる抗CD45抗体としては、モノクローナル抗体YAML568（これは、例えば、Glatting et al., J. Nucl. Med. 8:1335-1341, 2006に記載されていて、この開示は、抗CD45抗体に関するものとして、本明細書に参照により取り込まれる）、並びにそのヒト化バリアントが挙げられる。本明細書に記載する患者コンディショニング手順と併せて使用することがある、更なる抗CD45抗体としては、モノクローナル抗体YTH54.12及びYTH25.4（これは、例えば、Brenner et al., Ann. N.Y. Acad. Sci. 996:80-88, 2003に記載されていて、この開示は、抗CD45抗体に関するものとして、本明細書に参照により取り込まれる）、並びにそのヒト化バリアントが挙げられる。本明細書に記載する患者コンディショニング方法と併せて使用することがある、更なる抗CD45抗体としては、UCHL1, 2H4, SN130, MD4.3, MBI, 及び MT2（これらは、例えば、Brown et al., Immunology 64:331-336, 1998に記載されていて、この開示は、抗CD45抗体に関するものとして、本明細書に参照により取り込まれる）、並びにそのヒト化バリアントが挙げられる。本明細書に記載する方法と併せて使用することがある更なる抗CD45抗体としては、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション(American Type Culture Collection (ATCC))のアクセッション番号RA3-6132、RA3-2C2、及びTIB122から産生される、及び放出される抗CD45抗体、並びにモノクローナル抗体C363.16A、及び13/2（これらは、例えば、Johnson et al., J. Exp. Med. 169:1179-1184, 1989に記載されていて、この開示は、抗CD45抗体に関するものとして、本明細書に参照により取り込まれる）、並びにそのヒト化バリアントが挙げられる。本明細書に記載する患者コンディショニング方法と併せて使用することがある、更なる抗CD45抗体としては、モノクローナル抗体AHN-12.1、AHN-12、AHN-12.2、AHN-12.3、AHN-12.4、HLe-1、及びKC56(T200) （これらは、例え���、Harvath et al., J. Immunol. 146:949-957, 1991に記載されていて、この開示は、抗CD45抗体に関するものとして、本明細書に参照により取り込まれる）、並びにそのヒト化バリアントが挙げられる。
【０１７２】
本明細書に記載する患者コンディショニング手順と併せて使用することがある、更なる抗CD45抗体としては、例えば、米国特許番号7,265,212（これは、例えば、とりわけ、抗CD45抗体39E11、16C9、及び1G10を記載する）に記載されている抗CD45抗体；米国特許番号7,160,987（これは、例えば、ATCCアクセッション番号HB-11873が産生する及び放出する抗CD45抗体（例えば、モノクローナル抗体6G3等）を記載する）に記載されている抗CD45抗体；及び米国特許番号6,099,838（これは、例えば、抗CD45抗体MT3、並びにATCCアクセッション番号HB220（MB23G2とも呼ばれる）及びHB223が産生する及び放出する抗体を記載する）に記載されている抗CD45抗体、並びにUS 2004/0096901及びUS 2008/0003224（これらは、例えば、ATCCアクセッション番号PTA-7339が産生する及び放出する抗CD45抗体（例えば、モノクローナル抗体17.1等）を記載する）に記載されている抗CD45抗体、が挙げられる（これらの開示は、抗CD45抗体に関するものとして、本明細書に参照により取り込まれる）。
【０１７３】
本明細書に記載する患者コンディショニング手順と併せて使用することがある、更なる抗CD45抗体としては、ATCCアクセッション番号MB4B4、MB23G2、14.8、GAP 8.3、74-9-3、I/24.D6、9.4、4B2、M1/9.3.4.HL.2から生成及び放出される抗体、並びにそららのヒト化及び／又は親和性成熟バリアントが挙げられる。親和性成熟を、例えば、本明細書に記載するか、又は当該分野で公知のin vitroディスプレイ技術(例えば、以下の実施例６に記載されるようなファージ・ディスプレイ)を使用して実施することがある。
【０１７４】
本明細書に記載する患者コンディショニング手順と併せて使用することがある、更なる抗CD45抗体としては、抗CD45抗体T29/33が挙げられ、これは、例えば、Morikawa et al., Int. J. Hematol. 54:495-504, 1991に記載される（この開示は、抗CD45抗体に関するものとして、本明細書に参照により取り込まれる）。
【０１７５】
ある特定の実施形態では、前記抗CD45抗体は、アパミスタマブ(若しくは、公知の90Y-BC8、Iomab-B、BC8；例えば、US20170326259、WO2017155937、及びOrozco et al. Blood. 127.3 (2016): 352-359.に記載される)、又はBC8-B10(例えば、Li et al. PloS one 13.10 (2018): e0205135に記載される)から選択される（これらの各々は、参照により取り込まれる）。他の抗CD45抗体は、例えば、WO2003/048327, WO2016/016442, US2017/0226209, US2016/0152733, US9,701,756; US2011/0076270, 又は US7,825,222に記載されている（これらの各々は、参照により取り込まれる）。
【０１７６】
例えば、ある実施形態では、前記抗CD45抗体又はその抗原結合フラグメントは、結合領域（例えばCDR、可変領域、アパミスタマブの結合領域に対応する）を含む。アパミスタマブの重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)： 250に記載する。アパミスタマブの軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)： 251に記載する。他の実施形態では、抗CD45抗体、又はその抗原結合部分は、配列番号(SEQ ID NO)： 250に記載のアミノ酸残基を含む可変重鎖、及び配列番号(SEQ ID NO)： 251に記載の軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、前記抗CD45抗体は、アパミスタマブのCDR1、CDR2及びCDR3を含む重鎖、並びにアパミスタマブのCDR1、CDR2及びCDR3を含む軽鎖可変領域を含む。
【０１７７】
別の実施形態では、前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、本明細書中の抗CD45抗体に対して少なくとも95%の同一性、（例えば、本明細書中の抗CD45抗体に対して少なくとも95%、96%、97%、98%、99%、又は100%の同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、本明細書中の抗CD45抗体のHC可変ドメインを含む改変した重鎖(HC)可変領域、又はそのバリアントを含み、このバリアントは、(i)1、2、3、4又は5アミノ酸の置換、付加又は欠失において前記抗CD45抗体と異なる；(ii)多くとも5、4、3、2又は1アミノ酸の置換、付加又は欠失において前記抗CD45抗体と異なる；(iii)1-5、1-3、1-2、2-5又は3-5アミノ酸の置換、付加又は欠失において前記抗CD45抗体と異なる；及び／又は(iv)前記抗CD45抗体と少なくとも約75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%又は99%同一であるアミノ酸配列を含む、ここで、(i)-(iv)のいずれにおいても、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換又は非-保存的アミノ酸置換であってもよい；並びに、ここで、前記改変した重鎖可変領域は、抗CD45抗体のCD45結合特異性を保持しながら、前記抗CD45抗体の重鎖可変領域と比較して増強された生物学的活性を有し得る。
【０１７８】
前記の刊行物の各々の開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。本明細書に記載する組成物及び方法と組み合わせて使用され得る抗体及び抗原結合フラグメントとしては、上記の抗体及びその抗原結合フラグメント、並びに、上記の非ヒト抗体及び抗原結合フラグメントのヒト化バリアント、並びに、例えば、競合CD45結合アッセイによって評価した場合、上記のものと同じエピトープに結合する抗体又は抗原結合フラグメント、が挙げられる。
【０１７９】
ある実施形態では、本明細書中で開示する方法は、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗CD45抗体を含む抗CD45 ADCを投与することを含む。
【０１８０】
抗CD252抗体
いくつかの実施形態では、本明細書に記載する方法は、ヒトCD252(OX40リガンド(OX40L)とも呼ばれる)、タンパク質NCBI参照配列： NP_003317.1；Uniprotアクセッション番号：P23510；に特異的に結合する抗体又はそのフラグメントを含むADCを含む。本明細書中に開示する方法を使用して、抗CD252 ADCを、GVHDを予防する及び治療するための治療薬剤として使用することがある。抗CD252抗体は、単独で使用することがある、又は抗体薬物コンジュゲート(ADC)として細胞毒素にコンジュゲートすることがある。
【０１８１】
ある実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物(ADCを含む)において使用することがある抗CD252抗体は、マウス・モノクローナル抗CD252抗体11C3.1又は前記11C3.1抗体に対応する抗原結合領域を含む抗CD252抗体である。11C3.1(Biolegend CatNo. 326302より販売されている(2019年2月27日))。
【０１８２】
ある実施形態では、抗CD252抗体は、抗CD252抗体11C3.1のCDR1、CDR2及びCDR3を含む重鎖、並びに抗CD252抗体11C3.1のCDR1、CDR2及びCDR3を含む軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、本明細書中に開示する組成物及び方法において使用する抗CD252抗体は、ヒト化11C3.1抗体である。
【０１８３】
ある実施形態では、本明細書に記載する方法及び組成物(ADCを含む)において使用することがある抗CD252抗体は、マウス・モノクローナル抗CD252抗体159403又は159403抗体に対応する抗原結合領域を含む抗CD252抗体である。159403(R&Dシステムより販売されている、カタログ#MAB10541 (2019年2月27日))。
【０１８４】
ある実施形態では、抗CD252抗体は、抗CD252抗体159403のCDR1、CDR2及びCDR3を含む重鎖、並びに抗CD252抗体159403のCDR1、CDR2及びCDR3を含む軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、本明細書中に開示する組成物及び方法において使用する抗CD252抗体は、ヒト化159403抗体である。
【０１８５】
ある実施形態では、本明細書に記載する方法及び組成物(ADCを含む)において使用することがある抗CD252抗体は、マウス・モノクローナル抗CD252抗体159408又は159408抗体に対応する抗原結合領域を含む抗CD252抗体である。159408(R&Dシステムより販売されている、カタログ#MAB1054 (2019年2月27日))。
【０１８６】
ある実施形態では、抗CD252抗体は、抗CD252抗体159408のCDR1、CDR2及びCDR3を含む重鎖、並びに抗CD252抗体159408のCDR1、CDR2及びCDR3を含む軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、本明細書中に開示する組成物及び方法において使用する抗CD252抗体は、ヒト化159408抗体である。
【０１８７】
ある実施形態では、本明細書に記載する方法及び組成物(ADCを含む)において使用することがある抗CD252抗体は、マウス・モノクローナル抗CD252抗体MM0505-8S23、又はMM0505-8S23抗体に対応する抗原結合領域を含む抗CD252抗体である。MM0505-8S23(Novus、カタログ #NBP2-11969より販売されている(2019年2月27日))。この抗体は、ハイブリドーマ（ヒトTNFSF4(OX40リガンドとも呼ばれる)で免疫したマウス由来の脾細胞と融合したマウス骨髄腫）から産生された。
【０１８８】
ある実施形態では、抗CD252抗体は、抗CD252抗体MM0505-8S23のCDR1、CDR2及びCDR3を含む重鎖と、抗CD252抗体MM0505-8S23のCDR1、CDR2及びCDR3を含む軽鎖可変領域とを含む。別の実施形態では、本明細書中に開示する組成物及び方法において使用する抗CD252抗体は、ヒト化MM0505-8S23抗体である。
【０１８９】
ある実施形態では、本明細書に記載する方法及び組成物(ADCを含む)において使用することがある抗CD252抗体は、ウサギ・モノクローナル抗CD252抗体、又はオキセルマブに対応する抗原結合領域を含む抗CD252抗体である。オキセルマブ(Novusより販売されている、カタログ#NBP2-52687-0.1(2019年2月27日))。
【０１９０】
本明細書に記載する、及び本明細書に記載するADCにおいて使用する抗体又はその抗原結合フラグメントは、当該分野において公知であるように、抗体及び／又はフラグメントの特性を変化させる改変及び／又は変異(例えば、半減期を増大させる、ADCCを増大させる、又は低下させるなど)を含むことがある。
【０１９１】
Fc バリアント
ある実施形態では、本明細書に記載する前記抗体又はその結合フラグメントは、バリアントFc領域を含み、ここで、前記バリアントFc領域は、野生型Fc領域に対して少なくとも1つのアミノ酸修飾を含み、その結果、前記分子は、FcγRに対する親和性が変わる。前記Fc領域内の特定のアミノ酸位置は、FcγRと直接接触させた結晶学的研究によって分かっている。具体的には、アミノ酸234〜239(ヒンジ領域)、アミノ酸265〜269(B/Cループ)、アミノ酸297〜299(C'/Eループ)、及びアミノ酸327〜332(F/G)ループである。(Sondermann et al、2000 Nature、406: 267-273参照)。例えば、Fc領域のアミノ酸位置234及び235におけるアミノ酸置換は、Fcレセプター、特にFcガンマ・レセプター(FcγR)、への結合に関して、IgG抗体の親和性が減少することとして同定されている。ある実施形態において、本明細書に記載する抗CD117抗体は、L234及び／又はL235におけるアミノ酸置換（例えばL234A及びL235A）を含むFc領域を含む(EUインデックス)。従って、本明細書に記載する前記抗体又はその結合フラグメントは、構造的な及び結晶学的な解析に基づいてFcγRと直接接触する、少なくとも1つの残基が修飾されたバリアントFc領域を含むことがある。
ある実施形態では、本明細書に記載する前記抗体又はその結合フラグメントのFc領域(又はそのFc領域を含むフラグメント)は、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, NH1, MD (1991) (明確に本明細書に参照により取り込まれる)のEUインデックスに依るところのアミノ酸265で、アミノ酸置換を含む。「例えばKabatに依るところのEUインデックス」又は「EUインデックス」は、特に別記しない限り、ヒトIgG1 EU抗体の番号付けを指し、本明細書でFcアミノ酸位置を参照する際に使用される。
【０１９２】
ある実施形態では、前記Fc領域は、D265A変異を含む。ある実施形態では、前記Fc領域はD265C変異を含む。
【０１９３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載する前記抗体又はその結合フラグメントのFc領域は、例えばKabatに依るところのEUインデックスによるアミノ酸234でのアミノ酸置換を含む。ある実施形態では、前記Fc領域は、L234A変異を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載する前記抗体又はその結合フラグメントのFc領域は、例えばKabatに依るところのEUインデックスによるアミノ酸235でのアミノ酸置換を含む。ある実施形態では、前記Fc領域は、L235A変異を含む。更に別の実施形態では、前記Fc領域は、L234A及びL235A変異を含む。更なる実施形態では、前記Fc領域は、D265C、L234A、及びL235A変異を含む。
【０１９４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載する抗体又はその抗原結合フラグメントのFc領域は、例えばKabatに依るところのEUインデックスによるアミノ酸239でのアミノ酸置換を含む。ある実施形態では、前記Fc領域はS239C変異を含む。
【０１９５】
ある特定の態様において、バリアントIgG Fcドメインは、1つ以上のアミノ酸置換を含まない野生型Fcドメインと比較して、FcガンマR及び／又はC1qに対する結合親和性が減少する又は無くなるという結果になる、1つ以上のアミノ酸置換を含む。Fc結合相互作用は、様々なエフェクター機能及び下流シグナル伝達イベント（例えば、限定されるものではないが、抗体依存性細胞介在性細胞毒性(antibody dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC))及び補体依存性細胞毒性(complement dependent cytotoxicity (CDC))等を含む）に必須である。従って、特定の態様において、修飾されたFc領域を含む抗体(例えば、L234A、L235A、及びD265C変異を含む)では、エフェクター機能が実質的に減少する又は消失する。
【０１９６】
Fc領域に対する親和性は、当該技術分野で公知の様々な技術（例えば、限定されるものではないが、平衡方法（例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ(enzyme-linked immunoabsorbent assay (ELISA))；KinExA、Rathanaswami et al. Analytical Biochemistry, Vol. 373:52-60, 2008；ラジオイムノアッセイ(radioimmunoassay (RIA))）、又は表面プラズモン共鳴アッセイ若しくは他のメカニズムのキネティクスに基づくアッセイ(例えば、BIACORETM解析又はOctet TM解析(forteBIO))、並びに他の方法（例えば、間接結合アッセイ、競合的結合アッセイ、蛍光共鳴エネルギ移動(fluorescence resonance energy transfer (FRET))、ゲル電気泳動及びクロマトグラフィ(例えば、ゲルろ過)）を使用して、測定することができる。これら及び他の方法は、検査対象の1つ以上の成分にある標識を利用することがあり、及び／又は種々の検出方法（例えば、発色標識、蛍光標識、ルミネセンス標識、又は同位体標識等を含むがこれらに限定されない）を利用することがある。結合親和性及びキネティクスに関する詳細な記載は、Paul, W. E., ed., Fundamental Immunology, 4th Ed., Lippincott-Raven, Philadelphia (1999)（これは抗体-免疫原相互作用に焦点を当てている）に見出すことができる。競合的結合アッセイの一例はラジオイムノアッセイであり、ラジオイムノアッセイは、標識した抗原と目的の抗体とを、非標識抗原の存在量を増加させながら、インキュベートすること、及び標識した抗原に結合した抗体を検出することを含む。特定の抗原に対する目的の抗体の親和性及び結合解離速度を、スキャッチャード・プロット解析によるデータから決定することがある。第2の抗体との競合を、ラジオイムノアッセイを使用して測定することもある。この場合では、非標識の第2の抗体の存在量を増加させながら、前記抗原を、標識した化合物にコンジュゲートした目的の抗体とインキュベートする。
【０１９７】
ある実施形態では、本明細書に記載する抗体又はその抗原結合フラグメントは、L235A、L235A、及びD265C(EUインデックス)を含むFc領域を含む。本発明の抗体は、更に手を加えて、例えば(Dall'Acqua et al.(2006)J Biol Chem 281: 23514-24)、(Zalevsky et al.(2010)Nat Biotechnol 28: 157-9)、(Hinton et al.(2004)J Biol Chem 279: 6213-6)、(Hinton et al.(2006)J Immunol 176: 346-56)、(Shields et al.(2001)J Biol Chem 276: 6591-604)、(Petkova et al.(2006)Int Immunol 18: 1759-69)、(Datta-Mannan et al.(2007)Drug Metab Dispos 35: 86-94)、(Vaccaro et al.(2005)Nat Biotechnol 23: 1283-8)、(Yeung et al. (2010)Cancer Res 70: 3269-77)及び(Kim et al. (1999)Eur J Immunol 29: 2819-25)に記載のFc変異のようなFc変異を更に導入することによって、抗体の半減期を更に調節することがあり、並びに位置250、252、253、254、256、257、307、376、380、428、434及び435を含むことがある。単独で又は組み合わせて作製され得る例示的な変異は、T250Q、M252Y、1253A、S254T、T256E、P2571、T307A、D376V、E380A、M428L、H433K、N434S、N434A、N434H、N434F、H435A及びH435R変異である。
【０１９８】
従って、ある実施形態では、前記Fc領域は、半減期の低下をもたらす変異を含む。短い半減期を有する抗体は、抗体が短命の治療薬として機能することが期待される一定の例、例えば、抗体を投与し、続いてHSCを投与する本明細書に記載するコンディショニング工程において、有益であり得る。理想的には、前記HSCを投与する前に、前記抗体は実質的にクリアランスされるべきである。ある実施形態では、前記Fc領域は、位置435（KabatによるEUインデックス）に変異を含む。ある実施形態では、前記変異はH435A変異である。
【０１９９】
ある実施形態では、本明細書に記載する抗体又はその抗原結合フラグメントは、L235A、L235A、D265C、及びH435A(EUインデックス)を含むFc領域を含む。
【０２００】
ある実施形態では、本明細書に記載する抗体又はその抗原結合フラグメントは、約24時間以下、約22時間以下、約20時間以下、約18時間以下、約16時間以下、約14時間以下、約13時間以下、約12時間以下、約11時間以下、約10時間以下、約9時間以下、約8時間以下、約7時間以下、約6時間以下、約5時間以下、約4時間以下、約3時間以下、約2時間以下、又は約1時間以下の半減期を有する。ある実施形態では、前記抗体の半減期は、約10時間〜24時間；約11時間〜22時間；約12時間〜20時間；約14時間〜18時間；又は約15時間〜16時間である。
【０２０１】
抗体薬物コンジュゲート(ADC)
本明細書中に開示する方法において使用する抗体薬物コンジュゲート(ADC)は、以下に記載するような細胞毒素及びリンカーを含むADCを含む。特に、化合物は細胞傷害性部分(又は細胞毒素)にコンジュゲートした(即ち、リンカーによって共有結合した)抗体(又はその抗原結合フラグメント)を含む、ここで、前記細胞傷害性部分は、抗体にコンジュゲートしていない場合、細胞傷害性作用又は細胞増殖抑制作用を有する。様々な実施形態では、前記細胞毒性部分は、コンジュゲートとして結合している場合、細胞傷害性が減少する、又は細胞傷害性が無くなるが、前記リンカーから切断された後に細胞傷害性が戻る。様々な実施形態では、前記細胞毒性部分は、前記リンカーからの切断されること無しに、細胞傷害性を維持する。いくつかの実施形態では、細胞毒性分子は、前記抗体又はその抗原結合フラグメントが細胞取り込まれた後に、前記細胞毒素がその細胞内標的に接近し、例えば、造血細胞死を媒介し得るように、本明細書中に開示するような細胞内在化抗体又はその抗原結合フラグメントにコンジュゲートしている。
【０２０２】
従って、本発明の薬剤-抗体コンジュゲート(ADC)は、一般式Iであることがある、ここで、抗体又はその抗原結合フラグメント(Ab)が化学的な部分構造(Z)を介してリンカー(L)に、細胞傷害性部分(「薬剤」、D)に、コンジュゲート(共有結合)している。
[化３８]
Ab-(Z-L-D)n        (I)
【０２０３】
従って、前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体当たりの細胞毒素の平均の数を表す整数n、によって示されるような多数の薬物部分に結合していることがある、これは、例えば約1〜約20の範囲であることがある。いくつかの実施形態では、nは1〜4である。いくつかの実施形態では、nは1である。コンジュゲーション反応から調製されたADC中の抗体当たりの薬物部分の平均個数は、マス・スペクトロスコピー、ELISAアッセイ、及びHPLCのような従来の方法によって明らかにすることがある。nに関するADCの定量的な分布を測定することができる。場合によっては、nが特定の数値である均質なADCを、他の薬物搭載量を有するADCから、分離する、精製する、及び特性評価をすることは、逆相HPLC又は電気泳動のような方法によって、達成することができる。
【０２０４】
いくつかの抗体-薬物コンジュゲートについて、nは、抗体上の結合部位の数によって制限され得る。例えば、結合がシステインのチオールである場合、抗体は1個又は数個のシステインのチオール基しかもたない、又はリンカーが結合するのに十分な反応性をもつチオール基を1個又は数個しかもたない。一般に、抗体は、薬物部分に結合することができる遊離及び反応性システイン基を多くは含まない；主に、抗体中のシステインのチオール残基は、ジスルフィド架橋として存在する。ある特定の実施形態では、抗体を、部分的又は全還元条件下で、ジチオトレイトール(DTT)又はトリカルボニルエチルホスフィン(TCEP)などの還元剤で還元して、反応性システインのチオール基を生成させることができる。ある特定の実施形態では、より高く薬物を搭載させると(例えば、n>5)、特定の抗体-薬物コンジュゲートの凝集性、不溶性、毒性が引き起こされる、又は細胞透過性が失われることが引き起されることがある。
【０２０５】
ある特定の実施形態では、コンジュゲーション反応の間に、抗体にコンジュゲートする薬物部分の理論上の最大よりも少ない。抗体は、例えば、以下に論じるように、薬剤-リンカー中間体又はリンカー試薬と反応しないリジン残基を含むことがある。最も反応性の高いリジン基のみがアミン反応性リンカー試薬と反応することができる。ある特定の実施形態では、抗体を、変性条件下に供し、リジン又はシステインのような反応性求核基を表に出す。
【０２０６】
ADCの搭載(薬剤／抗体比)を、種々の方法で（例えば、(i)抗体に対する、薬物-リンカー中間体又はリンカー試薬のモル過剰を制限すること、(ii)コンジュゲーション反応の時間又は温度を制限すること、(iii)システインのチオール修飾のために、部分的又は制限的な還元条件下にすること、(iv)リンカー-薬物結合の数及び／又は位置をコントロールするために、システイン残基の数及び位置を改変するように、抗体のアミノ酸配列を組換え技術によって操作すること）、コントロールすることがある。
【０２０７】
細胞毒素
本明細書に記載の組成物及び方法と共に使用するのに適した細胞毒素（薬物）には、当該技術分野において公知の、とりわけ、DNA-インターカレーティング剤(例えば、アントラサイクリン)、紡錘体装置を破壊することができる薬剤(例えば、ビンカ・アルカロイド、メイタンシン、メイタンシノイド、及びその誘導体)、RNAポリメラーゼ阻害剤(例えば、α-アマニチン等のアマトキシン、及びその誘導体)、並びにタンパク質生合成を破壊することができる薬剤(例えば、サポリン及びリシンA鎖等のrRNA N-グリコシダーゼ活性を示す薬剤)が含まれる。
【０２０８】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、微小管結合剤(例えば、メイタンシン又はメイタンシノイド)、アマトキシン、シュードモナス外毒素A、deブーガニン、ジフテリア毒素、サポリン、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、SN-38、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、インドリノベンゾジアゼピン二量体、又はそのバリアント、又は本明細書に記載する若しくは当該技術分野で公知の他の細胞毒性化合物である。
【０２０９】
いくつかの実施形態では、抗体-薬物コンジュゲートの細胞毒素は、RNAポリメラーゼ阻害剤である。いくつかの実施形態では、前記RNAポリメラーゼ阻害剤は、アマトキシン又はその誘導体である。いくつかの実施形態では、本明細書中で開示する抗体-薬物コンジュゲートの細胞毒素は、アマトキシン又はその誘導体（例えば、α-アマニチン、β-アマニチン、γ-アマニチン、ε-アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、プロアマヌリン又はその誘導体など）である。
【０２１０】
アマトキシン
いくつかの実施形態では、前記RNAポリメラーゼ阻害剤は、アマトキシン又はその誘導体である。いくつかの実施形態では、本明細書中で開示する抗体-薬物コンジュゲートの細胞毒素は、アマトキシン又はその誘導体（例えば、α-アマニチン、β-アマニチン、γ-アマニチン、ε-アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、プロアマヌリン又はその誘導体など）である。種々の天然に存在するアマトキシンの構造は、式II及び一緒に提示する表２によって表される、及び、例えば、anotti et al., Int. J. Peptide Protein Res. 30, 1987, 450-459に開示される。
【化３９】
2021526525.tif 000042
【０２１１】
【表３】
2021526525.tif 000043
【０２１２】
アマトキシン又はその誘導体上の多くの位置は、連結部分L、及びそれ故にその抗体又は抗原結合フラグメントを共有結合させる位置としての役割をすることがある。いくつかの実施形態では、式IのADC中の細胞毒素は、式(III)で表されるアマトキシン又はその誘導体である：
【化４０】
2021526525.tif 000044
ここで：
R1はH、OH、ORA、又はORCである；
R2はH、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、5員ヘテロシクロアルキル基を形成する；
R3はH、RC、又はRDである；
R4、R5,  R6、及びR7 は、それぞれ独立してH、OH、ORC、ORD、RC、又はRDである；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、又はNRCRDである；
R9はH、OH、ORC、又はORDである；
Qは-S-、-S(O)-、又は-SO2 -である；
RCは、-L-Z'又は-L-Z-Abである、ここで、Lはリンカーである、Z'は反応性部分である、ZはZ'とAb上の官能基とのカップリング反応から生じる化学的な部分構造である；並びに、
RDは、C1-C6アルキル、C1-C6ヘテロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6ヘテロアルケニル、C2-C6アルキニル、C2-C6ヘテロアルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、又は組み合わせである、ここで、各C1-C6アルキル、C1-C6ヘテロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6ヘテロアルケニル、C2-C6アルキニル、C2-C6ヘテロアルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリールは、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリル、アルキル・ヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロからなる群よりそれぞれ独立して選択される1〜5個の置換基で、任意選択的に置換されている。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、式(IIIA)で表されるアマトキシンである：
【化４１】
2021526525.tif 000045
【０２１４】
いくつかの実施形態では、前記アマトキシンは1個のRC置換基を含む。
【０２１５】
いくつかの実施形態では、RA 及びRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、次式の5員ヘテロシクロアルキル基を形成する：
【化４２】
2021526525.tif 000046
ここで、Yは-(C=O)-、-(C=S)-、-(C=NRE) -, 又は-(CRERE’)-である；並びに
RE及びRE’は、それぞれ独立して、H、C1-C6アルキレン-RC、C1-C6ヘテロアルキレン-RC、C2-C6アルケニレン-RC、C2-C6ヘテロアルケニレン-RC、C2-C6アルキニレン-RC、C2-C6ヘテロアルキニレン-RC、シクロアルキレン-RC、ヘテロシクロアルキレン-RC、アリーレン-RC、若しくはヘテロアリーレン-RC、又はそれらの組み合わせである；ここで、各C1-C6アルキレン-RC、C1-C6ヘテロアルキレン-RC、C2-C6アルケニレン-RC、C2-C6ヘテロアルケニレン-RC、C2-C6アルキニレン-RC、C2-C6ヘテロアルキニレン-RC、シクロアルキレン-RC、ヘテロシクロアルキレン-RC、アリーレン-RC、若しくはヘテロアリーレン-RCは、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリル、アルキル・ヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロからなる群よりそれぞれ独立して選択される1〜5個の置換基で、任意選択的に置換されている。
【０２１６】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、式IIIAによって表されるアマトキシン又はその誘導体である、ここで、
R1はH、OH、ORA、又はORCである；
R2はH、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、以下を形成する：
【化４３】
2021526525.tif 000047
ここで、
R3はH又はRCである。
【０２１７】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、式IIIAによって表されるアマトキシン又はその誘導体である、ここで、
R1はH、OH、ORA、又はORCである；
R2はH、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、以下を形成する：
【化４４】
2021526525.tif 000048
ここで、
R3はH又はRCである；
R4及びR5は、それぞれ独立してH、OH、ORC、RC、又はORDである；
R6及びR7 は、それぞれHである；
R8は、OH、NH2、ORC、又はNHRCである；
R9はH又はOHである；並びに、
ここで、RC及びRDは、上記で定義した通りである。
【０２１８】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、式IIIAによって表されるアマトキシン又はその誘導体である、ここで、
R1はH、OH、又はORAである；
R2はH、OH、又はORBである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、以下を形成する：
【化４５】
2021526525.tif 000049
ここで、
R3、R4、R6、及びR7はそれぞれHである；
R5がORCである；
R8がOH又はNH2である；
R9がH又はOHである；
Qは-S-、-S(O)-、又は-SO2 -である；並びに、
ここで、RC 及びRDは、上記で定義した通りである。このようなアマトキシン・コンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第2016/0002298号に記載されており、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２１９】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、式IIIAによって表されるアマトキシン又はその誘導体である、ここで、
R1及びR2 は、それぞれ独立してH又はOHである；
R3は、RCである；
R4、R6、及びR7は、それぞれHである；
R5は、H、OH、又はOC1-C6アルキルである；
R8は、OH又はNH2である；
R9は、H又はOH；
Qは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；並びに、
ここで、RC 及びRDは、上記で定義した通りである。このようなアマトキシン・コンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第2014/0294865号に記載されており、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２２０】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、式IIIAによって表されるアマトキシン又はその誘導体である、ここで、
R1及びR2 は、それぞれ独立してH又はOHである；
R3、R6、及びR7は、それぞれHである；
R4とR5は、それぞれ独立してH、OH、ORC、又はRCである；
R8は、OH又はNH2である；
R9は、H又はOHである；
Qは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；並びに、
ここで、RC 及びRDは、上記で定義した通りである。このようなアマトキシン-リンカー・コンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第2015/0218220号に記載されており、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２２１】
ある実施形態では、図５(Z'-L-D)に示されるアマトキシン-リンカーは、本明細書中に開示する方法において使用するために、コンジュゲートしてADCになる。
【０２２２】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、式IIIAによって表されるアマトキシン又はその誘導体である、ここで、
R1及びR2 は、それぞれ独立してH又はOHである；
R3、R6、及びR7は、それぞれHである；
R4とR5は、それぞれ独立してH、又はOHである；
R8は、OH、NH2、ORC、又はNHRCである；
R9はH又はOHである；
Qは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；並びに、
ここで、RC 及びRDは、上記で定義した通りである。このようなアマトキシン・コンジュゲートは、例えば、米国特許第9,233,173 及び9,399,681号に記載されており、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２２３】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、式IIIBによって表されるアマトキシン又はその誘導体である:
【化４６】
2021526525.tif 000050
ここで：
R1はH、OH、ORA、又はORCである；
R2はH、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、5員ヘテロシクロアルキル基を形成する；
R3はH、RC、又はRDである；
R4、R5,  R6、及びR7 は、それぞれ独立してH、OH、ORC、ORD、RC、又はRDである；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、又はNRCRDである；
R9はH、OH、ORC、又はORDである；
Qは-S-、-S(O)-、又は-SO2 -である；
RCは、-L-Z'又は-L-Z-Abである、ここで、Lはリンカーである、Z'は反応性部分である、ZはZ'とAb上の官能基とのカップリング反応から生じる化学的な部分構造である；並びに、
RDは、C1-C6アルキル、C1-C6ヘテロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6ヘテロアルケニル、C2-C6アルキニル、C2-C6ヘテロアルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、又は組み合わせである、ここで、各C1-C6アルキル、C1-C6ヘテロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6ヘテロアルケニル、C2-C6アルキニル、C2-C6ヘテロアルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリールは、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリル、アルキル・ヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロからなる群よりそれぞれ独立して選択される1〜5個の置換基で、任意選択的に置換されている。
【０２２４】
いくつかの実施形態では、RA 及びRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、次式の5員ヘテロシクロアルキルを形成する：
【化４７】
2021526525.tif 000051
ここで、Yは-(C=O)-、-(C=S)-、-(C=NRE) -, 又は-(CRERE’)-である；並びに
RE及びRE’は、それぞれ独立して、H、C1-C6アルキレン-RC、C1-C6ヘテロアルキレン-RC、C2-C6アルケニレン-RC、C2-C6ヘテロアルケニレン-RC、C2-C6アルキニレン-RC、C2-C6ヘテロアルキニレン-RC、シクロアルキレン-RC、ヘテロシクロアルキレン-RC、アリーレン-RC、若しくはヘテロアリーレン-RC、又はそれらの組み合わせである、ここで、各C1-C6アルキレン-RC、C1-C6ヘテロアルキレン-RC、C2-C6アルケニレン-RC、C2-C6ヘテロアルケニレン-RC、C2-C6アルキニレン-RC、C2-C6ヘテロアルキニレン-RC、シクロアルキレン-RC、ヘテロシクロアルキレン-RC、アリーレン-RC、若しくはヘテロアリーレン-RCは、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリル、アルキル・ヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロからなる群よりそれぞれ独立して選択される1〜5個の置換基で、任意選択的に置換されている。
【０２２５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載する抗体又はその抗原結合フラグメントは、式IIIBによって表されるアマトキシン-リンカー・コンジュゲート又はその誘導体にコンジュゲートする、ここで、
R1はH、OH、ORA、又はORCである；
R2はH、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、次式の5員ヘテロシクロアルキルを形成する：
【化４８】
2021526525.tif 000052
ここで、
R3はH又はRCである。
【０２２６】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、式IIIBによって表されるアマトキシン又はその誘導体である、ここで、
R1はH、OH、ORA、又はORCである；
R2はH、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、次式の5員ヘテロシクロアルキル基を形成する：
【化４９】
2021526525.tif 000053
ここで、
R3はH又はRCである；
R4及びR5は、それぞれ独立してH、OH、ORC、RC、又はORDである；
R6及びR7 は、それぞれHである；
R8は、OH、NH2、ORC、又はNHRCである；
R9はH又はOHである；並びに、
ここで、RC及びRDは、上記で定義した通りである。
【０２２７】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、式IIIBによって表されるアマトキシン又はその誘導体である、ここで、
R1はH、OH、又はORAである；
R2はH、OH、又はORBである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、次式の5員ヘテロシクロアルキル基を形成する：
【化５０】
2021526525.tif 000054
ここで、
R3、R4、R6、及びR7はそれぞれHである；
R5がORCである；
R8がOH又はNH2である；
R9がH又はOHである；
Qは-S-、-S(O)-、又は-SO2 -である；並びに、
ここで、RC 及びRDは、上記で定義した通りである。このようなアマトキシン-リンカー・コンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第2016/0002298号に記載されており、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２２８】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、式IIIBによって表されるアマトキシン又はその誘導体である、ここで、
R1及びR2 は、それぞれ独立してH又はOHである；
R3は、RCである；
R4、R6、及びR7は、それぞれHである；
R5は、H、OH、又はOC1-C6アルキルである；
R8は、OH又はNH2である；
R9は、H又はOH；
Qは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；並びに、
ここで、RC 及びRDは、上記で定義した通りである。このようなアマトキシン・コンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第2014/0294865号に記載されており、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２２９】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、式IIIBによって表されるアマトキシン又はその誘導体である、ここで、
R1及びR2 は、それぞれ独立してH又はOHである；
R3、R6、及びR7は、それぞれHである；
R4とR5は、それぞれ独立してH、OH、ORC、又はRCである；
R8は、OH又はNH2である；
R9は、H又はOHである；
Qは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；並びに、
ここで、RC 及びRDは、上記で定義した通りである。このようなアマトキシン-リンカー・コンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第2015/0218220号に記載されており、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２３０】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、式IIIBによって表されるアマトキシン又はその誘導体である、ここで、
R1及びR2 は、それぞれ独立してH又はOHである；
R3、R6、及びR7は、それぞれHである；
R4とR5は、それぞれ独立してH、又はOHである；
R8は、OH、NH2、ORC、又はNHRCである；
R9はH又はOHである；
Qは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；並びに、
ここで、RC 及びRDは、上記で定義した通りである。このようなアマトキシン-リンカー・コンジュゲートは、例えば、米国特許第9,233,173 及び9,399,681号に記載されており、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２３１】
アウリスタチン
本明細書に記載する抗体及びその抗原結合フラグメントは、アウリスタチンである細胞毒素にコンジュゲートしていることがある(米国特許第5,635,483号;第5,780,588号)。アウリスタチンは、微小管動態、GTP加水分解、核分裂及び細胞分裂を妨げる抗有糸分裂剤であり(Woyke et al (2001) Antimicrob. Agents and Chemother. 45(12):3580-3584)、並びに抗がん(米国特許第5,663,149号)及び抗真菌活性(Pettit et al (1998) Antimicrob. Agents Chemother. 42:2961-2965). (米国特許第5,635,483; 5,780,588号)を有する。アウリスタチン薬物部分は、ペプチド薬物部分のN(アミノ)末端又はC(カルボキシル)末端を介して、抗体に結合することがある(WO02/088172)。
【０２３２】
例示的なアウリスタチンの実施形態は、N末端結合モノメチル・アウリスタチン薬物部分DE及びDFを含み、これらは、Senter et al, Proceedings of the American Association for Cancer Research, Volume 45, Abstract Number 623, 2004年3月28日に開示されている（この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる）。
【０２３３】
例示的なアウリスタチンの実施形態はMMAEであり、ここで、その波線は、抗体-リンカー・コンジュゲート(本明細書で記載されるように、-L-Z-Ab又は-L-Z')のリンカーへの共有結合の位置を示す。
【化５１】
2021526525.tif 000055
【０２３４】
別の例示的なアウリスタチンの実施形態はMMAFであり、ここで、その波線は、US 2005/0238649で開示されているように、抗体-リンカー・コンジュゲート(本明細書で記載されるように、-L-Z-Ab又は-L-Z')のリンカーへの共有結合の位置を示す：
【化５２】
2021526525.tif 000056
【０２３５】
アウリスタチンは以下の方法に従って調製することができる：米国特許第5,635,483号；米国特許第5,780,588；Pettit et al (1989) J. Am. Chem. Soc. 111:5463-5465; Pettit et al (1998) Anti-Cancer Drug Design 13:243-277; Pettit, G. R., et al. Synthesis, 1996, 719-725; Pettit et al (1996) J. Chem. Soc. Perkin Trans. 15:859-863; 及び Doronina (2003) Nat. Biotechnol. 21(7):778-784。
【０２３６】
メイタンシノイド
本明細書に記載する抗体及びその抗原結合フラグメントは、微小管結合剤である細胞毒素にコンジュゲートしていることがある。いくつかの実施形態では、前記微小管結合剤は、メイタンシン、メイタンシノイド又はメイタンシノイド類似体である。メイタンシノイドは微小管と結合し、チューブリン重合を阻害することによって作用する有糸分裂阻害剤である。メイタンシンは最初に、東アフリカ低木Maytenus serrataから単離された(米国特許第3,896,111号)。続いて、特定の微生物もまた、メイタンシノイド(例えば、メイタンシノール及びC-3メイタンシノール・エステル)を産生することが発見された(米国特許第4,151,042号)。合成メイタンシノール、並びにその誘導体及びその類似体は例えば、米国特許4,137,230; 4,248,870; 4,256,746; 4,260,608; 4,265,814; 4,294,757; 4,307,016; 4,308,268; 4,308,269; 4,309,428; 4,313,946; 4,315,929; 4,317,821; 4,322,348; 4,331,598; 4,361,650; 4,364,866; 4,424,219; 4,450,254; 4,362,663; 及び 4,371,533 号において開示されている。メイタンシノイドの薬物部分は、抗体薬物コンジュゲートにおいて魅力的な薬物部分である。なぜならば、メイタンシノイドの薬物部分は：(i)発酵又は、発酵産物の化学修飾、誘導体化によって調製することに、比較的アクセス可能である、(ii)非ジスルフィド・リンカーを介した抗体へのコンジュゲートに適した官能基による誘導体化がやり易い、(iii)血漿中で安定である、及び(iv)種々の腫瘍細胞株に対して効果的である、からである。
【０２３７】
好適なメイタンシノイドの例には、メイタンシノールのエステル、合成メイタンシノール、並びにメイタンシノール類似体及び誘導体、が含まれる。メイタンシノイド、メイタンシノール、並びにメイタンシノール類似体、及び誘導体のように、微小管形成を阻害し、哺乳動物細胞に対して非常に毒性である、任意の細胞毒素が本明細書に含まれる。
【０２３８】
好適なメイタンシノール・エステルの例としては、修飾された芳香環を有するもの、及び他の位置に修飾を有するものが含まれる。そのような好適なメイタンシノイドは、米国特許第4,137,230; 4,151,042; 4,248,870; 4,256,746; 4,260,608; 4,265,814;  4,294,757; 4,307,016; 4,308,268; 4,308,269; 4,309,428; 4,313,946; 4,315,929; 4,317,821; 4,322,348; 4,331,598; 4,361,650; 4,362,663; 4,364,866; 4,424,219 ;4,450,254; 4,322,348; 4,362,663; 4,371,533; 5,208,020; 5,416,064; 5,475,092; 5,585,499; 5,846,545; 6,333,410; 7,276,497; 及び 7,473,796号に開示されており、これらの各々は、メイタンシノイド及びその誘導体に関連するので、本明細書に参照により取り込まれる。
【０２３９】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体-薬物コンジュゲート(ADC)は、細胞毒素剤として、チオール含有メイタンシノイド(DM1)を利用し、正式にはN2'-デアセチル-N2'-(3-メルカプト-1-オキソプロピル)-メイタンシンと呼ばれる。DM1は、構造式Vで表される：
【化５３】
2021526525.tif 000057
【０２４０】
別の実施形態において、本発明のコンジュゲートは、チオール含有メイタンシノイドN2'-デアセチル-N2'(4-メチル-4-メルカプト-1-オキソペンチル)-メイタンシン(例えば、DM4)を細胞毒素剤として利用する。DM4は、以下の構造式VIで表される：
【化５４】
2021526525.tif 000058
【０２４１】
立体障害チオール結合を含む側鎖を含む別のメイタンシノイドは、N2'-デアセチル-N-2'(4-メルカプト-1-オキソペンチル)-メイタンシン(DM3と呼ばれる)であり、以下の構造式VIで表される：
【化５５】
2021526525.tif 000059
【０２４２】
米国特許第5,208,020 及び 7,276,497が教示する各メイタンシノイドを、本発明のコンジュゲートにおいて使用することもある。この点に関して、5,208,020及び7,276,697の開示全体は、本明細書に参照により取り込まれる。
【０２４３】
メイタンシノイド上の多くの位置は、連結部分及び、それ故に前記抗体又はその抗原結合フラグメント（本明細書に記載するように、-L-Z-Ab又は-L-Z'）を共有結合する位置として働くことができる。例えば、ヒドロキシル基を有するC-3位、ヒドロキシメチルで修飾されたC-14位、ヒドロキシで修飾されたC-15位、及びヒドロキシ基を有するC-20位は、全て有用であると予想される。いくつかの実施形態では、前記C-3位は、連結部分を共有結合する位置として働き、いくつかの特定の実施形態では、メイタンシノールのC-3位が、連結部分を共有結合する位置として働く。抗体-メイタンシノイド・コンジュゲートを作製するために、当該技術分野で知られている多くの連結基が存在し、例えば、それらは、米国特許第5,208,020、6,441,163、及び欧州特許第0425235 B1; Chari et al., Cancer Research 52:127-131 (1992); 並びに U.S. 2005/0169933 A1に開示されているもの等を含む（これらの開示は、本明細書に明確に参照により取り込まれる）。更なる結合基は、本明細書に記載され、例示される。
【０２４４】
本発明はまた、種々の異性体、並びにメイタンシノイド及びコンジュゲートの混合物を含む。本発明の特定の化合物及びコンジュゲートは、種々の立体異性体、鏡像異性体、及びジアステレオマーの形態で存在することがある。このような抗体-メイタンシノイド・コンジュゲートを生成することは、米国特許5,208,020、5,416,064、6,333,410、6,441,163、6,716,821、及び7,368,565に記載されている(これらの各々は、その全体が本明細書に取り込まれる)。
【０２４５】
アントラサイクリン
他の実施形態において、本明細書に記載する抗体及びその抗原結合フラグメントは、アントラサイクリン分子である細胞毒素にコンジュゲートしていることがある。アントラサイクリンは、細胞傷害活性を示す抗生物質化合物である。研究によれば、アントラサイクリンは、以下を含む多数の異なるメカニズムによって、細胞を死滅させることがあることが示されてきている： 1)前記薬物分子が細胞のDNAにインターカレーションすることによって、DNA依存性の核酸合成が阻害されること；2) 薬物によるフリーラジカルの産生、フリーラジカルは、次いで細胞性高分子と反応して細胞に損傷を引き起こす、又は3)薬物分子と細胞膜との相互作用[例えば、C. Peterson et al.," Transport And Storage Of Anthracycline In Experimental Systems And Human Leukemia" in Anthracycline Antibiotics In Cancer Therapy;N.R. Bachur, "Free Radical Damage" id. at pp.97-102を参照のこと]。細胞毒性の可能性があるため、白血病、乳がん、肺がん、卵巣腺がん及び肉腫のような多数のがんの治療にアントラサイクリンが用いられている[例えば、P.H- Wiernik, in Anthracycline: Current Status And New Developments p 11を参照]。一般的に使用されるアントラサイクリンには、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン及びダウノマイシンが含まれる。
【０２４６】
アントラサイクリン類似体であるドキソルビシン(ADRIAMYCINO)は、インターカレーションによってDNAと相互作用し、及び転写のためにDNAをほどく酵素トポイソメラーゼIIが進むことを阻害する、と考えられている。ドキソルビシンは、トポイソメラーゼII複合体を、複製のためにDNA鎖を切断した後に安定化させ、DNA二重らせんが再び結合するのを防ぎ、それによって複製のプロセスを止める。ドキソルビシン及びダウノルビシン(DAUNOMYCIN)は、プロトタイプの細胞毒性天然物アントラサイクリン化学療法剤である（Sessa et al., (2007) Cardiovasc. Toxicol. 7:75-79）。
【０２４７】
ピロロベンゾジアゼピン(PBDs)
他の実施形態では、本明細書に記載する抗体又はその抗原結合フラグメントを、ピロロベンゾジアゼピン(PBD)である細胞毒素、又はPBDを含む細胞毒素にコンジュゲートすることがある。PBDはある特定の放線菌によって産生される天然物であり、配列選択的なDNAアルキル化化合物であることが示されてきている。PBD細胞毒素としては、限定されるものではないが、アントラマイシン、二量体PBD、及び、例えば、Hartley, J.A. (2011). “The development of pyrrolobenzodiazepines as antitumour agents.”  Expert Opin. Inv. Drug, 20(6), 733-744; 及び Antonow, D.; Thurston, D.E. (2011) “Synthesis of DNA-interactive pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepines (PBDs).” Chem. Rev. 111: 2815-2864の中で開示されているものが挙げられる。
PBDは一般的な構造が以下である：
【化５６】
2021526525.tif 000060
。
【０２４８】
いくつかの実施形態では、本発明で使用する細胞毒素は、以下の構造式で表される二量体である：
【化５７】
2021526525.tif 000061
ここで、波線は、本明細書に記載する場合、ADCのリンカーへの共有結合の位置を示す。
【０２４９】
いくつかの実施形態では、本発明で使用する細胞毒素は、以下の構造式で表される二量体である：
【化５８】
2021526525.tif 000062
ここで、「**」は、本明細書に記載する場合、ADCのリンカーへの共有結合の位置を示す。
【０２５０】
いくつかの実施形態では、本発明で使用する細胞毒素は、以下の構造式で表される二量体である：
【化５９】
2021526525.tif 000063
ここで、「**」は、本明細書に記載する場合、ADCのリンカーへの共有結合の位置を示す。
【０２５１】
いくつかの実施形態では、意図するADCのリンカー及び細胞毒素部分、即ち意図するADCの「リンカー-細胞毒素」部分を、タリリン又はテシリンから選択することがある。
【０２５２】
カリケアマイシン
他の実施形態において、本明細書に記載する抗体及びその抗原結合フラグメントは、カリケアマイシン分子である細胞毒素にコンジュゲートしていることがある。カリケアマイシン・ファミリーの抗生物質は、ピコモル未満の濃度で、二本鎖DNAを切断することができる。カリケアマイシン・ファミリーのコンジュゲートの調製については、米国特許第5,712,374; 5,714,586; 5,739,116; 5,767,285; 5,770,701; 5,770,710; 5,773,001; 及び 5,877,296号を参照のこと（全てAmerican Cyanamid Companyに関する）。使用され得るカリケアマイシンの構造類似体としては、限定されるものではないが、例えば、Hinman et al., Cancer Research 53:3336-3342 (1993), Lode et al., Cancer Research 58:2925-2928 (1998), 及びAmerican Cyanamidに関する上記の米国特許、に開示されているものが挙げられる。
【０２５３】
追加の細胞毒素
他の実施形態では、本明細書に記載する抗体及びその抗原結合フラグメントを、本明細書において上記で開示される細胞毒素以外の、又はそれに加えた細胞毒素に、コンジュゲートすることがある。本明細書に記載する組成物及び方法と共に使用するのに適した追加の細胞毒素としては、限定されるものではないが、5-エチニルウラシル、アビラテロン(abiraterone)、アシルフルベン(acylfulvene)、アデシペノール(adecypenol)、アドゼレシン(adozelesin)、アルデスロイキン(aldesleukin)、アルトレタミン(altretamine)、アンバムスチン(ambamustine)、アミドックス(amidox)、アミフォスチン(amifostine)、アミノレブリン酸(aminolevulinic acid)、アムルビシン(amrubicin)、アムサクリン(amsacrine)、アナグレリド(anagrelide)、アナストロゾール(anastrozole)、アンドログラフォリド(andrographolide)、血管新生阻害剤、アンタレリクス(antarelix)、抗背側形成タンパク質-1（anti-dorsalizing  morphogenetic protein-1）、抗アンドロゲン、前立腺がん、抗エストロゲン、抗新生物薬(antineoplaston)、アンチセンス・オリゴヌクレオチド、アフィジコリン・グリシネート(aphidicolin glycinate)、アポトーシス遺伝子モジュレーター、アポトーシス・レギュレーター、アプリン酸(apurinic acid)、アスラクリン(asulacrine)、アタメスタン(atamestane)、アトリムスチン(atrimustine)、アキシナスタチン1(axinastatin 1)、アキシナスタチン2、アキシナスタチン3、アザセトロン(azasetron)、アザトキシン(azatoxin)、アザチロシン(azatyrosine)、バッカチンＩＩＩ(baccatin III.)誘導体、バラノール(balanol)、バチマスタット(batimastat)、BCR/ABL拮抗薬、ベンゾクロリン、ベンゾイルスタウロスポリン(benzoylstaurosporine)、βラクタム誘導体、βアレチン(beta-alethine)、βクラマイシン(betaclamycin)B、ベツリン酸、bFGF阻害剤、ビカルタミド(bicalutamide)、ビサントレン(bisantrene)、ビスアジリジニルスペルミン(bisaziridinylspermine)、ビスナフィド(bisnafide)、ビストラテン(bistratene)A、ビゼレシン(bizelesin)、ブレフラート(breflate)、ブレオマイシンA2、ブレオマイシンB2、ブロピリミン(bropirimine)、ブドチタン(budotitane)、ブチオニン・スルホキシイミン(buthionine sulfoximine)、カルシポトリオール(calcipotriol)、カルホスチン(calphostin)C、カンプトテシン(camptothecin)誘導体（例えば、10-ヒドロキシ-カンプトテシン）、カペシタビン(capecitabine)、カルボキサミド-アミノ-トリアゾール、カルボキシアミドトリアゾール、カルゼレシン(carzelesin)、カゼイン・キナーゼ阻害剤、カスタノスペルミン(castanospermine)、セクロピン(cecropin)B、セトロレリクス(cetrorelix)、クロリン(chlorins)、クロロキノキサリン・スルホンアミド(chloroquinoxaline sulfonamide)、シカプロスト(cicaprost)、シス-ポルフィリン、クラドリビン(cladribine)、クロミフェン(clomifene)及びその類似体、クロトリマゾール(clotrimazole)、コリスマイシン(collismycin)A、コリスマイシンB、コンブレタスタチン(combretastatin)A4、コンブレタスタチン類似体、コナゲニン(conagenin)、クラムベシジン(crambescidin)816、クリスナトール(crisnatol)、クリプトフィシン(cryptophycin)8、クリプトフィシンA誘導体、キュラシン(curacin)A、シクロペンタアントラキノン(cyclopentanthraquinones)、シクロプラタム(cycloplatam)、シペマイシン(cypemycin)、シタラビン・オクホスファート(cytarabine ocfosfate)、細胞溶解因子、シトスタチン(cytostatin)、ダクリキシマブ(dacliximab)、デシタビン(decitabine)、デヒドロジデムニン(dehydrodidemnin)B、2'デオキシコホルマイシン(DCF)、デスロレリン(deslorelin)、デキシホスファミド(dexifosfamide)、デクスラゾキサン(dexrazoxane)、デクスベラパミル(dexverapamil)、ジアジクオン(diaziquone)、ジデムニン(didemnin)B、ジドクス(didox)、ジエチルノルスペルミン(diethylnorspermine)、ジヒドロ-5-アザシチジン、ジヒドロタキソール、ジオキサマイシン(dioxamycin)、ジフェニル・スピロムスチン(diphenyl spiromustine)、ディスコデルモライド(discodermolide)、ドコサノール(docosanol)、ドラセトロン(dolasetron)、ドキシフルリジン(doxifluridine)、ドロロキシフェン(droloxifene)、ドロナビノール(dronabinol)、デュオカルマイシン(duocarmycin)SA、エブセレン(ebselen)、エコムスチン(ecomustine)、エデルフォシン(edelfosine)、エドレコロマブ(edrecolomab)、エフロルニチン(eflornithine)、エレメン(elemene)、エミテフール(emitefur)、エポチロン（epothilones）、エピチロン（epithilones）、エプリステリド(epristeride)、エストラムスチン(estramustine)及びその類似体、エトポシド（etoposide）、エトポシド4’-リン酸（etoposide 4’-phosphate）（エトポフォスとも呼ばれる）、エキセメスタン(exemestane)、ファドロゾール(fadrozole)、ファザラビン(fazarabine)、フェンレチニド(fenretinide)、フィルグラスチム(filgrastim)、フィナステリド(finasteride)、フラボピリドール(flavopiridol)、フレゼラスチン(flezelastine)、フルアステロン(fluasterone)、フルダラビン(fludarabine)、塩酸フルロダウノルニシン(fluorodaunorunicin hydrochloride)、フォルフェニメクス(forfenimex)、フォルメスタン(formestane)、フォストリエシン(fostriecin)、フォテムスチン(fotemustine)、ガドリニウム・テキサフィリン(gadolinium texaphyrin)、硝酸ガリウム、ガロシタビン(galocitabine)、ガニレリクス(ganirelix)、ゲラチナーゼ阻害剤、ゲムシタビン(gemcitabine)、グルタチオン阻害剤、ヘプスルファム(hepsulfam)、ホモハリングトニン（homoharringtonine(HHT)）、ハイペリシン(hypericin)、イバンドロン酸（Ibandronic acid）、イドキシフェン(idoxifene)、イドラマントン(idramantone)、イルモフォシン(ilmofosine)、イロマスタット(ilomastat)、イミダゾアクリドン、イミキモド(imiquimod)、免疫刺激ペプチド、イオベングアン(iobenguane)、ヨードドキソルビシン(iododoxorubicin)、イポメアノール(ipomeanol)、イリノテカン、イロプラクト(iroplact)、イルソグラジン(irsogladine)、イソベンガゾール(isobengazole)、ジャスプラキノリド(jasplakinolide)、カハラリド(kahalalide)F、三酢酸ラメラリン-N(lamellarin-N triacetate)、ランレオチド(lanreotide)、レイナマイシン(leinamycin)、レノグラスチム(lenograstim)、硫酸レンチナン(lentinan sulfate)、レプトルスタチン(leptolstatin)、レトロゾール(letrozole)、親油性白金化合物、リソクリナミド(lissoclinamide)7、ロバプラチン(lobaplatin)、ロメトレキソール(lometrexol)、ロニダミン(lonidamine)、ロソキサントロン(losoxantrone)、ロキソリビン(loxoribine)、ルルトテカン(lurtotecan)、ルテチウム・テキサフィリン(lutetium texaphyrin)、リソフィリン(lysofylline)、マソプロコール(masoprocol)、マスピン(maspin)、マトリックス・メタロプロテイナーゼ阻害剤、メノガリル(menogaril)、メルバロン(merbarone)、メテレリン(meterelin)、メチオニナーゼ、メトクロプラミド(metoclopramide)、MIF阻害剤、ミフェプリストン(mifepristone)、ミルテホシン(miltefosine)、ミリモスチム(mirimostim)、ミトラシン(mithracin)、ミトグアゾン(mitoguazone)、ミトラクトール(mitolactol)、マイトマイシン及び��の類似体、ミトナフィド(mitonafide)、ミトキサントロン(mitoxantrone)、モファロテン(mofarotene)、モルグラモスチム(molgramostim)、マイカペルオキシドB、ミリアポロン(myriaporone)、N-アセチルジナリン(acetyldinaline)、N-置換ベンズアミド、ナファレリン(nafarelin)、ナグレスチップ(nagrestip)、ナパビン(napavin)、ナフテルピン(naphterpin)、ナルトグラスチム(nartograstim)、ネダプラチン(nedaplatin)、ネモルビシン(nemorubicin)、ネリドロン酸、ニルタミド(nilutamide)、ニサマイシン(nisamycin)、ニトルリン(nitrullyn)、オクトレオチド(octreotide)、オキセノン(okicenone)、オナプリストン(onapristone)、オンダンセトロン(ondansetron)、オラシン(oracin)、オルマプラチン(ormaplatin)、オキサリプラチン(oxaliplatin)、オキサウノマイシン(oxaunomycin)、パクリタキセル(paclitaxel)及びその類似体、パラウアミン(palauamine)、パルミトイルリゾキシン(palmitoylrhizoxin)、パミドロン酸、パナキシトリオール(panaxytriol)、パノミフェン(panomifene)、パラバクチン(parabactin)、パゼリプチン(pazelliptine)、ぺグアスパルガーゼ(pegaspargase)、ペルデシン(peldesine)、ポリ硫酸ペントサンナトリウム、ペントスタチン(pentostatin)、ペントロゾール(pentrozole)、パーフルブロン(perflubron)、パーホスファミド(perfosfamide)、フェナジノマイシン(phenazinomycin)、ピシバニル(picibanil)、ピラルビシン(pirarubicin)、ピリトレキシム(piritrexim)、ポドフィロトキシン（podophyllotoxin）、ポルフィロマイシン(porfiromycin)、プリン・ヌクレオシド・ホスホリラーゼ阻害剤、ラルチトレキセド(raltitrexed)、リゾキシン(rhizoxin)、ログレチミド(rogletimide)、ロヒツキン(rohitukine)、ルビギノン(rubiginone)B1、ルボキシル(ruboxyl)、サフィンゴル(safingol)、サイントピン(saintopin)、サルコフィトール(sarcophytol)A、サルグラモスチム(sargramostim)、ソブゾキサン(sobuzoxane)、ソネルミン(sonermin)、スパルホジン酸(sparfosic acid)、スピカマイシン(spicamycin)D、スピロムスチン(spiromustine)、スチピアミド(stipiamide)、スルフィノシン(sulfinosine)、タリムスチン(tallimustine)、テガフール(tegafur)、テモゾロミド(temozolomide)、テニポシド(teniposide)、タリブラスチン(thaliblastine)、チオコラリン(thiocoraline)、チラパザミン(tirapazamine)、トポテカン、トプセンチン(topsentin)、トリシリビン(triciribine)、トリメトレキサート(trimetrexate)、ベラミン(veramine)、ビノレルビン(vinorelbine)、ビンキサルチン(vinxaltine)、ボロゾール(vorozole)、ゼニプラチン(zeniplatin)、並びにジラスコルブ(zilascorb)、が挙げられる。
【０２５４】
化学的にコンジュゲートさせるためのリンカー
本明細書で使用する用語「リンカー」は、抗体又はそのフラグメント(Ab)を薬物部分(D)に共有結合させて式Iの抗体-薬物コンジュゲート(ADC)を形成する、原子の共有結合又は鎖を含む、二価の化学的な部分構造を意味する。好適なリンカーは2つの反応性末端を有し、一方は抗体にコンジュゲートさせるためであり、他方は細胞毒素にコンジュゲートさせるためである。前記リンカーの抗体とコンジュゲートする反応性末端(反応性部分、Z')は、典型的には、前記抗体上のシステイン・チオール又はリジン・アミン基を介して、前記抗体にコンジュゲートさせることができる部位であり、従って、典型的には二重結合のようなチオールとの反応性がある基(マレイミドの場合)、又はクロロ、ブロモ、ヨード等の脱離基、若しくはR-スルファニル基、又はカルボキシル基のようなアミンとの反応性がある基である；一方、前記リンカーの抗体とコンジュゲートする反応性末端は、典型的には、細胞毒素上の塩基性アミン基又はカルボキシル基とのアミド結合の形成を介して細胞毒素にコンジュゲートすることができる部位であり、従って、典型的にはカルボキシル基又は塩基性アミン基である。前記用語「リンカー」を、コンジュゲートした形態のリンカーを説明する際に使用する場合、反応性末端の一方又は両方は、前記リンカー及び／又は前記細胞毒素間の、並びに前記リンカー及び／又は前記抗体若しくはその抗原結合フラグメント間の、結合が形成されているので、存在しない(例えば、反応性部分Z、化学的な部分構造Zに変換されている)か、又は反応途中にある(例えば、カルボン酸のカルボニルだけになっている等)。このようなコンジュゲートさせる反応を、本明細書中以下に更に記載する。
【０２５５】
様々なリンカーを使用して、記載した抗体、抗原結合フラグメント、及びリガンドを細胞毒性分子にコンジュゲートさせることができる。いくつかの実施形態では、前記リンカーは、細胞内の条件下で切断可能であり、その結果、前記リンカーの切断によって、細胞内環境において、抗体から薬物ユニットが放出される。更に他の実施形態では、そのリンカー・ユニットは切断可能ではなく、薬剤は、例えば、抗体の分解によって放出される。本発明のADCに有用なリンカーは、好ましくは細胞外で安定であり、ADC分子が凝集することを防止し、ADCが水溶性の媒体中で及び単量体状で溶け易いままにする。細胞内に輸送される又は送達される前には、前記ADCは、好ましくは安定であり、及びインタクトなままであり、即ち、前記抗体は、前記薬物部分に連結されたままである。前記リンカーはターゲット細胞の外部では安定であり、細胞内部ではある有効な速度で切断されることがある。効果的なリンカーは：(i)前記抗体の特異的な結合特性を維持する；(ii)前記コンジュゲート又は薬物部分が細胞内に送達されることを可能にする；(iii)前記コンジュゲートがそのターゲット部位に送達又は輸送されるまで、安定かつインタクトなままであり、即ち切断されない；及び(iv)前記細胞毒性部分の、細胞毒性、細胞傷害効果又は細胞増殖抑制効果を維持する。前記ADCの安定性を、質量分析、HPLC、及び分離／解析技術のLC/MS等の標準的な分析技術によって測定することができる。前記抗体及び前記薬物部分の共有結合は、前記リンカーが2つの反応性官能基を有することを要求する（即ち反応性の意味での二価である）。ペプチド、核酸、薬物、毒素、抗体、ハプテン、及びレポーター基等の2つ以上の機能的又は生物学的に活性な部分を結合させるのに役立つ二価のリンカー試薬が知られており、それらのコンジュゲートを得る方法については記載されている(Hermanson、GT(1996)Bioconjugate Techniques; Academic Press: New York、p.234-242)。
【０２５６】
好適な切断可能なリンカーとしては、例えば、酵素的加水分解、光分解、酸性条件下での加水分解、塩基性条件下での加水分解、酸化、ジスルフィド還元、求核切断、又は有機金属切断によって切断され得るものが挙げられる(例えば、Lericheら、Bioorg.Med.Chem、20:571-582、2012を参照のこと、これらの開示は、共有結合的にコンジュゲートさせることに適したリンカーに関連するので、本明細書に参照により取り込まれる)。好適な切断可能なリンカーとしては、例えば、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテル又はジペプチドなどの化学的な部分構造を挙げることができる。
【０２５７】
酸性条件下で加水分解可能なリンカーとしては、例えば、ヒドラゾン、セミカルバゾン、チオセミカルバゾン、シスアコニットアミド、オルトエステル、アセタール、ケタール等が挙げられる(例えば、米国特許第 5,122,368; 5,824,805; 5,622,929号； Dubowchik and Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123; Neville et al., 1989, Biol. Chem. 264:14653-14661、これらの各開示は、共有結合的にコンジュゲートさせることに適したリンカーに関するので、その全体が本明細書に参照により取り込まれる)。このようなリンカーは。血中の条件のような中性pHの条件下では比較的安定であるが、リソソームのおよそのpHであるpH 5.5又は5.0未満では不安定である。
【０２５８】
還元条件下で切断可能なリンカーとしては、例えば、ジスルフィドが挙げられる。例えば、SATA(N-スクシンイミジル-S-アセチルチオアセテート)、SPDP(N-スクシンイミジル-3-(2-ピリジルジチオ)プロピオネート)、SPDB(N-スクシンイミジル-3-(2-ピリジルジチオ)ブチレート)及びSMPT(N-スクシンイミジル-オキシカルボニル-α-メチル-α-(2-ピリジル-ジチオ)トルエン)、SPDB及びSMPT、を使用して形成することができるジスルフィド・リンカーを含む、様々なジスルフィド・リンカーが当該技術分野で知られている(例えば、Thorpe et al., 1987, Cancer Res. 47:5924-5931; Wawrzynczak et al., In Immunoconjugates: Antibody Conjugates in Radioimagery 及び Therapy of Cancer (C. W. Vogel ed., Oxford U. Press, 1987を参照のこと。米国特許第4,880,935も参照のこと。これらの各開示は、共有結合的にコンジュゲートさせることに適したリンカーに関するので、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２５９】
酵素的な加水分解に感受性があるリンカーは、例えば、細胞内ペプチダーゼ又はプロテアーゼ酵素(リソソーム・プロテアーゼ又はエンドソーム・プロテアーゼが挙げられるが
、これらに限定されない)によって切断されるペプチド含有リンカーであることがある。治療薬剤が細胞内タンパク質分解によって放出されることを使用することの1つの利点は、前記治療薬剤は、コンジュゲートされている場合、一般に減弱していて、及び前記コンジュゲートの血清安定性は一般的に高い、ということである。いくつかの実施形態では、前記ペプチジル・リンカーは、少なくとも2アミノ酸長又は少なくとも3アミノ酸長である。例示的なアミノ酸リンカーとしては、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド又はペンタペプチドが挙げられる。好適なペプチドの例としては、バリン、アラニン、シトルリン(Cit)、フェニルアラニン、リジン、ロイシン、及びグリシン等のアミノ酸を含有するペプチドが挙げられる。アミノ酸リンカー成分を含むアミノ酸残基としては、天然に存在するもの、並びにマイナーなアミノ酸及び非天然に存在するアミノ酸類似体(例えば、シトルリン)が挙げられる。例示的なジペプチドとしては、バリン-シトルリン(vc又はval-cit)及びアラニン-フェニルアラニン(af又はala-phe)が挙げられる。例示的なトリペプチドとしては、グリシン-バリン-シトルリン(gly-val-cit)及びグリシン-グリシン-グリシン(gly-gly-gly)が挙げられる。いくつかの実施形態では、前記リンカーとしては、Val-Cit、Ala-Val、又はPhe-Lys、Val-Lys、Ala-Lys、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit、Phe-Arg、又はTrp-Citのようなジペプチドが挙げられる。Val-Cit又はPhe-Lys等のジペプチドを含むリンカーは、例えば、米国特許第6,214,345号に開示されている（この開示は、共有結合的にコンジュゲートさせることに適したリンカーに関するので、その全体が本明細書に参照により取り込まれる）。いくつかの実施形態では、前記リンカーとしては、Val-Ala及びVal-Citから選択されるジペプチドが挙げられる。
【０２６０】
本明細書に記載する抗体、抗原結合フラグメント、及びリガンドを細胞毒性分子に結合させるのに適したリンカーとしては、1,6-脱離過程によって、細胞毒素を放出することができるリンカーが挙げられる。この脱離過程を可能にする化学的な部分構造としては、p-アミノベンジル・アルコール(PABC)、p-アミノベンジル(PAB)、6-マレイミドヘキサン酸、pH感受性炭酸塩、及びJain et al., Pharm. Res. 32:3526-3540, 2015（この開示は、共有結合的なコンジュゲーションに適したリンカーに関連するので、その全体が本明細書に参照により取り込まれる）に記載される他の試薬等が挙げれれる。
【０２６１】
いくつかの実施形態では、前記リンカーとしては、前述のPAB又はPABC(パラ-アミノベンジルオキシカルボニル)等の「自壊」基が挙げられ、これらは、例えば、Carl et al., J. Med. Chem. (1981) 24:479-480; Chakravarty et al (1983) J. Med. Chem. 26:638-644; US 6214345; US20030130189; US20030096743; US6759509; US20040052793; US6218519; US6835807; US6268488; US20040018194; W098/13059; US20040052793; US6677435; US5621002; US20040121940; W02004/032828に開示されている。このプロセスが可能な他のこのような化学的な部分構造(「自壊リンカー」)としては、メチレン・カルバメート及びヘテロアリール基、例えばアミノチアゾール、アミノイミダゾール、アミノピリミジンなどが挙げられる。このような複素環の自壊基を含むリンカーは、例えば、米国特許出願公開20160303254 及び 20150079114、並びに米国特許第7,754,681; Hay et al. (1999) Bioorg. Med. Chem. Lett. 9:2237; US 2005/0256030; de Groot et al (2001) J. Org. Chem. 66:8815-8830; 及び US 7223837に開示されている。いくつかの実施形態では、ジペプチドを、自壊リンカーと組合せて使用する。
【０２６２】
本明細書での使用に適したリンカーは、C1-C6アルキレン、C1-C6ヘテロアルキレン、C2-C6アルケニレン、C2-C6ヘテロアルケニレン、C2-C6アルキニレン、C2-C6ヘテロアルキンニレン、C3-C6シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、ヘテロアリーレン、及びそれらの組合せから選択される1つ以上の基を更に含むことがあり、これらの各々は任意選択的に置換されていることがある。このような基の非限定的な実施例としては、(CH2)p、(CH2CH2O)p、及び-(C=O)(CH2)p-ユニットが挙げられ、ここで、pは1〜6の整数であり、各々の場合に対して独立に選択される。
【０２６３】
好適なリンカーは、溶解性を高める特性を有する基を含むことがある。例えば、(CH2CH2O)p単位(ポリエチレングリコール、PEG)を含むリンカーは、溶解性を高めることができ、アミノ、スルホン酸、ホスホン酸又はリン酸残基で置換されたアルキル鎖も同様である。このような部分構造を含むリンカーは、例えば、米国特許番号8,236,319 及び9,504,756に開示されている（これらの各々の開示は、共有結合的なコンジュゲーションに適したリンカーに関連するので、その全体が本明細書に参照により取り込まれる）。更なる溶解性を高める基としては、例えば、以下の構造を有するアシル及びカルバモイル・スルファミド基が挙げられる：
【化６０】
2021526525.tif 000064
ここで、aは0又は1である；並びに
R10は、水素、C1-C24アルキル基、C3-C24シクロアルキル基、C1-C24(ヘテロ)アリール基、C1-C24アルキル（ヘテロ）アリール基、及びC1-C24（ヘテロ）アリールアルキル基、C1-C24アルキル基、C3-C24シクロアルキル基、C2-C24（ヘテロ）アリール基、C3-C24アルキル（ヘテロ）アリール基、及びC3-C24（ヘテロ）アリールアルキル基、からなる基から選択され、これらの各々は、O、S、及びNR11R12から選択される1種以上のヘテロ原子によって、任意選択的に置換している、及び／又は任意選択的に割り込まれていることがある、ここで、R11及びR12は、水素及びC1-C4アルキル基からなる群から独立して選択される；又はR10は細胞毒素である、ここで、前記細胞毒素は、スペーサー部分を介して、Nに任意選択的に結合する。そのような基を含むリンカーは、例えば、米国特許9,636,421号及び米国特許出願公開第2017/0298145号(これら開示は、細胞毒素及び抗体又はそれらの抗原結合フラグメントへの共有結合的なコンジュゲーションに適したリンカーに関連するので、その全体が、本明細書に参照により取り込まれる)に記載されている。
【０２６４】
いくつかの実施形態では、前記リンカーは、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテル、ジペプチド、p-アミノベンジル(PAB)基、複素環自壊基、任意選択的に置換されたC1-C6アルキル、任意選択的に置換されたC1-C6ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C6アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたC3-C6シクロアルキル、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたヘテロアリール、溶解増強基、アシル、-(C=O)-、又は-(CH2CH2O)p-基のうちの1つ以上を含むことがある、ここで、pは1〜6の整数である。当業者の中のある者は、列挙された基の1つ以上が、二価(ジラジカル)種(例えば、C1-C6アルキレン等)の形態で存在し得ることを認識する。
【０２６５】
いくつかの実施形態では、前記リンカーは、p-アミノベンジル基(PAB)を含む。ある実施形態では、前記p-アミノベンジル基は、細胞毒素剤とリンカー中のプロテアーゼ切断部位との間に配置される。ある実施形態では、前記p-アミノベンジル基は、p-アミノベンジルオキシカルボニル・ユニットの一部である。ある実施形態では、p-アミノベンジル基は、p-アミノベンジルアミド・ユニットの一部である。
【０２６６】
いくつかの実施形態では、前記リンカーは、PAB, Val-Cit-PAB, Val-Ala-PAB, Val-Lys(Ac)-PAB, Phe-Lys-PAB, Phe-Lys(Ac)-PAB, D-Val-Leu-Lys, Gly-Gly-Arg, Ala-Ala-Asn-PAB, 又は Ala-PAB を含む。
【０２６７】
いくつかの実施形態では、前記リンカーは、ペプチド、オリゴ糖、-(CH2)p-, -(CH2CH2O)p-, PAB, Val-Cit-PAB, Val-Ala-PAB, Val-Lys(Ac)-PAB, Phe-Lys-PAB, Phe-Lys(Ac)-PAB, D-Val-Leu-Lys, Gly-Gly-Arg, Ala-Ala-Asn-PAB, 又は Ala-PAB.
のうちの1つ以上の組合せを含む。
【０２６８】
いくつかの実施形態では、前記リンカーは、-(C=O)(CH2)p-ユニットを含み、ここで、pは1〜6の整数である。
【０２６９】
ある具体的na
実施形態では、前記リンカーは以下の構造を含む
【化６１】
2021526525.tif 000065
ここで、波線は、前記細胞毒素及び反応性部分構造Z'への結合の位置を示す。別の具体的な実施形態では、前記リンカーは以下の構造を含む
【化６２】
2021526525.tif 000066
ここで、波線は、前記細胞毒素及び反応性部分構造Z'への結合の位置を示す。このようなPAB-ジペプチド-プロピオニル・リンカーとしては、例えば、特許出願公開WO2017/149077に開示されている（これは、その全体が、参照により本明細書に取り込まれる）更に、WO2017/149077に開示された細胞毒素は、参照により本明細書に取り込まれる。
【０２７０】
本明細書に開示する化学基、部分及び特徴の何れか1つ以上を、多様な方法で組み合わせて、本明細書に開示するような抗体と細胞毒素とをコンジュゲートさせることに対して有用なリンカーを形成し得ることは、当業者の中のある者によって認識されるだろう。本明細書中に記載される組成物及び方法と併せることにおいて有用な更なるリンカーは、例えば、米国特許出願公開第2015/0218220号に記載されており、その開示内容は、その全体が参照により本明細書に取り込まれる。
【０２７１】
ある特定の実施形態では、リンカーの前駆物質である中間体を、適切な条件下で薬物部分と反応させる。ある特定の実施形態では、反応性基を、前記薬物及び／又は前記中間体若しくはリンカー上で使用する。前記薬物と前記中間体との間の反応の生成物、又は誘導体化した薬物を、その後、適切な条件下で、抗体又は抗原結合フラグメントと反応させる。あるいは、前記リンカー又は中間体を、最初に前記抗体又は誘導体化した抗体と反応させ、次いで前記薬物又は誘導体化した薬物と反応させてもよい。このようなコンジュゲーション反応を、ここで、より完全に記載する。
【０２７２】
前記抗体又はその抗原結合フラグメントに、前記リンカー又は薬物-リンカー・コンジュゲートを共有結合させるために、多くの様々な反応を利用することができる。抗体分子上の好適な結合の位置としては、リジンのアミン基、グルタミン酸及びアスパラギン酸の遊離カルボン酸基、システインのスルフヒドリル基、及び芳香族アミノ酸の種々の部分が挙げられる。例えば、化合物上のカルボキシ(又はアミノ)基を抗体部分上のアミノ(又はカルボキシ)基に連結するために、非特異的な共有結合を、カルボジイミド反応を用いて行うことがある。更に、化合物上のアミノ基を抗体部分上のアミノ基に結合させるために、ジアルデヒド又はイミドエステルなどの二官能基性の薬剤を使用することもある。薬物を結合剤に結合させることには、シッフ塩基反応を利用することも可能である。この方法は、グリコール又は水酸基を含有する薬物を過ヨウ素酸塩酸化させることを含み、このようにしてアルデヒドを形成させ、次いでこれを結合剤と反応させる。結合は、前記結合剤のアミノ基を有するシッフ塩基の形成を介して起こる。イソチオシアネートはまた、薬物を結合剤に共有結合させるためのカップリング剤として使用することもある。他の技術は当業者に知られており、本発明の範囲内である。
【０２７３】
本明細書に記載する場合、抗体又は抗原結合フラグメントへのコンジュゲーションに有用なリンカーとしては、限定されるものではないが、以下の表３に示すような、カップリング反応によって形成される化学的な部分構造Zを含むリンカーが挙げられる。曲線は、それぞれ、抗体又は抗原結合フラグメント、及び細胞毒性分子に結合する位置を示す。
【０２７４】
【表４−１】
2021526525.tif 000067
【表４−２】
2021526525.tif 000068
【表４−３】
2021526525.tif 000069
【０２７５】
当業者の中のある者は、前記リンカー及び前記抗体又はその抗原結合フラグメント上の反応性置換基に結合した反応性置換基Z'が、化学的な部分構造Zを生成する共有結合カップリング反応に関与するものであることを認識し、前記反応性の部分構造Z'を認識する。従って、本明細書に記載の方法と併せることにおいて有用な抗体-薬物コンジュゲートは、リンカー又は細胞毒素-リンカー・コンジュゲート(本明細書に記載されるように、前記リンカー又は細胞毒素-リンカー・コンジュゲートは、抗体又はその抗原結合フラグメント上の反応性置換基との反応に適した反応性置換基Z'を含む)と、抗体又はその抗原結合フラグメントとの反応によって形成され、化学的な部分構造Zを形成することがある。
【０２７６】
表３に示されるように、前記リンカー及び抗体、又はその抗原結合フラグメント上の適切に反応する置換基の例としては、求核／求電子対(例えば、チオール／ハロアルキル対、アミン／カルボニル対、又はチオール／α, β-不飽和カルボニル対等)、ジエン／ジエノフィル対(例えば、とりわけ、アジド／アルキン対、又はジエン／α,β-不飽和カルボニル対)等が挙げられる。化学的な部分構造Zを形成するための反応性置換基間のカップリング反応としては、限定されるものではないが、チオール・アルキル化、ヒドロキシル・アルキル化、アミン・アルキル化、アミン又はヒドロキシルアミン縮合、ヒドラジン形成、アミド化、エステル化、ジスルフィド形成、環化付加(例えば、とりわけ、[4+2]Diels-Alder環化付加、[3+2]Huisgen環化付加)、芳香族求核置換、芳香族求電子置換、及び当該技術分野で知られているか又は本明細書に記載されている他の反応様式が挙げられる。好ましくは、前記リンカーは、前記抗体又はその抗原結合フラグメント上の求核性官能基との反応のための求電子性官能基を含む。
【０２７７】
本明細書に開示するように、抗体、又はその抗原結合フラグメント内に存在し得る反応性置換基としては、限定されるものではないが、(i)N末端アミン基、(ii)側鎖アミン基(例えば、リジン)、(iii)側鎖チオール基(例えば、システイン)、及び(iv)糖水酸基又はアミノ基(ここで、前記抗体はグリコシル化されている)、のような求核基が挙げられる。本明細書に開示するように、抗体、又はその抗原結合フラグメント内に存在し得る反応性置換基としては、限定されるものではないが、セリン、スレオニン、及びチロシン残基のヒドロキシル部分；リジン残基のアミノ部分；アスパラギン酸及びグルタミン酸残基のカルボキシル部分；並びにシステイン残基のチオール部分、並びに、非天然アミノ酸のプロパルギル、アジド、ハロアリール(例えば、フルオロアリール)、ハロヘテロアリール(例えば、フルオロヘテロアリール)、ハロアルキル、及びハロヘテロアルキル部分が挙げられる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示するように、抗体、又はその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基としては、アミン又はチオール部分が挙げられる。ある特定の抗体は、還元可能な鎖間ジスルフィド（即ち、システイン架橋）を有する。抗体は、DTT(ジチオトレイトール)等の還元剤で処理することによって、リンカー試薬とコンジュゲートさせるために、反応性にすることができる。従って、各システイン架橋は、理論的には、2つの反応性チオール求核基を形成する。リジンと2-イミノチオラン(トラウト試薬)との反応によって、更なる求核基を抗体中に導入して、アミンをチオールに転化させることができる。1個、2個、3個、4個、又はそれ以上のシステイン残基を導入することによって(例えば、1個以上の非天然システイン・アミノ酸残基を含む変異抗体を調製することによって)、反応性チオール基を、抗体(又はそのフラグメント)に導入することがある。米国特許第7,521,541号は、反応性システイン・アミノ酸を導入することによる工学的に操作した抗体を教示している。
【０２７８】
いくつかの実施形態では、前記リンカーに結合した反応性の部分構造Z'は、抗体上に存在する求電子基と反応性である求核基である。抗体上の有用な求電子基としてはアルデヒド及びケトン・カルボニル基が挙げられるが、これらに限定されない。求核基のヘテロ原子は、抗体上の求電子基と反応し、前記抗体と共有結合を形成することがある。有用な求核基としては、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドロキシル、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジン・カルボキシレート、及びアリールヒドラジドが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２７９】
いくつかの実施形態では、Zは、抗体又はその抗原結合フラグメント内に存在する反応性求核置換基(例えば、アミン及びチオール部分)、及び反応性求電子置換基Z'との間の反応の生成物である。例えば、Z'は、特に、マイケル・アクセプター(例えば、マレイミド)、活性化エステル、電子欠損カルボニル化合物、及びアルデヒドであることがある。
【０２８０】
例えば、薬物-抗体及び薬物-リガンド結合体の合成に好適なリンカーとしては、限定されるものではないが、マレイミド又はハロアルキル基などの反応性置換基Z'が挙げられる。
これらは、試薬（例えば、スクシンイミジル4-(N-マレイミドメチル)-シクロヘキサン-L-カルボキシレート(SMCC)、N-スクシンイミジル・ヨードアセテート(SIA)、スルホ-SMCC、m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドロキシスクシンイミジル・エステル(MBS)、スルホ-MBS、及びスクシンイミジル・ヨードアセテート、とりわけ、例えば、Liu et al., 18:690-697, 1979に記載されている（この開示は、化学的にコンジュゲートさせるためのリンカーに関するものとして、本明細書に参照により取り込まれる））によって、前記リンカーに結合することがある。
【０２８１】
いくつかの実施形態では、リンカーLに結合した反応性置換基Z'は、マレイミド、アジド、又はアルキンである。マレイミド含有リンカーの例は、非切断性マレイミドカプロイル-ベースのリンカーであり、これは、アウリスタチンなどの微小管破壊剤をコンジュゲートするのに特に有効である。このようなリンカーはDoronina et al., Bioconjugate Chem. 17:14-24, 2006に記載されている（この開示は、化学的にコンジュゲートさせるためのリンカーに関するものとして、本明細書に参照により取り込まれる）。
【０２８２】
いくつかの実施形態では、反応性置換基Z'は-(C=O)-又は-NH(C=O)-であり、その結果、前記リンカーは、それぞれ、-(C=O)-又は-NH(C=O)基と抗体又はその抗原結合フラグメントのアミノ基との反応から生じるアミド又は尿素の部分構造によって、前記抗体又はその抗原結合フラグメントに結合することがある。
【０２８３】
いくつかの実施形態では、前記反応性置換基は、N-マレイミジル基、ハロゲン化N-アルキルアミド基、スルホニルオキシN-アルキルアミド基、カーボネート基、ハロゲン化スルホニル基、チオール基又はその誘導体、内部に炭素-炭素の三重結合を含むアルキニル基、（ヘテロ）シクロアルキニル基、ビシクロ[6.1.0]ノン-4-イン-9-イル基（bicyclo[6.1.0]non-4-yn-9-yl group）、内部に炭素-炭素の二重結合を含むアルケニル基、シクロアルケニル基、テトラジニル基、アジド基、ホスフィン基、ニトリル・オキシド基、ニトロン基、ニトリル・イミン基、ジアゾ基、ケトン基、(O-アルキル)ヒドロキシルアミノ基、ヒドラジン基、ハロゲン化N-マレイミジル基、1,1-ビス(スルホニルメチル)メチルカルボニル基又はその脱離誘導体、ハロゲン化カルボニル基、又はアレンアミド基であり、これらはそれぞれ任意に置換されていることがある。いくつかの実施形態では、前記反応性置換基は、シクロアルケン基、シクロアルキン基、又は任意に置換された(ヘテロ)シクロアルキニル基を含む。
【０２８４】
前記抗体又はその抗原結合フラグメント上の反応性残基との反応に適した反応性置換基Z'を含むアマトキシン-リンカー・コンジュゲートの非限定的な例としては、限定されるものではないが、以下が挙げられる、7'C-(4-(6-(マレイミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボニル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(3-カルボキシプロパンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(2-ブロモアセトアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(3-(ピリジン-2-イルジスルファニル)プロパンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(4-(マレイミド)ブタンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(マレイミド)アセチル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(3-(マレイミド)プロパノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(4-(マレイミド)ブタノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(3-((6-(マレイミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(3-((6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(3-((4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)メチル)ピロリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(3-((6-((4-(マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(4-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ブタンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(4-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ブタノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(6-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-((4-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(6-(マレイミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；(R)-7'C-((3-((6-(マレイミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；(S)-7'C-((3-((6-(マレイミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)エチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)-S-メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)-R-メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)-S-メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)-R-メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(3-カルボキシプロパンアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(マレイミド)アセチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(3-(マレイミド)プロパノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(4-(マレイミド)ブタノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(2-(マレイミド)アセトアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(4-(マレイミド)ブタンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((6-(マレイミド)ヘキサンアミド)メチル)アゼチジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-(2-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)エチル)アゼチジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)メチル)アゼチジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-(2-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)エチル)アゼチジン-1イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)アゼチジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-(((2-(6-(マレイミド)-N-メチルヘキサンアミド)エチル)(メチル)アミノ)メチル)-アマトキシン；7'C-(((4-(6-(マレイミド)-N-メチルヘキサンアミド)ブチル(メチル)アミノ)メチル)-アマトキシン；7'C-((2-(2-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)エチル)アジリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((2-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)アジリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(6-(6-(2-(アミノオキシ)アセトア��ド)ヘキサンアミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(1-(アミノオキシ)-2-オクソ-6,9,12,15-テトラオキサ-3-アザヘプタデカン-17-オイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)アセチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(3-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)プロパノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(4-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ブタノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(2-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)アセトアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(4-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ブタンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(20-(アミノオキシ)-4,19-ジオクソ-6,9,12,15-テトラオキサ-3,18-ジアザイコシル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-(((2-(6-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)-N-メチルヘキサンアミド)エチル)(メチル)アミノ)メチル)-アマトキシン；7'C-(((4-(6-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)-N-メチルヘキサンアミド)ブチル)(メチル)アミノ)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)-S-メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)-R-メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(2-ブロモアセトアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(2-ブロモアセトアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(3-(ピリジン-2-イルジスルファニル)プロパンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；6'O-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキシル)-アマトキシン；6'O-(5-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ペンチル)-アマトキシン；6'O-(2-((6-(マレイミド)ヘキシル)オキシ)-2-オキソエチル)-アマトキシン；6'O-((6-(マレイミド)ヘキシル)カルバモイル)-アマトキシン；6'O-((6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキシル)カルバモイル)-アマトキシン；6'O-(6-(2-ブロモアセトアミド)ヘキシル)-アマトキシン；7'C-(4-(6-(アジド)ヘキサンアミド)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(へクス-5-イノイルアミノ)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；6'O-(6-(6-(11,12-ジデヒドロ-5,6-ジヒドロ-ジベンズ[b,f]アゾシン-5-イル)-6-オクソヘキサンアミド)ヘキシル)-アマトキシン；6'O-(6-(へクス-5-イノイルアミノ)ヘキシル)-アマトキシン；6'O-(6-(2-(アミノオキシ)アセチルアミド)ヘキシル)-アマトキシン；6'O-((6-アミノオキシ)ヘキシル)-アマトキシン；及び 6'O-(6-(2-イオドアセトアミド)ヘキシル)-アマトキシン。
【０２８５】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示するアマトキシンは、以下の式を有するリンカー反応性部分構造-L-Z'にコンジュゲートする：
【化６３】
2021526525.tif 000070
【０２８６】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示するアマトキシンは、以下の式を有するリンカー反応性部分構造-L-Z'にコンジュゲートする：
【化６４】
2021526525.tif 000071
【０２８７】
前記のリンカー部分構造及びアマトキシン-リンカー・コンジュゲートは、とりわけ、本明細書に記載する組成物及び方法と関連して有益であり、例えば、米国特許出願公開第2015/0218220号及び特許出願公開第WO2017/149077号に記載されており、これらの各々の開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２８８】
抗体-薬物コンジュゲートの調製
本明細書に開示する式IのADCにおいて、抗体、又はその抗原結合フラグメントは、本明細書に開示するリンカーL及び化学的な部分構造Zを介して、1個以上の細胞素剤部分(D)(例えば、1抗体あたり約1〜約20個の薬物部分)にコンジュゲートしている。本発明のADCは、以下を含む、当業者に公知の有機化学反応、条件、及び試薬を使用するいくつかの経路によって調製され得る：(1)抗体、又はその抗原結合フラグメントの反応性置換基を、2価リンカー試薬と反応させて、本明細書中上記のようなAb-Z-Lを形成させる、続いて、薬物部分Dと反応させる；2)薬物部分の反応性置換基を、2価リンカー試薬と反応させて、D-L-Zを形成させる、続いて、本明細書中上記のような抗体、又はその抗原結合フラグメントの反応性置換基と反応させる。ADCを調製するための更なる方法は、本明細書中に記載される。
【０２８９】
別の態様において、前記抗体、又はその抗原結合フラグメントは、1つ以上のスルフヒドリル基を導入するために化学的に修飾され得る1つ以上のリジン残基を有する。次いで、前記ADCは、本明細書中上記に記載するように、スルフヒドリル基の硫黄原子を介してコンジュゲートすることによって形成される。リジンを修飾するために使用することができる試薬としては、限定されるものではないが、N-スクシンイミジルS-アセチルチオアセテート(SATA)及び2-イミノチオラン塩酸塩(Traut’s試薬)が挙げられる。
【０２９０】
別の態様において、前記抗体、又はその抗原結合フラグメントは、1つ以上のスルフヒドリル基を有するように化学的に修飾され得る1つ以上の炭水化物基を有することがある。次いで、前記ADCは、本明細書中上記に記載されるように、スルフヒドリル基の硫黄原子を介してコンジュゲートすることによって形成される。
【０２９１】
更に別の態様において、前記抗体は、酸化されてアルデヒド(-CHO)基を提供し得る1つ以上の炭水化物基を有することがある(例えば、Laguzza, et al., J. Med. Chem. 1989, 32(3), 548-55を参照のこと)。次いで、前記ADCは、本明細書中上記に記載されるように、対応するアルデヒドを介してコンジュゲートすることによって形成される。細胞毒素を結合させる又は会合させるためのタンパク質を修飾する他のプロトコールは、Coligan et al., Current Protocols in Protein Science, vol. 2, John Wiley & Sons (2002)に記載されている（参照により本明細書に取り込まれる）。
【０２９２】
抗体、免疫グロブリン又はそのフラグメント等の細胞にターゲットするタンパク質に、リンカー-薬物部分をコンジュゲートさせるための方法は、例えば、米国特許第5,208,020号; 米国特許第6,441,163号; WO2005037992; WO2005081711; 及びWO2006/034488に記載されている（これらの全ては、その全体が参照により本明細書に明確に取り込まれる）。
【０２９３】
或いは、前記抗体及び細胞毒素剤を含む融合タンパク質を、例えば、組換え技術又はペプチド合成によって、作製することがある。DNAの長さは、互いに隣接するか、又は前記コンジュゲートの所望の特性を破壊しないリンカー・ペプチドをコードする領域によって分離された、前記コンジュゲートの2つの部分をコードするそれぞれの領域を含むことがある。
【実施例】
【０２９４】
実施例
以下の実施例は、高用量のCD117-アマニチンADCを投与した非ヒトの霊長類で、肝臓の酵素が上昇したことが認められ、毒性が示唆された試験について記載する。しかし、同じ用量を、別々の日の2回以上にして投与した場合、前記毒性は消失した。肝臓の酵素レベルの低下の大きさは、用量を減少させたことをはるかに超えるものであった−例えば、ADCの単回用量(例えば、0.6 mg/kg)を投与した場合、肝臓の酵素レベルが低下する大きさは、例えば、肝臓の酵素が正常値の100倍に上昇したが、用量を2等分(例えば、2×0.3 mg/kg)に分割した場合、肝臓の酵素の上昇の大きさを単に小さくするだけではなかった。寧ろ、肝臓の酵素レベルは正常に戻った、即ち、全部で同量の薬物を投与したにもかかわらず毒性は回避される。重要なことは、両投薬レジメン(単回用量と分割用量)で同等の有効性が認められることである。
【０２９５】
以下の実施例において使用するADCは、リンカー(1)を介して細胞毒素(D)にコンジュゲートした種々の抗CD117抗体を含む。具体的には、前記ADCを、種々の抗CD117抗体を図５に描かれた化合物にコンジュゲートすることによって、合成した。より具体的には、ADC 1は、抗CD117抗体、即ち、CK6、であり、D265CとH435AのFc変異を含む改変したFc領域を有する、速い(即ち、短い)半減期を特徴とする。ADC 2は、配列番号(SEQ ID NO)：106に記載の重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：107に記載の軽鎖可変領域を含む抗CD117抗体であり、D265C及びH435A Fc変異を含む改変したFc領域を有する速い(即ち、短い)半減期を特徴とする。ADC 3は、配列番号(SEQ ID NO)：106に記載の重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：107に記載の軽鎖可変領域を含む抗CD117抗体であり、D265C、H435A、及びLALA Fc変異を含む改変したFc領域を有する速い(即ち、短い)半減期を特徴とする。
【０２９６】
実施例１. In vivo用量増加試験における網状赤血球の細胞数の解析
抗体薬物コンジュゲートADC 1をこの実施例では使用した。カニクイザルのコホート(1コホートあたり3匹のサル)に、1日目に、1時間の点滴を介して、以下の種々の用量のADC 1を投与した(即ち、0.1 mg/kg QDx1 (単回用量); 0.3 mg/kg QDx1 (単回用量); 0.6 mg/kg QDx1 (単回用量); 0.1 mg/kg Q3D x 2 (複数回用量); 0.3 mg/kg Q3D x 2 (複数回用量); 又はコントロール(PBS (QDx1 (単回用量)) 若しくは、アイソタイプADC (0.3 mg/kg QDx1 (単回用量)))。複数回用量のコホートには、1日目及び3日目に、0.1 mg/kgのADC又は0.3 mg/kgのADCのいずれかを投与した。全血からの網状赤血球の細胞数(109/μl)を、血液分析器を用いて測定し、図１に示すように、初回用量を投与した後の日数を横軸としてグラフで表した。
【０２９７】
図１の結果は、ADC 1を投与した全てのコホートについて、ベースラインの網状赤血球数(即ち、PBS)と比較して、ADC 1(即ち、0.1 mg/kg用量-0.6 mg/kg用量、0.1 mg/kg Q3D x 2(複数回用量)及び0.3 mg/kg Q3D x 2(複数回用量))を投与すると、網状赤血球数が一過的に減少することを示す。本結果はまた、ADC 1(即ち、0.1 mg/kg Q3D x 2)の複数回投薬レジメンの投与が、ADC 1の0.3 mg/kg用量の単回投与に対して、網状赤血球減少において同等であることを示している。
【０２９８】
速い半減期のAb85抗体のADC(配列番号(SEQ ID NO)：106に記載の重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：107に記載の軽鎖可変領域；データは示さず)及び速い半減期のAb67抗体のADC(配列番号(SEQ ID NO)：150に記載の重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：151に記載の軽鎖可変領域；データは示さず)を用いて行った実験において、同様の結果が得られた。
【０２９９】
実施例２. In vivo用量増加試験における血小板の細胞数の解析
抗体薬物コンジュゲートADC 1をこの実施例では使用した。カニクイザルのコホート(1コホートあたり3匹のサル)に、1日目に、1時間の点滴を介して、以下の種々の用量のADC 1を投与した(即ち、0.1 mg/kg QDx1 (単回用量); 0.3 mg/kg QDx1 (単回用量); 0.6 mg/kg QDx1 (単回用量); 0.1 mg/kg Q3D x 2 (複数回用量); 0.3 mg/kg Q3D x 2 (複数回用量); 又はコントロール(PBS (QDx1 (単回用量)) 若しくは、アイソタイプADC (0.3 mg/kg QDx1 (単回用量)))。複数回用量のコホートには、1日目及び3日目に、0.1 mg/kgのADC又は0.3 mg/kgのADCのいずれかを投与した。全血からの血小板の細胞数(103/μl)を、血液分析器を用いて測定し、図２に示すように、初回用量を投与した後の日数を横軸としてグラフで表した。
【０３００】
図２の結果は、ベースラインの血小板数(即ち、PBS)と比較して、ADC 1(即ち、0.1 mg/kg用量-0.6 mg/kg用量、0.1 mg/kg Q3D x 2(複数回用量)及び0.3 mg/kg Q3D x 2(複数回用量))を投与すると、血小板数が一過的に減少することを示す。0.1 mg/kg Q3D×2(複数回投与)での血小板数の減少は、0.1 mg/kg(単回投与)で観察された血小板数の減少と同等(即ち、悪化しない)であることも示している。更に、本結果はまた、ADC 1(即ち、0.3 mg/kg Q3D x 2)の複数回投薬レジメンの投与が、ADC 1の0.6 mg/kg用量の単回投与に対して、血小板減少において同等であることを示している。
【０３０１】
速い半減期のAb85抗体のADC(配列番号(SEQ ID NO)：106に記載の重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：107に記載の軽鎖可変領域；データは示さず)及び速い半減期のAb67抗体のADC(配列番号(SEQ ID NO)：150に記載の重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：151に記載の軽鎖可変領域；データは示さず)を用いて行った実験において、同様の結果が得られた。
【０３０２】
実施例３． In vivo用量増加試験における血漿中ALT、LDH、ASTの解析
抗体薬物コンジュゲートADC 1をこの実施例では使用した。カニクイザルのコホート(1コホートあたり3匹のサル)に、1日目に、1時間の点滴を介して、以下の種々の用量のADC 1を投与した(即ち、0.1 mg/kg QDx1； 0.3 mg/kg QDx1； 0.6 mg/kg QDx1； 0.1 mg/kg Q3D x 2 (複数回用量); 0.3 mg/kg Q3D x 2 (複数回用量); 又はコントロール(PBS (QDx1 (単回用量)) 若しくは、アイソタイプADC (0.3 mg/kg QDx1 (単回用量)))。複数回用量のコホートには、1日目及び3日目に、0.1 mg/kgのADC又は0.3 mg/kgのADCのいずれかを投与した。ALT (アラニン・アミノトランスアミナーゼ)、LDH(乳酸デヒドロゲナーゼ)及びAST(アスパラギン酸アミノトランスアミナーゼ)の血漿レベルを、血液学的分析器を用いて測定し、図３Ａ−３Ｃに示すように、初回用量を投与した後の日数を横軸としてグラフで表した。図３Ｄ及び３Ｅに示した結果について、単回投与では15日目に、複数回投与では18日目に骨穿刺液を採取し、フロー・サイトメトリー・アッセイを用いて、骨髄中の造血幹細胞及び前駆細胞の細胞を測定した。
【０３０３】
図３Ａ、３Ｂ及び３Ｃの結果は、アラニンアミノトランスアミナーゼ(ALT)、乳酸デヒドロゲナーゼ(LDH)、及びアスパラギン酸アミノトランスアミナーゼ(AST)のレベルが、それぞれ、0.6 mg/kg用量のADCの投与時に、ベースラインALT、LDH及びAST数(即ちPBS)及び他の投薬レジメンと比較して、有意に一過的に増加することを示す。本結果はまた、アラニンアミノトランスアミナーゼ(ALT)、乳酸デヒドロゲナーゼ(LDH)、及びアスパラギン酸アミノトランスアミナーゼ(AST)のレベルが、0.1 mg/kg用量のADCの投与時に、有意な変化がなかったことも示す。本結果はまた、複数回投薬レジメンは忍容性が良好であり、0.6 mg/kgの単回投与と比較してLDH、AST及びALTのレベルが有意に低くなったことも示している。
【０３０４】
図３Ｄの結果は、ADC 1(速い半減期)を、野生型(wt)の半減期のADC 1(D265C及びH435A Fcの変異を欠く)、IgG1アマニチンADC(即ち、ISO-AM)、及びコントロールのそのままのCD117抗体(即ち、「CD117」)と比較した、骨髄中の造血幹細胞及び前駆体細胞の数を記載する。本結果は、ADC 1(速い半減期)を投与したとき、造血幹細胞及び前駆細胞が、効率良く、オン−ターゲットで減少することを示す。本結果はまた、速い半減期ADC 1を複数回投薬レジメンで投与することは(即ち、0.1 mg/kg Q3D x 2)、造血幹細胞及び前駆細胞の減少が、速い半減期ADC 1の単回0.6 mg/kg用量で観察されたものと比較して、およそ同等の効率であったことも示す。図３Ｅの結果は、速い半減期のADC 1と速い半減期のアイソタイプ・コントロール(即ちISO-AM(D265C.H435A))とを比較した、骨髄中の造血幹細胞及び前駆体細胞の数を記載する。本結果は、速い半減期のADC 1を複数回投薬レジメンで投与することは(即ち、0.1 mg/kg Q3D×2及び0.3 mg/kg Q3D×2)、造血幹細胞及び前駆細胞の減少が、速い半減期ADC 1の単回0.6 mg/kg用量で観察されたものよりも、効率的であったことを示す。更に、複数回用量の0.3 mg/kg Q3D x 2は、忍容性が良好であった。
【０３０５】
速い半減期のAb85抗体のADC(配列番号(SEQ ID NO)：106に記載の重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：107に記載の軽鎖可変領域；データは示さず)及び速い半減期のAb67抗体のADC(配列番号(SEQ ID NO)：150に記載の重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：151に記載の軽鎖可変領域；データは示さず)を用いて行った実験において、同様の結果が得られた。
【０３０６】
加えて、ADC 1の血漿中濃度を、当業者の中のある者が知る方法を用いて測定し、ADC 1の様々な用量(即ち、0.1 mg/kg(QDx1)；0.3 mg/kg(QDx1)；0.6 mg/kg(QDx1)；0.1 mg/kg Q3D x 2(複数回用量)、0.3 mg/kg Q3D x 2(複数回用量)))を用いて、Cmax 及びAUCを計算した。複数回用量のコホートに対しては、0.1 mg/kgのADC 1又は0.3 mg/kgのADC 1のいずれかを、t = 0及びt= 72時間で投与し、単回投与のコホートに対しては、0.1 mg/kgのADC 1、0.3 mg/kgのADC 1又は0.6 mg/kgのADC 1のいずれかをt = 0で投与した。ADC 1の濃度(μg/ml)を、横軸を時間として測定し、図３Ｆにグラフで示した。その数値の結果を表４に示した。
【０３０７】
【表５】
2021526525.tif 000072
【０３０８】
本データは、0.3 mg/kg Q3Dx2の複数回投薬レジメンは、0.6 mg/kg QDx1(単回投与)と比較した場合、同様のAUC、より低いCmax、及びより低い肝臓の酵素レベル(例えば、より低いALT、LDH、AST)となり、網状赤血球は同様に一過的に減少した。これらのデータは、忍容性はCmaxによって決まること、一方、有効性はAUCによって決まること、を示した。
【０３０９】
速い半減期のAb85抗体のADC(配列番号(SEQ ID NO)：106に記載の重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：107に記載の軽鎖可変領域；データは示さず)及び速い半減期のAb67抗体のADC(配列番号(SEQ ID NO)：150に記載の重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：151に記載の軽鎖可変領域；データは示さず)を用いて行った実験において、AUC及びCmaxの同様の傾向が観察された。
【０３１０】
本明細書に示されるように、ADCの用量を増加させると、曝露量が増加した。総用量を考えた場合、2つの用量という分割投与により、より高い単回用量と、AUC値は同様になったが、同じ量の単回用量と比較して同様のCmax値となった。これらのADCを分割投与すると、高用量の単回投与と比較して、肝臓の酵素レベルはより低く、有効性は同様であり、ある特定の実施形態では、忍容性はCmaxによって決まること、一方、有効性はAUCによって決まること、を更に示した。
【０３１１】
例４．In vivo用量増加試験における網状赤血球の細胞数とプラズマASTの解析
抗体薬物コンジュゲートADC 2及びADC 3を以下の実施例で使用した。カニクイザルのコホート(1コホートあたり3匹のサル)に、1日目に、1時間の点滴を介して、複数回用量のADC 2(即ち、0.1 mg/kg QDx3)、又は種々の用量のADC 3（即ち、0.3 mg/kg QDx1(単回投与)又は0.1 mg/kg QDx5(複数回投与)）を投与した。ADC 2の複数回投与コホートでは、0.1 mg/kgのADCを1日目と3日目に投与した。ADC 3の複数回用量コホートでは、0.1 mg/kgのADCを1、2、3、4及び5日目に投与した。全血からの網状赤血球の細胞数(109/μl)を、血液分析器を用いて測定し、図４Ａに示すように、初回用量を投与した後の日数を横軸としてグラフで表した。加えて、血漿中のAST（アスパラギン酸アミノトランサミナーゼ(aspartate aminotransaminase)）レベルを血液学的分析器を用いて測定し、図４Ｂに示すように、初回用量を投与した後の日数を横軸としてグラフで表した。.
【０３１２】
図４Ａの結果は、ADC 2(即ち、0.1 mg/kg QD x 3(複数回用量))及びADC 3(即ち、0.3 mg/kg QD x 1(単回用量)及び0.1 mg/kg QD x 5(複数回用量))を投与すると、網状赤血球数が一過的に減少することを示す。ADC 2(即ち、0.1 mg/kg QD x 3(複数回用量))及びADC 3(即ち、0.3 mg/kg QD x 1(単回用量)及び0.1 mg/kg QD x 5(複数回用量))を投与したときに、血小板数が一過的に減少することも観察された（データを示さず）。図４Ｂの結果は、ADC 3の単回用量(即ち、0.3 mg/kg QD x 1(単回用量))と比較して、ADC 2を投与すると(即ち、0.1 mg/kg QD x 3(複数回用量))、アスパラギン酸アミノトランスアミナーゼ(AST)のレベルが有意に変化しないことを示す。同様の結果が、アラニン・アミノトランスアミナーゼ(ALT)乳酸デヒドロゲナーゼ(LDH)の血漿レベルについて、ADC 2(即ち、0.1 mg/kg QD x 3(複数回用量))及びADC 3(即ち、0.3 mg/kg QD x 1(単回用量)及び0.1 mg/kg QD x 5(複数回用量))を用いて行った実験において、得られた(データは示さず)。
【０３１３】
加えて、ADC 2及びADC3の血漿中濃度を、当業者の中のある者が知る方法を用いて測定し、ADC 2(即ち、0.1 mg/kg QD x 3(複数回用量))と変えた用量のADC 3(即ち、0.3 mg/kg QD x 1(単回用量)及び0.1 mg/kg QD x 5(複数回用量)))を用いて、Cmax 及びAUCを計算した。複数回用量のコホートに対しては、0.1 mg/kgのADC 2をt = 0、t = 24時間及びt= 48時間で、又は0.1 mg/kgのADC 3をt = 0、t = 24時間、t= 48時間、t = 72時間及びt= 96時間で投与し、単回投与のコホートに対しては、0.3 mg/kgのADC 3をt = 0で投与した。時間を横軸としたADC 2(μg/ml)及びADC 3(μg/ml)の濃度を測定し、図４Ｃにグラフで示した。その数値の結果を表５(ADC 2)及び表６(ADC 3)に示した。
【０３１４】
【表６】
2021526525.tif 000073
【０３１５】
【表７】
2021526525.tif 000074
【０３１６】
本データは、0.1 mg/kg QDx5の複数回投薬レジメンによって、より高いAUC、より低いCmax、及びより高い肝臓の酵素レベル(例えば、より高いAST(図４Ｂ)、より高いALT(データは示さず)、及びより高いLDH(データは示さず))がもたらされたことを示す。
【０３１７】
［表８］
【０３１８】
他の実施形態
本明細書において言及される全ての刊行物、特許、及び特許出願は、あたかも各独立した刊行物又は特許出願が具体的かつ個別に示されて参照により取り込まれるように、同程度に、本明細書に参照により取り込まれる。
【０３１９】
一方、本発明を、その特定の実施形態に関連させて説明しているが、本発明は更に改変することが可能であること、及び本出願は、一般に、本発明の原理に従いながらの、並びに本発明から逸脱すること（本発明から逸脱は、本発明が関係する技術分野における既知の又は慣例的に行われることの中である、及び本明細書に前述した本質的な特徴に適用することができる）を含みながらの、本発明の任意の変更、使用、又は適応を包含することが意図されること、並びに請求項の範囲内で従うこと、が理解されるのであろう。
【０３２０】
他の実施形態は、請求項の範囲内である。
【図１】
2021526525.tif 000077
【図２】
2021526525.tif 000078
【図３Ａ】
2021526525.tif 000079
【図３Ｂ】
2021526525.tif 000080
【図３Ｃ】
2021526525.tif 000081
【図３Ｄ】
2021526525.tif 000082
【図３Ｅ】
2021526525.tif 000083
【図３Ｆ】
2021526525.tif 000084
【図４Ａ】
2021526525.tif 000085
【図４Ｂ】
2021526525.tif 000086
【図４Ｃ】
2021526525.tif 000087
【図５】
2021526525.tif 000088
【配列表】
2021526525000001.app
【誤訳訂正書】
【提出日】令和3年3月5日(2021.3.5)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願の相互参照］
本出願は、2018年6月7日に出願された米国仮出願第62/682,154号、及び2019年5月1日に出願された米国仮出願第62/841,702号に対して、優先権を主張する。
【背景技術】
【０００２】
医学技術の進歩にもかかわらず、外因性の造血幹細胞が生着するのを促進すること、並びに、とりわけ、造血システムの病態（例えば、特定の血液細胞の疾患等）、代謝障害、がん、及び自己免疫症状を予防又は治療すること、に対する需要が依然として存在する。抗体薬物コンジュゲート(ADC)の投与は、大きな治療可能性を有し得るが、臨床において、それらを使用することを妨げてきた制約は、前記薬物の有効性に伴う毒性に関連した合併症であった。現在までのほとんどのADCは、腫瘍細胞を死滅させることによってがんを治療するために使用されている。幹細胞移植と組み合わせたコンディショニング療法のためにADCを使用することは、毒性及び有効性を含む特有の課題を提示する。更に、移植した細胞を前記患者の体内に生着させる前に、前記ターゲット細胞を除去するタイム・ウィンドウの間、前記ADCは有効でなければならない。現在、外因性の造血幹細胞グラフトが生着するのを促進するための方法において使用するための、並びに様々な疾患及び症状（例えば、自己免疫疾患、がん、及び移植片対宿主病(Graft-versus-Host-Disease(GvHD))）に罹患しているか又はリスクがある患者を、予防又は治療するための方法において使用するための、ADCの投薬レジメンが必要とされている。
【発明の概要】
【０００３】
外因性の造血幹細胞グラフトが生着するのを促進するための、並びに様々な疾患及び症状（例えば、自己免疫疾患、がん、及び移植片対宿主病(Graft-versus-Host-Disease(GvHD))）に罹患しているか又はリスクがある患者を治療するための、抗体薬物コンジュゲート(ADC)投薬レジメンを含む、組成物及び方法を、本明細書に記載する。本明細書が開示する方法は、ADCが対象に対する毒性を低減しながら内因性細胞を除去するのに効果的であるようなコンディショニングをするために、ADC（例えば、抗CD117 ADC）を投与する、という複雑な課題に対処する。
【０００４】
ある実施形態では、本方法は、ヒト患者におけるターゲット細胞の集団を減少させる方法を提供する、ここで、前記方法は、1日目に抗体薬物コンジュゲート(ADC)の第1の用量を前記患者に投与すること；及び前記第1の用量の後に、前記ADCの第2の用量を前記患者に投与すること；ここで、前記ADCは、リンカーを介してアマトキシンにコンジュゲートした抗体又はその抗原結合フラグメントを含む、ここで、前記ADCは細胞表面マーカーに対して特異的である、及びここで、前記投薬レジメンは、ヒト患者において、前記ターゲット細胞の集団の減少を誘導する、を含む。ある実施形態では、前記第1の用量が、約2〜12 mgのADC、約2〜11 mgのADC、約2〜10 mgのADC、約2〜9 mgのADC、約2〜8 mgのADC、約2〜7 mgのADC、約2〜6 mgのADC、約2〜5 mgのADC、約2〜4 mgのADC、及び約2〜3 mgのADCからなる群より選択される。別の実施形態では、前記第1の用量が、約1.9〜11.5 mgのADCを含む。更に別の実施形態では、前記第2の用量が、前記第1の用量の10重量%以内である。別の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した後1〜24時間の間に投与する。別の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した後1〜12日の間に投与する。別の実施形態では、前記ターゲット細胞が幹細胞である。更に別の実施形態では、ターゲット細胞が免疫細胞である。別の実施形態では、前記ターゲット細胞が疾患を引き起こす細胞である。更に別の実施形態では、前記細胞マーカーがCD117、CD45、CD2、CD5、CD252、CD134、及びCD137からなる群より選択される。
【０００５】
ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：10のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：11のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：12のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：13のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：14のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：15のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：16のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：17のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：18のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：19のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：20のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：21のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：22のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：23のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：24のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：25のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：26のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：27のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：28のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：29のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：30のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：31のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：32のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：33のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：34のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：35のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：36のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：37のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：38のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：39のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：40のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：41のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開���する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：42のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：43のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：34のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：44のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：45のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：46のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：47のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：48のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：49のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：50のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：51のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：52のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：53のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：54のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：55のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：56のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：57のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：58のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：59のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：60のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：61のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：62のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：63のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：52のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法���おいて使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：64のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：65のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：66のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：67のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：68のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：69のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：70のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：71のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：72のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：73のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：74のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：75のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：76のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：77のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：78のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：79のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：80のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：81のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：82のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：83のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：84のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：85のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：86のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：87のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：88のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：89のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：90のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：91のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：92のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：93のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：98のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：99のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：101のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：102のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：104のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：105のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：105のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：106のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：107のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：114のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：115のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：106のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：119のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：121のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：119のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：123のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：117のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：124のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：125のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：125のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：9のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：126のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：124のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：127のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：124のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：128のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：150のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：151のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：158のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：159のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：165のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：159のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：168のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：159のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：171のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：159のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：173アミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：174のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：180のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：174のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：183のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：151のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：186のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：151のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。ある実施形態��は、本明細書が開示する方法において使用するADCは、抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含み、配列番号(SEQ ID NO)：189のアミノ酸配列に記載される重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：151のアミノ酸配列に記載される軽鎖可変領域を含む。
【０００６】
ある実施形態では、US 2019-0153114 A1に記載されるように（これは、その全体が参照により取り込まれる）、本明細書中で開示する方法において使用するADCは, 抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含む。別の実施形態では、US 2019-0144558 A1に記載されるように（これは、その全体が参照により取り込まれる）、本明細書中で開示する方法において使用するADCは, 抗CD117抗体又はその抗原結合部位を含む。
【０００７】
ある実施形態では、本発明は、ヒト患者におけるターゲット細胞の集団を減少させる方法、を提供する。ここで、前記方法は、以下の工程を含む投薬レジメンを含む、1日目に抗体薬物コンジュゲート(ADC)の第1の用量を前記患者に投与すること；及び前記第1の用量の後に、前記ADCの第2の用量を前記患者に投与すること；ここで、前記ADCは、リンカーを介してアマトキシンにコンジュゲートした抗体又はその抗原結合フラグメントを含む、ここで、前記ADCは細胞表面マーカーに対して特異的である、及びここで、前記投薬レジメンは、ヒト患者において、前記ターゲット細胞の集団の減少を誘導する。ある実施形態では、前記第1の用量は、約0.03〜0.29 mg/kgのADC、約0.03〜0.25 mg/kgのADC、約0.03〜0.20 mg/kgのADC、約0.03〜0.15 mg/kgのADC、約0.03〜0.10 mg/kgのADC、約0.05〜0.10 mg/kgのADC、及び約0.05〜0.07 mg/kgのADCからなる群より選択される。別の実施形態では、前記第1の用量が約0.03〜0.19 mg/kgのADCを含む。更に別の実施形態では、前記第2の用量は、前記第1の用量の10重量%以内である。或いは、前記第1及び第2の用量は、同じ用量（同じ固定した用量又は同じmg/kgの計算による同じ用量のどちらか）であることがある。
【０００８】
別の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した後1〜24時間の間に投与する。更に別の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した後1〜12日の間に投与する。別の実施形態では、前記ターゲット細胞は幹細胞である。他の実施形態では、前記ターゲット細胞は免疫細胞である。別の実施形態では、前記ターゲット細胞が疾患を引き起こす細胞である。別の実施形態では、前記細胞マーカーがCD117、CD45、CD2、CD5、及びCD137からなる群より選択される。
【０００９】
ある実施形態では、本発明は、移植コンディショニングのための、ヒト患者におけるターゲット細胞の集団を減少させる方法、を提供する。ここで、前記方法は、1日目に抗体薬物コンジュゲート(ADC)の第1の用量を前記患者に投与すること；及び前記第1の用量の後に、前記ADCの第2の用量を前記患者に投与すること；ここで、前記ADCは、リンカーを介してアマトキシンにコンジュゲートした抗体又はその抗原結合フラグメントを含む、ここで、前記ADCは細胞表面マーカーに対して特異的である、及びここで、前記投薬レジメンは、移植コンディショニングのために、ヒト患者において、前記ターゲット細胞の集団の減少を誘導する。毒素は、抗有糸分裂薬剤又はRNAポリメラーゼ阻害剤である。別の実施形態では、前記RNAポリメラーゼ阻害剤がアマトキシンである。別の実施形態では、前記RNAポリメラーゼ阻害剤がアマニチンである。別の実施形態では、前記アマニチンが、α-アマニチン、β-アマニチン、γ-アマニチン、ε-アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、及びプロアマヌリンからなる群より選択される。更に別の実施形態では、前記アマトキシンが、式(I)で表される
【化１】
2021526525.tif 000089
ここで、R1はH、OH、ORA、又はORCである；
R2はH、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、任意選択的に置換された5員ヘテロシクロルアルキル基を形成する；
R3はH、RC、又はRDである；
R4、R5、R6、及びR7は、それぞれ独立してH、OH、ORC、ORD、RC、又はRDである；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、又はNRCRDである；
R9はH、OH、ORC、又はORDである；
Xは-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；
RCは-L-Zである；
RDは、置換されたC1-C6アルキル、置換されたC1-C6ヘテロアルキル、置換されたC2-C6アルケニル、置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、置換されたC2-C6アルキニル、置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、置換されたシクロアルキル、置換されたヘテロシクロアルキル、置換されたアリール、又は置換されたヘテロアリールである；
Lは、リンカーを含むペプチドである；及び、
Zは、L上に存在する反応性置換基と、抗CD137抗体、又はその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的な部分構造である。別の実施形態では、前記抗有糸分裂薬剤はメイタンシン又はアウリスタチンである。別の実施形態では、前記アウリスタチンが、モノメチル・アウリスタチンF(MMAF)又はモノメチル・アウリスタチンE(MMAE)である。別の実施形態では、前記ADCのリンカーが、N-ベータ-マレイミドプロピル-Val-Ala-パラ-アミノベンジル(BMP-Val-Ala-PAB)である。別の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約1時間後に投与する。別の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約2時間後に投与する。別の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約3時間後に投与する。別の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約4時間後に投与する。別の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約5時間後に投与する。別の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約6時間後に投与する。別の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約7時間後に投与する。別の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約8時間後に投与する。別の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約1日後に投与する。別の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約2日後に投与する。別の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約3日後に投与する。
【００１０】
ある実施形態では、本発明は、ヒト患者におけるターゲット細胞の集団を減少させる方法、を提供する。ここで、前記方法は、以下の工程を含む投薬レジメンを含む：(a)1日目に抗体薬物コンジュゲート(ADC)の第1の用量を前記患者に投与すること；及び(b)前記第1の用量の後に、前記ADCの第2の用量を前記患者に投与すること；ここで、前記ADCは、リンカーを介して細胞毒素（例、アマトキシン）にコンジュゲートした抗体又はその抗原結合フラグメントを含む、ここで、前記ADCは細胞表面マーカーに対して特異的である、及びここで、前記投薬レジメンは、ヒト患者において、前記ターゲット細胞の集団の減少を誘導する。ある実施形態では、前記第1の用量が、約2〜12 mgのADC、約2〜11 mgのADC、約2〜10 mgのADC、約2〜9 mgのADC、約2〜8 mgのADC、約2〜7 mgのADC、約2〜6 mgのADC、約2〜5 mgのADC、約2〜4 mgのADC、及び約2〜3 mgのADCからなる群より選択される。別の実施形態では、前記第1の用量が、約1.9〜11.5 mgのADCを含む。いくつかの実施形態では、前記第2の用量が、前記第1の用量の10重量%以内である、又はここで、前記第2の用量が前記第1の用量と同じである。更に他の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した後1〜24時間の間に投与する。他の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した後1〜12日の間に投与する。別の実施形態では、前記ターゲット細胞が幹細胞である。別の実施形態では、前記ターゲット細胞が免疫細胞である。更に別の実施形態では、前記ターゲット細胞が疾患を引き起こす細胞である。ある特定の実施形態では、細胞マーカーが、CD117、CD45、CD2、CD5、CD252、CD134、及びCD137からなる群より選択される。別の実施形態では、前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号(SEQ ID NO)：106に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：107に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。更に別の実施形態では、前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号(SEQ ID NO)：150に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：151に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００１１】
ある実施形態では、本発明は、ヒト患者におけるターゲット細胞の集団を減少させる方法、を提供する。ここで、前記方法は、以下の工程を含む投薬レジメンを含む：(a)1日目に抗体薬物コンジュゲート(ADC)の第1の用量を前記患者に投与すること、ここで、前記第1の用量は、約0.03〜0.29 mg/kgのADC、約0.03〜0.25 mg/kgのADC、約0.03〜0.20 mg/kgのADC、約0.03〜0.15 mg/kgのADC、約0.03〜0.10 mg/kgのADC、約0.05〜0.10 mg/kgのADC、及び約0.05〜0.07 mg/kgのADC、からなる群より選択される；並びに(b)前記第1の用量の後に、前記ADCの第2の用量を前記患者に投与すること；ここで、前記ADCは、リンカーを介して細胞毒素（例、アマトキシン）にコンジュゲートした抗体又はその抗原結合フラグメントを含む、ここで、前記ADCは細胞表面マーカーに対して特異的である、及びここで、前記投薬レジメンは、ヒト患者において、前記ターゲット細胞の集団の減少を誘導する。ある実施形態では、前記第1の用量が約0.03〜0.29 mg/kgである。別の実施形態では、前記第1の用量が約0.03〜0.19 mg/kgのADCを含む。別の実施形態では、前記第2の用量が前記第1の用量の10重量%以内である、又はここで、前記第2の用量が前記第1の用量と同じ重量である。更に別の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した後1〜24時間の間に投与する。いくつかの実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した後1〜12日の間に投与する。別の実施形態では、前記ターゲット細胞が幹細胞である。別の実施形態では、前記ターゲット細胞が免疫細胞である。更に別の実施形態では、前記ターゲット細胞が疾患を引き起こす細胞である。ある特定の実施形態では、細胞マーカーが、CD117、CD45、CD2、CD5、CD252、及びCD137からなる群より選択される。更に別の実施形態では、前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号(SEQ ID NO)：106に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：107に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号(SEQ ID NO)：150に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：151に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００１２】
ある実施形態では、本発明は、ヒト患者におけるターゲット細胞の集団を減少させる方法、を提供する。ここで、前記方法は、以下の工程を含む投薬レジメンを含む：(a)抗体薬物コンジュゲート(ADC)の第2の用量を、前記患者に、前記ADCの第1の用量を投与した後、1〜14日以内に、前記患者に投与すること；ここで、前記ADCは、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗体又はその抗原結合フラグメントを含む；ここで、前記ADCは細胞表面マーカーに特異的である；ここで、前記投薬レジメンは、ヒト患者において、前記ターゲット細胞の集団の減少を誘導する；並びに前記患者の血中AST、ALT、又はLDHレベルの少なくとも1つが、前記患者に対する、前記第1の用量の投与と前記第1の用量の投与後14日との間に、毒性レベルに達しない。
【００１３】
ある実施形態では、本発明は、ヒト患者におけるターゲット細胞の集団を減少させる方法、を提供する。ここで、前記方法は、以下の工程を含む投薬レジメンを含む：抗体薬物コンジュゲート(ADC)の第2の用量を、前記患者に、前記ADCの第1の用量を投与した後、1〜14日以内に、前記患者に投与すること；ここで、前記ADCは、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗体又はその抗原結合フラグメントを含む；ここで、前記ADCは細胞表面マーカーに特異的である；ここで、前記投薬レジメンは、ヒト患者において、前記ターゲット細胞の集団の減少を誘導する；並びに前記患者の血中AST、ALT、又はLDHレベルの少なくとも1つが、前記患者に対する、前記第1の用量の投与と前記第1の用量の投与後14日との間に、正常レベルの3倍よりも大きく上昇しない。
【００１４】
ある実施形態では、本発明は、移植コンディショニングのための、ヒト患者におけるターゲット細胞の集団を減少させる方法、を提供する。ここで、前記方法は、以下の工程を含む投薬レジメンを含む：(a)1日目に抗体薬物コンジュゲート(ADC)の第1の用量を前記患者に投与すること；及び(b)前記第1の用量の後に、前記ADCの第2の用量を前記患者に投与すること；ここで、前記ADCは、リンカーを介してアマトキシンにコンジュゲートした抗体又はその抗原結合フラグメントを含む、ここで、前記ADCは、CD117、CD45、CD137、CD2、CD252、又はCD5から選択される細胞表面マーカーに対して特異的である、及びここで、前記投薬レジメンは、移植コンディショニングのための、ヒト患者において、前記ターゲット細胞の集団の減少を誘導する。ある実施形態では、前記毒素が抗有糸分裂薬剤又はRNAポリメラーゼ阻害剤である。いくつかの実施形態では、前記RNAポリメラーゼ阻害剤がアマトキシンである。更に別の実施形態では、前記RNAポリメラーゼ阻害剤がアマニチンである。いくつかの実施形態では、前記アマニチンが、α-アマニチン、β-アマニチン、γ-アマニチン、ε-アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、及びプロアマヌリンからなる群より選択される。更に別の実施形態では、前記アマトキシンが、式(I)で表される
【化２】
2021526525.tif 000090
ここで、R1はH、OH、ORA、又はORCである；
R2はH、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、任意選択的に置換された5員ヘテロシクロルアルキル基を形成する；
R3はH、RC、又はRDである；
R4、R5、R6、及びR7は、それぞれ独立してH、OH、ORC、ORD、RC、又はRDである；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、又はNRCRDである；
R9はH、OH、ORC、又はORDである；
Xは-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；
RCは-L-Zである；
RDは、置換されたC1-C6アルキル、置換されたC1-C6ヘテロアルキル、置換されたC2-C6アルケニル、置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、置換されたC2-C6アルキニル、置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、置換されたシクロアルキル、置換されたヘテロシクロアルキル、置換されたアリール、又は置換されたヘテロアリールである；
Lは、リンカーを含むペプチドである；及び、
Zは、L上に存在する反応性置換基と、抗体、又はその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的な部分構造である。
【００１５】
ある実施形態では、前記細胞毒素がPBDである。
【００１６】
いくつかの実施形態では、前記抗有糸分裂薬剤がメイタンシン又はアウリスタチンである。更に別の実施形態では、前記アウリスタチンがモノメチル・アウリスタチンF(MMAF)又はモノメチル・アウリスタチンE(MMAE)である。いくつかの実施形態では、HSCの細胞表面マーカーがCD117である。いくつかの実施形態では、前記抗体はCD117に結合する、並びにa)配列番号(SEQ ID NO)：106に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：107に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む；又はb)配列番号(SEQ ID NO)：150に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：151に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。他の実施形態では、前記抗体が、D265C変異(EUインデックスによる)を含むFc領域を含む。いくつかの実施形態では、前記抗体がH435A変異(EUインデックスによる)を含む。他の実施形態では、前記ADCのリンカーが、N-ベータ-マレイミドプロピル-Val-Ala-パラ-アミノベンジル(BMP-Val-Ala-PAB)である。いくつかの実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約1時間後に投与する。いくつかの実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約2時間後に投与する。いくつかの実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約3時間後に投与する。他の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約4時間後に投与する。いくつかの実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約5時間後に投与する。いくつかの実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約6時間後に投与する。いくつかの実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約7時間後に投与する。他の実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約8時間後に投与する。いくつかの実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約1日後に投与する。いくつかの実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約2日後に投与する。いくつかの実施形態では、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約3日後に投与する。前記患者は、前記ADCが前記患者の血中から実質的にクリアランスされたときに、幹細胞移植を更に受ける。いくつかの実施形態では、前記ADCを投与するための投薬レジメンは、本質的に工程a)及びb)からなる。
【００１７】
更に他の実施形態では、前記方法は、前記ヒト患者に細胞移植を施すことを更に含む。
【００１８】
いくつかの実施形態では、前記細胞移植は造血幹細胞(HSC)移植である。更に他の実施形態では、前記方法が非-骨髄除去性である。
【００１９】
いくつかの実施形態では、患者サンプルから決定される肝臓マーカーが毒性レベルに達しない。いくつかの実施形態では、患者サンプルから決定される肝臓マーカーが正常レベル(例えば、基準範囲)を超えて上昇しない、正常レベルの1.5倍を超えて上昇しない、正常レベルの3倍を超えて上昇しない、正常レベルの5倍を超えて上昇しない、又は正常レベルの10倍を超えて上昇しない。いくつかの実施形態では、前記肝臓マーカーが、AST、LDH、又はALTである。別の実施形態では、前記患者から決定される肝臓マーカーが、前記第1の用量を投与した後、7日間だけ、上昇する。他の実施形態では、前記患者から決定される肝臓マーカーが、前記第1の用量を投与した後、6日間だけ、上昇する。いくつかの実施形態では、前記患者から決定される肝臓マーカーが、前記第1の用量を投与した後、5日間だけ、上昇する。いくつかの実施形態では、前記肝臓マーカーが、AST、ALT、又はLDHである。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】図１は、種々の用量のADC 1抗体薬物コンジュゲート(ADC)の初回用量を投与した後の日数を横軸とした、コントロール(即ち、PBS及びアイソタイプADCコントロール)に対する、網状赤血球の数(109/μL)を検出するアッセイの結果をグラフで示す。図１中の破線の水平線は、網状赤血球の数の正常範囲を表す。
【図２】図２は、種々の用量のADC 1抗体薬物コンジュゲート(ADC) の初回用量を投与した後の日数を横軸とした、コントロール(即ち、PBS及びアイソタイプADCコントロール)に対する、血小板の数(103/μL)を検出するアッセイの結果をグラフで示す。図２中の破線の水平線は、血小板の数の正常範囲を表す。
【図３】図３Ａ〜３Ｃは、種々の用量のADC 1抗体薬物コンジュゲート(ADC) の初回用量を投与した後の日数を横軸とした、コントロール(即ち、PBS及びアイソタイプADCコントロール)に対する、(図３Ａ)血漿アラニン・アミノトランスアミナーゼ(ALT；単位U/L)、(図３Ｂ)血漿乳酸デヒドロゲナーゼ(LDH；単位U/L)、及び(図３Ｃ)血漿アスパラギン酸アミノトランスアミナーゼ(AST；単位U/L)のレベルを検出するアッセイの結果をグラフで示す。図３Ａ、３Ｂ、及び３Ｃ中の破線の水平線は、それぞれ、ALT、LDH、及びASTレベルの正常範囲を表す。  図３Ｄは、種々の用量のADC 1（半減期の速い抗体薬物コンジュゲート）で処置した後の、骨髄における造血幹細胞数及び前駆細胞数を、野生型半減期のADC 1及び種々のコントロールと比較して、グラフで示す。図３Ｄに記載される実験において、骨髄穿刺液を、単回用量については15日目に、複数回用量(即ち、0.1 mg/kg、Q3Dx2(0.1/0.1))については18日目に、採取した。  図３Ｅは、ADC 1で処置した後の、骨髄における造血幹細胞の減少及び前駆細胞の減少を、種々のコントロールと比較して、グラフで示す。図３Ｅに記載される実験において、骨髄穿刺液を、単回用量については15日目に、複数回用量については18日目に、採取した。  図３Ｆは、時間(時間(hours))を横軸にした、様々な用量のADC 1の投与後のADC 1の血漿濃度を、グラフで示す。
【図４】図４Ａは、種々の用量のADC 2抗体薬物コンジュゲート(ADC) 及び1用量のADC 3の初回用量を投与した後の日数を横軸とした、網状赤血球の数(109/μL)を検出するアッセイの結果をグラフで示す。図４Ａ中の破線の水平線は、網状赤血球の数の正常範囲を表す。  図４Ｂは、種々の用量のADC 2及びADC 3の初回用量を投与した後の日数を横軸とした、血漿アスパラギン酸アミノトランスアミナーゼ(AST；単位U/L)のレベルを検出するアッセイの結果をグラフで示す。図４Ｂ中の破線の水平線は、ASTレベルの正常範囲を表す。  図４Ｃは、種々の用量のADC 2及びADC 3の投与後の、時間(時間(hours))を横軸にした、ADC 2及びADC 3の血漿中濃度を、グラフで示す。
【図５】図５は、式(Z'-L-D)の例示的な化合物を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
［詳細な説明］
本発明は、抗体薬物コンジュゲートの投薬レジメン、並びに造血細胞（例えば、造血幹細胞、免疫細胞又はがん細胞）が発現する抗原に結合することができる抗体薬物コンジュゲート(ADC)を投与することによって、様々な疾患及び症状（例えば、とりわけ、自己免疫疾患、がん、及び移植片対宿主病(GvHD)など）に罹患しているか又はリスクがある患者へ、前記投薬レジメンを処方する方法、を提供する。
【００２２】
［定義］
本明細書中で使用される場合、用語「約」は、記載される値より10%の範囲内で高い又は低い値をいう。
【００２３】
本明細書中で使用される場合、用語「アマトキシン」は、Amanita phalloidesキノコによって産生されるペプチドのアマトキシン・ファミリーのメンバー、又はそのバリアント若しくは誘導体（例えば、RNAポリメラーゼII活性を阻害し得るそのバリアント若しくは誘導体）のことをいう。本明細書に記載する組成物及び方法と併用して有用なアマトキシンには、例えば、限定されるものではないが、式(II)、(III)、(IIIa)及び(IIIb)の化合物（例、α-アマニチン、β-アマニチン、γ-アマニチン、ε-アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、又はプロアマヌリン等）のような化合物が含まれる。本明細書に記載するように、アマトキシンを、例えば、リンカー部分(L)を介して、抗体、又はその抗原結合フラグメントにコンジュゲートさせることがある（これにより、ADCを形成する)。このようなプロセスに有用な、例示的なアマトキシンをコンジュゲートさせる方法及びリンカーを以下に記載する。前記組成物及び方法による、抗体、又は抗原結合フラグメントへのコンジュゲートに有用な、例示的なリンカー含有アマトキシンもまた、本明細書に記載する。
【００２４】
本明細書中で使用される場合、用語「コンジュゲート」又は「抗体薬物コンジュゲート」又は「ADC」は、細胞毒素にコンジュゲートした抗体をいう。ADCは、抗体、又はその抗原結合フラグメントのようなある分子の反応性官能基と、本明細書に記載する細胞毒素のような別の分子の好適な反応性官能基との化学的な結合によって形成される。コンジュゲートは、互いに結合した2つの分子間（例、抗体と細胞毒素の間）に、リンカーを含むことがある。コンジュゲートの形成に用いることができるリンカーの例としては、ペプチド含有リンカー（例えば、天然に存在する又は天然に存在しないアミノ酸、例えば、D-アミノ酸を含有するリンカー）が挙げられる。リンカーを、本明細書中に記載する、及び当該技術分野で公知である、種々のストラテジーを使用して調製することがある。その中の反応性成分に依存して、リンカーを、例えば、酵素的加水分解、光分解、酸性条件下での加水分解、塩基性条件下での加水分解、酸化、ジスルフィド還元、求核切断、又は有機金属切断によって、切断することがある(例えば、Lericheら、Bioorg.Med.Chem.,20:571-582,2012を参照のこと)。
【００２５】
本明細書中で使用される場合、用語「抗体」は、特定の抗原に特異的に結合するか、又は特定の抗原と免疫学的に反応性である免疫グロブリン分子をいう。抗体としては、限定されるものではないが、所望の抗原結合活性を示しさえすれば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、マルチスペシフィック抗体（例、バイスペシフィック抗体）、及び抗体フラグメント、が挙げられる。
【００２６】
一般的に、抗体は、抗原結合領域を含む重鎖及び軽鎖を含む。各重鎖は、重鎖可変領域(本明細書では、HCVR又はVHと略す)及び重鎖定常領域から構成される。前記重鎖定常領域は、3つのドメイン（CH1、CH2及びCH3）から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域(本明細書では、LCVR又はVLと略す)及び軽鎖定常領域から構成される。前記軽鎖定常領域は、1つのドメイン（CL）から構成される。前記VH及びVL領域は、超可変性の領域（相補性決定領域(CDR)と呼ばれる）に更に細分化することができ、より保存された領域（骨格領域(FR)と呼ばれる）が点在する。各VH及びVLは、3つのCDR及び4つのFRから構成され、アミノ末端からカルボキシル末端に向かって、以下の順序で配列する：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。前記重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。前記抗体の定常領域は、前記免疫グロブリンが宿主の組織又は因子（例えば、免疫システムの種々の細胞(例、エフェクター細胞)及び古典的補体システムの第一成分(C1q)等）に結合することを、仲立ちすることがある。
【００２７】
本明細書中で使用される場合、「インタクト(intact)」又は「全長(full length)」抗体とは、2つの重鎖(H)ポリペプチド及び2つの軽鎖(L)ポリペプチドがジスルフィド結合によって相互接続している抗体をいう。各重鎖は、重鎖可変領域(本明細書では、HCVR又はVHと略す)及び重鎖定常領域から構成される。前記重鎖定常領域は、3つのドメイン（CH1、CH2及びCH3）から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域(本明細書では、LCVR又はVLと略す)及び軽鎖定常領域から構成される。前記軽鎖定常領域は、1つのドメイン（CL）から構成される。前記VH及びVL領域は、超可変性の領域（相補性決定領域(CDR)と呼ばれる）に更に細分化することができ、より保存された領域（骨格領域(FR)と呼ばれる）が点在する。各VH及びVLは、3つのCDR及び4つのFRから構成され、アミノ末端からカルボキシル末端に向かって、以下の順序で配列する：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。前記重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。前記抗体の定常領域は、前記免疫グロブリンが宿主の組織又は因子（例えば、免疫システムの種々の細胞(例、エフェクター細胞)及び古典的補体システムの第一成分(C1q)等）に結合することを、仲立ちすることがある。
【００２８】
本明細書中で使用される場合、用語「相補性決定領域」(CDR)は、抗体の軽鎖及び重鎖可変ドメインの両方に見出される超可変領域のことをいう。可変ドメインのより高度に保存された部分は、骨格領域(FR)と呼ばれる。抗体の超可変領域を表すアミノ酸の位置は、文脈及び当該技術分野で公知の種々の定義に依存して、変化することがある。可変ドメイン内のいくつかの位置は、これらの位置が、ある組の基準の下では超可変領域内にあると見なされることがあり、一方、別の組の基準の下では超可変領域外にあると見なされることがある、という点において、ハイブリッド超可変位置と見なされることがある。これらの位置の1つ以上はまた、拡張超可変領域において見出されることもある。本明細書に記載する抗体は、これらのハイブリッド超可変位置に、改変を含むことがある。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ、主にβ-シート構造をとり、3つのCDRによって連結した（CDRは、β-シート構造を連結するループを形成し、場合によってはその一部を形成する）、4つの骨格領域を含む。各々の鎖中のCDRは、FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4の順序で、骨格領域が近接して一緒にまとまり、そして他の抗体鎖由来のCDRと共に、抗体のターゲット結合部位の形成に寄与する(Kabatら、Sequences of Proteins of Immunological Interest、National Institute of Health、Bethesda、MD、1987を参照のこと)。ある特定の実施形態では、免疫グロブリンのアミノ酸残基の番号付けは、特に断らない限り、Kabatらの免疫グロブリンのアミノ酸残基の番号付けシステムに従って行う(しかし、限定されるものではないが、IMGT及びChothia等を含む、任意の抗体の番号付けスキームを利用することがある)。
【００２９】
本明細書中で使用される場合、用語「抗原結合フラグメント」は、ターゲット抗原に特異的に結合する作用能を保持する抗体の1つ以上のフラグメントをいう。抗体の抗原結合機能は、全長抗体のフラグメントによって果たされ得る。前記抗体フラグメントは、例えば、Fab、F(ab')2、scFv、ダイアボディ、トリアボディ、アフィボディ、ナノボディ、アプタマー、又はドメイン抗体であることがある。抗体の「抗原結合フラグメント」という用語に包含される結合フラグメントの例としては、限定されるものではないが、以下が挙げられる：(i)Fabフラグメント、VL、VH、CL及びCH1ドメインからなる一価フラグメント；(ii)F(ab')2フラグメント、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結した、2つのFabフラグメントを含む二価フラグメント；(iii)VH及びCH1ドメインからなるFdフラグメント；(iv)抗体の単一アームのVL及びVHドメインからなるFvフラグメント；(v) VH及びVLドメインを含むdAb；(vi) VHドメインからなるdAbフラグメント(例えば、Wardら、Nature 341:544-546、1989を参照のこと)；(vii) VH又はVLドメインからなるdAb；(viii)単離した相補性決定領域(CDR)；並びに(ix)合成リンカーによって任意選択的に連結することがある2つ以上(例えば、2つ、3つ、4つ、5つ、又は6つ)の単離したCDRの組み合わせ。更に、Fvフラグメントの2つのドメイン（VL及びVH）は、別々の遺伝子によってコードされているが、それらを、組換え方法を使用することで、リンカーによって連結して、単一タンパク質鎖（VL及びVH領域が対になって一価分子を形成する）とすることができる(単鎖Fv(scFv)として公知である；例えば、Bird et al., Science 242:423-426, 1988 及び Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883, 1988を参照のこと)。これらの抗体フラグメントを、当業者に公知の従来の技術を使用して入手することができ、及び前記フラグメントを、インタクトな抗体と同じ様式で有用性についてスクリーニングすることができる。抗原結合フラグメントを、組換えDNA技術、インタクトな免疫グロブリンの酵素的な又は化学的な切断によって、又は、ある場合には、当該技術分野で公知の化学的ペプチド合成手順によって、産生することができる。
【００３０】
本明細書中で使用される場合、「抗CD117抗体」又は「CD117に結合する抗体」という用語は、その抗体がCD117（例、ヒトCD117(hCD117)）をターゲティングする診断薬剤及び／又は治療薬剤として有用であるように、充分な親和性でCD117に結合することができる抗体のことをいう。ヒトCD117のアミノ酸配列は、配列番号(SEQ ID NO)：232に記載されている。
【００３１】
本明細書中で使用される場合、「抗CD137抗体」又は「CD137に結合する抗体」という用語は、その抗体がCD137（例、ヒトCD137(hCD137)）をターゲティングする診断薬剤及び／又は治療薬剤として有用であるように、充分な親和性でCD137に結合することができる抗体のことをいう。ヒトCD137のアミノ酸配列は、配列番号(SEQ ID NO)：233に記載されている。
【００３２】
本明細書中で使用される場合、「抗CD45抗体」又は「CD45に結合する抗体」という用語は、その抗体がCD45（例、ヒトCD45(hCD45)）をターゲティングする診断薬剤及び／又は治療薬剤として有用であるように、充分な親和性でCD45に結合することができる抗体のことをいう。様々なヒトCD45アイソフォームのアミノ酸配列は、配列番号(SEQ ID NO)：236（即ち、CD45ROアイソフォーム）、配列番号(SEQ ID NO)：237（即ち、CD45RAアイソフォーム）、配列番号(SEQ ID NO)：238（即ち、CD45RBアイソフォーム）、及び配列番号(SEQ ID NO)：239（即ち、CD45RCアイソフォーム）に記載されている。
【００３３】
本明細書中で使用される場合、「抗CD5抗体」又は「CD5に結合する抗体」という用語は、その抗体がCD5（例、ヒトCD5(hCD5)）をターゲティングする診断薬剤及び／又は治療薬剤として有用であるように、充分な親和性でCD5に結合することができる抗体のことをいう。ヒトCD5のアミノ酸配列は、配列番号(SEQ ID NO)：234に記載されている。
【００３４】
本明細書中で使用される場合、「抗CD2抗体」又は「CD2に結合する抗体」という用語は、その抗体がCD2（例、ヒトCD2(hCD2)）をターゲティングする診断薬剤及び／又は治療薬剤として有用であるように、充分な親和性でCD2に結合することができる抗体のことをいう。ヒトCD2のアミノ酸配列は、配列番号(SEQ ID NO)：235に記載されている。
【００３５】
本明細書中で使用される場合、用語「コンディショニングをする」及び「コンディショニング」は、移植物（例、造血幹細胞(HSC)を含む移植物）を受けるために、患者に対して準備をするプロセスのことをいう。このような処置によって、造血幹細胞移植物の生着は促進される(例えば、コンディショニング処置及び続いて行った造血幹細胞移植の後に、患者から単離した血液サンプル内の生存可能な造血幹細胞の量が持続的に増大していることから推測される)。本明細書に記載する方法に従って、造血幹細胞が発現する抗原に結合し得るADCを患者に投与することによって、造血幹細胞移植療法のために、前記患者をコンディショニングすることがある。本明細書に記載するように、前記抗体を、ADCを形成するように、細胞毒素に共有結合的にコンジュゲートさせることがある。上記の抗原の1つ以上に結合し得る、ADCを、造血幹細胞移植療法を必要とする患者に投与することは、例えば、内因性の造血幹細胞を選択的に減少させて、それによって、外因性の造血幹細胞移植物によって埋められる空きを生成することによって、造血幹細胞グラフトの生着を促進することがある。
【００３６】
本明細書中で使用される用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指す。即ち、例えば、天然に存在する変異を含むか、又はモノクローナル抗体調製物を産生する間に生じる、可能性のあるバリアント抗体を除いて（このようなバリアントは、一般に、少量で存在する）、前記集団を含む個々の抗体は、同一である及び／又は同じエピトープに結合する。異なる決定基(エピトープ)に対して向けられた異なる抗体を典型的には含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物のそれぞれのモノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して向けられる。従って、「モノクローナル」という修飾語は、抗体の実質的に均一な集団から得られるものとしての、前記抗体の特徴を示し、任意の特定の方法により抗体を産生することを必要とするものとして解釈されるべきではない。
【００３７】
本明細書中で使用される場合、「CRU(競合的再定植ユニット(competitive repopulating unit))」は、in vivo移植後に検出され得る、長期生着する幹細胞に関する測定の単位のことをいう。
【００３８】
本明細書中で使用される場合、用語「ドナー」は、レシピエントに細胞又はその子孫を投与する前に、1つ以上の細胞を単離したヒト又は動物を指す。1つ以上の細胞は、例えば、造血幹細胞の集団であることがある。
【００３９】
本明細書中で使用される場合、用語「内因性」は、ヒト患者のような特定の生物に天然に見出される分子、細胞、組織、又は臓器(例えば、造血幹細胞、又は巨核球、血小板(thrombocyte)、血小板(platelet)、赤血球、マスト細胞、骨髄芽球(myeoblast)、好塩基球、好中球、好酸球、ミクログリア細胞、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラル・キラー細胞、T-リンパ球、又はB-リンパ球のような造血系列の細胞)のような物質を記載する。
【００４０】
本明細書中で使用される場合、用語「生着能力(engraftment potential)」は、造血幹細胞及び造血前駆細胞が組織に再定殖する能力を指すために使用され、そのような細胞が自然に循環しているか、又は移植によって提供されるかに関わらない。前記用語は、細胞の組織ホーミング及び注目する組織内への細胞のコロニー形成のような、生着を取り巻くか、又は生着に至るすべての事象を包含する。生着の効率又は生着の割合は、当業者に公知の任意の臨床的に許容されるパラメータを用いて評価又は定量することができ、例えば、競合的再定植ユニット(competitive repopulating unit)(CRU)を評価すること；幹細胞がホーミングした、コロニー形成をした、又は生着した組織において、マーカーが取り込まれること若しくは発現すること；又は、疾患の進行、造血幹細胞及び造血前駆細胞の生存、若しくはレシピエントの生存により、対象の進行を評価すること、が含まれることがある。生着は、移植後の末梢血中の白血球細胞数を測定することによっても判定することができる。生着は、骨髄吸引サンプルにおけるドナー細胞による骨髄細胞の回収率を測定することによって評価することもできる。
【００４１】
本明細書中で使用される場合、用語「外因性」は、ヒト患者のような特定の生物に天然に見出されない分子、細胞、組織、又は臓器(例えば、造血幹細胞、又は巨核球、血小板(thrombocyte)、血小板(platelet)、赤血球、マスト細胞、骨髄芽球(myeoblast)、好塩基球、好中球、好酸球、ミクログリア細胞、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラル・キラー細胞、T-リンパ球、又はB-リンパ球のような造血系列の細胞)のような物質を記載する。外因性物質には、外部供給源から生物に又はそこから抽出した培養物に、提供されるものが含まれる。
【００４２】
本明細書中で使用される場合、用語「造血幹細胞」(「HSC」)とは、自己複製する能力、及び顆粒球(例えば、前骨髄球、好中球，好酸球、好塩基球)、赤血球(例えば、網状赤血球、赤血球)、血小板(例えば、巨核芽球、血小板(platelet)産生巨核球、血小板(platelets))、単球(例えば、単球、マクロファージ)、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、及びリンパ球(例えば、NK細胞、B-細胞及びT-細胞)を含むがこれらに限定されない多様な系列を含む成熟血液細胞に分化する能力、を有する未成熟血液細胞をいう。そのような細胞は、CD34+細胞を含むことがある。CD34+細胞は、CD34細胞表面マーカーを発現する未成熟細胞である。
【００４３】
本明細書中で使用される場合、用語「造血幹細胞の機能的な可能性」は、1)多能性（これは、限定されるものではないが、顆粒球（例えば、前骨髄球、好中球，好酸球、好塩基球)、赤血球(例えば、網状赤血球、赤血球)、血小板(例えば、巨核芽球、血小板(platelet)産生巨核球、血小板(platelets))、単球(例えば、単球、マクロファージ)、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、及びリンパ球(例えば、NK細胞、B細胞及びT細胞)等を含む、複数の様々な血液系列に分化する能力を指す）、2)自己複製（これは、母細胞と同等の潜在能力を有する娘細胞を生じさせる造血幹細胞の能力を指す、更に、この能力は消耗することなく個々の生存期間を通して繰り返し起こりうる）、並びに3)造血幹細胞又はその子孫が、移植レシピエントに再導入されると、造血幹細胞ニッチにホーミングし、生産的で持続的な造血を再確立する作用能、を含む、造血幹細胞の機能的な特性を指す。
【００４４】
本明細書中で使用される場合、用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する抗体を含むことが意図される。ヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされていないアミノ酸残基(例えば、in vitroでのランダムな若しくは部位特異的な変異誘発によって導入される変異、又はin vivoでの遺伝子再構成若しくは体細胞変異によって導入される変異)を含むことがある。しかし、本明細書中で使用される場合、用語「ヒト抗体」に、マウス等の別の哺乳動物種の生殖系列に由来するCDR配列をヒトの骨格配列上に移植した抗体が含まれることを、意図していない。ヒト抗体を、ヒト細胞において(例えば、組換え発現によって)、又は機能的に再構成したヒト免疫グロブリン(例えば、重鎖及び／又は軽鎖)遺伝子を発現し得る非ヒト動物又は原核若しくは真核細胞によって、産生することがある。ヒト抗体が一本鎖抗体である場合、それは天然のヒト抗体には見出されないリンカー・ペプチドを含むことがある。例えば、Fvは、2個〜約8個のグリシン又は他のアミノ酸残基のようなリンカー・ペプチドを含むことがあり、リンカーは前記重鎖の可変領域及び前記軽鎖の可変領域を連結する。このようなリンカー・ペプチドは、ヒト起源であると見なされる。ヒト抗体を、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリを使用するファージ・ディスプレイ法を含む、当該技術分野で公知の種々の方法によって作製することがある。ヒト抗体はまた、機能的な内因性の免疫グロブリンを発現することができないが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現することができるトランスジェニック・マウスを使用して産生することもある(例えば、PCT公開番号WO 1998/24893; WO 1992/01047; WO 1996/34096; WO 1996/33735;米国特許第5,413,923号;第5,625,126号;第5,633,425号;第5,569,825号;第5,661,016号;第5,545,806号;第5,814,318号;第5,885,793号;第5,916,771号;及び第5,939,598号を参照のこと)。
【００４５】
本明細書中で使用される場合、造血幹細胞移植を「必要とする」患者は、1種以上の血液細胞の型に欠陥又は欠損を示す患者、並びに幹細胞障害、自己免疫疾患、がん、又は本明細書に記載する他の病態を有する患者を含む。造血幹細胞は、一般に、1)多能性、従って、限定されるものではないが、顆粒球（例えば、前骨髄球、好中球，好酸球、好塩基球)、赤血球(例えば、網状赤血球、赤血球)、血小板(例えば、巨核芽球、血小板(platelet)産生巨核球、血小板(platelets))、単球(例えば、単球、マクロファージ)、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、及びリンパ球(例えば、NK細胞、B細胞及びT細胞)等を含む、複数の様々な血液系列に分化することができる、2)自己複製、従って、母細胞と同等の潜在能力を有する娘細胞を生じさせることができる、並びに3)移植レシピエントに再導入されると、造血幹細胞ニッチにホーミングし、生産的で持続的な造血を再確立する作用能、を示す。従って、造血系列の1種以上の細胞型において欠陥のある又は欠損した患者に、in vivoで、欠陥のある又は欠損した細胞の集団を再構成するために、造血幹細胞を投与することがある。例えば、前記患者は、がんに罹患していることがあり、前記欠損は、がん性細胞集団を選択的に又は非特異的に減少させる化学療法剤又は他の薬剤を投与することによって引き起こされることがある。更に、又はその代替として、前記患者は鎌状赤血球貧血、サラセミア、ファンコニ貧血、再生不良性貧血、及びウィスコット‐アルドリッチ症候群等の異常ヘモグロビン症(例えば、非悪性異常ヘモグロビン症)に罹患していることがある。前記対象は、アデノシン・デアミナーゼ重度複合免疫不全症(ADA SCID)、HIV/AIDS、異染性白質ジストロフィー、ダイアモンド‐ブラックファン貧血、及びシュワックマン‐ダイアモンド症候群に罹患している対象であることがある。前記対象は遺伝性の血液障害(例えば、鎌状赤血球貧血)又は自己免疫疾患を有するか、又はその影響を受けていることがある。更に、又はその代替として、前記対象は、神経芽細胞腫又は血液がん等の悪性腫瘍を有するか、又はその影響を受けていることがある。例えば、前記対象は、白血病、リンパ腫又は骨髄腫を有していることがある。いくつかの実施形態では、前記対象は、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫又は非-ホジキン・リンパ腫(non-Hodgkin’s lymphoma)を有する。いくつかの実施形態では、前記対象は骨髄異形成症候群を有する。いくつかの実施形態では、前記対象は、強皮症、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、クローン病、I型糖尿病等の自己免疫疾患、又は本明細書に記載の別の自己免疫性の病態を有する。いくつかの実施形態では、前記対象は、キメラ抗原レセプターT-細胞(CART)療法を必要とする。いくつかの実施形態では、前記対象は、代謝性貯蔵障害を有するか、又は影響を受けている。前記対象は、グリコーゲン蓄積症、ムコ多糖症、ゴーシェ病、ハーラー病、スフィンゴ脂質症、異染性白質ジストロフィー、からなる群から選択される代謝性障害、又は本明細書に開示される治療及び療法から恩恵を得ることができる任意の他の疾患又は障害（限定されるものではないが、重度複合免疫不全症、ウィスコット‐アルドリッチ症候群、高免疫グロブリンM症候群、チェディアック‐東病、遺伝性リンパ組織球症、大理石骨病、骨形成不全症、貯蔵疾患、サラセミア・メジャー、鎌状赤血球症、全身性硬化症、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、若年性関節リウマチ）、並びに"Bone Marrow Transplantation for Non-Malignant disease"、ASH Education Book、1:319-338(2000)（この開示は、造血幹細胞移植療物を投与する療法によって治療される可能性のある病態に関するものであり、その全体が本明細書に参照により取り込まれる）に記載されている疾患又は障害、に罹患している、又は影響を受けていることがある。更に又は代わりに、造血幹細胞移植を「必要とする」患者は、前述の病態のうちの1種に罹患している又は罹患していない患者（それにもかかわらず、巨核球、血小板(thrombocyte)、血小板(platelet)、赤血球、マスト細胞、骨髄芽球、好塩基球、好中球、好酸球、ミクログリア、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラル・キラー細胞、Tリンパ球、及びBリンパ球等の造血系列内の1種以上の内因性の細胞型のレベルの低下(例えば、他の健康な対象のレベルと比較して)を示す）であることがある。当業者の中のある者は、例えば、当該技術分野で公知の手順の中でも特に、フロー・サイトメトリー及び蛍光活性化細胞選別(FACS)方法によって、前記の細胞型又は他の血液細胞の型のうちの1種以上のもののレベルが、他の健康な対象に対して低下しているかどうかを容易に決定することができる。
【００４６】
本明細書中で使用される場合、用語「レシピエント」は、造血幹細胞の集団を含む移植物等の移植物を受ける患者を指す。レシピエントに投与される移植細胞は、例えば、自家、同系、又は同種異系細胞であることがある。
【００４７】
本明細書中で使用される場合、用語「サンプル」は、対象から採取された検体(例えば、血液、血液成分(例えば、血清又は血漿)、尿、唾液、羊水、脳脊髄液、組織(例えば、胎盤又は真皮)、膵液、絨毛膜絨毛サンプル、及び細胞)を指す。
【００４８】
本明細書中で使用される場合、用語「scFv」は、抗体由来の重鎖の可変ドメインと軽鎖の可変ドメインとが結合して1本の鎖を形成している、単鎖Fv抗体を指す。scFvフラグメントは、リンカーによって分離された、抗体軽鎖の可変領域(VL) (例えば、CDR-L1、CDR-L2、及び／又はCDR-L3)及び抗体重鎖の可変領域(VH) (例えば、CDR-H1、CDR-H2、及び／又はCDR-H3)を含む単一のポリペプチド鎖を含む。scFvフラグメントのVL領域及びVH領域を連結するリンカーは、タンパク質を構成するアミノ酸から構成されるペプチド・リンカーであることがある。
【００４９】
本明細書中で使用される場合、用語「対象」及び「患者」は、本明細書に記載するような特定の疾患又は症状に対して治療を受ける、ヒトのような生物をいう。例えば、ヒト患者のような患者は、外因性の造血幹細胞の生着を促進させるために、造血幹細胞移植療法の前に治療を受けることがある。
【００５０】
本明細書中で使用される場合、語句「血液から実質的にクリアランスされる」は、治療薬剤を患者に投与した後の時点であって、前記患者から単離された血液サンプル中の前記治療薬剤の濃度が、前記治療薬剤を従来の方法によって検出できないようなものである場合(例えば、前記治療薬剤が、前記治療薬剤を検出するために使用されるデバイス又はアッセイのノイズ閾値を超えて検出できないような場合)のことをいう。当該技術分野で知られている、様々な技法（当該技術分野で知られている又は本明細書に記載されているELISAベースの検出アッセイなど）を使用して、抗体、抗体フラグメント、及びタンパク質リガンドを検出することがある。抗体、又は抗体フラグメントを検出するために使用され得る更なるアッセイには、とりわけ当該技術分野で公知の、免疫沈降法及びイムノブロット・アッセイが含まれる。
【００５１】
本明細書中で使用される場合、語句「幹細胞障害」は、対象のターゲット組織をコンディショニングすることによって、及び／又はターゲット組織中の内因性の幹細胞集団を除去することによって(例えば、対象の骨髄組織から内因性の造血幹細胞集団又は造血前駆細胞集団を除去することによって)、及び／又は対象のターゲット組織中に幹細胞を生着させる又は移植することによって、治療又は治癒され得る任意の疾患、障害、又は症状を広く指す。例えば、I型糖尿病は、造血幹細胞移植によって治癒されることが示されており、本明細書に記載の組成物及び方法に従ってコンディショニングすることから恩恵を得ることができる。本明細書に記載する組成物及び方法を使用して治療され得る更なる障害には、限定されるものではないが、鎌状赤血球貧血、サラセミア、ファンコニ貧血、再生不良性貧血、ウィスコット‐アルドリッチ症候群、ADA SCID、HIV/AIDS、異染性白質ジストロフィー、ダイアモンド‐ブラックファン貧血、及びシュワックマン‐ダイアモンド症候群が挙げられる。本明細書に記載する患者コンディショニング及び／又は造血幹細胞移植の方法を用いて治療することができる更なる疾患には、遺伝性血液疾患(例えば、鎌状赤血球貧血)及び強皮症、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、及びクローン病等の自己免疫疾患が含まれる。本明細書に記載するコンディショニング及び／又は移植方法を使用して治療され得る更なる疾患には、悪性腫瘍(例えば、神経芽細胞腫)、又は血液がん(例えば、白血病、リンパ腫、及び骨髄腫)が含まれる。例えば、前記がんは、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、又は非-ホジキン・リンパ腫(non-Hodgkin’s lymphoma)であることがある。本明細書に記載のコンディショニング及び／又は移植方法を用いて治療可能な更なる疾患には、骨髄異形成症候群が含まれる。いくつかの実施形態では、前記対象は、代謝性貯蔵障害を有するか、又はそれによって影響を受けている。例えば、前記対象は、グリコーゲン蓄積症、ムコ多糖症、ゴーシェ病、ハーラー病、スフィンゴ脂質症、異染性白質ジストロフィー、からなる群から選択される代謝性障害、又は本明細書に開示される治療及び療法から恩恵を受けることができる任意の他の疾患又は障害（限定されるものではないが、重度複合免疫不全症、ウィスコット‐アルドリッチ症候群、高免疫グロブリンM(IgM)症候群、チェディアック‐東病、遺伝性リンパ組織球症、大理石骨病、骨形成不全症、貯蔵疾患、サラセミア・メジャー、鎌状赤血球症、全身性硬化症、全身性エリテマトーデス(systemic lupus erythematosus)、多発性硬化症、若年性関節リウマチ）、並びに"Bone Marrow Transplantation for Non-Malignant disease"、ASH Education Book、1:319-338(2000)（この開示は、造血幹細胞移植療物を投与する療法によって治療される可能性のある病態に関するものであり、その全体が本明細書に参照により取り込まれる）に記載されている疾患又は障害、に罹患している、又は影響を受けていることがある。
【００５２】
本明細書中で使用される場合、用語「治療する」又は「治療」は、疾患症状の重篤度及び／又は頻度を減少させること、疾患症状及び／又は前記症状の根本的な原因を取り除くこと、疾患症状及び／又はその根本的な原因の頻度又は可能性を減少させること、並びに疾患によって直接的又は間接的に引き起こされる損傷を改善又は修復することをいう。有益な又は所望の臨床的な結果としては、限定されるものではないが、本明細書に記載するような抗体コンディショニング療法及び続いて行う造血幹細胞移植療法の後に、患者において外因性の造血細胞の生着が促進されることが含まれる。更なる有益な結果には、造血幹細胞移植を必要としている患者において、コンディショニング療法及び続いて外因性の造血幹細胞グラフトを前記患者に投与した後に、造血幹細胞の細胞数が増加すること又は相対濃度が増加すること、が含まれる。本明細書に記載する療法の有益な結果にはまた、コンディショニング療法及び続いて行う造血幹細胞移植療法の後に、造血系列の1種以上の細胞（例えば、巨核球、血小板(thrombocyte)、血小板(platelet)、赤血球、マスト細胞、骨髄芽球、好塩基球、好中球、好酸球、ミクログリア細胞、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラル・キラー細胞、Tリンパ球、又はBリンパ球等）の細胞数が増加すること又は相対濃度が増加すること、が含まれることもある。更なる有益な結果には、がん細胞又は自己免疫細胞の集団等の、疾患を引き起こす細胞集団の量が減少することが含まれることがある。本発明の方法が障害を予防することを対象とする限り、用語「予防する」は、疾患の状態が完全に阻止されることを必要としないことが理解される。むしろ、本明細書中で使用される場合、予防するという用語は、疾患に感受性がある集団を同定し、疾患の発症前に本発明の化合物を投与すること等を、当業者ができることをいう。前記用語は、疾患の状態が完全に回避されることを意味するものではない。
【００５３】
本明細書中で使用される場合、「最大血漿濃度」又は「Cmax」は、対象(例えば、非ヒト霊長類)の血漿中の物質(例えば、本明細書に記載する場合、抗体又はADC)に関する、前記対象に前記物質を投与した後での、最大の観察濃度を意味する。
【００５４】
本明細書中で使用される場合、「曲線下面積」又は「AUC」は、血漿中の物質(例えば、本明細書に記載する場合、抗体又はADC)の濃度の経時変化をプロットした際の、曲線下面積である。AUCは、時間間隔の中で、瞬間的な濃度を積分した尺度とすることがあり、質量×時間／体積の単位を有する。AUCは、典型的には非コンパートメント方法(例えば、線状又は線状ログなどの台形方法)によって、又はコンパートメント方法によって計算する。AUCは、通常、0 〜無限大の時間間隔に対して求められ、他の時間間隔は表記する(たとえば、t1 及びt2 が開始時刻及び終了時刻の時間間隔である場合、AUC(t1, t2))。従って、本明細書中で使用される場合、「AUC(0-inf)」は、t=0から、無限期間にわたるAUCを指す。
【００５５】
本明細書中で使用される場合、「Tmax」は、対象(例えば、非ヒト霊長類)の血漿中の物質が、前記対象に前記物質を投与した後に、最大濃度に到達するのに観察された時間をいう。
【００５６】
本明細書で使用される用語「アシル」は、-C(=O)Rを指す、ここで、本明細書で定義されるように、RはH(「アルデヒド」)、C1-C12アルキル、C2-C12アルケニル、C2-C12アルキニル、C3-C7カルボシクリル、C6-C20アリール、5-10員ヘテロアリール、又は5-10員ヘテロシクリルである。非限定的な例としては、ホルミル、アセチル、プロパノイル、ベンゾイル、及びアクリロイルが挙げられる。
【００５７】
本明細書で使用される用語「C1-C12アルキル」は、1〜12個の炭素原子を有する直鎖又は分岐の飽和炭化水素を指す。代表的なC1-C12アルキル基としては、限定されるものではないが、-メチル、-エチル、-n-プロピル、-n-ブチル、-n-ペンチル、及び-n-ヘキシルが挙げられる；一方、分岐C1-C12アルキルとしては、限定されるものではないが、-イソプロピル、-sec-ブチル、-イソブチル、-tert-ブチル、-イソペンチル、及び2-メチルブチルが挙げられる。C1-C12のアルキル基は、置換されていない、又は置換されていることがある。
【００５８】
本明細書で使用される用語「アルケニル」は、不飽和の少なくとも1つの部位、即ち、炭素-炭素、sp2二重結合、を有する、通常の、第2級の、又は第3級の炭素原子を含むC2-C12炭化水素を指す。例としては、限定されるものではないが、以下が挙げられる：エチレン又はビニル、-アリル、-1-ブテニル、-2-ブテニル、-イソブチレニル、-1-ペンテニル、-2-ペンテニル、-3-メチル-1-ブテニル、-2-メチル-2-ブテニル、-2,3-ジメチル-2-ブテニルなどが挙げられる。アルケニル基は、置換されていない、又は置換されていることがある。
【００５９】
本明細書で使用される「アルキニル」は、不飽和の少なくとも1つの部位、即ち、炭素-炭素、sp三重結合を有する、通常の、第2級の、又は第3級の炭素原子を含むC2-C12炭化水素を指す。例としては、限定されるものではないが、アセチレン及びプロパルギルが挙げられる。アルキニル基は、置換されていない、又は置換されていることがある。
【００６０】
本明細書で使用される「アリール」は、C6-C20炭素環芳香族基を指す。アリール基の例としては、限定されるものではないが、フェニル、ナフチル及びアントラセニルが挙げられる。アリール基は、置換されていない、又は置換されていることがある。
【００６１】
本明細書で使用される「アリールアルキル」は、炭素原子（典型的には末端又はsp3炭素原子）に結合した水素原子の1つがアリール・ラジカルで置換されている、非環状アルキル・ラジカルを指す。代表的なアリールアルキル基としては、限定されるものではないが、ベンジル、2-フェニルエタン-1-イル、2-フェニルエテン-1-イル、ナフチルメチル、2-ナフチルエタン-1-イル、2-ナフチルエテン-1-イル、ナフトベンジル、2-ナフトフェニルエタン-1-イルなどが挙げられる。前記アリールアルキル基は6〜20個の炭素原子を含み、例えば、アリールアルキル基のアルキル部分（例えば、アルカニル、アルケニル又はアルキニル基等が挙げられる）は1〜6個の炭素原子であり、アリール部分は5〜14個の炭素原子である。アルカリル基は、置換されていない、又は置換されていることがある。
【００６２】
本明細書で使用される「シクロアルキル」は、飽和炭素環ラジカルを指し、これは単環式又は二環式であることがある。シクロアルキル基は、単環として3〜7個の炭素原子を有する環、又は二環として7〜12個の炭素原子を有する環を含む。単環式シクロアルキル基の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、及びシクロオクチルが挙げられる。シクロアルキル基は、置換されていない、又は置換されていることがある。
【００６３】
本明細書で使用される「シクロアルケニル」は不飽和炭素環ラジカルを指し、これは単環式でも二環式でもよい。シクロアルケニル基は、単環として3〜6個の炭素原子を有する環、又は二環として7〜12個の炭素原子を有する環を含む。単環式シクロアルケニル基の例としては、1-シクロペント-1-エニル、1-シクロペント-2-エニル、1-シクロペント-3-エニル、1-シクロヘキサ-1-エニル、1-シクロヘキサ-2-エニル、及び1-シクロヘキサ-3-エニルが挙げられる。シクロアルケニル基は、置換されていない、又は置換されていることがある。
【００６４】
本明細書で使用される「ヘテロアラルキル」は、炭素原子（典型的には末端又はsp3炭素原子）に結合した水素原子の1つがヘテロアリール・ラジカルで置換されている、非環状アルキル・ラジカルを指す。典型的なヘテロアリールアルキル基としては、限定されるものではないが、2-ベンズイミダゾリルメチル、2-フリルエチル等が挙げられる。前記ヘテロアリールアルキル基は6〜20個の炭素原子を含み、例えば、ヘテロアリールアルキル基のアルキル部分(アルカニル、アルケニル又はアルキニル基等が挙げられる)は1〜6個の炭素原子である、並びにヘテロアリール部分は5〜14個の炭素原子である並びにN、O、P、及びSから選択される1〜3個のヘテロ原子である。前記ヘテロアリールアルキル基のヘテロアリール部分は、3〜7個の環員を有する単環(2〜6個の炭素原子)であることがある、又は7〜10個の環員を有する二環(4〜9個の炭素原子並びにN、O、P、及びSから選択される1〜3個のヘテロ原子)であることがある、例えば：二環[4,5]、[5,5]、[5,6]、又は[6,6]システム。
【００６５】
本明細書で使用される「ヘテロアリール」及び「ヘテロシクロアルキル」は、それぞれ芳香族又は非芳香族環システムを指し、ここで1つ以上の環原子は、ヘテロ原子、例えば窒素、酸素、及び硫黄である。ヘテロアリール又はヘテロシクロアルキル・ラジカルは、2〜20個の炭素原子及びN、O、P、及びSから選択される1〜3個のヘテロ原子を含む。ヘテロアリール又はヘテロシクロアルキルは、3〜7個の環員を有する単環(2〜6個の炭素原子並びにN、O、P、及びSから選択される1〜3個のヘテロ原子)であることがある、又は7〜10個の環員を有する二環(4〜9個の炭素原子並びにN、O、P、及びSから選択される1〜3個のヘテロ原子)であることがある、例えば：二環[4,5]、[5,5]、[5,6]、又は[6,6]システム。ヘテロアリール及びヘテロシクロアルキルは、置換されていない、又は置換されていることがある。
【００６６】
ヘテロアリール及びヘテロシクロアルキル基は、Paquette, Leo A.; "Principles of Modern Heterocyclic Chemistry" (W. A. Benjamin, New York, 1968), 特に1, 3, 4, 6, 7, 及び 9章; "The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs" (John Wiley & Sons, New York, 1950 to present), 特に Volumes 13, 14, 16, 19, 及び 28; 並びに J. Am. Chem. Soc. (1960) 82:5566、に記載されている。
【００６７】
ヘテロアリール基の例としては、例えば、限定されるものではないが、ピリジル、チアゾリル、テトラヒドロチオフェニル、ピリミジニル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、テトラゾリル、ベンゾフラニル、チアナフタレニル、インドリル、インドレニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、イソキサゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、インドリジニル、イソインドリル、3H-インドリル、1H-インダゾリル、プリニル、4H-キノリジニル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、4aH-カルバゾリル、カルバゾリル、フェナントリジニル、アクリジニル、ピリミジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フラザニル、フェノキサジニル、イソクロマニル、クロマニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、及びイサチノイルが挙げられる。
【００６８】
ヘテロシクロアルキルの例としては、例えば、限定されるものではないが、ジヒドロピリジル、テトラヒドロピリジル(ピペリジル)、テトラヒドロチオフェニル、ピペリジニル、4-ピペリドニル、ピロリジニル、2-ピロリドニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、ビス-テトラヒドロピラニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、オクタヒドロイソキノリニル、ピペラジニル、キヌクリジニル、及びモルホリニルが挙げられる。
【００６９】
限定ではなく例として、炭素結合ヘテロアリール類及びヘテロシクロアルキル類は、ピリジンの2、3、4、5、若しくは6位、ピリダジンの3、4、5、若しくは6位、ピリミジンの2、4、5、若しくは6位、ピラジンの2、3、5、若しくは6位、フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロール若しくはテトラヒドロピロールの2、3、4、若しくは5位、オキサゾール、イミダゾール若しくはチアゾールの2、4、若しくは5位、イソオキサゾール、ピラゾール、若しくはイソチアゾールの3、4、若しくは5位、アジリジンの2、若しくは3位、アゼチジンの2、3若しくは4位、キノリンの2、3、4、5、6、7、若しくは8位、又はイソキノリンの1、3、4、5、6、7、若しくは8位、で結合する。更に典型的には、炭素結合ヘテロシクリルとしては、2-ピリジル、3-ピリジル、4-ピリジル、5-ピリジル、6-ピリジル、3-ピリダジニル、4-ピリダジニル、5-ピリダジニル、6-ピリダジニル、2-ピリミジニル、4-ピリミジニル、5-ピリミジニル、6-ピリミジニル、2-ピラジニル、3-ピラジニル、5-ピラジニル、6-ピラジニル、2-チアゾリル、4-チアゾリル、又は5-チアゾリルが挙げられる。
【００７０】
限定ではなく例として、窒素結合ヘテロアリール類及びヘテロシクロアルキル類は、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、2-ピロリン、3-ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、2-イミダゾリン、3-イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、2-ピラゾリン、3-ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン、1H-インダゾールの1位で、イソインドール又はイソインドリンの2位、モルホリンの4位、及びカルバゾール又はベータ・カルボリンの9位、に結合している。更に典型的には、窒素結合ヘテロ環としては、1-アジリジル、1-アゼチジル(1-azetedyl)、1-ピロリル、1-イミダゾリル、1-ピラゾリル、及び1-ピペリジニルが挙げられる。
【００７１】
本明細書で使用される、並びに上記のアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクリルなどの何れかに適用される、「置換された」とは1個以上の水素原子がそれぞれ独立して置換基で置換されていることを意味する。典型的な置換基には、限定されるものではないが、-X, -R, -OH, -OR, -SH, -SR, NH2, -NHR, -N(R)2, -N+(R)3, -CX3, -CN, -OCN, -SCN, -NCO, -NCS, -NO, -NO2, -N3, -NC(=O)H, -NC(=O)R,  -C(=O)H, -C(=O)R, -C(=O)NH2,  -C(=O)N(R)2, -SO3-, -SO3H, -S(=O)2R, -OS(=O)2OR, -S(=O)2NH2, -S(=O)2N(R)2, -S(=O)R, -OP(=O)(OH)2, -OP(=O)(OR)2, -P(=O)(OR)2, -PO3, -PO3H2, -C(=O)X, -C(=S)R, -CO2H, -CO2R, -CO2-, -C(=S)OR, -C(=O)SR, -C(=S)SR, -C(=O)NH2, -C(=O)N(R)2, -C(=S)NH2, -C(=S)N(R)2, -C(=NH)NH2, 及び -C(=NR)N(R)2、が含まれる；ここで、各Xは、F、Cl、Br、及びIから、それぞれの場合について独立に選択される；及び、各Rは、C1-C12アルキル、C6-C20アリール、C3-C14ヘテロシクロアルキル又はヘテロアリール、保護基及びプロドラック部分から、それぞれの場合について独立に選択される。基が「任意選択的に置換される」と記載されている場合はどんな場合でも、その基は、それぞれの場合について独立に、1個以上の上記の置換基で置換されることがある。
【００７２】
あるラジカルの命名規則には、状況に応じて、モノ-ラジカル又はジ-ラジカルの何れかが含まれうることを理解しておく必要がある。例えば、置換基が分子の残りの部分への2つの結合の位置を必要とする場合、前記置換基はジ-ラジカルであると理解される。例えば、2点の結合の位置を必要とするアルキルとして識別される置換基には、-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-、等のジ-ラジカルが含まれる。他のラジカル命名規則は、前記ラジカルが「アルキレン」、「アルケニレン」、「アリーレン」、「ヘテロシクロアルキレン」等のようなジ-ラジカルであることを明確に示す。
【００７３】
置換基がジ-ラジカルとして示される(即ち、分子の残りの部分への2つの結合の位置を有する)場合はどれでも、前記置換基は、別段の指示がない限り、任意の方向性配置で結合することができることを理解されたい。
【００７４】
抗体薬物コンジュゲート(ADC)を使用したコンディショニング方法
本明細書に記載の抗体薬物コンジュゲート(ADC)を、幹細胞移植前にコンディショニングをするために、ヒト患者(例えば、がん、自己免疫疾患に罹患している、造血幹細胞移植治療を必要とする、又はGvHDの危険性があるヒト患者)に投与することがある。本明細書に記載する方法を、毒性及び重篤な有害事象を減少させるが、コンディショニング剤としては依然として有効であるコンディショニング投薬レジメンにおいて、ADCをヒト患者に送達するために使用することがある。以下の実施例に記載するように、ADC用量を2つ以上の用量に分割することによって(本明細書中で「複数回用量」と呼ぶか、又は互換的に「分割用量」と呼ぶ)、前記ADCが治療(例えば、コンディショニング)に関して有効なままである一方、毒性を減少させることができる。ある実施形態では、本発明の投薬レジメンにおける送達毎の用量は、ほぼ同じである。
【００７５】
以下のセクションは、造血幹細胞が生着するのを促進するために、移植（例えば、造血幹細胞移植）を必要とする患者に投与することができるADC、並びに造血幹細胞移植の前に患者にそのような治療薬を投与する方法についての説明を提供する。
【００７６】
造血幹細胞移植前のコンディショニング療法の場合、前記ADCを、外因性の造血幹細胞移植を施す前、例えば、1時間〜1週間(例えば、1時間、2時間、3時間、4時間、5時間、6時間、7時間、8時間、9時間、10時間、11時間、12時間、13時間、14時間、15時間、16時間、17時間、18時間、19時間、20時間、21時間、22時間、23時間、24時間、2日、3日、4日、5日、6日、若しくは7日)又はそれ以上の、外因性の造血幹細胞移植の生着が最適に促進される時間に、患者に投与することがある。
【００７７】
本明細書で開示する方法によれば、前記ADCを、コンディショニング療法において、適時に分離した2つの用量で、ヒト患者に投与する。ある実施形態では、第1の用量を1日目に投与する、及び前記第1の用量を投与してから約1時間、約2時間、約3時間、約4時間、約5時間、約6時間、約7時間、約8時間、約9時間、約10時間、約11時間、又は約12時間後に第2の用量を投与する。別の実施形態では、第1の用量を1日目に投与する、及び第2の用量を投薬レジメンの2日目、3日目、4日目、5日目、6日目、7日目、8日目、9日目、10日目、11日目、又は12日目に投与する。
【００７８】
ADCの用量は、固定用量(mg)又は重量ベース用量(mg/kg)の何れか、又はそれらの組み合わせであることがある。例えば、ADCの用量は、0.03〜0.29 mg/kg、約0.03〜0.25 mg/kg、約0.03〜0.20 mg/kg、約0.03〜0.15 mg/kg、約0.03〜0.10 mg/kg、約0.05〜0.10 mg/kg、又は約0.05〜0.07 mg/kgであることがある。他の実施形態では、対象に投与されるADCの用量は、約0.03〜0.6 mg/kg；約0.03〜0.55 mg/kg；約0.03〜0.5 mg/kg； 約0.03〜0.45 mg/kg；約0.03〜0.4 mg/kg；約0.03〜0.35 mg/kg；約0.03〜0.3 mg/kg；約0.03〜0.25 mg/kg；約0.03〜0.2 mg/kg；約0.03〜0.15 mg/kg；約0.03〜0.1 mg/kg；約0.1〜0.6 mg/kg；約0.1〜0.55 mg/kg；約0.1〜0.5 mg/kg；約0.1〜0.45 mg/kg；約0.1〜0.4 mg/kg；約0.1〜0.35 mg/kg；約0.1〜0.3 mg/kg；約0.1〜0.25 mg/kg；約0.1〜0.2 mg/kg；約0.1〜0.15 mg/kg；約0.15〜0.6 mg/kg；約0.15〜0.55 mg/kg；約0.15〜0.5 mg/kg；約0.15〜0.45 mg/kg；約0.15〜0.4 mg/kg；約0.15〜0.35 mg/kg；約0.15〜0.3 mg/kg；約0.15〜0.25 mg/kg；又は約0.15〜0.2 mg/kgである。
【００７９】
ある実施形態では、ADCの用量は、約1 mg/kgである。ある実施形態では、ADCの用量は、約0.01〜1 mg/kg；約0.01〜0.95 mg/kg；約0.01〜0.9 mg/kg；約0.01〜0.85 mg/kg；約0.01〜0.8 mg/kg；約0.01〜0.75 mg/kg；約0.01〜0.7 mg/kg；約0.01〜0.65 mg/kg；約0.01〜0.6 mg/kg；約0.01〜0.55 mg/kg；約0.01〜0.5 mg/kg；約0.01〜0.45 mg/kg；約0.01〜0.4 mg/kg；約0.01〜0.35 mg/kg；約0.01〜0.2 mg/kg；約0.01〜0.15 mg/kg；約0.01〜0.1 mg/kg；又は約0.01〜0.05 mg/kgである。
【００８０】
ある実施形態では、ADCの用量は、約2 mg/kgである。ある実施形態では、ADCの用量は、約0.01〜2 mg/kg；約0.01〜1.8 mg/kg；約0.01〜1.6 mg/kg；約0.01〜1.4 mg/kg；又は約0.01〜1.2 mg/kgである。ある実施形態では、ADCの用量は、約0.05〜2 mg/kg；約0.05〜1.8 mg/kg；約0.05〜1.6 mg/kg；約0.05〜1.4 mg/kg；又は約0.05〜1.2 mg/kgである。
【００８１】
ある実施形態では、ADCの用量は、約3 mg/kgである。ある実施形態では、ADCの用量は、約0.01〜3 mg/kg；約0.01〜2.8 mg/kg；約0.01〜2.6 mg/kg；約0.01〜2.4 mg/kg；又は約0.01〜2.2 mg/kgである。ある実施形態では、ADCの用量は、約0.05〜3 mg/kg；約0.05〜2.8 mg/kg；約0.05〜2.6 mg/kg；約0.05〜2.4 mg/kg；又は約0.05〜2.2 mg/kgである。
【００８２】
ある実施形態では、ADCの用量は、約4 mg/kgである。ある実施形態では、ADCの用量は、約0.01〜4 mg/kg；約0.01〜3.8 mg/kg；約0.01〜3.6 mg/kg；約0.01〜3.4 mg/kg；又は約0.01〜3.2 mg/kgである。ある実施形態では、ADCの用量は、約0.05〜4 mg/kg；約0.05〜3.8 mg/kg；約0.05〜3.6 mg/kg；約0.05〜3.4 mg/kg；又は約0.05〜3.2 mg/kgである。
【００８３】
ある実施形態では、ADCの用量は、約5 mg/kgである。ある実施形態では、ADCの用量は、約0.01〜5 mg/kg；約0.01〜4.8 mg/kg；約0.01〜4.6 mg/kg；約0.01〜4.4 mg/kg；又は約0.01〜4.2 mg/kgである。ある実施形態では、ADCの用量は、約0.05〜5 mg/kg；約0.05〜4.8 mg/kg；約0.05〜4.6 mg/kg；約0.05〜4.4 mg/kg；又は約0.05〜4.2 mg/kgである。
【００８４】
ある実施形態では、ADCの用量は、約0.2〜0.8 mg/kgである。ある実施形態では、ADCの用量は、約0.2〜0.7 mg/kg；約0.2〜0.6 mg/kg；約0.3〜0.7 mg/kg；又は約0.3〜0.6 mg/kgである。
【００８５】
ある実施形態では、ADCの用量は、約0.01 mg/kg；約0.02 mg/kg；約0.03 mg/kg；約0.04 mg/kg；約0.05 mg/kg；約0.06 mg/kg；約0.07 mg/kg；約0.08 mg/kg；約0.09 mg/kg；約0.1 mg/kg；約0.15 mg/kg；約0.2 mg/kg；約0.25 mg/kg；約0.3 mg/kg；約0.35 mg/kg；約0.4 mg/kg；約0.45 mg/kg；約0.5 mg/kg；約0.55 mg/kg；約0.6 mg/kg；約0.65 mg/kg；約0.7 mg/kg；約0.75 mg/kg；約0.8 mg/kg；約0.85 mg/kg；約0.9 mg/kg；約0.95 mg/kg；約1 mg/kg；約1.5 mg/kg；約2 mg/kg；約2.5 mg/kg；約3 mg/kg；約3.5 mg/kg；約4 mg/kg；約4.5 mg/kg；又は約5 mg/kgである。
【００８６】
ある実施形態では、ADCを患者に約0.1 mg/kgの用量で投与する。ある実施形態では、ADCを患者に約0.3 mg/kgの用量で投与する。ADCを患者に約0.6 mg/kgの用量で投与する。ADCを患者に約1.0 mg/kgの用量で投与する。
【００８７】
更に別の実施形態では、ADCをヒト患者に、約2〜12 mg、約2〜11 mg、約2〜10 mg、約2〜9 mg、約2〜8 mg、約2〜7 mg、約2〜6 mg、約2〜5 mg、約2〜4 mg、又は 2〜3 mgの固定用量で投与する。ある実施形態では、ADCの用量は、約1 mg、約1.5 mg、約2 mg、約2.5 mg、約3 mg、約3.5 mg、約4 mg、約4.5 mg、約5 mg、約5.5 mg、約6 mg、約6.5 mg、約7 mg、約7.5 mg、約8 mg、約8.5 mg、約9 mg、約9.5 mg、約10 mg、約10.5 mg、約11 mg、約11.5 mg、又は約12 mgである。ある実施形態では、ADCの用量は、約0.01 mg、約0.02 mg、約0.03 mg、約0.04 mg、約0.05 mg、約0.06 mg、約0.07 mg、約0.08 mg、約0.09 mg、約1 mg、約1.5 mg、約2 mg、約2.5 mg、約3 mg、約3.5 mg、約4 mg、約4.5 mg、約5 mgである。上述の用量の範囲は、ここに開示した方法に使用することができる用量の量に含まれる。
【００８８】
ある実施形態では、前記投薬レジメンは、1日目及び3日目に0.1 mg/kgのADCを投与することを含む。別の実施形態では、前記投薬レジメンは、1日目及び3日目に0.2 mg/kgのADCを投与することを含む。別の実施形態では、前記投薬レジメンは、1日目及び3日目に0.3 mg/kgのADCを投与することを含む。更に別の実施形態では、前記投薬レジメンは、1日目に0.3 mg/kgのADCを投与すること、及び3日目に0.2 mg/kgのADCを投与することを含む。或いは、前記投薬レジメンは、約0.1 mg/kg Q3D x 2；又は約0.3 mg/kg Q3D x 2；又は約0.6 mg/kg Q3D x 2の投与を含む。
【００８９】
また、本発明の投薬レジメンで使用する用量を、当該技術分野で知られている標準方法(例えば、U.S. Department of Health and Human Services Food and Drug Administration Center for Drug Evaluation and Research (CDER). “Guidance for Industry Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers.” July 2005; http://www.fda.gov/cder/guidance/index.htm)を用いて、本明細書の実施例に記載したサルでの用量から計算することもできる。例えば、いくつかの実施形態では、ヒト等価用量(human equivalent dose (HED)を、換算係数を用いて動物での用量データから導き出すことがある。ある非限定的な例として、Nair and Jacob, J. Basic Clin. Pharma. (2016) 7:27-31は、動物種間での用量の外挿方法を開示する。例えば、ある非限定的な例において、HEDを、アカゲザルでの用量に約0.324を乗じることによって、アカゲザルでの用量から導き出すことがある。別の非限定的な例では、HEDを、マウスでの用量に約0.081を乗じることによって、マウスでの用量から導き出すことがある。
【００９０】
AUC、Cmax及びTmaxのような薬力学的パラメータもまた、本発明を特徴付けるために使用することがある。当業者は、本明細書に記載する薬物動態学的(例えば、限定されるものではないが、AUC、Cmax 及びTmax)パラメータを測定する及び計算するための様々な方法を理解するであろう。更に、当業者は、本明細書に記載する薬物動態学的パラメータを、統計的に比較する(例えば、限定されるものではないが、ベースラインから治療後までの変化を比較する、及び／又は治療群間を比較する)、及び／又は解析する様々な方法を理解するであろう。
【００９１】
ある実施形態では、本明細書に記載する方法において使用するためのADC投薬レジメンを提供する、ここで、前記投薬レジメンは、当業者の中のある者が知る方法によって決定する場合に、1〜500 μg/mL 時間の間のAUC(0-inf)値を提供する。ある実施形態では、前記投薬レジメンは、当業者の中のある者が知る方法によって決定する場合に、約1-50 μg/mL 時間の間の、約50-100 μg/mL 時間の間の、約100-150 μg/mL 時間の間の、約150-200 μg/mL 時間の間の、約200-250 μg/mL 時間の間の、約250-300 μg/mL 時間の間の、約300-350 μg/mL 時間の間の、約350-400 μg/mL 時間の間の、約400-450 μg/mL 時間の間の、約450-500 μg/mL 時間の間の、AUC(0-inf)値を提供する。別の実施形態では、前記投薬レジメンは、当業者の中のある者が知る方法によって決定する場合に、限定されるものではないが、約10 μg/mL 時間、約20 μg/mL 時間、約30 μg/mL 時間、約40 μg/mL 時間、約50 μg/mL 時間、約60 μg/mL 時間、約70 μg/mL 時間、約80 μg/mL 時間、約90 μg/mL 時間、約100 μg/mL 時間、約110 μg/mL 時間、約120 μg/mL 時間、約130 μg/mL 時間、約140 μg/mL 時間、約150 μg/mL 時間、約160 μg/mL 時間、約170 μg/mL 時間、約180 μg/mL 時間、約190 μg/mL 時間、約200 μg/mL 時間、約210 μg/mL 時間、約220 μg/mL 時間、約230 μg/mL 時間、約240 μg/mL 時間、約250 μg/mL 時間、約260 μg/mL 時間、約270 μg/mL 時間、約280 μg/mL 時間、約290 μg/mL 時間、約300 μg/mL 時間、約310 μg/mL 時間、約320 μg/mL 時間、約330 μg/mL 時間、約340 μg/mL 時間、約350 μg/mL 時間、約360 μg/mL 時間、約370 μg/mL 時間、約380 μg/mL 時間、約390 μg/mL 時間、約400 μg/mL 時間、約410 μg/mL 時間、約420 μg/mL 時間、約430 μg/mL 時間、約440 μg/mL 時間、約450 μg/mL 時間、約460 μg/mL 時間、約470 μg/mL 時間、約480 μg/mL 時間、約490 μg/mL 時間、約500 μg/mL 時間、等のAUC(0-inf)値を提供する。別の実施形態では、これらの値及び範囲は全て±10%であってもよい。
【００９２】
別の実施形態では、本明細書に記載する方法において使用するためのADC投薬レジメンを提供する、ここで、前記投薬レジメンは、当業者の中のある者が知る方法によって決定する場合に、0.1〜20 μg/mLの間のCmax値を提供する。ある実施形態では、前記投薬レジメンは、当業者の中のある者が知る方法によって決定する場合に、約0.1-0.5 μg/mLの間の、約0.5-1.0 μg/mLの間の、約1.0-1.5 μg/mLの間の、約1.5-2.0 μg/mLの間の、約2.0-2.5 μg/mLの間の、約2.5-3.0 μg/mLの間の、約3.0-3.5 μg/mLの間の、約3.5-4.0 μg/mLの間の、約4.0-4.5 μg/mLの間の、約4.5-5.0 μg/mLの間の、約5.0-5.5 μg/mLの間の、約5.5-6.0 μg/mLの間の、約6.0-6.5 μg/mLの間の、約6.5-7.0 μg/mLの間の、約7.0-7.5 μg/mLの間の、約7.5-8.0 μg/mLの間の、約8.0-8.5 μg/mLの間の、約8.5-9.0 μg/mLの間の、約9.0-9.5 μg/mLの間の、約9.5-10.0 μg/mLの間の、約10.0-10.5 μg/mLの間の、約10.5-11.0 μg/mLの間の、約11.0-11.5 μg/mLの間の、約11.5-12.0 μg/mLの間の、約12.0-12.5 μg/mLの間の、約12.5-13.0 μg/mLの間の、約13.0-13.5 μg/mLの間の、約13.5-14.0 μg/mLの間の、約14.0-14.5 μg/mLの間の、約14.5-15.0 μg/mLの間の、約15.0-15.5 μg/mLの間の、約15.5-16.0 μg/mLの間の、約16.0-16.5 μg/mLの間の、約16.5-17.0 μg/mLの間の、約17.0-17.5 μg/mLの間の、約18.5-19.0 μg/mLの間の、約19.0-19.5 μg/mLの間の、約19.5-20.0 μg/mLの間の、Cmax値を提供する。別の実施形態では、前記投薬レジメンは、当業者の中のある者が知る方法によって決定する場合に、限定されるものではないが、約0.1 μg/mL、約0.5 μg/mL、約1.0 μg/mL、約1.5 μg/mL、約2.0 μg/mL、約2.5 μg/mL、約3.0 μg/mL、約3.5 μg/mL、約4.0 μg/mL、約4.5 μg/mL、約5.0 μg/mL、約5.5 μg/mL、約6.0 μg/mL、約6.5 μg/mL、約7.0 μg/mL、約7.5 μg/mL、約8.0 μg/mL、約8.5 μg/mL、約9.0 μg/mL、約9.5 μg/mL、約10.0 μg/mL、約10.5 μg/mL、約11.0 μg/mL、約11.5 μg/mL、約12.0 μg/mL、約12.5 μg/mL、約13.0 μg/mL、約13.5 μg/mL、約14.0 μg/mL、約14.5 μg/mL、約15.0 μg/mL、約15.5 μg/mL、約16.0 μg/mL、約16.5 μg/mL、約17.0 μg/mL、約17.5 μg/mL、約18.0 μg/mL、約18.5 μg/mL、約19.0 μg/mL、約19.5 μg/mL、約20.0 μg/mL、等のCmax値を提供する。別の実施形態では、これらの値及び範囲は全て±10%であってもよい。
【００９３】
別の実施形態では、本明細書に記載する方法において使用するための抗体又はADC投薬レジメンを提供する、ここで、前記投薬レジメンは、上述される前記値、及び値の範囲を特徴とするAUC(0-inf)値(又は範囲)及びCmax値(又は範囲)の両方を提供する。
【００９４】
ある実施形態では、本発明は、このように、T細胞が発現する抗原に結合することができるADCを投与することによって、移植した造血幹細胞の生着を促進する組成物及び方法を提供する。この投与によって、CD4+及びCD8+ T細胞のような内因性のT細胞の集団が選択的に減少することがある。このようにT細胞を選択的に減少させることによって、次に、外因性(例えば、自家、同種異系、又は同系)の造血幹細胞グラフトを移植した後のグラフト拒絶を防止することができる。例えば、本明細書に記載する場合、ADCを使用して、CD4+及び／又はCD8+ T細胞を選択的に減少させることにより、移植した造血幹細胞グラフトに対して生じることがあるT細胞媒介免疫反応を、減弱させることができる。本発明は、造血幹細胞移植治療を必要とする患者に、一定の低毒性プロトコルに従って、ADCを、移植した造血幹細胞の生存及び生着能を促進させるために、並びに前記患者に対するADCの毒性を減少させるために、投与することができるという知見に、部分的に、基づいている。
【００９５】
本明細書に記載するADCを投与することにより造血幹細胞移植物が生着することを、種々の実験的な測定において、明らかにすることができる。例えば、移植した造血幹細胞が生着することを、本明細書に記載する、抗原に結合することができる抗体又はその抗原結合フラグメントを投与した後、及びその後に造血幹細胞移植を施した後に、患者の骨髄内に存在する競合的再定植ユニット(competitive repopulating unit)(CRU)の量を評価することによって、評価することがある。更に、蛍光の、発色の、又は発光の産物を生じる化学反応を触媒する酵素などのレポータ遺伝子をベクターの中に組み込ませて、このベクターをドナー(donor)の造血幹細胞にトランスフェクトし、続いて、骨髄などの造血幹細胞がホーミングした組織中における対応するシグナルをモニタリングすることによって、造血幹細胞移植の生着を観察することができる。また、例えば、当技術分野で知られている蛍光活性化細胞選別(fluorescence activated cell sorting)(FACS)解析方法によって決定するように、造血幹細胞及び前駆細胞の量及び生存を調べることによって、造血幹細胞の生着を観察することもできる。移植後の期間中の末梢血における白血球細胞数を測定することによって、及び／又は骨髄穿刺サンプルにおいてドナー(donor)細胞により骨髄細胞が回復したことを測定することによって、生着したことを決定することもできる。
【００９６】
本明細書に記載する場合、ADCを含む医薬製剤は、このようなADCを、1種以上の任意選択的な薬学的に許容可能な担体と混合することによって(Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition、Osol、AEd.(1980))、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で、調製される。薬学的に許容可能な担体は、一般に、使用する用量及び濃度で、レシピエントに対して無毒性であり、これには、限定されるものではないが、以下が挙げられる：リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸等のバッファー；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；保存剤（塩化オクタデシルジメチルベンジル・アンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル若しくはベンジル・アルコール；メチル若しくはプロピルパラベン等のアルキル・パラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；3-ペンタノール；及びm-クレゾール等）；低分子量(約10残基未満)ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、若しくは免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、若しくはリジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、若しくはデキストリンなどの他の糖類；EDTAなどのキレート剤；ショ糖、マンニトール、トレハロース、若しくはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成性対イオン；金属複合体（例えば、Zn-タンパク質複合体）；並びに／又はポリエチレン・グリコール（PEG）などの非イオン性界面活性剤。 
【００９７】
本明細書に記載する理由により、効率的に、オン-ターゲットで細胞を減少させること(例えば、網状赤血球、血小板(platelets)、及び／又は造血幹細胞並びに前駆体細胞)、有意なオフ-ターゲットな毒性(例えば、ある特定の肝臓タンパク質のレベルが有意に増加すること)を最小限にすること、の両方を可能にする、コンディショニング療法(例えば、造血幹細胞移植前のコンディショニング)の好適な投薬スキームを達成することは、特に速い(即ち、短い)半減期のADCを使用する場合は、難しい。この問題は、コンディショニング療法の投薬スキームが有効であるには、ADCのより低い最大血漿濃度で、充分な期間にわたって同様なオン-ターゲットでの暴露が維持されることが必要になること、を考えると、更に複雑になり、ターゲット・レセプターが細胞内部に移行すること及びADCから細胞毒素が離れる速度により、更に複雑になる可能性がある問題、を考えると、更に複雑になる。
【００９８】
ある実施形態では、本明細書中で開示する方法によって、コンディショニングのためにADCの投与を受ける患者において、肝毒性が最小限に抑えられる。例えば、ある特定の実施形態では、本明細書中で開示する方法によって、24時間、48時間、72時間、又は96時間を超えて、前記患者において、肝臓のマーカー・レベルが、既知の毒性レベル未満に留まるようになる。他の実施形態では、本明細書中で開示する方法によって、24時間、48時間、72時間、又は96時間を超えて、前記患者において、肝臓のマーカー・レベルが、基準範囲内に留まるようになる。ある特定の実施形態では、本明細書中で開示する方法によって、肝臓のマーカー・レベルの上昇が、24時間、48時間、72時間、又は96時間を超えて、基準範囲より1.5倍以下、基準範囲より3倍以下、基準範囲より5倍以下、又は基準範囲より10倍以下、になる。毒性試験に使用することがある肝臓のマーカーの例としては、アラニン・アミノトランスアミナーゼ(ALT)、乳酸脱水素酵素(LDH)、及びアスパラギン酸アミノトランスアミナーゼ(AST)等が挙げられる。ある特定の実施形態では、本明細書に記載するような(即ち、単回用量の代わりに2回用量で投与する)ADCを投与することによって、肝臓のマーカー(例えば、AST、LDH、及び／又はALT)は一過的に増加する。いくつかの例では、毒性を示す肝臓のマーカーは高レベルに達することがあるが、ある特定の期間（例えば、約12時間、約18時間、約24時間、約36時間、約48時間、約72時間、約3日、約3.5日、約4日、約4.5日、約5日、約5.5日、約6日、約6.5日、約7日、約7.5日、又は1週間未満）の範囲内であり、前記肝臓のマーカー・レベルは、肝毒性に関連しない正常レベルに戻る。例えば、ヒト(平均的な成人男性)において、ALTの正常な非毒性レベルは1リットル当たり7〜55単位(U/L)であり；ASTの正常な非毒性レベルは8〜48U/Lである。ある特定の実施形態では、患者の血中AST、ALT、又はLDHレベルの少なくとも1つは、前記患者に、第1の用量のADCを投与することと前記第1の用量を投与した14日後との間に、毒性レベルに達しない。例えば、前記患者に第1の用量を投与し、続いて、前記第1の用量を投与してから例えば5、10、又は14日以内に、第2の用量、第3の用量、第4の用量、又はそれより大きい数の用量を投与することがある。しかし、前記患者の血中AST、ALT、又はLDHレベルの少なくとも1つは、前記患者に、第1の用量のADCを投与することと前記第1の用量を投与した14日後との間に、毒性レベルに達しない。
【００９９】
ある特定の実施形態では、前記患者の血中AST、ALT、又はLDHレベルの少なくとも1つは、正常レベルを超えて上昇しない、正常レベルを1.5倍を超えて上昇しない、正常レベルを3倍を超えて上昇しない、正常レベルを5倍を超えて上昇しない、又は正常レベルを10倍を超えて上昇しない。
【０１００】
本発明は、造血細胞(例えば、造血幹細胞、免疫細胞又はがん細胞)が発現する抗原に結合することができるADCを使用して、有害事象及び毒性を減少させる投薬レジメンを包含する。このような抗原の例としては、限定されるものではないが、CD117、CD2、CD5、CD45、CD252、CD134、及びCD137が挙げられる。
【０１０１】
抗CD117抗体
ある実施形態では、本明細書中で開示する方法は、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗CD117抗体を含む抗CD117 ADCを投与することを含む。本明細書中で開示する抗体、又はその抗原結合フラグメントは、GNNK+ CD117のようなCD117に結合することができ、治療薬剤として使用して、(i)CD117+細胞を特徴とするがん及び自己免疫疾患を直接的に治療する、及び(ii)移植療法を必要とする患者において、移植された造血幹細胞の生着を促進する。これらの治療活性は、例えば、がん細胞、自己免疫細胞、又は造血幹細胞のような細胞の表面に発現しているCD117(例えば、GNNK+ CD117)に、抗CD117抗体、又はその抗原結合フラグメントが結合すること、続いて、細胞死を誘導すること、に起因する。内因性の造血幹細胞を減少させることにより、移植した造血幹細胞がホーミングすることができるニッチが提供され、その後、生産的な造血が確立される。このようにして、移植した造血幹細胞は、本明細書に記載の幹細胞障害に罹患しているヒト患者等の患者に、うまく生着することができる。
【０１０２】
ヒトCD117(c-Kitとも呼ばれる、mRNA NCBI参照配列: NM_000222.2、タンパク質NCBI参照配列: NP_000213.1（即ち、配列番号(SEQ ID No): 232を参照）)に結合することができる抗体及び抗原結合フラグメント(GNNK+CD117に結合することができる抗体及び抗原結合フラグメントを含む)を、造血幹細胞移植療法に向けて患者をコンディショニングするために、本明細書に記載する組成物及び方法と組み合わせて使用することがある。集団のかなりの割合で存在する、CD117のコーディング領域又は細胞外ドメインに影響を及ぼす多型は、現在のところ、腫瘍以外の適応症ではよく知られていない。CD117には少なくとも4種類のアイソフォームが同定されており、腫瘍細胞では、更なるアイソフォームが発現している可能性がある。CD117アイソフォームのうち2つは、タンパク質の細胞内ドメインに局在し、2つは外側の膜近傍領域に存在する。2つの細胞外アイソフォーム、GNNK+とGNNK-は、4アミノ酸配列が存在する(GNNK+)又は存在しない(GNNK-)点で異なる。これらのアイソフォームはリガンド(SCF)に対して同じ親和性を有することが報告されているが、GNNK-アイソフォームへのリガンド結合は、細胞内部への取り込み及び分解を増大させることが報告されている。GNNK+アイソフォームを、GNNK+及びGNNK-タンパク質を含むこのアイソフォームに対して生成される抗体として、CD117に結合し得る抗体を生成するための免疫原として使用することがある。
【０１０３】
ある実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物(ADCを含む)に使用することができる抗CD117抗体は、抗体77(Ab77)である。抗体77(Ab77)の重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)： 9として以下に提供する。
【化３】
2021526525.tif 000091
【０１０４】
Ab77のVH CDRアミノ酸配列を上記に下線で示し、以下の通りである：
TYWIG (VH CDR1; 配列番号(SEQ ID NO)： 94); IIYPGDSDTRYSPSFQG (VH CDR2; 配列番号(SEQ ID NO)： 2); 及び HGRGYNGYEGAFDI (VH CDR3; 配列番号(SEQ ID NO)： 3)。
【０１０５】
Ab77の軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)：93として以下に提供する。
【化４】
2021526525.tif 000092
【０１０６】
Ab77のVL CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである： 
RASQGVISALA (VL CDR1; 配列番号(SEQ ID NO)： 95); DASILES (VL CDR2; 配列番号(SEQ ID NO)： 96); 及び QQFNSYPLT (VL CDR3; 配列番号(SEQ ID NO)： 97)。
【０１０７】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物(ADCを含む)に使用することができる抗CD117抗体は、抗体79(Ab79)である。Ab79の重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)： 9として以下に提供する。
【化５】
2021526525.tif 000093
【０１０８】
Ab79のVH CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである：
TYWIG (VH CDR1; 配列番号(SEQ ID NO)： 94); IIYPGDSDTRYSPSFQG (VH CDR2; 配列番号(SEQ ID NO)： 2); 及び HGRGYNGYEGAFDI (VH CDR3; 配列番号(SEQ ID NO)： 3)。
【０１０９】
Ab79の軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を、以下の配列番号(SEQ ID NO)： 99として以下に提供する。
【化６】
2021526525.tif 000094
【０１１０】
Ab79のVL CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである： 
RASQGVGSALA (VL CDR1; 配列番号(SEQ ID NO)： 100); DASILES (VL CDR2; 配列番号(SEQ ID NO)： 96); 及び QQFNSYPLT (VL CDR3; 配列番号(SEQ ID NO)： 97)。
【０１１１】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物(ADCを含む)に使用することができる抗CD117抗体は、抗体81(Ab81)である。Ab81の重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)： 9として以下に提供する。
【化７】
2021526525.tif 000095
【０１１２】
Ab81のVH CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである：
TYWIG (VH CDR1; 配列番号(SEQ ID NO)： 94); IIYPGDSDTRYSPSFQG (VH CDR2; 配列番号(SEQ ID NO)： 2); 及び HGRGYNGYEGAFDI (VH CDR3; 配列番号(SEQ ID NO)： 3)。
【０１１３】
Ab81の軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)：102として以下に提供する。
【化８】
2021526525.tif 000096
【０１１４】
Ab81のVL CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである： RASQGVISALA (VL CDR1; 配列番号(SEQ ID NO)：95); DASTLES (VL CDR2; 配列番号(SEQ ID NO)：103); 及び QQFNSYPLT (VL CDR3; 配列番号(SEQ ID NO)： 97)。
【０１１５】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物(ADCを含む)に使用することができる抗CD117抗体は、抗体85(Ab85)である。Ab85の重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)：106として以下に提供する。
【化９】
2021526525.tif 000097
【０１１６】
Ab85のVH CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである：
NYWIG (VH CDR1; 配列番号(SEQ ID NO)：108); IINPRDSDTRYRPSFQG (VH CDR2; 配列番号(SEQ ID NO)： 109); 及びHGRGYEGYEGAFDI (VH CDR3; 配列番号(SEQ ID NO)：110)。
【０１１７】
Ab85の軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)：107として以下に提供する。
【化１０】
2021526525.tif 000098
【０１１８】
Ab85のVL CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである： 
RSSQGIRSDLG(VL CDR1；配列番号(SEQ ID NO)：111)； DASNLET(VL CDR2；配列番号(SEQ ID NO)：112)；及びQQANGFPLT(VL CDR3；配列番号(SEQ ID NO)：113)。
【０１１９】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物(ADCを含む)に使用することができる抗CD117抗体は、抗体86(Ab86)である。Ab86の重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)：114として以下に提供する。
【化１１】
2021526525.tif 000099
【０１２０】
Ab86のVH CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである： 
NYWIG(VH CDR1；配列番号(SEQ ID NO)：108)；IIYPGDSDIRYSPSLQG(VH CDR2；配列番号(SEQ ID NO)：116)；及びHGRGYNGYEGAFDI(VH CDR3；配列番号(SEQ ID NO)： 3)。
【０１２１】
Ab86の軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)：115として以下に提供する。
【化１２】
2021526525.tif 000100
【０１２２】
Ab86のVL CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである： 
RASQGIGDSLA(VL CDR1；配列番号(SEQ ID NO)：117)； DASNLET(VL CDR2；配列番号(SEQ ID NO)：112)；及びQQLNGYPIT(VL CDR3；配列番号(SEQ ID NO)：118)。
【０１２３】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物(ADCを含む)に使用することができる抗CD117抗体は、抗体87(Ab87)である。Ab87の重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)：106として以下に提供する。
【化１３】
2021526525.tif 000101
【０１２４】
Ab87のVH CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである： 
NYWIG(VH CDR1；配列番号(SEQ ID NO)：108)；IINPRDSDTRYRPSFQG(VH CDR2；配列番号(SEQ ID NO)：109)；及びHGRGYEGYEGAFDI(VH CDR3；配列番号(SEQ ID NO)：110)。
【０１２５】
Ab87の軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)：119として以下に提供する。
【化１４】
2021526525.tif 000102
【０１２６】
Ab87のVL CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである： 
RASQGIRNDLG(VL CDR1；配列番号(SEQ ID NO)：120)； DASSLES(VL CDR2；配列番号(SEQ ID NO)： 5)；及びQQLNGYPIT(VL CDR3；配列番号(SEQ ID NO)：118)。
【０１２７】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物(ADCを含む)に使用することができる抗CD117抗体は、抗体88(Ab88)である。Ab88の重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)：121として以下に提供する。
【化１５】
2021526525.tif 000103
【０１２８】
Ab88のVH CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである： 
NYWIG(VH CDR1；配列番号(SEQ ID NO)：108)；IIYPGDSLTRYSPSFQG(VH CDR2；配列番号(SEQ ID NO)：122)；及びHGRGYNGYEGAFDI(VH CDR3；配列番号(SEQ ID NO)： 3)。
【０１２９】
Ab88の軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)：119として以下に提供する。
【化１６】
2021526525.tif 000104
【０１３０】
Ab88のVL CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである：
RASQGIRNDLG(VL CDR1；配列番号(SEQ ID NO)：120)； DASSLES(VL CDR2；配列番号(SEQ ID NO)： 5)；及びQQLNGYPIT(VL CDR3；配列番号(SEQ ID NO)：118)。
【０１３１】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物(ADCを含む)に使用することができる抗CD117抗体は、抗体89(Ab89)である。Ab89の重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)：123として以下に提供する。
【化１７】
2021526525.tif 000105
【０１３２】
Ab89のVH CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである： NYWIG(VH CDR1；配列番号(SEQ ID NO)：108)；IIYPGDSDTRYSPSFQG(VH CDR2；配列番号(SEQ ID NO)： 2)；及びHGRGYNGYEGAFDI(VH CDR3；配列番号(SEQ ID NO)： 3)。
【０１３３】
Ab89の軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)：115として以下に提供する。
【化１８】
2021526525.tif 000106
【０１３４】
Ab89のVL CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである： 
RASQGIGDSLA(VL CDR1；配列番号(SEQ ID NO)：117)； DASNLET(VL CDR2；配列番号(SEQ ID NO)：112)；及びQQLNGYPIT(VL CDR3；配列番号(SEQ ID NO)：118)。
【０１３５】
以下の抗体もまた、好ましい抗CD117抗体として同定した： HC-245/LC-245(即ち、Ab245)、HC-246/LC-246(即ち、Ab246)、HC-247/LC-247(即ち、Ab247)、HC-248/LC-248(即ち、Ab248)、及びHC-249/LC-249(即ち、Ab249)。
【０１３６】
【表１】
2021526525.tif 000107
【０１３７】
本明細書に記載する患者コンディショニング方法と併せて使用することがある、更なる抗CD117抗体としては、例えば、ヒト化SR-1抗体を記載する米国特許第7,915,391号；例えば、抗CD117 A3C6E2抗体を記載する米国特許第5,808,002号；並びに例えば、ヒトCD117のPro317、Asn320、Glu329、Val331、Asp332、Lus358、Glue360、Glue376、His378、及び／又はThr380を含むエピトープに結合する抗CD117抗体を記載する、WO 2015/050959に記載されるもの；並びに、例えば、以下のCDR配列を有する抗CD117抗体CK6を記載するUS2012/0288506(米国特許第8,552,157号としても公開される)に記載されるものが挙げられる：
アミノ酸配列SYWIG(配列番号(SEQ ID NO)：1)を有するCDR-H1；
アミノ酸配列IIYPGDSDTRYSPSFQG(配列番号(SEQ ID NO)： 2)を有するCDR-H2；
アミノ酸配列HGRGYNGYEGAFDI(配列番号(SEQ ID NO)： 3)を有するCDR-H3；
アミノ酸配列RASQGISSALA(配列番号(SEQ ID NO)： 4)を有するCDR-L1；
アミノ酸配列DASSLES(配列番号(SEQ ID NO)： 5)を有するCDR-L2；及び
アミノ酸配列CQQFNSYPLT(配列番号(SEQ ID NO)： 6)を有するCDR-L3。
【０１３８】
抗CD137抗体
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、ヒトCD137の細胞外ドメインに特異的に結合する抗体又はそのフラグメントを含むADCを含む。ヒトCD137の細胞外ドメインであって、以下のアミノ酸配列を有する：
【化１９】
2021526525.tif 000108
【０１３９】
ある実施形態では、本明細書が開示する方法は、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗CD137抗体を含む抗CD137 ADCを投与することを含む。例えば、CD137に結合することができるADCを治療薬剤として使用して、同種移植を受けたヒト患者中の同種反応性T細胞を減少させることができる。更に、CD137に結合することができる抗体及びその抗原結合フラグメントを治療薬剤として使用して、GvHDに罹患している又はGvHDのリスクがある患者において、GvHDのリスクを予防する又は低減することができる、ということが発見された。CD137は4-1BBとも呼ばれる。
【０１４０】
T細胞はCD137を発現することが示されている（この抗原は、共刺激分子の膜貫通TNFレセプター・スーパーファミリーであり、種々の造血細胞上で発現し、T細胞の活性化を促進し、並びにT細胞の増殖及び生存を調節する）（例えば、Cannons et al., J. Immunol. 167:1313-1324, 2001を参照のこと、この開示は、T細胞によるCD137の発現に関連するものとして、参照により本明細書中に取り込まれる）。抗体、その抗原結合フラグメント、及びリガンドを、当技術分野で公知であり、及び本明細書に記載する技術（例えば、免疫化、計算モデリング技術、及びin vitro選択方法（例えば、以下に記載されるファージ・ディスプレイ及び細胞ベースのディスプレイのプラットフォーム等））を使用して、同定することがある。
【０１４１】
ある実施形態では、本明細書に記載する方法において使用することがある抗CD137抗体は、マウス抗CD137抗体BBK2(Thermo Fisher； MS621PABX)又はBBK2抗体に対応する抗原結合領域を含む抗CD137抗体である。前記BBK2抗体(BBK-2抗体又は抗4-1BB抗体とも呼ばれる)は、ヒト4-1BB組換えタンパク質(4-1BBはCD137としても知られる)の外部ドメインに結合するマウス・モノクローナル抗体(IgG1、カッパ)である。ある特定の実施形態では、本発明の方法及び組成物は、BBK2抗体の結合領域(例えば、CDR)を含む抗CD137抗体を含む。別の実施形態では、本発明の方法及び組成物は、前記BBK2抗体がCD137上のそのエピトープに結合することを競合的に阻害する抗体を含む。ある特定の実施形態では、前記抗CD137抗体は、ヒト化BBK2又はキメラBBK2である。
【０１４２】
ある実施形態では、本明細書に記載の方法は、BBK2の可変重鎖領域及び可変軽鎖領域を含むキメラ抗CD137(ch-BBK2)抗体を含む。ある特定の実施形態では、キメラBBK2抗体は、ヒト定常領域を含むIgG1抗体である。ch-BBK2の重鎖アミノ酸配列を配列番号(SEQ ID NO)： 214に記載し、ch-BBK2の軽鎖アミノ酸配列を配列番号(SEQ ID NO)： 215に記載する。重鎖及び軽鎖配列のそれぞれのCDR領域(CDR1、CDR2、及びCDR3)を、以下に太字で記載する。可変領域をイタリック体で示す。
【化２０】
2021526525.tif 000109
【化２１】
2021526525.tif 000110
【０１４３】
前記のCDR領域(及びBBK2抗体)は、Lee et al. (2002) European J of Immunogenetics29(5):449-452に記載されている。従って、ある実施形態では、抗CD137抗体BBK2(ch-BBK2を含む)のVH CDRアミノ酸配列は、以下の通りである： SGYTFTSYW(VH CDR1；配列番号(SEQ ID NO)： 252)； NIYPSDSYT(VH CDR2；配列番号(SEQ ID NO)： 253)及びTRNGVEGYPHYYAME(VH CDR3；配列番号(SEQ ID NO)： 254)。抗CD137抗体BBK2(ch-BBK2を含む)のVL CDRアミノ酸配列は、以下の通りである： SQDLSNH(VL CDR1；配列番号(SEQ ID NO)： 255)； YYTS(VL CDR2；配列番号(SEQ ID NO)： 256)及びCQQGYTLPY(VL CDR3；配列番号(SEQ ID NO)： 257)。
【０１４４】
あるいは、BBK2のCDR領域がKabat番号付けに従って定義することができる。Kabat番号付けによって定義されるようなCDRを、重鎖配列及び軽鎖配列の各々について、以下に記載する(以下に太字で記載する)。BBK2の可変領域をイタリック体で示す。
【化２２】
2021526525.tif 000111
(配列番号(SEQ ID NO)：214；ch-BK2重鎖)
【化２３】
2021526525.tif 000112
(配列番号(SEQ ID NO)：215；ch-BK2軽鎖)
【０１４５】
従って、ある実施形態では、抗CD137抗体BBK2(ch-BBK2を含む)のVH CDRアミノ酸配列は、以下のとおりである。SYWIN(VH CDR1；配列番号(SEQ ID NO)： 218)； NIYPSDSYTNYNQKFKD(VH CDR2；配列番号(SEQ ID NO)： 219)及びNGVEGYPHYYAMEY(VH CDR3；配列番号(SEQ ID NO)： 220)、及び抗CD137抗体BBK2(ch-BBK2を含む)のVL CDRアミノ酸配列は、以下のとおりである： RASQDLSNHLY(VL CDR1；配列番号(SEQ ID NO)： 221)； YTSRLHS(VL CDR2；配列番号(SEQ ID NO)： 222)及びQQGYTLPYT(VL CDR3；配列番号(SEQ ID NO)： 223)。
【０１４６】
BBK2の重鎖可変領域は、
【化２４】
2021526525.tif 000113
(配列番号(SEQ ID NO)：216)
【０１４７】
BBK2の軽鎖可変領域は、
【化２５】
2021526525.tif 000114
(配列番号(SEQ ID NO)：217)
抗CD137抗体(抗CD137 ADCを含む)は、上記の重鎖及び軽鎖可変領域アミノ酸配列を含むことがある。
【０１４８】
ある実施形態では、抗CD137抗体、例えばキメラ(ch-BBK2)抗体又はヒト化BBK2抗体は、BBK2重鎖CDRを含む重鎖可変領域を含む、及びBBK2軽鎖CDRを含む軽鎖可変領域を含む。
【０１４９】
ある実施形態では、抗CD137抗体、例えばキメラ(ch-BBK2)抗体又はキメラBBK2抗体は、BBK2重鎖CDRを含む重鎖可変領域を含む、及びBBK2軽鎖CDRを含む軽鎖可変領域を含む。
【０１５０】
従って、BBK2、ヒト化BBK2、又はキメラBBK2抗体を、本明細書に記載する抗CD137 ADC及び方法において使用することがある。これらの抗体の各々は、当技術分野で公知の方法及び本明細書に記載する方法を使用して、以下に記載する細胞毒素の何れかにコンジュゲートすることがある。
【０１５１】
抗CD5抗体
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、ヒトCD5に特異的に結合する抗体又はそのフラグメントを含むADCを含む。ヒトCD5は、LEU1又はT1とも呼ばれる。ヒトCD5は、胸腺細胞、Tリンパ球及びBリンパ球のサブセットの表面にみられるI型膜貫通糖タンパク質である。ヒトCD5の2つのアイソフォームが同定されている。アイソフォーム1は438アミノ酸を含み、Jones. et al. (1988) Nature 323 (6086), 346-349に記載されている、及び以下である(NCBI 参照配列： NP_001333385.1)：
【化２６】
2021526525.tif 000115
【０１５２】
ある実施形態では、本明細書中に開示する方法は、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗CD5抗体を含む抗CD5 ADCを投与することを含む。従って、抗CD5 ADCをコンディショニング薬剤として使用して、移植療法を必要とする患者において、免疫細胞が媒介する移植片拒絶の可能性を予防する、又は減少させることにより、移植した造血幹細胞が生着することを促進する。例えば、抗CD5 ADCは、非自己の造血幹細胞抗原（例えば、造血幹細胞グラフトが発現する非自己のMHC抗原等）と交差反応する、及び免疫反応を開始する免疫細胞（例えば、T細胞、B細胞、又はNK細胞等）が発現する、細胞表面のCD5と結合することができる。抗体及び抗原結合フラグメントが、造血幹細胞に特異的なCD5+免疫細胞にこのように結合することは、例えば、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity)によって、又は前記抗体若しくはその抗原結合フラグメントにコンジュゲートした細胞毒性薬物の作用によって、その結合した免疫細胞の死を誘導する。このようにして、非自己の造血幹細胞と交差反応するCD5+免疫細胞の集団が減少することにより、入ってくるグラフトに対する免疫反応を開始するレシピエント(recipient)の免疫システムの能力が弱まり、造血幹細胞移植の生着は、それを必要とする患者におけて、容易になる。このようにして、本明細書に記載する幹細胞障害、がん、自己免疫疾患、又は他の血液疾患に罹患している患者は、対象において欠陥がある及び／又は欠損している細胞の系統を再定植させるために、造血幹細胞移植を前記対象に施すように、治療を受けることがある。前記対象は、例えば、がん性細胞を根絶する目的で対象に処方したが、その過程において、同様に、正常な造血細胞も減少させてしまう化学療法によって、細胞の集団が欠損することがある。
【０１５３】
ある実施形態では、本明細書に記載する方法において使用することがある抗CD5抗体は、抗体5D7v(Ab5D7v)である。Ab5D7vの重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列を以下に提供する。
【化２７】
2021526525.tif 000116
【０１５４】
Ab5D7vのVH CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである： FSLSTSGMG(VH CDR1；配列番号(SEQ ID NO)： 226)； WWDDD(VH CDR2；配列番号(SEQ ID NO)： 227)；及びRRATGTGFDY(VH CDR3；配列番号(SEQ ID NO)： 228)。
【０１５５】
Ab5D7vの軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を以下に示す：
【化２８】
2021526525.tif 000117
【０１５６】
Ab5D7vのVL CDRアミノ酸配列を下線で示し、以下の通りである： QDVGTA(VL CDR1；配列番号(SEQ ID NO)： 229)； WTSTRHT(VL CDR2；配列番号(SEQ ID NO)： 230)；及びYNSYNT(VL CDR3；配列番号(SEQ ID NO)： 231)。
【０１５７】
別の実施形態では、本明細書に記載する方法及び組成物(ADCを含む)において使用することがある抗CD5抗体は、5D7抗体である（例えば、米国特許出願公開第20080254027A1号を参照のこと、この開示は、本明細書に参照により取り込まれる）。別の実施形態では、本明細書に記載する方法及び組成物(ADCを含む)において使用することがある抗CD5抗体は、5D7抗体のバリアントである（例えば、米国特許出願公開第20080254027A1号を参照のこと、この開示は、本明細書に参照により取り込まれる）。
【０１５８】
抗CD2抗体
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、ヒトCD2に特異的に結合する抗体又はそのフラグメントを含むADCを含む。ヒトCD2は、T-細胞表面抗原T11/Leu-5、T11、CD2抗原(p50)、及びヒツジ赤血球細胞レセプター(SRBC)とも呼ばれる。CD2はT細胞上に発現する。ヒトCD2の2つのアイソフォームが同定されている。アイソフォーム1は、Seed, B. et al. (1987) 84: 3365-69 (Sewell et al. (1986) 83: 8718-22も参照) に記載されている351個のアミノ酸を含有する、及び以下である (NCBI 参照配列: NP_001758.2):
【化２９】
2021526525.tif 000118
【０１５９】
CD2の第2のアイソフォームは、377アミノ酸であり、本明細書中でNCBI参照配列： NP_001315538.1として特定する。
【０１６０】
ある実施形態では、本明細書が開示する方法は、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗CD2抗体を含む抗CD2 ADCを投与することを含む。CD2と結合することができるADCを治療薬剤として使用して、免疫細胞を介したグラフト拒絶反応の可能性を予防する又は減少させることにより、移植療法を必要とする患者において、移植した造血幹細胞が生着することを促進させる。例えば、抗CD2 ADCは、1種以上の非自己の造血幹細胞抗原（例えば、造血幹細胞が発現する1種以上の非自己のMHC抗原等）、と交差反応する及び、に対して免疫反応を開始する、免疫細胞（例えば、T細胞又はNK細胞等）が発現する、細胞表面のCD2に結合することができる。そのような抗体及び抗原結合フラグメントが、造血幹細胞に特異的なCD2+免疫細胞にこのように結合することは、例えば、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity)によって、又は前記抗体若しくはその抗原結合フラグメントにコンジュゲートした細胞毒性薬物の作用によって、その結合した免疫細胞の死を誘導する。このようにして、非自己の造血幹細胞と交差反応するCD2+免疫細胞の集団が減少することにより、入ってくるグラフトに対する免疫反応を開始するレシピエント(recipient)の免疫システムの能力が弱まり、造血幹細胞移植の生着は、それを必要とする患者におけて、容易になる。このようにして、本明細書に記載する幹細胞障害、がん、自己免疫疾患、又は他の血液疾患に罹患している患者は、対象において欠陥がある及び／又は欠損している細胞の系統を再定植させるために、造血幹細胞移植を前記対象に施すように、治療を受けることがある。前記対象は、例えば、がん性細胞を根絶する目的で対象に処方したが、その過程において、同様に、正常な造血細胞も減少させてしまう化学療法によって、細胞の集団が欠損することがある。
【０１６１】
ある実施形態では、本明細書に記載する方法において使用するADCは、本明細書に記載する抗CD2抗体を含むことがある。例えば、ある実施形態では、抗CD2抗体は、以下に提供するような重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列及び軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を含む：
AbA抗CD2(VH)アミノ酸配列
【化３０】
2021526525.tif 000119
(配列番号(SEQ ID NO)： 240)
AbA抗CD2(VL)アミノ酸配列
【化３１】
2021526525.tif 000120
(配列番号(SEQ ID NO)： 241)
【０１６２】
別の実施形態では、前記抗CD2抗体は、以下に提供するような重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列及び軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を含む：
AbB抗CD2(VH)アミノ酸配列
【化３２】
2021526525.tif 000121
(配列番号(SEQ ID NO)： 242)
AbB抗CD2(VL)アミノ酸配列
【化３３】
2021526525.tif 000122
(配列番号(SEQ ID NO)： 243)
【０１６３】
別の実施形態では、前記抗CD2抗体は、以下に提供するような重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列及び軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を含む：
AbC抗CD2(VH)アミノ酸配列
【化３４】
2021526525.tif 000123
(配列番号(SEQ ID NO)： 244)
AbC抗CD2(VL)アミノ酸配列
【化３５】
2021526525.tif 000124
(配列番号(SEQ ID NO)： 245)
【０１６４】
別の実施形態では、前記抗CD2抗体は、以下に提供するような重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列及び軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を含む：
AbD抗CD2(VH)アミノ酸配列
【化３６】
2021526525.tif 000125
(配列番号(SEQ ID NO)： 246)
AbD抗CD2(VL)アミノ酸配列
【化３７】
2021526525.tif 000126
(配列番号(SEQ ID NO)： 247)
【０１６５】
抗CD45抗体
ヒトCD45(mRNA NCBI参照配列： NM_080921.3、タンパク質NCBI参照配列： NP_563578.2)に結合することができる抗体及び抗原結合フラグメント (アイソフォームCD45ROに結合することができるものを含む)を、本明細書中で開示する組成物及び方法と併せて使用して、例えば、造血幹細胞移植療法を必要とする患者における造血幹細胞グラフトの生着を促進させることがある。CD45の複数のアイソフォームは、一次転写産物中の34個のエキソンの選択的スプライシングから生じる。エクソン4、5、6、及び7（可能性有り）のスプライシングによって、複数のCD45のバリエーションが生じる。以下に述べるCD45アイソフォームでは選択的なエキソンの発現が観察される。
【０１６６】
【表２】
2021526525.tif 000127
【０１６７】
選択的スプライシングによって、CD45タンパク質の様々なアイソフォーム(例えば、CD45RA、CD45RAB、CD45RABC)で発現する、個々のエキソン又はエキソンの組合せがもたらされる。対照的に、CD45ROは、エクソン4〜6の発現を欠き、エクソン1〜3及び7〜34の組合せから生成される。エクソン7も前記タンパク質から排除され、エクソン1〜3及び8〜34が一緒にスプライシングされるというエビデンスがある。E3-8と名づけられたこのタンパク質は、mRNAレベルでは検出されているが、現在のところフロー・サイトメトリーによっては同定されていない。
【０１６８】
CD45ROは、現在、造血幹細胞で発現する唯一の既知のCD45アイソフォームである。CD45RA及びCD45RABCは、検出されていないか、造血器幹細胞の表現型から除外されている。CD45RBは胎児の造血幹細胞に発現しているが、成人の骨髄造血幹細胞には存在しないという、マウスで行われた研究からのエビデンスがある。特に、CD45RCには、アジア人集団内で認められる、エクソン6の多型が高い割合である(CD45RCのエクソン6の多型は、日本人集団の約25%に認められる)。この多型によって、CD45ROの高発現及びCD45RA、CD45RB、及びCD45RCのレベルの低下がもたらされる。更に、CD45RAバリアント(例えば、CD45RAB及びCD45RAC等)は、自己免疫疾患と関連しているエクソン4の多型を示す。
【０１６９】
造血幹細胞上にCD45ROが存在すること、及び他の免疫細胞(例えば、T及びBリンパ球サブセット並びに種々の骨髄性細胞等)上のCD45ROの発現が比較的限定的であることによって、CD45ROは、造血幹細胞移植を必要とする患者へのコンディショニング療法のための、特に非常に適したターゲットになる。CD45ROは、エキソン4、5、及び6の発現を欠くのみであるので、免疫原としてそれを使用することによって、パンCD45Ab及びCD45RO特異的な抗体をスクリーニングすることが可能になる。こうして、ある実施形態では、本明細書中で開示する方法において使用する抗CD45 ADCは、ヒトCD45ROに特異的に結合する。
【０１７０】
本明細書に記載する患者コンディショニング方法と共に使用することがある抗CD45抗体は、抗CD45抗体、及びその抗原結合部分を含む。抗体の抗原結合部分は当該分野で周知であり、前記抗体の抗原結合領域に基づいて容易に構築することができる。例示的な実施形態では、本明細書に記載のコンディショニング方法と併せて使用する抗CD45抗体は、モノクローナル抗体若しくはその抗原結合フラグメント、ポリクローナル抗体若しくはその抗原結合フラグメント、ヒト化抗体若しくはその抗原結合フラグメント、完全ヒト抗体若しくはその抗原結合フラグメント、キメラ抗体若しくはその抗原結合フラグメント、バイスペシフィック抗体(bispecific antibody)若しくはその抗原結合フラグメント、二重可変免疫グロブリン・ドメイン、一本鎖Fv分子(scFv)、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体様タンパク質スキャッフォルド、Fvフラグメント、Fabフラグメント、F(ab')2分子、又はタンデムdi-scFv、であることがある。本明細書に記載するADC又は方法において全体的に又は部分的に使用することがある例示的な抗CD45抗体を、以下で提供する。
【０１７１】
ある実施形態では、抗CD45抗体は、BIOLEGEND(登録商標)(カリフォルニア州サンディエゴ)から購入可能なクローンHI30である、若しくはそれに由来する、又はそれらのヒト化バリアントである。抗体のヒト化は、非ヒト抗体の骨格残基及び定常領域残基を、当技術分野で公知の手順に従って(例えば、以下の実施例7に記載されるように)生殖系列ヒト抗体のもので置換することによって行うことができる。本明細書に記載する方法と併せて使用することがある、更なる抗CD45抗体としては、抗CD45抗体ab10558, EP322Y, MEM-28, ab10559, 0.N.125, F10-89-4, HIe-1, 2B11, YTH24.5, PD7/26/16, F10-89-4, 1B7, ab154885, B-A11, phosphor S1007, ab170444, EP350, Y321, GA90, D3/9, X1 6/99, 及び LT45（これらはABCAM(登録商標)(ケンブリッジ、MA)から購入可能である）、又はそれらのヒト化バリアント、が挙げられる。本明細書に記載する患者コンディショニング手順と併せて使用することがある、更なる抗CD45抗体としては、抗CD45抗体HPA000440（これは、SIGMA-ALDRICH(登録商標)(セント・ルイス、MO)から購入可能である）、及びそのヒト化バリアントが挙げられる。本明細書に記載する患者コンディショニング方法と併せて使用することがある、更なる抗CD45抗体としては、マウス・モノクローナル抗体BC8（これは、例えば、Matthews et al., Blood 78:1864-1874, 1991に記載されていて、この開示は、抗CD45抗体に関するものとして、本明細書に参照により取り込まれる）、並びにそのヒト化バリアントが挙げられる。本明細書に記載する方法と併せて使用することがある更なる抗CD45抗体としては、モノクローナル抗体YAML568（これは、例えば、Glatting et al., J. Nucl. Med. 8:1335-1341, 2006に記載されていて、この開示は、抗CD45抗体に関するものとして、本明細書に参照により取り込まれる）、並びにそのヒト化バリアントが挙げられる。本明細書に記載する患者コンディショニング手順と併せて使用することがある、更なる抗CD45抗体としては、モノクローナル抗体YTH54.12及びYTH25.4（これは、例えば、Brenner et al., Ann. N.Y. Acad. Sci. 996:80-88, 2003に記載されていて、この開示は、抗CD45抗体に関するものとして、本明細書に参照により取り込まれる）、並びにそのヒト化バリアントが挙げられる。本明細書に記載する患者コンディショニング方法と併せて使用することがある、更なる抗CD45抗体としては、UCHL1, 2H4, SN130, MD4.3, MBI, 及び MT2（これらは、例えば、Brown et al., Immunology 64:331-336, 1998に記載されていて、この開示は、抗CD45抗体に関するものとして、本明細書に参照により取り込まれる）、並びにそのヒト化バリアントが挙げられる。本明細書に記載する方法と併せて使用することがある更なる抗CD45抗体としては、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション(American Type Culture Collection (ATCC))のアクセッション番号RA3-6132、RA3-2C2、及びTIB122から産生される、及び放出される抗CD45抗体、並びにモノクローナル抗体C363.16A、及び13/2（これらは、例えば、Johnson et al., J. Exp. Med. 169:1179-1184, 1989に記載されていて、この開示は、抗CD45抗体に関するものとして、本明細書に参照により取り込まれる）、並びにそのヒト化バリアントが挙げられる。本明細書に記載する患者コンディショニング方法と併せて使用することがある、更なる抗CD45抗体としては、モノクローナル抗体AHN-12.1、AHN-12、AHN-12.2、AHN-12.3、AHN-12.4、HLe-1、及びKC56(T200) （これらは、例え���、Harvath et al., J. Immunol. 146:949-957, 1991に記載されていて、この開示は、抗CD45抗体に関するものとして、本明細書に参照により取り込まれる）、並びにそのヒト化バリアントが挙げられる。
【０１７２】
本明細書に記載する患者コンディショニング手順と併せて使用することがある、更なる抗CD45抗体としては、例えば、米国特許番号7,265,212（これは、例えば、とりわけ、抗CD45抗体39E11、16C9、及び1G10を記載する）に記載されている抗CD45抗体；米国特許番号7,160,987（これは、例えば、ATCCアクセッション番号HB-11873が産生する及び放出する抗CD45抗体（例えば、モノクローナル抗体6G3等）を記載する）に記載されている抗CD45抗体；及び米国特許番号6,099,838（これは、例えば、抗CD45抗体MT3、並びにATCCアクセッション番号HB220（MB23G2とも呼ばれる）及びHB223が産生する及び放出する抗体を記載する）に記載されている抗CD45抗体、並びにUS 2004/0096901及びUS 2008/0003224（これらは、例えば、ATCCアクセッション番号PTA-7339が産生する及び放出する抗CD45抗体（例えば、モノクローナル抗体17.1等）を記載する）に記載されている抗CD45抗体、が挙げられる（これらの開示は、抗CD45抗体に関するものとして、本明細書に参照により取り込まれる）。
【０１７３】
本明細書に記載する患者コンディショニング手順と併せて使用することがある、更なる抗CD45抗体としては、ATCCアクセッション番号MB4B4、MB23G2、14.8、GAP 8.3、74-9-3、I/24.D6、9.4、4B2、M1/9.3.4.HL.2から生成及び放出される抗体、並びにそれらのヒト化及び／又は親和性成熟バリアントが挙げられる。親和性成熟を、例えば、本明細書に記載するか、又は当該分野で公知のin vitroディスプレイ技術(例えば、以下の実施例６に記載されるようなファージ・ディスプレイ)を使用して実施することがある。
【０１７４】
本明細書に記載する患者コンディショニング手順と併せて使用することがある、更なる抗CD45抗体としては、抗CD45抗体T29/33が挙げられ、これは、例えば、Morikawa et al., Int. J. Hematol. 54:495-504, 1991に記載される（この開示は、抗CD45抗体に関するものとして、本明細書に参照により取り込まれる）。
【０１７５】
ある特定の実施形態では、前記抗CD45抗体は、アパミスタマブ(若しくは、公知の90Y-BC8、Iomab-B、BC8；例えば、US20170326259、WO2017155937、及びOrozco et al. Blood. 127.3 (2016): 352-359.に記載される)、又はBC8-B10(例えば、Li et al. PloS one 13.10 (2018): e0205135に記載される)から選択される（これらの各々は、参照により取り込まれる）。他の抗CD45抗体は、例えば、WO2003/048327, WO2016/016442, US2017/0226209, US2016/0152733, US9,701,756; US2011/0076270, 又は US7,825,222に記載されている（これらの各々は、参照により取り込まれる）。
【０１７６】
例えば、ある実施形態では、前記抗CD45抗体又はその抗原結合フラグメントは、結合領域（例えばCDR、可変領域、アパミスタマブの結合領域に対応する）を含む。アパミスタマブの重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)： 250に記載する。アパミスタマブの軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を、配列番号(SEQ ID NO)： 251に記載する。他の実施形態では、抗CD45抗体、又はその抗原結合部分は、配列番号(SEQ ID NO)： 250に記載のアミノ酸残基を含む可変重鎖、及び配列番号(SEQ ID NO)： 251に記載の軽鎖可変領域を含む。ある実施形態では、前記抗CD45抗体は、アパミスタマブのCDR1、CDR2及びCDR3を含む重鎖、並びにアパミスタマブのCDR1、CDR2及びCDR3を含む軽鎖可変領域を含む。
【０１７７】
別の実施形態では、前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、本明細書中の抗CD45抗体に対して少なくとも95%の同一性、（例えば、本明細書中の抗CD45抗体に対して少なくとも95%、96%、97%、98%、99%、又は100%の同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、本明細書中の抗CD45抗体のHC可変ドメインを含む改変した重鎖(HC)可変領域、又はそのバリアントを含み、このバリアントは、(i)1、2、3、4又は5アミノ酸の置換、付加又は欠失において前記抗CD45抗体と異なる；(ii)多くとも5、4、3、2又は1アミノ酸の置換、付加又は欠失において前記抗CD45抗体と異なる；(iii)1-5、1-3、1-2、2-5又は3-5アミノ酸の置換、付加又は欠失において前記抗CD45抗体と異なる；及び／又は(iv)前記抗CD45抗体と少なくとも約75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%又は99%同一であるアミノ酸配列を含む、ここで、(i)-(iv)のいずれにおいても、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換又は非-保存的アミノ酸置換であってもよい；並びに、ここで、前記改変した重鎖可変領域は、抗CD45抗体のCD45結合特異性を保持しながら、前記抗CD45抗体の重鎖可変領域と比較して増強された生物学的活性を有し得る。
【０１７８】
前記の刊行物の各々の開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。本明細書に記載する組成物及び方法と組み合わせて使用され得る抗体及び抗原結合フラグメントとしては、上記の抗体及びその抗原結合フラグメント、並びに、上記の非ヒト抗体及び抗原結合フラグメントのヒト化バリアント、並びに、例えば、競合CD45結合アッセイによって評価した場合、上記のものと同じエピトープに結合する抗体又は抗原結合フラグメント、が挙げられる。
【０１７９】
ある実施形態では、本明細書中で開示する方法は、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗CD45抗体を含む抗CD45 ADCを投与することを含む。
【０１８０】
抗CD252抗体
いくつかの実施形態では、本明細書に記載する方法は、ヒトCD252(OX40リガンド(OX40L)とも呼ばれる)、タンパク質NCBI参照配列： NP_003317.1；Uniprotアクセッション番号：P23510；に特異的に結合する抗体又はそのフラグメントを含むADCを含む。本明細書中に開示する方法を使用して、抗CD252 ADCを、GVHDを予防する及び治療するための治療薬剤として使用することがある。抗CD252抗体は、単独で使用することがある、又は抗体薬物コンジュゲート(ADC)として細胞毒素にコンジュゲートすることがある。
【０１８１】
ある実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物(ADCを含む)において使用することがある抗CD252抗体は、マウス・モノクローナル抗CD252抗体11C3.1又は前記11C3.1抗体に対応する抗原結合領域を含む抗CD252抗体である。11C3.1(Biolegend CatNo. 326302より販売されている(2019年2月27日))。
【０１８２】
ある実施形態では、抗CD252抗体は、抗CD252抗体11C3.1のCDR1、CDR2及びCDR3を含む重鎖、並びに抗CD252抗体11C3.1のCDR1、CDR2及びCDR3を含む軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、本明細書中に開示する組成物及び方法において使用する抗CD252抗体は、ヒト化11C3.1抗体である。
【０１８３】
ある実施形態では、本明細書に記載する方法及び組成物(ADCを含む)において使用することがある抗CD252抗体は、マウス・モノクローナル抗CD252抗体159403又は159403抗体に対応する抗原結合領域を含む抗CD252抗体である。159403(R&Dシステムより販売されている、カタログ#MAB10541 (2019年2月27日))。
【０１８４】
ある実施形態では、抗CD252抗体は、抗CD252抗体159403のCDR1、CDR2及びCDR3を含む重鎖、並びに抗CD252抗体159403のCDR1、CDR2及びCDR3を含む軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、本明細書中に開示する組成物及び方法において使用する抗CD252抗体は、ヒト化159403抗体である。
【０１８５】
ある実施形態では、本明細書に記載する方法及び組成物(ADCを含む)において使用することがある抗CD252抗体は、マウス・モノクローナル抗CD252抗体159408又は159408抗体に対応する抗原結合領域を含む抗CD252抗体である。159408(R&Dシステムより販売されている、カタログ#MAB1054 (2019年2月27日))。
【０１８６】
ある実施形態では、抗CD252抗体は、抗CD252抗体159408のCDR1、CDR2及びCDR3を含む重鎖、並びに抗CD252抗体159408のCDR1、CDR2及びCDR3を含む軽鎖可変領域を含む。別の実施形態では、本明細書中に開示する組成物及び方法において使用する抗CD252抗体は、ヒト化159408抗体である。
【０１８７】
ある実施形態では、本明細書に記載する方法及び組成物(ADCを含む)において使用することがある抗CD252抗体は、マウス・モノクローナル抗CD252抗体MM0505-8S23、又はMM0505-8S23抗体に対応する抗原結合領域を含む抗CD252抗体である。MM0505-8S23(Novus、カタログ #NBP2-11969より販売されている(2019年2月27日))。この抗体は、ハイブリドーマ（ヒトTNFSF4(OX40リガンドとも呼ばれる)で免疫したマウス由来の脾細胞と融合したマウス骨髄腫）から産生された。
【０１８８】
ある実施形態では、抗CD252抗体は、抗CD252抗体MM0505-8S23のCDR1、CDR2及びCDR3を含む重鎖と、抗CD252抗体MM0505-8S23のCDR1、CDR2及びCDR3を含む軽鎖可変領域とを含む。別の実施形態では、本明細書中に開示する組成物及び方法において使用する抗CD252抗体は、ヒト化MM0505-8S23抗体である。
【０１８９】
ある実施形態では、本明細書に記載する方法及び組成物(ADCを含む)において使用することがある抗CD252抗体は、ウサギ・モノクローナル抗CD252抗体、又はオキセルマブに対応する抗原結合領域を含む抗CD252抗体である。オキセルマブ(Novusより販売されている、カタログ#NBP2-52687-0.1(2019年2月27日))。
【０１９０】
本明細書に記載する、及び本明細書に記載するADCにおいて使用する抗体又はその抗原結合フラグメントは、当該分野において公知であるように、抗体及び／又はフラグメントの特性を変化させる改変及び／又は変異(例えば、半減期を増大させる、ADCCを増大させる、又は低下させるなど)を含むことがある。
【０１９１】
Fc バリアント
ある実施形態では、本明細書に記載する前記抗体又はその結合フラグメントは、バリアントFc領域を含み、ここで、前記バリアントFc領域は、野生型Fc領域に対して少なくとも1つのアミノ酸改変を含み、その結果、前記分子は、FcγRに対する親和性が変わる。前記Fc領域内の特定のアミノ酸位置は、FcγRと直接接触させた結晶学的研究によって分かっている。具体的には、アミノ酸234〜239(ヒンジ領域)、アミノ酸265〜269(B/Cループ)、アミノ酸297〜299(C'/Eループ)、及びアミノ酸327〜332(F/G)ループである。(Sondermann et al、2000 Nature、406: 267-273参照)。例えば、Fc領域のアミノ酸位置234及び235におけるアミノ酸置換は、Fcレセプター、特にFcガンマ・レセプター(FcγR)、への結合に関して、IgG抗体の親和性が減少することとして同定されている。ある実施形態において、本明細書に記載する抗CD117抗体は、L234及び／又はL235におけるアミノ酸置換（例えばL234A及びL235A）を含むFc領域を含む(EUインデックス)。従って、本明細書に記載する前記抗体又はその結合フラグメントは、構造的な及び結晶学的な解析に基づいてFcγRと直接接触する、少なくとも1つの残基が改変されたバリアントFc領域を含むことがある。ある実施形態では、本明細書に記載する前記抗体又はその結合フラグメントのFc領域(又はそのFc領域を含むフラグメント)は、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, NH1, MD (1991) (本明細書に明確に参照により取り込まれる)にあるようなEUインデックスによるアミノ酸265で、アミノ酸置換を含む。「KabatにあるようなEUインデックス」又は「EUインデックス」は、特に別記しない限り、ヒトIgG1 EU抗体の番号付けを指し、本明細書でFcアミノ酸位置を参照する際に使用される。
【０１９２】
ある実施形態では、前記Fc領域は、D265A変異を含む。ある実施形態では、前記Fc領域はD265C変異を含む。
【０１９３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載する前記抗体又はその結合フラグメントのFc領域は、例えばKabatにあるようなEUインデックスによるアミノ酸234でのアミノ酸置換を含む。ある実施形態では、前記Fc領域は、L234A変異を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載する前記抗体又はその結合フラグメントのFc領域は、例えばKabatにあるようなEUインデックスによるアミノ酸235でのアミノ酸置換を含む。ある実施形態では、前記Fc領域は、L235A変異を含む。更に別の実施形態では、前記Fc領域は、L234A及びL235A変異を含む。更なる実施形態では、前記Fc領域は、D265C、L234A、及びL235A変異を含む。
【０１９４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載する抗体又はその抗原結合フラグメントのFc領域は、例えばKabatにあるようなEUインデックスによるアミノ酸239でのアミノ酸置換を含む。ある実施形態では、前記Fc領域はS239C変異を含む。
【０１９５】
ある特定の態様において、バリアントIgG Fcドメインは、1つ以上のアミノ酸置換を含まない野生型Fcドメインと比較して、FcガンマR及び／又はC1qに対する結合親和性が減少する又は無くなるという結果になる、1つ以上のアミノ酸置換を含む。Fc結合相互作用は、様々なエフェクター機能及び下流シグナル伝達イベント（例えば、限定されるものではないが、抗体依存性細胞介在性細胞毒性(antibody dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC))及び補体依存性細胞毒性(complement dependent cytotoxicity (CDC))等を含む）に必須である。従って、特定の態様において、改変されたFc領域を含む抗体(例えば、L234A、L235A、及びD265C変異を含む)では、エフェクター機能が実質的に減少する又は消失する。
【０１９６】
Fc領域に対する親和性は、当該技術分野で公知の様々な技術（例えば、限定されるものではないが、平衡方法（例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ(enzyme-linked immunoabsorbent assay (ELISA))；KinExA、Rathanaswami et al. Analytical Biochemistry, Vol. 373:52-60, 2008；ラジオイムノアッセイ(radioimmunoassay (RIA))）、又は表面プラズモン共鳴アッセイ若しくは他のメカニズムのキネティクスに基づくアッセイ(例えば、BIACORETM解析又はOctet TM解析(forteBIO))、並びに他の方法（例えば、間接結合アッセイ、競合的結合アッセイ、蛍光共鳴エネルギー移動(fluorescence resonance energy transfer (FRET))、ゲル電気泳動及びクロマトグラフィ(例えば、ゲルろ過)）を使用して、測定することができる。これら及び他の方法は、検査対象の1つ以上の成分上にある標識を利用することがあり、及び／又は種々の検出方法（例えば、発色標識、蛍光標識、ルミネセンス標識、又は同位体標識等を含むがこれらに限定されない）を利用することがある。結合親和性及びキネティクスに関する詳細な記載は、Paul, W. E., ed., Fundamental Immunology, 4th Ed., Lippincott-Raven, Philadelphia (1999)（これは抗体-免疫原相互作用に焦点を当てている）に見出すことができる。競合的結合アッセイの一例はラジオイムノアッセイであり、ラジオイムノアッセイは、標識した抗原と目的の抗体とを、非標識抗原の存在量を増加させながら、インキュベートすること、及び標識した抗原に結合した抗体を検出することを含む。特定の抗原に対する目的の抗体の親和性及び結合オフレート(off-rate)を、スキャッチャード・プロット解析によるデータから決定することがある。第2の抗体との競合を、ラジオイムノアッセイを使用して測定することもある。この場合では、非標識の第2の抗体の存在量を増加させながら、前記抗原を、標識した化合物にコンジュゲートした目的の抗体とインキュベートする。
【０１９７】
ある実施形態では、本明細書に記載する抗体又はその抗原結合フラグメントは、L235A、L235A、及びD265C(EUインデックス)を含むFc領域を含む。本発明の抗体は、更に手を加えて、例えば(Dall'Acqua et al.(2006)J Biol Chem 281: 23514-24)、(Zalevsky et al.(2010)Nat Biotechnol 28: 157-9)、(Hinton et al.(2004)J Biol Chem 279: 6213-6)、(Hinton et al.(2006)J Immunol 176: 346-56)、(Shields et al.(2001)J Biol Chem 276: 6591-604)、(Petkova et al.(2006)Int Immunol 18: 1759-69)、(Datta-Mannan et al.(2007)Drug Metab Dispos 35: 86-94)、(Vaccaro et al.(2005)Nat Biotechnol 23: 1283-8)、(Yeung et al. (2010)Cancer Res 70: 3269-77)及び(Kim et al. (1999)Eur J Immunol 29: 2819-25)に記載のFc変異のようなFc変異を更に導入することによって、抗体の半減期を更に調節することがあり、並びに位置250、252、253、254、256、257、307、376、380、428、434及び435を含むことがある。単独で又は組み合わせて作製され得る例示的な変異は、T250Q、M252Y、1253A、S254T、T256E、P2571、T307A、D376V、E380A、M428L、H433K、N434S、N434A、N434H、N434F、H435A及びH435R変異である。
【０１９８】
従って、ある実施形態では、前記Fc領域は、半減期の低下をもたらす変異を含む。短い半減期を有する抗体は、抗体が短命の治療薬として機能することが期待される一定の例、例えば、抗体を投与し、続いてHSCを投与する本明細書に記載するコンディショニング工程において、有益であり得る。理想的には、前記HSCを投与する前に、前記抗体は実質的にクリアランスされるべきである。ある実施形態では、前記Fc領域は、位置435（KabatによるEUインデックス）に変異を含む。ある実施形態では、前記変異はH435A変異である。
【０１９９】
ある実施形態では、本明細書に記載する抗体又はその抗原結合フラグメントは、L235A、L235A、D265C、及びH435A(EUインデックス)を含むFc領域を含む。
【０２００】
ある実施形態では、本明細書に記載する抗体又はその抗原結合フラグメントは、約24時間以下、約22時間以下、約20時間以下、約18時間以下、約16時間以下、約14時間以下、約13時間以下、約12時間以下、約11時間以下、約10時間以下、約9時間以下、約8時間以下、約7時間以下、約6時間以下、約5時間以下、約4時間以下、約3時間以下、約2時間以下、又は約1時間以下の半減期を有する。ある実施形態では、前記抗体の半減期は、約10時間〜24時間；約11時間〜22時間；約12時間〜20時間；約14時間〜18時間；又は約15時間〜16時間である。
【０２０１】
抗体薬物コンジュゲート(ADC)
本明細書中に開示する方法において使用する抗体薬物コンジュゲート(ADC)は、以下に記載するような細胞毒素及びリンカーを含むADCを含む。特に、その化合物は細胞毒性部分(又は細胞毒素)にコンジュゲートした(即ち、リンカーによって共有結合した)抗体(又はその抗原結合フラグメント)を含む、ここで、前記細胞毒性部分は、抗体にコンジュゲートしていない場合、細胞傷害性作用又は細胞増殖抑制作用を有する。様々な実施形態では、前記細胞毒性部分は、コンジュゲートとして結合している場合、細胞傷害性が減少する、又は細胞傷害性が無くなるが、前記リンカーから切断された後に細胞傷害性が復元する。様々な実施形態では、前記細胞毒性部分は、前記リンカーから切断されること無しに、細胞傷害性を維持する。いくつかの実施形態では、細胞毒性分子は、前記抗体又はその抗原結合フラグメントが細胞取り込まれた後に、前記細胞毒素がその細胞内標的に接近し、例えば、造血細胞死を媒介し得るように、本明細書中に開示するような細胞内在化抗体又はその抗原結合フラグメントにコンジュゲートしている。
【０２０２】
従って、本発明の薬剤-抗体コンジュゲート(ADC)は、一般式Iであることがある、ここで、抗体又はその抗原結合フラグメント(Ab)が化学的な部分構造(Z)を介してリンカー(L)に、細胞毒性部分(「薬剤」、D)に、コンジュゲート(共有結合)している。
[化３８]
Ab-(Z-L-D)n        (I)
【０２０３】
従って、前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、抗体当たりの細胞毒素の平均の数を表す整数n、によって示されるような多数の薬物部分に結合していることがある、これは、例えば約1〜約20の範囲であることがある。いくつかの実施形態では、nは1〜4である。いくつかの実施形態では、nは1である。コンジュゲーション反応から調製されたADC中の抗体当たりの薬物部分の平均個数は、マス・スペクトロスコピー、ELISAアッセイ、及びHPLCのような従来の方法によって明らかにすることがある。nに関するADCの定量的な分布を測定することができる。場合によっては、nが特定の数値である均質なADCを、他の薬物搭載量を有するADCから、分離する、精製する、及び特性評価をすることは、逆相HPLC又は電気泳動のような方法によって、達成することができる。
【０２０４】
いくつかの抗体-薬物コンジュゲートについて、nは、抗体上の結合部位の数によって制限され得る。例えば、結合がシステインのチオールである場合、抗体は1個又は数個のシステインのチオール基しかもたない、又はリンカーが結合するのに十分な反応性をもつチオール基を1個又は数個しかもたない。一般に、抗体は、薬物部分に結合することができる遊離及び反応性システイン基を多くは含まない；主に、抗体中のシステインのチオール残基は、ジスルフィド架橋として存在する。ある特定の実施形態では、抗体を、ジチオトレイトール(DTT)又はトリカルボニルエチルホスフィン(TCEP)などの還元剤で還元して、部分的又は全還元条件下で、反応性システインのチオール基を生成させることができる。ある特定の実施形態では、より高く薬物を搭載させると(例えば、n>5)、特定の抗体-薬物コンジュゲートの凝集性、不溶性、毒性が引き起こされる、又は細胞透過性が失われることが引き起されることがある。
【０２０５】
ある特定の実施形態では、コンジュゲーション反応の間に、薬物部分の理論上の最大よりも少ない薬物が、抗体にコンジュゲートする。抗体は、例えば、以下に論じるように、薬剤-リンカー中間体又はリンカー試薬と反応しないリジン残基を含むことがある。最も反応性の高いリジン基のみがアミン反応性リンカー試薬と反応することができる。ある特定の実施形態では、抗体を、変性条件下に供し、リジン又はシステインのような反応性求核基を表に出す。
【０２０６】
ADCの搭載(薬剤／抗体比)を、種々の方法で（例えば、(i)抗体に対する、薬物-リンカー中間体又はリンカー試薬のモル過剰を制限すること、(ii)コンジュゲーション反応の時間又は温度を制限すること、(iii)システインのチオール修飾のために、部分的又は制限的な還元条件下にすること、(iv)リンカー-薬物結合の数及び／又は位置をコントロールするために、システイン残基の数及び位置を改変するように、抗体のアミノ酸配列を組換え技術によって操作すること）、コントロールすることがある。
【０２０７】
細胞毒素
本明細書に記載の組成物及び方法と共に使用するのに適した細胞毒素（薬物）には、当該技術分野において公知の、とりわけ、DNA-インターカレーティング剤(例えば、アントラサイクリン)、紡錘体装置を破壊することができる薬剤(例えば、ビンカ・アルカロイド、メイタンシン、メイタンシノイド、及びその誘導体)、RNAポリメラーゼ阻害剤(例えば、α-アマニチン等のアマトキシン、及びその誘導体)、並びにタンパク質生合成を破壊することができる薬剤(例えば、サポリン及びリシンA鎖等のrRNA N-グリコシダーゼ活性を示す薬剤)が含まれる。
【０２０８】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、微小管結合剤(例えば、メイタンシン又はメイタンシノイド)、アマトキシン、シュードモナス外毒素A、deブーガニン、ジフテリア毒素、サポリン、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、SN-38、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、インドリノベンゾジアゼピン二量体、又はそのバリアント、又は本明細書に記載する若しくは当該技術分野で公知の他の細胞毒性化合物である。
【０２０９】
いくつかの実施形態では、抗体-薬物コンジュゲートの細胞毒素は、RNAポリメラーゼ阻害剤である。いくつかの実施形態では、前記RNAポリメラーゼ阻害剤は、アマトキシン又はその誘導体である。いくつかの実施形態では、本明細書中で開示する抗体-薬物コンジュゲートの細胞毒素は、アマトキシン又はその誘導体（例えば、α-アマニチン、β-アマニチン、γ-アマニチン、ε-アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、プロアマヌリン又はその誘導体など）である。
【０２１０】
アマトキシン
いくつかの実施形態では、前記RNAポリメラーゼ阻害剤は、アマトキシン又はその誘導体である。いくつかの実施形態では、本明細書中で開示する抗体-薬物コンジュゲートの細胞毒素は、アマトキシン又はその誘導体（例えば、α-アマニチン、β-アマニチン、γ-アマニチン、ε-アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、プロアマヌリン又はその誘導体など）である。種々の天然に存在するアマトキシンの構造は、式II及び一緒に提示する表２によって表される、及び、例えば、Zanotti et al., Int. J. Peptide Protein Res. 30, 1987, 450-459に開示される。
【化３９】
2021526525.tif 000128
【０２１１】
【表３】
2021526525.tif 000129
【０２１２】
アマトキシン又はその誘導体上の多くの位置は、連結部分Lと共有結合する位置としての役割を果たすことができる、及びそれ故に、前記抗体、又はその抗原結合フラグメントと共有結合する位置としての役割を果たすことができる。いくつかの実施形態では、式IのADC中の細胞毒素は、式(III)で表されるアマトキシン又はその誘導体である：
【化４０】
2021526525.tif 000130
ここで：
R1はH、OH、ORA、又はORCである；
R2はH、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、5員ヘテロシクロアルキル基を形成する；
R3はH、RC、又はRDである；
R4、R5,  R6、及びR7は、それぞれ独立してH、OH、ORC、ORD、RC、又はRDである；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、又はNRCRDである；
R9はH、OH、ORC、又はORDである；
Qは-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；
RCは、-L-Z'又は-L-Z-Abである、ここで、Lはリンカーである、Z'は反応性部分構造である、ZはZ'とAb上の官能基とのカップリング反応から生じる化学的な部分構造である；並びに、
RDは、C1-C6アルキル、C1-C6ヘテロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6ヘテロアルケニル、C2-C6アルキニル、C2-C6ヘテロアルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、又は組み合わせである、ここで、各C1-C6アルキル、C1-C6ヘテロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6ヘテロアルケニル、C2-C6アルキニル、C2-C6ヘテロアルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリールは、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリル、アルキル・ヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロからなる群よりそれぞれ独立して選択される1〜5個の置換基で、任意選択的に置換されている。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、式(IIIA)で表されるアマトキシンである：
【化４１】
2021526525.tif 000131
【０２１４】
いくつかの実施形態では、前記アマトキシンは1個のRC置換基を含む。
【０２１５】
いくつかの実施形態では、RA 及びRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、次式の5員ヘテロシクロアルキル基を形成する：
【化４２】
2021526525.tif 000132
ここで、Yは-(C=O)-、-(C=S)-、-(C=NRE)-, 又は-(CRERE’)-である；並びに
RE及びRE’は、それぞれ独立して、H、C1-C6アルキレン-RC、C1-C6ヘテロアルキレン-RC、C2-C6アルケニレン-RC、C2-C6ヘテロアルケニレン-RC、C2-C6アルキニレン-RC、C2-C6ヘテロアルキニレン-RC、シクロアルキレン-RC、ヘテロシクロアルキレン-RC、アリーレン-RC、若しくはヘテロアリーレン-RC、又はそれらの組み合わせである；ここで、各C1-C6アルキレン-RC、C1-C6ヘテロアルキレン-RC、C2-C6アルケニレン-RC、C2-C6ヘテロアルケニレン-RC、C2-C6アルキニレン-RC、C2-C6ヘテロアルキニレン-RC、シクロアルキレン-RC、ヘテロシクロアルキレン-RC、アリーレン-RC、若しくはヘテロアリーレン-RCは、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリル、アルキル・ヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロからなる群よりそれぞれ独立して選択される1〜5個の置換基で、任意選択的に置換されている。
【０２１６】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、式IIIAによって表されるアマトキシン又はその誘導体である、ここで、
R1はH、OH、ORA、又はORCである；
R2はH、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、以下を形成する：
【化４３】
2021526525.tif 000133
ここで、
R3はH又はRCである。
【０２１７】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、式IIIAによって表されるアマトキシン又はその誘導体である、ここで、
R1はH、OH、ORA、又はORCである；
R2はH、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、以下を形成する：
【化４４】
2021526525.tif 000134
ここで、
R3はH又はRCである；
R4及びR5は、それぞれ独立してH、OH、ORC、RC、又はORDである；
R6及びR7は、それぞれHである；
R8は、OH、NH2、ORC、又はNHRCである；
R9はH又はOHである；並びに、
ここで、RC及びRDは、上記で定義した通りである。
【０２１８】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、式IIIAによって表されるアマトキシン又はその誘導体である、ここで、
R1はH、OH、又はORAである；
R2はH、OH、又はORBである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、以下を形成する：
【化４５】
2021526525.tif 000135
ここで、
R3、R4、R6、及びR7はそれぞれHである；
R5がORCである；
R8がOH又はNH2である；
R9がH又はOHである；
Qは-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；並びに、
ここで、RC 及びRDは、上記で定義した通りである。このようなアマトキシン・コンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第2016/0002298号に記載されており、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２１９】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、式IIIAによって表されるアマトキシン又はその誘導体である、ここで、
R1及びR2は、それぞれ独立してH又はOHである；
R3は、RCである；
R4、R6、及びR7は、それぞれHである；
R5は、H、OH、又はOC1-C6アルキルである；
R8は、OH又はNH2である；
R9は、H又はOHである；
Qは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；並びに、
ここで、RC 及びRDは、上記で定義した通りである。このようなアマトキシン・コンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第2014/0294865号に記載されており、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２２０】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、式IIIAによって表されるアマトキシン又はその誘導体である、ここで、
R1及びR2は、それぞれ独立してH又はOHである；
R3、R6、及びR7は、それぞれHである；
R4とR5は、それぞれ独立してH、OH、ORC、又はRCである；
R8は、OH又はNH2である；
R9は、H又はOHである；
Qは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；並びに、
ここで、RC 及びRDは、上記で定義した通りである。このようなアマトキシン-リンカー・コンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第2015/0218220号に記載されており、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２２１】
ある実施形態では、図５(Z'-L-D)に示されるアマトキシン-リンカーは、コンジュゲートして、本明細書中に開示する方法において使用するためのADCになる。
【０２２２】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、式IIIAによって表されるアマトキシン又はその誘導体である、ここで、
R1及びR2は、それぞれ独立してH又はOHである；
R3、R6、及びR7は、それぞれHである；
R4とR5は、それぞれ独立してH、又はOHである；
R8は、OH、NH2、ORC、又はNHRCである；
R9はH又はOHである；
Qは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；並びに、
ここで、RC 及びRDは、上記で定義した通りである。このようなアマトキシン・コンジュゲートは、例えば、米国特許第9,233,173 及び9,399,681号に記載されており、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２２３】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、式IIIBによって表されるアマトキシン又はその誘導体である:
【化４６】
2021526525.tif 000136
ここで：
R1はH、OH、ORA、又はORCである；
R2はH、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、5員ヘテロシクロアルキル基を形成する；
R3はH、RC、又はRDである；
R4、R5,  R6、及びR7は、それぞれ独立してH、OH、ORC、ORD、RC、又はRDである；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、又はNRCRDである；
R9はH、OH、ORC、又はORDである；
Qは-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；
RCは、-L-Z'又は-L-Z-Abである、ここで、Lはリンカーである、Z'は反応性部分構造である、ZはZ'とAb上の官能基とのカップリング反応から生じる化学的な部分構造である；並びに、
RDは、C1-C6アルキル、C1-C6ヘテロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6ヘテロアルケニル、C2-C6アルキニル、C2-C6ヘテロアルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、又は組み合わせである、ここで、各C1-C6アルキル、C1-C6ヘテロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6ヘテロアルケニル、C2-C6アルキニル、C2-C6ヘテロアルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリールは、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリル、アルキル・ヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロからなる群よりそれぞれ独立して選択される1〜5個の置換基で、任意選択的に置換されている。
【０２２４】
いくつかの実施形態では、RA 及びRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、次式の5員ヘテロシクロアルキルを形成する：
【化４７】
2021526525.tif 000137
ここで、Yは-(C=O)-、-(C=S)-、-(C=NRE)-, 又は-(CRERE’)-である；並びに
RE及びRE’は、それぞれ独立して、H、C1-C6アルキレン-RC、C1-C6ヘテロアルキレン-RC、C2-C6アルケニレン-RC、C2-C6ヘテロアルケニレン-RC、C2-C6アルキニレン-RC、C2-C6ヘテロアルキニレン-RC、シクロアルキレン-RC、ヘテロシクロアルキレン-RC、アリーレン-RC、若しくはヘテロアリーレン-RC、又はそれらの組み合わせである、ここで、各C1-C6アルキレン-RC、C1-C6ヘテロアルキレン-RC、C2-C6アルケニレン-RC、C2-C6ヘテロアルケニレン-RC、C2-C6アルキニレン-RC、C2-C6ヘテロアルキニレン-RC、シクロアルキレン-RC、ヘテロシクロアルキレン-RC、アリーレン-RC、若しくはヘテロアリーレン-RCは、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリル、アルキル・ヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、ヒドロキシル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、及びニトロからなる群よりそれぞれ独立して選択される1〜5個の置換基で、任意選択的に置換されている。
【０２２５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載する抗体又はその抗原結合フラグメントは、式IIIBによって表されるアマトキシン-リンカー・コンジュゲート又はその誘導体にコンジュゲートする、ここで、
R1はH、OH、ORA、又はORCである；
R2はH、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、次式の5員ヘテロシクロアルキルを形成する：
【化４８】
2021526525.tif 000138
ここで、
R3はH又はRCである。
【０２２６】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、式IIIBによって表されるアマトキシン又はその誘導体である、ここで、
R1はH、OH、ORA、又はORCである；
R2はH、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、次式の5員ヘテロシクロアルキル基を形成する：
【化４９】
2021526525.tif 000139
ここで、
R3はH又はRCである；
R4及びR5は、それぞれ独立してH、OH、ORC、RC、又はORDである；
R6及びR7は、それぞれHである；
R8は、OH、NH2、ORC、又はNHRCである；
R9はH又はOHである；並びに、
ここで、RC及びRDは、上記で定義した通りである。
【０２２７】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、式IIIBによって表されるアマトキシン又はその誘導体である、ここで、
R1はH、OH、又はORAである；
R2はH、OH、又はORBである；
RA 及びRBは、存在する場合、それらが結合している酸素原子と一緒になって、次式の5員ヘテロシクロアルキル基を形成する：
【化５０】
2021526525.tif 000140
ここで、
R3、R4、R6、及びR7はそれぞれHである；
R5がORCである；
R8がOH又はNH2である；
R9がH又はOHである；
Qは-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；並びに、
ここで、RC 及びRDは、上記で定義した通りである。このようなアマトキシン-リンカー・コンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第2016/0002298号に記載されており、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２２８】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、式IIIBによって表されるアマトキシン又はその誘導体である、ここで、
R1及びR2は、それぞれ独立してH又はOHである；
R3は、RCである；
R4、R6、及びR7は、それぞれHである；
R5は、H、OH、又はOC1-C6アルキルである；
R8は、OH又はNH2である；
R9は、H又はOHである；
Qは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；並びに、
ここで、RC 及びRDは、上記で定義した通りである。このようなアマトキシン・コンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第2014/0294865号に記載されており、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２２９】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、式IIIBによって表されるアマトキシン又はその誘導体である、ここで、
R1及びR2は、それぞれ独立してH又はOHである；
R3、R6、及びR7は、それぞれHである；
R4とR5は、それぞれ独立してH、OH、ORC、又はRCである；
R8は、OH又はNH2である；
R9は、H又はOHである；
Qは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；並びに、
ここで、RC 及びRDは、上記で定義した通りである。このようなアマトキシン-リンカー・コンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第2015/0218220号に記載されており、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２３０】
いくつかの実施形態では、前記細胞毒素は、式IIIBによって表されるアマトキシン又はその誘導体である、ここで、
R1及びR2は、それぞれ独立してH又はOHである；
R3、R6、及びR7は、それぞれHである；
R4とR5は、それぞれ独立してH、又はOHである；
R8は、OH、NH2、ORC、又はNHRCである；
R9はH又はOHである；
Qは、-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；並びに、
ここで、RC 及びRDは、上記で定義した通りである。このようなアマトキシン-リンカー・コンジュゲートは、例えば、米国特許第9,233,173 及び9,399,681号に記載されており、この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２３１】
アウリスタチン
本明細書に記載する抗体及びその抗原結合フラグメントは、アウリスタチンである細胞毒素にコンジュゲートしていることがある(米国特許第5,635,483号;第5,780,588号)。アウリスタチンは、微小管動態、GTP加水分解、核分裂及び細胞分裂を妨げる抗有糸分裂剤であり(Woyke et al (2001) Antimicrob. Agents and Chemother. 45(12):3580-3584)、並びに抗がん活性(米国特許第5,663,149号)及び抗真菌活性(Pettit et al (1998) Antimicrob. Agents Chemother. 42:2961-2965). (米国特許第5,635,483; 5,780,588号)を有する。アウリスタチン薬物部分は、ペプチド薬物部分のN(アミノ)末端又はC(カルボキシル)末端を介して、抗体に結合することがある(WO02/088172)。
【０２３２】
例示的なアウリスタチンの実施形態は、N末端結合モノメチル・アウリスタチン薬物部分DE及びDFを含み、これらは、Senter et al, Proceedings of the American Association for Cancer Research, Volume 45, Abstract Number 623, 2004年3月28日に開示されている（この開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる）。
【０２３３】
例示的なアウリスタチンの実施形態はMMAEであり、ここで、その波線は、抗体-リンカー・コンジュゲート(本明細書で記載されるように、-L-Z-Ab又は-L-Z')のリンカーへの共有結合の位置を示す。
【化５１】
2021526525.tif 000141
【０２３４】
別の例示的なアウリスタチンの実施形態はMMAFであり、ここで、その波線は、US 2005/0238649で開示されているように、抗体-リンカー・コンジュゲート(本明細書で記載されるように、-L-Z-Ab又は-L-Z')のリンカーへの共有結合の位置を示す：
【化５２】
2021526525.tif 000142
【０２３５】
アウリスタチンは以下の方法に従って調製することができる：米国特許第5,635,483号；米国特許第5,780,588；Pettit et al (1989) J. Am. Chem. Soc. 111:5463-5465; Pettit et al (1998) Anti-Cancer Drug Design 13:243-277; Pettit, G. R., et al. Synthesis, 1996, 719-725; Pettit et al (1996) J. Chem. Soc. Perkin Trans. 15:859-863; 及び Doronina (2003) Nat. Biotechnol. 21(7):778-784。
【０２３６】
メイタンシノイド
本明細書に記載する抗体及びその抗原結合フラグメントは、微小管結合剤である細胞毒素にコンジュゲートしていることがある。いくつかの実施形態では、前記微小管結合剤は、メイタンシン、メイタンシノイド又はメイタンシノイド類似体である。メイタンシノイドは微小管と結合し、チューブリン重合を阻害することによって作用する有糸分裂阻害剤である。メイタンシンは最初に、東アフリカ低木Maytenus serrataから単離された(米国特許第3,896,111号)。続いて、特定の微生物もまた、メイタンシノイド(例えば、メイタンシノール及びC-3メイタンシノール・エステル)を産生することが発見された(米国特許第4,151,042号)。合成メイタンシノール、並びにその誘導体及びその類似体は例えば、米国特許4,137,230; 4,248,870; 4,256,746; 4,260,608; 4,265,814; 4,294,757; 4,307,016; 4,308,268; 4,308,269; 4,309,428; 4,313,946; 4,315,929; 4,317,821; 4,322,348; 4,331,598; 4,361,650; 4,364,866; 4,424,219; 4,450,254; 4,362,663; 及び 4,371,533 号において開示されている。メイタンシノイドの薬物部分は、抗体薬物コンジュゲートにおいて魅力的な薬物部分である。なぜならば、メイタンシノイドの薬物部分は：(i)発酵又は、発酵産物の化学修飾、誘導体化によって調製することに、比較的アクセス可能である、(ii)非ジスルフィド・リンカーを介した抗体へのコンジュゲートに適した官能基による誘導体化がやり易い、(iii)血漿中で安定である、及び(iv)種々の腫瘍細胞株に対して効果的である、からである。
【０２３７】
好適なメイタンシノイドの例としては、メイタンシノール、合成メイタンシノール、並びにメイタンシノール類似体及び誘導体、のエステルが挙げられる。メイタンシノイド、メイタンシノール、並びにメイタンシノール類似体、及び誘導体のように、微小管形成を阻害し、哺乳動物細胞に対して非常に毒性である、任意の細胞毒素が本明細書に含まれる。
【０２３８】
好適なメイタンシノール・エステルの例としては、修飾された芳香環を有するもの、及び他の位置に修飾を有するものが含まれる。そのような好適なメイタンシノイドは、米国特許第4,137,230; 4,151,042; 4,248,870; 4,256,746; 4,260,608; 4,265,814;  4,294,757; 4,307,016; 4,308,268; 4,308,269; 4,309,428; 4,313,946; 4,315,929; 4,317,821; 4,322,348; 4,331,598; 4,361,650; 4,362,663; 4,364,866; 4,424,219 ;4,450,254; 4,322,348; 4,362,663; 4,371,533; 5,208,020; 5,416,064; 5,475,092; 5,585,499; 5,846,545; 6,333,410; 7,276,497; 及び 7,473,796号に開示されており、これらの各々は、メイタンシノイド及びその誘導体に関連するものとして、本明細書に参照により取り込まれる。
【０２３９】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体-薬物コンジュゲート(ADC)は、細胞毒性薬物として、チオール含有メイタンシノイド(DM1)（正式にはN2'-デアセチル-N2'-(3-メルカプト-1-オキソプロピル)-メイタンシンと呼ばれる）を利用する。DM1は、以下の構造式Vで表される：
【化５３】
2021526525.tif 000143
【０２４０】
別の実施形態において、本発明のコンジュゲートは、チオール含有メイタンシノイドN2'-デアセチル-N2'(4-メチル-4-メルカプト-1-オキソペンチル)-メイタンシン(例えば、DM4)を細胞毒性薬物として利用する。DM4は、以下の構造式VIで表される：
【化５４】
2021526525.tif 000144
【０２４１】
立体障害チオール結合を含む側鎖を含む別のメイタンシノイドは、N2'-デアセチル-N-2'(4-メルカプト-1-オキソペンチル)-メイタンシン(DM3と呼ばれる)であり、以下の構造式VIIで表される：
【化５５】
2021526525.tif 000145
【０２４２】
米国特許第5,208,020 及び 7,276,497が教示する各メイタンシノイドを、本発明のコンジュゲートにおいて使用することもある。この点に関して、5,208,020及び7,276,697の開示全体は、本明細書に参照により取り込まれる。
【０２４３】
メイタンシノイド上の多くの位置は、連結部分と共有結合する位置としての役割を果たすことができる、及び、それ故に前記抗体又はその抗原結合フラグメントと共有結合する位置としての役割を果たすことができる（本明細書に記載するように、-L-Z-Ab又は-L-Z'）。例えば、ヒドロキシル基を有するC-3位、ヒドロキシメチルで修飾されたC-14位、ヒドロキシで修飾されたC-15位、及びヒドロキシ基を有するC-20位は、全て有用であると予想される。いくつかの実施形態では、前記C-3位は、連結部分と共有結合する位置としての役割をし、いくつかの特定の実施形態では、メイタンシノールのC-3位が、連結部分と共有結合する位置としての役割をする。抗体-メイタンシノイド・コンジュゲートを作製するために、当該技術分野で知られている多くの連結基が存在し、例えば、それらは、米国特許第5,208,020、6,441,163、及び欧州特許第0425235 B1; Chari et al., Cancer Research 52:127-131 (1992); 並びに U.S. 2005/0169933 A1に開示されているもの等を含む（これらの開示は、本明細書に明確に参照により取り込まれる）。更なる結合基は、本明細書に記載され、例示される。
【０２４４】
本発明はまた、メイタンシノイド及びコンジュゲートの種々の異性体及び混合物を含む。本発明の特定の化合物及びコンジュゲートは、種々の立体異性体、鏡像異性体、及びジアステレオマーの形態で存在することがある。このような抗体-メイタンシノイド・コンジュゲートを生成することは、米国特許5,208,020、5,416,064、6,333,410、6,441,163、6,716,821、及び7,368,565に記載されている(これらの各々は、その全体が本明細書に取り込まれる)。
【０２４５】
アントラサイクリン
他の実施形態において、本明細書に記載する抗体及びその抗原結合フラグメントは、アントラサイクリン分子である細胞毒素にコンジュゲートしていることがある。アントラサイクリンは、細胞傷害活性を示す抗生物質化合物である。研究によれば、アントラサイクリンは、以下を含む多数の異なるメカニズムによって、細胞を死滅させることがあることが示されてきている： 1)前記薬物分子が細胞のDNAにインターカレーションすることによって、DNA依存性の核酸合成を阻害すること；2) 薬物によるフリーラジカルの産生、フリーラジカルは、次いで細胞性高分子と反応して細胞に損傷を引き起こす、又は3)薬物分子と細胞膜との相互作用[例えば、C. Peterson et al.," Transport And Storage Of Anthracycline In Experimental Systems And Human Leukemia" in Anthracycline Antibiotics In Cancer Therapy;N.R. Bachur, "Free Radical Damage" id. at pp.97-102を参照のこと]。細胞毒性の可能性があるため、白血病、乳がん、肺がん、卵巣腺がん及び肉腫のような多数のがんの治療にアントラサイクリンが用いられている[例えば、P.H- Wiernik, in Anthracycline: Current Status And New Developments p 11を参照]。一般的に使用されるアントラサイクリンには、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン及びダウノマイシンが含まれる。
【０２４６】
アントラサイクリン類似体であるドキソルビシン(ADRIAMYCINO)は、インターカレーションによってDNAと相互作用し、及び転写のためにDNAをほどく酵素トポイソメラーゼIIが進むことを阻害する、と考えられている。ドキソルビシンは、トポイソメラーゼII複合体を、複製のためにDNA鎖を切断した後に安定化させ、DNA二重らせんが再び閉じることを防ぎ、それによって複製のプロセスを止める。ドキソルビシン及びダウノルビシン(DAUNOMYCIN)は、プロトタイプの細胞毒性天然物アントラサイクリン化学療法剤である（Sessa et al., (2007) Cardiovasc. Toxicol. 7:75-79）。
【０２４７】
ピロロベンゾジアゼピン(PBDs)
他の実施形態では、本明細書に記載する抗体又はその抗原結合フラグメントは、ピロロベンゾジアゼピン(PBD)である細胞毒素、又はPBDを含む細胞毒素にコンジュゲートしていることがある。PBDはある特定の放線菌によって産生される天然物であり、配列選択的なDNAアルキル化化合物であることが示されてきている。PBD細胞毒素としては、限定されるものではないが、アントラマイシン、二量体PBD、及び、例えば、Hartley, J.A. (2011). “The development of pyrrolobenzodiazepines as antitumour agents.”  Expert Opin. Inv. Drug, 20(6), 733-744; 及び Antonow, D.; Thurston, D.E. (2011) “Synthesis of DNA-interactive pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepines (PBDs).” Chem. Rev. 111: 2815-2864の中で開示されているものが挙げられる。
【０２４８】
PBDは一般的な構造が以下である：
【化５６】
2021526525.tif 000146
。
【０２４９】
いくつかの実施形態では、本発明で使用する細胞毒素は、以下の構造式で表される二量体である：
【化５７】
2021526525.tif 000147
ここで、波線は、本明細書に記載する場合、ADCのリンカーへの共有結合の位置を示す。
【０２５０】
いくつかの実施形態では、本発明で使用する細胞毒素は、以下の構造式で表される二量体である：
【化５８】
2021526525.tif 000148
ここで、「**」は、本明細書に記載する場合、ADCのリンカーへの共有結合の位置を示す。
【０２５１】
いくつかの実施形態では、本発明で使用する細胞毒素は、以下の構造式で表される二量体である：
【化５９】
2021526525.tif 000149
ここで、「**」は、本明細書に記載する場合、ADCのリンカーへの共有結合の位置を示す。
【０２５２】
いくつかの実施形態では、意図するADCのリンカー及び細胞毒素部分、即ち意図するADCの「リンカー-細胞毒素」部分を、タリリン又はテシリンから選択することがある。
【０２５３】
カリケアマイシン
他の実施形態において、本明細書に記載する抗体及びその抗原結合フラグメントは、カリケアマイシン分子である細胞毒素にコンジュゲートしていることがある。カリケアマイシン・ファミリーの抗生物質は、ピコモル未満の濃度で、二本鎖DNAを切断することができる。カリケアマイシン・ファミリーのコンジュゲートの調製については、米国特許第5,712,374; 5,714,586; 5,739,116; 5,767,285; 5,770,701; 5,770,710; 5,773,001; 及び 5,877,296号を参照のこと（全てAmerican Cyanamid Companyに関する）。使用され得るカリケアマイシンの構造類似体としては、限定されるものではないが、例えば、Hinman et al., Cancer Research 53:3336-3342 (1993), Lode et al., Cancer Research 58:2925-2928 (1998), 及びAmerican Cyanamidに関する上記の米国特許、に開示されているものが挙げられる。
【０２５４】
追加の細胞毒素
他の実施形態では、本明細書に記載する抗体及びその抗原結合フラグメントを、本明細書において上記で開示される細胞毒素以外の、又はそれに加えた細胞毒素に、コンジュゲートすることがある。本明細書に記載する組成物及び方法と共に使用するのに適した追加の細胞毒素としては、限定されるものではないが、5-エチニルウラシル、アビラテロン(abiraterone)、アシルフルベン(acylfulvene)、アデシペノール(adecypenol)、アドゼレシン(adozelesin)、アルデスロイキン(aldesleukin)、アルトレタミン(altretamine)、アンバムスチン(ambamustine)、アミドックス(amidox)、アミフォスチン(amifostine)、アミノレブリン酸(aminolevulinic acid)、アムルビシン(amrubicin)、アムサクリン(amsacrine)、アナグレリド(anagrelide)、アナストロゾール(anastrozole)、アンドログラフォリド(andrographolide)、血管新生阻害剤、アンタレリクス(antarelix)、抗背側形成タンパク質-1（anti-dorsalizing  morphogenetic protein-1）、抗アンドロゲン、前立腺がん、抗エストロゲン、抗新生物薬(antineoplaston)、アンチセンス・オリゴヌクレオチド、アフィジコリン・グリシネート(aphidicolin glycinate)、アポトーシス遺伝子モジュレーター、アポトーシス・レギュレーター、アプリン酸(apurinic acid)、アスラクリン(asulacrine)、アタメスタン(atamestane)、アトリムスチン(atrimustine)、アキシナスタチン1(axinastatin 1)、アキシナスタチン2、アキシナスタチン3、アザセトロン(azasetron)、アザトキシン(azatoxin)、アザチロシン(azatyrosine)、バッカチンＩＩＩ(baccatin III.)誘導体、バラノール(balanol)、バチマスタット(batimastat)、BCR/ABL拮抗薬、ベンゾクロリン、ベンゾイルスタウロスポリン(benzoylstaurosporine)、βラクタム誘導体、βアレチン(beta-alethine)、βクラマイシン(betaclamycin)B、ベツリン酸、bFGF阻害剤、ビカルタミド(bicalutamide)、ビサントレン(bisantrene)、ビスアジリジニルスペルミン(bisaziridinylspermine)、ビスナフィド(bisnafide)、ビストラテン(bistratene)A、ビゼレシン(bizelesin)、ブレフラート(breflate)、ブレオマイシンA2、ブレオマイシンB2、ブロピリミン(bropirimine)、ブドチタン(budotitane)、ブチオニン・スルホキシイミン(buthionine sulfoximine)、カルシポトリオール(calcipotriol)、カルホスチン(calphostin)C、カンプトテシン(camptothecin)誘導体（例えば、10-ヒドロキシ-カンプトテシン）、カペシタビン(capecitabine)、カルボキサミド-アミノ-トリアゾール、カルボキシアミドトリアゾール、カルゼレシン(carzelesin)、カゼイン・キナーゼ阻害剤、カスタノスペルミン(castanospermine)、セクロピン(cecropin)B、セトロレリクス(cetrorelix)、クロリン(chlorins)、クロロキノキサリン・スルホンアミド(chloroquinoxaline sulfonamide)、シカプロスト(cicaprost)、シス-ポルフィリン、クラドリビン(cladribine)、クロミフェン(clomifene)及びその類似体、クロトリマゾール(clotrimazole)、コリスマイシン(collismycin)A、コリスマイシンB、コンブレタスタチン(combretastatin)A4、コンブレタスタチン類似体、コナゲニン(conagenin)、クラムベシジン(crambescidin)816、クリスナトール(crisnatol)、クリプトフィシン(cryptophycin)8、クリプトフィシンA誘導体、キュラシン(curacin)A、シクロペンタアントラキノン(cyclopentanthraquinones)、シクロプラタム(cycloplatam)、シペマイシン(cypemycin)、シタラビン・オクホスファート(cytarabine ocfosfate)、細胞溶解因子、シトスタチン(cytostatin)、ダクリキシマブ(dacliximab)、デシタビン(decitabine)、デヒドロジデムニン(dehydrodidemnin)B、2'デオキシコホルマイシン(DCF)、デスロレリン(deslorelin)、デキシホスファミド(dexifosfamide)、デクスラゾキサン(dexrazoxane)、デクスベラパミル(dexverapamil)、ジアジクオン(diaziquone)、ジデムニン(didemnin)B、ジドクス(didox)、ジエチルノルスペルミン(diethylnorspermine)、ジヒドロ-5-アザシチジン、ジヒドロタキソール、ジオキサマイシン(dioxamycin)、ジフェニル・スピロムスチン(diphenyl spiromustine)、ディスコデルモライド(discodermolide)、ドコサノール(docosanol)、ドラセトロン(dolasetron)、ドキシフルリジン(doxifluridine)、ドロロキシフェン(droloxifene)、ドロナビノール(dronabinol)、デュオカルマイシン(duocarmycin)SA、エブセレン(ebselen)、エコムスチン(ecomustine)、エデルフォシン(edelfosine)、エドレコロマブ(edrecolomab)、エフロルニチン(eflornithine)、エレメン(elemene)、エミテフール(emitefur)、エポチロン（epothilones）、エピチロン（epithilones）、エプリステリド(epristeride)、エストラムスチン(estramustine)及びその類似体、エトポシド（etoposide）、エトポシド4’-リン酸（etoposide 4’-phosphate）（エトポフォスとも呼ばれる）、エキセメスタン(exemestane)、ファドロゾール(fadrozole)、ファザラビン(fazarabine)、フェンレチニド(fenretinide)、フィルグラスチム(filgrastim)、フィナステリド(finasteride)、フラボピリドール(flavopiridol)、フレゼラスチン(flezelastine)、フルアステロン(fluasterone)、フルダラビン(fludarabine)、塩酸フルロダウノルニシン(fluorodaunorunicin hydrochloride)、フォルフェニメクス(forfenimex)、フォルメスタン(formestane)、フォストリエシン(fostriecin)、フォテムスチン(fotemustine)、ガドリニウム・テキサフィリン(gadolinium texaphyrin)、硝酸ガリウム、ガロシタビン(galocitabine)、ガニレリクス(ganirelix)、ゲラチナーゼ阻害剤、ゲムシタビン(gemcitabine)、グルタチオン阻害剤、ヘプスルファム(hepsulfam)、ホモハリングトニン（homoharringtonine(HHT)）、ハイペリシン(hypericin)、イバンドロン酸（Ibandronic acid）、イドキシフェン(idoxifene)、イドラマントン(idramantone)、イルモフォシン(ilmofosine)、イロマスタット(ilomastat)、イミダゾアクリドン、イミキモド(imiquimod)、免疫刺激ペプチド、イオベングアン(iobenguane)、ヨードドキソルビシン(iododoxorubicin)、イポメアノール(ipomeanol)、イリノテカン、イロプラクト(iroplact)、イルソグラジン(irsogladine)、イソベンガゾール(isobengazole)、ジャスプラキノリド(jasplakinolide)、カハラリド(kahalalide)F、三酢酸ラメラリン-N(lamellarin-N triacetate)、ランレオチド(lanreotide)、レイナマイシン(leinamycin)、レノグラスチム(lenograstim)、硫酸レンチナン(lentinan sulfate)、レプトルスタチン(leptolstatin)、レトロゾール(letrozole)、親油性白金化合物、リソクリナミド(lissoclinamide)7、ロバプラチン(lobaplatin)、ロメトレキソール(lometrexol)、ロニダミン(lonidamine)、ロソキサントロン(losoxantrone)、ロキソリビン(loxoribine)、ルルトテカン(lurtotecan)、ルテチウム・テキサフィリン(lutetium texaphyrin)、リソフィリン(lysofylline)、マソプロコール(masoprocol)、マスピン(maspin)、マトリックス・メタロプロテイナーゼ阻害剤、メノガリル(menogaril)、メルバロン(merbarone)、メテレリン(meterelin)、メチオニナーゼ、メトクロプラミド(metoclopramide)、MIF阻害剤、ミフェプリストン(mifepristone)、ミルテホシン(miltefosine)、ミリモスチム(mirimostim)、ミトラシン(mithracin)、ミトグアゾン(mitoguazone)、ミトラクトール(mitolactol)、マイトマイシン及び��の類似体、ミトナフィド(mitonafide)、ミトキサントロン(mitoxantrone)、モファロテン(mofarotene)、モルグラモスチム(molgramostim)、マイカペルオキシドB、ミリアポロン(myriaporone)、N-アセチルジナリン(acetyldinaline)、N-置換ベンズアミド、ナファレリン(nafarelin)、ナグレスチップ(nagrestip)、ナパビン(napavin)、ナフテルピン(naphterpin)、ナルトグラスチム(nartograstim)、ネダプラチン(nedaplatin)、ネモルビシン(nemorubicin)、ネリドロン酸、ニルタミド(nilutamide)、ニサマイシン(nisamycin)、ニトルリン(nitrullyn)、オクトレオチド(octreotide)、オキセノン(okicenone)、オナプリストン(onapristone)、オンダンセトロン(ondansetron)、オラシン(oracin)、オルマプラチン(ormaplatin)、オキサリプラチン(oxaliplatin)、オキサウノマイシン(oxaunomycin)、パクリタキセル(paclitaxel)及びその類似体、パラウアミン(palauamine)、パルミトイルリゾキシン(palmitoylrhizoxin)、パミドロン酸、パナキシトリオール(panaxytriol)、パノミフェン(panomifene)、パラバクチン(parabactin)、パゼリプチン(pazelliptine)、ぺグアスパルガーゼ(pegaspargase)、ペルデシン(peldesine)、ポリ硫酸ペントサンナトリウム、ペントスタチン(pentostatin)、ペントロゾール(pentrozole)、パーフルブロン(perflubron)、パーホスファミド(perfosfamide)、フェナジノマイシン(phenazinomycin)、ピシバニル(picibanil)、ピラルビシン(pirarubicin)、ピリトレキシム(piritrexim)、ポドフィロトキシン（podophyllotoxin）、ポルフィロマイシン(porfiromycin)、プリン・ヌクレオシド・ホスホリラーゼ阻害剤、ラルチトレキセド(raltitrexed)、リゾキシン(rhizoxin)、ログレチミド(rogletimide)、ロヒツキン(rohitukine)、ルビギノン(rubiginone)B1、ルボキシル(ruboxyl)、サフィンゴル(safingol)、サイントピン(saintopin)、サルコフィトール(sarcophytol)A、サルグラモスチム(sargramostim)、ソブゾキサン(sobuzoxane)、ソネルミン(sonermin)、スパルホジン酸(sparfosic acid)、スピカマイシン(spicamycin)D、スピロムスチン(spiromustine)、スチピアミド(stipiamide)、スルフィノシン(sulfinosine)、タリムスチン(tallimustine)、テガフール(tegafur)、テモゾロミド(temozolomide)、テニポシド(teniposide)、タリブラスチン(thaliblastine)、チオコラリン(thiocoraline)、チラパザミン(tirapazamine)、トポテカン、トプセンチン(topsentin)、トリシリビン(triciribine)、トリメトレキサート(trimetrexate)、ベラミン(veramine)、ビノレルビン(vinorelbine)、ビンキサルチン(vinxaltine)、ボロゾール(vorozole)、ゼニプラチン(zeniplatin)、並びにジラスコルブ(zilascorb)、が挙げられる。
【０２５５】
化学的にコンジュゲートさせるためのリンカー
本明細書で使用する用語「リンカー」は、抗体又はそのフラグメント(Ab)を薬物部分(D)に共有結合させて式Iの抗体-薬物コンジュゲート(ADC)を形成する、原子の共有結合又は鎖を含む、二価の化学的な部分構造を意味する。好適なリンカーは2つの反応性末端を有し、一方は抗体にコンジュゲートさせるためであり、他方は細胞毒素にコンジュゲートさせるためである。前記リンカーの抗体とコンジュゲートする反応性末端(反応性部分構造、Z')は、典型的には、前記抗体上のシステイン・チオール又はリジン・アミン基を介して、前記抗体にコンジュゲートさせることができる部位であり、従って、典型的には二重結合のようなチオールとの反応性がある基(例えば、マレイミドなど)、又はクロロ、ブロモ、ヨード等の脱離基、若しくはR-スルファニル基、又はカルボキシル基のようなアミンとの反応性がある基である；一方、前記リンカーの抗体とコンジュゲートする反応性末端は、典型的には、細胞毒素上の塩基性アミン基又はカルボキシル基とのアミド結合の形成を介して細胞毒素にコンジュゲートすることができる部位であり、従って、典型的にはカルボキシル基又は塩基性アミン基である。前記用語「リンカー」を、コンジュゲートした形態のリンカーを説明する際に使用する場合、反応性末端の一方又は両方は、前記リンカー及び／又は前記細胞毒素間の、並びに前記リンカー及び／又は前記抗体若しくはその抗原結合フラグメント間の、結合が形成されているので、存在しない(例えば、反応性部分構造Z'、化学的な部分構造Zに変換されている)か、又は反応途中にある(例えば、カルボン酸のカルボニルだけになっている等)。このようなコンジュゲートさせる反応を、本明細書中以下に更に記載する。
【０２５６】
様々なリンカーを使用して、記載した抗体、抗原結合フラグメント、及びリガンドを細胞毒性分子にコンジュゲートさせることができる。いくつかの実施形態では、前記リンカーは、細胞内の条件下で切断可能であり、その結果、前記リンカーの切断によって、細胞内環境において、抗体から薬物ユニットが放出される。更に他の実施形態では、そのリンカー・ユニットは切断可能ではなく、薬剤は、例えば、抗体の分解によって放出される。本発明のADCに有用なリンカーは、好ましくは細胞外で安定であり、ADC分子が凝集することを防止し、ADCが水溶性の媒体中で及び単量体状で溶け易いように維持する。細胞内に輸送される又は送達される前には、前記ADCは、好ましくは安定であり、及びインタクトなままであり、即ち、前記抗体は、前記薬物部分に連結したままである。前記リンカーはターゲット細胞の外部では安定であり、細胞内部ではある有効な速度で切断されることがある。効果的なリンカーは：(i)前記抗体の特異的な結合特性を維持する；(ii)前記コンジュゲート又は薬物部分が細胞内に送達されることを可能にする；(iii)前記コンジュゲートがそのターゲット部位に送達又は輸送されるまで、安定かつインタクトなままであり、即ち切断されない；及び(iv)前記細胞毒性部分の、細胞毒性、細胞傷害効果又は細胞増殖抑制効果を維持する。前記ADCの安定性を、質量分析、HPLC、及び分離／解析技術のLC/MS等の標準的な分析技術によって測定することができる。前記抗体及び前記薬物部分の共有結合は、前記リンカーが2つの反応性官能基を有することを要求する（即ち反応性の意味での二価である）。ペプチド、核酸、薬物、毒素、抗体、ハプテン、及びレポーター基等の2つ以上の機能的又は生物学的に活性な部分を結合させるのに役立つ二価のリンカー試薬が知られており、それらのコンジュゲートを得る方法については記載されている(Hermanson、GT(1996)Bioconjugate Techniques; Academic Press: New York、p.234-242)。
【０２５７】
好適な切断可能なリンカーとしては、例えば、酵素的加水分解、光分解、酸性条件下での加水分解、塩基性条件下での加水分解、酸化、ジスルフィド還元、求核切断、又は有機金属切断によって切断され得るものが挙げられる(例えば、Lericheら、Bioorg.Med.Chem、20:571-582、2012を参照のこと、これらの開示は、共有結合的にコンジュゲートさせることに適したリンカーに関連するものとして、本明細書に参照により取り込まれる)。好適な切断可能なリンカーとしては、例えば、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテル又はジペプチドなどの化学的な部分構造を挙げることができる。
【０２５８】
酸性条件下で加水分解可能なリンカーとしては、例えば、ヒドラゾン、セミカルバゾン、チオセミカルバゾン、シス-アコニットアミド、オルトエステル、アセタール、ケタール等が挙げられる(例えば、米国特許第 5,122,368; 5,824,805; 5,622,929号； Dubowchik and Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123; Neville et al., 1989, Biol. Chem. 264:14653-14661、これらの各開示は、共有結合的にコンジュゲートさせることに適したリンカーに関するものとして、その全体が本明細書に参照により取り込まれる)。このようなリンカーは、血中の条件のような中性pHの条件下では比較的安定であるが、リソソームのおよそのpHであるpH 5.5又は5.0未満では不安定である。
【０２５９】
還元条件下で切断可能なリンカーとしては、例えば、ジスルフィドが挙げられる。例えば、SATA(N-スクシンイミジル-S-アセチルチオアセテート)、SPDP(N-スクシンイミジル-3-(2-ピリジルジチオ)プロピオネート)、SPDB(N-スクシンイミジル-3-(2-ピリジルジチオ)ブチレート)及びSMPT(N-スクシンイミジル-オキシカルボニル-α-メチル-α-(2-ピリジル-ジチオ)トルエン)、SPDB及びSMPT、を使用して形成することができるジスルフィド・リンカーが挙げられる、様々なジスルフィド・リンカーが当該技術分野で知られている(例えば、Thorpe et al., 1987, Cancer Res. 47:5924-5931; Wawrzynczak et al., In Immunoconjugates: Antibody Conjugates in Radioimagery and Therapy of Cancer (C. W. Vogel ed., Oxford U. Press, 1987を参照のこと。米国特許第4,880,935も参照のこと。これらの各開示は、共有結合的にコンジュゲートさせることに適したリンカーに関するものとして、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２６０】
酵素的な加水分解に感受性があるリンカーは、例えば、細胞内ペプチダーゼ又はプロテアーゼ酵素(リソソーム・プロテアーゼ又はエンドソーム・プロテアーゼが挙げられるが
、これらに限定されない)によって切断されるペプチド含有リンカーであることがある。治療薬剤が細胞内タンパク質分解によって放出されることを利用することの1つの利点は、前記治療薬剤は、コンジュゲートしている場合、一般に減弱していて、及び前記コンジュゲートの血清安定性は一般的に高い、ということである。いくつかの実施形態では、前記ペプチジル・リンカーは、少なくとも2アミノ酸長又は少なくとも3アミノ酸長である。例示的なアミノ酸リンカーとしては、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド又はペンタペプチドが挙げられる。好適なペプチドの例としては、バリン、アラニン、シトルリン(Cit)、フェニルアラニン、リジン、ロイシン、及びグリシン等のアミノ酸を含有するペプチドが挙げられる。アミノ酸リンカー成分を含むアミノ酸残基としては、天然に存在するもの、並びにマイナーなアミノ酸及び非天然に存在するアミノ酸類似体(例えば、シトルリン)が挙げられる。例示的なジペプチドとしては、バリン-シトルリン(vc又はval-cit)及びアラニン-フェニルアラニン(af又はala-phe)が挙げられる。例示的なトリペプチドとしては、グリシン-バリン-シトルリン(gly-val-cit)及びグリシン-グリシン-グリシン(gly-gly-gly)が挙げられる。いくつかの実施形態では、前記リンカーとしては、Val-Cit、Ala-Val、又はPhe-Lys、Val-Lys、Ala-Lys、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit、Phe-Arg、又はTrp-Citのようなジペプチドが挙げられる。Val-Cit又はPhe-Lys等のジペプチドを含むリンカーは、例えば、米国特許第6,214,345号に開示されている（この開示は、共有結合的にコンジュゲートさせることに適したリンカーに関するものとして、その全体が本明細書に参照により取り込まれる）。いくつかの実施形態では、前記リンカーとしては、Val-Ala及びVal-Citから選択されるジペプチドが挙げられる。
【０２６１】
本明細書に記載する抗体、抗原結合フラグメント、及びリガンドを細胞毒性分子に結合させるのに適したリンカーとしては、1,6-脱離過程によって、細胞毒素を放出することができるリンカーが挙げられる。この脱離過程を可能にする化学的な部分構造としては、p-アミノベンジル(PAB)基、6-マレイミドヘキサン酸、pH感受性炭酸塩、及びJain et al., Pharm. Res. 32:3526-3540, 2015（この開示は、共有結合的なコンジュゲーションに適したリンカーに関連するものとして、その全体が本明細書に参照により取り込まれる）に記載される他の試薬等が挙げれれる。
【０２６２】
いくつかの実施形態では、前記リンカーとしては、前述のPAB又はPABC(パラ-アミノベンジルオキシカルボニル)等の「自壊」基が挙げられ、これらは、例えば、Carl et al., J. Med. Chem. (1981) 24:479-480; Chakravarty et al (1983) J. Med. Chem. 26:638-644; US 6214345; US20030130189; US20030096743; US6759509; US20040052793; US6218519; US6835807; US6268488; US20040018194; WO98/13059; US20040052793; US6677435; US5621002; US20040121940; WO2004/032828に開示されている。このプロセスが可能な他のこのような化学的な部分構造(「自壊リンカー」)としては、メチレン・カルバメート及びヘテロアリール基、例えばアミノチアゾール、アミノイミダゾール、アミノピリミジンなどが挙げられる。このような複素環の自壊基を含むリンカーは、例えば、米国特許出願公開20160303254 及び 20150079114、並びに米国特許第7,754,681; Hay et al. (1999) Bioorg. Med. Chem. Lett. 9:2237; US 2005/0256030; de Groot et al (2001) J. Org. Chem. 66:8815-8830; 及び US 7223837に開示されている。いくつかの実施形態では、ジペプチドを、自壊リンカーと組合せて使用する。
【０２６３】
本明細書での使用に適したリンカーは、C1-C6アルキレン、C1-C6ヘテロアルキレン、C2-C6アルケニレン、C2-C6ヘテロアルケニレン、C2-C6アルキニレン、C2-C6ヘテロアルキニレン、C3-C6シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、ヘテロアリーレン、及びそれらの組合せから選択される1つ以上の基を更に含むことがあり、これらの各々は任意選択的に置換されていることがある。このような基の非限定的な実施例としては、(CH2)p、(CH2CH2O)p、及び-(C=O)(CH2)p-ユニットが挙げられ、ここで、pは1〜6の整数であり、各々の場合に対して独立に選択される。
【０２６４】
好適なリンカーは、溶解性を高める特性を有する基を含むことがある。例えば、(CH2CH2O)pユニット(ポリエチレングリコール、PEG)を含むリンカーは、溶解性を高めることができる（例えば、アミノ、スルホン酸、ホスホン酸又はリン酸残基で置換して、アルキル鎖の溶解性を高めることができる）。このような部分構造を含むリンカーは、例えば、米国特許番号8,236,319 及び9,504,756に開示されている（これらの各々の開示は、共有結合的なコンジュゲーションに適したリンカーに関連するものとして、その全体が本明細書に参照により取り込まれる）。更なる溶解性を高める基としては、例えば、以下の構造を有するアシル及びカルバモイル・スルファミド基が挙げられる：
【化６０】
2021526525.tif 000150
ここで、aは0又は1である；並びに
R10は、水素、C1-C24アルキル基、C3-C24シクロアルキル基、C1-C24(ヘテロ)アリール基、C1-C24アルキル（ヘテロ）アリール基、及びC1-C24（ヘテロ）アリールアルキル基、C1-C24アルキル基、C3-C24シクロアルキル基、C2-C24（ヘテロ）アリール基、C3-C24アルキル（ヘテロ）アリール基、及びC3-C24（ヘテロ）アリールアルキル基、からなる基から選択され、これらの各々は、O、S、及びNR11R12から選択される1種以上のヘテロ原子によって、任意選択的に置換している、及び／又は任意選択的に割り込まれていることがある、ここで、R11及びR12は、水素及びC1-C4アルキル基からなる群から独立して選択される；又はR10は細胞毒素である、ここで、前記細胞毒素は、スペーサー部分を介して、Nに任意選択的に結合する。そのような基を含むリンカーは、例えば、米国特許9,636,421号及び米国特許出願公開第2017/0298145号(これら開示は、細胞毒素及び抗体又はそれらの抗原結合フラグメントへの共有結合的なコンジュゲーションに適したリンカーに関連するものとして、その全体が本明細書に参照により取り込まれる)に記載されている。
【０２６５】
いくつかの実施形態では、前記リンカーは、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテル、ジペプチド、p-アミノベンジル(PAB)基、複素環自壊基、任意選択的に置換されたC1-C6アルキル、任意選択的に置換されたC1-C6ヘテロアルキル、任意選択的に置換されたC2-C6アルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、任意選択的に置換されたC2-C6アルキニル、任意選択的に置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、任意選択的に置換されたC3-C6シクロアルキル、任意選択的に置換されたヘテロシクロアルキル、任意選択的に置換されたアリール、任意選択的に置換されたヘテロアリール、溶解増強基、アシル、-(C=O)-、又は-(CH2CH2O)p-基のうちの1つ以上を含むことがある、ここで、pは1〜6の整数である。当業者の中のある者は、列挙された基の1つ以上が、二価(ジラジカル)種(例えば、C1-C6アルキレン等)の形態で存在し得ることを認識する。
【０２６６】
いくつかの実施形態では、前記リンカーは、p-アミノベンジル基(PAB)を含む。ある実施形態では、前記p-アミノベンジル基は、細胞毒性薬物とリンカー中のプロテアーゼ切断部位との間に配置される。ある実施形態では、前記p-アミノベンジル基は、p-アミノベンジルオキシカルボニル・ユニットの一部である。ある実施形態では、p-アミノベンジル基は、p-アミノベンジルアミド・ユニットの一部である。
【０２６７】
いくつかの実施形態では、前記リンカーは、PAB, Val-Cit-PAB, Val-Ala-PAB, Val-Lys(Ac)-PAB, Phe-Lys-PAB, Phe-Lys(Ac)-PAB, D-Val-Leu-Lys, Gly-Gly-Arg, Ala-Ala-Asn-PAB, 又は Ala-PAB を含む。
【０２６８】
いくつかの実施形態では、前記リンカーは、ペプチド、オリゴ糖、-(CH2)p-, -(CH2CH2O)p-, PAB, Val-Cit-PAB, Val-Ala-PAB, Val-Lys(Ac)-PAB, Phe-Lys-PAB, Phe-Lys(Ac)-PAB, D-Val-Leu-Lys, Gly-Gly-Arg, Ala-Ala-Asn-PAB, 又は Ala-PAB.
のうちの1つ以上の組合せを含む。
【０２６９】
いくつかの実施形態では、前記リンカーは、-(C=O)(CH2)p-ユニットを含み、ここで、pは1〜6の整数である。
【０２７０】
ある具体的な実施形態では、前記リンカーは以下の構造を含む
【化６１】
2021526525.tif 000151
ここで、波線は、前記細胞毒素及び反応性部分構造Z'への結合の位置を示す。別の具体的な実施形態では、前記リンカーは以下の構造を含む
【化６２】
2021526525.tif 000152
ここで、波線は、前記細胞毒素及び反応性部分構造Z'への結合の位置を示す。このようなPAB-ジペプチド-プロピオニル・リンカーとしては、例えば、特許出願公開WO2017/149077に開示されている（これは、その全体が、本明細書に参照により取り込まれる）更に、WO2017/149077に開示された細胞毒素は、本明細書に参照により取り込まれる。
【０２７１】
本明細書に開示する化学基、部分及び特徴の何れか1つ以上を、多様な方法で組み合わせて、本明細書に開示するような抗体と細胞毒素とをコンジュゲートさせることに対して有用なリンカーを形成し得ることは、当業者の中のある者によって認識されるだろう。本明細書中に記載される組成物及び方法と併せることにおいて有用な更なるリンカーは、例えば、米国特許出願公開第2015/0218220号に記載されており、その開示内容は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２７２】
ある特定の実施形態では、リンカーの前駆物質である中間体を、好適な条件下で薬物部分と反応させる。ある特定の実施形態では、反応性基を、前記薬物及び／又は前記中間体若しくはリンカー上で使用する。前記薬物と前記中間体との間の反応の生成物、又は誘導体化した薬物を、その後、好適な条件下で、抗体又は抗原結合フラグメントと反応させる。あるいは、前記リンカー又は中間体を、最初に前記抗体又は誘導体化した抗体と反応させ、次いで前記薬物又は誘導体化した薬物と反応させてもよい。このようなコンジュゲーション反応を、ここで、より完全に記載する。
【０２７３】
前記抗体又はその抗原結合フラグメントに、前記リンカー又は薬物-リンカー・コンジュゲートを共有結合させるために、多くの様々な反応を利用することができる。抗体分子上の好適な結合の位置としては、リジンのアミン基、グルタミン酸及びアスパラギン酸の遊離カルボン酸基、システインのスルフヒドリル基、及び芳香族アミノ酸の種々の部分が挙げられる。例えば、化合物上のカルボキシ(又はアミノ)基を抗体部分上のアミノ(又はカルボキシ)基に連結するために、非特異的な共有結合を、カルボジイミド反応を用いて行うことがある。更に、化合物上のアミノ基を抗体部分上のアミノ基に結合させるために、ジアルデヒド又はイミドエステルなどの二官能基性の薬剤を使用することもある。薬物を結合剤に結合させることには、シッフ塩基反応を利用することも可能である。この方法は、グリコール又は水酸基を含有する薬物を過ヨウ素酸塩酸化させることを含み、このようにしてアルデヒドを形成させ、次いでこれを結合剤と反応させる。結合は、前記結合剤のアミノ基を有するシッフ塩基の形成を介して起こる。イソチオシアネートはまた、薬物を結合剤に共有結合させるためのカップリング剤として使用することもある。他の技術は当業者に知られており、本発明の範囲内である。
【０２７４】
本明細書に記載する場合、抗体又は抗原結合フラグメントへのコンジュゲーションに有用なリンカーとしては、限定されるものではないが、以下の表３に示すような、カップリング反応によって形成される化学的な部分構造Zを含むリンカーが挙げられる。曲線は、それぞれ、抗体又は抗原結合フラグメント、及び細胞毒性分子に結合する位置を示す。
【０２７５】
【表４−１】
2021526525.tif 000153
【表４−２】
2021526525.tif 000154
【表４−３】
2021526525.tif 000155
【表４−４】
2021526525.tif 000156
【０２７６】
当業者の中のある者は、前記リンカー及び前記抗体又はその抗原結合フラグメント上の反応性置換基に結合した反応性置換基Z'が、化学的な部分構造Zを生成する共有結合カップリング反応に関与するものであることを認識し、前記反応性の部分構造Z'を認識する。従って、本明細書に記載の方法と併せることにおいて有用な抗体-薬物コンジュゲートは、抗体又はその抗原結合フラグメントが、リンカー又は細胞毒素-リンカー・コンジュゲートと反応することによって形成されることがあり、本明細書に記載するように、前記リンカー又は細胞毒素-リンカー・コンジュゲートは反応性置換基Z'等を含み、抗体又はその抗原結合フラグメント上の反応性置換基との反応に適していて、化学的な部分構造Zを形成する。
【０２７７】
表３に示されるように、前記リンカー及び抗体、又はその抗原結合フラグメント上の好適な反応性置換基の例としては、求核／求電子対(例えば、チオール／ハロアルキル対、アミン／カルボニル対、又はチオール／α, β-不飽和カルボニル対等)、ジエン／ジエノフィル対(例えば、とりわけ、アジド／アルキン対、又はジエン／α,β-不飽和カルボニル対)等が挙げられる。化学的な部分構造Zを形成するための反応性置換基間のカップリング反応としては、限定されるものではないが、チオール・アルキル化、ヒドロキシル・アルキル化、アミン・アルキル化、アミン又はヒドロキシルアミン縮合、ヒドラジン形成、アミド化、エステル化、ジスルフィド形成、環化付加(例えば、とりわけ、[4+2]Diels-Alder環化付加、[3+2]Huisgen環化付加)、芳香族求核置換、芳香族求電子置換、及び当該技術分野で知られているか又は本明細書に記載されている他の反応様式が挙げられる。好ましくは、前記リンカーは、前記抗体又はその抗原結合フラグメント上の求核性官能基との反応のための求電子性官能基を含む。
【０２７８】
本明細書に開示するように、抗体、又はその抗原結合フラグメント内に存在し得る反応性置換基としては、限定されるものではないが、(i)N末端アミン基、(ii)側鎖アミン基(例えば、リジン)、(iii)側鎖チオール基(例えば、システイン)、及び(iv)糖水酸基又はアミノ基(ここで、前記抗体はグリコシル化されている)、のような求核基が挙げられる。本明細書に開示するように、抗体、又はその抗原結合フラグメント内に存在し得る反応性置換基としては、限定されるものではないが、セリン、スレオニン、及びチロシン残基のヒドロキシル部分；リジン残基のアミノ部分；アスパラギン酸及びグルタミン酸残基のカルボキシル部分；並びにシステイン残基のチオール部分、並びに、非天然アミノ酸のプロパルギル、アジド、ハロアリール(例えば、フルオロアリール)、ハロヘテロアリール(例えば、フルオロヘテロアリール)、ハロアルキル、及びハロヘテロアルキル部分が挙げられる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示するように、抗体、又はその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基としては、アミン又はチオール部分が挙げられる。ある特定の抗体は、還元可能な鎖間ジスルフィド（即ち、システイン架橋）を有する。抗体は、DTT(ジチオトレイトール)等の還元剤で処理することによって、リンカー試薬とコンジュゲートさせるために、反応性にすることができる。従って、各システイン架橋は、理論的には、2つの反応性チオール求核基を形成する。リジンと2-イミノチオラン(トラウト試薬)との反応によって、更なる求核基を抗体中に導入して、アミンをチオールに転化させることができる。1個、2個、3個、4個、又はそれ以上のシステイン残基を導入することによって(例えば、1個以上の元々は無かったシステイン・アミノ酸残基を含む変異抗体を調製することによって)、反応性チオール基を、抗体(又はそのフラグメント)に導入することがある。米国特許第7,521,541号は、反応性システイン・アミノ酸を導入することによる工学的に操作した抗体を教示している。
【０２７９】
いくつかの実施形態では、前記リンカーに結合した反応性の部分構造Z'は、抗体上に存在する求電子基と反応性である求核基である。抗体上の有用な求電子基としてはアルデヒド及びケトンのカルボニル基が挙げられるが、これらに限定されない。求核基のヘテロ原子は、抗体上の求電子基と反応し、前記抗体と共有結合を形成することがある。有用な求核基としては、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドロキシル、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジン・カルボキシレート、及びアリールヒドラジドが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２８０】
いくつかの実施形態では、Zは、抗体又はその抗原結合フラグメント内に存在する反応性求核置換基(例えば、アミン及びチオール部分)、及び反応性求電子置換基Z'との間の反応の生成物である。例えば、Z'は、特に、マイケル・アクセプター(例えば、マレイミド)、活性化エステル、電子欠損カルボニル化合物、及びアルデヒドであることがある。
【０２８１】
例えば、薬物-抗体及び薬物-リガンド結合体の合成に好適なリンカーとしては、限定されるものではないが、マレイミド又はハロアルキル基などの反応性置換基Z'が挙げられる。これらは、試薬（例えば、特に、スクシンイミジル4-(N-マレイミドメチル)-シクロヘキサン-L-カルボキシレート(SMCC)、N-スクシンイミジル・ヨードアセテート(SIA)、スルホ-SMCC、m-マレイミドベンゾイル-N-ヒドロキシスクシンイミジル・エステル(MBS)、スルホ-MBS、及びスクシンイミジル・ヨードアセテート、等であり、例えば、Liu et al., 18:690-697, 1979に記載されている（この開示は、化学的にコンジュゲートさせるためのリンカーに関するものとして、本明細書に参照により取り込まれる））によって、前記リンカーに結合することがある。
【０２８２】
いくつかの実施形態では、リンカーLに結合した反応性置換基Z'は、マレイミド、アジド、又はアルキンである。マレイミド含有リンカーの例は、非切断性マレイミドカプロイル-ベースのリンカーであり、これは、アウリスタチンなどの微小管破壊剤をコンジュゲートするのに特に有用である。このようなリンカーはDoronina et al., Bioconjugate Chem. 17:14-24, 2006に記載されている（この開示は、化学的にコンジュゲートさせるためのリンカーに関するものとして、本明細書に参照により取り込まれる）。
【０２８３】
いくつかの実施形態では、反応性置換基Z'は-(C=O)-又は-NH(C=O)-であり、その結果、前記リンカーは、それぞれ、-(C=O)-又は-NH(C=O)基と抗体又はその抗原結合フラグメントのアミノ基との反応から生じるアミド又は尿素の部分構造によって、前記抗体又はその抗原結合フラグメントに結合することがある。
【０２８４】
いくつかの実施形態では、前記反応性置換基は、N-マレイミジル基、ハロゲン化N-アルキルアミド基、スルホニルオキシN-アルキルアミド基、カーボネート基、ハロゲン化スルホニル基、チオール基又はその誘導体、内部に炭素-炭素の三重結合を含むアルキニル基、（ヘテロ）シクロアルキニル基、ビシクロ[6.1.0]ノン-4-イン-9-イル基（bicyclo[6.1.0]non-4-yn-9-yl group）、内部に炭素-炭素の二重結合を含むアルケニル基、シクロアルケニル基、テトラジニル基、アジド基、ホスフィン基、ニトリル・オキシド基、ニトロン基、ニトリル・イミン基、ジアゾ基、ケトン基、(O-アルキル)ヒドロキシルアミノ基、ヒドラジン基、ハロゲン化N-マレイミジル基、1,1-ビス(スルホニルメチル)メチルカルボニル基又はその脱離誘導体、ハロゲン化カルボニル基、又はアレンアミド基であり、これらはそれぞれ任意に置換されていることがある。いくつかの実施形態では、前記反応性置換基は、シクロアルケン基、シクロアルキン基、又は任意に置換された(ヘテロ)シクロアルキニル基を含む。
【０２８５】
前記抗体又はその抗原結合フラグメント上の反応性残基との反応に適した反応性置換基Z'を含むアマトキシン-リンカー・コンジュゲートの非限定的な例としては、限定されるものではないが、以下が挙げられる、7'C-(4-(6-(マレイミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボニル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(3-カルボキシプロパンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(2-ブロモアセトアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(3-(ピリジン-2-イルジスルファニル)プロパンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(4-(マレイミド)ブタンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(マレイミド)アセチル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(3-(マレイミド)プロパノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(4-(マレイミド)ブタノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(3-((6-(マレイミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(3-((6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(3-((4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)メチル)ピロリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(3-((6-((4-(マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(4-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ブタンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(4-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ブタノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(6-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-((4-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(6-(マレイミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；(R)-7'C-((3-((6-(マレイミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；(S)-7'C-((3-((6-(マレイミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)エチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)-S-メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)-R-メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)-S-メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)-R-メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(3-カルボキシプロパンアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(マレイミド)アセチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(3-(マレイミド)プロパノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(4-(マレイミド)ブタノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(2-(マレイミド)アセトアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(4-(マレイミド)ブタンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((6-(マレイミド)ヘキサンアミド)メチル)アゼチジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-(2-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)エチル)アゼチジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)メチル)アゼチジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-(2-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)エチル)アゼチジン-1イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)アゼチジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-(((2-(6-(マレイミド)-N-メチルヘキサンアミド)エチル)(メチル)アミノ)メチル)-アマトキシン；7'C-(((4-(6-(マレイミド)-N-メチルヘキサンアミド)ブチル(メチル)アミノ)メチル)-アマトキシン；7'C-((2-(2-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)エチル)アジリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((2-(2-(6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)エチル)アジリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(6-(6-(2-(アミノオキシ)アセトア��ド)ヘキサンアミド)ヘキサノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(1-(アミノオキシ)-2-オクソ-6,9,12,15-テトラオキサ-3-アザヘプタデカン-17-オイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)アセチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(3-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)プロパノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(4-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ブタノイル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(6-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(2-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)アセトアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(4-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)ブタンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(20-(アミノオキシ)-4,19-ジオクソ-6,9,12,15-テトラオキサ-3,18-ジアザイコシル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-(((2-(6-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)-N-メチルヘキサンアミド)エチル)(メチル)アミノ)メチル)-アマトキシン；7'C-(((4-(6-(2-(アミノオキシ)アセトアミド)-N-メチルヘキサンアミド)ブチル)(メチル)アミノ)メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)メチル)ピロリジン-1-イル)-S-メチル)-アマトキシン；7'C-((3-((6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキサンアミド)-R-メチル)ピロリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(2-ブロモアセトアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(2-ブロモアセトアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；7'C-((4-(2-(3-(ピリジン-2-イルジスルファニル)プロパンアミド)エチル)ピペリジン-1-イル)メチル)-アマトキシン；6'O-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキシル)-アマトキシン；6'O-(5-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ペンチル)-アマトキシン；6'O-(2-((6-(マレイミド)ヘキシル)オキシ)-2-オキソエチル)-アマトキシン；6'O-((6-(マレイミド)ヘキシル)カルバモイル)-アマトキシン；6'O-((6-(4-((マレイミド)メチル)シクロヘキサンカルボキサミド)ヘキシル)カルバモイル)-アマトキシン；6'O-(6-(2-ブロモアセトアミド)ヘキシル)-アマトキシン；7'C-(4-(6-(アジド)ヘキサンアミド)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(へクス-5-イノイルアミノ)ピペリジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；7'C-(4-(2-(6-(6-(マレイミド)ヘキサンアミド)ヘキサンアミド)エチル)ピペラジン-1-イル)-アマトキシン；6'O-(6-(6-(11,12-ジデヒドロ-5,6-ジヒドロ-ジベンズ[b,f]アゾシン-5-イル)-6-オクソヘキサンアミド)ヘキシル)-アマトキシン；6'O-(6-(へクス-5-イノイルアミノ)ヘキシル)-アマトキシン；6'O-(6-(2-(アミノオキシ)アセチルアミド)ヘキシル)-アマトキシン；6'O-((6-アミノオキシ)ヘキシル)-アマトキシン；及び 6'O-(6-(2-イオドアセトアミド)ヘキシル)-アマトキシン。
【０２８６】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示するアマトキシンは、以下の式を有するリンカー反応性部分構造-L-Z'にコンジュゲートする：
【化６３】
2021526525.tif 000157
【０２８７】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示するアマトキシンは、以下の式を有するリンカー反応性部分構造-L-Z'にコンジュゲートする：
【化６４】
2021526525.tif 000158
【０２８８】
前記のリンカー部分構造及びアマトキシン-リンカー・コンジュゲートは、とりわけ、本明細書に記載する組成物及び方法と関連して有益であり、例えば、米国特許出願公開第2015/0218220号及び特許出願公開第WO2017/149077号に記載されており、これらの各々の開示は、その全体が本明細書に参照により取り込まれる。
【０２８９】
抗体-薬物コンジュゲートの調製
本明細書に開示する式IのADCにおいて、抗体、又はその抗原結合フラグメントは、本明細書に開示するリンカーL及び化学的な部分構造Zを介して、1個以上の細胞毒性薬物部分(D)(例えば、1抗体あたり約1〜約20個の薬物部分)にコンジュゲートしている。本発明のADCは、以下を含む、当業者に公知の有機化学反応、条件、及び試薬を使用するいくつかの経路によって調製され得る：(1)抗体、又はその抗原結合フラグメントの反応性置換基を、2価リンカー試薬と反応させて、本明細書中上記のようなAb-Z-Lを形成させる、続いて、薬物部分Dと反応させる；又は、(2)薬物部分の反応性置換基を、2価リンカー試薬と反応させて、D-L-Z'を形成させる、続いて、本明細書中上記のような抗体、又はその抗原結合フラグメントの反応性置換基と反応させる。ADCを調製するための更なる方法は、本明細書中に記載される。
【０２９０】
別の態様において、前記抗体、又はその抗原結合フラグメントは、1つ以上のスルフヒドリル基を導入するために化学的に修飾され得る1つ以上のリジン残基を有する。次いで、前記ADCは、本明細書中上記に記載するように、スルフヒドリル基の硫黄原子を介してコンジュゲートすることによって形成される。リジンを修飾するために使用することができる試薬としては、限定されるものではないが、N-スクシンイミジルS-アセチルチオアセテート(SATA)及び2-イミノチオラン塩酸塩(Traut’s試薬)が挙げられる。
【０２９１】
別の態様において、前記抗体、又はその抗原結合フラグメントは、1つ以上のスルフヒドリル基を有するように化学的に修飾され得る1つ以上の糖鎖部分(carbohydrate groups)を有することがある。次いで、前記ADCは、本明細書中上記に記載されるように、スルフヒドリル基の硫黄原子を介してコンジュゲートすることによって形成される。
【０２９２】
更に別の態様において、前記抗体は、酸化されてアルデヒド(-CHO)基を提供し得る1つ以上の糖鎖部分(carbohydrate groups)を有することがある(例えば、Laguzza, et al., J. Med. Chem. 1989, 32(3), 548-55を参照のこと)。次いで、前記ADCは、本明細書中上記に記載されるように、対応するアルデヒドを介してコンジュゲートすることによって形成される。細胞毒素を結合させる又は会合させるためのタンパク質を改変する他のプロトコールは、Coligan et al., Current Protocols in Protein Science, vol. 2, John Wiley & Sons (2002)に記載されている（本明細書に参照により取り込まれる）。
【０２９３】
抗体、免疫グロブリン又はそのフラグメント等の細胞にターゲットするタンパク質に、リンカー-薬物部分をコンジュゲートさせるための方法は、例えば、米国特許第5,208,020号; 米国特許第6,441,163号; WO2005037992; WO2005081711; 及びWO2006/034488に記載されている（これらの全ては、その全体が本明細書に明確に参照により取り込まれる）。
【０２９４】
或いは、前記抗体及び細胞毒性薬物を含む融合タンパク質を、例えば、組換え技術又はペプチド合成によって、作製することがある。DNAの長さは、互いに隣接するか、又は前記コンジュゲートの所望の特性を破壊しないリンカー・ペプチドをコードする領域によって分離された、前記コンジュゲートの2つの部分をコードするそれぞれの領域を含むことがある。
【実施例】
【０２９５】
実施例
以下の実施例は、高用量のCD117-アマニチンADCを投与した非ヒトの霊長類で、肝臓の酵素が上昇したことが認められ、毒性が示唆された試験について記載する。しかし、同じ用量を、別々の日の2回以上にして投与した場合、前記毒性は消失した。肝臓の酵素レベルの低下の大きさは、用量を減少させたことをはるかに超えるものであった−例えば、ADCの単回用量(例えば、0.6 mg/kg)を投与した場合、肝臓の酵素レベルは、例えば、正常値の100倍を超えて、上昇したが、用量を2等分(例えば、2×0.3 mg/kg)に分割した場合、肝臓の酵素の上昇の大きさは単に小さくなるだけではなかった。それどころか、前記肝臓の酵素レベルは正常に戻った、即ち、全部で同量の薬物を投与したにもかかわらず毒性は回避される。重要なことは、両投薬レジメン(単回用量と分割用量)で同等の有効性が認められることである。
【０２９６】
以下の実施例において使用するADCには、リンカー(L)を介して細胞毒素(D)にコンジュゲートした種々の抗CD117抗体が含まれる。具体的には、前記ADCを、種々の抗CD117抗体を図５に描かれた化合物にコンジュゲートすることによって、合成した。より具体的には、ADC 1は、抗CD117抗体、即ち、CK6、であり、D265CとH435AのFc変異を含む改変したFc領域を有する、速い(即ち、短い)半減期を特徴とする。ADC 2は、配列番号(SEQ ID NO)：106に記載の重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：107に記載の軽鎖可変領域を含む抗CD117抗体であり、D265C及びH435A Fc変異を含む改変したFc領域を有する速い(即ち、短い)半減期を特徴とする。ADC 3は、配列番号(SEQ ID NO)：106に記載の重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：107に記載の軽鎖可変領域を含む抗CD117抗体であり、D265C、H435A、及びLALA Fc変異を含む改変したFc領域を有する速い(即ち、短い)半減期を特徴とする。
【０２９７】
実施例１. in vivo用量増加試験における網状赤血球の細胞数の解析
抗体薬物コンジュゲートADC 1をこの実施例では使用した。カニクイザルのコホート(1コホートあたり3匹のサル)に、1日目に、1時間の点滴を介して、以下の種々の用量のADC 1を投与した(即ち、0.1 mg/kg QDx1 (単回用量); 0.3 mg/kg QDx1 (単回用量); 0.6 mg/kg QDx1 (単回用量); 0.1 mg/kg Q3D x 2 (複数回用量); 0.3 mg/kg Q3D x 2 (複数回用量); 又はコントロール(PBS (QDx1 (単回用量)) 若しくは、アイソタイプADC (0.3 mg/kg QDx1 (単回用量)))。複数回用量のコホートには、1日目及び3日目に、0.1 mg/kgのADC又は0.3 mg/kgのADCの何れかを投与した。全血からの網状赤血球の細胞数(109/μl)を、血液分析器を用いて測定し、図１に示すように、初回用量を投与した後の日数を横軸としてグラフで表した。
【０２９８】
図１の結果は、ADC 1を投与した全てのコホートについて、ベースラインの網状赤血球数(即ち、PBS)と比較して、ADC 1(即ち、0.1 mg/kg用量-0.6 mg/kg用量、0.1 mg/kg Q3D x 2(複数回用量)及び0.3 mg/kg Q3D x 2(複数回用量))を投与すると、網状赤血球数が一過的に減少することを示す。本結果はまた、ADC 1の複数回投薬レジメンでの投与(即ち、0.1 mg/kg Q3D x 2)が、ADC 1の0.3 mg/kg用量の単回投与に対して、網状赤血球減少において同等であることを示している。
【０２９９】
速い半減期のAb85抗体のADC(配列番号(SEQ ID NO)：106に記載の重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：107に記載の軽鎖可変領域；データは示さず)及び速い半減期のAb67抗体のADC(配列番号(SEQ ID NO)：150に記載の重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：151に記載の軽鎖可変領域；データは示さず)を用いて行った実験において、同様の結果が得られた。
【０３００】
実施例２. in vivo用量増加試験における血小板の細胞数の解析
抗体薬物コンジュゲートADC 1をこの実施例では使用した。カニクイザルのコホート(1コホートあたり3匹のサル)に、1日目に、1時間の点滴を介して、以下の種々の用量のADC 1を投与した(即ち、0.1 mg/kg QDx1 (単回用量); 0.3 mg/kg QDx1 (単回用量); 0.6 mg/kg QDx1 (単回用量); 0.1 mg/kg Q3D x 2 (複数回用量); 0.3 mg/kg Q3D x 2 (複数回用量); 又はコントロール(PBS (QDx1 (単回用量)) 若しくは、アイソタイプADC (0.3 mg/kg QDx1 (単回用量)))。複数回用量のコホートには、1日目及び3日目に、0.1 mg/kgのADC又は0.3 mg/kgのADCの何れかを投与した。全血からの血小板の細胞数(103/μl)を、血液分析器を用いて測定し、図２に示すように、初回用量を投与した後の日数を横軸としてグラフで表した。
【０３０１】
図２の結果は、ベースラインの血小板数(即ち、PBS)と比較して、ADC 1(即ち、0.1 mg/kg用量-0.6 mg/kg用量、0.1 mg/kg Q3D x 2(複数回用量)及び0.3 mg/kg Q3D x 2(複数回用量))を投与すると、血小板数が一過的に減少することを示す。0.1 mg/kg Q3D×2(複数回用量)での血小板数の減少は、0.1 mg/kg(単回用量)で観察された血小板数の減少と同等(即ち、悪化しない)であることも示している。更に、本結果はまた、ADC 1の複数回投薬レジメンの投与(即ち、0.3 mg/kg Q3D x 2)が、ADC 1の0.6 mg/kg用量の単回投与に対して、一過的な血小板減少において同等であることを示している。
【０３０２】
速い半減期のAb85抗体のADC(配列番号(SEQ ID NO)：106に記載の重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：107に記載の軽鎖可変領域；データは示さず)及び速い半減期のAb67抗体のADC(配列番号(SEQ ID NO)：150に記載の重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：151に記載の軽鎖可変領域；データは示さず)を用いて行った実験において、同様の結果が得られた。
【０３０３】
実施例３．in vivo用量増加試験における血漿中ALT、LDH、ASTの解析
抗体薬物コンジュゲートADC 1をこの実施例では使用した。カニクイザルのコホート(1コホートあたり3匹のサル)に、1日目に、1時間の点滴を介して、以下の種々の用量のADC 1を投与した(即ち、0.1 mg/kg QDx1； 0.3 mg/kg QDx1； 0.6 mg/kg QDx1； 0.1 mg/kg Q3D x 2 (複数回用量); 0.3 mg/kg Q3D x 2 (複数回用量); 又はコントロール(PBS (QDx1 (単回用量)) 若しくは、アイソタイプADC (0.3 mg/kg QDx1 (単回用量)))。複数回用量のコホートには、1日目及び3日目に、0.1 mg/kgのADC又は0.3 mg/kgのADCの何れかを投与した。ALT (アラニン・アミノトランスアミナーゼ)、LDH(乳酸デヒドロゲナーゼ)及びAST(アスパラギン酸アミノトランスアミナーゼ)の血漿レベルを、血液学的分析器を用いて測定し、図３Ａ−３Ｃに示すように、初回用量を投与した後の日数を横軸としてグラフで表した。図３Ｄ及び３Ｅに示した結果について、単回用量では15日目に、複数回用量では18日目に骨穿刺液を採取し、フロー・サイトメトリー・アッセイを用いて、骨髄中の造血幹細胞及び前駆細胞の細胞を測定した。
【０３０４】
図３Ａ、３Ｂ及び３Ｃの結果は、アラニン・アミノトランスアミナーゼ(ALT)、乳酸デヒドロゲナーゼ(LDH)、及びアスパラギン酸アミノトランスアミナーゼ(AST)のレベルが、それぞれ、0.6 mg/kg用量のADCの投与時に、ベースラインALT、LDH及びAST数(即ちPBS)及び評価した他の投薬レジメンと比較して、有意に一過的に増加することを示す。本結果はまた、アラニン・アミノトランスアミナーゼ(ALT)、乳酸デヒドロゲナーゼ(LDH)、及びアスパラギン酸アミノトランスアミナーゼ(AST)のレベルが、0.1 mg/kg用量のADCの投与時に、ベースライン（即ち、PBS）と比較して、有意な変化がなかったことも示す。本結果はまた、複数回投薬レジメンは忍容性が良好であり、0.6 mg/kgの単回用量と比較してLDH、AST及びALTのレベルが有意に低くなったことも示している。
【０３０５】
図３Ｄの結果は、ADC 1(速い半減期)を、野生型(wt)の半減期のADC 1(D265C及びH435A Fcの変異を欠く)、コントロールIgG1アマニチンADC(即ち、ISO-AM)、及びコントロールのそのままのCD117抗体(naked CD117 antibody) (即ち、「CD117」)と比較した、骨髄中の造血幹細胞及び前駆体細胞の数を記載する。本結果は、ADC 1(速い半減期)を投与したとき、造血幹細胞及び前駆細胞が、効率良く、オン−ターゲットで減少することを示す。本結果はまた、速い半減期ADC 1を複数回投薬レジメンで投与することは(即ち、0.1 mg/kg Q3D x 2)、造血幹細胞及び前駆細胞の減少が、速い半減期ADC 1の単回0.6 mg/kg用量で観察されたものと比較して、およそ同等の効率であったことも示す。図３Ｅの結果は、速い半減期のADC 1と速い半減期のアイソタイプ・コントロール(即ちISO-AM(D265C.H435A))とを比較した、骨髄中の造血幹細胞及び前駆体細胞の数を記載する。本結果は、速い半減期のADC 1を複数回投薬レジメンで投与することは(即ち、0.1 mg/kg Q3D×2及び0.3 mg/kg Q3D×2)、造血幹細胞及び前駆細胞の減少が、速い半減期ADC 1の単回0.6 mg/kg用量で観察されたものよりも、効率的であったことを示す。更に、複数回用量の0.3 mg/kg Q3D x 2は、忍容性が良好であった。
【０３０６】
速い半減期のAb85抗体のADC(配列番号(SEQ ID NO)：106に記載の重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：107に記載の軽鎖可変領域；データは示さず)及び速い半減期のAb67抗体のADC(配列番号(SEQ ID NO)：150に記載の重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：151に記載の軽鎖可変領域；データは示さず)を用いて行った実験において、同様の結果が得られた。
【０３０７】
加えて、ADC 1の血漿中濃度を、当業者の中のある者が知る方法を用いて測定し、ADC 1の様々な用量(即ち、0.1 mg/kg(QDx1)；0.3 mg/kg(QDx1)；0.6 mg/kg(QDx1)；0.1 mg/kg Q3D x 2(複数回用量)、0.3 mg/kg Q3D x 2(複数回用量)))を用いて、Cmax 及びAUCを計算した。複数回用量のコホートに対しては、0.1 mg/kgのADC 1又は0.3 mg/kgのADC 1の何れかを、t = 0及びt= 72時間で投与し、単回用量のコホートに対しては、0.1 mg/kgのADC 1、0.3 mg/kgのADC 1又は0.6 mg/kgのADC 1の何れかをt = 0で投与した。ADC 1の濃度(μg/ml)を、横軸を時間として測定し、図３Ｆにグラフで示した。その数値の結果を表４に示した。
【０３０８】
【表５】
2021526525.tif 000159
【０３０９】
本データは、0.3 mg/kg Q3Dx2の複数回投薬レジメンは、0.6 mg/kg QDx1(単回用量)と比較した場合、同様のAUC、より低いCmax、及びより低い肝臓の酵素レベル(例えば、より低いALT、LDH、AST)となり、網状赤血球は同様に一過的に減少した。これらのデータは、忍容性はCmaxによって決まること、一方、有効性はAUCによって決まること、を示した。
【０３１０】
速い半減期のAb85抗体のADC(配列番号(SEQ ID NO)：106に記載の重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：107に記載の軽鎖可変領域；データは示さず)及び速い半減期のAb67抗体のADC(配列番号(SEQ ID NO)：150に記載の重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：151に記載の軽鎖可変領域；データは示さず)を用いて行った実験において、AUC及びCmaxの同様の傾向が観察された。
【０３１１】
本明細書に示されるように、ADCの用量を増加させると、曝露量が増加した。総用量を考えた場合、2つの用量という分割投与により、より高い単回用量と、AUC値は同様になったが、同じ量の単回用量と比較して同様のCmax値となった。これらのADCを分割投与すると、より高い単回用量と比較して、肝臓の酵素レベルはより低く、有効性は同様となり、ある特定の実施形態では、忍容性はCmaxによって決まること、一方、有効性はAUCによって決まること、を更に示した。
【０３１２】
例４．in vivo用量増加試験における網状赤血球の細胞数と血漿ASTの解析
抗体薬物コンジュゲートADC 2及びADC 3を以下の実施例で使用した。カニクイザルのコホート(1コホートあたり3匹のサル)に、1日目に、1時間の点滴を介して、複数回用量のADC 2(即ち、0.1 mg/kg QDx3)、又は種々の用量のADC 3（即ち、0.3 mg/kg QDx1(単回用量)又は0.1 mg/kg QDx5(複数回用量)）を投与した。ADC 2の複数回用量コホートでは、0.1 mg/kgのADCを1日目と3日目に投与した。ADC 3の複数回用量コホートでは、0.1 mg/kgのADCを1、2、3、4及び5日目に投与した。全血からの網状赤血球の細胞数(109/μl)を、血液分析器を用いて測定し、図４Ａに示すように、初回用量を投与した後の日数を横軸としてグラフで表した。加えて、血漿中のAST（アスパラギン酸アミノトランサミナーゼ(aspartate aminotransaminase)）レベルを血液学的分析器を用いて測定し、図４Ｂに示すように、初回用量を投与した後の日数を横軸としてグラフで表した。.
【０３１３】
図４Ａの結果は、ADC 2(即ち、0.1 mg/kg QD x 3(複数回用量))及びADC 3(即ち、0.3 mg/kg QD x 1(単回用量)及び0.1 mg/kg QD x 5(複数回用量))を投与すると、網状赤血球数が一過的に減少することを示す。ADC 2(即ち、0.1 mg/kg QD x 3(複数回用量))及びADC 3(即ち、0.3 mg/kg QD x 1(単回用量)及び0.1 mg/kg QD x 5(複数回用量))を投与したときに、血小板数が一過的に減少することも観察された（データを示さず）。図４Ｂの結果は、ADC 3の単回用量(即ち、0.3 mg/kg QD x 1(単回用量))と比較して、ADC 2を投与しても(即ち、0.1 mg/kg QD x 3(複数回用量))、アスパラギン酸アミノトランスアミナーゼ(AST)のレベルが有意に変化しないことを示す。更に、ADC3の結果を比較すると（即ち、0.1 mg/kg QD x 5（複数回用量）と比較した0.3 mg/kg QD x 1(単回用量)）、血漿ASTレベルが上昇することが増加する閾値があることが示唆された。同様の結果が、アラニン・アミノトランスアミナーゼ(ALT)、乳酸デヒドロゲナーゼ(LDH)の血漿レベルについて、ADC 2(即ち、0.1 mg/kg QD x 3(複数回用量))及びADC 3(即ち、0.3 mg/kg QD x 1(単回用量)及び0.1 mg/kg QD x 5(複数回用量))を用いて行った実験において、得られた(データは示さず)。
【０３１４】
加えて、ADC 2及びADC3の血漿中濃度を、当業者の中のある者が知る方法を用いて測定し、ADC 2(即ち、0.1 mg/kg QD x 3(複数回用量))と変えた用量のADC 3(即ち、0.3 mg/kg QD x 1(単回用量)及び0.1 mg/kg QD x 5(複数回用量))を用いて、Cmax 及びAUCを計算した。複数回用量のコホートに対しては、0.1 mg/kgのADC 2をt = 0、t = 24時間及びt= 48時間で、又は0.1 mg/kgのADC 3をt = 0、t = 24時間、t= 48時間、t = 72時間及びt= 96時間で投与し、単回用量のコホートに対しては、0.3 mg/kgのADC 3をt = 0で投与した。時間を横軸としたADC 2(μg/ml)及びADC 3(μg/ml)の濃度を測定し、図４Ｃにグラフで示した。その数値の結果を表５(ADC 2)及び表６(ADC 3)に示した。
【０３１５】
【表６】
2021526525.tif 000160
【０３１６】
【表７】
2021526525.tif 000161
【０３１７】
本データは、0.1 mg/kg QDx5の複数回投薬レジメンによって、より高いAUC、より低いCmax、及びより高い肝臓の酵素レベル(例えば、より高いAST(図４Ｂ)、より高いALT(データは示さず)、及びより高いLDH(データは示さず))がもたらされたことを示す。
【０３１８】
配列表
【表８−１】
2021526525.tif 000162
【表８−２】
2021526525.tif 000163
【表８−３】
2021526525.tif 000164
【表８−４】
2021526525.tif 000165
【表８−５】
2021526525.tif 000166
【表８−６】
2021526525.tif 000167
【表８−７】
2021526525.tif 000168
【表８−８】
2021526525.tif 000169
【表８−９】
2021526525.tif 000170
【表８−１０】
2021526525.tif 000171
【表８−１１】
2021526525.tif 000172
【表８−１２】
2021526525.tif 000173
【表８−１３】
2021526525.tif 000174
【表８−１４】
2021526525.tif 000175
【表８−１５】
2021526525.tif 000176
【表８−１６】
2021526525.tif 000177
【表８−１７】
2021526525.tif 000178
【表８−１８】
2021526525.tif 000179
【表８−１９】
2021526525.tif 000180
【表８−２０】
2021526525.tif 000181
【表８−２１】
2021526525.tif 000182
【表８−２２】
2021526525.tif 000183
【表８−２３】
2021526525.tif 000184
【表８−２４】
2021526525.tif 000185
【表８−２５】
2021526525.tif 000186
【表８−２６】
2021526525.tif 000187
【表８−２７】
2021526525.tif 000188
【表８−２８】
2021526525.tif 000189
【表８−２９】
2021526525.tif 000190
【表８−３０】
2021526525.tif 000191
【表８−３１】
2021526525.tif 000192
【表８−３２】
2021526525.tif 000193
【表８−３３】
2021526525.tif 000194
【表８−３４】
2021526525.tif 000195
【表８−３５】
2021526525.tif 000196
【表８−３６】
2021526525.tif 000197
【表８−３７】
2021526525.tif 000198
【表８−３８】
2021526525.tif 000199
【表８−３９】
2021526525.tif 000200
【表８−４０】
2021526525.tif 000201
【表８−４１】
2021526525.tif 000202
【表８−４２】
2021526525.tif 000203
【表８−４３】
2021526525.tif 000204
【表８−４４】
2021526525.tif 000205
【表８−４５】
2021526525.tif 000206
【表８−４６】
2021526525.tif 000207
【表８−４７】
2021526525.tif 000208
【表８−４８】
2021526525.tif 000209
【表８−４９】
2021526525.tif 000210
【表８−５０】
2021526525.tif 000211
【表８−５１】
2021526525.tif 000212
【表８−５２】
2021526525.tif 000213
【表８−５３】
2021526525.tif 000214
【表８−５４】
2021526525.tif 000215
【０３１９】
他の実施形態
本明細書において言及される全ての刊行物、特許、及び特許出願は、あたかも各独立した刊行物又は特許出願が具体的かつ個別に示されて参照により取り込まれるように、同程度に、本明細書に参照により取り込まれる。
【０３２０】
一方、本発明を、その特定の実施形態に関連させて説明しているが、本発明は更に改変することが可能であること、及び本出願は、一般に、本発明の原理に従いながらの、並びに本発明から逸脱すること（本発明から逸脱は、本発明が関係する技術分野における既知の又は慣例的に行われることの中である、及び本明細書に前述した本質的な特徴に適用することができる）を含みながらの、本発明の任意の変更、使用、又は適応を包含することが意図されること、並びに請求項の範囲内で従うこと、が理解されるのであろう。
【０３２１】
他の実施形態は、請求項の範囲内である。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト患者におけるターゲット細胞の集団を減少させる方法、ここで、前記方法は、以下の工程を含む投薬レジメンを含む：
(a)1日目に抗体薬物コンジュゲート(ADC)の第1の用量を前記患者に投与すること；及び
(b)第1の用量後に前記ADCの第2の用量を前記患者に投与すること；
ここで、前記ADCは、リンカーを介してアマトキシンにコンジュゲートした抗体又はその抗原結合フラグメントを含む、
ここで、前記ADCは細胞表面マーカーに対して特異的である、及び
ここで、前記投薬レジメンは、ヒト患者において、前記ターゲット細胞の集団の減少を誘導する。
【請求項２】
請求項1に記載の方法、ここで、前記第1の用量が、約2〜12 mgのADC、約2〜11 mgのADC、約2〜10 mgのADC、約2〜9 mgのADC、約2〜8 mgのADC、約2〜7 mgのADC、約2〜6 mgのADC、約2〜5 mgのADC、約2〜4 mgのADC、及び約2〜3 mgのADCからなる群より選択される。
【請求項３】
請求項1に記載の方法、ここで、前記第1の用量が、約1.9〜11.5 mgのADCを含む。
【請求項４】
請求項1に記載の方法、ここで、前記第2の用量が、前記第1の用量の10重量%以内である、又はここで、前記第2の用量が前記第1の用量と同じである。
【請求項５】
請求項１〜４の何れか一項に記載の方法、ここで、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した後1〜24時間の間に投与する。
【請求項６】
請求項１〜４の何れか一項に記載の方法、ここで、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した後1〜12日の間に投与する。
【請求項７】
請求項１〜４の何れか一項に記載の方法、ここで、前記ターゲット細胞が幹細胞である。
【請求項８】
請求項１〜４の何れか一項に記載の方法、ここで、前記ターゲット細胞が免疫細胞である。
【請求項９】
請求項１〜４の何れか一項に記載の方法、ここで、前記ターゲット細胞が疾患を引き起こす細胞である。
【請求項１０】
請求項１〜４の何れか一項に記載の方法、ここで、細胞マーカーが、CD117、CD45、CD2、CD5、CD252、及びCD137からなる群より選択される。
【請求項１１】
請求項１〜４の何れか一項に記載の方法、ここで、前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号(SEQ ID NO)：106に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：107に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【請求項１２】
請求項１〜４の何れか一項に記載の方法、ここで、前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号(SEQ ID NO)：150に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：151に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【請求項１３】
ヒト患者におけるターゲット細胞の集団を減少させる方法、ここで、前記方法は、以下の工程を含む投薬レジメンを含む：
(a)1日目に抗体薬物コンジュゲート(ADC)の第1の用量を前記患者に投与すること、
ここで、前記第1の用量は、約0.3 mg/kg、約0.6 mg/kg、約0.03〜0.29 mg/kgのADC、約0.03〜0.25 mg/kgのADC、約0.03〜0.20 mg/kgのADC、約0.03〜0.15 mg/kgのADC、約0.03〜0.10 mg/kgのADC、約0.05〜0.10 mg/kgのADC、及び約0.05〜0.07 mg/kgのADC；並びに
(b)前記第1の用量後に、前記ADCの第2の用量を前記患者に投与すること；
ここで、前記ADCは、リンカーを介してアマトキシンにコンジュゲートした抗体又はその抗原結合フラグメントを含む、
ここで、前記ADCは細胞表面マーカーに対して特異的である、及び
ここで、前記投薬レジメンは、ヒト患者において、前記ターゲット細胞の集団の減少を誘導する。
【請求項１４】
請求項１３に記載の方法、ここで、前記第1の用量が約0.03〜0.29 mg/kgである。
【請求項１５】
請求項１３に記載の方法、ここで、前記第1の用量が約0.03〜0.19 mg/kgのADCを含む。
【請求項１６】
請求項１３に記載の方法、ここで、前記第2の用量が前記第1の用量の10重量%以内である、又はここで、前記第2の用量が前記第1の用量と同じ重量である。
【請求項１７】
請求項１３〜１６の何れか一項に記載の方法、ここで、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した後1〜24時間の間に投与する。
【請求項１８】
請求項１３〜１６の何れか一項に記載の方法、ここで、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した後1〜12日の間に投与する。
【請求項１９】
請求項１３〜１６の何れか一項に記載の方法、ここで、前記ターゲット細胞が幹細胞である。
【請求項２０】
請求項１３〜１６の何れか一項に記載の方法、ここで、前記ターゲット細胞が免疫細胞である。
【請求項２１】
請求項１３〜１６の何れか一項に記載の方法、ここで、前記ターゲット細胞が疾患を引き起こす細胞である。
【請求項２２】
請求項１３〜１６の何れか一項に記載の方法、ここで、細胞マーカーが、CD117、CD45、CD2、CD5、CD252、及びCD137からなる群より選択される。
【請求項２３】
請求項１３〜１６の何れか一項に記載の方法、ここで、前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号(SEQ ID NO)：106に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：107に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【請求項２４】
請求項１３〜１６の何れか一項に記載の方法、ここで、前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号(SEQ ID NO)：150に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：151に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【請求項２５】
移植コンディショニングのために、ヒト患者におけるターゲット細胞の集団を減少させる方法、ここで、前記方法は、以下の工程を含む投薬レジメンを含む： 
(a)1日目に抗体薬物コンジュゲート(ADC)の第1の用量を前記患者に投与すること；及び
(b)第1の用量後に前記ADCの第2の用量を前記患者に投与すること；
ここで、前記ADCは、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗体又はその抗原結合フラグメントを含む、
ここで、前記ADCは、CD117、CD45、CD137、CD2、CD252又はCD5から選択される細胞表面マーカーに特異的である、及び
ここで、前記投薬レジメンは、移植コンディショニングのために、ヒト患者におけるターゲット細胞の集団の減少を誘導する。
【請求項２６】
請求項２５に記載の方法、ここで、前記細胞毒素は、抗有糸分裂薬剤又はRNAポリメラーゼ阻害剤である。
【請求項２７】
請求項２６に記載の方法、ここで、前記RNAポリメラーゼ阻害剤がアマトキシンである。
【請求項２８】
請求項１〜２４又は２６の何れか一項に記載の方法、ここで、前記RNAポリメラーゼ阻害剤がアマニチンである。
【請求項２９】
請求項２８に記載の方法、ここで、前記アマニチンが、α-アマニチン、β-アマニチン、γ-アマニチン、ε-アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、及びプロアマヌリンからなる群より選択される。
【請求項３０】
請求項２７に記載の方法、ここで、前記アマトキシンが、式(I)で表される
【化１】
2021526525.tif 000216
ここで、R1はH、OH、ORA、又はORCである；
R2はH、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、任意選択的に置換された5員ヘテロシクロルアルキル基を形成する；
R3はH、RC、又はRDである；
R4、R5、R6, 及びR7は、それぞれ独立してH、OH、ORC、ORD、RC、又はRDである；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、又はNRCRDである；
R9はH、OH、ORC、又はORDである；
Xは-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；
RCは-L-Zである；
RDは、置換されたC1-C6アルキル、置換されたC1-C6ヘテロアルキル、置換されたC2-C6アルケニル、置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、置換されたC2-C6アルキニル、置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、置換されたシクロアルキル、置換されたヘテロシクロアルキル、置換されたアリール、又は置換されたヘテロアリールである；
Lは、リンカーを含むペプチドである；及び、
Zは、L上に存在する反応性置換基と、前記抗体、又はその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的な部分構造である。
【請求項３１】
請求項２５に記載の方法、ここで、前記細胞毒素がPBD、メイタンシン又はアウリスタチンである。
【請求項３２】
請求項３１に記載の方法、ここで、前記アウリスタチンが、モノメチル・アウリスタチンF(MMAF)又はモノメチル・アウリスタチンE(MMAE)である。
【請求項３３】
請求項２５〜３２の何れか一項に記載の方法、ここで、前記HSCの細胞表面マーカーがCD117である。
【請求項３４】
請求項３３に記載の方法、ここで、前記抗体がCD117に結合する、並びに
a)  配列番号(SEQ ID NO)：106に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：107に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む；又は
b)  配列番号(SEQ ID NO)：150に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：151に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【請求項３５】
請求項１、１３、又は２５の何れか一項に記載の方法、ここで、前記抗体が、D265C変異(EUインデックスによる)を含むFc領域を含む。
【請求項３６】
請求項３５に記載の方法、ここで、前記抗体がH435A変異(EUインデックスによる)を含む。
【請求項３７】
請求項１〜３６の何れか一項に記載の方法、ここで、前記ADCのリンカーが、N-ベータ-マレイミドプロピル-Val-Ala-パラ-アミノベンジル(BMP-Val-Ala-PAB)である。
【請求項３８】
請求項１、１３、又は２５の何れか一項に記載の方法、ここで、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約1時間後に投与する。
【請求項３９】
請求項１、１３、又は２５の何れか一項に記載の方法、ここで、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約2時間後に投与する。
【請求項４０】
請求項１、１３、又は２５の何れか一項に記載の方法、ここで、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約3時間後に投与する。
【請求項４１】
請求項１、１３、又は２５の何れか一項に記載の方法、ここで、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約4時間後に投与する。
【請求項４２】
請求項１、１３、又は２５の何れか一項に記載の方法、ここで、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約5時間後に投与する。
【請求項４３】
請求項１、１３、又は２５の何れか一項に記載の方法、ここで、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約6時間後に投与する。
【請求項４４】
請求項１、１３、又は２５の何れか一項に記載の方法、ここで、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約7時間後に投与する。
【請求項４５】
請求項１、１３、又は２５の何れか一項に記載の方法、ここで、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約8時間後に投与する。
【請求項４６】
請求項１、１３、又は２５の何れか一項に記載の方法、ここで、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約1日後に投与する。
【請求項４７】
請求項１、１３、又は２５の何れか一項に記載の方法、ここで、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約2日後に投与する。
【請求項４８】
請求項１、１３、又は２５の何れか一項に記載の方法、ここで、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約3日後に投与する。
【請求項４９】
請求項１、１３、又は２５の何れか一項に記載の方法、ここで、前記患者は,
前記ADCが前記患者の血中から実質的にクリアランスされたときに、幹細胞移植を更に受ける。
【請求項５０】
請求項１、１３、又は２５の何れか一項に記載の方法、ここで、前記ADCを投与するための投薬レジメンが、本質的に工程a)及びb)からなる。
【請求項５１】
前記ヒト患者に細胞移植を施すことを更に含む、請求項１、１３、又は２５の何れか一項に記載の方法。
【請求項５２】
請求項５１に記載の方法、ここで、前記細胞移植が造血幹細胞(HSC)移植である。
【請求項５３】
請求項１、１３、又は２５の何れか一項に記載の方法、ここで、前記方法が非-骨髄除去性である。
【請求項５４】
請求項１、１３、又は２５の何れか一項に記載の方法、ここで、前記患者から決定される肝臓マーカーが毒性レベルに達しない。
【請求項５５】
請求項５４に記載の方法、ここで、前記肝臓マーカーが、AST、ALT、又はLDHである。
【請求項５６】
請求項１、１３、又は２５の何れか一項に記載の方法、ここで、前記患者から決定される肝臓マーカーが、前記第1の用量を投与した後、5〜7日間、上昇する。
【請求項５７】
請求項１、１３、又は２５の何れか一項に記載の方法、ここで、前記患者から決定される肝臓マーカーが、前記第1の用量を投与した後、6日間、上昇する。
【請求項５８】
請求項１、１３、又は２５の何れか一項に記載の方法、ここで、前記患者の血中AST、ALT、又はLDHレベルのうちの少なくとも1つが、前記患者に対する、前記第1の用量の投与と前記第1の用量の投与後14日との間に、毒性レベルに達しない。
【請求項５９】
請求項５６〜５８の何れか一項に記載の方法、ここで、前記肝臓マーカーがASTである。
【請求項６０】
ヒト患者におけるターゲット細胞の集団を減少させる方法、ここで、前記方法は、以下の工程を含む投薬レジメンを含む：
抗体薬物コンジュゲート(ADC)の第2の用量を、前記患者に、前記ADCの第1の用量を投与した後、1〜14日以内に、前記患者に投与すること；
ここで、前記ADCは、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗体又はその抗原結合フラグメントを含む；
ここで、前記ADCは細胞表面マーカーに特異的である；
ここで、前記投薬レジメンは、ヒト患者において、前記ターゲット細胞の集団の減少を誘導する；並びに
ここで、前記患者の血中AST、ALT、又はLDHレベルの少なくとも1つが、前記患者に対する、前記第1の用量の投与と前記第1の用量の投与後14日との間に、毒性レベルに達しない。
【請求項６１】
ヒト患者におけるターゲット細胞の集団を減少させる方法、ここで、前記方法は、以下の工程を含む投薬レジメンを含む：
抗体薬物コンジュゲート(ADC)の第2の用量を、前記患者に、前記ADCの第1の用量を投与した後、1〜14日以内に、前記患者に投与すること；
ここで、前記ADCは、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートした抗体又はその抗原結合フラグメントを含む；
ここで、前記ADCは細胞表面マーカーに特異的である；
ここで、前記投薬レジメンは、ヒト患者において、前記ターゲット細胞の集団の減少を誘導する；並びに
ここで、あ前記患者の血中AST、ALT、又はLDHレベルの少なくとも1つが、前記患者に対する、前記第1の用量の投与と前記第1の用量の投与後14日との間に、正常レベルの3倍よりも大きく上昇しない。
【請求項６２】
請求項６０又は６１に記載の方法、ここで、前記細胞毒素が抗有糸分裂薬剤又はRNAポリメラーゼ阻害剤である。
【請求項６３】
請求項６２に記載の方法、ここで、前記RNAポリメラーゼ阻害剤がアマトキシンである。
【請求項６４】
請求項６３に記載の方法、ここで、前記アマトキシンが、式(I)で表される
【化２】
2021526525.tif 000217
ここで、R1はH、OH、ORA、又はORCである；
R2はH、OH、ORB、又はORCである；
RA 及びRBは、それらが結合している酸素原子と一緒になって、任意選択的に置換された5員ヘテロシクロルアルキル基を形成する；
R3はH、RC、又はRDである；
R4、R5、R6, 及びR7は、それぞれ独立してH、OH、ORC、ORD、RC、又はRDである；
R8は、OH、NH2、ORC、ORD、NHRC、又はNRCRDである；
R9はH、OH、ORC、又はORDである；
Xは-S-、-S(O)-、又は-SO2-である；
RCは-L-Zである；
RDは、置換されたC1-C6アルキル、置換されたC1-C6ヘテロアルキル、置換されたC2-C6アルケニル、置換されたC2-C6ヘテロアルケニル、置換されたC2-C6アルキニル、置換されたC2-C6ヘテロアルキニル、置換されたシクロアルキル、置換されたヘテロシクロアルキル、置換されたアリール、又は置換されたヘテロアリールである；
Lは、リンカーを含むペプチドである；及び、
Zは、L上に存在する反応性置換基と、前記抗体、又はその抗原結合フラグメント内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学的な部分構造である。
【請求項６５】
請求項６０又は６１に記載の方法、ここで、前記細胞毒素がPBD、メイタンシン又はアウリスタチンである。
【請求項６６】
請求項６５に記載の方法、ここで、前記アウリスタチンが、モノメチル・アウリスタチンF(MMAF)又はモノメチル・アウリスタチンE(MMAE)である。
【請求項６７】
請求項６０〜６６の何れか一項に記載の方法、ここで、前記細胞表面マーカーが、CD117、CD45、CD137、CD2、CD252、又はCD5である。
【請求項６８】
請求項６７に記載の方法、ここで、前記抗体がCD117に結合する、並びに
a)  配列番号(SEQ ID NO)：106に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：107に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む；又は
b)  配列番号(SEQ ID NO)：150に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号(SEQ ID NO)：151に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【請求項６９】
請求項６０〜６８の何れか一項に記載の方法、ここで、前記抗体が、D265C変異(EUインデックスによる)を含むFc領域を含む。
【請求項７０】
請求項６９に記載の方法、ここで、前記抗体がH435A変異(EUインデックスによる)を含む。
【請求項７１】
請求項６０〜７０の何れか一項に記載の方法、ここで、前記ADCのリンカーが、N-ベータ-マレイミドプロピル-Val-Ala-パラ-アミノベンジル(BMP-Val-Ala-PAB)である。
【請求項７２】
請求項６０〜７１の何れか一項に記載の方法、ここで、前記第2の用量を、前記第1の用量を投与した約1時間後に投与する；前記第1の用量を投与した約2時間後に投与する；前記第1の用量を投与した約３時間後に投与する；前記第1の用量を投与した約1日後に投与する；前記第1の用量を投与した約2日後に投与する；又は前記第1の用量を投与した約3日後に投与する。
【請求項７３】
請求項６０〜７２の何れか一項に記載の方法、ここで、前記患者は,前記ADCが前記患者の血中から実質的にクリアランスされたときに、幹細胞移植を更に受ける。
【請求項７４】
請求項７３に記載の方法、ここで、前記細胞移植が造血幹細胞(HSC)移植である。
【国際調査報告】
2021526525.tif 000218
2021526525.tif 000219
2021526525.tif 000220
2021526525.tif 000221