(57)【要約】  本開示は、概して、ステージＩＩＩ非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）と診断された未治療患者を治療する、及び／又は化学療法及び放射線療法（ｃＣＲＴ）に伴う病理学的状態を静めるための方法において使用するための二機能融合タンパク質による標的ＴＧＦ−β阻害のための投薬計画に関する。
2021527083.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ステージＩＩＩ非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）と診断され、併用化学療法及び放射線療法（ｃＣＲＴ）に伴う肺の病理学的障害を発症するリスクがある未治療患者を治療するための方法であって、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含む少なくとも１２００ｍｇの用量のタンパク質を併用ｃＣＲＴを用いて前記患者に投与する第１のステップ、並びに少なくとも１２００ｍｇのタンパク質を併用ｃＣＲＴなしで前記患者に投与する第２のステップを含み、
前記第１のポリペプチドは、（ａ）ヒトタンパク質プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に結合する抗体の重鎖の少なくとも１つの可変領域；及び（ｂ）ヒト形質転換増殖因子β受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）又は形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）に結合することができるその断片を含み、
前記第２のポリペプチドは、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の軽鎖の少なくとも１つの可変領域を含み、そして
前記第１のポリペプチドの前記重鎖及び前記第２のポリペプチドの前記軽鎖は、組み合わされると、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗原結合部位を形成する、方法。
【請求項２】
前記方法は、前記第１のステップにおける前記ｃＣＲＴに伴う前記肺の病理学的障害を静める、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記病理学的障害は、肺炎及び／又は肺線維症である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記方法は、前記患者において前記ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣの転移の発生までの時間及び／又は遠隔転移までの時間を増加させる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記第１のポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記用量は、１２００ｍｇ〜２４００ｍｇである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記用量は、１８００ｍｇ〜２４００ｍｇである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記用量は、１８００ｍｇである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記用量は、２４００ｍｇである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記用量は、２週間ごとに１回又は３週間ごとに１回、投与される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記用量は、１２００ｍｇであり、２週間ごとに１回、投与される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記用量は、２４００ｍｇであり、３週間ごとに１回、投与される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記用量は、２１００ｍｇ又は２４００ｍｇであり、３週間ごとに１回、投与される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、扁平上皮又は非扁平上皮組織像を示す、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、ＰＤ−Ｌ１＋発現を示す、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、ＰＤ−Ｌ１＋発現を示さない、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記患者は、ＥＧＦＲ感作突然変異を有するか、又は有していない、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記患者は、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）転座を有するか、又は有していない、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記患者は、ＲＯＳ１再構成を有するか、又は有していない、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記治療は、前記患者の疾患応答又は改善された生存期間をもたらす、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記疾患応答は、完全寛解、部分寛解、又は安定性の疾患である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記生存期間は、無増悪生存期間（ＰＦＳ）である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記化学療法は、シスプラチン／エトポシド、シスプラチン／ペメトレキセド、及び／又はカルボプラチン／パクリタキセルを前記患者に投与することを含む、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記化学療法は、シスプラチン／ペメトレキセドを含み、前記ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、非扁平上皮組織像を示す、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
シスプラチンは、約５０ｍｇ／ｍ２〜８０ｍｇ／ｍ２の用量で静脈内に投与される、請求項２３又は２４に記載の方法。
【請求項２６】
ペメトレキセドは、約５００ｍｇ／ｍ２の用量で静脈内に投与される、請求項２３又は２４に記載の方法。
【請求項２７】
エトポシドは、約５０ｍｇ／ｍ２の用量で静脈内に投与される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２８】
パクリタキセルは、約４５ｍｇ／ｍ２の用量で静脈内に投与される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２９】
カルボプラチンは、ＡＵＣ２に基づいて３０分にわたって静脈内に投与される、請求項２３に記載の方法。
【請求項３０】
前記放射線療法は、６０〜７４Ｇｙの線量を含む、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記放射線療法は、前記第１のステップの間の６〜７週目の１〜５日目に投与される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記タンパク質は、静脈内投与によって投与される、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記静脈内投与は、前記タンパク質を含む製剤を含む充填済みのバッグ、充填済みのペン、又は充填済みのシリンジによって実行される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記バッグは、チューブ及び／又は針を含む導管に接続される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記第２のステップは、前記第１のステップの完了の１〜４２日後に開始される、請求項１〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記第２のステップは、１２〜２４か月継続される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
ステージＩＩＩ非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）と診断された未治療患者において化学療法及び放射線療法（ｃＣＲＴ）に伴う病理学的障害を静めるための方法であって、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含む少なくとも１２００ｍｇの用量のタンパク質を併用化学療法及び放射線療法（ｃＣＲＴ）を用いて前記患者に投与する第１のステップ、並びに少なくとも１２００ｍｇの前記タンパク質を併用ｃＣＲＴなしで前記患者に投与する第２のステップを含み、
前記第１のポリペプチドは、（ａ）ヒトタンパク質プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に結合する抗体の重鎖の少なくとも１つの可変領域；及び（ｂ）ヒト形質転換増殖因子β受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）又は形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）に結合することができるその断片を含み、
前記第２のポリペプチドは、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の軽鎖の少なくとも１つの可変領域を含み、そして
前記第１のポリペプチドの前記重鎖及び前記第２のポリペプチドの前記軽鎖は、組み合わされると、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗原結合部位を形成する、方法。
【請求項３８】
前記病理学的障害は、肺炎及び／又は肺線維症である、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記第１のポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項３７又は３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記用量は、１２００ｍｇ〜２４００ｍｇである、請求項３７〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記用量は、１８００ｍｇ〜２４００ｍｇである、請求項３７〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記用量は、１２００ｍｇである、請求項３７〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記用量は、２４００ｍｇである、請求項３７〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記用量は、２週間ごとに１回又は３週間ごとに１回、投与される、請求項３７〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
前記用量は、１２００ｍｇであり、２週間ごとに１回、投与される、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記用量は、２４００ｍｇであり、３週間ごとに１回、投与される、請求項４４に記載の方法。
【請求項４７】
前記用量は、２１００ｍｇ又は２４００ｍｇであり、３週間ごとに１回、投与される、請求項４４に記載の方法。
【請求項４８】
前記ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、扁平上皮又は非扁平上皮組織像を示す、請求項３７〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
前記ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、ＰＤ−Ｌ１＋発現を示す、請求項３７〜４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
前記ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、ＰＤ−Ｌ１＋発現を示さない、請求項３７〜４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
前記患者は、ＥＧＦＲ感作突然変異を有するか、又は有していない、請求項３７〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
前記患者は、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）転座を有するか、又は有していない、請求項３７〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記患者は、ＲＯＳ１再構成を有するか、又は有していない、請求項３７〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
前記治療は、前記患者の前記ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣの疾患応答又は改善された生存期間をもたらす、請求項３７〜５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
前記疾患応答は、完全寛解、部分寛解、又は安定性の疾患である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記生存期間は、無増悪生存期間（ＰＦＳ）である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記化学療法は、シスプラチン／エトポシド、シスプラチン／ペメトレキセド、及び／又はカルボプラチン／パクリタキセルを前記患者に投与することを含む、請求項３７〜５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
前記化学療法は、シスプラチン／ペメトレキセドを含み、前記ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、非扁平上皮組織像を示す、請求項３７〜５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
シスプラチンは、約５０ｍｇ／ｍ２〜８０ｍｇ／ｍ２の用量で静脈内に投与される、請求項５７又は５８に記載の方法。
【請求項６０】
ペメトレキセドは、約５００ｍｇ／ｍ２の用量で静脈内に投与される、請求項５７又は５８に記載の方法。
【請求項６１】
エトポシドは、約５０ｍｇ／ｍ２の用量で静脈内に投与される、請求項５７に記載の方法。
【請求項６２】
パクリタキセルは、約４５ｍｇ／ｍ２の用量で静脈内に投与される、請求項５７に記載の方法。
【請求項６３】
カルボプラチンは、ＡＵＣ２に基づいて３０分にわたって静脈内に投与される、請求項５７に記載の方法。
【請求項６４】
前記放射線療法は、６０〜７４Ｇｙの線量を含む、請求項３７〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
前記放射線療法は、前記第１のステップの間の６〜７週目の１〜５日目に投与される、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記タンパク質は、静脈内投与によって投与される、請求項３７〜６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
前記静脈内投与は、前記タンパク質を含む製剤を含む充填済みのバッグ、充填済みのペン、又は充填済みのシリンジによって実行される、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記バッグは、チューブ及び／又は針を含む導管に接続される、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記第２のステップは、前記第１のステップの完了の１〜４２日後に開始される、請求項３７〜６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７０】
前記第２のステップは、１２〜２４か月継続される、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記ステージＩＩＩ非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）は、切除不能である、請求項１〜７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
前記化学療法は、白金ベース化学療法である、請求項１〜２２及び３７〜５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７３】
ステージＩＩＩ非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）と診断され、併用化学療法及び放射線療法（ｃＣＲＴ）に伴う肺の病理学的障害を発症するリスクがある未治療患者を治療するための方法において使用するための第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質であって、前記方法は、少なくとも１２００ｍｇの用量の前記タンパク質を併用ｃＣＲＴを用いて前記患者に投与する第１のステップ、並びに少なくとも１２００ｍｇの前記タンパク質を併用ｃＣＲＴなしで前記患者に投与する第２のステップを含み、
前記第１のポリペプチドは、（ａ）ヒトタンパク質プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に結合する抗体の重鎖の少なくとも１つの可変領域；及び（ｂ）ヒト形質転換増殖因子β受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）又は形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）に結合することができるその断片を含み、
前記第２のポリペプチドは、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の軽鎖の少なくとも１つの可変領域を含み、そして
前記第１のポリペプチドの前記重鎖及び前記第２のポリペプチドの前記軽鎖は、組み合わされると、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗原結合部位を形成する、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項７４】
ステージＩＩＩ非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）と診断された未治療患者において化学療法及び放射線療法（ｃＣＲＴ）に伴う病理学的障害を静めるための方法において使用するための第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質であって、前記方法は、少なくとも１２００ｍｇの用量の前記タンパク質を併用化学療法及び放射線療法（ｃＣＲＴ）と前記患者に投与する第１のステップ、並びに少なくとも１２００ｍｇの前記タンパク質を併用ｃＣＲＴなしで前記患者に投与する第２のステップを含み、
前記第１のポリペプチドは、（ａ）ヒトタンパク質プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に結合する抗体の重鎖の少なくとも１つの可変領域；及び（ｂ）ヒト形質転換増殖因子β受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）又は形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）に結合することができるその断片を含み、
前記第２のポリペプチドは、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の軽鎖の少なくとも１つの可変領域を含み、そして
前記第１のポリペプチドの前記重鎖及び前記第２のポリペプチドの前記軽鎖は、組み合わされると、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗原結合部位を形成する、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項７５】
前記方法は、前記第１のステップにおける前記ｃＣＲＴに伴う前記肺の病理学的障害を静める、請求項７３又は７４に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項７６】
前記病理学的障害は、肺炎及び／又は肺線維症である、請求項７５に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項７７】
前記方法は、前記患者において前記ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣの転移の発生までの時間及び／又は遠隔転移までの時間を増加させる、請求項７３〜７６のいずれか一項に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項７８】
前記第１のポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項７３〜７７のいずれか一項に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項７９】
前記用量は、１２００ｍｇ〜２４００ｍｇである、請求項７３〜７８のいずれか一項に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項８０】
前記用量は、１８００ｍｇ〜２４００ｍｇである、請求項７３〜７９のいずれか一項に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項８１】
前記用量は、１２００ｍｇである、請求項７３〜７９のいずれか一項に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項８２】
前記用量は、２４００ｍｇである、請求項７３〜８０のいずれか一項に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項８３】
前記用量は、２週間ごとに１回又は３週間ごとに１回、投与される、請求項７３〜７９のいずれか一項に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項８４】
前記用量は、１２００ｍｇであり、２週間ごとに１回、投与される、請求項８３に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項８５】
前記用量は、２４００ｍｇであり、３週間ごとに１回、投与される、請求項８３に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項８６】
前記用量は、２１００ｍｇ又は２４００ｍｇであり、３週間ごとに１回、投与される、請求項７９に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項８７】
前記ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、扁平上皮又は非扁平上皮組織像を示す、請求項７３〜８６のいずれか一項に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項８８】
前記ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、ＰＤ−Ｌ１＋発現を示す、請求項７３〜８７のいずれか一項に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項８９】
前記ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、ＰＤ−Ｌ１＋発現を示さない、請求項７３〜８７のいずれか一項に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項９０】
前記患者は、ＥＧＦＲ感作突然変異を有するか、又は有していない、請求項７３〜８９のいずれか一項に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項９１】
前記患者は、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）転座を有するか、又は有していない、請求項７３〜８９のいずれか一項に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項９２】
前記患者は、ＲＯＳ１再構成を有するか、又は有していない、請求項７３〜８９のいずれか一項に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項９３】
前記治療は、前記患者の疾患応答又は改善された生存期間をもたらす、請求項７３〜９２のいずれか一項に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項９４】
前記疾患応答は、完全寛解、部分寛解、又は安定性の疾患である、請求項９３に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項９５】
前記生存期間は、無増悪生存期間（ＰＦＳ）である、請求項９３に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項９６】
前記化学療法は、シスプラチン／エトポシド、シスプラチン／ペメトレキセド、及び／又はカルボプラチン／パクリタキセルを前記患者に投与することを含む、請求項７３〜９５のいずれか一項に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項９７】
前記化学療法は、シスプラチン／ペメトレキセドを含み、前記ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、非扁平上皮組織像を示す、請求項７３〜９５のいずれか一項に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項９８】
シスプラチンは、約５０ｍｇ／ｍ２〜８０ｍｇ／ｍ２の用量で静脈内に投与される、請求項９６又は９７に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項９９】
ペメトレキセドは、約５００ｍｇ／ｍ２の用量で静脈内に投与される、請求項９６又は９７に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項１００】
エトポシドは、約５０ｍｇ／ｍ２の用量で静脈内に投与される、請求項９６に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項１０１】
パクリタキセルは、約４５ｍｇ／ｍ２の用量で静脈内に投与される、請求項９６に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項１０２】
カルボプラチンは、ＡＵＣ２に基づいて３０分にわたって静脈内に投与される、請求項９６に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項１０３】
前記放射線療法は、６０〜７４Ｇｙの線量を含む、請求項７３〜１０２のいずれか一項に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項１０４】
前記放射線療法は、前記第１のステップの間の６〜７週目の１〜５日目に投与される、請求項１０３に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項１０５】
前記タンパク質は、静脈内投与によって投与される、請求項７３〜１０４のいずれか一項に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項１０６】
前記静脈内投与は、前記タンパク質を含む製剤を含む充填済みのバッグ、充填済みのペン、又は充填済みのシリンジによって実行される、請求項１０５に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項１０７】
前記バッグは、チューブ及び／又は針を含む導管に接続される、請求項１０６に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項１０８】
前記第２のステップは、前記第１のステップの完了の１〜４２日後に開始される、請求項７３〜１０７のいずれか一項に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【請求項１０９】
前記第２のステップは、１２〜２４か月継続される、請求項１０８に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
[0001]  本出願は、２０１８年６月１３日に出願された米国仮特許出願第６２／６８４，３８５号；２０１９年２月４日に出願された米国仮特許出願第６２／８００，８０８号；及び２０１９年５月３１日に出願された米国仮特許出願第６２／８５５，１７０号の利益及び優先権を主張し、これらの全開示は、本明細書において参照によって援用される。
【０００２】
配列表
[0002]  本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出され、その全体が参照によってこれによって援用される配列表を含有する。２０１９年５月３１日に作成された前記ＡＳＣＩＩの原稿は、名前がＥＭＤ−０１０ＷＯ＿ＳＬ＿ＳＴ２５．ｔｘｔで、サイズが７５，８８８バイトである。
【０００３】
開示の分野
[0003]  本開示は、概して、ステージＩＩＩ非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）と診断された未治療対象を治療する、及び／又は化学療法及び放射線療法（ｃＣＲＴ）に伴う病理学的状態を静めるための方法において使用するための二機能融合タンパク質による標的ＴＧＦ−β阻害のための投薬計画に関する。
【背景技術】
【０００４】
背景
[0004]  化学療法及び併用放射線療法（ｃＣＲＴ）による局所進行切除不能ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣの治療は、ＮＳＣＬＣ患者において疾患進行を抑制できないことが多い。さらに、放射線療法は、病理学的状態、たとえば肺線維症を引き起こす。肺の放射線誘導線維症は、治療の開始後の最初の６か月以内に≧２０Ｇｙで放射線照射された肺組織中で生じ得る。
【０００５】
[0005]  ＴＧＦβは、肺線維症の発症に寄与する主な線維症促進分子である。参照によって本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１５０２２５４８３  Ａ１号は、抗プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）抗体をＴＧＦβ中和「トラップ」としての腫瘍増殖因子ベータ受容体ＩＩ型（ＴＧＦβＲＩＩ）の可溶性細胞外ドメインと組み合わせて、単一の分子にした二機能融合タンパク質を記載する。詳細には、タンパク質は、可動性のグリシン−セリンリンカーを介してヒトＴＧＦβＲＩＩの細胞外ドメインに遺伝的に融合された抗ＰＤ−Ｌ１の２つの免疫グロブリン軽鎖及び抗ＰＤ−Ｌ１の重鎖を含む２つの重鎖からなるヘテロ四量体である（図１を参照）。この抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子は、腫瘍微小環境において免疫抑制の２つの重大なメカニズムを標的にするように設計されている。米国特許出願公開第２０１５０２２５４８３  Ａ１号は、患者の体重に基づいた用量でのトラップ分子の投与を記載する。
【０００６】
[0006]  本開示は、ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣと診断された未治療対象を治療する、及び／又は併用ｃＣＲＴに伴う病理学的状態（たとえば肺線維症、肺炎）を静めるための方法において使用するための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子による標的ＴＧＦ−β阻害のための投薬計画を提供する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
開示の概要
[0007]  ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣと診断された患者の有効な治療のため、並びに線維症に起因する急性及び長期の症状性肺損傷に対抗するため、本開示は、ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療し、放射線誘導損傷から可能な限り多くの正常の肺組織をスペアし、それによってＮＳＣＬＣ患者の疾患予後及び全生存期間を改善する治療計画を提供する。
【０００８】
[0008]  一態様では、本開示は、２つの免疫抑制経路：ＰＤ−Ｌ１及びＴＧＦ−βを同時に標的にし、それによってステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する一方、併用放射線療法に伴う病理学的状態（たとえば肺線維症、肺炎）の発症を最小化し、患者においてステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣの転移の発生までの時間及び／又は遠隔転移までの時間を増加させるための併用ｃＣＲＴを用いる抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを提供する。
【０００９】
[0009]  本開示は、ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する一方、併用放射線療法に伴う病理学的状態（たとえば肺線維症、肺炎）の発症を最小化し、患者においてステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣの転移の発生までの時間及び／又は遠隔転移までの時間を増加させるためのＰＤ−Ｌ１及びＴＧＦβを標的にする二機能タンパク質の投与のための改善された投薬計画を提供する。詳細には、様々な投薬頻度で投与される少なくとも５００ｍｇ（たとえば１２００ｍｇ、１８００ｍｇ、２４００ｍｇ）の二機能性タンパク質の投与を伴う体重に無関係な（ＢＷに無関係な）投薬計画及び関係する投薬形態は、ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する一方、併用放射線療法に伴う病理学的状態（たとえば肺線維症、肺炎）の発症を最小化し、患者においてステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣの転移の発生までの時間及び／又は遠隔転移までの時間を増加させるための抗腫瘍及び抗癌治療薬として使用することができる。ＢＷに無関係な投薬計画は、すべてのステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ患者が体重に関係なく、腫瘍部位に十分な薬剤曝露量を有するであろうということを保証する。
【００１０】
[0010]  本開示の二機能性タンパク質（抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子）は、第１及び第２のポリペプチドを含む。第１のポリペプチドは、（ａ）ヒトタンパク質プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に結合する抗体の重鎖の少なくとも１つの可変領域；及び（ｂ）ヒト形質転換増殖因子β受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）又は形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）に結合することができるその断片（たとえば可溶性の断片）を含む。第２のポリペプチドは、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の軽鎖の少なくとも１つの可変領域を含み、第１のポリペプチドの重鎖及び第２のポリペプチドの軽鎖は、組み合わせられると、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗原結合部位を形成する（たとえば、本明細書において記載される抗体又は抗体断片のいずれか）。本開示の二機能性タンパク質が２つの標的（１）大部分が膜に結合しているＰＤ−Ｌ１並びに（２）血液及び間質において可溶性であるＴＧＦβに結合するので、ＢＷに無関係な投薬計画は、腫瘍部位でＰＤ−Ｌ１を阻害するのに有効であるだけでなく、ＴＧＦβを阻害するのにも十分な用量を必要とする。
【００１１】
[0011]  一態様では、本開示は、ステージＩＩＩ非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）と診断された未治療対象を治療する、及び／又は化学療法及び放射線療法（ｃＣＲＴ）に伴う病理学的状態を静めるための方法において使用するための二機能融合タンパク質による標的ＴＧＦ−β阻害のための投薬計画を提供する。
【００１２】
[0012]  一態様では、本開示は、扁平上皮又は非扁平上皮組織像を示すステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する、及び／又は化学療法及び放射線療法（ｃＣＲＴ）に伴う病理学的状態を静めるための方法において使用するための二機能融合タンパク質による標的ＴＧＦ−β阻害のための投薬計画を提供する。ある実施形態では、ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＳは、切除不能である。
【００１３】
[0013]  一態様では、本開示は、ｃＣＲＴ（たとえば白金ベース化学放射線）と組み合わせて本開示の抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを患者に投与し、その後、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを患者に投与することによって、患者において進行切除不能ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療するための方法を提供する。ある実施形態では、本開示は、併用白金ベース化学放射線と組み合わせて、及びその後、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを患者に投与することによって、患者において進行切除不能ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療するための方法を提供する。
【００１４】
[0014]  ある実施形態では、ｃＣＲＴは、放射線（たとえば強度変調放射線療法によって送達される放射線）と同時にシスプラチン／エトポシド、シスプラチン／ペメトレキセド、又はシスプラチン／パクリタキセルのいずれかとして投与される。
【００１５】
[0015]  ある実施形態では、本開示は、ｃＣＲＴ（たとえばシスプラチン／ペメトレキセド及び放射線）と組み合わせて抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを患者に投与し、その後、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを患者に投与することによって、患者において非扁平上皮組織像を有する進行切除不能ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療するための方法を提供する。ある実施形態では、本開示は、併用シスプラチン／ペメトレキセド及び放射線（たとえば強度変調放射線療法によって送達される放射線）と組み合わせて、及びその後、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを患者に投与することによって、患者において進行切除不能ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療するための方法を提供する。
【００１６】
[0016]  本開示はまた、ＴＧＦβの局所的な除去を促進するための方法をも特徴づける。方法は、上記に記載されるタンパク質を投与することを含み、タンパク質は、溶液中のＴＧＦβに結合し、細胞表面のＰＤ−Ｌ１に結合し、細胞（たとえば癌細胞）の中に、結合ＴＧＦβを運ぶ。
【００１７】
[0017]  本開示はまた、細胞（たとえば癌細胞又は免疫細胞）におけるＳＭＡＤ３リン酸化を阻害するための方法であって、腫瘍微小環境中の細胞を上記に記載されるタンパク質に曝露することを含む方法をも特徴づける。
【００１８】
[0018]  他の実施形態及び本開示の詳細は、本明細書において下記に提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
図面の簡単な説明
【図１】[0019]図１は、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４Ｇｌｙ（配列番号１１）リンカーを介してＴＧＦβ受容体ＩＩの２つの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に融合された１つの抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子の略図を示す図である。
【図２】[0020]図２は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップがＰＤ−Ｌ１及びＴＧＦβの両方に同時に結合することを実証するツーステップＥＬＩＳＡを示す図である。
【図３】[0021]図３は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップが、ＩＬ−２レベルにおける劇的な増加を誘発することを示す図である。
【図４Ａ】[0022]図４Ａは、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップに応じたＴＧＦβ１のインビボにおける除去を示す図である。線グラフは、凡例において示されるように、ナイーブ、アイソタイプコントロール、及び３つの異なる用量を示す。
【図４Ｂ】[0022]図４Ｂは、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップに応じたＴＧＦβ２のインビボにおける除去を示す図である。線グラフは、凡例において示されるように、ナイーブ、アイソタイプコントロール、及び３つの異なる用量を示す。
【図４Ｃ】[0022]図４Ｃは、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップに応じたＴＧＦβ３のインビボにおける除去を示す図である。線グラフは、凡例において示されるように、ナイーブ、アイソタイプコントロール、及び３つの異なる用量を示す。
【図４Ｄ】[0022]図４Ｄは、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによるＰＤ−Ｌ１の占有率が、ＥＭＴ−６腫瘍系における受容体結合モデルを支持することを示す図である。
【図５】[0023]図５は、Ｄｅｔｒｏｉｔ５６２異種移植モデルにおける抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップコントロール（抗ＰＤ−Ｌ１（ｍｕｔ）／ＴＧＦβ）の抗腫瘍効能を示す図である。
【図６Ａ】[0024]図６Ａは、体重の中央値が６８ｋｇのシミュレーション集団における固定（１２００ｍｇ）対ｍｇ／ｋｇベースの投薬（１７．６５ｍｇ／ｋｇ）についての集団全体についてのＣａｖｇ分布のボックスプロットを示す図である。
【図６Ｂ】[0024]図６Ｂは、体重の中央値が６８ｋｇのシミュレーション集団における固定（１２００ｍｇ）対ｍｇ／ｋｇベースの投薬（１７．６５ｍｇ／ｋｇ）についての集団全体についての曝露量ＡＵＣ分布のボックスプロットを示す図である。
【図６Ｃ】[0024]図６Ｃは、体重の中央値が６８ｋｇのシミュレーション集団における固定（１２００ｍｇ）対ｍｇ／ｋｇベースの投薬（１７．６５ｍｇ／ｋｇ）についての集団全体についてのＣｔｒｏｕｇｈ分布のボックスプロットを示す図である。
【図６Ｄ】[0024]図６Ｄは、体重の中央値が６８ｋｇのシミュレーション集団における固定（１２００ｍｇ）対ｍｇ／ｋｇベースの投薬（１７．６５ｍｇ／ｋｇ）についての集団全体についてのＣｍａｘ分布のボックスプロットを示す図である。
【図６Ｅ】[0025]図６Ｅは、体重の中央値が６８ｋｇのシミュレーション集団における固定（５００ｍｇ）対ｍｇ／ｋｇベースの投薬（７．３５ｍｇ／ｋｇ）についての集団全体についてのＣａｖｇ分布のボックスプロットを示す図である。
【図６Ｆ】[0025]図６Ｆは、体重の中央値が６８ｋｇのシミュレーション集団における固定（５００ｍｇ）対ｍｇ／ｋｇベースの投薬（７．３５ｍｇ／ｋｇ）についての集団全体についての曝露量ＡＵＣ分布のボックスプロットを示す図である。
【図６Ｇ】[0025]図６Ｇは、体重の中央値が６８ｋｇのシミュレーション集団における固定（５００ｍｇ）対ｍｇ／ｋｇベースの投薬（７．３５ｍｇ／ｋｇ）についての集団全体についてのＣｔｒｏｕｇｈ分布のボックスプロットを示す図である。
【図６Ｈ】[0025]図６Ｈは、体重の中央値が６８ｋｇのシミュレーション集団における固定（５００ｍｇ）対ｍｇ／ｋｇベースの投薬（７．３５ｍｇ／ｋｇ）についての集団全体についてのＣｍａｘ分布のボックスプロットを示す図である。
【図７Ａ】[0026]図７Ａ〜７Ｃは、マウスにおける腫瘍静止に関連する用量及びスケジュールでの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子の予測ＰＫ及び予測ＰＤ−Ｌ１受容体占有率（「ＲＯ」）を示す図である。図７Ａは、予測血漿濃度対時間を示す図である。
【図７Ｂ】[0026]図７Ａ〜７Ｃは、マウスにおける腫瘍静止に関連する用量及びスケジュールでの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子の予測ＰＫ及び予測ＰＤ−Ｌ１受容体占有率（「ＲＯ」）を示す図である。図７Ｂは、ＰＢＭＣにおける予測ＰＤ−Ｌ１  ＲＯ対時間を示す図である。
【図７Ｃ】[0026]図７Ａ〜７Ｃは、マウスにおける腫瘍静止に関連する用量及びスケジュールでの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子の予測ＰＫ及び予測ＰＤ−Ｌ１受容体占有率（「ＲＯ」）を示す図である。図７Ｃは、腫瘍における予測ＰＤ−Ｌ１  ＲＯ対時間を示す図である。
【図８】[0027]図８は、コントロールマウス（非治療）並びに抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子、放射線、及び抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子及び放射線によって治療されたマウスにおける線維症と関連する遺伝子発現シグネチャーのボックスプロットを表す。
【図９】[0028]図９は、マウスを放射線、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子、並びに併用抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ及び放射線によって治療した後のＣｘｃｌ１２、Ｆａｐ、及びＣｄｃ６の遺伝子発現シグネチャー（ＲＮＡシーケンシング分析に基づく）を表す。「コントロール」は、非治療のままとしたマウスにおける遺伝子発現を表す。
【図１０】[0029]図１０は、実施例３において記載される治療計画の模式図である。安定性の疾患、部分寛解、及び完全寛解は、それぞれＳＤ、ＰＲ、及びＣＲによって示される。
【図１１】[0030]図１１は、実施例４において記載される治療計画の模式図である。安定性の疾患、部分寛解、及び完全寛解は、それぞれＳＤ、ＰＲ、及びＣＲによって示される。
【図１２Ａ】[0031]図１２Ａ〜１２Ｃは、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ及びトラップコントロールが化学療法誘導線維症を減少させるが、抗ＰＤ−Ｌ１は減少させないことを示す棒グラフである。図１２Ａは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体がアイソタイプコントロールと比べてコラーゲン含有量に影響しなかった一方、トラップコントロール及び抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ治療の両方がコラーゲン含有量を有意に減少させたことを示す（総コラーゲン（パーセントピクロシリウスレッド（ＰＳＲ）；ＰＳＲ染色は、パラフィン包埋組織切片中のコラーゲンを可視化するために一般に使用される組織学的技術である。ＰＳＲ染色コラーゲンは、光学顕微鏡観察において赤色を呈する）；それぞれｐ＝０．００３８及びｐ＝０．００１９）。
【図１２Ｂ】[0031]図１２Ａ〜１２Ｃは、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ及びトラップコントロールが化学療法誘導線維症を減少させるが、抗ＰＤ−Ｌ１は減少させないことを示す棒グラフである。図１２Ｂは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体がアイソタイプコントロールと比べてパーセントαＳＭＡに影響しなかった一方、トラップコントロール及び抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ治療の両方がパーセントαＳＭＡを有意に減少させたことを示す（それぞれｐ＝０．０００３及びｐ＝０．００１３）。
【図１２Ｃ】[0031]図１２Ａ〜１２Ｃは、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ及びトラップコントロールが化学療法誘導線維症を減少させるが、抗ＰＤ−Ｌ１は減少させないことを示す棒グラフである。図１２Ｃは、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップがアイソタイプコントロール治療と比べてｐＳｍａｄ２／３の比を低下させることを示す棒グラフである（ｐ＝０．０００６）。
【図１３Ａ】[0032]図１３Ａは、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ単独療法がアイソタイプコントロールと比べて上皮間葉転換（ＥＭＴ）シグネチャースコアの低下をもたらしたこと（ｐ＜０．０００１）、及び抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ及び放射線療法の組み合わせがアイソタイプコントロールと比べてＥＭＴシグネチャースコアを有意にダウンレギュレートしたこと（ｐ＜０．０００１）を示す散布図である。
【図１３Ｂ】[0032]図１３Ｂは、線維症促進遺伝子シグネチャースコアもアイソタイプコントロールと比べて抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ単独療法によって減少したが、放射線療法によって有意に増加したことを示す散布図である（ｐ＜０．０００１）。さらに、放射線と抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップとの組み合わせは、放射線単独と比べて線維症促進シグネチャースコアを低下させた。
【図１４Ａ】[0033]図１４Ａは、放射線療法と組み合わせた抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップがＡＣＴＡ２発現を有意に低下させたことを示すボックスプロットを示す。放射線治療単独は４Ｔ１モデルにおいてＡＣＴＡ２発現に対する有意な効果を有さなかった一方、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ単独療法及び放射線療法と組み合わせた抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、ＡＣＴＡ２発現を有意に低下させた（それぞれｐ＜０．０００１及びｐ＝０．０２３６）。
【図１４Ｂ】[0034]図１４Ｂは、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップがアイソタイプコントロールと比べてＣＴＧＦ発現を有意に低下させた（ｐ＝０．００１９）一方、予測のとおり、放射線治療がＣＴＧＦを増加させ、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ組み合わせが放射線単独療法と比較して放射線治療の効果を有意に弱めた（Ｐ＝０．００２４）ことを示すボックスプロットを示す。
【図１４Ｃ】[0035]図１４Ｃは、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップがアイソタイプコントロールと比べてＦＡＰ発現を有意に低下させ（ｐ＜０．０００１）、放射線療法について見られたＦＡＰの低下が抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップと放射線との組み合わせによってさらに低下した（Ｐ＝０．００５４）ことを示すボックスプロットを示す。
【図１５】[0036]図１５は、腫瘍当たりの複数の関心領域（ＲＯＩ）について決定され、ＲＯＩ面積に正規化されたα−ＳＭＡ＋ピクセルの数を示すボックスプロットを示し；それぞれの記号は、単一腫瘍についてのポジティブピクセルの割合を表す。Ｐ値は一元ＡＮＯＶＡによって決定した。スケールバー、２５０μｍ。
【図１６Ａ】[0037]図１６Ａ〜１６Ｄは、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ治療がマウス腫瘍においてα−ＳＭＡ発現を低下させることを示す画像である。アイソタイプコントロール（図１６Ａ）と比べて、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ治療はα−ＳＭＡ発現を有意に低下させた（ｐ＜０．０００１）（図１６Ｂ）一方、放射線療法は、α−ＳＭＡ発現を有意に増加させた（ｐ＝０．０００２）（図１６Ｃ）。
【図１６Ｂ】[0037]図１６Ａ〜１６Ｄは、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ治療がマウス腫瘍においてα−ＳＭＡ発現を低下させることを示す画像である。アイソタイプコントロール（図１６Ａ）と比べて、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ治療はα−ＳＭＡ発現を有意に低下させた（ｐ＜０．０００１）（図１６Ｂ）一方、放射線療法は、α−ＳＭＡ発現を有意に増加させた（ｐ＝０．０００２）（図１６Ｃ）。
【図１６Ｃ】[0037]図１６Ａ〜１６Ｄは、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ治療がマウス腫瘍においてα−ＳＭＡ発現を低下させることを示す画像である。アイソタイプコントロール（図１６Ａ）と比べて、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ治療はα−ＳＭＡ発現を有意に低下させた（ｐ＜０．０００１）（図１６Ｂ）一方、放射線療法は、α−ＳＭＡ発現を有意に増加させた（ｐ＝０．０００２）（図１６Ｃ）。
【図１６Ｄ】[0037]図１６Ａ〜１６Ｄは、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ治療がマウス腫瘍においてα−ＳＭＡ発現を低下させることを示す画像である。抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップと放射線療法との組み合わせは放射線単独療法と比べてα−ＳＭＡ発現を有意に低下させ（ｐ＝０．０００１）（図１６Ｄ）、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップが放射線誘導癌関連線維芽細胞（ＣＡＦ）活性を低下させることができることを示唆する。
【図１７】[0038]図１７は、実施例６において記載される治療計画の模式図である。安定性の疾患、部分寛解、及び完全寛解は、それぞれＳＤ、ＰＲ、及びＣＲによって示される。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
詳細な説明
[0039]  「ＴＧＦβＲＩＩ」又は「ＴＧＦβ受容体ＩＩ」は、野生型ヒトＴＧＦβ受容体２型アイソフォームＡ配列を有するポリペプチド（たとえばＮＣＢＩ参照配列（ＲｅｆＳｅｑ）受入番号ＮＰ＿００１０２００１８（配列番号８）のアミノ酸配列）又は野生型ヒトＴＧＦβ受容体２型アイソフォームＢ配列を有するポリペプチド（たとえばＮＣＢＩ  ＲｅｆＳｅｑ受入番号ＮＰ＿００３２３３（配列番号９）のアミノ酸配列）又は配列番号８若しくは配列番号９のアミノ酸配列と実質的に同一な配列を有するポリペプチドを意味する。ＴＧＦβＲＩＩは、野生型配列のＴＧＦβ結合活性の少なくとも０．１％、０．５％、１％、５％、１０％、２５％、３５％、５０％、７５％、９０％、９５％、又は９９％を保持してもよい。発現されたＴＧＦβＲＩＩのポリペプチドは、シグナル配列を欠く。
【００２１】
[0040]  「ＴＧＦβに結合することができるＴＧＦβＲＩＩの断片」は、少なくとも２０（たとえば少なくとも３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７５、又は２００）アミノ酸長であり、野生型受容体又は対応する野生型断片の少なくともいくらかのＴＧＦβ結合活性（たとえば少なくとも０．１％、０．５％、１％、５％、１０％、２５％、３５％、５０％、７５％、９０％、９５％、又は９９％）を保持する、ＮＣＢＩ  ＲｅｆＳｅｑ受入番号ＮＰ＿００１０２００１８（配列番号８）若しくはＮＣＢＩ  ＲｅｆＳｅｑ受入番号ＮＰ＿００３２３３（配列番号９）の任意の部分又は配列番号８若しくは配列番号９と実質的に同一な配列を意味する。典型的に、そのような断片は、可溶性の断片である。例示的なそのような断片は、配列番号１０の配列を有するＴＧＦβＲＩＩの細胞外ドメインである。
【００２２】
[0041]  「未治療」は、病気と診断されたステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣのための全身療法を以前に受けたことがない対象又は患者を指す。本開示の様々な実施形態では、未治療患者は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、若しくは抗細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ−４）抗体（イピリムマブを含む）又はＴ細胞同時刺激経路若しくはチェックポイント経路を特異的に標的にする任意の他の抗体若しくは薬剤による療法を以前に受けたことがない。本開示の様々な実施形態では、未治療患者は、本発明の第一選択（１Ｌ）治療に選択される。
【００２３】
[0042]  「ＰＤ−Ｌ１ポジティブ」又は「ＰＤ−Ｌ１＋」は、たとえば、Ｄａｋｏ  ＩＨＣ  ２２Ｃ３  ＰｈａｒｍＤｘアッセイによって又はＶＥＮＴＡＮＡ  ＰＤ−Ｌ１（ＳＰ２６３）アッセイによって決定される≧１％のＰＤ−Ｌ１ポジティブ腫瘍細胞を示す。
【００２４】
[0043]  「ＰＤ−Ｌ１高」又は「高ＰＤ−Ｌ１」は、ＰＤ−Ｌ１  ＩＨＣ  ７３−１０アッセイ（Ｄａｋｏ）によって決定されるように≧８０％のＰＤ−Ｌ１ポジティブ腫瘍細胞又はＤａｋｏ  ＩＨＣ  ２２Ｃ３  ＰｈａｒｍＤｘアッセイによって決定されるように腫瘍割合スコア（ＴＰＳ）≧５０％を指す（ＴＰＳは、ＩＨＣ  ２２Ｃ３  ＰｈａｒｍＤｘアッセイに関する専門用語であり、膜が部分的に又は完全に染色された（たとえばＰＤ−Ｌ１について染色）生存腫瘍細胞のパーセンテージについて説明する）。ＩＨＣ  ７３−１０アッセイ及びＩＨＣ  ２２Ｃ３アッセイの両方は、それらのそれぞれのカットオフ値で同様の患者集団を選択する。ある実施形態では、ＶＥＮＴＡＮＡ  ＰＤ−Ｌ１（ＳＰ２６３）アッセイは、２２Ｃ３  ＰｈａｒｍＤｘアッセイと非常に一致するが（Sughayer et al., Appl. Immunohistochem. Mol. Morphol., (2018)を参照）、これもまた、ＰＤ−Ｌ１高発現レベルを決定するために使用することができる。
【００２５】
[0044]  「実質的に同一な」は、参照アミノ酸配列に対して、少なくとも５０％、望ましくは６０％、７０％、７５％、又は８０％、より望ましくは８５％  ９０％、又は９５％、最も望ましくは９９％のアミノ酸配列同一性を示すポリペプチドを意味する。比較配列の長さは、一般に、少なくとも１０アミノ酸、望ましくは少なくとも１５の連続アミノ酸、より望ましくは少なくとも２０、２５、５０、７５、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、又は３５０の連続アミノ酸、最も望ましくは完全長アミノ酸配列であろう。
【００２６】
[0045]  「患者」は、ヒト又は非ヒト動物（たとえば哺乳動物）を意味する。「患者」、「対象」、「その必要がある患者」、及び「その必要がある対象」は、本開示において区別なく使用され、本開示において提供される方法及び組成物を使用する投与によって治療することができる疾患又は状態に罹患している又はそれを起こしやすい生物を指す。
【００２７】
[0046]  用語「治療する」、「治療すること」、又は「治療」及び本開示において使用される他の文法上の等価物は、疾患、状態、若しくは症状を軽減する、緩和する、回復させる、若しくは予防すること、さらなる症状を予防すること、症状の根底にある代謝的な原因を回復させる若しくは予防すること、疾患若しくは状態を阻害すること、たとえば疾患若しくは状態の発症を阻止すること、疾患若しくは状態を和らげること、疾患若しくは状態の後退を引き起こすこと、疾患若しくは状態によって引き起こされる状態を和らげること、又は疾患若しくは状態の症状を停止させることを含み、予防処置を含むことが意図される。用語は、治療上の利益及び／又は予防的な利益を実現することをさらに含む。治療上の利益は、治療されている根底にある障害の根絶又は回復を意味する。さらに、治療上の利益は、根底にある障害に関連する、１つ以上の生理学的症状の根絶又は回復により実現され、改善が患者において観察される、それにもかかわらず、患者は、なお、根底にある障害で苦しんでいてもよい。
【００２８】
[0047]  本開示の治療計画の文脈における用語「コンソリデーション」は、一般に当技術分野において理解されるとおり使用される。たとえば、National Cancer Instituteによれば、用語「コンソリデーション療法」は、「初回療法後に癌が消失した後に与えられる治療。コンソリデーション療法は、体内に残留し得るあらゆる癌細胞を殺傷するために使用される。これは、放射線療法、幹細胞移植、又は癌細胞を殺傷する薬剤による治療を含んでいてもよい。強化療法又は寛解後療法とも呼ばれる」である。https://www.cancer.gov/publications/dictionaries/cancer-terms/def/consolidation-therapy,last visited on June 9,2018。
【００２９】
[0048]  用語「無増悪生存期間」又はＰＦＳは、ランダム化（治療開始の６週間以上、後で行うことができる）から疾患進行の不存在下での腫瘍進行又は死亡の最初の確定イベントの日付までの時間と定義される。用語「全生存期間」は、ランダム化から任意の原因による死亡までの時間と定義される。無増悪生存期間は、調査者によってＲＥＣＩＳＴバージョン１．１に従って所定の感度分析として評価される。
【００３０】
[0049]  本開示において使用される用語「静める」、「静めること」、又は「鎮静」及び他の文法上の等価物は、疾患、状態若しくは症状を軽減する、緩和する、回復させる、若しくは予防すること、さらなる症状を予防すること、症状の根底にある代謝的な原因を回復させる若しくは予防すること、疾患若しくは状態を阻害すること、たとえば疾患若しくは状態の発症を阻止すること、疾患若しくは状態を和らげること、疾患若しくは状態の後退を引き起こすこと、疾患若しくは状態によって引き起こされる状態を和らげること、又は疾患若しくは状態の症状を停止させることを含み、予防処置を含むことが意図される。
【００３１】
[0050]  「癌」は、ステージＩＩＩ（ステージＩＩＩＡ、ステージＩＩＩＢ及び／又はステージＩＩＩＣ）非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を意味し、たとえばNational Cancer Institute of the United States of Americaによって特徴付けられるその普通の通常の意味に従って使用される。したがって、様々な実施形態では、癌は、たとえば原発腫瘍の同じ側のリンパ節に、又は原発腫瘍として胸部の反対側のリンパ節に広がっている。
【００３２】
[0051]  用語「切除不能」は、手術を介して摘出することができない癌を意味する。
【００３３】
[0052]  用語「リスク」、「リスクがある」、及び「リスク因子」は、当技術分野において従来理解されるとおり本明細書において使用される。たとえば、リスク因子は、疾患又は損傷を発症させる見込みを増加させる個体の任意の属性、特徴又は曝露量である。ある実施形態では、疾患、障害、又は状態を発症させるリスクがある者は、その疾患、障害、又は状態の発生確率に寄与する又はそれを高めるリスク因子に曝露される者を意味する。
【００３４】
[0053]  本開示の説明及び請求項の全体にわたって、「含む」という語並びに「含むこと」及び「含む（comprises）」などのようなこの語の他の形態は、〜を含むが、これらに限定されないという意味であり、たとえば他の構成成分を除外するようには意図されない。
【００３５】
[0054]  「同時投与する」によって、本明細書において記載される組成物が、さらなる療法の投与と同時に、その直前に、又はその直後に投与されることを意味する。本開示のタンパク質及び組成物は、患者に単独で投与することができる又は第２、第３、若しくは第４の治療剤と同時投与することができる。同時投与は、個々の又は組み合わせた（２つ以上の治療剤）、タンパク質又は組成物の同時の又は順次の投与を含むことを意味する。
【００３６】
[0055]  用語「１つの」は、単数に限られることを意味するものではない。ある実施形態では、用語「１つの」は、複数形を指してもよい。本開示の全体にわたって使用されるように、単数形「１つの（a）」、「１つの（an）」、及び「その」は、文脈上、明らかに他の意味を示す場合を除き、複数形の指示内容を含む。したがって、たとえば、「組成物」への言及は、単一の組成物だけでなく、複数のそのような組成物を含む。
【００３７】
[0056]  「還元」製剤は、二機能性分子が還元製剤中に溶解するように、水性キャリヤ中に凍結乾燥製剤を溶解することによって調製された製剤である。還元製剤は、その必要がある患者への静脈内投与（ＩＶ）に適している。
【００３８】
[0057]  用語「約」は、製剤の調製において及び疾患又は障害の治療において作用物質の効能を変化させない、作用物質の濃度又は量における任意の最小限の変化を指す。実施形態では、用語「約」は、特定の数値又はデータポイントの±１５％を含んでいてもよい。
【００３９】
[0058]  範囲は、「約」ある特定の値から及び／又は「約」別の特定の値までとして、本開示において表現することができる。そのような範囲が表現される場合、別の態様には、ある特定の値から及び／又は他の特定の値までが含まれる。同様に、値が、先の例の「約」の使用によって近似値として表現される場合、特定の値が、別の態様を形成することが理解される。範囲のそれぞれの終点が、他の終点に関連して及び他の終点と無関係に有効であることがさらに理解される。本開示において開示される多くの値があり、それぞれの値はまた、その値自体に加えて、「約」その特定の値としても開示されることもまた、理解される。本出願の全体にわたって、データは、多くの異なる形式で提供され、データは、データポイントの任意の組み合わせについて終点及び起点並びに範囲を示すこともまた、理解される。たとえば、特定のデータポイント「１０」及び特定のデータポイント「１５」が開示される場合、１０及び１５を超える、それを超える又はそれに等しい、それ未満の、それ未満の又はそれに等しい、並びにそれに等しいが、１０及び１５の間と同様に、開示されていると見なされることが理解される。２つの特定の単位量の間のそれぞれの単位量もまた、開示されることもまた、理解される。たとえば、１０及び１５が開示される場合、１１、１２、１３、及び１４もまた、開示される。
【００４０】
[0059]  「等張」製剤は、ヒト血液と本質的に同じ浸透圧を有する製剤である。等張製剤は、一般に、約２５０〜３５０ｍＯｓｍｏｌ／ＫｇＨ２Ｏの浸透圧を有するであろう。用語「高張」は、ヒト血液の浸透圧を上回る浸透圧を有する製剤を記載するために使用される。等張性は、たとえば、蒸気圧又は氷結型浸透圧計を使用して測定することができる。
【００４１】
[0060]  用語「緩衝剤」は、水溶液に追加された場合、酸若しくはアルカリを追加した場合に又は溶媒による希釈に際して、ｐＨの変動から溶液を保護することができる１つ以上の構成成分を指す。リン酸バッファーに加えて、グリシン酸、炭酸、クエン酸バッファー、及びその他同種のものを使用することができ、この場合、ナトリウム、カリウム、又はアンモニウムイオンは、対イオンとして果たすことができる。
【００４２】
[0061]  「酸」は、水溶液中で水素イオンを産出する物質である。「薬学的に許容され得る酸」は、それらが製剤される濃度及び手法で無毒な無機酸及び有機酸を含む。
【００４３】
[0062]  「塩基」は、水溶液中でヒドロキシルイオンを産出する物質である。「薬学的に許容され得る塩基」は、それらが製剤される濃度及び手法で無毒性の無機塩基及び有機塩基を含む。
【００４４】
[0063]  「凍結乾燥保護剤（lyoprotectant）」は、関心のあるタンパク質と組み合わせられた場合に、凍結乾燥及び続く保存に際してタンパク質の化学的及び／又は物理的不安定性を予防する又は低下させる分子である。
【００４５】
[0064]  「保存剤」は、細菌作用を低下させ、任意選択で本明細書における製剤に追加されてもよい作用物質である。保存剤の追加は、たとえば、多重使用（複数回投与）製剤の産生を容易にしてもよい。可能性として考えられる保存剤の例は、オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム（アルキル基が長鎖化合物である塩化アルキルベンジルジメチルアンモニウムの混合物）、及び塩化ベンゼトニウムを含む。他のタイプの保存剤は、フェノール、ブチル、及びベンジルアルコールなどのような芳香族アルコール、メチル又はプロピルパラベンなどのようなアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３ペンタノール、並びにｍ−クレゾールを含む。
【００４６】
[0065]  「界面活性剤」は、疎水性部分（たとえばアルキル鎖）並びに親水性部分（たとえばカルボキシル基及びカルボキシレート基）の両方を含有する表面活性分子である。界面活性剤は、本発明の製剤に追加されてもよい。本発明の製剤において使用するのに適した界面活性剤は、ポリソルベート（たとえばポリソルベート２０又は８０）；ポロキサマー（たとえばポロキサマー１８８）；ソルビタンエステル及び誘導体；Ｔｒｉｔｏｎ；ラウリル硫酸ナトリウム；オクチルグリコシドナトリウム；ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−、又はステアリル−スルホベタイン；ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−、又はステアリル−サルコシン；リノレイル−、ミリスチル−、又はセチル−ベタイン；ラウラミドプロピル−ココアミドプロピル−、リノールアミドプロピル−、ミリスタミドプロピル−、パルミドプロピル（palmidopropyl）−、又はイソステアラミドプロピルベタイン（たとえばラウロアミドプロピル（lauroamidopropyl））；ミリスタミドプロピル−、パルミドプロピル−、又はイソステアラミドプロピル−ジメチルアミン；ココイルメチルタウリン酸ナトリウム又はメチルオレイルタウリン酸二ナトリウム；並びにMONAQUAT（商標）シリーズ（Mona Industries, Inc.、Paterson、N.J.）、ポリエチレングリコール、ポリプロピルグリコール、及びエチレン及びプロピレングリコールのコポリマー（たとえばプルロニック（登録商標）、ＰＦ６８など）を含むが、これらに限定されない。
【００４７】
体重に無関係な投薬計画
[0066]  少なくとも５００ｍｇの本明細書において記載される二機能性抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子の未治療患者への投与を伴う体重に無関係な投薬計画を立て、分子についての様々な前臨床及び臨床評価の結果によって特徴づけた。２つの研究が、分子の安全性、耐性、及び薬物動態を調査し、治療された患者の血液から得られた末梢血単核細胞に対するＰＤ−Ｌ１標的占有率の評価並びにＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２、及びＴＧＦβ３の濃度の測定を含んだ。これらの評価は、合計３５０人の対象からのデータに基づいた（固形腫瘍における１、３、１０、及び２０ｍｇ／ｋｇの用量漸増コホート並びに選択した腫瘍タイプにおける３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、５００ｍｇ、及び１２００ｍｇの拡大コホート）。
【００４８】
ＰＫ／効能モデル（マウスモデル）
[0067]  実験はまた、腫瘍モデルにおける抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子の効能を決定するためにも行った。ＥＭＴ−６異種移植からの効能結果は、ＰＫ／効能モデルを確立するために使用した。マウスにおける確立されたＰＫモデルは、効能実験設定のために、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ血漿曝露量をシミュレートするために使用した。推定パラメーターを、表１に報告する。推定ＫＣ５０値は、５５．３μｇ／ｍＬであり、この値は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子の最大の抗腫瘍活性の５０％を実現することができた平均血漿濃度を示す。
【００４９】
[0068]  モデルの基本的な診断プロットは、モデル誤設計を明らかにしなかった。モデル予測により、腫瘍容積分布をとらえることができる。条件付き重み付き残差は、傾向（ｔｒｅｎｄ）なしの平均０及び分散１で正規分布する。次いで、ＰＫ／効能モデルは、様々な用量でのヒト予測濃度−時間プロファイルを使用し、腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）をシミュレートするために使用した。
【００５０】
[0069]  
【表１】
2021527083.tif 000003
【００５１】
ＰＤ−Ｌ１占有率に基づいた応答分析（マウスモデルにおいて）
[0070]  効能実験を使用して、マウスにおける応答について分析し、腫瘍後退又は腫瘍静止のいずれかによってソートし、ＰＫ及びＰＤ−Ｌ１受容体占有率（ＲＯ）を、統合ＰＫ／ＲＯモデルに基づいて予測した。このアプローチは、腫瘍における９５％を上回るＰＤ−Ｌ１  ＲＯに関連する４０及び１００μｇ／ｍＬの間の抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子血漿濃度が、腫瘍後退に達するために必要とされることを実証した。末梢における９５％を上回るＰＤ−Ｌ１  ＲＯに関連する１０及び４０μｇ／ｍＬの間の抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子の血漿濃度は、腫瘍静止に達するために必要とされる。
【００５２】
[0071]  マウスにおける応答分析及び予測ＰＫ／ＲＯは、図７Ａ〜７Ｃを導き、これらは、マウスにおける抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子についてのＰＫ／ＲＯ／効能を要約する。ＰＤ−Ｌ１  ＲＯの９５％は、４０μｇ／ｍＬの血漿濃度で実現され、期待／推定ＴＧＩは、わずか約６５％である。４０μｇ／ｍＬを上回る濃度の増加は、腫瘍増殖阻害においてさらなる増加をもたらす。９５％の腫瘍増殖阻害は、約１００μｇ／ｍＬの平均血漿濃度で実現される。
【００５３】
[0072]  下記に記載される母集団ＰＫモデルに基づくと、２週間ごとに１回投与される少なくとも５００ｍｇの均一の用量が、約１００μｇ／ｍＬの平均濃度を維持するために必要とされ、一方、２週間ごとに１回投与される約１２００ｍｇの均一の用量が、約１００μｇ／ｍＬのＣｔｒｏｕｇｈを維持するために必要とされる。ある実施形態では、約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ（たとえば約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇなど）の本開示のタンパク質産物（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）が、対象に投与される。ある実施形態では、約１２００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子は、２週間ごとに１回、対象に投与される。ある実施形態では、約１８００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子は、３週間ごとに１回、対象に投与される。
【００５４】
[0073]  実施形態では、約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ（たとえば約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇなど）の、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物が、対象に投与される。ある実施態様では、約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ（たとえば約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇなど）の、配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドを含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物が、対象に投与される。
【００５５】
[0074]  ある実施態様では、約１２００ｍｇの、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物が、２週間ごとに１回、対象に投与される。ある実施態様では、約１８００ｍｇの、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物が、３週間ごとに１回、対象に投与される。ある実施形態では、約１２００ｍｇの、配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むタンパク質産物が、２週間ごとに１回、対象に投与される。ある実施形態では、約１８００ｍｇの、配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むタンパク質産物が、３週間ごとに１回、対象に投与される。
【００５６】
体重に無関係な投薬計画の確立
[0075]  臨床及び前臨床データによって報告されるように、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子の投与のための新たな、体重に無関係な投薬計画を、曝露量におけるより少ないばらつきを実現し、投薬ミスを低下させ、用量の調製に必要な時間を低下させ、且つｍｇ／ｋｇ投薬と比較して薬剤浪費を低下させ、したがって好都合な治療成果を得やすくするために作成した。一実施形態によれば、少なくとも５００ｍｇの均一の用量を、患者の体重にかかわらず投与することができる。別の実施形態によれば、少なくとも１２００ｍｇの均一の用量を、患者の体重にかかわらず投与することができる。別の実施形態によれば、１８００ｍｇの均一の用量を、患者の体重にかかわらず投与することができる。ある実施形態によれば、２４００ｍｇの均一の用量を、患者の体重にかかわらず投与することができる。典型的には、そのような用量は、たとえば２週間ごとに１回又は３週間ごとに１回などのように、繰り返し投与されるであろう。たとえば、１２００ｍｇの均一の用量を２週間ごとに１回投与することができる又は１８００ｍｇの均一の用量を３週間ごとに１回投与することができる又は２４００ｍｇの均一の用量を３週間ごとに１回投与することができる。
【００５７】
ヒトにおける薬物動態（ＰＫ）解析のためのサンプリング
[0076]  抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの最適な均一の量を決定するための薬物動態解析の例は、下記に記載される実験によって提供される。
【００５８】
[0077]  薬物動態学的（ＰＫ）データ分析のための血清サンプルは、第１の用量のスタートの前に及び第１の用量の後の以下の時点で収集した：１日目の注入直後及び注入のスタートから４時間後；２日目、１日目の注入の終了から少なくとも２４時間後；並びに８日目及び１５日目。選択した続く投薬の時、投与前、注入の終了時、及び注入の終了から２〜８時間後のサンプルを、１５、２９、４３日目に収集した。５７、７１、及び８５日目の後の時点については、投与前のサンプルを収集し、その後、１２週まで６週間ごとに１回のＰＫサンプリング、次いで、１２週間ごとに１回、ＰＫサンプリングを続けた。拡大フェーズでは、まばらなＰＫサンプリングを行った。
【００５９】
[0078]  上記に記載されるＰＫデータは、母集団ＰＫモデルを生成するために及び実行可能な投薬計画のシミュレーションを実行するために使用した。Gastonguay, M., Full Covariate Models as an Alternative to Methods Relying on Statistical Significance for Inferences about Covariate Effects: A Review of Methodology and 42 Case Studies, (2011) p. 20, Abstract 2229において記載される完全アプローチモデルとして知られているモデリング方法を、母集団モデルに対して適用し、データをシミュレーションから得て、以下の特徴を有するパラメーターを得た：線形消失を有する２−コンパートメントＰＫモデル、ＣＬ、Ｖ１、及びＶ２のＩＩＶ、付加及び比例残差の組み合わせ、ＣＬ及びＶ１の完全共変量モデル。以下のベースライン共変量を最終モデルに含めた：年齢、体重、性別、人種、アルブミン、ＣＲＰ、血小板数、ｅＧＦＲ、肝臓の損傷、ＥＣＯＧスコア、腫瘍の大きさ、腫瘍のタイプ、及び生物製剤による以前の治療。本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）の薬物動態の典型的なパラメーター推定値について以下の推定値を得た：クリアランス（ＣＬ）  ０．０１７７Ｌ／時（６．２％）、中央分布容積（Ｖ１）  ３．６４Ｌ（８．８１％）、末梢分布容積（Ｖ２）  ０．５１３Ｌ（２５．１％）、及びコンパートメント間クリアランス（Ｑ）  ０．００２１９Ｌ／時（１７．８％）。患者間の変動は、ＣＬについては２２％、Ｖ１については２０％、Ｖ２については１３５％であった。体重は、ＣＬ及びＶ１の両方と関係のある共変量であった。均一の投薬アプローチを支持するために、本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）の曝露量変動に対する投薬戦略の影響について調べた。詳細には、シミュレーションは、２週間ごとに１回の１２００ｍｇの均一の投薬アプローチ対２週間ごとに１回の１７．６５ｍｇ／ｋｇ（６８ｋｇの対象については２週間ごとに１回の１２００ｍｇに対応する又は２週間ごとに１回の１５ｍｇ／ｋｇ（８０ｋｇの対象については１２００ｍｇに対応する）のＢＷ調整投薬アプローチを使用し、曝露量分布を比較するために実行した。さらなるシミュレーションは、２週間ごとに１回の５００ｍｇの均一の投薬アプローチ対２週間ごとに１回の７．３５ｍｇ／ｋｇのＢＷ調整投薬アプローチ（６８ｋｇの対象については２週間ごとに１回の５００ｍｇに対応する）を使用し、曝露量分布を比較するために実行した。そのうえ、シミュレーションを、３週間ごとに１回、以下の均一の用量について評価するために実行した：１２００ｍｇ、１４００ｍｇ、１６００ｍｇ、１８００ｍｇ、２０００ｍｇ、２２００ｍｇ、２４００ｍｇ、２６００ｍｇ、２８００ｍｇ、３０００ｍｇ。
【００６０】
[0079]  シミュレーションのために以下の手法を使用した：Ｎ＝２００セットのパラメーター推定値を、最終ＰＫモデル分散共分散行列を使用して、パラメーター推定値の多変量正規分布から得た。各パラメーター推定値について、２００のＩＩＶ推定値を、＄ＯＭＥＧＡ多変量正規分布から得て、合計４００００（２００×２００）の対象がもたらされた。共変量が一致した４００００セットを生成するために、元のデータセット（Ｎ＝３８０）を置き換えにより再サンプリングし、定常状態曝露量測定基準（ＡＵＣ、Ｃａｖｇ、Ｃｔｒｏｕｇｈ、及びＣｍａｘ）を、それぞれの投薬計画について生成した。
【００６１】
[0080]  シミュレーションは、広いＢＷ範囲にわたって、曝露量における変動が、固定投薬と比較してＢＷベースの投薬についてわずかに高いことを示した。６８ｋｇの体重の中央値についての１７．６５ｍｇ／ｋｇ及び１２００ｍｇの均一の用量又は７．３５ｍｇ／ｋｇ及び５００ｍｇの均一の用量の曝露量分布の例をそれぞれ図６Ａ及び図６Ｅに示す。シミュレーションは、さらに、患者集団にわたる体重四分値にわたって曝露量分布における反対の傾向を示した：低体重の患者は、固定投薬でより高い曝露量を有し、高体重の患者は、ＢＷ調整投薬でより高い曝露量を有する。
【００６２】
ヒトにおける効果的な用量／投薬計画の確立：抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの２週間毎に１回（ｑ２ｗ）の投薬後の第２選択非小細胞肺癌（２Ｌ  ＮＳＣＬＣ）における予備的用量応答
[0081]  抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの治療上の効能の例は、下記に記載される臨床試験によって立証される。
【００６３】
[0082]  第１選択標準治療後に進行した、ＰＤ−Ｌ１について未選択の進行ＮＳＣＬＣを有する患者（免疫療法を以前に受けていない）が、疾患進行、容認できない毒性、又は治験離脱まで２週間ごとに１回（ｑ２ｗ）、５００ｍｇ又は１２００ｍｇ（コホート当たりｎ＝４０）の本開示の抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを受けるようにランダム化された。主目的は、固形癌効果判定基準バージョン１．１（ＲＥＣＩＳＴ  ｖ１．１）によって最良総合効果（ＢＯＲ）を評価することであった。他の目的は、用量探索及び安全性／耐性評価を含んだ。腫瘍細胞ＰＤ−Ｌ１発現レベル（Ａｂクローン７３−１０（Ｄａｋｏ）［＞８０％＝Ａｂクローン２２Ｃ３（Ｄａｋｏ）で＞５０％］）は、ＰＤ−Ｌ１＜１％、≧１％（ＰＤ−Ｌ１＋）、又は≧８０％（ＰＤ−Ｌ１高）として特徴付けた。腫瘍細胞ＰＤ−Ｌ１発現は、７５人の患者において評価可能であった。
【００６４】
[0083]  解析時のデータカットオフの時点で、８０人の患者は、１１．９週間（範囲、２〜６６．１）の中央値の間、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを受け、追跡調査の中央値は５１．１週間であった。１０人の患者が、治療を続ける。治験責任医師が評価した、確認された全奏効率（ＯＲＲ）は、２３．８％であり（５００ｍｇ  ＯＲＲ、２０．０％；１２００ｍｇ  ＯＲＲ、２７．５％）、両方の用量レベルにわたって１８の部分寛解（ＰＲ）が見られ、１２００ｍｇで１つの完全寛解（ＣＲ）が見られた。表２において示されるように、臨床活性は、ＰＤ−Ｌ１発現レベルにわたって観察された：ＯＲＲは、１２００ｍｇで、ＰＤ−Ｌ１＋において３７．０％、ＰＤ−Ｌ１高の患者において８５．７％であった。最もよく見られた治療に関係する有害事象（ＴＲＡＥ）は、そう痒症（２０．０％）、斑状丘疹状皮疹（１８．８％）、及び食欲の減少（１２．５％）であった。グレード３のＴＲＡＥが２３人の患者（２８．８％）で生じ、グレード４のＴＲＡＥが２人の患者で生じた。８人の患者（５００ｍｇ、ｎ＝２；１２００ｍｇ、ｎ＝６）は、ＴＲＡＥにより治療を中止した。治療に関係する死亡は生じなかった。
【００６５】
[0084]  
【表２】
2021527083.tif 000004
【００６６】
[0085]  これらの結果は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ単独療法が十分に耐容性を示し、且つＰＤ−Ｌ１サブグループにわたって効能を示し、１２００ｍｇでのＯＲＲが、それぞれＰＤ−Ｌ１＋及びＰＤ−Ｌ１高の患者において３７．０％及び８５．７％であったことを実証する。より高いＰＤ−Ｌ１腫瘍細胞発現で有意に改善された奏効率を考慮すると（たとえば１２００ｍｇで治療された患者）、２Ｌ治療として観察された抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップのこの有望な活性は、未治療ＰＤ−Ｌ１高又はＰＤ−Ｌ１に無関係なＮＳＣＬＣ患者において第一選択（１Ｌ）療法として解釈される又は高まることが期待される。
【００６７】
様々な投薬頻度による投薬計画の確立
[0086]  様々な投薬頻度によるデータ投与計画を、それほど頻繁でない投与を可能にするために及び／又は併用薬との投薬スケジュールの調和を可能にするために作成した。詳細には、上記に記載される予備的母集団ＰＫモデリング及びシミュレーション手法を、様々な投薬計画についての曝露量をシミュレートするために及び曝露量に基づいた投与計画を比較するために使用した。
【００６８】
[0087]  これらのシミュレーションに基づくと、２週間ごとに１回投与される少なくとも５００ｍｇの均一の用量が、典型的な対象について約１００μｇ／ｍＬの平均濃度を維持するために必要とされ、一方、２週間ごとに１回投与される約１２００ｍｇの均一の用量が、約１００μｇ／ｍＬのＣｔｒｏｕｇｈを維持するために必要とされる。
【００６９】
[0088]  シミュレーションに基づくと、Ｃａｖｇについては、２週間ごとに１回の１２００ｍｇが、３週間ごとに１回の１８００ｍｇに等しく、一方、Ｃｔｒｏｕｇｈについては、２週間ごとに１回の１２００ｍｇが、３週間ごとに１回の２８００ｍｇに等しい。また、Ｃａｖｇについては、２週間ごとに１回の５００ｍｇが、３週間ごとに１回の７５０ｍｇに等しく、Ｃｔｒｏｕｇｈについては、２週間ごとに１回の５００ｍｇが、３週間ごとに１回の１，１６７ｍｇに等しい。
【００７０】
癌標的としてのＴＧＦβ
[0089]  本開示は、ある腫瘍細胞又は免疫細胞の外部表面に見つけられる細胞免疫チェックポイント受容体を標的にする抗体成分につながれた可溶性サイトカイン受容体（ＴＧＦβＲＩＩ）を使用してＴＧＦβを捕捉することによって、腫瘍微小環境におけるＴＧＦβの局所的な低下を可能にする。免疫チェックポイントタンパク質に対する本開示の抗体成分の例は、抗ＰＤ−Ｌ１である。本開示の二機能性分子は、時に本明細書において「抗体−サイトカイントラップ」と呼ばれ、まさに抗受容体抗体及びサイトカイントラップが物理的に連結されているという理由で、有効である。結果として生じる利点（たとえば別々の分子としての抗体及び受容体の投与に対して）は、部分的には、サイトカインがオートクリン及びパラクリン機能によってたいてい局所的な環境において機能するからである。抗体成分は、サイトカイントラップを、サイトカイントラップが局所的な免疫抑制性のオートクリン又はパラクリン効果を中和することによって非常に有効になり得る腫瘍微小環境に向ける。さらに、抗体の標的が抗体結合に際して内部移行される場合に、サイトカイン／サイトカイン受容体複合体のクリアランスにとって有効なメカニズムが提供される。抗体媒介性の標的内部移行は、ＰＤ−Ｌ１について示され、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、抗ＰＤ−Ｌ１と同様の内部移行率を有することが示された。第１に、抗ＴＧＦβ抗体が完全には中和していないかもしれず、そして第２に、抗ＴＧＦβ抗体が、サイトカインの半減期を延ばすキャリヤとして作用し得るので、これは、抗ＴＧＦβ抗体の使用にまさる明確な利点である。
【００７１】
[0090]  実際に、下記に記載されるように、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによる治療は、腫瘍細胞上のＰＤ−Ｌ１及び免疫細胞上のＰＤ−１の間の相互作用の同時の遮断並びに腫瘍微小環境におけるＴＧＦβの中和により、相乗的な抗腫瘍効果を誘起する。理論によって拘束されないが、これは、おそらく、２つの重大な免疫逃避メカニズムの同時の遮断並びにそのうえ単一の分子実体による腫瘍微小環境におけるＴＧＦβの除去から得られる相乗効果によるものである。この除去は、（１）腫瘍細胞の抗ＰＤ−Ｌ１ターゲティング；（２）ＴＧＦβトラップによる腫瘍微小環境におけるオートクリン／パラクリンＴＧＦβの結合；及び（３）ＰＤ−Ｌ１受容体媒介性のエンドサイトーシスによる結合ＴＧＦβの破壊によって実現される。さらに、Ｆｃ（ＩｇＧの結晶化可能断片）のＣ−末端に融合されたＴＧＦβＲＩＩは、ＦｃのＮ−末端にＴＧＦβＲＩＩを置くＴＧＦβＲＩＩ−Ｆｃよりも数倍強力であった。
【００７２】
[0091]  ＴＧＦβは、癌の分子二重人格者としてのその逆説的な役割のために、癌免疫療法において多少疑問の余地のある標的であった（Bierie et al., Nat. Rev. Cancer, 2006; 6:506-20）。他のいくつかのサイトカインのように、ＴＧＦβ活性は発生段階及び状況に依存性である。実際に、ＴＧＦβは、発癌プロモーター又は腫瘍抑制因子として作用することができ、腫瘍イニシエーション、進行、及び転移に影響を与える。ＴＧＦβのこの二重の役割の根底にあるメカニズムは、不明なままである（Yang et al., Trends Immunol. 2010; 31:220-227）。Ｓｍａｄ依存性のシグナル伝達がＴＧＦβシグナル伝達の増殖阻害を媒介し、一方、Ｓｍａｄ非依存性の経路が、その腫瘍促進効果に寄与することが想定されたが、Ｓｍａｄ依存性の経路が腫瘍進行に関係することを示すデータもある（Yang et al., Cancer Res. 2008; 68:9107-11）。
【００７３】
[0092]  ＴＧＦβリガンド及び受容体の両方は、治療標的として徹底的に研究されてきた。３つのリガンドアイソフォーム、ＴＧＦβ１、２、及び３があり、これらはすべて、ホモ二量体として存在する。ＴＧＦβ受容体（ＴＧＦβＲ）も３つあり、これらはＴＧＦβＲ  Ｉ、ＩＩ、及びＩＩＩ型と呼ばれる（Lopez-Casillas et al., J Cell Biol. 1994; 124:557-68）。ＴＧＦβＲＩは、シグナル伝達鎖であり、リガンドに結合することができない。ＴＧＦβＲＩＩは、高い親和性でリガンドＴＧＦβ１及び３に結合するが、ＴＧＦβ２には結合しない。ＴＧＦβＲＩＩ／ＴＧＦβ複合体は、シグナル伝達複合体を形成するためにＴＧＦβＲＩを動員する（Won et al., Cancer Res. 1999; 59:1273-7）。ＴＧＦβＲＩＩＩは、ＴＧＦβのそのシグナル伝達受容体への結合の正の調節因子であり、３つのＴＧＦβアイソフォームすべてに高い親和性で結合する。細胞表面上で、ＴＧＦβ／ＴＧＦβＲＩＩＩ複合体は、ＴＧＦβＲＩＩに結合し、次いでＴＧＦβＲＩを動員し、ＴＧＦβＲＩは、シグナル伝達複合体を形成するためにＴＧＦβＲＩＩＩにとって代わる。
【００７４】
[0093]  ３つの異なるＴＧＦβアイソフォームはすべて、同じ受容体によってシグナル伝達するが、それらは、インビボにおいて違う発現パターン及び重複しない機能を有することが知られている。３つの異なるＴＧＦ−βアイソフォームノックアウトマウスは、異なる表現型を有し、多数の非代償性の機能であることを示す（Bujak et al., Cardiovasc Res. 2007; 74:184-95）。ＴＧＦβ１ヌルマウスは、造血及び脈管形成の欠損を有し、ＴＧＦβ３ヌルマウスは、肺疾患の発症及び口蓋発生（palatogenesis）の欠損を表すが、ＴＧＦβ２ヌルマウスは、様々な発生異常を示し、複数の心奇形が最も顕著である（Bartram et al., Circulation. 2001; 103:2745-52; Yamagishi et al., Anat Rec. 2012; 295:257-67）。さらに、ＴＧＦβは、虚血及び再灌流傷害の後の心筋の損傷の修復において重大な役割を果たすことが示されている。成人の心臓では、心筋細胞は、ＴＧＦβを分泌し、これは、自発的な拍動数を維持するためにオートクリンとして作用する。重要なことには、心筋細胞によって分泌されるＴＧＦβの７０〜８５％は、ＴＧＦβ２である（Roberts et al., J Clin Invest. 1992; 90:2056-62）。ＴＧＦβＲＩキナーゼ阻害剤による治療によって持ち上がった心毒性の問題にもかかわらず、本発明の出願人らは、サルにおいて、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップについて、心毒性を含む毒性がないことを観察した。
【００７５】
[0094]  ＴＧＦβを中和するための治療上のアプローチは、可溶性の受容体トラップ及び中和抗体としてＴＧＦβ受容体の細胞外ドメインを使用することを含む。受容体トラップアプローチのうちで、可溶性のＴＧＦβＲＩＩＩが３つのＴＧＦβリガンドすべてに結合するので、可溶性のＴＧＦβＲＩＩＩが分かり切った選択肢のように思われるかもしれない。しかしながら、７６２アミノ酸残基の細胞外ドメインを有する２８０〜３３０ｋＤグルコサミノグリカン（ＧＡＧ）−糖タンパク質として天然に存在するＴＧＦβＲＩＩＩは、生物療法（biotherapeutic）の開発にとって非常に複雑なタンパク質である。ＧＡＧを欠く可溶性のＴＧＦβＲＩＩＩは、昆虫細胞において産生することができ、強力なＴＧＦβ中和剤であることが示された(Vilchis-Landeros et al, Biochem J., (2001),355:215)。ＴＧＦβＲＩＩＩの２つの別々の結合ドメイン（エンドグリンに関係する及びウロモジュリンに関係する）は、独立して発現させることができたが、それらは、可溶性のＴＧＦβＲＩＩＩよりも２０〜１００倍低い親和性及びはるかに小さな中和活性を有することが示された（Mendoza et al., Biochemistry. 2009; 48:11755-65）。他方では、ＴＧＦβＲＩＩの細胞外ドメインは、長さがわずか１３６のアミノ酸残基であり、２５〜３５ｋＤのグリコシル化タンパク質として産生することができる。組換え可溶性ＴＧＦβＲＩＩは、２００ｐＭのＫＤでＴＧＦβ１に結合することがさらに示され、これは、細胞上の完全長ＴＧＦβＲＩＩに対する５０ｐＭのＫＤにかなり類似している（Lin et al., J. Biol. Chem. 1995; 270:2747-54）。可溶性のＴＧＦβＲＩＩ−Ｆｃは、抗癌剤として試験され、腫瘍モデルにおいて確立されたマウス悪性中皮腫増殖を阻害することが示された（Suzuki et al., Clin. Cancer Res., 2004; 10:5907-18）。ＴＧＦβＲＩＩは、ＴＧＦβ２に結合せず、ＴＧＦβＲＩＩＩは、ＴＧＦβＲＩＩよりも低い親和性でＴＧＦβ１及び３に結合するので、ＴＧＦβＲＩＩＩのエンドグリンドメイン及びＴＧＦβＲＩＩの細胞外ドメインの融合タンパク質が、細菌において産生され、細胞ベースのアッセイにおいて、ＴＧＦβＲＩＩ又はＲＩＩＩのいずれかよりも有効に、ＴＧＦβ１及び２のシグナル伝達を阻害することが示された（Verona et al., Protein Engg Des. Sel. 2008; 21:463-73）。
【００７６】
[0095]  ＴＧＦβリガンドの３つのアイソフォームをすべて中和するさらに別のアプローチは、全部を中和する（pan-neutralizing）抗ＴＧＦβ抗体又はＴＧＦβ１、２、及び３への結合から受容体を遮断する抗受容体抗体についてスクリーニングすることである。ＴＧＦβのすべてのアイソフォームに対して特異的なヒト抗体であるＧＣ１００８は、進行悪性黒色腫又は腎細胞癌を有する患者においてフェーズＩ／ＩＩの研究中であった(Morris et al., J. Clin. Oncol. 2008; 26:9028 (Meeting abstract))。治療は安全で、十分に耐容性を示すことがわかったが、限られた臨床上の効能しか観察されず、よって、免疫学的効果のさらなる特徴付けなしで抗ＴＧＦβ療法の重要性を説明するのは困難であった（Flavell et al., Nat. Rev. Immunol. 2010; 10:554-67）。さらに、ＴＧＦβアイソフォーム特異的抗体が臨床において試験された。ＴＧＦβ１に対して特異的な抗体であるメテリムマブは、緑内障手術に対して過度の術後の瘢痕を予防する治療としてフェーズ２臨床試験において試験され、また、ＴＧＦβ２に対して特異的な抗体であるレルデリムマブは、フェーズ３研究において眼の手術の後の瘢痕の改善について安全であるが、効果がないことがわかった（Khaw et al., Ophthalmology 2007; 114:1822-1830）。抗ヒトＴＧＦβＲＩＩ抗体ＴＲ１及び抗マウスＴＧＦβＲＩＩ抗体ＭＴ１などのような、３つすべてのＴＧＦβアイソフォームへの結合から受容体を遮断する抗ＴＧＦβＲＩＩ抗体もまた、マウスモデルにおいて、原発性腫瘍増殖及び転移に対するいくらかの治療上の効能を示した（Zhong et al., Clin. Cancer Res. 2010; 16:1191-205）。しかしながら、抗体ＴＲ１（ＬＹ３０２２８５９）の最近のフェーズＩの研究において、２５ｍｇ（均一の用量）を超える用量漸増は、予防的な治療にもかかわらず、サイトカイン放出のコントロール不良により、安全でないと見なされた（Tolcher et al., Cancer Chemother. Pharmacol. 2017; 79:673-680）。現在までのところ、かなり毒性であることが多い、ＴＧＦβシグナル伝達の小分子阻害剤を含むＴＧＦβ標的抗癌治療に関する研究の大部分は、多くは、前臨床ステージにあり、得られた抗腫瘍効能は、限られている（Calone et al., Exp Oncol. 2012; 34:9-16; Connolly et al., Int. J. Biol. Sci. 2012; 8:964-78）。
【００７７】
[0096]  本開示の抗体−ＴＧＦβトラップは、ＴＧＦβに結合することができるヒトＴＧＦβ受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）の少なくとも一部分を含有する二機能性タンパク質である。ある実施形態では、ＴＧＦβトラップポリペプチドは、ＴＧＦβに結合することができるヒトＴＧＦβ受容体２型アイソフォームＡ（配列番号８）の可溶性の部分である。ある実施形態では、ＴＧＦβトラップポリペプチドは、配列番号８の少なくともアミノ酸７３〜１８４を含有する。ある実施形態では、ＴＧＦβトラップポリペプチドは、配列番号８のアミノ酸２４〜１８４を含有する。ある実施形態では、ＴＧＦβトラップポリペプチドは、ＴＧＦβに結合することができるヒトＴＧＦβ受容体２型アイソフォームＢ（配列番号９）の可溶性の部分である。ある実施形態では、ＴＧＦβトラップポリペプチドは、配列番号９の少なくともアミノ酸４８〜１５９を含有する。ある実施形態では、ＴＧＦβトラップポリペプチドは、配列番号９のアミノ酸２４〜１５９を含有する。ある実施形態では、ＴＧＦβトラップポリペプチドは、配列番号９のアミノ酸２４〜１０５を含有する。
【００７８】
作用メカニズム
[0097]  治療抗体による脱阻害のためにＴ細胞阻害チェックポイントを標的にするアプローチは、精力的に調査されているエリアである（概説についてはPardoll, Nat Rev Cancer. 2012; 12:253-264を参照）。あるアプローチでは、抗体成分又はその抗原結合断片は、たとえばＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＢＴＬＡ、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、又はＬＡＩＲ１などのような、Ｔ細胞上のＴ細胞阻害チェックポイント受容体タンパク質を標的にする。別のアプローチでは、抗体成分は、たとえばＰＤ−Ｌ１（Ｂ７−Ｈ１）、Ｂ７−ＤＣ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ−４、Ｂ７−Ｈ３、又はＢ７−Ｈ４などのような、抗原提示細胞及び腫瘍細胞（それら自体の免疫回避のためにこれらのカウンターレセプターのうちのいくつかを利用する）上のカウンターレセプターを標的にする。
【００７９】
[0098]  本開示は、抗体成分又はその抗原結合断片により、脱阻害のためにＴ細胞阻害チェックポイントを標的にする抗体ＴＧＦβトラップを企図する。その目的のために、出願人らは、ＴＧＦβトラップを、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＴＩＭ−３、及び抗ＬＡＧ３などのような様々なＴ細胞阻害チェックポイント受容体タンパク質を標的にする抗体と組み合わせることについての抗腫瘍効能を試験した。
【００８０】
[0099]  プログラム死１（ＰＤ−１）／ＰＤ−Ｌ１軸は、腫瘍免疫回避にとって重要なメカニズムである。長期にわたって抗原を検知し続けているエフェクターＴ細胞は、ＰＤ−１発現によって特徴づけられる、疲弊した表現型を持つようになり、このような状況下で、腫瘍細胞は、ＰＤ−Ｌ１をアップレギュレートすることによって交戦してくる。そのうえ、腫瘍微小環境では、骨髄系細胞、マクロファージ、実質細胞、及びＴ細胞は、ＰＤ−Ｌ１をアップレギュレートする。軸の遮断は、これらのＴ細胞におけるエフェクター機能を回復させる。抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップはまた、ＴＧＦβ（１、２、及び３アイソフォーム）にも結合し、これは、アポトーシス性好中球、骨髄由来抑制細胞、Ｔ細胞、及び腫瘍を含む細胞によって腫瘍微小環境において産生される阻害性サイトカインである。可溶性のＴＧＦβＲＩＩによるＴＧＦβの阻害は、ＣＤ８＋Ｔ細胞抗腫瘍効果の増加に関連する仕方で悪性中皮腫を低下させた。活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＴｒｅｇ細胞によって産生されるＴＧＦβ１の欠如は、腫瘍増殖を阻害し、自然発生癌からマウスを保護することが示された。したがって、ＴＧＦβは、腫瘍免疫回避にとって重要と思われる。
【００８１】
[0100]  ＴＧＦβは、正常な上皮細胞に対して増殖阻害効果を有し、上皮細胞ホメオスタシスの調節因子として機能し、またＴＧＦβは、初期の発癌現象の間は腫瘍抑制因子として作用する。腫瘍が悪性疾患の方へ進行すると、腫瘍に対するＴＧＦβの増殖阻害効果は、１つ以上のＴＧＦβ経路シグナル伝達構成成分における突然変異を介して又は腫瘍形成性の再プログラムによって失われる。ＴＧＦβ阻害に対する感受性の損失と同時に、腫瘍は、高レベルのＴＧＦβを産生し続け、次いで、これは、腫瘍増殖を促進する役目を果たす。ＴＧＦβサイトカインは、様々な癌のタイプで過剰発現され、腫瘍ステージと相関性がある。腫瘍細胞自体、未成熟骨髄系細胞、調節性Ｔ細胞、及び間質性線維芽細胞を含む腫瘍微小環境における多くのタイプの細胞が、ＴＧＦβを産生し、これらの細胞は、集団的に、細胞外マトリックス中にＴＧＦβの大きな貯蔵所を生成する。ＴＧＦβシグナル伝達は、転移を促進し、血管新生を刺激し、自然免疫及び適応抗腫瘍免疫を抑制することによって腫瘍進行に寄与する。広く免疫抑制性の因子として、ＴＧＦβは、活性化された細胞障害性Ｔ細胞及びＮＫ細胞のエフェクター機能を直接ダウンレギュレートし、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞の免疫抑制性調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）表現型への分化を強力に誘発する。そのうえ、ＴＧＦβは、マクロファージ及び好中球を、免疫抑制性のサイトカインの産生に関連する創傷治癒表現型に極性化する。治療上の戦略として、ＴＧＦβ活性の中和は、有効な抗腫瘍免疫を回復させ、転移を遮断し、血管新生を阻害することによって、腫瘍増殖をコントロールする可能性を有する。
【００８２】
[0101]  肺の放射線誘導線維症は、治療の開始後の最初の６か月以内に≧２０Ｇｙで放射線照射された肺組織中で生じ得る。ＴＧＦβは、肺線維症の発症に寄与する主な線維症促進分子である。したがって、ｃＣＲＴによる局所進行切除不能ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣの治療の間のＴＧＦβの標的化はｃＣＲＴの有害効果への対抗に役立つことができる。
【００８３】
[0102]  多くの肺線維症の症例は発生時に無症状性であり、最小の変化を有する肺組織中の早期の線維症変動は、肺中の炎症変化と区別することが困難であり得る。症候性の症例は、初回急性炎症後に発現される高レベルの循環血小板由来及び塩基性線維芽細胞増殖因子、線維芽細胞増殖及び移動、ＴＧＦβの放出、並びに放射線照射された肺の任意の組織学的空間、例として、血管及び肺胞コンパートメント中のコラーゲン沈着によって特徴付けられる慢性炎症を伴うことが多い。このような肺の慢性炎症は換気血流不均衡を導き、一次症状として肺機能（又はさらには機能状態）の悪化をもたらし得る。他の症状は、急性放射線肺炎、例として、乾性咳嗽及び呼吸困難と類似し得るが、これらの症状は概して事実上より慢性である。病理生理学的時間過程によって、症状は放射線療法の数か月後まで見られず、治療後数年間、進行に寄与し得る。
【００８４】
[0103]  したがって、併用化学療法及び放射線療法によるステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣと診断された患者の治療の間、急性及び長期の症状性肺損傷を回避するため、及び有効な癌療法のために治療の開始時に放射線誘導損傷から可能な限り多くの正常の肺をスペアすることが有利である。
【００８５】
[0104]  本開示は、ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣと診断された未治療対象を治療する、及び／又は併用ｃＣＲＴに伴う病理学的状態、たとえば肺線維症を静めるための方法において使用するための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子による標的ＴＧＦ−β阻害のための投薬計画を提供する。治療されているステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、ベースラインのＰＤ−Ｌ１発現レベルと無関係である。肺線維症のベースラインからの変化は、高分解能ＣＴスキャン及び肺機能試験によって測定される。
【００８６】
[0105]  同時に起こるＰＤ−１及びＴＧＦβの遮断は、炎症促進性のサイトカインを回復させることができる。抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、たとえば、完全ヒトＩｇＧ１抗ＰＤ−Ｌ１抗体のそれぞれの重鎖のＣ末端にグリシン／セリンリンカーを介して共有結合されたヒトＴＧＦβ受容体ＴＧＦβＲＩＩの細胞外ドメインを含む。応答は明らかであるが、効果量を増加させる余地がある抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１クラスについての明らかになりつつある状況を考慮すれば、補足的な免疫調整ステップを共標的にすることは腫瘍応答を改善するであろうということが仮定される。類似するＴＧＦ標的作用物質であるフレソリムマブは、ＴＧＦβ１、２、及び３を標的にするモノクローナル抗体であり、黒色腫を有する対象におけるフェーズＩ治験において腫瘍応答の最初の証拠を示した。
【００８７】
[0106]  本開示は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（トラップコントロール「抗ＰＤＬ−１（ｍｕｔ）／ＴＧＦβトラップ」）のＴＧＦβＲＩＩ部分が抗腫瘍活性を誘起することを実証した実験を提供する。たとえば、Ｄｅｔｒｏｉｔ５６２ヒト咽頭癌モデルにおける皮下移植後に、抗ＰＤＬ−１（ｍｕｔ）／ＴＧＦβトラップは、２５μｇ、７６μｇ、又は２２８μｇで投与された場合に、腫瘍容積において用量依存的な低下を誘起した（図５）。
【００８８】
[0107]  本開示は、本開示のタンパク質が、ＰＤ−Ｌ１及びＴＧＦβの両方に同時に結合することを実証した実験を提供する（図２）。
【００８９】
[0108]  本開示は、本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）が、インビトロにおいてＰＤ−Ｌ１及びＴＧＦβに依存性のシグナル伝達を阻害することを実証した実験を提供する。本開示は、本開示のタンパク質が、超抗原刺激後のＩＬ−２誘発アッセイによって測定されるように、ＰＤ−Ｌ１媒介性の免疫阻害の遮断を介してインビトロにおけるＴ細胞エフェクター機能を高めることを実証した実験を提供する（図３）。およそ１００ｎｇ／ｍｌで、本開示のタンパク質は、インビトロにおいてＩＬ−２レベルの劇的な増加を誘発した（図３）。
【００９０】
[0109]  本開示は、本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）が、インビボにおいて血液からのＴＧＦβの除去を引き起こすことを実証した実験を提供する。５５μｇ又は１６４μｇ又は４９２μｇの本開示のタンパク質によるＪＨマウスにおける同所移植ＥＭＴ−６乳癌細胞の治療は、ＴＧＦβ１（図４Ａ）、ＴＧＦβ２（図４Ｂ）、及びＴＧＦβ３（図４Ｃ）の効率的で特異的な除去をもたらした。さらに、本開示は、本開示のタンパク質が、ＰＤ−Ｌ１標的をふさぎ、本開示のタンパク質が、ＥＭＴ−６腫瘍系における受容体結合モデルにあてはまるという考えを支持することを実証した実験を提供する（図４Ｄ）。
【００９１】
[0110]  本開示は、本開示のタンパク質が、ＰＤ−Ｌ１及びＴＧＦβに効率的に、特異的に、且つ同時に結合し、様々なマウスモデルにおいて強力な抗腫瘍活性を持ち、腫瘍増殖及び転移を抑制する並びに生存期間を延ばし（たとえば６か月、１２か月、１８か月、２２か月、２８か月、３２か月、３８か月、４４か月、５０か月、５６か月、６２か月、６８か月、７４か月、８０か月、８６か月、９２か月、９８か月、１０４か月、又は１１０か月まで（終点を含む）の生存期間）、長期的な防御抗腫瘍免疫を与えることを実証した実験を提供する。ある実施形態では、延長された生存期間は、少なくとも１０８か月である。
【００９２】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体
[0111]  本開示の抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子は、当技術分野において記載される任意の抗ＰＤ−Ｌ１抗体又はその抗原結合断片を含むことができる。抗ＰＤ−Ｌ１抗体、たとえば２９Ｅ２Ａ３抗体（Biolegend、カタログ番号３２９７０１）は、市販で入手可能である。抗体は、モノクローナル、キメラ、ヒト化、又はヒト抗体とすることができる。抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ及びＦｖ断片を含み、これらは、下記にさらに詳細に記載される。
【００９３】
[0112]  例示的な抗体は、国際公開第２０１３／０７９１７４号において記載される。これらの抗体は、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含む重鎖可変領域ポリペプチドを含むことができ、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１配列は、Ｘ１ＹＸ２ＭＸ３（配列番号２１）であり、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２配列は、ＳＩＹＰＳＧＧＸ４ＴＦＹＡＤＸ５ＶＫＧ（配列番号２２）であり、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３配列は、ＩＫＬＧＴＶＴＴＶＸ６Ｙ（配列番号２３）であり、
さらにＸ１は、Ｋ、Ｒ、Ｔ、Ｑ、Ｇ、Ａ、Ｗ、Ｍ、Ｉ、又はＳであり、Ｘ２は、Ｖ、Ｒ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、又はＩであり、Ｘ３は、Ｈ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｙ、Ｗ、Ｆ、又はＭであり、Ｘ４は、Ｆ又はＩであり、Ｘ５は、Ｓ又はＴであり、Ｘ６は、Ｅ又はＤである。
【００９４】
[0113]  一実施形態では、Ｘ１は、Ｍ、Ｉ、又はＳであり、Ｘ２は、Ｒ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、又はＩであり、Ｘ３は、Ｆ又はＭであり、Ｘ４は、Ｆ又はＩであり、Ｘ５は、Ｓ又はＴであり、Ｘ６は、Ｅ又はＤである。
【００９５】
[0114]  別の実施形態では、Ｘ１は、Ｍ、Ｉ、又はＳであり、Ｘ２は、Ｌ、Ｍ、又はＩであり、Ｘ３は、Ｆ又はＭであり、Ｘ４は、Ｉであり、Ｘ５は、Ｓ又はＴであり、Ｘ６は、Ｄである。
【００９６】
[0115]  さらに別の実施形態ではＸ１は、Ｓであり、Ｘ２は、Ｉであり、Ｘ３は、Ｍであり、Ｘ４は、Ｉであり、Ｘ５は、Ｔであり、Ｘ６は、Ｄである。
【００９７】
[0116]  別の態様では、ポリペプチドは、式：（ＨＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｈ１）−（ＨＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｈ２）−（ＨＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｈ３）−（ＨＣ−ＦＲ４）によるＨＶＲの間に並べられた可変領域重鎖フレームワーク配列をさらに含む。
【００９８】
[0117]  さらに別の態様では、フレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列又はヒト生殖細胞系列フレームワーク配列に由来する。
【００９９】
[0118]  さらなる態様では、フレームワーク配列の少なくとも１つは、以下のとおり：
ＨＣ−ＦＲ１は、ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２４）であり、
ＨＣ−ＦＲ２は、ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳ（配列番号２５）であり、
ＨＣ−ＦＲ３は、ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２６）であり、
ＨＣ−ＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２７）である。
【０１００】
[0119]  さらなる態様では、重鎖ポリペプチドは、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む可変領域軽鎖とさらに組み合わせられ、
（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１配列は、ＴＧＴＸ７Ｘ８ＤＶＧＸ９ＹＮＹＶＳ（配列番号２８）であり、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２配列は、Ｘ１０ＶＸ１１Ｘ１２ＲＰＳ（配列番号２９）であり、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３配列は、ＳＳＸ１３ＴＸ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７ＲＶ（配列番号３０）であり、
さらにＸ７は、Ｎ又はＳであり、Ｘ８は、Ｔ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ９は、Ａ又はＧであり、Ｘ１０は、Ｅ又はＤであり、Ｘ１１は、Ｉ、Ｎ、又はＳであり、Ｘ１２は、Ｄ、Ｈ、又はＮであり、Ｘ１３は、Ｆ又はＹであり、Ｘ１４は、Ｎ又はＳであり、Ｘ１５は、Ｒ、Ｔ、又はＳであり、Ｘ１６は、Ｇ又はＳであり、Ｘ１７は、Ｉ又はＴである。
【０１０１】
[0120]  他の実施形態では、Ｘ７は、Ｎ又はＳであり、Ｘ８は、Ｔ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ９は、Ａ又はＧであり、Ｘ１０は、Ｅ又はＤであり、Ｘ１１は、Ｎ又はＳであり、Ｘ１２は、Ｎであり、Ｘ１３は、Ｆ又はＹであり、Ｘ１４は、Ｓであり、Ｘ１５は、Ｓであり、Ｘ１６は、Ｇ又はＳであり、Ｘ１７は、Ｔである。
【０１０２】
[0121]  さらに別の実施形態ではＸ７は、Ｓであり、Ｘ８は、Ｓであり、Ｘ９は、Ｇであり、Ｘ１０は、Ｄであり、Ｘ１１は、Ｓであり、Ｘ１２は、Ｎであり、Ｘ１３は、Ｙであり、Ｘ１４は、Ｓであり、Ｘ１５は、Ｓであり、Ｘ１６は、Ｓであり、Ｘ１７は、Ｔである。
【０１０３】
[0122]  さらなる態様では、軽鎖は、式：（ＬＣ−ＦＲ１ＭＨＶＲ−Ｌ１）−（ＬＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｌ２）−（ＬＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｌ３）−（ＬＣ−ＦＲ４）によるＨＶＲの間に並べられた可変領域軽鎖フレームワーク配列をさらに含む。
【０１０４】
[0123]  さらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列又はヒト生殖細胞系列フレームワーク配列に由来する。
【０１０５】
[0124]  さらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、ラムダ軽鎖配列である。
【０１０６】
[0125]  さらなる態様では、フレームワーク配列の少なくとも１つは、以下のとおり：
ＬＣ−ＦＲ１は、ＱＳＡＬＴＱＰＡＳＶＳＧＳＰＧＱＳＩＴＩＳＣ（配列番号３１）であり、
ＬＣ−ＦＲ２は、ＷＹＱＱＨＰＧＫＡＰＫＬＭＩＹ（配列番号３２）であり、
ＬＣ−ＦＲ３は、ＧＶＳＮＲＦＳＧＳＫＳＧＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣ（配列番号３３）であり、
ＬＣ−ＦＲ４は、ＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ（配列番号３４）である。
【０１０７】
[0126]  別の実施形態では、本開示は、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体又は抗原結合断片を提供し、
（ａ）重鎖は、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含み、さらに（ｉ）ＨＶＲ−Ｈ１配列は、Ｘ１ＹＸ２ＭＸ３（配列番号２１）であり、（ｉｉ）ＨＶＲ−Ｈ２配列は、ＳＩＹＰＳＧＧＸ４ＴＦＹＡＤＸ５ＶＫＧ（配列番号２２）であり、（ｉｉｉ）ＨＶＲ−Ｈ３配列は、ＩＫＬＧＴＶＴＴＶＸ６Ｙ（配列番号２３）であり、
（ｂ）軽鎖は、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含み、さらに（ｉｖ）ＨＶＲ−Ｌ１配列は、ＴＧＴＸ７Ｘ８ＤＶＧＸ９ＹＮＹＶＳ（配列番号２８）であり、（ｖ）ＨＶＲ−Ｌ２配列は、Ｘ１０ＶＸ１１Ｘ１２ＲＰＳ（配列番号２９）であり、（ｖｉ）ＨＶＲ−Ｌ３配列は、ＳＳＸ１３ＴＸ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７ＲＶ（配列番号３０）であり、Ｘ１は、Ｋ、Ｒ、Ｔ、Ｑ、Ｇ、Ａ、Ｗ、Ｍ、Ｉ、又はＳであり、Ｘ２は、Ｖ、Ｒ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、又はＩであり、Ｘ３は、Ｈ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｙ、Ｗ、Ｆ、又はＭであり、Ｘ４は、Ｆ又はＩであり、Ｘ５は、Ｓ又はＴであり、Ｘ６は、Ｅ又はＤであり、Ｘ７は、Ｎ又はＳであり、Ｘ８は、Ｔ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ９は、Ａ又はＧであり、Ｘ１０は、Ｅ又はＤであり、Ｘ１１は、Ｉ、Ｎ、又はＳであり、Ｘ１２は、Ｄ、Ｈ、又はＮであり、Ｘ１３は、Ｆ又はＹであり、Ｘ１４は、Ｎ又はＳであり、Ｘ１５は、Ｒ、Ｔ、又はＳであり、Ｘ１６は、Ｇ又はＳであり、Ｘ１７は、Ｉ又はＴである。
【０１０８】
[0127]  一実施形態では、Ｘ１は、Ｍ、Ｉ、又はＳであり、Ｘ２は、Ｒ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、又はＩであり、Ｘ３は、Ｆ又はＭであり、Ｘ４は、Ｆ又はＩであり、Ｘ５は、Ｓ又はＴであり、Ｘ６は、Ｅ又はＤであり、Ｘ７は、Ｎ又はＳであり、Ｘ８は、Ｔ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ９は、Ａ又はＧであり、Ｘ１０は、Ｅ又はＤであり、Ｘ１１は、Ｎ又はＳであり、Ｘ１２は、Ｎであり、Ｘ１３は、Ｆ又はＹであり、Ｘ１４は、Ｓであり、Ｘ１５は、Ｓであり、Ｘ１６は、Ｇ又はＳであり、Ｘ１７は、Ｔである。
【０１０９】
[0128]  他の実施形態では、Ｘ１は、Ｍ、Ｉ、又はＳであり、Ｘ２は、Ｌ、Ｍ、又はＩであり、Ｘ３は、Ｆ又はＭであり、Ｘ４は、Ｉであり、Ｘ５は、Ｓ又はＴであり、Ｘ６は、Ｄであり、Ｘ７は、Ｎ又はＳであり、Ｘ８は、Ｔ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ９は、Ａ又はＧであり、Ｘ１０は、Ｅ又はＤであり、Ｘ１１は、Ｎ又はＳであり、Ｘ１２は、Ｎであり、Ｘ１３は、Ｆ又はＹであり、Ｘ１４は、Ｓであり、Ｘ１５は、Ｓであり、Ｘ１６は、Ｇ又はＳであり、Ｘ１７は、Ｔである。
【０１１０】
[0129]  さらに別の実施形態では、Ｘ１は、Ｓであり、Ｘ２は、Ｉであり、Ｘ３は、Ｍであり、Ｘ４は、Ｉであり、Ｘ５は、Ｔであり、Ｘ６は、Ｄであり、Ｘ７は、Ｓであり、Ｘ８は、Ｓであり、Ｘ９は、Ｇであり、Ｘ１０は、Ｄであり、Ｘ１１は、Ｓであり、Ｘ１２は、Ｎであり、Ｘ１３は、Ｙであり、Ｘ１４は、Ｓであり、Ｘ１５は、Ｓであり、Ｘ１６は、Ｓであり、Ｘ１７は、Ｔである。
【０１１１】
[0130]  さらなる態様では、重鎖可変領域は、（ＨＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｈ１）−（ＨＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｈ２）−（ＨＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｈ３）−（ＨＣ−ＦＲ４）のようにＨＶＲの間に並べられた１つ以上のフレームワーク配列を含み、軽鎖可変領域は、（ＬＣ−ＦＲ１  ＭＨＶＲ−Ｌ１）−（ＬＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｌ２）−（ＬＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｌ３）−（ＬＣ−ＦＲ４）のようにＨＶＲの間に並べられた１つ以上のフレームワーク配列を含む。
【０１１２】
[0131]  さらなる態様では、フレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列又はヒト生殖細胞系列配列に由来する。
【０１１３】
[0132]  さらなる態様では、重鎖フレームワーク配列の１つ以上は、以下のとおり：
ＨＣ−ＦＲ１は、ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２４）であり、
ＨＣ−ＦＲ２は、ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳ（配列番号２５）であり、
ＨＣ−ＦＲ３は、ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２６）であり、
ＨＣ−ＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２７）である。
【０１１４】
[0133]  さらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、ラムダ軽鎖配列である。
【０１１５】
[0134]  さらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列の１つ以上は、以下のとおり：
ＬＣ−ＦＲ１は、ＱＳＡＬＴＱＰＡＳＶＳＧＳＰＧＱＳＩＴＩＳＣ（配列番号３１）であり、
ＬＣ−ＦＲ２は、ＷＹＱＱＨＰＧＫＡＰＫＬＭＩＹ（配列番号３２）であり、
ＬＣ−ＦＲ３は、ＧＶＳＮＲＦＳＧＳＫＳＧＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣ（配列番号３３）であり、
ＬＣ−ＦＲ４は、ＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ（配列番号３４）である。
【０１１６】
[0135]  さらなる態様では、重鎖可変領域ポリペプチド、抗体、又は抗体断片は、少なくとも１つのＣＨ１ドメインをさらに含む。
【０１１７】
[0136]  より特定の態様では、重鎖可変領域ポリペプチド、抗体、又は抗体断片は、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３ドメインをさらに含む。
【０１１８】
[0137]  さらなる態様では、可変領域軽鎖、抗体、又は抗体断片は、ＣＬドメインをさらに含む。
【０１１９】
[0138]  さらなる態様では、抗体は、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＬドメインをさらに含む。
【０１２０】
[0139]  さらに特定の態様では、抗体は、ヒト又はマウス定常領域をさらに含む。
【０１２１】
[0140]  さらなる態様では、ヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群から選択される。
【０１２２】
[0141]  さらに特定の態様では、ヒト又はマウス定常領域は、ｌｇＧ１である。
【０１２３】
[0142]  さらに別の実施形態では、本開示は、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体を特徴づけ、
（ａ）重鎖は、それぞれＳＹＩＭＭ（配列番号３５）、ＳＩＹＰＳＧＧＩＴＦＹＡＤＴＶＫＧ（配列番号３６）、及びＩＫＬＧＴＶＴＴＶＤＹ（配列番号３７）に対して少なくとも８０％の全体的な配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含み、
（ｂ）軽鎖は、それぞれＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号３８）、ＤＶＳＮＲＰＳ（配列番号３９）、及びＳＳＹＴＳＳＳＴＲＶ（配列番号４０）に対して少なくとも８０％の全体的な配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１２４】
[0143]  特定の態様では、配列同一性は、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％である。
【０１２５】
[0144]  さらに別の実施形態では、本開示は、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体を特徴づけ、
（ａ）重鎖は、それぞれＭＹＭＭＭ（配列番号４１）、ＳＩＹＰＳＧＧＩＴＦＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４２）、及びＩＫＬＧＴＶＴＴＶＤＹ（配列番号３７）に対して少なくとも８０％の全体的な配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含み、
（ｂ）軽鎖は、それぞれＴＧＴＳＳＤＶＧＡＹＮＹＶＳ（配列番号４３）、ＤＶＳＮＲＰＳ（配列番号３９）、及びＳＳＹＴＳＳＳＴＲＶ（配列番号４０）に対して少なくとも８０％の全体的な配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１２６】
[0145]  特定の態様では、配列同一性は、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％である。
【０１２７】
[0146]  さらなる態様では、本開示による抗体又は抗体断片において、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３の配列と比較して、少なくとも、以下のとおり下線を引くことによって強調されるアミノ酸は、不変のままであり：
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１において
【化１】
2021527083.tif 000005
、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２において
【化２】
2021527083.tif 000006
、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３において
【化３】
2021527083.tif 000007
、さらに、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３の配列と比較して、少なくとも、以下のとおり下線を引くことによって強調されるアミノ酸は、不変のままである：
（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１  ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号３８）
（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２
【化４】
2021527083.tif 000008
（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３
【化５】
2021527083.tif 000009
。
【０１２８】
[0147]  別の態様では、重鎖可変領域は、（ＨＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｈ１）−（ＨＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｈ２）−（ＨＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｈ３）−（ＨＣ−ＦＲ４）のようにＨＶＲの間に並べられた１つ以上のフレームワーク配列を含み、軽鎖可変領域は、（ＬＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｌ１）−（ＬＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｌ２）−（ＬＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｌ３）−（ＬＣ−ＦＲ４）のようにＨＶＲの間に並べられた１つ以上のフレームワーク配列を含む。
【０１２９】
[0148]  さらに別の態様では、フレームワーク配列は、ヒト生殖細胞系列配列に由来する。
【０１３０】
[0149]  さらなる態様では、重鎖フレームワーク配列の１つ以上は、以下のとおり：
ＨＣ−ＦＲ１は、ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２４）であり、
ＨＣ−ＦＲ２は、ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳ（配列番号２５）であり、
ＨＣ−ＦＲ３は、ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２６）であり、
ＨＣ−ＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２７）である。
【０１３１】
[0150]  さらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、ラムダ軽鎖配列に由来する。
【０１３２】
[0151]  さらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列の１つ以上は、以下のとおり：
ＬＣ−ＦＲ１は、ＱＳＡＬＴＱＰＡＳＶＳＧＳＰＧＱＳＩＴＩＳＣ（配列番号３１）であり、
ＬＣ−ＦＲ２は、ＷＹＱＱＨＰＧＫＡＰＫＬＭＩＹ（配列番号３２）であり、
ＬＣ−ＦＲ３は、ＧＶＳＮＲＦＳＧＳＫＳＧＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣ（配列番号３３）であり、
ＬＣ−ＦＲ４は、ＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ（配列番号３４）である。
【０１３３】
[0152]  さらに特定の態様では、抗体は、ヒト又はマウス定常領域をさらに含む。
【０１３４】
[0153]  さらなる態様では、ヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群から選択される。
【０１３５】
[0154]  ある実施形態では、本開示は、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体を特徴づけ、
（ａ）重鎖配列は、重鎖配列：
【化６】
2021527083.tif 000010
に対して少なくとも８５％の配列同一性を有し、
（ｂ）軽鎖配列は、軽鎖配列：
【化７】
2021527083.tif 000011
に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。
【０１３６】
[0155]  様々な実施形態では、重鎖配列は、配列番号４４に対して少なくとも８６％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４５に対して少なくとも８６％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４４に対して少なくとも８７％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４５に対して少なくとも８７％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４４に対して少なくとも８８％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４５に対して少なくとも８８％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４４に対して少なくとも８９％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４５に対して少なくとも８９％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４４に対して少なくとも９１％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４５に対して少なくとも９１％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４４に対して少なくとも９２％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４５に対して少なくとも９２％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４４に対して少なくとも９３％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４５に対して少なくとも９３％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４４に対して少なくとも９４％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４５に対して少なくとも９４％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４５に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４４に対して少なくとも９６％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４５に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４４に対して少なくとも９７％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４５に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４４に対して少なくとも９８％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４５に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４４に対して少なくとも９９％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４５に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する；又は重鎖配列は、配列番号４４を含み、軽鎖配列は、配列番号４５を含む。
【０１３７】
[0156]  ある実施形態では、本開示は、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体を提供し、
（ａ）重鎖配列は、重鎖配列：
【化８】
2021527083.tif 000012
に対して少なくとも８５％の配列同一性を有し、
（ｂ）軽鎖配列は、軽鎖配列：
【化９】
2021527083.tif 000013
に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。
【０１３８】
[0157]  様々な実施形態では、重鎖配列は、配列番号４６に対して少なくとも８６％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４７に対して少なくとも８６％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４６に対して少なくとも８７％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４７に対して少なくとも８７％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４６に対して少なくとも８８％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４７に対して少なくとも８８％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４６に対して少なくとも８９％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４７に対して少なくとも８９％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４６に対して少なくとも９１％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４７に対して少なくとも９１％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４６に対して少なくとも９２％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４７に対して少なくとも９２％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４６に対して少なくとも９３％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４７に対して少なくとも９３％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４６に対して少なくとも９４％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４７に対して少なくとも９４％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４６に対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４７に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４６に対して少なくとも９６％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４７に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４６に対して少なくとも９７％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４７に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４６に対して少なくとも９８％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４７に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４６に対して少なくとも９９％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４７に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する；又は重鎖配列は、配列番号４６を含み、軽鎖配列は、配列番号４７を含む。
【０１３９】
[0158]  別の実施形態では、抗体は、ヒト、マウス、又はカニクイザルＰＤ−Ｌ１に結合する。特定の態様では、抗体は、ヒト、マウス、又はカニクイザルＰＤ−Ｌ１及びそれぞれのヒト、マウス、又はカニクイザルＰＤ−１受容体の間の相互作用を遮断することができる。
【０１４０】
[0159]  別の実施形態では、抗体は、５×１０−９Ｍ又はそれ以下のＫＤで、好ましくは２×１０−９Ｍ又はそれ以下のＫＤで、さらにより好ましくは１×１０−９Ｍ又はそれ以下のＫＤでヒトＰＤ−Ｌ１に結合する。
【０１４１】
[0160]  さらに別の実施形態では、本開示は、ヒトＰＤ−Ｌ１の残基Ｙ５６及びＤ６１を含む機能的なエピトープに結合する抗ＰＤ−Ｌ１抗体又はその抗原結合断片に関する。
【０１４２】
[0161]  特定の態様では、機能的なエピトープは、ヒトＰＤ−Ｌ１のＥ５８、Ｅ６０、Ｑ６６、Ｒ１１３、及びＭ１１５をさらに含む。
【０１４３】
[0162]  より特定の態様では、抗体は、ヒトＰＤ−Ｌ１の残基５４〜６６及び１１２〜１２２を含む立体エピトープに結合する。
【０１４４】
[0163]  ある実施形態では、本開示は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体又はその抗原結合断片に関し、これは、本明細書において記載される本開示による抗体と、ＰＤ−Ｌ１への結合について交差競合（cross-compete）する。
【０１４５】
[0164]  ある実施形態では、本開示は、少なくとも１つの薬学的に許容され得るキャリヤと組み合わせて上記に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体のいずれかを含むタンパク質及びポリペプチドを特徴づける。
【０１４６】
[0165]  ある実施形態では、本開示は、本明細書において記載されるように、ポリペプチド又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体の軽鎖若しくは重鎖可変領域配列又はその抗原結合断片をコードする単離核酸を特徴づける。ある実施形態では、本開示は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体の軽鎖又は重鎖可変領域配列をコードする単離核酸であって、
（ａ）重鎖は、それぞれＳＹＩＭＭ（配列番号３５）、ＳＩＹＰＳＧＧＩＴＦＹＡＤＴＶＫＧ（配列番号３６）、及びＩＫＬＧＴＶＴＴＶＤＹ（配列番号３７）に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含む、又は
（ｂ）軽鎖は、それぞれＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号３８）、ＤＶＳＮＲＰＳ（配列番号３９）、及びＳＳＹＴＳＳＳＴＲＶ（配列番号４０）に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む、単離核酸を提供する。
【０１４７】
[0166]  特定の態様では、配列同一性は、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％である。
【０１４８】
[0167]  さらなる態様では、重鎖の核酸配列は、
【化１０】
2021527083.tif 000014
であり、
軽鎖の核酸配列は、
【化１１】
2021527083.tif 000015
である。
【０１４９】
[0168]  抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップにおいて使用することができるさらなる例示的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、米国特許出願公開第２０１０／０２０３０５６号に記載される。本開示の一実施形態では、抗体成分は、ＹＷ２４３．５５Ｓ７０である。本開示の別の実施形態では、抗体成分は、ＭＰＤＬ３２８９Ａである。
【０１５０】
[0169]  ある実施形態では、本開示は、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体成分を特徴づけ、
（ａ）重鎖配列は、重鎖配列：
【化１２】
2021527083.tif 000016
に対して少なくとも８５％の配列同一性を有し、
（ｂ）軽鎖配列は、軽鎖配列：
【化１３】
2021527083.tif 000017
に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。
【０１５１】
[0170]  様々な実施形態では、重鎖配列は、配列番号１２に対して少なくとも８６％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも８６％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１２に対して少なくとも８７％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも８７％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１２に対して少なくとも８８％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも８８％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１２に対して少なくとも８９％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも８９％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１２に対して少なくとも９１％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９１％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１２に対して少なくとも９２％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９２％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１２に対して少なくとも９３％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９３％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１２に対して少なくとも９４％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９４％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１２に対して少なくとも９６％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１２に対して少なくとも９７％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１２に対して少なくとも９８％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１２に対して少なくとも９９％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する；又は重鎖配列は、配列番号１２を含み、軽鎖配列は、配列番号１３を含む。
【０１５２】
[0171]  ある実施形態では、本開示は、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体成分を特徴づけ、
（ａ）重鎖配列は、重鎖配列：
【化１４】
2021527083.tif 000018
に対して少なくとも８５％の配列同一性を有し、
（ｂ）軽鎖配列は、軽鎖配列：
【化１５】
2021527083.tif 000019
に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。
【０１５３】
[0172]  様々な実施形態では、重鎖配列は、配列番号１４に対して少なくとも８６％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも８６％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１４に対して少なくとも８７％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも８７％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１４に対して少なくとも８８％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも８８％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１４に対して少なくとも８９％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも８９％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１４に対して少なくとも９１％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９１％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１４に対して少なくとも９２％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９２％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１４に対して少なくとも９３％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９３％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１４に対して少なくとも９４％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９４％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１４に対して少なくとも９６％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１４に対して少なくとも９７％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１４に対して少なくとも９８％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１４に対して少なくとも９９％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する；又は重鎖配列は、配列番号１４を含み、軽鎖配列は、配列番号１３を含む。
【０１５４】
[0173]  抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップにおいて使用することができるさらなる例示的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、米国特許出願公開第２０１８／０３３４５０４号に記載される。
【０１５５】
[0174]  ある実施形態では、本開示は、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体成分を特徴とし、
（ａ）重鎖配列は、重鎖配列：
【化１６】
2021527083.tif 000020
に対して少なくとも８５％の配列同一性を有し、
（ｂ）軽鎖配列は、軽鎖配列：
【化１７】
2021527083.tif 000021
に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。
【０１５６】
[0175]  様々な実施形態では、重鎖配列は、配列番号５５に対して少なくとも８６％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５６に対して少なくとも８６％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５５に対して少なくとも８７％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５６に対して少なくとも８７％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５５に対して少なくとも８８％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５６に対して少なくとも８８％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５５に対して少なくとも８９％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５６に対して少なくとも８９％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５５に対して少なくとも９１％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５６に対して少なくとも９１％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５５に対して少なくとも９２％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５６に対して少なくとも９２％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５５に対して少なくとも９３％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５６に対して少なくとも９３％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５５に対して少なくとも９４％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５６に対して少なくとも９４％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５５に対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５６に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５５に対して少なくとも９６％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５６に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５５に対して少なくとも９７％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５６に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５５に対して少なくとも９８％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５６に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５５に対して少なくとも９９％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５６に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する；又は重鎖配列は、配列番号５５を含み、軽鎖配列は、配列番号５６を含む。
【０１５７】
[0176]  ある実施形態では、本開示は、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体成分を特徴とし、
（ａ）重鎖配列は、重鎖配列：
【化１８】
2021527083.tif 000022
に対して少なくとも８５％の配列同一性を有し、
（ｂ）軽鎖配列は、軽鎖配列：
【化１９】
2021527083.tif 000023
に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。
【０１５８】
[0177]  様々な実施形態では、重鎖配列は、配列番号５７に対して少なくとも８６％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５８に対して少なくとも８６％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５７に対して少なくとも８７％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５８に対して少なくとも８７％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５７に対して少なくとも８８％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５８に対して少なくとも８８％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５７に対して少なくとも８９％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５８に対して少なくとも８９％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５７に対して少なくとも９１％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５８に対して少なくとも９１％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５７に対して少なくとも９２％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５８に対して少なくとも９２％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５７に対して少なくとも９３％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５８に対して少なくとも９３％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５７に対して少なくとも９４％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５８に対して少なくとも９４％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５７に対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５８に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５７に対して少なくとも９６％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５８に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５７に対して少なくとも９７％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５８に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５７に対して少なくとも９８％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５８に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５７に対して少なくとも９９％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５８に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する；又は重鎖配列は、配列番号５７を含み、軽鎖配列は、配列番号５８を含む。
【０１５９】
[0178]  ある実施形態では、本開示は、重鎖及び軽鎖配列を含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体成分を特徴とし、
（ａ）重鎖配列は、重鎖配列：
【化２０】
2021527083.tif 000024
に対して少なくとも８５％の配列同一性を有し、
（ｂ）軽鎖配列は、軽鎖配列：
【化２１】
2021527083.tif 000025
に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。
【０１６０】
[0179]  様々な実施形態では、重鎖配列は、配列番号５９に対して少なくとも８６％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６０に対して少なくとも８６％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５９に対して少なくとも８７％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６０に対して少なくとも８７％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５９に対して少なくとも８８％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６０に対して少なくとも８８％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５９に対して少なくとも８９％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６０に対して少なくとも８９％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５９に対して少なくとも９１％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６０に対して少なくとも９１％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５９に対して少なくとも９２％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６０に対して少なくとも９２％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５９に対して少なくとも９３％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６０に対して少なくとも９３％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５９に対して少なくとも９４％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６０に対して少なくとも９４％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５９に対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６０に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５９に対して少なくとも９６％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６０に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５９に対して少なくとも９７％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６０に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５９に対して少なくとも９８％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６０に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５９に対して少なくとも９９％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６０に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する；又は重鎖配列は、配列番号５９を含み、軽鎖配列は、配列番号６０を含む。
【０１６１】
[0180]  ある実施形態では、本開示は、重鎖及び軽鎖配列を含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体成分を特徴とし、
（ａ）重鎖配列は、重鎖配列：
【化２２】
2021527083.tif 000026
に対して少なくとも８５％の配列同一性を有し、
（ｂ）軽鎖配列は、軽鎖配列：
【化２３】
2021527083.tif 000027
に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。
【０１６２】
[0181]  様々な実施形態では、重鎖配列は、配列番号６１に対して少なくとも８６％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６２に対して少なくとも８６％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号６１に対して少なくとも８７％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６２に対して少なくとも８７％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号６１に対して少なくとも８８％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６２に対して少なくとも８８％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号６１に対して少なくとも８９％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６２に対して少なくとも８９％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号６１に対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号６１に対して少なくとも９１％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６２に対して少なくとも９１％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号６１に対して少なくとも９２％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６２に対して少なくとも９２％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号６１に対して少なくとも９３％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６２に対して少なくとも９３％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号６１に対して少なくとも９４％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６２に対して少なくとも９４％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号６１に対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号６１に対して少なくとも９６％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６２に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号６１に対して少なくとも９７％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６２に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号６１に対して少なくとも９８％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６２に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号６１に対して少なくとも９９％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６２に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する；又は重鎖配列は、配列番号６１を含み、軽鎖配列は、配列番号６２を含む。
【０１６３】
[0182]  抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップにおいて使用することができるさらなる例示的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、米国特許第７，９４３，７４３号に記載される。
【０１６４】
[0183]  本開示の一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＭＤＸ−１１０５である。
【０１６５】
[0184]  ある実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＭＥＤＩ−４７３６である。
【０１６６】
定常領域
[0185]  本開示のタンパク質及びペプチドは、免疫グロブリンの定常領域又は定常領域の断片、アナログ、変異体、突然変異体、若しくは誘導体を含むことができる。ある実施形態では、定常領域は、ヒト免疫グロブリン重鎖、たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、又は他のクラスに由来する。ある実施形態では、定常領域は、ＣＨ２ドメインを含む。ある実施形態では、定常領域は、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む又はヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む。その代わりに、定常領域は、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、及び／又はＣＨ３ドメインのすべて又は一部分を含むことができる。
【０１６７】
[0186]  一実施形態では、定常領域は、Ｆｃ受容体に対する親和性を低下させる又はＦｃエフェクター機能を低下させる突然変異を含有する。たとえば、定常領域は、ＩｇＧ重鎖の定常領域内のグリコシル化部位を省く突然変異を含有することができる。いくつかの実施形態では、定常領域は、ＩｇＧ１のＬｅｕ２３４、Ｌｅｕ２３５、Ｇｌｙ２３６、Ｇｌｙ２３７、Ａｓｎ２９７、又はＰｒｏ３３１に対応するアミノ酸の位置に突然変異、欠失、又は挿入を含有する（アミノ酸は、ＥＵ命名法に従ってナンバリングされる）。特定の実施形態では、定常領域は、ＩｇＧ１のＡｓｎ２９７に対応するアミノ酸の位置に突然変異を含有する。代替の実施形態では、定常領域は、ＩｇＧ１のＬｅｕ２８１、Ｌｅｕ２８２、Ｇｌｙ２８３、Ｇｌｙ２８４、Ａｓｎ３４４、又はＰｒｏ３７８に対応するアミノ酸の位置に突然変異、欠失、又は挿入を含有する。
【０１６８】
[0187]  いくつかの実施形態では、定常領域は、ヒトＩｇＧ２又はＩｇＧ４重鎖に由来するＣＨ２ドメインを含有する。好ましくは、ＣＨ２ドメインは、ＣＨ２ドメイン内のグリコシル化部位を省く突然変異を含有する。一実施形態では、突然変異は、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４重鎖のＣＨ２ドメイン内のＧｌｎ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ（配列番号１５）アミノ酸配列内のアスパラギンを改変する。好ましくは、突然変異は、アスパラギンをグルタミンに変化させる。その代わりに、突然変異は、Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ（配列番号１５）アミノ酸配列内のフェニルアラニン及びアスパラギンの両方を改変する。一実施形態では、Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ（配列番号１５）アミノ酸配列は、Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ（配列番号１６）アミノ酸配列と交換される。Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ（配列番号１５）アミノ酸配列内のアスパラギンは、ＩｇＧ１のＡｓｎ２９７に対応する。
【０１６９】
[0188]  別の実施形態では、定常領域は、ＣＨ２ドメイン及びヒンジ領域の少なくとも一部分を含む。ヒンジ領域は、免疫グロブリン重鎖、たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、又は他のクラスに由来することができる。好ましくは、ヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、又は他の適したクラスに由来する。より好ましくは、ヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ１重鎖に由来する。一実施形態では、ＩｇＧ１ヒンジ領域のＰｒｏ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（配列番号１７）アミノ酸配列におけるシステインは、改変される。ある実施形態では、Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（配列番号１７）アミノ酸配列は、Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（配列番号１８）アミノ酸配列と交換される。ある実施形態では、定常領域は、第１の抗体アイソタイプに由来するＣＨ２ドメイン及び第２の抗体アイソタイプに由来するヒンジ領域を含む。ある実施形態では、ＣＨ２ドメインは、ヒトＩｇＧ２又はＩｇＧ４重鎖に由来し、ヒンジ領域は、改変ヒトＩｇＧ１重鎖に由来する。
【０１７０】
[0189]  Ｆｃ部分及び非Ｆｃ部分の接合部の近くのアミノ酸の改変は、Ｆｃ融合タンパク質の血清半減期を劇的に増加させることができる（国際公開第０１５８９５７号、この開示は、参照によってこれによって組み込まれる）。したがって、本開示のタンパク質又はポリペプチドの接合部領域は、免疫グロブリン重鎖及びエリスロポイエチンの天然に存在する配列に比べて、好ましくは、接合点の約１０アミノ酸内にある改変を含有することができる。これらのアミノ酸変化は、疎水性の増加を引き起こすことができる。一実施形態では、定常領域は、Ｃ−末端リシン残基が交換されたＩｇＧ配列に由来する。好ましくは、ＩｇＧ配列のＣ−末端リシンは、血清半減期をさらに増加させるために、アラニン又はロイシンなどのような非リシンアミノ酸と交換される。別の実施形態では、定常領域は、定常領域のＣ−末端の近くのＬｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ（配列番号１９）アミノ酸配列が、可能性として考えられる接合部Ｔ細胞エピトープを省くために改変されたＩｇＧ配列に由来する。たとえば、一実施形態では、Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ（配列番号１９）アミノ酸配列は、Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｔｈｒ（配列番号２０）アミノ酸配列と交換される。他の実施形態では、Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ（配列番号１９）セグメント内のアミノ酸は、グリシン又はプロリンなどのような他のアミノ酸と交換される。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、又は他の免疫グロブリンクラス分子のＣ−末端の近くのＬｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ（配列番号１９）セグメントのアミノ酸置換を生成する詳細な方法は、米国特許出願公開第２００３０１６６８７７号において記載され、この開示は、参照によってこれによって組み込まれる。
【０１７１】
[0190]  本開示に適したヒンジ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、及び他の免疫グロブリンクラスに由来することができる。ＩｇＧ１ヒンジ領域は、３つのシステインを有し、このうちの２つは、免疫グロブリンの２つの重鎖の間のジスルフィド結合に関係する。これらの同じシステインは、Ｆｃ部分の間で効率的でしっかりしたジスルフィド結合形成を可能にする。そのため、本開示のヒンジ領域は、ＩｇＧ１、たとえばヒトＩｇＧ１に由来する。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域内の第１のシステインは、別のアミノ酸、好ましくはセリンに突然変異させられる。ＩｇＧ２アイソタイプヒンジ領域は、組換え系における分泌の間にオリゴマー化及び場合により不正確なジスルフィド結合を促進する傾向がある４つのジスルフィド結合を有する。適したヒンジ領域は、ＩｇＧ２ヒンジに由来することができ、最初の２つのシステインは、好ましくは、それぞれ、別のアミノ酸に突然変異させられる。ＩｇＧ４のヒンジ領域は、鎖間ジスルフィド結合を非効率的に形成することが知られている。しかしながら、本開示に適したヒンジ領域は、重鎖由来成分の間のジスルフィド結合の正確な形成を高める突然変異を好ましくは含有するＩｇＧ４ヒンジ領域に由来することができる（Angal S, et al. (1993) Mol. Immunol., 30:105-8）。
【０１７２】
[0191]  本開示に従って、定常領域は、異なる抗体アイソタイプに由来するＣＨ２及び／又はＣＨ３ドメイン並びにヒンジ領域を含有することができる、すなわちハイブリッド定常領域とすることができる。たとえば、一実施形態では、定常領域は、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４に由来するＣＨ２及び／又はＣＨ３ドメイン並びにＩｇＧ１に由来する突然変異ヒンジ領域を含有する。その代わりに、別のＩｇＧサブクラスからの突然変異ヒンジ領域が、ハイブリッド定常領域において使用される。たとえば、２つの重鎖の間で効率的なジスルフィド結合を可能にするＩｇＧ４ヒンジの突然変異形態を使用することができる。突然変異ヒンジはまた、最初の２つのシステインが別のアミノ酸にそれぞれ突然変異させられるＩｇＧ２ヒンジに由来することができる。そのようなハイブリッド定常領域のアセンブリーは、米国特許出願公開第２００３００４４４２３号において記載されており、この開示は、参照によってこれによって組み込まれる。
【０１７３】
[0192]  本開示に従って、定常領域は、本明細書において記載される１つ以上の突然変異を含有することができる。Ｆｃ部分における突然変異の組み合わせは、二機能性分子の血清半減期の延長及びインビボにおける効力の増加に対して相加的又は相乗的効果を有することができる。したがって、例示的な一実施形態では、定常領域は、（ｉ）Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ（配列番号１９）アミノ酸配列が、Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｔｈｒ（配列番号２０）アミノ酸配列と交換されるＩｇＧ配列に由来する領域；（ｉｉ）リシンの代わりとなるＣ−末端アラニン残基；（ｉｉｉ）異なる抗体アイソタイプに由来するＣＨ２ドメイン及びヒンジ領域、たとえばＩｇＧ２  ＣＨ２ドメイン及び改変ＩｇＧ１ヒンジ領域；並びに（ｉｖ）ＩｇＧ２由来ＣＨ２ドメイン内のグリコシル化部位を省く突然変異、たとえば、ＩｇＧ２由来ＣＨ２ドメイン内のＧｌｎ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ（配列番号１５）アミノ酸配列の代わりとなるＧｌｎ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ（配列番号１６）アミノ酸配列を含有することができる。
【０１７４】
抗体断片
[0193]  本開示のタンパク質及びポリペプチドはまた、抗体の抗原結合性断片を含むこともできる。例示的な抗体断片は、ラクダ科の動物起源のものなどのようなｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、及び単一ドメインＶＨＨ断片を含む。
【０１７５】
[0194]  単鎖抗体（ｓｃＦｖ）としても知られている単鎖抗体断片は、典型的に抗原又は受容体に結合する組換えポリペプチドであり、これらの断片は、１つ以上の相互連結リンカーあり又はなしで抗体可変軽鎖配列（ＶＬ）の少なくとも１つの断片につながれた抗体可変重鎖アミノ酸配列（ＶＨ）の少なくとも１つの断片を含有する。そのようなリンカーは、単鎖抗体断片が由来する抗体全体の標的分子結合特異性を維持するために、一旦ＶＬドメイン及びＶＨドメインが連結するとＶＬドメイン及びＶＨドメインの適切な三次元フォールディングが生じるのを確実にするように選択された短く可動性のペプチドであってもよい。一般に、ＶＬ又はＶＨ配列のカルボキシル末端は、そのようなペプチドリンカーによって相補的なＶＬ及びＶＨ配列のアミノ酸末端に共有結合で連結される。単鎖抗体断片は、分子クローニング、抗体ファージディスプレーライブラリー、又は同様の技術によって生成することができる。これらのタンパク質は、真核細胞又は細菌を含む原核細胞のいずれかにおいて産生することができる。
【０１７６】
[0195]  単鎖抗体断片は、本明細書に記載される抗体全体の可変領域又はＣＤＲの少なくとも１つを有するアミノ酸配列を含有するが、それらの抗体の定常ドメインのうちのいくつか又はすべてを欠いている。これらの定常ドメインは、抗原結合に必要ではないが、抗体全体の構造の大部分を構成する。そのため、単鎖抗体断片は、定常ドメインの一部又はすべてを含有する抗体の使用に関連する問題のうちのいくつかを改善してもよい。たとえば、単鎖抗体断片は、生体分子及び重鎖定常領域の間の望まれない相互作用又は他の不要な生物学的活性がない傾向がある。そのうえ、単鎖抗体断片は、抗体全体よりもかなり小さく、そのため、抗体全体よりも高い毛細血管透過性を有し、単鎖抗体断片が、より効率的に、局在化し、標的抗原結合性部位に結合するのを可能にしてもよい。さらに、抗体断片は、原核細胞において比較的大規模で産生され、したがって、それらの産生を容易にすることができる。さらに、比較的小さなサイズの単鎖抗体断片は、抗体全体よりもレシピエントにおいて免疫応答を引き起こす可能性が低い。
【０１７７】
[0196]  抗体全体の特徴と同じ又は同等の結合性の特徴を有する抗体の断片もまた、存在してもよい。そのような断片は、一方若しくは両方のＦａｂ断片又はＦ（ａｂ’）２断片を含有してもよい。抗体断片は、抗体全体の６つのＣＤＲをすべて含有してもよいが、３、４、又は５つのＣＤＲなどのようにすべてよりも少数のそのような領域を含有する断片もまた、機能的である。
【０１７８】
医薬組成物
[0197]  本開示はまた、治療有効量の本明細書において記載されるタンパク質を含有する医薬組成物をも特徴づける。組成物は、様々な薬剤送達系において使用するために製剤することができる。１つ以上の生理学的に許容され得る賦形剤又はキャリヤもまた、適切な製剤のために組成物に含むことができる。本開示において使用するための適した製剤は、Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, Pa., 17th ed., 1985において見つけることができる。薬剤送達のための方法の簡単な概説については、たとえばLanger (Science 249:1527-1533, 1990）を参照されたい。
【０１７９】
[0198]  一態様では、本開示は、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含む、５００ｍｇ〜２４００ｍｇのタンパク質を含む未治療癌患者において、ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための静脈注射用薬剤送達製剤であって、第１のポリペプチドは、（ａ）ヒトタンパク質プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に結合する抗体の重鎖の少なくとも１つの可変領域；及び（ｂ）ヒト形質転換増殖因子β受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）又は形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）に結合することができるその断片を含み、第２のポリペプチドは、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の軽鎖の少なくとも１つの可変領域を含み、第１のポリペプチドの重鎖及び第２のポリペプチドの軽鎖は、組み合わせられると、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗原結合部位を形成する、静脈注射用薬剤送達製剤を提供する。
【０１８０】
[0199]  ある実施形態では、本開示のタンパク質産物は、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む。ある実施形態では、本開示のタンパク質産物は、配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む。
【０１８１】
[0200]  本開示のある実施形態では、未治療癌患者において、ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための静脈注射用薬剤送達製剤は、約５００ｍｇ〜約２４００ｍｇの用量（たとえば約５００ｍｇ〜約２３００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２２００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２１００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１９００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１８００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１７００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１６００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１４００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１３００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１２００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１１００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１０００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約９００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約８００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約７００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約６００ｍｇ、約６００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約７００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約８００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約９００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約１０００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約１１００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約１３００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約１４００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約１５００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約１６００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約１７００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約１８００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約１９００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約２０００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約２１００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約２２００ｍｇ〜２４００ｍｇ、又は約２３００ｍｇ〜２４００ｍｇ）の本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む））を含んでいてもよい。ある実施形態では、静脈注射用薬剤送達製剤は、約５００〜約２０００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む））を含んでいてもよい。ある実施形態では、静脈注射用薬剤送達製剤は、約５００ｍｇの用量の、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有する本開示のタンパク質産物を含んでいてもよい。ある実施形態では、静脈注射用薬剤送達製剤は、５００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む））を含んでいてもよい。ある実施形態では、静脈注射用薬剤送達製剤は、約１２００ｍｇの用量の、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有する本開示のタンパク質産物を含んでいてもよい。ある実施形態では、静脈注射用薬剤送達製剤は、１２００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む））を含んでいてもよい。ある実施形態では、静脈注射用薬剤送達製剤は、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有する、約１８００ｍｇの用量の本開示のタンパク質産物を含んでいてもよい。ある実施形態では、静脈注射用薬剤送達製剤は、１８００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む））を含んでいてもよい。ある実施形態では、静脈注射用薬剤送達製剤は、１８００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（たとえば配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む））を含んでいてもよい。ある実施形態では、静脈注射用薬剤送達製剤は、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド、及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有する約２４００ｍｇの用量の本開示のタンパク質産物を含んでいてもよい。ある実施形態では、静脈注射用薬剤送達製剤は、２４００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（たとえば配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド、及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む））を含んでいてもよい。ある実施形態では、静脈注射用薬剤送達製剤は、２４００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（たとえば、配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む））を含んでいてもよい。
【０１８２】
[0201]  ある実施形態では、未治療癌患者においてステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための静脈注射用薬剤送達製剤は、約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ（たとえば約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２３００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２２００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２１００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１３００ｍｇ、約１３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２０００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２１００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇ、約２５００ｍｇ、約２６００ｍｇ、約２７００ｍｇ、約２８００ｍｇ、約２９００ｍｇ、又は約３０００ｍｇ）の本開示のタンパク質産物（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）を含んでいてもよい。ある実施形態では、未治療癌患者においてステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための静脈注射用薬剤送達製剤は、約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ（たとえば約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２３００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２２００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２１００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１３００ｍｇ、約１３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２０００ｍｇ〜約３００���ｍｇ、約２１００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇ、約２５００ｍｇ、約２６００ｍｇ、約２７００ｍｇ、約２８００ｍｇ、約２９００ｍｇ、又は約３０００ｍｇ）の、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド又は配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物を含んでいてもよい。
【０１８３】
[0202]  ある実施形態では、未治療癌患者においてステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための静脈注射用薬剤送達製剤は、約５２５ｍｇ、約５５０ｍｇ、約５７５ｍｇ、約６００ｍｇ、約６２５ｍｇ、約６５０ｍｇ、約６７５ｍｇ、約７００ｍｇ、約７２５ｍｇ、約７５０ｍｇ、約７７５ｍｇ、約８００ｍｇ、約８２５ｍｇ、約８５０ｍｇ、約８７５ｍｇ、約９００ｍｇ、約９２５ｍｇ、約９５０ｍｇ、約９７５ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１０２５ｍｇ、約１０５０ｍｇ、約１０７５ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１１２５ｍｇ、約１１５０ｍｇ、約１１７５ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１２２５ｍｇ、約１２５０ｍｇ、約１２７５ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１３２５ｍｇ、約１３５０ｍｇ、約１３７５ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１４２５ｍｇ、約１４５０ｍｇ、約１４７５ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１５２５ｍｇ、約１５５０ｍｇ、約１５７５ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１６２５ｍｇ、約１６５０ｍｇ、約１６７５ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１７２５ｍｇ、約１７５０ｍｇ、約１７７５ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１８２５ｍｇ、約１８５０ｍｇ、約１８７５ｍｇ、約１９００ｍｇ、約１９２５ｍｇ、約１９５０ｍｇ、約１９７５ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２０２５ｍｇ、約２０５０ｍｇ、約２０７５ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２１２５ｍｇ、約２１５０ｍｇ、約２１７５ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２２２５ｍｇ、約２２５０ｍｇ、約２２７５ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２３２５ｍｇ、約２３５０ｍｇ、約２３７５ｍｇ、又は約２４００ｍｇの本開示のタンパク質（たとえば、配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）を含んでいてもよい。
【０１８４】
[0203]  本開示の未治療癌患者においてステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための静脈注射用薬剤送達製剤は、バッグ、ペン、又はシリンジ中に含有されてもよい。ある実施形態では、バッグは、チューブ及び／又は針を含む導管に接続されてもよい。ある実施形態では、製剤は、凍結乾燥製剤又は液体製剤であってもよい。ある実施形態では、製剤は、冷凍乾燥されてもよく（凍結乾燥されてもよく）、約１２〜６０本のバイアル中に含有されてもよい。ある実施形態では、製剤は、冷凍乾燥されてもよく、約４５ｍｇの冷凍乾燥製剤は、１本のバイアル中に含有されてもよい。ある実施形態では、約４０ｍｇ〜約１００ｍｇの冷凍乾燥製剤は、１本のバイアル中に含有されてもよい。ある実施形態では、１２、２７、又は４５本のバイアルからの冷凍乾燥された製剤は、静脈注射用薬剤製剤における治療用量のタンパク質を得るために組み合わせられる。ある実施形態では、製剤は、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有する又は配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物の液体製剤であってもよく、約２５０ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル（たとえば約２５０ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１９００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１８００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１７００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１６００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１５００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１４００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１３００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１２００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１１００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１０００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約９００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約８００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約７００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約６００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約５００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約４００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約３００ｍｇ／バイアル、約３００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約４００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約５００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約６００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約７００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約８００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約９００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約１０００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約１１００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約１２００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約１３００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約１４００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約１５００ｍｇ／バイアル〜約２��００ｍｇ／バイアル、約１６００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約１７００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約１８００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、又は約１９００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル）として保存されてもよい。ある実施形態では、製剤は、液体製剤であってもよく、約６００ｍｇ／バイアルとして保存されてもよい。ある実施形態では、製剤は、液体製剤であってもよく、約１２００ｍｇ／バイアルとして保存されてもよい。ある実施形態では、製剤は、液体製剤であってもよく、約１８００ｍｇ／バイアルとして保存されてもよい。ある実施形態では、製剤は、液体製剤であってもよく、約２４００ｍｇ／バイアルとして保存されてもよい。ある実施形態では、製剤は、液体製剤であってもよく、約２５０ｍｇ／バイアルとして保存されてもよい。
【０１８５】
[0204]  本開示は、未治療癌患者においてステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための製剤を形成する緩衝液中に治療有効量の本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）を含む液体水性医薬製剤を提供する。
【０１８６】
[0205]  未治療癌患者においてステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するためのこれらの組成物は、従来の滅菌技術によって滅菌されてもよい又は滅菌ろ過されてもよい。結果として生じる水溶液は、そのまま使用するためにパッケージされてもよく又は凍結乾燥されてもよく、凍結乾燥された調製物は、投与前に滅菌水性キャリヤと組み合わせられる。調製物のｐＨは、典型的に、３及び１１の間に、より好ましくは５及び９の間に又は６及び８の間に、最も好ましくは、７〜７．５などのように７及び８の間にあるであろう。固体形態をした結果として生じる組成物は、複数の単回投与単位でパッケージされてもよく、それぞれが、固定量の前述の作用物質を含有する。固体形態をした組成物はまた、数量を柔軟にするためにコンテナーにパッケージすることもできる。
【０１８７】
[0206]  ある実施形態では、本開示は、未治療癌患者においてステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための、本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む））を、マンニトール、クエン酸一水和物、クエン酸ナトリウム、リン酸二ナトリウム二水和物、リン酸二水素ナトリウム二水和物、塩化ナトリウム、ポリソルベート８０、水、及び水酸化ナトリウムと組み合わせて含む、長期間にわたる有効期間を有する製剤を提供する。
【０１８８】
[0207]  ある実施形態では、未治療癌患者においてステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための、ｐＨ緩衝液中に本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド又は配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物を含む））を含む水性製剤が、調製される。本発明のバッファーは、約４〜約８、たとえば約４〜約８、約４．５〜約８、約５〜約８、約５．５〜約８、約６〜約８、約６．５〜約８、約７〜約８、約７．５〜約８、約４〜約７．５、約４．５〜約７．５、約５〜約約７．５、約５．５〜約７．５、約６〜約７．５、約６．５〜約７．５、約４〜約７、約４．５〜約７、約５〜約７、約５．５〜約７、約６〜約７、約４〜約６．５、約４．５〜約６．５、約５〜約６．５、約５．５〜約６．５、約４〜約６．０、約４．５〜約６．０、約５〜約６、若しくは約４．８〜約５．５の範囲にわたるｐＨを有していてもよい又は約５．０〜約５．２のｐＨを有していてもよい。上記に詳述されるｐＨの中間にある範囲もまた、本開示の一部であることが意図される。たとえば、上限値及び／又は下限値として上記に詳述される値のいずれかの組み合わせを使用する値に範囲が含まれることが意図される。この範囲内のｐＨをコントロールするだろうバッファーの例は、酢酸（たとえば酢酸ナトリウム）、コハク酸（コハク酸ナトリウムなど）、グルコン酸、ヒスチジン、クエン酸、及び他の有機酸バッファーを含む。
【０１８９】
[0208]  ある実施形態では、未治療癌患者においてステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための製剤は、約４〜約８の範囲にｐＨを維持するためにクエン酸及びリン酸を含有するバッファー系を含む。ある実施形態では、ｐＨ範囲は、約４．５〜約６．０若しくは約ｐＨ４．８〜約５．５であってもよい又は約５．０〜約５．２のｐＨ範囲にあってもよい。ある実施形態では、バッファー系は、クエン酸一水和物、クエン酸ナトリウム、リン酸二ナトリウム二水和物、及び／又はリン酸二水素ナトリウム二水和物を含む。ある実施形態では、バッファー系は、約１．３ｍｇ／ｍｌのクエン酸（たとえば１．３０５ｍｇ／ｍｌ）、約０．３ｍｇ／ｍｌのクエン酸ナトリウム（たとえば０．３０５ｍｇ／ｍｌ）、約１．５ｍｇ／ｍｌのリン酸二ナトリウム二水和物（たとえば１．５３ｍｇ／ｍｌ）、約０．９ｍｇ／ｍｌのリン酸二水素ナトリウム二水和物（たとえば０．８６）、及び約６．２ｍｇ／ｍｌの塩化ナトリウム（たとえば６．１６５ｍｇ／ｍｌ）を含む。ある実施形態では、バッファー系は、約１〜１．５ｍｇ／ｍｌのクエン酸、約０．２５〜約０．５ｍｇ／ｍｌのクエン酸ナトリウム、約１．２５〜約１．７５ｍｇ／ｍｌのリン酸二ナトリウム二水和物、約０．７〜約１．１ｍｇ／ｍｌのリン酸二水素ナトリウム二水和物、及び６．０〜６．４ｍｇ／ｍｌの塩化ナトリウムを含む。ある実施形態では、製剤のｐＨは、水酸化ナトリウムにより調整される。
【０１９０】
[0209]  等張化剤（tonicifier）として作用し、抗体を安定させてもよいポリオールもまた、製剤に含まれてもよい。ポリオールは、製剤の所望の等張性を基準にして変動してもよい量で製剤に追加される。ある実施形態では、水性製剤は、等張であってもよい。追加されるポリオールの量もまた、ポリオールの分子量を基準にして変化させてもよい。たとえば、二糖（トレハロースなど）と比較して、より少ない量の単糖（たとえばマンニトール）が、追加されてもよい。ある実施形態では、等張化剤として製剤中に使用されてもよいポリオールは、マンニトールである。ある実施形態では、マンニトール濃度は、約５〜約２０ｍｇ／ｍｌであってもよい。ある実施形態では、マンニトールの濃度は、約７．５〜約１５ｍｇ／ｍｌであってもよい。ある実施形態では、マンニトールの濃度は、約１０〜約１４ｍｇ／ｍｌであってもよい。ある実施形態では、マンニトールの濃度は、約１２ｍｇ／ｍｌであってもよい。ある実施形態では、ポリオールであるソルビトールが、製剤中に含まれてもよい。
【０１９１】
[0210]  洗浄剤又は界面活性剤もまた、製剤に追加されてもよい。例示的な洗浄剤は、ポリソルベート（たとえばポリソルベート２０、８０など）又はポロキサマー（たとえばポロキサマー１８８）などのような非イオン性洗浄剤を含む。追加される洗浄剤の量は、製剤された抗体の凝集を低下させる及び／又は製剤における粒子の形成を最小限にする及び／又は吸着を低下させるような量である。ある実施形態では、製剤は、ポリソルベートである界面活性剤を含んでいてもよい。ある実施形態では、製剤は、洗浄剤であるポリソルベート８０又はＴｗｅｅｎ８０を含有してもよい。Ｔｗｅｅｎ８０は、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレアートを記載するために使用される用語である（Fiedler, Lexikon der Hilfsstoffe, Editio Cantor Verlag Aulendorf, 4th edi., 1996を参照）。ある実施形態では、製剤は、約０．１ｍｇ／ｍＬ及び約１０ｍｇ／ｍＬの間の又は約０．５ｍｇ／ｍＬ及び約５ｍｇ／ｍＬの間のポリソルベート８０を含有してもよい。ある実施形態では、約０．１％のポリソルベート８０は、製剤中に追加されてもよい。
【０１９２】
凍結乾燥製剤
[0211]  本開示の未治療癌患者においてステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための凍結乾燥製剤は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子及び凍結乾燥保護剤を含む。凍結乾燥保護剤は、糖、たとえば二糖であってもよい。ある実施形態では、凍結乾燥保護剤は、スクロース又はマルトースであってもよい。凍結乾燥製剤はまた、緩衝剤、界面活性剤、増量剤、及び／又は保存剤の１つ以上を含んでいてもよい。
【０１９３】
[0212]  凍結乾燥薬剤製品の安定化に有用なスクロース又はマルトースの量は、少なくとも１：２のタンパク質対スクロース又はマルトースの重量比であってもよい。ある実施形態では、タンパク質対スクロース又はマルトースの重量比は、１：２〜１：５であってもよい。
【０１９４】
[0213]  ある実施形態では、製剤のｐＨは、冷凍乾燥前に、薬学的に許容され得る酸及び／又は塩基の追加によって設定されてもよい。ある実施形態では、薬学的に許容され得る酸は、塩酸であってもよい。ある実施形態では、薬学的に許容され得る塩基は、水酸化ナトリウムであってもよい。
【０１９５】
[0214]  凍結乾燥の前に、本開示のタンパク質を含有する溶液のｐＨは、約６〜約８の間に調整されてもよい。ある実施形態では、凍結乾燥薬剤製品についてのｐＨ範囲は、約７〜約８であってもよい。
【０１９６】
[0215]  ある実施形態では、塩又はバッファー構成成分は、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭの量で追加されてもよい。塩及び／又はバッファーは、薬学的に許容され得るものであり、「塩基形成」金属又はアミンと様々な既知の酸（無機及び有機）に由来する。ある実施形態では、バッファーは、リン酸バッファーであってもよい。ある実施形態では、バッファーは、グリシン酸、炭酸、クエン酸バッファーであってもよく、この場合、ナトリウム、カリウム、又はアンモニウムイオンは、対イオンとして果たすことができる。
【０１９７】
[0216]  ある実施形態では、「増量剤」が、追加されてもよい。「増量剤」は、凍結乾燥混合物に対して嵩を増し、凍結乾燥ケークの物理的構造に寄与する（たとえば、開気孔構造を維持する本質的に均一な凍結乾燥ケークの産生を容易にする）化合物である。例示の増量剤は、マンニトール、グリシン、ポリエチレングリコール、及びソルビトールを含む。本発明の凍結乾燥製剤は、そのような増量剤を含有してもよい。
【０１９８】
[0217]  保存剤は、細菌作用を低下させるために本明細書における製剤に任意選択で追加されてもよい。保存剤の追加は、たとえば、多重使用（複数回投与）製剤の産生を容易にしてもよい。
【０１９９】
[0218]  ある実施形態では、未治療癌患者においてステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための凍結乾燥薬剤製品は、水性キャリヤと共に構成されてもよい。本明細書において関心のある水性キャリヤは、薬学的に許容され得るものであり（たとえば、ヒトへの投与に安全であり、無毒性である）、冷凍乾燥後の液体製剤の調製に有用であるキャリヤである。例示の希釈剤は、注射用滅菌水（ＳＷＦＩ）、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝液（たとえばリン酸緩衝食塩水）、滅菌生理食塩水、リンゲル液、又はデキストロース溶液を含む。
【０２００】
[0219]  ある実施形態では、本開示の凍結乾燥薬剤製品は、注射用滅菌水、ＵＳＰ（ＳＷＦＩ）又は０．９％塩化ナトリウム注射液、ＵＳＰにより還元される。還元の間に、凍結乾燥粉剤は、溶液になる。
【０２０１】
[0220]  ある実施形態では、本開示の凍結乾燥タンパク質産物は、約４．５ｍＬ注射用水にされ、０．９％生理食塩水（塩化ナトリウム溶液）により希釈される。
【０２０２】
液体製剤
[0221]  実施形態では、本開示のタンパク質産物は、未治療癌患者においてステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための液体製剤として製剤される。液体製剤は、ゴム栓により密封され、アルミニウムクリンプシールにより密閉されたＵＳＰ／Ｐｈ  ＥｕｒのいずれかのＩ型５０Ｒバイアル中１０ｍｇ／ｍＬ濃度で提供されてもよい。栓は、ＵＳＰ及びＰｈ  Ｅｕｒに従うエラストマーから作製されてもよい。ある実施形態では、バイアルは、６０ｍＬの抽出可能な容積を可能にするよう、約６１．２ｍＬのタンパク質産物溶液により充填されてもよい。ある実施形態では、液体製剤は、０．９％生理食塩水により希釈されてもよい。ある実施形態では、バイアルは、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ（たとえば約２０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約３５ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、約４５ｍｇ／ｍＬ、又は約５０ｍｇ／ｍＬ）の約６１．２ｍＬのタンパク質産物（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む））溶液を、約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ（たとえば約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２３００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２２００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２１００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１３００ｍｇ、約１３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２０００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２１００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇ、約２５００ｍｇ、約２６００ｍｇ、約２７００ｍｇ、約２８００ｍｇ、約２９００ｍｇ、又は約３０００ｍｇ）のタンパク質産物（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド又は配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物を含む））を対象に送達するために６０ｍＬの抽出可能な容積を可能にするよう、含有してもよい。
【０２０３】
[0222]  ある実施形態では、バイアルは、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ（たとえば約２０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約３５ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、約４５ｍｇ／ｍＬ、又は  約５０ｍｇ／ｍＬ）の約６１．２ｍＬのタンパク質産物溶液（配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド又は配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物）を、約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ（たとえば約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２３００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２２００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２１００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１３００ｍｇ、約１３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２０００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２１００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇ、約２５００ｍｇ、約２６００ｍｇ、約２７００ｍｇ、約２８００ｍｇ、約２９００ｍｇ、又は約３０００ｍｇ）のタンパク質産物を未治療対象に送達するために６０ｍＬの抽出可能な容積を可能にするよう、含有してもよい。
【０２０４】
[0223]  ある実施形態では、本開示の未治療癌患者においてステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害する一方、併用放射線療法に伴う病理学的状態（たとえば肺線維症、肺炎）の発症を最小化し、患者においてステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣの転移の発生までの時間及び／又は遠隔転移までの時間を増加させるための方法において使用するための液体製剤は、安定レベルの糖と組み合わせて１０ｍｇ／ｍＬ濃度溶液として調製されてもよい。ある実施形態では、液体製剤は、水性キャリヤ中で調製されてもよい。ある実施形態では、安定剤は、静脈内投与にとって望ましくない又は適さない粘性をもたらすかもしれない量以下の量で追加されてもよい。ある実施形態では、糖は、二糖、たとえばスクロースであってもよい。ある実施形態では、液体製剤はまた、緩衝剤、界面活性剤、及び保存剤の１つ以上を含んでいてもよい。
【０２０５】
[0224]  ある実施形態では、液体製剤のｐＨは、薬学的に許容され得る酸及び／又は塩基の追加によって設定されてもよい。ある実施形態では、薬学的に許容され得る酸は、塩酸であってもよい。ある実施形態では、塩基は、水酸化ナトリウムであってもよい。
【０２０６】
[0225]  凝集に加えて、脱アミドは、発酵、回収／細胞清澄化、精製、原薬／薬剤製品保存の間に及びサンプル分析の間に生じ得る、ペプチド及びタンパク質の一般的な産物変異体である。脱アミドは、加水分解を受けることができるスクシンイミド中間体を形成する、タンパク質からのＮＨ３の損失である。スクシンイミド中間体は、親ペプチドの１７ｕの質量減少をもたらす。続く加水分解は、１８ｕの質量増加をもたらす。スクシンイミド中間体の単離は、水性条件下での不安定性により困難である。そのため、脱アミドは、１ｕの質量増加として典型的に検出可能である。アスパラギンの脱アミドは、アスパラギン酸又はイソアスパラギン酸をもたらす。脱アミド率に影響を与えるパラメーターは、ｐＨ、温度、溶媒誘電率、イオン強度、一次配列、局所的なポリペプチドコンホメーション、及び三次構造を含む。ペプチド鎖においてＡｓｎに隣接するアミノ酸残基は、脱アミド率に影響を与える。タンパク質配列におけるＡｓｎの後のＧｌｙ及びＳｅｒは、脱アミドに対して、より高い感受性をもたらす。
【０２０７】
[0226]  ある実施形態では、本開示の未治療癌患者においてステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための液体製剤は、タンパク質産物の脱アミドを予防するためのｐＨ及び湿度の条件下で保たれてもよい。
【０２０８】
[0227]  本明細書において関心のある水性キャリヤは、薬学的に許容され得るものであり（ヒトへの投与に安全であり、無毒性である）、液体製剤の調製に有用であるキャリヤである。例示のキャリヤは、注射用滅菌水（ＳＷＦＩ）、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝液（たとえばリン酸緩衝食塩水）、滅菌生理食塩水、リンゲル液、又はデキストロース溶液を含む。
【０２０９】
[0228]  保存剤は、細菌作用を低下させるために本明細書における製剤に任意選択で追加されてもよい。保存剤の追加は、たとえば、多重使用（複数回投与）製剤の産生を容易にしてもよい。
【０２１０】
[0229]  静脈内（ＩＶ）製剤は、患者が移植の後に入院しており、ＩＶルートを介してすべての薬剤を受けている場合などのような特定の場合に、好ましい投与ルートであってもよい。ある実施形態では、液体製剤は、投与の前に０．９％塩化ナトリウム溶液により希釈される。ある実施形態では、注射用の希釈薬剤製品は、等張であり、静脈内注入による投与に適している。
【０２１１】
[0230]  ある実施形態では、塩又はバッファー構成成分は、１０ｍＭ〜２００ｍＭの量で追加されてもよい。塩及び／又はバッファーは、薬学的に許容され得るものであり、「塩基形成」金属又はアミンと様々な既知の酸（無機及び有機）に由来する。ある実施形態では、バッファーは、リン酸バッファーであってもよい。ある実施形態では、バッファーは、グリシン酸、炭酸、クエン酸バッファーであってもよく、この場合、ナトリウム、カリウム、又はアンモニウムイオンは、対イオンとして果たすことができる。
【０２１２】
[0231]  保存剤は、細菌作用を低下させるために本明細書における製剤に任意選択で追加されてもよい。保存剤の追加は、たとえば、多重使用（複数回投与）製剤の産生を容易にしてもよい。
【０２１３】
[0232]  本明細書において関心のある水性キャリヤは、薬学的に許容され得るものであり（ヒトへの投与に安全であり、無毒性である）、液体製剤の調製に有用であるキャリヤである。例示のキャリヤは、注射用滅菌水（ＳＷＦＩ）、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝液（たとえばリン酸緩衝食塩水）、滅菌生理食塩水、リンゲル液、又はデキストロース溶液を含む。
【０２１４】
[0233]  保存剤は、細菌作用を低下させるために本明細書における製剤に任意選択で追加されてもよい。保存剤の追加は、たとえば、多重使用（複数回投与）製剤の産生を容易にしてもよい。
【０２１５】
癌を治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法
[0234]  一態様では、本開示は、その必要がある未治療対象においてステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害する一方、併用放射線療法に伴う病理学的状態（たとえば肺線維症、肺炎）の発症を最小化し、患者においてステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣの転移の発生までの時間及び／又は遠隔転移までの時間を増加させるための方法であって、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含む、少なくとも５００ｍｇの用量のタンパク質を対象に投与することを含む、方法を提供する。第１のポリペプチドは、（ａ）ヒトタンパク質プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に結合する抗体の重鎖の少なくとも１つの可変領域；及び（ｂ）ヒト形質転換増殖因子β受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）又は形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）に結合することができるその断片を含む。第２のポリペプチドは、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の軽鎖の少なくとも１つの可変領域を含み、第１のポリペプチドの重鎖及び第２のポリペプチドの軽鎖は、組み合わせられると、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗原結合部位を形成する。
【０２１６】
[0235]  一態様では、本開示は、ｃＣＲＴ（たとえば白金ベース化学放射線）と組み合わせて本開示の抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを患者に投与し、その後、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを患者に投与することによって、患者において進行切除不能ステージＩＩＩ非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を治療するための方法を提供する。ある実施形態では、本開示は、併用白金ベース化学放射線（ｃＣＲＴ）と組み合わせて、及びその後、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを患者に投与することによって、患者において進行切除不能ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療するための方法を提供する。
【０２１７】
[0236]  ある実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップと組み合わせてシスプラチン／ペメトレキセド及び放射線療法（ｃＣＲＴ）によって治療される患者は、非扁平上皮組織像を示す進行切除不能ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣと診断されている。
【０２１８】
[0237]  ある実施形態では、ｃＣＲＴは、強度変調放射線療法によって送達される６０〜６６Ｇｙ（たとえば６０Ｇｙ）の総線量の放射線と同時にシスプラチン／エトポシド、シスプラチン／ペメトレキセド、又はカルボプラチン／パクリタキセルのいずれかとして投与される。ある実施形態では、ｃＣＲＴは、強度変調放射線療法によって送達される６０〜６６Ｇｙ（たとえば６０Ｇｙ）の総線量の放射線と同時にシスプラチン／エトポシドとして投与される。ある実施形態では、ｃＣＲＴは、強度変調放射線療法によって送達される６０〜６６Ｇｙ（たとえば６０Ｇｙ）の総線量の放射線と同時にカルボプラチン／パクリタキセルとして投与される。ある実施形態では、ｃＣＲＴは、強度変調放射線療法によって送達される６０〜６６Ｇｙ（たとえば６０Ｇｙ）の総線量の放射線と同時にシスプラチン／ペメトレキセドとして投与される。
【０２１９】
[0238]  ある実施形態では、本開示のステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法は、第１のポリペプチドが配列番号３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドが配列番号１のアミノ酸配列を含む２つのぺプチドを含むタンパク質を未治療対象に投与することを含む。ある実施形態では、タンパク質は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子である。
【０２２０】
[0239]  一実施形態では、本開示において開示される方法に従って治療される未治療対象は、本開示の二機能性タンパク質（抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子）による治療法を以前に受けたことがない。いくつかの実施形態では、本開示の方法に従って治療されることになる未治療癌患者は、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）感作（活性化）突然変異、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）転座、及び／又はＲＯＳ１突然変異を有するか、又は有していない。
【０２２１】
[0240]  ある実施形態では、本開示の、ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害する一方、併用放射線療法に伴う病理学的状態（たとえば肺線維症、肺炎）の発症を最小化し、患者においてステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣの転移の発生までの時間及び／又は遠隔転移までの時間を増加させるための方法は、未治療対象に、タンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む；又は配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物））を、約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ（たとえば約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２３００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２２００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２１００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１３００ｍｇ、約１３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２０００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２１００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇ、約２５００ｍｇ、約２６００ｍｇ、約２７００ｍｇ、約２８００ｍｇ、約２９００ｍｇ、又は約３０００ｍｇ）の用量で投与することを含む。ある実施形態では、約１２００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子は、２週間ごとに１回、未治療ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ対象（たとえば切除不能ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ対象）に投与される。ある実施形態では、約１８００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子は、３週間ごとに１回、未治療ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ対象（たとえば切除不能ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ対象）に投与される。ある実施形態では、約１２００ｍｇの、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物は、２週間ごとに１回、未治療対象に投与される。ある実施���態では、約１８００ｍｇの、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物は、３週間ごとに１回、未治療ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ対象（たとえば切除不能ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ対象）に投与される。ある実施形態では、約１８００ｍｇの、配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物は、３週間ごとに１回、未治療ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ対象（たとえば切除不能ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ対象）に投与される。ある実施形態では、約２４００ｍｇの、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物は、３週間ごとに１回、対象に投与される。ある実施形態では、約２４００ｍｇの、配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物は、３週間ごとに１回、対象に投与される。
【０２２２】
[0241]  ある実施形態では、未治療ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ対象（たとえば切除不能ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ対象）に投与される用量は、約５００ｍｇ、約５２５ｍｇ、約５５０ｍｇ、約５７５ｍｇ、約６００ｍｇ、約６２５ｍｇ、約６５０ｍｇ、約６７５ｍｇ、約７００ｍｇ、約７２５ｍｇ、約７５０ｍｇ、約７７５ｍｇ、約８００ｍｇ、約８２５ｍｇ、約８５０ｍｇ、約８７５ｍｇ、約９００ｍｇ、約９２５ｍｇ、約９５０ｍｇ、約９７５ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１０２５ｍｇ、約１０５０ｍｇ、約１０７５ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１１２５ｍｇ、約１１５０ｍｇ、約１１７５ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１２２５ｍｇ、約１２５０ｍｇ、約１２７５ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１３２５ｍｇ、約１３５０ｍｇ、約１３７５ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１４２５ｍｇ、約１４５０ｍｇ、約１４７５ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１５２５ｍｇ、約１５５０ｍｇ、約１５７５ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１６２５ｍｇ、約１６５０ｍｇ、約１６７５ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１７２５ｍｇ、約１７５０ｍｇ、約１７７５ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１８２５ｍｇ、約１８５０ｍｇ、１８７５ｍｇ、約１９００ｍｇ、約１９２５ｍｇ、約１９５０ｍｇ、約１９７５ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２０２５ｍｇ、約２０５０ｍｇ、約２０７５ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２１２５ｍｇ、約２１５０ｍｇ、約２１７５ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２２２５ｍｇ、約２２５０ｍｇ、約２２７５ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２３２５ｍｇ、約２３５０ｍｇ、約２３７５ｍｇ、又は約２４００ｍｇであってもよい。
【０２２３】
[0242]  ある実施形態では、未治療ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ対象（たとえば切除不能ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ対象）に投与される用量は、２週間ごとに１回、投与されてもよい。ある実施形態では、未治療ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ対象（たとえば切除不能ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ対象）に投与される用量は、３週間ごとに１回、投与されてもよい。ある実施形態では、タンパク質は、たとえば充填済みのバッグ、充填済みのペン、又は充填済みのシリンジにより、静脈内投与によって投与されてもよい。ある実施形態では、タンパク質は、２５０ｍｌの生理的食塩水バッグから静脈内に投与され、静脈内注入は、約１時間（たとえば５０〜８０分間）であってもよい。ある実施形態では、バッグは、チューブ及び／又は針を含む導管に接続される。
【０２２４】
[0243]  いくつかの実施形態では、ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、扁平上皮又は非扁平上皮組織像を示す。たとえば、一実施形態では、方法は、扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する。いくつかの実施形態では、方法は、非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する。
【０２２５】
[0244]  ある実施形態では、ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（たとえば扁平上皮又は非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ）を有する未治療対象又は患者は、少なくとも５００ｍｇ（たとえば約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇ、又はそれ以上）の、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。ある実施形態では、ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（たとえば扁平上皮又は非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ）を有する未治療対象又は患者は、少なくとも５００ｍｇ（たとえば約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇ、又はそれ以上）の、配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。ある実施形態では、ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（たとえば扁平上皮又は非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ）を有する未治療対象又は患者は、２４００ｍｇの、配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。
【０２２６】
[0245]  ある実施形態では、ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（たとえば扁平上皮又は非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ））を有する未治療対象又は患者は、約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ（たとえば約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２３００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２２００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２１００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１３００ｍｇ、約１３００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１４００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１５００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１６００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１７００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１８００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１９００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約２０００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約２１００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約２２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、又は約２３００ｍｇ〜約２４００ｍｇ）の、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。
【０２２７】
[0246]  ある実施形態では、ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（たとえば扁平上皮又は非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ）を有する未治療対象又は患者は、約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ（たとえば約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２３００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２２００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２１００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１３００ｍｇ、約１３００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１４００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１５００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１６００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１７００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１８００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１９００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約２０００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約２１００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約２２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、又は約２３００ｍｇ〜約２４００ｍｇ）の、配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。
【０２２８】
[0247]  いくつかの実施形態では、ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（たとえば扁平上皮又は非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ）を有する未治療対象又は患者は、２週間ごとに１回、約１２００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。いくつかの実施形態では、ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（たとえば扁平上皮又は非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ）を有する未治療対象又は患者は、３週間ごとに１回、約１８００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。いくつかの実施形態では、ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（たとえば扁平上皮又は非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ）を有する未治療対象又は患者は、３週間ごとに１回、約２４００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。いくつかの実施形態では、ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（たとえば扁平上皮又は非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ）を有する未治療対象又は患者は、３週間ごとに１回、２４００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。
【０２２９】
[0248]  ある実施形態では、治療されることになるステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、ＰＤ−Ｌ１ポジティブである。ある実施形態では、治療されることになるステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、ＰＤ−Ｌ１ネガティブである。例示的な実施形態では、治療されることになるステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、高ＰＤ−Ｌ１発現（たとえば「高ＰＤ−Ｌ１」）を示す。例示的な実施形態では、治療されることになるステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、ＰＤ−Ｌ１発現を示さない。例示的な実施形態では、治療されることになるステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを有する患者は、ＰＤ−Ｌ１ポジティブステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣと診断されている。例示的な実施形態では、治療されることになるステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを有する患者は、ＰＤ−Ｌ１ネガティブステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣと診断されている。
【０２３０】
[0249]  たとえば癌又は腫瘍上のＰＤ−Ｌ１などのようなバイオマーカーを検出する方法は、当技術分野においてごく普通であり、本明細書において想定される。非限定的な例は、免疫組織化学的検査、免疫蛍光法、及び蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）を含む。ある実施形態では、ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣにおけるＰＤ−Ｌ１発現レベルは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体を使用して検出される。組織サンプルは、ホルマリン固定されたパラフィン包埋ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ組織であってもよい。
【０２３１】
[0250]  いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１高ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ又はＰＤ−Ｌ１発現と無関係のステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、ＰＤ−Ｌ１ポジティブ又はＰＤ−Ｌ１ネガティブのいずれかである）（たとえば扁平上皮又は非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ）を有する未治療対象又は患者は、少なくとも５００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１高ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ又はＰＤ−Ｌ１発現と無関係のステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、ＰＤ−Ｌ１ポジティブ又はＰＤ−Ｌ１ネガティブのいずれかである）（たとえば扁平上皮又は非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ）を有する未治療対象又は患者は、２週間ごとに１回、約１２００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１高ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ又はＰＤ−Ｌ１発現と無関係のステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、ＰＤ−Ｌ１ポジティブ又はＰＤ−Ｌ１ネガティブのいずれかである）（たとえば扁平上皮又は非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ）を有する未治療対象又は患者は、３週間ごとに１回、約１８００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１高ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ又はＰＤ−Ｌ１発現と無関係のステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、ＰＤ−Ｌ１ポジティブ又はＰＤ−Ｌ１ネガティブのいずれかである）（たとえば扁平上皮又は非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ）を有する未治療対象又は患者は、３週間ごとに１回、約２４００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。
【０２３２】
[0251]  ある実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップと組み合わせてシスプラチン／ペメトレキセド及び放射線療法（ｃＣＲＴ）によって治療される患者は、ＰＤ−Ｌ１を発現する進行切除不能ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣと診断されている。ある実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップと組み合わせてシスプラチン／ペメトレキセド及び放射線療法（ｃＣＲＴ）によって治療される患者は、ＰＤ−Ｌ１を発現しない進行切除不能ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣと診断されている。ある実施形態では、進行切除不能ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣと診断された患者は、ＰＤ−Ｌ１発現と無関係（ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、ＰＤ−Ｌ１ポジティブ又はＰＤ−Ｌ１ネガティブのいずれかである）に抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップと組み合わせて化学療法（たとえばシスプラチン／ペメトレキセド）及び放射線療法（ｃＣＲＴ）によって治療される。
【０２３３】
[0252]  いくつかの実施形態では、進行ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（たとえば、扁平上皮又は非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ）と診断された患者は、ＰＤ−Ｌ１発現と無関係（ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、ＰＤ−Ｌ１ポジティブ又はＰＤ−Ｌ１ネガティブのいずれかである）に抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップと組み合わせて化学療法（たとえばシスプラチン及びエトポシドの組み合わせ、又はカルボプラチン及びパクリタキセルの組み合わせ）及び放射線療法（ｃＣＲＴ）によって、少なくとも５００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。いくつかの実施形態では、進行ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（たとえば扁平上皮又は非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ）と診断された患者は、ＰＤ−Ｌ１発現と無関係（ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、ＰＤ−Ｌ１ポジティブ又はＰＤ−Ｌ１ネガティブのいずれかである）に抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップと組み合わせて化学療法（たとえばシスプラチン及びエトポシドの組み合わせ、又はカルボプラチン及びパクリタキセルの組み合わせ）及び放射線療法（ｃＣＲＴ）によって、２週間ごとに１回、約１２００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。いくつかの実施形態では、進行ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（たとえば扁平上皮又は非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ）と診断された患者は、ＰＤ−Ｌ１発現と無関係（ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、ＰＤ−Ｌ１ポジティブ又はＰＤ−Ｌ１ネガティブのいずれかである）に抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップと組み合わせて化学療法（たとえばシスプラチン及びエトポシドの組み合わせ、又はカルボプラチン及びパクリタキセルの組み合わせ）及び放射線療法（ｃＣＲＴ）によって、３週間ごとに１回、約１８００ｍｇ又は２４００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。
【０２３４】
[0253]  いくつかの実施形態では、非扁平上皮組織像を有する進行切除不能ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣと診断された患者は、ＰＤ−Ｌ１発現と無関係（ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、ＰＤ−Ｌ１ポジティブ又はＰＤ−Ｌ１ネガティブのいずれかである）に抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップと組み合わせて化学療法（たとえばシスプラチン及びペメトレキセドの組み合わせ）及び放射線療法（ｃＣＲＴ）によって、少なくとも５００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。いくつかの実施形態では、非扁平上皮組織像を有する進行切除不能ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣと診断された患者は、ＰＤ−Ｌ１発現と無関係（ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、ＰＤ−Ｌ１ポジティブ又はＰＤ−Ｌ１ネガティブのいずれかである）に抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップと組み合わせて化学療法（たとえばシスプラチン及びペメトレキセドの組み合わせ）及び放射線療法（ｃＣＲＴ）によって、２週間ごとに１回、約１２００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。いくつかの実施形態では、非扁平上皮組織像を有する進行切除不能ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣと診断された患者は、ＰＤ−Ｌ１発現と無関係（ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、ＰＤ−Ｌ１ポジティブ又はＰＤ−Ｌ１ネガティブのいずれかである）に抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップと組み合わせて化学療法（たとえばシスプラチン及びペメトレキセドの組み合わせ）及び放射線療法（ｃＣＲＴ）によって、３週間ごとに１回、約１８００ｍｇ又は２４００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。
【０２３５】
[0254]  ある実施形態では、本開示は、併用白金ベース化学放射線（ｃＣＲＴ）と組み合わせて、及びその後、少なくとも５００ｍｇ（たとえば約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇ、又はそれ以上）の用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを患者に投与することによって、患者において進行切除不能ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療するための方法を提供する。ある実施形態では、本開示は、併用白金ベース化学放射線（ｃＣＲＴ）と組み合わせて、及びその後、約１２００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを患者に投与することによって、患者において進行切除不能ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療するための方法を提供する。ある実施形態では、本開示は、併用白金ベース化学放射線（ｃＣＲＴ）と組み合わせて、及びその後、約１８００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを患者に投与することによって、患者において進行切除不能ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療するための方法を提供する。ある実施形態では、本開示は、併用白金ベース化学放射線（ｃＣＲＴ）と組み合わせて、及びその後、約２４００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを患者に投与することによって、患者において進行切除不能ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療するための方法を提供する。
【０２３６】
[0255]  いくつかの実施形態では、治療されることになる未治療対象又は患者は、ＥＧＦＲ感作突然変異、ＡＬＫ転座、及びＲＯＳ１突然変異から選択される突然変異を有する。たとえば、いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１高ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ又はＰＤ−Ｌ１発現と無関係のステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、ＰＤ−Ｌ１ポジティブ又はＰＤ−Ｌ１ネガティブのいずれかである）（たとえば扁平上皮又は非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ）を有し、ＥＧＦＲ感作突然変異、ＡＬＫ転座、及びＲＯＳ１突然変異から選択される突然変異を有する未治療対象又は患者は、少なくとも５００ｍｇ（たとえば約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇ、又はそれ以上）の用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１高ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ又はＰＤ−Ｌ１発現と無関係のステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、ＰＤ−Ｌ１ポジティブ又はＰＤ−Ｌ１ネガティブのいずれかである）（たとえば扁平上皮又は非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ）を有し、ＥＧＦＲ感作突然変異、ＡＬＫ転座、及びＲＯＳ１突然変異突然変異から選択される突然変異を有する未治療対象又は患者は、２週間ごとに１回、約１２００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１高ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ又はＰＤ−Ｌ１発現と無関係のステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、ＰＤ−Ｌ１ポジティブ又はＰＤ−Ｌ１ネガティブのいずれかである）（たとえば扁平上皮又は非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ）を有し、ＥＧＦＲ感作突然変異、ＡＬＫ転座、及びＲＯＳ１突然変異突然変異から選択される突然変異を有する未治療対象又は患者は、３週間ごとに１回、約１８００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１高ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ又はＰＤ−Ｌ１発現と無関係のステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、ＰＤ−Ｌ１ポジティブ又はＰＤ−Ｌ１ネガティブのいずれかである）（たとえば扁平上皮又は非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ）を有し、ＥＧＦＲ感作突然変異、ＡＬＫ転座、及びＲＯＳ１突然変異突然変異から選択される突然変異を有する未治療対象又は患者は、３週間ごとに１回、約２４００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。
【０２３７】
[0256]  いくつかの実施形態では、治療されることになる未治療対象又は患者は、ＥＧＦＲ感作突然変異、ＡＬＫ転座、ＲＯＳ１突然変異、及びＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ突然変異から選択される突然変異を有していない。たとえば、いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１高ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ又はＰＤ−Ｌ１発現と無関係のステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、ＰＤ−Ｌ１ポジティブ又はＰＤ−Ｌ１ネガティブのいずれかである）（たとえば扁平上皮又は非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ）を有し、ＥＧＦＲ感作突然変異、ＡＬＫ転座、ＲＯＳ１突然変異、及びＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ突然変異から選択される突然変異を有していない未治療対象又は患者は、少なくとも５００ｍｇ（たとえば約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇ、又はそれ以上）の用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１高ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ又はＰＤ−Ｌ１発現と無関係のステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、ＰＤ−Ｌ１ポジティブ又はＰＤ−Ｌ１ネガティブのいずれかである）（たとえば扁平上皮又は非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ）を有し、ＥＧＦＲ感作突然変異、ＡＬＫ転座、ＲＯＳ１突然変異、及びＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ突然変異から選択される突然変異を有していない未治療対象又は患者は、２週間ごとに１回、約１２００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１高ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ又はＰＤ−Ｌ１発現と無関係のステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、ＰＤ−Ｌ１ポジティブ又はＰＤ−Ｌ１ネガティブのいずれかである）（たとえば扁平上皮又は非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ）を有し、ＥＧＦＲ感作突然変異、ＡＬＫ転座、ＲＯＳ１突然変異、及びＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ突然変異から選択される突然変異を有していない未治療対象又は患者は、３週間ごとに１回、約１８００ｍｇの用量で抗Ｄ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１高ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ又はＰＤ−Ｌ１発現と無関係のステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣは、ＰＤ−Ｌ１ポジティブ又はＰＤ−Ｌ１ネガティブのいずれかである）（たとえば扁平上皮又は非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ）を有し、ＥＧＦＲ感作突然変異、ＡＬＫ転座、ＲＯＳ１突然変異、及びＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ突然変異から選択される突然変異を有していない未治療対象又は患者は、３週間ごとに１回、約２４００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。
【０２３８】
[0257]  いくつかの実施形態では、本明細書において開示される治療するための方法は、対象又は患者の疾患応答又は改善された生存期間（たとえば６か月、１２か月、１８か月、２２か月、２８か月、３２か月、３８か月、４４か月、５０か月、５６か月、６２か月、６８か月、７４か月、８０か月、８６か月、９２か月、９８か月、１０４か月、又は１１０か月まで（終点を含む）の生存期間）をもたらす。ある実施形態では、改善された生存期間は、少なくとも１０８か月である。いくつかの実施形態では、たとえば疾患応答は、完全寛解、部分寛解、又は安定性の疾患であってもよい。いくつかの実施形態では、たとえば改善された生存期間（たとえば６か月、１２か月、１８か月、２２か月、２８か月、３２か月、３８か月、４４か月、５０か月、５６か月、６２か月、６８か月、７４か月、８０か月、８６か月、９２か月、９８か月、１０４か月、又は１１０か月まで（終点を含む）の生存期間）は、無増悪生存期間（ＰＦＳ）又は全生存期間（ＯＳ）であってもよい。ある実施形態では、ＰＦＳ及び／又はＯＳの改善された生存期間は、少なくとも１０８か月である。いくつかの実施形態では、改善（たとえばＰＦＳにおける）は、本開示の抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによる治療の開始前の期間と比べて決定される。癌又は腫瘍療法についての疾患応答（たとえば完全寛解、部分寛解、又は安定性の疾患）及び患者生存期間（たとえばＰＦＳ、全生存期間（たとえば６か月、１２か月、１８か月、２２か月、２８か月、３２か月、３８か月、４４か月、５０か月、５６か月、６２か月、６８か月、７４か月、８０か月、８６か月、９２か月、９８か月、１０４か月、又は１１０か月まで（終点を含む）の生存期間））を決定する方法は、当技術分野においてごく普通であり、本明細書において想定される。ある実施形態では、患者生存期間は、少なくとも１０８か月である。いくつかの実施形態では、疾患応答は、治療される患者を、患部（たとえば、胸郭入口の上部から恥骨結合までのエリアをカバーする胸部／腹部及び骨盤）の造影コンピューター断層撮影（ＣＴ）又は磁気共鳴画像検査（ＭＲＩ）にかけた後、ＲＥＣＩＳＴ１．１に従って判定される。
【０２３９】
送達デバイス
[0258]  一態様では、本開示は、未治療癌患者において、ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための薬剤送達デバイスであって、デバイスは、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含む、約５００ｍｇ〜約３０００ｍｇのタンパク質を含む製剤を含み、第１のポリペプチドは、（ａ）ヒトタンパク質プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に結合する抗体の重鎖の少なくとも１つの可変領域；及び（ｂ）ヒト形質転換増殖因子β受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）又は形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）に結合することができるその断片を含み、第２のポリペプチドは、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の軽鎖の少なくとも１つの可変領域を含み、第１のポリペプチドの重鎖及び第２のポリペプチドの軽鎖は、組み合わせられると、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗原結合部位を形成する、薬剤送達デバイスを提供する。
【０２４０】
[0259]  ある実施形態では、デバイスは、バッグ、ペン、又はシリンジであってもよい。ある実施形態では、バッグは、チューブ及び／又は針を含む導管に接続されてもよい。
【０２４１】
[0260]  本開示のある実施形態では、未治療癌患者においてステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害する一方、併用放射線療法に伴う病理学的状態（たとえば肺線維症、肺炎）の発症を最小化し、患者においてステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣの転移の発生までの時間及び／又は遠隔転移までの時間を増加させるための方法において使用するための薬剤送達デバイスは、約５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ（たとえば約５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２９００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２８００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２７００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２６００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２５００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２３００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２２００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２１００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１９００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１８００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１７００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１６００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１４００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１３００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１２００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１１００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１０００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約９００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約８００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約７００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約６００ｍｇ、約６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１０００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１１００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２０００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２１００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、又は約２９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ）の本開示のタンパク質（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド又は配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物を含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）を含んでいてもよい。ある実施形態では、薬剤送達デバイスは、約５００〜約１２００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）を含んでいてもよい。ある実施形態では、薬剤送達デバイスは、約５００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ；又は配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物）を含んでいてもよい。
【０２４２】
[0261]  ある実施形態では、薬剤送達デバイスは、約１２００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ；又は配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物）を含む。ある実施形態では、未治療癌患者においてステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害する一方、併用放射線療法に伴う病理学的状態（たとえば肺線維症、肺炎）の発症を最小化し、患者においてステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣの転移の発生までの時間及び／又は遠隔転移までの時間を増加させるための方法において使用するための薬剤送達デバイスは、約１８００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ；又は配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物）を含む。ある実施形態では、未治療癌患者においてステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害する一方、併用放射線療法に伴う病理学的状態（たとえば肺線維症、肺炎）の発症を最小化し、患者においてステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣの転移の発生までの時間及び／又は遠隔転移までの時間を増加させるための方法において使用するための薬剤送達デバイスは、約１２００ｍｇ、約１８００ｍｇ、又は２４００ｍｇの用量の、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物；又は配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物を含む。
【０２４３】
[0262]  ある実施形態では、未治療癌患者においてステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害する一方、併用放射線療法に伴う病理学的状態（たとえば肺線維症、肺炎）の発症を最小化し、患者においてステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣの転移の発生までの時間及び／又は遠隔転移までの時間を増加させるための方法において使用するための薬剤送達デバイスは、約１２００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む；又は配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物））を含む。ある実施形態では、未治療癌患者においてステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための薬剤送達デバイスは、約１８００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む；又は配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物））を含む。ある実施形態では、未治療癌患者において、ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための薬剤送達デバイスは、約５００ｍｇ、約５２５ｍｇ、約５５０ｍｇ、約５７５ｍｇ、約６００ｍｇ、約６２５ｍｇ、約６５０ｍｇ、約６７５ｍｇ、約７００ｍｇ、約７２５ｍｇ、約７５０ｍｇ、約７７５ｍｇ、約８００ｍｇ、約８２５ｍｇ、約８５０ｍｇ、約８７５ｍｇ、約９００ｍｇ、約９２５ｍｇ、約９５０ｍｇ、約９７５ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１０２５ｍｇ、約１０５０ｍｇ、約１０７５ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１１２５ｍｇ、約１１５０ｍｇ、約１１７５ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１２２５ｍｇ、約１２５０ｍｇ、約１２７５ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１３２５ｍｇ、約１３５０ｍｇ、約１３７５ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１４２５ｍｇ、約１４５０ｍｇ、約１４７５ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１５２５ｍｇ、約１５５０ｍｇ、約１５７５ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１６２５ｍｇ、約１６５０ｍｇ、約１６７５ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１７２５ｍｇ、約１７５０ｍｇ、約１７７５ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１８２５ｍｇ、約１８５０ｍｇ、約１８７５ｍｇ、約１９００ｍｇ、約１９２５ｍｇ、約１９５０ｍｇ、約１９７５ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２０２５ｍｇ、約２０５０ｍｇ、約２０７５ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２１２５ｍｇ、約２１５０ｍｇ、約２１７５ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２２２５ｍｇ、約２２５０ｍｇ、約２２７５ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２３２５ｍｇ、約２３５０ｍｇ、約２３７５ｍｇ、又は約２４００ｍｇの本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ、たとえば、配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３��、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物）を含んでいてもよい。
【０２４４】
タンパク質産生
[0263]  抗体−サイトカイントラップタンパク質は、一般に、タンパク質を発現するように操作された核酸を含有する哺乳動物細胞を使用して、組換えで産生される。適した細胞株及びタンパク質産生方法の１つの例は、米国特許出願公開第２０１５０２２５４８３  Ａ１号の実施例１及び２において記載されるが、種々様々の適したベクター、細胞株、及びタンパク質産生方法が、抗体ベースの生物製剤を産生するために使用されてきており、これらの抗体−サイトカイントラップタンパク質の合成において使用することができた。
【０２４５】
治療上の指標
[0264]  本出願において記載される抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む）並びに前記抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質を含む開示される静脈注射用薬剤送達製剤及び送達デバイスは、未治療患者においてステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する又は腫瘍増殖を低下させるために使用することができる。
【０２４６】
[0265]  抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによって治療されることになるステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ又は腫瘍は、腫瘍におけるＰＤ−Ｌ１及び／又はＴＧＦβの発現の上昇、予後又は疾患進行とのそれらの発現レベルの相関性、並びにＰＤ−Ｌ１及びＴＧＦβを標的にする治療に対する腫瘍の感受性に関する前臨床及び臨床経験を有してもよい。
【０２４７】
[0266]  いくつかの実施形態では、本開示の方法に従って治療されることになる未治療癌患者は、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）感作（活性化）突然変異、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）転座、及びＲＯＳ１突然変異から選択される突然変異を有するか、又は有していない。いくつかの実施形態では、本開示の方法に従って治療されることになる未治療癌（たとえば高ＰＤ−Ｌ１発現を有する進行ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（たとえば扁平上皮又は非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ）；ＰＤ−Ｌ１ポジティブ進行ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（たとえば、扁平上皮又は非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ）；又はＰＤ−Ｌ１ネガティブ進行ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（たとえば扁平上皮又は非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ））患者は、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）感作（活性化）突然変異を有するか、又は有していない。いくつかの実施形態では、本開示の方法に従って治療されることになる未治療癌（たとえば高ＰＤ−Ｌ１発現を有する進行ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（たとえば扁平上皮又は非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ）；ＰＤ−Ｌ１ポジティブ進行ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（たとえば、扁平上皮又は非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ）；又はＰＤ−Ｌ１ネガティブ進行ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（たとえば、扁平上皮又は非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ））患者は、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）転座を有するか、又は有していない。いくつかの実施形態では、本開示の方法に従って治療されることになる未治療癌（たとえば高ＰＤ−Ｌ１発現を有する進行ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（たとえば扁平上皮又は非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ）；ＰＤ−Ｌ１ポジティブ進行ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（たとえば扁平上皮又は非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ）；又はＰＤ−Ｌ１ネガティブ進行ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（たとえば、扁平上皮又は非扁平上皮ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ））患者は、ＲＯＳ１突然変異を有するか、又は有していない。
【実施例】
【０２４８】
実施例
[0267]  ここで全般的に記載されている本開示は、本開示のある態様及び実施形態の例説の目的のために単に含まれる以下の実施例への参照によって、より容易に理解されるであろう、また、決して本開示の範囲を限定するようには意図されない。
【０２４９】
実施例１：静脈注射用薬剤製剤のパッケージ
[0268]  抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの製剤は、凍結乾燥製剤又は液体製剤として調製する。凍結乾燥製剤の調製のために、冷凍乾燥抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを滅菌し、使い捨てガラスバイアル中に保存した。次いで、癌又は腫瘍と診断された対象に、特定の体重に無関係な用量を送達するために数個のそのようなガラスバイアルをキット中にパッケージする。用量の必要量に依存して、キットは、１２〜６０バイアルを含有する。その代わりに、製剤は、液体製剤として調製し、パッケージし、２５０ｍｇ／バイアル〜１０００ｍｇ／バイアルとして保存する。たとえば、製剤は、液体製剤であり、６００ｍｇ／バイアルとして保存する又は２５０ｍｇ／バイアルとして保存する。別の実施例では、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、１０ｍｇ／ｍＬの溶液として製剤し、ＵＳＰ／Ｐｈ  Ｅｕｒ  Ｉ型バイアル中に入れ、６０ｍＬ（６００ｍｇ／６０ｍＬ）の抽出可能容量を可能にするように充填し、アルミニウムクリンプシール栓と共に、ＵＳＰ及びＰｈ  Ｅｕｒに従う血清フォーマット（serum format）でゴム栓により密封する。
【０２５０】
[0269]  ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣと診断された対象に、５００ｍｇ〜２４００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを含有する製剤を静脈内に投与する。たとえば、対象に、２週間毎に１回、１２００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ又は３週間毎に１回、１８００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与する。静脈内投与は、生理的食塩水バッグからとする。対象に投与される抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの量は、対象の体重に無関係である。
【０２５１】
実施例２：ｃＣＲＴ誘導線維症の鎮静における抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの効果
[0270]  本実施例において、肺線維症の鎮静に対する、放射線又は化学療法と組み合わせて投与される抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの効果を判定するために実行される実験が記載される。
【０２５２】
[0271]  細胞系：American Type Culture Collection（ＡＴＣＣ）から入手した４Ｔ１マウス乳癌細胞を、１０％の熱不活化ウシ胎児血清（ＦＢＳ）が補給されたＲＰＭＩ１６４０培地（Life Technologies）中で培養した。すべての細胞を無菌条件下で培養し、５％のＣＯ２で３７℃においてインキュベートした。細胞をインビボ移植前に継代し、接着細胞をTrypLE Express（Gibco）又は０．２５％のトリプシンによって回収した。
【０２５３】
[0272]  マウス：ＢＡＬＢ／ｃをCharles River Laboratoriesから入手した。実験に使用したすべてのマウスは、６〜１２週齢の雌であった。マウスを無菌施設中で飼料及び水を自由に与えて飼育した。
【０２５４】
[0273]  マウス腫瘍モデル：４Ｔ１細胞（およそ０．５×１０５個）を、治療開始の６日前にＢＡＬＢ／ｃマウスの大腿部内で筋肉内接種（ｉ．ｍ．）した。治療を６日後に開始し（０日目）、マウスを６日目に安楽死させた（すなわちｉ．ｍ．の１２日後）。
【０２５５】
[0274]  治療：すべての研究について、マウスを治療開始日（０日目）に治療群にランダム化した。
【０２５６】
[0275]  抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ及びコントロール：本開示の抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、ヒトＴＧＦ−β受容体ＩＩの細胞外ドメインに融合しているヒトＰＤ−Ｌ１に対する完全ヒト免疫グロブリン１（ＩｇＧ１）モノクローナル抗体（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む）である。アイソタイプコントロールは、ＰＤ−Ｌ１結合を完全に欠く抗ＰＤ−Ｌ１の突然変異バージョンである。腫瘍担持マウスにおいて、０、２、及び４日目に抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（４９２μｇ）又はアイソタイプコントロール（４００μｇ）を０．２ｍＬのＰＢＳ中で静脈内投与（ｉ．ｖ．）によって投与した。非腫瘍担持ＢＡＬＢ／ｃマウスに、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（２０ｍｇ／ｋｇ）、抗ＰＤ−Ｌ１（１６．３ｍｇ／ｋｇ）、トラップコントロール（抗ＰＤ−Ｌ１（ｍｕｔ）／ＴＧＦ−βトラップ、２０ｍｇ／ｋｇ）、又はアイソタイプコントロール（抗ＰＤ−Ｌ１（ｍｕｔ）、１６．３ｍｇ／ｋｇ）をｉ．ｖ．注射した。
【０２５７】
[0276]  線維症のＣＣｌ４（四塩化炭素）依存性誘導：マウスを秤量し、マウスに１：３のＣＣＬ４／オリーブ油溶液を、ガラスHamiltonシリンジ及び２７Ｇ×１／２針によって１μＬ／ｇにおいて週２日、ｉ．ｐ．注射した。
【０２５８】
[0277]  放射線：放射線と抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップとの組み合わせを評価するため、マウスを以下の治療群にランダム化した：アイソタイプコントロール（１３３、４００μｇ）＋ビヒクルコントロール（０．２ｍＬ）、放射線（３．６、７．５、８Ｇｙ／日）、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（１６４、４９２μｇ）、又は抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ＋放射線。放射線治療を送達するため、鉛遮蔽体を有するコリメーターデバイスを使用してマウスの腫瘍担持大腿部への送達を局所化した。この領域を、セシウム−１３７ガンマ放射線照射装置（GammaCell（登録商標）40Exactor,MDS Nordion,Ottawa,ON,Canada）への時限曝露によって放射線照射した。放射線治療は、４日間、１日１回与えた。
【０２５９】
ＣＣｌ４誘導肝線維症
[0278]  組織学検査：左肝サンプルを加工及び染色のためにHistotox（Boulder,CO）に送付した。中葉の上部、中央部、下部からの５μｍ切片を、αＳＭＡ（Abcam、カタログ番号ａｂ１２４９６４、１：２００）及びピクロシリウスレッドについて標準的な組織学的方法によって染色した。形態計測分析のためにスライドを最適化するため、二次又はバックグラウンド染色を省略し、その結果、ポジティブ染色細胞又は構造のみが示された。ＤＡＢ発色を可能とする二次ＨＲＰ標識抗体を含むAgilent Envision+ Rabbit HRPキット（カタログ番号Ｋ４０１１）を使用して一次抗体を標識した。
【０２６０】
[0279]  ＳＭＡＤ／ホスホＳＭＡＤ分析：０．０２％のＨＡＬＴプロテアーゼ阻害剤カクテル（Thermo）及びＲＩＰＡバッファー中１ｍＭのＥＤＴＡ（Sigma）を含有する組織溶解溶液を、冷凍肝サンプルに１：２の重量：容量の割合で添加した一方、解凍した。次いで、Tissuelyser（Qiagen）中でビーズ破砕を使用してサンプルを３０／秒の振動数において２分／秒、ホモジナイズし、破砕後、溶解物を１２，０００ｒｐｍ、２０分、４℃において遠心分離した。上清をアリコート化し、２０μＭのメッシュフィルタープレート（EMD Millipore）に通して濾過した。最終溶解物を後の分析のために−８０℃において冷凍し、又はＳＭＡＤ２／３及びホスホＳＭＡＤ２／３ＥＬＩＳＡ（Cell Signaling）を製造業者の説明書に従って使用して直接測定した。
【０２６１】
[0280]  形態計測分析：Hamamatsu Nanozoomer Scanner及びDigital Pathology Softwareを使用してスライドをデジタルスキャンした。保存した画像をレビューし、Hamamatsu NDP.viewソフトウェアを使用して１．５％ズームに縮小した。Image Pro Premierを使用して最終画像をポジティブ染色細胞の閾値分析によって分析した。同一の閾値をすべての組織に適用した。画像は平均結果を表す。
【０２６２】
[0281]  ＲＮＡ−ｓｅｑ分析：ＲＮＡをEnsembl 75マウスゲノム（GRCm38 February 2014）に対してマッピングし、Bowtie 2（Langmead & Salzber(2012),Nat.Methods,9(4):357-359）によってアラインし、ＲＳＥＭ（Li,B.,&Dewey(2011),BMC Bioinformatics,12:323）によって定量した。
【０２６３】
[0282]  シグネチャースコアは、それぞれの遺伝子シグネチャーにおけるすべての遺伝子のうちの平均ｌｏｇ２（倍率変化）と定義した。これらは、０．５ＴＰＭの擬似カウントをすべての遺伝子及びサンプルに付加し、ｌｏｇ２（ＴＰＭ）を決定し、次いですべてのサンプルにわたるそれぞれの遺伝子についてのｌｏｇ２−ＴＰＭ中央値をそれぞれの遺伝子についてのｌｏｇ２−ＴＰＭから差し引くことによって計算した。遺伝子セットについてのシグネチャースコア及び個々の遺伝子の発現（ｌｏｇ２倍率変化）を中央値並びに２５及び７５パーセンタイルを示すボックスプロットとして示し；ひげのスパンは最小から最大値である。
【０２６４】
[0283]  α−ＳＭＡ免疫組織化学的検査：単離腫瘍を１０％の中性緩衝ホルマリン（ＮＢＦ）中で室温において２４時間固定し、脱水し、パラフィンワックス中で包埋した。組織を５μｍにおいて切片化し、正荷電スライドに移した。染色前、切片を脱パラフィン化し、潤水操作した。確立されたプロトコル及びLeica BOND-RX自動染色装置を使用して抗α−ＳＭＡ免疫組織化学的検査を実行した。簡潔に述べると、エピトープ賦活化溶液２（Leica、カタログ番号ＡＲ９６４０）を使用して抗原賦活化を９５℃において２０分実行した。ブロッキング後、次いで切片をＨＲＰコンジュゲートされた５μｇ／ｍｌの抗α−ＳＭＡ抗体（クローン１Ａ４、Sigma、カタログ番号ＳＡＢ４２００６７）と６０分インキュベートした。ジアミノベンジジン基質（ＤＡＢ）を使用して検出を実行し、切片をヘマトキシリンによって対比染色した。染色の完了後、スライドを脱水し、カバースリップ処理した。Hamamatsu Nanozoomer顕微鏡を使用して染色した切片を画像化した。
【０２６５】
[0284]  Aperio ImageScope Software（バージョン１２．３．２．８０１３）を使用して画像のデジタル定量を実行した。それぞれの腫瘍について、複数の目的領域（ＲＯＩ）（８〜１１個のＲＯＩ）を分析した。壊死領域及び腫瘍辺縁は分析から除外した。ＤＡＢについてのバックグラウンドを超える総ポジティブピクセルを決定し、ＲＯＩ内のピクセルの総数によって割ってそれぞれのＲＯＩについてのパーセントポジティブ性を得た。ＲＯＩ値を平均化することによって得られたそれぞれの腫瘍についてのパーセントポジティブ性スコアを、GraphPad Prismを使用してプロットした。
【０２６６】
[0285]  統計的分析：GraphPad Prism Software、バージョン７．０を使用して統計分析を実行した。ｐＳＭＡＤ及びピクロシリウスレッド分析について、対応のない両側ｔ検定を使用して治療をアイソタイプコントロールと比較した。治療群間の遺伝子シグネチャースコアの差を評価するため、一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を実行し、その後、テューキーの多重比較検定を実行した。
【０２６７】
抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ及びトラップコントロールは化学療法誘導線維症を減少させるが、抗ＰＤ−Ｌ１は減少させない
[0286]  ＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるＣＣｌ４誘導肝線維症：抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップのインビボ抗線維症効果を判定するため、四塩化炭素（ＣＣｌ４）化学療法治療によって誘導させた肝線維症モデルを利用した。ＢＡＬＢ／ｃマウスを３用量のアイソタイプコントロール、抗ＰＤ−Ｌ１、トラップコントロール、又は抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップいずれかのとともにＣＣｌ４によって６週間、週２回治療した。
【０２６８】
[0287]  本実験において、マウスの５つの群を使用した：未治療のままとしたＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｎｖ）（ｎ＝４匹のマウス／群）、ＣＣｌ４（１μＬ／ｇ、ｉ．ｐ．；６週間、週２日）によって治療されたＢＡＬＢ／ｃマウス（ｎ＝８匹のマウス／群）、及びアイソタイプコントロール（１６．３ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｖ．；０、２、４日目）、抗ＰＤ−Ｌ１（１６．３ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．；０、２、４日目）、トラップコントロール（２０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．；０、２、４日目）、又は抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（２０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．；０、２、４日目）のいずれかによって治療されたＢＡＬＢ／ｃマウス。
【０２６９】
[0288]  マウスを６週間後に回収し、肝臓をピクロシリウスレッド又はｐＳＭＡＤ２／３について染色した。ＣＣｌ４は、パーセントピクロシリウスレッドによって測定されたとおり、アイソタイプコントロールマウスの肝臓中の総コラーゲン含有量を有意に増加させた。抗ＰＤ−Ｌ１抗体はアイソタイプコントロールと比べてコラーゲン含有量に影響を与えなかった一方、トラップコントロール及び抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ治療の両方は、コラーゲン含有量を有意に減少させた（総コラーゲン（パーセントピクロシリウスレッド）；それぞれｐ＝０．００３８及びｐ＝０．００１９）（図１２Ａ）。治療肝サンプル中の筋線維芽細胞のマーカーのパーセントαＳＭＡは、抗ＰＤ−Ｌ１治療によって同様に影響を受けなかったが、トラップコントロール及び抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ治療の両方は、パーセントαＳＭＡを有意に減少させた（それぞれｐ＝０．０００３及びｐ＝０．００１３）（図１２Ｂ）。治療肝サンプル中の総Ｓｍａｄ２／３に対するｐＳｍａｄ２／３の比も決定し、Ｒ−Ｓｍａｄのリン酸化、たとえばｐＳｍａｄ２／３がＴＧＦ−βアイソフォーム１〜３によって誘導され得ることを与えた（リン酸化ＳＭＡＤ２／３と総ＳＭＡＤ２／３との比を平均±ＳＥＭとして表し、それぞれのドットは個々のマウスを表す）。対応のないｔ検定を使用して治療をアイソタイプコントロールと比較した。＊＊ｐ≦０．０１及び＊＊＊ｐ≦０．００１は、有意差を示す。抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、アイソタイプコントロール治療と比べてｐＳｍａｄ２／３の比を低下させることができる唯一の治療であった（ｐ＝０．０００６）（図１２Ｃ）。
【０２７０】
抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ及び放射線療法を用いる組み合わせ療法は、ＥＭＴ及び線維症促進遺伝子シグネチャースコアを低下させた
[0289]  組み合わせ療法の抗腫瘍活性の向上を誘導した可能性として考えられる作用機序を試験するため、標的ＲＮＡシーケンシング（ＲＮＡｓｅｑ）を介して４Ｔ１腫瘍組織中の遺伝子発現をプロファイリングした。
【０２７１】
[0290]  図１３Ａ、１３Ｂ、及び図８は、４Ｔ１モデルにおけるＲＮＡｓｅｑ分析からのデータを提示する。ＢＡＬＢ／ｃマウスに０．５×１０５個の４Ｔ１細胞を筋肉内接種（ｉ．ｍ．）し（−６日目）、アイソタイプコントロール（４００μｇ  ｉ．ｖ．；０、２、４日目）＋ビヒクルコントロール（０．２ｍＬ、経口（per os（ｐ．ｏ．））、１日２回（ｑ．ｄ．）、０〜６日目）、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（４９２μｇ、静脈内（ｉ．ｖ．）；０、２、４日目）、放射線（８グレイ（Ｇｙ）、０〜３日目）、又は抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ＋ＲＴによって治療した（ｎ＝１０匹のマウス／群）。マウスを６日目に安楽死させ、腫瘍を回収し、ＲＮＡ抽出のために加工した。ＲＮＡｓｅｑをQiaseq標的ＲＮＡパネルによって実行し、シグネチャースコアを定義した。ＥＭＴ及び線維症促進遺伝子についてのシグネチャースコア（シグネチャーにおけるすべての遺伝子のうちの平均ｌｏｇ２倍率変化と定義）を散布図又は箱ひげ図として提示する。ひげのスパンは最小から最大値である。
【０２７２】
[0291]  ＲＮＡシーケンシング分析の一部として、遺伝子を機能群に分類し、「シグネチャースコア」を遺伝子発現の尺度として決定した。抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ単独療法は、アイソタイプコントロールと比べて上皮間葉転換（ＥＭＴ）シグネチャースコアの低下をもたらした（ｐ＜０．０００１）。放射線療法の追加はＥＭＴシグネチャーに有意に影響を与えなかったが（ｐ＞０．０５）、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ及び放射線療法の組み合わせは、アイソタイプコントロールと比べてＥＭＴシグネチャースコアを有意にダウンレギュレートした（ｐ＜０．０００１）（図１３Ａ）。
【０２７３】
[0292]  線維症促進遺伝子シグネチャースコアも、アイソタイプコントロールと比べて抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ単独療法によって減少したが、放射線療法によって有意に増加した（ｐ＜０．０００１）。さらに、放射線と抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップとの組み合わせは、放射線単独と比べて線維症促進シグネチャースコアを低下させた（図１３Ｂ）。放射線誘導線維症遺伝子シグネチャースコア（Alsner et al.,(2007) Radiotherapy and Oncology,83(3):261-266に基づく）は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ治療後に同様に減少した（ｐ＝０．００１４）。特に、放射線単独療法と比べて、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ治療は、放射線治療と組み合わせられると、放射線誘導線維症シグネチャーを有意に減少させることができた（ｐ＝０．０３６５）（図８）。放射線誘導線維症遺伝子シグネチャースコアについて、Ｃｄｃ６、Ｃｘｃｌ１２、及びＦａｐの発現レベルを測定した。単一遺伝子のレベルにおいて、Ｆａｐは２７．１％ダウンレギュレートされ、limmaによる調整ｐ値は０．０１０７であった（調整は、測定された全遺伝子である）。Ｃｄｃ６及びＣｘｃｌ１２の変化は、有意でなかった（図９）。線維症のキードライバーＣｔｇｆも、この比較において３４．４％ダウンレギュレートされた、ｐ＝０．００３５０。
【０２７４】
[0293]  ＥＭＴ及び線維症に対する抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ及び放射線療法の効果をさらに判定するため、線維芽細胞及びＥＭＴに関連する個々の遺伝子の発現を定量した。
【０２７５】
[0294]  平滑筋αアクチン（ＡＣＴＡ２）の発現は、平滑筋細胞、周皮細胞、及び筋線維芽細胞に限定され、筋線維芽細胞の機能において重要である。ＢＡＬＢ／ｃマウスに０．５×１０５個の４Ｔ１細胞を筋肉内接種（ｉ．ｍ．）し（−６日目）、アイソタイプコントロール（４００μｇ  ｉ．ｖ．；０、２、４日目）＋ビヒクルコントロール（０．２ｍＬ、経口（per os（ｐ．ｏ．））、１日２回（ｑ．ｄ．）、０〜６日目）、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（４９２μｇ、静脈内（ｉ．ｖ．）；０、２、４日目）、放射線（８Ｇｙ、０〜３日目）、又は抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ＋ＲＴによって治療した（ｎ＝１０匹のマウス／群）。マウスを６日目に安楽死させ、腫瘍を回収し、ＲＮＡ抽出のために加工した。ＲＮＡｓｅｑをQiaseq標的ＲＮＡパネルによって実行し、シグネチャースコアを定義した。それぞれの治療における遺伝子発現（ｌｏｇ２倍率変化）を、Ａｃｔａ２、Ｃｔｇｆ、及びＦａｐについての箱ひげ図で表す。ひげのスパンは最小から最大値である。
【０２７６】
[0295]  インビトロでは、ＡＣＴＡ２発現はＴＧＦ−β１治療によって増加する。４Ｔ１モデルにおいて、放射線治療単独はＡＣＴＡ２発現に対して有意な効果を有さなかった一方、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ単独療法及び放射線療法と組み合わせた抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップはＡＣＴＡ２発現を有意に低下させた（それぞれｐ＜０．０００１及びｐ＝０．０２３６）（図１４Ａ）。
【０２７７】
[0296]  結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）は、組織リモデリング及び線維症の中心的メディエーターであると示されている分泌タンパク質である。ＣＴＧＦ阻害は線維症進行を回復させることも示されており、ＣＴＧＦを標的にするモノクローナル抗体はマウスモデルにおいて放射線誘導肺線維症を有意に低下させた。抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、アイソタイプコントロールと比べて有意にＣＴＧＦ発現を低下させた（ｐ＝０．００１９）一方、予測のとおり、放射線治療はＣＴＧＦを増加させ、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ組み合わせは放射線単独療法と比較して放射線治療の効果を有意に弱めた（Ｐ＝０．００２４）（図１４Ｂ）。
【０２７８】
[0297]  線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）は、ヒト上皮癌の９０％超で癌関連線維芽細胞（ＣＡＦ）によって高度に発現され、それはＳＴＡＴ３シグナリングを介してＴＭＥにおいてＣＡＦによる免疫抑制を促進することができる。抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、アイソタイプコントロールと比べてＦＡＰ発現を有意に低下させ（ｐ＜０．０００１）、放射線療法について見られたＦＡＰの低下は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップと放射線との組み合わせによってさらに低下した（Ｐ＝０．００５４）（図１４Ｃ）。
【０２７９】
抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ治療は、マウス腫瘍においてα−ＳＭＡ発現を低下させる
[0298]  増加したＴＧＦ−β活性は、薬剤耐性に寄与することができ、免疫療法標的として浮上しているＣＡＦのマーカー、アルファ−平滑筋アクチン（α−ＳＭＡ）の発現を誘導する（Calon et al.(2014),Semin.Cancer Biol.25:15-22;Kakarla et al.(2012),Immunotherapy,4(11):1129-1138）。α−ＳＭＡ発現に対する抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ及び放射線療法の効果を判定するため、α−ＳＭＡ  ＩＨＣを４Ｔ１腫瘍切片において実行した。ＢＡＬＢ／ｃマウスに０．５×１０５個の４Ｔ１細胞を筋肉内接種（ｉ．ｍ．）し（−６日目）、アイソタイプコントロール（４００μｇ  ｉ．ｖ．；０、２、４日目）＋ビヒクルコントロール（０．２ｍＬ、ｐ．ｏ．、１日２回（ｑ．ｄ．）、０〜６日目）、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（４９２μｇ  ｉ．ｖ．；０、２、４日目）、放射線（８Ｇｙ、０〜３日目）、又は抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ＋放射線によって治療した（ｎ＝１０匹のマウス／群）。図１５において示されるボックスプロットにおいて、定量のためα−ＳＭＡ＋ピクセルの数を腫瘍当たりの複数の関心領域（ＲＯＩ）について決定し、ＲＯＩ面積に正規化し；それぞれの記号は、単一腫瘍についてのポジティブピクセルの割合を表す。ｐ値は一元ＡＮＯＶＡによって決定した。スケールバー、２５０μｍ。
【０２８０】
[0299]  抗α−ＳＭＡ  ＩＨＣの代表的な画像を示す（図１６Ａ〜１６Ｄ）。アイソタイプコントロール（図１６Ａ）と比べて、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ治療はα−ＳＭＡ発現を有意に低下させた（ｐ＜０．０００１）（図１６Ｂ）一方、放射線療法はα−ＳＭＡ発現を有意に増加させた（ｐ＝０．０００２）（図１６Ｃ）。抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップと放射線療法との組み合わせは、放射線単独療法と比べてα−ＳＭＡ発現を有意に低下させ（Ｐ＝０．０００１）（図１６Ｄ）、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップが放射線誘導ＣＡＦ活性を低下させることができることを示唆した。
【０２８１】
実施例３：未治療ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ患者コホートの併用化学療法及び放射線療法（ｃＣＲＴ）を用いる抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ投与−研究設計１
[0300]  ステージＩＩＩ非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する未治療患者は、ｃＣＲＴと組み合わせて抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによって治療され、その後、コンソリデーションのために抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによって治療され（アーム１）、ｃＣＲＴに登録され、その後、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによるコンソリデーション治療を受けた患者（アーム２）及びｃＣＲＴによって治療され、その後、デュルバルマブによって治療された患者（アーム３）と比較される。例示的な一実施形態では、ｃＣＲＴは、強度変調放射線療法によって送達される６０〜６６Ｇｙ（たとえば６０Ｇｙ）の総線量の放射線と同時にシスプラチン／エトポシド、シスプラチン／ペメトレキセド、又はカルボプラチン／パクリタキセルのいずれかとして投与される。化学療法計画は、層別因子である。
【０２８２】
[0301]  例示的な一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、１２００ｍｇのＢＷに無関係な用量として、ステージＩＩＩ非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する癌患者に２週間ごとに１回投与される。投与は、約１時間、静脈内に実行される（−１０分／＋２０分、たとえば５０分から８０分）。例示的な一実施形態では、抗−ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、１８００ｍｇのＢＷに無関係な用量として、ステージＩＩＩ非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する癌患者に３週間ごとに１回投与される。投与は、約１時間、静脈内に実行される（−１０分／＋２０分、たとえば５０分から８０分）。例示的な一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、２４００ｍｇのＢＷに無関係な用量として、ステージＩＩＩ非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する癌患者に３週間ごとに１回投与される。投与は、約１時間、静脈内に実行される（−１０分／＋２０分、たとえば５０分から８０分）。１つ以上の例示的な実施形態では、可能性として考えられる、注入に関係する反応を静めるために、抗ヒスタミン薬による及びパラセタモール（アセトアミノフェン）による前投薬（たとえば２５〜５０ｍｇジフェンヒドラミン及び５００〜６５０ｍｇパラセタモール［アセトアミノフェン］ＩＶ又は経口等価物）を、各抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを与えるおよそ３０〜６０分前に、最初の２回の注入について投与する。グレード≧２の注入反応が最初の２回の注入の間に観察される場合、前投薬は停止しない。前投薬としてのステロイドは許可しない。
【０２８３】
[0302]  以下は、本実施例において使用する、患者の選択基準について記載する。
患者：
−インフォームドコンセントの時点を含み≧１８歳とする、
−局所進行切除不能（ステージＩＩＩ）ＮＳＣＬＣの組織学的又は細胞学的確定診断を有する
−事前の開胸（実行した場合）以降、少なくとも３週間
−ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣの診断以降、全身性の治療法も、Ｔ細胞共調節タンパク質（免疫チェックポイント）を標的にするいかなる抗体又は薬剤、たとえば抗ＰＤＬ１、又は抗ＣＴＬＡ−４抗体も以前に受けたことがない
−少なくとも１２週間の平均余命を有する（診断後の患者の予後の医師の評価に基づく）
−バイオマーカー分析に十分な利用可能な腫瘍検体（＜６か月）を有する
−０〜１のEastern Cooperative Oncology Group Performance Status（ＥＣＯＧ  ＰＳ）を有する
−ランダム化前３週間以内に測定された１秒量の努力肺活量（ＦＥＶ１）≧１．２リットル又は予測基準量の≧５０％と定義される十分な肺機能を有する
−絶対的好中球数（ＡＮＣ）≧１．５×１０９／Ｌ、血小板数≧１００×１０９／Ｌ、及びＨｇｂ≧９ｇ／ｄＬによって定義される十分な血液機能を有する
−総ビリルビンレベル≦１．５×施設基準上限（ＵＬＮ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）レベル≦３．０×ＵＬＮ、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベル≦３．０×ＵＬＮ及びアルカリホスファターゼ≦２．５ＵＬＮによって定義される十分な肝機能を有する。
−クレアチニン≦１．５×ＵＬＮ又はＣｒ＞１．５×ＵＬＮを有する参加者については計算されたクレアチニンクリアランス（ＣｒＣｌ）≧５０ｍＬ／分によって定義される十分な腎機能を有する（ＧＦＲを使用することもできる）；
−参加者が抗凝固療法を受けていない限り国際標準化比（ＩＮＲ）又はプロトロンビン時間（ＰＴ）≦１．５×ＵＬＮ及び参加者が抗凝固療法を受けていない限り活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）≦１．５×ＵＬＮと定義される十分な凝固機能を有する。
【０２８４】
実施例４：未治療ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ患者コホートの併用化学療法及び放射線療法（ｃＣＲＴ）を用いる抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ投与−研究設計２
[0303]  ステージＩＩＩ非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する未治療患者は、ｃＣＲＴと組み合わせて抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによって治療され、その後、コンソリデーションのために抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによって治療され（アーム１）、ｃＣＲＴと組み合わせて１０ｍｇ／ｋｇの２週間に１回のデュルバルマブによって治療され、その後、１０ｍｇ／ｋｇの２週間に１回のデュルバルマブによるコンソリデーション治療を受けた患者（アーム２）及びさらにはｃＣＲＴ単独によって治療され、その後、プラセボによって治療された患者（アーム３）と比較される。例示的な一実施形態では、ｃＣＲＴは、強度変調放射線療法によって送達される６０〜６６Ｇｙ（たとえば６０Ｇｙ）の総線量の放射線と同時にシスプラチン／エトポシド、シスプラチン／ペメトレキセド、又はカルボプラチン／パクリタキセルのいずれかとして投与される。化学療法計画は、層別因子である。
【０２８５】
[0304]  例示的な一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、１２００ｍｇのＢＷに無関係な用量として、ステージＩＩＩ非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する癌患者に２週間ごとに１回投与される。投与は、約１時間、静脈内に実行される（−１０分／＋２０分、たとえば５０分から８０分）。例示的な一実施形態では、抗−ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、１８００ｍｇのＢＷに無関係な用量として、ステージＩＩＩ非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する癌患者に３週間ごとに１回投与される。投与は、約１時間、静脈内に実行される（−１０分／＋２０分、たとえば５０分から８０分）。例示的な一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、２４００ｍｇのＢＷに無関係な用量として、ステージＩＩＩ非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する癌患者に３週間ごとに１回投与される。投与は、約１時間、静脈内に実行される（−１０分／＋２０分、たとえば５０分から８０分）。１つ以上の例示的な実施形態では、可能性として考えられる、注入に関係する反応を静めるために、抗ヒスタミン薬による及びパラセタモール（アセトアミノフェン）による前投薬（たとえば２５〜５０ｍｇジフェンヒドラミン及び５００〜６５０ｍｇパラセタモール［アセトアミノフェン］ＩＶ又は経口等価物）を、各抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを与えるおよそ３０〜６０分前に、最初の２回の注入について投与する。グレード≧２の注入反応が最初の２回の注入の間に観察される場合、前投薬は停止しない。前投薬としてのステロイドは許可しない。
【０２８６】
[0305]  実施例４についての選択基準は実施例２と同様であるが、調査者の判断に従って調整することができた。
【０２８７】
実施例５：抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによるステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ患者の治療における治療効能
[0306]  ＲＥＣＩＳＴ１．１に従う無増悪生存期間（ＰＦＳ）が、実施例３及び４に記載のとおりｃＣＲＴと組み合わせて抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによって治療された参加者におけるプライマリーエンドポイントとして測定される。それぞれの実施例のアーム間の効能の差が調査される。
【０２８８】
[0307]  例示的な一実施形態では、シスプラチンは、５０ｍｇ／ｍ２の用量で６０分にわたって、又は各国の標準治療に従ってｃＣＲＴベース誘導の間の１、８、２９、３６日目に静脈内に投与される。エトポシドは、５０ｍｇ／ｍ２の用量で少なくとも３０分から６０分までｃＣＲＴベース誘導の間の１〜５、２９〜３３日目に毎日、静脈内に投与される。
【０２８９】
[0308]  Ｈ２ブロッカー、制吐薬、デキサメタゾンからなる標準的な前投薬（経口又は静脈内）が、各国のガイドラインに従って投与される。シスプラチン／エトポシドを受けている参加者における十分な補水の前及び後処理が、各国の慣行に従って保障される。
【０２９０】
[0309]  例示的な一実施形態では、パクリタキセルは、４５ｍｇ／ｍ２の用量で６０分にわたって、又は各国の処方情報に従ってｃＣＲＴベース誘導の間の週ごとの１日目に静脈内に投与される。各国の標準治療に従う、ジフェンヒドラミン２５〜５０ｍｇ、Ｈ２−ブロッカー、及びデキサメタゾンからなる標準的な前投薬（経口又はＩＶが容認できる）が、パクリタキセルの少なくとも３０分前に与えられる。
【０２９１】
[0310]  カルボプラチン／パクリタキセル計画によって治療され、コンソリデーションとしての抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップもデュルバルマブも受けることができない参加者について、カルボプラチン／パクリタキセルの２回のさらなるサイクル（カルボプラチンＡＵＣ６、パクリタキセル２００ｍｇ／ｍ２、Ｑ３Ｗ）が調査者の決定によってコンソリデーション治療として与えられる。
【０２９２】
[0311]  カルボプラチンは、ＡＵＣ２に基づいて３０分にわたって、又は各国の標準治療に従ってｃＣＲＴベース誘導の間の週ごとの１日目に静脈内に投与される。カルボプラチンは、パクリタキセルを投与した後に標準的な制吐薬と与えられる。
【０２９３】
[0312]  治療効能は、３つのさらなる成果決定因子によって測定することもできる。治療効能は、U.S.Food and Drug Administrationによれば、所定量の腫瘍サイズ低下を有する患者の割合及び最短期間に対するものである客観的奏効率（ＯＲＲ）として測定することができる。FDA 2007参照。完全寛解は、National Cancer Institute（NCI,USA）によれば、「治療に応答する癌のすべての徴候の消失」である。ＯＲＲは、ＣＲよりも好ましい治療効能の尺度である。Kogan & Haren(2008),Biotech.Healthcare,5(1):22-35参照。治療効能の別の尺度は、ランダム化から計画的評価までの時間である、たとえば５７か月における全生存期間（ＯＳ）である。治療効能は、ランダム化から計画的評価までの時間である、たとえば５７か月における応答の持続時間（疾患の進行（ＰＤ）、死亡、又は最後の腫瘍評価までのＣＲ又は部分寛解（ＰＲ）から評価される）として測定することもできる。
【０２９４】
[0313]  胸郭入口の上部から恥骨結合までのエリアをカバーする胸部／腹部及び骨盤の造影コンピューター断層撮影（ＣＴ）は、治療効能を評価するための画像化モダリティの第１候補である。コンソリデーション前の腫瘍評価は、コンソリデーション治療の開始前に可能な限り近く、及びＣＲＴベース誘導の終了後１４日以内に実行される。ｃＣＲＴに伴う毒性から回復している患者について、コンソリデーションの開始は、ｃＣＲＴの終了から４２日まで遅延される。参加者は放射線画像化によって６週間ごとに判定され、参加者の最初の投与の１５か月以内、その後、それ以降の１２週間ごとに治療に対する応答が評価される。
【０２９５】
[0314]  さらなるエンドポイントが調査されて治療効能がさらに確立される。たとえば、腫瘍サイズの変化がベースラインと比較した腫瘍容積分析によって判定され、腫瘍代謝容積の変化がＰＥＴスキャンによって測定される。肺線維症のベースラインからの変化は、高分解能ＣＴスキャン及び肺機能試験によって測定される。臨床応答の可能性として考えられる予測バイオマーカーは、血漿中又は腫瘍組織中の突然変異タイプ及び数（腫瘍突然変異負荷（ＴＭＢ））を試験し、ＴＭＢ及び臨床成果間の相関性を調査することによって判定される。
【０２９６】
[0315]  抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによる治療は、未治療ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ患者において最初の臨床活性をもたらすことが想定される。治療された患者は、疾患応答（たとえば部分寛解、完全寛解、安定性の疾患）及び／又は改善された生存期間（たとえば無増悪生存期間及び／又は全生存期間）を示す。併用ｃＣＲＴを用いる抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによる治療とその後の抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップコンソリデーション治療は、ｃＣＲＴ単独、又はｃＣＲＴによって治療され、その後、プラセボによって治療された患者と比較して未治療ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ患者の優れた生存期間をもたらすことが想定される。
【０２９７】
[0316]  まとめると、併用ｃＣＲＴを用いる抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、２つの免疫抑制経路：ＰＤ−Ｌ１及びＴＧＦ−βを同時に標的にし、それによってステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する一方、併用放射線療法に伴う線維症の発症を最小化し、対象においてステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣの転移の発生までの時間及び／又は遠隔転移までの時間を増加させるように設計される革新的なファーストインクラスの二機能融合タンパク質であることが見い出される。
【０２９８】
実施例６：進行切除不能ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ患者コホート［合計３５０人］の併用化学療法及び放射線療法（ｃＣＲＴ）を用いる抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ投与−研究設計３
[0317]  進行切除不能ステージＩＩＩ非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する患者は、ｃＣＲＴ（たとえば白金ベース化学放射線）と組み合わせて抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによって治療され、その後、コンソリデーションのために抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによって治療され（アーム１）、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップと適合するプラセボとともにｃＣＲＴによって治療され、その後、デュルバルマブによって治療された患者（アーム２）と比較される。治療計画の模式図を図１７に記載する。例示的な一実施形態では、ｃＣＲＴは、強度変調放射線療法によって送達される６０〜６６Ｇｙ（たとえば６０Ｇｙ）の総線量の放射線と同時にシスプラチン／エトポシド、シスプラチン／ペメトレキセド、又はカルボプラチン／パクリタキセルのいずれかとして投与される。化学療法計画及び／又はＰＤ−Ｌ１発現は、本研究において層別因子である。
【０２９９】
[0318]  例示的な一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、１２００ｍｇのＢＷに無関係な用量として、ステージＩＩＩ非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する癌患者に２週間ごとに１回投与される。投与は、約１時間、静脈内に実行される（−１０分／＋２０分、たとえば５０分から８０分）。例示的な一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、１８００ｍｇのＢＷに無関係な用量として、ステージＩＩＩ非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する癌患者に３週間ごとに１回投与される。投与は、約１時間、静脈内に実行される（−１０分／＋２０分、たとえば５０分から８０分）。例示的な一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、２４００ｍｇのＢＷに無関係な用量として、ステージＩＩＩ非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する癌患者に３週間ごとに１回投与される。投与は、約１時間、静脈内に実行される（−１０分／＋２０分、たとえば５０分から８０分）。１つ以上の例示的な実施形態では、可能性として考えられる、注入に関係する反応を静めるために、抗ヒスタミン薬による及びパラセタモール（アセトアミノフェン）による前投薬（たとえば２５〜５０ｍｇジフェンヒドラミン及び５００〜６５０ｍｇパラセタモール［アセトアミノフェン］ＩＶ又は経口等価物）を、各抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを与えるおよそ３０〜６０分前に、最初の２回の注入について投与する。グレード≧２の注入反応が最初の２回の注入の間に観察される場合、前投薬は停止しない。前投薬としてのステロイドは許可しない。
【０３００】
[0319]  例示的な一実施形態では、進行切除不能ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを有する患者に、ｃＣＲＴの間に及びｃＣＲＴの１年後まで容認できない毒性、疾患進行が確認されるまで１２００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを１時間にわたって２週間ごとに１回、静脈内に注入する。例示的な一実施形態では、４用量（たとえば各１２００ｍｇ）の抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップがｃＣＲＴと同時に誘導段階の間に投与される。１つ以上の例示的な実施形態では、２６用量（たとえば各１２００ｍｇ）の抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップがコンソリデーション段階の間に投与される。
【０３０１】
[0320]  例示的な一実施形態では、エトポシドは、５０ｍｇ／ｍ２の用量で又は各国の標準治療に従って少なくとも３０分から６０分までにわたってｃＣＲＴの間の１〜５及び２９〜３３日目に毎日、静脈内に投与される。例示的な一実施形態では、ペメトレキセドは、５００ｍｇ／ｍ２の用量で又は各国の標準治療に従って１０分にわたってｃＣＲＴの間の１、２２、及び４３日目に各国の標準治療に従って静脈内に投与される。例示的な一実施形態では、カルボプラチンは、曲線下面積（ＡＵＣ）２に基づいて３０分にわたってｃＣＲＴの間の１、８、１５、２２、２９、３６、及び４３日目に静脈内に投与される。例示的な一実施形態では、パクリタキセルは、４５ｍｇ／ｍ２の用量で又は各国の標準治療に従って６０分にわたってｃＣＲＴの間の１、８、１５、２２、２９、３６、及び４３日目に静脈内に投与される。各国の標準治療に従うジフェンヒドラミン２５〜５０ｍｇ、Ｈ２−ブロッカー、及びデキサメタゾンからなる標準的な前投薬（経口又はＩＶが容認できる）が、パクリタキセルの少なくとも３０分前に与えられる。
【０３０２】
[0321]  例示的な一実施形態では、シスプラチンは、５０ｍｇ／ｍ２の用量で６０分にわたって、又は各国の標準治療に従ってｃＣＲＴベース誘導の間の１、８、２９、３６日目に静脈内に投与される。エトポシドは、５０ｍｇ／ｍ２の用量で少なくとも３０分から６０分までｃＣＲＴベース誘導の間の１〜５、２９〜３３日目に毎日、静脈内に投与される。
【０３０３】
[0322]  例示的な一実施形態では、シスプラチンは、７５ｍｇ／ｍ２の用量で６０分にわたって、又は各国の標準治療に従ってｃＣＲＴベース誘導の間の１、２２、４３日目に静脈内に投与される。ペメトレキセドは、５００ｍｇ／ｍ２の用量で又は各国の標準治療に従って１０分にわたって又は各国の標準治療に従ってｃＣＲＴの間の１、２２、及び４３日目に静脈内に投与される。
【０３０４】
[0323]  アーム２において、進行切除不能ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを有する患者に、ｃＣＲＴの間に容認できる毒性、疾患進行が確認されるまで抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップと適合するプラセボを１時間にわたって２週間ごとに静脈内に注入する。デュルバルマブは、ｃＣＲＴの間に及びｃＣＲＴの１年後まで容認できる毒性、疾患進行が確認されるまで１０ｍｇ／ｋｇで１時間にわたって２週間に１回、投与される。１つ以上の例示的な実施形態では、２６用量（たとえば各１０ｍｇ／ｋｇ）のデュルバルマブがコンソリデーション段階の間に投与される。
【０３０５】
[0324]  例示的な一実施形態では、可能性として考えられる、注入に関係する反応を静めるために、抗ヒスタミン薬による及びパラセタモール（アセトアミノフェン）による前投薬（たとえば２５〜５０ｍｇジフェンヒドラミン及び５００〜６５０ｍｇパラセタモール［アセトアミノフェン］ＩＶ又は経口等価物）を、各抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを与えるおよそ３０〜６０分前に、最初の２回の注入について投与する。グレード≧２の注入反応が最初の２回の注入の間に観察される場合、前投薬は停止しない。前投薬としてのステロイドは許可しない。
【０３０６】
[0325]  例示的な一実施形態では、Ｈ２ブロッカー、制吐薬、デキサメタゾンからなる標準的な前投薬（経口又は静脈内）が、各国のガイドラインに従って投与される。シスプラチン／エトポシドを受けている参加者における十分な補水の前及び後処理が、各国の慣行に従って保証される。
【０３０７】
[0326]  以下は、本実施例において使用する、患者の選択基準について記載する。
患者：
−インフォームドコンセントの時点を含み≧１８歳とする、
−ステージＩＩＩの局所進行切除不能疾患を呈する組織学的に確定されたＮＳＣＬＣを有する（International Association for the Study of Lung Cancer Staging Manual in Thoracic Oncology）
−上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）感作（活性化）突然変異、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）転座、ＲＯＳ−１再構成を有する腫瘍を有する患者が適格である
−ランダム化前３週間以内に測定された１秒量の努力肺活量（ＦＥＶ１）１．２リットル以上（≧１．２リットル）又は予測基準量の≧５０％と定義される十分な肺機能を有する
−絶対的好中球数（ＡＮＣ）≧１．５×１０９／Ｌ、血小板数≧１００×１０９／Ｌ、及びヘモグロビン≧９ｇ／ｄＬによって定義される十分な血液機能を有する
−総ビリルビンレベル≦１．５×施設基準上限（ＵＬＮ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）レベル≦３．０×ＵＬＮ、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベル≦３．０×ＵＬＮ及びアルカリホスファターゼ≦２．５ＵＬＮによって定義される十分な肝機能を有する
−クレアチニン≦１．５×ＵＬＮ又はＣｒ＞１．５×ＵＬＮを有する参加者については計算されたクレアチニンクリアランス（ＣｒＣｌ）≧５０ｍＬ／分によって定義される十分な腎機能を有する（ＧＦＲを使用することもできる）
−避妊法に関する各国規制を満たす避妊薬（男性及び女性）を使用する
−０〜１のEastern Cooperative Oncology Group Performance Status（ＥＣＯＧ  ＰＳ）を有する
【０３０８】
[0327]  患者は、そのＮＳＣＬＣのための任意の以前の全身性細胞毒性化学療法又はＴ細胞共調節タンパク質を標的にする任意の抗体若しくは薬剤のために本研究から除外することができる。
【０３０９】
実施例７：実施例６において記載される進行切除不能ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ患者の治療における治療効能
[0328]  ＲＥＣＩＳＴ１．１に従う無増悪生存期間（ＰＦＳ）が、実施例６に記載のとおりｃＣＲＴと組み合わせて抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによって治療され、その後、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによって治療された参加者におけるプライマリーエンドポイントとして測定される。それぞれの実施例のアーム間の効能の差が調査される。
【０３１０】
[0329]  治療効能は、さらなる成果決定因子によって測定することもできる。治療効能の尺度は、ランダム化から計画的評価までの時間である、たとえば５９か月における全生存期間（ＯＳ）である。研究治療の開始から疾患進行／再発まで記録された最良効果である最良総合結果（ＢＯＲ）を調査して治療効能をさらに確立することもできる。治療効能のさらなる尺度は、ベースラインにおけるＰＤ−Ｌ１発現の判定を介するものである。別のセカンダリーエンドポイントは、安全性である。さらなるエンドポイントが調査されて治療効能がさらに確立される。たとえば、腫瘍サイズの変化がベースラインと比較した腫瘍容積分析によって評価され、腫瘍代謝容積の変化がＰＥＴスキャンによって測定される。肺線維症のベースラインからの変化は、高分解能ＣＴスキャン及び肺機能試験によって測定される。
【０３１１】
[0330]  胸郭入口の上部から恥骨結合までのエリアをカバーする胸部／腹部及び骨盤の造影コンピューター断層撮影（ＣＴ）は、治療効能を評価するための画像化モダリティの第１候補である。参加者は放射線画像化によって８週間ごとに評価され、進行又は研究からの離脱のどちらかが最初に生じない限り参加者の最初の投与の２４か月まで研究介入に対する応答が評価される。後続のスキャンは、進行、新たな治療の開始又は死亡まで８〜１２週間ごとに行われる。
【０３１２】
[0331]  臨床応答の可能性として考えられる予測バイオマーカーは、血漿中又は腫瘍組織中の突然変異タイプ及び数（腫瘍突然変異負荷（ＴＭＢ））を試験し、ＴＭＢ及び臨床成果間の相関性を調査することによって判定することができる。
【０３１３】
[0332]  さらなる外挿エンドポイントが調査されて治療効能がさらに確立される。たとえば、循環腫瘍ＤＮＡ（ｃｔＤＮＡ）レベルの変化、免疫関連固形癌効果判定基準（ｉｒＲＥＣＩＳＴ）に従う免疫関連最良総合結果（ｉｒＢＯＲ）及び免疫関連無増悪生存期間（ｉｒＰＦＳ）である。
【０３１４】
[0333]  抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによる治療は、進行切除不能ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ患者の治療において最初の臨床活性をもたらすことが想定される。治療された患者は、疾患応答（たとえば部分寛解、完全寛解、安定性の疾患）及び／又は改善された生存期間（たとえば無増悪生存期間及び／又は全生存期間）を示す。併用ｃＣＲＴを用いる抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによる治療とその後の抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップコンソリデーション治療は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップと適合するプラセボとともにｃＣＲＴによって治療され、その後、デュルバルマブによって治療された患者と比較して進行切除不能ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ患者の優れた生存期間をもたらすことが想定される。
【０３１５】
[0334]  例示的な一実施形態では、ＰＤ−Ｌ１発現は、ＦＤＡ承認試験（たとえば（腫瘍割合スコア（ＴＰＳ）又はVENTANA  ＰＤ−Ｌ１（ＳＰ２６３）アッセイ）によって決定される。例示的な一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体が使用されてホルマリン固定パラフィン包埋組織中のＰＤ−Ｌ１タンパク質発現が決定される。例示的な一実施形態では、患者は、ＰＤ−Ｌ１発現と無関係に登録され、ＳＰ２６３アッセイによってＰＤ−Ｌ１発現についてレトロスペクティブに層別化される。例示的な一実施形態では、ＰＤ−Ｌ１データ（レトロスペクティブ及びプロスペクティブ）は、プライマリー効能分析（ＰＦＳ及びＯＳに関する治療効果の推定のための感度分析としての層別ログランク検定、ＰＤ−Ｌ１層別コックスモデル、ＰＤ−Ｌ１調整コックスモデル）において考慮される。
【０３１６】
[0335]  例示的な一実施形態では、化学療法計画（たとえばシスプラチン／ペメトレキセドは、本研究において層別因子として使用される。例示的な一実施形態では、ステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣ（たとえば扁平上皮又は非扁平上皮）と診断された患者は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップと組み合わせてシスプラチン／エトポシド又はカルボプラチン／パクリタキセルを静脈内に投与することによって治療され、その後、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによって治療される。例示的な一実施形態では、非扁平上皮組織像を有するステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣと診断された患者は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップと組み合わせてシスプラチン／ペメトレキセドを静脈内に投与することによって治療され、その後、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによって治療される。
【０３１７】
[0336]  まとめると、併用ｃＣＲＴを用いる抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、２つの免疫抑制経路：ＰＤ−Ｌ１及びＴＧＦ−βを同時に標的にし、それによってステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣを治療する一方、併用放射線療法に伴う線維症の発症を最小化し、対象においてステージＩＩＩ  ＮＳＣＬＣの転移の発生までの時間及び／又は遠隔転移までの時間を増加させるように設計される革新的なファーストインクラスの二機能融合タンパク質であることが見い出される。
【０３１８】
配列
配列番号１
分泌抗ＰＤ−Ｌ１ラムダ軽鎖のペプチド配列
【化２４】
2021527083.tif 000028
配列番号２
抗ＰＤＬ１の分泌Ｈ鎖のペプチド配列
【化２５】
2021527083.tif 000029
配列番号３
抗ＰＤＬ１／ＴＧＦβトラップの分泌Ｈ鎖のペプチド配列
【化２６】
2021527083.tif 000030
配列番号４
抗ＰＤ−Ｌ１ラムダ軽鎖の翻訳開始コドンから翻訳終止コドンまでのＤＮＡ配列（ＶＬに先行するリーダー配列は、ウロキナーゼプラスミノーゲン活性化因子由来のシグナルペプチドである）
【化２７】
2021527083.tif 000031
配列番号５
翻訳開始コドンから翻訳終止コドンまでのＤＮＡ配列（ｍＶＫ  ＳＰリーダー：下線を引いた小文字；ＶＨ：大文字；ＫからＡへの突然変異を有するＩｇＧ１ｍ３：小文字；（Ｇ４Ｓ）ｘ４−Ｇ（配列番号１１）リンカー：太字の大文字；ＴＧＦβＲＩＩ：太字の下線を引いた小文字；２つの終止コドン：太字の下線を引いた大文字）
【化２８】
2021527083.tif 000032
配列番号６
突然変異Ａ３１Ｇ、Ｄ５２Ｅ、Ｒ９９Ｙを有する抗ＰＤ−Ｌ１（ｍｕｔ）／ＴＧＦβトラップの分泌ラムダ軽鎖のポリペプチド配列
【化２９】
2021527083.tif 000033
配列番号７
抗ＰＤ−Ｌ１（ｍｕｔ）／ＴＧＦβトラップの分泌重鎖のポリペプチド配列
【化３０】
2021527083.tif 000034
配列番号８
ヒトＴＧＦβＲＩＩアイソフォームＡ前駆体ポリペプチド（ＮＣＢＩ  ＲｅｆＳｅｑ受入番号：ＮＰ＿００１０２００１８）
【化３１】
2021527083.tif 000035
配列番号９
ヒトＴＧＦβＲＩＩアイソフォームＢ前駆体ポリペプチド（ＮＣＢＩ  ＲｅｆＳｅｑ受入番号：ＮＰ＿００３２３３）
【化３２】
2021527083.tif 000036
配列番号１０
ヒトＴＧＦβＲＩＩアイソフォームＢ細胞外ドメインポリペプチド
【化３３】
2021527083.tif 000037
配列番号１１
（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４Ｇｌｙリンカー
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧ
配列番号１２
抗ＰＤ−Ｌ１抗体ＭＰＤＬ３２８９Ａの分泌重鎖可変領域のポリペプチド配列
【化３４】
2021527083.tif 000038
配列番号１３
抗ＰＤ−Ｌ１抗体ＭＰＤＬ３２８９Ａの分泌軽鎖可変領域のポリペプチド配列
【化３５】
2021527083.tif 000039
配列番号１４
抗ＰＤ−Ｌ１抗体ＹＷ２４３．５５Ｓ７０の分泌重鎖可変領域のポリペプチド配列
【化３６】
2021527083.tif 000040
配列番号５０
切断型ヒトＴＧＦβＲＩＩアイソフォームＢ細胞外ドメインポリペプチド
【化３７】
2021527083.tif 000041
配列番号５１
切断型ヒトＴＧＦβＲＩＩアイソフォームＢ細胞外ドメインポリペプチド
【化３８】
2021527083.tif 000042
配列番号５２
切断型ヒトＴＧＦβＲＩＩアイソフォームＢ細胞外ドメインポリペプチド
【化３９】
2021527083.tif 000043
配列番号５３
切断型ヒトＴＧＦβＲＩＩアイソフォームＢ細胞外ドメインポリペプチド
【化４０】
2021527083.tif 000044
配列番号５４
突然変異ヒトＴＧＦβＲＩＩアイソフォームＢ細胞外ドメインポリペプチド
【化４１】
2021527083.tif 000045
配列番号５５
抗ＰＤ−Ｌ１抗体の重鎖可変領域のポリペプチド配列
【化４２】
2021527083.tif 000046
配列番号５６
抗ＰＤ−Ｌ１抗体の軽鎖可変領域のポリペプチド配列
【化４３】
2021527083.tif 000047
配列番号５７
抗ＰＤ−Ｌ１抗体の重鎖可変領域のポリペプチド配列
【化４４】
2021527083.tif 000048
配列番号５８
抗ＰＤ−Ｌ１抗体の軽鎖可変領域のポリペプチド配列
【化４５】
2021527083.tif 000049
配列番号５９
抗ＰＤ−Ｌ１抗体の重鎖のポリペプチド配列
【化４６】
2021527083.tif 000050
配列番号６０
抗ＰＤ−Ｌ１抗体の軽鎖のポリペプチド配列
【化４７】
2021527083.tif 000051
配列番号６１
抗ＰＤ−Ｌ１抗体の重鎖のポリペプチド配列
【化４８】
2021527083.tif 000052
配列番号６２
抗ＰＤ−Ｌ１抗体の軽鎖のポリペプチド配列
【化４９】
2021527083.tif 000053
【０３１９】
参照による組み込み
[0337]  本明細書において参照される特許文献及び科学論文のそれぞれの開示の全体は、事実上、参照によって組み込まれる。
【０３２０】
等価物
[0338]  本開示は、その精神又は本質的な特徴から逸脱することなく、他の特定の形態で例示されてもよい。そのため、前述の実施形態は、本明細書において記載される本開示を限定するものではなく、あらゆる点において例示と見なされるべきである。様々な実施形態の様々な構造的要素及び様々な開示される方法のステップは、様々に組み合わせて及び並べ換えて利用されてもよく、そのような変形はすべて、本開示の形態と見なされるべきである。本開示の範囲は、したがって、前述の説明ではなく、添付の請求項によって示され、請求項と同等の意味及び範囲内にある変化はすべて、請求項に包含されることが意図される。
【図１】
2021527083.tif 000054
【図２】
2021527083.tif 000055
【図３】
2021527083.tif 000056
【図４Ａ】
2021527083.tif 000057
【図４Ｂ】
2021527083.tif 000058
【図４Ｃ】
2021527083.tif 000059
【図４Ｄ】
2021527083.tif 000060
【図５】
2021527083.tif 000061
【図６Ａ】
2021527083.tif 000062
【図６Ｂ】
2021527083.tif 000063
【図６Ｃ】
2021527083.tif 000064
【図６Ｄ】
2021527083.tif 000065
【図６Ｅ】
2021527083.tif 000066
【図６Ｆ】
2021527083.tif 000067
【図６Ｇ】
2021527083.tif 000068
【図６Ｈ】
2021527083.tif 000069
【図７Ａ】
2021527083.tif 000070
【図７Ｂ】
2021527083.tif 000071
【図７Ｃ】
2021527083.tif 000072
【図８】
2021527083.tif 000073
【図９】
2021527083.tif 000074
【図１０】
2021527083.tif 000075
【図１１】
2021527083.tif 000076
【図１２Ａ】
2021527083.tif 000077
【図１２Ｂ】
2021527083.tif 000078
【図１２Ｃ】
2021527083.tif 000079
【図１３Ａ】
2021527083.tif 000080
【図１３Ｂ】
2021527083.tif 000081
【図１４Ａ】
2021527083.tif 000082
【図１４Ｂ】
2021527083.tif 000083
【図１４Ｃ】
2021527083.tif 000084
【図１５】
2021527083.tif 000085
【図１６Ａ】
2021527083.tif 000086
【図１６Ｂ】
2021527083.tif 000087
【図１６Ｃ】
2021527083.tif 000088
【図１６Ｄ】
2021527083.tif 000089
【図１７】
2021527083.tif 000090
【配列表】
2021527083000001.app
【国際調査報告】
2021527083.tif 000091
2021527083.tif 000092