(57)【要約】  ＳＮＨＧ１４遺伝子の活性を負に調節するマイクロＲＮＡの発現を、アンジェルマン症候群の処置に用いることができる。アンジェルマン症候群の処置に用いるための、そのようなマイクロＲＮＡとしては、例えば、ＭＩＲ−９２ａおよび／またはＭＩＲ−１４５、ならびにその類縁体および変異体が挙げられる。例えば、ＡＡＶベクターなどの発現ベクターは、アンジェルマン症候群の処置のために、ＭＩＲ−９２ａおよび／またはＭＩＲ−１４５を標的組織に導入するために細胞をトランスフェクションするために用いられ得る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
マイクロＲＮＡ−１４５、プリ−ｍｉＲ１４５、プレ−ｍｉＲ１４５、マイクロＲＮＡ−９２ａ、プリ−ｍｉＲ−９２ａまたはプレ−ｍｉＲ−９２ａをコードする核酸を含むベクターを、それを必要とする患者に投与することを含む、アンジェルマン症候群の処置方法であって、ここで、該核酸がプロモーターに作動可能に連結されており、アンジェルマン症候群の１以上の症状が改善される、処置方法。
【請求項２】
投与後、患者におけるマイクロＲＮＡ−１４５、プリ−ｍｉＲ１４５、プレ−ｍｉＲ１４５、マイクロＲＮＡ−１４５、プリ−ｍｉＲ１４５、プレ−ｍｉＲ１４５、マイクロＲＮＡ−９２ａ、プリ−ｍｉＲ−９２ａまたはプレ−ｍｉＲ−９２ａの発現が、アンジェルマン症候群の症状の軽減と関連している、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
プロモーターが、ＣＡＧプロモーター、ＣＭＶプロモーター、ヒトシナプシン１遺伝子プロモーター（ｈＳｙｎ）、ダイノルフィンプロモーター、エンセファリンプロモーターおよびＣａＭＫＩＩプロモーターからなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
プロモーターがＣＡＧプロモーターである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
ベクターが、ウッドチャック転写後調節因子（ＷＰＲＥ）を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
ベクターがウシ成長ホルモンポリアデニル化配列（ＢＧＨｐＡ）を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
ベクターが蛍光レポーターカセットを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
ベクターがアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
アデノ随伴ウイルスが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９またはＡＡＶＲｅｃ３である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
ベクターがレンチウイルスである、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
ベクターが、患者の脳内の標的位置に送達される、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
ベクターが、経口、口腔内、舌下、直腸、局所、鼻腔内、経膣および非経腸からなる群より選択される経路を介して投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
ベクターが、標的位置に直接的に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
方法が、発達遅延、知的障害、言語障害、歩行運動失調および／または四肢振戦、発作、小頭症、不適切な幸福表情、頻繁に笑うこと、水に引き付けられること、微笑むことおよび興奮症状からなる群より選択される少なくとも１つの症状の改善をもたらす、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
超音波を患者の脳の標的位置に適用して、標的位置での患者の血液脳関門の浸透性を増強することをさらに含み、ここで、ベクターが前記標的位置に送達される、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
患者の脳内のマイクロＲＮＡ−１４５および／またはマイクロＲＮＡ−９２ａ分子のレベルを増加させる有効量の医薬組成物を患者に投与することを含む、それを必要とする患者におけるアンジェルマン症候群の処置方法。
【請求項１７】
組成物が、マイクロＲＮＡ−１４５、プリ−ｍｉＲ１４５、プレ−ｍｉＲ１４５、マイクロＲＮＡ−９２ａ、プリ−ｍｉＲ９２ａまたはプレ−ｍｉＲ９２ａを含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
組成物が、マイクロＲＮＡ−１４５、プリ−ｍｉＲ１４５、プレ−ｍｉＲ１４５、マイクロＲＮＡ−９２ａ、プリ−ｍｉＲ９２ａまたはプレ−ｍｉＲ９２ａをコードする核酸を含むベクターを含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
投与後、患者におけるマイクロＲＮＡ−１４５、プリ−ｍｉＲ１４５、プレ−ｍｉＲ１４５、マイクロＲＮＡ−９２ａ、プリ−ｍｉＲ９２ａまたはプレ−ｍｉＲ９２ａの発現が、アンジェルマン症候群の症状の軽減と関連している、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
マイクロＲＮＡ−１４５、プリ−ｍｉＲ１４５、プレ−ｍｉＲ１４５、マイクロＲＮＡ−９２ａ、プリ−ｍｉＲ９２ａまたはプレ−ｍｉＲ９２ａをコードする核酸が、プロモーターに作動可能に連結されている、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
プロモーターが、ＣＡＧプロモーター、ＣＭＶプロモーター、ヒトシナプシン１遺伝子プロモーター（ｈＳｙｎ）、ダイノルフィンプロモーター、エンセファリンプロモーターおよびＣａＭＫＩＩプロモーターからなる群より選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
ベクターが、ウッドチャック転写後調節因子（ＷＰＲＥ）を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
ベクターが蛍光レポーターカセットを含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２４】
ベクターがアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２５】
アデノ随伴ウイルスが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９またはＡＡＶＲｅｃ３である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
ベクターがレンチウイルスである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２７】
ベクターが、患者の脳内の標的位置に送達される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２８】
ベクターが、経口、口腔内、舌下、直腸、局所、鼻腔内、経膣および非経腸からなる群より選択される経路を介して投与される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２９】
ベクターが、標的位置に直接的に投与される、請求項１８に記載の方法。
【請求項３０】
組成物が、非ウイルスベクターであるベクターを含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項３１】
非ウイルスベクターがリポソーム媒介性送達ベクターである、請求項３０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、２０１８年６月１４日付けで出願された米国仮特許出願第６２／６８４，７７４号に基づく優先権の利益を主張し、その内容全体を、引用により本明細書に包含させる。
【０００２】
技術分野
本発明は、一般的に、アンジェルマン症候群の処置における使用のための、ＳＮＨＧ１４遺伝子の活性を負に調節するマイクロＲＮＡの発現に関する。アンジェルマン症候群の処置における使用のための、かかるマイクロＲＮＡとしては、例えばＭＩＲ−９２ａおよび／またはＭＩＲ−１４５、ならびにその類縁体および変異体が挙げられる。さらに具体的には、本発明は、アンジェルマン症候群の処置のために、ＭＩＲ−９２ａおよび／またはＭＩＲ−１４５を標的組織に導入するために細胞をトランスフェクションするために用いられ得る、例えばＡＡＶベクターなどの発現ベクターの使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
背景
“アンジェルマン症候群”（ＡＳ）は、重度の発達遅延または知的障害、重度の言語障害、歩行失調および／または四肢振戦、発作、小頭症、および不適切な幸福表情を伴う独特の行動、例えば頻繁に笑うこと（frequent laughing）、水に引き付けられること（affinity for water）、微笑むこと（smiling）、興奮すること（excitability）などを特徴とする神経発達障害である。小頭症および発作もよく見られる。発達の遅れは生後６ヵ月頃に最初に認められる。しかしながら、アンジェルマン症候群の特異な臨床的特徴は１歳過ぎまで顕在化せず、正確な臨床的診断が明らかになるまでには数年かかることがある。
【０００４】
アンジェルマン症候群の特異な特徴の多くは、ユビキチン蛋白質リガーゼＥ３Ａ（ＵＢＥ３Ａ）遺伝子をコードするＵＢＥ３Ａと呼ばれる遺伝子の機能喪失に起因する（Kishino, T. et al. Nat Genet (1997) 12:385-395）。ヒトは通常、ＵＢＥ３Ａ遺伝子の１コピーを両親から受け継ぐ。この遺伝子の両コピーが身体の多くの組織でオンに（活性化）されているが、脳の特定領域では、母親から受け継いだコピー（母性コピー）のみが活性化されている。この親特異的な遺伝子活性化は、ゲノムインプリンティングと呼ばれる現象によって引き起こされる。ＵＢＥ３Ａは、脳内で母親由来遺伝子がインプリンティングされているため、母方の染色体からほぼ独占的に発現され、一方で父方の染色体はエピジェネティックにサイレンシングされている（Albrecht, U. et al., Nat Genet (1997) 17:75-78）。ＵＢＥ３Ａ遺伝子の母性コピーが染色体の変化または遺伝子変異によって失われると、ヒトは脳のいくつかの部分で遺伝子の活性コピーを持たなくなる。
【０００５】
いくつかの異なる遺伝的機序が、ＵＢＥ３Ａ遺伝子の母性コピーを不活性化または欠失させ得る。アンジェルマン症候群のほとんどの症例（約７０％）は、この遺伝子を含む母方の１５番染色体の１つのセグメントが欠失するときに生じる。他の症例（約１１％）では、アンジェルマン症候群は、ＵＢＥ３Ａ遺伝子の母性コピーの変異によって引き起こされる。
【０００６】
ＵＢＥ３Ａ−ＡＴＳとしても知られている低分子核小体ＲＮＡホスト遺伝子１４（ＳＮＨＧ１４）は、アンチセンス鎖をＵＢＥ３Ａ遺伝子にまで伸長し、従って、父親由来のＵＢＥ３Ａ発現の抑制およびインプリンティングに役割を果たす可能性がある。ＵＢＥ３Ａのタンパク質産物の不足が、アンジェルマン症候群で観察される神経発達障害をどのように引き起こすかについては、まだ多くのことが解明されていない。したがって、アンジェルマン症候群と診断された患者を処置するための改善された、および／または追加の治療法が必要とされている。
【発明の概要】
【０００７】
概要
ＳＮＨＧ１４遺伝子の活性を負に調節する組成物の有効量を患者に送達することを含む、それを必要とする患者においてアンジェルマン症候群（ＡＳ）を処置する方法を提供する。そのような処置方法は、患者の中枢神経系におけるマイクロＲＮＡ−１４５および／またはマイクロＲＮＡ−９２ａ分子のレベルを増加させる組成物の有効量を該患者に送達することを含む。本明細書に記載の方法は、ＳＮＨＧ１４遺伝子の活性を負に調節するように設計されている。
【０００８】
患者の中枢神経系の細胞内のマイクロＲＮＡ−１４５および／またはマイクロＲＮＡ−９２ａ分子のレベルを増加させる組成物の有効量を該患者に送達することを含む、それを必要とする患者においてアンジェルマン症候群を処置する方法を提供する。マイクロＲＮＡ−１４５、プリ（pri）−ｍｉＲＮＡ１４５またはプレ（pre）−ｍｉＲＮＡ１４５をコードするベクターを患者に投与することを含む、それを必要とする患者においてアンジェルマン症候群を処置する方法を提供する。マイクロＲＮＡ−９２ａ、プリ−ｍｉＲ９２ａまたはプレ−ｍｉＲＮＡ９２ａをコードするベクターを投与することを含む、それを必要とする患者においてアンジェルマン症候群を処置する方法を提供する。いくつかの態様において、マイクロＲＮＡ−１４５またはマイクロＲＮＡ−９２ａのレベルの増加は、アンジェルマン症候群の１以上の症状の改善をもたらす。
【０００９】
いくつかの態様において、マイクロＲＮＡ−１４５、プリ−ｍｉＲ１４５またはプレ−ｍｉＲ１４５をコードするベクターは、アンジェルマン症候群の患者においてマイクロＲＮＡ−１４５のレベルの増加をもたらし、該疾患の症状の軽減と関連している。いくつかの態様において、マイクロＲＮＡ−９２ａ、プリ−ｍｉＲ９２ａまたはプレ−ｍｉＲ９２ａをコードするベクターは、アンジェルマン症候群の患者においてマイクロＲＮＡ−９２ａのレベルの増加をもたらし、該疾患の症状の軽減と関連している。
【００１０】
特定の面において、マイクロＲＮＡ−１４５、プリ−ｍｉＲ１４５またはプレ−ｍｉＲ１４５をコードする核酸を含むベクターは、マイクロＲＮＡ−１４５、プリ−ｍｉＲ１４５またはプレ−ｍｉＲ１４５をコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む。いくつかの態様において、ベクターは、ウッドチャック（woodchuck）転写後調節因子（ＷＰＲＥ）を含む。いくつかの態様において、ベクターは、ウシ成長ホルモンポリアデニル化配列（ＢＧＨｐＡ）を含む。いくつかの態様において、ベクターは、蛍光レポーターカセットを含む。いくつかの態様において、ベクターは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）である。いくつかの態様において、ベクターはレンチウイルスである。いくつかの態様において、マイクロＲＮＡ−９２ａ、プリ−ｍｉＲ９２ａまたはプレ−ｍｉＲ９２ａをコードする核酸を含むベクターは、マイクロＲＮＡ−９２ａ、プリ−ｍｉＲ９２ａまたはプレ−ｍｉＲ９２ａをコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含む。いくつかの態様において、マイクロＲＮＡ−９２ａをコードする核酸は、マイクロＲＮＡ−９２ａ−３ｐである。いくつかの態様において、ベクターは、上記ＷＰＲＥを含む。いくつかの態様において、ベクターは、上記ＢＧＨｐＡを含む。いくつかの態様において、ベクターは、蛍光レポーターカセットを含む。いくつかの態様において、ベクターは、アデノ随伴ウイルスである。いくつかの態様において、ベクターはレンチウイルスである。いくつかの態様において、ベクターは、ＡＡＶベクターである。
【００１１】
いくつかの態様において、ベクターは、患者の中枢神経系の標的位置に送達される。いくつかの態様において、該標的位置は、患者の脳である。いくつかの態様において、ベクターの投与経路は、経口、口腔内、舌下、直腸、局所、鼻腔内、経膣または非経腸である。いくつかの態様において、ベクターは、該標的位置に直接投与される。
【００１２】
いくつかの態様において、超音波を患者の脳の標的位置に適用して、該標的位置での患者の血液脳関門の浸透性を増強し、ここで、マイクロＲＮＡ−１４５またはマイクロＲＮＡ−９２ａが標的位置に送達される。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
詳細な説明
本明細書には、ＳＮＧＨ１４遺伝子の活性を負に調節する組成物を、アンジェルマン症候群を有する患者に投与することを含む、アンジェルマン症候群の処置のための方法および組成物が記載されている。かかる組成物は、例えばマイクロＲＮＡ−１４５、プリ−ｍｉＲ１４５またはプレ−ｍｉＲ１４５を含む。本明細書にはまた、マイクロＲＮＡ−９２ａ、プリ−ｍｉＲ９２ａまたはプレ−ｍｉＲ９２ａを、アンジェルマン症候群を有する患者に投与することを含む、アンジェルマン症候群を処置するための方法および組成物が記載されている。
【００１４】
いくつかの態様において、マイクロＲＮＡ−１４５、プリ−ｍｉＲ１４５またはプレ−ｍｉＲ１４５をコードするベクターが提供される。いくつかの態様において、マイクロＲＮＡ−１４５、プリ−ｍｉＲ１４５またはプレ−ｍｉＲ１４５をコードするベクターは、アンジェルマン症候群を有する患者に投与され、ここで、該患者は該疾患の１以上の症状の改善を示す。いくつかの態様において、マイクロＲＮＡ−９２ａ、プリ−ｍｉＲ９２ａまたはプレ−ｍｉＲ９２をコードするベクターが提供される。いくつかの態様において、マイクロＲＮＡ−９２ａ、プリ−ｍｉＲ９２ａまたはプレ−ｍｉＲ９２ａをコードするベクターは、アンジェルマン症候群を有する患者に投与され、ここで、該患者は該疾患の１以上の症状の改善を示す。
【００１５】
マイクロＲＮＡ−１４５、プリ−ｍｉＲ１４５、プレ−ｍｉＲ１４５、マイクロＲＮＡ−９２ａ、プリ−ｍｉＲ９２ａおよび／またはプレ−ｍｉＲ９２ａは、本明細書中、マイクロＲＮＡまたはマイクロＲＮＡｓと総称される。マイクロＲＮＡ−１４５、プリ−ｍｉＲ１４５、プレ−ｍｉＲ１４５、マイクロＲＮＡ−９２ａ、プリ−ｍｉＲ９２ａおよび／またはプレ−ｍｉＲ９２ａの患者への投与は、本明細書ではマイクロＲＮＡ処置と総称される。マイクロＲＮＡ処置は、細胞内のそれぞれの活性マイクロＲＮＡ分子のレベルを増加させる。この増加は、マイクロＲＮＡを細胞に直接的に提供することによって生じ得るか、またはベクターを介するなどマイクロＲＮＡを細胞に間接的に提供することによって生じ得る。マイクロＲＮＡは、追加的な配列も含むＲＮＡ分子またはＤＮＡ分子を含み得る。例えば、患者の脳のＣＮＳ細胞におけるそれぞれの活性マイクロＲＮＡ分子のレベルの増加は、アンジェルマン症候群の１以上の症状の改善と関連する。
【００１６】
１以上のプリ−ｍｉＲＮＡを、本明細書に記載の組成物および方法で用いることができる。何れかの好適な形態のプリ−ｍＲＮＡを用いることができる。プリ−ｍＲＮＡは、細胞内でプロセッシングされ、ｍｉＲＮＡのための機能を獲得するように作用し得て、例えば、プレ−ｍＲＮＡに変換され、次いで成熟形態に変換され得る。あるいは、ｍｉＲＮＡは、最初はｍｉＲＮＡ前駆体であってよい。いくつかの態様において、組成物および方法はプレ−ｍｉＲＮＡを含み、これは、Ｄｉｃｅｒと呼ばれるＲＮａｓｅＩＩＩ型二本鎖エンドヌクレアーゼによる切断を受け、その結果、約２０〜２５ヌクレオチドのサイズである不完全なｍｉＲＮＡ：ｍｉＲＮＡ＊二本鎖をもたらす。この二本鎖は、成熟ｍｉＲＮＡ鎖とその対向する相補的ｍｉＲＮＡ＊鎖とを含む。１以上のプレ−ｍｉＲＮＡを、本明細書に記載の組成物および方法で用いることができる。プレ−ｍｉＲＮＡは、ｍｉＲＮＡのための機能を獲得するように作用し得る。何らかの好適な形態のプレ−ｍｉＲＮＡを用いることができる。また、本明細書に記載の組成物および方法のｍｉＲＮＡが成熟ｍｉＲＮＡであり得ることも企図される。
【００１７】
マイクロＲＮＡは、非発現ベクターまたは発現ベクターの様式で細胞に送達され得る。発現ベクターおよびベクターは、本明細書中互換的に用いられる。いくつかの態様において、マイクロＲＮＡは、後続の工程で用いる前に単離または精製されてもよい。マイクロＲＮＡは、細胞への導入の前に単離または精製されてもよい。細胞への“導入”としては、トランスフェクション、形質導入、感染の既知の方法、および発現ベクターまたは異種核酸を細胞に導入するための他の方法が挙げられる。テンプレート核酸または増幅プライマーは、それが転写または増幅される前に単離または精製されてもよい。単離または精製は、核酸に関する当業者に知られている多くの方法によって実施することができる。マイクロＲＮＡの送達は、化学的に修飾されたカプセル化を介するか、またはウイルス性もしくは非ウイルス性の送達容器内の未修飾のＲＮＡ部分を介するなど、いくつかの形態を介して起こり得る。非発現ベクターの送達様式としては、脳細胞を標的とし得るナノ粒子、マイクロ粒子、リポソーム、ポリマー、ミクロスフェアなどが挙げられる。マイクロＲＮＡはまた、プラスミドまたはミニベクターベースの発現系として送達されることもあり、その系では、マイクロＲＮＡは、細胞内でＲＮＡｉ機序によって発現およびプロセッシングされて、成熟マイクロＲＮＡを形成することができる。
【００１８】
ｍｉＲＮＡ発現のための核酸構築物は、組換え的に産生されてよい。そのような発現ベクターが本発明で提供される。発現ベクターとは、それを複製できる細胞への導入のために核酸配列を挿入することのできる担体核酸である。発現ベクターとしては、プラスミド、コスミド、組換えウイルス、例えばアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アデノウイルス、レトロウイルス、ポックスウイルス、および当技術分野の他の既知のウイルス（バクテリオファージ、動物ウイルスおよび植物ウイルス）など、ならびに人工染色体（例えば、ＹＡＣ）が挙げられる。当業者は、標準的な組換え技術を介して発現ベクターを構築するために十分に設備を備えている。いくつかの態様において、マイクロＲＮＡを有する発現ベクターは、患者の細胞に送達される。核酸分子は、それらが取り込まれ、治療的に有効なレベルを達成できるように有利に発現され得る形態で患者の細胞に送達される。
【００１９】
本発明のベクターに用いるための核酸分子としては、哺乳動物マイクロＲＮＡ−１４５、プリ−ｍｉＲ１４５、プレ−ｍｉＲ１４５、マイクロＲＮＡ−９２ａ、プリ−ｍｉＲ９２ａまたはプレ−ｍｉＲ９２ａをコードするものが挙げられる。そのような核酸は、当技術分野で周知であり、公に入手可能である。本発明の態様において、ヒトマイクロＲＮＡ−１４５、プリ−ｍｉＲ１４５、プレ−ｍｉＲ１４５、マイクロＲＮＡ−９２ａ、プリ−ｍｉＲ９２ａまたはプレ−ｍｉＲ９２ａ配列は、ベクターにおいて用いられる。マイクロＲＮＡ−９２ａ−３ｐとも称されるヒトマイクロＲＮＡ−９２ａの成熟配列は、次のとおりである：
（配列番号１） ５’−ＵＡＵＵＧＣＡＣＵＵＧＵＣＣＣＧＧＣＣＵＧＵ−３’
【００２０】
マイクロＲＮＡ−１４５−５ｐとも称されるヒトマイクロＲＮＡ−１４５の成熟配列は、次のとおりである：
（配列番号２） ５’−ＧＵＣＣＡＧＵＵＵＵＣＣＣＡＧＧＡＡＵＣＣＣＵ−３’
【００２１】
野生型マイクロＲＮＡ−１４５およびマイクロＲＮＡ−９２ａをコードする核酸に加えて、該核酸の変異体もまた、本発明の方法に用いられ得る。かかる変異体は、例えば、細胞内のマイクロＲＮＡの局在に影響を与え得る。かかる変異体は、細胞質局在性の増加と共にマイクロＲＮＡの各局在化の減少をもたらし得る。本発明の一面において、マイクロＲＮＡ−１４５およびマイクロＲＮＡ−９２ａ模倣体はまた、アンジェルマン症候群の処置のために用いられ得る。かかる模倣体は、市販されている（例えば、Sigma Aldrichを参照）。
【００２２】
当業者に知られている何れかの好適な発現ベクターを利用して、本明細書に記載のマイクロＲＮＡを中枢神経系の細胞内の標的位置に送達し得る。このような送達により、標的位置の細胞がマイクロＲＮＡでトランスフェクトされ、それにより、患者の脳内のそれらのマイクロＲＮＡのレベルが増加する。形質導入ウイルス（例えば、レトロウイルス、アデノウイルス、レンチウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）ベクターは、特に感染効率が高く、安定的に組み込まれ発現されるために、体細胞遺伝子療法に用いられ得る。
【００２３】
いくつかの態様において、発現ベクターは、安定な挿入ベクターであっても安定な非挿入ベクターであってもよい。適切なベクターの例は、レンチウイルスおよびアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである。レンチウイルスは、レトロウイルスのサブクラスである。レンチウイルスは、ニューロンなどの非分裂細胞のゲノムに挿入することができる。レンチウイルスは、高効率の感染、導入遺伝子の長期の安定的発現および低い免疫原性という特徴を有する。いくつかの態様において、レンチウイルスベクターを利用して、マイクロＲＮＡを脳に送達し得る。
【００２４】
ＡＡＶは、多くの細胞タイプに感染することが知られている欠損性パルボウイルスであり、ヒトに対して非病原性である。ＡＡＶは、分裂細胞および非分裂細胞の両方に感染し得る。いくつかの態様において、ＡＡＶベクターを本発明で利用して、マイクロＲＮＡを脳に送達してもよい。既知のアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）のいずれかを本発明で利用することができ、例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９およびＡＡＶＲｅｃ３を、ニューロンに関連して利用することができる。本明細書に記載の方法で用いるためのＡＡＶベクターには、引用によりその内容全体を本明細書に包含させる米国出願番号米国仮特許出願第６２／５５０，４５８号に記載されているものが含まれる。適した追加的なＡＡＶ血清型(セロタイプ）は、シュードタイピング、すなわち、異なるウイルスセロタイプ由来のカプシドおよびゲノムを混合することによって開発された。従って、例えば、ＡＡＶ２／７とは、セロタイプ７由来のカプシドにパッケージングされたセロタイプ２のゲノムを含むウイルスを示す。他の例は、ＡＡＶ２／５、ＡＡＶ２／８、ＡＡＶ２／９などである。ハイブリッドＡＡＶカプシドセロタイプｒｅｃ１、ｒｅｃ２、ｒｅｃ３およびｒｅｃ４は、３つ全ての非ヒト霊長動物ＡＡＶセロタイプｃｙ５、ｒｈ２０およびｒｈ３９においてＡＡＶ８に合致するカプシド配列の断片をシャッフリングすることによって作成された。Charbel et al., PLoS One. 2013 Apr 9;8(4):e60361を参照のこと。用語ｒｅｃ３ＡＡＶおよびＡＡＶＲｅｃ３は、本明細書中互換的に用いられ得る。自己相補的なアデノ随伴ウイルス（ｓｃＡＡＶ）もベクターとして利用できる。ＡＡＶが、ＤＮＡの一本鎖をパッケージングし、第二鎖合成のプロセスを必要とするのに対し、ｓｃＡＡＶは、互いにアニーリングして二本鎖ＤＮＡを形成する両方の鎖をパッケージングしている。第二鎖合成を省略することにより、ｓｃＡＡＶは、細胞内での迅速な発現を可能にする。
【００２５】
適切なベクターは、既知の技術を用いて当業者によって構築され得る。適切なベクターは、マイクロＲＮＡに加えて適切な調節配列を含有して選択または構築することができ、そのような調節配列としては、プロモーター配列、ターミネーターフラグメント、ポリアデニル化配列、マーカー遺伝子および他の適当な配列が挙げられる。当業者は、プロモーター配列、ターミネーターフラグメント、ポリアデニル化配列、マーカー遺伝子および他の適当な配列を含む、適当な調節配列に精通している。
【００２６】
本発明の発現ベクターは、標的宿主細胞においてその発現を促進するための、コード配列またはＯＲＦに作動可能に連結された好適な配列を含む。“作動可能に連結された”配列には、コード配列に隣接するプロモーターなどの発現制御配列およびトランスまたは遠位に作用して所望の産物の発現を調節する発現制御配列の両方が含まれる。
【００２７】
一般的には、ベクターは、標的細胞内のマイクロＲＮＡの発現を促進するためのプロモーターを含む。プロモーターは、脳内の選択された導入遺伝子の発現を駆動することができる多数の構成的プロモーターまたは誘導性プロモーターから選択されてもよい。構成的プロモーターの例としては、ＣＭＶ即時型初期エンハンサー（immediate early enhancer）／ニワトリベータアクチン（ＣＢＡ）プロモーター−エクソン１−イントロン１因子、ＲＳＶ ＬＴＲプロモーター／エンハンサー、ＳＶ４０プロモーター、ＣＭＶプロモーター、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）プロモーターおよびホスホグリセロールキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターが挙げられる。
【００２８】
特異性は、例えば、組織特異的または領域特異的なプロモーターを用いて、受容体の局所的および細胞型特異的発現によってのみ達成することができる。ウイルス遺伝子プロモーター因子は、マイクロＲＮＡを発現する細胞のタイプを決定するのに役立ち得る。いくつかのプロモーターは、非特異的であり（例えば、ＣＡＧ、合成プロモーター）、他のプロモーターは、ニューロン特異的である。ＣＡＧプロモーターは、高レベルの発現を駆動するために用いられ得る強力な合成プロモーターである。ＣＡＧプロモーターは、１）サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）初期エンハンサー因子、２）ニワトリベータアクチン遺伝子のプロモーター、第一エクソンおよび第一イントロン、ならびに３）ウサギベータグロビン遺伝子のスプライシングアクセプターから構成される。いくつかの態様において、プロモーターはＣＡＧプロモーターである。ニューロン特異的プロモーターは、（例えば、シナプシン、ｈＳｙｎ）を含むか、または特定のニューロン型に優先的（preferential）であり、例えば、ダイノルフィン、エンケファリン（encephalin）、星状膠細胞に優先的なＧＦＡＰ（グリア線維性酸性タンパク質）、または皮質グルタミン酸作動性細胞に優先的であるが皮質下のＧＡＢＡ作動性細胞を標的とすることもできるＣａＭＫＩＩａが含まれる。いくつかの態様において、プロモーターは、ＣａｍｋＩＩａ（アルファＣａＭキナーゼＩＩ遺伝子）プロモーターであり、これは前脳における発現を駆動し得る。他の神経細胞型特異的プロモーターとしては、ＮＳＥプロモーター、チロシンヒドロキシラーゼプロモーター、ミエリン塩基性タンパク質プロモーター、グリア線維性酸性タンパク質プロモーターおよびニューロフィラメント遺伝子（重鎖、中鎖、軽鎖）プロモーターが挙げられる。
【００２９】
発現制御配列としては、適切な転写開始配列、終結配列およびエンハンサー配列；スプライシングシグナルおよびポリアデニル化シグナルなどの効率的なＲＮＡプロセッシングシグナル；細胞質ｍＲＮＡを安定化する配列；翻訳効率を増強する配列（例えばＫｏｚａｋコンセンサス配列）；核酸またはタンパク質の安定性を増強する配列；ならびに、所望により、産物のプロセッシングおよび／または分泌を増強する配列が挙げられ得る。天然および非天然の、構成的、誘導性ならびに／または組織特異的なものを含む多くの様々な発現制御配列が、当技術分野で知られており、所望の発現タイプに応じて本発明で利用され得る。
【００３０】
プロモーターに加えて、真核細胞の発現制御配列としては、一般的には、免疫グロブリン遺伝子、ＳＶ４０、ＣＭＶなどに由来するものなどのエンハンサー、ならびにスプライスドナーおよびアクセプター部位を含み得るポリアデニル化配列が挙げられる。ポリアデニル化配列は、一般に、コード配列の３’側および３’ＩＴＲ配列の５’側に挿入される。本発明のベクターで用いられ得るポリＡシグナルの例示的な例としては、ポリＡ配列（例えば、ＡＡＴＡＡＡ、ＡＴＴＡＡＡまたはＡＧＴＡＡＡ）、ウシ成長ホルモンポリＡ配列（ＢＧＨｐＡ）、ウサギベータグロビンポリＡ配列（ｒβｇｐＡ）または当技術分野で知られている別の適切な異種または内因性のポリＡ配列が挙げられる。
【００３１】
本発明に有用な調節配列は、プロモーター／エンハンサー配列とコード配列との間に位置するものなど、イントロンを含有してもよい。１つの有用なイントロン配列は、ＳＶ４０に由来し、ＳＶ４０ Ｔイントロン配列と称される。もう１つには、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後因子（ＷＰＲＥ）が挙げられる。ＷＰＲＥは、転写されると、発現を増強する三次構造を作り出すＤＮＡ配列である。
【００３２】
本明細書に記載のベクターは、レポーター遺伝子、例えば、フルオロフォアをコードするものを含有してもよい。フルオロフォアは、通常は特定の周波数で、励起時に光を再放出できる蛍光化合物である。それらは、例えば、タンパク質に付着してそのタンパク質の位置を特定することができるタグまたはマーカーとして用いることができる。多くの適切なフルオロフォアが当技術分野で知られている。それらは、発色する色、例えば青色、シアン、緑、黄色、オレンジ、赤などにより分類され得る。例えば、ｍＣｈｅｒｒｙ、ｍＲａｓｂｅｒｒｙ、ｍＴｏｍａｔｏおよびｍＲｕｂｙは赤色フルオロフォアタンパク質であり、シトリン、ヴィーナスおよびＥＹＦＰは黄色フルオロフォアタンパク質である。緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）は、一般的に用いられるフルオロフォアである。
【００３３】
本明細書に記載のマイクロＲＮＡは、発現ベクター様式により送達されるかまたは非発現ベクター様式により送達されるかにかかわらず、アンジェルマン症候群を処置するために用いられる。アンジェルマン症候群の症状には、知的障害、発話の欠如、発作および特徴的な行動プロファイルが含まれるが、これらに限定されない。アンジェルマン症候群の行動的特徴には、幸福表情（happy demeanor）、容易に誘発される笑い（easily provoked laughter）、狭小注意力（short attention span）、過運動性行動（hypermotoric behavior）、ものを口に入れる行動（mouthing of objects）、睡眠障害および水への親和性（affinity for water）が含まれる。本発明の処置方法は、上記の症状の１以上を改善することを含み得る。
【００３４】
特定の態様において、アンジェルマン症候群に至る遺伝的欠陥を担持することが疑われる患者は、そのような欠陥の存在を検出し、確認するために、処置前に検査され得る。一例において、患者は、ＵＢＥ３Ａ遺伝子の欠陥を検出するために試験され得る。分子遺伝子検査（メチル化検査およびＵＢＥ３Ａ配列分析）は、約９０％の個体の変異を特定することができる。
【００３５】
患者のアンジェルマン症候群に関連する異常な活動の位置または疑いのある位置の決定が行われると、本明細書に記載の標的化処置を実施することができる。脳内またはさらに影響を受けた神経組織内の異常な活動の位置を決定する方法は、当技術分野で周知である。いくつかの態様において、異常な活動の起源の部位であると決定された領域を標的にすることができる。
【００３６】
いくつかの態様において、本明細書に記載のベクターは、中枢神経系、例えば、脳または脊髄に直接投与される。ベクターを中枢神経系に直接投与するための当技術分野で知られている何れかの方法を用いることができる。ベクターは、脊髄、脳幹（髄質オブロンガータ、橋（pons））、中脳（視床下部、視床、上視床、下垂体腺、大脳基底核、松果体腺）、小脳、終脳（線条体、後頭を含む大脳、側頭、頭頂葉および前頭葉、皮質、大脳基底核、海馬および偏桃体）、大脳辺縁系、新皮質、線条体、大脳ならびに下丘(inferior colliculus）に導入することができる。ベクターは、例えば腰椎穿刺によって脳脊髄液に送達され得る。さらに、投与が静脈内に行われるとき、超音波を患者の脳内の標的位置に適用して、ベクターの取り込みのための標的位置での患者の血液脳関門の透過性を高めることができる。患者の血液脳関門の透過性を高めるための超音波の適用は、特許出願番号６２／４７１，６３５明細書に開示されており、その内容全体は、引用により本明細書に包含される。
【００３７】
脳などの標的位置に直接的に物質を投与する方法は周知である。例えば、穴、例として穿頭孔を、頭蓋骨にドリルで穿つことができ、適当にサイズ調整された針を用いて、ベクターまたは非ベクタービークルを標的位置に送達してもよい。いくつかの態様において、頭蓋骨の一部は、標的位置でまたはその近くで硬膜物質を露出させるために除去されてもよく（開頭術）、ベクターまたは非ベクタービークルは、標的位置に直接的に投与され得る。いくつかの態様において、ベクターまたは非ベクタービークルは、周囲組織への損傷を最小限にして所望の領域にベクターまたは非ベクタービークルを正確に送達するために、定位脳座標系、マイクロピペットおよび自動ポンプを用いて頭蓋内に注入される。
【００３８】
いくつかの態様において、マイクロポンプを利用して、マイクロＲＮＡを含むベクターまたは非ベクタービークルを含有する医薬組成物を脳内の標的領域に送達し得る。組成物は、即時に、または長時間にわたって、例えば１分間、２分間、３分間、４分間、５分間、６分間、７分間、８分間、９分間、１０分間またはそれ以上にわたって、送達され得る。脳内の標的位置へのベクター送達の後、十分な時間が経過することにより、標的位置におけるマイクロＲＮＡの発現が可能となる。
【００３９】
特定の面において、本発明におけるベクターまたは非ベクター送達ビークルは、全身に投与され得る。全身送達には、経口、口腔内、舌下、直腸、局所的、鼻腔内、経膣および非経腸の投与様式が含まれる。非経腸投与様式の例としては、静脈内、腹腔内、筋肉内および皮下の投与様式が挙げられる。いくつかの態様において、ベクターまたは非ベクター送達ビークルは、マイクロＲＮＡを送達する脳を含むＣＮＳ内の標的位置に接触するまで、またはマイクロＲＮＡを発現させて、例えば、ネットワーク形成を助けるおよび／もしくはニューロンシグナル伝達ネットワークを調節するように作用させるまで、循環し得る。
【００４０】
マイクロＲＮＡは、患者のアンジェルマン症候群に対して有効な量で用いられる。有効成分の投与量は、患者の年齢、体重および個々の状態、個々の薬物動態データならびに投与様式によって変わる。体重約７０ｋｇのヒト個体の場合、マイクロＲＮＡの１日投与量は、体重１ｋｇ当たり０．０１ｍｇから１００ｍｇまで、例えば、体重１ｋｇ当たり０．１ｍｇから５０ｍｇまで、体重１ｋｇ当たり１ｍｇから２０ｍｇまでを、単回用量または複数回用量として投与することができる。
【００４１】
いくつかの態様において、超音波による処置が、血管脳関門を破壊することにより脳内の標的位置へのマイクロＲＮＡの送達を増強するために用いられる。本発明における集束超音波エネルギーの使用は、ベクター、非ベクター送達ビークル、マイクロＲＮＡおよび／または脳組織自体に悪影響を及ぼすことなく、ＢＢＢを破壊する。本発明における超音波エネルギーの使用は、脳内の標的位置へのベクター、非ベクター送達ビークルおよび／またはマイクロＲＮＡの送達速度を増加させ、脳内の標的位置へのベクター、非ベクター送達ビークルおよび／またはマイクロＲＮＡの送達に関連し得る副作用を低減させ、標的位置にベクター、非ベクター送達ビークルおよび／またはマイクロＲＮＡを濃縮するとともに投与量を低減させることができ、かつ標的位置でのベクター、非ベクター送達ビークルおよび／またはマイクロＲＮＡの量の制御放出を可能にする。頭蓋骨を通して超音波エネルギーを送達する方法は、当技術分野で知られている。例えば、米国特許第５，７５２，５１５号および米国特許出願公開第２００９／０００５７１１号を参照のこと（両文献の内容全体はそれぞれ、引用により本明細書に包含される）。Hynynen et al., NeuroImage 24 (2005) 12-120も参照のこと。
【００４２】
本開示によれば、マイクロＲＮＡ処置は、患者への投与後１時間以上にわたって、アンジェルマン症候群の１以上の症状の改善をもたらす。いくつかの態様において、マイクロＲＮＡ処置は、患者への投与後２時間以上にわたって、上記障害の１以上の症状の改善をもたらす。いくつかの態様において、マイクロＲＮＡ処置は、患者への投与後３時間以上にわたって、上記障害の１以上の症状の改善をもたらす。いくつかの態様において、マイクロＲＮＡ処置は、患者への投与後４時間以上にわたって、上記障害の１以上の症状の改善をもたらす。いくつかの態様において、マイクロＲＮＡ処置は、患者への投与後６時間以上にわたって、上記障害の１以上の症状の改善をもたらす。いくつかの態様において、マイクロＲＮＡ処置は、患者への投与後８時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間または２４時間にわたって、上記障害の１以上の症状の改善をもたらす。いくつかの態様において、本明細書の記載に従って、患者への投与後１２時間にわたって、少なくとも１つの症状の改善をもたらす。いくつかの態様において、マイクロＲＮＡ処置は、患者の翌日機能の改善をもたらす。例えば、マイクロＲＮＡは、投与後約２時間を超えて、約４時間を超えて、約６時間を超えて、約８時間を超えて、約１０時間を超えて、約１２時間を超えて、約１４時間を超ええ、約１６時間を超えて、約１８時間を超えて、約２０時間を超えて、約２２時間を超えて、または約２４時間を超えて、および一晩睡眠から起床後に、上記障害の１以上の症状の改善をもたらし得る。
【００４３】
いくつかの態様において、本明細書に記載の方法は、アンジェルマン症候群の１以上の他の臨床症状を軽減、遅延または予防するために有効である。例えば、脳を含む中枢神経系の標的位置におけるマイクロＲＮＡ処置の患者における効果が、未処置患者または処置前の患者の状態と比較され得る。いくつかの態様において、症状、薬理学的指標および／または生理学的指標は、処置前に患者で測定され、処置が開始された後に１回以上繰り返される。いくつかの態様において、対照は、処置される疾患または病状のない１人以上の患者（例えば健康な患者）の症状、薬理学的指標または生理学的指標の測定に基づいて決定される、対照レベルまたは平均である。いくつかの態様において、処置前の脳組織中のｍｉＲ−１４５および／またはｍｉＲ−９２ａの量は、処置後の脳組織中のｍｉＲ−１４５および／またはｍｉＲ−９２ａの量と比較される。いくつかの態様において、処置の効果は、当業者の技術範囲内にある従来の処置と比較される。
【００４４】
本明細書に記載のアンジェルマン症候群の有効な治療は、ベースラインと比較して、一定の期間後の症状の頻度または重症度の（例えば、１０％を超える、２０％を超える、３０％を超える、４０％を超えるまたは５０％を超える）軽減を示すことによって、確立され得る。例えば、１ヶ月のベースライン期間後、マイクロＲＮＡ処置を受けている患者は、２ヵ月の二重盲検期間中、標準療法に対する追加療法として、プラセボを無作為に割り当てられる場合がある。主要評価項目の測定は、ベースラインと比較して、二重盲検期間の２ヶ月目の間に、症状が少なくとも１０％〜５０％軽減したとして定義される、マイクロＲＮＡおよびプラセボでの応答者（responder）の割合を含み得る。
【００４５】
いくつかの態様において、ベクター、非ベクター送達ビークルおよび／またはマイクロＲＮＡを含む医薬組成物は、従来の放出プロファイルまたは改変された放出プロファイルを付与されてもよい。医薬組成物は、安全かつ有効であると考えられる材料から構成される薬学的に許容される“担体”を用いて調製され得る。“担体”は、有効物質または有効成分以外の医薬製剤中に存在する全ての構成要素を含む。用語“担体”には、希釈剤、結合剤、潤滑剤、崩壊剤、充填剤およびコーティング組成物が含まれるが、これらに限定されない。当業者は、そのような医薬担体およびそのような担体を用いる医薬組成物を配合する方法に精通している。
【００４６】
いくつかの態様において、ベクター、非ベクター送達ビークルおよび／またはマイクロＲＮＡを含む医薬組成物は、例えば、筋肉内（i.m.）、静脈内（i.v.）、皮下（s.c.）、腹腔内（i.p.）または髄腔内（i.t.）を含む、非経腸投与に適している。非経腸組成物は、注射、点滴または体内への移植による投与のために滅菌される必要があり、単回投与または複数回投与のいずれかの容器に包装され得る。いくつかの態様において、患者への非経腸投与のための液体医薬組成物は、有効物質、例えば、ベクター、非ベクター送達ビークルおよび／またはマイクロＲＮＡを、上記に記載された任意のそれぞれの量で含む。いくつかの態様において、非経腸投与のための医薬組成物は、総量で、例えば約０．１ｍｌ、約０．２５ｍｌ、約０．５ｍｌ、約０．７５ｍｌ、約１ｍｌ、約１．２５ｍｌ、約１．５ｍｌ、約１．７５ｍｌ、約２ｍｌ、約２．２５ｍｌ、約２．５ｍｌ、約２．７５ｍｌ、約３ｍｌ、約３．２５ｍｌ、約３．５ｍｌ、約３．７５ｍｌ、約４ｍｌ、約４．２５ｍｌ、約４．５ｍｌ、約４．７５ｍｌ、約５ｍｌ、約１０ｍｌ、約２０ｍｌ、約２５ｍｌ、約５０ｍｌ、約１００ｍｌ、約２００ｍｌ、約２５０ｍｌまたは約５００ｍｌとして製剤される。いくつかの態様において、発現ベクターを含む医薬組成物の体積は、マイクロリットル量である。例えば、０．１マイクロリットル〜１０マイクロリットル以上を注射することができる。例えば、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．２５、１．５、１．７５、２．０、２．２５、２．５、２．７５、３．０、３．２５、３．５、３．７５、４．０、４．２５、４．５、４．７５、５．０、５．２５、５．５、５．７５、６．０、６．２５、６．５、６．７５、７．０、８．２５、８．５、８．７５、９．０、９．２５、９．５、９．７５または１０マイクロリットルである。いくつかの態様において、組成物は、マイクロピペット、バッグ、ガラスバイアル、プラスチックバイアルまたはボトルに収められる。
【００４７】
いくつかの態様において、非経腸投与のための医薬組成物は、上記に記載のそれぞれの量を含む。いくつかの態様において、非経腸投与のための医薬組成物は、約０．０００１ｍｇ〜約５００ｍｇの有効物質、例えば、ベクター、非ベクター送達ビークルおよび／またはマイクロＲＮＡを含む。いくつかの態様において、患者への非経腸投与のための医薬組成物は、有効物質、例えば、ベクター、非ベクター送達ビークルおよび／またはマイクロＲＮＡを、約０．００１ｍｇ／ｍｌ〜約５００ｍｇ／ｍｌのそれぞれの濃度で含む。いくつかの態様において、非経腸投与のための医薬組成物は、有効物質をそれぞれの濃度で、例えば、約０．００５ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約０．０５ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌ、約０．０５ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約０．０５ｍｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌまたは約０．０５ｍｇ／ｍｌ〜約１ｍｇ／ｍｌで含む。いくつかの態様において、非経腸投与のための医薬組成物は、有効物質をそれぞれの濃度で、例えば、約０．０５ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約０．２５ｍｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約７ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌまたは約５ｍｇ／ｍｌ〜約１５ｍｇ／ｍｌで含む。
【００４８】
いくつかの態様において、医薬組成物が少なくとも６ヶ月間安定である、非経腸投与のための医薬組成物が提供される。いくつかの態様において、非経腸投与のための医薬組成物は、少なくとも、例えば、３ヶ月間または６ヶ月間、有効物質の最大で約５％の減少を示す。いくつかの態様において、ベクターまたは非ベクタービークルの量は、例えば、最大で約２．５％、約１％、約０．５％または約０．１％が分解される。いくつかの態様において、この分解は、少なくとも６ヶ月間、例えば、約５％未満、約２．５％未満、約１％未満、約０．５％未満、約０．２５％未満、約０．１％未満である。
【００４９】
いくつかの態様において、医薬組成物が可溶性のままである、非経腸投与のための医薬組成物が提供される。いくつかの態様において、安定であり、可溶性であり、局所的な部位適合性であり、および／または即時使用可能である、非経腸投与のための医薬組成物が提供される。いくつかの態様において、本発明の医薬組成物は、それを必要とする患者への直接投与のためにすぐに使用可能である。
【００５０】
本明細書に記載の非経腸投与のための医薬組成物は、１以上の賦形剤、例えば溶媒、溶解促進剤、懸濁剤、緩衝剤、等張剤、安定剤または抗菌性保存剤を含んでいてよい。使用される場合、非経腸組成物の賦形剤は、組成物で用いられるベクター、非ベクター送達ビークルおよび／またはマイクロＲＮＡの安定性、生物学的利用能、安全性および／または有効性に悪影響を及ぼさない。したがって、剤形の構成要素のいずれにも不適合性のない非経腸組成物が提供される。
【００５１】
いくつかの態様において、ベクター、非ベクター送達ビークルおよび／またはマイクロＲＮＡを含む非経腸組成物は、安定化量の少なくとも１つの賦形剤を含む。例えば、賦形剤は、緩衝剤、可溶化剤、等張剤、抗酸化剤、キレート剤、抗菌剤および防腐剤からなる群より選択され得る。当業者は、賦形剤が２以上の機能を有し、１以上の定義された群に分類され得ることを理解し得る。
【００５２】
いくつかの態様において、非経腸組成物は、ベクター、非ベクター送達ビークルおよび／またはマイクロＲＮＡならびに賦形剤を含み、ここで、該賦形剤は、例えば、約１０％未満、約５％未満、約２．５％未満、約１％未満または約０．５％未満の重量パーセント（ｗ／ｖ）で存在する。いくつかの態様において、賦形剤は、例えば、約１．０％〜約１０％、約１０％〜約２５％、約１５％〜約３５％、約０．５％〜約５％、約０．００１％〜約１％、約０．０１％〜約１％、約０．１％〜約１％または約０．５％〜約１％の重量パーセントで存在する。いくつかの態様において、賦形剤は、例えば、約０．００１％〜約１％、約０．０１％〜約１％、約１．０％〜約５％、約１０％〜約１５％または約１％〜約１５％の重量パーセントで存在する。
【００５３】
いくつかの態様において、非経腸組成物は、必要に応じて、例えば、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、１日５回、１日６回もしくはそれ以上の回数で、または患者の必要性に応じて連続的に、投与することができる。
【００５４】
いくつかの態様において、有効物質の非経腸組成物が提供され、ここで、該組成物のｐＨは約４．０〜約８．０の間である。いくつかの態様において、組成物のｐＨは、例えば、約５．０〜約８．０、約６．０〜約８．０、約６．５〜約８．０の間である。いくつかの態様において、組成物のｐＨは、例えば、約６．５〜約７．５、約７．０〜約７．８、約７．２〜約７．８または約７．３〜約７．６の間である。いくつかの態様において、水溶液のｐＨは、例えば、約６．８、約７．０、約７．２、約７．４、約７．６、約７．７、約７．８、約８．０、約８．２、約８．４または約８．６である。
【００５５】
他に特に定義されない限り、本明細書で用いる全ての技術用語および科学用語は、本発明の記載が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。
【００５６】
本明細書で用いる用語“約”または“およそ”は、当業者によって決定される特定の値についての許容誤差範囲内であり、この範囲は、部分的には、値がどのように測定または決定されるか、すなわち測定システムの限界に依存し得る。例えば、“約”は、当技術分野における慣行に従って、３以内または３を超える標準偏差を意味し得る。あるいは、“約”は、所与の値の最大２０％、最大１０％、最大５％および／または最大１％までの範囲を意味し得る。あるいは、特に生物学的システムもしくはプロセスに関しては、この用語は、値の１桁以内、好ましくは５倍以内、より好ましくは２倍以内であることを意味し得る。
【００５７】
“改善”とは、アンジェルマン症候群の処置を意味する。
【００５８】
“翌日の機能の改善”または“翌日の機能の改善がある”とは、一晩の睡眠時間から起床した後の改善を意味し、ここで、患者へのマイクロＲＮＡ治療剤の投与の有益な効果が、本発明における症候群または障害の少なくとも１つの症状に適用され、患者によって主観的にまたは観察者によって客観的に、ある期間にわたって、例えば、起床後２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、１２時間、２４時間などにわたって、認識できる。
【００５９】
“処置すること”、“処置”または“処置する”とは、以下を意味し得る：疾患または病状に罹患するかまたは罹りやすい可能性があるが、疾患または病状の臨床症状もしくは無症状を依然として経験または提示していない患者において、該疾患または病状の臨床症状の出現を緩和するかまたは遅延させること。特定の態様において、“処置すること”、“処置”または“処置する”とは、疾患または病状に罹患するかまたは罹りやすい可能性があるが、疾患または病状の臨床症状または無症状を依然として経験または提示していない患者において、該疾患または病状の臨床症状の出現を予防することを意味する。また、“処置すること”、“処置”または“処置する”とは、疾患または病状を阻害すること、例えば、その進行または少なくとも１つのそれらの臨床症状もしくは無症状を阻止または軽減（遅延）することを意味する。“処置すること”、“処置”または“処置する”とは、さらに、疾患または病状を緩和すること、例えば、その疾患または病状の退行、またはその臨床症状もしくは無症状の少なくとも１つの退行を引き起こすことを意味する。処置される患者への利益は、統計的に有意であるか、数学的に有意であるか、または患者および／もしくは医師に少なくとも知覚できるものであり得る。それにもかかわらず、予防的（防止的）処置と治療的（治癒的）処置とは、本明細書に記載の２つの別個の態様である。
【００６０】
“薬学的に許容される”とは、“一般的に安全であるとみなされる”、例えば、ヒトに投与された際に、生理学的に耐容性があり、一般的にはアレルギーもしくは同様の有害な反応、例えば胃の不調などを生じない、分子および組成物を意味する。いくつかの態様において、この用語は、連邦政府または州政府の規制当局により承認された分子および組成物であり、それらは、ＦＤＡによる市販前審査および承認に付される米国連邦食品・医薬品・化粧品法の第２０４（ｓ）条および４０９条に基づくＧＲＡＳリスト、または同様のリスト、米国薬局方または動物、特にヒトで用いるための一般的に認められている他の薬局方にある通りである。
【００６１】
“有効量”または“治療的有効量”は、処置されている症候群、障害、疾患もしくは病状の１以上の症状を軽減するために、あるいは所望の薬理学的および／もしくは生理的な効果を提供するために、十分な投与量を意味し得る。“有効量”または“治療的有効量”は、本明細書中で互換的に用いられ得る。
【００６２】
“同時投与”、“併用投与”、“〜との組合せ”または“〜と併せて投与される”は、互換的に用いられてよく、２以上の薬剤が治療の過程で投与されることを意味する。薬剤は、同時に投与されてもよいし、別個に間隔を空けて投与されてもよい。薬剤は、単一剤形で投与されてもよいし、別個の剤形で投与されてもよい。
【００６３】
“それを必要とする患者”としては、アンジェルマン症候群と診断された個体、例えば、ヒト、イヌ、ネコ、ブタ、齧歯動物などの哺乳動物を挙げることができる。方法は、以下を含む任意の個体に提供されてよく、例えば、患者は、新生児、乳児、小児患者（６ヶ月から１２歳）、青年患者（１２〜１８歳）または成人（１８歳以上）である。患者には哺乳動物が含まれる。そのような患者には、例えば、Ｕｂｅ３ａ遺伝子の遺伝的欠陥を有すると診断された患者が含まれる。
【００６４】
“プロドラッグ”とは、不活性の（または著しく活性の低い）形態で患者に投与される薬理学的物質（薬物）を意味する。投与されると、プロドラッグは、体内で（インビボで）代謝されて、所望の薬理活性を有する化合物になる。
【００６５】
“類縁体”および“誘導体”は、互換的に用いられてもよく、親化合物と同じコアを有する化合物を意味するが、結合順序、１以上の原子および／または原子群の有無、ならびにそれらの組み合わせで異なっていてよい。エナンチオマーは誘導体の例である。誘導体は、例えば、１以上の原子、官能基または部分構造を含み得るコア上に存在する１以上の置換基において、親化合物とは異なっていてよい。一般的に、誘導体は、少なくとも理論的には、化学的プロセスおよび／または物理的プロセスを介して親化合物から形成されるものと思われ得る。
【００６６】
本明細書で用いる用語“薬学的に許容される塩”は、本明細書で定義される化合物の誘導体を意味し、ここで、親化合物は酸性塩または塩基性塩を作製することにより修飾される。薬学的に許容される塩の例としては、無機塩基との非毒性の塩基付加塩が挙げられるが、これに限定されない。アルカリおよびアルカリ土類金属塩基などの適切な無機塩基としては、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどの金属カチオンが挙げられる。薬学的に許容される塩は、従来の化学的方法によって親化合物から合成され得る。
【００６７】
本明細書に記載の実施例および態様は、例示的な実施例および態様であることが理解されるべきである。当業者は、本明細書の記載の範囲と一致する実施例および態様の様々な改変を想定し得る。このような改変は、特許請求の範囲に包含されることが意図されている。
【配列表】
2021527087000001.app
【国際調査報告】
2021527087.tif 000002
2021527087.tif 000003