(57)【要約】  本発明は、癌の治療に使用するためのＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１阻害剤と組み合わせた、ＣＬＥＶＥＲ−１に結合可能な薬剤に関する。
2021527672.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療有効量の
（ａ）Ｃｌｅｖｅｒ−１に結合可能な薬剤と、
（ｂ）ＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１阻害剤と、の組み合わせであって、
ＰＤ−Ｌ１の発現を示さない、もしくは低発現を示し、かつ／またはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤単独では応答しない、もしくはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤に対して限定された応答性のみを示す腫瘍を有すると診断された個体における癌の治療における使用のための、組み合わせ。
【請求項２】
Ｃｌｅｖｅｒ−１に結合可能な前記薬剤が、抗体またはその断片、ペプチド（複数可）、巨大分子、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の癌の治療における使用のための組み合わせ。
【請求項３】
前記ＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１阻害剤が、ＰＤ−Ｌ１とその受容体ＰＤ−１との間の相互作用を遮断可能な抗体またはその断片を含む、請求項１または２に記載の癌の治療における使用のための組み合わせ。
【請求項４】
個体における悪性腫瘍成長を低減することによって、および／または転移形成を阻害することによって、癌を治療することにおける使用を特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の癌の治療における使用のための組み合わせ。
【請求項５】
Ｃｌｅｖｅｒ−１に結合可能な前記薬剤が、ＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１阻害剤（複数可）の前に個体に投与される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の癌の治療における使用のための組み合わせ。
【請求項６】
Ｃｌｅｖｅｒ−１に結合可能な前記薬剤が、ＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１阻害剤と同時に個体に投与される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の癌の治療における使用のための組み合わせ。
【請求項７】
前記腫瘍が、前記腫瘍の試料中に存在する生存腫瘍細胞の１％未満および／または１〜５０％でＰＤ−Ｌ１発現を示す、請求項１〜６のいずれか１項に記載の癌の治療における使用のための組み合わせ。
【請求項８】
前記腫瘍が、高マクロファージ浸潤、低変異負荷、および／または低Ｔ細胞浸潤をさらに示す、請求項１〜７のいずれか１項に記載の癌の治療における使用のための組み合わせ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌の治療に使用するためのＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１阻害剤と組み合わせた、Ｃｌｅｖｅｒ−１（ＣＬＥＶＥＲ−１）に結合可能な薬剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ほとんどの癌細胞に固有の膨大な数の遺伝子およびエピジェネティック変化は、宿主免疫系が認識することができる多くの腫瘍関連抗原を提供し、それによって特異的な免疫耐性機構を腫瘍が発現させることを要求する。重要な免疫耐性機構は、通常は免疫耐性を媒介し、かつ付帯組織損傷を軽減する免疫チェックポイントと称される免疫阻害経路を伴う。特に重要な免疫チェックポイント受容体は、Ｔ細胞活性化の振幅をダウンモジュレートする細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ４）である。癌のマウスモデルにおけるＣＴＬＡ４の抗体遮断は抗腫瘍免疫を誘発した。プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ１）などの一部の免疫チェックポイント受容体は、組織内のＴ細胞エフェクター機能を制限する。ＰＤ１のリガンドをアップレギュレートすることにより、腫瘍細胞は、腫瘍微小環境における抗腫瘍免疫応答を遮断する［１］。
【０００３】
現在、ＣＴＬＡ−４およびＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１軸を標的とする免疫チェックポイントモジュレーターは、臨床使用のために承認されており、メラノーマおよび特定の他の腫瘍を有する患者の約１０〜２０％において高い有効性を有するが、いくつかの他の重要な癌種（例えば、前立腺癌、乳癌および結腸直腸癌）は、それらに対して不応性のままである［２］。チェックポイント阻害に良好に応答する患者は、通常、高密度のＩＦＮγ産生ＣＤ８+  Ｔ細胞、腫瘍浸潤免疫細胞におけるＰＤ−Ｌ１の発現、および高い変異負荷を特徴とする既存の抗腫瘍免疫応答を有する。免疫チェックポイント遮断に応答しない腫瘍は、Ｔ細胞の腫瘍への浸潤（ＴＩＬ）または腫瘍微小環境（ＴＭＥ）におけるＴ細胞の活性化が免疫抑制性間質区画によって抑制される間質Ｔ細胞表現型、または低Ｔ細胞浸潤、変異負荷および腫瘍細胞の高増殖を特徴とする非炎症性表現型のいずれかを示す。腫瘍は、腫瘍浸潤細胞傷害性ＣＤ８  Ｔ細胞の存在に基づいて免疫学的に分類することができる（炎症性−非炎症性）［３］。炎症を起こした腫瘍は、高い変異負荷、高いＩＦＮγおよびＰＤ−Ｌ１発現を示し、免疫チェックポイント遮断療法に良好に応答する。
【０００４】
難治性腫瘍に対する免疫チェックポイント遮断の有効性を高めるために、科学者は、免疫学的に無知な腫瘍を炎症型に変換するための併用治療を設計した。そのようなアプローチの１つは、腫瘍に対する長期持続免疫を刺激するための新抗原の量を増加させるために、アントラサイクリンなどの化学療法レジメンを誘発する免疫原性細胞死とともにＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害を使用することである［４］。
【０００５】
しかしながら、マクロファージなどの先天性免疫細胞は、高い変異負荷にもかかわらず、Ｔ細胞活性化を抑制し、腫瘍進行に寄与することができる。腫瘍関連免疫抑制に寄与し、かつ腫瘍成長支持シグナルを提供するマクロファージは、標的療法の非常に適格な候補であり得る。これらの細胞は様々な腫瘍内に豊富に存在し、それらは非常に可塑性（plastic）であり、かつＴ細胞活性化および腫瘍拒絶を支持する炎症促進性マクロファージに変換することができるためである［５、６］。これまで、臨床開発中のマクロファージ標的戦略は、マクロファージコロニー刺激因子受容体阻害を利用して、腫瘍中のマクロファージ集団を枯渇させている［７］。しかしながら、これらのアプローチに対する耐性が既に報告されている［８］。したがって、癌と戦うために鎧としてこれらの細胞を利用するために新規の方法を見つける必要性が存在する。
【０００６】
近年、異なる刺激に対するマクロファージ応答の調節におけるスカベンジャー受容体の寄与がますます注目されている。Ｃｌｅｖｅｒ−１（スタビリン１としても知られる）は、抗炎症性マクロファージのサブセットに掃除能力を付与する多機能分子である［９、１０］。これらの細胞において、受容体媒介性エンドサイトーシスおよびリサイクル、細胞内選別、ならびに変更された、および正常な自己成分のトランスサイトーシスに関与する。最近、メラノーマ腫瘍の増殖および転移の進行が、Ｓｔａｂ１-/-（Ｃｌｅｖｅｒ−１ノックアウト）マウス、および抗Ｃｌｅｖｅｒ−１療法で処置したマウスにおいて減衰することが見出されている［１１］。
【発明の概要】
【０００７】
ここで、腫瘍微小環境におけるＣｌｅｖｅｒ−１阻害が、抗腫瘍免疫応答の増加に起因して、癌細胞上のＰＤ−Ｌ１発現を増加させることが驚くべきことに見出されている。これにより、非炎症性非応答性癌におけるより効果的な腫瘍治療のために、ＣＬＥＶＥＲ−１阻害と組み合わせた抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１療法の使用が広がる。
【０００８】
特に、Ｃｌｅｖｅｒ−１に結合可能な薬剤とＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１阻害剤（複数可）との組み合わせは、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤単独では応答しない、またはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤に対して限定的な応答性のみを示す腫瘍の治療に好適であることが見出されている。
【０００９】
したがって、本発明の目的は、癌のための新規な治療を提供し、したがって、先行技術に見られる上述の問題を低減するか、またはさらには排除することである。
【００１０】
とりわけ、上述の目的を達成するために、本発明は、添付の独立請求項の特徴付け部分で提示されるものによって特徴付けられる。本発明の一部の好ましい実施形態は、他の請求項に記載される。
【００１１】
本文中で言及される実施形態および利点は、該当する場合、必ずしも具体的に言及されていない場合でさえも、本発明による上記薬剤の組み合わせ、方法、ならびに使用の両方に関する。
【００１２】
本発明は、治療有効量の
（ａ）Ｃｌｅｖｅｒ−１に結合可能な薬剤と、
（ｂ）ＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１阻害剤と、の組み合わせであって、
ＰＤ−Ｌ１の発現を全く示さない、もしくは低発現を示す、および／またはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤単独では応答しない、もしくはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤に対して限定された応答性のみを示す腫瘍を有すると診断された個体における癌の治療に使用するための、組み合わせに関する。
【００１３】
特に、本発明は、治療有効量の
（ａ）Ｃｌｅｖｅｒ−１に結合可能な薬剤と、
（ｂ）ＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１阻害剤と、の組み合わせであって、
個体における悪性腫瘍成長を低減すること、および／または転移形成を阻害することによって、癌の治療に使用するための、組み合わせに関する。
【００１４】
ここで、驚くべきことに、Ｃｌｅｖｅｒ−１阻害が腫瘍におけるＰＤ−Ｌ１の発現を増加させ、それが抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１治療に対する傾向がより強く、かつより適していることと、Ｃｌｅｖｅｒ−１阻害が、通常、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤（複数可）に応答しない、またはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤（複数可）に対して限定的な応答性のみを示す腫瘍モデルにおけるＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害の治療有効性を促進することと、が発見されている。したがって、本発明は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤（複数可）単独では応答しない、またはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤（複数可）に対して限定的な応答性のみを示す患者においてＰＤ−Ｌ１発現を増加させ、よってＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１阻害剤治療に対するそれらの応答を改善するための方法を提供する。抗Ｃｌｅｖｅｒ−１治療は、Ｔ細胞の腫瘍への浸潤の増加をもたらし、このようにして、抗ＰＤ−１および／または抗ＰＤ−Ｌ１による標的化の改善のためにＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１発現を増加させる。したがって、本発明は、Ｃｌｅｖｅｒ−１標的化と組み合わせて腫瘍微小環境中のＴ細胞の負の調節を遮断するときに抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１治療の改善された有効性を提供する。
【００１５】
本発明は、癌患者のためのＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤（複数可）および抗Ｃｌｅｖｅｒ−１剤（複数可）の併用治療を提供する。一態様によれば、本発明は、個体に治療有効量のＣｌｅｖｅｒ−１に結合可能な薬剤をＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１阻害剤と組み合わせて投与することを含む、個体における癌を治療する、または癌の進行を遅延させるための方法を提供する。
【００１６】
ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤（複数可）と抗ＣＬＥＶＥＲ−１剤（複数可）との組み合わせは、癌の治療において、特に、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤単独では応答しない、またはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤（複数可）に対して限定的な応答性のみを示す患者において、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤単独よりも有効であることが示されている。特に、本発明に従った組み合わせは、原発性腫瘍成長ならびに肺およびリンパ節転移の発生率を低減することが観察されている。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】Ｃｌｅｖｅｒ−１阻害は、ルイス肺細胞癌（ＬＣＣ）および乳癌（Ｅ０７７１）モデルの両方におけるＰＤ−Ｌ１の発現を増加させ、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害の傾向をより強くする。Ｓｔａｂ１-/-は完全Ｃｌｅｖｅｒ−１ノックアウトマウスであり、Ｌｙｚ２−Ｃｒｅ／Ｓｔａｂ１fl/flはマクロファージ特異的ノックアウトマウスである。
【図２】Ｃｌｅｖｅｒ−１完全ノックアウトマウス（Ｓｔａｂ１-/-）、マクロファージ特異的Ｃｌｅｖｅｒ−１ノックアウトマウス（Ｌｙｚ２−Ｃｒｅ／Ｓｔａｂ１fl/fl）、または野生型対照マウスで成長したＬＬＣ腫瘍におけるＴ細胞（ＣＤ３）の免疫蛍光染色。図は、Ｋｉ６７（癌細胞増殖）およびＣＤ３１（血管）との共染色を示す。
【図３】Ｃｌｅｖｅｒ−１欠損ＬＬＣ腫瘍におけるＴ細胞活性の結果。細胞傷害性ＣＤ８  Ｔ細胞浸潤をフローサイトメトリーにより免疫チェックポイントマーカー（Ｌａｇ３+  ＰＤ−１+）で分析した。
【図４】抗体治療後のリンパ節および肺のＩＶＩＳ画像化によって、乳房脂肪パッドからの４Ｔ１乳癌細胞の拡散を監視した。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
Ｃｌｅｖｅｒ−１は、国際公開第０３／０５７１３０号に開示されるタンパク質、Ｃｏｍｍｏｎ  Ｌｙｍｐｈａｔｉｃ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ａｎｄ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−１である。これは、全身血管系およびリンパ管系の両方におけるリンパ球（および悪性腫瘍細胞）の内皮への接着を媒介する結合タンパク質である。Ｃｌｅｖｅｒ−１とそのリンパ球基質との相互作用を遮断することにより、リンパ球の組織への流入部位および組織からの流出部位において、リンパ球の再循環およびリンパ球の移動、ならびに炎症などの関連状態を同時に制御することが可能である。
【００１９】
「Ｃｌｅｖｅｒ−１に結合可能な薬剤」、「Ｃｌｅｖｅｒ−１阻害剤」および「抗Ｃｌｅｖｅｒ−１剤」という用語は置き替え可能であり、Ｃｌｅｖｅｒ−１と悪性腫瘍細胞との相互作用を遮断するためにＣｌｅｖｅｒ−１に結合可能な抗体およびその断片、ペプチド、ならびにこれに類するものを含む薬剤を指す。薬剤はまた、Ｃｌｅｖｅｒ−１受容体に結合するため、およびタンパク質活性を阻害するために適切な親和性を有する小分子阻害剤または巨大分子などの任意の他の阻害剤であってもよい。「抗体またはその断片」という用語は、個体においてＣｌｅｖｅｒ−１分子に結合可能な抗体またはその断片をカバーするために最も広義に使用される。特に、キメラ抗体、ヒト化抗体または霊長類化抗体、ならびに抗体断片および一本鎖抗体（例えば、Ｆａｂ、Ｆｖ）が所望の生物学的活性を呈する限り、それらが含まれると理解されるべきである。特に有用な薬剤は、抗Ｃｌｅｖｅｒ−１抗体およびその断片である。したがって、本発明の一実施形態によれば、Ｃｌｅｖｅｒ−１に結合可能な薬剤、すなわち、Ｃｌｅｖｅｒ−１阻害剤または抗Ｃｌｅｖｅｒ−１剤は、抗体またはその断片、ペプチド（複数可）、高分子、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
【００２０】
本発明の一実施形態によれば、癌を治療するための方法は、個体に、治療有効量の
（ａ）抗Ｃｌｅｖｅｒ−１抗体またはその断片などのＣｌｅｖｅｒ−１に結合可能な薬剤と、
（ｂ）プログラム死−１（ＰＤ−１）受容体に特異的に結合し、ＰＤ−１活性を阻害する、抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１抗体またはその断片などの、ＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１阻害剤との組み合わせを投与することを含む。
【００２１】
「治療」または「治療すること」という用語は、疾患もしくは障害の完全な治癒だけでなく、および前述の疾患もしくは障害の改善または軽減も含むと理解されるべきである。
【００２２】
「治療有効量」という用語は、所望の治療結果をもたらすのに十分な、本発明による薬剤の任意の量を含むことを意味する。
【００２３】
本発明において、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤とは、プログラム死−１（ＰＤ−１）／プログラム死リガンド−１（ＰＤ−Ｌ１）シグナル伝達経路を遮断可能な阻害剤を指す。ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１阻害剤は、プログラム死リガンド−１（ＰＤ−Ｌ１）とその受容体であるプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）との会合を阻害するように作用する。リガンド結合時、ＰＤ−１シグナル伝達はＴ細胞活性化を阻害し、増殖、サイトカイン産生、およびＴ細胞死の減少をもたらす。一部の実施形態において、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤はＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストであり、ＰＤ−Ｌ１とその受容体ＰＤ−１との相互作用を遮断する抗体またはその断片を含んでもよい。抗体またはその断片は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を中断し、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達を阻害するために、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に特異的に結合してもよい。抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体もしくはモノクローナル抗体、またはその任意の断片であってもよい。本発明によれば、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、任意の好適なＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤であってもよく、必要な治療に基づいて選択される。本発明による例示的な実施形態において、抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１抗体は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、またはそれらの任意の組み合わせから選択されてよい。これらの抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１抗体は、当該分野で使用される既知の抗体の例に過ぎず、本発明はこれらに限定されない。
【００２４】
悪性腫瘍成長を低減することによって、および／または転移形成を阻害することによって癌を治療するための本発明は、全ての形態の癌に適用可能である。したがって、任意の良性もしくは悪性腫瘍または悪性腫瘍の転移を治療することができる。
【００２５】
特に、本発明は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤単独では応答しない、またはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤に対して限定的な応答性のみを示す腫瘍に有用であり得る。腫瘍成長および／または転移において全く変化が観察されないか、またはわずかな変化のみが観察される場合、患者は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤に応答しないと分類される。本発明の一実施形態によれば、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤（複数可）と抗Ｃｌｅｖｅｒ−１剤（複数可）との組み合わせは、腫瘍微小環境においてＰＤ−Ｌ１の発現を示さないか、またはＰＤ−Ｌ１の低発現のみを示す腫瘍を有すると診断された個体の治療に使用される。本発明の一実施形態によれば、ＰＤ−Ｌ１の発現なしまたは低発現に加えて、腫瘍は、高度のマクロファージ浸潤、低変異負荷、および／または低Ｔ細胞浸潤を示すことがある。本発明の一実施形態によれば、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤（複数可）および抗Ｃｌｅｖｅｒ−１剤（複数可）の組み合わせは、Ｔ細胞浸潤および腫瘍浸潤免疫細胞におけるＰＤ−Ｌ１発現を増加させるために個体を治療する際に使用される。
【００２６】
一般に、腫瘍細胞上のＰＤ−Ｌ１発現は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤による治療に対する患者適格性を予測するために使用される。ＰＤ−Ｌ１発現のレベルは、ＰＤ−Ｌ１が評価される細胞の種類（腫瘍対免疫細胞）、または試料収集のソースおよびタイミングに基づいて変化することがある。試料中に存在する生存腫瘍細胞および／または腫瘍浸潤リンパ球の５０％以上でのＰＤ−Ｌ１発現は、典型的には、ＰＤ−Ｌ１に対する高発現とみなされ、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤に対する応答性を予測する。試料中に存在する生存腫瘍細胞および／または腫瘍浸潤リンパ球の１％未満でのＰＤ−Ｌ１発現は、発現なしとみなされ、試料中に存在する生存腫瘍細胞および／または腫瘍浸潤リンパ球の１〜４９％の範囲内でのＰＤ−Ｌ１発現も、ＰＤ−Ｌ１陽性とみなされるが、応答性は、治療に依存する場合がある。
【００２７】
本発明は、Ｃｌｅｖｅｒ−１阻害が腫瘍細胞におけるＰＤ−Ｌ１発現を増加させるという知見に基づくため、本発明は、ＰＤ−Ｌ１陽性のいずれの特定の閾値レベルに限定されないが、本発明は、天然レベルに依存しないＰＤ−Ｌ１発現の改善に適用可能である。本発明は、ＰＤ−Ｌ１の発現を全く示さないかまたは低発現を示す腫瘍を有すると診断された患者にとって最も有用である。その結果Ｃｌｅｖｅｒ−１の阻害は、冷たい腫瘍を熱い腫瘍に変換し、通常は治療応答を示さないであろう患者における免疫療法の有効性を増加させることができるからである。本発明において、試料中に存在する生存腫瘍細胞および／または腫瘍浸潤リンパ球の１％未満でのＰＤ−Ｌ１発現は、発現なしとみなされ、試料中に存在する生存腫瘍細胞および／または腫瘍浸潤リンパ球の１〜５０％でのＰＤ−Ｌ１発現は、低発現とみなされる。低発現は、いずれの細胞においても発現がない状況もカバーする。したがって、本発明の一実施形態によれば、低ＰＤ−Ｌ１発現を示す腫瘍は、試料中の生存腫瘍細胞の１％未満および／または１〜５０％もしくは１〜４９％においてＰＤ−Ｌ１発現を示す腫瘍を含む。パーセンテージは、試料中に存在する生存細胞の総量から計算される。ＰＤ−Ｌ１発現は、例えば、当業者に既知の異なる染色プラットフォームおよび抗体を使用することによって評価することができる。ＰＤ−Ｌ１発現の評価は、任意の好適な方法で行うことができる。ＰＤ−Ｌ１発現を決定するためのいくつかの市販の診断アッセイが利用可能であり、その一部は、ある特定の癌タイプに特異的であるか、または特定の抗ＰＤ−Ｌ１阻害剤と組み合わせて使用することを意図している。したがって、本発明の一実施形態によれば、予測バイオマーカー（複数可）は、抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１療法に対する患者の応答性を決定するために治療の前に使用されてもよい。抗ＰＤ−１療法に典型的に良好に応答した患者は、ＰＤ−Ｌ１陽性およびＴリンパ球豊富な腫瘍標本を有した。本発明の一実施形態によれば、ＰＤ−Ｌ１の発現は、腫瘍細胞を抗ＰＤ−Ｌ１で染色することによって試験され得る。ＰＤ−Ｌ１タンパク質発現は、典型的には、試料中に存在する生存細胞の総量から任意の強度で部分的または完全な膜染色を示す生存腫瘍細胞のパーセンテージを計算することによって決定される。
【００２８】
本発明の一実施形態によれば、Ｃｌｅｖｅｒ−１に結合可能な薬剤は、ＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１阻害剤の前に個体に投与される。本発明の別の実施形態によれば、Ｃｌｅｖｅｒ−１に結合可能な薬剤は、ＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１阻害剤と同時に個体に投与され、それらは単一組成物として混合されるか、または同時に投与される。本発明による一実施形態において、Ｃｌｅｖｅｒ−１に結合可能な薬剤と、ＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１阻害剤とを順次投与してもよく、抗Ｃｌｅｖｅｒ−１剤の少なくとも一部は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤の前に投与される。投与は、例えば、１回、複数回、および／または１つ以上の延長期間にわたって実行されてもよい。
【００２９】
本発明の一実施形態において、患者は、まずＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤（複数可）単独で治療されてもよく、そして所望の治療応答が達成されていないことを通知した後、抗Ｃｌｅｖｅｒ−１剤（複数可）を抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１剤と組み合わせて投与することによる治療が開始される。
【００３０】
「投与すること」は、当業者に既知の様々な方法および送達系のいずれかを用いて、個体に前記治療剤を含む組成物を物理的に導入することを指す。本発明で使用される薬剤は、それらの意図される目的を達成する任意の手段によって投与され得る。例えば、投与は、静脈内、筋肉内、腹腔内、腫瘍内、皮下、または例えば注射による他の非経口投与経路であってもよい。薬理活性化合物に加えて、上記薬剤の薬学的製剤は、好ましくは、薬学的に使用可能な製剤への活性薬剤の処理を容易にする賦形剤および補助剤を含む好適な薬学的に許容される担体を含有する。選択される用量は、悪性腫瘍成長を低減する、および／または転移形成を阻害するのに十分でなければならない。
【００３１】
本発明による治療方法では、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤および抗Ｃｌｅｖｅｒ−１剤に加えて、任意の他の抗癌剤も使用することができる。
【００３２】
実験
以下の実施例は、本発明の原理を例示するに過ぎず、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【００３３】
腫瘍モデル
ＬＬＣ１（ルイス肺癌細胞）を、Ｃｌｅｖｅｒ−１完全ノックアウトマウス（Ｓｔａｂ１-/-）、マクロファージ特異的Ｃｌｅｖｅｒ−１ノックアウトマウス（Ｌｙｚ２−Ｃｒｅ／Ｓｔａｂ１fl/fl）、または野生型対照マウスの脇腹に皮下注射し（１×１０5細胞／マウス）、腫瘍成長を３〜４日ごとに１５日間監視した。Ｓｔａｂ１-/-は完全Ｃｌｅｖｅｒ−１ノックアウトマウスであり、Ｌｙｚ２−Ｃｒｅ／Ｓｔａｂ１fl/flはマクロファージ特異的ノックアウトマウスである。腫瘍サイズをデジタルキャリパーで測定し、式Ｔ体積＝π／６×大径×（小径）2を用いて計算した。Ｅ０７７１乳癌モデルについて、腫瘍を遺伝子改変Ｃｌｅｖｅｒ−１マウスの鼠径部乳房脂肪パッドに注射した。屠殺の日に、腫瘍を除去し、１〜２ｍｍ3の小片へとみじん切りし、その後、３７℃に加熱されたシェーカー内でＰＢＳ中の１０ｍｇ／ｍＬのコラーゲナーゼＩＶ（Ｇｉｂｃｏ）、２０μｇ／ｍＬのＤＮａｓｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、２．２５μＭのＣａＣｌ2で消化した。３０分後、組織を４０μｍの細胞ストレーナーを通して濾過し、２ｍＬのＭＡＣＳ緩衝液（０．５％ＦＢＳ、ＰＢＳ中２ｍＭのＥＤＴＡ）でフラッシュした。得られた単一細胞懸濁液を抗ＣＤ４５および抗ＰＤ−Ｌ１で染色し、癌細胞上のＰＤ−Ｌ１発現についてＬＳＲ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ（ＢＤ）で分析した。データをＦｌｏｗＪｏソフトウェアバージョン１０．４．２でプロットした。癌細胞を、それらのＣＤ４５陰性およびサイズ（ＦＳＣ）に従って同定した。
【００３４】
結果を図１のＡ〜Ｃに示す。Ｃｌｅｖｅｒ−１阻害は、ルイス肺癌細胞（ＬＣＣ）および乳癌（Ｅ０７７１）モデルの両方におけるＰＤ−Ｌ１の発現を増加させ、それらの抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１治療に対する傾向をより強くし、かつより好適にした。
【００３５】
ＬＬＣ１腫瘍からのＴＩＬ分析
免疫チェックポイント標的療法に応答する患者は、通常、既存の抗腫瘍免疫応答を有し、これは、腫瘍組織における細胞傷害性ＣＤ８  Ｔ細胞の高浸潤およびＰＤ−Ｌ１発現によって見られる。Ｃｌｅｖｅｒ−１欠失が、Ｔ細胞の腫瘍への浸潤を増加させるのに十分であり、このことがＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１による改良された標的化のためにＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−１発現を増加させたかどうかを証明するために、ＬＬＣ腫瘍組織を抗ＣＤ３で染色し、組織中のＴ細胞の非常に高い浸潤を検出した。Ｔ細胞の免疫蛍光染色を図２に示す。Ｃｌｅｖｅｒ−１完全ノックアウトマウス（Ｓｔａｂ１-/-）およびマクロファージ特異的Ｃｌｅｖｅｒ−１ノックアウトマウス（Ｌｙｚ２−Ｃｒｅ／Ｓｔａｂ１fl/fl）は、野生型対照マウスと比較して、増加したＴ細胞の浸潤を示す。この知見は、Ｃｌｅｖｅｒ−１の欠失が、冷たい腫瘍を熱い腫瘍に変換し、通常は低抗腫瘍免疫応答のために応答を示さないであろう患者における免疫療法の有効性を、増加させることができることを示唆する。
【００３６】
さらに、Ｃｌｅｖｅｒ−１欠損ＬＬＣ腫瘍におけるＴ細胞活性の増加を、フローサイトメトリーによって免疫チェックポイントマーカー（Ｌａｇ３+  ＰＤ−１+）を用いて細胞傷害性ＣＤ８  Ｔ細胞浸潤を分析することによって検証した。その結果を図３に示す。Ｃｌｅｖｅｒ−１完全ノックアウトマウス（Ｓｔａｂ１-/-）およびマクロファージ特異的Ｃｌｅｖｅｒ−１ノックアウトマウス（Ｌｙｚ２−Ｃｒｅ／Ｓｔａｂ１fl/fl）におけるＣＤ８  Ｔ細胞は、抗腫瘍免疫応答の活性化を示すＬａｇ３およびＰＤ−１の両方のアップレギュレーションを示した。この観察は、腫瘍微小環境におけるＴ細胞の負の調節を遮断するために、Ｃｌｅｖｅｒ−１標的化と組み合わせた場合の抗ＰＤ−１治療の改善された有効性を提案する。
【００３７】
抗体治療
１×１０5ルシフェラーゼ発現４Ｔ１（Ｃａｌｉｐｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を、８〜１０週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ）の鼠径部乳房脂肪パッドに注射した。抗体治療（ｉ．ｐ．）を腫瘍の接種後３日目に開始し、そして抗Ｃｌｅｖｅｒ−１、５ｍｇ／ｋｇ（クローンｍＳｔａｂ１、ＩｎＶｉｖｏ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）、抗ＰＤ−１、５ｍｇ／ｋｇ（クローンＲＭＰ１−１４、ＢｉｏＸＣｅｌｌ）を単剤療法として、または組み合わせて試験終了まで３〜４日ごとに投与した。マウスＩｇＧ１およびラットＩｇＧ２ａ抗体の組み合わせを、５ｍｇ／ｋｇ（ともにＢｉｏＸＣｅｌｌから入手）でアイソタイプ対照として使用した。屠殺の日に、マウスに１５０ｍｇ／ｋｇのＤ−ルシフェリン基質（Ｃａｌｉｐｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を注射し、５分後にＣＯ2で屠殺した。腫瘍、肺、およびリンパ節を切除し、露出時間＝１秒（腫瘍）、１０秒（肺）、３０秒（リンパ節）、ｆ／停止＝１、中ビニング、視野＝３．９×３．９ｃｍ2という設定で１０分後にＩＶＩＳで撮像した。Ｌｉｖｉｎｇ  Ｉｍａｇｅソフトウェアを使用して、組織の輝度単位（光子／ｓ／ｃｍ2／ｓｒ）として報告された生物発光信号を定量化した。
【００３８】
その結果を図４のＡ〜Ｃに示す。各バーの上の数字は、各処置群におけるマウスの総数と比較して、ルシフェラーゼ陽性転移性細胞を有するマウスの数を示す。併用療法（抗Ｃｌｅｖｅｒ−１（ｍＳｔａｂ）および抗ＰＤ−１）は、原発性腫瘍における癌細胞の数を減少させた。抗ＰＤ−１と組み合わせた抗Ｃｌｅｖｅｒ−１は、４Ｔ１乳癌細胞のセンチネルリンパ節への拡散を阻止する。要約すると、抗Ｃｌｅｖｅｒ−１およびＰＤ−１阻害剤による併用治療は、原発性腫瘍成長ならびに肺およびリンパ節転移の発生率を低減する。
【００３９】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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