(57)【要約】  本発明は一般に、遺伝子治療を用いる、不均衡ヌクレオチドプールによって特徴付けられる疾患、例えば、ミトコンドリアＤＮＡ枯渇症候群、より具体的には、チミジンキナーゼ２（ＴＫ２）欠損症などの、ヒト遺伝疾患の治療の方法に関する。遺伝子治療は、機能性タンパク質をコードする核酸を含有するウイルスベクターなどの、１以上の構築物の投与を含んでよい。機能性タンパク質は、核遺伝子に対応し得る。ＴＫ２欠損症の治療のために、遺伝子治療は、機能性ＴＫ２酵素をコードする核酸を含有するウイルスベクターなどの、１以上の構築物の投与を含んでよい。治療はまた、遺伝子治療に関連して薬理学的療法を投与することも含んでよい。遺伝子治療を単独で又は薬理学的療法と組み合わせたものなどの本開示の治療プロトコルは、不均衡ヌクレオシドプールの様々な他の障害、特に、ミトコンドリアＤＮＡ枯渇症候群に見られるものを治療、予防、及び／又は治癒するために使用できる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
それを必要とする対象中の不均衡ヌクレオチドプールによって特徴付けられる疾患又は障害を治療、予防、及び／又は治癒する方法であって、チミジンキナーゼ２（ＴＫ２）、デオキシグアノシンキナーゼ（ｄＧＫ）、チミジンホスホリラーゼ（ＴＰ）、リボヌクレオチド還元酵素のｐ５３誘導性小サブユニット（ｐ５３Ｒ２）、スクシニルＣｏＡリガーゼＡＤＰ形成サブユニットベータ（ＳＵＣＬＡ２）、スクシニルＣｏＡリガーゼＧＤＰ形成サブユニットアルファ（ＳＵＣＬＧ１）、ミトコンドリア内膜タンパク質ＭＰＶ１７（ＭＰＶ１７）、及び／又はＤＮＡポリメラーゼサブユニットガンマ（ＰＯＬＧ）をコードする導入遺伝子を含む組成物の治療有効量を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２】
不均衡ヌクレオチドプールによって特徴付けられる疾患又は障害を有する対象における酵素活性を回復する方法であって、ＴＫ２、ｄＧＫ、ＴＰ、ｐ５３Ｒ２、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１、ＭＰＶ１７、及び／又はＰＯＬＧをコードする導入遺伝子を含む組成物の治療有効量を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項３】
それを必要とする対象中の不均衡ヌクレオチドプールによって特徴付けられる疾患又は障害に関連付けられる１以上の症状を軽減する方法であって、ＴＫ２、ｄＧＫ、ＴＰ、ｐ５３Ｒ２、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１、ＭＰＶ１７、及び／又はＰＯＬＧをコードする導入遺伝子を含む組成物の治療有効量を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項４】
前記疾患又は障害が、ミトコンドリア性疾患である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記ミトコンドリア性疾患が、ミトコンドリアＤＮＡ枯渇症候群（ＭＤＳ）である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記ＭＤＳが、ＴＫ２をコードする内因性遺伝子における１以上の変異によって特徴付けられる筋障害性ＭＤＳである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ＭＤＳが、ＳＵＣＬＡ２をコードする内因性遺伝子における１以上の変異によって特徴付けられる脳筋症型である、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記ＭＤＳが、ＴＰをコードする内因性遺伝子における１以上の変異によって特徴付けられる神経胃腸脳筋症型である、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
前記ＭＤＳが、ｄＧＫ、ＭＰＶ１７、及び／又はＰＯＬＧをコードする内因性遺伝子における１以上の変異によって特徴付けられる肝障害型である、請求項５に記載の方法。
【請求項１０】
前記導入遺伝子が、ＴＫ２をコードする、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＴＫ２が、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＴＫ２が、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＴＫ２が、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＴＫ２が、配列番号１のアミノ酸配列を有する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記導入遺伝子が、配列番号２の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列を有する、請求項１０〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記導入遺伝子が、配列番号２の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記導入遺伝子が、配列番号２の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記導入遺伝子が、配列番号２の核酸配列を有する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記導入遺伝子が、ｄＧＫをコードする、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記ｄＧＫが、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記ｄＧＫが、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記ｄＧＫが、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記ｄＧＫが、配列番号３のアミノ酸配列を有する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記導入遺伝子が、配列番号４の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列を有する、請求項１９〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記導入遺伝子が、配列番号４の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記導入遺伝子が、配列番号４の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記導入遺伝子が、配列番号４の核酸配列を有する、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記導入遺伝子が、ＴＰをコードする、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＴＰが、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＴＰが、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記ＴＰが、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記ＴＰが、配列番号５のアミノ酸配列を有する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記導入遺伝子が、配列番号６の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列を有する、請求項２８〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記導入遺伝子が、配列番号６の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記導入遺伝子が、配列番号６の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有する、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記導入遺伝子が、配列番号６の核酸配列を有する、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記導入遺伝子が、ｐ５３Ｒ２をコードする、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記ｐ５３Ｒ２が、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記ｐ５３Ｒ２が、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記ｐ５３Ｒ２が、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記ｐ５３Ｒ２が、配列番号７のアミノ酸配列を有する、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記導入遺伝子が、配列番号８の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列を有する、請求項３７〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記導入遺伝子が、配列番号８の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記導入遺伝子が、配列番号８の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有する、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記導入遺伝子が、配列番号８の核酸配列を有する、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記導入遺伝子が、ＳＵＣＬＡ２をコードする、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記ＳＵＣＬＡ２が、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記ＳＵＣＬＡ２が、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記ＳＵＣＬＡ２が、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
ＳＵＣＬＡ２が、配列番号９のアミノ酸配列を有する、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記導入遺伝子が、配列番号１０の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列を有する、請求項４６〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
前記導入遺伝子が、配列番号１０の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記導入遺伝子が、配列番号１０の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有する、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記導入遺伝子が、配列番号１０の核酸配列を有する、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記導入遺伝子が、ＳＵＣＬＧ１をコードする、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
前記ＳＵＣＬＧ１が、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記ＳＵＣＬＧ１が、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記ＳＵＣＬＧ１が、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記ＳＵＣＬＧ１が、配列番号１１のアミノ酸配列を有する、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記導入遺伝子が、配列番号１２の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列を有する、請求項５５〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
前記導入遺伝子が、配列番号１２の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記導入遺伝子が、配列番号１２の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有する、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記導入遺伝子が、配列番号１２の核酸配列を有する、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記導入遺伝子が、ＭＰＶ１７をコードする、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
前記ＭＰＶ１７が、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記ＭＰＶ１７が、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記ＭＰＶ１７が、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
ＭＰＶ１７が、配列番号１３のアミノ酸配列を有する、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記導入遺伝子が、配列番号１４の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列を有する、請求項６４〜６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７０】
前記導入遺伝子が、配列番号１４の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記導入遺伝子が、配列番号１４の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有する、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記導入遺伝子が、配列番号１４の核酸配列を有する、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記導入遺伝子が、ＰＯＬＧをコードする、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
前記ＰＯＬＧが、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記ＰＯＬＧが、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
前記ＰＯＬＧが、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記ＰＯＬＧが、配列番号１５のアミノ酸配列を有する、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記導入遺伝子が、配列番号１６の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列を有する、請求項７３〜７７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７９】
前記導入遺伝子が、配列番号１６の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記導入遺伝子が、配列番号１６の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有する、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記導入遺伝子が、配列番号１６の核酸配列を有する、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
それを必要とする対象においてＴＫ２欠損症を治療、予防、及び／又は治癒する方法であって、ＴＫ２をコードする導入遺伝子を含有する組成物の治療有効量を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項８３】
それを必要とする対象においてＴＫ２酵素活性を回復する方法であって、ＴＫ２をコードする導入遺伝子を含有する組成物の治療有効量を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項８４】
それを必要とする対象におけるＴＫ２欠損症に関連付けられる１以上の症状を軽減する方法であって、ＴＫ２をコードする導入遺伝子を含有する組成物の治療有効量を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項８５】
前記対象が、ＭＤＳを有するか又はＭＤＳを発症する危険性がある、請求項８２〜８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８６】
前記ＴＫ２が、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項８２〜８５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８７】
前記ＴＫ２が、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
前記ＴＫ２が、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記ＴＫ２が、配列番号１のアミノ酸配列を有する、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記導入遺伝子が、配列番号２の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列を有する、請求項８２〜８９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９１】
前記導入遺伝子が、配列番号２の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
前記導入遺伝子が、配列番号２の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有する、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
前記導入遺伝子が、配列番号２の核酸配列を有する、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
前記組成物が、ベクターである、請求項１〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９５】
前記ベクターが、ウイルスベクターである、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
前記ウイルスベクターが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アデノウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、ポックスウイルス、バキュロウイルス、単純ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス、及び合成ウイルスからなる群から選択される、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記合成ウイルスが、キメラウイルス、モザイクウイルス、又は偽型ウイルスであり、かつ／又は外来タンパク質、合成ポリマー、ナノ粒子、若しくは小分子を含む、請求項９６に記載の方法。
【請求項９８】
前記ウイルスベクターが、ＡＡＶである、請求項９６に記載の方法。
【請求項９９】
前記ＡＡＶが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ７４、ＡＡＶｒｈ．８、又はＡＡＶｒｈ．１０血清型である、請求項９８に記載の方法。
【請求項１００】
前記ＡＡＶが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、及びＡＡＶ９である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０１】
前記ウイルスベクターが、偽型ＡＡＶである、請求項９８に記載の方法。
【請求項１０２】
前記偽型ＡＡＶが、ＡＡＶ２／９である、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
前記偽型ＡＡＶが、ＡＡＶ２／８である、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０４】
前記ＡＡＶが、組換えキャプシドタンパク質を含む、請求項９８に記載の方法。
【請求項１０５】
前記組成物が、リポソーム、小胞、合成小胞、エキソソーム、合成エキソソーム、デンドリマー、又はナノ粒子である、請求項１〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０６】
前記導入遺伝子が、筋肉細胞において前記導入遺伝子の発現を誘導するプロモーターに作動可能に連結される、請求項１〜１０５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０７】
前記プロモーターが、ニワトリベータアクチンプロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ミオシン軽鎖２プロモーター、アルファアクチンプロモーター、トロポニン１プロモーター、Ｎａ＋／Ｃａ２＋交換因子プロモーター、ジストロフィンプロモーター、クレアチンキナーゼプロモーター、アルファ７インテグリンプロモーター、脳ナトリウム利尿ペプチドプロモーター、アルファＢクリスタリン／小分子熱ショックタンパク質プロモーター、アルファミオシン重鎖プロモーター、又は心房性ナトリウム利尿因子プロモーターである、請求項１０６に記載の方法。
【請求項１０８】
前記導入遺伝子が、筋肉細胞において導入遺伝子の発現を誘導するエンハンサーに作動可能に連結される、請求項１〜１０７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０９】
前記エンハンサーが、ＣＭＶエンハンサー、筋細胞エンハンサー因子２（ＭＥＦ２）エンハンサー、又はＭｙｏＤエンハンサーである、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１０】
前記組成物が、対象がＴＫ２、ｄＧＫ、ＴＰ、ｐ５３Ｒ２、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１、ＭＰＶ１７、及び／又はＰＯＬＧをコードする内因性遺伝子の欠損を有すると診断されるとすぐに、又は直後に前記対象に投与され、必要に応じて前記組成物が、前記対象がＴＫ２をコードする内因性遺伝子の欠損を有すると診断されるとすぐに、又は直後に前記対象に投与される、請求項１〜１０９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１１】
ＴＫ２、ｄＧＫ、ＴＰ、ｐ５３Ｒ２、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１、ＭＰＶ１７、及び／又はＰＯＬＧをコードする導入遺伝子を含む第２の組成物の治療有効量を前記対象に投与することをさらに含む、請求項１〜１１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１２】
前記第２の組成物が、ベクターである、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１３】
前記ベクターが、ウイルスベクターである、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１４】
前記ウイルスベクターが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アデノウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、ポックスウイルス、バキュロウイルス、単純ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス、及び合成ウイルスからなる群から選択される、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１５】
前記合成ウイルスが、キメラウイルス、モザイクウイルス、又は偽型ウイルスであり、かつ／又は外来タンパク質、合成ポリマー、ナノ粒子、若しくは小分子である、請求項１１４に記載の方法。
【請求項１１６】
前記ウイルスベクターが、ＡＡＶである、請求項１１４に記載の方法。
【請求項１１７】
前記ＡＡＶが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ７４、ＡＡＶｒｈ．８、又はＡＡＶｒｈ．１０血清型である、請求項１１６に記載の方法。
【請求項１１８】
前記ウイルスベクターが、偽型ＡＡＶである、請求項１１６に記載の方法。
【請求項１１９】
前記偽型ＡＡＶが、ＡＡＶ２／９である、請求項１１８に記載の方法。
【請求項１２０】
前記偽型ＡＡＶが、ＡＡＶ２／８である、請求項１１８に記載の方法。
【請求項１２１】
前記ＡＡＶが、組換えキャプシドタンパク質を含む、請求項１１６に記載の方法。
【請求項１２２】
前記第２の組成物が、リポソーム、小胞、合成小胞、エキソソーム、合成エキソソーム、デンドリマー、又はナノ粒子である、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１２３】
前記第２の組成物に含まれる導入遺伝子が、筋肉細胞において導入遺伝子の発現を誘導するプロモーターに作動可能に連結される、請求項１１０〜１２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２４】
前記プロモーターが、ニワトリベータアクチンプロモーター、ＣＭＶプロモーター、ミオシン軽鎖２プロモーター、アルファアクチンプロモーター、トロポニン１プロモーター、Ｎａ＋／Ｃａ２＋交換因子プロモーター、ジストロフィンプロモーター、クレアチンキナーゼプロモーター、アルファ７インテグリンプロモーター、脳ナトリウム利尿ペプチドプロモーター、アルファＢクリスタリン／小分子熱ショックタンパク質プロモーター、アルファミオシン重鎖プロモーター、又は心房性ナトリウム利尿因子プロモーターである、請求項１２２に記載の方法。
【請求項１２５】
前記第２の組成物に含まれる導入遺伝子が、筋肉細胞において導入遺伝子の発現を誘導するエンハンサーに作動可能に連結される、請求項１１０〜１２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２６】
前記エンハンサーが、ＣＭＶエンハンサー、ＭＥＦ２エンハンサー、又はＭｙｏＤエンハンサーである、請求項１２５に記載の方法。
【請求項１２７】
前記第２の組成物が、前記対象への前記第１の組成物の投与の後に前記対象に投与される、請求項１１０〜１２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２８】
前記第２の組成物が、前記対象への前記第１の組成物の投与の１日若しくはそれを超える日数又は週以内に前記対象に投与される、請求項１２７に記載の方法。
【請求項１２９】
前記第２の組成物が、前記対象への前記第１の組成物の投与後少なくとも１ヶ月で前記対象に投与される、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３０】
前記第１の組成物の投与が、前記第２の組成物が前記対象に投与される間継続する、請求項１１０〜１２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３１】
前記方法が、薬理学的薬剤を含む第３の組成物の治療有効量を前記対象に投与することをさらに含む、請求項１〜１３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３２】
前記薬理学的薬剤が、デオキシシチジン（ｄＣ）、デオキシチミジン（ｄＴ）、デオキシアデノシン（ｄＡ）、デオキシグアノシン（ｄＧ）、デオキシシチジン一リン酸（ｄＣＭＰ）、デオキシチミジン一リン酸（ＴＭＰ）、デオキシアデノシン一リン酸（ｄＡＭＰ）、デオキシグアノシン一リン酸（ｄＧＭＰ）、及びこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１３３】
前記薬理学的薬剤が、ｄＣ、ｄＴ、及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項１３２に記載の方法。
【請求項１３４】
前記第３の組成物が、前記対象への前記第１の組成物の投与の後に前記対象に投与される、請求項１３１〜１３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３５】
前記第３の組成物が、前記対象への前記第１の組成物の投与の１日若しくはそれを超える日数又は週以内に前記対象に投与される、請求項１３４に記載の方法。
【請求項１３６】
前記第３の組成物が、前記対象への前記第１の組成物の投与後少なくとも１ヶ月で前記対象に投与される、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１３７】
前記第３の組成物が、前記対象への前記第２の組成物の投与の後に前記対象に投与される、請求項１３１〜１３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３８】
前記第３の組成物が、前記対象への前記第２の組成物の投与の１日若しくはそれを超える日数又は週以内に前記対象に投与される、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１３９】
前記第３の組成物が、前記対象への前記第２の組成物の投与後少なくとも１ヶ月で前記対象に投与される、請求項１３８に記載の方法。
【請求項１４０】
前記第１の組成物の投与及び前記第２の組成物の投与が、前記第３の組成物が前記対象に投与される間継続する、請求項１３１〜１３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４１】
前記第３の組成物が、約１００ｍｇ／ｋｇ／日〜約１，０００ｍｇ／ｋｇ／日の量で前記対象に投与される、請求項１３１〜１４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４２】
前記第３の組成物が、約２００ｍｇ／ｋｇ／日〜約８００ｍｇ／ｋｇ／日の量で前記対象に投与される、請求項１４１に記載の方法。
【請求項１４３】
前記第３の組成物が、約２５０ｍｇ／ｋｇ／日〜約４００ｍｇ／ｋｇ／日の量で前記対象に投与される、請求項１４２に記載の方法。
【請求項１４４】
前記第３の組成物が、１日１日、１日２回、１日３回、１日４回、１日５回、又は１日６回前記対象に投与される、請求項１３１〜１４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４５】
前記第３の組成物が、牛のミルク、ヒト母乳、乳児用フォーミュラ、又は水と混合して前記対象に経口投与される、請求項１３１〜１４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４６】
前記第１の組成物が、静脈内、鞘内、皮内、経皮、非経口、筋肉内、鼻腔内、皮下、経皮、気管内、腹腔内、動脈内、血管内、吸入、灌流、洗浄、及び／又は経口投与により前記対象に投与される、請求項１〜１４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４７】
前記第２の組成物が、静脈内、鞘内、皮内、経皮、非経口、筋肉内、鼻腔内、皮下、経皮、気管内、腹腔内、動脈内、血管内、吸入、灌流、洗浄、及び／又は経口投与により前記対象に投与される、請求項１〜１４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４８】
前記第３の組成物が、静脈内、鞘内、皮内、経皮、非経口、筋肉内、鼻腔内、皮下、経皮、気管内、腹腔内、動脈内、血管内、吸入、灌流、洗浄、及び／又は経口投与により前記対象に投与される、請求項１〜１４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４９】
前記対象が、哺乳動物である、請求項１〜１４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５０】
前記対象が、ヒトである、請求項１４９に記載の方法。
【請求項１５１】
前記対象が、小児ヒト対象である、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１５２】
ＴＫ２、ｄＧＫ、ＴＰ、ｐ５３Ｒ２、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１、ＭＰＶ１７、及び／又はＰＯＬＧをコードする導入遺伝子を含む組換えウイルスベクター。
【請求項１５３】
前記導入遺伝子が、ＴＫ２をコードする、請求項１５２に記載のベクター。
【請求項１５４】
前記ＴＫ２が、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項１５３に記載のベクター。
【請求項１５５】
前記ＴＫ２が、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項１５４に記載のベクター。
【請求項１５６】
前記ＴＫ２が、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項１５５に記載のベクター。
【請求項１５７】
前記ＴＫ２が、配列番号１のアミノ酸配列を有する、請求項１５６に記載のベクター。
【請求項１５８】
前記導入遺伝子が、配列番号２の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列を有する、請求項１５３〜１５７のいずれか一項に記載のベクター。
【請求項１５９】
前記導入遺伝子が、配列番号２の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列を有する、請求項１５８に記載のベクター。
【請求項１６０】
前記導入遺伝子が、配列番号２の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列を有する、請求項１５９に記載のベクター。
【請求項１６１】
前記導入遺伝子が、配列番号２の核酸配列を有する、請求項１６０に記載のベクター。
【請求項１６２】
前記ベクターが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アデノウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、ポックスウイルス、バキュロウイルス、単純ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス、及び合成ウイルスからなる群から選択される、請求項１５２〜１６１のいずれか一項に記載のベクター。
【請求項１６３】
前記合成ウイルスが、キメラウイルス、モザイクウイルス、又は偽型ウイルスであり、かつ／又は外来タンパク質、合成ポリマー、ナノ粒子、若しくは小分子である、請求項１６２に記載のベクター。
【請求項１６４】
前記ウイルスベクターが、ＡＡＶである、請求項１６３に記載のベクター。
【請求項１６５】
前記ＡＡＶが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ７４、ＡＡＶｒｈ．８、又はＡＡＶｒｈ．１０である、請求項１６４に記載のベクター。
【請求項１６６】
前記ＡＡＶが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、及びＡＡＶ９である、請求項１６５に記載のベクター。
【請求項１６７】
前記ウイルスベクターが、偽型ＡＡＶである、請求項１６４に記載のベクター。
【請求項１６８】
前記偽型ＡＡＶが、ＡＡＶ２／９である、請求項１６７に記載のベクター。
【請求項１６９】
前記偽型ＡＡＶが、ＡＡＶ２／８である、請求項１６７に記載のベクター。
【請求項１７０】
前記ＡＡＶが、組換えキャプシドタンパク質を含む、請求項１６５に記載のベクター。
【請求項１７１】
前記導入遺伝子が、筋肉細胞における前記導入遺伝子の発現を誘導するプロモーターに作動可能に連結される、請求項１５２〜１７０のいずれか一項に記載のベクター。
【請求項１７２】
前記プロモーターが、ニワトリベータアクチンプロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ミオシン軽鎖２プロモーター、アルファアクチンプロモーター、トロポニン１プロモーター、Ｎａ＋／Ｃａ２＋交換因子プロモーター、ジストロフィンプロモーター、クレアチンキナーゼプロモーター、アルファ７インテグリンプロモーター、脳ナトリウム利尿ペプチドプロモーター、アルファＢクリスタリン／小分子熱ショックタンパク質プロモーター、アルファミオシン重鎖プロモーター、又は心房性ナトリウム利尿因子プロモーターである、請求項１７１に記載の方法。
【請求項１７３】
前記導入遺伝子が、筋肉細胞において導入遺伝子の発現を誘導するエンハンサーに作動可能に連結される、請求項１５２〜１７２のいずれか一項に記載のベクター。
【請求項１７４】
前記エンハンサーが、ＣＭＶエンハンサー、筋細胞エンハンサー因子２（ＭＥＦ２）エンハンサー、又はＭｙｏＤエンハンサーである、請求項１７３に記載のベクター。
【請求項１７５】
請求項１５２〜１７４のいずれか一項に記載のベクターを含むキット及び請求項１〜１５８のいずれか一項に記載の方法に従い対象に前記ベクターを投与するようキットの使用者に指示するパッケージ挿入物。
【請求項１７６】
ｄＣ、ｄＴ、ｄＡ、ｄＧ、ｄＣＭＰ、ＴＭＰ、ｄＡＭＰ、ｄＧＭＰ及びこれらの混合物からなる群から選択される薬理学的薬剤をさらに含む、請求項１７５に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願に対する相互参照
本出願は、２０１８年４月１８日出願で、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国仮特許出願第６２／６５９，２８１号の優先権を主張するものである。
【０００２】
政府支援の声明
本発明は、ＮＩＨによって与えられたＨＤ０８０６４２の下で政府の支援によりなされた。政府は、本発明において一定の権利を有する。
【０００３】
発明の分野
本発明は、不均衡ヌクレオチドプールによって特徴付けられるヒト疾患を含む遺伝子疾患の治療のための遺伝子治療の分野に関する。このような疾患の例は、チミジンキナーゼ２（ＴＫ２）欠損症などのミトコンドリアＤＮＡ枯渇症候群である。
【背景技術】
【０００４】
発明の背景
ミトコンドリア性疾患は、電子中のエネルギーをアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）に変換する生化学的経路であるミトコンドリア呼吸鎖（ＲＣ）及び酸化的リン酸化の欠陥に起因する臨床的に不均一な疾患である。呼吸鎖は、ミトコンドリアの内膜全域にプロトン勾配を発生させるために、電子を移動させる４つのマルチサブユニット酵素（複合体Ｉ−ＩＶ）で構成される。複合体Ｖを介したこの濃度勾配を下げるプロトンの流れはその後、ＡＴＰ合成を促進する（ＤｉＭａｕｒｏ及びＳｃｈｏｎ  ２００３；ＤｉＭａｕｒｏ及びＨｉｒａｎｏ  ２００５）。補酵素Ｑ１０（ＣｏＱ１０）は、複合体Ｉ及びＩＩから複合体ＩＩＩへ電子を往復させる必須分子である。この呼吸鎖は、２つのゲノム：ミトコンドリアＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）で構成されるもの及び核ＤＮＡ（ｎＤＮＡ）で構成される別のもの、によって制御されることにより、真核生物、例えば、哺乳類の細胞において特有である。その結果、いずれかのゲノム中の変異がミトコンドリア性疾患を引き起こし得る。
【０００５】
ミトコンドリア性疾患のサブグループであるミトコンドリアＤＮＡ枯渇症候群（ＭＤＳ）は、組織におけるミトコンドリアＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）コピー数の減少及びミトコンドリアＲＣ複合体の不十分な合成により、分子的に特徴付けられる重度の小児性脳筋症のよくある原因である（Ｈｉｒａｎｏら  ２００１）。ＴＫ２、ＤＧＵＯＫ、ＰＯＬＧ、ＰＯＬＧ２、ＳＣＬＡ２５Ａ４、ＭＰＶ１７、ＲＲＭ２Ｂ、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１、ＴＹＭＰ、ＯＰＡ１、及びＣ１０ｏｒｆ２（ＰＥＯ１）を含む、いくつかの核遺伝子中の変異が、幼児のＭＤＳの原因として特定されている（Ｂｏｕｒｄｏｎら  ２００７；Ｃｏｐｅｌａｎｄ  ２００８；Ｅｌｐｅｌｅｇら  ２００５；Ｍａｎｄｅｌら  ２００１；Ｎａｖｉａｕｘ及びＮｇｕｙｅｎ  ２００４；Ｏｓｔｅｒｇａａｒｄら  ２００７；Ｓａａｄａら  ２００３；Ｓａｒｚｉら  ２００７；Ｓｐｉｎａｚｚｏｌａら  ２００６）。加えて、これらの核遺伝子中の変異は、ｍｔＤＮＡ枯渇の有無にかかわらず、ｍｔＤＮＡの多重欠失を引き起こし得る（Ｂｅｈｉｎら、２０１２；Ｇａｒｏｎｅら、２０１２；Ｌｏｎｇｌｅｙら、２００６；Ｎｉｓｈｉｎｏら、１９９９；Ｐａｒａｄａｓら、２０１２；Ｒｏｎｃｈｉら、２０１２；Ｓｐｅｌｂｒｉｎｋら、２００１；Ｔｙｙｎｉｓｍａａら、２０１２；Ｔｙｙｎｉｓｍａａら、２００９；Ｖａｎ  Ｇｏｅｔｈｅｍら、２００１）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
ほとんどのミトコンドリア性疾患は、複数の身体器官に影響を及ぼし、典型的には、小児期又は初期の成人期において致死的である。ミトコンドリア性疾患に対し実績のある有効な治療又は治癒はなく、支持的な治療があるのみである。ＭＤＳなどのミトコンドリア性疾患を治療及び予防するための組成物並びに方法の必要性が存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本開示は、不均衡ヌクレオチドプールによって特徴付けられる疾患を有するか、又は疾患を発症する危険性のある対象（例えば、ヒト対象などの哺乳動物対象）を治療するために使用できる組成物及び方法に関する。本開示の組成物及び方法を使用して治療、予防、及び／又は治癒され得る典型的な病状は、チミジンキナーゼ２タンパク質をコードするＴＫ２、デオキシグアノシンキナーゼタンパク質をコードするＤＧＵＯＫ、リボヌクレオチド還元酵素のｐ５３誘導性サブユニットのｐ５３Ｒ２をコードするＲＲＭ２Ｂ、チミジンホスホリラーゼをコードするＴＹＭＰ、コハク酸ＣｏＡリガーゼＡＤＰ形成ベータサブユニットをコードするＳＵＣＬＡ２、コハク酸ＣｏＡリガーゼＡＤＰ形成アルファサブユニットをコードするＳＵＣＬＧ１、ミトコンドリア内膜タンパク質ＭＰＶ１７をコードするＭＰＶ１７、及びＤＮＡポリメラーゼガンマ触媒サブユニットをコードするＰＯＬＧから選択される遺伝子の欠損などの、ミトコンドリアＤＮＡ枯渇症候群を含むミトコンドリア性疾患である。
【発明の効果】
【０００８】
本開示の組成物及び方法を使用して、上記の疾患を有するか又は発症する危険性のある対象（例えば、ヒト対象などの哺乳動物対象）に、前述のタンパク質の１以上をコードする導入遺伝子を含む組成物を投与してよい。組成物は、例えば、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターなどのウイルスベクターであってよい。いくつかの実施形態では、対象は、上記タンパク質の１以上をコードする導入遺伝子を含有する第２の組成物を投与される。第２の組成物は、例えば、ＡＡＶベクターなどのウイルスベクターであってよい。いくつかの実施形態では、対象は、前述のタンパク質の１以上をコードする導入遺伝子を含有する第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、及び／又は第１０の組成物などの１以上の後続の組成物をさらに投与される。１以上の後続の組成物は、それぞれ独立して、例えば、ＡＡＶベクターなどのウイルスベクターであってよい。
【０００９】
第１の態様では、本開示は、それを必要とする対象中の不均衡ヌクレオチドプールによって特徴付けられる疾患又は障害を治療、予防、及び／又は治癒する方法を特徴とする。本方法は、チミジンキナーゼ２（ＴＫ２）、デオキシグアノシンキナーゼ（ｄＧＫ）、チミジンホスホリラーゼ（ＴＰ）、及びリボヌクレオチド還元酵素のｐ５３誘導性小サブユニット（ｐ５３Ｒ２）、スクシニルＣｏＡリガーゼＡＤＰ形成サブユニットベータ（ＳＵＣＬＡ２）、スクシニルＣｏＡリガーゼＧＤＰ形成サブユニットアルファ（ＳＵＣＬＧ１）、ミトコンドリア内膜タンパク質ＭＰＶ１７（ＭＰＶ１７）、及び／又はＤＮＡポリメラーゼサブユニットガンマ（ＰＯＬＧ）をコードする導入遺伝子を含有する組成物の治療有効量を対象に投与することを含む。
【００１０】
さらなる態様では、本開示は、不均衡ヌクレオチドプールによって特徴付けられる疾患又は障害を有する対象における酵素活性を回復する方法を特徴とする。本方法は、ＴＫ２、ｄＧＫ、ＴＰ、ｐ５３Ｒ２、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１、ＭＰＶ１７、及び／又はＰＯＬＧをコードする導入遺伝子を含有する組成物の治療有効量を対象に投与することを含む。
【００１１】
さらなる態様では、本開示は、それを必要とする対象中の不均衡ヌクレオチドプールによって特徴付けられる疾患又は障害に関連付けられる１以上の症状を軽減する方法を特徴とする。本方法は、ＴＫ２、ｄＧＫ、ＴＰ、ｐ５３Ｒ２、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１、ＭＰＶ１７、及び／又はＰＯＬＧをコードする導入遺伝子を含有する組成物の治療有効量を対象に投与することを含む。
【００１２】
本発明の態様のいずれかにおいて、本開示は、本明細書に記載の方法で使用するための本明細書に記載の組成物も提供する。本開示はまた、本明細書に記載の方法のための医薬の製造のための本明細書に記載の組成物の使用も提供する。導入遺伝子は、ＴＫ２、ｄＧＫ、ＴＰ、ｐ５３Ｒ２、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１、ＭＰＶ１７、及び／又はＰＯＬＧをコードし得る。例えば、導入遺伝子は、ＴＫ２、ｄＧＫ、ＴＰ、ｐ５３Ｒ２、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１及び／又はＭＰＶ１７をコードし得る。
【００１３】
前述の態様の一部として、本開示はしたがって、不均衡ヌクレオチドプールによって特徴付けられる疾患又は障害を治療、予防、及び／又は治癒するのに使用するための、ＴＫ２、ｄＧＫ、ＴＰ、ｐ５３Ｒ２、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１、ＭＰＶ１７、及び／又はＰＯＬＧをコードする導入遺伝子を含有する組成物も提供する。不均衡ヌクレオチドプールによって特徴付けられる疾患又は障害を有する対象における酵素活性を回復するのに使用するための、ＴＫ２、ｄＧＫ、ＴＰ、ｐ５３Ｒ２、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１、ＭＰＶ１７、及び／又はＰＯＬＧをコードする導入遺伝子を含有する組成物も提供される。さらに、不均衡ヌクレオチドプールによって特徴付けられる疾患又は障害に関連付けられる１以上の症状を軽減するのに使用するためのＴＫ２、ｄＧＫ、ＴＰ、ｐ５３Ｒ２、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１、ＭＰＶ１７、及び／又はＰＯＬＧをコードする導入遺伝子を含有する組成物が提供される。
【００１４】
前述の態様の一部として、本開示はまた、不均衡ヌクレオチドプールによって特徴付けられる疾患又は障害を治療、予防、及び／又は治癒するための医薬の製造のための、ＴＫ２、ｄＧＫ、ＴＰ、ｐ５３Ｒ２、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１、ＭＰＶ１７、及び／又はＰＯＬＧをコードする導入遺伝子を含有する組成物の使用を提供する。不均衡ヌクレオチドプールによって特徴付けられる疾患又は障害を有する対象における酵素活性を回復するための薬剤の製造のための、ＴＫ２、ｄＧＫ、ＴＰ、ｐ５３Ｒ２、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１、ＭＰＶ１７、及び／又はＰＯＬＧをコードする導入遺伝子を含有する組成物の使用も提供される。さらに、不均衡ヌクレオチドプールによって特徴付けられる疾患又は障害に関連付けられる１以上の症状を軽減するための薬剤の製造のための、ＴＫ２、ｄＧＫ、ＴＰ、ｐ５３Ｒ２、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１、ＭＰＶ１７、及び／又はＰＯＬＧをコードする導入遺伝子を含有する組成物の使用が提供される。
【００１５】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、疾患又は障害は、ミトコンドリアＤＮＡ枯渇症候群（ＭＤＳ）などのミトコンドリア性疾患である。いくつかの実施形態では、ＭＤＳは、ＴＫ２をコードする内因性遺伝子における１以上の変異によって特徴付けられる筋障害性ＭＤＳである。いくつかの実施形態では、ＭＤＳは、ＳＵＣＬＡ２をコードする内因性遺伝子における１以上の変異によって特徴付けられる脳筋症型である。いくつかの実施形態では、ＭＤＳは、ＴＰをコードする内因性遺伝子における１以上の変異によって特徴付けられる神経胃腸脳筋症型である。いくつかの実施形態では、ＭＤＳは、ｄＧＫ、ＭＰＶ１７、及び／又はＰＯＬＧをコードする内因性遺伝子における１以上の変異によって特徴付けられる肝障害型である。
【００１６】
いくつかの実施形態では、導入遺伝子はＴＫ２をコードする。ＴＫ２は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１のアミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有してよい。いくつかの実施形態では、ＴＫ２は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１のアミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＫ２は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＫ２は、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多いアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上のアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失によって配列番号１と異なるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＴＫ２は、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多い保存的アミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上の保存的アミノ酸置換によって配列番号１と異なるアミノ酸配列を有する。
【００１７】
いくつかの実施形態では、ＴＫ２をコードする導入遺伝子は、配列番号２の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列（例えば、配列番号２の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＫ２をコードする導入遺伝子は、配列番号２の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列（例えば、配列番号２の核酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＫ２をコードする導入遺伝子は、配列番号２の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列（例えば、配列番号２の核酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＫ２をコードする導入遺伝子は、配列番号２の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列（例えば、配列番号２の核酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＫ２をコードする導入遺伝子は、効率を高めるためにコドン最適化される。いくつかの実施形態では、ＴＫ２をコードする導入遺伝子の核酸は、ＴＫ２をコードする導入遺伝子のコード配列と少なくとも７０％同一（例えば、コード配列の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）である。いくつかの実施形態では、ＴＫ２をコードする導入遺伝子の核酸配列は、配列番号１７の核酸配列を有する。
【００１８】
いくつかの実施形態では、導入遺伝子はｄＧＫをコードする。ｄＧＫは、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号３のアミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有してよい。いくつかの実施形態では、ｄＧＫは、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号３のアミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｄＧＫは、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号３のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｄＧＫは、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多いアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上のアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失によって配列番号３と異なるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｄＧＫは、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多い保存的アミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上の保存的アミノ酸置換によって配列番号３と異なるアミノ酸配列を有する。
【００１９】
いくつかの実施形態では、ｄＧＫをコードする導入遺伝子は、配列番号４の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列（例えば、配列番号４の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｄＧＫをコードする導入遺伝子は、配列番号４の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列（例えば、配列番号４の核酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｄＧＫをコードする導入遺伝子は、配列番号４の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列（例えば、配列番号４の核酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｄＧＫをコードする導入遺伝子は、配列番号４の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列（例えば、配列番号４の核酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｄＧＫをコードする導入遺伝子は、効率を高めるためにコドン最適化される。いくつかの実施形態では、ｄＧＫをコードする導入遺伝子の核酸は、ｄＧＫをコードする導入遺伝子のコード配列と少なくとも７０％同一（例えば、コード配列の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）である。いくつかの実施形態では、ｄＧＫをコードする導入遺伝子の核酸配列は、配列番号１８の核酸配列を有する。
【００２０】
いくつかの実施形態では、導入遺伝子はＴＰをコードする。ＴＰは、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号５のアミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有してよい。いくつかの実施形態では、ＴＰは、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号５のアミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＰは、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号５のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＰは、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多いアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上のアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失によって配列番号５と異なるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＴＰは、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多い保存的アミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上の保存的アミノ酸置換によって配列番号５と異なるアミノ酸配列を有する。
【００２１】
いくつかの実施形態では、ＴＰをコードする導入遺伝子は、配列番号６の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列（例えば、配列番号６の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＰをコードする導入遺伝子は、配列番号６の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列（例えば、配列番号６の核酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＰをコードする導入遺伝子は、配列番号６の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列（例えば、配列番号６の核酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＰをコードする導入遺伝子は、配列番号６の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列（例えば、配列番号６の核酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＰをコードする導入遺伝子は、効率を高めるためにコドン最適化される。いくつかの実施形態では、ＴＰをコードする導入遺伝子の核酸は、ＴＰをコードする導入遺伝子のコード配列と少なくとも７０％同一（例えば、コード配列の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）である。いくつかの実施形態では、ＴＰをコードする導入遺伝子の核酸配列は、配列番号１９の核酸配列を有する。
【００２２】
いくつかの実施形態では、導入遺伝子はｐ５３Ｒ２をコードする。ｐ５３Ｒ２は、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号７のアミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有してよい。いくつかの実施形態では、ｐ５３Ｒ２は、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号７のアミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｐ５３Ｒ２は、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号７のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｐ５３Ｒ２は、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多いアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上のアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失によって配列番号７と異なるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｐ５３Ｒ２は、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多い保存的アミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上の保存的アミノ酸置換によって配列番号７と異なるアミノ酸配列を有する。
【００２３】
いくつかの実施形態では、ｐ５３Ｒ２をコードする導入遺伝子は、配列番号８の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列（例えば、配列番号８の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｐ５３Ｒ２をコードする導入遺伝子は、配列番号８の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列（例えば、配列番号８の核酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｐ５３Ｒ２をコードする導入遺伝子は、配列番号８の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列（例えば、配列番号８の核酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｐ５３Ｒ２をコードする導入遺伝子は、配列番号８の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列（例えば、配列番号８の核酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｐ５３Ｒ２をコードする導入遺伝子は、効率を高めるためにコドン最適化される。いくつかの実施形態では、ｐ５３Ｒ２をコードする導入遺伝子の核酸は、ｐ５３Ｒ２をコードする導入遺伝子のコード配列と少なくとも７０％同一（例えば、コード配列の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）である。いくつかの実施形態では、ｐ５３Ｒ２をコードする導入遺伝子の核酸配列は、配列番号２０の核酸配列を有する。
【００２４】
いくつかの実施形態では、導入遺伝子はＳＵＣＬＡ２をコードする。ＳＵＣＬＡ２は、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号９のアミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有してよい。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＡ２は、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号９のアミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＡ２は、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号９のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＡ２は、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多いアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上のアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失によって配列番号９と異なるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＡ２は、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多い保存的アミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上の保存的アミノ酸置換によって配列番号９と異なるアミノ酸配列を有する。
【００２５】
いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＡ２をコードする導入遺伝子は、配列番号１０の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列（例えば、配列番号１０の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＡ２をコードする導入遺伝子は、配列番号１０の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列（例えば、配列番号１０の核酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＡ２をコードする導入遺伝子は、配列番号１０の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列（例えば、配列番号１０の核酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＡ２をコードする導入遺伝子は、配列番号１０の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列（例えば、配列番号１０の核酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＡ２をコードする導入遺伝子は、効率を高めるためにコドン最適化される。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＡ２をコードする導入遺伝子の核酸は、ＳＵＣＬＡ２をコードする導入遺伝子のコード配列と少なくとも７０％同一（例えば、コード配列の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）である。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＡ２をコードする導入遺伝子の核酸配列は、配列番号２１の核酸配列を有する。
【００２６】
いくつかの実施形態では、導入遺伝子はＳＵＣＬＧ１をコードする。ＳＵＣＬＧ１は、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１１のアミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有してよい。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＧ１は、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１１のアミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＧ１は、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１１のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＧ１は、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多いアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上のアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失によって配列番号１１と異なるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＧ１は、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多い保存的アミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上の保存的アミノ酸置換によって配列番号１１と異なるアミノ酸配列を有する。
【００２７】
いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＧ１をコードする導入遺伝子は、配列番号１２の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列（例えば、配列番号１２の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＧ１をコードする導入遺伝子は、配列番号１２の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列（例えば、配列番号１２の核酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＧ１をコードする導入遺伝子は、配列番号１２の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列（例えば、配列番号１２の核酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＧ１をコードする導入遺伝子は、配列番号１２の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列（例えば、配列番号１２の核酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＧ１をコードする導入遺伝子は、効率を高めるためにコドン最適化される。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＧ１をコードする導入遺伝子の核酸は、ＳＵＣＬＧ１をコードする導入遺伝子のコード配列と少なくとも７０％同一（例えば、コード配列の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）である。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＧ１をコードする導入遺伝子の核酸配列は、配列番号２２の核酸配列を有する。
【００２８】
いくつかの実施形態では、導入遺伝子はＭＰＶ１７をコードする。ＭＰＶ１７は、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１３のアミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有してよい。いくつかの実施形態では、ＭＰＶ１７は、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１３のアミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＭＰＶ１７は、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１３のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＭＰＶ１７は、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多いアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上のアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失によって配列番号１３と異なるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＭＰＶ１７は、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多い保存的アミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上の保存的アミノ酸置換によって配列番号１３と異なるアミノ酸配列を有する。
【００２９】
いくつかの実施形態では、ＭＰＶ１７をコードする導入遺伝子は、配列番号１４の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列（例えば、配列番号１４の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＭＰＶ１７をコードする導入遺伝子は、配列番号１４の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列（例えば、配列番号１４の核酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＭＰＶ１７をコードする導入遺伝子は、配列番号１４の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列（例えば、配列番号１４の核酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＭＰＶ１７をコードする導入遺伝子は、配列番号１４の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列（例えば、配列番号１４の核酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＭＰＶ１７をコードする導入遺伝子は、効率を高めるためにコドン最適化される。いくつかの実施形態では、ＭＰＶ１７をコードする導入遺伝子の核酸は、ＭＰＶ１７をコードする導入遺伝子のコード配列と少なくとも７０％同一（例えば、コード配列の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）である。いくつかの実施形態では、ＭＰＶ１７をコードする導入遺伝子の核酸配列は、配列番号２３の核酸配列を有する。
【００３０】
いくつかの実施形態では、導入遺伝子はＰＯＬＧをコードする。ＰＯＬＧは、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１５のアミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有してよい。いくつかの実施形態では、ＰＯＬＧは、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１５のアミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＰＯＬＧは、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１５のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＰＯＬＧは、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多いアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上のアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失によって配列番号１５と異なるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＯＬＧは、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多い保存的アミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上の保存的アミノ酸置換によって配列番号１５と異なるアミノ酸配列を有する。
【００３１】
いくつかの実施形態では、ＰＯＬＧをコードする導入遺伝子は、配列番号１６の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列（例えば、配列番号１６の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＰＯＬＧをコードする導入遺伝子は、配列番号１６の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列（例えば、配列番号１６の核酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＰＯＬＧをコードする導入遺伝子は、配列番号１６の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列（例えば、配列番号１６の核酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＰＯＬＧをコードする導入遺伝子は、配列番号１６の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列（例えば、配列番号１６の核酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＰＯＬＧをコードする導入遺伝子は、効率を高めるためにコドン最適化される。いくつかの実施形態では、ＰＯＬＧをコードする導入遺伝子の核酸は、ＰＯＬＧをコードする導入遺伝子のコード配列と少なくとも７０％同一（例えば、コード配列の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）である。いくつかの実施形態では、ＰＯＬＧをコードする導入遺伝子の核酸配列は、配列番号２４の核酸配列を有する。
【００３２】
別の態様では、本開示は、それを必要とする対象におけるＴＫ２欠損症を治療、予防、及び／又は治癒する方法を特徴とする。本方法は、ＴＫ２をコードする導入遺伝子を含有する組成物の治療有効量を対象に投与することを含む。
【００３３】
さらなる態様では、本開示は、それを必要とする対象におけるＴＫ２酵素活性を回復する方法を特徴とする。本方法は、ＴＫ２をコードする導入遺伝子を含有する組成物の治療有効量を対象に投与することを含む。
【００３４】
別の態様では、本開示は、それを必要とする対象におけるＴＫ２欠損症に関連付けられる１以上の症状を軽減する方法を特徴とする。本方法は、ＴＫ２をコードする導入遺伝子を含有する組成物の治療有効量を対象に投与することを含む。
【００３５】
これらの態様の一部として、本開示はまた、ＴＫ２欠損症を治療、予防、及び／又は治癒するのに使用するためのＴＫ２をコードする導入遺伝子を含有する組成物を提供する。ＴＫ２欠損症を有する対象におけるＴＫ２酵素活性の回復に使用するためのＴＫ２をコードする導入遺伝子を含有する組成物も提供される。さらに、ＴＫ２欠損症に関連付けられる１以上の症状を軽減するのに使用するためのＴＫ２をコードする導入遺伝子を含有する組成物が提供される。典型的には、対象はＴＫ２欠損症を有する。
【００３６】
これらの態様の一部として、本開示はまた、ＴＫ２欠損症を治療、予防、及び／又は治癒するための薬剤の製造のための、ＴＫ２をコードする導入遺伝子を含有する組成物の使用も提供する。ＴＫ２欠損症を有する対象においてＴＫ２酵素活性を回復させる薬剤の製造のための、ＴＫ２をコードする導入遺伝子を含有する組成物の使用も提供される。さらに、ＴＫ２欠損症に関連付けられる１以上の症状を軽減するための薬剤の製造のための、ＴＫ２をコードする導入遺伝子を含有する組成物の使用が提供される。典型的には、対象はＴＫ２欠損症を有する。
【００３７】
前の３つの態様のいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、ＭＤＳを有するか、又は発症する危険性がある。ＴＫ２は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１のアミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有してよい。いくつかの実施形態では、ＴＫ２は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１のアミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＫ２は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＫ２は、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多いアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上のアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失によって配列番号１と異なるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＴＫ２は、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多い保存的アミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上の保存的アミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失によって、配列番号１と異なるアミノ酸配列を有する。
【００３８】
いくつかの実施形態では、ＴＫ２をコードする導入遺伝子は、配列番号２の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列（例えば、配列番号２の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＫ２をコードする導入遺伝子は、配列番号２の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列（例えば、配列番号２の核酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＫ２をコードする導入遺伝子は、配列番号２の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列（例えば、配列番号２の核酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＫ２をコードする導入遺伝子は、配列番号２の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列（例えば、配列番号２の核酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＫ２をコードする導入遺伝子は、効率を高めるためにコドン最適化される。いくつかの実施形態では、ＴＫ２をコードする導入遺伝子の核酸は、ＴＫ２をコードする導入遺伝子のコード配列と少なくとも７０％同一（例えば、コード配列の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）である。いくつかの実施形態では、ＴＫ２をコードする導入遺伝子の核酸配列は、配列番号１７の核酸配列を有する。
【００３９】
本開示の上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、組成物はウイルスベクターなどのベクターを含む。ウイルスベクターは、例えば、ＡＡＶ、アデノウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、ポックスウイルス、バキュロウイルス、単純ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス、又は合成ウイルス（例えば、キメラウイルス、モザイクウイルス、又は偽型ウイルス、及び／又は外来タンパク質、合成ポリマー、ナノ粒子、又は小分子を含有するウイルス）であってよい。
【００４０】
いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、ＡＡＶ１（すなわち、ＡＡＶ１逆末端反復（ＩＴＲ）及びＡＡＶ１キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）、ＡＡＶ２（すなわち、ＡＡＶ２  ＩＴＲ及びＡＡＶ２キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）、ＡＡＶ３（すなわち、ＡＡＶ３  ＩＴＲ及びＡＡＶ３キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）、ＡＡＶ４（すなわち、ＡＡＶ４  ＩＴＲ及びＡＡＶ４キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）、ＡＡＶ５（すなわち、ＡＡＶ５  ＩＴＲ及びＡＡＶ５キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）、ＡＡＶ６（すなわち、ＡＡＶ６  ＩＴＲ及びＡＡＶ６キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）、ＡＡＶ７（すなわち、ＡＡＶ７  ＩＴＲ及びＡＡＶ７キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）、ＡＡＶ８（すなわち、ＡＡＶ８  ＩＴＲ及びＡＡＶ８キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）、ＡＡＶ９（すなわち、ＡＡＶ９  ＩＴＲ及びＡＡＶ９キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）、ＡＡＶｒｈ７４（すなわち、ＡＡＶｒｈ７４  ＩＴＲ及びＡＡＶｒｈ７４キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）、ＡＡＶｒｈ．８（すなわち、ＡＡＶｒｈ．８  ＩＴＲ及びＡＡＶｒｈ．８キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）、又はＡＡＶｒｈ．１０（すなわち、ＡＡＶｒｈ．１０  ＩＴＲ及びＡＡＶｒｈ．１０キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）などのＡＡＶである。
【００４１】
いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、１つのＡＡＶ血清型からのＩＴＲ及び異なるＡＡＶ血清型からのキャプシドタンパク質を含有する偽型ＡＡＶである。いくつかの実施形態では、偽型ＡＡＶはＡＡＶ２／９（すなわち、ＡＡＶ２  ＩＴＲ及びＡＡＶ９キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）である。いくつかの実施形態では、偽型ＡＡＶはＡＡＶ２／８（すなわち、ＡＡＶ２  ＩＴＲ及びＡＡＶ８キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）である。いくつかの実施形態では、偽型ＡＡＶはＡＡＶ２／１（すなわち、ＡＡＶ２  ＩＴＲ及びＡＡＶ１キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）である。
【００４２】
いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ７４、ＡＡＶｒｈ．８、又はＡＡＶｒｈ．１０からのキャプシドタンパク質の１以上のキメラを含有するキャプシドタンパク質などの組換えキャプシドタンパク質を含有する。
【００４３】
特定の実施形態では、ウイルスベクターはＡＡＶ９である。例えば、組成物は、ＴＫ２、ｄＧＫ、ＴＰ、ｐ５３Ｒ２、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１、ＭＰＶ１７、及び／又はＰＯＬＧをコードする導入遺伝子を含む核酸配列を含むＡＡＶ９を含んでよい。特定の実施形態では、組成物は、ＴＫ２、ｄＧＫ、ＴＰ、ｐ５３Ｒ２、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１又はＭＰＶ１７をコードする導入遺伝子を含む核酸配列を含むＡＡＶ９を含む。特定の実施形態では、組成物は、ＴＫ２をコードする導入遺伝子を含む核酸配列を含むＡＡＶ９を含む。
【００４４】
特定の実施形態では、ウイルスベクターはＡＡＶであり、導入遺伝子はＴＫ２である。例えば、組成物は、機能性ＴＫ２タンパク質をコードする導入遺伝子を含む核酸配列を含む、ＡＡＶ９などの組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）を含んでよい。
【００４５】
本開示の上記態様のいずれかのいくつかの実施形態では、組成物は、リポソーム、小胞、合成小胞、エキソソーム、合成エキソソーム、デンドリマー、又はナノ粒子である。
【００４６】
本開示の上記態様のいずれかのいくつかの実施形態では、導入遺伝子は、筋肉細胞において導入遺伝子の発現を誘導するプロモーターに作動可能に連結される。プロモーターは、例えば、ニワトリベータアクチンプロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ミオシン軽鎖２プロモーター、アルファアクチンプロモーター、トロポニン１プロモーター、Ｎａ＋／Ｃａ２＋交換因子プロモーター、ジストロフィンプロモーター、クレアチンキナーゼプロモーター、アルファ７インテグリンプロモーター、脳ナトリウム利尿ペプチドプロモーター、アルファＢクリスタリン／小分子熱ショックタンパク質プロモーター、アルファミオシン重鎖プロモーター、又は心房性ナトリウム利尿因子プロモーターであってよい。
【００４７】
本開示の上記態様のいずれかのいくつかの実施形態では、導入遺伝子は、筋肉細胞において導入遺伝子の発現を誘導するエンハンサーに作動可能に連結される。本開示の組成物及び方法と共に使用され得る例示的なエンハンサーは、ＣＭＶエンハンサー、筋細胞増強因子２（ＭＥＦ２）エンハンサー、及びＭｙｏＤエンハンサーである。
【００４８】
いくつかの実施形態では、組成物は、対象がＴＫ２、ｄＧＫ、ＴＰ、ｐ５３Ｒ２、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１、ＭＰＶ１７、及び／又はＰＯＬＧをコードする内因性遺伝子に欠損を有すると診断されるとすぐに、又は直後に対象に投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、対象がＴＫ２をコードする内因性遺伝子に欠損を有すると診断されるとすぐに、又は直後に対象に投与される。
【００４９】
いくつかの実施形態では、本方法は、ＴＫ２、ｄＧＫ、ＴＰ、ｐ５３Ｒ２、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１、ＭＰＶ１７、及び／又はＰＯＬＧをコードする導入遺伝子を含有する第２の組成物の治療有効量を対象に投与することをさらに含む。
【００５０】
いくつかの実施形態では、第２の組成物の導入遺伝子はＴＫ２をコードする。ＴＫ２は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１のアミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有してよい。いくつかの実施形態では、ＴＫ２は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１のアミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＫ２は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＫ２は、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多いアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上のアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失によって配列番号１と異なるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＴＫ２は、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多い保存的アミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上の保存的アミノ酸置換によって配列番号１と異なるアミノ酸配列を有する。
【００５１】
いくつかの実施形態では、ＴＫ２をコードする第２の組成物の導入遺伝子は、配列番号２の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列（例えば、配列番号２の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＫ２をコードする第２の組成物の導入遺伝子は、配列番号２の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列（例えば、配列番号２の核酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＫ２をコードする導入遺伝子は、配列番号２の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列（例えば、配列番号２の核酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＫ２をコードする導入遺伝子は、配列番号２の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列（例えば、配列番号２の核酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＫ２をコードする導入遺伝子は、効率を高めるためにコドン最適化される。いくつかの実施形態では、ＴＫ２をコードする導入遺伝子の核酸は、ＴＫ２をコードする導入遺伝子のコード配列と少なくとも７０％同一（例えば、コード配列の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）である。いくつかの実施形態では、ＴＫ２をコードする導入遺伝子の核酸配列は、配列番号１７の核酸配列を有する。
【００５２】
いくつかの実施形態では、第２の組成物の導入遺伝子はｄＧＫをコードする。ｄＧＫは、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号３のアミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有してよい。いくつかの実施形態では、ｄＧＫは、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号３のアミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｄＧＫは、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号３のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｄＧＫは、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多いアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上のアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失によって配列番号３と異なるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｄＧＫは、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多い保存的アミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上の保存的アミノ酸置換によって配列番号３と異なるアミノ酸配列を有する。
【００５３】
いくつかの実施形態では、ｄＧＫをコードする第２の組成物の導入遺伝子は、配列番号４の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列（例えば、配列番号４の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｄＧＫをコードする第２の組成物の導入遺伝子は、配列番号４の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列（例えば、配列番号４の核酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｄＧＫをコードする導入遺伝子は、配列番号４の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列（例えば、配列番号４の核酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｄＧＫをコードする導入遺伝子は、配列番号４の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列（例えば、配列番号４の核酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｄＧＫをコードする導入遺伝子は、効率を高めるためにコドン最適化される。いくつかの実施形態では、ｄＧＫをコードする導入遺伝子の核酸は、ｄＧＫをコードする導入遺伝子のコード配列と少なくとも７０％同一（例えば、コード配列の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）である。いくつかの実施形態では、ｄＧＫをコードする導入遺伝子の核酸配列は、配列番号１８の核酸配列を有する。
【００５４】
いくつかの実施形態では、第２の組成物の導入遺伝子はＴＰをコードする。ＴＰは、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号５のアミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有してよい。いくつかの実施形態では、ＴＰは、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号５のアミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＰは、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号５のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＰは、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多いアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上のアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失によって配列番号５と異なるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＴＰは、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多い保存的アミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上の保存的アミノ酸置換によって配列番号５と異なるアミノ酸配列を有する。
【００５５】
いくつかの実施形態では、ＴＰをコードする第２の組成物の導入遺伝子は、配列番号６の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列（例えば、配列番号６の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＰをコードする第２の組成物の導入遺伝子は、配列番号６の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列（例えば、配列番号６の核酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＰをコードする導入遺伝子は、配列番号６の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列（例えば、配列番号６の核酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＰをコードする導入遺伝子は、配列番号６の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列（例えば、配列番号６の核酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＰをコードする導入遺伝子は、効率を高めるためにコドン最適化される。いくつかの実施形態では、ＴＰをコードする導入遺伝子の核酸は、ＴＰをコードする導入遺伝子のコード配列と少なくとも７０％同一（例えば、コード配列の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）である。いくつかの実施形態では、ＴＰをコードする導入遺伝子の核酸配列は、配列番号１９の核酸配列を有する。
【００５６】
いくつかの実施形態では、第２の組成物の導入遺伝子はｐ５３Ｒ２をコードする。ｐ５３Ｒ２は、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号７のアミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有してよい。いくつかの実施形態では、ｐ５３Ｒ２は、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号７のアミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｐ５３Ｒ２は、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号７のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｐ５３Ｒ２は、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多いアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上のアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失によって配列番号７と異なるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｐ５３Ｒ２は、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多い保存的アミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上の保存的アミノ酸置換によって配列番号７と異なるアミノ酸配列を有する。
【００５７】
いくつかの実施形態では、ｐ５３Ｒ２をコードする第２の組成物の導入遺伝子は、配列番号８の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列（例えば、配列番号８の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｐ５３Ｒ２をコードする第２の組成物の導入遺伝子は、配列番号８の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列（例えば、配列番号８の核酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｐ５３Ｒ２をコードする導入遺伝子は、配列番号８の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列（例えば、配列番号８の核酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｐ５３Ｒ２をコードする導入遺伝子は、配列番号８の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列（例えば、配列番号８の核酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｐ５３Ｒ２をコードする導入遺伝子は、効率を高めるためにコドン最適化される。いくつかの実施形態では、ｐ５３Ｒ２をコードする導入遺伝子の核酸は、ｐ５３Ｒ２をコードする導入遺伝子のコード配列と少なくとも７０％同一（例えば、コード配列の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）である。いくつかの実施形態では、ｐ５３Ｒ２をコードする導入遺伝子の核酸配列は、配列番号２０の核酸配列を有する。
【００５８】
いくつかの実施形態では、第２の組成物の導入遺伝子はＳＵＣＬＡ２をコードする。ＳＵＣＬＡ２は、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号９のアミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有してよい。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＡ２は、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号９のアミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＡ２は、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号９のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＡ２は、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多いアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上のアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失によって配列番号９と異なるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＡ２は、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多い保存的アミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上の保存的アミノ酸置換によって配列番号９と異なるアミノ酸配列を有する。
【００５９】
いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＡ２をコードする第２の組成物の導入遺伝子は、配列番号１０の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列（例えば、配列番号１０の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＡ２をコードする第２の組成物の導入遺伝子は、配列番号１０の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列（例えば、配列番号１０の核酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＡ２をコードする導入遺伝子は、配列番号１０の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列（例えば、配列番号１０の核酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＡ２をコードする導入遺伝子は、配列番号１０の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列（例えば、配列番号１０の核酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＡ２をコードする導入遺伝子は、効率を高めるためにコドン最適化される。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＡ２をコードする導入遺伝子の核酸は、ＳＵＣＬＡ２をコードする導入遺伝子のコード配列と少なくとも７０％同一（例えば、コード配列の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）である。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＡ２をコードする導入遺伝子の核酸配列は、配列番号２１の核酸配列を有する。
【００６０】
いくつかの実施形態では、第２の組成物の導入遺伝子はＳＵＣＬＧ１をコードする。ＳＵＣＬＧ１は、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１１のアミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有してよい。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＧ１は、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１１のアミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＧ１は、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１１のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＧ１は、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多いアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上のアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失によって配列番号１１と異なるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＧ１は、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多い保存的アミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上の保存的アミノ酸置換によって配列番号１１と異なるアミノ酸配列を有する。
【００６１】
いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＧ１をコードする第２の組成物の導入遺伝子は、配列番号１２の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列（例えば、配列番号１２の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＧ１をコードする第２の組成物の導入遺伝子は、配列番号１２の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列（例えば、配列番号１２の核酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＧ１をコードする導入遺伝子は、配列番号１２の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列（例えば、配列番号１２の核酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＧ１をコードする導入遺伝子は、配列番号１２の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列（例えば、配列番号１２の核酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＧ１をコードする導入遺伝子は、効率を高めるためにコドン最適化される。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＧ１をコードする導入遺伝子の核酸は、ＳＵＣＬＧ１をコードする導入遺伝子のコード配列と少なくとも７０％同一（例えば、コード配列の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）である。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＧ１をコードする導入遺伝子の核酸配列は、配列番号２２の核酸配列を有する。
【００６２】
いくつかの実施形態では、第２の組成物の導入遺伝子はＭＰＶ１７をコードする。ＭＰＶ１７は、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１３のアミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有してよい。いくつかの実施形態では、ＭＰＶ１７は、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１３のアミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＭＰＶ１７は、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１３のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＭＰＶ１７は、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多いアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上のアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失によって配列番号１３と異なるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＭＰＶ１７は、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多い保存的アミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上の保存的アミノ酸置換によって配列番号１３と異なるアミノ酸配列を有する。
【００６３】
いくつかの実施形態では、ＭＰＶ１７をコードする第２の組成物の導入遺伝子は、配列番号１４の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列（例えば、配列番号１４の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＭＰＶ１７をコードする第２の組成物の導入遺伝子は、配列番号１４の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列（例えば、配列番号１４の核酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＭＰＶ１７をコードする導入遺伝子は、配列番号１４の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列（例えば、配列番号１４の核酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＭＰＶ１７をコードする導入遺伝子は、配列番号１４の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列（例えば、配列番号１４の核酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＭＰＶ１７をコードする導入遺伝子は、効率を高めるためにコドン最適化される。いくつかの実施形態では、ＭＰＶ１７をコードする導入遺伝子の核酸は、ＭＰＶ１７をコードする導入遺伝子のコード配列と少なくとも７０％同一（例えば、コード配列の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）である。いくつかの実施形態では、ＭＰＶ１７をコードする導入遺伝子の核酸配列は、配列番号２３の核酸配列を有する。
【００６４】
いくつかの実施形態では、第２の組成物の導入遺伝子はＰＯＬＧをコードする。ＰＯＬＧは、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１５のアミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有してよい。いくつかの実施形態では、ＰＯＬＧは、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１５のアミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＰＯＬＧは、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１５のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＰＯＬＧは、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多いアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上のアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失によって配列番号１５と異なるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＯＬＧは、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多い保存的アミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上の保存的アミノ酸置換によって配列番号１５と異なるアミノ酸配列を有する。
【００６５】
いくつかの実施形態では、ＰＯＬＧをコードする第２の組成物の導入遺伝子は、配列番号１６の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列（例えば、配列番号１６の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＰＯＬＧをコードする第２の組成物の導入遺伝子は、配列番号１６の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列（例えば、配列番号１６の核酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＰＯＬＧをコードする導入遺伝子は、配列番号１６の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列（例えば、配列番号１６の核酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＰＯＬＧをコードする導入遺伝子は、配列番号１６の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列（例えば、配列番号１６の核酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＰＯＬＧをコードする導入遺伝子は、効率を高めるためにコドン最適化される。いくつかの実施形態では、ＰＯＬＧをコードする導入遺伝子の核酸は、ＰＯＬＧをコードする導入遺伝子のコード配列と少なくとも７０％同一（例えば、コード配列の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）である。いくつかの実施形態では、ＰＯＬＧをコードする導入遺伝子の核酸配列は、配列番号２４の核酸配列を有する。
【００６６】
いくつかの実施形態では、第２の組成物は、ウイルスベクターなどのベクターである。ウイルスベクターは、例えば、ＡＡＶ、アデノウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、ポックスウイルス、バキュロウイルス、単純ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス、又は合成ウイルス（例えば、キメラウイルス、モザイクウイルス、又は偽型ウイルス、及び／又は外来タンパク質、合成ポリマー、ナノ粒子、若しくは小分子を含有するウイルス）であってよい。
【００６７】
いくつかの実施形態では、第２の組成物は、ＡＡＶ１（すなわち、ＡＡＶ１逆末端反復（ＩＴＲ）及びＡＡＶ１キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）、ＡＡＶ２（すなわち、ＡＡＶ２  ＩＴＲ及びＡＡＶ２キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）、ＡＡＶ３（すなわち、ＡＡＶ３  ＩＴＲ及びＡＡＶ３キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）、ＡＡＶ４（すなわち、ＡＡＶ４  ＩＴＲ及びＡＡＶ４キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）、ＡＡＶ５（すなわち、ＡＡＶ５  ＩＴＲ及びＡＡＶ５キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）、ＡＡＶ６（すなわち、ＡＡＶ６  ＩＴＲ及びＡＡＶ６キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）、ＡＡＶ７（すなわち、ＡＡＶ７  ＩＴＲ及びＡＡＶ７キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）、ＡＡＶ８（すなわち、ＡＡＶ８  ＩＴＲ及びＡＡＶ８キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）、ＡＡＶ９（すなわち、ＡＡＶ９  ＩＴＲ及びＡＡＶ９キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）、ＡＡＶｒｈ７４（すなわち、ＡＡＶｒｈ７４  ＩＴＲ及びＡＡＶｒｈ７４キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）、ＡＡＶｒｈ．８（すなわち、ＡＡＶｒｈ．８  ＩＴＲ及びＡＡＶｒｈ．８キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）、又はＡＡＶｒｈ．１０（すなわち、ＡＡＶｒｈ．１０  ＩＴＲ及びＡＡＶｒｈ．１０キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）などのＡＡＶである。
【００６８】
いくつかの実施形態では、第２の組成物は、１つのＡＡＶ血清型からのＩＴＲ及び異なるＡＡＶ血清型からのキャプシドタンパク質を含有する偽型ＡＡＶである。いくつかの実施形態では、偽型ＡＡＶはＡＡＶ２／９（すなわち、ＡＡＶ２  ＩＴＲ及びＡＡＶ９キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）である。いくつかの実施形態では、偽型ＡＡＶはＡＡＶ２／８（すなわち、ＡＡＶ２  ＩＴＲ及びＡＡＶ８キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）である。いくつかの実施形態では、偽型ＡＡＶはＡＡＶ２／１（すなわち、ＡＡＶ２  ＩＴＲ及びＡＡＶ１キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）である。
【００６９】
いくつかの実施形態では、第２の組成物は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ７４、ＡＡＶｒｈ．８、又はＡＡＶｒｈ．１０からのキャプシドタンパク質のうちの１以上のキメラを含有するキャプシドタンパク質などの組換えキャプシドタンパク質を含有するＡＡＶである。
【００７０】
いくつかの実施形態では、第２の組成物は、リポソーム、小胞、合成小胞、エキソソーム、合成エキソソーム、デンドリマー、又はナノ粒子である。
【００７１】
いくつかの実施形態では、第２の組成物の導入遺伝子は、筋肉細胞において導入遺伝子の発現を誘導するプロモーターに作動可能に連結される。プロモーターは、例えば、ニワトリベータアクチンプロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ミオシン軽鎖２プロモーター、アルファアクチンプロモーター、トロポニン１プロモーター、Ｎａ＋／Ｃａ２＋交換因子プロモーター、ジストロフィンプロモーター、クレアチンキナーゼプロモーター、アルファ７インテグリンプロモーター、脳ナトリウム利尿ペプチドプロモーター、アルファＢクリスタリン／小分子熱ショックタンパク質プロモーター、アルファミオシン重鎖プロモーター、又は心房性ナトリウム利尿因子プロモーターであってよい。
【００７２】
いくつかの実施形態では、第２の組成物の導入遺伝子は、筋肉細胞において導入遺伝子の発現を誘導するエンハンサーに作動可能に連結される。本開示の組成物及び方法と共に使用され得る例示的なエンハンサーは、ＣＭＶエンハンサー、筋細胞増強因子２（ＭＥＦ２）エンハンサー、及びＭｙｏＤエンハンサーである。
【００７３】
いくつかの実施形態では、第１の組成物が対象に投与された後に、第２の組成物が対象に投与される。第２の組成物は、例えば、対象への第１の組成物の投与の１日若しくはそれを超える日数又は週以内に対象に投与されてよい。いくつかの実施形態では、第２の組成物は、第１の組成物の対象への投与の少なくとも１ヶ月後に対象に投与される。いくつかの実施形態では、第１の組成物の投与は、第２の組成物が対象に投与される間、継続する。
【００７４】
いくつかの実施形態では、本方法は、薬理学的薬剤を含有する第３の組成物の治療有効量を対象に投与することをさらに含む。薬理学的薬剤は、例えば、デオキシシチジン（ｄＣ）、デオキシチミジン（ｄＴ）、デオキシアデノシン（ｄＡ）、デオキシグアノシン（ｄＧ）、デオキシシチジン一リン酸（ｄＣＭＰ）、デオキシチミジン一リン酸（ＴＭＰ）、デオキシアデノシン一リン酸（ｄＡＭＰ）、デオキシグアノシン一リン酸（ｄＧＭＰ）、又はそれらの混合物であってよい。いくつかの実施形態では、薬理学的薬剤は、ｄＣ、ｄＴ、又はそれらの混合物である。
【００７５】
いくつかの実施形態では、対象に第１の組成物が投与された後に、第３の組成物が対象に投与される。第３の組成物は、対象への第１の組成物の投与の１日若しくはそれを超える日数又は週以内に対象に投与されてよい。いくつかの実施形態では、第３の組成物は、対象への第１の組成物の投与の少なくとも１ヶ月後に対象に投与される。
【００７６】
いくつかの実施形態では、対象に第２の組成物が投与された後に、第３の組成物が対象に投与される。第３の組成物は、対象への第２の組成物の投与の１日若しくはそれを超える日数又は週以内に対象に投与されてよい。いくつかの実施形態では、第３の組成物は、対象への第２の組成物の投与の少なくとも１ヶ月後に対象に投与される。
【００７７】
いくつかの実施形態では、第１の組成物の投与及び第２の組成物の投与は、第３の組成物が対象に投与される間、継続する。
【００７８】
いくつかの実施形態では、第３の組成物は、約１００ｍｇ／ｋｇ／日〜約１，０００ｍｇ／ｋｇ／日（例えば、約１００ｍｇ／ｋｇ／日、１０５ｍｇ／ｋｇ／日、１１０ｍｇ／ｋｇ／日、１１５ｍｇ／ｋｇ／日、１２０ｍｇ／ｋｇ／日、１２５ｍｇ／ｋｇ／日、１３０ｍｇ／ｋｇ／日、１３５ｍｇ／ｋｇ／日、１４０ｍｇ／ｋｇ／日、１４５ｍｇ／ｋｇ／日、１５０ｍｇ／ｋｇ／日、１５５ｍｇ／ｋｇ／日、１６０ｍｇ／ｋｇ／日、１６５ｍｇ／ｋｇ／日、１７０ｍｇ／ｋｇ／日、１７５ｍｇ／ｋｇ／日、１８０ｍｇ／ｋｇ／日、１８５ｍｇ／ｋｇ／日、１９０ｍｇ／ｋｇ／日、１９５ｍｇ／ｋｇ／日、２００ｍｇ／ｋｇ／日、２０５ｍｇ／ｋｇ／日、２１０ｍｇ／ｋｇ／日、２１５ｍｇ／ｋｇ／日、２２０ｍｇ／ｋｇ／日、２２５ｍｇ／ｋｇ／日、２３０ｍｇ／ｋｇ／日、２３５ｍｇ／ｋｇ／日、２４０ｍｇ／ｋｇ／日、２４５ｍｇ／ｋｇ／日、２５０ｍｇ／ｋｇ／日、２５５ｍｇ／ｋｇ／日、２６０ｍｇ／ｋｇ／日、２６５ｍｇ／ｋｇ／日、２７０ｍｇ／ｋｇ／日、２７５ｍｇ／ｋｇ／日、２８０ｍｇ／ｋｇ／日、２８５ｍｇ／ｋｇ／日、２９０ｍｇ／ｋｇ／日、２９５ｍｇ／ｋｇ／日、３００ｍｇ／ｋｇ／日、３０５ｍｇ／ｋｇ／日、３１０ｍｇ／ｋｇ／日、３１５ｍｇ／ｋｇ／日、３２０ｍｇ／ｋｇ／日、３２５ｍｇ／ｋｇ／日、３３０ｍｇ／ｋｇ／日、３３５ｍｇ／ｋｇ／日、３４０ｍｇ／ｋｇ／日、３４５ｍｇ／ｋｇ／日、３５０ｍｇ／ｋｇ／日、３５５ｍｇ／ｋｇ／日、３６０ｍｇ／ｋｇ／日、３６５ｍｇ／ｋｇ／日、３７０ｍｇ／ｋｇ／日、３７５ｍｇ／ｋｇ／日、３８０ｍｇ／ｋｇ／日、３８５ｍｇ／ｋｇ／日、３９０ｍｇ／ｋｇ／日、３９５ｍｇ／ｋｇ／日、４００ｍｇ／ｋｇ／日、４０５ｍｇ／ｋｇ／日、４１０ｍｇ／ｋｇ／日、４１５ｍｇ／ｋｇ／日、４２０ｍｇ／ｋｇ／日、４２５ｍｇ／ｋｇ／日、４３０ｍｇ／ｋｇ／日、４３５ｍｇ／ｋｇ／日、４４０ｍｇ／ｋｇ／日、４４５ｍｇ／ｋｇ／日、４５０ｍｇ／ｋｇ／日、４５５ｍｇ／ｋｇ／日、４６０ｍｇ／ｋｇ／日、４６５ｍｇ／ｋｇ／日、４７０ｍｇ／ｋｇ／日、４７５ｍｇ／ｋｇ／日、４８０ｍｇ／ｋｇ／日、４８５ｍｇ／ｋｇ／日、４９０ｍｇ／ｋｇ／日、４９５ｍｇ／ｋｇ／日、５００ｍｇ／ｋｇ／日、５０５ｍｇ／ｋｇ／日、５１０ｍｇ／ｋｇ／日、５１５ｍｇ／ｋｇ／日、５２０ｍｇ／ｋｇ／日、５２５ｍｇ／ｋｇ／日、５３０ｍｇ／ｋｇ／日、５３５ｍｇ／ｋｇ／日、５４０ｍｇ／ｋｇ／日、５４５ｍｇ／ｋｇ／日、５５０ｍｇ／ｋｇ／日、５５５ｍｇ／ｋｇ／日、５６０ｍｇ／ｋｇ／日、５６５ｍｇ／ｋｇ／日、５７０ｍｇ／ｋｇ／日、５７５ｍｇ／ｋｇ／日、５８０ｍｇ／ｋｇ／日、５８５ｍｇ／ｋｇ／日、５９０ｍｇ／ｋｇ／日、５９５ｍｇ／ｋｇ／日、６００ｍｇ／ｋｇ／日、６０５ｍｇ／ｋｇ／日、６１０ｍｇ／ｋｇ／日、６１５ｍｇ／ｋｇ／日、６２０ｍｇ／ｋｇ／日、６２５ｍｇ／ｋｇ／日、６３０ｍｇ／ｋｇ／日、６３５ｍｇ／ｋｇ／日、６４０ｍｇ／ｋｇ／日、６４５ｍｇ／ｋｇ／日、６５０ｍｇ／ｋｇ／日、６５５ｍｇ／ｋｇ／日、６６０ｍｇ／ｋｇ／日、６６５ｍｇ／ｋｇ／日、６７０ｍｇ／ｋｇ／日、６７５ｍｇ／ｋｇ／日、６８０ｍｇ／ｋｇ／日、６８５ｍｇ／ｋｇ／日、６９０ｍｇ／ｋｇ／日、６９５ｍｇ／ｋｇ／日、７００ｍｇ／ｋｇ／日、７０５ｍｇ／ｋｇ／日、７１０ｍｇ／ｋｇ／日、７１５ｍｇ／ｋｇ／日、７２０ｍｇ／ｋｇ／日、７２５ｍｇ／ｋｇ／日、７３０ｍｇ／ｋｇ／日、７３５ｍｇ／ｋｇ／日、７４０ｍｇ／ｋｇ／日、７４５ｍｇ／ｋｇ／日、７５０ｍｇ／ｋｇ／日、７５５ｍｇ／ｋｇ／日、７６０ｍｇ／ｋｇ／日、７６５ｍｇ／ｋｇ／日、７７０ｍｇ／ｋｇ／日、７７５ｍｇ／ｋｇ／日、７８０ｍｇ／ｋｇ／日、７８５ｍｇ／ｋｇ／日、７９０ｍｇ／ｋｇ／日、７９５ｍｇ／ｋｇ／日、８００ｍｇ／ｋｇ／日、８０５ｍｇ／ｋｇ／日、８１０ｍｇ／ｋｇ／日、８１５ｍｇ／ｋｇ／日、８２０ｍｇ／ｋｇ／日、８２５ｍｇ／ｋｇ／日、８３０ｍｇ／ｋｇ／日、８３５ｍｇ／ｋｇ／日、８４０ｍｇ／ｋｇ／日、８４５ｍｇ／ｋｇ／日、８５０ｍｇ／ｋｇ／日、８５５ｍｇ／ｋｇ／日、８６０ｍｇ／ｋｇ／日、８６５ｍｇ／ｋｇ／日、８７０ｍｇ／ｋｇ／日、８７５ｍｇ／ｋｇ／日、８８０ｍｇ／ｋｇ／日、８８５ｍｇ／ｋｇ／日、８９０ｍｇ／ｋｇ／日、８９５ｍｇ／ｋｇ／日、９００ｍｇ／ｋｇ／日、９０５ｍｇ／ｋｇ／日、９１０ｍｇ／ｋｇ／日、９１５ｍｇ／ｋｇ／日、９２０ｍｇ／ｋｇ／日、９２５ｍｇ／ｋｇ／日、９３０ｍｇ／ｋｇ／日、９３５ｍｇ／ｋｇ／日、９４０ｍｇ／ｋｇ／日、９４５ｍｇ／ｋｇ／日、９５０ｍｇ／ｋｇ／日、９５５ｍｇ／ｋｇ／日、９６０ｍｇ／ｋｇ／日、９６５ｍｇ／ｋｇ／日、９７０ｍｇ／ｋｇ／日、９７５ｍｇ／ｋｇ／日、９８０ｍｇ／ｋｇ／日、９８５ｍｇ／ｋｇ／日、９９０ｍｇ／ｋｇ／日、９９５ｍｇ／ｋｇ／日、又は１，０００ｍｇ／ｋｇ／日）の量で対象に投与される。
【００７９】
いくつかの実施形態では、第３の組成物は、約２００ｍｇ／ｋｇ／日〜約８００ｍｇ／ｋｇ／日（例えば、約２００ｍｇ／ｋｇ／日、２０５ｍｇ／ｋｇ／日、２１０ｍｇ／ｋｇ／日、２１５ｍｇ／ｋｇ／日、２２０ｍｇ／ｋｇ／日、２２５ｍｇ／ｋｇ／日、２３０ｍｇ／ｋｇ／日、２３５ｍｇ／ｋｇ／日、２４０ｍｇ／ｋｇ／日、２４５ｍｇ／ｋｇ／日、２５０ｍｇ／ｋｇ／日、２５５ｍｇ／ｋｇ／日、２６０ｍｇ／ｋｇ／日、２６５ｍｇ／ｋｇ／日、２７０ｍｇ／ｋｇ／日、２７５ｍｇ／ｋｇ／日、２８０ｍｇ／ｋｇ／日、２８５ｍｇ／ｋｇ／日、２９０ｍｇ／ｋｇ／日、２９５ｍｇ／ｋｇ／日、３００ｍｇ／ｋｇ／日、３０５ｍｇ／ｋｇ／日、３１０ｍｇ／ｋｇ／日、３１５ｍｇ／ｋｇ／日、３２０ｍｇ／ｋｇ／日、３２５ｍｇ／ｋｇ／日、３３０ｍｇ／ｋｇ／日、３３５ｍｇ／ｋｇ／日、３４０ｍｇ／ｋｇ／日、３４５ｍｇ／ｋｇ／日、３５０ｍｇ／ｋｇ／日、３５５ｍｇ／ｋｇ／日、３６０ｍｇ／ｋｇ／日、３６５ｍｇ／ｋｇ／日、３７０ｍｇ／ｋｇ／日、３７５ｍｇ／ｋｇ／日、３８０ｍｇ／ｋｇ／日、３８５ｍｇ／ｋｇ／日、３９０ｍｇ／ｋｇ／日、３９５ｍｇ／ｋｇ／日、４００ｍｇ／ｋｇ／日、４０５ｍｇ／ｋｇ／日、４１０ｍｇ／ｋｇ／日、４１５ｍｇ／ｋｇ／日、４２０ｍｇ／ｋｇ／日、４２５ｍｇ／ｋｇ／日、４３０ｍｇ／ｋｇ／日、４３５ｍｇ／ｋｇ／日、４４０ｍｇ／ｋｇ／日、４４５ｍｇ／ｋｇ／日、４５０ｍｇ／ｋｇ／日、４５５ｍｇ／ｋｇ／日、４６０ｍｇ／ｋｇ／日、４６５ｍｇ／ｋｇ／日、４７０ｍｇ／ｋｇ／日、４７５ｍｇ／ｋｇ／日、４８０ｍｇ／ｋｇ／日、４８５ｍｇ／ｋｇ／日、４９０ｍｇ／ｋｇ／日、４９５ｍｇ／ｋｇ／日、５００ｍｇ／ｋｇ／日、５０５ｍｇ／ｋｇ／日、５１０ｍｇ／ｋｇ／日、５１５ｍｇ／ｋｇ／日、５２０ｍｇ／ｋｇ／日、５２５ｍｇ／ｋｇ／日、５３０ｍｇ／ｋｇ／日、５３５ｍｇ／ｋｇ／日、５４０ｍｇ／ｋｇ／日、５４５ｍｇ／ｋｇ／日、５５０ｍｇ／ｋｇ／日、５５５ｍｇ／ｋｇ／日、５６０ｍｇ／ｋｇ／日、５６５ｍｇ／ｋｇ／日、５７０ｍｇ／ｋｇ／日、５７５ｍｇ／ｋｇ／日、５８０ｍｇ／ｋｇ／日、５８５ｍｇ／ｋｇ／日、５９０ｍｇ／ｋｇ／日、５９５ｍｇ／ｋｇ／日、６００ｍｇ／ｋｇ／日、６０５ｍｇ／ｋｇ／日、６１０ｍｇ／ｋｇ／日、６１５ｍｇ／ｋｇ／日、６２０ｍｇ／ｋｇ／日、６２５ｍｇ／ｋｇ／日、６３０ｍｇ／ｋｇ／日、６３５ｍｇ／ｋｇ／日、６４０ｍｇ／ｋｇ／日、６４５ｍｇ／ｋｇ／日、６５０ｍｇ／ｋｇ／日、６５５ｍｇ／ｋｇ／日、６６０ｍｇ／ｋｇ／日、６６５ｍｇ／ｋｇ／日、６７０ｍｇ／ｋｇ／日、６７５ｍｇ／ｋｇ／日、６８０ｍｇ／ｋｇ／日、６８５ｍｇ／ｋｇ／日、６９０ｍｇ／ｋｇ／日、６９５ｍｇ／ｋｇ／日、７００ｍｇ／ｋｇ／日、７０５ｍｇ／ｋｇ／日、７１０ｍｇ／ｋｇ／日、７１５ｍｇ／ｋｇ／日、７２０ｍｇ／ｋｇ／日、７２５ｍｇ／ｋｇ／日、７３０ｍｇ／ｋｇ／日、７３５ｍｇ／ｋｇ／日、７４０ｍｇ／ｋｇ／日、７４５ｍｇ／ｋｇ／日、７５０ｍｇ／ｋｇ／日、７５５ｍｇ／ｋｇ／日、７６０ｍｇ／ｋｇ／日、７６５ｍｇ／ｋｇ／日、７７０ｍｇ／ｋｇ／日、７７５ｍｇ／ｋｇ／日、７８０ｍｇ／ｋｇ／日、７８５ｍｇ／ｋｇ／日、７９０ｍｇ／ｋｇ／日、７９５ｍｇ／ｋｇ／日、８００ｍｇ／ｋｇ／日）の量で対象に投与される
【００８０】
いくつかの実施形態では、第３の組成物は、約２５０ｍｇ／ｋｇ／日〜約４００ｍｇ／ｋｇ／日（例えば、約２５０ｍｇ／ｋｇ／日、２５５ｍｇ／ｋｇ／日、２６０ｍｇ／ｋｇ／日、２６５ｍｇ／ｋｇ／日、２７０ｍｇ／ｋｇ／日、２７５ｍｇ／ｋｇ／日、２８０ｍｇ／ｋｇ／日、２８５ｍｇ／ｋｇ／日、２９０ｍｇ／ｋｇ／日、２９５ｍｇ／ｋｇ／日、３００ｍｇ／ｋｇ／日、３０５ｍｇ／ｋｇ／日、３１０ｍｇ／ｋｇ／日、３１５ｍｇ／ｋｇ／日、３２０ｍｇ／ｋｇ／日、３２５ｍｇ／ｋｇ／日、３３０ｍｇ／ｋｇ／日、３３５ｍｇ／ｋｇ／日、３４０ｍｇ／ｋｇ／日、３４５ｍｇ／ｋｇ／日、３５０ｍｇ／ｋｇ／日、３５５ｍｇ／ｋｇ／日、３６０ｍｇ／ｋｇ／日、３６５ｍｇ／ｋｇ／日、３７０ｍｇ／ｋｇ／日、３７５ｍｇ／ｋｇ／日、３８０ｍｇ／ｋｇ／日、３８５ｍｇ／ｋｇ／日、３９０ｍｇ／ｋｇ／日、３９５ｍｇ／ｋｇ／日、又は４００ｍｇ／ｋｇ／日）の量で対象に投与される。
【００８１】
いくつかの実施形態では、第３の組成物は、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、１日５回、又は１日６回対象に投与される。第３の組成物は、牛のミルク、ヒト母乳、乳児用フォーミュラ、及び／又は水と混合して対象に経口投与されてよい。
【００８２】
いくつかの実施形態では、第１の組成物は、静脈内、髄腔内、皮内、経皮、非経口、筋肉内、鼻腔内、皮下、経皮、気管内、腹腔内、動脈内、血管内、吸入、灌流、洗浄、及び／又は経口投与により対象に投与される。
【００８３】
いくつかの実施形態では、第２の組成物は、静脈内、髄腔内、皮内、経皮、非経口、筋肉内、鼻腔内、皮下、経皮、気管内、腹腔内、動脈内、血管内、吸入、灌流、洗浄、及び／又は経口投与により対象に投与される。
【００８４】
いくつかの実施形態では、第３の組成物は、静脈内、髄腔内、皮内、経皮、非経口、筋肉内、鼻腔内、皮下、経皮、気管内、腹腔内、動脈内、血管内、吸入、灌流、洗浄、及び／又は経口投与により対象に投与される。
【００８５】
いくつかの実施形態では、対象はヒトなどの哺乳動物である。いくつかの実施形態では、対象は、１ヶ月〜約１２歳のヒトの対象（例えば、約１ヶ月〜約１歳、２歳、３歳、４歳、５歳、６歳、７歳、８歳、９歳、１０歳、１１歳、又は１２歳のヒト対象）などの小児ヒト対象である。
【００８６】
さらなる態様では、本開示は、ＴＫ２、ｄＧＫ、ＴＰ、ｐ５３Ｒ２、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１、ＭＰＶ１７、及び／又はＰＯＬＧをコードする導入遺伝子を含有する組成物を特徴とする。
【００８７】
先の態様のいくつかの実施形態では、導入遺伝子はＴＫ２をコードする。ＴＫ２は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１のアミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有してよい。いくつかの実施形態では、ＴＫ２は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１のアミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＫ２は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＫ２は、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多いアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上のアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失によって配列番号１と異なるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＴＫ２は、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多い保存的アミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上の保存的アミノ酸置換によって配列番号１と異なるアミノ酸配列を有する。
【００８８】
先の態様のいくつかの実施形態では、ＴＫ２をコードする導入遺伝子は、配列番号２の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列（例えば、配列番号２の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。先の態様のいくつかの実施形態では、ＴＫ２をコードする導入遺伝子は、配列番号２の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列（例えば、配列番号２の核酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＫ２をコードする導入遺伝子は、配列番号２の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列（例えば、配列番号２の核酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＫ２をコードする導入遺伝子は、配列番号２の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列（例えば、配列番号２の核酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＫ２をコードする導入遺伝子は、効率を高めるためにコドン最適化される。いくつかの実施形態では、ＴＫ２をコードする導入遺伝子の核酸は、ＴＫ２をコードする導入遺伝子のコード配列と少なくとも７０％同一（例えば、コード配列の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）である。いくつかの実施形態では、ＴＫ２をコードする導入遺伝子の核酸配列は、配列番号１７の核酸配列を有する。
【００８９】
先の態様のいくつかの実施形態では、導入遺伝子はｄＧＫをコードする。ｄＧＫは、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号３のアミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有してよい。いくつかの実施形態では、ｄＧＫは、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号３のアミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｄＧＫは、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号３のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｄＧＫは、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多いアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上のアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失によって配列番号３と異なるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｄＧＫは、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多い保存的アミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上の保存的アミノ酸置換によって配列番号３と異なるアミノ酸配列を有する。
【００９０】
先の態様のいくつかの実施形態では、ｄＧＫをコードする導入遺伝子は、配列番号４の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列（例えば、配列番号４の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。先の態様のいくつかの実施形態では、ｄＧＫをコードする導入遺伝子は、配列番号４の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列（例えば、配列番号４の核酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｄＧＫをコードする導入遺伝子は、配列番号４の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列（例えば、配列番号４の核酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｄＧＫをコードする導入遺伝子は、配列番号４の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列（例えば、配列番号４の核酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｄＧＫをコードする導入遺伝子は、効率を高めるためにコドン最適化される。いくつかの実施形態では、ｄＧＫをコードする導入遺伝子の核酸は、ｄＧＫをコードする導入遺伝子のコード配列と少なくとも７０％同一（例えば、コード配列の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）である。いくつかの実施形態では、ｄＧＫをコードする導入遺伝子の核酸配列は、配列番号１８の核酸配列を有する。
【００９１】
先の態様のいくつかの実施形態では、導入遺伝子はＴＰをコードする。ＴＰは、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号５のアミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有してよい。いくつかの実施形態では、ＴＰは、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号５のアミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＰは、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号５のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＰは、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多いアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上のアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失によって配列番号５と異なるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＴＰは、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多い保存的アミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上の保存的アミノ酸置換によって配列番号５と異なるアミノ酸配列を有する。
【００９２】
先の態様のいくつかの実施形態では、ＴＰをコードする導入遺伝子は、配列番号６の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列（例えば、配列番号６の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。先の態様のいくつかの実施形態では、ＴＰをコードする導入遺伝子は、配列番号６の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列（例えば、配列番号６の核酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＰをコードする導入遺伝子は、配列番号６の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列（例えば、配列番号６の核酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＰをコードする導入遺伝子は、配列番号６の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列（例えば、配列番号６の核酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＴＰをコードする導入遺伝子は、効率を高めるためにコドン最適化される。いくつかの実施形態では、ＴＰをコードする導入遺伝子の核酸は、ＴＰをコードする導入遺伝子のコード配列と少なくとも７０％同一（例えば、コード配列の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）である。いくつかの実施形態では、ＴＰをコードする導入遺伝子の核酸配列は、配列番号１９の核酸配列を有する。
【００９３】
先の態様のいくつかの実施形態では、導入遺伝子はｐ５３Ｒ２をコードする。ｐ５３Ｒ２は、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号７のアミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有してよい。いくつかの実施形態では、ｐ５３Ｒ２は、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号７のアミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｐ５３Ｒ２は、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号７のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｐ５３Ｒ２は、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多いアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上のアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失によって配列番号７と異なるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｐ５３Ｒ２は、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多い保存的アミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上の保存的アミノ酸置換によって配列番号７と異なるアミノ酸配列を有する。
【００９４】
先の態様のいくつかの実施形態では、ｐ５３Ｒ２をコードする導入遺伝子は、配列番号８の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列（例えば、配列番号８の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。先の態様のいくつかの実施形態では、ｐ５３Ｒ２をコードする導入遺伝子は、配列番号８の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列（例えば、配列番号８の核酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｐ５３Ｒ２をコードする導入遺伝子は、配列番号８の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列（例えば、配列番号８の核酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｐ５３Ｒ２をコードする導入遺伝子は、配列番号８の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列（例えば、配列番号８の核酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ｐ５３Ｒ２をコードする導入遺伝子は、効率を高めるためにコドン最適化される。いくつかの実施形態では、ｐ５３Ｒ２をコードする導入遺伝子の核酸は、ｐ５３Ｒ２をコードする導入遺伝子のコード配列と少なくとも７０％同一（例えば、コード配列の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）である。いくつかの実施形態では、ｐ５３Ｒ２をコードする導入遺伝子の核酸配列は、配列番号２０の核酸配列を有する。
【００９５】
先の態様のいくつかの実施形態では、導入遺伝子はＳＵＣＬＡ２をコードする。ＳＵＣＬＡ２は、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号９のアミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有してよい。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＡ２は、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号９のアミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＡ２は、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号９のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＡ２は、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多いアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上のアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失によって配列番号９と異なるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＡ２は、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多い保存的アミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上の保存的アミノ酸置換によって配列番号９と異なるアミノ酸配列を有する。
【００９６】
先の態様のいくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＡ２をコードする導入遺伝子は、配列番号１０の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列（例えば、配列番号１０の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。先の態様のいくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＡ２をコードする導入遺伝子は、配列番号１０の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列（例えば、配列番号１０の核酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＡ２をコードする導入遺伝子は、配列番号１０の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列（例えば、配列番号１０の核酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＡ２をコードする導入遺伝子は、配列番号１０の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列（例えば、配列番号１０の核酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＡ２をコードする導入遺伝子は、効率を高めるためにコドン最適化される。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＡ２をコードする導入遺伝子の核酸は、ＳＵＣＬＡ２をコードする導入遺伝子のコード配列と少なくとも７０％同一（例えば、コード配列の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）である。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＡ２をコードする導入遺伝子の核酸配列は、配列番号２１の核酸配列を有する。
【００９７】
先の態様のいくつかの実施形態では、導入遺伝子はＳＵＣＬＧ１をコードする。ＳＵＣＬＧ１は、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１１のアミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有してよい。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＧ１は、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１１のアミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＧ１は、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１１のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＧ１は、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多いアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上のアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失によって配列番号１１と異なるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＧ１は、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多い保存的アミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上の保存的アミノ酸置換によって配列番号１１と異なるアミノ酸配列を有する。
【００９８】
先の態様のいくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＧ１をコードする導入遺伝子は、配列番号１２の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列（例えば、配列番号１２の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。先の態様のいくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＧ１をコードする導入遺伝子は、配列番号１２の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列（例えば、配列番号１２の核酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＧ１をコードする導入遺伝子は、配列番号１２の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列（例えば、配列番号１２の核酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＧ１をコードする導入遺伝子は、配列番号１２の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列（例えば、配列番号１２の核酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＧ１をコードする導入遺伝子は、効率を高めるためにコドン最適化される。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＧ１をコードする導入遺伝子の核酸は、ＳＵＣＬＧ１をコードする導入遺伝子のコード配列と少なくとも７０％同一（例えば、コード配列の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）である。いくつかの実施形態では、ＳＵＣＬＧ１をコードする導入遺伝子の核酸配列は、配列番号２２の核酸配列を有する。
【００９９】
先の態様のいくつかの実施形態では、導入遺伝子はＭＰＶ１７をコードする。ＭＰＶ１７は、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１３のアミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有してよい。いくつかの実施形態では、ＭＰＶ１７は、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１３のアミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＭＰＶ１７は、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１３のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＭＰＶ１７は、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多いアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上のアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失によって配列番号１３と異なるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＭＰＶ１７は、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多い保存的アミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上の保存的アミノ酸置換によって配列番号１３と異なるアミノ酸配列を有する。
【０１００】
先の態様のいくつかの実施形態では、ＭＰＶ１７をコードする導入遺伝子は、配列番号１４の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列（例えば、配列番号１４の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。先の態様のいくつかの実施形態では、ＭＰＶ１７をコードする導入遺伝子は、配列番号１４の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列（例えば、配列番号１４の核酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＭＰＶ１７をコードする導入遺伝子は、配列番号１４の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列（例えば、配列番号１４の核酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＭＰＶ１７をコードする導入遺伝子は、配列番号１４の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列（例えば、配列番号１４の核酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＭＰＶ１７をコードする導入遺伝子は、効率を高めるためにコドン最適化される。いくつかの実施形態では、ＭＰＶ１７をコードする導入遺伝子の核酸は、ＭＰＶ１７をコードする導入遺伝子のコード配列と少なくとも７０％同一（例えば、コード配列の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）である。いくつかの実施形態では、ＭＰＶ１７をコードする導入遺伝子の核酸配列は、配列番号２３の核酸配列を有する。
【０１０１】
先の態様のいくつかの実施形態では、導入遺伝子はＰＯＬＧをコードする。ＰＯＬＧは、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１５のアミノ酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有してよい。いくつかの実施形態では、ＰＯＬＧは、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１５のアミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＰＯＬＧは、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列（例えば、配列番号１５のアミノ酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＰＯＬＧは、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多いアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上のアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失によって配列番号１５と異なるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＰＯＬＧは、１〜１０個、１〜１５個、１〜２０個、１〜２５個、又はそれより多い保存的アミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれより多い保存的アミノ酸置換）などの１以上の保存的アミノ酸置換によって配列番号１５と異なるアミノ酸配列を有する。
【０１０２】
先の態様のいくつかの実施形態では、ＰＯＬＧをコードする導入遺伝子は、配列番号１６の核酸配列と少なくとも７０％同一である核酸配列（例えば、配列番号１６の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。先の態様のいくつかの実施形態では、ＰＯＬＧをコードする導入遺伝子は、配列番号１６の核酸配列と少なくとも８５％同一である核酸配列（例えば、配列番号１６の核酸配列と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＰＯＬＧをコードする導入遺伝子は、配列番号１６の核酸配列と少なくとも９０％同一である核酸配列（例えば、配列番号１６の核酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＰＯＬＧをコードする導入遺伝子は、配列番号１６の核酸配列と少なくとも９５％同一である核酸配列（例えば、配列番号１６の核酸配列と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）を有する。いくつかの実施形態では、ＰＯＬＧをコードする導入遺伝子は、効率を高めるためにコドン最適化される。いくつかの実施形態では、ＰＯＬＧをコードする導入遺伝子の核酸は、ＰＯＬＧをコードする導入遺伝子のコード配列と少なくとも７０％同一（例えば、コード配列の核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）である。いくつかの実施形態では、ＰＯＬＧをコードする導入遺伝子の核酸配列は、配列番号２４の核酸配列を有する。
【０１０３】
先の態様のいくつかの実施形態では、組成物はウイルスベクターなどのベクターを含む。ウイルスベクターは、例えば、ＡＡＶ、アデノウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、ポックスウイルス、バキュロウイルス、単純ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス、又は合成ウイルス（例えば、キメラウイルス、モザイクウイルス、又は偽型ウイルス、及び／又は外来タンパク質、合成ポリマー、ナノ粒子、若しくは小分子を含有するウイルス）であってよい。
【０１０４】
先の態様のいくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、ＡＡＶ１（すなわち、ＡＡＶ１逆末端反復（ＩＴＲ）及びＡＡＶ１キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）、ＡＡＶ２（すなわち、ＡＡＶ２  ＩＴＲ及びＡＡＶ２キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）、ＡＡＶ３（すなわち、ＡＡＶ３  ＩＴＲ及びＡＡＶ３キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）、ＡＡＶ４（すなわち、ＡＡＶ４  ＩＴＲ及びＡＡＶ４キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）、ＡＡＶ５（すなわち、ＡＡＶ５  ＩＴＲ及びＡＡＶ５キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）、ＡＡＶ６（すなわち、ＡＡＶ６  ＩＴＲ及びＡＡＶ６キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）、ＡＡＶ７（すなわち、ＡＡＶ７  ＩＴＲ及びＡＡＶ７キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）、ＡＡＶ８（すなわち、ＡＡＶ８  ＩＴＲ及びＡＡＶ８キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）、ＡＡＶ９（すなわち、ＡＡＶ９  ＩＴＲ及びＡＡＶ９キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）、ＡＡＶｒｈ７４（すなわち、ＡＡＶｒｈ７４  ＩＴＲ及びＡＡＶｒｈ７４キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）、ＡＡＶｒｈ．８（すなわち、ＡＡＶｒｈ．８  ＩＴＲ及びＡＡＶｒｈ．８キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）、又はＡＡＶｒｈ．１０（すなわち、ＡＡＶｒｈ．１０  ＩＴＲ及びＡＡＶｒｈ．１０キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）などのＡＡＶである。
【０１０５】
先の態様のいくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、１つのＡＡＶ血清型からのＩＴＲ及び異なるＡＡＶ血清型からのキャプシドタンパク質を含有する偽型ＡＡＶである。いくつかの実施形態では、偽型ＡＡＶはＡＡＶ２／９（すなわち、ＡＡＶ２  ＩＴＲ及びＡＡＶ９キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）である。いくつかの実施形態では、偽型ＡＡＶはＡＡＶ２／８（すなわち、ＡＡＶ２  ＩＴＲ及びＡＡＶ８キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）である。いくつかの実施形態では、偽型ＡＡＶはＡＡＶ２／１（すなわち、ＡＡＶ２  ＩＴＲ及びＡＡＶ１キャプシドタンパク質含有ＡＡＶ）である。
【０１０６】
先の態様のいくつかの実施形態では、ＡＡＶは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ７４、ＡＡＶｒｈ．８、又はＡＡＶｒｈ．１０からのキャプシドタンパク質の１以上のキメラを含有するキャプシドタンパク質などの組換えキャプシドタンパク質を含有する。
【０１０７】
先の態様のいくつかの実施形態では、組成物は、リポソーム、小胞、合成小胞、エキソソーム、合成エキソソーム、デンドリマー、又はナノ粒子である。
【０１０８】
先の態様のいくつかの実施形態では、導入遺伝子は、筋肉細胞において導入遺伝子の発現を誘導するプロモーターに作動可能に連結される。プロモーターは、例えば、ニワトリベータアクチンプロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ミオシン軽鎖２プロモーター、アルファアクチンプロモーター、トロポニン１プロモーター、Ｎａ＋／Ｃａ２＋交換因子プロモーター、ジストロフィンプロモーター、クレアチンキナーゼプロモーター、アルファ７インテグリンプロモーター、脳ナトリウム利尿ペプチドプロモーター、アルファＢクリスタリン／小分子熱ショックタンパク質プロモーター、アルファミオシン重鎖プロモーター、又は心房性ナトリウム利尿因子プロモーターであってよい。
【０１０９】
先の態様のいくつかの実施形態では、導入遺伝子は、筋肉細胞において導入遺伝子の発現を誘導するエンハンサーに作動可能に連結される。本開示の組成物及び方法と共に使用され得る例示的なエンハンサーは、ＣＭＶエンハンサー、筋細胞増強因子２（ＭＥＦ２）エンハンサー、及びＭｙｏＤエンハンサーである。
【０１１０】
別の態様では、本開示は、前述の態様の組成物を含有するキットを特徴とする。キットは、本開示の上記の態様又は実施形態のいずれかの方法に従って、組成物を対象に投与するために、キットの使用者に指示するパッケージ挿入物などのパッケージ挿入物をさらに含有してよい。キットは、ｄＣ、ｄＴ、ｄＡ、ｄＧ、ｄＣＭＰ、ＴＭＰ、ｄＡＭＰ、ｄＧＭＰ、及びこれらの混合物からなる群から選択される薬理学的薬剤をさらに含有してよい。
【０１１１】
本発明を説明する目的で、本発明の特定の実施形態を図面に示す。しかしながら、本発明は、図面に示された実施形態の正確な構成及び手段に限定されない。
【０１１２】
図面において、特定の略語が使用される。「ＷＴ」は、Ｔｋ２＋である野生型マウスを意味する。「Ｈｅｔ」は、ＴＫ２遺伝子についてヘテロ接合のマウスを意味する。「Ｍｕｔ」は、Ｔｋ２−／−マウスを意味する。「Ｐ＃」は、出生後＃日を意味する。「ＡＡＶ２−ｈＴＫ２」は、ヒトＴＫ２導入遺伝子を含有するＡＡＶ２ベクターを指す。「ＡＡＶ９−ｈＴＫ２」は、ヒトＴＫ２導入遺伝子を含有するＡＡＶ９ベクターを指す。「ｄＣ」は、デオキシシチジンを指す。「ｄＴ」は、デオキシチミジンを指す。「ＩＶ」は、静脈内投与を指す。「ｖｃ」は、ベクターゲノムコピーの量を指す。
【図面の簡単な説明】
【０１１３】
【図１】図１は、ヒトＴＫ２  ｃＤＮＡを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターの概略である。
【図２】図２は、次のマウスの生存曲線（左から右への曲線）を示す：未処置のＴｋ２−／−マウス（ｎ＝１３）；ミルクのみ投与したＴｋ２−／−マウス（ｎ＝６）；出生後１日目にＩＶにより４．２×１０１０ｖｃでＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２−／−マウス（ｎ＝５）；５２０ｍｇのｄＣ＋ｄＴで処置したＴｋ２−／−マウス（ｎ＝１１）；及び出生後１日目にＩＶにより４．２×１０１１ｖｃでＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２−／−マウス（ｎ＝１０）。未処置のＴｋ２＋（野生型）の生存を上部水平線によって示す。
【図３】図３は、次の雄雌マウスにおける体重対時間のグラフを示す：５２０ｍｇのｄＣ＋ｄＴで処置したＴｋ２＋；５２０ｍｇのｄＣ＋ｄＴで処置したＴｋ２−／−マウス；ＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２＋；出生後１日目にＩＶにより４．２×１０１１ｖｃでＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２−／−マウス；及び出生後１日目にＩＶにより４．２×１０１０ｖｃでＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２−／−マウス。
【図４】図４は、未処置のＴｋ２＋、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２＋及びＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２−／−マウスを含む雄雌マウスの出生後２９日及び出生後６０日目に、マウス体重で正規化した前肢（バー試験）及び前後の肢（グリッド試験）の握力試験の結果のグラフを示す。
【図５】図５は、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２＋及びＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２−／−マウスを含む雄雌マウスの出生後２９日及び出生後６０日目に、ロータロッド機能試験を促進することにより測定したマウス運動機能の結果のグラフを示す。
【図６】図６は、次のマウスの出生後２９日目の脳、肝臓、筋肉及び腎臓組織におけるタンパク質のｐｍｏｌ／分／ｍｇとして測定したＴＫ２酵素の活性のグラフを示す：未処置のＴｋ２＋；４．２×１０１１ｖｃでＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２＋；４．２×１０１１ｖｃでＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２−／−マウス；５２０ｍｇのｄＣ＋ｄＴで処置したＴｋ２＋；及び５２０ｍｇのｄＣ＋ｄＴで処置したＴｋ２−／−マウス。
【図７】図７は、１ヶ月、２ヶ月及び６ヶ月目にＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２＋の脳、肝臓、筋肉及び腎臓組織におけるマウスＴＫ２  ｍＲＮＡのパーセントとしてのヒトＴＫ２  ｍＲＮＡ発現測定のグラフを示す。
【図８】図８は、次のマウスの脳、肝臓、腎臓、心臓、筋肉、及び腸組織における出生後２９日目のｍｔＤＮＡコピー数（未処置のＴｋ２＋のパーセントとしてのｍｔＤＮＡ／ｎＤＮＡ）を示すグラフを示す：未処置のＴｋ２＋；ＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２＋；ＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２遺伝子についてヘテロ接合性であるマウス；ＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２−／−マウス；及び５２０ｍｇのｄＣ＋ｄＴで処置したＴｋ２−／−マウス。
【図９】図９は、次のマウスの脳、肝臓、腎臓、心臓、筋肉、及び腸組織における出生後６０日目のｍｔＤＮＡコピー数（未処置のＴｋ２＋のパーセントとしてのｍｔＤＮＡ／ｎＤＮＡ）を示すグラフを示す：未処置のＴｋ２＋；ＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２＋；ＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２遺伝子についてヘテロ接合性であるマウス；及びＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２−／−マウス。
【図１０】図１０は、次のマウスの脳における出生後２９日目の呼吸鎖酵素活性のグラフを示す：未処置Ｔｋ２＋；ＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２＋；ＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２遺伝子についてヘテロ接合性であるマウス；ＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２−／−マウス；及び５２０ｍｇのｄＣ＋ｄＴで処置したＴｋ２−／−マウス。
【図１１】図１１は、次のマウスの脳における出生後２９日目の呼吸鎖酵素レベル（ビンクリンで正規化した酸化的リン酸化定常レベル）のグラフを示す：未処置Ｔｋ２＋；ＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２＋；ＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２−／−マウス；及び５２０ｍｇのｄＣ＋ｄＴで処置したＴｋ２−／−マウス。
【図１２】図１２は、出生後９６日目のＡＡＶ９−ｈＴＫ２処置した変異体及び野生型マウスの染色した（Ｈ＆Ｅ）腎臓の画像を示す。
【図１３】図１３は、生存コホート及び出生後６０日目のコホートにおける、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２処置した変異体及び野生型マウスのクレアチニン及びＢＵＮ指数のグラフを示す。
【図１４】図１４は、次のマウスの生存曲線（左から右への曲線）を示す：未処置のＴｋ２−／−マウス（ｎ＝１３）；出生後１日目にＩＶにより４．２×１０１０ｖｃでＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２−／−マウス（ｎ＝５）；５２０ｍｇのｄＣ＋ｃＴで処置したＴｋ２−／−マウス（ｎ＝１１）；出生後１日目にＩＶにより４．２×１０１１ｖｃでＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２−／−マウス（ｎ＝１０）；１日目に２．１×１０１１でＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置し、２９日目に１．０５×１０１１でＡＡＶ２−ｈＴＫ２で同時処置したマウス（ｎ＝７）；及び１日目にＡＡＶ９−ｈＴＫ２で、２９日目にＡＡＶ２−ｈＴＫ２で同時処置し、２１日目から５２０ｍｇ／ｋｇ／日のｄＣ＋ｄＴを経口補充したマウス（ｎ＝７）。未処置のＴｋ２＋（野生型）の生存を上部水平線によって示す。
【図１５】図１５は、以下の雄マウスにおける体重対時間を示す：未処置のＴｋ２＋；５２０ｍｇのｄＣ＋ｄＴで処置したＴｋ２＋；５２０ｍｇのｄＣ＋ｄＴで処置したＴｋ２−／−マウス；出生後１日目にＩＶにより４．２×１０１１ｖｃでＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２＋；出生後１日目にＩＶにより４．２×１０１１ｖｃでＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２−／−マウス（「ＡＡＶ９」）；出生後１日目にＩＶにより４．２×１０１０ｖｃでＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２−／−マウス；出生後１日目にＩＶにより２．１×１０１１ｖｃでＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置し、出生後２９日目にＩＶにより１．０５×１０１１ｖｃでＡＡＶ２−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２−／−マウス（「ＡＡＶ９＋ＡＡＶ２」）；及び出生後１日目にＩＶにより２．１×１０１１ｖｃでＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置し、出生後２９日目にＩＶにより１．０５×１０１１ｖｃでＡＡＶ２−ｈＴＫ２で処置し、２１日目から５２０ｍｇ／ｋｇ／日のｄＣ＋ｄＴを経口補充したＴｋ２−／−マウス（「ＡＡＶ９＋ＡＡＶ２＋ｄＣｄＴ」）。
【図１６】図１６は、以下の雌マウスにおける体重対時間を示す：未処置のＴｋ２＋；５２０ｍｇのｄＣ＋ｄＴで処置したＴｋ２＋；５２０ｍｇのｄＣ＋ｄＴで処置したＴｋ２−／−マウス；出生後１日目にＩＶにより４．２×１０１１ｖｃでＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２＋；出生後１日目にＩＶにより４．２×１０１１ｖｃでＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２−／−マウス（「ＡＡＶ９」）；出生後１日目にＩＶにより４．２×１０１０ｖｃでＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２−／−マウス；出生後１日目にＩＶにより２．１×１０１１ｖｃでＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置し、出生後２９日目にＩＶにより１．０５×１０１１ｖｃでＡＡＶ２−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２−／−マウス（「ＡＡＶ９＋ＡＡＶ２」）；及び出生後１日目にＩＶにより２．１×１０１１ｖｃでＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置し、出生後２９日目にＩＶにより１．０５×１０１１ｖｃでＡＡＶ２−ｈＴＫ２で処置し、２１日目から５２０ｍｇ／ｋｇ／日のｄＣ＋ｄＴを経口補充したＴｋ２−／−マウス（「ＡＡＶ９＋ＡＡＶ２＋ｄＣｄＴ」）。
【図１７】図１７は、未処置のＴｋ２＋、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２＋、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２−／−マウス、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２とＡＡＶ２−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２−／−マウス、及びＡＡＶ９−ｈＴＫ２、ＡＡＶ２−ｈＴＫ２とｄＣ＋ｄＴで処置したＴｋ２−／−マウスを含む雌雄マウスの出生後６０日目に、マウス体重で正規化した前肢（バー試験）及び前後の肢（グリッド試験）の握力試験の結果のグラフを示す。
【図１８】図１８は、未処置のＴｋ２＋、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２＋、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２−／−マウス、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２とＡＡＶ２−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２−／−マウス、及びＡＡＶ９−ｈＴＫ２、ＡＡＶ２−ｈＴＫ２とｄＣ＋ｄＴで処置したＴｋ２−／−マウスを含む雄雌マウスの出生後９０日目に、マウス体重で正規化した前肢（バー試験）及び前後の肢（グリッド試験）の握力試験の結果のグラフを示す。
【図１９】図１９は、未処置のＴｋ２＋、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２＋、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２−／−マウス、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２とＡＡＶ２−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２−／−マウス、及びＡＡＶ９−ｈＴＫ２、ＡＡＶ２−ｈＴＫ２とｄＣ＋ｄＴで処置したＴｋ２−／−マウスを含む雄雌マウスの出生後６０日目と出生後９０日目に、加速ロータロッド機能試験により測定したマウス運動機能の結果のグラフを示す。
【図２０】図２０は、次のマウスの脳、肝臓、筋肉、心臓、腎臓、及び腸組織における出生後６０日目のｍｔＤＮＡコピー数（未処置のＴｋ２＋のパーセントとしてのｍｔＤＮＡ／ｎＤＮＡ）を示すグラフを示す：未処置Ｔｋ２＋；ＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２−／−マウス；ＡＡＶ９−ｈＴＫ２とＡＡＶ２−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２−／−マウス；及びＡＡＶ９−ｈＴＫ２、ＡＡＶ２−ｈＴＫ２とｄＣ＋ｄＴで処置したＴｋ２−／−マウス。
【図２１】図２１は、２１日〜２９日齢及び６０日齢のマウスからの尿を用いた尿ディップスティック中のタンパク質試験の結果を示す。全てのＴｋ２−／−マウスを１日目にＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置し、４匹中３匹のＴｋ２−／−マウスを２９日目にＡＡＶ２−ｈＴＫ２で処置した。
【図２２】図２２は、未処置Ｔｋ２＋、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２＋、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２−／−マウス、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２とＡＡＶ２−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２−／−マウス、及びＡＡＶ９−ｈＴＫ２、ＡＡＶ２−ｈＴＫ２とｄＣ＋ｄＴで処置したＴｋ２−／−マウスを含む、６０日目のマウスとエンドポイントコホート中のマウスのＢＵＮ指数のグラフを示す。
【図２３】図２３は、次のマウスの脳、肝臓、筋肉及び腎臓組織における出生後６０日目のタンパク質のｐｍｏｌ／分／ｍｇとして測定したＴＫ２酵素活性のグラフを示す：未処置Ｔｋ２＋；ＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２＋；ＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２−／−マウス；ＡＡＶ９−ｈＴＫ２とＡＡＶ２−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２−／−マウス；及びＡＡＶ９−ｈＴＫ２、ＡＡＶ２−ｈＴＫ２とｄＣ＋ｄＴで処置したＴｋ２−／−マウス。
【発明を実施するための形態】
【０１１４】
発明の詳細な説明
本発明は、少なくとも部分的に、ＴＫ２欠損症を含むミトコンドリアＤＮＡ枯渇症候群が、核遺伝子によってコードされる機能性タンパク質などの機能性タンパク質をコードする核酸の送達による遺伝子治療を介して治療、予防、及び／又は治癒され得るという驚くべき発見に基づく。本開示の組成物及び方法に関連して使用できる例示的な核酸は、チミジンキナーゼ２（ＴＫ２）、デオキシグアノシンキナーゼ（ｄＧＫ）、チミジンホスホリラーゼ（ＴＰ）、リボヌクレオチド還元酵素（ｐ５３Ｒ２）のｐ５３誘導性小サブユニット、スクシニルＣｏＡリガーゼＡＤＰ形成サブユニットベータ（ＳＵＣＬＡ２）、スクシニルＣｏＡリガーゼＧＤＰ形成サブユニットアルファ（ＳＵＣＬＧ１）、ミトコンドリア内膜タンパク質ＭＰＶ１７（ＭＰＶ１７）、及び／又はＤＮＡポリメラーゼサブユニットガンマ（ＰＯＬＧ）をコードする。このような核酸は、とりわけ本明細書に記載のアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）などの、１以上のウイルスベクターによって送達できる。遺伝子治療は、単独で、又は、デオキシヌクレオシド又はデオキシリボヌクレオシド一リン酸療法などの薬理学的療法と組み合わせて投与できる。以下の節は、本開示の組成物及び方法をさらに詳細に記載する。
【０１１５】
定義
本明細書で使用する用語は、一般に、本発明の文脈及び各用語が使用される特定の文脈で、当技術分野における通常の意味を有する。特定の用語は、本発明の方法及びそれらの使用方法を説明する際に、医師にさらなるガイダンスを提供するために以下で、又は本明細書中の他の場所で説明される。さらに、同じことが２以上の方法でも言えることが理解されよう。その結果、代替的な言語及び同義語は、本明細書で説明されるいずれかの１以上の用語のために使用されてもよいが、本明細書で詳細に説明されるか、又は記載されるかに関わらず特別な意味を有するものでもない。特定の用語の同義語が提供される。１以上の同義語の列挙は、他の同義語の使用を排除するものではない。本明細書中に記載された任意の用語の例を含む、本明細書中のどこかの実施例の使用は、例示的なものに過ぎず、決して本発明の範囲及び意味、又は任意の例示された用語を限定するものではない。同様に、本発明は、その好ましい実施形態に限定されない。
【０１１６】
用語「約」又は「およそ」は、当業者によって決定された特定の値に対する許容誤差範囲内を意味し、値が測定又は決定される方法、すなわち、測定システムの限界、すなわち、医薬製剤などの特定の目的に必要な精度の程度に部分的に依存する。例えば、「約」は、当技術分野での実施に従って、１又は１より大きい標準偏差内を意味してよい。あるいは、「約」は、所与の値の最大２０％、好ましくは最大１０％、より好ましくは最大５％、より好ましくはなお最大１％の範囲を意味してよい。あるいは、特に、生物学的システム又はプロセスに関して、この用語は、値の規模の範囲内、好ましくは５倍以内、より好ましくは２倍以内を意味してよい。特定の値が本出願及び特許請求の範囲に記載されている場合には、特にことわらない限り、特定の値に対する許容誤差範囲内を意味する用語「約」を想定すべきである。
【０１１７】
用語「変異体マウス」、「ＴＫ２ノックインマウス」及び「Ｔｋ２−／−」は、Ａｋｍａｎら  ２００８年に記載されているホモ接合性Ｔｋ２  Ｈ１２６Ｎノックイン変異体（Ｔｋ２−／−）マウスモデルを指す。用語「野生型マウス」、「ＷＴ」、及び「Ｔｋ２＋」はまた互換的に使用される。場合によって、Ｔｋ２遺伝子についてヘテロ接合性であるマウス（「Ｔｋ２＋／−」）は、比較のために使用され、野生型マウスと同じように挙動することが予想される。これらのマウスを「Ｈｅｔ」と命名する。
【０１１８】
本出願で使用する用語「対象」は、治療的処置又は予防的処置を必要とする動物を指す。対象は、イヌ、ネコ、げっ歯類、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、及び霊長類などの哺乳動物を含む。そのため、本発明は、動物医学で、例えば、コンパニオン動物、農場動物、動物園の実験動物、及び野生の動物を治療するために使用できる。本発明は、ヒト医療用途に特に望ましい。
【０１１９】
本出願で使用する用語「患者」は、ヒト対象を意味する。本発明のいくつかの実施形態では、「患者」は、不均衡ヌクレオチドプール、ミトコンドリア性疾患、ミトコンドリアＤＮＡ枯渇症候群、又はＴＫ２欠損症によって特徴付けられる疾患又は障害を有することが知られているか、又は疑われている。
【０１２０】
語句「治療有効量」は、本明細書において、対象における臨床的に顕著な病態の改善をもたらすか、又は疾患若しくは障害に関連付けられる１以上の症状を遅延又は最小化又は緩和するか、又は対象における所望の有益な生理学的変化をもたらすのに十分な量を意味するために用いられる。
【０１２１】
用語「治療する」、及び「治療」などは、疾患又は障害の症状の少なくとも１つを減速、軽減、改善又は緩和するか、又はその発症後の疾患若しくは障害を元の状態に戻すための手段を指す。
【０１２２】
用語「予防する」、及び「予防」などは、疾患若しくは障害の発症前に行動すること、疾患若しくは障害の発症を防ぐか又は疾患若しくは障害の程度を最小化すること、又はその進行経過を遅くすることを意味する。
【０１２３】
用語「治癒する」などは、癒すこと、よくすること、又は健康になるまで回復すること、又は再発リスクが小さくなるように疾患の再発のない時間を許すことを意味する。
【０１２４】
用語「それを必要とする」は、不均衡ヌクレオチドプール、ミトコンドリア性疾患、ミトコンドリアＤＮＡ枯渇症候群、又はＴＫ２欠損症によって特徴付けられる疾患若しくは障害を有するか若しくは疾患若しくは障害を有する危険性のあることが知られているか、又は疑われる対象である。
【０１２５】
本明細書で使用する用語「薬剤」は、効果をもたらすか、又はもたらすことができ、化学物質、医薬品、生物学、小有機分子、抗体、核酸、ペプチド、及びタンパク質を含むが、これらに限定されない物質を意味する。
【０１２６】
本明細書で使用する用語「デオキシヌクレオシド」又は「ｄＮ」は、デオキシチミジン又はｄＴ、デオキシシチジン又はｄＣ、デオキシアデノシン又はｄＡ、及びデオキシグアノシン又はｄＧを意味する。それぞれの完全な長さの名前及び共通の略語は、互換的に使用される。このようなデオキシヌクレオシドは、デオキシヌクレオシドの生理学的に機能的な誘導体も含む。
【０１２７】
本明細書で使用する用語「デオキシリボヌクレオシド一リン酸」は、チミジン−５’−一リン酸若しくは（ＴＭＰ）又は２’−デオキシシチジン−５’−一リン酸（ｄＣＭＰ）、デオキシアデノシン一リン酸又はｄＡＭＰ、及びデオキシグアノシン一リン酸又はｄＧＭＰを意味する。それぞれの完全な長さの名前及び共通の略語は、互換的に使用される。
【０１２８】
本明細書で使用する用語「薬理学的薬剤」は、単独の又は組成物若しくは医薬組成物中のデオキシヌクレオシド若しくはｄＮ及び／又はデオキシリボヌクレオシド一リン酸若しくはｄＮＭＰを意味する。
【０１２９】
本明細書で使用する用語「薬理学的療法」又は「薬理学的処置」は、本明細書に開示され、かつ同時所有の米国特許出願シリアル番号１５／０８２，２０７（以下「‘２０７出願」）及び１５／７３６，０９２（以下「‘０９２出願」）に十分に記載されているようなｄＮ及び／又はｄＮＭＰの投与を意味する。
【０１３０】
本明細書で使用する用語「生理学的に機能的な誘導体」は、生体内で形質転換されてデオキシヌクレオシドを生成する化合物（例えば、薬物前駆体）を指す。この形質転換は、例えば、血液中での加水分解などの様々な機構（例えば、代謝又は化学的プロセス）によって生じ得る。プロドラッグはそのような誘導体であり、プロドラッグの使用についての考察は、Ｔ．Ｈｉｇｕｃｈｉ及びＷ．Ｓｔｅｌｌａ、「新規送達システムとしてのプロドラッグ（Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）」、ｔｈｅ  Ａ．Ｃ．Ｓ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓの第１４巻、及び「薬物設計における生体可逆性担体（Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ）」、Ｅｄｗａｒｄ  Ｂ．Ｒｏｃｈｅ（編），Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，１９８７によって提供される。
【０１３１】
本明細書で使用する「副作用」は、薬物の投与によって引き起こされる望ましくない反応である。多くの場合、遺伝子及び薬理学的療法の投与は、副作用を引き起こさない。
【０１３２】
本明細書で使用する用語「担体」は、治療薬と一緒に投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤、又はビヒクルを指し、任意の及び全ての溶媒、分散媒体、ビヒクル、コーティング剤、希釈剤、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤、緩衝剤、担体溶液、懸濁液、及びコロイドなどを含む。薬学的活性物質のためのそのような媒体及び薬剤の使用は、当技術分野で周知である。
【０１３３】
用語「医薬として許容される」は、宿主に投与されたときにアレルギー性又は類似の不利な応答を生じず、ヒトに投与された場合に胃の不調及びめまいなどを生じず、連邦若しくは州政府の規制機関によって承認されているか、又は動物、より特にはヒトにおいて使用するための米国薬局方又は他の一般に認識された薬局方に列挙されている分子実体及び組成物を指す。
【０１３４】
「単離された核酸分子」は、単離されたポリヌクレオチドが天然に見出されるか、又は天然では結合されていないポリヌクレオチドに結合したポリヌクレオチドの全部又は一部に関連付けられないゲノム、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、若しくは合成起源のＤＮＡ又はＲＮＡ、又はそれらのいくつかの組み合わせを意味する。本開示の目的のために、特定のヌクレオチド配列「を含む核酸分子」は、完全な染色体を包含しないことが理解されるべきである。特定された核酸配列「を含む」単離された核酸分子は、特定された配列に加えて、最大１０個の若しくは最大２０個の若しくはより多くの他のタンパク質又はその一部若しくはその断片のコード配列を含むか、又は列挙された核酸配列のコード領域の発現を制御する作動可能に連結された調節配列を含むか、かつ／又はベクター配列を含んでよい。
【０１３５】
語句「制御配列」は、特定の宿主生物における作動可能に連結されたコード配列の発現に必要なＤＮＡ配列を指す。原核生物に適した制御配列は、例えば、プロモーター、必要に応じてオペレーター配列、及びリボソーム結合部位を含む。真核細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、及びエンハンサーを使用することが知られている。
【０１３６】
核酸は、別の核酸配列と機能的関係に置かれた時に、「作動可能に連結される」。例えば、プレ配列又は分泌リーダーのＤＮＡは、それがポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合に、ポリペプチドのＤＮＡに作動可能に連結され、プロモーター又はエンハンサーは、それが配列の転写に影響を及ぼす場合に、コード配列に作動可能に連結され、又はリボソーム結合部位は、それが翻訳を促進するように配置される場合に、コード配列に作動可能に連結される。一般に、「作動可能に連結される」は、連結されているＤＮＡ配列が連続的であることを意味し、分泌リーダーの場合には、連続的であり、読み取り相に合っていることを意味する。しかしながら、エンハンサーは連続的である必要はない。連結は、都合のよい制限部位でのライゲーションによって達成される。このような部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプター又はリンカーは、従来の方法に従って使用される。
【０１３７】
本明細書で使用する表現「細胞」、「細胞株」、及び「細胞培養」は、互換的に使用され、そのような全ての名称は子孫を含む。そのため、用語「形質転換体」及び「形質転換細胞」は、一次対象細胞及びそれから誘導された培養物を、導入の数に関係なく含む。また、意図的又は偶発的な変異に起因して、全ての子孫が正確に同一のＤＮＡ含量を有するわけではないことも理解される。最初に形質転換された細胞においてスクリーニングされたのと同じ機能又は生物学的活性を有する変異体の子孫が含まれる。別の名称が意図される場合、それは文脈から明らかである。
【０１３８】
いくつかの態様では、本発明は、単離されたアデノ随伴ベクター（ＡＡＶ）を提供する。ＡＡＶに関して本明細書で使用する用語「単離された」は、その自然環境から（例えば、宿主細胞、組織、又は対象から）単離されるか、又は人工的に生成されたＡＡＶを指す。単離されたＡＡＶは、組換え法を用いて生成されてもよい。このようなＡＡＶは、本明細書では「組換えＡＡＶ」と呼ばれる。組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）は、好ましくは、ｒＡＡＶの導入遺伝子が１以上の所定の組織（複数可）に特異的に送達されるように、組織特異的標的化能力を有する。ＡＡＶキャプシドは、これらの組織特異的標的化能力を決定する際に重要な要素である。
【０１３９】
所望のキャプシドタンパク質を有する組換えＡＡＶを取得する方法が説明されている（例えば、米国特許第７，９０６，１１１号参照）。多数の異なるＡＡＶキャプシドタンパク質、例えば、Ｇａｏら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ７８（１２）：６３８１−６３８８（Ｊｕｎｅ  ２００４）；Ｇａｏら，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １００（１０）：６０８１−６０８６（Ｍａｙ  １３，２００３）；及び米国特許第７，９０６，１１１号；同第８，９９９，６７８号に記載されているものが説明されている。現在記載されている構築物の所望のパッケージング及び方法については、ＡＡＶ９ベクターとキャプシド、又はＡＡＶ２ベクターとキャプシドが好ましい。しかしながら、ｒＡＡＶｒｈ．８及びｒＡＡＶｒｈ．１０などの他の適切なＡＡＶ、又は他の同様のベクターが、本発明での使用に適合し得ることに留意されたい。典型的には、これらの方法は、ＡＡＶキャプシドタンパク質又はその断片をコードする核酸配列、機能ｒｅｐ遺伝子、ＡＡＶ逆末端反復（ＩＴＲ）及び導入遺伝子で構成される組換えＡＡＶベクター、並びに組換えＡＡＶベクターのＡＡＶキャプシドタンパク質へのパッケージングを可能にするのに十分なヘルパー機能を含有する宿主細胞を培養することを含む。
【０１４０】
ＡＡＶキャプシド中のｒＡＡＶベクターをパッケージングするための宿主細胞中で培養されるべき構成要素は、トランスで宿主細胞に提供されてよい。あるいは、必要な構成要素（例えば、組換えＡＡＶベクター、ｒｅｐ配列、ｃａｐ配列、及び／又はヘルパー機能）のいずれか１以上は、当業者に公知の方法を用いて、必要な構成要素の１以上を含有するように操作された安定な宿主細胞によって提供されてよい。最も好適には、このような安定な宿主細胞は、誘導性プロモーターの制御下で必要な構成要素（複数可）を含有する。しかしながら、必要な構成要素（複数可）は、構成的プロモーターの制御下にあってよい。さらに別の代替では、選択される安定な宿主細胞は、構成的プロモーターの制御下の選択された構成要素（複数可）及び１以上の誘導性プロモーターの制御下の他の選択された構成要素（複数可）を含有してよい。例えば、２９３細胞（構成的プロモーターの制御下でＥ１ヘルパー機能を含有する）から誘導されるが、誘導性プロモーターの制御下でｒｅｐ及び／又はｃａｐタンパク質を含有する安定な宿主細胞を作製してよい。
【０１４１】
ｒＡＡＶを生成するための組換えＡＡＶベクター、ｒｅｐ配列、ｃａｐ配列、及びヘルパー機能は、任意の適切な遺伝子要素（ベクター）を用いてパッケージング宿主細胞に送達され得る。選択された遺伝子要素は、本明細書に記載されるものを含む任意の適切な方法によって送達され得る。例えば、Ｆｉｓｈｅｒら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ７０：５２０−５３２（１９９３）及び米国特許第５，４７８，７４５号を参照されたい。
【０１４２】
いくつかの実施形態では、組換えＡＡＶは、三重トランスフェクション法を用いて生成できる（例えば、米国特許第６，００１，６５０号に詳細に記載されているように）。典型的には、組換えＡＡＶは、ＡＡＶ粒子にパッケージングされる組換えＡＡＶベクター（導入遺伝子を含む）、ＡＡＶヘルパー機能ベクター、及び補助機能ベクターで宿主細胞にトランスフェクションすることにより生成される。ＡＡＶヘルパー機能ベクターは、「ＡＡＶヘルパー機能」配列（すなわち、ｒｅｐ及びｃａｐ）をコードし、生産的ＡＡＶ複製及びキャプシド形成のためにトランスで機能する。好ましくは、ＡＡＶヘルパー機能ベクターは、検出可能な野生型ＡＡＶビリオン（すなわち、機能的ｒｅｐ及びｃａｐ遺伝子を含有するＡＡＶビリオン）を作製することなく、効率的なＡＡＶベクター生成を支持する。本発明で使用するのに適するベクターの非限定的な例は、米国特許第６，００１，６５０号に記載されているｐＨＬＰ１９及び米国特許第６，１５６，３０３号に記載されているｐＲｅｐ６ｃａｐ６ベクターを含み、両方の特許の全体は、参照により本明細書に組み込まれる。補助機能ベクターは、ＡＡＶが複製に関して依存する非ＡＡＶ由来ウイルス及び／又は細胞機能（すなわち、「補助機能」）のヌクレオチド配列をコードする。補助機能は、ＡＡＶ複製に必要な機能を含み、限定されないが、ＡＡＶ遺伝子転写の活性化に関与する部分、段階特異的ＡＡＶ  ｍＲＮＡスプライシング、ＡＡＶ  ＤＮＡ複製、ｃａｐ発現産物の合成、及びＡＡＶキャプシドアセンブリを含む。ウイルスに基づく補助機能は、アデノウイルス、ヘルペスウイルス（単純ヘルペスウイルス１型以外）、及びワクシニアウイルスなどの既知のヘルパーウイルスのいずれかに由来してよい。
【０１４３】
本明細書で使用する用語「ＡＡＶ１」、「ＡＡＶ２」、「ＡＡＶ３」、及び「ＡＡＶ４」などは、それぞれＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、又はＡＡＶ４からのＩＴＲ、並びにそれぞれＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、又はＡＡＶ４からのキャプシドタンパク質を含有するＡＡＶベクターを指す。用語「ＡＡＶ２／１」、「ＡＡＶ２／８」、及び「ＡＡＶ２／９」などは、ＡＡＶ２からのＩＴＲ及びそれぞれＡＡＶ１、ＡＡＶ８、又はＡＡＶ９からのキャプシドタンパク質を含有する偽型ＡＡＶベクターを指す。
【０１４４】
トランスフェクトされた宿主細胞に関して、用語「トランスフェクション」は、細胞による外因性ＤＮＡの取り込みを指すために用いられ、細胞は、外因性ＤＮＡが細胞膜内に導入されている場合「トランスフェクト」されている。いくつかのトランスフェクション技術は一般に、当技術分野で知られている。例えば、Ｇｒａｈａｍら，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ５２：４５６（１９７３），Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，実験室マニュアル（ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ），  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８９），Ｄａｖｉｓら，分子生物学の基本法（Ｂａｓｉｃ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ），Ｅｌｓｅｖｉｅｒ（１９８６），及びＣｈｕら，Ｇｅｎｅ  １３：１９７（１９８１）を参照されたい。このような技術は、ヌクレオチド統合ベクター及び他の核酸分子などの１以上の外因性核酸を適切な宿主細胞に導入するために使用できる。
【０１４５】
「宿主細胞」は、興味のある物質を保有するか、又は保有できる任意の細胞を指す。多くの場合、宿主細胞は哺乳動物細胞である。宿主細胞は、ＡＡＶヘルパー構築物、ＡＡＶミニ遺伝子プラスミド、補助機能ベクター、又は組換えＡＡＶの生成に関連付けられる他の導入ＤＮＡのレシピエントとして使用されてよい。この用語は、トランスフェクトされた元の細胞の子孫を含む。そのため、本明細書で使用する「宿主細胞」は、外因性ＤＮＡ配列でトランスフェクトされた細胞を指してよい。単一の親細胞の子孫は、天然の、偶発的、又は意図的な変異に起因して、元の親と形態的に又はゲノム又は全ＤＮＡ相補体において必ずしも完全に同一である必要はないことが理解される。
【０１４６】
細胞に関して、用語「単離された」は、その自然環境から（例えば、組織又は対象から）単離された細胞を指す。用語「細胞株」は、インビトロで連続的又は長期的な増殖及び分裂が可能な細胞の集団を指す。多くの場合、細胞株は、単一の前駆細胞由来のクローン集団である。さらに、このようなクローン集団の保存又は導入中に、自然的又は誘導された変化が核型に生じ得ることは当技術分野で知られている。したがって、言及される細胞株由来の細胞は、祖先細胞又は培養物と正確に同一でなくてもよく、言及される細胞株はそのような変異体を含む。本明細書で使用する用語「組換え細胞」は、生物学的に活性のあるポリペプチドの転写又はＲＮＡなどの生物学的に活性のある核酸の生成をもたらすＤＮＡセグメントなどの、外因性ＤＮＡセグメントが導入された細胞を指す。
【０１４７】
用語「ベクター」は、プラスミド、ファージ、トランスポゾン、コスミド、染色体、人工染色体、ウイルス、又はビリオンなどの任意の遺伝子要素を含み、これらは、適切な制御要素と関連付けられる場合に複製でき、細胞間で遺伝子配列を移動させることができる。そのため、この用語は、クローニング及び発現ビヒクル並びにウイルスベクターを含む。いくつかの実施形態では、有用なベクターは、転写される核酸セグメントがプロモーターの転写制御下に配置されるベクターであることが企図される。「プロモーター」は、遺伝子の特異的転写を開始するのに必要な、細胞の合成機構又は導入される合成機構によって認識されるＤＮＡ配列を指す。語句「作動可能に配置された」、「作動可能に連結された」、「制御下」又は「転写制御下」は、ＲＮＡポリメラーゼの開始及び遺伝子の発現を制御するために、プロモーターが核酸に対して正しい位置及び配向にあることを意味する。
【０１４８】
用語「発現ベクター」又は「発現構築物」又は「構築物」は、核酸コード配列の一部又は全部が転写され得る核酸を含有する任意の種類の遺伝子構築物を意味する。いくつかの実施形態では、発現は、例えば、転写された遺伝子から生物学的に活性のあるポリペプチド産物又は阻害性ＲＮＡを作製するための核酸の転写を含む。
【０１４９】
本明細書で使用する用語「ＴＫ２」は、チミジンキナーゼ２をコードする遺伝子、又は対応するタンパク質産物を指す。用語「ＴＫ２」及び「チミジンキナーゼ２」は、ＴＫ２遺伝子又はタンパク質の野生型形態、並びに野生型ＴＫ２タンパク質及びそれをコードする核酸のバリアント（例えば、とりわけ、スプライスバリアント、トランケーション、コンカテマー、及び融合構築物）を含む。そのようなバリアントの例は、野生型ＴＫ２タンパク質のアミノ酸配列（例えば、配列番号１）のいずれかと少なくとも７０％の配列同一性（例えば、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９．９％の同一性、又はそれを超える）を有するタンパク質であり、ただし、ＴＫ２バリアントは野生型ＴＫ２の機能を保持している。さらに、用語「ＴＫ２」及び「チミジンキナーゼ２」は、融合タンパク質、又はそれをコードする核酸を指し、ここでＴＫ２は、別のポリペプチド、半減期改変剤、又は治療薬に作動可能に連結されている。用語「ＴＫ２」は、当業者には理解されるように、文脈に応じて、タンパク質又はこのタンパク質をコードする遺伝子を指してよい。
【０１５０】
例示的なＴＫ２アミノ酸配列（配列番号１）：
ＭＧＡＦＣＱＲＰＳＳＤＫＥＱＥＫＥＫＫＳＶＩＣＶＥＧＮＩＡＳＧＫＴＴＣＬＥＦＦＳＮＡＴＤＶＥＶＬＴＥＰＶＳＫＷＲＮＶＲＧＨＮＰＬＧＬＭＹＨＤＡＳＲＷＧＬＴＬＱＴＹＶＱＬＴＭＬＤＲＨＴＲＰＱＶＳＳＶＲＬＭＥＲＳＩＨＳＡＲＹＩＦＶＥＮＬＹＲＳＧＫＭＰＥＶＤＹＶＶＬＳＥＷＦＤＷＩＬＲＮＭＤＶＳＶＤＬＩＶＹＬＲＴＮＰＥＴＣＹＱＲＬＫＫＲＣＲＥＥＥＫＶＩＰＬＥＹＬＥＡＩＨＨＬＨＥＥＷＬＩＫＧＳＬＦＰＭＡＡＰＶＬＶＩＥＡＤＨＨＭＥＲＭＬＥＬＦＥＱＮＲＤＲＩＬＴＰＥＮＲＫＨＣＰ
例示的なＴＫ２核酸配列（配列番号２）：
ＧＣＣＡＡＧＴＴＡＴＧＧＧＴＧＣＧＴＴＣＴＧＣＣＡＧＣＧＴＣＣＴＡＧＣＡＧＴＧＡＴＡＡＡＧＡＡＣＡＧＧＡＡＡＡＡＧＡＧＡＡＡＡＡＡＴＣＡＧＴＧＡＴＣＴＧＴＧＴＣＧＡＧＧＧＣＡＡＴＡＴＴＧＣＡＡＧＴＧＧＧＡＡＧＡＣＧＡＣＡＴＧＣＣＴＧＧＡＡＴＴＣＴＴＣＴＣＣＡＡＣＧＣＧＡＣＡＧＡＣＧＴＣＧＡＧＧＴＧＴＴＡＡＣＧＧＡＧＣＣＴＧＴＧＴＣＣＡＡＧＴＧＧＡＧＡＡＡＴＧＴＣＣＧＴＧＧＣＣＡＣＡＡＴＣＣＴＣＴＧＧＧＣＣＴＧＡＴＧＴＡＣＣＡＣＧＡＴＧＣＣＴＣＴＣＧＣＴＧＧＧＧＴＣＴＴＡＣＧＣＴＡＣＡＧＡＣＴＴＡＴＧＴＧＣＡＧＣＴＣＡＣＣＡＴＧＣＴＧＧＡＣＡＧＧＣＡＴＡＣＴＣＧＴＣＣＴＣＡＧＧＴＧＴＣＡＴＣＴＧＴＡＣＧＧＴＴＧＡＴＧＧＡＧＡＧＧＴＣＧＡＴＴＣＡＣＡＧＣＧＣＡＡＧＡＴＡＣＡＴＴＴＴＴＧＴＡＧＡＡＡＡＣＣＴＧＴＡＴＡＧＡＡＧＴＧＧＧＡＡＧＡＴＧＣＣＡＧＡＡＧＴＧＧＡＣＴＡＴＧＴＡＧＴＴＣＴＧＴＣＧＧＡＡＴＧＧＴＴＴＧＡＣＴＧＧＡＴＣＴＴＧＡＧＧＡＡＣＡＴＧＧＡＣＧＴＧＴＣＴＧＴＴＧＡＴＴＴＧＡＴＡＧＴＴＴＡＣＣＴＴＣＧＧＡＣＣＡＡＴＣＣＴＧＡＧＡＣＴＴＧＴＴＡＣＣＡＧＡＧＧＴＴＡＡＡＧＡＡＧＡＧＡＴＧＣＡＧＧＧＡＡＧＡＧＧＡＧＡＡＧＧＴＣＡＴＴＣＣＧＣＴＧＧＡＡＴＡＣＣＴＧＧＡＡＧＣＡＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＴＧＡＧＧＡＧＴＧＧＣＴＣＡＴＣＡＡＡＧＧＣＡＧＣＣＴＴＴＴＣＣＣＣＡＴＧＧＣＡＧＣＣＣＣＴＧＴＴＣＴＧＧＴＧＡＴＴＧＡＧＧＣＴＧＡＣＣＡＣＣＡＣＡＴＧＧＡＧＡＧＧＡＴＧＴＴＡＧＡＡＣＴＣＴＴＴＧＡＡＣＡＡＡＡＴＣＧＧＧＡＴＣＧＡＡＴＡＴＴＡＡＣＴＣＣＡＧＡＧＡＡＴＣＧＧＡＡＧＣＡＴＴＧＣＣＣＡＴＡＧＧＡＧＧＣＡＡＡＡＧＧＴＣＴＡＴＧＧＣＴＣＡＴＧＴＣＴＧＡＡＡＡＡＴＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＣＡＡＧＴＴＡＧＣＴＡＴＴＧＧＧＡＧＣＡＡＴＣＴＧＧＡＡＡＡＡＣＴＴＧＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＧＧＣＴＴＴＧＴＧＴＣＴＧＧＣＣＡＧＣＴＴＧＡＴＴＴＴＣＣＴＡＡＴＧＧＴＣＴＣＡＴＣＴＣＣＴＴＴＧＣＴＡＧＴＧＴＣＴＴＴＧＴＣＡＴＧＣＧＴＣＴＣＴＧＧＣＣＣＴＣＧＴＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡＣＡＡＡＣＧＧＧＡＣＣＡＡＴＧＧＧＴＴＴＧＣＣＡＡＧＣＣＣＴＴＴＧＣＴＧＴＴＣＧＣＡＧＣＣＴＣＡＣＡＴＴＣＣＣＣＣＧＧＴＧＣＣＴＣＴＣＣＣＡＴＧＧＣＴＴＴＧＴＧＣＴＧＣＴＧＡＧＴＣＧＣＴＣＴＣＡＴＧＡＡＧＣＣＣＴＴＡＧＧＧＡＧＡＧＣＡＣＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＡＣＡＣＣＡＣＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＴＧＴＡＣＣＡＡＴＣＧＴＣＴＣＡＧＣＣＴＴＣＡＴＴＡＧＧＡＧＧＣＣＧＡＧＧＴＡＧＧＡＧＴＣＴＴＡＴＡＴＣＣＣＡＧＧＴＧＡＧＧＡＡＴＴＴＧＡＡＧＣＴＣＡＧＡＡＡＧＧＴＴＧＡＧＧＧＧＣＴＣＣＣＣＡＧＡＧＧＴＣＡＣＡＣＡＧＣＣＴＧＴＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＧＣＴＧＧＣＡＣＣＡＴＴＣＡＧＡＣＴＴＴＣＡＧＣＣＧＡＣＴＣＡＧＣＡＡＣＴＴＴＣＣＣＴＴＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＣＣＴＣＣＴＧＡＧＡＧＣＴＧＴＴＣＣＣＣＡＣＣＧＣＣＣＴＧＣＣＴＣＴＴＣＣＧＧＴＴＧＧＡＧＧＣＴＣＴＣＡＴＧＴＣＴＣＴＴＴＧＧＧＧＡＧＡＧＣＴＧＧＣＡＧＴＧＴＧＣＧＧＡＧＣＴＧＡＴＡＡＣＡＴＴＴＴＣＣＣＡＡＴＡＴＴＧＡＧＣＡＧＴＴＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＧＴＣＡＧＣＡＴＴＴＣＴＡＧＡＣＴＴＣＣＡＣＡＡＡＡＴＴＡＴＧＣＴＧＣＡＴＴＴＧＧＣＴＧＧＡＧＣＣＣＧＧＴＧＴＴＣＡＧＴＧＧＴＴＴＣＣＣＴＧＣＣＣＧＡＧＧＴＣＧＣＴＧＣＡＧＣＣＣＣＡＴＣＴＡＣＣＡＣＡＴＣＴＴＣＡＴＧＴＧＧＡＣＡＴＴＧＡＧＡＴＴＣＡＣＡＴＧＣＴＧＧＣＴＣＣＴＧＡＡＧＧＧＴＧＣＴＣＡＧＴＣＴＣＣＴＴＧＧＴＧＡＴＴＡＡＧＧＴＣＣＴＧＣＴＴＧＡＡＣＴＧＣＴＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＴＧＴＣＡＧＧＧＡＡＧＴＣＧＣＴＴＴＴＧＧＴＧＣＣＴＧＧＣＴＧＧＴＴＴＧＣＣＣＡＧＡＧＣＣＡＡＧＣＴＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＧＣＣＡＧＣＣＣＴＧＧＣＴＴＣＣＡＡＧＧＣＴＣＣＣＧＴＡＣＴＧＴＣＴＧＴＧＴＣＣＴＴＧＴＡＴＡＡＧＧＡＧＣＴＴＴＧＣＴＣＴＴＧＧＡＡＴＴＡＣＴＧＡＡＡＧＴＣＴＧＴＧＧＣＣＣＡＡＧＡＧＡＧＡＧＡＣＡＣＡＡＧＴＧＧＣＣＴＴＡＡＧＴＣＴＴＴＴＴＧＡＡＧＴＧＴＴＡＴＴＴＣＡＴＣＣＡＧＧＧＡＡＡＴＧＣＣＴＣＧＡＧＣＣＡＴＡＧＡＧＣＣＴＧＡＡＡＴＣＡＴＣＴＴＴＧＴＴＧＧＣＴＣＡＧＡＡＡＡＴＡＣＣＴＴＡＧＣＴＴＣＡＣＴＣＡＧＣＴＧＧＡＣＴＧＣＡＴＴＧＡＡＧＧＣＧＡＧＧＣＴＧＣＣＣＣＴＴＧＧＡＴＣＡＡＧＣＡＧＡＡＡＡＣＡＡＧＡＧＡＡＡＧＡＡＡＧＡＡＣＧＴＴＣＣＣＴＴＴＧＧＧＧＡＴＡＧＴＣＴＧＧＡＡＡＧＴＴＧＧＧＡＴＴＴＧＣＡＡＡＴＡＡＡＧＧＣＴＣＴＧＧＡＡＧＣＡＴＴＧＣＴＧＧＴＣＣＴＧＡＡＧＣＴＴＴＧＧＡＧＧＴＧＧＧＣＡＧＡＧＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＧＡＡＧＡＣＴＡＧＡＴＧＣＡＡＡＣＣＣＴＧＧＡＡＡＧＧＡＴＴＡＡＧＧＣＴＣＡＡＣＴＣＴＧＧＡＧＡＡＡＣＡＧＧＣＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＣＡＧＡＧＣＡＧＣＴＧＴＴＧＧＣＴＧＴＡＡＡＴＡＧＡＧＧＴＡＧＣＡＡＧＧＣＣＧＣＴＣＣＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＴＧＡＧＴＧＴＧＧＧＣＡＣＣＴＧＴＧＣＡＴＧＣＡＡＴＧＣＴＣＣＧＡＣＴＣＴＧＣＡＧＡＧＧＴＧＣＣＡＡＧＴＧＣＣＣＣＴＧＣＴＧＧＧＣＣＡＧＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＴＴＡＧＧＡＡＧＴＣＡＡＧＧＣＣＴＧＣＡＡＣＴＣＣＴＧＧＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＴＴＧＧＡＣＣＡＧＴＴＣＴＴＧＴＧＣＣＡＴＴＧＧＣＡＧＧＡＴＧＡＧＡＧＧＣＡＧＣＡＧＣＣＡＧＧＣＧＧＧＡＧＣＴＧＴＧＴＣＴＡＧＣＡＧＣＡＣＣＴＧＴＡＧＣＣＣＡＣＧＴＧＣＴＧＣＴＡＡＴＴＡＧＣＴＧＧＡＡＡＡＣＴＧＧＣＧＡＡＧＧＣＡＧＡＡＣＣＴＴＴＧＣＴＡＣＣＡＧＧＡＡＴＣＴＴＧＡＣＡＴＧＴＧＧＧＧＴＣＴＧＴＣＴＴＴＧＡＧＡＡＴＴＴＧＴＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＴＣＣＡＡＴＡＴＴＴＣＣＴＣＴＣＧＧＣＴＣＡＴＴＴＴＧＣＡＣＡＴＣＣＡＴＴＴＴＴＧＧＧＧＡＡＡＴＧＴＧＡＴＴＴＣＴＣＴＣＴＣＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＣＣＴＡＡＧＧＣＡＣＡＡＴＣＴＣＡＡＧＡＧＧＴＣＣＴＧＡＧＡＣＣＡＣＧＴＡＣＣＣＡＴＧＡＴＴＴＴＴＴＴＣＴＴＧＣＴＣＴＧＴＧＡＴＡＣＣＣＡＡＴＡＡＣＴＣＣＴＴＣＡＣＣＴＡＡＧＣＣＣＴＧＴＴＧＴＴＧＡＴＴＴＴＧＡＡＧＴＧＣＴＴＣＣＴＡＧＧＣＣＡＧＴＧＡＴＴＴＴＡＧＣＴＴＣＴＧＣＣＡＧＣＴＧＣＴＴＴＴＧＣＣＡＧＴＡＧＡＴＴＡＡＣＧＴＧＴＴＴＴＴＡＴＴＴＴＴＣＡＡＡＣＴＣＣＧＴＧＴＴＴＣＣＴＡＡＣＧＴＧＧＡＧＴＧＴＡＴＧＧＧＴＣＴＡＡＧＡＧＡＧＣＣＴＧＣＴＧＴＣＣＴＣＣＣＴＧＣＣＴＴＣＣＡＣＣＴＴＧＧＡＧＡＧＧＡＧＧＣＴＧＧＡＣＧＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＧＧＴＣＧＣＡＡＡＡＴＣＴＣＣＣＡＧＣＣＴＡＧＡＧＡＣＣＡＣＡＣＣＴＧＡＡＡＣＧＧＣＴＧＡＡＧＣＣＡＧＣＴＴＧＣＡＣＡＡＧＧＧＣＴＧＣＴＧＴＣＣＣＴＣＴＧＣＧＧＣＡＧＧＣＡＧＡＧＣＴＧＧＴＧＧＧＧＧＣＡＧＧＧＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＴＣＡＴＡＧＡＣＡＣＣＡＴＧＧＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＧＡＧＡＡＧＧＧＣＡＧＡＴＧＧＣＡＣＡＴＧＧＧＣＡＣＡＡＣＡＧＧＧＣＣＴＴＧＴＣＣＴＴＡＧＡＧＣＡＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＡＴＧＧＣＴＧＧＧＡＧＧＧＧＣＡＴＧＧＣＡＧＧＧＧＣＴＧＧＣＡＴＣＣＣＴＧＴＡＧＡＧＣＣＡＧＡＧＧＧＧＣＣＡＣＣＣＡＧＧＧＣＡＧＴＧＡＣＡＴＴＣＣＡＧＡＴＡＴＧＴＴＧＧＧＣＴＣＡＣＣＴＣＡＴＣＣＴＴＧＣＴＧＴＧＡＧＡＣＴＧＧＡＧＴＴＣＣＡＴＧＧＧＧＡＣＡＴＧＡＡＧＴＣＡＧＴＡＣＡＣＣＧＣＡＧＡＧＣＴＧＣＴＣＡＧＣＴＧＣＴＣＴＡＣＣＴＣＴＣＧＣＴＧＡＣＴＴＴＴＴＴＧＴＴＧＣＡＣＡＴＡＴＡＣＡＴＴＴＴＣＴＴＴＣＡＡＴＴＡＧＣＡＴＴＴＡＴＴＴＣＡＧＣＴＴＴＴＡＴＴＴＡＡＧＣＴＴＴＴＴＧＡＣＡＧＴＡＣＡＴＧＴＡＡＡＡＴＡＴＡＴＧＡＴＴＡＴＡＡＣＣＡＴＴＴＡＡＡＡＡＴＡＣＣＴＴＡＴＧＴＡＣＣＴＧＧＴＴＴＴＴＴＴＴＧＧＡＡＡＣＴＡＧＡＴＡＧＡＡＡＴＡＴＡＴＴＴＡＴＣＴＴＴＴＡＣＡＴＡＡＡＡＧＡＡＧＴＧＴＧＴＡＧＴＧＧＧＧＴＧＧＴＣＣＡＧＧＧＣＴＴＴＧＴＧＧＴＧＧＣＴＴＡＧＴＧＧＣＣＡＴＣＧＧＧＧＴＣＣＣＡＧＧＣＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＴＴＴＣＴＣＴＴＴＴＧＧＧＴＣＣＡＣＣＴＣＴＴＧＧＣＴＣＣＴＧＧＣＴＴＣＣＴＴＣＣＴＣＴＧＧＧＧＣＣＴＧＡＣＴＧＴＣＣＡＧＧＡＴＧＧＣＡＧＣＴＧＧＡＧＣＴＣＣＴＧＣＴＣＴＧＧＧＣＡＣＧＧＴＴＧＧＣＡＴＣＡＧＡＧＣＣＣＡＣＴＧＣＴＣＣＣＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＴＴＡＡＴＣＣＡＧＡＴＧＣＴＧＧＴＡＡＴＧＴＣＣＣＴＴＴＣＣＡＡＧＧＣＡＴＡＡＣＴＡＡＧＡＴＡＡＧＣＴＧＧＡＡＧＧＴＴＣＴＴＡＣＧＡＧＧＣＴＴＴＧＣＴＡＧＡＧＧＣＣＣＴＧＧＧＡＧＧＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＧＣＡＡＧＡＧＧＧＣＡＧＴＧＣＣＣＡＣＣＣＡＴＡＧＡＣＣＧＧＧＴＣＡＣＡＴＧＡＣＣＴＧＧＣＡＴＣＡＧＣＧＣＣＧＴＧＧＧＧＴＣＣＴＴＴＧＧＧＣＴＴＣＡＣＣＴＣＣＣＴＣＴＣＣＣＣＴＣＴＧＣＣＣＣＣＡＣＧＴＣＡＴＣＣＣＡＣＣＣＴＣＡＴＣＣＴＣＡＣＣＣＴＣＡＣＣＡＴＴＣＣＣＡＴＣＣＣＧＴＡＣＣＧＴＡＡＴＧＴＣＣＣＴＴＧＣＡＡＧＧＣＣＴＡＡＣＴＣＴＧＴＧＡＧＧＡＡＴＧＡＡＡＣＣＡＣＣＴＣＡＴＣＣＴＴＧＴＴＣＣＡＡＴＡＡＣＡＴＧＡＧＴＧＡＣＣＧＡＡＴＴＴＡＣＡＡＡＣＧＡＧＴＧＡＡＴＧＴＧＧＡＣＣＴＣＴＧＧＡＡＡＣＡＴＴＡＣＣＣＡＧＣＴＴＧＴＴＴＴＴＡＣＴＴＴＴＣＡＣＴＴＴＣＴＣＴＴＴＣＴＧＣＣＣＣＴＴＴＣＡＴＴＴＣＣＧＴＡＧＧＡＧＣＣＣＴＴＴＡＣＣＴＡＧＡＴＧＡＧＡＡＧＴＧＴＣＣＣＣＣＣＧＣＣＴＧＧＧＧＡＡＴＡＴＡＴＣＡＧＴＣＡＧＡＡＣＡＡＴＣＴＴＣＣＴＧＣＡＧＡＣＡＴＧＣＡＣＣＡＴＴＡＧＡＣＣＣＧＡＧＴＧＡＣＧＧＴＧＧＴＧＣＣＡＴＴＴＡＡＡＣＣＴＣＡＧＡＧＣＡＧＧＴＡＡＡＡＧＧＴＧＧＴＣＣＴＧＡＡＡＣＣＴＧＴＣＴＡＣＣＣＡＣＡＧＧＧＴＧＣＴＡＴＧＧＡＡＴＣＴＧＡＡＴＣＡＣＴＴＣＴＴＴＴＴＴＣＣＴＡＧＡＧＣＣＣＴＧＧＧＧＴＧＧＧＧＡＧＣＴＣＣＣＴＣＡＡＧＴＧＴＴＣＡＣＡＴＧＴＧＴＧＴＧＧＡＡＴＧＡＧＧＡＡＣＡＣＣＣＡＴＣＴＣＣＴＴＧＧＣＣＣＴＣＴＣＣＡＣＣＣＴＧＡＡＧＡＧＴＴＡＧＴＴＡＴＴＡＡＡＡＴＡＡＴＴＧＧＣＡＡＧＣＴＣＴＴＧＣＡＡＡＴＧＴＣＡＧＴＣＡＴＣＣＡＴＴＧＴＴＣＡＧＡＡＴＧＧＡＡＴＡＧＣＡＡＴＡＡＴＡＣＡＴＣＣＣＴＧＧＣＴＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＴＧＧＣＣＡＧＧＡＴＴＡＣＴＣＡＣＴＧＡＡＧＧＣＣＴＣＡＧＧＧＴＴＡＣＴＧＧＣＡＣＡＣＡＣＴＴＴＣＴＴＴＴＣＣＴＡＡＴＡＡＴＣＣＣＡＴＣＣＣＣＴＣＡＧＣＴＴＴＣＣＴＡＡＧＧＣＴＡＧＡＧＴＧＡＡＴＴＴＣＧＴＧＴＴＣＣＴＴＴＡＧＴＴＴＡＣＡＴＡＡＧＡＴＧＧＴＧＡＡＣＴＴＧＧＣＡＡＡＡＧＣＴＡＴＣＡＴＴＡＡＡＣＡＧＡＡＧＣＴＡＡＧＡＧＡＡＡＧＣＣＴＡＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＴＣＣＡＧＡＡＴＧＧＧＴＡＴＴＧＣＣＡＴＴＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＡＣＡＧＡＡＧＣＴＧＴＣＴＴＧＡＡＴＴＴＣＴＴＴＣＴＧＴＧＴＣＴＴＴＴＣＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＴＴＴＡＡＧＡＣＴＧＴＴＧＴＴＴＡＣＣＡＧＡＣＴＧＧＧＣＴＣＴＧＴＧＧＡＡＣＡＣＡＧＧＴＧＴＣＣＴＧＧＧＡＧＡＴＧＧＴＴＡＡＴＣＡＴＴＡＣＡＡＡＡＴＡＴＴ
ＧＧＴＡＡＣＡＡＴＣＴＡＡＡＧＡＴＧＣＡＴＡＣＡＴＡＡＧＡＧＡＧＴＧＧＴＣＡＡＡＴＡＡＡＣＣＡＴＴＴＴＣＣＡＴＴＣＡ
【０１５１】
本明細書で使用する用語「ｄＧＫ」は、デオキシグアノシンキナーゼをコードする遺伝子、又は対応するタンパク質産物を指す。用語「ｄＧＫ」及び「デオキシグアノシンキナーゼ」は、ｄＧＫ遺伝子又はタンパク質の野生型形態、並びに野生型ｄＧＫタンパク質及びそれをコードする核酸のバリアント（例えば、とりわけ、スプライスバリアント、トランケーション、コンカテマー、及び融合構築物）を含む。そのようなバリアントの例は、野生型ｄＧＫタンパク質のアミノ酸配列（例えば、配列番号３）のいずれかと少なくとも７０％の配列同一性（例えば、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９．９％の同一性、又はそれを超える）を有するタンパク質であり、ただし、ｄＧＫバリアントは野生型ｄＧＫの機能を保持している。さらに、用語「ｄＧＫ」及び「デオキシグアノシンキナーゼ」は、融合タンパク質、又はそれらをコードする核酸を指してよく、ここでｄＧＫは、別のポリペプチド、半減期改変剤、又は治療薬に作動可能に連結されている。用語「ｄＧＫ」は、当業者には理解されるように、文脈に応じて、タンパク質又はこのタンパク質をコードする遺伝子を指してよい。
【０１５２】
例示的なｄＧＫアミノ酸配列（配列番号３）：
ＭＡＡＧＲＬＦＬＳＲＬＲＡＰＦＳＳＭＡＫＳＰＬＥＧＶＳＳＳＲＧＬＨＡＧＲＧＰＲＲＬＳＩＥＧＮＩＡＶＧＫＳＴＦＶＫＬＬＴＫＴＹＰＥＷＨＶＡＴＥ
ＰＶＡＴＷＱＮＩＱＡＡＧＴＱＫＡＣＴＡＱＳＬＧＮＬＬＤＭＭＹＲＥＰＡＲＷＳＹＴＦＱＴＦＳＦＬＳＲＬＫＶＱＬＥＰＦＰＥＫＬＬＱＡＲＫＰＶＱＩＦ
ＥＲＬＨＦＥＡＬＭＮＩＰＶＬＶＬＤＶＮＤＤＦＳＥＥＶＴＫＱＥＤＬＭＲＥＶＮＴＦＶＫＮＬ
【０１５３】
例示的なｄＧＫ核酸配列（配列番号４）：
ＡＡＣＧＧＴＧＣＧＣＴＧＧＡＧＣＧＡＧＴＧＡＧＣＡＧＣＧＡＴＡＣＣＴＡＧＧＧＣＧＧＡＡＧＴＧＣＴＣＴＣＧＧＣＧＧＡＡＧＴＧＡＴＣＧＣＴＧＴＧＴＧＡＡＴＣＧＴＧＧＧＴＧＧＧＡＴＧＧＣＣＧＣＧＧＧＣＣＧＣＣＴＣＴＴＴＣＴＡＡＧＴＣＧＧＣＴＴＣＧＡＧＣＡＣＣＣＴＴＣＡＧＴＴＣＣＡＴＧＧＣＣＡＡＧＡＧＣＣＣＡＣＴＣＧＡＧＧＧＣＧＴＴＴＣＣＴＣＣＴＣＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＣＡＣＧＣＧＧＧＧＣＧＣＧＧＧＣＣＣＣＧＡＡＧＧＣＴＣＴＣＣＡＴＣＧＡＡＧＧＣＡＡＣＡＴＴＧＣＴＧＴＧＧＧＡＡＡＧＴＣＣＡＣＧＴＴＴＧＴＧＡＡＧＴＴＡＣＴＣＡＣＧＡＡＡＡＣＴＴＡＣＣＣＡＧＡＡＴＧＧＣＡＣＧＴＡＧＣＴＡＣＡＧＡＡＣＣＴＧＴＡＧＣＡＡＣＡＴＧＧＣＡＧＡＡＴＡＴＣＣＡＧＧＣＴＧＣＴＧＧＣＡＣＣＣＡＡＡＡＡＧＣＣＴＧＣＡＣＴＧＣＣＣＡＡＡＧＴＣＴＴＧＧＡＡＡＣＴＴＧＣＴＧＧＡＴＡＴＧＡＴＧＴＡＣＣＧＧＧＡＧＣＣＡＧＣＡＣＧＡＴＧＧＴＣＣＴＡＣＡＣＡＴＴＣＣＡＧＡＣＡＴＴＴＴＣＣＴＴＴＴＴＧＡＧＣＣＧＣＣＴＧＡＡＡＧＴＡＣＡＧＣＴＧＧＡＧＣＣＣＴＴＣＣＣＴＧＡＧＡＡＡＣＴＣＴＴＡＣＡＧＧＣＣＡＧＧＡＡＧＣＣＡＧＴＡＣＡＧＡＴＣＴＴＴＧＡＧＡＧＧＣＴＣＣＡＣＴＴＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＡＴＧＡＡＣＡＴＴＣＣＡＧＴＧＣＴＧＧＴＧＴＴＧＧＡＴＧＴＣＡＡＴＧＡＴＧＡＴＴＴＴＴＣＴＧＡＧＧＡＡＧＴＡＡＣＣＡＡＡＣＡＡＧＡＡＧＡＣＣＴＣＡＴＧＡＧＡＧＡＧＧＴＡＡＡＣＡＣＣＴＴＴＧＴＡＡＡＧＡＡＴＣＴＧＴＡＡＣＣＡＡＴＡＣＣＡＴＧＡＡＧＴＴＣＡＧＧＣＴＧＴＧＡＴＣＴＧＧＧＣＴＣＣＣＴＧＡＣＴＴＴＣＴＧＡＡＧＣＴＡＧＡＡＡＡＡＴＧＴＴＧＴＧＴＣＴＣＣＣＡＡＣＣＡＣＣＴＴＴＣＣＡＴＣＣＣＣＡＧＣＣＣＣＴＣＴＣＡＴＣＣＣＴＧＧＡＧＣＡＣＴＣＴＧＣＣＧＣＴＣＡＡＧＡＧＣＴＧＧＴＴＴＧＴＴＡＡＴＴＡＴＴＧＴＴＡＧＡＣＴＴＴＧＣＣＡＴＴＧＴＴＴＴＣＴＴＴＴＧＴＡＣＣＴＧＡＡＧＣＡＴＴＴＴＧＡＡＡＡＴＡＡＡＧＴＴＴＡＣＴＴＡＡＧＴＴＡＴＧＣＴＴＧＴＴＴＴＴＣＴＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ
【０１５４】
本明細書で使用する用語「ｐ５３Ｒ２」は、リボヌクレオチド還元酵素のｐ５３誘導性サブユニットをコードする遺伝子、又は対応するタンパク質産物を指す。用語「ｐ５３Ｒ２」又は「リボヌクレオチド還元酵素のｐ５３誘導性サブユニット」は、ｐ５３Ｒ２遺伝子又はタンパク質の野生型形態、並びに野生型ｐ５３Ｒ２タンパク質及びそれをコードする核酸のバリアント（例えば、とりわけ、スプライスバリアント、トランケーション、コンカテマー、及び融合構築物）を含む。そのようなバリアントの例は、野生型ｐ５３Ｒ２タンパク質のアミノ酸配列（例えば、配列番号５）のいずれかと少なくとも７０％の配列同一性（例えば、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９．９％の同一性、又はそれを超える）を有するタンパク質であるが、ただし、ｐ５３Ｒ２バリアントは、野生型ｐ５３Ｒ２の機能を保持している。さらに、用語「ｐ５３Ｒ２」又は「リボヌクレオチド還元酵素のｐ５３誘導性サブユニット」は、融合タンパク質、又はそれをコードする核酸を指し、ここでｐ５３Ｒ２は、別のポリペプチド、半減期改変剤、又は治療薬に作動可能に連結されている。用語「ｐ５３Ｒ２」は、当業者には理解されるように、文脈に応じて、タンパク質又はこのタンパク質をコードする遺伝子を指してよい。
例示的なｐ５３Ｒ２アミノ酸配列（配列番号５）：
ＭＬＬＬＲＬＰＰＨＲＳＨＡＳＰＬＤＣＫＬＱＤＲＣＲＫＣＹＳＰＲＳＧＱＡＣＰＰＡＬＡＡＡＷＬＲＲＣＥＲＲＧＧＲＰＲＧＧＲＲＫＥＬＴＬＧＬＲＰＡＲＣＳＡＰＧＰＡＫＤＤＡＷＲＰＱＡＧＲＳＳＳＤＴＮＥＳＥＩＫＳＮＥＥＰＬＬＲＫＳＳＲＲＦＶＩＦＰＩＱＹＰＤＩＷＫＭＹＫＱＡＱＡＳＦＷＴＡＥＥＶＤＬＳＫＤＬＰＨＷＮＫＬＫＡＤＥＫＹＦＩＳＨＩＬＡＦＦＡＡＳＤＧＩＶＮＥＮＬＶＥＲＦＳＱＥＶＱＶＰＥＡＲＣＦＹＧＦＱＩＬＩＥＮＶＨＳＥＭＹＳＬＬＩＤＴＹＩＲＤＰＫＫＲＥＦＬＦＮＡＩＥＴＭＰＹＶＫＫＫＡＤＷＡＬＲＷＩＡＤＲＫＳＴＦＧＥＲＶＶＡＦＡＡＶＥＧＶＦＦＳＧＳＦＡＡＩＦＷＬＫＫＲＧＬＭＰＧＬＴＦＳＮＥＬＩＳＲＤＥＧＬＨＣＤＦＡＣＬＭＦＱＹＬＶＮＫＰＳＥＥＲＶＲＥＩＩＶＤＡＶＫＩＥＱＥＦＬＴＥＡＬＰＶＧＬＩＧＭＮＣＩＬＭＫＱＹＩＥＦＶＡＤＲＬＬＶＥＬＧＦＳＫＶＦＱＡＥＮＰＦＤＦＭＥＮＩＳＬＥＧＫＴＮＦＦＥＫＲＶＳＥＹＱＲＦＡＶＭＡＥＴＴＤＮＶＦＴＬＤ
ＡＤＦ
例示的なｐ５３Ｒ２核酸配列（配列番号６）：
ＡＴＧＡＧＧＴＡＡＡＴＧＴＴＧＣＴＧＴＴＧＣＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＣＡＣＣＧＣＡＧＴＣＡＣＧＣＣＡＧＣＣＣＧＴＴＡＧＡＴＴＧＣＡＡＧＴＴＧＣＡＧＧＡＣＣＧＣＴＧＴＡＧＧＡＡＡＴＧＴＴＡＴＴＣＧＣＣＧＣＧＧＴＣＡＧＧＡＣＡＧＧＣＣＴＧＴＣＣＧＣＣＣＧＣＣＣＴＣＧＣＣＧＣＡＧＣＣＴＧＧＣＴＴＣＧＴＣＧＴＴＧＣＧＡＧＣＧＣＣＧＧＧＧＡＧＧＣＣＧＴＣＣＣＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＧＧＡＧＧＡＡＧＧＡＧＣＴＧＡＣＴＴＴＧＧＧＴＴＴＧＣＧＴＣＣＣＧＣＴＣＧＣＴＧＣＴＣＴＧＣＣＣＣＧＧＧＧＣＣＡＧＣＣＡＡＧＧＡＣＧＡＣＧＣＴＴＧＧＡＧＧＣＣＴＣＡＧＧＣＣＧＧＧＡＧＡＴＣＡＴＣＴＴＣＡＧＡＣＡＣＣＡＡＣＧＡＡＡＧＴＧＡＡＡＴＡＡＡＧＴＣＡＡＡＴＧＡＡＧＡＧＣＣＡＣＴＣＣＴＡＡＧＡＡＡＧＡＧＴＴＣＴＣＧＣＣＧＧＴＴＴＧＴＣＡＴＣＴＴＴＣＣＡＡＴＣＣＡＧＴＡＣＣＣＴＧＡＴＡＴＴＴＧＧＡＡＡＡＴＧＴＡＴＡＡＡＣＡＧＧＣＡＣＡＧＧＣＴＴＣＣＴＴＣＴＧＧＡＣＡＧＣＡＧＡＡＧＡＧＧＴＣＧＡＣＴＴＡＴＣＡＡＡＧＧＡＴＣＴＣＣＣＴＣＡＣＴＧＧＡＡＣＡＡＧＣＴＴＡＡＡＧＣＡＧＡＴＧＡＧＡＡＧＴＡＣＴＴＣＡＴＣＴＣＴＣＡＣＡＴＣＴＴＡＧＣＣＴＴＴＴＴＴＧＣＡＧＣＣＡＧＴＧＡＴＧＧＡＡＴＴＧＴＡＡＡＴＧＡＡＡＡＴＴＴＧＧＴＧＧＡＧＣＧＣＴＴＴＡＧＴＣＡＧＧＡＧＧＴＧＣＡＧＧＴＴＣＣＡＧＡＧＧＣＴＣＧＣＴＧＴＴＴＣＴＡＴＧＧＣＴＴＴＣＡＡＡＴＴＣＴＣＡＴＣＧＡＧＡＡＴＧＴＴＣＡＣＴＣＡＧＡＧＡＴＧＴＡＣＡＧＴＴＴＧＣＴＧＡＴＡＧＡＣＡＣＴＴＡＣＡＴＣＡＧＡＧＡＴＣＣＣＡＡＧＡＡＡＡＧＧＧＡＡＴＴＴＴＴＡＴＴＴＡＡＴＧＣＡＡＴＴＧＡＡＡＣＣＡＴＧＣＣＣＴＡＴＧＴＴＡＡＧＡＡＡＡＡＡＧＣＡＧＡＴＴＧＧＧＣＣＴＴＧＣＧＡＴＧＧＡＴＡＧＣＡＧＡＴＡＧＡＡＡＡＴＣＴＡＣＴＴＴＴＧＧＧＧＡＡＡＧＡＧＴＧＧＴＧＧＣＣＴＴＴＧＣＴＧＣＴＧＴＡＧＡＡＧＧＡＧＴＴＴＴＣＴＴＣＴＣＡＧＧＡＴＣＴＴＴＴＧＣＴＧＣＴＡＴＡＴＴＣＴＧＧＣＴＡＡＡＧＡＡＧＡＧＡＧＧＴＣＴＴＡＴＧＣＣＡＧＧＡＣＴＣＡＣＴＴＴＴＴＣＣＡＡＴＧＡＡＣＴＣＡＴＣＡＧＣＡＧＡＧＡＴＧＡＡＧＧＡＣＴＴＣＡＣＴＧＴＧＡＣＴＴＴＧＣＴＴＧＣＣＴＧＡＴＧＴＴＣＣＡＡＴＡＣＴＴＡＧＴＡＡＡＴＡＡＧＣＣＴＴＣＡＧＡＡＧＡＡＡＧＧＧＴＣＡＧＧＧＡＧＡＴＣＡＴＴＧＴＴＧＡＴＧＣＴＧＴＣＡＡＡＡＴＴＧＡＧＣＡＧＧＡＧＴＴＴＴＴＡＡＣＡＧＡＡＧＣＣＴＴＧＣＣＡＧＴＴＧＧＣＣＴＣＡＴＴＧＧＡＡＴＧＡＡＴＴＧＣＡＴＴＴＴＧＡＴＧＡＡＡＣＡＧＴＡＣＡＴＴＧＡＧＴＴＴＧＴＡＧＣＴＧＡＣＡＧＡＴＴＡＣＴＴＧＴＧＧＡＡＣＴＴＧＧＡＴＴＣＴＣＡＡＡＧＧＴＴＴＴＴＣＡＧＧＣＡＧＡＡＡＡＴＣＣＴＴＴＴＧＡＴＴＴＴＡＴＧＧＡＡＡＡＣＡＴＴＴＣＴＴＴＡＧＡＡＧＧＡＡＡＡＡＣＡＡＡＴＴＴＣＴＴＴＧＡＧＡＡＡＣＧＡＧＴＴＴＣＡＧＡＧＴＡＴＣＡＧＣＧＴＴＴＴＧＣＡＧＴＴＡＴＧＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＣＡＧＡＴＡＡＣＧＴＣＴＴＣＡＣＣＴＴＧＧＡＴＧＣＡＧＡＴＴＴＴＴＡＡＡＡＡＡＣＣＴＣＴＣＧＴＴＴＴＡＡＡＡＣＴＣＴＡＴＡＡＡＣＴＴＧＴＣＡＴＴＧＧＴＡＡＡＴＡＧＴＡＧＴＣＴＡＴＴＴＴＣＣＴＣＴＧＣＴＴＡＡＡＡＡＡＡＡＴＴＴＴＡＡＧＴＡＴＡＴＣＣＴＴＴＡＡＡＧＧＡＣＴＧＧＧＧＧＴＴＴＧＣＴＣＡＡＡＡＧＧＡＡＡＴＣＣＡＡＡＡＣＣＴＡＴＴＣＴＡＡＡＣＡＡＴＴＴＧＣＡＴＴＴＡＴＡＴＡＡＴＴＴＴＣＣＴＧＴＴＴＡＡＣＡＡＣＡＡＧＡＧＴＧＴＧＡＣＣＴＡＡＡＴＧＣＴＴＴＴＧＴＣＴＴＧＴＣＡＣＴＧＡＡＡＴＡＡＡＡＧＡＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧＴＧＧＴＴＡＡＧＡＧＣＡＴＧＧＧＧＣＧＡＧＧＧＧＴＣＡＧＡＣＡＴＧＡＧＴＣＴＡＡＧＧＴＴＣＴＧＣＣＣＴＴＡＣＴＣＣＡＧＴＧＴＧＴＧＡＣＣＣＴＴＧＧＣＡＡＧＴＣＡＧＴＴＡＡＴＣＴＴＧＧＴＡＡＡＣＣＴＣＧＧＴＧＴＡＣＴＴＡＴＣＴＴＴＡＡＡＡＴＧＧＧＡＧＴＡＡＴＡＧＴＡＧＧＴＣＣＴＡＡＡＴＴＣＡＴＡＧＡＧＴＧＧＡＴＡＴＴＡＧＧＡＴＴＡＧＧＡＴＧＣＡＡＡＡＡＴＡＡＡＴＧＣＴＴＡＡＣＣＡＡＣＡＣＴＡＣＴＡＣＴＧＴＴＡＧＣＡＣＣＡＣＴＡＣＴＡＡＴＴＡＴＣＡＴＴＣＡＴＴＧＡＴＡＡＴＡＴＴＡＡＴＴＧＣＡＡＴＧＡＴＧＴＴＧＴＡＡＴＡＡＡＡＴＡＣＴＣＴＣＡＴＴＴＣＣＴＴＡＡＡＡＴＡＡＴＴＧＴＧＡＴＴＣＴＡＧＧＴＣＣＴＡＧＧＡＴＣＴＡＧＡＡＴＴＡＧＡＴＣＴＴＴＧＴＡＴＴＴＴＴＡＡＴＧＣＴＴＡＧＧＧＧＡＡＧＡＡＴＡＴＡＡＧＴＡＴＣＴＣＣＴＴＡＡＡＡＡＧＡＡＣＡＴＡＡＴＴＣＴＣＡＴＴＣＡＣＧＣＡＡＧＡＡＴＡＡＧＴＴＣＴＴＴＧＡＡＴＴＣＣＴＴＡＧＴＡＴＧＴＡＧＴＧＡＡＧＡＡＡＡＴＴＴＡＧＴＴＧＴＴＡＧＴＴＧＣＴＴＴＧＧＧＡＡＧＣＣＴＡＣＴＴＡＴＧＧＡＧＴＧＧＡＡＡＣＣＡＧＧＡＧＧＴＴＡＴＣＡＴＧＧＴＡＧＴＴＧＡＣＣＴＴＡＴＡＡＧＡＡＡＡＡＴＧＡＴＴＣＴＴＣＴＴＣＡＧＡＡＡＴＴＡＡＡＡＡＣＡＴＡＡＣＴＡＴＴＧＣＣＡＧＡＴＴＴＡＧＣＴＣＴＧＧＡＡＴＧＴＴＴＡＧＡＡＴＣＡＧＧＣＴＡＧＡＡＴＡＧＣＡＴＴＴＴＣＣＡＡＡＧＡＡＴＡＴＴＣＴＡＡＧＡＧＣＴＡＴＴＡＧＣＴＣＣＴＣＴＡＧＡＴＡＴＴＴＴＴＴＴＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＡＴＴＣＴＧＴＧＧＴＣＡＧＡＴＧＡＧＴＴＴＧＧＧＡＡＡＴＧＣＴＧＡＡＣＡＣＴＴＣＡＴＴＣＴＴＣＴＴＴＡＧＣＡＡＧＴＡＣＡＧＴＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＡＧＡＣＴＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＧＴＧＧＴＡＣＡＴＡＡＡＴＴＴＡＴＣＴＣＧＣＣＣＴＧＣＡＴＡＴＴＣＣＣＡＡＣＡＴＡＣＴＴＡＡＣＡＣＡＧＡＴＧＴＴＴＴＴＴＡＣＣＴＧＴＴＡＡＣＡＴＣＴＣＡＣＣＣＡＧＣＴＡＧＴＧＴＴＣＣＴＣＡＧＡＡＣＡＡＡＧＡＴＴＧＧＡＡＡＡＡＧＣＴＧＧＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＴＴＴＡＴＡＣＡＴＡＧＡＧＧＡＡＧＧＧＣＴＴＡＴＧＧＡＣＴＧＡＧＡＡＡＧＧＧＡＧＡＡＣＡＴＧＧＴＡＧＧＧＡＴＴＡＴＴＧＡＡＴＣＡＴＴＴＣＡＡＡＴＴＴＡＴＡＣＣＡＧＣＣＴＧＡＡＴＡＧＴＧＴＡＣＣＡＧＣＡＡＴＴＧＡＣＴＴＡＧＧＣＴＧＴＧＴＴＴＣＴＴＴＡＴＧＧＴＴＴＴＡＡＡＡＣＴＣＴＴＧＡＧＣＴＧＴＴＡＴＡＡＧＡＧＡＴＡＧＴＴＣＴＴＴＴＡＡＴＧＴＧＡＣＴＡＴＧＣＡＡＣＡＴＧＡＴＡＧＣＣＡＡＴＧＧＴＧＡＧＧＧＡＡＡＡＧＧＡＧＧＴＴＴＣＴＣＴＡＧＡＡＧＡＧＴＣＴＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＣＧＧＧＡＡＣＣＡＡＧＧＴＴＴＴＴＧＡＧＡＡＧＴＣＴＧＣＣＣＣＴＡＴＴＴＡＴＴＴＴＴＡＧＴＡＡＧＴＡＴＣＡＡＧＡＧＧＴＡＧＣＣＴＧＡＧＣＣＴＡＧＴＴＡＧＡＧＴＴＡＧＡＣＣＴＧＴＣＴＴＴＧＧＡＴＧＡＡＧＡＡＧＴＣＴＴＡＡＴＡＣＴＧＡＡＡＴＡＣＴＧＡＡＴＴＴＴＴＡＡＴＡＣＡＴＴＡＴＴＡＴＴＴＧＧＴＡＴＴＣＴＧＴＡＴＡＣＣＣＣＴＴＣＡＡＧＣＡＧＴＴＧＴＴＴＣＣＣＡＴＴＣＣＣＡＡＣＡＡＡＣＴＧＴＡＣＴＴＴＡＴＡＣＡＡＴＴＣＴＧＧＡＴＧＣＴＡＡＡＡＣＴＴＡＧＡＧＡＴＴＴＴＣＴＣＴＴＴＧＣＡＴＡＡＡＴＴＴＴＧＧＣＴＣＣＡＴＴＣＴＴＴＣＣＡＴＡＡＣＡＡＴＣＴＡＡＴＣＡＡＡＡＣＴＧＧＧＡＧＴＴＣＴＣＡＡＧＴＧＡＡＴＧＣＡＡＡＡＧＧＡＧＣＡＧＧＣＣＡＴＡＡＣＴＴＴＡＴＴＴＧＴＴＡＧＡＴＡＣＡＣＴＧＴＣＡＧＡＡＡＣＴＴＧＡＧＡＴＣＴＴＴＴＧＧＣＣＴＡＴＧＡＴＡＡＴＡＣＣＡＴＴＡＡＴＴＴＴＴＧＣＡＴＴＧＣＴＴＣＡＧＴＴＴＧＣＣＡＡＧＴＧＴＴＴＴＴＡＣＡＴＣＡＴＣＴＣＡＴＴＴＧＡＴＣＴＣＡＡＡＡＣＡＧＣＴＴＧＡＣＡＧＡＧＣＡＡＣＴＧＴＴＡＴＴＧＡＡＡＴＡＴＴＡＣＡＧＡＴＧＧＡＡＡＧＡＡＴＧＡＧＧＣＴＣＡＧＧＧＡＡＧＴＴＡＡＡＴＧＡＣＴＴＧＧＣＣＡＡＧＡＴＣＴＧＣＴＣＡＴＣＧＴＣＡＣＴＧＴＣＴＧＴＡＣＡＧＴＡＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＧＡＧＧＴＴＧＴＡＡＴＧＴＣＴＣＡＧＡＴＴＴＡＧＴＣＣＴＴＴＡＣＣＡＴＣＴＡＴＧＴＴＧＡＴＴＴＧＣＴＴＴＴＧＴＣＴＡＴＴＴＣＣＴＣＡＴＴＡＡＴＴＧＡＡＴＡＴＡＣＴＴＴＡＡＡＴＡＴＡＴＡＴＡＴＴＡＡＡＧＴＡＴＣＡＡＡＡＴＡＴＡＧＡＧＡＧＡＣＡＴＴＴＧＡＡＣＴＧＴＡＴＴＣＡＧＧＴＡＡＴＡＴＧＴＴＴＡＡＡＧＡＴＡＴＴＴＡＴＡＴＡＴＴＧＣＣＡＴＡＣＡＡＡＡＡＣＴＴＡＡＣＡＴＴＴＡＡＡＡＣＴＧＡＴＡＡＴＡＴＣＴＧＴＡＡＴＧＡＣＡＴＣＡＧＡＡＴＧＡＡＡＧＡＡＡＡＡＡＡＡＴＴＧＴＡＣＡＧＴＧＴＡＴＡＴＴＣＣＴＴＴＧＴＴＴＴＧＡＡＴＣＣＡＡＡＴＣＴＴＴＴＴＣＡＴＡＧＧＴＡＡＴＧＡＣＡＧＡＴＧＣＣＴＴＡＡＴＧＴＧＡＡＧＣＴＴＡＴＴＴＡＴＡＡＴＡＧＣＡＡＴＡＡＡＣＣＴＡＡＣＴＧＧＡＴＴＴＧＧＡＴＧＡＡＧＡＡＧＴＣＴＴＡＡＴＡＣＴＧＡＣＡＴＡＣＴＧＧＡＴＴＴＴＴＡＡＴＧＣＡＣＴＧＧＴＴＴＧＴＴＡＴＴＴＧＧＴＡＴＴＣＴＡＴＣＴＣＴＴＴＴＴＣＣＡＧＧＣＣＴＣＣＡＧＧＴＴＧＣＡＣＡＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＡＴＧＴＴＣＡＡＴＡＣＴＴＴＧＧＴＴＣＴＴＡＧＴＴＣＴＴＡＡＡＧＡＡＴＣＡＡＧＡＡＧＴＴＧＴＧＴＡＡＴＣＴＴＴＴＡＡＡＡＡＴＡＴＴＡＴＣＴＴＧＣＡＧＡＴＡＡＡＧＡＡＡＡＡＡＡＴＴＡＡＧＡＧＴＧＴＧＴＴＴＡＣＡＡＣＴＧＴＴＴＴＣＴＣＴＴＴＴＴＴＡＣＡＧＴＡＣＡＴＧＴＡＴＴＴＡＡＡＴＣＡＴＴＧＣＴＡＴＡＡＴＡＡＡＧＴＴＡＡＧＴＴＣＡＴＴＡＧＧＡＡＴＡＴＡＡＡＡＡＣＴＴＧＣＡＧＴＴＣＴＡＴＧＡＴＡＧＡＴＴＧＣＡＴＴＴＡＴＴＡＡＡＡＡＴＧＴＴＴＣＡＴＴＧＴＡＴＣＡＣＡＴＡＧＡＡＡＴＡＴＧＧＣＣＡＧＧＡＡＧＧＡＣＴＴＧＡＧＡＡＧＡＣＡＧＴＴＴＧＡＴＣＣＡＴＴＧＣＴＴＴＴＡＧＡＣＡＧＧＡＣＴＧＧＧＴＴＴＴＧＣＴＧＴＣＣＡＡＴＴＡＴＡＴＡＣＡＡＴＡＡＴＡＧＴＴＴＴＴＣＴＴＡＣＡＡＣＴＡＡＧＣＴＧＧＣＣＣＣＡＧＣＣＴＴＧＴＣＴＴＧＡＴＡＴＴＡＡＴＡＣＡＴＧＡＡＡＴＴＴＴＴＡＴＡＡＴＴＧＴＣＴＣＡＴＴＧＴＣＴＣＡＴＴＴＡＧＡＡＡＣＡＴＣＣＡＴＡＴＴＴＴＴＣＴＧＣＴＴＴＴＴＣＴＡＴＴＧＣＣＡＴＴＴＴＴＴＡＴＴＴＧＴＧＣＡＴＧＡＡＴＴＧＡＴＴＡＴＴＧＡＧＡＡＡＡＴＧＴＡＧＣＡＧＴＴＴＧＣＡＴＡＴＴＴＡＡＡＡＡＴＴＡＡＴＣＡＴＴＴＴＧＣＡＴＴＴＴＡＣＡＴＴＴＡＡＡＴＡＴＧＣＴＡＡＣＡＴＣＡＣＴＧＴＣＡＴＡＧＡＡＴＴＣＣＣＡＡＡＴＴＴＣＡＴＴＴＧＴＡＧＡＴＡＣＴＧＡＡＣＴＡＡＧＧＧＣＴＡＡＴＧＴＣＡＧＧＡＧＣＴＧＡＴＴＴＴＴＡＡＴＧＡＴＡＡＡＧＣＴＧＣＡＧＡＴＧＧＧＣＴＡＡＡＴＡＡＡＡＧＣＣＡＡＡＴＴＡＡＴＣＣＴＡＣＡＡＴＣＡＧＧＴＡＴＴＡＴＧＴＴＴＴＴＡＡＡＣＣＡＡＧＴＴＧＡＧＴＧＡＡＴＴＧＧＴＡＧＴＧＧＡＣＴＴＧＧＧＡＡＡＴＣＴＴＣＣＣＣＡＧＣＡＧＡＡＴＣＴＧＧＡＴＧＡＡＴＧＧＣＡＣＡＧＡＡＴＴＧＡＡＡＴＣＴＣＴＴＴＧＴＴＴＣＣＣＡＣＣＡＴＴＴＣＣＣＴＴＴＡＡＧＴＧＣＴＣＴＧＣＴＣＣＴＴＴＧＴＡＡＡＡＡＧＴＴＡＡＡＧＡＴＴＴＧＡＡＡＧＡＧＡＡＴＣＴＣＡＴＡＴＴＣＣＣＧＡＧＧＣＡＴＴＡＧＧＡＡＧＡＡＡＧＧＡＴＴＴＡＡＴＣＣＣＴＴＣＡＡＴＴＴＧＧＧＧＣＴＴＡＡＴＣＴＴＧＴＴＴＡＡＡＡＡＡＡＴＧＴＡＡＧＴＧＡＡＧＡＴＧＧＡＡＧＧＣＴＧＧＡＧＡＧＡＡＴＧＡＴＴＧＣＴＴＴＴＴＧＴＡＣＡＧＴＴＡＡＡＴＡＡＧＧＴＣＡＣＡＡＴＡＴＴＣＴＴＡＣＡＴＡＣＴＴＴＧＴＴＴＴＡＣＡＡＣＴＧＴＧＴＴＴＴＣＡＴＴＴＴＴＴＣＡＡＡＴＧＴＣＴＧＧＣＣＡＴＴＴＡＧＣＡＡＡＧＴＴＡＴＴＴＡＣＴＡＴＴＴＡＣＴＧＴＧＴＡＣＡＴＡＧＡＡＡＧＣＴＴＴＡＴＴＡＴＧＴＧＴＧＧＴＧＴＡＴＣＴＡＡＡＴＴＴＴＴＴＴＴＧＣＴＧＡＡＡＴＡＣＡＴＴＡＴＧＧＴＣＡＡＴＣＡＡＧＣＣＡＡＧＣＣＴＧＣＡＴＧＴＡＣＡＧＡＡＴＴＴＧＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＡＡＡＴＡＡＡＴＴＡＧＴＴＧＴＴＴＴＣＴＴＡＴＴＴＴＴＴＴＧＧＣＴＴＡＧＴＡＴＧＴＴＧＡＡＡＴＡＡＡＣＴＡＴＧＧＴＡＴＣＴＴＣＡＴＣＡＴＴＴＴＧＴＡＣＡＴＴＴＣＣＴＴＴＴＴＧＡＧＧＡＡＧＧＴＴＴＣＴＴＴＡＴＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＧＣＴＡＣＣＣＴＡＡＴＡＡＡＧＧＡＡＴＧＴＡＴＡＴＡＣＴＴＡＣＴ
【０１５５】
本明細書で使用する用語「ＴＰ」は、チミジンホスホリラーゼをコードする遺伝子、又は対応するタンパク質産物を指す。用語「ＴＰ」及び「チミジンホスホリラーゼ」は、ＴＰ遺伝子又はタンパク質の野生型形態、並びに野生型ＴＰタンパク質及びそれをコードする核酸のバリアント（例えば、とりわけ、スプライスバリアント、トランケーション、コンカテマー、及び融合構築物）を含む。そのようなバリアントの例は、野生型ＴＰタンパク質のアミノ酸配列（例えば、配列番号７）のいずれかと少なくとも７０％の配列同一性（例えば、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９．９％の同一性、又はそれを超える）を有するタンパク質であるが、ただし、ＴＰバリアントは、野生型ＴＰの機能を保持している。さらに、用語「ＴＰ」及び「チミジンホスホリラーゼ」は、融合タンパク質、又はそれをコードする核酸を指し、ここでＴＰは、別のポリペプチド、半減期改変剤、又は治療薬に作動可能に連結されている。用語「ＴＰ」は、当業者には理解されるように、文脈に応じて、タンパク質又はこのタンパク質をコードする遺伝子を指してよい。
例示的なＴＰアミノ酸配列（配列番号７）：
ＭＡＡＬＭＴＰＧＴＧＡＰＰＡＰＧＤＦＳＧＥＧＳＱＧＬＰＤＰＳＰＥＰＫＱＬＰＥＬＩＲＭＫＲＤＧＧＲＬＳＥＡＤＩＲＧＦＶＡＡＶＶＮＧＳＡＱＧＡＱＩＧＡＭＬＭＡＩＲＬＲＧＭＤＬＥＥＴＳＶＬＴＱＡＬＡＱＳＧＱＱＬＥＷＰＥＡＷＲＱＱＬＶＤＫＨＳＴＧＧＶＧＤＫＶＳＬＶＬＡＰＡＬＡＡＣＧＣＫＶＰＭＩＳＧＲＧＬＧＨＴＧＧＴＬＤＫＬＥＳＩＰＧＦＮＶＩＱＳＰＥＱＭＱＶＬＬＤＱＡＧＣＣＩＶＧＱＳＥＱＬＶＰＡＤＧＩＬＹＡＡＲＤＶＴＡＴＶＤＳＬＰＬＩＴＡＳＩＬＳＫＫＬＶＥＧＬＳＡＬＶＶＤＶＫＦＧＧＡＡＶＦＰＮＱＥＱＡＲＥＬＡＫＴＬＶＧＶＧＡＳＬＧＬＲＶＡＡＡＬＴＡＭＤＫＰＬＧＲＣＶＧＨＡＬＥＶＥＥＡＬＬＣＭＤＧＡＧＰＰＤＬＲＤＬＶＴＴＬＧＧＡＬＬＷＬＳＧＨＡＧＴＱＡＱＧＡＡＲＶＡＡＡＬＤＤＧＳＡＬＧＲＦＥＲＭＬＡＡＱＧＶＤＰＧＬＡＲＡＬＣＳＧＳＰＡＥＲＲＱＬＬＰＲＡＲＥＱＥＥＬＬＡＰＡＤＧＴＶＥＬＶＲＡＬＰＬＡＬＶＬＨＥＬＧＡＧＲＳＲＡＧＥＰＬＲＬＧＶＧ
ＡＥＬＬＶＤＶＧＱＲＬＲＲＧＴＰＷＬＲＶＨＲＤＧＰＡＬＳＧＰＱＳＲＡＬＱＥＡＬＶＬＳＤＲＡＰＦＡＡＰＳＰＦＡＥＬＶＬＰＰＱＱ
例示的なＴＰ核酸配列（配列番号８）：
ＣＧＡＣＴＧＣＣＧＡＧＣＴＣＣＧＣＣＣＴＣＣＡＧＧＣＧＧＣＣＣＣＡＣＣＣＧＣＣＴＧＣＣＧＴＣＣＴＧＧＧＧＣＧＣＣＧＣＣＧＣＣＣＣＧＣＣＧＣＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＣＣＧＣＴＧＴＧＣＧＣＧＡＡＣＣＣＴＧＡＡＣＣＣＴＡＣＧＧＴＣＣＣＧＡＣＣＣＧＣＧＧＧＣＧＡＧＧＣＣＧＧＧＴＡＣＣＴＧＧＧＣＴＧＧＧＡＴＣＣＧＧＡＧＣＡＡＧＣＧＧＧＣＧＡＧＧＧＣＡＧＣＧＣＣＣＴＡＡＧＣＡＧＧＣＡＴＣＣＣＣＧＣＡＧＧＣＣＣＧＧＡＧＣＧＡＴＧＧＣＡＧＣＣＴＴＧＡＴＧＡＣＣＣＣＧＧＧＡＡＣＣＧＧＧＧＣＣＣＣＡＣＣＣＧＣＧＣＣＴＧＧＴＧＡＣＴＴＣＴＣＣＧＧＧＧＡＡＧＧＧＡＧＣＣＡＧＧＧＡＣＴＴＣＣＣＧＡＣＣＣＴＴＣＧＣＣＡＧＡＧＣＣＣＡＡＧＣＡＧＣＴＣＣＣＧＧＡＧＣＴＧＡＴＣＣＧＣＡＴＧＡＡＧＣＧＡＧＡＣＧＧＡＧＧＣＣＧＣＣＴＧＡＧＣＧＡＡＧＣＧＧＡＣＡＴＣＡＧＧＧＧＣＴＴＣＧＴＧＧＣＣＧＣＴＧＴＧＧＴＧＡＡＴＧＧＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＧＧＣＧＣＡＣＡＧＡＴＣＧＧＧＧＣＣＡＴＧＣＴＧＡＴＧＧＣＣＡＴＣＣＧＡＣＴＴＣＧＧＧＧＣＡＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＧＧＡＧＡＣＣＴＣＧＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＧＣＣＣＴＧＧＣＴＣＡＧＴＣＧＧＧＡＣＡＧＣＡＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＣＧＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＴＧＧＡＣＡＡＧＣＡＴＴＣＣＡＣＡＧＧＧＧＧＴＧＴＧＧＧＴＧＡＣＡＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＧＴＣＣＴＣＧＣＡＣＣＴＧＣＣＣＴＧＧＣＧＧＣＡＴＧＴＧＧＣＴＧＣＡＡＧＧＴＧＣＣＡＡＴＧＡＴＣＡＧＣＧＧＡＣＧＴＧＧＴＣＴＧＧＧＧＣＡＣＡＣＡＧＧＡＧＧＣＡＣＣＴＴＧＧＡＴＡＡＧＣＴＧＧＡＧＴＣＴＡＴＴＣＣＴＧＧＡＴＴＣＡＡＴＧＴＣＡＴＣＣＡＧＡＧＣＣＣＡＧＡＧＣＡＧＡＴＧＣＡＡＧＴＧＣＴＧＣＴＧＧＡＣＣＡＧＧＣＧＧＧＣＴＧＣＴＧＴＡＴＣＧＴＧＧＧＴＣＡＧＡＧＴＧＡＧＣＡＧＣＴＧＧＴＴＣＣＴＧＣＧＧＡＣＧＧＡＡＴＣＣＴＡＴＡＴＧＣＡＧＣＣＡＧＡＧＡＴＧＴＧＡＣＡＧＣＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＧＣＣＴＧＣＣＡＣＴＣＡＴＣＡＣＡＧＣＣＴＣＣＡＴＴＣＴＣＡＧＴＡＡＧＡＡＡＣＴＣＧＴＧＧＡＧＧＧＧＣＴＧＴＣＣＧＣＴＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＴＡＡＧＴＴＣＧＧＡＧＧＧＧＣＣＧＣＣＧＴＣＴＴＣＣＣＣＡＡＣＣＡＧＧＡＧＣＡＧＧＣＣＣＧＧＧＡＧＣＴＧＧＣＡＡＡＧＡＣＧＣＴＧＧＴＴＧＧＣＧＴＧＧＧＡＧＣＣＡＧＣＣＴＡＧＧＧＣＴＴＣＧＧＧＴＣＧＣＧＧＣＡＧＣＧＣＴＧＡＣＣＧＣＣＡＴＧＧＡＣＡＡＧＣＣＣＣＴＧＧＧＴＣＧＣＴＧＣＧＴＧＧＧＣＣＡＣＧＣＣＣＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＡＧＧＣＧＣＴＧＣＴＣＴＧＣＡＴＧＧＡＣＧＧＣＧＣＡＧＧＣＣＣＧＣＣＡＧＡＣＴＴＡＡＧＧＧＡＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＡＣＧＣＴＣＧＧＧＧＧＣＧＣＣＣＴＧＣＴＣＴＧＧＣＴＣＡＧＣＧＧＡＣＡＣＧＣＧＧＧＧＡＣＴＣＡＧＧＣＣＣＡＧＧＧＣＧＣＴＧＣＣＣＧＧＧＴＧＧＣＣＧＣＧＧＣＧＣＴＧＧＡＣＧＡＣＧＧＣＴＣＧＧＣＣＣＴＴＧＧＣＣＧＣＴＴＣＧＡＧＣＧＧＡＴＧＣＴＧＧＣＧＧＣＧＣＡＧＧＧＣＧＴＧＧＡＴＣＣＣＧＧＴＣＴＧＧＣＣＣＧＡＧＣＣＣＴＧＴＧＣＴＣＧＧＧＡＡＧＴＣＣＣＧＣＡＧＡＡＣＧＣＣＧＧＣＡＧＣＴＧＣＴＧＣＣＴＣＧＣＧＣＣＣＧＧＧＡＧＣＡＧＧＡＧＧＡＧＣＴＧＣＴＧＧＣＧＣＣＣＧＣＡＧＡＴＧＧＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＣＴＧＧＴＣＣＧＧＧＣＧＣＴＧＣＣＧＣＴＧＧＣＧＣＴＧＧＴＧＣＴＧＣＡＣＧＡＧＣＴＣＧＧＧＧＣＣＧＧＧＣＧＣＡＧＣＣＧＣＧＣＴＧＧＧＧＡＧＣＣＧＣＴＣＣＧＣＣＴＧＧＧＧＧＴＧＧＧＣＧＣＡＧＡＧＣＴＧＣＴＧＧＴＣＧＡＣＧＴＧＧＧＴＣＡＧＡＧＧＣＴＧＣＧＣＣＧＴＧＧＧＡＣＣＣＣＣＴＧＧＣＴＣＣＧＣＧＴＧＣＡＣＣＧＧＧＡＣＧＧＣＣＣＣＧＣＧＣＴＣＡＧＣＧＧＣＣＣＧＣＡＧＡＧＣＣＧＣＧＣＣＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＣＧＣＴＣＧＴＡＣＴＣＴＣＣＧＡＣＣＧＣＧＣＧＣＣＡＴＴＣＧＣＣＧＣＣＣＣＣＴＣＧＣＣＣＴＴＣＧＣＡＧＡＧＣＴＣＧＴＴＣＴＧＣＣＧＣＣＧＣＡＧＣＡＡＴＡＡＡＧＣＴＣＣＴＴＴＧＣＣＧＣＧＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ
【０１５６】
本明細書で使用する用語「ＳＵＣＬＡ２」は、スクシニルＣｏＡリガーゼＡＤＰ形成ベータサブユニットをコードする遺伝子、又は対応するタンパク質産物を指す。用語「ＳＵＣＬＡ２」及び「スクシニルＣｏＡリガーゼＡＤＰ形成ベータサブユニット」は、ＳＵＣＬＡ２遺伝子又はタンパク質の野生型形態、並びに野生型ＳＵＣＬＡ２タンパク質及びそれをコードする核酸のバリアント（例えば、とりわけ、スプライスバリアント、トランケーション、コンカテマー、及び融合構築物）を含む。そのようなバリアントの例は、野生型ＳＵＣＬＡ２タンパク質のアミノ酸配列（例えば、配列番号９）のいずれかと少なくとも７０％の配列同一性（例えば、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９．９％の同一性、又はそれを超える）を有するタンパク質であるが、ただし、ＳＵＣＬＡ２バリアントは、野生型ＳＵＣＬＡ２の機能を保持している。さらに、用語「ＳＵＣＬＡ２」及び「スクシニルＣｏＡリガーゼＡＤＰ形成ベータサブユニット」は、融合タンパク質、又はそれをコードする核酸を指し、ここでＳＵＣＬＡ２は、別のポリペプチド、半減期改変剤、又は治療薬に作動可能に連結されている。用語「ＳＵＣＬＡ２」は、当業者には理解されるように、文脈に応じて、タンパク質又はこのタンパク質をコードする遺伝子を指してよい。
例示的なＳＵＣＬＡ２アミノ酸配列（配列番号９）：
ＭＡＡＳＭＦＹＧＲＬＶＡＶＡＴＬＲＮＨＲＰＲＴＡＱＲＡＡＡＱＶＬＧＳＳＧＬＦＮＮＨＧＬＱＶＱＱＱＱＱＲＮＬＳＬＨＥＹＭＳＭＥＬＬＱＥＡＧＶＳＶＰＫＧＹＶＡＫＳＰＤＥＡＹＡＩＡＫＫＬＧＳＫＤＶＶＩＫＡＱＶＬＡＧＧＲＧＫＧＴＦＥＳＧＬＫＧＧＶＫＩＶＦＳＰＥＥＡＫＡＶＳＳＱＭＩＧＫＫＬＦＴＫＱＴＧＥＫＧＲＩＣＮＱＶＬＶＣＥＲＫＹＰＲＲＥＹＹＦＡＩＴＭＥＲＳＦＱＧＰＶＬＩＧＳＳＨＧＧＶＮＩＥＤＶＡＡＥＳＰＥＡＩＩＫＥＰＩＤＩＥＥＧＩＫＫＥＱＡＬＱＬＡＱＫＭＧＦＰＰＮＩＶＥＳＡＡＥＮＭＶＫＬＹＳＬＦＬＫＹＤＡＴＭＩＥＩＮＰＭＶＥＤＳＤＧＡＶＬＣＭＤＡＫＩＮＦＤＳＮＳＡＹＲＱＫＫＩＦＤＬＱＤＷＴＱＥＤＥＲＤＫＤＡＡＫＡＮＬＮＹＩＧＬＤＧＮＩＧＣＬＶＮＧＡＧＬＡＭＡＴＭＤＩＩＫＬＨＧＧＴＰＡＮＦＬＤＶＧＧＧＡＴＶＨＱＶＴＥＡＦＫＬＩＴＳＤＫＫＶＬＡＩＬＶＮＩＦＧＧＩＭＲＣＤＶＩＡＱＧＩＶＭＡＶＫＤＬＥＩＫＩＰＶＶＶＲＬＱＧＴＲＶＤＤＡＫＡＬＩＡＤＳＧＬＫＩＬＡＣＤＤＬＤＥＡＡＲＭＶＶＫＬＳＥＩＶＴＬＡＫＱＡＨＶＤＶＫＦＱＬＰＩ
例示的なＳＵＣＬＡ２核酸配列（配列番号１０）：
ＣＣＧＣＣＴＧＴＣＧＣＣＴＧＴＧＣＧＣＣＴＧＣＧＣＧＣＧＧＣＧＣＣＧＡＧＧＧＧＡＣＧＧＧＧＴＣＣＧＡＣＴＣＡＧＡＡＡＴＧＧＣＧＧＣＣＴＣＣＡＴＧＴＴＣＴＡＣＧＧＣＡＧＧＣＴＡＧＴＧＧＣＣＧＴＧＧＣＣＡＣＣＣＴＴＣＧＧＡＡＣＣＡＣＣＧＧＣＣＴＣＧＧＡＣＧＧＣＣＣＡＧＣＧＧＧＣＴＧＣＴＧＣＴＣＡＧＧＴＴＣＴＧＧＧＡＡＧＴＴＣＴＧＧＡＴＴＧＴＴＴＡＡＴＡＡＣＣＡＴＧＧＡＣＴＣＣＡＡＧＴＡＣＡＧＣＡＧＣＡＡＣＡＧＣＡＡＡＧＧＡＡＴＣＴＣＴＣＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＴＡＣＡＴＧＡＧＴＡＴＧＧＡＡＴＴＡＴＴＧＣＡＡＧＡＡＧＣＴＧＧＴＧＴＣＴＣＣＧＴＴＣＣＣＡＡＡＧＧＡＴＡＴＧＴＧＧＣＡＡＡＧＴＣＡＣＣＡＧＡＴＧＡＡＧＣＴＴＡＴＧＣＡＡＴＴＧＣＣＡＡＡＡＡＡＴＴＡＧＧＴＴＣＡＡＡＡＧＡＴＧＴＣＧＴＧＡＴＡＡＡＧＧＣＡＣＡＧＧＴＴＴＴＡＧＣＴＧＧＴＧＧＴＡＧＡＧＧＡＡＡＡＧＧＡＡＣＡＴＴＴＧＡＡＡＧＴＧＧＣＣＴＣＡＡＡＧＧＡＧＧＡＧＴＧＡＡＧＡＴＡＧＴＴＴＴＣＴＣＴＣＣＡＧＡＡＧＡＡＧＣＡＡＡＡＧＣＴＧＴＴＴＣＴＴＣＡＣＡＡＡＴＧＡＴＴＧＧＧＡＡＡＡＡＡＴＴＧＴＴＴＡＣＣＡＡＧＣＡＡＡＣＧＧＧＡＧＡＡＡＡＧＧＧＣＡＧＡＡＴＡＴＧＣＡＡＴＣＡＡＧＴＡＴＴＧＧＴＣＴＧＴＧＡＧＣＧＡＡＡＡＴＡＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＡＡＴＡＣＴＡＣＴＴＴＧＣＡＡＴＡＡＣＡＡＴＧＧＡＡＡＧＧＴＣＡＴＴＴＣＡＡＧＧＴＣＣＴＧＴＡＴＴＡＡＴＡＧＧＡＡＧＴＴＣＡＣＡＴＧＧＴＧＧＴＧＴＣＡＡＣＡＴＴＧＡＡＧＡＴＧＴＴＧＣＴＧＣＴＧＡＧＴＣＴＣＣＴＧＡＡＧＣＡＡＴＡＡＴＴＡＡＡＧＡＡＣＣＴＡＴＴＧＡＴＡＴＴＧＡＡＧＡＡＧＧＣＡＴＣＡＡＡＡＡＧＧＡＡＣＡＡＧＣＴＣＴＣＣＡＧＣＴＴＧＣＡＣＡＧＡＡＧＡＴＧＧＧＡＴＴＴＣＣＡＣＣＴＡＡＴＡＴＴＧＴＧＧＡＡＴＣＡＧＣＡＧＣＡＧＡＡＡＡＣＡＴＧＧＴＣＡＡＧＣＴＴＴＡＣＡＧＣＣＴＴＴＴＴＣＴＧＡＡＡＴＡＣＧＡＴＧＣＡＡＣＣＡＴＧＡＴＡＧＡＡＡＴＡＡＡＴＣＣＡＡＴＧＧＴＧＧＡＡＧＡＴＴＣＡＧＡＴＧＧＡＧＣＴＧＴＡＴＴＧＴＧＴＡＴＧＧＡＴＧＣＡＡＡＧＡＴＣＡＡＴＴＴＴＧＡＣＴＣＴＡＡＴＴＣＡＧＣＣＴＡＴＣＧＣＣＡＡＡＡＧＡＡＡＡＴＣＴＴＴＧＡＴＣＴＡＣＡＧＧＡＣＴＧＧＡＣＣＣＡＧＧＡＡＧＡＴＧＡＡＡＧＧＧＡＣＡＡＡＧＡＴＧＣＴＧＣＴＡＡＧＧＣＡＡＡＴＣＴＣＡＡＣＴＡＣＡＴＴＧＧＣＣＴＣＧＡＴＧＧＡＡＡＴＡＴＡＧＧＣＴＧＣＣＴＡＧＴＡＡＡＴＧＧＴＧＣＴＧＧＴＴＴＧＧＣＴＡＴＧＧＣＣＡＣＡＡＴＧＧＡＴＡＴＡＡＴＡＡＡＡＣＴＴＣＡＴＧＧＡＧＧＧＡＣＴＣＣＡＧＣＣＡＡＣＴＴＣＣＴＴＧＡＴＧＴＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＣＴＡＣＡＧＴＣＣＡＴＣＡＡＧＴＡＡＣＡＧＡＡＧＣＡＴＴＴＡＡＧＣＴＴＡＴＣＡＣＴＴＣＡＧＡＴＡＡＡＡＡＧＧＴＡＣＴＧＧＣＴＡＴＴＣＴＧＧＴＣＡＡＣＡＴＴＴＴＴＧＧＡＧＧＡＡＴＣＡＴＧＣＧＣＴＧＴＧＡＴＧＴＴＡＴＴＧＣＡＣＡＧＧＧＴＡＴＡＧＴＣＡＴＧＧＣＡＧＴＡＡＡＡＧＡＣＴＴＧＧＡＡＡＴＴＡＡＡＡＴＡＣＣＴＧＴＴＧＴＧＧＴＡＣＧＧＴＴＡＣＡＡＧＧＴＡＣＡＣＧＡＧＴＣＧＡＴＧＡＴＧＣＴＡＡＧＧＣＡＣＴＧＡＴＡＧＣＧＧＡＣＡＧＴＧＧＡＣＴＴＡＡＡＡＴＡＣＴＴＧＣＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＴＴＧＧＡＴＧＡＡＧＣＴＧＣＴＡＧＡＡＴＧＧＴＴＧＴＡＡＡＧＣＴＣＴＣＴＧＡＡＡＴＡＧＴＧＡＣＣＴＴＡＧＣＧＡＡＧＣＡＡＧＣＡＣＡＴＧＴＧＧＡＴＧＴＧＡＡＡＴＴＴＣＡＧＴＴＧＣＣＡＡＴＡＴＧＡＴＣＴＧＡＡＡＡＣＣＣＡＧＴＧＧＡＴＧＧＣＴＧＡＡＧＧＴＧＴＴＡＡＡＴＧＴＧＣＴＡＴＡＡＴＣＡＴＴＡＡＧＡＡＴＡＣＴＧＴＧＴＴＣＴＧＴＧＴＴＡＴＴＧＴＴＣＴＴＴＴＴＣＴＴＴＴＴＡＧＴＧＴＧＴＧＧＡＧＡＴＴＧＴＡＡＴＴＧＣＣＡＴＣＴＡＧＧＣＡＣＡＣＡＡＡＣＡＴＴＴＡＡＡＡＧＧＡＴＴＴＧＧＡＣＴＧＣＡＴＴＴＡＡＴＴＧＴＡＣＣＡＴＴＣＡＧＡＡＴＧＧＡＣＴＧＴＴＴＧＴＡＣＧＡＡＧＣＡＴＧＴＡＴＡＡＴＧＣＡＧＴＴＡＴＣＴＴＣＴＴＴＣＴＴＴＴＧＴＣＧＣＡＧＣＣＡＧＴＣＴＴＴＴＴＴＧＣＴＴＣＴＣＣＴＡＣＡＡＡＡＣＧＴＡＡＣＴＴＧＣＡＡＴＴＴＧＣＣＡＧＴＴＴＡＴＴＡＴＴＧＴＴＧＧＡＴＡＣＡＡＡＧＴＴＣＴＴＣＡＴＴＧＡＴＡＡＧＡＧＴＣＣＴＡＴＡＡＡＴＡＡＧＡＴＡＡＡＴＡＣＧＡＡＧＡＴＡＡＡＧＣＴＴＴＡＴＴＣＴＴＴＡＧＴＧＴＴＡＡＡＡＴＡＣＡＧＴＡＴＡＴＣＴＡＡＴＡＡＣＴＡＧＣＣＴＣＡＴＴＡＧＴＡＧＡＧＣＡＧＴＡＴＡＴＴＡＡＡＡＣＡＡＴＧＴＴＴＴＡＴＧＴＡＡＡＡＡＧＴＧＴＴＴＡＴＣＴＴＣＡＧＣＡＣＣＡＡＡＴＡＣＡＴＧＡＴＡＡＡＴＧＴＡＴＣＡＡＴＣＡＣＴＡＴＴＴＡＴＡＡＡＣＡＧＡＧＣＴＴＴＣＡＡＡＣＡＣＴＣＣＴＣＡＧＡＡＴＡＴＴＣＴＴＣＴＡＡＧＴＡＴＴＴＴＧＡＴＧＡＡＧＴＡＡＣＴＴＴＧＴＡＡＴＴＡＴＴＴＧＡＡＣＡＴＴＧＴＴＴＴＡＡＴＣＡＴＴＡＧＧＡＡＡＣＡＣＴＧＡＴＴＡＡＣＴＧＣＡＡＧＴＣＴＴＣＡＴＧＡＴＴＣＴＧＴＣＡＴＡＴＴＡＡＧＡＡＡＣＡＣＣＴＧＴＡＧＧＴＴＴＧＣＴＴＣＡＡＡＴＡＡＡＧＧＣＡＴＡＴＡＴＡＣＣＡＡＧＧＡＣＴＴＡＣＡＧＡＣＡＡＡＡＴＴＡＡＧＡＡＴＧＴＣＡＡＴＴＴＡＡＧＴＴＡＡＴＡＡＡＡＡＴＣＴＣＣＣＡＡＴＡＴＧＡＡＡＡＡＡＡ
ＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ
【０１５７】
本明細書で使用する用語「ＳＵＣＬＧ１」は、スクシニルＣｏＡリガーゼＡＤＰ形成アルファサブユニットをコードする遺伝子、又は対応するタンパク質産物を指す。用語「ＳＵＣＬＧ１」及び「スクシニルＣｏＡリガーゼＡＤＰ形成アルファサブユニット」は、ＳＵＣＬＧ１遺伝子又はタンパク質の野生型形態、並びに野生型ＳＵＣＬＧ１タンパク質及びそれをコードする核酸のバリアント（例えば、とりわけ、スプライスバリアント、トランケーション、コンカテマー、及び融合構築物）を含む。そのようなバリアントの例は、野生型ＳＵＣＬＧ１タンパク質のアミノ酸配列（例えば、配列番号１１）のいずれかと少なくとも７０％の配列同一性（例えば、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９．９％の同一性、又はそれを超える）を有するタンパク質であるが、ただし、ＳＵＣＬＧ１バリアントは、野生型ＳＵＣＬＧ１の機能を保持している。さらに、用語「ＳＵＣＬＧ１」及び「スクシニルＣｏＡリガーゼＡＤＰ形成アルファサブユニット」は、融合タンパク質、又はそれをコードする核酸を指し、ここでＳＵＣＬＧ１は、別のポリペプチド、半減期改変剤、又は治療薬に作動可能に連結されている。用語「ＳＵＣＬＧ１」は、当業者には理解されるように、文脈に応じて、タンパク質又はこのタンパク質をコードする遺伝子を指してよい。
例示的なＳＵＣＬＧ１アミノ酸配列（配列番号１１）：
ＭＴＡＴＬＡＡＡＡＤＩＡＴＭＶＳＧＳＳＧＬＡＡＡＲＬＬＳＲＳＦＬＬＰＱＮＧＩＲＨＣＳＹＴＡＳＲＱＨＬＹＶＤＫＮＴＫＩＩＣＱＧＦＴＧＫＱＧＴＦＨＳＱＱＡＬＥＹＧＴＫＬＶＧＧＴＴＰＧＫＧＧＱＴＨＬＧＬＰＶＦＮＴＶＫＥＡＫＥＱＴＧＡＴＡＳＶＩＹＶＰＰＰＦＡＡＡＡＩＮＥＡＩＥＡＥＩＰＬＶＶＣＩＴＥＧＩＰＱＱＤＭＶＲＶＫＨＫＬＬＲＱＥＫＴＲＬＩＧＰＮＣＰＧＶＩＮＰＧＥＣＫＩＧＩＭＰＧＨＩＨＫＫＧＲＩＧＩＶＳＲＳＧＴＬＴＹＥＡＶＨＱＴＴＱＶＧＬＧＱＳＬＣＶＧＩＧＧＤＰＦＮＧＴＤＦＩＤＣＬＥＩＦＬＮＤＳＡＴＥＧＩＩＬＩＧＥＩＧＧＮＡＥＥＮＡＡＥＦＬＫＱＨＮＳＧＰＮＳＫＰＶＶＳＦＩＡＧＬＴＡＰＰＧＲＲＭＧＨＡＧＡＩＩＡＧＧＫＧＧＡＫＥＫＩＳＡＬＱＳＡＧＶＶＶＳＭＳＰＡＱＬＧＴＴＩＹＫＥＦＥＫＲＫＭＬ
例示的なＳＵＣＬＧ１核酸配列（配列番号１２）：
ＧＴＣＡＴＴＧＧＣＧＴＡＴＧＡＣＣＧＣＡＡＣＣＣＴＴＧＣＣＧＣＴＧＣＣＧＣＴＧＡＣＡＴＣＧＣＴＡＣＣＡＴＧＧＴＣＴＣＣＧＧＣＡＧＣＡＧＣＧＧＣＣＴＣＧＣＣＧＣＣＧＣＣＣＧＴＣＴＣＣＴＧＴＣＧＣＧＣＡＧＣＴＴＣＣＴＣＣＴＧＣＣＧＣＡＧＡＡＴＧＧＡＡＴＴＣＧＧＣＡＴＴＧＴＴＣＣＴＡＣＡＣＡＧＣＴＴＣＴＣＧＧＣＡＡＣＡＴＣＴＣＴＡＴＧＴＴＧＡＴＡＡＡＡＡＴＡＣＡＡＡＧＡＴＴＡＴＴＴＧＣＣＡＧＧＧＴＴＴＣＡＣＴＧＧＣＡＡＡＣＡＧＧＧＣＡＣＣＴＴＴＣＡＣＡＧＣＣＡＧＣＡＧＧＣＡＴＴＧＧＡＡＴＡＴＧＧＣＡＣＣＡＡＡＣＴＣＧＴＴＧＧＡＧＧＡＡＣＣＡＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＧＡＧＧＣＣＡＧＡＣＡＣＡＴＣＴＧＧＧＣＴＴＡＣＣＴＧＴＣＴＴＴＡＡＴＡＣＴＧＴＧＡＡＧＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＡＡＣＡＧＡＣＡＧＧＡＧＣＡＡＣＧＧＣＴＴＣＴＧＴＣＡＴＴＴＡＴＧＴＴＣＣＴＣＣＧＣＣＴＴＴＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＣＡＴＴＡＡＴＧＡＡＧＣＴＡＴＴＧＡＧＧＣＡＧＡＡＡＴＴＣＣＣＴＴＧＧＴＴＧＴＧＴＧＴＡＴＣＡＣＴＧＡＡＧＧＡＡＴＴＣＣＣＣＡＧＣＡＧＧＡＣＡＴＧＧＴＡＣＧＡＧＴＣＡＡＧＣＡＣＡＡＡＣＴＧＣＴＧＣＧＣＣＡＧＧＡＡＡＡＧＡＣＡＡＧＧＣＴＡＡＴＴＧＧＧＣＣＣＡＡＣＴＧＣＣＣＴＧＧＡＧＴＣＡＴＣＡＡＴＣＣＴＧＧＡＧＡＡＴＧＴＡＡＡＡＴＴＧＧＣＡＴＣＡＴＧＣＣＴＧＧＣＣＡＴＡＴＴＣＡＣＡＡＡＡＡＡＧＧＡＡＧＧＡＴＴＧＧＣＡＴＴＧＴＧＴＣＣＡＧＡＴＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＴＴＡＴＧＡＡＧＣＡＧＴＴＣＡＣＣＡＡＡＣＡＡＣＧＣＡＡＧＴＴＧＧＡＴＴＧＧＧＧＣＡＧＴＣＴＴＴＧＴＧＣＧＴＴＧＧＣＡＴＴＧＧＡＧＧＴＧＡＴＣＣＴＴＴＴＡＡＴＧＧＡＡＣＡＧＡＴＴＴＴＡＴＴＧＡＣＴＧＣＣＴＣＧＡＡＡＴＣＴＴＴＴＴＧＡＡＣＧＡＴＴＣＴＧＣＣＡＣＡＧＡＡＧＧＣＡＴＣＡＴＡＴＴＧＡＴＴＧＧＴＧＡＡＡＴＴＧＧＴＧＧＴＡＡＴＧＣＡＧＡＡＧＡＧＡＡＴＧＣＴＧＣＡＧＡＡＴＴＴＴＴＧＡＡＧＣＡＡＣＡＴＡＡＴＴＣＡＧＧＴＣＣＡＡＡＴＴＣＣＡＡＧＣＣＴＧＴＡＧＴＧＴＣＣＴＴＣＡＴＴＧＣＴＧＧＴＴＴＡＡＣＴＧＣＴＣＣＴＣＣＴＧＧＧＡＧＡＡＧＡＡＴＧＧＧＴＣＡＴＧＣＣＧＧＧＧＣＡＡＴＴＡＴＴＧＣＴＧＧＡＧＧＡＡＡＡＧＧＴＧＧＡＧＣＴＡＡＡＧＡＧＡＡＧＡＴＣＴＣＴＧＣＣＣＴＴＣＡＧＡＧＴＧＣＡＧＧＡＧＴＴＧＴＧＧＴＣＡＧＴＡＴＧＴＣＴＣＣＴＧＣＡＣＡＧＣＴＧＧＧＡＡＣＣＡＣＧＡＴＣＴＡＣＡＡＧＧＡＡＴＴＴＧＡＡＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＴＧＣＴＡＴＧＡＡＡＧＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＴＴＣＣＴＡＡＡＡＣＴＧＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＣＡＣＧＴＡＧＡＣＡＴＧＴＡＡＣＣＣＡＧＣＡＧＣＡＧＴＴＴＧＣＴＴＣＴＧＴＴＧＴＣＣＡＣＴＧＡＴＴＡＡＴＣＡＧＣＣＴＡＴＧＴＧＣＣＴＧＡＣＡＣＴＧＧＴＣＴＴＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＴＧＧＡＡＧＣＣＡＡＡＡＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＧＡＴＧＴＣＣＴＧＡＡＴＴＡＡＧＡＴＧＴＴＴＴＣＡＣＣＡＣＡＴＴＧＴＡＴＴＡＣＡＧＡＧＡＣＡＧＣＣＡＡＴＡＡＡＴＣＴＡＣＴＡＴＴＴＧＡＴＴＴＣＡＡ
【０１５８】
本明細書で使用する用語「ＭＰＶ１７」は、ミトコンドリア内膜タンパク質ＭＰＶ１７をコードする遺伝子、又は対応するタンパク質産物を指す。用語「ＭＰＶ１７」及び「ミトコンドリア内膜タンパク質ＭＰＶ１７」は、ＭＰＶ１７遺伝子又はタンパク質の野生型形態、並びに野生型ＭＰＶ１７タンパク質及びそれをコードする核酸のバリアント（例えば、とりわけ、スプライスバリアント、トランケーション、コンカテマー、及び融合構築物）を含む。そのようなバリアントの例は、野生型ＭＰＶ１７タンパク質のアミノ酸配列（例えば、配列番号１３）のいずれかと少なくとも７０％の配列同一性（例えば、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９．９％の同一性、又はそれを超える）を有するタンパク質であるが、ただし、ＭＰＶ１７バリアントは、野生型ＭＰＶ１７の機能を保持している。さらに、用語「ＭＰＶ１７」及び「ミトコンドリア内膜タンパク質ＭＰＶ１７」は、融合タンパク質、又はそれをコードする核酸を指し、ここでＭＰＶ１７は、別のポリペプチド、半減期改変剤、又は治療薬に作動可能に連結されている。用語「ＭＰＶ１７」は、当業者には理解されるように、文脈に応じて、タンパク質又はこのタンパク質をコードする遺伝子を指してよい。
例示的なＭＰＶ１７アミノ酸配列（配列番号１３）：
ＭＡＬＷＲＡＹＱＲＡＬＡＡＨＰＷＫＶＱＶＬＴＡＧＳＬＭＧＬＧＤＩＩＳＱＱＬＶＥＲＲＧＬＱＥＨＱＲＧＲＴＬＴＭＶＳＬＧＣＧＦＶＧＰＶＶＧＧＷＹＫＶＬＤＲＦＩＰＧＴＴＫＶＤＡＬＫＫＭＬＬＤＱＧＧＦＡＰＣＦＬＧＣＦＬＰＬＶＧＡＬＮＧＬＳＡＱＤＮＷＡＫＬＱＲＤＹＰＤＡＬＩＴＮＹＹＬＷＰＡ
ＶＱＬＡＮＦＹＬＶＰＬＨＹＲＬＡＶＶＱＣＶＡＶＩＷＮＳＹＬＳＷＫＡＨＲＬ
例示的なＭＰＶ１７核酸配列（配列番号１４）：
ＡＧＴＴＣＣＴＡＧＧＣＣＡＧＣＣＴＧＴＣＡＣＧＴＧＧＧＡＧＧＧＡＧＧＣＴＣＧＧＣＧＣＴＣＡＧＧＡＡＧＣＡＴＧＧＣＡＣＴＣＴＧＧＣＧＧＧＣＡＴＡＣＣＡＧＣＧＧＧＣＣＣＴＧＧＣＣＧＣＴＣＡＣＣＣＧＴＧＧＡＡＡＧＴＡＣＡＧＧＴＣＣＴＧＡＣＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＴＧＧＧＣＣＴＧＧＧＴＧＡＣＡＴＴＡＴＣＴＣＡＣＡＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＡＧＧＣＧＧＧＧＴＣＴＧＣＡＧＧＡＡＣＡＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＧＧＡＣＴＣＴＧＡＣＣＡＴＧＧＴＧＴＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＴＧＧＣＴＴＴＧＴＧＧＧＣＣＣＴＧＴＧＧＴＡＧＧＡＧＧＣＴＧＧＴＡＣＡＡＧＧＴＴＴＴＧＧＡＴＣＧＧＴＴＣＡＴＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＡＣＣＡＡＡＧＴＧＧＡＴＧＣＡＣＴＧＡＡＧＡＡＧＡＴＧＴＴＧＴＴＧＧＡＴＣＡＧＧＧＧＧＧＣＴＴＴＧＣＣＣＣＧＴＧＴＴＴＴＣＴＡＧＧＣＴＧＣＴＴＴＣＴＣＣＣＡＣＴＧＧＴＡＧＧＧＧＣＡＣＴＴＡＡＴＧＧＡＣＴＧＴＣＡＧＣＣＣＡＧＧＡＣＡＡＣＴＧＧＧＣＣＡＡＡＣＴＡＣＡＧＣＧＧＧＡＴＴＡＴＣＣＴＧＡＴＧＣＣＣＴＴＡＴＣＡＣＣＡＡＣＴＡＣＴＡＴＣＴＡＴＧＧＣＣＴＧＣＴＧＴＧＣＡＧＴＴＡＧＣＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＴＧＧＴＣＣＣＣＣＴＴＣＡＴＴＡＣＡＧＧＴＴＧＧＣＣＧＴＴＧＴＣＣＡＡＴＧＴＧＴＴＧＣＴＧＴＴＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＣＣＴＡＣＣＴＧＴＣＣＴＧＧＡＡＧＧＣＡＣＡＴＣＧＧＣＴＣＴＡＡＧＣＣＴＧＣＣＴＣＡＣＴＣＣＡＴＣＧＴＴＴＣＣＡＣＣＴＴＧＣＡＧＴＧＡＴＧＣＡＧＣＴＴＧＡＣＣＣＴＧＧＡＡＣＧＧＴＣＡＧＡＣＡＡＣＣＴＣＣＴＣＡＡＡＧＴＧＧＧＣＡＴＡＣＣＡＧＴＴＴＣＣＡＣＧＧＧＧＴＴＧＧＧＴＴＧＣＣＧＧＴＣＡＧＡＧＣＴＴＡＡＧＡＧＧＡＣＴＡＧＣＡＣＣＣＴＧＣＡＡＴＧＣＣＣＣＴＣＴＴＣＡＣＴＣＴＡＡＡＡＴＧＴＡＣＡＣＴＧＡＣＴＧＣＴＴＴＡＧＡＧＣＣＣＴＴＧＡＴＡＡＴＡＧＴＣＴＴＡＴＴＣＣＣＡＣＣＡＣＡＴＡＣＴＡＧＧＣＡＣＴＣＣＡＴＡＡＡＴＡＴＣＴＧＴＴＧＡＡＣＣＴＴＣＡＴＧＡＣＣＴＴＡＴＣＡＡＣＴＴＴＡＣＡＣＣＣＡＴＡＴＣＣＣＡＧＣＡＡＡＴＧＣＣＡＣＴＣＡＴＣＣＣＣＡＣＴＣＴＴＣＡＴＡＧＡＣＡＣＡＴＴＴＧＴＴＡＣＴＣＴＡＡＣＣＣＴＧＣＣＴＡＧＧＣＴＴＣＴＴＧＴＡＧＣＴＣＣＡＧＣＴＣＴＴＴＡＧＡＧＡＣＴＣＣＣＧＧＡＡＣＣＣＴＴＴＡＴＡＴＧＧＴＧＣＣＴＣＡＧＴＡＡＡＴＡＴＧＴＴＡＴＴＡＡＡＴＡＴＧＴＡＡＴＣＣＧＧＡＡ
【０１５９】
本明細書で使用する用語「ＰＯＬＧ」は、ＤＮＡポリメラーゼガンマ触媒サブユニットをコードする遺伝子、又は対応するタンパク質産物を指す。用語「ＰＯＬＧ」及び「ＤＮＡポリメラーゼガンマ触媒サブユニット」は、ＰＯＬＧ遺伝子又はタンパク質の野生型形態、並びに野生型ＰＯＬＧタンパク質のバリアント及びそれをコードする核酸（例えば、とりわけ、スプライスバリアント、トランケーション、コンカテマー、及び融合構築物）を含む。そのようなバリアントの例は、野生型ＰＯＬＧタンパク質のアミノ酸配列（例えば、配列番号１５）のいずれかと少なくとも７０％の配列同一性（例えば、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９．９％の同一性、又はそれを超える）を有するタンパク質であるが、ただし、ＰＯＬＧバリアントは、野生型ＰＯＬＧの機能を保持している。さらに、用語「ＰＯＬＧ」及び「ＤＮＡポリメラーゼガンマ触媒サブユニット」は、融合タンパク質、又はそれをコードする核酸を指し、ここでＰＯＬＧは、別のポリペプチド、半減期改変剤、又は治療薬に作動可能に連結されている。用語「ＰＯＬＧ」は、当業者には理解されるように、文脈に応じて、タンパク質又はこのタンパク質をコードする遺伝子を指してよい。
例示的なＰＯＬＧアミノ酸配列（配列番号１５）：
ＭＳＲＬＬＷＲＫＶＡＧＡＴＶＧＰＧＰＶＰＡＰＧＲＷＶＳＳＳＶＰＡＳＤＰＳＤＧＱＲＲＲＱＱＱＱＱＱＱＱＱＱＱＱＱＰＱＱＰＱＶＬＳＳＥＧＧＱＬＲＨＮＰＬＤＩＱＭＬＳＲＧＬＨＥＱＩＦＧＱＧＧＥＭＰＧＥＡＡＶＲＲＳＶＥＨＬＱＫＨＧＬＷＧＱＰＡＶＰＬＰＤＶＥＬＲＬＰＰＬＹＧＤＮＬＤＱＨＦＲＬＬＡＱＫＱＳＬＰＹＬＥＡＡＮＬＬＬＱＡＱＬＰＰＫＰＰＡＷＡＷＡＥＧＷＴＲＹＧＰＥＧＥＡＶＰＶＡＩＰＥＥＲＡＬＶＦＤＶＥＶＣＬＡＥＧＴＣＰＴＬＡＶＡＩＳＰＳＡＷＹＳＷＣＳＱＲＬＶＥＥＲＹＳＷＴＳＱＬＳＰＡＤＬＩＰＬＥＶＰＴＧＡＳＳＰＴＱＲＤＷＱＥＱＬＶＶＧＨＮＶＳＦＤＲＡＨＩＲＥＱＹＬＩＱＧＳＲＭＲＦＬＤＴＭＳＭＨＭＡＩＳＧＬＳＳＦＱＲＳＬＷＩＡＡＫＱＧＫＨＫＶＱＰＰＴＫＱＧＱＫＳＱＲＫＡＲＲＧＰＡＩＳＳＷＤＷＬＤＩＳＳＶＮＳＬＡＥＶＨＲＬＹＶＧＧＰＰＬＥＫＥＰＲＥＬＦＶＫＧＴＭＫＤＩＲＥＮＦＱＤＬＭＱＹＣＡＱＤＶＷＡＴＨＥＶＦＱＱＱＬＰＬＦＬＥＲＣＰＨＰＶＴＬＡＧＭＬＥＭＧＶＳＹＬＰＶＮＱＮＷＥＲＹＬＡＥＡＱＧＴＹＥＥＬＱＲＥＭＫＫＳＬＭＤＬＡＮＤＡＣＱＬＬＳＧＥＲＹＫＥＤＰＷＬＷＤＬＥＷＤＬＱＥＦＫＱＫＫＡＫＫＶＫＫＥＰＡＴＡＳＫＬＰＩＥＧＡＧＡＰＧＤＰＭＤＱＥＤＬＧＰＣＳＥＥＥＥＦＱＱＤＶＭＡＲＡＣＬＱＫＬＫＧＴＴＥＬＬＰＫＲＰＱＨＬＰＧＨＰＧＷＹＲＫＬＣＰＲＬＤＤＰＡＷＴＰＧＰＳＬＬＳＬＱＭＲＶＴＰＫＬＭＡＬＴＷＤＧＦＰＬＨＹＳＥＲＨＧＷＧＹＬＶＰＧＲＲＤＮＬＡＫＬＰＴＧＴＴＬＥＳＡＧＶＶＣＰＹＲＡＩＥＳＬＹＲＫＨＣＬＥＱＧＫＱＱＬＭＰＱＥＡＧＬＡＥＥＦＬＬＴＤＮＳＡＩＷＱＴＶＥＥＬＤＹＬＥＶＥＡＥＡＫＭＥＮＬＲＡＡＶＰＧＱＰＬＡＬＴＡＲＧＧＰＫＤＴＱＰＳＹＨＨＧＮＧＰＹＮＤＶＤＩＰＧＣＷＦＦＫＬＰＨＫＤＧＮＳＣＮＶＧＳＰＦＡＫＤＦＬＰＫＭＥＤＧＴＬＱＡＧＰＧＧＡＳＧＰＲＡＬＥＩＮＫＭＩＳＦＷＲＮＡＨＫＲＩＳＳＱＭＶＶＷＬＰＲＳＡＬＰＲＡＶＩＲＨＰＤＹＤＥＥＧＬＹＧＡＩＬＰＱＶＶＴＡＧＴＩＴＲＲＡＶＥＰＴＷＬＴＡＳＮＡＲＰＤＲＶＧＳＥＬＫＡＭＶＱＡＰＰＧＹＴＬＶＧＡＤＶＤＳＱＥＬＷＩＡＡＶＬＧＤＡＨＦＡＧＭＨＧＣＴＡＦＧＷＭＴＬＱＧＲＫＳＲＧＴＤＬＨＳＫＴＡＴＴＶＧＩＳＲＥＨＡＫＩＦＮＹＧＲＩＹＧＡＧＱＰＦＡＥＲＬＬＭＱＦＮＨＲＬＴＱＱＥＡＡＥＫＡＱＱＭＹＡＡＴＫＧＬＲＷＹＲＬＳＤＥＧＥＷＬＶＲＥＬＮＬＰＶＤＲＴＥＧＧＷＩＳＬＱＤＬＲＫＶＱＲＥＴＡＲＫＳＱＷＫＫＷＥＶＶＡＥＲＡＷＫＧＧＴＥＳＥＭＦＮＫＬＥＳＩＡＴＳＤＩＰＲＴＰＶＬＧＣＣＩＳＲＡＬＥＰＳＡＶＱＥＥＦＭＴＳＲＶＮＷＶＶＱＳＳＡＶＤＹＬＨＬＭＬＶＡＭＫＷＬＦＥＥＦＡＩＤＧＲＦＣＩＳＩＨＤＥＶＲＹＬＶＲＥＥＤＲＹＲＡＡＬＡＬＱＩＴＮＬＬＴＲＣＭＦＡＹＫＬＧＬＮＤＬＰＱＳＶＡＦＦＳＡＶＤＩＤＲＣＬＲＫＥＶＴＭＤＣＫＴＰＳＮＰＴＧＭＥＲＲＹＧＩＰＱＧＥＡＬＤＩＹＱＩＩＥＬＴＫＧＳＬＥＫＲＳＱＰＧＰ
例示的なＰＯＬＧ核酸配列（配列番号１６）：
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【０１６０】
分子生物学における標準的な方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ及びＭａｎｉａｔｉｓ  分子クローニング、実験室マニュアル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ），Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８２＆１９８９  第２版，２００１  第３版）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ及びＲｕｓｓｅｌｌ  分子クローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ），第３版，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（２００１）；Ｗｕ  組み換えＤＮＡ（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ），２１７巻，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）（１９９３）に記載されている。標準的な方法はまた、Ａｕｓｂｅｌら  分子生物学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ），１〜４巻，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ（２００１）に載っている。
【０１６１】
ミトコンドリアＤＮＡ枯渇症候群の治療及び予防
本開示の組成物及び方法は、様々な病状を治療、予防、及び／又は治癒するために使用されてよい。例えば、本明細書に記載の遺伝子治療方法は、ミトコンドリア機能障害に関連付けられる疾患を治療、予防、及び／又は治癒するために、機能性タンパク質をコードする核酸を含有する１種以上の組成物の投与を含んでよい。ＴＫ２、ｄＧＫ、ＴＰ、ｐ５３Ｒ２、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１、ＭＰＶ１７、及び／又はＰＯＬＧの欠損症などのミトコンドリアＤＮＡ枯渇症候群の治療のために、遺伝子治療は、機能型の欠損タンパク質をコードする遺伝子を含有する１種以上の組成物の投与を含んでよい。治療はまた、遺伝子治療に関連して薬理学的療法を施すことを含んでよい。遺伝子療法を単独で又は薬理学的療法と組み合わせて含むこのような治療プロトコルは、ミトコンドリアＤＮＡ枯渇症候群に見られるものなどの不均衡ヌクレオシドプールによって特徴付けられる様々な障害を治療するために使用されてよい。
【０１６２】
ミトコンドリアＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）枯渇症候群（ＭＤＳ）は、罹患組織におけるｍｔＤＮＡコピー数の減少によって特徴付けられるいくつかの重篤な常染色体疾患を含む。大部分のＭＤＳ原因核遺伝子は、ｍｔＤＮＡ複製機構に属するタンパク質をコードするか、又はこれらの疾患の全てを遺伝子療法の候補にさせるデオキシリボヌクレオシド三リン酸（ｄＮＴＰ）代謝に関与する。
【０１６３】
ＭＤＳの一形態は、チミジンキナーゼ又はＴＫ２欠損症である。核遺伝子ＴＫ２によってコードされるＴＫ２は、チミジン及びシチジンをリン酸化するミトコンドリアマトリックスタンパク質であり、デオキシチミジン一リン酸（ＴＭＰ）及びデオキシシチジン一リン酸（ｄＣＭＰ）を作製し、次に、これらをミトコンドリアＤＮＡ合成に必要なデオキシヌクレオチド三リン酸（ｄＮＴＰ）に変換する。常染色体劣性ＴＫ２変異は、幼児及び子供ではミトコンドリアＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）の重度の枯渇を伴い、壊滅的に神経筋を脆弱にさせるとともに、成人ではｍｔＤＮＡ多重欠失を伴う進行性の外部眼筋麻痺を引き起こす。多くの患者は、歩行できず、ある種の機械的な通気と供給の管を必要とする。中枢神経系は、発作、脳症、認知障害、及び聴力損失を含む症状を伴い、これらの障害に可変的に関与する。患者の７％未満が４２歳を超えて生きる。
【０１６４】
そのように診断された患者の臨床的な及び分子遺伝学の知見に基づいて、３つの疾患の症状が特定された：ｉ）１歳になるまでに脱力感が発症し重度のｍｔＤＮＡ枯渇及び早期死亡を伴う乳児発症（１歳以下）の筋疾患；ｉｉ）重度のｍｔＤＮＡ枯渇を伴う小児期発症（１〜１１歳）の筋疾患、かつｉｉｉ）発症時に軽度の脱力を伴い、歩行の喪失、呼吸不全、又はその両方までの進行が遅く、ｍｔＤＮＡ多重欠失、ｍｔＤＮＡコピー数の低下、又はその両方に関連付けられる青年期又は成人期の慢性で進行性の外部眼筋麻痺を伴うことが多い、後期発症（１２歳以上）の筋疾患。Ｇａｒｏｎｅら  ２０１８を参照されたい。
【０１６５】
患者からの培養線維芽細胞を用いて病因を調べＴＫ２欠損症のための療法を試験する試みは、複製細胞がｍｔＤＮＡ枯渇を現さなかったため、成功しなかった。対照的に、ホモ接合性Ｔｋ２  Ｈ１２６Ｎノックイン変異体（Ｔｋ２−／−）マウスモデルは、ＴＫ２変異によって引き起こされるヒト乳児性脳筋症と著しく類似している表現型を現し、この表現型は１０日齢で歩行の低下、不安定歩行運動、粗大振戦、成長遅延及びミトコンドリアＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）の枯渇が発症し、１４〜１６日齢での初期死まで急速に進行することによって特徴付けられ、この期間はヒト乳児発症の疾患に類似している（Ａｋｍａｎら  ２００８；Ｄｏｒａｄｏら、２０１１）。このマウスモデルを用いて、経口ｄＣ／ｄＴの投与が、ＴＫ２欠損症の臨床症状の発症の遅延を延長させ、マウスの寿命を２〜３倍延長させることが示された（‘０９２出願）。またそれを用いて、経口ｄＣＭＰ／ＴＭＰ投与による臨床症状の遅延及び寿命の延長が示された（’２０７出願）。
【０１６６】
ＭＤＳのマウスモデルにおけるＴＫ２をコードするＡＡＶベクターからの例示的な知見
本明細書に示されるように、Ｔｋ２欠損のマウスモデルを使用して、変異遺伝子と、機能性Ｔｋ２タンパク質をコードする正常遺伝子を置換することにより疾患を治癒させることができる。本明細書に記載の例示的な遺伝子治療は、ＴＫ２をコードする導入遺伝子を含有するＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ２又はＡＡＶ９ウイルス）の使用を含む。ヒトＴＫ２を発現するＡＡＶ９ウイルス（以下で提供する実施例では「ＡＡＶ９−ｈＴＫ２」と呼ばれる）の投与が、ＴＫ２変異体マウスの寿命を最大約４ヶ月、平均約３ヶ月延長したことが明らかになった。これは、平均４３日であった経口ｄＣ／ｄＴ薬理学的処置済みＴＫ２変異体マウスの寿命の２倍超であり、１８日であった未処置のＴＫ２変異体マウスの５倍であった（例えば、実施例２参照）。体重も、ｄＣ／ｄＴ単独処置マウスよりも約５５％、及び野生型マウスの重量に対して約８０％増加した（例えば、実施例３参照）。
【０１６７】
ロータロッド試験によって評価する筋力（重量に対して正規化された）及び運動機能を、出生後６０日目に調べると、処置したＴＫ２変異体マウスと未処置の野生型マウスの間で差異は見られなかった（例えば、実施例３及び４参照）。野生型マウスは、治療に関連する副作用を示さず、全体的に健康であった。
【０１６８】
処置した変異体マウスの脳におけるＯＸＰＨＯＳ酵素複合体の活性及びレベルは、未処置の及び処置した野生型マウスにおいて示されたものと同様であった（例えば、実施例７及び８参照）。
【０１６９】
さらに、処置した変異体マウスは、未処置の及びｄＣ＋ｄＴ処置したＴｋ２−／−マウスの特徴である頭部振戦を全く示さず、中枢神経系におけるミトコンドリア機能の救済が病状を妨げることを確認した。
【０１７０】
ミトコンドリアＤＮＡはまた、変異体マウスの大部分の組織においてＡＡＶ９投与により救済された（例えば、実施例６参照）。
【０１７１】
Ｐ１でのＡＡＶ９−ｈＴＫ２の４．２×１０１１ｖｃによる処置は、他の研究で以前に観察されたように、腎臓細胞を効率的に形質導入しない。結果として、処置した変異体マウスにおけるＴＫ２活性は野生型マウスと比較して非常に劣っており、出生後２９日目すぐにｍｔＤＮＡ枯渇の兆候があった。組織学及び生化学的分析は、低下した腎臓機能を示し、これは基礎疾患であり得、Ｔｋ２−／−マウスの早死をもたらす（例えば、実施例８参照）。
【０１７２】
しかしながら、ＴＫ２変異体マウスに、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２とヒトＴＫ２遺伝子を発現するＡＡＶ２ウイルス（ＡＡＶ２−ｈＴＫ２）の組み合わせを投与した場合には、それらはより低レベルの総ウイルス量を有するにもかかわらず、著しく長く生存した。両方の構築物で処置した変異体マウスは、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２のみで処置したマウスと同様に成長し、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２のみで処置したマウスよりもわずかに高いレベルのｍｔＤＮＡを有した。それらは、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２のみで処置した変異体マウスと同様の成長及び力及び運動協調性を有すると共に、それらの尿中のタンパク質の減少および低いレベルのＢＵＮ指数を有した（例えば、実施例９参照）。
【０１７３】
さらに、変異体マウスをＡＡＶ９−ｈＴＫ２とＡＡＶ２−ｈＴＫ２の両方で処置し、水中のｄＣ＋ｄＴをさらに経口投与すると、それらはより長く生存し、より成長し、肝臓及び腎臓中の増加したｍｔＤＮＡレベル、および尿中の減少したタンパク質を有した（例えば、実施例１０参照）。
【０１７４】
さらに、ＴＫ２変異体マウスを、初期年齢、例えば、出生後４日で開始して、‘０９２出願に記載の経口ｄＣ／ｄＴ、又は‘２０７出願に記載の経口ｄＣＭＰ／ＴＭＰで処置し、続いて、約２１日が理想的である、１ヶ月〜約２ヶ月の範囲の、より後の年齢でＡＡＶ９−ｈＴＫ２ベクターを単独で又はＡＡＶ２−ｈＴＫ２ベクターと組み合わせて投与する。ＡＡＶ２−ｈＴＫ２ベクターは、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２ベクターと同時に投与されるか、後に投与されてよい。これらの変異体マウスは、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２のみを投与した変異体マウスよりも長く生存し、増加した成長及び力を有し、ｍｔＤＮＡ及びＲＣＥは、腎臓を含む全ての組織において回復される（例えば、実施例１１及び１２参照）。
【０１７５】
患者におけるミトコンドリア性疾患を治療、予防、及び／又は治癒する方法
説明される遺伝子治療の実施から恩恵を受ける患者は、ＴＫ２、ｄＧＫ、ＴＰ、ｐ５３Ｒ２、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１、ＭＰＶ１７、及び／又はＰＯＬＧの１以上の欠損症と診断されたものを含む。これらの患者において、欠損タンパク質の１以上をコードする核酸を含む組成物（例えば、そのような核酸を含むＡＡＶベクターなどのウイルスベクター）を、患者に投与してもよい。これらの組成物は、単独で、又はデオキシヌクレオシド（例えば、ｄＣ及びｄＴ若しくはそれらの混合物）、又はデオキシリボヌクレオシド一リン酸（例えば、ｄＣＭＰ及びＴＭＰ若しくはそれらの混合物）などの薬理学的薬剤と組み合わせて投与されてよい。例えば、対象はミトコンドリアＤＮＡ枯渇症候群を有し、治療は、（ｉ）欠損タンパク質の１以上をコードする核酸を含有するウイルスベクター（例えば、少なくとも筋肉組織、必要に応じて、少なくとも筋肉組織及びＣＮＳを標的とするＡＡＶなどのＡＡＶ、例えば、ＡＡＶ９）を含有する組成物、並びに（ｉｉ）デオキシヌクレオシド（例えば、ｄＣ及びｄＴ若しくはそれらの混合物）、又はデオキシリボヌクレオシド一リン酸（例えば、ｄＣＭＰ及びＴＭＰ若しくはそれらの混合物）を含む組成物を投与することを含む。一実施形態では、ミトコンドリアＤＮＡ枯渇症候群はＴＫ２欠損症であり、ウイルスベクター（例えば、少なくとも筋肉組織、必要に応じて、少なくとも筋肉組織及びＣＮＳを標的とするＡＡＶなどのＡＡＶ、例えば、ＡＡＶ９）は、ＴＫ２をコードする核酸を含む。特定の実施形態では、ミトコンドリアＤＮＡ枯渇症候群はＴＫ２欠損症であり、ウイルスベクターはＴＫ２をコードする核酸を含むＡＡＶ９である。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、本開示は、ＴＫ２をコードする核酸を含むウイルスベクター（例えば、ＡＡＶ）などの組成物の治療有効量を、それを必要とする対象に投与することにより、ＴＫ２欠損症を治療、予防、治癒、及び／又はＴＫ２欠損症の重篤度若しくは程度を軽減する方法を提供する。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、ＡＡＶ９又はＡＡＶ２などのＡＡＶである。いくつかの実施形態では、ＴＫ２をコードする核酸を含む組成物（例えば、ＡＡＶなどのウイルスベクター）は、ＴＫ２欠損症が診断される又は疑われるとすぐに投与される。いくつかの実施形態では、投与される導入遺伝子を含むＡＡＶの量は、約４．２×１０１１又は４．２×１０１０のゲノム又はベクター又はベクターコピーである。
【０１７７】
本開示はまた、ＴＫ２をコードする核酸を含有する第１の組成物（例えば、ＡＡＶなどのウイルスベクター）の治療有効量を、それを必要とする対象に投与することにより、かつＴＫ２をコードする核酸を含有する第２の組成物（例えば、ＡＡＶなどのウイルスベクター）の治療有効量を対象にさらに投与することをさらに含む、ＴＫ２欠損症を治療、予防、治癒及び／又はＴＫ２欠損症の重篤度若しくは程度を軽減する方法を提供する。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＡＡＶは、それぞれ独立して、ＴＫ２をコードするＡＡＶ２又はＡＡＶ９ベクターである。いくつかの実施形態では、第１のＡＡＶベクターは、第２のＡＡＶベクターの前に投与される。いくつかの実施形態では、第１の組成物（例えば、ＡＡＶベクター）は、ＴＫ２欠損症が診断される又は疑われるとすぐに投与され、第２の組成物（例えば、ＡＡＶベクター）は、第１の組成物の後の時点で投与される。いくつかの実施形態では、第２の組成物（例えば、ＡＡＶベクター）は、第１の組成物（例えば、ＡＡＶベクター）の数日以内に投与される。いくつかの実施形態では、第２の組成物（例えば、ＡＡＶベクター）は、第１の組成物（例えば、ＡＡＶベクター）の数週間以内に投与される。いくつかの実施形態では、第２の組成物（例えば、ＡＡＶベクター）は、第１の組成物（例えば、ＡＡＶベクター）の数ヶ月後に投与される。いくつかの実施形態では、第１の組成物（例えば、ＡＡＶベクター）及び第２の組成物（例えば、ＡＡＶベクター）は、任意の所与の時点で同時に投与される。いくつかの実施形態では、２種類の組成物（例えば、ＡＡＶベクター）は、同じより大きな組成物内に存在し、いくつかの実施形態では、その２つは別々の組成物である。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、本方法はさらに、ｄＣ及び／又はｄＴなどの薬理学的薬剤の治療有効量をさらに投与することを含む。薬理学的薬剤は、第１の組成物（例えば、ＡＡＶベクターなどのウイルスベクター）が投与されるのと同じ時に又は第１の組成物が投与された後の時点で投与されてよい。いくつかの実施形態では、ｄＣ及び／又はｄＴなどの薬理学的薬剤は、第１の組成物の数日以内に投与される。いくつかの実施形態では、ｄＣ及び／又はｄＴなどの薬理学的薬剤は、第１の組成物の数週間以内に投与され、いくつかの実施形態では、ｄＣ及び／又はｄＴなどの薬理学的薬剤は、第１の組成物の数か月後に投与される。いくつかの実施形態では、第１の組成物、第２の組成物及び薬理学的薬剤は、任意の所与の時点で同時に投与される。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、第１の組成物（例えば、本明細書に記載の導入遺伝子をコードするＡＡＶなどのウイルスベクター、例えば、ＴＫ２）は、ＴＫ２欠損症が知られるか又は疑われるとすぐに投与される。薬理学的薬剤（例えば、ｄＣ及び／又はｄＴ）は、第１の組成物の投与後約７日から始めて約３５日まで、第１の組成物の投与後約１４日から始めて約２８日後まで、第１の組成物の投与後約１４日から始めて約２１日まで、又は第１の組成物の投与後約２１日から投与されてよい。第２の組成物（例えば、本明細書に記載の導入遺伝子をコードするＡＡＶなどのウイルスベクター、例えば、ＴＫ２）は、第１の組成物の投与後約１４日から始めて約４５日まで、第１の組成物の投与後約２１日から始めて約３５日まで、第１の組成物の投与後約２１日から始めて約３０日まで、又は第１の組成物の投与後約２９日から投与されてよい。いくつかの実施形態では、薬理学的薬剤（例えば、ｄＣ及び／又はｄＴ）の投与は、対象が生きている間継続する。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、本開示は、治療有効量の薬理学的薬剤（例えば、ｄＣ及び／又はｄＴ）を、それを必要とする対象に投与することにより、ＴＫ２欠損症を治療、予防、治癒、及び／又はＴＫ２欠損症の重篤度若しくは程度を軽減する方法を提供し、ＴＫ２をコードする核酸を含有するＡＡＶベクター（例えば、ｒＡＡＶ）などのウイルスベクターを含有する組成物の治療有効量を対象に投与することをさらに含む。例えば、組成物は、ＴＫ２をコードする核酸を含有するＡＡＶ２又はＡＡＶ９を含有してよい。特定の実施形態では、ＡＡＶはＡＡＶ９である。いくつかの実施形態では、薬理学的薬剤は、ＡＡＶベクターの前に投与される。いくつかの実施形態では、薬理学的薬剤は、ＴＫ２欠損症が診断される又は疑われるとすぐに投与され、ＡＡＶベクターは、後の時点で投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、薬理学的薬剤の数日以内に投与され、いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、薬理学的薬剤の数週間以内に投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、薬理学的薬剤の数ヶ月後に投与される。いくつかの実施形態では、薬理学的薬剤とＡＡＶベクターは、任意の所与の時点で同時に投与される。いくつかの実施形態では、ＴＫ２をコードする第２のＡＡＶベクター（例えば、ＡＡＶ２又はＡＡＶ９）も投与される。第１及び第２のＡＡＶベクターは、同じであっても異なっていてもよい。例えば、第１のＡＡＶベクターは、ＡＡＶ２ベクター（すなわち、ＡＡＶ２  ＩＴＲ及びＡＡＶ２キャプシドタンパク質を含有する）であってよく、第２のＡＡＶベクターは、ＡＡＶ９ベクター（例えば、ＡＡＶ９  ＩＴＲ及びＡＡＶ９キャプシドタンパク質を含有する）であってよい。いくつかの実施形態では、第１及び第２のベクターの一方又は両方は、ＡＡＶ２  ＩＴＲ及び異なるＡＡＶ血清型（例えば、ＡＡＶ２／１、ＡＡＶ２／８、又はＡＡＶ２／９ベクター）からのキャプシドタンパク質を含有する偽型ＡＡＶベクターである。いくつかの実施形態では、第１のＡＡＶベクターは、第２のＡＡＶベクターの投与に対して同時に又は後に投与される。第１及び第２のベクターは、同じ組成物又は異なる組成物で投与されてよい。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、本開示は、ｄＣＭＰ及び／又はＴＭＰを含有する薬理学的薬剤の治療有効量を、それを必要とする対象に投与すること、かつＴＫ２をコードする核酸を含有するＡＡＶベクター（例えば、ＡＡＶ２又はＡＡＶ９）を含有する組成物の治療有効量を対象にさらに投与することにより、ＴＫ２欠損症を治療、予防及び／又はＴＫ２欠損症の重篤度又は程度を軽減する方法を提供する。いくつかの実施形態では、ｄＣＭＰ及び／又はＴＭＰは、ＡＡＶベクターの投与前に投与される。いくつかの実施形態では、ｄＣＭＰ及び／又はＴＭＰは、ＴＫ２欠損症が診断される又は疑われるとすぐに投与され、ＡＡＶベクターは、後の時点で投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ｄＣＭＰ及び／又はＴＭＰ投与の数日以内に投与され、いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ｄＣＭＰ及び／又はＴＭＰの数週間以内に投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ｄＣＭＰ及び／又はＴＭＰの数ヶ月後に投与される。いくつかの実施形態では、ｄＣＭＰ及び／又はＴＭＰ及びＡＡＶベクターは、任意の時点で同時に投与される。いくつかの実施形態では、ＴＫ２をコードする核酸を含有する追加のＡＡＶベクター（例えば、ＡＡＶ２又はＡＡＶ９ベクター）も、対象に投与される。第２のＡＡＶベクターは、第１のＡＡＶベクターの投与に対して同時又は後に投与できる。第１及び第２のＡＡＶベクターは、同じ組成物の一部として、又は異なる組成物として投与されてよい。
【０１８２】
上述の方法の全てを使用して、ＴＫ２欠損症を有する対象における機能障害性ＴＫ２タンパク質の機能を回復させることができる。
【０１８３】
ｄＧＭＰ及びｄＡＭＰの欠損症を伴うＤＧＵＯＫにおける常染色体劣性変異に起因するｄＧＫの両染色体欠損は、ｍｔＤＮＡ枯渇を引き起こし、典型的には、早期小児発症の肝脳疾患を現す（Ｍａｎｄｅｌら  ２００１）。これらの患者は、ｄＧＫをコードする核酸及び少なくとも１つのデオキシプリンのｄＧ若しくはｄＡ、又はそれらの混合物を含むＡＡＶベクターの投与から恩恵を受ける。同様に、ＴＰ、ｐ５３Ｒ２、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１、ＭＰＶ１７、及び／又はＰＯＬＧの欠損を有する患者は、本開示の組成物及び方法を用いて、例えば、欠損タンパク質をコードする導入遺伝子を含有する組成物（例えば、ＡＡＶベクターなどのウイルスベクター）の治療有効量をそのような患者に提供することにより、治療されてよい。組成物は、単独で、又は本明細書に記載のデオキシヌクレオシド又はデオキシヌクレオシド一リン酸などの薬理学的薬剤と組み合わせて患者に提供されてよい。
【０１８４】
例えば、他の形態のＭＤＳ、及び不均衡ヌクレオチドプールに関連する他の障害は、ＴＫ２、ｄＧＫ、ＴＰ、ｐ５３Ｒ２、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１、ＭＰＶ１７、及び／又はＰＯＬＧの１以上をコードする核酸を含有する組成物（例えば、ＡＡＶベクターなどのウイルスベクター）の投与によって治療できる。組成物は、単独で、又はデオキシヌクレオシド（例えば、ｄＡ、ｄＧ、ｄＣ、若しくはｄＴ、若しくはそれらの混合物）又はデオキシヌクレオシド一リン酸（例えば、ｄＡＭＰ、ｄＧＭＰ、ｄＣＭＰ、若しくはＴＭＰ、若しくはそれらの混合物）などの薬理学的薬剤と組み合わせて投与されてよい。これらの障害は、限定するものではないが、ＲＲＭ２Ｂ（ｐ５３Ｒ２、リボヌクレオチド還元酵素のｐ５３誘導性小サブユニット、ＲＮＲをコードする）に関連する欠損、及びミトコンドリア神経胃腸性脳筋症（ＭＮＧＩＥ）を引き起こすＴＹＭＰ（チミジンホスホリラーゼのＴＰをコードする）の変異を含む。ミトコンドリアｄＮＴＰプールを破壊するさらなる核遺伝子は、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１及びＭＰＶ１７を含むが、これらに限定されない。
【０１８５】
ミトコンドリア性疾患を有する患者の病態の評価
汎発性の筋緊張低下、近位筋脱力、以前の後天性運動技能の喪失、不十分な摂食、及び呼吸困難によって特徴付けられる、進行性筋疾患の最も典型的な提示を含むＴＫ２欠損症について上述した表現型を示す患者を調べて、疾患を明確に診断できる。
【０１８６】
ｍｔＤＮＡ枯渇症候群についての臨床症状が非常に疑わしい場合には、ｍｔＤＮＡ枯渇症候群を引き起こすことが知られている遺伝子のパネルを用いる分子遺伝学的試験を実施しなければならない（Ｃｈａｎｐｒａｓｅｒｔら  ２０１２）。ＴＫ２遺伝子は、その変異がＴＫ２関連ミトコンドリアＤＮＡ枯渇症候群を引き起こすことが知られている唯一の遺伝子である。この試験は、配列のバリアント及び欠失／重複についての、ＴＫ２の全コード領域及びエクソン／イントロン接合領域の配列解析を含み得る。配列解析において化合物のヘテロ接合性又はホモ接合性の有害な変異が特定されると、ＴＫ２欠損症の診断が確認され、したがって、対象は本明細書に記載の治療から恩恵を受ける。配列解析が２種の化合物のヘテロ接合性又はホモ接合性の有害な変異を特定しない場合、ＴＫ２欠損症診断を決定及び／又は確認するために、欠失／重複分析が考慮されるべきである。
【０１８７】
ＴＫ２欠損症診断を決定及び／又は確認するためのさらなる試験は、血清クレアチンキナーゼ（ＣＫ）濃度、筋電図、骨格筋上の組織病理学、ミトコンドリアＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）含量（コピー数）、及び骨格筋中の電子伝達鎖（ＥＴＣ）活性の試験を含んでよい。これらの試験において、下記の１以上が見出された場合には、ＴＫ２欠損症が決定及び／又は確認される。健康な対照と比較して上昇したＣＫ濃度は、ＴＫ２欠損を示し得る。骨格筋生検を行うことができ、次いで、骨格筋中のｍｔＤＮＡ含量分析を実施できる。骨格筋生検が、繊維サイズの顕著な変動、可変性の筋空胞、可変性の結合組織の増加、及び不規則の赤色繊維並びにコハク酸デヒドロゲナーゼ（ＳＤＨ）活性の増加及びシトクロムｃオキシダーゼ（ＣＯＸ）の低い活性〜活性なしを示し、かつｍｔＤＮＡコピー数が著しく低下される（典型的には、年齢及び組織を適合させた健康対照の２０％未満）場合、ＴＫ２欠損症の診断を決定及び／又は確認できる（Ｃｈａｎｐｒａｓｅｒｔら  ２０１２）。
【０１８８】
さらに、ＴＫ２欠損症は常染色体劣性様式で遺伝する。そのため、罹患患者の同胞を出産後できるだけ早期に調べて、疾患を診断できる。
【０１８９】
これらの実施例の全てにおいて、単独で、又はデオキシヌクレオシド療法又はデオキシリボヌクレオシド一リン酸療法と組み合わせた遺伝子治療は、ＴＫ２欠損症の診断後できるだけ早く開始されるべきである。
【０１９０】
組換えＡＡＶベクター
本明細書に記載の「組み換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ベクター」は一般に、導入遺伝子（例えば、ＴＫ２、ｄＧＫ、ＴＰ、ｐ５３Ｒ２、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１、ＭＰＶ１７、及び／又はＰＯＬＧをコードする）を含む。導入遺伝子は、５’及び３’ＩＴＲに隣接され、標的組織の細胞中で導入遺伝子の転写、翻訳、及び／又は発現を可能にする方法で１以上の調節要素に作動可能に連結されてよい。このような調節要素は、とりわけ本明細書に記載のニワトリβアクチンプロモーター又はサイトメガロウイルスエンハンサーなどの、プロモーター又はエンハンサーを含んでよい。組換えＡＡＶゲノムは一般に、キャプシドタンパク質（例えば、ＩＴＲが由来するものと同じＡＡＶ血清型由来の、又はＩＴＲが由来する異なるＡＡＶ血清型由来の）によりキャプシド形成される。ＡＡＶベクターを次いで、選択した標的細胞に送達してよい。いくつかの実施形態では、導入遺伝子は、ポリペプチド、タンパク質、機能的ＲＮＡ分子（例えば、ｍｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ阻害剤）又は目的の他の遺伝子産物（例えば、ＴＫ２）をコードするベクター配列に対し異種の核酸配列である。本開示の組成物及び方法と共に使用され得る例示的なＡＡＶベクターの構成要素は以下で説明する。
【０１９１】
本発明の方法及び組成物において、ＡＡＶ血清型又はＡＡＶ血清型の組み合わせを使用できる。本発明の方法及び組成物は、ミトコンドリア障害の治療及び治癒のためであるため、少なくとも筋肉、又は少なくとも筋肉と中枢神経系を標的とするＡＡＶ血清型をいくつかの実施形態で使用でき、それらはＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、及びＡＡＶ９を含むが、これらに限定されない。
【０１９２】
いくつかの実施形態では、広い指向性を有するＡＡＶ９血清型が使用される。
【０１９３】
ＡＡＶベクターの構成要素
本明細書に記載のＡＡＶベクターは、シス作用性の５’ＩＴＲ及び３’ＩＴＲを含んでよい（例えば、Ｃａｒｔｅｒ、パルボウイルスのハンドブック（Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓｅｓ）、Ｐ．Ｔｉｊｓｓｅｒ（編），ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，ｐｐ．１５５  １６８（１９９０））。ＩＴＲ配列は典型的には、約１４５ｂｐ長である。好ましくは、実質的にＩＴＲをコードする全配列が分子中で使用されるが、ある程度のこれらの配列のわずかな改変が許容される（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）及びＦｉｓｈｅｒら（１９９６））などの文章を参照されたい）。そのような分子の一例は、導入遺伝子を含有する「シス作用」プラスミドであり、選択された導入遺伝子配列及び関連する調節要素は、５’及び３’ＡＡＶ  ＩＴＲ配列に隣接される。ＡＡＶ  ＩＴＲ配列は、現在同定されている哺乳類ＡＡＶ型を含む任意の公知のＡＡＶから取得してよい。
【０１９４】
組換えＡＡＶベクターについて上記で同定した要素に加えて、ベクターはまた、本発明によって生成したプラスミドベクターでトランスフェクトされるか又はウイルスで感染された細胞における転写、翻訳及び／又は発現を可能にする様式で導入遺伝子に作動可能に連結された、従来の制御要素を含んでもよい。本明細書で使用する「作動可能に連結された」配列は、目的の遺伝子と隣接する発現制御配列と、目的の遺伝子を制御するためにトランスで作用するか又は離れて作用する発現制御配列の両方を含む。発現制御配列は、適切な転写開始点、終結、プロモーター及びエンハンサーの配列；スプライシング及びポリアデニル化（ポリＡ）シグナルなどの効率的なＲＮＡ処理シグナル；細胞質ｍＲＮＡを安定化する配列；翻訳効率を増強する配列（すなわち、ｋｏｚａｋコンセンサス配列）；タンパク質の安定性を増強する配列；及び所望であれば、コードされる生成物の分泌を増強する配列を含む。天然の、構成的な、誘導性の及び／又は組織特異的なプロモーターを含む多数の発現制御配列が、当技術分野で知られており、利用されてよい。
【０１９５】
本明細書で使用するように、核酸配列（例えば、コード配列）及び調節配列は、調節配列の影響下若しくは制御下で核酸配列の発現又は転写を行うように共有結合される場合、作動可能に連結されると言われる。核酸配列が機能性タンパク質に翻訳されることが望まれる場合、２つのＤＮＡ配列は、５’調節配列中のプロモーターの誘導がコード配列の転写をもたらす場合、かつ２つのＤＮＡ配列間の結合の性質が、（１）フレームシフト変異を導入しない、（２）コード配列の転写を指示するプロモーター領域の能力を妨げない、又は（３）対応するＲＮＡ転写物がタンパク質に翻訳される能力を妨げない場合に、作動可能に連結されると言われる。そのため、プロモーター領域は、プロモーター領域がそのＤＮＡ配列の転写を行うことができ、その結果得られた転写物が所望のタンパク質又はポリペプチドに翻訳され得る場合に、プロモーター領域は核酸配列に作動可能に連結される。同様に、２種以上のコード領域は、それらが共通のプロモーターからの転写がインフレームで翻訳される２種以上のタンパク質の発現をもたらすように連結される場合に、作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、作動可能に連結されたコード配列は、融合タンパク質を生成する。いくつかの実施形態では、作動可能に連結されたコード配列は、機能的ＲＮＡ（例えば、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）をもたらす。
【０１９６】
タンパク質をコードする核酸について、ポリアデニル化配列が一般に、導入遺伝子配列の後、かつ３’ＡＡＶ  ＩＴＲ配列の前に挿入される。本発明で有用なｒＡＡＶ構築物は、好ましくはプロモーター／エンハンサー配列と導入遺伝子との間に位置する、イントロンも含有してよい。１つの可能なイントロン配列はＳＶ−４０由来であり、ＳＶ−４０Ｔイントロン配列と呼ばれる。
【０１９７】
使用できる別のベクター要素は、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）である。ＩＲＥＳ配列は、単一の遺伝子転写物から２種以上のポリペプチドを生成するために使用される。ＩＲＥＳ配列は、２種以上のポリペプチド鎖を含有するタンパク質を生成するために使用される。これらの及び他の共通のベクター要素の選択は、従来のものであり、多くのそのような配列が利用可能である（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、及び引用される参考文献を参照されたい）。このようなモチーフは、例えば、複数の遺伝子又はその一部が同じＡＡＶベクターから発現される場合に有用であり得る。
【０１９８】
宿主細胞における遺伝子発現に必要な調節配列の正確な性質は、種、組織又は細胞型の間で変化し得るが、一般に、必要に応じて、ＴＡＴＡボックス、キャッピング配列、ＣＡＡＴ配列、及びエンハンサーエレメントなどの転写並びに翻訳の開始に関与する５’非転写配列及び５’非翻訳配列を含む。特に、このような５’非転写調節配列は、作動可能に結合された遺伝子の転写制御のためのプロモーター配列を含むプロモーター領域を含む。調節配列はまた、所望に応じて、エンハンサー配列又は上流の活性化配列を含んでよい。ベクターは、必要に応じて５’リーダー配列又はシグナル配列を含んでよい。
【０１９９】
構成的プロモーターの例は、限定されないが、ニワトリベータアクチンプロモーター、レトロウイルスラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）ＬＴＲプロモーター（必要に応じて、ＲＳＶエンハンサーを有する）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター（必要に応じて、ＣＭＶエンハンサーを有する）、ＳＶ４０プロモーター、ジヒドロ葉酸還元酵素プロモーター、１３−アクチンプロモーター、ホスホグリセロールキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、及びＥＦ１ａプロモーター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含む。
【０２００】
誘導性プロモーターは、遺伝子発現の調節を可能にし、外から供給される化合物、温度などの環境因子、又は特定の生理的状態の存在、例えば、急性期、細胞の特定の分化状態により、又は複製する細胞中でのみ調節できる。誘導性プロモーター及び誘導システムは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ及びＡｒｉａｄを含むがこれらに限定されない、様々な商業的供給源から利用可能である。外から供給されるプロモーターによって調節される誘導性プロモーターの例は、亜鉛誘導性ヒツジメタロチオネイン（ＭＴ）プロモーター、デキサメタゾン（Ｄｅｘ）誘導性マウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、Ｔ７ポリメラーゼプロモーターシステム（ＷＯ  ９８／１００８８）、エクジソン型昆虫プロモーター（ＮＯら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９３：３３４６−３３５１  （１９９６））、テトラサイクリン耐性システム（Ｇｏｓｓｅｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：５５４７−５５５１（１９９２））、テトラサイクリン誘導システム（Ｇｏｓｓｅｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６８：１７６６−１７６９（１９９５））、ＲＵ４８６誘導システム（Ｗａｎｇら，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１５：２３９−２４３（１９９７）及びＷａｎｇら，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．４：４３２−４４１（１９９７）、並びにラパマイシン誘導システム（Ｍａｇａｒｉら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１００：２８６５−２８７２（１９９７））を含む。なお、この文脈において有用であり得る他の種類の誘導性プロモーターは、特定の生理的状態、例えば、温度、急性期、細胞の特定の分化状態によって、又は複製する細胞中でのみ調節されるものである。
【０２０１】
別の実施形態では、導入遺伝子のための天然プロモーター又はその断片が使用される。天然プロモーターは、導入遺伝子の発現が天然の発現を模倣することが望まれる場合に、好ましい場合がある。天然プロモーターは、導入遺伝子の発現が時間的若しくは発生的に、又は組織特異的に、又は特定の転写刺激に応答して調節されなければならない場合に使用されてよい。さらなる実施形態では、エンハンサー要素、ポリアデニル化部位又はｋｏｚａｋコンセンサス配列などの他の天然発現制御要素も、天然発現を模倣するために使用されてよい。
【０２０２】
いくつかの実施形態では、調節配列は、組織特異的遺伝子発現能力を付与する。場合によっては、組織特異的調節配列は、組織特異的な様式で転写を誘導する組織特異的転写因子を結合する。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、１以上のｍｉＲＮＡの１以上の結合部位が、導入遺伝子を保有する対象の１以上の組織における導入遺伝子の発現を阻害するためにｒＡＡＶベクターの導入遺伝子中に組み込まれる。ｍＲＮＡ中のｍｉＲＮＡ標的部位は、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ又はコーディング領域にあってよい。典型的には、標的部位は、ｍＲＮＡの３’ＵＴＲにある。さらに、複数のｍｉＲＮＡが同じ又は複数の部位を認識することによりｍＲＮＡを調節するように導入遺伝子を設計してよい。複数のｍｉＲＮＡ結合部位の存在は、複数のＲＩＳＣの協調作用をもたらし、非常に効率的な発現阻害を提供し得る。標的部位配列は、合計５〜１００、１０〜６０個、又はそれより多いヌクレオチドを含んでよい。標的部位配列は、標的遺伝子結合部位の配列の少なくとも５ヌクレオチドを含んでよい。
【０２０４】
例えば、肝臓での導入遺伝子の発現を阻害する３’ＵＴＲ部位を導入遺伝子に組み込むことができる。これは、投与されたウイルスの大部分（約６０〜９０％）が最終的に肝臓で見出されるので、肝臓に対し毒性である治療タンパク質をコードする導入遺伝子にとって有益である。そのため、肝臓での治療的遺伝子発現を抑制することにより、肝臓細胞からの負担が軽減される。
【０２０５】
いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、自己相補性ＡＡＶであるように改変される。自己相補性ＡＡＶは、導入遺伝子の相補的配列（すなわち、導入遺伝子の二重コピー）を担持する。自己相補性は、遺伝子が細胞に入った後に、遺伝子をより安定にする。
【０２０６】
導入遺伝子コード配列
本明細書に記載の導入遺伝子の核酸配列は、導入遺伝子を発現する特定の組成物（例えば、ウイルスベクター）の知識に基づいて設計されてよい。例えば、一種類の導入遺伝子配列は、発現の際に検出可能なシグナルを生成するレポーター配列を含む。別の例では、導入遺伝子は、治療用タンパク質又は治療的機能性ＲＮＡをコードする。別の例では、導入遺伝子は、例えば、導入遺伝子産物の機能を研究するために、例えば、導入遺伝子を保有する体細胞トランスジェニック動物モデルを作製する研究目的で使用されることが意図されるタンパク質又は機能性ＲＮＡをコードする。別の例では、導入遺伝子は、疾患の動物モデルを作製するために使用されることが意図されるタンパク質又は機能性ＲＮＡをコードする。適切な導入遺伝子コード配列は、当業者には明らかである。
【０２０７】
本発明の実施形態では、導入遺伝子は、ＴＫ２、ｄＧＫ、ｐ５３Ｒ２、ＴＰ、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１、ＰＯＬＧ１、及びミトコンドリア膜タンパク質ＭＰＶ１７を含むが、これらに限定されない機能性タンパク質をコードする。
【０２０８】
ヒトＴＫ２遺伝子（遺伝子ＩＤ：７０８４）を用いて、機能性ＴＫ２タンパク質をコードする導入遺伝子を得ることができる。ヒトＤＧＵＯＫ（遺伝子ＩＤ：１７１６）を使用して、機能性ｄＧＫタンパク質をコードする導入遺伝子を得ることができる。ヒトＴＹＭＰ遺伝子（遺伝子ＩＤ：１８９０）を使用して、機能性ＴＰタンパク質をコードする導入遺伝子を得ることができる。ヒトＲＲＭ２Ｂ遺伝子（遺伝子ＩＤ：５０５８４）を使用して、機能性ｐ５３Ｒ２タンパク質をコードする導入遺伝子を得ることができる。ヒトＳＵＣＬＡ２遺伝子（遺伝子ＩＤ：８８０３）を使用して、機能性ＳＵＣＬＡ２タンパク質をコードする導入遺伝子を得ることができる。ヒトＳＵＣＬＧ１遺伝子（遺伝子ＩＤ：８８０２）を使用して、機能性ＳＵＣＬＧ１タンパク質をコードする導入遺伝子を得ることができる。ヒトＰＯＬＧ遺伝子（遺伝子ＩＤ：５４２８）を使用して、機能性ＰＯＬＧ１タンパク質をコードする導入遺伝子を得ることができる。ヒトＭＰＶ１７遺伝子（遺伝子ＩＤ：４５３８）を使用して、機能性ミトコンドリア膜タンパク質ＭＰＶ１７をコードする導入遺伝子を得ることができる。
【０２０９】
導入遺伝子コード配列のコドン最適化
導入遺伝子コード配列のコドン最適化は、遺伝子治療の効率を高めることができる。そのため、いくつかの実施形態では、治療タンパク質をコードする導入遺伝子のコード配列と少なくとも７０％同一である核酸（例えば、核酸配列と７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である核酸配列）が使用される。
【０２１０】
コドン最適化ツールは、当技術分野において知られている。
【０２１１】
例示的なコドン最適化核酸は以下の通りである。
【０２１２】
例示的なコドン最適化ＴＫ２核酸（配列番号１７）：
ＡＴＧＧＧＡＧＣＡＴＴＴＴＧＣＣＡＧＣＧＡＣＣＴＡＧＴＴＣＣＧＡＴＡＡＡＧＡＡＣＡＧＧＡＧＡＡＡＧＡＧＡＡＧＡＡＧＡＧＣＧＴＣＡＴＣＴＧＴＧＴＧＧＡＡＧＧＴＡＡＣＡＴＣＧＣＴＡＧＴＧＧＣＡＡＡＡＣＧＡＣＣＴＧＴＴＴＧＧＡＡＴＴＴＴＴＣＴＣＴＡＡＴＧＣＣＡＣＣＧＡＴＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＴＴＡＣＡＧＡＧＣＣＴＧＴＴＡＧＴＡＡＡＴＧＧＣＧＡＡＡＴＧＴＴＣＧＡＧＧＡＣＡＴＡＡＴＣＣＧＣＴＧＧＧＡＣＴＧＡＴＧＴＡＴＣＡＣＧＡＴＧＣＣＴＣＣＡＧＡＴＧＧＧＧＡＣＴＧＡＣＣＣＴＴＣＡＧＡＣＴＴＡＴＧＴＣＣＡＡＣＴＴＡＣＡＡＴＧＣＴＴＧＡＣＡＧＧＣＡＣＡＣＴＡＧＡＣＣＧＣＡＧＧＴＴＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＧＧＣＴＧＡＴＧＧＡＧＣＧＣＴＣＡＡＴＴＣＡＣＴＣＴＧＣＣＡＧＧＴＡＴＡＴＡＴＴＣＧＴＴＧＡＧＡＡＣＣＴＣＴＡＣＣＧＡＴＣＴＧＧＴＡＡＧＡＴＧＣＣＴＧＡＧＧＴＡＧＡＴＴＡＣＧＴＡＧＴＧＣＴＧＡＧＴＧＡＡＴＧＧＴＴＴＧＡＣＴＧＧＡＴＴＣＴＴＣＧＣＡＡＣＡＴＧＧＡＴＧＴＡＴＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＣＡＴＴＧＴＴＴＡＣＣＴＴＡＧＧＡＣＴＡＡＣＣＣＧＧＡＧＡＣＧＴＧＴＴＡＴＣＡＧＣＧＣＴＴＧＡＡＡＡＡＧＣＧＣＴＧＣＣＧＧＧＡＡＧＡＧＧＡＡＡＡＡＧＴＧＡＴＴＣＣＴＣＴＧＧＡＡＴＡＣＴＴＧＧＡＡＧＣＴＡＴＴＣＡＴＣＡＣＣＴＴＣＡＣＧＡＡＧＡＧＴＧＧＣＴＧＡＴＡＡＡＡＧＧＴＴＣＣＣＴＧＴＴＴＣＣＣＡＴＧＧＣＧＧＣＣＣＣＣＧＴＧＣＴＴＧＴＣＡＴＡＧＡＡＧＣＧＧＡＴＣＡＣＣＡＣＡＴＧＧＡＡＡＧＧＡＴＧＣＴＣＧＡＡＣＴＴＴＴＣＧＡＧＣＡＡＡＡＴＣＧＡＧＡＣＣＧＧＡＴＴＣＴＣＡＣＧＣＣＧＧＡＧＡＡＴＣＧＡＡＡＡＣＡＴＴＧＣＣＣＡＴＡＧ
【０２１３】
例示的なコドン最適化ｄＧＫ核酸（配列番号１８）：
ＡＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＧＡＧＧＣＴＴＴＴＴＴＴＧＴＣＴＡＧＡＴＴＧＡＧＧＧＣＡＣＣＴＴＴＴＡＧＣＴＣＣＡＴＧＧＣＧＡＡＧＴＣＴＣＣＧＣＴＴＧＡＧＧＧＧＧＴＧＡＧＴＡＧＣＡＧＣＣＧＧＧＧＧＣＴＣＣＡＴＧＣＴＧＧＣＡＧＡＧＧＧＣＣＣＣＧＧＡＧＧＣＴＧＴＣＴＡＴＴＧＡＧＧＧＧＡＡＴＡＴＴＧＣＡＧＴＴＧＧＴＡＡＧＡＧＣＡＣＧＴＴＴＧＴＴＡＡＡＴＴＧＣＴＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＴＡＴＣＣＡＧＡＡＴＧＧＣＡＣＧＴＴＧＣＴＡＣＡＧＡＡＣＣＡＧＴＡＧＣＴＡＣＡＴＧＧＣＡＡＡＡＣＡＴＴＣＡＡＧＣＡＧＣＡＧＧＣＡＣＡＣＡＧＡＡＧＧＣＴＴＧＣＡＣＴＧＣＡＣＡＧＴＣＴＣＴＣＧＧＡＡＡＣＣＴＧＣＴＣＧＡＴＡＴＧＡＴＧＴＡＣＡＧＡＧＡＧＣＣＣＧＣＣＣＧＧＴＧＧＴＣＡＴＡＣＡＣＧＴＴＴＣＡＧＡＣＣＴＴＣＡＧＣＴＴＴＣＴＴＴＣＴＣＧＧＴＴＧＡＡＧＧＴＡＣＡＧＴＴＧＧＡＧＣＣＣＴＴＣＣＣＡＧＡＧＡＡＧＴＴＧＣＴＴＣＡＡＧＣＡＣＧＧＡＡＡＣＣＴＧＴＡＣＡＧＡＴＡＴＴＣＧＡＡＣＧＡＴＴＧＣＡＴＴＴＣＧＡＧＧＣＧＣＴＧＡＴＧＡＡＣＡＴＡＣＣＴＧＴＧＣＴＴＧＴＴＣＴＧＧＡＴＧＴＧＡＡＣＧＡＣＧＡＴＴＴＴＴＣＣＧＡＧＧＡＡＧＴＴＡＣＴＡＡＧＣＡＡＧＡＧＧＡＣＣＴＣＡＴＧＣＧＧＧＡＧＧＴＡＡＡＣＡＣＧＴＴＣＧＴＴＡＡＧＡＡＣＣＴＧＴＡＡ
【０２１４】
例示的なコドン最適化ＴＰ核酸（配列番号１９）：
ＡＴＧＧＣＡＧＣＡＴＴＧＡＴＧＡＣＡＣＣＡＧＧＡＡＣＧＧＧＧＧＣＴＣＣＧＣＣＴＧＣＧＣＣＴＧＧＣＧＡＴＴＴＴＴＣＡＧＧＡＧＡＧＧＧＧＡＧＴＣＡＡＧＧＴＣＴＧＣＣＧＧＡＣＣＣＴＴＣＡＣＣＧＧＡＡＣＣＣＡＡＡＣＡＧＣＴＴＣＣＣＧＡＧＣＴＴＡＴＴＡＧＡＡＴＧＡＡＧＣＧＡＧＡＴＧＧＧＧＧＴＣＧＣＣＴＣＴＣＴＧＡＧＧＣＴＧＡＣＡＴＡＣＧＣＧＧＣＴＴＴＧＴＴＧＣＧＧＣＧＧＴＣＧＴＣＡＡＣＧＧＣＴＣＡＧＣＡＣＡＡＧＧＴＧＣＧＣＡＡＡＴＡＧＧＡＧＣＧＡＴＧＣＴＧＡＴＧＧＣＴＡＴＣＡＧＧＣＴＧＡＧＧＧＧＡＡＴＧＧＡＴＴＴＧＧＡＡＧＡＧＡＣＣＡＧＴＧＴＧＣＴＧＡＣＴＣＡＡＧＣＧＣＴＧＧＣＡＣＡＧＡＧＣＧＧＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＡＡＴＧＧＣＣＡＧＡＡＧＣＴＴＧＧＣＧＣＣＡＡＣＡＡＴＴＧＧＴＣＧＡＴＡＡＡＣＡＣＴＣＡＡＣＣＧＧＧＧＧＣＧＴＣＧＧＧＧＡＣＡＡＡＧＴＣＴＣＣＣＴＴＧＴＡＣＴＧＧＣＡＣＣＴＧＣＴＣＴＧＧＣＴＧＣＧＴＧＣＧＧＡＴＧＴＡＡＧＧＴＴＣＣＴＡＴＧＡＴＴＡＧＣＧＧＧＣＧＧＧＧＣＴＴＧＧＧＡＣＡＴＡＣＧＧＧＡＧＧＡＡＣＧＴＴＧＧＡＣＡＡＡＣＴＣＧＡＡＴＣＣＡＴＣＣＣＴＧＧＴＴＴＣＡＡＣＧＴＧＡＴＴＣＡＧＡＧＣＣＣＴＧＡＡＣＡＡＡＴＧＣＡＡＧＴＡＣＴＣＣＴＧＧＡＴＣＡＧＧＣＡＧＧＣＴＧＣＴＧＴＡＴＴＧＴＴＧＧＣＣＡＡＡＧＣＧＡＡＣＡＡＣＴＣＧＴＧＣＣＴＧＣＧＧＡＴＧＧＴＡＴＣＣＴＣＴＡＴＧＣＴＧＣＣＡＧＧＧＡＴＧＴＧＡＣＣＧＣＣＡＣＡＧＴＴＧＡＣＴＣＣＣＴＣＣＣＧＣＴＧＡＴＡＡＣＡＧＣＧＴＣＡＡＴＴＴＴＧＡＧＴＡＡＧＡＡＧＣＴＣＧＴＣＧＡＡＧＧＧＣＴＣＡＧＣＧＣＴＣＴＴＧＴＧＧＴＴＧＡＴＧＴＡＡＡＡＴＴＴＧＧＧＧＧＧＧＣＣＧＣＡＧＴＡＴＴＣＣＣＣＡＡＣＣＡＧＧＡＡＣＡＡＧＣＡＣＧＧＧＡＡＣＴＧＧＣＡＡＡＡＡＣＣＣＴＧＧＴＴＧＧＴＧＴＧＧＧＣＧＣＴＴＣＡＣＴＧＧＧＣＣＴＧＡＧＡＧＴＴＧＣＣＧＣＴＧＣＣＴＴＧＡＣＣＧＣＣＡＴＧＧＡＴＡＡＧＣＣＧＣＴＣＧＧＴＡＧＧＴＧＣＧＴＡＧＧＴＣＡＴＧＣＡＣＴＴＧＡＡＧＴＡＧＡＡＧＡＡＧＣＣＣＴＴＴＴＧＴＧＣＡＴＧＧＡＴＧＧＧＧＣＣＧＧＴＣＣＣＣＣＴＧＡＣＴＴＧＣＧＧＧＡＴＣＴＣＧＴＡＡＣＣＡＣＧＣＴＴＧＧＣＧＧＣＧＣＧＴＴＧＣＴＴＴＧＧＣＴＴＴＣＴＧＧＡＣＡＣＧＣＴＧＧＴＡＣＣＣＡＡＧＣＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＧＣＡＡＧＡＧＴＣＧＣＡＧＣＡＧＣＧＣＴＴＧＡＴＧＡＣＧＧＡＴＣＡＧＣＴＣＴＴＧＧＧＣＧＡＴＴＴＧＡＡＡＧＡＡＴＧＣＴＴＧＣＡＧＣＴＣＡＧＧＧＣＧＴＡＧＡＴＣＣＡＧＧＧＣＴＧＧＣＧＣＧＧＧＣＣＣＴＴＴＧＣＴＣＡＧＧＴＴＣＴＣＣＡＧＣＡＧＡＧＣＧＣＣＧＡＣＡＧＣＴＣＣＴＴＣＣＣＡＧＧＧＣＧＣＧＡＧＡＧＣＡＧＧＡＡＧＡＡＴＴＧＣＴＧＧＣＣＣＣＧＧＣＴＧＡＴＧＧＴＡＣＣＧＴＣＧＡＡＣＴＣＧＴＡＣＧＧＧＣＴＴＴＧＣＣＧＣＴＧＧＣＴＣＴＴＧＴＴＴＴＧＣＡＣＧＡＡＣＴＧＧＧＧＧＣＴＧＧＧＣＧＧＡＧＴＣＧＣＧＣＣＧＧＴＧＡＡＣＣＴＣＴＣＡＧＡＣＴＣＧＧＴＧＴＧＧＧＴＧＣＧＧＡＧＣＴＣＣＴＣＧＴＴＧＡＣＧＴＣＧＧＧＣＡＡＣＧＡＣＴＴＣＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＣＣＣＴＴＧＧＣＴＴＡＧＧＧＴＡＣＡＣＡＧＧＧＡＣＧＧＧＣＣＡＧＣＡＣＴＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＣＡＧＴＣＣＡＧＧＧＣＣＣＴＴＣＡＡＧＡＡＧＣＴＣＴＣＧＴＧＣＴＧＡＧＴＧＡＴＣＧＡＧＣＧＣＣＴＴＴＴＧＣＣＧＣＴＣＣＣＴＣＡＣＣＡＴＴＴＧＣＴＧＡＡＴＴＧＧＴＡＴＴＧＣＣＡＣＣＣＣＡＧＣＡＧＴＡＡ
【０２１５】
例示的なコドン最適化ｐ５３Ｒ２核酸（配列番号２０）：
ＡＴＧＣＴＧＣＴＴＣＴＣＡＧＡＣＴＧＣＣＡＣＣＣＣＡＣＣＧＣＡＧＴＣＡＴＧＣＴＴＣＣＣＣＡＣＴＴＧＡＣＴＧＴＡＡＡＣＴＴＣＡＡＧＡＴＡＧＧＴＧＣＣＧＧＡＡＧＴＧＴＴＡＣＴＣＡＣＣＣＣＧＡＴＣＡＧＧＡＣＡＡＧＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＴＧＣＧＴＴＧＧＣＧＧＣＣＧＣＣＴＧＧＣＴＴＣＧＧＣＧＧＴＧＴＧＡＡＣＧＣＣＧＡＧＧＡＧＧＴＣＧＧＣＣＧＡＧＧＧＧＴＧＧＧＣＧＡＣＧＣＡＡＧＧＡＡＣＴＧＡＣＣＣＴＴＧＧＣＣＴＧＣＧＣＣＣＴＧＣＡＣＧＧＴＧＴＴＣＡＧＣＴＣＣＣＧＧＴＣＣＴＧＣＣＡＡＧＧＡＴＧＡＴＧＣＡＴＧＧＡＧＡＣＣＴＣＡＧＧＣＡＧＧＴＣＧＣＴＣＣＴＣＣＴＣＡＧＡＴＡＣＣＡＡＣＧＡＧＡＧＴＧＡＡＡＴＴＡＡＡＴＣＴＡＡＴＧＡＡＧＡＡＣＣＣＣＴＴＣＴＴＣＧＣＡＡＧＡＧＴＡＧＴＣＧＣＡＧＧＴＴＣＧＴＧＡＴＡＴＴＣＣＣＣＡＴＡＣＡＡＴＡＴＣＣＴＧＡＴＡＴＣＴＧＧＡＡＡＡＴＧＴＡＣＡＡＧＣＡＡＧＣＣＣＡＡＧＣＡＴＣＡＴＴＣＴＧＧＡＣＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＧＴＴＧＡＴＣＴＣＡＧＴＡＡＧＧＡＣＣＴＣＣＣＡＣＡＣＴＧＧＡＡＣＡＡＡＣＴＧＡＡＡＧＣＣＧＡＣＧＡＡＡＡＡＴＡＴＴＴＣＡＴＡＴＣＣＣＡＴＡＴＡＣＴＴＧＣＴＴＴＣＴＴＴＧＣＡＧＣＣＴＣＡＧＡＴＧＧＡＡＴＴＧＴＧＡＡＴＧＡＡＡＡＣＴＴＧＧＴＡＧＡＧＣＧＣＴＴＣＴＣＴＣＡＡＧＡＧＧＴＣＣＡＡＧＴＴＣＣＴＧＡＡＧＣＡＣＧＡＴＧＣＴＴＴＴＡＣＧＧＡＴＴＴＣＡＡＡＴＣＣＴＧＡＴＡＧＡＡＡＡＴＧＴＡＣＡＴＴＣＣＧＡＡＡＴＧＴＡＴＴＣＣＴＴＧＣＴＴＡＴＡＧＡＣＡＣＧＴＡＴＡＴＣＡＧＡＧＡＴＣＣＣＡＡＡＡＡＡＡＧＧＧＡＧＴＴＣＴＴＧＴＴＣＡＡＴＧＣＧＡＴＣＧＡＧＡＣＣＡＴＧＣＣＡＴＡＴＧＴＴＡＡＧＡＡＡＡＡＡＧＣＣＧＡＴＴＧＧＧＣＣＣＴＧＡＧＧＴＧＧＡＴＡＧＣＴＧＡＴＡＧＧＡＡＧＴＣＴＡＣＡＴＴＴＧＧＧＧＡＡＣＧＣＧＴＴＧＴＴＧＣＣＴＴＣＧＣＣＧＣＣＧＴＣＧＡＧＧＧＡＧＴＣＴＴＣＴＴＣＴＣＣＧＧＡＴＣＣＴＴＣＧＣＴＧＣＴＡＴＣＴＴＴＴＧＧＣＴＧＡＡＡＡＡＡＣＧＣＧＧＣＴＴＧＡＴＧＣＣＴＧＧＴＴＴＧＡＣＣＴＴＴＡＧＣＡＡＴＧＡＧＴＴＧＡＴＡＴＣＡＣＧＧＧＡＴＧＡＡＧＧＧＣＴＧＣＡＴＴＧＴＧＡＣＴＴＴＧＣＣＴＧＣＣＴＴＡＴＧＴＴＣＣＡＧＴＡＣＴＴＧＧＴＧＡＡＣＡＡＡＣＣＧＴＣＴＧＡＧＧＡＡＣＧＧＧＴＡＡＧＧＧＡＡＡＴＣＡＴＡＧＴＧＧＡＴＧＣＡＧＴＡＡＡＡＡＴＡＧＡＧＣＡＧＧＡＧＴＴＣＣＴＴＡＣＴＧＡＡＧＣＧＣＴＣＣＣＣＧＴＡＧＧＧＣＴＣＡＴＴＧＧＣＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＴＴＣＴＴＡＴＧＡＡＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＧＡＧＴＴＣＧＴＧＧＣＣＧＡＴＡＧＡＣＴＴＴＴＧＧＴＧＧＡＧＣＴＣＧＧＧＴＴＣＴＣＡＡＡＧＧＴＴＴＴＴＣＡＧＧＣＴＧＡＡＡＡＴＣＣＴＴＴＴＧＡＴＴＴＴＡＴＧＧＡＧＡＡＣＡＴＡＴＣＴＣＴＧＧＡＧＧＧＣＡＡＧＡＣＴＡＡＣＴＴＴＴＴＴＧＡＡＡＡＡＡＧＡＧＴＡＴＣＣＧＡＧＴＡＴＣＡＡＡＧＧＴＴＴＧＣＣＧＴＧＡＴＧＧＣＡＧＡＡＡＣＡＡＣＡＧＡＴＡＡＴＧＴＣＴＴＣＡＣＡＣＴＴＧＡＴＧＣＧＧＡＴＴＴＴＴＡＡ
【０２１６】
例示的なコドン最適化ＳＵＣＬＡ２核酸（配列番号２１）：
ＡＴＧＧＣＧＧＣＴＴＣＴＡＴＧＴＴＣＴＡＴＧＧＡＣＧＣＣＴＧＧＴＣＧＣＣＧＴＴＧＣＣＡＣＧＴＴＧＣＧＧＡＡＴＣＡＣＡＧＧＣＣＣＣＧＡＡＣＴＧＣＡＣＡＡＡＧＧＧＣＴＧＣＣＧＣＴＣＡＧＧＴＧＣＴＴＧＧＡＡＧＣＡＧＣＧＧＡＴＴＧＴＴＣＡＡＣＡＡＴＣＡＣＧＧＣＣＴＣＣＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＡＣＡＧＣＡＧＣＡＧＡＧＡＡＡＣＣＴＣＴＣＴＣＴＧＣＡＴＧＡＧＴＡＴＡＴＧＡＧＴＡＴＧＧＡＡＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＡＡＧＣＡＧＧＧＧＴＧＴＣＴＧＴＡＣＣＡＡＡＧＧＧＣＴＡＣＧＴＡＧＣＡＡＡＡＡＧＣＣＣＣＧＡＣＧＡＧＧＣＧＴＡＣＧＣＣＡＴＡＧＣＴＡＡＡＡＡＡＣＴＧＧＧＡＡＧＴＡＡＧＧＡＣＧＴＡＧＴＴＡＴＣＡＡＡＧＣＡＣＡＧＧＴＴＣＴＧＧＣＣＧＧＴＧＧＣＣＧＣＧＧＴＡＡＧＧＧＡＡＣＣＴＴＣＧＡＧＡＧＴＧＧＴＴＴＧＡＡＡＧＧＣＧＧＴＧＴＣＡＡＧＡＴＣＧＴＡＴＴＴＡＧＴＣＣＣＧＡＧＧＡＧＧＣＣＡＡＧＧＣＴＧＴＡＡＧＴＴＣＣＣＡＧＡＴＧＡＴＣＧＧＣＡＡＡＡＡＡＴＴＧＴＴＣＡＣＡＡＡＧＣＡＡＡＣＣＧＧＣＧＡＡＡＡＧＧＧＴＡＧＡＡＴＴＴＧＣＡＡＣＣＡＡＧＴＡＣＴＴＧＴＣＴＧＣＧＡＡＡＧＡＡＡＧＴＡＴＣＣＧＡＧＡＡＧＧＧＡＧＴＡＴＴＡＴＴＴＣＧＣＴＡＴＡＡＣＣＡＴＧＧＡＡＡＧＡＴＣＡＴＴＣＣＡＡＧＧＴＣＣＣＧＴＧＣＴＣＡＴＣＧＧＣＡＧＴＴＣＡＣＡＣＧＧＧＧＧＣＧＴＴＡＡＴＡＴＡＧＡＧＧＡＴＧＴＣＧＣＴＧＣＡＧＡＧＴＣＴＣＣＧＧＡＧＧＣＣＡＴＡＡＴＴＡＡＧＧＡＧＣＣＴＡＴＡＧＡＣＡＴＣＧＡＧＧＡＡＧＧＣＡＴＴＡＡＡＡＡＡＧＡＡＣＡＡＧＣＣＴＴＧＣＡＡＣＴＧＧＣＡＣＡＡＡＡＡＡＴＧＧＧＴＴＴＴＣＣＴＣＣＧＡＡＣＡＴＣＧＴＣＧＡＧＡＧＴＧＣＣＧＣＡＧＡＡＡＡＴＡＴＧＧＴＧＡＡＡＣＴＧＴＡＣＡＧＣＣＴＧＴＴＴＴＴＧＡＡＧＴＡＣＧＡＴＧＣＧＡＣＡＡＴＧＡＴＡＧＡＡＡＴＴＡＡＴＣＣＧＡＴＧＧＴＣＧＡＧＧＡＣＴＣＡＧＡＴＧＧＡＧＣＣＧＴＧＣＴＴＴＧＴＡＴＧＧＡＣＧＣＣＡＡＡＡＴＴＡＡＣＴＴＣＧＡＴＴＣＡＡＡＣＡＧＣＧＣＴＴＡＴＣＧＡＣＡＧＡＡＧＡＡＡＡＴＴＴＴＣＧＡＴＴＴＧＣＡＡＧＡＴＴＧＧＡＣＣＣＡＡＧＡＧＧＡＴＧＡＧＣＧＡＧＡＣＡＡＡＧＡＴＧＣＣＧＣＣＡＡＡＧＣＡＡＡＴＣＴＣＡＡＴＴＡＴＡＴＡＧＧＡＣＴＣＧＡＴＧＧＴＡＡＴＡＴＴＧＧＡＴＧＴＴＴＧＧＴＣＡＡＴＧＧＴＧＣＣＧＧＴＣＴＣＧＣＧＡＴＧＧＣＡＡＣＴＡＴＧＧＡＴＡＴＡＡＴＣＡＡＧＴＴＧＣＡＴＧＧＴＧＧＧＡＣＴＣＣＣＧＣＣＡＡＣＴＴＴＣＴＴＧＡＣＧＴＣＧＧＧＧＧＡＧＧＣＧＣＣＡＣＣＧＴＴＣＡＣＣＡＡＧＴＴＡＣＧＧＡＧＧＣＴＴＴＣＡＡＡＣＴＣＡＴＡＡＣＣＴＣＴＧＡＣＡＡＧＡＡＧＧＴＧＣＴＧＧＣＧＡＴＴＣＴＴＧＴＡＡＡＴＡＴＣＴＴＴＧＧＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧＣＧＧＴＧＴＧＡＴＧＴＴＡＴＴＧＣＣＣＡＧＧＧＡＡＴＡＧＴＡＡＴＧＧＣＴＧＴＣＡＡＡＧＡＴＴＴＧＧＡＧＡＴＴＡＡＡＡＴＡＣＣＣＧＴＣＧＴＧＧＴＧＣＧＧＣＴＣＣＡＡＧＧＴＡＣＴＣＧＡＧＴＡＧＡＴＧＡＴＧＣＴＡＡＧＧＣＴＣＴＧＡＴＴＧＣＣＧＡＣＡＧＣＧＧＧＣＴＧＡＡＧＡＴＴＣＴＧＧＣＡＴＧＴＧＡＴＧＡＴＴＴＧＧＡＣＧＡＧＧＣＡＧＣＧＡＧＡＡＴＧＧＴＣＧＴＧＡＡＧＣＴＣＴＣＡＧＡＡＡＴＡＧＴＡＡＣＴＴＴＧＧＣＧＡＡＡＣＡＧＧＣＴＣＡＴＧＴＣＧＡＴＧＴＡＡＡＧＴＴＣＣＡＡＣＴＴＣＣＴＡＴＡＴＧＡ
【０２１７】
例示的なコドン最適化ＳＵＣＬＧ１核酸（配列番号２２）：
ＡＴＧＡＣＣＧＣＴＡＣＧＣＴＴＧＣＧＧＣＴＧＣＡＧＣＣＧＡＣＡＴＣＧＣＧＡＣＡＡＴＧＧＴＣＴＣＴＧＧＡＡＧＴＴＣＡＧＧＣＴＴＧＧＣＣＧＣＧＧＣＴＣＧＧＣＴＴＣＴＧＡＧＴＡＧＡＡＧＴＴＴＣＴＴＧＴＴＧＣＣＧＣＡＡＡＡＣＧＧＴＡＴＣＡＧＧＣＡＣＴＧＣＴＣＣＴＡＣＡＣＣＧＣＣＡＧＴＡＧＡＣＡＡＣＡＣＣＴＴＴＡＴＧＴＴＧＡＴＡＡＧＡＡＣＡＣＧＡＡＧＡＴＡＡＴＴＴＧＣＣＡＡＧＧＡＴＴＣＡＣＣＧＧＴＡＡＡＣＡＧＧＧＧＡＣＣＴＴＣＣＡＴＴＣＣＣＡＧＣＡＧＧＣＡＣＴＧＧＡＡＴＡＴＧＧＡＡＣＴＡＡＡＴＴＧＧＴＡＧＧＣＧＧＣＡＣＴＡＣＧＣＣＴＧＧＧＡＡＧＧＧＴＧＧＣＣＡＡＡＣＡＣＡＴＣＴＴＧＧＴＣＴＴＣＣＣＧＴＴＴＴＴＡＡＣＡＣＡＧＴＧＡＡＧＧＡＧＧＣＴＡＡＡＧＡＡＣＡＡＡＣＧＧＧＧＧＣＡＡＣＧＧＣＴＡＧＣＧＴＴＡＴＣＴＡＴＧＴＣＣＣＡＣＣＣＣＣＧＴＴＴＧＣＣＧＣＴＧＣＡＧＣＣＡＴＡＡＡＴＧＡＧＧＣＧＡＴＴＧＡＡＧＣＣＧＡＧＡＴＣＣＣＧＣＴＴＧＴＡＧＴＣＴＧＣＡＴＡＡＣＧＧＡＧＧＧＡＡＴＴＣＣＧＣＡＡＣＡＡＧＡＣＡＴＧＧＴＧＣＧＡＧＴＡＡＡＧＣＡＣＡＡＧＣＴＴＣＴＴＣＧＡＣＡＧＧＡＡＡＡＡＡＣＡＡＧＡＣＴＧＡＴＡＧＧＴＣＣＧＡＡＴＴＧＴＣＣＴＧＧＣＧＴＡＡＴＴＡＡＣＣＣＣＧＧＴＧＡＡＴＧＣＡＡＡＡＴＣＧＧＡＡＴＴＡＴＧＣＣＧＧＧＡＣＡＴＡＴＴＣＡＣＡＡＡＡＡＡＧＧＣＣＧＡＡＴＣＧＧＧＡＴＡＧＴＣＡＧＣＡＧＡＴＣＡＧＧＣＡＣＣＴＴＧＡＣＡＴＡＣＧＡＡＧＣＧＧＴＴＣＡＣＣＡＧＡＣＴＡＣＧＣＡＡＧＴＣＧＧＴＴＴＧＧＧＡＣＡＡＡＧＣＣＴＴＴＧＣＧＴＣＧＧＴＡＴＣＧＧＴＧＧＣＧＡＣＣＣＡＴＴＴＡＡＣＧＧＧＡＣＧＧＡＴＴＴＣＡＴＴＧＡＣＴＧＴＣＴＧＧＡＧＡＴＣＴＴＣＣＴＣＡＡＣＧＡＴＴＣＣＧＣＧＡＣＡＧＡＡＧＧＡＡＴＣＡＴＴＴＴＧＡＴＡＧＧＡＧＡＡＡＴＡＧＧＣＧＧＧＡＡＣＧＣＣＧＡＡＧＡＧＡＡＴＧＣＡＧＣＧＧＡＡＴＴＣＣＴＣＡＡＡＣＡＡＣＡＴＡＡＣＴＣＴＧＧＣＣＣＴＡＡＴＡＧＴＡＡＧＣＣＧＧＴＧＧＴＡＴＣＡＴＴＣＡＴＡＧＣＣＧＧＴＣＴＴＡＣＡＧＣＧＣＣＧＣＣＧＧＧＴＣＧＣＡＧＡＡＴＧＧＧＣＣＡＣＧＣＡＧＧＴＧＣＡＡＴＴＡＴＡＧＣＧＧＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＡＧＧＴＧＣＣＡＡＡＧＡＡＡＡＧＡＴＡＴＣＣＧＣＴＣＴＴＣＡＡＡＧＣＧＣＡＧＧＴＧＴＡＧＴＡＧＴＴＡＧＴＡＴＧＡＧＴＣＣＡＧＣＴＣＡＡＣＴＧＧＧＣＡＣＡＡＣＣＡＴＣＴＡＣＡＡＡＧＡＡＴＴＴＧＡＡＡＡＧＣＧＧＡＡＡＡＴＧＣＴＴＴＧＡ
【０２１８】
例示的なコドン最適化ＭＰＶ１７核酸（配列番号２３）：
ＡＴＧＧＣＣＣＴＣＴＧＧＡＧＡＧＣＴＴＡＣＣＡＡＣＧＡＧＣＣＴＴＧＧＣＣＧＣＧＣＡＣＣＣＴＴＧＧＡＡＧＧＴＡＣＡＧＧＴＣＴＴＧＡＣＣＧＣＣＧＧＡＴＣＴＴＴＧＡＴＧＧＧＴＣＴＴＧＧＡＧＡＴＡＴＴＡＴＴＴＣＴＣＡＡＣＡＧＴＴＧＧＴＴＧＡＡＣＧＧＣＧＡＧＧＣＣＴＣＣＡＧＧＡＡＣＡＣＣＡＡＡＧＧＧＧＧＡＧＡＡＣＣＣＴＴＡＣＡＡＴＧＧＴＡＡＧＴＣＴＧＧＧＴＴＧＣＧＧＡＴＴＣＧＴＣＧＧＧＣＣＴＧＴＣＧＴＧＧＧＧＧＧＡＴＧＧＴＡＴＡＡＧＧＴＴＣＴＧＧＡＴＣＧＣＴＴＴＡＴＡＣＣＧＧＧＧＡＣＣＡＣＣＡＡＧＧＴＣＧＡＴＧＣＣＴＴＧＡＡＧＡＡＧＡＴＧＴＴＧＣＴＧＧＡＴＣＡＧＧＧＡＧＧＡＴＴＣＧＣＴＣＣＧＴＧＴＴＴＴＴＴＧＧＧＡＴＧＴＴＴＴＣＴＧＣＣＡＣＴＴＧＴＴＧＧＧＧＣＴＣＴＧＡＡＣＧＧＡＣＴＧＴＣＣＧＣＧＣＡＧＧＡＴＡＡＣＴＧＧＧＣＧＡＡＧＴＴＧＣＡＡＣＧＣＧＡＣＴＡＣＣＣＡＧＡＣＧＣＣＣＴＧＡＴＡＡＣＡＡＡＴＴＡＣＴＡＴＣＴＣＴＧＧＣＣＡＧＣＡＧＴＴＣＡＧＴＴＧＧＣＣＡＡＴＴＴＴＴＡＣＣＴＧＧＴＡＣＣＴＣＴＣＣＡＣＴＡＴＣＧＣＣＴＴＧＣＴＧＴＡＧＴＡＣＡＧＴＧＴＧＴＣＧＣＣＧＴＣＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＣＡＴＡＣＣＴＴＴＣＡＴＧＧＡＡＧＧＣＴＣＡＴＡＧＡＴＴＧＴＡＡ
【０２１９】
例示的なコドン最適化ＰＯＬＧ核酸（配列番号２４）：
ＡＴＧＴＣＣＡＧＧＣＴＧＣＴＣＴＧＧＣＧＧＡＡＧＧＴＣＧＣＡＧＧＣＧＣＣＡＣＴＧＴＣＧＧＴＣＣＡＧＧＡＣＣＡＧＴＴＣＣＡＧＣＴＣＣＣＧＧＴＣＧＣＴＧＧＧＴＧＡＧＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＣＣＡＧＣＴＡＧＣＧＡＴＣＣＧＡＧＣＧＡＣＧＧＴＣＡＧＣＧＧＣＧＡＣＧＧＣＡＡＣＡＡＣＡＧＣＡＧＣＡＡＣＡＧＣＡＡＣＡＡＣＡＧＣＡＡＣＡＡＣＡＡＣＡＧＣＣＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＣＡＧＧＴＴＣＴＣＡＧＴＴＣＣＧＡＧＧＧＴＧＧＣＣＡＡＣＴＣＣＧＡＣＡＣＡＡＣＣＣＡＣＴＧＧＡＴＡＴＡＣＡＧＡＴＧＣＴＣＴＣＣＣＧＣＧＧＴＣＴＣＣＡＣＧＡＡＣＡＡＡＴＡＴＴＣＧＧＡＣＡＡＧＧＧＧＧＴＧＡＧＡＴＧＣＣＧＧＧＡＧＡＧＧＣＴＧＣＧＧＴＣＡＧＧＣＧＣＡＧＴＧＴＡＧＡＡＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＡＡＣＡＣＧＧＧＴＴＧＴＧＧＧＧＣＣＡＡＣＣＧＧＣＣＧＴＴＣＣＴＣＴＣＣＣＣＧＡＴＧＴＴＧＡＡＣＴＧＣＧＧＣＴＴＣＣＡＣＣＴＣＴＣＴＡＣＧＧＴＧＡＴＡＡＴＣＴＧＧＡＣＣＡＧＣＡＣＴＴＴＡＧＡＣＴＧＣＴＣＧＣＴＣＡＡＡＡＧＣＡＧＡＧＴＣＴＣＣＣＴＴＡＣＣＴＧＧＡＡＧＣＣＧＣＴＡＡＣＣＴＣＣＴＧＣＴＣＣＡＡＧＣＣＣＡＡＴＴＧＣＣＣＣＣＴＡＡＡＣＣＧＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＣＴＴＧＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＴＧＧＡＣＧＡＧＧＴＡＴＧＧＡＣＣＣＧＡＡＧＧＧＧＡＧＧＣＴＧＴＧＣＣＡＧＴＴＧＣＴＡＴＡＣＣＡＧＡＧＧＡＡＣＧＣＧＣＴＣＴＧＧＴＴＴＴＣＧＡＣＧＴＡＧＡＧＧＴＴＴＧＴＣＴＣＧＣＧＧＡＧＧＧＡＡＣＴＴＧＴＣＣＴＡＣＡＣＴＧＧＣＴＧＴＡＧＣＡＡＴＴＴＣＣＣＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＧＴＡＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＴＣＴＣＡＧＡＧＡＴＴＧＧＴＧＧＡＡＧＡＡＡＧＧＴＡＴＡＧＣＴＧＧＡＣＴＡＧＣＣＡＧＣＴＧＡＧＴＣＣＣＧＣＧＧＡＣＣＴＣＡＴＴＣＣＡＣＴＴＧＡＧＧＴＡＣＣＣＡＣＣＧＧＧＧＣＧＴＣＡＡＧＣＣＣＡＡＣＴＣＡＧＡＧＧＧＡＣＴＧＧＣＡＧＧＡＡＣＡＡＴＴＧＧＴＡＧＴＴＧＧＧＣＡＴＡＡＴＧＴＧＡＧＴＴＴＴＧＡＣＡＧＧＧＣＴＣＡＴＡＴＣＣＧＣＧＡＡＣＡＧＴＡＴＣＴＴＡＴＣＣＡＧＧＧＣＴＣＴＡＧＡＡＴＧＣＧＡＴＴＣＣＴＴＧＡＣＡＣＧＡＴＧＡＧＣＡＴＧＣＡＣＡＴＧＧＣＡＡＴＣＡＧＣＧＧＡＣＴＴＡＧＴＴＣＣＴＴＴＣＡＧＡＧＧＴＣＡＴＴＧＴＧＧＡＴＴＧＣＡＧＣＣＡＡＧＣＡＧＧＧＡＡＡＧＣＡＴＡＡＧＧＴＣＣＡＡＣＣＣＣＣＧＡＣＡＡＡＡＣＡＡＧＧＴＣＡＧＡＡＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＡＡＡＧＣＣＣＧＧＣＧＡＧＧＣＣＣＣＧＣＣＡＴＣＡＧＴＴＣＣＴＧＧＧＡＴＴＧＧＴＴＧＧＡＴＡＴＣＡＧＴＡＧＴＧＴＧＡＡＴＡＧＣＣＴＴＧＣＴＧＡＧＧＴＧＣＡＴＣＧＣＣＴＧＴＡＴＧＴＧＧＧＴＧＧＡＣＣＣＣＣＡＣＴＴＧＡＧＡＡＡＧＡＧＣＣＴＡＧＧＧＡＧＣＴＣＴＴＣＧＴＣＡＡＡＧＧＣＡＣＣＡＴＧＡＡＧＧＡＴＡＴＴＡＧＡＧＡＧＡＡＴＴＴＴＣＡＡＧＡＴＣＴＣＡＴＧＣＡＡＴＡＣＴＧＣＧＣＡＣＡＡＧＡＣＧＴＡＴＧＧＧＣＡＡＣＧＣＡＴＧＡＧＧＴＣＴＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＡＣＴＣＣＣＣＣＴＣＴＴＴＴＴＧＧＡＡＣＧＡＴＧＴＣＣＡＣＡＴＣＣＣＧＴＣＡＣＴＣＴＴＧＣＴＧＧＧＡＴＧＴＴＧＧＡＡＡＴＧＧＧＴＧＴＡＡＧＴＴＡＴＴＴＧＣＣＡＧＴＣＡＡＴＣＡＡＡＡＴＴＧＧＧＡＧＡＧＡＴＡＣＴＴＧＧＣＴＧＡＡＧＣＧＣＡＧＧＧＴＡＣＡＴＡＴＧＡＧＧＡＡＣＴＴＣＡＧＣＧＡＧＡＡＡＴＧＡＡＡＡＡＡＡＧＴＣＴＴＡＴＧＧＡＴＴＴＧＧＣＣＡＡＴＧＡＣＧＣＣＴＧＣＣＡＧＣＴＧＣＴＴＴＣＣＧＧＴＧＡＧＣＧＧＴＡＣＡＡＡＧＡＡＧＡＴＣＣＡＴＧＧＣＴＴＴＧＧＧＡＴＣＴＣＧＡＡＴＧＧＧＡＴＴＴＧＣＡＧＧＡＡＴＴＴＡＡＡＣＡＧＡＡＡＡＡＧＧＣＣＡＡＧＡＡＧＧＴＣＡＡＧＡＡＡＧＡＧＣＣＡＧＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＡＡＧＣＴＣＣＣＴＡＴＡＧＡＧＧＧＡＧＣＧＧＧＡＧＣＡＣＣＧＧＧＴＧＡＴＣＣＧＡＴＧＧＡＴＣＡＡＧＡＧＧＡＴＴＴＧＧＧＡＣＣＴＴＧＣＴＣＣＧＡＡＧＡＧＧＡＧＧＡＡＴＴＣＣＡＡＣＡＡＧＡＴＧＴＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＧＣＣＴＧＣＣＴＧＣＡＡＡＡＧＣＴＣＡＡＡＧＧＧＡＣＡＡＣＡＧＡＡＣＴＣＴＴＧＣＣＣＡＡＧＡＧＧＣＣＴＣＡＡＣＡＴＣＴＧＣＣＣＧＧＣＣＡＴＣＣＡＧＧＴＴＧＧＴＡＴＣＧＣＡＡＡＣＴＣＴＧＴＣＣＡＡＧＧＣＴＧＧＡＣＧＡＴＣＣＣＧＣＣＴＧＧＡＣＣＣＣＧＧＧＧＣＣＣＴＣＣＣＴＴＣＴＧＡＧＴＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＧＡＧＴＧＡＣＡＣＣＴＡＡＧＣＴＧＡＴＧＧＣＡＣＴＴＡＣＴＴＧＧＧＡＴＧＧＧＴＴＣＣＣＴＣＴＴＣＡＣＴＡＴＴＣＡＧＡＧＡＧＡＣＡＣＧＧＧＴＧＧＧＧＡＴＡＴＣＴＴＧＴＣＣＣＡＧＧＴＣＧＡＡＧＧＧＡＣＡＡＴＣＴＧＧＣＧＡＡＧＣＴＴＣＣＣＡＣＡＧＧＡＡＣＴＡＣＣＴＴＧＧＡＧＡＧＴＧＣＧＧＧＣＧＴＡＧＴＡＴＧＴＣＣＴＴＡＴＣＧＡＧＣＣＡＴＡＧＡＡＡＧＴＣＴＧＴＡＴＡＧＡＡＡＧＣＡＴＴＧＣＣＴＴＧＡＡＣＡＡＧＧＣＡＡＡＣＡＡＣＡＡＣＴＣＡＴＧＣＣＴＣＡＧＧＡＡＧＣＣＧＧＣＣＴＣＧＣＴＧＡＡＧＡＡＴＴＴＣＴＴＣＴＴＡＣＴＧＡＴＡＡＣＴＣＴＧＣＴＡＴＣＴＧＧＣＡＡＡＣＡＧＴＧＧＡＧＧＡＡＣＴＧＧＡＴＴＡＣＣＴＣＧＡＡＧＴＣＧＡＧＧＣＣＧＡＡＧＣＧＡＡＧＡＴＧＧＡＡＡＡＴＴＴＧＣＧＧＧＣＧＧＣＧＧＴＣＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＣＣＴＴＧＣＴＴＴＧＡＣＡＧＣＡＣＧＧＧＧＧＧＧＣＣＣＴＡＡＧＧＡＴＡＣＣＣＡＧＣＣＣＡＧＣＴＡＴＣＡＴＣＡＣＧＧＧＡＡＣＧＧＴＣＣＡＴＡＴＡＡＴＧＡＴＧＴＴＧＡＴＡＴＡＣＣＴＧＧＴＴＧＴＴＧＧＴＴＴＴＴＴＡＡＡＣＴＴＣＣＴＣＡＴＡＡＡＧＡＴＧＧＣＡＡＴＴＣＡＴＧＴＡＡＣＧＴＴＧＧＡＴＣＣＣＣＡＴＴＣＧＣＡＡＡＧＧＡＣＴＴＣＣＴＣＣＣＣＡＡＡＡＴＧＧＡＧＧＡＴＧＧＧＡＣＧＴＴＧＣＡＡＧＣＡＧＧＴＣＣＣＧＧＴＧＧＡＧＣＴＴＣＴＧＧＧＣＣＧＣＧＡＧＣＣＣＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＴＡＡＧＡＴＧＡＴＴＡＧＣＴＴＣＴＧＧＡＧＧＡＡＴＧＣＡＣＡＣＡＡＧＣＧＣＡＴＴＴＣＴＴＣＡＣＡＧＡＴＧＧＴＡＧＴＧＴＧＧＣＴＧＣＣＴＣＧＧＡＧＴＧＣＴＴＴＧＣＣＣＡＧＧＧＣＴＧＴＧＡＴＣＡＧＡＣＡＣＣＣＣＧＡＴＴＡＴＧＡＴＧＡＡＧＡＧＧＧＡＣＴＧＴＡＣＧＧＧＧＣＡＡＴＡＴＴＧＣＣＣＣＡＧＧＴＧＧＴＴＡＣＧＧＣＴＧＧＴＡＣＴＡＴＴＡＣＣＣＧＣＣＧＧＧＣＡＧＴＴＧＡＧＣＣＧＡＣＣＴＧＧＣＴＧＡＣＡＧＣＡＴＣＴＡＡＴＧＣＣＡＧＧＣＣＴＧＡＴＣＧＣＧＴＧＧＧＴＴＣＴＧＡＡＣＴＴＡＡＡＧＣＡＡＴＧＧＴＣＣＡＡＧＣＴＣＣＧＣＣＴＧＧＡＴＡＣＡＣＧＣＴＴＧＴＣＧＧＣＧＣＧＧＡＣＧＴＧＧＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＡＣＴＴＴＧＧＡＴＡＧＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＴＧＧＣＧＡＴＧＣＡＣＡＴＴＴＴＧＣＡＧＧＧＡＴＧＣＡＣＧＧＧＴＧＣＡＣＧＧＣＴＴＴＴＧＧＣＴＧＧＡＴＧＡＣＡＣＴＴＣＡＧＧＧＧＡＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＧＧＧＧＡＣＣＧＡＣＣＴＧＣＡＣＴＣＣＡＡＧＡＣＣＧＣＧＡＣＡＡＣＧＧＴＡＧＧＡＡＴＣＴＣＡＡＧＧＧＡＡＣＡＣＧＣＴＡＡＡＡＴＴＴＴＣＡＡＴＴＡＴＧＧＧＡＧＡＡＴＡＴＡＴＧＧＴＧＣＣＧＧＴＣＡＡＣＣＧＴＴＣＧＣＴＧＡＧＣＧＣＣＴＴＣＴＧＡＴＧＣＡＧＴＴＴＡＡＣＣＡＴＡＧＧＣＴＧＡＣＡＣＡＧＣＡＧＧＡＧＧＣＡＧＣＧＧＡＧＡＡＧＧＣＧＣＡＧＣＡＧＡＴＧＴＡＣＧＣＣＧＣＡＡＣＴＡＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧＡＴＧＧＴＡＴＣＧＣＣＴＣＴＣＡＧＡＣＧＡＧＧＧＣＧＡＧＴＧＧＣＴＴＧＴＣＣＧＧＧＡＡＴＴＧＡＡＣＣＴＣＣＣＧＧＴＣＧＡＴＣＧＧＡＣＧＧＡＡＧＧＴＧＧＴＴＧＧＡＴＴＡＧＴＣＴＴＣＡＧＧＡＴＣＴＣＡＧＡＡＡＧＧＴＧＣＡＧＣＧＧＧＡＡＡＣＡＧＣＡＣＧＣＡＡＧＴＣＴＣＡＧＴＧＧＡＡＧＡＡＡＴＧＧＧＡＧＧＴＧＧＴＣＧＣＣＧＡＧＣＧＧＧＣＡＴＧＧＡＡＧＧＧＴＧＧＡＡＣＡＧＡＡＴＣＣＧＡＧＡＴＧＴＴＴＡＡＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＧＣＡＴＡＧＣＡＡＣＴＡＧＴＧＡＣＡＴＣＣＣＴＡＧＧＡＣＡＣＣＧＧＴＣＴＴＧＧＧＡＴＧＴＴＧＣＡＴＴＡＧＣＣＧＧＧＣＡＣＴＣＧＡＧＣＣＡＴＣＴＧＣＣＧＴＡＣＡＧＧＡＡＧＡＡＴＴＣＡＴＧＡＣＧＴＣＡＣＧＧＧＴＣＡＡＣＴＧＧＧＴＴＧＴＣＣＡＧＴＣＴＴＣＡＧＣＣＧＴＣＧＡＴＴＡＴＣＴＧＣＡＴＴＴＧＡＴＧＣＴＧＧＴＣＧＣＧＡＴＧＡＡＧＴＧＧＣＴＣＴＴＣＧＡＡＧＡＧＴＴＴＧＣＴＡＴＡＧＡＴＧＧＣＣＧＡＴＴＴＴＧＣＡＴＣＴＣＴＡＴＴＣＡＣＧＡＴＧＡＧＧＴＧＣＧＣＴＡＣＣＴＧＧＴＡＡＧＧＧＡＡＧＡＡＧＡＣＣＧＡＴＡＣＣＧＡＧＣＣＧＣＣＣＴＣＧＣＣＣＴＴＣＡＧＡＴＡＡＣＡＡＡＴＣＴＧＣＴＴＡＣＣＡＧＧＴＧＴＡＴＧＴＴＴＧＣＡＴＡＣＡＡＧＣＴＧＧＧＧＴＴＧＡＡＣＧＡＣＣＴＴＣＣＣＣＡＧＴＣＣＧＴＣＧＣＴＴＴＣＴＴＴＴＣＡＧＣＴＧＴＴＧＡＴＡＴＡＧＡＴＣＧＣＴＧＣＣＴＧＡＧＡＡＡＡＧＡＧＧＴＴＡＣＧＡＴＧＧＡＣＴＧＣＡＡＡＡＣＧＣＣＣＴＣＡＡＡＣＣＣＣＡＣＴＧＧＴＡＴＧＧＡＧＣＧＣＡＧＡＴＡＴＧＧＣＡＴＣＣＣＣＣＡＡＧＧＡＧＡＡＧＣＣＣＴＣＧＡＣＡＴＡＴＡＣＣＡＧＡＴＡＡＴＴＧＡＧＣＴＣＡＣＧＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＧＧＡＧＡＡＧＡＧＡＴＣＣＣＡＡＣＣＴＧＧＣＣＣＡＴＡＧ
【０２２０】
例示的な組換えＡＡＶ組成物
本開示は、機能性タンパク質をコードする核酸配列を含有する組換えＡＡＶを含有する組成物を提供する。このようなタンパク質は、限定するものではないが、ＴＫ２、ｄＧＫ、ｐ５３Ｒ２、ＴＰ、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１、ＰＯＬＧ１、及びミトコンドリア膜タンパク質ＭＰＶ１７を含む。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶは、ニワトリベータアクチンプロモーターを含む。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶは、ＣＭＶエンハンサーをさらに含む。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶはＩＴＲをさらに含む。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶは３’ＵＴＲをさらに含む。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶはＡＡＶ２又はＡＡＶ９である。いくつかの実施形態では、導入遺伝子は、機能性ＴＫ２酵素をコードする。
【０２２１】
ヒトＴＫ２導入遺伝子、ニワトリベータアクチンプロモーター、ＣＭＶ  ＩＥエンハンサー、ＢＧＨ  ３’ＵＴＲ、ポリＡシグナル、並びに５’及び３’ＩＴＲを含む例示的なｒＡＡＶ−ｈＴＫ２ベクターを図１に示す。
【０２２２】
ｒＡＡＶ９−ｈＴＫ２とｒＡＡＶ２−ｈＴＫ２ベクターの両方を実施例で使用した。これらの構築物は、同じＩＴＲを有するが、異なるキャプシドタンパク質配列を有する。
【０２２３】
いくつかの実施形態では、組成物は、医薬担体をさらに含む。
【０２２４】
いくつかの実施形態では、組成物は、ＴＫ２、ｄＧＫ、ｐ５３Ｒ２、ＴＰ、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１、ＰＯＬＧ１、及びミトコンドリア膜タンパク質ＭＰＶ１７を含むが、これらに限定されない機能性タンパク質をコードする導入遺伝子を含む２以上のｒＡＡＶを含む。
【０２２５】
投与経路及び投薬
本発明は、不均衡ヌクレオチドプールによって特徴付けられる疾患若しくは障害を治療、予防、及び／又は治癒し、かつ／又は不均衡ヌクレオチドプールによって特徴付けられる疾患若しくは障害において機能不全であるタンパク質の機能を回復し、かつ／又は対象における不均衡ヌクレオチドプールに関連付けられる症状の少なくとも１つを緩和する方法で使用するためのｒＡＡＶベクターを提供する。いくつかの実施形態では、方法は、医薬として許容される担体中の１種以上の治療ペプチド、ポリペプチド、ｓｈＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、又はアンチセンスヌクレオチドをコードするrAAVベクトルを、そのような障害を有するか又はそのような疾患を有することが疑われる対象中の不均衡ヌクレオチドプールによって特徴づけられる疾患若しくは障害を治療、予防、及び／又は治癒するのに十分な量で、かつ十分な期間、対象に投与することを含む。
【０２２６】
本発明の方法によって治療、予防、及び／又は治癒できる不均衡ヌクレオチドプールによって特徴づけられる疾患又は障害は、以下の遺伝子：ＴＫ２；ＤＧＵＯＫ；ＴＹＭＰ；ＲＲＭ２Ｂ；ＳＵＣＬＡ２；ＳＵＣＬＧ１；及びＭＰＶ１７における変異により特徴づけられるものを含むが、これらに限定されない。これらの遺伝子によりコードされるタンパク質は、本発明の方法によって復元でき、ＴＫ２、ｄＧＫ、ｐ５３Ｒ２、ＴＰ、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１、ＰＯＬＧ１、及びミトコンドリア膜タンパク質ＭＰＶ１７を含むが、これらに限定されない。
【０２２７】
ｒＡＡＶは、当技術分野で公知の任意の適切な方法に従って、組成物で対象に送達されてよい。好ましくは、生理学的に適合性のある担体（例えば、組成物中）に懸濁されたｒＡＡＶを、対象に投与してよい。特定の実施形態では、組成物は、ｒＡＡＶを単独で含むか、又は１以上の他のウイルス（例えば、１以上の異なる導入遺伝子をコードする第２のｒＡＡＶ）と組み合わせて含んでよい。一実施形態では、組成物は、ＴＫ２、ｄＧＫ、ｐ５３Ｒ２、ＴＰ、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１、ＰＯＬＧ１、及びミトコンドリア膜タンパク質ＭＰＶ１７を含むが、これらに限定されない機能性タンパク質をコードする導入遺伝子を含む核酸配列を含むｒＡＡＶ９ベクターを含んでよい。  
【０２２８】
さらなる実施形態では、組成物は、ＴＫ２、ｄＧＫ、ｐ５３Ｒ２、ＴＰ、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１、ＰＯＬＧ１、及びミトコンドリア膜タンパク質ＭＰＶ１７を含むが、これらに限定されない機能性タンパク質をコードする導入遺伝子を含む核酸配列を含むｒＡＡＶ２ベクターを含んでよい。
【０２２９】
さらに別の実施形態では、組成物は、機能性ＴＫ２をコードする導入遺伝子を含む核酸配列を含むｒＡＡＶ９ベクターを含んでよい。さらなる実施形態では、組成物は、機能性ＴＫ２をコードする導入遺伝子を含む核酸配列を含むｒＡＡＶ２ベクターを含んでよい。さらなる実施形態では、組成物は、ＴＫ２をコードする導入遺伝子を含む核酸配列を含むｒＡＡＶ９ベクターと、ＴＫ２をコードする導入遺伝子を含む核酸配列を含むｒＡＡＶ２ベクターとを含んでよい。
【０２３０】
適切な担体は、ｒＡＡＶが向けられる兆候を考慮して、当業者によって容易に選択され得る。例えば、１つの適切な担体は、様々な緩衝溶液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）で製剤化できる生理食塩水を含む。他の例示的な担体は、無菌生理食塩水、ラクトース、スクロース、リン酸カルシウム、ゼラチン、デキストラン、寒天、ペクチン、ピーナッツ油、ゴマ油、及び水を含む。担体の選択は、本発明を限定するものではない。
【０２３１】
必要に応じて、本発明の組成物は、ｒＡＡＶ及び担体（複数可）に加えて、保存剤又は化学安定剤などの他の従来の医薬成分を含有してよい。適切で例示的な保存剤は、クロロブタノール、ソルビン酸カリウム、ソルビン酸、二酸化硫黄、没食子酸プロピル、パラベン、エチルバニリン、グリセリン、フェノール、及びパラクロロフェノールを含む。適切な化学安定剤は、ゼラチン及びアルブミンを含む。
【０２３２】
いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ組成物は、特に高濃度のｒＡＡＶが存在する場合（例えば、約１０１３ＧＣ／ｍｌまたはそれより多く）、組成物中のＡＡＶ粒子の凝集を低減するように製剤化される。ｒＡＡＶの凝集を低減する方法は、当技術分野において周知であり、例えば、界面活性剤の添加、ｐＨ調整、及び塩濃度の調整を含む（例えば、Ｗｒｉｇｈｔら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １２：１７１−１７８（２００５）参照）。
【０２３３】
医薬として許容される賦形剤及び担体溶液の製剤化は、様々な治療計画において本明細書に記載の特定の組成物を使用するのに適する投薬及び治療計画の開発であるので、当業者に周知である。典型的には、これらの製剤は、少なくとも約０．１％又はそれを超える有効成分を含有してよいが、有効成分（複数可）のパーセンテージは、当然ながら、変更でき、都合よく、全製剤の重量若しくは体積の約１又は２％と約７０％又は８０％の間又はそれを超えてよい。当然ながら、各治療上有用な組成物中の有効成分の量は、化合物の任意の所与の単位用量で適切な投与量が得られるように調製され得る。溶解性、生物学的利用能、生物学的半減期、投与経路、生成物の貯蔵寿命、並びに他の薬理学的考察などの要因は、そのような医薬製剤の調製分野の当業者によって企図され、したがって、様々な投与量及び治療計画が望ましいことがある。
【０２３４】
注射用途に適する医薬形態は、無菌の水溶液又は分散液、及び無菌の注射用溶液又は分散液の即時調製のための無菌粉末を含む。分散液はまた、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、及びそれらの混合物及び油中で調製されてよい。保存及び使用の通常の条件下では、これらの調製物は、微生物の成長を防止するための保存剤を含有する。多くの場合、形態は、無菌であり、容易な注射可能性が存在する程度まで流体である。それは、製造及び保存の条件下で安定でなければならず、細菌及び真菌などの微生物の混入作用に対し保存されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、それらの適切な混合物、及び／又は植物油を含有する溶媒又は分散媒体であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散液の場合に必要な粒径の維持、及び界面活性剤の使用によって維持されてよい。微生物作用の防止は、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、及びチメロサールなどの様々な抗菌剤及び抗真菌剤によってもたらすことができる。多くの場合、等張剤、例えば、糖又は塩化ナトリウムを含むことが好ましい。吸収を遅延させる薬剤の組成物、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンの使用により、注射用組成物の長期吸収をもたらすことができる。
【０２３５】
注射用水溶液の投与のために、例えば、必要に応じて、溶液は適切に緩衝化されてよく、液体希釈剤は、最初に、十分な生理食塩水又はグルコースで等張にされてよい。これらの特定の水溶液は、特に静脈内、筋肉内、皮下及び腹腔内投与に適している。これに関連して、使用できる滅菌水性媒体は当業者に知られている。例えば、１回の投与量を１ｍｌの等張ＮａＣｌ溶液に溶解し、１０００ｍｌの皮下点滴療法液に添加するか、又は指示された注入部位に注射してもよい。投与量のいくらかの変動は、宿主の状態に応じて必然的に生じる。いずれにしても、投与に関与する人は、個々のホストに適切な用量を決定する。
【０２３６】
無菌注射用溶液を、本明細書に列挙された様々な他の成分を有する適切な溶媒中に必要量の活性ｒＡＡＶを組み込み、必要に応じて、続いて濾過滅菌を行うことにより調製する。一般に、分散液は、様々な滅菌された有効成分を、基本的な分散媒体と、上記で列挙したものからの必要な他の成分とを含有する無菌ビヒクル中に組み込むことによって調製される。無菌注射溶液の調製のための無菌粉末の場合、調製の好ましい方法は真空乾燥及び凍結乾燥技術であり、これは、有効成分の粉末と、その前もって滅菌濾過された溶液からの任意の追加の所望の成分を生じる。  
【０２３７】
上記の送達方法に加えて、以下の技術もまた、ｒＡＡＶ組成物をホストに送達する代替方法として企図される。ソノフォレーシス（すなわち、超音波）は、循環系への及び循環系を通過する薬物透過の速度及び効率を高めるための装置として使用されており、米国特許第５，６５６，０１６号に記載されている。企図される他の薬物送達代替物は、骨内注射（米国特許第５，７７９，７０８号）、マイクロチップ装置（米国特許第５，７９７，８９８号）、眼科用製剤、経皮マトリックス（米国特許第５，７７０，２１９号及び第５，７８３，２０８号）及びフィードバック制御された送達（米国特許第５，６９７，８９９号）である。
【０２３８】
ｒＡＡＶは、所望の組織の細胞をトランスフェクトしかつ過度の副作用を伴わずに十分なレベルの遺伝子導入及び発現を提供するのに十分な量で投与される。従来の及び医薬として許容される投与経路は、選択された組織への直接送達（例えば、脳内投与、髄腔内投与）、静脈内投与、経口投与、吸入（鼻腔内及び気管内送達を含む）、眼内投与、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、皮内投与、及び他の非経口投与経路を含むが、これらに限定されない。必要に応じて、投与経路を組み合わせてよい。投与計画は、治療用組成物の血清又は組織の代謝回転速度、症状のレベル、及び生物学的マトリックス中の標的細胞の到達性を含むいくつかの要因に依存する。好ましくは、投与計画は、標的疾患状態の改善をもたらすのに十分な治療用組成物を送達し、同時に望ましくない副作用を最小化する。したがって、送達される生物製剤の量は、特定の治療用組成物及び治療される病態の重篤度に部分的に依存する。
【０２３９】
本発明は、ｒＡＡＶビリオンを含む安定な医薬組成物を提供する。組成物は、凍結／解凍サイクルに供した場合でも、ガラスを含む様々な材料から作られた容器に貯蔵した場合でも安定であり、活性である。
【０２４０】
適切な用量は、いくつかある要因の中で特に、治療される対象（例えば、ヒト若しくは非ヒトの霊長類又は他の哺乳動物）、治療される対象の年齢及び一般的な状態、治療される状態の重篤度、ｒＡＡＶビリオンの投与様式に依存する。適切な有効量は、当業者が容易に決定できる。
【０２４１】
所望の効果又は「治療効果」を達成するのに必要なｒＡＡＶビリオンの用量、例えば、体重１ｋｇあたりのベクターゲノムでの用量の単位（ｖｇ／ｋｇ）は、ｒＡＡＶ投与の経路、治療効果を達成するのに必要な遺伝子又はＲＮＡ発現のレベル、治療される特定の疾患若しくは障害、並びに遺伝子又はＲＮＡ産物の安定性を含むが、これらに限定されないいくつかの要因に基づいて変化する。当業者は、上記要因に基づいて特定の疾患若しくは障害を有する対象を治療するためのｒＡＡＶビリオン用量範囲、及び当技術分野で周知の他の要因を容易に決定できる。ｒＡＡＶの有効量は、一般に、対象あたり約１０９〜１０１６ゲノムコピーを含有する溶液の約１０μｌ〜約１００ｍｌの範囲である。溶液の他の量を使用してもよい。使用される量は、典型的には、とりわけ、対象のサイズ、ｒＡＡＶの用量、及び投与経路に依存する。例えば、髄腔内投与又は脳内投与については、１μｌ〜１０μｌ又は１０μｌ〜１００μｌの範囲の量を使用してよい。静脈内投与については、１０μｌ〜１００μｌ、１００μｌ〜１ｍｌ、１ｍｌ〜１０ｍｌ、又はそれ以上の範囲の量を使用してよい。場合によっては、対象あたり約１０１０〜１０１２のｒＡＡＶゲノムコピーの投与量が適切である。特定の実施形態では、対象あたり１０１２のｒＡＡＶゲノムコピーが、所望の組織を標的にするのに有効である。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶは、対象あたり１０１０、１０１１、１０１２、１０１３、１０１４、又は１０１５ゲノムコピーの用量で投与される。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶは、１ｋｇあたり１０１０、１０１１、１０１２、１０１３、又は１０１４ゲノムコピーの用量で投与される。
【０２４２】
そのため、「治療有効量」は、臨床試験によって決定できる比較的広い範囲に入る。例えば、インビボ注射、すなわち、対象への直接注射については、治療有効量は、約１０５〜１０１６のオーダーのｒＡＡＶビリオン、より好ましくは、１０８〜１０１４ｒＡＡＶビリオンである。インビトロ形質導入については、細胞に送達されるべきｒＡＡＶビリオンの有効量は、１０５〜１０１３のオーダー、好ましくは１０８〜１０１３のｒＡＡＶビリオンである。組成物が対象に戻し送達される形質導入細胞を含む場合、医薬組成物中の形質導入細胞の量は、約１０４〜１０１０細胞、より好ましくは１０５〜１０８細胞である。当然のことながら、用量は、形質導入の効率、プロモーターの強度、メッセージの安定性、及びそれによりコードされるタンパク質などに依存する。有効な投与量は、用量応答曲線を確立するルーチン試験を介して当業者が容易に確立できる。
【０２４３】
投与量処理は、最終的に上で指定した量を送達するための単回用量スケジュール又は複数回用量スケジュールであり得る。さらに、対象は、必要に応じて、多くの用量で投与されてもよい。そのため、対象に、例えば、単回用量で１０５〜１０１６のｒＡＡＶビリオンを、又は例えば、１０５〜１０１６のｒＡＡＶビリオンの送達を集合的にもたらす２、４、５、６回又はそれを超える用量で与えてよい。当業者は、投与すべき用量の適切な回数を容易に決定できる。
【０２４４】
そのため、医薬組成物は、目的のタンパク質の治療有効量、すなわち、問題の疾患状態の症状を軽減又は改善するのに十分な量、又は所望の恩恵を付与するのに十分な量をもたらすのに十分な遺伝子材料を含む。そのため、ｒＡＡＶビリオンは、１回以上の用量で与えられる場合に、治療効果を提供するのに十分な量で対象組成物中に存在する。ｒＡＡＶビリオンは、凍結乾燥調製物として提供でき、即時使用又は将来の使用のためにビリオン安定化組成物で希釈できる。あるいは、ｒＡＡＶビリオンは、生成直後に提供され、将来の使用のために保存されてよい。
【０２４５】
医薬組成物はまた、医薬として許容される賦形剤又は担体を含有する。このような賦形剤は、組成物を受けとる個体に有害な抗体の生成をそれ自体誘発せず、過度の毒性を伴わずに投与され得る任意の薬剤を含む。医薬として許容される賦形剤は、水、生理食塩水、グリセロール及びエタノールなどの液体を含むが、これらに限定されない。医薬として許容される塩は、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、及び硫酸塩などの鉱酸塩、並びに酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩、及び安息香酸塩などの有機酸の塩をその中に含んでよい。また、このようなビヒクル中に、湿潤剤又は乳化剤などの補助物質、並びにｐＨ緩衝物質などが存在してもよい。医薬として許容される賦形剤の完全な議論は、レミントンの薬学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）及び米国薬局方：Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９８４）で利用可能である。
【０２４６】
治療薬及び診断薬の製剤は、例えば、凍結乾燥粉末、スラリー、水溶液又は懸濁液の形態で、許容される担体、賦形剤、又は安定剤と混合することによって調製され得る。
【０２４７】
単独で又は別の薬剤と組み合わせて投与される治療用組成物の毒性及び治療有効性は、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に致死的な用量）及びＥＤ５０（集団の５０％で治療的に有効な用量）を決定するために、細胞培養物又は実験動物における標準的な薬学的手順によって決定できる。毒性と治療効果の間の用量比は、治療指数（ＬＤ５０／ＥＤ５０）である。特定の態様では、高い治療指数を示す治療用組成物が望ましい。これらの細胞培養アッセイ及び動物研究から得られたデータは、ヒトに使用するための投与量範囲で製剤化するのに用いることができる。そのような化合物の投与量は、毒性がほとんど又は全くないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内であることが好ましい。投与量は、使用される剤形及び投与経路に応じて、この範囲内で変化してよい。
【０２４８】
適切な用量の決定は、例えば、治療に影響を及ぼすことが当技術分野で知られているか若しくは疑われるパラメータ又は要因を使用して、臨床医によって行われる。一般に、用量は、最適用量よりも幾分少ない量で始まり、その後、任意の負の副作用に対して所望の又は最適な効果が達成されるまで、わずかな増分で増加される。重要な診断尺度は、例えば、炎症の症状のもの又は生成される炎症性サイトカインのレベルを含む。一般に、使用される生物製剤は、治療のために標的化される動物と同じ種から誘導され、それにより薬剤に対する免疫応答を最小化することが望ましい。
【０２４９】
ＡＡＶの好ましい投与経路は静脈内である。
【０２５０】
好ましい用量は、約１×１０１０〜約８×１０１１、約２×１０１０〜約６×１０１１、約４×１０１０〜約４×１０１１のゲノム又はウイルスコピー（ｖｃ）の全投与の範囲である。好ましい用量は、ｒＡＡＶの約４×１０１１ゲノム又はウイルスコピー（ｖｃ）の全投与である。
【０２５１】
２以上のｒＡＡＶが使用される場合、ベクターの好ましい総用量は、約１×１０１０〜約６×１０１１、約２×１０１０〜約５×１０１１、約１×１０１０〜約４×１０１１ゲノム又はウイルスコピー（ｖｃ）の全投与の範囲である。全ベクターの好ましい用量は、約３×１０１１である。ＡＡＶは、等量、例えば、５０／５０の比率で、又は約５／９５、１０／９０、１５／８５、２０／８０、２５／７５、３０／７０、３５／６５、４０／６０、４５／５５、５５／４５、６０／４０、６５／３５、７０／３０、７５／２５、８０／２０、８５／１５、９０／１０、及び９５／５の比率で投与できる。
【０２５２】
用量は、対象における効果を最適化するために調節できる。さらに、投与量を増加させる前に、対象をその状態の改善について監視できる。ｒＡＡＶの治療的投与に対する対象の応答は、対象の筋肉の強度及び制御、及び可動性、並びに身長及び体重の変化を観察することによって監視できる。これらのパラメータの１以上が投与後に増加すれば、治療を継続できる。これらのパラメータの１以上が同じ状態であるか又は減少する場合には、投与量を増加させることができる。
【０２５３】
薬理学的療法−投与及び投薬の方法
本発明は、本明細書に記載のタンパク質をコードする導入遺伝子を含有する組成物の投与と組み合わせた、デオキシヌクレオシド、及び／又はデオキシリボヌクレオシド一リン酸の投与を包含する。
【０２５４】
最も好ましい投与方法は、経口、髄腔内、及び静脈内を含む非経口投与である。デオキシヌクレオシド又はデオキシリボヌクレオシド一リン酸は、選択される投与に適切な形態で存在しなければならない。
【０２５５】
デオキシヌクレオシド又はデオキシリボヌクレオシド一リン酸は、液体（水、フォーミュラ又はミルク）に容易に溶解するが、遊離酸形態は、液体に容易に溶解しない。
【０２５６】
投与用の１種以上のデオキシヌクレオシド又はデオキシリボヌクレオシド一リン酸を含むそのような医薬組成物は、治療有効量のデオキシヌクレオシド又はデオキシリボヌクレオシド一リン酸及び医薬として許容される担体を含んでよい。そのような医薬担体は、水中の生理食塩水、並びにピーナッツ油、大豆油、鉱油、及びゴマ油などの、石油、動物、植物、又は合成起源のものを含む油類などの無菌液体であり得る。生理食塩水は、医薬組成物を静脈内投与する際に好ましい担体である。生理食塩水及び水性デキストロース及びグリセロール溶液を液体担体として、特に注射用溶液のために使用することもできる。適切な医薬賦形剤は、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、及びエタノールなどを含む。組成物は、必要に応じて、少量の湿潤剤又は乳化剤、又はｐＨ緩衝剤を含有してもよい。  
【０２５７】
経口投与は、好ましい投与方法である。デオキシヌクレオシド又はデオキシリボヌクレオシド一リン酸を、ミルク、牛とヒトの両方の乳、乳児用フォーミュラ、及び水を含むがこれらに限定されない、患者が消費する任意の形態の液体に添加できる。
【０２５８】
さらに、経口投与に適合する医薬組成物は、カプセル、錠剤、粉末、顆粒、溶液、シロップ、懸濁液（非水性又は水性の液体）、又は乳濁液であってよい。錠剤又は硬質ゼラチンカプセルは、ラクトース、デンプン又はその誘導体、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム、ステアリン酸又はそれらの塩を含んでよい。ソフトゼラチンカプセルは、植物油類、ワックス類、脂肪類、半固体又は液体のポリオール類を含んでよい。溶液及びシロップは、水、ポリオール類、及び糖類を含んでよい。経口投与用の活性剤は、胃腸管における活性剤の崩壊及び／又は吸収を遅延させる物質でコーティングされるか、又は混合されてよい。そのため、持続放出は、多くの時間にわたって達成されてよく、必要であれば、活性薬剤は胃内の分解から保護され得る。経口投与用の医薬組成物は、特定のｐＨ又は酵素的条件により特定の胃腸位置での活性剤の放出を促進するように製剤化されてよい。
【０２５９】
血液／脳関門を横断するデオキシヌクレオシド又はデオキシリボヌクレオシド一リン酸の問題を克服するために、髄腔内投与がさらなる好ましい投与形態である（Ｇａｌｂｉａｔｉら  ２００６；Ｇｏｔｚら  ２００８）。髄腔内投与は、それが脊髄液に到達するように、脊髄管、より具体的にはクモ膜下腔への薬物の注入を含む。本方法は、脊髄麻酔、化学療法、及び疼痛薬に一般に使用される。髄腔内投与は、腰部穿刺（ボーラス注射）又はポート−カテーテルシステム（ボーラス又は注入）によって行うことができる。カテーテルは、最も一般的には、腰椎の薄層の間に挿入され、先端は、髄腔に所望のレベル（一般にＬ３〜Ｌ４）にねじ込まれる。髄腔内製剤は最も一般的に、水及び賦形剤として生理食塩水を使用するが、ＥＤＴＡ及び脂質類も同様に使用されてきた。
【０２６０】
さらに好ましい投与形態は、静脈内投与を含む非経口である。静脈内投与を含む非経口投与に適合した医薬組成物は、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、及び組成物を対象の血液と実質的に等張にさせる溶質を含有し得る、水性及び非水性の無菌注射溶液又は懸濁液を含む。このような組成物中に存在し得る他の構成要素は、水、アルコール類、ポリオール類、グリセリン、及び植物油類を含む。非経口投与に適合された組成物は、密封アンプル及びバイアルなどの単位用量又は複数回用量の容器で提供されてよく、使用直前に無菌担体の添加のみを必要とする凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｉｅｄ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ））状態で保存されてよい。即時注射溶液及び懸濁液は、無菌の粉末、顆粒、及び錠剤から調製されてよい。本発明の非経口剤形を提供するために使用できる適切なビヒクルは、当業者に周知である。例は、注射用の水ＵＳＰ；塩化ナトリウム注射、リンゲル注射、デキストロース注射、デキストロースと塩化ナトリウム注射、及び乳酸化リンゲル注射などの水性ビヒクル；エチルアルコール、ポリエチレングリコール、及びポリプロピレングリコールなどの水混和性ビヒクル；並びにコーン油、綿実油、ピーナッツ油、ゴマ油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、及び安息香酸ベンジルなどの非水性ビヒクルを含む。
【０２６１】
加えて、一部の患者は、デオキシヌクレオシド又はデオキシリボヌクレオシド一リン酸処理が開始する時間まで経腸栄養を受けてよいので、ｄＮ又はｄＮＭＰは、胃瘻供給管又は他の経腸栄養手段を介して投与できる。
【０２６２】
投与のさらなる方法は、鼻、舌下、膣、頬、若しくは直腸などの粘膜、又は対象への経皮投与を含む。
【０２６３】
鼻及び肺投与用に適合された医薬組成物は、鼻を介した急速な吸入によって投与できる粉末などの固体担体を含んでよい。鼻投与用の組成物は、噴霧又は滴などの液体担体を含んでよい。あるいは、肺内への直接的吸入は、深い吸入によって、又はマウスピースを介する設置によって達成されてよい。これらの組成物は、有効成分の水性又は油性溶液を含んでよい。吸入用の組成物は、加圧エアロゾル、霧化器又は注入器を含むが、これらに限定されない、所定の投与量の有効成分を提供するように構築できる特別に適合された装置で供給されてよい。
【０２６４】
直腸投与に適合された医薬組成物は、坐剤又は浣腸剤として提供されてよい。膣投与に適合された医薬組成物は、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、泡又はスプレー製剤として提供されてよい。
【０２６５】
経皮投与に適合された医薬組成物は、長期間にわたってレシピエントの表皮と密接に接触した状態を意図した個別のパッチとして提供されてよい。
【０２６６】
デオキシヌクレオシド療法は、デオキシチミジン（ｄＴ）、デオキシシチジン（ｄＣ）、デオキシアデノシン（ｄＡ）及びデオキシグアノシン（ｄＧ）からなる群から選択される１種以上のデオキシヌクレオシドの投与を含む。
【０２６７】
当業者は、欠損に基づいて、どのデオキシヌクレオシドが有益であるかを決定できる。また、デオキシヌクレオシドの混合物を投与すべきか、どの比率で投与すべきかを決定することも当業者の能力の範囲内である。２つのデオキシヌクレオシドが投与されるべきである場合、それらは、各デオキシヌクレオシド、例えば、ｄＣとｄＴの５０／５０の比、又は約５／９５、１０／９０、１５／８５、２０／８０、２５／７５、３０／７０、３５／６５、４０／６０、４５／５５、５５／４５、６０／４０、６５／３５、７０／３０、７５／２５、８０／２０、８５／１５、９０／１０、及び９５／５の比であり得る。
【０２６８】
例として、ｄＴ及びｄＣは、ＴＫ２欠損用に等しい量の混合物で投与される。
【０２６９】
デオキシリボヌクレオシド一リン酸療法は、ＴＭＰ、ｄＣＭＰ、ｄＡＭＰ、及びｄＧＭＰからなる群から選択される１種以上のデオキシリボヌクレオシド一リン酸の投与を含む。２つのデオキシリボヌクレオシド一リン酸の場合、比を決定できる。
【０２７０】
例として、ＴＭＰ及びｄＣＭＰは、ＴＫ２欠損用に等しい量の混合物で投与される。
【０２７１】
治療有効量の選択は、当業者に知られているいくつかの要因を考慮して当業者によって決定される。このような要因は、デオキシヌクレオシド又はデオキシリボヌクレオシド一リン酸の特定の形態、並びに典型的には、医薬化合物の規制認可を得るために使用される通常の開発手順中に確立されている生物学的利用能、代謝、及び半減期などのその薬物動態学的パラメータを含む。用量を考慮する際のさらなる要因は、治療すべき症状若しくは疾患、又は正常な個体において達成される恩恵、患者の体重、投与経路、及び投与が急性又は慢性のいずれであるか、付随する薬物、及び投与される薬剤の有効性に影響を及ぼすことが周知の他の要因を含む。そのため、正確な用量は、当業者の判断及び各患者の状況に応じて、標準的な臨床技術に従って決定されるべきである。
【０２７２】
好ましい用量は、約１００ｍｇ／ｋｇ／日〜約１，０００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。さらに好ましい用量は、約２００ｍｇ／ｋｇ／日〜約８００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。さらに好ましい用量は、約２５０ｍｇ／ｋｇ／日〜約４００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。これらの投与量は、個々のデオキシヌクレオシド又はデオキシリボヌクレオシド一リン酸又は２種以上のデオキシヌクレオシド、例えば、ｄＴとｄＣ又はデオキシリボヌクレオシド一リン酸の混合物を有する組成物の量である。例えば、用量は、４００ｍｇ／ｋｇ／日のｄＴのみを含んでよい。さらなる例では、用量は、２００ｍｇ／ｋｇ／日のｄＴと２００ｍｇ／ｋｇ／日のｄＣの混合物を含んでよい。さらなる例では、用量は、４００ｍｇ／ｋｇ／日のｄＴとｄＣの混合物を含んでよい。
【０２７３】
デオキシヌクレオシド又はデオキシリボヌクレオシド一リン酸の投与は、好ましくは規則的な間隔で、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、１日５回、１日最大６回、であり得る。例えば、デオキシヌクレオシドが毎日４回投与される場合、投与は８：００ＡＭ、１２：００ＰＭ、４：００ＰＭ、及び８：００ＰＭである。
【０２７４】
静脈内又はクモ膜内に投与される場合、用量を低くできる。そのような投与に好ましい用量範囲は、約５０ｍｇ／ｋｇ／日〜約５００ｍｇ／ｋｇ／日である。
【０２７５】
‘０９２出願の図に示されるように、用量は、対象における効果を最適化するように調節できる。例えば、デオキシヌクレオシドを最初に１００ｍｇ／ｋｇ／日で投与し、次いで、対象の応答及び耐性に応じて２００ｍｇ／ｋｇ／日に、４００ｍｇ／ｋｇ／日に、８００ｍｇ／ｋｇ／日に、１，０００ｍｇ／ｋｇ／日に時間とともに増加させることができる。
【０２７６】
投与量を増加させる前に、対象をその状態の改善について監視できる。デオキシヌクレオシド又はデオキシリボヌクレオシド一リン酸の治療投与に対する対象の応答は、対象の筋肉の強度及び制御、及び可動性並びに身長及び体重の変化を観察することによって監視できる。これらのパラメータの１以上が投与後に増加する場合、治療を継続できる。これらのパラメータの１以上が同じか又は減少した場合、デオキシヌクレオシドの投与量を増加させることができる。
【０２７７】
先行特許出願に示されるように、薬理学的療法は十分に許容される。いずれの観察された副作用も軽微であり、ほとんどが下痢、腹部膨満及び他の胃腸の兆候であった。対象をまた、胃腸不耐性、例えば、下痢などの副作用についても監視できる。投与後に１以上の副作用が観察された場合、投与量を減少させることができる。このような副作用が観察されない場合、投与量を増加させることができる。さらに、副作用の観察に起因して投薬量が減少され、副作用がもはや観察されなくなったら、投与量を増加させることができる。
【０２７８】
デオキシヌクレオシド又はデオキシリボヌクレオシド一リン酸も、他の薬剤と同時投与できる。このような薬剤は、特定のＭＤＳ型の症状を治療するための治療薬を含む。特に、ＴＫ２欠損については、ｄＴ及びｄＣを、テトラヒドロウリジン（シチジンデアミナーゼの阻害剤）及びイムシリンＨ（プリンヌクレオシドホスホリラーゼの阻害剤）及びチピラシル（チミジンホスホリラーゼの阻害剤）などの酵素阻害剤を含むが、これらに限定されないユビキタスヌクレオシド異化酵素の阻害剤と共投与できる。このような阻害剤は既知であり、いくつかの癌の治療に使用される。
【０２７９】
キット
本発明はまた、キット形態で本発明の組み合わせの成分を含むキットを提供する。本発明のキットは、本明細書に記載のウイルスベクター（例えば、ＡＡＶベクター）及び／又は薬理学的薬剤（例えば、デオキシヌクレオシド及び／又はヌクレオシド一リン酸）を含むが、これらに限定されない１以上の成分を含む。キットは、本明細書に記載の医薬として許容される担体をさらに含んでよい。ウイルスベクター又は薬理学的薬剤は、医薬組成物中で、純粋な組成物として、又は医薬として許容される担体と組み合わせて製剤化できる。
【０２８０】
いくつかの実施形態では、キットは、１つの容器（例えば、無菌ガラス又はプラスチックバイアル）中に本明細書に記載の導入遺伝子を含有するＡＡＶベクターを含む。
【０２８１】
いくつかの実施形態では、キットは、１つの容器（例えば、無菌ガラス又はプラスチックバイアル）中に本明細書に記載の導入遺伝子を含有するＡＡＶベクター、及び別の容器（例えば、無菌ガラス又はプラスチックバイアル）中に本明細書に記載の導入遺伝子をコードする第２のＡＡＶベクターを含む。
【０２８２】
いくつかの実施形態では、キットは、１つの容器（例えば、無菌ガラス又はプラスチックバイアル）中に本明細書に記載の導入遺伝子を含有するＡＡＶベクター、及び別の容器（例えば、無菌ガラス又はプラスチックバイアル）中に薬理学的薬剤を含む。
【０２８３】
いくつかの実施形態では、キットは、１つの容器（例えば、無菌ガラス又はプラスチックバイアル）中に本明細書に記載の導入遺伝子を含有するＡＡＶ２ベクター、及び別の容器（例えば、無菌ガラス又はプラスチックバイアル）中に薬理学的薬剤を含む。
【０２８４】
いくつかの実施形態では、キットは、１つの容器（例えば、無菌ガラス又はプラスチックバイアル）中に本明細書に記載の導入遺伝子を含有するＡＡＶ９ベクター、及び別の容器（例えば、無菌ガラス又はプラスチックバイアル）中に薬理学的薬剤を含む。
【０２８５】
いくつかの実施形態では、キットは、１つの容器（例えば、無菌ガラス又はプラスチックバイアル）中にＴＫ２、ｄＧＫ、ｐ５３Ｒ２、ＴＰ、ＳＵＣＬＡ２、ＳＵＣＬＧ１、ＰＯＬＧ１、及び／又はミトコンドリア膜タンパク質ＭＰＶ１７をコードするＡＡＶベクター、又はその医薬組成物を含む。
【０２８６】
キットが対象への非経口投与のための１以上の医薬組成物を含む場合、キットはそのような投与を行うための装置を含み得る。例えば、キットは、上述したように、１以上の皮下注射針又は他の注入装置を含み得る。
【０２８７】
キットは、キット中の医薬組成物及び剤形に関する情報を含むパッケージ挿入物を含み得る。一般に、そのような情報は、封入された医薬組成物及び剤形を効果的かつ安全に使用する際に、患者及び医師を支援する。例えば、本発明の組み合わせに関する以下の情報：薬物動態、薬力学、臨床研究、効力パラメータ、指示及び使用法、禁忌、警告、予防、有害反応、過剰投与、適切な投与量及び投与、供給方法、適切な貯蔵条件、参考文献、製造者／配布者の情報及び特許情報を、挿入物中に供給してもよい。
【０２８８】
本発明の例示的な実施形態は以下を含む：
１．それを必要とする対象におけるチミジンキナーゼ２（ＴＫ２）欠損症の予防又は治療の方法であって、機能性ＴＫ２タンパク質をコードする導入遺伝子を含む核酸配列を含む組換えアデノ随伴ベクター（ｒＡＡＶ）を含む組成物の治療有効量を、対象に投与することを含む、方法。
２．ｒＡＡＶがＡＡＶ９及びＡＡＶ２からなる群から選択される、実施形態１に記載の方法。
３．対象が哺乳動物である、実施形態１に記載の方法。
４．対象がヒトである、実施形態１に記載の方法。
５．組成物が医薬組成物である、実施形態１に記載の方法。
６．組成物が第１のｒＡＡＶを含む第１の組成物であり、第１のｒＡＡＶがＡＡＶ９であり、さらに、機能性ＴＫ２タンパク質をコードする導入遺伝子を含む核酸配列を含む第２のｒＡＡＶを含む第２の組成物の治療有効量を投与することを含み、第２のｒＡＡＶがＡＡＶ２であり、第１のｒＡＡＶの投与後のある時点で投与される、実施形態１に記載の方法。
７．第２の組成物が医薬組成物である、実施形態６に記載の方法。
８．第１の組成物が、対象がＴＫ２欠損症と診断されるか、又はＴＫ２欠損症を有すると疑われるとすぐに投与され、第２の組成物の投与の間投与が継続される、実施形態６に記載の方法。
９．第２の組成物が、第１の組成物の数日以内に投与される、実施形態６に記載の方法。
１０．第２組成物が、第１組成物の数週間以内に投与される、実施形態６に記載の方法。
１１．第２の組成物が、第１の組成物の少なくとも１ヶ月後に投与される、実施形態６に記載の方法。
１２．デオキシシチジン（ｄＣ）、デオキシチミジン（ｄＴ）、及びそれらの混合物からなる群から選択される薬理学的薬剤を含む第３の組成物の治療有効量を投与することをさらに含む、実施形態６に記載の方法。
１３．第３の組成物が第２の組成物と同じ時点で投与される、実施形態１２に記載の方法。
１４．第３の組成物が第２の組成物の後の時点で投与される、実施形態１２に記載の方法。
１５．第３の組成物の治療有効量が、約１００ｍｇ／ｋｇ／日〜約１，０００ｍｇ／ｋｇ／日である、実施形態１２に記載の方法。
１６．第３の組成物の治療有効量が、約２００ｍｇ／ｋｇ／日〜約８００ｍｇ／ｋｇ／日である、実施形態１２に記載の方法。
１７．第３の組成物の治療有効量が、約２５０ｍｇ／ｋｇ／日〜約４００ｍｇ／ｋｇ／日である、実施形態１２に記載の方法。
１８．第３の組成物が、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、１日５回又は１日６回投与される、実施形態１２に記載の方法。
１９．第３の組成物が、経口、髄腔内、腸内、又は静脈内投与される、実施形態１２に記載の方法。
２０．第３の組成物が、経口投与され、牛のミルク、ヒト母乳、乳児用フォーミュラ又は水と混合されたデオキシヌクレオシドを含む、実施形態１９に記載の方法。
２１．それを必要とする対象におけるチミジンキナーゼ２（ＴＫ２）欠損症を予防又は治療する方法であって、薬理学的薬剤を含む第１の組成物の治療有効量を対象に投与すること、かつ機能性ＴＫ２タンパク質をコードする導入遺伝子を含む核酸配列を含む組換えアデノ随伴ベクター（ｒＡＡＶ）を含む第２の組成物の治療有効量をさらに投与することを含む、方法。
２２．薬理学的薬剤が、デオキシシチジン（ｄＣ）、デオキシチミジン（ｄＴ）、及びそれらの混合物；デオキシシチジン一リン酸（ｄＣＭＰ）、デオキシチミジン一リン酸（ｄＴＭＰ）、及びそれらの混合物からなる群から選択される、実施形態２１に記載の方法。
２３．ｒＡＡＶがＡＡＶ９である、実施形態２１に記載の方法。
２４．第２の組成物が医薬組成物である、実施形態２１に記載の方法。
２５．第１の組成物が、対象がＴＫ２欠損症と診断されるか、又はＴＫ２欠損症を有すると疑われるとすぐに投与され、第２の組成物の投与の間投与が継続される、実施形態２１に記載の方法。
２６．第２の組成物が、第１の組成物の数日以内に投与される、実施形態２１に記載の方法。
２７．第２組成物が、第１組成物の数週間以内に投与される、実施形態２１に記載の方法。
２８．第２の組成物が、第１の組成物の少なくとも１ヶ月後に投与される、実施形態２１に記載の方法。
２９．第１の組成物の治療有効量が、約１００ｍｇ／ｋｇ／日〜約１，０００ｍｇ／ｋｇ／日である、実施形態２１に記載の方法。
３０．第１の組成物の治療有効量が、約２００ｍｇ／ｋｇ／日〜約８００ｍｇ／ｋｇ／日である、実施形態２１に記載の方法。
３１．第１の組成物の治療有効量が、約２５０ｍｇ／ｋｇ／日〜約４００ｍｇ／ｋｇ／日である、実施形態２１に記載の方法。
３２．第１の組成物が、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、１日５回又は１日６回投与される、実施形態２１に記載の方法。
３３．第１の組成物が、経口、髄腔内、腸内、又は静脈内投与される、実施形態２１に記載の方法。
３４．第１の組成物が、経口投与され、牛のミルク、ヒト母乳、乳児用フォーミュラ又は水と混合された薬理学的薬剤を含む、実施形態３３に記載の方法。
３５．機能性ＴＫ２タンパク質をコードする導入遺伝子を含む核酸配列を含む組換えアデノ随伴ベクター（ｒＡＡＶ）を含み、かつＡＡＶ２である第２のｒＡＡＶを含む第３の組成物を投与することをさらに含む、実施形態２１に記載の方法。
３６．それを必要とする対象におけるチミジンキナーゼ２酵素活性を回復する方法であって、機能性ＴＫ２タンパク質をコードする導入遺伝子を含む核酸配列を含む組換えアデノ随伴ベクター（ｒＡＡＶ）を含む組成物の治療有効量を対象に投与することを含む、方法。
３７．ｒＡＡＶがＡＡＶ９及びＡＡＶ２からなる群から選択される、実施形態３６に記載の方法。
３８．対象が哺乳動物である、実施形態３６に記載の方法。
３９．対象がヒトである、実施形態３６に記載の方法。
４０．組成物が医薬組成物である、実施形態３６に記載の方法。
４１．組成物が、第１のｒＡＡＶを含む第１の組成物であり、第１のｒＡＡＶがＡＡＶ９であり、かつ機能性ＴＫ２タンパク質をコードする導入遺伝子を含む核酸配列を含む第２のｒＡＡＶを含む第２の組成物の治療有効量を投与することをさらに含み、第２のｒＡＡＶがＡＡＶ２であり、第１のｒＡＡＶの投与の後の時点で投与される、実施形態３６に記載の方法。
４２．第２の組成物が医薬組成物である、実施形態４１に記載の方法。
４３．第１の組成物が、対象がＴＫ２欠損症と診断されるか、又はＴＫ２欠損症を有すると疑われるとすぐに投与され、第２の組成物の投与の間投与が継続される、実施形態４１に記載の方法。
４４．第２の組成物が、第１の組成物の数日以内に投与される、実施形態４１に記載の方法。
４５．第２組成物が、第１組成物の数週間以内に投与される、実施形態４１に記載の方法。
４６．第２の組成物が、第１の組成物の少なくとも１ヶ月後に投与される、実施形態４１に記載の方法。
４７．デオキシシチジン（ｄＣ）、デオキシチミジン（ｄＴ）、及びそれらの混合物からなる群から選択される薬理学的薬剤を含む第３の組成物の治療有効量を投与することをさらに含む、実施形態４１に記載の方法。
４８．第３の組成物が第２の組成物と同じ時点で投与される、実施形態４７に記載の方法。
４９．第３の組成物が第２の組成物の後の時点で投与される、実施形態４７に記載の方法。
５０．第３の組成物の治療有効量が、約１００ｍｇ／ｋｇ／日〜約１，０００ｍｇ／ｋｇ／日である、実施形態４７に記載の方法。
５１．第３の組成物の治療有効量が、約２００ｍｇ／ｋｇ／日〜約８００ｍｇ／ｋｇ／日である、実施形態４７に記載の方法。
５２．第３の組成物の治療有効量が、約２５０ｍｇ／ｋｇ／日〜約４００ｍｇ／ｋｇ／日である、実施形態４７に記載の方法。
５３．第３の組成物が、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、１日５回又は１日６回投与される、実施形態４７に記載の方法。
５４．第３の組成物が、経口、髄腔内、腸内、又は静脈内投与される、実施形態４７に記載の方法。
５５．第３の組成物が、経口投与され、牛のミルク、ヒト母乳、乳児用フォーミュラ又は水と混合されたデオキシヌクレオシドを含む、実施形態５４に記載の方法。
５６．それを必要とする対象におけるチミジンキナーゼ２酵素活性を回復する方法であって、薬理学的薬剤を含む第１の組成物の治療有効量を対象に投与すること、かつ機能性ＴＫ２タンパク質をコードする導入遺伝子を含む核酸配列を含む組換えアデノ随伴ベクター（ｒＡＡＶ）を含む第２の組成物の治療有効量をさらに投与することを含む、方法。
５７．薬理学的薬剤が、デオキシシチジン（ｄＣ）、デオキシチミジン（ｄＴ）、及びそれらの混合物；並びにデオキシシチジン一リン酸（ｄＣＭＰ）、デオキシチミジン一リン酸（ｄＴＭＰ）、及びそれらの混合物からなる群から選択される、実施形態５６に記載の方法。
５８．ｒＡＡＶがＡＡＶ９である、実施形態５６に記載の方法。
５９．第２の組成物が医薬組成物である、実施形態５６に記載の方法。
６０．第１の組成物が、対象がＴＫ２欠損症と診断されるか、又はＴＫ２欠損症を有すると疑われるとすぐに投与され、第２の組成物の投与の間投与が継続される、実施形態５６に記載の方法。
６１．第２の組成物が、第１の組成物の数日以内に投与される、実施形態５６に記載の方法。
６２．第２組成物が、第１組成物の数週間以内に投与される、実施形態５６に記載の方法。
６３．第２の組成物が、第１の組成物の少なくとも１ヶ月後に投与される、実施形態５６に記載の方法。
６４．第１の組成物の治療有効量が、約１００ｍｇ／ｋｇ／日〜約１，０００ｍｇ／ｋｇ／日である、実施形態５６に記載の方法。
６５．第１の組成物の治療有効量が、約２００ｍｇ／ｋｇ／日〜約８００ｍｇ／ｋｇ／日である、実施形態５６に記載の方法。
６６．第１の組成物の治療有効量が、約２５０ｍｇ／ｋｇ／日〜約４００ｍｇ／ｋｇ／日である、実施形態５６に記載の方法。
６７．第１の組成物が、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、１日５回又は１日６回投与される、実施形態５６に記載の方法。
６８．第１の組成物が、経口、髄腔内、腸内、又は静脈内投与される、実施形態５６に記載の方法。
６９．第１の組成物が、経口投与され、牛のミルク、ヒト母乳、乳児用フォーミュラ又は水と混合された薬理学的薬剤を含む、実施形態５６に記載の方法。
７０．第２のｒＡＡＶはAAV2であり機能性ＴＫ２タンパク質をコードする導入遺伝子を含む核酸配列を含む組換えアデノ随伴ベクター（ｒＡＡＶ）を含み、かつＡＡＶ２である第２のｒＡＡＶを含む第３の組成物の投与をさらに含む、実施形態５６に記載の方法。
７１．それを必要とする対象における不均衡ヌクレオチドプールによって特徴付けられる疾患若しくは障害を予防又は治療する方法であって、ＴＫ２；ＤＧＵＯＫ；ＴＹＭＰ；ＲＲＭ２Ｂ；ＳＵＣＬＡ２；ＳＵＣＬＧＪ；及びＭＰＶ１７からなる群から選択される導入遺伝子を含む核酸配列を含む組換えアデノ随伴ベクター（ｒＡＡＶ）を含む組成物の治療有効量を対象に投与することを含む、方法。
７２．それを必要とする対象における不均衡ヌクレオチドプールによって特徴付けられる疾患若しくは障害を予防又は治療する方法であって、薬理学的薬剤を含む第１の組成物の治療有効量を対象に投与すること、かつＴＫ２；ＤＧＵＯＫ；ＴＹＭＰ；ＲＲＭ２Ｂ；ＳＵＣＬＡ２；ＳＵＣＬＧＪ；及びＭＰＶ１７からなる群から選択される導入遺伝子を含む核酸配列を含む組換えアデノ随伴ベクター（ｒＡＡＶ）を含む第２の組成物の治療有効量をさらに投与することを含む、方法。
７３．薬理学的薬剤が、デオキシシチジン（ｄＣ）、デオキシチミジン（ｄＴ）、デオキシアデノシン（ｄＡ）、デオキシグアノシン（ｄＧ、）及びそれらの混合物；デオキシシチジン一リン酸（ｄＣＭＰ）、デオキシチミジン一リン酸（ｄＴＭＰ）、デオキシアデノシン一リン酸（ｄＡＭＰ）、デオキシグアノシン一リン酸（ｄＧＭＰ）及びそれらの混合物からなる群から選択される、実施形態７２に記載の方法。
７４．それを必要とする対象における不均衡ヌクレオチドプールによって特徴付けられる疾患若しくは障害における酵素活性を回復する方法であって、ＴＫ２；ＤＧＵＯＫ；ＴＹＭＰ；ＲＲＭ２Ｂ；ＳＵＣＬＡ２；ＳＵＣＬＧＪ；及びＭＰＶ１７からなる群から選択される導入遺伝子を含む核酸配列を含む組換えアデノ随伴ベクター（ｒＡＡＶ）を含む組成物の治療有効量を対象に投与することを含む、方法。
７５．それを必要とする対象における不均衡ヌクレオチドプールによって特徴付けられる疾患若しくは障害における酵素活性を回復する方法であって、薬理学的薬剤を含む第１の組成物の治療有効量を対象に投与すること、かつＴＫ２；ＤＧＵＯＫ；ＴＹＭＰ；ＲＲＭ２Ｂ；ＳＵＣＬＡ２；ＳＵＣＬＧＪ；及びＭＰＶ１７からなる群から選択される導入遺伝子を含む核酸配列を含む組換えアデノ随伴ベクター（ｒＡＡＶ）を含む第２の組成物の治療有効量をさらに投与することを含む、方法。
７６．薬理学的薬剤が、デオキシシチジン（ｄＣ）、デオキシチミジン（ｄＴ）、デオキシアデノシン（ｄＡ）、デオキシグアノシン（ｄＧ）、及びそれらの混合物；デオキシシチジン一リン酸（ｄＣＭＰ）、デオキシチミジン一リン酸（ｄＴＭＰ）、デオキシアデノシン一リン酸（ｄＡＭＰ）、デオキシグアノシン一リン酸（ｄＧＭＰ）及びそれらの混合物からなる群から選択される、実施形態７５に記載の方法。
【０２８９】
実施例
本発明は、本発明の好ましい実施形態をより完全に説明するために提示される以下の非限定的な実施例を参照することによってよりよく理解できる。これらは、本発明の広い範囲を限定するものと解釈されるべきではない。
【０２９０】
実施例１−材料及び方法
ＴＫ２欠損のマウスモデル
ヒト乳児脳筋症と非常に似た表現型を現すホモ接合性Ｔｋ２  Ｈ１２６Ｎノックイン変異体（Ｔｋ２−／−）マウスが以前に報告された（Ａｋｍａｎら  ２００８）。出生１０日〜１３日に、Ｔｋ２−／−マウスは、歩行運動の減少、不安定歩調、粗大振戦、成長遅延、および１４〜１６日目での早期死亡への急速な進行によって特徴付けられる致死性脳筋症を急速に発症する。マウスモデルの分子及び生化学的解析は、疾患の病因が、酵素活性の喪失に起因し、脳でのｄＴＴＰレベル、及び肝臓でのｄＴＴＰとｄＣＴＰの両方のレベルが減少したｄＮＴＰプールの不均衡を結果として生じ、これが次に、脳及び脊髄において最も顕著に、ｍｔＤＮＡの枯渇及びｍｔＤＮＡをコードするサブユニットを含有する呼吸鎖酵素の欠損を生じさせることを実証した。
【０２９１】
全ての実験は、コロンビア大学医療センターの施設動物の世話及び使用の委員会によって承認されたプロトコルに従って行われ、米国立衛生研究所の実験動物の世話及び使用のためのガイドと一致した。マウスを、国際標準条件に従って、１２時間の光、ｌ２時間の暗闇のサイクルで飼育し、４、１３、及び２９日齢で屠殺した。
【０２９２】
臓器（脳、脊髄、肝臓、心臓、腎臓、四頭筋、肺、及び胃腸管）を摘出し、イソペンタンの液相で凍結して、凍結点（−１６０℃）付近でドライアイスにより予備冷却するか、又は１０％中性緩衝ホルマリンで固定し、標準的な手順を用いてパラフィンに包埋した。パラフィン包埋組織を次いで、形態学的研究のためにヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色するか、又はＧＦＡＰ、ＣＯＸＩ、又は複合体Ｉでの免疫染色研究のために処理した。臨床的及び生化学的な差異のないことが以前に記載されている（Ａｋｍａｎら  ２００８；Ｄｏｒａｄｏら  ２０１１）ので、ヘテロ接合性とホモ接合性の両方の野生型マウスを対照群（Ｔｋ２＋）とみなした。
【０２９３】
ｈＴＫ２構築物
ヒトＴＫ２遺伝子を含むベクター（ｐＡＡＶｓｃＣＢ６  ＰＩ  ＴＫ２を図１に示す）。構築物の主要成分は、ヒトＴＫ２  ｃＤＮＡ並びに５’ＩＴＲ、ＣＭＶ  ＩＥエンハンサー、ニワトリβアクチンプロモーター、ＢＧＨ３’ＵＴＲ、ポリＡシグナル、ＧＲＥ、及び３’ＩＴＲを含む。
【０２９４】
このベクターを、その後の実験のためにＡＡＶ９とＡＡＶ２の両方のキャプシドで被包した。
【０２９５】
遺伝子療法投与
野生型マウスにおけるＡＡＶ９−ＧＦＰベクターを用いベクターの分布を分析する以前の結果に基づいて、ＡＡＶ９ウイルスが、Ｉ．Ｐ．投与された場合に脳を標的化しないことを示した（結果は示さず）。この研究に基づいて、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２構築物の投与を、静脈内（ＩＶ）注射により行った。
【０２９６】
ＡＡＶ９−ｈＴＫ２を、出生後１日目に、約４．２×１０１１又は４．２×１０１０ゲノム又はベクターコピーを含有する総容量３５μｌの１×ＰＢＳの後眼窩注射でＩＶにより投与した。
【０２９７】
あるいは、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２を、出生後１日目に、約２．１×１０１１ベクターコピーを含有する３５μｌの１×ＰＢＳの後眼窩注射でＩＶにより投与し、その後、４ｍｌ／日／マウスの水消費量を仮定して、２１日目から５２０ｍｇ／ｋｇ／日の経口ｄＣ＋ｄＴ（飲料水中）を補充する場合と、補充しない場合で、２９日目に約１．０５×１０１１ベクターコピーを含有する尾静脈注射と共に、１００μＬのＡＡＶ２−ｈＴＫ２をＩＶにより投与した。
【０２９８】
薬理学的治療の管理及び実験計画
デオキシシチジン（ｄＣ）及びデオキシチミジン（ｄＴ）を、出生後４日目〜２９日目に、５２０ｍｇ／ｋｇ／日の用量を用いてＴｋ２−／−及び年齢を一致させた対照野生型（Ｔｋ２＋）に毎日の経口胃管栄養法により、小ペット（Ｐｅｔ−Ａｇ）用の５０μｌのＥｓｂｉｌａｃミルクフォーミュラ中で投与する。出生後２１日目に、マウスを母から分離し、４ｍｌ／日／マウスの水消費量を想定して処置を飲料水中のｄＣとｄＴの投与により継続した。未処置Ｔｋ２変異体の陰性対照群及び対照野生型マウスを秤量し、比較のためにしっかりと観察する。
【０２９９】
デオキシシチジン一リン酸（ｄＣＭＰ）及びデオキシチミジン一リン酸（ＴＭＰ）（Ｈｏｎｇｅｎｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ社）を、出生後４日目〜２９日目に、２００ｍｇ／ｋｇ／日及び４００ｍｇ／ｋｇ／日の２回の用量を用いてＴｋ２  Ｈ１２６Ｎノックインマウス（Ｔｋ２−／−）及び年齢を一致させた対照野生型（Ｔｋ２＋）に毎日の経口胃管栄養法により、小ペット（Ｐｅｔ−Ａｇ）用の５０μｌのＥｓｂｉｌａｃミルクフォーミュラ中で投与する。２９日目に、マウスを母から分離し、処置を、４００ｍｇ／ｋｇ／日の用量を使用して飲料水中のｄＣＭＰとＴＭＰの投与により継続した。
【０３００】
表現型評価
体重が増加しないことは疾患の最初の兆候であることが以前に観察されている（Ａｋｍａｎら  ２００８）ので、体重を毎日評価した。
【０３０１】
遺伝子治療の安全性及び有効性の程度を定義するために、処置済みの及び未処置のＴｋ２マウスにおける生存時間、疾患の発症年齢、症状の種類及び重篤度、副作用の発生、並びに有害事象による処置の終了の割合を比較した。マウスの一般的な行動、生存時間、及び体重を、出生後４日目に始めて毎日評価した。
【０３０２】
ＴＫ２酵素測定
ＴＫ２酵素の活性を、Ｆｒａｎｚｏｌｉｎら  ２００６に以前に記載されているように測定した。
【０３０３】
ｍｔＤＮＡコピー数の測定
ｍｔＤＮＡコピー数を、Ｓｐｉｎａｚｚｏｌａら  ２００６／に以前に記載されているように測定した。
【０３０４】
ミトコンドリア呼吸鎖酵素活性
ミトコンドリアＲＣ酵素の分析を、以前に記載された（ＤｉＭａｕｒｏら  １９８７；Ｂｉｒｃｈ−Ｍａｃｈｉｎら  １９９４；Ｑｕｉｎｚｉｉら  ２０１３）ように、大脳組織中で行った。
【０３０５】
統計的方法
データを、１群あたり少なくとも３回の実験の平均±ＳＤとして表す。Ｇｅｈａｎ−Ｂｒｅｓｌｏｗ−Ｗｉｌｃｏｘｏｎ試験を用いて、マウスの各群の生存率を比較した。０．０５未満のｐ値を、統計的に有意であると考えた。
【０３０６】
実施例２−ＡＡＶ９−ｈＴＫ２の投与は延長された寿命をもたらした
実施例１に記載の変異体マウスに、実施例１に記載のＡＡＶ９−ｈＴＫ２構築物（約４．２×１０１１又は４．２×１０１０ゲノム又はベクターコピーを含有する）を出生後１日目に、後眼窩注射でＩＶにより投与した。
【０３０７】
ＡＡＶ９−ｈＴＫ２による処置は、４．２×１０１０ｖｃの投与により用量依存的応答をもたらし、５２０ｍｇ／ｋｇ／日のｄＣ＋ｄＴ療法と同様に寿命を最高３倍（平均３９日）延長させた。４．２×１０１１ｖｃの投与は、寿命を最大１２９日で最高６倍（平均８９日）延長させた。図２を参照されたい。
【０３０８】
実施例３−ＡＡＶ９−ｈＴＫ２の投与は、変異体マウスにおいて増加された成長、力及び運動機能をもたらした
実施例１に記載のマウスを、実施例１に記載のＡＡＶ９−ｈＴＫ２構築物で、実施例１に記載したように処置した。
【０３０９】
より低い用量のＡＡＶ９−ｈＴＫ２（４．２×１０１０ｖｃ）で処置したＴｋ２−／−マウスは、５２０ｍｇ／ｋｇ／日のｄＣ＋ｄＴで処置したＴｋ２−／−マウスと同じ速度で成長した。それらはまた、プラトーに達した出生後２０日目まで、Ｔｋ２＋マウスと同じ速度で成長した。
【０３１０】
より高い用量のＡＡＶ９−ｈＴＫ２（４．２×１０１１ｖｃ）で処置したＴｋ２−／−マウスは、Ｐ３０までＴｋ２＋マウスと同じ速度で成長した。
【０３１１】
未処置Ｔｋ２＋と、より高い用量のＡＡＶ９−ｈＴＫ２（４．２×１０１１ｖｃ）で処置したＴｋ２＋の間には相違は認められなかった。図３を参照されたい。
【０３１２】
Ｐ１で４．２×１０１１ｖｃで処置したＴｋ２−／−マウスは、未処置の又はＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置した野生型マウスと比較して、力の差異を示さなかった。力を重量により正規化し、Ｐ２９及びＰ６０で測定した。図４を参照されたい。
【０３１３】
運動機能を評価するためにヒト患者において観察される運動挙動の欠陥、すなわち、運動表現型をモデルとすると考えられる結果の尺度であるロータロッド試験を、出生後２９日目及び６０日目に実施し、それは処置した変異体マウスと処置した野生型マウスの間で差異を示さなかったが、１匹のオス及び１匹のメスの２つの変異体は、脱力及びバランスの欠如のせいで試験を実行できなかった。図５を参照されたい。
【０３１４】
ＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置した野生型マウスは、治療に関連する副作用を示さず、全体的に健康であった。
【０３１５】
力及び運動機能に関する結果は、変異体マウスにおける筋疾患を除外するように思われ、Ｔｋ２−／−で示される体重減少が非筋肉関連の健康状態によって引き起こされ得ることを示唆する。
【０３１６】
実施例４−ＡＡＶ９−Ｔｋ２での処置は、ほとんどの組織においてＴＫ２酵素活性を回復させた
実施例１に記載の方法を用いて、ＴＫ２酵素の活性をＰ２９で測定し、それが未処置野生型マウスで見られるものと同様のレベルに、Ｐ１にＡＡＶ９−ｈＴＫ２の４．２×１０１１ｖｃで処置した変異体マウスの脳及び肝臓において、回復されたことが示された。筋肉において、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２は、未処置の野生型マウスと比較してＴＫ２活性を４０倍増加させた。しかしながら、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２の投与は、腎臓におけるＴＫ２活性の回復効率が不十分であることを示した。図６を参照されたい。
【０３１７】
実施例５−ＡＡＶ９−ｈＴｋ２での処置はほとんどの組織においてｈＴＫ２の発現を増加させた
ヒトＴＫ２を、脳、肝臓、筋肉、及び腎臓組織において１ヶ月、２ヶ月、及び６ヶ月の時点でＡＡＶ９−ｈＴＫ２（４×１０１１ｖｃ）で処置した野生型マウス中の実施例１に記載のマウスＴＫ２のｍＲＮＡ発現に対するパーセンテージとして測定した。
【０３１８】
ヒトＴＫ２は、処置の６ヶ月後の野生型マウスにおいても、標的組織上のマウスＴＫ２の発現の１００％を超えて脳、肝臓及び筋肉で発現された。対照的に、腎臓でのヒトＴＫ２の発現は、治療後２ヶ月で非常に低い。図７を参照されたい。
【０３１９】
実施例６−ＡＡＶ９−ｈＴＫ２での処置はほとんどの組織においてｍｔＤＮＡを救済した
ｍｔＤＮＡコピー数を、実施例１に記載されるように測定した。出生後１日目にＡＡＶ９−ｈＴＫ２（４×１０１１ｖｃ）で処置したＴｋ２−／−マウスは、出生後２９日目に、腎臓組織においてのみ重度のｍｔＤＮＡ枯渇の兆候を有し、ｍｔＤＮＡは脳、心臓、肝臓、腸及び筋肉において部分的に救済された（図８）。
【０３２０】
出生後６０日目に、ＡＡＶ９−ｈＴＫ処置した変異体マウスの肝臓、心臓、筋肉及び腸組織においてｍｔＤＮＡ枯渇は非常に穏やかであった（未処置の野生型マウスの６５〜８０％）。処置した変異体マウスの脳組織中のｍｔＤＮＡは、未処置野生型マウスのｍｔＤＮＡの８７％であった。これは、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２−／−マウスのほとんどの組織でのｍｔＤＮＡの救済を示した。同じ処置をした変異体マウスの腎臓組織でのｍｔＤＮＡ枯渇は深刻であった。図９を参照されたい。
【０３２１】
実施例７−ＡＡＶ９−ｈＴＫ２での処置は脳における生化学的異常を改善した
呼吸鎖酵素（ＲＣＥ）活性及びタンパク質レベルを、実施例１に記載のように測定した。
【０３２２】
出生後２９日目の脳におけるＲＣＥ活性は、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２（４×１０１１ｖｃ）で処置したＴｋ２−／−マウスの脳において完全に回復した（図１０）。複合ＩＩＩ活性のわずかな減少のみが、未処置の野生型マウスと比較してＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置したＴｋ２−／−マウスで観察できた（図１１）。
【０３２３】
実施例８−ＡＡＶ９−ｈＴＫ２は腎臓機能を救済しない
実施例１の方法を用いて、４．２×１０１１ｖｃでＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置した変異体マウスの出生後９６日目の死亡時の腎臓組織を、ＳＤＨ及びＣｏｘで染色した。ＡＡＶ９−ｈＴＫ２を４．２×１０１１ｖｃで処置した年齢を一致させた野生型マウスの腎臓組織も染色した。ＳＤＨ（青色）染色はＣｏｘ（茶色）染色との共局在化を示さず、変異体マウスの腎臓組織におけるＣｏｘ欠損及び機能障害性ミトコンドリアの可能性を示した（図１２）。
【０３２４】
クレアチニン及び血液尿素窒素（ＢＵＮ）指数を、４．２×１０１１ｖｃでＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置した変異体マウスと、４．２×１０１１ｖｃでＡＡＶ９−ｈＴＫ２で処置した野生型の両方における生存コホートと出生後６０日目の両方で評価した。クレアチニンとＢＵＮの両方は、両方のコホート内の変異体マウスにおいてより高く、腎臓機能障害を示唆する（図１３）。
【０３２５】
実施例９−ＡＡＶ２−ｈＴＫ２との組み合わせでのＡＡＶ９−ｈＴＫ２の投与は、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２単独の使用を上回って生存を増加させる
実施例１に記載の変異体マウスに、出生後１日目に実施例１にまた記載されるように、総容量３５μｌの後眼窩注射により２．１×１０１１ｖｃでＡＡＶ９−ｈＴＫ２を投与した。野生型マウスも出生後１日目に処置する。
【０３２６】
出生後２１日目に、これらの処置した変異体及び野生型のマウスの１／３に、５２０ｍｇ／ｋｇ／日の経口ｄＣ＋ｄＴ（飲料水中）を補充した。出生後２９日目に、マウスの２／３（ｄＣ＋ｄＴを補充した全てのマウス及び残りのマウスの半分）に、尾静脈注射により総容量１００μｌの１．０５×１０１１ｖｃでＡＡＶ２−ｈＴＫ（実施例１）を投与する。
【０３２７】
ＡＡＶ９−ｈＴＫ２のみで処置した変異体マウスは、実施例２の結果と一致して、平均８９日生存した。ＡＡＶ９−ｈＴＫ２とＡＡＶ２−ｈＴＫ２の両方を投与した変異体マウスは、著しくより長く約１２０日生存した（図１４）。全体的により低い用量のベクターコピーを有するにもかかわらず（合計で３．１５×１０１１ｖｃ対４．２×１０１１ｖｃ）、両方の構築物で処置した変異体マウスは、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２のみで処置した変異体マウスと同じくらい成長し（図１５及び１６）、等しい力及び運動協調性を示した（図１７、１８及び１９）。６０日目に、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２とＡＡＶ２−ｈＴＫ２の両方で処置した変異体マウスは、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２のみで処置したものよりもわずかに高いｍｔＤＮＡレベルを示した（図２０）。ＡＡＶ９−ｈＴＫ２とＡＡＶ２−ｈＴＫ２の組み合わせで処置したマウスはまた、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２のみで処置したマウスと比較して、尿中のタンパク質含量の減少（図２１）、指数ＢＵＮのわずかに低いレベル（図２２）、肝臓でのより高いＴｋ２活性（図２３）を示した。
【０３２８】
ｍｔＤＮＡ、尿中のタンパク質及びＢＵＮの組み合わせたデータは、腎臓機能障害が、ＡＡＶ２又はＡＡＶ２＋ｄＮで同時処置したマウスにおいて遅延され得、それは寿命も増加させることを示した。
【０３２９】
実施例１０−追加のヌクレオシドの投与は遺伝子治療の効果を高める
実施例９のＡＡＶ９−ｈＴＫ２とＡＡＶ２−ｈＴＫ２の両方で処置した変異体マウス及び野生型マウスの半分に、実施例１に記載したように、飲料水中の５２０ｍｇ／ｋｇ／日の経口ｄＣ＋ｄＴをさらに投与した。マウスはマウス１匹につき１日４ｍｌを摂取すると想定される。
【０３３０】
追加のヌクレオシドを与えた変異体マウスは、著しくより長く生存し、生存期間は１８０日を超えた（図１４）。それらはまた増加された成長を有し（図１５及び１６）、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２又はＡＡＶ９−ｈＴＫ２とＡＡＶ２−ｈＴＫ２の組み合わせで処置したマウスと等しい力及び運動協調性を有した。ＡＡＶ９−ｈＴＫ２とＡＡＶ２−ｈＴＫ２の組み合わせで処置し、さらにｄＣ＋ｄＴを補充したマウスは、肝臓でより高いｍｔＤＮＡレベルを示した。
【０３３１】
実施例１１−ｄＣ＋ｄＴと組み合わせたＡＡＶ９−ｈＴＫ２の投与は、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２単独での使用を上回って生存を増加させる
実施例１に記載の変異体マウスに、出生後４日目から経口ｄＣ＋ｄＴ（ミルク中それぞれ２６０又は５２０ｍｇ／ｋｇ／日）を投与する。出生後２１日目に、マウスの半分に、実施例１に記載したようにＡＡＶ９−ｈＴＫ２を投与する。
【０３３２】
ｄＣ＋ｄＴ処置のみを与えた変異体マウスは、それぞれ２６０及び５２０ｍｇ／ｋｇ／日の用量で、平均３１日及び４０日生存した。その後にＡＡＶ９−ｈＴＫ２を投与した変異体マウスは、著しくより長く生存する。
【０３３３】
ＡＡＶ９−ｈＴＫ２を投与したマウスのうち、これらのマウスの半分に次いで、出生後３０日目にＡＡＶ２−ｈＴＫ２を投与する。ｄＣ＋ｄＴ及びＡＡＶ９−ｈＴＫ２及びＡＡＶ２−ｈＴＫ２を投与したこれらのマウスは、ｄＣ＋ｄＴ及びＡＡＶ９−ｈＴＫ２のみを投与したマウスよりも著しく長く生存する。
【０３３４】
実施例１２−ｄＣＭＰ＋ＴＭＰと組み合わせたＡＡＶ９−ｈＴＫ２の投与は、ＡＡＶ９−ｈＴＫ２単独の使用を上回って生存を増加させる
実施例１に記載の変異体マウスに、出生後４日目からｄＣＭＰ＋ＴＭＰ（それぞれミルク中２００ｍｇ／ｋｇ／日又は４００ｍｇ／ｋｇ／日）を投与する。出生後２１日目に、マウスの半分に、実施例１に記載したようにＡＡＶ９−ｈＴＫ２を投与する。
【０３３５】
ｄＣＭＰ＋ＴＭＰ処置のみを与えた変異体マウスは、それぞれ２００ｍｇ／ｋｇ／日及び４００ｍｇ／ｋｇ／日の用量で、平均３５日及び４４日生存する。その後にＡＡＶ９−ｈＴＫ２を投与した変異体マウスは、著しくより長く生存する。
【０３３６】
ＡＡＶ９−ｈＴＫ２を投与したマウスのうち、これらのマウスの半分に次いで、出生後３０日目にＡＡＶ２−ｈＴＫ２を投与する。ｄＣＭＰ＋ＴＭＰ及びＡＡＶ９−ｈＴＫ２及びＡＡＶ２−ｈＴＫ２を投与したこれらのマウスは、ｄＣ＋ｄＴ及びＡＡＶ９−ｈＴＫ２のみを投与したマウスよりも著しく長く生存する。
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６−１】
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【図６−２】
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【図７】
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【図８−１】
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【図８−２】
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【図９−１】
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【図９−２】
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【図１０−１】
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【図１０−２】
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【図１１−１】
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【図１１−２】
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【図１２】
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【図１３−１】
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【図１３−２】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０−１】
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【図２０−２】
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【図２１】
2021522173.tif 000030
【図２２】
2021522173.tif 000031
【図２３−１】
2021522173.tif 000032
【図２３−２】
2021522173.tif 000033
【手続補正書】
【提出日】令和2年12月22日(2020.12.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2021522173000001.app
【国際調査報告】
2021522173.tif 000034
2021522173.tif 000035
2021522173.tif 000036