(57)【要約】対象を網膜変性から保護するため、および／または対象におけるブドウ膜炎、網膜炎もしくは脈絡網膜炎を処置するための方法が提供される。前記方法は、ブドウ膜炎、網膜炎、もしくは脈絡網膜炎を有する、および／または網膜変性からの保護を必要とする対象を選択するステップと、対象の眼に、（ａ）インターロイキン（ＩＬ）−３４のアミノ酸１〜１８２を含むポリペプチド、ＩＬ−３４のバリアント、もしくはＩＬ−３４のＦｃ融合タンパク質であって、ｉ）抗炎症性もしくはｉｉ）神経保護性である、前記ポリペプチド、バリアント、もしくはＦｃ融合タンパク質；または（ｂ）前記ポリペプチド、バリアント、またはＦｃ融合タンパク質をコードする核酸分子を治療有効量で局所的に投与するステップとを含む。開示されている方法のいずれかにおける使用のための医薬組成物も提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象を網膜変性から保護するため、および／または対象におけるブドウ膜炎、網膜炎もしくは脈絡網膜炎を処置するための方法であって、
ブドウ膜炎、網膜炎、もしくは脈絡網膜炎を有する、および／または網膜変性からの保護を必要とする対象を選択するステップと、
前記対象の眼に、
（ａ）インターロイキン（ＩＬ）−３４のアミノ酸１〜１８２を含むポリペプチド、ＩＬ−３４のバリアント、もしくはＩＬ−３４のＦｃ融合タンパク質であって、ｉ）抗炎症性もしくはｉｉ）神経保護性である、前記ポリペプチド、バリアント、もしくはＦｃ融合タンパク質；または
（ｂ）（ａ）のポリペプチド、バリアント、もしくはＦｃ融合タンパク質をコードする核酸分子
を治療有効量で局所的に投与するステップと
を含み、それにより、前記対象において網膜変性を阻害する、および／またはブドウ膜炎、網膜炎または脈絡網膜炎を処置する、方法。
【請求項２】
前記ポリペプチド、バリアント、またはＦｃ融合タンパク質が、ｉ）調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）数を増加させる、および／またはｉｉ）ミクログリア数を増加させる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記対象に、
（ａ）配列番号１もしくは配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のポリペプチドであって、Ｔｒｅｇの活性もしくは数を増加させる、ポリペプチド；
（ｂ）配列番号１もしくは配列番号２のアミノ酸１〜１８２を含むポリペプチド；
（ｃ）配列番号１もしくは配列番号２のアミノ酸配列を含むポリペプチド、または
（ｄ）（ａ）、（ｂ）もしくは（ｃ）のポリペプチドをコードする核酸分子
を治療有効量で投与するステップを含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記対象に（ｂ）配列番号１または配列番号２のアミノ酸１〜１８２を含むポリペプチドを治療有効量で投与するステップを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記対象に（ｃ）配列番号１または配列番号２のアミノ酸配列を含むポリペプチドを治療有効量で投与するステップを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記対象に前記核酸分子を治療有効量で投与するステップを含み、前記核酸分子が、配列番号１または配列番号２のアミノ酸１〜１８２をコードする、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記核酸分子が、配列番号１または配列番号２をコードする、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記対象に、前記核酸分子に作動可能に連結したプロモーターを含むウイルスベクターを投与するステップを含む、請求項６または７に記載の方法。
【請求項９】
前記ウイルスベクターが、前記核酸分子を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ８ベクターまたはＡＡＶ７ｍ８ベクターである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記プロモーターが、構成的プロモーターである、請求項８から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記プロモーターが、サイトメガロウイルスプロモーターである、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記プロモーターが、誘導性である、請求項８から１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記ポリペプチド、バリアント、またはＦｃ融合タンパク質の発現が、テトラサイクリンおよび／またはデオキシサイクリンによって誘導される、請求項８から１３に記載の方法。
【請求項１５】
ブドウ膜炎を有する対象を選択するステップを含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記ブドウ膜炎が、前部ブドウ膜炎、中間部ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎、またはびまん性ブドウ膜炎を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ブドウ膜炎が、虹彩炎、毛様体炎、毛様体炎、毛様体扁平部炎、脈絡網膜炎、虹彩毛様体炎、または虹彩炎のうちの少なくとも１つを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記ブドウ膜炎が、外科手術、外傷、自己免疫障害、化学的刺激への曝露、炎症性障害、またはヒト白血球抗原Ｂ２７（ＨＬＡ−Ｂ２７）ハプロタイプに起因する、請求項１５から１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記対象が、感染症を有する、請求項１５から１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記感染症が、Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ  ｈｅｎｓｅｌａｅ、帯状疱疹、単純ヘルペス、レプトスピラ症、トキソカラ症、トキソプラズマ症、梅毒、結核、ライム病、ウエストナイルウイルス、サイトメガロウイルス、またはヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に起因する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
網膜炎または脈絡網膜炎を有する対象を選択するステップを含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記対象が、感染症を有する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記感染症が、細菌感染症、ウイルス感染症、原生動物感染症、または真菌感染症である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記感染症が、
（ａ）前記ウイルス感染症であり、前記ウイルスが、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、単純ヘルペス、帯状疱疹、サイトメガロウイルス、もしくはウエストナイルウイルスである、
（ｂ）前記細菌感染症であり、前記対象が、結核、梅毒、ブルセラ症、ライム病、サルコイドーシス、もしくはＹｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ感染症を有する；または
（ｃ）前記真菌感染症であり、前記真菌が、Ｃａｎｄｉｄａ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ、もしくはＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓである、
請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記対象が、眼トキソプラズマ症、眼トキソカラ症、びまん性片側性亜急性視神経網膜炎、急性網膜壊死、サイトメガロウイルス網膜炎、ベーチェット関連網膜炎、急性網膜色素上皮炎またはサルコイドーシスを有する、請求項２１から２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
網膜変性からの保護を必要とする対象を選択するステップを含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記対象が、網膜変性に関連する疾患を有する、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記対象が、緑内障を有する、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記対象が、網膜色素変性症、加齢黄斑変性、レーバー先天性黒内障、糖尿病性網膜症、アッシャーＩ型、または先天性停止性夜盲症を有する、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記対象が、哺乳動物である、請求項１から２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記哺乳動物が、ヒトである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
追加的な抗炎症剤、免疫抑制剤、抗菌剤、抗真菌剤、または免疫調節剤のうちの少なくとも１つを治療有効量で前記対象に投与するステップをさらに含む、請求項１から３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記薬剤が、グルココルチコイドまたはカルシニューリンアンタゴニストである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記ポリペプチドまたは前記核酸分子を網膜下に投与する、請求項１から３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記ポリペプチドまたは前記核酸分子を硝子体内に投与する、請求項１から３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記対象が、神経損傷またはシナプス機能障害を有する、請求項１から３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記ポリペプチドまたは前記ポリヌクレオチドが、神経保護をもたらし、ミクログリアの恒常性を増加させる、請求項１から３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
請求項１から３７のいずれか一項に記載の方法における使用のための、
（ａ）インターロイキン（ＩＬ）−３４のアミノ酸１〜１８２を含むポリペプチド、ＩＬ−３４のバリアント、もしくはＩＬ−３４のＦｃ融合タンパク質であって、ｉ）Ｔｒｅｇ数を増加させ、ｉｉ）ミクログリア数を増加させる、前記ポリペプチド、バリアント、もしくはＦｃ融合タンパク質；または
（ｂ）前記ポリペプチド、そのバリアント、もしくはそのＦｃ融合タンパク質をコードする核酸
を含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本発明は、参照により本明細書に組み込まれる、２０１８年３月２日に出願された米国仮特許出願第６２／６３７，５９２号の利益を主張するものである。
【０００２】
政府支援に関する記載
本発明は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｙｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅによるプロジェクト番号Ｚ０１＃：１Ｚ１ＡＥＹ０００４４３の下で政府の支援を受けてなされた。米国政府は本発明に関して一定の権利を有する。
【０００３】
本発明は、眼疾患の分野に関し、具体的には、対象を網膜変性から保護するため、ならびにブドウ膜炎および網膜炎を処置するための方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
インターロイキン（ＩＬ）−３４は、コロニー刺激因子（ＣＳＦ１）と同様に機能する（Ｃｓｆ１欠損をレスキュー）ホモ二量体である。ＩＬ−３４は、表皮、脳、脾臓、腎臓、および精巣を含めたいくつかの組織において構成的に発現される。ＩＬ−３４は、主にケラチノサイト、神経細胞および調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）によって産生される。ＩＬ−３４の受容体の１つは、ＣＳＦ１−Ｒ（ＣＤ１１５またはｃ−Ｆｍｓとも称される）である。これらの受容体は、マクロファージ前駆細胞、単球、破骨細胞、クッパー細胞、ランゲルハンス細胞、およびミクログリアなどの単核食作用系列の細胞に存在する。脳におけるＩＬ−３４の別の受容体（ＰＴＰ−ζ）が報告されているが、ＣＳＦ−１ノックアウトマウスにおいてＩＬ−３４のＣＳＦ１−Ｒ非依存性機能は同定されていない。ＩＬ−３４は、ミクログリアの恒常性には必須であるが、ミクログリアの胚発生には必須ではないと考えられる。ＩＬ−３４は、中枢神経系の発達においてＣＳＦ−１と相補的であるが同一ではない役割を果たす。ＩＬ−３４は、例えば、シェーグレン症候群（Ciccia,  F.  et.al.  2013）、炎症性腸疾患（Zwicker,  S.  et.al.  2015）、およびループス腎炎（Menke,  J.  et.al.  2009）など、慢性炎症において役割を果たすことが示されている。
【０００５】
「ブドウ膜炎」という用語の下に群分けされる眼内炎症性疾患は、先進工業国における視覚喪失の主要な原因である。「ブドウ膜炎」とは、ブドウ膜、すなわち、虹彩、脈絡膜、および毛様体の眼内炎症を指す。ブドウ膜炎は、米国における法的盲の原因の約１０％を占めている（National  Institutes  of  Health,  Interim  Report  of  the  Advisory  Eye  Council  Support  for  Visual  Research,  U.S.  Department  of  Health  Education  and  Welfare,  Washington,  DC,  1976,  pp.  20-22）。ブドウ膜炎に関連する合併症としては、虹彩後癒着、白内障、緑内障、および網膜浮腫が挙げられる（Smith  et  al.,  Immunol.  Cell  Biol.  76:497-512,  1998）。
【０００６】
自己免疫性ブドウ膜炎は、眼の神経網膜を標的とする網膜特異的Ｔ細胞によって駆動される視覚を脅かす疾患である。実験的自己免疫性ブドウ膜炎（ＥＡＵ）の動物モデルにおける研究により、Ｔｈ１７細胞が主要なエフェクター集団であることが示される。Ｔｈ１７応答およびＩＬ−１７Ａは、患者において、および実験的な動物モデルにおいて、宿主防御および自己免疫疾患に関連付けられている。完全フロイントアジュバント中の網膜タンパク質ＩＲＢＰを用いて免疫することによって誘発される実験的自己免疫性ブドウ膜炎（ＥＡＵ）を含めた自己免疫のモデルにおいて、ＩＬ−１７ＡはＴｈ１７シグネチャーサイトカインとして認識され、ＩＬ−１７Ａ産生Ｔ細胞は病原性エフェクターである。
【０００７】
ブドウ膜炎の処置は、多くの場合、炎症性症状の制御に焦点を合わせたものである。そのような場合では、眼における炎症を抑制するためにコルチコステロイドが使用されることも多い。前部ブドウ膜炎は、多くの場合、点眼剤を用いた局所的ステロイド処置に応答する。しかし、後部ブドウ膜炎または汎ブドウ膜炎の処置に関して、点眼では通常、眼の後部分にステロイドが治療レベルでは供給されない。局所注射が失敗した場合にはコルチコステロイドを用いた全身性処置が使用されることも多い。しかし、ブドウ膜炎の最も重症の症例の多くは、高用量の全身性コルチコステロイド治療に応答しない。さらに、そのような全身性治療の副作用として、高血圧、高血糖、消化性潰瘍、クッシング様特徴、骨粗鬆症、成長限定、ミオパチー、精神病、および感染症への易罹患性の増加を挙げることができ、これらは壊滅的なものであり得る。最後に、局所的および全身性のステロイド治療の多くには、緑内障、白内障、および眼感染症への易罹患性などの、潜在的に視覚を脅かす副作用もある。タクロリムス、シロリムス、およびミコフェノール酸（mycophelonate）モフェチルなどの、より新しい免疫抑制剤がブドウ膜炎の処置における使用に関して調査されている。しかし、これらの薬物にも重篤な副作用がある（Anglade  and  Whitcup,  Drugs  49:213-223,  1995）。したがって、眼の炎症性疾患を処置するための新しい方法が必要とされている。
【０００８】
緑内障は、不可逆的な失明の世界での主な原因の１つであり、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）およびそれらの軸索のゆっくりと進行する変性によって特徴付けられる（Tham  et  al.,  Ophthalmology  2014;  121:2081-2090）。緑内障は原発性疾患であることが多いが、ブドウ膜炎およびいくつかの他の状態の合併症としても生じ得る。ＲＧＣは、網膜の光伝達視覚路における最終ステージとして作動し、視神経を作り、それらの軸索に沿って脳への電気化学的情報の投影を行う。ＲＧＣは、取り替えができないものであり、それらの機能障害およびその後の喪失が、視覚、したがって生活の質の重度の損害になる。現行の治療により緑内障に関連する極めて重要な危険因子である眼圧（ＩＯＰ）を首尾よく低下させることができるが、神経保護戦略は現在のところ存在しない。したがって、緑内障、ならびに他の網膜および視神経の神経変性疾患を処置するために使用することができる薬剤も依然として必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】National  Institutes  of  Health,  Interim  Report  of  the  Advisory  Eye  Council  Support  for  Visual  Research,  U.S.  Department  of  Health  Education  and  Welfare,  Washington,  DC,  1976,  pp.  20-22
【非特許文献２】Smith  et  al.,  Immunol.  Cell  Biol.  76:497-512,  1998
【非特許文献３】Anglade  and  Whitcup,  Drugs  49:213-223,  1995
【非特許文献４】Tham  et  al.,  Ophthalmology  2014;  121:2081-2090
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
開示の概要
ＩＬ−３４が神経炎症および網膜の保護において役割を果たすことが本明細書に開示される。例えば、眼の環境におけるＩＬ−３４の治療的発現により、神経網膜が、能動的に誘導されるブドウ膜炎から保護された。ＩＬ−３４はまた、網膜変性を阻害するためにも使用することができる。
【００１１】
一部の実施形態では、対象を網膜変性から保護するため、および／または対象におけるブドウ膜炎、網膜炎もしくは脈絡網膜炎を処置するための方法が提供される。方法は、ブドウ膜炎、網膜炎、もしくは脈絡網膜炎を有する、および／または網膜変性からの保護を必要とする対象を選択するステップと、対象の眼に、（ａ）インターロイキン（ＩＬ）−３４のアミノ酸１〜１８２を含むポリペプチド、ＩＬ−３４のバリアント、もしくはＩＬ−３４のＦｃ融合タンパク質であって、ｉ）抗炎症性もしくはｉｉ）神経保護性である、ポリペプチド、バリアント、もしくはＦｃ融合タンパク質；または（ｂ）ポリペプチド、バリアント、もしくはＦｃ融合タンパク質をコードする核酸分子を治療有効量で局所的に投与するステップとを含む。ポリペプチド、バリアント、またはＦｃ融合タンパク質は、ｉ）調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）数を増加させ得る、および／またはｉｉ）ミクログリア数を増加させ得る。対象は、これだけに限定されないが、ヒトなどの任意の哺乳動物であり得る。眼への局所投与としては、これだけに限定されないが、硝子体内または網膜下投与が挙げられる。
【００１２】
開示されている方法のいずれかにおける使用のための医薬組成物が提供される。この組成物は、（ａ）インターロイキン（ＩＬ）−３４のアミノ酸１〜１８２を含むポリペプチド、ＩＬ−３４のバリアント、もしくはＩＬ−３４のＦｃ融合タンパク質であって、ｉ）Ｔｒｅｇ数を増加させ、ｉｉ）ミクログリア数を増加させるポリペプチド、バリアント、もしくはＦｃ融合タンパク質、および／または（ｂ）ポリペプチド、そのバリアント、もしくはそのＦｃ融合タンパク質をコードする核酸を含む。
【００１３】
添付の図面を参照して進める以下のいくつかの実施形態の詳細な説明から、本発明の前述および他の特徴および利点がより明白になる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】ブドウ膜炎患者の血漿中に検出可能なレベルのＩＬ−３４は、存在する。
【００１５】
【図２】ＩＬ−３４は、眼組織において構成的に発現され、疾患増悪と共に下方調節される。
【００１６】
【図３】眼組織において種々の細胞がＩＬ−３４受容体を発現する。
【００１７】
【図４】ＩＬ−３４およびＣｓｆ１が眼組織において構成的に発現され、光受容体細胞がＩＬ−３４の主要な産生細胞である。
【００１８】
【図５】疾患の発症時の眼内環境におけるＩＬ−３４の枯渇により、実験的自己免疫性ブドウ膜炎（ＥＡＵ）の重症度は変更されなかった。
【００１９】
【図６】ＩＬ−３４欠損は、ＥＡＵ重症度に影響を及ぼさなかった。
【００２０】
【図７】ＩＬ−３４の外因性発現により、ブドウ膜炎からの保護が付与された（グラフ）。
【００２１】
【図８】ＩＬ−３４の外因性発現により、ブドウ膜炎からの保護が付与された（デジタル画像）。
【００２２】
【図９】図９は、ヒトＩＬ−３４とマウスＩＬ−３４のアラインメントである（配列番号１および配列番号２）。
【００２３】
【図１０Ａ】図１０Ａ〜１０Ｂは、実施例の節に開示されている実験に使用したｐＶ５．２  ＣＭＶ  ｍＩＬ−３４の核酸配列（配列番号６）である。
【図１０Ｂ】図１０Ａ〜１０Ｂは、実施例の節に開示されている実験に使用したｐＶ５．２  ＣＭＶ  ｍＩＬ−３４の核酸配列（配列番号６）である。
【００２４】
【図１１Ａ−１１Ｃ】網膜におけるＡＡＶ８媒介性ＩＬ−３４の外因性発現の結果、高ウイルス力価で使用した場合、ミクログリア細胞の増殖および活性化、その後の視覚の段階的な喪失がもたらされた。
【００２５】
【図１２Ａ−１２Ｄ】図１２Ａ〜１２Ｄは、外因性発現にはＡＡＶ８−ＩＬ３４粒子７×１０５個の低用量で十分であったが、ＥＡＵからの保護のためには１×１０７個が最適な予防用量であることが見いだされたことを示す。
【００２６】
【図１３】図１３は、ＥＡＵの間にＡＡＶ８−ＩＬ−３４（１×１０７個）で処置したマウス網膜のトランスクリプトームプロファイルを示す。
【００２７】
【図１４Ａ−１４Ｂ】図１４Ａ〜１４Ｂは、先天性ＩＬ−３４欠損により、網膜内のミクログリア細胞集団が減少し、誘発ＥＡＵのマウスモデルにおけるブドウ膜炎の臨床像が低下することを示す。
【００２８】
【図１５】図１５は、網膜の種々の変性状態により、マウス網膜におけるＩＬ−３４の内在性レベルの低下がもたらされることを示す。
【００２９】
【図１６】図１６は、ｐＡＡＶ−Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＩＬ３４ベクターである。このベクターの配列は配列番号９として提供される。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
配列表
添付の配列表に列挙されている核酸配列およびアミノ酸配列は、３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．１．８２２において定義されている通り、ヌクレオチド塩基については標準の文字略語、およびアミノ酸については３文字コードを使用して示されている。各核酸配列の一方の鎖のみが示されているが、示されている鎖への言及のいずれにも相補鎖が含まれると理解されたい。配列表は、ＡＳＣＩＩテキストファイル［Sequence_Listing,  March  1,  2019,  32.4KB］として提出され、参照により本明細書に組み込まれる。添付の配列表中：
【００３１】
配列番号１は、ヒトＩＬ−３４の例示的なアミノ酸配列である。
【００３２】
配列番号２は、マウスＩＬ−３４の例示的なアミノ酸配列である。
【００３３】
配列番号３は、ヒトＩＬ−３４をコードする例示的な核酸配列である。
【００３４】
配列番号４は、マウスＩＬ−３４をコードする例示的な核酸配列である。
【００３５】
配列番号５は、光受容体間レチノイド結合ペプチドのアミノ酸配列である。
【００３６】
配列番号６は、ｐＶ５．２  ＣＭＶ  ｍＩＬ−３４の核酸配列である。
【００３７】
配列番号７は、デオキシサイクリン（deoxycycline）誘導性プロモーターの例示的な核酸配列である。
【００３８】
配列番号８は、ＡＡＶ７ｍ８の核酸配列である。
【００３９】
配列番号９は、ｐＡＡＶ−Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＩＬ３４ベクターの核酸配列である。
【００４０】
いくつかの実施形態の詳細な説明
ＩＬ−３４は、免疫調節機能を有する。例えば、ＩＬ−３４により分化した単球では、ＴＮＦαおよびＩＬ−１βの発現が下方調節される（Zwicker,  S.  et.al.  2015）。さらに、ＩＬ−３４の存在下で分化したマクロファージでは、ＩＬ−１０発現が上方調節される（Zwicker,  S.  et.al.  2015）。このサイトカインはまた、Ｔ細胞生物学においてもいくつかの役割を有する（Bezie,  S.  et.al.  2015;  J.  Clin.  Invest.）。例えば、ラットにおいて、ＩＬ−３４による処置により、同種異系移植片耐性が促進され、これは、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の誘導によって媒介された。さらに、ＩＬ−３４と共に培養したヒトマクロファージでは、優れたサプレッサー機能を有するＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇが増えた。ＩＬ−３４は、ラットＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＣｌｏＴｒｅｇおよびヒトＦｏｘｐ３＋ＣＤ４５ＲＣｌｏＣＤ８＋およびＣＤ４＋Ｔｒｅｇによっても発現される。ＩＬ−３４はまた、アルツハイマー病モデルにおける神経保護効果も有する（Mizuno,  et.al.,  Am.  J.  Pathol.  179:2016-2027,  2011）。理論に束縛されることなく、ＩＬ−３４は、Ｔｒｅｇの活性および／または数を増加させることによってその効果を発揮することができる。
【００４１】
ＩＬ−３４およびその受容体が網膜において構成的に発現されることが本明細書に開示される。自己免疫性ブドウ膜炎のモデルでは、ＩＬ−３４のレベルが低減された。眼の環境におけるＩＬ−３４の治療的発現により、神経網膜が、盛んに誘発されるブドウ膜炎から保護されることが決定された。したがって、炎症を低下させ、網膜変性を阻害するためにＩＬ−３４を使用することができる。
【００４２】
用語
以下の用語および方法の説明は、本開示をよりよく説明するため、および本開示の実施に関して当業者をガイドするために提供される。単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈により明確に別段の規定がなされない限り、１つまたは１つよりも多くを指す。例えば、「１つの細胞を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ  ａ  ｃｅｌｌ）」という用語は、単一の細胞または複数の細胞を含み、「少なくとも１つの細胞を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ  ａｔ  ｌｅａｓｔ  ｏｎｅ  ｃｅｌｌ）」という句と等価であるとみなされる。「または（ｏｒ）」という用語は、文脈によりそうでないことが明白に示されない限り、記載されている代替要素のうちの単一の要素または２つもしくはそれよりも多くの要素の組合せを指す。本明細書で使用される場合、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」を意味する。したがって、「ＡまたはＢを含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ  Ａ  ｏｒ  Ｂ）」は、「Ａ、Ｂ、またはＡとＢとを含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  Ａ，Ｂ，ｏｒ  Ａ  ａｎｄ  Ｂ）」を意味し、追加的な要素は排除されない。本明細書で言及されるＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受託番号の日付は、少なくとも２０１５年９月１６日には入手可能であった配列である。本明細書において引用されている全ての参考文献、特許出願および刊行物、ならびにＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受託番号が参照により組み込まれる。本開示の種々の実施形態の精査を容易にするために、以下の特定の用語に関する説明を提供する。
【００４３】
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）：ＡＡＶは、ヒトおよびいくつかの他の霊長類種に感染する小さなウイルスである。ＡＡＶは、疾患を引き起こすことは現在知られておらず、したがって、当該ウイルスは非常に軽度の免疫応答を引き起こす。ＡＡＶは、分裂細胞および非分裂細胞のどちらにも感染し得、宿主細胞において主にエピソーム形態で存在する。ＡＡＶゲノムは、プラスセンスまたはマイナスセンスのいずれかの一本鎖デオキシリボ核酸（ｓｓＤＮＡ）で構成され、約４．７キロベース（ｋｂ）長である。ゲノムは、ＤＮＡ鎖の両末端の逆方向末端反復（ＩＴＲ）、ならびに２つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）：ｒｅｐおよびｃａｐを含む。ＲｅｐはＡＡＶ生活環に必要なＲｅｐタンパク質をコードする４つの重複した遺伝子で構成され、Ｃａｐは、一緒に相互作用して正二十面体対称のカプシドを形成するカプシドタンパク質：ＶＰ１、ＶＰ２およびＶＰ３の重複するヌクレオチド配列を含有する。遺伝子治療に関して、ＩＴＲは、治療用遺伝子に隣接してシスで（in  cis）必要とされる唯一の配列であると思われる：構造遺伝子（ｃａｐ）およびパッケージング遺伝子（ｒｅｐ）は、トランスで（in  trans）送達することができる。
【００４４】
加齢黄斑変性（ＡＭＤ）：米国および他の先進工業国において失明の主要な原因となっている疾患。（Evans  J,  Wormald  R.,  British  Journal  Ophthalmology  80:9-14,  1996；Klein  R,  Klein  B  E  K,  Linton  K  L  P,  Ophthalmology  99:933-943,  1992；Vingerling  J  R,  Ophthalmology  102:205-210,  1995）。初期ＡＭＤは、網膜色素上皮（ＲＰＥ）の真下に位置する、タンパク質、脂質、および細胞デブリの細胞外沈着物であるドルーゼン（Hageman  G  S,  Mullins  R  F,  Mol  Vis  5:28,  1999）によって臨床的に特徴付けられる。ＲＰＥは、その上を覆う光受容体への栄養機能、代謝機能、および食作用機能をもたらす。有意な視力喪失は、ＡＭＤの後期ステージ（網膜色素上皮細胞の地図状萎縮および網膜下血管新生）と関連して斑における光受容体の機能障害または死に起因する。
【００４５】
細胞培養物：制御された条件下で成長させた細胞。初代細胞培養物は、生物体から直接取得し、最初の継代培養をする前の細胞、組織または器官の培養物である。細胞は、細胞の成長および／または分裂を容易にする条件下で成長培地に入れると、培養物中で増え、その結果、当該細胞のより大きな集団が生じる。
【００４６】
先天性停止性夜盲症：非進行性網膜障害であり、重症度に応じて２つの形態、１型としても公知の完全型（ＣＳＮＢ１）および２型（ＣＳＮＢ２）としても公知の不完全型がある。完全型（ＣＳＮＢ１）では光に対する測定可能な杆体細胞応答が見られないが、この応答は不完全型では測定可能である。患者は、光受容体伝達が損なわれているので光が少ない状況への適合が困難である。これらの患者はまた、多くの場合、視力の低下、近視、眼振、および斜視も有する。ＣＳＮＢ１は、網膜シナプス形成またはシナプス伝達に関与するタンパク質をコードする遺伝子ＮＹＸの変異によって引き起こされる。ＣＳＮＢ２は、電位依存性カルシウムチャネルＣａＶ１．４をコードする遺伝子ＣＡＣＮＡ１Ｆの変異によって引き起こされる。
【００４７】
サイトカイン：リンパ球などの他の細胞の挙動に影響を及ぼす細胞によって作られるタンパク質。一実施形態では、サイトカインは、細胞の輸送に影響を及ぼす分子であるケモカインである。別の実施形態では、サイトカインは、リンパ球の成熟化を変更し、Ｂ細胞によるアイソタイプ切り換えに影響を及ぼすものである。
【００４８】
糖尿病性網膜症：糖尿病の対象において生じる網膜の変性。糖尿病性網膜症は、網膜の小血管およびニューロンへの損傷の結果として生じる。糖尿病の網膜において検出される最も早い変化としては、網膜の血流の低下を伴う網膜動脈の狭小化；後期ステージには視覚機能のわずかな変化および血液網膜関門の機能障害を伴う網膜の外側の機能の変化があり、網膜内部のニューロンの機能障害が挙げられる。後に、網膜血管の基底膜が肥厚し、毛細血管が変性し、細胞、特に周皮細胞および血管平滑筋細胞が失われ、それにより、血流の喪失および進行性虚血、ならびに顕微鏡レベルの動脈瘤がもたらされる（eading  to）。さらに、網膜のニューロンおよびグリア細胞の機能障害および変性が存在する。
【００４９】
非増殖性糖尿病性網膜症（ＮＰＤＲ）と称される第１のステージでは、臨床症状はない（または最小である）。しかし、眼底撮影により、毛細血管瘤が明らかになる。視覚が低下している場合、蛍光眼底造影により網膜虚血が明らかになる。ＮＰＤＲのあらゆるステージで黄斑浮腫が生じ得る。この黄斑浮腫の症状は、霧視および両眼で同じではない暗いまたは歪んだ像である。糖尿病患者の１０パーセントが、黄斑浮腫に関連する視力喪失を有する。光干渉断層撮影により、黄斑浮腫の網膜肥厚（流体の蓄積に起因する）の領域が示される。
【００５０】
第２のステージでは、増殖性糖尿病性網膜症（ＰＤＲ）の一部として血管新生が生じる；硝子体出血が生じ、視覚がかすむ恐れがある。この出血が最初に生じた時はそれほど重症ではない可能性がある。ほとんどの場合、ごくわずかな血液の小斑点、または斑点浮遊が人の視野に残るが、この斑点は多くの場合、数時間後になくなる。これらの斑点の後、多くの場合、数日または数週間以内に、はるかに大きな血液の漏出があり、これにより視覚がかすむ。極度の場合には、人はその眼で明暗しかわからなくなる恐れがある。血液が眼の内側から除かれるのに、数日から数年かかる場合がある（一部の場合では除かれない）。
【００５１】
下流：ポリヌクレオチド上の相対的な位置であり、「下流」の位置は、基準点よりもポリヌクレオチドの３’末端に近い。二本鎖ポリヌクレオチドの場合では、５’末端および３’末端の方向性は、アンチセンス鎖と対照的にセンス鎖に基づく。
【００５２】
実験的自己免疫性ブドウ膜網膜炎（ＥＡＵ）：いくつかの網膜自己抗原によって誘発することができるブドウ膜炎の動物モデル（Gery  and  Streilein,  Curr.  Opinion  Immunol.  6:938,  1994；Nussenblatt  and  Gery,  J.  Autoimmunity  9:575-585,  1996；Gery  et  al.,  "Autoimmune  Diseases  of  the  Eye.  In:  Theofilopoulosand  Bona"  (eds.),  The  Molecular  Pathology  of  Autoimmune  Diseases,  2nd  Edition,  Taylor  and  Francis,  New  York,  pp.  978-998,  2002を参照されたい）。一般に、眼内炎症は、非ヒト動物種において自己抗原を使用して誘発される。例えば、マウス、ラット、ウサギまたはブタの、眼特異的抗原での免疫処置を使用して、モデル系を作製することができる。アレスチンおよび光受容体間レチノールタンパク質（ＩＲＢＰ、アミノ酸配列に関してはＳｗｉｓｓｐｒｏｔ受託番号Ｐ１２６６１、Ｐ４９１９４、Ｐ１２６６２を参照されたい）は、どちらもＥＡＵを生じさせるために使用されている。
【００５３】
最も多く評価された抗原およびモデル系の１つは、網膜Ｓ−抗原（Ｓ−Ａｇ、Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔ受託番号Ｑ９９８５８、Ｐ１０５２３、Ｐ２０４４３、Ｐ３６５７６を参照されたい）によって誘発されるＥＡＵである。Ｓ−Ａｇは、リン酸化された細胞色素に結合し、トランスデューシンと視覚的カスケードの光励起された光受容体との相互作用を遮断する。Ｓ−Ａｇは、実質的な数の内在性中間部および後部ブドウ膜炎のヒト患者が一貫してｉｎ  ｖｉｔｒｏ増殖応答を示す唯一の網膜自己抗原である（Nussenblatt  et  al.,  Am.  J.  Ophthalmol.  89:173,  1980；Nussenblatt  et  al.,  Am.  J.  Ophthalmol.  94:147,  1982）。Ｓ−Ａｇのアミノ酸配列全体が記載されており、それぞれ齧歯類および非ヒト霊長類においてブドウ膜炎性（uveitogenicity）が実証されている（Donoso  et  al.,  Curr.  Eye  Res.  8:  1151,  1987；Singh  et  al.,  Cell.  Immunol.  115:413,  1988）ＮおよびＭと称される２つの断片を含む。このモデルの免疫操作は、ＥＡＵモデルで最初に試験されたヒトにおけるシクロスポリン使用の臨床的効果で実証されている通り、ヒトブドウ膜網膜炎に関して優れた予測的な価値を有すると思われる（Nussenblatt  et  al.,  J.  Clin.  Invest.  67:1228,  1981）。
【００５４】
Ｆｃポリペプチド：最初の定常領域免疫グロブリンドメインを除外した抗体の定常領域を含むポリペプチド。Ｆｃ領域とは、一般に、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＧの最後２つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ならびにＩｇＥおよびＩｇＭの最後３つの定常領域免疫グロブリンドメインを指す。Ｆｃ領域は、これらのドメインに対してＮ末端の柔軟なヒンジの一部または全部も含み得る。ＩｇＡおよびＩｇＭに関しては、Ｆｃ領域は、尾部（tailpiece）を含んでもよく含まなくてもよく、また、Ｊ鎖が結合していても結合していなくてもよい。ＩｇＧに関しては、Ｆｃ領域は、免疫グロブリンドメインＣｇａｍｍａ２およびＣｇａｍｍａ３（Ｃγ２およびＣγ３）、ならびにＣｇａｍｍａ１（Ｃγ１）とＣγ２との間のヒンジの下部を含む。Ｆｃ領域の境界は変動し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、典型的には残基Ｃ２２６またはＰ２３０からカルボキシル末端までを含み、ここで、番号付けはＫａｂａｔのようなＥＵ指針に従う。ＩｇＡに関しては、Ｆｃ領域は、免疫グロブリンドメインＣａｌｐｈａ２およびＣａｌｐｈａ３（Ｃα２およびＣα３）、ならびにＣａｌｐｈａ１（Ｃα１）とＣα２との間のヒンジの下部を含む。
【００５５】
ＦＯＸＰ３：「ＦＫＨｓｆ」または「スクルフィン」としても公知の転写因子。ＦＯＸＰ３をコードする例示的な核酸、およびＦＯＸＰ３ポリペプチドの例示的なアミノ酸配列は、参照により本明細書に組み込まれる公開ＰＣＴ出願第０２／０９０６００Ａ２号に開示されている。ＦＯＸＰ３転写因子は、Ｔｒｅｇ細胞によって優勢に発現される。ＦＯＸＰ３は、サイトカイン産生およびＴエフェクター細胞活性化の細胞間接触依存性阻害の調節因子である。ＦＯＸＰ３の変異は、ｓｃｕｒｆｙマウスおよびＩＰＥＸ（免疫調節不全、多腺性内分泌障害、および腸疾患、Ｘ連鎖）を有するヒトに関与することが示されている。ＦＯＸＰ３発現により、末梢ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞に抑制機能が付与される。
【００５６】
融合タンパク質：一緒に融合した少なくとも２つのドメインを有するタンパク質。一般に、開示される融合物のドメインは、各タンパク質ドメイン（またはサブドメイン）をコードする核酸分子が、例えば、直接またはリンカーオリゴヌクレオチドを通じてなどで機能的に連結しており、それにより、融合タンパク質をコードする（キメラ）核酸分子が生じるという点で、遺伝子的に融合している。そのような融合物をコードする（キメラ）核酸分子の翻訳産物は、融合タンパク質（例えば、ＩＬ−３４と連結したＦｃポリペプチドを含む融合タンパク質、すなわち、「Ｆｃ融合タンパク質」）である。
【００５７】
緑内障：網膜神経節細胞死、視神経乳頭の陥凹および視野の段階的な喪失により特徴付けられる眼の障害。異常に高い眼圧が眼に有害であることが一般に公知であり、緑内障の主要な危険因子の１つである。緑内障患者では、高眼圧の結果、網膜の変性的変化が生じ得る。「高眼圧症」は、眼圧が異常に高い個体における、視野や視神経乳頭の欠陥のいかなる顕在化も伴わない臨床的状況を指す。高眼圧症の個体は、緑内障への変換のリスクを保有し、このリスクは、より高い眼圧測定値と相関する。
【００５８】
緑内障は、開放隅角形態と閉塞隅角形態に分けることができ、急性形態と慢性形態にさらに分類することができる。正常眼圧緑内障も存在する。緑内障は、原発緑内障または続発緑内障であり得る。全ての緑内障の症例の８０％よりも多くが慢性開放隅角緑内障（ＣＯＡＧ）であり、これは原発開放隅角緑内障とも称される。これらの緑内障の形態のいずれも、本明細書に開示される方法を使用して処置することができる。
【００５９】
「原発閉塞隅角緑内障」は、虹彩、小柱網、および末梢角膜の間の接触によって引き起こされ、それにより次に、眼からの房水の流出が妨げられる。虹彩と小柱網（ＴＭ）との間のこの接触は、それが房水産生と歩調を合わせられなくなり、圧力が上昇するまで、小柱網の機能を徐々に損傷する可能性がある。全症例の過半数で、虹彩とＴＭとの持続的な接触により、癒着の形成が引き起こされる（事実上「傷痕を残す」）。これらにより、房水流出の恒久的な閉塞が引きこされる。一部の場合では、眼圧が急速に高まり、それにより、疼痛および発赤が引き起こされる恐れがある（症候性、またはいわゆる「急性」閉塞隅角）。この状況では、視覚がかすむ可能性があり、また、明るい光の周囲に暈輪が見られる可能性がある。付随的な症状としては、頭痛および嘔吐を挙げることができる。診断は、身体的な徴候および症状：瞳孔の中等度散大および光に対する不応答性、角膜浮腫（混濁）、視覚の低下、発赤、ならびに疼痛から行うことができる。しかし、大多数の症例が無症候性である。これらの症例は、非常に重度の視力喪失の前には、一般に眼科専門家による検査によってしか同定されない。
【００６０】
「原発開放隅角緑内障」は、視神経損傷の結果、進行性の視野の喪失が生じた場合に生じる。原発開放隅角緑内障の全員が正常を超えて上昇した眼圧を有するわけではない。圧の上昇は、房水流出経路の遮断によって引き起こされる。顕微鏡レベルの通路が遮断され、眼圧が高まり、非常に段階的なわずかな視力喪失が引き起こされる。周辺視が最初に影響を受けるが、処置しなければ最終的に視覚全体が失われる。診断は、視神経陥凹を探すことおよび視野を測定することによって行うことができる。プロスタグランジンアゴニストは、ブドウ膜強膜路を広げることによって働く。
【００６１】
緑内障の他の形態は、発達緑内障および続発緑内障であり、これらは、ブドウ膜炎、虹彩毛様体炎、眼内出血、外傷、または眼内腫瘍の後に生じ得る。あらゆる形態の緑内障を、本明細書に開示される方法を使用して処置することができる。
【００６２】
緑内障では網膜神経節細胞死が生じる。網膜神経節細胞の生存を増加させるための方法が本明細書に開示される。
【００６３】
免疫抑制剤：炎症反応などの免疫応答を低減することができる化学化合物、小分子、ステロイド、核酸分子、または他の生物学的薬剤などの分子。免疫抑制剤としては、これだけに限定されないが、ブドウ膜炎、網膜炎および脈絡網膜炎の処置において有用な薬剤が挙げられる。免疫抑制剤の具体的な非限定的な例は、コルチコステロイド、シクロスポリンＡ、ＦＫ５０６、および抗ＣＤ４である。
【００６４】
免疫応答：Ｂ細胞、Ｔ細胞、またはマクロファージなどの免疫系の細胞の、刺激に対する応答。一実施形態では、応答は、特定の抗原に対して特異的である（「抗原特異的応答」）。
【００６５】
炎症：病原体、損傷細胞、または刺激物などの有害な刺激に対する体組織の複雑な生物学的応答であり、免疫細胞、血管、および分子メディエーターが関与する防御応答である。炎症の機能は、細胞傷害の最初の原因を排除し、壊死細胞および損傷組織を元の侵襲および炎症過程から取り除くこと、ならびに組織修復を開始することである。
【００６６】
急性炎症の古典的な徴候は、熱（ｃａｌｏｒ）、疼痛（ｄｏｌｏｒ）、発赤（ｒｕｂｏｒ）、腫脹（ｔｕｍｏｒ）（熱（heat）、疼痛（ｐａｉｎ）、発赤（ｒｅｄｎｅｓｓ）および腫脹（ｓｗｅｌｌｉｎｇ））ならびに機能喪失である。炎症は、一般的な応答であり、したがって、各病原体に特異的である適応免疫とは対照的に、自然免疫の機構とみなされる。「慢性炎症」として公知の持続的な炎症は、単核細胞などの炎症部位に存在する細胞の型の進行性シフトをもたらし、また、炎症過程からの組織の同時に起こる破壊および治癒によって特徴付けられる。「眼炎症」は、眼の炎症である。「ブドウ膜炎」は、眼内炎症である。抗炎症剤により炎症が低減する。
【００６７】
疾患を阻害することまたは処置すること：例えば、ブドウ膜炎および／または眼表面炎症などの疾患のリスクがある対象における疾患または状態の完全な発生を阻害すること。「処置」は、疾患または病的状態の徴候または症状が発生し始めた後にそれを軽減する治療介入を指す。「軽減すること」という用語は、疾患または病的状態に関しては、処置によるあらゆる観察可能な有益な効果を指す。有益な効果は、例えば、易罹患性患者における疾患の臨床症状の発症の遅延、疾患の臨床症状の一部もしくは全部の重症度の低下、疾患の増悪が遅いこと、対象の全体的な健康もしくは健康状態（well-being）の改善によって、または特定の疾患に特異的な当技術分野で周知の他のパラメーターによって証明することができる。「予防的」処置は、疾患の徴候を示していないまたは初期の徴候しか示していない対象に対して、病状が発生するリスクを低減させる目的で投与される処置である。
【００６８】
眼内投与：薬剤を、例えば、硝子体中、もしくは前眼房中、または網膜下に送達することによって眼内に直接、局所的に投与すること。間接的な眼内送達（例えば、角膜を通じた拡散によるもの）は眼内への直接投与ではない。
【００６９】
硝子体内投与：薬剤を硝子体腔中に投与すること。硝子体腔は、眼の中心部の体積の大部分を占める空間であり、その前縁として水晶体およびその懸垂系（毛様小帯）、ならびに周囲縁として網膜およびその被覆部を伴う。硝子体内投与は、注射、ポンピングによって、または埋め込みによって実現することができる。
【００７０】
単離された：「単離された」生物学的構成成分は、当該構成成分が天然に存在する生物体の細胞内の他の生物学的構成成分、例えば、他の染色体および染色体外ＤＮＡおよびＲＮＡ、ならびにタンパク質などから実質的に分離されている、それらと切り離して作製されている、またはそれらから離して精製されている。したがって、「単離された」核酸、ペプチドおよびタンパク質は、標準の精製方法によって精製された核酸およびタンパク質を含む。この用語は、宿主細胞における組換え発現によって調製された核酸、ペプチド、およびタンパク質、ならびに化学的に合成された核酸も包含する。
【００７１】
レーバー先天性黒内障（ＬＣＡ）：出生時または生後数カ月のうちに出現する稀な遺伝性の眼疾患であり、主に網膜に影響を及ぼす。ＬＣＡは多数の遺伝子に関連するので、症状（ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ）は変動し得る。しかし、ＬＣＡは、眼振、羞明、瞳孔反射が緩慢であることまたは瞳孔反射がないこと、および重度の視力喪失または失明によって特徴付けられる（characterized  by  characterized  by）。
【００７２】
通常は眼に入ってくる光の量に応答して拡大収縮する瞳孔が、正常に光に反応しない。その代わりに、瞳孔は、正常よりもゆっくりと拡大収縮する、または光に全く応答しない場合もある。さらに、眼を覆っている透明な前面（角膜）が円錐形で異常に薄くなる場合があり、この状態は円錐角膜として公知である。
【００７３】
フランセスケッティの眼指徴候（Ｆｒａｎｃｅｓｃｈｅｔｔｉ’ｓ  ｏｃｕｌｏ−ｄｉｇｉｔａｌ  ｓｉｇｎ）と称される特異的な挙動は、レーバー先天性黒内障の特性である。この徴候は、指関節または指で眼を突くこと、押すこと、および、こすることからなる。
【００７４】
ミクログリア：脳および脊髄全体を通して位置する神経膠細胞（グリア細胞）の１種。ミクログリアは、中枢神経系（ＣＮＳ）の主要な免疫細胞であり、末梢マクロファージと同様に作用する。しかし、ミクログリア細胞は、非常に可塑性であり、種々の構造的な変化を受ける；これにより、ミクログリアはマクロファージと区別される。ミクログリアは、局所的な条件および化学的シグナルに応答して特異的な表現型に適合する。ミクログリア細胞は、その所定の領域を動くが、あらゆる外来物質、損傷細胞、アポトーシス細胞、神経原線維変化、ＤＮＡ断片、またはプラークを見つけると、「活性化」し、その物質または細胞を貪食する。したがって、活性化されたミクログリア細胞は、細胞デブリを貪食する「ハウスキーパー」として作用する。炎症後、ミクログリアは、神経組織の再成長を促進するためのいくつかのステップを受ける。これらとしては、シナプス除去、抗炎症性サイトカインの分泌、ニューロンおよびアストロサイトの損傷領域への動員、ならびに格子細胞の形成が挙げられる。
【００７５】
神経保護：ニューロン構造および／または機能の保存。進行中の侵襲（神経変性侵襲）の場合には、薬剤は、ニューロン完全性の相対的保存が経時的なニューロン喪失率の低下を意味する場合、「神経保護性」である。神経保護によって、ニューロンの喪失が停止または遅くなることにより、疾患増悪および二次傷害が防止されるまたは遅くなる。神経保護の具体的な非限定的な機構としては、酸化ストレス、ミトコンドリア機能不全、興奮毒性、炎症性変化、鉄の蓄積、およびタンパク質凝集の低下が挙げられる。一部の実施形態では、炎症の低下により、神経毒性が低下し、ニューロンの生存および／または機能が増加する。
【００７６】
薬学的に許容される担体：本発明において有用な薬学的に許容される担体は、従来のものである。Remington's  Pharmaceutical  Sciences,  by  E.  W.  Martin,  Mack  Publishing  Co.,  Easton,  PA,  15th  Edition  (1975)には、本明細書において開示されている融合タンパク質の医薬送達に適した組成物および製剤が記載されている。
【００７７】
一般に、担体の性質は、利用される特定の投与形式に依存する。例えば、非経口製剤は、通常、例えば、水、生理食塩水、平衡塩類溶液、水性デキストロース、グリセロールなどの薬学的かつ生理的に許容される流体をビヒクルとして含む注射液を含む。固体組成物（例えば、散剤、丸剤、錠剤、またはカプセル剤の形態）に関しては、従来の無毒性固体担体として、例えば、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプンまたはステアリン酸マグネシウムを挙げることができる。投与される医薬組成物は、生物学的に中性の担体に加えて、微量の無毒性補助物質、例えば、湿潤剤または乳化剤、保存剤、およびｐＨ緩衝剤など、例えば、酢酸ナトリウムまたはソルビタンモノラウレートを含み得る。
【００７８】
医薬品：対象または細胞に適正に投与された場合に所望の治療効果または予防効果を誘導することができる化学化合物または組成物。「インキュベートすること」は、薬物が細胞と相互作用するために十分な時間を含む。「接触させること」は、薬物を固体または液体の形態で細胞と一緒にインキュベートすることを含む。
【００７９】
ポリヌクレオチド：任意の長さの核酸配列（線状配列など）。したがって、ポリヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドを含み、染色体において見いだされる遺伝子配列も含む。「オリゴヌクレオチド」は、ネイティブなリン酸ジエステル結合によってつながれた、複数の接合ヌクレオチドである。オリゴヌクレオチドは、６ヌクレオチドから３００ヌクレオチドの間の長さのポリヌクレオチドである。オリゴヌクレオチドアナログは、オリゴヌクレオチドと同様に機能するが、天然に存在しない部分を有する部位を指す。例えば、オリゴヌクレオチドアナログは、変更された糖部位、またはホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレオチドなどの糖間連結などの天然に存在しない部分を含有し得る。天然に存在するポリヌクレオチドの機能的なアナログとは、ＲＮＡまたはＤＮＡと結合することができるものであり、ペプチド核酸（ＰＮＡ）分子を包含する。
【００８０】
ポリペプチド：３つまたはそれよりも多くの、共有結合により付着したアミノ酸。この用語は、タンパク質、タンパク質断片、およびタンパク質ドメインを包含する。「ＤＮＡ結合性」ポリペプチドは、ＤＮＡに特異的に結合する能力を有するポリペプチドである。
【００８１】
「ポリペプチド」という用語は、天然に存在するタンパク質、および組換えによってまたは合成的に作製されたものを網羅することが具体的に意図されている。「ポリペプチドの機能性断片」という用語は、ポリペプチドの活性を保持するポリペプチドの断片全てを指す。生物学的機能性断片は、例えば、抗体分子に結合することができるエピトープほどの小ささのポリペプチド断片から、細胞内の表現型の変化の特徴的な誘導またはプログラミングに関与することができる大きなポリペプチドまで、サイズが様々であり得る。「エピトープ」は、抗原との接触に応答して生成された免疫グロブリンに結合することができるポリペプチドの領域である。したがって、インスリンの生物活性を含有するより小さなペプチド、またはインスリンの保存的バリアントがこのように有用なものとして含まれる。
【００８２】
「実質的に精製されたポリペプチド」という用語は、本明細書で使用される場合、天然ではそれに付随する他のタンパク質、脂質、炭水化物または他の材料が実質的に除かれている  ポリペプチドを指す。一実施形態では、ポリペプチドは、天然ではそれに付随する他のタンパク質、脂質、炭水化物または他の材料が少なくとも５０％、例えば、少なくとも８０％除かれている。別の実施形態では、ポリペプチドは、天然ではそれに付随する他のタンパク質、脂質、炭水化物または他の材料が少なくとも９０％除かれている。さらに別の実施形態では、ポリペプチドは、天然ではそれに付随する他のタンパク質、脂質、炭水化物または他の材料が少なくとも９５％除かれている。
【００８３】
保存的置換は、１つのアミノ酸が、サイズ、疎水性などが同様である別のアミノ酸で置き換えられたものである。保存的置換の例を以下に示す。
【表１】
2021514991.tif 000002
【００８４】
保存的であるか否かにかかわらず、アミノ酸の変化をもたらすｃＤＮＡ配列の変動は、コードされるタンパク質の機能的および免疫学的同一性を保存するために、最小化されるべきである。タンパク質の免疫学的同一性は、当該タンパク質が抗体によって認識されるかどうかを決定することによって評価することができる；そのような抗体によって認識されるバリアントは、免疫学的に保存されたものである。いずれのｃＤＮＡ配列バリアントも、コードされるポリペプチドに２０アミノ酸以下、好ましくは１０アミノ酸未満の置換が導入されることが好ましい。バリアントアミノ酸配列は、ネイティブなアミノ酸配列と、例えば、８０％、９０％またはさらには９５％または９８％同一であり得る。
【００８５】
プロモーター：プロモーターは、核酸の転写を方向付ける一群の核酸制御配列である。プロモーターは、転写の開始部位の付近に、必要な核酸配列、例えば、ポリメラーゼＩＩ型プロモーターの場合ではＴＡＴＡエレメントなどを含む。プロモーターはまた、必要に応じて、転写の開始部位から数千塩基対程度のところに位置し得る遠位エンハンサーまたはリプレッサーエレメントも含む。
【００８６】
プロモーターは、構成的に活性なプロモーター（すなわち、構成的に活性／「オン」状態にあるプロモーター）、誘導性プロモーター（すなわち、その状態が活性／「オン」であるか不活性／「オフ」であるかが、外部刺激、例えば、特定の温度、化合物、またはタンパク質の存在によって制御されるプロモーター）、空間的に制限されたプロモーター（例えば、組織特異的プロモーター、細胞型特異的プロモーターなど）であってもよく、時間的に制限されたプロモーター（すなわち、プロモーターは胚発生の特定のステージの間、または生物学的プロセスの特定のステージの間、「オン」状態または「オフ」状態にある）であってもよい。
【００８７】
誘導性プロモーターの例としては、これだけに限定されないが、Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼプロモーター、Ｔ３  ＲＮＡポリメラーゼプロモーター、イソプロピル−ベータ−Ｄ−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）により調節されるプロモーター、ラクトースにより誘導されるプロモーター、熱ショックプロモーター、テトラサイクリンにより調節されるプロモーター、ラパマイシンにより調節されるプロモーター、低酸素反応エレメント（ＨＲＥ）により調節されるプロモーター、ＲＵ４８６により調節されるプロモーター、ステロイドにより調節されるプロモーター、金属により調節されるプロモーター、エストロゲン受容体により調節されるプロモーターなどが挙げられる。誘導性プロモーターは、これだけに限定されないが、ドキシサイクリン；ＲＮＡポリメラーゼ、例えば、Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼ；エストロゲン受容体；エストロゲン受容体融合物などを含めた分子により調節され得る。
【００８８】
精製された：「精製された」という用語は、絶対的な純度を要求するものではなく、相対的な用語として意図されている。したがって、例えば、精製されたタンパク質調製物は、言及されているタンパク質の純度が細胞内のその天然の環境にあるそのタンパク質よりも高い調製物である。例えば、タンパク質の調製物は、タンパク質がその調製物の総タンパク質含有量の少なくとも５０％を表すように精製される。同様に、精製されたオリゴヌクレオチド調製物は、オリゴヌクレオチドの純度が、オリゴヌクレオチドの複合混合物を含めた環境におけるものよりも高い調製物である。精製された核酸またはタンパク質の集団は、約９０％よりも大きく、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％純粋である、またはそれぞれ他の核酸もしくはタンパク質を含まない。
【００８９】
組換え：組換え核酸は、天然には存在しない配列を有する、またはそうでなければ分離した２つの配列のセグメントの人工的な組合せによって作製された配列を有する核酸である。この人工的な組合せは、多くの場合、化学合成によって、または、より一般には、単離された核酸のセグメントの人工的な操作、例えば、遺伝子操作技法によって、実現される。同様に、組換えタンパク質は、組換え核酸分子によってコードされるタンパク質である。
【００９０】
網膜：光に対する光受容体（錐体および杆体）を含有する眼の光（光子）感受性部分。杆体および錐体が感光色素を使用することによって光の知覚を行う。感光色素は、オプシンと称されるタンパク質およびビタミンＡのバリアントであるレチネンと称される発色団で構成される。杆体はロドプシンを含有し、一方、錐体はヨードプシンを含有する。杆体および錐体は、網膜の出力細胞および神経節細胞における神経放電を誘発する連続的なニューロンを通じてシグナルを伝達する。視覚シグナルが視神経によって外側膝状体に伝えられ、そこから視覚シグナルが視覚野（後頭葉）に移り、視覚刺激として登録される。「杆体細胞」、または「杆体」は、他の型の視覚光受容体である錐体細胞よりも強くない光の下で機能することができる眼の網膜内の光受容体細胞である。杆体は、網膜の外縁に集中しており、周辺視に使用される。杆体は、錐体よりもわずかに長く、引き締まっているが、構造的な基礎は同じである。オプシンまたは色素が外側側面にあり、網膜色素上皮に広がり、細胞の恒常性を完成させる。この上皮末端は、多くの積み重なったディスクを含有する。杆体は、視覚色素のための高領域を有し、したがって、光吸収の実質的な効率を有する。錐体と同様に、杆体細胞は、シナプス末端、内節、および外節を有する。シナプス末端は、別のニューロン、例えば、双極性細胞とシナプスを形成する。内節および外節は、遠位節を裏打ちする繊毛によって接続されている。内節は、細胞小器官および細胞の核を含有し、一方、眼の背後の方を向いている杆体外節は、光吸収物質を含有する。光による光色素の活性化により、杆体細胞が過分極することによってシグナルが送られ、それは、杆体細胞がその神経伝達物質を送らない原因となり、それにより、次いで、双極性細胞がその伝達物質を双極性−神経節シナプスにおいて放出し、シナプスの興奮を引き起こす。「錐体細胞」または「錐体」は、比較的明るい光の中で最良の色覚および機能を担う。錐体細胞は、網膜の末梢に向かって数が急速に低下する非常に薄い高密度に詰め込まれた錐体を伴う直径０．３ｍｍの杆体がない領域である中心窩に高密度に詰め込まれている。ヒト眼には約６００〜７００万個の錐体が存在し、斑（macula）に向かって最も集中している。錐体は、網膜内の杆体細胞（低い光レベルでの視覚を支持する）よりも光に対する感受性が低いが、色の知覚を可能にする。錐体はまた、刺激への応答時間が杆体よりも速いので、画像のより細かな詳細およびより迅速な変化も知覚することができる。ヒトでは、錐体は、通常、それぞれが異なる色素を有する３つの型、すなわち：Ｓ−錐体、Ｍ−錐体およびＬ−錐体のうちの１つである。したがって、各錐体は、短波長光、中波長光および長波長光に対応する光の可視波長に感受性である。３つの型は、個体に応じて、それぞれ４２０〜４４０ｎｍ付近、５３４〜５４５ｎｍ付近および５６４〜５８０ｎｍ付近のピーク波長を有する。
【００９１】
網膜色素上皮：下にある脈絡膜に付着した神経感覚網膜のすぐ外側の、哺乳動物においてｉｎ  ｖｉｖｏで存在する六角形の細胞の色のついた層。これらの細胞には色素顆粒が高密度に詰め込まれており、入射光から網膜を遮蔽する。網膜色素上皮はまた、アミノ酸、アスコルビン酸およびＤ−グルコースなどの小分子を供給する一方で、脈絡膜血液由来物質に対しては緊密な関門のままであることによって、網膜環境を維持する輸送制限因子としての機能も果たす。
【００９２】
配列同一性：アミノ酸配列間の類似性は、他には配列同一性と称される配列間の類似性に関して表される。配列同一性は、同一性（または類似性または相同性）パーセンテージに関して頻繁に測定される；パーセンテージが高いほど、２つの配列が類似している。ＦＧＦポリペプチドのホモログまたはバリアントは、標準の方法を使用してアラインメントした場合に比較的高い程度の配列同一性を有する。
【００９３】
比較のために配列をアラインメントする方法は当技術分野で周知である。種々のプログラムおよびアラインメントアルゴリズムが、Smith  and  Waterman,  Adv.  Appl.  Math.  2:482,  1981；Needleman  and  Wunsch,  J.  Mol.  Biol.  48:443,  1970；Pearson  and  Lipman,  Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA  85:2444,  1988；Higgins  and  Sharp,  Gene  73:237,  1988；Higgins  and  Sharp,  CABIOS  5:151,  1989；Corpet  et  al.,  Nucleic  Acids  Research  16:10881,  1988；およびPearson  and  Lipman,  Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA  85:2444,  1988に記載されている。Altschul,  et  al.,  Nature  Genet.,  6:119,  1994には、配列アラインメント方法および相同性の算出に関する詳細な考察が示されている。
【００９４】
配列解析プログラムｂｌａｓｔｐ、ｂｌａｓｔｎ、ｂｌａｓｔｘ、ｔｂｌａｓｔｎおよびｔｂｌａｓｔｘと関連して使用するためのＮＣＢＩ  Ｂａｓｉｃ  Ｌｏｃａｌ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｓｅａｒｃｈ  Ｔｏｏｌ  （ＢＬＡＳＴ）（Altschul,  et  al.,  J.  Mol.  Biol.  215:403,  1990）が、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ）を含めたいくつかの供給源から、およびインターネット上で入手可能である。このプログラムを使用して配列同一性をどのように決定するかについての説明は、インターネット上でＮＣＢＩウェブサイトにおいて入手可能である。
【００９５】
ポリペプチドのホモログおよびバリアントは、典型的には、ＮＣＢＩ  Ｂｌａｓｔ  ２．０、デフォルトパラメーターに設定したギャップ付きｂｌａｓｔｐを使用して上記因子のアミノ酸配列との全長アラインメントにわたって計数して、少なくとも約７５％、例えば、少なくとも約８０％の配列同一性を有することによって特徴付けられる。約３０アミノ酸を超えるアミノ酸配列の比較に関しては、Ｂｌａｓｔ２配列機能を、デフォルトパラメーター（ギャップ存在コスト１１、および１残基当たりのギャップコスト１）に設定したデフォルトのＢＬＯＳＵＭ６２マトリックスを使用して用いる。短いペプチド（約３０アミノ酸未満）をアラインメントする場合には、Ｂｌａｓｔ２配列機能を、デフォルトパラメーター（オープンギャップ９、エクステンションギャップ１ペナルティ）に設定したＰＡＭ３０マトリックスを用いて使用して、アラインメントを実施すべきである。この方法によって評価した場合、参照配列に対してさらに大きな類似性を有するタンパク質では、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性など、同一性パーセンテージの上昇が示される。配列全体未満を配列同一性について比較する場合には、ホモログおよびバリアントは、典型的には、１０〜２０アミノ酸の短いウィンドウにわたって少なくとも８０％の配列同一性を有し、参照配列に対するそれらの類似性に応じて、少なくとも８５％または少なくとも９０％または９５％の配列同一性を有し得る。そのような短いウィンドウにわたって配列同一性を決定するための方法は、インターネット上でＮＣＢＩウェブサイトにおいて入手可能である。これらの配列同一性の範囲は単に手引きとして提供するものであり、提供された範囲外の強力に有意なホモログを得ることができる可能性が全面的にあることが当業者には理解されよう。
【００９６】
対象：例えば、非ヒト霊長類、マウス、ウサギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ニワトリ、両生類、および爬虫類などの哺乳動物および非哺乳動物などの全ての脊椎動物を含めたヒトおよび非ヒト動物。当該記載の方法の多くの実施形態では、対象は、ヒトである。
【００９７】
Ｔ細胞：Ｔリンパ球としても公知であるＴ細胞は、細胞表面に特徴的なＴ細胞受容体を有する、細胞媒介性免疫に関与するリンパ球（白血球亜型）の１種である。Ｔ細胞の型は、ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ細胞）などの刺激に積極的に応答するエフェクターＴ細胞を含み、これは、活性化されると特定の亜型に分化し、特徴的なサイトカインを分泌して特定の型の免疫応答を促進する。
【００９８】
Ｔ細胞としては、これだけに限定されないが、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞が挙げられる。ＣＤ４＋Ｔリンパ球は、その表面に表面抗原分類（cluster  of  differentiation）４（ＣＤ４）として公知のマーカーを保有する免疫細胞である。これらの細胞は、古典的にはヘルパーＴ細胞（Ｔｈ細胞）として公知であり、抗体応答およびキラーＴ細胞応答を含めた免疫応答を統合する（orchestrate）のに役立つ。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、表面抗原分類８（ＣＤ８）マーカーを保有する。一実施形態では、ＣＤ８  Ｔ細胞は、直接細胞接触によって標的細胞を溶解させることができる細胞傷害性Ｔリンパ球（Ｔｃ細胞）である。これらの細胞は、ウイルス感染した細胞および腫瘍細胞の排除において役割を果たし、また、移植片拒絶プロセスに関与する。別の実施形態では、ＣＤ８細胞は、サプレッサーＴ細胞である。成熟Ｔ細胞はＣＤ３を発現する。
【００９９】
調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）は、他の細胞の免疫応答を抑制するＴ細胞である。一例では、調節性Ｔ細胞は、免疫応答を抑制するＣＤ４＋ＣＤ２５＋である。さらなる例では、調節性Ｔ細胞は、ＣＤ４、ＣＤ２５およびＦＯＸＰ３を発現する。
【０１００】
導入遺伝子：外因性遺伝子。
【０１０１】
処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）、処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）、および治療（ｔｈｅｒａｐｙ）：症状の緩解、寛解、減縮、または状態を患者により許容されるものにすること、変性もしくは減退の速度を遅くすること、変性の最終点をより消耗性の低いものにすること、対象の身体的もしくは精神的健康状態を改善すること、または視覚を改善することなどのあらゆる客観的または主観的パラメーターを含めた、傷害、病状または状態の減弱または軽減のあらゆる成功または成功の兆候。処置は、身体検査、神経学的検査、または精神医学的評価の結果を含めた客観的または主観的パラメーターによって評価することができる。
【０１０２】
上流：ポリヌクレオチド上の相対的な位置であり、ここで、「上流」の位置は、基準点よりもポリヌクレオチドの５’末端に近い。二本鎖ポリヌクレオチドの場合では、５’末端および３’末端の方向性は、アンチセンス鎖と対照的にセンス鎖に基づく。
【０１０３】
アッシャーＩ型：ハルグレン症候群、アッシャーハルグレン症候群、網膜色素変性−聴覚不全症候群、または網膜ジストロフィー聴覚不全症候群としても公知のアッシャー症候群は、聴力損失と視力障害の組合せをもたらす少なくとも１１種の遺伝子のうちのいずれか１種の変異によって引き起こされる非常に稀な遺伝障害である。アッシャー症候群は、盲ろうの主な原因である。アッシャー症候群は、症状の発症および重症度によって３つの亜型にクラス分けされる。３つの亜型は全て、内耳および網膜の機能に関与する遺伝子の変異によって引き起こされる。
【０１０４】
アッシャーＩの臨床亜型は、６種（ＵＳＨ１Ｂ〜Ｇ）のうちのいずれか１種の変異に関連する。これらの遺伝子は、有毛細胞（不動毛）などの内耳構造の発達および維持において機能する。これらの遺伝子の変更により、平衡を維持できなくなること（前庭機能障害）および聴力喪失が引き起こされ得る。この遺伝子はまた、杆体光受容体細胞および網膜色素上皮の両方の構造および機能に影響を及ぼすことによって網膜の発達および安定性においても役割を果たす。これらの遺伝子の正常機能に影響を及ぼす変異により、網膜色素変性症および結果として生じる視力喪失がもたらされ得る。アッシャーＩの人は、通常、生まれつき耳が聞こえず、多くの場合、前庭系の問題に起因して平衡を維持することが困難である。アッシャーＩを有する乳児は、通常、歩行などの運動技能の発達が遅い。世界的に、推定されるアッシャー症候群Ｉ型の有病率は、母集団１００，０００人当たり３〜６人である。Ｉ型は、アシュケナジユダヤ人を祖先とする人々（中央ヨーロッパ人および東ヨーロッパ人）ならびにフランス系アカディア集団（ルイジアナ）に多くみられることが見いだされている。
【０１０５】
ブドウ膜炎：虹彩炎、毛様体炎、汎ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎、および前部ブドウ膜炎を含む眼内炎症性疾患。虹彩炎は虹彩の炎症である。毛様体炎は毛様体の炎症である。汎ブドウ膜炎は、眼のブドウ膜（血管）層全体の炎症を指す。中間部ブドウ膜炎は、周辺部ブドウ膜炎とも称され、毛様体および毛様体扁平部（pars  plana）の領域内の虹彩および水晶体のすぐ後ろの領域に集中し、「毛様体炎」および「毛様体扁平部炎」とも称される。
【０１０６】
「後部」ブドウ膜炎とは、一般に、脈絡網膜炎（脈絡膜および網膜の炎症）を指す。後部ブドウ膜炎では、多様な症状が生じ得るが、最も一般的に引き起こされるものは、中間部ブドウ膜炎と同様にフローターおよび視力低下である。徴候としては、硝子体液中の細胞、網膜および／または下にある脈絡膜における白色または黄白色の病変、滲出性網膜剥離、網膜血管炎、ならびに視神経浮腫が挙げられる。
【０１０７】
前部ブドウ膜炎は、虹彩毛様体炎（虹彩および毛様体の炎症）ならびに／または虹彩炎を指す。前部ブドウ膜炎は、最も症候性になる傾向があり、典型的には、疼痛、発赤、羞明、および視力低下が示される。前部ブドウ膜炎の徴候としては、瞳孔収縮および角膜に隣接する結膜の充血、いわゆる縁潮紅（perilimbal  flush）が挙げられる。生体顕微鏡または細隙灯による所見として、房水中の細胞およびフレア、ならびに角膜内皮に対して接着性の細胞およびタンパク質性物質の凝集塊である角膜後面沈着物が挙げられる。「びまん性」ブドウ膜炎は、前部構造、中間部構造、および後部構造を含めた眼の全ての部分が関与する炎症を意味する。
【０１０８】
「急性」ブドウ膜炎は、徴候および症状が突発的に生じ、最大で約６週間続く、ブドウ膜炎の形態である。「慢性」ブドウ膜炎は、発症が段階的であり、約６週間よりも長く続く形態である。
【０１０９】
眼の炎症の炎症性産物（すなわち、細胞、フィブリン、過剰なタンパク質）は、一般に、眼の流体空間、すなわち、前眼房、後眼房および硝子体空間、ならびに差し迫って炎症反応に関与する浸潤組織に見いだされる。
【０１１０】
ブドウ膜炎は、眼への外科的傷害または外傷性傷害後に；自己免疫障害（例えば、関節リウマチ、ベーチェット病、強直性脊椎炎、サルコイドーシスなど）の構成成分として；単離した免疫媒介性眼障害（例えば、毛様体扁平部炎または虹彩毛様体炎など）として；公知の病因に関連しない疾患として、および、ブドウ膜組織内への抗体−抗原複合体の沈着を引き起こすある特定の全身性疾患後に生じ得る。ブドウ膜炎は、ベーチェット病、サルコイドーシス、フォークト小柳原田症候群、バードショット網脈絡膜症および交感性眼炎に関連する眼の炎症を含む。したがって、感染性因子の不在下では非感染性ブドウ膜炎が生じる。
【０１１１】
多種多様な感染因子によってもブドウ膜炎が引き起こされ得る。感染性の病因が診断されている場合、疾患を治癒させるために適切な抗菌薬を与えることができる。リンパ腫および眼の悪性黒色腫を含めたある特定のがんも、ブドウ膜炎に関連付けられる。しかし、ブドウ膜炎の病因は大多数の症例において依然としてわかりにくい。
【０１１２】
ベクター：宿主細胞に導入され、それにより、形質転換された宿主細胞を生じさせる核酸分子。ベクターは、複製開始点などの、宿主細胞での複製を可能にする核酸配列を含み得る。ベクターは、１つまたは複数の治療用遺伝子および／または選択マーカー遺伝子ならびに当技術分野で公知の他の遺伝子エレメントも含み得る。ベクターは、細胞に形質導入する、形質転換するまたは感染させ、それにより、細胞にその細胞のネイティブなもの以外の核酸および／またはタンパク質を発現させることができるものである。ベクターは、必要に応じて、例えばウイルス粒子、リポソーム、タンパク質コーティングなどの、核酸の細胞への進入の実現を補助する材料を含む。
【０１１３】
ウイルス：生細胞の内部で繁殖する顕微鏡レベルの感染性生物体。ウイルスは、タンパク質被膜で囲まれた単一の核酸であるコアから本質的になり、生細胞の内部でのみ複製する能力を有する。「ウイルス複製」は、少なくとも１つのウイルス生活環の出現による追加的なウイルスの産生である。ウイルスベクターが当技術分野で公知であり、それらとして、例えば、アデノウイルス、ＡＡＶ、レンチウイルスおよびヘルペスウイルスが挙げられる。
【０１１４】
他に説明がなければ、本明細書において使用される全ての科学技術用語は、本開示が属する技術分野の当業者に一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと同様または同等である方法および材料を本開示の実施または試験に使用することができるが、適切な方法および材料を以下に記載する。材料、方法および例は、単に例示的なものであり、それに限定されるものではない。
【０１１５】
概要
ＩＬ−３４が網膜における抗炎症効果および神経保護効果を有することが本明細書に開示される。ブドウ膜炎、網膜炎および脈絡網膜炎を処置するための方法が本明細書に提供される。網膜変性を阻害するための方法も本明細書に提供される。
【０１１６】
一部の実施形態では、対象を網膜変性から保護するため、および／または対象におけるブドウ膜炎、網膜炎もしくは脈絡網膜炎を処置するための方法が提供される。方法は、ブドウ膜炎、網膜炎、もしくは脈絡網膜炎を有する、ならびに／または炎症および／もしくは網膜変性からの保護を必要とする対象を選択するステップと、対象の眼に、（ａ）インターロイキン（ＩＬ）−３４のアミノ酸１〜１８２を含むポリペプチド、ＩＬ−３４のバリアント、もしくはＩＬ−３４のＦｃ融合タンパク質であって、ｉ）抗炎症性もしくはｉｉ）神経保護性である、ポリペプチド、バリアント、もしくはＦｃ融合タンパク質；または（ｂ）ポリペプチド、バリアント、もしくはＦｃ融合タンパク質をコードする核酸分子を治療有効量で局所的に投与するステップとを含む。ポリペプチド、バリアント、またはＦｃ融合タンパク質は、ｉ）調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）数を増加させること、および／またはｉｉ）ミクログリア数を増加させることができる。一部の実施形態では、方法により、ミクログリアの活性化が阻害される。対象は、これだけに限定されないが、ヒトなどの任意の哺乳動物であってもよい。眼への局所投与としては、これだけに限定されないが、硝子体内または網膜下投与が挙げられる。
【０１１７】
一部の実施形態では、対象に、（ａ）配列番号１もしくは配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のポリペプチドであって、Ｔｒｅｇの活性もしくは数を増加させるポリペプチド；（ｂ）配列番号１もしくは配列番号２のアミノ酸１〜１８２を含むポリペプチド；（ｃ）配列番号１もしくは配列番号２のアミノ酸配列を含むポリペプチド、または（ｄ）（ａ）、（ｂ）もしくは（ｃ）のポリペプチドをコードする核酸分子を投与する。
【０１１８】
ポリヌクレオチドを利用する場合、方法は、対象に、核酸分子に作動可能に連結したプロモーターを含むウイルスベクターを投与するステップを含み得る。具体的な非限定的な例では、ウイルスベクターは、核酸分子を含むＡＡＶ８ベクターなどのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである。さらなる実施形態では、プロモーターは、これだけに限定されないが、サイトメガロウイルスプロモーターなどの構成的プロモーターである。
【０１１９】
一部の実施形態では、ブドウ膜炎を有する対象を、開示されている方法を使用して処置する。ブドウ膜炎は、前部ブドウ膜炎、中間部ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎、またはびまん性ブドウ膜炎を含み得る。ブドウ膜炎は、虹彩炎、毛様体炎、毛様体炎、毛様体扁平部炎、脈絡網膜炎、虹彩毛様体炎、または虹彩炎のうちの少なくとも１つを含み得る。ブドウ膜炎は、外科手術、外傷、自己免疫障害、化学的刺激への曝露、炎症性障害、またはヒト白血球抗原Ｂ２７（ＨＬＡ−Ｂ２７）ハプロタイプに起因するものであり得る。一部の実施形態では、対象は、Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ  ｈｅｎｓｅｌａｅ、帯状疱疹、単純ヘルペス、レプトスピラ症、トキソカラ症、トキソプラズマ症、梅毒、結核、ライム病、ウエストナイルウイルス、サイトメガロウイルス、またはヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）などの感染を有する。
【０１２０】
他の実施形態では、網膜炎または脈絡網膜炎を有する対象を、開示されている方法を使用して処置する。一部の非限定的な例では、対象は、細菌感染症、ウイルス感染症、原生動物感染症、または真菌感染症などの感染症を有する。感染症は、例えば、（ａ）ウイルス感染症であり得、ウイルスは、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、もしくはウエストナイルウイルスである；（ｂ）細菌感染症であり得、対象は、結核、梅毒、ブルセラ症、ライム病、もしくはＹｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ感染症を有する；または（ｃ）真菌感染症であり得、真菌は、Ｃａｎｄｉｄａ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ、もしくはＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓである。追加的な非限定的な例では、対象は、眼トキソプラズマ症、眼トキソカラ症、びまん性片側性亜急性視神経網膜炎、急性網膜壊死、サイトメガロウイルス網膜炎、ベーチェット関連網膜炎、急性網膜色素上皮炎またはサルコイドーシスを有する。
【０１２１】
さらなる実施形態では、網膜変性からの保護を必要とする対象を、開示されている方法を使用して処置する。一部の非限定的な例では、対象は、これだけに限定されないが、緑内障、網膜色素変性症、加齢黄斑変性、レーバー先天性黒内障、糖尿病性網膜症、アッシャーＩ型、または先天性停止性夜盲症などの、網膜変性に関連する疾患を有する。
【０１２２】
一部の実施形態では、方法は、追加的な抗炎症剤、免疫抑制剤、抗菌剤、抗真菌剤、または免疫調節剤のうちの少なくとも１つを治療有効量で対象に投与するステップも含む。具体的な非限定的な例では、薬剤は、グルココルチコイドまたはカルシニューリンアンタゴニストである。
【０１２３】
開示されている方法のいずれかにおける使用のための医薬組成物が提供される。この組成物は、（ａ）インターロイキン（ＩＬ）−３４のアミノ酸１〜１８２を含むポリペプチド、ＩＬ−３４のバリアント、もしくはＩＬ−３４のＦｃ融合タンパク質であって、ｉ）Ｔｒｅｇ数を増加させ、ｉｉ）ミクログリア数を増加させるポリペプチド、バリアント、もしくはＦｃ融合タンパク質、および／または（ｂ）ポリペプチド、そのバリアント、もしくはそのＦｃ融合タンパク質をコードする核酸を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、ミクログリアの活性化を阻害する。
【０１２４】
ＩＬ−３４ポリペプチドおよびＩＬ−３４をコードするポリヌクレオチド
ヒトおよびマウスＩＬ−３４ポリペプチドおよびポリヌクレオチドは、どちらも参照により本明細書に組み込まれる米国特許第９，７７０，４８６号、および米国特許出願公開第２０１７／０２０２９２１号に開示されている。ＩＬ−３４ポリペプチドおよびＩＬ−３４ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、開示されている方法において有用であり、ここで、ＩＬ−３４ポリペプチドは、抗炎症性かつ／または神経保護性である。
【０１２５】
例示的なヒトＩＬ−３４は、
MPRGFTWLRYLGIFLGVALGNEPLEMWPLTQNEECTVTGFLRDKLQYRSRLQYMKHYFPINYKISVPYEGVFRIANVTRLQRAQVSERELRYLWVLVSLSATESVQDVLLEGHPSWKYLQEVETLLLNVQQGLTDVEVSPKVESVLSLLNAPGPNLKLVRPKALLDNCFRVMELLYCSCCKQSSVLNWQDCEVPSPQSCSPEPSLQYAATQLYPPPPWSPSSPPHSTGSVRPVRAQGEGLLP（配列番号１、参照により本明細書に組み込まれるＮＣＢＩ  Ｒｅｆ．Ｓｅｑ．Ｎｏ．ＮＰ＿６８９６６９．２、２０１８年３月１日を参照されたい）である。
【０１２６】
例示的なマウスＩＬ−３４は、
MPWGLAWLYCLGILLDVALGNENLEIWTLTQDKECDLTGYLRGKLQYKNRLQYMKHYFPINYRIAVPYEGVLRVANITRLQKAHVSERELRYLWVLVSLNATESVMDVLLEGHPSWKYLQEVQTLLENVQRSLMDVEIGPHVEAVLSLLSTPGLSLKLVRPKALLDNCFRVMELLYCSCCKQSPILKWQDCELPRLHPHSPGSLMQCTATNVYPLSRQTPTSLPGSPSSSHGSLP（配列番号２、参照により本明細書に組み込まれるＮＣＢＩ  Ｒｅｆ．Ｓｅｑ．Ｎｏ．ＮＰ＿００１１２８５７２．１、２０１８年３月１日を参照されたい）である。
【０１２７】
ウマＩＬ−３４の例示的なアミノ酸配列は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受託番号ＸＰ＿０２３４９３０７４．１、２０１８年１月２３日で提供され、イヌＩＬ−３４の例示的なアミノ酸配列は、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＸＰ＿０２２２７４９２５．１、２０１７年９月５日で提供され、これらは両方とも参照により本明細書に組み込まれる。これらのポリペプチド、およびこれらのポリペプチドをコードする核酸は、開示される方法において有用である。
【０１２８】
一部の実施形態では、抗炎症性かつ神経保護性のＩＬ−３４の断片およびバリアントを利用することができる。具体的な非限定的な例では、断片またはバリアントは、ｉ）調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）数を増加させ、かつ／または、ｉｉ）ミクログリア数を増加させ、ミクログリアの活性化を阻害する。
【０１２９】
抗炎症活性は、当技術分野で周知の多くの方法を使用して評価することができる。一実施形態では、全身免疫抑制を評価するために、白血球数（ＷＢＣ）を使用して、対象における白血球の数を測定することによって対象の免疫系の応答性を決定する。一部の実施形態では、対象の血液試料中の白血球を、他の血液細胞から分離し、計数する。白血球の正常値は、１μＬ当たり白血球約４，５００〜約１０，０００個である。白血球の数が少ないことにより、対象における免疫抑制の状態が示され得る。別の実施形態では、Ｔリンパ球数を利用することができる。当技術分野で周知の方法を使用し、対象の血液試料中の白血球を、他の血液細胞から分離する。Ｔリンパ球を、例えば、免疫蛍光法または蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）などの当技術分野における標準の方法を使用して、他の白血球と区別する。Ｔ細胞の数の低下、または特定のＴ細胞の集団を免疫抑制の測定として使用することができる。処置前のＴ細胞の数（または特定の集団内の細胞の数）と比較したＴ細胞の数または特定のＴ細胞の集団の低下を使用して、免疫抑制が誘導されていることを示すことができる。
【０１３０】
一部の実施形態では、抗炎症活性は、Ｔｒｅｇ数の増加である。Ｔｒｅｇ数を測定するための方法は当技術分野で公知である。それらとして、これだけに限定されないが、例えば、免疫組織化学的検査または蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）などの細胞選別法などを使用して、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞を測定すること、およびＦＯＸＰ３活性を測定することが挙げられる。生体試料をＦＯＸＰ３の発現および／または活性（例えば、遺伝子、転写物、またはタンパク質）について分析することができる。典型的には、生体試料は、ＤＮＡ、ＲＮＡおよび／またはタンパク質を、所望の分析を行うために十分な量で含有する。適当な生体試料としては、例えば、血液、または血清もしくは単離された白血球などの血液の構成成分が挙げられる。別の非限定的な例では、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞などのＣＤ４＋細胞におけるＦＯＸＰ３の発現を評価することができる。したがって、方法は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞などのＣＤ４＋細胞を単離することを含み得る。Ｔｒｅｇを測定するための方法は、例えば、参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ公開第２００６／０１２６４１号に開示されており、また、例示的な方法が下記の実施例に提供される。
【０１３１】
神経保護を測定するための方法も当技術分野で公知であり、それらとして、組織化学的分析およびニューロン機能の測定が挙げられる。これらの方法は、当技術分野で公知である。一部の実施形態では、神経保護は、酸化ストレス、ミトコンドリア機能不全、興奮毒性、炎症性変化、鉄の蓄積、ならびに、例えば網膜および／または網膜神経節へのタンパク質凝集の低下を含む。動物モデルにおける神経保護をモニタリングするための方法としては、網膜電図（ＥＲＧ）、光干渉断層撮影（ＯＣＴ）、眼の切片に対する免疫組織化学的検査によって実証されるＲＧＣ喪失の低減、眼の環境における脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、グリア細胞系由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ３）、および塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）などの神経栄養因子のレベルの測定が挙げられる。他の実施形態では、網膜内の杆体細胞および／または錐体細胞の数を、眼の切片の免疫組織化学的検査によって測定する。
【０１３２】
ＩＬ−３４のアミノ酸１〜１８２は、本明細書に開示される方法において活性である。したがって、一部の実施形態では、有用なポリペプチドは、例えば配列番号１または配列番号２のアミノ酸１〜１８２など、ＩＬ−３４のアミノ酸１〜１８２を含む。Ｎ２１〜Ｖ１９３の成熟ポリペプチドも有用である；これらのポリペプチド（１〜１８２および２１〜１９３）は、どちらも生物活性がある（Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ＰＭＩＤ  ２２４８３１１４、参照により本明細書に組み込まれる）。したがって、一部の実施形態では、これだけに限定されないが、配列番号１または配列番号２のアミノ酸２１〜１９３などのＩＬ−３４のアミノ酸２１〜１９３を利用することができる。参照により本明細書に組み込まれるMa  et  al.,  Structure  20:676-687,  2012を参照されたい。
【０１３３】
一部の実施形態では、方法は、ＩＬ−３４のバリアント、例えば、ヒトまたはマウスＩＬ−３４と約９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のポリペプチドなどを投与するステップを含む。一部の実施形態では、ＩＬ−３４ポリペプチドは、配列番号１または配列番号２に記載のアミノ酸と少なくとも９５％同一であり、例えば、配列番号１または配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である。さらなる実施形態では、投与されるＩＬ−３４ポリペプチドは、配列番号１に多くて１カ所、２カ所、３カ所、４カ所、５カ所、６カ所、７カ所、８カ所、９カ所、もしくは１０カ所の保存的置換、または配列番号２に多くて１カ所、２カ所、３カ所、４カ所、５カ所、６カ所、７カ所、８カ所、９カ所、１０カ所、もしくは１１カ所の保存的置換を含み、ここで、ポリペプチドは、抗炎症活性を有し、かつ／または神経保護性である。さらなる実施形態では、これらのバリアントは、配列番号１または配列番号２のアミノ酸１〜１８２を含む。
【０１３４】
ＩＬ−３４ポリペプチドを融合タンパク質に含めることができる。したがって、一部の実施形態では、Ｉｌ−３４を、Ｆｃ融合タンパク質などの融合タンパク質として投与する。一部の具体的な非限定的な例では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４  ＦｃドメインなどのＩｇＧ  Ｆｃドメインである。一部の実施形態では、これらのＩＬ−３４の形態は、融合タンパク質に含まれていないＩＬ−３４と比較して、半減期の増加を有する。
【０１３５】
理論に束縛されることなく、Ｆｃドメインは、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）との独特のｐＨ依存性会合を通じて、ＩｇＧの半減期を増加させる。内部移行後、ＩｇＧのＦｃドメインはエンドソームの酸性環境下でＦｃＲｎに結合することができ、したがって、次いでＩｇＧが細胞表面に循環し、循環中に再放出される。この生物システムにより、ＩｇＧが分解から保護され、長い血清中半減期がもたらされる。Ｆｃドメインと治療用分子との融合物は、延長された半減期を有する。さらに、ＩｇＧのＦｃ断片は密接に詰め込まれたホモ二量体からなるので、各分子内に２つの治療用タンパク質が存在する。最近、単一の活性タンパク質が二量体野生型Ｆｃと融合した単量体Ｆｃ融合タンパク質が生成された。これらのより小さな分子は、二量体バージョンと比較して、いっそう延長された半減期を有することが示されている。
【０１３６】
さらなる実施形態では、ポリペプチド、バリアント、またはＦｃ融合タンパク質は、ｉ）調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）数を増加させ、かつ／またはｉｉ）ミクログリア数を増加させるものである。ポリペプチド、断片、バリアントもしくはＦｃ融合タンパク質、またはポリペプチド、断片、バリアントもしくはＦｃ融合タンパク質をコードする核酸分子は、ブドウ膜炎、網膜炎および脈絡網膜炎を処置するため、かつ／または網膜変性を低下させるために有用である。ポリペプチド、断片、バリアントもしくはＦｃ融合タンパク質、またはポリペプチド、断片、バリアントもしくはＦｃ融合タンパク質をコードする核酸分子は、ｉ）調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）数を増加させることができ、かつ／またはｉｉ）ミクログリア数を増加させることができるものである。一部の実施形態では、ポリペプチド（teh  polypeptide）、バリアント（varian）またはＦｃ融合タンパク質は、ミクログリアの活性化を阻害するものである。
【０１３７】
さらなる実施形態では、方法は、ＩＬ−３４ポリペプチドをコードする核酸分子を投与するステップを含む。
【０１３８】
ヒトＩＬ−３４をコードする例示的な核酸は、
【化１】
2021514991.tif 000003
【化２】
2021514991.tif 000004
（配列番号３、参照により本明細書に組み込まれるＮＣＢＩ受託番号ＮＭ＿１５２４５６．２を参照されたい）である。追加的な核酸配列は、ＮＣＢＩ受託番号ＮＭ＿１５２４５６．２、ＮＣＢＩ受託番号ＮＭ＿００１１７２７７１．１、ＮＣＢＩ受託番号ＮＭ＿００１１７２７７２．１で提供され、これらは全て２０１８年３月１日で入手可能であるものとして、参照により本明細書に組み込まれる）。
【０１３９】
マウスＩＬ−３４をコードする例示的な核酸は、
ATGCCCTGGGGACTCGCCTGGCTATACTGTCTTGGGATCCTACTTGACGTGGCTTTGGGAAACGAGAATTTGGAGATATGGACTCTGACCCAAGATAAGGAGTGTGACCTTACAGGCTACCTTCGGGGCAAGCTGCAGTACAAGAACCGGCTTCAGTACATGAAACATTACTTCCCCATCAACTACAGGATTGCTGTGCCTTATGAGGGGGTACTCAGAGTGGCCAACATCACAAGGCTGCAGAAGGCTCACGTGAGTGAGCGAGAGCTTCGGTACCTGTGGGTCTTGGTGAGTCTCAATGCCACTGAGTCTGTGATGGATGTACTTCTCGAGGGCCACCCGTCCTGGAAGTATCTACAGGAGGTTCAGACATTGCTGGAGAACGTACAGCGGAGCCTCATGGATGTGGAGATTGGCCCTCACGTGGAAGCTGTGTTATCTCTTCTGAGTACTCCAGGCCTAAGCCTGAAGCTGGTGCGGCCCAAAGCCTTGCTGGACAACTGCTTCCGGGTCATGGAACTGCTGTACTGTTCTTGCTGTAAACAAAGCCCCATCTTAAAATGGCAGGACTGCGAGCTGCCCAGGCTCCATCCCCACAGTCCGGGGTCCTTGATGCAATGTACAGCTACAAATGTGTACCCTTTGTCTCGGCAGACCCCCACCTCCCTGCCCGGATCCCCAAGCTCAAGCCATGGCTCGTTGCCCTGA（配列番号４、参照により本明細書に組み込まれるＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受託番号ＮＭ＿００１１３５１００．２、２０１８年３月１日を参照されたい）である。マウスＩＬ−３４をコードする別の核酸配列は、参照により本明細書に組み込まれる、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受託番号ＮＭ＿０２９６４６．３、２０１８年３月１日である。
【０１４０】
一部の実施形態では、核酸分子は、配列番号１または配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である、例えば、配列番号１または配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。さらなる実施形態では、核酸分子は、配列番号１に多くて１カ所、２カ所、３カ所、４カ所、５カ所、６カ所、７カ所、８カ所、９カ所、もしくは１０カ所の保存的置換を含む、または配列番号２に多くて１カ所、２カ所、３カ所、４カ所、５カ所、６カ所、７カ所、８カ所、９カ所、もしくは１０カ所の保存的置換を含むポリペプチドをコードする。追加的な実施形態では、これらのポリペプチドは、配列番号１または配列番号２のアミノ酸１〜１８２を含む。さらに他の実施形態では、核酸分子は、配列番号３または配列番号４と少なくとも８５％同一であり、例えばさらに、配列番号３または配列番号４と８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一の核酸分子である。
【０１４１】
これらのポリヌクレオチドは、目的のＩＬ−３４ポリペプチドをコードするＤＮＡ、ｃＤＮＡ、およびＲＮＡ配列を含む。コード配列のサイレント変異は、１つよりも多くのコドンが同じアミノ酸残基をコードし得る遺伝暗号の縮重（すなわち、重複性）に起因する。したがって、例えば、ロイシンは、ＣＴＴ、ＣＴＣ、ＣＴＡ、ＣＴＧ、ＴＴＡ、またはＴＴＧによってコードされ得、セリンは、ＴＣＴ、ＴＣＣ、ＴＣＡ、ＴＣＧ、ＡＧＴ、またはＡＧＣによってコードされ得、アスパラギンは、ＡＡＴまたはＡＡＣによってコードされ得、アスパラギン酸は、ＧＡＴまたはＧＡＣによってコードされ得、システインは、ＴＧＴまたはＴＧＣによってコードされ得、アラニンは、ＧＣＴ、ＧＣＣ、ＧＣＡ、またはＧＣＧによってコードされ得、グルタミンは、ＣＡＡまたはＣＡＧによってコードされ得、チロシンは、ＴＡＴまたはＴＡＣによってコードされ得、イソロイシンは、ＡＴＴ、ＡＴＣ、またはＡＴＡによってコードされ得る。標準の遺伝暗号を示す表は、種々の出典において見いだすことができる（例えば、L.  Stryer,  1988,  Biochemistry,  3.  sup.  rd  Edition,  W.H.  5  Freeman  and  Co.,  NY）。縮重バリアントも本明細書に開示される方法において有用である。
【０１４２】
ＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、またはその融合タンパク質をコードする核酸分子は、本明細書に提供されるアミノ酸配列および遺伝暗号を使用して、当業者が容易に作製することができる。ＩＬ−３４をコードする核酸配列は、例えば、適切な配列のクローニング、または、例えば、Needham-VanDevanter  et  al.,  Nucl.  Acids  Res.  12:6159-6168,  1984に記載されている自動合成機および米国特許第４，４５８，０６６号の固相支持法を使用した、例えばNarang  et  al.,  Meth.  Enzymol.  68:90-99,  1979のホスホトリエステル法；Brown  et  al.,  Meth.  Enzymol.  68:109-151,  1979のホスホジエステル法；Beaucage  et  al.,  Tetra.  Lett.  22:1859-1862,  1981のジエチルホスホラミダイト法；Beaucage  &  Caruthers,  Tetra.  Letts.  22  (20):1859-1862,  1981に記載されている固相ホスホラミダイトトリエステル法などの方法による直接化学合成によるものを含めた、任意の適当な方法によって調製することができる。化学合成により、一本鎖（ｓｓ）オリゴヌクレオチドが作製され、これを、相補配列とのハイブリダイゼーションによって、または一本鎖を鋳型として使用したＤＮＡポリメラーゼとの重合によって、二本鎖（ｄｓ）ＤＮＡに変換することができる。ＩＬ−３４ポリペプチドをコードする配列を含む例示的な核酸は、クローニング技法によって調製することができる。
【０１４３】
ＩＬ−３４ポリペプチドをコードする核酸は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）、転写に基づく増幅系（ＴＡＳ）、自家持続配列複製系（３ＳＲ）、およびＱβレプリカーゼ増幅系（ＱＢ）などのｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける方法によってクローニングまたは増幅することができる。例えば、タンパク質をコードするポリヌクレオチドを、分子のＤＮＡ配列に基づいたプライマーを使用してｃＤＮＡのポリメラーゼ連鎖反応によって単離することができる。多種多様なクローニングおよびｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける増幅方法体系は、当業者に周知である。ＰＣＲ法は、例えば、米国特許第４，６８３，１９５号；Mullis  et  al.,  Cold  Spring  Harbor  Symp.  Quant.  Biol.  51:263,  1987；およびErlich,  ed.,  PCR  Technology,  (Stockton  Press,  NY,  1989)に記載されている。ポリヌクレオチドはまた、ゲノムまたはｃＤＮＡライブラリーを、所望のポリヌクレオチドの配列から選択されたプローブを用いて、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でスクリーニングすることによって単離することもできる。
【０１４４】
本明細書に記載の組成物および方法に関しては、例えば上記のＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、またはその融合タンパク質をコードする核酸配列を、確立された分子生物学の手順を使用し、宿主細胞における発現が可能なベクターに組み込む。例えば、ＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、またはその融合タンパク質をコードするｃＤＮＡなどの核酸を、制限酵素消化、ＤＮＡポリメラーゼを用いたフィルイン、エキソヌクレアーゼによる欠失、末端デオキシヌクレオチドトランスフェラーゼによる伸長、合成またはクローニングされたＤＮＡ配列のライゲーション、部位特異的配列−一本鎖バクテリオファージ中間体による変更、または特定のオリゴヌクレオチドとＰＣＲもしくは他のｉｎ  ｖｉｔｒｏ増幅の組合せの使用などの標準手順を用いて操作することができる。
【０１４５】
ＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、またはその融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む宿主細胞における発現が可能なベクターの作製を当業者にガイドするために十分な例示的な手順は、例えば、Sambrook  et  al.,  Molecular  Cloning:  A  Laboratory  Manual,  2d  ed.,  Cold  Spring  Harbor  Laboratory  Press,  1989；Sambrook  et  al.,  Molecular  Cloning:  A  Laboratory  Manual,  3d  ed.,  Cold  Spring  Harbor  Press,  2001；Ausubel  et  al.,  Current  Protocols  in  Molecular  Biology,  Greene  Publishing  Associates,  1992  (and  Supplements  to  2003）；およびAusubel  et  al.,  Short  Protocols  in  Molecular  Biology:  A  Compendium  of  Methods  from  Current  Protocols  in  Molecular  Biology,  4th  ed.,  Wiley  &  Sons,  1999に見いだすことができる。
【０１４６】
典型的には、ＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、またはその融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列は、例えば、プロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含めた転写制御配列に作動可能に連結している。プロモーターは、転写の開始に関与する宿主細胞の転写機構（または導入された合成機構）によって認識されるポリヌクレオチド配列である。ポリアデニル化シグナルは、適切なプロセシングおよび翻訳のために転写物を核から細胞質に輸送するための、ｍＲＮＡ転写物の末端上の一連のヌクレオチドの付加を指示するポリヌクレオチド配列である。
【０１４７】
例示的なプロモーターとしては、ウイルスプロモーター、例えば、サイトメガロウイルス最初期遺伝子プロモーター（「ＣＭＶ」）、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（「ｔｋ」）、ＳＶ４０初期転写単位、ポリオーマ、レトロウイルス、パピローマウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、ならびにヒトおよびサル免疫不全ウイルスなどが挙げられる。他のプロモーターとしては、哺乳動物遺伝子から単離されたプロモーター、例えば、免疫グロブリン重鎖、免疫グロブリン軽鎖、Ｔ細胞受容体、ＨＬＡ  ＤＱ  αおよびＤＱ  β、β−インターフェロン、インターロイキン２、インターロイキン２受容体、ＭＨＣクラスＩＩ、ＨＬＡ−ＤＲα、β−アクチン、筋肉クレアチンキナーゼ、プレアルブミン（トランスサイレチン）、エラスターゼＩ、メタロチオネイン、コラゲナーゼ、アルブミン、フェトプロテイン、β−グロビン、ｃ−ｆｏｓ、ｃ−ＨＡ−ｒａｓ、神経系細胞接着分子（ＮＣＡＭ）、α１−抗トリプシン、Ｈ２Ｂ（ＴＨ２Ｂ）ヒストン、Ｉ型コラーゲン、グルコース調節タンパク質（ＧＲＰ９４およびＧＲＰ７８）、ラット成長ホルモン、ヒト血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）、トロポニンＩ（ＴＮＩ）、血小板由来成長因子、およびジストロフィン、ならびに網膜細胞に特異的なプロモーターが挙げられる。
【０１４８】
プロモーターは、誘導性プロモーターであっても構成的プロモーターであってもよい。誘導性プロモーターは、インデューサー物質の存在下以外では不活性であるまたは低活性を示すプロモーターである。プロモーターの例としては、これだけに限定されないが、ＭＴ  ＩＩ、ＭＭＴＶ、コラゲナーゼ、ストロメライシン、ＳＶ４０、マウスＭＸ遺伝子、α−２−マクログロブリン、ＭＨＣクラスＩ遺伝子ｈ−２ｋｂ、ＨＳＰ７０、プロリフェリン、テトラサイクリン誘導性、腫瘍壊死因子、または甲状腺刺激ホルモン遺伝子プロモーターが挙げられる。誘導性プロモーターの１つの例は、インターフェロン誘導性ＩＳＧ５４プロモーターである（参照により本明細書に組み込まれるBluyssen  et  al.,  Proc.  Natl  Acad.  Sci.  92:5645-5649,  1995を参照されたい）。一部の実施形態では、プロモーターは、追加的な因子の不在下で、宿主細胞に導入された際に高レベルの転写をもたらす構成的プロモーターである。必要に応じて、転写制御配列は、転写を最小のプロモーター単独で観察されるものよりも増加させる１つまたは複数の転写因子の認識部位に結合する１つまたは複数のエンハンサーエレメントを含む。ｍＲＮＡの安定化および発現の増加に役立つイントロンも含めることができる。
【０１４９】
遺伝子転写物の適切な終結およびポリアデニル化をもたらすためにポリアデニル化シグナルを含めることが望ましい場合がある。例示的なポリアデニル化シグナルは、ベータグロビン、ウシ成長ホルモン、ＳＶ４０、および単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ遺伝子から単離されている。
【０１５０】
ＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、またはその融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、自律複製性プラスミドもしくはウイルスにおけるベクターに組み込まれるか、または原核生物もしくは真核生物のゲノムＤＮＡに組み込まれるか、または他の配列とは独立した別個の分子（例えば、ｃＤＮＡなど）として存在する組換えＤＮＡを含む。本発明のヌクレオチドは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、またはいずれかのヌクレオチドの改変形態であり得る。この用語は、ＤＮＡの単一形態および２重形態を包含する。
【０１５１】
ＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、またはその融合タンパク質をコードする核酸を、Ｔｅｔ−Ｏｎ系に含めることができる。Ｔｅｔ−Ｏｎ系では、ｒｔＴＡタンパク質は、テトラサイクリンまたはデオキシサイクリン（deoxycycline）が結合している場合にのみ、オペレーター（ドキシサイクリンプロモーター）に結合することができる。したがって、プロモーターは、ドキシサイクリンによって活性化される。本明細書に開示される系では、３Ｇ  ＴＥＴ技術に基づく誘導性発現プラットフォームを利用することができる。このプロモーターの例示的な核酸配列は、
ATCGATACTAGACTCGAGTTTACTCCCTATCAGTGATAGAGAACGTATGAAGAGTTTACTCCCTATCAGTGATAGAGAACGTATGCAGACTTTACTCCCTATCAGTGATAGAGAACGTATAAGGAGTTTACTCCCTATCAGTGATAGAGAACGTATGACCAGTTTACTCCCTATCAGTGATAGAGAACGTATCTACAGTTTACTCCCTATCAGTGATAGAGAACGTATATCCAGTTTACTCCCTATCAGTGATAGAGAACGTATAAGCTTTAGGCGTGTACGGTGGGCGCCTATAAAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCCTGGA（配列番号７）である。
【０１５２】
この核酸配列のバリアント、例えば、配列番号７と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３５、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％配列同一である核酸配列なども、当該核酸配列がドキシサイクリン誘導性プロモーターとして機能するという条件で、使用することができる。
【０１５３】
ドキシサイクリン誘導性プロモーターは、感受性が高く、漏出性を伴わずに転写をもたらす。ドキシサイクリン誘導性プロモーターの別の実施形態は、Ｔｅｔ−ｏｎ−３Ｇ系である。この系は、２つのエレメント：（１）ＣＭＶプロモーターなどのプロモーターによる制御下で、構成的に発現されるリバーステトラサイクリン制御性トランス活性化因子誘導性プロモーター（ｒｔＴＡ）；（２）目的の配列の転写を制御するテトラサイクリン応答エレメント（ＴＲＥ）で構成される。一部の実施形態では、ＴＲＥは、最小プロモーターの上流に位置する１９ｂｐの細菌Ｔｅｔ−Ｏｎ配列の７つのリピートで構成され、Ｔｅｔ−Ｏｎの不在下での基礎発現が非常に低い。ｒｔＴＡタンパク質は、ドキシサイクリン／テトラサイクリンが結合している場合にのみＴＲＥに結合する。ドキシサイクリン／テトラサイクリンを系に添加することにより、目的の配列（例えば、ＩＬ−３４、そのバリアントまたは融合タンパク質など）の転写が開始される。テトラサイクリン／ドキシサイクリン誘導性プロモーターは、例えば、全て参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，４６４，７５８号；米国特許第５，８５１，７９６号；米国特許第５，９１２，４１１号；および米国特許第６，０００，４９４号において開示されている。これらのプロモーターはいずれも、本明細書に開示される方法において有用である。追加的な適当なプロモーターは、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１４／０１０７１９０号において開示されている。したがって、一部の実施形態では、ウイルスベクターなどのベクターは、ｒｔＴＡタンパク質、およびＩＬ−３４、そのバリアントまたは融合物の転写を制御するＴＲＥをコードする構築物である。デオキシサイクリン誘導性系を含む例示的なベクターが図１６に示されている。
【０１５４】
ＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、またはその融合タンパク質をコードするウイルスベクターを調製することもできる。ポリオーマ；ＳＶ４０（Madzak  et  al.,  1992,  J.  Gen.  Virol.,  73:15331536）；アデノウイルス（Berkner,  1992,  Cur.  Top.  Microbiol.  Immunol.,  158:39-6；Berliner  et  al.,  1988,  Bio  Techniques,  6:616-629；Gorziglia  et  al.,  1992,  J.  Virol.,  66:4407-4412；Quantin  et  al.,  1992,  Proc.  Nad.  Acad.  Sci.  USA,  89:2581-2584；Rosenfeld  et  al.,  1992,  Cell,  68:143-155；Wilkinson  et  al.,  1992,  Nucl.  Acids  Res.,  20:2233-2239；Stratford-Perricaudet  et  al.,  1990,  Hum.  Gene  Ther.,  1:241-256）；ワクシニアウイルス（Mackett  et  al.,  1992,  Biotechnology,  24:495-499）；アデノ随伴ウイルス（Muzyczka,  1992,  Curr.  Top.  Microbiol.  Immunol.,  158:91-123；On  et  al.,  1990,  Gene,  89:279-282）；ＨＳＶおよびＥＢＶを含めたヘルペスウイルス（Margolskee,  1992,  Curr.  Top.  Microbiol.  Immunol.,  158:67-90；Johnson  et  al.,  1992,  J.  Virol.,  66:29522965；Fink  et  al.,  1992,  Hum.  Gene  Ther.  3:11-19；Breakfield  et  al.,  1987,  Mol.  Neurobiol.,  1:337-371；Fresse  et  al.,  1990,  Biochem.  Pharmacol.,  40:2189-2199）；シンドビスウイルス（H.  Herweijer  et  al.,  1995,  Human  Gene  Therapy  6:1161-1167；米国特許第５，０９１，３０９号および同第５，２２１７，８７９号）；アルファウイルス（S.  Schlesinger,  1993,  Trends  Biotechnol.  11:18-22；I.  Frolov  et  al.,  1996,  Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA  93:11371-11377）；ならびにトリ起源のレトロウイルス（Brandyopadhyay  et  al.,  1984,  Mol.  Cell  Biol.,  4:749-754；Petropouplos  et  al.,  1992,  J.  Virol.,  66:3391-3397）、マウス起源のレトロウイルス（Miller,  1992,  Curr.  Top.  Microbiol.  Immunol.,  158:1-24；Miller  et  al.,  1985,  Mol.  Cell  Biol.,  5:431-437；Sorge  et  al.,  1984,  Mol.  Cell  Biol.,  4:1730-1737；Mann  et  al.,  1985,  J.  Virol.,  54:401-407）、およびヒト起源のレトロウイルス（Page  et  al.,  1990,  J.  Virol.,  64:5370-5276；Buchschalcher  et  al.,  1992,  J.  Virol.,  66:2731-2739）を含めたいくつものウイルスベクターが構築されている。バキュロウイルス（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ多核多角体病ウイルス；ＡｃＭＮＰＶ）ベクターも当技術分野で公知であり、商業的供給源から入手することができる（例えば、ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．；Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｃｏｒｐ．、Ｍｅｒｉｄｅｎ、Ｃｏｎｎ．；Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、Ｃａｌｉｆ．など）。
【０１５５】
したがって、一実施形態では、ＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、またはその融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを、ウイルスベクターに含める。適当なベクターとしては、レトロウイルスベクター、オルソポックスベクター、アビポックスベクター、鶏痘ベクター、カプリポックスベクター、スイポックスベクター、アデノウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、アルファウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、シンドビスウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、およびポリオウイルスベクターが挙げられる。具体的な例示的なベクターは、ワクシニアウイルス、鶏痘ウイルスおよび高度に弱毒化されたワクシニアウイルス（ＭＶＡ）などのポックスウイルスベクター、アデノウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、酵母ベクターなどである。アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶ）は、さらなる詳細が下に開示されており、開示されている方法において有用である。
【０１５６】
ポリペプチドが機能的に活性である限りは、ＩＬ−３４ポリペプチドをコードする核酸配列の一部を欠失させることができることが理解される。例えば、Ｎ末端、Ｃ末端、またはその両方から１つまたは複数のアミノ酸を欠失させることが望ましい場合がある。ＩＬ−３４ポリペプチド内の残基の置換は、例えば、保存的置換であってよく、したがって、ＩＬ−３４ポリペプチドの機能性は維持されることも意図されている（上記を参照されたい）。一部の実施形態では、ＩＬ−３４のアミノ酸１〜１８２を利用する。
【０１５７】
ＡＡＶベクター
ウイルスベクター、例えばレトロウイルスベクターまたはアデノウイルスベクター、またはＡＡＶベクターなどの１つまたは複数のベクターを利用することを含む方法および組成物が本明細書に開示される。ウイルス遺伝子を完全にまたはほぼ完全に欠く欠陥ウイルスを使用することができる。欠陥ウイルスベクターの使用により、ベクターが他の細胞に感染する恐れがあるという懸念を伴わずに特定の細胞に投与することが可能になる。有用なアデノウイルスおよびＡＡＶベクターは、その複製コンピテント形態、複製欠損形態、ガットレス形態を含む。理論に束縛されることなく、アデノウイルスベクターは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける強力な発現、優れた力価、ならびにｉｎ  ｖｉｖｏにおける分裂細胞および非分裂細胞への形質導入能を示すことが公知である（Hitt  et  al.,  Adv  in  Virus  Res  55:479-505,  2000）。ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて使用した場合、これらのベクターにより、強力であるが、ベクター骨格に対して引き出される免疫応答に起因して一過性である遺伝子発現がもたらされる。一部の非限定的な例では、有用なベクターは、Stratford-Perricaudet  et  al.（J.  Clin.  Invest.,  90:626-630  1992；La  Salle  et  al.,  Science  259:988-990,  1993）に記載されているベクターなどの弱毒化アデノウイルスベクター；または、欠陥ＡＡＶベクター（Samulski  et  al.,  J.  Virol.,  61:3096-3101,  1987；Samulski  et  al.,  J.  Virol.,  63:3822-3828,  1989；Lebkowski  et  al.,  Mol.  Cell.  Biol.,  8:3988-3996,  1988）である。
【０１５８】
組換えＡＡＶベクターは、標的とした細胞における選択されたトランスジェニック産物の発現および産生を指示することができるという点において特徴付けられる。したがって、組換えベクターは、カプシド形成のために必須であるＡＡＶの配列および標的細胞への感染のための物理的構造の全てを少なくとも含む。
【０１５９】
ＡＡＶは、Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ科およびＤｅｐｅｎｄｏｖｉｒｕｓ属に属する。ＡＡＶは、直鎖状の一本鎖ＤＮＡゲノムをパッケージングしている小さな、エンベロープを有さないウイルスである。ＡＡＶ  ＤＮＡのセンス鎖およびアンチセンス鎖はどちらも、等頻度でＡＡＶカプシドにパッケージングされる。一部の実施形態では、ＡＡＶ  ＤＮＡは、Ｐｄｘ１およびＭａｆＡをコードする核酸を含むが、Ｎｇｎ３をコードする核酸は含まない。本明細書に開示される核酸分子を含む組換えアデノウイルスベクターおよび組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクターなどの組換えベクターがさらに提供される。一部の実施形態では、ＡＡＶは、ｒＡＡＶ８、および／またはＡＡＶ２、例えば、ＡＡＶ７ｍ８である。しかし、ＡＡＶ血清型は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１もしくはＡＡＶ１２などの任意の他の適当なＡＡＶ血清型、または２つまたはそれよりも多くのＡＡＶ血清型のハイブリッド（例えば、これだけに限定されないが、ＡＡＶ２／１、ＡＡＶ２／７、ＡＡＶ２／８もしくはＡＡＶ２／９など）であってよい。
【０１６０】
ＡＡＶゲノムは、２つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）に隣接する２つの逆方向末端反復（ＩＴＲ）によって特徴付けられる。ＡＡＶ２ゲノムでは、例えば、ＩＴＲの最初の１２５ヌクレオチドはパリンドロームであり、それ自体でフォールディングして塩基対合が最大になり、Ｔ字形ヘアピン構造が形成される。ＩＴＲの他の２０塩基はＤ配列と称され、対合しないまま残る。ＩＴＲは、ＡＡＶ  ＤＮＡ複製のための重要なシス作用性配列である；ＩＴＲは、複製開始点であり、ＤＮＡポリメラーゼによる第２の鎖合成のプライマーとしての機能を果たす。この合成の間に形成される二本鎖ＤＮＡは、複製型単量体と称され、セルフプライミング複製の第２ラウンドに使用され、複製型二量体を形成する。これらの二本鎖中間体が鎖置き換え機構によってプロセシングされ、その結果、パッケージングに使用される一本鎖ＤＮＡおよび転写に使用される二本鎖ＤＮＡがもたらされる。ＩＴＲ内にはＲｅｐ結合性エレメントおよび末端分解部位（ＴＲＳ）が位置する。これらの特徴は、ＡＡＶ複製の間にウイルス調節タンパク質Ｒｅｐによって使用されて、二本鎖中間体にプロセシングされる。ＡＡＶ複製におけるそれらの役割に加えて、ＩＴＲは、ＡＡＶゲノムパッケージング、転写、非許容条件下での負の調節、および部位特異的組み込みにも必須である（Daya  and  Berns,  Clin  Microbiol  Rev  21(4):583-593,  2008）。一部の実施形態では、これらのエレメントをＡＡＶベクターに含める。
【０１６１】
ＡＡＶの左側のＯＲＦは、４種のタンパク質  −  Ｒｅｐ７８、Ｒｅｐ６８、Ｒｅｐ５２およびＲｅｐ４０をコードするＲｅｐ遺伝子を含有する。右側のＯＲＦは、３種のウイルスカプシドタンパク質（ＶＰ１、ＶＰ２およびＶＰ３）を生じさせるＣａｐ遺伝子を含有する。ＡＡＶカプシドは、正二十面体対称性に配置された６０種のウイルスカプシドタンパク質を含有する。ＶＰ１、ＶＰ２およびＶＰ３は、１：１：１０のモル比で存在する（Daya  and  Berns,  Clin  Microbiol  Rev  21(4):583-593,  2008）。一部の実施形態では、これらのエレメントをＡＡＶベクターに含める。
【０１６２】
ＡＡＶベクターは遺伝子治療に使用することができる。有用な例示的なＡＡＶは、ＡＡＶ２（例えば、ＡＡＶ７ｍ８など）、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ８およびＡＡＶ９である。アデノウイルス、ＡＡＶ２およびＡＡＶ８は、網膜内の細胞を形質導入することができる。したがって、ｒＡＡＶ２またはｒＡＡＶ８ベクターのいずれも、本明細書に開示される方法において使用することができる。しかし、ｒＡＡＶ６およびｒＡＡＶ９ベクターも有用である。例示的なｒＡＡＶ７ｍ８ベクターが図１６に示されている。
【０１６３】
ＡＡＶは、ヒトおよびいくつかの他の霊長類種に感染するが、疾患を引き起こすことは知られておらず、非常に軽度の免疫応答を引き出す。ＡＡＶを利用する遺伝子治療ベクターは、分裂細胞および静止細胞のどちらにも感染することができ、宿主細胞のゲノムに組み込まれずに染色体外の状態で持続する。ＡＡＶ８は、網膜の細胞に優先的に感染する。ＡＡＶの有利な特徴を理由として、本開示は、本明細書に開示される方法へのｒＡＡＶの使用を意図している。
【０１６４】
ＡＡＶは、標的細胞に結合し、侵入する能力、核への侵入能力、長期間にわたって核において発現される能力、および低毒性を含めた、遺伝子治療ベクターとして望ましいいくつかの追加的な特徴を有する。ＡＡＶは、細胞へのトランスフェクトに使用することができ、適当なベクターは当技術分野で公知である。例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１４／００３７５８５号を参照されたい。遺伝子治療に適したｒＡＡＶを作製するための方法は当技術分野で周知であり（例えば、米国特許出願公開第２０１２／０１００６０６号；同第２０１２／０１３５５１５号；同第２０１１／０２２９９７１号；および同第２０１３／００７２５４８号；ならびにGhosh  et  al.,  Gene    Ther  13(4):321-329,  2006を参照されたい）、本明細書に開示される方法と共に利用することができる。
【０１６５】
一部の実施形態では、ベクターは、ｒＡＡＶ８ベクター、ｒＡＡＶ６ベクター、ｒＡＡＶ９ベクターである。具体的な非限定的な例では、ベクターは、ＡＡＶ８ベクターである。ＡＡＶ８ベクターは、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８，６９２，３３２号において開示されている。例示的なＡＡＶ８核酸配列が、図１および米国特許第８，６９２，３３２号の配列番号１に示されている。ＡＡＶ核酸配列は、この核酸配列と約９０％より大きく、９５％、９８％または９９％同一であり得ることが開示されている。カプシド、ｒｅｐ６８／７８、ｒｅｐ４０／５２、ＶＰ１、ＶＰ２およびＶＰ３の位置および配列は、この米国特許第８，６９２，３３２号に開示されている。ＡＡＶ８の位置および超可変領域も提供される。一部の実施形態では、ベクターは、ＡＡＶ７ｍ８などのｒＡＡＶ２ベクターである。
【０１６６】
本明細書に開示される方法において有用なベクターは、単一のＡＡＶ血清型（例えば、ＡＡＶ２、ＡＡＶ６、ＡＡＶ８またはＡＡＶ９）に由来するものであってもよいインタクトなＡＡＶカプシドをコードする核酸配列を含有し得る。米国特許第８，６９２，３３２号に開示されている通り、有用なベクターは、組換えの場合もあり、したがって、異種ＡＡＶまたは非ＡＡＶカプシドタンパク質（またはその断片）と融合したＡＡＶ８カプシドの１つまたは複数の断片を含有する人工的なカプシドをコードする配列を含有し得る。これらの人工的なカプシドタンパク質は、ＡＡＶ２、ＡＡＶ６、ＡＡＶ８またはＡＡＶ９カプシドの非連続部分から、または他のＡＡＶ血清型のカプシドから選択される。例えば、ｒＡＡＶベクターは、ＶＰ２および／もしくはＶＰ３から、またはＶＰ１から選択されるＡＡＶ８カプシド領域、あるいは、ＡＡＶ８カプシドのアミノ酸１〜１８４、アミノ酸１９９〜２５９；アミノ酸２７４〜４４６；アミノ酸６０３〜６５９；アミノ酸６７０〜７０６；アミノ酸７２４〜７３８から選択されるその断片の１つまたは複数を含むカプシドタンパク質を有し得る。米国特許第８，６９２，３３２号の配列番号２を参照されたい。別の例では、ＶＰ３タンパク質の開始コドンをＧＴＧに変更することが望ましい場合がある。あるいは、ｒＡＡＶは、ＡＡＶ血清型８カプシドタンパク質超可変領域の１つまたは複数、例えば、米国特許第８，６９２，３３２号の配列番号２に記載のＡＡＶ８カプシドのａａ１８５〜１９８；ａａ２６０〜２７３；ａａ４４７〜４７７；ａａ４９５〜６０２；ａａ６６０〜６６９；およびａａ７０７〜７２３を含有し得る。
【０１６７】
一部の実施形態では、ＡＡＶ血清型８カプシドを有する組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）を生成する。ベクターを作製するために、本明細書で定義されているＡＡＶ血清型８カプシドタンパク質またはその断片をコードする核酸配列；機能的ｒｅｐ遺伝子；最低でもＡＡＶ逆方向末端反復（ＩＴＲ）および例えば配列番号１または配列番号２のアミノ酸１〜１８２を含む、ＩＬ−３４またはその機能性断片をコードする導入遺伝子などの導入遺伝子で構成されるミニ遺伝子；ならびにＡＡＶ８カプシドタンパク質へのパッケージングを可能にするために十分なヘルパー機能を含有する、培養することができる宿主細胞。ＡＡＶミニ遺伝子をＡＡＶカプシドにパッケージングするために宿主細胞中で培養する必要がある構成成分は、宿主細胞にトランスでもたらすことができる。あるいは、必要な構成成分（例えば、ミニ遺伝子、ｒｅｐ配列、ｃａｐ配列、および／またはヘルパー機能）の任意の１つまたは複数を、当業者に公知の方法を使用して必要な構成成分の１つまたは複数を含有するように操作された安定な宿主細胞によってもたらすことができる。一部の実施形態では、安定な宿主細胞は、必要な構成成分（複数可）を誘導性プロモーターまたは組織特異的プロモーターの制御下で含有する。同様の方法を使用して、ｒＡＡＶ２、ｒＡＡＶ６またはｒＡＡＶ９ベクターおよび／またはビリオンを生成することができる。
【０１６８】
組織特異的プロモーターは、光受容体特異的プロモーター、例えば、ロドプシンキナーゼ（ＲＫ）プロモーターなどの網膜特異的プロモーターであり得る。ロドプシンキナーゼプロモーターにより、杆体細胞および錐体細胞における発現が指示される。このプロモーターは、発現のために最適化されている（参照により本明細書に組み込まれるKhani  et  al.,  Invest.  Opthamol.  Vis.  Science,  48:3954-3961,  2007を参照されたい）。このプロモーターの配列は、この参照文献の図１に提供されている。追加的なプロモーターとして、これだけに限定されないが、ＮＲＬ、ＣＲＸ、ＩＲＢＰ、またはロドプシンプロモーターが挙げられる。他の実施形態では、これだけに限定されないが、例えば配列番号１または配列番号２のアミノ酸１〜１８２を含む、ＩＬ−３４、そのバリアント、融合タンパク質、または機能性断片をコードする導入遺伝子などの構成成分（複数可）を、構成的プロモーターの制御下に置くことができる。適当な構成的プロモーターの非限定的な例は、サイトメガロウイルスプロモーターである。追加的な非限定的な例は、ユビキチン（例えば、Ｕ６など）またはＨ１プロモーターである。有用なプロモーターは、上の節にも開示されている。ベクターは、デオキシサイクリン／テトラサイクリン誘導性系（例えば、ＴＥＴ−Ｏｎ）などの誘導性系を含有し得る。
【０１６９】
なお別の代替では、選択された安定な宿主細胞は、構成的プロモーターの制御下にある選択された構成成分（複数可）と、１つまたは複数の誘導性プロモーターの制御下にある他の選択された構成成分（複数可）とを含有し得る。例えば、２９３細胞（構成的プロモーターの制御下にあるＥ１ヘルパー機能を含有する）に由来するが、誘導性プロモーターの制御下にあるｒｅｐおよび／またはｃａｐタンパク質を含有する安定な宿主細胞を生成することができる。当業者は、なお他の安定な宿主細胞を生成することができる。
【０１７０】
ｒＡＡＶを作製するために必要なミニ遺伝子、ｒｅｐ配列、ｃａｐ配列、およびヘルパー機能は、それが担持する配列を伝達する任意の遺伝子エレメントの形態でパッケージング宿主細胞に送達することができる。選択された遺伝子エレメントは、本明細書に記載のものを含めた任意の適当な方法によって送達することができる。ベクターを構築するために使用される方法は、核酸操作の当業者には公知であり、遺伝子操作、組換え操作、および合成の技法を含む。例えば、Sambrook  et  al,  Molecular  Cloning:  A  Laboratory  Manual,  Cold  Spring  Harbor  Press,  Cold  Spring  Harbor,  N.Yを参照されたい。同様に、ｒＡＡＶビリオンを生成する方法は周知であり、適当な方法の選択は、本発明を限定するものではない。例えば、K.  Fisher  et  al,  J.  Virol.,  70:520-532  (1993)および米国特許第５，４７８，７４５号を参照されたい。一部の実施形態では、選択されたＡＡＶ構成成分を、ＡＡＶ８を含めたＡＡＶ血清型から、当業者が利用可能な技法を使用して容易に単離することができる。そのようなＡＡＶは、学術的、商業的、または公共の供給源（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖａ．）から単離または入手され得る。あるいは、ＡＡＶ配列は、文献またはデータベース、例えばＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）などにおいて入手可能なものなどの公開された配列を参照することにより、合成または他の適当な手段を通じて入手することができる。
【０１７１】
医薬組成物および処置方法
対象を網膜変性から保護するため、および／またはブドウ膜炎、網膜炎もしくは脈絡網膜炎を処置するための方法が本明細書に開示される。これらの方法は、ブドウ膜炎、網膜炎、もしくは脈絡網膜炎を有する、および／または網膜変性からの保護を必要とする対象を選択するステップと、対象の眼に、（ａ）インターロイキン（ＩＬ）−３４のアミノ酸１〜１８２を含むポリペプチド、ＩＬ−３４のバリアント、もしくはＩＬ−３４のＦｃ融合タンパク質であって、ｉ）抗炎症性および／もしくはｉｉ）神経保護性である、ポリペプチド、バリアント、もしくはＦｃ融合タンパク質；ならびに／または（ｂ）ポリペプチド、バリアント、もしくはＦｃ融合タンパク質をコードする核酸分子を治療有効量で局所的に投与するステップとを含む。一部の実施形態では、ポリペプチド、バリアント、またはＦｃタンパク質は、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）数を増加させること、および／またはｉｉ）ミクログリア数を増加させ、ミクログリアの活性化を阻害することができる。追加的な実施形態では、方法は、核酸分子を、これだけに限定されないが、ＡＡＶベクター、例えばＡＡＶ８ベクターなどのウイルスベクター中で投与するステップを含む。対象は、動物対象またはヒトなどの哺乳動物であり得る。対象は、ネコ、イヌまたはウサギなどの飼育ペットであり得る。対象は、ブタ（wine）、反芻動物、ウマ、および家禽を含めた非ヒト、霊長類、または家畜であり得る。
【０１７２】
一部の実施形態では、対象は、神経損傷またはシナプス機能障害を有する。さらなる実施形態では、ポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、神経保護をもたらし、ミクログリアの恒常性を増加させる。一般に、対象が神経損傷を有する場合、網膜電図（ＥＲＧ）応答が影響を受ける。開示される方法により、ＥＧＦ応答が改善される。
【０１７３】
一部の実施形態では、方法は、網膜変性を有する対象を選択するステップと、この対象を処置するステップとを含み得る。対象は、緑内障、網膜色素変性症、加齢黄斑変性、レーバー先天性黒内障（ＬＣＡ）、糖尿病性網膜症、アッシャーＩ型、または先天性停止性夜盲症を有し得る。
【０１７４】
網膜変性に関しては、診断には、眼の眼底を検査し、かつ／または視野を評価する検査を利用することができる。これらとしては、網膜電図、蛍光血管造影、および目視検査が挙げられる。眼底検査は、網膜の状態を評価すること、および網膜表面の特徴的な色素斑点の存在について評価することを目的とする。視野の検査により、網膜の種々の部分の光刺激に対する感受性を評価することが可能になる。網膜電図（ＥＲＧ）を使用することができ、これは、特定の光刺激に応答した網膜の電気的活動を記録し、２つの異なる型の光受容体（すなわち、錐体細胞および杆体細胞）の機能性に関する別個の評価を可能にするものである。
【０１７５】
本開示の方法を使用して、あらゆる型の網膜色素変性症を処置することができる。一部の実施形態では、網膜色素変性症は、ロドプシン遺伝子、ペリフェリン遺伝子、および／または杆体において発現される他の遺伝子の変異によって引き起こされる。網膜色素変性症は、常染色体優性、常染色体劣性またはＸ連鎖様式での遺伝性の遺伝学的状態の結果であり得る。Ｘ連鎖網膜色素変性症は、劣性であり、男性に影響を及ぼす場合もあり、または優性であり、したがって、男性および女性に影響を及ぼす場合もある。網膜色素変性症は、中心性黄斑色素変化（ブルズアイ黄斑症）を示す杆体錐体網膜変性に関連し得る。網膜色素変性症は、Ｘ連鎖劣性網膜変性疾患であるコロイデレミアであり得る。一般に、網膜色素変性症（ＲＰ）は、光受容体細胞の進行性の喪失によって特徴付けられる。
【０１７６】
一部の実施形態では、方法は、緑内障の対象を選択するステップと、この対象を処置するステップとを含む。対象は、開放隅角緑内障、閉塞隅角緑内障、または正常眼圧緑内障を有し得る。緑内障は、原発性緑内障または続発緑内障であり得る。これらの対象のいずれも処置のために選択することができる。
【０１７７】
眼内の流体圧である眼圧（ＩＯＰ）は、水銀柱ミリメートル（ｍｍＨｇ）またはキロパスカル（ｋＰａ）の単位で測定することができる。正常眼圧は、典型的には、１０ｍｍＨｇから２０ｍｍＨｇの間とみなされる。眼圧の平均値は１５．５ｍｍＨｇであり、約２．７５〜３．５０ｍｍＨｇの変動がある。眼圧の上昇（２１ｍｍＨｇまたは２．８ｋＰａを上回る）が緑内障に関して最も重要であり、唯一の改変可能な危険因子である。一部の実施形態では、眼圧が上昇している対象を選択する。他の実施形態では、眼圧の上昇とまで言えないが、緑内障性損傷のエビデンスを有する対象を選択する。例えば、対象は、視神経乳頭陥凹を有し、陥凹乳頭径比が増加したまたは増加中であり得る（例えば、０．３よりも大きい、０．５よりも大きいまたは０．７よりも大きい）。他の実施形態では、対象は、緑内障性視神経損傷（例えば、陥凹乳頭径比の増悪など）の存在下でわずかに上昇したＩＯＰを有し得る。
【０１７８】
緑内障の検査は、例えば、眼圧測定、前房隅角検査または隅角鏡検査を使用した眼圧の測定、ならびに損傷、陥凹乳頭径比の変化、周縁部の外観および血管の変化の検出を同定するための視神経の検査を含み得る。視野検査を実施することができる。網膜神経線維層を、光干渉断層撮影、走査レーザー旋光分析、および／または走査レーザー検眼鏡検査（ハイデルベルク網膜断層像）などのイメージング技法を用いて評価することができる。追加的な検査として、眼圧測定、検眼鏡検査、視野測定、隅角鏡検査、角膜厚測定、および神経線維分析が挙げられる。本明細書に開示される方法に従った処置のための対象を選択するために、これらの方法を実施することができる。
【０１７９】
一部の実施形態では、主題の方法により、治療利益、例えば、緑内障、網膜色素変性症、加齢黄斑変性、レーバー先天性黒内障（ＬＣＡ）、糖尿病性網膜症、アッシャーＩ型、または先天性停止性夜盲症などの網膜障害の発生の防止、網膜障害の増悪の停止、網膜障害の増悪の逆転がもたらされる。一部の実施形態では、方法は、治療利益が実現されたことを検出するステップを含む。
【０１８０】
投与後、対象を応答について、当技術分野で公知の任意の方法を使用して評価することができる。それらとしては、これだけに限定されないが、検眼鏡検査、視野測定、隅角鏡検査、角膜厚測定、または神経線維分析が挙げられる。一部の実施形態では、網膜神経節細胞の数および／または生存能力を評価することができる。当業者は、開示されている方法が有効であることを容易に判定することができる。例えば、これは、陥凹乳頭径比が安定化されているかどうかによって決定することができる。例えば、網膜神経線維層分析を実施するために、走査レーザー旋光分析または光干渉断層撮影を使用することができる。緑内障の増悪をモニタリングするために視野検査を使用することができる。開示されている方法のいずれかに関して、視覚欠損の処置における治療有効性は、個体の視覚の変更としてであり得る。
【０１８１】
治療有効性の評価基準は、改変される特定の疾患に適用可能であり、治療有効性を測定するために使用するための適切な検出方法が認識されよう。例えば、治療有効性を眼底撮影またはＥＲＧ応答の評価によって観察することができる。方法は、対象に組成物を投与した後の検査結果と対象に組成物を投与する前の検査結果とを比較することを含み得る。別の例として、進行性の錐体機能障害の処置における治療有効性は、錐体機能障害の増悪の速度の低下として、錐体機能障害の増悪の休止として、または錐体機能の改善として観察することができ、その効果は、例えば、ＥＲＧおよび／もしくはｃＥＲＧ；色覚検査；機能的補償光学；ならびに／または視力検査によってなどで、例えば、対象に組成物を投与した後の検査結果と対象に組成物を投与する前の検査結果とを比較し、錐体の生存能力および／または機能の変化を検出することによって、観察することができる。第３の例として、視覚欠損の処置における治療有効性は、例えば、赤色波長の知覚における、緑色波長の知覚における、青色波長の知覚における個体の視覚の変更としてであり得、その効果は、ｃＥＲＧおよび色覚検査によって、例えば、対象に組成物を投与した後の検査結果と対象に組成物を投与する前の検査結果とを比較し、錐体および杆体の生存能力および／または機能の変化を検出することによって、観察することができる。一部の実施形態では、方法は、形態および構造保存ならびに／またはＥＲＧの評価を含む。
【０１８２】
一部の実施形態では、方法は、ブドウ膜炎を有する対象を選択するステップを含む。任意の形態のブドウ膜炎を、開示されている方法を使用して処置することができる。対象は、前部ブドウ膜炎（すなわち、虹彩毛様体炎または虹彩および毛様体の炎症ならびに／または虹彩炎）、中間部ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎（すなわち、脈絡網膜炎または脈絡膜および網膜の炎症）、またはびまん性ブドウ膜炎（すなわち、汎ブドウ膜炎）を有し得る。一部の他の例では、ブドウ膜炎は、虹彩炎、毛様体炎、毛様体炎、毛様体扁平部炎、脈絡網膜炎、虹彩毛様体炎、または虹彩炎を含み得る。方法を、急性または慢性であるブドウ膜炎を処置するために使用することもできる。一部の例では、ブドウ膜炎は、外科手術、外傷、自己免疫障害、化学的刺激への曝露、感染症、炎症性障害、またはヒト白血球抗原Ｂ２７（ＨＬＡ−Ｂ２７）ハプロタイプに起因するものであり得る。
【０１８３】
一実施形態では、対象における前部ブドウ膜炎を処置するための方法が提供される。特発性虹彩毛様体炎、ＨＬＡ−Ｂ２７陽性虹彩毛様体炎、若年性関節リウマチに関連するブドウ膜炎、フックス異色性虹彩毛様体炎、単純ヘルペス角膜ブドウ膜炎、強直性脊椎炎、眼内レンズ関連ブドウ膜炎、ライター症候群、帯状疱疹角膜ブドウ膜炎、梅毒に関連するブドウ膜炎、外傷性虹彩毛様体炎、炎症性腸疾患に関連するブドウ膜炎、および／または結核性虹彩毛様体炎を患っている対象を処置することができる。
【０１８４】
別の実施形態では、対象における後部ブドウ膜炎を処置するための方法が提供される。したがって、トキソプラズマ脈絡網膜炎（retinochroiditis）、網膜血管炎、特発性後部ブドウ膜炎、眼ヒストプラスマ症、トキソカラ症、サイトメガロウイルス網膜炎、特発性網膜炎、匍行性脈絡膜症、急性多発性斑状（acute  multifocal  placoid）、色素上皮症、急性網膜壊死、バードショット脈絡膜症（ｂｉｒｄ  ｓｈｏｔ  ｃｈｏｒｏｉｄｏｐａｔｈｙ）、白血病もしくはリンパ腫に関連するブドウ膜炎、細網肉腫、眼カンジダ症、結核性ブドウ膜炎、および／またはループス網膜炎を患っている対象を処置することができる。さらなる実施形態では、びまん性ブドウ膜炎を処置するための方法が提供される。したがって、サルコイドーシス、梅毒、フォークト小柳原田症候群、および／またはベーチェット病を患っている対象を処置することができる。
【０１８５】
一実施形態では、ブドウ膜炎の徴候または症状を低減または緩和する。眼の徴候としては、毛様充血、房水フレア、眼科検査で房水細胞、水晶体後細胞、および硝子体細胞などの細胞の目に見える蓄積、角膜後面沈着物、ならびに前房出血が挙げられる。症状としては、疼痛（例えば、毛様体痙攣など）、発赤、羞明、流涙の増加、および視力低下が挙げられる。当業者は、ブドウ膜炎を容易に診断することができる。一実施形態では、ブドウ膜炎を診断するため、疾患の臨床経過を評価するため、または処置プロトコールが上首尾であったことを検証するために、生体顕微鏡検査（例えば、「細隙灯」）を使用する。
【０１８６】
方法を使用して、ブドウ膜炎を有する対象を処置することができ、ここで、対象は、自己免疫障害を有する。一部の例示的な方法では、自己免疫障害は、サルコイドーシス、強直性脊椎炎、関節炎、多発性硬化症、または乾癬であり得る。他の実施形態では、対象は、炎症性障害を有し得る。一部の例では、炎症性障害は、クローン病、潰瘍性大腸炎、またはベーチェット症候群であり得る。追加的な例示的な方法では、対象は、感染症を有し得る。一部の方法では、感染症は、ネコひっかき病、帯状疱疹、単純ヘルペス、レプトスピラ症、トキソカラ症、トキソプラズマ症、梅毒、結核、ライム病、ウエストナイルウイルス、サイトメガロウイルス、またはヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に起因するものであり得る。他の実施形態では、対象は、ハプロタイプＨＬＡ−Ｂ２７を有し得る。
【０１８７】
さらなる実施形態では、網膜炎または脈絡網膜炎を有する対象を選択し、本明細書に開示される方法を使用して処置する。これらの対象は、細菌感染症、ウイルス感染症、原生動物感染症、または真菌感染症などの感染症を有し得る。感染症は、例えば、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、またはウエストナイルウイルス感染症であり得る。感染症は、単純ヘルペス、帯状疱疹、サイトメガロウイルス感染症であり得る。他の実施形態では、対象は、結核、梅毒、ブルセラ症、ライム病、またはＹｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ感染症を有し得る。さらに他の実施形態では、対象は、Ｃａｎｄｉｄａ種、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種、Ｆｕｓａｒｉｕｍ種、またはＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ種による感染症を有し得る。さらなる実施形態では、対象は、眼トキソプラズマ症、眼トキソカラ症、びまん性片側性亜急性視神経網膜炎、急性網膜壊死、サイトメガロウイルス網膜炎、ベーチェット関連網膜炎、急性網膜色素上皮炎またはサルコイドーシスを有する。
【０１８８】
ＩＬ−３４ポリペプチド、バリアント、および融合タンパク質、または、例えばウイルスベクター内の本明細書に開示されるＩＬ−３４ポリペプチド、バリアント、および融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む医薬組成物が本明細書に提供される。医薬組成物は、処置される疾患の位置および型に応じて様々なやり方で製剤化し、投与することができる（例えば、ＩＬ−３４ポリペプチドおよびそのバリアントの医薬組成物ならびにそのような組成物の投与が開示されており、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２００５／００５４５６７号を参照されたい）。医薬組成物は、ナノ粒子を含み得る。これらの医薬組成物は、本明細書に開示される方法において有用である。
【０１８９】
本明細書に開示される通り、眼に送達するための医薬組成物が提供される。ＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、またはその融合タンパク質を含む医薬組成物が本開示の範囲内に含まれる。例えば、ウイルスベクター、例えばＡＡＶベクター内のＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、またはその融合タンパク質をコードする核酸分子を含む医薬組成物も本開示の範囲内に含まれる。
【０１９０】
ＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、またはその融合タンパク質およびＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、またはその融合タンパク質をコードする核酸分子は、ｅｘ  ｖｉｖｏで投与することもでき（例えば、眼に埋め込まれる幹細胞内に）、例えば、これだけに限定されないが、網膜下（sub-retainl）または硝子体内投与（administrt）など、ｉｎ  ｖｉｖｏで対象の眼内に投与することもできる。一般に、組成物を意図された適用に適した医薬組成物として調製することが望ましい。したがって、上記のポリペプチド、核酸分子、またはベクターを含有する医薬または医薬組成物を作製する方法が本明細書に含まれる。典型的には、医薬組成物（医薬）の調製には、発熱物質、およびヒトまたは動物に有害であり得るあらゆる他の不純物を本質的に含まない医薬組成物を調製することが必要である。典型的には、医薬組成物は、組成物の構成成分を安定にし、標的細胞による核酸またはウイルスの取り込みを可能にするために、適切な塩および緩衝剤を含有する。
【０１９１】
例えば硝子体内または（of）網膜下投与のための、注射用の治療用組成物を提供することができる。そのような組成物は、一般に、開示される治療剤を、所望の程度の純度、単位投与量の注射可能な形態（溶液、懸濁液、またはエマルション）で、薬学的に許容される担体、例えば、用いられる投与量および濃度でレシピエントに対して無毒性であり、製剤の他の成分と適合する担体と混合することによって製剤化される。医薬組成物は、薬学的に許容される担体または賦形剤中に分散（例えば、溶解または懸濁）させた、有効量のポリペプチド、核酸分子を含み得る。薬学的に許容される担体および／または薬学的に許容される賦形剤は、当技術分野で公知であり、例えば、Remington's  Pharmaceutical  Sciences  by  E.  W.  Martin,  Mack  Publishing  Co.,  Easton,  PA,  19th  Edition  (1995)に記載されている。担体の性質は、用いられる特定の投与形式に依存する。例えば、非経口製剤は、通常、例えば、水、生理食塩水、平衡塩類溶液、水性デキストロース、グリセロールなどの薬学的かつ生理的に許容される流体を含む注射液をビヒクルとして含有する。さらに、投与される医薬組成物は、微量の無毒性補助物質、例えば、湿潤剤または乳化剤、保存剤、ｐＨ緩衝剤など、例えば、酢酸ナトリウムまたはソルビタンモノラウレートを含有し得る。開示される治療剤は、水性担体、例えば、ｐＨ約３．０〜約８．５、例えば、約４．０〜約８．０、約６．５〜約８．５、または約７．４などの等張性または低張性緩衝溶液に懸濁させることができる。有用なバッファとしては、食塩水緩衝リン酸バッファまたはイオン性ホウ酸バッファが挙げられる。活性成分は、必要に応じて賦形剤と一緒に、凍結乾燥物の形態であってもよく、投与前に適当な溶媒を添加することによって溶液にすることができる。
【０１９２】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」は、任意のあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌剤および抗真菌剤、等張化剤および吸収遅延剤などを含む。そのような媒体および剤の薬学的に活性な物質への使用は当技術分野で周知である。任意の従来の媒体または剤が活性成分と適合しない場合を除いて、任意の従来の媒体または剤の医薬組成物における使用が意図されている。補足的な活性成分も組成物に組み込むことができる。例えば、ある特定の医薬組成物は、ベクターまたはウイルスを水中に、ヒドロキシ−プロピルセルロースなどの適当な界面活性物質と混合して含み得る。グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびそれらの混合物中、ならびに油中の分散液剤も調製することができる。保管および使用の通常の条件下で、これらの調製物は、微生物の成長を防止するために保存剤を含有する。
【０１９３】
ＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、もしくはその融合タンパク質またはＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、もしくはその融合タンパク質をコードする核酸分子を、眼への局部適用または注射のため、例えば、硝子体内または網膜下投与のために、不活性マトリックスに含めることができる。不活性マトリックスの一例として、卵ホスファチジルコリン（ＰＣ）などのジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）からリポソームを調製することができる。カチオン性およびアニオン性リポソームを含めたリポソームを、当業者に公知の標準手順を使用して作製することができる。一部の適用に関しては、ＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、その融合タンパク質またはＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、もしくはその融合タンパク質をコードする核酸分子を含むリポソームを、眼内に注射することができる。眼内注射用の製剤中で、リポソームカプセルは、細胞による消化に起因して分解する。理論に束縛されることなく、これらの製剤により、対象をある期間にわたって実質的に一定の濃度のＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、もしくはその融合タンパク質またはＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、もしくはその融合タンパク質をコードする核酸分子に曝露させる緩徐放出薬物送達システムの利点がもたらされる。一例では、以前に記載されている通り、ＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、もしくはその融合タンパク質またはＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、もしくはその融合タンパク質をコードする核酸分子を、ＤＭＳＯまたはアルコールなどの有機溶媒中に溶解させることができ、また、ポリ酸無水物、ポリ（グリコール）酸、ポリ（乳）酸、またはポリカプロラクトンポリマーを含有させることができる。
【０１９４】
一部の実施形態では、ＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、もしくはその融合タンパク質またはＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、もしくはその融合タンパク質をコードする核酸分子を含む医薬組成物を、正確な投与量の個々の投与に適した単位剤形に製剤化する。投与される活性化合物（複数可）の量は、処置される対象、病気の重症度、および投与様式に依存し、処方する臨床医の判断に委ねるのが最良である。これらの縛りの中で、投与される製剤は、ある数量の活性構成成分（複数可）を、処置される対象において所望の効果を実現するために有効な量で含有する。
【０１９５】
ＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、もしくはその融合タンパク質またはＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、もしくはその融合タンパク質をコードする核酸分子を、埋め込み物のサイズ、形状、および製剤化ならびに移植手順の種類に応じて眼内の様々な部位に埋め込むことができる送達システムに含めることができる。ＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、もしくはその融合タンパク質またはＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、もしくはその融合タンパク質をコードする核酸分子を、単独で使用することができる。しかし、別の実施形態では、以下に開示される少なくとも１つの剤などの少なくとも１つの追加的な剤を、ＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、もしくはその融合タンパク質またはＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、もしくはその融合タンパク質をコードする核酸分子と一緒に、埋め込み物などの送達システムに含めることができる。次いで、送達システムを眼内に導入する。適当な部位としては、これだけに限定されないが、前房、前眼部、後眼房、後眼部、および硝子体腔が挙げられる。
【０１９６】
埋め込み物は、強膜への切開（例えば、２〜３ｍｍの切開）または他の適当な部位への切開を入れた後にピンセットまたはトロカールによって配置することを含めた、種々の方法によって眼内に挿入することができる。一部の場合では、トロカールによって、別の切開を入れず、その代わりに、トロカールを用いて眼に直接穴を形成することによって、埋め込み物を配置することができる。配置の方法は、放出動態に影響を及ぼす可能性がある。例えば、トロカールを用いてデバイスを硝子体または後眼房内に埋め込むことにより、ピンセットによる配置よりも硝子体内の深部へのデバイスの配置がもたらされ、これにより、埋め込み物を硝子体の縁により近づけることができる。埋め込まれたデバイスの位置は、デバイスの周囲のＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、もしくはその融合タンパク質またはＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、もしくはその融合タンパク質をコードする核酸分子の濃度勾配に影響を及ぼす可能性があり、したがって、放出速度に影響を及ぼす可能性がある（例えば、硝子体の縁により近づけて配置されたデバイスでは、より遅い放出速度をもたらすことができる。米国特許第５，８６９，０７９号および米国特許第６，６９９，４９３号を参照されたい）。
【０１９７】
眼内への埋め込み物の使用は当技術分野で周知である（米国特許第６，６９９，４９３号および米国特許第５，８６９，０７９号を参照されたい）。一実施形態では、埋め込み物を、ＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、もしくはその融合タンパク質またはＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、もしくはその融合タンパク質をコードする核酸分子と共に、生物侵食性ポリマーマトリックスと会合させて製剤化する。
【０１９８】
一般に、埋め込み物を使用する場合、ＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、もしくはその融合タンパク質またはＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、もしくはその融合タンパク質をコードする核酸分子を、ポリマーマトリックスにおける一様でない分布に起因する放出速度の有害な変動が生じないように一様に分布するように、ポリマーマトリックスを通じて均一に分布させる。用いるポリマー組成物の選択は、所望の放出動態、埋め込み物の位置、患者の許容性、および埋め込み手順の性質によって変動する。ポリマーを埋め込み物の少なくとも約１０重量パーセントで含めることができる。一例では、ポリマーを埋め込み物の少なくとも約２０重量パーセントで含める。別の実施形態では、埋め込み物は、１つよりも多くのポリマーを含む。これらの因子は、米国特許第６，６９９，４９３号に詳しく記載されている。ポリマーの特性としては、一般に、とりわけ、埋め込み部位における生分解性、目的の薬剤との適合性、封入のしやすさ、および水不溶性が挙げられる。一般に、ポリマーマトリックスは、薬物負荷量が放出されるまで完全には分解されない。適当なポリマーの化学組成は当技術分野で公知である（例えば、米国特許第６，６９９，４９３号を参照されたい）。本明細書に開示されるＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、もしくはその融合タンパク質またはＩＬ−３４ポリペプチド、そのバリアント、もしくはその融合タンパク質をコードする核酸分子は、他の担体および溶媒を用いて埋め込み形態に製剤化することができる。例えば、緩衝剤および保存剤を用いることができる。埋め込み物のサイズおよび形状も、眼の特定の領域における使用のために変動させることができる（米国特許第５，８６９，０７９号を参照されたい）。一部の実施形態では、ナノ粒子を使用する。
【０１９９】
局所投与形式としては、例として、眼内経路、眼窩内経路、硝子体内経路および網膜下経路が挙げられる。ある実施形態では、局所的に（例えば、硝子体内に）投与した場合、全身的に（例えば、静脈内に）投与した場合と比較して、有意に少量の構成成分（全身手法と比較）で効果が発揮される。局所投与形式により、潜在的な副作用の発生率を低下させるまたは排除することができる。一実施形態では、本明細書に記載の構成成分を網膜下に、例えば網膜下注射によって送達する。網膜下注射は、黄斑に直接行うことができ、例えば、黄斑下注射であってもよい。例示的な方法としては、眼内注射（例えば、眼球後、網膜下、黄斑下、硝子体内および脈絡膜内）、イオン導入、点眼、および眼内埋め込み（例えば、硝子体内、テノン嚢下および結膜下）が挙げられる。
【０２００】
一実施形態では、本明細書に開示される組成物を硝子体内注射によって送達する。硝子体内注射は、網膜剥離のリスクが比較的低い。薬剤を眼に投与するための方法は医学の分野で公知であり、本明細書に記載の構成成分を投与するために使用することができる。
【０２０１】
投与は、単回投与、周期的なボーラス（例えば、網膜下、静脈内もしくは硝子体内）または内部リザーバー（例えば、眼球内もしくは眼球外の位置に配置された埋め込み物（米国特許第５，４４３，５０５号および同第５，７６６，２４２号を参照されたい））から、もしくは外部リザーバー（例えば、静脈内バッグ）からの連続注入として提供することができる。構成成分を、眼の内壁に固定した持続放出薬物送達デバイスからの、または脈絡膜への標的化経強膜制御放出による特定の期間にわたる連続放出によって投与することができる（例えば、ＰＣＴ／ＵＳ００／００２０７、ＰＣＴ／ＵＳ０２／１４２７９、Ambati  et  al.  (2000)  INVEST.  OPHTHALMOL.  VIS.  SCI.  41:1181-1185、およびAmbati  et  al.  (2000)  INVEST.  OPHTHALMOL.  VIS.  SCI.  41:1186-1191を参照されたい）。構成成分を眼の内側に局所的に投与するために適した種々のデバイスが当技術分野で公知である。例えば、米国特許第６，２５１，０９０号、同第６，２９９，８９５号、同第６，４１６，７７７号、同第６，４１３，５４０号、およびＰＣＴ／ＵＳ００／２８１８７を参照されたい。
【０２０２】
個々の用量は、典型的には、対象に対する測定可能な効果を生じさせるために必要な量以上であり、主題の組成物またはその副産物の吸収、分布、代謝、および排泄（「ＡＤＭＥ」）についての薬物動態学および薬理学に基づいて、したがって、対象内での組成物の処理（ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ）に基づいて決定することができる。これは、網膜下適用（主に局所的効果のために作用が望まれる場所に直接適用される）、硝子体内適用（汎網膜効果のために硝子体に適用される）に関して調整することができる投与経路および投薬量の考慮を含む。有効な投与量および／または投与レジメンは、前臨床アッセイから、安全性および漸増および用量範囲試験から、個々の臨床医と患者の関係から、ならびにｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏアッセイから、経験的に容易に決定することができる。治療剤の硝子体内注射または網膜下注射は、１回実施することもでき、または、繰り返し、例えば、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、または１０回実施することもできる。投与は、２週間に１回、毎週、隔週、毎月、または２カ月毎、３カ月毎、４カ月毎、５カ月毎、または６カ月毎に実施することができる。
【０２０３】
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドを、例えば、ＡＡＶベクターなどのウイルスベクターにおいて利用する。例えば、ウイルスを、マイクロインジェクション、電気穿孔、脂質媒介性トランスフェクション、ペプチド媒介性送達、または当技術分野で公知の他の方法によって送達することができる。ｉｎ  ｖｉｖｏ送達のために、アデノウイルスまたはＡＡＶベクターなどのベクターを医薬組成物に製剤化することができ、一般に、眼に、例えば、硝子体内または網膜下に局所的に投与する。ウイルスベクターの適切な用量は、他の因子の中でも、処置される対象（例えば、ヒトもしくは非ヒト霊長類または他の哺乳動物）、処置される対象の年齢および全身状態、処置される状態の重症度、ベクター／ビリオンの投与形式に依存する。当業者は、適切な有効量を容易に決定することができる。したがって、「治療有効量」は、臨床試験によって決定することができる比較的広範な範囲に入る。
【０２０４】
それだけに限定されないがＡＡＶベクターを含めたウイルスベクターを、特定の期間にわたる放出が可能になるように製剤化することができる。放出系は、生分解性材料または組み込まれた構成成分を拡散によって放出する材料のマトリックスを含み得る。構成成分は、放出系内に均一にまたは不均一に分布する。種々の放出系が有用であり得るが、適切な系の選択は、特定の適用で必要とされる放出速度に依存する。非分解性放出系および分解性放出系のどちらを使用することもできる。適当な放出系は、ポリマーおよびポリマーマトリックス、非ポリマーマトリックス、または、これだけに限定されないが、炭酸カルシウムおよび糖（例えば、トレハロース）などの無機および有機賦形剤および希釈剤を含む。放出系は、天然のものであっても合成のものであってもよい。しかし、一般に、合成放出系はより信頼でき、より再現性があり、かつ、より定義された放出プロファイルが生じるので、合成放出系が好ましい。放出系材料は、分子量が異なる構成成分が材料への拡散または材料の分解によって放出されるように選択することができる。
【０２０５】
代表的な合成生分解性ポリマーとしては、例えば、ポリアミド、例えば、ポリ（アミノ酸）およびポリ（ペプチド）；ポリエステル、例えば、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）、およびポリ（カプロラクトン）；ポリ（酸無水物）；ポリオルトエステル；ポリカーボネート；ならびにそれらの化学的誘導体（化学基の置換、付加、例えば、アルキル、アルキレン、ヒドロキシル化、酸化、および当業者により常套的になされる他の修飾）、それらの共重合体および混合物が挙げられる。代表的な合成非分解性ポリマーとしては、例えば、：ポリエーテル、例えば、ポリ（エチレンオキシド）、ポリ（エチレングリコール）、およびポリ（テトラメチレンオキシド）；ビニルポリマー−ポリアクリレートおよびポリメタクリレート、例えば、メチル、エチル、他のアルキル、ヒドロキシエチルメタクリル酸、アクリルおよびメタクリル酸など、例えば、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、およびポリ（酢酸ビニル）；ポリ（ウレタン）；セルロースおよびその誘導体、例えば、アルキル、ヒドロキシアルキル、エーテル、エステル、ニトロセルロース、および種々の酢酸セルロース；ポリシロキサン；ならびにそれらの任意の化学的誘導体（化学基の置換、付加、例えば、アルキル、アルキレン、ヒドロキシル化、酸化、および当業者により常套的になされる他の修飾）、それらの共重合体および混合物が挙げられる。
【０２０６】
ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）マイクロスフェアも、眼内注射のために使用することができる。典型的には、マイクロスフェアは、乳酸およびグリコール酸のポリマーで構成され、構造化されて中空球体を形成している。この球体は、直径およそ１５〜３０ミクロンであり得、本明細書に記載の構成成分と共にロードすることができる。
【０２０７】
例えば、ｉｎ  ｖｉｖｏ注射、すなわち、対象への直接注射に関しては、治療有効用量は、約１０５〜１０１６個のＡＡＶビリオン、例えば、１０８〜１０１４個のＡＡＶビリオン程度になる。用量は当然、形質導入の効率、プロモーターの強度、メッセージおよびそれによりコードされるタンパク質の安定性、ならびに臨床的因子に依存する。有効な投与量は、当業者が用量応答曲線を確立する常套的試験によって容易に確立することができる。
【０２０８】
一部の実施形態では、主題の組成物がＡＡＶである場合、変化を実現するための有効量は、約１×１０８個またはそれよりも多くのベクターゲノム、一部の場合では、約１×１０９個、約１×１０１０個、約１×１０１１個、約１×１０１２個、または約１×１０１３個またはそれよりも多くのベクターゲノム、特定の例では、約１×１０１４個またはそれよりも多くのベクターゲノム、および通常は約１×１０１５個以下のベクターゲノムになる。一部の実施形態では、送達されるベクターの量は、約１×１０１４個またはそれ未満のベクター、例えば、約１×１０１３個、約１×１０１２個、約１×１０１１個、約１×１０１０個、または約１×１０９個またはそれ未満のベクターであり、ある特定の例では、約１×１０８個のベクター、および典型的には１×１０８個以上のベクターである。一部の非限定的な例では、送達されるベクターゲノムの量は、約１×１０１０個〜約１×１０１１個のベクターである。追加的な非限定的な例では、送達されるベクターの量は、約１×１０１０個〜約１×１０１２個のベクターゲノムである。
【０２０９】
一部の実施形態では、投与される医薬組成物の量を、感染多重度（ＭＯＩ）を使用して測定することができる。一部の実施形態では、ＭＯＩは、ベクターまたはウイルスゲノムの、核酸を送達することができる細胞に対する比、または倍数を指す。一部の実施形態では、ＭＯＩは、約１×１０６であり得る。一部の場合では、ＭＯＩは、約１×１０５〜約１×１０７であり得る。一部の場合では、ＭＯＩは、約１×１０４〜約１×１０８であり得る。一部の場合では、本開示の組換えウイルスは、少なくとも約１×１０１、約１×１０２、約１×１０３、約１×１０４、約１×１０５、約１×１０６、約１×１０７、約１×１０８、約１×１０９、約１×１０１０、約１×１０１１、約１×１０１２、約１×１０１３、約１×１０１４、約１×１０１５、約１×１０１６、約１×１０１７、および約１×１０１８ＭＯＩである。一部の場合では、本開示の組換えウイルスは、約１×１０８〜１×１０１４ＭＯＩである。
【０２１０】
一部では、送達される医薬組成物の量は、約１×１０８〜約１×１０１５個の組換えウイルスの粒子、約１×１０９〜約１×１０１４個の組換えウイルスの粒子、約１×１０１０〜約１×１０１３個の組換えウイルスの粒子、または約１×１０１１〜約１×１０．ｓ１２個の組換えウイルスの粒子を含む（参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１５／０２５９３９５号を参照されたい）。
【０２１１】
投薬処置は、最終的に上記の量を送達する単回投与スケジュールまたは複数回投与スケジュールであり得る。さらに、対象に必要なだけの用量を投与することができる。したがって、対象に、例えば、１０５〜１０１６個のＡＡＶビリオンを、例えば、１０５〜１０１６個のＡＡＶビリオンの送達を集合的にもたらす単回投与、または２回、４回、５回、６回もしくはそれよりも多くの投与で与えることができる。当業者は、施行する投与の適切な回数を容易に決定することができる。
【０２１２】
一部の実施形態では、ＡＡＶを、約１×１０１１〜約１×１０１４個のウイルス粒子（ｖｐ）／ｋｇの用量で投与する。一部の実施例では、ＡＡＶを、約１×１０１２〜約８×１０１３ｖｐ／ｋｇの用量で投与する。他の例では、ＡＡＶを、約１×１０１３〜約６×１０１３ｖｐ／ｋｇの用量で投与する。具体的な非限定的な例では、ＡＡＶを、少なくとも約１×１０１１ｖｐ／ｋｇ、少なくとも約５×１０１１ｖｐ／ｋｇ、少なくとも約１×１０１２ｖｐ／ｋｇ、少なくとも約５×１０１２ｖｐ／ｋｇ、少なくとも約１×１０１３ｖｐ／ｋｇ、少なくとも約５×１０１３ｖｐ／ｋｇ、または少なくとも約１×１０１４ｖｐ／ｋｇの用量で投与する。他の非限定的な例では、ｒＡＡＶを、約５×１０１１ｖｐ／ｋｇ以下、約１×１０１２ｖｐ／ｋｇ以下、約５×１０１２ｖｐ／ｋｇ以下、約１×１０１３ｖｐ／ｋｇ以下、約５×１０１３ｖｐ／ｋｇ以下、または約１×１０１４ｖｐ／ｋｇ以下の用量で投与する。１つの非限定的な例では、ＡＡＶを、約１×１０１２ｖｐ／ｋｇの用量で投与する。ＡＡＶは、所望の治療結果のために必要に応じて、単回投与で、または複数回投与で（例えば、２回投与、３回投与、４回投与、５回投与、６回投与、７回投与、８回投与、９回投与または１０回投与）投与することができる。
【０２１３】
医薬組成物は、ＡＡＶベクターなどのベクター、および／またはビリオン、ならびに薬学的に許容される賦形剤を含有し得る。そのような賦形剤は、それ自体では組成物を受け取る個体に対して有害な抗体の産生を誘導するものではなく、過度の毒性を伴わずに投与することができる任意の医薬品を含む。薬学的に許容される賦形剤としては、これだけに限定されないが、水、食塩水、グリセロールおよびエタノールなどの液体が挙げられる。薬学的に許容される塩、例えば、鉱酸塩、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩など；および有機酸の塩、例えば、酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩、安息香酸塩などをその中に含めることができる。さらに、例えば、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝物質などの補助物質がそのようなビヒクル中に存在し得る。薬学的に許容される賦形剤の詳細な考察は、REMINGTON'S  PHARMACEUTICAL  SCIENCES  (Mack  Pub.  Co.,  N.J.  1991)において入手可能である。
【０２１４】
一部の実施形態では、賦形剤により、ＡＡＶビリオンに対して保護効果が付与され、その結果、製剤手順、包装、保管、輸送などに起因するＡＡＶビリオンおよび形質導入能の喪失が最小化される。したがって、これらの賦形剤組成物は、これらにより、標準アッセイを使用して測定して、それらの保護されていない対応物よりも高いＡＡＶビリオン力価および高い形質導入能レベルがもたらされるという意味で、「ビリオン安定化性」である。例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１２／０２１９５２８号を参照されたい。したがって、これらの組成物は、本明細書に記載の特定の賦形剤を欠く組成物と比較して、「形質導入能レベルの増強」を示し、したがって、それらの保護されていない対応物よりも安定である。
【０２１５】
ＡＡＶビリオンを活性分解条件から保護するために使用することができる例示的な賦形剤としては、これだけに限定されないが、界面活性剤、タンパク質、例えば、オボアルブミンおよびウシ血清アルブミン、アミノ酸、例えば、グリシン、これだけに限定されないが、１５００〜６０００の分子量が好ましいが、ＰＥＧ−２００、ＰＥＧ−４００、ＰＥＧ−６００、ＰＥＧ−１０００、ＰＥＧ−１４５０、ＰＥＧ−３３５０、ＰＥＧ−６０００、ＰＥＧ−８０００およびこれらの値の間の任意の分子量などの種々の分子量のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、プロピレングリコール（ＰＧ）、炭水化物、好ましくはソルビトールなどの糖アルコールなどの多価アルコールおよび二価アルコールが挙げられる。界面活性剤は、存在する場合、アニオン性、カチオン性、双性イオン性または非イオン性界面活性剤であってもよい。例示的な界面活性剤は、非イオン性界面活性剤である。１つの適当な型の非イオン性界面活性剤は、ソルビタンエステル、例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０）ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミテート（ＴＷＥＥＮ（登録商標）−４０）、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート（ＴＷＥＥＮ（登録商標）−６０）、ポリオキシエチレンソルビタントリステアレート（ＴＷＥＥＮ（登録商標）−６５）、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０）、ポリオキシエチレンソルビタントリオレエート（ＴＷＥＥＮ（登録商標）−８５）、例えば、ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０および／またはＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０である。これらの賦形剤は、Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏなどのいくつかのベンダーから市販されている。
【０２１６】
ＡＡＶを含めた開示された組成物のいずれかに存在する種々の賦形剤の量は、様々であり、当業者によって容易に決定される。例えば、ＢＳＡなどのタンパク質賦形剤は、存在する場合、１．０重量（ｗｔ．）％〜約２０ｗｔ．％、好ましくは１０ｗｔ．％の濃度で存在し得る。グリシンなどのアミノ酸が製剤に使用される場合、約１ｗｔ．％〜約５ｗｔ．％の濃度で存在し得る。ソルビトールなどの炭水化物は、存在する場合、約０．１ｗｔ％〜約１０ｗｔ．％、例えば、約０．５ｗｔ．％〜約１５ｗｔ．％、または約１ｗｔ．％〜約５ｗｔ．％の濃度で存在し得る。ポリエチレングリコールが存在する場合、一般に、約２ｗｔ．％〜約４０ｗｔ．％、例えば、約１０ｗｔ．％〜約２５ｗｔ．％程度で存在し得る。プロピレングリコールが主題の製剤に使用される場合、典型的には、約２ｗｔ．％〜約６０ｗｔ．％、例えば、約５ｗｔ．％〜約３０ｗｔ．％の濃度で存在し得る。ソルビタンエステル（ＴＷＥＥＮ（登録商標））などの界面活性剤が存在する場合、約０．０５ｗｔ．％〜約５ｗｔ．％、例えば、約０．１ｗｔ．％から約１ｗｔ％の間の濃度で存在し得る。参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１２／０２１９５２８号を参照されたい。一例では、水性ビリオン安定化製剤は、ソルビトールなどの炭水化物を０．１ｗｔ．％〜約１０ｗｔ．％、例えば約１ｗｔ．％〜約５ｗｔ．％の濃度で含み、ソルビタンエステル（ＴＷＥＥＮ（登録商標））などの界面活性剤を約０．０５ｗｔ．％から約５ｗｔ．％の間、例えば、約０．１ｗｔ．％から約１ｗｔ．％の間の濃度で含む。ビリオンは、一般に、上で定義されている通り１回または複数回の投与で与えられる場合に治療効果をもたらすために十分な量で組成物中に存在する。
【０２１７】
一部の実施形態では、本明細書に開示される薬剤を治療有効量で、眼内注射、例えば、硝子体内注射または網膜下注射によって投与する。硝子体内注射のための一般的な方法は、以下の簡単な概略により例示することができる。この例は、ただ単に方法のある特定の特徴を例示するものであり、決して限定を意味するものではない。硝子体内注射の手順は当技術分野で公知である（例えば、Peyman,  et  al.  (2009)  Retina  29(7):875-912およびFagan  and  Al-Qureshi,  (2013)  Clin.  Experiment.  Ophthalmol.  41(5):500-7を参照されたい）。眼内投与の他の方法が当技術分野で公知であり、網膜下投与を含む。
【０２１８】
簡単に述べると、硝子体内注射するための対象に対し、瞳孔の拡張、眼の滅菌、および麻酔薬の投与による手順を用意することができる。当技術分野で公知の任意の適当な散瞳剤を瞳孔の拡張のために使用することができる。処置前に十分な瞳孔の拡張を確認することができる。滅菌は、滅菌用の眼の処置、例えば、ポビドンヨウ素（ＢＥＴＡＤＩＮＥ（登録商標））などのヨウ化物含有溶液を適用することによって実現することができる。眼瞼、睫毛、およびあらゆる他の近くの組織（例えば、皮膚）を清潔にするために同様の溶液を使用することもできる。リドカインまたはプロパラカインなどの任意の適当な麻酔薬を任意の適当な濃度で使用することができる。麻酔薬は、これだけに限定することなく、麻酔薬の局所滴剤、ゲルまたはゼリー、および結膜下適用を含めた当技術分野で公知の任意の方法によって投与することができる。
【０２１９】
注射前に、滅菌開瞼器を使用して、睫毛をその領域から取り除くことができる。注射の部位をシリンジでマークすることができる。注射の部位は、患者の水晶体に基づいて選択することができる。例えば、注射部位は、偽水晶体または無水晶体患者では縁（limus）から３〜３．５ｍｍ、有水晶体患者では縁からおよび３．５〜４ｍｍであり得る。患者は、注射部位とは逆の方向を見ることができる。注射中、針を強膜に垂直に挿入し、眼の中心に向けることができる。針を、先端が網膜下空間ではなく硝子体内に留まるように挿入することができる。当技術分野で公知の任意の適当な注射体積を使用することができる。注射後、眼を抗生物質などの滅菌剤で処置することができる。眼をすすいで過剰な滅菌剤を除去することもできる。
【０２２０】
対象に、追加的な治療剤を投与することができる。それらとしては、これだけに限定されないが、例えば、緑内障の対象に対して眼圧を低下させる薬剤が挙げられる。薬剤は、ａ）プロスタグランジンアナログ、ｂ）ベータ−アドレナリン作動性遮断薬、ｃ）アルファ−アドレナリン作動性アゴニスト、またはｄ）コリン作動性アゴニストであってもよい。例示的な薬剤としては、ラタノプロスト、ビマトプロスト（bimatorpost）、トラボプロスト、チモロール、ベタキソロール、ブリモニジン、ピロカルピン、ドルゾラミド、ブリンゾラミド、およびアセタゾラミドが挙げられる。一部の具体的な非限定的な例では、薬剤は、ａ）ラタノプロスト、ｂ）チモロール、ｃ）ブリモニジン、またはｄ）ピロカルピンである。対象に、これだけに限定されないが、リパスジルまたはネタルスジルなどのＲｈｏ−キナーゼ阻害剤を投与することができる。
【０２２１】
対象に投与することができる追加的な薬剤としては、感染症および炎症のリスクを低下させるための抗細菌性および抗真菌性抗生物質、ならびに非ステロイド性抗炎症剤が挙げられる。追加的な薬剤は、任意の経路によって投与することができる。追加的な薬剤は、別々に、または同じ組成物中に製剤化することができる。
【０２２２】
有用な薬剤としては、抗生物質、例えば、アミノグリコシド（minoglycosides）（例えば、アミカシン、アプラマイシン、アルベカシン、バンベルマイシン、ブチロシン、ジベカシン、ジヒドロストレプトマイシン、フォーチミシン、ゲンタマイシン、イセパマイシン、カナマイシン、ミクロノマイシン、ネオマイシン、ネオマイシンウンデシレン酸塩、ネチルマイシン、パロモマイシン、リボスタマイシン、シソマイシン、スペクチノマイシン、ストレプトマイシン、トブラマイシン、トロスペクトマイシン）、アンフェニコール（例えば、アジダムフェニコール、クロラムフェニコール、フロルフェニコール、チアンフェニコール）、アンサマイシン（例えば、リファミド、リファンピン、リファマイシンｓｖ、リファペンチン、リファキシミン）、β−ラクタム（例えば、カルバセフェム（例えば、ロラカルベフ）、カルバペネム（例えば、ビアペネム、イミペネム、メロペネム、パニペネム）、セファロスポリン（例えば、セファクロル、セファドロキシル、セファマンドール、セファトリジン、セファゼドン、セファゾリン、セフカペンピボキシル、セフクリジン、セフジニル、セフジトレン、セフェピム、セフェタメト、セフィキシム、セフメノキシム、セフォジジム、セフォニシド、セフォペラゾン、セフォラニド、セフォタキシム、セフォチアム、セフォゾプラン、セフピミゾール、セフピラミド、セフピロム、セフポドキシムプロキセチル、セフプロジル、セフロキサジン、セフスロジン、セフタジジム、セフテラム、セフテゾール、セフチブテン、セフチゾキシム、セフトリアキソン、セフロキシム、セフゾナム、セファセトリルナトリウム、セファレキシン、セファログリシン、セファロリジン、セファロスポリン、セファロチン、セファピリンナトリウム、セフラジン、ピブセファレキシン）、セファマイシン（例えば、セフブペラゾン、セフメタゾール、セフィニノックス、セフォテタン、セフォキシチン）、モノバクタム（例えば、アズトレオナム、カルモナム、チゲモナム）、オキサセフェム、フロモキセフ、モキサラクタム）、ペニシリン（例えば、アムジノシリン、アムジノシリンピボキシル、アモキシシリン、アンピシリン、アパルシリン、アスポキシシリン、アジドシリン、アズロシリン、バカンピシリン、ベンジルペニシリン酸、ベンジルペニシリンナトリウム、カルベニシリン、カリンダシリン、クロメトシリン、クロキサシリン、シクラシリン、ジクロサキシリン、エピシリン、フェンベニシリン、フロキサシリン、ヘタシリン、レナンピシリン、メタンピシリン、メチシリンナトリウム、メズロシリン、ナフシリンナトリウム、オキサシリン、ペナメシリン、ペネタメートヨウ化水素酸塩、ペニシリンＧベネタミン、ペニシリンｇベンザチン、ペニシリンｇベンズヒドリルアミン、ペニシリンＧカルシウム、ペニシリンＧヒドラバミン、ペニシリンＧカリウム、ペニシリンＧプロカイン、ペニシリンＮ、ペニシリンＯ、ペニシリンＶ、ペニシリンＶベンザチン、ペニシリンＶヒドラバミン、ペニメピサイクリン、フェネチシリンカリウム、ピペラリシン、ピバンピシリン、プロピシリン、キナシリン、スルベニシリン、スルタミシリン、タランピシリン、テモシリン、チカルシリン）、そ��他（例えば、リチペネム）、リンコサミド（例えば、クリンダマイシン、リンコマイシン）、マクロライド（例えば、アジスロマイシン、カルボマイシン、クラリスロマイシン、ジリスロマイシン、エリスロマイシン、エリスロマイシンアシストレート、エリスロマイシンエストレート、エリスロマイシングルコヘプトネート、エリスロマイシンラクトビオン酸塩、エリスロマイシンプロピオネート、エリスロマイシンステアリン酸塩、ジョサマイシン、ロイコマイシン、ミデカマイシン、ミオカマイシン、オレアンドマイシン、プリマイシン、ロキタマイシン、ロサラミシン、ロキシスロマイシン、スピラマイシン、トロレアンドマイシン）、ポリペプチド（例えば、アンホマイシン、バシトラシン、カプレオマイシン、コリスチン、エンデュラシジン、エンビオマイシン、フサファンギン、グラミシジンS、グラミシジン（S）、ミカマイシン、ポリミキシン、プリスチナマイシン、リストセチン、テイコプラニン、チオストレプトン、ツベラクチノマイシン、チロシジン、チロスリシン、バンコマイシン、バイオマイシン、バージニアマイシン、亜鉛バシトラシン）、テトラサイクリン（例えば、アピサイクリン、クロルテトラサイクリン、クロモサイクリン、デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、グアメサイクリン、リメサイクリン、メクロサイクリン、メタサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、ペニメピサイクリン、ピパサイクリン、ロリテトラサイクリン、サンサイクリン、テトラサイクリン）、など（例えば、サイクロセリン、ムピロシン、ツベリン）が挙げられる。有用な薬剤として、合成抗細菌薬、例えば、２，４−ジアミノピリミジン（例えば、ブロジモプリム、テトロキソプリム、トリメトプリム）、ニトロフラン（例えば、フラルタドン、塩化フラゾリウム、ニフラデン、ニフラテル、ニフルホリン、ニフルピリノール、ニフルプラジン、ニフルトイノール、ニトロフラントイン）、キノロンおよびアナログ（例えば、シノキサシン、シプロフロキサシン、クリナフロキサシン、ジフロキサシン、エノキサシン、フレロキサシン、フルメキン、グレパフロキサシン、ロメフロキサシン、ミロキサシン、ナジフロキサシン、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン、オキソリニン酸、パズフロキサシン、ペフロキサシン、ピペミド酸、ピロミド酸、ロソキサシン、ルフロキサシン、スパルフロキサシン、テマフロキサシン、トスフロキサシン、トロバフロキサシン）、スルホンアミド（例えば、アセチルスルファメトキシピラジン、ベンジルスルファミド、クロラミン−ｂ、クロラミン−ｔ、ジクロラミンｔ、マフェニド、４’−（メチルスルファモイル）スルファニルアニリド、ノプリルスルファミド、フタリルスルファセタミド、フタリルスルファチアゾール、サラゾスルファジミジン、スクシニルスルファチアゾール、スルファベンズアミド、スルファセタミド、スルファクロルピリダジン、スルファクリソイジン、スルファシチン、スルファジアジン、スルファジクラミド、スルファジメトキシン、スルファドキシン、スルファエチドール、スルファグアニジン、スルファグアノール、スルファレン、スルファロクス酸、スルファメラジン、スルファメータ、スルファメタジン、スルファメチゾール、スルファメトミジン、スルファメトキサゾール、スルファメトキシピリダジン、スルファメトロール、スルファミドクリソイジン、スルファモキソール、スルファニルアミド、スルファニリル尿素、ｎ−スルファニリル−３，４−キシラミド、スルファニトラン、スルファペリン、スルファフェナゾール、スルファプロキシリン、スルファピラジン、スルファピリジン、スルファソミゾール、スルファシマジン、スルファチアゾール、スルファチオ尿素、スルファトラミド、スルフイソミジン、スルフイソキサゾール）スルホン（例えば、アセダプソン、アセジアスルホン、アセトスルホンナトリウム、ダプソン、ジアチモスルホン、グルコスルホンナトリウム、ソラスルホン、スクシスルホン、スルファニル酸、ｐ−スルファニルベンジルアミン、スルホキソンナトリウム、チアゾールスルホン）、など（例えば、クロホクトール、ヘキセジン、メテナミン、メテナミンアンヒドロメチレン−クエン酸塩、馬尿酸メテナミン、マンデル酸メテナミン、スルホサリチル酸メテナミン、ニトロキソリン、タウロリジン、キシボルノール）も挙げられる。
【０２２３】
追加的な有用な薬剤としては、抗真菌抗生物質、例えば、ポリエン（例えば、アンホテリシンＢ、カンジシジン、デンノスタチン、フィリピン、フンギクロミン、ハチマイシン、ハマイシン、ルセンソマイシン、メパルトリシン、ナタマイシン、ナイスタチン、ペチロシン、ペリマイシン）、その他（例えば、アザセリン、グリセオフルビン、オリゴマイシン、ウンデシレン酸ネオマイシン、ピロールニトリン、シッカニン、ツベルシジン、ビリジン）アリルアミン（例えば、ブテナフィン、ナフチフィン、テルビナフィン）、イミダゾール（例えば、ビホナゾール、ブトコナゾール、クロルダントイン、クロルミダゾール（chlormiidazole）、クロコナゾール、クロトリマゾール、エコナゾール、エニルコナゾール、フェンチコナゾール、フルトリマゾール、イソコナゾール、ケトコナゾール、ラノコナゾール、ミコナゾール、オモコナゾール、オキシコナゾール硝酸塩、セルタコナゾール、スルコナゾール、チオコナゾール）、チオカルバメート（例えば、トルシクレート、トリンデート、トルナフテート）、トリアゾール（例えば、フルコナゾール、イトラコナゾール、サペルコナゾール、テルコナゾール）その他（例えば、アクリゾルシン、アモロルフィン、ビフェナミン、ブロモサリシルクロラニリド、ブクロサミド、プロピオン酸カルシウム、クロルフェネシン、シクロピロックス、クロキシキン、コパラフィネート、ジアムタゾールジヒドロクロリド、エキサラミド、フルシトシン、ハレタゾール、ヘキセチジン、ロフルカルバン、ニフラテル、ヨウ化カリウム、プロピオン酸、ピリチオン、サリチルアニリド、プロピオン酸ナトリウム、スルベンチン、テノニトロゾール、トリアセチン、ユジョチオン、ウンデシレン酸、プロピオン酸亜鉛）が挙げられる。（１）抗生物質およびアナログ（例えば、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カルビシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、メノガリル、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ピラルビシン、プリカマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ジノスタチン、ゾルビシン）、（２）代謝拮抗薬、例えば、葉酸アナログ（例えば、デノプテリン、エダトレキセート、メトトレキセート、ピリトレキシム、プテロプテリン、トリメトレキセート）、（３）プリンアナログ（例えば、クラドリビン、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン）、（４）ピリミジンアナログ（例えば、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ドキシフルリジン、エミテフール、エノシタビン、フロクスウリジン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、タガフール）を含めた抗新生物剤も有用であり得る。
【０２２４】
ステロイド性抗炎症剤、例えば、２１−アセトキシプレグネノロン、アルクロメタゾン、アルゲストン、アムシノニド、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、ブデソニド、クロロプレドニゾン、クロベタゾール、クロベタゾン、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチコステロン、コルチゾン、コルチバゾール、シクロスポリン、デフラザコート、デソニド、デスオキシメタゾン、デキサメタゾン、ジフロラゾン、ジフルコルトロン、ジフルプレドネート、エノキソロン、フルアザコルト、フルクロロニド、フルメタゾン、フルニソリド、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルオコルチンブチル、フルオコルトロン、フルオロメトロン、酢酸フルペロロン、酢酸フルプレドニデン、フルプレドニゾロン、フルランドレノリド、フルチカゾンプロピオン酸エステル、ホルモコータル、ハルシノニド、ハロベタソールプロピオン酸塩、ハロメタゾン、ハロプレドン酢酸エステル、ヒドロコルタメート、ヒドロコルチゾン、エタボン酸ロテプレドノール、マジプレドン、メドリゾン、メプレドニゾン、メチルプレドニゾロン、モメタゾンフランカルボン酸エステル、パラメタゾン、プレドニカルベート、プレドニゾロン、プレドニゾロン２５−ジエチルアミノ−アセテート、リン酸プレドニゾロンナトリウム、プレドニゾン、プレドニバール、プレドニリデン、リメキソロン、チキソコルトール、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンベネトニド、およびトリアムシノロンヘキサアセトニドも使用することができる。
【０２２５】
さらに、非ステロイド性抗炎症剤を使用することができる。これらとしては、アミノアリールカルボン酸誘導体（例えば、エフェナム酸、エトフェナメート、フルフェナム酸、イソニキシン、メクロフェナム酸、メフェナム酸、ニフルミン酸、タルニフルメート、テロフェナメート、トルフェナム酸）、アリール酢酸誘導体（例えば、アセクロフェナク、アセメタシン、アルクロフェナク、アンフェナク、アムトルメチングアシル、ブロムフェナク、ブフェキサマク、シンメタシン、クロピラク、ジクロフェナクナトリウム、エトドラク、フェルビナク、フェンクロジン酸、フェンチアザク、グルカメタシン、イブフェナック、インドメタシン、イソフェゾラク、イソキセパク、ロナゾラク、メチアジン酸、モフェゾラク、オキサメタシン、ピラゾラク、プログルメタシン、スリンダク、チアラミド、トルメチン、トロペシン、ゾメピラック）、アリール酪酸誘導体（例えば、ブマジゾン、ブチブフェン、フェンブフェン、キセンブシン）、アリールカルボン酸（例えば、クリダナク、ケトロラク、チノリジン）、アリールプロピオン酸誘導体（例えば、アルミノプロフェン、ベノキサプロフェン、ベルモプロフェン、ブクロキシ酸、カルプロフェン、フェノプロフェン、フルノキサプロフェン、フルルビプロフェン、イブプロフェン、イブプロキサム、インドプロフェン、ケトプロフェン、ロキソプロフェン、ナプロキセン、オキサプロジン、ピケトプロレン、ピルプロフェン、プラノプロフェン、プロチジン酸、スプロフェン、チアプロフェン酸、キモプロフェン、ザルトプロフェン）、ピラゾール（例えば、ジフェナミゾール、エピリゾール）、ピラゾロン（例えば、アパゾン、ベンズピペリロン、フェプラゾン、モフェブタゾン、モラゾン、オキシフェンブタゾン、フェニルブタゾン、ピペブゾン、プロピフェナゾン、ラミフェナゾン、スキシブゾン、チアゾリノブタゾン）、サリチル酸誘導体（例えば、アセタミノサロール、アスピリン、ベノリレート、ブロモサリゲニン、アセチルサリチル酸カルシウム、ジフルニサル、エテルサレート、フェンドサール、ゲンチジン酸、サリチル酸グリコール、サリチル酸イミダゾール、リシンアセチルサリチル酸、メサラミン、サリチル酸モルホリン、サリチル酸１−ナフチル、オルサラジン、パルサルミド、アセチルサリチル酸フェニル、サリチル酸フェニル、サルアセトアミド、サリチルアミドｏ−酢酸、サリシル硫酸、サルサレート、スルファサラジン）、チアジンカルボキシアミド（例えば、アンピロキシカム、ドロキシカム、イソキシカム、ロルノキシカム、ピロキシカム、テノキシカム）、イプシロン−アセトアミドカプロン酸、ｓ−アデノシルメチオニン、３−アミノ−４−ヒドロキシ酪酸、アミキセトリン、ベンダザック、ベンジダミン、アルファ−ビサボロール、ブコローム、ジフェンピラミド、ジタゾール、エモルファゾン、フェプラジノール、グアイアズレン、ナブメトン、ニメスリド、オキサセプロール、パラニリン、ペリソキサール、プロカゾン、スーパーオキシドジスムターゼ、テニダップ、およびジロートンが挙げられる。
【０２２６】
本開示を以下の非限定的な実施例により例示する。
【実施例】
【０２２７】
インターロイキン−３４は、炎症性の状態の下でマクロファージ、単球、およびミクログリアの分化、生存および増殖を誘導する神経細胞によって、主に産生されるサイトカインである。ＩＬ−３４のレベルの上昇が種々の自己免疫疾患の患者において報告されており、炎症促進性サイトカインのレベルと正に相関する。しかし、ＩＬ−３４は、単球のＭ２極性化を通じてＦｏｘｐ３＋調節性Ｔ細胞を誘導することも示されている。自己免疫性ブドウ膜炎におけるＩＬ−３４の役割を、実験的自己免疫性ブドウ膜炎（ＥＡＵ）のマウスモデルを使用して調査した。
【０２２８】
（実施例１）
材料および方法
動物およびヒト対象
近交系マウス系統Ｃ５７ＢＬ／６ＪをＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手し、ＩＬ−３４  ＫＯ（ＰＭＩＤ：２２７２９２４９）をＤｒ．Ｍａｒｃｏ  Ｃｏｌｏｎｎａ（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から入手した。動物を特定の病原体を含まない条件下、標準固形飼料および水を自由にとらせて維持した。動物飼育および使用は、施設のガイドラインに適合するものであった。
【０２２９】
ヒト対象由来の試料は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｂｏａｒｄのガイドラインに従って使用し、全ての手順がヘルシンキ宣言の教義に適合するものであった。Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｙｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｂｏａｒｄプロトコール番号０３−ＥＩ−０１２２に登録された非感染性ブドウ膜炎の明確に定義された臨床的診断を有する患者由来の血清試料を、本研究に使用した。血液試料採取に関して全ての患者からインフォームドコンセントを得た。研究目的の健康な対照試料を、Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈからインフォームドコンセントと共に得た。
【０２３０】
ＥＡＵの誘発および評価
Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンドのマウスに対する光受容体間レチノイド結合タンパク質（ＩＲＢＰ）のブドウ膜炎発生性ペプチド（ペプチドＩＲＢＰ６５１−６７０  ＬＡＱＧＡＹＲＴＡＶＤＬＥＳＬＡＳＱＬＴ、配列番号５）をＢｉｏ  Ｂａｓｉｃ  Ｉｎｃ（Ａｍｈｅｒｓｔ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）で、ソリッドステート法を使用して合成し、＞７０％純度で使用した。マウスに、２．５ｍｇ／ｍｌのＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ  Ｈ３７ＲＡ（Ｄｉｆｃｏ、Ｄｅｔｒｏｉｔ、ＭＩ）を含有する完全フロイントアジュバント中に１：１ｖ／ｖで乳化したペプチドＩＲＢＰ６５１−６７０  ３００μｇを皮下に能動免疫した。合計２００μｌのエマルションを３つの部位  −  尾の基部（１００μｌ）および後肢（各５０μｌ）に分布させた。マウスに、１００μｌの１×ＰＢＳ中１．０μｇの百日咳毒素（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ；Ｃａｔ番号Ｐ７２０８）も免疫と同じ日に腹腔内に単回投与した（ＰＭＩＤ：２６２８４５４９）。
【０２３１】
実験的自己免疫性ブドウ膜炎を、眼底検査により、炎症の程度に基づいて０〜４の尺度で評価した（ＰＭＩＤ：１５２８６３９７）。各実験の最後に眼を回収し、病理組織検査のために処理し、標準のヘマトキシリン−エオシンで染色した。ＥＡＵの重症度を二重盲検試験で病変の数、型、およびサイズに基づく０〜４の尺度に基づいて評価した（ＰＭＩＤ：１５２８６３９７）。
【０２３２】
ＥＬＩＳＡによるＩＬ−３４の定量
ＥＡＵを誘発するために免疫したマウスの脾臓および免疫部位（腸骨および鼠径部）から流出しているリンパ節から単一細胞浮遊液を作製した。細胞（合計２００μｌのＨＬ−１培地中ウェル当たり細胞１×１０６個；Ｌｏｎｚａ、Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ、ＭＤ）を、免疫用ペプチド（１０μｇ／ｍｌ）の存在下または不在下で培養し、４８時間後に細胞培養上清をＥＬＩＳＡによるサイトカインレベルの定量のために採取した。ＥＡＵマウス由来の眼をプールし、プロテアーゼ阻害剤（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を含有するＨＬ−１培地（Ｌｏｎｚａ、Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ、ＭＤ）中に１眼当たり培地５０μｌの比率で細かく切って入れ、以前に記載されている通りＱｉａｓｈｒｅｄｄｅｒ（Ｑｉａｇｅｎ  Ｉｎｃ、ＣＡ）を通して濾過して、上清を単離した（ＰＭＩＤ１８３９１０６１）。ＬＥＧＥＮＤ  ＭＡＸ  ｍｏｕｓｅ  ＩＬ−３４  ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を使用してサイトカインレベルを測定した。
【０２３３】
遺伝子特異的転写物を定量するための定量的リアルタイムＰＣＲ
全網膜、またはマウスミューラー細胞系、または６６１Ｗマウス光受容体細胞、またはＢＶ２マウスミクログリア細胞から、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ  Ｉｎｃ．、Ｖａｌｅｎｃｉａ、ＣＡ）を使用して全ＲＮＡを単離し、オリゴ−ｄＴおよびＳＵＰＥＲＳＣＲＩＰＴ（登録商標）ＩＩＩ逆転写酵素を使用して製造者（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）の指示通りｃＤＮＡを合成した。ＩＬ−３４の両受容体、すなわち、ＣＳＦ１受容体（ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）Ａｓｓａｙ  ＩＤ：Ｍｍ０１２６６６５２＿ｍ１）またはＰＴＰＲｚｅｔａ受容体（ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）Ａｓｓａｙ  ＩＤ：Ｍｍ００４５９４６７＿ｍ１）ならびにＩＬ−３４（ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）Ａｓｓａｙ  ＩＤ：Ｍｍ０１２４３２４８＿ｍ１）およびＣＳＦ１（ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）Ａｓｓａｙ  ＩＤ：Ｍｍ００４３２６８６＿ｍ１）などのＣＳＦ１Ｒの両リガンドの遺伝子発現プロファイルを、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ＲＴ−ＰＣＲアッセイ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）をＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ７５００  Ｆａｓｔ  ｓｙｓｔｅｍ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）で使用して測定した。データを、ＡＢＩ  ７５００ソフトウェアｖ２．０．６（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈ．  Ｃｏｒｐ．  Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を使用して比較ＣＴ（ΔΔＣＴ）法によって解析した。遺伝子転写物の相対的な定量は、各試料をそれ自体のＧａｐｄｈ遺伝子（内在性対照）の発現に対して正規化した後に測定した。
【０２３４】
治療剤の眼内投与
内在性に産生されたＩＬ−３４の影響を中和するために、中和抗体を眼の環境中に局所的に注入した。マウスをケタミン−キシラジンの組合せ（７７ｍｇ／ｋｇ＋４．６ｍｇ／ｋｇ）で麻酔し、４００ｎｇ／２μｌ／眼の抗マウスＩＬ−３４抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）を、以前に記載されている通り硝子体内に注入した（ＰＭＩＤ２７７８４０６３）。アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）送達方法を使用した遺伝子治療のために、動物を麻酔し、空ＡＡＶ８またはＡＡＶ８−ＩＬ−３４のいずれかのウイルス粒子７×１０８個を、以前に記載されている通り網膜下に注入した（ＰＭＩＤ２６２７４５４１）
【０２３５】
ＡＡＶ８−ＩＬ−３４構築物の生成
ＡＡＶ８−ＩＬ−３４構築物を、マウスＩＬ−３４のｃＤＮＡ配列全長（受託番号：ＮＭ＿００１１３５１００．２）を使用して作製した。ベクタープラスミドは、ＣＭＶプロモーター、ＣＭＶおよびベータ−グロビンに由来するキメライントロン、マウスＩＬ−３４コード配列およびベータグロビン由来のポリアデニル化シグナルによって分離された２つのＡＡＶ２由来ＩＴＲを含有する。２つのＩＴＲの外側は、Ａｍｐ  Ｒ遺伝子を含有する細菌骨格である。
【０２３６】
（実施例２）
結果
ブドウ膜炎患者および健康な対照由来の血清試料中のＩＬ−３４および他の炎症促進性サイトカインのレベルを分析した。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおいて網膜抗原を用いて免疫することによってＥＡＵを誘発し、ＥＡＵの過程中の種々の網膜細胞におけるＩＬ−３４およびその受容体の発現を決定した。ＥＡＵについて免疫したマウスにおいて、それぞれ中和抗体を眼内注射することまたはアデノ随伴ウイルスベクター血清型８（ＡＡＶ８）を網膜下注射することにより、ＩＬ−３４を局所的に中和させたまたは過剰発現させた。
【０２３７】
ブドウ膜炎患者および一部の健康な対照の血清中に検出可能なレベルのＩＬ−３４が存在した。マウスでは、ＩＬ−３４サイトカインは網膜光受容体細胞および網膜グリアミュラー細胞により構成的に発現され、一方、その受容体であるＣｓｆ１ｒおよびＰｔｐｒ−ｂは、それぞれ網膜ミクログリア細胞および光受容体によって発現された。マウス網膜におけるＩＬ−３４の発現は、ＥＡＵ疾患の増悪と共に徐々に低減する。眼内のＩＬ−３４の局所的な過剰発現により、神経網膜が自己免疫性ブドウ膜炎に起因する損傷から完全に保護された。結果を図１〜８に示す。
【０２３８】
したがって、ＩＬ−３４の局所送達を、神経保護のために使用することができる。理論に束縛されることなく、自己免疫性ブドウ膜炎の間、網膜光受容体層の段階的な変性により、ＩＬ−３４の内在性産生が枯渇する可能性がある。遺伝子治療によるＩＬ−３４の局所的な過剰発現の結果、神経網膜の自己免疫性炎症攻撃からの保護をもたらすことができる。ＩＬ−３４により、広範な視覚を脅かす自己免疫性ブドウ膜炎疾患において神経保護を増強するための有望な処置戦略がもたらされる。
【０２３９】
（実施例３）
追加的な研究
図１１Ａ〜１１Ｃは、網膜におけるＡＡＶ８媒介性ＩＬ−３４の外因性発現の結果、高ウイルス力価で使用した場合、ミクログリア細胞の増殖および活性化、その後の視覚の段階的な喪失がもたらされたことを示す。上の実施例１に開示されている通りアッセイを実施した。簡単に述べると、ベクターＡＡＶ８またはＡＡＶ８−ＩＬ３４発現系のウイルス粒子７．０×１０８個を、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスの左眼（ＯＳ）または右眼（ＯＤ）の網膜下に注入した。上の実施例１に開示されている通りＩＬ−３４産生をＥＬＩＳＡによって定量するために、ＡＡＶ８−ＩＬ−３４遺伝子送達後の様々な時点で動物を屠殺し、眼を採取した（１１Ａ）。ＩＬ−３４の外因性発現は９日目にピークに達したが、注射後４５日目であっても、対照の眼における発現のレベルと比較して数倍高いままであった。細胞レベルでの網膜の変化を免疫組織化学的検査によって評価するために眼を採取した（１１Ｂ）。マウスを二酸化炭素吸入によって安楽死させ、それらの眼を摘出し、水晶体を除去した。得られた眼杯をそれらの向きについて印をつけ、次いで、４％パラホルムアルデヒド中に室温で１時間にわたって固定した。眼杯を７％アガロースに包埋し、視神経を通って上下の平面に、ビブラトーム（ＶＴ１０００、Ｌｅｉｃａ）を使用して厚さ１００μｍの切片に切片作製した。切片をブロッキングし、透過処理し（０．５％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を伴う１×ＰＢＳ中５％正常ヤギ血清、室温で３時間）、次いで、０．５％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を伴う１×ＰＢＳ中、一次抗体と４℃で３６時間インキュベートした。一次抗体には、ミクログリアを検出するためのウサギ抗マウスＩｂａ１（和光、＃０１９−１９７４１、１：５００）、活性化を検出するためのラット抗マウスＣＤ６８（ＡｂＤ  Ｓｅｒｏｔｅｃ、＃ＭＣＡ１９５７、１：５００）、および増殖を検出するためのＫｉ６７（１：５０、Ｋｉ６７（１：５０、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、＃５０−５６９８−８２）を含めた。ＡＡＶ８−ＩＬ−３４構築物を受けた右眼（ＯＤ）では、ヌルベクターＡＡＶ８を受けた左眼と比較して、ミクログリア細胞の数の増加が明らかになり、中等度のレベルの活性化および増殖シグナルが伴った。一部の動物では、ＡＡＶ８媒介性ＩＬ−３４遺伝子送達後の様々な時点で、暗所順応条件下で網膜電図（ＥＲＧ）によって視覚機能を評価した（１１Ｃ）。マウスを終夜暗所順応させ、杆体の活性化を誘導するため、ならびに杆体光受容体および下流の網膜細胞の機能を測定するために、可変の強度の閃光に曝露させた。暗順応（暗所順応）「ｂ」波シグナルは、ＩＬ−３４遺伝子構築物を受けた右眼（ＯＤ）ではＡＡＶ８−ＩＬ−３４の網膜下送達後１２日目までに失われた。ＡＡＶ８−ＩＬ−３４のウイルス粒子７×１０８個を使用したブドウ膜炎からの保護（上の実施例２に開示されている通り）には、ミクログリアの望ましくない過剰活性化に起因するＥＲＧ応答の喪失が伴った。
【０２４０】
望ましくない副作用に起因して、ウイルス粒子の用量の用量設定を下げた。図１２Ａは、同じ用量のヌルベクターを注射した同側の眼における内在性レベルと比較して数倍高いレベルの外因性ＩＬ−３４発現には、ＡＡＶ８−ＩＬ３４粒子７×１０５個という低用量で十分であったことを示す。この用量で、ＥＲＧ応答における暗所順応「ｂ」波の振幅は、それらのＩＬ−３４発現とは無関係に、網膜下への遺伝子送達の３週間後に両眼で同様であった（図１２Ｂ）。しかし、この用量では、予防的処置として使用した場合にＥＡＵ重症度は低下しなかった。ＡＡＶ８−ＩＬ−３４のウイルス粒子１×１０７個の用量で、右眼（ＡＡＶ８−ＩＬ−３４）における疾患重症度が左眼（ヌルベクター）と比較して低下したことにより、保護効果があることが見いだされた（図１２Ｃ）。Ｍｉｃｒｏｎ  ＩＩＩ齧歯類眼底カメラによって取得した眼底画像から、ＡＡＶ８−ＩＬ−３４を注射した右眼（ＯＤ）の網膜後部では、ＩＬ−３４遺伝子送達を受けていない左眼（ＯＳ）における網膜炎症を示す細胞の浸潤および血管の怒張と比較して、細胞浸潤がないことおよび血管炎がないことが示される（図１２Ｄ−代表的なマウス５匹のうち１匹の画像）。これにより、ＩＬ−３４の眼内送達のための適正な用量を決定することができることが実証される。
【０２４１】
網膜における外因性ＩＬ−３４発現の機能的結果を理解するために、遺伝子発現プロファイリングを実施した。ＥＡＵ誘発の１４日後にマウス眼の網膜組織からＲＮＡを単離し、ヌルベクターＡＡＶ８（ＯＳ）またはＡＡＶ８−ＩＬ−３４（ＯＤ）を予防的に注射した。種々の遺伝子転写物の相対的存在量を、Ｎａｎｏｓｔｒｉｎｇマウス神経炎症アレイを使用して定量した。図１３は、ＥＡＵを有さないナイーブな網膜、またはヌルベクターＡＡＶ８（ＯＳ）もしくはＡＡＶ８−ＩＬ−３４（ＯＤ）で処置したＥＡＵ網膜の遺伝子発現プロファイルのヒートマップを示す。各群２匹のマウスの眼からの発現データから、ＩＬ−３４の存在下でのいくつかの遺伝子の発現レベルの差異が示される。
【０２４２】
ナイーブな網膜において低レベルのＩＬ−３４発現が存在するので、このサイトカインの先天性欠損を有するマウスにおいてＥＡＵ転帰に対するＩＬ−３４の効果を調査した。ナイーブな免疫していない野生型対照系統Ｃ５７ＢＬ／６ＪおよびＩＬ−３４ノックアウト系統の眼から調製した網膜フラットマウントを、ミクログリアマーカーであるＩｂａ１について染色した。先天性ＩＬ−３４欠損では眼内のミクログリア細胞が少なくなる（図１４Ａ）。ＩＬ−３４ノックアウトマウス（ｎ＝１５）およびその野生型対照Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ（ｎ＝１７）において、実施例１に開示されている方法に従って、しかしＩＲＢＰ６５１−６７０の量を減らして（２００μｇ）、ＥＡＵを誘発し、グレード付けした。この低用量免疫レジメンでは、これらの２つの系統の易罹患性の差異が、前に実施例２において記載したものよりも明らかであった。出生時の全身性ＩＬ−３４欠損により、ＥＡＵ顕在化の重症度が有意に低下した（図１４Ｂ）。これは、ＩＬ−３４ノックアウトマウスでは、ミクログリアおよび他の単球系列の細胞の数が少ないことに起因して、抗原提示の効率が低いことに起因する可能性がある。
【０２４３】
ＩＬ−３４のＥＡＵ転帰に対する有益な効果に基づいて、ＩＬ−３４により様々な形態の先天的にもたらされた網膜変性の慢性の状態をレスキューすることができると仮定した。網膜変性の間にＩＬ−３４産生の内在性レベルが低下するかどうかを評価した。網膜変性の間のＩＬ−３４産生の内在性レベルの定量的差異を評価するために、網膜における光受容体の変性が顕在化する天然に存在するマウス変異体または遺伝子ノックアウトマウス系統から、実施例１に開示されている通り眼組織抽出物を採取した。天然の変異体系統は、ＲＤ１（Ｐｄｅ６ｂｒｄ１）、ＲＤ５（ｔｕｂ）、ＲＤ９（Ｘ連鎖半優性）、ＲＤ１０（Ｐｄｅ６ｂｒｄ１０）、およびＲＤ１６（Ｃｅｐ２９０ｒｄ１６）であり、「レーバー先天性黒内障」のモデルである遺伝子ノックアウト系統は、ＲＰＧＲＩＰ（Ｒｐｇｒｉｐノックアウト）、およびＡＩＰＬ１（Ａｉｐｌ１ノックアウト）である。
【０２４４】
図１５は、視軸の遺伝子の変異に起因する網膜変性の種々の状態を有するマウスでは、正常な網膜を有する野生型マウスと比較してＩＬ−３４産生のレベルが低いことを示す。網膜抽出物を調製し、ＩＬ−３４のレベルを、前に実施例１において開示されている通りＥＬＩＳＡによって測定した。網膜変性の初期ステージのＩＬ−３４の外因性発現により、光受容体の恒常性維持によって失明を防止することができる。
【０２４５】
（実施例４）
ＡＡＶ７ｍ８
ＡＡＶ８−ｍＩＬ−３４ベクターの網膜下投与により網膜毒性が引き起こされる場合、硝子体内注射の使用によりこの問題を回避することができる。ＡＡＶ８ベクターは網膜の多数の層を透過することができず、したがって、硝子体内注射後に光受容体への形質導入は十分ではない。ｉｎ−ｖｉｖｏ定向進化によって開発されたＡＡＶ２バリアントであるＡＡＶ７ｍ８は、硝子体内注射後に網膜外層を標的とする（Dalkara  et  al.,  Sci  Transl  Med.  2013  Jun  12;5(189):189ra76.  doi:10.1126/scitranslmed.  3005708）、参照により本明細書に組み込まれる。このベクターの配列は配列番号８として提供される。
【０２４６】
このベクターを使用して、テトラサイクリン（またはドキシサイクリン）により制御されるＩＬ−３４発現を媒介するＴｅｔ−ＯｎマウスＩＬ−３４  ＡＡＶベクターを作製することができる。有用なベクターのマップが図１６に提供される。この構築物では、ミニＣＭＶプロモーターに挟まれたテトラサイクリン応答エレメント（ＴＲＥ）を有する双方向プロモーターを使用する（Goudy  et  al.,  J  Immunol.  2011  Mar  15;  186(6):3779-86.  doi:10.4049/jimmunol.1001422、参照により本明細書に組み込まれる）。図１６に示されている構築物では、プロモーターにより、リバーステトラサイクリン（tetracline）トランス活性化因子（ｒｔＴＡ）およびマウスＩＬ−３４の両方の発現が駆動される。しかし、ヒトＩＬ−３４、またはそのバリアント、断片および融合タンパク質も構築物に導入することができる。テトラサイクリンなしではＩＬ３４は発現されない。テトラサイクリン（またはドキシサイクリン）がもたらされると、ｒｔＴＡがテトラサイクリンに結合し、次いで、ＴＲＥに結合し、その結果、ミニＣＭＶプロモーターが活性化され、ＩＬ−３４が発現される。
【０２４７】
ｐＡＡＶ−Ｔｅｔ−Ｏｎ−ｍＩＬ３４の配列が配列番号９として提供される。このベクターは、以下のエレメントを含む：
左側ＩＴＲ：５１３４−２６；ＢＧＨポリＡ（相補的）：３９〜２６３
ｒｔＴＡコード配列（相補的）：２６４〜１０１０
ミニＣＭＶプロモーター（相補的）：１０１１〜１０７０
Ｔｅｔ応答エレメント：１０７１〜１３２７
ミニＣＭＶプロモーター：１３２８〜１３９７
マウスＩＬ−３４コード配列：１４１７〜２１２４
ベータグロビンポリＡ：２１２６〜２３５０
右側ＩＴＲ：２３８７〜２５２３
【０２４８】
本発明者らの発明の原理を適用することができる多くの可能性のある実施形態を考慮して、例示されている実施形態は単に本発明の例であり、本発明の範囲に対する限定とみなされるべきではないことが認識されるべきである。そうではなく、本発明の範囲は、以下の特許請求の範囲によって定義される。したがって、これらの特許請求の範囲の範囲および主旨に入る全てが本発明者らの発明であると主張する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ−１１Ｃ】
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【図１２Ａ−１２Ｄ】
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【図１３】
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【図１４Ａ−１４Ｂ】
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【図１５】
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【図１６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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