(57)【要約】本発明は、新規の抗体、ならびにＣ４ｄを決定および検出する改善された方法におけるそれらの使用に関する。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）配列番号１で示される配列と少なくとも７０％の配列同一性（配列番号１に、例えば少なくとも約７５％の配列同一性、例えば少なくとも約８０％の配列同一性、例えば少なくとも約８５％の配列同一性、例えば少なくとも約９０％の配列同一性、例えば少なくとも約９５％の配列同一性、例えば少なくとも約９８％の配列同一性、例えば少なくとも約９９％の配列同一性）を有する配列を含むポリペプチド配列、または配列番号１に同一のアミノ酸配列を認識しそれへ結合することが可能な抗体、
（ｂ）図３に示されるＡ鎖とＢ鎖（すなわち配列番号２および／または配列番号３）との間で保存されるポリペプチドまたはその断片を認識しそれらへ結合することが可能である抗体、
を含む、組成物またはキット。
【請求項２】
（ｂ）における前記抗体が配列番号１を認識しないかまたはそれへ結合しない、請求項１に記載の組成物またはキット。
【請求項３】
（ｂ）における前記抗体が、図３（すなわち配列番号２および／または配列番号３）に示される、前記保存された領域／アミノ酸配列のうちの少なくとも４残基（例えば少なくとも５残基等、例えば少なくとも６残基等、例えば少なくとも７残基等、例えば少なくとも８残基等、例えば少なくとも９残基等、例えば少なくとも１０残基等）のアミノ酸配列を認識することが可能な、請求項１〜２のいずれか１項に記載の組成物またはキット。
【請求項４】
（ｂ）における前記抗体によって認識される前記アミノ酸残基が、必ずしも連続していない、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物またはキット。
【請求項５】
前記抗体が、哺乳動物または非哺乳動物の起源である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物またはキット。
【請求項６】
前記抗体が、ヒト、鳥類またはマウスの起源である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物またはキット。
【請求項７】
前記抗体が、モノクローナルまたはポリクローナルである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物またはキット。
【請求項８】
（ｂ）における前記抗体は、任意選択で酵素へコンジュゲートされる、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物またはキット。
【請求項９】
任意選択で、請求項１（ｂ）〜８のいずれか１項に記載の前記抗体のＦｃ領域へ結合することが可能な二次抗体をさらに含み、前記二次抗体が、酵素へコンジュゲートされる、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物またはキット。
【請求項１０】
前記抗体へコンジュゲートされた前記酵素によって消化することが可能な基質をさらに含む、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物またはキット。
【請求項１１】
前記基質が、前記酵素によって消化された後に任意の好適な手段（例えば発色手段または蛍光手段）によって、検出を可能にする、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物またはキット。
【請求項１２】
診断方法における、あるいは疾患および／または病態の診断のための、あるいは補体系活性化の測定および／または薬物もしくは薬物候補のスクリーニングのための、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物またはキットの使用。
【請求項１３】
前記疾患または病態が、癌または自己免疫の疾患若しくは病態である、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
前記疾患または病態が、ＳＬＥ（血清レベル、血小板および赤血球上での沈着）、ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺癌）（血漿および気管支肺胞上皮のレベル）、抗体媒介性移植拒絶（移植の生検での予測）、血栓性微小血管症、狼瘡性腎炎、ヒト白血病Ｔ細胞ウイルス（ＨＬＴＶ）に起因する脊髄症である、請求項１２〜１３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１５】
生物学的サンプル中のＣ４ｄのレベルを測定する方法であって、
（ｉ）生物学的サンプルを準備し、
（ｉｉ）（ｉ）における前記生物学的サンプルを請求項１（ａ）および請求項５〜７のいずれか１項に記載の抗体に接触させ、ここで、請求項１（ａ）および請求項５〜７のいずれか１項に記載の抗体は、任意選択で固体支持体へ結合され、
（ｉｉｉ）請求項１（ｂ）〜８のいずれか１項に記載の抗体を（ｉｉ）において得られた前記サンプルへ添加し、
（ｉｖ）請求項１（ｂ）〜８のいずれか１項に記載の抗体のＦｃ領域へ結合することが可能な二次抗体を、任意選択で、（ｉｉｉ）において得られた前記サンプルへ添加し、ここで、前記二次抗体は酵素へコンジュゲートされており、
（ｖ）前記二次抗体へコンジュゲートされた前記酵素によって消化されることが可能な基質を（ｉｖ）において得られた前記サンプルへ添加し、
（ｖｉ）消化された前記基質のアウトプットを測定すること
を含む、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の分野は、医療診断および他の医療ツール、並びにその使用である。より具体的には、本発明は、古典的補体経路の活性化の測定を改善する、補体系の成分に対して特異的な抗体を提供する。さらにより具体的には、本発明は、古典的経路およびレクチン経路の活性化を測定するための手段および方法を提供する。さらに、本発明は、生物学的サンプル中の補体成分Ｃ４ｄの存在を測定するための手段および方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
補体系は、炎症の際に互いに反応して宿主の防御を支援する、多数の血漿タンパク質からなる。この活性は、抗体の活性を補足すると言われ、それ故この名称がつけられている。補体系は、解剖学的障壁、食細胞、およびケモカイン（すなわち即時型応答を提供するが持続的な免疫を与えない系）と共に、非特異的免疫系の一部分である。補体が先天性免疫応答と適応的免疫応答との間の機能的な懸け橋であるということが、現在知られている。
【０００３】
補体系は、血液中で見出される多数のタンパク質からなり、概して肝臓および食細胞によって合成され、通常は不活性な前駆体（プロタンパク質）として循環する。複数のトリガーの１つによって刺激されると、系中のプロテアーゼは、特異的補体タンパク質を切断し、活性化タンパク質であるアナフィラトキシンとし、さらなる切断の増幅カスケードを開始する。この活性化カスケードの最終結果は、細胞殺傷性の膜侵襲複合体の応答および活性化の大規模な増幅である。３０を超えるタンパク質およびタンパク質断片が補体系を作り上げ、血液および細胞膜受容体中で高濃度で見出される可溶性タンパク質が含まれる。それらは血液血清のグロブリン分画の約５％を占め、オプソニンに寄与し得る。
【０００４】
補体系を構成するタンパク質は主として肝細胞によって合成される。かなりの量が、組織マクロファージ、血中単球、ならびに尿生殖路および胃腸管の上皮細胞によっても産生される。
【０００５】
補体系は、３つの生化学プロセス：古典的経路、代替経路、およびレクチン経路によって開始され得る。
【０００６】
活性化の３つの経路はすべて類似したタンパク質溶解性Ｃ３転化酵素を生成し、共通の末端経路は膜侵襲の形成をもたらす。古典的補体経路は典型的には、活性化のために抗原：抗体複合体（免疫複合体）を要求するが、代替経路およびマンノース結合レクチン経路は、抗体の存在無しに、それぞれ自然発生性Ｃ３加水分解または炭水化物によって活性化され得る。３つのすべての経路において、Ｃ３転化酵素は成分Ｃ３を切断し活性化し、Ｃ３ａおよびＣ３ｂを生成し、さらなる切断および活性化事象のカスケードを引き起こす。
【０００７】
古典的経路は、Ｃ１複合体の活性化がきっかけとなって起きる。Ｃ１複合体は、１分子のＣ１ｑ、２分子のＣ１ｒ、および２分子のＣ１ｓ（すなわちＣ１ｑｒ２ｓ２）から構成される。Ｃ１ｑが、抗原と複合体化したＩｇＭまたはＩｇＧへ結合すると、Ｃ１複合体が活性化される。単一のＩｇＭは経路を開始することができる一方で、ＩｇＧは複数必要である。Ｃ１ｑが病原体の表面へ直接結合する場合にも、これが起こる。かかる結合はＣ１ｑ分子の立体配座的変化を導き、それは２つのＣ１ｒ分子の活性化を導く。Ｃ１ｒはセリンプロテアーゼである。活性化されたＣ１ｒは、Ｃ１ｓ（別のセリンプロテアーゼ）を切断する。Ｃ１ｒ２ｓ２成分は、ここでＣ４、次いでＣ２を切断し、Ｃ４ａ、Ｃ４ｂ、Ｃ２ａ、およびＣ２ｂを産生する。Ｃ４ｂおよびＣ２ａは結合して古典的経路のＣ３転化酵素（Ｃ４ｂ２ａ複合体）を形成し、これはＣ３を切断してＣ３ａおよびＣ３ｂとすることを増進し、Ｃ３ｂは後にＣ４ｂ２ａ（Ｃ３転化酵素）と連結してＣ５転化酵素（Ｃ４ｂ２ａ３ｂ複合体）を生じさせる。
【０００８】
次いで古典的経路の活性化の間に形成されたＣ４ｂは、セリンプロテアーゼ第Ｉ因子によって急速に分解され、それは、Ｃ４ｂ結合タンパク質等のコファクターの存在下においてＣ４ｄを生成する。Ｃ４および下流のプロセスは古典的経路とレクチン経路との間で共有される。古典的経路は通常レクチン経路よりも頻繁に起きるので、Ｃ４ｄは、古典的経路、特に自己免疫疾患のマーカーとして理想的であることが証明された。最近、全身の血液中のＣ４ｄは、肺癌の診断および予後のマーカーとして記載された。それは、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）および抗体媒介性移植拒絶のマーカーとして広く使用されている。大部分のＣ４ｄは細胞の表面へ結合されたままであり、それは元々古典的補体経路を活性化していたが、ある部分は放出され、血液中で検出可能である。
【０００９】
Ｃ４ｄの役割およびいくつかの疾患の根底にある古典的経路活性化を研究および理解するために、Ｃ４ｄについて特異的な試薬（典型的には抗体）についての当技術分野における必要性がある。本出願はその必要性に対処する。
【発明の概要】
【００１０】
一態様において、本発明は、Ｃ４ｄへ特異的に結合することが可能な抗体（抗Ｃ４ｄ）に関する。抗体は、好適な酵素（例えばホースラディシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、ウレアーゼ、または当技術分野において公知の任意の他の好適な酵素等）とコンジュゲートされてもコンジュゲートされなくてもよい。
【００１１】
抗体は、任意の起源（例えば哺乳動物等、例えばヒトまたはマウスなど等）であり得る。別の態様において、抗体は、鳥類のものであり得る。抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルであり得る。抗体は、好適にはＣ４ｄの両方のアレル変異体（すなわちＣ４ｄのＡ鎖およびＢ鎖）へ結合する。任意のホモ接合体の対象を取り扱うため、および主な集団中の分析感度を増加させるために、これらの抗体は、Ｃ４ｄの両方のアレルアイソフォームを結合するように選択される。
【００１２】
詳細には、本発明は、新しく形成され曝露されたタンパク質分解産物のＣ末端を認識することが可能であるが、インタクトまたは未消化のタンパク質形態で存在するアミノ酸の同じ配列を認識することまたはそれらへ結合することはできない、ネオエピトープ結合抗体に関する。それゆえ、これらの抗体は抗Ｃ４ｄ−ｎｅｏと表わされ得る。
【００１３】
本発明に記載の抗体は、任意の起源（例えば哺乳動物、例えばヒト、マウス等、または鳥類等の起源など）であり得る。抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルであり得る。上で記載された抗体は捕捉抗体として記載され得、モノクローナル抗体の事例において、これらは捕捉ｍＡｂと表わされ得る。
【００１４】
さらに、本発明の一態様において、本発明は、組換えヒトＣ４ｄにも関する。組換えヒトＣ４ｄは、好適には、上で言及される抗体を使用してアッセイを遂行する場合に基準および／または対照として使用される。
【００１５】
さらなる態様において、本発明は、Ｃ４ｄの定量化のためのアッセイに関する。定量化は、本明細書において言及される抗体ならびに基準および／または対照としての組換えヒトＣ４ｄを用いることによって遂行され得る。
【００１６】
アッセイは、Ｃ４ｄがバイオマーカーとして作用することが可能な任意の好適な目的のために使用され得る。Ｃ４ｄレベルの増加は多くの病理学的状態と関連し、例えばＳＬＥ（血清レベル、血小板および赤血球上での沈着）、ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺癌）（血漿および気管支肺胞上皮のレベル）、抗体媒介性移植拒絶（移植の生検中での予測）、血栓性微小血管症、狼瘡性腎炎、ヒト白血病Ｔ細胞ウイルス（ＨＬＴＶ）に起因する脊髄症など等である。概して、Ｃ４ｄは様々な腫瘍および自己免疫疾患と関連する。
【００１７】
本明細書において記載される本発明の他の適用は、例えば組織学的な目的のためでもあり得る。かかる適用において、本発明に記載の抗体は、フルオロフォアまたは他の実体へコンジュゲートされなくてもよい。かかる結合抗体を検出するために、さらなる抗体（検出抗体）が添加され、本発明に記載の抗体のＦｃ領域へ結合することが可能であり、検出抗体は本明細書において規定されるような酵素へコンジュゲートされ、検出はコンジュゲートされた酵素によって消化可能な基質の添加によって可能となる。別の例において、本発明に記載の抗体は、酵素へ直接コンジュゲートされ得、検出は本明細書において記載される標準的なＥＬＩＳＡ技法に従って行われる。
【００１８】
一態様において、可溶性のＣ４ｄおよび／または本発明は、表面へ結合された（例えば細胞表面上に結合された等）Ｃ４ｄの両方に関する。特定の態様において、本発明は、可溶性Ｃ４ｄに関する。
【００１９】
別の態様において、本発明は、診断方法における、または組織学的な目的のための、本明細書において記載される１つまたは複数の抗体の使用に関する。
【００２０】
なおさらなる方法において、本発明は、キットまたはキットのパーツにおける、本明細書において記載される１つまたは複数の抗体の使用に関する。
【００２１】
別の態様において、本発明は、Ｃ４ｄの定量化のための、本明細書において記載される１つまたは複数の抗体の使用に関する。
【００２２】
なおさらなる態様において、本発明は、容器が本明細書において記載される抗体のうちの１つまたは複数によりコーティングされた表面を有するような１つまたは複数の前記容器を含む、キットまたはキットのパーツに関する。
【００２３】
本発明に記載のキット中に存在する１つまたは複数の抗体は、互いから独立して好適な酵素（例えばホースラディシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、ウレアーゼ、当技術分野において公知の他の好適な酵素等）とコンジュゲートされ得る。抗体へコンジュゲートされ得る他の実体は、例えば他の酵素、放射性元素、またはフルオロフォアである。酵素のさらなる非限定例は、β−ガラクトシダーゼ、アセチルコリンエステラーゼおよびカタラーゼならびに同種のものであり得る。
【００２４】
さらに、キットは、好適な基準および／または対照を含み得る。基準および／または対照は、ヒトＣ４ｄ（例えば組換えヒトＣ４ｄ等）であり得る。
【００２５】
キットは、追加でおよび随意に、好適な基質を含み得る。基質は、コンジュゲートされた酵素が基質を消化することが可能なように考案された任意の基質であり得る。基質は、いったん基質が酵素によって消化されたならば、検出が任意の好適な手段によって可能になり、その結果としてＣ４ｄの定量化が可能になるような、実体を少なくとも含む。
【００２６】
本発明は、Ｃ４ｄの量を決定する方法にも関する。
【００２７】
具体的には、生物学的サンプル中のＣ４ｄの量を決定する方法は、本明細書において記載され以下に詳述される１つまたは複数の抗体の使用を含み得る。典型的には、本発明に記載の方法は、本出願のテキスト中で詳述される様々なキットまたはキットのパーツを用い得る。
【００２８】
方法は、好適な対照の使用を含み得る。対照または内部基準として、例えばＣ４ｄそれ自体が使用され得る。好ましくは、対照または内部基準として使用されるＣ４ｄはヒトであり、さらにより好ましくは、ヒトＣ４ｄは組換えである。
【００２９】
キットは、任意選択で停止溶液または停止剤をさらに含み得る。停止溶液の意図される使用は、アッセイにおいて使用される反応を停止することである。停止溶液の使用により、シグナルの読み取り／検出を直接遂行すること、または、読み取りに直接専念する必要性を省き、停止溶液が添加されるまでかかる行為を延期することのいずれかが、使用者に可能となる。この節中で言及されるように、停止溶液は、随意であり、使用される基質に依存する。いくつかの事例において、停止溶液はまとめて分注され得る。１つの非限定的な停止溶液または停止剤は、例えば硫酸であり得る。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】本発明に記載のアッセイセットアップの１つの例を図示し、より詳細には直接サンドイッチＥＬＩＳＡを例示する。旗は、酵素、フルオロフォア、または放射性元素であり得るレポーターを表わす。
【図２】本生理的濃度でのＣ４、Ｃ４ｂ、Ｃ３、Ｃ３ｂ、Ｃ３ｄ、Ｃ５、ＳＣ５ｂ−Ｃ９、またはＣ９への交差反応性無しで、補体因子Ｃ４ｄに対する特異性を提示する、発明に記載の補体Ｃ４ｄアッセイを例示する。本発明による例示されたアッセイは、Ｃ４ｄタンパク質のＡおよびＢの変異体の両方に結合し、高い分析感度をもたらす。
【図３】アミノ酸残基９５７〜１３３６からの切断されたＣ４ｄのアミノ酸配列の一部分を図示し、ペアで図示される両方の対立遺伝子タイプ（ＡタイプおよびＢタイプ）を示す。ネオエピトープはＣ末端に見られ、太字スタイルのみでマークされる。可変領域／アミノ酸は、太字且つ下線のスタイルでマークされる。Ａタイプは配列番号２で参照され、Ｂタイプは配列番号３で参照される。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
本発明は、Ｃ４ｄへの結合におけるより高い特異性、および／または生物学的サンプル中のＣ４ｄの定量におけるより高い感度を提供する。西欧諸国中の集団の約３０％がＣ４ｄのＡまたはＢバリアントのいずれかのみを有していると推定される。したがって、本発明は、両方のバリアントが検出可能であるということにおいて、先行技術方法の主要な改善を示す。
【００３２】
一態様において、本発明は、ＮＶＴＬＳＳＴＧＲ（配列番号１）を含むアミノ酸配列を含むエピトープおよび特にネオエピトープに関する。さらに、本発明は、配列番号１で示される配列と少なくとも７０％の配列同一性（配列番号１に、例えば少なくとも約７５％の配列同一性、例えば少なくとも約８０％の配列同一性、例えば少なくとも約８５％の配列同一性、例えば少なくとも約９０％の配列同一性、例えば少なくとも約９５％の配列同一性、例えば少なくとも約９８％の配列同一性、例えば少なくとも約９９％の配列同一性）のある配列を含むアミノ酸配列、または配列番号１に同一のアミノ酸配列にも関する。一態様において、本発明は、ペプチド配列の配列番号１を含むかもしくはそれからなるネオエピトープ配列、または配列番号１に少なくとも約９０％の配列同一性（例えば少なくとも約９５％の配列同一性、例えば少なくとも約９６％の配列同一性、例えば少なくとも約９７％の配列同一性、例えば少なくとも約９９％の配列同一性）を有するペプチド配列に関する。
【００３３】
別の態様において、本発明は、Ｃ４ｄへ特異的に結合することが可能な抗体（抗Ｃ４ｄ）に関する。具体的には、抗体は、配列ＮＶＴＬＳＳＴＧＲ（配列番号１）を含むアミノ酸を認識しそれへ結合することが可能である。したがって、本発明に記載の抗体は、配列番号１、または配列番号１で示される配列と少なくとも７０％の配列同一性（配列番号１に、例えば少なくとも約７５％の配列同一性、例えば少なくとも約８０％の配列同一性、例えば少なくとも約８５％の配列同一性、例えば少なくとも約９０％の配列同一性、例えば少なくとも約９５％の配列同一性、例えば少なくとも約９８％の配列同一性、例えば少なくとも約９９％の配列同一性）のある配列、または配列番号１に同一のアミノ酸配列を認識することが可能である。
【００３４】
上で言及されるように、本発明に記載の抗体は、ネオエピトープへ結合しそれを認識することが可能であるが、配列番号１を含む切断されていないアミノ酸配列であって、配列番号１が埋め込まれ、したがってペプチド配列のＣ末端ではない、アミノ酸配列を認識しない。したがって、ネオエピトープはＣ末端であり、配列番号１がペプチド配列のＣ末端のアミノ酸配列であることが意図される。違ったやり方で表現すると、配列ＮＶＴＬＳＳＴＧＲは、したがって当該配列であっても配列の一部分であってもよく、当該配列はＣ末端であり、したがって配列はＮＶＴＬＳＳＴＧＲ（−ＣＯＯＨ）であり得る。
【００３５】
本発明による抗Ｃ４ｄ抗体は、任意の起源（例えば任意の動物またはヒトの起源等）であり得る。好ましくは、抗体はヒト起源である。抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナルであり得る。好ましくは、抗体はモノクローナルであり、さらにより好ましくは抗体はモノクローナルヒト抗体であり得る。別の実施形態において、抗体はマウス起源であり得、具体的には例えばマウス抗体であり得る。さらなる実施形態において、抗体は鳥類起源であり得る。
【００３６】
本発明のさらなる態様において、本発明の抗体は、天然起源または非天然起源であってもなくてもよい。それらが任意の天然の生物体において存在しないという意味で、抗体は人工であり得る。
【００３７】
上で言及されるように、本発明は、Ｃ４ｄの両方のアリルアイソフォーム（すなわちＣ４ｄのＡ鎖およびＢ鎖の両方）へ特異的に結合することが可能な抗体にも関する。
【００３８】
したがって一態様において、本発明は、配列番号１、または配列番号１で示される配列と少なくとも７０％の配列同一性、（配列番号１に、例えば少なくとも約７５％の配列同一性、例えば少なくとも約８０％の配列同一性、例えば少なくとも約８５％の配列同一性、例えば少なくとも約９０％の配列同一性、例えば少なくとも約９５％の配列同一性、例えば少なくとも約９６％の配列同一性、例えば少なくとも約９７％の配列同一性、例えば少なくとも約９８％の配列同一性、例えば少なくとも約９９％の配列同一性）のある配列、または配列番号１に同一のアミノ酸配列を認識することが可能な抗体、およびＣ４ｄの両方のアレルアイソフォーム（すなわちＣ４ｄのＡ鎖およびＢ鎖の両方）を認識しそれらへ特異的に結合することが可能な異なる抗体に関する。
【００３９】
Ｃ４ｄの両方のアレルアイソフォームへ結合することが可能な抗体は、Ａ鎖およびＢ鎖の両方中で保存された領域（すなわちＣ４ｄのＡ鎖およびＢ鎖中で含有される同一のアミノ酸配列の領域）へ結合することが可能である。したがって一態様において、Ａ鎖およびＢ鎖の両方へ結合することが可能な抗体は、配列番号２および／または配列番号３、または配列番号２および／または配列番号３で示される配列と少なくとも７０％の配列同一性（配列番号２および／または配列番号３に、例えば少なくとも約７５％の配列同一性、例えば少なくとも約８０％の配列同一性、例えば少なくとも約８５％の配列同一性、例えば少なくとも約９０％の配列同一性、例えば少なくとも約９５％の配列同一性、例えば少なくとも約９６％の配列同一性、例えば少なくとも約９７％の配列同一性、例えば少なくとも約９８％の配列同一性、例えば少なくとも約９９％の配列同一性）のある配列、または配列番号２および／または配列番号３に同一のアミノ酸配列へ結合するかまたはそれらを認識することが可能である。
【００４０】
一態様において、ネオトープへ結合する抗体は、捕捉抗体として表記され得る。Ｃ４ｄの両方のアレルアイソフォーム（すなわちＣ４ｄのＡ鎖およびＢ鎖の両方）へ結合する抗体は、検出抗体として表記され得る。
【００４１】
上で言及されるように、検出抗体は、Ｃ４ｄのＡ鎖およびＢ鎖の両方へ、ならびに両方の鎖中の同一のアミノ酸配列のみへ結合することが可能である。関連のアミノ酸配列は図３中にある。具体的には、太字且つ下線のアミノ酸残基がＡ鎖とＢ鎖との間で異なることが図３中で見られ、それゆえ、アミノ酸配列がＡ鎖とＢ鎖との間で同一の領域のみが、検出抗体の結合が可能な関連のアミノ酸配列である。上記に代替して、抗体は、図３中で参照され、ＡタイプとＢタイプとの間で保存される領域／アミノ酸配列のうちの少なくとも４残基（例えば少なくとも５残基等、例えば少なくとも６残基等、例えば少なくとも７残基等、例えば少なくとも８残基等、例えば少なくとも９残基等、例えば少なくとも１０残基等）のアミノ酸配列を認識できるべきである。これらのアミノ酸残基が連続する必要はないことが指摘される。
【００４２】
一態様において、本発明は、診断方法における、配列番号１、または配列番号１で示される配列と少なくとも７０％の配列同一性、（配列番号１に、例えば少なくとも約７５％の配列同一性、例えば少なくとも約８０％の配列同一性、例えば少なくとも約８５％の配列同一性、例えば少なくとも約９０％の配列同一性、例えば少なくとも約９５％の配列同一性、例えば少なくとも約９８％の配列同一性、例えば少なくとも約９９％の配列同一性）の有る配列、または配列番号１に同一のアミノ酸配列を認識することが可能な抗体、およびＣ４ｄの両方のアレルアイソフォーム（すなわちＣ４ｄのＡ鎖およびＢ鎖の両方）を認識しそれらへ特異的に結合することが可能な異なる抗体の使用に関する。さらなる態様において、抗体はアッセイにおいて使用され得る。なおさらなる態様において、本発明に記載の抗体は、いわゆるサンドイッチアッセイにおいて使用され得る。
【００４３】
上で言及されるように、本発明は、アッセイまたは他の診断方法における本発明に記載の抗体の使用に関する。原理上はアッセイは、当技術分野において公知の任意のタイプのアッセイであり得る。１つのタイプのアッセイは、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）タイプのアッセイであり得る。ＥＬＩＳＡアッセイは、例えば間接ＥＬＩＳＡ、サンドイッチＥＬＩＳＡ、または競合ＥＬＩＳＡ等の当技術分野において公知の任意のタイプであり得る。非限定的文脈において以下に例示されるアッセイの別の例は、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）である。
【００４４】
一態様において、本発明に記載の１つまたは複数の抗体は、原理上は、診断用の使用等の任意の好適な使用のため、またはスクリーニング目的のためのものであり得る。スクリーニングまたは診断の目的に関して、本発明に記載の抗体は、補体系活性化の測定のために使用され得る。別の態様において、本発明に記載の抗体は、薬物候補またはリード化合物のスクリーニングのために使用されて、かかる薬物が補体系を引き起こす程度を調査することができる。
【００４５】
ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）
一態様において、本発明は、ＲＩＡにおける使用のための抗体に関する。抗体は、本明細書において開示されるアミノ酸配列を含むアミノ酸配列へ結合することが可能である。かかるアッセイにおいて、アッセイは、抗体が結合することが可能な放射性標識標的をさらに含み得る。一態様において、標的は、放射性標識Ｃ４ｄであり得る。さらに、抗体の使用において、患者サンプル中に存在するＣ４ｄは、本発明の抗体へ競合的に結合し、放出された放射性Ｃ４ｄが測定されるだろう。患者サンプル中のＣ４ｄは、配列番号１を含むアミノ酸配列に関するネオエピトープであると理解される。抗体は、固体支持体（ウェルの壁または任意の表面等）上に固定化されても固定化されなくてもよい。
【００４６】
例えば、本発明の抗体は、放射性標識標的（例えば放射性標識Ｃ４ｄ等）と混合され得る。抗体の利用可能な結合部位は、したがって結合された放射性標識標的により飽和されるだろう。放射性標識標的（Ｃ４ｄ）へ結合された抗体と生物学的サンプルとの接触に際して、放射性標識されてない標的は抗体へ競合的に結合し、その後に、放出された放射性標識標的の測定が遂行され、定量的測定を可能にする。
【００４７】
間接ＥＬＩＳＡ
さらなる態様において、本発明に記載の抗体は、本明細書において記載される好適な酵素とコンジュゲートされない。かかる抗体は、一次抗体として表わされ得る。一次抗体は配列番号１を含むアミノ酸配列へ結合することが可能である。
【００４８】
一次抗体が酵素とコンジュゲートされない事例において、本発明は、一次抗体のＦｃ部分を認識することが可能な抗体をさらに含む。かかる抗体は、二次抗体として表わされ得る。二次抗体は、任意選択で好適な酵素（例えばホースラディシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、ウレアーゼ、または当技術分野において公知の任意の他の好適な酵素等）とコンジュゲートされ得る。
【００４９】
検出および最終的に定量化を可能にするために、二次抗体へコンジュゲートされた酵素によって消化することが可能な基質が添加される。基質は、コンジュゲートされた酵素によって消化することが可能な任意の好適な基質であり得る。かかる基質の非限定例は、例えばテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）、２，２’−アジノビス［３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸］−二アンモニウム塩（ＡＢＴＳ）、パラニトロフェニルリン酸、二ナトリウム塩（ＰＮＰＰ）、ｏ−フェニレンジアミンジヒドロクロライド（ＯＰＤ）などである。
【００５０】
サンドイッチＥＬＩＳＡ
本発明は、本明細書において記載されるネオエピトープとは異なる部位（すなわちアミノ酸配列の配列番号１とは異なる配列を有する部位）でＣ４ｄへ特異的に結合することが可能な検出抗体にも関する。それゆえ、検出抗体は、アミノ酸配列の配列番号１へ結合することが可能な本発明に記載の抗体とは異なり、それゆえ、抗原（例えばＣ４ｄ等）の異なるエピトープ（それはこの例においてＣ４ｄのＡ鎖およびＢ鎖である）へ結合する。この文脈において、配列番号１へ結合することが可能な本発明に記載の抗体は、捕捉抗体として表わされる。Ｃ４ｄのＡ鎖およびＢ鎖へ結合することが可能な抗体は、検出抗体として表わされ、したがって、配列番号２および／または配列番号３へ結合することが可能である。
【００５１】
結合された抗原の検出および最終的に定量化を可能にするために、二次抗体が添加され得る。二次抗体は、検出抗体のＦｃ部分を認識することが可能である。二次抗体は、任意選択で好適な酵素（例えばホースラディシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、ウレアーゼ、または当技術分野において公知の任意の他の好適な酵素等）とコンジュゲートされ得る。
【００５２】
検出および最終的に定量化を可能にするために、コンジュゲートされた酵素によって消化することが可能な基質が添加される。基質は、コンジュゲートされた酵素によって消化することが可能な任意の好適な基質であり得る。かかる基質の非限定例は、例えばテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）、２，２’−アジノビス［３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸］−二アンモニウム塩（ＡＢＴＳ）、パラニトロフェニルリン酸、二ナトリウム塩（ＰＮＰＰ）、ｏ−フェニレンジアミンジヒドロクロライド（ＯＰＤ）などである。
【００５３】
本発明の他の態様において、検出抗体は、アミノ酸配列の配列番号１へ結合することが可能な本発明に記載の抗体であり得る。かかる事例において、捕捉抗体は、配列番号１とは異なるエピトープを有する問題になっている抗原へ特異的に結合することが可能な抗体である。したがってこの概念は、上記のものの逆方向のバージョンを表わす。この態様によれば、上で言及される二次抗体は、配列番号１を認識しそれへ結合する抗体のＦｃ部分を認識することが可能である。
【００５４】
競合ＥＬＩＳＡ
一態様において、本発明は、抗原が配列番号１を含む、生物学的サンプルの抗原へ結合することが可能な抗体に関する。この抗体は、この事例において、一次抗体として表わされ得る。
【００５５】
この態様において、本発明は、一次抗体のＦｃ部分へ結合することが可能な抗体にさらに関する。したがってこの抗体は、好適には二次抗体として表わされ得る。二次抗体は、任意選択で好適な酵素（例えばホースラディシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、ウレアーゼ、または当技術分野において公知の任意の他の好適な酵素等）とコンジュゲートされ得る。
【００５６】
検出および最終的に定量化を可能にするために、コンジュゲートされた酵素によって消化することが可能な基質が添加される。基質は、コンジュゲートされた酵素によって消化することが可能な任意の好適な基質であり得る。かかる基質の非限定例は、例えばテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）、２，２’−アジノビス［３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸］−二アンモニウム塩（ＡＢＴＳ）、パラニトロフェニルリン酸、二ナトリウム塩（ＰＮＰＰ）、ｏ−フェニレンジアミンジヒドロクロライド（ＯＰＤ）などである。
【００５７】
検出および定量化を可能にするために、一次抗体は、生物学的サンプルからの抗原と共にインキュベーションされる。生物学的サンプルからのその抗原へ結合された一次抗体は、次いで表面（典型的には任意のタイプの容器の表面であり得る）へ添加される。表面は、同じ抗原によりプレコーティングされる。任意の未結合の一次抗体（すなわち前記表面へ結合されなかった）は、任意の好適な方法（例えばリンス等）によって典型的には除去される。次いで前記表面は二次抗体と接触させられ、次いでそれは前記表面へ結合された一次抗体のＦｃ部分へ結合する。次いで好適な基質が添加され、それは、二次抗体へコンジュゲートされた酵素の消化に際して、検出および定量化を可能にする。
【００５８】
全体としておよび本明細書において言及されるように、本出願のテキストを通して言及される関連の抗体は、好適な酵素へコンジュゲートされてもコンジュゲートされなくてもよい。好適な酵素は当技術分野において公知であり、本出願のテキストを通して例示される。本明細書において言及されるアッセイの遂行において、好適な基質は、検出および定量化の目的のために添加される。複数の好適な基質は当技術分野において公知であり、それゆえ、本明細書において記載される方法およびキットは、基質（消化に際して、発色または蛍光シグナルをもたらし、それは検出および／または定量化をさらに可能にする）を含んでも含まなくてもよい。
【００５９】
本発明は、野生型Ｃ４ｄであり得るＣ４ｄそれ自体にも関する。具体的には、本発明は、組換えＣ４ｄ、およびより具体的にはヒト組換えＣ４ｄにさらに関する。本発明の文脈において、ヒト組換えＣ４ｄは対照および／または基準として使用され得る。１つの非限定例は、例えばＰ０Ｃ０Ｌ５［９５７−１３３６］であり得る。
【００６０】
ＲＩＡ
本発明は、抗原の存在を定量化する方法にも関する。抗原は、原理上は、任意の抗原（例えば生物学的サンプル中のＣ４ｄ等）であり得る。
【００６１】
それゆえ、本発明に記載の方法は、
ａ）本発明に記載の抗体であって、放射性標識抗原によりプレロードされた前記抗体を提供すること、
ｂ）ａ）における放射性標識抗原へ結合された抗体を、患者サンプルと接触させること、
ｃ）放出された放射性標識抗原を測定すること、
を含み得る。
【００６２】
抗体は、配列番号１を含むアミノ酸配列へ結合することができる抗体であり得、そこで、エピトープは、配列番号１を含む
【００６３】
間接ＥＬＩＳＡ
代替的に、方法は、
ａ）対象からの生物学的サンプルを提供すること、
ｂ）サンプルを、本発明に記載の一次抗体と接触させること、
ｃ）本発明に記載の二次抗体をサンプルへ添加すること、
ｄ）好適な基質をサンプルへ添加すること、および
ｅ）消化された基質のアウトプットを測定すること、
を含み得る。
【００６４】
アウトプットは、発色シグナルまたは蛍光シグナルであり得る。
【００６５】
サンドイッチＥＬＩＳＡ
さらなる代替として、本発明に記載の方法は、
ａ）対象からの生物学的サンプルを提供すること、
ｂ）サンプルを、本発明に記載の捕捉抗体と接触させること、
ｃ）本発明に記載の一次抗体をサンプルへ添加すること、
ｄ）本発明に記載の二次抗体をサンプルへ添加すること、
ｅ）好適な基質をサンプルへ添加すること、および
ｆ）消化された基質のアウトプットを測定すること、
のステップを含み得る。
【００６６】
アウトプットは、発色シグナルまたは蛍光シグナルであり得る。
【００６７】
競合ＥＬＩＳＡ
なおさらなる代替において、本発明に記載の方法は、
ａ）本発明に記載の一次抗体を、抗原を含有する生物学的サンプルと接触させること、
ｂ）ステップａ）からの一次抗体−抗原複合体を、ａ）におけるものと同じ抗原によりプレコーティングされた表面と接触させること、
ｃ）ステップｂ）における任意の未結合の抗体を除去すること、
ｄ）二次抗体を前記表面へ添加すること、
ｅ）基質を添加すること、および
ｆ）消化された基質のアウトプットを測定すること、
のステップを含み得る。
【００６８】
アウトプットは、発色シグナルまたは蛍光シグナルであり得る。
【００６９】
上で記載される方法は、方法中のステップのうちの任意のものの間にリンスするステップを含み得ることが理解される。例えば、リンスするステップは、好適には例えばステップｂ）とステップｃ）との間で起こり得る。本明細書において記載される方法において、停止溶液は酵素反応を停止するために任意選択で添加され得る。これは、読み取りシグナルの測定前のステップにおいて添加され得る。
【００７０】
全体として、本発明は、当技術分野において公知の検出の任意の形態を可能にする任意の基質を含み得ることも理解される。例えば、基質は、Ｃ４ｄを定量化するために、吸光度もしくは蛍光による、または電気化学的シグナルによる検出に使用され得る。他の態様において、読み取りは、サンプルの放射能の測定によるものであり得る。
【００７１】
方法は、好適な対照および／または基準の使用を含み得る。対照または内部基準として、Ｃ４ｄそれ自体が使用され得る。好ましくは、対照または内部基準として使用されるＣ４ｄはヒトであり、さらにより好ましくは、ヒトＣ４ｄは組換えである。Ｃ４ｄの測定／定量化は、対照または内部基準からのシグナルによりサンプルからの検出シグナルを割ることによって通常行われるか、または代替的に、サンプルからのシグナルは、対照または内部基準のシグナルに対して比較される。
【００７２】
本発明は、キットまたはキットのパーツにも関する。キットは、好適な酵素（例えばホースラディシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、ウレアーゼ、または当技術分野において公知の任意の他の好適な酵素等）と任意選択でコンジュゲートされた、本明細書において記載される１つまたは複数の抗体を含み得る。１つまたは複数の抗体は、本明細書において記載される一次抗体または検出抗体であり得る。これらの抗体は、好適な酵素へ任意選択でコンジュゲートされ得る。
【００７３】
キットは、好適な酵素（例えばホースラディシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、ウレアーゼ、または当技術分野において公知の任意の他の好適な酵素等）と任意選択でコンジュゲートされた、本明細書において記載される二次抗体をさらに含み得る。
【００７４】
キットは、本明細書において記載されるネオエピトープとは異なる部位（すなわちアミノ酸配列の配列番号１とは異なる部位）で抗原（例えばＣ４ｄ等）へ特異的に結合することが可能な捕捉抗体をさらに含み得る。捕捉抗体は、一次抗体とは異なる。いくつかの態様において、捕捉抗体は、溶液中にある。好ましい態様において、捕捉抗体は、任意の種類の表面へ直接的または間接的に付着される。例えば、捕捉抗体は、ウェル（例えばマイクロタイタープレートまたは任意のフォーマットのウェル等）の表面へ付着され得る。
【００７５】
キットは、さらに好適な基質を含み得る。基質は、関連する抗体へ事例に応じてコンジュゲートされた酵素によって消化することが可能な任意の基質かもしれない。
【００７６】
キットは、対照および／または内部基準も含み得る。
【００７７】
キットは、任意の好適な形態（１つまたは複数の容器を含む等）であり得る。例えば、キットは、任意の好適なフォーマットのマイクロタイタープレートを含み得る。１つまたは複数の容器は、１つまたは複数の容器の１つまたは複数の表面上で、本発明に記載の捕捉抗体によりコーティングされ得る。一態様において、容器は、関連する（一次）抗体によって認識することが可能な抗原によってもコーティングされ得る。
【００７８】
具体的には、本発明に記載のキットまたはキットのパーツは、アッセイおよびその方法論（ハイスループットスクリーニングなど等）のために所望される文脈に適するようにデザインされ得る。
【００７９】
ＲＩＡのためのキット
一態様において、本発明に記載のキットは、
ａ）配列番号１を含む抗原を結合することが可能な本発明に記載の抗体、
ｂ）ａ）に記載の抗体が結合の可能な放射性標識抗原
を含み得る。
【００８０】
抗原は、例えばＣ４ｄであり得る。
【００８１】
間接ＥＬＩＳＡのためのキット
本発明の一態様において、本発明に記載のキットは、
ａ）配列番号１を含む抗原を結合することが可能な本発明に記載の抗体、
ｂ）ａ）における抗体のＦｃ部分へ結合することが可能な、酵素へ任意選択でコンジュゲートされた抗体、
ｃ）任意選択でｂ）における酵素によって消化可能な基質、
を含み得る。
【００８２】
サンドイッチＥＬＩＳＡのためのキット
本発明のさらなる態様において、本発明に記載のキットは、
ａ）配列番号１を含む抗原を結合することが可能な本発明に記載の抗体、
ｂ）ａ）における同じ抗原へ結合することができるが、配列番号１へ結合しない抗体、
ｃ）ｂ）における抗体のＦｃ部分へ結合することが可能な、酵素へ任意選択でコンジュゲートされた抗体、
ｄ）任意選択でｃ）における酵素によって消化可能な基質、
を含み得る。
【００８３】
競合ＥＬＩＳＡのためのキット
本発明のなおさらなる態様において、本発明に記載のキットは、
ａ）配列番号１を含む抗原を結合することが可能な本発明に記載の抗体、
ｂ）ａ）における抗原によりプレコーティングされた表面、
ｃ）ａ）における抗体のＦｃ部分へ結合することが可能な、酵素へ任意選択でコンジュゲートされた抗体、
ｄ）任意選択でｃ）における酵素によって消化可能な基質、
を含み得る。
【００８４】
本発明に記載の方法、キットおよび／または抗体は、任意の診断用または組織学的な設定または文脈における使用のためのものであり得る。それゆえ、本発明は、生物学的サンプル中のＣ４ｄの存在または非存在の検出に関する。重要なことには、本発明は、生物学的サンプル中のＣ４ｄの定量化に関する。Ｃ４ｄの存在もしくは非存在、または事例に応じてＣ４ｄの量は、Ｃ４ｄと関連する任意の疾患の存在または非存在を可能にし得る。それを使用して、Ｃ４ｄと関連する任意の疾患の進行またはステージを決定することもできる。代替的に、本発明に記載の方法、キットおよび／または抗体を使用して、それを必要とする対象の治療方法をモニターすることができる。その帰結として、本発明は、対象の好適な治療の選択を可能にし得る。
【００８５】
Ｃ４ｄと関連する疾患または病態は、例えば腫瘍および自己免疫疾患と関連する任意の病態、またはより具体的にはＳＬＥ（血清レベル、血小板および赤血球上での沈着）、糸球体腎炎、ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺癌）（血漿および気管支肺胞上皮のレベル）、抗体媒介性移植拒絶（移植の生検中での予測）、血栓性微小血管症、狼瘡性腎炎、全身性紅斑性狼瘡、ヒト白血病Ｔ細胞ウイルス（ＨＬＴＶ）に起因する脊髄症などであり得る。
【実施例】
【００８６】
進化遺伝的に関連するタンパク質Ｃ３、Ｃ４およびＣ５、ならびにその派生物は、構造類似性を有し得るので、試験を遂行して、補体Ｃ４ｄアッセイの分析的特異性を分析した。分析的特異性を、補体因子Ｃ４、Ｃ４ｂ、Ｃ３、Ｃ３ｂ、Ｃ３ｄ、Ｃ５、ＳＣ５ｂ−９およびＣ９の分析によって確認した。交差反応性を調査するために、抗原を、生理的濃度をわずかに超える濃度でＥＬＩＳＡアッセイにおいて分析した。分析した補体因子は、Ｃ４ｄアッセイにおいてシグナルを与えなかった（図２）。使用指示書中で記載される手順に従って、試験を遂行した。
【００８７】
ＥＬＩＳＡアッセイがＣ４ｄの両方の興奮性バリアント（ＡおよびＢ）を検出する能力を分析した。個体は、Ｃ４Ａ遺伝子またはＣ４Ｂ遺伝子のいずれかを欠損し得る。Ｃ４ＡまたはＣ４Ｂの部分的な欠損は、正常なコーカサス人の集団中で３１％を超える組み合わせ頻度で、ヒトにおける公知の最も一般的な遺伝性免疫欠損である。したがって、分析感度を両方のバリアントについて試験して、全集団のためのアッセイの結合有効性を決定した。
【００８８】
一態様において、本発明は以下の条項に関する。
【００８９】
条項
１．配列番号１がペプチド配列のＣ末端および／またはＮ末端である、前記配列番号１を含むポリペプチド配列。
【００９０】
２．前記ポリペプチド配列が、配列番号１で示される配列と少なくとも７０％の配列同一性、（配列番号１に、例えば少なくとも約７５％の配列同一性、例えば少なくとも約８０％の配列同一性、例えば少なくとも約８５％の配列同一性、例えば少なくとも約９０％の配列同一性、例えば少なくとも約９５％の配列同一性、例えば少なくとも約９８％の配列同一性、例えば少なくとも約９９％の配列同一性）の有る配列、または配列番号１に同一のアミノ酸配列を含む、条項１に記載のポリペプチド配列。
【００９１】
３．前記ポリペプチド配列が、Ｃ４ｄのネオエピトープである、条項１〜２のいずれか１項に記載のポリペプチド配列。
【００９２】
４．疾患の診断のための、条項１〜３のいずれか１項に記載のポリペプチドの使用。
【００９３】
５．前記疾患が、癌または自己免疫の疾患または病態である、条項４に記載の使用。
【００９４】
６．前記疾患が、ＳＬＥ（血清レベル、血小板および赤血球上での沈着）、ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺癌）（血漿および気管支肺胞上皮のレベル）、抗体媒介性移植拒絶（移植の生検中での予測）、血栓性微小血管症、狼瘡性腎炎、ヒト白血病Ｔ細胞ウイルス（ＨＬＴＶ）に起因する脊髄症である、条項４〜５のいずれか１項に記載の使用。
【００９５】
７．条項１〜３のいずれか１項に記載のポリペプチド配列へ結合することが可能な抗体。
【００９６】
８．前記抗体が、哺乳動物または非哺乳動物の起源である、条項７に記載の抗体。
【００９７】
９．前記抗体が、ヒト、鳥類またはマウスの起源である、条項７〜８のいずれか１項に記載の抗体。
【００９８】
１０．前記抗体が、モノクローナルまたはポリクローナルである、条項７〜９のいずれか１項に記載の抗体。
【００９９】
１１．疾患の診断のための、条項７〜１０のいずれか１項に記載の抗体の使用。
【０１００】
１２．前記疾患が、癌または自己免疫の疾患または病態である、条項１１に記載の使用。
【０１０１】
１３．前記疾患が、ＳＬＥ（血清レベル、血小板および赤血球上での沈着）、ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺癌）（血漿および気管支肺胞上皮のレベル）、抗体媒介性移植拒絶（移植の生検中での予測）、血栓性微小血管症、狼瘡性腎炎、ヒト白血病Ｔ細胞ウイルス（ＨＬＴＶ）に起因する脊髄症である、条項１１〜１２のいずれか１項に記載の使用。
【０１０２】
１４．条項７〜１０のいずれか１項に記載の抗体を含む、キットまたはキットのパーツ。
【０１０３】
１５．生物学的サンプル中のＣ４ｄのレベルを決定する方法であって、
ａ）生物学的サンプルを条項７〜１０のいずれか１項に記載の抗体と接触させ、前記抗体が、放射性標識抗原によりプレロードされるか、または好適な酵素へコンジュゲートされること、
ｂ）前記抗体へコンジュゲートされた前記酵素によって消化することが可能な基質を任意選択で添加すること、
ｃ）放出された前記放射性標識抗原を測定するか、または消化された前記基質のアウトプットを測定して、それによって前記サンプル中に存在するＣ４ｄのレベルを測定すること、
を含む、前記方法。
【図１】
2021526639.tif 000003
【図２】
2021526639.tif 000004
【図３】
2021526639.tif 000005
【配列表】
2021526639000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和3年2月1日(2021.2.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）配列番号１で示される配列と少なくとも約９８％の配列同一性、例えば少なくとも約９９％の配列同一を有する配列、または配列番号１に同一のアミノ酸配列を含むポリペプチド配列を認識し結合することが可能な抗体、および
（ｂ）図３に示されるＡ鎖とＢ鎖、すなわち配列番号２および／または配列番号３との間で保存されるポリペプチドまたはその断片を認識し結合することが可能である抗体、
を含む、キット。
【請求項２】
（ａ）配列番号１で示される配列と少なくとも約９８％の配列同一性、例えば少なくとも約９９％の配列同一を有する配列、または配列番号１に同一のアミノ酸配列を含むポリペプチド配列を認識し結合することが可能な抗体、および
（ｂ）図３に示されるＡ鎖とＢ鎖、すなわち配列番号２および／または配列番号３との間で保存されるポリペプチドまたはその断片を認識し結合することが可能である抗体、
を含む、組成物。
【請求項３】
前記抗体が、哺乳動物または非哺乳動物の起源である、請求項１または２に記載の組成物またはキット。
【請求項４】
前記抗体が、ヒト、鳥類またはマウスの起源である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物またはキット。
【請求項５】
前記抗体が、モノクローナルまたはポリクローナルである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物またはキット。
【請求項６】
（ｂ）における前記抗体は、任意選択で酵素へコンジュゲートされる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物またはキット。
【請求項７】
任意選択で、請求項１（ｂ）および３〜６のいずれか１項に記載の抗体のＦｃ領域へ結合することが可能な二次抗体をさらに含み、前記二次抗体が、酵素へコンジュゲートされる、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物またはキット。
【請求項８】
前記抗体へコンジュゲートされた前記酵素によって消化することが可能な基質をさらに含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物またはキット。
【請求項９】
前記基質が、前記酵素によって消化された後に任意の好適な手段、例えば発色手段または蛍光手段によって、検出を可能にする、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物またはキット。
【請求項１０】
診断方法における、あるいは疾患および／または病態の診断のための、あるいは補体系活性化の測定および／または薬物もしくは薬物候補のスクリーニングのための、請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物またはキット。
【請求項１１】
前記疾患または病態が、癌または自己免疫の疾患若しくは病態である、請求項１０に記載の組成物またはキット。
【請求項１２】
前記疾患または病態が、ＳＬＥ（血清レベル、血小板および赤血球上での沈着）、ＮＳＣＬＣ（非小細胞肺癌）（血漿および気管支肺胞上皮のレベル）、抗体媒介性移植拒絶（移植の生検での予測）、血栓性微小血管症、狼瘡性腎炎、ヒト白血病Ｔ細胞ウイルス（ＨＬＴＶ）に起因する脊髄症である、請求項１０または１１の組成物またはキット。
【請求項１３】
生物学的サンプル中のＣ４ｄのレベルを測定する方法であって、
（ｉ）生物学的サンプルを準備し、
（ｉｉ）（ｉ）における前記生物学的サンプルを請求項１（ａ）および請求項３〜５のいずれか１項に記載の抗体に接触させ、ここで、請求項１（ａ）および請求項３〜５のいずれか１項に記載の抗体は、任意選択で固体支持体へ結合され、
（ｉｉｉ）請求項１（ｂ）および請求項３〜６のいずれか１項に記載の抗体を（ｉｉ）において得られた前記サンプルへ添加し、
（ｉｖ）請求項１（ｂ）および請求項３〜６のいずれか１項に記載の抗体のＦｃ領域へ結合することが可能な二次抗体を、任意選択で、（ｉｉｉ）において得られた前記サンプルへ添加し、ここで、前記二次抗体は酵素へコンジュゲートされており、
（ｖ）前記二次抗体へコンジュゲートされた前記酵素によって消化されることが可能な基質を（ｉｖ）において得られた前記サンプルへ添加し、
（ｖｉ）消化された前記基質のアウトプットを測定すること
を含む、前記方法。
【国際調査報告】
2021526639.tif 000006
2021526639.tif 000007