(57)【要約】  本開示は、約１０質量％〜約２０質量％の脂肪、約５質量％〜約１５質量％の繊維、及び約３０質量％〜約６０質量％のタンパク質を含むドッグフード組成物に関し、ここで、質量パーセンテージは、組成物の乾燥物の総重量に基づいている。【特許請求の範囲】
【請求項１】
約１０質量％〜約２０質量％の脂肪、約５質量％〜約１５質量％の繊維、及び約３０質量％〜約６０質量％のタンパク質を含むドッグフード組成物（質量パーセンテージは、前記組成物の乾燥物の総重量に基づく）。
【請求項２】
約１０質量％〜約２０質量％の脂肪、約５質量％〜約１５質量％の繊維、及び約３０質量％〜約５０質量％のタンパク質を含む、請求項１に記載のドッグフード組成物（質量パーセンテージは、前記組成物の乾燥物の総重量に基づく）。
【請求項３】
前記組成物の乾燥物の総重量に基づいて、約１５質量％〜約４０質量％の範囲の量の炭水化物をさらに含む、請求項１又は２に記載のドッグフード組成物。
【請求項４】
ドライペットフード、セミモイストペットフード、及びウェットペットフードからなる群より選択される、請求項１から３のいずれか一項に記載のドッグフード組成物。
【請求項５】
抗酸化剤の供給源をさらに含む、請求項１から４のいずれか一項に記載のドッグフード組成物。
【請求項６】
ａ）前記ドッグフード組成物がドライペットフード組成物であり、抗酸化剤の供給源が、ビタミンＣ（ここで、ビタミンＣは、乾燥物基準で約２２０ｐｐｍ〜約４４０ｐｐｍの範囲の量で存在する）、及び／又はビタミンＥ（ここで、ビタミンＥは、乾燥物基準で約６６０ｐｐｍ〜約１１００ｐｐｍの範囲の量で存在する）、及び／又はカロテノイド（ここで、カロテノイドは、乾燥物基準で約２ｐｐｍ〜約１２ｐｐｍの範囲の量で存在する）を含み、
ｂ）前記ドッグフード組成物がウェットペットフード組成物であり、抗酸化剤の供給源が、ビタミンＣ（ここで、ビタミンＣは乾燥物基準で約２００〜約６００ｐｐｍの範囲の量で存在する）、及び／又はビタミンＥ（ここで、ビタミンＥは乾燥物基準で約６００ｐｐｍ〜約２０００ｐｐｍの範囲の量で存在する）、及び／又はカロテノイド（ここで、カロテノイドは乾燥物基準で約３０ｐｐｍ〜約１００ｐｐｍの範囲の量で存在する）を含む、
請求項１から５のいずれか一項に記載のドッグフード組成物。
【請求項７】
クルクミノイド供給源をさらに含む、請求項１から６のいずれか一項に記載のドッグフード組成物。
【請求項８】
クルクミノイド供給源としてウコン抽出物をさらに含む、請求項１から７のいずれか一項に記載のドッグフード組成物。
【請求項９】
ドライペットフードである、請求項１から８のいずれか一項に記載のドッグフード組成物。
【請求項１０】
乾燥物基準で３６０ｐｐｍ〜７８０ｐｐｍの範囲の量のウコン抽出物を含む、請求項９に記載のドッグフード組成物。
【請求項１１】
乾燥物基準で約２５０〜約２０００ｐｐｍの範囲の量のクルクミノイドを含む、請求項９に記載のドッグフード組成物。
【請求項１２】
カルノシン酸／カルノソールの供給源をさらに含む、請求項９から１１のいずれか一項に記載のドッグフード組成物。
【請求項１３】
ローズマリー抽出物をさらに含む、請求項９から１２のいずれか一項に記載のドッグフード組成物。
【請求項１４】
前記ローズマリー抽出物が、乾燥物基準で約５５ｐｐｍ〜約１３０ｐｐｍの範囲の量で存在する、請求項１３に記載のドッグフード組成物。
【請求項１５】
乾燥物基準で約２０〜約９０ｐｐｍの量のカルノシン酸及びカルノソールを含む、請求項９から１４のいずれか一項に記載のドッグフード組成物。
【請求項１６】
ピペリン供給源をさらに含む、請求項１０から１５のいずれか一項に記載のドッグフード組成物。
【請求項１７】
ピペリンが、乾燥物基準で１４〜６０ｐｐｍの範囲の量で前記ペットフード組成物中に存在する、請求項１６に記載のドッグフード組成物。
【請求項１８】
ウェットフード組成物である、請求項１から８のいずれか一項に記載のドッグフード組成物。
【請求項１９】
ウコン抽出物を含む、請求項１８に記載のドッグフード組成物。
【請求項２０】
クルクミノイド供給源をさらに含む、請求項１８に記載のドッグフード組成物。
【請求項２１】
前記クルクミノイドが、乾燥物基準で約２５０〜約２０００ｐｐｍの範囲の量で存在する、請求項２０に記載のドッグフード組成物。
【請求項２２】
カルノシン酸及びカルノソールの供給源をさらに含む、請求項２０又は２１に記載のドッグフード組成物。
【請求項２３】
カルノシン酸及びカルノソールの量が、乾燥物基準で約２０ｐｐｍ〜約９０ｐｐｍの範囲である、請求項２２に記載のドッグフード組成物。
【請求項２４】
ピペリン供給源をさらに含む、請求項２０から２３のいずれか一項に記載のドッグフード組成物。
【請求項２５】
ピペリンが、乾燥物基準で１４〜６０ｐｐｍの範囲の量で前記ペットフード組成物中に存在する、請求項２４に記載のドッグフード組成物。
【請求項２６】
がんに罹患しており、かつ化学療法を受けているイヌの支援に使用するための請求項１から２５のいずれか一項に記載のドッグフード組成物。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【０００１】
本出願は、その全体がここに参照することによって本願に援用される、２０１８年６月１４日出願の欧州特許出願第１８１７７８４７．３号に対する優先権の利益を主張するものである。
【技術分野】
【０００２】
本開示は、がんに罹患したイヌのための食品組成物の分野に関する。
【背景技術】
【０００３】
動物の健康の維持及び改善は、当技術分野における継続的な目標である。人間と同様に、先進国に住むペットは、平均余命が一貫して長くなっている。したがって、主にイヌ個体群の老化及び増加の理由から、世界的ながん負担は増加し続けている。一例として、イヌ個体群におけるがんの発生率は、イヌ１００，０００匹あたり２８２．２から９５８であると推定されている。イヌで最も頻度の高い腫瘍は、メスの乳房腫瘍（全がんの７０．５％）、非ホジキンリンパ腫（メス８．４％、オス２０．１％）、及び皮膚腫瘍（メス４％、オス１９．９％）である。さらには、欧州獣医癌学会によれば、１０才以上のイヌの５０％が、がん関連の問題で致死するであろう。
【０００４】
化学療法は、動物腫瘍学においてますます使用されている。ヒトのがん治療での医学の進歩を利用して、愛玩動物を治療するために、ビンクリスチン、シクロホスファミド、カルボプラチン、又はシスプラチンなどの利用可能な分子がますます増えている。獣医学の分野では、特に造血組織に由来する腫瘍（リンパ腫、白血病）の治療に、抗がん剤が使用されている。例えば、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、及びプレドニゾンを組み合わせたＣＨＯＰベースのプロトコルは、現在、多くのリンパ腫の治療に使用されている。化学療法剤は、がん性動物の寿命を数週間から数ヶ月に延長するのに特に効果的でありうる（ＣＨＯＰプロトコルで治療されたイヌの生存期間の中央値は１３ヶ月である）。
【０００５】
実際、ペットの飼い主、とりわけイヌなどの愛玩動物の飼い主は、ペットを化学療法で治療して、良好な生活の質（ＱＯＬ）を可能な限り延長することをますます選択している。イヌは、ＱＯＬを低下させ、治療の変更又は治療の中止にすらつながりうる、食欲不振、吐き気、又は下痢の形で胃腸の不調を経験しうる。
【０００６】
がんを患う罹患体を管理するための統合的アプローチは、腫瘍の発生を支援する複数の生化学的及び生理学的経路を対象とし、また、正常組織毒性を最小限に抑える必要がある。栄養介入は、治療への反応を高め、ＱＯＬを改善するための重要な要素である。さらには、特定の栄養素は、抗がん療法に関連する毒性を減じるための強力なツールとして使用することができる。
【０００７】
がんを患うペットの飼い主は、がん治療中にペットを支援するためにどのような食餌が最も給餌に適しているかをよく尋ねる。インターネット及び他のリソースには、がんを患うイヌの転帰を改善するか、又は治療の副作用を最小限に抑えることを目的として、多くの「がん用食」（例えば、生食、高度又は中程度のタンパク質／低炭水化物食、「ケトジェニック」ダイエット、高脂肪、オメガ−３脂肪酸補給食）について記載されている。
【０００８】
この問題を解決することを目的とした唯一の既存製品は、「Ｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｄｉｅｔ（商標）ｎ／ｄ（商標）Ｃａｎｉｎｅ」と呼ばれるウェット製品である。該製品は、ドキソルビシン化学療法と組み合わせて使用した場合に、臨床試験でリンパ腫を患うイヌの選択された群における幾らかの適度な生存利益に関連していた。この製品は通常、獣医師によって使用又は処方されておらず、臨床診療では一般に使用されていない。第一に、それはウェット製品であるため、ドライ製品と同様に、その使用には、より多くの制約が提示される。それは缶詰の形態でのみ入手可能であり、これは一部のペットの飼い主にとっては不便で費用がかかりすぎる可能性があり、胃腸の不調を引き起こすという逸話的な評判もある。さらには、この製品は、一般常識によって一般的に認められているように、適度な量のタンパク質及び炭水化物を含むが、高用量の魚油が補給されている。腫瘍が簡単に使用できないがペットにとっては必要なエネルギー源に相当するため、この種の食品には高レベルの脂肪が必要であると当業者は一般に考えている。がん細胞は、グルコースの取り込みを増加させ、エネルギー生成をミトコンドリアの酸化的リン酸化から細胞質ゾルの解糖へとシフトするようにプログラムされていることが判明したが、これは、効率の悪い経路である；がん細胞のこの代謝の特徴は「ワールブルク効果」と呼ばれる。がん細胞によるグルコースの取り込みがこのように増加し、これががん細胞の成長及び増殖の促進に使用されるため、がん罹患体の食餌は、腫瘍細胞を「好ましくない」状況に置くために、適度なレベルの炭水化物を有するべきであると想定されていた。逆に、多くのがん細胞は、循環脂質を使用するのではなく、必要とする脂肪酸のほとんどを内因的に合成することから（脂質新生）、がん罹患体の高脂肪食は腫瘍細胞ではなく宿主細胞に利益をもたらすと推測された。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
現在、がんを患っているペットの最適な栄養状態及び生活の質を支援し、化学療法の消化管副作用の軽減に役立つように特別に処方され、かつ臨床的に検証された市販の食餌は存在しない。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本開示は、約１０質量％〜約２０質量％の脂肪、約５質量％〜約１５質量％の繊維、及び約３０質量％〜約６０質量％のタンパク質を含むペットフード組成物に関し、ここで、質量パーセンテージは、組成物の乾燥物の総重量に基づいている。
【００１１】
幾つかの実施態様では、本開示のペットフード組成物はウェットペットフード組成物からなる。
【００１２】
他の幾つかの実施態様では、本開示のペットフード組成物はセミモイストペットフード組成物からなる。
【００１３】
幾つかのさらなる実施態様では、本開示のペットフード組成物はドライペットフード組成物からなる。
【００１４】
幾つかの実施態様では、本開示のペットフード組成物はウェットドッグフード組成物からなる。
【００１５】
他の幾つかの実施態様では、本開示のペットフード組成物はセミモイストドッグフード組成物からなる。
【００１６】
幾つかのさらなる実施態様では、本開示のペットフード組成物はドライドッグフード組成物からなる。
【００１７】
本開示はまた、約１０質量％〜約２０質量％の脂肪、約５質量％〜約１５質量％の繊維、及び約３０質量％〜約５０質量％のタンパク質を含むドッグフード組成物にも関し、ここで、質量パーセンテージは、組成物の乾燥物の総重量に基づいている。
【００１８】
幾つかの実施態様では、本開示の上記ペットフード組成物はウェットドッグフード組成物からなる。
【００１９】
他の幾つかの実施態様では、本開示の上記ペットフード組成物はセミモイストドッグフード組成物からなる。
【００２０】
幾つかのさらなる実施態様では、本開示の上記ペットフード組成物はドライドッグフード組成物からなる。
【００２１】
幾つかの実施態様では、本開示による上記食品組成物は、該組成物の乾燥物の総重量に基づいて約１５質量％〜約４０質量％の範囲の量の炭水化物をさらに含む。
【００２２】
幾つかの実施態様では、上記食品組成物は、抗酸化剤の供給源をさらに含む。
【００２３】
幾つかの実施態様では、抗酸化剤の供給源は、ビタミンＣ、ビタミンＥ、及びカロテノイドからなる群より選択される１つ以上のビタミンを含む。
【００２４】
最も好ましい実施態様では、上記食品組成物はドライペットフード組成物からなり、抗酸化剤の供給源は、ビタミンＣ（ここで、ビタミンＣは乾燥物基準で約２２０ｐｐｍ〜約４４０ｐｐｍの範囲の量で食品組成物中に存在する）、及び／又はビタミンＥ（ここで、ビタミンＥは乾燥物基準で約６６０ｐｐｍ〜約１１００ｐｐｍの範囲の量で食品組成物中に存在する）、及び／又はカロテノイド（ここで、カロテノイドは乾燥物基準で約２ｐｐｍ〜約１２ｐｐｍの範囲の量で食品組成物中に存在する）を含む。
【００２５】
他の最も好ましい実施態様では、上記食品組成物は、ウェットペットフード組成物からなり、抗酸化剤の供給源は、ビタミンＣ（ここで、ビタミンＣは乾燥物基準で約２００〜約６００ｐｐｍの範囲の量で食品組成物中に存在する）、及び／又はビタミンＥ（ここで、ビタミンＥは乾燥物基準で約６００ｐｐｍ〜約２０００ｐｐｍの範囲の量で食品組成物中に存在する）、及び／又はカロテノイド（ここで、カロテノイドは乾燥物基準で約３０ｐｐｍ〜約１００ｐｐｍの範囲の量で食品組成物中に存在する）を含む。
【００２６】
幾つかの実施態様では、上記食品組成物は、抗酸化剤の供給源を含むドライドッグフード組成物であり、該抗酸化剤供給源は、給餌時に約２００ｐｐｍ〜約４００ｐｐｍの範囲の量のビタミンＣ、及び／又は給餌時に約６００ｐｐｍ〜約１０００ｐｐｍの範囲の量のビタミンＥ、及び／又は給餌時に約２ｐｐｍ〜約１０ｐｐｍの範囲の量のカロテノイドを含みうる。
【００２７】
幾つかの実施態様では、上記食品組成物はクルクミノイド供給源をさらに含む。
【００２８】
最も好ましい実施態様では、上記食品組成物は、乾燥物基準で約２５０ｐｐｍ〜約２０００ｐｐｍの範囲の量のクルクミノイドを含む。
【００２９】
幾つかの実施態様では、上記食品組成物は、給餌時に約３００ｐｐｍ〜約７００ｐｐｍの範囲の量などのウコン抽出物をさらに含む。
【００３０】
幾つかの実施態様では、上記食品組成物は、カルノシン酸／カルノソールの供給源をさらに含む。
【００３１】
幾つかの実施態様では、上記食品組成物は、カルノシン酸及びカルノソールの供給源としてローズマリー抽出物をさらに含む。ペットフード組成物の他の成分に関しては、ペットフード組成物中に存在するローズマリー抽出物の量は、前記抽出物のカルノシン酸及びカルノソール含有量に応じて変化しうる。
【００３２】
幾つかの実施態様では、上記食品はローズマリー抽出物をさらに含み、このローズマリー抽出物は、給餌時に約５０ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍの範囲の量で存在しうる。
【００３３】
最も好ましい実施態様では、上記食品組成物は、乾燥物基準で約２０ｐｐｍ〜約９０ｐｐｍの範囲の量のカルノシン酸及びカルノソールを含む。
【００３４】
幾つかの実施態様では、上記食品組成物はピペリン供給源をさらに含む。
【００３５】
幾つかの実施態様では、上記食品組成物はドライドッグフードであり、ピペリン供給源をさらに含む。
【００３６】
幾つかの実施態様では、ピペリン供給源は、コショウ抽出物で構成されうる。
【００３７】
本開示による食品組成物の幾つかの実施態様では、ピペリン供給源は、コショウ抽出物からなり、該コショウ抽出物は、給餌時に約１５ｐｐｍ〜約３５ｐｐｍの範囲の量で組成物中に存在する。
【００３８】
最も好ましい実施態様では、本開示による食品組成物は、乾燥物基準で１４ｐｐｍ〜６０ｐｐｍの範囲の量のピペリンを含む。
【００３９】
本開示による食品組成物の幾つかの実施態様では、ピペリジンの供給源はコショウ抽出物からなる。
【００４０】
コショウ抽出物は、上記コショウ抽出物のピペリン含有量に応じて、最も好ましくは、乾燥物基準で１４ｐｐｍ〜６０ｐｐｍの範囲の食品組成物中の最終含有量を得るのに適した量で組成物中に存在する。
【００４１】
上記ペットフード組成物がコショウ抽出物の形態でピペリン供給源を含むドライドッグフード組成物である実施形態では、コショウ抽出物は、給餌時に１５〜３５ｐｐｍの範囲の量でドライドッグフード組成物中に存在する。
【００４２】
幾つかの実施態様では、上記食品組成物は、ウコン抽出物、及び／又はローズマリー抽出物、及び／又はコショウ抽出物、及び／又は緑茶抽出物、及び／又はザクロ抽出物を含む。これらの実施態様の幾つかでは、上記食品組成物は、クルクミノイド供給源及びローズマリー抽出物供給源を含み、任意選択的にピペリン供給源も含む。幾つかの実施態様では、上記食品組成物はドライドッグフード組成物である。
【００４３】
この開示はまた、がんに罹患し、かつ化学療法を受けているイヌの支援に使用するための、本明細書全体にわたって規定される食品組成物にも関する。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】中程度の脂肪栄養組成物を給餌された動物の時間による糞便スコアを示すグラフ。縦座標：毎週の糞便スコアの平均値。横座標：（ｉ）左パネル：試験動物群；（ｉｉ）右パネル：対照動物群。左右のパネルの各々において、各パネル左から右へ：動物に当該組成物（左パネル）又は従来の組成物（右パネル）を給餌し始めてからの期間：（ｉ）１週目、（ｉｉ）２週目、（ｉｉｉ）第３週目、（ｉｖ）４週目、（ｖ）５週目、（ｖｉ）６週目、（ｖｉｉ）７週目、（ｖｉｉｉ）８週目。
【図２】中程度の脂肪栄養組成物を給餌された動物の時間によるグローバルＱＯＬスコア値を示すグラフ。縦座標：ケースの割合。横座標：（１）対になったバーの各群について、左から右へ：（Ｉ）中程度の脂肪栄養組成物を給餌された動物、（ｉｉ）従来の栄養組成物を給餌された動物。（２）対になったバーの群について、左から右へ：（ｉ）ベースライン、（ｉｉ）２週目、（ｉｉｉ）４週目、（ｉｖ）６週目、（ｖ）８週目。各バーにおいて、色付きのセクション、上から下へ：（ｉ）悪い、（ｉｉ）普通、（ｉｉｉ）良い、（ｉｖ）非常に良い、（ｖ）優れている。各セクションにおいて数字は動物の数を表している。
【図３Ａ】さまざまなイヌ腫瘍細胞株における植物抽出物の抗増殖効果を示すグラフ。図３Ａは、さまざまなイヌ腫瘍細胞株におけるザクロ４０％エラグ酸抽出物（ＰＯＥ４０（登録商標））の抗増殖活性を示している。縦座標、図の上部から下部に向かって：ＢＡＣＡ、ＢＲ、Ｃ２、ＣＦ３３．ＭＴ、ＣＦ４１．Ｍｇ、ＣＬＢＬ−１、Ｄ１７、ＨＭＰＯＳ、Ｋ９。横座標：μｇ／ｍｌで表される細胞培養物中の抽出物の最終濃度。
【図３Ｂ】さまざまなイヌ腫瘍細胞株における植物抽出物の抗増殖効果を示すグラフ。図３Ｂは、さまざまなイヌ腫瘍細胞株における緑茶抽出物（Ｎａｔｕｒｅｘ社）の抗増殖活性を示している。縦座標、図の上部から下部に向かって：ＢＡＣＡ、ＢＲ、Ｃ２、ＣＦ３３．ＭＴ、ＣＦ４１．Ｍｇ、ＣＬＢＬ−１、Ｄ１７、ＨＭＰＯＳ、Ｋ９。横座標：μｇ／ｍｌで表される細胞培養物中の抽出物の最終濃度。
【図３Ｃ】さまざまなイヌ腫瘍細胞株における植物抽出物の抗増殖効果を示すグラフ。図３Ｃは、さまざまなイヌ腫瘍細胞株における黒コショウ抽出物（ＶＥＴＰＥＲＩＮＥ（登録商標））の抗増殖活性を示している。縦座標、図の上部から下部に向かって：ＢＡＣＡ、ＢＲ、Ｃ２、ＣＦ３３．ＭＴ、ＣＦ４１．Ｍｇ、ＣＬＢＬ−１、Ｄ１７、ＨＭＰＯＳ、Ｋ９。横座標：μｇ／ｍｌで表される細胞培養物中の抽出物の最終濃度。
【図３Ｄ】さまざまなイヌ腫瘍細胞株における植物抽出物の抗増殖効果を示すグラフ。図３Ｄは、さまざまなイヌ腫瘍細胞株におけるローズマリー抽出物（ＩＮＯＬＥＮＳ７０（登録商標））の抗増殖活性を示している。縦座標、図の上部から下部に向かって：ＢＡＣＡ、ＢＲ、Ｃ２、ＣＦ３３．ＭＴ、ＣＦ４１．Ｍｇ、ＣＬＢＬ−１、Ｄ１７、ＨＭＰＯＳ、Ｋ９。横座標：μｇ／ｍｌで表される細胞培養物中の抽出物の最終濃度。
【図３Ｅ】さまざまなイヌ腫瘍細胞株における植物抽出物の抗増殖効果を示すグラフ。図３Ｅは、さまざまなイヌ腫瘍細胞株におけるウコンの根（Ｎａｔｕｒｅｘ社）抽出物の抗増殖活性を示している。縦座標、図の上部から下部に向かって：ＢＡＣＡ、ＢＲ、Ｃ２、ＣＦ３３．ＭＴ、ＣＦ４１．Ｍｇ、ＣＬＢＬ−１、Ｄ１７、ＨＭＰＯＳ、Ｋ９。横座標：μｇ／ｍｌで表される細胞培養物中の抽出物の最終濃度。
【図３Ｆ】さまざまなイヌ腫瘍細胞株における植物抽出物の抗増殖効果を示すグラフ。図３Ｆは、さまざまなイヌ腫瘍細胞株におけるザクロ４０％プニコシド抽出物（Ｐ４０Ｐ（登録商標））の抗増殖活性を示している。縦座標、図の上部から下部に向かって：ＢＡＣＡ、ＢＲ、Ｃ２、ＣＦ３３．ＭＴ、ＣＦ４１．Ｍｇ、ＣＬＢＬ−１、Ｄ１７、ＨＭＰＯＳ、Ｋ９。横座標：μｇ／ｍｌで表される細胞培養物中の抽出物の最終濃度。
【図４Ａ】さまざまなイヌ腫瘍細胞株における２つの植物抽出物の組合せの抗増殖効果を示すグラフ。図４Ａは、Ｃ２がん細胞株の増殖におけるローズマリー抽出物とウコン抽出物との組合せの抗増殖効果を示している。曲線：（ｉ）破線：ウコン抽出物、（ｉｉ）点線：７０％ｗ／ｗのカルノシン酸でのローズマリー抽出物；（ｉｉｉ）実線：７０％ｗ／ｗのカルノシン酸でのウコン抽出物とローズマリー抽出物の組合せ。縦座標：これらの抽出物の非存在下での対照培養と比較した増殖細胞のパーセント。横座標：μｇ／ｍｌで表される、細胞培養物中の抽出物の組合せの最終濃度。
【図４Ｂ】さまざまなイヌ腫瘍細胞株における２つの植物抽出物の組合せの抗増殖効果を示すグラフ。図４Ｂは、ＣＭＴ−１２がん細胞株の増殖におけるローズマリー抽出物とウコン抽出物との組合せの抗増殖効果を示している。曲線：（ｉ）破線：ウコン抽出物、（ｉｉ）点線：７０％ｗ／ｗのカルノシン酸でのローズマリー抽出物；（ｉｉｉ）実線：７０％ｗ／ｗのカルノシン酸でのウコン抽出物とローズマリー抽出物の組合せ。縦座標：これらの抽出物の非存在下での対照培養と比較した増殖細胞のパーセント。横座標：μｇ／ｍｌで表される、細胞培養物中の抽出物の組合せの最終濃度。
【図４Ｃ】さまざまなイヌ腫瘍細胞株における２つの植物抽出物の組合せの抗増殖効果を示すグラフ。図４Ｃは、Ｄ１７がん細胞株の増殖におけるローズマリー抽出物とウコン抽出物との組合せの抗増殖効果を示している。曲線：（ｉ）破線：ウコン抽出物、（ｉｉ）点線：７０％ｗ／ｗのカルノシン酸でのローズマリー抽出物；（ｉｉｉ）実線：７０％ｗ／ｗのカルノシン酸でのウコン抽出物とローズマリー抽出物の組合せ。縦座標：これらの抽出物の非存在下での対照培養と比較した増殖細胞のパーセント。横座標：μｇ／ｍｌで表される、細胞培養物中の抽出物の組合せの最終濃度。
【図５Ａ】さまざまなイヌ腫瘍細胞株における、異なる調達による異なる植物抽出物の抗増殖活性。図５Ａは、イヌ腫瘍細胞株Ｃ２における、次の抽出物の組合せの抗増殖活性を示している：（ｉ）ウコン抽出物（Ｎａｔｕｒｅｘ社）とローズマリー抽出物「ＩＮＯＬＥＮＳ７０」、（ｉｉ）ウコン抽出物（Ｎａｔｕｒｅｘ社）とローズマリー抽出物ＩＮＯＬＥＮＳ５０（登録商標）、（ｉｉｉ）ウコン抽出物ＢＣＭ−９５（登録商標）とローズマリー抽出物「ＩＮＯＬＥＮＳ７０」、並びに（ｉｖ）ウコン抽出物ＢＣＭ−９５（登録商標）とローズマリー抽出物「ＩＮＯＬＥＮＳ５０」。縦座標：植物抽出物の上記組合せの非存在下で行った、対照培養と比較した生細胞のパーセント。横座標：μｇ／ｍｌで表される、細胞培養物中の抽出物の組合せの最終濃度。
【図５Ｂ】さまざまなイヌ腫瘍細胞株における、異なる調達による異なる植物抽出物の抗増殖活性。図５Ｂは、イヌ腫瘍細胞株ＣＭＴ−１２における、次の抽出物の組合せの抗増殖活性を示している：（ｉ）ウコン抽出物とローズマリー抽出物「ＩＮＯＬＥＮＳ７０」、（ｉｉ）ウコン抽出物とローズマリー抽出物「ＩＮＯＬＥＮＳ５０」、（ｉｉｉ）ウコン抽出物「ＢＣＭ−９５」とローズマリー抽出物「ＩＮＯＬＥＮＳ７０」、並びに（ｉｖ）ウコン抽出物「ＢＣＭ−９５」とローズマリー抽出物「ＩＮＯＬＥＮＳ５０」。縦座標：植物抽出物の上記組合せの非存在下で行った、対照培養と比較した生細胞のパーセント。横座標：μｇ／ｍｌで表される、細胞培養物中の抽出物の組合せの最終濃度。
【図５Ｃ】さまざまなイヌ腫瘍細胞株における、異なる調達による異なる植物抽出物の抗増殖活性を示すグラフ。図５Ｃは、イヌ腫瘍細胞株Ｄ１７における、次の抽出物の組合せの抗増殖活性を示している：（ｉ）ウコン抽出物とローズマリー抽出物「ＩＮＯＬＥＮＳ７０」、（ｉｉ）ウコン抽出物とローズマリー抽出物「ＩＮＯＬＥＮＳ５０」、（ｉｉｉ）ウコン抽出物「ＢＣＭ−９５」とローズマリー抽出物「ＩＮＯＬＥＮＳ７０」、並びに（ｉｖ）ウコン抽出物「ＢＣＭ−９５」とローズマリー抽出物「ＩＮＯＬＥＮＳ５０」。縦座標：植物抽出物の上記組合せの非存在下で行った、対照培養と比較した生細胞のパーセント。横座標：μｇ／ｍｌで表される、細胞培養物中の抽出物の組合せの最終濃度。
【図６】軟寒天コロニー形成アッセイにおける天然抽出物の抗増殖活性を示すグラフ。縦座標：抽出物の非存在下で行った、対照培養と比較した生細胞のパーセントを示すグラフ。横座標のバー、左から右へ：（ｉ）対照（ＤＭＳＯ）、（ｉｉ）０．４μｇ／ｍｌのクルクミン抽出物（Ｎａｔｕｒｅｘ社のウコン抽出物）、（ｉｉｉ）０．８μｇ／ｍｌローズマリー「ＩＮＯＬＥＮＳ７０」、（ｉｖ）６．２５μｇ／ｍｌの「ＶＥＴＰＥＲＩＮＥ」、（ｖ）０．４μｇ／ｍｌのクルクミン抽出物（Ｎａｔｕｒｅｘ社）と０．８μｇ／ｍｌのローズマリー「ＩＮＯＬＥＮＳ７０」、並びに（ｖｉ）０．４μｇ／ｍｌのクルクミン抽出物（Ｎａｔｕｒｅｘ社）と０．８μｇ／ｍｌのローズマリー「ＩＮＯＬＥＮＳ７０」と６．２５μｇ／ｍｌの「ＶＥＴＰＥＲＩＮＥ」。
【図７】イヌ細胞におけるさまざまな植物抽出物の細胞毒性活性を示すグラフ。縦座標：上記植物抽出物を含まない対照培養と比較した生細胞のパーセント。横座標：（１）バー群、左から右へ、イヌ腫瘍細胞株：（ｉ）ＣＤＦ、（ｉｉ）Ｃ２、（ｉｉｉ）ＣＭＴ−１２、（ｉｖ）Ｄ１７；（２）バーの各群において、左から右へ：（ｉ）対照（ＤＭＳＯ）、（ｉｉ）６．３μｇ／ｍｌのウコン抽出物（Ｎａｔｕｒｅｘ社）、（ｉｉｉ）６．３μｇ／ｍｌのローズマリー抽出物「ＩＮＯＬＥＮＳ７０」、（ｉｖ）３．１μｇ／ｍｌのウコン抽出物（Ｎａｔｕｒｅｘ社）と３．１μｇ／ｍｌのローズマリー抽出物「ＩＮＯＬＥＮＳ７０」。
【図８Ａ】植物抽出物の抗増殖活性及び細胞毒性効果の機序を示す図。図８Ａはフローサイトメトリーアッセイの結果であり、各象限は、次に対応する事象の数を表している：（ｉ）左下の象限：生存していると評価された細胞、（ｉｉ）右下の象限：初期アポトーシスであると評価された細胞、（ｉｉｉ）右上の象限：後期アポトーシス／壊死であると評価された細胞。縦座標：任意単位で表される７−ＡＡＤ発現細胞の蛍光シグナル。横座標：任意単位で表される、アネキシンＶ陽性細胞の蛍光シグナル。
【図８Ｂ】植物抽出物の抗増殖活性及び細胞毒性効果の機序を示す図。図８Ｂはフローサイトメトリーアッセイの結果であり、各象限は、次に対応する事象の数を表している：（ｉ）左下の象限：生存していると評価された細胞、（ｉｉ）右下の象限：初期アポトーシスであると評価された細胞、（ｉｉｉ）右上の象限：後期アポトーシス／壊死であると評価された細胞。縦座標：任意単位で表される７−ＡＡＤ発現細胞の蛍光シグナル。横座標：任意単位で表される、アネキシンＶ陽性細胞の蛍光シグナル。
【図８Ｃ】植物抽出物の抗増殖活性及び細胞毒性効果の機序を示す図。図８Ｃは、フローサイトメトリーアッセイの結果であり、各象限は、次に対応する事象の数を表している：（ｉ）左下の象限：生存していると評価された細胞、（ｉｉ）右下の象限：初期アポトーシスであると評価された細胞、（ｉｉｉ）右上の象限：後期アポトーシス／壊死であると評価された細胞。縦座標：任意単位で表される７−ＡＡＤ発現細胞の蛍光シグナル。横座標：任意単位で表される、アネキシンＶ陽性細胞の蛍光シグナル。
【図８Ｄ】植物抽出物の抗増殖活性及び細胞毒性効果の機構を示す図。図８Ｄは、フローサイトメトリーアッセイの結果であり、各象限は、次に対応する事象の数を表している：（ｉ）左下の象限：生存していると評価された細胞、（ｉｉ）右下の象限：初期アポトーシスであると評価された細胞、（ｉｉｉ）右上の象限：後期アポトーシス／壊死であると評価された細胞。縦座標：任意単位で表される７−ＡＡＤ発現細胞の蛍光シグナル。横座標：任意単位で表される、アネキシンＶ陽性細胞の蛍光シグナル。
【図８Ｅ】植物抽出物の抗増殖活性及び細胞毒性効果の機序を示す図。図８Ｅは、平均±標準偏差３の独立した複製として表された、初期アポトーシス細胞（アネキシンＶ陽性細胞及び７−ＡＡＤ陰性細胞の右下の象限）の割合である。各細胞株内において、文字が異なる平均は、互いに有意に異なっている（ｐ＜０．０５）。縦座標：アポトーシス細胞のパーセント。横座標：（１）バーの群、左から右へ、イヌ腫瘍細胞株：Ｃ２、ＣＭＴ−１２及びＤ１７。（２）バーの各群について、左から右へ：（ｉ）対照（ＤＭＳＯ）、（ｉｉ）６．３μｇ／ｍｌのウコン抽出物（Ｎａｔｕｒｅｘ社）、（ｉｉｉ）６．３μｇ／ｍｌのローズマリー抽出物「ＩＮＯＬＥＮＳ７０」、（ｉｖ）３．１μｇ／ｍｌのウコン抽出物と３．１μｇ／ｍｌのローズマリー抽出物「ＩＮＯＬＥＮＳ７０」。
【図９】植物抽出物のアポトーシス活性を示すグラフ。縦座標：活性化カスパーゼ３／７の倍率変化。横座標：（１）バーの群、左から右へ、イヌ腫瘍細胞株：Ｃ２、ＣＭＴ−１２及びＤ１７。（２）バーの各群について、左から右へ：（ｉ）対照（ＤＭＳＯ）、（ｉｉ）６．３μｇ／ｍｌのウコン抽出物（Ｎａｔｕｒｅｘ社）、（ｉｉｉ）６．３μｇ／ｍｌのローズマリー抽出物「ＩＮＯＬＥＮＳ７０」、（ｉｖ）３．１μｇ／ｍｌのウコン抽出物（Ｎａｔｕｒｅｘ社）と３．１μｇ／ｍｌのローズマリー抽出物「ＩＮＯＬＥＮＳ７０」。
【図１０】植物抽出物の抗酸化活性を示すグラフ。縦座標：活性酸素種（ＲＯＳ）生成における倍率変化。横座標：（１）バーの群、左から右へ、イヌ腫瘍細胞株：Ｃ２、ＣＭＴ−１２及びＤ１７。（２）バーの各群について、左から右へ：（ｉ）対照（ＤＭＳＯ）、（ｉｉ）６．３μｇ／ｍｌのウコン抽出物（Ｎａｔｕｒｅｘ社）、（ｉｉｉ）６．３μｇ／ｍｌのローズマリー抽出物「ＩＮＯＬＥＮＳ７０」、（ｉｖ）３．１μｇ／ｍｌのウコン抽出物（Ｎａｔｕｒｅｘ社）と３．１μｇ／ｍｌのローズマリー抽出物「ＩＮＯＬＥＮＳ７０」。
【図１１Ａ】植物抽出物によるＳＡＰＫ／ＪＮＫ経路の活性化を示す図。図１１Ａは、Ｃ２細胞株を用いて行ったウエスタンブロッティングの実験結果を表している。レーンを左から右へ：（ｉ）１２時間のインキュベーション後の対照（ＤＭＳＯ）、（ｉｉ）２４時間のインキュベーション後の対照（ＤＭＳＯ）、（ｉｉｉ）１２時間のインキュベーション後の６．３μｇ／ｍｌのウコン抽出物（Ｎａｔｕｒｅｘ社）、（ｉｖ）２４時間のインキュベーション後の６．３μｇ／ｍｌのウコン抽出物（Ｎａｔｕｒｅｘ社）、（ｖ）１２時間のインキュベーション後の６．３μｇ／ｍｌのローズマリー抽出物（「ＩＮＯＬＥＮＳ７０」）、（ｖｉ）２４時間のインキュベーション後の６．３μｇ／ｍｌのローズマリー抽出物（「ＩＮＯＬＥＮＳ７０」）、（ｖｉｉ）１２時間のインキュベーション後の３．１μｇ／ｍｌのウコン抽出物とローズマリー抽出物との組合せ、（ｖｉｉｉ）２４時間のインキュベーション後の３．１μｇ／ｍｌのウコン抽出物とローズマリー抽出物との組合せ。
【図１１Ｂ】植物抽出物によるＳＡＰＫ／ＪＮＫ経路の活性化を示す図。図１１Ｂは、ＣＭＴ−１２細胞株を用いて行ったウエスタンブロッティングの実験結果を示している。レーンを左から右へ：（ｉ）１２時間のインキュベーション後の対照（ＤＭＳＯ）、（ｉｉ）２４時間のインキュベーション後の対照（ＤＭＳＯ）、（ｉｉｉ）１２時間のインキュベーション後の６．３μｇ／ｍｌのウコン抽出物（Ｎａｔｕｒｅｘ社）、（ｉｖ）２４時間のインキュベーション後の６．３μｇ／ｍｌのウコン抽出物（Ｎａｔｕｒｅｘ社）、（ｖ）１２時間のインキュベーション後の６．３μｇ／ｍｌのローズマリー抽出物（「ＩＮＯＬＥＮＳ７０」）、（ｖｉ）２４時間のインキュベーション後の６．３μｇ／ｍｌのローズマリー抽出物（「ＩＮＯＬＥＮＳ７０」）、（ｖｉｉ）１２時間のインキュベーション後の３．１μｇ／ｍｌのウコン抽出物とローズマリー抽出物との組合せ、（ｖｉｉｉ）２４時間のインキュベーション後の３．１μｇ／ｍｌのウコン抽出物とローズマリー抽出物との組合せ。
【図１２Ａ】ローズマリー抽出物で処理した細胞によるクルクミンの蓄積を示すグラフ。図１２Ａ：Ｃ２細胞株における効果。縦座標：ローズマリー抽出物を含まない対照培養と比較したクルクミンの倍率変化。横座標、バーを左から右へ：（ｉ）対照（ＤＭＳＯ）、（ｉｉ）３．１μｇ／ｍｌのウコン抽出物（Ｎａｔｕｒｅｘ社）、（ｉｉｉ）３．１μｇ／ｍのローズマリー抽出物「ＩＮＯＬＥＮＳ７０」、（ｉｖ）３．１μｇ／ｍｌのウコン抽出物（Ｎａｔｕｒｅｘ社）と３．１μｇ／ｍのローズマリー抽出物「ＩＮＯＬＥＮＳ７０」。
【図１２Ｂ】ローズマリー抽出物で処理した細胞によるクルクミンの蓄積を示すグラフ。図１２Ｂ：ＣＭＴ−１２細胞株における効果。縦座標：ローズマリー抽出物を含まない対照培養と比較したクルクミンの倍率変化。横座標、バーを左から右へ：（ｉ）対照（ＤＭＳＯ）、（ｉｉ）３．１μｇ／ｍｌのウコン抽出物（Ｎａｔｕｒｅｘ社）、（ｉｉｉ）３．１μｇ／ｍのローズマリー抽出物「ＩＮＯＬＥＮＳ７０」、（ｉｖ）３．１μｇ／ｍｌのウコン抽出物（Ｎａｔｕｒｅｘ社）と３．１μｇ／ｍのローズマリー抽出物「ＩＮＯＬＥＮＳ７０」。
【図１２Ｃ】ローズマリー抽出物で処理した細胞によるクルクミンの蓄積を示すグラフ。図１２Ｃ：Ｄ１７細胞株における効果。縦座標：ローズマリー抽出物を含まない対照培養と比較したクルクミンの倍率変化。横座標、バーを左から右へ：（ｉ）対照（ＤＭＳＯ）、（ｉｉ）３．１μｇ／ｍｌのウコン抽出物（Ｎａｔｕｒｅｘ社）、（ｉｉｉ）３．１μｇ／ｍのローズマリー抽出物「ＩＮＯＬＥＮＳ７０」、（ｉｖ）３．１μｇ／ｍｌのウコン抽出物（Ｎａｔｕｒｅｘ社）と３．１μｇ／ｍのローズマリー抽出物「ＩＮＯＬＥＮＳ７０」。
【発明を実施するための形態】
【００４５】
本開示は、（ｉ）化学療法を受けている、及び／又は（ｉｉ）化学療法による治療期間の後に、がんと診断されたイヌのための栄養製品を利用可能にすること（日々の消費）を目的とする。この食品組成物は、良好なＱＯＬを維持し、化学療法の副作用を制限し（例えば、「治療への支援」を通じてイヌが自身のがんと闘うのを助ける）、良好な栄養状態（体重の維持、良好な消化器の健康）を維持することが可能である必要がある。
【００４６】
この目標は、大量のタンパク質と適度な量の炭水化物及び適度な量の脂肪を有する栄養組成物を提供することによって達成された。本明細書の実施例に示されるように、このような栄養組成物は、がんに罹患したイヌ、とりわけ抗がん化学療法を受けているイヌに提供されると、認容性が高く、病気の兆候を大幅に軽減し、生活の質を大幅に改善する。さらには、本明細書に開示される高タンパク質／中程度の炭水化物及び脂肪を給餌されたがんを有するイヌの生活の質の改善は、この食餌療法の開始後の短期間の後に容易に生じ、通常、この食餌療法の開始後わずか４週間で改善が生じる。
【００４７】
本開示は、大量のタンパク質と適度な量の炭水化物及び脂肪とを有する食品組成物に関する。このような組成物は、がんを患う動物、より具体的には化学療法などのがん治療中の動物を支援するために使用することができる。この食品組成物はまた、化学療法などのがん治療中の動物を支援する方法にも使用することができる。該組成物は、がんの治療のための方法に使用することもできる。
【００４８】
本開示は、約１０質量％〜約２０質量％の脂肪、約５質量％〜約１５質量％の繊維、及び約３０質量％〜約６０質量％のタンパク質を含む食品組成物に関し、ここで、質量パーセンテージは、組成物の乾燥物の総重量に基づいている。
【００４９】
幾つかの実施態様では、本開示の食品組成物は、ウェットドッグフード組成物などのウェットペットフード組成物からなる。
【００５０】
他の幾つかの実施態様では、本開示の食品組成物は、セミモイストドッグフード組成物などのセミモイストペットフード組成物からなる。
【００５１】
幾つかのさらなる実施態様では、本開示の食品組成物は、ドライドッグフード組成物などのドライペットフード組成物からなる。
【００５２】
本明細書で用いられる場合、「約」又は「およそ」という用語は、当業者によって決定される特定の値の許容誤差範囲内であることを意味し、これは、一部には、値を測定又は決定する方法、すなわち、測定システムの制限に依存するものである。例えば、「約」は、当技術分野の慣行に従って、３以内又は３を超える標準偏差を意味しうる。あるいは、「約」は、所与の値の２０％まで、好ましくは１０％まで、さらに好ましくは５％まで、さらになお好ましくは１％までの範囲を意味しうる。また、特にシステム又はプロセスに関して、この用語は、ある値の１桁以内、好ましくは５倍以内、さらに好ましくは２倍以内を意味しうる。
【００５３】
本明細書で用いられる場合、「ドライペットフード」、「ドライフード」、「ウェットペットフード」、「ウェットフード」、「セミモイストペットフード」、及び「セミモイストフード」という用語は、ペット動物がその食餌で摂取するあらゆる製品を包含する、栄養的に完全なペットフード組成物を指す。ペットフード組成物は、好ましくは調理済み製品である。該製品には、肉又は動物由来の材料（牛肉、鶏肉、七面鳥、子羊、魚、血漿、骨髄骨など、又はそれらの１つ以上）を組み込むことができる。あるいは、ペットフード組成物は、タンパク質源を提供するために肉を含まなくてよい（好ましくは、大豆、トウモロコシグルテン、又は大豆製品などの肉代替物を含む）。
【００５４】
本明細書で用いられる場合、「ドライ」ペットフード組成物は、１５％以下の含水量、例えば、１％〜１５％の範囲の含水量を有する。
【００５５】
本明細書で用いられる場合、「セミモイスト」ペットフード組成物は、１５％超〜５０％の範囲の含水量を有する。
【００５６】
本明細書で用いられる場合、「ウェット」ペットフード組成物は、９０％以下の含水量、例えば、５０％超〜９０％の範囲の含水量を有する。
【００５７】
その態様の幾つかでは、本開示は、脂肪、繊維、及びタンパク質を含む、がんを患うイヌに有用な食品組成物に関し、ここで、該食品組成物は、乾燥物基準で約１０％〜約２０％の範囲の量の脂肪、乾燥物基準で約５％〜約１５％の範囲の量の繊維、及び乾燥物基準で約３０％〜約５０％の範囲の量のタンパク質を含むことを特徴とする。
【００５８】
本開示は、脂肪、繊維及びタンパク質を含む食品組成物に関し、ここで、前記組成物の乾燥物の総重量に基づいて、脂肪は、約１０質量％〜約２０質量％の範囲の量で含まれ、繊維は、約５質量％〜約１５質量％の範囲の量で含まれ、タンパク質は、約３０質量％〜約５０質量％の範囲の量で含まれる。
【００５９】
本開示は、約１０質量％〜約２０質量％の脂肪、約５質量％〜約１５質量％の繊維、及び約３０質量％〜約５０質量％のタンパク質を含む食品組成物に関し、ここで、質量パーセンテージは、組成物の乾燥物の総重量に基づいている。
【００６０】
「乾燥物（ＤＭ）基準」という表現は、乾燥物含有量に対する濃度（水分の除去後に残る濃度）を表すことによって、飼料中の栄養素又は構成成分の濃度を表す方法として解釈する必要がある。反対に、「給餌時に」という表現は、水分を含む給餌された状態での濃度を表すことにより、飼料中の栄養素又は構成成分の濃度を表す方法として解釈する必要がある。
【００６１】
上記ように、本開示の食品組成物は、ドライペットフード組成物、又はセミモイストペットフード組成物、又はウェットペットフード組成物で構成されうる。
【００６２】
本明細書に記載されるペットフード組成物中の脂肪、繊維、タンパク質、及び炭水化物のそれぞれの量は、上記組成物の乾燥物の総重量を参照して表され、したがって、上記ペットフード組成物の含水量には関係しない。
【００６３】
本明細書全体にわたって記載される食品組成物に含まれうる他の成分は、ペットフード組成物中に含まれる場合を含めて、組成物中に含まれる物質の量を特定する別の従来の方法である「ｐｐｍ」単位（「百万分率」とも呼ばれる）で表すことができる。
【００６４】
本明細書全体を通して、「ｐｐｍ」単位で表される所与の物質の量は、指定されるように、（ｉ）「給餌時」における組成物中の量、又は（ｉｉ）「乾燥物基準」でのｐｐｍ単位の量を意味する。
【００６５】
所与の物質の量が本明細書において「給餌時」におけるｐｐｍ単位で表される場合、ｐｐｍ単位での量の値は、ペットフード組成物の含水量に応じて変化しうる。例示的に、５０％の含水量を有し、「給餌時」に１００ｐｐｍの量の所与の物質を含むペットフード組成物は、乾燥物基準で表される場合、３０％の含水量を有し、「給餌時」に１４０ｐｐｍの上記所与の物質を含むペットフード組成物と同じ量の上記所与の物質を有する。すなわち、両方の場合において、ペットフード組成物は、乾燥物基準で２００ｐｐｍの上記所与の物質を含む。
【００６６】
当技術分野では通常のことであるように、「給餌時のｐｐｍ」単位で表されるペットフード組成物中に含まれる所与の物質の量は、次式を使用して、ペットフード組成物の乾燥物の総量を参照して表される上記所与の物質の量へと容易に変換される：
Ｙｍｇ／１００ｇＤＭ＝「給餌時」のＸｐｐｍ）＊１００／（％乾燥物）
式中、
−Ｙは、ペットフード組成物中に含まれる乾燥物（「ＤＭ」）１００ｇあたりの上記所与の物質のｍｇ単位での量であり、
−Ｘは、ペットフード組成物中の上記所与の物質のｐｐｍ単位での量であり、
−％乾燥物は、ペットフード組成物中の乾燥物のパーセンテージである。
【００６７】
下記の他の式を使用することもできる：
（「給餌時」の％Ｘ）＊１００／（％乾燥物）＝Ｙｇ／１００ｇＤＭ
式中、
−％Ｘは、「すぐに食べられる」ペットフード組成物中の上記所与の物質の質量パーセンテージ単位の量であり、
−％乾燥物は、「すぐに食べられる」ペットフード組成物中の乾燥物のパーセンテージであり、
−Ｙは、「すぐに使用できる」ペットフード組成物中に含まれる乾燥物（「ＤＭ」）１００ｇあたりの上記所与の物質のｇ単位での量である。
【００６８】
本開示の目的では、特に明記しない限り、ドライドッグフード組成物中に含まれる物質のパーセンテージは、上記組成物の乾燥物の総重量に基づいた質量パーセンテージで構成される。
【００６９】
本明細書に記載される食品組成物の第１の態様は、該組成物中に含まれる中程度のレベルの脂肪からなる。上記のように、高レベルの脂肪は、がん細胞に利用されにくいエネルギー源を表すことから、がん治療を受けている動物のための食品への真の関心を提示するはずであると科学界では一般に認められている。本開示の特定の革新的な態様は、この偏見に反して、比較的中程度のレベルの脂肪を含む組成物が初めて記載されることである。本発明者らは、がんに罹患したイヌ、とりわけ、例えば、化学療法によるがん治療などの抗がん治療を受けている、がんを有するイヌに使用するための食品組成物に含まれるべき最適な脂肪含有量を規定した。本発明者らは、結果的に得られるドッグフード組成物がカロリー含有量において少なくとも最低限の要件を有するように、脂肪の含有量が低すぎてはならないことを本明細書において決定した。しかしながら、本発明者らはまた、結果的に得られるドッグフード組成物ががんに罹患した動物に十分に許容されるように、脂肪の含有量が高すぎてはならないことも、本明細書において決定した。病気の動物のがん治療が消化器系の機能に変化を引き起こすことは、よく知られている。したがって、本発明者らは、がんを有するイヌに十分に許容され、とりわけ、がん治療を受けている、がんを有するイヌに十分に許容される組成物を設計することに注意を払った。
【００７０】
好ましい実施態様では、本明細書に記載されるドライドッグフード組成物は、乾燥物基準で、すなわち、前記組成物の乾燥物の総重量に基づいて、１０質量％〜２０質量％の範囲の量、好ましくは１２質量％〜１６質量％の範囲、さらになお好ましくは約１３質量％の量の脂肪を含む。
【００７１】
本明細書で用いられる「脂肪」又は「脂肪源」という表現は、室温でのそれらの一貫性に関係なく、すなわち、前記「脂肪源」が実質的に流体形態で存在するか、又は実質的に固体形態で存在するかに関係なく、任意の食品に許容される（一又は複数の）脂肪及び／又は（一又は複数の）油を含む。本開示による組成物は、動物起源及び／又は植物起源の脂肪を含みうる。脂肪は、当業者に知られているさまざまな供給源のいずれかによって供給されうる。植物脂肪源には、小麦、ヒマワリ、ベニバナ、菜種、オリーブ、ルリジサ、アマニ、ピーナッツ、カシス種子、綿実、小麦胚芽、トウモロコシ胚芽、並びにこれら及び他の植物脂肪源に由来する油が含まれるが、これらに限定されない。動物脂肪源には、例えば、鶏脂肪、七面鳥脂肪、牛肉脂肪、アヒル脂肪、豚脂肪、子羊脂肪など、魚油又は任意の肉、肉副産物、魚介類、乳製品、卵などが含まれるが、これらに限定されない。食品の脂肪含有量は、当業者に知られているあらゆる方法によって決定することができる。
【００７２】
本明細書に記載される食品組成物の第２の特定の態様は、該組成物中に含まれる繊維のレベルからなる。
【００７３】
「繊維」という表現は、「食物繊維」に類似しており、本開示の目的では総合的な繊維として解釈されるべきであり、これは、可溶性繊維及び不溶性繊維を含むことを意味している。可溶性繊維（発酵性繊維とも呼ばれる）は、小腸での消化及び吸収に耐性があり、大腸で完全な又は部分的な発酵を被るものとして定義することができる。可溶性繊維の非限定的な例としては、ビートパルプ、グアーガム、チコリの根、オオバコ、ペクチン、ブルーベリー、クランベリー、カボチャ、リンゴ、オート麦、豆、柑橘類、大麦、又はエンドウ豆が挙げられる。好ましい可溶性繊維はチコリパルプである。可溶性繊維は、結腸細胞にエネルギー源として短鎖脂肪酸を提供することにより、プレバイオティクス効果を有すると考えられている。反対に、不溶性繊維（非発酵性繊維とも呼ばれる）は、小腸での消化及び吸収に耐性があり、かつ大腸での発酵に耐性がある非デンプン多糖類として定義することができる。不溶性繊維の非限定的な例としては、セルロース、全粒小麦製品、小麦、オート麦、トウモロコシふすま、亜麻仁、ブドウ、セロリ、サヤインゲン、カリフラワー、ジャガイモの皮、果皮、植物皮、ピーナッツの殻、大豆繊維が挙げられる。好ましい不溶性繊維はセルロースである。不溶性繊維は、輸送及びバラスト効果に有用であると考えられている。好ましい実施態様では、本開示の組成物は、乾燥物基準で、５〜１５％、好ましくは７〜１０％、さらになお好ましくは約８．９％の量の繊維を含む。
【００７４】
別の実施態様では、本明細書に記載される食品組成物はまた、サイリウムが液体糞便に一貫性を与え、乾燥糞便を柔らかくすることから、消化器の健康を改善するためにサイリウムを含むことができる。好ましくは、本明細書に開示されるドライドッグフード組成物は、乾燥物基準で、すなわち、前記組成物の乾燥物の総重量に基づいて、０．２質量％〜１質量％の範囲、さらに好ましくは約０．５質量％の量のサイリウムを含む。
【００７５】
本明細書に開示される食品組成物の第３の特定の態様は、該組成物中に含まれるタンパク質のレベルからなる。除脂肪体重の維持を確実にするために、タンパク質レベルは高くなければならない。本開示による食品組成物は、１つ以上の別個のタンパク質を含むことができる。概して、本明細書に記載される食品組成物は、製造プロセスで用いられるタンパク質源に含まれる複数のタンパク質を含む。幾つかの実施態様では、食品組成物に含まれるタンパク質は天然の形態である。他の幾つかの実施態様では、タンパク質は、ほぼ完全に加水分解されたタンパク質を包含する、少なくとも部分的に加水分解された形態で存在することができる。本開示による食品組成物は、肉又は動物由来の材料（牛肉、鶏肉、七面鳥、子羊、魚、血漿、骨髄骨など、又はそれらの１つ以上）の形態でタンパク質を組み込むことができる。他の幾つかの実施態様では、本明細書に記載される食品組成物は、肉を含まなくてもよく、また、タンパク質源を提供するために、大豆、トウモロコシグルテン、又は他のタンパク質含有大豆製品などの肉代替タンパク質源を含むことが好ましい。本明細書に開示される食品組成物は、大豆タンパク質濃縮物、乳タンパク質、グルテンなどの追加のタンパク質源を含みうる。
【００７６】
幾つかの実施態様では、本明細書に記載される食品組成物は、乾燥物基準で、すなわち、前記組成物の乾燥物の総重量に基づいて、約１５質量％〜約４０質量％の範囲の量の炭水化物をさらに含む。
【００７７】
本明細書で用いられる「炭水化物」という表現は、体内で加水分解されると、エネルギーのために代謝される多糖類及び糖類を包含する。食品の炭水化物含有量は、当業者に知られているあらゆる方法によって決定することができる。しかしながら、本明細書では、そうでないことが明確に指定されていない限り、炭水化物のパーセンテージは、窒素を含まない抽出物（「ＮＦＥ」）として計算され、これは、次のように計算することができる：
ＮＦＥ＝１００％−水分％−タンパク質％−脂肪％−アッシュ％−粗繊維％。
【００７８】
炭水化物は、オート麦繊維、セルロース、ピーナッツの殻、ビートパルプ、パーボイルド米、コーンスターチ、コーングルテンミール、及びこれらの供給源の任意の組合せを含む、当業者に知られているさまざまな炭水化物源のいずれかの形態で供給することができる。炭水化物を供給する穀物には、小麦、トウモロコシ、大麦、及び米が含まれるが、これらに限定されない。
【００７９】
本開示による食品の好ましい実施態様では、本開示によるドライペットフード組成物の含水量は、乾燥物基準で、すなわち、前記組成物の乾燥物の総重量に基づいて、１質量％〜１５質量％の範囲であり、有利には５質量％〜１２質量％の範囲であり、さらに好ましくは８質量％〜１０質量％の範囲である。最も好ましい実施態様では、含水量は、乾燥物基準で、すなわち、前記組成物の乾燥物の総重量に基づいて、約９．５質量％である。
【００８０】
さらなる成分
幾つかの実施態様では、本開示による食品組成物は抗酸化剤の供給源をさらに含む。
【００８１】
「抗酸化剤」という表現は、フリーラジカルと反応してそれらを中和することができる物質又は成分を意味する。このような物質の実例には、ベータカロチン、リコピン、及びルテインを含むカロテノイド、セレン、コエンザイムＱ１０（ユビキノン）、トコトリエノール、大豆イソフラボン、Ｓ−アデノシルメチオニン、グルタチオン、タウリン、Ｎ−アセチルシステイン、ビタミンＥ、ビタミンＣ、リポ酸、及びＬ−カルニチンが含まれるが、これらに限定されない。
【００８２】
好ましい実施態様では、食品組成物はビタミンＣを含む。
【００８３】
好ましい実施態様では、食品組成物はビタミンＥを含む。
【００８４】
好ましい実施態様では、食品組成物はカロテノイドを含む。好ましいカロテノイドは、ルテイン及びベータカロチンである。
【００８５】
好ましい実施態様では、食品組成物はルテインをさらに含む。
【００８６】
幾つかの実施態様では、食品組成物は、このような抗酸化剤の組合せ、例えばビタミンＣ、及び／又はビタミンＥ、及び／又はカロテノイド、及び／又はタウリンの組合せを含む。幾つかの好ましい実施態様では、食品組成物は、ビタミンＣ及びビタミンＥ及びカロテノイドの組合せを含む。
【００８７】
幾つかの好ましい実施態様では、本開示による食品組成物は、ビタミンＣを含む抗酸化剤供給源をさらに含む。
【００８８】
最も好ましい実施態様では、本開示による食品組成物は、乾燥物基準で２００ｐｐｍ〜６００ｐｐｍの範囲の量のビタミンＣを含む。
【００８９】
幾つかの最も好ましい実施態様では、本開示による食品組成物は、ドライペットフード組成物であり、ビタミンＣを含む抗酸化剤の供給源を含み、ここで、ビタミンＣは、乾燥物基準で２２０ｐｐｍ〜４４０ｐｐｍの範囲の量で存在する。
【００９０】
幾つかの最も好ましい実施態様では、本開示による食品組成物は、ウェットペットフード組成物であり、ビタミンＣを含む抗酸化剤の供給源をさらに含み、ここで、ビタミンＣは、乾燥物基準で２００ｐｐｍ〜６００ｐｐｍの範囲の量で存在する。
【００９１】
幾つかの好ましい実施態様では、本開示による食品組成物は、ドライペットフード組成物であり、ビタミンＥを含む抗酸化剤の供給源をさらに含み、ここで、食品組成物中のビタミンＥの最終的な量は、乾燥物基準で６６０ｐｐｍ〜１１００ｐｐｍの範囲の量である。
【００９２】
幾つかの好ましい実施態様では、本開示による食品組成物は、ウェットペットフード組成物であり、ビタミンＥを含む抗酸化剤の供給源をさらに含み、ここで、食品組成物中のビタミンＥの最終的な量は、乾燥物基準で、８００ｐｐｍ〜１３００ｐｐｍを包含する、６００ｐｐｍ〜２０００ｐｐｍの範囲の量である。
【００９３】
幾つかの好ましい実施態様では、本開示による食品組成物はドライペットフード組成物であり、カロテノイドを含む抗酸化剤供給源をさらに含む。
【００９４】
本開示によるドライペットフードの最も好ましい実施態様では、カロテノイドは、乾燥物基準で２ｐｐｍ〜１２ｐｐｍの範囲の量で食品組成物中に存在する。
【００９５】
他の幾つかの好ましい実施態様では、本開示による食品組成物はウェットペットフード組成物であり、カロテノイドを含む抗酸化剤供給源をさらに含む。
【００９６】
他の幾つかの好ましい実施態様では、本開示による食品組成物はウェットペットフード組成物であり、かつカロテノイドをさらに含み、ここで、カロテノイドは、乾燥物基準で３０ｐｐｍ〜１００ｐｐｍを包含する、２ｐｐｍ〜１００ｐｐｍの範囲の量で上記ウェットペットフード中に存在する。
【００９７】
非限定的な実施態様として、ビタミンＣ（約３００ｐｐｍ）、ビタミンＥ（約８００ｐｐｍ）、ルテイン（約５ｐｐ）、タウリン（約０．６２５ｇ／ＭＣａｌ）＋ビタミンＤ３（約１０００ＩＵ／ｋｇ）を含む「ＣＥＬＴカクテル」と呼ばれる抗酸化剤の組み合わせを使用することができる。
【００９８】
別の実施態様では、本開示による食品組成物はまた、短鎖脂肪酸及び結腸細胞のエネルギー源としてプレバイオティクス効果のための酪酸ナトリウムも含むことができる。好ましくは、食品組成物は、乾燥物基準で、すなわち、前記組成物の乾燥物の総重量に基づいて、０．２質量％〜１質量％の酪酸ナトリウム、さらに好ましくは約０．５質量％の酪酸ナトリウムを含む。
【００９９】
上記の酪酸ナトリウムと同じ目標において、本開示による食品組成物はまた、糞便の一貫性を改善するためにゼオライトを含むことができる。好ましくは、食品組成物は、乾燥物基準で、すなわち、前記組成物の乾燥物の総重量に基づいて、０．５質量％〜１．５質量％、さらに好ましくは約１質量％のゼオライトを含む。
【０１００】
幾つかの好ましい実施態様では、本明細書に記載される食品組成物はまた、特定の免疫を増強するために、サプリメントとしてアルギニンを含むことができる。好ましくは、食品組成物は、乾燥物基準で、すなわち、前記組成物の乾燥物の総重量に基づいて、１質量％〜４質量％、さらに好ましくは２質量％〜３質量％、さらになお好ましくは約２．７質量％のアルギニンを含む。
【０１０１】
別の実施態様では、食品組成物はまた、代謝状態を改善し、抗炎症効果を生じるために、ＥＰＡ／ＤＨＡも含むことができる。好ましくは、食品組成物は、乾燥物基準で、すなわち、前記組成物の乾燥物の総重量に基づいて、０．４質量％〜０．８質量％、さらに好ましくは約０．６質量％のＥＰＡ／ＤＨＡを含む。
【０１０２】
本明細書の実施例に示されるように、本開示による食品組成物は、がん細胞に対して抗増殖効果及び／又はアポトーシス促進効果を有する物質を含む、がん細胞に対して細胞毒性である物質を包含する、抗がん活性を有する１つ以上の抽出物をさらに含むことが望ましい場合がある。本明細書の実施例にも示されているように、本開示によるドライドッグフード組成物は、抗がん活性を有する２つ以上の物質の組合せ、とりわけ、相乗的な抗がん活性が確認されている、抗がん活性を有する２つ以上の物質の組合せをさらに含むことが望ましい場合がある。抗がん活性を有する物質の組合せは、抗がん活性を有する２つの物質、並びに抗がん活性を有する３つの物質、とりわけ相乗的な抗がん活性を有するものの組合せを包含する。
【０１０３】
本明細書に開示される食品組成物の別の特定の好ましい実施態様は、クルクミノイドを含めることである。
【０１０４】
したがって、幾つかの実施態様では、本明細書に記載される食品組成物はクルクミノイド供給源をさらに含む。
【０１０５】
クルクミノイドには、クルクミン、デメトキシクルクミン、ビス−メトキシルクミン、及び／又はテトラヒドロクルクミンが含まれる。クルクミノイドは、特にインドのスパイスであるウコン中に存在する天然フェノールである。ウコンは、クルクマ・ロンガ（Ｃｕｒｃｕｍａ  ｌｏｎｇａ）という植物の根に由来する。クルクミノイドは、クルクマ属のショウガ科の植物の他の種の根にも見出されている。特に、ウコンは、６０〜８０％のクルクミン、１５〜３０％のデメトキシクルクミン、及び２〜６％のビス−デメトキシクルクミンを含む。本開示の組成物中のクルクミノイドは、粉末又は液体抽出物を含めた任意の形態のものでありうる。
【０１０６】
本開示による食品組成物の最も好ましい実施態様では、クルクミノイドは、乾燥物基準で約２５０ｐｐｍ〜約２０００ｐｐｍの範囲の量で存在する。
【０１０７】
好ましい実施態様では、クルクミノイド供給源は、ウコン抽出物（Ｃｕｒｃｕｍａ  Ｌｏｎｇａ）からなる。非限定的な例として、（ｉ）８６％ｗｔ／ｗｔのクルクミノイドを含むＡｒｊｕｎａ社によって商品化されたウコン抽出物「ＢＣＭ−９５」、（ｉｉ）８５％ｗｔ／ｗｔのクルクミノイドを含むＮａｔｕｒｅｘ社によって商品化されたウコン抽出物、及び（ｉｉｉ）２０％ｗｔ／ｗｔのクルクミノイドを含むＩｎｄｅｎａ／Ｍｅｒｉｖａ社によって商品化されたウコン抽出物が挙げられる。当業者によって知られている他の任意の調達もまた使用することができる。このような好ましい態様によれば、本明細書に記載される食品組成物は、ウコン抽出物をさらに含む。クルクミノイドの他の利用可能な供給源は、リポソームクルクミン、クルクミンナノ粒子、クルクミンリン脂質複合体、クルクミンの構造類似体（例えば、ＥＦ−２４）、デメトキシクルクミン、ビスデメトキシクルクミン、テトラヒドロクルクミン、及び市販／ＤＭ、クルクミンの生物学的利用能を高めるように設計された任意の製剤から選択することもできる。
【０１０８】
当業者には容易に理解されるように、本開示によるペットフード組成物中に含まれるウコン抽出物の量は、濃度に依存する。
【０１０９】
例示的に、約１０００ｐｐｍのクルクミノイドを含むペットフード組成物は、（ｉ）８６％ｗｔ／ｗｔのクルクミノイドを有する約１１６３ｐｐｍのウコン抽出物を含むペットフード組成物、（ｉｉ）８５％ｗｔ／ｗｔのクルクミノイドを有する約１１７６ｐｐｍのウコン抽出物を含むペットフード組成物、又は（ｉｉｉ）２０％ｗｔ／ｗｔのクルクミノイドを有する約５０００ｐｐｍのウコン抽出物を含むペットフード組成物から選択することができる。
【０１１０】
食品組成物がドライドッグフード組成物である実施態様では、上記ウコン抽出物は、給餌時に３００ｐｐｍ〜７００ｐｐｍの範囲の量、好ましくは給餌時に４００ｐｐｍ〜６００ｐｐｍ、さらになお好ましくは給餌時に５００ｐｐｍの量で、ドライフード組成物中に存在しうる。
【０１１１】
上記ウコン抽出物は、給餌時に３００ｐｐｍ〜７００ｐｐｍの範囲の量、好ましくは給餌時に４００ｐｐｍ〜７００ｐｐｍ、さらになお好ましくは給餌時に５００ｐｐｍの量でドライドッグフード組成物中に存在しうる。
【０１１２】
食品組成物がドライドッグフード組成物であるさらに別の好ましい実施態様では、ペットフード組成物は、約３００ｐｐｍ〜約７００ｐｐｍの範囲の量で存在する上記ウコン抽出物を含みうる。
【０１１３】
本開示による食品組成物の最も好ましい実施態様では、クルクミノイドが乾燥物基準で約２５０ｐｐｍ〜約２０００ｐｐｍの範囲の量で存在する。
【０１１４】
他の幾つかの実施態様では、本明細書に記載される食品組成物はカルノシン酸／カルノソールを含みうる。幾つかの好ましい態様では、本明細書に開示される食品組成物はカルノシン酸／カルノソールの供給源をさらに含む。
【０１１５】
好ましい実施態様では、カルノシン酸／カルノソールの供給源は、ローズマリー抽出物（Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）からなる。非限定的な例として、Ｖｉｔｉｖａ社のローズマリー抽出物「ＩＮＯＬＥＮＳ５０」又は「ＩＮＯＬＥＮＳ７０」が挙げられる。当業者によって知られている他の任意の調達もまた使用することができる。このような好ましい態様によれば、本明細書に記載されるペットフード組成物は、ローズマリー抽出物をさらに含む。上記ローズマリー抽出物は、乾燥物基準で、給餌時に約５０ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍの範囲の量で、好ましくは給餌時に約７０ｐｐｍ〜約１００ｐｐｍ、さらになお好ましくは約９０ｐｐｍの量で、上記食品組成物中に存在しうる。食品組成物のさらに別の好ましい実施態様では、ローズマリー抽出物は、給餌時に約５０ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍの範囲の量で存在する。
【０１１６】
上記ローズマリー抽出物は、約１０％の含水量を有するドライペットフード組成物中に、乾燥物基準で５５ｐｐｍ〜１４０ｐｐｍの範囲の量で、好ましくは乾燥物基準で８０ｐｐｍ〜１２０ｐｐｍ、さらになお好ましくは乾燥物基準で約１００ｐｐｍの量で存在しうる。食品組成物のさらに別の好ましい実施態様では、ローズマリー抽出物は、乾燥物基準で約５５ｐｐｍ〜約１４０ｐｐｍの範囲の量で存在する。カルノシン酸／カルノソールの他の利用可能な供給源は、タイム、オレガノ、サベロ（savero）、レモンバーム、又はヒソップなどのシソ科植物科由来の一般的なセージ抽出物（Ｓａｌｖｉａ  Ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）から選択することもできる。
【０１１７】
本開示による食品の幾つかの実施態様では、上記食品は、乾燥物基準で約２０〜約９０ｐｐｍの範囲の量のカルノシン酸及びカルノソールをさらに含みうる。
【０１１８】
本明細書で用いられる場合、「カルノシン酸及びカルノソール」の量とは、ペットフード組成物中の（ｉ）カルノシン酸の量と（ｉｉ）カルノソールの量の合計から得られる総量を意味する。
【０１１９】
本開示の別の特定の好ましい実施態様は、ピペリンを含めることである。好ましい態様では、本明細書に開示される食品組成物はピペリン供給源をさらに含む。
【０１２０】
本開示による食品組成物の最も好ましい実施態様では、上記組成物は、乾燥物基準で１４〜６０ｐｐｍの範囲の量のピペリンを含みうる。
【０１２１】
好ましい実施態様では、ピペリン供給源は、黒コショウ抽出物（Ｐｉｐｅｒ  ｎｉｇｒｕｍ）からなる。非限定的な例として、Ｓａｂｉｎｓａ社からのコショウ抽出物「ＶＥＴＰＥＲＩＮＥ」が挙げられる。当業者によって知られている他の任意の調達もまた使用することができる。このような好ましい態様によれば、本明細書に記載されるドライドッグフード組成物は、コショウ抽出物をさらに含む。上記コショウ抽出物は、給餌時に１５〜３５ｐｐｍの範囲の量で、好ましくは給餌時に２０〜３０ｐｐｍ、さらになお好ましくは給餌時に約２７ｐｐｍの量で、ドライドッグフード組成物中に存在しうる。
【０１２２】
さらに別の好ましい実施態様では、本開示による食品組成物は、約１５ｐｐｍ〜約３５ｐｐｍの範囲の量のコショウ抽出物を含みうる。ピペリンの他の利用可能な供給源は、ピーマン及び白コショウ、コショウ属、又はヒハツ（Ｐｉｐｅｒ  ｌｏｎｇｕｍ及びＰｉｐｅｒ  ｏｆｆｉｃｉｎａｒｕｍ）から選択することもでる。さらに別の好ましい実施態様では、本開示による食品組成物は、ウコン抽出物が約３００ｐｐｍ〜約７００ｐｐｍの範囲の量で上記組成物中に存在する、及び／又はローズマリー抽出物が約５０ｐｐｍ〜約１１０ｐｐｍの範囲の量で上記組成物中に存在する、及び／又はコショウ抽出物が約１５ｐｐｍ〜約３５ｐｐｍの範囲の量で上記組成物中に存在することを特徴とする。
【０１２３】
ウコン抽出物（クルクミンが豊富）及びローズマリー抽出物（カルノシン酸が豊富）は、（以下の実施例に示されるように）相乗的に作用して新生細胞の増殖を低減する。この抽出物の組合せは、カスパーゼ３／７の活性化を通じて細胞アポトーシスを引き起こす。抽出物は両方とも、活性酸素種（ＲＯＳ）を減じる抗酸化作用を有する。さらに、ウコン抽出物及びローズマリー抽出物の曝露により、活性化されたｃ−Ｊｕｎ  Ｎ−末端キナーゼ（ＪＮＫ）が増加した。さらなる調査では、ローズマリー処理は、クルクミンの細胞蓄積の有意な増加を生じさせることがわかった。細胞内クルクミンレベルのこの増加は、相乗効果における役割を果たしうる。ピペリンが豊富なコショウ抽出物は、（実施例に示されているように）さまざまな腫瘍細胞の増殖を低減させることができ、さらに、クルクミンなどのさまざまな栄養素の吸収及びバイオアベイラビリティを増加させる。
【０１２４】
幾つかの実施態様では、本開示による食品組成物はまた、カテキン類などのポリフェノール供給源も含むことができる。カテキン類（フラボノイド類）の供給源は、好ましくは緑茶抽出物（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）で構成されうる。非限定的な例として、Ｎａｔｕｒｅｘ社からの抽出物が挙げられる。緑茶抽出物とは、緑茶の葉に由来するハーブ誘導体を指す。緑茶抽出物は、ソフトインフュージョン、軟エキス、ドライエキス、及び部分的精製エキスの技術によって生成することができる。緑茶抽出物は、緑茶カテキン類（ＧＴＣ）、エピガロカテキン（ＥＧＣ）、没食子酸エピカテキン（ＥＣＧ）、没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）、並びにケンペロール、ケルセチン、及びミリセチンなどのフラボノイドを含みうる。ポリフェノールの他の一般的な供給源は、カカオ、ケンタウレア・マクラタ（Ｃｅｎｔａｕｒｅａ  ｍａｃｕｌａｔｅ）の根、並びに白茶、紅茶、及びウーロン茶などの茶樹、並びにブドウワインであるが、これらに限定されない。
【０１２５】
他の幾つかの実施態様では、本開示による食品組成物はまた、エラグ酸／プニカラギンの供給源も含みうる。エラグ酸／プニカラギンの供給源は、好ましくは、ザクロ抽出物（Ｐｕｎｉｃａ  ｇｒａｎａｔｕｍ）からなりうる。非限定的な例として、Ｐｏｌｉｎａｔ社からの抽出物「ＰＯＥ４０」又は「Ｐ４０Ｐ」が挙げられる。他の利用可能なエラグ酸／プニカラギンの供給源は、クランベリー、クルミ、ラズベリー、モモタマナ（Ｔｅｒｍｉｎａｌｉａ  ｃａｔａｐｐａ）の木、ターミナリア・ミリオカルパ（Ｔｅｒｍｉｎａｌｉａ  ｍｙｒｉｏｃａｒｐａ）の木、コンブレタム・モレ（Ｃｏｍｂｒｅｔｕｍ  ｍｏｌｌｅ）（ベルベットブッシュウィロー植物）、又はフトモモ属（Ｇｅｎｅｒａ  Ｍｙｒｔａｌｅｓ）植物から選択されうる。
【０１２６】
好ましい実施態様では、本開示による食品組成物は、ウコン抽出物、及び／又はローズマリー抽出物、及び／又はコショウ抽出物、及び／又は緑茶抽出物、及び／又はザクロ抽出物をさらに含む。
【０１２７】
幾つかの実施態様では、本明細書に開示される食品組成物は、クルクミノイド供給源とローズマリー抽出物の組合せを含む。これらの実施態様の幾つかでは、上記ペットフード組成物はピペリン供給源をさらに含む。
【０１２８】
本明細書は、食品組成物を調製するための方法を含む。記載されている食品の製造プロセスは、当技術分野で知られている任意の方法に従って行うことができる。
【０１２９】
ドライペットフード組成物
本開示の他の箇所で説明されているように、本開示によるドライペットフード組成物は、１５％未満の含水量、例えば１％〜１５％の範囲の含水量、例えば約１０％の含水量、又は例えば約１２％の含水量を有する。
【０１３０】
したがって、本開示は、約１０質量％〜約２０質量％の脂肪、約５質量％〜約１５質量％の繊維、及び約３０質量％〜約６０質量％のタンパク質を含むドライペットフード組成物を包含し、ここで、質量パーセンテージは、組成物の乾燥物の総重量に基づいている。
【０１３１】
本開示は、とりわけ、約１０質量％〜約２０質量％の脂肪、約５質量％〜約１５質量％の繊維、及び約３０質量％〜約５０質量％のタンパク質を含むドライドッグフード組成物に関し、ここで、質量パーセンテージは、組成物の乾燥物の総重量に基づいている。
【０１３２】
幾つかの実施態様では、上記ドライペットフード組成物は、給餌時に約２００ｐｐｍ〜約４００ｐｐｍの範囲の量で存在するビタミンＣ、及び／又は給餌時に約６００ｐｐｍ〜約１０００ｐｐｍの範囲の量のビタミンＥ、及び／又は給餌時に約２ｐｐｍ〜約１０ｐｐｍの範囲の量のカロテノイドを含む、抗酸化剤の供給源を含む。
【０１３３】
幾つかの実施態様では、上記ドライペットフード組成物は、ビタミンＣ（ここで、ビタミンＣは乾燥物基準で約２２０ｐｐｍ〜約４４０ｐｐｍの範囲の量で存在する）、及び／又はビタミンＥ（ここで、ビタミンＥは約６６０ｐｐｍ〜約１１００ｐｐｍの範囲の量で存在する）、及び／又はカロテノイド（ここで、カロテノイドは約２ｐｐｍ〜約１２ｐｐｍの範囲の量で存在する）を含む抗酸化剤の供給源を含み、ここで、ｐｐｍ単位の量は乾燥物基準で表されている。
【０１３４】
幾つかの実施態様では、上記ドライペットフード組成物は、給餌時に３００ｐｐｍ〜７００ｐｐｍの範囲の量で、好ましくは給餌時に４００ｐｐｍ〜６００ｐｐｍ、さらになお好ましくは給餌時に５００ｐｐｍの量でドライドッグフード組成物中に存在することができる、ウコン抽出物を含む。
【０１３５】
幾つかの実施態様では、上記ドライペットフード組成物は、乾燥物基準で３６０ｐｐｍ〜７８０ｐｐｍの範囲の量で、好ましくは乾燥物基準で４４０ｐｐｍ〜６７０ｐｐｍ、さらになお好ましくは乾燥物基準で５５０ｐｐｍの量で、ドライドッグフード組成物中に存在することができる、ウコン抽出物を含む。
【０１３６】
最も好ましい実施態様では、上記ドライペットフード組成物は、乾燥物基準で約２５０ｐｐｍ〜約２０００ｐｐｍの範囲の量で存在するクルクミノイドを含む。
【０１３７】
幾つかの実施態様では、上記ドライペットフード組成物は、ローズマリー抽出物などのカルノシン酸／カルノソールの供給源をさらに含む。上記ローズマリー抽出物は、給餌時に５０〜１２０ｐｐｍの範囲の量で、好ましくは給餌時に７０〜１００ｐｐｍ、さらになお好ましくは給餌時に約９０ｐｐｍの量で、上記ドライドッグフード組成物中に存在しうる。ドライペットフード組成物のさらに別の好ましい実施態様では、ローズマリー抽出物は、給餌時に約５０ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍの範囲の量で存在する。
【０１３８】
幾つかの実施態様では、上記ドライペットフード組成物は、ローズマリー抽出物などのカルノシン酸／カルノソールの供給源をさらに含む。上記ローズマリー抽出物は、乾燥物基準で約５５〜約１３０ｐｐｍの範囲の量で上記ドライドッグフード組成物中に存在しうる。
【０１３９】
ドライペットフード組成物の最も好ましい実施態様では、上記組成物は、乾燥物基準で２０ｐｐｍ〜９０ｐｐｍの範囲の量で存在する、カルノシン酸及びカルノソールを含む。
【０１４０】
本明細書で用いられる場合、「カルノシン酸及びカルノソール」の量とは、（ｉ）カルノシン酸の量と（ｉｉ）カルノソールの量の合計から得られる総量を意味する。
【０１４１】
幾つかの実施態様では、上記ドライペットフード組成物は、ピペリン供給源を含む。幾つかの実施態様では、ピペリン供給源は黒コショウ抽出物からなる。上記コショウ抽出物は、給餌時に１５〜３５ｐｐｍの範囲の量で、好ましくは給餌時に２０〜３０ｐｐｍ、さらになお好ましくは給餌時に約２７ｐｐｍの量で、ドライドッグフード組成物中に存在しうる。
【０１４２】
ドライペットフード組成物の実施態様では、上記コショウ抽出物は、乾燥物基準で１５ｐｐｍ〜３５ｐｐｍの範囲の量で、好ましくは乾燥物基準で２０ｐｐｍ〜３０ｐｐｍ、さらになお好ましくは乾燥物基準で約３０ｐｐｍの量で、ペットフード組成物中に存在しうる。
【０１４３】
本開示によるドライペットフードの幾つかの実施態様では、ピペリン供給源はコショウ抽出物からなる。
【０１４４】
最も好ましい実施態様では、ピペリンは、乾燥物基準で１４ｐｐｍ〜６０ｐｐｍの範囲の量でドライフード組成物中に存在する。
【０１４５】
さらに別の好ましい実施態様では、本開示によるドライペットフード組成物は、ウコン抽出物が給餌時に約３００ｐｐｍ〜約７００ｐｐｍの範囲の量で上記組成物中に存在する、及び／又はローズマリー抽出物が給餌時に約５０ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍの範囲の量で上記組成物中に存在する、及び／又はコショウ抽出物が給餌時に約１５ｐｐｍ〜約３５ｐｐｍの範囲の量で上記組成物中に存在することを特徴とする。
【０１４６】
さらに他の実施態様では、本開示によるドライペットフード組成物は、ウコン抽出物が乾燥物基準で約３６０ｐｐｍ〜約７８０ｐｐｍの範囲の量で上記組成物中に存在する、及び／又はローズマリー抽出物が約５５ｐｐｍ〜約１３０ｐｐｍの範囲の量で上記組成物中に存在する、及び／又はコショウ抽出物が乾燥物基準で約１５ｐｐｍ〜約３５ｐｐｍの範囲の量で上記組成物中に存在することを特徴とする。
【０１４７】
調理できる一貫した生地を作るために、材料を混ぜ合わせて混練することによって、食品組成物を製造することができる。ドライペットフードを生成するプロセスは、通常、ベーキング及び／又は押し出しによって行われる。生地は通常、加圧蒸気又は熱水を使用して材料を調理する、エキスパンダー及び／又は押出機と呼ばれる機械に供給される。押出機内にある間、生地は極度の圧力及び高温下にある。次に、生地をダイ（特定のサイズと形状の孔）に押し込み、その後、ナイフを使用して切り取る。膨らんだ生地ピースを乾燥機に通してキブルにし、規定された目標まで水分を低下させ、消費までの食品の安定性を確保する。次に、キブルに脂肪、油、ミネラル、ビタミン、天然抽出物のカクテルを噴霧し、任意選択的に密封包装することができる。
【０１４８】
好ましい実施態様では、ドライペットフードはキブルの形態からなる。好ましくは、例えば、限定はしないが、キブルには、粒子；ペレット；ペットフード、脱水肉、肉類似物、野菜などのピース、及びそれらの組合せ；並びに、肉又は野菜のジャーキー、生皮、及びビスケットなどのペットスナックが含まれる。
【０１４９】
ドライペットフード組成物は、好ましくは包装される。このようにして、消費者は、包装から食品の成分を識別し、それが問題の特定のペットに適していることを確認することができる。包装は、金属、プラスチック、紙、又はカードでありうる。
【０１５０】
ウェットペットフード組成物
好ましい実施態様では、本開示による栄養的に完全なウェットフードは、５０％超の含水量、例えば、５０％超〜９０％の範囲の含水量を有する。
【０１５１】
したがって、本開示は、約１０質量％〜約２０質量％の脂肪、約５質量％〜約１５質量％の繊維、及び約３０質量％〜約６０質量％のタンパク質を含むウェットペットフード組成物を包含し、ここで、質量パーセンテージは、組成物の乾燥物の総重量に基づいている。
【０１５２】
本開示は、とりわけ、約１０質量％〜約２０質量％の脂肪、約５質量％〜約１５質量％の繊維、及び約３０質量％〜約５０質量％のタンパク質を含むウェットドッグフード組成物に関し、ここで、質量パーセンテージは、組成物の乾燥物の総重量に基づいている。
【０１５３】
上記ウェットペットフードに含めることができる他の成分又は物質、並びに組成物中のそれらのそれぞれの量は、本開示によるペットフードの一般的な説明において既に以前に記載されている。
【０１５４】
幾つかの実施態様では、上記ウェットペットフード組成物は、ビタミンＣ（ここで、ビタミンＣは乾燥物基準で約２００ｐｐｍ〜約６００ｐｐｍの範囲の量で存在する）、及び／又はビタミンＥ（ここで、ビタミンＥは乾燥物基準で約６００ｐｐｍ〜約２０００ｐｐｍの範囲の量で存在する）、及び／又はカロテノイド（ここで、カロテノイドは乾燥物基準で約３０ｐｐｍ〜約１００ｐｐｍの範囲の量で存在する）を含む、抗酸化剤の供給源を含む。
【０１５５】
幾つかの実施態様では、上記ウェットフード組成物は、クルクミノイド供給源としてウコン抽出物を含む。
【０１５６】
したがって、幾つかの実施態様では、上記ウェットフード組成物は、クルクミノイド供給源を含む。これらの実施態様の幾つかでは、クルクミノイドは、乾燥物基準で約２５０ｐｐｍ〜約２０００ｐｐｍの範囲の量で存在する。
【０１５７】
幾つかの実施態様では、上記ウェットフードは、カルノシン酸及びカルノソールの供給源をさらに含みうる。これらの実施態様の幾つかでは、カルノシン酸の量及びカルノソールは、乾燥物基準で約２０ｐｐｍ〜約９０ｐｐｍの範囲である。
【０１５８】
幾つかの実施態様では、上記ウェットフード組成物はピペリン供給源を含む。これらの実施態様の幾つかでは、ピペリンは、乾燥物基準で約１４ｐｐｍ〜約６０ｐｐｍの範囲の量で存在する。
【０１５９】
好ましい実施態様では、ウェットフードは、チャンク形態、より具体的にはグレービー形態のチャンクからなる。好ましくは、ウェットフードは、チャンク及びグレービー、ゼリー、ローフ、ムース、テリーヌ、バイトの形態のチャンクからなる。
【０１６０】
「チャンク及びグレービー」製品は、肉エマルジョンを作製し、この肉エマルジョンを圧力下でマズル（muzzle）に通し、その後調理することによって調製された、予め形成された肉粒子を含む。調理された肉などの製品は、さいの目に切られてチャンクとなり、最終的にはグレービー又はソースと混合される。次に、２つの成分が、通常は缶又はパウチである容器に充填され、シーム付け又は密封され、滅菌される。グラウンドローフ（ground loaf）とは対照的に、チャンク及びグレービー組成物は、調製時に、物理的に分離された個別のチャンク（すなわち、挽肉と穀物の断片）を有する。これらの個別の粒子は、最終的な容器内のグレイビータイプの液体中に存在する。よそうときに、チャンク及びグレービー製品は缶から流れ出て、他のドライ製品と簡単に混合することができる。チャンク及びグレービー製品は個々の成分のより良好な完全性を可能にするが、チャンク及びグレービー製品の不均一な配合は消費者に好まれないことがある。
【０１６１】
ウェットフード組成物は、概して、缶のような容器に包装され、そこに含まれる水分の理由から、外観が「ウェット」であると見なされる。２種類のウェット組成物が当技術分野で一般に知られている。最初のものは、当技術分野では「グラウンドローフ」として知られている。ローフ製品は通常、加熱下で成分の混合物を接触させて、実質的に均質なセル内ハニカムタイプの塊又は「グラウンドローフ」を生成することによって調製される。次に、グラウンドローフの塊は、缶などの円筒形の容器に充填される。包装の際に、グラウンドローフは容器の形状をとり、愛玩動物に給餌するときにグラウンドローフを切断する必要がある。
【０１６２】
さらなる態様では、本開示は、半固体の湿った動物用食品組成物の調製のためのプロセス記述例を提供する。該プロセスは、水性成分の存在下又は不存在下で、組成物の固体成分を切断、チョッピング、又は粉砕することを含みうる。このような固形成分は、冷凍肉のブロックでありうる。成分はさらに、栄養補助食品などの補足的な成分と混合することができる。通常、混合物は２０〜７０℃の温度に加熱される。一構成では、混合物は約４５℃の温度に加熱される。混合容器は、蒸気注入又は熱交換器、あるいは食品調製の分野では従来型である任意の装置による加熱に適しうる。
【０１６３】
本開示によるプロセスはまた、バッチプロセスで調製することができる。
【０１６４】
プロセスの最後に、この組成物を用いて缶などの容器に充填することができる。容器は密閉され、内容物の滅菌には従来の装置が用いられる。商業的滅菌は通常、用いられる温度及び組成に応じて適切な時間、少なくとも１１８℃の温度に加熱することによって達成される。乾燥した栄養的に完全な食品組成物は、好ましくは包装される。このようにして、消費者は、包装から食品の成分を識別し、それが問題の特定のペットに適していることを確認することができる。包装は、金属、プラスチック、紙、又はカードでありうる。
【０１６５】
セミモイストペットフード組成物
本明細書で用いられる場合、「セミモイスト」ペットフード組成物は、１５％超〜５０％の範囲の含水量を有する。
【０１６６】
したがって、本開示は、約１０質量％〜約２０質量％の脂肪、約５質量％〜約１５質量％の繊維、及び約３０質量％〜約６０質量％のタンパク質を含むセミモイストペットフード組成物を包含し、ここで、質量パーセンテージは、組成物の乾燥物の総重量に基づいている。
【０１６７】
本開示は、とりわけ、約１０質量％〜約２０質量％の脂肪、約５質量％〜約１５質量％の繊維、及び約３０質量％〜約５０質量％のタンパク質を含むセミモイストドッグフード組成物に関し、ここで、質量パーセンテージは、組成物の乾燥物の総重量に基づいている。
【０１６８】
上記ウェットペットフードに含めることができる他の成分又は物質、並びに組成物中のそれらのそれぞれの量は、本開示によるペットフードの一般的な説明において既に以前に記載されている。
【０１６９】
従来認められているように、セミモイストペットフードは、ドライペットフードとウェットペットフードの中間の含水量値を得ることができる、プロセスの最終製品である。幾つかの実施態様では、上記プロセスは、保湿剤を添加するステップを含みうる。幾つかの実施態様では、上記プロセスは、押出ステップと、それに続く過熱蒸気（ＳＨＳ）による処理ステップとを含む。
【０１７０】
非限定的な例として、セミモイストフードは、国際公開第２００９／０１８９９０号、同第２００９／０１８９９６号、同第２０１０／１１２０９７号、同第２０１４／１２２０７２号、同第２０１６／０７１３７２号、及び／又は同第２０１６／０７１３６７号に記載されるプロセス又は方法など、過熱蒸気（ＳＨＳ）プロセスを使用して得ることができる。
【０１７１】
好ましい実施態様では、セミモイストフードは、柔らかいセミモイストキブルからなる。
【０１７２】
食品組成物は、好ましくは包装される。このようにして、消費者は、包装から食品の成分を識別し、それが問題の特定のペットに適していることを確認することができる。包装は、金属、プラスチック、紙、又はカードでありうる。
【０１７３】
ペットフード製品の形態の組成物は、ペットがその食餌で摂取するあらゆる製品を包含することができる。したがって、本開示は、標準的な食品並びにペットフードスナック（例えば、スナックバー、ビスケット、及びスイーツ製品）に及ぶ。食品は、好ましくは調理済み製品である。該製品には、肉又は動物由来の材料（牛肉、鶏肉、七面鳥、子羊、魚、血漿、骨髄骨など、又はそれらの１つ以上）を組み込むことができる。あるいは、製品は、タンパク質源を提供するために、肉を含まなくてよい（好ましくは、大豆、トウモロコシグルテン、又は大豆製品などの肉代替物を含む）。製品は、大豆タンパク質濃縮物、乳タンパク質、グルテンなどの追加のタンパク質源を含みうる。製品はまた、１つ以上の穀物（例えば、小麦、トウモロコシ、米、オート麦、大麦など）などのデンプン源を含むことができ、又はデンプンを含まなくてもよい。製品は、チコリ、サトウダイコンパルプなどの繊維、及び／又はイヌリン、フラクトオリゴ糖、プロバイオティクスなどの成分を含むことができ、最も好ましくは、本開示によるペット食品の組合せ成分は、例えば、National Research Council, 1985, Nutritional Requirements for dogs, National Academy Press, Washington DC or Association of America Feed Control Officials, Official Publication 1996に記載される、対象とする特定の動物に推奨されるすべてのビタミン及びミネラルを提供する（完全でバランスの取れた食品）。
【０１７４】
本開示全体にわたって記載される食品組成物は、特に、がんに罹患し、かつ化学療法を受けているイヌの支援に使用するためのものである。
【０１７５】
「支援する」という表現によって、治療関連の問題の管理、副作用の最小化、良好な栄養状態の維持、及びがんとの闘いの支援、自発的な栄養摂取の適切性、除脂肪体重の維持、健康体重の維持、最適なＢＣＳ、及び栄養失調の防止の確保が一般的に理解される。
【０１７６】
好ましい実施態様では、前記がんは、リンパ腫又は肥満細胞腫（ＭＣＴ）からなる。
【０１７７】
本開示の別の特定の態様は、がんを患っている動物に本開示による食品組成物を投与するステップを含む、がんに罹患したイヌを支援する方法からなる。
【０１７８】
本開示はまた、がんを有しており、かつ化学療法治療を受けた動物に、本開示による食品組成物を投与するステップを含む、がんに罹患したイヌを支援する方法にも関する。
【０１７９】
幾つかの実施態様では、本開示は、化学療法剤及び本明細書に記載される食品組成物の両方の投与を含む、併用抗がん治療に関する。
【０１８０】
より具体的には、本開示は、がんを有するイヌに、治療有効量の化学療法剤及び本開示によるペットフード組成物を投与するステップを含む、がんの治療方法に関する。幾つかの実施態様では、ペットフードはドッグフードである。幾つかの実施態様では、ドッグフードはドライドッグフードである。
【０１８１】
本開示はさらに、本開示によるペットフード組成物と組み合わせて治療有効量の化学療法剤を動物に投与するステップを含む、イヌのがん、好ましくはリンパ腫又は肥満細胞腫を治療するための方法に関する。幾つかの実施態様では、ペットフードはドッグフードである。幾つかの実施態様では、ドッグフードはドライドッグフードである。
【０１８２】
本開示はまた、化学療法剤と本開示によるペットフード組成物とを含む医薬組成物にも関する。幾つかの実施態様では、ペットフードはドッグフードである。幾つかの実施態様では、ドッグフードはドライドッグフードである。
【０１８３】
本開示によれば、「化学療法剤」は、作用機序に関係なく、がんの治療に有用な化学薬剤（例えば、化合物又は薬物）である。化学療法剤には、標的療法及び従来の化学療法に用いられる化合物が含まれる。当業者に知られている任意のこのような化合物又は薬物は、本開示に従って使用することができる。
【０１８４】
本開示による適切な好ましい化学療法剤は、アクチノマイシン、ブレオマイシン、カルボプラチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、シトシンアラビノシド、ドキソルビシン、Ｌ−アスパラギナーゼ、ロムスチン、メルファレン（Melphalen）、メトトレキサート、ミトキサントロン、ピロキシカム、プレドニゾン、ビンブラスチン、ビンクリスチンである。
【０１８５】
「治療有効量」という表現によって、がん及び／又はそれに関連する症状の重症度及び／又は期間を低減及び／又は改善するのに十分な化学療法剤の量を理解する必要がある。
【０１８６】
「併用療法」又は「組合せ」という用語は、本開示に記載されている治療状態又は障害を治療するための治療薬及びドライフード組成物の投与を意味する。このような投与は、実質的に同時の態様で、又は連続的な態様でのこれらの成分の共投与を包含する。
【０１８７】
本開示は、以下の実施例によってさらに説明されが、以下の実施例に限定されない。
【実施例】
【０１８８】
実施例１：化学療法を受けているイヌの生活の質における新しい食餌の影響
目的：
がんは、イヌの最も一般的な死因の１つであり、ペットの飼い主は、ペットを化学療法で治療して、良好な生活の質（ＱＯＬ）を可能な限り延長することをますます選択している。この二重盲検多施設無作為化臨床試験の目的は、増加した食物繊維含有量を含み、オメガ−３脂肪酸の濃度を補充した、新しい高タンパク質、低炭水化物、中程度の脂肪（典型的なドライフードと比較して）の食餌が、８週間の給餌期間内に肥満細胞腫（ＭＣＴ）及び多中心性リンパ腫（ＬＳＡ）の治療のために化学療法を受けているイヌの生活の質（ＱＯＬ）及び胃腸の健康に及ぼす影響を調査することである。
【０１８９】
Ａ．材料及び方法
多中心性ＬＳＡ若しくは高悪性度の転移性又は切除不能なＭＣＴであると新たに診断された４５匹の化学療法を受けていないクライアント所有のイヌを、腫瘍の種類に応じて標準的な化学療法プロトコルに加えて（ＬＳＡの場合はＣＨＯＰプロトコル、ＭＣＴの場合はビンクリスチン及び／又はチロシンキナーゼ阻害剤又はＣＣＮＵ）、対照食又は試験食のいずれかを８週間受けるように無作為化した。対照食には、２５％のタンパク質、１３％の脂肪、８．５％の水分、１．５％の粗繊維が含まれていた。試験食には、３７％のタンパク質、１３％の脂肪、８．５％の水分、３．５％の粗繊維、０．６％のＥＰＡ−ＤＨＡ、抗酸化サプリメント、及び対照食とは異なる繊維ブレンドが含まれていた；両方の食餌は、成犬の維持のためのＡＡＦＣＯ栄養素プロファイルを満たすように処方され、同じエネルギー含有量を有していた。
【０１９０】
【表１】
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【０１９１】
【表２】
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【０１９２】
成分
醸造米、鶏肉副産物ミール、脱皮えん麦、鶏脂、天然香料、チコリ、小麦グルテン、エンドウ豆繊維、炭酸カルシウム、塩化カリウム、塩、塩化コリン、ビタミン類［ＤＬ−アルファトコフェロールアセテート（ビタミンＥの供給源）、ビオチン、Ｄ−パントテン酸カルシウム、ビタミンＡアセテート、ナイアシンサプリメント、ピリドキシン塩酸塩（ビタミンＢ６）、チアミン一硝酸塩（ビタミンＢ１）、ビタミンＢ１２サプリメント、リボフラビンサプリメント、葉酸、ビタミンＤ３サプリメント］、微量ミネラル［亜鉛タンパク質化合物、酸化亜鉛、硫酸第一鉄、マンガンタンパク質化合物、酸化マンガン、硫酸銅、ヨウ素酸カルシウム、亜セレン酸ナトリウム、銅タンパク質化合物］、ローズマリー抽出物（混合トコフェロール及びクエン酸で保存）。
【０１９３】
【表３】
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【０１９４】
成分
鶏肉副産物ミール、脱皮えん麦、醸造米、小麦グルテン、天然香料、エンドウ豆繊維、魚油、鶏脂、チコリ、Ｌ−アルギニン、炭酸カルシウム、塩化カリウム、アルミノケイ酸ナトリウム、サイリウム種子の殻、フラクトオリゴ糖、塩、加水分解酵母、タウリン、Ｎ−酪酸、Ｌ−カルニチン、塩化コリン、ビタミン類［ＤＬ−アルファトコフェロールアセテート（ビタミンＥの供給源）、Ｌ−アスコルビル−２−ポリリン酸塩（ビタミンＣの供給源）、ビオチン、Ｄ−パントテン酸カルシウム、ビタミンＡアセテート、ナイアシンサプリメント、ピリドキシン塩酸塩（ビタミンＢ６）、チアミン一硝酸塩（ビタミンＢ１）、ビタミンＢ１２サプリメント、リボフラビンサプリメント、葉酸、ビタミンＤ３サプリメント］、微量ミネラル［亜鉛タンパク質お化合物、酸化亜鉛、硫酸第一鉄、マンガンタンパク質化合物、酸化マンガン、硫酸銅、ヨウ素酸カルシウム、亜セレン酸ナトリウム、銅タンパク質化合物］、マリーゴールド抽出物（Ｔａｇｅｔｅｓ  ｅｒｅｃｔａ  Ｌ．）、ローズマリー抽出物（混合トコフェロール及びクエン酸で保存）。
【０１９５】
イヌの飼い主は、がんを患うイヌのために設計された以前に公開されたアンケートを使用して、ベースライン及びその後２週間ごとに８週間まで、それぞれ５つのレベルの回答を有する１２の質問を含む生活の質（ＱＯＬ）（Iliopoulou MA, Kitchell BE, Yuzbasiyan-Gurkan V. Development of a survey instrument to assess health-related quality of life in small animal cancer patients treated with chemotherapy. J Am Vet Med Assoc. 2013 Jun 15;242(12):1679-87）、並びに９ポイントの例示された糞便スコアチャート（１：非常に液体の便から５：非常に硬い便までのハーフポイント。４が最適なスコアである）を使用して、毎週、８週間まで平均糞便スコアを評価した。
【０１９６】
体重、ＢＣＳ（１から９までの５ポイントスケールでの体調スコア、２ポイント間隔、スコア５が最適である）、及びＭＣＳ（筋肉状態スコア：正常筋肉量、軽度、中等度、又は重度の筋肉喪失）は、ベースライン時には獣医師が評価し、その後２週間ごとに８週間まで評価し、ＣＢＣ（全血球計算）及び標準的な生化学を同じスケジュールで実行した。
【０１９７】
Ｂ．結果
臨床試験の結果を下記表４に示す。
【０１９８】
【表４】
2021526363.tif 000005
【０１９９】
維持群／対照群の１４匹のイヌ（ＬＳＡ１０匹、ＭＣＴ４匹）及び試験群の２２匹のイヌ（ＬＳＡ１６匹、ＭＣＴ６匹）が８週間の研究を完了した（ｐ＝０．０６１）。
【０２００】
Ｂ．１．食餌の受け入れは良好であった：４５匹のイヌのうち、食餌を摂取しないため、４匹のみ（対照群で３／２１、試験群で１／２４、ｐ＝０．３２５）が研究から除外された。
【０２０１】
各群でドロップオフしたイヌの数に違いはなかったが（ｐ＝０．０６１）、試験群と比較して対照群では研究を離れるイヌの数が多い傾向があった（対照群で７／２１（３３％）、試験群で２／２４（８％））。
【０２０２】
イヌは、研究を通して安定したＣＢＣ及び生化学の値を有していた。
【０２０３】
結果を下記表５に示す。
【０２０４】
【表５】
2021526363.tif 000006
【０２０５】
Ｂ．２．体重及び体調スコアは安定しており、研究全体を通して両方の群で健康基準範囲内であった。
【０２０６】
結果を下記表６及び７に示す。
【０２０７】
【表６】
2021526363.tif 000007
【０２０８】
【表７】
2021526363.tif 000008
【０２０９】
Ｂ．３．糞便スコア
図１に示すように、糞便スコアは安定しており、研究全体を通して両方の群で健康基準範囲内にあった。
【０２１０】
Ｂ．４．生活の質（ＱＯＬ）パラメータ
ベースラインから８週間まで、試験食のイヌでは１０／１２のＱＯＬパラメータが有意に改善したが、対照食を食べたイヌでは１／１２しか改善しなかった。
【０２１１】
試験群で有意な改善を示したＱＯＬパラメータ及びｐ値
・イヌががんに悩まされた程度（ｐ＝０．００３）
・イヌが好きな活動を楽しんだ頻度（ｐ＝０．０２１）
・イヌの睡眠パターンの変化（ｐ＝０．００９）
・イヌの遊戯性（ｐ＝０．０３０）
・イヌが病気の兆候を示した頻度（ｐ＝０．００３）
・イヌが人間との相互作用を楽しんだ程度（ｐ＝０．０３５）
・イヌが幸せそうに見えた頻度（ｐ＝０．０２６）
・イヌが不安又は恐怖を経験した頻度（ｐ＝０．０１８）
・イヌが移動性の問題を経験した頻度（ｐ＝０．０１１）
・イヌの全体的なＱＯＬ（ｐ＝０．０１０）。
【０２１２】
試験食を与えられたイヌはまた、対照食を与えられたイヌと比較して、病気の兆候において有意な改善を示した（ｐ＜０．００９）。
【０２１３】
化学療法の２、４、６、及び８週目のがん診断における各食餌群の全体的なＱＯＬスコアは、治療を受けたイヌの生活の質のスコアを開示する図２に示されている。
【０２１４】
全体として、実施例１の結果は、試験食が十分に許容され、試験食を与えられたイヌが、８週間の化学療法及び食餌の摂取後に、改善された生活の質を示したことを示している。
【０２１５】
実施例２：複数の植物抽出物の抗増殖活性
Ａ．材料及び方法
Ａ．１．天然抽出物は製造業者から直接入手し、製造業者の純度分析に基づいて対象の各化合物の含有量を二次研究所で検証した。抽出物を１００％ＤＭＳＯに２０ｍｇ／ｍＬで溶解し、すべての実験の前にストック溶液を得た。
【０２１６】
【表８】
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【０２１７】
Ａ．２．使用した化学療法剤は、リン酸トセラニブ（Ｐａｌｌａｄｉａ（商標）、Ｚｏｅｔｉｓ  Ａｎｉｍａｌ  Ｈｅａｌｔｈ社）及び塩酸ドキソルビシン（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ社）であった。ドキソルビシン（陽性対照）を２００μｍで調製した（増殖アッセイ用のストック溶液）。
【０２１８】
Ａ．３．異なる腫瘍型を代表するさまざまなイヌ腫瘍性初代細胞株を使用した。細胞株は、１０％の熱不活化ウシ胎児血清及び１％の抗生物質−抗真菌剤を含む適切な培地を用いて組織培養処理プレート上で増殖させた。すべての実験及び細胞の継代について、それらを３７℃及び５％ＣＯ２で増殖させた。
【０２１９】
【表９】
2021526363.tif 000010
【０２２０】
さらに、イヌの初代皮膚線維芽細胞（ＣＤＦ）を使用して、正常細胞における影響を調査し、１０％ＨＩ−ＦＢＳ及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含むＰｒｉｇｒｏｗ  ＩＩ培地で増殖及び維持した。
【０２２１】
Ａ．４．細胞増殖を分析するためのさまざまなインビトロアッセイ
Ａ．４．１．ＡＴＰｌｉｔｅ（商標）増殖アッセイ
さまざまながん細胞株を、平底微量滴定９６ウェルプレート内の９０μＬの適切な培地／ウェルに、ウェルあたりの最適な細胞数で播種した。プレートを３７℃で２４時間インキュベートした後、薬物を含まない培地で処理した。最初の希釈プロセスの後、１０μｌの試験物質（単一）を、播種の２４時間後に細胞を含むプレートに加えた。腫瘍細胞株を、５％ＣＯ２下、３７℃で７２時間、１：２の希釈ステップでの９種類の濃度の各天然抽出物とともにインキュベートした。最高用量は、各植物抽出物で１００μｇ／ｍｌ、ドキソルビシンで１μＭであった。各濃度について３連で試験した。各試験物質の希釈並びに細胞を含むプレートへの分配は手動で行った。各植物抽出物について、少なくとも２つの独立した実験を実施した。対照細胞は、ビヒクルのみで処理した。
【０２２２】
５種類の植物抽出物（緑茶の葉、ザクロＰＯＥ４０、ローズマリーの葉ＩＮＯＬＥＮＳ７０、ウコンの根、及びベトペリン（vetperine））を適切な濃度でＤＭＳＯに溶解させた。２つの選択したがん細胞株（ＨＭＰＯＳ及びＣ２）を、平底微量滴定９６ウェルプレート内の８０μＬの適切な培地／ウェルに、ウェルあたりの最適な細胞数で播種した。プレートを３７℃で２４時間インキュベートした後、薬物を含まない培地で処理した。最初の希釈プロセスの後、細胞を含むプレートに各試験物質１０μｌを加えた。腫瘍細胞株を、５％ＣＯ２下、３７℃で７２時間、５種類の濃度の各試験物質を単独で又は組み合わせてインキュベートした。各条件を４連で実行した。各試験物質の希釈並びに細胞を含むプレートへの分配は手動で行った。２つの独立した実験を行った。対照細胞は、ビヒクルのみで処理した（１％ＤＭＳＯ）。
【０２２３】
処理の終わりに、試験物質の細胞毒性活性をＡＴＰ−Ｌｉｔｅアッセイで評価した（参照番号６０１６９４９、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ社、バッチ６９−１２１７２）。このアッセイは、代謝活性のマーカーであるＡＴＰの細胞内レベルを測定するものである。このＡＴＰレベルは、ＡＴＰ依存性反応を介してホタルルシフェラーゼが放出する発光によって定量化される。細胞処理の終わりに、５０μｌの哺乳動物細胞溶解溶液をウェルあたり１００μｌの細胞懸濁液に添加した。プレートを７００ｒｐｍのオービタルシェーカーで５分間振とうした。この溶液は細胞を溶解し、ＡＴＰを安定化させる。次に、５０μｌの基質溶液をウェルに加え、プレートを７００ｒｐｍのオービタルシェーカーで５分間振とうした。その後、プレートを暗所に１０分間放置し、発光をＬＶ（発光値）として測定した。
【０２２４】
Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙ  ＣＩは、適切なアルゴリズムを使用して計算された併用係数に対応する。各抽出物（１．６、３．１、６．３、１２．５、及び２５μｇ／ｍｌのローズマリー、０．８、１．６、３．１、６．２、又は１２．５μｇ／ｍｌのコショウ又はウコン抽出物）の６つの異なる用量の組合せＣＩ値≦０．９は相乗効果を示し、ＣＩ値＞０．９及び＜１．１は相加効果を示し、ＣＩ値≧１．１は拮抗作用を示す。
【０２２５】
Ａ．４．２．ＭＴＴ増殖アッセイ
細胞を９６ウェル組織培養処理した平底プレートにウェルあたり４×１０３の細胞密度で播種し、完全培地で一晩インキュベートした。翌日、細胞を、ＤＭＳＯ対照又は抽出物で、４８時間、０．４〜１００μｇ／ｍＬの範囲の８つの最終濃度について２倍段階希釈を使用して処理し、すべての抽出物を細胞増殖の低減における潜在的な有効性について評価した。細胞増殖を定量化するために、３０μＬのＭＴＴ色素（リン酸緩衝生理食塩水中、５ｍｇ／ｍＬ）を各ウェルに添加し、３７℃で１時間インキュベートすることにより、ＭＴＴ色素アッセイを実施した。次に培地を吸引し、細胞を２００μＬのイソプロパノールに溶解した。各ウェルの光学密度を、分光光度プレートリーダー（Ｅｐｏｃｈ；米国バーモント州ウィヌースキー所在のＢｉｏｔｅｋ社製）で５７０ｎｍの波長で分析した。
【０２２６】
抽出物間の相乗効果は、２種類の抽出物の６つの濃度（０．８、１．７、３．１、６．３、１２．５、又は２５μｇ／ｍＬ）の組合せを使用して調査した。各処理の対照のパーセント増殖細胞は、すべての実験からプールされ、平均±平均の標準誤差として報告される。
【０２２７】
増殖アッセイからの生データ（各ウェルの光学密度）を、１００％の増殖細胞（単一又は併用療法）を表すと見なされる、個々のアッセイのビヒクル単独療法に対して正規化した。次に、％増殖細胞を各複製にわたって平均化した。次に、各抽出物のＩＣ５０を、プロビット分析によって実験全体わたって計算した。化合物の相互作用は、ＣａｌｃｕＳｙｎソフトウェア（ｖ．２．１１；Ｂｉｏｓｏｆｔ社、英国（ＧＢ）ケンブリッジ所在）を使用して、複数の薬物効果分析によって計算した。
【０２２８】
Ａ．４．３．細胞生存率のトリパンブルー排除アッセイ
これらの正常なイヌ細胞は増殖速度が遅く、代謝活性が低いことから、ＣＤＦでアッセイを行い、生産的ＭＴＴアッセイを排除した。抽出物処理の効果を、Ｃ２、ＣＭＴ−１２、及びＤ１７細胞株で得られた結果と比較した。すべての細胞株について、細胞をウェルあたり５×１０３細胞の密度で播種し、６０％コンフルエントになるまでインキュベートした後、ＤＭＳＯビヒクル対照、６．３μｇ／ｍＬのＴＥ、６．３μｇ／ｍＬのＲＥ、又はＴＥとＲＥのそれぞれ３．１μｇ／ｍＬの組合せで処理した。４８時間の処理後、細胞を回収し、遠心分離した。Ｃ２細胞株を除いて、細胞を０．０５％トリプシン／ＥＤＴＡで剥離した。細胞ペレットをＰＢＳ溶液及び１％ＦＢＳ中の０．１％トリパンブルーに再懸濁し、血球計算盤にロードし、倒立顕微鏡で視覚化した。青く染色された細胞は生存不能と見なした。すべての値を、１００％の生細胞を表すと見なしたビヒクル対照処理に対して標準化した。
【０２２９】
Ａ．５．コロニー形成のための軟寒天増殖アッセイ
このアッセイは、細胞形質転換の顕著な特徴の１つであり、細胞の悪性形質転換を検出するための最も正確かつ厳格なインビトロのアッセイであると考えられている。このクローン原性アッセイは、コロニーを手動でカウントすることによって、約３週間後の半固形培地での増殖を測定するものである。Ｄ１７細胞を１００ｍｍの細胞培養皿で培養した。最初に滅菌リン酸緩衝生理食塩水に３％で可溶化し、完全ＲＰＭＩ培地で０．６％に再構成した、０．６％寒天タイプＶＩＩを含む６ウェル培養皿を設定した。０．５ｍｌの軟寒天をベース層として６ウェル皿に置いた後、各細胞株を、３８°Ｆ（約３．３３℃）の完全ＲＰＭＩ中の０．６％軟寒天に１ｍｌあたり１０，０００細胞で懸濁し、６ウェル皿に播種する直前に、対応する懸濁液に処理を適用する。抽出物の用量は、以前の実験で使用したＭＴＴアッセイの用量に基づいて選択した。通常、軟寒天中の細胞は、ＭＴＴアッセイで通常見られるよりも低い用量に反応する。したがって、ＭＴＴの下端の用量を選択した（０．４〜０．８μｇ／ｍｌ）。
【０２３０】
０．５ｍｌの細胞及び処理物を同日に３連で播種し、細胞培養フード内で、室温で３０〜６０分間固化させ、３７°Ｆ（約２．７８℃）のインキュベータに入れた。細胞には、完全ＲＰＭＩ及び０．６％の適切な処理を３日ごとに補充した。コロニー数は、盲検化された観察者が、顕微鏡下で増殖の１６日目にカウントした。すべてのデータは、１００％のＤＭＳＯ対照に基づくコロニー数のパーセントで表される。
【０２３１】
Ａ．６．アポトーシス関連カスパーゼ３／７活性化アッセイ
細胞を９６ウェル組織培養処理したプレートに４×１０３細胞／ウェルの密度で播種し、完全培地で一晩インキュベートした。翌日、細胞を、ＤＭＳＯビヒクル対照、６．３μｇ／ｍＬ抽出物単独、又は３．１μｇ／ｍＬの各抽出物の組合せで３６時間処理した。５０％阻害濃度（ＩＣ５０）の化学療法薬を陽性対照として使用した；１２．５ｎＭのリン酸トセラニブ（「Ｐａｌｌａｄｉａ」）をＣ２細胞株に使用し、０．３又は０．５μＭのドキソルビシン塩酸塩をＣＭＴ−１２及びＤ１７細胞株にそれぞれ使用した。バックグラウンドの蛍光及び発光を、処理を含むが細胞を含まないウェルで測定した。カスパーゼ３／７の活性化は、製造業者の指示に従ってＡｐｏＬｉｖｅ−Ｇｌｏ（商標）Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ社、米国ウィスコンシン州マディソン所在）を使用して定量化した。簡単に説明すると、３６時間の処理後、生存率検出試薬をウェルに添加し、３７℃で３０分間インキュベートし、４００Ｅｘ／５０５Ｅｍで蛍光を測定した。次に、カスパーゼ−Ｇｌｏ３／７試薬をすべてのウェルに添加し、室温で３０分間インキュベートし、発光を測定した。ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｍ３マイクロプレートリーダを使用して、蛍光及び発光を測定した。
【０２３２】
Ａ．７．フローサイトメトリー
細胞を６０ｍｍの組織培養処理プレート（ＬＰＳ）に播種し、６０％コンフルエントになるまで完全培地でインキュベートした。次に、細胞を、培地、ＤＭＳＯビヒクル対照、抽出物単独、又は抽出物の組合せを用いて処理した。細胞を１２時間（ＲＯＳ生成）、２４時間（クルクミン蓄積）、又は４８時間（アポトーシス／壊死）処理した。すべてのフローサイトメトリー分析は、ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒで行った。すべてのフローサイトメトリー実験で、サンプルごとに１０，０００の事象を収集し、前方散乱／側方散乱プロットに基づいてゲートした。各処理からの幾何平均蛍光（ＧＭＦ）をＤＭＳＯ処理サンプルと比較し、細胞株間の蛍光強度の違いによるＧＭＦを使用したすべての実験の倍率変化として表した。
【０２３３】
Ａ．８．アポトーシス及び壊死アッセイ
アネキシンＶ及び７−ＡＡＤ染色を使用して４８時間の処理後にアポトーシス及び壊死を測定した。簡単に説明すると、細胞をＡｃｃｕｍａｘ剥離液（Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）を用いて剥離し、収集して、５００ｒｃｆ、４℃で１０分間遠心分離した。細胞ペレットをＰＢＳで１回洗浄した後、アネキシン結合バッファ（ＡＢＢ；１０  ｍＭのＨＥＰＥＳ、１４０ｍＭのＮａＣｌ、２．５ｍＭのＣａＣｌ２、ｐＨ７．４）に１×１０６細胞／ｍＬの密度で再懸濁した。アネキシンＶ４８８コンジュゲート及び７−アミノアクチノマイシンＤ（７−ＡＡＤ）を細胞懸濁液に加え、室温で１５分間インキュベートした。次に、ＡＢＢを細胞懸濁液に添加し、蛍光分析まで氷上に保持した。アネキシンＶ陽性のみとラベル付けした事象は、アポトーシス細胞を表すと見なした；アネキシンＶ陽性及び７−ＡＡＤ陽性とラベル付けした事象は、壊死細胞を表すと見なした。
【０２３４】
Ａ．９．細胞内活性酸素種（ＲＯＳ）分析
ウコン抽出物とローズマリー抽出物の主成分（それぞれクルクミンとカルノシン酸）が抗酸化剤として関係していることから、ジヒドロローダミン１２３（ＤＨＲ１２３；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）アッセイを使用して、各抽出物で１２時間処理した後に存在するＲＯＳの量を決定した。簡単に説明すると、Ａｃｃｕｍａｘ剥離液を使用して細胞を剥離し、収集して、５００ｒｃｆ、４℃で１０分間遠心分離した。ペレットをＰＢＳで１回洗浄した後、１ｍｌの染色液（ＤＭＥＭ中３０μＭのＤＨＲ１２３）に再懸濁した。次に、細胞懸濁液を３７℃で３０分間インキュベートし、ペレット化し、１ｍＬのＤＭＥＭに再懸濁し、細胞の蛍光分析の前に濾過した。
【０２３５】
Ａ．１０．クルクミンの細胞蓄積
この化合物の自己蛍光特性を利用して、クルクミンの細胞蓄積を測定した。２４時間の処理後、細胞をＡｃｃｕｍａｘ剥離液で剥離し、収集し、５００ｒｃｆ、４℃で１０分間遠心分離した。細胞ペレットをＰＢＳで１回洗浄した後、ＤＭＥＭに再懸濁し、ろ過し、４８８ｎｍの波長で励起して蛍光分析した後、５３０／３０フィルタを使用して発光を測定した。
Ａ．１１．ウエスタンブロッティング（シグナル伝達経路）
細胞を１００ｍｍの組織培養処理プレート（ＬＰＳ）に播種し、６０％のコンフルエンシーに達するまで完全培地で一晩インキュベートした。翌日、細胞を、ＤＭＳＯビヒクル対照、６．３μｇ／ｍＬ抽出物単独、又は３．１μｇ／ｍＬの各抽出物の組合せで処理した。細胞を回収し、Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｌｙｓｉｓ  Ｂｕｆｆｅｒ（ＭＬＢ；２５ｍＭのＴｒｉｓ、１００ｍＭのＮａＣＬ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、０．００４％のＮａＦ、１ｍＭのＮａＶＯ４、２５ｍＭのグリセロリン酸、１００μｇ／ｍｌのフッ化フェニルメチルスルホニル、及び各１μｇ／ｍｌのアプロチニン及びロイペプチン、ｐＨ７．４）並びに超音波処理を使用した処理の１２時間後及び２４時間後に溶解し、次に、１４，０００ｒｃｆ、４℃で５分間遠心分離した。上清を収集し、ブラッドフォードアッセイ（クマシー染色）を使用してタンパク質濃度を決定した。サンプルは、ＭＬＢ及び５×レムリーローディングバッファで共通体積（μｇ／μ）に平衡化した。目的の各タンパク質について、３０μｇの総タンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥに供した。次に、タンパク質を孔径０．４５μｍのポリフッ化ビニリデン膜に３３３ｍＡで１時間転写し、ＴＢＳＴ溶液中５％ミルクでブロックした。膜を、ＴＢＳＴ中、１：１０００に希釈した一次抗体溶液で、４℃のロッキングプラットフォーム上で一晩インキュベートした。一次抗体には、ウサギストレス活性化プロテインキナーゼ／ｊｕｎ−アミノ末端キナーゼ（ＳＡＰＫ／ＪＮＫ）、及びＴｈｒ１８３／Ｔｙｒ１８５リン酸化ＳＡＰＫ／ＪＮＫ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社）が含まれていた。膜をＴＢＳＴで３回洗浄し、１：２０００の希釈率の抗ウサギＩｇＧ西洋ワサビペルオキシダーゼ結合抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社）中、室温で１時間インキュベートした。膜をＴＢＳＴで３回洗浄し、化学発光試薬（Ｂｉｏ−Ｒａｄ社）で可視化した。撮像システム（Ｂｉｏｓｐｅｃｔｒｕｍ４１０）を使用してデジタル画像をキャプチャした。画像を収集した後、膜をＴＢＳＴで３回洗浄し、ＴＢＳＴで１：１０，０００に希釈したハウスキーピング抗体β−アクチン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社）を用いて、室温で１時間インキュベートした。膜を洗浄し、１：２０００の希釈率でマウス二次抗体とインキュベートした。
【０２３６】
Ｂ．結果
Ｂ．１．イヌがん細胞株における単一抽出物処理の抗増殖活性
「ＡＴＰｌｉｔｅ」アッセイで決定した抗増殖活性：ＩＣ５０値
ザクロ４０％（図３Ａ）、緑茶（図３Ｂ）、ベトペリン（図３Ｃ）、ローズマリーの葉（図３Ｄ）、ウコンの根（図３Ｅ）、ザクロ４０％プニコシド（図３Ｆ）からの抽出物についてのさまざまな植物抽出物の抗増殖活性の結果を図１Ａ〜１Ｆに示す。
【０２３７】
ドキソルビシン（陽性対照）：すべての細胞株はドキソルビシンに対して感受性があり、ＩＣ５０値はＨＭＰＯＳの１１ｎＭからＣＦ４１．Ｍｇ細胞株の３７５±３６１ｎＭの範囲であった。注目すべきことに、ＣＬＢＬ−１及びＢＡＣＡ細胞株は培養が非常に困難な細胞株であり、異なる植物抽出物から得られたこれらの細胞株に関する結果は慎重に検討する必要がある。
【０２３８】
抗増殖活性もまた、ＭＴＴアッセイに従ってアッセイした。結果を下記表１０に示す。
【０２３９】
【表１０】
2021526363.tif 000011
【０２４０】
Ｂ．２．イヌがん細胞株に対する二重抽出物併用療法の抗増殖活性
相乗効果は、「ＡＴＰｌｉｔｅ」アッセイによって決定した２種類のがん細胞株（Ｃ２及びＨＭＰＯＳ）から生じる
次の化合物を最適な指示濃度範囲で用いて、最高の相乗効果の組合せが観察された：
−ローズマリー（０．８〜６．３μｇ／ｍｌ）＋ザクロ（１．２〜３３μｇ／ｍｌ）
−ローズマリー（０．８〜３．１μｇ／ｍｌ）＋ウコンの根（０．８〜３．１μｇ／ｍｌ）
−ザクロ（３．７〜１１μｇ／ｍｌ）＋ウコンの根（１．６〜６．２μｇ／ｍｌ）。
【０２４１】
各組合せアッセイについて、化合物の相乗効果を、濃度混合の検証された条件の数に対する相乗的併用係数の数（ＣＩ＜０．９）として評価した。濃度混合の条件は、結合されたＦａが０．０５から０．９５の範囲内にあるときに、Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙの計算で検証した。濃度混合の検証済み条件の少なくとも５０％がＣＩ＜０．９を示した場合に、２つの抽出物の組合せが相乗的であると見なした。２つの細胞株すべてについて、加法モデルの方法で計算した相乗効果の７０％は、Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙモデルで計算したものと共通している。結果のこの類似性は、相乗的な組合せのほとんどが２つの独立した計算方法によって検証されることを示している。
【０２４２】
結果を下記表１１に提示する。
【０２４３】
Ｂ．３．相乗効果は、ＭＴＴアッセイによって決定された３種類のがん細胞株（Ｃ２、ＣＭＴ−１２、及びＤ１７）から生じる
ウコン抽出物とローズマリー抽出物の組合せは、３つの細胞株すべてでＩＣ５０に到達するために必要とされる各抽出物の濃度の最も有意な減少をもたらし、相乗的な組合せが示唆される。結果を下記表１２、１３及び１４に提示する。
【０２４４】
【表１１】
2021526363.tif 000012
【０２４５】
Ｃ２がん細胞株における抗増殖活性は図４Ａにも示されている。
【０２４６】
【表１２】
2021526363.tif 000013
【０２４７】
Ｃ２がん細胞株における抗増殖活性は図４Ｂにも示されている。
【０２４８】
【表１３】
2021526363.tif 000014
【０２４９】
Ｄ１７がん細胞株における抗増殖活性は図４Ｃにも示されている。
【０２５０】
ＣＩ値は、ローズマリーＩＮＯＬＥＮＳ７０抽出物及びウコンの根抽出物を０．８〜２５μｇ／ｍＬの範囲の用量で組み合わせて使用した場合の（Ａ）Ｃ２、（Ｂ）ＣＭＴ−１２、及び（Ｃ）Ｄ１７細胞株についてＭＴＴアッセイによって決定した。０．８未満の値は相乗効果を示し、０．８〜１．２は相加効果を示し、１．２を超える値は拮抗作用を示す。ＮＰ＝計算実行不能。
【０２５１】
＋（ＴＥ単独）、＃（ＲＥ単独）、及び＾（２つの抽出物の組合せ）で示した、ＤＭＳＯ対照と比較して％増殖の有意な（ｐ＜０．０５）減少を誘発した最低用量。
【０２５２】
Ｂ．４．抽出物の異なる調達からの抗増殖活性
我々は、ウコン抽出物（Ｎａｔｕｒｅｘ又はＡｒｊｕｎａ）又はローズマリー抽出物（「Ｉｎｏｌｅｎｓ７０」、「ＩＮＯＬＥＮＳ５０」）の２つの異なる調達を使用して、同様の抽出物の同様の抗増殖活性も得た。単一処理又は２種類の組合せを３つの腫瘍細胞株（Ｃ２、Ｄ１７、ＣＭＴ１２）で試験し、細胞毒性（ＩＣ５０）は、ＭＴＴアッセイで決定した。結果を下記表１５、並びに図５Ａ、５Ｂ、及び５Ｃに提示する。
【０２５３】
【表１４】
2021526363.tif 000015
【０２５４】
Ｂ．５．軟寒天コロニー形成アッセイで試験したウコン抽出物の抗増殖活性
軟寒天に最も大きい影響を与えるウコン抽出物（クルクミノイド）は、対照の２７％においてコロニーがほとんど形成されていない。ローズマリー及びコショウ抽出物は、それぞれ、７５％及び６５％のコロニー形成しかなく、穏やかな効果を示している。クルクミン及びローズマリーの二重処理では、０．４μｇ／ｍｌのクルクミン及び０．８μｇ／ｍｌのローズマリーでわずか２１％の形成しか示さなかった。６．２５μｇ／ｍｌのコショウ抽出物の添加は、カクテル混合物では１２％への控えめな減少を示した。
【０２５５】
結果を図６に示す。
【０２５６】
３連の平均で、細胞は、カウントする前に１６日間、３日ごとに処理した。ＤＭＳＯビヒクル対照による％平均コロニー形成が報告されている。ＤＭＳＯ対照と比較して、＊はｐ＜０．０５を示しており、＊＊はｐ＜０．０１を示している。
【０２５７】
Ｂ．６．がん細胞株の増殖阻害における天然抽出物と化学療法の相互作用
抽出物と、肥満細胞疾患（Ｃ２細胞株）に対するパラディア／トセラニブ（チロシンキナーゼ阻害剤）、乳腺癌及び骨肉腫に対するドキソルビシン（アントラサイクリン系抗生物質）を含む、一般的に用いられる化学療法との相互作用を調べることを目的とした。
【０２５８】
ウコン及びローズマリー抽出物（０．８〜１．７μｇ／ｍｌ）は両方とも、相加効果に対して軽度の拮抗作用を誘発するが、３．１μｇ／ｍｌの両方の抽出物では、リン酸トセラニブ（肥満細胞腫細胞株）の存在下で決定的な相加効果があった。いずれかの抽出物を６．３μｇ／ｍｌで添加すると、決定的な相乗効果があった。
【０２５９】
結果を下記表１６〜２４に提示する。
【０２６０】
【表１５】
2021526363.tif 000016
【０２６１】
【表１６】
2021526363.tif 000017
【０２６２】
【表１７】
2021526363.tif 000018
【０２６３】
【表１８】
2021526363.tif 000019
【０２６４】
【表１９】
2021526363.tif 000020
【０２６５】
【表２０】
2021526363.tif 000021
【０２６６】
【表２１】
2021526363.tif 000022
【０２６７】
【表２２】
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【０２６８】
【表２３】
2021526363.tif 000024
【０２６９】
Ｂ．７．正常細胞に影響を与えることのない、がん細胞株に対する抽出物の細胞毒性活性
６．３μｇ／ｍＬの個々の抽出物、又は３．１μｇ／ｍＬのＴＥと３．１μｇ／ｍＬのＲＥとの組合せは、対照一次細胞の細胞生存率の有意な低下を誘発しなかった。
【０２７０】
結果を図７に提示する。
【０２７１】
トリパンブルー排除アッセイによって決定される％生細胞は、ＤＭＳＯビヒクル処理と比較した平均±ＳＥＭとして表される。各細胞株内では、同じ文字を共有しない平均は有意に異なる（ｐ＜０．０５）。ＮＳ＝有意ではない。
【０２７２】
Ｂ．８．ＴＥ及びＲＥが個別に及び組み合わせて抗増殖効果及び細胞毒性効果を発揮する機序
細胞アポトーシスは、ウコン及びローズマリー抽出物の処理によって誘発される
ＴＥ＋ＲＥの併用療法は、ＴＥ単独の効果を超えて、すべての細胞株においてカスパーゼ３／７の活性化及びアポトーシスをもたらした。
【０２７３】
結果を図８Ａ〜８Ｅに示す。
【０２７４】
図６は、（図８Ａ）ＤＭＳＯ、（図８Ｂ）６．３μｇ／ｍＬのＴＥ、（図８Ｃ）６．３μｇ／ｍＬのＲＥ、又は（図８Ｄ）３．１μｇ／ｍＬのＴＥ＋３．１μｇ／ｍＬのＲＥで処理されたＣＭＴ−１２細胞株の代表的な象限プロットを示している。各象限は、生細胞（左下）、初期アポトーシス（右下）、又は後期アポトーシス／壊死（右上）と見なされる事象の数を表している。（図６Ｅ）パーセント初期アポトーシス細胞（アネキシンＶ陽性及び７−ＡＡＤ陰性細胞の右下象限）は、平均±３つの独立した複製からの標準偏差として表されている。各細胞株内において、文字が異なる平均は、互いに有意に異なっている（ｐ＜０．０５）。
【０２７５】
アポトーシス効果はまた、生細胞あたりのカスパーゼ３／７レベルの変化を定量化することによっても評価されている。
【０２７６】
結果を図９に示す。
【０２７７】
図７では、生細胞あたりの活性化されたカスパーゼ３／７を、ＤＭＳＯ対照値からの平均倍率変化±３つの独立した複製からの標準偏差として表した。各細胞株内において、文字が異なる値は、互いに有意に異なっている（Ｃ２ではｐ＜０．００１；ＣＭＴ−１２ではｐ＜０．００５；Ｄ１７ではｐ＜０．０５）。
【０２７８】
Ｂ．９．がん細胞株におけるＴＥ及びＲＥの抗酸化活性
両方の抽出物は抗酸化作用を有しており、ＲＥは活性酸素種（ＲＯＳ）を４０〜５０％削減し、ＴＥはＲＯＳを８０〜９０％削減した。
【０２７９】
結果を図１０に示す。
【０２８０】
図８では、値は平均±４つの独立した複製の標準偏差として表されている。報告された値は、ＤＭＳＯビヒクル対照と比較した倍率変化として表されている。各細胞株内において、文字が異なる平均は、互いに有意に異なっている（Ｃ２ではｐ＜０．０５；ＣＭＴ−１２及びＤ１７ではｐ＜０．０００１）。
【０２８１】
Ｂ．１０．ＴＥ及びＲＥはＳＡＰＫ／ＪＮＫ細胞経路の活性化を促進する
ＲＥ処理は、Ｃ２細胞株のｃ−ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ（ＪＮＫ）活性を増強し、ＴＥ＋ＲＥ曝露は、ＣＭＴ−１２細胞株において活性化ＪＮＫを４〜５倍増加させた。
【０２８２】
結果を図１１Ａ（Ｃ２細胞株）及び１１Ｂ（ＣＭＴ−１２細胞株）に示す。
【０２８３】
図１１Ａ及び１１Ｂでは、各ブロットは、３つの独立した実験の代表である。デンシトメトリー値は、総タンパク質に対するリン酸化タンパク質の比率を表しており、同じ時点のＤＭＳＯビヒクル対照に対して正規化されている（３つの別々の実験の平均）。ＤＭＳＯ対照と比較したデンシトメトリーの変化（ｐ＜０．０５の有意性が＊で表されている）。β−アクチンをすべてのブロットのローディング対照として使用し、サンプルのローディングの均一化を確実にした。
【０２８４】
Ｂ．１０．ＲＥ処理によって誘発されるクルクミンの細胞蓄積の増加
ＴＥは、ＲＥ処理により、クルクミンの細胞蓄積がＣ２及びＤ１７細胞株で約３０％、ＣＭＴ−１２細胞株で４．８倍に有意に増加することを示した。この増加したクルクミン細胞内レベルは、ＴＥとＲＥとを組み合わせて使用したときに示される相乗効果における役割を果たすことができる。
【０２８５】
結果を図１２Ａ、１２Ｂ、及び１２Ｃに示す。
【０２８６】
Ｃ２（図１２Ａ）、ＣＭＴ−１２（図１２Ｂ）、及びＤ１７（図１２Ｃ）細胞株を示された濃度の抽出物で２４時間処理した後、クルクミンの細胞蓄積をフローサイトメトリーで定量した。Ｙ軸の値は、ＤＭＳＯ対照と比較したすべての細胞の幾何平均蛍光（ＧＭＦ）の倍率変化を表している。報告されたデータは、４つの独立した複製の平均±標準偏差として表されている。各細胞株内において、文字が異なる平均は、互いに有意に異なっている（ｐ＜０．０００１）。
【０２８７】
実施例３：最終組成物を用いたインビボの実施例
この前向き多施設臨床試験の目的は、特別に処方された実験食が化学療法の有効性を改善し、その副作用を軽減し、かつ化学療法プロトコルを受けているイヌの生活の質（ＱｏＬ）を維持できるかどうかを判断することである。この新しい食餌の臨床的有効性は、がんの診断後１年間にわたって評価される。その主な目的は、良好な栄養状態を維持する「治療への支援」を通じて、イヌががんと闘うのを助けることである。この研究は、二重盲検無作為化プラセボ対照試験として設計される。主な転帰は、世界的な健康状態／ＱｏＬスコア、ＧＩの有害事象、及び体重の維持である。二次有効性パラメータは、他のＱｏＬスコア（機能及び症状の尺度）、糞便スコア（ＧＩ−ＡＥに関連するパラメータ）、生存期間中央値、１年生存率、治療反応率、血液学的有害事象（Ｈ−ＡＥ）、飼い主による食餌の評価である。
【０２８８】
研究デザイン：
●比較：化学療法プロトコル中及び化学療法プロトコル後のがんを患うイヌのための２つのカスタム処方された栄養的に完全でバランスの取れた乾燥食を比較する。
【０２８９】
●無作為化：動物は、対照群又は試験群のいずれかに無作為に割り当てられる前に、研究サイトによって層別化される（事前に決定した無作為化計画を利用する）
○がん診断後（治療中及び治療後）に１年間給餌したイヌ（クライアント所有）の２つの群：
■Ａ群（ｎ＝３０）＝試験食
成分：脱水家禽タンパク質、殻付きオート麦、米、小麦グルテン、植物性繊維、加水分解家禽タンパク質、家禽脂肪、魚油、チコリパルプ、脂肪酸塩、サイリウムの殻と種子、マリーゴールド抽出物、天然抽出物の排他的カクテル、ミネラル、ビタミン、抗酸化剤、及び防腐剤。保証分析：水分（最高）９．５％；タンパク質（最低）３６．５％、粗脂肪（最低）：１３％；粗繊維（最高）４．８％、アッシュ（平均）７．２％
■Ｂ群（ｎ＝３０）＝対照食
成分：殻付きオート麦、米、脱水家禽タンパク質、家禽脂肪、小麦グルテン、植物性繊維、加水分解家禽タンパク質、ビートパルプミネラル、ビタミン、抗酸化剤、及び防腐剤。保証分析：水分（最高）９．５％；タンパク質（最低）２５％、粗脂肪（最低）：１３％；粗繊維（最高）４．８％、アッシュ（平均）６．８％。
【０２９０】
研究対象母集団
包含基準
■≧１歳；体重≧３ｋｇ
■新たに、ステージＩＩＩ、ＩＶ、又はＶのリンパ節びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ、中心芽細胞又は免疫芽細胞）と診断されたイヌ（骨髄又は末梢血の関与に限定される場合）
■すべての動物は現在のがんに対する治療を受けていない必要があるが、１年以上前であれば、過去に他のがんの治療を受けたことがあってもよい
■飼い主は標準的な多剤化学療法で治療することに前向きである：２５週間のシクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾロンを含むＣＨＯＰプロトコル。
【０２９１】
治療スケジュールは下記表２５にさらに開示されている。
【０２９２】
■ペットの飼い主は、すべてのハーブ及びビタミンのサプリメントを中止することに前向きである。イヌが栄養補助食品を摂取している場合は、登録の時点で停止しても、研究の対象となる
■ペットの飼い主は、処方された食餌を与え、おやつをカロリーの５％に制限し（具体的なおやつの推奨事項を提供する）、毎月のＱＯＬを維持し、かつ、糞便スコア、詳細な食餌日誌（１週間の摂取食餌量）を記録することに前向きである。
【０２９３】
除外基準
■包括訪問時にリンパ腫によって誘発された神経学的問題を有しているイヌ
■骨髄以外のリンパ腫、血液浸潤（肺、ＳＮＣなど）を有しているイヌ
■現在診断されている併存疾患が、例えば、内分泌疾患、ＩＳＡＣＨＣステージ２〜３の心臓病、ＩＲＩＳ２〜４の慢性腎臓病など、ＱｏＬに悪影響を及ぼすか、生存期間が変更されるか（＜３ヶ月と推定）、又は特定の治療食を必要とすることが予想される
■研究登録から１週間以内の現在の抗生物質の使用。含める前に１週間の洗浄を行えば、その動物を含めることができる
■胃腸徴候の病歴（がん以前）−慢性の嘔吐又は下痢（６エピソード／年又は１ヶ月以上の臨床徴候）、及び特別な対照食を必要とする動物（がんとの関連なし）
■研究登録から１週間以内の制吐剤及び止瀉薬の現在の予防的使用
■研究登録から１ヶ月以内のオメガ−３脂肪酸サプリメント（例えば、魚油、オキアミ油、亜麻、ルリヂサ、月見草）の使用
■前月内での１週間を超えるがんに対するコルチコステロイドの投与（経口経路）、又は前月内での長時間作用型コルチコステロイドの投与（注射の回数に関係なし）。
【０２９４】
参加の撤回／中止の基準
以下の基準のいずれかを満たす場合、動物は研究から除外される：
■化学療法プロトコルの変更を必要とする治療反応評価（プロトコルの６週目）後の部分奏効（ＰＲ）、病勢の安定（ＳＤ）、又は病勢の進行（ＰＤ）にある動物
■６週目（導入フェーズ）から細胞診（ＬＮ  ＦＮＡ）で再発が確認された
■食餌療法の不耐性の研究−実験的な食餌療法の導入から最初の２週間以内の食事療法に関連する、投薬なしでは５日以内に解消されないＧＩ徴候
■次のような不十分な食餌コンプライアンス：実験食が給餌されていない５日以上のギャップ（病気、クライアントの不足、経管栄養などの理由で）。おやつの過剰使用
■追加の栄養補助食品の使用（基本的なグルコサミン／コンドロイチンサプリメントを除く）。
【０２９５】
試験スケジュール
−Ｖ１＝ベースライン／包含、化学療法及び食餌の開始前に診断を行った  
−Ｖ２＝約１ヶ月の食餌後（＝導入フェーズの終わり、６週目、すなわち最後のドキソルビシン注射後２週間だが、ビンクリスチン注射前）
−Ｖ３＝約３ヶ月の食餌後（＝中間維持期、ビンクリスチン注射前の１５週目）
−Ｖ４＝６ヶ月の食餌後（＝化学療法プロトコルの完了後、最後の注射から２週間以内、２６週目又は２７週目）
−Ｖ５＝９ヶ月の食餌後（３９週目から４１週目の間）
−Ｖ６＝１年間の食餌後（５１週目から５３週目の間）
治療スケジュールは、以下の表２６にさらに記載されている。
【０２９６】
パラメータ
■診断及び臨床病期分類（Ｖ１）：
−完全な身体検査
−血液塗抹標本＋血清生化学プロファイル（ＢＵＮ−ＣＲＥＡ−ＡＬＴ−ＡＬＫＰ−ＴＰ−ＡＬＢ−Ｃａ）＋尿検査（同日に施設内で実施）を伴ったＣＢＣ
−１つ又は２つの影響を受けたリンパ節の穿刺吸引（ＦＮＡ）に対するフローサイトメトリーによる（又は生検での免疫組織化学による；研究者の裁量による）細胞診及び免疫表現型検査
−胸部Ｘ線写真（２つの画像：右側面及び背腹側）（又は研究員の裁量でのスキャナ）
−必須の脾臓／肝ＦＮＡを伴う腹部超音波検査及び細胞診
−骨髄穿刺及び細胞診
■体重；体調スコア（ＢＣＳ  ９ポイントスケール）；筋肉状態スコア（ＭＣＳ  ＷＳＡＶＡ）
■投薬の文書化：化学療法プロトコル（ＡＥに起因する適応規則に関連する軽微な変更）及び他の薬剤
■化学療法後の有害事象の文書化（ＶＣＯＧ−ＣＴＣＡＥスケールＶ１．１による１から５までのグレード及び事象の日付）：「胃腸」カテゴリ及び「血液／骨髄」カテゴリのみ
■導入フェーズ（Ｖ２）中の治療反応評価：
○ＶＣＯＧコンセンサスに従って実施された、完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、病勢の安定（ＳＤ）、及び病勢の進行（ＰＤ）：イヌｖ１．０における末梢リンパ節リンパ腫の反応評価基準
○診断訪問時に異常であったパラメータのみ実行（動物がＣＲにある場合のみ）
■標準化された生活の質に関するアンケート調査
■糞便のスコアリング（５ポイントスケール）
■特定の血液バイオマーカー：
■食餌の評価アンケート
■文書化
○ＬＮ細胞診（ＦＮＡ）で確認された１２ヶ月（初期診断後）までの再発状態のモニタリング。獣医師は、化学療法プロトコルの完了後（少なくとも月に１回、又は明らかな病勢の進行の場合）に動物を確認する必要がある；医師の裁量で（無増悪生存期間の計算を可能にする）
○生存期間の中央値を計算可能な死（自然又は安楽死、がんに起因する可能性が高いかどうか、原因不明）
○入院；手術；けがなどの他の主要な事象
治療プロトコルは下記表２７に記載されている。
【０２９７】
【表２４】
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【０２９８】
【表２５】
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【０２９９】
【表２６】
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【０３００】
【表２７】
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【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図３Ｅ】
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【図３Ｆ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図８Ｅ】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【国際調査報告】
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