(57)【要約】癌細胞などのＣＤ４７＋疾患細胞は、ＣＤ４７遮断薬とポリ−（ＡＤＰリボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害薬との組み合わせを用いて治療される。ＣＤ４７遮断薬は、ＳＩＲＰαＦｃおよびＰＡＲＰ阻害薬ニラパリブであり得る。ニラパリブの抗癌作用は、ＳＩＲＰαＦｃの存在下で増強される。具体的な組み合わせは、ＩｇＧ１または好ましくはＩｇＧ４アイソタイプを含むＳＩＲＰαＦｃを含む。これらの組み合わせは、特に、固形腫瘍およびリンパ腫、白血病および骨髄腫などの血液癌の治療に有用である【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ４７＋疾患細胞を示す対象を治療する方法であって、ＰＡＲＰ阻害薬およびＣＤ４７遮断薬を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記ＰＡＲＰ阻害薬が、ＰＡＲＰ−１阻害薬である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＰＡＲＰ阻害薬が、タラゾパリブである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ＰＡＲＰ阻害薬が、ベリパリブである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記ＰＡＲＰ阻害薬が、ニラパリブである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記ＰＡＲＰ阻害薬が、オラパリブである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記ＰＡＲＰ阻害薬が、ルカパリブである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記ＰＡＲＰ阻害薬が、イニパリブである、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記ＣＤ４７遮断薬が、ＣＤ４７結合ＳＩＲＰαポリペプチドである、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＳＩＲＰαポリペプチドが、ヒトＳＩＲＰαポリペプチドである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記ヒトＳＩＲＰαＦｃポリペプチドが、ヒトＳＩＲＰαのＣＤ４７結合領域を含むＦｃ融合タンパク質である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号８の可溶性ＳＩＲＰαを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号９の可溶性ＳＩＲＰαを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＳＩＲＰαＦｃポリペプチドが、Ｌ４Ｖ／Ｉ、Ｖ６Ｉ／Ｌ、Ａ２１Ｖ、Ｖ２７Ｉ／Ｌ、Ｉ３１Ｔ／Ｓ／Ｆ、Ｅ４７Ｖ／Ｌ、Ｋ５３Ｒ、Ｅ５４Ｑ、Ｈ５６Ｐ／Ｒ、Ｓ６６Ｔ／Ｇ、Ｋ６８Ｒ、Ｖ９２Ｉ、Ｆ９４Ｖ／Ｌ、Ｖ６３Ｉ、およびＦ１０３Ｖから選択される１個または複数の活性増強アミノ酸置換を有する可溶性ＳＩＲＰαを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１５】
ＳＩＲＰαＦｃおよびＰＡＲＰ−１阻害薬、および請求項１〜１４のいずれか１項に記載の治療方法でのそれらの使用を教示する説明書を含む抗癌剤の医薬組合せ。
【請求項１６】
疾患細胞の治療のための放射線療法と組み合わせた、請求項１５で定められる医薬組合せの使用。
【請求項１７】
前記放射線療法が、体外照射療法である、請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
前記ＣＤ４７＋疾患細胞を示す対象の治療のための、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の組み合わせの使用。
【請求項１９】
前記ＣＤ４７＋疾患細胞が、ＣＤ４７＋癌細胞である、請求項１７に記載の使用。
【請求項２０】
前記ＣＤ４７＋癌細胞が、血液癌または固形腫瘍である、請求項１７に記載の使用。
【請求項２１】
前記癌細胞が、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄増殖性疾患／腫瘍（ＭＰＤＳ）、および骨髄異形成症候群から選択される癌型の細胞である、請求項１７に記載の使用。
【請求項２２】
前記癌が、ホジキンリンパ腫、無痛性および侵襲性両方の非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ＣＤ２０＋リンパ腫、バーキットリンパ腫、ならびに小細胞濾胞性リンパ腫および大細胞濾胞性リンパ腫から選択されるリンパ腫である、請求項１７に記載の使用。
【請求項２３】
前記癌が、多発性骨髄腫（ＭＭ）、巨細胞骨髄腫、重鎖骨髄腫、および軽鎖またはベンス・ジョーンズ骨髄腫から選択される骨髄腫である、請求項１７に記載の使用。
【請求項２４】
前記癌が黒色腫である、請求項１７に記載の使用。
【請求項２５】
前記癌が卵巣癌である、請求項１７に記載の使用。
【請求項２６】
前記癌がＣＴＣＬである、請求項１７に記載の使用。
【請求項２７】
前記癌が菌状息肉腫である、請求項１７に記載の使用。
【請求項２８】
前記癌が乳癌である、請求項１７に記載の使用。
【請求項２９】
前記癌が神経膠芽腫である、請求項１７に記載の使用。
【請求項３０】
ＰＡＲＰ阻害薬およびＣＤ４７遮断薬の少なくとも１種、および請求項１〜１４の方法に記載のそれらの使用のための説明書を含むキット。
【請求項３１】
放射線療法と組み合わせた、請求項３０に記載のキットの使用。
【請求項３２】
ＣＤ４７＋疾患細胞を示す対象を治療するための、ＰＡＲＰ阻害薬およびＣＤ４７遮断薬の使用。
【請求項３３】
前記ＰＡＲＰ阻害薬が、ＰＡＲＰ−１阻害薬である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記ＰＡＲＰ阻害薬が、タラゾパリブ、ベリパリブ、ニラパリブ、オラパリブ、ルカパリブおよびイニパリブからなる群より選択される、請求項３２に記載の使用。
【請求項３５】
前記ＣＤ４７遮断薬が、ＣＤ４７結合ＳＩＲＰαポリペプチドである、請求項３２〜３４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３６】
前記ＳＩＲＰαポリペプチドが、ヒトＳＩＲＰαポリペプチドである、請求項３５に記載の使用。
【請求項３７】
前記ヒトＳＩＲＰαＦｃポリペプチドが、ヒトＳＩＲＰαのＣＤ４７結合領域を含むＦｃ融合タンパク質である、請求項３６に記載の使用。
【請求項３８】
前記Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号８の可溶性ＳＩＲＰαを含む、請求項３７に記載の使用。
【請求項３９】
前記Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号９の可溶性ＳＩＲＰαを含む、請求項３７に記載の使用。
【請求項４０】
前記ＳＩＲＰαＦｃポリペプチドが、Ｌ４Ｖ／Ｉ、Ｖ６Ｉ／Ｌ、Ａ２１Ｖ、Ｖ２７Ｉ／Ｌ、Ｉ３１Ｔ／Ｓ／Ｆ、Ｅ４７Ｖ／Ｌ、Ｋ５３Ｒ、Ｅ５４Ｑ、Ｈ５６Ｐ／Ｒ、Ｓ６６Ｔ／Ｇ、Ｋ６８Ｒ、Ｖ９２Ｉ、Ｆ９４Ｖ／Ｌ、Ｖ６３Ｉ、およびＦ１０３Ｖから選択される１個または複数の活性増強アミノ酸置換を有する可溶性ＳＩＲＰαを含む、請求項３５に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年９月４日出願の米国特許仮出願第６２／７２６，４９７号の利益を主張するものであり、この開示内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
発明の分野
本発明は、ＣＤ４７／ＳＩＲＰα相互作用を遮断する薬物の使用方法に関する。より具体的には、本発明は、組み合わせた場合に、癌療法に有用な方法および手段に関する。
【背景技術】
【０００３】
ＣＤ４７は、シグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）に結合し、「食用不可」シグナルを送出し、マクロファージ食作用を抑制する免疫チェックポイントである。腫瘍細胞は高頻度にＣＤ４７を過剰発現してマクロファージ媒介破壊を回避している。ＴｒｉｌｌｉｕｍのＷＯ２０１４／０９４１２２は、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用を抑制する薬物について記載している。このＣＤ４７遮断薬は、特に有用な形態のＩｇＧ１ベースＦｃ領域と結合したヒトＳＩＲＰαの細胞外ドメインの特定領域を組み込んだヒトＳＩＲＰαの一形態である。ＩｇＧ４ベースＦｃ領域を有するＳＩＲＰαの関連形体も記載されている。これら形態では、ＳＩＲＰαＦｃは、ＣＤ４７＋表現型で存在する癌細胞の生存率に対して劇的な作用を示す。この作用は、特に急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞および他の多くのタイプの癌で見られる。一次構造が顕著に変化し、ＣＤ４７結合親和性が増強された可溶性型のＳＩＲＰは、ＷＯ２０１３／１０９７５２に記載されている。
【０００４】
他のＣＤ４７遮断薬は、文献に記載されており、これらには、それぞれ、異なる抗原結合部位をそれぞれ含むが、共通して、ＣＤ４７への結合に関し内在性ＳＩＲＰαと競合し、それによりマクロファージとの食作用を可能にし、最終的にはＣＤ４７＋癌細胞枯渇の速度を上昇させる能力を有する種々のＣＤ４７抗体（例えばＳｔａｎｆｏｒｄの米国特許第８，５６２，９９７号およびＩｎｈｉｂＲｘのＷＯ２０１４／１２３５８０を参照されたい）が含まれる。これらのＣＤ４７抗体は、ＳＩＲＰαベース薬物に固有のものとは極めて異なるインビボ活性を有する。後者は、例えば、赤血球への無視できる程度の結合しか示さないのに対し、ＣＤ４７抗体の逆の特性は、投与後の薬物「シンク」に配慮する戦略の必要性をもたらす。
【０００５】
ＣＤ４７／ＳＩＲＰα系を遮断するのに使用するためのさらに他の薬剤が提案されている。これらには、ＣＤ４７Ｆｃタンパク質（Ｖｉｒａｌ  ＬｏｇｉｃのＷＯ２０１０／０８３２５３を参照されたい）、ならびにＵＨＮのＷＯ２０１３／０５６３５２、ＳｔａｎｆｏｒｄのＷＯ２０１６／０２２９７１、Ｅｂｅｒｈａｒｄの米国特許第６，９１３，８９４号、および他の箇所において記載されているＳＩＲＰα抗体が含まれる。
【０００６】
抗癌剤開発において、ＣＤ４７遮断手法は極めて有望である。これらの薬物の作用を改善するための、特にＣＤ４７遮断薬、特にＳＩＲＰαを組み込んだ遮断薬の作用を改善するための方法および手段を提供することは有用であろう。
【発明の概要】
【０００７】
今では、ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ、すなわち、「ＰＡＲＰ」として知られる酵素の活性を抑制する薬剤と組み合わせた場合、ＣＤ４７遮断薬の抗癌作用が改善されることが明らかになっている。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７遮断薬は、ＳＩＲＰα−Ｆｃポリペプチドである。他の実施形態では、ＰＡＲＰ阻害薬はＰＡＲＰ−１阻害薬である。ＰＡＲＰ阻害薬とＣＤ４７遮断薬との治療薬の組み合わせから生ずる利益は、ＰＡＲＰ阻害が通常、ＤＮＡ障害剤により強化され、このＤＮＡ障害活性は、ＣＤ４７遮断薬に対して報告されてこなかったという点で特に予想外である。
【０００８】
一態様では、ＣＤ４７＋疾患細胞を示す対象を治療する方法が提供され、該方法は、ＣＤ４７遮断薬およびＰＡＲＰ阻害薬を対象に投与することを含む。関連する態様では、本発明は、ＣＤ４７＋癌細胞および腫瘍を含むＣＤ４７＋疾患細胞を示す対象の治療のために、ＳＩＲＰαＦｃ融合タンパク質のＰＡＲＰ阻害薬と組み合わせた使用を提供する。別の態様では、ＣＤ４７＋癌細胞および腫瘍を含むＣＤ４７＋疾患細胞を示す対象の治療での使用のために、ＳＩＲＰαＦｃ融合タンパク質のＰＡＲＰ阻害薬を含む組み合わせが提供される。
【０００９】
別の態様では、ＳＩＲＰαＦｃポリペプチドなどのＣＤ４７遮断薬およびＰＡＲＰ阻害薬を含む医薬組合せ剤も、本明細書で記載の治療方法でのそれらの使用を教示する説明書と共に提供される。関連する態様では、癌などのＣＤ４７＋疾患細胞を示す対象の治療において、２種の薬剤の少なくとも１種、および２種の薬剤のもう一方を組み合わせる場合のそれらの使用のための説明書を含む製品が提供される。いくつかの実施形態では、本方法で組み合わせて使用するために、別々に梱包された、２種の薬剤の少なくとも１種または両方を含むキットが提供される。
【００１０】
治療が放射線療法により補われる場合に、ＣＤ４７遮断薬およびＰＡＲＰ阻害薬の組み合わせによる治療は、さらに強化され得るということも発見された。この３種の治療法の組み合わせにより、生存が高められるという利益が示された。従って、いくつかの態様では、疾患細胞の治療のために、放射線療法、ＰＡＲＰ阻害薬およびＣＤ４７遮断薬を利用する３種併用療法が提供される。
【００１１】
他の態様では、本明細書で記載の疾患細胞および腫瘍の治療に有用な材料を含むキットの形態などの製品が提供される。
【００１２】
本開示の他の特徴および利点は、下記詳細な説明から明らかになるであろう。しかし、詳細な説明および具体的実施例は、本開示の好ましい実施形態を示してはいるが、この詳細な説明から、本開示の趣旨および範囲内での様々な変更および修正が当業者には明らかであり、したがって、これらは実例として与えられているにすぎないことを理解されたい。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】薬剤の組み合わせ試験デザインおよび投与計画を示す図である。ＰＢＳ中に懸濁させた５ｘ１０６個のルシフェラーゼ発現腫瘍細胞の０．２ｍＬの最終体積をＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスの腹腔内に０日目に注射した。マウスをＢＬＩで撮像し、６日目のそれらのＢＬＩ画像に基づいて、異なる治療群にランダム化した。腫瘍接種後７日目から、ビークル対照、ＩＲ、ニラパリブ、ＳＩＲＰαＦｃ、またはそれらの組み合わせでマウスを治療した。
【図２】治療後の動物の生存曲線（カプランマイヤープロット）を示す。動物は、腫瘍接種の７日後、ビークル対照、ＳＩＲＰαＦｃ、ニラパリブ（ＰＡＲＰｉ）、照射（ＩＲ）、単独でまたは組み合わせて治療された。治療後の動物の生存率。（Ａ）＆（Ｂ）ＢＲＣＡコンピテントＳＫＯＶ−３の腹腔内腫瘍を有する動物の生存率。（Ｃ）＆（Ｄ）ＢＲＣＡノックダウンＳＫＯＶ−３の腹腔内腫瘍を有する動物の生存率。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明は、ＣＤ４７＋表現型を有する癌細胞および腫瘍などのＣＤ４７＋疾患細胞を示す対象を治療するための改善された方法を提供する。この方法では、対象は、ＳＩＲＰαＦｃなどのＣＤ４７遮断薬および酵素の阻害薬、ＰＡＲＰと呼ばれるポリ−（ＡＤＰリボース）ポリメラーゼの組み合わせを投与される。ＣＤ４７＋疾患細胞に対するこの治療の効果は、一方の薬剤単独での治療に効果に比べて改善される。ＰＡＲＰ阻害薬は、腫瘍細胞に対する高められた細胞傷害性作用を介して、放射線療法などのＤＮＡ障害療法の効力を高めることができることが知られているが、ニラパリブ（ＰＡＲＰ阻害薬）および本明細書で記載のＳＩＲＰαＦｃの相乗効果は、ニラパリブによる腫瘍細胞死滅およびＳＩＲＰαＦｃによる免疫調節から生じる。ＰＡＲＰ阻害薬が別のＤＮＡ障害剤以外の薬剤と共に使用される場合には、この組み合わせ作用は予測されていない。
【００１５】
用語の「ＣＤ４７＋」は、本発明では、ＣＤ４７遮断薬による治療のために標的化される細胞の表現型について使用される。ＣＤ４７＋である細胞は、親和性リガンドとしてＣＤ４７抗体を用いて、フローサイトメトリーにより特定できる。標識されたＣＤ４７抗体は、この用途のために市販されている（例えば、クローンＢ６Ｈ１２はＳａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから入手可能である）。ＣＤ４７表現型について検査された細胞は、特に、内在性ＣＤ４７＋癌細胞を有すると疑われる対象から採取した液体および組織試料を含む標準的な腫瘍生検試料とすることができる。本発明の組み合わせによる療法の標的として特に関心対象のＣＤ４７疾患細胞は、ＣＤ４７を「過剰発現する」ものである。これらのＣＤ４７＋細胞は通常、疾患細胞であり、所定のタイプの細胞に対する正常なＣＤ４７密度を超える表面上の密度でＣＤ４７を提示する。ＣＤ４７過剰発現は、異なる細胞タイプにわたって変化するが、本明細書では、フローサイトメトリーによって、または免疫染色によって、または遺伝子発現分析などによって、その細胞型について正常であるＣＤ４７表現型を有する同等の細胞タイプで測定可能なレベルより大きいと測定される何らかのＣＤ４７レベルを指すことが意図される。
【００１６】
本明細書で使用される場合、「ＣＤ４７遮断薬」は、ＣＤ４７がマクロファージ提示ＳＩＲＰαと相互作用する場合に発生するシグナル伝達を妨害する、抑制するまたは遮断する任意の薬物または薬剤であり得る。ＣＤ４７遮断薬は、ＣＤ４７のＳＩＲＰαとの相互作用を抑制する薬剤である。ＣＤ４７遮断薬は、好ましくは、ＣＤ４７に結合し、ＳＩＲＰαとの相互作用を遮断する。ＣＤ４７遮断薬は、ＣＤ４７に結合してＣＤ４７とＳＩＲＰαと相互作用を遮断する抗体などのＣＤ４７／ＳＩＲＰαシグナル伝達系の抗体または抗体ベース拮抗薬であり得る。必須ではないが、望ましくは、ＣＤ４７遮断薬は、活性化されて、ＣＤ４７遮断薬が結合している細胞を破壊するマクロファージにより結合され得る定常領域、すなわち、Ｆｃ領域を含む。ＣＤ４７遮断薬のＦｃ領域は、好ましくは、エフェクター機能を有し、好ましくは、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）を含むＩｇＧ４由来である。別の実施形態では、Ｆｃ領域は、エフェクター機能を、例えば、不活性状態へ変えるためにアミノ酸置換により改変されたものであり得る。
【００１７】
ヒトＳＩＲＰαのＣＤ４７結合型は、本明細書で開示の組み合わせを使用するための好ましいＣＤ４７遮断薬である。これらの薬物は、ヒトＳＩＲＰαの細胞外領域をベースにしている。それらは、効果的なＣＤ４７結合親和性および特異性を付与するのに十分な細胞外領域の少なくとも一部を含む。ＳＩＲＰαの膜係留成分を欠く、いわゆる、「可溶性」型のＳＩＲＰαは有用で、文献に記載されており、これらには、ＮｏｖａｒｔｉｓのＷＯ２０１０／０７００４７、ＳｔａｎｆｏｒｄのＷＯ２０１３／１０９７５２、ＭｅｒｃｋのＷＯ２０１６／０２４０２１およびＴｒｉｌｌｉｕｍのＷＯ２０１４／０９４１２２で引用されているものが含まれる。
【００１８】
本発明の方法で使用されるＳＩＲＰαＦｃ薬物は、抗体のＦｃ領域およびヒトＳＩＲＰαのＣＤ４７結合領域を含むモノマーまたはホモダイマーまたはヘテロダイマー型の単鎖ポリペプチドである。この一般タイプのＳＩＲＰαベース薬物は、文献に記載されており、これらには、ＮｏｖａｒｔｉｓのＷＯ２０１０／０７００４７およびＳｔａｎｆｏｒｄのＷＯ２０１３／１０９７５２ならびにＴｒｉｌｌｉｕｍのＷＯ２０１４／０９４１２２で引用されているもの、およびＭｅｒｃｋのＷＯ２０１６／０２４０２１で教示されているＳＩＲＰαＦｃの特定のバリアントが含まれる。
【００１９】
好ましい実施形態では、ＳＩＲＰαＦｃポリペプチドは、以下で考察される特性を有する。より詳細には、ポリペプチドは、抗体定常領域またはＦｃ（結晶化可能なフラグメント）と直接的または間接的に融合した形態で、ヒトＳＩＲＰαタンパク質のＣＤ４７結合部分を適切に含む。別に定める場合を除き、本明細書で使用される場合、「ヒトＳＩＲＰα」という用語は、野生型の、内在性の成熟した形態のヒトＳＩＲＰαを指す。ヒトでは、ＳＩＲＰαタンパク質は２つの主形態として認められる。１つの形態であるバリアント１またはＶ１型は、ＮＣＢＩ  ＲｅｆＳｅｑ  ＮＰ＿５４２９７０．１として示されるアミノ酸配列を有する（残基２７〜５０４は成熟型を構成する）。別の型のバリアント２またはＶ２型は、１３個のアミノ酸が異なっており、ＧｅｎＢａｎｋにＣＡＡ７１４０３．１としてとして示されるアミノ酸配列を有する（残基３０〜５０４は成熟型を構成する）。これらの２つの形態のＳＩＲＰαは、ヒトに存在するＳＩＲＰαの形態の約８０％を構成し、本明細書では、両方とも「ヒトＳＩＲＰα」という用語により包含される。ヒトに内在性であり、ＣＤ４７に結合し、ＣＤ４７を介したシグナル伝達を誘発する同じ特性を有するその少数型も同様に、「ヒトＳＩＲＰα」という用語に包含される。本発明は、特に、ＳＩＲＰαのＶ２型を含む薬剤の組み合わせに関する。
【００２０】
本発明の薬物の組み合わせでは、有用なＣＤ４７遮断薬は、ヒトＳＩＲＰαの細胞外領域内にある３個のいわゆる免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメインの内の少なくとも１個を含むＳＩＲＰαＦｃ融合ポリペプチドである。より詳細には、本発明のＳＩＲＰαＦｃポリペプチドは、好ましくは、ヒトＳＩＲＰαの残基３２〜１３７（１０６マー）を組み込み、これは、現行の命名法によるＶ２型のＩｇＶドメインを構成および定義する。以下に示すこのＳＩＲＰα配列は、本明細書では配列番号１として参照される。
ＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＡＩＬＨＣＴＶＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＥＳＴＫＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥＦＫＳＧＡ［配列番号１］
【００２１】
好ましい実施形態では、ＳＩＲＰαＦｃ融合タンパク質は、配列番号１によって定義されるＩｇＶドメイン、およびさらに、野生型ヒトＳＩＲＰα配列内で連続的な追加の隣接残基を組み込む。ヒトＳＩＲＰαのＶ２型の残基３１〜１４８によって表されるこの好ましい形態のＩｇＶドメインは、以下に示す配列番号５を有する１１８マーである：
ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＡＩＬＨＣＴＶＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＥＳＴＫＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ［配列番号５］
【００２２】
ＳＩＲＰαＦｃ融合ポリペプチドのＦｃ領域は、好ましくは、エフェクター機能を有する。Ｆｃは、「結晶化可能なフラグメント」を意味し、主として重鎖定常領域とヒンジ領域内の複数の成分とからなるＩｇＧ抗体の定常領域を表す。したがって、適切なＦｃ成分は、エフェクター機能を有するものである。「エフェクター機能を有する」Ｆｃ成分は、抗体依存性細胞傷害活性への少なくともいくつかの寄与または補体を修復するいくつかの能力など、少なくともいくつかのエフェクター機能を有するＦｃ成分である。また、Ｆｃは少なくとも１個または複数のタイプのＦｃ受容体に結合する。これらの特性は、この目的のために確立されたアッセイを用いて明らかにすることができる。機能アッセイには、標的細胞溶解を検出する標準的なクロム放出アッセイが含まれる。この定義により、野生型ＩｇＧ１またはＩｇＧ４であるＦｃ領域はエフェクター機能を有するが、Ｐｒｏ２３３、Ｖａｌ２３４、Ａｌａ２３５を含み、およびＧｌｙ２３６（ＥＵ）の欠失を含む変化系列の組み込みなどによる、エフェクター機能を除去するように変異したヒトＩｇＧ４のＦｃ領域は、エフェクター機能を有しないと考えられている。好ましい実施形態では、Ｆｃは、ＩｇＧ１アイソタイプのヒト抗体をベースにしている。代替的実施形態では、Ｆｃは、ＩｇＧ４アイソタイプをベースにして、Ｐｒｏ２２８Ｓｅｒ変化を含む。これらの抗体のＦｃ領域は、当業者に容易に特定可能であろう。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、低級ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３ドメインを含む。
【００２３】
特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ、残基１０４〜３３０のＰ０１８５７として示されるヒトＩｇＧ１のアミノ酸配列をベースにし、以下に示し本明細書では配列番号２として参照されるアミノ酸配列を有する：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ＊［配列番号２］
【００２４】
したがって、いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１定常領域の野生型配列またはコンセンサス配列のいずれかを有する。代替実施形態では、融合タンパク質に組み込まれたＦｃ領域は、エフェクターにより活性化される典型的な定常領域を有する任意のＩｇＧ１抗体に由来する。このようなＦｃ領域の配列は、例えば、以下のＩｇＧ１配列（全てＧｅｎＢａｎｋから引用される）のいずれかのＦｃ領域、例えばＢＡＧ６５２８３（残基２４２〜４７３）、ＢＡＣ０４２２６．１（残基２４７〜４７８）、ＢＡＣ０５０１４．１（残基２４０〜４７１）、ＣＡＣ２０４５４．１（残基９９〜３２０）、ＢＡＣ０５０１６．１（残基２３８〜４６９）、ＢＡＣ８５３５０．１（残基２４３〜４７４）、ＢＡＣ８５５２９．１（残基２４４〜４７５）、およびＢＡＣ８５４２９．１（残基２３８〜４６９）に対応し得る。
【００２５】
他の実施形態では、Ｆｃ領域は、野生型ヒトＩｇＧ４定常領域の配列を有する。代替実施形態では、融合タンパク質に組み込まれたＦｃ領域は、存在するが、天然ではＩｇＧ１  Ｆｃ領域よりも効力が低いエフェクター活性を備えた定常領域を有する任意のＩｇＧ４抗体に由来する。このようなＦｃ領域の配列は、例えば、以下のＩｇＧ４配列、すなわち、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ由来のＰ０１８６１（残基９９〜３２７）およびＧｅｎＢａｎｋ由来のＣＡＣ２０４５７．１（残基９９〜３２７）のいずれかのＦｃ領域に対応し得る。
【００２６】
特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ、残基９９〜３２７のＰ０１８６１として示されるヒトＩｇＧ４のアミノ酸配列をベースにし、以下に示し本明細書では配列番号６として引用されるアミノ酸配列を有する：
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ［配列番号６］
【００２７】
いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、特定のＦｃ特性に影響するアミノ酸置換を含む、１つまたは複数の変化、通常約５つ以下のこのような変化を組み込んでいる。特定の好ましい一実施形態では、Ｆｃ領域は、位置２２８（ＥＵナンバリング）でセリンがプロリンによって置換されている（Ｓ２２８Ｐ）変化を組み込み、それにより、Ｆｃダイマー内のジスルフィド結合を安定化させる。Ｆｃ領域内の他の変化は、グリシンまたはアラニンによるＡｓｎ２９７の置換などのグリコシル化を変える置換、米国特許第６２，７７７，３７５号で教示のＴ２５２Ｌ、Ｔ２５３Ｓ、およびＴ２５６Ｆなどの半減期延長変化、ならびに４０９位置を含む多くの他の変化を含み得る。特に有用であるのは、Ｆｃ特性を増強するが、立体配座に関してサイレントのままである、例えばＦｃ受容体結合を保持している変化である。
【００２８】
特定の実施形態では、Ｆｃ成分がＩｇＧ４  Ｆｃである場合、Ｆｃは、少なくともＳ２２８Ｐ変異を組み込み、以下に示され配列番号７として本明細書で引用されるアミノ酸配列を有する：
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ［配列番号７］
【００２９】
組み合わせに使用されるＣＤ４７遮断薬は、従って、ヒトＳＩＲＰαとヒトＣＤ４７との間の結合を抑制し、それにより、ＳＩＲＰα結合ＣＤ４７、ヒトＳＩＲＰα成分を含む融合タンパク質、およびこの融合タンパク質と融合したＦｃ成分を経由して媒介されるシグナルの伝達を抑制または低下させるのに有用なＳＩＲＰαＦｃ融合タンパク質であり、ＳＩＲＰα成分がヒトＳＩＲＰαＶ２の単一ＩｇＶドメインを含みまたはそれからなり、Ｆｃ成分がヒトＩｇＧの定常領域であり、定常領域が好ましくはエフェクター機能を有する。
【００３０】
一実施形態では、融合タンパク質は、野生型ヒトＳＩＲＰαのＶ２型の少なくとも残基３２〜１３７、すなわち配列番号１からなるＳＩＲＰα成分を含む。好ましい実施形態では、ＳＩＲＰα成分は、ヒトＳＩＲＰαのＶ２型の残基３１〜１４８、すなわち配列番号５からなる。別の実施形態では、Ｆｃ成分は、Ｐ０１８５７と呼ばれるヒトＩｇＧ１のＦｃ成分であり、特定の実施形態では、その低級ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３領域、すなわち配列番号２を組み込んでいるアミノ酸配列を有する。
【００３１】
従って、好ましい実施形態では、本発明の方法は、発現した一本鎖ポリペプチドおよびその分泌ダイマー融合体（ホモダイマー）としてＳＩＲＰαＦｃ融合ポリペプチドであるＣＤ４７遮断薬を利用し、融合タンパク質は、配列番号１および好ましくは配列番号５を有するＳＩＲＰα成分ならびに、これと融合して、エフェクター機能を有し、配列番号２を有するＦｃ領域を組み込む。ＳＩＲＰα成分が配列番号１である場合、この融合タンパク質は、以下に示す配列番号３を含む：
ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＡＩＬＨＣＴＶＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＥＳＴＫＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ＊［配列番号３］
【００３２】
ＳＩＲＰα成分が配列番号５である場合、この融合タンパク質は、以下に示す配列番号８を含む：
ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＡＩＬＨＣＴＶＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＥＳＴＫＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ［配列番号８］
【００３３】
代替実施形態では、融合タンパク質のＦｃ成分は、ＩｇＧ４、好ましくはＳ２２８Ｐ変異を組み込んだＩｇＧ４をベースにしている。この融合タンパク質が好ましい配列番号５のＳＩＲＰα  ＩｇＶドメインを組み込む場合、得られるＩｇＧ４ベースのＳＩＲＰα−Ｆｃタンパク質は、以下に示す配列番号９を有する：
ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＡＩＬＨＣＴＶＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＥＳＴＫＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ［配列番号９］
【００３４】
好ましい実施形態では、融合タンパク質は、融合タンパク質のＳＩＲＰα  ＩｇＶドメインとして、配列番号５である配列を含む。好ましいＳＩＲＰαＦｃは配列番号８である。
【００３５】
ＣＤ４７遮断薬内に組み込まれたＳＩＲＰα配列は、文献に記載のように変化させることができる。すなわち、ＳＩＲＰα内の有用な置換は通常、ＣＤ４７の結合親和性を高め、下記の１種または複数を含み得る：Ｌ４Ｖ／Ｉ、Ｖ６Ｉ／Ｌ、Ａ２１Ｖ、Ｖ２７Ｉ／Ｌ、１３１Ｔ／Ｓ／Ｆ、Ｅ４７Ｖ／Ｌ、Ｋ５３Ｒ、Ｅ５４Ｑ、Ｈ５６Ｐ／Ｒ、Ｓ６６Ｔ／Ｇ、Ｋ６８Ｒ、Ｖ９２Ｉ、Ｆ９４Ｖ／Ｌ、Ｖ６３Ｉ、および／またはＦ１０３Ｖ。さらに他の置換には、アミノ酸が同じグループ由来のアミノ酸により置換される保存的アミノ酸置換が含まれる。また、上述のように、ＳＩＲＰα配列はまた、ＣＤ４７結合親和性が維持される限りにおいて、短縮または延長できる。
【００３６】
ＳＩＲＰαＦｃ融合ポリペプチドでは、ＳＩＲＰα成分およびＦｃ成分は、直接的または間接的に融合されて、単鎖ポリペプチドが得られ、この単鎖ポリペプチドは個別の単鎖ＳＩＲＰαＦｃポリペプチドのＦｃ領域間で形成される鎖内ジスルフィド結合により結合されるホモダイマーとして最終的に生成される。ＳＩＲＰα領域とＦｃを連結する融合領域の性質は重要ではない。融合は、ＳＩＲＰ成分が融合体のＮ末端を構成し、Ｆｃ成分がＣ末端を構成する２つの成分の間で直接的であってもよい。あるいは、融合は、１個または複数のアミノ酸、望ましくは２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸などの遺伝的にコードされたアミノ酸、または５〜５０、５〜３０もしくは５〜２０個のアミノ酸などの５〜１００個の任意の数のアミノ酸から構成されるリンカーを介する間接的であってもよい。リンカーは、ＢａｍＨＩ、ＣｌａＩ、ＥｃｏＲＩ、ＨｉｎｄＩＩＩ、ＰｓｔＩ、ＳａｌＩおよびＸｈｏＩ部位などの制限酵素部位を構成するＤＮＡによってコードされるペプチドを含んでもよい。
【００３７】
リンカーアミノ酸は、典型的にはおよび望ましくは、Ｆｃ成分およびＳＩＲＰα成分が活性のある立体配座をとることを可能とする幾分かの可撓性を提供するであろう。このような可撓性を可能にする残基は通常、Ｇｌｙ、ＡｓｎおよびＳｅｒであるので、リンカー内のこれらの残基（ならびに特にＧｌｙおよびＳｅｒ）の実質的に任意の組み合わせが所望の連結作用を提供する可能性がある。一例では、このようなリンカーは、（Ｇ４Ｓ）ｎ（式中、ｎは１、２、３またはそれ超である）のように反復し得る、いわゆるＧ４Ｓ配列（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）（配列番号１０）に基づいており、または（Ｇｌｙ）ｎ、（Ｓｅｒ）ｎ、（Ｓｅｒ−Ｇｌｙ）ｎもしくは（Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）ｎなどに基づいている。別の実施形態では、リンカーはＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号４）である。この配列は、Ｃ末端がＩｇＶドメインに隣接するＳＩＲＰα配列を構成する（この隣接配列が、上述のＩｇＶ最小配列と結合した場合、ＩｇＶドメインのリンカーまたは異なる形態のいずれかとみなされ得ることは理解される）。融合領域またはリンカーは、この複数の成分が活性のある立体配座をとることを可能とするという点でのみ必要であり、このことは、当該技術分野で有用な任意の形態のリンカーによって達成することができる。
【００３８】
ＳＩＲＰαＦｃ融合体は、ＣＤ４７遮断薬として、ＳＩＲＰαとＣＤ４７との相互作用を抑制し、それによりこの系を通るシグナル伝達を遮断するのに有用である。ＣＤ４７によるマクロファージ上のＳＩＲＰαの刺激は、ミオシンＩＩ活性およびマクロファージ中へと標的を引っ張り込むことに関与する収縮性細胞骨格活性を不活性化させることによって、マクロファージ媒介性食作用を抑制すると理解されている。従って、このカスケードの活性化は、ＣＤ４７＋疾患細胞の生存にとって重要である。この経路を遮断することにより、マクロファージの貪食が可能となり、ＣＤ４７＋疾患細胞集団を根絶することができる。
【００３９】
本発明の医薬組合せ剤は、ＳＩＲＰαＦｃなどのＣＤ４７遮断薬、およびポリ−（ＡＤＰリボース）−ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）酵素活性の阻害薬の両方を含む。ＰＡＲＰ阻害薬（ＰＡＲＰｉ）は、既知のＰＡＲＰｉの中から、および特に、販売が認可された、または臨床開発中であるＰＡＲＰｉの中から選択できる。
【００４０】
ＰＡＲＰｉは、標的ＰＡＲＰ酵素の活性を抑制し、従って、ＰＡＲＰ阻害を検出する任意のアッセイ、例えば、ＰＡＲＰｉ候補の存在下および非存在下で、所与のＰＡＲＰ基質に対するＰＡＲＰ活性を明らかにするアッセイを用いて特定できる。評価される酵素活性は、酵素のＤＮＡ結合活性、そのＣ末端触媒活性、その自己調節活性および／またはそのカスパーゼ切断活性であり得る。いくつかの実施形態では、ＰＡＲＰｉは、触媒ドメイン中の配列相同性に基づいて特徴付けられた１７種の酵素種を含むＰＡＲＰファミリーメンバーの特有のものであるＰＡＲＰの活性を抑制する。ヒトの既知のＰＡＲＰスーパーファミリーの内で、ＰＡＲＰ−１、ＰＡＲＰ−２、タンキラーゼ１、タンキラーゼ２、およびｖＰＡＲＰは、ＤＮＡ修復で役割を有すると考えられるが、ＰＡＲＰ−１が細胞性ＰＡＲＰ活性の９０％超を占め、依然として最も研究されている。これらの酵素は、例えば、複合体形成を抑制する、破壊するまたは低下させるために、本明細書で有用なＰＡＲＰｉにより標的化できる塩基除去修復複合体の一部を形成する。
【００４１】
いくつかの実施形態では、ＰＡＲＰｉは、ＰＡＲＰ−１の活性を抑制する薬剤である。このＰＡＲＰ−１種のヒト型は、Ｐ０９８７４としてＵｎｉＰｒｏｔＫＢデータベース中で、そのアミノ酸配列の観点から、および他の多くの観点から記載されており、酵素機能は、ＥＣ：２．４．２．３０として示されている。
【００４２】
本発明の医薬組合せ剤では、ＰＡＲＰ阻害薬は、生物学的でも小分子でも、ＰＡＲＰ酵素の機能を妨害し、破壊する任意の薬剤であってよい。薬剤は、例えば、ＰＡＲＰ結合物質もしくは抗体、またはＰＡＲＰ遺伝子発現または翻訳の阻害薬であり得る。あるいは、および好ましくは、ＰＡＲＰ阻害薬は、ＰＡＲＰ−１活性を阻害する小分子の化学的物質である。ＰＡＲＰはＮＡＤ＋を切断し、ニコチンアミドを放出するので、これらのＰＡＲＰｉ化合物の多くは、ニコチンアミドファルマコフォアを有し得る。
【００４３】
いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰαＦｃなどのＣＤ４７遮断薬との組み合わせで用いられるＰＡＲＰｉは、ベリパリブ（ＡＢＴ８８８）、オリパリブ（ｏｌｉｐａｒｉｂ）（ＡＺ２２８１、ＫＵ５９４３６）、イニパリブ（ＢＳＩ２０１／ＢＳＩ４０１）、ルカパリブ（ＡＧ０１、４６９９）、ニラパリブ（ゼジューラ（登録商標））、パミパリブ、タラゾパリブ、ＭＫ４８２７、ＣＥＰ９７２２、ＢＭＮ６７２、ＢＭＮ６７３、Ｅ７０１６、ＩＮＯ−１００１、ＬＴ−６７３、ＭＰ１２４、ＮＭＳ−Ｐ１１８およびＸＡＶ９３９を含むまたはこれらからなる群から選択されるＰＡＲＰ阻害薬である。
【００４４】
これらの化合物の内のいくつかの構造を便宜上以下に示し、全ては先行技術で明らかになっている：
【化１】
2021535215.tif 000002
2021535215.tif 000003
【００４５】
好ましい実施形態では、ＰＡＲＰ阻害薬はニラパリブである。現在、ニラパリブは、ＢＲＣＡ状態を考慮することなしに卵巣癌治療での使用が認可されている。
【００４６】
ＰＡＲＰ阻害薬は、治療用量、送達方法、および治療計画を含む単剤療法でのその使用に対する処方法と同様にして本発明の併用療法で使用できる。特に、ニラパリブを、例えば、毎日１回、１００〜３００ｍｇの薬物を含む経口送達カプセル（ＦＤＡによる推奨）として使用できる。別のＰＡＲＰ阻害薬ベリパリブの推奨用量は、第２相臨床試験に基づいて４００ｍｇを１日２回であった。
【００４７】
より一般的には、各薬物または薬剤は、薬学的に許容可能な担体を含む好適な単位剤形で、および治療有効量で投与される。本明細書中で使用される場合、「薬学的に許容可能な担体」は、タンパク質／抗体製剤の技術分野において生理学的に適合し、有用ないずれかのおよびすべての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤、などを意味し、ＣＤ４７遮断薬はタンパク質である。別の理由で、化学的薬物製剤において使用される標準的薬剤は、選択されたＰＡＲＰｉを処方するのに使用できる。薬学的に許容可能な担体の例としては、水、生理食塩水、リン酸緩衝食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、ならびにそれらの組み合わせの内の１種または複数が挙げられる。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば、糖；マンニトール、ソルビトール、または塩化ナトリウムなどのポリアルコールを含むことが好ましいであろう。
【００４８】
本明細書で使用される場合、「有効量」は、所望の治療結果を達成するのに必要な投薬量および特定の期間にわたり有効な量を意味する。組み合わせにおける各薬物の治療有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別および体重、ならびにレシピエントにおいて所望の応答を誘発する薬物の能力などの因子によって変化してよい。治療有効量は、薬理学的作用剤の任意の毒性のあるまたは有害な作用が、治療上有益な作用によって凌駕されるものでもある。
【００４９】
本発明の医薬組合せ剤の使用は、どちらかの薬剤単独による治療に比べて、併用治療により死滅させられるまたは弱められるＣＤ４７＋疾患細胞の数の増大として顕在化し得る高められた応答を提供できる。応答はまた、治療を受けている対象中のＣＤ４７＋腫瘍の全体量、またはそれらのサイズ、数、増殖速度、または分布の改善として顕在化され得る。この改善された効力は、相加より低い効果として顕在化でき、この場合、組み合わせの効果は、各成分単独での効果より大きいが、両成分の効果の合計未満である、または相加効果であってもよく、この場合、組み合わせの効果は、個別に使用した場合の成分の効果の合計と同等である、または相加より大きい効果であってもよく、この場合、組み合わせの効果は、単独使用の各成分の効果の合計よりも大きい。相加より大きい効果は、相乗的効果と呼ばれることもある。改善された組み合わせの効力は、当該技術分野において既知の多くの方法により測定できる。改善された効力は、各成分単独の効果に比べて、ＣＤ４７＋疾患細胞の成長または増殖または活力を抑制する、組み合わせによる能力の統計的に有意な増大をもたらすことができる。いくつかの実施形態では、効果は、相加効果より大きい。従って、ＳＩＲＰαＦｃと組み合わせたＰＡＲＰｉの治療有効量または用量は、好ましくは、ＣＤ４７＋疾患細胞の活力に対する、または任意の他の治療関連パラメーターに対する相加効果または相加より大きい効果を与える組み合わせの量または用量である。
【００５０】
ＣＤ４７遮断薬と組み合わせて使用される場合、治療計画は、組み合わせて使用されるべき薬物種、薬物投与の相対的タイミングおよび治療される医学的適応症の性質をさらに考慮することになる。好ましい薬物または医薬組合せ剤は、下記から選択される：
１）配列番号８または配列番号９を有するＳＩＲＰαＦｃおよびニラパリブとして知られるＰＡＲＰ阻害薬。特定の実施形態では、組み合わせは、配列番号８を有するＳＩＲＰαＦｃおよびＰＡＲＰｉニラパリブを含む。別の特定の実施形態では、組み合わせは、配列番号９を有するＳＩＲＰαＦｃおよびＰＡＲＰｉニラパリブを含む。
２）配列番号８または配列番号９を有するＳＩＲＰαＦｃおよびＰＡＲＰ阻害薬ベリパリブ。特定の実施形態では、組み合わせは、配列番号８を有するＳＩＲＰαＦｃおよびＰＡＲＰｉベリパリブを含む。別の特定の実施形態では、組み合わせは、配列番号９を有するＳＩＲＰαＦｃおよびＰＡＲＰｉベリパリブを含む。
３）配列番号８または配列番号９または配列番号７を有するＳＩＲＰαＦｃおよびルカパリブとして知られるＰＡＲＰ阻害薬。特定の実施形態では、組み合わせは、配列番号８を有するＳＩＲＰαＦｃおよびＰＡＲＰｉルカパリブを含む。別の特定の実施形態では、組み合わせは、配列番号９を有するＳＩＲＰαＦｃおよびＰＡＲＰｉルカパリブを含む。
４）配列番号８または配列番号９または配列番号７を有するＳＩＲＰαＦｃおよびＰＡＲＰｉオラパリブ。特定の実施形態では、組み合わせは、配列番号８を有するＳＩＲＰαＦｃおよびオラパリブを含む。別の特定の実施形態では、組み合わせは、配列番号９を有するＳＩＲＰαＦｃおよびオラパリブを含む。組み合わせて含まれる各薬物は、組み合わせて使用するために別々に製剤化できる。
【００５１】
これらの薬物は、両方の薬物のレシピエントで、一方の薬物の効果がもう一方の薬物の効果を増強するために使用される場合、薬物は「組み合わせて」使用されると言われる。
【００５２】
ＳＩＲＰαＦｃおよびＰＡＲＰｉは、薬物送達のために確立された任意の経路を介して、別々にまたは組み合わせて、対象に投与され得る。投与の選択経路および／または方法は、所望する結果に応じて変わるであろう。ＳＩＲＰαＦｃなどの融合タンパク質の投与の好ましい経路は、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、関節内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、腫瘍内、皮下、表皮下、関節腔内、嚢下、くも膜下、脊髄内、硬膜外および胸骨内などの注射および注入によるなどの非経口の投与経路である。特にＰＡＲＰｉのための本明細書で有用な他の経路は、経口もしくは経鼻などの腸内経路または肺内投与、または点滴によるまたは局所、表皮、または粘膜投与経路による、例えば、鼻腔内、経口、経膣、直腸内または舌下投与であり、このような経路は、認可された形態のこのようなＰＡＲＰｉに対し確立されている。
【００５３】
本発明の組み合わせにおける薬剤は、順次に、または実質的に同時に投与できる。すなわち、ＰＡＲＰｉは、ＳＩＲＰαＦｃの投与前または投与後に投与できる。薬剤または少なくともそれらの作用がレシピエント中で重なりあうのが望ましい。従って、ＳＩＲＰαＦｃは、ＰＡＲＰｉで既に治療されたレシピエントに投与でき、または逆もまた同じである。特定の実施形態では、ＣＤ４７遮断薬、例えば、ＳＩＲＰαＦｃは、対象がニラパリブなどのＰＡＲＰ阻害薬で治療された後で投与される。別の実施形態では、ＰＡＲＰｉおよびＳＩＲＰαＦｃは同時に投与される。
【００５４】
投与計画は、最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するように調節される。例えば、各薬物の単回ボーラス投与をしてもよく、またはいくつかの分割用量を経時的に投与してもよく、または治療状況によって示されるように用量を比例して減少または増加させてもよい。投与の簡便さおよび用量の均一性のために、単位剤形により非経口組成物を処方することは特に有利である。本明細書で使用される「単位剤形」は、治療される対象のための単位投与量として適した物理的に別個の単位を意味し、各単位は、必要とされる医薬担体に関連して所望の治療作用を生じるように計算された所定量の活性のある化合物を含有する。本発明の投与単位剤形の仕様は、（ａ）活性化合物の独特の特徴および達成される特定の治療効果、ならびに（ｂ）個体における感受性の扱いのためにこのような活性化合物の配合の当該技術分野に固有の制限、によって必然的に決まり、これらに直接的に依存している。
【００５５】
薬物は、組み合わせで処方することができ、それにより、１回の投与、例えば１回の注射または１回の注入バッグで組み合わせをレシピエントに導入できる。別の実施形態では、薬物は、併用療法投与計画での別々の投与のために別々に処方される。
【００５６】
投与のために、各薬剤の投与量は、宿主体重の約０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ、さらに通例では０．０１〜５ｍｇ／ｋｇの範囲内である。例えば、投与量は、０．１ｍｇ／ｋｇ体重、０．２ｍｇ／ｋｇ体重、０．３ｍｇ／ｋｇ体重、１ｍｇ／ｋｂ体重、３ｍｇ／ｋｇ体重、５ｍｇ／ｋｇ体重もしくは１０ｍｇ／ｋｇ体重、または１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であり得る。単位剤形では、薬物は、１、２、３、４、５、１０、２５、５０、１００、２００、２５０、および５００ｍｇ／用量などの１〜５００ｍｇの薬物を含む。２つの薬物は、ほぼ等モル量（±１０％）で投与することができる。例示的な治療投与計画は、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、１か月に１回、３か月に１回または３〜６か月に１回の投与を伴う。本発明の薬物組み合わせに好ましい投与計画には、静脈内投与を介した１ｍｇ／ｋｇ体重または３ｍｇ／ｋｇ体重が含まれ、各薬物は、以下の投薬計画のうちの１つを用いて同時に投与される；（ｉ）４週毎に６投与量、その後、３ヶ月毎；（ｉｉ）３週毎；（ｉｉｉ）３ｍｇ／ｋｇ体重を１回、その後、３週毎に１ｍｇ／ｋｇ体重。いくつかの方法では、投与量は、約１〜１，０００μｇ／ｍｌ、およびいくつかの方法では、２５〜３００μｇ／ｍｌの血漿中融合タンパク質濃度を達成するように調節される。
【００５７】
いくつかの実施形態では、対象は、毎週０．１ｍｇ／ｋｇの配列番号８または配列番号９のＳＩＲＰαＦｃ薬物および２週毎に約３ｍｇ／ｋｇのニラパリブを含む投与計画を用いて治療される。ＳＩＲＰαＦｃタンパク質は、赤血球への無視できる程度の結合を示す。したがって、薬物の組み合わせを用いて投与する場合、ＲＢＣ「シンク」を考慮する必要はない。ＲＢＣに結合される他のＣＤ４７遮断薬と比較して、本発明のＳＩＲＰαＦｃ融合体は、ＣＤ４７抗体などの、ＲＢＣ結合体となる薬物に必要な用量の半分未満の用量で有効であり得ると推定される。さらに、ＳＩＲＰα−Ｆｃ融合タンパク質は、ＳＩＲＰα媒介シグナルの専用の拮抗薬であり、これは、当該融合タンパク質への結合の際に無視できる程度のＣＤ４７拮抗を示すためである。従って、薬物によって誘導される何らかの刺激を考慮することは、医学的に有用な単位投与計画を確立する際には必要はない。
【００５８】
組み合わせにおける各薬物は、持続放出製剤として投与することもでき、この場合、投与頻度を少なくする必要がある。投与量および頻度は、患者中の融合タンパク質および他の薬剤の半減期に依存して変化する。投与量および投与頻度は、治療が予防的であるか治療的であるかによって変化し得る。予防適用では、相対的に低い投与量が、長期間にわたって相対的に低い頻度の間隔で投与される。一部の患者は、余生のために治療を受け続ける。治療適用では、疾患の進行が低下または終了するまで、好ましくは患者が疾患の症状の部分的または完全な寛解を示すまで、相対的に短い間隔で相対的に高い投与量が必要な場合がある。その後、予防投与計画を用いて患者を治療することができる。
【００５９】
本発明の治療はまた、上述のように、ＰＡＲＰ阻害と組み合わせたＣＤ４７遮断薬の使用を含み、および照射療法またはＲＴとしても知られる放射線治療をさらに含む。ある実施形態では、ＲＴは、体外照射療法（ＥＢＲ）である。代替的実施形態では、ＲＴは、ブラキセラピーである。放射線治療の主要機能は、ＤＮＡ鎖を切断して、著しいＤＮＡ損傷を生じさせ、細胞死に至らせることである。放射線療法とＰＡＲＰ阻害薬の組み合わせは、特にＢＲＣＡ１／ＢＲＣＡ２変異を有する腫瘍組織中では（この場合だけではないが）、放射線治療による一本鎖切断から二本鎖切断を形成できる。ＢＲＣＡ遺伝子（乳癌抗原遺伝子）ＢＲＣＡ１およびＢＲＣＡ２は、無関係のタンパク質をコードするが、両者は乳房および他の組織中で発現され、そこでそれらは、損傷ＤＮＡの修復を支援する、またはＤＮＡを修復できない場合には細胞を破壊する。それらは、ＤＮＡ二重鎖切断の誤りのない修復における重要な役割を有する染色体損傷の修復に関与する。ＢＲＣＡ１またはＢＲＣＡ２が変異により損傷を受け、ＤＮＡは修復されず、乳癌のリスクが増大する場合、ＢＲＣＡ１およびＢＲＣＡ２は、「乳癌感受性遺伝子」および「乳癌感受性タンパク質」と呼ばれてきた。
【００６０】
放射線治療は、癌および他の疾患の電離放射線を用いた治療である。これは、多数の癌型の治療に対する十分に確立されている手法であり、各癌型が、通常その特定の癌に適応させたＲＴ治療計画を受けるように精密化されている。電離放射線は、それらの遺伝物質を損傷することにより治療される領域中で細胞を損傷または破壊するエネルギーを蓄積し、これらの細胞が増殖を続けるのを不可能にする。放射線治療を含む併用療法を用いて、卵巣、前立腺、皮膚、舌、喉頭、脳、乳、または子宮頸部癌などの局在化した固形腫瘍を治療できる。それはまた、白血病およびリンパ腫（それぞれ、血液形成細胞およびリンパ系の癌）を含む、いわゆる血液癌を治療するために使用できる。
【００６１】
ある実施形態では、ＲＴは、体外照射（ＥＢＲ）療法である。従来の体外照射療法（２ＤＸＲＴ）は、高エネルギーＸ線を生成するキロボルト治療Ｘ線ユニットまたは医学線形加速器を用いて二次元ビームを介して照射される。２ＤＸＲＴは、主に、いくつかの方向：多くの場合、前後、および両側から患者に照射される放射線単一ビームからなる。体外照射療法は、ほとんどの場合、光子ビーム（Ｘ線またはガンマ線）の形で照射される。電気を使用して高速移動亜原子粒子流を形成する線形加速器を用いて多くのタイプの体外照射療法が行われる。対象は、体外照射療法を数週間のあいだの毎日の治療セッションで受けることができる。治療セッションの数は、投与される予定の総放射線量を含む多くの因子に依存する。別の有用なタイプの体外照射療法は、３次元原体照射法（３Ｄ−ＣＲＴ）である。３Ｄ−ＣＲＴは、高性能コンピューターソフトウェアおよび先進治療機械を用いて、極めて正確に整形された標的領域に照射する。
【００６２】
さらに他の体外照射療法方法が、本発明の治療方法に有用である。これらには、強度変調放射線治療（ＩＭＲＴ）が含まれ、これは、数百の小さい放射線ビーム整形装置、すなわち、コリメーターを用いて一定の照射線量を照射する。コリメーターは、固定することができ、または治療中に動かすこともでき、治療セッション中に放射線ビームの強度を変えることができるので、腫瘍の異なる領域または近くの組織に異なる照射線量で照射できる。ＩＭＲＴを用いて、治療領域への放射線量を増大させることができる。
【００６３】
使用中には、本発明の治療の組み合わせにおける３種の治療モダリティのそれぞれは、単独療法で使用されているかのように、すなわち、任意の他の薬剤とのその組み合わせとは独立に使用されているかのように利用できる。投与および照射方法は、単独療法として確立された適用と同じであるので、各モダリティは、投与される対象の治療で組み合わせられる場合、強化された抗癌の恩恵をもたらす。放射線、ＰＡＲＰｉおよびＳＩＲＰαＦｃの組み合わせは、放射線が一次モダリティであると見なされる場合に投与されるであろう。放射線が治療オプションではない場合には、治療は、ＰＡＲＰｉ＋ＳＩＲＰαＦｃ併用療法のみから構成できる。
【００６４】
治療の組み合わせでは、ＰＡＲＰｉは、放射線治療の前に投与され得るが、ＳＩＲＰαＦｃは、それと同時に投与されるであろう。
【００６５】
いくつかの実施形態では、対象は、ほとんどのタイプの体外照射療法を、週最大５日間、数週間にわたり受ける。計画された総照射線量の内の１線量（単回照射）を毎日投与される。場合により、１日当たり２種の治療を投与される。ほとんどのタイプの体外照射療法は、１日１回照射され、それにより、正常組織に対する損傷は最小化され、癌細胞は、それらがＤＮＡ損傷を最も受けやすいいくつかの細胞周期のポイントで放射線に暴露される可能性が高まる。照射スケジュールの分割は、今日では一般的であり、加速分割照射では、治療は、大きい量で毎日または毎週照射により投与され、治療週の数を減らす；過分割照射法では、より小さい照射量が１日１回より多い頻度で投与される；および少分割照射法では、より大きな照射量が１日１回またはそれより少ない頻度で投与されて治療回数を減らす。
【００６６】
分割投与計画は、異なる放射線療法センター間で、および個別の医師間でも、個人に合わせられる。北米、オーストラリア、および欧州では、成人向けの典型的な分割スケジュールは、１日当たり１．８〜２Ｇｙ、週５日間である。いくつかの癌型では、分割スケジュールの長すぎる延長は、頭頸部癌および頸部扁平上皮細胞癌を含む腫瘍の再増殖の開始を可能にでき、これらの腫瘍型に対する放射線療法は、一定の時間内に完結されるのが好ましい。子供に対しては、典型的な分割サイズは、１日当たり１．５〜１．８Ｇｙであってよい。理由は、より小さい分割サイズは、正常組織中の晩期発症型副作用の発生率および重症度の低減と関係しているためである。
【００６７】
いくつかの事例では、治療過程の終わり近くで、１日当たり、２種の分割が用いられる同時ブースト法または過分割照射法として知られるこのスケジュールを、それらがより小さい場合により急速に再生する腫瘍に対して用いられる。特に、頭頸部の腫瘍は、この挙動を示す。
【００６８】
少分割照射法は、総照射線量が大きな線量に分割される放射線療法である。典型的な線量は、癌型により、２．２Ｇｙ／分割量〜２０Ｇｙ／分割量へと大きく変わる。少分割照射法の背後にある論理は、細胞に対し再生するための十分な時間を与えないことにより、癌再発の可能性を減らすことであり、またいくつかの腫瘍の固有的な生物学的放射線感受性を搾取することにある。１つの一般的に治療される部位でこのような治療の極めて良好な証拠である部位は、乳癌である。３〜４週にわたる、例えば、４０Ｇｙの１５分割または４２．５Ｇｙの１６分割による短期少分割照射治療は、癌対照に対するより長い５〜６週の治療と同等の有効性を示した。
【００６９】
別の分割スケジュールは、連続加速過分割照射療法である。ＣＨＡＲＴは、肺癌の治療に使用され、１日当たり３種のより小さい分割量からなる。別のよく知られるようになってきた別の分割スケジュールは、乳癌の治療に使用され、加速乳房部分照射（ＡＰＢＩ）と呼ばれる。ＡＰＢＩは、外部ビーム放射線により実施できる。ＡＰＢＩは、全乳房照射に比べて、５日間にわたる１日当たり２種の高線量分割量を含み、この場合、単一のより小さい分割量が週５回で、６〜７週の期間にわたり照射される。
【００７０】
従って、放射線治療に対し、照射レベルおよび投与計画は、治療される癌の型、位置および病期により決定される。線量は、光子またはプロトンベースであり得、レントゲンまたはグレイ単位で表され、放射線の暴露線量（Ｒｎ）または吸収線量（Ｇｙ）を示す。グレイは、電離放射線量の誘導単位であり、これは、１キログラムのヒト組織により吸収された放射線エネルギーの量の尺度である。これはラドと関連し、ラドは、０．０１Ｇｙである。一般に、適切な線量は、暴露当たり約１〜約３００Ｇｙの範囲であろう。暴露当たりの総投与量は、約１〜約５００Ｇｙの範囲で変動し得、特に、４０〜７０Ｇｙである。
【００７１】
定義では、空気カーマ（単位質量当り放出された動力学的エネルギー）の１レントゲンは、乾燥空気中での吸収線量の０．００８７７Ｇｙ（０．８７７ｒａｄ）、または軟組織中での吸収線量の０．００９６Ｇｙ（０．９６ｒａｄ）を沈着させる。Ｘ線の１レントゲン（空気カーマ）は、ビームエネルギーに応じて骨中のどこかに、０．０１〜０．０４Ｇｙ（１．０〜４．０ｒａｄ）を沈着させ得る。本発明の方法のＸ線の線量範囲は、５０〜２００レントゲンから、ならびに３〜４週などの長期期間に対するすべてのそれらの間の中間的線量レベルから、２０００〜６０００の単一用量（限定されないが、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００、および５５００レントゲンを含む）の範囲までである。
【００７２】
本発明の方法により使用される体外照射療法スケジュールは、同様に変えることができる。特定の実施形態では、特定のスケジュールは、約６〜約７週間にわたる週当り約５回の毎日の治療を含むことができ、または約２〜約３週間にわたる毎日約２回の治療を含むことができる。
【００７３】
代替実施形態では、放射線療法はブラキセラピーであり得る。ブラキセラピーでは、放射線源は、治療の必要な領域の内側またはそれに隣接して配置される。それは、特に、乳癌、子宮頸部癌、前立腺癌および皮膚癌のための治療として使用される。ブラキセラピーは、短飛程放射線源（放射性同位元素）の腫瘍位置への直接的精密留置を必要とする。これらは、保護カプセルまたはワイヤー中に封入され、電離放射線が周辺組織を治療し、死滅させることを可能とする。
【００７４】
従って、ブラキセラピーのコースは放射線源の留置で始まり、その除去時に、または放射線源が寿命になるとき、終わる。ブラキセラピーの線量率は、放射線が周辺の媒体に照射され、１時間当たりのグレイ（Ｇｙ／時間）で表されるレベルまたは「強度」を意味する。低線量率（ＬＤＲ）のブラキセラピーは、最大２Ｇｙ／時間の線量率で放射する放射線源の移植を必要とする。ＬＤＲブラキセラピーは、口腔、中咽頭、肉腫および前立腺の癌に一般的に使用される。中程度の線量率（ＭＤＲ）のブラキセラピーは、２Ｇｙ／時間〜１２Ｇｙ／時間の範囲の中程度の照射線量率を特徴とする。高線量率（ＨＤＲ）のブラキセラピーでは、照射線量率は、１２Ｇｙ／時間を超える。ＨＤＲブラキセラピーの最もよくある用途は、子宮頸部、食道、肺、乳房および前立腺の腫瘍である。
【００７５】
パルス線量率（ＰＤＲ）ブラキセラピーは、通常、１時間に１回の放射線の短パルスを伴い、ＬＤＲ治療の全体線量率および有効性をシミュレートする。ＰＤＲブラキセラピーにより治療される典型的腫瘍部位は、婦人科および頭頸部癌である。
【００７６】
標的領域での放射線源の留置は、一時的でも永久的でもよい。一時的ブラキセラピーは、取り出す前に、設定期間（通常、数分または数時間）の間の放射線源の留置を伴う。治療時間は、必要な照射線量率および癌の型、サイズおよび位置などの多くの因子に依存する。ＬＤＲおよびＰＤＲブラキセラピーでは、線源は、２４時間まで所定位置でとどまり、その後、取り出されるが、ＨＤＲブラキセラピーでは、この時間は通常、ほんの数分間にすぎない。
【００７７】
永久的ブラキセラピーは、シード移植としても知られ、小型ＬＤＲ放射性シードまたはペレット（凡そ米粒の大きさ）の腫瘍または治療部位中への留置を含み、そこでそれらを永久的に徐々に崩壊させる。数週間または数ヶ月の期間を超えると、線源から放出される放射線は、ほぼゼロに低下するであろう。その後、治療部位中に不活性シードが残されるが、効果の持続はない。
【００７８】
一般的に使用されるブラキセラピー放射線の線源には、セシウム−１３１、セシウム−１３７、コバルト−６０、イリジウム−１９２、ヨウ素−１２５、パラジウム−１０３、ルテニウム−１０６およびラジウム−２２６が挙げられる。
【００７９】
上述のように、本発明の治療法では、ＣＤ４７結合型のヒトＳＩＲＰαなどのＣＤ４７遮断薬がＰＡＲＰ阻害薬と組み合わせて使用される。別の実施形態では、ＣＤ４７遮断薬は、放射線療法およびＰＡＲＰ阻害の両方と組み合わせて使用される。これらの方法は、ＣＤ４７＋疾患、特に、過剰増殖疾患、さらに特に癌の治療に有用である。ＣＤ４７＋がん細胞の枯渇などの抗癌作用の観点では、治療モダリティは、共同して癌細胞活力、活性または死亡率の高められた低減をもたらす。組み合わせの共同的または高められた作用はまた、癌細胞生存率、サイズ、数、または分布、または腫瘍の全体量の改善などの他のパラメーターの場合でも明らかである。
【００８０】
本発明の組み合わせにおける治療モダリティは、順次に、または実質的に同時に投与できる。いくつかの実施形態では、ＲＴは、ＳＩＲＰαＦｃの投与の前に投与できる。一般に、時間的観点からの１つのモダリティのもう一方に対する投与は、もう一方の治療コースの観点からのそのモダリティの投与に対する、１つの治療コースの観点からの１つのモダリティの投与を意味する。従って、同時投与は、治療コースがオーバーラップし、一方で、逐次または連続的または順次投与は、治療コースがオーバーラップしない開始点を有することを意味する。
【００８１】
いくつかの実施形態では、ＥＢＲ療法は、約１〜６０分以内、もしくは２〜４８時間内に投与でき、またはＣＤ４７遮断薬を投与の前に、および／または投与の後で投与できる。他の実施形態では、放射線療法は、ＣＤ４７遮断薬の投与の約１日〜約２１日前以内におよび／または後に投与できる。いくつかの実施形態では、治療期間は、大きく延長できるが、しかし、ＣＤ４７遮断薬と放射線療法の投与の間で数週（例えば、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、もしくは約８週またはそれ超）がいつしか経過してしまう。もう一方の薬剤が投与されるときに、１つの薬剤の効果が対象中で存在していることのみが重要である。一実施形態では、薬剤が同時に使用されること、およびそれらの作用が治療を受けている対象内で能動的にオーバーラップすることが望ましい。ブラキセラピーの場合には、そのモダリティを同時に用いることができ、ＣＤ４７遮断薬およびＰＡＲＰｉで治療コース中に内部放射線が所定位置にあること、またはＣＤ４７結合物質およびＰＡＲＰｉ治療が、ブラキセラピーのコースを完了している対象に投与できることを意味する。
【００８２】
本発明の方法を使って、本発明の方法から利益を得られ得る、ヒトを含む哺乳動物を含む全ての対象を治療できることも理解されよう。本発明の治療の組み合わせは、種々の疾患細胞を治療するためにも有用である。これらには、特に液体腫瘍および固形腫瘍を含む、特にＣＤ４７＋癌細胞が含まれる。固形腫瘍は、本発明の薬物の組み合わせを用いて治療して、その大きさ、数または成長速度を低下させ、癌幹細胞の増殖を制御することができる。本発明の治療法はまた、全生存期間などの生存を延長するのにも役立つ。このような固形腫瘍には、ＣＤ４７＋泌尿生殖器腫瘍および膀胱、脳、頭頸部、乳房、肺、結腸、卵巣、卵管、腹膜、前立腺、胃組織、結腸、肝臓、膵臓、子宮内膜、ユーイング肉腫、皮膚およびさらに他の組織中などのその他のものが含まれる。一実施形態では、薬物の組み合わせは、血液癌の成長または増殖を抑制するために使用できる。本明細書で使用する場合、「血液癌」は、血液の癌を指し、特に、白血病、リンパ腫および骨髄腫を含む。「白血病」は、感染と戦う上で有効ではないあまりにも多くの白血球ができ、したがって血小板および赤血球などの血液を構成する他の部分を締め出す血液の癌を意味する。白血病の症例が急性または慢性に分類されることは理解される。ある特定の形態の白血病は、例として、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄増殖性疾患／腫瘍（ＭＰＤＳ）、および骨髄異形成症候群であり得る。「リンパ腫」は、特に、ホジキンリンパ腫、無痛性および侵襲性の両非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫ならびに濾胞性リンパ腫（小細胞および大細胞）を意味し得る。骨髄腫は、多発性骨髄腫（ＭＭ）、巨細胞骨髄腫、重鎖骨髄腫、および軽鎖またはベンス・ジョーンズ骨髄腫を意味し得る。
【００８３】
いくつかの実施形態では、治療の組み合わせを用いて治療される血液学的癌は、好ましくは急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、および骨髄異形成症候群から選択され、好ましくはヒト急性骨髄性白血病から選択されるＣＤ４７＋白血病である。
【００８４】
他の実施形態では、ＳＩＲＰαＦｃタンパク質を用いて治療される血液癌は、ホジキンリンパ腫、無痛性および侵襲性非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫（小細胞および大細胞）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、巨細胞性骨髄腫、重鎖骨髄腫、および軽鎖またはベンス・ジョーンズ骨髄腫ならびに平滑筋肉腫から選択されるＣＤ４７＋リンパ腫または骨髄腫である。
【００８５】
他の実施形態では、治療の組み合わせで治療される癌は、神経膠腫または神経膠芽腫である。さらなる実施形態では、治療される癌は、黒色腫である。
【００８６】
特定の実施形態では、本発明の組み合わせを用いて、変異生殖細胞系列、例えば、変異ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＩＤＨまたはＰＡＬＢ２、進行型卵巣癌、乳癌、進行型前立腺癌、および結腸直腸癌を、特に、ＰＡＲＰｉがオリパリブ（ｏｌｉｐａｒｉｂ）またはルカパリブである場合に；および上皮卵巣、卵管、および原発性腹膜癌を、特に、ＰＡＲＰｉがニラパリブである場合に；および進行型血液系腫瘍および進行型または再発性固形腫瘍および転移性の生殖系列ＢＲＣＡ変異型乳癌に対して、特に、ＰＡＲＰｉがタラゾパリブである場合；および転移性黒色腫、進行型卵巣癌、三種陰性乳癌および非小細胞肺癌に対し、特にＰＡＲＰｉがベリパリブである場合に、治療できる。
【００８７】
より具体的には、本発明の治療の組み合わせで治療できる卵巣癌のタイプには、それらが形成される細胞の種類に従って次の３つの主要分類に入るものが含まれる：（１）卵巣の内側を覆うまたは外側を覆う細胞から生ずる上皮腫瘍；（２）卵巣内の卵子を形成する予定の細胞から生ずる生殖細胞腫瘍；および（３）卵巣を一緒に保持し、女性ホルモンを産生する結合組織細胞中で開始される性索間質細胞腫瘍。卵巣外腹膜癌（腹腔内がん腫症）などの卵巣組織に隣接する腫瘍も含まれる。
【００８８】
一般的上皮腫瘍は、卵巣の表面上皮で開始され、全ての卵巣癌の約９０％を占める。それらは、多くのサブタイプ（漿液性、子宮内膜様、粘液性、および明細胞腫瘍を含む）に分類され、これらはさらに良性（非癌性）または悪性（癌性）腫瘍に分類される。漿液性腫瘍は、もっとも一般的な形態の卵巣癌である。それらは、一般的上皮腫瘍の４０％を占める。これらの腫瘍の約５０％は悪性で、３３％が良性であり、１７％がボーダーライン上の悪性腫瘍である。子宮内膜性腫瘍は、一般的上皮腫瘍の約２０％である。約２０％の個体において、これらの癌は、子宮内膜癌（子宮内膜の癌）に付随する。５％の症例では、それらはまた、骨盤腔内の子宮内膜（子宮内膜組織）の異常発生である子宮内膜症に関連付けられる。これらの腫瘍の大部分（約８０％）は悪性で、残り（約２０％）は通常、ボーダーライン上の悪性腫瘍である。粘液性腫瘍は、全ての一般的上皮腫瘍の１％を構成する。これらの腫瘍のほとんど（約８０％）は良性で、１５％がボーダーライン上の悪性腫瘍であり、５％のみが悪性である。明細胞腫瘍は、一般的上皮腫瘍の約６％を占める。これらの腫瘍のほとんど全てが悪性である。全ての明細胞腫瘍の約半分が子宮内膜症に関連している。本発明の組み合わせでさらに治療可能なのは、ブレンナー腫瘍、未分化腫瘍、および移行細胞腫瘍ならびに卵巣内の卵子を作る細胞から形成される生殖細胞腫瘍などの希なタイプの卵巣腫瘍である。
【００８９】
特定の実施形態では、治療を受けている対象は、卵巣癌に罹患しており、治療は、毎週０．１〜０．３ｍｇ／ｋｇの配列番号８または配列番号９含有ＳＩＲＰαＦｃ薬物と、毎日の１００〜３００ｍｇのニラパリブの経口（または５〜５０ｍｇ／ｋｇ）との組み合わせの２週間を含む。さらなる実施形態では、この組み合わせを受けている対象は、さらに放射線療法も投与される。
【００９０】
別の態様では、本発明の方法の実施に有用なキットが提供され、該キットは、少なくとも１種のＰＡＲＰ阻害薬およびＣＤ４７遮断薬を、好ましくはラベルを適宜有する容器に入れて含む。好適な容器には、例えば、瓶、バイアル、シリンジ、および試験管が挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの種々の材料から形成されてよい。容器は、疾患の治療のために組み合わせにより有効である組成物を保持し、無菌の出入り口を有してよい（例えば、容器は、皮下組織注入針により貫通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグまたはバイアルであってよい）。容器上の、またはそれに添付されたラベルは、組成物が癌状態を治療するために使用されることを示す。製品は、さらに、リン酸塩緩衝生理食塩水、リンゲル溶液およびデキストロース溶液などの薬学的に許容可能な緩衝液を含む第２の容器をさらに含む。それは、本発明の併用療法で有用な２種の成分のもう一方、例えば、第１の容器がＣＤ４７遮断薬を含む場合には、ＰＡＲＰ阻害薬をさらに含む。キットには、他の緩衝液、希釈液、フィルター、針、シリンジ、および本発明の治療方法に従って使用するための説明書を含む添付文書などの、商業上および使用の観点から見て望ましい他のものをさらに含めてもよい。組織標本、標準物質または対照などの本発明の方法に有用な対照薬剤または標準物質もまた、キットに含めることができる。
【００９１】
実施例
ＲＴ、ＰＡＲＰ阻害薬およびＣＤ４７遮断薬ＳＩＲＰαＦｃの組み合わせを、異種移植片腫瘍モデルで試験した。
材料および方法
ＳＩＲＰαＦｃ、ＲＴおよびニラパリブ（ＰＡＲＰ阻害薬）のインビボ効力を、ＢＲＣＡコンピテントおよびノックダウンルシフェラーゼ発現卵巣癌細胞の腹腔内腫瘍異種移植片をＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス中で、単独で、または組み合わせて評価した。ＳＩＲＰαＦｃ（１０ｍｇ／ｋｇ）を、ＲＴの１時間前に、週３回で３週間、腹腔内に投与した。ニラパリブ（５０ｍｇ／ｋｇ）を、ＲＴの１時間前に、週５回で１週間投与した。マウスを全腹部放射線治療（体外照射療法）により２Ｇｙの線量の２分割量で、画像誘導小動物照射器（２２５ｋＶｐ、１３ｍＡ）を用いて治療した。治療は、腫瘍接種後７日目に開始した。治療効力は、生物発光イメージング（ＢＬＩ）および動物生存により評価した。全身毒性を臨床パラメーター採点により評価した。
【００９２】
結果
ＳＩＲＰαＦｃ単剤療法は、ＢＲＣＡコンピテント異種移植片モデルで腫瘍増殖を抑制したが、ＳＩＲＰαＦｃおよびＲＴの組み合わせは、ＲＴ単独に比べて生存を有意に改善し、生存期間中央値が３４日から４７日に延長された（ｐ＝０．００８５）。
【００９３】
ＢＲＣＡノックダウン腫瘍を有するマウスは、ビークル対照に比べて、ＳＩＲＰαＦｃ＋ニラパリブの組み合わせで生存を改善した（生存期間中央値４１日対４２日、ｐ＝０．０１３）。ＳＩＲＰαＦｃは、放射線治療と組み合わせた場合、生存を有意に高め（生存期間中央値４２．５日、ＲＴ単独、対４６．５日、ＳＩＲＰαＦｃ＋ＲＴ、ｐ＝０．０００９）、ＲＴ＋ＳＩＲＰαＦｃ＋ニラパリブ群で延長された生存が観察された（生存期間中央値５２日、ｐ＝０．００４）。
【００９４】
卵巣癌の標準治療−細胞減少性減量手術に続く化学療法−は、７０％の高い再発率を示し、ＰＡＲＰｉは、１回または複数回の事前の化学療法計画を受けている再発性進行型卵巣癌の患者で使用されるべきであることが承認されている。
【００９５】
ＲＴの最近の進歩は、腫瘍に対する精密および原体照射線量の照射を容易にし、健康な組織のＲＴへの暴露を最小限にし、それにより、許容可能な毒性にする。従って、ＲＴは、卵巣癌の治療への関心を獲得した。ＰＡＲＰ阻害薬が有効な放射線増感剤として機能するという事実は、ＰＡＲＰ阻害薬＋ＲＴの組み合わせをさらに大きな可能性のある治療戦略にしている。
【００９６】
しかし、単剤療法としてのＰＡＲＰｉは、重度血液学的毒性のリスクが付随し、これは通常、投与の遅延および細胞傷害性化学療法剤と同様の中断に繋がり、新規治療戦略が特に必要である。本研究では、ＳＩＲＰαＦｃが、追加の毒性を示すことなく、ＰＡＲＰｉ（ニラパリブ）および／またはＲＴの効力を高めることができることが示されている。
【００９７】
この研究は、生得的調節（ＳＩＲＰαＦｃ）を放射線療法と組み合わせて、卵巣癌患者の全生存期間を改善することに対して支持する証拠を提供する。さらに、変異型ＢＲＣＡ腫瘍の患者は、ＳＩＲＰαＦｃ、ニラパリブおよびＲＴによる３種併用療法から恩恵を受けることができる。ＳＩＲＰαＦｃと、ＰＡＲＰｉおよび／またはＲＴとの組み合わせを用いて、ＰＡＲＰｉの有効量を低減し、さらに、治療に付随する毒性を最小限にし得る。
【００９８】
本開示は、現時点で好ましい実施例であると考えられるものを基準にして記載してきたが、本開示は、開示実施例に限定されるものではないことを理解されたい。むしろ、本開示は、添付の特許請求の範囲の趣旨と範囲内でさまざまな修正および均等の組み合わせ方を包含することが意図されている。
【００９９】
全ての出版物、特許および特許出願は、あたかも、それぞれ個別の出版物、特許または特許出願が具体的に、また、個別に参照によってその全体が本明細書に組み込まれることが示されるのと同程度にその全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【図１】
2021535215.tif 000004
【図２】
2021535215.tif 000005
【手続補正書】
【提出日】令和3年5月27日(2021.5.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2021535215000001.app
【国際調査報告】
2021535215.tif 000006
2021535215.tif 000007
2021535215.tif 000008
2021535215.tif 000009