(57)【要約】  産生バイオリアクターにおける細胞生存度に対する感作剤の濃度の影響を予測する方法、産生バイオリアクターにおける細胞生存度を改善する方法、産生バイオリアクターにおける細胞生存度を予測する方法、および産生バイオリアクターにおいて細胞を培養するための方法が、本明細書で提供される。【選択図】図１１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
産生バイオリアクターにおける細胞生存度に対する感作剤の濃度の影響を予測する方法であって、
（ａ）試験培養容器における複数の試験条件下での細胞生存度を決定する工程であって、複数の試験条件は、パラメーターのセットによって規定される、工程；および
（ｂ）試験培養容器における複数の条件下での細胞生存度に基づいて、産生バイオリアクターにおける細胞生存度に対する感作剤の濃度の影響を予測する工程
を含む、前記方法。
【請求項２】
パラメーターのセットは、剪断応力、感作剤の濃度および保護剤の濃度を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
複数の試験条件は、完全実施要因スクリーニングおよび／または内接中心複合計画に基づいて選択される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
感作剤は、消泡剤である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
消泡剤は、ポリジメチルシロキサンベースの消泡剤である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
消泡剤は、シメチコンである、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
試験培養容器は、約５ｍＬ〜約５Ｌの容量を有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
試験培養容器は、約１０ｍＬ〜約５００ｍＬの容量を有する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
試験培養容器は、バッフル付き振盪フラスコである、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
産生バイオリアクターは、約５Ｌ〜約２０，０００Ｌの容量を有する、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
産生バイオリアクターは、約５０Ｌ〜約１０，０００Ｌの容量を有する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
産生バイオリアクターは、灌流バイオリアクターである、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
産生バイオリアクターは、流加バイオリアクターである、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、４０％／日未満の特異的細胞死亡率を有すると予測される感作剤の濃度を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、２０％／日未満の特異的細胞死亡率を有すると予測される感作剤の濃度を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１５０ｎＵ／細胞／日未満の細胞特異的ＬＤＨ産生を生じると予測される感作剤の濃度を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１００ｎＵ／細胞／日未満の細胞特異的ＬＤＨ産生を生じると予測される感作剤の濃度を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１％／日よりも大きい見かけの成長速度を生じると予測される感作剤の濃度を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、５％／日よりも大きい見かけの成長速度を生じると予測される感作剤の濃度を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
細胞は、組換え治療タンパク質をコードする核酸を含む、請求項１４〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
組換え治療タンパク質を収集する工程をさらに含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
組換え治療タンパク質を精製する工程をさらに含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
精製された組換え治療タンパク質を製剤化する工程をさらに含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
細胞は、細菌、酵母または哺乳動物細胞である、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
細胞生存度は、試験培養容器中の乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の濃度を測定することによって決定される、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
試験培養容器は、バッフル付き振盪フラスコであり、複数の試験条件は、
（ａ）約１２５ＲＰＭ〜約４００ＲＰＭの回転式撹拌；
（ｂ）約０ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍの感作剤の濃度；および
（ｃ）約１ｇ／Ｌ〜約１０ｇ／Ｌである保護剤の濃度
のうち１つまたはそれ以上を含む、請求項１〜８および１０〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
保護剤は、ポロクサマー、ポロキサミンまたはプルロニックポリオールである、請求項２または２６に記載の方法。
【請求項２８】
ポロクサマーは、ポロクサマー−１８８、ポロクサマー−４０１、ポロクサマー−４０２またはポロクサマー−４０７である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
ポロキサミンは、ポロキサミン−９０４またはポロキサミン−９０８である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
産生バイオリアクターにおける細胞生存度を改善する方法であって、
（ａ）試験培養容器における複数の試験条件下での細胞生存度を決定する工程であって、複数の条件は、パラメーターのセットによって規定される、工程；
（ｂ）試験培養容器における複数の条件下での細胞生存度に基づいて、産生バイオリアクターにおける細胞生存度にとって最適な条件を選択する工程；および
（ｄ）選択された条件下で、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程
を含む、前記方法。
【請求項３１】
パラメーターのセットは、剪断応力、感作剤の濃度および保護剤の濃度を含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
複数の試験条件は、完全実施要因スクリーニングおよび／または内接中心複合計画に基づいて選択される、請求項３０または３１に記載の方法。
【請求項３３】
感作剤は、消泡剤である、請求項３１または３２に記載の方法。
【請求項３４】
消泡剤は、ポリジメチルシロキサンベースの消泡剤である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
消泡剤は、シメチコンである、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
試験培養容器は、約５ｍＬ〜約５Ｌの容量を有する、請求項３０〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
試験培養容器は、約１０ｍＬ〜約５００ｍＬの容量を有する、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
試験培養容器は、バッフル付き振盪フラスコである、請求項３０〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
産生バイオリアクターは、約５Ｌ〜約２０，０００Ｌの容量を有する、請求項３０〜３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
産生バイオリアクターは、約５０Ｌ〜約１０，０００Ｌの容量を有する、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
産生バイオリアクターは、灌流バイオリアクターである、請求項３０〜４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
産生バイオリアクターは、流加バイオリアクターである、請求項３０〜４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
工程（ｃ）は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、４０％／日未満の特異的細胞死亡率を生じる、請求項３０〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
工程（ｃ）は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、２０％／日未満の特異的細胞死亡率を生じる、請求項３０〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
工程（ｃ）は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１５０ｎＵ／細胞／日未満の細胞特異的ＬＤＨ産生を生じる、請求項３０〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４６】
工程（ｃ）は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１００ｎＵ／細胞／日未満の細胞特異的ＬＤＨ産生を生じる、請求項３０〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４７】
工程（ｃ）は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１％／日よりも大きい見かけの成長速度を生じる、請求項３０〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４８】
工程（ｃ）は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、５％／日よりも大きい見かけの成長速度を生じる、請求項３０〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４９】
細胞は、組換え治療タンパク質をコードする核酸を含む、請求項３０〜４８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５０】
組換え治療タンパク質を収集する工程をさらに含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
組換え治療タンパク質を精製する工程をさらに含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
精製された組換え治療タンパク質を製剤化する工程をさらに含む、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
細胞は、細菌、酵母または哺乳動物細胞である、請求項３０〜５２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５４】
細胞生存度は、試験培養容器中の乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の濃度を測定することによって決定される、請求項３０〜５３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５５】
試験培養容器は、バッフル付き振盪フラスコであり、複数の試験条件は、
（ａ）約１２５ＲＰＭ〜約４００ＲＰＭの回転式撹拌；
（ｂ）約０ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍの感作剤の濃度；および
（ｃ）約１ｇ／Ｌ〜約１０ｇ／Ｌである保護剤の濃度
のうち１つまたはそれ以上を含む、請求項３０〜３７および３９〜５４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５６】
保護剤は、ポロクサマー、ポロキサミンまたはプルロニックポリオールである、請求項３１または５５に記載の方法。
【請求項５７】
ポロクサマーは、ポロクサマー−１８８、ポロクサマー−４０１、ポロクサマー−４０２またはポロクサマー−４０７である、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
ポロキサミンは、ポロキサミン−９０４またはポロキサミン−９０８である、請求項５６に記載の方法。
【請求項５９】
産生バイオリアクターにおける細胞生存度を予測するための方法であって、
（ａ）少なくとも２つのパラメーターを含むパラメーターのセットを選択する工程；
（ｂ）試験培養容器におけるパラメーターのセットによって規定される複数の試験条件下での細胞生存度を決定する工程；および
（ｃ）試験培養容器における複数の条件下での細胞生存度に基づいて、産生バイオリアクターにおける細胞生存度を予測する工程
を含む、前記方法。
【請求項６０】
パラメーターのセットは、剪断応力、感作剤の濃度および保護剤の濃度を含む、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
複数の試験条件は、完全実施要因スクリーニングおよび／または内接中心複合計画に基づいて選択される、請求項５９または６０に記載の方法。
【請求項６２】
感作剤は、消泡剤である、請求項６０または６１に記載の方法。
【請求項６３】
消泡剤は、ポリジメチルシロキサンベースの消泡剤である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
消泡剤は、シメチコンである、請求項６２に記載の方法。
【請求項６５】
試験培養容器は、約５ｍＬ〜約５Ｌの容量を有する、請求項５９〜６４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６６】
試験培養容器は、約１０ｍＬ〜約５００ｍＬの容量を有する、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
試験培養容器は、バッフル付き振盪フラスコである、請求項５９〜６６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６８】
産生バイオリアクターは、約５Ｌ〜約２０，０００Ｌの容量を有する、請求項５９〜６７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６９】
産生バイオリアクターは、約５０Ｌ〜約１０，０００Ｌの容量を有する、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
産生バイオリアクターは、灌流バイオリアクターである、請求項５９〜６９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７１】
産生バイオリアクターは、流加バイオリアクターである、請求項５９〜６９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７２】
産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、４０％／日未満の特異的細胞死亡率を生じると予測される条件を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む、請求項５９〜７１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７３】
産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、２０％／日未満の特異的細胞死亡率を生じると予測される条件を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む、請求項５９〜７１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７４】
産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１５０ｎＵ／細胞／日未満の細胞特異的ＬＤＨ産生を生じると予測される条件を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む、請求項５９〜７１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７５】
産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１００ｎＵ／細胞／日未満の細胞特異的ＬＤＨ産生を生じると予測される条件を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む、請求項５９〜７１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７６】
産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１％／日よりも大きい見かけの成長速度を生じると予測される条件を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む、請求項５９〜７１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７７】
産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、５％／日よりも大きい見かけの成長速度を生じると予測される条件を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む、請求項５９〜７１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７８】
細胞は、組換え治療タンパク質をコードする核酸を含む、請求項７２〜７７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７９】
組換え治療タンパク質を収集する工程をさらに含む、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
組換え治療タンパク質を精製する工程をさらに含む、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
精製された組換え治療タンパク質を製剤化する工程をさらに含む、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
細胞は、細菌、酵母または哺乳動物細胞である、請求項５９〜８１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８３】
細胞生存度は、試験培養容器中の乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の濃度を測定することによって決定される、請求項５９〜８２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８４】
試験培養容器は、バッフル付き振盪フラスコであり、複数の試験条件は、
（ａ）約１２５ＲＰＭ〜約４００ＲＰＭの回転式撹拌；
（ｂ）約０ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍの感作剤の濃度；および
（ｃ）約１ｇ／Ｌ〜約１０ｇ／Ｌである保護剤の濃度
のうち１つまたはそれ以上を含む、請求項５９〜６６および６８〜８３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８５】
保護剤は、ポロクサマー、ポロキサミンまたはプルロニックポリオールである、請求項６０または８４に記載の方法。
【請求項８６】
ポロクサマーは、ポロクサマー−１８８、ポロクサマー−４０１、ポロクサマー−４０２またはポロクサマー−４０７である、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
ポロキサミンは、ポロキサミン−９０４またはポロキサミン−９０８である、請求項８５に記載の方法。
【請求項８８】
産生バイオリアクターにおいて細胞を培養するための方法であって、以下の条件：
ｅ）産生バイオリアクターは、約１．０〜約１１０（例えば、約３．０〜約８．０、約３．０〜約７．０、約４．０〜約６．０、約５．０〜約６．０、または約６．０）のＰ／Ｖ（ｋＷ／ｍ３）を有する；
ｆ）産生バイオリアクターは、約０．０１〜約０．１０（例えば、約０．０２〜約０．０８、約０．０４〜約０．０６、または約０．０６）の空気容量／液体容量／分（ＶＶＭ）（分−１）を有する；
ｇ）培地は、約０ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍ（例えば、約０ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約１１０ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約１００ｐｐｍ、または約１００ｐｐｍ）の濃度を有する感作剤を含む；および
ｈ）液体培養培地は、約１ｇ／Ｌ〜約１５ｇ／Ｌ（例えば、約２ｇ／Ｌ〜約１０ｇ／Ｌ、約３ｇ／Ｌ〜約７ｇ／Ｌ、約４ｇ／Ｌ〜約６ｇ／Ｌ、または約５ｇ／Ｌ）である濃度を有する保護剤を含む
のうち１つまたはそれ以上の下で、液体培養培地において細胞を培養する工程を含む、前記方法。
【請求項８９】
感作剤は、消泡剤である、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
消泡剤は、ポリジメチルシロキサンベースの消泡剤である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
消泡剤は、シメチコンである、請求項８９に記載の方法。
【請求項９２】
保護剤は、ポロクサマー、ポロキサミンまたはプルロニックポリオールである、請求項８８〜９１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９３】
ポロクサマーは、ポロクサマー−１８８、ポロクサマー−４０１、ポロクサマー−４０２またはポロクサマー−４０７である、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
ポロキサミンは、ポロキサミン−９０４またはポロキサミン−９０８である、請求項９２に記載の方法。
【請求項９５】
産生バイオリアクターは、約５Ｌ〜約２０，０００Ｌの容量を有する、請求項８８〜９４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９６】
産生バイオリアクターは、約５０Ｌ〜約１０，０００Ｌの容量を有する、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
産生バイオリアクターは、灌流バイオリアクターである、請求項８８〜９６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９８】
産生バイオリアクターは、流加バイオリアクターである、請求項８８〜９６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９９】
産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、４０％／日未満の特異的細胞死亡率を生じる、請求項８８〜９８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１００】
産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、２０％／日未満の特異的細胞死亡率を生じる、請求項８８〜９８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０１】
産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１５０ｎＵ／細胞／日未満の細胞特異的ＬＤＨ産生を生じる、請求項８８〜９８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０２】
産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１００ｎＵ／細胞／日未満の細胞特異的ＬＤＨ産生を生じる、請求項８８〜９８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０３】
産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１％／日よりも大きい見かけの成長速度を生じる、請求項８８〜９８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０４】
産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、５％／日よりも大きい見かけの成長速度を生じる、請求項８８〜９８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０５】
細胞は、組換え治療タンパク質をコードする核酸を含む、請求項８８〜９８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０６】
組換え治療タンパク質を収集する工程をさらに含む、請求項１０５に記載の方法。
【請求項１０７】
組換え治療タンパク質を精製する工程をさらに含む、請求項１０６に記載の方法。
【請求項１０８】
精製された組換え治療タンパク質を製剤化する工程をさらに含む、請求項１０７に記載の方法。
【請求項１０９】
細胞は、細菌、酵母または哺乳動物細胞である、請求項８８〜１０８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１０】
細胞生存度は、試験培養容器中の乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の濃度を測定することによって決定される、請求項８８〜１０９のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願に対する相互参照
本出願は、２０１８年３月１６日出願の米国仮特許出願第６２／６４４，３３９号および２０１８年３月２０日出願の米国仮特許出願第６２／６４５，７５５号に対する優先権を主張する；これらの出願の各々の全内容は、参照によって本明細書に組み入れられる。
【０００２】
本開示は、産生バイオリアクターにおける細胞生存度を改善する方法ならびにバイオテクノロジーおよび細胞生物学の分野に関する。
【背景技術】
【０００３】
プロセス強化は、組換え治療タンパク質の産生に多くの利点を提供する。プロセス強化のための戦略の１つは、組換えタンパク質産生を改善するために高い細胞密度を維持することであるが、これは、高い酸素必要量をさらに要求する。産生バイオリアクターにおける酸素スパージは、産生バイオリアクターにおける発泡をもたらす。発泡は、強化された流加プロセスおよび灌流プロセスの両方においてしばしば生じる。従って、泡消し剤が、これらのプロセスにおいて通常添加される。しかし、消泡剤の添加および蓄積は、細胞を剪断に対して感受性にし、増加した細胞死をもたらし得る。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
従って、種々の細胞培養パラメーター、例えば、剪断、培地成分および添加剤、ならびに消泡剤濃度の中で、産生バイオリアクターにおける許容可能な細胞培養条件を特徴付けるためのモデルを開発する必要がある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、例えば、試験培養容器（例えば、バッフル付き振盪フラスコ）において取得されたデータを利用する本明細書で特許請求された方法が、産生バイオリアクターにおける細胞生存度に対する感作剤の濃度の影響を正確に予測するため、産生バイオリアクターにおける細胞生存度にとって最適な条件を正確に選択するため、産生バイオリアクターにおける細胞生存度を予測するため、および産生バイオリアクターにおいて細胞を培養するために使用することができる条件のセットを正確に同定するために使用されるという発見に基づく。
【０００６】
一態様では、本開示は、産生バイオリアクターにおける細胞生存度に対する感作剤の濃度の影響を予測する方法に関する。これらの方法は、（ａ）試験培養容器における複数の試験条件下での細胞生存度を決定する工程であって、複数の試験条件は、パラメーターのセットによって規定される、工程；および（ｂ）試験培養容器における複数の条件下での細胞生存度に基づいて、産生バイオリアクターにおける細胞生存度に対する感作剤の濃度の影響を予測する工程、を含む。
【０００７】
一部の実施形態では、パラメーターのセットは、剪断応力、感作剤の濃度および保護剤の濃度を含む。
【０００８】
一部の実施形態では、複数の試験条件は、完全実施要因スクリーニングおよび／または内接中心複合計画に基づいて選択される。
【０００９】
一部の実施形態では、感作剤は、消泡剤である。
【００１０】
一部の実施形態では、消泡剤は、ポリジメチルシロキサンベースの消泡剤またはシメチコンである。
【００１１】
一部の実施形態では、試験培養容器は、約５ｍＬ〜約５Ｌの容量を有するまたは約１０ｍＬ〜約５００ｍＬの容量を有する。一部の実施形態では、試験培養容器は、バッフル付き振盪フラスコである。
【００１２】
一部の実施形態では、産生バイオリアクターは、約５Ｌ〜約２０，０００Ｌの容量を有するまたは約５０Ｌ〜約１０，０００Ｌの容量を有する。一部の実施形態では、産生バイオリアクターは、灌流バイオリアクターまたは流加バイオリアクターである。
【００１３】
一部の実施形態では、これらの方法は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、４０％／日未満の特異的細胞死亡率を有すると予測される感作剤の濃度を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む。
【００１４】
一部の実施形態では、これらの方法は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、２０％／日未満の特異的細胞死亡率を有すると予測される感作剤の濃度を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む。
【００１５】
一部の実施形態では、これらの方法は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１５０ｎＵ／細胞／日未満の細胞特異的ＬＤＨ産生を生じると予測される感作剤の濃度を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む。
【００１６】
一部の実施形態では、これらの方法は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１００ｎＵ／細胞／日未満の細胞特異的ＬＤＨ産生を生じると予測される感作剤の濃度を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む。
【００１７】
一部の実施形態では、これらの方法は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１％／日よりも大きい見かけの成長速度を生じると予測される感作剤の濃度を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む。
【００１８】
一部の実施形態では、これらの方法は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、５％／日よりも大きい見かけの成長速度を生じると予測される感作剤の濃度を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む。
【００１９】
一部の実施形態では、細胞は、組換え治療タンパク質をコードする核酸を含む。
【００２０】
一部の実施形態では、これらの方法は、組換え治療タンパク質を収集する工程をさらに含む。一部の実施形態では、これらの方法は、組換え治療タンパク質を精製する工程をさらに含む。一部の実施形態では、これらの方法は、精製された組換え治療タンパク質を製剤化する工程をさらに含む。
【００２１】
一部の実施形態では、細胞は、細菌、酵母または哺乳動物細胞である。
【００２２】
一部の実施形態では、細胞生存度は、試験培養容器中の乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の濃度を測定することによって決定される。
【００２３】
一部の実施形態では、試験培養容器は、バッフル付き振盪フラスコであり、複数の試験条件は、
（ａ）約１２５ＲＰＭ〜約４００ＲＰＭの回転式撹拌；
（ｂ）約０ｐｐｍ〜約５０００ｐｐｍの感作剤の濃度；および
（ｃ）約１ｇ／Ｌ〜約１０ｇ／Ｌである保護剤の濃度
のうち１つまたはそれ以上を含む。
【００２４】
一部の実施形態では、保護剤は、ポロクサマー、ポロキサミンまたはプルロニックポリオールである。
【００２５】
一部の実施形態では、ポロクサマーは、ポロクサマー−１８８、ポロクサマー−４０１、ポロクサマー−４０２またはポロクサマー−４０７である。
【００２６】
一部の実施形態では、ポロキサミンは、ポロキサミン−９０４またはポロキサミン−９０８である。
【００２７】
別の態様では、本開示は、産生バイオリアクターにおける細胞生存度を改善する方法に関する。これらの方法は、
（ａ）試験培養容器における複数の試験条件下での細胞生存度を決定する工程であって、複数の条件は、パラメーターのセットによって規定される、工程；
（ｂ）試験培養容器における複数の条件下での細胞生存度に基づいて、産生バイオリアクターにおける細胞生存度にとって最適な条件を選択する工程；および
（ｃ）選択された条件下で、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程
を含む。
【００２８】
一部の実施形態では、パラメーターのセットは、剪断応力、感作剤の濃度および保護剤の濃度を含む。
【００２９】
一部の実施形態では、複数の試験条件は、完全実施要因スクリーニングおよび／または内接中心複合計画に基づいて選択される。
【００３０】
一部の実施形態では、感作剤は、消泡剤である。一部の実施形態では、消泡剤は、ポリジメチルシロキサンベースの消泡剤またはシメチコンである。
【００３１】
一部の実施形態では、試験培養容器は、約５ｍＬ〜約５Ｌの容量を有する。
【００３２】
一部の実施形態では、試験培養容器は、約１０ｍＬ〜約５００ｍＬの容量を有する。一部の実施形態では、試験培養容器は、バッフル付き振盪フラスコである。
【００３３】
一部の実施形態では、産生バイオリアクターは、約５Ｌ〜約２０，０００Ｌの容量を有する。一部の実施形態では、産生バイオリアクターは、約５０Ｌ〜約１０，０００Ｌの容量を有する。一部の実施形態では、産生バイオリアクターは、灌流バイオリアクターまたは流加バイオリアクターである。
【００３４】
一部の実施形態では、工程（ｃ）は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、４０％／日未満の特異的細胞死亡率を生じる。一部の実施形態では、工程（ｃ）は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、２０％／日未満の特異的細胞死亡率を生じる。一部の実施形態では、工程（ｃ）は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１５０ｎＵ／細胞／日未満の細胞特異的ＬＤＨ産生を生じる。一部の実施形態では、工程（ｃ）は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１００ｎＵ／細胞／日未満の細胞特異的ＬＤＨ産生を生じる。一部の実施形態では、工程（ｃ）は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１％／日よりも大きい見かけの成長速度を生じる。一部の実施形態では、工程（ｃ）は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、５％／日よりも大きい見かけの成長速度を生じる。
【００３５】
一部の実施形態では、細胞は、組換え治療タンパク質をコードする核酸を含む。
【００３６】
一部の実施形態では、これらの方法は、組換え治療タンパク質を収集する工程をさらに含む。一部の実施形態では、これらの方法は、組換え治療タンパク質を精製する工程をさらに含む。一部の実施形態では、これらの方法は、精製された組換え治療タンパク質を製剤化する工程をさらに含む。
【００３７】
一部の実施形態では、細胞は、細菌、酵母または哺乳動物細胞である。一部の実施形態では、細胞生存度は、試験培養容器中の乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の濃度を測定することによって決定される。
【００３８】
一部の実施形態では、試験培養容器は、バッフル付き振盪フラスコであり、複数の試験条件は、
（ａ）約１２５ＲＰＭ〜約４００ＲＰＭの回転式撹拌；
（ｂ）約０ｐｐｍ〜約５０００ｐｐｍの感作剤の濃度；および
（ｃ）約１ｇ／Ｌ〜約１０ｇ／Ｌである保護剤の濃度
のうち１つまたはそれ以上を含む。
【００３９】
一部の実施形態では、保護剤は、ポロクサマー、ポロキサミンまたはプルロニックポリオールである。一部の実施形態では、ポロクサマーは、ポロクサマー−１８８、ポロクサマー−４０１、ポロクサマー−４０２またはポロクサマー−４０７である。一部の実施形態では、ポロキサミンは、ポロキサミン−９０４またはポロキサミン−９０８である。
【００４０】
別の態様では、本開示は、産生バイオリアクターにおける細胞生存度を予測するための方法に関する。これらの方法は、
（ａ）少なくとも２つのパラメーターを含むパラメーターのセットを選択する工程；
（ｂ）試験培養容器におけるパラメーターのセットによって規定される複数の試験条件下での細胞生存度を決定する工程；および
（ｃ）試験培養容器における複数の条件下での細胞生存度に基づいて、産生バイオリアクターにおける細胞生存度を予測する工程
を含む。
【００４１】
一部の実施形態では、パラメーターのセットは、剪断応力、感作剤の濃度および保護剤の濃度を含む。
【００４２】
一部の実施形態では、複数の試験条件は、完全実施要因スクリーニングおよび／または内接中心複合計画に基づいて選択される。
【００４３】
一部の実施形態では、感作剤は、消泡剤である。
【００４４】
一部の実施形態では、消泡剤は、ポリジメチルシロキサンベースの消泡剤である。一部の実施形態では、消泡剤は、シメチコンである。
【００４５】
一部の実施形態では、試験培養容器は、約５ｍＬ〜約５Ｌの容量を有する。
【００４６】
一部の実施形態では、試験培養容器は、約１０ｍＬ〜約５００ｍＬの容量を有する。
【００４７】
一部の実施形態では、試験培養容器は、バッフル付き振盪フラスコである。
【００４８】
一部の実施形態では、産生バイオリアクターは、約５Ｌ〜約２０，０００Ｌの容量を有するまたは約５０Ｌ〜約１０，０００Ｌの容量を有する。
【００４９】
一部の実施形態では、産生バイオリアクターは、灌流バイオリアクターまたは流加バイオリアクターである。
【００５０】
一部の実施形態では、これらの方法は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、４０％／日未満の特異的細胞死亡率を生じると予測される条件を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む。
【００５１】
一部の実施形態では、これらの方法は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、２０％／日未満の特異的細胞死亡率を生じると予測される条件を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む。
【００５２】
一部の実施形態では、これらの方法は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１５０ｎＵ／細胞／日未満の細胞特異的ＬＤＨ産生を生じると予測される条件を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む。
【００５３】
一部の実施形態では、これらの方法は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１００ｎＵ／細胞／日未満の細胞特異的ＬＤＨ産生を生じると予測される条件を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む。
【００５４】
一部の実施形態では、これらの方法は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１％／日よりも大きい見かけの成長速度を生じると予測される条件を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む。
【００５５】
一部の実施形態では、これらの方法は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、５％／日よりも大きい見かけの成長速度を生じると予測される条件を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む。
【００５６】
一部の実施形態では、細胞は、組換え治療タンパク質をコードする核酸を含む。
【００５７】
一部の実施形態では、これらの方法は、組換え治療タンパク質を収集する工程をさらに含む。一部の実施形態では、これらの方法は、組換え治療タンパク質を精製する工程をさらに含む。一部の実施形態では、これらの方法は、精製された組換え治療タンパク質を製剤化する工程をさらに含む。
【００５８】
一部の実施形態では、細胞は、細菌、酵母または哺乳動物細胞である。
【００５９】
一部の実施形態では、細胞生存度は、試験培養容器中の乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の濃度を測定することによって決定される。
【００６０】
一部の実施形態では、試験培養容器は、バッフル付き振盪フラスコであり、複数の試験条件は、
（ａ）約１２５ＲＰＭ〜約４００ＲＰＭの回転式撹拌；
（ｂ）約０ｐｐｍ〜約５０００ｐｐｍの感作剤の濃度；および
（ｃ）約１ｇ／Ｌ〜約１０ｇ／Ｌである保護剤の濃度
のうち１つまたはそれ以上を含む。
【００６１】
一部の実施形態では、保護剤は、ポロクサマー、ポロキサミンまたはプルロニックポリオールである。一部の実施形態では、ポロクサマーは、ポロクサマー−１８８、ポロクサマー−４０１、ポロクサマー−４０２またはポロクサマー−４０７である。一部の実施形態では、ポロキサミンは、ポロキサミン−９０４またはポロキサミン−９０８である。
【００６２】
別の態様では、本開示は、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養するための方法であって、以下の条件：
ａ）産生バイオリアクターは、約１．０〜約１１０．０（例えば、約１０．０〜約１００．０、約２０．０〜約８０．０、約４０．０〜約６０．０、または約６．０）のＰ／Ｖ（Ｗ／ｍ３）を有する；
ｂ）産生バイオリアクターは、約０．０１〜約０．１０（例えば、約０．０２〜約０．０８、約０．０４〜約０．０６、または約０．０６）の空気容量／液体容量／分（ＶＶＭ）（分−１）を有する；
ｃ）培地は、約０ｐｐｍ〜約５０００ｐｐｍ（例えば、約５０ｐｐｍ〜約４０００ｐｐｍ、約１０００ｐｐｍ〜約２０００ｐｐｍ、または約１００ｐｐｍ）の濃度を有する感作剤を含む；および
ｄ）液体培養培地は、約１ｇ／Ｌ〜約１５ｇ／Ｌ（例えば、約２ｇ／Ｌ〜約１０ｇ／Ｌ、約３ｇ／Ｌ〜約７ｇ／Ｌ、約４ｇ／Ｌ〜約６ｇ／Ｌ、または約５ｇ／Ｌ）である濃度を有する保護剤を含む
のうち１つまたはそれ以上の下で、液体培養培地において細胞を培養する工程を含む、方法もまた提供する。
【００６３】
一部の実施形態では、感作剤は、消泡剤である。
【００６４】
一部の実施形態では、消泡剤は、ポリジメチルシロキサンベースの消泡剤である。一部の実施形態では、消泡剤は、シメチコンである。
【００６５】
一部の実施形態では、保護剤は、ポロクサマー、ポロキサミンまたはプルロニックポリオールである。
【００６６】
一部の実施形態では、ポロクサマーは、ポロクサマー−１８８、ポロクサマー−４０１、ポロクサマー−４０２またはポロクサマー−４０７である。一部の実施形態では、ポロキサミンは、ポロキサミン−９０４またはポロキサミン−９０８である。
【００６７】
一部の実施形態では、産生バイオリアクターは、約５Ｌ〜約２０，０００Ｌの容量を有する。一部の実施形態では、産生バイオリアクターは、約５０Ｌ〜約１０，０００Ｌの容量を有する。一部の実施形態では、産生バイオリアクターは、灌流バイオリアクターまたは流加バイオリアクターである。
【００６８】
一部の実施形態では、これらの方法は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、４０％／日未満の特異的細胞死亡率を生じる。一部の実施形態では、これらの方法は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、２０％／日未満の特異的細胞死亡率を生じる。一部の実施形態では、これらの方法は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１５０ｎＵ／細胞／日未満の細胞特異的ＬＤＨ産生を生じる。一部の実施形態では、これらの方法は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１００ｎＵ／細胞／日未満の細胞特異的ＬＤＨ産生を生じる。一部の実施形態では、これらの方法は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１％／日よりも大きい見かけの成長速度を生じる。一部の実施形態では、これらの方法は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、５％／日よりも大きい見かけの成長速度を生じる。
【００６９】
一部の実施形態では、細胞は、組換え治療タンパク質をコードする核酸を含む。
【００７０】
一部の実施形態では、これらの方法は、組換え治療タンパク質を収集する工程をさらに含む。一部の実施形態では、これらの方法は、組換え治療タンパク質を精製する工程をさらに含む。一部の実施形態では、これらの方法は、精製された組換え治療タンパク質を製剤化する工程をさらに含む。
【００７１】
一部の実施形態では、細胞は、細菌、酵母または哺乳動物細胞である。一部の実施形態では、細胞生存度は、試験培養容器中の乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の濃度を測定することによって決定される。
【００７２】
本明細書で使用する場合、名詞の前の「１つの（ａ）」という単語は、その特定の名詞の１つまたはそれ以上を示す。例えば、語句「１つの（ａ）細胞」は、「１つまたはそれ以上の細胞」を示す。
【００７３】
用語「保護剤」は、容器（例えば、試験培養容器または産生バイオリアクター）における培養の間に、剪断応力に対する細胞の感受性（例えば、哺乳動物細胞の感受性）を減少させる薬剤を意味する。保護剤の非限定的な例には、例えば、ポロクサマー（例えば、ポロクサマー−１８８、ポロクサマー−４０１、ポロクサマー−４０２およびポロクサマー−４０７）、ポロキサミン（例えば、ポロキサミン−９０４またはポロキサミン−９０８）およびプルロニックポリオールが含まれる。保護剤のさらなる例は、本明細書に記載され、当該分野で公知である。
【００７４】
用語「感作剤」は、容器（例えば、試験培養容器または産生バイオリアクター）における培養の間に、剪断応力に対する細胞の感受性を増加させる、細胞の培養物（例えば、哺乳動物細胞培養物）の液体培養培地に添加されるおよび／またはその中に存在する薬剤を意味する。感作剤の非限定的な例には、消泡剤（例えば、ポリジメチルシロキサンベースの消泡剤またはシメチコン）が含まれる。感作剤のさらなる例は、本明細書に記載され、当該分野で公知である。
【００７５】
用語「哺乳動物細胞」は、任意の哺乳動物（例えば、ヒト、ハムスター、マウス、ミドリザル、ラット、ブタ、ウシまたはウサギ）由来のまたはそれに由来する任意の細胞を意味する。例えば、哺乳動物細胞は、不死化細胞であり得る。一部の実施形態では、哺乳動物細胞は、分化した細胞である。一部の実施形態では、哺乳動物細胞は、未分化細胞である。哺乳動物細胞の非限定的な例は、本明細書に記載される。哺乳動物細胞のさらなる例は、当該分野で公知である。
【００７６】
用語「培養」または「細胞培養」は、制御されたセットの物理的条件の下での、哺乳動物細胞の維持または増殖を意味する。
【００７７】
用語「細胞の培養物」または「細胞培養物」は、制御されたセットの物理的条件の下で維持または増殖される、複数の細胞を含む液体培養培地を意味する。
【００７８】
用語「液体培養培地」は、細胞（例えば、哺乳動物細胞）がｉｎ  ｖｉｔｒｏで成長または増殖するのを可能にするのに十分な栄養素を含む流体を意味する。例えば、液体培養培地は、以下のうち１つまたはそれ以上を含むことができる：アミノ酸（例えば、２０種のアミノ酸）、プリン（例えば、ヒポキサンチン）、ピリミジン（例えば、チミジン）、コリン、イノシトール、チアミン、葉酸、ビオチン、カルシウム、ナイアシンアミド、ピリドキシン、リボフラビン、チミジン、シアノコバラミン、ピルベート、リポ酸、マグネシウム、グルコース、ナトリウム、カリウム、鉄、銅、亜鉛および重炭酸ナトリウム。一部の実施形態では、液体培養培地は、哺乳動物由来の血清を含むことができる。一部の実施形態では、液体培養培地は、哺乳動物由来の血清も別の抽出物も含まない（規定された液体培養培地）。一部の実施形態では、液体培養培地は、微量金属、哺乳動物成長ホルモンおよび／または哺乳動物増殖因子を含むことができる。液体培養培地の別の例は、最少培地（例えば、無機塩、炭素源および水のみを含む培地）である。液体培養培地の非限定的な例は、本明細書に記載される。液体培養培地のさらなる例は、当該分野で公知であり、市販されている。液体培養培地は、任意の密度の哺乳動物細胞を含むことができる。例えば、本明細書で使用する場合、バイオリアクターから除去される液体培養培地の容量は、哺乳動物細胞を実質的に含まなくてもよい。
【００７９】
用語「動物由来成分なしの液体培養培地」は、哺乳動物に由来するいずれの成分（例えば、タンパク質または血清）も含まない液体培養培地を意味する。
【００８０】
用語「無血清液体培養培地」は、哺乳動物血清を含まない液体培養培地を意味する。
【００８１】
用語「血清含有液体培養培地」は、哺乳動物血清を含む液体培養培地を意味する。
【００８２】
用語「化学的に規定された液体培養培地」は、当該分野の用語であり、化学的成分の全てが既知である液体培養培地を意味する。例えば、化学的に規定された液体培養培地は、胎仔ウシ血清もウシ血清アルブミンもヒト血清アルブミンも含まないが、それは、これらの調製物が、典型的には、アルブミンおよび脂質の複雑な混合物を含むからである。
【００８３】
用語「タンパク質なしの液体培養培地」は、いずれのタンパク質（例えば、いずれの検出可能なタンパク質）も含まない液体培養培地を意味する。
【００８４】
用語「灌流バイオリアクター」は、第１の液体培養培地中に複数の細胞（例えば、哺乳動物細胞）を含むバイオリアクターを意味し、バイオリアクター中に存在する細胞の培養は、第１の液体培養培地の周期的または継続的な除去、およびそれと同時またはその直後の、バイオリアクターへの実質的に同じ容量の第２の液体培養培地の添加を含む。一部の例では、第２の液体培養培地は、第１の液体培養培地と同じであり得る。一部の例では、培養期間の間の増分期間（例えば、約２４時間の期間、約１分間と約２４時間との間の期間、または２４時間よりも長い期間）にわたって除去および添加される第１の液体培養培地の容量において、増分変化（例えば、増加または減少）（例えば、毎日の培養培地再供給速度）が存在する。それぞれの日に除去および置換される培地の割合は、培養されている特定の細胞、初期播種密度および特定の時点における細胞密度に依存して変動し得る。「ＲＶ」または「リアクター容量」は、培養プロセスの開始時に存在する培養培地の容量（例えば、播種後に存在する培養培地の総容量）を意味する。
【００８５】
用語「流加バイオリアクター」は、当該分野の用語であり、第１の液体培養培地中に複数の細胞（例えば、哺乳動物細胞）を含むバイオリアクターを意味し、バイオリアクター中に存在する細胞の培養は、細胞培養物からの第１の液体培養培地または第２の液体培養培地の実質的なまたは著しい除去を伴わない、第１の液体培養培地への第２の液体培養培地の周期的または継続的な添加を含む。第２の液体培養培地は、第１の液体培養培地と同じであり得る。流加培養の一部の例では、第２の液体培養培地は、第１の液体培養培地の濃縮形態である。流加培養の一部の例では、第２の液体培養培地は、乾燥粉末として添加される。流加培養の一部の例では、第２の液体培養培地は、第１の液体培養培地と比較して完全に異なる処方である。
【００８６】
用語「濃縮流加バイオリアクター」は、当該分野の用語であり、第１の液体培養培地中に複数の細胞（例えば、哺乳動物細胞）を含むバイオリアクターを意味し、バイオリアクター中に存在する細胞の培養は、バイオリアクターから産物を除去することなしの、細胞培養物からの第１の液体培養培地または第２の液体培養培地の実質的なまたは著しい除去を伴う、第１の液体培養培地への第２の液体培養培地の周期的または継続的な添加を含む。第２の液体培養培地は、第１の液体培養培地と同じであり得る。濃縮流加培養の一部の例では、第２の液体培養培地は、第１の液体培養培地の濃縮形態である。濃縮流加培養の一部の例では、第２の液体培養培地は、乾燥粉末として添加される。濃縮流加培養の一部の例では、第２の液体培養培地は、第１の液体培養培地とは完全に異なる処方である。
【００８７】
「回転式撹拌」は、当該分野で周知の用語であり、例えば、その中に含まれる液体培養培地中の溶存Ｏ２濃度を増加させるために、概して円形の様式、例えば、時計回りまたは反時計回りでの、振盪フラスコの動きを指す。撹拌は、当該分野で公知の任意の方法、例えば、円形または楕円形の運動で振盪フラスコを動かす機器、例えば、回転式振盪器を使用して実施することができる。回転式撹拌を実施するために使用することができる例示的なデバイスは、本明細書に記載される。かかるデバイスのさらなる例もまた、当該分野で公知であり、市販されている。
【００８８】
用語「振盪フラスコ」は、少なくとも１つの気体透過性表面（例えば、気体透過性要素を有する端部、例えば、滅菌したバリアとしても作用し得るメンブレン）および／または少なくとも１つのベントキャップを有する、液体培養培地の容量を保持できる容器（例えば、滅菌した容器）を意味し、その形状の少なくとも一部分は、およそ円錐台状である。例えば、振盪フラスコは、バッフル付き振盪フラスコもしくはＥｒｌｅｎｍｅｙｅｒフラスコ、または当該分野で認識されたその任意の改変バージョンであり得る。
【００８９】
用語「産生バイオリアクター」は、当該分野の用語であり、大規模バイオリアクター（例えば、５Ｌ、１，０００Ｌ、５，０００Ｌ、１０，０００Ｌ、２０，０００Ｌ、５０，０００Ｌまたは１００，０００Ｌを超える内部容量を有する）を意味する。例えば、産生バイオリアクターは、灌流バイオリアクターである。
【００９０】
用語「試験培養容器」は、当該分野の用語であり、約２ｍＬ〜約５００ｍＬの容量を有する小規模バイオリアクター（例えば、産生バイオリアクターと比較して）を意味する。一部の例では、試験培養容器の高さと幅の比は、本明細書に記載される方法における産生バイオリアクターのおよその高さと幅の比に対応する。一部の実施形態では、試験培養容器は、振盪フラスコ（例えば、バッフル付き振盪フラスコ）である。試験培養容器のさらなる例は、本明細書に記載され、当該分野で公知である。
【００９１】
用語「バッチ培養」は、当該分野の用語であり、液体培養培地中に複数の細胞（例えば、哺乳動物細胞）を含む容器（例えば、バイオリアクター）を意味し、容器（例えば、バイオリアクター）中に存在する細胞の培養は、細胞培養物への実質的なまたは著しい量の新鮮な液体培養培地の添加を含まず、培養の間に、細胞培養物からの実質的なまたは著しい量の液体培養培地の除去を含まない。
【００９２】
用語「流加培養」は、当該分野の用語であり、液体培養培地中に複数の細胞（例えば、哺乳動物細胞）を含む容器（例えば、産生バイオリアクター）を意味し、容器（例えば、産生バイオリアクター）中に存在する細胞の培養は、培養の間に、容器からの液体培養培地の実質的なまたは著しい除去を伴わない、容器への新鮮な液体培養培地の周期的または継続的な添加を含む。新鮮な液体培養培地は、培養の開始時に容器中に存在する液体培養培地と同じであり得る。流加培養の一部の例では、新鮮な液体培養培地は、培養の開始時に容器中に存在する液体培養培地の濃縮形態である。流加培養の一部の例では、新鮮な培養培地は、乾燥粉末として添加される。流加培養の一部の例では、新鮮な培養培地は、培養の開始時に容器中に存在する液体培養培地と比較して、完全に異なる処方である。
【００９３】
本明細書に記載される方法は、いくつかの利点を提供する。例えば、この方法は、異なる規模を整列させ、Δパラメーターを予測し、既存の計画空間を最適化することができる。これはまた、規模にわたる成績の予測性／整列を増加させ、より代表的な小規模モデルを生み出し、プロセスのロバスト性を増加させ、プロセス強化のために剪断許容範囲を改善し、異なる剪断プロファイルにわたる感作剤および保護剤添加についてのガイダンスを提供する（図１２）。
【００９４】
特に定義しない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者が一般に理解するものと同じ意味を有する。方法および材料は、本発明における使用のために本明細書に記載される；当該分野で公知の他の適切な方法および材料もまた使用することができる。材料、方法および例は、例示に過ぎず、限定を意図しない。本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、配列、データベースエントリーおよび他の参考文献は、それらの全体が参照によって組み入れられる。矛盾する場合、定義を含む本明細書が支配する。
【００９５】
本発明の他の構成および利点は、以下の詳細な説明および図面ならびに特許請求の範囲から明らかとなる。
【図面の簡単な説明】
【００９６】
【図１】図１は、細胞培養培地中の気泡がどのように細胞死を引き起こし得るかを示す図である。
【図２】図２は、消泡剤（例示的な感作剤）の添加が、運転条件を許容可能な運転空間の外側に移動させ得ることを示す図である。
【図３】図３は、特異的乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）産生と細胞死亡率との間の関連性を示す図である。
【図４】図４は、保護剤、感作剤および回転式撹拌の間の関連性、ならびに細胞培養物における特異的ＬＤＨ産生に対する保護剤、感作剤および撹拌の影響を示す図である。
【図５】図５は、特異的ＬＤＨ産生が、感作剤濃度、保護剤濃度および回転式撹拌（剪断応力）の結果であることを示す図である。
【図６】図６は、３つの選択されたパラメーター：感作剤濃度、保護剤濃度および回転式撹拌（剪断応力）についての完全実施要因計画を示す図である。上のパネルは、完全実施要因計画（２３）を示し、ここで、応答は、特異的ＬＤＨ産生（死亡率）であり、要因は、剪断、保護剤の濃度および感作剤の濃度である。中央のパネルは、失敗が極値を生じ、失敗点とデータの残部との間に大きい幅が存在し、失敗点のモデル化が困難であり、極値が排除される（運転不能な領域）ことを示す。下のパネルは、中心点がうまく予測されないことを示す（曲率の指標、応答は、非線形である可能性が高く、ＲＰＭを増加させることは、線形に拡大縮小させない）。
【図７】図７は、感作剤濃度、保護剤濃度および回転式撹拌（剪断応力）の選択されたパラメーターについての、内接中心複合計画と組み合わせた完全実施要因計画を示す図である。
【図８】図８は、内接中心複合計画と組み合わせた完全実施要因計画の利点を示す図である。
【図９】図９は、本明細書に記載される方法が、劣った成績の領域（明るい影）および運転失敗の領域（暗い影）を同定するために使用することができることを示す図である。
【図１０】図１０は、特異的ＬＤＨ産生を介して規模にわたり剪断応力を標準化する方法およびパラメーター変化（Δパラメーター）の影響を予測する方法を示す図である。
【図１１】図１１は、本明細書に記載されるモデルが産生バイオリアクターの運転条件を最適化するためにどのように使用できるかを示す図である。このデータは、運転条件（白抜きの四角で埋められた矩形）が、現在動作しているが、さらに最適化する（例えば、プロセス中の感作剤許容範囲の濃度範囲を増加させ、容器の発泡に対する回復力を改善する）ことができる（大きい矢印の右側の明るい影の矩形）ことを示している。
【図１２】図１２は、本明細書に記載されるモデルの能力および有用性を列挙する図である。このモデルは、異なる規模を整列させ、パラメーターにおける変化を予測し、既存の計画空間を最適化することができる。このモデルは、規模にわたる成績の予測性／整列の増加もまた提供する（例えば、より代表的な小規模モデルを生み出し、伝統的な方法論に加えて、規模にわたる剪断の理解を増補する）。このモデルは、増加したプロセスロバスト性（例えば、プロセス強化のための改善された剪断許容範囲ならびに異なる剪断プロファイルにわたる感作剤の濃度および保護剤添加の濃度についての改善されたガイダンス）もまた提供する。
【図１３Ａ】図１３Ａは、予測された特異的ＬＤＨ産生値に対して、試験したベンチトップ容器における観察された特異的ＬＤＨ産生値を比較するグラフを示す図である。
【図１３Ｂ】図１３Ｂは、実施例２に記載される実験からのデータを示す図である。
【図１３Ｃ】図１３Ｃは、予測された値と共に、観察された特異的ＬＤＨ産生値を列挙する図である。
【図１４】図１４は、特異的ＬＤＨ産生に対する消泡剤の観察された影響および特異的ＬＤＨ産生に対する消泡剤の予測された影響を比較する図である。
【図１５Ａ】図１５Ａは、試験した産生バイオリアクターにおける観察された特異的ＬＤＨ産生値を、予測された値と比較するグラフを示す図である。
【図１５Ｂ】図１５Ｂは、予測された値と共に、試験した産生バイオリアクターにおける観察された特異的ＬＤＨ産生値を列挙する図である。
【発明を実施するための形態】
【００９７】
詳細な説明
本開示は、タンパク質またはポリペプチドの産生のためにプロセス強化を最適化する方法に関する。一態様では、本開示は、種々の運転パラメーター、例えば、保護剤（例えば、ポロクサマー−１８８）濃度、感作剤（例えば、消泡剤）、剪断応力（例えば、撹拌速度または酸素スパージ速度）、培地成分および添加剤、ｐＨおよび時間などによって規定される、運転空間を特徴付けることができる小規模試験培養容器（例えば、バッフル付き振盪フラスコ）モデルに関する。特に、本明細書に記載される方法は、産生バイオリアクターにおける細胞培養物の成長および生存度に対するこれらの運転パラメーターの影響を予測するために使用することができる。直交アプローチが、小規模モデルとより大規模なモデルとの間で剪断応力を相関付けるために使用され、予測された運転空間が、ベンチトップ規模および産生規模におけるデータによって検証されている。
【００９８】
従って、産生バイオリアクターにおける細胞生存度に対する感作剤の濃度の影響を予測する方法、産生バイオリアクターにおける細胞生存度を改善する方法、産生バイオリアクターにおける細胞生存度を予測するための方法、および産生バイオリアクターにおいて細胞を培養するための方法が、本明細書で提供される。これらの方法の非限定的な態様は、本明細書に記載され、限定なしに組み合わせることができる。
【００９９】
プロセス強化
プロセス強化は、製造プロセスがより正確かつより効率的になるように既存の運転スキームを最適化することによる、製造および加工における改善を指す。これらの改善は、種々の利点、例えば、バイオマスの増加、容量生産性の改善、施設稼働率の最適化、商品原価の低減、製品品質一貫性の維持もしくは改善、施設設置面積の低減、および／またはユニット運転の低減をもたらすことができる。分子レベルでは、プロセス強化は、混合を増強すること、反応速度論を改善すること、ならびに／または収量および特異性を増加させることも含み得る。
【０１００】
本開示は、タンパク質またはポリペプチド（例えば、組換え治療タンパク質、組換えタンパク質または組換えポリペプチド）の産生のためのプロセス強化に関する。組換え治療タンパク質またはポリペプチドの産生を増加させるための１つの戦略は、細胞密度を増加させることである。高い細胞密度は通常、高い酸素消費を要求し、要求される酸素スパージは、発泡問題（即ち、気泡）をもたらす場合が多い。図１に示されるように、気泡は、例えば、細胞−気泡接触、細胞気泡付着、または気泡破裂からの致死的な力を介して、細胞死をもたらし得る。式１は、細胞死亡率、容量通気および気泡サイズの間の関連性を示す。
【０１０１】
【数１】
2021515584.tif 000003
【０１０２】
従って、泡消し剤が細胞培養物プロセスに添加される場合が多い。しかし、消泡剤の添加および／または蓄積は、細胞培養成績（例えば、哺乳動物細胞培養成績）に対して負の影響を引き起こし得る。一部の場合には、消泡剤の添加および蓄積は、特に産生規模（産生バイオリアクター規模）では、増加した細胞死亡率をもたらし得る。従って、産生規模（産生バイオリアクター規模）における、運転パラメーターまたはこれらの運転パラメーター（例えば、消泡剤または一部の他のパラメーター）における変化の影響を評価することは重要である。
【０１０３】
感作剤、撹拌および保護剤
産生規模（産生バイオリアクター規模）における種々の運転パラメーターの影響を試験することはひどく費用がかかるので、パイロット実験が通常、試験培養容器（例えば、振盪フラスコ、実験室発酵槽またはパイロット発酵槽）において最初に実施される。これらの試験培養容器は、小規模における種々のパラメーター、例えば、撹拌、感作剤濃度、保護剤濃度、温度、ｐＨ、栄養素組成、バイオマス負荷および供給戦略の影響を試験し、観察された影響を産生規模（産生バイオリアクター規模）における影響と相関付けるために運転される。多くの伝統的な方法では、仕事率／容量（Ｐ／Ｖ）、物質移動容量係数（ｋＬａ）、羽先端速度、混合時間、数値流体力学（ＣＦＤ）モデル化が、試験培養容器における結果を産生規模（産生バイオリアクター規模）における影響と相関付けるためにしばしば使用される。
【０１０４】
これらの種々のパラメーターのうち、感作剤パラメーター（例えば、感作剤の濃度）は、スケールアップが特に困難である。本明細書に記載される方法のいずれかの一部の実施形態では、感作剤は、消泡剤（例えば、シメチコン、シメチコンエマルジョンまたはポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）ベースの油）であり得る。消泡剤の説明は、例えば、Ｂｒｅｃｅｖｉｃら、「Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ａｎｔｉｆｏａｍｉｎｇ  ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｉｍｅｔｈｉｃｏｎｅ」、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．１４（３）：２０７〜２１１、１９９４；およびＢｅｒｇｅｒｏｎら、「Ｐｏｌｙｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｏｘａｎｅ（ＰＤＭＳ）−ｂａｓｅｄ  ａｎｔｉｆｏａｍｓ」、Ｃｏｌｌｏｉｄｓ  ａｎｄ  Ｓｕｒｆａｃｅｓ  Ａ：Ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ａｓｐｅｃｔｓ  １２２（１〜３）：１０３〜１２０、１９９７において見出すことができる；これらは共に、その全体が参照によって本明細書に組み入れられる。
【０１０５】
感作剤のさらなる例には、例えば、有機油ベースの感作剤、シリコーン油ベースの感作剤および混成液体−固体混合物／乳化感作剤（例えば、フュームドシリカ、油配合消泡剤）が含まれる。感作剤は、シリコーン発泡制御剤、例えば、ＸＩＡＭＥＴＥＲ（登録商標）ＡＣＰ−０１００消泡剤化合物、ＸＩＡＭＥＴＥＲ（登録商標）ＡＣＰ−１５００消泡剤化合物、ＸＩＡＭＥＴＥＲ（登録商標）ＡＦＥ−１５１０消泡剤エマルジョン、ＸＩＡＭＥＴＥＲ（登録商標）ＡＦＥ−１５２０消泡剤エマルジョン、ＸＩＡＭＥＴＥＲ（登録商標）ＡＦＥ−１５３０消泡剤エマルジョン、ＸＩＡＭＥＴＥＲ（登録商標）ＡＣＰ−１４００消泡剤化合物、ＸＩＡＭＥＴＥＲ（登録商標）ＡＦＥ−０７００消泡剤エマルジョン、ＸＩＡＭＥＴＥＲ（登録商標）ＡＣＰ−１９２０粉末消泡剤およびＸＩＡＭＥＴＥＲ（登録商標）ＰＭＸ−２００シリコーン流体である。感作剤のさらなる例には、Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標）消泡剤Ｃエマルジョン、消泡剤２０４（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）、消泡剤Ａ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）、消泡剤Ｂエマルジョン（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）、消泡剤Ｃエマルジョン（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）、消泡剤Ｙ−３０エマルジョン（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）、消泡剤Ｏ−３０（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）および消泡剤ＳＥ−１５（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）が含まれる。有機非シリコーンポリプロピレンベースのポリエーテル感作剤の非限定的な例は、消泡剤２０４である。シメチコンエマルジョンの非限定的な例は、消泡剤ＥＸ−Ｃｅｌｌである。混成固体−液体消泡剤の非限定的な例には、Ｍａｒｉｎｏｖａら、Ｌａｎｇｍｕｉｒ  １７：２４２６〜２４３６、２００１に記載される、シリコーン油（ＰＤＭＳ）、コンパウンドＡ、改変ＣＡ（ＭＣＡ）、エマルジョンＡ（ＥＡ）およびＥＡのアナログ（ＡＥＡ）が含まれる。ポリジメチルシロキサン（ＰＭＳＡ）ベースの消泡剤の非限定的な例は、Ｂｅｒｇｅｒｏｎら、Ｃｏｌｌｏｉｄｓ  ａｎｄ  Ｓｕｒｆａｃｅｓ  Ａ：Ｐｈｙｓｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ａｓｐｅｃｔｓ  １２２：１０３〜１２０、１９９７に記載されている。
【０１０６】
感作剤のさらなる例は、当該分野で公知である。例えば、Ｒａｓｈｍｉｋａら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．３４（１）：２６２〜２７０、２０１８を参照のこと。
【０１０７】
一部の他のパラメーター、例えば、バッフリング、フラスコサイズ、撹拌もまた、剪断に対する細胞の感受性に対して影響を有する。他のパラメーターとの相互作用に起因して、これらの感作剤パラメーター（例えば、消泡剤の濃度）は、スケールアッププロセスにおいて非線形の関係を有する場合が多く、異なる規模にわたって幾何学的に関係がない。従って、伝統的なモデルは通常、産生規模における感作剤パラメーターの影響を予測することに関して無力である。
【０１０８】
予測をさらにいっそう困難にしているのは、感作剤パラメーターが産生期間全体において変化し得るということである。例えば、産生プロセス（例えば、産生バイオリアクターにおける細胞の培養）の間に、細胞密度は増加し、より高い酸素スパージが要求される。従って、より多くの消泡剤が要求され、産生バイオリアクターに添加される。消泡剤の増加した濃度は、細胞を剪断応力に対してさらにいっそう感受性にし、運転条件を許容可能な運転空間の外に迅速に移動させる（図２）。
【０１０９】
さらに、保護剤は、増加した剪断応力から細胞を保護することができ、液体培養培地にしばしば添加される。増加した保護剤濃度が、感作剤の負の影響を軽減するために必要な場合があるが、保護剤と他のパラメーターとの相互作用により、必要とされる保護剤の正確な量を決定することは困難になる。一部の一般的な保護剤には、例えば、ポロクサマー、ポロキサミンおよび／またはプルロニックポリオールが含まれる。一部の実施形態では、保護剤は、ポロクサマー（例えば、ポロクサマー−１８８、ポロクサマー−４０１、ポロクサマー−４０２またはポロクサマー−４０７）である。一部の他の実施形態では、保護剤は、ポロキサミン（例えば、ポロキサミン−９０４またはポロキサミン−９０８）である。一部のさらなる実施形態では、保護剤は、プルロニックポリオール（例えば、Ｌ−６１、Ｌ−１２１、Ｐ−１０３、Ｐ−１２３、Ｐ−８４、Ｐ−１０４、Ｐ−６５、Ｐ−１０５、Ｌ−３５、Ｆ−１２７、Ｆ−３８、Ｆ−６８またはＦ−１０８）またはリバースプルロニックポリオール（例えば、２５  Ｒ−２、２５  Ｒ−４、２５  Ｒ−５、２５  Ｒ−８、１０  Ｒ−５または１０  Ｒ−８）である。例示的な保護剤の詳細な説明は、例えば、Ｍｏｇｈｉｍｉら、「Ｐｏｌｏｘａｍｅｒｓ  ａｎｄ  ｐｏｌｏｘａｍｉｎｅｓ  ｉｎ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ａｎｄ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ」、Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １８（１０）：４１２〜４２０、２０００；Ｍｕｒｈａｍｍｅｒら、「Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｆｅａｔｕｒｅｓ  ｏｆ  ｎｏｎｉｏｎｉｃ  ｐｏｌｙｇｌｙｃｏｌ  ｐｏｌｙｍｅｒ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｉｎ  ｓｐａｒｇｅｄ  ａｎｉｍａｌ  ｃｅｌｌ  ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒｓ」、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ６（２）：１４２〜１４８、１９９０；Ｍｕｒｈａｍｍｅｒ、「Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  ｐｏｌｙｏｌｓ，ｃｅｌｌ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ」、Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（１９９９）において見出すことができる；これらは各々、その全体が参照によって本明細書に組み入れられる。
【０１１０】
実施要因計画および中心複合計画に基づくモデル化
本開示は、試験培養容器モデルからの結果に基づいて、任意の規模においてリアクターを最適化することを目的とした、種々の運転パラメーター、例えば、保護剤（培地成分／添加剤、例えば、プルロニック）、感作剤（例えば、消泡剤）および剪断応力（撹拌）の影響（例えば、細胞生存度、細胞死亡率、組換え治療タンパク質産生または収量）を捕捉するためのモデル化方法を提供する。
【０１１１】
一態様では、本明細書に記載される方法は、産生バイオリアクターにおける細胞生存度を予測するために使用することができる。これらの方法は、少なくとも２つ（例えば、３つ、４つ、５つまたは６つ）のパラメーターを含むパラメーターのセットを選択する工程；試験培養容器（例えば、本明細書に記載される試験培養容器のいずれか）におけるパラメーターのセットによって規定される複数の試験条件下での細胞生存度を決定する工程；および試験培養容器における複数の条件下での細胞生存度に基づいて、産生バイオリアクターにおける細胞生存度を予測する工程、を含む。予測に基づいて、改善された細胞生存度を有する条件を同定することができる。産生バイオリアクターにおける細胞生存度に対する感作剤の濃度の影響を予測する方法もまた、本明細書で提供される。これらの方法は、試験培養容器における複数の試験条件下での細胞生存度を決定する工程であって、複数の試験条件は、パラメーターのセットによって規定される、工程；および試験培養容器における複数の条件下での細胞生存度に基づいて、産生バイオリアクターにおける細胞生存度に対する感作剤の濃度の影響を予測する工程、を含む。
【０１１２】
試験培養容器は、スピンチューブ（例えば、バッフル付きスピンチューブ）、フラスコ（例えば、約３Ｌの容量を有する振盪フラスコ）（例えば、バッフル付き振盪フラスコ）、自動実験室発酵槽（ＳａｒｔｏｒｉｕｓのＡｍｂｒ  １５およびＡｍｂｅｒ  ２５０）、実験室発酵槽またはパイロット発酵槽であり得る。一部の実施形態では、試験培養容器は、５Ｌ未満、３Ｌ未満、１Ｌ未満、５００ｍｌ未満または１００ｍｌ未満（例えば、１Ｌ未満、または５０ｍｌ〜５００ｍｌ）の容量を有し得る。一部の実施形態では、試験培養容器は、約５ｍＬ〜約５Ｌ（例えば、約１０ｍＬ〜約５００ｍＬまたは約２．５Ｌ〜約３．５Ｌ）の容量（内部容量）を有する。例えば、試験培養容器は、約５ｍＬ〜約５Ｌ、約５ｍＬ〜約４．５Ｌ、約５ｍＬ〜約４．０Ｌ、約５ｍＬ〜約３．５Ｌ、約５ｍＬ〜約３．０Ｌ、約５ｍＬ〜約２．５Ｌ、約５ｍＬ〜約２Ｌ、約５ｍＬ〜約１．５Ｌ、約５ｍＬ〜約１Ｌ、約５ｍＬ〜約９００ｍＬ、約５ｍＬ〜約８００ｍＬ、約５ｍＬ〜約７００ｍＬ、約５ｍＬ〜約６００ｍＬ、約５ｍＬ〜約５００ｍＬ、約５ｍＬ〜約４５０ｍＬ、約５ｍＬ〜約４００ｍＬ、約５ｍＬ〜約３５０ｍＬ、約５ｍＬ〜約３００ｍＬ、約５ｍＬ〜約２５０ｍＬ、約５ｍＬ〜約２００ｍＬ、約５ｍＬ〜約１５０ｍＬ、約５ｍＬ〜約１００ｍＬ、約５ｍＬ〜約８０ｍＬ、約５ｍＬ〜約６０ｍＬ、約５ｍＬ〜約５０ｍＬ、約５ｍＬ〜約４０ｍＬ、約５ｍＬ〜約３０ｍＬ、約５ｍＬ〜約２５ｍＬ、約５ｍＬ〜約２０ｍＬ、約５ｍＬ〜約１５ｍＬ、約５ｍＬ〜約１０ｍＬ、約１０ｍＬ〜約５Ｌ、約１０ｍＬ〜約４．５Ｌ、約１０ｍＬ〜約４．０Ｌ、約１０ｍＬ〜約３．５Ｌ、約１０ｍＬ〜約３．０Ｌ、約１０ｍＬ〜約２．５Ｌ、約１０ｍＬ〜約２Ｌ、約１０ｍＬ〜約１．５Ｌ、約１０ｍＬ〜約１Ｌ、約１０ｍＬ〜約９００ｍＬ、約１０ｍＬ〜約８００ｍＬ、約１０ｍＬ〜約７００ｍＬ、約１０ｍＬ〜約６００ｍＬ、約１０ｍＬ〜約５００ｍＬ、約１０ｍＬ〜約４５０ｍＬ、約１０ｍＬ〜約４００ｍＬ、約１０ｍＬ〜約３５０ｍＬ、約１０ｍＬ〜約３００ｍＬ、約１０ｍＬ〜約２５０ｍＬ、約１０ｍＬ〜約２００ｍＬ、約１０ｍＬ〜約１５０ｍＬ、約１０ｍＬ〜約１００ｍＬ、約１０ｍＬ〜約８０ｍＬ、約１０ｍＬ〜約６０ｍＬ、約１０ｍＬ〜約５０ｍＬ、約１０ｍＬ〜約４０ｍＬ、約１０ｍＬ〜約３０ｍＬ、約１０ｍＬ〜約２５ｍＬ、約１０ｍＬ〜約２０ｍＬ、約１０ｍＬ〜約１５ｍＬ、約１５ｍＬ〜約５Ｌ、約１５ｍＬ〜約４．５Ｌ、約１５ｍＬ〜約４．０Ｌ、約１５ｍＬ〜約３．５Ｌ、約１５ｍＬ〜約３．０Ｌ、約１５ｍＬ〜約２．５Ｌ、約１５ｍＬ〜約２Ｌ、約１５ｍＬ〜約１．５Ｌ、約１５ｍＬ〜約１Ｌ、約１５ｍＬ〜約９００ｍＬ、約１５ｍＬ〜約８００ｍＬ、約１５ｍＬ〜約７００ｍＬ、約１５ｍＬ〜約６００ｍＬ、約１５ｍＬ〜約５００ｍＬ、約１５ｍＬ〜約４５０ｍＬ、約１５ｍＬ〜約４００ｍＬ、約１５ｍＬ〜約３５０ｍＬ、約１５ｍＬ〜約３００ｍＬ、約１５ｍＬ〜約２５０ｍＬ、約１５ｍＬ〜約２００ｍＬ、約１５ｍＬ〜約１５０ｍＬ、約１５ｍＬ〜約１００ｍＬ、約１５ｍＬ〜約８０ｍＬ、約１５ｍＬ〜約６０ｍＬ、約１５ｍＬ〜約５０ｍＬ、約１５ｍＬ〜約４０ｍＬ、約１５ｍＬ〜約３０ｍＬ、約１５ｍＬ〜約２５��Ｌ、約１５ｍＬ〜約２０ｍＬ、約２０ｍＬ〜約５Ｌ、約２０ｍＬ〜約４．５Ｌ、約２０ｍＬ〜約４．０Ｌ、約２０ｍＬ〜約３．５Ｌ、約２０ｍＬ〜約３．０Ｌ、約２０ｍＬ〜約２．５Ｌ、約２０ｍＬ〜約２Ｌ、約２０ｍＬ〜約１．５Ｌ、約２０ｍＬ〜約１Ｌ、約２０ｍＬ〜約９００ｍＬ、約２０ｍＬ〜約８００ｍＬ、約２０ｍＬ〜約７００ｍＬ、約２０ｍＬ〜約６００ｍＬ、約２０ｍＬ〜約５００ｍＬ、約２０ｍＬ〜約４５０ｍＬ、約２０ｍＬ〜約４００ｍＬ、約２０ｍＬ〜約３５０ｍＬ、約２０ｍＬ〜約３００ｍＬ、約２０ｍＬ〜約２５０ｍＬ、約２０ｍＬ〜約２００ｍＬ、約２０ｍＬ〜約１５０ｍＬ、約２０ｍＬ〜約１００ｍＬ、約２０ｍＬ〜約８０ｍＬ、約２０ｍＬ〜約６０ｍＬ、約２０ｍＬ〜約５０ｍＬ、約２０ｍＬ〜約４０ｍＬ、約２０ｍＬ〜約３０ｍＬ、約２０ｍＬ〜約２５ｍＬ、約２５ｍＬ〜約５Ｌ、約２５ｍＬ〜約４．５Ｌ、約２５ｍＬ〜約４．０Ｌ、約２５ｍＬ〜約３．５Ｌ、約２５ｍＬ〜約３．０Ｌ、約２５ｍＬ〜約２．５Ｌ、約２５ｍＬ〜約２Ｌ、約２５ｍＬ〜約１．５Ｌ、約２５ｍＬ〜約１Ｌ、約２５ｍＬ〜約９００ｍＬ、約２５ｍＬ〜約８００ｍＬ、約２５ｍＬ〜約７００ｍＬ、約２５ｍＬ〜約６００ｍＬ、約２５ｍＬ〜約５００ｍＬ、約２５ｍＬ〜約４５０ｍＬ、約２５ｍＬ〜約４００ｍＬ、約２５ｍＬ〜約３５０ｍＬ、約２５ｍＬ〜約３００ｍＬ、約２５ｍＬ〜約２５０ｍＬ、約２５ｍＬ〜約２００ｍＬ、約２５ｍＬ〜約１５０ｍＬ、約２５ｍＬ〜約１００ｍＬ、約２５ｍＬ〜約８０ｍＬ、約２５ｍＬ〜約６０ｍＬ、約２５ｍＬ〜約５０ｍＬ、約２５ｍＬ〜約４０ｍＬ、約２５ｍＬ〜約３０ｍＬ、約３０ｍＬ〜約５Ｌ、約３０ｍＬ〜約４．５Ｌ、約３０ｍＬ〜約４．０Ｌ、約３０ｍＬ〜約３．５Ｌ、約３０ｍＬ〜約３．０Ｌ、約３０ｍＬ〜約２．５Ｌ、約３０ｍＬ〜約２Ｌ、約３０ｍＬ〜約１．５Ｌ、約３０ｍＬ〜約１Ｌ、約３０ｍＬ〜約９００ｍＬ、約３０ｍＬ〜約８００ｍＬ、約３０ｍＬ〜約７００ｍＬ、約３０ｍＬ〜約６００ｍＬ、約３０ｍＬ〜約５００ｍＬ、約３０ｍＬ〜約４５０ｍＬ、約３０ｍＬ〜約４００ｍＬ、約３０ｍＬ〜約３５０ｍＬ、約３０ｍＬ〜約３００ｍＬ、約３０ｍＬ〜約２５０ｍＬ、約３０ｍＬ〜約２００ｍＬ、約３０ｍＬ〜約１５０ｍＬ、約３０ｍＬ〜約１００ｍＬ、約３０ｍＬ〜約８０ｍＬ、約３０ｍＬ〜約６０ｍＬ、約３０ｍＬ〜約５０ｍＬ、約３０ｍＬ〜約４０ｍＬ、約４０ｍＬ〜約５Ｌ、約４０ｍＬ〜約４．５Ｌ、約４０ｍＬ〜約４．０Ｌ、約４０ｍＬ〜約３．５Ｌ、約４０ｍＬ〜約３．０Ｌ、約４０ｍＬ〜約２．５Ｌ、約４０ｍＬ〜約２Ｌ、約４０ｍＬ〜約１．５Ｌ、約４０ｍＬ〜約１Ｌ、約４０ｍＬ〜約９００ｍＬ、約４０ｍＬ〜約８００ｍＬ、約４０ｍＬ〜約７００ｍＬ、約４０ｍＬ〜約６００ｍＬ、約４０ｍＬ〜約５００ｍＬ、約４０ｍＬ〜約４５０ｍＬ、約４０ｍＬ〜約４００ｍＬ、約４０ｍＬ〜約３５０ｍＬ、約４０ｍＬ〜約３００ｍＬ、約４０ｍＬ〜約２５０ｍＬ、約４０ｍＬ〜約２００ｍＬ、約４０ｍＬ〜約１５０ｍＬ、約４０ｍＬ〜約１００ｍＬ、約４０ｍＬ〜約８０ｍＬ、約４０ｍＬ〜約６０ｍＬ、約４０ｍＬ〜約５０ｍＬ、約５０ｍＬ〜約５Ｌ、約５０ｍＬ〜約４．５Ｌ、約５０ｍＬ〜約４．０Ｌ、約５０ｍＬ〜約３．５Ｌ、約５０ｍ��〜約３．０Ｌ、約５０ｍＬ〜約２．５Ｌ、約５０ｍＬ〜約２Ｌ、約５０ｍＬ〜約１．５Ｌ、約５０ｍＬ〜約１Ｌ、約５０ｍＬ〜約９００ｍＬ、約５０ｍＬ〜約８００ｍＬ、約５０ｍＬ〜約７００ｍＬ、約５０ｍＬ〜約６００ｍＬ、約５０ｍＬ〜約５００ｍＬ、約５０ｍＬ〜約４５０ｍＬ、約５０ｍＬ〜約４００ｍＬ、約５０ｍＬ〜約３５０ｍＬ、約５０ｍＬ〜約３００ｍＬ、約５０ｍＬ〜約２５０ｍＬ、約５０ｍＬ〜約２００ｍＬ、約５０ｍＬ〜約１５０ｍＬ、約５０ｍＬ〜約１００ｍＬ、約５０ｍＬ〜約８０ｍＬ、約５０ｍＬ〜約６０ｍＬ、約６０ｍＬ〜約５Ｌ、約６０ｍＬ〜約４．５Ｌ、約６０ｍＬ〜約４．０Ｌ、約６０ｍＬ〜約３．５Ｌ、約６０ｍＬ〜約３．０Ｌ、約６０ｍＬ〜約２．５Ｌ、約６０ｍＬ〜約２Ｌ、約６０ｍＬ〜約１．５Ｌ、約６０ｍＬ〜約１Ｌ、約６０ｍＬ〜約９００ｍＬ、約６０ｍＬ〜約８００ｍＬ、約６０ｍＬ〜約７００ｍＬ、約６０ｍＬ〜約６００ｍＬ、約６０ｍＬ〜約５００ｍＬ、約６０ｍＬ〜約４５０ｍＬ、約６０ｍＬ〜約４００ｍＬ、約６０ｍＬ〜約３５０ｍＬ、約６０ｍＬ〜約３００ｍＬ、約６０ｍＬ〜約２５０ｍＬ、約６０ｍＬ〜約２００ｍＬ、約６０ｍＬ〜約１５０ｍＬ、約６０ｍＬ〜約１００ｍＬ、約６０ｍＬ〜約８０ｍＬ、約８０ｍＬ〜約５Ｌ、約８０ｍＬ〜約４．５Ｌ、約８０ｍＬ〜約４．０Ｌ、約８０ｍＬ〜約３．５Ｌ、約８０ｍＬ〜約３．０Ｌ、約８０ｍＬ〜約２．５Ｌ、約８０ｍＬ〜約２Ｌ、約８０ｍＬ〜約１．５Ｌ、約８０ｍＬ〜約１Ｌ、約８０ｍＬ〜約９００ｍＬ、約８０ｍＬ〜約８００ｍＬ、約８０ｍＬ〜約７００ｍＬ、約８０ｍＬ〜約６００ｍＬ、約８０ｍＬ〜約５００ｍＬ、約８０ｍＬ〜約４５０ｍＬ、約８０ｍＬ〜約４００ｍＬ、約８０ｍＬ〜約３５０ｍＬ、約８０ｍＬ〜約３００ｍＬ、約８０ｍＬ〜約２５０ｍＬ、約８０ｍＬ〜約２００ｍＬ、約８０ｍＬ〜約１５０ｍＬ、約８０ｍＬ〜約１００ｍＬ、約１００ｍＬ〜約５Ｌ、約１００ｍＬ〜約４．５Ｌ、約１００ｍＬ〜約４．０Ｌ、約１００ｍＬ〜約３．５Ｌ、約１００ｍＬ〜約３．０Ｌ、約１００ｍＬ〜約２．５Ｌ、約１００ｍＬ〜約２Ｌ、約１００ｍＬ〜約１．５Ｌ、約１００ｍＬ〜約１Ｌ、約１００ｍＬ〜約９００ｍＬ、約１００ｍＬ〜約８００ｍＬ、約１００ｍＬ〜約７００ｍＬ、約１００ｍＬ〜約６００ｍＬ、約１００ｍＬ〜約５００ｍＬ、約１００ｍＬ〜約４５０ｍＬ、約１００ｍＬ〜約４００ｍＬ、約１００ｍＬ〜約３５０ｍＬ、約１００ｍＬ〜約３００ｍＬ、約１００ｍＬ〜約２５０ｍＬ、約１００ｍＬ〜約２００ｍＬ、約１００ｍＬ〜約１５０ｍＬ、約１５０ｍＬ〜約５Ｌ、約１５０ｍＬ〜約４．５Ｌ、約１５０ｍＬ〜約４．０Ｌ、約１５０ｍＬ〜約３．５Ｌ、約１５０ｍＬ〜約３．０Ｌ、約１５０ｍＬ〜約２．５Ｌ、約１５０ｍＬ〜約２Ｌ、約１５０ｍＬ〜約１．５Ｌ、約１５０ｍＬ〜約１Ｌ、約１５０ｍＬ〜約９００ｍＬ、約１５０ｍＬ〜約８００ｍＬ、約１５０ｍＬ〜約７００ｍＬ、約１５０ｍＬ〜約６００ｍＬ、約１５０ｍＬ〜約５００ｍＬ、約１５０ｍＬ〜約４５０ｍＬ、約１５０ｍＬ〜約４００ｍＬ、約１５０ｍＬ〜約３５０ｍＬ、約１５０ｍＬ〜約３００ｍＬ、約１５０ｍＬ〜約２５０ｍＬ、約１５０ｍＬ〜約２００ｍＬ、約２００ｍＬ〜約５Ｌ、約２００ｍＬ〜約４．５��、約２００ｍＬ〜約４．０Ｌ、約２００ｍＬ〜約３．５Ｌ、約２００ｍＬ〜約３．０Ｌ、約２００ｍＬ〜約２．５Ｌ、約２００ｍＬ〜約２Ｌ、約２００ｍＬ〜約１．５Ｌ、約２００ｍＬ〜約１Ｌ、約２００ｍＬ〜約９００ｍＬ、約２００ｍＬ〜約８００ｍＬ、約２００ｍＬ〜約７００ｍＬ、約２００ｍＬ〜約６００ｍＬ、約２００ｍＬ〜約５００ｍＬ、約２００ｍＬ〜約４５０ｍＬ、約２００ｍＬ〜約４００ｍＬ、約２００ｍＬ〜約３５０ｍＬ、約２００ｍＬ〜約３００ｍＬ、約２００ｍＬ〜約２５０ｍＬ、約２５０ｍＬ〜約５Ｌ、約２５０ｍＬ〜約４．５Ｌ、約２５０ｍＬ〜約４．０Ｌ、約２５０ｍＬ〜約３．５Ｌ、約２５０ｍＬ〜約３．０Ｌ、約２５０ｍＬ〜約２．５Ｌ、約２５０ｍＬ〜約２Ｌ、約２５０ｍＬ〜約１．５Ｌ、約２５０ｍＬ〜約１Ｌ、約２５０ｍＬ〜約９００ｍＬ、約２５０ｍＬ〜約８００ｍＬ、約２５０ｍＬ〜約７００ｍＬ、約２５０ｍＬ〜約６００ｍＬ、約２５０ｍＬ〜約５００ｍＬ、約２５０ｍＬ〜約４５０ｍＬ、約２５０ｍＬ〜約４００ｍＬ、約２５０ｍＬ〜約３５０ｍＬ、約２５０ｍＬ〜約３００ｍＬ、約３００ｍＬ〜約５Ｌ、約３００ｍＬ〜約４．５Ｌ、約３００ｍＬ〜約４．０Ｌ、約３００ｍＬ〜約３．５Ｌ、約３００ｍＬ〜約３．０Ｌ、約３００ｍＬ〜約２．５Ｌ、約３００ｍＬ〜約２Ｌ、約３００ｍＬ〜約１．５Ｌ、約３００ｍＬ〜約１Ｌ、約３００ｍＬ〜約９００ｍＬ、約３００ｍＬ〜約８００ｍＬ、約３００ｍＬ〜約７００ｍＬ、約３００ｍＬ〜約６００ｍＬ、約３００ｍＬ〜約５００ｍＬ、約３００ｍＬ〜約４５０ｍＬ、約３００ｍＬ〜約４００ｍＬ、約３００ｍＬ〜約３５０ｍＬ、約３５０ｍＬ〜約５Ｌ、約３５０ｍＬ〜約４．５Ｌ、約３５０ｍＬ〜約４．０Ｌ、約３５０ｍＬ〜約３．５Ｌ、約３５０ｍＬ〜約３．０Ｌ、約３５０ｍＬ〜約２．５Ｌ、約３５０ｍＬ〜約２Ｌ、約３５０ｍＬ〜約１．５Ｌ、約３５０ｍＬ〜約１Ｌ、約３５０ｍＬ〜約９００ｍＬ、約３５０ｍＬ〜約８００ｍＬ、約３５０ｍＬ〜約７００ｍＬ、約３５０ｍＬ〜約６００ｍＬ、約３５０ｍＬ〜約５００ｍＬ、約３５０ｍＬ〜約４５０ｍＬ、約３５０ｍＬ〜約４００ｍＬ、約４００ｍＬ〜約５Ｌ、
約４００ｍＬ〜約４．５Ｌ、約４００ｍＬ〜約４．０Ｌ、約４００ｍＬ〜約３．５Ｌ、約４００ｍＬ〜約３．０Ｌ、約４００ｍＬ〜約２．５Ｌ、約４００ｍＬ〜約２Ｌ、約４００ｍＬ〜約１．５Ｌ、約４００ｍＬ〜約１Ｌ、約４００ｍＬ〜約９００ｍＬ、約４００ｍＬ〜約８００ｍＬ、約４００ｍＬ〜約７００ｍＬ、約４００ｍＬ〜約６００ｍＬ、約４００ｍＬ〜約５００ｍＬ、約４００ｍＬ〜約４５０ｍＬ、約４５０ｍＬ〜約５Ｌ、約４５０ｍＬ〜約４．５Ｌ、約４５０ｍＬ〜約４．０Ｌ、約４５０ｍＬ〜約３．５Ｌ、約４５０ｍＬ〜約３．０Ｌ、約４５０ｍＬ〜約２．５Ｌ、約４５０ｍＬ〜約２Ｌ、約４５０ｍＬ〜約１．５Ｌ、約４５０ｍＬ〜約１Ｌ、約４５０ｍＬ〜約９００ｍＬ、約４５０ｍＬ〜約８００ｍＬ、約４５０ｍＬ〜約７００ｍＬ、約４５０ｍＬ〜約６００ｍＬ、約４５０ｍＬ〜約５００ｍＬ、約５００ｍＬ〜約５Ｌ、約５００ｍＬ〜約４．５Ｌ、約５００ｍＬ〜約４．０Ｌ、約５００ｍＬ〜約３．５Ｌ、約５００ｍＬ〜約３．０Ｌ、約５００ｍＬ〜約２．５Ｌ、約５００ｍＬ〜約２Ｌ、約５００ｍＬ〜約１．５Ｌ、約５００ｍＬ〜約１Ｌ、約５００ｍＬ〜約９００ｍＬ、約５００ｍＬ〜約８００ｍＬ、約５００ｍＬ〜約７００ｍＬ、約５００ｍＬ〜約６００ｍＬ、約６００ｍＬ〜約５Ｌ、約６００ｍＬ〜約４．５Ｌ、約６００ｍＬ〜約４．０Ｌ、約６００ｍＬ〜約３．５Ｌ、約６００ｍＬ〜約３．０Ｌ、約６００ｍＬ〜約２．５Ｌ、約６００ｍＬ〜約２Ｌ、約６００ｍＬ〜約１．５Ｌ、約６００ｍＬ〜約１Ｌ、約６００ｍＬ〜約９００ｍＬ、約６００ｍＬ〜約８００ｍＬ、約６００ｍＬ〜約７００ｍＬ、約７００ｍＬ〜約５Ｌ、約７００ｍＬ〜約４．５Ｌ、約７００ｍＬ〜約４．０Ｌ、約７００ｍＬ〜約３．５Ｌ、約７００ｍＬ〜約３．０Ｌ、約７００ｍＬ〜約２．５Ｌ、約７００ｍＬ〜約２Ｌ、約７００ｍＬ〜約１．５Ｌ、約７００ｍＬ〜約１Ｌ、約７００ｍＬ〜約９００ｍＬ、約７００ｍＬ〜約８００ｍＬ、約８００ｍＬ〜約５Ｌ、約８００ｍＬ〜約４．５Ｌ、約８００ｍＬ〜約４．０Ｌ、約８００ｍＬ〜約３．５Ｌ、約８００ｍＬ〜約３．０Ｌ、約８００ｍＬ〜約２．５Ｌ、約８００ｍＬ〜約２Ｌ、約８００ｍＬ〜約１．５Ｌ、約８００ｍＬ〜約１Ｌ、約８００ｍＬ〜約９００ｍＬ、約９００ｍＬ〜約５Ｌ、約９００ｍＬ〜約４．５Ｌ、約９００ｍＬ〜約４．０Ｌ、約９００ｍＬ〜約３．５Ｌ、約９００ｍＬ〜約３．０Ｌ、約９００ｍＬ〜約２．５Ｌ、約９００ｍＬ〜約２Ｌ、約９００ｍＬ〜約１．５Ｌ、約９００ｍＬ〜約１Ｌ、約１Ｌ〜約５Ｌ、約１Ｌ〜約４．５Ｌ、約１Ｌ〜約４．０Ｌ、約１Ｌ〜約３．５Ｌ、約１Ｌ〜約３．０Ｌ、約１Ｌ〜約２．５Ｌ、約１Ｌ〜約２Ｌ、約１Ｌ〜約１．５Ｌ、約１．５Ｌ〜約５Ｌ、約１．５Ｌ〜約４．５Ｌ、約１．５Ｌ〜約４．０Ｌ、約１．５Ｌ〜約３．５Ｌ、約１．５Ｌ〜約３．０Ｌ、約１．５Ｌ〜約２．５Ｌ、約１．５Ｌ〜約２Ｌ、約２Ｌ〜約５Ｌ、約２Ｌ〜約４．５Ｌ、約２Ｌ〜約４．０Ｌ、約２Ｌ〜約３．５Ｌ、約２Ｌ〜約３．０Ｌ、約２Ｌ〜約２．５Ｌ、約２．５Ｌ〜約５Ｌ、約２．５Ｌ〜約４．５Ｌ、約２．５Ｌ〜約４．０Ｌ、約２．５Ｌ〜約３．５Ｌ、約２．５Ｌ〜約３．０Ｌ、約３．０Ｌ〜約５Ｌ、約３．０Ｌ〜約４．５Ｌ、約３．０Ｌ〜約４．０Ｌ、約３．０Ｌ〜約３．５Ｌ、約３．５Ｌ〜約５Ｌ、約３．５Ｌ〜約４．５Ｌ、約３．５Ｌ〜約４．０Ｌ、約４．０Ｌ〜約５Ｌ、約４．０Ｌ〜約４．５Ｌ、または約４．５Ｌ〜約５．０Ｌの容量（内部容量）を有し得る。一部の実施形態では、試験培養容器の高さと幅との比は、産生バイオリアクターの高さと幅との比とおよそ同じである。
【０１１３】
一部の実施形態では、試験培養容器中に配置された液体培養培地の容量（培養の間）は、約０．５ｍＬ〜約１．５Ｌ、約０．５ｍＬ〜約１．４Ｌ、約０．５ｍＬ〜約１．３Ｌ、約０．５ｍＬ〜約１．２Ｌ、約０．５ｍＬ〜約１．１Ｌ、約０．５ｍＬ〜約１．０Ｌ、約０．５ｍＬ〜約９００ｍＬ、約０．５ｍＬ〜約８００ｍＬ、約０．５ｍＬ〜約７００ｍＬ、約０．５ｍＬ〜約６００ｍＬ、約０．５ｍＬ〜約５００ｍＬ、約０．５ｍＬ〜約４００ｍＬ、約０．５ｍＬ〜約３００ｍＬ、約０．５ｍＬ〜約２５０ｍＬ、約０．５ｍＬ〜約２００ｍＬ、約０．５ｍＬ〜約１５０ｍＬ、約０．５ｍＬ〜約１００ｍＬ、約０．５ｍＬ〜約８０ｍＬ、約０．５ｍＬ〜約６０ｍＬ、約０．５ｍＬ〜約５０ｍＬ、約０．５ｍＬ〜約４０ｍＬ、約０．５ｍＬ〜約３０ｍＬ、約０．５ｍＬ〜約２５ｍＬ、約０．５ｍＬ〜約２０ｍＬ、約０．５ｍＬ〜約１０ｍＬ、約０．５ｍＬ〜約５ｍＬ、約０．５ｍＬ〜約２．５ｍＬ、約２．５ｍＬ〜約１．５Ｌ、約２．５ｍＬ〜約１．４Ｌ、約２．５ｍＬ〜約１．３Ｌ、約０．５ｍＬ〜約１．２Ｌ、約０．５ｍＬ〜約１．１Ｌ、約０．５ｍＬ〜約１．０Ｌ、約２．５ｍＬ〜約９００ｍＬ、約２．５ｍＬ〜約８００ｍＬ、約２．５ｍＬ〜約７００ｍＬ、約２．５ｍＬ〜約６００ｍＬ、約２．５ｍＬ〜約５００ｍＬ、約２．５ｍＬ〜約４００ｍＬ、約２．５ｍＬ〜約３００ｍＬ、約２．５ｍＬ〜約２５０ｍＬ、約２．５ｍＬ〜約２００ｍＬ、約２．５ｍＬ〜約１５０ｍＬ、約２．５ｍＬ〜約１００ｍＬ、約２．５ｍＬ〜約８０ｍＬ、約２．５ｍＬ〜約６０ｍＬ、約２．５ｍＬ〜約５０ｍＬ、約２．５ｍＬ〜約４０ｍＬ、約２．５ｍＬ〜約３０ｍＬ、約２．５ｍＬ〜約２５ｍＬ、約２．５ｍＬ〜約２０ｍＬ、約２．５ｍＬ〜約１０ｍＬ、約２．５ｍＬ〜約５ｍＬ、約５ｍＬ〜約１．５Ｌ、約５ｍＬ〜約１．４Ｌ、約５ｍＬ〜約１．３Ｌ、約５ｍＬ〜約１．２Ｌ、約５ｍＬ〜約１．１Ｌ、約５ｍＬ〜約１．０Ｌ、約５ｍＬ〜約９００ｍＬ、約５ｍＬ〜約８００ｍＬ、約５ｍＬ〜約７００ｍＬ、約５ｍＬ〜約６００ｍＬ、約５ｍＬ〜約５００ｍＬ、約５ｍＬ〜約４００ｍＬ、約５ｍＬ〜約３００ｍＬ、約５ｍＬ〜約２５０ｍＬ、約５ｍＬ〜約２００ｍＬ、約５ｍＬ〜約１５０ｍＬ、約５ｍＬ〜約１００ｍＬ、約５ｍＬ〜約８０ｍＬ、約５ｍＬ〜約６０ｍＬ、約５ｍＬ〜約５０ｍＬ、約５ｍＬ〜約４０ｍＬ、約５ｍＬ〜約３０ｍＬ、約５ｍＬ〜約２５ｍＬ、約５ｍＬ〜約２０ｍＬ、約５ｍＬ〜約１０ｍＬ、約１０ｍＬ〜約１．５Ｌ、約１０ｍＬ〜約１．４Ｌ、約１０ｍＬ〜約１．３Ｌ、約１０ｍＬ〜約１．２Ｌ、約１０ｍＬ〜約１．１Ｌ、約１０ｍＬ〜約１．０Ｌ、約１０ｍＬ〜約９００ｍＬ、約１０ｍＬ〜約８００ｍＬ、約１０ｍＬ〜約７００ｍＬ、約１０ｍＬ〜約６００ｍＬ、約１０ｍＬ〜約５００ｍＬ、約１０ｍＬ〜約４００ｍＬ、約１０ｍＬ〜約３００ｍＬ、約１０ｍＬ〜約２５０ｍＬ、約１０ｍＬ〜約２００ｍＬ、約１０ｍＬ〜約１５０ｍＬ、約１０ｍＬ〜約１００ｍＬ、約１０ｍＬ〜約８０ｍＬ、約１０ｍＬ〜約６０ｍＬ、約１０ｍＬ〜約５０ｍＬ、約１０ｍＬ〜約４０ｍＬ、約１０ｍＬ〜約３０ｍＬ、約１０ｍＬ〜約２５ｍＬ、約１０ｍＬ〜約２０ｍＬ、約２０ｍＬ〜約１．５Ｌ、約２０ｍＬ〜約１．４Ｌ、約２０ｍＬ〜約１．３Ｌ、約２０ｍＬ〜約１．２Ｌ、約２０ｍＬ〜約１．１Ｌ、約２０ｍＬ〜約１．０Ｌ、約２０ｍＬ〜約９００ｍＬ、約２０ｍＬ〜約８００ｍＬ、約２０ｍＬ〜約７００ｍＬ、約２０ｍＬ〜約６００ｍＬ、約２０ｍＬ〜約５００ｍＬ、約２０ｍＬ〜約４００ｍＬ、約２０ｍＬ〜約３００ｍＬ、約２０ｍＬ〜約２５０ｍＬ、約２０ｍＬ〜約２００ｍＬ、約２０ｍＬ〜約１５０ｍＬ、約２０ｍＬ〜約１００ｍＬ、約２０ｍＬ〜約８０ｍＬ、約２０ｍＬ〜約６０ｍＬ、約２０ｍＬ〜約５０ｍＬ、約２０ｍＬ〜約４０ｍＬ、約２０ｍＬ〜約３０ｍＬ、約２０ｍＬ〜約２５ｍＬ、約２５ｍＬ〜約１．５Ｌ、約２５ｍＬ〜約１．４Ｌ、約２５ｍＬ〜約１．３Ｌ、約２５ｍＬ〜約１．２Ｌ、約２５ｍＬ〜約１．１Ｌ、約２５ｍＬ〜約１．０Ｌ、約２５ｍＬ〜約９００ｍＬ、約２５ｍＬ〜約８００ｍＬ、約２５ｍＬ〜約７００ｍＬ、約２５ｍＬ〜約６００ｍＬ、約２５ｍＬ〜約５００ｍＬ、約２５ｍＬ〜約４００ｍＬ、約２５ｍＬ〜約３００ｍＬ、約２５ｍＬ〜約２５０ｍＬ、約２５ｍＬ〜約２００ｍＬ、約２５ｍＬ〜約１５０ｍＬ、約２５ｍＬ〜約１００ｍＬ、約２５ｍＬ〜約８０ｍＬ、約２５ｍＬ〜約６０ｍＬ、約２５ｍＬ〜約５０ｍＬ、約２５ｍＬ〜約４０ｍＬ、約２５ｍＬ〜約３０ｍＬ、約３０ｍＬ〜約１．５Ｌ、約３０ｍＬ〜約１．４Ｌ、約３０ｍＬ〜約１．３Ｌ、約３０ｍＬ〜約１．２Ｌ、約３０ｍＬ〜約１．１Ｌ、約３０ｍＬ〜約１．０Ｌ、約３０ｍＬ〜約９００ｍＬ、約３０ｍＬ〜約８００ｍＬ、約３０ｍＬ〜約７００ｍＬ、約３０ｍＬ〜約６００ｍＬ、約３０ｍＬ〜約５００ｍＬ、約３０ｍＬ〜約４００ｍＬ、約３０ｍＬ〜約３００ｍＬ、約３０ｍＬ〜約２５０ｍＬ、約３０ｍＬ〜約２００ｍＬ、約３０ｍＬ〜約１５０ｍＬ、約３０ｍＬ〜約１００ｍＬ、約３０ｍＬ〜約８０ｍＬ、約３０ｍＬ〜約６０ｍＬ、約３０ｍＬ〜約５０ｍＬ、約３０ｍＬ〜約４０ｍＬ、約４０ｍＬ〜約１．５Ｌ、約４０ｍＬ〜約１．４Ｌ、約４０ｍＬ〜約１．３Ｌ、約４０ｍＬ〜約１．２Ｌ、約４０ｍＬ〜約１．１Ｌ、約４０ｍＬ〜約１．０Ｌ、約４０ｍＬ〜約９００ｍＬ、約４０ｍＬ〜約８００ｍＬ、約４０ｍＬ〜約７００ｍＬ、約４０ｍＬ〜約６００ｍＬ、約４０ｍＬ〜約５００ｍＬ、約４０ｍＬ〜約４００ｍＬ、約４０ｍＬ〜約３００ｍＬ、約４０ｍＬ〜約２５０ｍＬ、約４０ｍＬ〜約２００ｍＬ、約４０ｍＬ〜約１５０ｍＬ、約４０ｍＬ〜約１００ｍＬ、約４０ｍＬ〜約８０ｍＬ、約４０ｍＬ〜約６０ｍＬ、約４０ｍＬ〜約５０ｍＬ、約５０ｍＬ〜約１．５Ｌ、約５０ｍＬ〜約１．４Ｌ、約５０ｍＬ〜約１．３Ｌ、約５０ｍＬ〜約１．２Ｌ、約５０ｍＬ〜約１．１Ｌ、約５０ｍＬ〜約１．０Ｌ、約５０ｍＬ〜約９００ｍＬ、約５０ｍＬ〜約８００ｍＬ、約５０ｍＬ〜約７００ｍＬ、約５０ｍＬ〜約６００ｍＬ、約５０ｍＬ〜約５００ｍＬ、約５０ｍＬ〜約４００ｍＬ、約５０ｍＬ〜約３００ｍＬ、約５０ｍＬ〜約２５０ｍＬ、約５０ｍＬ〜約２００ｍＬ、約５０ｍＬ〜約１５０ｍＬ、約５０ｍＬ〜約１００ｍＬ、約５０ｍＬ〜約８０ｍＬ、約５０ｍＬ〜約６０ｍＬ、約６０ｍＬ〜約１．５Ｌ、約６０ｍＬ〜約１．４Ｌ、約６０ｍＬ〜約１．３Ｌ、約６０ｍＬ〜約１．２Ｌ、約６０ｍＬ〜約１．１Ｌ、約６０ｍＬ〜約１．０Ｌ、約６０ｍＬ〜約９００ｍＬ、約６０ｍＬ〜約８００ｍＬ、約６０ｍＬ〜約７００ｍＬ、約６０ｍＬ〜約６００ｍＬ、約６０ｍＬ〜約５００ｍＬ、約６０ｍＬ〜約４００ｍＬ、約６０ｍＬ〜約３００ｍＬ、約６０ｍＬ〜約２５０ｍＬ、約６０ｍＬ〜約２００ｍＬ、約６０ｍＬ〜約１５０ｍＬ、約６０ｍＬ〜約１００ｍＬ、約６０ｍＬ〜約８０ｍＬ、約８０ｍＬ〜約１．５Ｌ、約８０ｍＬ〜約１．４Ｌ、約８０ｍＬ〜約１．３Ｌ、約８０ｍＬ〜約１．２Ｌ、約８０ｍＬ〜約１．１Ｌ、約８０ｍＬ〜約１．０Ｌ、約８０ｍＬ〜約９００ｍＬ、約８０ｍＬ〜約８００ｍＬ、約８０ｍＬ〜約７００ｍＬ、約８０ｍＬ〜約６００ｍＬ、約８０ｍＬ〜約５００ｍＬ、約８０ｍＬ〜約４００ｍＬ、約８０ｍＬ〜約３００ｍＬ、約８０ｍＬ〜約２５０ｍＬ、約８０ｍＬ〜約２００ｍＬ、約８０ｍＬ〜約１５０ｍＬ、約８０ｍＬ〜約１００ｍＬ、約１００ｍＬ〜約１．５Ｌ、約１００ｍＬ〜約１．４Ｌ、約１００ｍＬ〜約１．３Ｌ、約１００ｍＬ〜約１．２Ｌ、約１００ｍＬ〜約１．１Ｌ、約１００ｍＬ〜約１．０Ｌ、約１００ｍＬ〜約９００ｍＬ、約１００ｍＬ〜約８００ｍＬ、約１００ｍＬ〜約７００ｍＬ、約１００ｍＬ〜約６００ｍＬ、約１００ｍＬ〜約５００ｍＬ、約１００ｍＬ〜約４００ｍＬ、約１００ｍＬ〜約３００ｍＬ、約１００ｍＬ〜約２５０ｍＬ、約１００ｍＬ〜約２００ｍＬ、約１００ｍＬ〜約１５０ｍＬ、約１５０ｍＬ〜約１．５Ｌ、約１５０ｍＬ〜約１．４Ｌ、約１５０ｍＬ〜約１．３Ｌ、約１５０ｍＬ〜約１．２Ｌ、約１５０ｍＬ〜約１．１Ｌ、約１５０ｍＬ〜約１．０Ｌ、約１５０ｍＬ〜約９００ｍＬ、約１５０ｍＬ〜約８００ｍＬ、約１５０ｍＬ〜約７００ｍＬ、約１５０ｍＬ〜約６００ｍＬ、約１５０ｍＬ〜約５００ｍＬ、約１５０ｍＬ〜約４００ｍＬ、約１５０ｍＬ〜約３００ｍＬ、約１５０ｍＬ〜約２５０ｍＬ、約１５０ｍＬ〜約２００ｍＬ、約２００ｍＬ〜約１．５Ｌ、約２００ｍＬ〜約１．４Ｌ、約２００ｍＬ〜約１．３Ｌ、約２００ｍＬ〜約１．２Ｌ、約２００ｍＬ〜約１．１Ｌ、約２００ｍＬ〜約１．０Ｌ、約２００ｍＬ〜約９００ｍＬ、約２００ｍＬ〜約８００ｍＬ、約２００ｍＬ〜約７００ｍＬ、約２００ｍＬ〜約６００ｍＬ、約２００ｍＬ〜約５００ｍＬ、約２００ｍＬ〜約４００ｍＬ、約２００ｍＬ〜約３００ｍＬ、約２００ｍＬ〜約２５０ｍＬ、約２５０ｍＬ〜約１．５Ｌ、約２５０ｍＬ〜約１．４Ｌ、約２５０ｍＬ〜約１．３Ｌ、約２５０ｍＬ〜約１．２Ｌ、約２５０ｍＬ〜約１．１Ｌ、約２５０ｍＬ〜約１．０Ｌ、約２５０ｍＬ〜約９００ｍＬ、約２５０ｍＬ〜約８００ｍＬ、約２５０ｍＬ〜約７００ｍＬ、約２５０ｍＬ〜約６００ｍＬ、約２５０ｍＬ〜約５００ｍＬ、約２５０ｍＬ〜約４００ｍＬ、約２５０ｍＬ〜約３００ｍＬ、約３００ｍＬ〜約１．５Ｌ、約３００ｍＬ〜約１．４Ｌ、約３００ｍＬ〜約１．３Ｌ、約３００ｍＬ〜約１．２Ｌ、約３００ｍＬ〜約１．１Ｌ、約３００ｍＬ〜約１．０Ｌ、約３００ｍＬ〜約９００ｍＬ、約３００ｍＬ〜約８００ｍＬ、約３００ｍＬ〜約７００ｍＬ、約３００ｍＬ〜約６００ｍＬ、約３００ｍＬ〜約５００ｍＬ、約３００ｍＬ〜約４００ｍＬ、約４００ｍＬ〜約１．５Ｌ、約４００ｍＬ〜約１．４Ｌ、約４００ｍＬ〜約１．３Ｌ、約４００ｍＬ〜約１．２Ｌ、約４００ｍＬ〜約１．１Ｌ、約４００ｍＬ〜約１．０Ｌ、約４００ｍＬ〜約９００ｍＬ、約４００ｍＬ〜約８００ｍＬ、約４００ｍＬ〜約７００ｍＬ、約４００ｍＬ〜約６００ｍＬ、約４００ｍＬ〜約５００ｍＬ、約５００ｍＬ〜約１．５Ｌ、約５００ｍＬ〜約１．４Ｌ、約５００ｍＬ〜約１．３Ｌ、約５００ｍＬ〜約１．２Ｌ、約５００ｍＬ〜約１．１Ｌ、約５００ｍＬ〜約１．０Ｌ、約５００ｍＬ〜約９００ｍＬ、約５００ｍＬ〜約８００ｍＬ、約５００ｍＬ〜約７００ｍＬ、約５００ｍＬ〜約６００ｍＬ、約６００ｍＬ〜約１．５Ｌ、約６００ｍＬ〜約１．４Ｌ、約６００ｍＬ〜約１．３Ｌ、約６００ｍＬ〜約１．２Ｌ、約６００ｍＬ〜約１．１Ｌ、約６００ｍＬ〜約１．０Ｌ、約６００ｍＬ〜約９００ｍＬ、約６００ｍＬ〜約８００ｍＬ、約６００ｍＬ〜約７００ｍＬ、約７００ｍＬ〜約１．５Ｌ、約７００ｍＬ〜約１．４Ｌ、約７００ｍＬ〜約１．３Ｌ、約７００ｍＬ〜約１．２Ｌ、約７００ｍＬ〜約１．１Ｌ、約７００ｍＬ〜約１．０Ｌ、約７００ｍＬ〜約９００ｍＬ、約７００ｍＬ〜約８００ｍＬ、約８００ｍＬ〜約１．５Ｌ、約８００ｍＬ〜約１．４Ｌ、約８００ｍＬ〜約１．３Ｌ、約８００ｍＬ〜約１．２Ｌ、約８００ｍＬ〜約１．１Ｌ、約８００ｍＬ〜約１．０Ｌ、約８００ｍＬ〜約９００ｍＬ、約９００ｍＬ〜約１．５Ｌ、約９００ｍＬ〜約１．４Ｌ、約９００ｍＬ〜約１．３Ｌ、約９００ｍＬ〜約１．２Ｌ、約９００ｍＬ〜約１．１Ｌ、約９００ｍＬ〜約１．０Ｌ、約１．０Ｌ〜約１．５Ｌ、約１．０Ｌ〜約１．４Ｌ、約１．０Ｌ〜約１．３Ｌ、約１．０Ｌ〜約１．２Ｌ、約１．０Ｌ〜約１．１Ｌ、約１．１Ｌ〜約１．５Ｌ、約１．１Ｌ〜約１．４Ｌ、約１．１Ｌ〜約１．３Ｌ、約１．１Ｌ〜約１．２Ｌ、約１．２Ｌ〜約１．５Ｌ、約１．２Ｌ〜約１．４Ｌ、約１．２Ｌ〜約１．３Ｌ、約１．３Ｌ〜約１．５Ｌ、約１．３Ｌ〜約１．４Ｌ、または約１．４Ｌ〜約１．５Ｌの範囲であり得る。
【０１１４】
一部の実施形態では、試験培養容器は、振盪フラスコ、例えば、バッフル付き振盪フラスコである。振盪フラスコは、例えば、約２５０ｍＬ〜約３００ｍＬ、約３００ｍＬ〜約４００ｍＬまたは約４００ｍＬ〜約５００ｍＬの容量を有し得る。振盪フラスコは、少なくとも１つの気体透過性表面（例えば、滅菌したバリアとしても作用し得る気体透過性メンブレンを有する少なくとも１つの表面）および／または少なくとも１つのベント型キャップを含むことができる。振盪フラスコは、その外部表面に、振盪フラスコが組織培養インキュベータ（例えば、回転式インキュベータ）中に安定に配置されることを可能にする構造を有していてもよい。
【０１１５】
振盪フラスコの内部表面は、少なくとも１つのコーティング（例えば、ゼラチン、コラーゲン、ポリ−Ｌ−オルニチン、ポリスチレンおよびラミニンの少なくとも１つのコーティング）を有してもよい。本明細書に記載される方法のいずれかにおいて使用することができる例示的な振盪フラスコは、Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｉｎｃ．（Ｔｅｗｓｂｕｒｙ、ＭＡ）、Ｐｒｅｓｅｎｓ（Ｂｒｏｎｄｂｙ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、Ｎａｌｇｅ−Ｎｕｎｃ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ、ＮＹ）から購入することができる。例示的な振盪フラスコには、バッフル付き振盪フラスコもしくはＥｒｌｅｎｍｅｙｅｒフラスコ、または当該分野で認識されたその任意の改変バージョンが含まれる。振盪フラスコ（例えば、異なる形状および寸法の振盪フラスコ）および振盪フラスコの内部表面コーティングのさらなる例は、当該分野で公知であり、本発明の方法において使用することができる。
【０１１６】
一部の実施形態では、試験培養容器は、約１２５ＲＰＭ〜約４００ＲＰＭ（例えば、約１５０ＲＰＭ〜約３５０ＲＰＭまたは約２００ＲＰＭ〜約３００ＲＰＭ）の回転式撹拌を有し得る。例えば、試験培養容器は、約１２５ＲＰＭ〜約４００ＲＰＭ、約１２５ＲＰＭ〜約３８０ＲＰＭ、約１２５ＲＰＭ〜約３６０ＲＰＭ、約１２５ＲＰＭ〜約３４０ＲＰＭ、約１２５ＲＰＭ〜約３２０ＲＰＭ、約１２５ＲＰＭ〜約３００ＲＰＭ、約１２５ＲＰＭ〜約２８０ＲＰＭ、約１２５ＲＰＭ〜約２６０ＲＰＭ、約１２５ＲＰＭ〜約２４０ＲＰＭ、約１２５ＲＰＭ〜約２２０ＲＰＭ、約１２５ＲＰＭ〜約２００ＲＰＭ、約１２５ＲＰＭ〜約１８０ＲＰＭ、約１２５ＲＰＭ〜約１６０ＲＰＭ、約１２５ＲＰＭ〜約１４０ＲＰＭ、約１４０ＲＰＭ〜約４００ＲＰＭ、約１４０ＲＰＭ〜約３８０ＲＰＭ、約１４０ＲＰＭ〜約３６０ＲＰＭ、約１４０ＲＰＭ〜約３４０ＲＰＭ、約１４０ＲＰＭ〜約３２０ＲＰＭ、約１４０ＲＰＭ〜約３００ＲＰＭ、約１４０ＲＰＭ〜約２８０ＲＰＭ、約１４０ＲＰＭ〜約２６０ＲＰＭ、約１４０ＲＰＭ〜約２４０ＲＰＭ、約１４０ＲＰＭ〜約２２０ＲＰＭ、約１４０ＲＰＭ〜約２００ＲＰＭ、約１４０ＲＰＭ〜約１８０ＲＰＭ、約１４０ＲＰＭ〜約１６０ＲＰＭ、約１６０ＲＰＭ〜約４００ＲＰＭ、約１６０ＲＰＭ〜約３８０ＲＰＭ、約１６０ＲＰＭ〜約３６０ＲＰＭ、約１６０ＲＰＭ〜約３４０ＲＰＭ、約１６０ＲＰＭ〜約３２０ＲＰＭ、約１６０ＲＰＭ〜約３００ＲＰＭ、約１６０ＲＰＭ〜約２８０ＲＰＭ、約１６０ＲＰＭ〜約２６０ＲＰＭ、約１６０ＲＰＭ〜約２４０ＲＰＭ、約１６０ＲＰＭ〜約２２０ＲＰＭ、約１６０ＲＰＭ〜約２００ＲＰＭ、約１６０ＲＰＭ〜約１８０ＲＰＭ、約１８０ＲＰＭ〜約４００ＲＰＭ、約１８０ＲＰＭ〜約３８０ＲＰＭ、約１８０ＲＰＭ〜約３６０ＲＰＭ、約１８０ＲＰＭ〜約３４０ＲＰＭ、約１８０ＲＰＭ〜約３２０ＲＰＭ、約１８０ＲＰＭ〜約３００ＲＰＭ、約１８０ＲＰＭ〜約２８０ＲＰＭ、約１８０ＲＰＭ〜約２６０ＲＰＭ、約１８０ＲＰＭ〜約２４０ＲＰＭ、約１８０ＲＰＭ〜約２２０ＲＰＭ、約１８０ＲＰＭ〜約２００ＲＰＭ、約２００ＲＰＭ〜約４００ＲＰＭ、約２００ＲＰＭ〜約３８０ＲＰＭ、約２００ＲＰＭ〜約３６０ＲＰＭ、約２００ＲＰＭ〜約３４０ＲＰＭ、約２００ＲＰＭ〜約３２０ＲＰＭ、約２００ＲＰＭ〜約３００ＲＰＭ、約２００ＲＰＭ〜約２８０ＲＰＭ、約２００ＲＰＭ〜約２６０ＲＰＭ、約２００ＲＰＭ〜約２４０ＲＰＭ、約２００ＲＰＭ〜約２２０ＲＰＭ、約２２０ＲＰＭ〜約４００ＲＰＭ、約２２０ＲＰＭ〜約３８０ＲＰＭ、約２２０ＲＰＭ〜約３６０ＲＰＭ、約２２０ＲＰＭ〜約３４０ＲＰＭ、約２２０ＲＰＭ〜約３２０ＲＰＭ、約２２０ＲＰＭ〜約３００ＲＰＭ、約２２０ＲＰＭ〜約２８０ＲＰＭ、約２２０ＲＰＭ〜約２６０ＲＰＭ、約２２０ＲＰＭ〜約２４０ＲＰＭ、約２４０ＲＰＭ〜約４００ＲＰＭ、約２４０ＲＰＭ〜約３８０ＲＰＭ、約２４０ＲＰＭ〜約３６０ＲＰＭ、約２４０ＲＰＭ〜約３４０ＲＰＭ、約２４０ＲＰＭ〜約３２０ＲＰＭ、約２４０ＲＰＭ〜約３００ＲＰＭ、約２４０ＲＰＭ〜約２８０ＲＰＭ、約２４０ＲＰＭ〜約２６０ＲＰＭ、約２６０ＲＰＭ〜約４００ＲＰＭ、約２６０ＲＰＭ〜約３８０ＲＰＭ、約２６０ＲＰＭ〜約３６０ＲＰＭ、約２６０ＲＰＭ〜約３４０ＲＰＭ、約２６０ＲＰＭ〜約３２０ＲＰＭ、約２６０ＲＰＭ〜約３００ＲＰＭ、約２６０ＲＰＭ〜約２８０ＲＰＭ、約２８０ＲＰＭ〜約４００ＲＰＭ、約２８０ＲＰＭ〜約３８０ＲＰＭ、約２８０ＲＰＭ〜約３６０ＲＰＭ、約２８０ＲＰＭ〜約３４０ＲＰＭ、約２８０ＲＰＭ〜約３２０ＲＰＭ、約２８０ＲＰＭ〜約３００ＲＰＭ、約３００ＲＰＭ〜約４００ＲＰＭ、約３００ＲＰＭ〜約３８０ＲＰＭ、約３００ＲＰＭ〜約３６０ＲＰＭ、約３００ＲＰＭ〜約３４０ＲＰＭ、約３００ＲＰＭ〜約３２０ＲＰＭ、約３２０ＲＰＭ〜約４００ＲＰＭ、約３２０ＲＰＭ〜約３８０ＲＰＭ、約３２０ＲＰＭ〜約３６０ＲＰＭ、約３２０ＲＰＭ〜約３４０ＲＰＭ、約３４０ＲＰＭ〜約４００ＲＰＭ、約３４０ＲＰＭ〜約３８０ＲＰＭ、約３４０ＲＰＭ〜約３６０ＲＰＭ、約３６０ＲＰＭ〜約４００ＲＰＭ、約３６０ＲＰＭ〜約３８０ＲＰＭ、または約３８０ＲＰＭ〜約４００ＲＰＭの回転式撹拌を有し得る。
【０１１７】
一部の実施形態では、試験培養容器の回転式撹拌は、約２５ｍｍ〜約５０ｍｍの間のスロー（軌道）直径を有する回転式インキュベータを使用して実施することができる。一部の実施形態では、試験培養容器は、約０ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍ（例えば、約０ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍまたは約５０ｐｐｍ〜約１００ｐｐｍ）の感作剤の濃度を有し得る。一部の実施形態では、試験培養容器は、０ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約１９０ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約１８０ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約１７０ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約１６０ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約１５０ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約１４０ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約１３０ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約１１０ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約１００ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約９０ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約８０ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約７０ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約６０ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約５０ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約４０ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約３０ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約２０ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約１０ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約１９０ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約１８０ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約１７０ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約１６０ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約１５０ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約１４０ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約１３０ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約１１０ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約１００ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約９０ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約８０ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約７０ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約６０ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約５０ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約４０ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約３０ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約２０ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約１９０ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約１８０ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約１７０ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約１６０ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約１５０ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約１４０ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約１３０ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約１１０ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約１００ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約９０ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約８０ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約７０ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約６０ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約５０ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約４０ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約３０ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約１９０ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約１８０ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約１７０ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約１６０ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約１５０ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約１４０ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約１３０ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約１１０ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約１００ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約９０ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約８０ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約７０ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約６０ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約５０ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約４０ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約１９０ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約１８０ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約１７０ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約１６０ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約１５０ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約１４０ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約１３０ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約１１０ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約１００ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約９０ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約８０ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約７０ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約６０ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約５０ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約１９０ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約１８０ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約１７０ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約１６０ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約１５０ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約１４０ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約１３０ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約１１０ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約１００ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約９０ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約８０ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約７０ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約６０ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約１９０ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約１８０ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約１７０ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約１６０ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約１５０ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約１４０ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約１３０ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約１１０ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約１００ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約９０ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約８０ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約７０ｐｐｍ、約７０ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍ、約７０ｐｐｍ〜約１９０ｐｐｍ、約７０ｐｐｍ〜約１８０ｐｐｍ、約７０ｐｐｍ〜約１７０ｐｐｍ、約７０ｐｐｍ〜約１６０ｐｐｍ、約７０ｐｐｍ〜約１５０ｐｐｍ、約７０ｐｐｍ〜約１４０ｐｐｍ、約７０ｐｐｍ〜約１３０ｐｐｍ、約７０ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍ、約７０ｐｐｍ〜約１１０ｐｐｍ、約７０ｐｐｍ〜約１００ｐｐｍ、約７０ｐｐｍ〜約９０ｐｐｍ、約７０ｐｐｍ〜約８０ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約１９０ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約１８０ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約１７０ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約１６０ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約１５０ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約１４０ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約１３０ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約１１０ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約１００ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約９０ｐｐｍ、約９０ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍ、約９０ｐｐｍ〜約１９０ｐｐｍ、約９０ｐｐｍ〜約１８０ｐｐｍ、約９０ｐｐｍ〜約１７０ｐｐｍ、約９０ｐｐｍ〜約１６０ｐｐｍ、約９０ｐｐｍ〜約１５０ｐｐｍ、約９０ｐｐｍ〜約１４０ｐｐｍ、約９０ｐｐｍ〜約１３０ｐｐｍ、約９０ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍ、約９０ｐｐｍ〜約１１０ｐｐｍ、約９０ｐｐｍ〜約１００ｐｐｍ、約１００ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍ、約１００ｐｐｍ〜約１９０ｐｐｍ、約１００ｐｐｍ〜約１８０ｐｐｍ、約１００ｐｐｍ〜約１７０ｐｐｍ、約１００ｐｐｍ〜約１６０ｐｐｍ、約１００ｐｐｍ〜約１５０ｐｐｍ、約１００ｐｐｍ〜約１４０ｐｐｍ、約１００ｐｐｍ〜約１３０ｐｐｍ、約１００ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍ、約１００ｐｐｍ〜約１１０ｐｐｍ、約１１０ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍ、約１１０ｐｐｍ〜約１９０ｐｐｍ、約１１０ｐｐｍ〜約１８０ｐｐｍ、約１１０ｐｐｍ〜約１７０ｐｐｍ、約１１０ｐｐｍ〜約１６０ｐｐｍ、約１１０ｐｐｍ〜約１５０ｐｐｍ、約１１０ｐｐｍ〜約１４０ｐｐｍ、約１１０ｐｐｍ〜約１３０ｐｐｍ、約１１０ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍ、約１２０ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍ、約１２０ｐｐｍ〜約１９０ｐｐｍ、約１２０ｐｐｍ〜約１８０ｐｐｍ、約１２０ｐｐｍ〜約１７０ｐｐｍ、約１２０ｐｐｍ〜約１６０ｐｐｍ、約１２０ｐｐｍ〜約１５０ｐｐｍ、約１２０ｐｐｍ〜約１４０ｐｐｍ、約１２０ｐｐｍ〜約１３０ｐｐｍ、約１３０ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍ、約１３０ｐｐｍ〜約１９０ｐｐｍ、約１３０ｐｐｍ〜約１８０ｐｐｍ、約１３０ｐｐｍ〜約１７０ｐｐｍ、約１３０ｐｐｍ〜約１６０ｐｐｍ、約１３０ｐｐｍ〜約１５０ｐｐｍ、約１３０ｐｐｍ〜約１４０ｐｐｍ、約１４０ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍ、約１４０ｐｐｍ〜約１９０ｐｐｍ、約１４０ｐｐｍ〜約１８０ｐｐｍ、約１４０ｐｐｍ〜約１７０ｐｐｍ、約１４０ｐｐｍ〜約１６０ｐｐｍ、約１４０ｐｐｍ〜約１５０ｐｐｍ、約１５０ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍ、約１５０ｐｐｍ〜約１９０ｐｐｍ、約１５０ｐｐｍ〜約１８０ｐｐｍ、約１５０ｐｐｍ〜約１７０ｐｐｍ、約１５０ｐｐｍ〜約１６０ｐｐｍ、約１６０ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍ、約１６０ｐｐｍ〜約１９０ｐｐｍ、約１６０ｐｐｍ〜約１８０ｐｐｍ、約１６０ｐｐｍ〜約１７０ｐｐｍ、約１７０ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍ、約１７０ｐｐｍ〜約１９０ｐｐｍ、約１７０ｐｐｍ〜約１８０ｐｐｍ、約１８０ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍ、約１８０ｐｐｍ〜約１９０ｐｐｍ、または約１９０ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍの感作剤（例えば、消泡剤、例えば、本明細書に記載される消泡剤のいずれか）の濃度を有し得る（感作剤が、例えば、培養の間の期間にわたって、試験培養容器中に配置された液体培養培地中に存在する場合）。
【０１１８】
一部の実施形態では、試験培養容器は、０ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約４，５００ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約４，０００ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約３，５００ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約３，０００ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約２，５００ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約２，０００ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約１，５００ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約８００ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約６００ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約５００ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約４５０ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約４００ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約３５０ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約３００ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約２５０ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約１５０ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約１４０ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約１００ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約８０ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約６０ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約５０ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約４０ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約３０ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約２０ｐｐｍ、０ｐｐｍ〜約１０ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約４，５００ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約４，０００ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約３，５００ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約３，０００ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約２，５００ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約２，０００ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約１，５００ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約８００ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約６００ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約５００ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約４５０ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約４００ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約３５０ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約３００ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約２５０ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約１５０ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約１４０ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約１００ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約８０ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約６０ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約５０ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約４０ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約３０ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約２０ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約４，５００ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約４，０００ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約３，５００ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約３，０００ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約２，５００ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約２，０００ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約１，５００ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約８００ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約６００ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約５００ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約４５０ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約４００ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約３５０ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約３００ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約２５０ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約１５０ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約１４０ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約１００ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約８０ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約６０ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約５０ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約４０ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ〜約３０ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約４，５００ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約４，０００ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約３，５００ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約３，０００ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約２，５００ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約２，０００ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約１，５００ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約８００ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約６００ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約５００ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約４５０ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約４００ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約３５０ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約３００ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約２５０ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約１５０ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約１４０ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約１００ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約８０ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約６０ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約５０ｐｐｍ、約３０ｐｐｍ〜約４０ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約４，５００ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約４，０００ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約３，５００ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約３，０００ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約２，５００ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約２，０００ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約１，５００ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約８００ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約６００ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約５００ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約４５０ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約４００ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約３５０ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約３００ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約２５０ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約１５０ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約１４０ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約１００ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約８０ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約６０ｐｐｍ、約４０ｐｐｍ〜約５０ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約４，５００ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約４，０００ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約３，５００ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約３，０００ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約２，５００ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約２，０００ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約１，５００ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約８００ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約６００ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約５００ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約４５０ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約４００ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約３５０ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約３００ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約２５０ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約１５０ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約１４０ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約１００ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約８０ｐｐｍ、約５０ｐｐｍ〜約６０ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約４，５００ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約４，０００ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約３，５００ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約３，０００ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約２，５００ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約２，０００ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約１，５００ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約８００ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約６００ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約５００ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約４５０ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約４００ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約３５０ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約３００ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約２５０ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約１５０ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約１４０ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約１００ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ〜約８０ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約４，５００ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約４，０００ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約３，５００ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約３，０００ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約２，５００ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約２，０００ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約１，５００ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約８００ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約６００ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約５００ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約４５０ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約４００ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約３５０ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約３００ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約２５０ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約１５０ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約１４０ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍ、約８０ｐｐｍ〜約１００ｐｐｍ、約１００ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍ、約１００ｐｐｍ〜約４，５００ｐｐｍ、約１００ｐｐｍ〜約４，０００ｐｐｍ、約１００ｐｐｍ〜約３，５００ｐｐｍ、約１００ｐｐｍ〜約３，０００ｐｐｍ、約１００ｐｐｍ〜約２，５００ｐｐｍ、約１００ｐｐｍ〜約２，０００ｐｐｍ、約１００ｐｐｍ〜約１，５００ｐｐｍ、約１００ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約１００ｐｐｍ〜約８００ｐｐｍ、約１００ｐｐｍ〜約６００ｐｐｍ、約１００ｐｐｍ〜約５００ｐｐｍ、約１００ｐｐｍ〜約４５０ｐｐｍ、約１００ｐｐｍ〜約４００ｐｐｍ、約１００ｐｐｍ〜約３５０ｐｐｍ、約１００ｐｐｍ〜約３００ｐｐｍ、約１００ｐｐｍ〜約２５０ｐｐｍ、約１００ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍ、約１００ｐｐｍ〜約１５０ｐｐｍ、約１００ｐｐｍ〜約１４０ｐｐｍ、約１００ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍ、約１２０ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍ、約１２０ｐｐｍ〜約４，５００ｐｐｍ、約１２０ｐｐｍ〜約４，０００ｐｐｍ、約１２０ｐｐｍ〜約３，５００ｐｐｍ、約１２０ｐｐｍ〜約３，０００ｐｐｍ、約１２０ｐｐｍ〜約２，５００ｐｐｍ、約１２０ｐｐｍ〜約２，０００ｐｐｍ、約１２０ｐｐｍ〜約１，５００ｐｐｍ、約１２０ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約１２０ｐｐｍ〜約８００ｐｐｍ、約１２０ｐｐｍ〜約６００ｐｐｍ、約１２０ｐｐｍ〜約５００ｐｐｍ、約１２０ｐｐｍ〜約４５０ｐｐｍ、約１２０ｐｐｍ〜約４００ｐｐｍ、約１２０ｐｐｍ〜約３５０ｐｐｍ、約１２０ｐｐｍ〜約３００ｐｐｍ、約１２０ｐｐｍ〜約２５０ｐｐｍ、約１２０ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍ、約１２０ｐｐｍ〜約１５０ｐｐｍ、約１２０ｐｐｍ〜約１４０ｐｐｍ、約１４０ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍ、約１４０ｐｐｍ〜約４，５００ｐｐｍ、約１４０ｐｐｍ〜約４，０００ｐｐｍ、約１４０ｐｐｍ〜約３，５００ｐｐｍ、約１４０ｐｐｍ〜約３，０００ｐｐｍ、約１４０ｐｐｍ〜約２，５００ｐｐｍ、約１４０ｐｐｍ〜約２，０００ｐｐｍ、約１４０ｐｐｍ〜約１，５００ｐｐｍ、約１４０ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約１４０ｐｐｍ〜約８００ｐｐｍ、約１４０ｐｐｍ〜約６００ｐｐｍ、約１４０ｐｐｍ〜約５００ｐｐｍ、約１４０ｐｐｍ〜約４５０ｐｐｍ、約１４０ｐｐｍ〜約４００ｐｐｍ、約１４０ｐｐｍ〜約３５０ｐｐｍ、約１４０ｐｐｍ〜約３００ｐｐｍ、約１４０ｐｐｍ〜約２５０ｐｐｍ、約１４０ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍ、約１４０ｐｐｍ〜約１５０ｐｐｍ、約１５０ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍ、約１５０ｐｐｍ〜約４，５００ｐｐｍ、約１５０ｐｐｍ〜約４，０００ｐｐｍ、約１５０ｐｐｍ〜約３，５００ｐｐｍ、約１５０ｐｐｍ〜約３，０００ｐｐｍ、約１５０ｐｐｍ〜約２，５００ｐｐｍ、約１５０ｐｐｍ〜約２，０００ｐｐｍ、約１５０ｐｐｍ〜約１，５００ｐｐｍ、約１５０ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約１５０ｐｐｍ〜約８００ｐｐｍ、約１５０ｐｐｍ〜約６００ｐｐｍ、約１５０ｐｐｍ〜約５００ｐｐｍ、約１５０ｐｐｍ〜約４５０ｐｐｍ、約１５０ｐｐｍ〜約４００ｐｐｍ、約１５０ｐｐｍ〜約３５０ｐｐｍ、約１５０ｐｐｍ〜約３００ｐｐｍ、約１５０ｐｐｍ〜約２５０ｐｐｍ、約１５０ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍ、約２００ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍ、約２００ｐｐｍ〜約４，５００ｐｐｍ、約２００ｐｐｍ〜約４，０００ｐｐｍ、約２００ｐｐｍ〜約３，５００ｐｐｍ、約２００ｐｐｍ〜約３，０００ｐｐｍ、約２００ｐｐｍ〜約２，５００ｐｐｍ、約２００ｐｐｍ〜約２，０００ｐｐｍ、約２００ｐｐｍ〜約１，５００ｐｐｍ、約２００ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約２００ｐｐｍ〜約８００ｐｐｍ、約２００ｐｐｍ〜約６００ｐｐｍ、約２００ｐｐｍ〜約５００ｐｐｍ、約２００ｐｐｍ〜約４５０ｐｐｍ、約２００ｐｐｍ〜約４００ｐｐｍ、約２００ｐｐｍ〜約３５０ｐｐｍ、約２００ｐｐｍ〜約３００ｐｐｍ、約２００ｐｐｍ〜約２５０ｐｐｍ、約２５０ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍ、約２５０ｐｐｍ〜約４，５００ｐｐｍ、約２５０ｐｐｍ〜約４，０００ｐｐｍ、約２５０ｐｐｍ〜約３，５００ｐｐｍ、約２５０ｐｐｍ〜約３，０００ｐｐｍ、約２５０ｐｐｍ〜約２，５００ｐｐｍ、約２５０ｐｐｍ〜約２，０００ｐｐｍ、約２５０ｐｐｍ〜約１，５００ｐｐｍ、約２５０ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約２５０ｐｐｍ〜約８００ｐｐｍ、約２５０ｐｐｍ〜約６００ｐｐｍ、約２５０ｐｐｍ〜約５００ｐｐｍ、約２５０ｐｐｍ〜約４５０ｐｐｍ、約２５０ｐｐｍ〜約４００ｐｐｍ、約２５０ｐｐｍ〜約３５０ｐｐｍ、約２５０ｐｐｍ〜約３００ｐｐｍ、約３００ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍ、約３００ｐｐｍ〜約４，５００ｐｐｍ、約３００ｐｐｍ〜約４，０００ｐｐｍ、
約３００ｐｐｍ〜約３，５００ｐｐｍ、約３００ｐｐｍ〜約３，０００ｐｐｍ、約３００ｐｐｍ〜約２，５００ｐｐｍ、約３００ｐｐｍ〜約２，０００ｐｐｍ、約３００ｐｐｍ〜約１，５００ｐｐｍ、約３００ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約３００ｐｐｍ〜約８００ｐｐｍ、約３００ｐｐｍ〜約６００ｐｐｍ、約３００ｐｐｍ〜約５００ｐｐｍ、約３００ｐｐｍ〜約４５０ｐｐｍ、約３００ｐｐｍ〜約４００ｐｐｍ、約３００ｐｐｍ〜約３５０ｐｐｍ、約３５０ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍ、約３５０ｐｐｍ〜約４，５００ｐｐｍ、約３５０ｐｐｍ〜約４，０００ｐｐｍ、約３５０ｐｐｍ〜約３，５００ｐｐｍ、約３５０ｐｐｍ〜約３，０００ｐｐｍ、約３５０ｐｐｍ〜約２，５００ｐｐｍ、約３５０ｐｐｍ〜約２，０００ｐｐｍ、約３５０ｐｐｍ〜約１，５００ｐｐｍ、約３５０ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約３５０ｐｐｍ〜約８００ｐｐｍ、約３５０ｐｐｍ〜約６００ｐｐｍ、約３５０ｐｐｍ〜約５００ｐｐｍ、約３５０ｐｐｍ〜約４５０ｐｐｍ、約３５０ｐｐｍ〜約４００ｐｐｍ、約４００ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍ、約４００ｐｐｍ〜約４，５００ｐｐｍ、約４００ｐｐｍ〜約４，０００ｐｐｍ、約４００ｐｐｍ〜約３，５００ｐｐｍ、約４００ｐｐｍ〜約３，０００ｐｐｍ、約４００ｐｐｍ〜約２，５００ｐｐｍ、約４００ｐｐｍ〜約２，０００ｐｐｍ、約４００ｐｐｍ〜約１，５００ｐｐｍ、約４００ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約４００ｐｐｍ〜約８００ｐｐｍ、約４００ｐｐｍ〜約６００ｐｐｍ、約４００ｐｐｍ〜約５００ｐｐｍ、約４００ｐｐｍ〜約４５０ｐｐｍ、約４５０ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍ、約４５０ｐｐｍ〜約４，５００ｐｐｍ、約４５０ｐｐｍ〜約４，０００ｐｐｍ、約４５０ｐｐｍ〜約３，５００ｐｐｍ、約４５０ｐｐｍ〜約３，０００ｐｐｍ、約４５０ｐｐｍ〜約２，５００ｐｐｍ、約４５０ｐｐｍ〜約２，０００ｐｐｍ、約４５０ｐｐｍ〜約１，５００ｐｐｍ、約４５０ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約４５０ｐｐｍ〜約８００ｐｐｍ、約４５０ｐｐｍ〜約６００ｐｐｍ、約４５０ｐｐｍ〜約５００ｐｐｍ、約５００ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍ、約５００ｐｐｍ〜約４，５００ｐｐｍ、約５００ｐｐｍ〜約４，０００ｐｐｍ、約５００ｐｐｍ〜約３，５００ｐｐｍ、約５００ｐｐｍ〜約３，０００ｐｐｍ、約５００ｐｐｍ〜約２，５００ｐｐｍ、約５００ｐｐｍ〜約２，０００ｐｐｍ、約５００ｐｐｍ〜約１，５００ｐｐｍ、約５００ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約５００ｐｐｍ〜約８００ｐｐｍ、約５００ｐｐｍ〜約６００ｐｐｍ、約６００ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍ、約６００ｐｐｍ〜約４，５００ｐｐｍ、約６００ｐｐｍ〜約４，０００ｐｐｍ、約６００ｐｐｍ〜約３，５００ｐｐｍ、約６００ｐｐｍ〜約３，０００ｐｐｍ、約６００ｐｐｍ〜約２，５００ｐｐｍ、約６００ｐｐｍ〜約２，０００ｐｐｍ、約６００ｐｐｍ〜約１，５００ｐｐｍ、約６００ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約６００ｐｐｍ〜約８００ｐｐｍ、約８００ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍ、約８００ｐｐｍ〜約４，５００ｐｐｍ、約８００ｐｐｍ〜約４，０００ｐｐｍ、約８００ｐｐｍ〜約３，５００ｐｐｍ、約８００ｐｐｍ〜約３，０００ｐｐｍ、約８００ｐｐｍ〜約２，５００ｐｐｍ、約８００ｐｐｍ〜約２，０００ｐｐｍ、約８００ｐｐｍ〜約１，５００ｐｐｍ、約８００ｐｐｍ〜約１，０００ｐｐｍ、約１，０００ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍ、約１，０００ｐｐｍ〜約４，５００ｐｐｍ、約１，０００ｐｐｍ〜約４，０００ｐｐｍ、約１，０００ｐｐｍ〜約３，５００ｐｐｍ、約１，０００ｐｐｍ〜約３，０００ｐｐｍ、約１，０００ｐｐｍ〜約２，５００ｐｐｍ、約１，０００ｐｐｍ〜約２，０００ｐｐｍ、約１，０００ｐｐｍ〜約１，５００ｐｐｍ、約１，５００ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍ、約１，５００ｐｐｍ〜約４，５００ｐｐｍ、約１，５００ｐｐｍ〜約４，０００ｐｐｍ、約１，５００ｐｐｍ〜約３，５００ｐｐｍ、約１，５００ｐｐｍ〜約３，０００ｐｐｍ、約１，５００ｐｐｍ〜約２，５００ｐｐｍ、約１，５００ｐｐｍ〜約２，０００ｐｐｍ、約２，０００ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍ、約２，０００ｐｐｍ〜約４，５００ｐｐｍ、約２，０００ｐｐｍ〜約４，０００ｐｐｍ、約２，０００ｐｐｍ〜約３，５００ｐｐｍ、約２，０００ｐｐｍ〜約３，０００ｐｐｍ、約２，０００ｐｐｍ〜約２，５００ｐｐｍ、約２，５００ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍ、約２，５００ｐｐｍ〜約４，５００ｐｐｍ、約２，５００ｐｐｍ〜約４，０００ｐｐｍ、約２，５００ｐｐｍ〜約３，５００ｐｐｍ、約２，５００ｐｐｍ〜約３，０００ｐｐｍ、約３，０００ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍ、約３，０００ｐｐｍ〜約４，５００ｐｐｍ、約３，０００ｐｐｍ〜約４，０００ｐｐｍ、約３，０００ｐｐｍ〜約３，５００ｐｐｍ、約３，５００ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍ、約３，５００ｐｐｍ〜約４，５００ｐｐｍ、約３，５００ｐｐｍ〜約４，０００ｐｐｍ、約４，０００ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍ、約４，０００ｐｐｍ〜約４，５００ｐｐｍ、または約４，５００ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍの感作剤（例えば、消泡剤、例えば、本明細書に記載される消泡剤のいずれか）の濃度を有し得る（感作剤が、例えば、培養の間の期間にわたって、試験培養容器中に配置された液体培養培地中に存在する場合）。
【０１１９】
一部の実施形態では、試験培養容器は、約１ｇ／Ｌ〜約１０ｇ／Ｌ（例えば、約２ｇ／Ｌ〜約８ｇ／Ｌ、約３ｇ／Ｌ〜約７ｇ／Ｌ、約４ｇ／Ｌ〜約６ｇ／Ｌ、または約５ｇ／Ｌ）である保護剤の濃度を有し得る。一部の実施形態では、試験培養容器は、約１．０ｇ／Ｌ〜約１０．０ｇ／Ｌ、約１．０ｇ／Ｌ〜約９．５ｇ／Ｌ、約１．０ｇ／Ｌ〜約９．０ｇ／Ｌ、約１．０ｇ／Ｌ〜約８．５ｇ／Ｌ、約１．０ｇ／Ｌ〜約８．０ｇ／Ｌ、約１．０ｇ／Ｌ〜約７．５ｇ／Ｌ、約１．０ｇ／Ｌ〜約７．０ｇ／Ｌ、約１．０ｇ／Ｌ〜約６．５ｇ／Ｌ、約１．０ｇ／Ｌ〜約６．０ｇ／Ｌ、約１．０ｇ／Ｌ〜約５．５ｇ／Ｌ、約１．０ｇ／Ｌ〜約５．０ｇ／Ｌ、約１．０ｇ／Ｌ〜約４．５ｇ／Ｌ、約１．０ｇ／Ｌ〜約４．０ｇ／Ｌ、約１．０ｇ／Ｌ〜約３．５ｇ／Ｌ、約１．０ｇ／Ｌ〜約３．０ｇ／Ｌ、約１．０ｇ／Ｌ〜約２．５ｇ／Ｌ、約１．０ｇ／Ｌ〜約２．０ｇ／Ｌ、約１．０ｇ／Ｌ〜約１．５ｇ／Ｌ、約１．５ｇ／Ｌ〜約１０．０ｇ／Ｌ、約１．５ｇ／Ｌ〜約９．５ｇ／Ｌ、約１．５ｇ／Ｌ〜約９．０ｇ／Ｌ、約１．５ｇ／Ｌ〜約８．５ｇ／Ｌ、約１．５ｇ／Ｌ〜約８．０ｇ／Ｌ、約１．５ｇ／Ｌ〜約７．５ｇ／Ｌ、約１．５ｇ／Ｌ〜約７．０ｇ／Ｌ、約１．５ｇ／Ｌ〜約６．５ｇ／Ｌ、約１．５ｇ／Ｌ〜約６．０ｇ／Ｌ、約１．５ｇ／Ｌ〜約５．５ｇ／Ｌ、約１．５ｇ／Ｌ〜約５．０ｇ／Ｌ、約１．５ｇ／Ｌ〜約４．５ｇ／Ｌ、約１．５ｇ／Ｌ〜約４．０ｇ／Ｌ、約１．５ｇ／Ｌ〜約３．５ｇ／Ｌ、約１．５ｇ／Ｌ〜約３．０ｇ／Ｌ、約１．５ｇ／Ｌ〜約２．５ｇ／Ｌ、約１．５ｇ／Ｌ〜約２．０ｇ／Ｌ、約２．０ｇ／Ｌ〜約１０．０ｇ／Ｌ、約２．０ｇ／Ｌ〜約９．５ｇ／Ｌ、約２．０ｇ／Ｌ〜約９．０ｇ／Ｌ、約２．０ｇ／Ｌ〜約８．５ｇ／Ｌ、約２．０ｇ／Ｌ〜約８．０ｇ／Ｌ、約２．０ｇ／Ｌ〜約７．５ｇ／Ｌ、約２．０ｇ／Ｌ〜約７．０ｇ／Ｌ、約２．０ｇ／Ｌ〜約６．５ｇ／Ｌ、約２．０ｇ／Ｌ〜約６．０ｇ／Ｌ、約２．０ｇ／Ｌ〜約５．５ｇ／Ｌ、約２．０ｇ／Ｌ〜約５．０ｇ／Ｌ、約２．０ｇ／Ｌ〜約４．５ｇ／Ｌ、約２．０ｇ／Ｌ〜約４．０ｇ／Ｌ、約２．０ｇ／Ｌ〜約３．５ｇ／Ｌ、約２．０ｇ／Ｌ〜約３．０ｇ／Ｌ、約２．０ｇ／Ｌ〜約２．５ｇ／Ｌ、約２．５ｇ／Ｌ〜約１０．０ｇ／Ｌ、約２．５ｇ／Ｌ〜約９．５ｇ／Ｌ、約２．５ｇ／Ｌ〜約９．０ｇ／Ｌ、約２．５ｇ／Ｌ〜約８．５ｇ／Ｌ、約２．５ｇ／Ｌ〜約８．０ｇ／Ｌ、約２．５ｇ／Ｌ〜約７．５ｇ／Ｌ、約２．５ｇ／Ｌ〜約７．０ｇ／Ｌ、約２．５ｇ／Ｌ〜約６．５ｇ／Ｌ、約２．５ｇ／Ｌ〜約６．０ｇ／Ｌ、約２．５ｇ／Ｌ〜約５．５ｇ／Ｌ、約２．５ｇ／Ｌ〜約５．０ｇ／Ｌ、約２．５ｇ／Ｌ〜約４．５ｇ／Ｌ、約２．５ｇ／Ｌ〜約４．０ｇ／Ｌ、約２．５ｇ／Ｌ〜約３．５ｇ／Ｌ、約２．５ｇ／Ｌ〜約３．０ｇ／Ｌ、約３．０ｇ／Ｌ〜約１０．０ｇ／Ｌ、約３．０ｇ／Ｌ〜約９．５ｇ／Ｌ、約３．０ｇ／Ｌ〜約９．０ｇ／Ｌ、約３．０ｇ／Ｌ〜約８．５ｇ／Ｌ、約３．０ｇ／Ｌ〜約８．０ｇ／Ｌ、約３．０ｇ／Ｌ〜約７．５ｇ／Ｌ、約３．０ｇ／Ｌ〜約７．０ｇ／Ｌ、約３．０ｇ／Ｌ〜約６．５ｇ／Ｌ、約３．０ｇ／Ｌ〜約６．０ｇ／Ｌ、約３．０ｇ／Ｌ〜約５．５ｇ／Ｌ、約３．０ｇ／Ｌ〜約５．０ｇ／Ｌ、約３．０ｇ／Ｌ〜約４．５ｇ／Ｌ、約３．０ｇ／Ｌ〜約４．０ｇ／Ｌ、約３．０ｇ／Ｌ〜約３．５ｇ／Ｌ、約３．５ｇ／Ｌ〜約１０．０ｇ／Ｌ、約３．５ｇ／Ｌ〜約９．５ｇ／Ｌ、約３．５ｇ／Ｌ〜約９．０ｇ／Ｌ、約３．５ｇ／Ｌ〜約８．５ｇ／Ｌ、約３．５ｇ／Ｌ〜約８．０ｇ／Ｌ、約３．５ｇ／Ｌ〜約７．５ｇ／Ｌ、約３．５ｇ／Ｌ〜約７．０ｇ／Ｌ、約３．５ｇ／Ｌ〜約６．５ｇ／Ｌ、約３．５ｇ／Ｌ〜約６．０ｇ／Ｌ、約３．５ｇ／Ｌ〜約５．５ｇ／Ｌ、約３．５ｇ／Ｌ〜約５．０ｇ／Ｌ、約３．５ｇ／Ｌ〜約４．５ｇ／Ｌ、約３．５ｇ／Ｌ〜約４．０ｇ／Ｌ、約４．０ｇ／Ｌ〜約１０．０ｇ／Ｌ、約４．０ｇ／Ｌ〜約９．５ｇ／Ｌ、約４．０ｇ／Ｌ〜約９．０ｇ／Ｌ、約４．０ｇ／Ｌ〜約８．５ｇ／Ｌ、約４．０ｇ／Ｌ〜約８．０ｇ／Ｌ、約４．０ｇ／Ｌ〜約７．５ｇ／Ｌ、約４．０ｇ／Ｌ〜約７．０ｇ／Ｌ、約４．０ｇ／Ｌ〜約６．５ｇ／Ｌ、約４．０ｇ／Ｌ〜約６．０ｇ／Ｌ、約４．０ｇ／Ｌ〜約５．５ｇ／Ｌ、約４．０ｇ／Ｌ〜約５．０ｇ／Ｌ、約４．０ｇ／Ｌ〜約４．５ｇ／Ｌ、約４．５ｇ／Ｌ〜約１０．０ｇ／Ｌ、約４．５ｇ／Ｌ〜約９．５ｇ／Ｌ、約４．５ｇ／Ｌ〜約９．０ｇ／Ｌ、約４．５ｇ／Ｌ〜約８．５ｇ／Ｌ、約４．５ｇ／Ｌ〜約８．０ｇ／Ｌ、約４．５ｇ／Ｌ〜約７．５ｇ／Ｌ、約４．５ｇ／Ｌ〜約７．０ｇ／Ｌ、約４．５ｇ／Ｌ〜約６．５ｇ／Ｌ、約４．５ｇ／Ｌ〜約６．０ｇ／Ｌ、約４．５ｇ／Ｌ〜約５．５ｇ／Ｌ、約４．５ｇ／Ｌ〜約５．０ｇ／Ｌ、約５．０ｇ／Ｌ〜約１０．０ｇ／Ｌ、約５．０ｇ／Ｌ〜約９．５ｇ／Ｌ、約５．０ｇ／Ｌ〜約９．０ｇ／Ｌ、約５．０ｇ／Ｌ〜約８．５ｇ／Ｌ、約５．０ｇ／Ｌ〜約８．０ｇ／Ｌ、約５．０ｇ／Ｌ〜約７．５ｇ／Ｌ、約５．０ｇ／Ｌ〜約７．０ｇ／Ｌ、約５．０ｇ／Ｌ〜約６．５ｇ／Ｌ、約５．０ｇ／Ｌ〜約６．０ｇ／Ｌ、約５．０ｇ／Ｌ〜約５．５ｇ／Ｌ、約５．５ｇ／Ｌ〜約１０．０ｇ／Ｌ、約５．５ｇ／Ｌ〜約９．５ｇ／Ｌ、約５．５ｇ／Ｌ〜約９．０ｇ／Ｌ、約５．５ｇ／Ｌ〜約８．５ｇ／Ｌ、約５．５ｇ／Ｌ〜約８．０ｇ／Ｌ、約５．５ｇ／Ｌ〜約７．５ｇ／Ｌ、約５．５ｇ／Ｌ〜約７．０ｇ／Ｌ、約５．５ｇ／Ｌ〜約６．５ｇ／Ｌ、約５．５ｇ／Ｌ〜約６．０ｇ／Ｌ、約６．０ｇ／Ｌ〜約１０．０ｇ／Ｌ、約６．０ｇ／Ｌ〜約９．５ｇ／Ｌ、約６．０ｇ／Ｌ〜約９．０ｇ／Ｌ、約６．０ｇ／Ｌ〜約８．５ｇ／Ｌ、約６．０ｇ／Ｌ〜約８．０ｇ／Ｌ、約６．０ｇ／Ｌ〜約７．５ｇ／Ｌ、約６．０ｇ／Ｌ〜約７．０ｇ／Ｌ、約６．０ｇ／Ｌ〜約６．５ｇ／Ｌ、約６．５ｇ／Ｌ〜約１０．０ｇ／Ｌ、約６．５ｇ／Ｌ〜約９．５ｇ／Ｌ、約６．５ｇ／Ｌ〜約９．０ｇ／Ｌ、約６．５ｇ／Ｌ〜約８．５ｇ／Ｌ、約６．５ｇ／Ｌ〜約８．０ｇ／Ｌ、約６．５ｇ／Ｌ〜約７．５ｇ／Ｌ、約６．５ｇ／Ｌ〜約７．０ｇ／Ｌ、約７．０ｇ／Ｌ〜約１０．０ｇ／Ｌ、約７．０ｇ／Ｌ〜約９．５ｇ／Ｌ、約７．０ｇ／Ｌ〜約９．０ｇ／Ｌ、約７．０ｇ／Ｌ〜約８．５ｇ／Ｌ、約７．０ｇ／Ｌ〜約８．０ｇ／Ｌ、約７．０ｇ／Ｌ〜約７．５ｇ／Ｌ、約７．５ｇ／Ｌ〜約１０．０ｇ／Ｌ、約７．５ｇ／Ｌ〜約９．５ｇ／Ｌ、約７．５ｇ／Ｌ〜約９．０ｇ／Ｌ、約７．５ｇ／Ｌ〜約８．５ｇ／Ｌ、約７．５ｇ／Ｌ〜約８．０ｇ／Ｌ、約８．０ｇ／Ｌ〜約１０．０ｇ／Ｌ、約８．０ｇ／Ｌ〜約９．５ｇ／Ｌ、約８．０ｇ／Ｌ〜約９．０ｇ／Ｌ、約８．０ｇ／Ｌ〜約８．５ｇ／Ｌ、約８．５ｇ／Ｌ〜約１０．０ｇ／Ｌ、約８．５ｇ／Ｌ〜約９．５ｇ／Ｌ、約８．５ｇ／Ｌ〜約９．０ｇ／Ｌ、約９．０ｇ／Ｌ〜約１０．０ｇ／Ｌ、約９．０ｇ／Ｌ〜約９．５ｇ／Ｌ、または約９．５ｇ／Ｌ〜約１０．０ｇ／Ｌの保護剤（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の保護剤のいずれか）の濃度を有し得る（保護剤が、例えば、培養の間の期間にわたって、試験培養容器中に配置された液体培養培地中に存在する場合）。
【０１２０】
産生バイオリアクターは、灌流バイオリアクター、流加バイオリアクターまたは濃縮流加バイオリアクターであり得る。一部の実施形態では、産生バイオリアクターは、約５Ｌ〜約２０，０００Ｌ（例えば、約５０Ｌ〜約１０，０００Ｌ）の容量を有し得る。一部の実施形態では、産生バイオリアクターは、５Ｌよりも大きい、１０Ｌよりも大きい、５０Ｌよりも大きい、１００Ｌよりも大きい、１０００Ｌよりも大きい、２０００Ｌよりも大きい、５０００Ｌよりも大きい、２００００Ｌよりも大きい、１０００００Ｌよりも大きいまたは１５００００Ｌよりも大きい（例えば、１０００Ｌよりも大きい）容量を有し得る。一部の実施形態では、産生バイオリアクターは、約５Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約５Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約５Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約５Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約５Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約５Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約５Ｌ〜約９，５００Ｌ、約５Ｌ〜約９，０００Ｌ、約５Ｌ〜約８，５００Ｌ、約５Ｌ〜約８，０００Ｌ、約５Ｌ〜約７，５００Ｌ、約５Ｌ〜約７，０００Ｌ、約５Ｌ〜約６，５００Ｌ、約５Ｌ〜約６，０００Ｌ、約５Ｌ〜約５，５００Ｌ、約５Ｌ〜約５，０００Ｌ、約５Ｌ〜約４，５００Ｌ、約５Ｌ〜約４，０００Ｌ、約５Ｌ〜約３，５００Ｌ、約５Ｌ〜約３，０００Ｌ、約５Ｌ〜約２，５００Ｌ、約５Ｌ〜約２，０００Ｌ、約５Ｌ〜約１，５００Ｌ、約５Ｌ〜約１，０００Ｌ、約５Ｌ〜約９００Ｌ、約５Ｌ〜約８００Ｌ、約５Ｌ〜約７００Ｌ、約５Ｌ〜約６００Ｌ、約５Ｌ〜約５００Ｌ、約５Ｌ〜約４００Ｌ、約５Ｌ〜約３００Ｌ、約５Ｌ〜約２５０Ｌ、約５Ｌ〜約２００Ｌ、約５Ｌ〜約１５０Ｌ、約５Ｌ〜約１００Ｌ、約５Ｌ〜約８０Ｌ、約５Ｌ〜約６０Ｌ、約５Ｌ〜約５０Ｌ、約５Ｌ〜約２５Ｌ、約５Ｌ〜約１０Ｌ、約１０Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約１０Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約１０Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約１０Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約１０Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約１０Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約１０Ｌ〜約９，５００Ｌ、約１０Ｌ〜約９，０００Ｌ、約１０Ｌ〜約８，５００Ｌ、約１０Ｌ〜約８，０００Ｌ、約１０Ｌ〜約７，５００Ｌ、約１０Ｌ〜約７，０００Ｌ、約１０Ｌ〜約６，５００Ｌ、約１０Ｌ〜約６，０００Ｌ、約１０Ｌ〜約５，５００Ｌ、約１０Ｌ〜約５，０００Ｌ、約１０Ｌ〜約４，５００Ｌ、約１０Ｌ〜約４，０００Ｌ、約１０Ｌ〜約３，５００Ｌ、約１０Ｌ〜約３，０００Ｌ、約１０Ｌ〜約２，５００Ｌ、約１０Ｌ〜約２，０００Ｌ、約１０Ｌ〜約１，５００Ｌ、約１０Ｌ〜約１，０００Ｌ、約１０Ｌ〜約９００Ｌ、約１０Ｌ〜約８００Ｌ、約１０Ｌ〜約７００Ｌ、約１０Ｌ〜約６００Ｌ、約１０Ｌ〜約５００Ｌ、約１０Ｌ〜約４００Ｌ、約１０Ｌ〜約３００Ｌ、約１０Ｌ〜約２５０Ｌ、約１０Ｌ〜約２００Ｌ、約１０Ｌ〜約１５０Ｌ、約１０Ｌ〜約１００Ｌ、約１０Ｌ〜約８０Ｌ、約１０Ｌ〜約６０Ｌ、約１０Ｌ〜約５０Ｌ、約１０Ｌ〜約２５Ｌ、約２５Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約２５Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約２５Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約２５Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約２５Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約２５Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約２５Ｌ〜約９，５００Ｌ、約２５Ｌ〜約９，０００Ｌ、約２５Ｌ〜約８，５００Ｌ、約２５Ｌ〜約８，０００Ｌ、約２５Ｌ〜約７，５００Ｌ、約２５Ｌ〜約７，０００Ｌ、約２５Ｌ〜約６，５００Ｌ、約２５Ｌ〜約６，０００Ｌ、約２５Ｌ〜約５，５００Ｌ、約２５Ｌ〜約５，０００Ｌ、約２５Ｌ〜約４，５００Ｌ、約２５Ｌ〜約４，０００Ｌ、約２５Ｌ〜約３，５００Ｌ、約２５Ｌ〜約３，０００Ｌ、約２５Ｌ〜約２，５００Ｌ、約２５Ｌ〜約２，０００Ｌ、約２５Ｌ〜約１，５００Ｌ、約２５Ｌ〜約１，０００Ｌ、約２５Ｌ〜約９００Ｌ、約２５Ｌ〜約８００Ｌ、約２５Ｌ〜約７００Ｌ、約２５Ｌ〜約６００Ｌ、約２５Ｌ〜約５００Ｌ、約２５Ｌ〜約４００Ｌ、約２５Ｌ〜約３００Ｌ、約２５Ｌ〜約２５０Ｌ、約２５Ｌ〜約２００Ｌ、約２５Ｌ〜約１５０Ｌ、約２５Ｌ〜約１００Ｌ、約２５Ｌ〜約８０Ｌ、約２５Ｌ〜約６０Ｌ、約２５Ｌ〜約５０Ｌ、約５０Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約５０Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約５０Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約５０Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約５０Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約５０Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約５０Ｌ〜約９，５００Ｌ、約５０Ｌ〜約９，０００Ｌ、約５０Ｌ〜約８，５００Ｌ、約５０Ｌ〜約８，０００Ｌ、約５０Ｌ〜約７，５００Ｌ、約５０Ｌ〜約７，０００Ｌ、約５０Ｌ〜約６，５００Ｌ、約５０Ｌ〜約６，０００Ｌ、約５０Ｌ〜約５，５００Ｌ、約５０Ｌ〜約５，０００Ｌ、約５０Ｌ〜約４，５００Ｌ、約５０Ｌ〜約４，０００Ｌ、約５０Ｌ〜約３，５００Ｌ、約５０Ｌ〜約３，０００Ｌ、約５０Ｌ〜約２，５００Ｌ、約５０Ｌ〜約２，０００Ｌ、約５０Ｌ〜約１，５００Ｌ、約５０Ｌ〜約１，０００Ｌ、約５０Ｌ〜約９００Ｌ、約５０Ｌ〜約８００Ｌ、約５０Ｌ〜約７００Ｌ、約５０Ｌ〜約６００Ｌ、約５０Ｌ〜約５００Ｌ、約５０Ｌ〜約４００Ｌ、約５０Ｌ〜約３００Ｌ、約５０Ｌ〜約２５０Ｌ、約５０Ｌ〜約２００Ｌ、約５０Ｌ〜約１５０Ｌ、約５０Ｌ〜約１００Ｌ、約５０Ｌ〜約８０Ｌ、約５０Ｌ〜約６０Ｌ、約６０Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約６０Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約６０Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約６０Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約６０Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約６０Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約６０Ｌ〜約９，５００Ｌ、約６０Ｌ〜約９，０００Ｌ、約６０Ｌ〜約８，５００Ｌ、約６０Ｌ〜約８，０００Ｌ、約６０Ｌ〜約７，５００Ｌ、約６０Ｌ〜約７，０００Ｌ、約６０Ｌ〜約６，５００Ｌ、約６０Ｌ〜約６，０００Ｌ、約６０Ｌ〜約５，５００Ｌ、約６０Ｌ〜約５，０００Ｌ、約６０Ｌ〜約４，５００Ｌ、約６０Ｌ〜約４，０００Ｌ、約６０Ｌ〜約３，５００Ｌ、約６０Ｌ〜約３，０００Ｌ、約６０Ｌ〜約２，５００Ｌ、約６０Ｌ〜約２，０００Ｌ、約６０Ｌ〜約１，５００Ｌ、約６０Ｌ〜約１，０００Ｌ、約６０Ｌ〜約９００Ｌ、約６０Ｌ〜約８００Ｌ、約６０Ｌ〜約７００Ｌ、約６０Ｌ〜約６００Ｌ、約６０Ｌ〜約５００Ｌ、約６０Ｌ〜約４００Ｌ、約６０Ｌ〜約３００Ｌ、約６０Ｌ〜約２５０Ｌ、約６０Ｌ〜約２００Ｌ、約６０Ｌ〜約１５０Ｌ、約６０Ｌ〜約１００Ｌ、約６０Ｌ〜約８０Ｌ、約８０Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約８０Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約８０Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約８０Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約８０Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約８０Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約８０Ｌ〜約９，５００Ｌ、約８０Ｌ〜約９，０００Ｌ、約８０Ｌ〜約８，５００Ｌ、約８０Ｌ〜約８，０００Ｌ、約８０Ｌ〜約７，５００Ｌ、約８０Ｌ〜約７，０００Ｌ、約８０Ｌ〜約６，５００Ｌ、約８０Ｌ〜約６，０００Ｌ、約８０Ｌ〜約５，５００Ｌ、約８０Ｌ〜約５，０００Ｌ、約８０Ｌ〜約４，５００Ｌ、約８０Ｌ〜約４，０００Ｌ、約８０Ｌ〜約３，５００Ｌ、約８０Ｌ〜約３，０００Ｌ、約８０Ｌ〜約２，５００Ｌ、約８０Ｌ〜約２，０００Ｌ、約８０Ｌ〜約１，５００Ｌ、約８０Ｌ〜約１，０００Ｌ、約８０Ｌ〜約９００Ｌ、約８０Ｌ〜約８００Ｌ、約８０Ｌ〜約７００Ｌ、約８０Ｌ〜約６００Ｌ、約８０Ｌ〜約５００Ｌ、約８０Ｌ〜約４００Ｌ、約８０Ｌ〜約３００Ｌ、約８０Ｌ〜約２５０Ｌ、約８０Ｌ〜約２００Ｌ、約８０Ｌ〜約１５０Ｌ、約８０Ｌ〜約１００Ｌ、約１００Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約１００Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約１００Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約１００Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約１００Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約１００Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約１００Ｌ〜約９，５００Ｌ、約１００Ｌ〜約９，０００Ｌ、約１００Ｌ〜約８，５００Ｌ、約１００Ｌ〜約８，０００Ｌ、約１００Ｌ〜約７，５００Ｌ、約１００Ｌ〜約７，０００Ｌ、約１００Ｌ〜約６，５００Ｌ、約１００Ｌ〜約６，０００Ｌ、約１００Ｌ〜約５，５００Ｌ、約１００Ｌ〜約５，０００Ｌ、約１００Ｌ〜約４，５００Ｌ、約１００Ｌ〜約４，０００Ｌ、約１００Ｌ〜約３，５００Ｌ、約１００Ｌ〜約３，０００Ｌ、約１００Ｌ〜約２，５００Ｌ、約１００Ｌ〜約２，０００Ｌ、約１００Ｌ〜約１，５００Ｌ、約１００Ｌ〜約１，０００Ｌ、約１００Ｌ〜約９００Ｌ、約１００Ｌ〜約８００Ｌ、約１００Ｌ〜約７００Ｌ、約１００Ｌ〜約６００Ｌ、約１００Ｌ〜約５００Ｌ、約１００Ｌ〜約４００Ｌ、約１００Ｌ〜約３００Ｌ、約１００Ｌ〜約２５０Ｌ、約１００Ｌ〜約２００Ｌ、約１００Ｌ〜約１５０Ｌ、約１５０Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約１５０Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約１５０Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約１５０Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約１５０Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約１５０Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約１５０Ｌ〜約９，５００Ｌ、約１５０Ｌ〜約９，０００Ｌ、約１５０Ｌ〜約８，５００Ｌ、約１５０Ｌ〜約８，０００Ｌ、約１５０Ｌ〜約７，５００Ｌ、約１５０Ｌ〜約７，０００Ｌ、約１５０Ｌ〜約６，５００Ｌ、約１５０Ｌ〜約６，０００Ｌ、約１５０Ｌ〜約５，５００Ｌ、約１５０Ｌ〜約５，０００Ｌ、約１５０Ｌ〜約４，５００Ｌ、約１５０Ｌ〜約４，０００Ｌ、約１５０Ｌ〜約３，５００Ｌ、約１５０Ｌ〜約３，０００Ｌ、約１５０Ｌ〜約２，５００Ｌ、約１５０Ｌ〜約２，０００Ｌ、約１５０Ｌ〜約１，５００Ｌ、約１５０Ｌ〜約１，０００Ｌ、約１５０Ｌ〜約９００Ｌ、約１５０Ｌ〜約８００Ｌ、約１５０Ｌ〜約７００Ｌ、約１５０Ｌ〜約６００Ｌ、約１５０Ｌ〜約５００Ｌ、約１５０Ｌ〜約４００Ｌ、約１５０Ｌ〜約３００Ｌ、約１５０Ｌ〜約２５０Ｌ、約１５０Ｌ〜約２００Ｌ、約２００Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約２００Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約２００Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約２００Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約２００Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約２００Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約２００Ｌ〜約９，５００Ｌ、約２００Ｌ〜約９，０００Ｌ、約２００Ｌ〜約８，５００Ｌ、約２００Ｌ〜約８，０００Ｌ、約２００Ｌ〜約７，５００Ｌ、約２００Ｌ〜約７，０００Ｌ、約２００Ｌ〜約６，５００Ｌ、約２００Ｌ〜約６，０００Ｌ、約２００Ｌ〜約５，５００Ｌ、約２００Ｌ〜約５，０００Ｌ、約２００Ｌ〜約４，５００Ｌ、約２００Ｌ〜約４，０００Ｌ、約２００Ｌ〜約３，５００Ｌ、約２００Ｌ〜約３，０００Ｌ、約２００Ｌ〜約２，５００Ｌ、約２００Ｌ〜約２，０００Ｌ、約２００Ｌ〜約１，５００Ｌ、約２００Ｌ〜約１，０００Ｌ、約２００Ｌ〜約９００Ｌ、約２００Ｌ〜約８００Ｌ、約２００Ｌ〜約７００Ｌ、約２００Ｌ〜約６００Ｌ、約２００Ｌ〜約５００Ｌ、約２００Ｌ〜約４００Ｌ、約２００Ｌ〜約３００Ｌ、約２００Ｌ〜約２５０Ｌ、約２５０Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約２５０Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約２５０Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約２５０Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約２５０Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約２５０Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約２５０Ｌ〜約９，５００Ｌ、約２５０Ｌ〜約９，０００Ｌ、約２５０Ｌ〜約８，５００Ｌ、約２５０Ｌ〜約８，０００Ｌ、約２５０Ｌ〜約７，５００Ｌ、約２５０Ｌ〜約７，０００Ｌ、約２５０Ｌ〜約６，５００Ｌ、約２５０Ｌ〜約６，０００Ｌ、約２５０Ｌ〜約５，５００Ｌ、約２５０Ｌ〜約５，０００Ｌ、約２５０Ｌ〜約４，５００Ｌ、約２５０Ｌ〜約４，０００Ｌ、約２５０Ｌ〜約３，５００Ｌ、約２５０Ｌ〜約３，０００Ｌ、約２５０Ｌ〜約２，５００Ｌ、約２５０Ｌ〜約２，０００Ｌ、約２５０Ｌ〜約１，５００Ｌ、約２５０Ｌ〜約１，０００Ｌ、約２５０Ｌ〜約９００Ｌ、約２５０Ｌ〜約８００Ｌ、約２５０Ｌ〜約７００Ｌ、約２５０Ｌ〜約６００Ｌ、約２５０Ｌ〜約５００Ｌ、約２５０Ｌ〜約４００Ｌ、約２５０Ｌ〜約３００Ｌ、約３００Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約３００Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約３００Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約３００Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約３００Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約３００Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約３００Ｌ〜約９，５００Ｌ、約３００Ｌ〜約９，０００Ｌ、約３００Ｌ〜約８，５００Ｌ、約３００Ｌ〜約８，０００Ｌ、約３００Ｌ〜約７，５００Ｌ、
約３００Ｌ〜約７，０００Ｌ、約３００Ｌ〜約６，５００Ｌ、約３００Ｌ〜約６，０００Ｌ、約３００Ｌ〜約５，５００Ｌ、約３００Ｌ〜約５，０００Ｌ、約３００Ｌ〜約４，５００Ｌ、約３００Ｌ〜約４，０００Ｌ、約３００Ｌ〜約３，５００Ｌ、約３００Ｌ〜約３，０００Ｌ、約３００Ｌ〜約２，５００Ｌ、約３００Ｌ〜約２，０００Ｌ、約３００Ｌ〜約１，５００Ｌ、約３００Ｌ〜約１，０００Ｌ、約３００Ｌ〜約９００Ｌ、約３００Ｌ〜約８００Ｌ、約３００Ｌ〜約７００Ｌ、約３００Ｌ〜約６００Ｌ、約３００Ｌ〜約５００Ｌ、約３００Ｌ〜約４００Ｌ、約４００Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約４００Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約４００Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約４００Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約４００Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約４００Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約４００Ｌ〜約９，５００Ｌ、約４００Ｌ〜約９，０００Ｌ、約４００Ｌ〜約８，５００Ｌ、約４００Ｌ〜約８，０００Ｌ、約４００Ｌ〜約７，５００Ｌ、約４００Ｌ〜約７，０００Ｌ、約４００Ｌ〜約６，５００Ｌ、約４００Ｌ〜約６，０００Ｌ、約４００Ｌ〜約５，５００Ｌ、約４００Ｌ〜約５，０００Ｌ、約４００Ｌ〜約４，５００Ｌ、約４００Ｌ〜約４，０００Ｌ、約４００Ｌ〜約３，５００Ｌ、約４００Ｌ〜約３，０００Ｌ、約４００Ｌ〜約２，５００Ｌ、約４００Ｌ〜約２，０００Ｌ、約４００Ｌ〜約１，５００Ｌ、約４００Ｌ〜約１，０００Ｌ、約４００Ｌ〜約９００Ｌ、約４００Ｌ〜約８００Ｌ、約４００Ｌ〜約７００Ｌ、約４００Ｌ〜約６００Ｌ、約４００Ｌ〜約５００Ｌ、約５００Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約５００Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約５００Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約５００Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約５００Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約５００Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約５００Ｌ〜約９，５００Ｌ、約５００Ｌ〜約９，０００Ｌ、約５００Ｌ〜約８，５００Ｌ、約５００Ｌ〜約８，０００Ｌ、約５００Ｌ〜約７，５００Ｌ、約５００Ｌ〜約７，０００Ｌ、約５００Ｌ〜約６，５００Ｌ、約５００Ｌ〜約６，０００Ｌ、約５００Ｌ〜約５，５００Ｌ、約５００Ｌ〜約５，０００Ｌ、約５００Ｌ〜約４，５００Ｌ、約５００Ｌ〜約４，０００Ｌ、約５００Ｌ〜約３，５００Ｌ、約５００Ｌ〜約３，０００Ｌ、約５００Ｌ〜約２，５００Ｌ、約５００Ｌ〜約２，０００Ｌ、約５００Ｌ〜約１，５００Ｌ、約５００Ｌ〜約１，０００Ｌ、約５００Ｌ〜約９００Ｌ、約５００Ｌ〜約８００Ｌ、約５００Ｌ〜約７００Ｌ、約５００Ｌ〜約６００Ｌ、約６００Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約６００Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約６００Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約６００Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約６００Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約６００Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約６００Ｌ〜約９，５００Ｌ、約６００Ｌ〜約９，０００Ｌ、約６００Ｌ〜約８，５００Ｌ、約６００Ｌ〜約８，０００Ｌ、約６００Ｌ〜約７，５００Ｌ、約６００Ｌ〜約７，０００Ｌ、約６００Ｌ〜約６，５００Ｌ、約６００Ｌ〜約６，０００Ｌ、約６００Ｌ〜約５，５００Ｌ、約６００Ｌ〜約５，０００Ｌ、約６００Ｌ〜約４，５００Ｌ、約６００Ｌ〜約４，０００Ｌ、約６００Ｌ〜約３，５００Ｌ、約６００Ｌ〜約３，０００Ｌ、約６００Ｌ〜約２，５００Ｌ、約６００Ｌ〜約２，０００Ｌ、約６００Ｌ〜約１，５００Ｌ、約６００Ｌ〜約１，０００Ｌ、約６００Ｌ〜約９００Ｌ、約６００Ｌ〜約８００Ｌ、約６００Ｌ〜約７００Ｌ、約７００Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約７００Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約７００Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約７００Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約７００Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約７００Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約７００Ｌ〜約９，５００Ｌ、約７００Ｌ〜約９，０００Ｌ、約７００Ｌ〜約８，５００Ｌ、約７００Ｌ〜約８，０００Ｌ、約７００Ｌ〜約７，５００Ｌ、約７００Ｌ〜約７，０００Ｌ、約７００Ｌ〜約６，５００Ｌ、約７００Ｌ〜約６，０００Ｌ、約７００Ｌ〜約５，５００Ｌ、約７００Ｌ〜約５，０００Ｌ、約７００Ｌ〜約４，５００Ｌ、約７００Ｌ〜約４，０００Ｌ、約７００Ｌ〜約３，５００Ｌ、約７００Ｌ〜約３，０００Ｌ、約７００Ｌ〜約２，５００Ｌ、約７００Ｌ〜約２，０００Ｌ、約７００Ｌ〜約１，５００Ｌ、約７００Ｌ〜約１，０００Ｌ、約７００Ｌ〜約９００Ｌ、約７００Ｌ〜約８００Ｌ、約８００Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約８００Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約８００Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約８００Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約８００Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約８００Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約８００Ｌ〜約９，５００Ｌ、約８００Ｌ〜約９，０００Ｌ、約８００Ｌ〜約８，５００Ｌ、約８００Ｌ〜約８，０００Ｌ、約８００Ｌ〜約７，５００Ｌ、約８００Ｌ〜約７，０００Ｌ、約８００Ｌ〜約６，５００Ｌ、約８００Ｌ〜約６，０００Ｌ、約８００Ｌ〜約５，５００Ｌ、約８００Ｌ〜約５，０００Ｌ、約８００Ｌ〜約４，５００Ｌ、約８００Ｌ〜約４，０００Ｌ、約８００Ｌ〜約３，５００Ｌ、約８００Ｌ〜約３，０００Ｌ、約８００Ｌ〜約２，５００Ｌ、約８００Ｌ〜約２，０００Ｌ、約８００Ｌ〜約１，５００Ｌ、約８００Ｌ〜約１，０００Ｌ、約８００Ｌ〜約９００Ｌ、約９００Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約９００Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約９００Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約９００Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約９００Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約９００Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約９００Ｌ〜約９，５００Ｌ、約９００Ｌ〜約９，０００Ｌ、約９００Ｌ〜約８，５００Ｌ、約９００Ｌ〜約８，０００Ｌ、約９００Ｌ〜約７，５００Ｌ、約９００Ｌ〜約７，０００Ｌ、約９００Ｌ〜約６，５００Ｌ、約９００Ｌ〜約６，０００Ｌ、約９００Ｌ〜約５，５００Ｌ、約９００Ｌ〜約５，０００Ｌ、約９００Ｌ〜約４，５００Ｌ、約９００Ｌ〜約４，０００Ｌ、約９００Ｌ〜約３，５００Ｌ、約９００Ｌ〜約３，０００Ｌ、約９００Ｌ〜約２，５００Ｌ、約９００Ｌ〜約２，０００Ｌ、約９００Ｌ〜約１，５００Ｌ、約９００Ｌ〜約１，０００Ｌ、約１，０００Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約１，０００Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約１，０００Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約１，０００Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約１，０００Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約１，０００Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約１，０００Ｌ〜約９，５００Ｌ、約１，０００Ｌ〜約９，０００Ｌ、約１，０００Ｌ〜約８，５００Ｌ、約１，０００Ｌ〜約８，０００Ｌ、約１，０００Ｌ〜約７，５００Ｌ、約１，０００Ｌ〜約７，０００Ｌ、約１，０００Ｌ〜約６，５００Ｌ、約１，０００Ｌ〜約６，０００Ｌ、約１，０００Ｌ〜約５，５００Ｌ、約１，０００Ｌ〜約５，０００Ｌ、約１，０００Ｌ〜約４，５００Ｌ、約１，０００Ｌ〜約４，０００Ｌ、約１，０００Ｌ〜約３，５００Ｌ、約１，０００Ｌ〜約３，０００Ｌ、約１，０００Ｌ〜約２，５００Ｌ、約１，０００Ｌ〜約２，０００Ｌ、約１，０００Ｌ〜約１，５００Ｌ、約１，５００Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約１，５００Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約１，５００Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約１，５００Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約１，５００Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約１，５００Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約１，５００Ｌ〜約９，５００Ｌ、約１，５００Ｌ〜約９，０００Ｌ、約１，５００Ｌ〜約８，５００Ｌ、約１，５００Ｌ〜約８，０００Ｌ、約１，５００Ｌ〜約７，５００Ｌ、約１，５００Ｌ〜約７，０００Ｌ、約１，５００Ｌ〜約６，５００Ｌ、約１，５００Ｌ〜約６，０００Ｌ、約１，５００Ｌ〜約５，５００Ｌ、約１，５００Ｌ〜約５，０００Ｌ、約１，５００Ｌ〜約４，５００Ｌ、約１，５００Ｌ〜約４，０００Ｌ、約１，５００Ｌ〜約３，５００Ｌ、約１，５００Ｌ〜約３，０００Ｌ、約１，５００Ｌ〜約２，５００Ｌ、約１，５００Ｌ〜約２，０００Ｌ、約２，０００Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約２，０００Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約２，０００Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約２，０００Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約２，０００Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約２，０００Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約２，０００Ｌ〜約９，５００Ｌ、約２，０００Ｌ〜約９，０００Ｌ、約２，０００Ｌ〜約８，５００Ｌ、約２，０００Ｌ〜約８，０００Ｌ、約２，０００Ｌ〜約７，５００Ｌ、約２，０００Ｌ〜約７，０００Ｌ、約２，０００Ｌ〜約６，５００Ｌ、約２，０００Ｌ〜約６，０００Ｌ、約２，０００Ｌ〜約５，５００Ｌ、約２，０００Ｌ〜約５，０００Ｌ、約２，０００Ｌ〜約４，５００Ｌ、約２，０００Ｌ〜約４，０００Ｌ、約２，０００Ｌ〜約３，５００Ｌ、約２，０００Ｌ〜約３，０００Ｌ、約２，０００Ｌ〜約２，５００Ｌ、約２，５００Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約２，５００Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約２，５００Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約２，５００Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約２，５００Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約２，５００Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約２，５００Ｌ〜約９，５００Ｌ、約２，５００Ｌ〜約９，０００Ｌ、約２，５００Ｌ〜約８，５００Ｌ、約２，５００Ｌ〜約８，０００Ｌ、約２，５００Ｌ〜約７，５００Ｌ、約２，５００Ｌ〜約７，０００Ｌ、約２，５００Ｌ〜約６，５００Ｌ、約２，５００Ｌ〜約６，０００Ｌ、約２，５００Ｌ〜約５，５００Ｌ、約２，５００Ｌ〜約５，０００Ｌ、約２，５００Ｌ〜約４，５００Ｌ、約２，５００Ｌ〜約４，０００Ｌ、約２，５００Ｌ〜約３，５００Ｌ、約２，５００Ｌ〜約３，０００Ｌ、約３，０００Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約３，０００Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約３，０００Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約３，０００Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約３，０００Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約３，０００Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約３，０００Ｌ〜約９，５００Ｌ、約３，０００Ｌ〜約９，０００Ｌ、約３，０００Ｌ〜約８，５００Ｌ、約３，０００Ｌ〜約８，０００Ｌ、約３，０００Ｌ〜約７，５００Ｌ、約３，０００Ｌ〜約７，０００Ｌ、約３，０００Ｌ〜約６，５００Ｌ、約３，０００Ｌ〜約６，０００Ｌ、約３，０００Ｌ〜約５，５００Ｌ、約３，０００Ｌ〜約５，０００Ｌ、約３，０００Ｌ〜約４，５００Ｌ、約３，０００Ｌ〜約４，０００Ｌ、約３，０００Ｌ〜約３，５００Ｌ、約３，５００Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約３，５００Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約３，５００Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約３，５００Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約３，５００Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約３，５００Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約３，５００Ｌ〜約９，５００Ｌ、約３，５００Ｌ〜約９，０００Ｌ、約３，５００Ｌ〜約８，５００Ｌ、約３，５００Ｌ〜約８，０００Ｌ、約３，５００Ｌ〜約７，５００Ｌ、約３，５００Ｌ〜約７，０００Ｌ、約３，５００Ｌ〜約６，５００Ｌ、約３，５００Ｌ〜約６，０００Ｌ、約３，５００Ｌ〜約５，５００Ｌ、約３，５００Ｌ〜約５，０００Ｌ、約３，５００Ｌ〜約４，５００Ｌ、約３，５００Ｌ〜約４，０００Ｌ、約４，０００Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約４，０００Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約４，０００Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約４，０００Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約４，０００Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約４，０００Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約４，０００Ｌ〜約９，５００Ｌ、約４，０００Ｌ〜約９，０００Ｌ、約４，０００Ｌ〜約８，５００Ｌ、約４，０００Ｌ〜約８，０００Ｌ、約４，０００Ｌ〜約７，５００Ｌ、約４，０００Ｌ〜約７，０００Ｌ、約４，０００Ｌ〜約６，５００Ｌ、約４，０００Ｌ〜約６，０００Ｌ、約４，０００Ｌ〜約５，５００Ｌ、約４，０００Ｌ〜約５，０００Ｌ、約４，０００Ｌ〜約４，５００Ｌ、約４，５００Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約４，５００Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約４，５００Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約４，５００Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約４，５００Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約４，５００Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約４，５００Ｌ〜約９，５００Ｌ、約４，５００Ｌ〜約９，０００Ｌ、約４，５００Ｌ〜約８，５００Ｌ、約４，５００Ｌ〜約８，０００Ｌ、約４，５００Ｌ〜約７，５００Ｌ、約４，５００Ｌ〜約７，０００Ｌ、約４，５００Ｌ〜約６，５００Ｌ、約４，５００Ｌ〜約６，０００Ｌ、約４，５００Ｌ〜約５，５００Ｌ、約４，５００Ｌ〜約５，０００Ｌ、約５，０００Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約５，０００Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約５，０００Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約５，０００Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約５，０００Ｌ〜約１２，０００Ｌ、
約５，０００Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約５，０００Ｌ〜約９，５００Ｌ、約５，０００Ｌ〜約９，０００Ｌ、約５，０００Ｌ〜約８，５００Ｌ、約５，０００Ｌ〜約８，０００Ｌ、約５，０００Ｌ〜約７，５００Ｌ、約５，０００Ｌ〜約７，０００Ｌ、約５，０００Ｌ〜約６，５００Ｌ、約５，０００Ｌ〜約６，０００Ｌ、約５，０００Ｌ〜約５，５００Ｌ、約５，５００Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約５，５００Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約５，５００Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約５，５００Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約５，５００Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約５，５００Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約５，５００Ｌ〜約９，５００Ｌ、約５，５００Ｌ〜約９，０００Ｌ、約５，５００Ｌ〜約８，５００Ｌ、約５，５００Ｌ〜約８，０００Ｌ、約５，５００Ｌ〜約７，５００Ｌ、約５，５００Ｌ〜約７，０００Ｌ、約５，５００Ｌ〜約６，５００Ｌ、約５，５００Ｌ〜約６，０００Ｌ、約６，０００Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約６，０００Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約６，０００Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約６，０００Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約６，０００Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約６，０００Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約６，０００Ｌ〜約９，５００Ｌ、約６，０００Ｌ〜約９，０００Ｌ、約６，０００Ｌ〜約８，５００Ｌ、約６，０００Ｌ〜約８，０００Ｌ、約６，０００Ｌ〜約７，５００Ｌ、約６，０００Ｌ〜約７，０００Ｌ、約６，０００Ｌ〜約６，５００Ｌ、約６，５００Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約６，５００Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約６，５００Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約６，５００Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約６，５００Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約６，５００Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約６，５００Ｌ〜約９，５００Ｌ、約６，５００Ｌ〜約９，０００Ｌ、約６，５００Ｌ〜約８，５００Ｌ、約６，５００Ｌ〜約８，０００Ｌ、約６，５００Ｌ〜約７，５００Ｌ、約６，５００Ｌ〜約７，０００Ｌ、約７，０００Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約７，０００Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約７，０００Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約７，０００Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約７，０００Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約７，０００Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約７，０００Ｌ〜約９，５００Ｌ、約７，０００Ｌ〜約９，０００Ｌ、約７，０００Ｌ〜約８，５００Ｌ、約７，０００Ｌ〜約８，０００Ｌ、約７，０００Ｌ〜約７，５００Ｌ、約７，５００Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約７，５００Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約７，５００Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約７，５００Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約７，５００Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約７，５００Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約７，５００Ｌ〜約９，５００Ｌ、約７，５００Ｌ〜約９，０００Ｌ、約７，５００Ｌ〜約８，５００Ｌ、約７，５００Ｌ〜約８，０００Ｌ、約８，０００Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約８，０００Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約８，０００Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約８，０００Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約８，０００Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約８，０００Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約８，０００Ｌ〜約９，５００Ｌ、約８，０００Ｌ〜約９，０００Ｌ、約８，０００Ｌ〜約８，５００Ｌ、約８，５００Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約８，５００Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約８，５００Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約８，５００Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約８，５００Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約８，５００Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約８，５００Ｌ〜約９，５００Ｌ、約８，５００Ｌ〜約９，０００Ｌ、約９，０００Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約９，０００Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約９，０００Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約９，０００Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約９，０００Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約９，０００Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約９，０００Ｌ〜約９，５００Ｌ、約９，５００Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約９，５００Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約９，５００Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約９，５００Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約９，５００Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約９，５００Ｌ〜約１０，０００Ｌ、約１０，０００Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約１０，０００Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約１０，０００Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約１０，０００Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約１０，０００Ｌ〜約１２，０００Ｌ、約１２，０００Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約１２，０００Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約１２，０００Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約１２，０００Ｌ〜約１４，０００Ｌ、約１４，０００Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約１４，０００Ｌ〜約１８，０００Ｌ、約１４，０００Ｌ〜約１６，０００Ｌ、約１６，０００Ｌ〜約２０，０００Ｌ、約１６，０００Ｌ〜約１８，０００Ｌ、または約１８，０００Ｌ〜約２０，０００Ｌの容量を有し得る。
【０１２１】
一部の実施形態では、運転パラメーターは、細胞生存度または細胞死に関する任意のパラメーター（例えば、剪断応力、感作剤の濃度、保護剤の濃度、温度、ｐＨ、栄養素組成、バイオマス負荷および供給戦略）であり得る。細胞生存度または細胞死亡率は、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）を発現できる細胞を使用することによって測定することができる。ＬＤＨを発現できる細胞が死ぬと、細胞中のＬＤＨは、液体培養培地中に放出される。従って、細胞生存度または細胞死亡率は、ＬＤＨと直交して測定することができ、特異的ＬＤＨ産生（ｓＬＤＨｐ）と比例する（図３）。
【０１２２】
図４は、プルロニック（例えば、保護剤）、感作剤および剪断（例えば、撹拌）が、特異的ＬＤＨ産生にどのように影響し得るかを示す。図４に示されるように、保護剤は、細胞−気泡付着を減少させ、細胞の耐久力を増加させ、従って、高い細胞生存度を維持し、細胞を死から保護することができる。対照的に、感作剤は、細胞−気泡付着を増加させ、細胞の耐久力を減少させ、従って、細胞生存度を減少させことができる。これらのパラメーターは互いに相互関連するので、伝統的なモデルによって感作剤、撹拌および／または保護剤の正確な影響を予測することは、非常に困難な場合が多い。
【０１２３】
図５は、小規模モデルにおける特異的ＬＤＨ産生が、感作剤濃度、保護剤濃度および撹拌の関数であることを示す。これらのパラメーター間の相互作用に起因して、特異的ＬＤＨ産生は通常、これらのパラメーターのいずれとも、線形の関連性を有さない。特異的ＬＤＨ産生に対するこれらのパラメーターの影響は、実施要因計画、例えば、完全実施要因計画または一部実施要因計画によって決定することができる。
【０１２４】
実施要因計画は、条件のセットの下で実験を実施することを含み、これらの条件は、パラメーター（例えば、運転パラメーター）のセットによって規定される。条件のセットにおいて、各パラメーターは、２つまたはそれ以上のレベルを有し得る。実施要因計画の目的は、異なるパラメーター（例えば、感作剤濃度、保護剤濃度および撹拌）間の主効果および相互作用効果を研究することである。用語「完全実施要因計画」は、全てのパラメーターにわたる異なるレベルの全ての可能な組み合わせを含む実験計画を指す。例えば、各々が２つのレベルをとる３つのパラメーター（即ち、要因）を用いる場合、完全実施要因計画は、合計で８つの組み合わせを有し、通常、２３実施要因計画と呼ばれる（図６）。対照的に、用語「一部実施要因計画」は、完全実施要因計画の実験的実行の注意深く選択されたサブセット（一部）からなる実験計画を指す。このサブセットは、実験的実行およびリソースに関する完全実施要因計画の試みの一部を使用しつつ、研究される問題の最も重要な構成についての情報を明らかにするために効果の希薄性の原理を利用するように選択される。実施要因計画を実施することによって、運転不能な領域（例えば、運転を失敗させるパラメーターの値の組み合わせ）を同定することができる。実施要因計画は、当該分野で公知であり、例えば、Ｂｏｘ，Ｇ．Ｅ．；Ｈｕｎｔｅｒ，Ｗ．Ｇ．；Ｈｕｎｔｅｒ，Ｊ．Ｓ．（２００５）．Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  ｆｏｒ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｅｒｓ：Ｄｅｓｉｇｎ，Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（第２版）．Ｗｉｌｅｙ．ＩＳＢＮ  ０−４７１−７１８１３−０；Ｖｉｃｅｎｔｅ，Ｇｅｍｍａら、「Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｆａｃｔｏｒｉａｌ  ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ  ａｎｄ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ  ｔｏ  ｏｐｔｉｍｉｚｅ  ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ」、Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  ｃｒｏｐｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ８．１（１９９８）：２９〜３５；Ｖａｎｄｅｒｖｏｏｒｔ，ＪｏおよびＡｎｎｉｃｋ  Ｌｕｄｗｉｇ．「Ｂｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ  ｓｔａｂｉｌｉｚｅｒｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＰＬＧＡ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ：ａ  ｆａｃｔｏｒｉａｌ  ｄｅｓｉｇｎ  ｓｔｕｄｙ」、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  ２３８．１〜２（２００２）：７７〜９２に記載される；これらは各々、その全体が参照によって本明細書に組み入れられる。
【０１２５】
典型的な実施要因計画では、中心点（例えば、目的の領域）は、うまく予測されない場合が多い。従って、一部の実施形態では、実施要因計画は、中心複合計画（例えば、内接中心複合計画、外接中心複合計画または面心複合計画）と組み合わせて使用することができる（図７）。中心複合計画は、曲率の推定を可能にする一群の軸点で増補される、中心点を有する埋め込み実施要因または一部実施要因計画を含む実験計画である。複合計画は、当該分野で公知であり、中心複合計画に関する詳細な説明は、例えば、Ｂｏｘ，Ｇ．Ｅ．；Ｈｕｎｔｅｒ，Ｗ．Ｇ．；Ｈｕｎｔｅｒ，Ｊ．Ｓ．（２００５）．Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  ｆｏｒ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｅｒｓ：Ｄｅｓｉｇｎ，Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（第２版）．Ｗｉｌｅｙ．ＩＳＢＮ  ０−４７１−７１８１３−０；Ａｈｍａｄｉ，Ｍ．ら、「Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ  ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ  ｔｏ  ｔｈｅ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｏｌｉｖｅ  ｏｉｌ  ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ｗａｓｔｅｗａｔｅｒ  ｕｓｉｎｇ  Ｆｅｎｔｏｎ’ｓ  ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈａｚａｒｄｏｕｓ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  １２３．１〜３（２００５）：１８７〜１９５において見出すことができる；これらは各々、その全体が参照によって本明細書に組み入れられる。
【０１２６】
一部の実施形態では、試験条件は、完全実施要因スクリーニングおよび中心複合計画（例えば、内接中心複合計画）に基づいて選択される。完全実施要因スクリーニングおよび中心複合計画を組み合わせることによって、選択された試験条件は、目的の領域を最大化し、潜在的な失敗の領域を最小化することができる（図８および図９）。
【０１２７】
試験培養容器におけるこれらの試験条件の実験結果は、選択されたパラメーター間の関連性を示す推定された等高線を提供する。小規模モデルの等高線が決定されると、この小規模モデルは、足りない値を予測するために使用することができる。例えば、消泡剤濃度または剪断応力が分かっているので、運転のためにどのくらいのプルロニックが要求されるかを予測することができる。この関連性は、異なる規模（例えば、小規模、ベンチトップ、産生など）にわたって細胞成長速度および死亡率を相関付けることによって決定される。
【０１２８】
一部の実施形態では、小規模モデルの推定された等高線は、異なる規模（例えば、産生規模）において収集されたデータポイントを合致させるために使用することができる。感作剤および保護剤の濃度が既知であるので、等高線から、産生バイオリアクターにおける剪断応力に対応する小規模モデルにおける剪断応力を決定することが可能である（図１０）。産生バイオリアクターにおける剪断応力に対応する剪断応力および感作剤の濃度に基づいて、保護剤濃度変化（Δ［保護剤］）の影響を、推定された等高線から決定することができる（図１１）。例えば、図１１に示されるように、左端の点（円）、中央左の点（円）、中央右の点（円）および右端の点（円）は全て、同じ剪断応力および感作剤濃度を有する。影付きの領域は、運転不能な空間である。保護剤濃度を増加させる（中央右の点（円）から右端の点（円）まで、これら２つの点の間に示される矢印）ことによって、感作剤濃度の許容可能な範囲は増加し、感作剤に対するより良い回復力をもたらす。
【０１２９】
従って、一部の実施形態では、本明細書に記載されるモデルは、異なるパラメーター間の相互作用的な影響を決定するために使用される。伝統的なモデルは通常、各パラメーターの影響を個々に研究する。本明細書に記載されるモデルは、各パラメーターの影響を個々に研究するのではなく、３つのパラメーターの影響を一度に研究できる。従って、本明細書に記載されるこのモデルは、任意の単一のパラメーターが変化される場合に、期待された細胞培養成績がどこに存在するかを予測することができる。
【０１３０】
さらに、伝統的なスケールアップパラメーターは通常、細胞培養成績の予測を提供しない。本明細書に記載されるモデルは、産生規模に展開させた場合に失敗のより低い可能性をもたらすより良いガイダンスを用いて運転範囲を予測でき、他の伝統的なパラメーター（Ｐ／Ｖ、羽先端速度、混合時間、ＫＬａ）が満たされたときにスケールアップする能力を提供する。
【０１３１】
一部の他の実施形態では、本明細書に記載されるモデルは、任意の個々のパラメーターまたはパラメーターの組み合わせ（例えば、プルロニック、消泡剤および剪断）を考慮して、任意の規模のリアクターのための運転計画空間を確立するために使用することができる。このモデルは、細胞培養物が所与の剪断条件について失敗の前に許容することができる消泡剤の最大量を決定するために使用することができる。
【０１３２】
一部の実施形態では、このモデルは、プルロニック濃度が所与の剪断条件についてその効能を喪失する前に持続させることができる消泡剤の最大量を決定するために使用することができる。
【０１３３】
一部の実施形態では、このモデルは、異なるプルロニックに対して異なる型の消泡剤（消泡剤Ｃ、オートクレーブされた消泡剤、照射された消泡剤など）を試験するために使用することができる。
【０１３４】
一部の実施形態では、このモデルは、細胞密度範囲非依存的であり得、規模にわたって標準化するためにＬＤＨを使用するので、強化された灌流培養のみに適用される必要はない。
【０１３５】
一部の実施形態では、このモデルは、独立した添加（開始時に１回のボーラス）または毎日の添加のいずれかによって、消泡剤濃度を試験することもできる。
【０１３６】
一部の実施形態では、このモデルは、消泡剤非活性化の後の反応速度論および細胞培養物に対するその影響について試験するために使用することができる。
【０１３７】
細胞
本明細書で提供される方法は、種々の異なる細胞（例えば、哺乳動物細胞、細菌細胞および酵母細胞）を培養するために使用することができる。
【０１３８】
細菌細胞の非限定的な例には、大腸菌、クロストリジウム・ディフィシル、クロストリジウム・スポロゲネス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｓｐｏｒｏｇｅｎｅｓ）、クロストリジウム・ベイジェリンキおよびクロストリジウム・アセトブチリカムが含まれる。本明細書に記載される方法のいずれかにおいて使用される例示的な市販の細菌細胞には、ＢＬ２１（ＤＥ３）（Ｎｏｖａｇｅｎ）、ＢＬ２１（ＤＥ３）−ｐＬｙｓＳ（Ｎｏｖａｇｅｎ）、ＢＬ２１  Ｓｔａｒ−ｐＬｙｓＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ＢＬ２１−ＳＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ＢＬ２１−ＡＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、Ｔｕｎｅｒ（Ｎｏｖａｇｅｎ）、Ｔｕｎｅｒ  ｐＬｙｓＳ（Ｎｏｖａｇｅｎ）、Ｏｒｉｇａｍｉ（Ｎｏｖａｇｅｎ）、Ｏｒｉｇａｍｉ  Ｄ（Ｎｏｖａｇｅｎ）、Ｏｒｉｇａｍｉ  Ｂ  ｐＬｙｓＳ（Ｎｏｖａｇｅｎ）、Ｒｏｓｅｔｔａ（Ｎｏｖａｇｅｎ）、Ｒｏｓｅｔｔａ  ｐＬｙｓＳ（Ｎｏｖａｇｅｎ）、Ｒｏｓｅｔｔａ−ｇａｍｉ−ｐＬｙｓＳ（Ｎｏｖａｇｅｎ）、ＢＬ２１  ＣｏｄｏｎＰｌｕｓ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、ＡＤ４９４（Ｎｏｖａｇｅｎ）、ＢＬ２１ｔｒｘＢ（Ｎｏｖａｇｅｎ）、ＨＭＳ１７４（Ｎｏｖａｇｅｎ）、ＮｏｖａＢｌｕｅ（ＤＥ３）（Ｎｏｖａｇｅｎ）、ＢＬＲ（Ｎｏｖａｇｅｎ）、Ｃ４１（ＤＥ３）（Ｌｕｃｉｇｅｎ）、Ｃ４３（ＤＥ３）（Ｌｕｃｉｇｅｎ）、Ｌｅｍｏ２１（ＤＥ３）（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ＢｉｏＬａｂｓ）、ＳＨｕｆｆｌｅ  Ｔ７（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ＢｉｏＬａｂｓ）、ＡｒｔｉｃＥｘｐｒｅｓｓ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）およびＡｒｔｉｃ  Ｅｘｐｒｅｓｓ（ＤＥ３）（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）が含まれる。
【０１３９】
酵母細胞の非限定的な例には、以下が含まれる：出芽酵母、Ｓ．エクシグウス（Ｓ．ｅｘｉｇｕｕｓ）およびピキア・パストリス。本明細書に記載される方法のいずれかにおいて使用される酵母細胞のさらなる例には、サッカロマイセス属、ピキア属、クルイベロマイセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）属、ハンゼヌラ属およびヤロウイア属由来のものが含まれる。本明細書に記載される方法のいずれかにおいて使用される酵母細胞のさらなる例は、Ｎｉｅｌｓｅｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ５３６：１３３〜１４７、２０１４に記載されている。
【０１４０】
本明細書に記載される方法のいずれかを使用して培養することができる哺乳動物細胞の非限定的な例には、以下が含まれる：チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（例えば、ＣＨＯ  ＤＧ４４細胞、ＣＨＯ−Ｋ１ｓ細胞およびＣＨＯ−ＤＸＢ１１細胞）、Ｓｐ２．０、骨髄腫細胞（例えば、ＮＳ／０）、Ｂ細胞、ハイブリドーマ細胞、Ｔ細胞、ヒト胎児由来腎臓（ＨＥＫ）細胞（例えば、ＨＥＫ  ２９３ＥおよびＨＥＫ  ２９３Ｆ）、アフリカミドリザル腎臓上皮細胞（Ｖｅｒｏ）細胞およびメイディン・ダービー・イヌ（コッカースパニエル）腎臓上皮細胞（ＭＤＣＫ）細胞。本明細書に記載される方法を使用して培養することができるさらなる哺乳動物細胞は、当該分野で公知である。本明細書に記載される方法のいずれかの非限定的な例では、培養の開始時に試験培養容器および／または産生バイオリアクター中に存在する哺乳動物細胞の濃度は、約０．１×１０６細胞／ｍＬ〜約１０×１０６細胞／ｍＬ（例えば、約０．１×１０６細胞／ｍＬ〜約９×１０６細胞／ｍＬ、約０．１×１０６細胞／ｍＬ〜約８×１０６細胞／ｍＬ、約０．１×１０６細胞／ｍＬ〜約７×１０６細胞／ｍＬ、約０．１×１０６細胞／ｍＬ〜約６×１０６細胞／ｍＬ、約０．１×１０６細胞／ｍＬ〜約５×１０６細胞／ｍＬ、約０．１×１０６細胞／ｍＬ〜約４×１０６細胞／ｍＬ、約０．１×１０６細胞／ｍＬ〜約３×１０６細胞／ｍＬ、約０．１×１０６細胞／ｍＬ〜約２×１０６細胞／ｍＬ、約０．１×１０６細胞／ｍＬ〜約１．５×１０６細胞／ｍＬ、約０．１×１０６細胞／ｍＬ〜約１．０×１０６細胞／ｍＬ、約０．１×１０６細胞／ｍＬ〜約０．８×１０６細胞／ｍＬ、約０．１×１０６細胞／ｍＬ〜約０．５×１０６細胞／ｍＬ、約０．１×１０６細胞／ｍＬ〜約０．３×１０６細胞／ｍＬ、約０．２×１０６細胞／ｍＬ〜約１０×１０６細胞／ｍＬ、約０．２×１０６細胞／ｍＬ〜約９×１０６細胞／ｍＬ、約０．２×１０６細胞／ｍＬ〜約８×１０６細胞／ｍＬ、約０．２×１０６細胞／ｍＬ〜約７×１０６細胞／ｍＬ、約０．２×１０６細胞／ｍＬ〜約６×１０６細胞／ｍＬ、約０．２×１０６細胞／ｍＬ〜約５×１０６細胞／ｍＬ、約０．２×１０６細胞／ｍＬ〜約４×１０６細胞／ｍＬ、約０．２×１０６細胞／ｍＬ〜約３×１０６細胞／ｍＬ、約０．２×１０６細胞／ｍＬ〜約２×１０６細胞／ｍＬ、約０．２×１０６細胞／ｍＬ〜約１．５×１０６細胞／ｍＬ、約０．２×１０６細胞／ｍＬ〜約１．０×１０６細胞／ｍＬ、約０．２×１０６細胞／ｍＬ〜約０．８×１０６細胞／ｍＬ、約０．２×１０６細胞／ｍＬ〜約０．５×１０６細胞／ｍＬ、約０．３×１０６細胞／ｍＬ〜約１０×１０６細胞／ｍＬ、約０．３×１０６細胞／ｍＬ〜約９×１０６細胞／ｍＬ、約０．３×１０６細胞／ｍＬ〜約８×１０６細胞／ｍＬ、約０．３×１０６細胞／ｍＬ〜約７×１０６細胞／ｍＬ、約０．３×１０６細胞／ｍＬ〜約６×１０６細胞／ｍＬ、約０．３×１０６細胞／ｍＬ〜約５×１０６細胞／ｍＬ、約０．３×１０６細胞／ｍＬ〜約４×１０６細胞／ｍＬ、約０．３×１０６細胞／ｍＬ〜約３×１０６細胞／ｍＬ、約０．３×１０６細胞／ｍＬ〜約２×１０６細胞／ｍＬ、約０．３×１０６細胞／ｍＬ〜約１．５×１０６細胞／ｍＬ、約０．３×１０６細胞／ｍＬ〜約１．０×１０６細胞／ｍＬ、約０．３×１０６細胞／ｍＬ〜約０．８×１０６細胞／ｍＬ、約０．３×１０６細胞／ｍＬ〜約０．５×１０６細胞／ｍＬ、約０．５×１０６細胞／ｍＬ〜約１０×１０６細胞／ｍＬ、約０．５×１０６細胞／ｍＬ〜約９×１０６細胞／ｍＬ、約０．５×１０６細胞／ｍＬ〜約８×１０６細胞／ｍＬ、約０．５×１０６細胞／ｍＬ〜約７×１０６細胞／ｍＬ、約０．５×１０６細胞／ｍＬ〜約６×１０６細胞／ｍＬ、約０．５×１０６細胞／ｍＬ〜約５×１０６細胞／ｍＬ、約０．５×１０６細胞／ｍＬ〜約４×１０６細胞／ｍＬ、約０．５×１０６細胞／ｍＬ〜約３×１０６細胞／ｍＬ、約０．５×１０６細胞／ｍＬ〜約２×１０６細胞／ｍＬ、約０．５×１０６細胞／ｍＬ〜約１．５×１０６細胞／ｍＬ、約０．５×１０６細胞／ｍＬ〜約１．０×１０６細胞／ｍＬ、約０．５×１０６細胞／ｍＬ〜約０．８×１０６細胞／ｍＬ、約０．８×１０６細胞／ｍＬ〜約１０×１０６細胞／ｍＬ、約０．８×１０６細胞／ｍＬ〜約９×１０６細胞／ｍＬ、約０．８×１０６細胞／ｍＬ〜約８×１０６細胞／ｍＬ、約０．８×１０６細胞／ｍＬ〜約７×１０６細胞／ｍＬ、約０．８×１０６細胞／ｍＬ〜約６×１０６細胞／ｍＬ、約０．８×１０６細胞／ｍＬ〜約５×１０６細胞／ｍＬ、約０．８×１０６細胞／ｍＬ〜約４×１０６細胞／ｍＬ、約０．８×１０６細胞／ｍＬ〜約３×１０６細胞／ｍＬ、約０．８×１０６細胞／ｍＬ〜約２×１０６細胞／ｍＬ、約０．８×１０６細胞／ｍＬ〜約１．５×１０６細胞／ｍＬ、約０．８×１０６細胞／ｍＬ〜約１．０×１０６細胞／ｍＬ、約１．０×１０６細胞／ｍＬ〜約１０×１０６細胞／ｍＬ、約１．０×１０６細胞／ｍＬ〜約９×１０６細胞／ｍＬ、約１．０×１０６細胞／ｍＬ〜約８×１０６細胞／ｍＬ、約１．０×１０６細胞／ｍＬ〜約７×１０６細胞／ｍＬ、約１．０×１０６細胞／ｍＬ〜約６×１０６細胞／ｍＬ、約１．０×１０６細胞／ｍＬ〜約５×１０６細胞／ｍＬ、約１．０×１０６細胞／ｍＬ〜約４×１０６細胞／ｍＬ、約１．０×１０６細胞／ｍＬ〜約３×１０６細胞／ｍＬ、約１．０×１０６細胞／ｍＬ〜約２×１０６細胞／ｍＬ、約１．０×１０６細胞／ｍＬ〜約１．５×１０６細胞／ｍＬ、約１．５×１０６細胞／ｍＬ〜約１０×１０６細胞／ｍＬ、約１．５×１０６細胞／ｍＬ〜約９×１０６細胞／ｍＬ、約１．５×１０６細胞／ｍＬ〜約８×１０６細胞／ｍＬ、約１．５×１０６細胞／ｍＬ〜約７×１０６細胞／ｍＬ、約１．５×１０６細胞／ｍＬ〜約６×１０６細胞／ｍＬ、約１．５×１０６細胞／ｍＬ〜約５×１０６細胞／ｍＬ、約１．５×１０６細胞／ｍＬ〜約４×１０６細胞／ｍＬ、約１．５×１０６細胞／ｍＬ〜約３×１０６細胞／ｍＬ、約１．５×１０６細胞／ｍＬ〜約２×１０６細胞／ｍＬ、約２×１０６細胞／ｍＬ〜約１０×１０６細胞／ｍＬ、約２×１０６細胞／ｍＬ〜約９×１０６細胞／ｍＬ、約２×１０６細胞／ｍＬ〜約８×１０６細胞／ｍＬ、約２×１０６細胞／ｍＬ〜約７×１０６細胞／ｍＬ、約２×１０６細胞／ｍＬ〜約６×１０６細胞／ｍＬ、約２×１０６細胞／ｍＬ〜約５×１０６細胞／ｍＬ、約２×１０６細胞／ｍＬ〜約４×１０６細胞／ｍＬ、約２×１０６細胞／ｍＬ〜約３×１０６細胞／ｍＬ、約３×１０６細胞／ｍＬ〜約１０×１０６細胞／ｍＬ、約３×１０６細胞／ｍＬ〜約９×１０６細胞／ｍＬ、約３×１０６細胞／ｍＬ〜約８×１０６細胞／ｍＬ、約３×１０６細胞／ｍＬ〜約７×１０６細胞／ｍＬ、約３×１０６細胞／ｍＬ〜約６×１０６細胞／ｍＬ、約３×１０６細胞／ｍＬ〜約５×１０６細胞／ｍＬ、約３×１０６細胞／ｍＬ〜約４×１０６細胞／ｍＬ、約４×１０６細胞／ｍＬ〜約１０×１０６細胞／ｍＬ、約４×１０６細胞／ｍＬ〜約９×１０６細胞／ｍＬ、約４×１０６細胞／ｍＬ〜約８×１０６細胞／ｍＬ、約４×１０６細胞／ｍＬ〜約７×１０６細胞／ｍＬ、約４×１０６細胞／ｍＬ〜約６×１０６細胞／ｍＬ、約４×１０６細胞／ｍＬ〜約５×１０６細胞／ｍＬ、約５×１０６細胞／ｍＬ〜約１０×１０６細胞／ｍＬ、約５×１０６細胞／ｍＬ〜約９×１０６細胞／ｍＬ、約５×１０６細胞／ｍＬ〜約８×１０６細胞／ｍＬ、約５×１０６細胞／ｍＬ〜約７×１０６細胞／ｍＬ、約５×１０６細胞／ｍＬ〜約６×１０６細胞／ｍＬ、約６×１０６細胞／ｍＬ〜約１０×１０６細胞／ｍＬ、約６×１０６細胞／ｍＬ〜約９×１０６細胞／ｍＬ、約６×１０６細胞／ｍＬ〜約８×１０６細胞／ｍＬ、約６×１０６細胞／ｍＬ〜約７×１０６細胞／ｍＬ、約７×１０６細胞／ｍＬ〜約１０×１０６細胞／ｍＬ、約７×１０６細胞／ｍＬ〜約９×１０６細胞／ｍＬ、約７×１０６細胞／ｍＬ〜約８×１０６細胞／ｍＬ、約８×１０６細胞／ｍＬ〜約１０×１０６細胞／ｍＬ、約８×１０６細胞／ｍＬ〜約９×１０６細胞／ｍＬ、または約９×１０６細胞／ｍＬ〜約１０×１０６細胞／ｍＬ）である。
【０１４１】
細胞（例えば、哺乳動物細胞）は、組換え治療タンパク質（例えば、細胞によって分泌される組換え治療タンパク質）をコードする組換え核酸（例えば、細胞のゲノム中に安定に組み込まれた核酸）を含み得る。組換え治療タンパク質の非限定的な例は、本明細書に記載され、当該分野で公知である。
【０１４２】
組換え治療タンパク質
組換え治療タンパク質は、細胞（例えば、哺乳動物細胞）によって細胞培養物の液体培養培地中に放出される分泌されるタンパク質であり得る。例えば、可溶性組換えタンパク質をコードする核酸配列は、組換えタンパク質のＮ末端またはＣ末端に分泌シグナルペプチドをコードする配列を含むことができ、この組換えタンパク質は、細胞（例えば、哺乳動物細胞）中に存在する酵素によって切断され、細胞培養物の液体培養培地中に引き続いて放出される。他の例では、組換えタンパク質は、分泌されない可溶性タンパク質であり、組換えタンパク質は、細胞（例えば、哺乳動物細胞）内から回収される。
【０１４３】
組換えタンパク質の非限定的な例には、免疫グロブリン（軽鎖および重鎖免疫グロブリンを含む）、抗体もしくは抗体断片（例えば、本明細書に記載される抗体断片のいずれか）、酵素（例えば、ガラクトシダーゼ（例えば、アルファ−ガラクトシダーゼ）、ＭｙｏｚｙｍｅまたはＣｅｒｅｚｙｍｅ）、タンパク質（例えば、ヒトエリスロポエチン、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）またはインターフェロンアルファもしくはベータ）、または免疫原性もしくは抗原性タンパク質もしくはタンパク質断片（例えば、ワクチンにおける使用のためのタンパク質）が含まれる。一部の実施形態では、組換えタンパク質は、少なくとも１つの多機能性組換えタンパク質足場を含む操作された抗原結合ポリペプチドである（例えば、Ｇｅｂａｕｅｒら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１３：２４５〜２５５、２００９；および米国特許出願公開第２０１２／０１６４０６６号（その全体が参照によって本明細書に組み入れられる）に記載される組換え抗原結合タンパク質を参照のこと）。抗体である組換えタンパク質の非限定的な例には、以下が含まれる：パニツムマブ、オマリズマブ、アバゴボマブ（ａｂａｇｏｖｏｍａｂ）、アブシキシマブ、アクトクスマブ（ａｃｔｏｘｕｍａｂ）、アダリムマブ、アデカツムマブ（ａｄｅｃａｔｕｍｕｍａｂ）、アフェリモマブ、アフツズマブ、アラシズマブ（ａｌａｃｉｚｕｍａｂ）、アレムツズマブ、アリロクマブ、アルツモマブ（ａｌｔｕｍｏｍａｂ）、アマツキシマブ、アナツモマブ（ａｎａｔｕｍｏｍａｂ）、アポリズマブ、アチムマブ（ａｔｉｎｕｍａｂ）、トシリズマブ、バシリキシマブ、ベクツモマブ（ｂｅｃｔｕｍｏｍａｂ）、ベリムマブ、ベバシズマブ、ビシロマブ（ｂｉｃｉｒｏｍａｂ）、カナキヌマブ、セツキシマブ、ダクリズマブ、デノスマブ、エクリズマブ、エドレコロマブ、エファリズマブ、エフングマブ（ｅｆｕｎｇｕｍａｂ）、エルツマキソマブ（ｅｒｔｕｍａｘｏｍａｂ）、エタラシズマブ（ｅｔａｒａｃｉｚｕｍａｂ）、ゴリムマブ、インフリキシマブ、ナタリズマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、ペルツズマブ、ラニビズマブ、リツキシマブ、トシリズマブおよびトラスツズマブ。治療抗体のさらなる例は、当該分野で公知である。組換えタンパク質のさらなる非限定的な例には、以下が含まれる：アルグルコシダーゼアルファ、ラロニダーゼ、アバタセプト、ガルスルファーゼ、ルトロピンアルファ、抗血友病因子、アガルシダーゼベータ、インターフェロンベータ−１ａ、ダルベポエチンアルファ、テネクテプラーゼ、エタネルセプト、凝固第ＩＸ因子、卵胞刺激ホルモン、インターフェロンベータ−１ａ、イミグルセラーゼ、ドルナーゼアルファ、エポエチンアルファおよびアルテプラーゼ。
【０１４４】
分泌された可溶性組換えタンパク質は、液体培養培地から回収することができる。例えば、遠心分離、濾過、ピペッティングおよび／または吸引を含む、細胞（例えば、哺乳動物細胞）から液体培養培地を除去するための種々の異なる方法が、当該分野で公知である。次いで、分泌された組換えタンパク質は、種々の型のクロマトグラフィー（例えば、アフィニティクロマトグラフィー、分子ふるいクロマトグラフィー、カチオン交換クロマトグラフィーまたはアニオン交換クロマトグラフィー）および／または濾過（例えば、分子量カットオフ濾過）を含む種々の生化学的技術を使用して、液体培養培地から回収し、さらに精製することができる。
【０１４５】
細胞内組換えタンパク質を回収するために、細胞（例えば、哺乳動物細胞）は溶解される。例えば、超音波処理ならびに／または界面活性剤、酵素的および／もしくは化学的溶解を含む、細胞（例えば、哺乳動物細胞）を溶解させるための広範な種々の方法が、当該分野で公知である。組換えタンパク質は、細胞デブリを除去するための遠心分離の工程で典型的には開始し、１つまたはそれ以上のさらなる工程（例えば、１つまたはそれ以上の型のクロマトグラフィー（例えば、アフィニティクロマトグラフィー、分子ふるいクロマトグラフィー、カチオン交換クロマトグラフィーまたはアニオン交換クロマトグラフィー）および／または濾過（例えば、分子量カットオフ濾過））が後に続く、当該分野で公知の種々の生化学的方法を使用して、細胞溶解物（例えば、哺乳動物細胞溶解物）から精製することができる。
【０１４６】
一部の実施形態では、回収された組換えタンパク質は、少なくとも５０重量％純粋もしくは約５０重量％純粋、例えば、少なくとも５５重量％純粋もしくは約５５重量％純粋、少なくとも６０重量％純粋、少なくとも６５重量％純粋、少なくとも７０重量％純粋、少なくとも７５重量％純粋、少なくとも８０重量％純粋、少なくとも８５重量％純粋、少なくとも９０重量％純粋、少なくとも９５重量％純粋、少なくとも９６重量％純粋、少なくとも９７重量％純粋、少なくとも９８重量％純粋、もしくは少なくとも９９重量％純粋もしくは約９９重量％純粋、または９９重量％よりも高く純粋である。
【０１４７】
一部の実施形態では、回収された組換えタンパク質は、ヒト中の同じネイティブタンパク質と比較して、１つまたはそれ以上の異なる生物物理学的特性（例えば、グリコシル化の型もしくは量における差異、リン酸化における差異、アシル化における差異、メタル化もしくは金属化学量論における差異および／または補因子結合における差異）を有する組換えヒト治療タンパク質である。
【０１４８】
本明細書に記載される方法のいずれかによって産生される組換え治療タンパク質もまた、本明細書で提供される。
【０１４９】
液体培養培地
液体培養培地は、当該分野で公知である。液体培養培地には、哺乳動物血清（例えば、胎仔ウシ血清およびウシ血清）および／または成長ホルモンもしくは増殖因子（例えば、インスリン、トランスフェリンおよび上皮増殖因子）を補充することができる。あるいはまたはさらに、液体培養培地は、化学的に規定された液体培養培地、動物由来成分なしの液体培養培地、無血清液体培養培地または血清含有液体培養培地であり得る。化学的に規定された液体培養培地、動物由来成分なしの液体培養培地、無血清液体培養培地および血清含有液体培養培地の非限定的な例は、市販されている。
【０１５０】
液体培養培地は、典型的には、エネルギー源（例えば、炭水化物、例えば、グルコース）、必須アミノ酸（例えば、２０種のアミノ酸プラスシステインの基本セット）、ビタミンおよび／もしくは低濃度で必要とされる他の有機化合物、遊離脂肪酸ならびに／または微量元素を含む。液体培養培地には、必要に応じて、例えば、哺乳動物ホルモンもしくは増殖因子（例えば、インスリン、トランスフェリンまたは上皮増殖因子）、塩および緩衝剤（例えば、カルシウム、マグネシウムおよびリン酸塩）、ヌクレオシドおよび塩基（例えば、アデノシン、チミジンおよびヒポキサンチン）、タンパク質および組織加水分解物、ならびに／またはこれらもしくは他の添加剤の任意の組み合わせを補充することができる。
【０１５１】
本明細書に記載される方法において特に有用な液体培養培地の非限定的な例には、例えば、ＣＤ  ＣＨＯ、Ｏｐｔｉ  ＣＨＯおよびＦｏｒｔｉ  ＣＨＯ（全て、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹから入手可能）、Ｈｙｃｅｌｌ  ＣＨＯ培地（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．；Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）、Ｅｘ−ｃｅｌｌ  ＣＤ  ＣＨＯ  Ｆｕｓｉｏｎ培地（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ．；Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）およびＰｏｗｅｒＣＨＯ培地（Ｌｏｎｚａ  Ｇｒｏｕｐ、Ｌｔｄ．；Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）が含まれる。本発明の方法においても有用であり得る培地成分には、化学的に規定された（ＣＤ）加水分解物、例えば、ＣＤペプトン、ＣＤポリペプチド（２つまたはそれ以上のアミノ酸）およびＣＤ増殖因子が含まれるがこれらに限定されない。液体組織培養培地および培地成分のさらなる例は、当該分野で公知である。
【０１５２】
灌流培養
細胞の培養は、灌流培養を使用して実施することができる。容器における細胞（例えば、哺乳動物細胞）の灌流培養は、第１の容量の第１の液体培養培地（例えば、任意の濃度の哺乳動物細胞を含む、例えば、細胞を実質的に含まない第１の容量の第１の液体培養培地）の容器からの除去、および第１の液体培養培地への第２の容量の第２の液体培養培地の添加を含む。除去および添加は、同時にもしくは順次、またはそれら２つの組み合わせで実施することができる。さらに、除去および添加は、（例えば、任意の所与の期間にわたり（例えば、２４時間の期間にわたり、約１時間〜約２４時間の増分期間にわたり、または２４時間よりも長い増分期間にわたり）、容器の容量または第１の液体培養培地容量の０．１％〜８００％の間（例えば、１％と７００％との間、１％と６００％との間、１％と５００％との間、１％と４００％との間、１％と３５０％との間、１％と３００％との間、１％と２５０％との間、１％と１００％との間、１００％と２００％との間、５％と１５０％との間、１０％と５０％との間、１５％と４０％との間、８％と８０％との間および４％と３０％との間）の容量を除去および置換する速度で）継続的に、もしくは周期的に（例えば、３日に１回、１日おきに一回、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回または１日５回）、またはそれらの任意の組み合わせで実施することができる。周期的に実施される場合、（例えば、約２４時間の期間以内、約１時間〜約２４時間の増分期間以内、または２４時間よりも長い増分期間以内に）除去または置換される容量は、例えば、容器の容量または第１の液体培養培地容量の０．１％〜８００％の間（例えば、１％と７００％との間、１％と６００％との間、１％と５００％との間、１％と４００％との間、１％と３００％との間、１％と２００％との間、１％と１００％との間、１００％と２００％との間、５％と１５０％との間、１０％と５０％との間、１５％と４０％との間、８％と８０％との間および４％と３０％との間）であり得る。除去される第１の液体培養培地の第１の容量および添加される第２の液体培養培地の第２の容量は、一部の場合には、培養期間の全体または一部にわたって、各２４時間の期間（またはあるいは、約１時間〜約２４時間の増分期間もしくは２４時間よりも長い増分期間）にわたっておよそ同じに維持することができる。当該分野で公知のように、第１の容量の第１の液体培養培地が除去される速度（容量／時間の単位）および第２の容量の第２の液体培養培地が添加される速度（容量／時間の単位）は、変動させることができる。第１の容量の第１の液体培養培地が除去される速度（容量／時間の単位）および第２の容量の第２の液体培養培地が添加される速度（容量／時間の単位）は、おおよそ同じであり得る、または異なり得る。
【０１５３】
あるいは、除去および添加される容量は、培養期間の間に、各２４時間の期間（またはあるいは、１時間と約２４時間との間の増分期間もしくは２４時間よりも長い増分期間）にわたって変化（例えば、徐々に増加）し得る。例えば、培養期間にわたる各２４時間の期間（またはあるいは、約１時間と２４時間超との間の増分期間もしくは２４時間よりも長い増分期間）以内に除去される第１の液体培養培地の容量および添加される第２の液体培養培地の容量は、容器容量または第１の液体培養培地容量の０．５％〜約２０％から容器容量または第１の液体培養培地容量の約２５％〜約１５０％までの間の容量から、培養期間にわたって増加（例えば、徐々にまたはずれた増分を介して）させることができる。
【０１５４】
当業者は、第１の液体培養培地と第２の液体培養培地とが、同じ型の培地であり得ることを理解する。他の例では、第１の液体培養培地と第２の液体培養培地とは、異なり得る。
【０１５５】
第１の容量の第１の液体培養培地は、例えば、容器から第１の容量の第１の液体培養培地を（例えば、バイオリアクターから、細胞を実質的に含まない第１の容量の第１の液体培養培地を）除去できる機械システムによって除去することができる。あるいはまたはさらに、第１の容量の第１の液体培養培地は、細胞（例えば、哺乳動物細胞）を排除する分子量カットオフを有する滅菌したメンブレンを介した第１の容量の第１の液体培養培地の浸出または重力流によって除去することができる。
【０１５６】
第２の容量の第２の液体培養培地は、例えば、灌流ポンプによって、自動様式で第１の液体培養培地に添加することができる。
【０１５７】
一部の例では、第１の容量の第１の液体培養培地（例えば、哺乳動物細胞を実質的に含まない第１の容量の第１の液体培養培地）を除去し、第１の液体培養培地に第２の容量の第２の液体培養培地を添加することは、容器への細胞（例えば、哺乳動物細胞）の播種の少なくとも１時間以内（例えば、２時間以内、３時間以内、４時間以内、５時間以内、６時間以内、７時間以内、８時間以内、９時間以内、１０時間以内、１２時間以内、１４時間以内、１６時間以内、１８時間以内、２４時間以内、３６時間以内、４８時間以内、７２時間以内、９６時間以内、または９６時間後）には行われない。
【０１５８】
流加培養
細胞（例えば、哺乳動物細胞）の培養は、流加培養を使用して実施することができる。細胞（例えば、哺乳動物細胞）の流加培養は、培養期間の大部分にわたる、第１の液体培養培地への第２の容量の第２の液体培養培地の添加（例えば、周期的または継続的な添加）を含む。第２の液体培養培地の添加は、（例えば、任意の所与の期間にわたり（例えば、２４時間の期間にわたり、約１時間〜約２４時間の増分期間にわたり、または２４時間よりも長い増分期間にわたり）、容器の容量または第１の液体培養培地容量の０．１％〜３００％の間（例えば、１％と２５０％との間、１％と１００％との間、１００％と２００％との間、５％と１５０％との間、１０％と５０％との間、１５％と４０％との間、８％と８０％との間および４％と３０％との間）の容量を添加する速度で）継続的に、もしくは周期的に（例えば、３日に１回、１日おきに一回、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回または１日５回）、またはそれらの任意の組み合わせで実施することができる。周期的に実施される場合、（例えば、約２４時間の期間以内、約１時間〜約２４時間の増分期間以内、または２４時間よりも長い増分期間以内に）添加される容量は、例えば、容器の容量または第１の液体培養培地容量の０．１％〜３００％の間（例えば、１％と２００％との間、１％と１００％との間、１００％と２００％との間、５％と１５０％との間、１０％と５０％との間、１５％と４０％との間、８％と８０％との間および４％と３０％との間）であり得る。添加される第２の液体培養培地の第２の容量は、一部の場合には、培養期間の全体または一部にわたって、各２４時間の期間（またはあるいは、約１時間〜約２４時間の増分期間もしくは２４時間よりも長い増分期間）にわたっておよそ同じに維持することができる。当該分野で公知のように、第２の容量の第２の液体培養培地が添加される速度（容量／時間の単位）は、培養期間の全体または一部にわたって変動させることができる。例えば、添加される第２の液体培養培地の容量は、培養期間の間に、各２４時間の期間（またはあるいは、１時間と約２４時間との間の増分期間もしくは２４時間よりも長い増分期間）にわたって変化（例えば、徐々に増加）し得る。例えば、培養期間にわたる各２４時間の期間（またはあるいは、約１時間と２４時間超との間の増分期間もしくは２４時間よりも長い増分期間）以内に添加される第２の液体培養培地の容量は、容器容量または第１の液体培養培地容量の０．５％〜約２０％から容器容量または第１の液体培養培地容量の約２５％〜約１５０％までの間の容量から、培養期間にわたって増加（例えば、徐々にまたはずれた増分を介して）させることができる。第２の容量の第２の液体培養培地が添加される速度（容量／時間の単位）は、培養期間の全体または一部にわたって、およそ同じであり得る。
【０１５９】
当業者は、第１の液体培養培地と第２の液体培養培地とが、同じ型の培地であり得ることを理解する。他の例では、第１の液体培養培地と第２の液体培養培地とは、異なり得る。第２の液体培養培地の容量は、例えば、灌流ポンプによって、自動様式で第１の液体培養培地に添加することができる。
【０１６０】
一部の例では、第１の液体培養培地に第２の容量の第２の液体培養培地を添加することは、容器への細胞（例えば、哺乳動物細胞）の播種の少なくとも１時間以内（例えば、２時間以内、３時間以内、４時間以内、５時間以内、６時間以内、７時間以内、８時間以内、９時間以内、１０時間以内、１２時間以内、１４時間以内、１６時間以内、１８時間以内、２４時間以内、３６時間以内、４８時間以内、７２時間以内、９６時間以内、または９６時間後）には行われない。流加培養における細胞培養培地は、典型的には、培養期間の終了時に収集され、本明細書に記載されるプロセスのいずれかにおいて使用されるが、流加培養における細胞培養培地は、培養期間の間の１つまたはそれ以上の時点においても収集することができ、本明細書に記載されるプロセスのいずれかにおいて使用することができる。
【０１６１】
当業者は、種々の培養パラメーター（例えば、容器、容量、培養容量置換の速度または頻度、撹拌周波数、温度、培地およびＣＯ２濃度）のいずれかが、これらの方法を実施するために任意の組み合わせで使用されることを理解する。
【０１６２】
温度
培養は、３２℃〜約３９℃の温度、例えば、約３２℃〜約３７℃の温度で実施することができる。当業者は、温度を、培養方法における（例えば、第１の期間、第２の期間および第３の期間のうち１つまたはそれ以上の間の）特定の時点（複数可）において、例えば、１時間毎にまたは毎日、変化させることができることを理解する。例えば、温度は、振盪フラスコへの哺乳動物細胞の最初の播種の約１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、もしくは約２０日もしくはそれ以上後に、または本明細書に記載される第１、第２および／もしくは第３の期間内の任意の時点において、変化またはシフト（例えば、増加または減少）させることができる。例えば、温度は、上にシフトさせることができる（例えば、最大で０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５もしくは１０．０℃または約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５もしくは１０．０℃の変化）。例えば、温度は、下にシフトさせることができる（例えば、最大で０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５もしくは１０℃または約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５もしくは１０℃の変化）。
【０１６３】
ＣＯ２
培養は、多くてもまたは約１％〜１５％のＣＯ２（例えば、多くてももしくは約１４％のＣＯ２、１２％のＣＯ２、１０％のＣＯ２、８％のＣＯ２、６％のＣＯ２、５％のＣＯ２、４％のＣＯ２、３％のＣＯ２、２％のＣＯ２、または多くてももしくは約１％のＣＯ２）を含む大気中で細胞培養物を培養することを含み得る。培養は、加湿大気（例えば、少なくとももしくは約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、もしくは少なくとももしくは約９５％の湿度、または約１００％の湿度）中で細胞培養物をインキュベートすることを含み得る。
【０１６４】
細胞生存度測定
細胞培養物（例えば、哺乳動物細胞培養物）の細胞生存度を決定するために使用することができる種々の方法およびアッセイは、当該分野で公知である。例えば、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）が、細胞培養物の液体培養培地中で検出される。細胞培養物の液体培養培地中のＬＤＨの検出のための市販のキットは、当該分野で公知である。
【０１６５】
生存細胞によって排除されるが非生存細胞によって選択的に取り込まれる種々の異なる色素が、細胞生存度を決定するために使用される。これらの色素の非限定的な例には、ヨウ化プロピジウム、トリパンブルーおよび７−アミノアクチノマイシンＤが含まれる。細胞の生存度は、色素とのインキュベーション後の細胞の染色を可視化または他の方法で検出することによって決定される。
【０１６６】
細胞の培養物の細胞生存度を決定するためのさらなるアッセイには、細胞におけるミトコンドリア活性またはカスパーゼ活性の検出（例えば、レサズリンおよびホルマザン）が含まれる。細胞の培養物における細胞生存度を決定するためのさらなる方法は、当該分野で公知である。
【０１６７】
産生バイオリアクターにおける細胞生存度に対する感作剤の濃度の影響を予測する方法
産生バイオリアクターにおける細胞生存度に対する感作剤（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の感作剤のいずれか）の濃度の影響を予測する方法であって、（ａ）試験培養容器（例えば、本明細書に記載される試験培養容器のいずれか）における複数の試験条件下での細胞生存度を決定する工程であって、複数の試験条件は、パラメーターのセットによって規定される、工程；および（ｂ）試験培養容器における複数の条件下での細胞生存度に基づいて、産生バイオリアクター（例えば、本明細書に記載される産生バイオリアクターのいずれか）における細胞生存度に対する感作剤の濃度の影響を予測する工程、を含む方法が、本明細書で提供される。
【０１６８】
一部の実施形態では、パラメーターのセットは、剪断応力、感作剤の濃度および保護剤（例えば、本明細書に記載される保護剤のいずれか）の濃度を含む、それらからなる、またはそれらから本質的になる。これらの方法の一部の実施形態では、複数の試験条件は、完全実施要因スクリーニングおよび／または内接中心複合計画に基づいて選択される。これらの方法のいずれかの一部の実施形態では、感作剤は、消泡剤（例えば、ポリジメチルシロキサンベースの消泡剤、シメチコン、または本明細書に記載されるもしくは当該分野で公知の任意の他の消泡剤）である。
【０１６９】
一部の実施形態では、試験培養容器（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の例示的な試験培養容器のいずれか）は、約５ｍＬ〜約５Ｌ（または本明細書に記載されるこの範囲の下位範囲のいずれか）の容量を有する。一部の実施形態では、試験培養容器は、振盪フラスコ、例えば、バッフル付き振盪フラスコである。
【０１７０】
一部の実施形態では、産生バイオリアクター（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の例示的な産生バイオリアクターのいずれか）は、約５Ｌ〜約２０，０００Ｌ（または本明細書に記載されるこの範囲の下位範囲のいずれか）の容量を有する。一部の例では、産生バイオリアクターは、灌流バイオリアクターである。他の例では、産生バイオリアクターは、流加バイオリアクターである。
【０１７１】
本明細書に記載される特異的細胞死亡率は、以下の式によって定義される：
特異的細胞死亡率＝（特異的ＬＤＨ産生）／（細胞１つ当たりのＬＤＨ含量）。
【０１７２】
これらの方法の一部の実施形態は、産生バイオリアクターにおける細胞（例えば、本明細書に記載される細胞のいずれか）の培養の間に、４０％／日未満、３９％／日未満、３８％／日未満、３７％／日未満、３６％／日未満、３５％／日未満、３４％／日未満、３３％／日未満、３２％／日未満、３１％／日未満、３０％／日未満、２９％／日未満、２８％／日未満、２７％／日未満、２６％／日未満、２５％／日未満、２４％／日未満、２３％／日未満、２２％／日未満、２１％／日未満、２０％／日未満、１９％／日未満、１８％／日未満、１７％／日未満、１６％／日未満、１５％／日未満、１４％／日未満、１３％／日未満、１２％／日未満、１１％／日未満、１０％／日未満、９％／日未満、８％／日未満、７％／日未満、６％／日未満、５％／日未満、４％／日未満、３％／日未満、２％／日未満または１％／日未満の特異的細胞死亡率を有すると予測される感作剤の濃度を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞（例えば、本明細書に記載される細胞のいずれか）を培養する工程をさらに含む。本明細書に記載される方法のいずれかの一部の実施形態は、産生バイオリアクターにおける細胞（例えば、本明細書に記載される細胞のいずれか）の培養の間に、約０．１％〜約４０％／日、約０．１％〜約３８％／日、約０．１％〜約３６％／日、約０．１％〜約３４％／日、約０．１％〜約３２％／日、約０．１％〜約３０％／日、約０．１％〜約２８％／日、約０．１％〜約２６％／日、約０．１％〜約２４％／日、約０．１％〜約２２％／日、約０．１％〜約２０％／日、約０．１％〜約１８％／日、約０．１％〜約１６％／日、約０．１％〜約１４％／日、約０．１％〜約１２％／日、約０．１％〜約１０％／日、約０．１％〜約８％／日、約０．１％〜約６％／日、約０．１％〜約５％／日、約０．１％〜約４．５％／日、約０．１％〜約４．０％／日、約０．１％〜約３．５％／日、約０．１％〜約３．０％／日、約０．１％〜約２．５％／日、約０．１％〜約２．０％／日、約０．１％〜約１．５％／日、約０．１％〜約１．０％／日、約０．１％〜約０．５％／日、約０．５％〜約４０％／日、約０．５％〜約３８％／日、約０．５％〜約３６％／日、約０．５％〜約３４％／日、約０．５％〜約３２％／日、約０．５％〜約３０％／日、約０．５％〜約２８％／日、約０．５％〜約２６％／日、約０．５％〜約２４％／日、約０．５％〜約２２％／日、約０．５％〜約２０％／日、約０．５％〜約１８％／日、約０．５％〜約１６％／日、約０．５％〜約１４％／日、約０．５％〜約１２％／日、約０．５％〜約１０％／日、約０．５％〜約８％／日、約０．５％〜約６％／日、約０．５％〜約５％／日、約０．５％〜約４．５％／日、約０．５％〜約４．０％／日、約０．５％〜約３．５％／日、約０．５％〜約３．０％／日、約０．５％〜約２．５％／日、約０．５％〜約２．０％／日、約０．５％〜約１．５％／日、約０．５％〜約１．０％／日、約１．０％〜約４０％／日、約１．０％〜約３８％／日、約１．０％〜約３６％／日、約１．０％〜約３４％／日、約１．０％〜約３２％／日、約１．０％〜約３０％／日、約１．０％〜約２８％／日、約１．０％〜約２６％／日、約１．０％〜約２４％／日、約１．０％〜約２２％／日、約１．０％〜約２０％／日、約１．０％〜約１８％／日、約１．０％〜約１６％／日、約１．０％〜約１４％／日、約１．０％〜約１２％／日、約１．０％〜約１０％／日、約１．０％〜約８％／日、約１．０％〜約６％／日、約１．０％〜約５％／日、約１．０％〜約４．５％／日、約１．０％〜約４．０％／日、約１．０％〜約３．５％／日、約１．０％〜約３．０％／日、約１．０％〜約２．５％／日、約１．０％〜約２．０％／日、約１．０％〜約１．５％／日、約１．５％〜約４０％／日、約１．５％〜約３８％／日、約１．５％〜約３６％／日、約１．５％〜約３４％／日、約１．５％〜約３２％／日、約１．５％〜約３０％／日、約１．５％〜約２８％／日、約１．５％〜約２６％／日、約１．５％〜約２４％／日、約１．５％〜約２２％／日、約１．５％〜約２０％／日、約１．５％〜約１８％／日、約１．５％〜約１６％／日、約１．５％〜約１４％／日、約１．５％〜約１２％／日、約１．５％〜約１０％／日、約１．５％〜約８％／日、約１．５％〜約６％／日、約１．５％〜約５％／日、約１．５％〜約４．５％／日、約１．５％〜約４．０％／日、約１．５％〜約３．５％／日、約１．５％〜約３．０％／日、約１．５％〜約２．５％／日、約１．５％〜約２．０％／日、約２．０％〜約４０％／日、約２．０％〜約３８％／日、約２．０％〜約３６％／日、約２．０％〜約３４％／日、約２．０％〜約３２％／日、約２．０％〜約３０％／日、約２．０％〜約２８％／日、約２．０％〜約２６％／日、約２．０％〜約２４％／日、約２．０％〜約２２％／日、約２．０％〜約２０％／日、約２．０％〜約１８％／日、約２．０％〜約１６％／日、約２．０％〜約１４％／日、約２．０％〜約１２％／日、約２．０％〜約１０％／日、約２．０％〜約８％／日、約２．０％〜約６％／日、約２．０％〜約５％／日、約２．０％〜約４．５％／日、約２．０％〜約４．０％／日、約２．０％〜約３．５％／日、約２．０％〜約３．０％／日、約２．０％〜約２．５％／日、約２．５％〜約４０％／日、約２．５％〜約３８％／日、約２．５％〜約３６％／日、約２．５％〜約３４％／日、約２．５％〜約３２％／日、約２．５％〜約３０％／日、約２．５％〜約２８％／日、約２．５％〜約２６％／日、約２．５％〜約２４％／日、約２．５％〜約２２％／日、約２．５％〜約２０％／日、約２．５％〜約１８％／日、約２．５％〜約１６％／日、約２．５％〜約１４％／日、約２．５％〜約１２％／日、約２．５％〜約１０％／日、約２．５％〜約８％／日、約２．５％〜約６％／日、約２．５％〜約５％／日、約２．５％〜約４．５％／日、約２．５％〜約４．０％／日、約２．５％〜約３．５％／日、約２．５％〜約３．０％／日、約３．０％〜約４０％／日、約３．０％〜約３８％／日、約３．０％〜約３６％／日、約３．０％〜約３４％／日、約３．０％〜約３２％／日、約３．０％〜約３０％／日、約３．０％〜約２８％／日、約３．０％〜約２６％／日、約３．０％〜約２４％／日、約３．０％〜約２２％／日、約３．０％〜約２０％／日、約３．０％〜約１８％／日、約３．０％〜約１６％／日、約３．０％〜約１４％／日、約３．０％〜約１２％／日、約３．０％〜約１０％／日、約３．０％〜約８％／日、約３．０％〜約６％／日、約３．０％〜約５％／日、約３．０％〜約４．５％／日、約３．０％〜約４．０％／日、約３．０％〜約３．５％／日、約３．５％〜約４０％／日、約３．５％〜約３８％／日、約３．５％〜約３６％／日、約３．５％〜約３４％／日、約３．５％〜約３２％／日、約３．５％〜約３０％／日、約３．５％〜約２８％／日、約３．５％〜約２６％／日、約３．５％〜約２４％／日、約３．５％〜約２２％／日、約３．５％〜約２０％／日、約３．５％〜約１８％／日、約３．５％〜約１６％／日、約３．５％〜約１４％／日、約３．５％〜約１２％／日、約３．５％〜約１０％／日、約３．５％〜約８％／日、約３．５％〜約６％／日、約３．５％〜約５％／日、約３．５％〜約４．５％／日、約３．５％〜約４．０％／日、約４．０％〜約４０％／日、約４．０％〜約３８％／日、約４．０％〜約３６％／日、約４．０％〜約３４％／日、約４．０％〜約３２％／日、約４．０％〜約３０％／日、約４．０％〜約２８％／日、約４．０％〜約２６％／日、約４．０％〜約２４％／日、約４．０％〜約２２％／日、約４．０％〜約２０％／日、約４．０％〜約１８％／日、約４．０％〜約１６％／日、約４．０％〜約１４％／日、約４．０％〜約１２％／日、約４．０％〜約１０％／日、約４．０％〜約８％／日、約４．０％〜約６％／日、約４．０％〜約５％／日、約４．０％〜約４．５％／日、約４．５％〜約４０％／日、約４．５％〜約３８％／日、約４．５％〜約３６％／日、約４．５％〜約３４％／日、約４．５％〜約３２％／日、約４．５％〜約３０％／日、約４．５％〜約２８％／日、約４．５％〜約２６％／日、約４．５％〜約２４％／日、約４．５％〜約２２％／日、約４．５％〜約２０％／日、約４．５％〜約１８％／日、約４．５％〜約１６％／日、約４．５％〜約１４％／日、約４．５％〜約１２％／日、約４．５％〜約１０％／日、約４．５％〜約８％／日、約４．５％〜約６％／日、約４．５％〜約５％／日、約５％〜約４０％／日、約５％〜約３８％／日、約５％〜約３６％／日、約５％〜約３４％／日、約５％〜約３２％／日、約５％〜約３０％／日、約５％〜約２８％／日、約５％〜約２６％／日、約５％〜約２４％／日、約５％〜約２２％／日、約５％〜約２０％／日、約５％〜約１８％／日、約５％〜約１６％／日、約５％〜約１４％／日、約５％〜約１２％／日、約５％〜約１０％／日、約５％〜約８％／日、約５％〜約６％／日、約６％〜約４０％／日、約６％〜約３８％／日、約６％〜約３６％／日、約６％〜約３４％／日、約６％〜約３２％／日、約６％〜約３０％／日、約６％〜約２８％／日、約６％〜約２６％／日、約６％〜約２４％／日、約６％〜約２２％／日、約６％〜約２０％／日、約６％〜約１８％／日、約６％〜約１６％／日、約６％〜約１４％／日、約６％〜約１２％／日、約６％〜約１０％／日、約６％〜約８％／日、約８％〜約４０％／日、約８％〜約３８％／日、約８％〜約３６％／日、約８％〜約３４％／日、約８％〜約３２％／日、約８％〜約３０％／日、約８％〜約２８％／日、約８％〜約２６％／日、約８％〜約２４％／日、約８％〜約２２％／日、約８％〜約２０％／日、約８％〜約１８％／日、約８％〜約１６％／日、約８％〜約１４％／日、約８％〜約１２％／日、約８％〜約１０％／日、約１０％〜約４０％／日、約１０％〜約３８％／日、約１０％〜約３６％／日、約１０％〜約３４％／日、約１０％〜約３２％／日、約１０％〜約３０％／日、約１０％〜約２８％／日、約１０％〜約２６％／日、約１０％〜約２４％／日、約１０％〜約２２％／日、約１０％〜約２０％／日、約１０％〜約１８％／日、約１０％〜約１６％／日、約１０％〜約１４％／日、約１０％〜約１２％／日、約１２％〜約４０％／日、約１２％〜約３８％／日、約１２％〜約３６％／日、約１２％〜約３４％／日、約１２％〜約３２％／日、約１２％〜約３０％／日、約１２％〜約２８％／日、約１２％〜約２６％／日、約１２％〜約２４％／日、約１２％〜約２２％／日、約１２％〜約２０％／日、約１２％〜約１８％／日、約１２％〜約１６％／日、約１２％〜約１４％／日、約１４％〜約４０％／日、約１４％〜約３８％／日、約１４％〜約３６％／日、約１４％〜約３４％／日、約１４％〜約３２％／日、約１４％〜約３０％／日、約１４％〜約２８％／日、約１４％〜約２６％／日、約１４％〜約２４％／日、約１４％〜約２２％／日、約１４％〜約２０％／日、約１４％〜約１８％／日、約１４％〜約１６％／日、約１６％〜約４０％／日、約１６％〜約３８％／日、約１６％〜約３６％／日、約１６％〜約３４％／日、約１６％〜約３２％／日、約１６％〜約３０％／日、約１６％〜約２８％／日、約１６％〜約２６％／日、約１６％〜約２４％／日、約１６％〜約２２％／日、約１６％〜約２０％／日、約１６％〜約１８％／日、約１８％〜約４０％／日、約１８％〜約３８％／日、約１８％〜約３６％／日、約１８％〜約３４％／日、約１８％〜約３２％／日、約１８％〜約３０％／日、約１８％〜約２８％／日、約１８％〜約２６％／日、約１８％〜約２４％／日、約１８％〜約２２％／日、約１８％〜約２０％／日、約２０％〜約４０％／日、約２０％〜約３８％／日、約２０％〜約３６％／日、約２０％〜約３４％／日、約２０％〜約３２％／日、
約２０％〜約３０％／日、約２０％〜約２８％／日、約２０％〜約２６％／日、約２０％〜約２４％／日、約２０％〜約２２％／日、約２２％〜約４０％／日、約２２％〜約３８％／日、約２２％〜約３６％／日、約２２％〜約３４％／日、約２２％〜約３２％／日、約２２％〜約３０％／日、約２２％〜約２８％／日、約２２％〜約２６％／日、約２２％〜約２４％／日、約２４％〜約４０％／日、約２４％〜約３８％／日、約２４％〜約３６％／日、約２４％〜約３４％／日、約２４％〜約３２％／日、約２４％〜約３０％／日、約２４％〜約２８％／日、約２４％〜約２６％／日、約２６％〜約４０％／日、約２６％〜約３８％／日、約２６％〜約３６％／日、約２６％〜約３４％／日、約２６％〜約３２％／日、約２６％〜約３０％／日、約２６％〜約２８％／日、約２８％〜約４０％／日、約２８％〜約３８％／日、約２８％〜約３６％／日、約２８％〜約３４％／日、約２８％〜約３２％／日、約２８％〜約３０％／日、約３０％〜約４０％／日、約３０％〜約３８％／日、約３０％〜約３６％／日、約３０％〜約３４％／日、約３０％〜約３２％／日、約３２％〜約４０％／日、約３２％〜約３８％／日、約３２％〜約３６％／日、約３２％〜約３４％／日、約３４％〜約４０％／日、約３４％〜約３８％／日、約３４％〜約３６％／日、約３６％〜約４０％／日、約３６％〜約３８％／日、または約３８％〜約４０％／日の特異的細胞死亡率を有すると予測される感作剤の濃度を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞（例えば、本明細書に記載される細胞のいずれか）を培養する工程をさらに含む。
【０１７３】
これらの方法の一部の実施形態は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１５０ｎＵ／細胞／日未満、１４５ｎＵ／細胞／日未満、１４０ｎＵ／細胞／日未満、１３５ｎＵ／細胞／日未満、１３０ｎＵ／細胞／日未満、１２５ｎＵ／細胞／日未満、１２０ｎＵ／細胞／日未満、１１５ｎＵ／細胞／日、１５０ｎＵ／細胞／日未満、１１０ｎＵ／細胞／日未満、１０５ｎＵ／細胞／日未満、１００ｎＵ／細胞／日未満、９５ｎＵ／細胞／日未満、９０ｎＵ／細胞／日未満、８５ｎＵ／細胞／日未満、８０ｎＵ／細胞／日未満、７５ｎＵ／細胞／日未満、７０ｎＵ／細胞／日未満、６５ｎＵ／細胞／日未満、６０ｎＵ／細胞／日未満、５５ｎＵ／細胞／日未満、５０ｎＵ／細胞／日未満、４５ｎＵ／細胞／日未満、４５ｎＵ／細胞／日未満、４０ｎＵ／細胞／日未満、３５ｎＵ／細胞／日未満、３０ｎＵ／細胞／日未満、２５ｎＵ／細胞／日未満、２０ｎＵ／細胞／日未満、１５ｎＵ／細胞／日未満、１０ｎＵ／細胞／日未満、５ｎＵ／細胞／日未満または１ｎＵ／細胞／日未満の細胞特異的ＬＤＨ産生を生じると予測される感作剤の濃度を使用して、産生バイオリアクター（例えば、本明細書に記載される産生バイオリアクターのいずれか）において細胞（例えば、本明細書に記載される細胞のいずれか）を培養する工程をさらに含む。これらの方法の一部の実施形態は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、約０．１ｎＵ／細胞／日〜約１５０ｎＵ／細胞／日、約０．１ｎＵ／細胞／日〜約１４０ｎＵ／細胞／日、約０．１ｎＵ／細胞／日〜約１３０ｎＵ／細胞／日、約０．１ｎＵ／細胞／日〜約１２０ｎＵ／細胞／日、約０．１ｎＵ／細胞／日〜約１１０ｎＵ／細胞／日、約０．１ｎＵ／細胞／日〜約１００ｎＵ／細胞／日、約０．１ｎＵ／細胞／日〜約９５ｎＵ／細胞／日、約０．１ｎＵ／細胞／日〜約９０ｎＵ／細胞／日、約０．１ｎＵ／細胞／日〜約８５ｎＵ／細胞／日、約０．１ｎＵ／細胞／日〜約８０ｎＵ／細胞／日、約０．１ｎＵ／細胞／日〜約７５ｎＵ／細胞／日、約０．１ｎＵ／細胞／日〜約７０ｎＵ／細胞／日、約０．１ｎＵ／細胞／日〜約６５ｎＵ／細胞／日、約０．１ｎＵ／細胞／日〜約６０ｎＵ／細胞／日、約０．１ｎＵ／細胞／日〜約５５ｎＵ／細胞／日、約０．１ｎＵ／細胞／日〜約５０ｎＵ／細胞／日、約０．１ｎＵ／細胞／日〜約４５ｎＵ／細胞／日、約０．１ｎＵ／細胞／日〜約４０ｎＵ／細胞／日、約０．１ｎＵ／細胞／日〜約３５ｎＵ／細胞／日、約０．１ｎＵ／細胞／日〜約３０ｎＵ／細胞／日、約０．１ｎＵ／細胞／日〜約２５ｎＵ／細胞／日、約０．１ｎＵ／細胞／日〜約２０ｎＵ／細胞／日、約０．１ｎＵ／細胞／日〜約１５ｎＵ／細胞／日、約０．１ｎＵ／細胞／日〜約１０ｎＵ／細胞／日、約０．１ｎＵ／細胞／日〜約５ｎＵ／細胞／日、約０．１ｎＵ／細胞／日〜約２．５ｎＵ／細胞／日、約０．１ｎＵ／細胞／日〜約１．０ｎＵ／細胞／日、約１．０ｎＵ／細胞／日〜約１５０ｎＵ／細胞／日、約１．０ｎＵ／細胞／日〜約１４０ｎＵ／細胞／日、約１．０ｎＵ／細胞／日〜約１３０ｎＵ／細胞／日、約１．０ｎＵ／細胞／日〜約１２０ｎＵ／細胞／日、約１．０ｎＵ／細胞／日〜約１１０ｎＵ／細胞／日、約１．０ｎＵ／細胞／日〜約１００ｎＵ／細胞／日、約１．０ｎＵ／細胞／日〜約９５ｎＵ／細胞／日、約１．０ｎＵ／細胞／日〜約９０ｎＵ／細胞／日、約１．０ｎＵ／細胞／日〜約８５ｎＵ／細胞／日、約１．０ｎＵ／細胞／日〜約８０ｎＵ／細胞／日、約１．０ｎＵ／細胞／日〜約７５ｎＵ／細胞／日、約１．０ｎＵ／細胞／日〜約７０ｎＵ／細胞／日、約１．０ｎＵ／細胞／日〜約６５ｎＵ／細胞／日、約１．０ｎＵ／細胞／日〜約６０ｎＵ／細胞／日、約１．０ｎＵ／細胞／日〜約５５ｎＵ／細胞／日、約１．０ｎＵ／細胞／日〜約５０ｎＵ／細胞／日、約１．０ｎＵ／細胞／日〜約４５ｎＵ／細胞／日、約１．０ｎＵ／細胞／日〜約４０ｎＵ／細胞／日、約１．０ｎＵ／細胞／日〜約３５ｎＵ／細胞／日、約１．０ｎＵ／細胞／日〜約３０ｎＵ／細胞／日、約１．０ｎＵ／細胞／日〜約２５ｎＵ／細胞／日、約１．０ｎＵ／細胞／日〜約２０ｎＵ／細胞／日、約１．０ｎＵ／細胞／日〜約１５ｎＵ／細胞／日、約１．０ｎＵ／細胞／日〜約１０ｎＵ／細胞／日、約１．０ｎＵ／細胞／日〜約５ｎＵ／細胞／日、約１．０ｎＵ／細胞／日〜約２．５ｎＵ／細胞／日、約２．５ｎＵ／細胞／日〜約１５０ｎＵ／細胞／日、約２．５ｎＵ／細胞／日〜約１４０ｎＵ／細胞／日、約２．５ｎＵ／細胞／日〜約１３０ｎＵ／細胞／日、約２．５ｎＵ／細胞／日〜約１２０ｎＵ／細胞／日、約２．５ｎＵ／細胞／日〜約１１０ｎＵ／細胞／日、約２．５ｎＵ／細胞／日〜約１００ｎＵ／細胞／日、約２．５ｎＵ／細胞／日〜約９５ｎＵ／細胞／日、約２．５ｎＵ／細胞／日〜約９０ｎＵ／細胞／日、約２．５ｎＵ／細胞／日〜約８５ｎＵ／細胞／日、約２．５ｎＵ／細胞／日〜約８０ｎＵ／細胞／日、約２．５ｎＵ／細胞／日〜約７５ｎＵ／細胞／日、約２．５ｎＵ／細胞／日〜約７０ｎＵ／細胞／日、約２．５ｎＵ／細胞／日〜約６５ｎＵ／細胞／日、約２．５ｎＵ／細胞／日〜約６０ｎＵ／細胞／日、約２．５ｎＵ／細胞／日〜約５５ｎＵ／細胞／日、約２．５ｎＵ／細胞／日〜約５０ｎＵ／細胞／日、約２．５ｎＵ／細胞／日〜約４５ｎＵ／細胞／日、約２．５ｎＵ／細胞／日〜約４０ｎＵ／細胞／日、約２．５ｎＵ／細胞／日〜約３５ｎＵ／細胞／日、約２．５ｎＵ／細胞／日〜約３０ｎＵ／細胞／日、約２．５ｎＵ／細胞／日〜約２５ｎＵ／細胞／日、約２．５ｎＵ／細胞／日〜約２０ｎＵ／細胞／日、約２．５ｎＵ／細胞／日〜約１５ｎＵ／細胞／日、約２．５ｎＵ／細胞／日〜約１０ｎＵ／細胞／日、約２．５ｎＵ／細胞／日〜約５ｎＵ／細胞／日、約５ｎＵ／細胞／日〜約１５０ｎＵ／細胞／日、約５ｎＵ／細胞／日〜約１４０ｎＵ／細胞／日、約５ｎＵ／細胞／日〜約１３０ｎＵ／細胞／日、約５ｎＵ／細胞／日〜約１２０ｎＵ／細胞／日、約５ｎＵ／細胞／日〜約１１０ｎＵ／細胞／日、約５ｎＵ／細胞／日〜約１００ｎＵ／細胞／日、約５ｎＵ／細胞／日〜約９５ｎＵ／細胞／日、約５ｎＵ／細胞／日〜約９０ｎＵ／細胞／日、約５ｎＵ／細胞／日〜約８５ｎＵ／細胞／日、約５ｎＵ／細胞／日〜約８０ｎＵ／細胞／日、約５ｎＵ／細胞／日〜約７５ｎＵ／細胞／日、約５ｎＵ／細胞／日〜約７０ｎＵ／細胞／日、約５ｎＵ／細胞／日〜約６５ｎＵ／細胞／日、約５ｎＵ／細胞／日〜約６０ｎＵ／細胞／日、約５ｎＵ／細胞／日〜約５５ｎＵ／細胞／日、約５ｎＵ／細胞／日〜約５０ｎＵ／細胞／日、約５ｎＵ／細胞／日〜約４５ｎＵ／細胞／日、約５ｎＵ／細胞／日〜約４０ｎＵ／細胞／日、約５ｎＵ／細胞／日〜約３５ｎＵ／細胞／日、約５ｎＵ／細胞／日〜約３０ｎＵ／細胞／日、約５ｎＵ／細胞／日〜約２５ｎＵ／細胞／日、約５ｎＵ／細胞／日〜約２０ｎＵ／細胞／日、約５ｎＵ／細胞／日〜約１５ｎＵ／細胞／日、約５ｎＵ／細胞／日〜約１０ｎＵ／細胞／日、約１０ｎＵ／細胞／日〜約１５０ｎＵ／細胞／日、約１０ｎＵ／細胞／日〜約１４０ｎＵ／細胞／日、約１０ｎＵ／細胞／日〜約１３０ｎＵ／細胞／日、約１０ｎＵ／細胞／日〜約１２０ｎＵ／細胞／日、約１０ｎＵ／細胞／日〜約１１０ｎＵ／細胞／日、約１０ｎＵ／細胞／日〜約１００ｎＵ／細胞／日、約１０ｎＵ／細胞／日〜約９５ｎＵ／細胞／日、約１０ｎＵ／細胞／日〜約９０ｎＵ／細胞／日、約１０ｎＵ／細胞／日〜約８５ｎＵ／細胞／日、約１０ｎＵ／細胞／日〜約８０ｎＵ／細胞／日、約１０ｎＵ／細胞／日〜約７５ｎＵ／細胞／日、約１０ｎＵ／細胞／日〜約７０ｎＵ／細胞／日、約１０ｎＵ／細胞／日〜約６５ｎＵ／細胞／日、約１０ｎＵ／細胞／日〜約６０ｎＵ／細胞／日、約１０ｎＵ／細胞／日〜約５５ｎＵ／細胞／日、約１０ｎＵ／細胞／日〜約５０ｎＵ／細胞／日、約１０ｎＵ／細胞／日〜約４５ｎＵ／細胞／日、約１０ｎＵ／細胞／日〜約４０ｎＵ／細胞／日、約１０ｎＵ／細胞／日〜約３５ｎＵ／細胞／日、約１０ｎＵ／細胞／日〜約３０ｎＵ／細胞／日、約１０ｎＵ／細胞／日〜約２５ｎＵ／細胞／日、約１０ｎＵ／細胞／日〜約２０ｎＵ／細胞／日、約１０ｎＵ／細胞／日〜約１５ｎＵ／細胞／日、約１５ｎＵ／細胞／日〜約１５０ｎＵ／細胞／日、約１５ｎＵ／細胞／日〜約１４０ｎＵ／細胞／日、約１５ｎＵ／細胞／日〜約１３０ｎＵ／細胞／日、約１５ｎＵ／細胞／日〜約１２０ｎＵ／細胞／日、約１５ｎＵ／細胞／日〜約１１０ｎＵ／細胞／日、約１５ｎＵ／細胞／日〜約１００ｎＵ／細胞／日、約１５ｎＵ／細胞／日〜約９５ｎＵ／細胞／日、約１５ｎＵ／細胞／日〜約９０ｎＵ／細胞／日、約１５ｎＵ／細胞／日〜約８５ｎＵ／細胞／日、約１５ｎＵ／細胞／日〜約８０ｎＵ／細胞／日、約１５ｎＵ／細胞／日〜約７５ｎＵ／細胞／日、約１５ｎＵ／細胞／日〜約７０ｎＵ／細胞／日、約１５ｎＵ／細胞／日〜約６５ｎＵ／細胞／日、約１５ｎＵ／細胞／日〜約６０ｎＵ／細胞／日、約１５ｎＵ／細胞／日〜約５５ｎＵ／細胞／日、約１５ｎＵ／細胞／日〜約５０ｎＵ／細胞／日、約１５ｎＵ／細胞／日〜約４５ｎＵ／細胞／日、約１５ｎＵ／細胞／日〜約４０ｎＵ／細胞／日、約１５ｎＵ／細胞／日〜約３５ｎＵ／細胞／日、約１５ｎＵ／細胞／日〜約３０ｎＵ／細胞／日、約１５ｎＵ／細胞／日〜約２５ｎＵ／細胞／日、約１５ｎＵ／細胞／日〜約２０ｎＵ／細胞／日、約２０ｎＵ／細胞／日〜約１５０ｎＵ／細胞／日、約２０ｎＵ／細胞／日〜約１４０ｎＵ／細胞／日、約２０ｎＵ／細胞／日〜約１３０ｎＵ／細胞／日、約２０ｎＵ／細胞／日〜約１２０ｎＵ／細胞／日、約２０ｎＵ／細胞／日〜約１１０ｎＵ／細胞／日、約２０ｎＵ／細胞／日〜約１００ｎＵ／細胞／日、約２０ｎＵ／細胞／日〜約９５ｎＵ／細胞／日、約２０ｎＵ／細胞／日〜約９０ｎＵ／細胞／日、約２０ｎＵ／細胞／日〜約８５ｎＵ／細胞／日、約２０ｎＵ／細胞／日〜約８０ｎＵ／細胞／日、約２０ｎＵ／細胞／日〜約７５ｎＵ／細胞／日、約２０ｎＵ／細胞／日〜約７０ｎＵ／細胞／日、約２０ｎＵ／細胞／日〜約６５ｎＵ／細胞／日、約２０ｎＵ／細胞／日〜約６０ｎＵ／細胞／日、約２０ｎＵ／細胞／日〜約５５ｎＵ／細胞／日、約２０ｎＵ／細胞／日〜約５０ｎＵ／細胞／日、約２０ｎＵ／細胞／日〜約４５ｎＵ／細胞／日、約２０ｎＵ／細胞／日〜約４０ｎＵ／細胞／日、約２０ｎＵ／細胞／日〜約３５ｎＵ／細胞／日、約２０ｎＵ／細胞／日〜約３０ｎＵ／細胞／日、約２０ｎＵ／細胞／日〜約２５ｎＵ／細胞／日、約２５ｎＵ／細胞／日〜約１５０ｎＵ／細胞／日、約２５ｎＵ／細胞／日〜約１４０ｎＵ／細胞／日、約２５ｎＵ／細胞／日〜約１３０ｎＵ／細胞／日、約２５ｎＵ／細胞／日〜約１２０ｎＵ／細胞／日、約２５ｎＵ／細胞／日〜約１１０ｎＵ／細胞／日、約２５ｎＵ／細胞／日〜約１００ｎＵ／細胞／日、約２５ｎＵ／細胞／日〜約９５ｎＵ／細胞／日、約２５ｎＵ／細胞／日〜約９０ｎＵ／細胞／日、約２５ｎＵ／細胞／日〜約８５ｎＵ／細胞／日、約２５ｎＵ／細胞／日〜約８０ｎＵ／細胞／日、約２５ｎＵ／細胞／日〜約７５ｎＵ／細胞／日、約２５ｎＵ／細胞／日〜約７０ｎＵ／細胞／日、約２５ｎＵ／細胞／日〜約６５ｎＵ／細胞／日、約２５ｎＵ／細胞／日〜約６０ｎＵ／細胞／日、約２５ｎＵ／細胞／日〜約５５ｎＵ／細胞／日、約２５ｎＵ／細胞／日〜約５０ｎＵ／細胞／日、約２５ｎＵ／細胞／日〜約４５ｎＵ／細胞／日、約２５ｎＵ／細胞／日〜約４０ｎＵ／細胞／日、約２５ｎＵ／細胞／日〜約３５ｎＵ／細胞／日、約２５ｎＵ／細胞／日〜約３０ｎＵ／細胞／日、約３０ｎＵ／細胞／日〜約１５０ｎＵ／細胞／日、約３０ｎＵ／細胞／日〜約１４０ｎＵ／細胞／日、約３０ｎＵ／細胞／日〜約１３０ｎＵ／細胞／日、約３０ｎＵ／細胞／日〜約１２０ｎＵ／細胞／日、約３０ｎＵ／細胞／日〜約１１０ｎＵ／細胞／日、約３０ｎＵ／細胞／日〜約１００ｎＵ／細胞／日、
約３０ｎＵ／細胞／日〜約９５ｎＵ／細胞／日、約３０ｎＵ／細胞／日〜約９０ｎＵ／細胞／日、約３０ｎＵ／細胞／日〜約８５ｎＵ／細胞／日、約３０ｎＵ／細胞／日〜約８０ｎＵ／細胞／日、約３０ｎＵ／細胞／日〜約７５ｎＵ／細胞／日、約３０ｎＵ／細胞／日〜約７０ｎＵ／細胞／日、約３０ｎＵ／細胞／日〜約６５ｎＵ／細胞／日、約３０ｎＵ／細胞／日〜約６０ｎＵ／細胞／日、約３０ｎＵ／細胞／日〜約５５ｎＵ／細胞／日、約３０ｎＵ／細胞／日〜約５０ｎＵ／細胞／日、約３０ｎＵ／細胞／日〜約４５ｎＵ／細胞／日、約３０ｎＵ／細胞／日〜約４０ｎＵ／細胞／日、約３０ｎＵ／細胞／日〜約３５ｎＵ／細胞／日、約３５ｎＵ／細胞／日〜約１５０ｎＵ／細胞／日、約３５ｎＵ／細胞／日〜約１４０ｎＵ／細胞／日、約３５ｎＵ／細胞／日〜約１３０ｎＵ／細胞／日、約３５ｎＵ／細胞／日〜約１２０ｎＵ／細胞／日、約３５ｎＵ／細胞／日〜約１１０ｎＵ／細胞／日、約３５ｎＵ／細胞／日〜約１００ｎＵ／細胞／日、約３５ｎＵ／細胞／日〜約９５ｎＵ／細胞／日、約３５ｎＵ／細胞／日〜約９０ｎＵ／細胞／日、約３５ｎＵ／細胞／日〜約８５ｎＵ／細胞／日、約３５ｎＵ／細胞／日〜約８０ｎＵ／細胞／日、約３５ｎＵ／細胞／日〜約７５ｎＵ／細胞／日、約３５ｎＵ／細胞／日〜約７０ｎＵ／細胞／日、約３５ｎＵ／細胞／日〜約６５ｎＵ／細胞／日、約３５ｎＵ／細胞／日〜約６０ｎＵ／細胞／日、約３５ｎＵ／細胞／日〜約５５ｎＵ／細胞／日、約３５ｎＵ／細胞／日〜約５０ｎＵ／細胞／日、約３５ｎＵ／細胞／日〜約４５ｎＵ／細胞／日、約３５ｎＵ／細胞／日〜約４０ｎＵ／細胞／日、約４０ｎＵ／細胞／日〜約１５０ｎＵ／細胞／日、約４０ｎＵ／細胞／日〜約１４０ｎＵ／細胞／日、約４０ｎＵ／細胞／日〜約１３０ｎＵ／細胞／日、約４０ｎＵ／細胞／日〜約１２０ｎＵ／細胞／日、約４０ｎＵ／細胞／日〜約１１０ｎＵ／細胞／日、約４０ｎＵ／細胞／日〜約１００ｎＵ／細胞／日、約４０ｎＵ／細胞／日〜約９５ｎＵ／細胞／日、約４０ｎＵ／細胞／日〜約９０ｎＵ／細胞／日、約４０ｎＵ／細胞／日〜約８５ｎＵ／細胞／日、約４０ｎＵ／細胞／日〜約８０ｎＵ／細胞／日、約４０ｎＵ／細胞／日〜約７５ｎＵ／細胞／日、約４０ｎＵ／細胞／日〜約７０ｎＵ／細胞／日、約４０ｎＵ／細胞／日〜約６５ｎＵ／細胞／日、約４０ｎＵ／細胞／日〜約６０ｎＵ／細胞／日、約４０ｎＵ／細胞／日〜約５５ｎＵ／細胞／日、約４０ｎＵ／細胞／日〜約５０ｎＵ／細胞／日、約４０ｎＵ／細胞／日〜約４５ｎＵ／細胞／日、約４５ｎＵ／細胞／日〜約１５０ｎＵ／細胞／日、約４５ｎＵ／細胞／日〜約１４０ｎＵ／細胞／日、約４５ｎＵ／細胞／日〜約１３０ｎＵ／細胞／日、約４５ｎＵ／細胞／日〜約１２０ｎＵ／細胞／日、約４５ｎＵ／細胞／日〜約１１０ｎＵ／細胞／日、約４５ｎＵ／細胞／日〜約１００ｎＵ／細胞／日、約４５ｎＵ／細胞／日〜約９５ｎＵ／細胞／日、約４５ｎＵ／細胞／日〜約９０ｎＵ／細胞／日、約４５ｎＵ／細胞／日〜約８５ｎＵ／細胞／日、約４５ｎＵ／細胞／日〜約８０ｎＵ／細胞／日、約４５ｎＵ／細胞／日〜約７５ｎＵ／細胞／日、約４５ｎＵ／細胞／日〜約７０ｎＵ／細胞／日、約４５ｎＵ／細胞／日〜約６５ｎＵ／細胞／日、約４５ｎＵ／細胞／日〜約６０ｎＵ／細胞／日、約４５ｎＵ／細胞／日〜約５５ｎＵ／細胞／日、約４５ｎＵ／細胞／日〜約５０ｎＵ／細胞／日、約５０ｎＵ／細胞／日〜約１５０ｎＵ／細胞／日、約５０ｎＵ／細胞／日〜約１４０ｎＵ／細胞／日、約５０ｎＵ／細胞／日〜約１３０ｎＵ／細胞／日、約５０ｎＵ／細胞／日〜約１２０ｎＵ／細胞／日、約５０ｎＵ／細胞／日〜約１１０ｎＵ／細胞／日、約５０ｎＵ／細胞／日〜約１００ｎＵ／細胞／日、約５０ｎＵ／細胞／日〜約９５ｎＵ／細胞／日、約５０ｎＵ／細胞／日〜約９０ｎＵ／細胞／日、約５０ｎＵ／細胞／日〜約８５ｎＵ／細胞／日、約５０ｎＵ／細胞／日〜約８０ｎＵ／細胞／日、約５０ｎＵ／細胞／日〜約７５ｎＵ／細胞／日、約５０ｎＵ／細胞／日〜約７０ｎＵ／細胞／日、約５０ｎＵ／細胞／日〜約６５ｎＵ／細胞／日、約５０ｎＵ／細胞／日〜約６０ｎＵ／細胞／日、約５０ｎＵ／細胞／日〜約５５ｎＵ／細胞／日、約５５ｎＵ／細胞／日〜約１５０ｎＵ／細胞／日、約５５ｎＵ／細胞／日〜約１４０ｎＵ／細胞／日、約５５ｎＵ／細胞／日〜約１３０ｎＵ／細胞／日、約５５ｎＵ／細胞／日〜約１２０ｎＵ／細胞／日、約５５ｎＵ／細胞／日〜約１１０ｎＵ／細胞／日、約５５ｎＵ／細胞／日〜約１００ｎＵ／細胞／日、約５５ｎＵ／細胞／日〜約９５ｎＵ／細胞／日、約５５ｎＵ／細胞／日〜約９０ｎＵ／細胞／日、約５５ｎＵ／細胞／日〜約８５ｎＵ／細胞／日、約５５ｎＵ／細胞／日〜約８０ｎＵ／細胞／日、約５５ｎＵ／細胞／日〜約７５ｎＵ／細胞／日、約５５ｎＵ／細胞／日〜約７０ｎＵ／細胞／日、約５５ｎＵ／細胞／日〜約６５ｎＵ／細胞／日、約５５ｎＵ／細胞／日〜約６０ｎＵ／細胞／日、約６０ｎＵ／細胞／日〜約１５０ｎＵ／細胞／日、約６０ｎＵ／細胞／日〜約１４０ｎＵ／細胞／日、約６０ｎＵ／細胞／日〜約１３０ｎＵ／細胞／日、約６０ｎＵ／細胞／日〜約１２０ｎＵ／細胞／日、約６０ｎＵ／細胞／日〜約１１０ｎＵ／細胞／日、約６０ｎＵ／細胞／日〜約１００ｎＵ／細胞／日、約６０ｎＵ／細胞／日〜約９５ｎＵ／細胞／日、約６０ｎＵ／細胞／日〜約９０ｎＵ／細胞／日、約６０ｎＵ／細胞／日〜約８５ｎＵ／細胞／日、約６０ｎＵ／細胞／日〜約８０ｎＵ／細胞／日、約６０ｎＵ／細胞／日〜約７５ｎＵ／細胞／日、約６０ｎＵ／細胞／日〜約７０ｎＵ／細胞／日、約６０ｎＵ／細胞／日〜約６５ｎＵ／細胞／日、約６５ｎＵ／細胞／日〜約１５０ｎＵ／細胞／日、約６５ｎＵ／細胞／日〜約１４０ｎＵ／細胞／日、約６５ｎＵ／細胞／日〜約１３０ｎＵ／細胞／日、約６５ｎＵ／細胞／日〜約１２０ｎＵ／細胞／日、約６５ｎＵ／細胞／日〜約１１０ｎＵ／細胞／日、約６５ｎＵ／細胞／日〜約１００ｎＵ／細胞／日、約６５ｎＵ／細胞／日〜約９５ｎＵ／細胞／日、約６５ｎＵ／細胞／日〜約９０ｎＵ／細胞／日、約６５ｎＵ／細胞／日〜約８５ｎＵ／細胞／日、約６５ｎＵ／細胞／日〜約８０ｎＵ／細胞／日、約６５ｎＵ／細胞／日〜約７５ｎＵ／細胞／日、約６５ｎＵ／細胞／日〜約７０ｎＵ／細胞／日、約７０ｎＵ／細胞／日〜約１５０ｎＵ／細胞／日、約７０ｎＵ／細胞／日〜約１４０ｎＵ／細胞／日、約７０ｎＵ／細胞／日〜約１３０ｎＵ／細胞／日、約７０ｎＵ／細胞／日〜約１２０ｎＵ／細胞／日、約７０ｎＵ／細胞／日〜約１１０ｎＵ／細胞／日、約７０ｎＵ／細胞／日〜約１００ｎＵ／細胞／日、約７０ｎＵ／細胞／日〜約９５ｎＵ／細胞／日、約７０ｎＵ／細胞／日〜約９０ｎＵ／細胞／日、約７０ｎＵ／細胞／日〜約８５ｎＵ／細胞／日、約７０ｎＵ／細胞／日〜約８０ｎＵ／細胞／日、約７０ｎＵ／細胞／日〜約７５ｎＵ／細胞／日、約７５ｎＵ／細胞／日〜約１５０ｎＵ／細胞／日、約７５ｎＵ／細胞／日〜約１４０ｎＵ／細胞／日、約７５ｎＵ／細胞／日〜約１３０ｎＵ／細胞／日、約７５ｎＵ／細胞／日〜約１２０ｎＵ／細胞／日、約７５ｎＵ／細胞／日〜約１１０ｎＵ／細胞／日、約７５ｎＵ／細胞／日〜約１００ｎＵ／細胞／日、約７５ｎＵ／細胞／日〜約９５ｎＵ／細胞／日、約７５ｎＵ／細胞／日〜約９０ｎＵ／細胞／日、約７５ｎＵ／細胞／日〜約８５ｎＵ／細胞／日、約７５ｎＵ／細胞／日〜約８０ｎＵ／細胞／日、約８０ｎＵ／細胞／日〜約１５０ｎＵ／細胞／日、約８０ｎＵ／細胞／日〜約１４０ｎＵ／細胞／日、約８０ｎＵ／細胞／日〜約１３０ｎＵ／細胞／日、約８０ｎＵ／細胞／日〜約１２０ｎＵ／細胞／日、約８０ｎＵ／細胞／日〜約１１０ｎＵ／細胞／日、約８０ｎＵ／細胞／日〜約１００ｎＵ／細胞／日、約８０ｎＵ／細胞／日〜約９５ｎＵ／細胞／日、約８０ｎＵ／細胞／日〜約９０ｎＵ／細胞／日、約８０ｎＵ／細胞／日〜約８５ｎＵ／細胞／日、約８５ｎＵ／細胞／日〜約１５０ｎＵ／細胞／日、約８５ｎＵ／細胞／日〜約１４０ｎＵ／細胞／日、約８５ｎＵ／細胞／日〜約１３０ｎＵ／細胞／日、約８５ｎＵ／細胞／日〜約１２０ｎＵ／細胞／日、約８５ｎＵ／細胞／日〜約１１０ｎＵ／細胞／日、約８５ｎＵ／細胞／日〜約１００ｎＵ／細胞／日、約８５ｎＵ／細胞／日〜約９５ｎＵ／細胞／日、約８５ｎＵ／細胞／日〜約９０ｎＵ／細胞／日、約９０ｎＵ／細胞／日〜約１５０ｎＵ／細胞／日、約９０ｎＵ／細胞／日〜約１４０ｎＵ／細胞／日、約９０ｎＵ／細胞／日〜約１３０ｎＵ／細胞／日、約９０ｎＵ／細胞／日〜約１２０ｎＵ／細胞／日、約９０ｎＵ／細胞／日〜約１１０ｎＵ／細胞／日、約９０ｎＵ／細胞／日〜約１００ｎＵ／細胞／日、約９０ｎＵ／細胞／日〜約９５ｎＵ／細胞／日、約９５ｎＵ／細胞／日〜約１５０ｎＵ／細胞／日、約９５ｎＵ／細胞／日〜約１４０ｎＵ／細胞／日、約９５ｎＵ／細胞／日〜約１３０ｎＵ／細胞／日、約９５ｎＵ／細胞／日〜約１２０ｎＵ／細胞／日、約９５ｎＵ／細胞／日〜約１１０ｎＵ／細胞／日、約９５ｎＵ／細胞／日〜約１００ｎＵ／細胞／日、約１００ｎＵ／細胞／日〜約１５０ｎＵ／細胞／日、約１００ｎＵ／細胞／日〜約１４０ｎＵ／細胞／日、約１００ｎＵ／細胞／日〜約１３０ｎＵ／細胞／日、約１００ｎＵ／細胞／日〜約１２０ｎＵ／細胞／日、約１００ｎＵ／細胞／日〜約１１０ｎＵ／細胞／日、約１１０ｎＵ／細胞／日〜約１５０ｎＵ／細胞／日、約１１０ｎＵ／細胞／日〜約１４０ｎＵ／細胞／日、約１１０ｎＵ／細胞／日〜約１３０ｎＵ／細胞／日、約１１０ｎＵ／細胞／日〜約１２０ｎＵ／細胞／日、約１２０ｎＵ／細胞／日〜約１５０ｎＵ／細胞／日、約１２０ｎＵ／細胞／日〜約１４０ｎＵ／細胞／日、約１２０ｎＵ／細胞／日〜約１３０ｎＵ／細胞／日、約１３０ｎＵ／細胞／日〜約１５０ｎＵ／細胞／日、約１３０ｎＵ／細胞／日〜約１４０ｎＵ／細胞／日、または約１４０ｎＵ／細胞／日〜約１５０ｎＵ／細胞／日の細胞特異的ＬＤＨ産生を生じると予測される感作剤の濃度を使用して、産生バイオリアクター（例えば、本明細書に記載される産生バイオリアクターのいずれか）において細胞（例えば、本明細書に記載される細胞のいずれか）を培養する工程をさらに含む。
【０１７４】
成長速度は、以下の方程式を使用して決定される複合的な成長計算である。
【０１７５】
最終細胞密度＝初期密度×ｅｋｔ
式中、ｋは成長定数であり、ｔは日数での時間である。
【０１７６】
見かけの成長速度は、成長速度に加算された計算された死亡率の合計である。
【０１７７】
本明細書に記載される方法のいずれかの一部の実施形態は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１％／日よりも大きい、１．５％／日よりも大きい、２％／日よりも大きい、２．５％／日よりも大きい、３％／日よりも大きい、３．５％／日よりも大きい、４．０％／日よりも大きい、４．５％／日よりも大きい、５．０％／日よりも大きい、５．５％／日よりも大きい、６．０％／日よりも大きい、６．５％／日よりも大きい、７．０％／日よりも大きい、７．５％／日よりも大きい、８．０％／日よりも大きい、８．５％／日よりも大きい、９．０％／日よりも大きい、９．５％／日よりも大きい、１０．０％／日よりも大きい、１０．５％／日よりも大きい、１１．０％／日よりも大きい、１１．５％／日よりも大きい、１２．０％／日よりも大きい、１２．５％／日よりも大きい、１３．０％／日よりも大きい、１３．５％／日よりも大きい、１４．０％／日よりも大きい、１４．５％／日よりも大きい、１５．０％／日よりも大きい、１６％／日よりも大きい、１７％／日よりも大きい、１８％／日よりも大きい、１９％／日よりも大きい、２０％／日よりも大きい、２１％／日よりも大きい、２２％／日よりも大きい、２３％／日よりも大きい、２４％／日よりも大きい、２５％／日よりも大きい、３０％／日よりも大きい、３５％／日よりも大きい、４０％／日よりも大きい、４５％／日よりも大きい、５０％／日よりも大きい、５５％／日よりも大きい、６０％／日よりも大きい、６５％／日よりも大きい、７０％／日よりも大きい、７５％／日よりも大きい、８０％／日よりも大きい、８５％／日よりも大きい、９０％／日よりも大きい、９５％／日よりも大きい、１００％／日よりも大きい、１０５％／日よりも大きい、１１０％／日よりも大きい、１１５％／日よりも大きい、１２０％／日よりも大きい、１２５％／日よりも大きい、１３０％／日よりも大きい、１３５％／日よりも大きい、１４０％／日よりも大きい、１４５％／日よりも大きい、または１５０％／日よりも大きい見かけの成長速度を生じると予測される感作剤の濃度を使用して、産生バイオリアクター（例えば、本明細書に記載される産生バイオリアクターのいずれか）において細胞（例えば、本明細書に記載される細胞のいずれか）を培養する工程をさらに含む。本明細書に記載される方法のいずれかの一部の実施形態は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、約０．１％／日〜約１５０％／日、約０．１％／日〜約１４０％／日、約０．１％／日〜約１３５％／日、約０．１％／日〜約１３０％／日、約０．１％／日〜約１２５％／日、約０．１％／日〜約１２０％／日、約０．１％／日〜約１１５％／日、約０．１％／日〜約１１０％／日、約０．１％／日〜約１０５％／日、約０．１％／日〜約１００％／日、約０．１％／日〜約９５％／日、約０．１％／日〜約９０％／日、約０．１％／日〜約８５％／日、約０．１％／日〜約８０％／日、約０．１％／日〜約７５％／日、約０．１％／日〜約７０％／日、約０．１％／日〜約６５％／日、約０．１％／日〜約６０％／日、約０．１％／日〜約５５％／日、約０．１％／日〜約５０％／日、約０．１％／日〜約４５％／日、約０．１％／日〜約４０％／日、約０．１％／日〜約３５％／日、約０．１％／日〜約３０％／日、約０．１％／日〜約２５％／日、約０．１％／日〜約２０％／日、約０．１％／日〜約１８％／日、約０．１％／日〜約１６％／日、約０．１％／日〜約１４％／日、約０．１％／日〜約１２％／日、約０．１％／日〜約１０％／日、約０．１％／日〜約９．０％／日、約０．１％／日〜約８．０％／日、約０．１％／日〜約７．０％／日、約０．１％／日〜約６．０％／日、約０．１％／日〜約５．０％／日、約０．１％／日〜約４．５％／日、約０．１％／日〜約４．０％／日、約０．１％／日〜約３．５％／日、約０．１％／日〜約３．０％／日、約０．１％／日〜約２．５％／日、約０．１％／日〜約２．０％／日、約０．１％／日〜約１．５％／日、約０．１％／日〜約１．０％／日、約０．１％／日〜約０．５％／日、約０．５％／日〜約１４０％／日、約０．５％／日〜約１３５％／日、約０．５％／日〜約１３０％／日、約０．５％／日〜約１２５％／日、約０．５％／日〜約１２０％／日、約０．５％／日〜約１１５％／日、約０．５％／日〜約１１０％／日、約０．５％／日〜約１０５％／日、約０．５％／日〜約１００％／日、約０．５％／日〜約９５％／日、約０．５％／日〜約９０％／日、約０．５％／日〜約８５％／日、約０．５％／日〜約８０％／日、約０．５％／日〜約７５％／日、約０．５％／日〜約７０％／日、約０．５％／日〜約６５％／日、約０．５％／日〜約６０％／日、約０．５％／日〜約５５％／日、約０．５％／日〜約５０％／日、約０．５％／日〜約４５％／日、約０．５％／日〜約４０％／日、約０．５％／日〜約３５％／日、約０．５％／日〜約３０％／日、約０．５％／日〜約２５％／日、約０．５％／日〜約２０％／日、約０．５％／日〜約１８％／日、約０．５％／日〜約１６％／日、約０．５％／日〜約１４％／日、約０．５％／日〜約１２％／日、約０．５％／日〜約１０％／日、約０．５％／日〜約９．０％／日、約０．５％／日〜約８．０％／日、約０．５％／日〜約７．０％／日、約０．５％／日〜約６．０％／日、約０．５％／日〜約５．０％／日、約０．５％／日〜約４．５％／日、約０．５％／日〜約４．０％／日、約０．５％／日〜約３．５％／日、約０．５％／日〜約３．０％／日、約０．５％／日〜約２．５％／日、約０．５％／日〜約２．０％／日、約０．５％／日〜約１．５％／日、約０．５％／日〜約１．０％／日、約１．０％／日〜約１４０％／日、約１．０％／日〜約１３５％／日、約１．０％／日〜約１３０％／日、約１．０％／日〜約１２５％／日、約１．０％／日〜約１２０％／日、約１．０％／日〜約１１５％／日、約１．０％／日〜約１１０％／日、約１．０％／日〜約１０５％／日、約１．０％／日〜約１００％／日、約１．０％／日〜約９５％／日、約１．０％／日〜約９０％／日、約１．０％／日〜約８５％／日、約１．０％／日〜約８０％／日、約１．０％／日〜約７５％／日、約１．０％／日〜約７０％／日、約１．０％／日〜約６５％／日、約１．０％／日〜約６０％／日、約１．０％／日〜約５５％／日、約１．０％／日〜約５０％／日、約１．０％／日〜約４５％／日、約１．０％／日〜約４０％／日、約１．０％／日〜約３５％／日、約１．０％／日〜約３０％／日、約１．０％／日〜約２５％／日、約１．０％／日〜約２０％／日、約１．０％／日〜約１８％／日、約１．０％／日〜約１６％／日、約１．０％／日〜約１４％／日、約１．０％／日〜約１２％／日、約１．０％／日〜約１０％／日、約１．０％／日〜約９．０％／日、約１．０％／日〜約８．０％／日、約１．０％／日〜約７．０％／日、約１．０％／日〜約６．０％／日、約１．０％／日〜約５．０％／日、約１．０％／日〜約４．５％／日、約１．０％／日〜約４．０％／日、約１．０％／日〜約３．５％／日、約１．０％／日〜約３．０％／日、約１．０％／日〜約２．５％／日、約１．０％／日〜約２．０％／日、約１．０％／日〜約１．５％／日、約１．５％／日〜約１４０％／日、約１．５％／日〜約１３５％／日、約１．５％／日〜約１３０％／日、約１．５％／日〜約１２５％／日、約１．５％／日〜約１２０％／日、約１．５％／日〜約１１５％／日、約１．５％／日〜約１１０％／日、約１．５％／日〜約１０５％／日、約１．５％／日〜約１００％／日、約１．５％／日〜約９５％／日、約１．５％／日〜約９０％／日、約１．５％／日〜約８５％／日、約１．５％／日〜約８０％／日、約１．５％／日〜約７５％／日、約１．５％／日〜約７０％／日、約１．５％／日〜約６５％／日、約１．５％／日〜約６０％／日、約１．５％／日〜約５５％／日、約１．５％／日〜約５０％／日、約１．５％／日〜約４５％／日、約１．５％／日〜約４０％／日、約１．５％／日〜約３５％／日、約１．５％／日〜約３０％／日、約１．５％／日〜約２５％／日、約１．５％／日〜約２０％／日、約１．５％／日〜約１８％／日、約１．５％／日〜約１６％／日、約１．５％／日〜約１４％／日、約１．５％／日〜約１２％／日、約１．５％／日〜約１０％／日、約１．５％／日〜約９．０％／日、約１．５％／日〜約８．０％／日、約１．５％／日〜約７．０％／日、約１．５％／日〜約６．０％／日、約１．５％／日〜約５．０％／日、約１．５％／日〜約４．５％／日、約１．５％／日〜約４．０％／日、約１．５％／日〜約３．５％／日、約１．５％／日〜約３．０％／日、約１．５％／日〜約２．５％／日、約１．５％／日〜約２．０％／日、約２．０％／日〜約１４０％／日、約２．０％／日〜約１３５％／日、約２．０％／日〜約１３０％／日、約２．０％／日〜約１２５％／日、約２．０％／日〜約１２０％／日、約２．０％／日〜約１１５％／日、約２．０％／日〜約１１０％／日、約２．０％／日〜約１０５％／日、約２．０％／日〜約１００％／日、約２．０％／日〜約９５％／日、約２．０％／日〜約９０％／日、約２．０％／日〜約８５％／日、約２．０％／日〜約８０％／日、約２．０％／日〜約７５％／日、約２．０％／日〜約７０％／日、約２．０％／日〜約６５％／日、約２．０％／日〜約６０％／日、約２．０％／日〜約５５％／日、約２．０％／日〜約５０％／日、約２．０％／日〜約４５％／日、約２．０％／日〜約４０％／日、約２．０％／日〜約３５％／日、約２．０％／日〜約３０％／日、約２．０％／日〜約２５％／日、約２．０％／日〜約２０％／日、約２．０％／日〜約１８％／日、約２．０％／日〜約１６％／日、約２．０％／日〜約１４％／日、約２．０％／日〜約１２％／日、約２．０％／日〜約１０％／日、約２．０％／日〜約９．０％／日、約２．０％／日〜約８．０％／日、約２．０％／日〜約７．０％／日、約２．０％／日〜約６．０％／日、約２．０％／日〜約５．０％／日、約２．０％／日〜約４．５％／日、約２．０％／日〜約４．０％／日、約２．０％／日〜約３．５％／日、約２．０％／日〜約３．０％／日、約２．０％／日〜約２．５％／日、約２．５％／日〜約１４０％／日、約２．５％／日〜約１３５％／日、約２．５％／日〜約１３０％／日、約２．５％／日〜約１２５％／日、約２．５％／日〜約１２０％／日、約２．５％／日〜約１１５％／日、約２．５％／日〜約１１０％／日、約２．５％／日〜約１０５％／日、約２．５％／日〜約１００％／日、約２．５％／日〜約９５％／日、約２．５％／日〜約９０％／日、約２．５％／日〜約８５％／日、約２．５％／日〜約８０％／日、約２．５％／日〜約７５％／日、約２．５％／日〜約７０％／日、約２．５％／日〜約６５％／日、約２．５％／日〜約６０％／日、約２．５％／日〜約５５％／日、約２．５％／日〜約５０％／日、約２．５％／日〜約４５％／日、約２．５％／日〜約４０％／日、約２．５％／日〜約３５％／日、約２．５％／日〜約３０％／日、約２．５％／日〜約２５％／日、約２．５％／日〜約２０％／日、約２．５％／日〜約１８％／日、約２．５％／日〜約１６％／日、約２．５％／日〜約１４％／日、約２．５％／日〜約１２％／日、約２．５％／日〜約１０％／日、約２．５％／日〜約９．０％／日、約２．５％／日〜約８．０％／日、約２．５％／日〜約７．０％／日、約２．５％／日〜約６．０％／日、約２．５％／日〜約５．０％／日、約２．５％／日〜約４．５％／日、約２．５％／日〜約４．０％／日、約２．５％／日〜約３．５％／日、約２．５％／日〜約３．０％／日、約３．０％／日〜約１４０％／日、約３．０％／日〜約１３５％／日、約３．０％／日〜約１３０％／日、約３．０％／日〜約１２５％／日、約３．０％／日〜約１２０％／日、
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約１０％／日〜約１６％／日、約１０％／日〜約１４％／日、約１０％／日〜約１２％／日、約１２％／日〜約１４０％／日、約１２％／日〜約１３５％／日、
約１２％／日〜約１３０％／日、約１２％／日〜約１２５％／日、約１２％／日〜約１２０％／日、約１２％／日〜約１１５％／日、約１２％／日〜約１１０％／日、約１２％／日〜約１０５％／日、約１２％／日〜約１００％／日、約１２％／日〜約９５％／日、約１２％／日〜約９０％／日、約１２％／日〜約８５％／日、約１２％／日〜約８０％／日、約１２％／日〜約７５％／日、約１２％／日〜約７０％／日、約１２％／日〜約６５％／日、約１２％／日〜約６０％／日、約１２％／日〜約５５％／日、約１２％／日〜約５０％／日、約１２％／日〜約４５％／日、約１２％／日〜約４０％／日、約１２％／日〜約３５％／日、約１２％／日〜約３０％／日、約１２％／日〜約２５％／日、約１２％／日〜約２０％／日、約１２％／日〜約１８％／日、約１２％／日〜約１６％／日、約１２％／日〜約１４％／日、約１４％／日〜約１４０％／日、約１４％／日〜約１３５％／日、約１４％／日〜約１３０％／日、約１４％／日〜約１２５％／日、約１４％／日〜約１２０％／日、約１４％／日〜約１１５％／日、約１４％／日〜約１１０％／日、約１４％／日〜約１０５％／日、約１４％／日〜約１００％／日、約１４％／日〜約９５％／日、約１４％／日〜約９０％／日、約１４％／日〜約８５％／日、約１４％／日〜約８０％／日、約１４％／日〜約７５％／日、約１４％／日〜約７０％／日、約１４％／日〜約６５％／日、約１４％／日〜約６０％／日、約１４％／日〜約５５％／日、約１４％／日〜約５０％／日、約１４％／日〜約４５％／日、約１４％／日〜約４０％／日、約１４％／日〜約３５％／日、約１４％／日〜約３０％／日、約１４％／日〜約２５％／日、約１４％／日〜約２０％／日、約１４％／日〜約１８％／日、約１４％／日〜約１６％／日、約１６％／日〜約１４０％／日、約１６％／日〜約１３５％／日、約１６％／日〜約１３０％／日、約１６％／日〜約１２５％／日、約１６％／日〜約１２０％／日、約１６％／日〜約１１５％／日、約１６％／日〜約１１０％／日、約１６％／日〜約１０５％／日、約１６％／日〜約１００％／日、約１６％／日〜約９５％／日、約１６％／日〜約９０％／日、約１６％／日〜約８５％／日、約１６％／日〜約８０％／日、約１６％／日〜約７５％／日、約１６％／日〜約７０％／日、約１６％／日〜約６５％／日、約１６％／日〜約６０％／日、約１６％／日〜約５５％／日、約１６％／日〜約５０％／日、約１６％／日〜約４５％／日、約１６％／日〜約４０％／日、約１６％／日〜約３５％／日、約１６％／日〜約３０％／日、約１６％／日〜約２５％／日、約１６％／日〜約２０％／日、約１６％／日〜約１８％／日、約１８％／日〜約１４０％／日、約１８％／日〜約１３５％／日、約１８％／日〜約１３０％／日、約１８％／日〜約１２５％／日、約１８％／日〜約１２０％／日、約１８％／日〜約１１５％／日、約１８％／日〜約１１０％／日、約１８％／日〜約１０５％／日、約１８％／日〜約１００％／日、約１８％／日〜約９５％／日、約１８％／日〜約９０％／日、約１８％／日〜約８５％／日、約１８％／日〜約８０％／日、約１８％／日〜約７５％／日、約１８％／日〜約７０％／日、約１８％／日〜約６５％／日、約１８％／日〜約６０％／日、約１８％／日〜約５５％／日、約１８％／日〜約５０％／日、約１８％／日〜約４５％／日、約１８％／日〜約４０％／日、約１８％／日〜約３５％／日、約１８％／日〜約３０％／日、約１８％／日〜約２５％／日、約１８％／日〜約２０％／日、約２０％／日〜約１４０％／日、約２０％／日〜約１３５％／日、約２０％／日〜約１３０％／日、約２０％／日〜約１２５％／日、約２０％／日〜約１２０％／日、約２０％／日〜約１１５％／日、約２０％／日〜約１１０％／日、約２０％／日〜約１０５％／日、約２０％／日〜約１００％／日、約２０％／日〜約９５％／日、約２０％／日〜約９０％／日、約２０％／日〜約８５％／日、約２０％／日〜約８０％／日、約２０％／日〜約７５％／日、約２０％／日〜約７０％／日、約２０％／日〜約６５％／日、約２０％／日〜約６０％／日、約２０％／日〜約５５％／日、約２０％／日〜約５０％／日、約２０％／日〜約４５％／日、約２０％／日〜約４０％／日、約２０％／日〜約３５％／日、約２０％／日〜約３０％／日、約２０％／日〜約２５％／日、約２５％／日〜約１４０％／日、約２５％／日〜約１３５％／日、約２５％／日〜約１３０％／日、約２５％／日〜約１２５％／日、約２５％／日〜約１２０％／日、約２５％／日〜約１１５％／日、約２５％／日〜約１１０％／日、約２５％／日〜約１０５％／日、約２５％／日〜約１００％／日、約２５％／日〜約９５％／日、約２５％／日〜約９０％／日、約２５％／日〜約８５％／日、約２５％／日〜約８０％／日、約２５％／日〜約７５％／日、約２５％／日〜約７０％／日、約２５％／日〜約６５％／日、約２５％／日〜約６０％／日、約２５％／日〜約５５％／日、約２５％／日〜約５０％／日、約２５％／日〜約４５％／日、約２５％／日〜約４０％／日、約２５％／日〜約３５％／日、約２５％／日〜約３０％／日、約３０％／日〜約１４０％／日、約３０％／日〜約１３５％／日、約３０％／日〜約１３０％／日、約３０％／日〜約１２５％／日、約３０％／日〜約１２０％／日、約３０％／日〜約１１５％／日、約３０％／日〜約１１０％／日、約３０％／日〜約１０５％／日、約３０％／日〜約１００％／日、約３０％／日〜約９５％／日、約３０％／日〜約９０％／日、約３０％／日〜約８５％／日、約３０％／日〜約８０％／日、約３０％／日〜約７５％／日、約３０％／日〜約７０％／日、約３０％／日〜約６５％／日、約３０％／日〜約６０％／日、約３０％／日〜約５５％／日、約３０％／日〜約５０％／日、約３０％／日〜約４５％／日、約３０％／日〜約４０％／日、約３０％／日〜約３５％／日、約３５％／日〜約１４０％／日、約３５％／日〜約１３５％／日、約３５％／日〜約１３０％／日、約３５％／日〜約１２５％／日、約３５％／日〜約１２０％／日、約３５％／日〜約１１５％／日、約３５％／日〜約１１０％／日、約３５％／日〜約１０５％／日、約３５％／日〜約１００％／日、約３５％／日〜約９５％／日、約３５％／日〜約９０％／日、約３５％／日〜約８５％／日、約３５％／日〜約８０％／日、約３５％／日〜約７５％／日、約３５％／日〜約７０％／日、約３５％／日〜約６５％／日、約３５％／日〜約６０％／日、約３５％／日〜約５５％／日、約３５％／日〜約５０％／日、約３５％／日〜約４５％／日、約３５％／日〜約４０％／日、約４０％／日〜約１４０％／日、約４０％／日〜約１３５％／日、約４０％／日〜約１３０％／日、約４０％／日〜約１２５％／日、約４０％／日〜約１２０％／日、約４０％／日〜約１１５％／日、約４０％／日〜約１１０％／日、約４０％／日〜約１０５％／日、約４０％／日〜約１００％／日、約４０％／日〜約９５％／日、約４０％／日〜約９０％／日、約４０％／日〜約８５％／日、約４０％／日〜約８０％／日、約４０％／日〜約７５％／日、約４０％／日〜約７０％／日、約４０％／日〜約６５％／日、約４０％／日〜約６０％／日、約４０％／日〜約５５％／日、約４０％／日〜約５０％／日、約４０％／日〜約４５％／日、約４５％／日〜約１４０％／日、約４５％／日〜約１３５％／日、約４５％／日〜約１３０％／日、約４５％／日〜約１２５％／日、約４５％／日〜約１２０％／日、約４５％／日〜約１１５％／日、約４５％／日〜約１１０％／日、約４５％／日〜約１０５％／日、約４５％／日〜約１００％／日、約４５％／日〜約９５％／日、約４５％／日〜約９０％／日、約４５％／日〜約８５％／日、約４５％／日〜約８０％／日、約４５％／日〜約７５％／日、約４５％／日〜約７０％／日、約４５％／日〜約６５％／日、約４５％／日〜約６０％／日、約４５％／日〜約５５％／日、約４５％／日〜約５０％／日、約５０％／日〜約１４０％／日、約５０％／日〜約１３５％／日、約５０％／日〜約１３０％／日、約５０％／日〜約１２５％／日、約５０％／日〜約１２０％／日、約５０％／日〜約１１５％／日、約５０％／日〜約１１０％／日、約５０％／日〜約１０５％／日、約５０％／日〜約１００％／日、約５０％／日〜約９５％／日、約５０％／日〜約９０％／日、約５０％／日〜約８５％／日、約５０％／日〜約８０％／日、約５０％／日〜約７５％／日、約５０％／日〜約７０％／日、約５０％／日〜約６５％／日、約５０％／日〜約６０％／日、約５０％／日〜約５５％／日、約５５％／日〜約１４０％／日、約５５％／日〜約１３５％／日、約５５％／日〜約１３０％／日、約５５％／日〜約１２５％／日、約５５％／日〜約１２０％／日、約５５％／日〜約１１５％／日、約５５％／日〜約１１０％／日、約５５％／日〜約１０５％／日、約５５％／日〜約１００％／日、約５５％／日〜約９５％／日、約５５％／日〜約９０％／日、約５５％／日〜約８５％／日、約５５％／日〜約８０％／日、約５５％／日〜約７５％／日、約５５％／日〜約７０％／日、約５５％／日〜約６５％／日、約５５％／日〜約６０％／日、約６０％／日〜約１４０％／日、約６０％／日〜約１３５％／日、約６０％／日〜約１３０％／日、約６０％／日〜約１２５％／日、約６０％／日〜約１２０％／日、約６０％／日〜約１１５％／日、約６５０％／日〜約１１０％／日、約６０％／日〜約１０５％／日、約６０％／日〜約１００％／日、約６０％／日〜約９５％／日、約６０％／日〜約９０％／日、約６０％／日〜約８５％／日、約６０％／日〜約８０％／日、約６０％／日〜約７５％／日、約６０％／日〜約７０％／日、約６０％／日〜約６５％／日、約６５％／日〜約１４０％／日、約６５％／日〜約１３５％／日、約６５％／日〜約１３０％／日、約６５％／日〜約１２５％／日、約６５％／日〜約１２０％／日、約６５％／日〜約１１５％／日、約６５％／日〜約１１０％／日、約６５％／日〜約１０５％／日、約６５％／日〜約１００％／日、約６５％／日〜約９５％／日、約６５％／日〜約９０％／日、約６５％／日〜約８５％／日、約６５％／日〜約８０％／日、約６５％／日〜約７５％／日、約６５％／日〜約７０％／日、約７０％／日〜約１４０％／日、約７０％／日〜約１３５％／日、約７０％／日〜約１３０％／日、約７０％／日〜約１２５％／日、約７０％／日〜約１２０％／日、約７０％／日〜約１１５％／日、約７０％／日〜約１１０％／日、約７０％／日〜約１０５％／日、約７０％／日〜約１００％／日、約７０％／日〜約９５％／日、約７０％／日〜約９０％／日、約７０％／日〜約８５％／日、約７０％／日〜約８０％／日、約７０％／日〜約７５％／日、約７５％／日〜約１４０％／日、約７５％／日〜約１３５％／日、約７５％／日〜約１３０％／日、約７５％／日〜約１２５％／日、約７５％／日〜約１２０％／日、約７５％／日〜約１１５％／日、約７５％／日〜約１１０％／日、約７５％／日〜約１０５％／日、約７５％／日〜約１００％／日、約７５％／日〜約９５％／日、約７５％／日〜約９０％／日、約７５％／日〜約８５％／日、約７５％／日〜約８０％／日、約８０％／日〜約１４０％／日、約８０％／日〜約１３５％／日、約８０％／日〜約１３０％／日、約８０％／日〜約１２５％／日、約８０％／日〜約１２０％／日、約８０％／日〜約１１５％／日、約８０％／日〜約１１０％／日、約８０％／日〜約１０５％／日、約８０％／日〜約１００％／日、約８０％／日〜約９５％／日、約８０％／日〜約９０％／日、約８０％／日〜約８５％／日、約８５％／日〜約１４０％／日、約８５％／日〜約１３５％／日、約８５％／日〜約１３０％／日、約８５％／日〜約１２５％／日、約８５％／日〜約１２０％／日、約８５％／日〜約１１５％／日、
約８５％／日〜約１１０％／日、約８５％／日〜約１０５％／日、約８５％／日〜約１００％／日、約８５％／日〜約９５％／日、約８５％／日〜約９０％／日、約９０％／日〜約１４０％／日、約９０％／日〜約１３５％／日、約９０％／日〜約１３０％／日、約９０％／日〜約１２５％／日、約９０％／日〜約１２０％／日、
約９０％／日〜約１１５％／日、約９０％／日〜約１１０％／日、約９０％／日〜約１０５％／日、約９０％／日〜約１００％／日、約９０％／日〜約９５％／日、約９５％／日〜約１４０％／日、約９５％／日〜約１３５％／日、約９５％／日〜約１３０％／日、約９５％／日〜約１２５％／日、約９５％／日〜約１２０％／日、約９５％／日〜約１１５％／日、約９５％／日〜約１１０％／日、約９５％／日〜約１０５％／日、約９５％／日〜約１００％／日、約１００％／日〜約１４０％／日、約１００％／日〜約１３５％／日、約１００％／日〜約１３０％／日、約１００％／日〜約１２５％／日、約１００％／日〜約１２０％／日、約１００％／日〜約１１５％／日、約１００％／日〜約１１０％／日、約１００％／日〜約１０５％／日、約１０５％／日〜約１４０％／日、約１０５％／日〜約１３５％／日、約１０５％／日〜約１３０％／日、約１０５％／日〜約１２５％／日、約１０５％／日〜約１２０％／日、約１０５％／日〜約１１５％／日、約１０５％／日〜約１１０％／日、約１１０％／日〜約１４０％／日、約１１０％／日〜約１３５％／日、約１１０％／日〜約１３０％／日、約１１０％／日〜約１２５％／日、約１１０％／日〜約１２０％／日、約１１０％／日〜約１１５％／日、約１１５％／日〜約１４０％／日、約１１５％／日〜約１３５％／日、約１１５％／日〜約１３０％／日、約１１５％／日〜約１２５％／日、約１１５％／日〜約１２０％／日、約１２０％／日〜約１４０％／日、約１２０％／日〜約１３５％／日、約１２０％／日〜約１３０％／日、約１２０％／日〜約１２５％／日、約１２５％／日〜約１４０％／日、約１２５％／日〜約１３５％／日、約１２５％／日〜約１３０％／日、約１３０％／日〜約１４０％／日、約１３０％／日〜約１３５％／日、または約１３５％／日〜約１４０％／日の見かけの成長速度を生じると予測される感作剤の濃度を使用して、産生バイオリアクター（例えば、本明細書に記載される産生バイオリアクターのいずれか）において細胞（例えば、本明細書に記載される細胞のいずれか）を培養する工程をさらに含む。
【０１７８】
これらの方法の一部の実施形態では、細胞は、組換え治療タンパク質をコードする核酸を含む。これらの方法の一部の実施形態は、組換え治療タンパク質を収集または回収する工程をさらに含む。これらの方法の一部の実施形態は、組換え治療タンパク質を精製する工程をさらに含む。これらの方法の一部の実施形態は、精製された組換え治療タンパク質を製剤化する工程をさらに含む。
【０１７９】
これらの方法の一部の実施形態では、細胞は、細菌（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の例示的な細菌のいずれか）、酵母（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の例示的な酵母細胞のいずれか）または哺乳動物細胞（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の例示的な哺乳動物細胞のいずれか）である。
【０１８０】
これらの方法の一部の実施形態では、細胞生存度は、試験培養容器中の乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の濃度を測定することによって決定される。
【０１８１】
一部の実施形態では、試験培養容器は、バッフル付き振盪フラスコ（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知のバッフル付き振盪フラスコのいずれか）であり、複数の試験条件は、（ａ）約１２５ＲＰＭ〜約４００ＲＰＭ（または本明細書に記載されるこの範囲の下位範囲のいずれか）の回転式撹拌；（ｂ）約０ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍ（または本明細書に記載されるこの範囲の下位範囲のいずれか）の感作剤（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の感作剤のいずれか）の濃度；および（ｃ）約１ｇ／Ｌ〜約１０ｇ／Ｌ（または本明細書に記載されるこの範囲の下位範囲のいずれか）である保護剤（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の保護剤のいずれか）の濃度、のうち１つまたはそれ以上を含む。一部の実施形態では、保護剤は、ポロクサマー（例えば、ポロクサマー−１８８、ポロクサマー−４０１、ポロクサマー−４０２またはポロクサマー−４０７）、ポロキサミン（例えば、ポロキサミン−９０４またはポロキサミン−９０８）またはプルロニックポリオールである。
【０１８２】
産生バイオリアクターにおける細胞生存度を改善する方法
産生バイオリアクター（例えば、本明細書に記載される産生バイオリアクターのいずれか）における細胞生存度を改善する方法であって、（ａ）試験培養容器における複数の試験条件下での細胞生存度を決定する工程であって、複数の条件は、パラメーターのセットによって規定される、工程；（ｂ）試験培養容器における複数の条件下での細胞生存度に基づいて、産生バイオリアクターにおける細胞生存度にとって最適な条件を選択する工程；および（ｃ）選択された条件下で、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程、を含む方法もまた、本明細書で提供される。
【０１８３】
これらの方法の一部の実施形態では、パラメーターのセットは、剪断応力、感作剤（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の感作剤のいずれか）の濃度および保護剤（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の保護剤のいずれか）の濃度を含む、それらから本質的になる、またはそれらからなる。これらの方法の一部の実施形態では、複数の試験条件は、完全実施要因スクリーニングおよび／または内接中心複合計画に基づいて選択される。これらの方法の一部の実施形態では、感作剤は、消泡剤（例えば、ポリジメチルシロキサンベースの消泡剤、シメチコン、または本明細書に記載されるもしくは当該分野で公知の任意の他の消泡剤）である。
【０１８４】
これらの方法の一部の実施形態では、試験培養容器（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の試験培養容器のいずれか）は、約５ｍＬ〜約５Ｌ（または本明細書に記載されるこの範囲の下位範囲のいずれか）の容量を有する。これらの方法の一部の実施形態では、試験培養容器は、振盪フラスコ、例えば、バッフル付き振盪フラスコ（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知のバッフル付き振盪フラスコのいずれか）である。
【０１８５】
これらの方法の一部の実施形態では、産生バイオリアクター（例えば、本明細書に記載される産生バイオリアクターのいずれか）は、約５Ｌ〜約２０，０００Ｌ（または本明細書に記載されるこの範囲の下位範囲のいずれか）の容量を有する。一部の例では、産生バイオリアクターは、灌流バイオリアクターである。他の例では、産生バイオリアクターは、流加バイオリアクターである。
【０１８６】
一部の実施形態では、工程（ｃ）は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１％／日、２％／日、３％／日、４％／日、５％／日、６％／日、７％／日、８％／日、９％／日、１０％／日、１１％／日、１２％／日、１３％／日、１４％／日、１５％／日、１６％／日、１７％／日、１８％／日、１９％／日、２０％／日、２１％／日、２２％／日、２３％／日、２４％／日、２５％／日、２６％／日、２７％／日、２８％／日、２９％／日、３０％／日、３１％／日、３２％／日、３３％／日、３４％／日、３５％／日、３６％／日、３７％／日、３８％／日、３９％／日または４０％／日未満の特異的細胞死亡率を生じる。一部の実施形態では、工程（ｃ）は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、約０．１％／日〜約４０％／日（または本明細書に記載されるこの範囲の下位範囲のいずれか）の特異的細胞死亡率を生じる。
【０１８７】
一部の実施形態では、工程（ｃ）は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１５０ｎＵ／細胞／日未満、１４５ｎＵ／細胞／日未満、１４０ｎＵ／細胞／日未満、１３５ｎＵ／細胞／日未満、１３０ｎＵ／細胞／日未満、１２５ｎＵ／細胞／日未満、１２０ｎＵ／細胞／日未満、１１５ｎＵ／細胞／日未満、１５０ｎＵ／細胞／日未満、１１０ｎＵ／細胞／日未満、１０５ｎＵ／細胞／日未満、１００ｎＵ／細胞／日未満、９５ｎＵ／細胞／日未満、９０ｎＵ／細胞／日未満、８５ｎＵ／細胞／日未満、８０ｎＵ／細胞／日未満、７５ｎＵ／細胞／日未満、７０ｎＵ／細胞／日未満、６５ｎＵ／細胞／日未満、６０ｎＵ／細胞／日未満、５５ｎＵ／細胞／日未満、５０ｎＵ／細胞／日未満、４５ｎＵ／細胞／日未満、４５ｎＵ／細胞／日未満、４０ｎＵ／細胞／日未満、３５ｎＵ／細胞／日未満、３０ｎＵ／細胞／日未満、２５ｎＵ／細胞／日未満、２０ｎＵ／細胞／日未満、１５ｎＵ／細胞／日未満、１０ｎＵ／細胞／日未満、５ｎＵ／細胞／日未満または１ｎＵ／細胞／日未満の細胞特異的ＬＤＨ産生を生じる。これらの方法の一部の実施形態では、工程（ｃ）は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、約０．１ｎＵ／細胞／日〜約１５０ｎＵ／細胞／日（または本明細書に記載されるこの範囲の下位範囲のいずれか）の細胞特異的ＬＤＨ産生を生じる。
【０１８８】
一部の実施形態では、工程（ｃ）は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１％／日よりも大きい、１．５％／日よりも大きい、２％／日よりも大きい、２．５％／日よりも大きい、３％／日よりも大きい、３．５％／日よりも大きい、４．０％／日よりも大きい、４．５％／日よりも大きい、５．０％／日よりも大きい、５．５％／日よりも大きい、６．０％／日よりも大きい、６．５％／日よりも大きい、７．０％／日よりも大きい、７．５％／日よりも大きい、８．０％／日よりも大きい、８．５％／日よりも大きい、９．０％／日よりも大きい、９．５％／日よりも大きい、１０．０％／日よりも大きい、１０．５％／日よりも大きい、１１．０％／日よりも大きい、１１．５％／日よりも大きい、１２．０％／日よりも大きい、１２．５％／日よりも大きい、１３．０％／日よりも大きい、１３．５％／日よりも大きい、１４．０％／日よりも大きい、１４．５％／日よりも大きい、１５．０％／日よりも大きい、１６％／日よりも大きい、１７％／日よりも大きい、１８％／日よりも大きい、１９％／日よりも大きい、２０％／日よりも大きい、２１％／日よりも大きい、２２％／日よりも大きい、２３％／日よりも大きい、２４％／日よりも大きい、２５％／日よりも大きい、３０％／日よりも大きい、３５％／日よりも大きい、４０％／日よりも大きい、４５％／日よりも大きい、５０％／日よりも大きい、５５％／日よりも大きい、６０％／日よりも大きい、６５％／日よりも大きい、７０％／日よりも大きい、７５％／日よりも大きい、８０％／日よりも大きい、８５％／日よりも大きい、９０％／日よりも大きい、９５％／日よりも大きい、１００％／日よりも大きい、１０５％／日よりも大きい、１１０％／日よりも大きい、１１５％／日よりも大きい、１２０％／日よりも大きい、１２５％／日よりも大きい、１３０％／日よりも大きい、１３５％／日よりも大きい、１４０％／日よりも大きい、１４５％／日よりも大きい、または１５０％／日よりも大きい見かけの成長速度を生じる。これらの方法の一部の実施形態では、工程（ｃ）は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、約０．１％／日〜約１５０％／日（または本明細書に記載されるこの範囲の下位範囲のいずれか）の見かけの成長速度を生じる。
【０１８９】
これらの方法の一部の実施形態では、細胞（例えば、本明細書に記載される細胞のいずれか）は、組換え治療タンパク質（例えば、本明細書に記載される組換え治療タンパク質のいずれか）をコードする核酸を含む。これらの方法の一部の実施形態は、組換え治療タンパク質を収集または回収する工程をさらに含む。これらの方法の一部の実施形態は、組換え治療タンパク質を精製する工程をさらに含む。これらの方法の一部の実施形態は、精製された組換え治療タンパク質を製剤化する工程をさらに含む。これらの方法の一部の実施形態では、細胞は、細菌（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の例示的な細菌のいずれか）、酵母細胞（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の例示的な酵母細胞のいずれか）または哺乳動物細胞（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の例示的な哺乳動物細胞のいずれか）である。
【０１９０】
これらの方法の一部の実施形態では、細胞生存度は、試験培養容器中の乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の濃度を測定することによって決定される。これらの方法の一部の実施形態では、試験培養容器は、バッフル付き振盪フラスコであり、複数の試験条件は、（ａ）約１２５ＲＰＭ〜約４００ＲＰＭ（または本明細書に記載されるこの範囲の下位範囲のいずれか）の回転式撹拌；（ｂ）約０ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍ（または本明細書に記載されるこの範囲の下位範囲のいずれか）の感作剤（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の感作剤のいずれか）の濃度；および（ｃ）約１ｇ／Ｌ〜約１０ｇ／Ｌ（または本明細書に記載されるこの範囲の下位範囲のいずれか）である保護剤（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の保護剤のいずれか）の濃度、のうち１つまたはそれ以上（例えば、２つまたは３つ）を含む（またはそれからなる）。これらの方法の一部の実施形態では、保護剤は、ポロクサマー（例えば、ポロクサマー−１８８、ポロクサマー−４０１、ポロクサマー−４０２またはポロクサマー−４０７）、ポロキサミン（例えば、ポロキサミン−９０４またはポロキサミン−９０８）またはプルロニックポリオールである。
【０１９１】
産生バイオリアクターにおける細胞生存度を予測するための方法
産生バイオリアクター（例えば、本明細書に記載される産生バイオリアクターのいずれか）における細胞生存度を予測する方法であって、（ａ）少なくとも２つ（例えば、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つ）のパラメーターを含むパラメーターのセットを選択する工程；（ｂ）試験培養容器（例えば、本明細書に記載される試験培養容器のいずれか）におけるパラメーターのセットによって規定される複数の試験条件下での細胞生存度を決定する工程；および（ｃ）試験培養容器における複数の条件下での細胞生存度に基づいて、産生バイオリアクターにおける細胞生存度を予測する工程、を含む方法もまた、本明細書で提供される。
【０１９２】
これらの方法の一部の実施形態では、パラメーターのセットは、剪断応力、感作剤（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の例示的な感作剤のいずれか）の濃度および保護剤（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の保護剤のいずれか）の濃度を含む、それらから本質的になる、またはそれらからなる。これらの方法の一部の実施形態では、複数の試験条件は、完全実施要因スクリーニングおよび／または内接中心複合計画に基づいて選択される。
【０１９３】
これらの方法の一部の実施形態では、感作剤は、消泡剤（例えば、ポリジメチルシロキサンベースの消泡剤、シメチコン、または本明細書に記載されるもしくは当該分野で公知の任意の他の消泡剤）である。
【０１９４】
これらの方法の一部の実施形態では、試験培養容器（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の試験培養容器のいずれか）は、約５ｍＬ〜約５Ｌ（または本明細書に記載されるこの範囲の下位範囲のいずれか）の容量を有する。これらの方法の一部の実施形態では、試験培養容器は、振盪フラスコ、例えば、バッフル付き振盪フラスコ（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知のバッフル付き振盪フラスコのいずれか）である。
【０１９５】
これらの方法の一部の実施形態では、産生バイオリアクター（例えば、本明細書に記載される産生バイオリアクターのいずれか）は、約５Ｌ〜約２０，０００Ｌ（または本明細書に記載されるこの範囲の下位範囲のいずれか）の容量を有する。一部の例では、産生バイオリアクターは、灌流バイオリアクターである。他の例では、産生バイオリアクターは、流加バイオリアクターである。
【０１９６】
これらの方法の一部の実施形態は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１％／日、２％／日、３％／日、４％／日、５％／日、６％／日、７％／日、８％／日、９％／日、１０％／日、１１％／日、１２％／日、１３％／日、１４％／日、１５％／日、１６％／日、１７％／日、１８％／日、１９％／日、２０％／日、２１％／日、２２％／日、２３％／日、２４％／日、２５％／日、２６％／日、２７％／日、２８％／日、２９％／日、３０％／日、３１％／日、３２％／日、３３％／日、３４％／日、３５％／日、３６％／日、３７％／日、３８％／日、３９％／日または４０％／日未満の特異的細胞死亡率を生じると予測される条件を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む。これらの方法の一部の実施形態は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、約０．１％／日〜約４０％／日（または本明細書に記載されるこの範囲の下位範囲のいずれか）の特異的細胞死亡率を生じると予測される条件を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む。
【０１９７】
これらの方法の一部の実施形態は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１５０ｎＵ／細胞／日未満、１４５ｎＵ／細胞／日未満、１４０ｎＵ／細胞／日未満、１３５ｎＵ／細胞／日未満、１３０ｎＵ／細胞／日未満、１２５ｎＵ／細胞／日未満、１２０ｎＵ／細胞／日未満、１１５ｎＵ／細胞／日未満、１５０ｎＵ／細胞／日未満、１１０ｎＵ／細胞／日未満、１０５ｎＵ／細胞／日未満、１００ｎＵ／細胞／日未満、９５ｎＵ／細胞／日未満、９０ｎＵ／細胞／日未満、８５ｎＵ／細胞／日未満、８０ｎＵ／細胞／日未満、７５ｎＵ／細胞／日未満、７０ｎＵ／細胞／日未満、６５ｎＵ／細胞／日未満、６０ｎＵ／細胞／日未満、５５ｎＵ／細胞／日未満、５０ｎＵ／細胞／日未満、４５ｎＵ／細胞／日未満、４５ｎＵ／細胞／日未満、４０ｎＵ／細胞／日未満、３５ｎＵ／細胞／日未満、３０ｎＵ／細胞／日未満、２５ｎＵ／細胞／日未満、２０ｎＵ／細胞／日未満、１５ｎＵ／細胞／日未満、１０ｎＵ／細胞／日未満、５ｎＵ／細胞／日未満、または１ｎＵ／細胞／日未満の細胞特異的ＬＤＨ産生を生じると予測される条件を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む。これらの方法の一部の実施形態は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、約０．１ｎＵ／細胞／日〜約１５０ｎＵ／細胞／日（または本明細書に記載されるこの範囲の下位範囲のいずれか）の細胞特異的ＬＤＨ産生を生じると予測される条件を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む。
【０１９８】
これらの方法の一部の実施形態は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１％／日よりも大きい、１．５％／日よりも大きい、２％／日よりも大きい、２．５％／日よりも大きい、３％／日よりも大きい、３．５％／日よりも大きい、４．０％／日よりも大きい、４．５％／日よりも大きい、５．０％／日よりも大きい、５．５％／日よりも大きい、６．０％／日よりも大きい、６．５％／日よりも大きい、７．０％／日よりも大きい、７．５％／日よりも大きい、８．０％／日よりも大きい、８．５％／日よりも大きい、９．０％／日よりも大きい、９．５％／日よりも大きい、１０．０％／日よりも大きい、１０．５％／日よりも大きい、１１．０％／日よりも大きい、１１．５％／日よりも大きい、１２．０％／日よりも大きい、１２．５％／日よりも大きい、１３．０％／日よりも大きい、１３．５％／日よりも大きい、１４．０％／日よりも大きい、１４．５％／日よりも大きい、１５．０％／日よりも大きい、１６％／日よりも大きい、１７％／日よりも大きい、１８％／日よりも大きい、１９％／日よりも大きい、２０％／日よりも大きい、２１％／日よりも大きい、２２％／日よりも大きい、２３％／日よりも大きい、２４％／日よりも大きい、２５％／日よりも大きい、３０％／日よりも大きい、３５％／日よりも大きい、４０％／日よりも大きい、４５％／日よりも大きい、５０％／日よりも大きい、５５％／日よりも大きい、６０％／日よりも大きい、６５％／日よりも大きい、７０％／日よりも大きい、７５％／日よりも大きい、８０％／日よりも大きい、８５％／日よりも大きい、９０％／日よりも大きい、９５％／日よりも大きい、１００％／日よりも大きい、１０５％／日よりも大きい、１１０％／日よりも大きい、１１５％／日よりも大きい、１２０％／日よりも大きい、１２５％／日よりも大きい、１３０％／日よりも大きい、１３５％／日よりも大きい、１４０％／日よりも大きい、１４５％／日よりも大きい、または１５０％／日よりも大きい見かけの成長速度を生じると予測される条件を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む。これらの方法の一部の実施形態は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、約０．１％／日〜約１５０％／日（または本明細書に記載されるこの範囲の下位範囲のいずれか）の見かけの成長速度を生じると予測される条件を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む。
【０１９９】
これらの方法の一部の実施形態では、細胞（例えば、本明細書に記載される細胞のいずれか）は、組換え治療タンパク質（例えば、本明細書に記載される組換え治療タンパク質のいずれか）をコードする核酸を含む。これらの方法の一部の実施形態は、組換え治療タンパク質を収集または回収する工程をさらに含む。これらの方法の一部の実施形態は、組換え治療タンパク質を精製する工程をさらに含む。これらの方法の一部の実施形態は、精製された組換え治療タンパク質を製剤化する工程をさらに含む。これらの方法の一部の実施形態では、細胞は、細菌（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の例示的な細菌のいずれか）、酵母細胞（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の例示的な酵母細胞のいずれか）または哺乳動物細胞（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の例示的な哺乳動物細胞のいずれか）である。
【０２００】
これらの方法の一部の実施形態では、細胞生存度は、試験培養容器中の乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の濃度を測定することによって決定される。これらの方法の一部の実施形態では、試験培養容器は、バッフル付き振盪フラスコであり、複数の試験条件は、（ａ）約１２５ＲＰＭ〜約４００ＲＰＭ（または本明細書に記載されるこの範囲の下位範囲のいずれか）の回転式撹拌；（ｂ）約０ｐｐｍ〜約１２０ｐｐｍ（または本明細書に記載されるこの範囲の下位範囲のいずれか）の感作剤（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の感作剤のいずれか）の濃度；および（ｃ）約１ｇ／Ｌ〜約１０ｇ／Ｌ（または本明細書に記載されるこの範囲の下位範囲のいずれか）である保護剤（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の保護剤のいずれか）の濃度、のうち１つまたはそれ以上（例えば、２つまたは３つ）を含む（またはそれからなる）。これらの方法の一部の実施形態では、保護剤は、ポロクサマー（例えば、ポロクサマー−１８８、ポロクサマー−４０１、ポロクサマー−４０２またはポロクサマー−４０７）、ポロキサミン（例えば、ポロキサミン−９０４またはポロキサミン−９０８）またはプルロニックポリオールである。
【０２０１】
産生バイオリアクターにおいて細胞を培養するための方法
産生バイオリアクターにおいて細胞（例えば、本明細書に記載される細胞のいずれか）を培養する方法であって、以下の条件：
（ａ）産生バイオリアクターは、約１．０〜約１１０（例えば、約３．０〜約７．０、約４．０〜約６．０、約５．０〜約６．０、または約６．０）（例えば、約１．０〜約１１０、約１．０〜約９５、約１．０〜約９０、約１．０〜約８５、約１．０〜約８０、約１．０〜約７５、約１．０〜約７０、約１．０〜約６５、約１．０〜約６０、約１．０〜約５５、約１．０〜約５０、約１．０〜約４５、約１．０〜約４０、約１．０〜約３５、約１．０〜約３０、約１．０〜約２５、約１．０〜約２０、約１．０〜約１８、約１．０〜約１６、約１．０〜約１４、約１．０〜約１２、約１．０〜約１０、約１．０〜約９．０、約１．０〜約８．０、約１．０〜約７．０、約１．０〜約６．０、約１．０〜約５．０、約１．０〜約４．０、約１．０〜約３．０、約１．０〜約２．０、約２．０〜約１１０、約２．０〜約９５、約２．０〜約９０、約２．０〜約８５、約２．０〜約８０、約２．０〜約７５、約２．０〜約７０、約２．０〜約６５、約２．０〜約６０、約２．０〜約５５、約２．０〜約５０、約２．０〜約４５、約２．０〜約４０、約２．０〜約３５、約２．０〜約３０、約２．０〜約２５、約２．０〜約２０、約２．０〜約１８、約２．０〜約１６、約２．０〜約１４、約２．０〜約１２、約２．０〜約１０、約２．０〜約９．０、約２．０〜約８．０、約２．０〜約７．０、約２．０〜約６．０、約２．０〜約５．０、約２．０〜約４．０、約２．０〜約３．０、約３．０〜約１１０、約３．０〜約９５、約３．０〜約９０、約３．０〜約８５、約３．０〜約８０、約３．０〜約７５、約３．０〜約７０、約３．０〜約６５、約３．０〜約６０、約３．０〜約５５、約３．０〜約５０、約３．０〜約４５、約３．０〜約４０、約３．０〜約３５、約３．０〜約３０、約３．０〜約２５、約３．０〜約２０、約３．０〜約１８、約３．０〜約１６、約３．０〜約１４、約３．０〜約１２、約３．０〜約１０、約３．０〜約９．０、約３．０〜約８．０、約３．０〜約７．０、約３．０〜約６．０、約３．０〜約５．０、約３．０〜約４．０、約４．０〜約１１０、約４．０〜約９５、約４．０〜約９０、約４．０〜約８５、約４．０〜約８０、約４．０〜約７５、約４．０〜約７０、約４．０〜約６５、約４．０〜約６０、約４．０〜約５５、約４．０〜約５０、約４．０〜約４５、約４．０〜約４０、約４．０〜約３５、約４．０〜約３０、約４．０〜約２５、約４．０〜約２０、約４．０〜約１８、約４．０〜約１６、約４．０〜約１４、約４．０〜約１２、約４．０〜約１０、約４．０〜約９．０、約４．０〜約８．０、約４．０〜約７．０、約４．０〜約６．０、約４．０〜約５．０、約５．０〜約１１０、約５．０〜約９５、約５．０〜約９０、約５．０〜約８５、約５．０〜約８０、約５．０〜約７５、約５．０〜約７０、約５．０〜約６５、約５．０〜約６０、約５．０〜約５５、約５．０〜約５０、約５．０〜約４５、約５．０〜約４０、約５．０〜約３５、約５．０〜約３０、約５．０〜約２５、約５．０〜約２０、約５．０〜約１８、約５．０〜約１６、約５．０〜約１４、約５．０〜約１２、約５．０〜約１０、約５．０〜約９．０、約５．０〜約８．０、約５．０〜約７．０、約５．０〜約６．０、約６．０〜約１１０、約６．０〜約９５、約６．０〜約９０、約６．０〜約８５、約６．０〜約８０、約６．０〜約７５、約６．０〜約７０、約６．０〜約６５、約６．０〜約６０、約６．０〜約５５、約６．０〜約５０、約６．０〜約４５、約６．０〜約４０、約６．０〜約３５、約６．０〜約３０、約６．０〜約２５、約６．０〜約２０、約６．０〜約１８、約６．０〜約１６、約６．０〜約１４、約６．０〜約１２、約６．０〜約１０、約６．０〜約９．０、約６．０〜約８．０、約６．０〜約７．０、約７．０〜約１１０、約７．０〜約９５、約７．０〜約９０、約７．０〜約８５、約７．０〜約８０、約７．０〜約７５、約７．０〜約７０、約７．０〜約６５、約７．０〜約６０、約７．０〜約５５、約７．０〜約５０、約７．０〜約４５、約７．０〜約４０、約７．０〜約３５、約７．０〜約３０、約７．０〜約２５、約７．０〜約２０、約７．０〜約１８、約７．０〜約１６、約７．０〜約１４、約７．０〜約１２、約７．０〜約１０、約７．０〜約９．０、約７．０〜約８．０、約８．０〜約１１０、約８．０〜約９５、約８．０〜約９０、約８．０〜約８５、約８．０〜約８０、約８．０〜約７５、約８．０〜約７０、約８．０〜約６５、約８．０〜約６０、約８．０〜約５５、約８．０〜約５０、約８．０〜約４５、約８．０〜約４０、約８．０〜約３５、約８．０〜約３０、約８．０〜約２５、約８．０〜約２０、約８．０〜約１８、約８．０〜約１６、約８．０〜約１４、約８．０〜約１２、約８．０〜約１０、約８．０〜約９．０、約９．０〜約１１０、約９．０〜約９５、約９．０〜約９０、約９．０〜約８５、約９．０〜約８０、約９．０〜約７５、約９．０〜約７０、約９．０〜約６５、約９．０〜約６０、約９．０〜約５５、約９．０〜約５０、約９．０〜約４５、約９．０〜約４０、約９．０〜約３５、約９．０〜約３０、約９．０〜約２５、約９．０〜約２０、約９．０〜約１８、約９．０〜約１６、約９．０〜約１４、約９．０〜約１２、約９．０〜約１０、約１０〜約１１０、約１０〜約９５、約１０〜約９０、約１０〜約８５、約１０〜約８０、約１０〜約７５、約１０〜約７０、約１０〜約６５、約１０〜約６０、約１０〜約５５、約１０〜約５０、約１０〜約４５、約１０〜約４０、約１０〜約３５、約１０〜約３０、約１０〜約２５、約１０〜約２０、約１０〜約１８、約１０〜約１６、約１０〜約１４、約１０〜約１２、約１２〜約１１０、約１２〜約９５、約１２〜約９０、約１２〜約８５、約１２〜約８０、約１２〜約７５、約１２〜約７０、約１２〜約６５、約１２〜約６０、約１２〜約５５、約１２〜約５０、約１２〜約４５、約１２〜約４０、約１２〜約３５、約１２〜約３０、約１２〜約２５、約１２〜約２０、約１２〜約１８、約１２〜約１６、約１２〜約１４、約１４〜約１１０、約１４〜約９５、約１４〜約９０、約１４〜約８５、約１４〜約８０、約１４〜約７５、約１４〜約７０、約１４〜約６５、約１４〜約６０、約１４〜約５５、約１４〜約５０、約１４〜約４５、約１４〜約４０、約１４〜約３５、約１４〜約３０、約１４〜約２５、約１４〜約２０、約１４〜約１８、約１４〜約１６、約１６〜約１１０、約１６〜約９５、約１６〜約９０、約１６〜約８５、約１６〜約８０、約１６〜約７５、約１６〜約７０、約１６〜約６５、約１６〜約６０、約１６〜約５５、約１６〜約５０、約１６〜約４５、約１６〜約４０、約１６〜約３５、約１６〜約３０、約１６〜約２５、約１６〜約２０、約１６〜約１８、約１８〜約１１０、約１８〜約９５、約１８〜約９０、約１８〜約８５、約１８〜約８０、約１８〜約７５、約１８〜約７０、約１８〜約６５、約１８〜約６０、約１８〜約５５、約１８〜約５０、約１８〜約４５、約１８〜約４０、約１８〜約３５、約１８〜約３０、約１８〜約２５、約１８〜約２０、約２０〜約１１０、約２０〜約９５、約２０〜約９０、約２０〜約８５、約２０〜約８０、約２０〜約７５、約２０〜約７０、約２０〜約６５、約２０〜約６０、約２０〜約５５、約２０〜約５０、約２０〜約４５、約２０〜約４０、約２０〜約３５、約２０〜約３０、約２０〜約２５、約２５〜約１１０、約２５〜約９５、約２５〜約９０、約２５〜約８５、約２５〜約８０、約２５〜約７５、約２５〜約７０、約２５〜約６５、約２５〜約６０、約２５〜約５５、約２５〜約５０、約２５〜約４５、約２５〜約４０、約２５〜約３５、約２５〜約３０、約３０〜約１１０、約３０〜約９５、約３０〜約９０、約３０〜約８５、約３０〜約８０、約３０〜約７５、約３０〜約７０、約３０〜約６５、約３０〜約６０、約３０〜約５５、約３０〜約５０、約３０〜約４５、約３０〜約４０、約３０〜約３５、約３５〜約１１０、約３５〜約９５、約３５〜約９０、約３５〜約８５、約３５〜約８０、約３５〜約７５、約３５〜約７０、約３５〜約６５、約３５〜約６０、約３５〜約５５、約３５〜約５０、約３５〜約４５、約３５〜約４０、約４０〜約１１０、約４０〜約９５、約４０〜約９０、約４０〜約８５、約４０〜約８０、約４０〜約７５、約４０〜約７０、約４０〜約６５、約４０〜約６０、約４０〜約５５、約４０〜約５０、約４０〜約４５、約４５〜約１１０、約４５〜約９５、約４５〜約９０、約４５〜約８５、約４５〜約８０、約４５〜約７５、約４５〜約７０、約４５〜約６５、約４５〜約６０、約４５〜約５５、約４５〜約５０、約５０〜約１１０、約５０〜約９５、約５０〜約９０、約５０〜約８５、約５０〜約８０、約５０〜約７５、約５０〜約７０、約５０〜約６５、約５０〜約６０、約５０〜約５５、約５５〜約１１０、約５５〜約９５、約５５〜約９０、約５５〜約８５、約５５〜約８０、約５５〜約７５、約５５〜約７０、約５５〜約６５、約５５〜約６０、約６０〜約１１０、約６０〜約９５、約６０〜約９０、約６０〜約８５、約６０〜約８０、約６０〜約７５、約６０〜約７０、約６０〜約６５、約６５〜約１１０、約６５〜約９５、約６５〜約９０、約６５〜約８５、約６５〜約８０、約６５〜約７５、約６５〜約７０、約７０〜約１１０、約７０〜約９５、約７０〜約９０、約７０〜約８５、約７０〜約８０、約７０〜約７５、約７５〜約１１０、約７５〜約９５、約７５〜約９０、約７５〜約８５、約７５〜約８０、約８０〜約１１０、約８０〜約９５、約８０〜約９０、約８０〜約８５、約８５〜約１１０、約８５〜約９５、約８５〜約９０、約９０〜約１１０、約９０〜約９５、約９５〜約１１０、約９５〜約１０５、約９５〜約１００、約１００〜約１１０、約１００〜約１０５、または約１０５〜約１１０）のＰ／Ｖ（Ｗ／ｍ３）を有する；
（ｂ）産生バイオリアクターは、約０．０１〜約０．１０（例えば、約０．０２〜約０．０８、約０．０４〜約０．０６、または約０．０６）（例えば、約０．０１〜約０．１０、約０．０１〜約０．０９、約０．０１〜約０．０８、約０．０１〜約０．０７、約０．０１〜約０．０６、約０．０１〜約０．０５、約０．０１〜約０．０４、約０．０１〜約０．０３、約０．０１〜約０．０２、約０．０２〜約０．１０、約０．０２〜約０．０９、約０．０２〜約０．０８、約０．０２〜約０．０７、約０．０２〜約０．０６、約０．０２〜約０．０５、約０．０２〜約０．０４、約０．０２〜約０．０３、約０．０３〜約０．１０、約０．０３〜約０．０９、約０．０３〜約０．０８、約０．０３〜約０．０７、約０．０３〜約０．０６、約０．０３〜約０．０５、約０．０３〜約０．０４、約０．０４〜約０．１０、約０．０４〜約０．０９、約０．０４〜約０．０８、約０．０４〜約０．０７、約０．０４〜約０．０６、約０．０４〜約０．０５、約０．０５〜約０．１０、約０．０５〜約０．０９、約０．０５〜約０．０８、約０．０５〜約０．０７、約０．０５〜約０．０６、約０．０６〜約０．１０、約０．０６〜約０．０９、約０．０６〜約０．０８、約０．０６〜約０．０７、約０．０７〜約０．１０、約０．０７〜約０．０９、約０．０７〜約０．０８、約０．０８〜約０．１０、約０．０８〜約０．０９または約０．０９〜約０．１０）の空気容量／液体容量／分（ＶＶＭ）（分−１）を有する；
（ｃ）培地は、約０ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍ（または本明細書に記載されるこの範囲の下位範囲のいずれか）の濃度を有する感作剤（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の感作剤のいずれか）を含む；および
（ｄ）液体培養培地は、約１ｇ／Ｌ〜約１５ｇ／Ｌ（例えば、本明細書に記載されるこの範囲の下位範囲のいずれか、例えば、約１ｇ／Ｌ〜約１５ｇ／Ｌ、約１ｇ／Ｌ〜約１４ｇ／Ｌ、約１ｇ／Ｌ〜約１３ｇ／Ｌ、約１ｇ／Ｌ〜約１２ｇ／Ｌ、約１ｇ／Ｌ〜約１１ｇ／Ｌ、約２ｇ／Ｌ〜約１５ｇ／Ｌ、約２ｇ／Ｌ〜約１４ｇ／Ｌ、約２ｇ／Ｌ〜約１３ｇ／Ｌ、約２ｇ／Ｌ〜約１２ｇ／Ｌ、約２ｇ／Ｌ〜約１１ｇ／Ｌ、約３ｇ／Ｌ〜約１５ｇ／Ｌ、約３ｇ／Ｌ〜約１４ｇ／Ｌ、約３ｇ／Ｌ〜約１３ｇ／Ｌ、約３ｇ／Ｌ〜約１２ｇ／Ｌ、約３ｇ／Ｌ〜約１１ｇ／Ｌ、約４ｇ／Ｌ〜約１５ｇ／Ｌ、約４ｇ／Ｌ〜約１４ｇ／Ｌ、約４ｇ／Ｌ〜約１３ｇ／Ｌ、約４ｇ／Ｌ〜約１２ｇ／Ｌ、約４ｇ／Ｌ〜約１１ｇ／Ｌ、約５ｇ／Ｌ〜約１５ｇ／Ｌ、約５ｇ／Ｌ〜約１４ｇ／Ｌ、約５ｇ／Ｌ〜約１３ｇ／Ｌ、約５ｇ／Ｌ〜約１２ｇ／Ｌ、約５ｇ／Ｌ〜約１１ｇ／Ｌ、約６ｇ／Ｌ〜約１５ｇ／Ｌ、約６ｇ／Ｌ〜約１４ｇ／Ｌ、約６ｇ／Ｌ〜約１３ｇ／Ｌ、約６ｇ／Ｌ〜約１２ｇ／Ｌ、約６ｇ／Ｌ〜約１１ｇ／Ｌ、約７ｇ／Ｌ〜約１５ｇ／Ｌ、約７ｇ／Ｌ〜約１４ｇ／Ｌ、約７ｇ／Ｌ〜約１３ｇ／Ｌ、約７ｇ／Ｌ〜約１２ｇ／Ｌ、約７ｇ／Ｌ〜約１１ｇ／Ｌ、約８ｇ／Ｌ〜約１５ｇ／Ｌ、約８ｇ／Ｌ〜約１４ｇ／Ｌ、約８ｇ／Ｌ〜約１３ｇ／Ｌ、約８ｇ／Ｌ〜約１２ｇ／Ｌ、約８ｇ／Ｌ〜約１１ｇ／Ｌ、約９ｇ／Ｌ〜約１５ｇ／Ｌ、約９ｇ／Ｌ〜約１４ｇ／Ｌ、約９ｇ／Ｌ〜約１３ｇ／Ｌ、約９ｇ／Ｌ〜約１２ｇ／Ｌ、約９ｇ／Ｌ〜約１１ｇ／Ｌ、約１０ｇ／Ｌ〜約１５ｇ／Ｌ、約１０ｇ／Ｌ〜約１４ｇ／Ｌ、約１０ｇ／Ｌ〜約１３ｇ／Ｌ、約１０ｇ／Ｌ〜約１２ｇ／Ｌ、約１０ｇ／Ｌ〜約１１ｇ／Ｌ、約１１ｇ／Ｌ〜約１５ｇ／Ｌ、約１１ｇ／Ｌ〜約１４ｇ／Ｌ、約１１ｇ／Ｌ〜約１３ｇ／Ｌ、約１１ｇ／Ｌ〜約１２ｇ／Ｌ、約１２ｇ／Ｌ〜約１５ｇ／Ｌ、約１２ｇ／Ｌ〜約１４ｇ／Ｌ、約１２ｇ／Ｌ〜約１３ｇ／Ｌ、約１３ｇ／Ｌ〜約１５ｇ／Ｌ、約１３ｇ／Ｌ〜約１４ｇ／Ｌ、または約１４ｇ／Ｌ〜約１５ｇ／Ｌ）である濃度を有する保護剤（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の保護剤のいずれか）を含む
のうち１つまたはそれ以上（例えば、２つ、３つまたは４つ）の下で、液体培養培地において細胞を培養する工程を含む、方法もまた、本明細書で提供される。
【０２０２】
最適化された条件下では、特異的細胞死亡率は、１％／日、２％／日、３％／日、４％／日、５％／日、６％／日、７％／日、８％／日、９％／日、１０％／日、１１％／日、１２％／日、１３％／日、１４％／日、１５％／日、１６％／日、１７％／日、１８％／日、１９％／日、２０％／日、２１％／日、２２％／日、２３％／日、２４％／日、２５％／日、２６％／日、２７％／日、２８％／日、２９％／日、３０％／日、３１％／日、３２％／日、３３％／日、３４％／日、３５％／日、３６％／日、３７％／日、３８％／日、３９％／日もしくは４０％／日未満であり得る、または１％／日、２％／日、３％／日、４％／日、５％／日、６％／日、７％／日、８％／日、９％／日、１０％／日、１１％／日、１２％／日、１３％／日、１４％／日、１５％／日、１６％／日、１７％／日、１８％／日、１９％／日、２０％／日、２１％／日、２２％／日、２３％／日、２４％／日、２５％／日、２６％／日、２７％／日、２８％／日、２９％／日、３０％／日、３１％／日、３２％／日、３３％／日、３４％／日、３５％／日、３６％／日、３７％／日、３８％／日、３９％／日もしくは４０％／日未満であると予測することができる。最適化された条件下では、特異的細胞死亡率は、約０．１％〜約４０％（または本明細書に記載されるこの範囲の下位範囲のいずれか）であり得る。
【０２０３】
一部の実施形態では、細胞生存度は、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の濃度を測定することによって決定することができる。細胞特異的ＬＤＨ産生（ｎＵ／細胞／日）は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０もしくは２００未満（例えば、１５０）であり得る、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０もしくは２００未満（例えば、１５０）であると予測することができる。一部の実施形態では、ＬＤＨ産生（ｎＵ／細胞／日）は、約０．１〜約２００（例えば、本明細書に記載されるこの範囲の下位範囲のいずれか、例えば、約０．１〜約２００、約０．１〜約１９０、約０．１〜約１８０、約０．１〜約１７０、約０．１〜約１６０、約０．５〜約２００、約０．５〜約１９０、約０．５〜約１８０、約０．５〜約１７０、約０．５〜約１６０、約１．０〜約２００、約１．０〜約１９０、約１．０〜約１８０、約１．０〜約１７０、約１．０〜約１６０、約２．５〜約２００、約２．５〜約１９０、約２．５〜約１８０、約２．５〜約１７０、約２．５〜約１６０、約５．０〜約２００、約５．０〜約１９０、約５．０〜約１８０、約５．０〜約１７０、約５．０〜約１６０、約１０〜約２００、約１０〜約１９０、約１０〜約１８０、約１０〜約１７０、約１０〜約１６０、約２０〜約２００、約２０〜約１９０、約２０〜約１８０、約２０〜約１７０、約２０〜約１６０、約３０〜約２００、約３０〜約１９０、約３０〜約１８０、約３０〜約１７０、約３０〜約１６０、約４０〜約２００、約４０〜約１９０、約４０〜約１８０、約４０〜約１７０、約４０〜約１６０、約５０〜約２００、約５０〜約１９０、約５０〜約１８０、約５０〜約１７０、約５０〜約１６０、約６０〜約２００、約６０〜約１９０、約６０〜約１８０、約６０〜約１７０、約６０〜約１６０、約７０〜約２００、約７０〜約１９０、約７０〜約１８０、約７０〜約１７０、約７０〜約１６０、約８０〜約２００、約８０〜約１９０、約８０〜約１８０、約８０〜約１７０、約８０〜約１６０、約９０〜約２００、約９０〜約１９０、約９０〜約１８０、約９０〜約１７０、約９０〜約１６０、約１００〜約２００、約１００〜約１９０、約１００〜約１８０、約１００〜約１７０、約１００〜約１６０、約１１０〜約２００、約１１０〜約１９０、約１１０〜約１８０、約１１０〜約１７０、約１１０〜約１６０、約１２０〜約２００、約１２０〜約１９０、約１２０〜約１８０、約１２０〜約１７０、約１２０〜約１６０、約１３０〜約２００、約１３０〜約１９０、約１３０〜約１８０、約１３０〜約１７０、約１３０〜約１６０、約１４０〜約２００、約１４０〜約１９０、約１４０〜約１８０、約１４０〜約１７０、約１４０〜約１６０、約１５０〜約２００、約１５０〜約１９０、約１５０〜約１８０、約１５０〜約１７０、約１５０〜約１６０、約１６０〜約２００、約１６０〜約１９０、約１６０〜約１８０、約１６０〜約１７０、約１７０〜約２００、約１７０〜約１９０、約１７０〜約１８０、約１８０〜約２００、約１８０〜約１９０、または約１９０〜約２００）であり得る。
【０２０４】
一部の実施形態では、見かけの成長速度は、１％／日よりも大きい、１．５％／日よりも大きい、２％／日よりも大きい、２．５％／日よりも大きい、３％／日よりも大きい、３．５％／日よりも大きい、４．０％／日よりも大きい、４．５％／日よりも大きい、５．０％／日よりも大きい、５．５％／日よりも大きい、６．０％／日よりも大きい、６．５％／日よりも大きい、７．０％／日よりも大きい、７．５％／日よりも大きい、８．０％／日よりも大きい、８．５％／日よりも大きい、９．０％／日よりも大きい、９．５％／日よりも大きい、１０．０％／日よりも大きい、１０．５％／日よりも大きい、１１．０％／日よりも大きい、１１．５％／日よりも大きい、１２．０％／日よりも大きい、１２．５％／日よりも大きい、１３．０％／日よりも大きい、１３．５％／日よりも大きい、１４．０％／日よりも大きい、１４．５％／日よりも大きい、１５．０％／日よりも大きい、１６％／日よりも大きい、１７％／日よりも大きい、１８％／日よりも大きい、１９％／日よりも大きい、２０％／日よりも大きい、２１％／日よりも大きい、２２％／日よりも大きい、２３％／日よりも大きい、２４％／日よりも大きい、２５％／日よりも大きい、３０％／日よりも大きい、３５％／日よりも大きい、４０％／日よりも大きい、４５％／日よりも大きい、５０％／日よりも大きい、５５％／日よりも大きい、６０％／日よりも大きい、６５％／日よりも大きい、７０％／日よりも大きい、７５％／日よりも大きい、８０％／日よりも大きい、８５％／日よりも大きい、９０％／日よりも大きい、９５％／日よりも大きい、１００％／日よりも大きい、１０５％／日よりも大きい、１１０％／日よりも大きい、１１５％／日よりも大きい、１２０％／日よりも大きい、１２５％／日よりも大きい、１３０％／日よりも大きい、１３５％／日よりも大きい、１４０％／日よりも大きい、１４５％／日よりも大きい、もしくは１５０％／日よりも大きい場合がある、または１％／日よりも大きい、１．５％／日よりも大きい、２％／日よりも大きい、２．５％／日よりも大きい、３％／日よりも大きい、３．５％／日よりも大きい、４．０％／日よりも大きい、４．５％／日よりも大きい、５．０％／日よりも大きい、５．５％／日よりも大きい、６．０％／日よりも大きい、６．５％／日よりも大きい、７．０％／日よりも大きい、７．５％／日よりも大きい、８．０％／日よりも大きい、８．５％／日よりも大きい、９．０％／日よりも大きい、９．５％／日よりも大きい、１０．０％／日よりも大きい、１０．５％／日よりも大きい、１１．０％／日よりも大きい、１１．５％／日よりも大きい、１２．０％／日よりも大きい、１２．５％／日よりも大きい、１３．０％／日よりも大きい、１３．５％／日よりも大きい、１４．０％／日よりも大きい、１４．５％／日よりも大きい、１５．０％／日よりも大きい、１６％／日よりも大きい、１７％／日よりも大きい、１８％／日よりも大きい、１９％／日よりも大きい、２０％／日よりも大きい、２１％／日よりも大きい、２２％／日よりも大きい、２３％／日よりも大きい、２４％／日よりも大きい、２５％／日よりも大きい、３０％／日よりも大きい、３５％／日よりも大きい、４０％／日よりも大きい、４５％／日よりも大きい、５０％／日よりも大きい、５５％／日よりも大きい、６０％／日よりも大きい、６５％／日よりも大きい、７０％／日よりも大きい、７５％／日よりも大きい、８０％／日よりも大きい、８５％／日よりも大きい、９０％／日よりも大きい、９５％／日よりも大きい、１００％／日よりも大きい、１０５％／日よりも大きい、１１０％／日よりも大きい、１１５％／日よりも大きい、１２０％／日よりも大きい、１２５％／日よりも大きい、１３０％／日よりも大きい、１３５％／日よりも大きい、１４０％／日よりも大きい、１４５％／日よりも大きい、もしくは１５０％／日よりも大きいと予測することができる。一部の実施形態では、見かけの成長速度は、約０．１％／日〜約１５０％／日（例えば、本明細書に記載されるこの範囲の下位範囲のいずれか、例えば、約０．１％〜約４８％、約０．１％〜約４６％、約０．１％〜約４４％、約０．１％〜約４２％、約０．５％〜約５０％、約０．５％〜約４８％、約０．５％〜約４６％、約０．５％〜約４４％、約０．５％〜約４２％、約１．０％〜約５０％、約１．０％〜約４８％、約１．０％〜約４６％、約１．０％〜約４４％、約１．０％〜約４２％、約２．０％〜約５０％、約２．０％〜約４８％、約２．０％〜約４６％、約２．０％〜約４４％、約２．０％〜約４２％、約４．０％〜約５０％、約４．０％〜約４８％、約４．０％〜約４６％、約４．０％〜約４４％、約４．０％〜約４２％、約６．０％〜約５０％、約６．０％〜約４８％、約６．０％〜約４６％、約６．０％〜約４４％、約６．０％〜約４２％、約８．０％〜約５０％、約８．０％〜約４８％、約８．０％〜約４６％、約８．０％〜約４４％、約８．０％〜約４２％、約１０％〜約５０％、約１０％〜約４８％、約１０％〜約４６％、約１０％〜約４４％、約１０％〜約４２％、約１２％〜約５０％、約１２％〜約４８％、約１２％〜約４６％、約１２％〜約４４％、約１２％〜約４２％、約１４％〜約５０％、約１４％〜約４８％、約１４％〜約４６％、約１４％〜約４４％、約１４％〜約４２％、約１６％〜約５０％、約１６％〜約４８％、約１６％〜約４６％、約１６％〜約４４％、約１６％〜約４２％、約１８％〜約５０％、約１８％〜約４８％、約１８％〜約４６％、約１８％〜約４４％、約１８％〜約４２％、約２０％〜約５０％、約２０％〜約４８％、約２０％〜約４６％、約２０％〜約４４％、約２０％〜約４２％、約２２％〜約５０％、約２２％〜約４８％、約２２％〜約４６％、約２２％〜約４４％、約２２％〜約４２％、約２４％〜約５０％、約２４％〜約４８％、約２４％〜約４６％、約２４％〜約４４％、約２４％〜約４２％、約２６％〜約５０％、約２６％〜約４８％、約２６％〜約４６％、約２６％〜約４４％、約２６％〜約４２％、約２８％〜約５０％、約２８％〜約４８％、約２８％〜約４６％、約２８％〜約４４％、約２８％〜約４２％、約３０％〜約５０％、約３０％〜約４８％、約３０％〜約４６％、約３０％〜約４４％、約３０％〜約４２％、約３２％〜約５０％、約３２％〜約４８％、約３２％〜約４６％、約３２％〜約４４％、約３２％〜約４２％、約３４％〜約５０％、約３４％〜約４８％、約３４％〜約４６％、約３４％〜約４４％、約３４％〜約４２％、約３６％〜約５０％、約３６％〜約４８％、約３６％〜約４６％、約３６％〜約４４％、約３６％〜約４２％、約３８％〜約５０％、約３８％〜約４８％、約３８％〜約４６％、約３８％〜約４４％、約３８％〜約４２％、約４０％〜約５０％、約４０％〜約４８％、約４０％〜約４６％、約４０％〜約４４％、約４０％〜約４２％、約４２％〜約５０％、約４２％〜約４８％、約４２％〜約４６％、約４２％〜約４４％、約４４％〜約５０％、約４４％〜約４８％、約４４％〜約４６％、約４６％〜約５０％、約４６％〜約４８％、または約４８％〜約５０％）であり得る。
【０２０５】
これらの方法の一部の実施形態では、感作剤は、消泡剤（例えば、ポリジメチルシロキサンベースの消泡剤、シメチコン、または本明細書に記載されるもしくは当該分野で公知の他の消泡剤のいずれか）である。一部の実施形態では、保護剤は、ポロクサマー（例えば、ポロクサマー−１８８、ポロクサマー−４０１、ポロクサマー−４０２またはポロクサマー−４０７）、ポロキサミン（例えば、ポロキサミン−９０４またはポロキサミン−９０８）またはプルロニックポリオールである。
【０２０６】
これらの方法の一部の実施形態では、産生バイオリアクター（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の例示的な産生バイオリアクターのいずれか）は、約５Ｌ〜約２０，０００Ｌ（または本明細書に記載されるこの範囲の下位範囲のいずれか）の容量を有する。これらの方法の一部の実施形態では、産生バイオリアクターは、灌流バイオリアクターである。これらの方法の一部の実施形態では、産生バイオリアクターは、流加バイオリアクターである。
【０２０７】
一部の実施形態では、この方法は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１％／日、２％／日、３％／日、４％／日、５％／日、６％／日、７％／日、８％／日、９％／日、１０％／日、１１％／日、１２％／日、１３％／日、１４％／日、１５％／日、１６％／日、１７％／日、１８％／日、１９％／日、２０％／日、２１％／日、２２％／日、２３％／日、２４％／日、２５％／日、２６％／日、２７％／日、２８％／日、２９％／日、３０％／日、３１％／日、３２％／日、３３％／日、３４％／日、３５％／日、３６％／日、３７％／日、３８％／日、３９％／日または４０％／日未満の特異的細胞死亡率を生じる。一部の実施形態では、この方法は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、約０．１％／日〜約４０％／日（または本明細書に記載されるこの範囲の下位範囲のいずれか）の特異的細胞死亡率を生じる。
【０２０８】
一部の実施形態では、この方法は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１５０ｎＵ／細胞／日未満、１４５ｎＵ／細胞／日未満、１４０ｎＵ／細胞／日未満、１３５ｎＵ／細胞／日未満、１３０ｎＵ／細胞／日未満、１２５ｎＵ／細胞／日未満、１２０ｎＵ／細胞／日未満、１１５ｎＵ／細胞／日未満、１５０ｎＵ／細胞／日未満、１０５ｎＵ／細胞／日未満、１００ｎＵ／細胞／日未満、９５ｎＵ／細胞／日未満、９０ｎＵ／細胞／日未満、８５ｎＵ／細胞／日未満、８０ｎＵ／細胞／日未満、７５ｎＵ／細胞／日未満、７０ｎＵ／細胞／日未満、６５ｎＵ／細胞／日未満、６０ｎＵ／細胞／日未満、５５ｎＵ／細胞／日未満、５０ｎＵ／細胞／日未満、４５ｎＵ／細胞／日未満、４５ｎＵ／細胞／日未満、４０ｎＵ／細胞／日未満、３５ｎＵ／細胞／日未満、３０ｎＵ／細胞／日未満、２５ｎＵ／細胞／日未満、２０ｎＵ／細胞／日未満、１５ｎＵ／細胞／日未満、１０ｎＵ／細胞／日未満、５ｎＵ／細胞／日未満または１ｎＵ／細胞／日未満の細胞特異的ＬＤＨ産生を生じる。これらの方法の一部の実施形態では、この方法は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、約０．１ｎＵ／細胞／日〜約１５０ｎＵ／細胞／日（または本明細書に記載されるこの範囲の下位範囲のいずれか）の細胞特異的ＬＤＨ産生を生じる。
【０２０９】
一部の実施形態では、この方法は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、１％／日よりも大きい、１．５％／日よりも大きい、２％／日よりも大きい、２．５％／日よりも大きい、３％／日よりも大きい、３．５％／日よりも大きい、４．０％／日よりも大きい、４．５％／日よりも大きい、５．０％／日よりも大きい、５．５％／日よりも大きい、６．０％／日よりも大きい、６．５％／日よりも大きい、７．０％／日よりも大きい、７．５％／日よりも大きい、８．０％／日よりも大きい、８．５％／日よりも大きい、９．０％／日よりも大きい、９．５％／日よりも大きい、１０．０％／日よりも大きい、１０．５％／日よりも大きい、１１．０％／日よりも大きい、１１．５％／日よりも大きい、１２．０％／日よりも大きい、１２．５％／日よりも大きい、１３．０％／日よりも大きい、１３．５％／日よりも大きい、１４．０％／日よりも大きい、１４．５％／日よりも大きい、１５．０％／日よりも大きい、１６％／日よりも大きい、１７％／日よりも大きい、１８％／日よりも大きい、１９％／日よりも大きい、２０％／日よりも大きい、２１％／日よりも大きい、２２％／日よりも大きい、２３％／日よりも大きい、２４％／日よりも大きい、２５％／日よりも大きい、３０％／日よりも大きい、３５％／日よりも大きい、４０％／日よりも大きい、４５％／日よりも大きい、５０％／日よりも大きい、５５％／日よりも大きい、６０％／日よりも大きい、６５％／日よりも大きい、７０％／日よりも大きい、７５％／日よりも大きい、８０％／日よりも大きい、８５％／日よりも大きい、９０％／日よりも大きい、９５％／日よりも大きい、１００％／日よりも大きい、１０５％／日よりも大きい、１１０％／日よりも大きい、１１５％／日よりも大きい、１２０％／日よりも大きい、１２５％／日よりも大きい、１３０％／日よりも大きい、１３５％／日よりも大きい、１４０％／日よりも大きい、１４５％／日よりも大きい、または１５０％／日よりも大きい見かけの成長速度を生じる。これらの方法の一部の実施形態では、この方法は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、約０．１％／日〜約１５０％／日（または本明細書に記載されるこの範囲の下位範囲のいずれか）の見かけの成長速度を生じる。
【０２１０】
これらの方法の一部の実施形態では、細胞（例えば、本明細書に記載される細胞のいずれか）は、組換え治療タンパク質（例えば、本明細書に記載される組換え治療タンパク質のいずれか）をコードする核酸を含む。これらの方法の一部の実施形態は、組換え治療タンパク質を収集または回収する工程をさらに含む。これらの方法の一部の実施形態は、組換え治療タンパク質を精製する工程をさらに含む。これらの方法の一部の実施形態は、精製された組換え治療タンパク質を製剤化する工程をさらに含む。
【０２１１】
これらの方法の一部の実施形態では、細胞は、細菌（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の例示的な細菌のいずれか）、酵母細胞（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の酵母細胞のいずれか）または哺乳動物細胞（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の哺乳動物細胞のいずれか）である。
【０２１２】
これらの方法の一部の実施形態では、細胞生存度は、試験培養容器中の乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の濃度を測定することによって決定される。
【０２１３】
実施例
本発明は、特許請求の範囲に記載される本発明の範囲を限定しない、以下の実施例にさらに記載される。
【実施例１】
【０２１４】
試験培養容器のための内接中心複合計画と組み合わせた完全実施要因スクリーニング
回転式撹拌（ＲＰＭ３）、感作剤の濃度および保護剤の濃度を、パラメーターとして選択した。内接中心複合計画と組み合わせた完全実施要因計画を使用して、試験条件のセットを決定した（図７）。特異的ＬＤＨ産生値を、各試験条件において測定した。結果を使用して、選択されたパラメーターの推定された等高線を提供した。劣った成績の領域および運転失敗の領域を同定した（図９）。
【実施例２】
【０２１５】
ベンチトップ規模での特異的ＬＤＨ産生値を予測する
概念実証実験をベンチトップ規模で実施して、本明細書に記載される予測方法の精度を決定した。
【０２１６】
ベンチトップ規模での保護剤の濃度を、３つの異なるレベルに設定した。各レベルについて、２つのベンチトップ培養バイオリアクターを試験した。灌流プロセスに起因するピーク特異的ＬＤＨ産生値を測定し、予測された値に対して比較した。
【０２１７】
ベンチトップ規模実験からの実際の観察された値は、予測された値と非常に良好に合致した（Ｐ＜０．０００１、Ｒ２＝０．８４）（図１３Ａおよび図１３Ｃ）。これらの結果は、本明細書に記載される方法が、より大きい規模における種々のパラメーターの影響を予測するために首尾よく使用することができることを実証した。
【０２１８】
１日当たり３０〜４０ｐｐｍの消泡剤濃度範囲の消泡剤の添加を維持して実験を実施した。プルロニック濃度を、１．８ｇ／Ｌ（破線）、２．８ｇ／Ｌ（実線、黒塗り円）、３．８ｇ／Ｌ（実線、白抜き円）から調整した。実験を再現して実施した。これは、プルロニック濃度を変化させた場合の特異的ＬＤＨ産生を予測するモデルの能力を実証している。
【０２１９】
消泡剤の濃度を１日当たり３０ｐｐｍから８０ｐｐｍまで増加させる実験もまた実施した。予測されたＬＤＨ範囲は９０．１９〜９６．３８であり、これは、実際の観察されたＬＤＨ範囲９４．７４〜９９．３６と非常に良好に合致した（図１４）。これらの結果は、本明細書に記載される方法が、消泡剤の影響を予測するために首尾よく使用できることを示した。
【実施例３】
【０２２０】
産生規模での特異的ＬＤＨ産生値を予測する
実験を産生規模で実施して、本明細書に記載されるモデルの精度を決定した。
【０２２１】
３つの５０Ｌ産生バイオリアクターおよび２つの１００Ｌ産生バイオリアクターを試験した。これらの実験は、１．８ｇ／Ｌ〜５．８ｇ／Ｌの範囲のポロクサマー−１８８（プルロニック）濃度を試験した。
【０２２２】
特異的ＬＤＨ産生についての実際の観察された値は、これらの予測された値と良好に合致した（Ｐ＜０．０００１、Ｒ２＝０．８４）（図１５Ａおよび図１５Ｂ）。これらの結果は、本明細書に記載される方法が、産生規模（産生バイオリアクター規模）における選択されたパラメーターの影響を予測するために首尾よく使用できることを実証した。
【０２２３】
他の実施形態
その詳細な説明と併せて本発明を記載してきたが、上述の説明は例示を意図し、添付の特許請求の範囲によって規定される本発明の範囲を限定しない意図であることを理解すべきである。他の態様、利点および改変は、以下の特許請求の範囲の範囲内である。
【図１】
2021515584.tif 000004
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１４】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【国際調査報告】
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