(57)【要約】  本発明はｃ−ＭＥＴ阻害剤の結晶形、その塩形、並びに調製方法を開示し、具体的に、式（Ｉ）で表される化合物及びその塩形、結晶形に関し、更に、腫瘍を治療する医薬の製造における前記結晶形、及び塩形の使用を含む。    【化１】2021522265.tif 000027
2021522265.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：４．５４°±０．２°、１３．７０°±０．２°、１７．８４±０．２°、２１．２４°±０．２°及び２６．６２±０．２°において特徴的な回折ピークを有する、式（Ｉ）で表される化合物のＡ結晶形。
【化１】
2021522265.tif 000022
【請求項２】
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：４．５４°±０．２°、１３．７０°±０．２°、１５．１４±０．２°、１７．８４±０．２°、１８．４０°±０．２°、２１．２４°±０．２°、２４．０６°±０．２°、２６．６２±０．２°及び２７．４４±０．２°において特徴的な回折ピークを有する、請求項１に記載のＡ結晶形。
【請求項３】
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：４．５３８°、９．０２１°、１１．３００°、１３．６９９°、１５．１４１°、１６．６４０°、１７．８４０°、１８．３９９°、１９．０３９°、１９．６２０°、２０．４４１°、２１．２４１°、２２．５９８°、２４．０６０°、２４．９６２°、２５．６６０°、２６．６２１°、２７．４４０°、２８．２５８°、２９．１５９°、３１．０８１°、３２．４６５°、３４．７８０°、３５．４００°、３６．９２０°及び３８．７６０°において特徴的な回折ピークを有する、請求項１又は２に記載のＡ結晶形。
【請求項４】
示差走査熱量曲線は１７１．９０℃±３℃において一つの吸熱ピークの開始点を有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載のＡ結晶形。
【請求項５】
示差走査熱量曲線スペクトルは図２で示される通りである、請求項１〜４のいずれか一項に記載のＡ結晶形。
【請求項６】
熱重量分析曲線は２２３．２３℃±３℃の際に重量が０．１８７０％減少し、３０５．０６℃±３℃の際に重量が１０．２２％減少する、請求項１〜５のいずれか一項に記載のＡ結晶形。
【請求項７】
熱重量分析曲線スペクトルは図３で示される通りである、請求項１〜６のいずれか一項に記載のＡ結晶形。
【請求項８】
式（ＩＩ）で表される示化合物。
【化２】
2021522265.tif 000023
【請求項９】
粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：４．３４°±０．２°、１２．９９°±０．２°、１５．３５°±０．２°及び２５．５０°±０．２°において特徴的な回折ピークを有する、請求項８に記載の式（ＩＩ）で表される化合物のＢ結晶形。
【化３】
2021522265.tif 000024
【請求項１０】
粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：４．３４°±０．２°、６．５０°±０．２°、８．６５°±０．２°、１０．８２°±０．２°、１２．９９°±０．２°、１５．３５°±０．２°、１７．９６°±０．２°及び２５．５０°±０．２°において特徴的な回折ピークを有する、請求項９に記載のＢ結晶形。
【請求項１１】
粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：４．３３５°、６．５０２°、８．６４５°、１０．８１６°、１２．９８６°、１５．３４９°、１５．７８２°、１６．１０９°、１７．９５５°、１８．４４７°、１９．０５７°、１９．５３４°、１９．８１６°、２０．５３１°、２１．１６°、２２．２６５°、２２．７５２°、２３．９０７°、２４．４０７°、２５．４９９°、２６．２４８°、２６．８８６°、２７．７２５°、２８．００４°、２８．６５３°、２９．１２７°、２９．７７９°、３０．４３２°、３１．０６４°、３３．７３４°及び３７．０２°において特徴的な回折ピークを有する、請求項９又は１０に記載のＢ結晶形。
【請求項１２】
示差走査熱量曲線は４３．９８℃±３℃及び２１９．６４℃±３℃において吸熱ピークの開始点を有する、請求項９〜１１のいずれか一項に記載のＢ結晶形。
【請求項１３】
示差走査熱量曲線スペクトルは図５で示される通りである、請求項９〜１２のいずれか一項に記載のＢ結晶形。
【請求項１４】
熱重量分析曲線は７３．６４℃±３℃の際に重量が０．５２７０％減少し、２３０．９０℃±３℃の際に重量が１．５４２％減少する、請求項９〜１１のいずれか一項に記載のＢ結晶形。
【請求項１５】
熱重量分析曲線スペクトルは図６で示される通りである、請求項９〜１４のいずれか一項に記載のＢ結晶形。
【請求項１６】
式（ＩＩＩ）で表される示化合物。
【化４】
2021522265.tif 000025
【請求項１７】
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：６．９４°±０．２°、１９．０８°±０．２°、２１．０５°±０．２°及び２４．７３°±０．２°において特徴的な回折ピークを有する、請求項１６に記載の式（ＩＩＩ）で表される化合物のＣ結晶形。
【化５】
2021522265.tif 000026
【請求項１８】
粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：６．９４°±０．２°、９．９４°±０．２°、１７．２９°±０．２°、１８．０４°±０．２°、１９．０８°±０．２°、２１．０５°±０．２°、２４．１２°±０．２°及び２４．７３°±０．２°において特徴的な回折ピークを有する、請求項１７に記載のＣ結晶形。
【請求項１９】
粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：６．９４°、９．９４°、１３．３６°、１５．２７１°、１６．８３°、１７．２８６°、１８．０３８°、１８．７６７°、１９．０８２°、２０．６０５°、２１．０５４°、２１．８８４°、２２．６１５°、２３．２２８°、２４．１１８°、２４．７２８°、２５．１８２°、２５．８１３°、２８．１８２°、３０．７５７°、３１．４９８°、３３．３１８°、３３．７７°及び３４．５９５°において特徴的な回折ピークを有する、請求項１７又は１８に記載のＣ結晶形。
【請求項２０】
示差走査熱量曲線は１９８．１６℃±３℃において一つの吸熱ピークの開始点を有する、請求項１７〜１９のいずれか一項に記載のＣ結晶形。
【請求項２１】
示差走査熱量曲線スペクトルは図８で示される通りである、請求項１７〜２０のいずれか一項に記載のＣ結晶形。
【請求項２２】
熱重量分析曲線は２０４．７３℃±３℃の際に重量が０．４５４１％減少する、請求項１７〜１９のいずれか一項に記載のＣ結晶形。
【請求項２３】
熱重量分析曲線スペクトルは図９で示される通りである、請求項１７〜２２のいずれか一項に記載のＣ結晶形。
【請求項２４】
癌を治療する医薬の製造における請求項１〜２３のいずれか一項に記載の化合物又は結晶形の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は出願日が２０１８年４月２６日である中国特許出願番号２０１８１０３８７６９３．２の優先権を主張する。本出願は上記中国特許出願の全文を引用する。
【０００２】
本発明はｃ−ＭＥＴ阻害剤の結晶形、及びその塩形、並びに調製方法に関し、更に腫瘍を治療する医薬の製造における前記結晶形、及び塩形の使用を含む。
【背景技術】
【０００３】
プロトオンコジーンＭｅｔによってコードされるｃ−Ｍｅｔは、ＲＯＮサブファミリーに属する結合性の高い受容体チロシンキナーゼであり、散乱因子又は肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）の唯一の既知の受容体である。ＨＧＦはｃ−Ｍｅｔの細胞外ドメインに結合した後、ｃ−Ｍｅｔのリン酸化を誘導し、Ｃ末端多機能領域に、例えばＧＡＢ１（成長因子受容体結合タンパク質−１）、ＧＡＢ２（成長因子受容体結合タンパク質−２）等の様々な細胞間因子を収集し、更に、ＳＨＰ２、ＰＩ３Ｋ等の分子と引き付けてここで結合し、これによってＲＡＳ／ＭＡＰＫ、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路等を活性化して、細胞の成長、移動、増殖及び生存を調節する。ｃ−Ｍｅｔ経路の異常は、通常、腫瘍の発生及び転移を誘発し、例えば膀胱癌、胃癌、肺癌、乳癌等の様々なヒトの悪性腫瘍で、異常に高いレベルのｃ−Ｍｅｔが発現された。
【０００４】
これ以外に、ｃ−Ｍｅｔは複数のキナーゼ阻害剤に対する腫瘍の医薬に対する耐性にも関する。ｃ−Ｍｅｔは様々な膜受容体との間で相互作用（クロストーク）があり、複雑なネットワークシステムを形成する。ｃ−Ｍｅｔと接着受容体ＣＤ４４の間の相互作用は、シグナルペプチドの応答を増幅し、脳タンパク質受容体タンパク質との相互作用は、リガンド非依存性ＨＧＦのｃ−Ｍｅｔを活性化させ、侵入効果を高め、アポトーシス促進性受容体ＦＡＳとの間の相互作用は細胞のアポトーシスを加速し、例えばＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ等のような様々な受容体チロシンキナーゼとの作用は相互の活性化が調節され、血管新生プロセスが影響を受ける。ｃ−Ｍｅｔとこれらの膜受容体の間の相互作用は、腫瘍の発生と転移を促進し、薬剤耐性を誘発する。
【０００５】
現在、ｃ−Ｍｅｔ経路に対する抗腫瘍治療薬は２種類があり、１つは抗ＨＧＦ又はｃ−Ｍｅｔのモノクローナル抗体であり、もう１つはｃ−Ｍｅｔに対する小分子阻害剤である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
研究中又は臨床研究に入っているｃ−Ｍｅｔの小分子阻害剤には、ＰＦ−２３４１０６６、ＥＭＤ−１２１４０６３、ＸＬ−１８４又はＡＲＱ−１９７等がある。その中で、テポチニブは抗腫瘍活性が最も高く、様々なｃ−ＭＥＴの高発現の腫瘍細胞に対して非常に強い阻害効果があり（ｃ−ＭＥＴ酵素活性ＩＣ５０＝３．６７ｎＭ、ＭＨＣＣ９７−Ｈ細胞ＩＣ５０＝６．２ｎＭ）、現在、臨床第ＩＩ相研究段階に入った。しかし、テポチニブは高い選択性を有しているが、依然として代謝安定性が低く、生体内でのクリアランス率が高いという欠点がある。したがって、この欠点を補うために、代謝的に安定したｃ−Ｍｅｔ阻害剤が緊急に必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
発明の開示
本発明は、粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：４．５４°±０．２°、１３．７０°±０．２°、１７．８４±０．２°、２１．２４°±０．２°及び２６．６２±０．２°において特徴的な回折ピークを有する式（Ｉ）で表される化合物のＡ結晶形を提供する。
【化１】
2021522265.tif 000003
【０００８】
本発明の幾つかの実施態様において、前記Ａ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：４．５４°±０．２°、１３．７０°±０．２°、１５．１４±０．２°、１７．８４±０．２°、１８．４０°±０．２°、２１．２４°±０．２°、２４．０６°±０．２°、２６．６２±０．２°及び２７．４４±０．２°において特徴的な回折ピークを有する。
【０００９】
本発明の幾つかの実施態様において、前記Ａ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは図１で示される通りである。
【００１０】
本発明の幾つかの実施態様において、前記Ａ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：４．５３８°、９．０２１°、１１．３００°、１３．６９９°、１５．１４１°、１６．６４０°、１７．８４０°、１８．３９９°、１９．０３９°、１９．６２０°、２０．４４１°、２１．２４１°、２２．５９８°、２４．０６０°、２４．９６２°、２５．６６０°、２６．６２１°、２７．４４０°、２８．２５８°、２９．１５９°、３１．０８１°、３２．４６５°、３４．７８０°、３５．４００°、３６．９２０°及び３８．７６０°において特徴的な回折ピークを有する。
【００１１】
本発明の幾つかの実施態様において、前記Ａ結晶形のＸＲＰＤスペクトル解析データは表１に示す通りである。
【００１２】
【表１】
2021522265.tif 000004
【００１３】
本発明の幾つかの実施態様において、前記Ａ結晶形はＤＳＣによって特徴付けることができ、開始温度は１７１．９０℃であり、ピーク温度は１７３．０９℃である。
【００１４】
本発明の幾つかの実施態様において、前記Ａ結晶形の示差走査熱量曲線は１７１．９０℃±３℃において一つの吸熱ピークを有する。
【００１５】
本発明の幾つかの実施態様において、前記Ａ結晶形の示差走査熱量曲線スペクトルは図２で示される通りである。
【００１６】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記Ａ結晶形は、ＴＧＡによって特徴付けることもでき、ＴＧＡスペクトルは、２２３．２３℃に加熱する場合、重量が０．１８７０％減少し、３０５．０６℃に加熱する場合、重量が又１０．０３％減少し、２０５．０６℃以降からは、大幅な重量減少が現れることを示している。
【００１７】
本発明の幾つかの実施態様において、前記Ａ結晶形の熱重量分析曲線は２２３．２３℃±３℃の際に重量が０．１８７０％減少し、３０５．０６℃±３℃の際に重量が１０．２２％減少する。
【００１８】
本発明の幾つかの実施態様において、前記Ａ結晶形の熱重量分析曲線スペクトルは図３で示される通りである。
【００１９】
本発明の幾つかの実施態様において、前記Ａ結晶形の赤外線スペクトルは３０４６ｃｍ−１±５ｃｍ−１、２９３８ｃｍ−１±５ｃｍ−１、２９１４ｃｍ−１±５ｃｍ−１、２８８４ｃｍ−１±５ｃｍ−１、２８４９ｃｍ−１±５ｃｍ−１、２７８０ｃｍ−１±５ｃｍ−１、２７３４ｃｍ−１±５ｃｍ−１、２６７９ｃｍ−１±５ｃｍ−１、２２４２ｃｍ−１±５ｃｍ−１、１７３２ｃｍ−１±２ｃｍ−１、１７１６ｃｍ−１±２ｃｍ−１、１６７１ｃｍ−１±２ｃｍ−１、１６３１ｃｍ−１±２ｃｍ−１、１５９５ｃｍ−１±２ｃｍ−１、１５５６ｃｍ−１±２ｃｍ−１、１５４７ｃｍ−１±２ｃｍ−１、１５０７ｃｍ−１±２ｃｍ−１、１４８２ｃｍ−１±２ｃｍ−１、１３８７ｃｍ−１±２ｃｍ−１、１０７０ｃｍ−１±２ｃｍ−１及び１１９６ｃｍ−１±２ｃｍ−１における特徴的な吸収ピークを含む。
【００２０】
本発明は、更に、式（ＩＩ）で表される示化合物を提供する。
【化２】
2021522265.tif 000005
【００２１】
本発明は、更に、粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：４．３４°±０．２°、１２．９９°±０．２°、１５．３５°±０．２°及び２５．５０°±０．２°において特徴的な回折ピークを有する式（ＩＩ）で表される化合物のＢ結晶形を提供する。
【００２２】
本発明の幾つかの実施態様において、前記Ｂ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：４．３４°±０．２°、６．５０°±０．２°、８．６５°±０．２°、１０．８２°±０．２°、１２．９９°±０．２°、１５．３５°±０．２°、１７．９６°±０．２°及び２５．５０°±０．２°において特徴的な回折ピークを有する。
【００２３】
本発明の幾つかの実施態様において、前記Ｂ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは図４で示される通りである。
【００２４】
本発明の幾つかの実施態様において、前記Ｂ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：４．３３５°、６．５０２°、８．６４５°、１０．８１６°、１２．９８６°、１５．３４９°、１５．７８２°、１６．１０９°、１７．９５５°、１８．４４７°、１９．０５７°、１９．５３４°、１９．８１６°、２０．５３１°、２１．１６°、２２．２６５°、２２．７５２°、２３．９０７°、２４．４０７°、２５．４９９°、２６．２４８°、２６．８８６°、２７．７２５°、２８．００４°、２８．６５３°、２９．１２７°、２９．７７９°、３０．４３２°、３１．０６４°、３３．７３４°及び３７．０２°において特徴的な回折ピークを有する。
【００２５】
本発明の幾つかの実施態様において、前記Ｂ結晶形のＸＲＰＤスペクトル解析データは表２に示す通りである。
【００２６】
【表２】
2021522265.tif 000006
【００２７】
本発明の幾つかの実施態様において、前記Ｂ結晶形の示差走査熱量曲線は４３．９８℃±３℃及び２１９．６４℃±３℃において吸熱ピークを有する。
【００２８】
本発明の幾つかの実施態様において、前記Ｂ結晶形の示差走査熱量曲線スペクトルは図５で示される通りである。
【００２９】
本発明の幾つかの実施態様において、前記Ｂ結晶形の熱重量分析曲線は７３．６４℃±３℃の際に重量が０．５２７０％減少し、２３０．９０℃±３℃の際に重量が１．５４２％減少する。
【００３０】
本発明の幾つかの実施態様において、前記Ｂ結晶形の熱重量分析曲線スペクトルは図６で示される通りである。
【００３１】
本発明は、更に、式（ＩＩＩ）で表される示化合物を提供する。
【化３】
2021522265.tif 000007
【００３２】
本発明は、更に、粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：６．９４°±０．２°、１９．０８°±０．２°、２１．０５°±０．２°及び２４．７３°±０．２°において特徴的な回折ピークを有する式（ＩＩＩ）で表される化合物のＣ結晶形を提供する。
【００３３】
本発明の幾つかの実施態様において、前記Ｃ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：６．９４°±０．２°、９．９４°±０．２°、１７．２９°±０．２°、１８．０４°±０．２°、１９．０８°±０．２°、２１．０５°±０．２°、２４．１２°±０．２°及び２４．７３°±０．２°において特徴的な回折ピークを有する。
【００３４】
本発明の幾つかの実施態様において、前記Ｃ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは図７で示される通りである。
【００３５】
本発明の幾つかの実施態様において、前記Ｃ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：６．９４°、９．９４°、１３．３６°、１５．２７１°、１６．８３°、１７．２８６°、１８．０３８°、１８．７６７°、１９．０８２°、２０．６０５°、２１．０５４°、２１．８８４°、２２．６１５°、２３．２２８°、２４．１１８°、２４．７２８°、２５．１８２°、２５．８１３°、２８．１８２°、３０．７５７°、３１．４９８°、３３．３１８°、３３．７７°及び３４．５９５°において特徴的な回折ピークを有する。
【００３６】
本発明の幾つかの実施態様において、前記Ｃ結晶形のＸＲＰＤスペクトル解析データは表３に示す通りである。
【００３７】
【表３】
2021522265.tif 000008
【００３８】
本発明の幾つかの実施態様において、前記Ｃ結晶形の示差走査熱量曲線は１９８．１６℃±３℃において一つの吸熱ピークを有する。
【００３９】
本発明の幾つかの実施態様において、前記Ｃ結晶形の示差走査熱量曲線スペクトルは図８で示される通りである。
【００４０】
本発明の幾つかの実施態様において、前記Ｃ結晶形の熱重量分析曲線は２０４．７３℃±３℃の際に、重量が０．４５４１％減少する。
【００４１】
本発明の幾つかの実施態様において、前記Ｃ結晶形の熱重量分析曲線スペクトルは図９で示される通りである。
【００４２】
本発明は、更に、癌を治療する医薬の製造における前記化合物又は結晶形の使用を提供する。
【００４３】
本発明は、更に、癌を治療するために使用される前記化合物又は結晶形を提供する。
【００４４】
本発明は、更に、前記化合物又は結晶形を投与することで、癌を治療する方法を提供する。
【００４５】
本発明において、用語の癌は好ましくは肝臓癌である。
【００４６】
技術効果
本発明に記載の式（Ｉ）で表される化合物の塩形及び結晶形の製造工程が簡単で、かつ、前記結晶形は比較的に安定し、高温高湿度に耐え、製剤化に便利である。
【００４７】
定義及び説明
別途に説明しない限り、本明細書で用いられる以下の用語及び連語は以下の意味を含む。一つの特定の連語又は用語は、特別に定義されない場合、不確定又は不明瞭ではなく、普通の定義として理解されるべきである。本明細書で商品名が出た場合、相応の商品又はその活性成分を指す。
【００４８】
本発明の中間体化合物は当業者に熟知の様々な合成方法によって製造することができ、以下に挙げられた具体的な実施形態、ほかの化学合成方法と合わせた実施形態及び当業者に熟知の同等の代替方法を含み、好適な実施形態は本発明の実施例を含むが、これらに限定されない。
【００４９】
本発明の具体的な実施形態の化学反応は適切な溶媒で完成され、前記溶媒は本発明の化学変化及びそれに必要な試薬と材料に適するべきである。本発明の化合物を得るため、当業者が既存の実施形態に基づいて合成工程又は反応スキームを変更又は選択することが必要であることもある。
【００５０】
以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、これらの実施例は本発明の何らの制限にもならない。
【００５１】
本発明に使用されたすべての溶媒は市販品で、更に精製せずにそのままで使用してもよい。
【００５２】
本発明は下記の略語を使用する。
（Ｒ）−ＣＢＳ：（３ａＲ）−１−メチル−３，３−ジフェニル−３ａ，４，５，６−テトラヒドロピロロ［１，２−ｃ］［１，３，２］オキサゾボラン、
ＤＩＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン、
Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２：１，１´−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロリド、
Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２：ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）ジクロリド。
【００５３】
化合物は手作りで名付けられ、又はＣｈｅｍＤｒａｗ(R)ソフトウェアで名付けられ、市販化合物はカタログ名を用いる。
【００５４】
本発明の粉末Ｘ線回折（Ｘ−ｒａｙｐｏｗｄｅｒｄｉｆｆｒａｃｔｏｍｅｔｅｒ、ＸＲＰＤ）方法
計器の型番：ブルカーＤ８ａｄｖａｎｃｅＸ線回折計
測定方法：約１０〜２０ｍｇの試料をＸＲＰＤの検出に用いる。
詳細なＸＲＰＤパラメーターは下記の通りである。
Ｘ線管：Ｃｕ、ｋα、（λ＝１．５４０５６Å）
管電圧：４０ｋＶ、管電流：４０ｍＡ
発散スリット：０．６０ｍｍ
センサスリット：１０．５０ｍｍ
散乱防止スリット：７．１０ｍｍ
走査範囲：３又は４〜４０ｄｅｇ
ステップ角：０．０２ｄｅｇ
ステップ幅：０．１２秒
試料パン回転速度：１５ｒｐｍ
【００５５】
本発明の示差熱分析（ＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌＳｃａｎｎｉｎｇＣａｌｏｒｉｍｅｔｅｒ、ＤＳＣ）方法
計器の型番：ＴＡＤＳＣＱ２０００示差走査熱量計
測定方法：試料（０．５〜１ｍｇ）をＤＳＣアルミニウム製坩堝に量り取り測定を行い、５０ｍＬ／ｍｉｎのＮ２条件で、１０℃／ｍｉｎの昇温速度で、試料を室温（２５℃）から３００℃又は３５０℃まで加熱する。
【００５６】
本発明の熱重量分析（ＴｈｅｒｍａｌｇｒａｖｉｍｅｔｒｉｃＡｎａｌｙｚｅｒ、ＴＧＡ）方法
計器の型番：ＴＡＱ５０００熱重量分析計
測定方法：試料（２〜５ｍｇ）をＴＧＡ白金坩堝に量り取り測定を行い、２５ｍＬ／ｍｉｎのＮ２条件で、１０℃／ｍｉｎの昇温速度で、試料を室温（２５℃）から３００℃、３５０℃又は重量が２０％減少するまで加熱する。
【００５７】
本発明の動的水蒸気吸着機（ＤＶＳ）
計器の型番：ＤＶＳＡｄｖａｎｔａｇｅ−１（ＳＭＳ）
測定条件：約１０〜１５ｍｇの試料を測定に使用する。
平衡化ｄｍ／ｄｔ：０．０１％／ｍｉｎ：（時間：１０ｍｉｎ〜最長１８０ｍｉｎ）
乾燥：０％ＲＨで、１２０ｍｉｎ
ＲＨ（％）勾配の測定：１０％
ＲＨ（％）勾配の測定範囲：０％〜９０％〜０％
【００５８】
以下の表４は吸湿性の判断基準である。
【表４】
2021522265.tif 000009
【００５９】
本発明の高速液体クロマトグラフ（Ｈｉｇｈ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ、ＨＰＬＣ）方法
計器の型番：Ａｇｉｌｅｎｔ１２００高速液体クロマトグラフ
【００６０】
分析方法は以下の通りである。
【表５】
2021522265.tif 000010
【図面の簡単な説明】
【００６１】
【図１】図１は式（Ｉ）の化合物のＡ結晶形のＸＲＰＤスペクトルである。
【図２】図２は式（Ｉ）の化合物のＡ結晶形のＤＳＣスペクトルである。
【図３】図３は式（Ｉ）の化合物のＡ結晶形のＴＧＡスペクトルである。
【図４】図４は式（ＩＩ）の化合物のＢ結晶形のＸＲＰＤスペクトルである。
【図５】図５は式（ＩＩ）の化合物のＢ結晶形のＤＳＣスペクトルである。
【図６】図６は式（ＩＩ）の化合物のＢ結晶形のＴＧＡスペクトルである。
【図７】図７は式（ＩＩＩ）の化合物のＣ結晶形のＸＲＰＤスペクトルである。
【図８】図８は式（ＩＩＩ）の化合物のＣ結晶形のＤＳＣスペクトルである。
【図９】図９は式（ＩＩＩ）の化合物のＣ結晶形のＴＧＡスペクトルである。
【発明を実施するための形態】
【００６２】
本発明の内容をよりよく理解するために、以下では具体的な実施の形態を参照しながら更に説明するが、具体的な実施形態は本発明の内容を制限するものではない。
【００６３】
実施例１：式（Ｉ）の化合物のＡ結晶形の製造
【化４】
2021522265.tif 000011
【００６４】
１−Ｂの製造
−３０℃の窒素ガスの保護下で、攪拌しながら化合物１−Ａ（４Ｋｇ、２５．１９ｍｏｌ）のジクロロメタン（２０Ｌ）溶液にジイソプロピルエチルアミン（２．９Ｋｇ、２２．６７ｍｏｌ）及びメタンスルホニルクロリド（２．２Ｋｇ、１９．５１ｍｏｌ）を滴下した。滴下完了後、−１０℃下で１時間攪拌した。ＬＣＭＳにより反応が完了したことを検出した。反応液を飽和塩化アンモニウム溶液（１２Ｌ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、中間体１−Ｂを得、精製せず、直接的に次のステップで使用した。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３１６．０［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【００６５】
１−Ｃの製造
窒素ガスの保護下で、中間体１−Ｂ（５．４５Ｋｇ、１８．５８ｍｏｌ）及び２−クロロピリミジン−５−オール（２．４２Ｋｇ、１８．５６ｍｏｌ）のＤＭＦ（２５Ｌ）溶液に、炭酸カリウム（１．５４Ｋｇ、１１．１５ｍｏｌ）を添加した。反応液を９０℃下で１６時間反応させ、ＬＣＭＳにより反応が完了したことを検出した。反応液を水（７５Ｌ）に注ぎ、１６時間攪拌した後濾過し、ケーキを水（２０Ｌ）に入れ、１６時間攪拌し、濾過し、ケーキを乾燥させて中間体１−Ｃを得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３２８．１［Ｍ＋Ｈ］＋；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ１．２１〜１．３６（ｍ、２Ｈ）１．４４〜１．４９（ｍ、９Ｈ）１．８１（ｂｒｄ、Ｊ＝１２．１０Ｈｚ、２Ｈ）１．９１〜２．０８（ｍ、１Ｈ）２．７５（ｂｒｔ、Ｊ＝１１．９８Ｈｚ、２Ｈ）３．９０（ｄ、Ｊ＝６．２４Ｈｚ、２Ｈ）４．０１〜４．３７（ｍ、２Ｈ）８．２８（ｓ、２Ｈ）。
【００６６】
１−Ｅの製造
−３０℃、窒素ガスの保護下で、（Ｒ）−ＣＢＳ（１２．５Ｌ、１ｍｏｌ／Ｌ）及びボランジメチルスルフィド（５Ｌ、１０ｍｏｌ／Ｌ）の混合溶液の中に、化合物１−Ｄ（５Ｋｇ、２５．１９ｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（５Ｌ）溶液を添加した。反応液を−３０℃下で１時間反応させ、ＬＣＭＳにより反応が完了したことを検出した。反応液にメタノール（１０Ｌ）を滴下して反応をクエンチングさせた後、減圧濃縮し、残留物に酢酸エチル（２Ｌ）及びｎ−ヘキサン（２０）を添加して溶解させた後、塩酸（１０Ｌ、２ｍｏｌ／Ｌ）を添加して１時間攪拌し、濾過し、濾液を塩酸（１２Ｌ×３、２ｍｏｌ／Ｌ）及び飽和食塩水（１５Ｌ）で洗浄した後、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して中間体１−Ｅを得た。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．３１（ｄ、Ｊ＝６．５３Ｈｚ、３Ｈ）、４．６１〜４．８４（ｍ、１Ｈ）、５．３０（ｄ、Ｊ＝４．３９Ｈｚ、１Ｈ）、７．２５〜７．３１（ｍ、１Ｈ）、７．３１〜７．３７（ｍ、１Ｈ）、７．４１（ｂｒｄ、Ｊ＝７．６５Ｈｚ、１Ｈ）、７．５３（ｓ、１Ｈ）。
【００６７】
１−Ｆの製造
窒素ガスの保護下で、中間体１−Ｅ（１．２Ｋｇ、５．９７ｍｏｌ）のトルエン（３０Ｌ）溶液に、順次に３−フルオロ−１−ヒドロ−ピリジン−２−オン（７２３．３９ｇ、６．４ｍｏｌ）、トリブチルホスフィン（１．３９Ｋｇ、６．８８ｍｏｌ）及びアゾジカルボニルジピペリジン（１．７４Ｋｇ、６．８９ｍｏｌ）を添加した。反応液を９０℃に昇温させ、２時間反応させ、ＬＣＭＳにより反応が完了したことを検出した。反応液を室温に冷却させた後遠心分離し、濾液を塩酸（９Ｌ×２、４ｍｏｌ／Ｌ）で洗浄した後減圧濃縮し、残留物にメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１２Ｌ）を添加して溶解させた後、塩酸（９Ｌ×３、４ｍｏｌ／Ｌ）及び飽和食塩水（９Ｌ×２）でそれぞれ洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した後減圧濃縮し、残留物にｎ−ヘキサン（１０Ｌ）を添加して１６時間攪拌した後濾過し、ケーキを乾燥させ、中間体１−Ｆを得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：２９７．９［Ｍ＋Ｈ］＋；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．７４（ｄ、Ｊ＝７．０９Ｈｚ、３Ｈ）、６．１０（ｔｄ、Ｊ＝７．２４、４．５８Ｈｚ、１Ｈ）、６．４６（ｑ、Ｊ＝７．０１Ｈｚ、１Ｈ）、６．９５（ｄｔ、Ｊ＝７．０９、１．５３Ｈｚ、１Ｈ）、７．０８（ｄｄｄ、Ｊ＝９．２０、７．４３、１．７１Ｈｚ、１Ｈ）、７．２２〜７．３２（ｍ、２Ｈ）、７．４３〜７．５３（ｍ、２Ｈ）。
【００６８】
１−Ｇの製造
窒素ガスの保護下で、中間体１−Ｆ（２ｋｇ、６．７５ｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（１．８９ｋｇ、７．４３ｍｏｌ）、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）ジクロリド（４８．５１ｇ、６７．５４ｍｍｏｌ）及び酢酸カリウム（１．３４ｋｇ、１３．５１ｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（２０Ｌ）溶液を９０℃に昇温させて２時間反応させ、ＬＣＭＳにより反応が完了したことを検出した。化合物１−Ｇの反応液を精製せず、直接的に次のステップで使用した。
【００６９】
１−Ｈの製造
窒素ガスの保護下で、化合物１−Ｇの反応液に、順次に中間体１−Ｃ（２．４４ｋｇ、７．４３ｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（１．４３ｋｇ、１３．５１ｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２９９．６０ｇ、４０５．２２ｍｍｏｌ）及び水（４Ｌ）を添加し、反応液を１００℃に昇温させ、１６時間反応させた。ＬＣＭＳにより反応が完了したことを検出した。反応液を８０℃に冷却した後濾過し、攪拌しながら濾液に水（１２Ｌ）を滴下し、１６時間攪拌した後、濾過し、ケーキを水で洗浄し、乾燥させた後、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（３５Ｌ）及びアセトン（１Ｌ）を添加し、１６時間攪拌し、濾過し、ケーキを収集して乾燥させ、中間体１−Ｈを得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：５３１．１［Ｍ＋Ｎａ］＋；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．１０〜１．２６（ｍ、２Ｈ）１．４０（ｓ、９Ｈ）１．７７（ｂｒｄ、Ｊ＝７．１５Ｈｚ、５Ｈ）１．９７（ｂｒｄ、Ｊ＝３．６４Ｈｚ、１Ｈ）２．６３〜２．９０（ｍ、２Ｈ）３．８８〜４．０３（ｍ、２Ｈ）４．０６（ｄ、Ｊ＝６．４０Ｈｚ、２Ｈ）、６．１７〜６．３６（ｍ、２Ｈ）、７．３１〜７．６３（ｍ、４Ｈ）、８．１７〜８．３０（ｍ、２Ｈ）、８．６４（ｓ、２Ｈ）。
【００７０】
１−Ｉの製造
３０℃、窒素ガスの保護下で、中間体１−Ｈ（２．６３ｋｇ、５．１７ｍｏｌ）のＤＭＦ（２７Ｌ）溶液に１，３−ジブロモ−５，５−ジメチルイミダゾリン−２，４−ジオン（１ｋｇ、３．５ｍｏｌ）を添加し、反応液を３０℃で１時間反応させ、ＬＣＭＳにより反応が完了したことを検出した。反応液に水（１６．２Ｌ）を滴下した後１６時間攪拌し、濾過し、ケーキを水で洗浄した後乾燥させ、ケーキをアセトン（１７．６Ｌ）の中に入れ、加熱して還流し、１時間撹拌した後、水（１２Ｌ）を滴下して１６時間撹拌し、濾過し、ケーキを乾燥させ、中間体１−Ｉを得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：６１１．１［Ｍ＋Ｎａ］＋；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．１０〜１．２７（ｍ、２Ｈ）、１．４０（ｓ、９Ｈ）、１．７１〜１．８７（ｍ、５Ｈ）、１．９３〜２．０６（ｍ、１Ｈ）、２．６７〜２．８５（ｍ、２Ｈ）、３．９９（ｂｒｄ、Ｊ＝１１．６７Ｈｚ、２Ｈ）、４．０７（ｂｒｄ、Ｊ＝６．２７Ｈｚ、２Ｈ）、６．２３（ｑ、Ｊ＝６．８６Ｈｚ、１Ｈ）、７．４２〜７．５７（ｍ、２Ｈ）、７．７１（ｄｄ、Ｊ＝９．２９、１．７６Ｈｚ、１Ｈ）、７．８５（ｓ、１Ｈ）、８．１８〜８．３０（ｍ、２Ｈ）、８．６５（ｓ、２Ｈ）。
【００７１】
１−Ｊの製造
窒素ガスの保護下で、中間体１−Ｉ（２．１ｋｇ、３．５８ｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（１．８２ｋｇ、７．１７ｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（１２７．０９ｇ、１１０ｍｍｏｌ）及び酢酸カリウム（７１９．６８ｇ、７．１６ｍｏｌ）の１，２−ジメトキシエタン（２１Ｌ）の溶液を８５℃に昇温させて２時間反応させ、ＬＣＭＳにより反応が完了したことを検出した。化合物１−Ｋの反応液を精製せず、直接的に次のステップで使用した。
【００７２】
１−Ｋの製造
窒素ガスの保護下で、化合物１−Ｊの反応液に順次に２−ブロモピリジン−４−カルボニトリル（７０７ｇ、３．８６ｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（７４１ｇ、６．９９ｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（１６３ｇ、１４１ｍｍｏｌ）及び水（４．２Ｌ）を添加し、反応液を８５℃に昇温させ、１６時間反応させた。ＬＣＭＳにより反応が完了したことを検出した。反応液を５０℃に冷却させた後反応液に水（１２．６Ｌ）を滴下し、１６時間攪拌し、濾過し、ケーキを乾燥させた後イソプロパノール：水＝３０：１の混合溶媒を添加して３回スラリー化し、固体を収集して乾燥させ、中間体１−Ｋを得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：６３３．２［Ｍ＋Ｎａ］＋；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．０９〜１．２６（ｍ、２Ｈ）、１．４０（ｓ、９Ｈ）、１．７６（ｂｒｄ、Ｊ＝１１．１７Ｈｚ、２Ｈ）、１．９１（ｄ、Ｊ＝７．１５Ｈｚ、３Ｈ）、１．９３〜２．０５（ｍ、１Ｈ）、２．５７〜２．９２（ｍ、２Ｈ）３．９８（ｂｒｄ、Ｊ＝１０．９２Ｈｚ、２Ｈ）、４．０５（ｄ、Ｊ＝６．４０Ｈｚ、２Ｈ）、６．３５（ｑ、Ｊ＝７．０３Ｈｚ、１Ｈ）、７．４７〜７．５６（ｍ、２Ｈ）、７．７３（ｄｄ、Ｊ＝５．０２、１．００Ｈｚ、１Ｈ）、８．１９（ｄｄ、Ｊ＝１１．２９、２．１３Ｈｚ、１Ｈ）、８．２２〜８．２７（ｍ、１Ｈ）、８．３０（ｓ、１Ｈ）、８．４０（ｓ、１Ｈ）、８．４８（ｓ、１Ｈ）、８．６４（ｓ、２Ｈ）、８．７９（ｄ、Ｊ＝５．０２Ｈｚ、１Ｈ）。
【００７３】
式（Ｉ）の化合物の製造
窒素ガスの保護下で、中間体１−Ｋ（２．４ｋｇ、３．９３ｍｏｌ）をバッチにメタンスルホン酸（７５８．６６ｇ、７．８９ｍｏｌ）のメタノール（７．２Ｌ）溶液に添加し、反応液を５０℃に昇温させ、２時間攪拌し、ＬＣＭＳにより中間体１−Ｋの消耗が完了した後ことを検出した後、順次に反応液にメタノール（１６．８Ｌ）、酢酸ナトリウム（６４５．５４ｇ、７．８７ｍｏｌ）、ホルムアルデヒド（６３９．６３ｇ、７．８８ｍｏｌ、３７％の水溶液）及びナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（１．２５ｋｇ、５．９１ｍｏｌ）を添加し、反応溶液を１６時間撹拌反応させ、ＬＣＭＳにより反応が完了したことを検出した。反応液を濾過し、濾液に順次にアンモニア水（３Ｌ）及び水（４．５Ｌ）を滴下し、６時間攪拌し、濾過し、ケーキを水で洗浄した後乾燥させた。固体をテトラヒドロフラン（１３Ｌ）に入れ、５０℃に昇温させて溶解させ、チオ尿素樹脂（６５０ｇ）を添加して２時間撹拌した後、濾過し、濾液にチオ尿素樹脂（６５０ｇ）を添加し、５０℃で２時間撹拌した後濾過し、濾液にチオ尿素樹脂（６５０ｇ）を添加し、５０℃で１６時間撹拌した後濾過し、更に濾液に活性炭素粉末（１５０ｇ）を添加し６６℃に昇温させ、２時間攪拌した。濾過し、濾液を減圧濃縮し、残留物に酢酸エチル（１６．８Ｌ）を添加し、全部溶解するまで還流温度下で攪拌し、熱いうちに濾過し、濾液をゆっくりと２０℃に冷却させた後濾過し、ケーキを収集して乾燥させ、式（Ｉ）の化合物を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：５２５．２［Ｍ＋Ｈ］＋；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δｐｐｍ８．７２（ｄ、Ｊ＝５．０１Ｈｚ、１Ｈ）、８．５２（ｓ、２Ｈ）、８．３８（ｓ、１Ｈ）、８．２４〜８．３３（ｍ、２Ｈ）、８．０６〜８．１５（ｍ、２Ｈ）、７．４６〜７．５７（ｍ、３Ｈ）、６．４９（ｑ、Ｊ＝７．１７Ｈｚ、１Ｈ）、４．０３（ｄ、Ｊ＝５．７５Ｈｚ、２Ｈ）、２．９５（ｂｒｄ、Ｊ＝１１．７４Ｈｚ、２Ｈ）、２．３１（ｓ、３Ｈ）、２．０４〜２．１４（ｍ、２Ｈ）、１．９６（ｄ、Ｊ＝７．０９Ｈｚ、３Ｈ）、１．８０〜１．９２（ｍ、３Ｈ）、１．４０〜１．５８（ｍ、２Ｈ）。
【００７４】
式（Ｉ）の化合物のＡ結晶形の製造
式（Ｉ）の化合物（８５０ｇ）を酢酸エチル（６．８Ｌ）に添加し、還流温度まで昇温させ、２時間攪拌した後、反応液をゆっくりと３５℃に冷却させて１６時間攪拌し、濾過し、ケーキを収集して乾燥させ、式（Ｉ）の化合物のＡ結晶形を得た。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．２３〜１．４０（ｍ、２Ｈ）、１．６５〜１．７８（ｍ、３Ｈ）、１．７９〜１．８９（ｍ、２Ｈ）、１．９１（ｄ、Ｊ＝７．２１Ｈｚ、３Ｈ）、２．１５（ｓ、３Ｈ）、２．７８（ｂｒｄ、Ｊ＝１１．２５Ｈｚ、２Ｈ）、４．０３（ｄ、Ｊ＝５．９９Ｈｚ、２Ｈ）、６．３５（ｄ、Ｊ＝７．０９Ｈｚ、１Ｈ）、７．４６〜７．５８（ｍ、２Ｈ）、７．７３（ｄｄ、Ｊ＝５．０１、１．２２Ｈｚ、１Ｈ）、８．１８（ｄｄ、Ｊ＝１１．３１、２．１４Ｈｚ、１Ｈ）、８．２１〜８．２７（ｍ、１Ｈ）、８．３０（ｓ、１Ｈ）、８．４０（ｄ、Ｊ＝１．３４Ｈｚ、１Ｈ）、８．４８（ｓ、１Ｈ）、８．６３（ｓ、２Ｈ）、８．７９（ｄ、Ｊ＝５．０１Ｈｚ、１Ｈ）。
【００７５】
実施例２：式（ＩＩ）の化合物のＢ結晶形の製造
【化５】
2021522265.tif 000012
【００７６】
４００ｍｇの式（Ｉ）の化合物を秤量して４０ｍＬのバイアルに入れ、６ｍＬのＴＨＦを添加し、試料を磁気攪拌機（４０℃）に置き、５分間攪拌して溶解させ、適量の塩酸（式（Ｉ）の化合物と塩酸のモル比は１：１．０５であり、ＴＨＦは希釈してから添加する）をゆっくりと添加し、現象を観察した。試料を磁気攪拌機（４０℃）に置き、一晩攪拌した。反応液に白色の固体が析出した。試料溶液を素早く遠心分離し、上澄みを廃棄し、得られた固体を３０℃の真空乾燥箱に置き、一晩乾燥させ、式（ＩＩ）の化合物のＢ結晶形を得た。
【００７７】
実施例３：式（ＩＩＩ）の化合物のＣ結晶形の製造
【化６】
2021522265.tif 000013
４００ｍｇの式（Ｉ）の化合物を秤量して４０ｍＬのバイアルに入れ、６ｍＬのＴＨＦを添加し、試料を磁気攪拌機（４０℃）に置き、５分間攪拌して溶解させ、適量のリン酸（式（Ｉ）の化合物とリン酸のモル比は１：１．０５であり、ＴＨＦは希釈してから添加する）をゆっくりと添加し、現象を観察した。試料を磁気攪拌機（４０℃）に置き、一晩攪拌した。反応液に白色の固体が析出した。試料溶液を素早く遠心分離し、上澄みを廃棄し、得られた固体を３０℃の真空乾燥箱に置き、一晩乾燥させ、式（ＩＩＩ）の化合物のＣ結晶形を得た。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．４９（ｑ、Ｊ＝１０．８８Ｈｚ、２Ｈ）、１．７１〜２．０５（ｍ、６Ｈ）、２．２８〜２．４９（ｍ、６Ｈ）、３．０７（ｂｒｄ、Ｊ＝１０．７９Ｈｚ、２Ｈ）、４．０６（ｂｒｄ、Ｊ＝６．２７Ｈｚ、２Ｈ）、６．３４（ｑ、Ｊ＝６．９４Ｈｚ、１Ｈ）、７．４４〜７．６２（ｍ、２Ｈ）、７．７３（ｄｄ、Ｊ＝４．８９、１．１３Ｈｚ、１Ｈ）、８．１８（ｄｄ、Ｊ＝１１．２９、２．２６Ｈｚ、１Ｈ）、８．２１〜８．２７（ｍ、１Ｈ）、８．２９（ｓ、１Ｈ）、８．４０（ｓ、１Ｈ）、８．４７（ｓ、１Ｈ）、８．６４（ｓ、２Ｈ）、８．７８（ｄ、Ｊ＝５．０２Ｈｚ、１Ｈ）。
【００７８】
実施例４：式（Ｉ）の化合物のＡ結晶形の安定性試験
式（Ｉ）の化合物のＡ結晶形を約１０ｍｇ秤量し、安定性試験条件下に置き、それぞれ１０日目、１ヶ月目と２ヶ月目でサンプリングして分析し、実験結果は表６に示したとおりであった。
【００７９】
【表６】
2021522265.tif 000014
【００８０】
実験結果から、式（Ｉ）の化合物のＡ結晶形は、高温及び高湿度の条件下で不純物含有量に有意な変化がなく、良好な安定性を有することが分かった。
【００８１】
実施例５：式（ＩＩ）の化合物のＢ結晶形の安定性試験
式（ＩＩ）の化合物のＢ結晶形を約１０ｍｇ秤量し、安定性試験条件下に置き、それぞれ５日間、１０日間と１ヶ月目でサンプリングして分析し、実験結果は表７に示した通りであった。
【００８２】
【表７】
2021522265.tif 000015
【００８３】
実験結果から、式（ＩＩ）の化合物のＢ結晶形は、高温及び光照射の条件下で安定であることが分かった。
【００８４】
実施例６：式（ＩＩＩ）の化合物のＣ結晶形の安定性試験
式（ＩＩＩ）の化合物のＣ結晶形を約１０ｍｇ秤量し、安定性試験条件下に置き、それぞれ５日間、１０日間と１ヶ月目でサンプリングして分析し、実験結果は表８に示した通りであった。
【００８５】
【表８】
2021522265.tif 000016
【００８６】
実験結果から、式（ＩＩＩ）の化合物のＣ結晶形は、高温及び高湿度の条件下で相対的に安定であることが分かる。
【００８７】
実施例７：式（Ｉ）の化合物のＡ結晶形の吸湿性に関する研究
３本の乾いた栓付きのガラス計量ボトル（外径は５０ｍｍであり、高さは３０ｍｍである）を下部に飽和塩化アンモニウム溶液を置いた乾燥機に入れ、計量ボトルは開口して置き、乾燥機の蓋を覆い、乾燥機を２５℃のサーモスタットに入れ、一晩放置した。
【００８８】
計量ボトルを一晩放置した後、取り出して正確に計量し、それぞれｍ１１、ｍ１２及びｍ１３とした。
【００８９】
式（Ｉ）の化合物のＡ結晶形を適量取り、既に秤量した計量ボトル（試料の厚さは約１ｍｍである）に平らに広げ、正確に計量し、それぞれｍ２１、ｍ２２及びｍ２３とした。
【００９０】
計量ボトルを開口して置き、蓋と一緒に下部に飽和塩化アンモニウム溶液を置いた乾燥機に入れ、乾燥機の蓋を覆い、乾燥機を２５℃のサーモスタットに入れ、２４時間放置した。
【００９１】
２４時間放置した後、計量ボトルの栓を閉め、取り出して正確に計量し、それぞれｍ３１、ｍ３２及びｍ３３と記録した。
【００９２】
吸湿重量増加を計算し、計算式は以下の通りであった。
重量増加の百分率＝１００％×（ｍ３−ｍ２）／（ｍ２−ｍ１）
【００９３】
【表９】
2021522265.tif 000017
【００９４】
吸湿性試験の結果により、式（Ｉ）の化合物のＡ結晶形の吸湿平均値は０．０６０％（＜０．２％）であったため、式（Ｉ）の化合物のＡ結晶形は吸湿性がないかほとんどないことが分かった。
【００９５】
実施例８：式（Ｉ）の化合物のＡ結晶形の溶解度試験
式（Ｉ）の化合物のＡ結晶形１０ｍｇを秤量してガラス瓶入れ、溶媒１ｍＬを添加し、２５℃±２℃で５分ごとに３０秒間激しく振とうし、３０分以内の溶解を観察した。対応するデータを表に記録した。
【００９６】
不溶性試料に対しては、他に式（Ｉ）の化合物の結晶形１ｍｇを秤量してガラス瓶に入れ、適切な溶媒を添加し、２５℃±２℃で５分ごとに３０秒間激しく振とうし、３０分以内の溶解を観察した。対応するデータは表１０に記録した通りであった。
【００９７】
【表１０】
2021522265.tif 000018
【００９８】
実験結果から、式（Ｉ）の化合物のＡ結晶形は、水又はＮ−メチルピロリドンに容易に溶解し、０．１ＮＨＣ１に溶解し、テトラヒドロフラン又はトリフルオロ酢酸にわずかに溶解し、酢酸エチル、アセトニトリル又はエタノールに非常にわずかに溶解し；ｎ−ヘキサン、ジエチルアミン、又は０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液にほとんど溶解しない又は溶解しないことが分かった。
【００９９】
実施例９：式（Ｉ）の化合物の酵素活性試験
試薬と消耗品
ｃ−ＭＥＴ（ＩｎｖＩｔｒｏｇｅｎＰＶ３１４３）
Ｔｒａｃｅｒ２３６（ＬｏｔＮｕｍｂｅｒ：１０８１５９７８）
Ｅｕ−ＡｎｔＩ−ＨＩｓＡＢ（ＭＡｂＡｎｔＩ６ＨＩＳ−Ｋ）
ＰｅｒｋＩｎＥｌｍｅｒ社のＥｎｖＩｓｏｎ  ６６５ｎｍ及び６１５ｎｍで検出
３８４ウェルプレート＿検出プレート（ＰｅｒｋＩｎＥｌｍｅｒ＃６００７２９９）
【０１００】
実験原理
本実験はＬａｎｔｈａ  Ｓｃｒｅｅｎ  ＴＭＥｕキナーゼ結合実験（Ｌａｎｔｈａ  Ｓｃｒｅｅｎ  ＴＭＥｕ  ＫＩｎａｓｅ  ＢＩｎｄＩｎｇ  Ａｓｓａｙ）を利用し、図１に示すように、Ｅｕ標識抗体を添加することによりＡｌｅｘａＦｌｕｏｒコンジュゲート又はキナーゼ「トレーサー」の結合を検出した。トレーサーと抗体をキナーゼと組み合わせると、高度なＦＲＥＴが得られるが、トレーサーの代わりにキナーゼ阻害剤化合物を使用すると、ＦＲＥＴの損失を引き起こした。
【０１０１】
実験方法
１）抗体Ｅｕ−Ａｎｔｉ−ＨｉｓＡＢ、酵素ｃ−ＭＥＴ、トレーサーＴｒａｃｅｒ２３６を希釈した。
２）化合物の調製：１０ｍＭの試験化合物と参照化合物を１００％のＤＭＳＯで０．６６７ｍＭに希釈し、全自動マイクロプレート前処理システムＥＣＨＯを使用して、８個濃度勾配で３倍に希釈し、同じ条件で２つのウェルを調製し、ウェルあたり７５ｎＬであった。
３）化合物プレートに７．５μＬ抗体（１／３７５ｎＭ）とキナーゼ（１０ｎＭ）の混合物を添加し、更に７．５ｕＬのＴｒａｃｅｒ（６０ｎＭ）を添加した。反応の最終の濃度：ｃ−ＭＥＴ：５ｎＭ、Ｔｒａｃｅｒ２３６：３０ｎＭ、Ｅｕ−Ａｎｔｉ−ＨｉｓＡＢ（ＭＡｂＡｎｔｉ６ＨＩＳ−Ｋ）：１／７５０ｎＭ。
４）４℃で６０分間インキュベートした後、マルチラベルマイクロプレート検出器ＥｎｖｉｓＩｏｎによってデータを読み取った（６６５ｎｍ／６１５ｎｍの信号値はＰｒｉｓｍ５でデータを分析し；Ｅｘ励起光：Ｌａｓｅｒｍｉｒｒｏｒ４４６、Ｅｍ放射光：６１５ａｎｄ６６５ｎＭである）。
【０１０２】
実験結果：表１１に示す通りであった。
【０１０３】
【表１１】
2021522265.tif 000019
【０１０４】
実験結果は、式（Ｉ）の化合物がｃ−ＭＥＴ酵素に対して強い阻害活性を有することを示した。
【０１０５】
実施例１０：式（Ｉ）の化合物の細胞増殖に対する抑制試験
本実験は、ＡＫＴを過剰発現する前立腺癌細胞ＬＮＣａＰに対する式（Ｉ）の化合物の阻害効果を研究することを目的としている。
【０１０６】
試薬と消耗品
１．細胞の培養：ＤＭＥＭ培地、ウシ胎児血清、ＤＰＢＳ
２．細胞株：ＭＨＣＣ９７−Ｈ
３．検出試薬：生細胞検出キットＣｅｌｌＴＩｔｅｒ−Ｇｌｏ
４．その他の主な消耗品と試薬：化合物希釈プレート、ミドルプレート、検出プレート、ＤＭＳＯ
【０１０７】
実験方法
１．細胞プレートの製造
ＭＨＣＣ９７−Ｈ細胞を、各ウェルに５００個の細胞が含まれるように３８４ウェルプレートに接種した。細胞プレートを二酸化炭素インキュベーターで一晩培養した。
【０１０８】
２．化合物の準備
Ｅｃｈｏで９個の化合物濃度で４倍に希釈し、同じ条件で２つのウェルを設置した。
【０１０９】
３．化合物で細胞を処理
化合物を細胞プレートに移し、化合物の初期濃度は１０μＭであった。細胞プレートを二酸化炭素インキュベーターに入れ、３日間培養した。
【０１１０】
４．検出
Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬を細胞プレートに添加し、室温で１０分間インキュベートして発光信号を安定させた。Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＥｎｖｉｓＩｏｎマルチマーカーアナライザーでデータを読み取った。
【０１１１】
実験結果：表１２に示す通りであった。
【０１１２】
【表１２】
2021522265.tif 000020
【０１１３】
実験結果は、式（Ｉ）の化合物がＭＨＣＣ９７Ｈ細胞に対して良好な阻害活性を有することを示した。
【０１１４】
実施例１１：式（Ｉ）の化合物的生体内の有効性研究
細胞の培養
ＭＨＣＣ９７Ｈ細胞を体外で単層培養し、培養条件はＲＰＭＩ１６４０培地に１０％の熱不活化ウシ胎児血清、１％のペニシリン−ストレプトマイシン二重抗体を添加し、３７℃の５％のＣＯ２で培養した。週２回でトリプシン−ＥＤＴＡを使用して従来の消化処理して継代した。細胞が指数増殖期にあるとき、細胞を収集し、数を数え、播種した。
【０１１５】
動物
ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス、オス。６〜８週齢、体重は１８〜２２ｇであった。
【０１１６】
腫瘍の接種
５×１０６個のＭＨＣＣ９７Ｈ細胞を含む０．２ｍｌの細胞懸濁液を各マウスの右背部に皮下接種した。平均腫瘍体積が約１７２ｍｍ３に達した場合、グループ投与を開始した。
【０１１７】
実験のためのグループ分けと投与方法は以下の表に示す通りである。
【０１１８】
実験の指標
実験指標は、腫瘍の成長が阻害されるか、遅延又は治癒されるかを調査するものである。
【０１１９】
週に２回ノギスで腫瘍の直径を測定した。腫瘍体積の計算式は：Ｖ＝０．５ａ×ｂ２であり、ａとｂは、それぞれ腫瘍の長径と短径を表す。化合物の抗腫瘍効果（ＴＧＩ）は、Ｔ−Ｃ（日）およびＴ／Ｃ（％）で評価した。
【０１２０】
実験結果：表１３に示す通りであった。
【０１２１】
【表１３】
2021522265.tif 000021
【０１２２】
結論：式（Ｉ）の化合物は、ＭＨＣＣ９７Ｈ肝癌細胞の皮下異種移植腫瘍モデルの薬力学的実験において、テポチニブよりも優れた腫瘍抑制効果を示した。
【０１２３】
式（Ｉ）の化合物は、テポチニブよりも優れた代謝安定性を有する。ヒト、ラット、およびマウスの肝臓微粒子代謝における式（Ｉ）の化合物のｔ１／２は、それぞれ６２．１分、３６．５分、４９．１分であるが、同じ条件下で、テポチニブはヒト、ラット、およびマウスの肝臓微粒子代謝におけるｔ１／２は、それぞれ４８．３分、１０．５分、１２．４分であった。本発明の化合物は、半減期が増加し、標的に対する作用時間が延長され、代謝安定性が増強され、より優れた阻害活性を有する。半減期が長くなると、血中の薬の濃度を長期間維持でき、これにより、当該化合物が腫瘍治療に使用される場合、類似薬に比べて患者の服用量又は投薬頻度を減らし、患者のコンプライアンスが大幅に改善できることが予想できた。
【０１２４】
ｃ−ＭＥＴはＨＧＦと結合した後、ＭＡＰＫ、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ、Ｃｄｃ４２／Ｒａｃ１等の経路を活性化させるため、癌細胞の生存と増殖をもたらし、それによって腫瘍の成長を促進する。したがって、ｃ−ＭＥＴ阻害剤であるピリドン系化合物は、肝臓癌、非小細胞肺癌、胃癌等の標的療法薬において大きな応用の見通しがある。特に肝がんの治療において、これらの化合物はｃ−ＭＥＴの高発現による肝がんに対して正確な治療効果を有する。したがって、式（Ｉ）の化合物は、ピリドン系のｃ−ＭＥＴ阻害剤として、その生体内および体外での有意な阻害活性および良好な代謝安定性から、同様の製品よりも優れた治療効果を有する新薬になると予想される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年10月28日(2020.10.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：４．５４°±０．２°、１３．７０°±０．２°、１７．８４±０．２°、２１．２４°±０．２°及び２６．６２±０．２°において特徴的な回折ピークを有する、式（Ｉ）で表される化合物のＡ結晶形。
【化１】
2021522265.tif 000037
【請求項２】
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：４．５４°±０．２°、１３．７０°±０．２°、１５．１４±０．２°、１７．８４±０．２°、１８．４０°±０．２°、２１．２４°±０．２°、２４．０６°±０．２°、２６．６２±０．２°及び２７．４４±０．２°において特徴的な回折ピークを有し、
及び/又は示差走査熱量曲線は１７１．９０℃±３℃において一つの吸熱ピークの開始点を有し、
及び/又は熱重量分析曲線は２２３．２３℃±３℃の際に重量が０．１８７０％減少し、３０５．０６℃±３℃の際に重量が１０．２２％減少する、請求項１に記載のＡ結晶形。
【請求項３】
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：４．５３８°、９．０２１°、１１．３００°、１３．６９９°、１５．１４１°、１６．６４０°、１７．８４０°、１８．３９９°、１９．０３９°、１９．６２０°、２０．４４１°、２１．２４１°、２２．５９８°、２４．０６０°、２４．９６２°、２５．６６０°、２６．６２１°、２７．４４０°、２８．２５８°、２９．１５９°、３１．０８１°、３２．４６５°、３４．７８０°、３５．４００°、３６．９２０°及び３８．７６０°において特徴的な回折ピークを有し、
及び/又は示差走査熱量曲線スペクトルは図２で示される通りであり、
及び/又は熱重量分析曲線スペクトルは図３で示される通りである、請求項１又は２に記載のＡ結晶形。
【請求項４】
式（ＩＩ）又は式（ＩＩＩ）で表される示化合物。
【化２】
2021522265.tif 000038
【請求項５】
粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：４．３４°±０．２°、１２．９９°±０．２°、１５．３５°±０．２°及び２５．５０°±０．２°において特徴的な回折ピークを有する、請求項４に記載の式（ＩＩ）で表される化合物のＢ結晶形。
【化３】
2021522265.tif 000039
【請求項６】
粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：４．３４°±０．２°、６．５０°±０．２°、８．６５°±０．２°、１０．８２°±０．２°、１２．９９°±０．２°、１５．３５°±０．２°、１７．９６°±０．２°及び２５．５０°±０．２°において特徴的な回折ピークを有し、
及び/又は示差走査熱量曲線は４３．９８℃±３℃及び２１９．６４℃±３℃において吸熱ピークの開始点を有し、
及び/又は熱重量分析曲線は７３．６４℃±３℃の際に重量が０．５２７０％減少し、２３０．９０℃±３℃の際に重量が１．５４２％減少する、請求項５に記載のＢ結晶形。
【請求項７】
粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：４．３３５°、６．５０２°、８．６４５°、１０．８１６°、１２．９８６°、１５．３４９°、１５．７８２°、１６．１０９°、１７．９５５°、１８．４４７°、１９．０５７°、１９．５３４°、１９．８１６°、２０．５３１°、２１．１６°、２２．２６５°、２２．７５２°、２３．９０７°、２４．４０７°、２５．４９９°、２６．２４８°、２６．８８６°、２７．７２５°、２８．００４°、２８．６５３°、２９．１２７°、２９．７７９°、３０．４３２°、３１．０６４°、３３．７３４°及び３７．０２°において特徴的な回折ピークを有し、
及び/又は示差走査熱量曲線スペクトルは図５で示される通りであり、
及び又は熱重量分析曲線スペクトルは図６で示される通りである、請求項５又は６に記載のＢ結晶形。
【請求項８】
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：６．９４°±０．２°、１９．０８°±０．２°、２１．０５°±０．２°及び２４．７３°±０．２°において特徴的な回折ピークを有する、請求項４に記載の式（ＩＩＩ）で表される化合物のＣ結晶形。
【化４】
2021522265.tif 000040
【請求項９】
粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：６．９４°±０．２°、９．９４°±０．２°、１７．２９°±０．２°、１８．０４°±０．２°、１９．０８°±０．２°、２１．０５°±０．２°、２４．１２°±０．２°及び２４．７３°±０．２°において特徴的な回折ピークを有し、
及び/又は示差走査熱量曲線は１９８．１６℃±３℃において一つの吸熱ピークの開始点を有し、
及び/又は熱重量分析曲線は２０４．７３℃±３℃の際に重量が０．４５４１％減少する、請求項８に記載のＣ結晶形。
【請求項１０】
粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：６．９４°、９．９４°、１３．３６°、１５．２７１°、１６．８３°、１７．２８６°、１８．０３８°、１８．７６７°、１９．０８２°、２０．６０５°、２１．０５４°、２１．８８４°、２２．６１５°、２３．２２８°、２４．１１８°、２４．７２８°、２５．１８２°、２５．８１３°、２８．１８２°、３０．７５７°、３１．４９８°、３３．３１８°、３３．７７°及び３４．５９５°において特徴的な回折ピークを有し、
及び/又は示差走査熱量曲線スペクトルは図８で示される通りであり、
及び/又は熱重量分析曲線スペクトルは図９で示される通りである、請求項８又は９に記載のＣ結晶形。
【請求項１１】
癌を治療する医薬の製造における請求項１〜３のいずれか一項に記載のＡ結晶形、または請求項４に記載の化合物、または請求項５〜７のいずれか一項に記載のＢ結晶形、または請求項８〜１０のいずれか一項に記載のＣ結晶形の使用。
【国際調査報告】
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