(57)【要約】  本発明は、非乳児ヒトにおける症候性および無症候性の非腸自己免疫疾患の二次予防、処置または食事管理のための方法、化合物および組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
非乳児ヒトにおける症候性および無症候性の全身性自己免疫疾患（ＳＡＤ）の二次予防、処置または食事管理に使用するためのヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）。
【請求項２】
少なくとも１つのヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）を含む、非乳児ヒトにおける症候性および無症候性の全身性自己免疫疾患（ＳＡＤ）の二次予防、処置または食事管理に使用するための合成組成物。
【請求項３】
１ｇ〜１５ｇの量のヒトミルクオリゴ糖、より好ましくは２ｇ〜１０ｇを含む、請求項２に記載の使用のための合成組成物。
【請求項４】
少なくとも１つのヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）の有効量の個別の１日用量を少なくとも１４日分含む、非乳児ヒトにおける症候性および無症候性全身性自己免疫疾患（ＳＡＤ）の二次予防、処置または食事管理に使用するためのパック。
【請求項５】
各用量が約１ｇ〜約１５ｇのＨＭＯ、より好ましくは約２g〜約１０ｇを含む、請求項４に記載の使用のためのパック。
【請求項６】
少なくとも約２１日用量、例えば約２８日用量を含む、請求項４または請求項５に記載の使用のためのパック。
【請求項７】
ビフィズス菌、例えば、ビフィドバクテリウム・ロングムおよび／またはビフィドバクテリウム・ビフィダム、ビタミンＤの供給源、および／またはオメガ−３ポリ不飽和脂肪酸の供給源を含む、請求項２〜６のいずれかに記載の使用のための合成組成物またはパック。
【請求項８】
ヒトミルクオリゴ糖が、２'−ＦＬならびにＬＮｎＴおよびＬＮＴのうちの少なくとも１つ；２'−ＦＬ、ＤＦＬならびにＬＮｎＴおよびＬＮＴのうちの少なくとも１つ；２'−ＦＬおよび６'−ＳＬ；２'−ＦＬ、ＤＦＬおよび６'−ＳＬ；２'−ＦＬ、６'−ＳＬならびにＬＮｎＴおよびＬＮＴのうちの少なくとも１つ；または２'−ＦＬ、ＤＦＬ、６'−ＳＬならびにＬＮｎＴおよびＬＮＴのうちの少なくとも１つ、を含む、から本質的になる、またはからなる請求項１〜７のいずれかに記載の使用のためのＨＭＯ、合成組成物またはパック。
【請求項９】
非乳児ヒトにおける症候性および無症候性の全身性自己免疫疾患（ＳＡＤ）の二次予防、処置または食事管理の方法であって、前記非乳児ヒトに少なくとも１つのヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）の有効量を投与することを含む方法。
【請求項１０】
非乳児ヒトに少なくとも２週間、より好ましくは少なくとも３週間、ＨＭＯを投与する、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
非乳児ヒトに１日あたり約１ｇ〜約１５ｇの量のＨＭＯ、より好ましくは１日あたり約２ｇ〜約１０ｇを投与する、請求項９または請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
非乳児ヒトに、初期段階に高用量を投与し、二次的な維持段階に低用量を投与できる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
非乳児ヒトに１日あたり約３ｇ〜約１０ｇの処置用量、例えば１日あたり約４ｇ〜約７.５ｇを投与し、その後、１日あたり約２ｇ〜約７.５ｇの維持または二次的な予防用量、例えば１日あたり約２ｇ〜約５ｇを投与する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
ヒトミルクオリゴ糖が、２'−ＦＬおよび／またはＤＦＬならびにＬＮｎＴおよび／またはＬＮＴ；２'−ＦＬおよび６'−ＳＬ；２'−ＦＬ、ＤＦＬおよび６'−ＳＬ;２'−ＦＬ、６'−ＳＬならびにＬＮｎＴおよび／またはＬＮＴ；または２'−ＦＬ、ＤＦＬ、６'−ＳＬならびにＬＮｎＴおよび／またはＬＮＴを含む、から本質的になる、またはからなる、請求項９〜１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
非乳児ＳＡＤ患者が、関節リウマチ、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、バセドウ病、橋本甲状腺炎、乾癬、アジソン病、シェーグレン症候群、血管炎、重症筋無力症、およびＩ型糖尿病の１つもしくはそれ以上を患っている、請求項９〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
非乳児ヒトがさらに、意識混濁／意識障害、倦怠感、胃腸痛、皮膚発疹、不安神経症およびうつ病の１つもしくはそれ以上を患っている、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
非乳児ヒトがさらに、腸内菌共生バランス失調、腸バリア機能障害、および胃腸の炎症の１つもしくはそれ以上を患っている、請求項９〜１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
ＳＡＤがシェーグレン症候群である、請求項１〜１７のいずれかに記載の使用のためのＨＭＯ、合成組成物またはパック。
【請求項１９】
ＨＭＯが、２'−ＦＬ、ＤＦＬおよび６'−ＳＬの１つもしくはそれ以上を含む、から本質的になる、またはからなる、請求項１８に記載の使用のためのＨＭＯ、合成組成物またはパック。
【請求項２０】
唾液腺および／または涙腺の炎症の二次予防、処置または食事管理に使用するための、請求項１８または１９に記載の使用のためのＨＭＯ、合成組成物またはパック。
【請求項２１】
ＳＡＤがシェーグレン症候群である、請求項１〜２０のいずれかに記載の方法。
【請求項２２】
ＨＭＯが、２'−ＦＬ、ＤＦＬおよび６'−ＳＬの１つもしくはそれ以上を含む、から本質的になる、またはからなる、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
唾液腺および／または涙腺の炎症の二次予防、処置または食事管理のための請求項２１または２２に記載の方法。
【請求項２４】
ＳＡＤが１型糖尿病である、請求項１または８に記載の使用のためのＨＭＯ、請求項２、３、７もしくは８のいずれかに記載の使用のための合成組成物、または請求項４〜８のいずれかに記載の使用のためのパック。
【請求項２５】
ＨＭＯが２'−ＦＬ、ＤＦＬおよび６'−ＳＬの１つもしくはそれ以上を含む、から本質的になる、またはからなる、請求項２４に記載の使用のためのＨＭＯ、合成組成物またはパック。
【請求項２６】
膵臓膵島炎の二次予防、処置または食事管理に使用するための、請求項２４または２５に記載の使用のためのＨＭＯ、合成組成物またはパック。
【請求項２７】
ＳＡＤが１型糖尿病である、請求項９〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項２８】
ＨＭＯが２'−ＦＬ、ＤＦＬおよび６'−ＳＬの１つもしくはそれ以上を含む、から本質的になる、またはからなる、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
膵臓膵島炎の二次予防、処置または食事管理のための請求項２７または２８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、非乳児ヒトにおける症候性および無症候性の非腸自己免疫疾患の食事管理に使用するための方法、化合物および組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
自己免疫疾患は、自身の組織に対する異常な免疫応答から生じる状態である。それは慢性的であり、生活の質（QOL）を低下させる。８０種類以上の自己免疫障害が存在することが知られており、それには、腸の自己免疫疾患、例えばクローン病やセリアック病など、ならびに全身性自己免疫疾患（ＳＡＤ）、例えば関節リウマチ、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、バセドウ病、橋本甲状腺炎、乾癬、アジソン病、シェーグレン症候群、血管炎、重症筋無力症およびＩ型糖尿病などの両方が含まれる。自己免疫疾患は、米国の若年および中年の女性の主要死因の１つである。発症率は自己免疫疾患によって異なり、その推定値は年１０万人あたり、全身性硬化症の新たに診断される１例未満から、成人発症関節リウマチの２０例以上にまで及ぶ。全身性硬化症、全身性エリテマトーデスおよびシェーグレン症候群の患者の少なくとも８５％は女性である。ほとんどの疾患はどの年齢でも発症する可能性があるが、疾患の中には主に小児期および青年期（例えば１型糖尿病）、中年期（例えば多発性硬化症）、または高齢期（例えばシェーグレン症候群）に発症するものがある。
【０００３】
自身の組織や分子に対する不適切な免疫応答は、組織特異的または全身性の炎症を引き起こし、臓器の損傷や機能不全を導く。この疾患は、最初のナイーブリンパ球の活性化から、Ｔ細胞および抗体の標的となる自己抗原の数の増加に特徴付けられる慢性状態へと進行する。活性化された自己反応性Ｂ細胞は、新たなペプチドに対する抗原提示細胞として機能し、共刺激分子を発現する。抗原は処理され、ナイーブＴ細胞に提示され、大多数の自己抗原に対する自己反応性が示される時点まで新しいエピトープを提示するさらなる自己反応性Ｂ細胞の活性化につながる。自己抗体が産生されると、免疫複合体の形成、細胞溶解または標的自己細胞の貪食による組織損傷が誘発され、適切な組織および細胞機能が妨げられる。自己免疫疾患の病因は不明であるが、遺伝的再配置、環境要因および腸内微生物叢の腸内菌共生バランス失調が原因の可能性となっていることが特定されている（Opazo et al. Front. Microbiol. 9, 432 (2018)）。
【０００４】
人間の腸には１０１３〜１０１４個の細胞が潜んでおり、細菌の数は体内の細胞の総数よりも１０倍多いと推定されている。ヒトの腸の微生物叢は、複雑で非常に動的な微生物生態系であり、病原体からの保護、免疫調節機能の誘導、栄養処理および代謝機能など、ヒト宿主にとって必須の多くの機能を果たすと考えられている。腸内微生物叢の組成は、食事、抗生物質、微生物と微生物の相互作用および宿主の遺伝学など、非常に多くの要因によって影響される。これらの要因の変化は、微生物叢の破壊（腸内菌共生バランス失調、腸内毒素症）を引き起こし得る。ヒト微生物叢の腸内菌共生バランス失調は、腸バリアに衝撃を与えることができ、それにより細菌が内腔から腸の免疫学的区画に異動し、局所的な粘膜の炎症を誘発し、そして腸の透過性を高める。次いで、炎症促進性リンパ球とサイトカインは体循環に広がり、ＳＡＤに見られるように関節、組織、涙腺または唾液腺などの解剖学的遠位部位にて炎症のリスクを高めることができる（Campbell AutoimmuneDis。152428(2014)）。
【０００５】
いくつかの研究では、腸内微生物叢と全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）などのＳＡＤとが関連することが示されている。例えば、ＳＬＥの患者は、健常人と比較してファーミキューテス門（Firmicutes）対バクテロイデス門（Bacteroidetes）の比率が低く、腸内菌科の種組成が異なっている（Hevia et al. mBio. 5, e01548-14 (2014)）。さらに、ＳＳ患者は、ビフィズス菌やフィーカリバクテリウム・プラウスニッツィ（ブチレート産生菌）などの有益な共生菌の相対存在量が低い。また、ＳＳ患者の腸内菌共生バランス失調は、全身性の疾患活動性の臨床マーカーと関連している(Mandl et al. Arthritis Res. Ther. 19、237(2017))。Ｔ１Ｄの子供では、同様の微生物叢の変化が、ラクトバチルス（Lactobacillus）、ビフィズス菌（Bifidobacterium）およびブラウチア・コッコイデス／ユーバクテリウム・レクタール（Blautia coccoides/Eubacterium rectale）グループ（ブチレート産生菌のグループ）などの有益な腸内菌の減少とともに観察されている（Murri et al. BMC Medicine 11, 46 (2013)）。
【０００６】
腸内微生物叢の特定のメンバーは、独特の生理学的効果を有する短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）などの代謝産物を産生できる。ＳＣＦＡは、非消化性炭水化物の発酵を介して糖分解細菌から結腸において産生される。この産生は、食物摂取のパターンおよび食事を介した腸内微生物叢の変化に影響される。主な産物は、アセテート、プロピオネートおよびブチレートであり、これらは結腸から吸収される。それらは腸環境の形成に寄与し、結腸の生理機能に影響し、そして腸の免疫応答を調節する。ブチレートは上皮細胞の主要エネルギー源として働き、そしてムチン遺伝子ならびに密着結合発現および集合体を変化させることにより、結腸粘膜の物理的かつ機能的完全性を調節することが報告されている。さらに、ブチレートおよびプロピオネートは、Ｔ制御性細胞の分化を誘導し、これが腸の炎症の制御に役立つことが報告されている。この効果は、ヒストン脱アセチル化の阻害によって媒介される。アセテートは、上皮細胞によって媒介される腸の防御を強化でき、それによって宿主を攻撃から保護できる（Canani et al. World J. Gastroenterol. 17, 1519 (2011)）。
【０００７】
糖分解細菌とブチレート産生菌の存在量が減少している腸内微生物叢の腸内菌共生バランス失調は、ＳＣＦＡの産生を低下させることができ、このことが腸内の炎症に対する免疫バランスに影響を与える可能性がある。腸の炎症は、ＳＡＤで観察されている。例えば、胃腸の有効な炎症マーカーである便中のカルプロテクチンのレベルの上昇が、ＳＳ患者において見出されている。腸透過性の調節と密着結合タンパク質の分解に関連する重要なマーカーはゾヌリンである。ゾヌリンシグナル伝達経路の脱調節または破壊は、透過性の増加の原因となる。Ｔ１Ｄ患者では、高い腸透過性が血清中のゾヌリンレベルの上昇に関連している。このことはＭＳ患者でも見られる（Fasano Clinic. Rev. Allerg. Immunol. 42, 71 (2012)）。
【０００８】
ＳＡＤの治療法はない。現在の処置法は、過剰な免疫反応を制御し、炎症を抑えることに重点が置かれている。しかし、それらでは症状の再発を防ぐことはできない。処置には、イブプロフェン(Motrin、Advil)やナプロキセン(Naprosyn)などの非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、およびコルチコステロイド、カルシニュリン阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤やＩＭＤＨ阻害剤などの免疫抑制薬が含まれる。最近、免疫系の特定の側面を標的とする生物製剤、例えば抗ＴＮＦα抗体（インフリキシマブ）などが処置の選択肢になった。これらの処置はすべて副作用があり、長期使用することには問題がある。そこで、長期使用により適している処置法が探求されている。プロバイオティクスはこうしたアプローチの１つである（Opazo et al. Front. Microbiol. 9, 432 (2018)）。例えば、プロバイオティクス混合物ＶＳＬ３は、動物モデルにおいて自己免疫疾患を発症する可能性を低下させることが示されている。しかし、他のプロバイオティクスは動物モデルでは良好な結果を出していない。また、ヒトでのプロバイオティクスの有効性の証拠は不足している。
【０００９】
長期にわたる完全母乳の育児（授乳）は、ヒトの１型糖尿病の発症に対する保護因子として特定されている。このことによって、ヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）は後年の１型糖尿病の発症から乳児を保護するのに寄与しているかもしれないという仮説が導かれている。ＨＭＯは、ヒト母乳に高濃度に見出される可溶性グリカンの不均一な混合物である。この仮説は、若いＮＯＤマウスでの研究によって実体化されており、ここでは、ヒト母乳から抽出されたＨＭＯの混合物がそのマウスの１型糖尿病の発症を防ぐことが示されている（Xiao et al. Sci. Rep. 8, 3829 (2018)）。この結果をヒトに置き換えることができる場合、乳児および子供にＨＭＯを投与することは、後年の１型糖尿病のリスクを低減させる方法を提供する可能性がある。
【００１０】
しかしながら、ヒトにおけるＳＡＤの処置または二次予防のための安全で忍容性が良好な介入の必要性が依然として存在する。
【発明の概要】
【００１１】
本発明の第１の態様は、非乳児ヒトにおける症候性および無症候性の全身性自己免疫疾患（ＳＡＤ）の二次予防、処置または食事管理に使用するためのヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）に関する。
【００１２】
本発明の第２の態様は、少なくとも１つのヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）を含む、非乳児ヒトにおける症候性および無症候性の全身性自己免疫疾患（ＳＡＤ）の二次予防、処置または食事管理に使用するための合成組成物に関する。
【００１３】
好ましくは、本発明の合成組成物は１ｇ〜１５ｇの量のＨＭＯ、より好ましくは２ｇ〜１０ｇを含む。例えば、本発明の合成組成物は３ｇ〜７ｇのＨＭＯを含むことができる。
【００１４】
本発明の第３の態様は、少なくとも１つのヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）の、有利には中性ＨＭＯの有効量の個別の１日用量を少なくとも１４日分含む、非乳児ヒトにおける症候性および無症候性の全身性自己免疫疾患（ＳＡＤ）の二次予防、処置または食事管理に使用するためのパックに関する。好ましくは、各用量は約１ｇ〜約１５ｇのＨＭＯ、より好ましくは約２g〜約１０ｇを含む。例えば、本発明の合成組成物は約３ｇ〜約７．５ｇのＨＭＯを含むことができる。好ましくは、本発明のパックは１日用量を少なくとも約２１日分、例えば約２８日分含む。パックは使用説明書を含むことができる。
【００１５】
本発明の合成組成物またはパックは、ビフィズス菌、例えばビフィドバクテリウム・ロングム（Bifidobacterium longum）および／またはビフィドバクテリウム・ビフィダム（Bifidobacterium bifidum）を含むことができる。本発明の合成組成物またはパックは、ビタミンＤの供給源を含むことができる。さらに、本発明の合成組成物またはパックは、オメガ−３ポリ不飽和脂肪酸の供給源を含むことができる。
【００１６】
本発明の第４の態様は、非乳児ヒトにおける症候性および無症候性の全身性自己免疫疾患（ＳＡＤ）の二次予防、処置または食事管理の方法であって、前記非乳児ヒトに少なくとも１つのヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）の有効量を投与することを含む方法に関する。
【００１７】
好ましくは、非乳児ヒトに少なくとも２週間、より好ましくは少なくとも３週間、ＨＭＯを投与する。例えば、ＨＭＯを４週間もしくはそれ以上投与することができる。
【００１８】
好ましくは、非乳児ヒトに１日あたり約１ｇ〜約１５ｇの量のＨＭＯ、より好ましくは１日あたり約２ｇ〜約１０ｇを投与する。例えば非乳児ヒトに１日あたり約３ｇ〜約７．５ｇのＨＭＯを投与することができる。非乳児ヒトに、初期段階に高用量を投与し、二次的な維持段階に低用量を投与することができる。例えば、非乳児ヒトに１日あたり約３ｇ〜約１０ｇ（例えば１日あたり約４ｇ〜約７.５ｇ）の処置用量を投与し、その後、１日あたり約２ｇ〜約７.５ｇ（例えば、１日あたり約２ｇ〜約５ｇ）の維持または二次的な予防用量を投与することができる。
【００１９】
本発明の第５の態様は、
−１つもしくはそれ以上のヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）、
−１つもしくはそれ以上のヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）を含む合成組成物、または
−１つもしくはそれ以上のヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）の有効量の個別の１日用量を少なくとも１４日分含むパックの
全身性自己免疫疾患（ＳＡＤ）を有する非乳児ヒトの食事管理における使用である。
【００２０】
先に開示した本発明のすべての態様において、ＨＭＯは中性ＨＭＯまたは酸性ＨＭＯであり得る。中性ＨＭＯは、１つもしくはそれ以上のフコシル化中性ＨＭＯまたは１つもしくはそれ以上の非フコシル化中性ＨＭＯであり得る。好ましくは、ＨＭＯは、２'−ＦＬ、３−ＦＬ、ＤＦＬ、ＬＮＴ、ＬＮｎＴ、３'−ＳＬ、６'−ＳＬ、ＬＮＦＰ−Ｉまたはこれらの混合物から選択される。好ましくは、ＨＭＯは、２'−ＦＬならびにＬＮｎＴおよびＬＮＴのうちの少なくとも１つ；２'−ＦＬ、ＤＦＬならびにＬＮｎＴおよびＬＮＴのうちの少なくとも１つ；２'−ＦＬおよび６'−ＳＬ；２'−ＦＬ、ＤＦＬおよび６'−ＳＬ；２'−ＦＬ、６'−ＳＬならびにＬＮｎＴおよびＬＮＴのうちの少なくとも１つ；および２'−ＦＬ、ＤＦＬ、６'−ＳＬならびにＬＮｎＴおよびＬＮＴのうちの少なくとも１つを含む。
【００２１】
非乳児ＳＡＤ患者は関節リウマチ、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、バセドウ病、橋本甲状腺炎、乾癬、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、アジソン病、シェーグレン症候群、血管炎、重症筋無力症、およびＩ型糖尿病などの１つもしくはそれ以上の状態を患っている場合がある。また、非乳児ヒトはさらに、「意識混濁」／「意識障害」、倦怠感、胃腸痛、便秘、下痢、皮膚発疹、不安神経症およびうつ病の１つもしくはそれ以上を患っている場合がある。
【００２２】
一実施形態では、症候性および無症候性の全身性自己免疫疾患（ＳＡＤ）はシェーグレン症候群である。好ましくは、ＨＭＯは、本発明の合成組成物および／またはパックにおいても、１つもしくはそれ以上の２'−ＦＬ、ＤＦＬおよび６'−ＳＬ、例えば２'−ＦＬおよびＤＦＬ、２'−ＦＬおよび６'−ＳＬまたは２'−ＦＬ、ＤＦＬおよび６'−ＳＬを含む、から本質的になる、またはからなる。例えば、シェーグレン症候群の患者は、唾液腺および／または涙腺の炎症を患っている場合がある。
【００２３】
別の実施形態では、症候性および無症候性全身性自己免疫疾患（ＳＡＤ）は１型糖尿病である。好ましくは、ＨＭＯは、本発明の合成組成物および／またはパックにおいても、１つもしくはそれ以上の２'−ＦＬ、ＤＦＬおよび６'−ＳＬ、例えば２'−ＦＬおよびＤＦＬ、２'−ＦＬおよび６'−ＳＬまたは２'−ＦＬ、ＤＦＬおよび６'−ＳＬを含む、から本質的になる、またはからなる。例えば、１型糖尿病患者は膵臓膵島炎を患っている場合がある。
【００２４】
また、非乳児ＳＡＤ患者はさらに、腸内菌共生バランス失調、腸バリア機能障害、および胃腸の炎症の１つもしくはそれ以上を患っている場合がある。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】図１は近位（ＰＣ）および遠位（ＤＣ）結腸リアクターにおける２'−ＦＬ処置に関連する酢酸（ＡＡ）、プロピオン酸（ＰＡ）、酪酸（ＢＡ）および総ＳＣＦＡ（総量）の絶対値を示している。２週間の対照週、３週間の処置週、および２週間のウォッシュアウト週に試料を採取した。毎週、代謝分析のために３つの試料（Ａ、ＢおよびＣは各週の１日目、３日目および５日目にそれぞれ対応する）を採取した。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
驚くべきことに、全身性自己免疫疾患を患っているヒトに１つもしくはそれ以上のヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）を経口的または腸内へ投与すると、その状態の症状が軽減または再発を遅らせることを今回、見出した。従って、ヒトミルクオリゴ糖は、ヒトの全身性自己免疫疾患の処置、食事管理または二次予防として使用できる。ＨＭＯはまた、胃腸管内のビフィズス菌、特にＢ.アドレセンティス系統発生グループのビフィズス菌、ビフィドバクテリウム・ロングムおよび／またはビフィドバクテリウム・ビフィダムの存在量を増加させることによって、優先的に腸内菌共生バランス失調にある腸内微生物叢を回復させる。これらの細菌はラクテートおよびアセテートを産生し、次にこれらはブチレート産生菌によってブチレートに変換され得る。さらに、非乳児ヒトにヒトミルクオリゴ糖を投与することによって、有益な腸内微生物叢を優先的に作り出す。結果として、胃腸透過性ならびに腸および全身両方の炎症が軽減することになる。
【００２７】
短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）などの有益な代謝産物が誘導されることによって、「意識混濁」／「意識障害」、倦怠感、胃腸痛、関節痛、口腔および眼の乾燥、不安神経症、うつ病および／または皮膚の発疹などの１つもしくはそれ以上の指標または症状を検出可能とする改善をもたらすことができる。
【００２８】
ヒトミルクオリゴ糖（ＮＭＯ）は、ヒト母乳に見出される可溶性グリカンの不均一な混合物である。これは、ヒト母乳中の乳糖と脂質に次いで３番目に豊富な固形成分であり、５〜２５ｇ／Ｌの濃度で存在する（Bode L et al 2013; pp. 515-32. Wageningen Academic Publishers (2013)）。ＨＭＯは、小腸での酵素による加水分解に耐性があるため、大部分は消化・吸収されず、そのまま結腸に到達する。結腸に到達したＨＭＯの大部分は、特定の細菌の成長を選択的に刺激することにより腸の生態系を形成する基質として機能する。ＨＭＯは乳児の腸内微生物叢を実質的に調節し、人工栄養乳児と母乳栄養乳児の微生物叢の違いにおける決定的な役割を果たすと考えられる。これらの違いとしては、人工栄養乳児のより多様な腸内微生物叢と比較して母乳栄養乳児においては腸内のビフィズス菌が優勢になっていることが挙げられる。このことは、ビフィドバクテリウム種の菌株は腸の健康に良い影響を与えると考えられているため、乳児にとって有益であると見なされる。
【００２９】
本明細書中、次の用語は以下の意味を有する。
【００３０】
「非乳児ヒト」または「非乳児」とは、３歳齢およびそれ以上の年齢のヒトを意味する。非乳児ヒトは子供、ティーンエイジャー、大人または高齢者（６５歳より上）であり得る。
【００３１】
「ヒトミルクオリゴ糖」または「ＨＭＯ」は、ヒト母乳に見出される複合炭水化物を意味する（Urashima et al.: Milk Oligosaccharides. Nova Science Publisher (2011); Chen Adv. Carbohydr. Chem. Biochem. 72, 113 (2015)）。ＨＭＯは、１つもしくはそれ以上のβ−Ｎ−アセチル−ラクトサミニルおよび／または１つもしくはそれ以上のβ−ラクト−Ｎ−ビオシル単位によって伸長できる還元末端にラクトース単位を含むコア構造を有し、そのコア構造はα−Ｌ−フコピラノシルおよび／またはα−Ｎ−アセチル−ノイラミニル（シアリル）部分と置換されていることがある。これに関し、非酸性（または中性）ＨＭＯはシアリル残基を欠いており、酸性ＨＭＯはその構造中に少なくとも１つのシアリル残基を有する。非酸性（または中性）ＨＭＯは、フコシル化または非フコシル化できる。そのような中性の非フコシル化ＨＭＯの例としては、ラクト−Ｎ−テトラオース（ＬＮＴ）、ラクト−Ｎ−ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）、ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース（ＬＮｎＨ）、パラ−ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース（ｐＬＮｎＨ）、パラ−ラクト−Ｎ−ヘキサオース（ｐＬＮＨ）およびラクト−Ｎ−ヘキサオース（ＬＮＨ）が挙げられる。中性フコシル化ＨＭＯの例としては、２’−フコシルラクトース（２'−ＦＬ）、ラクト−Ｎ−フコペンタオースＩ（ＬＮＦＰ−Ｉ）、ラクト−Ｎ−ジフコヘキサオースＩ（ＬＮＤＦＨ−Ｉ）、３−フコシルラクトース（３−ＦＬ）、ジフコシルラクトース（ＤＦＬ）、ラクト−Ｎ−フコペンタオースＩＩ（ＬＮＦＰ−ＩＩ）、ラクト−Ｎ−フコペンタオースＩＩＩ（ＬＮＦＰ−ＩＩＩ）、ラクト−Ｎ−ジフコヘキサオースＩＩＩ（ＬＮＤＦＨ−ＩＩＩ）、フコシル−ラクト−Ｎ−ヘキサオースＩＩ（ＦＬＮＨ−ＩＩ）、ラクト−Ｎ−フコペンタオースＶ（ＬＮＦＰ−Ｖ）、ラクト−Ｎ−ジフコヘキサオースＩＩ（ＬＮＤＦＨ−ＩＩ）、フコシル−ラクト−Ｎ−ヘキサオースＩ（ＦＬＮＨ−Ｉ）、フコシル−パラ−ラクト−Ｎ−ヘキサオースＩ（ＦｐＬＮＨ−Ｉ）、フコシル−パラ−ラクト−Ｎ−ネオヘキサオースＩＩ（ＦｐＬＮｎＨ ＩＩ）およびフコシル−ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース（ＦＬＮｎＨ）が挙げられる。酸性ＨＭＯの例としては、３'−シアリルラクトース（３'−ＳＬ）、６'−シアリルラクトース（６'−ＳＬ）、３−フコシル−３'−シアリルラクトース（ＦＳＬ）、ＬＳＴ ａ、フコシル−ＬＳＴ ａ（ＦＬＳＴ ａ）、ＬＳＴ ｂ、フコシル−ＬＳＴ ｂ（ＦＬＳＴ ｂ）、ＬＳＴ ｃ、フコシル−ＬＳＴ ｃ（ＦＬＳＴ ｃ）、シアリル−ＬＮＨ（ＳＬＮＨ）、シアリル−ラクト−Ｎ−ヘキサオース（ＳＬＮＨ）、シアリル−ラクト−Ｎ−ネオヘキサオースＩ（ＳＬＮＨ−Ｉ）、シアリルラクト−Ｎ−ネオヘキサオースＩＩ（ＳＬＮＨ−ＩＩ）およびジシアリルラクト−Ｎ−テトラオース（ＤＳＬＮＴ）が挙げられる。
【００３２】
「合成組成物」は、人工的に調製された組成物を意味し、好ましくは、例えば化学反応、酵素反応または組換え法により、生体外で化学的および／または生物学的に生成される少なくとも１つの化合物を含む組成物を意味する。いくつかの実施形態では、本発明の合成組成物は、天然に存在する組成物と同一であってもよいが、好ましくは同一ではないものである。合成組成物は、典型的には１つもしくはそれ以上のＨＭＯを含み、これらは約１４日間投与した場合、胃腸管の微生物叢におけるビフィズス菌、例えばビフィドバクテリウム・ロングムおよび／またはビフィドバクテリウム・ビフィダムの存在量を優先的に増加させることができ、胃腸管におけるブチレートの産生を増加させる。いくつかの実施形態では、合成組成物は、非乳児ヒト被検者のビフィズス菌または微生物叢の炎症性緊張にインビボで効果を生じ得るＨＭＯ以外の１つもしくはそれ以上の化合物または成分、例えば、非消化性オリゴ糖もしくはプレバイオティクス、ビタミンＤおよび／またはオメガ−３ポリ不飽和脂肪酸を含んでもよい。また、いくつかの実施形態では、合成組成物は、上記の化合物の効力に悪影響を及ぼさない１つもしくはそれ以上の栄養学的または薬学的に有効な成分を含んでもよい。本発明の合成組成物のいくつかの非限定的な実施形態もまた、以下に記載される。
【００３３】
「微生物叢」、「マイクロフローラ」および「マイクロバイオーム」は、身体器官または部分、特にヒトの胃腸器官に通常、生息する、生きている微生物の集団を意味する。胃腸器官微生物叢の最も優勢なメンバーとしては、ファーミキューテス、バクテロイデス、アクチノバクテリア、プロテオバクテリア、シネルギステス、ウェルコミクロビア、フソバクテリア、およびユーリアーキオータ門の微生物；属レベルではバクテロイデス、フィーカリバクテリウム、ビフィドバクテリウム、ローズブリア、アリスティペス、コリンセラ、ブラウティア、コプロコッカス、ルミノコッカス、ユーバクテリウム、およびドレア；種レベルではバクテロイデス・ユニフォルミス、アリスティペス・ピュトレディニス、パラバクテロイデス・メルダエ、ルミノコッカス・ブロミイ、ドレア・ロンギカテナ、バクテロイデス・カッカエ、バクテロイデス・テタイオタオミクロン、ユーバクテリウム・ハリー、ルミノコッカス・トルケス、フィーカリバクテリウム・プラウスニッツイ、ルミノコッカス・ラクタリス、コリンセラ・アエルファシエンス、ドレア・フォルミシゲネランス、バクテロイデス・ブルガタス、およびローズブリアインテスティナリス挙げられる。胃腸内微生物叢としては、胃腸管の上皮を覆う粘膜層に位置するかまたは付着している粘膜関連微生物叢と、胃腸管の内腔に見られる管腔関連微生物叢が挙げられる。
【００３４】
「腸内投与」とは、消化管（胃を含む）に組成物の堆積を引き起こす、非乳児に組成物を供給するための従来からの形態を意味する。腸内投与の方法には、経鼻胃管または空腸管、経口、舌下および直腸を通しての投与が挙げられる。
【００３５】
「経口投与」とは、口を通して非乳児に組成物を供給するための従来からの形態を意味する。従って、経口投与は腸内投与の一形態である。
【００３６】
「有効量」とは、非乳児ヒトにおいて所望の処置結果をもたらすのに十分な量のＨＭＯを提供する組成物の量を意味する。所望の処置結果を達成するために、有効量を１回もしくはそれ以上の用量で投与することができる。
【００３７】
「ビフィドバクテリウム・ロングムおよび／またはビフィドバクテリウム・ビフィダムの相対存在量」とは、非乳児ヒトの胃腸管の微生物叢における他のビフィズス菌と比較したビフィドバクテリウム・ロングムおよび／またはビフィドバクテリウム・ビフィダムの存在量を意味する。
【００３８】
「ビフィドバクテリウム・ロングムおよび／またはビフィドバクテリウム・ビフィダムの相対増殖」とは、非乳児ヒトの胃腸管内の微生物叢における他のビフィズス菌と比較したビフィドバクテリウム・ロングムおよび／またはビフィドバクテリウム・ビフィダムの増殖を意味する。
【００３９】
「Ｂ.アドレセンティス系統発生グループのビフィフィドバクテリウム属」とは、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス、ビフィドバクテリウム・アングラタム、ビフィドバクテリウム・カテヌラタム、ビフィドバクテリウム・シュードカテヌラタム、ビフィドバクテリウム・カシワノヘンス、ビフィドバクテリウム・デンタムおよびビフィドバクテリウム・ステルコリスからなる群から選択される細菌である（Duranti et al. Appl. Environ. Microbiol. 79, 336 (2013); Bottacini et al. Microbial Cell Fact. 13:S4 (2014)）。好ましくは、Ｂ.アドレセンティス系統発生グループのビフィドバクテリウム属はビフィドバクテリウム・アドレセンティスおよび／またはビフィドバクテリウム・シュードカテヌラタムである。
【００４０】
「Ｂ.アドレセンティス系統発生グループのビフィズス菌の相対存在量」とは非乳児の胃腸管の微生物叢における他のビフィズス菌と比較したＢ.アドレセンティス系統発生グループのビフィズス菌の存在量を意味する。
【００４１】
「Ｂ．アドレセンティスおよび／またはＢ．シュードカテヌラタムの相対存在量」とは、非乳児の胃腸管の微生物叢における他のビフィズス菌と比較したＢ.アドレセンティスおよび／またはＢ．シュードカテヌラタムの存在量を意味する。
【００４２】
「Ｂ.アドレセンティス系統発生グループのビフィズス菌の相対増殖」とは、非乳児の胃腸管内の微生物叢における他のビフィズス菌と比較したＢ.アドレセンティス系統発生グループのビフィズス菌の増殖を意味する。
【００４３】
「Ｂ．アドレセンティスおよび／またはＢ．シュードカテヌラタムの相対増殖」とは、非乳児の胃腸管の微生物叢における他のビフィズス菌と比較したＢ．アドレセンティスおよび／またはＢ．シュードカテヌラタムの増殖を意味する。
【００４４】
「処置」とは、処置を受けているヒトの結果を改善もしくは安定させることを目的として、医学的状態または疾患に対処することを意味する。処置には、処置を受けるヒトの栄養ニーズに対処することによる、医学的状態または疾患の食事もしくは栄養管理が含まれる。「処置する」と「処置」は文法的に対応する意味を有する。
【００４５】
「二次予防」とは、無症候性疾患が症候性疾患へと進行するのを予防すること、または症候性疾患が悪化または再発することを予防することを意味する。疾患や状態の発生を予防することを目的とする一次予防とは対照的に、二次予防は、疾患または状態の悪化や再発を予防することを目的とする。個人／患者が疾患の保因者であるが症状がない場合、疾患は無症候性と見なされる。通常関連する顕著な症状を示さない場合、その状態は無症候性である可能性がある。
【００４６】
好ましくは、本発明は、非乳児ヒトにおける症候性または無症候性ＳＡＤの食事管理および／または食事の二次予防に関する。
【００４７】
「食事管理」なる用語は、疾患、障害または医学的状態のために、
−通常の食品もしくはその中に含まれる特定の栄養素、もしくは代謝産物を摂取、消化、吸収、代謝もしくは排泄する能力が制限された、損なわれた、もしくは乱れている、または
−他の医学的に決定された栄養要件を有する
いずれかの患者に、全体的にまたは部分的に規定食を与えることを意味する（参照：Commission Notice on the classification of Food for Special Medical Purposes of the European Commission, Official Journal of the European Union C 401, 25.11.2017, p. 10-11）。
【００４８】
本発明によれば、全身性自己免疫疾患を患っている非乳児ヒトにＨＭＯを投与すると、疾患／状態の症状が軽減され、および／または再発を遅らせることが発見された。従って、ヒトミルクオリゴ糖は、ヒトの全身性自己免疫疾患の処置、食事管理、または二次予防として使用できる。このため、ＨＭＯは非乳児ヒトにおけるＳＡＤの処置または二次予防に使用できる。従って、ＨＭＯは、関節リウマチ、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、バセドウ病、橋本甲状腺炎、乾癬、アジソン病、シェーグレン症候群、血管炎、重症筋無力症、およびＩ型糖尿病などの状態の処置および／または二次予防に使用できる。
【００４９】
従って、本発明の第１の態様は、非乳児ヒトにおける症候性および無症候性の全身性自己免疫疾患（ＳＡＤ）の二次予防、処置または食事管理において使用するためのＨＭＯに関する。
【００５０】
ＨＭＯは、１つもしくはそれ以上のフコシル化中性ＨＭＯ、１つもしくはそれ以上の非フコシル化中性ＨＭＯ、および／または１つもしくはそれ以上のシアリル化ＨＭＯであり得る。一実施形態では、ＨＭＯは、中性ＨＭＯの混合物、好ましくはフコシル化中性ＨＭＯおよび非フコシル化中性ＨＭＯを含む、から本質的になる、またはからなる混合物である。具体的には、１つもしくはそれ以上のフコシル化中性ＨＭＯは、２'−ＦＬ、３−ＦＬ、ＤＦＬ、ＬＮＦＰ−Ｉ、ＦＬＮＨ−ＩＩ、ＬＮＦＰ−ＩＩＩ、 ＬＮＦＰ−Ｖ、ＬＮＤＦＨ−Ｉ、ＬＮＤＦＨ−ＩＩ、ＬＮＤＦＨ−ＩＩＩ、ＦＬＮＨ−Ｉ、ＦＬＮＨ−ＩＩ、ＦＬＮｎＨ、ＦｐＬＮＨ−ＩおよびＦ−ｐＬＮｎＨ ＩＩから選択され、好ましくは２'−ＦＬ、３−ＦＬおよびＤＦＬである。好ましくは、１つもしくはそれ以上の非フコシル化中性ＨＭＯは、ＬＮＴ、ＬＮｎＴ、ＬＮＨ、ＬＮｎＨ、ｐＬＮＨおよびｐＬＮｎＨから選択され、好ましくはＬＮｎＴおよびＬＮＴである。１つもしくはそれ以上のシアリル化ＨＭＯは、好ましくは、３'−ＳＬ、６'−ＳＬ、ＬＳＴ ａ、ＬＳＴ ｂ、ＬＳＴ ｃ、ＤＳ−ＬＮＴ、Ｓ−ＬＮＨおよびＳ−ＬＮｎＨ Ｉから選択され、より好ましくは３'−ＳＬおよび６'−ＳＬである。フコシル化部分とシアリル化部分の両方を含むＨＭＯ、例えばＦＳＬも使用できる。いくつかの好ましい実施形態では、混合物は、ｉ）２'−ＦＬおよび／またはＤＦＬ、ならびにｉｉ）ＬＮｎＴおよび／またはＬＮＴを含む、から本質的になる、またはからなる（このことは、混合物が２'−ＦＬおよびＤＦＬのうちの少なくとも１つならびにＬＮｎＴおよびＬＮＴのうちの少なくとも１つを含む、から本質的になる、またはからなること、例えば混合物が２'−ＦＬおよびＬＮｎＴを含む、から本質的になる、またはからなることを意味する)。混合物はまた、２'−ＦＬおよびＤＦＬを含む、から本質的になる、またはからなることができる。ある実施形態では、混合物中のｉ）２'−ＦＬおよび／またはＤＦＬならびにｉｉ）ＬＮｎＴおよび／またはＬＮＴの質量比は、５：１〜１：１の範囲であり、例えば、２'−ＦＬおよびＬＮｎＴを含む、から本質的になる、またはからなる混合物中の２'−ＦＬおよびＬＮｎＴの比は、２：１または４：１である。他の好ましい実施形態では、混合物は、ｉ）２'−ＦＬおよび／またはＤＦＬならびにｉｉ）３'−ＳＬおよび／または６'−ＳＬを含む、から本質的になる、またはからなる。これらの実施形態はまた、ｉｉｉ）ＬＮｎＴおよび／またはＬＮＴを含むことができる。
【００５１】
ＨＭＯは、ヒト、ウシ、ヒツジ、ブタまたはヤギ種を含むがこれらに限定されない哺乳類から分泌される乳から、周知の方法によって単離または濃縮することができる。ＨＭＯはまた、微生物発酵、酵素プロセス、化学合成、またはこれらの技術の組み合わせを使用する周知の方法によって調製することができる。例えば、化学的方法を使用し、ＬＮｎＴはWO2011/100980およびWO2013/044928に記載されているようにして調製することができ、ＬＮＴはWO2012/155916およびWO2013/044928に記載されているようにして合成することができ、ＬＮＴおよびＬＮｎＴの混合物はWO2013/091660に記載されているようにして製造することができ、２'−ＦＬはWO2010/115934およびWO2010/115935に記載されているようにして製造することができ、３−ＦＬはWO2013/139344に記載されているようにして製造することができ、６'−ＳＬおよびその塩はWO2010/100979に記載されているようにして製造することができ、シアリル化オリゴ糖は、WO2012/113404に記載されているようにして製造することができ、ヒトミルクオリゴ糖の混合物は、WO2012/113405に記載されているようにして製造することができる。酵素生産の例として、シアリル化オリゴ糖は、WO2012/007588に記載されているようにして調製することができ、フコシル化オリゴ糖は、WO2012/127410に記載されているようにして調製することができ、ヒトミルクオリゴ糖の多様な混合物はWO2012/156897およびWO2012/156898に記載されているようにして、有利に調製することができる。さらに、WO01/04341およびWO2007/101862は、遺伝子改変大腸菌を使用して、フコースまたはシアル酸で置換されていることがあるコアヒトミルクオリゴ糖を調製する方法を説明している。
【００５２】
本発明の第２の態様は、非乳児ヒトにおける症候性および無症候性ＳＡＤの二次予防、処置または食事管理に使用するためのＨＭＯ、有利には中性ＨＭＯを含む合成組成物である。本発明の合成組成物に含まれるＨＭＯは、第１の態様で説明しているとおりである。
【００５３】
本発明の合成組成物は医薬組成物であり得る。本発明の医薬組成物は、薬学的に許容される担体、例えばリン酸緩衝生理食塩水、水中エタノール混合物、水および油／水もしくは水／油エマルションなどのエマルション、ならびに様々な湿潤剤または賦形剤を含むことができる。医薬組成物はまた、非乳児に投与した時、有害な、アレルギー性の、あるいは望ましくない反応を引き起こさない他の物質を含むこともできる。担体および他の材料としては、溶媒、分散剤、コーティング、吸収促進剤、制御放出剤、およびデンプン、ポリオール、造粒剤、微結晶性セルロース、希釈剤、潤滑剤、結合剤、および崩壊剤などの１つもしくはそれ以上の不活性賦形剤を挙げることができる。必要に応じて、本組成物の錠剤調剤は、標準的な水性または非水性技術によってコーティングできる。
【００５４】
本発明の医薬組成物は、例えば、所定量を含む錠剤、カプセル、もしくはペレットとして、もしくは所定濃度を含む粉末もしくは顆粒として、もしくは所定濃度を含むゲル、ペースト、溶液、懸濁液、エマルション、シロップ、ボーラス、舐剤、もしくは、所定濃度を含む水性または非水性液体中のスラリーとして経口投与できる。経口投与される組成物は、結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤、香味剤、および保湿剤を含むことができる。錠剤などの経口投与組成物は、場合によってはコーティングでき、その中の混合物の持続放出、遅延放出または制御放出を提供するように製剤化できる。
【００５５】
本発明の医薬組成物はまた、直腸坐剤、エアロゾル管、経鼻胃管または直接注入によって胃腸管に投与することができる。
【００５６】
本発明の医薬組成物はまた、抗ウイルス薬、抗生物質、プロバイオティクス、鎮痛剤、および抗炎症剤などの治療薬を含むことができる。非乳児ヒトに対するこれらの組成物の適切な投与量は、免疫状態、体重および年齢などの要因に基づいて、従来の方法によって決定できる。場合によっては、投与量はヒトの母乳中のＨＭＯに見られる濃度と同様の濃度である。所要量は一般に、１日あたり約１ｇ〜約２０ｇの範囲であり、ある実施形態では１日あたり約２ｇ〜約１５ｇ、例えば１日あたり約３ｇ〜約７．５ｇである。適切な用法は、当業者に知られている方法によって決定できる。
【００５７】
合成組成物は、栄養組成物でもあり得る。それは、タンパク質、脂質および／または消化可能な炭水化物の供給源を含むことができ、粉末または液体の形態であり得る。組成物は、唯一の栄養供給源または栄養補助食品となるように設計できる。
【００５８】
適当なタンパク質の供給源としては乳タンパク質、大豆タンパク質、米タンパク質、エンドウ豆タンパク質およびオート麦タンパク質、またはこれらの混合物が挙げられる。乳タンパク質は、乳タンパク質濃縮物、乳タンパク質分離物、乳清タンパク質もしくはカゼイン、または両方の混合物の形態であり得る。タンパク質は、総タンパク質、または部分的に加水分解されたもしくは広範囲に加水分解された加水分解タンパク質であり得る。加水分解されたタンパク質は、消化がよりよいという利点を提供し、これは、胃腸管が炎症を起こした非乳児にとって重要であり得る。タンパク質は遊離アミノ酸の形で提供することもできる。タンパク質は、栄養組成物のエネルギーの約５％〜約３０％、通常は約１０％〜２０％を構成することができる。
【００５９】
タンパク質源は、グルタミン、スレオニン、システイン、セリン、プロリン、またはこれらのアミノ酸の組み合わせの供給源であり得る。グルタミン供給源は、グルタミンジペプチドおよび／またはグルタミン濃縮タンパク質であり得る。腸細胞がエネルギー源としてグルタミンを使用することに起因して、グルタミンを含めることができる。スレオニン、セリン、プロリンはムチンの産生に重要なアミノ酸である。ムチンは胃腸管を覆い粘膜の治癒を改善する。システインはグルタチオンの重要な前駆体であり、体の抗酸化防御の鍵となる。
【００６０】
適当な消化可能な炭水化物としては、マルトデキストリン、加水分解もしくは加工デンプンもしくはコーンスターチ、グルコースポリマー、コーンシロップ、コーンシロップ固形物、高フルクトースコーンシロップ、米由来炭水化物、エンドウ豆由来炭水化物、ジャガイモ由来炭水化物、タピオカ、スクロース、グルコース、フルクトース、スクロース、ラクトース、ハチミツ、糖アルコール（例えばマルチトール、エリスリトール、ソルビトール）、またはこれらの混合物が挙げられる。好ましくは当該組成物はラクトースを含まない。一般に、消化可能な炭水化物は、栄養組成物のエネルギーの約３５％から約５５％を提供する。好ましくは栄養組成物はラクトースを含まない。特に適当な消化可能な炭水化物は、低デキストロース当量（ＤＥ）マルトデキストリンである。
【００６１】
適当な脂質としては中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）および長鎖トリグリセリド（ＬＣＴ）が挙げられる。好ましくは、脂質は、ＭＣＴとＬＣＴの混合物である。例えば、ＭＣＴは、脂質の約３０重量％〜約７０重量％を構成することができ、より具体的には約５０重量％〜約６０重量％を構成することができる。ＭＣＴは、消化がより容易であるという利点を提供し、これは胃腸管が炎症を起こした非乳児にとって重要であり得る。一般的に、脂質は栄養組成物のエネルギーの約３５％〜約５０％を提供する。脂質は必須脂肪酸（オメガ３およびオメガ６脂肪酸）を含むことができる。好ましくは、これらの多価不飽和脂肪酸は、脂質供給源の総エネルギーの約３０％未満を提供する。組成物はオメガ−３多価不飽和脂肪酸の供給源を含むことが特に好ましい。例えば、魚油、ドコサヘキサエン酸、α-リノレン酸および／またはエイコサペンタエン酸。多価不飽和脂肪酸は、ジホモ−食用−γ-リノレン酸（ＤＧＬＡ）であってもよい。
【００６２】
長鎖トリグリセリドの適当な供給源は、菜種油、ヒマワリ油、ヤシ油、大豆油、乳脂肪、トウモロコシ油、高オレイン油、および大豆レシチンである。分画ココナッツオイルは中鎖トリグリセリドの適当な供給源である。栄養組成物の脂質プロファイルは、好ましくは、約４：１〜約１０：１の多価不飽和脂肪酸オメガ−６（ｎ−６）対オメガ−３（ｎ−３）比を有するように設計される。例えば、ｎ−６対ｎ−３脂肪酸比は、約６：１〜約９：１であり得る。
【００６３】
栄養組成物は、好ましくは、ビタミンおよびミネラルも含む。栄養組成物が唯一の栄養源であることを意図する場合、それは好ましくは完全なビタミンおよびミネラルプロファイルを含む。ビタミンの例としては、ビタミンＡ、Ｂ複合体（Ｂ１、Ｂ２、Ｂ６、およびＢ１２など）、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、ナイアシン、ならびにパントテン酸、葉酸およびビオチンなどの酸性ビタミンが挙げられる。ミネラルの例としては、カルシウム、鉄、亜鉛、マグネシウム、ヨウ素、銅、リン、マンガン、カリウム、クロム、モリブデン、セレン、ニッケル、スズ、シリコン、バナジウムおよびホウ素が挙げられる。ビタミンＤの供給源が特に好ましい。
【００６４】
栄養組成物は、ルテイン、リコピン、ゼアキサンチン、およびベータカロテンなどのカロテノイドも含有することができる。含まれるカロテノイドの総量は、約０．００１μｇ／ｍＬ〜約１０μｇ／ｍＬまで変動し得る。ルテインは、約０．００１μｇ／ｍＬ〜約１０μｇ／ｍＬ、好ましくは約０．０４４μｇ／ｍＬ〜約５ｇ／ｍＬの量のルテインを含有することができる。リコピンは、約０．００１μｇ／ｍＬ〜約１０μｇ／ｍＬ、好ましくは約０．０１８５ｍｇ／ｍＬ〜約５ｇ／ｍＬの量のリコピンを含有することができる。ベータカロテンは、約０．００１μｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、例えば約０．０３４μｇ／ｍＬ〜約５μｇ／ｍＬのベータカロテンを含有することができる。
【００６５】
栄養組成物は、好ましくは、濃度を低くした、例えば、約３００ｍｇ／Ｌ〜約４００ｍｇ／Ｌのナトリウムも含む。残りの電解質は、腎機能に過度の腎溶質負荷を与えることなく、ニーズを満たすように設定された濃度で存在し得る。例えば、カリウムは、好ましくは約１１８０〜約１３００ｍｇ／Ｌの範囲で存在し、塩化物は、好ましくは約６８０〜約８００ｍｇ／Ｌの範囲で存在する。
【００６６】
栄養組成物はまた、他の様々な従来の成分、例えば、防腐剤、乳化剤、増粘剤、緩衝液、繊維およびプレバイオティクス（例えば、フルクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖）、プロバイオティクス（例えば、Ｂ.アニマリス亜種ラクティスＢＢ−１２、Ｂ．ラクティスＨＮ０１９、Ｂ．ラクティスＢｉ０７、Ｂ．インファンティスＡＴＣＣ １５６９７、Ｌ．ラムノサスＧＧ、Ｌ．ラムノサスＨＮ００１、Ｌ．アシドフィルスＬＡ−５、Ｌ．アシドフィルスＮＣＦＭ、Ｌ．ファーメンタムＣＥＣＴ５７１６、Ｂ．ロングムＢＢ５３６、Ｂ．ロングムＡＨ１２０５、Ｂ．ロングムＡＨ１２０６、Ｂ．ブレヴェＭ−１６Ｖ、Ｌ．レウテリＡＴＣＣ ５５７３０、Ｌ．レウテリＡＴＣＣ ＰＴＡ−６４８５、Ｌ．レウテリＤＳＭ １７９３８）、トコフェロール、カロテノイド、アスコルベート／ビタミンＣ、パルミチン酸アスコルビル、ポリフェノール、グルタチオン、およびスーパーオキシドジスムターゼ（メロン）などの抗酸化／抗炎症化合物、その他の生物活性因子（例えば、成長ホルモン、サイトカイン、ＴＦＧ−β）、着色剤、香味料、および安定剤、潤滑剤などを含むことができる。
【００６７】
栄養組成物は、可溶性粉末、液体濃縮物、または使用準備済みの製剤の形態であり得る。組成物は、経鼻胃管を介して、または経口で、非乳児に与えることができる。様々な香味料、繊維および他の添加剤も存在することができる。
【００６８】
栄養組成物は、固体または液体の形態の栄養組成物を調製するために一般的に使用される任意の製造技術によって調製できる。例えば、当該組成物は、様々な摂食溶液を混ぜ合わせることによって調製できる。脂質源を加熱および混合し、次に加熱および攪拌しながら乳化剤（例えばレシチン）、脂溶性ビタミン、およびタンパク質源の少なくとも一部を添加することにより、脂肪中タンパク質摂食溶液を調製できる。次に、炭水化物摂食溶液は、ミネラル、微量ミネラルおよび超微量ミネラル、増粘剤または懸濁剤を加熱および攪拌しながら水に添加することによって調製される。得られた溶液は炭水化物（例えば、ＨＭＯおよび消化可能な炭水化物源）を追加する前に加熱と攪拌を継続しながら１０分間保持される。次に、得られた摂食溶液を加熱および撹拌しながら一緒に混合し、ｐＨを６．６〜７．０に調整し、その後、組成物を高温短時間処理にかけ、その間に組成物を熱処理し、乳化し、均質化し、その後、放冷する。水溶性ビタミンとアスコルビン酸を加え、必要に応じてｐＨを所望の範囲に調整し、香味料を加え、水を加えて、所望の全固体濃度を達成する。
【００６９】
液体製品の場合、得られた溶液を無菌で包装して、無菌包装された栄養組成物を形成できる。この形態では、栄養組成物は、すぐに食べられる形態または濃縮された液体形態であり得る。あるいは、組成物を噴霧乾燥し、処理し、再構成可能な粉末として包装できる。
【００７０】
栄養製品がすぐに食べられる栄養液である場合、液体中のＨＭＯの総濃度は、液体の重量で約０．０００１％〜約２．０％、例えば約０．００１％〜約１．５％、例えば約０．０１％〜約１．０％である。栄養製品が濃縮栄養液体である場合、液体中のＨＭＯの総濃度は、液体の重量で約０．０００２％〜約４．０％、例えば約０．００２％〜約３．０％、例えば約０．０２％〜約２．０％である。
【００７１】
合成組成物、好ましくは栄養組成物は、カプセル、錠剤または小袋／スティックパックなどの単位投与剤型でもあり得る。例えば、合成組成物、好ましくは栄養組成物は、ＨＭＯ、ならびに希釈剤、賦形剤、抗酸化剤、潤滑剤、着色剤、結合剤、崩壊剤などの製剤および投与を補助する１つもしくはそれ以上の追加の成分を含む錠剤形態または粉末形態であり得る。
【００７２】
適当な希釈剤、賦形剤、潤滑剤、着色剤、結合剤、および崩壊剤としては、ポリエチレン、ポリ塩化ビニル、エチルセルロース、アクリレートポリマーおよびそれらのコポリマー、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリヒドロキシエチルメチルアクリレート（ＰＨＥＭＡ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）、またはポリアクリルアミド（ＰＡ）、カラギーナン、アルギン酸ナトリウム、ポリカルボフィル、ポリアクリル酸、トラガカント、メチルセルロース、ペクチン、天然ガム、キサンタンガム、グアーガム、カラヤガム、ヒプロメロース、ステアリン酸マグネシウム、微結晶性セルロース、およびコロイド状二酸化ケイ素が挙げられる。適当な抗酸化物質は、ビタミンＡ、カロテノイド、ビタミンＣ、ビタミンＥ、セレン、フラボノイド、ポリフェノール、リコピン、ルテイン、リグナン、コエンザイムＱ１０（「ＣｏＱＩＯ」）およびグルタチオンである。
【００７３】
単位投与剤型、特に小袋またはスティックパック形態のものは、主要栄養素などの様々な栄養素を含むこともできる。特に好ましい栄養素は、上記のように、ビタミンＤ、オメガ−３多価不飽和脂肪酸、およびプロバイオティクスの供給源である。
【００７４】
ＨＭＯまたは合成組成物の適切な投与量は、免疫状態、体重、年齢などの要因に基づいて、従来の方法で決定できる。場合によっては、投与量は、ヒトの母乳中のＨＭＯに見られる濃度と同様の濃度である。所要量は、一般に、１日あたり約１g〜約２０ｇの範囲であり、ある実施形態では、１日あたり約１ｇ〜約１５ｇ、例えば、１日あたり約２ｇ〜約１０ｇであり、ある実施形態では、１日あたり約３ｇ〜約７．５ｇである。適切な投与計画は、従来の方法で決定することができる。理想的には、症状が処置されているか（通常高用量)、二次予防が意図されているか（低用量）に応じて選択された正確な量で、１日あたり約２ｇ〜約１０ｇの用量が投与される。
【００７５】
ＨＭＯまたは合成組成物は、ヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）の有効量の個別の１日用量を少なくとも１４日分含むパックの形態で提示できる。１日用量は、好ましくは小袋／スティックパックの形態であるが、任意の適切な形態であってもよい。各用量は、好ましくは、約１ｇ〜約２０ｇのヒトミルクオリゴ糖、より好ましくは、約２ｇ〜約１５ｇ、例えば、約２ｇ〜約１０ｇを含む。好ましくは、パックは、少なくとも２１日分の１日用量、より好ましくは少なくとも２８日分の１日用量を含む。最も適切なパックは、４週間または１か月に十分な用量を含む。パックは使用説明書を含むことができる。
【００７６】
適切な用量は、例えば、体重および／または状態、症状の重症度、副作用の発生率および／または重症度、ならびに投与方法などのいくつかの要因に基づいて決定することができる。適切な用量範囲は、当業者に既知の方法により決定され得る。初期処置段階に、投与量はより高くなり得る（例えば、１日当たり３ｇ〜１５ｇ、好ましくは１日当たり４ｇ〜１０ｇ、より好ましくは１日あたり４ｇ〜７．５ｇ）。維持段階に、投与量を減らすことができる（例えば、１日当たり１ｇ〜１０ｇ、好ましくは１日当たり２ｍｇ〜５ｇ、より好ましくは１日当たり２ｇ〜５ｇ）。
【００７７】
処置期間は体重および／または状態、症状の重症度、副作用の発生率および／または重症度などのいくつかの要因に基づいて決定することができる。好ましくは、当該期間は少なくとも１４日、より好ましくは少なくとも３週間であり、さらにより好ましくは４週間以上である。合成組成物またはＨＭＯも長期摂取できる。
【００７８】
ＨＭＯ、合成組成物、およびパックは、非乳児ヒトにおける症候性および無症候性の全身性自己免疫疾患（ＳＡＤ）の二次予防、処置、または食事管理の方法に使用できる。ＨＭＯ、合成組成物およびパックは先に開示されている。
【００７９】
本発明のある態様は、
−１つもしくはそれ以上のヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）、
−１つもしくはそれ以上のヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）を含む合成組成物、または
−１つもしくはそれ以上のヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）の有効量の個別の１日用量を少なくとも１４日分含むパックの全身性自己免疫疾患（ＳＡＤ）を有する非乳児の食事管理における使用である。ＨＭＯ、合成組成物およびパックは先に説明している。
【実施例】
【００８０】
本明細書に記載している実施例は、単なる説明を目的としており、限定的なものと捉えてはならない。
【００８１】
実施例１
合計１００人の男女の健康な成人を本試験参加のために採用する。１〜２週間のスクリーニング訪問とならし期間の後、参加者を選択し、各１０人の被験者の１０群に無作為に分ける。１つの群には、２グラムのグルコースを含むプラセボ製品を投与する。残りの９群には、ａ）２'−ＦＬ２０ｇ、ｂ）２'−ＦＬ１０ｇ、ｃ）２'−ＦＬ５ｇ、ｄ）ＬＮｎＴ２０ｇ、ｅ）ＬＮｎＴ１０ｇ、f）ＬＮｎＴ５ｇ、ｇ）２'−ＦＬおよびＬＮｎＴの重量で２：１の混合物２０ｇ、ｈ）２'−ＦＬおよびＬＮｎＴの重量で２：１の混合物１０ｇ、およびｉ）２'−ＦＬおよびＬＮｎＴの重量で２：１の混合物５ｇを含む処置製品を４週間投与する。プラセボおよび処置製品は、単位投与容器に入っている粉末形態である。
【００８２】
健康な成人は、１８歳から６０歳までの年齢であれば参加する資格がある。採用された参加者はすべて、試験手順を理解し、遵守することができ、進んでこれらに取り組む意思がある。以下の場合、参加者を除外する：スクリーニング訪問の１か月前に臨床試験に参加していた；スクリーニング検査において、試験参加に臨床的に影響する異常な結果を示した；悪性腫瘍、糖尿病、重度の冠動脈疾患、腎臓病、神経系疾患、もしくは重度の精神疾患、または試験結果を混乱させる可能性のある状態など、重篤な疾患を患っている；試験前の３ヶ月間、高用量のプロバイオティックサプリメント(ヨーグルトは可）を使用した；試験の６ヶ月前に抗生物質を摂取した；試験の２週間前に症状の評価を妨げた可能性のある薬剤を定期的に摂取した；および妊娠中または授乳中である。
【００８３】
スクリーニング訪問時に、病歴と併用薬を登録し、安全分析のための血液試料を採取する。便試料キットを配布する。参加者には、次の訪問まで試料を冷凍庫に保管するように指示する。
【００８４】
２回目の訪問時に、適格基準を確認し、適格な被験者を本試験として１０の群（処置群とプラセボ群）に無作為に分ける。便試料を回収し、新しい試料のための器具を配布する。参加者は、毎日データを記録する双方向のインターネット対応システムに精通し、処置または対照製品のいずれかを与えられる。被験者には、試験中は通常の食事を変えないように念を押す。バイオマーカーの研究のため、血液試料を採取する。便試料を分析まで−８０℃で保存する。
【００８５】
試験は４週間であり、その間、参加者にはプラセボまたは処置製品のいずれかを毎日摂取してもらう。参加者には朝、朝食とともに製品を摂取するように指示する。双方向のインターネット対応システムを通じてコンプライアンスを監視する。
【００８６】
参加者はまた、システムを使用して以下を記録する：
−ブリストル便形状スケール（BSFS）情報．
−腹痛、腹部不快感、腹部けいれん、腹部腫脹、腹部膨満などの症状情報．
−付加的に、胃腸症状評価尺度（GSRS）情報。
【００８７】
このアンケートには、５つの側面（腹痛、消化不良、逆流、下痢、便秘)を網羅する１５項目が含まれており、７段階のリッカート尺度を使用している。
【００８８】
２週間後、各参加者は医療チームの訪問を受ける。便試料および血液試料を回収する。便試料を分析まで−８０℃で保存する。新しい試料の器具を配布する。被験者には試験中、通常の食事を変えないように念を押す。
【００８９】
４週間後、各参加者は医療チームの終了訪問を受ける。便試料および血液試料を回収する。便試料を分析まで−８０℃で保存する。
【００９０】
血液試料を電気化学発光プラットフォームにおいて多重化フォーマットで同時に分析する。パネルには以下の測定対象が含まれる：BUN、LDLコレステロール、HDLコレステロール、鉄、トリグリセリド、ApoA1、ApoB、インスリン、FFA、グルカゴン、IL-10、IL-6、およびTNF-α。
【００９１】
微生物叢のプロファイルを評価するために、９６ウエルPowerSoil DNA単離キット（MO-BIO）を使用し、便試料からDNAを抽出する。PCRにおいて、プレートあたり最低１つの試料−ウエルを空にしておき、陰性対照とする。PCRは、フォワードプライマーSD-Bact-0341-bS-17およびリバースプライマーSD-Bact-0785-aA-21をイルミナアダプターに取り付けて行う（Klindworth et al. Nucleic Acids Res. 41, e1 (2013)）。これらはユニバーサル・バクテリアル16S rDNAプライマーであり、これはV3-V4領域を標的としている。以下のPCRプログラムを使用する：９８℃で３０秒、２５×（９８℃で１０秒、５５℃で２０秒、７２℃で２０秒）、７２℃で５分。増幅は、１％アガロースゲル上で産物を流すことにより確認する。Nextera Index Kit V2（Illumina）を使用するネステットＰＣＲにバーコードを加え、以下のPCRプログラムを行う：９８℃で３０秒、８×（９８℃で１０秒、５５℃で２０秒、７２℃で２０秒）、７２℃で５分間。プライマーの付着は、１％アガロースゲル上で産物を流すことにより確認する。ネステットPCRの産物を、SequalPrep正規化プレートキットを使用して正規化し、プールする。プールしたライブラリを留去によって濃縮し、プールしたライブラリのDNA濃度をQubit高感度アッセイキット（Themo Fisher Scientific）を使用したQubit蛍光光度計で測定する。配列決定は、MiSeqデスクトップシーケンサーで、MiSeq Reagent Kit V3(Illumina)を使用して２×３００ｂｐペアエンドシーケンスで行う。ＵＳＥＡＲＣＨの６４ビットバージョン（Edgar, Nature Methods 10, 996 (2013)）を使用し、配列データを生体情報分析にかける。
【００９２】
ビフィズス菌集団を評価するために、DNA試料のITSプロファイリングを行う。
【００９３】
ビフィズス菌集団のプロファイリングの結果は、最初の２週間、単一のＨＭＯを摂取するとＢ.アドレセンティスの存在量が増加し、２つのＨＭＯの混合物を摂取するとＢ.シュードカテヌラタムの存在量が増加することを示している。Ｂ.アドレセンティスおよびＢ.シュードカテヌラタムはどちらも、Ｂ.アドレセンティス系統発生グループのメンバーである。４週目には、Ｂ.アドレセンティス系統発生グループのメンバーの存在量が減少し、一方でビフィドバクテリウム・ロングムおよび／またはビフィドバクテリウム・ビフィダムの存在量が増加する。ＨＭＯを１４日以上経口摂取すると、健康な成人の微生物叢におけるビフィドバクテリウム・ロングムおよび／またはビフィドバクテリウム・ビフィダムの存在量、および他のビフィズス菌種の全体と比較したそれらの相対存在量が明らかに増加することがわかる。SCFA分析は、ＨＭＯを摂取している成人は、最初にアセテートとプロピオネートが増加し、次いで約１４日後にブチレートが増加することを示している。
【００９４】
実施例２
糖尿病およびシェーグレン症候群の非肥満糖尿病（NOD）マウスモデルにおいて、ＨＭＯの抗炎症効果を調べる。
【００９５】
マウスを４つの群（ｎ ＝ ８）に分け、１つの対照群には標準的な水道水を与え、３つの処置群には、飲料水に約１０グラムのヒトの１日用量（NODマウス系統の代謝率と１日あたりの水消費量によって計算）に相当する用量の２'−ＦＬ、２'−ＦＬおよびＤＦＬの混合物（重量比４：１）、または６'−ＳＬを補充して与える。
【００９６】
週２回（bi-weekly）で水を換えながら１２週間、マウスを処置する。１２週齢から、マウスの血糖値を毎週検査する。血糖値が７mmol/Lを超えるマウスを注意深く監視し、２回の測定で連続して血糖値が１２mmol/L以上になった場合、安楽死させる（そして試験から除外する）。
【００９７】
１２週間の処置後、マウスを安楽死させ、以下の試料を採取する：血清、膵臓、唾液腺、ハーデリアン涙腺、眼窩外涙腺、ならびに盲腸および結腸内容物。
【００９８】
唾液腺および涙腺は、マウス一匹あたり８つ（唾液腺）および２つ（涙腺）のヘマトキシリンおよびエオシン染色パラフィン包埋切片の腺全体の大きさに対する炎症性病巣の合計面積を測定することによって分析する。膵臓は組織切片を使用し、膵島炎の程度について最低２５（好ましくは５０）のランゲルハンス島をスコアリングして、０〜３の範囲でスコアにし（０＝膵島炎なし、１＝膵島周囲炎、２＝膵島の５０％以下に支障を来している浸潤性膵島炎、３＝膵島の５０％以上に支障を来している浸潤性膵島炎）、同様に分析する。
【００９９】
盲腸内容物および血清を使用し、短鎖脂肪酸、すなわちアセテート、プロピオネート、ブチレートの濃度を測定する。安楽死後に採取した結腸内容物と共にベースラインで得られた便試料を使用し、微生物叢の１６ＳｒＲＮＡゲノム配列決定を行う。
【０１００】
血清試料も使用し、MesoscaleのV-plexマウスサイトカイン19-Plexキット（V-plex Mouse Cytokine 19-Plex Kit）を用いてサイトカイン濃度を測定することによって、全身性炎症を測定する。
【０１０１】
結果は、２'−ＦＬ、６'−ＳＬ、ならびに２'−ＦＬおよびＤＦＬの混合物で処置したマウスは、対照マウスと比較し、唾液腺および涙腺の炎症が軽減し、膵臓膵島炎もまた軽減したことを示している。
【０１０２】
短鎖脂肪酸の測定は、２'−ＦＬおよび２'−ＦＬ＋ＤＦＬを補充すると、対照動物と比較して血清中のアセテート濃度が増加することを示している。６'−ＳＬで処置すると、盲腸および血清の両方のアセテート濃度が増加し、また盲腸のブチレート濃度も増加させる。
【０１０３】
これらのデータは、２'−ＦＬ、６'−ＳＬ、または２'−ＦＬおよびＤＦＬの混合物を、ヒトの約１０ｇ／日用量に相当する用量で毎日補充すると、ＮＯＤマウスの外分泌腺の炎症が軽減することを示している。
【０１０４】
実施例３
M-SHIME（登録商標）(M−TripleSHIME（登録商標）)インビトロ胃腸モデル(Prodigest)において、微生物叢に対するＨＭＯの影響を調べた。M−TripleSHIME（登録商標）の典型的なリアクター装備は、ヒトの消化管の様々な部分を模擬する連続した４つのリアクター（反応器）から構成されていた。最初の２つのリアクターは、食物摂取と消化の様々な工程をフィル・アンド・ドロー法で模擬するものであり、それは、所定量のSHIME食材（１４０mL ３×/日）と膵液や胆汁液（６０mL ３×/日）を、それぞれ胃と小腸の区画に加え、特定の間隔後にそれぞれのリアクターを空にする蠕動ポンプを備えていた。最後の２つの区画は、一定の体積でpH制御した、連続的に攪拌されるリアクターであった。種々の菅の保持時間とpHを選択し、結腸の様々な部分のインビボ条件に類似するようにした。近位結腸はｐＨ５．４〜５．６、保持時間＝１２時間に設定し、遠位結腸はｐＨ６．０〜６．５、保持時間＝２０時間に設定した。２'−ＦＬ、ＬＮｎＴ、または混合物（４：１の質量比の２'−ＦＬ：ＬＮｎＴ）を、１日あたり１０グラムに相当する濃度でSHIM食材に加えた。
【０１０５】
便の微生物叢を接種すると、これらのリアクターは近位、横行および遠位結腸を模擬した。結腸の様々な領域において微生物集団を２週間、適応させた後、代表的な微生物集団が３つの結腸区画で確立され、この集団は、異なる結腸領域で組成および機能性の両方が異なっていた。
【０１０６】
粘液層のコロニー形成を考慮に入れるため、さらに、結腸を模擬するリアクターにブタのムチンを含めた。このようにして、M-SHIME（登録商標）によって、管腔および粘膜関連の微生物集団の両方を数週間にわたって培養することが可能になった。
【０１０７】
M-SHIME（登録商標）は、４段階で操作した：
１．安定化：健康な成人から採取した新鮮な便試料をリアクターに接種した後、２週間の安定化期間をおき、それによって、微生物集団が局所環境条件に応じて異なるリアクターで区別できるようにした。この期間中、便の接種材料に元から存在していた腸内微生物叢の最大多様性を支える、基本的な栄養素マトリックスが提供された。
【０１０８】
２．対照：この２週間（Ｃ１およびＣ２）は、標準的な栄養素マトリックスを１４日間、モデルに投与した。異なるリアクターにおけるベースラインの微生物集団の組成および活性を試料分析によって測定し、これを参照として使用した。
【０１０９】
３．処置：SHIMEシステムを通常の条件下で３週間（Ｔ１、Ｔ２およびＴ３）、操作したが、ＨＭＯを補充した標準的な栄養素マトリックスを使用した。試験したＨＭＯは、２'−ＦＬ、ＬＮｎＴ、ならびに２'−ＦＬおよびＬＮｎＴの４：１混合物であった。
【０１１０】
４．ウォッシュアウト：この２週間（Ｗ１およびＷ２）は、SHIMEシステムを標準的な栄養素マトリックスのみで、再び操作する。
【０１１１】
各リアクター内の液体試料を定期的に採取し（週の１日目、３日目、５日目はそれぞれ、図１のＡ、Ｂ、Ｃに対応する）、微生物代謝産物および居住微生物集団の組成について分析した。具体的には、ビフィズス菌の組成は、ＩＴＳプロファイリングを使用して分析した。
【０１１２】
図１は、近位（ＰＣ）および遠位（ＤＣ）結腸リアクターにおける２'−ＦＬ処置に関連する酢酸（ＡＡ）、プロピオン酸（ＰＡ）、酪酸（ＢＡ）、および総ＳＣＦＡ(総量)の絶対値を表している。
【０１１３】
発酵システムの結果は、ＨＭＯが塩基−酸の消費に影響を与えることを示し、これは、ＨＭＯが近位結腸および、程度は低いが遠位結腸の両方において発酵したことを意味する。細菌の代謝産物の分析は、ＨＭＯ処置によって、主にアセテートおよびプロピオネート産生の増加により、両方の結腸領域における総ＳＣＦＡの産生増加を直ちに誘導することを示した。ＨＭＯ処置の３週目の間に、ブチレートが増加した。これは、アセテートの減少と関連していた。
【０１１４】
ビフィズス菌集団のプロファイリングは、最初の２週間（Ｔ１およびＴ２）は、ＨＭＯを摂取するとＢ.アドレセンティスの存在量が増加することを示した。しかし、３週目（Ｔ３）までに、Ｂ.アドレセンティス系統発生グループのメンバーの相対存在量が減少し、その一方でビフィドバクテリウム・ロングムおよび／またはビフィドバクテリウム・ビフィダムの存在量および相対存在量が増加した。
【０１１５】
M-SHIMEにＨＭＯを供給すると、ＳＣＦＡの産生に影響を与え、１４日以上の処置によって、両方の結腸領域におけるブチレート濃度が増加することを認めることができる。
【０１１６】
実施例４
合計１８０人の全身性自己免疫状態を有する男女の参加者を、本試験参加のために採用する。試験に含める際、各参加者は、処置を開始する前に様々な胃腸状態および非胃腸状態を報告する電子的調査票を記入する。スコア１が「症状なし」、スコア５が「重度の症状」を意味する、５ポイントのリッカート尺度を用いる。次に、患者は約４ｇの２'−ＦＬ、または２'−ＦＬとＬＮｎＴの４：１混合物（重量で）を摂取する。
【０１１７】
その後３週間ごとに、患者はさらに調査票に再び記入し、様々な胃腸状態および非胃腸状態を報告する。調査に記入した患者には、さらに３週間のＨＭＯを与える。調査票を記入しない患者は、試験から除外する。
【０１１８】
３週間後、初期症状のある患者は、胃腸の痛み、便秘、下痢、活力、集中力、うつ病、不安神経症、および片頭痛／頭痛が改善したと報告する。１２週間後、患者の平均症状スコアは、バックグラウンドの健康な母集団のレベルまで低下する。さらに、初期症状のない患者は、平均症状スコアの増加を示さない。
【図１】
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【国際調査報告】
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