(57)【要約】ペイロードに共有結合されたか、またはリンカーを介してペイロードに結合された認識エレメントを含む結合体が開示される。ペイロードは、医薬剤（例えば、抗腫瘍剤、抗感染剤、もしくは抗炎症剤）または診断剤である。結合体を使用する方法もまた開示される。一般に、本発明は、例えば、ペイロード（例えば、抗腫瘍剤または抗菌剤）をそれを必要とする対象における疾患部位（例えば、癌組織（例えば、結腸直腸癌組織））にデリバリーするための、結合体、それを含有する医薬組成物、およびそれらの使用方法を提供する。ペイロードは、腫瘍、前癌性組織、または病変に集合するマイクロバイオームに標的化され得る。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ペイロードに共有結合された、またはペイロードにリンカーを介して結合される認識エレメントを含み、前記ペイロードは医薬剤である、結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２】
前記ペイロードが抗腫瘍剤である、請求項１に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項３】
前記抗腫瘍剤が、７−エチル−１０−ヒドロキシ−カンプトテシン（ＳＮ−３８）、イリノテカン、モノメチルオーリスタチンＥ、モノメチルオーリスタチンＦ、パクリタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ピロロベンゾジアゼピン、１０−ヒドロキシカンプトテシン、エキサテカン、シクロパミン、タセジナリン、５’−デオキシ−５−フルオロウリジン、５−フルオロウラシル、カリチアマイシン、メイタンシノイド、メイタンシン、メトトレキサート、ズオカルマイシン、エルロチニブ、ゲフィチニブ、カペシタビン、ロイコボリン、トリフルリジン、チピラシル、またはＣＣ−１０６５である、請求項２に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項４】
前記抗腫瘍剤が、ＳＮ−３８、モノメチルオーリスタチンＥ、カペシタビン、５’−デオキシ−５−フルオロウリジン、または５−フルオロウラシルである、請求項２に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項５】
前記抗腫瘍剤が、ＳＮ−３８である、請求項２に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項６】
前記抗腫瘍剤が、モノメチルオーリスタチンＥである、請求項２に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項７】
前記抗腫瘍剤が、５−フルオロウラシルである、請求項２に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項８】
前記抗腫瘍剤が、５’−デオキシ−５−フルオロウリジンである、請求項２に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項９】
前記抗腫瘍剤が、カペシタビンである、請求項２に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１０】
前記ペイロードが抗感染剤である、請求項１に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１１】
前記抗感染剤が、アミカシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシン、パロモマイシン、ストレプトマイシン、ゲルダナマイシン、ハービマイシン、リファキシミン、ロラカルベフ、エルタペネム、ドリペネム、メロペネム、セファドロキシル、セファゾリン、セファレキシン、セファクロル、セフプロジル、セフロキシム、セフィキシム、セフジニル、セフジトレン、セフォペラゾン、セフォタキシム、セフポドキシム、セフチブテン、セフトリアクソン、セフェピム、セフタロリンフォサミル、セフトビプロール、バンコマイシン、テイコプラニン、テラバンシン、ダルババンシン、オリタバンシン、クリンダマイシン、リンコマイシン、ダプトマイシン、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、テリスロマイシン、スピラマイシン、アズトレオナム、フラゾリドン、ニトロフラトイン、リネゾリド、ポシゾリド、ラデゾリド、トレゾリド、アモキシシリン、アンピシリン、アズロシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、メズロシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、ピペラシリン、テモシリン、チカルシリン、コリスチン、バシトラシン、ポリミキシンＢ、シプロフロキサシン、エノキサシン、ガチフロキサシン、ゲミフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、モキシフロキサシン、ナジフロキサシン、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン、トロバフロキサシン、グレパフロキサシン、スパルフロキサシン、テマフロキサシン、マフェナイド、スルファセタミド、スルファジアジン、スルファジアジン銀、スルファジメトキシン、スルファメチゾール、スルファニルアミド、スルファサラジン、スルフィソキサゾール、トリメトプリム、スルファメトキサゾール、スルホンアミドクリソイジン、デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、メタサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、テトラサイクリン、クロファジミン、ダプソン、カプレオマイシン、シクロセリン、エタンブトール、エチオンアミド、イソニアジド、ピラジンアミド、リファンピシン、リファブチン、リファペンチン、ストレプトマイシン、アルスフェナミン、クロラムフェニコール、ホスホマイシン、フシジン酸、メトロニダゾール、ムピロシン、プラテンシマイシン、キヌプリスチン、ダルホプリスチン、チアムフェニコール、チゲサイクリン、チニダゾール、テイクソバクチン、マラシジン、フェノール、ヒドロキシナフタレン、キニーネ、ヒドロキシクロロキン、ケトコナゾール、フルコナゾール、またはアムホテリシンＢである、請求項１０に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１２】
ペイロードに共有結合された、またはペイロードにリンカーを介して結合される認識エレメントを含み、前記ペイロードが診断剤である、結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１３】
前記認識エレメントが、微生物またはそれにより産生されるタンパク質により認識可能である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１４】
前記認識エレメントが、式Ｒ１−Ｌ−（式中、
Ｒ１が、任意で置換されるＣ１−２２アルカノイル、任意で置換されるＣ２−２２アルケノイル、任意で置換されるＣ２−２２アルキノイル、任意で置換されるＣ６−１２アロイル、任意で置換されるＣ１−２２アルコキシカルボニル、任意で置換されるＣ１−２２アルキルアミノカルボニル、任意で置換されるＣ１−２２アルキルウレイド、−Ｎ（ＲＮ）２で任意で置換される脂肪酸アシル、メトキシポリエチレングリコール酢酸アシル、メトキシポリエチレングリコールプロピオン酸アシル、アミノ酸残基、ジペプチド、トリペプチド、β−Ｎ−アセチルグルコサミン、β−１，４−グルカン、任意で置換されるシンナモイル、Ｄ−アラニル−メソ−２，６−ジアミノ−ピメリルアミド、任意で置換されるアルキル、または任意で置換されるアリールアルキルであり；
Ｌは、アミノ酸残基、−Ｏ−ＣＯ−Ｌ１−、−ＮＨ−ＣＯ−Ｌ１−、または−ＳＯ２−Ｌ１−であり、各ＲＮは、独立してＣ１−６アルキルであり、Ｌ１は、アミノ酸残基である）の基である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１５】
Ｒ１が、任意で置換されるＣ１−１４アルカノイル、任意で置換されるベンゾイル、任意で置換されるＣ１−１４アルコキシカルボニル、または任意で置換されるＣ１−１４アルキルアミノカルボニルである、請求項１４に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１６】
Ｒ１が、任意で置換されるプロパノイル、任意で置換されるベンゾイル、任意で置換されるフェニルプロピオニル、任意で置換されるナフチルプロピオニル、任意で置換されるジヒドロキノリンカルボニル、ブタノイル、ヘキサノイル、オクタノイル、ドデカノイル、テトラデカノイル、ヘキシルオキシカルボニル、オクチルオキシカルボニル、ドデシルオキシカルボニル、ヘキシルウレイド、オクチルウレイド、およびドデシルオキシウレイドからなる群から選択される、請求項１４に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１７】
各任意の置換基が、独立してヒドロキシル、アミノ、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキル、ならびにハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキル、５員のヘテロ環、および６員のヘテロ環からなる群から独立して選択される１〜５個の基で任意で置換されるフェニルである、請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１８】
各任意の置換基が、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキル、ならびにヒドロキシル、アミノ、Ｃ１−６アルコキシ、およびＣ１−６アルキルからなる群から独立して選択される１、２、３、４、または５個の基で任意で置換されるフェニルからなる群から独立して選択される、請求項１７に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１９】
Ｒ１が、−Ｎ（ＲＮ）２で任意で置換される脂肪酸アシル、メトキシポリエチレングリコール酢酸アシル、メトキシポリエチレングリコールプロピオン酸アシル、アミノ酸残基、ジペプチド、トリペプチド、β−Ｎ−アセチルグルコサミン、β−１，４−グルカン、任意で置換されるシンナモイル、Ｄ−アラニル−メソ−２，６−ジアミノ−ピメリルアミド、任意で置換されるアルキル、または任意で置換されるアリールアルキルである、請求項１４に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２０】
Ｌが、アミノ酸残基である、請求項１４〜１９のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２１】
Ｌが、Ｒ１にそのα−アミノ基を介して結合したアミノ酸残基である、請求項１４〜２０のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２２】
Ｒ１が、フェニルで任意で置換されるＣ１−１４脂肪酸アシルである、請求項１４〜２１のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２３】
Ｌが、Ｄ−アミノ酸残基である、請求項１４〜２２のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２４】
Ｌが、Ｄ−アスパラギン、Ｄ−アルギニン、Ｄ−グルタミン、Ｄ−アスパラギン酸、Ｄ−ヒスチジン、またはＤ−グルタミン酸である、請求項２３に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２５】
Ｌが、任意で置換されるＤ−アスパラギン、任意で置換されるＤ−アルギニン、任意で置換されるＤ−グルタミン、任意で置換されるＤ−アスパラギン酸、任意で置換されるＤ−ヒスチジン、または任意で置換されるＤ−グルタミン酸である、請求項２３に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２６】
Ｌが、Ｄ−アスパラギンである、請求項２３に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２７】
前記認識エレメントが、３−（２−メトキシエトキシ）プロパノイル−Ｄ−アスパラギニル、２−（４−イソブチルフェニル）プロパノイル−Ｄ−アスパラギニル、６−メトキシナフタレン−２−イル）プロパノイル−Ｄ−アスパラギニル、（１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−７−（ピペラジン−１−イル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボニル、ヘキシルオキシカルボニル−Ｄ−アスパラギニル、ドデシルオキシカルボニル−Ｄ−アスパラギニル、ヘキシルカルバモイル−Ｄ−アスパラギニル、ドデシルカルバモイル−Ｄ−アスパラギニル、ブタノイル−Ｄ−アスパラギニル、ヘキサノイル−Ｄ−アスパラギニル、オクタノイル−Ｄ−アスパラギニル、ドデカノイル−Ｄ−アスパラギニル、テトラデカノイル−Ｄ−アスパラギニル、ベンゾイル−Ｄ−アスパラギニル、２−ヒドロキシベンゾイル−Ｄ−アスパラギニル、５−アミノ−２−ヒドロキシベンゾイル−Ｄ−アスパラギニル、２−フェニルアセチル−Ｄ−アスパラギニル、ブタノイル−Ｄ−アルギニニル、ヘキサノイル−Ｄ−アルギニニル、オクタノイル−Ｄ−アルギニニル、ドデカノイル−Ｄ−アルギニニル、テトラデカノイル−Ｄ−アルギニニル、ブタノイル−Ｄ−アスパルチル、ヘキサノイル−Ｄ−アスパルチル、オクタノイル−Ｄ−アスパルチル、ドデカノイル−Ｄ−アスパルチル、テトラデカノイル−Ｄ−アスパルチル、ブタノイル−Ｄ−グルタミニル、ヘキサノイル−Ｄ−グルタミニル、オクタノイル−Ｄ−グルタミニル、ドデカノイル−Ｄ−グルタミニル、テトラデカノイル−Ｄ−グルタミニル、ブタノイル−Ｄ−グルタミル、ヘキサノイル−Ｄ−グルタミル、オクタノイル−Ｄ−グルタミル、ドデカノイル−Ｄ−グルタミル、テトラデカノイル−Ｄ−グルタミル、ブタノイル−Ｄ−ヒスチジニル、ヘキサノイル−Ｄ−ヒスチジニル、オクタノイル−Ｄ−ヒスチジニル、ドデカノイル−Ｄ−ヒスチジニル、およびテトラデカノイル−Ｄ−ヒスチジニルからなる群から選択される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２８】
前記認識エレメントが、リンカーを介して前記ペイロードに共有結合される、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２９】
前記リンカーが、エステル結合、アミド結合、チオエステル結合、グリコシド結合、カルボネートリンカー、カルバメートリンカー、または尿素リンカーを介して前記ペイロードに共有結合される、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項３０】
前記リンカーが、トレースレスリンカーである、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項３１】
前記リンカーが、式ＲＡ−（ＣＯ）ｎ−ＮＲ３−Ｌ１−（Ｃ（Ｒ２）２）ｍ−Ｌ２−（ＲＢ）ｋ
（式中、ｎおよびｍの各々が、独立して０または１であり、ｋが、１、２、または３であり、ＲＡは、前記認識エレメントへの結合であり、ＲＢが、前記ペイロードへの結合であり、Ｌ１が、１，４−フェニレン、１，２−フェニレン、任意で置換されるスチレン−ジイル、任意で置換されるＣ１−３炭化水素鎖、または−ＬＡ−ＮＲＤ−ＣＯ−Ｏ−ＬＢ−（式中、ＬＡが、任意で置換されるＣ２−６アルキレンであり、ＬＢが、１，４−フェニレン、１，２−フェニレン、または任意で置換されるスチレン−ジイルである）であり、Ｌ２は、（ＲＢ）ｋと結合して、−ＮＲＤ−ＣＯ−ＲＢ、−（ＣＯ）−ＲＢ、−Ｓ−ＲＢ、−ＯＣＯ−ＲＢ、−Ｎ（ＲＢ）ｑ（ＲＥ）３−ｑを形成する）、または
【化１０９】
2021535092.tif 000137
（式中、ＲＤは、Ｈまたは任意で置換されるＣ１−６アルキルであり、ｑは、１、２、または３であり、各ＲＥは、独立してＨまたは任意で置換されるＣ１−６アルキルであり、各Ｒ２は、独立してＨまたはＣ１−６アルキルであるか、または両方のＲ２は、各々が結合している原子と結合して、シクロアルキレンを形成し、Ｒ３は、ＨまたはＣ１−６アルキルである）のものである、請求項２８〜３０のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項３２】
前記リンカーが、式ＲＡ−（ＣＯ）ｎ−ＮＨ−Ｌ１−（Ｃ（Ｒ２）２）ｍ−Ｌ２−（ＲＢ）ｋ
（式中、ｎおよびｍの各々が、独立して０または１であり、ｋが、１、２、または３であり、ＲＡは、前記認識エレメントへの結合であり、ＲＢが、前記ペイロードへの結合であり、Ｌ１が、１，４−フェニレン、１，２−フェニレン、任意で置換されるスチレン−ジイル、任意で置換されるＣ１−３炭化水素鎖、または−ＬＡ−ＮＲＤ−ＣＯ−Ｏ−ＬＢ−（式中、ＬＡが、任意で置換されるＣ２−６アルキレンであり、ＬＢが、１，４−フェニレン、１，２−フェニレン、または任意で置換されるスチレン−ジイルである）であり、Ｌ２は、（ＲＢ）ｋと結合して、−ＮＲＤ−ＣＯ−ＲＢ、−（ＣＯ）−ＲＢ、−Ｓ−ＲＢ、−ＯＣＯ−ＲＢ、−Ｎ（ＲＢ）ｑ（ＲＥ）３−ｑを形成する）、または
【化１１０】
2021535092.tif 000138
（式中、ＲＤは、Ｈまたは任意で置換されるＣ１−６アルキルであり、ｑは、１、２、または３であり、各ＲＥは、独立してＨまたは任意で置換されるＣ１−６アルキルであり、および各Ｒ２は、独立してＨまたはＣ１−６アルキルであるか、または両方のＲ２は、各Ｒ２が結合している原子に結合して、シクロアルキレンを形成する）のものである、請求項２８〜３０のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項３３】
前記リンカーが、式ＲＡ−ＮＲ３−Ｌ１−（Ｃ（Ｒ２）２）ｍ−Ｌ２−ＲＢ
（式中、ＲＡが、前記認識エレメントへの結合であり、ＲＢが、前記ペイロードへの結合であり、Ｌ１が、１，４−フェニレン、または任意で置換されるＣ１−３アルキレンであり、Ｌ２が、ＲＢと結合して、−ＮＲＤ−ＣＯ−ＲＢ、−（ＣＯ）−ＲＢ、または−ＣＯＯ−ＲＢを形成し、ｍが、０または１であり、
ＲＤは、Ｈまたは任意で置換されるＣ１−６アルキルであり、各Ｒ２が、独立してＨまたはＣ１−６アルキルであり、Ｒ３が、ＨまたはＣ１−６アルキルである）である、請求項２８〜３０のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項３４】
前記リンカーが、式ＲＡ−ＮＨ−Ｌ１−（Ｃ（Ｒ２）２）−Ｌ２−ＲＢ
（式中、ＲＡが、前記認識エレメントへの結合であり、ＲＢが、前記ペイロードへの結合であり、Ｌ１が、１，４−フェニレン、１，２−フェニレン、または任意で置換されるＣ１−３炭化水素鎖であり、Ｌ２が、ＲＢと結合して、−ＮＲＤ−ＣＯ−ＲＢ、−（ＣＯ）−ＲＢ、−Ｓ−ＲＢ、−ＯＣＯ−ＲＢ、−Ｎ（ＲＢ）ｑ（ＲＥ）３−ｑを形成する）、または
【化１１１】
2021535092.tif 000139
（式中、ＲＤは、Ｈまたは任意で置換されるＣ１−６アルキルであり、ｑは、１、２、または３であり、各ＲＥは、独立してＨまたは任意で置換されるＣ１−６アルキルであり、各Ｒ２は、独立してＨまたはＣ１−６アルキルであるか、または両方のＲ２は、各Ｒ２が結合している原子に結合して、シクロアルキレンを形成する）のものである、請求項２８〜３０のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項３５】
前記リンカーが、２−アミノベンジル、４−アミノベンジル、４−アミノブタノイル、４−アミノペンタノイル、２−アミノ−３−メチルブタノイル、４−アミノ−２，２−ジメチルブタノイル、２−アミノプロパノイル、２−アミノ−４−メチルペンタノイル、４−アミノブタノエートカルボキシメチレン、２−アミノエチルアミノカルボニル、２−アミノプロピルアミノカルボニル、２−アミノプロピルメチルアミノカルボニル、２−アミノプロピルメチルアミノカルボキシメチレン、２−メチルアミノエチルアミノカルボニル、および２−アミノエチルメチルアミノカルボニルからなる群から選択される、請求項２８〜３０のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項３６】
前記リンカーが、Ｄ−２−アミノプロパノイル、Ｌ−２−アミノプロパノイル、２−アミノエチルアミノカルボニル、４−アミノペンタノイル、４−アミノブタノエートカルボキシメチレン、２−アミノプロピルメチルアミノカルボニル、および２−アミノエチルメチルアミノカルボニルからなる群から選択される、請求項２８〜３０のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項３７】
前記認識エレメントが、前記ペイロードに共有結合される、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項３８】
前記結合体が、インビボで切断して、前記ペイロードを前記結合体から放出可能である、請求項１〜３７のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項３９】
前記ペイロードが、前記認識エレメントを前記ペイロードに結合する共有結合のインビボでの切断の際に放出可能である、請求項３８に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項４０】
前記ペイロードが、前記認識エレメントを前記ペイロードに結びつける前記リンカーのインビボでの切断の際に放出可能である、請求項３８に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項４１】
前記結合体が、インビボで切断して、前記結合体から前記認識エレメントを放出可能である、請求項３８〜４０のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項４２】
前記認識エレメントが、大腸菌またはクレブシエラ・ニューモニエにより産生される酵素により認識可能である、請求項１〜４１のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項４３】
前記結合体が、大腸菌またはクレブシエラ・ニューモニエにより産生される前記酵素によりインビボで切断可能である、請求項４２に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項４４】
以下の構造：
【化１１２−１】
2021535092.tif 000140
【化１１２−２】
2021535092.tif 000141
【化１１２−３】
2021535092.tif 000142
【化１１２−４】
2021535092.tif 000143
の結合体、
またはその医薬的に許容される塩。
【請求項４５】
以下の構造：
【化１１３−１】
2021535092.tif 000144
【化１１３−２】
2021535092.tif 000145
【化１１３−３】
2021535092.tif 000146
【化１１３−４】
2021535092.tif 000147
、の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項４６】
請求項１〜１１および１３〜４５のいずれか１項に記載の結合体ならびに医薬的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項４７】
それを必要とする対象における癌マーカーを調節する方法であって、前記対象に、治療上有効量の請求項１〜１１および１３〜４５のいずれか１項に記載の結合体または請求項４６に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項４８】
前記癌マーカーが、結腸直腸癌、結腸ポリープ、肺癌、胆嚢癌、乳癌、子宮頸癌、非小細胞肺癌、頭頸部扁平上皮癌、古典的ホジキンリンパ腫、尿路上皮癌、メラノーマ、腎細胞癌、肝細胞癌、メルケル細胞癌、前立腺癌、およびマイクロサテライト不安定性を有する癌腫からなる群から選択される癌または前癌状態についてのものである、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記癌マーカーが、炭水化物抗原１９−９および癌胎児性抗原からなる群から選択される結腸直腸癌マーカーである、請求項４７に記載の方法。
【請求項５０】
前記対象が、癌に罹患している、請求項４７〜４９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５１】
それを必要とする対象における感染マーカーを調節する方法であって、前記対象に、治療上有効量の請求項１〜１１および１３〜４５のいずれか１項に記載の結合体または請求項４６に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項５２】
前記感染マーカーが、血液、尿もしくは脳脊髄の白血球細胞カウント；赤血球沈降速度；血清の肝トランスアミラーゼレベル；血清の血中アルカリホスファターゼレベル；または無菌の体液の培養物である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記感染マーカーが、肺炎、肺膿瘍、肝膿瘍、髄膜炎、脊椎感染、硬膜外膿瘍、脳膿瘍、血流感染、尿路感染症、および菌血症からなる群から選択される感染についてのものである、請求項５１または５２に記載の方法。
【請求項５４】
それを必要とする対象における疾患を治療する方法であって、前記対象に、治療上有効量の請求項１〜１１および１３〜４５のいずれか１項に記載の結合体または請求項４６に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項５５】
前記疾患が、癌または前癌状態である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記癌または前癌状態が、結腸直腸癌、結腸ポリープ、肺癌、胆嚢癌、乳癌、子宮頸癌、非小細胞肺癌、頭頸部扁平上皮癌、古典的ホジキンリンパ腫、尿路上皮癌、メラノーマ、腎細胞癌、肝細胞癌、メルケル細胞癌、前立腺癌、またはマイクロサテライト不安定性を有する癌腫である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記癌または前癌状態が、結腸直腸癌、結腸ポリープ、肺癌、胆嚢癌、乳癌、または子宮頸癌である、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記疾患が、感染である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５９】
前記感染が、肺炎、肺膿瘍、肝膿瘍、髄膜炎、脊椎感染、硬膜外膿瘍、脳膿瘍、血流感染、尿路感染症、または菌血症である、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
それを必要とする対象における疾患部位にペイロードをデリバリーする方法であって、前記対象に、治療上有効量の請求項１〜１１および１３〜４５のいずれか１項に記載の結合体または請求項４６に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項６１】
前記疾患部位に微生物が集合する、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記微生物が、細菌である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記微生物が、ＣｌｂＰを発現する、請求項６１または６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記疾患部位に、大腸菌、プロピオニバクテリウム・アクネス、クラミジア・ニューモニエ、サルモネラ・エンテリカ・チフィ、メチロバクテリウム・ラデイオトレランス、クラミジア・トラコマティス、またはクレブシエラ・ニューモニエが集合する、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記結合体が、インビボで切断されて、前記ペイロードを前記疾患部位にデリバリー可能である、請求項６０〜６４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６６】
癌、感染、または病変を有する対象のマイクロバイオームを調節する方法であって、前記対象に、治療上有効量の請求項１〜１１および１３〜４５のいずれか１項に記載の結合体または請求項４６に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項６７】
前記結合体が、微生物により産生されるタンパク質によりインビボで切断可能である、請求項６１〜６６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６８】
前記結合体が、細菌により産生されるタンパク質によりインビボで切断可能である、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記細菌が、大腸菌、プロピオニバクテリウム・アクネス、クラミジア・ニューモニエ、サルモネラ・エンテリカ・チフィ、メチロバクテリウム・ラデイオトレランス、クラミジア・トラコマティス、またはクレブシエラ・ニューモニエである、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記細菌が、ＣｌｂＰを発現する、請求項６８または６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記細菌が、大腸菌またはクレブシエラ・ニューモニエである、請求項６８〜７０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７２】
ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞カウント、細胞毒性Ｔ細胞カウント、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）レベル、インターロイキン−１７（ＩＬ１７）レベル、または細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）レベルが、前記結合体またはその医薬的に許容される塩の前記投与後に調節される、請求項４７〜７１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７３】
ＮＦκＢレベル、マトリックスメタロペプチダーゼ９（ＭＭＰ９）レベル、８−イソ−プロスタグランジンＦ２α（８−イソ−ＰＧＦ２α）レベル、またはＣＸＣＬ１３レベルが、前記結合体またはその医薬的に許容される塩の前記投与後に低減される、請求項４７〜７２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７４】
Ｔｈ１細胞カウント、ＩｇＡレベル、または誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）レベルが、前記結合体またはその医薬的に許容される塩の前記投与後に調節される、請求項４７〜７３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７５】
微生物の存在または量を決定することをさらに含み、前記微生物が、アミド、エステル、チオエステル、もしくはグリコシド結合、またはカルバメートもしくは尿素リンカーを切断する能力がある、請求項４７〜７４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７６】
それを必要とする対象における疾患を治療する方法であって、
前記疾患と診断された前記対象における請求項１〜４５のいずれか１項に記載の結合体を切断する能力があるタンパク質を発現する微生物の存在または量を決定すること、および
前記対象の評価が前記微生物の存在について陽性である場合、前記対象に、治療上有効量の請求項１〜１１および１３〜４５のいずれか１項に記載の結合体または請求項４６に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項７７】
前記決定工程が、ＰＣＲ、細菌学的培養分析、蛍光インサイツハイブリダイゼーション、ガス−液体クロマトグラフィー、および／または細菌酵素活性分析を行うことを含む、請求項７５または７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記決定工程が、前記投与工程前、中、および／または後に行われる、請求項７５〜７７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７９】
前記微生物の存在が、前記対象由来の試料において決定される、請求項７５〜７８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８０】
前記試料が、糞便試料、体液試料、または生検試料である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記微生物が、細菌である、請求項７５〜８０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８２】
前記細菌が、大腸菌、プロピオニバクテリウム・アクネス、クラミジア・ニューモニエ、サルモネラ・エンテリカ・チフィ、メチロバクテリウム・ラデイオトレランス、クラミジア・トラコマティス、またはクレブシエラ・ニューモニエである、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
前記細菌が、ＣｌｂＰを発現する、請求項８１または８２に記載の方法。
【請求項８４】
前記細ｏ菌が、大腸菌またはクレブシエラ・ニューモニエである、請求項８１または８３に記載の方法。
【請求項８５】
前記結合体が、前記結合体および医薬的に許容される賦形剤を含む医薬組成物として投与される、請求項４７〜８４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８６】
前記結合体が、経口、直腸、静脈内、腫瘍内、または病巣内投与される、請求項４７〜８５のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、化合物およびそれらの医薬的使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
化学療法処置ストラテジーは、典型的には、多数の副作用が付随する。化学療法剤に付随する有害な現象の多くは、典型的には、細胞毒性であり、化学療法剤の組織選択性の欠如により引き起こされると考えられている。組織選択性を欠くことで、化学療法剤は、非癌性組織に影響して、副作用を引き起こし得る。
【０００３】
感染または感染に付随した病変を処置するための薬剤はまた、毒性、病変部位での有効性、または両方により限定され得る。抗感染症と関連する毒性の多くは、薬剤が感染または病変を有効に処置するのに十分なレベルで投与されるときの宿主細胞および組織に対するそれらの作用に関する。高度に選択的な分布を欠くことで、多くの抗感染症は、感染していない組織または非病変組織に影響して、副作用を引き起こし得る。
【０００４】
癌、前癌、および感染に付随した病変の治療に対する新規の治療アプローチ、特に、これらの状態の処置に対する標的化アプローチの必要がある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
一般に、本発明は、例えば、ペイロード（例えば、抗腫瘍剤または抗菌剤）をそれを必要とする対象における疾患部位（例えば、癌組織（例えば、結腸直腸癌組織））にデリバリーするための、結合体、それを含有する医薬組成物、およびそれらの使用方法を提供する。ペイロードは、腫瘍、前癌性組織、または病変に集合するマイクロバイオームに標的化され得る。
【０００６】
一態様では、本発明は、ペイロードに共有結合された、またはリンカーを介して結合された認識エレメントを含む、結合体、またはその医薬的に許容される塩を提供する。ペイロードは、医薬剤または診断剤である。好ましくは、ペイロードは、医薬剤である。
【０００７】
一部の実施形態では、認識エレメントは、微生物またはそれにより産生されるタンパク質により認識可能である。
【０００８】
ある特定の実施形態では、認識エレメントは、式Ｒ１−Ｌ−（式中、Ｒ１は、Ｎ（ＲＮ）２で任意で置換される脂肪酸アシル、メトキシポリエチレングリコール酢酸アシル、メトキシポリエチレングリコールプロピオン酸アシル、アミノ酸残基、ジペプチド、トリペプチド、β−Ｎ−アセチルグルコサミン、β−１，４−グルカン、任意で置換されるシンナモイル、Ｄ−アラニル−メソ−２，６−ジアミノ−ピメリルアミド、任意で置換されるアルキル、または任意で置換されるアリールアルキルであり、Ｌは、アミノ酸残基、−Ｏ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ−、または−ＳＯ２−であり、各ＲＮは、独立してＣ１−６アルキルである）の基である。一部の実施形態では、Ｒ１は、任意で置換されるＣ１−２２アルカノイル、任意で置換されるＣ２−２２アルケノイル、任意で置換されるＣ２−２２アルキノイル、任意で置換されるＣ６−１２アロイル、任意で置換されるＣ１−２２アルコキシカルボニル、任意で置換されるＣ１−２２アルキルアミノカルボニル、任意で置換されるＣ１−２２アルキルウレイド、−Ｎ（ＲＮ）２で任意で置換される脂肪酸アシル、メトキシポリエチレングリコール酢酸アシル、メトキシポリエチレングリコールプロピオン酸アシル、アミノ酸残基、ジペプチド、トリペプチド、β−Ｎ−アセチルグルコサミン、β−１，４−グルカン、任意で置換されるシンナモイル、Ｄ−アラニル−メソ−２，６−ジアミノ−ピメリルアミド、任意で置換されるアルキル、または任意で置換されるアリールアルキルであり、Ｌは、アミノ酸残基、−Ｏ−ＣＯ−Ｌ１−、−ＮＨ−ＣＯ−Ｌ１−、または−ＳＯ２−Ｌ１−であり、各ＲＮは、独立してＣ１−６アルキルであり、Ｌ１は、アミノ酸残基である。さらなる実施形態では、Ｒ１は、任意で置換されるＣ１−１４アルカノイル、任意で置換されるベンゾイル、任意で置換されるＣ１−１４アルコキシカルボニル、または任意で置換されるＣ１−１４アルキルアミノカルボニルである。なおさらなる実施形態では、Ｒ１は、任意で置換されるプロパノイル、任意で置換されるベンゾイル、任意で置換されるフェニルプロピオニル、任意で置換されるナフチルプロピオニル、任意で置換されるジヒドロキノリンカルボニル、ブタノイル、ヘキサノイル、オクタノイル、ドデカノイル、テトラデカノイル、ヘキシルオキシカルボニル、オクチルオキシカルボニル、ドデシルオキシカルボニル、ヘキシルウレイド、オクチルウレイド、およびドデシルオキシウレイドからなる群から選択される。なおさらなる実施形態では、各任意の置換基は、独立してヒドロキシル、アミノ、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキル、ならびにハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキル、５員のヘテロ環、および６員のヘテロ環からなる群から独立して選択される１〜５個の基で任意で置換されるフェニルである。他の実施形態では、各任意の置換基は、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキル、ならびにヒドロキシル、アミノ、Ｃ１−６アルコキシ、およびＣ１−６アルキルからなる群から独立して選択される１、２、３、４、または５個の基で任意で置換されるフェニルからなる群から独立して選択される。一部の実施形態では���Ｒ１は、−Ｎ（ＲＮ）２で任意で置換される脂肪酸アシル、メトキシポリエチレングリコール酢酸アシル、メトキシポリエチレングリコールプロピオン酸アシル、アミノ酸残基、ジペプチド、トリペプチド、β−Ｎ−アセチルグルコサミン、β−１，４−グルカン、任意で置換されるシンナモイル、Ｄ−アラニル−メソ−２，６−ジアミノ−ピメリルアミド、任意で置換されるアルキル、または任意で置換されるアリールアルキルである。ある特定の実施形態では、Ｌは、アミノ酸残基である。特定の実施形態では、Ｌは、そのα−アミノ基を通じてＲ１に結合したアミノ酸残基である。さらなる実施形態では、Ｒ１は、フェニルで任意で置換されるＣ１−１４脂肪酸アシルである。なおさらなる実施形態では、Ｌは、Ｄ−アミノ酸残基（例えば、任意で置換されるＤ−アスパラギン、任意で置換されるＤ−アルギニン、任意で置換されるＤ−グルタミン、任意で置換されるＤ−アスパラギン酸、または任意で置換されるＤ−グルタミン酸）である。なおさらなる実施形態では、認識エレメントは、アミノ酸残基、ジペプチド、トリペプチド、β−Ｎ−アセチルグルコサミン、β−１，４−グルカン、任意で置換されるシンナモイル、またはＤ−アラニル−メソ−２，６−ジアミノ−ピメリルアミドである。他の実施形態では、Ｌは、Ｄ−アスパラギン、Ｄ−アルギニン、Ｄ−グルタミン、Ｄ−アスパラギン酸、Ｄ−ヒスチジン、またはＤ−グルタミン酸である。なお他の実施形態では、Ｌは、Ｄ−アスパラギンである。
【０００９】
なお他の実施形態では、認識エレメントは、３−（２−メトキシエトキシ）プロパノイル−Ｄ−アスパラギニル、２−（４−イソブチルフェニル）プロパノイル−Ｄ−アスパラギニル、６−メトキシナフタレン−２−イル）プロパノイル−Ｄ−アスパラギニル、（１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−７−（ピペラジン−１−イル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボニル、ヘキシルオキシカルボニル−Ｄ−アスパラギニル、ドデシルオキシカルボニル−Ｄ−アスパラギニル、ヘキシルカルバモイル−Ｄ−アスパラギニル、ドデシルカルバモイル−Ｄ−アスパラギニル、ブタノイル−Ｄ−アスパラギニル、ヘキサノイル−Ｄ−アスパラギニル、オクタノイル−Ｄ−アスパラギニル、ドデカノイル−Ｄ−アスパラギニル、テトラデカノイル−Ｄ−アスパラギニル、ベンゾイル−Ｄ−アスパラギニル、２−ヒドロキシベンゾイル−Ｄ−アスパラギニル、５−アミノ−２−ヒドロキシベンゾイル−Ｄ−アスパラギニル、２−フェニルアセチル−Ｄ−アスパラギニル、ブタノイル−Ｄ−アルギニニル、ヘキサノイル−Ｄ−アルギニニル、オクタノイル−Ｄ−アルギニニル、ドデカノイル−Ｄ−アルギニニル、テトラデカノイル−Ｄ−アルギニニル、ブタノイル−Ｄ−アスパルチル、ヘキサノイル−Ｄ−アスパルチル、オクタノイル−Ｄ−アスパルチル、ドデカノイル−Ｄ−アスパルチル、テトラデカノイル−Ｄ−アスパルチル、ブタノイル−Ｄ−グルタミニル、ヘキサノイル−Ｄ−グルタミニル、オクタノイル−Ｄ−グルタミニル、ドデカノイル−Ｄ−グルタミニル、テトラデカノイル−Ｄ−グルタミニル、ブタノイル−Ｄ−グルタミル、ヘキサノイル−Ｄ−グルタミル、オクタノイル−Ｄ−グルタミル、ドデカノイル−Ｄ−グルタミル、テトラデカノイル−Ｄ−グルタミル、ブタノイル−Ｄ−ヒスチジニル、ヘキサノイル−Ｄ−ヒスチジニル、オクタノイル−Ｄ−ヒスチジニル、ドデカノイル−Ｄ−ヒスチジニル、およびテトラデカノイル−Ｄ−ヒスチジニルからなる群から選択される。一部の実施形態では、認識エレメントは、テトラデカノイル−Ｄ−アスパラギニルではない。
【００１０】
ある特定の実施形態では、リンカーは、トレースレスリンカーである。特定の実施形態では、リンカーは、エステル結合、アミド結合、チオエステル結合、グリコシド結合、カルバメートリンカー、カルボネートリンカー、または尿素リンカーを通じてペイロードに共有結合される。特定の実施形態では、リンカーは、エステル結合、アミド結合、チオエステル結合、グリコシド結合、カルバメートリンカー、または尿素リンカーを通じてペイロードに共有結合される。一部の実施形態では、リンカーは、式ＲＡ−（ＣＯ）ｎ−ＮＨ−Ｌ１−（Ｃ（Ｒ２）２）ｍ−Ｌ２−（ＲＢ）ｋ（式中、ｎおよびｍの各々は、独立して０または１であり、ｋは、１、２、または３であり、ＲＡは、認識エレメントへの結合であり、ＲＢは、ペイロードへの結合であり、Ｌ１は、１，４−フェニレン、１，２−フェニレン、任意で置換されるスチレン−ジイル、任意で置換されるＣ１−３炭化水素鎖、または−ＬＡ−ＮＲＤ−ＣＯ−Ｏ−ＬＢ−（式中、ＬＡは、任意で置換されるＣ２−６アルキレンであり、ＬＢは、１，４−フェニレン、１，２−フェニレン、または任意で置換されるスチレン−ジイルである）であり、Ｌ２は、（ＲＢ）ｋと結合して、−ＮＲＤ−ＣＯ−ＲＢ、−（ＣＯ）−ＲＢ、−Ｓ−ＲＢ、−ＯＣＯ−ＲＢ、−Ｎ（ＲＢ）ｑ（ＲＥ）３−ｑを形成する）、または
【化１】
2021535092.tif 000002
（式中、ＲＤは、Ｈまたは任意で置換されるＣ１−６アルキルであり、ｑは、１、２、または３であり、各ＲＥは、独立してＨまたは任意で置換されるＣ１−６アルキルであり、各Ｒ２は、独立してＨまたはＣ１−６アルキルであるか、または両方のＲ２は、各々が結合している原子と結合して、シクロアルキレンを形成し、Ｒ３は、ＨまたはＣ１−６アルキルである）のものである。
【００１１】
ある特定の実施形態では、リンカーは、式ＲＡ−ＮＲ３−Ｌ１−（Ｃ（Ｒ２）２）ｍ−Ｌ２−ＲＢ（式中、ｎおよびｍの各々は、独立して０または１であり、ｋは、１、２、または３であり、ＲＡは、認識エレメントへの結合であり、ＲＢは、ペイロードへの結合であり、Ｌ１は、１，４−フェニレン、１，２−フェニレン、任意で置換されるスチレン−ジイル、任意で置換されるＣ１−３炭化水素鎖、または−ＬＡ−ＮＲＤ−ＣＯ−Ｏ−ＬＢ−（式中、ＬＡは、任意で置換されるＣ２−６アルキレンであり、ＬＢは、１，４−フェニレン、１，２フェニレン、または任意で置換されるスチレン−ジイルである）、ｌ２は、（ＲＢ）ｋと結合して、＿ＮＲＤ−ＣＯ−ＲＢ、−（ＣＯ）−ＲＢ、−Ｓ−ＲＢ、−ＯＣＯ−ＲＢ、−Ｎ（ＲＢ）ｑ（ＲＥ）３−ｑである）、または
【化２】
2021535092.tif 000003
（式中、ＲＤは、Ｈまたは任意で置換されるＣ１−６アルキルであり、ｑは、１、２、または３であり、各ＲＥは、独立してＨまたは任意で置換されるＣ１−６アルキルであり、各Ｒ２は、独立してＨまたはＣ１−６アルキルであるか、または両方のＲ２は、各々が結合している原子と結合して、シクロアルキレンを形成する）のものである。
【００１２】
特定の実施形態では、リンカーは、式ＲＡ−ＮＨ−Ｌ１−（Ｃ（Ｒ２）２）−Ｌ２−ＲＢ（式中、ＲＡは、認識エレメントへの結合であり、ＲＢは、ペイロードへの結合であり、Ｌ１は、１，４−フェニレン、１，２−フェニレン、または任意で置換されるＣ１−３アルキレンであり、Ｌ２は、ＲＢと結合して、−ＮＲＤ−ＣＯ−ＲＢ、−（ＣＯ）−ＲＢ（式中、ＲＤは、Ｈまたは任意で置換されるＣ１−６アルキルである）を形成し、ｍは、０または１であり、各Ｒ２は、独立してＨまたはＣ１−６アルキルであり、ＲＢは、ＨまたはＣ１−６アルキルである）のものである。
【００１３】
さらなる実施形態では、リンカーは、ＲＡ−ＮＨ−Ｌ１−（Ｃ（Ｒ２）２）−Ｌ２−ＲＢ（式中、ＲＡは、認識エレメントへの結合であり、ＲＢは、ペイロードへの結合であり、Ｌ１は、１，４−フェニレン、１，２−フェニレン、または任意で置換されるＣ１−３炭化水素鎖であり、Ｌ２は、ＲＢと結合して、−ＮＲＤ−ＣＯ−ＲＢ、−（ＣＯ）−ＲＢ−Ｓ−ＲＢ、−ＯＣＯ−ＲＢ、−Ｎ（ＲＢ）ｑ（ＲＥ）３−ｑを形成する）、または
【化３】
2021535092.tif 000004
（式中、ＲＤは、Ｈまたは任意で置換されるＣ１−６アルキルであり、ｑは、１、２、または３であり、各ＲＥは、独立してＨまたは任意で置換されるＣ１−６アルキルであり、各Ｒ２は、独立してＨまたはＣ１−６アルキルであるか、または両方のＲ２は、各Ｒ２が結合している原子に結合して、シクロアルキレンを形成する）のものである。
【００１４】
他の実施形態では、リンカーは、２−アミノベンジル、４−アミノベンジル、４−アミノブタノイル、４−アミノペンタノイル、２−アミノ−３−メチルブタノイル、４−アミノ−２，２−ジメチルブタノイル、２−アミノプロパノイル、２−アミノ−４−メチルペンタノイル、４−アミノブタノエートカルボキシメチレン、２−アミノエチルアミノカルボニル、２−アミノプロピルアミノカルボニル、２−アミノプロピルメチルアミノカルボニル、２−アミノプロピルメチルアミノカルボキシメチレン、２−メチルアミノエチルアミノカルボニル、および２−アミノエチルメチルアミノカルボニルからなる群から選択される。なお他の実施形態では、リンカーは、Ｄ−２−アミノプロパノイル、Ｌ−２−アミノプロパノイル、２−アミノエチルアミノカルボニル、４−アミノペンタノイル、４−アミノブタノエートカルボキシメチレン、２−アミノプロピルメチルアミノカルボニル、および２−アミノエチルメチルアミノカルボニルからなる群から選択される。なお他の実施形態では、認識エレメントは、ペイロードに共有結合される。
【００１５】
特定の実施形態では、認識エレメントは、ペイロードに共有結合される。さらなる実施形態では、ペイロードは、抗腫瘍剤である。なおさらなる実施形態では、抗腫瘍剤は、細胞毒性抗腫瘍剤である。なおさらなる実施形態では、抗腫瘍剤は、７−エチル−１０−ヒドロキシ−カンプトテシン（ＳＮ−３８）、イリノテカン、モノメチルオーリスタチンＥ、モノメチルオーリスタチンＦ、パクリタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ピロロベンゾジアゼピン、１０−ヒドロキシカンプトテシン、エキサテカン、シクロパミン、タセジナリン、５−フルオロウラシル、カリチアマイシン、メイタンシノイド、メイタンシン、メトトレキサート、ズオカルマイシン、エルロチニブ、ゲフィチニブ、カペシタビン、ロイコボリン、トリフルリジン、チピラシル、またはＣＣ−１０６５である。他の実施形態では、抗腫瘍剤は、ＳＮ−３８、モノメチルオーリスタチンＥ、または５−フルオロウラシルである。なお他の実施形態では、ペイロードは、抗感染剤である。なお他の実施形態では、抗感染剤は、アミカシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシン、パロモマイシン、ストレプトマイシン、ゲルダナマイシン、ハービマイシン、リファキシミン、ロラカルベフ、エルタペネム、ドリペネム、メロペネム、セファドロキシル、セファゾリン、セファレキシン、セファクロル、セフプロジル、セフロキシム、セフィキシム、セフジニル、セフジトレン、セフォペラゾン、セフォタキシム、セフポドキシム、セフチブテン、セフトリアクソン、セフェピム、セフタロリンフォサミル、セフトビプロール、バンコマイシン、テイコプラニン、テラバンシン、ダルババンシン、オリタバンシン、クリンダマイシン、リンコマイシン、ダプトマイシン、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、テリスロマイシン、スピラマイシン、アズトレオナム、フラゾリドン、ニトロフラトイン、リネゾリド、ポシゾリド、ラデゾリド、トレゾリド、アモキシシリン、アンピシリン、アズロシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、メズロシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、ピペラシリン、テモシリン、チカルシリン、コリスチン、バシトラシン、ポリミキシンＢ、シプロフロキサシン、エノキサシン、ガチフロキサシン、ゲミフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、モキシフロキサシン、ナジフロキサシン、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン、トロバフロキサシン、グレパフロキサシン、スパルフロキサシン、テマフロキサシン、マフェナイド、スルファセタミド、スルファジアジン、スルファジアジン銀、スルファジメトキシン、スルファメチゾール、スルファニルアミド、スルファサラジン、スルフィソキサゾール、トリメトプリン、スルファメトキサゾール、スルホンアミドクリソイジン、デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、メタサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、テトラサイクリン、クロファジミン、ダプソン、カプレオマイシン、シクロセリン、エタンブトール、エチオンアミド、イソニアジド、ピラジンアミド、リファンピシン、リファブチン、リファペンチン、ストレプトマイシン、アルスフェナミン、クロラムフェニコール、ホスホマイシン、フシジン酸、メトロニダゾール、ムピロシン、プラテンシマイシン、キヌプリスチン、ダルホプリスチン、チアムフェニコール、チゲサイクリン、チニダゾール、テイクソバクチン、マラシジン、フェノール、ヒドロキシナフタレン、キニーネ、ヒドロキシクロロキン、ケトコナゾール、フルコナゾール、またはアムホテリシンＢである。
【００１６】
一部の実施形態では、結合体は、インビボで切断して、結合体からペイロードを放出可能である。ある特定の実施形態では、ペイロードは、認識エレメントをペイロードに結合する共有結合のインビボ切断の際に放出可能である。特定の実施形態では、ペイロードは、認識エレメントをペイロードに結びつけるリンカーのインビボでの切断の際に放出可能である。さらなる実施形態では、結合体は、インビボで切断して、結合体から認識エレメントを放出可能である。なおさらなる実施形態では、認識エレメントは、フソバクテリウム門、プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐ．ａｃｎｅｓ）、クラミジア・ニューモニエ（Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、サルモネラ・エンテリカ・チフィ（Ｓ．ｅｎｔｅｒｉｃａ  ｓｅｒｏｖａｒ  Ｔｙｐｈｉ）、メチロバクテリウム・ラデイオトレランス（Ｍ．ｒａｄｉｏｔｏｌｅｒａｎｓ）、クラミジア・トラコマティス（Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ））、またはクレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）により（好ましくは、大腸菌もしくはクレブシエラ・ニューモニエ（例えば、ｃｌｂＰ）により）産生されるタンパク質により認識可能である。なおさらなる実施形態では、結合体は、フソバクテリウム門、プロピオニバクテリウム・アクネス、クラミジア・ニューモニエ、サルモネラ・エンテリカ・チフィ、メチロバクテリウム・ラデイオトレランス、クラミジア・トラコマティス、大腸菌、またはクレブシエラ・ニューモニエにより（好ましくは、大腸菌もしくはクレブシエラ・ニューモニエ（例えば、ｃｌｂＰ）により）産生されるタンパク質によりインビボで切断可能である。
【００１７】
特定の実施形態では、結合体は、以下の構造：
【化４−１】
2021535092.tif 000005
【化４−２】
2021535092.tif 000006
【化４−３】
2021535092.tif 000007
【化４−４】
2021535092.tif 000008
のもの、またはその医薬的に許容される塩である。
【００１８】
ある特定の実施形態では、結合体は、以下の構造：
【化５−１】
2021535092.tif 000009
【化５−２】
2021535092.tif 000010
【化５−３】
2021535092.tif 000011
【化５−４】
2021535092.tif 000012
のもの、またはその医薬的に許容される塩である。
【００１９】
別の態様では、本発明は、本発明の結合体および医薬的に許容される賦形剤を含む医薬組成物（例えば、経口、直腸、静脈内、腫瘍内、または病巣内投与用に製剤化された医薬組成物）を提供する。
【００２０】
なお別の態様では、本発明は、対象に、治療上有効量の本発明の結合体または本発明の医薬組成物を投与することにより、それを必要とする対象における癌マーカーを調節する方法を提供する。一部の実施形態では、癌マーカーは、結腸直腸癌、結腸ポリープ、肺癌、胆嚢癌、乳癌、子宮頸癌、非小細胞肺癌、頭頸部扁平上皮癌、古典的ホジキンリンパ腫、尿路上皮癌、メラノーマ、腎細胞癌、肝細胞癌、メルケル細胞癌、前立腺癌、およびマイクロサテライト不安定性を有する癌腫からなる群から選択される癌または前癌状態についてのものである。ある特定の実施形態では、癌マーカーは、炭水化物抗原１９−９および癌胎児性抗原からなる群から選択される結腸直腸癌マーカーである。
【００２１】
特定の実施形態では、対象は、癌に罹患している。
【００２２】
なお別の態様では、本発明は、対象に、治療上有効量の本発明の結合体または本発明の医薬組成物を投与することにより、それを必要とする対象における感染マーカーを調節する方法を提供する。
【００２３】
一部の実施形態では、感染マーカーは、血液、尿もしくは脳脊髄の白血球細胞カウント；赤血球沈降速度；血清の肝トランスアミラーゼレベル；血清の血中アルカリホスファターゼレベル；または無菌の体液の培養物である。ある特定の実施形態では、感染マーカーは、肺炎、肺膿瘍、肝膿瘍、髄膜炎、脊椎感染、硬膜外膿瘍、脳膿瘍、血流感染、尿路感染症、および菌血症からなる群から選択される感染についてのものである。
【００２４】
さらなる態様では、本発明は、対象に、治療上有効量の本発明の結合体または本発明の医薬組成物を投与することにより、それを必要とする対象における疾患を処置する方法を提供する。
【００２５】
なおさらなる態様では、本発明は、対象に、治療上有効量の本発明の結合体または本発明の医薬組成物を投与することにより、それを必要とする対象における疾患部位にペイロードをデリバリーする方法を提供する。
【００２６】
なおさらなる態様では、本発明は、対象に、治療上有効量の本発明の結合体または本発明の医薬組成物を投与することを含む、癌、感染、または病変を有する対象のマイクロバイオームを調節する方法を提供する。
【００２７】
なお別の態様において、本発明は、疾患と診断された対象における本発明の結合体を切断する能力があるタンパク質を発現する微生物の存在または量を決定する工程、および対象の評価が、微生物の存在について陽性である場合、対象に、治療上有効量の本発明の結合体または本発明の医薬組成物を投与する工程により、それを必要とする対象における疾患を処置する方法を提供する。
【００２８】
なお別の態様では、本発明は、対象に、治療上有効量の本発明の結合体または本発明の医薬組成物を投与することにより、それを必要とする対象における疾患を処置する方法であって、対象は、結合体を切断する能力があるタンパク質を発現する微生物（例えば、微生物は、細菌（例えば、フソバクテリウム門、プロピオニバクテリウム・アクネス、クラミジア・ニューモニエ、サルモネラ・エンテリカ・チフィ、メチロバクテリウム・ラデイオトレランス、クラミジア・トラコマティス、大腸菌、またはクレブシエラ・ニューモニエ）である）を有する、方法を提供する。好ましくは、細菌は、ｃｌｂＰを発現する（例えば、細菌は、大腸菌またはクレブシエラ・ニューモニエである）。
【００２９】
ある特定の実施形態では、決定工程は、ＰＣＲ、細菌学的培養分析、蛍光インサイツハイブリダイゼーション、ガス−液体クロマトグラフィー、および／または細菌酵素活性分析を行う工程を含む。一部の実施形態では、決定工程は、投与工程前、中、および／または後に行われる。特定の実施形態では、微生物の存在は、対象由来の試料において決定される。さらなる実施形態では、試料は、糞便試料、体液試料、または生検試料である。
【００３０】
一部の実施形態では、疾患は、癌または前癌状態（例えば、結腸直腸癌、結腸ポリープ、肺癌、胆嚢癌、乳癌、子宮頸癌、非小細胞肺癌、頭頸部扁平上皮癌、古典的ホジキンリンパ腫、尿路上皮癌、メラノーマ、腎細胞癌、肝細胞癌、メルケル細胞癌、前立腺癌、もしくはマイクロサテライト不安定性を有する癌腫）である。一部の実施形態では、癌または前癌状態は、結腸直腸癌、結腸ポリープ、肺癌、胆嚢癌、乳癌、または子宮頸癌である。
【００３１】
特定の実施形態では、疾患は、感染（例えば、肺炎、肺膿瘍、肝膿瘍、髄膜炎、脊椎感染、硬膜外膿瘍、脳膿瘍、血流感染、尿路感染症、または菌血症）である。
【００３２】
ある特定の実施形態では、疾患部位は、腫瘍（例えば、癌性もしくは前癌性組織）または病変である。特定の実施形態では、結合体は、インビボで切断して、ペイロードを疾患部位（例えば、腫瘍または病変）にデリバリー可能である。一部の実施形態では、腫瘍は、結腸直腸癌組織である。特定の実施形態では、結合体は、細菌（例えば、フソバクテリウム門、プロピオニバクテリウム・アクネス、クラミジア・ニューモニエ、サルモネラ・エンテリカ・チフィ、メチロバクテリウム・ラデイオトレランス、クラミジア・トラコマティス、またはクレブシエラ・ニューモニエ）により産生されるタンパク質により、インビボで切断可能である。好ましくは、細菌は、大腸菌またはクレブシエラ・ニューモニエである。
【００３３】
さらなる実施形態では、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞カウント、細胞毒性Ｔ細胞カウント、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）レベル、インターロイキン−１７（ＩＬ１７）レベル、または細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）レベルは、結合体またはその医薬的に許容される塩の投与後に調節される。なおさらなる実施形態では、ＮＦκＢレベル、マトリックスメタロペプチダーゼ９（ＭＭＰ９）レベル、８−イソ−プロスタグランジンＦ２α（８−イソ−ＰＧＦ２α）レベル、またはＣＸＣＬ１３レベルは、結合体またはその医薬的に許容される塩の投与後に低減される。なおさらなる実施形態では、Ｔｈ１細胞カウント、ＩｇＡレベル、または誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）レベルは、結合体またはその医薬的に許容される塩の投与後に調節される。
【００３４】
他の実施形態では、本明細書において記載される方法は、微生物の存在または量を決定する工程をさらに含み、微生物は、アミド、エステル、チオエステル、もしくはグリコシド結合、またはカルバメートもしくは尿素リンカーを切断する能力がある。
【００３５】
一部の実施形態では、結合体は、結合体および医薬的に許容される賦形剤を含む医薬組成物として投与される。ある特定の実施形態では、結合体は、経口、直腸、静脈内、腫瘍内、または病巣内投与される。
【００３６】
本発明はまた、以下の列挙される項目により部分的に記載される。
【００３７】
１．ペイロードに共有結合した、またはペイロードにリンカーを介して結合した認識エレメントを含み、ペイロードは医薬剤である、結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００３８】
２．ペイロードが抗腫瘍剤である、項１に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００３９】
３．抗腫瘍剤が、７−エチル−１０−ヒドロキシ−カンプトテシン（ＳＮ−３８）、イリノテカン、モノメチルオーリスタチンＥ、モノメチルオーリスタチンＦ、パクリタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ピロロベンゾジアゼピン、１０−ヒドロキシカンプトテシン、エキサテカン、シクロパミン、タセジナリン、５’−デオキシ−５−フルオロウリジン、５−フルオロウラシル、カリチアマイシン、メイタンシノイド、メイタンシン、メトトレキサート、ズオカルマイシン、エルロチニブ、ゲフィチニブ、カペシタビン、ロイコボリン、トリフルリジン、チピラシル、またはＣＣ−１０６５である、項２に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００４０】
４．抗腫瘍剤が、ＳＮ−３８、モノメチルオーリスタチンＥ、カペシタビン、５’−デオキシ−５−フルオロウリジン、または５−フルオロウラシルである、項２に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００４１】
５．抗腫瘍剤が、ＳＮ−３８、モノメチルオーリスタチンＥ、または５−フルオロウラシルである、項２に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００４２】
６．抗腫瘍剤が、ＳＮ−３８である、項２に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００４３】
７．抗腫瘍剤が、モノメチルオーリスタチンＥである、項２に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００４４】
８．抗腫瘍剤が、５−フルオロウラシルである、項２に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００４５】
９．抗腫瘍剤が、５’−デオキシ−５−フルオロウリジンである、項２に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００４６】
１０．抗腫瘍剤が、カペシタビンである、項２に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００４７】
１１．ペイロードが、抗感染剤である、項１に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００４８】
１２．抗感染剤が、アミカシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシン、パロモマイシン、ストレプトマイシン、ゲルダナマイシン、ハービマイシン、リファキシミン、ロラカルベフ、エルタペネム、ドリペネム、メロペネム、セファドロキシル、セファゾリン、セファレキシン、セファクロル、セフプロジル、セフロキシム、セフィキシム、セフジニル、セフジトレン、セフォペラゾン、セフォタキシム、セフポドキシム、セフチブテン、セフトリアクソン、セフェピム、セフタロリンフォサミル、セフトビプロール、バンコマイシン、テイコプラニン、テラバンシン、ダルババンシン、オリタバンシン、クリンダマイシン、リンコマイシン、ダプトマイシン、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、テリスロマイシン、スピラマイシン、アズトレオナム、フラゾリドン、ニトロフラトイン、リネゾリド、ポシゾリド、ラデゾリド、トレゾリド、アモキシシリン、アンピシリン、アズロシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、メズロシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、ピペラシリン、テモシリン、チカルシリン、コリスチン、バシトラシン、ポリミキシンＢ、シプロフロキサシン、エノキサシン、ガチフロキサシン、ゲミフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、モキシフロキサシン、ナジフロキサシン、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン、トロバフロキサシン、グレパフロキサシン、スパルフロキサシン、テマフロキサシン、マフェナイド、スルファセタミド、スルファジアジン、スルファジアジン銀、スルファジメトキシン、スルファメチゾール、スルファニルアミド、スルファサラジン、スルフィソキサゾール、トリメトプリム、スルファメトキサゾール、スルホンアミドクリソイジン、デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、メタサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、テトラサイクリン、クロファジミン、ダプソン、カプレオマイシン、シクロセリン、エタンブトール、エチオンアミド、イソニアジド、ピラジンアミド、リファンピシン、リファブチン、リファペンチン、ストレプトマイシン、アルスフェナミン、クロラムフェニコール、ホスホマイシン、フシジン酸、メトロニダゾール、ムピロシン、プラテンシマイシン、キヌプリスチン、ダルホプリスチン、チアムフェニコール、チゲサイクリン、チニダゾール、テイクソバクチン、マラシジン、フェノール、ヒドロキシナフタレン、キニーネ、ヒドロキシクロロキン、ケトコナゾール、フルコナゾール、またはアムホテリシンＢである、項１１に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００４９】
１２．ペイロードに共有結合された、またはペイロードにリンカーを介して結合される認識エレメントを含み、ペイロードは診断剤である、結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００５０】
１３．認識エレメントが、微生物またはそれにより産生されるタンパク質により認識可能である、項１〜１２のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００５１】
１４．認識エレメントが、式Ｒ１−Ｌ−（式中、
Ｒ１が、任意で置換されるＣ１−２２アルカノイル、任意で置換されるＣ２−２２アルケノイル、任意で置換されるＣ２−２２アルキノイル、任意で置換されるＣ６−１２アロイル、任意で置換されるＣ１−２２アルコキシカルボニル、任意で置換されるＣ１−２２アルキルアミノカルボニル、任意で置換されるＣ１−２２アルキルウレイド、−Ｎ（ＲＮ）２で任意で置換される脂肪酸アシル、メトキシポリエチレングリコール酢酸アシル、メトキシポリエチレングリコールプロピオン酸アシル、アミノ酸残基、ジペプチド、トリペプチド、β−Ｎ−アセチルグルコサミン、β−１，４−グルカン、任意で置換されるシンナモイル、Ｄ−アラニル−メソ−２，６−ジアミノ−ピメリルアミド、任意で置換されるアルキル、または任意で置換されるアリールアルキルであり；
Ｌは、アミノ酸残基、−Ｏ−ＣＯ−Ｌ１−、−ＮＨ−ＣＯ−Ｌ１−、または−ＳＯ２−Ｌ１−であり、各ＲＮは、独立してＣ１−６アルキルであり、Ｌ１は、アミノ酸残基である）の基である、項１〜１３の任意の１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００５２】
１５．Ｒ１が、任意で置換されるＣ１−１４アルカノイル、任意で置換されるベンゾイル、任意で置換されるＣ１−１４アルコキシカルボニル、または任意で置換されるＣ１−１４アルキルアミノカルボニルである、項１４に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００５３】
１６．Ｒ１は、任意で置換されるプロパノイル、任意で置換されるベンゾイル、任意で置換されるフェニルプロピオニル、任意で置換されるナフチルプロピオニル、任意で置換されるジヒドロキノリンカルボニル、ブタノイル、ヘキサノイル、オクタノイル、ドデカノイル、テトラデカノイル、ヘキシルオキシカルボニル、オクチルオキシカルボニル、ドデシルオキシカルボニル、ヘキシルウレイド、オクチルウレイド、およびドデシルオキシウレイドからなる群から選択される、項１４に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００５４】
１７．各任意の置換基は、独立してヒドロキシル、アミノ、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキル、ならびにハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキル、５員のヘテロ環、および６員のヘテロ環からなる群から独立して選択される１〜５個の基で任意で置換されるフェニルである、項１４〜１６のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００５５】
１８．各任意の置換基は、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキル、ならびにヒドロキシル、アミノ、Ｃ１−６アルコキシ、およびＣ１−６アルキルからなる群から独立して選択される１、２、３、４、または５個の基で任意で置換されるフェニルからなる群から独立して選択される、項１７に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００５６】
１９．Ｒ１は、−Ｎ（ＲＮ）２で任意で置換される脂肪酸アシル、メトキシポリエチレングリコール酢酸アシル、メトキシポリエチレングリコールプロピオン酸アシル、アミノ酸残基、ジペプチド、トリペプチド、β−Ｎ−アセチルグルコサミン、β−１，４−グルカン、任意で置換されるシンナモイル、Ｄ−アラニル−メソ−２，６−ジアミノ−ピメリルアミド、任意で置換されるアルキル、または任意で置換されるアリールアルキルである、項１４に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００５７】
２０．Ｌが、アミノ酸残基である、項１４〜１９のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００５８】
２１．Ｌが、Ｒ１にそのα−アミノ基を介して結合したアミノ酸残基である、項１４〜２０のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００５９】
２２．Ｒ１が、フェニルで任意で置換されるＣ１−１４脂肪酸である、項１４〜２１のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００６０】
２３．Ｌが、Ｄ−アミノ酸残基である、項１４〜２２のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００６１】
２４．Ｌが、Ｄ−アスパラギン、Ｄ−アルギニン、Ｄ−グルタミン、Ｄ−アスパラギン酸、Ｄ−ヒスチジン、またはＤ−グルタミン酸である、項２３に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００６２】
２５．Ｌが、任意で置換されるＤ−アスパラギン、任意で置換されるＤ−アルギニン、任意で置換されるＤ−グルタミン、任意で置換されるＤ−アスパラギン酸、または任意で置換されるＤ−グルタミン酸である、項２３に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。一部の実施形態では、Ｌは、任意で置換されるＤ−アスパラギン、任意で置換されるＤ−アルギニン、任意で置換されるＤ−グルタミン、任意で置換されるＤ−アスパラギン酸、任意で置換されるＤ−ヒスチジン、または任意で置換されるＤ−グルタミン酸である。
【００６３】
２６．Ｌが、Ｄ−アスパラギンである、項２３に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００６４】
２７．認識エレメントが、３−（２−メトキシエトキシ）プロパノイル−Ｄ−アスパラギニル、２−（４−イソブチルフェニル）プロパノイル−Ｄ−アスパラギニル、６−メトキシナフタレン−２−イル）プロパノイル−Ｄ−アスパラギニル、（１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−７−（ピペラジン−１−イル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボニル、ヘキシルオキシカルボニル−Ｄ−アスパラギニル、ドデシルオキシカルボニル−Ｄ−アスパラギニル、ヘキシルカルバモイル−Ｄ−アスパラギニル、ドデシルカルバモイル−Ｄ−アスパラギニル、ブタノイル−Ｄ−アスパラギニル、ヘキサノイル−Ｄ−アスパラギニル、オクタノイル−Ｄ−アスパラギニル、ドデカノイル−Ｄ−アスパラギニル、テトラデカノイル−Ｄ−アスパラギニル、ベンゾイル−Ｄ−アスパラギニル、２−ヒドロキシベンゾイル−Ｄ−アスパラギニル、５−アミノ−２−ヒドロキシベンゾイル−Ｄ−アスパラギニル、２−フェニルアセチル−Ｄ−アスパラギニル、ブタノイル−Ｄ−アルギニニル、ヘキサノイル−Ｄ−アルギニニル、オクタノイル−Ｄ−アルギニニル、ドデカノイル−Ｄ−アルギニニル、テトラデカノイル−Ｄ−アルギニニル、ブタノイル−Ｄ−アスパルチル、ヘキサノイル−Ｄ−アスパルチル、オクタノイル−Ｄ−アスパルチル、ドデカノイル−Ｄ−アスパルチル、テトラデカノイル−Ｄ−アスパルチル、ブタノイル−Ｄ−グルタミニル、ヘキサノイル−Ｄ−グルタミニル、オクタノイル−Ｄ−グルタミニル、ドデカノイル−Ｄ−グルタミニル、テトラデカノイル−Ｄ−グルタミニル、ブタノイル−Ｄ−グルタミル、ヘキサノイル−Ｄ−グルタミル、オクタノイル−Ｄ−グルタミル、ドデカノイル−Ｄ−グルタミル、テトラデカノイル−Ｄ−グルタミル、ブタノイル−Ｄ−ヒスチジニル、ヘキサノイル−Ｄ−ヒスチジニル、オクタノイル−Ｄ−ヒスチジニル、ドデカノイル−Ｄ−ヒスチジニル、およびテトラデカノイル−Ｄ−ヒスチジニルからなる群から選択される、項１〜１３のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００６５】
２８．認識エレメントが、テトラデカノイル−Ｄ−アスパラギニルでない、項１〜２７のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００６６】
２９．認識エレメントが、アミノ酸残基、ジペプチド、トリペプチド、β−Ｎ−アセチルグルコサミン、β−１，４−グルカン、任意で置換されるシンナモイル、またはＤ−アラニル−メソ−２，６−ジアミノ−ピメリルアミドである、項１〜１４のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００６７】
３０．認識エレメントが、リンカーを介してペイロードに共有結合される、項１〜２９のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００６８】
３１．リンカーが、エステル結合、アミド結合、チオエステル結合、グリコシド結合、カルボネートリンカー、カルバメートリンカー、または尿素リンカーを介してペイロードに共有結合される、項１〜３０のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００６９】
３２．リンカーが、エステル結合、アミド結合、チオエステル結合、グリコシド結合、カルバメートリンカー、または尿素リンカーを介してペイロードに共有結合される、項３１に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００７０】
３３．リンカーが、トレースレスリンカーである、項１〜３２のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００７１】
３４．リンカーが、式ＲＡ−（ＣＯ）ｎ−ＮＲ３−Ｌ１−（Ｃ（Ｒ２）２）ｍ−Ｌ２−（ＲＢ）ｋ
（式中、ｎおよびｍの各々が、独立して０または１であり、ｋが、１、２、または３であり、ＲＡは、認識エレメントへの結合であり、ＲＢが、ペイロードへの結合であり、Ｌ１が、１，４−フェニレン、１，２−フェニレン、任意で置換されるスチレン−ジイル、任意で置換されるＣ１−３炭化水素鎖、または−ＬＡ−ＮＲＤ−ＣＯ−Ｏ−ＬＢ−（式中、ＬＡが、任意で置換されるＣ２−６アルキレンであり、ＬＢが、１，４−フェニレン、１，２−フェニレン、または任意で置換されるスチレン−ジイルである）であり、Ｌ２は、（ＲＢ）ｋと結合して、−ＮＲＤ−ＣＯ−ＲＢ、−（ＣＯ）−ＲＢ、−Ｓ−ＲＢ、−ＯＣＯ−ＲＢ、−Ｎ（ＲＢ）ｑ（ＲＥ）３−ｑを形成する）、または
【化６】
2021535092.tif 000013
（式中、ＲＤが、Ｈまたは任意で置換されるＣ１−６アルキル、ｑは、１、２、または３であり、各ＲＥが、独立してＨまたは任意で置換されるＣ１−６アルキルであり、各Ｒ２が、独立してＨまたはＣ１−６アルキルであるか、または両方のＲ２が、各Ｒ２が結合している原子と結合して、シクロアルキレンを形成し、Ｒ３が、ＨまたはＣ１−６アルキルである）のものである、項３０〜３３のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００７２】
３５．リンカーが、式ＲＡ−（ＣＯ）ｎ−ＮＨ−Ｌ１−（Ｃ（Ｒ２）２）ｍ−Ｌ２−（ＲＢ）ｋ
（式中、ｎおよびｍの各々が、独立して０または１であり、ｋが、１、２、または３であり、ＲＡは、認識エレメントへの結合であり、ＲＢが、ペイロードへの結合であり、Ｌ１が、１，４−フェニレン、１，２−フェニレン、任意で置換されるスチレン−ジイル、任意で置換されるＣ１−３炭化水素鎖、または−ＬＡ−ＮＲＤ−ＣＯ−Ｏ−ＬＢ−（式中、ＬＡが、任意で置換されるＣ２−６アルキレンであり、ＬＢが、１，４−フェニレン、１，２−フェニレン、または任意で置換されるスチレン−ジイルである）であり、Ｌ２は、（ＲＢ）ｋと結合して、−ＮＲＤ−ＣＯ−ＲＢ、−（ＣＯ）−ＲＢ、−Ｓ−ＲＢ、−ＯＣＯ−ＲＢ、−Ｎ（ＲＢ）ｑ（ＲＥ）３−ｑを形成する）、または
【化７】
2021535092.tif 000014
（式中、ＲＤが、Ｈまたは任意で置換されるＣ１−６アルキルであり、ｑが、１、２、または３であり、各ＲＥが、独立してＨまたは任意で置換されるＣ１−６アルキルであり
各Ｒ２が、独立してＨまたはＣ１−６アルキルであるか、または両方のＲ２が、各Ｒ２が結合している原子と結合して、シクロアルキレンを形成する）のものである、項３０〜３３のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００７３】
３６．リンカーが、式ＲＡ−ＮＲ３−Ｌ１−（Ｃ（Ｒ２）２）ｍ−Ｌ２−ＲＢ
（式中、ＲＡが、認識エレメントへの結合であり、ＲＢが、ペイロードへの結合であり、Ｌ１が、１，４−フェニレン、または任意で置換されるＣ１−３アルキレンであり、Ｌ２が、ＲＢと結合して、−ＮＲＤ−ＣＯ−ＲＢ（式中、ＲＤが、Ｈまたは任意で置換されるＣ１−６アルキルである）、−（ＣＯ）−ＲＢ、または−ＣＯＯ−ＲＢを形成し、ｍが、０または１であり、各Ｒ２が、独立してＨまたはＣ１−６アルキルであり、Ｒ３が、ＨまたはＣ１−６アルキルである）のものである、項３０〜３３のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００７４】
３７．リンカーが、式ＲＡ−ＮＨ−Ｌ１−（Ｃ（Ｒ２）２）−Ｌ２−ＲＢ
（式中、ＲＡが、認識エレメントへの結合であり、ＲＢが、ペイロードへの結合であり、Ｌ１が、１，４−フェニレン、１，２−フェニレン、または任意で置換されるＣ１−３炭化水素鎖であり、Ｌ２が、ＲＢと結合して、−ＮＲＤ−ＣＯ−ＲＢ、−（ＣＯ）−ＲＢ、−Ｓ−ＲＢ、−ＯＣＯ−ＲＢ、−Ｎ（ＲＢ）ｑ（ＲＥ）３−ｑを形成する）、または
【化８】
2021535092.tif 000015
（式中、ＲＤが、Ｈまたは任意で置換されるＣ１−６アルキルであり、ｑが、１、２、または３であり、各ＲＥが、独立してＨまたは任意で置換されるＣ１−６アルキルであり、各Ｒ２が、独立してＨまたはＣ１−６アルキルであるか、または両方のＲ２が、各々が結合している原子と結合して、シクロアルキレンを形成する）のものである、項３０〜３３のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００７５】
３８．リンカーが、２−アミノベンジル、４−アミノベンジル、４−アミノブタノイル、４−アミノペンタノイル、２−アミノ−３−メチルブタノイル、４−アミノ−２，２−ジメチルブタノイル、２−アミノプロパノイル、２−アミノ−４−メチルペンタノイル、４−アミノブタノエートカルボキシメチレン、２−アミノエチルアミノカルボニル、２−アミノプロピルアミノカルボニル、２−アミノプロピルメチルアミノカルボニル、２−アミノプロピルメチルアミノカルボキシメチレン、２−メチルアミノエチルアミノカルボニル、および２−アミノエチルメチルアミノカルボニルからなる群から選択される、項３０〜３３のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００７６】
３９．リンカーが、Ｄ−２−アミノプロパノイル、Ｌ−２−アミノプロパノイル、２−アミノエチルアミノカルボニル、４−アミノペンタノイル、４−アミノブタノエートカルボキシメチレン、２−アミノプロピルメチルアミノカルボニル、および２−アミノエチルメチルアミノカルボニルからなる群から選択される、項３０〜３３のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００７７】
４０．認識エレメントが、ペイロードに共有結合される、項１〜２９のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００７８】
４１．結合体が、インビボで切断して、ペイロードを結合体から放出可能である、項１〜４０のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００７９】
４２．ペイロードが、認識エレメントをペイロードに結合する共有結合のインビボでの切断の際に放出可能である、項３８に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００８０】
４３．ペイロードが、認識エレメントをペイロードに結びつけるリンカーのインビボでの切断の際に放出可能である、項３８に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００８１】
４４．結合体が、インビボで切断して、結合体から認識エレメントを放出可能である、項３８〜４０のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００８２】
４５．認識エレメントが、大腸菌またはクレブシエラ・ニューモニエにより産生される酵素により認識可能である、項１〜４１のいずれか１項に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００８３】
４６．結合体が、大腸菌またはクレブシエラ・ニューモニエにより産生される酵素によりインビボで切断可能である、項４２に記載の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００８４】
４７．以下の構造：
【化９−１】
2021535092.tif 000016
【化９−２】
2021535092.tif 000017
【化９−３】
2021535092.tif 000018
【化９−４】
2021535092.tif 000019
の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００８５】
４８．以下の構造：
【化１０−１】
2021535092.tif 000020
【化１０−２】
2021535092.tif 000021
【化１０−３】
2021535092.tif 000022
【化１０−４】
2021535092.tif 000023
の結合体、またはその医薬的に許容される塩。
【００８６】
４９．項１〜１１および１３〜４８のいずれか１項に記載の結合体ならびに医薬的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
【００８７】
５０．それを必要とする対象における癌マーカーを調節する方法であって、対象に、治療上有効量の項１〜１１および１３〜４８のいずれか１項に記載の結合体または４９に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【００８８】
５１．癌マーカーが、結腸直腸癌、結腸ポリープ、肺癌、胆嚢癌、乳癌、子宮頸癌、非小細胞肺癌、頭頸部扁平上皮癌、古典的ホジキンリンパ腫、尿路上皮癌、メラノーマ、腎細胞癌、肝細胞癌、メルケル細胞癌、前立腺癌、およびマイクロサテライト不安定性を有する癌腫からなる群から選択される癌または前癌状態についてのものである、項５０に記載の方法。
【００８９】
５２．癌マーカーが、炭水化物抗原１９−９および癌胎児性抗原からなる群から選択される結腸直腸癌マーカーである、項５０に記載の方法。
【００９０】
５３．対象が、癌に罹患している、項５０〜５２のいずれか１項に記載の方法。
【００９１】
５４．それを必要とする対象における感染マーカーを調節する方法であって、対象に、治療上有効量の項１〜１１および１３〜４８のいずれか１項に記載の結合体または項４９に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【００９２】
５５．感染マーカーが、血液、尿もしくは脳脊髄の白血球細胞カウント；赤血球沈降速度；血清の肝トランスアミラーゼレベル；血清の血中アルカリホスファターゼレベル；または無菌の体液の培養物である、項５４に記載の方法。
【００９３】
５６．感染マーカーが、肺炎、肺膿瘍、肝膿瘍、髄膜炎、脊椎感染、硬膜外膿瘍、脳膿瘍、血流感染、尿路感染症、および菌血症からなる群から選択される感染についてのものである、項５４または５５に記載の方法。
【００９４】
５７．それを必要とする対象における疾患を治療する方法であって、対象に、治療上有効量の項１〜１１および１３〜４８のいずれか１項に記載の結合体または項４９に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【００９５】
５８．疾患が、癌または前癌状態である、項５７に記載の方法。
【００９６】
５９．癌または前癌状態が、結腸直腸癌、結腸ポリープ、肺癌、胆嚢癌、乳癌、子宮頸癌、非小細胞肺癌、頭頸部扁平上皮癌、古典的ホジキンリンパ腫、尿路上皮癌、メラノーマ、腎細胞癌、肝細胞癌、メルケル細胞癌、前立腺癌、またはマイクロサテライト不安定性を有する癌腫である、項５８に記載の方法。
【００９７】
６０．癌または前癌状態が、結腸直腸癌、結腸ポリープ、肺癌、胆嚢癌、乳癌、または子宮頸癌である、項５９に記載の方法。
【００９８】
６１．疾患が、感染である、項５７に記載の方法。
【００９９】
６２．感染が、肺炎、肺膿瘍、肝膿瘍、髄膜炎、脊椎感染、硬膜外膿瘍、脳膿瘍、血流感染、尿路感染症、または菌血症である、項６１に記載の方法。
【０１００】
６３．それを必要とする対象における疾患部位にペイロードをデリバリーする方法であって、対象に、治療上有効量の項１〜４８のいずれか１項に記載の結合体または項４９に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【０１０１】
６４．疾患部位に微生物が集合する、項６３に記載の方法。
【０１０２】
６５．微生物が、細菌である、項６４に記載の方法。
【０１０３】
６６．微生物が、ＣｌｂＰを発現する、項６４または６５に記載の方法。
【０１０４】
６７．疾患部位に、大腸菌、プロピオニバクテリウム・アクネス、クラミジア・ニューモニエ、サルモネラ・エンテリカ・チフィ、メチロバクテリウム・ラデイオトレランス、クラミジア・トラコマティス、またはクレブシエラ・ニューモニエが集合する、項６４〜６６のいずれか１項に記載の方法。
【０１０５】
６８．結合体が、インビボで切断されて、ペイロードを疾患部位にデリバリー可能である、項６３〜６７のいずれか１項に記載の方法。
【０１０６】
６９．癌、感染、または病変を有する対象のマイクロバイオームを調節する方法であって、対象に、治療上有効量の項１〜１１および１３〜４８のいずれか１項に記載の結合体または項４９の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【０１０７】
７０．結合体が、微生物により産生されるタンパク質によりインビボで切断可能である、項６８〜６９のいずれか１項に記載の方法。
【０１０８】
７１．結合体が、細菌により産生されるタンパク質によりインビボで切断可能である、項７０に記載の方法。
【０１０９】
７２．細菌が、大腸菌、プロピオニバクテリウム・アクネス、クラミジア・ニューモニエ、サルモネラ・エンテリカ・チフィ、メチロバクテリウム・ラデイオトレランス、クラミジア・トラコマティス、またはクレブシエラ・ニューモニエである、項７１に記載の方法。
【０１１０】
７３．細菌が、ＣｌｂＰを発現する、項７１または７２に記載の方法。
【０１１１】
７４．細菌が、大腸菌またはクレブシエラ・ニューモニエである、項７１〜７３のいずれか１項に記載の方法。
【０１１２】
７５．ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞カウント、細胞毒性Ｔ細胞カウント、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）レベル、インターロイキン−１７（ＩＬ１７）レベル、または細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）レベルが、結合体またはその医薬的に許容される塩の投与後に調節される、項５０〜７４のいずれか１項に記載の方法。
【０１１３】
７６．ＮＦκＢレベル、マトリックスメタロペプチダーゼ９（ＭＭＰ９）レベル、８−イソ−プロスタグランジンＦ２α（８−イソ−ＰＧＦ２α）レベル、またはＣＸＣＬ１３レベルが、結合体またはその医薬的に許容される塩の投与後に低減される、項５０〜７５のいずれか１項に記載の方法。
【０１１４】
７７．Ｔｈ１細胞カウント、ＩｇＡレベル、または誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）レベルが、結合体またはその医薬的に許容される塩の投与後に調節される、項５０〜７６のいずれか１項に記載の方法。
【０１１５】
７８．微生物の存在または量を決定することをさらに含み、微生物が、アミド、エステル、チオエステル、もしくはグリコシド結合、またはカルバメートもしくは尿素リンカーを切断する能力がある、項５０〜７７のいずれか１項に記載の方法。
【０１１６】
７９．それを必要とする対象における疾患を治療する方法であって、
疾患と診断された対象における項１〜４８のいずれか１項に記載の結合体を切断する能力があるタンパク質を発現する微生物の存在または量を決定すること、および
対象の評価が微生物の存在について陽性である場合、対象に、治療上有効量の項１〜４８のいずれか１項に記載の結合体または項４９に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【０１１７】
８０．決定工程は、ＰＣＲ、細菌学的培養分析、蛍光インサイツハイブリダイゼーション、ガス−液体クロマトグラフィー、および／または細菌酵素活性分析を行うことを含む、項７８または７９に記載の方法。
【０１１８】
８１．決定工程が、投与工程前、中、および／または後に行われる、項７８〜８０のいずれか１項に記載の方法。
【０１１９】
８２．微生物の存在が、対象由来の試料において決定される、項７８〜８１のいずれか１項に記載の方法。
【０１２０】
８３．試料が、糞便試料、体液試料、または生検試料である、項８２に記載の方法。
【０１２１】
８４．微生物が、細菌である、項７８〜８３のいずれか１項に記載の方法。
【０１２２】
８５．細菌が、大腸菌、プロピオニバクテリウム・アクネス、クラミジア・ニューモニエ、サルモネラ・エンテリカ・チフィ、メチロバクテリウム・ラデイオトレランス、クラミジア・トラコマティス、またはクレブシエラ・ニューモニエである、項８４に記載の方法。
【０１２３】
８６．細菌が、ＣｌｂＰを発現する、項８４または８５に記載の方法。
【０１２４】
８７．細菌が、大腸菌またはクレブシエラ・ニューモニエである、項８４〜８６のいずれか１項に記載の方法。
【０１２５】
８８．結合体が、結合体および医薬的に許容される賦形剤を含む医薬組成物として投与される、項５０〜８７のいずれか１項に記載の方法。
【０１２６】
８９．結合体が、経口、直腸、静脈内、腫瘍内、または病巣内投与される、項５０〜８８のいずれか１項に記載の方法。
【０１２７】
定義
本明細書において使用される場合、「アシル」という用語は、式−Ｃ（Ｏ）−Ｒの化学置換基を表し、式中、Ｒは、アルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロアリール、またはヘテロアリールアルキルである。任意で置換されるアシルは、各Ｒ基に関して本明細書に記載されるように任意で置換されるアシルである。アシルの非限定的な例としては、脂肪酸アシル（例えば、短鎖脂肪酸アシル（例えば、アセチル））、およびベンゾイルが挙げられる。
【０１２８】
本明細書において使用される場合、「アシルオキシ」という用語は、式−ＯＲの化学置換基を表し、式中、Ｒはアシルである。任意で置換されるアシルオキシは、アシルに関して本明細書に記載されるように任意で置換されるアシルオキシである。
【０１２９】
本明細書において使用される場合、「アルコール酸素原子」という用語は、ｓｐ３がハイブリダイズした炭素原子に結合した少なくとも一つの価数を有する２価の酸素原子を指す。
【０１３０】
本明細書において使用される場合、「アルケノイル」という用語は、式−Ｃ（Ｏ）−Ｒの化学置換基を表し、式中、Ｒはアルケニルである。任意で置換されるアルケノイルは、アルキルに関して本明細書に記載されるように任意で置換されるアルケノイルである。
【０１３１】
本明細書において使用される場合、「アルカノイル」という用語は、式−Ｃ（Ｏ）−Ｒの化学置換基を表し、式中、Ｒはアルキルである。任意で置換されるアルカノイルは、アルキルに関して本明細書に記載されるように任意で置換されるアルカノイルである。
【０１３２】
本明細書において使用される場合、「アルキノイル」という用語は、式−Ｃ（Ｏ）−Ｒの化学置換基を表し、式中、Ｒはアルキニルである。任意で置換されるアルキノイルは、アルキルに関して本明細書に記載されるように任意で置換されるアルキノイルである。
【０１３３】
本明細書において使用される場合、「アルコキシ」という用語は、式−ＯＲの化学置換基を表し、式中、Ｒは、別段の特定が無い限り、Ｃ１−６アルキル基である。任意で置換されるアルコキシは、アルキルに関して本明細書に規定されるように任意で置換されるアルコキシ基である。
【０１３４】
本明細書において使用される場合、「アルケニル」という用語は、１、２、または３個の炭素−炭素二重結合を含有する非環式一価の直鎖または分枝鎖の炭化水素基を表す。アルケニルは、非置換であるとき、別段の特定が無い限り、２〜２２個の炭素を有する。ある好ましい実施形態では、アルケニルは、非置換であるとき、２〜１２個の炭素原子（例えば、１〜８個の炭素）を有する。アルケニル基の非限定的な例としては、エテニル、プロパ−１−エニル、プロパ−２−エニル、１−メチルエテニル、ブタ−１−エニル、ブタ−２−エニル、ブタ−３−エニル、１−メチルプロパ−１−エニル、２−メチルプロパ−１−エニル、および１−メチルプロパ−２−エニルが挙げられる。アルケニル基は、アルキルについて本明細書に定義されるように任意で置換され得る。
【０１３５】
「アルケニレン」という用語は、本明細書で使用される場合、一つの水素が除去され、それによりこの基が二価となっている直鎖または分岐鎖アルケニル基を指す。アルケニレン基の非限定的な例としては、エテン−１，１−ジイル、エテン−１，２−ジイル、プロパ−１−エン−１，１−ジイル、プロパ−２−エン−１，１−ジイル、プロパ−１−エン−１，２−ジイル、プロパ−１−エン−１，３−ジイル、プロパ−２−エン−１，１−ジイル、プロパ−２−エン−１，２−ジイル、ブタ−１−エン−１，１−ジイル、ブタ−１−エン−１，２−ジイル、ブタ−１−エン−１，３−ジイル、ブタ−１−エン−１，４−ジイル、ブタ−２−エン−１，１−ジイル、ブタ−２−エン−１，２−ジイル、ブタ−２−エン−１，３−ジイル、ブタ−２−エン−１，４−ジイル、ブタ−２−エン−２，３−ジイル、ブタ−３−エン−１，１−ジイル、ブタ−３−エン−１，２−ジイル、ブタ−３−エン−１，３−ジイル、ブタ−３−エン−２，３−ジイル、ブタ−１，２−ジエン−１，１−ジイル、ブタ−１，２−ジエン−１，３−ジイル、ブタ−１，２−ジエン−１，４−ジイル、ブタ−１，３−ジエン−１，１−ジイル、ブタ−１，３−ジエン−１，２−ジイル、ブタ−１，３−ジエン−１，３−ジイル、ブタ−１，３−ジエン−１，４−ジイル、ブタ−１，３−ジエン−２，３−ジイル、ブタ−２，３−ジエン−１，１−ジイル、およびブタ−２，３−ジエン−１，２−ジイルが挙げられる。任意で置換されるアルケニレンは、アルキルに関して本明細書に記載されるように任意で置換されるアルケニレンである。
【０１３６】
本明細書において使用される場合、「アルコキシカルボニル」は、式−Ｃ（Ｏ）ＯＲの化学置換基を表し、式中、Ｒは、別段の特定が無い限り、Ｃ１−６アルキル基である。任意で置換されるアルコキシカルボニルは、アルキルに関して本明細書に規定されるように任意で置換されるアルコキシカルボニル基である。
【０１３７】
「アルキル」という用語は、本明細書で使用される場合、非置換であるとき、別段の特定が無い限り、１〜２２個の炭素（例えば、１〜２０個の炭素）を有する、非環式の直鎖または分枝鎖の飽和炭化水素基を指す。ある好ましい実施形態では、アルキルは、非置換であるとき、１〜１２個の炭素（例えば、１〜８個の炭素）を有する。アルキル基は、メチル；エチル；ｎ−およびｉｓｏ−プロピル；ｎ−、ｓｅｃ−、ｉｓｏ−およびｔｅｒｔ−ブチル；ネオペンチルなどにより例示され、価数が許容する限り、１、２、３個の置換基、または炭素数が２個以上のアルキル基の場合には四つ以上の置換基で任意で置換されてもよく、当該置換基は独立して、アルコキシ；アシルオキシ；アルキルスルフェニル；アルキルスルフィニル；アルキルスルホニル；アミノ；アリール；アリールオキシ；アジド；シクロアルキル；シクロアルコキシ；ハロ；ヘテロシクリル；ヘテロアリール；ヘテロシクリルアルキル；ヘテロアリールアルキル；ヘテロシクリルオキシ；ヘテロアリールオキシ；ヒドロキシ；ニトロ；チオアルキル；チオアルケニル；チオアリール；チオール；シリル；シアノ；＝Ｏ；＝Ｓ；および＝ＮＲ’からなる群から選択され、式中、Ｒ’は、Ｈ、アルキル、アリール、またはヘテロシクリルである。各置換基は、それ自体が非置換であってもよく、または価数が許容する限り、それぞれの各基に対して本明細書において定義される非置換の置換基で置換されてもよい。
【０１３８】
本明細書において使用される場合、「アルキルアミノカルボニル」という用語は、式−ＣＯＲＸの化学置換基を表し、式中、ＲＸは、アミノである。任意で置換されるアルキルアミノカルボニルは、アルキルに関して本明細書に規定されるように任意で置換されるアルキルアミノカルボニルである。
【０１３９】
「アルキレン」という用語は、本明細書で使用される場合、直鎖または分枝鎖の飽和炭化水素である飽和二価炭化水素基を指し、当該基において、二つの価数が、二つの水素原子に代わる。アルキレン基の非限定的な例としては、メチレン、エタン−１，２−ジイル、エタン−１，１−ジイル、プロパン−１，３−ジイル、プロパン−１，２−ジイル、プロパン−１，１−ジイル、プロパン−２，２−ジイル、ブタン−１，４−ジイル、ブタン−１，３−ジイル、ブタン−１，２−ジイル、ブタン−１，１−ジイル、およびブタン−２，２−ジイル、ブタン−２，３−ジイルが挙げられる。任意で置換されるアルキレンは、アルキルに関して本明細書に記載されるように任意で置換されるアルキレンである。
【０１４０】
本明細書において使用される場合、「アルキルスルフェニル」という用語は、式−Ｓ−（アルキル）の基を表す。任意で置換されるアルキルスルフェニルは、アルキルに関して本明細書に記載されるように任意で置換されるアルキルスルフェニルである。
【０１４１】
本明細書において使用される場合、「アルキルスルフィニル」という用語は、式−Ｓ（Ｏ）−（アルキル）の基を表す。任意で置換されるアルキルスルフィニルは、アルキルに関して本明細書に記載されるように任意で置換されるアルキルスルフィニルである。
【０１４２】
本明細書において使用される場合、「アルキルスルホニル」という用語は、式−Ｓ（Ｏ）２−（アルキル）の基を表す。任意で置換されるアルキルスルホニルは、アルキルに関して本明細書に記載されるように任意で置換されるアルキルスルホニルである。
【０１４３】
本明細書において使用される場合、「アルキルウレイド」という用語は、式−ＮＲＮ１−ＣＯ−ＮＲＮ２ＲＮ３式中の基を表し、ＲＮ１、ＲＮ２、およびＲＮ３の各々は、独立してＨまたはアルキルであり、ただし、ＲＮ１、ＲＮ２、およびＲＮ３の少なくとも１個は、アルキルである。非限定的な例としては、モノメチルウレイド、モノエチルウレイド、ジメチルウレイド、ジエチルウレイド、Ｎ−メチル−Ｎ−エチルウレイド、ヘキシルウレイド、オクチルウレイド、およびドデシルウレイドが挙げられる。好ましくは、アルキルウレイドは、式−ＮＨ−ＣＯ−ＮＲＮ２ＲＮ３の基である。任意で置換されるアルキルウレイドは、アルキルに関して本明細書に記載されるように任意で置換されるアルキルウレイドである。
【０１４４】
本明細書において使用される場合、「アミド結合」という用語は、カルボニル基の窒素原子と炭素原子の間の共有結合を指す。
【０１４５】
本明細書において使用される場合、「アミノ」という用語は、別段の特定が無い限り、式−ＮＲＮ１ＲＮ２の基を表し、ＲＮ１およびＲＮ２の各々は、独立してＨまたはアルキルである。
【０１４６】
本明細書において使用される場合、「アミノ酸」という用語は、プロリン、タウリン、または任意で置換されるアルキレンもしくは任意で置換されるアリーレンにより分離されるアミノ基とカルボン酸基またはスルホン酸基を有する化合物を表す。アミノ酸は低分子であり、９００ｇ／ｍｏｌ未満の分子量（好ましくは、５００ｇ／ｍｏｌ未満）を有する。リンカーがアルキレンであるとき、当該リンカーは、アルキルに関して本明細書に記載されるように任意で置換され得る。一部の実施形態では、任意で置換されるアルキレンは、独立してヒドロキシル、チオール、アミノ、グアニジン、カルバモイルアミノ、イミダゾリル、インドリル、−ＳｅＨ、オキソ、４−ヒドロキシフェニル、フェニル、または‐ＳＭｅである１個または２個の基で置換されるアルキレンである。アミノ酸の非限定的な例としては、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セレノシステイン、セリン、スレオニン、チロシン、トリプトファン、オルニチン、シトルリン、アミノ安息香酸、およびタウリンが挙げられる。任意で置換されるアスパラギン、アルギニン、グルタミン、アスパラギン酸、およびグルタミン酸は、アルキルで任意で置換される側鎖酸素または窒素原子を有するアスパラギン、アルギニン、グルタミン、アスパラギン酸、およびグルタミン酸である。
【０１４７】
本明細書で使用される場合、「アンモニウム窒素原子」という用語は、四級アンモニウム塩中の四級置換窒素原子を指す。
【０１４８】
本明細書において使用される場合、「非タンパク質性」という用語は、ペプチド結合により相互接続された三つ以上のアミノ酸をその構造内に欠く化学置換基を指す。
【０１４９】
本明細書において使用される場合、「アロイル」という用語は、式−Ｃ（Ｏ）−Ｒの化学置換基を表し、Ｒは、アリールである。任意で置換されるアロイルは、アリールに関して本明細書において記載されるように任意で置換されるアロイルである。
【０１５０】
本明細書において使用される場合、「アリール」という用語は、一つまたは二つの芳香族環を有する単環式、二環式、または多環式の炭素環系を表す。アリール基は、６〜１０個の炭素原子を含み得る。非置換の炭素環式アリール基内のすべての原子は、炭素原子である。炭素環式アリール基の非限定的な例としては、フェニル、ナフチル、１，２−ジヒドロナフチル、１，２，３，４−テトラヒドロナフチル、フルオレニル、インダニル、インデニルなどが挙げられる。アリール基は、非置換であってもよく、または１、２、３、４、もしくは５個の置換基で置換されてもよく、当該置換基は独立して、アルキル、アルケニル、アルコキシ、アシルオキシ、アミノ、アリール、アリールオキシ、アジド、シクロアルキル、シクロアルコキシ、ハロ、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクリルオキシ、ヘテロアリールオキシ、ヒドロキシ、ニトロ、チオアルキル、チオアルケニル、チオアリール、チオール、シリル、およびシアノからなる群から選択される。各置換基は、それ自体が非置換であってもよく、またはそれぞれの各基に対して本明細書において定義される非置換の置換基で置換されてもよい。
【０１５１】
本明細書で使用される場合、「アリーレン」という用語は、１個の水素原子が価数で置き換えられるアリール基を表す。任意で置換されるアリーレンは、アリールに関して本明細書に記載されるように任意で置換されるアリーレンである。一部の実施形態では、アリーレンは、フェニレン（例えば、１，２−フェニレンまたは１，４−フェニレン）である。
【０１５２】
本明細書において使用される場合、「アリールアルキル」という用語は、アリール基で置換されたアルキル基を表す。任意で置換されるアリールアルキルは、アリール部分とアルキル部分は、本明細書に記載される個々の基のように任意で置換されるアリールアルキルである。
【０１５３】
本明細書において使用される場合、「アリールオキシ」という用語は、−ＯＲ基を表し、式中、Ｒは、アリールである。アリールオキシは、任意で置換されるアリールオキシであってもよい。任意で置換されるアリールオキシは、アリールに関して本明細書に記載されるように任意で置換されるアリールオキシである。
【０１５４】
本明細書において使用される場合、「カルボン酸塩」という用語は、−ＣＯＯＨ基またはその塩を表す。
【０１５５】
本明細書において使用される場合、「カルボキシレート酸素原子」という用語は、カルボニル基の炭素原子に結合した少なくとも一つの価数を有する２価の酸素原子を指す。
【０１５６】
「癌」という用語は、本明細書で使用される場合、対象における異常細胞の制御不能な分裂を特徴とする増殖性疾患群を指す。癌の非限定的な例としては、非小細胞肺癌、頭頸部の扁平上皮細胞癌、古典的ホジキンリンパ腫、尿路上皮癌、メラノーマ、腎細胞癌、肝細胞癌、メルケル細胞癌、前立腺癌、マイクロサテライト不安定性を伴う癌、結腸直腸癌、小腸癌、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、副腎皮質癌、カポジ肉腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、肛門癌、星状細胞腫、グリア芽腫、膀胱癌、ユーイング肉腫、骨肉腫、非ホジキンリンパ腫、乳癌、脳腫瘍、子宮頸癌、胆管癌、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、胆嚢癌、消化管間質腫瘍、卵巣癌、精巣癌、多発性骨髄腫、神経芽細胞腫、膵癌、副甲状腺癌、前立腺癌、直腸癌、およびウィルムス腫瘍が挙げられる。
【０１５７】
本明細書において使用される場合、「癌マーカー」という用語は、癌（例えば、結腸直腸癌、非小細胞肺癌、頭頸部扁平上皮癌、古典的ホジキンリンパ腫、尿路上皮癌、メラノーマ、腎細胞癌、肝細胞癌、メルケル細胞癌、前立腺癌もしくはマイクロサテライト不安定性を有する癌腫）または前癌状態の存在、不存在、またはリスクの観察可能な指標である。癌マーカーのレベルは、癌の進行と直接または反比例で相関し得る。癌の進行と反比例で相関する癌マーカーは、「逆の癌マーカー」である。癌マーカーの非限定的な例は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞（例えば、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ細胞）の数、細胞傷害性Ｔ細胞数、Ｔｈ１細胞数、ＮＦκＢレベル、誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）レベル、マトリクスメタロペプチダーゼ９（ＭＭＰ９）レベル、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）レベル、インターロイキン−１７（ＩＬ１７）レベル、細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）レベル、ＣＸＣＬ１３レベル、および８−イソ−プロスタグランジンＦ２α（８−イソ−ＰＧＦ２α）レベルである。癌マーカーは、当分野で公知の方法を使用して測定され得る。例えば、血液試料分析を実施して、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞（例えば、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ細胞）の数、細胞傷害性Ｔ細胞数、Ｔｈ１レベル、ＮＦκＢレベル、誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）レベル、マトリクスメタロペプチダーゼ９（ＭＭＰ９）レベル、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）レベル、インターロイキン−１７（ＩＬ１７）レベル、細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）レベル、ＣＸＣＬ１３レベル、および８−イソ−プロスタグランジンＦ２α（８−イソ−ＰＧＦ２α）レベルを測定してもよい。癌マーカーのさらなる非限定的な例としては、ポジトロン放出断層撮影上の腫瘍の存在およびフルデオキシグルコースシグナルの取り込み強度のためのコンピュータ断層撮影または磁気共鳴画像が挙げられる。特定の癌タイプに関連する癌マーカーのさらなる非限定的な例としては、それぞれ、乳癌についてのホルモン受容体、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ−２）、Ｋｉ６７抗原、腫瘍タンパク質ｐ５３およびケモカイン受容体タイプ４（ＣＸＣＲ４）；子宮頸癌についてのヒトパピローマウイルスＤＮＡ（ＨＰＶ  ＤＮＡ）、扁平上皮癌抗原、サイトケラチンの血清フラグメント（ＣＹＦＲＡ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）および可溶性ＣＤ４４；胆嚢癌についての癌抗原（ＣＡ）単独または癌抗原（ＣＡ）の２４２、１９９、１２５、１５−３、ＣＥＡとの組み合わせ；肺癌についてのＣＹＦＲＡ１９、扁平上皮癌抗原、ＣＥＡ、ＣＡ１２５、組織ポリペプチド特異的抗原；ならびに前立腺癌についての前立腺特異的抗原、ヒトカリクレイン２（ｈＫ２）、トランスフォーミング成長因子ベータ−１、インターロイキン−６、脂肪酸合成酵素（ＦＡＳ）、早期前立腺癌抗原（ＥＰＣＡ）、および前立腺癌抗原−３（ＰＣＡ−３）が挙げられる。癌マーカーは、疑われる腫瘍部位の生検により外科的に、内視鏡的に、または経胸腔、経直腸もしくは腟頸管検査手段を介して、または画像化ガイダンスの有無を問わず決定されてもよい。癌マーカーはまた、血液、血漿、血清、尿、脳脊髄液、糞便または他��体液中で決定されてもよい。
【０１５８】
本明細書で使用される場合、「カルバメートリンカー」という用語は、基Ｒ１−（ＣＯ）−Ｒ２を指し、式中、Ｒ１は、酸素原子への結合であり、Ｒ２は、窒素原子への結合である。
【０１５９】
「カーボネートリンカー」という用語は、本明細書で使用される場合、基Ｒ１−Ｃ（Ｏ）−Ｒ２を指し、式中、Ｒ１は、第一の酸素原子への結合であり、Ｒ２は、第二の酸素原子への結合である。
【０１６０】
「カルボニル」という用語は、本明細書で使用される場合、式−Ｃ（Ｏ）−の二価の基を指す。
【０１６１】
本明細書において使用される場合、「シンナモイル」という用語は、式トランスＡｒ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ−の一価基を指し、式中、Ａｒは、ヒドロキシおよびアルコキシ（例えば、メトキシ）からなる群から独立して選択される１または２個の置換基で任意で置換されるフェニルである。任意で置換されるシンナモイル基の非限定的な例としては、カフェイン酸、フェリル酸、および４−ヒドロキシケイ皮酸が挙げられる。
【０１６２】
本明細書において使用される場合、「インビボで切断可能」という用語は、インビボで破壊されて、少なくとも二つの別個の化合物を生じる化合物または化合物内の結合の特性を指す。一部の実施形態では、切断プロセスは、加水分解である。したがって、インビボで切断可能である化合物は、インビボで加水分解性の化合物であってもよい。化合物または結合の切断は、酵素により仲介され得るか、または所定のインビボ区画（例えば、胃腸管の一部）に存在する条件下で自然に進行され得る。一部の実施形態では、インビボで切断可能な結合または化合物は、細菌（例えば、疾患部位に存在する細菌（例えば、大腸菌またはクレブシエラ・ニューモニエ））により産生される酵素（例えば、ペプチダーゼ）により実質的に切断可能である。
【０１６３】
本明細書において使用される場合、「結腸直腸癌マーカー」という用語は、結腸直腸癌の存在、不存在、またはリスクの観察可能な指標を表す。結腸直腸癌は、結腸鏡検査、生検、生検およびＤＮＡマイクロサテライト不安定性検査、全血球計算、癌胎児性抗原レベル測定（例えば、血中）、画像化（例えば、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、超音波、Ｘ線、もしくはポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ））、または炭水化物抗原１９−９レベルにより決定されてもよい。
【０１６４】
本明細書において使用される場合、「Ｃｘ−ｙ」という表現は、当該表現のすぐ後にある名称の基が、非置換である場合、合計でｘ〜ｙ個の炭素原子を含有することを示す。当該基が複合的な基である場合（例えば、アリールアルキルなど）、「Ｃｘ−ｙ」という表現は、当該表現のすぐ後にある名称の部分が、非置換である場合、合計でｘ〜ｙ個の炭素原子を含有することを示す。例えば（Ｃ６−１０−アリール）−Ｃ１−６−アルキルは、アリール部分は、非置換である場合、合計で６〜１０個の炭素原子を含有し、アルキル部分は、非置換である場合、合計で１〜６個の炭素原子を含有する基である。
【０１６５】
本明細書において使用される場合、「シクロアルコキシ」という用語は、−ＯＲ基を表し、式中、Ｒは、シクロアルキルである。任意で置換されるシクロアルコキシは、シクロアルキルに関して本明細書に記載されるように任意で置換されるシクロアルコキシである。
【０１６６】
「シクロアルキル」という用語は、本明細書で使用される場合、別段の特定がない限り、３〜１０個の炭素を有する環状アルキル基を指す（例えば、Ｃ３−Ｃ１０シクロアルキル）。シクロアルキル基は、単環式または二環式であってもよい。二環式シクロアルキル基は、ビシクロ［ｐ．ｑ．０］アルキル型の基であってもよく、その場合、ｐおよびｑの各々は独立して、１、２、３、４、５、６、または７であり、ただしｐとｑの合計は、２、３、４、５、６、７、または８である。あるいは二環式シクロアルキル基は、架橋シクロアルキル構造、例えばビシクロ［ｐ．ｑ．ｒ］アルキルを含んでもよく、式中、ｒは、１、２または３であり、ｐおよびｑの各々は独立して、１、２、３、４、５または６であるが、ただしｐ、ｑおよびｒの合計は、３、４、５、６、７、または８である。シクロアルキル基は、スピロ環式基であってもよく、例えばスピロ［ｐ．ｑ］アルキルであってもよく、その場合、ｐおよびｑの各々は独立して、２、３、４、５、６、または７であり、ただしｐとｑの合計は、４、５、６、７、８または９である。シクロアルキルの非限定的な例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、１−ビシクロ［２．２．１．］へプチル、２−ビシクロ［２．２．１．］へプチル、５−ビシクロ［２．２．１．］へプチル、７−ビシクロ［２．２．１．］へプチル、およびデカリニルが挙げられる。シクロアルキル基は、非置換であってもよく、または１、２、３、４、もしくは５個の置換基で置換されてもよく（例えば任意で置換されるシクロアルキル）、当該置換基は独立して、アルキル、アルケニル、アルコキシ、アシルオキシ、アルキルスルフェニル、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アミノ、アリール、アリールオキシ、アジド、シクロアルキル、シクロアルコキシ、ハロ、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクリルオキシ、ヘテロアリールオキシ、ヒドロキシ、ニトロ、チオアルキル、チオアルケニル、チオアリール、チオール、シリル、シアノ、＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＲ’からなる群から選択され、式中、Ｒ’は、Ｈ、アルキル、アリールまたはヘテロシクリルである。各置換基は、それ自体が非置換であってもよく、またはそれぞれの各基に対して本明細書において定義される非置換の置換基で置換されてもよい。
【０１６７】
本明細書において使用される場合、「シクロアルキレン」という用語は、シクロアルキルである二価の基を表し、一つの水素原子が価数で置換される。シクロアルキレンは、シクロアルキルに関して本明細書に記載されるように非置換または置換であってもよい。
【０１６８】
「エステル結合」という用語は、本明細書で使用される場合、炭素原子にさらに結合する、アルコールまたはフェノールの酸素原子と、カルボニル基の炭素原子の間の共有結合を指す。
【０１６９】
「脂肪酸」という用語は、本明細書で使用される場合、短鎖脂肪酸、中鎖脂肪酸、長鎖脂肪酸、超長鎖脂肪酸、またはそれらの不飽和アナログ、またはそれらのフェニル置換アナログを指す。短鎖脂肪酸は、１〜６個の炭素原子を含み、中鎖脂肪酸は、７〜１３個の炭素原子を含み、長鎖脂肪酸は、１４〜２２個の炭素原子を含み、極度の長鎖脂肪酸は、２３〜２６個の炭素原子を含む。脂肪酸は、飽和脂肪酸であっても、または不飽和脂肪酸であってもよい。不飽和脂肪酸は、１、２、３、４、５、または６個の炭素−炭素二重結合を含む。不飽和脂肪酸中の炭素−炭素二重結合は、Ｚ立体化学を有することが好ましい。
【０１７０】
「脂肪酸アシル」という用語は、本明細書で使用される場合、ヒドロキシル基が価数で置換される脂肪酸を指す。
【０１７１】
本明細書において使用される場合、「脂肪酸アシルオキシ」という用語は、−ＯＲ基を指し、式中、Ｒは、脂肪酸アシルである。
【０１７２】
「グリコシド結合」という用語は、本明細書で使用される場合、ピラノース環またはフラノース環の酸素原子とアノマー炭素原子の間の共有結合を指す。
【０１７３】
「ハロゲン」という用語は、本明細書で使用される場合、臭素、塩素、ヨウ素、およびフッ素から選択されるハロゲンを表す。ハロゲン化物は、脱離基として使用される場合、典型的には、塩化物、臭化物、またはヨウ化物である。
【０１７４】
本明細書において使用される場合、「ヘテロアリール」という用語は、単環式の５、６、７、または８員の環系、または縮合もしくは架橋の二環式、三環式、または四環式の環系を表す。当該環系は、窒素、酸素、および硫黄からなる群から独立して選択される１、２、３、または４個のヘテロ原子を含み、当該環の少なくとも一つは、芳香族環である。ヘテロアリール基の非限定的な例としては、ベンズイミダゾリル、ベンゾフリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチエニル、ベンゾキサゾリル、フリル、イミダゾリル、インドリル、イソインダゾリル、イソキノリニル、イソチアゾリル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、プリニル、ピロリル、ピラジニル、ピリミジニル、キナゾリニル、キノリニル、チアジアゾリル（例えば、１，３，４−チアジアゾ―ル）、チアゾリル、チエニル、トリアゾリル、テトラゾリル、ジヒドロインドリル、テトラヒドロキノリル、テトラヒドロイソキノリルなどが挙げられる。二環式、三環式、および四環式のヘテロアリールという用語は、上述の少なくとも一つのヘテロ原子を有する少なくとも一つの環と、少なくとも一つの芳香族環とを含む。例えば、少なくとも一つのヘテロ原子を有する環は、１、２、または３個の炭素環、例えばアリール環、シクロヘキサン環、シクロヘキセン環、シクロペンタン環、シクロペンテン環、または別の単環式複素環に縮合されてもよい。縮合ヘテロアリールの例としては、１，２，３，５，８，８ａ−ヘキサヒドロインドリジン、２，３−ジヒドロベンゾフラン、２，３−ジヒドロインドール、および２，３−ジヒドロベンゾチオフェンが挙げられる。ヘテロアリールは、１、２、３、４、または５個の置換基で任意で置換されてもよく、当該置換基は独立して、アルキル、アルケニル、アルコキシ、アシルオキシ、アリールオキシ、アルキルスルフェニル、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アミノ、アリールアルコキシ、シクロアルキル、シクロアルコキシ、ハロゲン、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクリルオキシ、ヘテロアリールオキシ、ヒドロキシル、ニトロ、チオアルキル、チオアルケニル、チオアリール、チオール、シアノ、＝Ｏ、−ＮＲ２、−ＣＯＯＲＡ、および−ＣＯＮ（ＲＢ）２からなる群から選択され、式中、各Ｒは独立して、水素、アルキル、アシル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、またはヘテロアリールであり、式中、ＲＡは、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリルまたはヘテロアリールであり、式中、各ＲＢは独立して、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、またはヘテロアリールである。各置換基は、それ自体が非置換であってもよく、またはそれぞれの各基に対して本明細書において定義される非置換の置換基で置換されてもよい。
【０１７５】
本明細書において使用される場合、「ヘテロアリールオキシ」という用語は、−ＯＲ構造を指し、式中、Ｒは、ヘテロアリールである。ヘテロアリールオキシは、ヘテロアリールに対して定義されるように、任意で置換され得る。
【０１７６】
本明細書において使用される場合、「ヘテロシクリル」という用語は、別段の特定が無い限り、縮合もしくは架橋の４、５、６、７、または８員の環を有する単環式、二環式、三環式、または四環式の非芳香族環系を表し、当該環系は、窒素、酸素、および硫黄からなる群から独立して選択される１、２、３、または４個のヘテロ原子を含む。非芳香族の５員ヘテロシクリルは、０または１個の二重結合を有し、非芳香族の６員および７員のヘテロシクリル基は、０〜２個の二重結合を有し、非芳香族の８員ヘテロシクリル基は、０〜２個の二重結合および／または０もしくは１個の炭素−炭素三重結合を有する。ヘテロシクリル基は、別段の特定が無い限り、１〜１６個の炭素原子の炭素数を有する。あるヘテロシクリル基は、最大９個の炭素原子の炭素数を有し得る。非芳香族ヘテロシクリル基としては、ピロリニル、ピロリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ホモピペリジニル、ピペラジニル、ピリダジニル、オキサゾリジニル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、チアゾリジニル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、ジヒドロチエニル、ピラニル、ジヒドロピラニル、ジチアゾリルなどが挙げられる。また「ヘテロシクリル」という用語は、一つ以上の炭素および／またはヘテロ原子が単環の二つの非隣接員を架橋する、架橋多環式構造を有する複素環式化合物を表し、例えば、キヌクリジン、トロパン、またはジアザ−ビシクロ［２．２．２］オクタンがある。「ヘテロシクリル」という用語は、上記複素環のいずれかが、例えばシクロヘキサン環、シクロヘキセン環、シクロペンタン環、シクロペンテン環、または別の複素環など、１、２、または３個の炭素環に縮合された二環式、三環式または四環式の基を含む。縮合ヘテロシクリルの例としては、１，２，３，５，８，８ａ−ヘキサヒドロインドリジン、２，３−ジヒドロベンゾフラン、２，３−ジヒドロインドール、および２，３−ジヒドロベンゾチオフェンが挙げられる。ヘテロシクリル基は、非置換であってもよく、または１、２、３、４もしくは５個の置換基で置換されてもよく、当該置換基は独立して、アルキル、アルケニル、アルコキシ、アシルオキシ、アルキルスルフェニル、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アリールオキシ、アミノ、アリールアルコキシ、シクロアルキル、シクロアルコキシ、ハロゲン、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクリルオキシ、ヘテロアリールオキシ、ヒドロキシル、ニトロ、チオアルキル、チオアルケニル、チオアリール、チオール、シアノ、＝Ｏ、＝Ｓ、−ＮＲ２、−ＣＯＯＲＡ、および−ＣＯＮ（ＲＢ）２からなる群から選択され、式中、各Ｒは独立して、水素、アルキル、アシル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、またはヘテロアリールであり、式中、ＲＡは、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリルまたはヘテロアリールであり、式中、各ＲＢは独立して、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、またはヘテロアリールである。
【０１７７】
本明細書において使用される場合、「ヘテロシクリルアルキル」という用語は、ヘテロシクリル基で置換されたアルキル基を表す。任意で置換されるヘテロシクリルアルキルのヘテロシクリル部分およびアルキル部分は、それぞれヘテロシクリルおよびアルキルについて記載されるように、任意で置換される。
【０１７８】
本明細書において使用される場合、「ヘテロシクリルオキシ」という用語は、−ＯＲ構造を指し、式中、Ｒは、ヘテロシクリルである。ヘテロシクリルオキシは、ヘテロシクリルについて記載されるように、任意で置換され得る。
【０１７９】
本明細書において使用される場合、「炭化水素鎖」という用語は、式−（Ｃ（ＲＸ）２）ｎ−の構造を指し、式中、ｎは、１、２、または３であり、各ＲＸは、独立してＨまたはＣ１−３アルキルであるか、または同じ炭素原子に結合された両方のＲＸは、それらが結合している炭素原子と一緒に結合して、Ｃ３−８シクロアルキレンを形成する。炭化水素鎖は、非置換であってもよいか（各ＲＸが、Ｈであるとき）、または置換されていてもよい（少なくとも一つのＲＸは、Ｈではないとき）。
【０１８０】
「ヒドロキシル」および「ヒドロキシ」という用語は、本明細書で相互交換可能に使用され、−ＯＨを表す。
【０１８１】
本明細書において使用される場合、用語「感染」という用語は、微生物により引き起こされる疾患、障害、および状態の分類を指す。感染の非限定的な例としては、肺炎、肺膿瘍、肝膿瘍、髄膜炎、脊椎感染、硬膜外膿瘍、脳膿瘍、血流感染、尿路感染症、および菌血症が挙げられる。
【０１８２】
本明細書において使用される、「感染マーカー」という用語は、感染（例えば、肺炎、肺膿瘍、肝膿瘍、髄膜炎、脊椎感染、硬膜外膿瘍、脳膿瘍、血流感染、尿路感染症、もしくは菌血症）の存在、不存在、またはリスクの観察可能な指標を指す。感染マーカーのレベルは、感染状態と直接または反比例で相関し得る。感染マーカーの非限定的な例としては、ＩＬ１またはＴＮＦαの血液レベル；血液、尿もしくは脳脊髄の白血球細胞カウント；赤血球沈降速度；血清の肝トランスアミラーゼレベル；血清の血中アルカリホスファターゼレベル；または血液、胸膜液、もしくは脳脊髄液のような無菌の体液の培養物が挙げられる。一部の実施形態では、本発明の結合体の投与後、脳脊髄もしくは尿の白血球細胞カウント、赤血球沈降速度、肝トランスアミナーゼ、血清アルカリホスファターゼ、または無菌の体液培養物における細菌成長が、減少する。白血球細胞の血液レベルは、これらの感染マーカーが、正常範囲より上であるか、または下であるかに応じて、正常レベルに向かって調節され得る。付き添っている医療従事者（例えば、医師またはナース・プラクティショナー）が、感染マーカー調節の望ましい方向を決定してもよい。
【０１８３】
本明細書において使用される場合、「病変」という用語は、疾患に付随する組織損傷（例えば、肺炎、肺膿瘍、肝膿瘍、髄膜炎、脊椎感染、硬膜外膿瘍、脳膿瘍、血流感染、尿路感染症、菌血症、または非癌性腫瘍（例えば、多発性嚢胞腎疾患）に付随する組織損傷）。
【０１８４】
本明細書において使用される、「病変マーカー」という用語は、病変（例えば、肺炎、肺膿瘍、肝膿瘍、髄膜炎、脊椎感染、硬膜外膿瘍、脳膿瘍、血流感染、尿路感染症、菌血症、または非癌性腫瘍（例えば、多発性嚢胞腎疾患）において見られる病変）の存在、不存在、またはリスクの観察可能な指標である。病変マーカーのレベルは、病変の進行と直接または反比例で相関し得る。病変の進行と逆相関する病変マーカーは、「逆病変マーカー」である。病変マーカーの非限定的な例は、発熱；血液、尿もしくは脳脊髄の白血球細胞カウント；赤血球沈降速度；血清の肝トランスアミラーゼレベル；血清の血中アルカリホスファターゼレベル；または血液、胸膜液、もしくは脳脊髄液のような無菌の体液の培養物である。病変マーカーは、当分野で公知の方法を使用して測定され得る。
【０１８５】
例えば、白血球細胞カウント、赤血球沈降速度、血液培養物、血清アルカリホスファターゼレベル、血清肝トランスアミラーゼレベルを測定するための血液試料分析が行われ得る。病変マーカーのさらなる非限定的な例としては、コンピュータ断層撮影、磁気共鳴画像法または超音波検査により塊の可視化、疑わしい塊の生検ならびに血液、脳脊髄液、尿、胸膜液および腹水のような仮定の無菌の体液の培養が挙げられる。病変マーカーは、疑われる病変部位の生検により外科的に、内視鏡的に、または経胸腔、経直腸もしくは腟頸管検査法を介して、または画像化ガイダンスの有無を問わず決定されてもよい。病変マーカーはまた、血液、血漿、血清、尿、脳脊髄液、糞便または他の体液中で決定されてもよい。
【０１８６】
本明細書において使用される場合、「ロイシンリッチなペプチド」という用語は、ｘｘＬＰｘｘＬＰｘｘ（例えば、クラミジアの標的化において使用され得る、モチーフｘＩｘｘＧｘｘｘｘｘｘｘｘｘＬＰｘｘｘｘＬｘｘＬｘＬＧＧｘＰ）（式中、各ｘは、独立してアミノ酸（例えば、タンパク新生アミノ酸）である）の一般的に保存されたロイシンリッチなリピート構造を含むポリペプチドを指す。ロイシンリッチなペプチドの非限定的な例としては、ｘｘＬＰｘｘＬＰｘｘ（例えば、ｘＩｘｘＧｘｘｘｘｘｘｘｘｘＬＰｘｘｘｘＬｘｘＬｘＬＧＧｘＰ）、（式中、各ｘは、独立してアミノ酸（例えば、タンパク新生アミノ酸）である）のロイシンリッチなリピート構造を含有するペプチドが挙げられる。
【０１８７】
本明細書において使用される場合、「微生物」という用語は、哺乳類細胞ではない任意の実体を指す。微生物の非限定的な例としては、細菌、古細菌、ウイルス、ならびに原生生物界および真菌類のメンバーを含むが、これらに限定されない、真核生物が挙げられる。
【０１８８】
「調節する」という用語は、本明細書で使用される場合、マーカーの測定に関し当分野で公知の技術および方法を使用して測定されたときの、対象におけるマーカーのレベルにおける観察可能な変化を指す。対象におけるマーカーレベルの調節は、投与前または対照と比較して、少なくとも１％の変化（例えば、投与前または対照と比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または少なくとも９８％以上の変化、例えば投与前または対照と比較して最大で１００％の変化）をもたらし得る。一部の実施形態では、調節することは、対象においてマーカーのレベルを増加させることである。対象におけるマーカーレベルの増加は、投与前または対照と比較して、少なくとも１％の増加（例えば、投与前または対照と比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または少なくとも９８％以上の増加、例えば投与前または対照と比較して最大で１００％の増加）をもたらし得る。他の実施形態では、調節することは、対象においてマーカーのレベルを減少させることである。対象におけるマーカーレベルの減少は、投与前または対照と比較して、少なくとも１％の減少（例えば、投与前または対照と比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または少なくとも９８％以上の減少、例えば投与前または対照と比較して最大で１００％の減少）をもたらし得る。本明細書に記載の組成物を投与する工程の後に、対象においてパラメータが増加または減少（または低下）する実施形態において、増加または減少は、投与後の一定時間内に発生してもよく、および／または検出可能となってもよく（例えば、６時間以内、２４時間以内、３日以内、１週間以上）、ならびに１回以上の投与後に発生し、および／または検出可能となってもよい（例えば、対象に対する投与レジメンの一部として、例えば２、３、４、５、６、７、８、９、１０回以上の投与の後）。
【０１８９】
「オキソ」という用語は、本明細書で使用される場合、二価の酸素原子を表す（例えば、オキソの構造は、＝Ｏとして示される場合もある）。
【０１９０】
本明細書において使用される場合、「ペイロード」という用語は、疾患部位（例えば、癌、前癌性組織、もしくは病変）にデリバリーされるべき医薬または診断剤を表す。本発明の結合体において使用されるペイロードは、小分子、例えば、小分子医薬剤であってもよい。ペイロード（例えば、医薬剤）は、抗腫瘍剤、抗感染剤（例えば、抗細菌、酸化剤、もしくは殺生剤）、または抗炎症剤（例えば、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）もしくはメサラミン）であってもよい。抗腫瘍剤の非限定的な例としては、７−エチル−１０−ヒドロキシ−カンプトテシン（ＳＮ−３８）、イリノテカン、モノメチルオーリスタチンＥ、モノメチルオーリスタチンＦ、パクリタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ピロロベンゾジアゼピン、１０−ヒドロキシカンプトテシン、エキサテカン、シクロパミン、タセジナリン、５−フルオロウラシル、カリチアマイシン、メイタンシノイド（例えば、メルトランジンまたはラブタンジン）、メイタンシン、メトトレキサート、ズオカルマイシン、エルロチニブ、ゲフィチニブ、カペシタビン、ロイコボリン、トリフルリジン、チピラシル、およびＣＣ−１０６５として挙げられる。抗菌剤の非限定的な例としては、アミカシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシン、パロモマイシン、ストレプトマイシン、ゲルダナマイシン、ハービマイシン、リファキシミン、ロラカルベフ、エルタペネム、ドリペネム、メロペネム、セファドロキシル、セファゾリン、セファレキシン、セファクロル、セフプロジル、セフロキシム、セフィキシム、セフジニル、セフジトレン、セフォペラゾン、セフォタキシム、セフポドキシム、セフチブテン、セフトリアクソン、セフェピム、セフタロリンフォサミル、セフトビプロール、バンコマイシン、テイコプラニン、テラバンシン、ダルババンシン、オリタバンシン、クリンダマイシン、リンコマイシン、ダプトマイシン、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、テリスロマイシン、スピラマイシン、アズトレオナム、フラゾリドン、ニトロフラトイン、リネゾリド、ポシゾリド、ラデゾリド、トレゾリド、アモキシシリン、アンピシリン、アズロシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、メズロシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、ピペラシリン、テモシリン、チカルシリン、コリスチン、バシトラシン、ポリミキシンＢ、シプロフロキサシン、エノキサシン、ガチフロキサシン、ゲミフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、モキシフロキサシン、ナジフロキサシン、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン、トロバフロキサシン、グレパフロキサシン、スパルフロキサシン、テマフロキサシン、マフェナイド、スルファセタミド、スルファジアジン、スルファジアジン銀、スルファジメトキシン、スルファメチゾール、スルファニルアミド、スルファサラジン、スルフィソキサゾール、トリメトプリム、スルファメトキサゾール、スルホンアミドクリソイジン、デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、メタサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、テトラサイクリン、クロファジミン、ダプソン、カプレオマイシン、シクロセリン、エタンブトール、エチオンアミド、イソニアジド、ピラジンアミド、リファンピシン、リファブチン、リファペンチン、ストレプトマイシン、アルスフェナミン、クロラムフェニコール、ホスホマイシン、フシジン酸、メトロニダゾール、ムピロシン、プラテンシマイシン、キヌプリスチン、ダルホプリスチン、チアムフェニコール、チゲサイクリン、チニダゾール、テイクソバクチン、マラシジン、フェノール、ヒドロキシナフタレン、キニーネ、ヒドロキシクロロキン、ケトコナゾール、フルコナゾール、またはアムホテリシンＢが挙げられる。ＮＳＡＩＤの非限定的な例としては、イブプロフェン、ケトプロフェン、フルルビプロフェン、オキサプロジン、ケトロラック、ナプロキセン、インドメタシン、スリンダク、エトドラク、ジクロフェナク、アセクロフェナク、ピロキシカム、メロキシカム、テノキシカム、ロルノキシカム、メフェナム酸、またはクロニキシンが挙げられる。本発明の結合体において使用されるペイロードは、診断剤（例えば、蛍光剤または放射性標識された造影剤）であってもよい。放射性標識された造影剤の非限定的な例としては、１８Ｆ−フルオロデオキシグルコースが挙げられる。診断剤を使用して、標的腫瘍のステージを決定してもよい。
【０１９１】
本明細書で使用される場合、用語「医薬的に許容される塩」は、正常な医学的判断の範囲内において、過度の毒性、刺激、アレルギー応答などなしでの、ヒトおよび動物の組織と接触しての使用に適し、合理的な恩恵／リスク比に見合った、その塩を表す。医薬的に許容される塩は、当該技術分野で周知である。例えば、医薬的に許容される塩は、Ｂｅｒｇｅら、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ６６：１〜１９、１９７７年およびＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｕｓｅ，（Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌおよび  Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ編）、Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、２００８年において記載される。塩は、本明細書に記載される化合物の最終単離および精製中にインサイツで、または遊離塩基を適当な有機酸と反応させることにより別個に調製することができる。代表的な酸付加塩としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプトン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、親水ヨウ化物、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモン酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが挙げられる。代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなど、ならびにアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアンモニウム、ジメチルアンモニウム、トリメチルアンモニウム、トリエチルアンモニウム、エチルアンモニウムなどを含むが、これらに限定されない、無毒性のアンモニウム（例えば、四級アンモニウム）アンモニウム陽イオンが挙げられる。
【０１９２】
本明細書において使用される場合、「フェノール酸素原子」という用語は、炭素芳香環内のｓｐ２がハイブリダイズした炭素原子に結合した少なくとも一つの価数を有する２価の酸素原子を指す。
【０１９３】
本明細書で使用される場合、「前癌状態」という用語は、組織または器官において多数の成長物またはポリープが形成され、良性から始まり、経時的に、未処置のままなら癌に発展する状態を表す。前癌状態の一例は、家族性腺腫性ポリープ症（ＦＡＰ）である。
【０１９４】
「保護基」という用語は、本明細書で使用される場合、化学合成中にヒドロキシ、アミノ、またはカルボニルが、一つ以上の望ましくない反応に関与するのを防ぐことが意図された基を表す。「Ｏ−保護基」という用語は、本明細書で使用される場合、化学合成中にヒドロキシ基、またはカルボニル基が、一つ以上の望ましくない反応に関与するのを防ぐことが意図された基を表す。「Ｎ−保護基」という用語は、本明細書で使用される場合、化学合成中に窒素含有（例えばアミノまたはヒドラジン）基が、一つ以上の望ましくない反応に関与するのを防ぐことが意図された基を表す。一般的に使用されるＯ−およびＮ−保護基は、Ｇｒｅｅｎｅの“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，”  ３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  （Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９９）に開示されており、当該文献は参照により本明細書に組み込まれる。例示的なＯ−およびＮ−保護基としては、アルカノイル、アリーロイルまたはカルバミル基、例えばホルミル、アセチル、プロピオニル、ピバロイル、ｔ−ブチルアセチル、２−クロロアセチル、２−ブロモアセチル、トリフルオロアセチル、トリクロロアセチル、フタリル、ｏ−ニトロフェノキシアセチル、α−クロロブチリル、ベンゾイル、４−クロロベンゾイル、４−ブロモベンゾイル、ｔ−ブチルジメチルシリル、トリ−ｉｓｏ−プロピルシリルオキシメチル、４，４’−ジメトキシトリチル、イソブチリル、フェノキシアセチル、４−イソプロピルフェノキシアセチル、ジメチルホルムアミジノ、および４−ニトロベンゾイルなどが挙げられる。
【０１９５】
カルボニル含有基を保護するための例示的なＯ−保護基としては、限定されないが、アセタール、アシラール、１，３−ジチアン、１，３−ジオキサン、１，３−ジオキソラン、および１，３−ジチオランが挙げられる。
【０１９６】
その他のＯ−保護基としては限定されないが、置換アルキル、アリール、およびアリール−アルキルエーテル（例えば、トリチル；メチルチオメチル；メトキシメチル；ベンジルオキシメチル；シロキシメチル；２，２，２−トリクロロエトキシメチル；テトラヒドロピラニル；テトラヒドロフラニル；エトキシエチル；１−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］エチル；２−トリメチルシリルエチル；ｔ−ブチルエーテル；ｐ−クロロフェニル、ｐ−メトキシフェニル、ｐ−ニトロフェニル、ベンジル、ｐ−メトキシベンジル、およびニトロベンジル）；シリルエーテル（例えば、トリメチルシリル；トリエチルシリル；トリイソプロピルシリル；ジメチルイソプロピルシリル；ｔ−ブチルジメチルシリル；ｔ−ブチルジフェニルシリル；トリベンジルシリル；トリフェニルシリル；およびジフェニメチルシリル）；炭酸塩（例えば、メチル、メトキシメチル、９−フルオレニルメチル；エチル；２，２，２−トリクロロエチル；２−（トリメチルシリル）エチル；ビニル、アリル、ニトロフェニル；ベンジル；メトキシベンジル；３，４−ジメトキシベンジル；およびニトロベンジル）が挙げられる。
【０１９７】
その他のＮ−保護基としては限定されないが、キラル補助基、例えば保護もしくは非保護Ｄ、ＬまたはＤ−アミノ酸、例えばアラニン、ロイシン、フェニルアラニンなど；スルホニル含有基、例えばベンゼンスルホニル、ｐ−トルエンスルホニルなど；カルバミン酸形成基、例えばベンジルオキシカルボニル、ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル、ｐ‐メトキシベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、２−ニトロベンジルオキシカルボニル、ｐ‐ブロモベンジルオキシカルボニル、３，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、３，５−ジメトキシベンジル  オキシカルボニル、２，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、３，４，５−トリメトキシベンジルオキシカルボニル、１−（ｐ−ビフェニルイル）−１−メチルエトキシカルボニル、α，α−ジメチル−３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、ベンズヒドリルオキシカルボニル、ｔ−ブチルオキシカルボニル、ジイソプロピルメトキシカルボニル、イソプロピルオキシカルボニル、エトキシカルボニル、メトキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル、フェノキシカルボニル、４−ニトロフェノキシカルボニル、フルオレニル−９−メトキシカルボニル、シクロペンチルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、シクロヘキシルオキシカルボニル、フェニルチオカルボニルなど、アリール−アルキル基、例えばベンジル、トリフェニルメチル、ベンジルオキシメチルなど、およびシリル基、例えばトリメチルシリルなどが挙げられる。有用なＮ−保護基は、ホルミル、アセチル、ベンゾイル、ピバロイル、ｔ−ブチルアセチル、アラニル、フェニルスルホニル、ベンジル、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、およびベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）である。
【０１９８】
本明細書において使用される場合、「擬ハロゲン化物」という用語は、式−ＯＲの脱離基を指し、式中、Ｒは、任意で置換されるアリールまたは１個もしくは複数のフッ素原子で任意で置換されるアルキルスルホニルである。擬ハロゲン化物の非限定的な例は、ｐ−トルエンスルホニルオキシ、メタンスルホニルオキシ、およびトリフルオロメタンスルホニルオキシである。
【０１９９】
本明細書において使用される場合、「認識エレメント」という用語は、病変、新生物細胞、もしくは前癌細胞に集合するか、または局在化する微生物により産生されるタンパク質により認識される非抗体基を指す。好ましくは、認識エレメントは、非タンパク質性である。
【０２００】
本明細書において使用される場合、用語「スチレン−ジイル」は、スチレン中の２個の水素原子を価数で置換することにより形成される二価の基を指す。任意で置換されるスチレン−ジイルは、アリールに関して本明細書に記載されるように任意で置換されるスチレン−ジイルである。
【０２０１】
本明細書において使用された場合、「対象」という用語は、対象由来の試料の臨床検査分野において公知であるかに限らず、資格を有する専門家（例えば、医師または看護師）により決定される、疾患に罹患しているか、またはリスクがあるヒトまたは非ヒト動物（例えば、哺乳動物）を表す。疾患の非限定的な例は、癌（例えば、結腸直腸癌）である。
【０２０２】
本明細書において使用される場合、「硫化物原子」という用語は、２価の基−Ｓ−を指す。
【０２０３】
本明細書において使用される場合、「治療上有効量」という用語は、それを必要とする対象に健康上の恩恵をもたらす（例えば、腫瘍を処置すること、癌マーカーを調節すること、および／またはマイクロバイオームを調節すること）能力がある結合体または非結合のペイロードの量を意味する。結合体または非結合のペイロードの治療上有効量は、対象に応じて異なり得、合理的な恩恵／リスク比に従い決定されてもよい。最終的に、担当医、薬剤師、またはナース・プラクティショナーは、所定の対象のための治療上有効量を決定し得る。
【０２０４】
「チオアルケニル」という用語は、本明細書において使用される場合、−ＳＲ基を表し、式中、Ｒはアルケニルである。任意で置換されるチオアルケニルは、アルケニルに関して本明細書に記載されるように任意で置換されるチオアルケニルである。
【０２０５】
「チオアルキル」という用語は、本明細書で使用される場合、−ＳＲ基を表し、式中、Ｒはアルキルである。任意で置換されるチオアルキルは、アルキルに関して本明細書に記載されるように任意で置換されるチオアルキルである。
【０２０６】
「チオアリール」という用語は、本明細書で使用される場合、−ＳＲ基を表し、式中、Ｒはアリールである。任意で置換されるチオアリールは、アリールに関して本明細書に記載されるように任意で置換されるチオアリールである。
【０２０７】
本明細書において使用される場合、「チオエステル結合」という用語は、カルボニル基における硫黄原子と炭素原子の間の共有結合を指す。
【０２０８】
本明細書において使用される場合、「トレースレスリンカー」という用語は、多価の基、認識エレメント、またはその間の結合の切断が、多価の基とペイロードの間の結合の切断を引き起こすように、認識エレメントをペイロードに共有結合させる多価（例えば、２価）の基を表す。トレースレスリンカーは、式ＲＡ−ＮＨ−Ｌ１−（Ｃ（Ｒ２）２）−Ｌ２−ＲＢの基であってもよく、式中、ＲＡは、認識エレメントへの結合であり、ＲＢは、ペイロードへの結合であり、Ｌ１は、１，４−フェニレン、１，２−フェニレン、または任意で置換されるＣ１−３炭化水素鎖であり、Ｌ２は、ＲＢと結合して、−ＮＨＣＯ−ＲＢ、−（ＣＯ）−ＲＢ、または−ＯＣＯ−ＲＢを形成し、各Ｒ２は、独立してＨまたはＣ１−６アルキルであるか、または両方のＲ２は、各Ｒ２が結合している原子と結合して、シクロアルキレンを形成する。トレースレスリンカーの非限定的な例は、以下の基：
【化１１】
2021535092.tif 000024
（式中、ＲＡは、認識エレメントへの結合であり、ＲＢは、ペイロード（例えば、抗腫瘍剤または抗菌剤）への結合であり、Ｘは、Ｈ、ハロゲン、任意で置換されるアルキル（例えば、ハロアルキル（例えば、−ＣＦ３））、アルキルスルホニル（例えば、−ＳＯ２Ｍｅ）、またはシアノであり、ＲＣは、Ｈまたはメチルであり、ｎは、１または２である）を含む。ＲＡは、認識エレメントにおけるカルボニル基（例えば、アミノ酸残基のカルボニル基）の炭素に結合されてもよい。ＲＢは、ペイロードにおける酸素（例えば、フェノール酸素原子もしくはカルボキシレート酸素原子）、窒素原子（例えば、アンモニウム窒素原子）、または硫黄原子（例えば、スルフィド原子）への結合であってもよい。
【０２０９】
「治療」および「治療すること」は、本明細書で使用される場合、疾患を改善、向上、安定化、予防、または治癒することを意図した、対象の医学的管理を指す。この用語には、積極的治療（疾患の改善を目的とした治療）；原因治療（関連する疾患の原因に対する治療）、緩和治療（疾患の症状緩和を目的とした治療）、予防治療（関連する疾患の発生を最小限に抑える、または部分的もしくは完全に阻害することを目的とした治療）、および支持療法（他の療法を補完するために行われる治療）が含まれる。
【０２１０】
本明細書において使用される場合、「腫瘍」という用語は、異常かつ過剰な増殖を有すると特徴付けられる組織を指す。腫瘍は、悪性（例えば、癌性組織）、前癌性（例えば、前癌性組織）または良性であってもよい。
【０２１１】
本明細書で使用される場合、「尿素リンカー」という用語は、基Ｒ１−（ＣＯ）−Ｒ２を指し、式中、Ｒ１は、窒素原子への結合であり、Ｒ２は、別の窒素原子への結合である。
【０２１２】
本明細書に記載される結合体は、別段の記載が無い限り、同位体が富化された化合物（例えば、重水素化化合物）、互変異性体、ならびに立体異性体および配座異性体（例えば、エナンチオマー、ジアステレオマー、Ｅ／Ｚ異性体、アトロプ異性体など）、ならびにそのラセミ化合物、ならびに異なる比率のエナンチオマーもしくはジアステレオマーの混合物、または前述の形態および塩（例えば、医薬的に許容される塩）の混合物、または溶媒和物を包含する。
【発明を実施するための形態】
【０２１３】
本発明は、結合体および医薬的に許容されるその塩、それを含有する組成物、およびそれを使用する方法を提供する。本発明の結合体、またはその医薬的に許容される塩は、典型的には、ペイロードに供給結合した、またはリンカーを介して結合した認識エレメントを含む。ペイロードは、医薬剤（例えば、抗腫瘍剤、抗感染剤、もしくは抗炎症剤）または診断剤であってもよい。ペイロードは、小分子であってもよい。
【０２１４】
本発明の結合体を使用して、それを必要とする対象における疾患部位（例えば、腫瘍または病変）にペイロード（例えば、抗腫瘍剤、抗感染剤、または抗炎症剤）を標的化してもよい。理論に拘束されることを意図するものではないが、本発明の結合体を疾患部位（例えば、腫瘍または病変）に標的化することにより、標的化された組織環境の利点（例えば、新生物細胞または病変を含有する組織に生息する微生物）を得てもよい。例えば、大腸菌およびクレブシエラ・ニューモニエは、結腸直腸癌組織に繁殖すると考えられている。これらの細菌は、本発明の結合体を加水分解して、ペイロードを結腸直腸癌組織の領域に放出する能力がある１種以上の酵素（例えば、コリバクチン成熟酵素ＣｌｂＰ）を産生するので、これらの細菌を使用して、ペイロードを結腸直腸癌組織に標的化してもよい。従って、対象の胃腸管は、結合体を切断するための大腸菌またはクレブシエラ・ニューモニエを含んでもよい。微生物と共存する病変は、肝臓、脳、心臓、骨または身体の他の領域において見られ場合がある。例えば、肝臓における病変の標的化は、ペイロードをクレブシエラ・ニューモニエにより産生されるＣｌｂＰに標的化することを含み得る。
【０２１５】
有利なことに、本明細書において記載される疾患組織標的化ストラテジーは、結合していない医薬剤のものと比較して優れている場合がある。有利なことには、疾患組織（例えば、腫瘍）を標的化する本発明の結合体は、結合していないペイロードの投与と比較してより高い局所濃度のペイロードをもたらすと予想されるので、本明細書において記載される疾患組織標的化ストラテジーにより、より少ないペイロード（例えば、医薬剤（例えば、抗腫瘍剤、抗菌剤、または抗炎症剤））用量の投与が可能になる場合がある。あるいは、そして有利なことには、疾患組織（例えば、腫瘍）を標的化する本発明の結合体は、結合していないペイロードの投与と比較してオフターゲットの濃度のペイロードを低減すると予想されるので、本明細書において記載される疾患組織標的化ストラテジーにより、より多いペイロード（例えば、医薬剤（例えば、抗腫瘍剤、抗菌剤、または抗炎症剤））用量の投与が可能になる場合がある。また有利なことに、本発明の結合体は、同じモル投薬量で結合していないペイロードより、対象への投与の際のより低い発生率および／または重症度を生じ得る。
【０２１６】
以下の表１は、特定の癌、前癌状態、および病変の疾患部位と関連する細菌のさらなる例を示す。
【０２１７】
【表１】
2021535092.tif 000025
【０２１８】
プロピオニバクテリウム・アクネスは、前立腺癌の組織において頻繁にみられ、健常な前立腺には存在しない（表１）。プロピオニバクテリウム・アクネスは、外部の化学結合の切断のための多数の分泌されたタンパク質および細胞外起源のタンパク質をコードする。プロピオニバクテリウム・アクネス株ＫＰＡ１７１２０２由来のこれらのタンパク質の例は、Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニンカルボキシペプチダーゼ（遺伝子ＷＰ＿００２５３１２１０．１）およびβ−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ（遺伝子ＷＰ＿０４１４４４２３２．１）を含む。これらの遺伝子産物は、それぞれ、ペプチド（Ａｃ）２−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａおよびグリコシド末端の非還元β−Ｎ−アセチルグルコサミン結合を標準的に切断する。ペプチド（Ａｃ）２−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａにおいて、Ｄ−ＡｌａとＤ−Ａｌａの間のペプチド結合が切断される。β−Ｎ−アセチルグルコサミンにおいて、グリコシド結合が切断される。これらの酵素の活性を利用して、本発明のある特定の結合体を使用して、前立腺においてプロピオニバクテリウム・アクネスと局在化した癌を標的にすることができる。プロピオニバクテリウム・アクネスタンパク質により切断可能な認識エレメントの非限定的な例は、（Ａｃ）２−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａおよびβ−Ｎ−アセチルグルコサミンを含む。
【０２１９】
クラミジア・ニューモニエは、肺癌の上昇したリスクと関連することが見出された（表１）。クラミジア・ニューモニエは、外部の化学結合の切断のための多数の分泌されたタンパク質および細胞外提示タンパク質をコードする。クラミジア・ニューモニエＣＷＬ０２９由来のこれらのタンパク質の例は、タンパク質分解酵素（遺伝子ＮＰ＿２２４８０９．１）およびシンナモイルエステラーゼ（遺伝子ＮＰ＿２２４３６０．１）を含む。これらの遺伝子産物は、それぞれ、ケイ皮酸誘導体のロイシンリッチなペプチドおよびカルボン酸エステル結合を標準的に切断する。これらの酵素の活性を利用して、本発明のある特定の結合体を使用して、肺においてクラミジア・ニューモニエと局在化した癌を標的にすることができる。クラミジア・ニューモニエタンパク質により切断可能な認識エレメントの非限定的な例は、任意で置換されるシンナモイル（例えば、カフェイン酸アシル、４−ヒドロキシケイ皮酸アシル、またはフェリル酸アシル）およびロイシンリッチなペプチド（例えば、ｘｘＬＰｘｘＬＰｘｘ（例えば、ｘＩｘｘＧｘｘｘｘｘｘｘｘｘＬＰｘｘｘｘＬｘｘＬｘＬＧＧｘＰ（式中、各ｘは、独立してアミノ酸（例えば、タンパク新生アミノ酸）である））のロイシンリッチなリピート構造を含有する）を含む。
【０２２０】
バクテロイデス・フラジリス（例えば、腸内毒素原性バクテロイデス・フラジリス）は、大腸癌と関連することが見出された（表１）。バクテロイデス・フラジリスは、Ａｒｇ−ＡｒｇおよびＬｅｕ−Ａｒｇ結合を切断することができる細胞外タンパク質分解酵素を分泌する。大腸癌の処置のためバクテロイデス・フラジリスを標的にする本発明の結合体は、ジペプチド（Ａｒｇ−ＡｒｇまたはＬｅｕ−Ａｒｇ）を認識エレメントとして含む。切断は、典型的には、二つのアルギニンの間またはＬｅｕ−Ａｒｇ結合で生じる。
【０２２１】
サルモネラ・エンテリカ血清型チフスは、胆嚢癌の発生と正の関係を有する（表１）。サルモネラ・エンテリカ血清型チフスは、外部の化学結合の切断のための多数の分泌されたタンパク質および細胞外提示タンパク質をコードする。サルモネラ・エンテリカ種エンテリカ血清型チフス株ＣＴ１８由来のこれらのタンパク質の例は、ペニシリン無感受性マウスエンドペプチダーゼ（遺伝子ＮＰ＿４５６９２４．１）およびエンドグルカナーゼ（遺伝子ＮＰ＿４５８３０３．１）を含む。これらの遺伝子産物は、それぞれ、Ｄ−アラニル−メソ−２，６−ジアミノ−ピメリルアミド結合およびβ−１，４−グルカン結合を標準的に切断する。これらの酵素の活性を利用し、本発明のある特定の結合体を使用して、胆嚢におけるサルモネラ・エンテリカ・チフィと局在化した癌を標的にすることができる。サルモネラ・エンテリカ・チフィタンパク質により切断可能な認識エレメントの非限定的な例は、Ｄ−アラニル−メソ−２，６−ジアミノ−ピメリルおよびβ−１，４−グルカン（例えば、２〜１０個のグルコースモノマー；好ましくは、２〜４個のグルコースモノマーを有するβ−１，４−グルカン）を含む。
【０２２２】
メチロバクテリウム・ラデイオトレランスは、乳癌組織において富化され、正常な乳房組織において枯渇することが見出された（表１）。メチロバクテリウム・ラデイオトレランスは、外部の化学結合の切断について多数の分泌されたタンパク質および細胞提示タンパク質をコードする。メチロバクテリウム・ラデイオトレランスＪＣＭ２８３１由来のこれらのタンパク質の例は、Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニンカルボキシペプチダーゼ（遺伝子ＷＰ＿０４１３７２２９５．１）およびセルラーゼ（ＷＰ＿０１２３１７２９７．１）を含む。これらの遺伝子産物は、それぞれ、ペプチド（Ａｃ）２−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ａｌａ−−Ｄ−Ａｌａおよびβ−１，４−グルカン結合を標準的に切断する。これらの酵素の活性を利用して、本発明のある特定の結合体を使用して、乳房におけるメチロバクテリウム・ラデイオトレランスと局在化した癌を標的にすることができる。メチロバクテリウム・ラデイオトレランスタンパク質により切断可能な認識エレメントの非限定的な例は、（Ａｃ）２−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａおよびβ−１，４−グルカン（例えば、２〜１０個のグルコースモノマー；好ましくは、２〜４個のグルコースモノマーを有するβ−１，４−グルカン）を含む。
【０２２３】
クラミジア・トラコマティスの存在は、子宮頸癌における増大したリスク因子と関係している（表１）。クラミジア・トラコマティスは、外部の化学結合の切断について多数の分泌されたタンパク質および細胞提示タンパク質をコードする。クラミジア・トラコマティスＤ／ＵＷ−３／ＣＸ由来のこれらのタンパク質の例は、Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニンカルボキシペプチダーゼ（遺伝子ＮＰ＿２２００６６．１）およびシンナモイルエステラーゼ（遺伝子ＮＰ＿２１９６５２．１）を含む。これらの遺伝子産物は、それぞれ、（Ａｃ）２−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａおよびケイ皮酸誘導体のカルボン酸エステル結合を標準的に切断する。これらの酵素の活性を利用して、本発明のある特定の結合体を使用して、子宮頸部におけるクラミジア・トラコマティスと局在化した癌を標的にすることができる。クラミジア・トラコマティスタンパク質により切断可能な認識エレメントの非限定的な例は、（Ａｃ）２−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａおよび任意で置換されるシンナモイル（例えば、カフェイン酸アシル、４−ヒドロキシケイ皮酸アシル、またはフェリル酸アシル）を含む。
【０２２４】
クレブシエラ・ニューモニエの標的化は、例えば、ある特定のアミド結合を切断する、コリバクチン成熟酵素ＣｌｂＰを標的化することにより、大腸菌標的化と類似する方法で行われ得る。ＣｌｂＰを標的化するための認識エレメントの非限定的な例は、Ｒ１−Ｌ−（式中、Ｒ１は、脂肪酸アシル（例えば、カプリオイル）であり、Ｌは、アミノ酸残基（例えば、任意で置換されるＤ−アスパラギン、任意で置換されるＤ−アルギニン、任意で置換されるＤ−グルタミン、任意で置換されるＤ−アスパラギン酸、または任意で置換されるＤ−グルタミン酸）である）である。
【０２２５】
本発明の結合体
本発明の結合体、またはその医薬的に許容される塩は、ペイロードに供給結合した、またはリンカーを介して結合した認識エレメントを含む。ペイロードは、医薬剤（例えば、抗腫瘍剤もしくは抗菌剤）または診断剤である。好ましい抗腫瘍剤は、細胞毒性抗腫瘍剤である。
【０２２６】
本発明の結合体において、抗腫瘍剤は、例えば、７−エチル−１０−ヒドロキシ−カンプトテシン（ＳＮ−３８）、イリノテカン、モノメチルオーリスタチンＥ、モノメチルオーリスタチンＦ、パクリタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ピロロベンゾジアゼピン、１０−ヒドロキシカンプトテシン、エキサテカン、シクロパミン、タセジナリン、５’−デオキシ−５−フルオロウリジン、５−フルオロウラシル、カリチアマイシン、メイタンシノイド（例えば、メルトランジンもしくはラブタンジン）、メイタンシン、メトトレキサート、ズオカルマイシン、エルロチニブ、ゲフィチニブ、カペシタビン、ロイコボリン、トリフルリジン、チピラシル、またはＣＣ−１０６５であってもよい。理論により結び付けられることを望まないが、抗腫瘍剤は、標的化腫瘍（例えば、結腸直腸癌組織もしくは結腸ポリープのような、大腸菌またはクレブシエラ・ニューモニエが集合した腫瘍；前立腺癌組織のような、プロピオニバクテリウム・アクネスが集合した腫瘍；肺癌組織のような、クラミジア・ニューモニエが集合した腫瘍；胆嚢癌組織のような、サルモネラ・エンテリカ・チフィが集合した腫瘍；乳癌組織のような、メチロバクテリウム・ラデイオトレランスが集合した腫瘍；または子宮頸癌組織のようなクラミジア・トラコマティスが集合した腫瘍）にデリバリーされた際、結合体から標的化組織に放出される。標的化された癌または前癌性組織（例えば、結腸直腸癌組織、結腸ポリープ、肺癌組織、胆嚢癌組織、乳癌組織、または子宮頸癌組織）に放出されると、抗腫瘍剤は、癌または前癌状態（例えば、結腸直腸癌、結腸ポリープ、肺癌、胆嚢癌、乳癌、または子宮頸癌）を処置し得る。一部の実施形態では、抗腫瘍剤は、モノメチルオーリスタチンＥである。ある特定の実施形態では、抗腫瘍剤は、７−エチル−１０−ヒドロキシ−カンプトテシン（ＳＮ−３８）である。
【０２２７】
本発明の結合体において、抗菌剤は、例えば、アミカシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシン、パロモマイシン、ストレプトマイシン、ゲルダナマイシン、ハービマイシン、リファキシミン、ロラカルベフ、エルタペネム、ドリペネム、メロペネム、セファドロキシル、セファゾリン、セファレキシン、セファクロル、セフプロジル、セフロキシム、セフィキシム、セフジニル、セフジトレン、セフォペラゾン、セフォタキシム、セフポドキシム、セフチブテン、セフトリアクソン、セフェピム、セフタロリンフォサミル、セフトビプロール、バンコマイシン、テイコプラニン、テラバンシン、ダルババンシン、オリタバンシン、クリンダマイシン、リンコマイシン、ダプトマイシン、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、テリスロマイシン、スピラマイシン、アズトレオナム、フラゾリドン、ニトロフラトイン、リネゾリド、ポシゾリド、ラデゾリド、トレゾリド、アモキシシリン、アンピシリン、アズロシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、メズロシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、ピペラシリン、テモシリン、チカルシリン、コリスチン、バシトラシン、ポリミキシンＢ、シプロフロキサシン、エノキサシン、ガチフロキサシン、ゲミフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、モキシフロキサシン、ナジフロキサシン、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン、トロバフロキサシン、グレパフロキサシン、スパルフロキサシン、テマフロキサシン、マフェナイド、スルファセタミド、スルファジアジン、スルファジアジン銀、スルファジメトキシン、スルファメチゾール、スルファニルアミド、スルファサラジン、スルフィソキサゾール、トリメトプリム、スルファメトキサゾール、スルホンアミドクリソイジン、デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、メタサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、テトラサイクリン、クロファジミン、ダプソン、カプレオマイシン、シクロセリン、エタンブトール、エチオンアミド、イソニアジド、ピラジンアミド、リファンピシン、リファブチン、リファペンチン、ストレプトマイシン、アルスフェナミン、クロラムフェニコール、ホスホマイシン、フシジン酸、メトロニダゾール、ムピロシン、プラテンシマイシン、キヌプリスチン、ダルホプリスチン、チアムフェニコール、チゲサイクリン、チニダゾール、テイクソバクチン、マラシジン、フェノール、ヒドロキシナフタレン、キニーネ、ヒドロキシクロロキン、ケトコナゾール、フルコナゾール、またはアムホテリシンＢであってもよい。理論により結び付けられることを望まないが、抗菌剤は、標的化された腫瘍（例えば、結腸直腸癌組織のような、大腸菌またはクレブシエラ・ニューモニエが集合した腫瘍）にデリバリーされた際、結合体から標的化された腫瘍に放出される。標的化された腫瘍（例えば、結腸直腸癌組織）において放出されると、抗菌剤は、標的化された腫瘍に存在するマイクロバイオームを調節し得る。
【０２２８】
本発明の結合体において、認識エレメントは、共有結合により結合された原子の非抗体アレイである。認識エレメントは、疾患の部位に実質的に位置する微生物により産生されるタンパク質に結合する能力がある。認識エレメントの非限定的な例は、式Ｒ１−Ｌ−（式中、Ｒ１は、脂肪酸アシル（例えば、カプリロイル、アセチル、またはバレリル）、アミノ酸残基（例えば、Ａｌａ  Ｃ１−６アルキルエステル）、ジペプチド（例えば、Ｌ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ａｌａ−またはＤ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ）、トリペプチド（Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−）、β−Ｎ−アセチルグルコサミン、β−１，４−グルカン、任意で置換されるシンナモイル、Ｄ−アラニル−メソ−２，６−ジアミノ−ピメリルアミド、任意で置換されるフェニル、任意で置換されるアルキル、または任意で置換されるアリールアルキルであり；Ｌは、結合、アミノ酸残基（例えば、任意で置換されるＤ−アスパラギン、任意で置換されるＤ−アルギニン、任意で置換されるＤ−グルタミン、任意で置換されるＤ−アスパラギン酸、または任意で置換されるＤ−グルタミン酸）、−ＮＨ−ＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−、または−ＳＯ２−である）の基を含む。一部の実施形態では、Ｌは、そのα−アミノ基を介してＲ１に結合する。認識エレメントの非限定的な例は、脂肪酸アシル（例えば、カプリロイル、アセチル、またはバレリル）、Ｌ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ａｌａ−、Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｓｎ、β−Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−、シンナモイル、Ｄ−アラニル−メソ−２，６−ジアミノ−ピメリルアミド、およびβ−Ｄ−１，４−グルカンを含む。
【０２２９】
本発明の結合体において、ペイロードは、認識エレメントに共有結合されるか、またはリンカーを介して結合されてもよい。ペイロードが、認識エレメントに共有結合されるとき、ペイロードと認識エレメントの間の共有結合は、エステル結合、アミド結合、グリコシド結合、カルバメートリンカー、またはカルボネートリンカーである。ペイロードが、認識エレメントにリンカーを介して共有結合されるとき、ペイロードとリンカーの間の共有結合は、典型的には、標的化された腫瘍の環境により（例えば、腫瘍を集める微生物により産生される酵素により）直接または間接的に切断される。リンカーとペイロードの間の共有結合の間接的な切断は、リンカーおよび／または認識エレメント中または間の結合の切断後に生じ得る。例えば、リンカーは、トレースレスリンカーであってもよい。トレースレスリンカーは、例えば、アミド結合を介して、認識エレメントに結合されてもよい。トレースレスリンカーは、例えば、アミド結合、エステル結合、チオエステル結合、カルボネートリンカー、カルバメートリンカーを介して、ペイロードに結合されてもよい。トレースレスリンカーは、式ＲＡ−ＮＨ−Ｌ１−（Ｃ（Ｒ２）２）−Ｌ２−ＲＢの基であってもよく、式中、ＲＡは、認識エレメントへの結合であり、ＲＢは、ペイロードへの結合であり、Ｌ１は、１，４−フェニレン、１，２−フェニレン、または任意で置換されるＣ１−３炭化水素鎖であり、Ｌ２は、ＲＢと結合して、−ＮＨＣＯ−ＲＢ、−（ＣＯ）−ＲＢ、または−ＯＣＯ−ＲＢを形成し、各Ｒ２は、独立してＨまたはＣ１−６アルキルであるか、または両方のＲ２は、各Ｒ２が結合している原子と結合して、シクロアルキレンを形成する。トレースレスリンカーの非限定的な例は、以下の基：
【化１２】
2021535092.tif 000026
（式中、ＲＡは、認識エレメントへの結合であり、ＲＢは、ペイロード（例えば、抗腫瘍剤または抗菌剤）への結合であり、Ｘは、Ｈ、ハロゲン、任意で置換されるアルキル（例えば、ハロアルキル（例えば、−ＣＦ３））、アルキルスルホニル（例えば、−ＳＯ２Ｍｅ）、またはシアノであり、ＲＣは、Ｈまたはメチルであり、ｎは、１または２である）を含む。ＲＡは、認識エレメントにおけるカルボニル基（例えば、アミノ酸残基のカルボニル基）の炭素に結合されてもよい。ＲＢは、ペイロード中の酸素原子（例えば、フェノール酸素原子もしくはカルボキシレート酸素原子）、窒素原子（例えば、アンモニウム窒素原子）、または硫黄原子（例えば、硫化物原子）に結合されてもよい。
【０２３０】
本発明の結合体の非限定的な例は：
【化１３−１】
2021535092.tif 000027
【化１３−２】
2021535092.tif 000028
【化１３−３】
2021535092.tif 000029
【化１３−４】
2021535092.tif 000030
【化１３−５】
2021535092.tif 000031
【化１３−６】
2021535092.tif 000032
【化１３−７】
2021535092.tif 000033
およびその医薬的に許容される塩を含む。
【０２３１】
使用方法
本発明の結合体を使用して、対象においてペイロード（例えば、抗腫瘍剤、抗感染剤、または抗炎症剤）を組織にデリバリーしてもよい。デリバリーされるペイロードを使用して、それを必要とする対象における癌マーカー（例えば、結腸直腸癌マーカー）を調節するか、それを必要とする対象における癌（例えば、結腸直腸癌）を処置するか、感染もしくは感染に関連する病変を処置するか、感染マーカーを調節するか、またはそれを必要とする対象のマイクロバイオーム（例えば、ペイロードデリバリーの部位で）を調節してもよい。抗炎症剤を含む結合体を使用して、本明細書において記載される癌、感染、および病変に続く炎症を標的化してもよい。
【０２３２】
本発明の方法は、それを必要とする対象における癌マーカー（例えば、結腸直腸癌マーカー）を調節するためであってもよい。対象における癌マーカー（例えば、結腸直腸癌マーカー）レベルの調節により、投与前または対照と比較して少なくとも１％（例えば、投与前または対照と比較して少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または少なくとも９８％以上、例えば、投与前または対照と比較して最大１００％）の変化を生じ得る。一部の癌マーカーは、癌状態またはそのリスクと直接相関する場合があり、一方で他の癌マーカーは、癌状態またはそのリスクと逆相関する場合がある。したがって、一部の実施形態では、調節は、対象における癌マーカーのレベルを増加させることである。対象における癌マーカーレベルの増加は、投与または対照と比較して少なくとも１％（例えば、投与または対照と比較して少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または少なくとも９８％以上、例えば、投与または対照と比較して最大１００％）の増加を生じ得る。他の実施形態では、調節は、対象における癌マーカーのレベルを減少させることである。対象における癌マーカーレベルの減少は、投与または対照と比較して少なくとも１％（例えば、投与または対照と比較して少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または少なくとも９８％以上、例えば、投与または対照と比較して最大１００％）の減少を生じ得る。
【０２３３】
本発明の方法は、それを必要とする対象において感染マーカー（例えば、血液、尿もしくは脳脊髄の白血球細胞カウント、赤血球沈降速度、血清肝トランスアミラーゼレベル、血清血液アルカリホスファターゼレベル、または血液、胸膜液もしくは脳脊髄液のような無菌の体液の培養物）を調節するためであってもよい。対象における感染マーカー（例えば、血液または肝臓の感染マーカー）レベルの調節により、投与前または対照と比較して少なくとも１％（例えば、投与前または対照と比較して少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または少なくとも９８％以上、例えば、投与前または対照と比較して最大１００％）の変化を生じ得る。一部の感染マーカーは、感染状態またはそのリスクと直接的に相関し得るか、一方、他の感染マーカーは、感染状態またはそのリスクと逆相関し得る。したがって、一部の実施形態では、調節は、対象における感染マーカーのレベルを増加させることである。対象における感染マーカーレベルの増加は、投与または対照と比較して少なくとも１％（例えば、投与または対照と比較して少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または少なくとも９８％以上、例えば、投与または対照と比較して最大１００％）の増加を生じ得る。他の実施形態では、調節は、対象において感染マーカーレベルを減少させることである。対象における感染マーカーレベルの減少は、投与または対照と比較して少なくとも１％（例えば、投与または対照と比較して少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または少なくとも９８％以上、例えば、投与または対照と比較して最大１００％）の減少を生じ得る。一部の実施形態では、本発明の結合体の投与後、脳脊髄もしくは尿の白血球細胞カウント、赤血球沈降速度、肝トランスアミナーゼ、血清アルカリホスファターゼ、または無菌の体液培養物における細菌成長が、減少する。白血球細胞の血液レベルは、これらの感染マーカーが、正常範囲より上であるか、または下であるかに応じて、正常レベルに向かって調節され得る。付き添っている医療従事者（例えば、医師またはナース・プラクティショナー）が、感染マーカー調節の望ましい方向を決定してもよい。
【０２３４】
特定の実施形態では、本明細書において記載される結合体は（例えば、切断され、ペイロード（例えば、抗腫瘍剤）を放出する際）、インビトロアッセイにおいて新生物細胞の生存能力を低減するか、または癌の動物モデルにおいて腫瘍負荷量を減少する。一部の実施形態では、本明細書において記載される結合体は（例えば、切断されて、ペイロード（例えば、抗腫瘍剤）を放出する際）、疼痛の量または患者により使用される支えとなる薬物治療を低減する、例えば、対象において、オピオイド薬物治療の持続期間を変化させるか、または組み換えヒト顆粒球コロニー刺激因子類似体の必要性を減少する（例えば、対照群と比較して少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９８％以上）。ある特定の実施形態では、本明細書において記載される結合体は（例えば、切断されて、ペイロード（例えば、抗腫瘍剤）を放出する際）、患者における有害な現象の発生率を低減する、例えば、ＣＩＰＮの患者により報告された結果、患者の頭痛強度スコア、末梢性感覚ニューロパチーに起因して化学療法を停止する患者の割合、もしくは有害な現象に起因して化学療法用量強度の減少が必要な患者の割合を変化させる（例えば、対照群と比較して少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９８％以上）。特定の実施形態では、本明細書において記載される結合体は（例えば、切断されて、ペイロード（例えば、抗腫瘍剤）を放出する際）、患者における疾患の進行の複合的な評価項目、例えば、対象における客観的な応答率、進行せずに生存、全体的な生存、応答率を改善する（例えば、対照群と比較して少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９８％以上）。一部の実施形態では、本明細書において記載される結合体は（例えば、切断されて、ペイロード（例えば、抗腫瘍剤）を放出する際）、対象において、癌マーカーレベル、例えば、細胞毒性Ｔ細胞カウント、Ｔｈ１細胞カウント、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）レベル、インターロイキン−１７（ＩＬ１７）レベル、または細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）レベルを増大する（例えば、対照群または投与前もしくは対照のレベルと比較して少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９８％以上）。ある特定の実施形態では、本明細書において記載される結合体は（例えば、切断されて、ペイロード（例えば、抗腫瘍剤）を放出する際に）、対象において、癌マーカー、例えば、ＮＦκＢレベル、ＭＭＰ９レベル、８−イソ−ＰＧＦ２αレベル、またはＣＸＣＬ１３レベルを低減する（例えば、対照群または投与前もしくは対照のレベルと比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５���、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９８％以上）。さらなる実施形態では、本明細書において記載される結合体は（例えば、切断されて、ペイロード（例えば、抗腫瘍剤）を放出する際）、対象において、癌マーカー、例えば、Ｔｈ１細胞カウント、ＩｇＡレベル、またはｉＮＯＳレベルを調節する（増大するか、または減少する）（例えば、対照群または投与前もしくは対照のレベルと比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９８％以上）。担当の医師または看護師は、Ｔｈ１細胞数、ＩｇＡレベル、またはｉＮＯＳレベルの増加または減少が望ましいかどうかを判断することができる。
【０２３５】
癌マーカーは、当分野で公知の方法を使用して測定され得る。例えば、血液試料分析を実施して、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞（例えば、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ細胞）の数、細胞傷害性Ｔ細胞数、Ｔｈ１レベル、ＮＦκＢレベル、誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）レベル、マトリクスメタロペプチダーゼ９（ＭＭＰ９）レベル、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）レベル、インターロイキン−１７（ＩＬ１７）レベル、細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）レベル、ＣＸＣＬ１３レベル、および８−イソ−プロスタグランジンＦ２α（８−イソ−ＰＧＦ２α）レベルを測定してもよい。
【０２３６】
特定の実施形態では、本明細書において記載される結合体は（例えば、切断され、ペイロード（例えば、抗感染剤）を放出する際）、インビトロアッセイにおいて感染細胞の生存能力を低減するか、または癌の動物モデルにおいて感染負荷量を減少する。
【０２３７】
加えて、または或いは、本発明の方法は、感染または感染と関連する病変を処置してもよい。特定の実施形態では、本明細書において記載される結合体は（例えば、切断され、ペイロード（例えば、抗感染剤）を放出する際）、インビトロアッセイにおいて感染因子の生存能力を低減するか、または癌の動物モデルにおいて感染負荷量を減少する。特定の実施形態では、本明細書において記載される結合体は（例えば、切断されて、ペイロード（例えば、抗感染剤）を放出する際）、患者における疾患進行または退縮の個々または複合的な評価項目、例えば、発熱の持続期間、上昇した血液白血球細胞カウントレベルの持続期間、入院期間、臨床治癒率、微生物学的治癒率、抜管までの時間、集中治療室を出るまでの時間、主要臓器不全の発生または持続期間を改善する。
【０２３８】
加えて、または代わりに、本発明の方法は、それを必要とする対象におけるマイクロバイオームを調節するためであってもよい。それを必要とする対象におけるマイクロバイオームの調節は、大腸菌またはクレブシエラ・ニューモニエの低減を生じ得る。
【０２３９】
加えて、または代わりに、本発明の方法は、それを必要とする対象における癌（例えば、結腸直腸癌）を処置するためであってもよい。理論により結び付けられることを望まないが、本発明の結合体は、投与の際、対象の身体を介して分散するか、または進み得ると考えられている。
【０２４０】
本発明の方法は、治療上有効量の本発明の結合体をそれを必要とする対象（例えば、結腸直腸癌に罹患している対象）に投与する工程を含む。治療上有効量の本発明の結合体は、モルで測定されるとき、治療上有効量より少ない量の結合していないペイロード（例えば、抗腫瘍剤または抗菌剤）であってもよい。例えば、治療上有効量の本発明の結合体は、治療上有効量より少なくとも１０％（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％、例えば、最大９０％、最大８０％、最大７０％、または最大６０％）少ない量の対応する結合していないペイロード（例えば、抗腫瘍剤または抗菌剤）であってもよい。あるいは、治療上有効量の本発明の結合体は、治療上有効量と等しいか、またはそれを超える対応する結合していないペイロード（例えば、抗腫瘍剤または抗菌剤）であってもよい。例えば、治療上有効量の本発明の結合体は、治療上有効量より少なくとも１０％（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも１００％、または少なくとも２００％、例えば、最大５００％、最大４００％、最大３００％、または最大２００％）多い対応する結合していないペイロード（例えば、抗腫瘍剤または抗菌剤）であってもよい。
【０２４１】
さらに、本明細書において記載される方法は、結腸直腸癌と診断された対象のＧＩ管における大腸菌またはクレブシエラ・ニューモニエの存在または量を決定する工程を含んでもよい。例えば、決定工程は、結腸直腸癌と診断された対象のＧＩ管における大腸菌またはクレブシエラ・ニューモニエの存在または量について、対象の評価を行う工程、評価をもたらす工程、または評価の結果を得る工程を含んでもよい。典型的には、対象のＧＩ管における大腸菌またはクレブシエラ・ニューモニエの存在または量は、対象の糞便試料において、または対象の口腔由来の試料において決定され得る。対象由来の試料における大腸菌またはクレブシエラ・ニューモニエの存在または量は、例えば、ＰＣＲ、細菌学的培養分析、蛍光インサイツハイブリダイゼーション、ガス−液体クロマトグラフィー、および／または細菌酵素活性分析を使用して、当該技術分野で公知の方法を使用して測定されてもよい。
【０２４２】
本発明はまた、対象が、新生物細胞および本発明の結合体を切断する能力のある細菌を含むかどうかを決定することにより、本発明の結合体を使用した治療の好ましい候補として対象を同定する方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、それを必要とする対象を処置する方法であって、方法は、本発明の結合体を対象に投与する工程をさらに含む。同定工程の前または後に、対象は、癌（例えば、結腸直腸癌）と診断されてもよい。対象が、本発明の結合体を使用した治療の好ましい候補であるかどうかを評価するために、ペイロードとして保護され、不活性な蛍光または比色分析色素が、エクスビボで対象由来の試料（例えば、生検試料）の一部に加えられてもよい。細菌が存在するなら、色素が放出され、色素（色素中のフルオロフォア／発色団）により放出されるシグナルを生じ、これにより、本発明の結合体を使用した治療の好ましい候補として対象を同定してもよい、
ある特定の状況において、糞便試料または体液を集めて、細菌または腫瘍と局在化する細菌により産生されるタンパク質の存在についてスクリーニングする。例えば、上で記載された細菌と関連する癌（例えば、前立腺癌、胆嚢癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、または前癌ＦＡＰ）に罹患している対象は、かかる採取物の適当な候補である。
【０２４３】
腫瘍生検における細菌または細菌タンパク質の存在を評価して、治療について適当な対象を同定してもよい。この評価を行うために、生検は、組織学的解析（悪性細胞の存在を決定するため）、配列決定解析（細菌もしくは細菌タンパク質の存在を決定するため）、および／または診断活性解析のため集められ、分けられてもよい。配列解析のため、ＤＮＡおよびＲＮＡは、新生物細胞から抽出され、対象の細菌を同定するための１６Ｓ  ｒＲＮＡ配列決定を使用して、調べられてもよい。細菌のタンパク質自体の存在は、ｑＰＣＲまたは全ゲノムＤＮＡもしくはＲＮＡ配列決定（すなわち、ＲＮＡ  ｓｅｑ）を使用して決定されてもよい。腫瘍生検が悪性であり、対象の細菌／細菌タンパク質が陽性であるなら、対象は治療の候補である。
【０２４４】
ある特定の実施形態では、対象は、本発明の結合体を切断する能力がある細菌を有するものとして対象を同定するために使用されるものと同じ試料に基づき、癌を有するものとして特定されてもよい。本発明の方法において、対象由来の試料は、細菌（例えば、サルモネラ・エンテリカ（例えば、サルモネラ・エンテリカ種エンテリカ血清型チフス株）、バクテロイデス・フラジリス（例えば、腸内毒素原性バクテロイデス・フラジリス）、大腸菌（例えば、ＰＫＳ＋大腸菌）、メチロバクテリウム・ラデイオトレランス、またはクラミジア・トラコマティス）のごく近傍に位置することが知られた新生物細胞の存在（例えば、胆嚢、結腸、乳房、または子宮頸部）についてスクリーニングされてもよい。本発明の方法において、対象は、細菌または細菌タンパク質（例えば、サルモネラ・エンテリカ（例えば、サルモネラ・エンテリカ種エンテリカ血清型チフス株）、バクテロイデス・フラジリス（例えば、腸内毒素原性バクテロイデス・フラジリス）、大腸菌（例えば、ＰＫＳ＋大腸菌）、メチロバクテリウム・ラデイオトレランス、またはクラミジア・トラコマティス）の存在についてスクリーニングされてもよい。
【０２４５】
本明細書において記載される方法において、本発明の結合体は、医薬組成物（例えば、本明細書において記載されるもの）において投与されてもよい。
【０２４６】
結合体の調製
本発明の結合体は、当該技術分野で公知の反応種類および技術を使用して調製されてもよい。例えば、ペイロードは、アミド化またはエステル化反応により、認識エレメントに直接結合されてもよい。あるいは、ペイロードは、リンカーを介して認識エレメントに共有結合されてもよい。ペイロードを認識エレメントに結合する共有結合性リンカーを有する結合体の調製は、第一に、リンカー部分とペイロードの間の共有結合形成、第二に、認識エレメントとリンカー部分の間の共有結合形成を含んでもよいか、または共有結合形成工程の順序が逆転してもよい。共有結合形成工程は、アミド化および／またはエステル化反応条件下で行われてもよい。
【０２４７】
アミド化条件は、当該技術分野において公知であり、例えば、典型的なアミド条件は、ＥＤＣ／ＤＭＡＰ、ＥＤＣ／ＨＯＢｔ、ＨＡＴＵ／ＨＯＡｔ、またはＨＢＴＵ／ＨＯＡｔのような試薬の使用を含む。エステル化反応条件は、当該技術分野で公知である。例えば、エステル化条件は、中間体混合無水物を調製し、次に、これを求核体と反応させるためのステグリックエステル化（例えば、ＥＤＣ／ＤＭＡＰ）、またはイソ−ブチルクロロホルメートおよびＮ−メチルモルホリンを用いた処理を含んでもよい。アミド化およびエステル化反応において、ＥＤＣは、例えば、ＥＤＣ−ＨＣｌまたはＥＤＣＩとして提供されてもよい。
【０２４８】
当業者は、本発明の結合体の調製においてある特定の変換は、保護基の使用を必要とし得ることを認識する。保護基およびそれらの使用方法は、Ｇｒｅｅｎｅ、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、第３編（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９９年）に詳細に記載される。
【０２４９】
本発明の結合体への合成経路の非限定的な例は、以下のスキームにおいて提供される。
【０２５０】
【化１４】
2021535092.tif 000034
スキーム１は、（工程１）Ｏ−保護されたリンカー部分と認識エレメントの間のアミド化、（工程２）リンカー部分上のＯ−保護基を除去して、−ＣＯＯＨを明らかにする、および（工程３）工程２生成物のヒドロキシル基を有するペイロードでのエステル化して、本発明の結合体の実施形態を形成する、による本発明の結合体の調製を説明する。
【０２５１】
【化１５】
2021535092.tif 000035
スキーム２は、（工程１）アミンを有するペイロードとｐ−ニトロクロロギ酸ベンジルの間の反応を介したカルバメート形成、（工程２）工程１の生成物におけるニトロ基の還元、および（工程３）認識エレメントと工程２の生成物の間のアミド化反応で、本発明の結合体の実施形態を形成する、による、本発明の結合体の調製を説明する。
【０２５２】
【化１６】
2021535092.tif 000036
スキーム３は、リンカーに結合した認識エレメントまたは本発明の結合体を脱離基（例えば、ハロゲン化物または擬ハロゲン化物）を有するペイロードとの求核置換反応に供して、本発明の結合体の実施形態を生成することによる、本発明の第４級アンモニウム塩ベースの結合体の調製を説明する。求核置換反応条件は、当該技術分野で公知である。例えば、Ｃａｒｅｙ  ａｎｄ  Ｓｕｎｄｂｅｒｇ、「Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｐａｒｔ  Ｂ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、第４編（Ｋｌｕｗｅｒ  Ａｃａｄｅｍｉｃ／Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、２００１年）を参照されたい。
【０２５３】
【化１７】
2021535092.tif 000037
スキーム４は、（工程１）脱離基（例えば、ハロゲン化物または擬ハロゲン化物）を有する認識エレメントを任意で置換される２−フェニル−３−ヒドロキシルアクロレインと求核置換反応条件下で反応させ、続いて、アルデヒドカルボニルの低減、（工程２）工程１の生成物を、求電子ギ酸変換剤に変換すること、および（工程３）工程２の生成物を、ペイロード（例えば、ヒドロキシルまたはアミノ基を有するペイロード）と反応させて、本発明の結合体の実施形態（例えば、本発明の結合体、ここで、ペイロードが、カルボネートまたはカルバメート基を介してリンカーに結合される）を生成することによる、本発明の結合体の調製を説明する。カルボニル還元反応条件は、当該技術分野で公知である。典型的には、アルデヒドカルボニルは、水素化ホウ素化合物（例えば、水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素リチウム、または水素化トリエチルホウ素リチウム）を使用して低減され得る。
【０２５４】
【化１８】
2021535092.tif 000038
スキーム５は、（工程１）カルボキシレート基を有する認識エレメントとリンカー部分Ｈ２Ｎ−ＬＡ−ＮＨＢｏｃの間のアミド化反応、（工程２）工程１の生成物上のＢｏｃ−保護基の除去、（工程３）工程２の生成物を、カルボニルジイミダゾールと任意で置換される２−フェニル−３−ヒドロキシアクロレインを反応させること、（工程４）アルデヒドカルボニルを還元し、得られたアルコールを求電子ギ酸変換剤に変換すること、および（工程５）工程４の生成物をペイロードと、エステル化またはアミド化反応条件下で反応させて、本発明の結合体の実施形態を生成させることによる、本発明の結合体の調製を説明する。
【０２５５】
医薬組成物
本明細書において開示される結合体は、インビボでの投与に適した生物学的に適合な形態でヒト対象に投与するための医薬組成物に製剤化されてもよい。医薬組成物は、典型的には、本明細書において記載される結合体および生理学的に許容される賦形剤（例えば、医薬的に許容される賦形剤）を含む。
【０２５６】
本明細書において記載される結合体はまた、遊離酸／遊離塩基の形態、塩の形態、双性イオンの形態、または溶媒和物として使用することもできる。すべての形態が、本発明の範囲内である。結合体、塩、双性イオン、溶媒和物、またはその医薬組成物は、当業者に理解されるように、選択された投与経路に応じて様々な形態で対象に投与され得る。本明細書において記載される結合体は、例えば、経口、直腸、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、経皮、経鼻、肺内、くも膜下腔内、直腸、局所、病巣内、または腫瘍内投与により、およびそれに応じて製剤化された医薬組成物により投与されてもよい。本明細書において記載される方法において使用され得る本発明の結合体は、例えば、経口、非経口、口腔、舌下、鼻腔、直腸、パッチ、ポンプ、または経皮投与により、およびそれに応じて製剤化された医薬組成物により投与されてもよい。非経口投与は、選択された期間にわたって持続的に点滴を行うことにより投与されてもよい。
【０２５７】
ヒト使用に関し、本明細書に開示される結合体は、単独で、または意図される投与経路および標準的な薬学実務に関して選択された医薬担体と混合されて投与することができる。したがって、本発明に従った使用のための医薬組成物は、医薬的に使用することができる製剤へと本明細書に開示される結合体を処理することを容易にする賦形剤および補助剤を含む、一つ以上の生理学的に許容される担体を使用して、標準的な方法で製剤化することができる。
【０２５８】
本開示はまた、一つ以上の生理学的に許容される担体を含み得る医薬組成物も含む。本発明の医薬組成物の製造において、有効成分は、典型的には賦形剤と混合され、賦形剤により希釈され、または例えばカプセル、サシェ、紙、もしくは他の容器の形態の担体内に封入される。賦形剤が希釈剤として機能する場合、賦形剤は、固体、半固体、または液体材料（例えば、通常の生理食塩水）であってもよく、それらは活性成分のビヒクル、担体、または媒体として機能する。したがって、組成物は、錠剤、粉末、トローチ、サシェ、カシェ、エリキシル、懸濁液、エマルション、溶液、シロップ、ならびに軟ゼラチンカプセルおよび硬ゼラチンカプセルの形態であってもよい。当分野で公知であるように、希釈剤の種類は、意図される投与経路に応じて変化し得る。得られた組成物は、例えば、保存剤などの追加的な剤を含んでもよい。
【０２５９】
賦形剤または担体は、投与様式および投与経路に基づき選択される。医薬製剤での使用に対し、適切な医薬用担体ならびに医薬必需品は、当分野でよく知られた参考文献であるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ  Ｅｄ．，Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｅｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００５）、およびＵＳＰ／ＮＦ（Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ）に記載されている。適切な賦形剤の例は、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアゴム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、およびメチルセルロースである。製剤はさらに、潤滑剤、例えば、滑石、ステアリン酸マグネシウム、および鉱物油；湿潤剤；乳化剤および懸濁剤；保存剤、例えば、安息香酸メチルおよびヒドロキシ安息香酸プロピル；甘味剤；ならびに香味剤を含んでもよい。他の例示的な賦形剤は、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，６ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｒｏｗｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｄｓ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ（２００９）に記載されている。
【０２６０】
これらの医薬組成物は、従来的な方法で製造することができ、例えば、従来的な混合、溶解、顆粒化、糖衣錠作製、粉末化、乳化、被包、封入または凍結乾燥の処理により製造することができる。製剤作製に関する当分野に公知の方法は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ  Ｅｄ．，Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｅｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  （２００５）、およびＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｅｄｓ．Ｊ．Ｓｗａｒｂｒｉｃｋ  ａｎｄ  Ｊ．Ｃ．Ｂｏｙｌａｎ，１９８８−１９９９，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋに見いだされる。適正な製剤化は、選択された投与経路に依存する。そうした組成物の製剤化および調製は、医薬製剤の分野の当業者に公知である。製剤の調製において、結合体を粉砕して、他の成分と組み合わせる前に適切な粒径を提供することができる。結合体が実質的に不溶性であるなら、２００メッシュ未満の粒径に粉砕することができる。結合体が実質的に水溶性であるなら、粒径は、粉砕によって調節されて、製剤化において、例えば、約４０メッシュなど、実質的に均一な分布を提供することができる。
【０２６１】
投薬量
本明細書において記載される方法において使用される結合体、またはその医薬的に許容される塩もしくはプロドラッグ、またはその医薬組成物の投薬量は、例えば、結合体の薬力学的特性、投与様式、レシピエントの年齢、健康状態および体重、症状の性質および程度、治療頻度、およびもしあれば併用治療の種類、ならびに治療される対象における結合体のクリアランス速度などの多くの因子に応じて変化し得る。当業者であれば、上記の因子に基づき適切な用量を決定することができる。本明細書に記載される方法において使用される結合体は、臨床反応に応じて、必要なときに調整され得る好適な用量で最初に投与され得る。概して、本明細書に開示される結合体の好適な１日用量は、治療効果を生じさせるために有効な最低投与量である、結合体の量である。そうした有効投与量は概して、上述の因子に依存する。
【０２６２】
本明細書に開示される結合体は、単回用量または複数回用量で対象に投与され得る。複数投与量が投与される場合、投与量は、例えば１〜２４時間、１〜７日、または１〜４週で互いに分けられてもよい。結合体は、スケジュールに従って投与されてもよく、または結合体は、所定のスケジュールを伴わずに投与されてもよい。任意の特定の対象について、個々の必要性、および組成物の投与を管理または監督する者の専門的判断に従って、具体的な投薬レジメンを経時的に調整するべきである。
【０２６３】
結合体は、投与形態で提供されてもよい。ある特定の実施形態では、投薬形態は、本明細書において開示される少なくとも一つの結合体の投与用に設計され、ここで、投与される結合体の総量は、例えば、担当医またはナース・プラクティショナーにより確立され得る。
【０２６４】
本発明の方法において、本明細書において開示される結合体の複数回用量が対象に投与される期間は、変化し得る。例えば、一部の実施形態では、結合体の用量は、１〜７日、１〜１２週間、または１〜３カ月の期間にわたって対象に投与される。他の実施形態では、結合体は、例えば、４〜１１カ月または１〜３０年の期間にわたって対象に投与される。さらに他の実施形態では、本明細書に開示される結合体は、症状の発症時に対象に投与される。これらの実施形態のいずれかでは、投与される結合体の量は、投与期間中、変化し得る。結合体が毎日投与される場合、投与は、例えば、１日当たり１回、２回、３回、または４回行われてもよい。
【０２６５】
製剤
本明細書において記載される結合体は、単位剤形中、医薬的に許容される希釈剤、担体、または賦形剤と共に対象に投与され得る。従来的な薬学実務を採用して、障害を患う対象に結合体を投与するための好適な製剤または組成物を提供してもよい。対象が症状を示す前に投与を開始してもよい。
【０２６６】
本発明で使用される、本明細書に開示される結合体またはその医薬組成物の例示的な投与経路としては、経口、舌下、口腔、経皮、皮内、筋肉内、非経口、静脈内、動脈内、肺内、頭蓋内、皮下、眼窩内、脳室内、脊髄内、くも膜下腔内、病巣内、腫瘍内、腹腔内、鼻腔内、吸入、および局所投与が挙げられる。結合体は、生理学的に許容される担体（例えば、医薬的に許容される担体）と共に投与されることが望ましい。本明細書に記載される障害の治療のために製剤化される、本明細書に記載される結合体の医薬製剤も、本発明の一部である。いくつかの好ましい実施形態では、本明細書に開示される結合体は、経口で対象に投与される。他の好ましい実施形態では、本明細書に開示される結合体は、局所的に対象に投与される。
【０２６７】
経口投与用製剤
本発明に予期される医薬組成物は、経口投与用に製剤化されたもの（「経口剤形」）を含む。経口剤形は、例えば、生理学的に許容される賦形剤（例えば、医薬的に許容される賦形剤）との混合物中に活性成分を含有する、錠剤、カプセル、液状溶液もしくは懸濁液、粉末、または液状結晶もしくは固体結晶の形態であり得る。これらの賦形剤は、例えば、不活性な希釈剤または充填剤（例えば、スクロース、ソルビトール、糖、マンニトール、微結晶性セルロース、ジャガイモデンプンを含むデンプン、炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、またはリン酸ナトリウム）、造粒剤および崩壊剤（例えば、微結晶性セルロースを含むセルロース誘導体、ジャガイモデンプンを含むデンプン、クロスカルメロースナトリウム、アルギン酸塩、またはアルギン酸）、結合剤（例えば、スクロース、グルコース、ソルビトール、アカシア、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、デンプン、アルファデンプン、微結晶性セルロース、ケイ酸マグネシウムアルミニウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリドン、またはポリエチレングリコール）、ならびに潤滑剤、流動促進剤、および付着防止剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、シリカ、水素化植物油または滑石）であってもよい。他の生理学的に許容される賦形剤（例えば、医薬的に許容される賦形剤）は、着色剤、香味剤、可塑剤、保湿剤、緩衝剤などがあり得る。
【０２６８】
また経口投与用の製剤は、チュアブル錠として、不活性固体希釈剤（例えば、ジャガイモデンプン、ラクトース、微結晶性セルロース、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、またはカオリン）と活性成分が混合されている硬質ゼラチンカプセルとして、または水媒体もしくは油性媒体、例えばピーナッツ油、流動パラフィンまたはオリーブ油と活性成分が混合されている軟ゼラチンカプセルとして、提供されてもよい。粉末、顆粒、およびペレットは、例えば、ミキサー、流動層装置、または噴霧乾燥装置を使用して、従来的な様式で錠剤およびカプセルの下、上述の成分を使用して調製されてもよい。
【０２６９】
経口用途の放出制御組成物は、活性原薬の溶解および／または拡散を制御することによって活性薬剤を放出するように構築されてもよい。時間プロファイルに対する放出制御と目標血漿濃度を得るために、多数の戦略のいずれかを続行させることができる。一例では、放出制御は、様々な製剤パラメータと、例えば様々なタイプの放出制御組成物とコーティングを含む成分を適切に選択することにより取得される。例としては、単一単位または複数単位の錠剤またはカプセル組成物、油溶液、懸濁液、エマルション、マイクロカプセル、マイクロスフィア、ナノ粒子、パッチ、およびリポソームが挙げられる。ある実施形態では、組成物は、生分解性でｐＨおよび／または温度感受性のポリマーコーティングを含む。
【０２７０】
溶解または拡散を制御した放出は、結合体の錠剤、カプセル、ペレット、または顆粒製剤を適切にコーティングすることにより、または結合体を適切なマトリクスに組み込むことにより達成することができる。放出制御コーティングは、上述のコーティング物質、ならびに／または例えば、セラック、蜜蝋、グリコワックス（ｇｌｙｃｏｗａｘ）、カスターワックス（ｃａｓｔｏｒ  ｗａｘ）、カルナバワックス、ステアリルアルコール、モノステアリン酸グリセリル、ジステアリン酸グリセリル、パルミトステアリン酸グリセロール、エチルセルロース、アクリル樹脂、ｄｌ−ポリ乳酸、酢酸酪酸セルロース、ポリ塩化ビニル、ポリ酢酸ビニル、ビニルピロリドン、ポリエチレン、ポリメタクリレート、メチルメタクリレート、２−ヒドロキシメタクリレート、メタクリレートハイドロゲル、１，３−ブチレングリコール、エチレングリコールメタクリレート、および／またはポリエチレングリコールのうちの一つ以上を含んでもよい。放出制御マトリクス製剤では、マトリクス材料はさらに、例えば、水和メチルセルロース、カルナバワックス、およびステアリルアルコール、カーボポール９３４、シリコン、トリステアリン酸グリセリル、アクリル酸メチル−メチルメタクリレート、ポリ塩化ビニル、ポリエチレン、および／またはハロゲン化フルオロカーボンを含んでもよい。
【０２７１】
本発明の結合体および組成物が、経口投与を目的として組み込まれることができる液状形態としては、水溶液、好適なフレーバーシロップ、水性または油性の懸濁液、および例えば、綿実油、ゴマ油、ココナッツ油、またはピーナッツ油などの食用油とのフレーバーエマルション、ならびにエリキシル、ならびに類似の医薬用ビヒクルが挙げられる。
【０２７２】
口腔投与用製剤
口腔投与または舌下投与に対する用量は、通常、必要に応じて、１回の投与あたり０．１〜５００ｍｇである。実務的には、医師が個々の患者に最も適した実際の投薬レジメンを決定し、その用量は、特定の患者の年齢、体重、および反応に応じて変化する。上記の用量は平均的な事例であるが、より高用量または低用量が有益となる個々のケースも存在し、そうした例も本発明の範囲内である。
【０２７３】
口腔投与に関しては、組成物は、従来的な方法で製剤化される錠剤、トローチ剤などの形態をとってもよい。ネブライザーおよび液体噴霧装置および電気流体力学的（ＥＨＤ）エアロゾル装置と併用するのに好適な液体薬物製剤は、医薬的に許容される担体と共に本明細書に開示される結合体を含むのが一般的である。医薬的に許容される担体は、液体、例えば、アルコール、水、ポリエチレングリコール、またはパーフルオロカーボンであることが好ましい。任意に、別の材料を加えて、本明細書に開示される結合体の溶液または懸濁液のエアロゾル特性を変えてもよい。望ましくは、この材料は液体、例えば、アルコール、グリコール、ポリグリコール、または脂肪酸である。エアロゾル装置での使用に適した液状薬物の溶液または懸濁液を製剤化するための他の方法は、当業者に公知である（例えば、Ｂｉｅｓａｌｓｋｉ、米国特許第５，１１２，５９８号およびＢｉｅｓａｌｓｋｉ、第５，５５６，６１１号を参照のこと。それら文献は、参照により本明細書に組み込まれる）。
【０２７４】
経鼻投与および吸入投与のための製剤化
結合体は、経鼻投与用に製剤化されてもよい。経鼻投与用の組成物は、エアロゾル、ドロップ、ゲル、および粉末として製剤化されると好都合である。製剤は、単回または複数回の投与形態で提供されてもよい。ドロッパーまたはピペットの場合、適切な規定量の溶液または懸濁液を患者に投与することにより、投与が達成されてもよい。噴霧の場合には、定量霧化スプレーポンプにより達成されてもよい。
【０２７５】
結合体は、エアロゾル投与用にさらに製剤化されてもよく、特に鼻腔内投与を含む、吸入による気道へのエアロゾル投与用に製剤化されてもよい。結合体は概して、例えば５ミクロン以下の桁の小さい粒径を有する。そうした粒径は、例えば微紛化などの当分野で公知の手段により得ることができる。活性成分は、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、またはジクロロテトラフルオロエタンなどのクロロフルオロカーボン（ＣＦＣ）、または二酸化炭素、またはその他の好適なガスなどの適切な噴射剤を含む加圧パック中で提供される。エアロゾルはさらに、例えばレシチンなどの界面活性剤を含有すると好都合である。薬物の投与量は、定量弁によって制御されてもよい。あるいは、有効成分は、乾燥粉末、例えば、ラクトース、デンプンおよびデンプン誘導体、例えばヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびポリビニルピロリジン（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｅ）（ＰＶＰ）などの好適な粉末ベースでの結合体の粉末混合物の形態で提供されてもよい。粉末担体は、鼻腔中でゲルを形成する。粉末組成物は、例えば、ゼラチンまたはブリスターパックなどのカプセルまたはカートリッジでの単位用量形態で提供されてもよく、それらから吸入器により粉末が投与されてもよい。
【０２７６】
エアロゾル製剤は、典型的には、生理学的に許容される水性または非水性の溶媒中で、活性物質の溶液または微細懸濁液を含み、通常、密封容器において滅菌形態で単回または複数回の投与量で提供され、霧化装置と併用するためのカートリッジまたはリフィルの形態を取ることができる。あるいは密封容器は、単位的な分配装置であってもよく、例えば、使用後には廃棄が意図される定量弁を備えた単回投与経鼻吸入器またはエアロゾルディスペンサーなどであってもよい。剤形がエアロゾルディスペンサーを備える場合、例えば圧縮空気、または有機推進剤、例えばフルオロクロロヒドロカーボンなどの圧縮ガスであり得る推進剤を含む。エアロゾル剤形はさらに、ポンプアトマイザーの形態をとることもできる。
【０２７７】
非経口投与用製剤
本発明方法における使用のための本明細書に記載の結合体は、本明細書に記載の医薬的に許容される非経口（例えば、静脈内または筋肉内）製剤において投与することができる。医薬製剤はまた、標準的で非毒性な医薬的に許容される担体およびアジュバントを含む剤形または製剤において、非経口（静脈内、筋肉内、皮下など）で投与されてもよい。特に、非経口投与に適した製剤としては、水性または非水性の滅菌注射溶液が挙げられ、それらは抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、および意図されるレシピエントの血液との等張性を製剤に与える溶質を含んでもよい。また、水性または非水性の滅菌懸濁液も挙げられ、それらは懸濁化剤および増粘剤を含んでもよい。例えば、そのような組成物を調製するために、本発明の結合体は、非経口的に許容される液体ビヒクル中で溶解または懸濁されてもよい。採用され得る許容可能なビヒクルおよび溶媒の中では、水、適切な量の塩酸、水酸化ナトリウムまたは適切な緩衝剤、１，３−ブタンジオール、リンゲル液、および等張塩化ナトリウム溶液を添加することにより適切なｐＨに調整された水が挙げられる。水性製剤はさらに、例えば、メチル、エチル、またはｎ−プロピルｐ−ヒドロキシ安息香酸塩などの一つ以上の保存剤を含有してもよい。非経口製剤に関する追加情報は、例えば、Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ−Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ（ＵＳＰ−ＮＦ）に見出すことができ、当該文献は参照により本明細書に組み込まれる。
【０２７８】
非経口製剤は、非経口投与に適するとして、ＵＳＰ−ＮＦにより特定される５種類の一般的な調製物のいずれかであってもよい。
（１）「薬剤の注射」：原薬（例えば、本発明の結合体）、またはその溶液である液体調製物；
（２）「注射用薬剤」：薬物注射としての非経口投与に適した滅菌ビヒクルと混合される乾燥固体としての原薬（例えば、本発明の結合体）；
（３）「薬剤注射可能なエマルション」：適切なエマルション媒体に溶解または分散された原薬（例えば、本発明の結合体）の液体調製物；
（４）「薬剤注射可能な懸濁液」：適切な液体媒体中に懸濁された原薬（例えば、本発明の結合体）の液体調製物；および
（５）「注射可能な懸濁液用の薬剤」：薬剤注射可能な懸濁液としての非経口投与に適した滅菌ビヒクルと混合される乾燥固体としての原薬（例えば本発明の結合体）。
【０２７９】
非経口投与用の例示的な製剤としては、例えばヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性剤と好適に混合されて水中で調製された結合体の溶液が挙げられる。グリセロール、液体ポリエチレングリコール、ＤＭＳＯ、およびアルコールを含むまたは含まないそれらの混合物での分散溶液、および油中の分散溶液も調製され得る。保存および使用の通常の条件下で、これらの調製物は微生物の増殖を防ぐための保存剤を含有してもよい。適切な製剤の選択と調製に関する標準的な手順と成分は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ  Ｅｄ．，Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｅｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  （２００５）、および２０１３年に公開されたＴｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：Ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ  （ＵＳＰ  ３６  ＮＦ３１）に記載されている。
【０２８０】
非経口投与用製剤は、例えば、賦形剤、滅菌水または生理食塩水、ポリアルキレングリコール、例えばポリエチレングリコール、植物起源の油、または水素化ナフタレンなどを含んでもよい。生体適合性の生分解性ラクチドポリマー、ラクチド／グリコリドコポリマー、またはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーを使用して、結合体の放出を制御してもよい。結合体に有用な可能性のある他の非経口送達システムとしては、エチレン−酢酸ビニルコポリマー粒子、浸透圧ポンプ、移植可能な注入システム、およびリポソームが挙げられる。吸入用製剤は、賦形剤、例えばラクトースを含有してもよく、または例えばポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル、グリココール酸塩およびデオキシコール酸塩を含有する水溶液であってもよく、または点鼻薬の形態で、もしくはゲルとしての投与用の油性溶液であってもよい。
【０２８１】
非経口製剤は、結合体の即時放出用に製剤化されてもよく、または持続／長期放出用に製剤化されてもよい。結合体の非経口放出用の製剤の例としては、水溶液、再構成用粉末、共溶媒溶液、油／水エマルション、懸濁液、油系溶液、リポソーム、マイクロスフィア、およびポリマーゲルが挙げられる。
【０２８２】
以下の実施例は、本発明の解説を意図している。それらは、いかなる点でも本発明を限定することを意図していない。
【実施例】
【０２８３】
化合物の調製
【化１９】
2021535092.tif 000039
実施例１：メチルテトラデカノイル−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−アラニネート    
工程１：
Ｂｏｃ−Ｄ−アスパラギン（１５．９ｇ、６９ｍｍｏｌ、１．２当量）、ＨＯＢｔ（１０．６ｇ、６３ｍｍｏｌ、１．１当量）、およびＬアラニンメチルエステルヒドロクロリド（８ｇ、５７ｍｍｏｌ、１当量）を、無水ＤＭＦ（３００ｍＬ）に溶解し、続いて、トリエチルアミン（１７．４ｍＬ、１２６ｍｍｏｌ、２．２当量）を加えた。混合物を、氷浴で０℃まで冷却し、ＥＤＣ．ＨＣｌ（１２ｇ、６３ｍｏｌ、１．１当量）を加えた。反応混合物を０℃で１５分間攪拌し、次に、氷浴を取り除き、反応物を、室温で一晩攪拌した。混合物を、酢酸エチル（１Ｌ）で希釈し、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（１Ｌ）、飽和ＮａＨＣＯ３（１Ｌ）、脱イオン水（１Ｌ）、および塩水（１Ｌ）で洗浄した。有機層を、無水硫酸ナトリウムで乾燥させて、濾過し、回転蒸発により濃縮させて、Ｂｏｃ−Ｄ−Ａｓｎ−Ｌ−Ａｌａ−ＯＭｅを白色の固体（６．６ｇ、３６％）として得て、それを、さらに精製することなく次の工程で使用した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．０４（ｄ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．２３（ｓ、１Ｈ）、６．９４〜６．７４（ｍ、２Ｈ）、４．３１〜４．１８（ｍ、２Ｈ）、３．６０（ｓ、３Ｈ）、２．４５〜２．２４（ｍ、２Ｈ）、１．３６（ｓ、９Ｈ）、１．２４（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）。ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋３１８．１。
【０２８４】
工程２：
Ｂｏｃ−Ｄ−Ａｓｎ−Ｌ−Ａｌａ−ＯＭｅ（０．８ｇ、２．５ｍｍｏｌ、１当量）を、ＴＨＦ（１２ｍＬ）において溶解し、続いて、ジオキサン中の４Ｍ  ＨＣｌ（６．３ｍＬ、２５ｍｍｏｌ、１０当量）を窒素下で滴下した。反応物を、窒素下で一晩撹拌し、次に、溶媒を、真空下で除去して、Ｄ−Ａｓｎ−Ｌ−Ａｌａ−ＯＭｅのＨＣｌ塩を白色の粉末（０．６ｇ、９３％）として得て、それを、さらに精製することなく次の工程で使用した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．８９（ｄ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、１Ｈ）、８．１７（ｓ、３Ｈ）、７．６９（ｓ、１Ｈ）、７．２２（ｓ、１Ｈ）、４．２９（ｐ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、４．０４（ｓ、１Ｈ）、３．６３（ｓ、３Ｈ）、２．７１（ｄｄ、Ｊ＝１６．９、４．８Ｈｚ、１Ｈ）、２．６２（ｄｄ、Ｊ＝１６．８、７．９Ｈｚ、１Ｈ）、１．２８（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋２１８．２。
【０２８５】
工程３：
テトラデカン酸（２７０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ、１．５当量）、ＨＯＢｔ（１５０ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＥＤＣ・ＨＣｌ（２３０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ、１．５当量）を、無水ＤＭＦ（０．２Ｍ）に溶解し、続いて、トリエチルアミン（０．２７ｍＬ、２．０ｍｍｏｌ、２．５当量）を加えた。反応物を、３０分間攪拌し、そのときに、Ｄ−Ａｓｎ−Ｌ−Ａｌａ−ＯＭｅのＨＣｌ塩（２００ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ、１当量）を一度に加えた。反応物を、室温で一晩攪拌し、次に、水を加えて、溶液を清澄化した。逆層Ｃ１８クロマトグラフィーに注入する前に、追加のＤＭＳＯを加え、不溶性物質を濾去した。生成物を、白色の固体（２５ｍｇ、７．４％）として精製した。ＬＣＭＳ［Ｍ−Ｈ］−４２６．４。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．０３（ｄ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．９０（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．２３（ｓ、１Ｈ）、６．８２（ｓ、１Ｈ）、４．５６（ｔｄ、Ｊ＝７．９、６．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．２３（ｐ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．５９（ｓ、３Ｈ）、２．４７〜２．２５（ｍ、２Ｈ）、２．０７（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ）、１．４９〜１．４１（ｍ、３Ｈ）、１．２８〜１．２０（ｍ、２５Ｈ）、０．８４（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）。
【０２８６】
【化２０】
2021535092.tif 000040
実施例２：メチルオクタノイル−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−アラニネート  
工程１：
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｄ−アスパラギン（９９８ｍｇ、４．３０ｍｍｏｌ、１．２当量）、ＨＯＢｔ（５３２ｍｇ、３．９４ｍｍｏｌ、１．１当量）、メチルＬ−アラニネート．ＨＣｌ（５００ｍｇ、３．５８ｍｍｏｌ、１当量）、ＴＥＡ（７９７ｍｇ、７．８８ｍｍｏｌ、１．１０ｍＬ、２．２当量）の溶液に、ＥＤＣＩ（７５５ｍｇ、３．９４ｍｍｏｌ、１．１当量）を０℃で加えた。混合物を、２５℃で１２時間攪拌した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮し、残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ｌｕｎａ  Ｃ１８  ２５０＊５０ｍｍ＊１０μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：５％〜３０％、２０分）により精製して、メチル（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−アラニネート（１ｇ、８８％）を白色の固体として得た。
【０２８７】
工程２：
ＥｔＯＡｃ（３ｍＬ）中のメチル（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−アラニネート（３００ｍｇ、９４５μｍｏｌ）の溶液に、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（３ｍＬ）（４Ｍ）を２５℃で加えた。混合物を、２５℃で２時間攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、メチル（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−アラニネートヒドロクロリド（１００ｍｇ、３９４．１９μｍｏｌ、４２％）を黄色の固体として得た。
【０２８８】
工程３：
ＤＭＦ（５ｍＬ）中のメチル（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−アラニネートヒドロクロリド（１００ｍｇ、３９４μｍｏｌ、１当量）、オクタン酸（６８ｍｇ、４７３μｍｏｌ、７５μＬ、１．２当量）およびＨＯＢｔ（５９ｍｇ、４３４μｍｏｌ、１．１当量）の溶液に、ＴＥＡ（８８ｍｇ、８６７μｍｏｌ、１２１μＬ、２．２当量）を２５℃で加えた。混合物を、２５℃で５分間攪拌した。反応混合物を０℃まで冷却し、ＥＤＣＩ（８３ｍｇ、４３４μｍｏｌ、１．１当量）を加えた。混合物を、０℃で１５分間攪拌し、次に、２５℃まで温め、２５℃で１２時間攪拌した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮し、残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ−ｍｉｃｒｏ  Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ１８  １００＊３０ｍｍ  ５μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：１８％〜４８％、１０分）により精製して、表題化合物（５５ｍｇ、４０％）を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）３４４．２。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．０（ｄ、１Ｈ）、７．９（ｄ、１Ｈ）、７．２（ｓ  １  Ｈ）、４．６（ｑ、１  Ｈ）、４．２（ｍ、１  Ｈ）、３．６（ｓ、３Ｈ）、２．３（ｄｄ、２Ｈ）、２．１（ｔ、２Ｈ）、２．０（ｍ、２Ｈ）、１．４（ｍ、１１Ｈ）、０．８３（ｍ、３Ｈ）。
【０２８９】
【化２１】
2021535092.tif 000041
実施例３：メチルテトラデカノイル−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−バリネート
ＤＣＭ（５ｍＬ）中のメチル（２Ｓ）−２−［［（２Ｒ）−２，４−ジアミノ−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］−３−メチル−ブタノエートヒドロクロリド（実施例６の工程２において合成した、２３０ｍｇ、８１６μｍｏｌ、１当量）の溶液に、テトラデカノイルクロリド（２２２ｍｇ、８９８μｍｏｌ、１．１当量）を加えた。反応混合物を０℃まで冷却し、ＴＥＡ（１６５ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ、２２７μＬ、２当量）を加えた。混合物を、２５℃で１２時間、Ｎ２下で攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｂｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＯＢＤ  Ｃ１８  １５０＊３０  ５μ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：６０％〜９０％、１０分）により濾過した。メチルテトラデカノイル−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−バリネート（２１ｍｇ、５．５％）を、白色の固体として得た。ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋：４５６．３。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．００（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．９０（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．３０（ｓ、１Ｈ）、６．８８（ｓ、１Ｈ）、４．６５（ｑ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．１８（ｄｄ、Ｊ＝８．４、６．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．６４（ｓ、３Ｈ）、２．４２〜２．３２（ｍ、２Ｈ）、２．１０（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ）、２．０８〜１．９７（ｍ、１Ｈ）、１．５０〜１．４５（ｍ、２Ｈ）、１．２７〜１．２１（ｍ、２０Ｈ）、０．９０〜０．８１（ｍ、９Ｈ）。
【０２９０】
【化２２】
2021535092.tif 000042
実施例４：メチルオクタノイル−Ｌ−アスパラギニル−Ｌ−アラニネート
工程１
ＤＭＦ（５中の（２Ｓ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタン酸（９９８ｍｇ、４．３０ｍｍｏｌ，１．２当量）、メチル（２Ｓ）−２−アミノプロパノエート（５００ｍｇ、３．５８ｍｍｏｌ、１当量、ＨＣｌ）、ＨＯＢｔ（５３２ｍｇ、３．９４ｍｍｏｌ，１．１当量）およびＴＥＡ（７９７ｍｇ、７．８８ｍｍｏｌ、１．１０ｍＬ、２．２当量）の混合物に、ＥＤＣＩ（７５５ｍｇ、３．９４ｍｍｏｌ、１．１当量）を０℃で加えた。反応混合物を、０℃で１５分間撹拌し、次に、２５℃で１２時間温めた。反応混合物を濾過し、濾液を、減圧下で濃縮して、残渣を得て、それを、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ｌｕｎａ  Ｃ１８  ２５０＊５０ｍｍ＊１０μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：１０％〜４０％、２０分）により精製した。メチル（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］プロパノエート（７５０ｍｇ、６６％）を、白色の固体として得た。
【０２９１】
工程２：
ＨＣｌ／ジオキサン（３Ｍ、３．６８ｍＬ、５当量）中のメチル（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］プロパノエート（７００ｍｇ、２．２１ｍｍｏｌ、１当量）の混合物を、２５℃で１時間攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、残渣を得た。メチル（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２，４−ジアミノ−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］プロパノエート．ＨＣｌ（４００ｍｇ、７１％）を白色の固体として得て、それを、さらに精製することなく次の工程で使用した。
【０２９２】
工程３：
ＤＭＦ（５ｍＬ）中のメチル（２Ｓ）−２−［［（２Ｓ）−２，４−ジアミノ−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］プロパノエート．ＨＣｌ（２５０ｍｇ、９８５μｍｏｌ、１当量）、オクタン酸（１７０ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ、１８７μＬ、１．２当量）、ＨＯＢｔ（１４６ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＴＥＡ（２１９ｍｇ、２．１７ｍｍｏｌ、３０２μＬ、２．２当量）の混合物を、０℃まで冷却した。ＥＤＣＩ（２０８ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ、１．１当量）を、混合物に加えた。反応混合物を、０℃で１５分間撹拌し、次に、２５℃で１２時間温めた。反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ−ｍｉｃｒｏ  Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ１８  １００＊３０ｍｍ  ５μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：２３％〜４３％、１０分）により精製した。メチルオクタノイル−Ｌ−アスパラギニル−Ｌ−アラニネート（７０ｍｇ、２１％）を、白色の固体として得た。ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）：３４４．２  １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．１（ｄ、１Ｈ）、７．９（ｄ、１Ｈ）、７．２（ｓ、１Ｈ）、６．８（ｓ、１Ｈ）、４．５（ｍ、１Ｈ）、４．２（ｍ、１Ｈ）、３．３（ｓ、３Ｈ）、２．４（ｄｄ、２Ｈ）、２．０（ｔ、３Ｈ）、１．２（ｍ、２Ｈ）、１．１３（ｍ、１１Ｈ）、０．８（ｔ、３Ｈ）。
【０２９３】
【化２３】
2021535092.tif 000043
実施例５：メチルオクタノイル−Ｄ−アスパラギニル−Ｄ−アラニネート  
工程１：
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタン酸（９９８ｍｇ、４．３０ｍｍｏｌ、１．２当量）、メチル（２Ｒ）−２−アミノプロパノエート（５００ｍｇ、３．５８ｍｍｏｌ、１当量、ＨＣｌ）、ＨＯＢｔ（５３２ｍｇ、３．９４ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＴＥＡ（７９７ｍｇ、７．８８ｍｍｏｌ、１．１０ｍＬ、２．２当量）の混合物を、０℃まで冷却した。ＥＤＣＩ（７５５ｍｇ、３．９４ｍｍｏｌ、１．１当量）を加え、反応混合物を、０℃で１５分間攪拌し、次に、２５℃で１２時間温めた。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、残渣を得て、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ｌｕｎａ  Ｃ１８  ２５０＊５０ｍｍ＊１０μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：５％〜３５％、２０分）により精製した。メチル（２Ｒ）−２−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］プロパノエート（８９０ｍｇ、７８％）を、白色の固体として得た。
【０２９４】
工程２：
ＨＣｌ／ジオキサン（３ｍＬ）中のメチル（２Ｒ）−２−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］プロパノエート（１９０ｍｇ、５９９μｍｏｌ）の混合物を、２０℃で１時間攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、メチル（２Ｒ）−２−［［（２Ｒ）−２，４−ジアミノ−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］プロパノエート．ＨＣｌ（９０ｍｇ、５９％）を白色の固体として得て、それを、さらに精製することなく使用した。
【０２９５】
工程３：
ＤＭＦ（３ｍＬ）中のメチル（２Ｒ）−２−［［（２Ｒ）−２，４−ジアミノ−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］プロパノエート．ＨＣｌ（９０ｍｇ、３５５μｍｏｌ、１当量）、オクタン酸（６１ｍｇ、４２３μｍｏｌ、６７μＬ、１．２当量）、ＨＯＢｔ（５３ｍｇ、３９０μｍｏｌ、１．１当量）およびＴＥＡ（７９ｍｇ、７８１μｍｏｌ、１０９μＬ、２．２当量）の混合物を、０℃まで冷却した。ＥＤＣＩ（７５ｍｇ、３９０μｍｏｌ、１．１当量）を、混合物に加え、反応混合物を、０℃で１５分間攪拌し、次に、２５℃で１２時間攪拌した。反応混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、残渣を得て、それを、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｂｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＯＢＤ  Ｃ１８  １５０＊３０  ５μ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：１５％〜７５％、１０分）により精製した。メチルオクタノイル−Ｄ−アスパラギニル−Ｄ−アラニネート（２５ｍｇ、２０％）を、白色の固体として得た。ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）：３４４．１  １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：８．１（ｄ、１Ｈ）、７．９（ｄ、１Ｈ）、４．５（ｍ、１Ｈ）、４．２（ｍ、１Ｈ）、３．６（ｓ、３Ｈ）、２．３（ｄｄ、２Ｈ）、２．０（ｔ、２Ｈ）、１．２（ｍ、２Ｈ）、１．２（ｍ、１１Ｈ）、０．８７（ｔ、３Ｈ）。
【０２９６】
【化２４】
2021535092.tif 000044
実施例６：メチルオクタノイル−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−バリネート
工程１：
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタン酸（８３１ｍｇ、３．５８ｍｍｏｌ、１．２当量）、メチル（２Ｓ）−２−アミノ−３−メチル−ブタノエート（５００ｍｇ、２．９８ｍｍｏｌ、１当量、ＨＣｌ）、ＨＯＢｔ（４４３ｍｇ、３．２８ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＴＥＡ（６６４ｍｇ、６．５６ｍｍｏｌ、９１３μＬ、２．２当量）の混合物を、０℃まで冷却した。ＥＤＣＩ（６２９ｍｇ、３．２８ｍｍｏｌ、１．１当量）を、混合物に加えた。反応混合物を、０℃で１５分間攪拌し、次に、２５℃まで温め、１２時間攪拌した。反応混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、残渣を得て、それを、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ｌｕｎａ  Ｃ１８  ２５０＊５０ｍｍ＊１０μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：１０％〜４０％、２０分）により精製した。メチル（２Ｓ）−２−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］−３−メチル−ブタノエート（８００ｍｇ、７８％）を、白色の固体として得た。
【０２９７】
工程２：
ＨＣｌ／ジオキサン（３Ｍ、４８３μＬ、１当量）中のメチル（２Ｓ）−２−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］−３−メチル−ブタノエート（５００ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ、１当量）の混合物を、２５℃で１時間攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、メチル（２Ｓ）−２−［［（２Ｒ）−２，４−ジアミノ−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］−３−メチル−ブタノエート．ＨＣｌ（３００ｍｇ、７４％）を白色の固体として得た。生成物を、さらに精製することなく次の工程に用いた。
【０２９８】
工程３：
ＤＭＦ（５ｍＬ）中のメチル（２Ｓ）−２−［［（２Ｒ）−２，４−ジアミノ−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］−３−メチル−ブタノエート．ＨＣｌ（２５０ｍｇ、８８７μｍｏｌ、１当量）、オクタン酸（１５４ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ、１６９μＬ、１．２当量）、ＥＤＣＩ（１８７ｍｇ、９７６μｍｏｌ、１．１当量）およびＨＯＢｔ（１３２ｍｇ、９７６μｍｏｌ、１．１当量）の混合物を、０℃まで冷却し、ＴＥＡ（１９８ｍｇ、１．９５ｍｍｏｌ、２７２μＬ、２．２当量）を、混合物に加えた。反応混合物を、０℃で１５分間攪拌し、次に、２５℃まで温め、１２時間攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、残渣を得た。残渣を、石油エーテル３＊５ｍＬで洗浄した。固体残渣を、真空下で乾燥させた。メチルオクタノイル−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−バリネート（２０．８ｍｇ、６．３％）を、白色の固体として得た。ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）：３７２．２  １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：７．５（ｓ、１Ｈ）、７．３（ｓ、１Ｈ）、６．０（ｓ、１Ｈ）、５．５（ｓ、１Ｈ）、４．８（ｓ、１Ｈ）、４．４（ｓ、１Ｈ）、３．７（ｓ、３Ｈ）、２．９（ｄｄ、２Ｈ）、２．２（ｔ、２Ｈ）、２．１（ｍ、１Ｈ）１．２（ｍ、８Ｈ）、０．９（ｍ、９Ｈ）。
【０２９９】
【化２５】
2021535092.tif 000045
実施例７：メチルオクタノイル−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−ロイシネート
工程１：
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタン酸（７６７ｍｇ、３．３０ｍｍｏｌ、１．２当量）、メチル（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチル−ペンタノエート．ＨＣｌ（５００ｍｇ、２．７５ｍｍｏｌ、１当量）、ＨＯＢｔ（４０９ｍｇ、３．０３ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＴＥＡ（６１３ｍｇ、６．０６ｍｍｏｌ、８４２３μＬ、２．２当量）の混合物を、０℃まで冷却した。ＥＤＣＩ（５８０ｍｇ、３．０３ｍｍｏｌ、１．１当量）を、混合物に加えた。反応混合物を、０℃で１５分間、２５℃で１２時間攪拌した。反応混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ｌｕｎａ  Ｃ１８  ２５０＊５０ｍｍ＊１０μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：１０％〜４０％、２０分）により精製して、メチル（２Ｓ）−２−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］−４−メチル−ペンタノエート（６８０ｍｇ、６９％）を白色の固体として得た。
【０３００】
工程２：
ＨＣｌ／ジオキサン（３Ｍ、５．５６ｍＬ、１５当量）中のメチル（２Ｓ）−２−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］−４−メチル−ペンタノエート（４００ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ、１当量）の混合物を、２５℃で１時間攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、メチル（２Ｓ）−２−［［（２Ｒ）−２，４−ジアミノ−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］−４−メチル−ペンタノエート．ＨＣｌ（２６０ｍｇ、７９％）を白色の固体として得た。生成物を、さらに精製することなく次の工程で使用した。
【０３０１】
工程３：
ＤＭＦ（５ｍＬ）中のメチル（２Ｓ）−２−［［（２Ｒ）−２，４−ジアミノ−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］−４−メチル−ペンタノエート．ＨＣｌ（２５０ｍｇ、８４５μｍｏｌ、１当量）、オクタン酸（１３４ｍｇ、９３０μｍｏｌ、１４７μＬ、１．１当量）、ＨＯＢｔ（１２６ｍｇ、９３０μｍｏｌ、１．１当量）およびＴＥＡ（１８８ｍｇ、１．８６ｍｍｏｌ、２５９μＬ、２．２当量）の混合物を、０℃まで冷却した。ＥＤＣＩ（１７８ｍｇ、９３０μｍｏｌ、１．１当量）を、混合物に加えた。反応混合物を、０℃で１５分間、２５℃で１２時間攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ−ｍｉｃｒｏ  Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ１８  １００＊３０ｍｍ  ５μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：３５％〜５０％、１０分）により精製した。メチルオクタノイル−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−ロイシネート（１１９ｍｇ、３７％）を、白色の固体として得た。ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）：３８６．２  １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：８．０（ｍ、１Ｈ）、７．９（ｍ、１Ｈ）、７．２（ｓ、１Ｈ）６．８（ｍ、１Ｈ）、４．５（ｍ、１Ｈ）、４．２（ｍ、１Ｈ）、３．５（ｓ、３Ｈ）、２．４（ｄｄ、２Ｈ）、２．０（ｍ、２  Ｈ），１．４７（ｍ、２Ｈ）、１．４４（ｍ、２Ｈ）、１．２２（ｍ、８Ｈ）、０．８２（ｍ、９Ｈ）。
【０３０２】
【化２６】
2021535092.tif 000046
実施例８：（Ｒ）−４−（（（Ｓ）−１−メトキシ−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−オクタナミド−４−オキソブタン酸
工程１：
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の（２Ｒ）−４−ベンジルオキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタン酸（１．３９ｇ、４．３０ｍｍｏｌ、１．２当量）、メチル（２Ｓ）−２−アミノプロパノエートヒドロクロリド（５００ｍｇ、３．５８ｍｍｏｌ、１当量）、ＨＯＢｔ（５３２ｍｇ、３．９４ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＴＥＡ（７９７ｍｇ、７．８８ｍｍｏｌ、１．１０ｍＬ、２．２当量）の混合物を、０℃まで冷却した。ＥＤＣＩ（７５５ｍｇ、３．９４ｍｍｏｌ、１．１当量）を、混合物に加えた。反応混合物を、０℃で１５分間、２５℃で１２時間攪拌した。反応混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ｌｕｎａ  Ｃ１８  ２５０＊５０ｍｍ＊１０μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：２５％〜５５％、２０分）により精製した。ベンジル（３Ｒ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−［［（１Ｓ）−２−メトキシ−１−メチル−２−オキソ−エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノエート（１．２ｇ、８２％）を、黄色の油状物として得た。
【０３０３】
工程２：
ＨＣｌ／ジオキサン（３Ｍ、１０ｍＬ、１２．２５当量）中のベンジル（３Ｒ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−［［（１Ｓ）−２−メトキシ−１−メチル−２−オキソ−エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノエート（１ｇ、２．４５ｍｍｏｌ、１当量）を、２５℃で１時間攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、ベンジル（３Ｒ）−３−アミノ−４−［［（１Ｓ）−２−メトキシ−１−メチル−２−オキソ−エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノエート．ＨＣｌ（４６０ｍｇ、５４％）を白色の固体として得て、それを、さらに精製することなく次の工程で使用した。
【０３０４】
工程３：
ＤＭＦ（５ｍＬ）中のベンジル（３Ｒ）−３−アミノ−４−［［（１Ｓ）−２−メトキシ−１−メチル−２−オキソ−エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノエート．ＨＣｌ（２５０ｍｇ、７２５μｍｏｌ、１当量）、オクタン酸（１２５ｍｇ、８７０μｍｏｌ、１３８μＬ、１．２当量）、ＨＯＢｔ（１０８ｍｇ、７９８μｍｏｌ、１．１当量）およびＴＥＡ（１６１ｍｇ、１．６０ｍｍｏｌ、２２２μＬ、２．２当量）の混合物を、０℃まで冷却した。ＥＤＣＩ（１５３ｍｇ、７９８μｍｏｌ、１．１当量）を、混合物に加えた。反応混合物を、０℃で１５分間、２５℃で１２時間攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ−ｍｉｃｒｏ  Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ１８  １００＊３０ｍｍ  ５μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：４０％〜７０％、１０分）により精製した。ベンジル（３Ｒ）−４−［［（１Ｓ）−２−メトキシ−１−メチル−２−オキソ−エチル］アミノ］−３−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノエート（１２３ｍｇ、３９％）を、白色の固体として得た。
【０３０５】
工程４：
ＴＨＦ（３ｍＬ）中のベンジル（３Ｒ）−４−［［（１Ｓ）−２−メトキシ−１−メチル−２−オキソ−エチル］アミノ］−３−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノエート（１００ｍｇ、２３０μｍｏｌ、１当量）の溶液に、Ｐｄ／Ｃ（１０％、０．０３ｇ）を加えた。懸濁液を、脱気し、Ｈ２で３回パージした。混合物を、Ｈ２下、圧４５ｐｓｉ、２５℃で１５時間攪拌した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、残渣を得た。残渣を石油エーテル３＊５ｍＬで洗浄した。固体残渣を真空下で乾燥させた。（Ｒ）−４−（（（Ｓ）−１−メトキシ−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−オクタナミド−４−オキソブタン酸（１００ｍｇ、９５％）を、白色の固体として得た。ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）：３４５．２  １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：１２．２（ｓ、１Ｈ）、８．１  ｄ、１Ｈ）、８．０（ｄ、１Ｈ）、４．６（ｍ、１Ｈ）、４．２（ｍ、１Ｈ）、３．６（ｓ、３Ｈ）、２．６（ｄｄ、２Ｈ）、２．１（ｔ、２Ｈ）、１．２４（ｍ、２Ｈ）、１．２（ｍ、１１Ｈ）、０．８５（ｍ、３Ｈ）。
【０３０６】
【化２７】
2021535092.tif 000047
実施例９：（Ｒ）−５−（（（Ｓ）−１−メトキシ−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−４−オクタナミド−５−オキソペンタン酸
工程１：
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の（２Ｒ）−５−ベンジルオキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−５−オキソ−ペンタン酸（１．４５ｇ、４．３０ｍｍｏｌ、１．２当量）、メチル（２Ｓ）−２−アミノプロパノエート．ＨＣｌ（５００ｍｇ、３．５８ｍｍｏｌ、１当量）、ＨＯＢｔ（５３２ｍｇ、３．９４ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＴＥＡ（７９７ｍｇ、７．８８ｍｍｏｌ、１．１０ｍＬ、２．２当量）の混合物を、０℃まで冷却し、ＥＤＣＩ（７５５ｍｇ、３．９４ｍｍｏｌ、１．１当量）を混合物に加えた。反応混合物を、０℃で１５分間、２５℃で１２時間攪拌した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、残渣を得た。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ｌｕｎａ  Ｃ１８  ２５０＊５０ｍｍ＊１０μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：１０％〜４０％、２０分）により精製した。ベンジル（４Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−５−［［（１Ｓ）−２−メトキシ−１−メチル−２−オキソ−エチル］アミノ］−５−オキソ−ペンタノエート（６５０ｍｇ、４３％）を白色の固体として得た。
【０３０７】
工程２：
ＨＣｌ／ジオキサン（３Ｍ、３．１６ｍＬ、１０当量）中のベンジル（４Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−５−［［（１Ｓ）−２−メトキシ−１−メチル−２−オキソ−エチル］アミノ］−５−オキソ−ペンタノエート（４００ｍｇ、９４７μｍｏｌ、１当量）の混合物を、２５℃で１時間攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、ベンジル（４Ｒ）−４−アミノ−５−［［（１Ｓ）−２−メトキシ−１−メチル−２−オキソ−エチル］アミノ］−５−オキソ−ペンタノエート．ＨＣｌ（２４０ｍｇ、７１％）を白色の固体として得た。
【０３０８】
工程３：
ＤＭＦ（５ｍＬ）中のベンジル（４Ｒ）−４−アミノ−５−［［（１Ｓ）−２−メトキシ−１−メチル−２−オキソ−エチル］アミノ］−５−オキソ−ペンタノエート．ＨＣｌ（２４０ｍｇ、６６９μｍｏｌ、１当量）、オクタン酸（１２５ｍｇ、８７０μｍｏｌ、１３８μＬ、１．３当量）、ＨＯＢｔ（９９ｍｇ、７３６μｍｏｌ、１．１当量）およびＴＥＡ（６８ｍｇ、６６９μｍｏｌ、９３μＬ、１当量）の混合物を、０℃まで冷却し、ＥＤＣＩ（１４１ｍｇ、７３６μｍｏｌ、１．１当量）を混合物に加えた。反応混合物を、０℃で１５分間、２５℃で１２時間攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、残渣を得て、それを、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ−ｍｉｃｒｏ  Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ１８  １００＊３０ｍｍ  ５μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：４０％〜７０％、１０分）により精製した。ベンジル（４Ｒ）−５−［［（１Ｓ）−２−メトキシ−１−メチル−２−オキソ−エチル］アミノ］−４−（オクタノイルアミノ）−５−オキソ−ペンタノエート（１７５ｍｇ、５８％）を、黄色の固体として得た。
【０３０９】
工程４：
ＴＨＦ（３ｍＬ）中のベンジル（４Ｒ）−５−［［（１Ｓ）−２−メトキシ−１−メチル−２−オキソ−エチル］アミノ］−４−（オクタノイルアミノ）−５−オキソ−ペンタノエート（１５０ｍｇ、３３４μｍｏｌ、１当量）の溶液に、Ｐｄ／Ｃ（１０％、０．０３ｇ）を加えた。混合物を、２５℃で１５時間、Ｈ２下、圧４５ｐｓｉで攪拌した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、残渣を得て、それを、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｂｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＯＢＤ  Ｃ１８  １５０＊３０ｍｍ＊５μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：２０％〜５０％、１０分）により精製した。（Ｒ）−５−（（（Ｓ）−１−メトキシ−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−４−オクタナミド−５−オキソペンタン酸（２３ｍｇ、１７％）を、白色の固体として得た。ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）：３５９．１  １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：８．２（ｓ、１Ｈ）、７．９（ｓ、１Ｈ）、４．２（ｍ、２Ｈ）、３．６（ｓ、３Ｈ）、２．１（ｄｄ、２Ｈ）、１．８（ｍ、１Ｈ）、１．７（ｍ、１Ｈ）、１．４（ｍ、２Ｈ）、１．２（ｍ、１１Ｈ）、０．８５（ｍ、３Ｈ）。
【０３１０】
【化２８】
2021535092.tif 000048
実施例１０：メチルオクタノイル−Ｄ−グルタミニル−Ｌ−アラニネート
工程１：
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の（２Ｒ）−５−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−５−オキソ−ペンタン酸（１．０６ｇ、４．３０ｍｍｏｌ、１．２当量）、メチル（２Ｓ）−２−アミノプロパノエートヒドロクロリド（５００ｍｇ、３．５８ｍｍｏｌ、１当量）、ＨＯＢｔ（５３２ｍｇ、３．９４ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＴＥＡ（７９７ｍｇ、７．８８ｍｍｏｌ、１．１０ｍＬ、２．２当量）の混合物を、０℃まで冷却し、ＥＤＣＩ（７５５ｍｇ、３．９４ｍｍｏｌ、１．１当量）を混合物に加えた。反応混合物を、０℃で１５分間、２５℃で１２時間攪拌した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、残渣を得て、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ｌｕｎａ  Ｃ１８  ２５０＊５０ｍｍ＊１０μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：１０％〜４０％、２０分）により精製した。メチル（２Ｓ）−２−［［（２Ｒ）−５−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−５−オキソ−ペンタノイル］アミノ］プロパノエート（６６０ｍｇ、５６％）を、白色の固体として得た。
【０３１１】
工程２：
ＨＣｌ／ジオキサン（３Ｍ、４．０２ｍＬ、１０当量）中のメチル（２Ｓ）−２−［［（２Ｒ）−５−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−５−オキソ−ペンタノイル］アミノ］プロパノエート（４００ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ、１当量）の混合物を、２５℃で１時間攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、メチル（２Ｓ）−２−［［（２Ｒ）−２，５−ジアミノ−５−オキソ−ペンタノイル］アミノ］プロパノエート．ＨＣｌ（２６０ｍｇ、８０％）を白色の固体として得た。
【０３１２】
工程３：
ＤＭＦ（５ｍＬ）中のメチル（２Ｓ）−２−［［（２Ｒ）−２，５−ジアミノ−５−オキソ−ペンタノイル］アミノ］プロパノエート．ＨＣｌ（２５０ｍｇ、９３４μｍｏｌ、１当量）、オクタン酸（１６２ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ、１７８μＬ、１．２当量）、ＨＯＢｔ（１３９ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＴＥＡ（２０８ｍｇ、２．０５ｍｍｏｌ、２８６μＬ、２．２当量）の混合物を、０℃まで冷却し、ＥＤＣＩ（１９７ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ、１．１当量）を混合物に加えた。反応混合物を、０℃で１５分間、２５℃で１２時間攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、残渣を得て、それを、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｂｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＯＢＤ  Ｃ１８  １５０＊３０ｍｍ＊５μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：２５％〜８５％、１０分）により精製した。メチルオクタノイル−Ｄ−グルタミニル−Ｌ−アラニネート（３３ｍｇ、１０％）を、白色の固体として得た。ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）：３５８．２  １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：８．２（ｄ、１Ｈ）、７．８（ｄ、１Ｈ）、７．２（ｓ、１Ｈ）、６．７（ｓ、１Ｈ）、４．２（ｍ、２Ｈ）、３．６（ｓ、３Ｈ）、２．５（ｄｄ、２Ｈ）、２．１（ｍ、１Ｈ）、２．０５（ｍ、１Ｈ）、１．４（ｍ、１Ｈ）、１．２（ｍ、１１Ｈ）、０．８３（ｔ、３Ｈ）。
【０３１３】
【化２９】
2021535092.tif 000049
実施例１１：メチルオクタノイル−Ｄ−アルギニル−Ｌ−アラニネート  
工程１：
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の（２Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−５−グアニジノ−ペンタン酸（１．１８ｇ、４．３０ｍｍｏｌ、１．２当量）、メチル（２Ｓ）−２−アミノプロパノエート．ＨＣｌ（５００ｍｇ、３．５８ｍｍｏｌ、１当量，）、ＨＯＢｔ（５３２ｍｇ、３．９４ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＴＥＡ（７９７ｍｇ、７．８８ｍｍｏｌ、１．１０ｍＬ、２．２当量）の混合物を、０℃まで冷却し、ＥＤＣＩ（７５５ｍｇ、３．９４ｍｍｏｌ、１．１当量）を混合物に加えた。反応混合物を、０℃で１５分間撹拌し、次に、２５℃で１２時間温めた。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、残渣を得て、それを、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｌｕｎａ  Ｃ１８  １００＊３０ｍｍ＊５μｍ；移動層：［水（０．０７５％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：１％〜３０％、１４分）により精製した。メチル（２Ｓ）−２−［［（２Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−５−グアニジノ−ペンタノイル］アミノ］プロパノエート（８８０ｍｇ、６８％）を、白色の固体として得た。
【０３１４】
工程２：
ＨＣｌ／ジオキサン（３Ｍ、５．５６ｍＬ、１０当量）中のメチル（２Ｓ）−２−［［（２Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−５−グアニジノ−ペンタノイル］アミノ］プロパノエート（６００ｍｇ、１．６７ｍｍｏｌ、１当量）の混合物を、２５℃で１時間攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、メチル（２Ｓ）−２−［［（２Ｒ）−２−アミノ−５−グアニジノ−ペンタノイル］アミノ］プロパノエート．ＨＣｌ（４２０ｍｇ、８５％）を、白色の固体として得た。
【０３１５】
工程３：
ＤＭＦ（５ｍＬ）中のメチル（２Ｓ）−２−［［（２Ｒ）−２−アミノ−５−グアニジノ−ペンタノイル］アミノ］プロパノエート．ＨＣｌ（２５０ｍｇ、８４５μｍｏｌ、１当量）、オクタン酸（１４６ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ、１６１μＬ、１．２当量）、ＨＯＢｔ（１２６ｍｇ、９３０μｍｏｌ、１．１当量）およびＴＥＡ（１８８ｍｇ、１．８６ｍｍｏｌ、２５９μＬ、２．２当量）の混合物を、０℃まで冷却し、ＥＤＣＩ（１７８ｍｇ、９３０μｍｏｌ、１．１当量）を混合物に加えた。反応混合物を、０℃で１５分間、２５℃で１２時間攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、残渣を得て、それを、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｂｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＯＢＤ  Ｃ１８  １５０＊３０ｍｍ＊５μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：１５％〜４５％、１０分）により精製した。メチルオクタノイル−Ｄ−アルギニル−Ｌ−アラニネートトリフルオロアセテート塩（９０ｍｇ、２８％）を、白色の固体として得た。ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）：３８６．２  １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：８．３（ｄ、１Ｈ）、７．９（ｄ、１Ｈ）、７．５（ｍ、１Ｈ）、６．９−７．２（ｂｒｍ、３Ｈ）、４．３（ｍ、２Ｈ）、３．６（ｓ、３Ｈ）、３．０（ｍ、２Ｈ）、２．１（ｍ、２Ｈ）、１．５（ｍ、１Ｈ）、１．４（ｍ、５Ｈ）、１．２（Ｍ、１１Ｈ）、０．８３（ｔ、３Ｈ）。
【０３１６】
【化３０】
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実施例１２：メチルブチリル−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−アラニネート
無水ブタン酸（０．１ｍＬ、０．６ｍｍｏｌ、１．５当量）を、無水ＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解し、続いて、トリエチルアミン（０．１４ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ、２．５当量）を加えた。Ｄ−Ａｓｎ−Ｌ−Ａｌａ−ＯＭｅ（０．１ｇ、０．４ｍｍｏｌ、１当量）のＨＣｌ塩を加え、反応物を、一晩攪拌した。生成物を、実施例１の工程３に示した一般的な手法に従い、逆相クロマトグラフィーで精製し、凍結乾燥させて、白色の固体（９２ｍｇ、８４％）を得た。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）、２８６．１。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．０３（ｄ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．９０（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．２２（ｓ、１Ｈ）、６．８２（ｓ、１Ｈ）、４．５８（ｔｄ、Ｊ＝８．０、５．９Ｈｚ、１Ｈ）、４．２４（ｐ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、１Ｈ）、３．５９（ｓ、３Ｈ）、２．４６〜２．２６（ｍ、２Ｈ）、２．０７（ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、２Ｈ）、１．４９（ｈ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ）、１．２４（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）、０．８３（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、３Ｈ）。
【０３１７】
【化３１】
2021535092.tif 000051
実施例１３：メチルベンゾイル−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−アラニネート
メチルベンゾイル−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−アラニネートを、安息香酸（７２ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ、１．５当量）、少なくとも２０重量％の水を含むＨＯＢｔ水和物（７３ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ、１．１当量）、ＥＤＣ・ＨＣｌ（１１３ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ、１．５当量）、トリエチルアミン（０．１４ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ、２．５当量）、およびＤ−Ａｓｎ−Ｌ−Ａｌａ−ＯＭｅのＨＣｌ塩（実施例１の工程２において合成、１００ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ、１当量）を使用して、実施例１の工程３に示したＮ−アシル化ジペプチドについての一般的な手法に従い合成した。生成物を、白色の固体（９３ｍｇ、５５％）として精製した。ＬＣＭＳ［Ｍ−Ｈ］−３２０．２。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．４９（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、８．２３（ｄ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．９０〜７．８２（ｍ、２Ｈ）、７．６１〜７．４０（ｍ、３Ｈ）、７．３０（ｓ、１Ｈ）、６．８８（ｓ、１Ｈ）、４．７９（ｔｄ、Ｊ＝８．０、５．７Ｈｚ、１Ｈ）、４．２６（ｐ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．５８（ｓ、３Ｈ）、２．６５〜２．５２（ｍ、２Ｈ）、１．２５（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）。
【０３１８】
【化３２】
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実施例１４：メチル（２−フェニルアセチル）−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−アラニネート  
メチル（２−フェニルアセチル）−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−アラニネートを、フェニル酢酸（８０．４ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ、１．５当量）、少なくとも２０重量％の水を含むＨＯＢｔ水和物（７３ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ、１．１当量）、ＥＤＣ・ＨＣｌ（１１３ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ、１．５当量）、トリエチルアミン（０．１４ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ、２．５当量）、およびＤ−Ａｓｎ−Ｌ−Ａｌａ−ＯＭｅのＨＣｌ塩（実施例１の工程２において合成、１００ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ、１当量）を使用して、実施例１の工程３に示したＮ−アシルジペプチドについての一般的な手法に従い合成した。生成物を、白色の固体（１７．９ｍｇ、１３．５％）として精製した。ＬＣＭＳ［Ｍ−Ｈ］−３３４．１。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．２２（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、１Ｈ）、８．０９（ｄ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．３０〜７．２０（ｍ、５Ｈ）、７．２４〜７．１５（ｍ、１Ｈ）、６．８５（ｓ、１Ｈ）、４．５７（ｔｄ、Ｊ＝７．８、６．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．２３（ｐ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．５９（ｓ、３Ｈ）、３．４５（ｓ、２Ｈ）、２．５３〜２．４３（ｍ、１Ｈ）、２．３４（ｄｄ、Ｊ＝１５．３、７．７Ｈｚ、１Ｈ）、１．２２（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）。
【０３１９】
【化３３】
2021535092.tif 000053
実施例１５：メチル（５−アミノ−２−ヒドロキシベンゾイル）−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−アラニネート
メチル（５−アミノ−２−ヒドロキシベンゾイル）−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−アラニネートを、５−アミノサリチル酸（９０．５ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ、１当量）、少なくとも２０重量％の水を含むＨＯＢｔ水和物（９９．７ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ、１当量）、ＥＤＣ・ＨＣｌ（１１３ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ、１．５当量）、トリエチルアミン（０．１６ｍＬ、１．２ｍｍｏｌ、２当量）、およびＤ−Ａｓｎ−Ｌ−Ａｌａ−ＯＭｅのＨＣｌ塩（実施例１の工程２において合成、１５０ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ、１当量）を使用して、実施例１の工程３に示したＮ−アシルジペプチドについての一般的な手法に従い合成した。生成物を、１Ｍ  ＨＣｌ２当量で凍結乾燥させ、ＨＣｌ塩（１０ｍｇ、４．４％）として精製した。ＬＣＭＳ［Ｍ−Ｈ］−３５１．１。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．８５（ｓ、１Ｈ）、９．８８（ｓ、３Ｈ）、９．０３（ｄ、Ｊ＝７．７Ｈｚ、１Ｈ）、８．３６（ｄ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．８５（ｄ、Ｊ＝２．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．４０〜７．３１（ｍ、２Ｈ）、７．０５（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、１Ｈ）、６．８８（ｓ、１Ｈ）、４．８０（ｔｄ、Ｊ＝７．３、５．７Ｈｚ、１Ｈ）、４．２６（ｐ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．６０（ｓ、３Ｈ）、２．６６〜２．５０（ｍ、２Ｈ）、１．２６（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）。
【０３２０】
【化３４】
2021535092.tif 000054
実施例１６：メチル（２−ヒドロキシベンゾイル）−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−アラニネート
メチル（２−ヒドロキシベンゾイル）−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−アラニネートを、サリチル酸（１３８．１ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ、１．５当量）、少なくとも２０重量％の水を含むＨＯＢｔ水和物（７３ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ、１．１当量）、ＥＤＣ・ＨＣｌ（１１３ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ、１．５当量）、トリエチルアミン（０．１４ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ、２．５当量）、およびＤ−Ａｓｎ−Ｌ−Ａｌａ−ＯＭｅのＨＣｌ塩（実施例１の工程２において合成、１００ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ、１当量）を使用して、実施例１の工程３に示したＮ−アシルジペプチドについての一般的な手法に従い合成した。生成物を、白色の固体（１７ｍｇ、１３％）として精製した。ＬＣＭＳ［Ｍ−Ｈ］−３３６．１。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．０５（ｓ、１Ｈ）、９．０１（ｓ、１Ｈ）、８．３４（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．８６（ｄｄ、Ｊ＝７．９、１．７Ｈｚ、１Ｈ）、７．４１〜７．３２（ｍ、１Ｈ）、７．３３（ｓ、１Ｈ）、６．９１〜６．８２（ｍ、３Ｈ）、４．８５〜４．７５（ｍ、１Ｈ）、４．２６（ｐ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．５９（ｓ、３Ｈ）、２．６５〜２．５０（ｍ、２Ｈ）、１．２５（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）。
【０３２１】
【化３５】
2021535092.tif 000055
実施例１７：メチル（２−（４−イソブチルフェニル）プロパノイル）−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−アラニネート
メチル（２−（４−イソブチルフェニル）プロパノイル）−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−アラニネートを、イブプロフェン（１２２ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ、１．５当量）、少なくとも２０重量％の水を含むＨＯＢｔ水和物（７３ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ、１．１当量）、ＥＤＣ。ＨＣｌ（１１３ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ、１．５当量）、トリエチルアミン（０．１４ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ、２．５当量）、およびＤ−Ａｓｎ−Ｌ−Ａｌａ−ＯＭｅのＨＣｌ塩（実施例１の工程２において合成、１００ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ、１当量）を使用して、実施例１の工程３に示したＮ−アシルジペプチドについての一般的な手法に従い合成した。イブプロフェンα−炭素でのジアステレオマーの混合物である生成物を、白色の固体（１１８ｍｇ、７４％）として精製した。ＬＣＭＳ［Ｍ−Ｈ］−４０４．２。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．１４〜８．０２（ｍ、１．５Ｈ）、７．７６（ｄ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、０．５Ｈ）、７．２５（ｓ、０．５Ｈ）、７．２４〜７．１５（ｍ、２．５Ｈ）、７．０７〜７．０１（ｍ、２Ｈ）、６．８５（ｓ、０．５Ｈ）、６．７９（ｓ、０．５Ｈ）、４．６１〜４．４８（ｍ、１Ｈ）、４．２５（ｐ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、０．５Ｈ）、４．１７（ｐ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、０．５Ｈ）、３．６９〜３．６０（ｍ、１Ｈ）、３．６１（ｓ、１．５Ｈ）、３．５４（ｓ、１．５Ｈ）、２．４９〜２．４２（ｍ、１）、２．４５〜２．３４（ｍ、２Ｈ）、２．３７〜２．２２（ｍ、１Ｈ）、１．８５〜１．７０（ｍ、１Ｈ）、１．３３〜１．２０（ｍ、４．５Ｈ）、１．１３（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１．５Ｈ）、０．８６〜０．８０（ｍ、６Ｈ）。
【０３２２】
【化３６】
2021535092.tif 000056
実施例１８：メチル（（Ｓ）−２−（６−メトキシナフタレン−２−イル）プロパノイル）−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−アラニネート  
メチル（（Ｓ）−２−（６−メトキシナフタレン−２−イル）プロパノイル）−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−アラニネートを、（Ｓ）−６−メトキシ−α−メチル−２−ナフタレン酢酸（１４０ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ，１．５当量）、少なくとも２０重量％の水を含むＨＯＢｔ水和物（７３ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ、１．１当量）、ＥＤＣ・ＨＣｌ（１１３ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ、１．５当量）、トリエチルアミン（０．１４ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ、２．５当量）、およびＤ−Ａｓｎ−Ｌ−Ａｌａ−ＯＭｅのＨＣｌ塩（実施例１の工程２において合成、１００ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ、１当量）を使用して、実施例１の工程３に示したＮ−アシルジペプチドについての一般的な手法に従い合成した。生成物を、α−炭素ジアステレオマーの混合物として、白色の固体（１０５ｍｇ、６２％）として単離した。ＬＣＭＳ［Ｍ−Ｈ］−４２８．２。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．２５〜８．０４（ｍ、２Ｈ）、７．８５〜７．６６（ｍ、３Ｈ）、７．４７〜７．３７（ｍ、１Ｈ）、７．３１〜７．１６（ｍ、２Ｈ）、７．１１（ｄｄ、Ｊ＝８．９、２．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．８６（ｓ、０．５Ｈ）、６．７８（ｓ、０．５Ｈ）、４．６４〜４．５１（ｍ、１Ｈ）、４．２６（ｐ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、０．５Ｈ）、４．１５（ｐ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、０．５Ｈ）、３．８６〜３．８３（ｍ、３Ｈ）、３．８３〜３．７６（ｍ、１Ｈ）、３．６１（ｓ、１．５Ｈ）、３．４９（ｓ、１．５Ｈ）、２．４４〜２．２２（ｍ、２Ｈ）、１．４３〜１．３４（ｍ、３Ｈ）、１．２４（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１．５Ｈ）、１．０８（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１．５Ｈ）。
【０３２３】
【化３７】
2021535092.tif 000057
実施例１９：メチル（１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−７−（ピペラジン−１−イル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボニル）−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−アラニネート
メチル（１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−７−（ピペラジン−１−イル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボニル）−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−アラニネートを、７−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルピペラジン−１−イル）−１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−キノリン−３−カルボン酸（１４０ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ，１．５当量）、少なくとも２０重量％の水を含むＨＯＢｔ水和物（７３ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ、１．１当量）、ＥＤＣ・ＨＣｌ（１１３ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ、１．５当量）、トリエチルアミン（０．１４ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ、２．５当量）、およびＤ−Ａｓｎ−Ｌ−Ａｌａ−ＯＭｅのＨＣｌ塩（実施例１の工程２において合成、１００ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ、１当量）を使用して、実施例１の工程３に示したＮ−アシルジペプチドについての一般的な手法に従い合成した。凍結乾燥させたｂｏｃ保護シプロフロキサシンジペプチドを、脱保護が、ＬＣＭＳによりモニターして完了するまで、ジクロロメタン（１ｍＬ）およびトリフルオロ酢酸（０．５ｍＬ）の溶液において攪拌した。有機溶媒を回転蒸発により取り除き、生成物を、水およびアセトニトリルに溶解し、次に、凍結乾燥させて、生成物をトリフルオロアセテート（８ｍｇ、３％）として得た。ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋５３１．２。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．１７（ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、１Ｈ）、９．０１（ｓ、２Ｈ）、８．６１（ｓ、１Ｈ）、８．３５（ｄ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．８８（ｄ、Ｊ＝１３．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．５２（ｄ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．３７（ｄ、Ｊ＝２．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．８５（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．８３（ｑ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、１Ｈ）、４．２４（ｐ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．７９〜３．７０（ｍ、１Ｈ）、３．５９（ｓ、３Ｈ）、３．５０〜３．３０（ｍ、８Ｈ）、２．５１（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、１．３２〜１．１９（ｍ、５Ｈ）、１．１７〜１．０２（ｍ、２Ｈ）。
【０３２４】
【化３８】
2021535092.tif 000058
実施例２０：メチル（Ｒ）−４−（４−アミノ−４−オキソ−２−テトラデカンアミドブタナミド）ブタノエート  
工程１：
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタン酸（１．８１ｇ、７．８１ｍｍｏｌ、１．２当量）、ＨＯＢｔ（９６８ｍｇ、７．１６ｍｍｏｌ、１．１当量）、ＴＥＡ（１．４５ｇ、１４．３ｍｍｏｌ、１．９９ｍＬ、２．２当量）の混合物を、０℃まで冷却した。ＥＤＣＩ（１．３７ｇ、７．１６ｍｍｏｌ、１．１当量）およびメチル４−アミノブタノエート．ＨＣｌ（１ｇ、６．５１ｍｍｏｌ、１当量）を、混合物に加えた。反応混合物を、０℃で１５分間撹拌し、２５℃で１２時間攪拌した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、残渣を得て、それを、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ｌｕｎａ  Ｃ１８  ２５０＊５０ｍｍ＊１０μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：０％〜３２％、２０分）により精製した。メチル４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ブタノエート（１．２ｇ、５６％）を、白色の固体として得た。
【０３２５】
工程２：
ＨＣｌ／ジオキサン（２Ｍ、１５．１ｍＬ、１０当量）中のメチル４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ブタノエート（１ｇ、３．０２ｍｍｏｌ）の混合物を、２５℃で１時間、Ｎ２雰囲気下で攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、メチル４−［［（２Ｒ）−２，４−ジアミノ−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ブタノエート．ＨＣｌ（５５０ｍｇ、６８％）を、黄色のゴムとして得た。
【０３２６】
工程３：
ＤＣＭ（５ｍＬ）中のメチル４−［［（２Ｒ）−２，４−ジアミノ−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ブタノエート．ＨＣｌ（５５０ｍｇ、２．０５ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＴＥＡ（４１６ｍｇ、４．１１ｍｍｏｌ、５７２μＬ、２当量）を加えた。次に、反応混合物を０℃まで冷却し、テトラデカノイルクロリド（５５８ｍｇ、２．２６ｍｍｏｌ、１．１当量）を加えた。混合物を、２５℃で１２時間、Ｎ２下で攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、残渣を得て、それを、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｂｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＯＢＤ  Ｃ１８  １５０＊３０ｍｍ  ５μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：５５％〜８５％、１０分）により精製した。メチル（Ｒ）−４−（４−アミノ−４−オキソ−２−テトラデカンアミドブタナミド）ブタノエート（１４．７ｍｇ、１．６％）を、白色の固体として得た。ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）：４４２．３  １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．８（ｍ、１Ｈ）、７．７（ｍ、１Ｈ）、７．２（ｍ、１Ｈ）、６．８（ｍ、１Ｈ）、４．４（ｍ、１Ｈ）３．５（ｓ、３Ｈ）、３．０（ｍ、２Ｈ）、２．４（ｄｄ、２Ｈ）、２．２（ｍ、１Ｈ）、２．０（ｍ、２Ｈ）、１．６（ｍ、２Ｈ）、１．４（ｍ、２Ｈ）、１．２（ｍ、２０Ｈ）、０．８３（ｔ、３Ｈ）。
【０３２７】
【化３９】
2021535092.tif 000059
実施例２１：メチル（Ｓ）−４−（（Ｒ）−４−アミノ−４−オキソ−２−テトラデカンアミドブタナミド）ペンタノエート
工程１：
トルエン（５０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル  Ｎ−［（１Ｓ）−１−メチル−２−オキソ−エチル］カルバメート（５ｇ、２８．９ｍｍｏｌ、１当量）の混合物に、メチル（トリフェニルホスホラニリデン）アセテート（９．６５ｇ、２８．９ｍｍｏｌ、１当量）を加え、次に、混合物を、２５℃で１２時間、Ｎ２雰囲気下で攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、残渣を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル／酢酸エチル＝１０：１〜４：１）により精製した。メチル（Ｅ，４Ｓ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペンタ−２−エノエート（６ｇ、９１％）を、淡黄色の油状物として得た。
【０３２８】
工程２：
ＤＣＭ（２５ｍＬ）中のメチル（Ｅ，４Ｓ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペンタ−２−エノエート（６ｇ、２６．２ｍｍｏｌ）の混合物に、ＴＦＡ（５ｍＬ）を加え、混合物を、２５℃で２時間攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、メチル（Ｅ，４Ｓ）−４−アミノペンタ−２−エニック酸トリフルオロアセテート塩（４ｇ、６３％）を淡黄色の油状物として得た。生成物を、さらに精製することなく次の工程で使用した。
【０３２９】
工程３：
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中のメチル（Ｅ，４Ｓ）−４−アミノペンタ−２−エン酸トリフルオロアセテート塩（４ｇ、１６．５ｍｍｏｌ、１当量）、ＨＯＢｔ（２．４４ｇ、１８．１ｍｍｏｌ、１．１当量）、ＴＥＡ（３．６６ｇ、３６．２ｍｍｏｌ、５．０４ｍＬ、２．２当量）の混合物を、０℃まで冷却した。ＥＤＣＩ（３．４７ｇ、１８．１ｍｍｏｌ、１．１当量）および（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタン酸（４．５８ｇ、１９．７ｍｍｏｌ、１．２当量）を、混合物に加えた。反応混合物を、０℃で１５分間、２５℃で１２時間攪拌した。反応混合物を、Ｈ２Ｏ（２５ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で４回抽出した。合わせた有機層を、塩水（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル／酢酸エチル＝１：１〜０：１）により精製して、メチル（Ｅ，４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ペンタ−２−エノエート（５ｇ、８９％）を白色の固体として得た。
【０３３０】
工程４：
ＭｅＯＨ（５ｍＬ）中のメチル（Ｅ，４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ペンタ−２−エノエート（５ｇ、１４．６ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｐｄ／Ｃ（１０％、０．４ｇ）を加えた。懸濁液を脱気し、Ｈ２で３回パージした。混合物を、Ｈ２下、圧１５ｐｓｉ、２５℃にて１２時間攪拌した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、メチル（４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ペンタノエート（４ｇ）を白色の固体として得た。
【０３３１】
工程５：
ＨＣｌ／ジオキサン（２Ｍ、５７．９ｍＬ、１０当量）中のメチル（４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ペンタノエート（４ｇ、１１．６ｍｍｏｌ、１当量）の混合物を、２５℃で１時間攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ｌｕｎａ  ｃ１８  ２５０ｍｍ＊１００ｍｍ＊１０μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：５％〜３５％、２０分）により精製し、メチル（４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−２，４−ジアミノ−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ペンタノエート（１ｇ、３１％）を、白色の固体として得た。
工程６：
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中のメチル（４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−２，４−ジアミノ−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ペンタノエート（１ｇ、３．５５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＥＡ（７１８ｍｇ、７．１０ｍｍｏｌ、９８８μＬ、２当量）を加えた。反応混合物を０℃まで冷却し、テトラデカノイルクロリド（９６４ｍｇ、３．９０ｍｍｏｌ、１．１当量）を加えた。混合物を、２５℃で１２時間、Ｎ２下で攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ｌｕｎａ  Ｃ１８  ２５０＊５０ｍｍ＊１０μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：５０％〜８０％、２０分）により精製した。メチル（Ｓ）−４−（（Ｒ）−４−アミノ−４−オキソ−２−テトラデカンアミドブタナミド）ペンタノエート（２５０ｍｇ、１５％）を、白色の固体として得た。ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）：４５６．３  １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．８（ｄ、１Ｈ）、７．４（ｄ、１Ｈ）、７．２（ｂｒｓ、１Ｈ）、６．８（ｂｒｓ、１Ｈ）、４．４（ｍ、１Ｈ）、３．７（ｍ、１Ｈ）、３．６（ｓ、３Ｈ）、２．４（ｍ、１Ｈ）、２．２（ｍ、３Ｈ）、２．０（ｍ、１Ｈ）、１．４（ｍ、１Ｈ）、１．２、ｍ、１Ｈ）．１．０ｍ、２０Ｈ）、０．８７、（ｄ、３Ｈ）、０．８４、（ｍ、３Ｈ）。
【０３３２】
【化４０】
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実施例２２：（Ｒ）−Ｎ１−（４−（メトキシメチル）フェニル）−２−テトラデカンアミドスクシンアミド  
工程１：
ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）中の（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタン酸（１．０２ｇ、４．３７ｍｍｏｌ、１．２当量）、４−（メトキシメチル）アニリン（５００ｍｇ、３．６４ｍｍｏｌ、１当量）の混合物を、０℃まで冷却した。プロパンホスホン酸酸無水物（１．７４ｇ、５．４７ｍｍｏｌ、１．６３ｍＬ、１．５当量）およびＤＩＰＥＡ（９４２ｍｇ、７．２９ｍｍｏｌ、１．２７ｍＬ、２当量）を、混合物に加えた。反応混合物を、０℃で１５分間、２５℃で１２時間攪拌した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ｌｕｎａ  Ｃ１８  ２５０＊５０ｍｍ＊１０μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：１０％〜４０％、２０分）により精製した。残渣を、分取ＴＬＣ（ＳｉＯ２、石油エーテル：酢酸エチル＝０：１）により精製して、ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（１Ｒ）−３−アミノ−１−［［４−（メトキシメチル）フェニル］  カルバモイル］−３−オキソ−プロピル］カルバメート（８０ｍｇ、６．３％）を白色の固体として得た。
【０３３３】
工程２：
ＨＣｌ／ジオキサン（３Ｍ、１．５２ｍＬ、２０当量）中のｔｅｒｔ−ブチル  Ｎ−［（１Ｒ）−３−アミノ−１−［［４−（メトキシメチル）フェニル］カルバモイル］−３−オキソ−プロピル］カルバメート（８０ｍｇ、２２８μｍｏｌ、１当量）の混合物を、２５℃で１時間、Ｎ２雰囲気下で攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、粗生成物（２Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−［４−（メトキシメチル）フェニル］ブタンジアミドヒドロクロリド（６０ｍｇ）を白色の固体として得た。
【０３３４】
工程３：
ＤＣＭ（５ｍＬ）中の（２Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−［４−（メトキシメチル）フェニル］ブタンジアミドヒドロクロリド（６０ｍｇ、２０９μｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＴＥＡ（４２ｍｇ、４１７μｍｏｌ、５８μＬ、２当量）を加えた。次に、反応混合物を０℃まで冷却し、テトラデカノイルクロリド（５７ｍｇ、２２９μｍｏｌ、１．１当量）を加えた。混合物を、２５℃で１２時間、Ｎ２下で攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｂｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＯＢＤ  Ｃ１８  １５０＊３０ｍｍ  ５μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：５５％〜８５％、１０分）により精製して、（Ｒ）−Ｎ１−（４−（メトキシメチル）フェニル）−２−テトラデカンアミドスクシンアミド（６．１ｍｇ、５．９％）を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）：４６２．３  １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．９（ｓ、１Ｈ）、８．０（ｍ、１Ｈ）、７．５ｍ、２Ｈ）、７．３（ｍ、１Ｈ）、７．２、（ｍ、２Ｈ）、６．８（ｂｒｓ、１Ｈ）、４．６（ｍ、１Ｈ）、４．３（ｓ、２Ｈ）、３．２（ｓ、３Ｈ）、２．５、ｄｄ、２Ｈ）、２．１（ｍ、２Ｈ）、１．２（ｍ、２Ｈ）、１．１（ｂｒｓ、２０Ｈ）、０．８４（ｍ、３Ｈ）。
【０３３５】
【化４１】
2021535092.tif 000061
実施例２３：メチル（（Ｓ）−２−（（Ｒ）−４−アミノ−４−オキソ−２−テトラデカンアミドブタナミド）プロピル）カルバメート
テトラデカノイルクロリド（１．１当量）を、Ｄ−アスパラギン（１当量）と反応させて、テトラデカノイル−Ｄ−アスパラギンを合成する。得られたテトラデカノイル−Ｄ−アスパラギン（１当量）を、ＥＤＣｌ（１．１当量）、ＨＯＢｔ（１．１当量）、およびｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−（２−アミノプロピル）カルバメート（１．１当量）で処理し、次に、ジオキサン中のＨＣｌで脱保護した。得られたアミン（１当量）を、クロロギ酸メチル（１．１当量）とカップリングして、表題化合物を得た。ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）：４５７．３。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．８５（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．５４（ｄｄ、Ｊ＝２４．９、８．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．２７〜７．２２（ｍ、１Ｈ）、７．１１〜６．９１（ｍ、１Ｈ）、６．８６〜６．８１（ｍ、１Ｈ）、４．４５〜４．４０（ｍ、１Ｈ）、３．７７〜３．７２（ｍ、１Ｈ）、３．４９（ｓ、３Ｈ）、２．９８〜２．９３（ｍ、２Ｈ）、２．０９〜２．０５（ｍ、２Ｈ）、１．４６〜１．４１（ｍ、２Ｈ）、１．２１（ｓ、２２Ｈ）、０．９５（ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、３Ｈ）、０．８３（ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、３Ｈ）。
【０３３６】
【化４２】
2021535092.tif 000062
実施例２４：（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル（Ｓ）−４−（（Ｒ）−４−アミノ−４−オキソ−２−テトラデカンアミドブタナミド）ペンタノエート  
化合物（４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−４−オキソ−２−（テトラｄｅｃａｎｏイルアミンｏ）ブタノイル］アミノ］ペンタン酸を、実施例１に示したＮ−アシルジペプチドについての一般的な手法に従い合成し、続いて、ＨＣｌで処置して、カルボキシレートを形成した。ＤＭＦ（５ｍＬ）中の（４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−４−オキソ−２−（テトラデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］ペンタン酸（２０ｍｇ、４５．２９μｍｏｌ、１当量）および（２１Ｓ）−１７，２１−ジエチル−１０，２１−ジヒドロキシ−２８−ｏｘａ−２２，２３−ジアザペンタシクロヘニコサ−２（１０），３（１１），４（１２），５（１４），１３（１６），１５（１７），１８（２２）−ヘプタエン−１９，２０−ジオン（１７．７７ｍｇ、４５．２９μｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＤＭＡＰ（２．７７ｍｇ、２２．６４μｍｏｌ、０．５当量）を加えた。次に、反応混合物を０℃まで冷却し、ＥＤＣＩ（９．５５ｍｇ、４９．８２μｍｏｌ、１．１当量）を加えた。混合物を、２５℃で１２時間、Ｎ２下で攪拌した。ＬＣ−ＭＳは、反応物質を完全に消費し、所望のｍ／ｚを検出したことを示した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、残渣を得た。残渣を、分取ＨＰＬＣにより精製した。表題化合物（２ｍｇ、２．４５μｍｏｌ、収率５．４１％）を、黄色の固体として得た。ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）：８１６．４１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．２１（ｄ、Ｊ＝９．１Ｈｚ、１Ｈ）、８．００（ｄ、Ｊ＝２．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．９４（ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．７３〜７．６０（ｍ、２Ｈ）、７．３４（ｓ、１Ｈ）、７．２８（ｓ、１Ｈ）、６．８６（ｓ、１Ｈ）、６．５２（ｓ、１Ｈ）、５．４４（ｓ、２Ｈ）、５．３５（ｓ、２Ｈ）、４．５５〜４．４５（ｍ、１Ｈ）、４．３２〜４．２４（ｍ、１Ｈ）、２．７２〜２．３１（ｍ、４Ｈ）、２．１４〜１．７９（ｍ、４Ｈ）、１．４８〜１．１７（ｍ、４Ｈ）、１．１０（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、３Ｈ）、１．０８（ｓ、２２Ｈ）、０．９３〜０．７８（ｍ、６Ｈ）。
【０３３７】
【化４３】
2021535092.tif 000063
実施例２５：フェニル（Ｓ）−４−（（Ｒ）−４−アミノ−２−ブチルアミド−４−オキソブタンアミド）ペンタノエート
工程１：
ＭｅＯＨ（２００ｍＬ）中の（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタン酸（２０ｇ、８６．１２ｍｍｏｌ、１当量）の混合物に、Ｃｓ２ＣＯ３（１５．４３ｇ、４７．３７ｍｍｏｌ、０．５５当量）を一度に２５℃でＮ２下で加えた。混合物を、２５℃で１時間攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、残渣を得た。ＤＭＦ（１００ｍＬ）中のブロモメチルベンゼン（１６．９１ｇ、９８．８７ｍｍｏｌ、１１．７４ｍＬ、１．２当量）の混合物に、上の残渣を、２５℃でＮ２下で一度に加えた。混合物を、２５℃で１２時間攪拌した。ＴＬＣは、反応が完了し、新たなスポットを形成したことを示した。反応混合物を濾過し、次に、Ｈ２Ｏ５０ｍＬで希釈し、ＥｔＯＡｃ５０ｍＬ（１０ｍＬ＊５）で抽出した。合わせた有機層を、塩水３０ｍＬで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、残渣を得た。残渣を、カラムクロマトグラフィーにより精製して、ベンジル（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタノエート（２５ｇ、７７．５５ｍｍｏｌ、収率９４．１３％）を白色の固体として得た。
【０３３８】
工程２：
ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ、約４Ｍ）中のベンジル（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタノエート（２０ｇ、６２．０４ｍｍｏｌ、１当量）の溶液を、２５℃で２時間攪拌した。ＴＬＣは、反応を完了したことを示した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、ベンジル（２Ｒ）−２，４−ジアミノ−４−オキソ−ブタノエート（１６ｇ、粗、ＨＣｌ）を白色の固体として得た。
【０３３９】
工程３：
ＤＣＭ（８０ｍＬ）中のベンジル（２Ｒ）−２，４−ジアミノ−４−オキソ−ブタノエート（４ｇ、１５．４６ｍｍｏｌ、１当量、ＨＣｌ）の混合物に、ＴＥＡ（４．６９ｇ、４６．３９ｍｍｏｌ、６．４６ｍＬ、３当量）をＮ２下で加えた。混合物を０℃まで冷却し、ブタノイルクロリド（１．８１ｇ、１７．０１ｍｍｏｌ、１．７８ｍＬ、１．１当量）を、混合物に０℃で滴下し、２時間２５℃で攪拌した。ＴＬＣは、反応を完了し、一つの新たなスポットを形成したことを示した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、ＤＣＭを取り除いた。残渣を、Ｈ２Ｏ１００ｍＬおよびＥｔＯＡｃ１００ｍＬで希釈した。次に、混合物を、Ｈ２Ｏ１５０ｍＬ（５０ｍＬ×３）で洗浄した。合わせた有機層を、Ｎａ２ＳＯ４乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、ベンジル（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ブタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノエート（３．３ｇ、粗）を白色の固体として得た。
【０３４０】
工程４：
ＴＨＦ（１２０ｍＬ）中のベンジル（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ブタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノエート（３．３ｇ、１１．２９ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、Ｐｄ／Ｃ（１．５ｇ、純度１０％）をＮ２雰囲気下で加えた。懸濁液を脱気し、Ｈ２で３回パージした。混合物を、Ｈ２（１５Ｐｓｉ）下、２５℃で１０時間攪拌した。ＴＬＣは、ベンジル（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ブタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノエートを、完全に消費し、一つの新たなスポットを形成したことを示した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ブタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタン酸（２ｇ、粗）を白色の固体として得た。
【０３４１】
工程５：
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ブタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタン酸（１ｇ、４．９５ｍｍｏｌ、１当量）、ＨＯＢｔ（７３５．０６ｍｇ、５．４４ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＴＥＡ（１．１０ｇ、１０．８８ｍｍｏｌ、１．５１ｍＬ、２．２当量）の混合物を、０℃、Ｎ２下で撹拌した。次に、ＥＤＣＩ（１．０４ｇ、５．４４ｍｍｏｌ、１．１当量）およびメチル（Ｅ，４Ｓ）−４−アミノペンタ−２−エノエート（９００．９５ｍｇ、５．４４ｍｍｏｌ、１．１当量、ＨＣｌ）を、混合物に加え、２５℃で１０時間、Ｎ２下で攪拌した。ＬＣＭＳは、所望のＭＳを検出したことを示した。反応混合物を、Ｈ２Ｏ１５ｍＬで希釈し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×４）で抽出した。合わせた有機層を、塩水１０ｍＬで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、残渣を得た。残渣を、分取ＨＰＬＣにより精製して、メチル（Ｅ，４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ブタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ペンタ−２−エノエート（４００ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ、収率２５．８１％）を白色の固体として得た。
【０３４２】
工程６：
ＴＨＦ（５ｍＬ）およびＨ２Ｏ（５ｍＬ）中のメチル（Ｅ，４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ブタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ペンタ−２−エノエート（２００ｍｇ、６３８．２７μｍｏｌ、１当量）の混合物に、ＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏ（５３．５７ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ、２当量）を０℃でＮ２下で加えた。混合物を、２５℃で５時間攪拌した。反応混合物を、ｐＨ５〜６に１Ｍ  ＨＣｌで調節した。ＬＣＭＳは、所望の化合物を検出したことを示した。混合物を減圧下で濃縮して、残渣を得た。残渣を、分取ＨＰＬＣにより精製して、（Ｅ，４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ブタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ペンタ−２−エン酸（５０ｍｇ、１６７．０４μｍｏｌ、収率２６．１７％）を白色の固体として得た。
【０３４３】
工程７：
ＤＭＦ（３ｍＬ）中の（Ｅ，４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ブタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ペンタ−２−エン酸（２５ｍｇ、８３．５２μｍｏｌ、１当量）およびフェノール（１１．７９ｍｇ、１２５．２８μｍｏｌ、１１．０２μＬ、１．５当量）の混合物に、ＤＭＡＰ（５．１０ｍｇ、４１．７６μｍｏｌ、０．５当量）を０℃、Ｎ２下で加えた。ＥＤＣＩ（１７．６１ｍｇ、９１．８７μｍｏｌ、１．１当量）を混合物に加え、２５℃で１０時間攪拌した。ＬＣＭＳは、所望の化合物を検出したことを示した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、残渣を得た。残渣を、分取ＨＰＬＣにより精製して、フェニル（Ｅ，４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ブタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ペンタ−２−エノエート（５ｍｇ、１３．３２μｍｏｌ、収率１５．９５％）を黄色の固体として得た。
【０３４４】
工程８：
ＴＨＦ（２０ｍＬ）中のフェニル（Ｅ，４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ブタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ペンタ−２−エノエート（５ｍｇ、１３．３２μｍｏｌ、１当量）の混合物に、Ｐｄ／Ｃ（２０ｍｇ、純度１０％）を、２５℃、Ｈ２（１５ｐｓｉ）下で一度に加えた。混合物を、２５℃で５時間攪拌した。ＬＣＭＳは、所望の質量を検出したことを示した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、残渣を得た。残渣を、分取ＨＰＬＣにより精製して、（Ｓ）−フェニル４−（（Ｒ）−４−アミノ−２−ブチルアミド−４−オキソブタンアミド）ペンタノエート（４．５ｍｇ、９．４２μｍｏｌ、収率７０．７１％、純度７９．９９％）を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）３７８．２。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．９５（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．６２（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．３９（ｔ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、２Ｈ）、７．２８（ｓ、１Ｈ）、７．２３（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．１２〜７．０５（ｍ、２Ｈ）、６．８６（ｓ、１Ｈ）、４．４７（ｑ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．８５〜３．８０（ｍ、１Ｈ）、２．５９〜２．２８（ｍ、２Ｈ）、２．０５（ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、２Ｈ）、１．８０〜１．６０（ｍ、２Ｈ）、１．５４〜１．４１（ｍ、２Ｈ）、１．０４（ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、３Ｈ）、０．８１（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、３Ｈ）。
【０３４５】
【化４４】
2021535092.tif 000064
実施例２６：（Ｒ）−４−（４−アミノ−４−オキソ−２−テトラデカンアミドブタナミド）ベンジル（４−ブロモベンジル）（メチル）カルバメート  
テトラデカノイルクロリド（１．１当量）を、Ｄ−アスパラギン（１当量）と反応させて、テトラデカノイル−Ｄ−アスパラギンを合成する。得られたテトラデカノイル−Ｄ−アスパラギン（１当量）を、ＥＤＣｌ（１．１当量）、ＨＯＢｔ（１．１当量）、および４−アミノベンジルアルコール（１．１当量）で処理した。得られたアルコール（１当量）を、４，４’−ジニトロフェニルカルボネート（１．１当量）で処理し、次に、１−（４−ブロモフェニル）−Ｎ−メチルメタンアミン（１．１当量）で処理して、表題化合物を得た。
【０３４６】
【化４５】
2021535092.tif 000065
実施例２７：（Ｒ）−４−（４−アミノ−２−ブチルアミド−４−オキソブタンアミド）ベンジル（４−ブロモベンジル）（メチル）カルバメート
この化合物を、実施例２６に関して記載した実験手法に従い合成してもよい。
【０３４７】
【化４６】
2021535092.tif 000066
実施例２８：４−（（Ｒ）−４−アミノ−４−オキソ−２−テトラデカンアミドブタナミド）ベンジル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）（メチル）カルバメート
テトラデカノイルクロリドを、Ｄ−アスパラギンで処理し、得られたテトラデカノイル−Ｄ−アスパラギン（１当量）を、ＥＤＣｌ（１．１当量）、ＨＯＢｔ（１．１当量）、および４−アミノベンジルアルコール（１．１当量）で処理した。得られたアルコールを、４，４’−ジニトロフェニルカルボネート（１当量）で処理した。得られたカルボネートを、モノメチルオーリスタチンＥで処理して、表題化合物を得た。
【０３４８】
【化４７】
2021535092.tif 000067
実施例２９：４−（（Ｒ）−４−アミノ−２−ブチルアミド−４−オキソブタンアミド）ベンジル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）（メチル）カルバメート    
この化合物を、実施例２８に関して記載した実験手法に従い合成してもよい。
【０３４９】
【化４８】
2021535092.tif 000068
実施例３０：メチル（Ｒ）−（２−（４−アミノ−４−オキソ−２−テトラデカンアミドブタナミド）エチル）（メチル）カルバメート
工程１：
ＤＭＦ（３ｍＬ）中の（２Ｒ）−４−アミノ−４−オキソ−２−（テトラデカノイルアミノ）ブタン酸（１００ｍｇ、２９２μｍｏｌ、１当量）およびＴＥＡ（６５ｍｇ、６４２μｍｏｌ、８９μＬ、２．２当量）の溶液に、ｔｅｒｔ−ブチルＮ−（２−アミノエチル）−Ｎ−メチル−カルバメート（６１ｍｇ、３５０μｍｏｌ、６３μＬ、１．２当量）およびＨＯＢｔ（４３ｍｇ、３２１μｍｏｌ、１．１当量）を加えた。反応混合物を０℃まで冷却し、ＥＤＣＩ（６２ｍｇ、３２１μｍｏｌ、１．１当量）を加えた。次に、混合物を、２５℃で１２時間、Ｎ２下で攪拌した。反応混合物を、Ｈ２Ｏ（５ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）で４回抽出した。合わせた有機層を、塩水（５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［２−［［（２Ｒ）−４−アミノ−４−オキソ−２−（テトラデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エチル］−Ｎ−メチル−カルバメート（８０ｍｇ）を白色の固体として得て、それを、さらに精製することなく次の工程に使用した。
【０３５０】
工程２：
ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４ｍＬ、４Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチルＮ−［２−［［（２Ｒ）−４−アミノ−４−オキソ−２−（テトラデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エチル］−Ｎ−メチル−カルバメート（８０ｍｇ、１６０μｍｏｌ）の混合物を、２５℃で１時間攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、（２Ｒ）−Ｎ−［２−（メチルアミノ）エチル］−２−（テトラデカノイルアミノ）ブタンジアミドヒドロクロリド（６０ｍｇ）を白色の固体を得た。
【０３５１】
工程３：
ＤＣＭ（３ｍＬ）中の（２Ｒ）−Ｎ−［２−（メチルアミノ）エチル］−２−（テトラデカノイルアミノ）ブタンジアミドヒドロクロリド（８０ｍｇ、１８４μｍｏｌ、１当量）およびＴＥＡ（４１ｍｇ、４０５μｍｏｌ、５６μＬ、２．２当量）の混合物を、０℃まで冷却し、カルボノクロリジン酸メチル（１７ｍｇ、１８４μｍｏｌ、１４μＬ、１当量）を加えた。混合物を２５℃まで温め、１２時間攪拌した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮し、残渣を、分取ＴＬＣ（ＳｉＯ２、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）により精製して、メチル（Ｒ）−（２−（４−アミノ−４−オキソ−２−テトラデカンアミドブタナミド）エチル）（メチル）カルバメート（４．３ｍｇ、４．７％）を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）：４５７．３  １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．９１〜７．８２（ｍ、２Ｈ）、７．２６（ｓ、１Ｈ）、６．８５（ｓ、１Ｈ）、４．５１〜４．４５（ｍ、１Ｈ）、３．５７（ｓ、３Ｈ）、３．３５〜３．１２（ｍ、４Ｈ）、２．８１（ｓ、３Ｈ）、２．４５〜２．２７（ｍ、２Ｈ）、２．０９（ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、１．４８〜１．４４（ｍ、２Ｈ）、１．２６〜１．２２（ｍ、２０Ｈ）、０．８６（ｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、３Ｈ）。
【０３５２】
【化４９】
2021535092.tif 000069
実施例３１：４−ブロモフェニル（Ｒ）−（２−（４−アミノ−４−オキソ−２−テトラデカンアミドブタナミド）エチル）（メチル）カルバメート
工程１：
ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中の（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタン酸（１０．０ｇ、４３ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（７．７２ｇ、２３．７ｍｍｏｌ、０．５５当量）を加えた。混合物を、２５℃で２時間攪拌し、次に、ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）を取り除き、残渣をＤＭＦ（５０ｍＬ）に溶解した。臭化ベンジル（１１ｇ、６４．６ｍｍｏｌ、７．６７ｍＬ、１．５当量）を加え、混合物を、２５℃で１２時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を、シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝１０／１〜０／１）により精製して、ベンジル（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタノエート（１３．５ｇ、７７．８％）を白色の固体として得た。
【０３５３】
工程２：
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中のベンジル（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタノエート（１．００ｇ、３．１０ｍｍｏｌ、１当量）の混合物に、ＴＦＡ（３．５４ｇ、３１．０ｍｍｏｌ、２．３０ｍＬ、１０当量）を加え、混合物を、２５℃で０．５時間攪拌した。溶媒を取り除き、残渣をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解し、０℃まで冷却した。ＴＥＡ（１．２６ｇ、１２．４ｍｍｏｌ、１．７３ｍＬ、４当量）およびＤＭＡＰ（３７．０ｍｇ、３１０μｍｏｌ、０．１当量）、続いて、テトラデカノイルクロリド（９１９ｍｇ、３．７２ｍｍｏｌ、１．２当量）を加えた。混合物を、２５℃で１１．５時間攪拌し、次に、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル／酢酸エチル＝５／１〜１：１）により精製して、ベンジル（２Ｒ）−４−アミノ−４−オキソ−２−（テトラデカノイルアミノ）ブタノエート（１．０ｇ、５２％）を白色の固体として得た。
【０３５４】
工程３：
ＥｔＯＨ（１０ｍＬ）中のベンジル（２Ｒ）−４−アミノ−４−オキソ−２−（テトラデカノイルアミノ）ブタノエート（１．００ｇ、２．３１ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、１０％Ｐｄ／Ｃ（１ｇ）をＮ２下で加えた。懸濁液を、真空下で脱気し、Ｈ２で数回パージした。混合物を、Ｈ２下、圧１５ｐｓｉ、２５℃にて１２時間攪拌した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、（２Ｒ）−４−アミノ−４−オキソ−２−（テトラデカノイルアミノ）ブタン酸（０．３ｇ、３８％）を白色の固体として得た。
【０３５５】
工程４：
ＤＭＦ（３ｍＬ）中の（２Ｒ）−４−アミノ−４−オキソ−２−（テトラデカノイルアミノ）ブタン酸（１５０ｍｇ、４３８μｍｏｌ、１当量）、ＴＥＡ（９８ｍｇ、９６４μｍｏｌ、１３４μＬ、２．２当量）およびＨＯＢｔ（６５ｍｇ、４８２μｍｏｌ、１．１当量）の混合物を、０℃で１時間攪拌した。次に、ＥＤＣＩ（９２ｍｇ、４８２μｍｏｌ、１．１当量）およびｔｅｒｔ−ブチルＮ−（２−アミノエチル）−Ｎ−メチル−カルバメート（９２ｍｇ、５２５μｍｏｌ、９３．９μＬ、１．２当量）を加え、混合物を、１１時間、２５℃で攪拌した。混合物を、酢酸エチル（９ｍＬ）とＨ２Ｏ（９ｍＬ）の間で分配した。有機層を分離し、濾過し、減圧下で濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［２−［［（２Ｒ）−４−アミノ−４−オキソ−２−（テトラデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エチル］−Ｎ−メチル−カルバメート（０．１ｇ、収率４１％）を白色の固体として得た。
【０３５６】
工程５：
ＨＣｌ／ジオキサン（４ｍＬ、４Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチルＮ−［２−［［（２Ｒ）−４−アミノ−４−オキソ−２−（テトラデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エチル］−Ｎ−メチル−カルバメート（０．０５ｇ、１００μｍｏｌ、１当量）の混合物を、２５℃で３０分間攪拌した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、（２Ｒ）−Ｎ−［２−（メチルアミノ）エチル］−２−（テトラデカノイルアミノ）ブタンジアミドヒドロクロリド（０．０５ｇ）を白色の固体として得て、それを、さらなに精製することなく使用した。
【０３５７】
工程６：
ＴＨＦ（５０ｍＬ）中のトリホスゲン（３．４３ｇ、１１．６ｍｍｏｌ、０．４当量）の混合物に、４−ブロモフェノール（５ｇ、２８．９ｍｍｏｌ、１当量）およびピリジン（２．２９ｇ、２８．９ｍｍｏｌ、２．３３ｍＬ、１当量）を、０℃でＮ２下で一度に加えた。次に、混合物を、２５℃で１２時間攪拌し、次に、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル／酢酸エチル＝１：０）により精製して、（４−ブロモフェニル）カルボノクロリデート（０．８ｇ、収率１２％）を白色の固体として得た。
【０３５８】
工程７：ＤＣＭ（５ｍＬ）中の（２Ｒ）−Ｎ−［２−（メチルアミノ）エチル］−２−（テトラデカノイルアミノ）ブタンジアミドヒドロクロリド（０．０５ｇ、１１５μｍｏｌ、１当量）およびＴＥＡ（４６．５ｍｇ、４６０μｍｏｌ、６４μＬ、４当量）の混合物に、（４−ブロモフェニル）カルボノクロリデート（３２．５ｍｇ、１３８μｍｏｌ、１９．７μＬ、１．２当量）を、０℃、Ｎ２下で一度に加えた。次に、混合物を、２５℃で１２時間攪拌した。混合物を濾過し、減圧下で濃縮し、残渣を、分取ＨＰＬＣ（水（０．０４％ＮＨ３  Ｈ２Ｏ）−アセトニトリル）により精製して、（４−ブロモフェニル）Ｎ−［２−［［（２Ｒ）−４−アミノ−４−オキソ−２−（テトラデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］エチル］−Ｎ−メチル−カルバメート（０．００３ｇ、収率４％）を白色の固体として得た。
【０３５９】
ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）：５９７．２および５９９．２。
【０３６０】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ７．４７（ｄ、２Ｈ）、７．３４〜７．３０（ｍ、２Ｈ）、７．０６（ｄ、２Ｈ）、５．８８〜５．７４（ｍ、１Ｈ）、５．３６（ｄ、１Ｈ）、４．７９〜４．６４（ｍ、１Ｈ）、３．５３（ｓ、４Ｈ）、３．４４（ｓ、１Ｈ）、３．１０（ｓ、２Ｈ）、３．０２（ｓ、１Ｈ）、２．４７（ｄｄ、１Ｈ）、２．２４〜２．１６（ｍ、１Ｈ）、２．１０〜２．０２（ｍ、１Ｈ）、１．２７〜１．２３（ｍ、２２Ｈ）、０．８８（ｔ、３Ｈ）。
【０３６１】
【化５０】
2021535092.tif 000070
実施例３２：メチル（Ｓ）−４−（（Ｒ）−４−アミノ−４−オキソ−２−テトラデカンアミドブタナミド）−２−メチルブタノエート
テトラデカノイルクロリド（１．１当量）を、Ｄ−アスパラギン（１当量）と反応させて、テトラデカノイル−Ｄ−アスパラギンを合成する。得られたテトラデカノイル−Ｄ−アスパラギン（１当量）を、ＥＤＣｌ（１．１当量）、ＨＯＢｔ（１．１当量）、およびメチル（Ｓ）−４−アミノ−２−メチルブタノエート（１．１当量）で処理して、表題化合物を得た。
【０３６２】
【化５１】
2021535092.tif 000071
実施例３３：メチル（Ｒ）−４−（（Ｒ）−４−アミノ−４−オキソ−２−テトラデカンアミドブタナミド）−２−メチルブタノエート
化合物（Ｓ）−（＋）−４−ベンジル−３−プロピオニル−２−オキサゾリジノン（１当量）を、ジクロロメタン中のメチルアクリレート（１．１当量）、チタン（ＩＶ）イソプロポキシド、チタン（ＩＶ）クロリド、およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンで処理して、メチル（Ｒ）−５−（（Ｓ）−４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）−４−メチル−５−オキソペンタノエートを合成した。得られた化合物（１当量）を、ジオキサン中のＨＣｌで加水分解して、（Ｒ）−５−（（Ｓ）−４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）−４−メチル−５−オキソペンタン酸を得、次に、アジ化ジフェニルホスホリル（１．１当量）、トリエチルアミン（１．１当量）、およびｔｅｒｔ−ブタノール（１．５当量）と反応させて、ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｒ）−４−（（Ｓ）−４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）−３−メチル−４−オキソブチル）カルバメートを得た。得られた化合物（１当量）のＬｉＯＨ−Ｈ２ＯおよびＨ２Ｏ２での加水分解により、（Ｒ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−メチルブタン酸を得て、次に、メタノール中のＳＯＣｌ２でメチルし、ジオキサン中のＨＣｌで脱保護して、メチル（Ｒ）−４−アミノ−２−メチルブタノエートを得た。
【０３６３】
テトラデカノイルクロリド（１．１当量）を、Ｄ−アスパラギン（１当量）と反応させて、テトラデカノイル−Ｄ−アスパラギンを合成する。得られたテトラデカノイル−Ｄ−アスパラギン（１当量）を、ＥＤＣｌ（１．１当量）、ＨＯＢｔ（１．１当量）、およびメチル（Ｒ）−４−アミノ−２−メチルブタノエート（１．１当量）で処理して、表題化合物を得た。
【０３６４】
【化５２】
2021535092.tif 000072
実施例３４：メチル（Ｒ）−４−（４−アミノ−４−オキソ−２−テトラデカンアミドブタナミド）−２，２−ジメチルブタノエート
工程１：
ＴＨＦ（１０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−オキソピロリジン−１−カルボキシレート（１．００ｇ、５．４０ｍｍｏｌ、９１７μＬ、１当量）の溶液に、ＬｉＨＭＤＳ（１Ｍ、１１．９ｍＬ、２．２当量）を−６０℃で加えた。混合物を、−６０℃で０．５時間撹拌した。ＭｅＩ（１．６９ｇ、１１．９ｍｍｏｌ、７３９μＬ、２．２当量）を、−６０℃で加えた。混合物を２５℃までゆっくりと温め、１２時間攪拌した。反応混合物を、Ｈ２Ｏ（１５ｍＬ）で０℃にてクエンチし、酢酸エチル（１０ｍＬ）で３回抽出した。合わせた有機層を、塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチル３，３−ジメチル−２−オキソ−ピロリジン−１−カルボキシレート（１ｇ）を黄色の油状物として得て、それを、さらに精製することなく使用した。
【０３６５】
工程２：
ＴＨＦ（２ｍＬ）およびＥｔＯＨ（２ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル３，３−ジメチル−２−オキソ−ピロリジン−１−カルボキシレート（６００ｍｇ、２．８１ｍｍｏｌ、９１７μＬ、１当量）の溶液に、Ｈ２Ｏ（１ｍＬ）中のＮａＯＨ（５７６ｍｇ、１４．４ｍｍｏｌ、５．１２当量）を、２５℃で加えた。混合物を、２５℃で１２時間攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、残渣を得て、それを、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）に中に取り、酢酸エチル（１０ｍＬ）で抽出した。水層を、ｐＨ＝７にＨＣｌ（１Ｍ）で調節し、酢酸エチル（１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を濾過し、減圧下で濃縮して、４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２，２−ジメチル−ブタン酸（２８０ｍｇ、４３％）を黄色の油状物として得た。
【０３６６】
工程３：
ＤＭＦ（２ｍＬ）中の４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２，２−ジメチル−ブタン酸（２３０ｍｇ、９９４μｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＭｅＩ（２８２ｍｇ、１．９９ｍｍｏｌ、１２４μＬ、２当量）およびＫ２ＣＯ３（４１２ｍｇ、２．９８ｍｍｏｌ、３当量）を２５℃で加えた。混合物を、２５℃で１２時間攪拌した。反応混合物を、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（１０ｍＬ）で３回抽出した。合わせた有機層を、塩水（１０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させて、濾過し、減圧下で濃縮して、メチル４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２，２−ジメチル−ブタノエート（１７０ｍｇ、７０％）を黄色の油状物として得た。
【０３６７】
工程４：
ＭｅＯＨ（２．５ｍＬ）中のメチル４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２，２−ジメチル−ブタノエート（１７０ｍｇ、６９３μｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＨＣｌ／ＭｅＯＨ（２．５ｍＬ、４Ｍ）を２５℃で加えた。混合物を、２５℃で２時間攪拌した。反応混合液を減圧下で濃縮した。残渣を、石油エーテル（１０ｍＬ）で洗浄して、メチル４−アミノ−２，２−ジメチル−ブタノエートヒドロクロリド（１５０ｍｇ）を赤色の固体として得た。
【０３６８】
工程５：
ＤＭＦ（５ｍＬ）中のメチル４−アミノ−２，２−ジメチル−ブタノエート（１００ｍｇ、６８９μｍｏｌ、１当量）、（２Ｒ）−４−アミノ−４−オキソ−２−（テトラデカノイルアミノ）ブタン酸（２８３ｍｇ、８２６μｍｏｌ、１．２当量）、ＨＯＢｔ（１０２ｍｇ、７５８μｍｏｌ、１．１当量）およびＴＥＡ（１５３ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ、２１１μＬ、２．２当量）の溶液に、ＥＤＣＩ（１４５ｍｇ、７５８μｍｏｌ、１．１当量）を０℃で加えた。混合物を、２５℃で１２時間攪拌した。反応混合物を濾過して、濾液を得た。濾液を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｌｕｎａ  Ｃ１８  １００＊３０  ５μ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：５５％〜８５％、１２分）により精製して、メチル４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−４−オキソ−２−（テトラデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］−２，２−ジメチル−ブタノエート（５０ｍｇ、１４％）を白色の固体として得た。
【０３６９】
ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）：４７０．３。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ７．３２（ｄ、１Ｈ）、７．０９（ｔ、１Ｈ）、６．０９（ｓ、１Ｈ）、５．６６（ｓ、１Ｈ）、４．７４〜４．６５（ｍ、１Ｈ）、３．６８（ｓ、３Ｈ）、３．３０〜３．１８（ｍ、２Ｈ）、２．８９（ｄｄ、１Ｈ）、２．４７（ｄｄ、１Ｈ）、２．３０〜２．２４（ｍ、２Ｈ）、１．７９〜１．７０（ｍ、２Ｈ）、１．６９〜１．５９（ｍ、２Ｈ）、１．２５（ｍ、２０Ｈ）、１．２０（ｓ、６Ｈ）、０．８８（ｔ、３Ｈ）。
【０３７０】
【化５３】
2021535092.tif 000073
実施例３５：（Ｓ）−４，１１−ジエチル−９−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル（Ｓ）−４−（（Ｒ）−４−アミノ−４−オキソ−２−テトラデカンアミドブタナミド）ペンタノエート
工程１〜６：
実施例４９の工程１〜６に従い合成した。
【０３７１】
工程７：
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の（Ｓ）−４，１１−ジエチル−９−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル（Ｓ）−４−アミノペンタノエートヒドロクロリド（５０ｍｇ、１０２μｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＨＯＢｔ（１５ｍｇ、１１２μｍｏｌ、１．１当量）、（２Ｒ）−４−アミノ−４−オキソ−２−（テトラデカノイルアミノ）ブタン酸（３５ｍｇ、１０２μｍｏｌ、１当量）、ＴＥＡ（２３ｍｇ、２２４μｍｏｌ、３１μＬ、２．２当量）およびＥＤＣＩ（２１ｍｇ、１１２μｍｏｌ、１．１当量）を０℃で加えた。混合物を、１５℃で１２時間攪拌した。反応混合物を濾過し、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗｅｌｃｈ  Ｕｌｔｉｍａｔｅ  ＡＱ−Ｃ１８  １５０＊３０ｍｍ＊５μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：５５％−８５％、１２分）により精製して、（Ｓ）−４，１１−ジエチル−９−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル（Ｓ）−４−（（Ｒ）−４−アミノ−４−オキソ−２−テトラデカンアミドブタナミド）ペンタノエート（１４ｍｇ、１６％）を黄色の固体として得た。ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）８１６．４。
【０３７２】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ８．０５（ｄ、１Ｈ）、７．７６（ｄ、１Ｈ）、７．６４〜７．５９（ｍ、１Ｈ）、７．４４〜７．３６（ｍ、２Ｈ）、７．３１（ｓ、１Ｈ）、６．６９〜６．６２（ｍ、１Ｈ）、６．２１（ｓ、１Ｈ）、５．６８（ｄ、１Ｈ）、５．４０（ｄ、１Ｈ）、５．２０〜５．０２（ｍ、２Ｈ）、４．７７（ｓ、１Ｈ）、４．００（ｓ、１Ｈ）、３．０９〜２．９５（ｍ、８Ｈ）、２．６１〜２．４７（ｍ、３Ｈ）、２．２７（ｄｔ、３Ｈ）、２．１４〜２．０６（ｍ、１Ｈ）、１．９０〜１．８６（ｍ、１Ｈ）、１．３４〜１．１９（ｍ、１９Ｈ）、１．０９（ｄ、３Ｈ）、０．９４（ｑ、３Ｈ）、０．８７（ｔ、３Ｈ）。
【０３７３】
【化５４】
2021535092.tif 000074
実施例３６：４−（（（（４−ブロモベンジル）（メチル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェニル（Ｒ）−（２−（４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）エチル）（メチル）カルバメート
テトラデカノイルクロリド（１．１当量）を、Ｄ−アスパラギン（１当量）と反応させて、テトラデカノイル−Ｄ−アスパラギンを合成する。得られたテトラデカノイル−Ｄ−アスパラギン（１当量）を、ＥＤＣｌ（１．１当量）、ＨＯＢｔ（１．１当量）、およびｔｅｒｔ−ブチル（２−アミノエチル）（メチル）カルバメート（１．１当量）で処理し、次に、ジオキサン中のＨＣｌで脱保護して、アミン中間体を得る。
【０３７４】
化合物（４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）フェニル）メタノール（１当量）を、４，４’−ジニトロフェニル  カルボネート（１．１当量）と反応させ、続いて、１−（４−ブロモフェニル）−Ｎ−メチルメタンアミンと反応させる。得られた化合物を、ＴＢＡＦ（１．１当量）脱保護し、次に、４，４’−ジニトロフェニルカルボネート（１当量）と反応させる。得られた化合物（１．１当量）を、アミン中間体（１当量）とカップリングして、表題化合物を得る。
【０３７５】
【化５５】
2021535092.tif 000075
実施例３７：（Ｅ）−３−（（（４−ブロモベンジル）（メチル）カルバモイル）オキシ）−２−フェニルプロパ−１−エン−１−イル（Ｒ）−（２−（４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）エチル）（メチル）カルバメート
テトラデカノイルクロリド（１．１当量）を、Ｄ−アスパラギン（１当量）と反応させて、テトラデカノイル−Ｄ−アスパラギンを合成する。得られたテトラデカノイル−Ｄ−アスパラギン（１当量）を、ＥＤＣｌ（１．１当量）、ＨＯＢｔ（１．１当量）、およびｔｅｒｔ−ブチル（２−アミノエチル）（メチル）カルバメート（１．１当量）で処理し、次に、ジオキサン中のＨＣｌで脱保護して、アミン中間体を得る。
【０３７６】
化合物３−ヒドロキシ−２−フェニルプロパナール（１当量）を、４，４’−ジニトロフェニルカルボネート（１．１当量）と反応させ、続いて、１−（４−ブロモフェニル）−Ｎ−メチルメタンアミンと反応させる。得られた化合物を、トリホスゲンと反応させ、次に、クロロ炭酸塩（１．１当量）を、アミン中間体（１当量）とカップリングして、表題化合物を得る。
【０３７７】
【化５６】
2021535092.tif 000076
実施例３８：（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル（Ｓ）−４−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）−２−メチルブタノエート
化合物（Ｒ）−（−）−４−ベンジル−３−プロピオニル−２−オキサゾリジノン（１当量）を、ジクロロメタン中のメチルアクリレート（１．１当量）、チタン（ＩＶ）イソプロポキシド、チタン（ＩＶ）クロリド、およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンと反応させて、メチル（Ｓ）−５−（（Ｒ）−４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）−４−メチル−５−オキソペンタノエートを合成する。得られた化合物（１当量）を、ジオキサン中のＨＣｌで加水分解して、（Ｓ）−５−（（Ｒ）−４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）−４−メチル−５−オキソペンタン酸を得て、それを、次に、アジ化ジフェニルホスホリル（１．１当量）、トリエチルアミン（１．１当量）、およびｔｅｒｔ−ブタノール（１．５当量）と反応させて、ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−４−（（Ｒ）−４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）−３−メチル−４−オキソブチル）カルバメートを得る。得られた化合物（１当量）のＬｉＯＨ−Ｈ２ＯおよびＨ２Ｏ２での加水分解により、（Ｓ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−メチルブタン酸を得て、それを、次に、メタノール中のＳＯＣｌ２でメチル化し、ジオキサン中のＨＣｌで脱保護して、メチル（Ｓ）−４−アミノ−２−メチルブタノエートを得る。
【０３７８】
オクタノイルクロリド（１．１当量）を、Ｄ−アスパラギン（１当量）と反応させて、オクタノイル−Ｄ−アスパラギンを合成する。得られたオクタノイル−Ｄ−アスパラギン（１当量）を、ＥＤＣｌ（１．１当量）、ＨＯＢｔ（１．１当量）、およびメチル（Ｓ）−４−アミノ−２−メチルブタノエート（１．１当量）と反応させて、メチル（Ｓ）−４−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）−２−メチルブタノエートを得る。
【０３７９】
メチル（Ｓ）−４−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）−２−メチルブタノエート（１当量）を、塩基性条件下（ＬｉＯＨ／水／ＴＨＦ中の２Ｍ）で加水分解して、遊離カルボン酸を得る。得られたカルボン酸を、ＤＣＣ（１当量）および７−エチル−１０−ヒドロキシ−カンプトテシン（１．１当量）と反応させ、表題化合物を得る。
【０３８０】
【化５７】
2021535092.tif 000077
実施例３９：（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル（Ｒ）−４−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）−２−メチルブタノエート
化合物（Ｓ）−（−）−４−ベンジル−３−プロピオニル−２−オキサゾリジノン（１当量）を、ジクロロメタン中のメチルアクリレート（１．１当量）、チタン（ＩＶ）イソプロポキシド、チタン（ＩＶ）クロリド、およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンと反応させて、メチル（Ｒ）−５−（（Ｓ）−４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）−４−メチル−５−オキソペンタノエートを合成する。得られた化合物（１当量）を、ジオキサン中のＨＣｌで加水分解して、（Ｒ）−５−（（Ｓ）−４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）−４−メチル−５−オキソペンタン酸を得、次に、アジ化ジフェニルホスホリル（１．１当量）、トリエチルアミン（１．１当量）、およびｔｅｒｔ−ブタノール（１．５当量）と反応させて、ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｒ）−４−（（Ｓ）−４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）−３−メチル−４−オキソブチル）カルバメートを得た。得られた化合物（１当量）のＬｉＯＨ−Ｈ２ＯおよびＨ２Ｏ２での加水分解により、（Ｒ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−メチルブタン酸を得て、次に、メタノール中のＳＯＣｌ２でメチルし、ジオキサン中のＨＣｌで脱保護して、メチル（Ｒ）−４−アミノ−２−メチルブタノエートを得た。
【０３８１】
オクタノイルクロリド（１．１当量）を、Ｄ−アスパラギン（１当量）と反応させて、オクタノイル−Ｄ−アスパラギンを合成する。得られたオクタノイル−Ｄ−アスパラギン（１当量）を、ＥＤＣｌ（１．１当量）、ＨＯＢｔ（１．１当量）、およびメチル（Ｒ）−４−アミノ−２−メチルブタノエート（１．１当量）で処理して、メチル（Ｒ）−４−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）−２−メチルブタノエートを得る。
【０３８２】
メチル（Ｒ）−４−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）−２−メチルブタノエート（１当量）を、塩基性条件下（ＬｉＯＨ／水／ＴＨＦ中の）で加水分解して、遊離カルボン酸を得る。得られたカルボン酸を、ＤＣＣ（１当量）および７−エチル−１０−ヒドロキシ−カンプトテシン（１当量）で処理して、表題化合物を得る。
【０３８３】
【化５８】
2021535092.tif 000078
実施例４０：（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル  ４−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）−２，２−ジメチルブタノエート
工程１：
ＴＨＦ（６０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−オキソピロリジン−１−カルボキシレート（１０ｇ、５４ｍｍｏｌ、９．２ｍＬ、１当量）の溶液に、ＬｉＨＭＤＳ（１Ｍ、１１９ｍＬ、２．２当量）を−６０℃で加えた。混合物を、−６０℃で０．５時間撹拌した。ＭｅＩ（１６．８６ｇ、１１８．８ｍｍｏｌ、７．３９ｍＬ、２．２当量）を、−６０℃で加えた。混合物を、１５℃までゆっくり温め、１２時間攪拌した。反応混合物を、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）により０℃でクエンチし、酢酸エチル（２００ｍＬ）で３回抽出した。合わせた有機層を、塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチル３，３−ジメチル−２−オキソ−ピロリジン−１−カルボキシレート（１２ｇ、粗）を黄色の油状物として得た。
【０３８４】
工程２：
ＴＨＦ（３０ｍＬ）およびＥｔＯＨ（３０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル３，３−ジメチル−２−オキソ−ピロリジン−１−カルボキシレート（１２ｇ、５６ｍｍｏｌ、９２０μＬ、１当量）の溶液に、Ｈ２Ｏ（１５ｍＬ）中のＮａＯＨ（１１．２５ｇ、２８１ｍｍｏｌ、５当量）の溶液を１５℃で加えた。混合物を、１５℃で１２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（３０ｍＬ）で抽出した。合わせた水層を、ＨＣｌ（１Ｍ）によりｐＨ＝７に調節し、減圧下で濃縮した。残渣を、酢酸エチル（１００ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機層を濾過し、減圧下で濃縮して、４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２，２−ジメチル−ブタン酸（２．０ｇ、収率１５％）を赤色の油状物として得た。
【０３８５】
工程３：
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４，９−ジヒドロキシ−１，１２−ジヒドロ−１４Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−３，１４（４Ｈ）−ジオン（１ｇ、２．５５ｍｍｏｌ、１当量）、４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２，２−ジメチル−ブタン酸（７０７ｍｇ、３．０６ｍｍｏｌ、１．２当量）、ＨＯＢｔ（３７９ｍｇ、２．８ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＴＥＡ（５７０ｍｇ、５．６ｍｍｏｌ、７８０μＬ、２．２当量）の混合物に、ＥＤＣＩ（５３７ｍｇ、２．８０ｍｍｏｌ、１．１当量）を０℃で加えた。混合物を、１５℃で１２時間撹拌した。溶液を、Ｈ２Ｏ（４０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（５０ｍＬ）で３回抽出した。合わせた有機層を、塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムを乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、石油エーテル（５０ｍＬ）で洗浄し、濾過して、（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２，２−ジメチルブタノエート（６００ｍｇ、３９％）を黄色の固体として得た。
【０３８６】
工程４：
ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ、４Ｍ）中の（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２，２−ジメチルブタノエート（６００ｍｇ、９９１μｍｏｌ、１当量）の溶液を、１５℃で２時間攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、残渣を得た。残渣を、酢酸エチル（６０ｍＬ）で洗浄し、濾過して、（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル  ４−アミノ−２，２−ジメチルブタノエートヒドロクロリド（３００ｍｇ、４６％）を黄色の固体として得た。
【０３８７】
工程５：
ＤＣＭ（３ｍＬ）中の（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル４−アミノ−２，２−ジメチルブタノエートヒドロクロリド（５０ｍｇ、９２μｍｏｌ、１当量）、（２Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−４−（ｔｒｉｔイルアミンｏ）ブタン酸（５３ｍｇ、１１１μｍｏｌ、１．２当量）、ＤＭＡＰ（５．６ｍｇ、４６μｍｏｌ、０．５当量）、ＤＣＣ（２８．６ｍｇ、１３８μｍｏｌ、２７．９９μＬ、１．５当量）の混合物を、１５℃で４時間攪拌した。反応混合物を、通常の圧力下で濃縮し、残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｌｕｎａ  Ｃ１８  １００＊３０  ５μ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：５０％〜７５％、１２分）により精製して、（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル４−（（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−４−オキソ−４−（トリチルアミノ）ブタンアミド）−２，２−ジメチルブタノエートトリフルオロアセテート（５ｍｇ、収率５％）を黄色の固体として得た。
【０３８８】
工程６：
ＴＦＡ（０．５ｍＬ）およびＤＣＭ（２．５ｍＬ）中の（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル４−（（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−４−オキソ−４−（トリチルアミノ）ブタンアミド）−２，２−ジメチルブタノエートトリフルオロアセテート（５ｍｇ、５μｍｏｌ、１当量）の混合物を、１５℃で５時間攪拌した。混合物に、ＴＦＡ（１ｍＬ）およびＤＣＭ（１ｍＬ）をさらに加え、次に、混合物を、１５℃で１２時間攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、残渣を、石油エーテル（１０ｍＬ）で洗浄して、（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル４−（（Ｒ）−２，４−ジアミノ−４−オキソブタンアミド）−２，２−ジメチルブタノエートトリフルオロアセテート（５ｍｇ）を黄色の固体として得た。
【０３８９】
工程７：
ＤＣＭ（３ｍＬ）中の（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル４−（（Ｒ）−２，４−ジアミノ−４−オキソブタンアミド）−２，２−ジメチルブタノエートトリフルオロアセテート（５ｍｇ、６．８μｍｏｌ、１当量）の溶液に、オクタノイルクロリド（１．１ｍｇ、６．８μｍｏｌ、１．１６μＬ、１当量）およびＴＥＡ（６９０μｇ、６．８１μｍｏｌ、０．９５μＬ、１当量）を０℃で加えた。混合物を、０℃で１．５時間撹拌した。反応混合液を減圧下で濃縮した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｌｕｎａ  Ｃ１８  １００＊３０  ５μ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：２５％〜５５％、１２分）により精製して、（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル４−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）−２，２−ジメチルブタノエート・１／３ＴＦＡ（２ｍｇ）を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）：７４６．４
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．２０（ｄ、１Ｈ）、８．０６（ｓ、１Ｈ）、７．９０（ｄ、１Ｈ）、７．８３（ｔ、１Ｈ）、７．６５（ｄｄ、１Ｈ）、７．３１（ｓ、１Ｈ）、７．２４（ｓ、１Ｈ）、６．８２（ｓ、１Ｈ）、６．５１（ｓ、１Ｈ）、５．４２（ｓ、２Ｈ）、５．３２（ｓ、２Ｈ）、４．４９（ｑ、１Ｈ）、３．２２〜３．１２（ｍ、４Ｈ）、２．３８〜２．３２（ｍ、２Ｈ）、２．１２〜２．０３（ｍ、２Ｈ）、１．９２〜１．７６（ｍ、４Ｈ）、１．４２（ｄｄ、２Ｈ）、１．３４〜１．３１（ｍ、６Ｈ）、１．２７（ｔ、３Ｈ）、１．２５〜１．１５（ｍ、８Ｈ）、０．９３〜０．７７（ｍ、６Ｈ）。
【０３９０】
【化５９】
2021535092.tif 000079
実施例４１：（Ｒ）−４−（４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）ベンジル（４−ブロモベンジル）（メチル）カルバメート
この化合物を、実施例２６に関して記載した実験手法に従い合成してもよい。
【０３９１】
【化６０】
2021535092.tif 000080
実施例４２：メチル（Ｓ）−４−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）ペンタノエート
ＤＣＭ（２０ｍＬ）中のメチル（４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−２，４−ジアミノ−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ペンタノエートヒドロクロリド（実施例２１の工程５において合成、１ｇ、３．５５ｍｍｏｌ、１当量）およびＴＥＡ（７９０ｍｇ、７．８１ｍｍｏｌ、１．０９ｍＬ、２．２当量）の混合物を、０℃まで冷却し、オクタノイルクロリド（６９３ｍｇ、４．２６ｍｍｏｌ、７２７μＬ、１．２当量）を加えた。次に、混合物を２５℃まで温め、１２時間攪拌した。反応混合液をろ過し、減圧下で濃縮した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ｌｕｎａ  Ｃ１８  ２５０＊５０ｍｍ＊１０μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：１５％〜４５％、２０分）により精製して、メチル（Ｓ）−４−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）ペンタノエート（３３０ｍｇ、２５％）を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：３７２．２。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．８６（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．５３（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．２３（ｓ、１Ｈ）、６．８４（ｓ、１Ｈ）、４．４４（ｑ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．７２〜３．６８（ｍ、１Ｈ）、３．５５（ｓ、３Ｈ）、２．４６〜２．３７（ｍ、１Ｈ）、２．３５〜２．１４（ｍ、３Ｈ）、２．０６（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、２Ｈ）、１．６４〜１．５２（ｍ、２Ｈ）、１．４５〜１．４１（ｍ、２Ｈ）、１．２７〜１．１９（ｍ、８Ｈ）、０．９９（ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、３Ｈ）、０．８７〜０．７９（ｍ、３Ｈ）。
【０３９２】
【化６１】
2021535092.tif 000081
実施例４３：メチル（Ｒ）−４−（４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）ブタノエート
工程１：
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタン酸（５００ｍｇ、２．１５ｍｍｏｌ、１当量）、ＨＯＢｔ（３２０ｍｇ、２．３７ｍｍｏｌ、１．１当量）、ＴＥＡ（４７９ｍｇ、４．７４ｍｍｏｌ、６５９μＬ、２．２当量）の混合物を、０℃まで冷却した。ＥＤＣＩ（４５４ｍｇ、２．３７ｍｍｏｌ、１．１当量）およびメチル４−アミノブタノエート（３９７ｍｇ、２．５８ｍｍｏｌ、１．２当量、ＨＣｌ）を加えた。反応混合物を、０℃で１５分間攪拌し、２５℃で１２時間攪拌した。反応混合液をろ過し、減圧下で濃縮した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ｌｕｎａ  Ｃ１８  ２５０＊５０ｍｍ＊１０μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：５％〜３５％、２０分）により精製して、メチル４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ブタノエート（４６０ｍｇ、６４％）を白色の固体として得た。
【０３９３】
工程２：
ＨＣｌ−ジオキサン（２Ｍ、６９４μＬ、１当量）中のメチル４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ブタノエート（４６０ｍｇ、１．３９ｍｍｏｌ、１当量）を、２５℃で１時間攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、メチル４−［［（２Ｒ）−２，４−ジアミノ−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ブタノエートヒドロクロリド（４２０ｍｇ）を白色の固体として得て、それを、さらに精製することなく、次の工程で使用した。
【０３９４】
工程３：
ＤＣＭ（５ｍＬ）中のメチル４−［［（２Ｒ）−２，４−ジアミノ−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ブタノエートヒドロクロリド（４２０ｍｇ、１．５７ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＴＥＡ（３４９ｍｇ、３．４５ｍｍｏｌ、４８０μＬ、２．２当量）を加えた。反応混合物を０℃まで冷却し、オクタノイルクロリド（３０６ｍｇ、１．８８ｍｍｏｌ、３２１μＬ、１．２当量）を加えた。混合物を、２５℃で１２時間、Ｎ２下で攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｌｕｎａ  Ｃ１８  １００＊３０ｍｍ  ５μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：１５％〜４０％、１２分）により精製した。メチル（Ｒ）−４−（４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）ブタノエート（２５４ｍｇ、４５％）を、白色の固体として得た。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：３５８．２。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．８９（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．７４（ｔ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．２４（ｓ、１Ｈ）、６．８３（ｓ、１Ｈ）、４．４４（ｑ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、１Ｈ）、３．５５（ｓ、３Ｈ）、３．０２（ｑ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．４７〜２．３９（ｍ、１Ｈ）、２．３５〜２．２７（ｍ、１Ｈ）、２．２６（ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．０６（ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、１．６０（ｐ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、２Ｈ）、１．４８〜１．４０（ｍ、２Ｈ）、１．２７〜１．１４（ｍ、８Ｈ）、０．８３（ｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、３Ｈ）。
【０３９５】
【化６２】
2021535092.tif 000082
実施例４４：（Ｒ）−Ｎ１−（４−（メトキシメチル）フェニル）−２−オクタナミドスクシンアミド
工程１：
ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）中の（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタン酸（１．０２ｇ、４．３７ｍｍｏｌ、１．２当量）、４−（メトキシメチル）アニリン（５００ｍｇ、３．６４ｍｍｏｌ、１当量）の混合物を、０℃まで冷却した。プロパンホスホン酸無水物（３．４８ｇ、５．４７ｍｍｏｌ、５．４７ｍＬ、純度５０％、１．５当量）およびＤＩＰＥＡ（９４２．１５ｍｇ、７．２９ｍｍｏｌ、１．２７ｍＬ、２当量）を加えた。反応混合物を、０℃で１５分間、２５℃で１２時間攪拌した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮し、残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ｌｕｎａ  Ｃ１８  ２５０＊５０ｍｍ＊１０μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：１０％〜３５％、２０分）により精製して、ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（１Ｒ）−３−アミノ−１−［［４−（メトキシメチル）フェニル］カルバモイル］−３−オキソ−プロピル］カルバメート（２１０ｍｇ、１６％）を黄色の固体として得た。
【０３９６】
工程２：
ＨＣｌ／ジオキサン（２Ｍ、２９９μＬ、１当量）中のＴｅｒｔ−ブチルＮ−［（１Ｒ）−３−アミノ−１−［［４−（メトキシメチル）フェニル］カルバモイル］−３−オキソ−プロピル］カルバメート（２１０ｍｇ、５９８μｍｏｌ、１当量）を、２５℃で１時間攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、（２Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−［４−（メトキシメチル）フェニル］ブタンジアミドヒドロクロリド（１３０ｍｇ、７６％）を白色の固体として得て、それを、さらに精製することなく次の工程で使用した。
【０３９７】
工程３：
ＤＣＭ（５ｍＬ）中の（２Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−［４−（メトキシメチル）フェニル］ブタンジアミドヒドロクロリド（２１０ｍｇ、７３０μｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＴＥＡ（１６２ｍｇ、１．６１ｍｍｏｌ、２２３μＬ、２．２当量）を加えた。次に、反応混合物を、０℃まで冷却し、オクタノイルクロリド（１４２ｍｇ、８７６μｍｏｌ、１４９μＬ、１．２当量）を加えた。混合物を、２５℃で１２時間、Ｎ２下で攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｌｕｎａ  Ｃ１８  １００＊３０ｍｍ  ５μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：２０％〜３５％、１２分）により精製した。化合物（Ｒ）−Ｎ１−（４−（メトキシメチル）フェニル）−２−オクタナミドスクシンアミド（１３０ｍｇ、４０％）を、白色の固体として得た。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：３７８．２。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．５０（ｄ、Ｊ＝７．７Ｈｚ、２Ｈ）、７．３２（ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、２Ｈ）、４．５２〜４．３９（ｍ、３Ｈ）、３．４１（ｓ、３Ｈ）、３．３５〜３．１８（ｍ、１Ｈ）、２．９４〜２．８０（ｍ、１Ｈ）、２．２８（ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、２Ｈ）、１．６６〜１．５７（ｍ、２Ｈ）、１．３３〜１．２６（ｍ、８Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）。
【０３９８】
【化６３】
2021535092.tif 000083
実施例４５：メチル（（Ｓ）−２−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）プロピル）カルバメート
工程１：
ＤＭＦ（２ｍＬ）中の（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタン酸（５０ｍｇ、１９４μｍｏｌ、１当量）、ＥＤＣＩ（４１ｍｇ、２１３μｍｏｌ、１．１当量）、ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（２Ｓ）−２−アミノプロピル］カルバメート（４１ｍｇ、２３２μｍｏｌ、３６μＬ、１．２当量）の混合物を、０℃まで冷却した。ＨＯＢｔ（２９ｍｇ、２１３μｍｏｌ、１．１当量）およびＴＥＡ（４３ｍｇ、４２６μｍｏｌ、５９μＬ、２．２当量）を、混合物に加え、反応混合物を、０℃で１５分間攪拌し、２５℃で１２時間攪拌した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮し、残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｌｕｎａ  Ｃ１８  １００＊３０ｍｍ  ５μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：２５％〜５５％、１２分）により精製して、ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］プロピル］カルバメート（４０ｍｇ、５０％）を白色の固体として得た。
【０３９９】
工程２：
ＨＣｌ／ジオキサン（２Ｍ、８．００ｍＬ、１６６当量）中のｔｅｒｔ−ブチル  Ｎ−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］プロピル］カルバメート（４０ｍｇ、９６μｍｏｌ、１当量）の溶液を、２５℃で１時間攪拌した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、（２Ｒ）−Ｎ−［（１Ｓ）−２−アミノ−１−メチル−エチル］−２−（オクタノイルアミノ）ブタンジアミドヒドロクロリド（２０ｍｇ、５９％）を白色の固体として得て、それを、さらに精製することなく次の工程で使用した。
【０４００】
工程３：
ＤＣＭ（２ｍＬ）中の（２Ｒ）−Ｎ−［（１Ｓ）−２−アミノ−１−メチル−エチル］−２−（オクタノイルアミノ）ブタンジアミドヒドロクロリド（１５ｍｇ、４３μｍｏｌ、１当量）およびＴＥＡ（８．７ｍｇ、８６μｍｏｌ、１１．９  μＬ、２当量）の混合物を、０℃まで冷却した。カルボノクロリジン酸メチル（３．６ｍｇ、３８μｍｏｌ、２．９８μＬ、０．９当量）を加え、混合物を、２５℃で１２時間攪拌した。反応混合液をろ過し、減圧下で濃縮した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｌｕｎａ  Ｃ１８  １００＊３０ｍｍ  ５μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：１０％〜４５％、１２分）により精製して、メチル（（Ｓ）−２−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）プロピル）カルバメート（３．８ｍｇ、２３％）を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：３７３．２。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．８８（ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．６４〜７．５１（ｍ、１Ｈ）、７．２８（ｓ、１Ｈ）、７．０６〜７．００（ｍ、１Ｈ）、６．８７（ｓ、１Ｈ）、４．４８〜４．４３（ｍ、１Ｈ）、３．８１〜３．７３（ｍ、１Ｈ）、３．５４〜３．４９（ｍ、３Ｈ）、３．０２〜２．９３（ｍ、２Ｈ）、２．４６〜２．２９（ｍ、２Ｈ）、２．１４〜２．０６（ｍ、２Ｈ）、１．４９〜１．４５（ｍ、２Ｈ）、１．２６〜１．２２（ｍ、８Ｈ）、０．９７（ｄ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、３Ｈ）、０．９０〜０．８２（ｍ、３Ｈ）。
【０４０１】
【化６４】
2021535092.tif 000084
実施例４６：メチル（Ｒ）−（２−（４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）エチル）カルバメート
工程１：
ＨＣｌ／ジオキサン（３Ｍ、１４．４ｍＬ、１０当量）中の（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタン酸（１ｇ、４．３１ｍｍｏｌ、１当量）の混合物を、２５℃で１時間、Ｎ２雰囲気下で攪拌した。反応混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮し、（２Ｒ）−２，４−ジアミノ−４−オキソ−ブタン酸ヒドロクロリド（６５０ｍｇ、９０％）を、白色の固体として得て、さらに精製することなく次の工程で使用した。
【０４０２】
工程２：
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の（２Ｒ）−２，４−ジアミノ−４−オキソ−ブタン酸（１０ｇ、７５．７ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＴＥＡ（１５．３２ｇ、１５１．４ｍｍｏｌ、２１．０７ｍＬ、２当量）を加えた。次に、反応混合物を、０℃まで冷却し、オクタノイルクロリド（１８．４７ｇ、１１３．５ｍｍｏｌ、１９．３８ｍＬ、１．５当量）を加えた。混合物を、２５℃で１２時間、Ｎ２下で攪拌した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮し、残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ｌｕｎａ  Ｃ１８  ２５０ｍｍ＊１００ｍｍ＊１０μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：１５％〜４５％、２５分）により精製して、（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタン酸（１ｇ、収率５．１％）を白色の固体として得た。
【０４０３】
工程３：
ＤＭＦ（３ｍＬ）中の（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタン酸（１００ｍｇ、３８７μｍｏｌ、１当量）、ＨＯＢｔ（５８ｍｇ、４２６μｍｏｌ、１．１当量）、ＴＥＡ（８６ｍｇ、８５２μｍｏｌ、１１９μＬ、２．２当量）の混合物を、０℃まで冷却した。ＥＤＣＩ（８２ｍｇ、４２６μｍｏｌ、１．１当量）およびｔｅｒｔ−ブチルＮ−（２−アミノエチル）カルバメート（８１ｍｇ、５０３μｍｏｌ、７９μＬ、１．３当量）を加えた。反応混合物を、０℃で１５分間撹拌し、次に、２５℃で１２時間温めた。反応混合物を、Ｈ２Ｏ（５ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）で４回抽出した。合わせた有機層を、塩水（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［２−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］エチル］カルバメート（６０ｍｇ、３９％）を白色の固体として得た。
【０４０４】
工程４：
ＨＣｌ／ジオキサン（３Ｍ、５０μＬ、１当量）中のｔｅｒｔ−ブチルＮ−［２−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］エチル］カルバメート（６０ｍｇ、１５０μｍｏｌ、１当量）の混合物を、２５℃で１時間、Ｎ２雰囲気下で攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、（２Ｒ）−Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（オクタノイルアミノ）ブタンジアミドヒドロクロリド（３０ｍｇ、５９％）を白色の固体として得た。
【０４０５】
工程５：
ＤＣＭ（３ｍＬ）中の（２Ｒ）−Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（オクタノイルアミノ）ブタンジアミドヒドロクロリド（５０ｍｇ、１６６μｍｏｌ、１当量）およびＴＥＡ（３４ｍｇ、３３３μｍｏｌ、４６μＬ、２当量）の混合物を、０℃まで冷却した。カルボノクロリジン酸メチル（２４ｍｇ、２５０μｍｏｌ、１９μＬ、１．５当量）を、混合物に加えた。次に、混合物を２５℃まで温め、１２時間攪拌した。反応混合液をろ過し、減圧下で濃縮した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｌｕｎａ  Ｃ１８  １００＊３０ｍｍ  ５μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：２０％〜３５％、４分）により精製して、メチル（Ｒ）−（２−（４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）エチル）カルバメート（９ｍｇ、１３％）を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：３５９．２。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．８９（ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．８３〜７．７７（ｍ、１Ｈ）、７．２５（ｓ、１Ｈ）、７．０７〜７．０３（ｍ、１Ｈ）、６．８５（ｓ、１Ｈ）、４．４４（ｑ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、１Ｈ）、３．４９（ｓ、３Ｈ）、３．１３〜２．９５（ｍ、４Ｈ）、２．４８〜２．４０（ｍ、１Ｈ）、２．３１（ｄｄ、Ｊ＝１５．１、７．８Ｈｚ、１Ｈ）、２．０７（ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、１．４８〜１．４０（ｍ、２Ｈ）、１．２８〜１．１６（ｍ、８Ｈ）、０．８７〜０．８０（ｍ、３Ｈ）。
【０４０６】
【化６５】
2021535092.tif 000085
実施例４７：４−ブロモフェニル（Ｓ）−４−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）ペンタノエート
工程１：
ＭｅＯＨ（２ｍＬ）およびＨ２Ｏ（１ｍＬ）中のメチル（４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ペンタノエート（１５０ｍｇ、４０４μｍｏｌ、１当量）の混合物に、ＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏ（３４ｍｇ、８０９μｍｏｌ、２当量）を加え、混合物を、２５℃で５時間、Ｎ２下で攪拌した。反応混合物を、約ｐＨ４に２Ｎ  ＨＣｌで調節し、固形生成物を、濾過により集めて、（４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ペンタン酸（１１０ｍｇ、７６％）を得た。
【０４０７】
１．２５５分でのＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）３５８．２。
【０４０８】
工程２：
ＤＭＦ（２ｍＬ）中の（４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ペンタン酸（５０ｍｇ、１４０μｍｏｌ、１当量）、ＨＯＢｔ（２１ｍｇ、１５４μｍｏｌ、１．１当量）および４−ブロモフェノール（２９ｍｇ、１６８μｍｏｌ、１．２当量）の混合物を、０℃まで冷却した。ＥＤＣＩ（２９．５ｍｇ、１５４μｍｏｌ、１．１当量）およびＴＥＡ（３１ｍｇ、３０８μｍｏｌ、４２．８μＬ、２．２当量）を加え、混合物を、０℃で１５分間、次に、２５℃で１２時間攪拌した。混合物を濾過し、減圧下で濃縮し、残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｌｕｎａ  Ｃ１８  １００＊３０  ５μ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：３５％〜６０％、１２分）により精製して、（４−ブロモフェニル）（４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ペンタノエート（１０ｍｇ、１４％）を白色の固体として得た。
【０４０９】
ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）５１４．１。
【０４１０】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．８８（ｄ、１Ｈ）、７．５８（ｄｄ、３Ｈ）、７．２４（ｓ、１Ｈ）、７．１３〜７．０６（ｍ、２Ｈ）、６．８４（ｓ、１Ｈ）、４．４７（ｑ、１Ｈ）、３．８５〜３．７７（ｍ、１Ｈ）、２．５４（ｄｄ、１Ｈ）、２．４４（ｄ、１Ｈ）、２．３２（ｄｄ、１Ｈ）、２．０７（ｔ、２Ｈ）、１．７９〜１．６７（ｍ、１Ｈ）、１．７１〜１．５９（ｍ、１Ｈ）、１．４８〜１．４０（ｍ、２Ｈ）、１．２１（ｓ、８Ｈ）、１．０４（ｄ、３Ｈ）、０．８３（ｑ、３Ｈ）。
【０４１１】
【化６６】
2021535092.tif 000086
実施例４８：４−ブロモフェニル（（Ｓ）−２−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）プロピル）カルバメート
工程１：
ＤＣＭ（３０ｍＬ）中のベンジル（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタノエート（３．００ｇ、９．３１ｍｍｏｌ、１当量）の混合物に、ＴＦＡ（１０．６ｇ、９３ｍｍｏｌ、６．８９ｍＬ、１０当量）を加え、混合物を、２５℃で０．５時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をＤＣＭ（３０ｍＬ）に０℃で溶解した。ＴＥＡ（３．７７ｇ、３７．２ｍｍｏｌ、５．１８ｍＬ、４当量）およびＤＭＡＰ（１１４ｍｇ、９３１μｍｏｌ、０．１当量）を、続いて、オクタノイルクロリド（１．８２ｇ、１１．２ｍｍｏｌ、１．９１ｍＬ、１．２当量）を加えた。混合物を、２５℃で１１．５時間攪拌し、そして次に、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル／酢酸エチル、５／１〜１：１）により精製して、ベンジル（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノエート（１．９ｇ、５３％）を白色の固体として得た。
【０４１２】
工程２：
ＥｔＯＨ（２０ｍＬ）中のベンジル（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノエート（１．９ｇ、５．４５ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、１０％Ｐｄ／Ｃ（１ｇ）をＮ２下で加えた。懸濁液を、真空下で脱気し、Ｈ２で数回パージした。混合物を、Ｈ２下、２５℃、１５ｐｓｉで２時間攪拌した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタン酸（１．３ｇ、収率９２％）を白色の固体として得た。
【０４１３】
工程３：
ＤＭＦ（３ｍＬ）中の（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタン酸（０．２ｇ、７７４μｍｏｌ、１当量）、ＨＯＢｔ（１１５ｍｇ、８５２μｍｏｌ、１．１当量）およびＴＥＡ（１７２ｍｇ、１．７０ｍｍｏｌ、２３７μＬ、２．２当量）の混合物を、０℃で１時間攪拌した。ＥＤＣＩ（１６３ｍｇ、８５２μｍｏｌ、１．１当量）、続いて、ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（２Ｓ）−２−アミノプロピル］カルバメート（１６２ｍｇ、９２９μｍｏｌ、１．２当量）を加え、混合物を２５℃で１１時間攪拌した。反応混合物を、酢酸エチル（９ｍｌ）とＨ２Ｏ（９ｍｌ）の間で分配した。有機層を分離し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、分取ＴＬＣ（ＳｉＯ２、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、１０：１）により精製して、ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］プロピル］カルバメート（０．１４ｇ、３９％）を白色の固体として得た。
【０４１４】
工程４：
ＨＣｌ／ジオキサン（３ｍＬ、４Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］プロピル］カルバメート（０．０５ｇ、１２１μｍｏｌ、１当量）の混合物を、２５℃で０．５時間攪拌した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、（２Ｒ）−Ｎ−［（１Ｓ）−２−アミノ−１−メチル−エチル］−２−（オクタノイルアミノ）ブタンジアミドヒドロクロリドを白色の固体として得た。
【０４１５】
工程５：
ＤＣＭ（２００ｍＬ）中の（２Ｒ）−Ｎ−［（１Ｓ）−２−アミノ−１−メチル−エチル］−２−（オクタノイルアミノ）ブタンジアミドヒドロクロリド（０．０５ｇ、１４３μｍｏｌ、１当量）およびＴＥＡ（２９ｍｇ、２８５μｍｏｌ、４０μＬ、２当量）の混合物に、（４−ブロモフェニル）カルボノクロリデート（４０ｍｇ、１７１μｍｏｌ、２４μＬ、１．２当量）を０℃Ｎ２下で一度に加えた。混合物を、２５℃で１２時間攪拌し、次に、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（［水（０．１％ＴＦＡ）−アセトニトリル］）により精製して、（４−ブロモフェニル）Ｎ−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］プロピル］カルバメート（２．４ｍｇ、３．３％）を白色の固体として得た。
【０４１６】
ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）：５１３．１および５１５．１。
【０４１７】
【化６７】
2021535092.tif 000087
実施例４９：（Ｓ）−４，１１−ジエチル−９−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル（Ｓ）−４−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）ペンタノエート    
工程１：
ＤＣＭ（１５ｍＬ）中の（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４，９−ジヒドロキシ−１，１２−ジヒドロ−１４Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−３，１４（４Ｈ）−ジオン（２．５ｇ、６．３７ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、Ｂｏｃ２Ｏ（２．０９ｇ、９．５６ｍｍｏｌ、２．２０ｍＬ、１．５当量）およびピリジン（１．０１ｇ、１２．７ｍｍｏｌ、１．０３ｍＬ、２当量）を２０℃で加えた。混合物を、２０℃で１２時間攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル）カルボネート（２．７ｇ、８６％）を白色の固体として得た。
【０４１８】
工程２：
トルエン（２０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−（１−オキソプロパン−２−イル）カルバメート（４．０ｇ、２３ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、メチル（トリフェニルホスホラニリデン）アセテート（８．４９ｇ、２５ｍｍｏｌ、１．１当量）を０℃で加えた。混合物を、２０℃で１２時間攪拌した。反応混合液をろ過し、減圧下で濃縮した。残渣を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル／酢酸エチル＝１０：１〜１：１）により精製して、メチル（Ｅ，４Ｓ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペンタ−２−エノエート（４．５ｇ、８５％）を無色の油状物として得た。
【０４１９】
工程３：
ＴＨＦ（１ｍＬ）およびＨ２Ｏ（１ｍＬ）中のメチル（Ｅ，４Ｓ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペンタ−２−エノエート（５００ｍｇ、２．１８ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏ（２７５ｍｇ、６．５４ｍｍｏｌ、３当量）を０℃で加えた。混合物を、２０℃で１２時間攪拌した。反応混合物を、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル１０ｍＬで抽出した。合わせた水層を、ＨＣｌ（１Ｍ、Ｈ２Ｏ）によりｐＨ＝３に調節し、酢酸エチル（２０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を、塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、（Ｅ，４Ｓ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペンタ−２−エン酸（４６０ｍｇ）を白色の固体として得た。
【０４２０】
工程４：
ＤＣＭ（３ｍＬ）中の（Ｅ，４Ｓ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペンタ−２−エン酸（３００ｍｇ、１．３９ｍｍｏｌ、１当量）、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル）カルボネート（１．０３ｇ、２．０９ｍｍｏｌ、１．５当量）、ＤＣＣ（４３１ｍｇ、２．０９ｍｍｏｌ、４２２．９μＬ、１．５当量）、ＤＭＡＰ（８５．１ｍｇ、６９７μｍｏｌ、０．５当量）の混合物を、２０℃で１２時間攪拌した。反応混合液をろ過し、減圧下で濃縮した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８  ２００＊４０ｍｍ＊１０μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：６０％〜８０％、１０分）により精製して、（Ｓ）−９−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）オキシ）−４，１１−ジエチル−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル（Ｓ，Ｅ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ペンタ−２−エノエート（４５０ｍｇ、４７％）を黄色の固体として得た。
【０４２１】
工程５：
ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中の（Ｓ）−９−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）オキシ）−４，１１−ジエチル−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル（Ｓ，Ｅ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ペンタ−２−エノエート（４５０ｍｇ、６５２μｍｏｌ、１当量）の溶液に、Ｐｄ／Ｃ（２００ｍｇ、純度１０％）を２０℃で加えた。懸濁液を脱気し、Ｈ２で３回パージした。混合物を、Ｈ２（１５Ｐｓｉ）、２０℃で１４時間攪拌した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、（Ｓ）−９−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）オキシ）−４，１１−ジエチル−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル（Ｓ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ペンタノエート（３００ｍｇ、６７％）を黄色の固体として得て、それを、さらに精製することなく使用した。
【０４２２】
工程６：
ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ、４Ｍ）中の（Ｓ）−９−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）オキシ）−４，１１−ジエチル−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル（Ｓ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ペンタノエート（３００ｍｇ、４３４μｍｏｌ、１当量）の溶液を、２０℃で８時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、（Ｓ）−４，１１−ジエチル−９−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル（Ｓ）−４−アミノペンタノエートヒドロクロリド（１００ｍｇ、４４％）を黄色の固体として得て、それをさらに精製しなかった。
【０４２３】
工程７：
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の（Ｓ）−４，１１−ジエチル−９−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル（Ｓ）−４−アミノペンタノエートヒドロクロリド（５０ｍｇ、１０２μｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＨＯＢｔ（１５．１ｍｇ、１１９μｍｏｌ、１．１当量）、（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタン酸（２６．３ｍｇ、１０２μｍｏｌ、１当量）、ＴＥＡ（２２．６ｍｇ、２２４μｍｏｌ、３１．２μＬ、２．２当量）およびＥＤＣＩ（２１．５ｍｇ、１１２μｍｏｌ、１．１当量）を０℃で加えた。混合物を、１５℃で１２時間攪拌した。反応混合物を濾過し、濃縮し、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ−Ｍｉｃｒｏ  ＵｎｉＳｉｌ  ５−１００  Ｃ１８  ＵＬＴＲＡ  １００＊２５０ｍｍ  ５μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：３８％〜５６％、１０分）により精製して、（Ｓ）−４，１１−ジエチル−９−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル（Ｓ）−４−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）ペンタノエート（２４ｍｇ、３０％）を黄色の固体として得た。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：７３２．３。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．３１（ｓ、１Ｈ）、８．０５〜７．９７（ｍ、１Ｈ）、７．８９（ｄｄ、１Ｈ）、７．６２〜７．５５（ｍ、１Ｈ）、７．４２〜７．３６（ｍ、２Ｈ）、７．２８（ｄ、１Ｈ）、６．９６〜６．９３（ｍ、１Ｈ）、６．８５（ｄ、１Ｈ）、５．４５（ｓ、２Ｈ）、５．２８（ｓ、２Ｈ）、４．５８〜４．４１（ｍ、１Ｈ）、３．８７〜３．７０（ｍ、１Ｈ）、３．１３〜３．０２（ｍ、２Ｈ）、２．６７〜２．６３（ｍ、２Ｈ）、２．３９〜２．２８（ｍ、２Ｈ）、２．１６〜２．０１（ｍ、４Ｈ）、１．６６〜１．５５（ｍ、２Ｈ）、１．４６〜１．４１（ｍ、２Ｈ）、１．２７（ｔ、３Ｈ）、１．２４〜１．１１（ｍ、８Ｈ）、１．００（ｄｄ、３Ｈ）、０．９３〜０．８５（ｍ、３Ｈ）、０．８５〜０．７４（ｍ、３Ｈ）。
【０４２４】
【化６８】
2021535092.tif 000088
実施例５０：メチル（トリデシルスルホニル）−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−アラニネート
トリデカン−１−スルホニルクロリド（１．５当量）を、無水ＤＭＦに溶解し、続いて、トリエチルアミン（２．５当量）を加えた。Ｄ−Ａｓｎ−Ｌ−Ａｌａ−ＯＭｅのＨＣｌ塩（実施例１の工程２において合成、１当量）を、反応が、ＬＣＭＳによりモニターして、完了するまで加える。生成物を、逆相クロマトグラフィーにより精製し、凍結乾燥させて、表題化合物を得た。
【０４２５】
【化６９】
2021535092.tif 000089
実施例５１：メチル（ヘプチルスルホニル）−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−アラニネート
この化合物を、実施例５０に関して記載した実験手法に従いヘプタン−１−スルホニルクロリドを用いて合成してもよい。
【０４２６】
【化７０】
2021535092.tif 000090
実施例５２：メチル（（ヘキシルオキシ）カルボニル）−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−アラニネート
ヘキシルクロロホルメート（０．０３５ｇ、０．２２ｍｍｏｌ、１．１当量）を無水ＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解し、続いて、トリエチルアミン（０．０３ｍＬ、０．２２ｍｍｏｌ、１．１当量）を加えた。Ｄ−Ａｓｎ−Ｌ−Ａｌａ−ＯＭｅのＨＣｌ塩（実施例１の工程２において合成、０．０５ｇ、０．２ｍｍｏｌ、１当量）を加え、反応物を、一晩攪拌した。水を加えて、溶液を清澄化した後、生成物を、逆相クロマトグラフィーで精製し、凍結乾燥させて、白色の固体（２７．６ｍｇ、４０％）を得た。ＬＣＭＳ（Ｍ−Ｈ）−、３４４．２。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．１３（ｄ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．２３（ｓ、１Ｈ）、７．１１（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．８５（ｓ、１Ｈ）、４．３４〜４．２８（ｍ、１Ｈ）、４．２３（ｐ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．９１（ｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、２Ｈ）、３．６０（ｓ、３Ｈ）、２．４２（ｄｄ、Ｊ＝１５．２、５．２Ｈｚ、１Ｈ）、２．３３（ｄｄ、Ｊ＝１５．１、８．５Ｈｚ、１Ｈ）、１．５５〜１．４５（ｍ、２Ｈ）、１．２８〜１．２３（ｍ、６Ｈ）、１．２４（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）、０．８９〜０．８１（ｍ、３Ｈ）。
【０４２７】
【化７１】
2021535092.tif 000091
実施例５３：メチル（ヘキシルカルバモイル）−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−アラニネート
ヘキシルイソシアネート（０．０２８ｇ、０．２２ｍｍｏｌ、１．１当量）を、無水ＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解し、続いて、トリエチルアミン（０．０３ｍＬ、０．２２ｍｍｏｌ、１．１当量）を加えた。Ｄ−Ａｓｎ−Ｌ−Ａｌａ−ＯＭｅのＨＣｌ塩（実施例１の工程２において合成、０．０５ｇ、０．２ｍｍｏｌ、１当量）を加え、反応物を、一晩攪拌した。水を加えて、溶液を清澄化した後、生成物を、逆相クロマトグラフィーで精製し、凍結乾燥させて、白色の固体（３６．２ｍｇ、５３％）を得た。ＬＣＭＳ（Ｍ−Ｈ）−、３４３．２。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．０９（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．２８（ｓ、１Ｈ）、６．８３（ｓ、１Ｈ）、６．１８（ｔ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、１Ｈ）、６．０４（ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ、１Ｈ）、４．３９（ｄｔ、Ｊ＝８．４、６．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．２３（ｐ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．６０（ｓ、３Ｈ）、３．０１〜２．８８（ｍ、２Ｈ）、２．４２〜２．２９（ｍ、２Ｈ）、１．３２（ｔ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、２Ｈ）、１．３０〜１．１８（ｍ、９Ｈ）、０．８８〜０．８０（ｍ、３Ｈ）。
【０４２８】
【化７２】
2021535092.tif 000092
実施例５４：メチルオクタノイル−Ｄ−ヒスチジル−Ｌ−アラニネート
工程１：
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の（２Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン酸（５００ｍｇ、１．９６ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＨＯＢｔ（３１８ｍｇ、２．３５ｍｍｏｌ、１．２当量）およびＴＥＡ（６３４ｍｇ、６．２７ｍｍｏｌ、８７２μＬ、３．２当量）を加えた。次に、ＥＤＣＩ（４５１ｍｇ、２．３５ｍｍｏｌ、１．２当量）およびメチル（２Ｓ）−２−アミノプロパノエートヒドロクロリド（３０１ｍｇ、２．１５ｍｍｏｌ、１．１当量）を、混合物に０℃で加えた。混合物を、２５℃で１２時間撹拌し、次に、Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で３回抽出した。合わせた有機層を塩水（２０ｍＬ）で３回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて、濾過し、濃縮して、メチル（２Ｓ）−２−［［（２Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパノイル］アミノ］プロパノエート（３００ｍｇ）を無色の油状物として得た。
【０４２９】
工程２：
メチル（２Ｓ）−２−［［（２Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパノイル］アミノ］プロパノエート（１４０ｍｇ、４１１μｍｏｌ、１当量）をＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ、４Ｍ）に溶解し、混合物を２５℃で５時間撹拌した。混合物を濃縮して、メチル（２Ｓ）−２−［［（２Ｒ）−２−アミノ−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパノイル］アミノ］プロパノエートヒドロクロリド（１５０ｍｇ）を白色の固体として得た。
【０４３０】
工程３：
ＤＣＭ（５ｍＬ）中のメチル（２Ｓ）−２−［［（２Ｒ）−２−アミノ−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパノイル］アミノ］プロパノエートヒドロクロリド（９０ｍｇ、３２５μｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＴＥＡ（１３２ｍｇ、１．３０ｍｍｏｌ、１８１μＬ、４当量）およびオクタノイルクロリド（５８ｍｇ、３５８μｍｏｌ、６１μＬ、１．１当量）を０℃で加えた。混合物を、２５℃で１２時間攪拌し、次に、濃縮した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｌｕｎａ  Ｃ１８  １００＊３０  ５μ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−アセトニトリル］；Ｂ％：１０％〜３５％、１２分）により精製して、メチル（２Ｓ）−２−［［（２Ｒ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−（オクタノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］プロパノエートトリフルオロアセテート（１５ｍｇ、１２％）を白色の固体として得た。
【０４３１】
ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）：３６７．２
【化７３】
2021535092.tif 000093
実施例５５：（Ｒ）−Ｎ１−（２−（５−フルオロ−２，４−ジオキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−１−カルボキサミド）エチル）−２−オクタナミドスクシンアミド
工程１
ピリジン（１５ｍＬ）中の５−フルオロ−１Ｈ−ピリミジン−２，４−ジオン（１．００ｇ、７．６９ｍｍｏｌ、１当量）の溶液を、ＴＨＦ（１５ｍＬ）中のビス（トリクロロメチル）カルボネート（１．１４ｇ、３．８４ｍｍｏｌ、０．５当量）の溶液に０℃で滴下した。混合物を、０℃で２時間撹拌した。反応混合物を濾過し、さらに精製することなく次のステップで使用した。
【０４３２】
工程２
ＤＭＳＯ（１ｍＬ）中の（２Ｒ）−Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（オクタノイルアミノ）ブタンジアミド（１００ｍｇ、３３３μｍｏｌ、１当量）の溶液を、５−フルオロ−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−カルボニルクロリド（工程１の溶液、約０．２５６Ｍ、ＴＨＦおよびピリジン３０ｍＬ、２３．０７当量）に加えた。混合物を、１５℃で１２時間撹拌した。反応混合液をろ過し、減圧下で濃縮した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗｅｌｃｈ  Ｕｌｔｉｍａｔｅ  ＡＱ−Ｃ１８  １５０＊３０ｍｍ＊５μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：２７％〜５７％、１２分）により精製して、（Ｒ）−Ｎ１−（２−（５−フルオロ−２，４−ジオキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−１−カルボキサミド）エチル）−２−オクタナミドスクシンアミド（２５ｍｇ、１６％）を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）：４５７．３
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．２７（ｓ、１Ｈ）、９．１３（ｔ、１Ｈ）、８．３９（ｄ、１Ｈ）、７．９１〜７．８４（ｍ、２Ｈ）、７．２３（ｓ、１Ｈ）、６．８２（ｓ、１Ｈ）、４．５２〜４．４２（ｍ、１Ｈ）、３．２６〜３．１４（ｍ、２Ｈ）、２．４７〜２．４２（ｍ、１Ｈ）、２．３９〜２．２８（ｍ、１Ｈ）、２．１２〜２．０４（ｍ、２Ｈ）、１．４５（ｔ、２Ｈ）、１．３２〜１．１６（ｍ、１０Ｈ）、０．９０〜０．８２（ｍ、３Ｈ）。
【０４３３】
【化７４】
2021535092.tif 000094
実施例５６：（Ｒ）−４−（４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）ベンジル（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリミジン−４−イル）カルバメート
オクタノイル−Ｄ−アスパラギン（１当量）を、ＨＯＢｔ（１．１当量）および４−アミノベンジルアルコールで処理する。得られたアルコールを、４，４’−ジニトロフェニルカルボネート（１当量）で処理した。得られたカルボネートを、４−アミノ−５−フルオロピリミジン−２（１Ｈ）−ｏｎｅ（１当量）で処理して、表題化合物を得る。
【０４３４】
【化７５】
2021535092.tif 000095
実施例５７：４−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）ベンジル（１−（（２Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）−５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリミジン−４−イル）カルバメート    この化合物を、実施例５６に関して記載した実験手法に従い合成してもよい。
【０４３５】
【化７６】
2021535092.tif 000096
実施例５８：（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル（Ｓ）−４−（（Ｒ）−４−アミノ−２−ブチルアミド−４−オキソブタンアミド）ペンタノエート
工程１：
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の（Ｅ，４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ブタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ペンタ−２−エン酸（８７ｍｇ、２９０．６６μｍｏｌ、１当量）、（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４，９−ジヒドロキシ−１，１２−ジヒドロ−１４Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−３，１４（４Ｈ）−ジオン（９１ｍｇ、２３３μｍｏｌ、０．８当量）、ＥＤＣＩ（６１ｍｇ、３２０μｍｏｌ、１．１当量）の混合物を、脱気し、Ｎ２で３回パージし、次に、混合物を、０℃で、Ｎ２雰囲気下で攪拌した。次に、ＤＭＦ（５ｍＬ）中のＤＭＡＰ（１８ｍｇ、１４５μｍｏｌ、０．５当量）を混合物に加え、攪拌し、１５℃、Ｎ２雰囲気下で１０時間攪拌した。ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）を、１５℃で加え、Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）および混合物を、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で４回抽出した。合わせた有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル（Ｓ，Ｅ）−４−（（Ｒ）−４−アミノ−２−ブチルアミド−４−オキソブタンアミド）ペンタ−２−エノエート（１００ｍｇ、粗）を黄色の固体として得た。
【０４３６】
工程２：
ＴＨＦ（４０ｍＬ）中の（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル（Ｓ，Ｅ）−４−（（Ｒ）−４−アミノ−２−ブチルアミド−４−オキソブタンアミド）ペンタ−２−エノエート（１００ｍｇ、１４８μｍｏｌ、１当量）の混合物に、Ｐｄ／Ｃ（０．１ｇ、純度１０％）を加えた。混合物を脱気し、Ｈ２で３回パージし、次に、１５℃で２時間、１５ｐｓｉ  Ｈ２下で撹拌した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮し、残渣を、分取ＴＬＣ（ＳｉＯ２、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）により精製して、（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル（Ｓ）−４−（（Ｒ）−４−アミノ−２−ブチルアミド−４−オキソブタンアミド）ペンタノエート（２７ｍｇ、２２％）を黄色の固体として得た。
【０４３７】
ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）６７６．２。
【０４３８】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．２１（ｄ、１Ｈ）、８．０５〜７．９４（ｍ、２Ｈ）、７．７４〜７．６１（ｍ、２Ｈ）、７．３４（ｓ、１Ｈ）、７．３１（ｓ、１Ｈ）、６．８９（ｓ、１Ｈ）、６．５５（ｓ、１Ｈ）、５．４５（ｓ、２Ｈ）、５．３５（ｓ、２Ｈ）、４．６０〜４．４６（ｍ、１Ｈ）、３．９５〜３．８９（ｍ、１Ｈ）、３．１９（ｑ、２Ｈ）、２．７２〜２．６４（ｍ、２Ｈ）、２．４２（ｄｄｄ、２Ｈ）、２．１４〜２．０５（ｍ、２Ｈ）、１．９８〜１．６４（ｍ、４Ｈ）、１．５８〜１．４３（ｍ、２Ｈ）、１．３０（ｔ、３Ｈ）、１．１０（ｄ、３Ｈ）、０．９３〜０．７９（ｍ、６Ｈ）。
【０４３９】
【化７７】
2021535092.tif 000097
実施例５９：メチル（（ドデシルオキシ）カルボニル）−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−アラニネート
ドデシルクロロホルメート（０．０５４ｇ、０．２２ｍｍｏｌ、１．１当量）を、無水ＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解し、続いて、トリエチルアミン（０．０３ｍＬ、０．２２ｍｍｏｌ、１．１当量）を加えた。Ｄ−Ａｓｎ−Ｌ−Ａｌａ−ＯＭｅのＨＣｌ塩（実施例１の工程２において合成、０．０５ｇ、０．２ｍｍｏｌ、１当量）を加え、反応物を、一晩攪拌した。水およびＤＭＳＯを溶液に加え、不溶性物質を濾去後、生成物を、逆相クロマトグラフィーで精製し、凍結乾燥させて、白色の固体（２２．２ｍｇ、２６％）を得た。ＬＣＭＳ（Ｍ−Ｈ）−：４２８．３。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．１２（ｄ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．２３（ｓ、１Ｈ）、７．１１（ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ、１Ｈ）、６．８５（ｓ、１Ｈ）、４．３５〜４．２８（ｍ、１Ｈ）、４．２３（ｐ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．９０（ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）、３．５９（ｓ、３Ｈ）、２．４２（ｄｄ、Ｊ＝１５．１、５．２Ｈｚ、１Ｈ）、２．３３（ｄｄ、Ｊ＝１５．１、８．５Ｈｚ、１Ｈ）、１．５１（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、２Ｈ）、１．３０〜１．２０（ｍ、２１Ｈ）、０．８８〜０．８０（ｍ、３Ｈ）。
【０４４０】
【化７８】
2021535092.tif 000098
実施例６０：メチル（ドデシルカルバモイル）−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−アラニネート
ドデシルイソシアネート（０．０４６ｇ、０．２２ｍｍｏｌ、１．１当量）を、無水ＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解し、続いて、トリエチルアミン（０．０３ｍＬ、０．２２ｍｍｏｌ、１．１当量）を加えた。Ｄ−Ａｓｎ−Ｌ−Ａｌａ−ＯＭｅのＨＣｌ塩（実施例１の工程２において合成、０．０５ｇ、０．２ｍｍｏｌ、１当量）を加え、反応物を、一晩攪拌した。水およびＤＭＳＯを溶液に加え、不溶性物質を濾去後、生成物を、逆相クロマトグラフィーで精製し、凍結乾燥させて、白色の固体（（４７．６ｍｇ、５６％）を得た。ＬＣＭＳ（Ｍ−Ｈ）−、４２７．３。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．０８（ｄ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．２８（ｓ、１Ｈ）、６．８２（ｓ、１Ｈ）、６．１７（ｔ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、１Ｈ）、６．０４（ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ、１Ｈ）、４．３９（ｄｔ、Ｊ＝８．３、６．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．２３（ｐ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．６０（ｓ、３Ｈ）、３．００〜２．８７（ｍ、２Ｈ）、２．４１〜２．３０（ｍ、２Ｈ）、１．３２（ｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、２Ｈ）、１．２６〜１．１９（ｍ、２１Ｈ）、０．８８〜０．８０（ｍ、３Ｈ）。
【０４４１】
【化７９】
2021535092.tif 000099
実施例６１：メチル（３−（２−メトキシエトキシ）プロパノイル）−Ｄ−アスパラギニル−Ｌ−アラニネート
ＤＭＦ（２ｍＬ）中の３−（２−メトキシエトキシ）プロパン酸（８８ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ、１．５当量）、ＨＯＢｔ（少なくとも２０重量％の水を含む１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、７３ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ、１．１当量）、およびＥＤＣ．ＨＣｌ（１１３ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液に、トリエチルアミン（０．１４ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ、２．５当量）を加えた。５分間攪拌後、Ｄ−Ａｓｎ−Ｌ−Ａｌａ−ＯＭｅ  ＨＣｌ塩（１００ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ、１当量）を加え、反応物を、室温、Ｎ２下で一晩攪拌した。反応物を、少量の水で希釈し、トリエチルアミン塩を溶解し、次に、分取Ｃ１８カラムクロマトグラフィー（水中の１０％ＭｅＣＮ〜１００％ＭｅＣＮ）により精製して、表題化合物を白色の粉末（４６ｍｇ、３４％）として得た。
【０４４２】
ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｎａ＋）：３７０．４。
【０４４３】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．０１（ｄ、Ｊ＝７．７Ｈｚ、２Ｈ）、７．２４（ｓ、１Ｈ）、６．８３（ｓ、１Ｈ）、４．６２〜４．５２（ｍ、１Ｈ）、４．２３（ｐ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．６０（ｓ、３Ｈ）、３．５７（ｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、２Ｈ）、３．４９〜３．３７（ｍ、４Ｈ）、３．２１（ｓ、３Ｈ）、２．４６〜２．２５（ｍ、４Ｈ）、１．２３（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）。
【０４４４】
【化８０】
2021535092.tif 000100
実施例６２：メチル（２Ｓ）‐２‐［（２Ｒ）‐３‐カルバモイル‐２‐［６‐（ジメチルアミノ）ヘキサンアミド］プロパンアミド］プロパノエート
Ｄ−Ａｓｎ−Ｌ−Ａｌａ−ＯＭｅのＨＣｌ塩（実施例１の工程２において合成、１当量）を、ＥＤＣｌ（１．１当量）、ＨＯＢｔ（１．１当量）、および６−（ジメチルアミノ）ヘキサン酸（１．１当量）で処理して、表題化合物を得る。
【０４４５】
【化８１】
2021535092.tif 000101
実施例６３：４−ブロモフェニル（Ｓ）−４−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）−２−メチルブタノエート
化合物（Ｓ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−メチルブタン酸を、ＥＤＣｌ（１．１当量）、ＨＯＢｔ（１．１当量）、および４−ブロモフェノール（１．１当量）と反応させ、ジオキサン中のＨＣｌで脱保護して、４−ブロモフェニル（Ｓ）−４−アミノ−２−メチルブタノエートを得る。テトラデカノイルクロリド（１．１当量）を、Ｄ−アスパラギン（１当量）と反応させて、テトラデカノイル−Ｄ−アスパラギンを合成する。得られたテトラデカノイル−Ｄ−アスパラギン（１当量）を、ＥＤＣｌ（１．１当量）、ＨＯＢｔ（１．１当量）、および４−ブロモフェニル（Ｓ）−４−アミノ−２−メチルブタノエート（１．１当量）と反応させて、表題化合物を得る。
【０４４６】
【化８２】
2021535092.tif 000102
実施例６４：４−ブロモフェニル（Ｒ）−４−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）−２−メチルブタノエート
この化合物を、実施例６３に関して記載した実験手法に従い合成してもよい。
【０４４７】
【化８３】
2021535092.tif 000103
実施例６５：４−ブロモフェニル（Ｒ）−４−（４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）−２，２−ジメチルブタノエート
この化合物を、実施例６３に関して記載した実験手法に従い合成してもよい。
【０４４８】
【化８４】
2021535092.tif 000104
実施例６６：フェニル（Ｓ）−４−（（Ｒ）−４−アミノ−４−オキソ−２−テトラデカンアミドブタナミド）ペンタノエート
工程１：
トルエン（５０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（１Ｓ）−１−メチル−２−オキソ−エチル］カルバメート（５ｇ、２８．９ｍｍｏｌ、１当量）の混合物に、メチル２−（トリフェニル−ホスファニリデン）アセテート（９．６５ｇ、２８．９ｍｍｏｌ、１当量）を加え、混合物を、２５℃で１２時間、Ｎ２雰囲気下で攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、残渣を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル／酢酸エチル＝１０：１〜４：１）により精製して、メチル（Ｅ，４Ｓ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペンタ−２−エノエート（６ｇ、９１％）を淡黄色の油状物として得た。
【０４４９】
工程２：
ＤＣＭ（２．５ｍＬ）中のメチル（Ｅ，４Ｓ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペンタ−２−エノエート（３００ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌ）の混合物に、ＴＦＡ（０．５ｍＬ）を添加し、次に、混合物を、２５℃で１時間、Ｎ２雰囲気下で攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、メチル（Ｅ，４Ｓ）−４−アミノペンタ−２−エノエートトリフルオロアセテート（２００ｍｇ、６３％）を黄色の油状物として得た。これを、さらに精製することなく次の工程に使用した。
【０４５０】
工程３：
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中のメチル（Ｅ，４Ｓ）−４−アミノペンタ−２−エノエートトリフルオロアセテート（２００ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ、１当量）、ＨＯＢｔ（１７９ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ、１．１当量）、ＴＥＡ（２６９ｍｇ、２．６６ｍｍｏｌ、３７０μＬ、２．２当量）の混合物を、０℃まで冷却した。ＥＤＣＩ（２５５ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ、１．１当量）および（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタン酸（３３７ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ、１．２当量）を、混合物に加え、反応混合物を、０℃で１５分間攪拌し、次に、２５℃で１２時間温めた。反応混合液をろ過し、減圧下で濃縮した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ｌｕｎａ  Ｃ１８  ２５０＊５０ｍｍ＊１０μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：１５％〜４５％、２０分）により精製して、メチル（Ｅ，４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ペンタ−２−エノエート（３５０ｍｇ、８４％）を白色の固体として得た。
【０４５１】
工程４：
ＨＣｌ／ジオキサン（２Ｍ、２．３２ｍＬ、２０当量）中のメチル（４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ペンタノエート（８０ｍｇ、２３２μｍｏｌ、１当量）の混合物を、２５℃で１時間、Ｎ２雰囲気下で攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、メチル（４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−２，４−ジアミノ−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ペンタノエートヒドロクロリド（３０ｍｇ）を白色の固体として得た。これを、さらに精製することなく次の工程で使用した。
【０４５２】
工程５：
ＤＣＭ（３ｍＬ）中のメチル（４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−２，４−ジアミノ−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ペンタノエートヒドロクロリド（３０ｍｇ、１０６μｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＴＥＡ（２２ｍｇ、２１３μｍｏｌ、２９．６μＬ、２当量）を加えた。次に、反応混合物を０℃まで冷却し、テトラデカノイルクロリド（２９ｍｇ、１１７μｍｏｌ、１．１当量）を加えた。混合物を、２５℃で１２時間、Ｎ２下で攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、メチル（４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−４−オキソ−２−（テトラデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］ペンタノエートを白色の固体として得て、それを、さらに精製することなく使用した。
【０４５３】
工程６：
ＭｅＯＨ（３ｍＬ）およびＨ２Ｏ（１ｍＬ）中のメチル（４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−４−オキソ−２−（テトラデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］ペンタノエート（１９５ｍｇ、４２８μｍｏｌ、１当量）の混合物に、ＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏ（３６ｍｇ、８５６μｍｏｌ、２当量）を加え、次に、混合物を、２５℃で５時間攪拌した。反応混合物に、２Ｎ  ＨＣｌを加えて、ｐＨ約４に調節し、次に、濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、残渣を得た。（４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−４−オキソ−２−（テトラデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］ペンタン酸（１５０ｍｇ、７９％）を白色の固体として得た。これを、さらに精製することなく次の工程で使用した。
【０４５４】
工程７：
ＤＭＦ（２ｍＬ）中の（４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−４−オキソ−２−（テトラデカノイルアミノ）ブタノイル］アミノ］ペンタン酸（１２０ｍｇ、２７１μｍｏｌ、１当量）およびフェノール（４３ｍｇ、４６２μｍｏｌ、４０．６μＬ、１．７当量）の溶液に、ＤＭＡＰ（１６．６ｍｇ、１３６μｍｏｌ、０．５当量）を加えた。次に、反応混合物を０℃まで冷却し、ＥＤＣＩ（５７．３ｍｇ、２９９μｍｏｌ、１．１当量）を加えた。混合物を、２５℃で１２時間、Ｎ２下で攪拌した。反応混合液をろ過し、減圧下で濃縮した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｂｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＯＢＤ  Ｃ１８  １５０＊３０ｍｍ  ５μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：６０％〜９０％、１０分）により精製して、フェニル（Ｓ）−４−（（Ｒ）−４−アミノ−４−オキソ−２−テトラデカンアミドブタナミド）ペンタノエート（３５．６ｍｇ、１９％）を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋５１８．３。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．４４〜７．３５（ｍ、２Ｈ）、７．２９〜７．２０（ｍ、１Ｈ）、７．１８〜７．０７（ｍ、２Ｈ）、４．６７（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．０６〜４．０１（ｍ、１Ｈ）、２．７１（ｄｄ、Ｊ＝１５．４、６．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．６９〜２．５８（ｍ、３Ｈ）、２．２７〜２．１９（ｍ、２Ｈ）、２．０２〜１．８９（ｍ、１Ｈ）、１．８７〜１．７４（ｍ、１Ｈ）、１．６５〜１．５５（ｍ、２Ｈ）、１．３２〜１．２５（ｍ、２０Ｈ）、１．２１（ｄ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、３Ｈ）、０．９２（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）。
【０４５５】
【化８５】
2021535092.tif 000105
実施例６７：４−メチル−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−７−イル（Ｒ）−４−（４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）ブタノエート
工程１：
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタン酸（１０００ｍｇ、３．８７ｍｍｏｌ、１．８３当量）、メチル  ４−アミノブタノエートヒドロクロリド（３２４ｍｇ、２．１１ｍｍｏｌ、１当量）、ＥＤＣＩ（４４５ｍｇ、２．３２ｍｍｏｌ、１．１当量）、ＨＯＢｔ（３１４ｍｇ、２．３２ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＴＥＡ（４２７ｍｇ、４．２２ｍｍｏｌ、５８８μＬ、２当量）の混合物を、０℃で０．５時間攪拌し、次に、２５℃で９．５時間、Ｎ２雰囲気下で攪拌した。反応混合物を、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で２回抽出した。合わせた有機層を、塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、メチル４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ブタノエート（６００ｍｇ、粗）を黄色の固体として得て、それを次の工程に直接使用した。
【０４５６】
工程２：
ＴＨＦ（５ｍＬ）およびＨ２Ｏ（５ｍＬ）中のメチル４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ブタノエート（６００ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ、１当量）の混合物に、ＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏ（１４１ｍｇ、３．３６ｍｍｏｌ、２当量）を０℃で加えた。混合物を、２５℃で２時間、Ｎ２雰囲気下で攪拌した。反応混合物を、１Ｎ  ＨＣｌでｐＨ＝４まで酸性化した。沈殿物を、濾過により収集し、乾燥して、白色固体として４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ブタン酸（３００ｍｇ）を得た。
【０４５７】
工程３：
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ブタン酸（３００ｍｇ、８７４μｍｏｌ、１当量）、７−ヒドロキシ−４−メチル−クロメン−２−ｏｎｅ（１５４ｍｇ、８７４μｍｏｌ、１当量）、ＥＤＣＩ（１８４ｍｇ、９６１μｍｏｌ、１．１当量）、ＤＭＡＰ（５３ｍｇ、４３７μｍｏｌ、０．５当量）の混合物を、０℃で０．５時間、次に、２５℃で１０時間、Ｎ２雰囲気下で攪拌した。混合物を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ−Ｍｉｃｒｏ  ＵｎｉＳｉｌ  ５−１００  Ｃ１８  ＵＬＴＲＡ  １００＊２５０ｍｍ  ５μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：３３％〜４８％、１０分）により精製して、４−メチル−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−７−イル（Ｒ）−４−（４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）ブタノエート（３０ｍｇ、６．５％）を白色の固体として得た。
【０４５８】
ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）５０２．３；
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．９４（ｄ、１Ｈ）、７．８３（ｔ、１Ｈ）、７．８０（ｄ、１Ｈ）、７．３０〜７．２２（ｍ、２Ｈ）、７．１６（ｄｄ、１Ｈ）、６．８３（ｓ、１Ｈ）、６．３７（ｓ、１Ｈ）、４．４６（ｑ、１Ｈ）、３．１２（ｑ、２Ｈ）、２．５８（ｔ、２Ｈ）、２．４１（ｓ、３Ｈ）、２．４５〜２．３０（ｍ、２Ｈ）、２．０６（ｔ、２Ｈ）、１．７２（ｔ、２Ｈ）、１．４３（ｓ、２Ｈ）、１．３６（ｄ、１Ｈ）、１．１８（ｍ、８Ｈ）、０．８０（ｔ、３Ｈ）。
【０４５９】
【化８６】
2021535092.tif 000106
実施例６８：４−メチル−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−７−イル（Ｓ）−４−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）ペンタノエート
工程１：
ＤＭＦ（１５ｍＬ）中の（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタン酸（１ｇ、３．８７ｍｍｏｌ、１当量）、メチル（Ｅ，４Ｓ）−４−アミノペンタ−２−エノエートトリフルオロアセテート（９４１ｍｇ、３．８７ｍｍｏｌ、１当量）、ＥＤＣＩ（８１６ｍｇ、４．２６ｍｍｏｌ、１．１当量）、ＨＯＢｔ（５７５ｍｇ、４．２６ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＴＥＡ（７８３ｍｇ、７．７４ｍｍｏｌ、１．０８ｍＬ、２当量）の混合物を脱気し、Ｎ２で数回０℃でパージし、次に、混合物を、２０℃で１０時間Ｎ２雰囲気下で攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、ＤＭＦを取り除いた。残渣をＨ２Ｏ（６０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で３回抽出した。合わせた有機層を、塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、酢酸エチル／メタノール＝１０／１〜１：１）により精製して、メチル（Ｅ，４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ペンタ−２−エノエート（１．２ｇ、８４％）を白色の固体として得た。
【０４６０】
工程２：
ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中のメチル（Ｅ，４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ペンタ−２−エノエート（１．２ｇ、３．２５ｍｍｏｌ、１当量）、１０％Ｐｄ／Ｃ（４００ｍｇ、５４１μｍｏｌ）の混合物を脱気し、Ｈ２で３回パージし、次に、混合物を、２０℃で１０時間、Ｈ２雰囲気下、１５ｐｓｉで攪拌した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮して、メチル（４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ペンタノエート（８００ｍｇ）を黄色の固体として得た。
【０４６１】
工程３：
ＴＨＦ（５ｍＬ）およびＨ２Ｏ（５ｍＬ）中のメチル（４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ペンタノエート（８００ｍｇ、２．１５ｍｍｏｌ、１当量）に、ＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏ（１３６ｍｇ、３．２３ｍｍｏｌ、１．５当量）を０℃で加え、次に、混合物を、２０℃で５時間、Ｎ２雰囲気下で攪拌した。反応混合物を、水性ＨＣｌ（１Ｍ）でｐＨ＝４〜５に酸性化した。沈殿物を、濾過により集め、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｘｂｒｉｄｇｅ  １５０＊３０ｍｍ＊１０ｕｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：１０％〜４０％、１０分）により、（４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ペンタン酸（４００ｍｇ、５２％）を白色の固体として得た。
【０４６２】
工程４：
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の（４Ｓ）−４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ペンタン酸（３００ｍｇ、８３９μｍｏｌ、１当量）、７−ヒドロキシ−４−メチル−クロメン−２−ｏｎｅ（１４８ｍｇ、８３９μｍｏｌ、１当量）、ＥＤＣＩ（１７７ｍｇ、９２３μｍｏｌ、１．１当量）の混合物に、ＤＭＡＰ（５１ｍｇ、４２０μｍｏｌ、０．５当量）を２０℃で加え、次に、混合物を２０℃で１０時間、Ｎ２雰囲気下で攪拌した。混合物を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗｅｌｃｈ  Ｕｌｔｉｍａｔｅ  ＡＱ−Ｃ１８  １５０＊３０ｍｍ＊５μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：３２％〜６２％、１２分）により精製して、４−メチル−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−７−イル（Ｓ）−４−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）ペンタノエート（７０ｍｇ、１６％）を白色の固体として得た。
【０４６３】
ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）５１６．３。
【０４６４】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．７９（ｄ、１Ｈ）、７．６７（ｄ、１Ｈ）、７．３４（ｄ、１Ｈ）、７．２０（ｄ、１Ｈ）、７．１５（ｄｄ、１Ｈ）、７．０７（ｓ、１Ｈ）、６．６３（ｓ、１Ｈ）、６．３３（ｓ、１Ｈ）、４．４９（ｑ、１Ｈ）、３．８７（ｍ、１Ｈ）、２．６４〜２．５６（ｍ、２Ｈ）、２．４３（ｓ、３Ｈ）、２．１０（ｔ、２Ｈ）、１．８９〜１．６６（ｍ、２Ｈ）、１．４８（ｍ、２Ｈ）、１．２３（ｄ、１０Ｈ）、１．０９（ｄ、３Ｈ）、０．８８〜０．７８（ｍ、３Ｈ）。
【０４６５】
【化８７】
2021535092.tif 000107
実施例６９：４−メチル−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−７−イル（Ｒ）−（２−（４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）エチル）カルバメート
工程１：
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタン酸（５００ｍｇ、１．９４ｍｍｏｌ、１．１当量）、ＨＯＢｔ（２６２ｍｇ、１．９４ｍｍｏｌ、１．１当量）、ＴＥＡ（３９２ｍｇ、３．８７ｍｍｏｌ、５３９μＬ、２．２当量）およびＥＤＣＩ（３７１ｍｇ、１．９４ｍｍｏｌ、１．１当量）の混合物を、０℃でＮ２雰囲気下で攪拌した。次に、ｔｅｒｔ−ブチルＮ−（２−アミノエチル）カルバメート（２８２ｍｇ、１．７６ｍｍｏｌ、２７６μＬ、１当量）を０℃で加え、混合物を、１５℃で１０時間、Ｎ２雰囲気下で攪拌した。反応混合物を、Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で３回抽出した。合わせた有機層を、Ｎａ２ＳＯ４乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［２−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−  ブタノイル］アミノ］エチル］カルバメート（０．６６ｇ）を黄色の固体として得た。
【０４６６】
工程２：
ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ、４Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル  Ｎ−［２−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］エチル］カルバメート（６６０ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）の混合物を、１５℃で２時間、Ｎ２雰囲気下で攪拌した。反応混合液を減圧下で濃縮した。残渣を、１５℃で３０分間ＥｔＯＡｃ（４０ｍＬ）で粉砕した。混合物を濾過し、濾過ケーキを、減圧下で乾燥させて、（２Ｒ）−Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（オクタノイルアミノ）ブタンジアミドヒドロクロリド（４４０ｍｇ）を黄色の固体として得た。
【０４６７】
工程３：
ＤＣＭ（８ｍＬ）中のビス（トリクロロメチル）カルボネート（１００ｍｇ、３３７μｍｏｌ、０．３３当量）の混合物を、ＴＨＦ（８ｍＬ）中の７−ヒドロキシ−４−メチル−クロメン−２−オン（１８０ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ、１当量）およびＤＩＰＥＡ（１３２ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ、１７８μＬ、１当量）にゆっくり加えた。混合物を、０℃で２時間、Ｎ２雰囲気下で攪拌した。化合物（４−メチル−２−オキソ−クロメン−７−イル）カルボノクロリデート（１１５ｍｇ、４８１μｍｏｌ、収率４７．１％）を、白色の液体として得た。粗生成物（４−メチル−２−オキソ−クロメン−７−イル）カルボノクロリデート（１１５ｍｇ、４７％）を、さらに精製することなく次の工程で使用した。
【０４６８】
工程４：
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の（２Ｒ）−Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（オクタノイルアミノ）ブタンジアミドヒドロクロリド（１１４ｍｇ、３３８μｍｏｌ、１当量）およびＤＩＰＥＡ（８７．５ｍｇ、６７７μｍｏｌ、１１８μＬ、２当量）の混合物に、（４−メチル−２−オキソ−クロメン−７−イル）カルボノクロリデート（８１ｍｇ、３３８μｍｏｌ、１当量）を１５℃で加え、次に、混合物を、１５℃で１０時間、Ｎ２雰囲気下で攪拌した。反応混合物を濾過し、濾過ケーキを、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗｅｌｃｈ  Ｕｌｔｉｍａｔｅ  ＡＱ−Ｃ１８  １５０＊３０ｍｍ＊５μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：３０％〜６０％、１２分）により精製して、４−メチル−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−７−イル（Ｒ）−（２−（４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）エチル）カルバメート（２０ｍｇ、９５％）を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）５０３．４。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．９２（ｄ、１Ｈ）、７．８６（ｄｔ、２Ｈ）、７．７８（ｄ、１Ｈ）、７．２７（ｓ、１Ｈ）、７．２３（ｄ、１Ｈ）、７．１７（ｄｄ、１Ｈ）、６．８６（ｓ、１Ｈ）、６．３６（ｄ、１Ｈ）、４．４９（ｔｄ、１Ｈ）、３．２５〜３．０８（ｍ、４Ｈ）、２．４３（ｄ、３Ｈ）、２．４１〜２．３３（ｍ、２Ｈ）、２．０８（ｔ、２Ｈ）、１．４６（ｄ、２Ｈ）、１．２６〜１．１７（ｍ、８Ｈ）、０．８４（ｔ、３Ｈ）。
【０４６９】
【化８８】
2021535092.tif 000108
実施例７０：４−メチル−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−７−イル（Ｒ）−（２−（４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）エチル）（メチル）カルバメート
工程１：
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタン酸（５００ｍｇ、１．９４ｍｍｏｌ、１．１当量）、ＨＯＢｔ（２６２ｍｇ、１．９４ｍｍｏｌ、１．１当量）、ＥＤＣＩ（３７１ｍｇ、１．９４ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＴＥＡ（３９２ｍｇ、３．８７ｍｍｏｌ、５３９μＬ、２．２当量）の混合物を脱気し、Ｎ２で３回パージした。ｔｅｒｔ−ブチルＮ−（２−アミノエチル）−Ｎ−メチル−カルバメート（３０７ｍｇ、１．７６ｍｍｏｌ、３１４μＬ、１当量）を、混合物に、０℃でＮ２雰囲気下で加え、混合物を、１５℃で１０時間、Ｎ２雰囲気下で攪拌した。反応混合物を、Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で３回抽出した。合わせた有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［２−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］エチル］−Ｎ−メチル−カルバメート（０．６６ｇ）を黄色の固体として得た。
【０４７０】
工程２：
ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ、約４Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチルＮ−［２−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］エチル］−Ｎ−メチル−カルバメート（６６０ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ、１当量）の混合物を、１５℃で２時間、Ｎ２雰囲気下で攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、残渣を、４０ｍＬで１５℃、３０分間、ＥｔＯＡｃで粉砕した。固形生成物を、濾過により集め、乾燥させて、（２Ｒ）−Ｎ−［２−（メチルアミノ）エチル］−２−（オクタノイルアミノ）ブタンジアミドヒドロクロリド（４６０ｍｇ）を黄色の固体として得た。
【０４７１】
工程３：
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の（２Ｒ）−Ｎ−［２−（メチルアミノ）エチル］−２−（オクタノイルアミノ）ブタンジアミドヒドロクロリド（１００ｍｇ、２８５μｍｏｌ、１当量）およびＤＩＰＥＡ（５５ｍｇ、４２７μｍｏｌ、７４．４μＬ、１．５当量）の混合物に、（４−メチル−２−オキソ−クロメン−７−イル）カルボノクロリデート（６８ｍｇ、２８４μｍｏｌ、１当量）を１５℃で加え、次に、混合物を、１５℃で１０時間、Ｎ２雰囲気下で攪拌した。反応混合液をろ過し、減圧下で濃縮した。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８  ２００＊４０ｍｍ＊１０μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：３０％〜５０％、１０分）により精製して、４−メチル−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−７−イル（Ｒ）−（２−（４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）エチル）（メチル）カルバメート（６ｍｇ、４％）を白色の固体として得た。
【０４７２】
ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）５１７．３。
【０４７３】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．７９（ｄｄ、１Ｈ）、７．２８〜７．１７（ｍ、２Ｈ）、６．３１（ｓ、１Ｈ）、４．６９（ｑ、１Ｈ）、３．６２〜３．４１（ｍ、４Ｈ）、３．０９（ｄ、３Ｈ）、２．７５〜２．５６（ｍ、２Ｈ）、２．４８（ｄ、３Ｈ）、２．１７（ｄｔ、２Ｈ）、１．５８〜１．５０（ｍ、２Ｈ）、１．２６（ｄ、８Ｈ）、０．８７（ｔｄ、３Ｈ）。
【０４７４】
【化８９】
2021535092.tif 000109
実施例７１：４−メチル−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−７−イル（（Ｓ）−２−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）プロピル）カルバメート
工程１：
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタン酸（５００ｍｇ、１．９４ｍｍｏｌ、１．１当量）の混合物に、ＨＯＢｔ（２６２ｍｇ、１．９４ｍｍｏｌ、１．１当量）、ＴＥＡ（３９２ｍｇ、３．８７ｍｍｏｌ、５３９μＬ、２．２当量）およびＥＤＣＩ（３７１ｍｇ、１．９４ｍｍｏｌ、１．１当量）を、０℃、Ｎ２下で一度に加えた。次に、ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（２Ｓ）−２−アミノプロピル］カルバメート（３０７ｍｇ、１．７６ｍｍｏｌ、１当量）を加え、混合物を、１５℃で１０時間、Ｎ２雰囲気下で攪拌した。反応混合物を、Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で５回抽出した。合わせた有機層を、塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］プロピル］カルバメート（６２０ｍｇ、粗）を白色の固体として得た。
【０４７５】
工程２：
４Ｍ  ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］プロピル］カルバメート（６２０ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ、１当量）の混合物を、１５℃で２時間、Ｎ２雰囲気下で攪拌した。反応混合液を減圧下で濃縮した。残渣を、ＥｔＯＡｃ（４０ｍＬ）中で、１５℃で３０分間粉砕した。固形物質を、濾過により集め、乾燥させて、（２Ｒ）−Ｎ−［（１Ｓ）−２−アミノ−１−メチル−エチル］−２−（オクタノイルアミノ）ブタンジアミドヒドロクロリド（４８０ｍｇ）を得た。
【０４７６】
工程３：
ＤＣＭ（５ｍＬ）中のビス（トリクロロメチル）カルボネート（５６ｍｇ、１８９μｍｏｌ、０．３３当量）に、ＴＨＦ（５ｍＬ）中の７−ヒドロキシ−４−メチル−クロメン−２−オン（１０１ｍｇ、５７０μｍｏｌ、１当量）およびＤＩＰＥＡ（７４ｍｇ、５７０μｍｏｌ、１００μＬ、１当量）を０℃でゆっくり加え、混合物を、１５℃で２時間、Ｎ２雰囲気下で攪拌した。（４−メチル−２−オキソ−クロメン−７−イル）カルボノクロリデートの溶液（１０ｍＬ、ＤＣＭおよびＴＨＦ中の０．０５６Ｍ）を、さらに精製することなく次の工程に使用した。
【０４７７】
工程４：
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の（２Ｒ）−Ｎ−［（１Ｓ）−２−アミノ−１−メチル−エチル］−２−（オクタノイルアミノ）ブタンジアミドヒドロクロリド（２００ｍｇ、５７０μｍｏｌ、１当量）およびＤＩＰＥＡ（１４７ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ、１９９μＬ、２当量）の混合物に、（４−メチル−２−オキソ−クロメン−７−イル）カルボノクロリデート（５７０μｍｏｌ、１０ｍＬ、１当量）の溶液を１５℃で加え、次に、混合物を、１５℃で１０時間、Ｎ２雰囲気下で拡販した。反応混合物を濾過して、液体を得て、それを、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｘｂｒｉｄｇｅ  １５０＊３０ｍｍ＊１０μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：２５％〜５５％、１０分）により精製した。（４−メチル−２−オキソ−クロメン−７−イル）Ｎ−［（２Ｓ）−２−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］プロピル］カルバメート（１０ｍｇ、収率２．７％）を、白色の固体として得た。
【０４７８】
ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）５１７．３。
【０４７９】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．８９（ｄ、１Ｈ）、７．８２〜７．７２（ｍ、１Ｈ）、７．６８〜７．５８（ｍ、１Ｈ）、７．２８（ｓ、１Ｈ）、７．２２（ｄ、１Ｈ）、７．１５（ｄ、１Ｈ）、６．８７（ｓ、１Ｈ）、６．３５（ｓ、１Ｈ）、４．４４（ｄ、１Ｈ）、３．８９（ｓ、１Ｈ）、３．１２（ｓ、２Ｈ）、２．４２（ｓ、３Ｈ）、２．３６（ｄ、２Ｈ）、２．０３（ｔ、２Ｈ）、１．４３〜１．３９（ｍ、２Ｈ）、１．２４〜１．１２（ｍ、１０Ｈ）、１．０３（ｄ、３Ｈ）、０．８１（ｑ、３Ｈ）。
【０４８０】
【化９０】
2021535092.tif 000110
実施例７２Ａ：４−メチル−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−７−イル（Ｒ）−４−（４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）−２，２−ジメチルブタノエート
工程１：
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の７−ヒドロキシ−４−メチル−クロメン−２−オン（５００ｍｇ、２．８４ｍｍｏｌ、１当量）、４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２，２−ジメチル−ブタン酸（７８８ｍｇ、３．４１ｍｍｏｌ、１．２当量）、ＨＯＢｔ（４２２ｍｇ、３．１２ｍｍｏｌ、１．１当量）、ＴＥＡ（６３２ｍｇ、６．２４ｍｍｏｌ、８６９μＬ、２．２当量）の混合物に、ＥＤＣＩ（５９９ｍｇ、３．１２ｍｍｏｌ、１．１当量）を０℃で加えた。混合物を、１５℃で１２時間攪拌した。反応混合物を、Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（２０ｍＬ）で３回抽出した。合わせた有機層を、塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を、分取ＴＬＣ（ＳｉＯ２、石油エーテル／酢酸エチル＝１：１）により精製して、（４−メチル−２−オキソ−クロメン−７−イル）４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２，２−ジメチル−ブタノエート（６００ｍｇ、５４％）を白色の固体として得た。
【０４８１】
工程２：
ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ、４Ｍ）中の（４−メチル−２−オキソ−クロメン−７−イル）４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２，２−ジメチル−ブタノエート（６００ｍｇ、１．５４ｍｍｏｌ、１当量）混合物を、１５℃で３時間撹拌した。反応混合液を減圧下で濃縮した。残渣を、酢酸エチル（３０ｍＬ）で２回洗浄し、濾過して、（４−メチル−２−オキソ−クロメン−７−イル）４−アミノ−２，２−ジメチル−ブタノエートヒドロクロリド（３５０ｍｇ、７０％）を白色の固体を得た。
【０４８２】
工程３：
ＤＣＭ（５ｍＬ）中の（４−メチル−２−オキソ−クロメン−７−イル）４−アミノ−２，２−ジメチル−ブタノエートヒドロクロリド（５０ｍｇ、１５０μｍｏｌ、１当量）、（２Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−４−（トリチルアミノ）ブタン酸（８７ｍｇ、１８０μｍｏｌ、１．２当量）、ＤＣＣ（４８ｍｇ、２３０μｍｏｌ、４７μＬ、１．５当量）、ＤＭＡＰ（９．４ｍｇ、７７μｍｏｌ、０．５当量）を１５℃で２時間、Ｎ２雰囲気下で撹拌した。反応混合物を濃縮し、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｌｕｎａ  Ｃ１８  １００＊３０  ５μ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：５５％〜７５％、１２分）により精製した。次に、生成物を、分取ＴＬＣ（ＳｉＯ２、石油エーテル／酢酸エチル＝１：１）によりさらに精製して、（４−メチル−２−オキソ−クロメン−７−イル）４−［［（２Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−４−（トリチルアミノ）ブタノイル］アミノ］−２，２−ジメチル−ブタノエート（７ｍｇ、６％）を白色の固体として得た。
【０４８３】
工程４：
ＴＦＡ（０．２５ｍＬ）およびＤＣＭ（１ｍＬ）中の（４−メチル−２−オキソ−クロメン−７−イル）４−［［（２Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−４−（トリチルアミノ）ブタノイル］アミノ］−２，２−ジメチル−ブタノエート（７ｍｇ、９μｍｏｌ、１当量）の混合物を、１５℃で１時間攪拌した。混合物に、ＴＦＡ（１ｍＬ）およびＤＣＭ（４ｍＬ）を加え、混合物を、１５℃で１２時間攪拌した。反応混合物を濃縮して、（４−メチル−２−オキソ−クロメン−７−イル）４−［［（２Ｒ）−２，４−ジアミノ−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］−２，２−ジメチル−ブタノエートトリフルオロアセテート（４ｍｇ）を白色の固体として得た。
【０４８４】
工程５：
ＤＣＭ（３ｍＬ）中の（４−メチル−２−オキソ−クロメン−７−イル）４−［［（２Ｒ）−２，４−ジアミノ−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］−２，２−ジメチル−ブタノエートトリフルオロアセテート（４．０ｍｇ、７．７μｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＴＥＡ（７８０μｇ、７．７μｍｏｌ、１．０８μＬ、１当量）およびオクタノイルクロリド（１．３ｍｇ、７．７μｍｏｌ、１．３μＬ、１当量）を０℃で加えた。混合物を、０℃で２時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｌｕｎａ  Ｃ１８  １００＊３０  ５μ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：４０％〜５５％、１２分）により精製して、４−メチル−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−７−イル（Ｒ）−４−（４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）−２，２−ジメチルブタノエート（２．０ｍｇ、４６％）を白色の固体として得た。
【０４８５】
ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）：５３０．３
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．９１（ｄ、１Ｈ）、７．８２（ｄｄ、２Ｈ）、７．３０（ｄ、１Ｈ）、７．２４（ｓ、１Ｈ）、７．１９（ｄｄ、１Ｈ）、６．８３（ｓ、１Ｈ）、６．３９（ｓ、１Ｈ）、４．４８（ｑ、１Ｈ）、３．１０（ｄｔ、２Ｈ）、２．４３（ｓ、３Ｈ）、２．３７〜２．２７（ｍ、２Ｈ）、２．０７（ｔ、２Ｈ）、１．８０〜１．７２（ｍ、２Ｈ）、１．４５（ｑ、２Ｈ）、１．２８（ｓ、６Ｈ）、１．２０（ｍ、８Ｈ）、０．８２（ｔ、３Ｈ）。
【０４８６】
【化９１】
2021535092.tif 000111
実施例７２Ｂ：（５−フルオロ−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）メチル（Ｒ）−４−（４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）ブタノエート
工程１：
ＤＭＦ（４０ｍＬ）中の（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタン酸（５．００ｇ、１９．４ｍｍｏｌ、１．１当量）の溶液に、ＨＯＢｔ（２．６ｇ、１９ｍｍｏｌ、１．１当量）、ＥＤＣＩ（３．７１ｇ、１９．４ｍｍｏｌ、１．１当量）、メチル４−アミノブタノエート（２．７０ｇ、１７．６ｍｍｏｌ、１当量、ＨＣｌ）およびＴＥＡ（３．９２ｇ、３８．７ｍｍｏｌ、５．３９ｍＬ、２．２当量）を０℃で加えた。混合物を、１５℃で１２時間攪拌した。反応混合物を、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、酢酸エチル（１００ｍＬ）の加えてクエンチし、濾過した。濾過ケーキを乾燥させて、メチル４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ブタノエート（４．２ｇ、６７％）を白色の固体として得た。
【０４８７】
工程２：
Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）およびＴＨＦ（２０ｍＬ）中のメチル４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ブタノエート（２．２０ｇ、６．１５ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、Ｈ２Ｏ（５ｍＬ）中のＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏ（５１７ｍｇ、１２．３ｍｍｏｌ、２当量）を０℃で加えた。混合物を、０℃で２時間攪拌した。反応混合物を、酢酸エチル（３０ｍＬ）で洗浄した。合わせた水層を、１Ｎ  ＨＣｌでｐＨ＝４に酸性化した。固体生成物を、濾過により精製し、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）および石油エーテル（１０ｍＬ）で洗浄して、４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ブタン酸（１．３ｇ、６２％）を白色の固体として得た。
【０４８８】
１．１１２分間でのＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）：３４４．２。
【０４８９】
工程３：
メタナール溶液（１ｍＬ、Ｈ２Ｏ中の３７％）の５−フルオロ−１Ｈ−ピリミジン−２，４−ジオン（２６０ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ、１当量）の混合物を、６０℃で２時間、Ｎ２雰囲気下で攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、５−フルオロ−１−（ヒドロキシメチル）ピリミジン−２，４−ジオン（３００ｍｇ）を無色の油状物として得た。
【０４９０】
工程４：
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ブタン酸（３００ｍｇ、８７４μｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＨＯＢｔ（１３０ｍｇ、９６１μｍｏｌ、１．１当量）、ＥＤＣＩ（１８４ｍｇ、９６１μｍｏｌ、１．１当量）、５−フルオロ−１−（ヒドロキシメチル）ピリミジン−２，４−ジオン（１８０ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ、１．２９当量）およびＴＥＡ（１９４ｍｇ、１．９２ｍｍｏｌ、２６８μＬ、２．２当量）を０℃で加えた。混合物を、１５℃で１２時間攪拌した。反応混合物を、ＤＭＳＯ（５ｍＬ）で希釈し、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｂｒｉｄｇｅ  ＢＥＨ  Ｃ１８  １００＊３０ｍｍ＊１０μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：１０％〜４０％、１０分）により精製して、（５−フルオロ−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）メチル（Ｒ）−４−（４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）ブタノエート（１０ｍｇ、２．３％）を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）：４８６．２  １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．９３（ｄ、１Ｈ）、５．６４（ｓ、２Ｈ）、４．６４（ｔ、１Ｈ）、３．２３（ｑ、１Ｈ）、２．７３〜２．５５（ｍ、２Ｈ）、２．４１（ｔ、２Ｈ）、２．２３（ｔ、２Ｈ）、１．７９（ｍ、２Ｈ）、１．６３〜１．５６（ｍ、２Ｈ）、１．３１（ｓ、８Ｈ）、０．９３〜０．８６（ｍ、３Ｈ）。
【０４９１】
【化９２】
2021535092.tif 000112
実施例７３：（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（４−アミノ−５−フルオロ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−ヒドロキシ−２−メチルテトラヒドロフラン−３−イル４−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）ブタノエート
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の４−［［（２Ｒ）−４−アミノ−２−（オクタノイルアミノ）−４−オキソ−ブタノイル］アミノ］ブタン酸（５００ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ、１当量）（実施例７２の工程１−２において調製）の攪拌溶液に、ＨＯＢｔ（２１６ｍｇ、１．６０ｍｍｏｌ、１．１当量）、ＥＤＣＩ（３０７ｍｇ、１．６０ｍｍｏｌ、１．１当量）、４−アミノ−１−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−メチル−テトラヒドロフラン−２−イル］−５−フルオロ−ピリミジン−２−オン（３９３ｍｇ、１．６０ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＴＥＡ（３２４ｍｇ、３．２０ｍｍｏｌ、４４６μＬ、２．２当量）を０℃で加えた。混合物を、１５℃で１２時間攪拌した。反応混合物を、ＤＭＳＯ（５ｍＬ）で希釈し、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｘｂｒｉｄｇｅ  １５０＊３０ｍｍ＊１０μｍ；移動層：［水（０．０４％ＮＨ３Ｈ２Ｏ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：１０％〜４０％、１０分］により精製した。生成物を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｘｂｒｉｄｇｅ  １５０＊３０ｍｍ＊１０μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：１０％〜４０％、１０分）によりさらに精製して、（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（４−アミノ−５−フルオロ−２−オキソピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−ヒドロキシ−２−メチルテトラヒドロフラン−３−イル４−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）ブタノエート（２ｍｇ、３％）を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）：５７１．３  １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．８７（ｄ、１Ｈ）、５．８６〜５．８１（ｍ、１Ｈ）、４．８１（ｔ、１Ｈ）、４．６６（ｔ、１Ｈ）、４．４１（ｔ、１Ｈ）、４．２１（ｍ、１Ｈ）、３．２６（ｍ、２Ｈ）、２．６６（ｑｄ、２Ｈ）、２．４６（ｍ、２Ｈ）、２．２３（ｍ、２Ｈ）、１．８３（ｑ、２Ｈ）、１．６２〜１．５７（ｍ、２Ｈ）、１．４２（ｄ、３Ｈ）、１．３１（ｓ、１０Ｈ）、０．８９（ｔ、３Ｈ）。
【０４９２】
【化９３】
2021535092.tif 000113
実施例７４：（Ｒ）−Ｎ１−（４−（（５−フルオロ−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）メチル）フェニル）−２−オクタナミドスクシンアミド
工程１：
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の１−［（４−アミノフェニル）メチル］−５−フルオロ−ピリミジン−２，４−ジオン（４３０ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ、１当量）、（２Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−４−（トリチルアミノ）ブタン酸（１．０４ｇ、２．１９ｍｍｏｌ、１．２当量）、ＤＣＣ（５６６ｍｇ、２．７４ｍｍｏｌ、５５５μＬ、１．５当量）およびＤＭＡＰ（１１２ｍｇ、９１４μｍｏｌ、０．５当量）の混合物を、１５℃で２時間、Ｎ２雰囲気下で攪拌した。反応混合物を、Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（３０ｍＬ）で３回抽出した。合わせた有機層を、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、分取ＴＬＣ（ＳｉＯ２、石油エーテル／酢酸エチル＝０：１）により精製して、ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（１Ｒ）−１−［［４−［（５−フルオロ−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）メチル］フェニル］カルバモイル］−３−オキソ−３−（トリチルアミノ）プロピル］カルバメート（４００ｍｇ、３２％）を白色の固体として得た。
【０４９３】
工程２：
ＤＣＭ（８ｍＬ）およびＴＦＡ（２ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル  Ｎ−［（１Ｒ）−１−［［４−［（５−フルオロ−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）メチル］フェニル］カルバモイル］−３−オキソ−３−（トリチルアミノ）プロピル］カルバメート（４００ｍｇ、５７８μｍｏｌ、１当量）の混合物を、１５℃で１２時間、Ｎ２雰囲気下で攪拌した。追加のＴＦＡ（２ｍＬ）を加え、混合物を、１５℃で３時間攪拌した。混合物を、減圧下で濃縮して、（２Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−［４−［（５−フルオロ−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）メチル］フェニル］ブタンジアミドトリフルオロアセテート（５００ｍｇ、粗）を黄色の固体として得た。
【０４９４】
工程３：
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の（２Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−［４−［（５−フルオロ−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）メチル］フェニル］ブタンジアミドトリフルオロアセテート（５００ｍｇ、１．４３ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＴＥＡ（１４５ｍｇ、１．４３ｍｍｏｌ、１９９μＬ、１当量）およびオクタノイルクロリド（２３３ｍｇ、１．４３ｍｍｏｌ、２４４μＬ、１当量）を０℃で加えた。混合物を、０℃で１時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｂｒｉｄｇｅ  ＢＥＨ  Ｃ１８  １００＊３０ｍｍ＊１０μｍ；移動層：［水（０．１％ＴＦＡ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：２０％〜５０％、１０分）により精製して、（２Ｒ）−Ｎ−［４−［（５−フルオロ−２，４−ジオキソ−ピリミジン−１−イル）メチル］フェニル］−２−（オクタノイルアミノ）ブタンジアミド（８ｍｇ、１．２％）を白色の固体として得た。ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）：４７６．２  １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．８２（ｄ、１Ｈ）、９．９７（ｓ、１Ｈ）、８．１６（ｄ、１Ｈ）、８．０７（ｄ、１Ｈ）、７．５５（ｄ、２Ｈ）、７．２９（ｓ、１Ｈ）、７．２４（ｄ、２Ｈ）、６．８８（ｓ、１Ｈ）、４．７３（ｍ、３Ｈ）、２．０８（ｍ、２Ｈ）、１．４５（ｍ、２Ｈ）、１．２０（ｍ、１０Ｈ）、０．８１（ｔ、３Ｈ）。
【０４９５】
【化９４】
2021535092.tif 000114
実施例７５：（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル（２−（（Ｒ）−４−アミノ−Ｎ−メチル−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）エチル）カルバメート
工程１：ＤＭＦ３０ｍＬ中のＮ２−（（（９Ｈ−ｆｌｕｏｒｅｎ−９−イル）メトキシ）カルボニル）−Ｎ４−トリチル−Ｄ−アスパラギン（１．００ｇ、１当量、１．６８ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（７６５ｍｇ、１．２当量、２．０１ｍｍｏｌ）、３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−ｏｌ（２７４ｍｇ、１．２当量、２．０１ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、窒素下で、ｔｅｒｔ−ブチル（２−（メチルアミノ）エチル）カルバメート（５８４ｍｇ、２当量、３．３５ｍｍｏｌ）を滴下し、得られた溶液を、５分間、室温で攪拌し、ＤＩＥＡ（６５０ｍｇ、０．８８ｍＬ、３当量、５．０３ｍｍｏｌ）を加え、溶液を、９０分間室温で攪拌した。反応を、回転蒸発により濃縮し、残渣を、逆相フラッシュクロマトグラフィー（０〜１００％アセトニトリル／０．１％ＴＦＡを含む水）により精製した。画分を濃縮し、（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（Ｒ）−（７，１３，１３−トリメチル−３，６，１１−トリオキソ−１，１，１−トリフェニル−１２−オキサ−２，７，１０−トリアザテトラデカン−５−イル）カルバメート（０．８５２ｇ、６６．３％）を白色の固体として得た。
【０４９６】
工程２：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−Ｎ−メチル−４−オキソ−４−（トリチルアミノ）ブタンアミド）エチル）カルバメート（０．８５２ｇ、１当量、１．１３ｍｍｏｌ）を、２０ｍＬの２％ＤＢＵ、２％ピペリジン、９６％ＤＭＦに溶解した。反応物を、室温で１０分間攪拌し、濃縮し、残渣を、逆相フラッシュクロマトグラフィー（０〜１００％アセトニトリル／０．１％ＴＦＡを含む水）により精製した。画分を濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−（２−（２−アミノ−Ｎ−メチル−４−オキソ−４−（トリチルアミノ）ブタンアミド）エチル）カルバメート、トリフルオロアセテート（７７０ｍｇ、８９．９％）を白色の固体として得た。
【０４９７】
工程３：ＤＭＦ８ｍＬ中のｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−（２−（２−アミノ−Ｎ−メチル−４−オキソ−４−（トリチルアミノ）ブタンアミド）エチル）カルバメート（３８０ｍｇ、１当量、５９０μｍｏｌ）の攪拌溶液に、窒素下、室温で、無水オクタン酸（３５０μＬ、２当量）、続いて、ＤＩＥＡ（３１０μＬ、３当量）を加えた。反応物を１時間攪拌し、次に、回転蒸発により濃縮した。残渣を、逆相クロマトグラフィー（水／０．１重量％ＴＦＡ中の０〜１００％アセトニトリル）により精製した。画分を濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−（２−（Ｎ−メチル−２−オクタナミド−４−オキソ−４−（トリチルアミノ）ブタンアミド）エチル）カルバメート（３４０ｍｇ、８５．８％）を白色の固体として得た。
【０４９８】
工程４：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−（２−（Ｎ−メチル−２−オクタナミド−４−オキソ−４−（トリチルアミノ）ブタンアミド）エチル）カルバメート（３１０ｍｇ、１当量、４７２μｍｏｌ）を、４ｍＬの２．５％トリエチルシラン／２．５％水／５％ＤＣＭ／９５％トリフルオロ酢酸に溶解し、室温、窒素下で１時間撹拌した。反応物を濃縮し、残渣を、逆相フラッシュクロマトグラフィー（０．１％ＴＦＡバッファーを含む水中の１０〜９５％アセトニトリル）により精製した。画分を組み合わせて、濃縮して、（Ｒ）−Ｎ１−（２−アミノエチル）−Ｎ１−メチル−２−オクタナミドスクシンアミド（１６０ｍｇ、７７．５％）を白色の結晶固体として得た。
【０４９９】
工程５：実施例７６の工程５に従い合成した。
【０５００】
工程６：（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル（４−ニトロフェニル）カルボネート（７１ｍｇ、１当量、０．１３ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ３ｍＬに溶解し、窒素下、室温で攪拌した。ＤＭＦ２ｍＬ中の溶液（Ｒ）−Ｎ１−（２−アミノエチル）−Ｎ１−メチル−２−オクタナミドスクシンアミドトリフルオロアセテート（７１ｍｇ、１．３当量、０．１７ｍｍｏｌ）、続いて、Ｎ，Ｎ−ジメチルピリジン−４−アミン（３７ｍｇ、２当量、０．３０ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を、室温で３０分間攪拌し、濃縮し、残渣を、逆相分取ＨＰＬＣ（水／０．１重量％ＴＦＡ中の０〜９５％アセトニトリル）により精製した。画分を濃縮して、（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル（２−（（Ｒ）−４−アミノ−Ｎ−メチル−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）エチル）カルバメート（５２ｍｇ、５６％）を黄色の固体として得た。
【０５０１】
ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）：７３３．３
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．１４（ｄｄ、１Ｈ）、８．０７〜７．９８（ｍ、１Ｈ）、７．９３（ｄｄ、１Ｈ）、７．７６（ｔ、１Ｈ）、７．６３（ｄｄ、１Ｈ）、７．３０（ｓ、２Ｈ）、６．８２（ｓ、１Ｈ）、５．４２（ｓ、２Ｈ）、５．３１（ｓ、２Ｈ）、５．１５〜４．９１（ｍ、１Ｈ）、３．７０〜３．４６（ｍ、２Ｈ）、３．４１〜３．２８（ｍ、１Ｈ）、３．１９（ｍ、ＨＨ）、２．９５（ｄ、３Ｈ）２．６１（ｍ、１Ｈ）、２．２５（ｍ、１Ｈ）、２．１１〜１．９４（ｍ、２Ｈ）、１．９４〜１．７３（ｍ、２Ｈ）、１．４１（ｍ、２Ｈ）、１．２８（ｔ、３Ｈ）、１．１７（ｍ、８Ｈ）、０．８６（ｔ、３Ｈ）、０．７９（ｔ、３Ｈ）。
【０５０２】
【化９５】
2021535092.tif 000115
実施例７６：（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル（２−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）エチル）（メチル）カルバメート
工程１：ＤＭＦ３０ｍＬ中のＮ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−Ｎ４−トリチル−Ｄ−アスパラギン（０．５０ｇ、１当量、０．８４ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（０．３８ｇ、１．２当量、１．０ｍｍｏｌ）、３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−オール（０．１４ｇ、１．２当量、１．０ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、窒素下で、ｔｅｒｔ−ブチル（２−アミノエチル）（メチル）カルバメート（０．２９ｇ、０．３０ｍＬ、２当量、１．７ｍｍｏｌ）を滴下し、得られた溶液を、５分間室温で攪拌した。ＤＩＥＡ（０．３２ｇ、０．４４ｍＬ、３当量、２．５ｍｍｏｌ）を加え、溶液を、９０分間室温で攪拌した。反応を、回転蒸発により濃縮し、残渣を、逆相フラッシュクロマトグラフィー（０〜１００％アセトニトリル／０．１％ＴＦＡを含む水）により精製した。画分を濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−４−オキソ−４−（トリチルアミノ）ブタンアミド）エチル）（メチル）カルバメート（６００ｍｇ、９５％）を白色のガラス状の固体として得た。
【０５０３】
工程２：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−（２−（２−（（（（９Ｈ−ｆｌｕｏｒｅｎ−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−４−オキソ−４−（トリチルアミノ）ブタンアミド）エチル）（メチル）カルバメート（６００ｍｇ、１当量、７９７μｍｏｌ）を、２０ｍＬの２％ＤＢＵ、２％ピペリジン、９６％ＤＭＦに溶解した。反応物を、室温で１０分間攪拌し、濃縮し、残渣を、逆相フラッシュクロマトグラフィー（０〜１００％アセトニトリル／０．１％ＴＦＡを含む水）により精製した。画分を濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−（２−（２−アミノ−４−オキソ−４−（トリチルアミノ）ブタンアミド）エチル）（メチル）カルバメート（３４７ｍｇ、８２．１％）を白色の固体として得た。
【０５０４】
工程３：ＤＭＦ９ｍＬ中のｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−（２−（２−アミノ−４−オキソ−４−（トリチルアミノ）ブタンアミド）エチル）（メチル）カルバメート（３４７ｍｇ、１当量、６５４μｍｏｌ）の攪拌溶液に、窒素下、室温で、無水オクタン酸（２６５ｍｇ、２９１μＬ、１．５当量、９８１μｍｏｌ）、続いて、ＤＩＥＡ（３３８ｍｇ、４５７μＬ、４当量、２．６２ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を１時間攪拌し、次に、回転蒸発により濃縮した。残渣を、逆相クロマトグラフィー（水／０．１重量％ＴＦＡ中の０〜１００％アセトニトリル）により精製した。画分を濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−メチル（２−（２−オクタナミド−４−オキソ−４−（トリチルアミノ）ブタンアミド）エチル）カルバメート（２５７ｍｇ、５９．８％）を白色の固体として得た。
【０５０５】
工程４：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−メチル（２−（２−オクタナミド−４−オキソ−４−（トリチルアミノ）ブタンアミド）エチル）カルバメート（２５７ｍｇ、１当量、３９１μｍｏｌ）を、４ｍＬの２．５％トリエチルシラン／２．５％水／５％ＤＣＭ／９５％トリフルオロ酢酸に溶解し、室温、窒素下で１時間撹拌した。反応物を濃縮し、残渣を、逆相フラッシュクロマトグラフィー（０．１％ＴＦＡバッファーを含む水中の１０〜９５％アセトニトリル）により精製した。画分を組み合わせて、濃縮して、（Ｒ）−Ｎ１−（２−（メチルアミノ）エチル）−２−オクタナミドスクシンアミド、トリフルオロアセテート（１５０ｍｇ、８９．７％）を白色の結晶固体として得た。
【０５０６】
工程５：ＤＩＥＡ（４０μＬ、１．５当量、０．２３ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（５ｍＬ）中のＳＮ−３８（６０ｍｇ、１当量、０．１５ｍｍｏｌ）および４−ニトロフェニルカルボノクロリデート（３７ｍｇ、１．２当量、０．１８ｍｍｏｌ）の攪拌分散液に、０℃、窒素下で滴下した。反応物を、２時間攪拌した。溶液を濃縮して、（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル（４−ニトロフェニル）カルボネートを粗淡黄色残渣として得た。
【０５０７】
工程６：（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル（４−ニトロフェニル）カルボネート（８５ｍｇ、１当量、０．１５ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ３ｍＬに溶解し、窒素下、室温で攪拌した。ＤＭＦ２ｍＬ中の（Ｒ）−Ｎ１−（２−（メチルアミノ）エチル）−２−オクタナミドスクシンアミド、トリフルオロアセテート（７２ｍｇ、１．１当量、０．１７ｍｍｏｌ）の溶液、続いて、Ｎ，Ｎ−ジメチルピリジン−４−アミン（３７ｍｇ、２当量、０．３０ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を、室温で３０分間攪拌し、濃縮し、残渣を、逆相分取ＨＰＬＣ（水／０．１重量％ＴＦＡ中の０〜９５％アセトニトリル）により精製した。画分を濃縮して、（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル（２−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）エチル）（メチル）カルバメート（０．０５２  ｇ、４７％）を黄色の固体として得た。ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）：７３３．２  １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．１７（ｄ、１Ｈ）、８．０６〜７．８３（ｍ、３Ｈ）、７．６９（ｄｄ、１Ｈ）、７．３３（ｓ、１Ｈ）、７．２５（ｓ、１Ｈ）、６．８４（ｄ、１Ｈ）、６．５０（ｓ、１Ｈ）、５．４４（ｓ、２Ｈ）、５．３４（ｓ、２Ｈ）、４．６１〜４．４９（ｍ、１Ｈ）、３．５５〜３．４８（ｍ、２Ｈ）、３．３５〜３．２８（ｍ、２Ｈ）、３．１９（ｑ、２Ｈ）、３．０４（ｄ、３Ｈ）、２．５４〜２．５１（ｍ、１Ｈ）、２．３７（ｄｄ、１Ｈ）、２．１２〜１．９８（ｍ、２Ｈ）、１．９５〜１．７９（ｍ、２Ｈ）、１．５０〜１．３５（ｍ、２Ｈ）、１．３０（ｔ、３Ｈ）、１．２６〜１．０５（ｍ、８Ｈ）、０．８８（ｔ、３Ｈ）、０．８５〜０．７７（ｍ、３Ｈ）。
【０５０８】
【化９６】
2021535092.tif 000116
実施例７７：（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル（２−（（Ｒ）−４−アミノ−２−（３−ヘキシルウレイド）−４−オキソブタンアミド）エチル）（メチル）カルバメート
工程１〜２：実施例７６に記載した工程に従った。
【０５０９】
工程３：無水ＤＭＦ５ｍＬ中のｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−（２−（２−アミノ−４−オキソ−４−（トリチルアミノ）ブタンアミド）エチル）（メチル）カルバメート（０．３７０ｇ、１当量、６９７μｍｏｌ）および１−イソシアナトヘキサン（９７．５ｍｇ、１１２μＬ、１．１当量、７６７μｍｏｌ）の攪拌溶液に、Ｎ２下で、トリエチルアミン（１０６ｍｇ、１４６μＬ、１．５当量、１．０５ｍｍｏｌ）を滴下した。得られた溶液を、１８時間攪拌し、濃縮し、残渣を、逆相フラッシュクロマトグラフィー（０．１％ＴＦＡを含む水中の１０〜１００％アセトニトリル）により精製して、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−（２−（２−（３−ヘキシルウレイド）−４−オキソ−４−（トリチルアミノ）ブタンアミド）エチル）（メチル）カルバメート（３１０ｍｇ、６７．６％）を白色の固体として得た。
【０５１０】
工程４：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−（２−（２−（３−ヘキシルウレイド）−４−オキソ−４−（トリチルアミノ）ブタンアミド）エチル）（メチル）カルバメート（３１０ｍｇ、１当量、４７１μｍｏｌ）を、４ｍＬの２．５％トリエチルシラン／２．５％水／５％ＤＣＭ／９５％トリフルオロ酢酸に溶解し、室温、窒素下で１時間撹拌した。反応物を濃縮し、残渣を、逆相フラッシュクロマトグラフィー（０．１％ＴＦＡバッファーを含む水中の１０〜９５％アセトニトリル）により精製した。画分を合わせて、濃縮して、（Ｒ）−２−（３−ヘキシルウレイド）−Ｎ１−（２−（メチルアミノ）エチル）スクシンアミド、トリフルオロアセテート（１７１ｍｇ、８４．７％）を得た。
【０５１１】
工程５：ＤＩＥＡ（４０μＬ、１．５当量、０．２３ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（５ｍＬ）中のＳＮ−３８（６０ｍｇ、１当量、０．１５ｍｍｏｌ）および４−ニトロフェニルカルボノクロリデート（３７ｍｇ、１．２当量、０．１８ｍｍｏｌ）の攪拌分散液に、０℃、窒素下で滴下した。反応物を、２時間攪拌した。溶液を濃縮して、（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル（４−ニトロフェニル）カルボネートを粗淡黄色残渣として得た。
【０５１２】
工程６：（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル（４−ニトロフェニル）カルボネート（８５ｍｇ、１当量、０．１５ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ３ｍＬに溶解し、窒素下、室温で攪拌した。ＤＭＦ２ｍＬ中の（Ｒ）−２−（３−ヘキシルウレイド）−Ｎ１−（２−（メチルアミノ）エチル）スクシンアミド、トリフルオロアセテート（７２ｍｇ、１．１当量、０．１７ｍｍｏｌ）の溶液、続いて、Ｎ，Ｎ−ジメチルピリジン−４−アミン（３７ｍｇ、２当量、０．３０ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を、室温で３０分間攪拌し、濃縮し、残渣を、逆相分取ＨＰＬＣ（水／０．１重量％ＴＦＡ中の０〜９５％アセトニトリル）により精製して、（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル（２−（（Ｒ）−４−アミノ−２−（３−ヘキシルウレイド）−４−オキソブタンアミド）エチル）（メチル）カルバメート（２６ｍｇ、２３％）を黄色の固体として得た。ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）：７３４．２  １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．１５（ｄ、１Ｈ）、８．０５〜７．８８（ｍ、２Ｈ）、７．６７（ｄｄ、１Ｈ）、７．３１（ｓ、１Ｈ）、７．３０（ｓ、１Ｈ）、６．８３（ｄ、１Ｈ）、６．４９（ｓ、１Ｈ）、６．１７（ｑ、１Ｈ）、６．０６（ｔ、１Ｈ）、５．４２（ｓ、２Ｈ）、５．３２（ｓ、２Ｈ）、４．４３〜４．３２（ｍ、１Ｈ）、３．５８〜３．４５（ｍ、２Ｈ）、３．３６〜３．２４（ｍ、２Ｈ）、３．１８（ｑ、２Ｈ）、３．０３（ｄ、３Ｈ）、２．９３（ｄ、２Ｈ）、２．４３〜２．３５（ｍ、２Ｈ）、１．９３〜１．７７（ｍ、２Ｈ）、１．３６〜１．１３（ｍ、１１Ｈ）、０．８６（ｔ、３Ｈ）、０．８１（ｔｄ、３Ｈ）。
【０５１３】
【化９７】
2021535092.tif 000117
実施例７８：（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル（２−（（Ｒ）−４−アミノ−４−オキソ−２−（４−フェニルブタンアミド）ブタンアミド）エチル）（メチル）カルバメート
工程１〜２：実施例７６に記載した工程に従った。
【０５１４】
工程３：無水ＤＭＦ１０ｍＬ中の４−フェニルブタン酸（８０ｍｇ、１当量、０．４９ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（０．２０ｇ、１．１当量、０．５４ｍｍｏｌ）、および３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−オール（７３ｍｇ、１．１当量、０．５４ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、窒素下で、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−（２−（２−アミノ−４−オキソ−４−（トリチルアミノ）ブタンアミド）エチル）（メチル）カルバメート（０．３４ｇ、１．３当量、０．６３ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を、５分間攪拌した。ＤＩＥＡ（０．１９ｇ、０．２６ｍＬ、３当量、１．５ｍｍｏｌ）を加え、反応物を、１時間攪拌し、次に、回転蒸発により濃縮した。残渣を、逆相フラッシュクロマトグラフィー（水／０．１重量％ＴＦＡ中の０〜１００％アセトニトリル）により精製して、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−メチル（２−（４−オキソ−２−（４−フェニルブタンアミド）−４−（トリチルアミノ）ブタンアミド）エチル）カルバメート（２９０ｍｇ、８８％）を白色の固体として得た。
【０５１５】
工程４：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−メチル（２−（４−オキソ−２−（４−フェニルブタンアミド）−４−（トリチルアミノ）ブタンアミド）エチル）カルバメート（２９０ｍｇ、１当量、４２８μｍｏｌ）を、２．５％トリエチルシラン／２．５％水／５％ＤＣＭ／９５％トリフルオロ酢酸４ｍＬに溶解し、室温、窒素下で１時間攪拌した。反応物を濃縮し、残渣を、逆相フラッシュクロマトグラフィー（０．１％ＴＦＡバッファーを含む水中の１０〜９５％アセトニトリル）により精製した。画分を組み合わせて、濃縮して、（Ｒ）−Ｎ１−（２−（メチルアミノ）エチル）−２−（４−フェニルブタンアミド）スクシンアミド、トリフルオロアセテート（１００ｍｇ、５２．２％）を固体として得た。
【０５１６】
工程５：工程５：ＤＩＥＡ（１７ｍｇ、２３μＬ、１．５当量、０．１３ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（３ｍＬ）中のＳＮ−３８（３４ｍｇ、１当量、８７μｍｏｌ）および４−ニトロフェニルカルボノクロリデート（２１ｍｇ、１．２当量、０．１０ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、０℃、窒素下で滴下した。反応物を、２時間攪拌した。溶液を濃縮して、（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル（４−ニトロフェニル）カルボネートを粗白色残渣として得た。
【０５１７】
工程６：（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル（４−ニトロフェニル）カルボネート（４５ｍｇ、１当量、８１μｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ３ｍＬに溶解し、窒素下、室温で攪拌した。ＤＭＦ２ｍＬ中の（Ｒ）−Ｎ１−（２−（メチルアミノ）エチル）−２−（４−フェニルブタンアミド）スクシンアミド、トリフルオロアセテート（４０ｍｇ、１．１当量、８９μｍｏｌ）の溶液、続いて、Ｎ，Ｎ−ジメチルピリジン−４−アミン（２０ｍｇ、２当量、０．１６ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を、室温で３０分間攪拌し、濃縮し、残渣を、逆相分取ＨＰＬＣ（水／０．１重量％ＴＦＡ中の０〜９５％アセトニトリル）により精製して、（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル（２−（（Ｒ）−４−アミノ−４−オキソ−２−（４−フェニルブタンアミド）ブタンアミド）エチル）（メチル）カルバメート（１９ｍｇ、３１％）を得た。
【０５１８】
ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）：７５３．２
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．１５（ｄ、１Ｈ）、８．０５〜７．８９（ｍ、３Ｈ）、７．６７（ｄｄ、１Ｈ）、７．３１（ｓ、１Ｈ）、７．２７〜７．１７（ｍ、３Ｈ）、７．１２（ｄｄ、３Ｈ）、６．８３（ｓ、１Ｈ）、６．４８（ｓ、１Ｈ）、５．４２（ｓ、２Ｈ）、５．３１（ｄ、２Ｈ）、４．６７〜４．３７（ｍ、１Ｈ）、３．５２〜３．４５（ｍ、２Ｈ）、３．４５〜３．２５（ｍ、２Ｈ）、３．１７（ｑ、２Ｈ）、３．０２（ｄ、３Ｈ）、２．５４〜２．５０（ｍ、２Ｈ）、２．４７〜２．４３（ｍ、１Ｈ）、２．３６（ｄｄ、１Ｈ）、２．１３〜２．０３（ｍ、２Ｈ）、１．８６（ｈｅｐｔ、２Ｈ）、１．７９〜１．６４（ｍ、２Ｈ）、１．２８（ｔ、３Ｈ）、０．８６（ｔ、３Ｈ）。
【０５１９】
【化９８】
2021535092.tif 000118
実施例７９：（Ｓ）−４，１１−ジエチル−９−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル（２−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）エチル）（メチル）カルバメート
工程１〜４：実施例７６に記載した工程に従った。
【０５２０】
工程５：無水ＤＣＭ５ｍＬ中のＢｏｃ−無水物（６５ｍｇ、６９μＬ、１．３当量、０．３０ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４，９−ジヒドロキシ−１，１２−ジヒドロ−１４Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−３，１４（４Ｈ）−ジオン（９０ｍｇ、１当量、０．２３ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液に、窒素下で、ピリジン（０．５４ｇ、０．５６ｍＬ、３０当量、６．９ｍｍｏｌ）を滴下した。反応物を、１８時間室温で攪拌し、次に、ＤＣＭ１０ｍＬで希釈した。有機層を、１Ｍ  ＨＣｌ（１０ｍＬ×２）で洗浄し、飽和ＮａＣｌ（１０ｍＬ）で洗浄した。有機層を、ＭｇＳＯ４乾燥させ、濾過し、濃縮して、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル）カルボネートを粗残渣を得た。
【０５２１】
工程６：ＤＭＦ２ｍＬ中の（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（４，１１−ジエチル−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４，９−ジイル）（４−ニトロフェニル）ビス（炭素ａｔｅ）（１３０ｍｇ、１．１当量、０．１９ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、窒素下で、ＤＭＦ２ｍＬ中の（Ｒ）−Ｎ１−（２−（メチルアミノ）エチル）−２−オクタナミドスクシンアミドトリフルオロアセテート（７５ｍｇ、１当量、０．１８ｍｍｏｌ）の溶液、続いて、トリエチルアミン（５３ｍｇ、７３μＬ、３当量、０．５３ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を、室温で４５分間攪拌し、濃縮し、逆相分取クロマトグラフィー（水／０．１重量％ＴＦＡ中の１０〜１００％アセトニトリル）により精製した。画分を濃縮して、（Ｓ）−９−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）オキシ）−４，１１−ジエチル−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル（２−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）エチル）（メチル）カルバメート（０．０５２ｇ、３６％）を得た。
【０５２２】
工程７：無水ジクロロメタン２ｍＬ中の（Ｓ）−９−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）オキシ）−４，１１−ジエチル−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル（２−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）エチル）（メチル）カルバメート（５０ｍｇ、１当量、６０μｍｏｌ）の溶液に、トリフルオロアセテート２ｍＬを加えた。反応物を、３０分間攪拌し、濃縮し、逆相分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む水中の０〜９０％アセトニトリル）により精製して、（Ｓ）−４，１１−ジエチル−９−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル（２−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）エチル）（メチル）カルバメート（１４ｍｇ、３２％）を得た。
【０５２３】
ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）：７３３．５
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．２７（ｓ、１Ｈ）、８．０１（ｄｄ、１Ｈ）、７．９９〜７．７０（ｍ、２Ｈ）、７．４２〜７．３５（ｍ、２Ｈ）、７．２０（ｄ、１Ｈ）、６．９４（ｄ、１Ｈ）、６．７９（ｄ、１Ｈ）、５．４１（ｄ、２Ｈ）、５．２６（ｄ、２Ｈ）、４．４９（ｄｑ、１Ｈ）、３．４６〜３．２６（ｍ、２Ｈ）、３．２２〜２．９６（ｍ、５Ｈ）、２．７６（ｓ、２Ｈ）、２．５２〜２．２２（ｍ、２Ｈ）、２．１１（ｐ、３Ｈ）、２．０３（ｔ、１Ｈ）、１．５１〜１．３５（ｍ、２Ｈ）、１．２７（ｔ、３Ｈ）、１．２４〜１．１１（ｍ、８Ｈ）、０．９７〜０．８６（ｍ、３Ｈ）、０．８６〜０．７４（ｍ、３Ｈ）。
【０５２４】
【化９９】
2021535092.tif 000119
実施例８０：（５−フルオロ−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）メチル（Ｒ）−（２−（４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）エチル）（メチル）カルバメート
実施例７２について記載した実験手法に従い合成し、（５−フルオロ−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）メチル（Ｒ）−（２−（４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）エチル）（メチル）カルバメートを白色の固体（５０ｍｇ）として得た。ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）：５０１．１。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．９４（ｔ、１Ｈ）、８．０９（ｄ、１Ｈ）、７．８８（ｍ、２Ｈ）、７．２５（ｓ、１Ｈ）、６．８４（ｓ、１Ｈ）、５．５３（ｓ、２Ｈ）、４．４８（ｍ、１Ｈ）、３．２２（ｍ、４Ｈ）、２．８２（ｓ、３Ｈ）、２．３７〜２．２８（ｍ、２Ｈ）、２．０９（ｔ、２Ｈ）、１．４７（ｍ、２Ｈ）、１．２４（ｍ、８Ｈ）、０．８６（ｔ、３Ｈ）。
【０５２５】
【化１００】
2021535092.tif 000120
実施例８１：（Ｒ）−Ｎ１−（２−（５−フルオロ−Ｎ−メチル−２，４−ジオキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−１−カルボキサミド）エチル）−２−オクタナミドスクシンアミド
実施例５５について記載した実験手法に従い合成して、（Ｒ）−Ｎ１−（２−（５−フルオロ−Ｎ−メチル−２，４−ジオキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−１−カルボキサミド）エチル）−２−オクタナミドスクシンアミドを白色の固体（３０ｍｇ）として得た。ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋）：４７１．１。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．０３（ｓ、１Ｈ）、８．０５（ｄ、１Ｈ）、７．９０（ｍ、２Ｈ）、７．７５（ｍ、１Ｈ）、７．２７（ｓ、１Ｈ）、６．８３（ｓ、１Ｈ）、４．４８（ｑ、１Ｈ）、３．２２−３．１８（ｍ、２Ｈ）２．９４（ｄ、３Ｈ）、２．３０−２．３９（ｍ、２Ｈ）、２．１２（ｍ、２Ｈ）、１．５１−１．３８（ｍ、３Ｈ）、１．２６〜１．２１（ｍ、８Ｈ）、０．８９〜０．８１（ｍ、３Ｈ）。
【０５２６】
【化１０１】
2021535092.tif 000121
実施例８２：（Ｓ）−４，１１−ジエチル−９−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル（（Ｓ）−２−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）プロピル）（メチル）カルバメート
この化合物を、実施例７９に関して記載した実験手法に従い合成してもよい。
【０５２７】
【化１０２】
2021535092.tif 000122
実施例８３：（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル（（Ｓ）−２−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）プロピル）（メチル）カルバメート
この化合物を、実施例７６に関して記載した実験手法に従い合成してもよい。
【０５２８】
【化１０３】
2021535092.tif 000123
実施例８４：（Ｒ）−Ｎ１−（（Ｓ）−１−（５−フルオロ−Ｎ−メチル−２，４−ジオキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−１−カルボキサミド）プロパン−２−イル）−２−オクタナミドスクシンアミド
この化合物を、実施例７４に関して記載した実験手法に従い合成してもよい。
【０５２９】
【化１０４】
2021535092.tif 000124
実施例８５：（５−フルオロ−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）メチル（（Ｓ）−２−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）プロピル）（メチル）カルバメート
この化合物を、実施例７２に関して記載した実験手法に従い合成してもよい。
【０５３０】
【化１０５】
2021535092.tif 000125
実施例８６：（Ｓ）−４，１１−ジエチル−９−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−４−イル（（Ｒ）−２−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）プロピル）（メチル）カルバメート
この化合物を、実施例７９に関して記載した実験手法に従い合成してもよい。
【０５３１】
【化１０６】
2021535092.tif 000126
実施例８７：（Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル（（Ｒ）−２−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）プロピル）（メチル）カルバメート
この化合物を、実施例７６に関して記載した実験手法に従い合成してもよい。
【０５３２】
【化１０７】
2021535092.tif 000127
実施例８８：（Ｒ）−Ｎ１−（（Ｒ）−１−（５−フルオロ−Ｎ−メチル−２，４−ジオキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−１−カルボキサミド）プロパン−２−イル）−２−オクタナミドスクシンアミド
この化合物を、実施例７４に関して記載した実験手法に従い合成してもよい。
【０５３３】
【化１０８】
2021535092.tif 000128
実施例８９：（５−フルオロ−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）メチル（（Ｒ）−２−（（Ｒ）−４−アミノ−２−オクタナミド−４−オキソブタンアミド）プロピル）（メチル）カルバメート
この化合物を、実施例７２に関して記載した実験手法に従い合成してもよい。
【０５３４】
生物学的アッセイ
以下の実施例は、本発明の例示的な結合体の切断に対する活性および感受性を評価するためのアッセイを記載する。
【０５３５】
実施例９０：結合体のインビトロ安定性
アッセイ１。模擬胃液（ＳＧＦ）における結合体の安定性。このアッセイを使用して、胃における結合体の安定性が評価された。培地は、超純水（ＭｉｌｌｉＱ（登録商標）、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｓｉｇｍａ社、ドイツ、ダルムシュタット）中、０．６Ｌで２ｇの塩化ナトリウムを溶解させることにより調製された。１Ｎ塩酸を用いてｐＨを１．６に調整し、次いで精製水で体積を１Ｌに調整した。６０ｍｇのＦａＳＳＩＦ粉末（Ｂｉｏｒｅｌｅｖａｎｔ（商標）、Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ）を５００ｍＬの緩衝液（上記）に溶解した。ペプシン（０．１ｍｇ／ｍＬ）（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｓｉｇｍａ社、ドイツ、ダルムシュタット）を加え、溶液を攪拌した。新鮮な得られたＳＧＦ培地を各実験に対して使用した。試験化合物は、１ｍＭにＤＭＳＯストック中で溶解した。ＤＭＳＯストック溶液の分注物を取り出し、１５ｍＬのファルコン管中、ＳＧＦ培地で希釈し、化合物総濃度を１μＭとした。Ｔ０時点について、１ｍＬの分注物を直ちに取り出し、１体積のアセトニトリルで１回希釈した。混合液を密封し、インキュベーター中、３７℃で混合した。分注物（１ｍＬ）を一定間隔で取り出し、１体積のアセトニトリルを加えることにより直ちにクエンチした。得られた試料をＬＣ／ＭＳにより分析し、ＳＧＦ中の分解速度を決定した。
【０５３６】
アッセイ２。模擬腸液（ＳＩＦ）における結合体の安定性。このアッセイを使用して、小腸における結合体の安定性が評価された。リン酸緩衝液は、０．４２ｇの水酸化ナトリウムペレット、および３．９５ｇのリン酸一ナトリウム一水和物、および６．１９ｇの塩化ナトリウムを超純水（ＭｉｌｌｉＱ（登録商標）、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｓｉｇｍａ社、ドイツ、ダルムシュタット）に溶解させることにより調製された。ｐＨを、必要に応じてＨＣｌ水溶液と、ＮａＯＨ水溶液を使用して６．７に調整し、溶液を超純水で希釈して、１ＬのｐＨ６．７緩衝液を生成した。１１２ｍｇのＦａＳＳＩＦ粉末（Ｂｉｏｒｅｌｅｖａｎｔ（商標）、英国、ロンドン）を５０ｍＬのｐＨ６．７緩衝液に溶解した。次いで、２〜３ｍＬの得られた溶液を５００ｍｇのパンクレアチン（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｓｉｇｍａ社、ドイツ、ダルムシュタット）に加えた。得られた混合物を、混合物を含む容器を指でタッピングすることによって、乳白色の懸濁液が形成されるまで撹拌した。この時点で、５０ｍＬのＦａＳＳｉＦ／ｐＨ６．７緩衝液の残りを加えた。得られた懸濁液を１０回転倒混和してＳＩＦを作製し、新鮮な状態で使用した。試験化合物は、１ｍＭにＤＭＳＯストック中で溶解した。ＤＭＳＯストック溶液の分注物を取り出し、１５ｍＬのファルコン管中、ＳＩＦ培地で希釈し、試験化合物濃度が１μＭの混合液を作製した。Ｔ０時点について、１ｍＬの分注物を直ちに取り出し、１体積のアセトニトリルで１回希釈した。混合液を密封し、インキュベーター中、３７℃で攪拌した。分注物（１ｍＬ）を一定間隔で取り出し、１体積のアセトニトリルを加えることにより直ちにクエンチした。得られた試料をＬＣ／ＭＳにより分析し、分解速度を決定した。
【０５３７】
アッセイ３インビトロ結腸内物質安定性試験  このアッセイを使用して、大腸におけるアシル化活性剤の安定性が評価された。すべての実験は、窒素９０％、水素５％、および二酸化炭素５％を含有する嫌気チャンバー中で実施された。結腸内物質は、予め還元され、嫌気的に滅菌された希釈ブランク（Ａｎａｅｒｏｂｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＡＳ−９０８）中のスラリー（１５％ｗ／ｖ  最終濃度）として再懸濁された。次いで、結腸内物質を、ＹＣＦＡＣ培地（Ａｎａｅｒｏｂｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＡＳ−６８０）または他の適切な培地（６．７μＬのスラリーを１ｍＬの総培地に含む）を含有する９６ウェルプレートに接種した。化合物、または化合物群を個々の各ウェルに添加し、最終検体濃度を１μＭまたは１０μＭとし、物質をピペッティングにより混合した。試料を、設定時点（アッセイ開始後、０、１２０、２４０、４８０、１４４０、２８８０分）の後に取り出し、内部標準を含有するアセトニトリルでクエンチし、ＬＣ／ＭＳにより分析した。結果を表２に示す。
【０５３８】
【表２−１】
2021535092.tif 000129
【表２−２】
2021535092.tif 000130
【０５３９】
表２において、Ａ：残存する試験した化合物の＜２５％；Ｂ：残存する試験した化合物の２５〜７５％；およびＣ：残存する試験した化合物の＞７５％。
【０５４０】
表２は、例えば、化合物１２、２０、２１、２２、および６６を、結腸に選択的にデリバリーすることができることを示す。
【０５４１】
実施例９１：生化学的アッセイのための酵素の単離
対象のタンパク質の溶解ドメインを同定し、大腸菌のような宿主において融合タンパク質として異種発現に適した適当なベクターをクローニングした。同様に、触媒的に不活性であった溶解性バリアントを、酵素活性に重要なアミノ酸を変異させることによって構築した。
【０５４２】
タンパク質および触媒的に不活性なバリアントを、適当な発現宿主に発現した。細胞を溶解し、溶解物を清澄化し、タンパク質を適切な樹脂でインキュベートした。単離後、タグを任意で除去し、第二の直交クロマトグラフィー工程を使用して、タグのないバージョンのタンパク質を単離してもよい。
【０５４３】
実施例９２：生化学的アッセイのためのＣｌｂＰの単離
本実施例は、実施例９１に記載した方法の代表であり、ＣｌｂＰの溶解性ペプチドドメイン（アミノ酸３８〜３７５）または触媒上不活性な変異Ｓ９５Ａを、開始点として既に定義した境界を使用して、ｐＥＴ２８ａにクローニングした（Ｂｒｏｔｈｅｒｔｏｎ、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１３５：３３５９〜３３６２、２０１３年）。
【０５４４】
ＷＴ  ＣｌｂＰまたはＳ９５Ａ  ＣｌｂＰを、タンパク質を発現させるための大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ＲＩＰＬを使用し、ｐＥＴ２８ｂからＮ−末端にタグ付したＨｉｓ６−ＳＵＭＯ１−融合タンパク質として単離した。細胞を、３０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８．０、３００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０％（ｖ／ｖ）グリセロール、ベンゾナーゼ（Ｓｉｇｍａ−Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、リゾチーム、Ｂ−ｐｅｒ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）、およびＹ−ｐｅｒ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）において溶解した。溶解物を、遠心分離（１３，０００ｇ、２０分間）を介して清澄化し、上清を、Ｈｉ結合Ｎｉ−ＮＴＡアガロース（５ｍＬ）とインキュベーションした。続いて、樹脂を、洗浄バッファー（３０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．５、２５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭイミダゾール、３％（ｖ／ｖ）グリセロール、および２ｍＭ  ＴＣＥＰ）で洗浄した。樹脂を、３０℃で１時間、ＵＬＰ１タンパク質分解酵素１．４ｍｇとインキュベーションした。次に、樹脂を、追加の画分の洗浄バッファーで洗浄した。遠心分離濾過物を使用して、タンパク質を濃縮し、続いて、濃縮したタンパク質を、流速ＸｍＬ／分で１６／６００  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００サイズ限界カラムに、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．４、３２５ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＫＣｌおよび３％（ｖ／ｖ）グリセロールの定組成溶離で適用した。タンパク質を含有する画分を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより決定し、合わせ、遠心分離濾過により濃縮した。３ｍＭ  ＴＣＥＰを、濃縮したタンパク質に加え、次に、一定分量に分け、液体Ｎ２において瞬間凍結し、−８０℃で保存した。
【０５４５】
実施例９３：生化学的アッセイのための他の細菌酵素の単離
実施例９１および９２に展開した原理に従い、他の細菌酵素をクローニングし、発現させ、生化学的アッセイのため単離し得る。これらは、プロピオニバクテリウム・アクネス株ＫＰＡ１７１２０２由来の溶解性バージョンのＤ−アラニル−Ｄ−アラニンカルボキシペプチダーゼ（遺伝子ＷＰ＿００２５３１２１０．１）およびβ−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ（遺伝子ＷＰ＿０４１４４４２３２．１）、クラミジア・ニューモニエＣＷＬ０２９由来のタンパク質分解酵素（遺伝子ＮＰ＿２２４８０９．１）およびシンナモイルエステラーゼ（遺伝子ＮＰ＿２２４３６０．１）、サラモネラ・エンテリカ・血清型チフィ株ＣＴ１８由来のペニシリン無感受性マウスエンドペプチダーゼ（遺伝子ＮＰ＿４５６９２４．１）およびエンドグルカナーゼ（遺伝子ＮＰ＿４５８３０３．１）、メチロバクテリウム・ラデイオトレランスＪＣＭ  ２８３１由来のＤ−アラニル−Ｄ−アラニンカルボキシペプチダーゼ（遺伝子ＷＰ＿０４１３７２２９５．１）およびセルラーゼ（ＷＰ＿０１２３１７２９７．１）、ならびにクラミジア・トラコマティスＤ／ＵＷ−３／ＣＸ由来のＤ−アラニル−Ｄ−アラニンカルボキシペプチダーゼ（遺伝子ＮＰ＿２２００６６．１）およびシンナモイルエステラーゼ（遺伝子ＮＰ＿２１９６５２．１）を含む。各場合で、可溶性で触媒的に不活性なタンパク質バージョンも同様にクローニングし、発現させ、単離した。
【０５４６】
実施例９４：精製したタンパク質を用いたアッセイ
精製した酵素の活性を評価するために、精製したタンパク質またはその触媒的に不活性なバリアントを、化合物とインキュベーションする。対照として、化合物を、バッファー単独とインキュベーションする。指定の間隔後、反応を、有機溶媒の添加により止める。ＬＣＭＳ解析を使用して、活性な酵素、不活性な酵素、および酵素のない対照を含む反応物における出発材料および生成物の相対量を決定する。
【０５４７】
実施例９５：精製したＣｌｂＰタンパク質を用いたアッセイ
本実施例は、実施例９４に記載した方法の代表であり、ＣｌｂＰを、インビトロアッセイで試験化合物と共にインキュベーションした。典型的なアッセイでは、０、１、または２０μＭ精製ＷＴまたはＳ９５Ａ  ＣｌｂＰを、反応バッファー（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．５、３７．５ｍＭ  ＮａＣｌ）中の１００または５００μＭ化合物と室温、２４時間インキュベーションした。この反応物の総容量は、１５０μＬであった。
【０５４８】
２４時間後、２容量のアセトニトリル（３００μＬ）を、反応物に加え、溶液をクエンチした。
【０５４９】
反応物を遠心分離し（４，０００ｇ、１５分）、次に、上清をＬＣＭＳにより分析した。上清５μｍＬを、Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８  １．７μｍ  ２．１×１００カラムに注入した。バッファーＡは、水中の０．１％（ｖ／ｖ）ギ酸であり、バッファーＢは、アセトニトリル中の０．１％（ｖ／ｖ）ギ酸であった。流量は０．５ｍＬ／分であった。最初の％Ｂは１０であり、３０秒間保持し、次に３分間にわたり９０％Ｂまで上昇させ、１分間、９０％Ｂで保持し、１５秒間にわたり１０％Ｂまで下げ、次に、１５秒間１０％Ｂで保持した。２１０〜４００ｎｍのＵＶ−Ｖｉｓスペクトルを、３．６ｎｍの解像度でモニターした。正および負モードＥＳＩを、セントロイド収集物において５Ｈｚサンプリング周波数で２０Ｖの円錐電圧で１００〜１０００ｍ／ｚモニターした。
【０５５０】
ＷＴ  ＣｌｂＰ反応物に残留する相対的出発材料を、ＬＣＭＳにより決定し、次に、酵素を含まないおよび触媒的に不活性な酵素（Ｓ９５Ａ  ＣｌｂＰ）反応物における残りの開始物質と比較した。理想的な場合では、ＷＴ  ＣｌｂＰ反応物における残りの出発材料の量は、Ｓ９５Ａ  ＣｌｂＰおよび酵素を含まない条件下で＜２５％の量であった。許容可能な場合では、ＷＴ  ＣｌｂＰ反応物における残りの出発材料の量は、Ｓ９５Ａ  ＣｌｂＰおよび酵素を含まない条件下で２５〜７５％の量であった。好ましくない場合では、ＷＴ  ＣｌｂＰ反応物における残りの出発材料の量は、Ｓ９５Ａ  ＣｌｂＰおよび酵素を含まない条件下で＞７５％の量であった。
【０５５１】
予想される生成物の形成を、ＬＣＭＳ解析により同様に定量し、外部生成物標準との共溶出により確認した。理想的な場合では、ＷＴ  ＣｌｂＰ反応物において形成した生成物の量は、理論上の最大値の＞７５％に対応した。許容可能な事例では、ＷＴ  ＣｌｂＰ反応で形成される生成物の量は、理論上の最大値の２５〜７５％に対応した。好ましくない場合では、ＷＴ  ＣｌｂＰ反応物において形成した生成物の量は、理論上の最大値の＜２５％に対応した。結果を以下の表３に示す。
【０５５２】
【表３】
2021535092.tif 000131
【０５５３】
表３では、状態：「−」は、酵素を含まない対照と比較して２０μＭ  ＷＴ  ＣｌｂＰ反応物に残存する＞７５％化合物を示し、「＋」は、酵素を含まない対照と比較して、２０μＭ  ＷＴ  ＣｌｂＰ反応物に残存する２５〜７５％化合物を示し、「＋＋」は、対照と比較して、２０μＭ  ＷＴ  ＣｌｂＰ反応物に残存する＜２５％化合物を示す。
【０５５４】
実施例９６：他の細菌酵素を用いたアッセイ
実施例９４および９５に記載した原理に従い、実施例Ｃに列挙したタンパク質の活性バージョンおよび不活性バージョンを、適切に設計した化合物と反応するそれらの活性についてアッセイしてもよい。
【０５５５】
実施例９７：ＬＣＭＳ読み取りでの最近酵素を用いた細胞ベースアッセイ
ベクターを、その天然の形態または触媒的に不活性なバージョンの酵素を発現するよう設計してもよい。ベクターは、異種宿主、例えば、大腸菌発現株に形質転換されてもよい。あるいは、実施例９３で同定した酵素のうちの一つをコードする天然で生じる株生成してもよく、同定した酵素を欠く密接に関連する株を陰性対照として使用する。ＣｌｂＰの場合、例えば、大腸菌ＣＦＴ０７３  ＡＴＣＣ  ７００９２８または大腸菌ニッスル１９１７のようなＣｌｂＰを天然でコードする株を使用してもよい。大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）は、ＣｌｂＰをコードしないため、陰性対照として使用することができる。
【０５５６】
異種性宿主（野生型酵素、触媒的に不活性なバージョン、または空のベクターを含有する）または天然株を、望ましいレベルまで成長させてもよい。
【０５５７】
化合物を、細菌増殖または非接種媒体に加えてもよい。混合物を、指定した時間インキュベートしてもよい。
【０５５８】
インキュベーション後、混合物は、有機溶媒の添加または凍結乾燥に続いて有機溶媒中での溶解により、ＬＣＭＳ解析と適合させることができる。残留開始物質の量および生成物は、ＬＣＭＳ解析により定量化されてもよい。
【０５５９】
実施例９８：ＬＣＭＳを用いたＣｌｂＰを用いた細胞ベースアッセイ
本実施例は、実施例９７に記載した方法を表す。ＣｌｂＰを、化合物を活性化する能力について試験した。種々の試験化合物を、全長ＷＴ  ＣｌｂＰ（大腸菌ＣＦＴ０７３  ＡＴＣＣ  ７００９２８および／または大腸菌Ｎｉｓｓｌｅ  １９１７）を天然に発現する大腸菌と共に、または陰性対照として、ＣｌｂＰ（大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３））をコードしない大腸菌株と共にインキュベーションした。これら三つの株の各々を、ＬＢ寒天またはＢＨＩ寒天などの適切な固体培地に打ちつけた。次に、細菌を３７℃で一晩好気的に成長させた。
【０５６０】
単一のコロニーをプレートから単離し、１０ｍＬのＬＢに接種した。液体培養物を、振動装置上で揺動させながら３７℃で一晩好気的に成長させた。
【０５６１】
飽和した大腸菌培養物をバイオセーフティキャビネットに移した。各培養物５μＬを新鮮なＬＢブロス（合計２００μＬ、一晩培養物の１：４０（ｖ／ｖ）希釈）に接種し、試験した化合物を最終濃度１０μＭに加えた。培地単独での化合物の天然安定性を確立するために、化合物を、最終濃度１０μＭで非接種培地に加えた。各化合物を、各株または培地単独のインキュベーションで２回試験した。プレートを密封し、３７℃で２０時間振動装置上で好気的にインキュベーションした。
【０５６２】
２０時間後、２００μＬのアセトニトリルの添加により、反応を停止させた。各ウェルの内容物を混合し、次にプレートを遠心分離した（４，０００ｒｐｍ、１０分）。プレートを、最初にアセトニトリル（１０×希釈）で最終希釈１：１００まで、次に（４：１）移動相Ａ−２０ｍＭギ酸アンモニウム＋水：移動相Ｂ−イソプロパノール：メタノール：水（４：４：２）＋２０ｍＭギ酸アンモニウム（１０×希釈）で連続希釈した。
【０５６３】
各インキュベーション中の残りの各親化合物の量を、各親化合物に特異的な移行を標的にする複数の反応をモニタリングしながら、ＬＣ−ＭＳ解析により定量した。
【０５６４】
培地単独条件に存在する化合物の量を、１００％と正規化した。ＣｌｂＰをコードする大腸菌（大腸菌ＣＦＴ０７３  ＡＴＣＣ  ７００９２８および／または大腸菌Ｎｉｓｓｌｅ  １９１７）との反応物に存在する親化合物の量を、培地単独に存在する量と比較し、パーセントとして表した。同様に、陰性対照の大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）との反応物に存在する親化合物の量を、培地単独に存在する量と比較し、パーセントとして表した。
【０５６５】
理想的な場合では、ＣｌｂＰをコードする大腸菌との反応（複数可）における残留の出発物質の量は、大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）および培地単独条件における量の＜２５％であった。理想的な場合では、ＣｌｂＰをコードする大腸菌との反応（複数可）における残留の出発物質の量は、大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）および培地単独条件における量の２５〜７５％であった。好ましくない場合では、ＣｌｂＰをコードする大腸菌との反応（複数可）における残留の出発物質の量は、大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）および培地単独条件における量の＞７５％であった。結果を表４に要約する。
【０５６６】
【表４−１】
2021535092.tif 000132
【表４−２】
2021535092.tif 000133
【０５６７】
表４では、状態：「−」は、酵素を含まない対照と比較して２０μＭ  ＷＴ  ＣｌｂＰ反応物に残存する＞７５％化合物を示し、「＋」は、酵素を含まない対照と比較して、２０μＭ  ＷＴ  ＣｌｂＰ反応物に残存する２５〜７５％化合物を示し、「＋＋」は、対照と比較して、２０μＭ  ＷＴ  ＣｌｂＰ反応物に残存する＜２５％化合物を示す。
【０５６８】
化合物５、１３、４６、３５、５３、７０、および７２Ｂは、ＣｌｂＰ陽性とＣｌｂＰ陰性放出プロファイルの間の特に好ましい差を呈した。
【０５６９】
実施例９９：ＬＣＭＳ読み取りを用いた他の細菌酵素を用いた細胞ベースアッセイ
実施例９７および９８の原則に従い、実施例９３に列挙したタンパク質の活性および不活性バージョンを、細胞ベースアッセイにおいて適切に設計した化合物と反応する能力についてアッセイしてもよい。
【０５７０】
実施例１００：哺乳類ＣＴ２６．ＣＬ２５マウス結腸直腸癌生存率読み取りを用いた細菌酵素の細胞ベースアッセイ  
化合物を細胞毒に変換する細菌酵素の能力を評価するために、実施例９８の工程１〜３を続けてもよい。
【０５７１】
インキュベーション後、上清を濾過して、すべての細菌を除去してもよい。次に、上清を哺乳類細胞株に適用してもよく、生じる細胞生存率を、例えば、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏキット（Ｐｒｏｍｅｇａ社）を使用して、適切なインキュベーション期間後に評価してもよい。
【０５７２】
実施例１０１：Ｃａｃｏ−２生存率の読み取りを用いたＣｌｂＰの細胞ベースアッセイ：
本実施例は、実施例１００に記載した方法を表す。
【０５７３】
細菌を含まない培地を、示した試験化合物と共にインキュベーションした。ペイロードを欠く認識エレメント−リンカー結合体である（（Ｒ）−Ｎ１−（２−（メチルアミノ）エチル）−２−オクタナミドスクシンアミドを、ＤＭＳＯ中で１：１０００、および培地＋１０％のＦＢＳ中で１：１００００まで連続希釈して、最終濃度１０ｎＭを得た。化合物３５、化合物７６、化合物７７、化合物７８、化合物７９、およびＳＮ−３８を、ＤＭＳＯ中では１：１０００、培地中で１：１０００まで連続希釈して、最終濃度１０ｎＭを得、次に、哺乳類細胞を殺す能力について、細菌を含まない上清を試験した。追加の対照として、試験化合物をまた、細菌を含まない培地とインキュベーションする。上述の工程を、大腸菌（ＣＦＴ０７３  ＡＴＣＣ  ７００９２８、Ｎｉｓｓｌｅ１９１７、またはＢＬ２１（ＤＥ３））の存在下で行い、本出願の結合体の切断をもたらすことができる。
【０５７４】
１日目、ＣＴ２６．ＣＬ２５細胞（１５，０００細胞／ウェル）を２４ウェルプレートに三重に播種し、完全培地１００μＬ中で一晩インキュベーションした。反応物（細菌または培地ブランク）を遠心分離によりペレット化し、次に、上清を０．２μｍの滅菌フィルターに通し、残留細菌を取り除いた。
【０５７５】
２日目に、培地中の各化合物の１０ｎＭの溶液３００μＬを、１日目に調製したＣＴ２６．ＣＬ２５細胞の別々のウェルに適用した。細胞を、３７℃で７２時間インキュベーションした。このポイント後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏキットを使用して生存率を評価した。
【０５７６】
化合物の貯蔵を、細胞の成長または停止を測定することにより達成した（例えば、残りの細胞は、＞９０％生存可能、＞８０％生存可能、＞７０％生存可能、＞６０％生存可能、＞５０％生存可能、＞４０％生存可能、＞３０％生存可能、＞２０％生存可能、または＞１０％生存可能である）。結果を表５に示す。
【０５７７】
【表５】
2021535092.tif 000134
【０５７８】
実施例１００：ＣＴ２６．ＣＬ２５生存率読み取りを用いた他の細菌酵素の細胞ベースアッセイ  
実施例１００および１０１の原則に従い、実施例９３に列挙した酵素を、哺乳類細胞の生存率を低減させることができる細胞毒を生成する能力について評価してもよい。
【０５７９】
実施例１０３：糞便の存在下での細菌酵素活性化による化合物動態
糞便試料を、対象の特異的な遺伝子の存在について、ＰＣＲによりそれを増幅するその遺伝子に特異的なプライマーを使用することにより、アッセイしてもよい。有意なシグナルを生じない試料を、その後の工程でエクスビボでのインキュベーションのための供給材料として使用してもよい。
【０５８０】
対象の遺伝子（野生型または触媒的に不活性）を有する発現ベクターを含有する異種宿主を、所望のレベルまで成長させてもよい。あるいは、野生型遺伝子を含有する天然株、または遺伝子を欠く密接に関連する株を、望ましいレベルまで成長させてもよい。
【０５８１】
糞便試料を、異種宿主（野生型または触媒的に不活性タンパク質のいずれかを発現する）で補正してもよい。あるいは、糞便試料を、天然の株またはその活性を欠く密接に関連する株を用いて、様々なレベルで補正してもよい。
【０５８２】
化合物の安定性を、予め決めた時間間隔後の上清のＬＣＭＳ解析により評価してもよい。化合物安定性も、哺乳類細胞の生存率を低減する濾過した上清の能力により評価してもよい。
【０５８３】
実施例１０４：糞便の存在下でのＣｌｂＰ活性化による化合物動態
本実施例は、実施例１０３に記載した方法を表す。糞便試料を、メタゲノミクス全ゲノムショットガンシーケンシングに供し、続いて、データセットにｃｌｂＰ遺伝子の存在を検索するか、またはｑＰＣＲによりそれに特異的なプライマーを用いて遺伝子を増幅しようと試みた。検出限界を下回るシグナルを与えた試料を、その後の工程で使用した。糞便試料を、嫌気性リン酸緩衝液生理食塩水中の１５％（ｗ／ｖ）スラリーとして再懸濁した。
【０５８４】
実施例９８に詳述した工程１および２に続いて、大腸菌ＣＦＴ０７３  ＡＴＣＣ  ７００９２８、大腸菌Ｎｉｓｓｌｅ  １９１７、または大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）を液体培養で成長させた。
【０５８５】
嫌気性チャンバーにおいて、大腸菌株を、２００μＬの容積のＰＲＡＳ希釈ブランクに存在するすべての生物体の０、１、１０、５０、９０、９９、または１００％を表すように計算した希釈レベルで、工程１で得た糞便試料に加えた。試験化合物（１０μＭ最終濃度）を混合物に加えた。試験化合物も、類似の条件下で最近を含まない培地対照に加えた。プレートを密封し、３７℃で２０時間インキュベーションした。同様の条件下で、出発物質およびペイロード化合物の両方の標準曲線を、細菌を含まない培地中で作製した。
【０５８６】
２０時間後、アリコートを、外部標準曲線と比較した絶対量で、最初にアセトニトリル（１０×希釈）で、次いで（１：１）移動相Ａ−水中の０．１％のギ酸：移動相Ｂ−アセトニトリル中の０．１％のホルミン酸（１０倍希釈）で、最終希釈１：１００に連続希釈することにより、ＬＣＭＳによってペイロードの分解および放出について試験した。理想的な場合では、ＣｌｂＰをコードする大腸菌との反応において放出したペイロードの量は、理論上の最大値の＞７５％であり、大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）および培地単独の条件下では放出されなかった。許容可能な場合では、ＣｌｂＰをコードする大腸菌との反応において放出したペイロードの量は、理論上の最大値の２５〜７５％であり、理論上の最大値の＜２５％は、大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）および培地単独の条件下では放出されなかった。好ましくない場合では、ＣｌｂＰをコードする大腸菌との反応において放出したペイロードの量は、理論上の最大値の＜２５％％であり、理論上の最大値の＞２５％は、大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）および培地単独の条件下では放出されなかった。
【０５８７】
あるいは、化合物を、実施例１００に記載したアッセイに上清を添加することにより、有効性について試験してもよい。
【０５８８】
【表６−１】
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【表６−２】
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【０５８９】
実施例１０５：糞便の存在下での他の細菌酵素による化合物動態
実施例１０３および１０４の原則に従い、実施例９３に列挙した遺伝子を同様の様式で試験してもよい。
【０５９０】
実施例１０６：前臨床マウスモデルにおける化合物有効性
以下の前臨床モデルは、炎症関連結腸直腸癌の研究に適したモデルとして一般的に認められている（Ｄｅ  Ｒｏｂｅｒｔｉｓ，Ｊ．Ｃａｒｃｉｎｏｇ．２０１１，１０，１−２２  Ｔｈｅ  ＡＯＭ／ＤＳＳ  ｍｕｒｉｎｅ  ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｃｏｌｏｎ  ｈａｍｍｏｎａｓｅｓｉｓ：Ｆｒｏｍ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ｔｏ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｓｔｕｄｉｅｓ）。生殖細胞を含まないマウスまたは抗生物質処置をしたマウスを、タンパク質の触媒的に不活性なバージョンを欠くか、または発現するＣｌｂＰまたは大腸菌変異体を発現する野生型大腸菌でモノコロニー化してもよい。細菌コロニー形成を、実験中の様々な時点での細菌コロニー形成単位を決定するための糞便ペレットの収集、均質化、および播種により決定してもよい。コロニー形成を確立した後、発癌物質アゾキシメタン（ＡＯＭ）で腹腔内処置したマウスに、飲料水中に投与したデキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）の７日間のコースの１週間続けた。細菌がコロニー形成していない対照マウスでは、腫瘍は、ＡＯＭ処置の１２週間後（ＡＯＭの数週間後）に形成されると予測する。マウスを、対象の化合物で、腫瘍発現前または腫瘍発現後（ＡＯＭの５〜１１週間後の範囲）の様々な時点で、異なる処置期間で、経口、静脈内または皮下投与してもよい。化合物介入の早期の時点は、前癌を定義し、癌腫への進行を阻害する可能性を決定することを目的としてもよい。後の介入の時点で、確立した癌表現型を処置する化合物の能力を決定してもよい。
【０５９１】
全てのマウスを、ＡＯＭ処置の１８〜２０週間後に屠殺してもよい。結腸を集め、全長について肉眼的にモニタリングしてもよい。化合物の治療有効性を、腫瘍の頻度およびサイズに対するその効果を測定することにより決定し得る。次に、結腸組織を固定し、埋め込むことができ、その後、組織学的検査により、腫瘍形成の様々なマーカーに対する化合物の効果を決定する。炎症、腫瘍浸潤、および異形成のレベルをスコア化し得る。細胞増殖のマーカー（すなわち、Ｋｉ６７）およびＤＮＡ損傷（すなわち、Ｈ２ＡＸ）を評価してもよい。Ｗｎｔ／Ａｐｃ／Ｂ−カテニン経路、ならびにＫ−Ｒａｓおよびｃ−Ｍｙｃ活性化の関与を、モニタリングしてもよい。細菌増殖および増加する炎症マーカーを確立する場合の腫瘍形成の予防における化合物の効果を評価するために、炎症の以下のマーカー、サイトカイン（ＩＬ６、ＩＬ１７、ＩＬ１８、ＩＬ２３、ＩＬ１ｂ、ＩＬ１２、ＴＮＦα）、ＣＯＸ−２、ＴＧＦ−ベータ、およびｉＮＯＳ）をモニタリングしてもよい。例えば、治療上有効な化合物は、上記マーカーのレベルを、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも１００％、未処置コホートよりも低く変化させ得る。
【０５９２】
全生存に対する化合物の効果を決定するために、マウスを細菌でモノコロニー形成し、前述したようにＡＯＭ／ＤＳＳおよび治療化合物で処置してもよい。各マウスの健康状態を、（動き、グルーミング、隆肉に基づいて）スコア付けし、体重を、定期的な間隔で測定し得る。マウスを、健康スコアおよび体重の極度な低下に基づいて、所定の基準を満たした上で安楽死させてもよい。
【０５９３】
実施例１０７：マウスにおける同所性直腸癌モデル
ヒト直腸癌を模倣する同所性直腸癌モデルも使用される。抗生物質処置したＢａｌｂ／Ｃマウスを、タンパク質の触媒的に不活性なバージョンを欠くか、または発現するＣｌｂＰまたは大腸菌変異体を発現する野生型大腸菌でモノコロニー化してもよい。細菌コロニー形成を、実験中の様々な時点での細菌コロニー形成単位を決定するための糞便ペレットの収集、均質化、および播種により決定してもよい。コロニー形成を確立した後、マウス結腸癌細胞株ＣＴ２６−Ｌｕｃ−２Ａ−ＧＦＰ細胞を、Ｂａｌｂ／Ｃマウスの遠位直腸の粘膜下に注射する。５０μｌのＨａｍｉｌｔｏｎシリンジ上の３０Ｇ針を、肛門管の１〜２ｍｍ上の遠位後部直腸粘膜下組織に注意深く挿入する。腫瘍細胞を、５０μＬのＳＦ  ＲＰＭＩ−１６４０：２０％  ＧＦＲ  Ｍａｔｒｉｇｅｌ（商標）の体積で、１ｅ０６腫瘍細胞を直腸粘膜下組織にゆっくりと注入する。動物が麻酔から回復するので、モニタリングし、注射後約１時間観察する。マウスにおける腫瘍発生を追跡し、応答を定量する。腫瘍負荷を、記録したＬｕｍｉｎａ  Ｓｅｒｉｅｓ  ＩＩＩ  ｉｎ−ｌｉｆｅ  Ｉｍａｇｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍ（ＩＶＩＳ；ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）および総放射束（ＴＲＦ；光子／秒（ｐｈ／秒））により、０．２ｍＬのＲｅｄｉＪｅｃｔ  Ｄ−ルシフェリン生物発光基質（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ＃７７０５０４）の腹腔内注射の１２分後に、全身撮像（腹）を介して毎週２回（２×／週）測定する。マウスを、対象の化合物で、腫瘍発現前または腫瘍発現後の様々な時点で、異なる処置期間で、経口、静脈内または皮下投与してもよい。化合物介入の早期の時点は、前癌を定義し、癌腫への進行を阻害する可能性を決定することを目的としてもよい。後の介入の時点で、確立した癌表現型を処置する化合物の能力を決定してもよい。人道的な評価項目に達したとき、全てのマウスを屠殺してもよい。結腸を集め、全長について肉眼的にモニタリングしてもよい。化合物の治療有効性を、初代および第二の腫瘍の頻度およびサイズに対するその効果を測定することにより決定し得る。次に、結腸組織を固定し、埋め込むことができ、その後、組織学的検査により、腫瘍形成の様々なマーカーに対する化合物の効果を決定する。炎症、腫瘍浸潤、および異形成のレベルをスコア化し得る。細胞増殖のマーカー（すなわち、Ｋｉ６７）およびＤＮＡ損傷（すなわち、Ｈ２ＡＸ）を評価してもよい。Ｗｎｔ／Ａｐｃ／Ｂ−カテニン経路、ならびにＫ−Ｒａｓおよびｃ−Ｍｙｃ活性化の関与を、モニタリングしてもよい。細菌増殖および増加する炎症マーカーを確立する場合の腫瘍形成の予防における化合物の効果を評価するために、炎症の以下のマーカー、サイトカイン（ＩＬ６、ＩＬ１７、ＩＬ１８、ＩＬ２３、ＩＬ１ｂ、ＩＬ１２、ＴＮＦ−α、ＣＯＸ−２、ＴＧＦ−β、およびｉＮＯＳ）をモニタリングしてもよい。例えば、治療上有効な化合物は、上記マーカーのレベルを、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも１００％、未処置コホートよりも低く変化させ得る。
【０５９４】
実施例１０９：培養物におけるクレブシエラ・ニューモニエ生存率に対する抗感染結合体の評価
工程１：ｐｋｓ病原性膵島をコードするクレブシエラ・ニューモニエの株（好ましくは、株クレブシエラ・ニューモニエ亜種ＳＧＨ１０、Ｌａｍ、Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２０１８，９，２７０３  Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ  ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ｏｆ  ｈｙｐｅｒｖｉｒｕｌｅｎｔ  クレブシエラ・ニューモニエ均一な群２３のような過病原性の均一の群２３に属する臨床単離物により、早期の出現および急速な全体的播種が明らかにする）を得てもよい。
【０５９５】
工程２：株を、栄養寒天（ＡＴＣＣ培地３）などの適切な固体成長培地上で成長させてもよい。単一のコロニーを選択し、５ｍＬの栄養ブロスに接種し、３７℃で中間の対数期に成長させてもよい。
【０５９６】
工程３：アリコートを回収して、逆転写酵素ポリメラーゼ鎖反応を介して遺伝子ｃｌｂＰの発現、またはウェスタンブロッティングを介してタンパク質ＣｌｂＰの産生を確認してもよい。残りの細菌培養物に、化合物（例えば、０または１０μＭ）を加えてもよく、混合物を３７℃で２時間インキュベーションしてもよい。
【０５９７】
工程４：化合物の有効性を、６００ｎｍでの光学密度をモニターし、播種して、無化合物対照と比較してコロニー形成単位を列挙することにより評価してもよい。残留出発物質および生成物を評価するために、アリコートを回収し、例えば、実施例９５の工程３のように、ＬＣＭＳにより解析してもよい。
【０５９８】
実施例１１０：化膿性肝膿瘍マウスモデルにおけるクレブシエラ・ニューモニエに対する抗感染結合体の評価
以下の前臨床モデルを使用して、ヒトの化膿性肝膿瘍を模倣した（Ｃｈｕｎｇ，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．，２０１１，７９，２２３４−２２４０  Ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｔ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ｉｎ  Ｌｉｖｅｒ  Ａｂｓｃｅｓｓ  Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｅ）。Ｃ５７ＢＬ／６マウス（４〜６週、オス）を得ることができる。マウスを麻酔し、毛を削り、消毒する。前方正中線切開を、マウスの腹壁および腹膜を通して行う。実施例１０７の工程１〜２に従い０．１ｍＬの容量で調製した細菌接種剤を、肝門脈に注射してもよい。細菌接種は、クレブシエラ・ニューモニエの毒性株またはｃｌｂＰ遺伝子を欠く（または遺伝子的に欠失した可能性のある）クレブシエラ・ニューモニエを含んでもよい。次いで、腹壁を縫合で閉じてもよい。
【０５９９】
マウスを、対象の化合物で、細菌感染前または後の様々な時点で、異なる処置期間で、経口、静脈内または皮下投与してもよい。糞便を、マウスから定期的に集め、培養し、クレブシエラ・ニューモニエがマウスの消化管に浸潤したかどうかを評価してもよい。すべてのマウスを、細菌感染の１〜３週間後に屠殺してもよい。肝膿瘍形成を調べるために、肝臓切片をマウスから取り出してもよい。肝臓を病理組織学的に調べて、膿瘍の数および膿瘍のサイズを含むがこれらに限定されない指標を評価してもよい。クレブシエラ・ニューモニエを肝臓切片から培養して、細菌感染を除去する化合物の有効性を評価してもよい。さらに、屠殺時にマウスから他の器官を取り出し、それを使用して、クレブシエラ・ニューモニエを培養し、細菌が転移したかどうかを判断してもよい。
【０６００】
他の実施形態
記載される本発明の様々な改変およびバリエーションが、本発明の主旨および範囲から逸脱することなく当業者には明白であろう。本発明は特定の実施形態と連関させて記載されているが、請求される本発明は、そうした特定の実施形態に不当に拘束されるべきではないことを理解されたい。事実、当業者にとって明白な、本発明の実施に関する記載の様式の様々な改変が、本発明の範囲の内にあることが意図される。
【０６０１】
他の実施形態は、特許請求の範囲にある。
【国際調査報告】
2021535092.tif 000148
2021535092.tif 000149