(57)【要約】  本開示は、水不溶性炭水化物および近赤外線（ＮＩＲ）造影剤などの蛍光色素を含んでなる溶液に関し、その溶液はｉｎ  ｖｉｖｏなどの水性条件下で固化して、例えば、ゲルガラス、半固体、固体、結晶またはそれらの任意の混合物を形成する。本開示はさらに、このような溶液の調製およびｉｎ  ｖｉｖｏイメージングまたは手術のガイドまたは介入的治療手技のためのこのような溶液の使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ．水不溶性炭水化物、
ｂ．蛍光色素、および
ｃ．−２〜２の範囲のｌｏｇＰを有する有機溶媒
を含んでなる、溶液。
【請求項２】
前記蛍光色素が２を上回るｌｏｇＰを有し、それにより、水性条件下で溶液における蛍光色素の保持を可能とする、請求項１に記載の溶液。
【請求項３】
水性条件下で５時間後に１０％未満、例えば５％未満、の蛍光色素が放出される、請求項１または２に記載の溶液。
【請求項４】
前記蛍光色素が近赤外線（ＮＩＲ）造影剤である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項５】
ＮＩＲ造影剤がフタロシアニン、ナフタロシアニン、ポルフィン、アントラコシアニンおよびシアニン色素からなる群から選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項６】
ＮＩＲ造影剤が、ＰＣ１、ＰＣ２および／またはＰＣ３などのフタロシアニンである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項７】
前記蛍光色素が、ＳＡＩＢ、ＳＳＩＢおよびＬＯＩＢからなる群から選択される水不溶性炭水化物にコンジュゲートされている、請求項１〜６のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項８】
前記水不溶性炭水化物が、マルトース、トレハロース、ラクトースおよびスクロースからなる群から選択される二糖類を含んでなり、炭水化物を水不溶性とするように１以上のヒドロキシル基が官能化されている、請求項１に記載の溶液。
【請求項９】
前記水不溶性炭水化物が、Ｃ２−Ｃ７エステルを形成するように官能化された１以上のヒドロキシル基を含んでなる、請求項１〜８のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項１０】
Ｃ２−Ｃ７エステルを形成するように官能化されたヒドロキシル基の数が、ｎ、ｎ−１、ｎ−２、ｎ−３、ｎ−４またはｎ−５であり、ここで、ｎは前記炭水化物のヒドロキシル基の総数である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項１１】
前記Ｃ２−Ｃ７エステルが、炭水化物のヒドロキシル基とＣ２−Ｃ７アルカノイルのカルボニル基の間の結合により形成される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項１２】
前記Ｃ２−Ｃ７アルカノイルがアセチル、プロパノイル、イソブタノイルおよびベンゾイルから選択される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項１３】
前記水不溶性炭水化物が、オクタイソ酪酸マルトース（ＭＯＩＢ）、ジ酢酸ヘキサイソ酪酸スクロース（ＳＡＩＢ）、オクタイソ酪酸スクロース（ＳＯＩＢ）、オクタイソ酪酸ラクトース（ＬＯＩＢ）、およびオクタイソ酪酸トレハロース（ＴＯＩＢ）からなる群から選択される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項１４】
前記有機溶媒が、水性条件下で溶液から拡散して、ゲル、ガラス、半固体、固体、結晶またはその任意の組合せを提供する、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項１５】
粘度が、水性条件下で１０００センチポアズ（ｃＰ）より多く、例えば５０００ｃＰより多く、例えば１００００ｃＰより多く、例えば５００００ｃＰより多く、例えば１０００００ｃＰより多く増す、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項１６】
水性条件下で５時間未満、例えば４時間未満、例えば３時間未満、例えば２時間未満で固化する、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項１７】
前記水性条件がｉｎ  ｖｉｖｏ条件である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項１８】
前記有機溶媒が、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、イソブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、ベンジルアルコール、プロピレンカーボネートおよびジメチルスルホキシドからなる群から選択される、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項１９】
モノグリセリド、ジグリセリドおよび／またはトリグリセリドをさらに含んでなる、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項２０】
前記蛍光色素が放射性核種に配位している、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項２１】
前記放射性核種がＴｃ−９９ｍ、Ｉｎ−１１１、Ｇａ−６７、Ｌｕ−１７７、Ｔｌ−２０１、Ｓｎ−１１７ｍ、Ｃｕ−６４、Ｍｎ−５２、Ｚｒ−８９、Ｃｏ−５５、Ｓｃ−４４、Ｔｉ−４５、Ｓｃ−４３、Ｃｕ−６１、Ａｓ−７２、Ｔｅ−１５２、Ｆ−１８、Ｇａ−６８、Ｃ−１１、Ｎｄ−１４０およびＴｅ−１４９からなる群から選択される、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項２２】
Ｃｕ−６４、ならびにＰＣ１、ＰＣ２、および／またはＰＣ３を含んでなる、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項２３】
さらなる造影剤を含んでなる、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項２４】
前記さらなる造影剤が、Ｘ線剤、ＣＴ剤、ＭＲＩ剤、ＰＥＴ剤およびＳＰＥＣＴ剤からなる群から選択される、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項２５】
前記さらなる造影剤が、式（ＩＩＩ）：
【化１】
2021527704.tif 000014
の構造を有する、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項２６】
ｉｎ  ｖｉｖｏ診断ツールとして使用するための、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項２７】
ｉｎ  ｖｉｖｏイメージングの方法であって、
ａ．請求項１〜２６のいずれか一項に記載の溶液を、それを必要とする個体に投与すること、
ｂ．蛍光色素の励起、および
ｃ．蛍光色素の検出
を含んでなる、方法。
【請求項２８】
前記溶液が、注入および／または塗抹により投与される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
ｉｎ  ｖｉｖｏイメージングのための、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の溶液の使用。
【請求項３０】
基準マーカーとしての、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の溶液の使用。
【請求項３１】
手術のガイドのための、求項１〜２６のいずれか一項に記載の溶液の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、水不溶性炭水化物および近赤外線（ＮＩＲ）造影剤などの蛍光色素を含んでなる溶液に関し、その溶液はｉｎ  ｖｉｖｏなどの水性条件下で固化して、例えば、ゲルガラス、半固体、固体、結晶またはそれらの任意の混合物を形成する。本開示はさらに、このような溶液の調製ならびにｉｎ  ｖｉｖｏイメージングおよび／または手術のガイドおよび／または介入的手技のためのこのような溶液の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
手術は、永らく固形癌の治療の基礎であった。手術の程度、外科的アプローチおよびその奏効転帰は、癌のタイプ、その病期、サイズ、分布および場所によって異なる。癌の初期段階に行われる手術は、良好な治療転帰をもたらす。外科手技の目的は、待期的または根治的であり得る。待期的手術は、癌により引き起こされた症状を軽減することを目的とし、根治的手術は、治癒目的を持つ。手術は、結腸直腸癌前駆体の切除または肺におけるすりガラス陰影の切除の場合のように癌を予防する目的で行われる場合もある。治癒目的および予防目的の癌手術では、患者から総ての悪性細胞が除去されることが最も良い。従って、外科手技の精密さが主となる。
【０００３】
対象が外科医の裸眼で見えない場合には、外科手技の詳細な計画が必要とされる。計画目的で、術前スキャン（ほとんどの場合、ＭＲＩおよびＣＴ）が対象構造および器官の３Ｄモデルを構築するために使用される。術前スキャンからの立体復元もまた、患者に特異的なバーチャルリアリティシミュレーションの開発の基礎であり、それにより、外科医は実際の介入を行う前に手技訓練を行うことができる。
【０００４】
ますます利用度が高くなっている別のアプローチは、外科手技のリアルタイムイメージガイダンスの使用である。Ｃ−アームおよび術中コーンビームコンピューター断層撮影法（ＣＢＣＴ）などの技術がハイブリッド手術室に組み込まれている。同様のことがフルオロスコピーおよび磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）にも当てはまる。しかしながら、Ｃ−アームおよびＣＢＣＴは両方とも、軟組織が見えず、金組織マーカーが補助として使用される場合が多いＸ線に基づくイメージングを基にしている。乳癌の場合のように、マーカーを用いて、また用いずに、術中ガイドに超音波が使用されることもある。
【０００５】
肺癌では、スクリーニングプログラムが登場し、初期段階には小型の孤立性肺結節(solitary pulmonary nodules)（ＳＰＮ）数の増加が特定される。最適には、このようなＳＰＮは、疾患の進行を防ぐために診断時にビデオ補助胸腔鏡手術(video assisted thoracic surgery)（ＶＡＴＳ）によって外科的に除去されるべきである。ＳＰＮの大部分は、小型でかつ／または胸膜から離れているために触知不能であり、外科医にそれらを位置特定し、除去することを不可能とするので、この状況は外科医と患者の双方に挫折感を抱かせる問題を引き起こした。結果として、ＶＡＴＳ手技は、結節が触知可能な大きさに成長するまで延期される。このような延期は望ましくなく、転移癌への進行のリスクを高め、これが予後を著しく増悪し、治療関連コストを引き上げる。
【０００６】
最新のマンモグラフィーは、外科医が正確に位置特定し、切除するには難しいますます小さなサイズで病巣を識別する。ワイヤガイド(wire-guided localization)（ＷＧＬ）およびラジオガイド潜在性病変位置特定(radio-guided occult lesion localization)（ＲＯＬＬ）を含むいくつかのアプローチが外科的転帰を改善するために現在使用されている。見られた手術ガイドの利益は、ＲＯＬＬ技術の使用を孤立性肺腫瘍および甲状腺癌腫へ拡大した。
【０００７】
よって、手術中に癌病変を特定するという問題を克服するため、外科的露出中に診断画像の可能性を十分に活用するために、手術中に位置特定および識別が可能なマーカーが鋭意探究されている。試験マーカーの例としては、（ｉ）メチレンブルーなどの組織カラー染料およびＩＣＧなどの近赤外線（ＮＩＲ）色素、（ｉｉ）放射線不透過性オイルであるリピオドール、（ｉｉｉ）フックワイヤ、（ｉｖ）金基準、および（ｖ）９９ｍＴｃ放射性標識マーカーがある。最適なマーカーは、ｉ）診断画像上で可視化でき、ｉｉ）手術中にいずれの組織深度でも位置特定しやすく、ｉｉｉ）局在後に非局在化も移動もせず、ｉｖ）高精度で位置特定でき、かつｖ）気胸またはその他の望ましくない合併症などの患者への付加的リスクを生じない。しかしながら、これらの基準を満たす現在利用可能なマーカーは存在しない。
【０００８】
ＮＩＲカメラ、ＳＰＥＣＴスキャナーおよびガンマプローブ検出器は、標準的な手術ならびにＩｎｔｕｉｔｉｖｅ  Ｓｕｒｇｉｃａｌ製のダビンチシステムなどのロボット手術システムの両方に搭載されている。同じことがＰＥＴスキャナーにも当てはまる。ロボット補助手術は、腹腔鏡手術を行うためにロボットアームを使用する。ロボット手術を用いる利点には、より優れた可視化、操作性の増進およびより優れた精度が含まれ、これらは患者にとって疼痛および不快感の軽減、より速い回復期間および通常活動への復帰、感染リスクの軽減となるより小さな切開、ならびに最小の瘢痕を含むいくつかの利益をもたらす。
【０００９】
よって、良好な基準マーカーの開発の分野においては、画像ガイド手術の分野において発達している技術と併用する差し迫った必要がある。
【発明の概要】
【００１０】
本開示は、外科的介入をガイドするまたは生検後などに身体の部位をマークするための優れた基準マーカーを提供する。本開示は、ｉｎ  ｖｉｖｏなどの水性条件下で固化して、例えば、ゲル、ガラス、半固体、固体、結晶またはそれらの任意の混合物を形成し、その後、蛍光色素制御放出または保持のためのシステムを提供し、かつ／または１もしくは複数の画像診断法によるイメージングのための組織マーカーとして働き得る注入可能な溶液を提供する。本開示の溶液は、最新の生体材料および色素技術を、生体適合性、分解性があり、複数の画像診断法で可視化でき、かつ、容易に注入でき、現在の技術水準の気管支鏡に適合する新しい外科的マーカーに結びつける。本開示の溶液の他の利点は、それが従来のシリンジと針の注入ならびに限定されるものではないが、内視鏡、ＣＴおよびＵＳガイド吸引および注入技術を含む現在の技術水準の注入技術に適合することを含む。よって、本開示の溶液は、規定の位置、例えば、腫瘍、異物、重要な周縁部および神経の位置における蛍光色素の定着を提供する。
【００１１】
本開示は、水不溶性炭水化物、蛍光色素および−２〜２の範囲のｌｏｇＰを有する溶媒を含んでなる溶液に関する。１つの態様において、蛍光色素は、２を上回るｌｏｇＰを有する。蛍光色素の疎水性により、この溶液中での蛍光色素の拡散速度が低いことおよび／または水相に対するその親和性が低く、それにより、定着させた溶液に蛍光色素が保持されることが保証される。例えば、ある腫瘍部位にこの溶液を投与すると、溶液の溶媒が周囲の環境に拡散して、その結果として粘度が増し、やがて溶液が固化して、例えば、ゲル、ガラス、半固体、固体、結晶またはそれらの任意の混合物を形成し、それにより、蛍光色素の動的トラップが提供される。それにより、蛍光色素は、注入または直接投与、例えば、腫瘍除去後の手術床での散布の投与部位に保持され、基準マーカーの正確な位置特定を可能とする。第２の別の態様において、蛍光色素は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）に共有結合的にコンジュゲートされ、２０００を超える分子量を有する。ＰＥＧの親水性は、溶液からの蛍光色素の放出をもたらし、その後、蛍光色素−ＰＥＧコンジュゲートは、それを必要とする個体に投与されると、局所リンパ系に入り、これを染色し、リンパ節に蓄積し得る。
【００１２】
本開示のゲルに基づく基準マーカーの利益は、ゲルが現行の標準的手法に比べて拡散によって起こる移動または分散を受けにくいこと、ＮＩＲ／ＰＥＴ／ＳＰＥＣＴ／ＣＴマーカーなどの複数の画像診断法に適合可能であること、処置が終わった後に外科的に取り出す必要がないこと、生体適合性が改善されていること、侵襲性が最小の適用法を用いて挿入／注入できることが含まれる。全体的にこれは患者の快適性および処置の転帰の改善をもたらし、小ゲージの針または気管支鏡で容易に注入できることは、基準マーカーが適切である潜在的適用を拡大する。
【００１３】
本明細書の上記で述べたように、画像ガイド手術の分野においては、良好な基準マーカーが必要である。本開示の溶液は、ＮＩＲ／ＰＥＴ／ＳＰＥＣＴ／ＣＴ／ＭＲＩ／ＵＳマーカーなどの複数の画像診断法に適合させることができ、ＰＥＴまたはＳＰＥＣＴイメージングまたはハンドヘルドガンマプローブ検出と併用可能である。現在、注入部位に放射能を保持することができる液体基準マーカー技術で利用可能なものはなく、ＣＴ造影剤で希釈された、９９ｍＴｃで標識された大凝集塊の溶液がＣＴガイダンスにより小節に注入されるあまり魅力的でない方法が使用される。しかしながら、このような溶液はマーカーの急速なクリアランスと活性の拡散を受け、精度および有用性を低下させる。
【００１４】
理想的なマーカーは、診断画像上で可視化され、ＶＡＴＳ手技中に識別が容易でなければならない。本開示は、ｉ）非ガイド注入、超音波（ＵＳ）、コンピューター断層撮影法（ＣＴ）または注入の蛍光透視画像ガイダンスを用いて罹患組織へ注入することが容易であり、かつ、ｉｉ）例えば、胸膜表面から離れた肺組織内の深部に位置したいっそう小さな小節、軟組織内の異物、腫瘍境界、臨界構造およびさらなる組織が除去されることを要求される術後床を位置特定する確率を改善する多モード基準マーカーを記載する。これらのマーカーは、注入前には流体であり、高精度でマーカーの局在を可能とする現在の技術水準の電磁式ナビゲーション気管支鏡(electromagnetic navigation bronchoscopes)（ＥＮＢ）と適合する。注入すると、この溶液は固化してゲル、ガラス、半固体、固体、結晶またはその任意の組合せを形成し、これが移動のリスクを最小にし、外科医が末梢に局在するＳＰＮに関して触診により病変を特定することを可能とする。
【００１５】
本開示の溶液は、基準マーカーがガイドを保証する総ての外科手技／適応に使用可能である。ロボット手術は、本開示の適用のもう１つの分野であり、この場合、イメージングによるガイドが患者内のロードマップおよび基準マーカーとしての診断画像をビーコンとして用いてロボットにナビゲートさせる。
【００１６】
よって、１つの態様において、本開示は、
ａ．水不溶性炭水化物、
ｂ．蛍光色素、および
ｃ．−２〜２の範囲のｌｏｇＰを有する有機溶媒
を含んでなる溶液に関する。
【００１７】
１つの態様において、本開示は、２を上回るｌｏｇＰを有し、それにより、水性条件下で溶液における蛍光色素の保持を可能とする、本明細書に開示されるような溶液に関する。
【００１８】
１つの態様において、本開示は、蛍光色素がポリエチレングリコールに共有結合的にコンジュゲートされ、２０００Ｄａを超える分子量を有し、それにより、水性条件下で溶液からの蛍光色素の放出が提供される、本明細書に開示されるような溶液に関する。
【００１９】
蛍光色素−ＰＥＧコンジュゲートのこのような放出は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて溶液からの放出後に、リンパ節における前記コンジュゲートの蓄積を提供し得る。
【００２０】
１つの態様において、本開示は、蛍光色素が放射性核種に配位している、本明細書に記載されるような溶液に関する。蛍光色素の放射性核種への配位は、複数の画像診断法および核医学検出技術により検出可能な基準マーカーを提供し得る。
【００２１】
１つの態様において、本開示は、ｉｎ  ｖｉｖｏイメージングツールとして使用するための、本明細書に記載されるような溶液に関する。
【００２２】
別の態様において、本開示は、
ａ．本明細書に記載されるような溶液を、それを必要とする個体に投与すること、
ｂ．蛍光色素の励起、および
ｃ．蛍光色素の検出
を含んでなる、ｉｎ  ｖｉｖｏイメージングの方法に関する。
【００２３】
１つの態様において、本開示は、ｉｎ  ｖｉｖｏイメージングのための、本明細書に記載されるような溶液の使用に関する。
【００２４】
１つの態様において、本開示は、手術および介入的治療手技のガイドのための、本明細書に記載されるような溶液の使用に関する。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１Ａ】図１：トルエンまたはマーカー配合物に溶解させたＰＣ１、ＰＣ２およびＰＣ３の吸光度および蛍光スペクトル。（Ａ）トルエンに溶解させたＰＣ１、および（Ｂ）ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０マーカー配合物に溶解させたＰＣ１。（Ｃ）トルエンに溶解させたＰＣ２、および（Ｄ）ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０マーカー配合物に溶解させたＰＣ２。（Ｅ）トルエンに溶解させたＰＣ３、および（Ｆ）ＳＡＩＢ：ＢＡ  ８０：２０マーカー配合物に溶解させたＰＣ３。
【図１Ｂ】図１：トルエンまたはマーカー配合物に溶解させたＰＣ１、ＰＣ２およびＰＣ３の吸光度および蛍光スペクトル。（Ａ）トルエンに溶解させたＰＣ１、および（Ｂ）ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０マーカー配合物に溶解させたＰＣ１。（Ｃ）トルエンに溶解させたＰＣ２、および（Ｄ）ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０マーカー配合物に溶解させたＰＣ２。（Ｅ）トルエンに溶解させたＰＣ３、および（Ｆ）ＳＡＩＢ：ＢＡ  ８０：２０マーカー配合物に溶解させたＰＣ３。
【図１Ｃ】図１：トルエンまたはマーカー配合物に溶解させたＰＣ１、ＰＣ２およびＰＣ３の吸光度および蛍光スペクトル。（Ａ）トルエンに溶解させたＰＣ１、および（Ｂ）ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０マーカー配合物に溶解させたＰＣ１。（Ｃ）トルエンに溶解させたＰＣ２、および（Ｄ）ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０マーカー配合物に溶解させたＰＣ２。（Ｅ）トルエンに溶解させたＰＣ３、および（Ｆ）ＳＡＩＢ：ＢＡ  ８０：２０マーカー配合物に溶解させたＰＣ３。
【図１Ｄ】図１：トルエンまたはマーカー配合物に溶解させたＰＣ１、ＰＣ２およびＰＣ３の吸光度および蛍光スペクトル。（Ａ）トルエンに溶解させたＰＣ１、および（Ｂ）ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０マーカー配合物に溶解させたＰＣ１。（Ｃ）トルエンに溶解させたＰＣ２、および（Ｄ）ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０マーカー配合物に溶解させたＰＣ２。（Ｅ）トルエンに溶解させたＰＣ３、および（Ｆ）ＳＡＩＢ：ＢＡ  ８０：２０マーカー配合物に溶解させたＰＣ３。
【図１Ｅ】図１：トルエンまたはマーカー配合物に溶解させたＰＣ１、ＰＣ２およびＰＣ３の吸光度および蛍光スペクトル。（Ａ）トルエンに溶解させたＰＣ１、および（Ｂ）ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０マーカー配合物に溶解させたＰＣ１。（Ｃ）トルエンに溶解させたＰＣ２、および（Ｄ）ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０マーカー配合物に溶解させたＰＣ２。（Ｅ）トルエンに溶解させたＰＣ３、および（Ｆ）ＳＡＩＢ：ＢＡ  ８０：２０マーカー配合物に溶解させたＰＣ３。
【図１Ｆ】図１：トルエンまたはマーカー配合物に溶解させたＰＣ１、ＰＣ２およびＰＣ３の吸光度および蛍光スペクトル。（Ａ）トルエンに溶解させたＰＣ１、および（Ｂ）ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０マーカー配合物に溶解させたＰＣ１。（Ｃ）トルエンに溶解させたＰＣ２、および（Ｄ）ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０マーカー配合物に溶解させたＰＣ２。（Ｅ）トルエンに溶解させたＰＣ３、および（Ｆ）ＳＡＩＢ：ＢＡ  ８０：２０マーカー配合物に溶解させたＰＣ３。
【図２Ａ】図２：ＳＡＩＢ：ｘ−ＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０中のフタロシアニン色素ＰＣ２の蛍光自己消光分析。（Ａ）色素濃度の関数として示されるＰＣ２の蛍光放出スペクトル。（Ｂ）ＰＣ２色素濃度の関数として示される（Ａ）において得られたＰＣ２の正規化最大蛍光強度。放出スペクトルは、７６８ｎｍにおける励起により、３反復で記録した。（Ｃ）ある範囲の異なるＰＣ２色素濃度に関してＥｔＯＨの存在下（＋ＥｔＯＨ）および不在下（−ＥｔＯＨ）で記録した表面蛍光強度画像。（Ｄ）ＰＣ２色素濃度の関数として示される（Ｃ）から得られたＰＣ２の正規化表面蛍光強度。表面蛍光画像強度は、ＩｍａｇｅＪを用いた強度分析により得られたものである。
【図２Ｂ】図２：ＳＡＩＢ：ｘ−ＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０中のフタロシアニン色素ＰＣ２の蛍光自己消光分析。（Ａ）色素濃度の関数として示されるＰＣ２の蛍光放出スペクトル。（Ｂ）ＰＣ２色素濃度の関数として示される（Ａ）において得られたＰＣ２の正規化最大蛍光強度。放出スペクトルは、７６８ｎｍにおける励起により、３反復で記録した。（Ｃ）ある範囲の異なるＰＣ２色素濃度に関してＥｔＯＨの存在下（＋ＥｔＯＨ）および不在下（−ＥｔＯＨ）で記録した表面蛍光強度画像。（Ｄ）ＰＣ２色素濃度の関数として示される（Ｃ）から得られたＰＣ２の正規化表面蛍光強度。表面蛍光画像強度は、ＩｍａｇｅＪを用いた強度分析により得られたものである。
【図２Ｃ】図２：ＳＡＩＢ：ｘ−ＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０中のフタロシアニン色素ＰＣ２の蛍光自己消光分析。（Ａ）色素濃度の関数として示されるＰＣ２の蛍光放出スペクトル。（Ｂ）ＰＣ２色素濃度の関数として示される（Ａ）において得られたＰＣ２の正規化最大蛍光強度。放出スペクトルは、７６８ｎｍにおける励起により、３反復で記録した。（Ｃ）ある範囲の異なるＰＣ２色素濃度に関してＥｔＯＨの存在下（＋ＥｔＯＨ）および不在下（−ＥｔＯＨ）で記録した表面蛍光強度画像。（Ｄ）ＰＣ２色素濃度の関数として示される（Ｃ）から得られたＰＣ２の正規化表面蛍光強度。表面蛍光画像強度は、ＩｍａｇｅＪを用いた強度分析により得られたものである。
【図２Ｄ】図２：ＳＡＩＢ：ｘ−ＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０中のフタロシアニン色素ＰＣ２の蛍光自己消光分析。（Ａ）色素濃度の関数として示されるＰＣ２の蛍光放出スペクトル。（Ｂ）ＰＣ２色素濃度の関数として示される（Ａ）において得られたＰＣ２の正規化最大蛍光強度。放出スペクトルは、７６８ｎｍにおける励起により、３反復で記録した。（Ｃ）ある範囲の異なるＰＣ２色素濃度に関してＥｔＯＨの存在下（＋ＥｔＯＨ）および不在下（−ＥｔＯＨ）で記録した表面蛍光強度画像。（Ｄ）ＰＣ２色素濃度の関数として示される（Ｃ）から得られたＰＣ２の正規化表面蛍光強度。表面蛍光画像強度は、ＩｍａｇｅＪを用いた強度分析により得られたものである。
【図３】図３：ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０配合物からのＰＣ２色素のｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出。バッファーへの注入後６日目のＰＢＳ放出媒体中のＰＣ２のＵＶｖｉｓスペクトル（３反復で実施）。１０％放出に相当する標準を参照に含めた。６日の時間枠内で放出されたＰＣ２色素はほとんど無かった。
【図４Ａ】図４：ＵＶｖｉｓおよび蛍光により調べたＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０中のＰＣ２色素の銅誘導性消光。（Ａ）Ｃｕ／ＰＣ２比の関数として示されるＰＣ２の正規化吸収スペクトル。（Ｂ）Ｃｕ／ＰＣ２比の関数として示されるＰＣ２の正規化蛍光強度。
【図４Ｂ】図４：ＵＶｖｉｓおよび蛍光により調べたＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０中のＰＣ２色素の銅誘導性消光。（Ａ）Ｃｕ／ＰＣ２比の関数として示されるＰＣ２の正規化吸収スペクトル。（Ｂ）Ｃｕ／ＰＣ２比の関数として示されるＰＣ２の正規化蛍光強度。
【図５Ａ】図５：ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０またはＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２  ７０：１０：２０：０．１中に配合した場合のＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５の蛍光放出。（Ａ）異なるＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５色素濃度での、ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０マーカー配合物中のＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５の蛍光放出。（Ｂ）ＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２：ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５  ７０：１０：２０：０．１：０．０１の正規化吸光度および放出。
【図５Ｂ】図５：ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０またはＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２  ７０：１０：２０：０．１中に配合した場合のＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５の蛍光放出。（Ａ）異なるＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５色素濃度での、ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０マーカー配合物中のＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５の蛍光放出。（Ｂ）ＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２：ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５  ７０：１０：２０：０．１：０．０１の正規化吸光度および放出。
【図６Ａ】図６：雄ラットの大腿および精巣からのＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５  ＮＩＲマーカー（ＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２：ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５  ７０：１０：２０：０．１：０．０１）の外科的切除。ラットの右大腿からの外科的切除のＲＧＢ（Ａ）およびＮＩＲ（Ｂ）画像。ラットの精巣内のマーカーのＲＧＢ（Ｃ）およびＮＩＲ（Ｄ）画像（ＮＩＲカメラ積分時間４０ミリ秒）。
【図６Ｂ】図６：雄ラットの大腿および精巣からのＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５  ＮＩＲマーカー（ＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２：ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５  ７０：１０：２０：０．１：０．０１）の外科的切除。ラットの右大腿からの外科的切除のＲＧＢ（Ａ）およびＮＩＲ（Ｂ）画像。ラットの精巣内のマーカーのＲＧＢ（Ｃ）およびＮＩＲ（Ｄ）画像（ＮＩＲカメラ積分時間４０ミリ秒）。
【図６Ｃ】図６：雄ラットの大腿および精巣からのＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５  ＮＩＲマーカー（ＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２：ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５  ７０：１０：２０：０．１：０．０１）の外科的切除。ラットの右大腿からの外科的切除のＲＧＢ（Ａ）およびＮＩＲ（Ｂ）画像。ラットの精巣内のマーカーのＲＧＢ（Ｃ）およびＮＩＲ（Ｄ）画像（ＮＩＲカメラ積分時間４０ミリ秒）。
【図６Ｄ】図６：雄ラットの大腿および精巣からのＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５  ＮＩＲマーカー（ＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２：ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５  ７０：１０：２０：０．１：０．０１）の外科的切除。ラットの右大腿からの外科的切除のＲＧＢ（Ａ）およびＮＩＲ（Ｂ）画像。ラットの精巣内のマーカーのＲＧＢ（Ｃ）およびＮＩＲ（Ｄ）画像（ＮＩＲカメラ積分時間４０ミリ秒）。
【図７Ａ】図７：ブタ肺組織におけるＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５マーカー（ＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２：ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５  ７０：１０：２０：０．１：０．０１）の注入。（Ａ）開放胸腔。（Ｂ）３箇所における１００μＬ  ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５マーカーの注入。（Ｃ）マーカーの位置および組織深度のＲＧＢ画像（左＝深部、中央＝中間、右＝表面）。（Ｄ）３つのマーカーのＮＩＲ画像（積分時間８３ミリ秒）。ＣとＤには、３つのマーカーの位置を強調するために破線の円を挿入している。
【図７Ｂ】図７：ブタ肺組織におけるＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５マーカー（ＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２：ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５  ７０：１０：２０：０．１：０．０１）の注入。（Ａ）開放胸腔。（Ｂ）３箇所における１００μＬ  ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５マーカーの注入。（Ｃ）マーカーの位置および組織深度のＲＧＢ画像（左＝深部、中央＝中間、右＝表面）。（Ｄ）３つのマーカーのＮＩＲ画像（積分時間８３ミリ秒）。ＣとＤには、３つのマーカーの位置を強調するために破線の円を挿入している。
【図７Ｃ】図７：ブタ肺組織におけるＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５マーカー（ＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２：ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５  ７０：１０：２０：０．１：０．０１）の注入。（Ａ）開放胸腔。（Ｂ）３箇所における１００μＬ  ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５マーカーの注入。（Ｃ）マーカーの位置および組織深度のＲＧＢ画像（左＝深部、中央＝中間、右＝表面）。（Ｄ）３つのマーカーのＮＩＲ画像（積分時間８３ミリ秒）。ＣとＤには、３つのマーカーの位置を強調するために破線の円を挿入している。
【図７Ｄ】図７：ブタ肺組織におけるＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５マーカー（ＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２：ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５  ７０：１０：２０：０．１：０．０１）の注入。（Ａ）開放胸腔。（Ｂ）３箇所における１００μＬ  ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５マーカーの注入。（Ｃ）マーカーの位置および組織深度のＲＧＢ画像（左＝深部、中央＝中間、右＝表面）。（Ｄ）３つのマーカーのＮＩＲ画像（積分時間８３ミリ秒）。ＣとＤには、３つのマーカーの位置を強調するために破線の円を挿入している。
【図８Ａ】図８：６４Ｃｕで放射性標識したＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：ＰＣ２（７０：１０：２０：０．０１）のラジオ−ＴＬＣクロマトグラム。（Ａ）ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨマーカーにおける６４Ｃｕ−ＰＣ２の複合体形成（結果はＲｆ＝０．９〜１．０）。（Ｂ）ＰＣ２を含有しないＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨマーカーの放射性標識の対照実験（結果はＲｆ＝０）。
【図８Ｂ】図８：６４Ｃｕで放射性標識したＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：ＰＣ２（７０：１０：２０：０．０１）のラジオ−ＴＬＣクロマトグラム。（Ａ）ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨマーカーにおける６４Ｃｕ−ＰＣ２の複合体形成（結果はＲｆ＝０．９〜１．０）。（Ｂ）ＰＣ２を含有しないＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨマーカーの放射性標識の対照実験（結果はＲｆ＝０）。
【図９Ａ】図９：ＰＣ２色素を含有する６４Ｃｕ放射性標識ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０マーカー配合物の導入効率およびｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出。（Ａ）ＰＣ２色素濃度の関数として示される６４Ｃｕ放射性標識ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０マーカー配合物の導入効率。（Ｂ）種々のＰＣ２色素濃度を含有するＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０マーカー配合物に関する、時間の関数として示されるＴＲＩＳ緩衝ＥＤＴＡリポソーム含有媒体中への６４Ｃｕのｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出。実験は総て３反復で行い、結果は平均±ＳＥＭとして示す。
【図９Ｂ】図９：ＰＣ２色素を含有する６４Ｃｕ放射性標識ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０マーカー配合物の導入効率およびｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出。（Ａ）ＰＣ２色素濃度の関数として示される６４Ｃｕ放射性標識ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０マーカー配合物の導入効率。（Ｂ）種々のＰＣ２色素濃度を含有するＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０マーカー配合物に関する、時間の関数として示されるＴＲＩＳ緩衝ＥＤＴＡリポソーム含有媒体中への６４Ｃｕのｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出。実験は総て３反復で行い、結果は平均±ＳＥＭとして示す。
【図１０Ａ】図１０：注入後の時間の関数としての、６４Ｃｕの生体分布、マーカー体積、およびマーカー蛍光強度の変化。（Ａ）ＰＥＴに基づくマーカー、肝臓、心臓および膀胱における６４Ｃｕの生体分布。（Ｂ）時間の関数として示されるマーカー体積。（Ｃ）投与後の時間の関数として示されるマーカーから放出された総ＮＩＲ蛍光強度。（Ｄ）臓器のウェルカウントデータに基づく注入４８時間後の６４Ｃｕの生体分布。
【図１０Ｂ】図１０：注入後の時間の関数としての、６４Ｃｕの生体分布、マーカー体積、およびマーカー蛍光強度の変化。（Ａ）ＰＥＴに基づくマーカー、肝臓、心臓および膀胱における６４Ｃｕの生体分布。（Ｂ）時間の関数として示されるマーカー体積。（Ｃ）投与後の時間の関数として示されるマーカーから放出された総ＮＩＲ蛍光強度。（Ｄ）臓器のウェルカウントデータに基づく注入４８時間後の６４Ｃｕの生体分布。
【図１０Ｃ】図１０：注入後の時間の関数としての、６４Ｃｕの生体分布、マーカー体積、およびマーカー蛍光強度の変化。（Ａ）ＰＥＴに基づくマーカー、肝臓、心臓および膀胱における６４Ｃｕの生体分布。（Ｂ）時間の関数として示されるマーカー体積。（Ｃ）投与後の時間の関数として示されるマーカーから放出された総ＮＩＲ蛍光強度。（Ｄ）臓器のウェルカウントデータに基づく注入４８時間後の６４Ｃｕの生体分布。
【図１０Ｄ】図１０：注入後の時間の関数としての、６４Ｃｕの生体分布、マーカー体積、およびマーカー蛍光強度の変化。（Ａ）ＰＥＴに基づくマーカー、肝臓、心臓および膀胱における６４Ｃｕの生体分布。（Ｂ）時間の関数として示されるマーカー体積。（Ｃ）投与後の時間の関数として示されるマーカーから放出された総ＮＩＲ蛍光強度。（Ｄ）臓器のウェルカウントデータに基づく注入４８時間後の６４Ｃｕの生体分布。
【図１１】図１１：６４Ｃｕ放射性標識ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：ＰＣ２  ７０：１０：２０：０．０１マーカー配合物を皮下注入した１個体のマウスの代表的画像。冠状ＰＥＴおよびＣＴ画像は注入１時間、２４時間および４８時間後に示され、ＦＬＩ画像は注入１時間、２４時間、４８時間、２週間、３週間および４週間後のＰＣ２のＮＩＲ蛍光を示す。
【図１２Ａ】図１２：（Ａ）６４Ｃｕ（８ＨＱ）放射性標識ＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２：ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５  ７０：１０：２０：０．１：０．０１マーカーを皮下注入したマウスのＰＥＴ／ＣＴ／ＦＬＩ／ＮＩＲ画像、ならびに対応する６４Ｃｕ生体分布、ＮＩＲ蛍光強度およびマーカー体積の変化。（Ｂ）時間の関数としてのマーカー、肝臓および腎臓における６４Ｃｕ生体分布。（Ｃ）注入１８時間および４４時間後のマーカーからのＮＩＲ蛍光において記録された総フラックス。（Ｄ）注入後の時間の関数として示されるマーカーの相対体積変化。
【図１２Ｂ】図１２：（Ａ）６４Ｃｕ（８ＨＱ）放射性標識ＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２：ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５  ７０：１０：２０：０．１：０．０１マーカーを皮下注入したマウスのＰＥＴ／ＣＴ／ＦＬＩ／ＮＩＲ画像、ならびに対応する６４Ｃｕ生体分布、ＮＩＲ蛍光強度およびマーカー体積の変化。（Ｂ）時間の関数としてのマーカー、肝臓および腎臓における６４Ｃｕ生体分布。（Ｃ）注入１８時間および４４時間後のマーカーからのＮＩＲ蛍光において記録された総フラックス。（Ｄ）注入後の時間の関数として示されるマーカーの相対体積変化。
【図１２Ｃ】図１２：（Ａ）６４Ｃｕ（８ＨＱ）放射性標識ＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２：ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５  ７０：１０：２０：０．１：０．０１マーカーを皮下注入したマウスのＰＥＴ／ＣＴ／ＦＬＩ／ＮＩＲ画像、ならびに対応する６４Ｃｕ生体分布、ＮＩＲ蛍光強度およびマーカー体積の変化。（Ｂ）時間の関数としてのマーカー、肝臓および腎臓における６４Ｃｕ生体分布。（Ｃ）注入１８時間および４４時間後のマーカーからのＮＩＲ蛍光において記録された総フラックス。（Ｄ）注入後の時間の関数として示されるマーカーの相対体積変化。
【図１２Ｄ】図１２：（Ａ）６４Ｃｕ（８ＨＱ）放射性標識ＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２：ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５  ７０：１０：２０：０．１：０．０１マーカーを皮下注入したマウスのＰＥＴ／ＣＴ／ＦＬＩ／ＮＩＲ画像、ならびに対応する６４Ｃｕ生体分布、ＮＩＲ蛍光強度およびマーカー体積の変化。（Ｂ）時間の関数としてのマーカー、肝臓および腎臓における６４Ｃｕ生体分布。（Ｃ）注入１８時間および４４時間後のマーカーからのＮＩＲ蛍光において記録された総フラックス。（Ｄ）注入後の時間の関数として示されるマーカーの相対体積変化。
【図１３】図１３：時間の関数として示される５０μＬの１２５Ｉ放射性標識ＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２：ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５マーカー配合物を皮下注入した１個体のマウスの代表的ＳＰＥＣＴ／ＣＴおよびＦＬＩ／Ｘ線画像。注入１０分、１週間、２週間および３週間後にマウスをスキャンし、画像化した。
【発明の具体的説明】
【００２６】
本開示は、ＮＩＲ造影剤などの蛍光色素を含んでなる溶液に関し、この溶液は、ｉｎ  ｖｉｖｏなどの水性条件下で固化して、例えば、ゲル、ガラス、半固体、固体、結晶またはそれらの任意の混合物を形成し、それにより、この溶液は、規定の位置、例えば、腫瘍部位における蛍光色素の定着を提供する。
【００２７】
本開示の溶液はまた、ｉｎ  ｖｉｖｏイメージングのためおよび手術中の誘導のための基準マーカーとしても使用可能である。
【００２８】
定義
用語「溶液」は、本明細書で使用する場合、本発明の成分を含んでなる液体組成物を指す。１つの実施態様において、総ての成分を前記液体組成物に溶解させる。別の実施態様において、一部または総ての成分を前記液体組成物に分散させて、例えば、コロイド分散液を作製する。用語「溶液」および「分散液」は本明細書では互換的に使用できる。
【００２９】
用語「溶液の固化」は、本明細書で使用する場合、物理的特性の変化、溶液であれば、流体形態からゲル形態、半固体形態、固体形態、結晶性形態またはそれらの任意の組合せへの変化を指す。本開示の溶液は、ｉｎ  ｖｉｖｏ条件などの水性条件に曝されるまで流体形態であり、有機溶媒が周囲の環境に拡散すると、溶液が固化してゲル、半固体、固体、結晶またはその任意の組合せを形成する。言い換えると、水性条件下で「溶液は固化して」ゲル、半固体、固体、結晶またはその任意の組合せを形成する。よって、「固化した溶液」という場合には、水性条件下でこの溶液によって形成されたゲル、半固体、個体、結晶またはその任意の組合せを指す。同様に、ゲル、ゲル混合物、半固体、固体、結晶またはその任意の組合せという場合には、本発明の溶液を水性条件に曝すことから生じる組成物またはデポ(depot)を指す。よって「固化した溶液の形態」は、ゲル、半固体、固体、結晶またはその任意の組合せであり得る。用語「固化した溶液」、「ゲル」および「デポ」は、本明細書では互換的に使用できる。
【００３０】
用語「ｌｏｇＰ」は、本明細書で使用する場合、所与の化合物の、水相と１−オクタノール相間の分配係数を指す。ｌｏｇＰは、水相と１−オクタノール相中の、所与の化合物の濃度比の対数として示される。ｌｏｇＰは、これら２相における化合物の溶解度の違いの尺度である。正のｌｏｇＰ値は一般に疎水性化合物に特徴的であり、負のｌｏｇＰ値は親水性化合物を示す。
【００３１】
用語「水性条件」、本明細書で使用する場合、主として水を含んでなる溶液および／または条件を指す。水性条件は、バッファー系などのｉｎ  ｖｉｔｒｏ条件であり得る。あるいは、水性条件は、腫瘍部位など、ｉｎ  ｖｉｖｏ条件とも呼ばれるヒトまたは動物組織内であり得る。
【００３２】
用語「含んでなる」は、包含形式で理解されるべきである。従って、例として、化合物Ｘを含んでなる組成物は、化合物Ｘおよび任意選択で付加的化合物を含んでなり得る。
【００３３】
用語「フェルスター共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）」は、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）、共鳴エネルギー移動（ＲＥＴ）または電子エネルギー移動（ＥＥＴ）としても知られ、２つの感光性分子（発色団）間のエネルギー移動を表すメカニズムを指す。ドナー発色団は、最初は電子励起状態にあり、非発光性の双極子間カップリングを介してアクセプター発色団にエネルギーを移動し得る。このエネルギー移動の効率は、ドナーとアクセプター間の距離の６乗に反比例し、これはＦＲＥＴを距離の小さな変化に対して極めて高感度とする。
【００３４】
溶液
本開示は、水不溶性炭水化物、蛍光色素および有機溶媒を含んでなる溶液に関する。水性条件下で、有機溶媒は周囲の環境に拡散して、溶液の固化による例えば、ゲル、ガラス、半固体、固体、結晶またはその任意の組合せの形成をもたらす。
【００３５】
よって、１つの実施態様において、本開示は、
ａ．水不溶性炭水化物、
ｂ．蛍光色素、および
ｃ．−２〜２の範囲のｌｏｇＰを有する有機溶媒
を含んでなる溶液に関する。
【００３６】
これらの溶液は、本明細書では「マーカー」と呼ばれる場合がある。
【００３７】
この溶液は、溶液および／または固化した溶液において蛍光色素の拡散速度を制御するように設計される。より好ましくは、この溶液は、溶液および／または固化した溶液からの蛍光色素の拡散速度を制御するように設計される。前記拡散速度を制御することにより、溶液および／または固化した溶液からの蛍光色素の放出または保持が制御される。これは、水性条件下で蛍光色素の制御放出または蛍光色素の保持を提供する溶液の設計を可能とする。
【００３８】
本開示の溶液の投与は、目的の部位における注入により行うことができる。よって、１つの実施態様において、本開示の溶液は、注入針によって注入可能である。本開示の溶液は粘稠な溶液であってもよい。よって、１つの実施態様において、溶液は、１〜１０００ｃＰの範囲、例えば１〜７５０ｃＰの範囲、例えば１〜５００ｃＰの範囲、例えば１〜２５０の範囲、例えば１〜１００の範囲、例えば１００〜１０００ｃＰの範囲、例えば１００〜５００ｃＰの範囲の粘度を有する。
【００３９】
この溶液の水不溶性炭水化物は、溶液が水性条件下で固化する特性を提供する。溶液および固化した溶液の疎水性および粘度は、前記水不溶性炭水化物の性質により制御することができ、それにより、蛍光色素の拡散速度が制御される。
【００４０】
本開示の固化した溶液は一般に、ｉｎ  ｖｉｖｏで３〜１２か月以内に分解される。本開示の溶液の水不溶性炭水化物は、分解または加水分解時に組織、臓器などで十分な忍容性がある糖類の形成をもたらす生分解性化合物である。
【００４１】
１つの態様において、溶液の蛍光色素は２を上回るｌｏｇＰを有する。ｌｏｇＰが高い蛍光色素は、ＬｏｇＰが低い蛍光色素に比べて、定着した溶液から水相へ拡散しにくいものであり得る。蛍光色素の疎水性は、蛍光色素の溶液中での拡散速度を低くすることおよび／または水相に対するその親和性を低くし、それにより、定着した溶液内に蛍光色素が保持されることを保証する。蛍光色素はそれにより投与部位に保持され、基準マーカーの正確な局在が可能となる。
【００４２】
第２の態様において、この溶液の蛍光色素は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）に共有結合的にコンジュゲートされ、２０００を超える分子量を有する。ＰＥＧの親水性は、溶液からの蛍光色素の放出をもたらし、その後、蛍光色素−ＰＥＧコンジュゲートは、それを必要とする個体に投与されると、リンパ系に入り、リンパ節に蓄積し得る。
【００４３】
この溶液の溶媒は、水不溶性炭水化物および蛍光色素を溶解させる働きをする。溶媒は、ａ）この溶液の成分を溶解させることができ、かつｂ）水性条件下で溶液から周囲の環境へ拡散することができる特性を有するべきである。
【００４４】
１つの実施態様において、有機溶媒の量は、１〜３０％、例えば１〜２０％、例えば１〜１５％、例えば１〜１０％、例えば５〜１０％の範囲である。
【００４５】
本開示の溶液は、１つの実施態様において、モノグリセリド、ジグリセリドおよび／またはトリグリセリドなどの、本明細書では補助溶媒とも呼ばれるさらなる溶媒をさらに含んでなってもよい。
【００４６】
よって、１つの実施態様において、本開示は、
ａ．水不溶性炭水化物、
ｂ．蛍光色素、
ｃ．−２〜２の範囲のｌｏｇＰを有する有機溶媒、ならびに
ｄ．モノグリセリド、ジグリセリドおよび／またはトリグリセリドなどのさらなる溶媒
を含んでなる溶液に関する。
【００４７】
１つの実施態様において、さらなる溶媒の量は、０〜５０％の範囲、例えば０〜４０％の範囲、例えば０〜３０％の範囲、例えば０〜２０％の範囲、例えば０〜１０％の範囲である。
【００４８】
本開示の溶液は、造影剤をさらに含んでなってもよい。このような造影剤は、例えばｉｎ  ｖｉｖｏにおいて定着させると、溶液の、ＮＩＲ以外の画像診断法による可視化を可能とする。
【００４９】
よって、１つの実施態様において、本開示は、
ａ．水不溶性炭水化物、
ｂ．蛍光色素、
ｃ．−２〜２の範囲のｌｏｇＰを有する有機溶媒、ならびに
ｄ．造影剤
を含んでなる溶液に関する。
【００５０】
別の実施態様において、本開示は、
ａ．水不溶性炭水化物、
ｂ．蛍光色素、
ｃ．−２〜２の範囲のｌｏｇＰを有する有機溶媒、
ｄ．モノグリセリド、ジグリセリドおよび／またはトリグリセリドなどのさらなる溶媒、ならびに
ｅ．造影剤
を含んでなる溶液に関する。
【００５１】
１つの実施態様において、本開示は、
ａ．４０〜６０ｗ／ｗ％の範囲の式（ＩＩ）の水不溶性炭水化物、
ｂ．０，００１〜１ｗ／ｗ％の範囲のＣｕ−６４配位２，１１，２０，２９−テトラ−ｔｅｒｔ−ブチル−２，３−ナフタロシアニン、
ｃ．１５〜２５ｗ／ｗ％の範囲のエタノール、および
ｄ．２０〜４０ｗ／ｗ％の範囲の式（ＩＩＩ）の造影剤
を含んでなる溶液に関する。
【００５２】
１つの実施態様において、本開示は、前記蛍光色素の制御放出をもたらす溶液に関する。
【００５３】
別の実施態様において、本開示は、前記蛍光色素の保持をもたらす溶液に関する。
【００５４】
水不溶性炭水化物
この溶液の水不溶性炭水化物は、溶液が水性条件下で固化する特性を提供する。溶液および固化した溶液の疎水性および粘度は、前記水不溶性炭水化物の性質により制御することができ、それにより、蛍光色素の拡散速度が制御される。さらに、固化した溶液の形態は、溶液の水不溶性炭水化物を変更することにより変更可能である。
【００５５】
用語「水不溶性炭水化物」は、本明細書で使用する場合、２〜２０の範囲、例えば２〜１５の範囲、例えば２〜１０の範囲、例えば２〜５の範囲、例えば４〜２０の範囲、例えば４〜１５の範囲、例えば４〜１０の範囲のｌｏｇＰを有する炭水化物を指す。水不溶性炭水化物は、いずれの単糖、二糖、三糖またはオリゴ糖であってもよい。
【００５６】
１つの実施態様において、水不溶性炭水化物は、単糖類、二糖類、三糖類およびオリゴ糖類からなる群から選択される。
【００５７】
用語「オリゴ糖」は、本明細書で使用する場合、１０までの単糖単位、例えば９までの単糖単位、例えば８までの単糖単位、例えば７までの単糖単位、例えば６までの単糖単位、例えば５までの単糖単位、例えば４までの単糖単位を含んでなる糖ポリマーを指す。オリゴ糖は直鎖であってもまたは分岐していてもよい。
【００５８】
１つの実施態様において、水不溶性炭水化物は、グルコサミン、ガラクトサミン、マンノサミン、マンノース、ラムノース、ラムノサミン、ガラクトース、アロース、アロサミン、アルトロース、アルトロサミン、グロース、グロサミン、イドース、イドサミン、タロースおよびタロサミンからなる群から選択される単糖である。
【００５９】
本開示の糖類は、Ｌ型またはＤ型のいずれでもよい。さらに、二糖類、三糖類およびオリゴ糖類の単糖単位は、αまたはβのいずれのグリコシド結合によって連結されてもよく、いずれの比のα，βアノマー混合物も存在してよい。
【００６０】
１つの実施態様において、水不溶性炭水化物は、マルトース、トレハロース、ラクトース、スクロース、Ｇａｌｐ−（１→２）−Ｇｌｃ、Ｇａｌｐ−（１→３）−ＧｌｃＮ、Ｇａｌｐ−（１→４）−Ｇｌｃ、Ｇｌｃｐ−（１→４）−Ｇｌｃ、Ｇｌｃｐ−（１→６）−Ｇｌｃ、Ｇｌｃｐ−（１→２）−ＧｌｃＮ、Ｇａｌｐ−（１→４）−ＭａｎＮ、Ｇｌｃｐ−（１→４）−ＧａｌＮ、Ｍａｎｐ−（１→３）−Ｇｌｃ、ＭａｎＮｐ−（１→４）−Ｇａｌ、ＧａｌＮｐ−（１→３）−ＭａｎＮ、ＧｌｃＮｐ−（１→６）−ＧａｌＮ、Ｒｈａｍｎｐ−（１→６）−Ｇｌｃ、Ｇｌｃｐ−（１→１）−Ｇｌｃｐ、Ｔａｌｐ−（１→４）−Ｇｌｕ、Ｇｌｕｐ（１→３）−ｌｄｏ、ＧｌｃＮｐ−（１→４）−ＧｌｃＮ、ＧｌｃＮｐ−（１→６）−ＧｌｃＮからなる群から選択される二糖である。
【００６１】
１つの実施態様において、水不溶性炭水化物は、マルトース、トレハロース、ラクトースおよびスクロースからなる群から選択される二糖である。
【００６２】
１つの実施態様において、水不溶性炭水化物は、ラフィノース、Ｇａｌｐ−（１→２）−Ｇｌｃｐ−（１→３）−Ｇａｌｐ、Ｇａｌｐ−（１→４）−Ｇｌｃｐ−（１→６）−ＧｌｃＮ、Ｇａｌｐ−（１→４）−Ｇｌｃｐ−（１→６）−Ｇａｌ、Ｇｌｃｐ−（１→４）−Ｇｌｃｐ−（１→４）−Ｇｌｃｐ、Ｇｌｃｐ−（１→６）−Ｇｌｃｐ−（１→６）−Ｇｌｃ、Ｇａｌｐ−（１→６）−Ｇｌｃｐ（１→２）−Ｆｒｕｆ、Ｇｌｃｐ−（１→３）−Ｆｒｕｆ−（２→１）−Ｇｌｃｐ、Ｇａｌｐ−（１→４）−ＭａｎＮｐ−（１→３）−Ｇｌｕ、Ｇｌｃｐ−（１→４）−ＧａｌＮ−（１→２）−Ｍａｎ、Ｍａｎｐ−（１→３）−Ｇｌｃｐ−（１→４）−ＧｌｃＮ、ＭａｎＮｐ−（１→４）−Ｇａｌｐ−（１→３）−Ｇｌｃ、ＧａｌＮｐ−（１→３）−ＭａｎＮｐ−（１→６）−ＧｌｃＮ、Ｒｈａｍｎｐ−（１→６）−Ｇｌｃｐ−（１→４）−ＧｌｃＮ、Ｇａｌｐ−（１→６）−Ｇｌｃｐ−（１→１）−Ｇｌｃｐ、Ｔａｌｐ−（１→４）−Ｇｌｕｐ−（１→２）−Ｍａｎ、Ｇｌｕｐ（１→３）−ｌｄｏｐ−（１→６）−Ｇｌｕ、ＧｌｃＮｐ−（１→６）−ＧｌｃＮｐ（１→４）−ＧｌｃＮからなる群から選択される三糖である。
【００６３】
１つの実施態様において、水不溶性炭水化物はラフィノースである。
【００６４】
１つの実施態様において、水不溶性炭水化物は、Ｇａｌｐ−（１→４）−Ｇｌｃｐ−（１→６）−ｇｌｃｐ−（１→４）−Ｇｌｃ、Ｇａｌｐ−（１→４）−Ｇｌｃｐ−（１→４）−Ｇｌｃｐ−（１→４）−Ｇｌｃｐ−（１→４）−Ｇｌｃ、Ｇａｌｐ−（１→４）−Ｇｌｃｐ−（１→４）−Ｇａｌｐ−（１→４）−Ｇｌｃ、Ｇｌｃｐ−（１→４）−Ｇｌｃｐ−（１→４）−Ｇｌｃｐ−（１→４）−Ｇｌｃ、Ｇａｌｐ−（１→６）−Ｇｌｃｐ−（１→６）−Ｇａｌｐ−（１→６）−Ｇｌｃ、Ｇａｌｐ−（１→６）−Ｇｌｃｐ−（１→６）−Ｇａｌｐ−（１→４）−Ｇｌｃ、Ｇａｌｐ−（１→６）−Ｇｌｃｐ−（１→６）−Ｇｌｃｐ−（１→４）−Ｇｌｃ、ＧｌｃＮｐ−（１→４）−ＧｌｃＮｐ−（１→６）−ＧｌｃＮｐ−（１→４）−ＧｌｃＮ、ＧｌｃＮｐ−（１→６）−Ｇａｌｐ−（１→６）−Ｇｌｃｐ−（１→２）−Ｆｒｕｆ、Ｇａｌｐ−（１→４）−Ｇｌｃｐ−（１→３）−Ｆｒｕｆ−（２→１）−Ｇｌｃｐ、Ｔａｌｐ−（１→４）−Ｇｌｕｐ−（１→２）−Ｍａｎ−（１−３）−Ｇｌｕ、Ｇｌｕｐ（１→３）−ｌｄｏｐ−（１→６）−Ｇｌｕｐ−（１→２）−Ｇａｌ、酢酸セルロース、酢酸酪酸セルロースおよび酢酸プロプリオン酸(proprionate)セルロースからなる群から選択されるオリゴ糖である。
【００６５】
１つの実施態様において、水不溶性炭水化物は、エステルを形成するように官能化された１以上のヒドロキシル基を含んでなる。このようなエステルは、炭水化物のヒドロキシル基とアルカノイルのカルボニル基の間の結合により形成され得る。
【００６６】
１つの実施態様において、水不溶性炭水化物は、Ｃ２−Ｃ７エステルを形成するように官能化された１以上のヒドロキシル基を含んでなる。
【００６７】
用語「Ｃｎ−Ｃｍエステル」は、本明細書で使用する場合、アルコールとｎおよびｍ個の炭素原子を含んでなるアルカノイルの間の結合により形成されたエステル官能基を指す。例えば、Ｃ２−Ｃ７エステルは、アルコールとＣ２−Ｃ７アルカノイル、すなわち、２〜７個の炭素原子を含んでなるアルカノイルのカルボニル基の間の結合により形成されたエステル官能基である。
【００６８】
よって、１つの実施態様において、水不溶性炭水化物は、エステルを形成するように官能化された１以上のヒドロキシル基を含んでなり、これらのエステルは、炭水化物のヒドロキシル基とアルカノイルのカルボニル基の間の結合により形成される。
【００６９】
１つの実施態様において、エステルを形成するように官能化された水不溶性炭水化物のヒドロキシル基の数は、ｎ、ｎ−１、ｎ−２、ｎ−３、ｎ−４またはｎ−５であり、ここで、ｎは、炭水化物のヒドロキシル基の総数である。
【００７０】
１つの実施態様において、水不溶性炭水化物の総てのヒドロキシル基がエステルを形成するように官能化されている。
【００７１】
１つの実施態様において、水不溶性炭水化物のエステルは、Ｃ２−Ｃ１０エステル、例えばＣ２−Ｃ９エステル、例えばＣ２−Ｃ８エステル、例えばＣ２−Ｃ７エステル、例えばＣ２−Ｃ６エステル、例えばＣ２−Ｃ５エステル、例えばＣ２−Ｃ４エステル、例えばＣ２−Ｃ３エステルである。
【００７２】
１つの実施態様において、水不溶性炭水化物のエステルは、Ｃ２−Ｃ７エステルである。
【００７３】
１つの実施態様において、アルカノイルは、アセチル、プロパノイル、ブタノイル、イソブタノイル、ペンタノイル、ヘキサノイル、ヘプタノイルおよびベンゾイルから選択される。
【００７４】
１つの実施態様において、アルカノイルは、アセチル、プロパノイル、イソブタノイルおよびベンゾイルから選択される。
【００７５】
１つの実施態様において、水不溶性炭水化物は、オクタイソ酪酸マルトース（ＭＯＩＢ）、ジ酢酸ヘキサイソ酪酸スクロース（ＳＡＩＢ）、オクタイソ酪酸スクロース（ＳＯＩＢ）、オクタイソ酪酸ラクトース（ＬＯＩＢ）、オクタイソ酪酸トレハロース（ＴＯＩＢ）からなる群から選択される。
【００７６】
１つの実施態様において、水不溶性炭水化物は、ジ酢酸ヘキサイソ酪酸スクロース（ＳＡＩＢ）およびオクタイソ酪酸ラクトース（ＬＯＩＢ）からなる群から選択される。
【００７７】
水不溶性炭水化物は、異なる水不溶性炭水化物の混合物であり得る。ある実施態様において、水不溶性炭水化物は、オクタイソ酪酸ラクトースとオクタ安息香酸ラクトースの混合物、またはオクタイソ酪酸ラクトースとオクタ安息香酸スクロースの混合物である。
【００７８】
１つの実施態様において、水不溶性炭水化物は、式（Ｉ）の構造を有する。
【化１】
2021527704.tif 000002
【００７９】
１つの実施態様において、水不溶性炭水化物は、式（ＩＩ）の構造を有する。
【化２】
2021527704.tif 000003
【００８０】
１つの実施態様において、水不溶性炭水化物は、十一イソ酪酸ラフィノースである。
【００８１】
蛍光色素
１つの実施態様において、蛍光色素は、ローダミン、ＢＯＤＩＰＹ、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ、ＮＢＤ、シアニン色素（Ｃｙ３）およびカルボキシフルオレセインからなる群から選択される。
【００８２】
１つの実施態様において、蛍光色素は、ＮＩＲ造影剤である。
【００８３】
従来のおよび近赤外線（ＮＩＲ）蛍光団は、荷電基の組み込みおよびまたはＰＥＧなどの親水性ポリマーにより、水溶液中で可溶性となるように化学的に修飾されない限り、疎水性（ｌｏｇＰ＞０）であることを特徴とする高度にコンジュゲートされた分子から構成されることが多い。このような色素の疎水性の特徴は、本開示の疎水性溶液との良好な適合性を保証し、溶液および／または固化した溶液中での高い保持を可能とする。このような蛍光団は、様々なサイズのストークシフトにより分離される励起スペクトルおよび放出スペクトルによって特徴付けられる。従来の蛍光団は、可視スペクトル（２００〜７００ｎｍ）域で光子を放出し、ＮＩＲ−１蛍光団は、７００〜９００ｎｍ域で光子を放出するが、ＮＩＲ−ＩＩ蛍光団は、９００ｎｍを超える領域で光子を放出する。しかしながら、組織吸収およびの光子散乱は可視スペクトル域（６００ｎｍ未満）で高く、結果として従来の蛍光団から放出される蛍光は、減衰性が高い。６００ｎｍｗ超えると、組織吸光度は著しく低下し、放出される光子の散乱は光子波長の関数としてますます低下する。よって、ＮＩＲ−ＩおよびＮＩＲ−ＩＩ領域で光を発する蛍光団は、数センチメートルの組織深度で可視化でき、すなわち、励起および放出された光子は数センチメートルの組織を通過でき、これにより、手術中に臓器内でＮＩＲカメラを用いてＮＩＲ標識マーカーの特定が可能となる。ＮＩＲ−ＩおよびＮＩＲ−ＩＩスペクトル領域内で組織からのより低レベルの自家蛍光もまたシグナル／ノイズ比を改善し、組織におけるこのような色素のより良い検出力を可能とする。ＮＩＲ−ＩＩ色素は、組織内で光子散乱の最大の低下を受け、より深い組織深度での可視化およびより集中した（拡散の少ない）蛍光シグナルの獲得を可能とし、これが基準マーカーを用いた外科的イメージングの主要な利点である。
【００８４】
１つの実施態様において、２種または多種の色素がこの溶液に組み込まれ、これにより、ＦＲＥＴ（フェルスター共鳴エネルギー移動）が可能となる。このような多種の蛍光団の包含は、励起光と放出光の間により大きなシフトを誘導するのに役立ち得る。
【００８５】
生体分子コンジュゲーションのための標識試薬として使用される現行の有機蛍光団は、光安定性に制限がある。これは、光安定性蛍光レポート基を必要とする適用においては、それらの性能を損なう。例えば、分子イメージングおよび単分子顕微鏡では、長期間にわたって個々の分子イベントを観測および追跡するためには、光安定性蛍光標識が重要である。本開示においては、高濃度の色素を溶液に組み込むことができ、光退色の問題が回避される。
【００８６】
さらに、組み込まれた色素のより高い光安定性は、これが長期イメージングを可能とし、反復曝露／ＮＩＲイメージングの後または他の光源に曝された際であってもＮＩＲマーカーとしてのこの溶液性能の再現性を保証するので保証される。保存安定性の改善は、より高い光安定性のさらにもう１つの結果である。フタロ−およびナフタロ−シアニン色素およびポルフィリン色素は、溶液中に包理するため最適な疎水性ＮＩＲ色素であり、従来の有機色素に比べて、極端な光安定性を示す。これらの色素は、現行の近ＩＲ蛍光団、例えば、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６８０、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７およびＩＲＤｙｅ（商標）８００ＣＷ色素の約４０〜１２５倍の光安定性であり、最も光安定性の高い有機色素の１つであるテトラメチルローダミン（ＴＭＲ）の約２０倍の光安定性である。
【００８７】
１つの実施態様において、ＮＩＲ造影剤は、ＮＩＲ−Ｉ造影剤である。
【００８８】
１つの実施態様において、ＮＩＲ造影剤は、ＮＩＲ−ＩＩ造影剤である。
【００８９】
１つの実施態様において、ＮＩＲ造影剤は、インドシアニングリーン（ＩＣＧ）、メチレンブルー（ＭＢ）、ＣＨ１０５５、ＩＲＤｙｅ８００ＣＷ、非スルホン化およびスルホン化シアニン色素（Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、Ｃｙ７．５）、両性イオンシアニン色素（ＺＷ８００−１）、ホスホン酸シアニン色素（Ｐａｍ７８、Ｐ８００ＳＯ３）、第四級アンモニウムシアニン色素（Ｃ７００−ＯＭｅ、Ｃ８００−ＯＭｅ）、ＢＯＤＩＰＹ色素（ｍＰＢ、ＢＡＰ−５）、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ色素（Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ７０２、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ７４９およびＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ７９０からなる群から選択される。
【００９０】
１つの実施態様において、ＮＩＲ造影剤は、シアニン７．５−アルキン、シアニン７．５−アミン、シアニン７．５−アジド、シアニン７．５−カルボン酸、シアニン７．５−ヒドラジド、シアニン７．５−マレイミド、シアニン７．５−ＮＨＳエステル、シアニン７．５−テトラジン、シアニン７−アルキン、シアニン７−アミン、シアニン７−アジド、シアニン７−カルボン酸、シアニン７−ヒドラジド、シアニン７−マレイミド、シアニン７−ＮＨＳエステル、シアニン７−テトラジン、Ｃｙ５−アルキンおよびＣｙ５．５−アルキンからなる群から選択されるシアニン色素である。
【００９１】
１つの実施態様において、ＮＩＲ造影剤は、シアニン７．５−アルキン、シアニン７．５−アミン、シアニン７．５−アジド、シアニン７．５−カルボン酸、シアニン７．５−ヒドラジド、シアニン７．５−マレイミド、シアニン７．５−ＮＨＳエステルおよびシアニン７．５−テトラジンからなる群から選択されるシアニン色素である。
【００９２】
１つの実施態様において、ＮＩＲ造影剤は、シアニン７−アルキン、シアニン７−アミン、シアニン７−アジド、シアニン７−カルボン酸、シアニン７−ヒドラジド、シアニン７−マレイミド、シアニン７−ＮＨＳエステルおよびシアニン７−テトラジンからなる群から選択されるシアニン色素である。
【００９３】
１つの実施態様において、ＮＩＲ造影剤は、Ｃｙ５−アルキン、Ｃｙ５．５−アルキン、Ｃｙ７−アルキンおよびＣｙ７．５−アルキンからなる群から選択されるシアニン色素である。
【００９４】
１つの実施態様において、ＮＩＲ造影剤は、ポルフィリン、フタロシアニンおよびナフタロシアニンからなる群から選択される。
【００９５】
１つの実施態様において、ＮＩＲ造影剤は、２，３，７，８，１２，１３，１７，１８−オクタエチル−２１Ｈ，２３Ｈ−ポルフィン、５，１０，１５，２０−テトラフェニル−２１Ｈ，２３Ｈ−ポルフィン、２，９，１６，２３−テトラ−ｔｅｒｔ−ブチル−２９Ｈ，３１Ｈ−フタロシアニン、１，４，８，１１，１５，１８，２２，２５−オクタブトキシ−２９Ｈ，３１Ｈ−フタロシアニン、２，３，９，１０，１６，１７，２３，２４−オクタキス（オクチルオキシ）−２９Ｈ，３１Ｈ−フタロシアニン、２，１１，２０，２９−テトラ−ｔｅｒｔ−ブチル−２，３−ナフタロシアニン、５，９，１４，１８，２３，２７，３２，３６−オクタブトキシ−２，３−ナフタロシアニンおよびアントラコシアニンからなる群から選択される。
【００９６】
１つの実施態様において、ＮＩＲ造影剤は、２，９，１６，２３−テトラ−ｔｅｒｔ−ブチル−２９Ｈ，３１Ｈ−フタロシアニン、１，４，８，１１，１５，１８，２２，２５−オクタブトキシ−２９Ｈ，３１Ｈ−フタロシアニン、２，３，９，１０，１６，１７，２３，２４−オクタキス（オクチルオキシ）−２９Ｈ，３１Ｈ−フタロシアニンおよび２，１１，２０，２９−テトラ−ｔｅｒｔ−ブチル−２，３−ナフタロシアニン、５，９，１４，１８，２３，２７，３２，３６−オクタブトキシ−２，３−ナフタロシアニンからなる群から選択される。
【００９７】
１つの実施態様において、ＮＩＲ造影剤は、ＩＦＰ１．４、ＩＦＰ２．０、ｉＲＦＰ７１３およびｍｉＲＦＰ７０３からなる群から選択される。
【００９８】
１つの実施態様において、ＮＩＲ造影剤は、ＩＲ−７８０、ＩＲ−７９２、ＩＲ−８９５、ＩＲ−１４０、ＩＲ−２６／２７、ＩＲ−１０４８、ＩＲ−１０６１、ＮＩＲ−ＩＩ蛍光団−Ｈ１（３，６−ビス［５−｛７−アミノ−９，９−ビス−［２−（２−トリメチルシラニル−エトキシカルボニル）−エチル］−９Ｈ−フルオレン−２−イル｝−チオフェン−２−イル］ベンゾ［１，２−ｃ；４，５−ｃ’］ビス［１，２，５］チアジアゾール）、１，４，８，１１，１５，１８，２２，２５−オクタブトキシ−２９Ｈ，３１Ｈ−フタロシアニンおよび５，９，１４，１８，２３，２７，３２，３６−オクタブトキシ−２，３−ナフタロシアニンからなる群から選択される。
【００９９】
１つの実施態様において、ＮＩＲ造影剤は、ＩＲ−７８０、ＩＲ−７９２、ＩＲ−８９５、ＩＲ−１４０、ＩＲ−２６／２７、ＩＲ−１０４８およびＩＲ−１０６１からなる群から選択される。
【０１００】
１つの実施態様において、ＮＩＲ造影剤は、ＮＩＲ−ＩＩ蛍光団−Ｈ１、１，４，８，１１，１５，１８，２２，２５−オクタブトキシ−２９Ｈ，３１Ｈ−フタロシアニンおよび５，９，１４，１８，２３，２７，３２，３６−オクタブトキシ−２，３−ナフタロシアニンからなる群から選択される。
【０１０１】
１つの実施態様において、ＮＩＲ造影剤は、金属に配位している。このようなＮＩＲ造影剤の金属への配位は、ＮＩＲ造影剤の励起波長および放出波長の微調整を容易にし得る。金属に配位しているＮＩＲ造影剤の例としては、限定されるものではないが、鉛（ＩＩ）フタロシアニン、マンガン（ＩＩ）フタロシアニン、Ｃｕ（ＩＩ）フタロシアニン、コバルト（ＩＩ）フタロシアニン、アルミニウム（ＩＩＩ）フタロシアニンクロリド、ガリウム（ＩＩＩ）フタロシアニンクロリド、インジウム（ＩＩＩ）フタロシアニンクロリド、鉄（ＩＩＩ）フタロシアニンクロリド、マンガン（ＩＩＩ）フタロシアニンクロリド、ニッケル（ＩＩ）フタロシアニン、チタニルフタロシアニン、チタン（ＩＶ）フタロシアニンジクロリド、亜鉛（ＩＩ）フタロシアニン、バナジル３，１０，１７，２４−テトラ−ｔｅｒｔ−ブチル−１，８，１５，２２−テトラキス（ジメチルアミノ）−２９Ｈ，３１Ｈ−フタロシアニン、バナジル２，３−ナフタロシアニン、コバルト（ＩＩ）２，３−ナフタロシアニン、銅（ＩＩ）２，３−ナフタロシアニン、銅（ＩＩ）５，９，１４，１８，２３，２７，３２，３６−オクタブトキシ−２，３−ナフタロシアニン、ニッケル（ＩＩ）５，９，１４，１８，２３，２７，３２，３６−オクタブトキシ−２，３−ナフタロシアニン、スズ（ＩＶ）２，３−ナフタロシアニンジクロリドおよびバナジル２，１１，２０，２９−テトラ−ｔｅｒｔ−ブチル−２，３−ナフタロシアニンが含まれる。
【０１０２】
よって、１つの実施態様において、ＮＩＲ造影剤は、鉛（ＩＩ）フタロシアニン、マンガン（ＩＩ）フタロシアニン、Ｃｕ（ＩＩ）フタロシアニン、コバルト（ＩＩ）フタロシアニン、アルミニウム（ＩＩＩ）フタロシアニンクロリド、ガリウム（ＩＩＩ）フタロシアニンクロリド、インジウム（ＩＩＩ）フタロシアニンクロリド、鉄（ＩＩＩ）フタロシアニンクロリド、マンガン（ＩＩＩ）フタロシアニンクロリド、ニッケル（ＩＩ）フタロシアニン、チタニルフタロシアニン、チタン（ＩＶ）フタロシアニンジクロリド、亜鉛（ＩＩ）フタロシアニンおよびバナジル３，１０，１７，２４−テトラ−ｔｅｒｔ−ブチル−１，８，１５，２２−テトラキス（ジメチルアミノ）−２９Ｈ，３１Ｈ−フタロシアニンからなる群から選択される。
【０１０３】
別の実施態様において、ＮＩＲ造影剤は、バナジル２，３−ナフタロシアニン、コバルト（ＩＩ）２，３−ナフタロシアニン、銅（ＩＩ）２，３−ナフタロシアニン、銅（ＩＩ）５，９，１４，１８，２３，２７，３２，３６−オクタブトキシ−２，３−ナフタロシアニン、ニッケル（ＩＩ）５，９，１４，１８，２３，２７，３２，３６−オクタブトキシ−２，３−ナフタロシアニン、スズ（ＩＶ）２，３−ナフタロシアニンジクロリドおよびバナジル２，１１，２０，２９−テトラ−ｔｅｒｔ−ブチル−２，３−ナフタロシアニンからなる群から選択される。
【０１０４】
本開示による溶液は、種々の疎水性の溶媒と混合された水不溶性炭水化物に基づく。この溶液を例えば腫瘍部位へ投与すると、溶液の溶媒が周囲の環境に拡散して、その結果として粘度が増し、やがて溶液が固化して、例えば、ゲル、ガラス、半固体、固体、結晶またはそれらの任意の混合物を形成し、それにより、溶液の内容物の動的トラップが提供される。この溶液およびその内容物、例えば、おそらく放射性核種に配位している蛍光色素は、それにより、投与部位に保持される。蛍光団色素を効果的に動的トラップするためには、この溶液は固化しなければならず、それにより、その粘度は、固体デポの場合、１００〜１０００ｃＰから１０００００〜１００００００ｃＰまたはそれ以上に増す。ストークス・アインシュタインの関係によれば、このような粘度の１０００倍の上昇は、溶液における拡散速度に１０００倍の低下をもたらし、それにより、色素が粘稠な溶液から抜け出さないようにする。同様に、拡散する色素の分子断面積を大きくすれば、色素の移動性がさらに低下し、溶液からの色素の漏出の低減につながる。漸増する分子断面積を有する色素の例は表１に示され、漸増する分子量を有する選択された色素が示される。拡散速度を低下させる目的で分子断面積を増すためのもう１つの戦略は、より大きな構築物、例えば、ＰＮＩＰＡＭのＰＬＡなどのポリマーにより小さな色素をコンジュゲートすることに頼るものである。
【０１０５】
よって、１つの実施態様において、蛍光色素は、ＰＮＩＰＡＭ、酢酸酪酸セルロース、酢酸セルロース、ペルフルオロカーボン、ポロキサマープルロニック、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリ（Ｌ−ラクチド）（ＰＬＡ）、ポリ（グリコリド）（ＰＧＡ）、ポリ(ploy)（ＤＬ−ラクチド）（ＤＬＰＬＡ）、ポリ（ジオキサノン）（ＰＤＯ）、ポリ（ＤＬ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−ラクチド）（ＬＤＬＰＬＡ）、ポリ（ＤＬ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＤＬＰＬＧ）、ポリ（グリコリド−ｃｏ−炭酸トリメチレン）ＰＧＡ−ＴＭＣ、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＬＰＬＧ）またはポリ（カプロラクトン）（ＰＣＬ）からなる群から選択されるポリマーにコンジュゲートされる。
【０１０６】
あるいは、蛍光色素は、水不溶性炭水化物にコンジュゲートさせてもよい。水不溶性炭水化物は、本明細書の他所に定義されるようないずれの水不溶性炭水化物であってもよい。１つの実施態様において、蛍光色素は、ＳＡＩＢ、ＳＳＩＢ、ＬＯＩＢ、三糖類、オリゴ糖類(oligosaccharaides)およびセルロースを含んでなるリストから選択される水不溶性炭水化物にコンジュゲートされる。１つの実施態様において、蛍光色素は、ＳＡＩＢ、ＳＳＩＢ、ＬＯＩＢ、三糖類、オリゴ糖類(oligosaccharaides)およびセルロースからなる群から選択される水不溶性炭水化物にコンジュゲートされる。１つの実施態様において、蛍光色素Ｃｙ７．５は、水不溶性炭水化物ＳＳＩＢにコンジュゲートされる。
【０１０７】
溶液に対する高い親和性と水性媒体に対する最小の親和性を有する色素を選択することにより、溶液の注入後、溶液が完全に固化し（５〜６時間）動的トラップが有効となる前に、溶液構成成分（色素、放射性核種など）は溶液中で熱力学的に安定となり得、漏出が防げる。溶液に対して高い親和性を有する色素は、４を上回る、例えば８を上回る、例えば１２を上回るｌｏｇＰ値を有し、これは溶液と色素の疎水性の相互作用を強め、加えて、水性媒体中の色素の溶解度を最小とする。
【０１０８】
１つの実施態様において、蛍光色素は、２を上回る、例えば３を上回る、例えば４を上回る、例えば５を上回る、例えば６を上回る、例えば８を上回る、例えば１０を上回る、例えば１５を上回るｌｏｇＰを有する。
【０１０９】
拡散の遅い蛍光色素
量子ドット（Ｑドット）は、それらのサイズ、およびまたは溶液に対する親和性を確保するためのＰＮＩＰＡＭなどのポリマーによる表面の官能化およびまたはポリマーのもつれにより生じる拡散の阻害のために本開示の溶液に動的にトラップされ得る粒子である。量子ドットは、ＮＩＲ−ＩおよびＮＩＲ−ＩＩ両方の光領域にわたって変種で存在する。
【０１１０】
Ｑドットは、さらに、有機蛍光団の使用に伴う消光の問題の一部を回避するための任意選択の解決策であり、代替の生物学的標識として浮上したのが量子ドットの使用である。Ｑドット標識の１つのユニークな特性は、粒子の大きさまたは化学組成を変更することにより放出波長が容易に調節できることである。従来の有機色素に比べ、Ｑドットは、ａ）長い蛍光寿命（＞１０ナノ秒）；ｂ）はるかにシャープな分離のよい放出ピーク；ｃ）単一のＵＶまたは可視光源による効率的励起；およびｄ）明るい蛍光を有する。最も重要なこととして、量子ドットは、有機色素の最大限界である顕著な光安定性を示す。定量的測定では、Ｑドットは光退色に対してローダミン６Ｇの約１００倍の安定性を示す。単一のＱドットにより放出される光子の総数は、光退色を受ける前には、典型的な有機色素分子よりも１桁〜２桁高いと見積もられる。
【０１１１】
本開示に示される溶液から構成される動的トラップを利用するためのもう１つの代替戦略は、シアニン色素Ｃｙ５、Ｃｙ７．５などのようなより小さな色素に比べて断面積を増した粒子またはロッドの使用である。このような粒子は、抗力の増大のために粘稠な媒体中での拡散速度が低減されている。このような実施態様の例は、シアニン色素などの蛍光色素の官能基を有する１〜１０００μｍの大きさの金属またはポリマーナノ粒子である。あるいは、溶液中での保持を向上させるために、このような粒子の内部に低親和性色素を捕捉させてもよい。
【０１１２】
さらなる代替戦略は、量子ドットまたはカーボンナノチューブなどの固有の蛍光粒子またはロッドを利用することである。量子ドットおよびカーボンナノチューブは両方とも高い量子収率を持ち、ＮＩＲ−Ｉ〜ＮＩＲ−ＩＩ、すなわち、５００〜１６００ｎｍの光学域にわたる。
【０１１３】
よって、１つの実施態様において、本明細書に記載されるような溶液の蛍光色素は、量子ドット、ナノ粒子およびカーボンナノチューブからなる群から選択される。
【０１１４】
１つの実施態様において、蛍光色素は、ＣｄＴｅ、ＣｄＨｇＴｅ  ＣｄＴｅ／ＺｎＳ、ＣｄＴｅ／ＣｄＳｅ、ＣｄＳｅＴｅ／ＣｄＳ、ＣｄＴｅ／ＣｄＳ／ＺｎＳ、ＰｂＳ、ＰｂＳ／ＣｄＳ、ＰｂＳ／ＣｄＳ／ＺｎＳ、ＩｎＡｓ／ＺｎＳ、ＩｎＡｓ／ＺｎＳｅ、ＩｎＡｓ／ＩｎＰ／ＺｎＳｅ、ＩｎＡｓｘＰ１−ｘ／ＩｎＰ／ＺｎＳｅ、ＣｕＩｎＳ２／ＺｎＳ、（ＣｕＩｎＳｅｘＳ２−ｘ）／ＺｎＳ、Ａｇ２Ｓ  Ａｇ２ＳｅおよびＳｉからなる群から選択される量子ドットである。
【０１１５】
１つの実施態様において、蛍光色素は、ＮａＹＦ４：Ｅｒ、Ｈｏ、Ｔｍ、Ｐｒ（ホスト：ドーパント）；ＮａＧｄＦ４：Ｎｄ、Ｙｂ、Ｔｍ；ＳｒＦ２：Ｎｄ  ＬａＦ３：Ｎｄ；ＬｉＹＦ４：Ｎｄ  ＮａＹ０．７８Ｙｂ０．２Ｅｒ０．０２Ｆ４からなる群から選択される希土類ナノ粒子である。
【０１１６】
１つの実施態様において、蛍光色素は、Ａｕ、ＡｇまたはＣｕナノクラスターからなる群から選択される金属ナノクラスターである。
【０１１７】
１つの実施態様において、蛍光色素は、単層カーボンナノチューブなどのカーボンナノチューブである。
【０１１８】
有機溶媒
本開示の溶液の有機溶媒は、溶液の成分を溶解させる、例えば、水不溶性炭水化物および蛍光色素を溶解させる役割を果たす。蛍光色素が粒子として提供される場合、溶媒はそれらの粒子を分散させる。さらに、有機溶媒は水といくらかの混和性を有し、それにより、溶液と水相間の分配傾向を有するべきである。
【０１１９】
よって、１つの実施態様において、有機溶媒は、−２〜２の範囲、例えば−１．８〜１．８の範囲、例えば−１．５〜１．５の範囲、例えば−１〜１の範囲、例えば−２〜１の範囲、例えば−１．５〜１の範囲、例えば−１〜２の範囲、例えば−１〜１．５の範囲のｌｏｇＰを有する。
【０１２０】
１つの実施態様において、有機溶媒は、アルコールである。
【０１２１】
１つの実施態様において、有機溶媒は、Ｃ１−Ｃ７アルコール、例えばＣ１−Ｃ６アルコール、例えばＣ１−Ｃ５アルコール、例えばＣ１−Ｃ４アルコールである。
【０１２２】
用語Ｃｎ−Ｃｍアルコールは、本明細書で使用する場合、ｎ〜ｍ個の炭素原子を有するアルコールを指す。例えば、用語Ｃ１−Ｃ４アルコールは、１〜４個の炭素原子を有するアルコールを指す。
【０１２３】
１つの実施態様において、有機溶媒は、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、イソブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、ベンジルアルコール、プロピレンカーボネートおよびジメチルスルホキシドからなる群から選択される。
【０１２４】
１つの実施態様において、有機溶媒は、エタノール、ベンジルアルコール、プロピレンカーボネートおよびジメチルスルホキシドからなる群から選択される。
【０１２５】
１つの実施態様において、本開示の溶液中の有機溶媒の量は、１〜３０％、例えば１〜２０％、例えば１〜１５％、例えば１〜１０％、例えば５〜１０％の範囲である。
【０１２６】
さらなる溶媒
本開示の溶液は、さらなる溶媒を含んでなり得る。さらなる溶媒は、本明細書に記載されるように補助溶媒とも呼ばれる。さらなる溶媒としては、限定されるものではないが、モノグリセリド、ジグリセリドおよび／またはトリグリセリドを含み得る。
【０１２７】
溶液中へのさらなる溶媒の包含は、蛍光色素の放出速度を調節するための手段を提供し得る。１つの実施態様において、さらなる溶媒の量を増やすと、溶液および／または固化した溶液からの蛍光色素の放出が増える。
【０１２８】
１つの実施態様において、さらなる溶媒は、トリデカン酸グリセリル（ＧＴＤ）、トリオクタン酸グリセリル（ＧＴＯ）およびトリヘキサン酸グリセリル（ＧＴＨ）からなる群から選択されるトリグリセリドである。
【０１２９】
１つの実施態様において、さらなる溶媒の量は、０〜５０％の範囲、例えば０〜４０％の範囲、例えば０〜３０％の範囲、例えば０〜２０％の範囲、例えば０〜１０％の範囲である。
【０１３０】
画像診断法
本開示のいくつかの実施態様は、キレーターであるＮＩＲ造影剤などの蛍光色素を含有する。このような色素は、それらが例えばＮＩＲ蛍光装置を用いてこれらの溶液の可視化を可能とし、加えて放射性核種の錯化ができるので多機能である。このような溶液は、ＮＩＲカメラによって、また疎水性ＮＩＲキレーターを介して溶液に放射性核種を組み込むことによりＰＥＴまたはＳＰＥＣＴ画像でも可視化され得る。このようなＮＩＲキレーターの例は、ナフタロシアニンおよびフタロシアニン誘導体化色素、ポルフィリン誘導体化色素、例えば、テキサフィリンである。
【０１３１】
金属陽イオンをキレート化すると、ＮＩＲキレーター色素のスペクトル特性は変化し、これを基準マーカーの光学特性を改変するため、または注入後に組織に存在する特定の陽イオンを検出するために使用することができる。
【０１３２】
ＮＩＲおよびＰＥＴイメージングの両方により可視化できるこのような溶液を適用すると、外科医が例えば術前に注入後の基準マーカーをＰＥＴにより可視化すること、および外科的露出中にＮＩＲカメラを用いて基準マーカーを識別することを可能とする。他の放射性核種タイプの組み込みはさらに、手術中のＳＰＥＣＴイメージングまたはハンドヘルドガンマプローブ検出誘導を可能とする。このような溶液の適用は、外科医が、ガンマプローブを用いてより深い組織深度で基準マーカーの位置を特定すること、およびＮＩＲイメージングを用いて中間の組織深度で基準マーカーをなお可視化することを可能とする。
【０１３３】
加えて、ヨウ素化炭水化物エステル、ヨウ素化ポリマーまたは金ナノ粒子などの放射線不透性造影剤がこの溶液にさらに含まれてもよく、これはＣＴイメージングまたは外科手技中のＸ線透視法による誘導を可能とする。本開示の溶液はさらに、本質的に低水含量の材料のために磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）により、また、組織よりも高い粘度および／または延性のために超音波（ＵＳ）により可視化可能である。
【０１３４】
ＮＩＲ／ＰＥＴ／ＳＰＥＣＴ／ＣＴ／ＭＲＩおよびＵＳ中で可視性を有する多モード基準マーカーとして機能する本開示の溶液は、それがいくつかの画像診断法において共通の参照点として使用される場合、これらの橋渡し／アラインメントの可能性を提供する。本開示の溶液はさらに，注入が容易であり、注入／移植中にＵＳまたはＸ線透視法によってリアルタイムで追跡可能であり、その後、外科医が手術中に、また、到達困難な対象を、深い組織深度ではガンマプローブ検出器、または浅い〜中間の組織深度ではＮＩＲイメージングを用いて識別／位置特定することを可能とする。このようなマーカーのＰＥＴおよびＳＰＥＣＴイメージングはまた、外科手技において、マーカーが罹患組織／病変の位置を実際にマークする確認のため、またはリアルタイムＳＰＥＣＴ誘導手術のためにも使用可能である。
【０１３５】
よって、１つの実施態様において、この溶液は、さらなる造影剤を含んでなる。
【０１３６】
画像診断法としては、限定されるものではないが、Ｘ線イメージング、ＣＴイメージング、ＭＲＩ、ＰＥＴイメージング、単光子放射コンピューター断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）イメージング、核シンチグラフィーイメージング、超音波検査イメージングおよび／または超音波イメージングが含まれる。
【０１３７】
１つの実施態様において、さらなる造影剤は、Ｘ線剤、ＣＴ剤、ＭＲＩ剤、ＰＥＴ剤およびＳＰＥＣＴ剤からなる群から選択される。
【０１３８】
１つの実施態様において、蛍光色素は、放射性核種に配位している。
【０１３９】
１つの実施態様において、放射性核種は、Ｔｃ−９９ｍ、Ｉｎ−１１１、Ｇａ−６７、Ｌｕ−１７７、Ｔｌ−２０１、Ｓｎ−１１７ｍ、Ｃｕ−６４、Ｍｎ−５２、Ｚｒ−８９、Ｃｏ−５５、Ｓｃ−４４、Ｔｉ−４５、Ｓｃ−４３、Ｃｕ−６１、Ａｓ−７２、Ｔｅ−１５２、Ｆ−１８、Ｇａ−６８、Ｃ−１１、Ｎｄ−１４０およびＴｅ−１４９からなる群から選択される。
【０１４０】
１つの実施態様において、放射性核種は、Ｔｃ−９９ｍ、Ｉｎ−１１１、Ｇａ−６７、Ｌｕ−１７７、Ｔｌ−２０１およびＳｎ−１１７ｍからなる群から選択される。
【０１４１】
１つの実施態様において、放射性核種は、Ｃｕ−６４、Ｍｎ−５２、Ｚｒ−８９、Ｃｏ−５５、Ｓｃ−４４、Ｔｉ−４５、Ｓｃ−４３、Ｃｕ−６１、Ａｓ−７２およびＴｅ−１５２からなる群から選択される。
【０１４２】
１つの実施態様において、放射性核種は、Ｃｕ−６７、Ｃｕ−６４、Ｍｎ−５２、Ｚｒ−８９、Ｃｏ−５５、Ｓｃ−４４、Ｔｉ−４５、Ｓｃ−４３、Ｃｕ−６１、Ａｓ−７２およびＴｅ−１５２からなる群から選択される。
【０１４３】
１つの実施態様において、この溶液は、溶液に関連の放射性核種、例えば、Ｔｃ−９９ｍ、Ｉｎ−１１１、Ｇａ−６７、Ｌｕ−１７７、Ｔｌ−２０１、Ｓｎ−１１７ｍ、Ｃｕ−６４、Ｍｎ−５２、Ｚｒ−８９、Ｃｏ−５５、Ｓｃ−４４、Ｔｉ−４５、Ｓｃ−４３、Ｃｕ−６１、Ａｓ−７２、Ｔｅ−１５２、Ｆ−１８、Ｇａ−６８、Ｃ−１１、Ｎｄ−１４０、Ｔｅ−１４９が組み込まれているためにＰＥＴおよび／またはＳＰＥＣＴイメージングによるイメージングを提供し得る。
【０１４４】
１つの実施態様において、この溶液は、放射性ハロゲン化水不溶性炭水化物、例えば放射性ヨウ素化または放射性フッ素化水不溶性炭水化物を含んでなり得る。よって、１つの実施態様において、この溶液は、３１Ｉ、１２５Ｉおよび／または１８Ｆで標識された水不溶性炭水化物を含んでなり得る。このような標識はＰＥＴおよび／またはＳＰＥＣＴによる溶液の可視化を可能とし得る。
【０１４５】
１つの実施態様において、さらなる造影剤は、Ｘ線剤である。Ｘ線剤は、１以上のヨウ素化ポリマー、ヨウ素化オリゴマー、ヨウ素化脂質、ヨウ素化糖類、ヨウ素化二糖類、ヨウ素化多糖類、ヨウ素化ペプチド、またはそれらの誘導体もしくは組合せを含んでなり得る。好ましい造影剤は、ポリマーなどのヨウ素化化合物、あるいはグルコースもしくはスクロースの誘導体または二糖類、三糖類もしくはオリゴ糖類の誘導体などの糖分子である。Ｘ線剤は、あるいは、１以上のＸ線造影剤、すなわち、Ｘ線照射を遮断または減衰することができる化合物を含んでなる、またはからなる固体粒子であり得る。このような化合物には、周期表によって定義される遷移金属、希土類金属、アルカリ金属、アルカリ土類金属、その他の金属が含まれる。
【０１４６】
１つの実施態様において、Ｘ線造影剤は、ヨウ素（Ｉ）、金（Ａｕ）、パラジウム（Ｐｄ）、銀（Ａｇ）、ビスマス（Ｂｉ）、ガドリニウム（Ｇｄ）、鉄（Ｆｅ）、バリウム（Ｂａ）、カルシウム（Ｃａ）およびマグネシウム（Ｍｇ）から選択される。
【０１４７】
１つの実施態様において、さらなる造影剤は、式（ＩＩＩ）の構造を有する。
【化３】
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【０１４８】
１つの実施態様において、この溶液は、同じクラスの非ヨウ素化水不溶性炭水化物を含んでなる溶液にドープされた水不溶性炭水化物ヨウ素化誘導体を含んでなる。
【０１４９】
１つの実施態様において、この溶液は、ＭＲＩなどの画像診断法で使用するための常磁性化合物をさらに含んでなり得る。
【０１５０】
１つの実施態様において、この溶液は、溶液の無視できる水分含量のためにネガティブコントラストでＭＲＩによるイメージングを提供し得る。
【０１５１】
１つの実施態様において、この溶液は、組織によりも高い粘度および／または延性のために超音波（ＵＳ）で可視化可能であり得る。
【０１５２】
別の実施態様において、この溶液は、超音波検査イメージングのために脂質系、ポリマー系または無機系粒子に封入された１以上のガスをさらに含んでなる。前記ガスは、空気、六フッ化硫黄または十フッ化二硫黄などのハロゲン化硫黄；ペルフルオロカーボンなどのフルオロカーボン；ペリウオロアセトン(peril uoroacetone)などのフッ素化（例えば、過フッ素化）ケトン；およびペルフルオロジエチルエーテルなどのフッ素化（例えば、過フッ素化）エーテルを含んでなり得る。
【０１５３】
溶液の物理学
本開示の溶液は、水不溶性炭水化物および１００〜１０００ｃＰの範囲の粘度を有する溶液または分散液を共に形成する極性〜非極性の特徴を有する溶媒を含んでなる。本開示のいくつかの実施態様では、水不溶性炭水化物は４〜１０の範囲のｌｏｇＰ値を有するが、使用する溶媒は−２〜２の範囲のｌｏｇＰを有する。水性媒体または間質液を含有する組織に注入すると、溶液は非溶媒誘起相分離(non-solvent induced phase separation)（ＮＩＰＳ）を受け、溶液の溶媒が周囲の水相に分配されて、水不溶性炭水化物の沈澱およびその炭水化物を反映する材料特性を有するデポの形成に至る。ＮＩＰＳの際、例えばＳＡＩＢなど、極めて粘稠な（１０００００〜１００００００ｃＰ）液体を形成する炭水化物もあるし、例えば、オクタイソ酪酸マルトース、オクタイソ酪酸スクロース、オクタイソ酪酸ラクトース、オクタイソ酪酸トレハロースまたは十一イソ酪酸ラフィノースなど、脆いまたは延性のある固体を形成する炭水化物もある。脆く硬い炭水化物は、非晶質、結晶性、ガラス状またはそれらの混合物のいずれかであるとして特徴付けることができる。このような実施態様の例は、ＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ８０：２０、ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ５０：３０：２０、ＬＯＩＢ：ＥｔＯＨ  ８０：２０またはＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ５０：３０：２０を含んでなり、任意選択で他の炭水化物、溶媒およびそれらの変形形態を含む溶液である。
【０１５４】
１つの実施態様において、有機溶媒は、水性条件下で溶液から拡散して、ゲル、ガラス、半固体、固体、結晶またはその任意の組合せを提供する。
【０１５５】
１つの実施態様において、溶液の粘度は、水性条件下で、１０００センチポアズ(centipose)（ｃＰ）より多く、例えば５０００ｃＰより多く、例えば１００００より多く、例えば５００００ｃＰより多く、例えば１０００００ｃＰより多く増す。
【０１５６】
１つの実施態様において、固化した溶液の粘度は、１０００００〜１００００００ｃＰの範囲、例えば１０００００〜７５００００の範囲、例えば１０００００〜５０００００ｃＰの範囲、例えば１０００００〜２５００００ｃＰの範囲である。
【０１５７】
１つの実施態様において、固化した溶液の粘度は、１０００００〜１００００００ｃＰの範囲、例えば２５００００〜１００００００ｃＰの範囲、例えば５０００００〜１００００００ｃＰの範囲、例えば７５００００〜１００００００ｃＰの範囲である。
【０１５８】
粘稠度の高い液体であるデポでも、脆い、延性のある、非晶質の、結晶性のまたはガラス状のデポでも、デポの高い粘度または固体の特徴によって拡散が妨げられるので、捕捉された蛍光色素は動的にトラップされる。より大きい蛍光色素またはナノ粒子の場合、抗力／摩擦が高まるために、その溶液内での拡散はなおさらに低下し、固化した溶液中のこれらの動的トラップの有効性の向上がもたらされる。
【０１５９】
いくつかの実施態様では、限定されるものではないが、モノ、ジおよびトリグリセリドなどの、４〜１０の範囲のｌｏｇＰ値を特徴とする補助溶媒が本明細書に記載されるような溶液に含められる。水性媒体または間質液を含有する組織に注入すると、このような溶液はＮＩＰＳを受けて炭水化物補助溶媒溶液を生じ、炭水化物材料特性、補助溶媒粘度および炭水化物／補助溶媒比を反映する調節可能な粘度を有するデポが形成する。このような実施態様の例は、ＳＡＩＢ：ＧＴＨ：ＥｔＯＨ  ６４：２８：８、ＳＡＩＢ：ＧＴＯ：ＥｔＯＨ  ８３：９：８  ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＧＴＯ：ＥｔＯＨ  ６６：９：１７：８、ＬＯＩＢ：ＧＴＯ：ＥｔＯＨ  ６４：２８：８、ＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＧＴＯ：ＥｔＯＨ  ５０：９：３３：８またはそれらの変形形態である。
【０１６０】
水性媒体または間質液を含有する組織への注入時のこのような溶液からの溶媒流出速度は、溶液中で溶媒の水溶解度、ならびに水不溶性炭水化物に対する溶媒の親和性によって異なる。より高いｌｏｇＰを有する溶媒ほどより遅い溶媒放出およびＮＩＰＳにより形成された炭水化物デポの粘度により緩慢な増加をもたらす。一例として、９５％ＥｔＯＨの流出は、ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ５０：２０：２０の溶液の場合、ｉｎ  ｖｉｖｏで２時間以内に完了し、すなわち、これらの溶液は固化し、数時間以内にＮＩＰＳを受け、注入後５〜６時間以内に溶液の完全な固化をもたらす。溶液固化期間の後、流体定着物の粘度または固体デポにおいて拡散の減少が蛍光色素の逸出を妨げる。
【０１６１】
１つの実施態様において、溶液は水性条件下で１０時間未満、例えば８時間未満、例えば６時間未満、例えば５時間未満、例えば４時間未満、例えば３時間未満、例えば２時間未満で固化する。
【０１６２】
本開示のいくつかの実施態様では、低粘度で、蛍光色素保持の高い溶液が保証される。水不溶性炭水化物を補助溶媒と混合することにより、より低い粘度が得られる。
【０１６３】
炭水化物および補助溶媒が完全に適合する、すなわち、例えばＬＯＩＢおよびＧＴＯまたはＳＡＩＢおよびＧＴＨと同等のｌｏｇＰを有する場合には主として一相系が形成されるが、これらには補助溶媒の存在によって生じる粘度低下のために動的トラップ原理に基づく蛍光色素の保持はできない。しかしながら、適合度の低い炭水化物エステルおよび補助溶媒を選択するとミクロ相分離(microphase separation)（ＭＰＳ）に至る場合があり、組み込まれた蛍光色素などの化合物が一方の相または他方の相に分離され得る。本開示のいくつかの実施態様において、これらの相は不連続であるかまたは完全な浸透構造ではなく、組み込まれた化合物の拡散および逸出が妨げられる。一例は、蛍光色素を保持する固化溶液内における液滴の液体−液体共存であろう。補助溶媒の包含により最小放出が得られる本開示のある実施態様は、ＳＡＩＢ：ＧＴＯ：ＥｔＯＨから構成される溶液である。
【０１６４】
１つの実施態様において、蛍光色素の拡散速度は、溶液が固化してしまうまで蛍光色素が溶液中に保持され、それにより、蛍光色素の放出が全くないかまたは限定された状態で、固化した溶液中に蛍光色素を動的にトラップするようなものである。
【０１６５】
溶液中の保持
外科的介入の誘導は、現在、診療所では、メチレンブルーおよびインドシアニングリーン（ＩＣＧ）などの自由拡散色素の注入により使用されている。どちらの色素もＮＩＲ−Ｉ型であり、組織のマークのためまたはＮＩＲカメラ装置を用いた臓器灌流のモニタリングのために使用されている。しかしながら、このような色素の臓器内注入は、拡散により引き起こされる急速な分散に至り、外科的誘導のためのこれら色素の最適な使用を阻んでいる。本開示の溶液は蛍光色素の保持によってこの問題を解決する。溶液を注入すると、その溶液は固化し、ＮＩＲ色素を動的にトラップするか、または色素と溶液間の高い親和性のために色素を保持する。このようにして、高濃度の色素が注入部位に保持され、外科医が手術中に目的の領域を特定することを可能とする。
【０１６６】
本明細書の上記に記載されるような溶液の物理学のために、蛍光色素は溶液および／または固化した溶液中に保持され得る。これは周囲組織および／または臓器への漏出を最小にして、蛍光色素を所望の位置に正確かつ安定に局在させることを可能とする。
【０１６７】
溶液および／または固化した溶液中の蛍光色素の保持は、溶液の粘度の制御、固化溶液の形成、蛍光色素の疎水性、蛍光色素の大きさならびに溶媒および／またはさらなる溶媒の疎水性など、溶液の組成によって制御することができる。
【０１６８】
さらに、溶液および／または固化した溶液中の蛍光色素の保持は、本明細書の「溶液の物理学」の節に上記されるように、溶液の種々の成分の相対的ｌｏｇＰ値によっても制御することができる。
【０１６９】
１つの実施態様において、水性条件下で５時間後に１０％未満、例えば５％未満、例えば４％未満、例えば２％未満の蛍光色素が溶液および／または固化した溶液から放出される。
【０１７０】
１つの実施態様において、水性条件下で４時間後に１０％未満、例えば５％未満、例えば４％未満、例えば２％未満の蛍光色素が溶液および／または固化した溶液から放出される。
【０１７１】
１つの実施態様において、水性条件下で３時間後に１０％未満、例えば５％未満、例えば４％未満、例えば２％未満の蛍光色素が溶液および／または固化した溶液から放出される。
【０１７２】
１つの実施態様において、水性条件下で２時間後に１０％未満、例えば５％未満、例えば４％未満、例えば２％未満の蛍光色素が溶液および／または固化した溶液から放出される。
【０１７３】
１つの実施態様において、水性条件は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ条件、例えばバッファー系である。
【０１７４】
１つの実施態様において、水性条件は、ｉｎ  ｖｉｖｏ条件、例えば腫瘍部位への注入である。
【０１７５】
本開示の溶液からの蛍光色素の低い放出は、基準マーカーのより正確で安定な局在を提供し得る。さらに、本開示の溶液からの蛍光色素の低い放出は、蛍光色素による所望の組織の長期の標的を提供し得る。
【０１７６】
溶液からの制御放出
本開示の溶液はまた、溶液および／または固化した溶液からの蛍光色素の制御放出も提供し得る。蛍光色素の制御放出は、所属リンパ節の標識を提供し得る。
【０１７７】
溶液および／または固化した溶液からの蛍光色素の放出速度は、溶液の粘度の制御、固化溶液の形成、蛍光色素の疎水性、溶媒および／またはさらなる溶媒の疎水性など、溶液の組成によって制御することができる。
【０１７８】
さらに、溶液および／または固化した溶液からの蛍光色素の放出速度は、本明細書の「溶液の物理学」の節に上記されるように、溶液の種々の成分の相対的ｌｏｇＰ値によっても制御することができる。一例として、水不溶性炭水化物および完全に適合する、すなわち、同等のｌｏｇＰを有する溶媒を含んでなる溶液は、溶液および／または固化した溶液からの蛍光色素のより高い放出をもたらすであろう。炭水化物および溶媒が完全に適合する、すなわち、例えばＬＯＩＢおよびＧＴＯまたはＳＡＩＢおよびＧＴＨと同等のｌｏｇＰを有する場合には主として一相系が形成されるが、これらには補助溶媒の存在によって生じる粘度低下のために動的トラップ原理に基づく蛍光色素の保持はできない。
【０１７９】
炭水化物が補助溶媒と混合されて、粘度が低い基準マーカーを形成する場合、拡散により制限される速度論に基づいて、捕捉された化合物の制御放出が助長され得る。捕捉された化合物（ＮＩＲ色素−ポリマー構築物という）は、デポの粘度およびまたは拡散するＮＩＲ色素−ポリマー構築物の分子断面積によって定義される制御された様式で放出され得る。このようなポリマー構築物は、フタロシアニン、ナフタロシアニン、ポルフィン、アントラコシアニンなどの蛍光色素にコンジュゲートされたＰＮＩＰＡＭ、酢酸酪酸セルロース、酢酸セルロース、ペルフルオロカーボン、ポロキサマープルロニック、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリ（Ｌ−ラクチド）（ＰＬＡ）、ポリ（グリコリド）（ＰＧＡ）、ポリ(ploy)（ＤＬ−ラクチド）（ＤＬＰＬＡ）、ポリ（ジオキサノン）（ＰＤＯ）、ポリ（ＤＬ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−ラクチド）（ＬＤＬＰＬＡ）、ポリ（ＤＬ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＤＬＰＬＧ）、ポリ（グリコリド−ｃｏ−炭酸トリメチレン）ＰＧＡ−ＴＭＣ、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＬＰＬＧ）またはポリ（カプロラクトン）（ＰＣＬ）を含んでなり得る。デポからの放出速度は、大きさ（分子断面積）、ポリマーと溶液のもつれおよび相互作用、ならびに水性媒体中でのポリマーの溶解度によって制御される。
【０１８０】
本開示の他の実施態様において、量子ドットまたはカーボンナノチューブなどの蛍光粒子またはロッドを、固化した溶液から放出させることができる。さらに別の実施態様において、蛍光色素を捕捉しているかまたは蛍光色素で表面が官能化されたポリマーまたは金属ナノ粒子を、制御放出を達成するために同様の原理を用いて放出させることができる。
【０１８１】
蛍光標識粒子、ポリマーまたはロッドが放出すると、これらは腫瘍組織において拡散により分散し、所属リンパ節に蓄積する。リンパ節蓄積の程度は、ポリマーの大きさ、疎水性およびまたは標的リガンドのコンジュゲーションによって異なる。
【０１８２】
本開示のいくつかの実施態様では、放出された構築物は、所属リンパ節のＳＰＥＣＴ／ＰＥＴまたはガンマプローブ検出のための診断同位体を運び得る。本開示の別の実施態様において、放出された構築物は、例えば所属リンパ節内の転移性癌の治療のためのプロドラッグを含み得る。本開示の別の実施態様において、放出された構築物は、腫瘍またはリンパ節の機能的イメージングのための酵素、酸化還元またはｐＨで活性化可能な蛍光色素を含み得る。
【０１８３】
１つの実施態様において、蛍光色素は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）に共有結合的にコンジュゲートされ、２０００Ｄａを超える分子量を有する。蛍光色素の親水性ＰＥＧポリマーとのコンジュゲーションは、水性条件下で溶液からの蛍光色素の放出をもたらし得る。
【０１８４】
１つの実施態様において、放出された蛍光色素−ＰＥＧコンジュゲートは、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて溶液から放出された後にリンパ節に蓄積する。
【０１８５】
１つの実施態様において、蛍光色素−ＰＥＧコンジュゲートは、２０００Ｄａを超える、例えば３０００Ｄａを超える、例えば４０００Ｄａを超える、例えば５０００Ｄａを超える、例えば１００００Ｄａを超える、例えば１５０００Ｄａを超える、例えば２００００Ｄａを超える分子量を有する。
【０１８６】
溶液の使用
本開示による溶液は、１００〜１０００ｃＰの範囲の粘度を有する液体であってよく、ヒト身体のほとんどいずれの部位にも細い注入針で皮下投与、内視鏡投与または気管支鏡投与可能である。
【０１８７】
よって、本開示の１つの態様は、本明細書に記載されるような溶液の基準マーカーとしての使用に関する。
【０１８８】
手術の誘導
上記のように、画像誘導手術の分野で開発中の技術と併用するための良好な基準マーカーの開発の分野においての需要が存在する。
【０１８９】
本明細書に記載されるような溶液は、基準マーカーとして外科的誘導に適切な多モード画像診断法を含んでなり得る。これらの溶液は、それらの無視できる水分含量のためにＭＲＩでネガティブコントラストを、また、軟組織に比べてそれらの固有の高い粘度および延性のために超音波コントラストを本質的に有する水不溶性炭水化物を含んでなる。これらの溶液はさらに、ヨウ素化炭水化物エステル(iodinates carbohydate esters)、ヨウ素化ポリマーまたは金ナノ粒子の組み込みによりＣＴイメージングを、また、溶液中に捕捉された蛍光色素への診断放射性核種の配位によりＳＰＥＣＴ／ＰＥＴイメージングを可能とし得る。
【０１９０】
溶液の注入中、基準マーカーの位置および体積の変化は、ｘＳＡＩＢなどの放射線不透過性成分を含む溶液に対する、超音波イメージングまたはＸ線に基づく技術、例えば、Ｘ線透視法によりリアルタイムでモニタリングすることができる。従って、マーカーを注入する医療専門家は、外科手技を進める前に基準マーカーの質および精度を評価することができる。注入の質が疑わしい場合には、外科的介入を進める前にマーカーの正確な位置を保証するために、Ｘ線に基づくイメージング、例えば、ＣＴをさらに使用してもよい。このような多モードマーカーは、画像誘導手術において、外科的および治療的介入を改善し、患者の不快感および術後痛を軽減し、生存率を向上させ、入院を短縮し、および医療コストを引き下げる高い可能性を有する。
【０１９１】
本開示の溶液は、誘導のために基準マーカーが保証される総ての外科的および介入的手技／適応に使用可能である。
【０１９２】
よって、１つの実施態様において、本開示は、手術の誘導のための、本明細書に記載されるような溶液の使用に関する。
【０１９３】
１つの実施態様において、本明細書に記載されるような溶液は、外科手技後の参照点の標識に使用される。一例として、本明細書に記載されるような溶液は、組織生検手順の参照点の標識または治療デバイスの位置特定のために使用可能である。
【０１９４】
外部照射療法の誘導
放射線療法は、費用対効果のある、癌治療に広く採用される解決法であり、固形腫瘍を有すると診断された５０％を超える患者が何らかの形の放射線処置を受けている。米国および欧州だけで、年間２５０万人を超える患者が放射線療法を受ける。この治療選択肢の普及はまた、欧州で１０００を超える医療施設が線形加速器またはリニアックとして知られる放射線療法装置を備えていることにも表される。放射線療法処置は、いくつかの処置画分（最大３０のことがある）に送達されることが最も多く、効果的な処置に最終的に重要なのは、これらの処置画分のそれぞれで正確に腫瘍に当てることである。一部の癌では、それらの位置および軟組織コントラストは、周囲組織と似すぎていて、線形加速器に含まれるＸ線に基づくイメージング技術を基に正確に画定できない。このような場合、高いＸ線コントラストを有する基準マーカーの包含が患者の正確な位置決めおよび放射線療法の送達のための参照点を提供し得る。
【０１９５】
この達成を可能とするには、軟組織マーカー、または基準マーカーが必要である。
【０１９６】
放射線療法の技術の進展は、新しく、かつ最適化された処置アプローチの浮上を可能とし、それらは総て向上した画像誘導処置および軟組織マーカーの必要に頼るものである。
【０１９７】
よって、１つの態様において、本開示は、ＥＢＲＴの誘導のための、本明細書に記載されるような溶液に関する。
【０１９８】
１つの実施態様において、本開示は、外部照射療法の誘導のための、本明細書に記載されるような溶液の使用に関する。
【０１９９】
特定の酵素活性／環境を有する部位の標識（ｗ切断可能なクエンチャー）
１つの実施態様において、本開示の溶液の蛍光色素は、クエンチャーにコンジュゲートされる。
【０２００】
蛍光色素−クエンチャーコンジュゲートは、特定の酵素反応、低ｐＨまたは酸化還元電位の変化などの条件下で切断され得る。
【０２０１】
よって、蛍光色素−クエンチャーコンジュゲートにおいて、溶液からシグナルは提供されない。しかしながら、固化した溶液から蛍光色素−クエンチャーコンジュゲートが制御放出された際に、蛍光色素は例えば、低ｐＨ、特定の酸化還元電位または所与の酵素の存在を有する目的部位において活性化され得る。
【０２０２】
併用処置
本開示の溶液は、本開示を他の療法と併用することにより、またはすでに記載した基準マーカー機能の上に付加的な／その他の特徴を含めることにより、ある範囲の併用処置の可能性を与える。
【０２０３】
本開示の溶液は、創傷治癒剤または消毒剤などの種々の有効医薬成分とともに処方され得る。このような溶液を注入すると、創傷治癒剤または消毒剤が局所放出される。あるいは、本開示の溶液は、抗生物質とともに処方され得る。
【０２０４】
本開示のさらに別の実施態様では、光線力学療法(photo dynamic therapy)（ＰＤＴ）のための溶液に対する親和性が低減された（ｌｏｇＰが低減された）フタロシアニンまたはナフタロシアニン誘導体などの光増感剤を、腫瘍組織にその光増感剤が最適な蓄積をするように放出させることができ、その光増感剤を光で活性化させた後に癌細胞の破壊に至らせることを可能とする。
【０２０５】
調製用キット
本開示は、さらに、投与現場またはその付近で本開示の溶液を調製するためのキットに関する。放射性線源は必要に応じて提供され、最終的には現場で受容または作製された後に適用され得るのに対し、溶液の非放射性成分は例えば病院で提供および保管され得るので、このキットは、蛍光色素が放射性核種に配位される場合に有利であり得る。
【０２０６】
よって、１つの実施態様において、本開示は、
ａ．本明細書に記載されるような、水不溶性炭水化物、−２〜２の範囲のｌｏｇＰを有する溶媒、および任意選択のさらなる溶媒および／またはさらなる造影剤を含んでなる溶液、
ｂ．本明細書に記載されるような蛍光色素を含んでなる溶液
を含んでなるキットに関する。
【０２０７】
１つの実施態様において、キットは、成分ｂ）の一部としてのまたは個々の成分ｃ）としての放射性核種をさらに含んでなる。
【０２０８】
１つの実施態様において、キットの成分ａ）の成分は別個の部分として、またはａ）固体成分およびｂ）液体成分を含んでなる２成分として提供される。
【０２０９】
１つの実施態様において、キットの成分ｂ）の成分は、別個の部分として、またはａ）固体成分およびｂ）液体成分を含んでなる２成分として提供される。
【０２１０】
アイテム
１．ａ．水不溶性炭水化物、
ｂ．蛍光色素、および
ｃ．−２〜２の範囲のｌｏｇＰを有する有機溶媒
を含んでなる溶液。
【０２１１】
２．前記蛍光色素が２を上回るｌｏｇＰを有し、それにより、水性条件下で溶液における蛍光色素の保持を可能とする、第１項に記載の溶液。
【０２１２】
３．前記蛍光色素が２を上回る、例えば３を上回る、例えば４を上回る、例えば５を上回る、例えば６を上回る、例えば８を上回る、例えば１０を上回る、例えば１５を上回るｌｏｇＰを有する、第１項〜第２項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２１３】
４．水性条件下で５時間後に１０％未満、例えば、５％未満の蛍光色素が放出される、第１項〜第３項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２１４】
５．前記蛍光色素がポリエチレングリコールに共有結合的にコンジュゲートされ、２０００Ｄａを超える分子量を有し、それにより、水性条件下で溶液からの蛍光色素の放出を提供する、第１項に記載の溶液。
【０２１５】
６．放出された蛍光色素−ＰＥＧコンジュゲートが、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて溶液から放出した後にリンパ節に蓄積する、第５項に記載の溶液。
【０２１６】
７．蛍光色素−ＰＥＧコンジュゲートが、２０００Ｄａを超える、例えば３０００Ｄａを超える、例えば４０００Ｄａを超える、例えば５０００Ｄａを超える、例えば１００００Ｄａを超える、例えば１５０００Ｄａを超える、例えば２００００Ｄａを超える分子量を有する、第５項および第６項に記載の溶液。
【０２１７】
８．前記蛍光色素が粒子の一部である、第１項〜第７項に記載の溶液。
【０２１８】
９．前記粒子が、量子ドット、蛍光色素で官能化された金属ナノ粒子、蛍光色素で官能化されたポリマーナノ粒子およびカーボンナノチューブからなる群から選択される、第８項に記載の溶液。
【０２１９】
１０．前記粒子がポリマーでコーティングされている、第８項〜第９項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２２０】
１１．前記蛍光色素が近赤外線（ＮＩＲ）造影剤である、第１項〜第１０項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２２１】
１２．前記蛍光色素がＮＩＲ−Ｉ造影剤である、第１項〜第１１項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２２２】
１３．前記蛍光色素がＮＩＲ−ＩＩ造影剤である、第１項〜第１２項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２２３】
１４．ＮＩＲ造影剤がフタロシアニン、ナフタロシアニン、ポルフィン、アントラコシアニンおよびシアニン色素からなる群から選択される、第１項〜第１３項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２２４】
１５．ＮＩＲ造影剤がフタロシアニン、ナフタロシアニン、ポルフィン、アントラコシアニンからなる群から選択される、第１項〜第１４項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２２５】
１６．ＮＩＲ造影剤がＰＣ１、ＰＣ２および／またはＰＣ３などのフタロシアニンである、第１項〜第１５項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２２６】
１７．前記蛍光色素がポリマーにコンジュゲートされている、第１項〜第１６項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２２７】
１８．前記蛍光色素がＮＩＲより下の領域で光子を放出する、第１項〜第１７項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２２８】
１９．前記蛍光色素が７００〜９００ｎｍ域で光子を放出する、第１項〜第１８項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２２９】
２０．前記蛍光色素が９００ｎｍより上の領域で光子を放出する、第１項〜第１９項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２３０】
２１．前記水不溶性炭水化物がＣ２−Ｃ７エステルを形成するように官能化された１以上のヒドロキシル基を含んでなる、第１項〜第２０項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２３１】
２２．前記Ｃ２−Ｃ７エステルが炭水化物のヒドロキシル基とＣ２−Ｃ７アルカノイルのカルボニル基の間の結合により形成される、第１項〜第２１項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２３２】
２３．Ｃ２−Ｃ７エステルを形成するように官能化されたヒドロキシル基の数がｎ、ｎ−１、ｎ−２、ｎ−３、ｎ−４またはｎ−５であり、ここで、ｎは炭水化物のヒドロキシル基の総数である、第１項〜第２２項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２３３】
２４．総てのヒドロキシル基がＣ２−Ｃ７エステルを形成するように官能化された、第１項〜第２３項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２３４】
２５．前記水不溶性炭水化物が単糖類、二糖類、三糖類およびオリゴ糖類からなる群から選択される、第１項〜第２４項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２３５】
２６．前記水不溶性炭水化物が、グルコサミン、ガラクトサミン、マンノサミン、マンノース、ラムノース、ラムノサミン、ガラクトース、アロース、アロサミン、アルトロース、アルトロサミン、グロース、グロサミン、イドース、イドサミン、タロースおよびタロサミンからなる群から選択される単糖である、第１項〜第２５項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２３６】
２７．前記水不溶性炭水化物が、マルトース、トレハロース、ラクトース、スクロース、Ｇａｌｐ−（１→２）−Ｇｌｃ、Ｇａｌｐ−（１→３）−ＧｌｃＮ、Ｇａｌｐ−（１→４）−Ｇｌｃ、Ｇｌｃｐ−（１→４）−Ｇｌｃ、Ｇｌｃｐ−（１→６）−Ｇｌｃ、Ｇｌｃｐ−（１→２）−ＧｌｃＮ、Ｇａｌｐ−（１→４）−ＭａｎＮ、Ｇｌｃｐ−（１→４）−ＧａｌＮ、Ｍａｎｐ−（１→３）−Ｇｌｃ、ＭａｎＮｐ−（１→４）−Ｇａｌ、ＧａｌＮｐ−（１→３）−ＭａｎＮ、ＧｌｃＮｐ−（１→６）−ＧａｌＮ、Ｒｈａｍｎｐ−（１→６）−Ｇｌｃ、Ｇｌｃｐ−（１→１）−Ｇｌｃｐ、Ｔａｌｐ−（１→４）−Ｇｌｕ、Ｇｌｕｐ  （１→３）−ｌｄｏ、ＧｌｃＮｐ−（１→４）−ＧｌｃＮ、ＧｌｃＮｐ−（１→６）−ＧｌｃＮからなる群から選択される二糖である、第１項〜第２６項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２３７】
２８．前記水不溶性炭水化物が、ラフィノース、Ｇａｌｐ−（１→２）−Ｇｌｃｐ−（１→３）−Ｇａｌｐ、Ｇａｌｐ−（１→４）−Ｇｌｃｐ−（１→６）−ＧｌｃＮ、Ｇａｌｐ−（１→４）−Ｇｌｃｐ−（１→６）−Ｇａｌ、Ｇｌｃｐ−（１→４）−Ｇｌｃｐ−（１→４）−Ｇｌｃｐ、Ｇｌｃｐ−（１→６）−Ｇｌｃｐ−（１→６）−Ｇｌｃ、Ｇａｌｐ−（１→６）−Ｇｌｃｐ（１→２）−Ｆｒｕｆ、Ｇｌｃｐ−（１→３）−Ｆｒｕｆ−（２→１）−Ｇｌｃｐ、Ｇａｌｐ−（１→４）−ＭａｎＮｐ−（１→３）−Ｇｌｕ、Ｇｌｃｐ−（１→４）−ＧａｌＮ−（１→２）−Ｍａｎ、Ｍａｎｐ−（１→３）−Ｇｌｃｐ−（１→４）−ＧｌｃＮ、ＭａｎＮｐ−（１→４）−Ｇａｌｐ−（１→３）−Ｇｌｃ、ＧａｌＮｐ−（１→３）−ＭａｎＮｐ−（１→６）−ＧｌｃＮ、Ｒｈａｍｎｐ−（１→６）−Ｇｌｃｐ−（１→４）−ＧｌｃＮ、Ｇａｌｐ−（１→６）−Ｇｌｃｐ−（１→１）−Ｇｌｃｐ、Ｔａｌｐ−（１→４）−Ｇｌｕｐ−（１→２）−Ｍａｎ、Ｇｌｕｐ（１→３）−ｌｄｏｐ−（１→６）−Ｇｌｕ、ＧｌｃＮｐ−（１→６）−ＧｌｃＮｐ（１→４）−ＧｌｃＮからなる群から選択される三糖である、第１項〜第２７項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２３８】
２９．前記水不溶性炭水化物が、Ｇａｌｐ−（１→４）−Ｇｌｃｐ−（１→６）−ｇｌｃｐ−（１→４）−Ｇｌｃ、Ｇａｌｐ−（１→４）−Ｇｌｃｐ−（１→４）−Ｇｌｃｐ−（１→４）−Ｇｌｃｐ−（１→４）−Ｇｌｃ、Ｇａｌｐ−（１→４）−Ｇｌｃｐ−（１→４）−Ｇａｌｐ−（１→４）−Ｇｌｃ、Ｇｌｃｐ−（１→４）−Ｇｌｃｐ−（１→４）−Ｇｌｃｐ−（１→４）−Ｇｌｃ、Ｇａｌｐ−（１→６）−Ｇｌｃｐ−（１→６）−Ｇａｌｐ−（１→６）−Ｇｌｃ、Ｇａｌｐ−（１→６）−Ｇｌｃｐ−（１→６）−Ｇａｌｐ−（１→４）−Ｇｌｃ、Ｇａｌｐ−（１→６）−Ｇｌｃｐ−（１→６）−Ｇｌｃｐ−（１→４）−Ｇｌｃ、ＧｌｃＮｐ−（１→４）−ＧｌｃＮｐ−（１→６）−ＧｌｃＮｐ−（１→４）−ＧｌｃＮ、ＧｌｃＮｐ−（１→６）−Ｇａｌｐ−（１→６）−Ｇｌｃｐ−（１→２）−Ｆｒｕｆ、Ｇａｌｐ−（１→４）−Ｇｌｃｐ−（１→３）−Ｆｒｕｆ−（２→１）−Ｇｌｃｐ、Ｔａｌｐ−（１→４）−Ｇｌｕｐ−（１→２）−Ｍａｎ−（１−３）−Ｇｌｕ、Ｇｌｕｐ（１→３）−ｌｄｏｐ−（１→６）−Ｇｌｕｐ−（１→２）−Ｇａｌ、酢酸セルロース、酢酸酪酸セルロースおよび酢酸プロプリオン酸(proprionate)セルロースからなる群から選択されるオリゴ糖である、第１項〜第２８項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２３９】
３０．前記Ｃ２−Ｃ７アルカノイルがアセチル、プロパノイル、ブタノイル、イソブタノイル、ペンタノイル、ヘキサノイル、ヘプタノイルおよびベンゾイルから選択される、第１項〜第２９項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２４０】
３１．前記Ｃ２−Ｃ７アルカノイルがアセチル、プロパノイル、イソブタノイルおよびベンゾイルから選択される、第１項〜第３０項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２４１】
３２．前記水不溶性炭水化物が式（Ｉ）の構造を有する、第１項〜第３１項のいずれか一項に記載の溶液。
【化４】
2021527704.tif 000005
【０２４２】
３３．前記水不溶性炭水化物が式（ＩＩ）の構造を有する、第１項〜第３２項のいずれか一項に記載の溶液。
【化５】
2021527704.tif 000006
【０２４３】
３４．前記有機溶媒が水性条件下で溶液から拡散し、ゲル、ガラス、半固体、固体、結晶またはその任意の組合せを提供する、第１項〜第３３項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２４４】
３５．粘度が水性条件下で、１０００センチポアズ(centipose)（ｃＰ）より多く、例えば５０００ｃＰより多く、例えば１００００より多く、例えば５００００ｃＰより多く、例えば１０００００ｃＰより多く増す、第１項〜第３４項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２４５】
３６．溶液が水性条件下で５時間未満、例えば４時間未満、例えば３時間未満、例えば２時間未満で固化する、第１項〜第３５項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２４６】
３７．前記水性条件がバッファー系などのｉｎ  ｖｉｔｒｏ条件である、第１項〜第３６項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２４７】
３８．前記水性条件がｉｎ  ｖｉｖｏ条件である、第１項〜第３７項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２４８】
３９．前記有機溶媒が−２〜２の範囲、例えば−１．８〜１．８の範囲、例えば−１．５〜１．５の範囲、例えば−１〜１の範囲、例えば−２〜１の範囲、例えば−１．５〜１の範囲、例えば−１〜２の範囲、例えば−１〜１．５の範囲のｌｏｇＰを有する、第１項〜第３８項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２４９】
４０．前記有機溶媒がアルコールである、第１項〜第３９項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２５０】
４１．前記有機溶媒がＣ１−Ｃ４アルコールである、第１項〜第４０項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２５１】
４２．前記有機溶媒がメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、イソブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、ベンジルアルコール、プロピレンカーボネートおよびジメチルスルホキシドからなる群から選択される、第１項〜第４１項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２５２】
４３．有機溶媒の量が１〜３０％、例えば１〜２０％、例えば１〜１５％、例えば１〜１０％、例えば５〜１０％の範囲である、第１項〜第４２項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２５３】
４４．モノグリセリド、ジグリセリドおよび／またはトリグリセリドをさらに含んでなる、第１項〜第４３項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２５４】
４５．前記トリグリセリドがトリデカン酸グリセリル（ＧＴＤ）、トリオクタン酸グリセリル（ＧＴＯ）およびトリヘキサン酸グリセリル（ＧＴＨ）からなる群から選択される、第１項〜第４４項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２５５】
４６．モノグリセリド、ジグリセリドおよび／またはトリグリセリドの量が０〜５０％の範囲、例えば０〜４０％の範囲、例えば０〜３０％の範囲、例えば０〜２０％の範囲、例えば０〜１０％の範囲である、第１項〜第４５項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２５６】
４７．前記蛍光色素が放射性核種に配位している、第１項〜第４６項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２５７】
４８．前記放射性核種がＴｃ−９９ｍ、Ｉｎ−１１１、Ｇａ−６７、Ｌｕ−１７７、Ｔｌ−２０１、Ｓｎ−１１７ｍ、Ｃｕ−６４、Ｍｎ−５２、Ｚｒ−８９、Ｃｏ−５５、Ｓｃ−４４、Ｔｉ−４５、Ｓｃ−４３、Ｃｕ−６１、Ａｓ−７２、Ｔｅ−１５２、Ｆ−１８、Ｇａ−６８、Ｃ−１１、Ｎｄ−１４０およびＴｅ−１４９からなる群から選択される、第１項〜第４７項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２５８】
４９．Ｃｕ−６４およびＰＣ１、ＰＣ２、および／またはＰＣ３を含んでなる、第１項〜第４８項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２５９】
５０．さらなる造影剤を含んでなる、第１項〜第４９項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２６０】
５１．さらなる造影剤がＸ線剤、ＣＴ剤、ＭＲＩ剤、ＰＥＴ剤およびＳＰＥＣＴ剤からなる群から選択される、第１項〜第５０項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２６１】
５２．さらなる造影剤が式（ＩＩＩ）の構造を有する、第１項〜第５１項のいずれか一項に記載の溶液。
【化６】
2021527704.tif 000007
【０２６２】
５３．ｉｎ  ｖｉｖｏ診断ツールとして使用するための、第１項〜第５２項のいずれか一項に記載の溶液。
【０２６３】
５４．
ａ．第１項〜第５４項のいずれか一項に記載の溶液の、それを必要とする個体への投与、
ｂ．蛍光色素の励起、および
ｃ．蛍光色素の検出
を含んでなる、ｉｎ  ｖｉｖｏイメージングの方法。
【０２６４】
５５．前記溶液が注入および／または塗抹により投与される、第１項〜第５４項のいずれか一項に記載の方法。
【０２６５】
５６．ｉｎ  ｖｉｖｏイメージングのための、第１項〜第５５項のいずれか一項に記載の溶液の使用。
【０２６６】
５７．基準マーカーとしての、第１項〜第５６項のいずれか一項に記載の溶液の使用。
【０２６７】
５８．手術の誘導のための、第１項〜第５７項のいずれか一項に記載の溶液の使用。
【実施例】
【０２６８】
実施例１  蛍光色素およびゲル材料の疎水性および分子量
従来の近赤外線（ＮＩＲ）蛍光団は、荷電残基およびまたはＰＥＧなどの親水性ポリマーの組み込みにより、水溶液中で可溶性となるように化学的に修飾されない限り、疎水性（ｌｏｇＰ＞０）であることを特徴とする高度にコンジュゲートされた分子から構成されることが多い。このような色素の疎水性の特徴は、疎水性溶液との良好な適合性を保証し、高い保持を可能とする。このような色素の例は表１に記載され、関連の溶液材料は表２に記載される。
【０２６９】
ｌｏｇＰ値は、Viswanadhan et al (Viswanadhan, V. N.; Ghose, A. K.; Revankar, G. R.; Robins, R. K., J. Chem. Inf. Comput. Sci., 1989, 29, 163-172;)のアルゴリズムに基づく計算によって得た。ｌｏｇＰ値はまた、オクタノール−水分配実験によって求めることもできる。正のｌｏｇＰ値は疎水性化合物に特徴的であり、負のｌｏｇＰ値は親水性化合物を示す。
【０２７０】
【表１】
2021527704.tif 000008
【０２７１】
【表２】
2021527704.tif 000009
【０２７２】
考察
選択された色素は、可視光（４００〜６００ｎｍ）からＮＩＲ−Ｉ域（７００〜９００ｎｍ）までの光学領域に存在する。表１の色素は総て、４を上回るｌｏｇＰ値を有する疎水性であり、分子量とｌｏｇＰの間に正の直線的相間を示す（Ｒ２＝０．８６）。よって、分子量の大きい色素ほど、溶液との疎水性相互作用を介した親和性の増強ならびにより大きな分子断面積によって引き起こされる粘稠な溶液中での拡散の阻害の両方のために、本開示に記載される溶液に効果的に保持されると予想される。
【０２７３】
放射性核種などの陽イオンをキレートすることができる蛍光団は、表１のポルフィン、フタロシアニン、ナフタロシアニンおよびアントラコシアニンにより代表される。総て、より小さいシアニン色素Ｃｙ５〜Ｃｙ７．５に比べて高いｌｏｇＰ値を有するより大きい構築物であり、高い溶液保持を示す。このような色素の水溶解度は極めて低く、このような色素の放出は最小であると思われる。
【０２７４】
炭水化物エステルおよびトリグリセリド補助溶媒の疎水性（ｌｏｇＰ）は、アシル鎖長が増すほど大きくなることが判明した。ゲル形成に適用可能な溶媒は、−１．４〜１．２の１ｌｏｇＰ値範囲にわたると判明し、水性媒体に注入した際に溶液から拡散する傾向を示し、非溶媒誘起相分離を生じる。トリグリセリド補助溶媒は５．５９〜１０．９２のｌｏｇＰ範囲にわたると見られ、炭水化物エステルは−１．１７〜１５．３０のｌｏｇＰ範囲にわたる。
【０２７５】
補助溶媒と炭水化物エステルの間にｌｏｇＰ値の特定の一致が見られ、例えば、補助溶媒炭水化物混合物ＳＡＩＢ：ＧＴＨとＬＯＩＢ：ＧＴＯのｌｏｇＰ値の差異は１未満であり、類似の疎水性および適合性を示す。補助溶媒と炭水化物エステルの間のｌｏｇＰ値の大きな差異は、不適合性の予測因子となり得、溶液のミクロ相分離につながる、さらに「溶液の物理学」の節も参照。
【０２７６】
結論
ｌｏｇＰ値は、選択された溶液基質および色素化合物に対して計算法により確立され、補助溶媒と炭水化物エステルの間の適合性を予測するために使用されているとともに、キレート色素のより高い保持も予測する。
【０２７７】
実施例２  材料および方法
別段の断りがない限り、化学物質は総てＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。ＩＣＰ−ＭＳ測定用の試薬はＴｒａｃｅＳｅｌｅｃｔ（登録商標）であり、硝酸はＦｌｕｋａ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌから購入した。ＨＳＰＣ：ＣＨＯＬ：ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００モル比（５６．５：３８．２：５．３）の水素化ダイズＬ−α−ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）、コレステロール（ＣＨＯＬ）および１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（アンモニウム塩）（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００）から構成されるプレミックス脂質混合物は、Ｌｉｐｏｉｄ  ＧｍｂＨから購入した。
【０２７８】
酢酸イソ酪酸スクロース（ＳＡＩＢ）はＳｉｇｍａから購入し、オクタイソ酪酸ラクトース（ＬＯＩＢ）およびｘＳＡＩＢは所内カスタム合成により作製した。
【０２７９】
１２５Ｉ（［１２５Ｉ］ＮａＩ）およびＬＣＳカクテル、Ｕｌｔｉｍａゴールドは、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒから購入した。
【０２８０】
ＣＴ２６（マウス結腸癌）は、ＡＴＴＣ（ロックビル、ＭＤ、ＵＳＡ）から購入した。１０％ウシ胎仔血清およびペニシリン−ストレプトマイシン(pen-strep)を添加したＤＭＥＭ培地は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｉｎｃ．（デンマーク）から購入した。
【０２８１】
使用する水は総て、Ｍｉｌｌｉ−Ｑシステム（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）から得た。ＴＲＩＳ等浸透圧バッファー（１０ｍＭ  ＴＲＩＳ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ）はＭｉｌｌｉ−Ｑ水で調製し、ＨＣｌでｐＨ７．８に調整した。
【０２８２】
略号：
８ＨＱ：  ８−ヒドロキシキノリン
ＳＡＩＢ：  ジ酢酸ヘキサイソ酪酸スクロース、式（Ｉ）
ＬＯＩＢ：  オクタイソ酪酸ラクトース、式（ＩＩ）
ｘＳＡＩＢ：  式（ＩＩＩ）のヨウ素化ＳＡＩＢ誘導体
【化７】
2021527704.tif 000010
【０２８３】
実施例３  ６’−（シアニン７．５）−イソ酪酸スクロース（セプタイソ酪酸スクロースシアニン７．５、ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５）の合成
本実施例では、ＮＩＲ色素シアニン７．５は、疎水性炭水化物エステルであるセプタイソ酪酸スクロースに化学的に連結され、生成物ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５となっている。
【０２８４】
方法：
反応は総て不活性雰囲気（Ｎ２）下で行った。感水性の液体および溶液をシリンジに移した。単離した生成物の洗浄のために使用した水は総ての場合でＭｉｌｌｉＱ水であった。有機溶液を３０〜６０℃、２００〜０ミリバールでの回転蒸発により濃縮した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、間シリカ６０Ｆ（Ｍｅｒｃｋ  ５５５４）でプレコートされたアルミニウムシートを用いて行った。これらのＴＬＣプレートをＵＶ光下で調べるかまたは硫酸セリウムアンモニウム溶液（１０％硫酸溶液中、１％硫酸セリウム（ＩＶ）および２．５％モリブデン酸五アンモニウム）を用いて現像した。
【０２８５】
試薬：  シアニン７．５ＮＨＳエステルはＬｕｍｉｐｒｏｂｅから購入し、乾燥溶媒はＡｃｒｏｓ  Ｏｒｇａｎｉｃｓから購入した（ＡｃｒｏＳｅａｌ、モレキュラーシーブス上エキストラドライ）。他の化学物質は総てＳｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃから購入し、受領したまま使用した。
【０２８６】
機器：  中間体の核磁気共鳴（ＮＭＲ）は、ｎｍｒ溶媒中、残留非重水素化溶媒残留物を内部標準として用い、２９８Ｋにおいて５ｍｍＨ−ブロードバンドデュアルチャネルｚ勾配プロディジークライオプローブを用い、１Ｈに対しては４０１．３ＭＨｚおよび１３Ｃに対しては１００．６２ＭＨｚで作動するＢｒｕｋｅｒ  Ａｓｃｅｎｄ（商標）４００ＭＨｚにて取得した。最終生成物のＮＭＲは、最適なスペクトル分解能を得るために、ＴＣＩクライオプローブ（Ｂｒｕｋｅｒ）を備えた８００ＭＨｚ  Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  ＩＩＩＨＤ分光計を用いて取得した。結合定数（Ｊ）は総てＨｚで表される。ＦＩＤファイルはＭｎｏｖａ  Ｓｕｉｔｅで処理した。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳは、Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｕｔｏｆｌｅｘ  Ｓｐｅｅｄ（商標）質量分析計で取得した。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦに関して使用したマトリックスは、エタノール中トリフルオロ酢酸ナトリウム（６０ｍｇ／ｍＬ）でスパイクした２，５ジヒドロキシ安息香酸（ＤＨＢ）の混合物であった。ＵＰＬＣは、Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  Ｕｌｔｒａ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ＬＣシステムにて、二元溶媒マネージャーおよびＴＵＶ検出器を用いて行った。分取ＨＰＬＣは、Ｗａｔｅｒｓ  ６００ポンプおよびコントローラーにて、Ｗａｔｅｒｓ  ２４８９  ＵＶ／Ｖｉｓ検出器を用いて行った。
【化８】
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【０２８７】
６’−ＴＢＤＰＳ−イソ酪酸スクロース（２）
スクロース（１）（２．５ｇ、７．３ｍｍｏｌ）を、３５ｍＬの乾燥ピリジンと１０ｍＬの乾燥ＤＭＦの溶媒混合物に懸濁させた。その後、ＤＭＡＰ（０．３６ｇ、２．９２ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を適切に溶解するまで撹拌した。次に、ＴＢＤＰＳ−Ｃｌ（１．１ｍＬ、４．０ｍｍｏｌ（０．５５当量））を、シリンジを通して１０〜１５分かけて滴下し、反応を一晩継続した。１６時間後、追加のＴＢＤＰＳ−Ｃｌ（１．１ｍＬ、４．０ｍｍｏｌ（０．５５当量））を加え、その後、反応物を再び一晩撹拌した。その後、ＵＰＬＣ（カラム：Ｃ８  注入体積：５μＬ  溶出剤：Ａ：水中０．１％ギ酸  Ｂ：アセトニトリル、０．１％ギ酸  勾配：６分で５〜１００％Ｂ  波長２２０および２８０ｎｍ）は、２：１の関係でモノ−およびジ−ｔｂｄｐｓスクロースへの変換を示した（保持時間：それぞれ３．１分および５．２分）。形成した６’−ＴＢＤＰＳ−スクロースは単離されず、代わりに、混合物をそのまま無水イソ酪酸物と反応させ、次いで、精製して（２）を得た。イソ酪酸無水物（３４ｍＬ、０．２１ｍｏｌ）を加え、この反応物を室温で１日撹拌した。反応の後にＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳを行った。完了した時点で、反応混合物をセライトで真空濃縮した。精製はフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中ＥｔＯＡｃ  ２％増）により行った。収量＝１４．８ｇ（５０％）。1H-NMR (400MHz, DMSO-D6): 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.63 - 7.57 (m, 4H), 7.47 - 7.37 (m, 6H), 5.62 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 5.51 - 5.46 (m, 2H), 5.39 - 5.33 (m, 1H), 5.04 (t, J = 9.8 Hz, 1H), 4.87 (dd, J = 10.4, 3.7 Hz, 1H), 4.25 (ddd, J = 10.3, 4.2, 2.0 Hz, 1H), 4.20 - 4.03 (m, 4H), 3.91 (dd, J = 12.5, 2.0 Hz, 1H), 3.87 - 3.77 (m, 2H), 2.60 - 2.51 (m, 3H), 2.47 - 2.33 (m, 3H), 1.15 - 1.07 (m, 12H), 1.07 - 0.94 (m, 40H)。
13C-NMR (101 MHz, DMSO-d6): δ 175.6, 175.2 (2C), 175.0, 174.9 (2C), 174.5, 135.0 (4 C), 132.4, 132.2, 129.9 (2C), 127.8 (4C), 102.4, 89.1, 80.0, 75.2, 73.5, 69.2 69.1, 68.1, 67.1, 63.8, 63.3, 61.2 (炭水化物の炭素), 33.2 (3C), 33.1 (2C), 33.0 (2C) (CH イソ酪酸), 26.4 (4C), 18.7, 18.6 (3C), 18.5 (5C), 18.4 (2C), 
MALDI-TOF MS: 理論値[M+ Na]+: 1093.53。実測値:1093.31。
【０２８８】
６’−ＯＨ−イソ酪酸スクロース（セプタイソ酪酸スクロース）（３）
６’−ＴＢＤＰＳ−イソ酪酸スクロース（２）（１４．８ｇ、１３．８ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（８０ｍＬ）に溶解させた。酢酸（１２ｍＬ、０．２１ｍｏｌ）を注意深く滴下した。次に、この反応混合物を冷却し、ＴＨＦ中、１．０ＭのＴＢＡＦ溶液（８３ｍＬ、８３ｍｍｏｌ）を、シリンジを通して１０〜１５分かけて加えた。この反応物を３０分かけて加熱して室温とし、その後、これを４０℃に温め、この温度で一晩撹拌した。その後、ＴＬＣ（ヘキサン：酢酸エチル  ３：１）は、反応の完了を示した（生成物ｒｆ：０．２）。この反応混合物を室温に冷却し、まず、ヘキサン（３００ｍＬ）、次に、脱イオン水（３００ｍＬ）を加えた。この混合物を１０分間撹拌し、その後、分液漏斗に注いだ。有機相を回収し、水相をヘキサン（２×３００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＨＣｌ（水溶液）（５００ｍＬ、ｐＨ＝２）、次に、リン酸バッファー（３×３００ｍＬ、ｐＨ＝６．８）で洗浄した。有機相をセライトで濃縮し、次に、ドライカラム精製（ヘキサン中ＥｔＯＡｃ  ２〜４％増）により精製して生成物を得た。収量５．１ｇ（８９．５％）。性状：透明油状物。1H-NMR (400 MHz, クロロホルム-d): δ 5.68 - 5.39 (m, 4H), 5.18 (t, J = 10.4 Hz, 1H), 4.94 (dd, J = 10.4, 3.6 Hz, 1H), 4.36 - 4.14 (m, 3H), 4.10 - 3.93 (m, 3H), 3.84 (dd, J = 12.9, 2.8 Hz, 1H), 3.60 (dd, J = 12.9, 3.6 Hz, 1H), 2.69 - 2.24 (m, 7H), 1.34 - 0.99 (m, 42H)。
13C-NMR (101 MHz, クロロホルム-d): δ 176.8, 176.3 (2C), 176.1, 176.0, 175.9, 175.2, 102.8, 90.2, 81.4, 75.6, 72.5, 70.0, 69.5, 69.1, 67.2, 64.0, 60.8, 60.7, 34.0 (4C), 33.9 (2C), 33.8, 19.2, 19.1, 19.0 (4C), 18.9 (5C), 18.8 (2C), 18.5。
MALDI-TOF MS: 理論値[M+ Na]+: 855.41. 実測値: 855.20。
【０２８９】
６’−（シアニン７．５）−イソ酪酸スクロース（セプタイソ酪酸スクロースＣｙ７．５）（４）
６’−ＯＨ−イソ酪酸スクロース（３）（１４ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（３ｍＬ）に溶解させた。次に、シアニン７．５ＮＨＳエステル（１５ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ）を加え、次いで、トリエチルアミン（１０μＬ、０．０７２ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を室温で２日間撹拌した。その後、ＴＬＣ（ヘキサン：酢酸エチル  ３：１）は完全な変換を示した。有機相を真空濃縮し、この化合物をメタノール（２ｍＬ）に再溶解させ、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｘｔｅｒｒａ  Ｃ８  溶出剤系：Ａ：水中０．１％ＴＦＡ  Ｂ：アセトニトリル、０．１％ＴＦＡ  勾配：１５分で７５〜１００％Ｂ）により精製した。収量：１５．２ｍｇ（６２％）。性状：緑色粉末。1H-NMR (800 MHz, DMSO-d6): δ 8.24 (dd, J = 11.5, 8.5 Hz, 2H), 8.09 - 8.02 (m, 4H), 7.84 - 7.63 (m, 6H), 7.53 - 7.47 (m, 2H), 6.19 (dd, J = 26.1, 14.0 Hz, 2H), 5.62 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 5.50 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 5.40 - 5.31 (m, 2H), 5.10 - 5.06 (m, 1H), 4.93 - 4.85 (m, 2H), 4.33 - 4.01 (m, 8H), 3.86 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 3.76 - 3.74 (m, 2H), 2.93 (q, J = 6.7 Hz, 1H), 2.59 - 2.53 (m, 10H), 2.47 - 2.30 (m, 3H), 2.07 (s, 3H), 1.94 (br s, 6H), 1.89 - 1.85 (m, 2H), 1.80 - 1.74 (m, 2H), 1.66 - 1.34 (m, 8H), 1.27 - 0.83 (m, 42H). 
MALDI-TOF MS: 理論値[M+ H]+: 1464.78. 実測値: 1464.73。
【０２９０】
結論：
結論として、生成物ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５は、高い収率および純度で形成された。
【０２９１】
実施例４：  ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５マーカー配合物の調製
本実施例では、ＮＩＲ色素ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５を、ＬＯＩＢまたはＳＡＩＢに基づくマーカー配合物に溶解させた。
【０２９２】
方法：
ＳＡＩＢマーカー配合物の調製：  ＳＡＩＢを７０℃に加熱し、７ｇのＳＡＩＢをガラスバイアルに注いだ。１ｇのｘＳＡＩＢおよび２ｇのＥｔＯＨをＳＡＩＢと混合し、３０分間音波処理を施して透明で均質なＳＡＩＢ配合物（ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０）を得た。
【０２９３】
ＬＯＩＢマーカー配合物の調製：  ７ｇのＬＯＩＢをガラスバイアルに秤量した。１ｇのｘＳＡＩＢおよび２ｇのＥｔＯＨをＳＡＩＢと混合し、３０分間音波処理を施して透明で均質なＬＯＩＢ配合物（ＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０）を得た。
【０２９４】
ＳＳＩＢ−ＣＹ７．５の添加：  ２ｍｇ／ｍｌのＳＳＩＢ−ＣＹ７．５保存溶液をＥｔＯＨで調製した。その後、０．１ｍｌのＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５保存溶液をピペットでガラスバイアルに移し、穏やかなＮ２流下、５５℃で乾燥させ、２ｇのＳＡＩＢまたはＬＯＩＢのいずれかの配合物を加え、この溶液に６時間音波処理を施して最終色素濃度を０．０１％ｗ／ｗとした。０．０１％、０．００６％、０．００３％、０．００１％，０．０００６％、０．０００３％、０．０００１％または０．００００１％のＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５を含有する配合物を連続希釈により調製した。
【０２９５】
Ｄ＆Ｃバイオレット２（Ｄ＆Ｃｖ２）の添加：  ＬＯＩＢマーカー中、０．０１％（ｗ／ｗ％）のＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５および０．１％（ｗ／ｗ％）のブルーＤ＆Ｃバイオレット２を動物で試験するために調製した。簡単に述べれば、１ｍｇのＤ＆Ｃバイオレット２を１ｇのＳＳＩＢ−ＣＹ７．５−ＬＯＩＢマーカー溶液（ＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５  ７０：１０：２０：０．０１）中に混合し、この溶液に３０分間音波処理を施した。
【０２９６】
結果：
１０％ｗ／ｗのｘＳＡＩＢ、２０％のＥｔＯＨおよび０．００００１％〜０．０１％ｗ／ｗのＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５を含有する、ＬＯＩＢまたはＳＡＩＢのいずれかに基づくＮＩＲマーカー配合物を調製した。これらの配合物は透明で均質であり、６か月を超えて沈澱も外観変化もなく５℃で保存することができた。０．１％ｗ／ｗのＤ＆Ｃバイオレット２を含有する配合物は暗青色であり、動物試験のために調製した。
【０２９７】
結論：
結論として、新規なＮＩＲ色素ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５を含有する透明で均質なＮＩＲマーカー配合物を調製することができた。
【０２９８】
実施例５：  ＰＣ１、ＰＣ２およびＰＣ３マーカー配合物の調製
本実施例では、ＮＩＲ色素ＰＣ１、ＰＣ２およびＰＣ３をマーカー配合物で調製した。
【０２９９】
方法：
ＳＡＩＢマーカー配合物の調製：  ＳＡＩＢを７０℃に加熱し、７ｇのＳＡＩＢをガラスバイアルに注いだ。１ｇのｘＳＡＩＢおよび２ｇのＥｔＯＨをＳＡＩＢと混合し、３０分間音波処理を施して透明で均質なＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ配合物（ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０）を得た。８ｇのＳＡＩＢをガラスバイアルに注いだ。２ｇのベンジルアルコール（ＢＡ）をＳＡＩＢと混合し、３０分間音波処理を施して透明で均質なＳＡＩＢ：ＢＡ配合物（ＳＡＩＢ：ＢＡ  ８０：２０）を得た。
【０３００】
色素を含むＳＡＩＢマーカー配合物の調製：
ＰＣ１：  クロロホルムに溶解させたＰＣ１の溶液（５０〜５００μＬ、１ｍｇ／ｍＬ）をピペットでガラスバイアルに移し、室温、窒素流下でクロロホルムを蒸発させた。次に、１ｇのマーカー配合物（ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：エタノール  ７０：１０：２０）をバイアルに加えてＰＣ１濃度を０．００５〜０．０５％ｗ／ｗとした。得られた混合物に１５分間、７０℃で音波処理を施した後、ボルテックスで撹拌した。
【０３０１】
ＰＣ２：  １ｍｇのＰＣ２をガラスバイアルに秤量した。１ｇのＳＡＩＢマーカー配合物を加え、この溶液に５５℃で６時間、音波処理を施した後、５５℃で１６時間、磁気撹拌して、最終色素濃度を０．１％ｗ／ｗとした。
【０３０２】
ＰＣ３：  クロロホルム（５０〜５００μＬ、１ｍｇ／ｍＬ）に溶解させたＰＣ３の溶液をピペットでガラスバイアルに移し、室温、窒素流下でクロロホルムを蒸発させた。次に、１ｇのマーカー配合物（ＳＡＩＢ：ＢＡ  ８０：２０）をバイアルに加えてＰＣ３濃度を０．００５〜０．０５％とした。得られた混合物に１５分間、７０℃で音波処理を施した後、ボルテックスで撹拌した。
【０３０３】
種々の色素含量を含有する配合物を、マーカー溶液を用いた連続希釈により調製した後、激しく撹拌した。
【０３０４】
結論：
結論として、３種類のフタロシアニン色素は総て、ＳＡＩＢを含有するマーカー配合物に良好に溶解された。
【０３０５】
実施例６：  ＰＣ１、ＰＣ２およびＰＣ３  ＮＩＲ色素の分光学的特徴
本実施例では、トルエンおよびマーカー溶液に溶解させた場合のＮＩＲ色素ＰＣ１、ＰＣ２およびＰＣ３に基づくフタロシアニンの吸光度および蛍光を検討した。
【０３０６】
方法：
有機溶媒でのＰＣ色素の調製：  トルエン中総てのＰＣ色素の保存溶液を単に混合することにより調製し（１ｍｇ／ｍＬ）、さらに希釈して吸収および蛍光の測定に好適な濃度とた。３種類の濃度の各色素をトルエンで調製し、蛍光スペクトルを記録するために用い、吸光度のためには１種類の色素濃度を調製した。
【０３０７】
マーカー配合物でのＰＣ色素の調製：  総ての組成物を重量パーセントまたは重量比で表す。ＳＡＩＢ（７０％）、ｘＳＡＩＢ（１０％）およびＥｔＯＨ（２０％）、またはＳＡＩＢ（８０％）およびベンジルアルコール（ＢＡ）（２０％）を含有するマーカー配合物を実施例５に記載のように調製した。
【０３０８】
ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：エタノール  ７０：１０：２０に基づくＰＣ１マーカー溶液を実施例５に記載のように調製した。このＰＣ１マーカー溶液をＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：エタノール  ７０：１０：２０でさらに希釈して吸収（０．００１％ｗ／ｗ）および蛍光測定（０．００５％ｗ／ｗ）に好適な濃度とした。
【０３０９】
ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：エタノール  ７０：１０：２０に基づくＰＣ２マーカー溶液を実施例５に記載のように調製した。このＰＣ２マーカー溶液をさらにＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：エタノール  ７０：１０：２０で希釈して吸収（０．００１％ｗ／ｗ）および蛍光測定（０．００１％ｗ／ｗ）に好適な濃度とした。
【０３１０】
ＳＡＩＢ：ＢＡ  ８０：２０に基づくＰＣ３マーカー溶液を実施例５に記載のように調製した。このＰＣ３マーカー溶液をさらにＳＡＩＢ：ＢＡ  ８０：２０で希釈して吸収（０．０１％ｗ／ｗ）および蛍光測定（０．００５％ｗ／ｗ）に好適な濃度とした。
【０３１１】
蛍光放出測定：  各マーカー配合物（１．０ｍＬ）を石英キュベット（Ｈｅｌｍａ、１０ｍｍ光路）に移し、蛍光スペクトルを励起／放出帯域幅２６ｎｍおよび積分時間０．２秒を用い、蛍光分光計（ＯＬＩＳ  ＤＭ  ４５）により収集した。トルエンおよびマーカー配合物中のＰＣ１には、６５０ｎｍの励起波長を使用した。ＰＣ２では、トルエンおよびマーカー配合物中の色素に関して７００ｎｍの励起波長を使用し、トルエン中のＰＣ３には８００ｎｍ、マーカー配合物中のＰＣ３には７５０ｎｍの励起波長を使用した。
【０３１２】
ＵＶ−ｖｉｓ吸光度測定：  各溶液（０．２ｍＬ）をピペットで９６ウェルプレートに移し、ＵＶ−ｖｉｓスペクトル（４００〜１０００ｎｍ）を多モードマイクロプレートリーダー（Ｓｐａｒｋ（登録商標）、Ｔｅｃａｎ）により、帯域幅３．５ｎｍで記録した。  
【０３１３】
結果：
３種類のフタロシアニン色素ＰＣ１、ＰＣ２およびＰＣ３の吸光度および蛍光を検討し、結果を図１に示す。
【０３１４】
結論：
結論として、ＰＣ１は、７００〜８００ｎｍ域で蛍光を発し、６００〜７００ｎｍで吸光を示すことが判明した。ＰＣ２は、約７９０ｎｍを中心とするよりシャープな蛍光バンドを示し、トルエン中ではより大きな波長に向かう肩を持っていた。マーカー配合物では、ＰＣ２は、約７９０ｎｍを中心とする狭い放出ピークを示した。ＰＣ２は、６５０〜８００ｎｍ域で吸光を示し、トルエン中では７８２ｎｍにシャープなピークを有していた。ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０配合物中に組み込んだ場合のＰＣ２では、より幅の広い吸収バンドが見られた。トルエンでは、ＰＣ３は、８５０〜１１００ｎｍ域で蛍光を発し、７００〜９００ｎｍ域で吸光を示した。ＳＡＩＢ：ＢＡ  ８０：２０に溶解させた場合、ＰＣ３は、トルエンに溶解させたＰＣ３に比べてより幅の広い吸収および放出ピークを示した。３種類のＰＣ色素は総て、蛍光放出強度の蛍光団濃度依存を示し、自己消光を示した。
【０３１５】
実施例７：  フタロシアニンの蛍光自己消光分析
最高の蛍光強度を有する最も明るいマーカー配合物を特定するために、ＰＣ２色素の自己消光を調べた。自己消光はＵＶｖｉｓにより調べ、蛍光はキュベットを用いて９０°で収集し、表面蛍光は表面プレートリーダーにより収集した。
【０３１６】
方法：
種々のレベルのＰＣ２を含有する組成物ＳＡＩＢ：ｘ−ＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０を含む配合物を実施例５に記載のように調製した。
【０３１７】
蛍光光度計による蛍光放出  ：簡単に述べれば、０．０１％、０．００６％、０．００３％、０．００１％、０．０００６％、０．０００３％、０．０００１％または０．００００１％のいずれかのＰＣ２色素を含有するマーカー配合物サンプルの蛍光放出強度を記録し、例えば、１．２ｍＬのＰＣ２配合物をピペットで石英キュベット（Ｈｅｌｍａ  １０．００ｍｍ）に移し、蛍光分光計（ＯＬＩＳ  ＳＬＭ８０００、ＵＳＡ）を用いて７８０ｎｍ〜８３０ｎｍで蛍光放出を記録した。励起波長７６８ｎｍ、スキャン時間４５秒、およびスリット幅８ｎｍを用いて放出スペクトルを記録した。
【０３１８】
表面蛍光イメージング：  ゲルサンプルの表面蛍光を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＮＩＲイメージングシステム（Ｏｄｙｓｓｅｙ  ＦＣ、Ｌｉｃｏｒ、ＵＳＡ）を用い、ＰＣ２色素濃度の関数として調べた。種々のＰＣ２色素濃度を有する７０μＬのゲルサンプルをピペットで１０ウェル試料ガラス（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、１０ウェル  ６．７  ｍｍ）に移し、８００ｎｍチャネル設定（７８５ｎｍ励起、分解能１２５μｍ）を用いて蛍光を記録した。次に、サンプルを含む１０ウェル試料ガラスを真空炉にて５５℃で一晩維持してＥｔＯＨを除去した。ＥｔＯＨの除去後、これらのサンプルを室温に冷却し、蛍光を再測定した。
【０３１９】
結果：
フタロシアニン色素のＰＣ２蛍光自己消光を、標準９０°キュベット測定を用い、表面蛍光イメージングにより調べ、結果を図２に示す。
【０３２０】
結論：
結論として、ＳＡＩＢ：ｘ−ＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０中に配合されたフタロシアニン色素ＰＣ２の蛍光強度は、標準キュベットおよび表面蛍光アッセイの両方における色素濃度に依存することが判明した。自己消光の最大強度および最低程度は、標準放出蛍光における０．００１％ｗ／ｗおよび表面蛍光における０．０１％ｗ／ｗと決定された。自己消光はＥｔＯＨ放出に依存しないこと、すなわち、このマーカーはＥｔＯＨ流出の前後で同じ蛍光強度を有することが判明した。
【０３２１】
実施例８：  ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５色素の分光学的特徴
新規なＮＩＲ色素ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５は、ＳＡＩＢまたはＬＯＩＢに基づくマーカー中に配合され、蛍光または吸光度により特徴付けられる。蛍光放出はさらに、ＳＡＩＢに基づくマーカー中の色素濃度の関数として調べた。
【０３２２】
方法：
ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５を含有するマーカー配合物ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨおよびＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２を実施例４に従って調製した。
【０３２３】
蛍光スペクトル：  ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５配合物の場合、１ｍＬのサンプルをピペットで石英キュベット（Ｈｅｌｍａ  １０．００ｍｍ）に移し、蛍光分光計（ＯＬＩＳ  ＳＬＭ８０００、ＵＳＡ）を用いて７８０ｎｍ〜９００ｎｍの蛍光放出を記録した。励起波長７６８ｎｍ、スキャン時間４５秒、およびスリット幅８ｍｍを用いて放出スペクトルを記録した。ＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５配合物の場合、１ｍＬのサンプルをピペットで石英キュベット（Ｈｅｌｍａ  １０．００ｍｍ）に移し、蛍光分光計（ＯＬＩＳ  ＤＭ４５、ＵＳＡ）を用い、励起／放出帯域幅２６ｎｍおよび積分時間０．２秒で８００ｎｍ〜１１００ｎｍの蛍光放出を記録した。励起波長７６８ｎｍを使用した。
【０３２４】
ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５マーカーサンプル、例えば、０．２ｍＬのＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５配合物のＵＶｖｉｓスペクトルを、多モードマイクロプレートリーダー（Ｔｅｃａｎ、Ｓｗｅｄｅｎ）を用いて記録し、Ｄ＆Ｃｖ２を含む０．０５ｍＬのＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５配合物をピペットで９６ウェルプレートに移し、５５０ｎｍ〜１０００ｎｍのＵＶ−ｖｉｓ  スペクトルを測定した。
【０３２５】
結果：
ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５を含有する蛍光マーカーを調製し、分光光度的に特徴付けた。結果を図５に示す。ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０中のＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５の蛍光放出は、放出強度における色素濃度依存的変化および８０４から８４４へのピーク強度の段階的シフトを示した。ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５の濃度が増すにつれ、放出強度は０．００３％ｗ／ｗまで増大し、その後は低下して色素の自己消光を示す。ＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２のＵＶｖｉｓ分析は、それぞれ０．１％ｗ／ｗ  Ｄ＆Ｃｖ２色素および０．０１％ｗ／ｗ  ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５色素からの吸収に相当する５９０ｎｍおよび８０３ｎｍに吸収ピークを示した。ＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２中、０．０１％ｗ／ｗ  ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５から８４５ｎｍを中心とする放出ピークが決定された。
【０３２６】
結論：
結論として、ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５は、ＬＯＩＢおよびＳＡＩＢの両マーカー配合物中に上手く配合され、蛍光強度およびピーク位置の両方の色素濃度依存を示した。
【０３２７】
実施例９：  ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるマーカーからのＰＣ２の漏出
水性媒体または組織中にマーカーを注入すると、ＥｔＯＨがマーカーから拡散し、これが色素の漏出をもたらし得る。この現象を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、高い量（０．１％ｗ／ｗ）のＰＣ２を、リン酸緩衝溶液を含有するマーカー配合物に注入することにより検討した。その後、マーカーからの色素の漏出をＵＶｖｉｓ分光法により検出した。
【０３２８】
方法：
０．１％ｗ／ｗのＰＣ２を含有するマーカー配合物ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０を実施例４〜５に記載されているように調製し、漏出実験に使用した。
【０３２９】
マーカーからのＰＣ２色素のｉｎ  ｖｉｔｒｏ漏出：  マーカーからのＰＣ２色素の放出を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、３００μＬのＰＣ２マーカー配合物（０．１％〜１ｍｇ／ｍｌ）を５ｍＬのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、５ｍＭ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．０）に注入することにより調べた。その後、サンプルを暗所にて３７℃で保存し、１、３、６時間後および１、２、４、６日後にＵＶ−ｖｉｓ分光法により色素放出をモニタリングした。０．５ｍｌのＰＢＳ放出バッファーのＵＶ−ｖｉｓスペクトルを、石英キュベットにて、ナノドロップ２０００ｃ（Ｔｈｅｒｍｏｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＵＳ）分光光度計を用い、６００ｎｍ〜８５０ｎｍで記録した。バッファー中でのＰＣ２の溶解度が低いために、バッファー中のＰＣの標準曲線を得ることができなかった。アセトニトリル中ＰＣ２溶液（０．０５ｍｇ／ｍＬ）を調製し、ＰＢＳ中でのＰＣ２の１０％放出に相当する０．００６ｍｇ／ｍＬ濃度となるようにＰＢＳバッファーを用いて希釈した。
【０３３０】
結果：
ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０およびＰＣ２色素を含有する配合物を調製し、放出媒体中のＰＣ２をＵＶｖｉｓにより決定した（図３）。
【０３３１】
６日以内に判定された放出媒体の吸光度の変化はなかったが、このことは色素が形成されたマーカー中に完全に保持されていることを示す。含めた１０％標準（図３）に基づくと、放出されたＰＣ２色素は１％未満である。この結果は１％より低い可能性があるが、現行のベースラインノイズレベルでは解明することはできない。
【０３３２】
結論：
結論として、実験の６日という時間枠では、マーカーからのＰＣ２の漏出は検出されなかった。
【０３３３】
実施例１０：  銅のキレート化によるＰＣ２の蛍光消光
フタロシアニン色素はキレーターであり、金属陽イオンに配位することができ、キレートの電子特性の変化は、色素の蛍光および吸光度に変化を引き起こし得る。
【０３３４】
方法：
０．００１％ｗ／ｗのＰＣ２を含有するマーカー配合物ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０を実施例４〜５に記載されるように調製した。
【０３３５】
銅消光サンプル：  エタノール中ＣｕＣｌ２・２Ｈ２Ｏの溶液（０．００５ｍｇ／ｍＬ）を調製し、ガラスバイアル（０、４４、８７、１３１、２１８または４３６μＬ）に移した。各バイアル中のエタノールを、窒素流を用い、５５℃に加熱することにより蒸発させた。ＰＣ２マーカー溶液（１．２ｍＬ、０．００１％）を、種々の量のＣｕＣｌ２を含有する各バイアル(vail)に加え、その後の各バイアルのＣｕ２＋／ＰＣ２のモル比はそれぞれ０、１：１０、１：５、３：１０、１：２および１：１となった。得られた混合物を５５℃で２時間、磁気撹拌した。
【０３３６】
ＰＣ２マーカーサンプルのＵＶｖｉｓスペクトルを、多モードマイクロプレートリーダー（Ｔｅｃａｎ、スウェーデン）を用いて記録し、例えば、０．２ｍＬのＰＣ２配合物をピペットで９６ウェルプレートに移し、５５０ｎｍ〜１０００ｎｍのＵＶ−ｖｉｓスペクトルを測定した。
【０３３７】
各混合物の蛍光放出スペクトルを得た。簡単に述べれば、各マーカー溶液（１．２ｍＬ）を石英キュベットに移し、蛍光放出スペクトルを波長域７８０〜８３０ｎｍ、励起波長７６８ｎｍ、スキャン時間４５秒およびスリット幅８ｍｍで記録した。
【０３３８】
結果および結論：
図４に示すデータに基づけば、銅はＰＣ２によりキレート化される、およびＰＣ２の蛍光強度は銅の結合時に低下すると結論付けられる。ＰＣ２色素を完全に消光するためには１：１モル比の色素および銅が必要とされる。
【０３３９】
実施例１１：  フタロシアニン種色素の６４Ｃｕによる放射性標識
フタロシアニン種色素（ＰＣ１、ＰＣ２およびＰＣ３）は、銅がＰＣ２の蛍光放出を消光した実施例１０で実証されたように金属キレーターである。本実施例では、ＰＣ２を含有するマーカー配合物を６４Ｃｕ２＋で放射性標識し、その後、Ｒａｄｉｏ−ＴＬＣにより定量する。
【０３４０】
方法：
６４Ｃｕ生産：  ６４Ｃｕは、電気めっき６４Ｎｉ標的の陽子照射によるビームラインを備えたＰＥＴｔｒａｃｅサイクロトロン（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で作製した後、塩化水素水溶液（ＨＣｌ）媒体中での陰イオン交換クロマトグラフィーにより精製した。６４Ｃｕは最終的にＨＣｌ水溶液（１．０Ｍ）中に得られ、アルゴン流によるＨＣｌ水溶液の蒸発により単離した。乾燥６４ＣｕＣｌ２を、マーカーを放射性標識するために使用した。
【０３４１】
マーカーの放射性標識：  ＰＣ２を含有するマーカーＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ（７０：１０：２０）（７５０μＬ、０．０１％または０．００１％）、またはＰＣ２不含マーカー（７５０μＬ）をガラスバイアルの乾燥６４ＣｕＣｌ２（１５０ＭＢｑ）に加えた。得られた混合物を５５℃で２時間、磁気拡散した。
【０３４２】
放射性ＴＬＣによる特性決定：  少量の各放射性標識マーカーをガラスバイアルに秤量し、約１０ｍｇ／ｍＬの濃度となるようにアセトニトリルに溶解させた。得られた溶液を放射性ＴＬＣ（Ｂｅｔａ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ  ＧＭＣプローブを備えたＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  ＭｉｎｉＧｉｔａ  Ｓｔａｒ）により、ＴＬＣプレート（Ｍｅｒｃｋ、シリカゲル６０  Ｆ２５４）に１μＬをスポットすることによって分析した。これらのＴＬＣプレートを、クロロホルム：メタノール：ｍｉｌｉ−Ｑ水：酢酸  ７０：２５：４：１  （ｖ／ｖ）を溶離剤として用いて展開した。非錯化６４Ｃｕは、これらのＴＬＣ条件を用いると元の位置に留まることが分かっている。
【０３４３】
結果：
マーカーＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：ＰＣ２（７０：１０：２０：０．０１）を６４Ｃｕで放射性標識し、放射性ＴＬＣを用いて錯体の形成を調べた。データを図８に示す。６４Ｃｕ−ＰＣ２の形成は、得られたＴＬＣ保持係数（Ｒｆ＝０．９〜１．０）を化学的に同じ非放射性対照化合物のものと比較することにより確認した。ＰＣ２を含まないマーカー中の６４ＣｕのＲｆは元の位置に留まった（Ｒｆ＝０）。
【０３４４】
結論：
結論として、ＰＣ２は、そのままＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：ＰＣ２（７０：１０：２０：０．０１）および乾燥６４ＣｕＣｌ２と混合することにより、６４Ｃｕと容易に錯体を形成する。マーカー配合物中に０．０１％ｗ／ｗのＰＣ２が存在すると、６４Ｃｕの＞９９％がその錯体とともにＴＬＣプレート上の溶媒前線を移動した。
【０３４５】
実施例１２：  ６４Ｃｕ標識マーカーのｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出および導入効率
６４Ｃｕの導入効率および放射性標識ＰＣ２  ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０マーカーからのｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出を調べた。遊離６４Ｃｕ２＋のスカベンジャーとしてのＥＤＴＡおよび放出されたＰＣ２色素のスカベンジャーとしてのリポソームを含有する等張ＴＲＩＳバッファーをｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出媒体として使用した。
【０３４６】
方法：
マーカー調製：  ＰＣ２を含有する放射性標識ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０マーカー（１００μＬ、０．０１％または０．００１％）およびＰＣ２不含の対照マーカー（１００μＬ）を実施例５に記載されるように調製した。
【０３４７】
ステルスリポソームの調製：  ステルスリポソーム（ＨＳＰＬＣ：Ｃｈｏｌ：ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２ｋ  ３：１：１ｗ／ｗ）は、６５℃で音波処理１時間により市販のステルス脂質混合物を等張ＴＲＩＳバッファーで水和させた後、２００ｎｍポリカーボネートフィルターを備えたミニエクストルーダーでサイズ選別を行うことにより調製した。リポソームサイズは１４２．４±１．６ｎｍであり、ＰＤＩは０．１９±０．００６であった。脂質濃度はＩＣＰ−ＭＳを用いて決定し、リポソームは終濃度５ｍＭとなるようにＩＳＯ−イソＴＲＩＳでさらに希釈した。
【０３４８】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出アッセイ：  その後、放射性標識マーカーを２５Ｇ針で、ＴＲＩＳ（１０ｍＭ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．８）緩衝ＥＤＴＡ（１．０ｍＭ）およびステルスリポソーム（５．０ｍＭ脂質）を含有する放出媒体（４．０ｍＬ）の入ったガラスバイアルに注入した。放出バッファーに注入した各マーカーの放射能をドーズキャリブレーター（Ｃｏｍｅｃｅｒ、ＶＤＣ−５０５）にて測定した。アリコート（１５〜１０００μＬ）を時間（１時間、３時間、６時間、１日、２日、４日および６日）の関数として取り出し、等量の放出媒体に置き換えた。６日後、総ての放出媒体を除去し、残ったマーカーを、エタノール（１．０ｍＬ）を用いて溶解させた。得られた溶液（２５０μＬ）のアリコートを定量のために取り出した。次に、総てのサンプルアリコートをＬＳＣカクテル（Ｕｌｔｉｍａゴールド）と混合し、液体シンチレーション（ＨＩＤＥＸ、３００ＳＬ  分光計）により２〜８５０ｋｅＶのエネルギー範囲で分析した。６４Ｃｕに関する検量線（２０〜８００Ｂｑ）を作成したところ、必要とする濃度範囲では直線であった（ｒ２＞０．９９９）。
【０３４９】
導入効率：  導入効率は、サンプル中で可溶化されていた全活性の画分を測定する。導入効率は、個々の配合物に関し、活性濃度の決定により求め、すなわち、１００μＬのサンプルをガラスバイアルに移し、活性をドーズキャリブレーター（Ｃｏｍｅｃｅｒ、ＶＤＣ−５０５）で決定した。
【０３５０】
結果：
マーカーは上手く調製され、放射性標識され、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出および導入効率が決定された。結果を図９に報告する。
【０３５１】
０、０．００１または０．０１％ｗ／ｗのいずれかのＰＣ２を含有するＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ  ７０：１０：２０マーカー配合物を６４Ｃｕで放射性標識したところ、ＰＣ２色素濃度の増大とともに導入効率の増大が見られ、銅がＰＣ２によりキレート化されることが確認される。ＰＣ２が存在しない場合（０％ｗ／ｗ）、６４Ｃｕの６７％がマーカー溶液に可溶化されていたが、このことは酸素豊富なマーカー成分ＳＡＩＢ、ｘＳＡＩＢおよびＥｔＯＨに対する銅の親和性を示す。
【０３５２】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出アッセイにおいてマーカー間で顕著な差異が見られ、ＰＣ２不含のマーカー（キレーター無し）は急速なバーストを示し、数時間内に活性の８０％を放出する。０．００１％または０．０１％ｗ／ｗのＰＣ２を含有するマーカーは、それぞれ２％未満または０．４％未満の限定された放出を示した。後者の結果から、予測されたように、色素／キレーター濃度が高いほどマーカー中でより高い放射性核種の保持をもたらすので、ＰＣ２と銅はキレートを形成することが確認される。
【０３５３】
結論：
結論として、ＰＣ２を含有するマーカーは、導入効率が高く（＞８０％）、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出程度が低い（＜２％）６４Ｃｕにより容易に放射性標識され得る。
【０３５４】
実施例１３：  マーカーＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２：ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５を用いたＮＩＲ誘導手術
配合物ＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２：ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５を、ＮＩＲ画像誘導を用いるラットおよびブタモデルで外科的マーカーとして検討した。
【０３５５】
方法：
マーカー配合物ＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２：ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５  ７０：１０：２０：０．１：０．０１は実施例４に記載されるように調製した。
【０３５６】
ラットモデル：  ウィスター雄ラット（体重４００ｇ）を過量のペントバルビタール（Ｅｕｔｈａｎｉｍａｌ  Ｖｅｔ、４００ｍｇ／ｍｌ、Ｓｃａｎｖｅｔ、ヘルスホルム、デンマーク）の静注により安楽死させ、５０μＬのマーカー配合物を右大腿および一方の精巣の筋肉内に１ｍｌシリンジおよび２３  Ｇ注射針を用いて注射した。マーカーの蛍光を、ＮＩＲカメラ（Ｆｌｕｏｂｅａｍ  ８００、Ｆｌｕｏｐｔｉｃｓ、グルノーブル、フランス）を用いて評価し、外科的に摘出した(surgically exercised)。
【０３５７】
ブタモデル：  ４５ｋｇの標準飼育のブタを過量のペントバルビタール（Ｅｕｔｈａｎｉｍａｌ  Ｖｅｔ、４００ｍｇ／ｍｌ、Ｓｃａｎｖｅｔ、ヘルスホルム、デンマーク）の静注により安楽死させ、胸壁切開により胸腔を開いた。切開創を開き、大きいＷｉｃｋｅｒｓ開創鉤を用いて開放を維持した（図７Ａ）。ＮＩＲカメラ（Ｆｌｕｏｂｅａｍ  ８００、８００ｎｍ  ｃｏｎｆｉｇ、Ｆｌｕｏｐｔｉｃｓ、グルノーブル、フランス）を用い、蛍光放出に関してマーカー性能のイメージングデータを得るために、肺の軸側から３層の深さでマーカーを注入した。
【０３５８】
結果：
ＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２：ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５マーカーは上手く注入され、ラットの大腿および精巣（図６）、ならびにブタの肺組織（図７）でＮＩＲカメラにより識別された。ラットモデルでは、マーカーは手術中（図６Ａ）または組織末梢に組み込まれた場合（図６Ｃ）にＤ＆Ｃｖ２色素により可視化されたが、ＮＩＲカメラを用いて可視化した場合にはより明瞭であった（図６ＢおよびＤ）。ブタモデルにおいて、これらのマーカーは、約１ｃｍまでの組織深度で識別できたが、放出光は最も深い組織ではますます減衰した（図７Ｄ、左のマーカー）。さらに、ＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２：ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５は、末梢／表面に組み込まれたマーカーのブルーＤ＆Ｃｖ２色素によって視覚的に識別することができた（図７Ｃ、右のマーカー）。
【０３５９】
結論：
結論として、組織内のマーカーの局在を可能とするＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５色素は、ＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２配合物のＮＩＲイメージングを可能とする。
【０３６０】
実施例１４：  マウスモデルにおけるマーカーのｉｎ  ｖｉｖｏ  ＰＥＴ／ＮＩＲ／ＣＴイメージング
６４Ｃｕ放射性標識ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：ＰＣ２  ７０：１０：２０：０．０１マーカーを調製し、８個体のマウスの側腹部の皮下に注射した。その後、ＩＶＩＳスキャナー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を用いて動物をＰＥＴ／ＣＴおよび蛍光（ＦＬＩ）により２次元で画像化した。データを図１０で定量測定値として、図１１で記録画像としてコンパイルする。
【０３６１】
方法：
６４Ｃｕ放射性標識ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：ＰＣ２  ７０：１０：２０：０．０１マーカーを実施例１０に記載されるように調製した。注入時に、マーカーは３５ＭＢｑ／ｍｌの活性を有した。
【０３６２】
試験の設定：  経時的な蛍光団のＩＶＩＳイメージングおよび６４ＣｕのＰＥＴイメージングのために、８個体のマウス（ＮＭＲＩ／Ｔａｃｏｎｉｃ）の右側腹部に５０μＬ（１．７５ＭＢｑ）マーカーを皮下注射した。８個体のマウス総てに、注射後１時間、４時間、２４時間および４８時間の時点でＰＥＴ／ＣＴおよびＩＶＩＳスキャンを行い、３個体のマウスに２週間、３週間および４週間後にＩＶＩＳスキャンを行った。ＰＥＴ／ＣＴスキャンの後に５個体のマウスを安楽死させ、その後、臓器を回収し、ガンマカウンター（Ｗｉｚａｒｄ２、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）Ｗｅｌｌカウンターで１２０秒間カウントした。
【０３６３】
ＰＥＴ手順：  セボフルランを用いてマウスを麻酔し、スキャンのために加温ベッドに寝かせ、ＣＴでスキャンし、次いで、ＭｉｃｒｏＰＥＴ  Ｆｏｃｕｓ  １２０（Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ、マルバーン、ＰＡ、ＵＳＡ）にてＰＥＴデータを取得した。ボクセルサイズは０．８６６×０．８６６×０．７９６ｍｍ３であり、中央視野において、分解能は，半値全幅(full width at half-maximum)（ｆｗｈｍ）１．４ｍｍであった。１時間および４時間の時点に関しては５分、２４時間の時点に関しては１０分、さらに、４８時間に関しては２０分の放出時間での６４ＣｕのＰＥＴ−プロトコールでスキャンする。データは、最大事後確率(maximum a posterior)（ＭＡＰ）再構築アルゴリズムで再構築した。活性の解剖学的局在ついては、専用の(dediactes)小動物イメージングシステム（ＮａｎｏＳｃａｎ  ｍｉｃｒｏＳＰＥＣＴ／ＣＴ、Ｍｅｄｉｓｏ、ブダペスト、ハンガリー）を用いてＣＴ画像を取得した。データの再構築の後、ＰＥＴおよびＣＴ画像を、Ｉｎｖｅｏｎソフトウエア（Ｓｉｅｍｅｎｓ）を用いて融合した。放出スキャンをランダムカウントおよびデッドタイムに関して補正した。これらのＰＥＴおよびＣＴ画像を用いてトレーサー取り込みの領域を特定し、各スキャンに個別に適用された関心領域(regions of interest)（ＲＯＩ）を作成した。関心領域はゲルおよび肝臓および腎臓周囲に描かれ、％ＩＤ／ゲルまたは％ＩＤ／ｇのいずれかが計算された。
【０３６４】
ＩＶＩＳ手順：  蛍光イメージングは小動物生物発光および蛍光スキャナー（ＩＶＩＳ、Ｌｕｍｉｎａ  ＸＲ、Ｃａｌｉｐｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＵＳＡ）を用いて行った。イソフルランを用いてマウスを麻酔し、スキャンのために加温プレートに寝かせ、蛍光（ＦＬＩ）をスキャンした。ビニング２、曝露時間最大１２０秒および励起および放出波長Ｅｘ：７４５ｎｍおよびＥｍ：８１０〜８７５ｎｍを用いた。
【０３６５】
ウェルカウント：  最後のＰＥＴスキャン時間（４８時間）の後、５個体のマウスを安楽死させ、生体分布に関するウェルカウントのために臓器を回収した。ウェルカウントプロトコールは各臓器サンプルについて１２０秒のカウントからなり、結果は平均％注入用量／ｇ（％ＩＤ／ｇ）±ＳＥＭとして表した。
【０３６６】
マーカー体積：  マーカー体積は、２５０ＨＵのＣＴコントラストカットオフに基づく自動セグメンテーション手順により得た。
【０３６７】
結果：
全体的に見れば、マーカー中の活性濃度は、最初の４８時間で７．５％の増加が見られ、肝臓蓄積は１％未満であった（図１０Ａ）。ＰＥＴ画像によってまた、活性の主要な部分がマーカー体積中に存在することも確認された（図１１）。マーカー体積は最初の４８時間に１１％減少することが判明し（図１０Ｂ）、これはマーカーからのＥｔＯＨ流出により引き起こされる。この体積減はまた、体積当たりのマーカー活性濃度の増大も説明する。このマーカーではいっそう高い活性濃度が見られたが、ウェルカウントデータ（図１０Ｄ）はさらに、得られたＰＥＴに基づく生体分布とも一致した。
【０３６８】
マーカー中のＰＣ２からのＮＩＲ蛍光強度は、４週間ほぼ一定であることが判明し、２４時間および４８時間の時点では若干増加した（図１０Ｃ）。このことは機器性能またはスキャナー内の動物の位置の変動によって説明でき、ＮＩＲ放出強度における実際の変化とは見なされない。ＦＬＩ画像もまた、４週間、マーカーからの一定のＮＩＲ蛍光強度を示し（図１１）、このことは、時間が経っても光退色はマーカーの性能を変化させないことを示す。
【０３６９】
マーカーのＣＴコントラスト（図１１）は、最初の４８時間、一定であることが判明し、このマーカーは、骨構造と等しいコントラストレベルを有して明らかに可視である。
【０３７０】
結論：
結論として、６４Ｃｕ放射性標識ＳＡＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：ＰＣ２  ７０：１０：２０：０．０１マーカーは、ＰＥＴ／ＣＴおよびＮＩＲにおいて可視であり、総ての画像診断法で、ＰＣ２色素および６４Ｃｕ活性の位置、強度および保持に関して高い安定性を示した。
【０３７１】
実施例１５：  イオノフォアを用いたＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５を含有するＮＩＲマーカーの６４Ｃｕ放射性標識
本実施例では、別の戦略を用いて非キレート蛍光団を組み込んだＮＩＲマーカーを放射性標識することにより現行のプラットフォーム技術の多機能性が示される。この手順では、マーカーＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２：ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５（７０：１０：２０：０．０１：０．０１）を、疎水性のキレーター８−ヒドロキシ−キノリン（８ＨＱ）を使用して６４Ｃｕで放射性標識し、それにより、ＰＥＴ／ＣＴ／ＮＩＲにおいて可視であり、有色であって目に見え、かつ、外科手技において触知可能な固体を形成するマーカーを作出した。
【０３７２】
方法：
マーカー配合物の調製：  ＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２：ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５（７０：１０：２０：０．１：０．０１）マーカー配合物を実施例４に記載されるように調製した。
【０３７３】
６４Ｃｕの調製：  ［６４Ｃｕ］ＣｕＣｌ２は、実施例１０に記載されるように調製した。
【０３７４】
マーカーの放射性標識：  エタノール中８ＨＱの溶液（２００μＬ、５００μＭ）および純粋なエタノール（３００μＬ）を乾燥［６４Ｃｕ］ＣｕＣｌ２（３００ＭＢｑ）と混合し、室温にて４００ｒｐｍで１８時間撹拌した。エタノール溶媒をアルゴン流を用い２０分間５０℃で蒸発させた。次に、１ｍＬのマーカー配合物（ＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２：ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５  ７０：１０：２０：０．１：０．０１）を６４Ｃｕ（８ＨＱ）の乾燥フィルムに加え、その後、この配合物を５０℃、４００ｒｐｍで２時間撹拌した。放射性標識マーカー配合物（６６０μＬ）を新しいガラスバイアルに移し、放射能をドーズキャリブレーター（Ｃｏｍｅｃｅｒ、ＶＤＣ−５０５）により測定した。非放射性ゲル配合物（１．５ｍＬ）を加えてこの配合物を２０ＭＢｑ／ｍＬとなるように希釈した。最終配合物を５０℃にて４００ｒｐｍで２０分間さらに撹拌することによりホモジナイズし、ボルテックスで撹拌した。
【０３７５】
動物モデル：  組成物ＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２：ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５  ７０：１０：２０：０．１：０．０１）を含むマーカーを２０ＭＢｑの６４Ｃｕ（８ＨＱ）／ｍＬで放射性標識した。４個体の雌Ｂａｌｂ／Ｃ  ＣＴ２６マウスの群をセボフルランで麻酔した。マウスの右側腹部を鉗子で留め、皮下注射のための無菌的準備を行い、各マウスに、１ＭＢｑ／マウスの活性用量レベルに相当する５０μＬのゲル配合物（２０ＭＢｑ／ｍＬ）を皮下注射した。
【０３７６】
ＰＥＴデータは、専用の小動物ＰＥＴ／ＣＴスキャナー（Ｉｎｖｅｏｎ、ＭｉｃｒｏＰＥＴ  Ｆｏｃｕｓ  １２０（Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ、マルバーン、３０  ＰＡ、ＵＳＡ）で取得した。ボクセルサイズは０．８６６×０．８６６×０．７９６ｍｍ３であり、中央視野において、分解能は，半値全幅（ｆｗｈｍ）１．４ｍｍであった。ＰＥＴスキャンは、ゲル注入の１０分後に取得し、注入の１時間、１７時間および４２時間後に再び取得した。最大事後確率（ＭＡＰ）再構築アルゴリズムで再構築物した。活性の解剖学的局在ついては、ＭｉｃｒｏＣＡＴ  ＩＩ  ３５システム（Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ、マルバーン、ＰＡ、ＵＳＡ）を用いてＣＴ画像を取得した。データの再構築の後、ＰＥＴおよびＣＴ画像を、Ｉｎｖｅｏｎソフトウエア（Ｓｉｅｍｅｎｓ）を用いて融合した。放出スキャンをランダムカウントおよびデッドタイムに関して補正した。これらのＰＥＴおよびＣＴ画像を用いてトレーサー取り込みの領域を特定し、各スキャンに個別に適用された関心領域（ＲＯＩ）を作成した。関心領域はゲルの周囲ならびに肝臓および腎臓の境界内に描かれ、％ＩＤ／ゲルまたは％ＩＤ／ｇのいずれかが計算された。
【０３７７】
マーカー体積：  マーカー体積は、２５０ＨＵのＣＴコントラストカットオフに基づく自動セグメンテーション手順により得た。
【０３７８】
ＦＬＩ画像：  ２個体のマウスから実施例１４に記載の設定を用いて注入１８時間および４４時間後にＦＬＩ画像を得た。次に、マーカーからの総フラックスを積分し、図１２に示す。
【０３７９】
ＮＩＲカメラ画像：  ＮＩＲカメラ（Ｆｌｕｏｂｅａｍ、８００ｎｍ  ｃｏｎｆｉｇ、Ｆｌｕｏｐｔｉｃｓ）を用いてＮＩＲ画像を取得した。
【０３８０】
結果：
ＰＥＴ／ＣＴ／ＮＩＲデータを収集し、結果を図１２に示す。ＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２：ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５  ７０：１０：２０：０．１：０．０１マーカー配合物は８ＨＱにより錯体形成された６４Ｃｕで上手く放射性標識された。４個体の雌Ｂａｌｂ／Ｃマウスの右側腹部を鉗子で留め、皮下注射のための無菌的準備を行った。マーカーを皮下注射し、ＰＥＴ／ＣＴ画像を時間の関数として記録した。初期スキャン時間（１０分）において、総活性の９０％がゲル中に回収され、これは４２時間後に８１％に徐々に低下した（図１２Ａ）。経時的に、６４Ｃｕの小画分の肝臓および脾臓への蓄積が見られたが、両臓器に見られたのは１．２％ＩＤ／ｇ未満であった。蛍光強度は注射後１８時間および４４時間の時点で一定であることが判明し、体積はこの実験の過程で８％減少した。
【０３８１】
結論：
結論として、８ＨＱは、６４Ｃｕのマーカーへの組み込みのための疎水性イオノフォアとして機能した。４２時間で活性に見られた低下は１０％未満であり、肝臓および脾臓への蓄積は最小であった。
【０３８２】
実施例１６：  イオノフォアを用いたＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５を含有するＮＩＲマーカーの放射性ヨウ素標識
【０３８３】
本実施例では、別の戦略を用いて非キレート蛍光団を組み込んだＮＩＲマーカーを放射性標識することにより現行のプラットフォーム技術の多機能性が示される。この手順では、マーカーＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２：ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５（７０：１０：２０：０．０１：０．０１）を、従前に記載の(Schaarup-Jensen et. al. Injectable iodine-125 labeled tissue marker for radioactive localization of non-palpable breast lesions, Acta Biomaterialia 65 (2018), p. 197-202)ＳＡＩＢ−ＴＭＳ基質を使用して１２５Ｉで放射性標識し、それにより、ＳＰＥＣＴ／ＣＴ／ＮＩＲにおいて可視であり、有色であって目に見え、かつ、外科手技において触知可能な固体を形成するマーカーを作出した。
【０３８４】
方法：
ＴＬＣをヘプタン：ＥｔＯＡｃ（６：４）で実施し、ＫＭｎＯ４染色剤で現像した。ＳＡＩＢ−ＴＭＳはＲｆ＝０．６に、［１２５Ｉ］ＳＡＩＢ−Ｉはやや下方に溶出した。放射性ＴＬＣはＣｙｃｌｏｎｅ  Ｐｌｕｓ  Ｓｔｒａｇｅ  Ｐｈｏｓｐｈｏｒ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で分析した。放射能をＶｅｅｎｓｔｒａ  ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓドーズキャリブレーターＶＤＣ−５０５にて、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒにより示されるＩ−１２５仕様を用いて予め較正された標準化４ｍＬガラスバイアルで測定した。
【０３８５】
放射性ヨウ素化：  Ｔｌ（ＣＦ３ＣＯＯ）３（１０．２ｍｇ）をアセトニトリル（２．３０ｍＬ）とトリフルオロ酢酸（１．５０ｍＬ）の混合物に溶解させた。この溶液（３８０μＬ）のアリコートをＨＰＬＣバイアルに移した。（Ｔｌ（ＣＦ３ＣＯＯ）３：１．１ｍｇ、１．８μｍｏｌ）。次に、このバイアルにアセトニトリル中ＳＡＩＢ−ＴＭＳ（１２０μＬ、１．２μｍｏｌ）を加えた。この溶液を室温で２時間撹拌した。次に、この混合物に１０−５Ｍ  ＮａＯＨ水溶液中［１２５Ｉ］ＮａＩ（３０μＬ、９６．５ＭＢｑ）を加えた。室温で４３分撹拌した後、ＮａＩ水溶液（１８μＬ、３．６μｍｏｌ）を加え、次いで、室温で６０分撹拌した。
【化９】
2021527704.tif 000012
【０３８６】
後処理：  この反応混合物に水（５００μＬ）を加えた。その後、予めエタノール（２×５ｍＬ）および水（３×５ｍＬ）で洗浄したＳＥＰ−ＰＥＡＫ  Ｃ１８  Ｐｌｕｓカートリッジに生成物を捕捉した。反応容器およびカートリッジをＤＴＰＡ水溶液（３×１ｍＬ、５０ｍＭ、ｐＨ７．０）、水（３×１０ｍＬ）および水中２５％（ｖ／ｖ）エタノール（２×２ｍＬ）で洗浄した。次に、この生成物をエタノール（３×１ｍＬ）で溶出した。エタノールの最初の２画分（２×１ｍＬ）は生成物本体を含有していた。これら２つの画分で放射性ＴＬＣにおいて放射性化学純度は、９０．６％（画分１０、５１．６ＭＢｑ）および９２．６％（画分１１、３０．０ＭＢｑ）であると決定された。この生成物をＴＬＣにより分析したところ、放射性標識生成物の同一性が非放射性ＳＡＩＢ−ＩのＲｆとの比較により確認される化学純度であることが判明した。これら２つの画分をプールし、５００μＬのエタノールを追加して容器をすすいだ。放射能収量は８３．４ＭＢｑ（ＲＣＹ：８６％）であると決定された。
【０３８７】
マーカーの配合：  エタノール中の合わせた生成物画分（２．５ｍＬ）から２．２ｍＬ（７３ＭＢｑ）を取り出し、これをガラスバイアルにてアルゴン流下、４０℃で７４分間蒸発乾固させた。この乾燥残渣に１．８ｍＬのＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２：ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５マーカー溶液を加えた後、室温で３０分間、磁気撹拌した。これを最終マーカー配合物とした。
【０３８８】
放射能のｉｎ  ｖｉｔｒｏ保持：  放射性標識を含有するおよそ３×１００μＬのゲル溶液を、ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（３．０ｍＬ）を含有するガラスバイアルに移した。数時点で、２ｍＬの媒体を取り出し、２ｍＬの新鮮媒体に置き換えた。この置き換えの後にバイアルに残った放射能を測定し、表１に示す。最後に示された測定点（Ｘ）において、全媒体を取り出し、新鮮媒体に置き換えた。これを最終の１０日目の測定直後に行った。取り出した媒体アリコート中の放射能も測定し、表３に示す。
【０３８９】
動物モデル：  雌ＮＭＲＩマウスまたは１２週齢雌Ｂａｌｂ／Ｃマウスの右側腹部を鉗子で留め、マーカーの皮下注射のための無菌的準備を行った。マーカーの注射後、ＳＰＥＣＴ／ＣＴスキャンおよび蛍光イメージングを行った。
【０３９０】
ＳＰＥＣＴ／ＣＴスキャン：  １２５Ｉ放射性標識ＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２：ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５マーカー注射マウスのマイクロＳＰＥＣＴ／ＣＴスキャンを、専用小動物ＳＰＥＣＴ／ＣＴスキャナー（ＮａｎｏＳｃａｎ、Ｍｅｄｉｓｏ、ブダペスト、ハンガリー）を用いて行った。ＳＰＥＣＴスキャンは、マーカーを注射した領域の単一の視野（ＦＯＶ）として行った。スキャンはマイクロピンホールコリメーターを用いて行い、総てのスキャンについて９０秒の２０投影を取得した。
【０３９１】
ＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像上で、手動関心体積（ＶＯＩ）を、市販のソフトウエア（Ｖｉｖｏ−ｑｕａｎｔ  ３．５、ｉｎｖｉＣＲＯ  ＬＣＣ．ボストン、ＭＡ、ＵＳＡ）を用いて構築した。複数のスキャン点で減衰補正１２５Ｉ活性を計算して、マーカーにおける１２５Ｉ保持を求めた。
【０３９２】
ＦＬＩ画像：  マーカーの蛍光イメージングは、小動物蛍光および生物発光イメージング（ＦＬＩ）およびＸ線システム（ＩＶＩＳ  Ｌｕｍｉｎａ  ＸＲ、Ｃａｌｉｐｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＵＳＡ）を使用し、実施例１４に記載の設定を用いて実施した。ＦＬＩ／Ｘ線イメージング（ｅｘ／ｅｍ、光、１ｃｍ  ＦＯＶ）は、注射日とマーカーの注射後３週間毎週実施した。対応するラジオグラフおよび光学画像を記録した。画像を、ゲル面積の３倍のＲＯＩを手動構築し、その構築したＲＯＩ内で総フラックス（カウント／秒）を記録することにより放出収量に関して評価した。
【０３９３】
結果：
【表３】
2021527704.tif 000013
【０３９４】
マーカーにおいて放射能の優れた保持が見られ、測定されたゲル中の放射能は測定初日に約９５％に下がり、ゆっくり降下するプラトーに達した。マーカー中の放射能が唯一測定されたインキュベーション１０日後の最終測定点（Ｘ）では、その保持は９５．５±０．５％（ｎ＝３）であった。保持される放射能の最初の低下はバースト放出に帰すことができるが、それは放出された媒体中の放射能により反映されていなかったことから、最初に観察された低下は、エタノールが放出されゲルが定着するにつれてのゲルの変化の幾何学的形状の結果である可能性がある。モニタリングの初日に、取り出された媒体中では０．１７±０．０８％（ｎ＝３）の放出が見られたにすぎず、連続１０日間で合計約１％が放出されるまでにゆっくり着実に増加した。
【０３９５】
結論：
論として、これらのデータは、このＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２：ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５マーカーシステムでは、極めて高い程度のＩ−１２５放射能保持が協調される。
【０３９６】
さらに、ＳＰＥＣＴ／ＣＴおよびＦＬＩ／Ｘｒａｙ画像（図１３）から、１２５Ｉ放射性標識ＬＯＩＢ：ｘＳＡＩＢ：ＥｔＯＨ：Ｄ＆Ｃｖ２：ＳＳＩＢ−Ｃｙ７．５マーカーが３週間の期間、色素および１２５Ｉ活性の局在、強度および保持に関して安定性が高かった。
【図１Ａ】
2021527704.tif 000015
【図１Ｂ】
2021527704.tif 000016
【図１Ｃ】
2021527704.tif 000017
【図１Ｄ】
2021527704.tif 000018
【図１Ｅ】
2021527704.tif 000019
【図１Ｆ】
2021527704.tif 000020
【図２Ａ】
2021527704.tif 000021
【図２Ｂ】
2021527704.tif 000022
【図２Ｃ】
2021527704.tif 000023
【図２Ｄ】
2021527704.tif 000024
【図３】
2021527704.tif 000025
【図４Ａ】
2021527704.tif 000026
【図４Ｂ】
2021527704.tif 000027
【図５Ａ】
2021527704.tif 000028
【図５Ｂ】
2021527704.tif 000029
【図６Ａ】
2021527704.tif 000030
【図６Ｂ】
2021527704.tif 000031
【図６Ｃ】
2021527704.tif 000032
【図６Ｄ】
2021527704.tif 000033
【図７Ａ】
2021527704.tif 000034
【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
2021527704.tif 000036
【図７Ｄ】
2021527704.tif 000037
【図８Ａ】
2021527704.tif 000038
【図８Ｂ】
2021527704.tif 000039
【図９Ａ】
2021527704.tif 000040
【図９Ｂ】
2021527704.tif 000041
【図１０Ａ】
2021527704.tif 000042
【図１０Ｂ】
2021527704.tif 000043
【図１０Ｃ】
2021527704.tif 000044
【図１０Ｄ】
2021527704.tif 000045
【図１１】
2021527704.tif 000046
【図１２Ａ】
2021527704.tif 000047
【図１２Ｂ】
2021527704.tif 000048
【図１２Ｃ】
2021527704.tif 000049
【図１２Ｄ】
2021527704.tif 000050
【図１３】
2021527704.tif 000051
【手続補正書】
【提出日】令和3年3月4日(2021.3.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ．水不溶性炭水化物、
ｂ．蛍光色素、および
ｃ．−２〜２の範囲のｌｏｇＰを有する有機溶媒
を含んでなる、溶液。
【請求項２】
前記蛍光色素が２を上回るｌｏｇＰを有し、それにより、水性条件下で溶液における蛍光色素の保持を可能とする、請求項１に記載の溶液。
【請求項３】
水性条件下で５時間後に１０％未満、例えば５％未満、の蛍光色素が放出される、請求項１または２に記載の溶液。
【請求項４】
前記蛍光色素が近赤外線（ＮＩＲ）造影剤である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項５】
ＮＩＲ造影剤がフタロシアニン、ナフタロシアニン、ポルフィン、アントラコシアニンおよびシアニン色素からなる群から選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項６】
ＮＩＲ造影剤が、ＰＣ１、ＰＣ２および／またはＰＣ３などのフタロシアニンである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項７】
前記蛍光色素が、ＳＡＩＢ、ＳＳＩＢおよびＬＯＩＢからなる群から選択される水不溶性炭水化物にコンジュゲートされている、請求項１〜６のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項８】
前記水不溶性炭水化物が、マルトース、トレハロース、ラクトースおよびスクロースからなる群から選択される二糖類を含んでなり、炭水化物を水不溶性とするように１以上のヒドロキシル基が官能化されている、請求項１に記載の溶液。
【請求項９】
前記水不溶性炭水化物が、Ｃ２−Ｃ７エステルを形成するように官能化された１以上のヒドロキシル基を含んでなる、請求項１〜８のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項１０】
Ｃ２−Ｃ７エステルを形成するように官能化されたヒドロキシル基の数が、ｎ、ｎ−１、ｎ−２、ｎ−３、ｎ−４またはｎ−５であり、ここで、ｎは前記炭水化物のヒドロキシル基の総数である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項１１】
前記Ｃ２−Ｃ７エステルが、炭水化物のヒドロキシル基とＣ２−Ｃ７アルカノイルのカルボニル基の間の結合により形成される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項１２】
前記Ｃ２−Ｃ７アルカノイルがアセチル、プロパノイル、イソブタノイルおよびベンゾイルから選択される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項１３】
前記水不溶性炭水化物が、オクタイソ酪酸マルトース（ＭＯＩＢ）、ジ酢酸ヘキサイソ酪酸スクロース（ＳＡＩＢ）、オクタイソ酪酸スクロース（ＳＯＩＢ）、オクタイソ酪酸ラクトース（ＬＯＩＢ）、およびオクタイソ酪酸トレハロース（ＴＯＩＢ）からなる群から選択される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項１４】
前記有機溶媒が、水性条件下で溶液から拡散して、ゲル、ガラス、半固体、固体、結晶またはその任意の組合せを提供する、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項１５】
粘度が、水性条件下で１０００センチポアズ（ｃＰ）より多く、例えば５０００ｃＰより多く、例えば１００００ｃＰより多く、例えば５００００ｃＰより多く、例えば１０００００ｃＰより多く増す、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項１６】
水性条件下で５時間未満、例えば４時間未満、例えば３時間未満、例えば２時間未満で固化する、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項１７】
前記水性条件がｉｎ  ｖｉｖｏ条件である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項１８】
前記有機溶媒が、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、イソブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、ベンジルアルコール、プロピレンカーボネートおよびジメチルスルホキシドからなる群から選択される、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項１９】
モノグリセリド、ジグリセリドおよび／またはトリグリセリドをさらに含んでなる、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項２０】
前記蛍光色素が放射性核種に配位している、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項２１】
前記放射性核種がＴｃ−９９ｍ、Ｉｎ−１１１、Ｇａ−６７、Ｌｕ−１７７、Ｔｌ−２０１、Ｓｎ−１１７ｍ、Ｃｕ−６４、Ｍｎ−５２、Ｚｒ−８９、Ｃｏ−５５、Ｓｃ−４４、Ｔｉ−４５、Ｓｃ−４３、Ｃｕ−６１、Ａｓ−７２、Ｔｅ−１５２、Ｆ−１８、Ｇａ−６８、Ｃ−１１、Ｎｄ−１４０およびＴｅ−１４９からなる群から選択される、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項２２】
Ｃｕ−６４、ならびにＰＣ１、ＰＣ２、および／またはＰＣ３を含んでなる、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項２３】
さらなる造影剤を含んでなる、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項２４】
前記さらなる造影剤が、Ｘ線剤、ＣＴ剤、ＭＲＩ剤、ＰＥＴ剤およびＳＰＥＣＴ剤からなる群から選択される、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項２５】
前記さらなる造影剤が、式（ＩＩＩ）：
【化１】
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の構造を有する、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項２６】
ｉｎ  ｖｉｖｏ診断ツールとして使用するための、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の溶液。
【請求項２７】
ｉｎ  ｖｉｖｏイメージングの方法に用いるための、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の溶液を含んでなる組成物であって、前記方法が、
ａ．請求項１〜２６のいずれか一項に記載の溶液を、それを必要とする個体に投与すること、
ｂ．蛍光色素の励起、および
ｃ．蛍光色素の検出
を含んでなる、組成物。
【請求項２８】
前記溶液が、注入および／または塗抹により投与される、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
ｉｎ  ｖｉｖｏイメージングのための、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の溶液を含んでなる、組成物。
【請求項３０】
基準マーカーとして用いるための、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の溶液を含んでなる、組成物。
【請求項３１】
手術のガイドのための、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の溶液を含んでなる、組成物。
【国際調査報告】
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