(57)【要約】  本開示は、対象のがんを処置する方法を提供する。本方法は、対象中の肝細胞増殖因子、好中球絶対数、ｃ−Ｍｅｔ＋好中球および好中球リンパ球比（ＮＬＲ）からなる群から選択されるバイオマーカーのベースレベルを測定するステップを含む。本方法はまた、前記バイオマーカーのベースレベルが閾値以上であることを判別するステップ、または免疫チェックポイント調節物質の投与時の前記バイオマーカーの変化が閾値以上であることを判別するステップと、対象にｃ−Ｍｅｔ阻害剤と免疫チェックポイントの調節物質の組み合わせを投与するステップとを含む。【選択図】図１Ｂ
2021515032.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
がんを有する対象を処置する方法であって、
前記対象からのサンプル中の肝細胞増殖因子、好中球絶対数、ｃ−Ｍｅｔ＋好中球および好中球リンパ球比（ＮＬＲ）からなる群から選択されるバイオマーカーのベースレベルを測定することと、
前記バイオマーカーの前記ベースレベルが閾値以上であることを判別することと、
前記対象に好中球調節物質と免疫チェックポイントの調節物質の組み合わせを投与することと
を含む方法。
【請求項２】
前記バイオマーカーはＮＬＲであり、前記閾値は３である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記がんは、肺がん、黒色腫、腎がん、肝がん、骨髄腫、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、膵がん、甲状腺がん、血液がん、白血病および非ホジキンリンパ腫からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記がんは、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、腎細胞がんまたは肝細胞がんである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記好中球調節物質は、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記ｃ−Ｍｅｔ阻害剤は、クリゾチニブ、カボザンチニブ、ＡＰＬ−１０１、ＰＬＢ１００１、ボジチニブ、ＳＵ１１２７４、ＰＨＡ６６５７５２、Ｋ２５２ａ、ＰＦ−２３４１０６６、ＡＭ７、ＪＮＪ−３８８７７６０５、ＰＦ−０４２１７９０３、ＭＫ２４６１、ＧＳＫ１３６３０８９（ＸＬ８８０、ホレチニブ）、ＡＭＧ４５８、チバンチニブ（ＡＲＱ１９７）、ＩＮＣＢ２８０６０（ＩＮＣ２８０、カプマチニブ）、Ｅ７０５０、ＢＭＳ−７７７６０７、サボリチニブ（ボリチニブ）、ＨＱＰ−８３６１、メレスチニブ、ＡＲＧＸ−１１１、オナルツズマブ、リロツムマブ、エミベツズマブ、およびＸＬ１８４からなる群から選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ｃ−Ｍｅｔ阻害剤は、抗ｃ−Ｍｅｔ抗体である、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記免疫チェックポイントは、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−１、ＣＴＬＡ−４、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ６、２８４、ＩＣＯＳ、ＨＶＥＭ、ＣＤ１６０、ｇｐ４９Ｂ、ＰＩＲ−Ｂ、ＫＩＲファミリーレセプター、ＴＩＭ−１、ＴＩＭ−４、ＢＴＬＡ、ＳＩＲＰアルファ（ＣＤ４７）、ＣＤ４８、２８４（ＣＤ２４４）、Ｂ７．１、Ｂ７．２、ＩＬＴ−２、ＩＬＴ−４、ＴＩＧＩＴおよびＡ２ａＲからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記免疫チェックポイントの前記調節物質は、抗体または化合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記免疫チェックポイントの前記調節物質は、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗ＰＤ−１抗体は、ＡＰＬ−５０１、ＧＢ２２６、またはゲノリムズマブである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＡＰＬ−５０２またはＴＱＢ２４５０である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
がんを有する対象を処置する方法であって、
前記対象中の肝細胞増殖因子、好中球絶対数、ｃ−Ｍｅｔ＋好中球およびＮＬＲからなる群から選択されるバイオマーカーの第１のレベルを測定することと、
前記対象に免疫チェックポイントの調節物質をある期間投与することと、
前記対象中の前記バイオマーカーの第２のレベルを測定することと、
前記バイオマーカーの前記第２のレベルとバイオマーカーの前記第１のレベルの差が臨界値以上であることを判別することと、
前記対象に好中球調節物質と免疫チェックポイントの前記調節物質の組み合わせを投与することと
を含む方法。
【請求項１４】
前記バイオマーカーはＮＬＲであり、前記臨界値は２である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記バイオマーカーの前記第１のレベルは、閾値未満である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記バイオマーカーはＮＬＲであり、前記閾値は３である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記がんは、肺がん、黒色腫、腎がん、肝がん、骨髄腫、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、膵がん、甲状腺がん、血液がん、白血病および非ホジキンリンパ腫からなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
前記がんは、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）または肝細胞がんである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】
前記好中球調節物質は、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤である、請求項１３に記載の方法。
【請求項２０】
前記ｃ−Ｍｅｔ阻害剤は、クリゾチニブ、カボザンチニブ、ＳＵ１１２７４、ＰＨＡ６６５７５２、Ｋ２５２ａ、ＰＦ−２３４１０６６、ＡＭ７、ＪＮＪ−３８８７７６０５、ＰＦ−０４２１７９０３、ＭＫ２４６１、ＧＳＫ１３６３０８９（ＸＬ８８０、ホレチニブ）、ＡＭＧ４５８、チバンチニブ（ＡＲＱ１９７）、ＩＮＣＢ２８０６０（ＩＮＣ２８０、カプマチニブ）、Ｅ７０５０、ＢＭＳ−７７７６０７、サボリチニブ（ボリチニブ）、ＨＱＰ−８３６１、メレスチニブ、ＡＲＧＸ−１１１、オナルツズマブ、リロツムマブ、エミベツズマブ、およびＸＬ１８４からなる群から選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記ｃ−Ｍｅｔ阻害剤は、抗ｃ−Ｍｅｔ抗体である、請求項１３に記載の方法。
【請求項２２】
前記免疫チェックポイントは、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−１、ＣＴＬＡ−４、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ６、２８４、ＩＣＯＳ、ＨＶＥＭ、ＣＤ１６０、ｇｐ４９Ｂ、ＰＩＲ−Ｂ、ＫＩＲファミリーレセプター、ＴＩＭ−１、ＴＩＭ−４、ＢＴＬＡ、ＳＩＲＰアルファ（ＣＤ４７）、ＣＤ４８、２８４（ＣＤ２４４）、Ｂ７．１、Ｂ７．２、ＩＬＴ−２、ＩＬＴ−４、ＴＩＧＩＴおよびＡ２ａＲからなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項２３】
前記免疫チェックポイントの前記調節物質は、抗体または化合物である、請求項１３に記載の方法。
【請求項２４】
前記免疫チェックポイントの前記調節物質は、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項１３に記載の方法。
【請求項２５】
前記抗ＰＤ−１抗体は、ＡＰＬ−５０１、ＧＢ２２６、またはゲノリムズマブである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＡＰＬ−５０２またはＴＱＢ２４５０である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
がんを有する対象を処置する方法であって、前記方法は、
（Ａ）前記対象に以下の式の化合物を含むｃ−Ｍｅｔ阻害剤を投与することと、
【化１】
2021515032.tif 000014
［式中
Ｒ１およびＲ２は、独立して水素またはハロゲンであり、
ＸおよびＸ１は、独立して水素またはハロゲンであり、
ＡおよびＧは、独立してＣＨもしくはＮであるか、またはＣＨ＝Ｇは、硫黄原子で置き換えられ、
Ｅは、Ｎであり、
Ｊは、ＣＨ、ＳまたはＮＨであり、
Ｍは、ＮまたはＣであり、
Ａｒは、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシル、ハロＣ１〜６アルキル、ハロＣ１〜６アルコキシ、Ｃ３〜７シクロアルキル、ハロゲン、シアノ、アミノ、−ＣＯＮＲ４Ｒ５、−ＮＨＣＯＲ６、−ＳＯ２ＮＲ７Ｒ８、Ｃ１〜６アルコキシル−、Ｃ１〜６アルキル−、アミノ−Ｃ１〜６アルキル−、ヘテロシクリルおよびヘテロシクリル−Ｃ１〜６アルキル−から独立して選択される１〜３個の置換基で任意に置換されるアリールもしくはヘテロアリールであるか、または２つの連結した置換基は、それらが結合している原子と一緒になって、前記アリールまたはヘテロアリールと縮合した４〜６員環ラクタムを形成しており、
Ｒ３は、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、ハロＣ１〜６アルキル、ハロゲン、アミノ、または−ＣＯＮＨ−Ｃ１〜６アルキル−ヘテロシクリルであり、
Ｒ４およびＲ５は、独立して水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜７シクロアルキル、ヘテロシクリル−Ｃ１〜６アルキルであるか、またはＲ４およびＲ５は、それらが結合しているＮと一緒になってヘテロシクリルを形成しており、
Ｒ６は、Ｃ１〜６アルキルまたはＣ３〜７シクロアルキルであり、
Ｒ７およびＲ８は、独立して水素またはＣ１〜６アルキルである。］
（Ｂ）前記対象に
ＷＯ２０１６／０１４６８８に開示されているものからなる群から選択される抗ＰＤ−１抗体
または
ＷＯ２０１６／０２２６３０に開示されているものからなる群から選択される抗ＰＤ−Ｌ１抗体
を投与することと
を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年２月１７日に出願された米国仮特許出願第６２／６３１，７７１号および２０１８年１１月８日に出願された同第６２／７５７，７２９号に対する優先権を主張し、その開示を参照によって本明細書に組み込むものとする。
【０００２】
発明の分野
本発明は、概してがん処置に関する。特に、本発明は、好中球調節物質と免疫チェックポイントの調節物質の組み合わせを使用した、がんを処置するための方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
背景
患者自身の免疫系を腫瘍と戦うよう調節するがん免疫療法は、がん細胞が、例えば、がん関連遺伝学的変更によって発現される腫瘍抗原に対する免疫寛容を促進することによって免疫監視を避けるよう進化するメカニズムの重大さを強調する。ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１またはＣＴＬＡ４に対するモノクローナル抗体によって代表されるいくつかの免疫チェックポイント阻害剤は、ますます幅広い多様ながんタイプの一部の患者に対して、際だった長続きする応答をもたらした。しかしながら、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害などの単剤としての現行の免疫療法は、がん患者において限られた応答しか示さない（例えば、Ｐａｄｍａｎｅｅ  Ｓｈａｒｍａ  ａｎｄ  Ｊａｍｅｓ  Ｐ．  Ａｌｌｉｓｏｎ，  “Ｉｍｍｕｎｅ  Ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：  Ｔｏｗａｒｄ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｗｉｔｈ  Ｃｕｒａｔｉｖｅ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ”  Ｃｅｌｌ（２０１５）  １６１：  ２０５−２１４を参照）。
【０００４】
がん免疫療法の適用を広げるために、免疫チェックポイント経路の活性を調節する併用療法が探索されている。例えば、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤とＰＤ−１の抗体の組み合わせが試験されている（例えば、ＷＯ２０１７／１０６８１０；Ｇｌｏｄｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２０１７）  ４７：７８９−８０２を参照）。しかしながら、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤と抗ＰＤ−１抗体の組み合わせ処置に対する応答性は状況依存的である（Ｇｌｏｄｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２０１７）  ４７：７８９−８０２）。したがって、がんを処置するために併用免疫療法の応答性を高める新しい方法を開発することが引き続き必要とされている。
【発明の概要】
【０００５】
一態様において、本開示は、がんを有する対象を処置する方法を提供する。一実施形態において、本方法は、対象からのサンプル中の肝細胞増殖因子、好中球絶対数、ｃ−Ｍｅｔ＋好中球および好中球リンパ球比（ＮＬＲ）からなる群から選択されるバイオマーカーのベースレベルを測定することと、前記バイオマーカーのベースレベルが閾値以上であることを判別することと、対象に治療有効量の好中球調節物質と免疫チェックポイントの調節物質の組み合わせを投与することとを含む。
【０００６】
別の実施形態において、本方法は、対象中の肝細胞増殖因子、好中球絶対数、ｃ−Ｍｅｔ＋好中球およびＮＬＲからなる群から選択されるバイオマーカーの第１のレベルを測定することと、対象に免疫チェックポイントの調節物質をある期間投与することと、対象中のバイオマーカーの第２のレベルを測定することと、バイオマーカーの第２のレベルとバイオマーカーの第１のレベルの差が臨界値以上であることを判別することと、対象に治療有効量の好中球調節物質と免疫チェックポイントの調節物質の組み合わせを投与することとを含む。
【０００７】
さらに別の実施形態において、本開示の方法は、対象に治療有効量のｃ−Ｍｅｔ阻害剤と抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体の組み合わせを投与する。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１Ａ】図１Ａ〜１Ｃは、ＭＣ−３８同系結腸がんモデルにおけるｃ−Ｍｅｔ阻害剤と抗ＰＤ−１抗体の組み合わせの相乗効果を示す。図１Ａは、実験のデザインを示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤（ＡＰＬ−１０１）と抗ＰＤ−１抗体の組み合わせが腫瘍増殖を相乗的に抑制したことを示す。
【図１Ｃ】図１Ｃは、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤および抗ＰＤ−１抗体の、単独または組み合わせでの処置が、処置されるマウスの体重に影響を及ぼさなかったことを示す。
【図２Ａ】図２Ａ〜２Ｃは、Ｈ−２２同系肝細胞がんモデルにおけるｃ−Ｍｅｔ阻害剤と抗ＰＤ−１抗体の組み合わせの相乗効果を示す。図２Ａは、実験のデザインを示す。
【図２Ｂ】図２Ｂは、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤（ＡＰＬ−１０１）と抗ＰＤ−１抗体の組み合わせが腫瘍増殖を相乗的に抑制したことを示す。
【図２Ｃ】図２Ｃは、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤および抗ＰＤ−１抗体の、単独または組み合わせでの処置が、処置されるマウスの体重に影響を及ぼさなかったことを示す。
【図３Ａ】図３Ａ〜３Ｃは、ＲＥＮＣＡ同系腎細胞がんモデルにおけるｃ−Ｍｅｔ阻害剤と抗ＰＤ−１抗体の組み合わせの相乗効果を示す。図３Ａは、実験のデザインを示す。
【図３Ｂ】図３Ｂは、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤（ＡＰＬ−１０１）と抗ＰＤ−１抗体の組み合わせが腫瘍増殖を相乗的に抑制したことを示す。
【図３Ｃ】図３Ｃは、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤および抗ＰＤ−１抗体の、単独または組み合わせでの処置が、処置されるマウスの体重に影響を及ぼさなかったことを示す。
【図４Ａ】図４Ａ〜４Ｃは、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤と抗ＰＤ−１抗体の組み合わせが腫瘍微小環境の好中球パーセンテージを低下させたことを示す。図４Ａは、抗ＰＤ−１抗体の処置がＩＨＣ分析においてｃ−Ｍｅｔ陽性好中球を増加させたことを示す。
【図４Ｂ】図４Ｂは、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤と抗ＰＤ−１抗体の組み合わせが腫瘍微小環境の好中球パーセンテージを低下させたことを示す。
【図４Ｃ】図４Ｃは、抗ＰＤ−１抗体の処置が、末梢循環のｃ−Ｍｅｔ陽性好中球を増加させ、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤と抗ＰＤ−１抗体の組み合わせが、末梢循環の好中球パーセンテージを低下させたことを示す。
【図５】抗ＰＤ１とｃ−Ｍｅｔ阻害剤の併用免疫療法の第１相試験の概略図である。
【図６】抗ＰＤ１とｃ−Ｍｅｔ阻害剤の併用免疫療法の第２相試験の概略図である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
発明の詳細な説明
本開示をさらに詳細に記載する前に、本開示は記載されている特定の実施形態に限定されないため、当然、変化する場合もあることが理解されるべきである。本開示の範囲は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、本明細書中で使用される術語は、特定の実施形態を記載するために過ぎず、限定することを意図しないことも理解されるべきである。
【００１０】
別に定義されない限り、本明細書において使用されるすべての技術および科学用語は、本開示が属する分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載されているものと類似または同等の任意の方法および材料も本開示の実施または試験に使用できるが、ここでは、好ましい方法および材料が記載されている。
【００１１】
本明細書において引用されるすべての刊行物および特許は、個々の刊行物または特許それぞれが具体的に個別に参照により組み込まれることが示されたかのように参照によって本明細書に組み込まれ、刊行物が関連して引用される方法および／または材料を開示し、記載するために参照によって本明細書に組み込むものとする。いかなる刊行物の引用も出願日に先立つその開示のためであり、本開示が先の開示が理由でそのような刊行物に先行する資格が与えられないことを認めるものと解釈されるべきではない。さらに、示される刊行物の日付は、実際の公開日とは異なる場合もあり、個別に確認する必要がある場合もある。
【００１２】
本開示を読めば当業者には明白なとおり、本明細書に記載され、示されている個々の実施形態のそれぞれは、個別の構成要素および特徴を有し、それらは、本開示の範囲または趣旨から逸脱することなく、容易に任意の他のいくつかの実施形態の特徴から分離されてもよく、またはそれらと組み合わされてもよい。記載されたいずれの方法も、記載された事象の順序または論理的に可能な任意の他の順序で行うこともできる。
【００１３】
定義
以下の定義は、読み手を助けるために提供される。別に定義されない限り、本明細書中で使用されるすべての専門用語、表記、およびその他の科学または医学用語または術語は、化学および医学分野の当業者によって一般に理解される意味を有することが意図される。ある場合には、一般的に理解される意味を有する用語が、明確にするため、および／またはすぐに参照できるよう本明細書において定義されるが、本明細書にそのような定義を含めることは、必ずしも当該技術分野において一般に理解されるとおりの用語の定義と比較して実質的な差を表すものと解釈されるべきではない。
【００１４】
本明細書中で使用される場合、単数形「１つの、ある（ａ、ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、文脈が明らかに別のことを規定していない限り、複数の言及も含む。
【００１５】
本明細書中で使用される場合、「投与すること」という用語は、医薬品または組成物を対象に与えることを意味し、以下に限定されるものではないが、医療従事者および自己投与による投与を含む。
【００１６】
本明細書中で使用される場合、「抗体」は、天然に存在する免疫グロブリンならびに、例えば、単鎖抗体、キメラ抗体（例えば、ヒト化マウス抗体）、および異種結合抗体（例えば、二重特異性抗体）を含む、天然に生じない免疫グロブリンを包含する。抗体のフラグメントとしては、抗原と結合するものが挙げられる（例えば、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、Ｆｖ、およびｒＩｇＧ）。例えば、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃａｔａｌｏｇ  ａｎｄ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，  １９９４−１９９５（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，  Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，  Ｉｌｌ．）；Ｋｕｂｙ，  Ｊ．，  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  ３ｒｄ  Ｅｄ．，  Ｗ．Ｈ．  Ｆｒｅｅｍａｎ  ＆  Ｃｏ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９８）も参照のこと。抗体という用語は、二価または二重特異性分子、ダイアボディ、トリアボディ、およびテトラボディも含む。「抗体」という用語は、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の両方をさらに含む。
【００１７】
本明細書中で使用される場合、「血管新生阻害薬」は、新しい血管の成長を低減または阻害する物質、例えば、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）の阻害剤および内皮細胞遊走の阻害剤を意味する。血管新生阻害薬としては、以下に限定されないが、２−メトキシエストラジオール、アンジオスタチン、ベバシズマブ、軟骨由来血管形成抑制因子、エンドスタチン、ＩＦＮ−α、ＩＬ−１２、イトラコナゾール、リノミド、血小板因子−４、プロラクチン、ＳＵ５４１６、スラミン、タスキニモド、テコガラン、テトラチオモリブダート、サリドマイド、トロンボスポンジン、トロンボスポンジン、ＴＮＰ−４７０、ｚｉｖ−アフリベルセプト、薬学的に許容されるその塩、プロドラッグ、およびそれらの組み合わせが挙げられる。
【００１８】
本明細書中で使用される場合、「がん」という用語は、異常な細胞増殖を伴うあらゆる疾患を指し、体内のあらゆる組織、臓器または細胞を冒す疾患のあらゆるステージおよびあらゆる形態を含む。この用語は、悪性、良性、軟組織、または固形と特徴づけられるかにかかわらず、すべての既知のがんおよび新生物状態、ならびに転移前および転移後がんを含む、すべてのステージおよびグレードのがんを含む。一般に、がんは、がんが位置するまたは発生した組織または臓器、ならびにがん組織および細胞の形態に従って分類することができる。本明細書中で使用される場合、がんタイプとしては、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病、副腎皮質がん、肛門がん、星細胞腫、小児小脳または大脳、基底細胞がん、胆管がん、膀胱がん、骨腫瘍、脳がん、乳がん、バーキットリンパ腫、小脳星細胞腫、大脳星細胞腫／悪性グリオーマ、子宮頸がん、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、結腸がん、肺気腫、子宮内膜がん、上衣腫、食道がん、ユーイングファミリー腫瘍、ユーイング肉腫、胃の（胃）がん、グリオーマ、頭頸部がん、心臓がん、ホジキンリンパ腫、膵島細胞がん（膵内分泌部）、カポジ肉腫、腎がん（腎細胞がん）、喉頭がん、白血病、肝がん、肺がん、髄芽腫、黒色腫、神経芽腫、非ホジキンリンパ腫、卵巣がん、膵がん、咽頭がん、前立腺がん、直腸がん、腎細胞がん（腎がん）、網膜芽細胞腫、皮膚がん、胃がん、テント上未分化神経外胚葉性腫瘍、精巣がん、咽頭がん、甲状腺がん、腟がん、視経路および視床下部神経膠腫が挙げられる。
【００１９】
本発明による細胞傷害性薬剤としては、ＤＮＡ損傷剤、代謝拮抗剤、微小管阻害剤、抗生剤などが挙げられる。ＤＮＡ損傷剤としては、アルキル化剤、プラチナ系薬剤、インターカレート剤、およびＤＮＡ複製の阻害剤が挙げられる。ＤＮＡアルキル化剤の非限定例としては、シクロホスファミド、メクロレタミン、ウラムスチン、メルファラン、クロラムブシル、イホスファミド、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾトシン、ブスルファン、テモゾロミド、薬学的に許容されるその塩、プロドラッグ、およびそれらの組み合わせが挙げられる。プラチナ系薬剤の非限定例としては、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、サトラプラチン、トリプラチンテトラニトラート、薬学的に許容されるその塩、プロドラッグ、およびそれらの組み合わせが挙げられる。インターカレート剤の非限定例としては、ドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、ミトキサントロン、薬学的に許容されるその塩、プロドラッグ、およびそれらの組み合わせが挙げられる。ＤＮＡ複製の阻害剤の非限定例としては、イリノテカン、トポテカン、アムサクリン、エトポシド、エトポシドホスフェート、テニポシド、薬学的に許容されるその塩、プロドラッグ、およびそれらの組み合わせが挙げられる。代謝拮抗剤としては、葉酸拮抗薬、例えば、メトトレキサートおよびペメトレキセド〔premetrexed〕、プリン拮抗薬、例えば、６−メルカプトプリン、ダカルバジン、およびフルダラビン、ならびにピリミジン拮抗薬、例えば、５−フルオロウラシル、アラビノシルシトシン、カペシタビン、ゲムシタビン、デシタビン、薬学的に許容されるその塩、プロドラッグ、ならびにそれらの組み合わせが挙げられる。微小管阻害剤としては、以下に限定されないが、ビンカアルカロイド、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、およびイクサベピロン（Ｉｘｅｍｐｒａ（登録商標））が挙げられる。抗生剤としては、以下に限定されないが、アクチノマイシン、アントラサイクリン、バルルビシン、エピルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン、マイトマイシン、薬学的に許容されるその塩、プロドラッグ、およびそれらの組み合わせが挙げられる。
【００２０】
本明細書中で使用される場合、「有効量」または「治療有効量」という用語は、任意の障害もしくは疾患の症状および／または基となる原因を予防する、処置する、低減する、および／または回復させるのに十分な薬剤の量、あるいは細胞に所望の効果をもたらすのに十分な薬剤の量を意味する。一実施形態において、「治療有効量」は、疾患の症状を低減または除去するのに十分な量である。別の実施形態において、治療有効量は、疾患自体を克服するのに十分な量である。
【００２１】
本発明において、「免疫調節物質」という用語は、抗体を産生する、またはその産生を惹起した抗原を認識し、それと反応する細胞を感作するための、免疫系の能力を増大または低下させることによって、免疫応答を変える物質を意味する。免疫調節物質は、組み換え、合成、または天然の調製物であってもよく、サイトカイン、副腎皮質ステロイド薬、細胞傷害性薬剤、チモシン、および免疫グロブリンが挙げられる。一部の免疫調節物質は、もともと体内に存在し、それらの一部は薬理作用のある調製物に利用可能である。特定の実施形態において、免疫調節物質は、免疫チェックポイントの調節物質である。免疫調節物質の例としては、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、インターフェロン、イミキモドおよび細菌の細胞膜部分、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ２６、ＣＸＣＬ７、ならびに合成シトシンリン酸・グアノシン（ＣｐＧ）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００２２】
「薬学的に許容される」という語句は、適切な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激症状、アレルギー反応、またはその他の問題もしくは合併症なく、妥当なベネフィット／リスク比に対応する、ヒトおよび動物の組織と接触する使用に適した化合物、材料、組成物、および／または剤形を指す。
【００２３】
「薬学的に許容される担体」という語句は、本明細書中で使用される場合、対象化合物を１つの臓器、または体の部分から別の臓器、または体の部分に運搬または輸送することに関与する、液体もしくは固体の増量剤、希釈剤、賦形剤、または溶媒カプセル化材料などの薬学的に許容される材料、組成物またはビヒクルを意味する。各担体は、製剤の他の成分と適合し、患者に有害でないという意味で「許容される」ものでなければならない。薬学的に許容される担体としての機能を果たすことができる材料のいくつかの例としては、糖、例えば、ラクトース、グルコースおよびスクロース；デンプン、例えば、トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプン；セルロース、およびその誘導体、例えば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、エチルセルロースおよびセルロースアセタート；粉末トラガント；麦芽；ゼラチン；タルク；賦形剤、例えば、カカオバターおよび座剤ワックス；油、例えば、ピーナッツ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油および大豆油；グリコール、例えば、プロピレングリコール；ポリオール、例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコール；エステル、例えば、オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル；寒天；緩衝剤、例えば、水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム；アルギン酸；パイロジェンフリー水；生理食塩水；リンゲル液；エチルアルコール；ｐＨ緩衝液；ポリエステル、ポリカーボネートおよび／またはポリ酸無水物；ならびに医薬製剤に利用されるその他の無毒の適合した物質が挙げられる。
【００２４】
「薬学的に許容される塩」は、化合物の比較的無毒の無機および有機酸付加塩を指す。
【００２５】
本明細書中で使用される場合、「光活性治療剤」という用語は、光への曝露時に活性になる化合物および組成物を意味する。光活性治療剤の特定の例は、例えば、米国特許出願公開第２０１１／０１５２２３号に開示されている。
【００２６】
本明細書中で使用される場合、「放射線増感剤」という用語は、腫瘍細胞を放射線療法に対してより高感度にする化合物を意味する。放射線増感剤の例としては、ミソニダゾール、メトロニダゾール、チラパザミン、およびトランスクロセチン酸ナトリウムが挙げられる。
【００２７】
「応答性の」、「臨床応答」、「肯定的な臨床応答」などの用語は、がん療法に対する患者の応答と関連して使用される場合、同義に使用され、好ましくない応答、すなわち有害事象と対照的に、処置に対する好ましい患者の応答を指す。患者における有益な応答は、検出可能な腫瘍の喪失（完全奏効、ＣＲ）、腫瘍サイズおよび／または癌細胞数の減少（部分奏効、ＰＲ）、腫瘍増殖停止（安定した疾患、ＳＤ）、結果として腫瘍の退縮または排除が生じる場合もある抗腫瘍免疫応答の増大；腫瘍と関連する１つ以上の症状のある程度の緩和；処置後の生存期間の延長；および／または処置後の所与の時点における死亡率の低下を含む、多くの臨床パラメーターに換算して表すことができる。腫瘍サイズおよび／または癌細胞数および／または腫瘍転移の継続する増加は、処置に対する有益な応答がないことを示す。集団における薬物の臨床的有益性、すなわち、その効力は、１つ以上のエンドポイントに基づいて評価することができる。例えば、全奏効率（ＯＲＲ）の分析は、薬物による処置後にＣＲまたはＰＲを経験した患者をレスポンダーと分類する。病勢コントロール（ＤＣ）の分析は、薬物による処置後にＣＲ、ＰＲまたはＳＤを経験した患者をレスポンダーと分類する。肯定的な臨床応答は、（１）減速および完全な増殖停止を含む、腫瘍増殖のある程度の抑制；（２）腫瘍細胞の数の減少；（３）腫瘍サイズの縮小；（４）隣接する末梢器官および／または組織への腫瘍細胞浸潤の抑制（すなわち、低減、減速もしくは完全な停止）；（５）転移の抑制；（６）結果として腫瘍の退縮または排除が生じる場合もある抗腫瘍免疫応答の増大；（７）腫瘍と関連する１つ以上の症状のある程度の緩和；（８）処置後の生存期間の延長；および／または（９）処置後の所与の時点における死亡率の低下を含むが、それらに限定されない患者に対する利益を示す任意のエンドポイントを使用して評価することができる。肯定的な臨床応答はまた、臨床転帰のさまざまな尺度に換算して表されてもよい。肯定的な臨床転帰はまた、同等の臨床診断を有する患者の集団の転帰と比較した個体の転帰と関連して考えることもでき、無再発期間（ＲＦＩ）の延長、集団における全生存期間（ＯＳ）と比較した場合の生存時間の延長、無病生存時間（ＤＦＳ）の延長、無遠隔再発期間（ＤＲＦＩ）の延長などのさまざまなエンドポイントを使用して評価することができる。追加のエンドポイントとしては、無イベント（ＡＥ）生存の可能性、無転移性再燃（ＭＲ）生存の可能性（ＭＲＦＳ）、無病生存の可能性（ＤＦＳ）、無再燃生存の可能性（ＲＦＳ）、一次増悪の可能性（ＦＰ）、および無遠隔転移生存の可能性（ＤＭＦＳ）が挙げられる。肯定的な臨床応答の可能性の増加は、がん再発または再燃の可能性の低下に対応する。
【００２８】
本明細書中で使用される場合、「対象」という用語は、ヒトまたは任意の非ヒト動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマもしくは霊長類）を指す。ヒトは、出生前および後の状態を含む。多くの実施形態において、対象は、ヒトである。対象は、患者である場合もあり、患者とは、疾患の診断または処置のために医療提供者の診療を受けにきているヒトを指す。「対象」という用語は、本明細書中では「個体」または「患者」と同義に使用される。対象は、疾患または障害に苦しんでいる可能性があるか、またはそれに罹患しやすいが、疾患または障害の症状を示す場合も、または示さない場合もある。
【００２９】
本明細書中で使用される場合、「相乗的な」は、相加的なよりも大きいことを意味する。相乗効果は、当該技術分野において知られているさまざまなアッセイによって測定することができる。
【００３０】
本明細書中で使用される場合、「毒素」という用語は、植物または動物由来の抗原性毒または毒液を意味する。例は、ジフテリア毒素またはその一部である。
【００３１】
「処置」、「処置する」または「処置すること」という用語は、がん（例えば、乳がん、肺がん、卵巣がんなど）の影響またはがんの症状を低減する方法を指す。したがって、本開示の方法において、処置は、がんの重症度またはがんの症状の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％の低減を指す場合がある。例えば、疾患を処置する方法は、対照と比較した場合に対象の疾患の１つ以上の症状の１０％の低減がある場合に、処置であると考えられる。したがって、低減は、本来のまたは対照レベルと比較した場合に１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％または１０から１００％の間の任意のパーセントの低減であってもよい。処置が必ずしも疾患、状態、または疾患もしくは状態の症状の回復または完全な消失を指すわけではないと理解されよう。
【００３２】
好中球関連バイオマーカー
本開示は、一態様において、併用免疫療法の応答性を予測することができる好中球関連バイオマーカーに基づく、併用免疫療法を用いたがん患者を処置する方法を提供する。一実施形態において、本方法は、対象からのサンプル中の好中球関連バイオマーカーのベースレベルを測定することと、前記バイオマーカーのベースレベルが閾値以上であることを判別することと、対象に併用免疫療法を施すこととを含む。
【００３３】
中性好性白血球または多形核骨髄由来抑制細胞（ＰＭＮ−ＭＤＳＣ）としても知られている好中球は、通常血流中に見られる食細胞のタイプである。大半の哺乳動物において、好中球は、最も豊富なタイプの顆粒球および最も豊富なタイプの白血球である。好中球は、自然免疫系の根幹をなし、さまざまな状況においてさまざまな機能を果たす。特に細菌感染および一部のがんの結果としての急性炎症の過程において、好中球は、炎症の部位に遊走する炎症細胞の最初の応答細胞の１つである。
【００３４】
好中球の数を検出および測定する方法は、当該技術分野において知られている。例えば、ヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色は、好塩基性および好酸球性白血球細胞から好中球を区別するために長く使用されてきた。好中球はまた、特定のマーカー、例えば、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１３、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ３３およびＣＤ６８の発現によって特定することもできる。
【００３５】
骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）は、免疫系を抑制する未熟な骨髄細胞の不均質な群である。集合的に、ＭＤＳＣ集団は、単球様ＭＤＳＣおよび多形核ＭＤＳＣ（ＰＭＮ−ＭＤＳＣまたは好中球）から構成される。ＭＤＳＣの数は、腫瘍が存在する場合に増加する。ＰＭＮ−ＭＤＳＣは、がんにおけるＭＤＳＣの大半に相当し、がんを免疫系から保護することが示されてきた。
【００３６】
本明細書中で使用される場合、「好中球関連バイオマーカー」という用語は、対象の任意のサンプルまたは組織中の好中球の存在、存在量または活性化を示すバイオマーカーを指す。特定の実施形態において、好中球関連バイオマーカーは、肝細胞増殖因子、好中球絶対数、ｃ−Ｍｅｔ＋好中球および好中球リンパ球比（ＮＬＲ）からなる群から選択される。
【００３７】
特定の実施形態において、好中球関連バイオマーカーは、ＮＬＲであり、閾値は、約３、３．５、４、４．５または５である。
【００３８】
別の実施形態において、本方法は、対象におけるバイオマーカーの第１のレベルを測定することと、対象に免疫療法をある期間施すことと、対象中のバイオマーカーの第２のレベルを測定することと、バイオマーカーの第２のレベルとバイオマーカーの第１のレベルの差が臨界値以上であることを判別することと、対象に併用免疫療法を施すこととを含む。
【００３９】
特定の実施形態において、好中球関連バイオマーカーは、ＮＬＲであり、臨界値は、約２、２．５、３、３．５または４である。
【００４０】
特定の実施形態において、処置される対象は、哺乳動物である。特定の実施形態において、哺乳動物は、ヒト、霊長類、家畜および飼育動物からなる群から選択される。特定の実施形態において、哺乳動物は、ヒトである。
【００４１】
特定の実施形態において、処置されるがんは、肺がん、黒色腫、腎がん〔renal caner〕、肝がん、骨髄腫、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、膵がん、甲状腺がん、血液がん、白血病および非ホジキンリンパ腫からなる群から選択される。
【００４２】
ｃ−Ｍｅｔ阻害剤および免疫チェックポイントの調節物質の併用
別の態様において、本開示は、組み合わせ免疫療法を使用してがんを処置する方法を提供する。特定の実施形態において、例えば、上記のとおり好中球関連バイオマーカーを監視することによって、対象が併用免疫療法に応答性である可能性があると判断された場合、併用免疫療法が対象に施される。特定の実施形態において、併用免疫療法は、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤と免疫チェックポイントの調節物質の組み合わせ使用である。いくつかの実施形態において、免疫チェックポイントの調節物質は、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。
【００４３】
ｃ−Ｍｅｔは、肝細胞増殖因子受容体（ＨＧＦＲ）として知られているタンパク質をコードするがん原遺伝子である。ｃ−Ｍｅｔタンパク質は、ｃ−Ｍｅｔの前駆体（プロｃ−Ｍｅｔ）を切断することによって形成されるα鎖およびβ鎖から構成され、ジスルフィド結合によって二量体を形成する。ｃ−Ｍｅｔは、細胞膜を貫通するレセプターであり、α鎖全体およびβ鎖の一部が細胞外に存在する（例えば、Ｍａｒｋ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  １９９２，  Ｖｏｌ．  ２６７，  Ｎｏ．  ３６，  ｐｐ．  ２６１６６−２６１７１；Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（ＩＧＡＫＵ  ＮＯ  ＡＹＵＭＩ），  ２００８，  Ｖｏｌ．  ２２４，  Ｎｏ．  １，  ｐｐ．  ５１−５５を参照）。ヒトｃ−Ｍｅｔおよびそのα鎖およびβ鎖に関するＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＮＰ＿０００２３６．２も参照のこと。がんにおける異常なＭＥＴ活性化が不良な予後と関連することが示されてきており、異常に活性なｃ−Ｍｅｔが腫瘍増殖、腫瘍に栄養を供給する新しい血管の形成、およびがんの広がりまたはその他の臓器を誘発する。
【００４４】
「ｃ−Ｍｅｔ阻害剤」は、本明細書中で使用される場合、ｃ−Ｍｅｔタンパク質の発現または活性を抑制することが可能な薬剤を指す。特定の実施形態において、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤は、クリゾチニブ、カボザンチニブ、ＡＰＬ−１０１、ＰＬＢ１００１、ボジチニブ、ＳＵ１１２７４、ＰＨＡ６６５７５２、Ｋ２５２ａ、ＰＦ−２３４１０６６、ＡＭ７、ＪＮＪ−３８８７７６０５、ＰＦ−０４２１７９０３、ＭＫ２４６１、ＧＳＫ１３６３０８９（ＸＬ８８０、ホレチニブ）、ＡＭＧ４５８、チバンチニブ（ＡＲＱ１９７）、ＩＮＣＢ２８０６０（ＩＮＣ２８０、カプマチニブ）、Ｅ７０５０、ＢＭＳ−７７７６０７、サボリチニブ（ボリチニブ）、ＨＱＰ−８３６１、メレスチニブ、ＡＲＧＸ−１１１、オナルツズマブ、リロツムマブ、エミベツズマブ、およびＸＬ１８４からなる群から選択される。
【００４５】
いくつかの実施形態において、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤は、以下の式の化合物を含む。
【００４６】
【化１】
2021515032.tif 000003
式中、
Ｒ１およびＲ２は、独立して水素またはハロゲンであり、
ＸおよびＸ１は、独立して水素またはハロゲンであり、
ＡおよびＧは、独立してＣＨもしくはＮであるか、またはＣＨ＝Ｇは、硫黄原子で置き換えられ、
Ｅは、Ｎであり、
Ｊは、ＣＨ、ＳまたはＮＨであり、
Ｍは、ＮまたはＣであり、
Ａｒは、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシル、ハロＣ１〜６アルキル、ハロＣ１〜６アルコキシ、Ｃ３〜７シクロアルキル、ハロゲン、シアノ、アミノ、−ＣＯＮＲ４Ｒ５、−ＮＨＣＯＲ６、−ＳＯ２ＮＲ７Ｒ８、Ｃ１〜６アルコキシル−、Ｃ１〜６アルキル−、アミノ−Ｃ１〜６アルキル−、ヘテロシクリルおよびヘテロシクリル−Ｃ１〜６アルキル−から独立して選択される１〜３個の置換基で任意に置換されるアリールもしくはヘテロアリールであるか、または２つの連結した置換基は、それらが結合している原子と一緒になって、前記アリールまたはヘテロアリールと縮合した４〜６員環ラクタムを形成しており、
Ｒ３は、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、ハロＣ１〜６アルキル、ハロゲン、アミノ、または−ＣＯＮＨ−Ｃ１〜６アルキル−ヘテロシクリルであり、
Ｒ４およびＲ５は、独立して水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜７シクロアルキル、ヘテロシクリル−Ｃ１〜６アルキルであるか、またはＲ４およびＲ５は、それらが結合しているＮと一緒になってヘテロシクリルを形成しており、
Ｒ６は、Ｃ１〜６アルキルまたはＣ３〜７シクロアルキルであり、
Ｒ７およびＲ８は、独立して水素またはＣ１〜６アルキルである。
【００４７】
いくつかの実施形態において、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤は、以下からなる群から選択される。
【００４８】
【化２−１】
2021515032.tif 000004
【化２−２】
2021515032.tif 000005
【化２−３】
2021515032.tif 000006
【化２−４】
2021515032.tif 000007
【化２−５】
2021515032.tif 000008
【化２−６】
2021515032.tif 000009
【００４９】
特定の実施形態において、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤は、ＡＰＬ−１０１（以前の名称ＣＢＴ−１０１、参照によってその全体が組み込まれるＵＳ２０１５０２１８１７１を参照）であり、これは、以下の式を有する。
【００５０】
【化３】
2021515032.tif 000010
【００５１】
特定の実施形態において、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤は、薬学的に許容される担体とともに製剤化されてもよい。担体は、存在する場合、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤および担体の総体積または重量に基づいて、５％から９５重量％の担体の量などの任意の適した量でｃ−Ｍｅｔ阻害剤と混合されてもよい。いくつかの実施形態において、担体の量は、５％、１０％、１２％、１５％、２０％、２５％、２８％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％または７５％のいずれかの下限、ならびに下限より大きい、２０％、２２％、２５％、２８％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、および９５％のいずれかの上限を有する範囲であってもよい。特定の実施形態における担体の量は、製剤の分野の当業者には知られているとおり、特定の用量形態、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤の相対量、担体を含む組成物の総重量、担体の物理的および化学的特性、ならびにその他の要素の考慮に基づいて決定することができる。
【００５２】
本明細書中で使用される場合、「免疫チェックポイント」または「がん免疫チェックポイント」という用語は、免疫応答のシグナルを強める（すなわち、共刺激分子）か、またはシグナルを弱める（すなわち、抑制分子）かのいずれかの免疫系の分子を指す。特定の実施形態において、免疫チェックポイントは、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−１、ＣＴＬＡ−４、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ６、２８４、ＩＣＯＳ、ＨＶＥＭ、ＣＤ１６０、ｇｐ４９Ｂ、ＰＩＲ−Ｂ、ＫＩＲファミリーレセプター、ＴＩＭ−１、ＴＩＭ−４、ＢＴＬＡ、ＳＩＲＰアルファ（ＣＤ４７）、ＣＤ４８、２８４（ＣＤ２４４）、Ｂ７．１、Ｂ７．２、ＩＬＴ−２、ＩＬＴ−４、ＴＩＧＩＴおよびＡ２ａＲからなる群から選択される。
【００５３】
特定の実施形態において、免疫チェックポイントの調節物質は、免疫チェックポイントに対するモノクローナル抗体である。特定の実施形態において、免疫チェックポイントは、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１である。特定の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、参照によってその全体が組み込まれる国際公開第ＷＯ２０１６／０１４６８８号に開示されているものから選択される。特定の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、ＡＰＬ−５０１（以前の名称ＣＢＴ−５０１、ＷＯ２０１６／０１４６８８を参照）、ＧＢ２２６またはゲノリムズマブである。特定の実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、参照によってその全体が組み込まれる国際公開第ＷＯ２０１６／０２２６３０号に開示されているものから選択される。特定の実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＡＰＬ−５０２（以前の名称ＣＢＴ−５０２、ＷＯ２０１６／０２２６３０を参照）またはＴＱＢ２４５０である。
【００５４】
本開示によると、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤および免疫チェックポイントの調節物質（または別の抗がん治療剤）は、医師が最も適切だと考えるとおり、同時または異なる時間のいずれかに対象に共投与されてもよい。ｃ−Ｍｅｔ阻害剤および免疫チェックポイント調節物質が、例えば連続投与によって、異なる時間に投与される場合、免疫チェックポイント調節物質は、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤の前に対象に投与されてもよい。あるいは、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤は、免疫チェックポイント調節物質の前に対象に投与されてもよい。
【００５５】
ｃ−Ｍｅｔ阻害剤または免疫チェックポイントの調節物質またはその他の抗がん治療剤は、任意の所望の効果的な様式で投与されてもよい：経口摂取用、または眼への局所投与のための軟膏もしくは点眼薬として、または非経口用あるいは任意の適切な様式のその他の投与、例えば、腹腔内、皮下、局所、皮内、吸入、肺内、直腸内、経膣、舌下、筋肉内、静脈内、動脈内、髄腔内、またはリンパ管内。さらに、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤または免疫チェックポイントの調節物質またはその他の抗がん治療剤は、その他の処置と組み合わせて投与されてもよい。ｃ−Ｍｅｔ阻害剤または免疫チェックポイントの調節物質またはその他の抗がん治療剤は、必要に応じて、カプセル化されてもよく、または別の方法で胃の分泌物またはその他の分泌物から保護されてもよい。
【００５６】
本明細書中で開示されているｃ−Ｍｅｔ阻害剤または免疫チェックポイントの調節物質またはその他の抗がん治療剤の投与量の適した非限定例は、１日当たり約１ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇを含む、１日当たり約１ｍｇ／ｋｇから約１２００ｍｇ／ｋｇ、１日当たり７５ｍｇ／ｋｇから１日当たり約３００ｍｇ／ｋｇなどの、１日当たり約１ｍｇ／ｋｇから約２４００ｍｇ／ｋｇである。そのような薬剤のその他の典型的な投与量としては、１日当たり約１ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、６０ｍｇ／ｋｇ、７０ｍｇ／ｋｇ、７５ｍｇ／ｋｇ、８０ｍｇ／ｋｇ、９０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、１２５ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇ、１７５ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ、４００ｍｇ／ｋｇ、５００ｍｇ／ｋｇ、６００ｍｇ／ｋｇ、７００ｍｇ／ｋｇ、８００ｍｇ／ｋｇ、９００ｍｇ／ｋｇ、１０００ｍｇ／ｋｇ、１１００ｍｇ／ｋｇ、１２００ｍｇ／ｋｇ、１３００ｍｇ／ｋｇ、１４００ｍｇ／ｋｇ、１５００ｍｇ／ｋｇ、１６００ｍｇ／ｋｇ、１７００ｍｇ／ｋｇ、１８００ｍｇ／ｋｇ、１９００ｍｇ／ｋｇ、２０００ｍｇ／ｋｇ、２１００ｍｇ／ｋｇ、２２００ｍｇ／ｋｇ、および２３００ｍｇ／ｋｇが挙げられる。いくつかの実施形態において、ヒトにおけるｃ−Ｍｅｔ阻害剤の投与量は、１２時間毎に与えられる約４００ｍｇ／日である。いくつかの実施形態において、ヒトにおけるｃ−Ｍｅｔ阻害剤の投与量は、３００〜５００ｍｇ／日、１００〜６００ｍｇ／日または２５〜１０００ｍｇ／日の範囲である。有効量の本明細書中で開示されているｃ−Ｍｅｔ阻害剤または免疫チェックポイントの調節物質またはその他の抗がん治療剤は、１日をとおして適切な間隔で個別に投与される、２、３、４、５、６回以上の分割用量として投与されてもよい。
【００５７】
その他の併用療法
一実施形態において、本方法は、細胞傷害性薬剤、毒素、放射性核種、免疫調節物質、光活性治療剤、放射線増感剤、ホルモン、血管新生阻害薬、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの追加の治療剤を投与することをさらに含む。特定の実施形態において、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤、免疫チェックポイントの調節物質および追加の治療剤の投与は、相乗効果をもたらす。
【００５８】
以下の実施例は、特許請求される発明をさらによく説明するために提供され、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。以下に示されるすべての特定の組成物、材料、および方法は、全体としてまたは一部として、本発明の範囲内にある。これらの特定の組成物、材料、および方法は、本発明を限定することを意図せず、単に本発明の範囲内にある特定の実施形態を説明することを意図する。当業者であれば、発明力を要することなく、本発明の範囲から逸脱することなく均等な組成物、材料、および方法を開発することができる。本明細書に記載される手順において多くの変形形態を作製することができ、それは依然として本発明の範囲内にあることが理解されよう。そのような変形形態が本発明の範囲内に含まれることが発明者らの意図である。
【実施例】
【００５９】
［実施例１］
この実施例は、ＭＣ−３８同系結腸がんモデルにおいてｃ−Ｍｅｔ阻害剤（ＡＰＬ−１０１）および抗ＰＤ−１抗体を使用した組み合わせ処置の相乗効果を示す。
【００６０】
実験デザイン
本発明者らは、組み合わせの安全性および効力を評価するためにＡＰＬ−１０１と抗ＰＤ−１抗体の組み合わせ試験を試みた。同系マウスのＭＣ−３８結腸がんモデルの４つの群において、各群当たり５匹の動物に、ビヒクル（２０ｍｇ／ｋｇの水、経口、１日１回）、ＡＰＬ−１０１（１０ｍｇ／ｋｇ、経口、１日１回）、抗ＰＤ−１（１０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内注射、週に２回）、またはＡＰＬ−１０１プラス抗ＰＤ−１のいずれかを与えた。ビヒクル群ならびにＡＰＬ−１０１群では、動物に１〜１５日目の毎日投与したが、単剤抗ＰＤ−１群では、１、４、８、１１、および１５日目に用量を投与した。ＡＰＬ−１０１と抗ＰＤ−１の組み合わせ群では、ＡＰＬ−１０１を５〜１５日目（４日遅れ）に投与し、抗ＰＤ−１を１、４、８、１１、および１５日目に投与した。
【００６１】
材料および方法
動物：６〜８週齢の体重が１８〜２０ｇの雌のＣ５７ＢＬ／６マウスは、Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｌｉｎｇｃｈａｎｇ  Ｂｉｏ−Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．  Ｌｔｄによって提供された。
【００６２】
ＡＰＬ−１０１は、ＣＢＴ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（現Ａｐｏｌｌｏｍｉｃｓ，  Ｉｎｃ．）によって提供された。抗−ＰＤ１抗体は、ＢｉｏＸｃｅｌｌによって供給された。
【００６３】
細胞培養：ＭＣ３８腫瘍細胞を、解凍し、１０％熱失活ウシ胎仔血清を加えたＤＭＥＭ培地中で、空気中５％ＣＯ２の雰囲気下、３７℃で、単層培養としてインビトロにおいて維持した。腫瘍細胞を、トリプシン・ＥＤＴＡ処置によって週に２回、定期的に継代培養した。指数増殖期に増殖している細胞を回収し、腫瘍接種のためにカウントした。
【００６４】
腫瘍接種：各マウスの右下脇腹の皮下に０．１ｍｌのＰＢＳ中のＭＣ３８腫瘍細胞（１×１０６）を接種した。平均腫瘍サイズがおよそ８０〜１２０ｍｍ３に達したら、処置が開始した。腫瘍細胞接種の日を０日目とする。
【００６５】
群の割り当て：グループ分けおよび処置の前に、すべての動物を計量し、腫瘍体積を、ノギスを使用して測定した。腫瘍体積は、任意の与えられる処置の有効性に影響を及ぼす可能性があるため、特定の群に選択される動物をランダム化するための数値パラメーターとして腫瘍体積を使用した。グループ分けは、ＳｔｕｄｙＤｉｒｅｃｔｏｒＴＭソフトウェア（Ｓｔｕｄｙｌｏｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｉｎｃ．、ＣＡ、米国）を使用することによって行った。
【００６６】
観察およびデータ収集：腫瘍細胞接種後、病的状態および死亡率に関して動物を毎日確認した。定期的な監視の間、正常な挙動、例えば、移動度、フードおよび水の摂取の視覚的評価、体重増加／減少（体重は、ランダム化後、週に２回測定した）、眼／毛の艶のなさおよびその他の異常なあらゆる影響に対する、腫瘍増殖および処置のあらゆる影響について動物を確認した。死亡および観察された臨床徴候を、各動物に関するデータシートのコメントに詳細に記録した。ランダム化後、週に２回、ノギスを使用して二次元で腫瘍体積を測定し、式：Ｖ＝０．５ａ×ｂ２を使用してｍｍ３単位で体積を表した。式中、ａおよびｂは、それぞれ腫瘍の長さおよび幅である。（腫瘍重量は、試験の終わりに測定した）。投薬の全手順ならびに腫瘍および体重測定は、クリーンベンチで行った。
【００６７】
統計：各時点における各群の腫瘍体積の平均および平均の標準誤差（ＳＥＭ）を得た。２つの比較群の間の腫瘍体積の差の統計分析を、最良の治療時点（通常、最後の用量の後）に得たデータに対して一元配置分散分析検定を使用して行った。データはすべてＳＰＳＳ（Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  ａｎｄ  Ｓｅｒｖｉｃｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）バージョン１８．０（ＩＢＭ、アーモンク、ＮＹ、米国）で分析した。生Ｐ値が０．００１未満の場合に、それらをＰ＜０．００１と示したことを除いて、Ｐ値は小数第３位に丸めた。すべての検定は、両側とした。Ｐ＜０．０５を統計学的に有意であると見なした。
【００６８】
結果
図１Ａ〜１Ｃおよび表１に示されるとおり、抗ＰＤ−１、１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ  ＢＩＷ×２週プラスＡＰＬ−１０１、１０ｍｇ／ｋｇ、ＱＤ×２週の組み合わせの平均腫瘍増殖阻害パーセントは、それぞれ、抗ＰＤ−１、ＩＰ  １０ｍｇ／ｋｇ、ＢＩＷ×３週およびＡＰＬ−１０１、ＰＯ  １０ｍｇ／ｋｇ、ＱＤ×３週について３９．９％および３３．６％であったのに対して、６５．１％の腫瘍増殖阻害を示した。組み合わせ投与計画は、動物で忍容性が良好であった。ｃ−Ｍｅｔ陽性およびＰＤ−Ｌ１好中球に関して採取した腫瘍組織を好中球リンパ球比とともに評価する。
【００６９】
【表１】
2021515032.tif 000011
【００７０】
［実施例２］
この実施例は、Ｈ２２同系肝がんモデルにおいてｃ−Ｍｅｔ阻害剤（ＡＰＬ−１０１）および抗ＰＤ−１抗体を使用した組み合わせ処置の相乗効果を示す。
【００７１】
実験デザイン
本発明者らは、組み合わせの安全性および効力を評価するためにＡＰＬ−１０１と抗ＰＤ−１抗体の組み合わせ試験を試みた。同系マウスのＨ２２肝がんモデルの４つの群において、各群当たり１０匹の動物に、ビヒクル（２０ｍｇ／ｋｇのＰＶＰ  Ｋ３０、経口、１日１回、３週間）、ＡＰＬ−１０１（１０ｍｇ／ｋｇ、経口、１日１回、３週間）、抗ＰＤ−１（１０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内注射、週に２回、３週間）、またはＡＰＬ−１０１プラス抗ＰＤ−１のいずれかを与えた。
【００７２】
材料および方法
動物：６〜８週齢の体重が１８〜２０ｇの雌のＣ５７ＢＬ／６マウスは、Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｌｉｎｇｃｈａｎｇ  Ｂｉｏ−Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．  Ｌｔｄによって提供された。
【００７３】
ＡＰＬ−１０１は、ＣＢＴ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（現Ａｐｏｌｌｏｍｉｃｓ，  Ｉｎｃ．）によって提供された。抗ＰＤ１抗体は、ＢｉｏＸｃｅｌｌによって供給された。ＰＶＰ  Ｋ３０は、Ｆｌｕｋａ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌによって供給された。
【００７４】
細胞培養：Ｈ２２腫瘍細胞株を、１０％ウシ胎仔血清を加えたＲＰＭＩ−１６４０培地中で、空気中５％ＣＯ２の雰囲気下、３７℃でインビトロにおいて維持した。腫瘍細胞を、トリプシン・ＥＤＴＡ処置によって週に２回、定期的に継代培養した。指数増殖期に増殖している細胞を回収し、腫瘍接種のためにカウントした。
【００７５】
腫瘍接種：腫瘍を発生させるために、各マウスの右前脇腹の皮下に０．１ｍｌのＰＢＳ中のＨ２２腫瘍細胞（２×１０６）を接種した。平均腫瘍サイズがおよそ８０〜１２０ｍｍ３に達したら、処置を開始した。腫瘍細胞接種の日を０日目とした。
【００７６】
ランダム化：平均腫瘍サイズがおよそ８０〜１２０ｍｍ３に達したら、ランダム化が開始した。この試験には４０匹のマウスを登録した。すべての動物を、４つの試験群にランダムに割り当てた。ランダム化は、乱塊法に基づいて行った。
【００７７】
観察およびデータ収集：腫瘍細胞接種後、病的状態および死亡率に関して動物を毎日確認した。定期的な監視の間、挙動、例えば、移動度、フードおよび水の摂取、体重増加／減少（体重は、ランダム化後、週に２回測定した）、眼／毛の艶のなさおよびその他のあらゆる異常に対する、腫瘍増殖および処置のあらゆる影響について動物を確認した。死亡率および観察された臨床徴候を、個々の動物に関して詳細に記録した。週に２回、ノギスを使用して二次元で腫瘍体積を測定し、式：“Ｖ＝（Ｌ×Ｗ×Ｗ）／２を使用してｍｍ３単位で体積を表した。式中、Ｖは、腫瘍体積であり、Ｌは、腫瘍の長さ（最長の腫瘍寸法）であり、Ｗは、腫瘍の幅（Ｌに垂直な最長の腫瘍寸法）である。（腫瘍重量は、試験の終わりに測定した）。投薬ならびに腫瘍および体重測定は、クリーンベンチで行った。
【００７８】
統計分析：３つ以上の群間の比較のために、多重比較法に従って一元配置分散分析法を実施した。生存分析のために、カプラン・マイヤー生存曲線を作製し、ログランク検定を実施した。ＳＰＳＳ  １８．０を使用してすべてのデータを分析した。Ｐ＜０．０５を統計学的に有意であると見なした。
【００７９】
結果
図２Ａ〜２Ｃおよび表２に示されるとおり、抗ＰＤ−１、１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ  ＢＩＷ×３週プラスＡＰＬ−１０１、１０ｍｇ／ｋｇ、ＱＤ×３週の組み合わせの平均腫瘍増殖パーセントは、ＡＰＬ−１０１、１０ｍｇ／ｋｇ、ＱＤ×３週について１０８．７３％、および抗ＰＤ−１、ＩＰ  １０ｍｇ／ｋｇ、ＢＩＷ×３週について６５．８５％であったのに対して、４０．３８％の腫瘍増殖を示した。組み合わせ投与計画は、動物で忍容性が良好であった。
【００８０】
【表２】
2021515032.tif 000012
【００８１】
［実施例３］
この実施例は、同系Ｒｅｎｃａ腎がんモデルにおいてｃ−Ｍｅｔ阻害剤（ＡＰＬ−１０１）および抗ＰＤ−１抗体を使用した組み合わせ処置の相乗効果を示す。
【００８２】
実験デザイン
本発明者らは、組み合わせの安全性および効力を評価するためにＡＰＬ−１０１と抗ＰＤ−１抗体の組み合わせ試験を試みた。同系マウスのＲｅｎｃａ腎がんモデルの４つの群において、各群当たり１０匹の動物に、ビヒクル（２０ｍｇ／ｋｇのＰＶＰ  Ｋ３０、経口、１日１回、３週間）、ＡＰＬ−１０１（２０ｍｇ／ｋｇ、経口、１日１回、３週間）、抗ＰＤ−１（１０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内注射、週に２回、３週間）、またはＡＰＬ−１０１（２０ｍｇ／ｋｇ、経口、１日１回、３週間）プラス抗ＰＤ−１（１０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内注射、週に２回、３週間）のいずれかを与えた。
【００８３】
材料および方法
動物：６〜８週齢の体重が１８〜２０ｇの雌のＣ５７ＢＬ／６マウスは、Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｌｉｎｇｃｈａｎｇ  Ｂｉｏ−Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．  Ｌｔｄによって提供された。
【００８４】
ＡＰＬ−１０１は、ＣＢＴ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ａｐｏｌｌｏｍｉｃｓ，  Ｉｎｃ．）によって提供された。抗ＰＤ１抗体は、ＢｉｏＸｃｅｌｌによって供給された。ＰＶＰ  Ｋ３０は、Ｆｌｕｋａ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌによって供給された。
【００８５】
細胞培養：Ｒｅｎｃａ腫瘍細胞株を、１０％ウシ胎仔血清を加えたＤＭＥＭ培地中で、空気中５％ＣＯ２の雰囲気下で３７℃でインビトロにおいて維持した。腫瘍細胞を、週に２回、定期的に継代培養した。指数増殖期に増殖している細胞を回収し、腫瘍接種のためにカウントした。
【００８６】
腫瘍接種：腫瘍を発生させるために、各マウスの右前脇腹の皮下に０．１ｍｌのＰＢＳ中のＲＥＮＣＡ腫瘍細胞（１×１０６）を接種した。平均腫瘍サイズがおよそ８０〜１２０ｍｍ３に達したら、処置を開始した。腫瘍細胞接種の日を０日目とした。
【００８７】
ランダム化：平均腫瘍サイズがおよそ８０〜１２０ｍｍ３に達したら、ランダム化が開始した。この試験には４０匹のマウスを登録した。すべての動物を、４つの試験群にランダムに割り当てた。ランダム化は、乱塊法に基づいて行った。
【００８８】
観察およびデータ収集：腫瘍細胞接種後、病的状態および死亡率に関して動物を毎日確認した。定期的な監視の間、挙動、例えば、移動度、フードおよび水の摂取、体重増加／減少（体重は、ランダム化後、週に２回測定した）、眼／毛の艶のなさおよびその他のあらゆる異常に対する、腫瘍増殖および処置のあらゆる影響について動物を確認した。死亡率および観察された臨床徴候を、個々の動物に関して詳細に記録した。週に２回、ノギスを使用して二次元で腫瘍体積を測定し、式：“Ｖ＝（Ｌ×Ｗ×Ｗ）／２を使用してｍｍ３単位で体積を表した。式中、Ｖは、腫瘍体積であり、Ｌは、腫瘍の長さ（最長の腫瘍寸法）であり、Ｗは、腫瘍の幅（Ｌに垂直な最長の腫瘍寸法）である。（腫瘍重量は、試験の終わりに測定した）。投薬ならびに腫瘍および体重測定は、クリーンベンチで行った。
【００８９】
統計分析：３つ以上の群間の比較のために、多重比較法に従って一元配置分散分析法を実施した。生存分析のために、カプラン・マイヤー生存曲線を作製し、ログランク検定を実施した。ＳＰＳＳ  １８．０を使用してすべてのデータを分析した。Ｐ＜０．０５を統計学的に有意であると見なした。
【００９０】
結果
図３Ａ〜３Ｃおよび表３に示されるとおり、抗ＰＤ−１、１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ  ＢＩＷ×３週プラスＡＰＬ−１０１、１０ｍｇ／ｋｇ、ＱＤ×３週の組み合わせの平均腫瘍増殖パーセントは、それぞれ、ＡＰＬ−１０１、１０ｍｇ／ｋｇ、ＱＤ×３週について７７％および抗ＰＤ−１、ＩＰ  １０ｍｇ／ｋｇ、ＢＩＷ×３週について７１％であったのに対して、４７％の腫瘍増殖を示した。組み合わせ投与計画は、動物で忍容性が良好であった。
【００９１】
【表３】
2021515032.tif 000013
【００９２】
［実施例４］
この実施例は、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤（ＡＰＬ−１０１）と抗ＰＤ−１抗体の組み合わせが腫瘍微小環境における好中球パーセンテージを低下させることを示す。
【００９３】
実験デザイン
試験の終わりに（実施例１に記載されている）ＭＣ３８結腸腺がん同系モデルから腫瘍組織を採取し、ホルマリン中で固定した。ｃ−Ｍｅｔおよび好中球の二重ＩＨＣ分析を使用して、Ｍｅｔ＋  好中球の発現を定量した。
【００９４】
サンプル調製：新しい試料を採取し、１０％  ＮＢＦ（中性緩衝ホルマリン；固定液体積／組織、１０〜２０倍）に入れ、室温で２４時間固定した。固定した組織を３〜５ｍｍの厚さで切った。切った組織を包埋カセットに入れた。そのカセットを素早く脱イオン化水に３０分間入れ、３０分間毎に２回水を変えた。脱水手順を時間どおり行えなかった場合は、組織を７０％エタノール中に移し、４℃の冷蔵庫に入れた。組織は、７０％エタノール中で約３〜５日間、冷蔵庫において保存できる。脱水後、固定した組織のＦＦＰＥ作製物およびＦＦＰＥスライド作製物を、脱水のためにＬＥＩＣＡ  ＡＳＰ３００Ｓ  Ｖａｃｕｕｍ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｐｒｏｃｅｓｓｏｒに移した。
【００９５】
ＦＦＰＥスライド作製：脱水した組織を、Ｐａｒａｆｆｉｎ  Ｅｍｂｅｄｄｉｎｇ  Ｓｔａｔｉｏｎにおいてパラフィンに包埋した。ＦＦＰＥブロックを、手動回転式ミクロトームを用いて４μｍの厚さ／切片に切断した。
【００９６】
ＦＦＰＥスライドを、以下の抗体を用いたＩＨＣのために使用した：抗好中球（ＬＹ６Ｇ／Ｃ）（ａｂｃａｍカタログ番号ａｂ２５５７）；抗ｃ−Ｍｅｔ（ａｂｃａｍカタログ番号ａｂ５１０６７）；ヤギ抗Ｒｂ  ＩｇＧ（Ｌｅｉｃａカタログ番号ＤＳ９８００）；抗ラットＩｇＧ（ｖｅｃｔｏｒカタログ番号ＭＰ−７４４４−１５）。
【００９７】
画像スキャン：すべての染色切片を、４０×倍（Ｈａｍａｍａｔｓｕ  ｐｈｏｔｏｎｉｃｓ）で３つの蛍光チャネル：赤、緑、青を用いてＮａｎｏＺｏｏｍｅｒ−ＨＴ  ２．０  Ｉｍａｇｅシステムによりスキャンした。全切片に関する高解像度写真を形成し、さらに定量分析。
【００９８】
ＩＨＣ染色に関するスコア：最初のステップは、染色パターンを全体的に見ること、および壊死および大きな間質領域を排除することであった。各サンプルから５つの代表的な領域を選択して、定量分析を行った。各染色の５つの領域を選択し、２０×倍で画像化した。すべての画像をＩｍａｇｅ  Ｊソフトウェアを用いて分析した。ｃ−ＭｅｔおよびＬＹ６Ｇ／Ｃ共局在細胞および全細胞をカウントした。二重ＩＦスコアは、５つの領域における合計の細胞数に対するｃ−ＭｅｔおよびＬＹ６Ｇ／Ｃ共局在細胞数の平均の比として示した。
【００９９】
結果
図４Ａ〜４Ｂに示されるとおり、腫瘍微小環境において、抗ＰＤ１抗体は、ｃ−Ｍｅｔ陽性好中球を増加させ、抗ＰＤ１プラスｃ−Ｍｅｔ阻害剤は、好中球パーセンテージを低下させた。図４Ｃに示されるとおり、抗ＰＤ−１抗体の処置は、末梢循環におけるｃ−Ｍｅｔ陽性好中球を増加させ、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤と抗ＰＤ−１抗体の組み合わせは、末梢循環における好中球パーセンテージを低下させた。
【０１００】
［実施例５］
この実施例は、ＮＳＣＬＣ、ＲＣＣ、ＨＣＣおよび胃がん患者におけるｃ−Ｍｅｔ阻害剤および抗ＰＤ−１抗体のインビボにおける効力の評価を示す。
【０１０１】
組み合わせ試験は、腫瘍におけるｃ−Ｍｅｔ＋好中球の浸潤のためにＰＤ−１単剤療法から利益を得る見込みがない患者（例えば、ＨＣＣおよびＲＣＣ）のサブセットを見つけるためにデザインし、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤のＰＤ−１との共投与は、この集団において完全なＰＤ−１の効果を回復させることが予想される。ｃ−Ｍｅｔ阻害剤とＰＤ−１阻害剤の組み合わせ処置は、Ｔ細胞と腫瘍細胞との間にブリッジを形成して、Ｔ細胞が直接、腫瘍細胞を標的とすることを可能にするであろう。これらの作用の異なるメカニズムにより、ＡＰＬ−１０１（ｃ−Ｍｅｔ阻害剤）とＡＰＬ−５０１（抗ＰＤ−１抗体）の組み合わせ処置が宿主の抗腫瘍応答を増強する際に相乗的に作用する。
【０１０２】
サイクル１、夕刻に開始する１日目において、２８日サイクルをとおして連続的（１日目〜２８日目）に投与されるＰＤ−１阻害剤と同時にＡＰＬ−１０１を投与する。これにより、血液バイオマーカー、ベースラインまたはＰＤ−１単剤処置時の変化のいずれかの好中球またはＨＧＦが、試験集団を予測することができるかどうか試験することが可能になる。好中球リンパ球比、血小板リンパ球比、ＨＧＦおよびその他のマーカーが、ＨＣＣ、ｍＲＣＣ、およびその他の腫瘍（例えば、ＮＳＣＬＣ）におけるＰＤ−１非応答に関して予測するバイオマーカーと仮定された。
【０１０３】
図５に示されるとおり、第１相部において、適格のＨＣＣおよびＲＣＣ対象は、２８日サイクルの１日目および１５日目に、ＡＰＬ−５０１を静脈内に（ＩＶ）またはニボルマブをＩＶに、ならびに各２８日サイクルの連続した２８日間、１２時間毎にＡＰＬ−１０１を経口で与えられる。２８日サイクルの１日目および１５日目に静脈内投与される３ｍｇ／ｋｇのＡＰＬ−５０１の用量は、選択された再燃したおよび抵抗性の固形腫瘍対象を含むオーストラリアにおける進行中の第１相臨床試験に基づく。ニボルマブ２４０ｍｇまたは３ｍｇ／ｋｇの２週毎の投与（１日目および１５日目）は、それぞれ米国またはオーストラリア／ニュージーランドに対して承認を受けたラベルに基づく。ＰＤ−１阻害剤の用量は、固定する。ＡＰＬ−１０１の用量は、毒性の結果が出るまで段階的に増加または減少させる。ＡＰＬ−１０１の開始用量（１２時間毎に１５０ｍｇ；１日当たりの総用量は３００ｍｇ）は、ＡＰＬ−１０１を用いた中国において進行中の臨床試験（ＮＣＴ０２８９６２３１およびＮＣＴ０２９７８２６１）からの臨床データに基づく。それぞれの場合において、安全性評価委員会は、それぞれ、３ｍｇ／ｋｇおよび３００ｍｇ用量がＡＰＬ−５０１およびＡＰＬ−１０１に関して安全と考えている。試験は、第１にＡＰＬ−５０１＋ＡＰＬ−１０１および第２にニボルマブ＋ＡＰＬ−１０１の安全な用量の組み合わせ（Ｒ２ＰＤ）を見つけるためにデザインする。
【０１０４】
コホートの６人の対象の間で２つ以上のＤＬＴが生じる場合、そのコホートへの登録は中止し、前の用量レベルを仮のＭＴＤと考える。仮のＭＴＤ群の追加の６人の対象はすべて、組み合わせＰＤ−１プラスＡＰＬ−１０１投与の１サイクルを完了しなければならない。毒性以外の理由で最初の処置サイクルを完了する前に脱落した対象は入れ替える。用量レベル２への用量増加は、サイクル１の安全性データのすべてをＳＲＣが評価および承認した後にのみ許される。ＳＲＣは、ＲＰ２Ｄをさらなる評価に推薦する前に併用療法の全般的な忍容性（例えば、持続するグレード２の有害事象、減量、および投与中断ならびにあらゆる遅延毒性の発生）を評価する。ＲＰ２Ｄが決定されたら、ＰＤ−１プラスＡＰＬ−１０１から引き続き臨床的有益性を受ける、より低用量で登録された対象に対して患者内の用量増加が許可され、ＲＰ２Ｄに増加してもよい。評価されるすべてのコホートレベルに関して第１相においてＰＫサンプリングおよび評価を行う。
【０１０５】
第２相は、局所進行および転移性のＨＣＣおよびＲＣＣの対象において第１相で決定されたＲＰ２Ｄの安全性、忍容性および効力を確認する。図６に示されるとおり、Ｓｉｍｏｎのミニマックスデザインに基づいて、推奨される第２相で投与されるＡＰＬ−１０１を、それぞれ２３人および２２人のＨＣＣおよびＲＣＣ対象においてさらに評価する。ＯＲＲがＨＣＣ群のステージ１において登録された２３人の対象のうち≧４人の応答を示す場合、追加の１９人の対象をステージ２に登録する。同様に、ＯＲＲがＲＣＣ群のステージ１において登録された２３人の対象のうち≧５人の応答を示す場合、追加の１９人の対象をステージ２に登録する。第２相ではＰＫサンプリングおよび評価は行わない。
【０１０６】
可能性のある各対象に対して、登録前に２８日のスクリーニングおよび適格性評価期間があり、サイクル１の１日目（Ｃ１Ｄ１）に試験処置の最初の用量を投与する（安全性および処置企図集団）。ｉｒＲＥＣＩＳＴによって、およびＨＣＣ対象に対しては第２にｍＲＥＣＩＳＴによって確認される疾患進行［進行性疾患（ＰＤ）］、死亡、許容できない処置関連毒性が生じるまで、または治験依頼者によって試験が打ち切られるまで、試験全体をとおして対象は、割り当てられた処置を継続して受ける。処置期間中、試験訪問は、サイクル１中は１日目、２日目、８日目、１５日目、および１６日目に、続く各サイクルの１日目および１５日目に行われる。≧２サイクルの応答［完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）］を経験した対象は、ＰＤ−１プラスＡＰＬ−１０１の組み合わせを、応答を超えて少なくともさらに２サイクル継続する。対象は、応答の十分な評価のために最低２サイクルのＰＤ−１およびＡＰＬ−１０１を受ける（評価可能集団）。ＰＤ−１およびＡＰＬ−１０１は、ｉｒＲＥＣＩＳＴにより、第２にｍＲＥＣＩＳＴにより（ＨＣＣ対象のみ）判定される進行性疾患（ＰＤ）の判定時、耐えられない毒性または治験責任医師によって判断される場合にリスク／ベネフィット比が対象に対してもはや有益でないとき、または対象の同意撤回時に中止される。試験処置の永久的な中止時には、処置終了訪問および３０日の安全性追跡訪問がある。毒性以外の理由で組み合わせ処置の最初のサイクルを完了する前に脱落した対象は入れ替える。
【０１０７】
試験処置の忍容性および安全性は、有害事象（ＡＥ）に関する情報、重篤な有害事象（ＳＡＥ）、ＤＬＴ、併用薬剤、バイタルサイン、心電図（ＥＣＧ）、およびＥａｓｔｅｒｎ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｇｒｏｕｐ（ＥＣＯＧ）パフォーマンスステータスを含む、臨床および検査データの収集によって試験全体をとおして評価する。抗腫瘍応答は、コンピューター断層撮影（ＣＴ）または磁気共鳴断層撮影（ＭＲＩ）スキャンを使用して、標準的なＲＥＣＩＳＴ  ｖ１．１に従っておよび第２にｉｒＲＥＣＩＳＴを用いて評価する。血清または血漿サンプルは、ＰＫおよびＰＤ分析のために特定の時点で採取する。
【０１０８】
第１および２相は、ベースラインにおける好中球絶対数（ＡＮＣ）および好中球リンパ球比（ＮＬＲ）ならびに組み合わせ処置によるＡＮＣおよびＮＬＲ比の変化の、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）および骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）との関連、ならびにその薬物動態との相関性を評価する。
【０１０９】
この結果は、ＨＧＦの発現、好中球の数およびＮＬＲが、組み合わせ処置の効力と相関関係にあることを示す。
【図１Ａ】
2021515032.tif 000015
【図１Ｂ】
2021515032.tif 000016
【図１Ｃ】
2021515032.tif 000017
【図２Ａ】
2021515032.tif 000018
【図２Ｂ】
2021515032.tif 000019
【図２Ｃ】
2021515032.tif 000020
【図３Ａ】
2021515032.tif 000021
【図３Ｂ】
2021515032.tif 000022
【図３Ｃ】
2021515032.tif 000023
【図４Ａ】
2021515032.tif 000024
【図４Ｂ】
2021515032.tif 000025
【図４Ｃ】
2021515032.tif 000026
【図５】
2021515032.tif 000027
【図６】
2021515032.tif 000028
【国際調査報告】
2021515032.tif 000029