(57)【要約】  本発明は、悪性腫瘍の悪性度及び特に神経系の悪性腫瘍における好ましくない臨床的予後に関連して、ジカウイルスの腫瘍溶解作用に基づいて幹細胞特性を有するがん細胞を破壊するためのキットに関する。前記キットは、医薬組成物、ゴム栓付き滅菌ガラスバイアル、及び注入用の滅菌された使い捨て注射針が付いた注射器を含む。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
−  医薬組成物、
−  ゴム栓付き滅菌ガラスバイアル  ２〜５本、
−  内径０．３〜１ｍｍ、長さ１０〜２００ｍｍの注入用の滅菌された使い捨ての注射針が付いた０．１〜２５ｍＬ注射器  ２〜５本、
−  医薬組成物の貯蔵容器、
−  製品解凍内部インジケーター
を含むことを特徴とする医薬キット。
【請求項２】
前記医薬組成物が、滅菌緩衝剤（ｐＨ６〜８）、安定化剤、浸透圧調節剤、免疫学的アジュバント、ｏｎｃｏｍｉＲ阻害剤及び化学療法剤に可溶化された、ＭＯＩ（感染多重度）が０．０１〜１０の濃度のジカウイルスを投与するのに十分な数のウイルス粒子を含むことを特徴とする、請求項１に記載のキット。
【請求項３】
前記ジカウイルスが、さまざまな分離株に由来する野生型、又は天然で獲得された若しくは人工的に挿入された改変を含む遺伝的変異型であることを特徴とする、請求項２に記載のキット。
【請求項４】
遺伝子改変が、主に、正常細胞に対するより少ない有害性、より高い腫瘍溶解性、腫瘍細胞に対するより高い特異性、免疫系の防御に抵抗するより高い性質、又は外来性遺伝子の運搬を促進する改変であることを特徴とする、請求項３に記載のキット。
【請求項５】
前記緩衝剤が、主に、終濃度１〜１０ｍＭのリン酸カリウム又はリン酸ナトリウム、終濃度５〜２０ｍＭのトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、及び終濃度５〜２０ｍＭの4-(2-ヒドロキシエチル)ピペラジン-1-エタンスルホン酸であることを特徴とする、請求項２に記載のキット。
【請求項６】
前記安定化剤が、主に、終濃度２〜１５％のスクロース、終濃度１〜１０％のトレハロース、終濃度５〜１５％のマンニトール、終濃度１〜１０％のソルビトール、終濃度１〜２００μＭのポリエチレングリコール、終濃度１〜１０％のポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン共重合体、終濃度０．５〜５％のヒト血清アルブミン、又は２つ以上の安定化剤の組合せからなる群から選択されることを特徴とする、請求項２に記載のキット。
【請求項７】
前記浸透圧調節剤が、主に、塩化ナトリウム（０．１〜１０％）、塩化マグネシウム（０．１〜１０％）、クエン酸ナトリウム（０．１〜１０％）、塩化カリウム（０．１〜１０％）、塩化カルシウム（０．１〜１０％）、グルコース（０．１〜３０％）、又は２つ以上の浸透圧調節剤の組合せからなる群から選択されることを特徴とする、請求項２に記載のキット。
【請求項８】
前記免疫学的アジュバントが、主に、リン酸アルミニウム（０．１〜１０％）、リン酸カリウム（０．１〜１０％）、ビロソーム（０．１〜１０％）、トコフェロール（０．１〜１０％）、スクアレン（０．１〜１０％）、又は２つ以上の免疫学的アジュバントの組合せからなる群から選択されることを特徴とする、請求項２に記載のキット。
【請求項９】
前記ｏｎｃｏｍｉＲ阻害剤が、終濃度０．１〜１０００ｍｇ／ｍＬであることを特徴とする、請求項２に記載のキット。
【請求項１０】
前記化学療法剤が、カルボプラチン及びシスプラチンなどの白金誘導体、カルムスチン及びロムスチンなどのニトロソ尿素、テモゾロミド、シクロホスファミド、プロカルバジンといったアルキル化剤；タキソール及びパクリタキセルなどタキサン、エトポシド、ビンクリスチンといった有糸分裂阻害剤；メトトレキサートなどの代謝拮抗物質；イリノテカン、ラパマイシンなどの酵素阻害剤；抗ＶＥＧＦ、抗ＥＧＦＲ、抗ＰＤ１、抗ＰＤＬ１、抗ＣＴＬＡ４などの一般なモノクローナル抗体及び免疫調節物質を含むがこれらには限定されないものの、亜致死量の用量からなる群から選択されることを特徴とする、請求項２に記載のキット。
【請求項１１】
１〜１２カ月の指定された時間、−８０〜４℃の低温で貯蔵されることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１２】
ジカウイルスの腫瘍溶解作用に基づいて幹細胞特性を有するがん細胞を破壊するためのものであることを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のキットの使用。
【請求項１３】
単剤としてがん細胞を、転移性腫瘍細胞を、ネオアジュバント及びアジュバントの様式でがん細胞を、直接破壊するためのものであることを特徴とする、請求項１２に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生物学の分野、より正確には分子生物学及びヒトの健康の分野に含まれ、ジカウイルスの腫瘍溶解作用に基づいて幹細胞特性を有するがん細胞を破壊するための、医薬組成物、ゴム栓付き滅菌ガラスバイアル及び注入用の滅菌された使い捨て注射針が付いた注射器を含むキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
がん細胞に感染し、死滅させ得るウイルスは、腫瘍溶解性ウイルスと呼ばれる。患者における天然のウイルス感染後の腫瘍退縮の予備的観察は、1950年代から始まる。しかしながら、固形腫瘍を治療するための新たな薬物としての腫瘍溶解性ウイルスの効果を調査するための、適切で根拠のある構造化された一連の臨床研究は、2000年代前半以降に行われた。アデノウイルス、ヘルペスウイルス、風疹ウイルス及び天然痘ウイルスを含めたいくつかの型のウイルスが、第Ｉ相から第ＩＩＩ相臨床研究において試験されてきた。一般に、これらの臨床研究は、これらの実験的処置を受けている患者において、低い毒性及び最小限の有害作用を報告している（Patel MR, Kratzke RA. Transl Res. 2013 Apr; 161(4):355 to 364）。
【０００３】
Ｈ１０１と呼ばれる修飾アデノウイルスが、2005年に中国において鼻咽頭がんの治療用として承認されたが、その使用は、この国に制限されている（Liang M. Curr Cancer Drug Targets. 2017 Nov 29）。2015年に、Ｔ−ＶＥＣと呼ばれる、ヘルペス単純ウイルス１型（ＨＳＶ−１）の修飾された形態が、再発性黒色腫患者の治療用として米国食品医薬品局（ＦＤＡ）によって米国において承認された。その後、Ｔ−ＶＥＣによるこの同じ条件での治療は、欧州医薬品庁（ＥＭＡ）及び豪州規制庁によって承認され（Rehman et al. J Immunother Cancer. 2016 Sep 20; 4:53）、腫瘍溶解性ウイルスによる療法は、がん患者にとって現実のものとなった。
【０００４】
この新たな治療法は、開発中で、2018年までに、異なるウイルスプラットフォームを用いる７０以上の臨床研究が、膵臓がん、黒色腫及び神経膠腫を含めた強力ながんを治療するために進行中である（ClinicalTrials.gov, NIH-USA）。
【０００５】
腫瘍溶解性ウイルス療法は、腫瘍細胞に優先的に感染し（腫瘍親和性）、それらを破壊する（腫瘍溶解性）ことができる天然の又は修飾されたウイルスを利用する。この治療法の制約の１つは、大部分の天然のウイルスが、がん細胞と正常細胞の両者に感染する可能性があることである。この理由から、多くの腫瘍溶解性ウイルスは、腫瘍細胞を優先的に感染するための遺伝子操作を必要とする。欠失されたＥ１Ｂ−５５ｋ遺伝子を有するＨ１０１アデノウイルス、並びに人工的に突然変異されたｃ３４．５及びａ４７遺伝子を有する修飾ＨＳＶ−１ヘルペスウイルス（Ｔ−ＶＥＣ）がその例である（Fukuhara et al. Cancer Sci. 2016 Oct; 107(10):1373 to 1379）。
【０００６】
また、新たな遺伝子の挿入を伴う遺伝子操作をウイルスに実施して、がん細胞を破壊する力を増大させる。修飾ヘルペスウイルスＴ−ＶＥＣ自体は、がん細胞に対する患者の免疫応答を刺激するためにヒトＧＭ−ＣＳＦ（ヒト顆粒球マクロファージコロニー刺激因子）をコードする遺伝子が挿入されている。
【０００７】
他方で、それらをより安全にし、抗腫瘍活性を増大させるためのウイルスゲノムの操作は比較的複雑で、患者におけるこれらのウイルスの注入の点で望ましくない又は制御不能な効果を有する可能性がある。
【０００８】
腫瘍溶解性療法の別の制約は、臨床的に使用するのに適切な高力価のウイルスを生成する能力が制限されていることである。そのことは、所望の腫瘍親和性及び腫瘍溶解効果を得るために大量のウイルスを必要とする。また、現在の薬剤は、一般的なウイルス、たとえばヘルペスウイルス及び風疹ウイルスに基づいており、それらのウイルスは、患者内に前から存在する抗体の存在のため有効性が減少する。たとえば、西洋人の約９５％はワクチン接種及び／又は過去の感染のため風疹ウイルスに対する中和抗体を有している。
【０００９】
この点で、本発明は、中枢神経系（ＣＮＳ）のがん細胞に対し効果的かつ特異的な腫瘍溶解作用、及び他の細胞型に対する感染力が低い少量のウイルスをその組成物中に含有するので、傑出している。本発明では、腫瘍溶解性ウイルスがＣＮＳに直接接近することを可能にする注入系も組み込まれており、その系は、通常、血液脳関門によって制限されているＣＮＳへ接近できる中和抗体によるウイルスの破壊を最小化する。
【００１０】
現在の技術
「ZIKA VIRUS INFECTION INDUCES SYNTHESIS OF DIGOXIN IN GLIOBLASTOMA CELLS（ジカウイルス感染は膠芽腫細胞におけるジゴキシンの合成を誘導する）」という表題の文献は、ウイルス感染によって誘導される細胞変性効果に関連するジカウイルス／神経膠芽腫細胞系のバイオマーカーとして内在性ジゴキシンを使用して、ヒト神経膠芽腫細胞に対するジカウイルス感染の腫瘍溶解効果を評価している。しかしながら、この文献は、本発明とのいくつかの相違点、たとえば、in vitroにおける細胞変性効果のみ説明されており、細胞死を決定していない点；腫瘍溶解効果を示すものではない点；研究された腫瘍が神経膠芽腫であって本発明に関する腫瘍とは異なっており、また、その腫瘍溶解効果を、in vitro及びin vivoで、集団において発生率の高い腫瘍（乳腺腫瘍、前立腺腫瘍及び結腸直腸腫瘍）と中枢神経系の胎生期腫瘍を比較することで示した点が存在する。
【００１１】
「ZIKA VIRUS INFECTS NEURAL PROGENITORS IN THE ADULT MOUSE BRAIN AND ALTERS PROLIFERATION（ジカウイルスは成体マウスの脳の神経前駆細胞に感染し、増殖を変化させる）」という表題の文献は、成体マウスと胎児マウスのニューロン幹細胞に対するジカウイルスの効果を研究しており、その効果は、細胞死及び増殖の減少をもたらし得る。しかしながら、この文献は、ジカウイルスの小頭症関連効果を理解するために正常脳細胞に対する効果しか扱っておらず、腫瘍細胞には言及していない。ウイルスは、特定の型の正常細胞に感染する可能性があるが、必ずしも他の型の正常細胞に感染しない（ジカウイルスに対して検証される）のと同様に、ジカウイルスが正常幹細胞に感染するという事実は、ジカウイルスが、がん幹細胞にも感染しることを意味しない。
【００１２】
「ONCOLYTIC VIRUSES IN CANCER THERAPY（癌治療における腫瘍溶解性ウイルス）」という表題の文献は、ウイルス療法について概説しており、特定の状況下でウイルスが、がん患者のがん細胞を攻撃し、破壊し得ることを示している。「RECENT PROGRESS IN THE BATTLE BETWEEN ONCOLYTIC VIRUSES AND TUMORS（腫瘍溶解性ウイルスと腫瘍の戦いにおける最近の進捗）」という表題の文献は、腫瘍溶解性ウイルスを使用する抗がん療法の開発の段階を概観している。「ONCOLYTIC VIRUS（腫瘍溶解性ウイルス）」という表題の文献は、個体においてがん細胞の生存率を減少させるための薬物の製造におけるウイルスの使用を提案している。以上のように、これらの文献は、腫瘍細胞を破壊するために特定のウイルスを使用する例である。しかしながら、そのいずれも本発明において評価したジカウイルス又は腫瘍細胞については具体的に述べていない。多くの文献が、腫瘍細胞を破壊するためのモノクローナル抗体の使用を指摘していることは事実であるが、これら文献は、この目的のために特異的な新しい抗体の特許要件を危うくするのに充分な最新技術を提供するものではない。同様に、他の確立された条件から微生物の挙動を予測することはできないので、腫瘍溶解性ウイルスに関する文献は、同じテーマの新しい物への先例を提供するものではない。
【００１３】
したがって、予想外なことに、本発明において提案されるキットは、ネクローシスの大幅な増大によりヒトがん幹細胞の効果的な破壊をもたらす。加えて、それは、既存の方法と比較して、実験動物の神経系における腫瘍とその転移の徹底した根絶能力、優れた効力も実証する。実際に、多くの型のがんにおいて、がん幹細胞の存在は、腫瘍の発生、従来の治療後の腫瘍成長の回復、及び高い遠隔転移のため、より好ましくない臨床的予後と関連している。
【発明の概要】
【００１４】
本発明の目的は、ジカウイルスの腫瘍溶解作用に基づいて幹細胞特性を有するがん細胞を破壊するためのキットであって、医薬組成物、ゴム栓付き滅菌ガラスバイアル、及び注入用の滅菌された使い捨て注射針付き注射器を含むキットを提案することである。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、中枢神経系腫瘍細胞（細胞系ＤＡＯＹ、ＵＳＰ１３−ＭＥＤ及びＵＳＰ７−ＡＴＲＴ）、乳腺腫瘍（細胞系ＭＣＦ−７）、結腸直腸腫瘍（細胞系ＨＣＴ−８）及び前立腺腫瘍（ＤＵ１４５）に対する異なる量のジカウイルス（ＭＯＩ  ０．０１、０．１、１又は２）の腫瘍溶解効果を示す図である。＊死細胞。
【図２】図２は、異なる量のジカウイルス（ＭＯＩ  ０．０１、０．１、１又は２）に中枢神経系腫瘍細胞（細胞系ＤＡＯＹ、ＵＳＰ１３−ＭＥＤ及びＵＳＰ７−ＡＴＲＴ）を曝露した後のネクローシスの特異的誘導を示すグラフである。同じ実験条件で、乳腺腫瘍細胞（細胞系ＭＣＦ−７）、結腸直腸腫瘍細胞（細胞系ＨＣＴ−８）及び前立腺腫瘍細胞（ＤＵ１４５）は、細胞死を生じなかった。統計的有意性：＊＊＊ｐ＜０．００５；＊＊＊＊ｐ＜０．００１。黒色バーは、ネクローシスによって死滅した細胞の％（ＰＩ＋）；赤色バーは、後期アポトーシスによって死滅した細胞の％（Ｃａｓ＋ＰＩ＋）；灰色バーは、初期アポトーシスによって死滅した細胞の％。
【図３】図３は、中枢神経系腫瘍（細胞系ＤＡＯＹ、ＵＳＰ１３−ＭＥＤ及びＵＳＰ７−ＡＴＲＴ）、前立腺腫瘍（ＤＵ１４５）及び正常ヒト神経幹細胞（ＮＰＣ）由来の幹細胞で構成される腫瘍球体に対する異なる量のジカウイルス（ＭＯＩ  １又は２）の腫瘍溶解効果を示す図である。＊死細胞。
【図４】図４は、中枢神経系の腫瘍の発生及び脊髄におけるそれらの転移に対するジカウイルスの効果を示す図である。「対照」は、ビヒクルが脳室内に注入（ｉ．ｃ．ｖ．）された動物；「ジカ」は、ジカウイルスが脳室内に注入（６×１０３ｐｆｕ）された動物。「前」は、注入前の腫瘍の存在及び場所を示す画像；「後」は、注入２週間後の同じ動物の画像。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明は、ウイルス腫瘍溶解作用に基づいて幹細胞特性を有するがん細胞を破壊するための、医薬組成物、５本のゴム栓付き滅菌ガラスバイアル及び注入用の滅菌された使い捨て注射針が付いた５本の注射器を含むキットに関する。
【００１７】
前記医薬組成物は、滅菌緩衝剤（ｐＨ６〜８）、安定化剤、浸透圧調節剤、免疫学的アジュバント、ｏｎｃｏｍｉＲ阻害剤及び化学療法剤に可溶化された、ＭＯＩ（感染多重度）が０．０１〜１０の濃度のジカウイルスを投与するのに十分な数のウイルス粒子を含む。
【００１８】
キットに使用されるジカウイルスは、さまざまな分離株に由来する野生型、又は天然で獲得された若しくは人工的に挿入された変化を含む遺伝的変異型であり得る。遺伝子変化の例には、とりわけ、正常細胞におけるより少ない有害効果、より高い腫瘍溶解効果、腫瘍細胞に対するより高い特異性、免疫系の防御に抵抗するより高い能力、外来性遺伝子の保有を促進する変化が含まれるが、これに限定されるものではない。
【００１９】
緩衝剤は、とりわけ、リン酸カリウム若しくはリン酸ナトリウム（終濃度１〜１０ｍＭ）、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（終濃度５〜２０ｍＭ）又は4-(2-ヒドロキシエチル)ピペラジン-1-エタンスルホン酸（終濃度５〜２０ｍＭ）であり得る。
【００２０】
安定化剤には、スクロース（終濃度２〜１５％）、グリセロール（終濃度０．１〜１０％）、非イオン性界面活性剤、たとえば、プルロニック（登録商標）Ｆ−６８（終濃度０．０００１〜１％）、トレハロース（終濃度１〜１０％）、マンニトール（終濃度５〜１５％）、ソルビトール（終濃度１〜１０％）、アルギニン（終濃度０．１〜１０％）、グルタミン（終濃度０．１〜１０％）、ポリエチレングリコール（終濃度１〜２００μＭ）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマー（終濃度１〜１０％）、血清アルブミン（終濃度０．５〜５％）、グルタミン酸一ナトリウム１〜１ｍＭ、又は２つ以上の安定化剤の組合せがあるが、これらに限定されるものではない。
【００２１】
浸透圧調節剤には、塩化ナトリウム（０．１〜１０％）、塩化マグネシウム（０．１〜１０％）、クエン酸ナトリウム（０．１〜１０％）、塩化カリウム（０．１〜１０％）、塩化カルシウム（０．１〜１０％）、グルコース（０．１〜３０％）、又は２つ以上の浸透圧調節剤の組合せがあるが、これらに限定されるものではない。
【００２２】
免疫アジュバントには、リン酸アルミニウム（０．１〜１０％）、リン酸カリウム（０．１〜１０％）、ビロソーム（０．１〜１０％）、トコフェロール（０．１〜１０％）、スクアレン（０．１〜１０％）、又は２つ以上の免疫学的アジュバントの組合せがあるが、これらに限定されるものではない。
【００２３】
また、前記医薬組成物は、終濃度０．１〜１０００ｍｇ／ｍＬで存在するｏｎｃｏｍｉＲ阻害剤（表１）の添加を含んでもよい。
【００２４】
【表１】
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【００２５】
また、ｏｎｃｏｍｉＲ阻害剤は、低分子量の陽イオン性物質、たとえばポリエチレンイミン（ＰＥＩ）及びその誘導体（ポリマー／阻害剤比２〜３０）又はリポソーム（最終比１〜２ｍｏｌ％）と複合体を形成してもよい。
【００２６】
さらに、本医薬組成物は、アルキル化剤（たとえば、白金誘導体、たとえばカルボプラチン及びシスプラチン；ニトロソ尿素、たとえばカルムスチン及びロムスチン；テモゾロミド；シクロホスファミド；プロカルバジン）、有糸分裂阻害剤（たとえば、タキサン、たとえばタキソール及びパクリタキセル；エトポシド；ビンクリスチン）、代謝拮抗物質（たとえば、メトトレキサート）、酵素阻害剤（たとえば、イリノテカン、ラパマイシン）、一般にモノクローナル抗体及び免疫調節物質（たとえば、抗ＶＥＧＦ、抗ＥＧＦＲ、抗ＰＤ１、抗ＰＤＬ１、抗ＣＴＬＡ４等）を含むがそれらに限定されるものではない化学療法剤を亜致死量で含有してもよい。
【００２７】
本キットは、限定されるものではないが、その二次包装中に以下の品目：Ａ）２〜５本の接種に理想的及び安全な形態（内径０．３〜１ｍｍ、長さ１０〜２００ｍｍの注射針）で構成された注射器（０．１〜２５ｍＬ）；Ｂ）調合物中の治療活性物質の貯蔵容器；Ｃ）治療活性物質の希釈容器；Ｄ）製品解凍内部インジケーターを含む。
【００２８】
キットは、１〜１２カ月間の指定された時間、低温（たとえば−８０〜４℃）で貯蔵されなければならない。注入１回につき１つのバイアルだけを使用する。薬剤の注入は、全身的（たとえば、静脈内、動脈内、筋肉内又は皮下）又は局所的（たとえば、腫瘍内、腫瘍切除後に生成した腔内、間質内、脳室内、くも膜下腔内）に行うことができ、単剤として、がん細胞を、転移性腫瘍細胞を、ネオアジュバント及びアジュバント様式でがん細胞を直接破壊するのに役立つ。また、薬剤の注入は、化学療法又は放射線療法による追加の治療におけるがん細胞の認識；従来の治療法、化学療法、放射線療法、免疫調節物質又は標的療法と組み合わせたがん細胞の破壊；及び標的療法又は免疫調節物質による追加の治療のためにがん細胞をさら強力に認識させることを目的とする。
【実施例】
【００２９】
限られた量のウイルス粒子が、神経系に感染し、腫瘍細胞のネクローシスを誘導できることが立証された。神経系以外の腫瘍細胞が感染し、溶解することはめったにない（図１）。そのような結果は、in vitro試験（ＡＴＣＣの勧告にしたがって６ウェルプレート中で培養し、さまざまなＭＯＩのウイルスと６０分間インキュベートすることによってジカウイルスに感染させ、その後、７２時間、細胞死をモニタリングした腫瘍細胞培養）及びin vivo試験（定位注入法によりヒト腫瘍細胞１×１０６個を注入し、次いで、同じ領域にジカウイルス［動物当たりウイルス粒子２０００個］を感染させたヌードマウス）において得られた。
【００３０】
感染した場合、神経系のがん細胞はネクローシスによって破壊される（図２）。ジカウイルスに感染した神経系以外のがん細胞は、著しく破壊されることはない。ジカウイルスに感染したすべてのがん細胞が破壊されるとは限らないという事実は予想外であり、したがって、このウイルスががん細胞を破壊する選択的な性質を有することを示している。これらの結果は、ヌードマウスでヒト腫瘍細胞が事前に注入された領域でのジカウイルスによる感染後に得られた。
【００３１】
特に、本発明は、ジカウイルスが、幹細胞特性を有する細胞で構成される神経系腫瘍の球体（Ｂ−２７、Ｎ２、ＥＧＦ及びＦＧＦが添加されたＤＭＥＭ−Ｆ１２中に形成された３次元細胞培養球体）に感染し、破壊できることを示す。ジカウイルスは、正常神経幹細胞球体と比較して、神経系腫瘍由来の幹細胞球体の破壊により効果的で（図３）、このことも、細胞破壊に対する予想外の選択的な性質を示す。
【００３２】
神経系の腫瘍（同所性及び転移性）のin vivoモデルでは、本発明のキットは、腫瘍成長を安定化することができ、腫瘍の発生を遅らせることができ、又は腫瘍の根絶さえ可能であることを示す。さらに、このキットは、腫瘍転移を排除するのみならず、軸索における転移の発生を阻止できることを示す（図４）。そのような結果は、軸索転移の有無にかかわらず、腫瘍細胞が事前に注入されたマウスのウイルス感染後で得られた。
【００３３】
中枢神経系の非転移性悪性腫瘍の場合、たとえば、ウイルス粒子の注入は、頭蓋内であって、原発腫瘍が存在する神経解剖学的領域内である。そのような注入は、これらの腫瘍に利用可能な他の治療と組み合わせることができる。たとえば、ウイルス粒子の注入は、神経系の原発腫瘍切除手術中、腫瘍塊の除去直後に実行され得る。中枢神経軸における転移性腫瘍の場合、たとえば、ウイルス粒子の注入は、従来の治療法と組み合わせて、又は、放射線療法及び化学療法のような積極的な治療に置きかえて、脳室内に行うことができる。
【００３４】
したがって、本発明の主要な技術的進歩は、従来の治療に対して一般に抵抗性であるヒトのがん幹細胞を排除するための効果的なキットの開発に関する。このキットは、中枢神経系の強力な悪性腫瘍由来のがん幹細胞の感染及び選択的破壊と組み合わせたジカウイルスの強力な腫瘍溶解作用で傑出している。
【００３５】
以上、本発明は広く記載されているが、本発明の範囲に含まれる様々な変更及び修飾を行って、本発明を改善し得ることは、当業者にとって明らかである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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