(57)【要約】  患者においてｉｎ  ｖｉｖｏで樹状（ＤＣ）細胞および／またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を拡大させる方法であって、該患者に投与される前の段階で、ＵＭ１７１またはそれに由来するアナログを用いて培養されて拡大された幹細胞および前駆体細胞の移植片を生成する工程を含む方法が提供される。患者における樹状（ＤＣ）細胞および／またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の集団の拡大または増加は、結果として、移植関連死亡（ＴＲＭ）、重症の移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、再燃、および／または重症のウイルス感染症を低減させる免疫応答の増加をもたらす。
2021521262.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
樹状（ＤＣ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、またはそれらの組合せを患者においてｉｎ  ｖｉｖｏで拡大させる方法であって、
ａ）開始時の幹細胞および／または前駆体細胞集団を、少なくとも１つの式Ｉの化合物：
【化１】
2021521262.tif 000031
またはその塩もしくはプロドラッグ
［式中、
各Ｙは、ＮおよびＣＨから独立に選択され、
Ｚは、
−ＣＮ、
−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、または
−ヘテロアリール（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基で置換されていてもよい）
であり、
式中、（Ｒ１）およびＲ３が窒素原子と結合しているとき、（Ｒ１）およびＲ３は前記窒素原子と一緒になって、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個または複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい３〜７員の環を形成してもよく、前記環は１個または複数個のＲＡまたはＲ４で置換されていてもよく、
Ｗは、
−ＣＮ、
−Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｒ１、
−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１、
−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、
−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
−ＮＲ１Ｓ（Ｏ）２Ｒ１、
−ベンジル（１、２または３個のＲＡまたはＲ１置換基で置換されていてもよい）、
−Ｘ−Ｌ−（Ｘ−Ｌ）ｎ−Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
−Ｘ−Ｌ−（Ｘ−Ｌ）ｎ−ヘテロアリール（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基で置換されていてもよく、置換基はＬおよびヘテロアリール基のいずれかまたは両方に結合している）、
−Ｘ−Ｌ−（Ｘ−Ｌ）ｎ−ヘテロシクリル（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基で置換されていてもよく、置換基はＬおよびヘテロシクリル基のいずれかまたは両方に結合している）、
−Ｘ−Ｌ−（Ｘ−Ｌ）ｎ−アリール（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基で置換されていてもよい）、
−Ｘ−Ｌ−（Ｘ−Ｌ）ｎ−ＮＲ１ＲＡ、または
−（Ｎ（Ｒ１）−Ｌ）ｎ−Ｎ＋Ｒ１Ｒ３Ｒ５Ｒ６−
であり、
式中、ｎは、０、１、２、３、４または５のいずれかに等しい整数であり、
式中、Ｒ１およびＲ３が窒素原子と結合しているとき、Ｒ１およびＲ３は前記窒素原子と一緒になって、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個または複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい３〜７員の環を形成してもよく、前記環は１個または複数個のＲＡまたはＲ４で置換されていてもよく、
各Ｘは、Ｃ、Ｏ、ＳおよびＮＲ１から独立に選択され、
各Ｌは、独立に、
−Ｃ１〜６アルキレン、
−Ｃ２〜６アルケニレン、
−Ｃ２〜６アルキニレン、
−Ｃ３〜７シクロアルキレン（Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個または複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい）、または
−Ｃ３〜７シクロアルケニレン（Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個または複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい）
であり、
式中、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、シクロアルキレンおよびシクロアルケニレン基は、それぞれ独立に、１個または２個のＲ４またはＲＡ置換基で置換されていてもよく、
Ｒ１は、それぞれ独立に、
−Ｈ、
−Ｃ１〜６アルキル、
−Ｃ２〜６アルケニル、
−Ｃ２〜６アルキニル、
−Ｃ３〜７シクロアルキル、
−Ｃ３〜７シクロアルケニル、
−Ｃ１〜５過フッ素化基、
−ヘテロシクリル、
−アリール、
−ヘテロアリール、または
−ベンジル
であり、
式中、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルケニル、過フッ素化アルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールおよびベンジル基は、それぞれ独立に、１、２または３個のＲＡまたはＲｄ置換基で置換されていてもよく、
Ｒ２は、
−Ｈ、
−Ｃ１〜６アルキル（１個または複数個のＲＡ置換基で置換されていてもよい）、
−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、
−Ｌ−ヘテロアリール（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基で置換されていてもよい）、
−Ｌ−ヘテロシクリル（１個または複数個のＲＡまたはＲ４で置換されていてもよい）、または
−Ｌ−アリール（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基で置換されていてもよい）
であり、
Ｒ３は、それぞれ独立に、
−Ｈ、
−Ｃ１〜６アルキル、
−Ｃ２〜６アルケニル、
−Ｃ２〜６アルキニル、
−Ｃ３〜７シクロアルキル、
−Ｃ３〜７シクロアルケニル、
−Ｃ１〜５過フッ素化基、
−ヘテロシクリル、
−アリール、
−ヘテロアリール、または
−ベンジル
であり、
式中、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、過フッ素化アルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールおよびベンジル基は、それぞれ独立に、１、２または３個のＲＡまたはＲｄ置換基で置換されていてもよく、
Ｒ４は、それぞれ独立に、
−Ｈ、
−Ｃ１〜６アルキル、
−Ｃ２〜６アルケニル、
−Ｃ２〜６アルキニル、
−Ｃ３〜７シクロアルキル、
−Ｃ３〜７シクロアルケニル、
−Ｃ１〜５過フッ素化基、
−ヘテロシクリル、
−アリール、
−ヘテロアリール、または
−ベンジル
であり、
式中、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、過フッ素化アルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールおよびベンジル基は、それぞれ独立に、１、２または３個のＲＡまたはＲｄ置換基で置換されていてもよく、
Ｒ５は、それぞれ独立に、
−Ｃ１〜６アルキル、
−Ｃ１〜６アルキレン−Ｃ２〜６アルケニル（Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個または複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい）、
−Ｃ１〜６アルキレン−Ｃ２〜６アルキニル（Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個または複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい）、
−Ｌ−アリール（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基を含んでいてもよい）、
−Ｌ−ヘテロアリール（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基を含んでいてもよい）、
−Ｃ１〜６アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
−Ｃ１〜６アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
−Ｃ１〜６アルキレン−ＣＮ、
−Ｃ１〜６アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１Ｒ３（式中、Ｒ１およびＲ３は、窒素原子と一緒になって、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個または複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい３〜７員の環を形成してもよい）、または
−Ｃ１〜６アルキレン−ＯＨ
であり、
Ｒ６は、
−ハロゲン、
−ＯＣ（Ｏ）ＣＦ３、または
−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１
であり、
ＲＡは、それぞれ独立に、
−ハロゲン、
−ＣＦ３、
−ＯＲ１、
−Ｌ−ＯＲ１、
−ＯＣＦ３、
−ＳＲ１、
−ＣＮ、
−ＮＯ２、
−ＮＲ１Ｒ３、
−Ｌ−ＮＲ１Ｒ１、
−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
−Ｓ（Ｏ）２Ｒ４、
−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｒ１、
−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１、
−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、
−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、または
−Ｎ３
であり、
Ｒｄは、それぞれ独立に、
−Ｈ、
−Ｃ１〜６アルキル、
−Ｃ２〜６アルケニル、
−Ｃ２〜６アルキニル、
−Ｃ３〜７シクロアルキル、
−Ｃ３〜７シクロアルケニル、
−Ｃ１〜５過フッ素化基、
−ベンジル、または
−ヘテロシクリル
である］
を任意選択で少なくとも１つの細胞拡大因子と一緒に用いて培養する工程と、
ｂ）培養された前記幹細胞および／または前駆体細胞集団を拡大させて移植片を生成する工程と、
ｃ）前記患者に前記移植片を移植し、それにより、前記患者においてＤＣ細胞、ＮＫ細胞、またはそれらの組合せを拡大させる工程と
を含む方法。
【請求項２】
ＤＣ細胞、ＮＫ細胞、またはそれらの組合せの前記拡大が、前記患者の免疫応答を刺激する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記患者における重症の移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、再燃、および／または重症のウイルス感染症をさらに低減させる、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
開始時の前記幹細胞および／または前駆体細胞集団が、ヒト造血幹細胞（ＨＳＣ）である、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記造血幹細胞が、臍帯血細胞、動員末梢血細胞または骨髄細胞に由来するものである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記造血幹細胞が、ヒトさい帯血細胞に由来するものである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
拡大されている前記幹細胞および／または前駆体細胞が、ＣＤ３４＋、ＣＤ３８＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ１３３および／またはＣＤ４９ｆ＋細胞を得るために精製される、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記ＣＤ３４＋細胞が、ＥＰＣＲ＋細胞である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ＮＫ細胞が、ＣＤ５６＋またはＮＫＧ２Ａ＋細胞である、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＤＣ細胞が、ＣＤ１１ｃ＋細胞である、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
開始時の前記幹細胞および／または前駆体細胞集団が、少なくとも１つの細胞拡大因子を用いて培養される、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記少なくとも１つの細胞拡大因子が、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、顆粒球・マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（ＦＬＴ３−Ｌ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、またはそれらの組合せである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
開始時の前記幹細胞および／または前駆体細胞集団が、アリール炭化水素受容体（ＡＨＲ）アンタゴニストを用いてさらに培養される、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＡＨＲアンタゴニストが、Ｓｔｅｍ  Ｒｅｇｅｎｉｎ１（ＳＲ１）またはＣＨ２２３１９１である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記式Ｉの化合物が、
【化２】
2021521262.tif 000032
またはその薬学的に許容される塩である、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記式Ｉの化合物が、
【化３】
2021521262.tif 000033
の臭化水素酸塩である、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記式Ｉの化合物が、
【化４】
2021521262.tif 000034
またはその薬学的に許容される塩である、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記式Ｉの化合物が、
【表１−１】
2021521262.tif 000035
【表１−２】
2021521262.tif 000036
【表１−３】
2021521262.tif 000037
【表１−４】
2021521262.tif 000038
【表１−５】
2021521262.tif 000039
【表１−６】
2021521262.tif 000040
【表１−７】
2021521262.tif 000041
【表１−８】
2021521262.tif 000042
またはその薬学的に許容される塩である、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
培養された前記幹細胞および／または前駆体細胞集団が、バイオリアクターで拡大される、請求項１から１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記患者が、ヒトまたは動物である、請求項１から１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記動物がマウスである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記患者におけるウイルス感染症を治療するための、請求項１から２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記ウイルス感染症が、ＣＭＶ感染症、ＥＢＶ感染症またはアデノウイルス膀胱炎である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
炎症状態が前記患者において制御される、請求項１から２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記移植片が、樹状細胞集団および肥満細胞を含む、請求項１から２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記樹状細胞集団が、ＣＤ８６＋ＣＤ３４＋細胞である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記移植片が、４０〜５０％に相当する樹状細胞を含む、請求項２５または２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記移植片が、１／３に相当する未熟樹状細胞を含む、請求項１から２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記移植片が、肥満細胞を含む、請求項１から２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記移植片が、約１０％に相当する肥満細胞を含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記移植片が、ＦＣＥＲ１＋ＣＤ３４＋細胞、ＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ＋細胞、ＣＤ３４＋ＣＤ８６＋細胞、ＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−細胞およびＣＤ３４−細胞を含む、請求項１から３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
樹状（ＤＣ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、またはそれらの組合せを患者においてｉｎ  ｖｉｖｏで拡大させるための、少なくとも１つの化合物を用いて培養された、拡大されている幹細胞および／または前駆体細胞の移植片の使用であって、前記少なくとも１つの化合物が、式Ｉ：
【化５】
2021521262.tif 000043
を有する化合物またはその塩もしくはプロドラッグ
［式中、
各Ｙは、ＮおよびＣＨから独立に選択され、
Ｚは、
−ＣＮ、
−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、または
−ヘテロアリール（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基で置換されていてもよい）
であり、
式中、（Ｒ１）およびＲ３が窒素原子と結合しているとき、（Ｒ１）およびＲ３は前記窒素原子と一緒になって、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個または複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい３〜７員の環を形成してもよく、前記環は１個または複数個のＲＡまたはＲ４で置換されていてもよく、
Ｗは、
−ＣＮ、
−Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｒ１、
−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１、
−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、
−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
−ＮＲ１Ｓ（Ｏ）２Ｒ１、
−ベンジル（１、２または３個のＲＡまたはＲ１置換基で置換されていてもよい）、
−Ｘ−Ｌ−（Ｘ−Ｌ）ｎ−Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
−Ｘ−Ｌ−（Ｘ−Ｌ）ｎ−ヘテロアリール（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基で置換されていてもよく、置換基はＬおよびヘテロアリール基のいずれかまたは両方に結合している）、
−Ｘ−Ｌ−（Ｘ−Ｌ）ｎ−ヘテロシクリル（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基で置換されていてもよく、置換基はＬおよびヘテロシクリル基のいずれかまたは両方に結合している）、
−Ｘ−Ｌ−（Ｘ−Ｌ）ｎ−アリール（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基で置換されていてもよい）、
−Ｘ−Ｌ−（Ｘ−Ｌ）ｎ−ＮＲ１ＲＡ、または
−（Ｎ（Ｒ１）−Ｌ）ｎ−Ｎ＋Ｒ１Ｒ３Ｒ５Ｒ６−
であり、
式中、ｎは、０、１、２、３、４または５のいずれかに等しい整数であり、
式中、Ｒ１およびＲ３が窒素原子と結合しているとき、Ｒ１およびＲ３は前記窒素原子と一緒になって、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個または複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい３〜７員の環を形成してもよく、前記環は１個または複数個のＲＡまたはＲ４で置換されていてもよく、
各Ｘは、Ｃ、Ｏ、ＳおよびＮＲ１から独立に選択され、
各Ｌは、独立に、
−Ｃ１〜６アルキレン、
−Ｃ２〜６アルケニレン、
−Ｃ２〜６アルキニレン、
−Ｃ３〜７シクロアルキレン（Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個または複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい）、または
−Ｃ３〜７シクロアルケニレン（Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個または複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい）
であり、
式中、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、シクロアルキレンおよびシクロアルケニレン基は、それぞれ独立に、１個または２個のＲ４またはＲＡ置換基で置換されていてもよく、
Ｒ１は、それぞれ独立に、
−Ｈ、
−Ｃ１〜６アルキル、
−Ｃ２〜６アルケニル、
−Ｃ２〜６アルキニル、
−Ｃ３〜７シクロアルキル、
−Ｃ３〜７シクロアルケニル、
−Ｃ１〜５過フッ素化基、
−ヘテロシクリル、
−アリール、
−ヘテロアリール、または
−ベンジル
であり、
式中、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルケニル、過フッ素化アルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールおよびベンジル基は、それぞれ独立に、１、２または３個のＲＡまたはＲｄ置換基で置換されていてもよく、
Ｒ２は、
−Ｈ、
−Ｃ１〜６アルキル（１個または複数個のＲＡ置換基で置換されていてもよい）、
−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、
−Ｌ−ヘテロアリール（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基で置換されていてもよい）、
−Ｌ−ヘテロシクリル（１個または複数個のＲＡまたはＲ４で置換されていてもよい）、または
−Ｌ−アリール（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基で置換されていてもよい）
であり、
Ｒ３は、それぞれ独立に、
−Ｈ、
−Ｃ１〜６アルキル、
−Ｃ２〜６アルケニル、
−Ｃ２〜６アルキニル、
−Ｃ３〜７シクロアルキル、
−Ｃ３〜７シクロアルケニル、
−Ｃ１〜５過フッ素化基、
−ヘテロシクリル、
−アリール、
−ヘテロアリール、または
−ベンジル
であり、
式中、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、過フッ素化アルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールおよびベンジル基は、それぞれ独立に、１、２または３個のＲＡまたはＲｄ置換基で置換されていてもよく、
Ｒ４は、それぞれ独立に、
−Ｈ、
−Ｃ１〜６アルキル、
−Ｃ２〜６アルケニル、
−Ｃ２〜６アルキニル、
−Ｃ３〜７シクロアルキル、
−Ｃ３〜７シクロアルケニル、
−Ｃ１〜５過フッ素化基、
−ヘテロシクリル、
−アリール、
−ヘテロアリール、または
−ベンジル
であり、
式中、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、過フッ素化アルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールおよびベンジル基は、それぞれ独立に、１、２または３個のＲＡまたはＲｄ置換基で置換されていてもよく、
Ｒ５は、それぞれ独立に、
−Ｃ１〜６アルキル、
−Ｃ１〜６アルキレン−Ｃ２〜６アルケニル（Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個または複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい）、
−Ｃ１〜６アルキレン−Ｃ２〜６アルキニル（Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個または複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい）、
−Ｌ−アリール（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基を含んでいてもよい）、
−Ｌ−ヘテロアリール（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基を含んでいてもよい）、
−Ｃ１〜６アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
−Ｃ１〜６アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
−Ｃ１〜６アルキレン−ＣＮ、
−Ｃ１〜６アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１Ｒ３（式中、Ｒ１およびＲ３は、窒素原子と一緒になって、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個または複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい３〜７員の環を形成してもよい）、または
−Ｃ１〜６アルキレン−ＯＨ
であり、
Ｒ６は、
−ハロゲン、
−ＯＣ（Ｏ）ＣＦ３、または
−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１
であり、
ＲＡは、それぞれ独立に、
−ハロゲン、
−ＣＦ３、
−ＯＲ１、
−Ｌ−ＯＲ１、
−ＯＣＦ３、
−ＳＲ１、
−ＣＮ、
−ＮＯ２、
−ＮＲ１Ｒ３、
−Ｌ−ＮＲ１Ｒ１、
−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
−Ｓ（Ｏ）２Ｒ４、
−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｒ１、
−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１、
−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、
−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、または
−Ｎ３
であり、
Ｒｄは、それぞれ独立に、
−Ｈ、
−Ｃ１〜６アルキル、
−Ｃ２〜６アルケニル、
−Ｃ２〜６アルキニル、
−Ｃ３〜７シクロアルキル、
−Ｃ３〜７シクロアルケニル、
−Ｃ１〜５過フッ素化基、
−ベンジル、または
−ヘテロシクリル
である］
である、使用。
【請求項３３】
ＤＣ細胞、ＮＫ細胞、またはそれらの組合せの前記拡大が、前記患者の免疫応答を刺激する、請求項３２に記載の使用。
【請求項３４】
重症の移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、再燃、および／または重症のウイルス感染症を低減させる、請求項３２または３３に記載の使用。
【請求項３５】
前記幹細胞および／または前駆体細胞が、ヒト造血幹細胞（ＨＳＣ）である、請求項３２から３４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３６】
前記造血幹細胞が、臍帯血細胞、動員末梢血細胞または骨髄細胞に由来するものである、請求項３５に記載の使用。
【請求項３７】
前記造血幹細胞が、ヒトさい帯血細胞に由来するものである、請求項３６に記載の使用。
【請求項３８】
前記幹細胞および前駆体細胞が、ＣＤ３４＋、ＣＤ３８＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ１３３および／またはＣＤ４９ｆ＋細胞を得るために精製される、請求項３２から３７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３９】
前記ＣＤ３４＋細胞が、ＥＰＣＲ＋細胞である、請求項３８に記載の使用。
【請求項４０】
前記ＮＫ細胞が、ＣＤ５６＋またはＮＫＧ２Ａ＋細胞である、請求項３２から３９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４１】
前記ＤＣ細胞が、ＣＤ１１ｃ＋細胞である、請求項３２から４０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４２】
前記幹細胞および／または前駆体細胞が、少なくとも１つの細胞拡大因子を用いて培養される、請求項３２から４１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４３】
前記少なくとも１つの細胞拡大因子が、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（ＦＬＴ３−Ｌ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、またはそれらの組合せである、請求項４２に記載の使用。
【請求項４４】
前記幹細胞および／または前駆体細胞が、アリール炭化水素受容体（ＡＨＲ）アンタゴニストを用いてさらに培養される、請求項３２から４３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４５】
前記ＡＨＲアンタゴニストが、Ｓｔｅｍ  Ｒｅｇｅｎｉｎ１（ＳＲ１）またはＣＨ２２３１９１である、請求項４４に記載の使用。
【請求項４６】
前記式Ｉの化合物が、ＵＭ１７１
【化６】
2021521262.tif 000044
またはその薬学的に許容される塩である、請求項３２から４５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４７】
前記式Ｉの化合物が、
【化７】
2021521262.tif 000045
の臭化水素酸塩である、請求項３２から４６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４８】
前記式Ｉの化合物が、
【化８】
2021521262.tif 000046
またはその薬学的に許容される塩である、請求項３２から４７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４９】
前記式Ｉの化合物が、
【表２−１】
2021521262.tif 000047
【表２−２】
2021521262.tif 000048
【表２−３】
2021521262.tif 000049
【表２−４】
2021521262.tif 000050
【表２−５】
2021521262.tif 000051
【表２−６】
2021521262.tif 000052
【表２−７】
2021521262.tif 000053
【表２−８】
2021521262.tif 000054
またはその薬学的に許容される塩である、請求項３２から４８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５０】
前記幹細胞および前駆体細胞が、バイオリアクターで拡大される、請求項３２から４９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５１】
前記患者が、ヒトまたは動物である、請求項３２から５０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５２】
前記動物がマウスである、請求項５１に記載の使用。
【請求項５３】
前記患者におけるウイルス感染症を治療するための、請求項３２から５２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５４】
前記ウイルス感染症が、ＣＭＶ感染症、ＥＢＶ感染症またはアデノウイルス膀胱炎である、請求項５３に記載の使用。
【請求項５５】
炎症状態が前記患者において制御される、請求項３２から５４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５６】
前記移植片が、樹状細胞集団および肥満細胞を含む、請求項３２から５５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５７】
前記樹状細胞集団が、ＣＤ８６＋ＣＤ３４＋細胞である、請求項５６に記載の使用。
【請求項５８】
前記移植片が、４０〜５０％に相当する樹状細胞を含む、請求項５６または５７に記載の使用。
【請求項５９】
前記移植片が、１／３に相当する未熟樹状細胞を含む、請求項３２から５８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６０】
前記移植片が、肥満細胞を含む、請求項３２から５９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６１】
前記移植片が、約１０％に相当する肥満細胞を含む、請求項６０に記載の使用。
【請求項６２】
前記移植片が、ＦＣＥＲ１＋ＣＤ３４＋細胞、ＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ＋細胞、ＣＤ３４＋ＣＤ８６＋細胞、ＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−細胞およびＣＤ３４−細胞を含む、請求項３２から６１のいずれか一項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年２月２０日に出願された米国特許仮出願第６２／６３２，７３３号の利益を主張するものであり、同文献の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
ＵＭ１７１またはそれに由来するアナログを用いて培養された幹細胞および前駆体細胞（ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  ｃｅｌｌ）の移植片を移植することにより、患者においてｉｎ  ｖｉｖｏで樹状（ＤＣ）細胞および／またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を拡大させる方法が提供される。
【背景技術】
【０００３】
免疫療法は、抗がん療法の分野における大きな突破口であると考えられており、その理由は、このアプローチが、化学療法不応性のがんに対してその有効性を実証したからである。試みの多くは抗原を標的としたアプローチに集中したが、がん細胞と戦うために自然免疫を利用するアプローチも提案されており、抗がん免疫療法のデザインにナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が用いられることが増えてきている。
【０００４】
ＮＫ細胞は、事前感作なしに、感染細胞または形質転換細胞を認識して殺す。がん細胞に対するＮＫ細胞の細胞毒性活性は、活性化シグナルと抑制性シグナルとの間のバランス、ならびに、自己および非形質転換細胞をがんおよび感染細胞と区別するためにＮＫ細胞が受ける教育により、高度に調節されている。ところが、がん細胞は、ＮＫ細胞活性化受容体に対するリガンドを下方調節することにより、ＮＫ細胞媒介性溶解に耐性をもつようになりうる。この耐性をもたせないようにするには、ＮＫ細胞の細胞傷害機能を高めるためにＮＫ細胞を刺激することが必要となる。インターロイキン（ＩＬ）−２およびＩＬ−１５は、ＮＫ細胞の溶解機能を高めるために最も高頻度に使用されるサイトカインであるが、臨床におけるそれらの使用には、がんに対するＮＫ細胞媒介性細胞毒性の有効性を阻みかねない高毒性および副作用が伴う。ナチュラルキラー細胞は、がん再燃および感染症に対する防御において決定的に重要な役割を果たす。
【０００５】
ＮＫ細胞機能は、少数の活性化樹状細胞により刺激されうる。樹状細胞（ＤＣ）は、自然免疫応答および獲得免疫応答の両方を刺激し、それにより感染抵抗性、防御的抗腫瘍免疫および自己寛容をもたらす、最も強力な抗原提示細胞である。高アビディティーのエフェクター細胞、例えば細胞傷害性Ｔリンパ球およびナチュラルキラー細胞などを多数作り出すこの独特の固有能力により、ＤＣは、がんを含む多様な血液学的悪性腫瘍、感染性疾患、アレルギーおよび自己免疫疾患に対する細胞ベース療法のきわめて優れた候補となっている。ＤＣは自己の免疫状態に基づいてその機能を形成することができ、このことは、免疫と、恒常性を保つための寛容とのバランスにとって決定的に重要である。幹細胞移植実施に伴う免疫応答においては、ＤＣは、免疫寛容および抗腫瘍免疫の誘導に関わっている。
【０００６】
いくつかあるＤＣサブセットは、異なるレパートリーのＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）および表面分子ならびに異なるセットのサイトカイン／ケモカインを発現することを特徴としており、それらはすべて、特徴的で特異的な液性および／または細胞性免疫応答をもたらす。２つの主要なサブセットが、骨髄系ＤＣ（ｍＤＣ）および形質細胞様ＤＣ（ｐＤＣ）である。
【０００７】
ｍＤＣおよびｐＤＣは、病原刺激に対して異なる形で応答し、各サブセットは、免疫応答の方向付けにおいて、特殊化した機能を有する。ｍＤＣが、ＴＬＲを介して微生物刺激に応答することでＴＮＦ−αおよびＩＬ−１２を産生するのに対し、ｐＤＣは、細菌感染またはウイルス感染に応答して大量のＩ型インターフェロン（ＩＦＮ）を産生することから、自然免疫におけるキーエフェクターとなっている。最近の観察結果から、ｐＤＣおよびｍＤＣはどちらも抗腫瘍応答の誘導にとって重要であり、両者が相乗的に作用することで、より優れた免疫学的転帰を誘導しうることが示唆されている。
【０００８】
同種造血幹細胞（ＨＳＣ）移植は、血液がん患者を治癒に導く利用可能な最良の治療法である。移植片拒絶、腫瘍再発および造腫瘍性のリスクは、幹細胞移植実施後にも存在する。残念なことに、患者のうち４０％にはヒト白血球抗原（ＨＬＡ）適合ドナー（血縁または非血縁）がみつからない。さい帯血（ＣＢ：ｃｏｒｄ  ｂｌｏｏｄ）は、その独特な特性から、幹細胞の代替ドナー源として最も魅力的なものとなっており、そのような特性としては、ＨＬＡ不適合に対して寛容であること、慢性の移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の発生率が低いこと、および、速やかに入手できることが挙げられる。しかし、これらの利点は、細胞用量が限られていること（すなわち、バンクに保管されているさい帯が小規模であること）により打ち消され、生着遅延または非生着、感染症の増加、入院の長期化および早期死亡という結果を招いている。
【０００９】
同種移植法は、移植前処置（化学療法＋／−放射線）と、これに続く、残存がん細胞を根絶するための幹細胞（移植片）の輸注とからなる。
【００１０】
骨髄および刺激された末梢血幹細胞がＨＬＡの適合する血縁ドナーまたはボランティアの非血縁ドナーから採取されるのに対し、臍帯血（ｕｍｂｉｌｉｃａｌ  ＣＢ）は出産時に提供される。好中球減少症の持続期間は、重症感染症および移植関連死亡のリスクと直接的に相関しており、末梢血の場合が最も短く（１４日間）、骨髄がこれに続く（１９日間）が、ＣＢの場合は最も長い（２６日間）。
【００１１】
同種ＨＳＣ移植に伴う移植関連死亡率は、４０％にもなる。最もよく見られる合併症としては、急性（約５０％）および慢性（約６０％）のＧＶＨＤが挙げられる。ＧＶＨＤは、レシピエントに対してドナー側が起こす免疫反応であり、これにより粘膜（口、眼）、皮膚、肝臓、肺および腸管が高頻度に損傷される。さらに、感染症はきわめてよく見られ、移植片不全（ｇｒａｆｔ  ｆａｉｌｕｒｅ）（生着が認められないこと、約１０％）は、移植片中の幹細胞の不足、および／または、レシピエントの免疫系による移植片破壊が原因で生じる。これらの合併症は、４つの主要因、すなわち、ｉ）移植前処置の強度、ｉｉ）輸注される移植片の種類（骨髄、末梢血またはＣＢ）、ｉｉｉ）ドナーとレシピエントとの間でのＨＬＡ不適合の度合、およびｉｖ）患者の併存疾患、により変化する。ＧＶＨＤは、高用量の免疫抑制薬、例えばコルチコステロイドなどで治療され、平均で４〜５年間の治療を必要とすることが多い。免疫抑制療法がこのような長期にわたって必要になると、感染症、続発性がんおよび薬物関連毒性のリスクはさらに増加し、こうしたリスクのすべてが、患者のクオリティー・オブ・ライフに劇的に影響を及ぼす要因となる。
【００１２】
移植レシピエントは、長期の免疫不全状態にある。初期のＴ細胞回復は、ドナー記憶Ｔ細胞の末梢での拡大に依存する。初期のＴ細胞回復の後、ドナー幹細胞由来のリンパ前駆体の、胸腺におけるナイーブＴ細胞への成熟が続くが、この段階はポリクローナルＴ細胞レパートリーの再構築にとって欠かせないものである。ロバストな胸腺移出が達成できるまで、ＣＢ移植片レシピエントは、ナイーブＴ細胞しかもたない（記憶細胞が存在しない状態で）ことから病原体と戦うことができない、つまり、最初の数カ月間のウイルス感染リスクが増加している。成熟記憶Ｂ細胞の産生には機能的なＣＤ４＋Ｔ細胞が必須であるため、成熟記憶Ｂ細胞はＨＳＣ移植から１〜２年経つまでは完全に再構築された状態にならないのが通常であり、最初の１年間は、液性免疫はレシピエント由来のものが支配的である。
【００１３】
現在、入手可能なＣＢユニットのうち成人にとって十分な細胞用量を有するものは６％しかない。したがって、成人においてはダブルユニットＣＢ移植（ｄｏｕｂｌｅ  ＣＢ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ）が慣例になってきている。移植のしやすさは、さい帯を２ユニット用いることで向上しており、その理由は、最低限必要とされるＴＮＣ（ｔｏｔａｌ  ｎｕｃｌｅａｔｅｄ  ｃｅｌｌ：総有核細胞）用量が、さい帯１ユニットにつき１．５×１０７／ｋｇと低下しているからである。好中球生着は改善されないが、移植片不全のリスクは低減する。移植後早期には、さい帯は両ユニット分とも検出されるが、３カ月後には一方しか残っていない。各ＣＢが免疫応答を開始して他方を排除するので、Ｔリンパ球およびＣＤ３４＋細胞の用量の増加により、どちらのさい帯が生き残るかが決定される。この免疫応答は、重症の急性ＧＶＨＤおよびＨＳＣ破壊の発生率が高くなる原因であり、このことは、より高い細胞用量を輸注しているにもかかわらず生着が遅延する理由を説明している。さらに、高額な費用がダブルユニットＣＢを手の届きにくいものにしている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
したがって、移植片の移植実施後にｉｎ  ｖｉｖｏでＮＫ細胞および／または樹状細胞を刺激する方法が提供されることはきわめて望ましいと考えられる。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
樹状（ＤＣ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、またはそれらの組合せを患者においてｉｎ  ｖｉｖｏで拡大させる方法であって、
ａ）開始時の幹細胞および／または前駆体細胞集団を、少なくとも１つの式Ｉの化合物：
【００１６】
【化１】
2021521262.tif 000003
またはその塩もしくはプロドラッグ
［式中、
各Ｙは、ＮおよびＣＨから独立に選択され、
Ｚは、
−ＣＮ、
−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、または
−ヘテロアリール（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基で置換されていてもよい）
であり、
式中、（Ｒ１）およびＲ３が窒素原子と結合しているとき、（Ｒ１）およびＲ３はその窒素原子と一緒になって、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個または複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい３〜７員の環を形成してもよく、その環は１個または複数個のＲＡまたはＲ４で置換されていてもよく、
Ｗは、
−ＣＮ、
−Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｒ１、
−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１、
−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、
−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
−ＮＲ１Ｓ（Ｏ）２Ｒ１、
−ベンジル（１、２または３個のＲＡまたはＲ１置換基で置換されていてもよい）、
−Ｘ−Ｌ−（Ｘ−Ｌ）ｎ−Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
−Ｘ−Ｌ−（Ｘ−Ｌ）ｎ−ヘテロアリール（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基で置換されていてもよく、置換基はＬおよびヘテロアリール基のいずれかまたは両方に結合している）、
−Ｘ−Ｌ−（Ｘ−Ｌ）ｎ−ヘテロシクリル（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基で置換されていてもよく、置換基はＬおよびヘテロシクリル基のいずれかまたは両方に結合している）、
−Ｘ−Ｌ−（Ｘ−Ｌ）ｎ−アリール（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基で置換されていてもよい）、
−Ｘ−Ｌ−（Ｘ−Ｌ）ｎ−ＮＲ１ＲＡ、または
−（Ｎ（Ｒ１）−Ｌ）ｎ−Ｎ＋Ｒ１Ｒ３Ｒ５Ｒ６−
であり、
式中、ｎは、０、１、２、３、４または５のいずれかに等しい整数であり、
式中、Ｒ１およびＲ３が窒素原子と結合しているとき、Ｒ１およびＲ３はその窒素原子と一緒になって、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個または複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい３〜７員の環を形成してもよく、その環は１個または複数個のＲＡまたはＲ４で置換されていてもよく、
各Ｘは、Ｃ、Ｏ、ＳおよびＮＲ１から独立に選択され、
各Ｌは、独立に、
−Ｃ１〜６アルキレン、
−Ｃ２〜６アルケニレン、
−Ｃ２〜６アルキニレン、
−Ｃ３〜７シクロアルキレン（Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個または複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい）、または
−Ｃ３〜７シクロアルケニレン（Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個または複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい）
であり、
式中、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、シクロアルキレンおよびシクロアルケニレン基は、それぞれ独立に、１個または２個のＲ４またはＲＡ置換基で置換されていてもよく、
Ｒ１は、それぞれ独立に、
−Ｈ、
−Ｃ１〜６アルキル、
−Ｃ２〜６アルケニル、
−Ｃ２〜６アルキニル、
−Ｃ３〜７シクロアルキル、
−Ｃ３〜７シクロアルケニル、
−Ｃ１〜５過フッ素化基、
−ヘテロシクリル、
−アリール、
−ヘテロアリール、または
−ベンジル
であり、
式中、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルケニル、過フッ素化アルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールおよびベンジル基は、それぞれ独立に、１、２または３個のＲＡまたはＲｄ置換基で置換されていてもよく、
Ｒ２は、
−Ｈ、
−Ｃ１〜６アルキル（１個または複数個のＲＡ置換基で置換されていてもよい）、
−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、
−Ｌ−ヘテロアリール（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基で置換されていてもよい）、
−Ｌ−ヘテロシクリル（１個または複数個のＲＡまたはＲ４で置換されていてもよい）、または
−Ｌ−アリール（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基で置換されていてもよい）
であり、
Ｒ３は、それぞれ独立に、
−Ｈ、
−Ｃ１〜６アルキル、
−Ｃ２〜６アルケニル、
−Ｃ２〜６アルキニル、
−Ｃ３〜７シクロアルキル、
−Ｃ３〜７シクロアルケニル、
−Ｃ１〜５過フッ素化基、
−ヘテロシクリル、
−アリール、
−ヘテロアリール、または
−ベンジル
であり、
式中、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、過フッ素化アルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールおよびベンジル基は、それぞれ独立に、１、２または３個のＲＡまたはＲｄ置換基で置換されていてもよく、
Ｒ４は、それぞれ独立に、
−Ｈ、
−Ｃ１〜６アルキル、
−Ｃ２〜６アルケニル、
−Ｃ２〜６アルキニル、
−Ｃ３〜７シクロアルキル、
−Ｃ３〜７シクロアルケニル、
−Ｃ１〜５過フッ素化基、
−ヘテロシクリル、
−アリール、
−ヘテロアリール、または
−ベンジル
であり、
式中、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、過フッ素化アルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールおよびベンジル基は、それぞれ独立に、１、２または３個のＲＡまたはＲｄ置換基で置換されていてもよく、
Ｒ５は、それぞれ独立に、
−Ｃ１〜６アルキル、
−Ｃ１〜６アルキレン−Ｃ２〜６アルケニル（Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個または複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい）、
−Ｃ１〜６アルキレン−Ｃ２〜６アルキニル（Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個または複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい）、
−Ｌ−アリール（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基を含んでいてもよい）、
−Ｌ−ヘテロアリール（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基を含んでいてもよい）、
−Ｃ１〜６アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、
−Ｃ１〜６アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
−Ｃ１〜６アルキレン−ＣＮ、
−Ｃ１〜６アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１Ｒ３（式中、Ｒ１およびＲ３は、窒素原子と一緒になって、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個または複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい３〜７員の環を形成してもよい）、または
−Ｃ１〜６アルキレン−ＯＨ
であり、
Ｒ６は、
−ハロゲン、
−ＯＣ（Ｏ）ＣＦ３、または
−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１
であり、
ＲＡは、それぞれ独立に、
−ハロゲン、
−ＣＦ３、
−ＯＲ１、
−Ｌ−ＯＲ１、
−ＯＣＦ３、
−ＳＲ１、
−ＣＮ、
−ＮＯ２、
−ＮＲ１Ｒ３、
−Ｌ−ＮＲ１Ｒ１、
−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
−Ｓ（Ｏ）２Ｒ４、
−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｒ１、
−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、
−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１、
−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、
−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、
−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、または
−Ｎ３
であり、
Ｒｄは、それぞれ独立に、
−Ｈ、
−Ｃ１〜６アルキル、
−Ｃ２〜６アルケニル、
−Ｃ２〜６アルキニル、
−Ｃ３〜７シクロアルキル、
−Ｃ３〜７シクロアルケニル、
−Ｃ１〜５過フッ素化基、
−ベンジル、または
−ヘテロシクリル
である］
を任意選択で少なくとも１つの細胞拡大因子（ｃｅｌｌ  ｅｘｐａｎｄｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ）と一緒に用いて培養する工程と、
ｂ）該培養された幹細胞および／または前駆体細胞集団を拡大させて移植片を生成する工程と、
ｃ）該患者に該移植片を移植し、それにより、該患者においてＤＣ細胞、ＮＫ細胞、またはそれらの組合せを拡大させる工程と
を含む方法が提供される。
【００１７】
樹状（ＤＣ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、またはそれらの組合せを患者においてｉｎ  ｖｉｖｏで拡大させるための、本明細書に定義の少なくとも１つの化合物を任意選択で少なくとも１つの細胞拡大因子と一緒に用いて培養された、拡大されている幹細胞および／または前駆体細胞の移植片の使用も提供される。
【００１８】
一実施形態において、ＤＣ細胞、ＮＫ細胞、またはそれらの組合せの拡大は、前記患者の免疫応答を刺激する。
【００１９】
別の実施形態において、患者におけるＤＣ細胞、ＮＫ細胞、またはそれらの組合せの拡大は、前記患者における重症の移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、再燃、および／または重症のウイルス感染症をさらに低減させる。
【００２０】
一実施形態において、幹細胞および／または前駆体細胞は、ヒト造血幹細胞（ＨＳＣ）である。
【００２１】
別の実施形態において、造血幹細胞は、臍帯血細胞、動員末梢血細胞または骨髄細胞に由来するものである。
【００２２】
さらなる一実施形態において、造血幹細胞は、ヒトさい帯血細胞に由来するものである。
【００２３】
一実施形態において、幹細胞および／または前駆体細胞は、ＣＤ３４＋、ＣＤ３８＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ１３３および／またはＣＤ４９ｆ＋細胞を得るために精製される。
【００２４】
別の実施形態において、ＣＤ３４＋細胞は、ＥＰＣＲ＋細胞である。
【００２５】
さらなる一実施形態において、ＮＫ細胞は、ＣＤ５６＋またはＮＫＧ２Ａ＋細胞である。
【００２６】
別の実施形態において、ＤＣ細胞は、ＣＤ１１ｃ＋である。
【００２７】
一実施形態において、幹細胞および／または前駆体細胞は、少なくとも１つの細胞拡大因子を用いて培養される。
【００２８】
別の実施形態において、該少なくとも１つの細胞拡大因子は、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、顆粒球・マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（ＦＬＴ３−Ｌ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、またはそれらの組合せである。
【００２９】
さらなる一実施形態において、幹細胞および／または前駆体細胞は、アリール炭化水素受容体（ＡＨＲ）アンタゴニストを用いてさらに培養される。
【００３０】
一実施形態において、ＡＨＲアンタゴニストは、Ｓｔｅｍ  Ｒｅｇｅｎｉｎ１（ＳＲ１）またはＣＨ２２３１９１である。
【００３１】
好ましい一実施形態において、式Ｉの化合物は、
【００３２】
【化２】
2021521262.tif 000004
またはその薬学的に許容される塩である。
【００３３】
別の実施形態において、式Ｉの化合物は、
【００３４】
【化３】
2021521262.tif 000005
の臭化水素酸塩である。
【００３５】
補足的な一実施形態において、式Ｉの化合物は、
【００３６】
【化４】
2021521262.tif 000006
またはその薬学的に許容される塩である。
【００３７】
別の実施形態において、式Ｉの化合物は、
【００３８】
【表１−１】
2021521262.tif 000007
【表１−２】
2021521262.tif 000008
【表１−３】
2021521262.tif 000009
【表１−４】
2021521262.tif 000010
【表１−５】
2021521262.tif 000011
【表１−６】
2021521262.tif 000012
【表１−７】
2021521262.tif 000013
【表１−８】
2021521262.tif 000014
またはその薬学的に許容される塩である。
【００３９】
別の実施形態において、幹細胞および／または前駆体細胞は、バイオリアクターで拡大される。
【００４０】
一実施形態において、患者は、ヒトまたは動物である。
【００４１】
別の実施形態において、動物は、マウスである。
【００４２】
さらなる一実施形態において、患者におけるウイルス感染症を治療する方法、または、患者におけるウイルス感染症を治療するための、本明細書に記載の拡大されている幹細胞および／または前駆体細胞の移植片の使用も包含される。
【００４３】
一実施形態において、ウイルス感染症は、ＣＭＶ感染症、ＥＢＶ感染症またはアデノウイルス膀胱炎である。
【００４４】
別の実施形態において、ＤＣ細胞および／またはＮＫ細胞は、患者の体内に入って１４日で、２１日で、２８日で、５６日で、１００日で、６カ月で、１２カ月で、または１８カ月で、拡大される。
【００４５】
一実施形態において、炎症状態は、患者において制御される。
【００４６】
一実施形態において、移植片は、樹状細胞集団を含む。
【００４７】
別の実施形態において、樹状細胞集団は、ＣＤ８６＋ＣＤ３４＋細胞である。
【００４８】
さらなる一実施形態において、移植片は、４０〜５０％に相当する樹状細胞を含む。
【００４９】
別の実施形態において、移植片は、１／３に相当する未熟樹状細胞を含む。
【００５０】
一実施形態において、移植片は、肥満細胞を含む。
【００５１】
別の実施形態において、移植片は、約１０％に相当する肥満細胞を含む。
【００５２】
好ましい一実施形態において、移植片は、ＦＣＥＲ１＋ＣＤ３４＋細胞、ＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ＋細胞、ＣＤ３４＋ＣＤ８６＋細胞、ＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−細胞およびＣＤ３４−細胞を含む。
【００５３】
次に、添付の図面を参照する。
【図面の簡単な説明】
【００５４】
【図１】ＵＭ１７１が、未分化な樹状細胞前駆体のｅｘ  ｖｉｖｏ拡大を促進させることを示す図である。ここでは、さい帯血由来のＣＤ３４＋細胞を、基剤（ＤＭＳＯ  ０．１％）、ＳＲ１（５００ｎＭ）またはＵＭ１７１（３５ｎＭ）を添加したＨＳＣ拡大培地にて７日間および１４日間培養し、樹状細胞前駆細胞（ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）（ｉＤＣ：ＣＤ３４＋ＣＤ８６＋）の頻度をフロー（ｆｌｏｗ）により評価した。
【図２】ＤＭＳＯ、ＳＲ１またはＵＭ１７１を用いて拡大させ培養したさい帯血サンプル中で同定された細胞集団を示す図であり、移植片の独特の特徴が示されている。
【図３】（Ａ）臨床試験デザインを示す図である。（Ｂ）患者コホートの定義を示す図である。（Ｃ）７０Ｋｇの患者に標準的な選定基準を用いる場合のさい帯血の入手しやすさを示す図である。（Ｄ）コホート２の患者に用いた基準を用いる場合のさい帯血の入手しやすさを示す図である。（Ｅ）Ｈｏｐｉｔａｌ  Ｍａｉｓｏｎｎｅｕｖｅ−Ｒｏｓｅｍｏｎｔにおける履歴データであり、ＣＤ３４細胞用量（ＣＢユニットの解凍後）と好中球生着までの時間との間の関係を示す図である。
【図４】ＵＭ１７１ＣＢ患者におけるＮＫ細胞の生着後の測定値を示す図であり、矢印は、移植後約２カ月時点での測定値を指している。
【図５】（Ａ）生着状態およびキメリズムを示すものであり、１００個の好中球が生着するまでの時間を示す図である。（Ｂ）生着状態およびキメリズムを示すものであり、発熱の消失を示す図である。（Ｃ）生着状態およびキメリズムを示すものであり、ＵＭ１７１拡大ＣＢ細胞（青色）または無操作ＣＢ細胞（緑色）を移植した患者の入院期間を示す図である。（Ｄ）生着状態およびキメリズムを示すものであり、ＵＭ１７１拡大ＣＢを移植した患者におけるさまざまな時点（日）での系統毎のキメリズムを示す図である。（Ｅ）生着状態およびキメリズムを示すものであり、ＵＭ１７１拡大ＣＢを移植した患者と無操作ＣＢを移植した患者との、３カ月および１２カ月時点でのＣＤ４計数値を比較した図である。（Ｆ）生着状態およびキメリズムを示すものであり、ＵＭ１７１拡大ＣＢのレシピエントにおけるＩｇＧレベルを示す図である。対照ＣＢ：無操作のさい帯血。
【図６】ＵＭ１７１患者コホート（左）および同期間ＣＢコホート（ｃｏｎｔｅｍｐｏｒａｒｙ  ＣＢ  ｃｏｈｏｒｔ）（右）におけるＣＢ血液ユニットのＨＬＡ適合度を示す図であり、患者／ＣＢ血液ユニット間で６〜７／８が適合した患者および４〜５／８が適合した患者の割合を示している。
【図７】（Ａ）免疫抑制薬中止の累積発生率を示す図である。（Ｂ）移植関連死亡（ＴＲＭ）の累積発生率を示す図である。（Ｃ）ＵＭ１７１拡大ＣＢコホートおよび無操作ＣＢコホートにおける全生存期間（ＯＳ）のＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ推定値を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００５５】
本開示によれば、ＵＭ１７１またはそのアナログを用いて拡大させたさい帯血移植片の移植後に、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、またはそれらの組合せをｉｎ  ｖｉｖｏで拡大させる方法が提供される。
【００５６】
したがって、患者においてｉｎ  ｖｉｖｏで樹状（ＤＣ）細胞および／またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を拡大させる方法であって、患者に投与される前の段階でＵＭ１７１またはそれに由来するアナログを用いて培養されて拡大された幹細胞および前駆体細胞の移植片を生成する工程を含む方法が提供される。患者における樹状（ＤＣ）細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞集団の拡大または増加は、結果として、移植関連死亡（ＴＲＭ）、重症の移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、再燃、および／または重症のウイルス感染症を低減させる免疫応答の増加をもたらす。
【００５７】
同種造血幹細胞（ＨＳＣ）移植は、血液がん患者を治癒に導く利用可能な最良の治療法である。さい帯血（ＣＢ）は、最も魅力的な、幹細胞の源である。
【００５８】
ＣＤ３４＋細胞のｅｘ  ｖｉｖｏ拡大を促進するプリン誘導体ＳｔｅｍＲｅｇｅｎｉｎ１（ＳＲ１）は、ＨＳＣを拡大させることはできたが、長期ＨＳＣの拡大を再現しないことは不可能であったことは公知である（Ｃｈｅｎら、２０１２、Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．、２６：２４９９〜２５１１）。ＳＲ１に対する大きな懸念は、ＳＲ１がｉｎ  ｖｉｔｒｏで白血病幹細胞の成長を支持する能力をもっていることである（Ｐａｂｓｔら、２０１４、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｔｈｏｄｓ、１１：４３６〜４４２）。
【００５９】
ＣＢ細胞のうちおよそ１％がＣＤ３４表面抗原を発現するが、この表面抗原は、短期または長期造血をもたらすさまざまな能力を有する幹細胞および前駆体細胞の特徴的なサブセットから構成されている。これらのサブセットは、成熟血球産生の早期かつ長期的な回復に、それぞれ異なる形で寄与する。生涯持続する造血再構築をもたらすことができるのは、長期ＨＳＣのみである。ＣＢ由来の短期ＨＳＣ（前駆体細胞）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ拡大は、移植後の好中球回復までの時間を劇的に短縮させる。しかし、今日までに記載されているｅｘ  ｖｉｖｏでの細胞拡大戦略の大半は、長期ＨＳＣを失うという代償を払ってこの効果を達成しており、それにより、持続的な再構築に支障をきたし、晩期移植片不全のリスクを伴う。したがって、これらの戦略の多くは、長期生着を確実にするために、第２のＣＢの輸注を必要とする。きわめて対照的なことに、本明細書に記載および包含されている通り、ＣＢ由来の短期的に再増殖する細胞の増幅（ａｍｐｌｉｆｙｉｎｇ）に使用される分子は、長期的に再増殖する細胞を枯渇させるのではなく同時に拡大させることが可能であり、拡大ＣＢをシングルユニットで用いる道を開くものである。
【００６０】
本明細書に包含されるＵＭ１７１（米国特許第９，４０９，９０６号を参照されたい。同文献の内容は、参照により組み込まれる）は、未分化な細胞に対する活性を有する化合物であり、この活性は、当該化合物が培養系から除去されれば速やかに可逆的経過をたどる。ＵＭ１７１は、成長因子の非存在下で細胞増殖を独立に惹起させることはない。ＵＭ１７１は、有糸分裂を促進するのではなく、細胞分化を妨げるのである。ＵＭ１７１は、フェッドバッチ培養システム（ｆｅｄ−ｂａｔｃｈ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｓｙｓｔｅｍ）で試験した。成熟細胞がＣＤ３４＋ＣＢ培養系中で生じると、その成熟細胞により、サイトカインに対する負の調節因子（ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）がいくつか放出される（Ｃｓａｓｚａｒら、２０１２、Ｃｅｌｌ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ、１０：２１８〜２２９）。本明細書に包含されるフェッドバッチは、内因性に産生される負の調節因子の低減をもたらす。このシステムは、必要とする培地がはるかに少なく（培養系は＜１リットルである。これに対し大半の試験では１０リットルである）、ＣＢ由来のＨＳＣの維持をより良好に支持する。７日間培養は、細胞の質を最大化する上で最適である。重要なことは、フェッドバッチ培養は細胞操作を必要としない閉鎖システムであるため、汚染リスクが最小化され、細胞製品の製造への移行が容易になることである。
【００６１】
本明細書に包含されているように、幹細胞および／または前駆体細胞の拡大は、前記細胞の拡大用の培養細胞などの生物学的に活性な環境を支持する任意の製造または設計された装置またはシステムからなるバイオリアクターにおいて実施することができる。
【００６２】
したがって、さい帯血移植片の移植後に、本明細書に定義の一般式Ｉ：
【００６３】
【化５】
2021521262.tif 000015
の化合物またはその塩もしくはプロドラッグ
［式中、
各Ｙは、ＮおよびＣＨから独立に選択され、
Ｚは、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、または−ヘテロアリール（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基で置換されていてもよい）であり、式中、（Ｒ１）およびＲ３が窒素原子と結合しているとき、（Ｒ１）およびＲ３はその窒素原子と一緒になって、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個または複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい３〜７員の環を形成してもよく、その環は１個または複数個のＲＡまたはＲ４で置換されていてもよく、
Ｗは、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｒ１、−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、−ＮＲ１Ｓ（Ｏ）２Ｒ１、−ベンジル（１、２または３個のＲＡまたはＲ１置換基で置換されていてもよい）、−Ｘ−Ｌ−（Ｘ−Ｌ）ｎ；−Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、−Ｘ−Ｌ−（Ｘ−Ｌ）ｎ−ヘテロアリール（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基で置換されていてもよく、置換基はＬおよびヘテロアリール基のいずれかまたは両方に結合している）、−Ｘ−Ｌ−（Ｘ−Ｌ）ｎ−ヘテロシクリル（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基で置換されていてもよく、置換基はＬおよびヘテロシクリル基のいずれかまたは両方に結合している）、−Ｘ−Ｌ−（Ｘ−Ｌ）ｎ−アリール（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基で置換されていてもよい）、−Ｘ−Ｌ−（Ｘ−Ｌ）ｎ−ＮＲ１ＲＡ、または−（Ｎ（Ｒ１）−Ｌ）ｎ−Ｎ＋Ｒ１Ｒ３Ｒ５Ｒ６−であり、
式中、ｎは、０、１、２、３、４または５のいずれかに等しい整数であり、
式中、Ｒ１およびＲ３が窒素原子と結合しているとき、Ｒ１およびＲ３はその窒素原子と一緒になって、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個または複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい３〜７員の環を形成してもよく、その環は１個または複数個のＲＡまたはＲ４で置換されていてもよく、
各Ｘは、Ｃ、Ｏ、ＳおよびＮＲ１から独立に選択され、
Ｌは、それぞれ独立に、−Ｃ１〜６アルキレン、−Ｃ２〜６アルケニレン、−Ｃ２〜６アルキニレン、−Ｃ３〜７シクロアルキレン（Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個または複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい）、または−Ｃ３〜７シクロアルケニレン（Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個または複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい）であり、式中、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、シクロアルキレンおよびシクロアルケニレン基は、それぞれ独立に、１個または２個のＲ４またはＲＡ置換基で置換されていてもよく、
Ｒ１は、それぞれ独立に、−Ｈ、−Ｃ１〜６アルキル、−Ｃ２〜６アルケニル、−Ｃ２〜６アルキニル、−Ｃ３〜７シクロアルキル、−Ｃ３〜７シクロアルケニル、−Ｃ１〜５過フッ素化基、−ヘテロシクリル、−アリール、−ヘテロアリール、または−ベンジルであり、式中、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルケニル、過フッ素化アルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールおよびベンジル基は、それぞれ独立に、１、２または３個のＲＡまたはＲｄ置換基で置換されていてもよく、
Ｒ２は、−Ｈ、−Ｃ１〜６アルキル（１個または複数個のＲＡ置換基で置換されていてもよい）、−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、−Ｌ−ヘテロアリール（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基で置換されていてもよい）、−Ｌ−ヘテロシクリル（１個または複数個のＲＡまたはＲ４で置換されていてもよい）、または−Ｌ−アリール（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基で置換されていてもよい）、であり、
Ｒ３は、それぞれ独立に、−Ｈ、−Ｃ１〜６アルキル、−Ｃ２〜６アルケニル、−Ｃ２〜６アルキニル、−Ｃ３〜７シクロアルキル、−Ｃ３〜７シクロアルケニル、−Ｃ１〜５過フッ素化基、−ヘテロシクリル、−アリール、−ヘテロアリール、または−ベンジルであり、式中、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、過フッ素化アルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールおよびベンジル基は、それぞれ独立に、１、２または３個のＲＡまたはＲｄ置換基で置換されていてもよく、
Ｒ４は、それぞれ独立に、−Ｈ、−Ｃ１〜６アルキル、−Ｃ２〜６アルケニル、−Ｃ２〜６アルキニル、−Ｃ３〜７シクロアルキル、−Ｃ３〜７シクロアルケニル、−Ｃ１〜５過フッ素化基、−ヘテロシクリル、−アリール、−ヘテロアリール、または−ベンジルであり、式中、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、過フッ素化アルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールおよびベンジル基は、それぞれ独立に、１、２または３個のＲＡまたはＲｄ置換基で置換されていてもよく、
Ｒ５は、それぞれ独立に、−Ｃ１〜６アルキル、−Ｃ１〜６アルキレン−Ｃ２〜６アルケニル（Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個または複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい）、−Ｃ１〜６アルキレン−Ｃ２〜６アルキニル（Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個または複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい）、−Ｌ−アリール（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基を含んでいてもよい）、−Ｌ−ヘテロアリール（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基を含んでいてもよい）、−Ｃ１〜６アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ１〜６アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、−Ｃ１〜６アルキレン−ＣＮ、−Ｃ１〜６アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１Ｒ３（式中、Ｒ１およびＲ３は、窒素原子と一緒になって、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個または複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい３〜７員の環を形成してもよい）、または−Ｃ１〜６アルキレン−ＯＨであり、
Ｒ６は、ハロゲン、−ＯＣ（Ｏ）ＣＦ３、または−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１であり、
ＲＡは、それぞれ独立に、−ハロゲン、−ＣＦ３、−ＯＲ１、−Ｌ−ＯＲ１、−ＯＣＦ３、−ＳＲ１、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＮＲ１Ｒ３、−Ｌ−ＮＲ１Ｒ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ４、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｒ１、−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１、−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）Ｒ３、または−Ｎ３
であり、
Ｒｄは、それぞれ独立に、−Ｈ、−Ｃ１〜６アルキル、−Ｃ２〜６アルケニル、−Ｃ２〜６アルキニル、−Ｃ３〜７シクロアルキル、−Ｃ３〜７シクロアルケニル、−Ｃ１〜５過フッ素化基、−ベンジル、または−ヘテロシクリルである］
を用いて、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、またはそれらの組合せをｉｎ  ｖｉｖｏで拡大させる方法が包含される。
【００６４】
一実施形態において、Ｚは、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、または−ヘテロアリール（１個もしくは複数個のＲＡもしくはＲ１置換基で置換されていてもよい）であり、Ｒ２は、Ｈ、−Ｃ１〜６アルキル（１個もしくは複数個のＲＡ置換基で置換されていてもよい）、または−Ｌ−アリール（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基で置換されていてもよい）であり、Ｗは、−Ｎ（Ｒ１）Ｒ３であり、式中、Ｒ１は、ＲＡにより置換されているＣ３〜７シクロアルキルであり、Ｒ３は、Ｈである。
【００６５】
一実施形態において、Ｚは、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ１〜４アルキルまたは５員環ヘテロアリールであり、このヘテロアリールは２〜４個のヘテロ原子（ＮまたはＯ）を含み、Ｒ２は、Ｈ、または−Ｌ−アリール（ハロゲンにより置換されていてもよい）、ＯＲ１、Ｃ１〜６アルキル（ＲＡにより置換されていてもよい）、−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、−ヘテロシクリル、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、またはＣ２〜６アルキニルであり、Ｗは、−Ｎ（Ｒ１）Ｒ３であり、式中、Ｒ１は、ＲＡにより置換されているシクロヘキシルであり、Ｒ３は、Ｈである。
【００６６】
一実施形態において、Ｚは、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、テトラゾールまたはオキサジアゾールである。
【００６７】
一実施形態において、Ｒ２は、Ｈ、または−ＣＨ２−アリール（ハロゲンにより置換されていてもよい）、ＯＲ１、Ｃ１〜６アルキル（ＲＡにより置換されていてもよい）、−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、−ヘテロシクリル、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、またはＣ２〜６アルキニルであり、式中、アリールは、フェニルである。
【００６８】
一実施形態において、Ｒ２は、Ｈ、−Ｃ１〜６アルキレン−ヘテロアリール、または−Ｃ１〜６アルキレン−アリール（１個または複数個のＲＡまたはＲ４置換基で置換されていてもよい）である。
【００６９】
別の実施形態によれば、化合物は、式Ｉ、ＩＡまたはＩＩＡの化合物であり、式中、Ｚは、ＣＯ２Ｍｅまたは２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イルであり、
【００７０】
Ｒ２は、ベンジルまたはＨであり、
【００７１】
Ｗは、ＮＨ−Ｌ−Ｎ（Ｒ１）Ｒ３であり、式中、Ｌは、Ｃ２〜４アルキレンまたはＣ３〜７シクロアルキレンであり、Ｒ１およびＲ３は、Ｃ１〜４アルキルもしくはＨであるか、または、Ｒ１およびＲ３は、それらが結合している窒素原子と一緒になって３〜７員の環（Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個または複数個の他のヘテロ原子を含んでいてもよい）を形成し、その環は１個または複数個のＲＡまたはＲ４で置換されていてもよい。
【００７２】
別の実施形態によれば、化合物は、式Ｉの化合物であり、式中、Ｗは、
【００７３】
【化６】
2021521262.tif 000016
である。
【００７４】
本明細書において開示する式Ｉの化合物（以下に記載の代表的な化合物を含む）は、その調製および特徴付けを含め、参照によりその内容の全体が組み込まれるＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１３／１１０１９８号、ならびに、後述する合成法のセクションに記載されている。
【００７５】
本明細書において、「アルキル」という用語は、特定数の炭素原子を有する分枝鎖および直鎖両方の飽和脂肪族炭化水素基を含むものとする。例えば、Ｃ１〜Ｃ６アルキルにおけるＣ１〜Ｃ６は、直鎖状または分枝状の飽和配列の１、２、３、４、５または６個の炭素を有する基を含むと定義される。上記定義のＣ１〜Ｃ６アルキルの例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ｉ−ブチル、ペンチル、およびヘキシルなどであるが、これらに限定されない。
【００７６】
本明細書において、「シクロアルキル」という用語は、特定数の炭素原子を基中に有する単環式飽和脂肪族炭化水素基を意味するものとする。例えば、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルにおけるＣ３〜Ｃ７は、単環式飽和配列の３、４、５、６または７個の炭素を有する基を含むと定義される。上記定義のＣ３〜Ｃ７シクロアルキルの例は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルおよびシクロヘプチルなどであるが、これらに限定されない。
【００７７】
本明細書において、「アルケニル」という用語は、特定数の炭素原子を基中に有し、その炭素原子のうちの少なくとも２個が二重結合によって互いに結合され、ＥまたはＺの位置化学のいずれかおよびそれらの組合せを有する不飽和直鎖または分枝鎖炭化水素基を意味するものとする。例えば、Ｃ２〜Ｃ６アルケニルにおけるＣ２〜Ｃ６は、直鎖状または分枝状配列の２、３、４、５または６個の炭素を有し、その炭素原子のうちの少なくとも２個が二重結合によって一緒に結合されている基を含むと定義される。Ｃ２〜Ｃ６アルケニルの例は、エテニル（ビニル）、１−プロペニル、２−プロペニル、１−ブテニルなどであるが、これらに限定されない。
【００７８】
本明細書において、「アルキニル」という用語は、特定数の炭素原子を基中に有し、少なくとも２個の炭素原子が三重結合によって一緒に結合されている不飽和直鎖炭化水素基を意味するものとする。例えば、Ｃ２〜Ｃ４アルキニルは、２、３または４個の炭素原子を鎖中に有し、その炭素原子のうちの少なくとも２個が三重結合によって一緒に結合されている基を含むと定義される。そのようなアルキニルの例は、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニルなどであるが、これらに限定されない。
【００７９】
本明細書において、「シクロアルケニル」という用語は、特定数の炭素原子を基中に有する単環式飽和脂肪族炭化水素基を意味するものとする。例えば、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルケニルにおけるＣ３〜Ｃ７は、単環式配列の３、４、５、６または７個の炭素を有する基を含むと定義される。上記定義のＣ３〜Ｃ７シクロアルケニルの例は、シクロペンテニル、シクロヘキセニルなどであるが、これらに限定されない。
【００８０】
本明細書において、「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を意味するものとする。
【００８１】
本明細書において、「ハロアルキル」という用語は、上記定義のアルキルにおいて、各水素原子がハロゲン原子によって逐次的に置き換えられていてもよいアルキルを意味するものとする。ハロアルキルの例は、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２およびＣＦ３などであるが、これらに限定されない。
【００８２】
本明細書において、「アリール」という用語は、単独でもまたは別の基との組合せでも、６個の炭素原子を含有する炭素環式芳香族単環基を意味し、芳香族、飽和または不飽和でありうる第二の５または６員炭素環式基にさらに縮合されていてもよい。アリールの例は、フェニル、インダニル、１−ナフチル、２−ナフチル、テトラヒドロナフチルなどであるが、これらに限定されない。アリールは、シクロアルキル環または芳香環いずれかの適切な位置で別の基に接続されていてもよい。
【００８３】
本明細書において、「ヘテロアリール」という用語は、１０個までの原子からなる単環式または二環式環系であって、少なくとも１つの環は芳香族であり、Ｏ、ＮおよびＳからなる群から選択される１個から４個までのヘテロ原子を含有する単環式または二環式環系を意味するものとする。ヘテロアリールは、環炭素原子か、または、ヘテロ原子のうちの１つかを介して結合していることがある。ヘテロアリールの例は、チエニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾ［ｂ］チエニル、フリル、ベンゾフラニル、ピラニル、イソベンゾフラニル、クロメニル、キサンテニル、２Ｈ−ピロリル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、インドリジニル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、インドリル、インダゾリル、プリニル、４Ｈ−キノリジニル、イソキノリル、キノリル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、イソチアゾリル、イソクロマニル、クロマニル、イソキサゾリル、フラザニル、インドリニル、イソインドリニル、チアゾロ［４，５−ｂ］−ピリジン、テトラゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、チエニル、ピリミドインドリル、ピリドインドリル、ピリドピロロピリミジニル、ピロロジピリジニルおよびフルオロセイン誘導体などであるが、これらに限定されない。
【００８４】
本明細書において、「複素環」、「複素環式」または「ヘテロシクリル」という用語は、Ｏ、ＮおよびＳからなる群から選択される１個から４個までのヘテロ原子を含有する３、４、５、６または７員の非芳香族環系を意味するものとする。複素環の例は、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、ピペリジル、３，５−ジメチルピペリジル、ピロリニル、ピペラジニル、イミダゾリジニル、モルホリニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、テトラヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−２（３Ｈ）−オン、ジアジリニルなどであるが、これらに限定されない。環への結合は、例えば以下に記載されている環の窒素原子または炭素原子におけるものでありうる。
【００８５】
【化７】
2021521262.tif 000017
【００８６】
本明細書において、「１個または複数個の置換基で置換されていてもよい」という用語またはその等価用語である「少なくとも１個の置換基で置換されていてもよい」とは、その後に記載されている状況の事象が起こっても起こらなくてもよいこと、ならびに、その記載には、事象または状況が起こる場合およびそれが起こらない場合が含まれることを意味するものとする。定義は、０から５個までの置換基を意味するものとする。
【００８７】
本明細書において、「対象」または「患者」という用語は、ヒトおよびヒト以外の哺乳動物、例えば霊長類、ネコ、イヌ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ウサギ、ラット、マウスなどを意味するものとする。
【００８８】
置換基自体が本明細書に記載の合成方法に合わない場合には、その置換基を、これらの方法で用いられる反応条件に対して安定な適切な保護基（ＰＧ）によって保護できる。保護基は、所望の中間体または標的化合物を得るために、方法の反応順序の適切な時点で除去できる。適切な保護基およびそのような適切な保護基を用いてさまざまな置換基を保護および脱保護するための方法は当業者には周知である。その例は、Ｔ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｗｕｔｓ、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」（第４版）、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、ＮＹ（２００７）に見出すことができ、同文献は参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。全体を通して使用されている保護基の例は、Ｆｍｏｃ、Ｂｎ、Ｂｏｃ、ＣＢｚおよびＣＯＣＦ３などであるが、これらに限定されない。場合によっては、置換基を、本明細書に記載の方法に用いられている反応条件下で反応性であるように特に選択することもある。こうした状況下では、反応条件が、選択された置換基を、本明細書に記載の方法における中間体化合物に有用であるか、または標的化合物における所望の置換基であるかのいずれかである別の置換基に変換させる。
【００８９】
本明細書において、「薬学的に許容される塩」という用語は、酸付加塩および塩基付加塩の両方を意味するものとする。
【００９０】
本明細書において、「薬学的に許容される酸付加塩」という用語は、生物学的にまたはその他の点で有害ではない遊離塩基の生物学的有効性および性質を保持している酸付加塩を意味するものとし、そのような酸付加塩は、無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸など、および有機酸、例えば、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸などを用いて形成される。
【００９１】
本明細書において、「薬学的に許容される塩基付加塩」という用語は、生物学的にまたはその他の点で有害ではない遊離酸の生物学的有効性および性質を保持している塩基付加塩を意味するものとする。このような塩基付加塩は、遊離酸に無機塩基または有機塩基が付加されることにより調製される。無機塩基から誘導された塩は、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウム塩などであるが、これらに限定されない。有機塩基から誘導された塩は、第一級、第二級、および第三級アミン、天然置換アミンを含む置換アミン、環状アミンおよび塩基性イオン交換樹脂、例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、２−ジメチルアミノエタノール、２−ジエチルアミノエタノール、ジシクロヘキシルアミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、Ｎ−エチルピペリジン、ポリアミン樹脂などの塩を含むが、これらに限定されない。
【００９２】
本明細書に包含される化合物またはその薬学的に許容される塩は、１つまたは複数の不斉中心、キラル軸およびキラル面を含有しうることから、エナンチオマー、ジアステレオマーおよびその他の立体異性体を生じうる。それらは、例えば（Ｒ）−もしくは（Ｓ）−、または、アミノ酸の場合は（Ｄ）−もしくは（Ｌ）−など、絶対立体化学の観点から定義してもよい。本発明は、すべてのそのような可能な異性体のほか、それらのラセミ体および光学的に純粋な形態も含むものとする。光学活性（＋）および（−）、（Ｒ）−および（Ｓ）−、または（Ｄ）−および（Ｌ）−異性体は、キラルシントンもしくはキラル試薬を用いて調製することも、または、逆相ＨＰＬＣなどの従来技術を用いて分割することもできる。ラセミ混合物を調製し、その後で個々の光学異性体に分離することもできるが、これらの光学異性体をキラル合成によって調製することもできる。エナンチオマーは、当業者に公知の方法により分割でき、例えば、ジアステレオマー塩を形成し、次いでそれを結晶化、気−液または液体クロマトグラフィー、一方のエナンチオマーとエナンチオマー特異的試薬との選択的反応によって分離することが可能である。当業者には、所望のエナンチオマーが分離技術によって別の化学物質に変換された場合、所望のエナンチオマー形を形成するためには追加の工程を次いで行う必要があることは理解されよう。代替的には、特定のエナンチオマーは、光学活性試薬、基質、触媒もしくは溶媒を用いる不斉合成によって、または、一方のエナンチオマーを不斉転換により他方に変換させることによって合成することもできる。
【００９３】
本明細書に包含される一定の化合物は、エピマーの混合体として存在することもある。エピマーは、それぞれの化合物に存在する２つ以上の立体中心のうちの１カ所のみで反対の立体配置を有するジアステレオ異性体を意味する。
【００９４】
本明細書に包含される化合物は双性イオン形で存在することもあり、本発明はこれらの化合物の双性イオン形およびその混合物を含む。
【００９５】
さらに、本明細書に包含される化合物は、水和物形および無水物形でも存在しうる。本明細書に記載のいずれかの式の化合物の水和物も含まれる。さらなる一実施形態において、本明細書に記載のいずれかの式による化合物は、一水和物である。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の化合物は、約１０％以下、約９％以下、約８％以下、約７％以下、約６％以下、約５％以下、約４％以下、約３％以下、約２％以下、約１％以下、約０．５％以下、約０．１％以下（重量比）の水を含む。他の実施形態において、本明細書に記載の化合物は、約０．１％以上、約０．５％以上、約１％以上、約２％以上、約３％以上、約４％以上、約５％以上、または約６％以上（重量比）の水を含む。
【００９６】
本化合物をプロドラッグの形態で調製する、精製するおよび／または取り扱うことが便利であるまたは望ましい場合がある。したがって、本明細書において「プロドラッグ」という用語は、代謝されると（例えばｉｎ  ｖｉｖｏで）所望の活性化合物を生じる化合物に関係する。典型的には、プロドラッグは不活性である、または所望の活性化合物よりも低活性であるが、有利な取扱い、投与または代謝特性をもたらしうる。特に明記しない限り、特定の化合物への言及には、そのプロドラッグも含まれる。
【００９７】
一実施形態において、式Ｉの化合物、より詳細にはＵＭ１７１または誘導体は、単球由来のＡＭＬ細胞系を未熟な、さらには成熟した機能的ＤＣに分化させるために、単独で、またはＡＨＲと組み合わせて、使用することができる。
【００９８】
ＵＭ１７１は、以下の構造の通りである。
【００９９】
【化８】
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【０１００】
したがって、以下の化合物も包含される。
【０１０１】
【表２−１】
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【表２−２】
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【表２−３】
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【表２−４】
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【表２−５】
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【表２−６】
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【表２−７】
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【表２−８】
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【表２−９】
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【実施例】
【０１０２】
フェッドバッチシステム中のＵＭ１７１は、すべてのＨＳＣを包含する重要な亜集団であるＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−細胞の有意な拡大をもたらし、これには、長期的に再増殖する細胞（移植実施の２０〜３０週間後にＮＳＧマウスを再構築する能力の有無により決まる）、および、好中球生着までの時間を決定するＣＦＵ−ＧＥＭＭ（顆粒球・赤血球・単球・巨核球コロニー形成ユニット（ｃｏｌｏｎｙ  ｆｏｒｍｉｎｇ  ｕｎｉｔ−ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ，  ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ，  ｍｏｎｏｃｙｔｅ  ａｎｄ  ｍｅｇａｋａｒｙｏｃｙｔｅ））前駆体などの短期的に再増殖する細胞が含まれる。ＣＤ３４＋ＣＤ４５ＲＡ−、および、ＣＤ３４＋以外の表現型は、ＨＳＣの拡大をモニタリングするための最良の代替パラメーター（ｓｕｒｒｏｇａｔｅ  ｐａｒａｍｅｔｅｒ）である。ＤＭＳＯを用いたフェッドバッチシステムで拡大に供されている細胞は、１２日後には、ＣＤ３４＋の発現率が１００％から１０％未満に低下している成熟細胞に分化する。
【０１０３】
図１でわかるように、ヒトＣＤ３４＋前駆体をさい帯血サンプルから精製し、ＵＭ１７１を用いて２週間培養した場合、前記化合物は、未分化な樹状細胞前駆体のｅｘ  ｖｉｖｏでの富化を促進し、例としてＳＲ１と比較すると、結果として新しい移植片をもたらす（図２）。他の分子（ＳＲ１など）に曝露された際に拡大および発生する細胞集団は、ＵＭ１７１を用いた場合に得られる細胞集団とは異なる。樹状細胞の集団（ＣＤ８６＋ＣＤ３４＋）は、ＵＭ１７１拡大さい帯血（ＵＭ１７１  ｅｘｐａｎｄｅｄ  ｃｏｒｄ  ｂｌｏｏｄ）中の移植片の４０〜５０％を占めるが、ＳＲ１拡大さい帯血中に占める割合は５％未満であり、無処置のさい帯血中では検出できない。ＵＭ１７１処置は移植片組成を劇的に変化させ、未熟樹状細胞を５００倍増加させることとなった。ＦｃｅＲ１Ａおよびｃ−Ｋｉｔを発現する肥満細胞もＵＭ１７１曝露により選択的に増幅され、移植片のおよそ１０％を占めた（拡大率は＞８０００倍）。
【０１０４】
ＵＭ１７１／フェッドバッチに備わる、短期ＨＳＣおよび長期ＨＳＣを先例のないレベル（拡大率＞１０００倍）にまで拡大させる能力は、迅速で持続的な生着をもたらす。安全性、実現可能性、患者における生着および免疫再構築について、ここで説明する。
【０１０５】
２２名の患者からなるコホートを対象に、ＵＭ１７１／フェッドバッチシステムを用いて得た拡大ＣＢユニットが、好中球回復＜２１日での持続的な生着をもたらす可能性について試験した。用量の減量は、ＣＤ３４＋の輸注用量と臨床的に許容される２１日時点以内の好中球回復との間の強い相関を考慮に入れるＣｏｘモデリングに基づくＷａｌｄ検定によって進めた。安全上の理由から、最低限、ｉ）５×１０５／ｋｇのＣＤ３４＋生細胞、およびｉｉ）１×１０６／ｋｇのＣＤ３＋生Ｔ細胞を輸注しなければならない。これらの値を実現できなかった、または出荷基準を満たしていない場合には、２回目のＣＢを注入した（図３Ａ）。
【０１０６】
コホートの説明および拡大前のＣＢ選定基準は、以下の通りである：
コホート１：ＴＮＣ≧２．０×１０７／ｋｇおよびＣＤ３４＋≧１．０×１０５／ｋｇ、
コホート２：ＴＮＣ≧１．５×１０７／ｋｇおよびＣＤ３４＋≧０．５×１０５／ｋｇ、ならびに
コホート３：ＴＮＣ≧１．２５×１０７／ｋｇおよびＣＤ３４＋≧０．２５×１０５／ｋｇ。
コホート１からコホート２へ移るには、最低３名の患者が、解凍時点でＣＤ３４＋を＜２．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｋｇ有するシングルユニット分のＵＭ１７１拡大ＣＢを輸注してから１８日以内に生着を得なければならないこととした。コホート２からコホート３へ移るには、最低３名の患者が、解凍時点でＣＤ３４＋を＜１．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｋｇ有するシングルユニット分のＵＭ１７１拡大ＣＢを輸注してから１８日以内に生着を得なければならないこととした（図３Ｂ）。コホート２では、バンクに保管されているＣＢユニットの４７％を利用できるようになったが、これに対し、無拡大のＣＢを用いた場合は、わずか５％であった（図３Ｃおよび図３Ｄ）。
【０１０７】
好中球生着と、輸注したＣＤ３４＋生細胞の用量との間の強い関係に基づいて、患者の小規模コホート内でＣＤ３４＋細胞用量の減量が安全に臨床的に達成可能であるかどうかを推定することができる。例えば、３×１０５／ｋｇを超えるＣＤ３４＋生細胞の細胞用量ではきわめて速やかな生着が予測される一方、０．５×１０５／ｋｇ未満のレベルでは、生着は遅くなる（図３Ｅ）。
【０１０８】
これ以降、２２名の患者（１〜２２の番号を付けた）は、シングルユニット分のＵＭ１７１さい帯の輸注を受けた（Ｎ＝２２）。追跡中央値は、１８カ月である（患者１〜２２について１〜２８カ月の幅がある）。結果は、無操作のさい帯血を同じ施設で連続移植された患者（対照ＣＢ）と比較した。≧１×１０５ｃｅｌｌｓ／ｋｇのＣＤ３４＋生細胞の輸注で２１日以内での好中球生着が確認されたことから、この量で輸注を行った（図３Ｅ）。加えて、今回の治験に参加している患者と同じ、ＡＴＧなしの移植前処置を受けたＣＢ単独対照は、対照群に含めた。
【０１０９】
ＣＢ選定プロセスは、ばらつきを回避するために標準化した。試験のために選定したＣＢを、患者がプロトコールに準拠しない場合に選定したＣＢ（複数）と比較した。これにより、ＨＬＡ適合度の改善、およびダブルユニットＣＢの必要性の減少を実証することが可能になった。
【０１１０】
拡大用のＣＢは、購入し、製造センターに送った（最初の１０名の患者用のＦＨＣＲＣ、および、次の１５名の患者用のＣＥＴＣ）。ＣＢを解凍し、ＣＤ３４＋細胞の選定に供した。ＣＤ３４＋細胞は、成長因子を用いてフェッドバッチで７日間培養し、次いでこれを洗浄し凍結保存したものを移植センターに送った。ＣＤ３４−細胞は、凍結保存し、移植時に患者に輸注した。すべての細胞製品は、工程毎に生存能および表現型についてアセスメントし、出荷基準には、無菌状態、マイコプラズマ、エンドトキシン、ＣＤ３４＋拡大率最低１０倍、および生存率＞７０％が含まれた。
【０１１１】
患者は、所定の骨髄破壊的前処置を受けた（Ｂａｒｋｅｒら、２００５、Ｂｌｏｏｄ、１０５：１３４３〜１３４７；Ｏｒａｎら、２００１、Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｂｌｏｏｄ  ａｎｄ  ｍａｒｒｏｗ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ：Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｂｌｏｏｄ  ａｎｄ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、１７：１３２７〜１３３４）。移植当日に拡大ＣＢを輸注し、ＣＤ４製品は翌日輸注した。ＧＶＨＤ予防薬は、ミコフェノール酸モフェチルおよびシクロスポリンで構成されていた。予想外の合併症が生じていないことを確認するために、患者を最低３年間追跡する。患者は、標準化された支持療法を受けている。
【０１１２】
下記の表１でわかるように、細胞数は、移植片の移植実施後１４、２１、２８、５６、１００日目、６カ月目および１２カ月目に測定した。抗体のパネルを選んで、骨髄系統およびリンパ系統の生着をどちらも評価できるように測定した。具体的には以下である：
−ＣＤ４５＋ＣＤ３＋は、リンパＴ細胞である
−ＣＤ５６＋ＮＫＰ４６＋またはＮＫＧ２Ａ＋は、公知のＮＫ細胞である。
【０１１３】
表１は、血液１μｌ当たりで測定した細胞の数をμｌ／血液±５％で表したものである。
【０１１４】
【表３】
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【０１１５】
見てわかるように、ＮＫ細胞の急増（ｆｌａｒｅ）または拡大が、移植実施後２１日目と、１２カ月時点で初期の数に戻ったときとの間で、患者においてｉｎ  ｖｉｖｏで測定された。図４でわかるように、患者において測定されたＮＫ細胞の拡大の程度は、生着後２カ月時点（図４の矢印を参照されたい）の方が、これまでに報告されているデータより有意に高い（Ｌｕｃｃｈｉｎｉら、２０１５、Ｃｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ、１７：７１１〜７２２を参照されたい）。
【０１１６】
樹状細胞の２つのサブセットであるＣＤ１１ｃ＋ＣＤ１４＋細胞およびＣＤ１１ｃ＋ＣＤ１４−細胞のレベルを測定すると、同様の急増または拡大が観察される（表２）。
【０１１７】
【表４】
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【０１１８】
ＵＭ１７１拡大細胞を移植した患者において測定された、ナチュラルキラー細胞および樹状細胞のｉｎ  ｖｉｖｏでの急増は、免疫抑制活性を有し、ＧＶＨ反応を防止し、移植片寛容を可能にする。免疫細胞回復は、ＵＭ１７１拡大さい帯を用いた場合の方が早く、このことは、造血細胞移植後（ＨＣＴ後）感染症および再燃を減少させるために重要である。したがって、ＵＭ１７１は、炎症促進応答および抗炎症応答を調整し炎症状態の制御を助けることにより、ＨＳＣおよび前駆体細胞の拡大を促進する。
【０１１９】
好中球回復の累積発生率は１００％であり、好中球が１００個になるまでの時間中央値および５００個になるまでの時間中央値はそれぞれ、９．５（８〜２３）日および１８（１０〜３０）日であった（図５Ａ）。対照ＣＢでは、好中球が１００個になるまでの時間中央値は１１．５日であったが、好中球が５００個になるまでの時間は、１９日であった。興味深いことに、好中球１００個を達成することは、ＣＤ３４細胞用量とは無関係であった。晩期移植片不全は一例も生じず、ほぼすべての患者は、移植後６カ月および１２カ月時点で血小板が≧１００個、好中球が≧１５００個、およびヘモグロビンが≧１００個になっていた。迅速な生着は、ＵＭ１７１患者において、移植実施後の発熱の消失を早め、入院期間を短期化させる結果をもたらした（図５Ｂおよび図５Ｃ）。
【０１２０】
さまざまな細胞集団、特に、ＣＤ３、ＣＤ５６、ＣＤ１９、ＣＤ１４およびＣＤ３３のキメリズム解析から、患者は、すべての細胞系においてドナー生着率１００％を速やかに達成したことが明らかになった（図５Ｄ）。
【０１２１】
１０カ月超に及ぶ追跡の後、患者１６名のうち２名のみにグレードＩＩＩの急性ＧＶＨＤが認められ（どちらもステロイドに迅速に応答した）、中等症から重症の慢性ＧＶＨＤは一例も認められなかったと報告されている。興味深いことに、ウイルス感染性の合併症（例えば、ＣＭＶ、ＥＢＶ、アデノウイルス膀胱炎）はほとんど認められず、これらの患者における免疫応答がロバストであることが示された。ＥＢＶウイルス血症（ＥＢＶ  ｖｉｒｅｍｉａ）の自然消失が、移植実施前から感染していた患者３名のうち２名において認められた（表３）。
【０１２２】
【表５】
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【０１２３】
したがって、１１名の患者はＣＭＶ血清学的検査において陽性であり、６名は治療を行う必要があるウイルス血症を発症したが、ＣＭＶ病を生じた例はなかった。Ｄ＋２５より前に生じているアデノウイルス膀胱炎早期発症の２例は、シドフォビル静脈内投与による治療を行う必要があった。３名の患者は、ＥＢＶウイルス血症の治療のために、リツキシマブの投与を受けた。ＰＴＬＤの発症例はなかった。ニューモシスチス肺炎（ＰＪＰ）が２例生じ、１例目の患者は、＞２カ月にわたって予防を行ったためにノンコンプライアンスであり、２例目の患者は、アトバコン耐性ＰＪＰが発生していた施設において、アトボコン（ａｔｏｖｏｑｕｏｎｅ）予防薬を使用中であった。皮節性の帯状疱疹が２例あったが、どちらも予防薬を休薬中であった。侵襲性真菌感染症、トキソプラズマ症またはＨＨＶ６感染症は一例も確認されなかった。３、６および１２カ月時点でのＣＤ４／μｌ中央値は、それぞれ、１９６、３０１および４１３であった（図５Ｅ）。Ｄ＋１００までにＣＤ４計数値５０を達成しなかった患者は１名のみであった。３、６、１２カ月時点でのＩｇＧ中央値は、それぞれ、５．９、７．３および７．３ｇ／Ｌであった（正常値：５．５〜１６．３）（図５Ｆ）。
【０１２４】
さい帯血の標準的な選定基準（ＴＮＣ≧２．０×１０７／ｋｇおよびＣＤ３４≧１．７×１０５／ｋｇ）と比較した場合、２２名中１２名の患者は、最小細胞用量の基準が低くなっていたことから、より良好なＨＬＡ適合度のさい帯を得た。こうして、＞７５％の患者に、ＨＬＡ適合度が６〜７／８（５名は５／８、１５名は６／８、２名は７／８）のＣＢを移植した（図６）。細胞用量が十分なＨＬＡ適合ＣＢが同定できなかったという理由で治験から除外された患者はいなかった。
【０１２５】
移植後１２カ月時点で、免疫抑制療法を中止していた者は、ＵＭ１７１ＣＢ患者では８５％であったのに対し、対照ＣＢ患者では７２％であった（図７Ａ）。全体では、１名の患者がびまん性肺胞出血で死亡しており、１年時点でのＴＲＭの累積発生率については、ＵＭ１７１ＣＢコホートでは５％（９５％ＣＩ：１〜３１％）であったのに対し、対照ＣＢコホートでは２５％（９５％ＣＩ：１２〜５４）であった（図７Ｂ）。１２カ月時点でのＯＳは９０％（９５％ＣＩ：６７〜９８）であり、これに対して対照ＣＢでは７５％（９５％ＣＩ：４９〜８７）であった（図７Ｃ）。
【０１２６】
本試験で、シングルユニット分の、より小規模でＨＬＡ適合度がより良好なＵＭ１７１拡大ＣＢを患者に移植した場合にはＣＢ移植実施による罹病および死亡のリスクが低下するであろうことを実証する。この目的を達成するために第Ｉ相〜第ＩＩ相臨床試験を実施したところ、主要評価項目である実現可能性（拡大失敗は１つのさい帯で認められたが、元から異常が内在していた疑いがある）、ＴＲＭが５％の安全性、および生着が迅速な、より小規模でＨＬＡ適合度がより良好なさい帯の使用が実証された。
【０１２７】
さらに、迅速（＜Ｄ＋１８）でロバストかつ持続的な好中球生着が確実に得られ、移植片不全を生じることはなかった。さらに、好中球１００個の回復がきわめて早期に（Ｄ＋１０）達成されたことにより、発熱性好中球減少症の速やかな消失（Ｄ＋７．５）、および入院の短期化（ＵＭ１７１ＣＢでは３５日間であったのに対し、ＣＢ対照では４７日間）がもたらされたが、この日数は、従来の同種移植の場合にみられる日数と同程度であった［ＢＭ（ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ、骨髄）では２９．５日、および、ＰＢ（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｂｌｏｏｄ、末梢血）では３３日］。好中球５００個の回復がより迅速に得られることから、ＵＭ１７１患者の退院は、ＢＭ−ＰＢと比較して早まることが期待されよう。
【０１２８】
さい帯血はＴ細胞免疫再構築の不足および遅延を伴うと以前から考えられているが、その理由の少なくとも一部は、輸注されるＴ細胞がナイーブであること、および、記憶Ｔ細胞の欠損がウイルス感染リスクの増加の一因となることである。本明細書に記載の拡大手順では記憶Ｔ細胞を移すことをせず、平均Ｔ細胞消失率が３３％であるにもかかわらず、ＣＤ４回復は、無操作ＣＢ移植に比して少なくとも同程度に早い（図４Ｅ）。ＣＤ４回復は、感染性合併症だけでなくＴＲＭおよび再燃の予防にとっても重要であることが示されている。小児におけるＣＢ移植実施においては、Ａｄｍｉｒａａｌら（２０１６、Ｂｌｏｏｄ、１２８：２７３４〜２７４１）は、Ｄ＋１００までにＣＤ４計数値で５０個が達成されない場合、再燃のリスクは、ＡＭＬでは１００％（対２４％）、ＴＲＭでは３１％（対１１％）、およびＯＳでは５６％（対７３％）であったと報告した。本明細書に記載されている２２名の患者からなるコホートでは、Ｄ＋１００までにＣＤ４計数値で５０個が達成されていなかったのはわずか１名であった。本治験における迅速な免疫回復により、重症のウイルス感染症は発生せず、ＣＭＶ病もＰＴＬＤも認められないこととなった。さらに、ＥＢＶウイルス血症のための治療を受けた３名の患者のうち２名は、リツキシマブの投与を受ける前の時点でＥＢＶ力価が閾値未満にすでに改善していた。
【０１２９】
ＣＢ移植実施において予想されるＴＲＭは従来の移植の場合より高いが、その理由は、好中球および免疫再構築がより遅く、移植片不全のリスクはより高いことである。高頻度のＴＲＭおよび入院の長期化は、ＣＢに対する関心が低下しハプロ同一移植を用いることが増えている主な理由である。ＨＣＴ−ＣＩは、移植実施におけるＴＲＭを予測するための最良の検証済みの指標である。ＨＣＴＣＩが＜３および≧３である場合、ＣＢを用いた場合のＴＲＭはそれぞれ２６％および５０％であると報告されている。本治験におけるＨＣＴ−ＣＩ中央値は２であり、スコアが≧３の患者は８名（３８％）であった。したがって、５％というＴＲＭはきわめて低いものであることがわかる。ＴＲＭの低さを説明し裏付ける理由は、以下の通り多数ある：ｉ）Ｄ＋１８時点で速やかな好中球回復が認められ、きわめて速やかに好中球１００個に到達していること、ｉｉ）ＨＬＡ適合度がより良好であり、≧６／８の対立遺伝子が適合するＣＢの移植を受けた患者が＞７５％であったこと、ｉｉｉ）移植片不全のリスクがきわめて低いこと、ｉｖ）ＡＴＧを使用していないこと、ｖ）迅速な免疫再構築により重症のウイルス感染症のリスクが低くなること、およびｖｉ）ステロイド不応性ＧＶＨＤがみられなかったこと。ＣＢ移植実施に伴うＴＲＭが１２カ月を超えてから生じることは、慢性ＧＶＨＤの発生率が低いことから稀であり、したがって、本明細書に記載されているＴＲＭが、より長く追跡を行うことで劇的に増加する可能性は低い。
【０１３０】
要約すると、高リスクの血液学的悪性腫瘍や複数の併存疾患を有する患者を対象にした、シングルユニット分のＵＭ１７１拡大さい帯血移植において、優れた結果が得られた。本明細書において提供される知見から、シングルユニット分のＵＭ１７１拡大ＣＢは、ＨＬＡ一致ドナーがみつからない場合の許容される移植片であることが確認される。
【０１３１】
本開示は、その特定の実施形態と関連付けて記載してあるが、本開示はさらなる改変が可能であること、ならびに、本出願は、例えば、当技術分野における公知のまたは慣例的な実施方法の範囲に入るような、および、本明細書において先に記載した本質的な特徴に当てはまる可能性があるような、および、添付の「特許請求の範囲」に記載するような、本開示からの逸脱を含む、すべての変形、使用または応用を包含することを意図したものであることは理解されよう。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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