(57)【要約】  対象における小葉炎症、非アルコール性脂肪性肝疾患、又は非アルコール性脂肪性肝炎の治療又は予防に、セファランチン、レピリナスト、イフェンプロジル半酒石酸塩、ブロマンタン、アクタリット、ロベンザリット、イルソグラジン、イストラデフィリン、トラパジル、及びベミチルが使用される。
2021535175.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患の予防又は治療におけるセファランチンの使用。
【請求項２】
セファランチンの量が、対象1kgあたり1mg〜5mgの間である、請求項1に記載の使用。
【請求項３】
セファランチンの量が、対象1kgあたり約2.25mgである、請求項2に記載の使用。
【請求項４】
セファランチンの量が、対象1kgあたり約2.5mgである、請求項3に記載の使用。
【請求項５】
対象における小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患の予防又は治療におけるレピリナストの使用。
【請求項６】
レピリナストの量が、対象1kgあたり1mg〜20mgの間である、請求項5に記載の使用。
【請求項７】
レピリナストの量が、対象1kgあたり3mg〜10mgの間である、請求項6に記載の使用。
【請求項８】
レピリナストの量が、対象1kgあたり約10mgである、請求項7に記載の使用。
【請求項９】
対象における小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患の予防又は治療におけるイフェンプロジル半酒石酸塩の使用。
【請求項１０】
イフェンプロジル半酒石酸塩の量が、対象1kgあたり0.1mg〜5mgの間である、請求項9に記載の使用。
【請求項１１】
イフェンプロジル半酒石酸塩の量が、対象1kgあたり0.5mg〜3mgの間である、請求項10に記載の使用。
【請求項１２】
イフェンプロジル半酒石酸塩の量が、対象1kgあたり約1mgである、請求項11に記載の使用。
【請求項１３】
対象における小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患の予防又は治療におけるブロマンタンの使用。
【請求項１４】
ブロマンタンの量が、対象1kgあたり0.5mg〜5mgの間である、請求項13に記載の使用。
【請求項１５】
ブロマンタンの量が、対象1kgあたり1mg〜2mgの間である、請求項14に記載の使用。
【請求項１６】
ブロマンタンの量が、対象1kgあたり約1.7mgである、請求項15に記載の使用。
【請求項１７】
対象における小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患の予防又は治療におけるアクタリットの使用。
【請求項１８】
アクタリットの量が、対象1kgあたり1mg〜10mgの間である、請求項17に記載の使用。
【請求項１９】
アクタリットの量が、対象1kgあたり2mg〜7mgの間である、請求項18に記載の使用。
【請求項２０】
アクタリットの量が、対象1kgあたり4mg〜6mgの間である、請求項19に記載の使用。
【請求項２１】
アクタリットの量が、対象1kgあたり約5mgである、請求項20に記載の使用。
【請求項２２】
対象における小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患の予防又は治療におけるロベンザリットの使用。
【請求項２３】
ロベンザリットの量が、対象1kgあたり1mg〜10mgの間である、請求項22に記載の使用。
【請求項２４】
ロベンザリットの量が、対象1kgあたり2mg〜8mgの間である、請求項23に記載の使用。
【請求項２５】
ロベンザリットの量が、対象1kgあたり3mg〜6mgの間である、請求項24に記載の使用。
【請求項２６】
ロベンザリットの量が、対象1kgあたり約4mgである、請求項24に記載の使用。
【請求項２７】
対象における小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患の予防又は治療におけるイルソグラジンの使用。
【請求項２８】
イルソグラジンの量が、対象1kgあたり0.02mg〜0.5mgの間である、請求項27に記載の使用。
【請求項２９】
イルソグラジンの量が、対象1kgあたり0.05mg〜0.1mgの間である、請求項28に記載の使用。
【請求項３０】
イルソグラジンの量が、対象1kgあたり約0.07mgである、請求項29に記載の使用。
【請求項３１】
対象における小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患の予防又は治療におけるイストラデフィリンの使用。
【請求項３２】
イストラデフィリンの量が、対象1kgあたり0.1mg〜4mgの間である、請求項31に記載の使用。
【請求項３３】
イストラデフィリンの量が、対象1kgあたり0.3mg〜1.3mgの間である、請求項32に記載の使用。
【請求項３４】
イストラデフィリンの量が、対象1kgあたり約1.3mgである、請求項33に記載の使用。
【請求項３５】
対象における小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患の予防又は治療におけるトラパジルの使用。
【請求項３６】
トラパジルの量が、対象1kgあたり1mg〜10mgの間である、請求項35に記載の使用。
【請求項３７】
トラパジルの量が、対象1kgあたり3mg〜8mgの間である、請求項36に記載の使用。
【請求項３８】
トラパジルの量が、対象1kgあたり約5mgである、請求項37に記載の使用。
【請求項３９】
請求項44から46のいずれか一項に記載の使用より前に、1kgあたり10mgの単回用量のトラパジルが使用される、請求項35から38のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４０】
対象における小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患の治療又は予防におけるベミチルの使用。
【請求項４１】
ベミチルの量が、対象1kgあたり5mg〜50mgの間である、請求項40に記載の使用。
【請求項４２】
ベミチルの量が、対象1kgあたり12mg〜25mgの間である、請求項41に記載の使用。
【請求項４３】
ベミチルの量が、対象1kgあたり8mg〜17mgの間である、請求項42に記載の使用。
【請求項４４】
ベミチルの量が、対象1kgあたり約8mgである、請求項43に記載の使用。
【請求項４５】
ベミチルの量が、対象1kgあたり約17mgである、請求項44に記載の使用。
【請求項４６】
非アルコール性脂肪性肝疾患が非アルコール性脂肪性肝炎である、請求項1から45のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４７】
非アルコール性脂肪性肝疾患が、非アルコール性脂肪性肝炎由来肝細胞癌である、請求項1から46のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４８】
対象において小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患を治療又は予防する方法であって、
対象に治療有効量のセファランチンを投与する工程
を含む、方法。
【請求項４９】
対象に、対象1kgあたり1mg〜5mgの間のセファランチンが投与される、請求項48に記載の方法。
【請求項５０】
対象に対象1kgあたり約2.25mgのセファランチンが投与される、請求項49に記載の方法。
【請求項５１】
対象に対象1kgあたり約2.5mgのセファランチンが投与される、請求項50に記載の方法。
【請求項５２】
対象において小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患を治療又は予防する方法であって、
対象に治療有効量のレピリナストを投与する工程
を含む、方法。
【請求項５３】
対象に対象1kgあたり1mg〜20mgの間のレピリナストが投与される、請求項52に記載の方法。
【請求項５４】
対象に対象1kgあたり3mg〜10mgの間のレピリナストが投与される、請求項53に記載の方法。
【請求項５５】
対象に対象1kgあたり約10mgのレピリナストが投与される、請求項54に記載の方法。
【請求項５６】
対象において小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患を治療又は予防する方法であって、
対象に治療有効量のイフェンプロジル半酒石酸塩を投与する工程
を含む、方法。
【請求項５７】
対象に対象1kgあたり0.1mg〜5mgの間のイフェンプロジル半酒石酸塩が投与される、請求項56に記載の方法。
【請求項５８】
対象に対象1kgあたり0.5mg〜3mgの間のイフェンプロジル半酒石酸塩が投与される、請求項57に記載の方法。
【請求項５９】
対象に対象1kgあたり約1mgのイフェンプロジル半酒石酸塩が投与される、請求項58に記載の方法。
【請求項６０】
対象において小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患を治療又は予防する方法であって、
対象に治療有効量のブロマンタンを投与する工程
を含む、方法。
【請求項６１】
対象に対象1kgあたり0.5mg〜5mgの間のブロマンタンが投与される、請求項60に記載の方法。
【請求項６２】
対象に対象1kgあたり1.7mg〜3.3mgの間のブロマンタンが投与される、請求項61に記載の方法。
【請求項６３】
対象に対象1kgあたり約3.3mgのブロマンタンが投与される、請求項62に記載の方法。
【請求項６４】
対象において小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患を治療又は予防する方法であって、
対象に治療有効量のアクタリットを投与する工程
を含む、方法。
【請求項６５】
対象に対象1kgあたり1mg〜10mgの間のアクタリットが投与される、請求項64に記載の方法。
【請求項６６】
対象に対象1kgあたり2mg〜7mgの間のアクタリットが投与される、請求項65に記載の方法。
【請求項６７】
対象に対象1kgあたり約5mgのアクタリットが投与される、請求項66に記載の方法。
【請求項６８】
対象において小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患を治療又は予防する方法であって、
対象に治療有効量のロベンザリットを投与する工程含む、方法。
【請求項６９】
対象に対象1kgあたり1mg〜10mgの間のロベンザリットが投与される、請求項68に記載の方法。
【請求項７０】
対象に対象1kgあたり2mg〜8mgの間のロベンザリットが投与される、請求項69に記載の方法。
【請求項７１】
対象に対象1kgあたり約4mgのロベンザリットが投与される、請求項70に記載の方法。
【請求項７２】
対象において小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患を治療又は予防する方法であって、
対象に治療有効量のイルソグラジンを投与する工程
を含む、方法。
【請求項７３】
対象に対象1kgあたり0.02mg〜0.5mgの間のイルソグラジンが投与される、請求項72に記載の方法。
【請求項７４】
対象に対象1kgあたり0.05mg〜0.1mgの間のイルソグラジンが投与される、請求項73に記載の方法。
【請求項７５】
対象に対象1kgあたり約0.07mgのイルソグラジンが投与される、請求項74に記載の方法。
【請求項７６】
対象において小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患を治療又は予防する方法であって、
対象に治療有効量のイストラデフィリンを投与する工程
を含む、方法。
【請求項７７】
対象に対象1kgあたり0.1mg〜4mgの間のイストラデフィリンが投与される、請求項76に記載の方法。
【請求項７８】
対象に対象1kgあたり0.3mg〜1.3mgの間のイストラデフィリンが投与される、請求項77に記載の方法。
【請求項７９】
対象に対象1kgあたり約1.3mgのイストラデフィリンが投与される、請求項78に記載の方法。
【請求項８０】
対象において小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患を治療又は予防する方法であって、
対象に治療有効量のトラパジルを投与する工程
を含む、方法。
【請求項８１】
対象に対象1kgあたり1mg〜10mgの間のトラパジルが投与される、請求項80に記載の方法。
【請求項８２】
対象に対象1kgあたり3mg〜8mgの間のトラパジルが投与される、請求項81に記載の方法。
【請求項８３】
対象に対象1kgあたり約5mgのトラパジルが投与される、請求項82に記載の方法。
【請求項８４】
対象において小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患を治療又は予防する方法であって、
対象に治療有効量のベミチルを投与する工程
を含む、方法。
【請求項８５】
対象に対象1kgあたり5mg〜50mgの間のベミチルが投与される、請求項84に記載の方法。
【請求項８６】
対象に対象1kgあたり12mg〜25mgの間のベミチルが投与される、請求項85に記載の方法。
【請求項８７】
対象に対象1kgあたり約17mgのベミチルが投与される、請求項86に記載の方法。
【請求項８８】
非アルコール性脂肪性肝疾患が非アルコール性脂肪性肝炎である、請求項48から87のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８９】
非アルコール性脂肪性肝疾患が、非アルコール性脂肪性肝炎由来肝細胞癌である、請求項48から88のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の参照
本出願は、2018年7月6に出願された米国仮出願第62/694,848号、及び2019年2月22に出願された米国仮出願第62/809,351号の優先権を主張するものであり、これら出願の内容は、参照により本明細書に援用される。
【０００２】
本発明は、非アルコール性脂肪性肝疾患を治療するための化合物の使用、詳細には、非アルコール性脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪肝、及び非アルコール性脂肪性肝炎を治療するための特定の試験化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
非アルコール性脂肪性肝疾患(NAFLD)は、肝細胞に貯蔵された過剰の脂肪を特徴とする、一定範囲の肝臓の状態を包含する。その病名が意味するとおり、原因は、一般に、アルコール消費とは無関係である。これは、アルコールの多用によって引き起こされるアルコール性肝疾患とは対照的である。最も一般的には、NAFLDは、非アルコール性単純性脂肪肝又は非アルコール性脂肪性肝炎(NASH)のいずれかである。  
【０００４】
非アルコール脂肪肝は、肝臓に脂肪があるが、炎症又は肝細胞損傷がほとんど又はまったくない状態である。非アルコール脂肪肝は、通常、進行して肝損傷又は合併症を引き起こすことはない。
【０００５】
NASHは、脂肪肝及び肝臓炎症の両方を含む。非アルコール性脂肪肝だけを伴うものは、一般に無症候性であるが、NASHに伴う炎症及び肝細胞損傷は、肝臓の線維化又は瘢痕化を引き起こす場合があり、重篤な場合では、硬変(進行した瘢痕化)又は肝臓がんにつながることもある。それに関して、NASH及び硬変の一般的な徴候及び症状として、腹部の腫脹、皮膚表面のすぐ下での血管肥大、男性における胸部肥大、及び黄疸を挙げることができる。
【０００６】
NASHのリスクを高める要因としては、糖尿病、肥満、高フルクトース食、遺伝的性質、及び加齢が挙げられる。食事及び運動を改善することが、NAFLDを管理し、インスリン抵抗性を低減する効率的な手段ではあるものの、現在、NAFLD又はNASHに治癒はなく、あらゆる個体に作用する単独治療は存在しない。NAFLD及びNASHの治療に現在使用されている薬物は、脂肪減少を増進し、かつ/又は生物医学的マーカーレベルを改善する助けになることはあるが、いずれも、肝臓瘢痕化が始まってしまった後で、NAFLD及びNASHを逆転又は軽減させることは示されていない。
【０００７】
NAFLD及びNASHのネズミモデルは、多くの慢性肝炎障害に共通の特徴である自発的な肝臓脂肪変性に最終的には至る代謝性肝傷害の十分に特徴付けられた実験モデルである。この食餌性モデルでは、脂肪肝への進行が高度に予測可能及び再現可能であり、インスリン抵抗性及び肥満により脂肪変性がもたらされる(Ishiiら、Female spontaneously diabetic Torii fatty rats develop nonalcoholic steatohepatitis-like hepatic lesions、World J Gastroenterol、21(30):9067-78 (2015); Kucera 0及びCervinkova Z、Experimental models of nonalcoholic fatty liver disease in rats、World J Gastroenterol、20(26):8364-76 (2014); Takahashiら、Animal models of nonalcoholic fatty liver disease/nonalcoholic steatohepatitis、World J Gastroenterol、18(19);2300-08 (2012))。
【０００８】
マウスにおけるNASH由来肝細胞癌(「NASH-HCC」)の(Stelic Animal Model又はSTAM(商標)として知られる)そうしたモデルの1つでは、皮下ストレプトゾトシン(「STZ」)曝露に続く継続的な高脂肪食によって、6〜16週間という比較的短い期間で、ヒトNASHの主要な証しであるトランスアミナーゼ及び血漿脂質の中等度の増加を含めて、ヒトNASH-HCCの全カスケードに似通った、糖尿病、有意な脂肪変性、慢性小葉炎症、細胞周囲の線維化、肝硬変、及びHCCがもたらされる(Fujii Mら、A murine model for non-alcoholic steatohepatitis showing evidence of association between diabetes and hepatocellular carcinoma、Med Mol Morphol、46(3):141-52 (2013))。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ishiiら、Female spontaneously diabetic Torii fatty rats develop nonalcoholic steatohepatitis-like hepatic lesions、World J Gastroenterol、21(30):9067-78 (2015)
【非特許文献２】Kucera 0及びCervinkova Z、Experimental models of nonalcoholic fatty liver disease in rats、World J Gastroenterol、20(26):8364-76 (2014)
【非特許文献３】Takahashiら、Animal models of nonalcoholic fatty liver disease/nonalcoholic steatohepatitis、World J Gastroenterol、18(19);2300-08 (2012)
【非特許文献４】Fujii Mら、A murine model for non-alcoholic steatohepatitis showing evidence of association between diabetes and hepatocellular carcinoma、Med Mol Morphol、46(3):141-52 (2013)
【非特許文献５】Gittoら、Treatment of nonalcoholic steatohepatitis in adults: present and future、Gastroenterol Res Pract、2015: 732870 (2015)
【非特許文献６】Paschos P及びTziomalos K、Nonalcoholic fatty liver disease and the renin-angiotensin system: Implications for treatment、World J Hepatol、4(12):327-31 (2012)
【非特許文献７】Musso Gら、A meta-analysis of randomized trials for the treatment of nonalcoholic fatty liver disease、Hepatology、52(1):79-104 (2010)
【非特許文献８】Georgescu EFら、Angiotensin-receptor blockers as therapy for mild-to-moderate hypertension-associated non-alcoholic steatohepatitis、World J Gastroenterol、15(8):942-54 (2009)
【非特許文献９】Takakuraら、Characterization of non-alcoholic steatohepatitis、Anticancer Res、34(9):4849-55 (2014)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、NAFLD及びNASHを治療及び/又は緩和するための、通常は他の病理について潜在的な治療薬として研究されている既存の薬物の新規の使用を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
一実施形態では、本発明は、対象における小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患の予防又は治療においてのセファランチン（Cepharanthine）についての方法及び使用を提供する。
【００１２】
別の実施形態では、本発明は、対象における小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患の予防又は治療においてのレピリナスト（Repirinast）についての方法及び使用を提供する。
【００１３】
別の実施形態では、本発明は、対象における小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患の予防又は治療においてのイフェンプロジル半酒石酸塩(Ifenprodil Hemitartrate)についての方法及び使用を提供する。
【００１４】
別の実施形態では、本発明は、対象における小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患の予防又は治療においてのブロマンタン（Bromantane）についての方法及び使用を提供する。
【００１５】
別の実施形態では、本発明は、対象における小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患の予防又は治療においてのトシル酸スプラタスト（Suplatast Tosylate）についての方法及び使用を提供する。
【００１６】
別の実施形態では、本発明は、対象における小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患の予防又は治療においてのアクタリット（Actarit）についての方法及び使用を提供する。
【００１７】
別の実施形態では、本発明は、対象における小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患の予防又は治療においてのロベンザリット（Lobenzarit）についての方法及び使用を提供する。
【００１８】
別の実施形態では、本発明は、対象における小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患の予防又は治療においてのイルソグラジン（Irsogladine）についての方法及び使用を提供する。
【００１９】
別の実施形態では、本発明は、対象における小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患の予防又は治療においてのイストラデフィリン（Istradefylline）についての方法及び使用を提供する。
【００２０】
別の実施形態では、本発明は、対象における小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患の予防又は治療においてのトラパジル(Trapadil)についての方法及び使用を提供する。
【００２１】
別の実施形態では、本発明は、対象における小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患の予防又は治療においてのベミチル(Bemithyl)についての方法及び使用を提供する。
【００２２】
別の実施形態では、本発明は、対象における小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患の予防又は治療においてのセニクリビロクについての方法及び使用を提供する。
【００２３】
さらなる態様では、非アルコール性脂肪性肝疾患は、非アルコール性脂肪性肝炎である。
【００２４】
本発明の一実施形態では、非アルコール性脂肪性肝疾患は、非アルコール性脂肪性肝炎由来肝細胞癌である。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
例示的な実施形態は、図面の参考図において例証される。本明細書で開示する実施形態及び図は、限定するものというより例証となるものとみなされるものである。
【図１】「媒体(vehicle)」対照群と、陽性対照処置群であるテルミサルタンを含む11の処置群とからなる、C57BL/6マウスの第1の研究における12の研究群それぞれについての、単位/Lとしての血漿(Plasma)アラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT)からなる肝機能及び疾患進行の評価を示すグラフである。ボンフェローニ多重比較検定を使用して判定されたとおりに、平均値±SDを示す。
【図２ａ】「媒体」対照群と、陽性対照処置群であるテルミサルタンを含む11の処置群とからなる、C57BL/6マウスの12の研究群それぞれについての、HE染色肝臓切片の代表的な顕微鏡写真である。上方のパネルは、50倍の倍率で撮影されている。下方のパネルは、200倍の倍率である。各研究群の素性は、各パネルペアにおいて上方のパネルの上に載せている。
【図２ｂ】「媒体」対照群と、陽性対照処置群であるテルミサルタンを含む11の処置群とからなる、C57BL/6マウスの12の研究群それぞれについての、HE染色肝臓切片の代表的な顕微鏡写真である。上方のパネルは、50倍の倍率で撮影されている。下方のパネルは、200倍の倍率である。各研究群の素性は、各パネルペアにおいて上方のパネルの上に載せている。
【図２ｃ】「媒体」対照群と、陽性対照処置群であるテルミサルタンを含む11の処置群とからなる、C57BL/6マウスの12の研究群それぞれについての、HE染色肝臓切片の代表的な顕微鏡写真である。上方のパネルは、50倍の倍率で撮影されている。下方のパネルは、200倍の倍率である。各研究群の素性は、各パネルペアにおいて上方のパネルの上に載せている。
【図２ｄ】「媒体」対照群と、陽性対照処置群であるテルミサルタンを含む11の処置群とからなる、C57BL/6マウスの12の研究群それぞれについての、HE染色肝臓切片の代表的な顕微鏡写真である。上方のパネルは、50倍の倍率で撮影されている。下方のパネルは、200倍の倍率である。各研究群の素性は、各パネルペアにおいて上方のパネルの上に載せている。
【図３】「媒体」対照群と、陽性対照処置群であるテルミサルタンを含む11の処置群とからなる、C57BL/6マウスの12の研究群それぞれについての、NAFLD活性スコアを示すグラフである。ボンフェローニ多重比較検定を使用して判定されたとおりに、平均値±SDを示す。
【図４】「媒体」対照群と、陽性対照処置群であるテルミサルタンを含む11の処置群とからなる、C57BL/6マウスの12の研究群それぞれについての、脂肪変性スコアを示すグラフである。ボンフェローニ多重比較検定を使用して判定されたとおりに、平均値±SDを示す。
【図５】「媒体」対照群と、陽性対照処置群であるテルミサルタンを含む11の処置群とからなる、C57BL/6マウスの12の研究群それぞれについての、小葉炎症スコアを示すグラフである。ボンフェローニ多重比較検定を使用して判定されたとおりに、平均値±SDを示す。
【図６】「媒体」対照群と、陽性対照処置群であるテルミサルタンを含む11の処置群とからなる、C57BL/6マウスの12の研究群それぞれについての、肝細胞風船化スコアを示すグラフである。ボンフェローニ多重比較検定を使用して判定されたとおりに、平均値±SDを示す。
【図７】「媒体」対照群と、陽性対照処置群であるテルミサルタンを含めたブロマンタン及びイストラデフィリン処置群とからなるC57BL/6マウスの研究群についての、シリウスレッド染色肝臓切片の代表的な顕微鏡写真である。パネルは、200倍の倍率で撮影されている。各研究群の素性は、各パネルペアにおいて上方のパネルの上に載せている。
【図８】「媒体」対照群と、陽性対照処置群であるテルミサルタンを含めたブロマンタン及びイストラデフィリン処置群とからなるC57BL/6マウスの研究群についての、シリウスレッド陽性面積(Sirius red-positive area)を示すグラフである。ボンフェローニ多重比較検定を使用して判定されたとおりに、平均値±SDを示す。
【図９】正常(NASHなし)群と、「媒体」対照群と、陽性対照処置群であるテルミサルタンを含む5つの処置群とからなる、C57BL/6マウスの第2の研究における7つの研究群についての、単位/Lとしての血漿アラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT)からなる肝機能及び疾患進行の評価を示すグラフである。ボンフェローニ多重比較検定を使用して判定されたとおりに、平均値±SDを示す。
【図１０ａ】正常(NASHなし)群と、「媒体」対照群と、陽性対照処置群であるテルミサルタンを含む5つの処置群とからなる、C57BL/6マウスの7つの研究群それぞれについての、HE染色肝臓切片の代表的な顕微鏡写真である。上方のパネルは、50倍の倍率で撮影されている。下方のパネルは、200倍の倍率である。各研究群の素性は、各パネルペアにおいて上方のパネルの上に載せている。
【図１０ｂ】正常(NASHなし)群と、「媒体」対照群と、陽性対照処置群であるテルミサルタンを含む5つの処置群とからなる、C57BL/6マウスの7つの研究群それぞれについての、HE染色肝臓切片の代表的な顕微鏡写真である。上方のパネルは、50倍の倍率で撮影されている。下方のパネルは、200倍の倍率である。各研究群の素性は、各パネルペアにおいて上方のパネルの上に載せている。
【図１０ｃ】正常(NASHなし)群と、「媒体」対照群と、陽性対照処置群であるテルミサルタンを含む5つの処置群とからなる、C57BL/6マウスの7つの研究群それぞれについての、HE染色肝臓切片の代表的な顕微鏡写真である。上方のパネルは、50倍の倍率で撮影されている。下方のパネルは、200倍の倍率である。各研究群の素性は、各パネルペアにおいて上方のパネルの上に載せている。
【図１１】正常(NASHなし)群と、「媒体」対照群と、陽性対照処置群であるテルミサルタンを含む5つの処置群とからなる、C57BL/6マウスの7つの研究群それぞれについての、NAFLD活性スコアを示すグラフである。ボンフェローニ多重比較検定を使用して判定されたとおりに、平均値±SDを示す。
【図１２】正常(NASHなし)群と、「媒体」対照群と、陽性対照処置群であるテルミサルタンを含む5つの処置群とからなる、C57BL/6マウスの7つの研究群それぞれについての、脂肪変性スコアを示すグラフである。ボンフェローニ多重比較検定を使用して判定されたとおりに、平均値±SDを示す。
【図１３】正常(NASHなし)群と、「媒体」対照群と、陽性対照処置群であるテルミサルタンを含む5つの処置群とからなる、C57BL/6マウスの7つの研究群それぞれについての、小葉炎症スコアを示すグラフである。ボンフェローニ多重比較検定を使用して判定されたとおりに、平均値±SDを示す。
【図１４】正常(NASHなし)群と、「媒体」対照群と、陽性対照処置群であるテルミサルタンを含む5つの処置群とからなる、C57BL/6マウスの7つの研究群それぞれについての、肝細胞風船化スコアを示すグラフである。ボンフェローニ多重比較検定を使用して判定されたとおりに、平均値±SDを示す。
【図１５ａ】正常(NASHなし)群と、「媒体」対照群と、陽性対照処置群であるテルミサルタンを含む5つの処置群とからなる、C57BL/6マウスの7つの研究群それぞれについての、シリウスレッド染色肝臓切片の代表的な顕微鏡写真である。パネルは、200倍の倍率で撮影されている。各研究群の素性は、各パネルペアにおいて上方のパネルの上に載せている。
【図１５ｂ】正常(NASHなし)群と、「媒体」対照群と、陽性対照処置群であるテルミサルタンを含む5つの処置群とからなる、C57BL/6マウスの7つの研究群それぞれについての、シリウスレッド染色肝臓切片の代表的な顕微鏡写真である。パネルは、200倍の倍率で撮影されている。各研究群の素性は、各パネルペアにおいて上方のパネルの上に載せている。
【図１６】正常(NASHなし)群と、「媒体」対照群と、陽性対照処置群であるテルミサルタンを含む5つの処置群とからなる、C57BL/6マウスの7つの研究群の、百分率としての線維化面積、すなわち、シリウスレッド陽性面積からなる肝機能及び疾患進行の評価を示すグラフである。ボンフェローニ多重比較検定を使用して判定されたとおりに、平均値±SDを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
本発明者らは、他の病理における使用について承認されているいくつかの薬理化合物が、肝臓脂肪変性、小葉炎症、及び肝細胞風船化の抑制又は緩和において活性成分として有用であり、NASHの予防及び/又は治療において有用となりうることを見出した。一部の実施形態では、NASH-HCCのネズミSTAM(商標)モデルにおいて、肝臓脂肪変性、小葉炎症、及び肝細胞風船化のレベルが抑制又は緩和されることが見出される。本明細書に記載する実験結果によれば、本明細書に記載の化合物は、一部の実施形態において、NASH及び/又はNASH由来HCCの予防及び/又は治療において有用となることが示されている。
【００２７】
以下の実施例及びデータは、2つの研究において、肝臓脂肪変性、小葉炎症、及び肝細胞風船化を抑制又は緩和する効果を示すものである。第1の研究では、治療有効量の10種の薬理化合物を投与した。第2の研究では、治療有効量の5種の薬理化合物を投与した。以下では「試験薬剤」として承知される薬理化合物は、他の病理における使用について承認されており、送達及び吸収の目的のために薬学的に許容される媒体を用いて製剤されている。
【００２８】
NAFLD及びNASH治療のために現在提案されている療法は、薬理化合物テルミサルタンを投与することであり(Gittoら、Treatment of nonalcoholic steatohepatitis in adults: present and future、Gastroenterol Res Pract、2015:732870 (2015); Paschos P及びTziomalos K、Nonalcoholic fatty liver disease and the renin-angiotensin system: Implications for treatment、World J Hepatol、4(12):327-31 (2012); Musso Gら、A meta-analysis of randomized trials for the treatment of nonalcoholic fatty liver disease、Hepatology、52(1):79-104 (2010); Georgescu EFら、Angiotensin-receptor blockers as therapy for mild-to-moderate hypertension-associated non-alcoholic steatohepatitis、World J Gastroenterol、15(8):942-54 (2009))、この化合物を、本明細書に記載する実験実施例において陽性対照として使用した。
【００２９】
テルミサルタン、すなわち、2-(4-{[4-メチル-6-(1-メチル-1H-1,3-ベンゾジアゾール-2-イル)-2-プロピル-1H-1,3-ベンゾジアゾール-1-イル]メチル}フェニル)安息香酸は、当業界において高血圧の治療で知られているアンジオテンシン受容体遮断薬である。テルミサルタンの化学構造は、
【００３０】
【化１】
2021535175.tif 000003
【００３１】
である。
【００３２】
本明細書に記載するとおりのNASH-HCCの動物モデルでは、通常、治療有効量を、ヒト最大日用量と同等の動物日用量として算出することができる。
【００３３】
セファランチンの使用
セファランチン、すなわち、(14S,27R)-22,33-ジメトキシ-13,28-ジメチル-2,5,7,20-テトラオキサ-13,28-ジアザオクタシクロ[25.6.2.216,19.13,10.121,25.04,8.014,39.031,35]ノナトリアコンタ-1(33),3,8,10(39),16,18,21(36),22,24,31,34,37-ドデカエンは、当業界において、放射線誘発白血球減少症、特発性血小板減少性紫斑病、円形及び粃糠性脱毛症、口内乾燥症、サルコイドーシス、難治性貧血、並びに種々のがん関連状態の治療で知られている抗炎症性及び抗悪性腫瘍性化合物である。セファランチンの化学構造は、
【００３４】
【化２】
2021535175.tif 000004
【００３５】
である。
【００３６】
一態様において、本発明は、対象において小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患をセファランチン又は薬学的に許容されるその変形形態によって治療又は予防するという使用及び方法を提供する。非アルコール性脂肪性肝疾患は、NASH又はNASH-HCCである場合がある。
【００３７】
一実施形態では、セファランチンの使用量は、対象1kgあたり0.5mg〜10mgの間である。好ましい一実施形態では、セファランチンの使用量は、対象1kgあたり1mg〜4mgの間である。更に好ましい一実施形態では、セファランチンの使用量は、対象1kgあたり約2.25mgである。更に好ましい一実施形態では、セファランチンの使用量は、対象1kgあたり約2.5mgである。
【００３８】
セファランチン又は薬学的に許容されるその変形形態は、経口的に、静脈内に、又は当業界で知られている要領で対象に投与することができる。セファランチン又は薬学的に許容されるその変形形態は、薬学的に許容される1種又は複数の賦形剤と共に投与されてもよい。
【００３９】
レピリナストの使用
レピリナスト、すなわち、3-メチルブチル7,8-ジメチル-4,5-ジオキソ-5,6-ジヒドロ-4H-ピラノ[3,2-c]キノリン-2-カルボキシレートは、当業界で抗ヒスタミン薬として知られている。レピリナストの化学構造は、
【００４０】
【化３】
2021535175.tif 000005
【００４１】
である。
【００４２】
一態様において、本発明は、対象において小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患をレピリナスト又は薬学的に許容されるその変形形態によって治療又は予防するという使用及び方法を提供する。非アルコール性脂肪性肝疾患は、NASH又はNASH-HCCである場合がある。
【００４３】
一実施形態では、レピリナストの使用量は、対象1kgあたり1日2mg〜50mgの間である。好ましい一実施形態では、レピリナストの使用量は、対象1kgあたり1日5mg〜10mgの間である。更に好ましい一実施形態では、レピリナストの使用量は、対象1kgあたり1日約10mgである。
【００４４】
レピリナスト又は薬学的に許容されるその変形形態は、経口的に、静脈内に、又は当業界で知られている要領で対象に投与することができる。レピリナスト又は薬学的に許容されるその変形形態は、薬学的に許容される1種又は複数の賦形剤と共に投与されてもよい。
【００４５】
イフェンプロジルの使用
イフェンプロジル、すなわち、4-[2-(4-ベンジルピペリジン-1-イル)-1-ヒドロキシプロピル]フェノールは、当業界で、選択的NMDA受容体(グルタミン酸)拮抗薬として知られている。化学構造は、
【００４６】
【化４】
2021535175.tif 000006
【００４７】
である。
【００４８】
本明細書における実施例で試験した一部の実施形態では、次の構造:
【００４９】
【化５】
2021535175.tif 000007
【００５０】
を有する、イフェンプロジル半酒石酸塩、すなわち、4-[2-(4-ベンジルピペリジン-1-イウム-1-イル)-1-ヒドロキシプロピル]フェノール;2,3,4-トリヒドロキシ-4-オキソブタノエートを使用した。
【００５１】
一態様において、本発明は、対象において小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患をイフェンプロジル半酒石酸塩又は薬学的に許容されるその変形形態によって治療又は予防するという使用及び方法を提供する。非アルコール性脂肪性肝疾患は、NASH又はNASH-HCCである場合がある。
【００５２】
一実施形態では、イフェンプロジルの使用量は、対象1kgあたり1日0.1mg〜5mgの間である。好ましい一実施形態では、イフェンプロジルの使用量は、対象1kgあたり1日0.5mg〜3mgの間である。更に好ましい一実施形態では、イフェンプロジルの使用量は、対象1kgあたり1日約1mgである。
【００５３】
イフェンプロジル半酒石酸塩又は薬学的に許容されるその変形形態は、経口的に、静脈内に、又は当業界で知られている要領で対象に投与することができる。イフェンプロジル半酒石酸塩又は薬学的に許容されるその変形形態は、薬学的に許容される1種又は複数の賦形剤と共に投与されてもよい。
【００５４】
ブロマンタンの使用
ブロマンタン、すなわち、N-(4-ブロモフェニル)アダマンタン-2-アミンは、神経衰弱症治療の分野で知られているアダマンタンファミリーの非定型精神刺激及び抗不安薬物である。ブロマンタンの化学構造は、
【００５５】
【化６】
2021535175.tif 000008
【００５６】
である。
【００５７】
一態様において、本発明は、対象において小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患をブロマンタン又は薬学的に許容されるその変形形態によって治療又は予防するという使用及び方法を提供する。非アルコール性脂肪性肝疾患は、NASH又はNASH-HCCである場合がある。
【００５８】
一実施形態では、ブロマンタンの使用量は、対象1kgあたり1日0.8mg〜5mgの間である。好ましい一実施形態では、ブロマンタンの使用量は、対象1kgあたり1日1.7mg〜3.3mgの間である。更に好ましい一実施形態では、ブロマンタンの使用量は、対象1kgあたり1日約1.7mgである。
【００５９】
ブロマンタン又は薬学的に許容されるその変形形態は、経口的に、静脈内に、又は当業界で知られている要領で対象に投与することができる。ブロマンタン又は薬学的に許容されるその変形形態は、薬学的に許容される1種又は複数の賦形剤と共に投与されてもよい。
【００６０】
トシル酸スプラタストの使用
トシル酸スプラタスト、すなわち、(3-{[4-(3-エトキシ-2-ヒドロキシプロポキシ)フェニル]アミノ}-3-オキソプロピル)(ジメチル)スルホニウム4-メチルベンゼンスルホネートは、当業界で抗アレルギー薬として知られているTh2サイトカイン阻害薬である。トシル酸スプラタストの化学構造は、
【００６１】
【化７】
2021535175.tif 000009
【００６２】
である。
【００６３】
一態様において、本発明は、対象において小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患をトシル酸スプラタスト又は薬学的に許容されるその塩によって治療又は予防するという使用及び方法を提供する。非アルコール性脂肪性肝疾患は、NASH又はNASH-HCCである場合がある。
【００６４】
一実施形態では、トシル酸スプラタストの使用量は、対象1kgあたり1日1mg〜10mgの間である。好ましい一実施形態では、トシル酸スプラタストの使用量は、対象1kgあたり1日2mg〜8mgの間である。別の好ましい一実施形態では、トシル酸スプラタストの使用量は、対象1kgあたり1日4.5mg〜5.4mgの間である。更にまた好ましい一実施形態では、トシル酸スプラタストの使用量は、対象1kgあたり1日約5mgである。
【００６５】
トシル酸スプラタスト又は薬学的に許容されるその塩は、経口的に、静脈内に、又は当業界で知られている要領で対象に投与することができる。トシル酸スプラタスト又は薬学的に許容されるその塩は、薬学的に許容される1種又は複数の賦形剤と共に投与されてもよい。
【００６６】
アクタリットの使用
アクタリット、すなわち、(4-アセトアミドフェニル)酢酸は、当業界において関節リウマチの治療で知られている疾患修飾性抗リウマチ薬である。アクタリットの化学構造は、
【００６７】
【化８】
2021535175.tif 000010
【００６８】
である。
【００６９】
一態様において、本発明は、対象において小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患をアクタリット又は薬学的に許容されるその変形形態によって治療又は予防するという使用及び方法を提供する。非アルコール性脂肪性肝疾患は、NASH又はNASH-HCCである場合がある。
【００７０】
一実施形態では、アクタリットの使用量は、対象1kgあたり1日3.75mg〜6.25mgの間である。好ましい一実施形態では、アクタリットの使用量は、対象1kgあたり1日4.16mg〜5.83mgの間である。別の好ましい一実施形態では、アクタリットの使用量は、対象1kgあたり1日4.58mg〜5.42mgの間である。更にまた好ましい一実施形態では、アクタリットの使用量は、対象1kgあたり1日約5mgである。
【００７１】
アクタリット又は薬学的に許容されるその変形形態は、経口的に、静脈内に、又は当業界で知られている要領で対象に投与することができる。アクタリット又は薬学的に許容されるその変形形態は、薬学的に許容される1種又は複数の賦形剤と共に投与されてもよい。
【００７２】
ロベンザリットの使用
ロベンザリット、すなわち、2-[(2-カルボキシフェニル)アミノ]-4-クロロ安息香酸は、当業界において関節炎の治療で知られている免疫調節薬である。ロベンザリットの化学構造は、
【００７３】
【化９】
2021535175.tif 000011
【００７４】
である。
【００７５】
一態様において、本発明は、対象において小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患をロベンザリット又は薬学的に許容されるその変形形態によって治療又は予防するという使用及び方法を提供する。非アルコール性脂肪性肝疾患は、NASH又はNASH-HCCである場合がある。
【００７６】
一実施形態では、ロベンザリットの使用量は、対象1kgあたり1日1mg〜10mgの間である。好ましい一実施形態では、ロベンザリットの使用量は、対象1kgあたり1日2mg〜7mgの間である。別の好ましい一実施形態では、ロベンザリットの使用量は、対象1kgあたり1日3mg〜5mgの間である。更にまた好ましい一実施形態では、ロベンザリットの使用量は、対象1kgあたり1日約4mgである。
【００７７】
ロベンザリット又は薬学的に許容されるその変形形態は、経口的に、静脈内に、又は当業界で知られている要領で対象に投与することができる。ロベンザリット又は薬学的に許容されるその変形形態は、薬学的に許容される1種又は複数の賦形剤と共に投与されてもよい。
【００７８】
イルソグラジンの使用
イルソグラジン、すなわち、6-(2,5-ジクロロフェニル)-1,3,5-トリアジン-2,4-ジアミンは、消化性潰瘍疾患及び急性胃炎の治療において使用される粘膜保護薬として当業界で知られているホスホジエステラーゼ阻害薬である。イルソグラジンの化学構造は、
【００７９】
【化１０】
2021535175.tif 000012
【００８０】
である。
【００８１】
一態様において、本発明は、対象において小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患をイルソグラジン又は薬学的に許容されるその変形形態によって治療又は予防するという使用及び方法を提供する。非アルコール性脂肪性肝疾患は、NASH又はNASH-HCCである場合がある。
【００８２】
一実施形態では、イルソグラジンの使用量は、対象1kgあたり1日0.0416mg〜0.125mgの間である。好ましい一実施形態では、イルソグラジンの使用量は、対象1kgあたり1日0.066mg〜0.1mgの間である。更に好ましい一実施形態では、イルソグラジンの使用量は、対象1kgあたり1日約0.08mgである。更に好ましい一実施形態では、イルソグラジンの使用量は、対象1kgあたり1日約0.07mgである。
【００８３】
イルソグラジン又は薬学的に許容されるその変形形態は、経口的に、静脈内に、又は当業界で知られている要領で対象に投与することができる。イルソグラジン又は薬学的に許容されるその変形形態は、薬学的に許容される1種又は複数の賦形剤と共に投与されてもよい。
【００８４】
イストラデフィリンの使用
イストラデフィリン、すなわち、8-[(E)-2-(3,4-ジメトキシフェニル)ビニル]-1,3-ジエチル-7-メチル-3,7-ジヒドロ-1H-プリン-2,6-ジオンは、当業界においてパーキンソン病におけるジスキネジーの治療で知られている選択的A2A受容体拮抗薬である。イストラデフィリンの化学構造は、
【００８５】
【化１１】
2021535175.tif 000013
【００８６】
である。
【００８７】
一態様において、本発明は、対象において小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患をイストラデフィリン又は薬学的に許容されるその変形形態によって治療又は予防するという使用及び方法を提供する。非アルコール性脂肪性肝疾患は、NASH又はNASH-HCCである場合がある。
【００８８】
一実施形態では、イストラデフィリンの使用量は、対象1kgあたり1日0.1mg〜5mgの間である。好ましい一実施形態では、イストラデフィリンの使用量は、対象1kgあたり1日0.3mg〜1.3mgの間である。更に好ましい一実施形態では、イストラデフィリンの使用量は、対象1kgあたり1日約1.3mgである。
【００８９】
イストラデフィリン又は薬学的に許容されるその変形形態は、経口的に、静脈内に、又は当業界で知られている要領で対象に投与することができる。イストラデフィリン又は薬学的に許容されるその変形形態は、薬学的に許容される1種又は複数の賦形剤と共に投与されてもよい。
【００９０】
トラパジル(Trapidil)の使用
トラパジル、すなわち、N,N-ジエチル-5-メチル-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピリミジン-7-アミンは、当業界で、血管拡張薬、抗血小板薬、及び血小板由来成長因子拮抗薬として知られている。トラパジルの化学構造は、
【００９１】
【化１２】
2021535175.tif 000014
【００９２】
である。
【００９３】
一態様において、本発明は、対象において小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患をトラパジル又は薬学的に許容されるその変形形態によって治療又は予防するという使用及び方法を提供する。非アルコール性脂肪性肝疾患は、NASH又はNASH-HCCである場合がある。
【００９４】
一実施形態では、トラパジルの使用量は、対象1kgあたり1日4.16mg〜5.83mgの間である。好ましい一実施形態では、トラパジルの使用量は、対象1kgあたり1日4.58mg〜5.41mgの間である。更に好ましい一実施形態では、トラパジルの使用量は、対象1kgあたり1日約5mgである。更に別の一実施形態では、対象において1kgあたり5mgのトラパジルを使用する前に、対象において10mg/kgの単回用量のトラパジルを使用した。
【００９５】
トラパジル又は薬学的に許容されるその変形形態は、経口的に、静脈内に、又は当業界で知られている要領で対象に投与することができる。トラパジル又は薬学的に許容されるその変形形態は、薬学的に許容される1種又は複数の賦形剤と共に投与されてもよい。
【００９６】
ベミチルの使用
ベミチル、すなわち、2-エチルスルファニル-1H-ベンゾイミダゾールは、当業界で、合成アクトプロテクター(actoprotector)、抗酸化物質、及び抗変異原性薬として知られており、身体能力を増強するために使用されることが多い。ベミチルの化学構造は、
【００９７】
【化１３】
2021535175.tif 000015
【００９８】
である。
【００９９】
一態様において、本発明は、対象において小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患をベミチル又は薬学的に許容されるその変形形態によって治療又は予防するという使用及び方法を提供する。非アルコール性脂肪性肝疾患は、NASH又はNASH-HCCである場合がある。
【０１００】
一実施形態では、ベミチルの使用量は、対象1kgあたり1日0.5mg〜30mgの間である。好ましい一実施形態では、ベミチルの使用量は、対象1kgあたり1日1mg〜25mgの間である。更に好ましい一実施形態では、ベミチルの使用量は、対象1kgあたり1日5mg〜20mgの間である。更にまた好ましい一実施形態では、ベミチルの使用量は、対象1kgあたり1日約8mgである。更に一層好ましい一実施形態では、ベミチルの使用量は、対象1kgあたり1日約17mgである。
【０１０１】
ベミチル又は薬学的に許容されるその変形形態は、経口的に、静脈内に、又は当業界で知られている要領で対象に投与することができる。ベミチル又は薬学的に許容されるその変形形態は、薬学的に許容される1種又は複数の賦形剤と共に投与されてもよい。
【０１０２】
組み合わせた使用
別の態様において、本発明は、対象において、NASH又はNASH-HCCを、セファランチン、レピリナスト、イフェンプロジル半酒石酸塩、ブロマンタン、トシル酸スプラタスト、アクタリット、ロベンザリット、イルソグラジン、イストラデフィリン、及びトラパジルの1つ又は複数を組み合わせて治療又は予防するという使用及び方法を提供する。別の態様において、本発明は、対象において、NASH又はNASH-HCCを、コレステロール低下薬、糖尿病薬、抗高血圧薬、又はビタミンEの1つ又は複数と組み合わせた、セファランチン、レピリナスト、イフェンプロジル半酒石酸塩、ブロマンタン、トシル酸スプラタスト、アクタリット、ロベンザリット、イルソグラジン、イストラデフィリン、及びトラパジルの1つ又は複数によって治療又は予防するという使用及び方法を提供する。
【０１０３】
組み合わせて使用されるコレステロール低下薬の例としては、アトルバスタチン(Lipitor)、フルバスタチン(Lescol)、ロバスタチン、ピタバスタチン(Livalo)、プラバスタチン(Pravachol)、ロスバスタチンカルシウム(Crestor)、シンバスタチン(Zocor)及びナイアシン、アリロクマブ(Praluent)、エボロクマブ(Repatha)、アリロクマブ(Praluent)、及びエボロクマブ(Repatha)が挙げられる。組み合わせて使用される糖尿病薬の例としては、インスリンが挙げられる。組み合わせて使用される抗高血圧薬の例としては、降圧薬、カルシウムチャネル遮断薬、ACE阻害薬  アンジオテンシンII受容体遮断薬、利尿薬、及びβ遮断薬が挙げられる。既知のアンジオテンシンII受容体拮抗薬の例には、アンジオテンシンI受容体サブタイプ拮抗薬及びアンジオテンシンII受容体サブタイプ拮抗薬の両方が含まれる。適切なアンジオテンシンII受容体拮抗薬としては、ロサルタン及びバルサルタンが挙げられる。適切なカルシウムチャネル遮断薬としては、たとえば、ベラパミル、ジルチアゼム、ニカルジピン、ニフェジピン、アムロジピン、フェロジピン、ニモジピン、及びベプリジルが挙げられる。利尿薬としては、たとえば、フロセミド、diuril、アミロライド、及びhydrodiurilが挙げられる。ロサルタン、カンデサルタン、テルミサルタン、バルサルタン、オルメサルタン、イルベサルタン等は、血圧降下薬として使用することができる。
【０１０４】
本明細書で使用する用語「有効量」とは、治療を受ける対象において所望の予防又は治療効果を付与するのに十分な活性成分の量を指す。一態様において、肝臓脂肪変性、小葉炎症、肝細胞風船化、又はNASH由来HCCを抑制又は緩和するための有効量は、その1つ又は複数の症状、状態、又は進行を改善又は軽減する。一部の実施形態では、症状、状態、又は進行は、疾患進行と関連した種々の指標を測定する、当業界で知られている方法を使用して、たとえば、肝臓切片を免疫組織化学染色によって分析することにより、判定及び評価がなされる。
【０１０５】
一部の実施形態では、有効量は、当業者によって、たとえば、投与経路及び頻度、薬理化合物を受け入れる対象の体重及び種を評価しながら求められる。一部の実施形態では、有効量の薬理化合物が、薬学的に許容される媒体と共に製剤され、対象に投与される。
【０１０６】
本明細書で使用する用語「薬学的に許容される」とは、媒体が、薬理化合物と適合すると同時に、治療を受ける対象にとっても安全であると、当業界で知られていることを意味する。一部の実施形態では、薬学的に許容される媒体は、当業者によって、たとえば、薬理化合物の前記媒体への溶解性を評価しながら決定される。
【０１０７】
本発明の例示的な実施形態について、以下の実施例に関連して更に記載するが、実施例は、例証となるものであり、限定する性質のものではない。第1の研究では、治療有効量の10種の薬理化合物を投与した。第2の研究では、治療有効量の5種の薬理化合物を投与した。
【実施例１】
【０１０８】
材料及び方法
雄の新生C57BL/6マウスを使用した。マウスはすべて、研究開始前に、日本エスエルシー株式会社(日本国浜松市)から入手した、病原体をもたない妊娠14日のマウスから出生した。
【０１０９】
NASH-HCCのネズミSTAM(商標)モデルは、当業界で知られている以前に記載されている方法(Takakuraら、Characterization of non-alcoholic steatohepatitis、Anticancer Res、34(9):4849-55 (2014); Fujiiら(2013))に従って実行した。雄のマウスにおいて、出生後2日の時点で200μgのストレプトゾトシン(STZ、Sigma社、米国ミズーリ州)を単独で皮下注射し、4週齢(28±2日目)を過ぎてから、高脂肪食(日本クレア株式会社、日本国東京都)を制約なく与えて継続的に給餌することにより、NASHを誘発させた。
【０１１０】
NASHが誘発された後、6週齢(42±2日目)の時点で、処置開始の前日に、マウスを、体重に基づき、それぞれ8匹のマウスからなる12の個々の研究群にランダム化した。
【０１１１】
ランダム化から1日後、6週齢プラス1日(43±2日目、処置1日目)から9週齢まで(以下では「処置期間」と呼ぶ)、マウスに1日1回の経口処置を施した。12のうち11の研究群(以下では「処置群」と呼ぶ)におけるマウスは、薬学的に許容される媒体と共に製剤された別個の薬理化合物によって個々に処置した。こうした11群それぞれに与えられた薬理化合物は、10種のうちの1種の試験薬剤又は陽性対照としてのテルミサルタンのいずれかであった。すべての群における薬学的に許容される媒体を、0.5%のカルボキシメチルセルロース(CMC)とした。残りの試験群(以下では「媒体対照群」と呼ぶ)におけるマウスは、活性成分を含まない薬学的に許容される同じ媒体で個々に処置した。処置期間の間、個々の体重を毎日測定した。マウスの生存、臨床徴候、及び挙動も、毎日モニターした。
【０１１２】
【表１】
2021535175.tif 000016
【０１１３】
各場合において、10mL/kgの体積の0.5%CMCを、Table 1 (表1)に示したとおりの活性成分と共に(又は活性成分なしで)、6週齢から屠殺するまでの9週齢まで経口投与した。1つの例外がトラパジルであり、トラパジルは、0日目に120mg/kgの1回の投与で、次いで、処置1日目からは60mg/kgの日用量で経口投与した。次いで、9週齢の時点ですべてのマウスを屠殺した。分析のために、すべてのマウスから血液サンプルを集め、各マウスから肝臓を取り出した。
【０１１４】
動物研究のために選択された用量は、既知のヒト最大日用量を考慮し、成人の平均体重(約60〜70kg)で割って、ヒトのmg/kg用量を得ることにより求めた。次いで、従来の投与量換算表(dosing table)に基づき、その数に12を掛けて、マウス用量に変換した。Nair及びJacob、J Basic Clin Pharm March 2016-May 2016、7(2):27-31を参照されたい。
【０１１５】
各マウスについて、次の測定及び評価を行った。
【０１１６】
体重:処置期間を通して、すべてのマウスの体重を毎日測定した。
【０１１７】
血液サンプル採取及び生化学分析:屠殺したすべてのマウスから血液を集め、さらなる分析又は発送のために凍結させた。
【０１１８】
血漿アラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT):肝機能及び疾患進行の指標としてのアラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT)について、各血液サンプルからの血漿を、FUJI DRI CHEM (富士フイルム株式会社、日本国)で分析した。
【０１１９】
肝臓サンプル採取、生化学分析、及び組織学分析:屠殺したすべてのマウスから肝臓を取り出し、さらなる分析又は発送のために凍結させた。
【０１２０】
肝臓質量:屠殺したすべてのマウスからの肝臓は、取り出した後、グラムで秤量した。
【０１２１】
肝臓組織病理学:取り出した肝臓をホルマリンで固定し、パラフィンに包埋し、次いで、横断切片(4μm)を調製した。
【０１２２】
脂肪性肝炎の評価:肝臓脂肪変性、小葉炎症、及び肝細胞風船化を組織学的に評価するために、肝臓横断切片を、標準技術を使用するヘマトキシリン及びエオシン(H&E)染色にかけた。脂肪変性の評価については倍率を50倍、炎症の評価及び風船化の評価については倍率をそれぞれ200倍とした、厚さ4μmのH&E染色肝臓横断切片のランダムに選択した3つの視野において、各肝臓横断切片における脂肪性肝炎重症度のレベルを、0 (正常)、1〜2 (NAFLD)、3〜4 (境界)、又は5以上(NASH)のNAFLD活性スコアによって示した。NAFLD活性スコアは、1)肝臓脂肪変性スコア(0〜3)、2)小葉炎症スコア(0〜2)、3)肝細胞風船化スコア(0〜2)の重み付けなしの合計である。
【０１２３】
媒体群、並びにブロマンタン、イストラデフィリン、及びテルミサルタン処置群の肝臓横断切片は、線維化面積の百分率を組織学的に推定するために、標準技術を使用するシリウスレッド染色にもかけた。線維化面積の定量分析については、シリウスレッド染色された切片の明視野像を、デジタルカメラ(DFC295、Leica社、ドイツ国)を200倍の倍率で使用して、中心静脈の周囲で捉え、1切片につき5視野における陽性面積を、ImageJソフトウェア(国立保健研究所、米国)を使用して測定した。
【０１２４】
統計分析
値は、算術平均である。両側異分散(2標本不等分散)スチューデントt検定を使用して、研究群と陽性対照群の比較を行った。複数の群についてのボンフェローニ事後統計補正分析(ボンフェローニ多重比較検定)に従って、0.05未満のP値を統計的に有意とみなした。この場合では、補正係数は、研究群の数に対応する12とした。選択したP値分類及び統計的有意性レベルを、通常の規則に従い、Table 2 (表2)に、その対応する分類スコアと並べて示す。
【０１２５】
【表２】
2021535175.tif 000017
【０１２６】
結果
肝機能評価:肝機能及び疾患進行を、以前に記載したとおりに血漿ALTによって評価した。結果を図1に要約する。
【０１２７】
脂肪性肝炎評価:脂肪性肝炎及び疾患進行を、以前に記載したとおりの肝臓横断切片のH&E染色によって評価した。12の研究群それぞれについてのHE染色肝臓切片の代表的な顕微鏡写真を、図2a〜図2dに示す。
【０１２８】
各研究群のNAFLD活性スコアは、各研究群におけるすべてのマウスのNAFLD活性スコア平均からなるものとした。各動物についての脂肪変性スコア、小葉炎症スコア、及び肝細胞風船化スコアをもとにスコアを求めた。結果を図3〜図6に要約する。
【０１２９】
脂肪性肝炎及び疾患進行を、以前に記載したとおりの肝臓横断切片のシリウスレッド染色によっても評価した。媒体、ブロマンタン、イストラデフィリン、及びテルミサルタン研究群についてのシリウスレッド染色肝臓切片の代表的な顕微鏡写真を図7に示す。結果を図8に示す。
【０１３０】
ブロマンタン及びイストラデフィリン処置群、並びにテルミサルタン陽性対照について、媒体対照に比べて、NAFLD活性スコアの統計的に有意な低下が認められた。ブロマンタン、イルソグラジン、及びイストラデフィリン処置群について、媒体対照に比べて、肝細胞風船化スコアの統計的に有意な低下が認められた。
【０１３１】
ブロマンタン及びイストラデフィリン群は、媒体群に比べて、線維化面積(シリウスレッド陽性面積)の有意な減少を示した。テルミサルタン群における線維化面積は、媒体群に比べて減少する傾向があった。媒体群からの肝臓切片は、肝臓小葉の中心周囲領域におけるコラーゲン沈着の増加を示した。
【０１３２】
特に、ブロマンタン及びイストラデフィリンについての、統計的に有意であり、臨床的に関連のあるNAFLD活性スコアの総合的な低下から、これらの化合物が、NASH及びその続発症の予防及び/又は治療において有用となりうることが示唆される。
【実施例２】
【０１３３】
材料及び方法
前と同様に、雄の新生C57BL/6マウスを使用した。マウスはすべて、研究開始前に、日本エスエルシー株式会社(日本国浜松市)から入手した、病原体をもたない妊娠14日のマウスから出生した。
【０１３４】
NASH-HCCのネズミSTAM(商標)モデルは、当業界で知られている以前に記載されている方法(Takakuraら、Characterization of non-alcoholic steatohepatitis、Anticancer Res、34(9): 4849-55 (2014); Fujiiら(2013))に従って実行した。雄のマウスにおいて、出生後2日の時点で200μgのストレプトゾトシン(STZ、Sigma社、米国ミズーリ州)を単独で皮下注射し、4週齢(28±2日目)を過ぎてから、高脂肪食(日本クレア株式会社、日本国東京都)を制約なく与えて継続的に給餌することにより、NASHを誘発させた。
【０１３５】
NASHが誘発された後、6週齢(42±2日目)の時点で、処置開始の前日に、マウスを、その体重に基づき、それぞれ8匹のマウスからなる7つの個々の研究群にランダム化した。
【０１３６】
ランダム化から1日後、6週齢プラス1日(43±2日目、処置1日目)から9週齢まで、マウスに1日1回の経口処置を施した。7つのうち6つの研究群におけるマウスは、薬学的に許容される媒体と共に製剤された治療量の薬理化合物によって個々に処置した。こうした6群それぞれに与えられた薬理化合物は、4種のうちの1種の試験薬剤又は陽性対照としてのテルミサルタンのいずれかであった。すべての群における薬学的に許容される媒体を、0.5%のCMCとした。残りの試験群、媒体対照群におけるマウスは、活性成分を含まない薬学的に許容される同じ媒体で個々に処置した。処置期間の間、個々の体重を毎日測定した。マウスの生存、臨床徴候、及び挙動も、毎日モニターした。
【０１３７】
【表３】
2021535175.tif 000018
【０１３８】
各場合において、10mL/kgの体積の0.5%CMCを、Table 3 (表1)に示したとおりの活性成分と共に(又は活性成分なしで)、6週齢から9週齢まで経口投与した。次いで、9週齢の時点ですべてのマウスを屠殺した。分析のために、すべてのマウスから血液サンプルを集め、各マウスから肝臓を取り出した。
【０１３９】
動物研究のために選択された用量は、既知のヒト最大日用量を考慮し、成人の平均体重(約60〜70kg)で割って、ヒトのmg/kg用量を得ることにより求めた。次いで、従来の投与量換算表に基づき、その数に12を掛けて、マウス用量に変換した。Nair及びJacob、J Basic Clin Pharm March 2016-May 2016、7(2): 27-31を参照されたい。
【０１４０】
各マウスについて、次の測定及び評価を行った。
【０１４１】
体重:処置期間を通して、すべてのマウスの体重を毎日測定した。
【０１４２】
血液サンプル採取及び生化学分析:屠殺したすべてのマウスから血液を集め、さらなる分析又は発送のために凍結させた。
【０１４３】
血漿アラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT):肝機能及び疾患進行の指標としてのアラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT)について、各血液サンプルからの血漿を、FUJI DRI CHEM (富士フイルム株式会社、日本国)で分析した。
【０１４４】
肝臓サンプル採取、生化学分析、及び組織学分析:屠殺したすべてのマウスから肝臓を取り出し、さらなる分析又は発送のために凍結させた。屠殺したすべてのマウスからの肝臓は、取り出した後、グラムで秤量した。
【０１４５】
肝臓組織病理学:取り出した肝臓をホルマリンで固定し、パラフィンに包埋し、次いで、横断切片(4μm)を調製した。
【０１４６】
脂肪性肝炎の評価:肝臓脂肪変性、小葉炎症、及び肝細胞風船化を組織学的に評価するために、肝臓横断切片を、標準技術を使用するヘマトキシリン及びエオシン(H&E)染色にかけた。脂肪変性の評価については倍率を50倍、炎症の評価及び風船化の評価については倍率をそれぞれ200倍とした、厚さ4μmのH&E染色肝臓横断切片のランダムに選択した3つの視野において、各肝臓横断切片における脂肪性肝炎重症度のレベルを、0 (正常)、1〜2 (NAFLD)、3〜4 (境界)、又は5以上(NASH)のNAFLD活性スコアによって示した。NAFLD活性スコアは、1)肝臓脂肪変性スコア(0〜3)、2)小葉炎症スコア(0〜2)、3)肝細胞風船化スコア(0〜2)の重み付けなしの合計である。
【０１４７】
処置群の肝臓横断切片は、線維化面積の百分率を組織学的に推定するために、標準技術を使用するシリウスレッド染色にもかけた。線維化面積の定量分析については、シリウスレッド染色された切片の明視野像を、デジタルカメラ(DFC295、Leica社、ドイツ国)を200倍の倍率で使用して、中心静脈の周囲で捉え、1切片につき5視野における陽性面積を、ImageJソフトウェア(国立保健研究所、米国)を使用して測定した。
【０１４８】
統計分析
値は、算術平均である。両側異分散(2標本不等分散)スチューデントt検定を使用して、研究群と陽性対照群の比較を行った。複数の群についてのボンフェローニ事後統計補正分析(ボンフェローニ多重比較検定)に従って、0.05未満のP値を統計的に有意とみなした。この場合では、補正係数は、研究群の数に対応する7とした。選択したP値分類及び統計的有意性レベルを、通常の規則に従い、Table 2 (表2) (上記)に、その対応する分類スコアと並べて示している。
【０１４９】
結果
肝機能評価:肝機能及び疾患進行を、以前に記載したとおりに血漿ALTによって評価した。結果を図9に要約する。
【０１５０】
脂肪性肝炎評価:脂肪性肝炎及び疾患進行を、以前に記載したとおりの肝臓横断切片のH&E染色によって評価した。7の研究群それぞれについてのHE染色肝臓切片の代表的な顕微鏡写真を、図10a〜図10cに示す。
【０１５１】
各研究群のNAFLD活性スコアは、各研究群におけるすべてのマウスのNAFLD活性スコア平均からなるものとした。各動物についての脂肪変性スコア、小葉炎症スコア、及び肝細胞風船化スコアをもとにスコアを求めた。結果を図11〜図14に要約する。
【０１５２】
ブロマンタン高及びセニクリビロク処置群、並びにテルミサルタン陽性対照について、媒体対照に比べて、NAFLD活性スコアの統計的に有意な低下が認められた。ブロマンタン高処置群並びにテルミサルタン陽性対照について、媒体対照に比べて、脂肪変性スコアの統計的に有意な低下が認められた。
【０１５３】
ブロマンタン低、ブロマンタン高、ベミチル、及びセニクリビロク群を含む研究群のすべてが、媒体群に比べて、線維化面積(シリウスレッド陽性面積)の統計的に有意な減少を示したことは意義深い。ベミチル群は、特に統計的に有意な線維化面積の減少を示した。テルミサルタン群における線維化面積も、媒体群に比べて減少する傾向があった。
【０１５４】
特に、ブロマンタン高、ベミチル、及びセニクリビロクについての、統計的に有意であり、臨床的に関連のあるNAFLD活性スコアの総合的な低下から、これらの化合物が、NASH及びその続発症の予防及び/又は治療において有用となりうることが示唆される。
【０１５５】
結論
結論として、上記試験薬剤、特に、ブロマンタン、イストラデフィリン、及びセニクリビロクの投与は、NAFLD活性スコア、肝臓脂肪変性、小葉炎症、及び肝細胞風船化を減らすことにおいて改善を示しており、NASHの予防及び/又は治療において有用となりうる。詳細には、40mg/kgのブロマンタン及び18mg/kgのイストラデフィリンに次いで、30mg/kgのセニクリビロクによって処置した群で、改善がより良好となった。
【０１５６】
10mg/kgのテルミサルタンの経口投与でも、媒体群に比べて、NAFLD活性スコア、肝臓脂肪変性、小葉炎症、及び肝細胞風船化の改善が示された。
【０１５７】
本記述全体にわたって、当業者により十分に理解してもらうために、詳細な細目を述べている。しかし、よく知られている要素は、本開示を不必要にわかりにくくするのを回避するために、詳細に示していない又は述べていない場合もある。したがって、記述及び図面は、限定するものというより例証となるものという意味で考えられる。
【０１５８】
いくつかの例示的な態様及び実施形態について上で論じてきたが、当業者なら、その一定の変更、並べ替え、追加、及び下位組合せ(sub-combinations)を認識するところとなる。したがって、以下の添付の請求項、及び今後導入される請求項は、全体として本明細書の最も広い解釈と矛盾せずに、そうした変更、並べ替え、追加、及び下位組合せをすべて含むように解釈されるものとする。
【図１】
2021535175.tif 000019
【図２ａ】
2021535175.tif 000020
【図２ｂ】
2021535175.tif 000021
【図２ｃ】
2021535175.tif 000022
【図２ｄ】
2021535175.tif 000023
【図３】
2021535175.tif 000024
【図４】
2021535175.tif 000025
【図５】
2021535175.tif 000026
【図６】
2021535175.tif 000027
【図７】
2021535175.tif 000028
【図８】
2021535175.tif 000029
【図９】
2021535175.tif 000030
【図１０ａ】
2021535175.tif 000031
【図１０ｂ】
2021535175.tif 000032
【図１０ｃ】
2021535175.tif 000033
【図１１】
2021535175.tif 000034
【図１２】
2021535175.tif 000035
【図１３】
2021535175.tif 000036
【図１４】
2021535175.tif 000037
【図１５ａ】
2021535175.tif 000038
【図１５ｂ】
2021535175.tif 000039
【図１６】
2021535175.tif 000040
【手続補正書】
【提出日】令和3年3月2日(2021.3.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象において小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患を予防又は治療するための医薬の調製におけるブロマンタンの使用。
【請求項２】
ブロマンタンを含む、小葉炎症又は非アルコール性脂肪性肝疾患を予防又は治療するための医薬組成物又は製剤。
【請求項３】
ブロマンタンの量が、対象1kgあたり0.5mg〜5mgの間である、請求項1に記載の使用又は請求項2に記載の組成物。
【請求項４】
ブロマンタンの量が、対象1kgあたり1mg〜2mgの間である、請求項1に記載の使用又は請求項2に記載の組成物。
【請求項５】
ブロマンタンの量が、対象1kgあたり約1.7mgである、請求項1に記載の使用又は請求項2に記載の組成物。
【請求項６】
非アルコール性脂肪性肝疾患が非アルコール性脂肪性肝炎である、請求項1から5のいずれか一項に記載の使用又は組成物。
【請求項７】
非アルコール性脂肪性肝疾患が、非アルコール性脂肪性肝炎由来肝細胞癌である、請求項1から5のいずれか一項に記載の使用又は組成物。
【国際調査報告】
2021535175.tif 000041
2021535175.tif 000042
2021535175.tif 000043
2021535175.tif 000044