(57)【要約】  提供される様々な態様および実施形態は、加齢性疾患または障害を治療するための方法、および／または患者において虚弱を治療または防止するための方法である。ある実施形態では、本方法は、組換えＴＬＲ５アゴニスト（例えば、フラジェリンベースの剤）を投与することを含む。【選択図】図１
2021522271.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者において虚弱を治療または防止する方法であって、
（ａ）虚弱の治療または防止を所望するまたは必要としている患者を特定することと、
（ｂ）前記患者に組換えＴＬＲ５アゴニストを投与することであって、前記ＴＬＲ５アゴニストが、病原性タンパク質抗原に融合されない、投与すること
を含む、方法。
【請求項２】
虚弱が、主要な生理学的機能における欠陥の蓄積、再生能力の低下、損なわれた創傷治癒および／または加齢性疾患または障害の増大されたリスクを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
虚弱が、生理学的虚弱指数に従って測定される、請求項１または２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４】
前記生理学的虚弱指数（ＰＦＩ）が、握力、収縮期血圧、拡張期血圧、血流量、血中好中球の数、血中好中球の割合、血中単球の数、血中単球の割合、リンパ球の数、赤血球の数、ヘモグロビン値、ヘマトクリット値、平均赤血球容積、平均赤血球ヘモグロビン値、平均赤血球ヘモグロビン濃度およびケラチノサイト由来サイトカインレベルから選択される１つ以上のパラメータの評価を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記ＴＬＲ５アゴニストが、フラジェリンまたはその誘導体である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記ＴＬＲ５アゴニストが、配列番号１に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ＴＬＲ５アゴニストが、配列番号１であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記ＴＬＲ５アゴニストが、配列番号２〜２７の１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
前記ＴＬＲ５アゴニストが、配列番号２〜２７の１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記患者の生理学的虚弱指数が、約２５％〜約７５％低下される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記患者の生理学的虚弱指数が、少なくとも約７５％、または約５０％、または約３５％、または約２５％低下される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記虚弱が、加齢と関連する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記患者が、中年である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記患者が、約３６歳〜約５５歳である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記患者が、高齢である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記患者が、約５６歳〜約８５歳である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記患者の生物学的性別が、男性である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記患者の生物学的性別が、女性である、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
患者において加齢性疾患または障害を治療または防止する方法であって、
（ａ）加齢性疾患または障害の治療または防止を所望するかまたは必要としている患者を特定することと、
（ｂ）前記患者に組換えＴＬＲ５アゴニストを投与することであって、前記ＴＬＲ５アゴニストが、病原性タンパク質抗原に融合されない、投与すること
を含む、方法。
【請求項２０】
前記加齢性疾患または障害が、増大された細胞老化を特徴とする、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記加齢性疾患または障害が、加速された加齢、循環器疾患、脳血管障害、末梢血管疾患、心臓拡張機能障害、良性前立腺肥大症、大動脈瘤、肺気腫、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、肺線維症、失明、認知症、アルツハイマー病、腎機能障害、変形性関節症、低悪性度の慢性無菌炎症、椎間板ヘルニア、虚弱、脱毛、難聴、視力喪失、筋肉疲労、皮膚の状態、皮膚母斑、しわの多い皮膚、色素沈着過剰、傷跡、ケロイド、酒さ、白斑、尋常性魚鱗癬、皮膚筋炎、日光角化症、およびサルコペニアから選択される、請求項１９または２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記加齢性疾患または障害が、加速された加齢である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記加速された加齢が、早老症候群、またはその症状である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記早老症が、ハッチンソン−ギルフォード早老症候群（ＨＧＰＳ）、ウェルナー症候群（ＷＳ）、ブルーム症候群（ＢＳ）、ロスムンド・トムソン症候群（ＲＴＳ）、コケイン症候群（ＣＳ）、色素性乾皮症（ＸＰ）、トリコチオジストロフィー（ＴＴＤ）、色素性乾皮症−コケイン症候群（ＸＰ−ＣＳ）の合併症、および拘束性皮膚障害（ＲＤ）から選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記加速された加齢が、癌または癌治療によって誘発される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
前記癌治療が、放射線療法、ホルモン療法、チロシンキナーゼ阻害剤、アントラサイクリン、アルキル化剤、トポイソメラーゼ阻害剤、代謝拮抗剤／細胞毒性薬物、ＢＲＡＦ阻害剤、抗腫瘍抗生物質、イソキノロリンアルカロイド、Ｂｃｌ−２阻害剤、造血細胞移植（ＨＣＴ）、テロメラーゼ阻害剤、ヌクレオシドアナログ逆転写酵素阻害剤、ＤＮＡ架橋剤、リボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤、微小管阻害剤、およびｍｉＲＮＡの１つ以上から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記患者が、以前に癌に罹患していた、請求項２５または２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記患者が、癌生存者である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記癌生存者が、癌治療を完了しておりかつ活動性疾患の明らかなエビデンスを有しない、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記癌が、基底細胞癌、胆道癌；膀胱癌；骨肉腫；脳および中枢神経系の癌；乳癌；腹膜癌；子宮頸癌；絨毛癌；結腸直腸癌；結合組織癌；消化器系癌；子宮内膜癌；食道癌；眼癌；頭頸部癌；胃癌（消化器癌を含む）；膠芽腫；肝癌；肝細胞癌；上皮内新生物；腎臓癌または腎癌；喉頭癌；白血病；肝癌；肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、および肺扁平上皮癌）；黒色腫；骨髄腫；神経芽細胞腫；口腔癌（唇、舌、口、および咽頭）；卵巣癌；膵癌；前立腺癌；網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫；直腸癌；呼吸器系癌；唾液腺癌；肉腫；皮膚癌；扁平上皮癌；胃癌；精巣腫瘍；甲状腺癌；子宮癌または子宮内膜癌；泌尿器系癌；外陰癌；ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫、ならびにＢ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度非切断小細胞ＮＨＬ；巨大腫瘤性ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；およびワルデンストレームマクログロブリン血症；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；有毛細胞白血病；慢性骨髄芽球性白血病；ならびに他の癌腫および肉腫；および移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症、浮腫（例えば、脳腫瘍に関連するもの）に関連する異常な血管増殖、ならびにメイグズ症候群である、請求項２５〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記患者が、中年である、請求項１９〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記患者が、約３６歳〜約５５歳である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記患者が、高齢である、請求項１９〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記患者が、約５６歳〜約８５歳である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記患者が、約１８歳より前に、約１６歳より前に、約１４歳より前に、約１２歳より前に、約１０歳より前に、約８歳より前に、約６歳より前に、約４歳より前に、または約２歳より前に前記癌治療を受けた、請求項２５〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＴＬＲ５アゴニストが、前記患者が前記癌治療を受けた後で少なくとも１週間、または少なくとも１ヶ月間、または少なくとも６ヶ月間、または少なくとも１年間、または少なくとも２年間、または少なくとも３年間、または少なくとも４年間、または少なくとも５年間前記患者に投与される、請求項２５〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記患者が、もはや癌を有していないかまたは前記患者が、前記ＴＬＲ５アゴニストが投与される時点で寛解している、請求項２５〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記患者に前記ＴＬＲ５アゴニストを投与することが、細胞老化を減少させることにより前記加齢性疾患または障害を治療または防止する、請求項１９〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記ＴＬＲ５アゴニストが、フラジェリンまたはその誘導体である、請求項１９〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記ＴＬＲ５アゴニストが、配列番号１に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記ＴＬＲ５アゴニストが、配列番号１であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記ＴＬＲ５アゴニストが、配列番号２〜２７の１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４３】
前記ＴＬＲ５アゴニストが、配列番号２〜２７の１つであるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記患者の生物学的性別が、男性である、請求項１９〜４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
前記患者の生物学的性別が、女性である、請求項１９〜４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記ＴＬＲ５アゴニストが、１つ以上のサイクルで投与される、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記サイクルが、１日１回を１日、１日１回を２日間、１日１回を３日間、１日１回を４日間、または１日１回を５日間患者に投与することを伴う、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
５サイクル以下、または３サイクル以下、または２サイクル以下が、年あたり投与される、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
虚弱の治療または防止における使用のためのＴＬＲ５アゴニスト。
【請求項５０】
虚弱の治療または防止のための医薬品の製造におけるＴＬＲ５アゴニストの使用。
【請求項５１】
加齢性疾患または障害の治療または防止における使用のためのＴＬＲ５アゴニスト。
【請求項５２】
加齢性疾患または障害の治療または防止のための医薬品の製造におけるＴＬＲ５アゴニストの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、加齢性疾患を治療するための、および／または虚弱を改善するための組成物および方法に関する。
関連出願の相互参照
【０００２】
この出願は、２０１８年４月２４日に出願された米国仮出願第６２／６６２，０２８号の利益を主張し、その全内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
電子的に提出されたテキストファイルの説明
【０００３】
本明細書と共に電子的に提出したテキストファイルの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる：配列表のコンピュータ可読形式のコピー（ファイル名：「ＧＰＩ−００２ＰＣ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」；作成日：２０１９年４月２４日；ファイルサイズ：５９．９ＫＢ）。
【背景技術】
【０００４】
哺乳動物の加齢は、体細胞におけるＤＮＡ損傷の蓄積、慢性全身性炎症の増加、および損傷した細胞の除去における免疫系の有効性の低下に関連する。
【０００５】
フラジェリン由来のＴＬＲ５アゴニストは、様々な疾患の治療法として開発されている。例えば、エントリモドは、医療用放射線対策として現在開発されている天然ＴＬＲ５アゴニストであるフラジェリンの薬理学的に有用な誘導体である。エントリモドは、その放射線防護活性に加えて、前臨床癌モデルにおいて免疫療法活性を示した。
【０００６】
現在、加齢の予防および治療のために、医学において従来使用されている薬物または治療はない。カロリーの制限による健康的な生活および寿命の延長が報告されている。ラパマイシンなどのｍＴＯＲ阻害剤を使用して、同様の効果が達成され得る。しかし、いずれも長期にわたって適用する必要がある。したがって、加齢に伴う虚弱の進行プロセス（自然に発生し、かつ例えば癌治療によって加速される）を減速させることができる薬剤が必要である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
したがって、本発明は、特定の態様において、患者における虚弱を改善もしくは低減する、かつ／または治療もしくは防止する方法を提供し、本方法は、虚弱の治療または防止を望んでいる、または必要としている患者を特定すること、およびその患者に組換えＴＬＲ５アゴニストを投与することを含み、ここで組換えＴＬＲ５アゴニストは、病原性タンパク質抗原に融合されない。
【０００８】
いくつかの実施形態では、虚弱は加齢に関連している。いくつかの実施形態では、虚弱は、主要な生理学的機能の欠陥の蓄積、再生能力の低下、創傷治癒の障害、および加齢性疾患のリスクの上昇を含む。例えば、いくつかの実施形態では、虚弱は、自然な加齢または加速された加齢に関連している。虚弱は、当業者に公知である任意の数の指標または試験に従って測定できる。例えば、そのような指数の１つである生理学的虚弱指数（ＰＦＩ）は、握力、収縮期血圧、拡張期血圧、血流量、血中好中球の数、血中好中球の割合、血中単球の数、血中単球の割合、リンパ球の数、赤血球の数、ヘモグロビン値、ヘマトクリット値、平均赤血球容積、平均赤血球ヘモグロビン値、平均赤血球ヘモグロビン濃度およびケラチノサイト由来サイトカインレベルから選択される１つ以上のパラメータの測定を含む。任意の１個体における参照標準からの逸脱は欠陥として公知であり、個体の全体的な平均ＰＦＩスコアは、測定されたパラメータの総数に対する欠陥の比率である。
【０００９】
いくつかの実施形態では、本発明は、患者のＰＦＩスコアの低下によって測定されるように、患者の虚弱を改善もしくは低減し、かつ／または治療もしくは防止する方法を提供する。いくつかの実施形態では、患者の虚弱を改善もしくは低減し、かつ／または治療もしくは防止するための本発明の方法および組成物は、患者が、本発明のＴＬＲ５アゴニストを投与されなかった場合よりも遅い速度でスコアが上昇するように、経時的にＰＦＩスコアを維持することを含む。本発明のいくつかの実施形態では、患者のＰＦＩスコアは、時間の経過と共にほぼ同じ状態を維持する。さらなる実施形態では、本発明の方法は、自然な加齢および／または加速された加齢（例えば、癌または癌治療によって誘発される加速された加齢）に関連する細胞老化および免疫老化の減少をもたらす。
【００１０】
別の態様では、本発明は、患者において加齢性疾患または障害を治療または防止する方法を提供し、本方法は、加齢性疾患または障害の治療または防止を望んでいる、または必要としている患者を特定すること、この患者に組換えＴＬＲ５アゴニストを投与することを含み、ここで組換えＴＬＲ５アゴニストは、病原性タンパク質抗原に融合されない。いくつかの実施形態では、加齢性疾患または障害は、細胞老化または免疫老化の増加を特徴とする。
【００１１】
いくつかの実施形態では、加齢性疾患または障害は、加齢の加速、循環器疾患、脳血管障害、末梢血管疾患、心臓拡張機能障害、良性前立腺肥大症、大動脈瘤、肺気腫、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、肺線維症、失明、認知症、アルツハイマー病、腎機能障害、変形性関節症、低悪性度の慢性無菌炎症、椎間板ヘルニア、虚弱、脱毛、難聴、視力喪失、筋肉疲労、皮膚の状態、皮膚母斑、しわの多い皮膚、色素沈着過剰、傷跡、ケロイド、酒さ、白斑、尋常性魚鱗癬、皮膚筋炎、日光角化症、およびサルコペニアから選択される。
【００１２】
特定の実施形態では、本発明の方法は、加速された加齢を治療または防止することを含む。いくつかの実施形態では、加速された加齢は、早老症またはその症状であり、これらに限定されないが、ハッチンソン−ギルフォード早老症候群（ＨＧＰＳ）、ウェルナー症候群（ＷＳ）、ブルーム症候群（ＢＳ）、ロスムンド・トムソン症候群（ＲＴＳ）、コケイン症候群（ＣＳ）、色素性乾皮症（ＸＰ）、トリコチオジストロフィー（ＴＴＤ）、色素性乾皮症−コケイン症候群（ＸＰ−ＣＳ）の合併症、または拘束性皮膚障害（ＲＤ）を含む。これらの疾患または障害の１つを有する対象は、典型的には、寿命（すなわち、生存期間）が短縮される。
【００１３】
さらなる実施形態において、加速された加齢は、癌または癌治療によって誘発される。例えば、本発明によって、自然な加齢プロセスにおいて加速を誘発する癌治療は、放射線療法、ホルモン、チロシンキナーゼ阻害剤、アントラサイクリン、アルキル化剤、トポイソメラーゼ阻害剤、代謝拮抗剤／細胞毒性薬物、ＢＲＡＦ阻害剤、抗腫瘍抗生物質、イソキノロリンアルカロイド、Ｂｃｌ−２阻害剤、造血細胞移植（ＨＣＴ）、テロメラーゼ阻害剤、ヌクレオシドアナログ逆転写酵素阻害剤、ＤＮＡ架橋剤、リボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤、微小管阻害剤、およびｍｉＲＮＡからなる１つ以上の治療法から選択されることが企図される。
【００１４】
いくつかの実施形態では、そのために加速された加齢を誘発し得る治療を患者が受ける、任意の癌が企図される。一実施形態では、そのために患者が治療を受ける癌は、血液癌である。さらに、いくつかの実施形態では、患者は、小児期に癌治療を受けた。
【００１５】
さらなる実施形態では、組換えＴＬＲ５アゴニストは、患者が癌治療を受けた後、少なくとも１週間、または少なくとも１ヶ月間、または少なくとも６ヶ月間、または少なくとも１年間、または少なくとも２年間、または少なくとも３年間、または少なくとも４年間、または少なくとも５年間患者に投与される。いくつかの実施形態において、患者は、もはや癌を有しないか、または患者は、組換えＴＬＲ５アゴニストが投与される時点で寛解している。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
実施形態の前述の特徴は、添付の図面を参照して、以下の詳細な説明を参照することによって、より容易に理解されるであろう。
【図１】ＮＩＨスイス雄マウスおよび雌マウスの寿命および暦年齢による加齢。Ａ．ＮＩＨスイス雄マウスおよび雌マウスのカプランマイヤー生存曲線（ｎ＝７９／群）。統計的に有意な性差は検出されず、平均生存期間は、それぞれ雄で８９．１３＋３．４９週、雌で９６．９５＋２．９９週（ｐ＝０．３６８、ログランク検定）であった。Ｂ．異なる年齢の経時的加齢のＮＩＨスイス雄マウスおよびメスマウス用に作成した生理学的虚弱指数（ＰＦＩ）。ＰＦＩにおける年齢依存性の上昇は、いずれの性別のマウスにおいても観察された健康欠陥の蓄積を反映している。
【図２】フラジェリン治療の実験スケジュールの概略図。各実験群において、雄および雌は、５日間連続で毎日皮下注射された短期コースのフラジェリン（１ｍｇ／注射）を：群１は５５週齢で、群２は４４週齢で受け、群３は１８週齢および８４週齢で２コース受けた。ＰＦＩを、マウスが２６、５２、７８、１０４、および１２０週齢に達したときに評価した。
【図３】５５週齢でのフラジェリン投与の５日間の単一コース（実験群１）は、ＮＩＨスイス雄マウスの平均生存率を８９＋７．９週から１１２．３＋９．２週に延長した。雌マウスの生存率への影響は検出されなかった。生理学的虚弱指数を、１０４週齢および１２０週齢で雄マウスおよび雌マウス用に作成した。存命中の早い段階でのフラジェリンの５日間の注射コースは、雌マウスではなく雄マウスのＰＦＩを有意に減少させた。
【図４】実験群１からのマウスにおける生理学的虚弱指数の動的変化。１０４週齢で、フラジェリン治療を受けた雄群での平均ＰＦＩ（破線）は、５５週齢での治療時から３３％増加し、対照マウス（実線）では、それは着実に１００％増加した。雌では、いかなる影響も観察されなかった。
【図５】実験群２からのマウスにおける生理学的虚弱指数の動的変化。４４週齢でマウスにフラジェリンを注射した。７８週齢および１０４週齢で評価した平均ＰＦＩは、フラジェリン治療を受けた雄群（破線）では、治療時からほとんど変化がないことを示し、対照マウスでは、それは２００％を超えて着実に増加した（実線）。雌では、いかなる影響も観察されなかった。
【図６】実験群３からのマウスにおける生理学的虚弱指数の動的変化。１８週齢および８４週齢でマウスにフラジェリンを２回注射した。５２週齢、７８週齢、８８週齢、および１０４週齢で４回評価した平均ＰＦＩは、対照マウス（実線）と比較して、フラジェリン治療雄群（破線）における有意に小さな増加を示した。雌では、いかなる影響も観察されなかった。
【図７】ラパタール（ナノ配合された水溶性ラパマイシン、Ｃｏｍａｓら、Ａｇｉｎｇ（Ａｌｂａｎｙ  ＮＹ）１０：７１５−２２（２０１２）を参照）の慢性投与は、ＮＩＨスイス雌マウスの生存期間を延長するが、ＮＩＨスイス雄マウスの生存期間は延長しない。８９週齢で飲料水中のラパタールの投与を開始したマウスのカプランマイヤー生存曲線。ラパマイシンの慢性投与は、雌マウスの生存期間を１１４．４＋３．１から１２７．３＋３．１週間に延長する（ｐ＝０．０１、カプランマイヤーログランク検定）。
【図８】ＮＩＨスイスマウスの治療および評価のタイムラインの概略図（縮尺どおりではない）。「エントリモド」矢印は、エントリモド治療（または対照群のＰＢＳ治療）の時期を示し、「ＰＦＩ」矢印は、ＰＦＩ決定の時期を示す。
【図９】「高齢」マウスの寿命に対するエントリモド治療の効果。カプランマイヤー生存曲線を、１１３週齢（矢印）でエントリモド（５μｇ／マウス；暗い線）またはＰＢＳ（明るい線）の５日間のＳＱ注射を受けたＮＩＨスイス雄マウスおよび雌マウスの群について示す。
【図１０】「中年」マウスの寿命に対するエントリモド治療の効果。カプランマイヤー生存曲線を、５５週齢（矢印）でエントリモド（５μｇ／マウス；暗い線）またはＰＢＳ（明るい線）の５日間のＳＱ注射を受けたＮＩＨスイス雄マウスおよび雌マウスの群について示す。
【図１１】「若年」マウスの寿命に対するエントリモド治療の効果。カプランマイヤー生存曲線を、１８週齢および８４週齢（矢印）およびエントリモド（５μｇ／マウス；暗い線）またはＰＢＳ（明るい線）の５日間のＳＱ注射を受けたＮＩＨスイス雄マウスおよび雌マウスの群について示す。
【図１２】１１２週齢でのエントリモドによるＮＩＨスイスマウスの治療は、１２８週齢で測定した平均ＰＦＩに対しいかなる影響もなかった。各群について評価された動物の数を、棒グラフ内に白で示す。
【図１３】５５週齢でのエントリモドによるＮＩＨスイスマウスの治療は、雌ではなく雄において１０４週齢および１２０週齢でＰＦＩの低下をもたらした。各群について評価された動物の数を、棒グラフ内に白で示す。
【図１４】１８週齢および８４週齢でエントリモド治療を受けた後のＮＩＨスイス雄マウスおよび雌マウスにおけるＰＦＩの変化のダイナミクス。平均ＰＦＩを、エントリモド治療（黒丸）およびＰＢＳ治療（灰色の円）のマウス群について、１８週齢、５２週齢、８４週齢、および１０４週齢で測定した。治療の時期を、矢印で示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
この本開示のいくつかの態様および実施形態は、少なくとも部分的に、病原性タンパク質抗原に融合されないＴＬＲ５アゴニスト（例えば、組換えフラジェリンおよび／またはエントリモドなどのフラジェリンベースの剤）が、例えば、虚弱を改善するかつ／または治療もしくは防止すること、かつ／または加齢性疾患もしくは障害を治療もしくは防止すること、かつ／または加齢（加速された加齢を含む）を防止することもしくは減速させることにおいて有効であり得るという所見に基づく。
【００１８】
加齢プロセスは、すべての主要な生理学的機能の欠陥の段階的な蓄積、再生能力の低下、創傷治癒の障害、および癌、２型糖尿病、関節炎、アルツハイマー病、およびパーキンソン病、アテローム性動脈硬化症などの加齢性疾患または障害のリスクの上昇によって示される。累積的に、これらすべてのイベントは、虚弱の段階的な増大として説明でき、いわゆる「虚弱指数」によって測定される。加齢に伴う虚弱の増大は、化学療法および放射線による癌治療を受けたヒトまたは動物において促進され得、これは加速された加齢と解釈され得る。
【００１９】
理論に束縛されることを望むものではないが、本発明は、自然な加齢の進行、ならびに例えば癌治療によって加速される加齢を、べん毛を有する細菌による感染に応答する天然の自然免疫機構の活性化によって劇的に減速させ得ることを企図する。べん毛は、フラジェリンと名付けられたタンパク質により構築される活発な動きのための細胞小器官である。身体におけるこうした細菌の存在は、Ｔｏｌｌ様受容体５（ＴＬＲ５）と呼ばれる細胞表面受容体によって認識される。ＴＬＲ５へのＴＬＲ５アゴニスト（例えばフラジェリンまたはフラジェリンベースの剤（エントリモドなど））の結合は、生理学的応答を引き起こし、虚弱の獲得の減速、ならびに治療された有機体の健康および生活の質の改善として現われる有機体への長期的な影響を有する複数の生物活性因子（サイトカイン、ケモカインなど）の産生を伴う、免疫系の全身的な動員をもたらす。ＴＬＲ５を活性化できるフラジェリンまたはその誘導体による治療は、自然な加齢ならびに癌治療および他の種類の毒化によって引き起こされる早期の加速された加齢を防止し、治療するためのアプローチとして計画することができる。
【００２０】
加齢は、時間と共に進行する哺乳類生物の段階的な全身性の病理学的変化である。これは、複数の臓器および組織の機能における複数の欠陥の蓄積ならびに再生能力の低下に関連し、加齢性慢性疾患または障害（アテローム性動脈硬化症、糖尿病、肺線維症、失明、認知症、腎機能障害、変形性関節症、および低悪性度の慢性無菌炎症など）、ならびに本明細書で企図される他の加齢性疾患および障害の発症をもたらす。これらの状態は、虚弱、認知障害、および不動を含む老年症候群の段階的な発症と一致することが多い。加齢は、自然で不可避のプロセスである。加齢の根本的な原因は依然として議論の余地があるが、加齢の２つの特徴であるＤＮＡ損傷の増加および全身性の無菌性慢性炎症の発症は、一般的に普遍的なものとして受け入れられており、いずれも加齢に伴う病状の主な寄与因子と考えられている。
【００２１】
様々な実施形態において、本発明は、加齢、またはその複数の欠陥の原因を減少させる方法を提供する。様々な実施形態において、本発明は、ＤＮＡ損傷の量または細胞内の影響を低減する方法を提供する。様々な実施形態において、本発明は、全身性の無菌性慢性炎症の量または細胞内の影響を低減する方法を提供する。
【００２２】
様々な実施形態において、本発明は、例えば高齢の対象において機能的に低下され得る、損傷した細胞の細胞クリアランスを改善する方法を提供する。
【００２３】
様々な実施形態において、本発明は、例えば、老化を減少、停止、または遅延させることにより、細胞老化を治療または防止することに関する。任意の特定の理論に拘束されることを意図することなく、細胞の加齢（老化）は、特に細胞周期が遮断されるときに、ｍＴＯＲ経路などのシグナル伝達経路の過剰刺激および過剰活性化によって引き起こされ、細胞の超活性化および機能亢進をもたらすと考えられている。次に、このことが、二次信号の耐性および代償的無能を引き起こす。細胞の機能亢進および信号耐性の両方が、加齢（無臨床損傷）および加齢性疾患または障害（臨床損傷）として現われる臓器損傷（遠隔臓器でなど）を引き起こし、最終的には生物の死をもたらす。細胞加齢マーカーの非限定的な例としては、細胞肥大、増殖能の永久的な喪失、平坦で腫大化した（ｌａｒｇｅ−ｆｌａｔ）細胞形態およびｂｅｔａ−Ｇａｌ染色が挙げられる。様々な実施形態において、本発明は、細胞加齢のマーカーのいずれかを調節することに関する。
虚弱および虚弱指数
【００２４】
様々な実施形態において、本発明は、患者において虚弱を改善もしくは低減する、かつ／または治療もしくは防止する方法を提供し、本方法は、虚弱の治療または防止を望んでいる、または必要としている患者を特定すること、およびその患者に組換えＴＬＲ５アゴニストを投与することを含み、ここで組換えＴＬＲ５アゴニストは、病原性タンパク質抗原に融合されていない。
【００２５】
いくつかの実施形態では、虚弱は、主要な生理学的機能の欠陥の蓄積、再生能力の低下、創傷治癒の障害、および加齢性疾患のリスクの上昇を含む。例えば、いくつかの実施形態では、虚弱は、自然な加齢または加速された加齢に関連している。虚弱は、当業者に公知である任意の数の指標または試験に従って測定できる。例えば、そのような指数の１つである生理学的虚弱指数（ＰＦＩ）は、握力、収縮期血圧、拡張期血圧、血流量、血中好中球の数、血中好中球の割合、血中単球の数、血中単球の割合、リンパ球の数、赤血球の数、ヘモグロビン値、ヘマトクリット値、平均赤血球容積、平均赤血球ヘモグロビン値、平均赤血球ヘモグロビン濃度およびケラチノサイト由来サイトカインレベルから選択される１つ以上のパラメータの測定を含む。任意の１個体における参照標準からの逸脱は、欠陥として公知であり、その個体の全体的な平均ＰＦＩスコアは、測定されたパラメータの総数に対する欠陥の比率である。
【００２６】
虚弱は、ストレス因子に対する虚弱およびストレスに耐える能力の低下として現われる場合がある。例えば、Ｂｕｃｈｎｅｒ  ａｎｄ  Ｗａｇｎｅｒ（１９９２  Ｃｌｉｎ  Ｇｅｒｉａｔｒ  Ｍｅｄ．１９９２  Ｆｅｂ；８（１）：１−１７）の開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。虚弱は、恒常性メカニズム（例えば、相互接続性および／またはフィードバックまたはフィードフォワード）の複雑性の喪失として現われる場合もある。例えば、Ｌｉｐｓｉｔｚ（２００２  Ｊ  Ｇｅｒｏｎｔｏｌ  Ａ  Ｂｉｏｌ  Ｓｃｉ  Ｍｅｄ  Ｓｃｉ．２００２  Ｍａｒ；５７（３）：Ｂ１１５−２５の開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。虚弱はまた、Ｂｏｒｔｚ  ２００２，Ｊ  Ｇｅｒｏｎｔｏｌ  Ａ  Ｂｉｏｌ  Ｓｃｉ  Ｍｅｄ  Ｓｃｉ．２００２  Ｍａｙ；５７（５）：Ｍ２８３−８に記載のとおり（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、生物を介するエネルギーの流れを使用しないことおよび／またはそれらの流れの減少として現われる場合がある。虚弱は、Ｆｅｒｒｕｃｃｉ  ２００５  Ｊ．Ｇｅｒｏｎｔｏｌ．Ａ  Ｂｉｏｌ．Ｓｃｉ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．６０，５６（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載のとおり、恒常性調節不全として現われる場合もある。
【００２７】
ヒトおよび動物における欠陥および虚弱の加齢に伴う蓄積を定量的に評価するためのいくつかの包括的なアプローチがある。個々の生物は、それらの健康状態および加齢速度が均一でない。このような不均一性を説明するために、虚弱指数（ＦＩ）が数値スコアとして導入されており、それは、本研究で検討した欠陥の総数に対するヒトに存在する欠陥の比率である。ＦＩの変化は、個々の加齢の比率を特徴づける。同様のアプローチが実験動物にも適用されている。虚弱指数は、「生物学的年齢」および生活の質の低下を示す一般的な健康低下の程度の、信頼でき、広く受け入れられている尺度と考えられる。
【００２８】
特定の態様および実施形態では、本明細書で提供されるものは、患者において虚弱を改善および／または治療もしくは防止するための方法、ならびに／または虚弱指数を低下させるための方法を含む。虚弱は、当技術分野で公知である多くの方法のいずれかで評価できる。例えば、虚弱および虚弱を評価する／インデックス付けする方法は、Ｈｕｂｂａｒｄら、Ａｇｅｉｎｇ，２００８年１１月に電子公開、１１５−１１８ページ；Ｃｅｓａｒｉら、Ａｇｅ  ａｎｄ  Ａｇｅｉｎｇ，４３：１０−１２，２０１４；およびＭｏｈｌｅｒ  ｅｔａｌ，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｇｅｒｏｎｔｏｌｏｇｙ，５４：６−１３，２０１４に記載されており、これらはすべて、参照により本明細書に組み込まれる。
【００２９】
様々な実施形態において、虚弱指数は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１５／０２８５８２３号に記載されるように計算される。例えば、虚弱指数の決定の説明が提供される。虚弱指数は、暦年齢が必ずしも生物学的年齢を反映するものではないという概念に対処するために、同じ暦年齢の生物の虚弱範囲への適合を評価するために開発された。１６項目のパラメータ（体重、握力、血圧、全血球計算、サイトカイン値分析の測定値を含む）に基づいて、ＦＩは、測定された欠陥の総数の比率として計算され、０（欠陥なし＝適合）と１（すべての欠陥が存在する＝虚弱）のＦＩのスコアを割り当てられる。したがって、ＦＩが高いほど、生物の健康状態が悪いことを示す。この点で、ＦＩは、同じ暦年齢の「虚弱」範囲の生物への「適合」を評価するための有用なツールとして提供される。
【００３０】
特定の実施形態では、本発明の方法は、Ａｎｔｏｃｈら、Ａｇｉｎｇ．２０１７；９：１−１２（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載のとおり、生理学的虚弱指数（ＰＦＩ）に従って測定されるように、対象における虚弱を低減させるかまたは防止する。例えば、ＰＦＩは、若年の参照対象を参照して個々の対象について決定できる。各対象について、様々なパラメータが測定される。これらのパラメータとしては、年齢、体重、握力、および拡張期血圧を含む非侵襲的測定が挙げられる。追加の血液化学測定値（白血球数、好中球数、好中球の割合、リンパ球の割合、単球の割合、好酸球の割合、赤血球数、ヘモグロビン値、ヘマトクリット値、平均赤血球容積、平均赤血球ヘモグロビン値、平均赤血球ヘモグロビン濃度、血小板数、および平均血小板容積を含む）も決定され得る。各パラメータについて、中央値および標準偏差が計算される。任意の単一のパラメータにおいて複数の標準偏差（ＳＴＤＥＶ）が中央値とは異なる対象は、参照群から除外される。高齢の対象について測定された各パラメータ値を、参照群の対応する値と比較し、任意のスコアを割り当てる。差が１ＳＴＤＥＶ未満である値に、スコア０（欠陥がなく、参照群の範囲内）を割り当てる。差が１ＳＴＤＥＶである値は、０．２５（最小の欠陥）としてスコア付けする。参照群の対応する値との差が２ＳＴＤＥＶのみである値は、０．５としてスコア付けし、差が３ＳＴＤＥＶのみである値は、０．７５としてスコア付けする。値が３ＳＴＤＥＶを超える場合、１（極度の欠陥）としてスコア付けする。個々の対象が表した欠陥の数は、測定されたパラメータの総数の比率として計算され、生理学的虚弱指数（ＰＦＩ）と呼ばれる。
【００３１】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、ＰＦＩによって測定されるとおり、対象において虚弱を低減させるかもしくは改善する、かつ／または治療もしくは防止する。例えば、虚弱を低減させるかもしくは改善する、かつ／または治療もしくは防止するために組換えＴＬＲ５アゴニストを対象に投与することは、低下されたＰＦＩスコアをもたらし得る。いくつかの実施形態では、対象のＰＦＩスコアは、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも１００％低下される。いくつかの実施形態では、対象のＰＦＩスコアは、約２５％〜７５％、約２５％〜５０％、または約５０％〜７５％低下される。いくつかの実施形態では、対象のＰＦＩスコアは、０．９、０．８５、０．８、０．７５、０．７、０．６５、０．６、０．５５、０．５、０．４５、０．４、０．３５、０．３、０．２５、０．２、０．１５、０．１、または０．５程度に低下される。
【００３２】
さらに、欠陥の蓄積としての虚弱は、Ｒｏｃｋｗｏｏｄら、Ｊ  Ｇｅｒｏｎｔｏｌ  Ａ  Ｂｉｏｌ  Ｓｃｉ  Ｍｅｄ  Ｓｃｉ．２００７  Ｊｕｌ；６２（７）：７２２−７２７（参照によりその全体が組み込まれる）に記載のとおり、ロックウッド虚弱指数によって測定できる。実施形態では、本方法は、ロックウッド虚弱指数によって評価されるように、虚弱を低減させるかまたは防止する。
【００３３】
複数の生理学的系にわたる累積的な低下によって生じる予備力の低下である生物学的症候群としての虚弱は、Ｆｒｉｅｄら、Ｊ  Ｇｅｒｏｎｔｏｌ  Ａ  Ｂｉｏｌ  Ｓｃｉ  Ｍｅｄ  Ｓｃｉ．２００１  Ｍａｒ；５６（３）：Ｍ１４６−５６（参照によりその全体が組み込まれる）に記載の虚弱スコアによって測定できる。Ｆｒｉｅｄ虚弱スコアは、１０ポンド（４．５ｋｇ）を超える体重減少、握力に関連する弱さ；自己申告による倦怠感；歩行速度１５フィート（４．５７メートル）、および週あたりの身体活動の量（Ｋｃａｌ）などの、様々なパラメータを測定する、物理的虚弱表現型（ＰＦＰ）を含む。Ｆｒｉｅｄ虚弱スコアは、０（虚弱でない）、１〜２（中程度の虚弱）、および３以上（虚弱）のスコアを組み込む。様々な実施形態では、本発明の方法は、Ｆｒｉｅｄ虚弱スコアによって測定されるとおり、対象において虚弱を低減させるかもしくは改善する、かつ／または治療もしくは防止する。例えば、虚弱を低減させるもしくは改善する、かつ／または治療もしくは防止するために組換えＴＬＲ５アゴニストを対象に投与することは、３から２へ、３から１へ、３から０へ、２から１へ、２から０へ、または１から０へ低下されたＦｒｉｅｄ虚弱スコアをもたらし得る。さらに、いくつかの実施形態では、虚弱を低減させるもしくは改善する、かつ／または治療もしくは防止するために組換えＴＬＲ５アゴニストを対象に投与することは、対象のＦｒｉｅｄ虚弱スコアの上昇をなくす。
【００３４】
虚弱は、Ａｂｅｌｌｅａｎ  Ｖａｎ  Ｋａｎら、Ｊ  Ａｍ  Ｍｅｄ  Ｄｉｒ  Ａｓｓｏｃ．２００８  Ｆｅｂ；９（２）：７１−２．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｊａｍｄａ．２００７．１１．００５（参照によりその全体が組み込まれる）に記載のフレイルスケールによっても測定できる。フレイルスケールで測定されるパラメータとしては、疲労の持続；耐性（１回の階段を上る能力）；歩行（１ブロック歩く能力）；５つ以上の病気；および５％以上の体重減少が挙げられる。フレイル虚弱コアは、０（虚弱でない）、１〜２（中程度の虚弱）、および３以上（虚弱）のスコアを組み込む。様々な実施形態において、本発明の方法は、フレイルスケールスコアによって測定されるように、対象において虚弱を低減させるかまたは改善する。例えば、虚弱を減少させるまたは改善するために組換えＴＬＲ５アゴニストを対象に投与することは、３から２へ、３から１へ、３から０へ、２から１へ、２から０へ、または１から０へ低下されたフレイルスケールスコアをもたらし得る。さらに、いくつかの実施形態では、虚弱を低減させるもしくは改善する、かつ／または治療もしくは防止するために組換えＴＬＲ５アゴニストを対象に投与することは、対象のフレイルスケールスコアの上昇をなくす。
【００３５】
いくつかの実施形態では、本明細書において提供される方法は、少なくとも１つの認められている虚弱の尺度を使用して虚弱指数を改善する（もしくは低下させる）か、または虚弱における減少を遅延させるかまたは減速させる。いくつかの実施形態では、本明細書において提供される方法は、虚弱指数（ＦＩ）、生理学的虚弱指数（ＰＦＩ）、Ｆｒｉｅｄ虚弱スコア、ロックウッド虚弱指数、フレイルスケール、および改訂虚弱指数（ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ｆｒａｉｌｔｙ  ｉｎｄｅｘ）から選択される少なくとも１つの認められている虚弱の尺度を使用して、虚弱指数を改善する（もしくは減少させる）か、または虚弱における減少を遅延させるかまたは減速させる。
【００３６】
いくつかの実施形態では、虚弱は、除脂肪体重の低下、弱化、倦怠感、エネルギー消費の低下、および／または歩行速度の低下を含む。実施形態では、本方法は、除脂肪体重の低下、弱化、倦怠感、エネルギー消費の低下、および／または歩行速度の低下の１つ以上の発症または進行を低減するかまたは防止する。
加齢性疾患および障害
【００３７】
本発明は、病原性タンパク質抗原に融合されていない組換えＴＬＲ５アゴニストを投与することを含む方法を企図する。様々な実施形態において、組換えＴＬＲ５アゴニストは、加齢性疾患または障害を有する患者において細胞老化を減少させる。
【００３８】
いくつかの実施形態では、疾患は、癌、加齢性疾患、タバコ関連疾患、または皮膚のしわである。
【００３９】
例えば、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、アルツハイマー病、ＩＩ型糖尿病、黄斑変性症、慢性炎症に基づく病状（例えば、関節炎）などの加齢性疾患もしくは障害を防止もしくは治療するため、かつ／または加齢に関連することが知られている癌種（例えば、前立腺癌、黒色腫、肺癌、結腸癌など）の発症を防止するためであり、かつ／または加齢化組織（例えば、皮膚または前立腺）の機能および形態を回復する目的として、かつ／または蓄積された老化細胞によって損なわれた組織の形態を改善する目的として（例えば、色素性皮膚病変の美容的治療）、かつ／または放射線療法もしくは化学療法による癌治療の結果を改善する目的として、かつ／または休眠中の癌細胞を排除することにより癌患者における再発および転移性疾患を防止することを目的としている。本開示は、ヒトおよび非ヒト動物の疾患ならびに加齢および加齢性障害の予防および／または治療に好適である。
【００４０】
様々な例において、本開示は、これに限定されないが、アルツハイマー病、ＩＩ型糖尿病、黄斑変性症、または慢性炎症、必ずしもこれらに限定されないが関節炎を含む、加齢性疾患または障害を有するまたは発症するリスクがあることが疑われる個体を治療する方法に関する。
【００４１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法、または心血管疾患もしくは心障害、炎症性疾患または障害、肺疾患または肺障害、神経疾患または神経障害、代謝性疾患または障害、皮膚疾患または皮膚障害、加齢性疾患または障害、早期老化疾患または障害、および睡眠障害を有するか、または有するリスクがあると特定された患者の治療のための方法。
【００４２】
特定の態様および実施形態で本明細書において提供される方法は、加齢に伴う変性障害の治療または防止に適用可能である。より具体的には、本明細書で提供される方法は、１）脂肪組織が失われる率を低下させること、２）筋繊維の直径が減少する速度を低下させること、および３）皮膚の張りが時間の経過と共に悪化する速度を低下させることにおいて改善をもたらし得る。これらの影響は、高齢のレシピエント、すなわち５１歳以上のレシピエント、特に６５歳、７０歳、７５歳以上などの６１歳以上のレシピエントでより劇的に見られ得る。また、候補となるレシピエントとしては、喫煙者および使用者、アルコールおよび麻薬の乱用者、日焼け愛好家など、彼らのライフスタイルが加齢を促進する効果を課す、レシピエントが挙げられる。
【００４３】
様々な実施形態において、本方法によって治療される特定の状態および疾患または障害は、サルコペニアを含む。サルコペニアはまず、筋肉繊維の脂肪への置換、線維症の増加、筋肉代謝の変化、酸化ストレス、および神経筋接合部の変性などの要因によって引き起こされる、筋肉組織の「質」の低下と共に、筋萎縮（筋肉サイズの減少）を特徴とする。これらの変化は、組み合わさって、筋肉機能の進行性の喪失および虚弱をもたらす。
【００４４】
本発明の方法によって治療される他の状態は、様々な実施形態において、白内障、ならびに皮膚のしわおよび変色、ならびに全体的な皮膚の張りなどのいわゆる「加齢の兆候」を含む。本方法による治療は、皮膚の張りを支える脂肪および筋肉が減少する速度を低下させると予想され、その結果、皮膚のしわも減少するか、遅延するか、または消失する。治療はまた、白内障が眼内に生じる速度に利点を有すると予想される。
加速された加齢（癌およびプロセロイド症候群）
【００４５】
いくつかの実施形態では、本発明は、対象において加速された加齢を低下させるための方法を提供する。例えば、いくつかの実施形態において、本発明は、組換えＴＬＲ５アゴニスト、例えば、フラジェリンまたはフラジェリンベースの剤（エントリモドなど）を対象または患者に投与して、癌および／または癌治療または早老症に関連する加齢の加速を低下させる。
【００４６】
遺伝毒性のある医学的治療または環境への若年の個体の曝露は、上に列挙されかつ加速された加齢と見なされる複数の加齢性状態の早期発症の高リスクに関連づけられている。
【００４７】
このタイプの最も一般的な治療法の１つは、癌治療である。癌治療は、多くの場合、ヒトおよび動物の遺伝毒性ストレスへの曝露を伴い、多数の正常細胞に損傷したＤＮＡを残し、老化細胞の蓄積および慢性全身性炎症の獲得を誘発する。これらの状態は、甲状腺機能の異常、骨塩密度の低下および骨粗鬆症の増加、不妊、組織再生の障害、心毒性、肺線維症および慢性無菌炎症などの、自然な加齢に一般的に関連する複数の疾患または障害のリスクを高める。
【００４８】
様々な実施形態では、治療対象の癌は、基底細胞癌、胆道癌；膀胱癌；骨肉腫；脳および中枢神経系癌；乳癌；腹膜癌；子宮頸癌；絨毛癌；結腸直腸癌；結合組織癌；消化器系癌；子宮内膜癌；食道癌；眼癌；頭頸部癌；胃癌（消化器癌など）；膠芽腫；肝癌；肝細胞癌；上皮内新生物；腎臓癌または腎癌；喉頭癌；白血病；肝癌；肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌）；黒色腫；骨髄腫；神経芽細胞腫；口腔癌（唇、舌、口、および咽頭）；卵巣癌；膵癌；前立腺癌；網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫；直腸癌；呼吸器系癌；唾液腺癌；肉腫；皮膚癌；扁平上皮癌；胃癌；精巣腫瘍；甲状腺癌；子宮癌または子宮内膜癌；泌尿器系癌；外陰癌；ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫などのリンパ腫、ならびにＢ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）など）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度非切断小細胞ＮＨＬ；巨大腫瘤性ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；およびワルデンストレームマクログロブリン血症；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；有毛細胞白血病；慢性骨髄芽球性白血病；ならびに他の癌腫および肉腫；および移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症、浮腫（例えば、脳腫瘍に関連するもの）に関連する異常な血管増殖、ならびにメイグズ症候群から選択される。
【００４９】
癌生存者における加齢の加速は、小児期に癌に対して治療が奏功した個体で特によく報告されている。実際に、小児癌の治療を受けた成人は、心血管、肺、肝臓、腎、および性腺の機能障害、二次性悪性新生物などの慢性的な健康状態の早期発症のリスクが高く、死亡率が高い。２０代の生存者における慢性疾患の発症率は、５０代の同胞の発症率とほぼ同じである。認知機能障害および筋力の低下などの、他の加齢に伴う状態の発症率の上昇も、小児癌生存者の間で報告されており、予想よりも数十年早く現われる。この研究および他の研究は、小児癌の一部の生存者が、高齢者に見られるものと一致する生理学的虚弱表現型を有することを示唆する。造血細胞移植（ＨＣＴ）生存者の生理学的虚弱も、加速された加齢を示唆し、早期死亡の予測因子である。虚弱率は、ＨＣＴ生存者の方が同胞よりも８倍高かった。移植後少なくとも１０年のＨＣＴの生存者では、重度の／生命を脅かす／致命的な状態の１５年の累積発生率は４１％であった。
【００５０】
様々な実施形態では、本発明の方法は、早期の加齢または加速された加齢を治療または防止することを含む。いくつかの実施形態では、加速された加齢は、これらに限定されないが、ハッチンソン−ギルフォード早老症候群（ＨＧＰＳ）、ウェルナー症候群（ＷＳ）、ブルーム症候群（ＢＳ）、ロスムンド・トムソン症候群（ＲＴＳ）、コケイン症候群（ＣＳ）、色素性乾皮症（ＸＰ）、トリコチオジストロフィー（ＴＴＤ）、色素性乾皮症−コケイン症候群（ＸＰ−ＣＳ）の合併症、または拘束性皮膚障害（ＲＤ）を含む、早老症のいずれか１つの症状である。これらの疾患または障害の１つを有する対象は典型的には、寿命（すなわち、生存期間）が短縮されている。
【００５１】
様々な実施形態では、本発明の方法は、対象における炎症のレベルを調節する（例えば、増大または減少させる）。「炎症」は、感染、発熱、および外傷を含む、身体にかかる様々な急性ストレスに対する正常な応答である。他の種類の炎症としては、組織内および全身の血漿中に見られる炎症誘発性サイトカインのレベルの上昇が挙げられる。炎症は、感染症と関連する可能性があるが、身体的外傷、風邪、放射線による火傷、熱性物質または腐食性物質、化学的刺激物、細菌またはウイルス性病原体、局所的な酸素欠乏（虚血）、または再灌流（虚血組織への酸素の突然の再注入）を含む、事実上あらゆる種類の外傷または脅威に応答して生じる。これは、発赤、熱、腫れ、および疼痛などの典型的な症状を含み、炎症を起こした臓器または組織の機能低下を伴い得る。これは、外傷または脅威が検出された部位に存在し得る有害な剤と戦う傾向があり得るか、または元の場所に外傷または脅威を封じ込める、急速に広がらないようにする傾向があり得る、いくつかの影響を伴う一般的な反応である。炎症は、有害な刺激を排除または中和し、組織の完全性を回復することを目的とした自己防衛反応である。末梢炎症と同様に、神経炎症は、有害なプロセスになり得、それが多くの中枢神経系障害の病因に寄与し得ることが現在広く受け入れられている。ＣＮＳ炎症は一般に、ミエリン鞘の喪失または軸索の喪失を含む、ある程度の組織損傷に関連しており、ヒトＭＳ患者における中心的なテーマである。炎症のレベルは、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）と呼ばれる特定の化合物について簡単な血液検査を実施することによって定量化できる。
【００５２】
様々な実施形態では、本発明の方法は、対象における非感染症（ｓｔｅｒｉｌｅ）慢性全身性炎症のレベルを低下させる。「炎症性老化（ｉｎｆｌａｍｍａｇｉｎｇ）」と名付けられた「無菌性の慢性全身性炎症」は、加齢の特徴である。慢性炎症は、心臓、脳、および腎臓などの臓器系に時間の経過と共に損傷を引き起こし、障害または早死をもたらす。これらの臓器に供給する血管は炎症に対して脆弱であり、血管壁が厚くなり、血液通路（ｂｌｏｏｄ  ｐａｓｓａｇｅｗａｙ）が狭くなる。時間の経過と共に測定されるＣＲＰレベルの上昇は、ヒトにおける慢性炎症の指標である。研究は、ＣＲＰレベルの上昇が、心臓発作および脳卒中のリスクの上昇と相関していることを示している。加齢は、環境因子、遺伝因子、後成的因子、および確率的因子の組み合わせから生じる複雑なプロセスである。慢性的な炎症誘発性の状態は、加齢の蔓延する特徴である。明白な感染がない場合に発生するこの低悪性度の慢性全身性炎症（無菌性炎症）は、「炎症性老化」と定義されており、高齢者における罹患率および死亡率の重大な危険因子を表す。Ｐｒａｔｔｉｃｈｉｚｚｏらは（Ｉｎｆｌａｍｍａｇｉｎｇ”ａｓ  ａ  Ｄｒｕｇｇａｂｌｅ  Ｔａｒｇｅｔ：Ａ  Ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ  Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ−Ｃｅｎｔｅｒｅｄ  Ｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｔｙｐｅ  ２  Ｄｉａｂｅｔｅｓ）Ｏｘｉｄ  Ｍｅｄ  Ｃｅｌｌ  Ｌｏｎｇｅｖ．２０１６で、およびＮａｓｉらは（Ａｇｉｎｇ  ａｎｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ＨＩＶ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）、Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１６  Ｍａｙ２０で、加齢と炎症との関係を調査している。
【００５３】
様々な実施形態では、本発明の方法は、対象における加齢性疾患または障害を治療または防止する。「加齢性疾患または障害」という用語は、これらに限定されないが、癌、代謝性疾患、心血管疾患、タバコ関連疾患、または皮膚のしわなどの成人における疾患または障害を含む。癌としては、これらに限定されないが、前立腺癌、結腸癌、肺癌、頭頸部扁平上皮癌、食道癌、肝細胞癌、胃癌、膵癌、卵巣癌、または乳癌が挙げられる。加齢性疾患もしくは障害またはタバコ関連性疾患もしくは障害としては、心血管疾患、脳血管疾患、末梢血管疾患、アルツハイマー病、骨関節炎、心臓拡張機能障害、良性前立腺肥大症、大動脈瘤、または気腫が挙げられる。
【００５４】
様々な実施形態では、本発明の方法は、対象における若返りを媒介する。「若返り」という用語は、加齢の進行を低減または防止すること、および／または加齢性疾患または障害の進行を低減または防止することの結果を指す。「若返り」という用語は、例えば、筋肉の持久力または筋力の改善、耐糖能の改善、全身性または局所性炎症性サイトカインの存在の減少、ミトコンドリア機能の改善、および細胞の加齢表現型に関与するエピジェネティックな修飾の消去など、虚弱指数のパラメータおよび／または加齢細胞表現型の他のマーカーまたは加齢性疾患または障害状態のマーカーを改善するプロセスを指す。いくつかの実施形態では、高齢マウスの脂肪組織マクロファージ（ＡＴＭ）中で発現が増加していると特定されたマーカー（Ｇａｒｇ，Ｓ．ＫらＣｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１４；３４（１）：１−１４）：ＣＤ１１ｃ、ＣＤ２０６、Ｍｇｌ１、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、Ｎｏｓ２、Ｃｃｒ−７、ＩＬ−１２、Ａｒｇ１、Ｃｃｌ−２、Ｃｃｒ−１、Ｃｃｒ−５、Ｃｃｒ−９、Ｍｃｐ−１、Ｃｘｃｒ−３、ＩＬ−１βの少なくとも１つの発現の喪失または減少も、若返りの兆候と見なされる場合がある。
生存期間
【００５５】
いくつかの実施形態では、本発明は、対象の寿命または生存期間を延長させるための方法を提供する。例えば、いくつかの実施形態では、本発明は、寿命または生存期間を延長させるための、患者への組換えＴＬＲ５アゴニスト、例えば、フラジェリンまたはフラジェリンベースの剤（エントリモドなど）の投与に関する。
【００５６】
例えば、本発明は、本明細書に記載の組換えＴＬＲ５アゴニストを投与されていない対象と比較して、かつ／または本明細書に記載の平均余命計算値と比較して、対象の寿命または生存期間を、少なくとも約５年、少なくとも約１０年、少なくとも約１５年、少なくとも約２０年、または少なくとも約２５年延長させ得る。さらに、本発明の様々な実施形態は、対象における細胞老化および／または免疫老化を低減または減少させる方法を企図する。
【００５７】
様々な実施形態において、寿命または生存期間の延長は、同等の集団と比較して評価される。例えば、寿命または生存期間の延長は、あるコホートに対し評価され、例えばコホートＬＥＢは、実際の出生コホート（すべての個体が特定の年に生まれた）の平均寿命であり、または期間に対し評価され、例えば期間ＬＥＢは、出生から死亡まで、特定の年に観察された死亡率にさらされていると想定される仮想コホートの平均寿命である。こうした評価は、当技術分野における生存期間および／または寿命に関する様々な報告に関連して行われ得る（例えば、Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ（ＷＨＯ）の健康状態統計：死亡率）。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、同等の集団と比較して予想されるものよりも延長された寿命または生存期間をもたらす。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、当技術分野における生存期間および／または寿命に関する様々な報告と比較して（例えば、Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ（ＷＨＯ）の健康状態統計：死亡率）、予想されるものよりも延長された寿命または生存期間をもたらす。
【００５８】
さらなる実施形態では、寿命または生存期間の延長は、１つ以上の保険数理生命表（例えば、Ｌｉｆｅ  Ｔａｂｌｅｓ  Ｆｏｒ  Ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｓｏｃｉａｌ  Ｓｅｃｕｒｉｔｙ  Ａｒｅａ  １９００−２１００（Ａｃｔｕａｒｉａｌ  Ｓｔｕｄｙ  Ｎｏ．１２０，Ｂｅｌｌ  ａｎｄ  Ｍｉｌｌｅｒ））を参照して評価される。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、１つ以上の保険数理生命表と比較して予想されるものよりも延長された寿命または生存期間をもたらす。
対象
【００５９】
本明細書で提供される方法は、ヒトおよび非ヒト哺乳動物を含む、哺乳動物である患者に使用できる。本発明の方法を使用して治療される非ヒト哺乳動物としては、飼われている動物（すなわち、イヌ、ネコ、マウス、げっ歯類、およびウサギ）および農業動物（ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ）が挙げられる。様々な例において、化合物または組成物が投与される個体は、加齢性疾患または障害のリスクがあるか、その疑いがあるか、またはそのように診断された個体である。
【００６０】
本発明の様々な実施形態では、患者は、若年のヒト、中年のヒト、または高齢のヒトである。例えば、いくつかの実施形態では、患者は、約１８〜約３５歳、または約１８〜約３０歳、または約１８〜約２５歳、または約１８〜約２０歳である。いくつかの実施形態では、患者は、約３６〜約５５歳、約４０〜約５５歳、約４５〜約５５歳、約３６〜約５０歳、約３６〜約４５歳、約３６〜約４０歳、約４０〜約５０歳、約４５〜約５５歳である。いくつかの実施形態では、患者は、約５６歳〜約８５歳、約６０歳〜約８５歳、または約６５歳〜約８５歳、約７０歳〜約８５歳、約７５歳〜約８５歳、または８０歳〜約８５歳、または５６歳〜約８０歳、または５６歳〜約７５歳、または５６歳〜約７０歳、または５６歳〜約６５歳、または５６歳〜約６０歳、または約６０歳〜約８０歳、または約６５歳〜約７５歳である。
【００６１】
いくつかの実施形態では、患者は、約１歳、または約２歳、または約３歳、または約４歳、または約５歳、または約６歳、または約７歳、または約８歳、または約９歳、または約１０歳、または約１１歳、または約１２歳、または約１３歳、または約１４歳、または約１５歳、または約１６歳、または約１７歳、または約１８歳、または約１９歳、または約２０歳、または約２１歳、または約２２歳、または約２３歳、または約２４歳、または約２５歳、または約２６歳、または約２７歳、または約２８歳、または約２９歳、または約３０歳、または約３１歳、または約３２歳、または約３３歳、または約３４歳、または約３５歳、または約３６歳、または約３７歳、または約３８歳、または約３９歳、または約４０歳、または約４１歳、または約４２歳、または約４３歳、または約４４歳、または約４５歳、または約４６歳、または約４７歳、または約４８歳、または約４９歳、または約５０歳、または約５１歳、または約５２歳、または約５３歳、または約５４歳、または約５５歳、または約５６歳、または約５７歳、または約５８歳、または約５９歳、または約６０歳、または約６１歳、または約６２歳、または約６３歳、または約６４歳、または約６５歳、または約６６歳、または約６７歳、または約６８歳、または約６９歳、または約７０歳、または約７１歳、または約７２歳、または約７３歳、または約７４歳、または約７５歳、または約７６歳、または約７７歳、または約７８歳、または約７９歳、または約８０歳、または約８１歳、または約８２歳、または約８３歳、または約８４歳、または約８５歳である。いくつかの実施形態では、患者は少なくとも５５歳である。
【００６２】
当業者は、「若年の」、「中年の」、および「高齢の」の定義に関する年齢範囲は、他の要因の中でもとりわけ、地理的地域に基づいて変化し得ると考えるであろう。Ｐｅｔｒｙ，Ｇｅｒｏｎｔｏｌｏｇｉｓｔ  ２００２  Ｆｅｂ；４２（１）：９２−９は、加齢関連の定義を記載しており、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００６３】
実施形態では、患者の生物学的性別は雄または雌である。実施形態では、患者の生物学的性別は雄である。実施形態では、患者の生物学的性別は雌である。
【００６４】
いくつかの実施形態では、患者の生物学的性別は雄であり、患者は中年（例えば、約３６〜約５５歳、約４０〜約５５歳、約４５〜約５５歳、約３６〜約５０歳、約３６〜約４５歳、約３６〜約４０歳、約４０〜約５０歳、約４５〜約５５歳）である。いくつかの実施形態では、本方法は、例えば、中年の男性患者に適用できる場合、１つ以上の虚弱および加齢性疾患または障害を防止するか、それらの重症度を低下させる。
【００６５】
本発明の様々な実施形態では、対象は患者である。いくつかの実施形態では、患者は中年のヒトである。例えば、いくつかの実施形態では、患者は約３５歳〜５５歳である。さらなる実施形態では、患者の生物学的性別は男性である。
【００６６】
本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、患者は哺乳動物である。本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、患者はヒトである。本明細書で提供される方法のある実施形態では、患者は男性である。
ＴＬＲ５アゴニストおよびその誘導体
【００６７】
Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）は、細胞の自然免疫応答の開始において中心的な役割を果たす。ＴＬＲは、感染性因子上に発現する病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を認識し、効果的な免疫の発達に必要なサイトカインの産生を仲介する。ヒトには１０個のＴＬＲ遺伝子があり、マウスには１２個のＴＬＲ遺伝子がある。特に、Ｔｏｌｌ様受容体５（ＴＬＲ５）は、細菌のフラジェリンを認識する膜貫通タンパク質であり、腸粘膜で高度に発現される。脊椎動物は、自然免疫の自然防御機構の活性化および動員を目的としたシグナル伝達イベントのカスケードをトリガーするフラジェリンとＴＬＲ５との特異性の高い相互作用によって活性化されるシグナル伝達を介して、潜在的に病原性のべん毛を有する細菌の存在を認識する。薬理学的に有用なフラジェリン誘導体であるエントリモド（ＣＢＬＢ５０２）によるＴＬＲ５の活性化は、致死的な全身照射から動物を保護できた。
【００６８】
本明細書で使用される場合、「ＴＬＲ５アゴニスト」という用語は、ＴＬＲ５を介する通常のシグナル伝達を選択的に活性化または増加させる化合物またはペプチドを指す。本発明のいくつかの実施形態では、ＴＬＲ５アゴニストは組換え型である。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ５アゴニストは、約１０−７Ｍ未満、または１０−８Ｍ未満；または１０−９Ｍ未満；または１０−１０Ｍ未満；または１０−１０Ｍ未満；または１０−１１Ｍ未満のＥＣ５０を有する。ある実施形態では、本明細書で提供されるＴＬＲ５アゴニストは、Ｌｕ  Ｙ．，ら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．１１０、２０７３−２０８５（２０１３）およびｉｎ  Ｌｕ  ａｎｄ  Ｓｗａｒｔｚ，Ｓｃｉ  Ｒｅｐ  ６：１８３７９（２０１６）、または同様のＴＬＲ５生物活性アッセイに記載される、ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）−ｈＴＬＲ５細胞（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）を使用するフラジェリン生物活性アッセイにおいて、約１０−７Ｍ未満、または１０−８Ｍ未満；または１０−９Ｍ未満；または１０−１０Ｍ未満；または１０−１０Ｍ未満；または１０−１１Ｍ未満のＥＣ５０を有する。
【００６９】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される病原性タンパク質に融合されていないＴＬＲ５アゴニストは、フラジェリンベースの剤である。本明細書で使用される場合、「フラジェリン」という用語は、様々なグラム陽性またはグラム陰性細菌種に含まれるフラジェリンポリペプチドを意味する。２２の細菌種からのフラジェリンのヌクレオチドおよびアミノ酸配列が米国特許公開第２００３／００４４４２９号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）の図７に提供されている。したがって、種間の配列の差が、用語の意味に含まれる。特定の実施形態では、本開示によるフラジェリンベースの剤は、米国特許公開第２００３／００４４４２９号の図７に提供される２２の細菌種由来のフラジェリンの１つ以上と少なくとも８０％の同一性、または少なくとも８５％の同一性、または少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性、または少なくとも少なくとも９７％の同一性、または少なくとも９８％の同一性、または少なくとも９９％の同一性、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。２１の細菌由来の保存的アミノ末端およびカルボキシ末端のアミノ酸配列（ＴＬＲ５活性にとって重要である）が、米国特許第８，００７，８１２号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）の図２４Ａおよび図２４Ｂに提供される。
【００７０】
特定の実施形態では、本開示によるフラジェリンベースの剤は、フラジェリンタンパク質の断片またはフラジェリンベースの剤を含む。いくつかの実施形態では、フラジェリンベースの剤またはその断片は、ＴＬＲ５アゴニストとしての活性を有する。様々な実施形態では、
【００７１】
いくつかの実施形態では、ＴＬＲ５アゴニストは、サルモネラ菌フラジェリンタンパク質、例えば、組換えサルモネラ菌フラジェリンタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＴＬＲ５アゴニストは、サルモネラ菌ダブリンフラジェリンタンパク質、例えば、組換えサルモネラ菌ダブリンフラジェリンタンパク質である。様々な実施形態では、サルモネラ菌ダブリンフラジェリンタンパク質は、以下に示すように、配列番号２７のアミノ酸配列を有する：
ＭＡＱＶＩＮＴＮＳＬＳＬＬＴＱＮＮＬＮＫＳＱＳＳＬＳＳＡＩＥＲＬＳＳＧＬＲＩＮＳＡＫＤＤＡＡＧＱＡＩＡＮＲＦＴＳＮＩＫＧＬＴＱＡＳＲＮＡＮＤＧＩＳＩＡＱＴＴＥＧＡＬＮＥＩＮＮＮＬＱＲＶＲＥＬＳＶＱＡＴＮＧＴＮＳＤＳＤＬＫＳＩＱＤＥＩＱＱＲＬＥＥＩＤＲＶＳＮＱＴＱＦＮＧＶＫＶＬＳＱＤＮＱＭＫＩＱＶＧＡＮＤＧＥＴＩＴＩＤＬＱＫＩＤＶＫＳＬＧＬＤＧＦＮＶＮＧＰＫＥＡＴＶＧＤＬＫＳＳＦＫＮＶＴＧＹＤＴＹＡＡＧＡＤＫＹＲＶＤＩＮＳＧＡＶＶＴＤＡＡＡＰＤＫＶＹＶＮＡＡＮＧＱＬＴＴＤＤＡＥＮＮＴＡＶＤＬＦＫＴＴＫＳＴＡＧＴＡＥＡＫＡＩＡＧＡＩＫＧＧＫＥＧＤＴＦＤＹＫＧＶＴＦＴＩＤＴＫＴＧＤＤＧＮＧＫＶＳＴＴＩＮＧＥＫＶＴＬＴＶＡＤＩＡＴＧＡＡＤＶＮＡＡＴＬＱＳＳＫＮＶＹＴＳＶＶＮＧＱＦＴＦＤＤＫＴＫＮＥＳＡＫＬＳＤＬＥＡＮＮＡＶＫＧＥＳＫＩＴＶＮＧＡＥＹＴＡＮＡＴＧＤＫＩＴＬＡＧＫＴＭＦＩＤＫＴＡＳＧＶＳＴＬＩＮＥＤＡＡＡＡＫＫＳＴＡＮＰＬＡＳＩＤＳＡＬＳＫＶＤＡＶＲＳＳＬＧＡＩＱＮＲＦＤＳＡＩＴＮＬＧＮＴＶＴＮＬＮＳＡＲＳＲＩＥＤＡＤＹＡＴＥＶＳＮＭＳＫＡＱＩＬＱＱＡＧＴＳＶＬＡＱＡＮＱＶＰＱＮＶＬＳＬＬＲ（配列番号２７）。
【００７２】
いくつかの実施形態において、本発明は、配列番号２７に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約８７％、少なくとも約９０％、少なくとも約９３％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むＴＬＲ５アゴニストの使用を企図する。様々な実施形態において、アミノ酸配列を有するポリペプチドは、Ｈｉｓタグを含まない。
【００７３】
本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、病原性タンパク質抗原に融合されていないＴＬＲ５アゴニストは、エントリモド（ＣＢＬＢ５０２）である。エントリモド（ＣＢＬＢ５０２）は、フラジェリン関連ポリペプチドである（例えば、米国特許公開第２００３／００４４４２９号の図７を参照されたい（その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。本明細書で使用される場合、「エントリモド」（別名「ＣＢＬＢ５０２」）は、以下に示す、ＷＩＰＯ国際特許出願公開第２０１６／１０９００２号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）の配列番号１の配列を有するポリペプチドを指す。
ＭＲＧＳＨＨＨＨＨＨＧＭＡＳＭＴＧＧＱＱＭＧＲＤＬＹＤＤＤＤＫＤＰＭＡＱＶＩＮＴＮＳＬＳＬＬＴＱＮＮＬＮＫＳＱＳＳＬＳＳＡＩＥＲＬＳＳＧＬＲＩＮＳＡＫＤＤＡＡＧＱＡＩＡＮＲＦＴＳＮＩＫＧＬＴＱＡＳＲＮＡＮＤＧＩＳＩＡＱＴＴＥＧＡＬＮＥＩＮＮＮＬＱＲＶＲＥＬＳＶＱＡＴＮＧＴＮＳＤＳＤＬＫＳＩＱＤＥＩＱＱＲＬＥＥＩＤＲＶＳＮＱＴＱＦＮＧＶＫＶＬＳＱＤＮＱＭＫＩＱＶＧＡＮＤＧＥＴＩＴＩＤＬＱＫＩＤＶＫＳＬＧＬＤＧＦＮＶＮＳＰＧＩＳＧＧＧＧＧＩＬＤＳＭＧＴＬＩＮＥＤＡＡＡＡＫＫＳＴＡＮＰＬＡＳＩＤＳＡＬＳＫＶＤＡＶＲＳＳＬＧＡＩＱＮＲＦＤＳＡＩＴＮＬＧＮＴＶＴＮＬＮＳＡＲＳＲＩＥＤＡＤＹＡＴＥＶＳＮＭＳＫＡＱＩＬＱＱＡＧＴＳＶＬＡＱＡＮＱＶＰＱＮＶＬＳＬＬＲ（配列番号１）。
【００７４】
いくつかの実施形態において、本発明は、配列番号１に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約８７％、少なくとも約９０％、少なくとも約９３％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むＴＬＲ５アゴニストの使用を企図する。様々な実施形態において、アミノ酸配列を有するポリペプチドは、Ｈｉｓタグを含まない。
【００７５】
本明細書で提供される態様および実施形態のいくつかの実施形態では、病原性タンパク質に融合されていないＴＬＲ５アゴニストは、ＣＢＬＢ５０２−Ｓ３３ＭＬ（国際公開第２０１６／０１９０３４号の配列番号３５）、ＣＢＬＢ５０２−４８５ＣＴ（ＣＢＬＢ５３３、国際公開第２０１６／０１９０３４号の配列番号７１）、ＣＢＬＢ５０２−Ｓ３３ＭＸ（ＣＢＬＢ５４３、国際公開第２０１６／０１９０３４号の配列番号１５０）、ＣＢＬＢ５０２−Ｓ３３（国際公開第２０１６／０１９０３４号の配列番号１７）、国際公開第２０１６／０１９０３４号の突然変異体３３ＭＬ（国際公開第２０１６／０１９０３４号の配列番号４２）（以下にそれぞれ示すように、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）の１つ以上と少なくとも８０％の同一性、または少なくとも８５％の同一性、または少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性、または少なくとも９７％の同一性、または少なくとも９８％の同一性、または少なくとも９９％の同一性、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、フラジェリンベースの薬剤である。
ＣＢＬＢ５０２−Ｓ３３ＭＬ（国際公開第２０１６／０１９０３４号の配列番号３５）
ＭＳＧＬＲＩＮＳＡＫＤＤＡＡＧＱＡＩＡＮＲＦＴＳＮＩＫＧＬＴＱＡＳＲＮＡＮＤＧＩＳＩＡＱＴＴＥＧＡＬＮＥＩＮＮＮＬＱＲＶＲＥＬＳＶＱＡＴＮＧＴＮＳＤＳＤＬＫＳＩＱＤＥＩＱＱＲＬＥＥＩＤＲＶＳＮＱＴＱＦＮＧＶＫＶＬＳＱＤＮＱＭＫＩＱＶＧＡＮＤＧＥＴＩＴＩＤＬＱＫＩＤＶＫＳＬＧＬＤＧＦＮＶＮＳＰＧＩＳＧＧＧＧＧＩＬＤＳＭＧＴＬＩＮＥＤＡＡＡＡＫＫＳＴＡＮＰＬＡＳＩＤＳＡＬＳＫＶＤＡＶＲＳＳＬＧＡＩＱＮＲＦＤＳＡＩＴＮＬＧＮＴＶＴＮＬＮＳＡＲＳＲＩＥＤＡＤＹＡＴＥＶＳＮＭＳＫＡＱＩＬＱＱＡＧＴＳＶＬＡＱＡＮＱＶＰＱＮＶＬＳＬＬＶＰＲＧＳＨＨＨＨＨＨＧ（配列番号２）；
ＣＢＬＢ５０２−４８５ＣＴ（ＣＢＬＢ５３３、国際公開第２０１６／０１９０３４号の配列番号７１）
ＭＳＧＬＲＩＮＳＡＫＤＤＡＡＧＱＡＩＡＮＲＦＴＳＮＩＫＧＬＴＱＡＳＲＮＡＮＤＧＩＳＩＡＱＴＴＥＧＡＬＮＥＩＮＮＮＬＱＲＶＲＥＬＳＶＱＡＴＮＧＴＮＳＤＳＤＬＫＳＩＱＤＥＩＱＱＲＬＥＥＩＤＲＶＳＮＱＴＱＦＮＧＶＫＶＬＳＱＤＮＱＭＫＩＱＶＧＡＮＤＧＥＴＩＴＩＤＬＱＫＩＤＶＫＳＬＧＬＤＧＦＮＶＮＳＰＧＳＴＡＮＰＬＡＳＩＤＳＡＬＳＫＶＤＡＶＲＳＳＬＧＡＩＱＮＲＦＤＳＡＩＴＮＬＧＮＴＶＴＮＬＮＳＡＲＳＲＩＥＤＡＤＹＡＴＥＶＳＮＭＳＫＡＱＩＬＱＱＡＧＬＶＰＲＧＳＨＨＨＨＨＨＧ（配列番号３）；
ＣＢＬＢ５０２−Ｓ３３ＭＸ（ＣＢＬＢ５４３、国際公開第２０１６／０１９０３４号の配列番号１５０）
ＭＳＧＬＲＩＮＳＡＫＤＤＡＡＧＱＡＩＡＮＲＦＴＳＮＩＫＧＬＴＱＡＳＲＮＡＡＤＧＩＳＩＡＱＴＴＥＧＡＬＮＥＩＮＮＮＬＱＲＶＲＥＬＳＶＱＡＴＡＧＡＮＡＤＡＡＬＫＡＩＱＡＥＩＱＱＲＬＥＥＩＤＲＶＳＱＱＴＱＡＡＡＶＫＶＬＳＱＤＮＡＭＡＩＱＶＧＡＮＤＧＡＡＩＴＩＤＬＱＫＩＤＶＫＳＬＧＬＤＧＦＮＶＮＳＰＧＳＴＡＮＰＬＡＳＩＤＳＡＬＳＫＶＤＡＶＲＳＳＬＧＡＩＱＮＲＦＤＳＡＩＴＮＬＧＮＴＶＴＮＬＮＳＡＲＳＲＩＥＤＡＤＹＡＴＥＶＳＱＭＳＫＡＱＩＬＱＱＡＧＴＳＶＬＡＱＡＮＱＶＰＱＮＶＬＳＬＬＶＰＲＧＳＨＨＨＨＨＨＧ（配列番号４）；
ＣＢＬＢ５０２−Ｓ３３（国際公開第２０１６／０１９０３４号の配列番号１７）
ＭＲＧＳＨＨＨＨＨＨＧＭＡＳＭＴＧＧＱＱＭＧＲＤＬＹＤＬＶＰＲＧＳＡＫＤＰＳＧＬＲＩＮＳＡＫＤＤＡＡＧＱＡＩＡＮＲＦＴＳＮＩＫＧＬＴＱＡＳＲＮＡＮＤＧＩＳＩＡＱＴＴＥＧＡＬＮＥＩＮＮＮＬＱＲＶＲＥＬＳＶＱＡＴＮＧＴＮＳＤＳＤＬＫＳＩＱＤＥＩＱＱＲＬＥＥＩＤＲＶＳＮＱＴＱＦＮＧＶＫＶＬＳＱＤＮＱＭＫＩＱＶＧＡＮＤＧＥＴＩＴＩＤＬＱＫＩＤＶＫＳＬＧＬＤＧＦＮＶＮＳＰＧＩＳＧＧＧＧＧＩＬＤＳＭＧＴＬＩＮＥＤＡＡＡＡＫＫＳＴＡＮＰＬＡＳＩＤＳＡＬＳＫＶＤＡＶＲＳＳＬＧＡＩＱＮＲＦＤＳＡＩＴＮＬＧＮＴＶＴＮＬＮＳＡＲＳＲＩＥＤＡＤＹＡＴＥＶＳＮＭＳＫＡＱＩＬＱＱＡＧＴＳＶＬＡＱＡＮＱＶＰＱＮＶＬＳＬＬＲ（配列番号５）；および  
変異体３３ＭＬ（国際公開第２０１６／０１９０３４号の配列番号４２）
ＭＳＧＬＲＩＮＳＡＫＤＤＡＡＧＱＡＩＡＮＲＦＴＳＮＩＫＧＬＴＱＡＳＲＮＡＮＤＧＩＳＩＡＱＴＴＥＧＡＬＮＥＩＮＮＮＬＱＲＶＲＥＬＳＶＱＡＴＮＧＴＮＳＤＳＤＬＫＳＩＱＤＥＩＱＱＲＬＥＥＩＤＲＶＳＮＱＴＱＦＮＧＶＫＶＬＳＱＤＮＱＭＫＩＱＶＧＡＮＤＧＥＴＩＴＩＤＬＱＫＩＤＶＫＳＬＧＬＤＧＦＮＶＮＳＰＧＳＴＡＮＰＬＡＳＩＤＳＡＬＳＫＶＤＡＶＲＳＳＬＧＡＩＱＮＲＦＤＳＡＩＴＮＬＧＮＴＶＴＮＬＮＳＡＲＳＲＩＥＤＡＤＹＡＴＥＶＳＮＭＳＫＡＱＩＬＱＱＡＧＴＳＶＬＡＱＡＮＱＶＰＱＮＶＬＳＬＬＶＰＲＧＳＨＨＨＨＨＨＧ（配列番号６）。
【００７６】
いくつかの実施形態において、本発明は、配列番号２〜６の１つ以上に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約８７％、少なくとも約９０％、少なくとも約９３％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むＴＬＲ５アゴニストの使用を企図する。様々な実施形態において、アミノ酸配列を有するポリペプチドは、Ｈｉｓタグを含まない。
【００７７】
本明細書で提供される態様および実施形態のいくつかの実施形態では、病原性タンパク質に融合されないＴＬＲ５アゴニストは、以下にそれぞれ示すように、国際公開第２０１６／０１９１３４号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）の配列番号２４３〜２５２の１つ以上と少なくとも８０％の同一性、または少なくとも８５％の同一性、または少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性、または少なくとも９７％の同一性、または少なくとも９８％の同一性、または少なくとも９９％の同一性、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むフラジェリンベースの剤である。
国際公開第２０１６／０１９１３４号の配列番号２４３
ＭＧＨＨＨＨＨＨＳＧＭＥＥＦＮＭＲＩＮＴＮＶＡＡＭＮＴＹＳＲＬＴＡＡＮＴＡＫＳＮＳＬＡＫＬＳＳＧＬＲＩＮＫＡＧＤＤＡＡＧＬＡＩＳＥＫＭＫＳＱＩＧＧＬＴＱＡＫＲＮＡＱＤＧＩＳＬＶＱＴＡＥＧＡＬＮＥＴＨＳＩＬＥＲＭＲＤＬＡＶＱＧＳＮＧＴＬＴＳＳＤＲＧＳＩＮＫＥＬＫＡＬＨＱＥＬＴＲＩＳＮＴＴＥＦＮＴＱＫＬＦＳＱＴＫＱＫＳＶＴＦＴＦＱＩＧＡＮＡＧＱＴＬＳＶＡＩＴＡＭＳＧＥＡＬＬＶＳＴＤＡＫＦＳＬＮＡＡＧＴＮＡＧＡＭＩＫＳＩＤＡＡＩＡＫＶＳＤＱＲＡＤＬＧＡＶＱＮＲＬＥＨＴＩＮＮＬＴＡＴＮＥＮＬＳＤＡＮＳＲＩＲＤＶＤＭＡＥＥＭＭＴＦＴＫＳＮＩＬＳＱＡＡＴＳＭＬＡＱＡＮＡＭＰＮＳＶＬＮＬＬＱＧ（配列番号７）；
国際公開第２０１６／０１９１３４号の配列番号２４４
ＭＧＨＨＨＨＨＨＳＧＭＲＩＮＨＮＩＳＡＬＮＡＷＲＮＩＤＱＴＱＹＳＭＳＫＴＬＥＲＬＳＳＧＬＲＩＮＲＡＧＤＤＡＡＧＬＡＩＳＥＫＭＲＧＱＩＫＧＬＮＭＡＩＫＮＡＱＤＡＩＳＬＩＱＴＡＥＧＡＬＴＥＶＨＳＩＬＱＲＭＲＥＬＡＶＱＡＡＳＤＴＮＴＮＶＤＲＥＱＩＱＫＥＩＤＱＬＲＥＥＩＤＲＩＡＲＴＴＥＦＮＴＫＫＬＬＤＧＫＬＥＧＦＲＳＱＶＤＡＫＶＶＴＧＧＮＩＮＶＱＬＧＴＶＳＳＫＡＶＥＧＴＹＶＩＥＶＧＡＡＥＲＡＩＭＶＶＤＡＡＩＨＲＶＳＴＡＲＡＡＬＧＡＩＱＮＲＬＥＨＴＩＳＮＬＧＶＡＡＥＮＬＴＡＡＥＳＲＩＲＤＡＤＭＡＫＥＭＭＥＦＴＫＱＱＩＬＬＱＳＳＭＡＭＬＡＱＳＮＴＬＰＱＮＶＬＱＬＭＲ（配列番号８）；
国際公開第２０１６／０１９１３４号の配列番号２４５
ＭＧＨＨＨＨＨＨＳＧＬＮＭＡＩＫＮＡＱＤＡＩＳＬＩＱＴＡＥＧＡＬＴＥＶＨＳＩＬＱＲＭＲＥＬＡＶＱＡＡＳＤＴＮＴＮＶＤＲＥＱＩＱＫＥＩＤＱＬＲＥＥＩＤＲＩＡＲＴＴＥＦＮＴＫＫＬＬＤＧＫＬＥＧＦＲＳＱＶＤＡＫＶＶＴＧＧＮＩＮＶＱＬＧＴＶＳＳＫＡＶＥＧＴＹＶＩＥＶＧＡＡＥＲＡＩＭＶＶＤＡＡＩＨＲＶＳＴＡＲＡＡＬＧＡＩＱＮＲＬＥＨＴＩＳＮＬＧ（配列番号９）；
国際公開第２０１６／０１９１３４号の配列番号２４６
ＭＧＨＨＨＨＨＨＳＧＭＳＬＲＩＮＮＮＩＥＡＬＮＡＷＲＡＬＮＳＴＳＮＡＬＱＫＳＭＥＫＬＳＳＧＬＲＩＮＲＡＧＤＤＡＡＧＬＡＩＳＥＫＬＲＡＱＩＲＧＬＮＱＡＩＲＮＡＱＤＧＩＳＬＩＱＴＡＥＧＧＬＳＥＩＱＮＩＬＱＲＭＲＥＬＧＶＱＡＡＮＧＴＬＮＮＱＤＩＳＡＩＴＴＥＬＮＱＬＦＮＥＩＤＲＩＡＧＡＴＥＦＮＴＫＮＬＬＡＶＳＴＧＬＶＶＴＬＱＶＧＡＮＡＧＱＶＩＡＦＴＩＤＮＡＧＴＡＳＬＧＬＳＳＡＤＬＡＩＮＤＮＡＳＡＳＡＦＩＳＫＶＤＳＡＬＱＫＶＳＴＹＲＡＮＬＧＳＩＱＮＲＬＥＨＴＩＡＮＬＧＩＡＳＥＮＬＳＡＳＥＳＲＩＲＤＶＤＭＡＡＥＭＭＮＦＴＫＮＱＩＬＱＱＡＧＶＡＩＬＡＱＡＮＱＡＰＱＡＶＬＱＬＬＲ（配列番号１０）；
国際公開第２０１６／０１９１３４号の配列番号２４７
ＭＧＨＨＨＨＨＨＳＧＬＮＱＡＩＲＮＡＱＤＧＩＳＬＩＱＴＡＥＧＧＬＳＥＩＱＮＩＬＱＲＭＲＥＬＧＶＱＡＡＮＧＴＬＮＮＱＤＩＳＡＩＴＴＥＬＮＱＬＦＮＥＩＤＲＩＡＧＡＴＥＦＮＴＫＮＬＬＡＶＳＴＧＬＶＶＴＬＱＶＧＡＮＡＧＱＶＩＡＦＴＩＤＮＡＧＴＡＳＬＧＬＳＳＡＤＬＡＩＮＤＮＡＳＡＳＡＦＩＳＫＶＤＳＡＬＱＫＶＳＴＹＲＡＮＬＧＳＩＱＮＲＬＥＨＴＩＡＮＬＧ（配列番号１１）；
国際公開第２０１６／０１９１３４号の配列番号２４８
ＭＧＨＨＨＨＨＨＳＧＬＮＱＡＩＲＮＡＱＤＧＩＳＬＩＱＴＡＥＧＧＬＳＥＩＱＮＩＬＱＲＭＲＥＬＧＶＱＡＡＮＧＴＬＮＮＱＤＩＳＡＩＴＴＥＬＮＱＬＦＮＥＩＤＲＩＡＧＡＴＥＦＮＴＫＮＬＬＡＡＧＴＡＳＬＧＬＳＳＡＤＬＡＩＮＤＮＡＳＡＳＡＦＩＳＫＶＤＳＡＬＱＫＶＳＴＹＲＡＮＬＧＳＩＱＮＲＬＥＨＴＩＡＮＬＧ（配列番号１２）；
国際公開第２０１６／０１９１３４号の配列番号２４９
ＭＧＨＨＨＨＨＨＳＡＳＡＦＩＳＫＶＤＳＡＬＱＫＶＳＴＹＲＡＮＬＧＳＩＱＮＲＬＥＨＴＩＡＮＬＧＰＤＧＬＮＱＡＩＲＮＡＱＤＧＩＳＬＩＱＴＡＥＧＧＬＳＥＩＱＮＩＬＱＲＭＲＥＬＧＶＱＡＡＮＧＴＬＮＮＱＤＩＳＡＩＴＴＥＬＮＱＬＦＮＥＩＤＲＩＡ（配列番号１３）；
国際公開第２０１６／０１９１３４号の配列番号２５０
ＭＧＨＨＨＨＨＨＳＮＮＱＤＩＳＡＩＴＴＥＬＮＱＬＦＮＥＩＤＲＩＡＧＡＴＧＳＧＧＬＳＥＩＱＮＩＬＱＲＭＲＥＬＧＶＱＡＡＮＧＴＬＮＧＧＳＡＳＡＦＩＳＫＶＤＳＡＬＱＫＶＳＴＹＲＡＮＬＧＳＩＱＮＲＬＥＨＴＩＡＮＬＧ（配列番号１４）；
国際公開第２０１６／０１９１３４号の配列番号２５１
ＭＧＨＨＨＨＨＨＳＧＬＡＱＡＳＲＮＡＱＤＡＩＳＩＡＱＴＡＥＧＡＬＤＥＴＱＳＩＬＱＲＶＲＥＬＧＶＱＧＡＮＧＴＬＴＡＤＤＩＮＡＬＱＡＥＶＤＱＬＩＡＥＩＤＲＩＡＧＡＴＥＦＮＴＱＮＬＬＤＧＳＦＴＴＫＡＦＱＶＧＡＮＳＧＱＮＭＴＬＴＩＧＫＭＤＴＴＴＬＧＬＳＳＡＤＬＡＩＮＤＮＡＦＡＮＧＡＩＳＴＶＤＳＡＬＱＫＶＳＡＥＲＡＫＬＧＡＩＱＮＲＬＥＨＴＩＡＮＬＧ（配列番号１５）；および
国際公開第２０１６／０１９１３４号の配列番号２５２
ＭＧＨＨＨＨＨＨＳＧＬＡＱＡＳＲＱＡＱＤＡＩＳＩＡＱＴＡＥＧＡＬＤＥＴＱＳＩＬＱＲＶＲＥＬＧＶＱＧＡＤＧＴＬＴＡＤＤＩＤＡＬＱＡＥＶＤＱＬＩＡＥＩＤＲＩＡＧＡＴＥＦＡＴＱＫＬＬＤＧＳＦＴＴＫＡＦＱＶＧＡＡＳＧＱＤＶＴＬＴＩＧＫＶＤＴＴＴＬＧＬＳＳＡＤＬＡＩＤＳＡＡＦＡＤＧＡＩＳＴＶＤＳＡＬＱＫＶＳＡＥＲＡＫＬＧＡＩＱＮＲＬＥＨＴＩＡＱＬＧ（配列番号１６）。
【００７８】
いくつかの実施形態において、本発明は、配列番号７〜１６の１つ以上に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約８７％、少なくとも約９０％、少なくとも約９３％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むＴＬＲ５アゴニストの使用を企図する。様々な実施形態において、アミノ酸配列を有するポリペプチドは、Ｈｉｓタグを含まない。
【００７９】
本明細書で提供される態様および実施形態のいくつかの実施形態では、病原性タンパク質に融合されないＴＬＲ５アゴニストは、以下にそれぞれ示すように、国際公開第２００６／０６９１９８号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）の配列番号１０、１２、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、または４４の１つ以上と少なくとも８０％の同一性、または少なくとも８５％の同一性、または少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性、または少なくとも９７％の同一性、または少なくとも９８％の同一性、または少なくとも９９％の同一性、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むフラジェリンベースの剤である。
国際公開第２００６／０６９１９８号の配列番号１０
ＭＲＧＳＨＨＨＨＨＨＧＭＡＳＭＴＧＧＱＱＭＧＲＤＬＹＤＤＤＤＫＤＰＭＡＱＶＩＮＴＮＳＬＳＬＬＴＱＮＮＬＮＫＳＱＳＳＬＳＳＡＩＥＲＬＳＳＧＬＲＩＮＳＡＫＤＤＡＡＧＱＡＩＡＮＲＦＴＳＮＩＫＧＬＴＱＡＳＲＮＡＮＤＧＩＳＩＡＱＴＴＥＧＡＬＮＥＩＮＮＮＬＱＲＶＲＥＬＳＶＱＡＴＮＧＴＮＳＤＳＤＬＫＳＩＱＤＥＩＱＱＲＬＥＥＩＤＲＶＳＮＱＴＱＦＮＧＶＫＶＬＳＱＤＮＱＭＫＩＱＶＧＡＮＤＧＥＴＩＴＩＤＬＱＫＩＤＶＫＳＬＧＬＤＧＦＮＶＮＳＰＧＩＳＧＧＧＧＧＩＬＤＳＭＧＴＬＩＮＥＤＡＡＡＡＫＫＳＴＡＮＰＬＡＳＩＤＳＡＬＳＫＶＤＡＶＲＳＳＬＧＡＩＱＮＲＦＤＳＡＩＴＮＬ（配列番号１７）；
国際公開第２００６／０６９１９８号の配列番号１２
ＭＲＧＳＨＨＨＨＨＨＧＭＡＳＭＴＧＧＱＱＭＧＲＤＬＹＤＤＤＤＫＤＰＦＴＳＮＩＫＧＬＴＱＡＳＲＮＡＮＤＧＩＳＩＡＱＴＴＥＧＡＬＮＥＩＮＮＮＬＱＲＶＲＥＬＳＶＱＡＴＮＧＴＮＳＤＳＤＬＫＳＩＱＤＥＩＱＱＲＬＥＥＩＤＲＶＳＮＱＴＱＦＮＧＶＫＶＬＳＱＤＮＱＭＫＩＱＶＧＡＮＤＧＥＴＩＴＩＤＬＱＫＩＤＶＫＳＬＧＬＤＧＦＮＶＮＳＰＧＩＳＧＧＧＧＧＩＬＤＳＭＧＴＬＩＮＥＤＡＡＡＡＫＫＳＴＡＮＰＬＡＳＩＤＳＡＬＳＫＶＤＡＶＲＳＳＬＧＡＩＱＮＲＦＤＳＡＩＴＮＬＧＮＴＶＴＮＬＮＳＡＲＳＲＩＥＤＡＤＹＡＴＥＶＳＮＭＳＫＡＱＩＬＱＱＡＧＴＳＶＬＡＱＡＮＱＶＰＱＮＶＬＳＬＬＲ（配列番号１７）；
国際公開第２００６／０６９１９８号の配列番号３０
ＭＲＧＳＨＨＨＨＨＨＧＭＡＳＭＴＧＧＱＱＭＧＲＤＬＹＤＤＤＤＫＤＰＭＡＱＶＩＮＴＮＳＬＳＬＬＴＱＮＮＬＮＫＳＱＳＳＬＳＳＡＩＥＲＬＳＳＧＬＲＩＮＳＡＫＤＤＡＡＧＱＡＩＡＮＲＦＴＳＮＩＫＧＬＴＱＡＳＲＮＡＮＤＧＩＳＩＡＱＴＴＥＧＡＬＮＥＩＮＮＮＬＱＲＶＲＥＬＳＶＱＡＴＮＧＴＮＳＤＳＤＬＫＳＩＱＤＥＩＱＱＲＬＥＥＩＤＲＶＳＮＱＴＱＦＮＧＶＫＶＬＳＱＤＮＱＭＫＩＱＶＧＡＮＤＧＥＴＩＴＩＤＬＱＫＩＤＶＫＳＬＧＬＩＰＧＩＳＧＧＧＧＧＩＬＤＳＭＧＴＬＩＮＥＤＡＡＡＡＫＫＳＴＡＮＰＬＡＳＩＤＳＡＬＳＫＶＤＡＶＲＳＳＬＧＡＩＱＮＲＦＤＳＡＩＴＮＬＧＮＴＶＴＮＬＮＳＡＲＳＲＩＥＤＡＤＹＡＴＥＶＳＮＭＳＫＡＱＩＬＱＱＡＧＴＳＶＬＡＱＡＮＱＶＰＱＮＶＬＳＬＬＲ（配列番号１７）；
国際公開第２００６／０６９１９８号の配列番号３２
ＭＲＧＳＨＨＨＨＨＨＧＭＡＳＭＴＧＧＱＱＭＧＲＤＬＹＤＤＤＤＫＤＰＦＴＳＮＩＫＧＬＴＱＡＳＲＮＡＮＤＧＩＳＩＡＱＴＴＥＧＡＬＮＥＩＮＮＮＬＱＲＶＲＥＬＳＶＱＡＴＮＧＴＮＳＤＳＤＬＫＳＩＱＤＥＩＱＱＲＬＥＥＩＤＲＶＳＮＱＴＱＦＮＧＶＫＶＬＳＱＤＮＱＭＫＩＱＶＧＡＮＤＧＥＴＩＴＩＤＬＱＫＩＤＶＫＳＬＧＬＩＰＧＩＳＧＧＧＧＧＩＬＤＳＭＧＴＬＩＮＥＤＡＡＡＡＫＫＳＴＡＮＰＬＡＳＩＤＳＡＬＳＫＶＤＡＶＲＳＳＬＧＡＩＱＮＲＦＤＳＡＩＴＮＬＧＮＴＶＴＮＬＮＳＡＲＳＲＩＥＤＡＤＹＡＴＥＶＳＮＭＳＫＡＱＩＬＱＱＡＧＴＳＶＬＡＱＡＮＱＶＰＱＮＶＬＳＬＬＲ（配列番号１７）；
国際公開第２００６／０６９１９８号の配列番号３４
ＭＲＧＳＨＨＨＨＨＨＧＭＡＳＭＴＧＧＱＱＭＧＲＤＬＹＤＤＤＤＫＤＰＭＡＱＶＩＮＴＮＳＬＳＬＬＴＱＮＮＬＮＫＳＱＳＳＬＳＳＡＩＥＲＬＳＳＧＬＲＩＮＳＡＫＤＤＡＡＧＱＡＩＡＮＲＦＴＳＮＩＫＧＬＴＱＡＳＲＮＡＮＤＧＩＳＩＡＱＴＴＥＧＡＬＮＥＩＮＮＮＬＱＲＶＲＥＬＳＶＱＡＴＮＧＴＮＳＤＳＤＬＫＳＩＱＤＥＩＱＱＲＬＥＥＩＤＲＶＳＮＱＴＱＦＮＧＶＫＶＬＳＱＤＮＱＭＫＩＱＶＧＡＮＤＧＥＴＩＴＩＤＬＱＫＩＩＰＧＩＳＧＧＧＧＧＩＬＤＳＭＧＴＬＩＮＥＤＡＡＡＡＫＫＳＴＡＮＰＬＡＳＩＤＳＡＬＳＫＶＤＡＶＲＳＳＬＧＡＩＱＮＲＦＤＳＡＩＴＮＬＧＮＴＶＴＮＬＮＳＡＲＳＲＩＥＤＡＤＹＡＴＥＶＳＮＭＳＫＡＱＩＬＱＱＡＧＴＳＶＬＡＱＡＮＱＶＰＱＮＶＬＳＬＬＲ（配列番号１７）；
国際公開第２００６／０６９１９８号の配列番号３６
ＭＲＧＳＨＨＨＨＨＨＧＭＡＳＭＴＧＧＱＱＭＧＲＤＬＹＤＤＤＤＫＤＰＦＴＳＮＩＫＧＬＴＱＡＳＲＮＡＮＤＧＩＳＩＡＱＴＴＥＧＡＬＮＥＩＮＮＮＬＱＲＶＲＥＬＳＶＱＡＴＮＧＴＮＳＤＳＤＬＫＳＩＱＤＥＩＱＱＲＬＥＥＩＤＲＶＳＮＱＴＱＦＮＧＶＫＶＬＳＱＤＮＱＭＫＩＱＶＧＡＮＤＧＥＴＩＴＩＤＬＱＫＩＩＰＧＩＳＧＧＧＧＧＩＬＤＳＭＧＴＬＩＮＥＤＡＡＡＡＫＫＳＴＡＮＰＬＡＳＩＤＳＡＬＳＫＶＤＡＶＲＳＳＬＧＡＩＱＮＲＦＤＳＡＩＴＮＬＧＮＴＶＴＮＬＮＳＡＲＳＲＩＥＤＡＤＹＡＴＥＶＳＮＭＳＫＡＱＩＬＱＱＡＧＴＳＶＬＡＱＡＮＱＶＰＱＮＶＬＳＬＬＲ（配列番号１７）；
国際公開第２００６／０６９１９８号の配列番号３８
ＭＲＧＳＨＨＨＨＨＨＧＭＡＳＭＴＧＧＱＱＭＧＲＤＬＹＤＤＤＤＫＤＰＭＡＱＶＩＮＴＮＳＬＳＬＬＴＱＮＮＬＮＫＳＱＳＳＬＳＳＡＩＥＲＬＳＳＧＬＲＩＮＳＡＫＤＤＡＡＧＱＡＩＡＮＲＦＴＳＮＩＫＧＬＴＱＡＳＲＮＡＮＤＧＩＳＩＡＱＴＴＥＧＡＬＮＥＩＮＮＮＬＱＲＶＲＥＬＳＶＱＡＴＮＧＴＮＳＤＳＤＬＫＳＩＱＤＥＩＱＱＲＬＥＥＩＤＲＶＳＮＱＴＱＦＮＧＶＫＶＬＳＱＤＮＱＭＫＩＱＶＧＡＮＤＧＥＴＩＴＩＤＬＱＫＩＤＶＫＳＬＧＬＩＰＧＩＳＧＧＧＧＧＩＬＤＳＭＧＴＬＩＮＥＤＡＡＡＡＫＫＳＴＡＮＰＬＡＳＩＤＳＡＬＳＫＶＤＡＶＲＳＳＬＧＡＩＱＮＲＦＤＳＡＩＴＮＬ（配列番号１７）；
国際公開第２００６／０６９１９８号の配列番号４０
ＭＲＧＳＨＨＨＨＨＨＧＭＡＳＭＴＧＧＱＱＭＧＲＤＬＹＤＤＤＤＫＤＰＭＡＱＶＩＮＴＮＳＬＳＬＬＴＱＮＮＬＮＫＳＱＳＳＬＳＳＡＩＥＲＬＳＳＧＬＲＩＮＳＡＫＤＤＡＡＧＱＡＩＡＮＲＦＴＳＮＩＫＧＬＴＱＡＳＲＮＡＮＤＧＩＳＩＡＱＴＴＥＧＡＬＮＥＩＮＮＮＬＱＲＶＲＥＬＳＶＱＡＴＮＧＴＮＳＤＳＤＬＫＳＩＱＤＥＩＱＱＲＬＥＥＩＤＲＶＳＮＱＴＱＦＮＧＶＫＶＬＳＱＤＮＱＭＫＩＱＶＧＡＮＤＧＥＴＩＴＩＤＬＱＫＩＩＰＧＩＳＧＧＧＧＧＩＬＤＳＭＧＴＬＩＮＥＤＡＡＡＡＫＫＳＴＡＮＰＬＡＳＩＤＳＡＬＳＫＶＤＡＶＲＳＳＬＧＡＩＱＮＲＦＤＳＡＩＴＮＬ（配列番号１７）；
国際公開第２００６／０６９１９８号の配列番号４２
ＭＲＧＳＨＨＨＨＨＨＧＭＡＳＭＴＧＧＱＱＭＧＲＤＬＹＤＤＤＤＫＤＰＭＡＱＶＩＮＴＮＳＬＳＬＬＴＱＮＮＬＮＫＳＱＳＳＬＳＳＡＩＥＲＬＳＳＧＬＲＩＮＳＡＫＤＤＡＡＧＱＡＩＡＮＲＦＴＳＮＩＫＧＬＴＱＡＳＲＮＡＮＤＧＩＳＩＡＱＴＴＥＧＡＬＮＥＩＮＮＮＬＱＲＶＲＥＬＳＶＱＡＴＮＧＴＮＳＤＳＤＬＫＳＩＱＤＥＩＱＱＲＬＥＥＩＤＲＶＳＮＱＩＰＧＩＳＧＧＧＧＧＩＬＤＳＭＧＴＬＩＮＥＤＡＡＡＡＫＫＳＴＡＮＰＬＡＳＩＤＳＡＬＳＫＶＤＡＶＲＳＳＬＧＡＩＱＮＲＦＤＳＡＩＴＮＬＧＮＴＶＴＮＬＮＳＡＲＳＲＩＥＤＡＤＹＡＴＥＶＳＮＭＳＫＡＱＩＬＱＱＡＧＴＳＶＬＡＱＡＮＱＶＰＱＮＶＬＳＬＬＲ（配列番号１７）；および
国際公開第２００６／０６９１９８号の配列番号４４
ＭＲＧＳＨＨＨＨＨＨＧＭＡＳＭＴＧＧＱＱＭＧＲＤＬＹＤＤＤＤＫＤＰＦＴＳＮＩＫＧＬＴＱＡＳＲＮＡＮＤＧＩＳＩＡＱＴＴＥＧＡＬＮＥＩＮＮＮＬＱＲＶＲＥＬＳＶＱＡＴＮＧＴＮＳＤＳＤＬＫＳＩＱＤＥＩＱＱＲＬＥＥＩＤＲＶＳＮＱＩＰＧＩＳＧＧＧＧＧＩＬＤＳＭＧＴＬＩＮＥＤＡＡＡＡＫＫＳＴＡＮＰＬＡＳＩＤＳＡＬＳＫＶＤＡＶＲＳＳＬＧＡＩＱＮＲＦＤＳＡＩＴＮＬＧＮＴＶＴＮＬＮＳＡＲＳＲＩＥＤＡＤＹＡＴＥＶＳＮＭＳＫＡＱＩＬＱＱＡＧＴＳＶＬＡＱＡＮＱＶＰＱＮＶＬＳＬＬＲ（配列番号１７）。
【００８０】
いくつかの実施形態において、本発明は、配列番号１７〜２６の１つ以上に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約８７％、少なくとも約９０％、少なくとも約９３％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むＴＬＲ５アゴニストの使用を企図する。様々な実施形態において、アミノ酸配列を有するポリペプチドは、Ｈｉｓタグを含まない。
【００８１】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＴＬＲ５アゴニストおよび／またはフラジェリンベースの剤に融合されない病原性タンパク質抗原の例としては、肺炎連鎖球菌の表面タンパク質Ａ（ＰｓｐＡ）および肺炎球菌表面タンパク質Ａ（ＰｓａＡ）のαヘリックスドメイン、インフルエンザウイルスのサブユニット血球凝集素（ＨＡ）およびノイラミニダーゼ（ＮＡ）、ならびに重症急性呼吸器症候群ウイルス（ＳＡＲＳウイルス）のスパイク（Ｓ）タンパク質が挙げられる。
投与量、投与および医薬配合物
【００８２】
実施形態において、ＴＬＲ５アゴニストの医薬調製物は、様々な方法で使用され、いくつかの実施形態において、それは単位剤形であり得る。こうした形態では、調製物は、適切な量の活性成分を含む単位用量に細分される。単位剤形は、パッケージ化された調製物であり得、パッケージは、パケット化された錠剤、カプセル、およびバイアルまたはアンプル中の粉末などの、個別の量の調製物を含む。また、単位剤形は、カプセル、錠剤、カシェ、またはトローチ自体であってよく、またはパッケージ化形態のこれらのいずれかの適切な数であってよい。組成物は、所望であれば、他の適合性のある治療剤を含んでもよい。いくつかの医薬調製物は、徐放性配合物中で本開示の化合物を送達できる。
【００８３】
本発明によるＴＬＲ５アゴニストの場合、剤形は、任意により液体剤形であり得る。溶液は、ヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性剤またはポリソルベートなどの乳化剤と適切に混合された水中で調製できる。分散液は、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、ＤＭＳＯ、およびアルコールの有無にかかわらずそれらの混合物、および油中で調製できる。通常の保管条件および使用条件下で、これらの調製物は、微生物の成長を防ぐための防腐剤を含む。適切な配合物の選択および調製のための従来の手順および成分は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（２００３−第２０版）および１９９９年発行のＵｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：Ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ（ＵＳＰ  ２４  ＮＦ１９）に記載されている。配合物は、これらに限定されないが、緩衝剤、抗酸化剤、安定剤、担体、希釈剤、およびｐＨ調整剤などの賦形剤を任意により含む。注射用途に好適である医薬形態としては、滅菌水溶液または分散液、および滅菌注射溶液または分散液の即時調製のための滅菌粉末が挙げられる。許容される担体、賦形剤、または安定剤は、使用される投与量および濃度でレシピエントにとって無毒であり、リン酸塩、クエン酸塩、他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウムなど；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、またはベンジルアルコール；メチルまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清、アルブミン、ゼラチン、免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジンなどのアミノ酸；単糖、二糖、およびグルコース、マンノース、またはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；ショ糖、マンニトール、トレハロースまたはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；および／またはＴＷＥＥＮ、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳもしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含む。
【００８４】
治療において、ＴＬＲ５アゴニストの用量は、任意により、対象の体重の約０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、約０．１５ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇおよび約１ｍｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇの範囲である。他の実施形態では、用量は、対象の体重の約１００ｍｇ／ｋｇ〜約５ｇ／ｋｇ、約５００ｍｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇ、および約７５０ｍｇ／ｋｇ〜約１．５ｇ／ｋｇの範囲である。例えば、疾患または障害の種類および重症度に応じて、約１ｍｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ）の剤が、例えば、１回以上の別々の投与によるか、または持続注入によるかにかかわらず、患者への投与のための候補投与量である。典型的な１日投与量は、上記の要因に応じて、約１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲である。状態に応じて、数日以上の反復投与では、疾患または障害の症状の望ましい抑制が生じるまで治療を継続する。しかし、他の投与レジメンが有用である場合もある。単位用量は、例えば、約５ｍｇ〜５００ｍｇの範囲、例えば、５０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇおよび３００ｍｇであり得る。治療法の進行を、従来の技術およびアッセイによって監視する。
【００８５】
いくつかの実施形態では、ＴＬＲ５アゴニスト、例えば、フラジェリンまたはフラジェリンベースの剤（エントリモドなど）は、約１μｇ／ｋｇ未満、例えば、約０．３５〜約０．７５μｇ／ｋｇまたは約０．４０〜約０．６０μｇ／ｋｇの有効量（または用量）でヒト患者に投与される。いくつかの実施形態では、フラジェリンまたはフラジェリンベースの剤（エントリモドなど）の用量は、約０．３５μｇ／ｋｇ、または約０．４０μｇ／ｋｇ、または約０．４５μｇ／ｋｇ、または約０．５０μｇ／ｋｇ、または約０．５５μｇ／ｋｇ、または約０．６０μｇ／ｋｇ、または約０．６５μｇ／ｋｇ、または約０．７０μｇ／ｋｇ、または約０．７５μｇ／ｋｇ、または約０．８０μｇ／ｋｇ、または約０．８５μｇ／ｋｇ、または約０．９０μｇ／ｋｇ、または約０．９５μｇ／ｋｇまたは約１μｇ／ｋｇである。様々な実施形態では、フラジェリンまたはフラジェリンベースの剤（エントリモドなど）の絶対用量は、約２μｇ／対象〜約４５μｇ／対象、または約５μｇ／対象〜約４０μｇ／対象、または約１０μｇ／対象〜約３０μｇ／対象、または約１５μｇ／対象〜約２５μｇ／対象である。いくつかの実施形態では、フラジェリンまたはフラジェリンベースの剤（エントリモドなど）の絶対用量は、約２０μｇ、または約３０μｇ、または約４０μｇである。 
【００８６】
様々な実施形態において、ＴＬＲ５アゴニスト、例えば、フラジェリンまたはフラジェリンベースの剤（エントリモドなど）の用量は、ヒト患者の体重によって決定され得る。フラジェリンまたはフラジェリンベースの剤（エントリモドなど）の用量は、約０〜約５ｋｇ（例えば、約０ｋｇ、もしくは約１ｋｇ、もしくは約２ｋｇ、もしくは約３ｋｇ、もしくは約４ｋｇ、もしくは約５ｋｇ）の小児ヒト患者に対し約２μｇ、または約６〜約８ｋｇ（例えば、約６ｋｇ、もしくは約７ｋｇ、もしくは約８ｋｇ）の小児ヒト患者に対し約３μｇ、または、約９〜約１３ｋｇ（例えば、９ｋｇ、もしくは約１０ｋｇ、もしくは約１１ｋｇ、もしくは約１２ｋｇ、もしくは約１３ｋｇ）の小児ヒト患者に対し約５μｇ、または、約１４〜約２０ｋｇ（例えば、約１４ｋｇ、もしくは約１６ｋｇ、もしくは約１８ｋｇ、もしくは約２０ｋｇ）の小児ヒト患者に対し約８μｇ、または、約２１〜約３０ｋｇ（例えば、約２１ｋｇ、もしくは約２３ｋｇ、もしくは約２５ｋｇ、もしくは約２７ｋｇ、もしくは約３０ｋｇ）の小児ヒト患者に対し約１２μｇ、または、約３１〜約３３ｋｇ（例えば、約３１ｋｇ、もしくは約３２ｋｇ、もしくは約３３ｋｇ）の小児ヒト患者に対し約１３μｇ、または、約３４〜約５０ｋｇ（例えば、約３４ｋｇ、もしくは約３６ｋｇ、もしくは約３８ｋｇ、もしくは約４０ｋｇ、もしくは約４２ｋｇ、もしくは約４４ｋｇ、もしくは約４６ｋｇ、もしくは約４８ｋｇ、もしくは約５０ｋｇ）の成人患者に対し約２０μｇ、または、約５１〜約７５ｋｇ（例えば、約５１ｋｇ、もしくは約５５ｋｇ、もしくは約６０ｋｇ、もしくは約６５ｋｇ、もしくは約７０ｋｇ、もしくは約７５ｋｇ）の成人ヒト患者に対し約３０μｇ、または、約１１４ｋｇを超える（例えば、約１１４ｋｇ、もしくは約１２０ｋｇ、もしくは約１３０ｋｇ、もしくは約１４０ｋｇ、もしくは約１５０ｋｇ）成人患者に対し約４５μｇである。 
【００８７】
ある実施形態では、ＴＬＲ５アゴニスト、例えば、本明細書で提供される方法によるフラジェリンまたはフラジェリンベースの剤（エントリモドなど）は、皮下（ｓ．ｃ．）、静脈内（ｉ．ｖ．）、筋肉内（ｉ．ｍ．）、鼻腔内または局所的に投与される。本明細書に記載のフラジェリンまたはフラジェリンベースの剤（エントリモドなど）の投与は、独立して、１日１〜４回、または１ヶ月に１〜４回、または１年に１〜６回、または２年、３年、４年または５年に１回であり得る。投与は、１日または１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、１年、２年、３年の期間であり得、またヒト患者の生涯中でさえあり得る。投与量は、単回投与としてまたは複数回投与に分割して投与されてよい。いくつかの実施形態では、フラジェリンまたはフラジェリンベースの剤（エントリモドなど）は、約１回〜約３回（例えば、１回、または２回または３回）投与される。いくつかの実施形態では、フラジェリンまたはフラジェリンベースの剤（エントリモドなど）は、１回投与される。
【００８８】
本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、ＴＬＲ５アゴニスト、例えば、ＴＬＲ５アゴニスト、フラジェリンまたはフラジェリンベースの剤（エントリモドなど）は、１つ以上のサイクルで投与される。本明細書で提供される方法の特定の実施形態では、ＴＬＲ５アゴニスト、例えば、フラジェリンまたはフラジェリンベースの剤（エントリモドなど）は、１回以上のサイクルで投与され、サイクルは、１回／日、１日間、または２日間１回／日、または３日間１回／日を、または４日間１回／日、または５日間１回／日患者に投与することを伴う。本明細書で提供される方法の特定の実施形態では、ＴＬＲ５アゴニスト、例えば、フラジェリンまたはフラジェリンベースの剤（エントリモドなど）は、本明細書で提供される１つ以上のサイクルで投与され、１年に５サイクル以下が投与されるか、または、１年に３サイクル以下が投与されるか、または、１年に２サイクル以下が投与される。
【００８９】
ＴＬＲ５アゴニストの様々な投与態様、例えば、本明細書では、フラジェリンまたはフラジェリンベースの剤（エントリモドなど）が、企図される。一実施形態では、ＴＬＲ５アゴニスト、例えば、フラジェリンまたはフラジェリンベースの剤（エントリモドなど）は非経口的投与される。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ５アゴニスト、例えば、フラジェリンまたはフラジェリンベースの剤（エントリモドなど）は、注射、例えば、筋肉内注射によって投与される。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ５アゴニスト、例えば、フラジェリンまたはフラジェリンベースの剤（エントリモドなど）は、単回筋肉内注射によって投与される。いくつかの実施形態では、投与は、本明細書に記載のキットを使用して（例えば、単位剤形、例えば、事前に装填された（別名、事前に投与または事前に充填された）シリンジまたはペン針注射器（注射ペン）を介して）達成される。 
キット
【００９０】
本発明は、本明細書に記載の任意の剤の投与を簡素化できるキットを提供する。本発明の例示的なキットは、単位剤形で本明細書に記載の任意の組成物を含む。一実施形態では、単位剤形は、本明細書に記載の任意の剤および薬学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤、またはビヒクルを含む、無菌であり得るプレフィルドシリンジなどの容器である。キットは、本明細書に記載の任意の剤の使用を指示するラベルまたは印刷された説明書をさらに含んでよい。キットは、開瞼器（ｌｉｄ  ｓｐｅｃｕｌｕｍ）、局所麻酔薬、および投与場所用の洗浄剤を含んでもよい。キットはまた、本明細書に記載の１つ以上の追加の剤をさらに含んでもよい。一実施形態では、キットは、有効量の本発明の組成物および有効量の本明細書に記載されるような別の組成物を含有する容器を含む。
定義
【００９１】
本明細書に記載の剤に関して、用語「調節する」および「調節剤」は、応答の上方制御（すなわち、活性化または刺激）または下方制御（すなわち、阻害または抑制）を指す。「調節剤」は、調節する剤、化合物、または分子であり、例えば、アゴニスト、アンタゴニスト、アクチベータ、刺激剤、抑制剤、または阻害剤であり得る。本明細書で使用される「阻害する」、「低下させる」、除去するという用語は、発現、活性または症状におけるあらゆる阻害、低下、減少、抑制、下方制御、または防止を指し、これらの用語は、活性または症状の部分的なまたは完全な阻害を含む。部分的阻害は、例えば、阻害されていない発現、活性または症状の９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、または５％未満である発現、活性または症状のレベルを意味し得る。「排除する」または「根絶する」という用語は、活性または症状の完全な低下を示す。
【００９２】
本明細書で使用される場合、「障害」または「疾患」という用語は、機能のあらゆる混乱または異常、病的な身体的または精神的状態を指す。ＤｏｒｌａｎｄのＩｌｌｕｓｔｒａｔｅｄ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ  Ｃｏ．第２７版、１９８８年）を参照されたい。
【００９３】
本明細書で使用される場合、任意の疾患または障害の「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、一実施形態では、疾患または障害を改善すること（すなわち、疾患の発現またはその臨床症状の少なくとも１つを減速させるか、阻止するか、または減少させること）を指す。別の実施形態では、「治療すること」または「治療」は、少なくとも１つの物理的パラメータ（患者によって識別不可能であり得るものなど）を軽減または改善することを指す。さらに別の実施形態では、「治療すること」または「治療」は、物理的に、（例えば、識別可能な症状の安定化）、生理学的に、（例えば、物理的パラメータの安定化）、またはその両方のいずれかで、疾患または障害を調節することを指す。さらに別の実施形態では、「治療すること」または「治療」は、疾患または障害の発症または発現または進行を防止または遅延させることを指す。
【００９４】
本明細書で使用される場合、「異常な」という用語は、正常な活性または特徴とは異なる活性または特徴を指す。本明細書で使用される場合、「異常な活性」という用語は、野生型もしくは天然の遺伝子もしくはタンパク質の活性とは異なるか、または健康な対象における遺伝子もしくはタンパク質の活性とは異なる活性を指す。異常な活性は、通常の活性よりも強くても、弱くてもよい。一実施形態では、「異常な活性」は、遺伝子から転写されたｍＲＮＡの異常（過剰なまたは過少のいずれかの）産生を含む。別の実施形態では、「異常な活性」は、遺伝子からのポリペプチドの異常な（過剰なまたは過少のいずれかの）産生を含む。別の実施形態では、異常な活性は、ｍＲＮＡまたはポリペプチドの正常レベルと約１５％、約２５％、約３５％、約５０％、約６５％、約８５％、約１００％以上異なるｍＲＮＡまたはポリペプチドのレベルを指す。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡまたはポリペプチドの異常なレベルは、ｍＲＮＡまたはポリペプチドの正常レベルよりも高くても低くてもよい。さらに別の実施形態では、異常な活性は、野生型タンパク質の正常な活性とは異なるタンパク質の機能的活性を指す。いくつかの実施形態では、異常な活性は、正常な活性よりも強くても弱くてもよい。いくつかの実施形態では、異常な活性は、対応する遺伝子中の突然変異によるものであり、突然変異は、遺伝子のコード領域または転写プロモーター領域などの非コード領域にあり得る。突然変異は、置換、欠失、挿入であり得る。
【００９５】
本明細書で使用される「治療有効量」は、細胞、細胞集団、組織、個体、患者などにおいて少なくとも１つの所望の変化を引き起こす化合物または組成物（本明細書に記載されるなどの）の量を意味する。いくつかの実施形態では、本明細書で使用される治療有効量は、疾患もしくは障害もしくは状態におけるまたは本明細書に記載の疾患もしくは障害もしくは状態の１つ以上の特徴における臨床的に有意な変化を防止するかもしくはそれらをもたらす（例えば、少なくとも約３０パーセント、少なくとも約５０パーセント、または少なくとも約９０パーセント減少させる）化合物または組成物（本明細書に記載されるなどの）の量を意味する。
実施例
【００９６】
本開示は、以下の実施例においてさらに説明される。これらは、特許請求の範囲に記載のあらゆる本発明（複数可）の範囲を限定するものではない。
実施例１：ＴＬＲ５の薬理学的刺激は、生活の質を改善し虚弱を減少させる
【００９７】
この実施例は、加齢に関連する虚弱を防止し健康的な寿命（「健康期間」）および寿命（「生存期間」）を延長するための薬理学的なフラジェリンベースの剤と、その使用方法について記載する。
【００９８】
前臨床加齢モデル。生理学的機能の大部分の一般的な低下、再生能力、創傷治癒の障害、様々な疾患または障害のリスクの段階的な上昇、すべての哺乳動物の生涯の間に起こる非感染性全身性炎症の増加は、虚弱として累積的に定義される症状の組み合わせをもたらす。任意の特定の病状によって誘発または加速されない健康な動物およびヒトにおいて観察される虚弱の増大は、暦年齢による加齢（ｃｈｒｏｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｇｉｎｇ）と呼ばれる。この状態の重症度は時間と共に大きくなり、生物が、その自然な遺伝的に決定された生存期間に近い年齢に近づくと、重篤な重症度に達する。実験用マウスの暦年齢による加齢は、老年学の分野で一般に使用される、ヒトの加齢の幅広く許容されているモデルである。ほとんどの系統のマウスの自然な生存期間は、約２年である。各系統は、加齢性疾患または障害の一般的なスペクトルによって特性が決定され、これらは、主要な死因となり、加齢の他の徴候を危険な状態にし虚弱の研究を複雑にし得る現象になる。この因子の影響を最小限に抑えるために、ある特定の病状に対する遺伝的素因が生来それほどない非近交系ＮＩＨスイスマウスを、研究に使用した。加齢に伴う虚弱以外の健康リスク（感染、中毒、外傷、ストレスなど）のリスクを最小限に抑えた条件下で維持される両方の性別のＮＩＨスイスマウスの寿命の特徴を明らかにした。これらの条件は、Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓ  ｏｆ  Ｒｏｓｗｅｌｌ  Ｐａｒｋ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅで提供され、ここで動物が、ＮＩＨの動物福祉ガイドラインに従って飼育される。これらの条件下では、動物は、それらの自然の生存期間を完全に実現しかつ自然の暦年齢による加齢の内因性プロセスを反映する虚弱により死亡する最大の可能性を有する（図１）。このモデルの妥当性は、図７に示すように、寿命を調節することが知られている因子の生物学的効果を明らかにするその能力によって確認された。ｍＴＯＲ阻害剤ラパマイシンによるマウスの治療は、マウスの生存期間を延長することが示された。実際に、ｍＴＯＲ阻害剤であるラパマイシンによる治療の結果は、フラジェリンまたはエントリモドの投与に関して示された結果の正反対の効果を有するようである。
【００９９】
生物学的年齢の客観的な定量的評価を、加齢に伴う欠陥の蓄積の規模を反映するパラメータである、いわゆる「虚弱指数」（ＦＩ）の決定によって行った。生殖器クリニックで一般的に使用されるＦＩを、実験動物に適合させ、複数の測定可能な生理学的および生化学的パラメータの健康な若い動物のパラメータからの偏差の程度の関数として、各動物について計算した。結果として得られる数値は、「生理学的虚弱指数（ＰＦＩ）」と呼ばれ、生存と共に徐々に上昇し、動物の生物学的年齢を反映する。ＰＦＩは、「０」（欠陥なし、参照群の範囲内）〜「１」（極度の欠陥）のスコアとして表される。
【０１００】
サルモネラ菌のフラジェリン。細菌べん毛の主成分である、細菌タンパク質であるフラジェリンは、自然免疫受容体ＴＬＲ５の唯一の既知のアゴニストである。サルモネラフラジェリンを、以前に記載されるとおり（Ｂｕｒｄｅｌｙａ，Ｌ．Ｇ．らＡｎ  Ａｇｏｎｉｓｔ  ｏｆ  Ｔｏｌｌ−Ｌｉｋｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ５  Ｈａｓ  Ｒａｄｉｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  Ｍｏｕｓｅ  ａｎｄ  Ｐｒｉｍａｔｅ  Ｍｏｄｅｌｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２０，２２６−２３０（２００８年））大腸菌において組換えタンパク質として合成し、Ｈｉｓタグ用のＮｉ含有カラムでアフィニティ精製した後、他の精製ステップ（例えば、エンドトキシンを除去するためのポリミキシンカラム）で精製した。得られた産物の品質を、個々のＴＬＲを発現する一群のレポーター細胞株を含む一連の機能アッセイを使用して制御した。ＴＬＲ５を発現する細胞でのみＮＦ−κＢシグナル伝達を活性化でき、他のＴＬＲではできなかった。フラジェリンを、深く凍結したアリコートとして溶液中で保存する。
【０１０１】
実験デザインおよび理論的根拠。動物を、温度、昼夜の切り替え、健康的なバランスの取れた食餌、飲料水、無菌食品および空気への常時アクセスの厳しく制御された条件下で維持した。それらのＰＦＩを、動物の生涯において指示される時点で測定した（図２）。個々のＰＦＩが典型的な範囲にある雄および雌を等しい比で含む３つの群を、それらの生涯の様々な時期において他の群から分離し、短期コースのフラジェリンｓ．ｃ．注射（１日１回（１μｇ／注射）、５日間連続）を行った。対照動物は、ビヒクル（生理食塩水）注射を受けた。注射の具体的な時期を図２に示す。２つの群が１コース（生後４４週と５５週）を受け、１群が２コース（１８週および８４週齢）のフラジェリンを受けた。ＰＦＩを、後で決定し、動物を、死ぬまで毎日モニターした。ＮＩＨスイスマウスにおけるＴＬＲ５シグナル伝達の機能性は、本発明者らの以前の実験において確立され、そこでＴＬＲ５アゴニスト（フラジェリンおよびその薬理学的誘導体エントリモド）は、動物を致死的な全身照射から保護できると示された。この実験デザインを、ＰＦＩとして決定されるマウスの生物学的年齢に対するフラジェリンによる治療の長期的な効果を明らかにするために選択した。また、このデザインは、ＴＬＲ５アゴニストに対する生物応答の性差を検出することも可能にした。
【０１０２】
マウスの暦年齢による加齢に対するフラジェリン治療の効果。図２に概略的に記載した３つの独立した実験の結果を、図３〜６に示す。これらはいずれも、フラジェリン治療を受けた群におけるＰＦＩの上昇の実質的な減速を示す。この効果は、雄のマウスに限定され、雌では見られなかった。エストロゲン受容体およびエストラジオールが、ＴＬＲ５の発現およびフラジェリンに対するＴＬＲ５依存性応答を調節するという報告がある。
【０１０３】
例えば、図３は、１日５回のｓ．ｃ．注射（フラジェリン１μｇ／マウス）による５６週齢のＮＩＨスイス雄の治療が、ほぼ１年後の１０４週齢で大幅に低いＰＦＩに変換されることを示す。差は統計的に有意である（ｐ＝０．０４）。この効果を、図４にグラフで示す。１０４週で、フラジェリン治療雄群（破線）の平均ＰＦＩは、５５週での治療時から３３％上昇したが、対照マウスでは着実に１００％上昇した（実線）。その結果、治療を受けた雄の群は、ビヒクル治療を受けた対照と比較して、寿命の延長を示した（２２週の平均生存期間、または対照より２０％長い）。上記はいずれも、雌群では観察されなかった。
【０１０４】
ＰＦＩに対するフラジェリン治療の同様の性別特異的効果が、実験群２および３で観察された（図５、６）。重要なことに、対照マウスとフラジェリン治療マウスの間のＰＦＩの動的差は、観察期間全体において拡大し続け、ＴＬＲ５アゴニストによる１週間の治療が治療１年後でも依然として目に見える長期的な生理学的効果を有したことを示した。
実施例２：虚弱指数を改善するためのエントリモドの投与。
【０１０５】
動物の寿命（生存期間）および全体的な健康（健康期間）に対するエントリモド治療の効果を評価するために、雄および雌のＮＩＨスイスマウスに異なる年齢（「高齢」（１１２週齢）、「中年」（５５週）、「若年」（１８週））でエントリモド（５μｇ／マウス、ＳＱ）を毎日５回注射した。「若年」で治療された群は、８４週で２ラウンド目の治療を受けた。対照群は、エントリモドの代わりにＰＢＳのＳＱ注射を受けた、性別および年齢が一致しているマウスで構成された。実験デザインを図８に示す。マウスを、実験中標準条件下で収容し、死亡率および罹患率をモニターした。生存を、生存期間の指標として記録した。さらに、治療後の様々な時点で（図８を参照）、健康寿命の定量的指標としてＰＦＩを決定するための試験を行った。
【０１０６】
治療されたマウスを、標準収容条件下で自然に加齢させ、それらの寿命を、ＩＡＣＵＣ承認の加齢動物エンドポイント基準に基づき記録した。図９〜１１は、試験を行った年齢群における生存期間に対するエントリモドによる治療の影響を示す。中年の雄のマウスは、生存期間の延長を示した。
【０１０７】
加齢プロセスの読み取りは、絶対生存期間または寿命のみでなく、個体の全体的な健康状態に基づく「健康期間」も含む。健康期間に対するエントリモド治療の潜在的な効果を、治療されたＮＩＨスイスマウスについて、図８に示される治療後の時間での生理学的虚弱指数（ＰＦＩ）を決定することにより評価した。ＰＦＩは、試験群と参照群の間の生理学的パラメータの比較に基づく定量的尺度である。図１２に示すように、「老年」（１１２週）で治療され約４ヶ月後（１２８週）に評価されたマウスの対照群とエントリモド治療群の間でＰＦＩ中央値に差はなかった。同様の結果が、雄および雌で得られた。これらのデータは、高齢動物の治療は、すでに動物が複数の健康欠陥を得ているため、加齢プロセスの速度を減速できないという仮説（理論に拘束されることを望むものではない）と一致する。
【０１０８】
対照的に、エントリモドによる中年の（５５週齢）マウスの治療は、雄でのみであるが、１０４週および１２０週でＰＦＩにより測定した場合、加齢に対して有益な効果を有した（図１３）。ＰＦＩ中央値は、１０４週間の評価時点で、ＰＢＳ治療を受けた対照群に対して、エントリモド治療を受けた雄において有意に低かった。同じ傾向が１２０週で観察された。１０４週齢または１２０週齢でのいずれかで評価した場合、５５週齢においてエントリモドにより治療したまたはＰＢＳにより治療した雌の群で検出されたＰＦＩ中央値に、差はなかった（図１３）。同様の性差が、若年（１８週）で治療を受け、その後の８４週において２回目の治療を受けたマウスにおいて観察された（実験デザインについては図８を参照）。中年（５５週）で評価した場合、雄または雌のいずれについても、エントリモド治療群およびＰＢＳ治療群間で、ＰＦＩ中央値に差はなかった（図１４）。しかし、中年（８４週）において２回目の治療を受けた後、１０４週での評価時に、ＰＦＩ中央値は、対応するＰＢＳ治療群と比較して、エントリモド治療を受けた雄において有意に低かった。これらのマウスはまた、８４週において、ＰＦＩの顕著な減少を示した。５５週齢で治療されたマウスにおいて観察されたものと同様に（図１３）、１８週齢および８４週齢でのエントリモド治療の有益な効果は、雄マウスでのみ検出された。
【０１０９】
要約すると、これらの結果は、単回の５日間のエントリモドによる治療コースが、中年期（本発明者らの実験では５５〜８４週齢）に治療が行われた場合にのみ、および雄でのみ、より高齢のマウスの健康状態を有意に改善したことを示す。
実施例３：虚弱指数を改善するための患者へのエントリモドの投与。
【０１１０】
６６歳の男性患者を、虚弱指数（ＦＩ）、生理学的虚弱指数（ＰＦＩ）、Ｆｒｉｅｄ虚弱スコア、ロックウッド虚弱指数、フレイルスケール、または改訂虚弱指数を使用して決定された、虚弱指数の減少の最近の履歴を有すると特定する。３連続日ごとに１日あたり１回のエントリミドを投与することを含む単一サイクルを、患者に投与する。患者の虚弱指数を、虚弱指数（ＦＩ）、生理学的虚弱指数（ＰＦＩ）、Ｆｒｉｅｄ虚弱スコア、ロックウッド虚弱指数、フレイルスケール、または改訂虚弱指数を使用して、エントリミド投与後にモニターする。エントリミド投与後に、患者の虚弱指数の低下が低減されるか、または虚弱指数が改善される。
実施例４：白血病治療を受けた小児患者へのエントリモドの投与。
【０１１１】
以前に白血病のための化学療法により治療された６歳の男性の癌生存者患者を特定する。３連続日ごとに１日１回のエントリミドの投与を含む１サイクルを、患者に投与し、２回目の同一のエントリミドサイクルを、６ヶ月後に投与する。患者の虚弱指数を、エントリミド投与後にモニターし、加速された加齢は、患者で観察されない。
【０１１２】
本開示を、特定の実施形態を参照して特に示し、説明してきたが、当業者であれば、本明細書に、開示の本開示の趣旨および範囲から逸脱することなく、形態および詳細の様々な変更を行い得ることを理解する。
【０１１３】
本明細書で参照されるすべての参考文献は、それらの全体が組み込まれる。本発明の様々な実施形態は、この段落の後の段落に（および本出願の末尾に提供される実際の請求項の前に）列挙する潜在的な請求項によって特徴付けられ得る。これらの潜在的な請求項は、この出願の書面による説明の一部に含まれる。したがって、以下の潜在的な請求項の主題は、本出願または本出願に基づいて優先権を主張する任意の出願を含む後の手続において実際の請求項として提示され得る。こうした潜在的な請求項を含むことは、実際の請求項が潜在的な請求項の主題を網羅していないことを意味すると解釈されるべきではない。したがって、これらの潜在的な請求項を後の手続で提示しないという決定は、主題の寄付原則として解釈されるべきではない。
【０１１４】
上記の本発明の実施形態は、単に例示することを意図するものであり、多くの変形および修正が当業者には明らかであろう。そのようなすべての変形および修正は、添付の特許請求の範囲で定義される本発明の範囲内にあることが意図される。
【０１１５】
本書で使用されるように、すべての見出しは単に編成上のものであり、いかなる方法においても開示を制限することを意図するものではない。個々の章の内容は、すべての章に等しく適用され得る。
【図１】
2021522271.tif 000003
【図２】
2021522271.tif 000004
【図３】
2021522271.tif 000005
【図４】
2021522271.tif 000006
【図５】
2021522271.tif 000007
【図６】
2021522271.tif 000008
【図７】
2021522271.tif 000009
【図８】
2021522271.tif 000010
【図９】
2021522271.tif 000011
【図１０】
2021522271.tif 000012
【図１１】
2021522271.tif 000013
【図１２】
2021522271.tif 000014
【図１３】
2021522271.tif 000015
【図１４】
2021522271.tif 000016
【手続補正書】
【提出日】令和3年1月15日(2021.1.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2021522271000001.app
【国際調査報告】
2021522271.tif 000017
2021522271.tif 000018