(57)【要約】  中空マイクロニードルの内部に位置設定されたプローブを伴い、プローブを損傷から保護するためのピングを有するデバイス、および被分析物を検出するためにこのデバイスを使用する方法。【選択図】図１Ｂ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
１つ以上の中空マイクロニードルのアレイであって、前記１つ以上のマイクロニードルが、
中空内部の側面を画定する１つ以上の外部壁を含む突出した針構造、
前記中空マイクロニードルの外部にある生物学的表面に面するように構成された先端部、および
前記中空内部の中に位置設定されたプローブ、
を含んでいるアレイ；
を含むデバイスにおいて、
前記プローブが、前記プローブと接触してプローブ検知信号を生成する１つ以上の化学的または生物学的物質と相互作用するように構成されており；
さらに、前記中空針の先端部を覆うプラグを含み、前記プラグが前記プローブと前記中空マイクロニードルの前記外部の間に配置されており、前記プラグは、生物学的環境内で少なくとも部分的に溶解して、前記中空内部の前記先端部内に開口部を形成し、前記プローブを前記生物学的環境に曝露するように構成されていることを特徴とするデバイス。
【請求項２】
前記外部壁の少なくとも一部分が、生物学的環境内で溶解、崩壊または劣化しないように構成されている材料から形成されている、請求項１に記載のデバイス。
【請求項３】
前記プローブの１つ以上が、流体内部の被分析物と相互作用するように構成された機能化コーティングを含む、請求項１または２に記載のデバイス。
【請求項４】
前記機能化コーティングが、酵素機能化コーティングまたはイオン選択性コーティングのうちの少なくとも１つを含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載のデバイス。
【請求項５】
１つ以上の中空マイクロニードルの前記アレイが接着パッチに取付けられている、請求項１〜４のいずれか１項に記載のデバイス。
【請求項６】
前記プラグが、糖、天然ポリマ、または合成ポリマを含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載のデバイス。
【請求項７】
前記糖がフルクトース、トレハロース、ラフィノース、スクロースまたはグルコースである、請求項６に記載のデバイス。
【請求項８】
前記天然ポリマがセルロースまたはアルギン酸ナトリウムである、請求項６に記載のデバイス。
【請求項９】
前記合成ポリマが、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（エチレンオキシド）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリカプロラクトンまたは、ラクチド、グリコリドおよびカプロラクトンのうちの２つ以上のコポリマである、請求項６に記載のデバイス。
【請求項１０】
前記プラグの少なくとも一部分が前記マイクロニードルの前記中空内部の内部に配置されている、請求項１〜９のいずれか１項に記載のデバイス。
【請求項１１】
前記プラグが、前記中空マイクロニードルの前記先端部を覆うキャップとして配置されている、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のデバイス。
【請求項１２】
前記プラグが、前記中空マイクロニードルの前記先端部および前記マイクロニードルの前記外部壁の少なくとも一部分を覆うシースとして配置される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のデバイス。
【請求項１３】
さらに電極を含み、前記電極が前記プローブを含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載のデバイス。
【請求項１４】
前記プローブ信号が電気信号である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のデバイス。
【請求項１５】
前記プローブが、カーボンファイバ、カーボンペースト、導電性金属、半導体ポリマおよび導電性ポリマのうちの１つ以上を含む、請求項１〜１４のいずれか１項に記載のデバイス。
【請求項１６】
前記デバイスが、前記プローブに結合された１つ以上のワイヤまたは１つ以上の無線通信モジュールをさらに含み、前記ワイヤまたは無線通信モジュールが、１つ以上のプローブによって生成されたプローブ検出信号を伝送するように構成されている、請求項１〜１５のいずれか１項に記載のデバイス。
【請求項１７】
生物学的基質上の被分析物を検出する方法において、
請求項１〜１６のいずれか１項に記載の前記デバイスの前記中空マイクロニードルで前記生物学的基質を穿孔するステップと；
前記被分析物が前記プローブと作動的近接状態になって、前記被分析物の存在と相互関係があるプローブ信号を生成することができるようにするステップと；
を含む方法。
【請求項１８】
前記生物学的基質が表皮を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記生物学的基質が真皮を含む、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記生物学的基質が粘膜を含む、請求項１７〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
生物学的被分析物を検出するための経皮デバイス、詳細にはマイクロニードルを伴う経皮デバイスの使用は、ＰＣＴ公報、国際公開第２０１３／０５８８７９号、国際公開第２０１５／００８０１８号および国際公開第２０１３／５８８７９号、欧州特許第２８９８８２６号、米国特許第８，５６０，０５９号および米国特許出願公開第２０１４／０２７５８９７号中で開示されている。
【０００２】
国際公開第２０１３／０５８８７９号は、バイオセンシングのための技術、システムおよびデバイス、例えば、中空針アレイであって、各針が、中空内部を形成する外部壁および中空内部を曝露する突出針構造末端部にある開口部を含む突出針構造、および開口部を介してプローブと接触状態になってプローブ検知信号を生成する１つ以上の化学的または生物学的物質と相互作用するための外部壁内部のプローブを含んでいる中空針アレイと；、中空針アレイのプローブにそれぞれ結合されたワイヤアレイであって、各ワイヤがそれぞれのプローブによって生成されたプローブ検知信号を伝送するために導電性を有しているワイヤアレイと；を含むデバイスを開示している。
【発明の概要】
【０００３】
デバイスには、中空内部の側面を画定する１つ以上の外部壁を含む突出した針構造、中空マイクロニードルの外部にある生物学的表面に面するように構成された先端部、および外部壁の内側のプローブを含む１つ以上の中空針のアレイが含まれる。プローブは、１つ以上の外部壁により画定された中空内部内に位置設定され、プローブと接触してプローブ検知信号を生成する１つ以上の化学的または生物学的物質と相互作用するように構成されている。該デバイスは、プローブと中空マイクロニードルの外部の間に配置されるような形で中空針の先端部を覆うプラグを特徴としており、ここでこのプラグは、生物学的環境内で少なくとも部分的に溶解して、中空内部の先端部内に開口部を形成し、プローブを生物学的環境に曝露するように構成されている。このデバイスを用いて、被分析物を検出する方法は、デバイスの中空マイクロニードルで生物学的基質を穿孔するステップと、被分析物がプローブと作動的近接状態になって、被分析物の存在と相互関係があるプローブ信号を生成することができるようにするステップとを含むことができる。
【図面の簡単な説明】
【０００４】
【図１Ａ】プラグの溶解前後のマイクロニードルの図である。
【図１Ｂ】プラグの溶解前後のマイクロニードルの図である。
【図２】マイクロニードルの分解組立図である。
【図３Ａ】プラグおよび外部壁の溶解前後のマイクロニードルの図である。
【図３Ｂ】プラグおよび外部壁の溶解前後のマイクロニードルの図である。
【発明を実施するための形態】
【０００５】
本開示全体を通して、「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」などの単数形態は便宜上使用されている。しかしながら、単数形態は、単数が単独で明示的に規定されているかまたは文脈から明らかに指示されているのでないかぎり、複数を含めるように意図されていると理解すべきである。
【０００６】
「一般的な」、「一般的に」、「通常の」、「通常は」、「典型的な」、および「典型的には」などの用語は、本開示において、開示中で頻繁に使用される特徴に言及するために使用される。先行技術に関連して特定的に使用されるのでないかぎり、これらの用語は、或る特徴が先行技術において存在することを伝えるように意図されておらず、ましてやこのような特徴が先行技術において、一般的、典型的または通常であることを伝えるために意図されたものではない。
【０００７】
生物学的被分析物を検出するための経皮デバイス、詳細にはマイクロニードルを伴う経皮デバイスの使用は、例えば国際公開第２０１３／０５８８７９号、国際公開第２０１５／００８０１８号および国際公開第２０１３／５８８７９号などのＰＣＴ刊行物；欧州特許第２８９８８２６号、米国特許第８，５６０，０５９号、および米国特許出願公開第２０１４／０２７５８９７号中で開示されている。出願人らは、これらのデバイスが有する問題点、具体的には、マイクロニードルが生物学的基質、典型的には皮膚に非常に高い速度率でかつ非常に大きな力または圧力の下で衝撃を与えるために、たとえマイクロニードルがこの衝撃に損傷無く耐えたとしてもマイクロニードル内に格納されたプローブは多くの場合損傷を受けることになるという問題点を識別した。例えば国際公開第２０１３／０５８８７９号では、化学的アレイストリップ上のマイクロニードル組付け式プローブに由来する分析結果を開示しており、同様に、中空マイクロニードルは皮膚などの生物学的表面の衝撃および貫入に耐えることができることも開示しているものの、プローブが損傷無く衝撃および貫入に耐え得ることを標示してはいない。したがって、先行技術において開示されたデバイスは、多くの事例において、実践的意味合いでは作動不能である可能性がある。これは必ずしも、基本的技術に根本的な欠陥があるからではなく、むしろ、被分析物を検出する上での有用性が損なわれるまで損傷を受けることなくプローブを生物学的基質内に送達することができないためである。
【０００８】
この問題、およびマイクロニードル内または或る程度マイクロニードル上の損傷可能な材料または構造の使用に結び付けられる他の問題に対する解決法が、本明細書中で開示される。簡単に言うと、生物学的材料を検出するためのプローブが、中空マイクロニードルの外部壁内に位置設定される。先端部に開口部を有する中空マイクロニードルには、先端部を覆うプラグが嵌合されている。プラグは、プローブと中空マイクロニードルの外部の間に配置され、こうして通常は皮膚であるものの他の生物学的表面であり得ると考えられマイクロニードルによる衝撃を受ける生物学的表面とプローブとの間に１つの障壁を提供し、生物学的表面に対するマイクロニードルの衝撃中の損傷からプローブを保護する。プラグは、生物学的環境内で少なくとも部分的に溶解して中空内部の先端部内に開口部を形成し、プローブを生物学的環境に曝露するように構成されており、その後プローブは生物学的環境と相互作用し被分析物を検出するために利用可能となる。プラグは、本明細書中でさらに論述される通り、さまざまな形態のものであり得、さまざまな材料で製造され得る。
【０００９】
好適な任意のマイクロニードルを利用することができる。典型的には、マイクロニードルは中空であり、より典型的には、１つ以上の中空針のアレイが使用される。１つ以上の中空マイクロニードルのアレイは、１つ以上の外部壁を含む突出した針構造を有するマイクロニードルを含み、１つ以上の外部壁はマイクロニードルの中空内部の側面を画定する。概して円錐形状を有するマイクロニードルが通常使用され、そのような状況では、典型的に存在する外部壁は１つだけとなる。他の形状も同様に可能である。例えば、いくつかの中空マイクロニードルは概して円錐の形状を有するものの、マイクロニードルの長手方向軸との関係において各々異なる角度を有する明確に区別されるベース部分と端部部分を有することができる。マイクロニードルは同様に、非限定的に三角錐および四角錐を含めた、概して角錐の形状を有することもでき、その場合、２つ以上の外部壁が使用されることになる。
【００１０】
マイクロニードルは、中空マイクロニードルの外部にある生物学的表面に面するように構成された先端部を有する。先端部は典型的には、マイクロニードルの端部または尖端に１つ以上の開口部を有するが、１つ以上の開口部は、外部壁のうちの１つ以上の上、または先端部の他の部分上にもあり得る。マイクロニードルにおける開口部の場所は、本明細書中に記載の解決法に特に関連性を有するものではない。その代わりにそれは、使用されている特定のプローブ、検出対象の被分析物、およびマイクロニードルによる衝撃を受けるべき生物学的表面のニーズに基づくものである確率が高い。
【００１１】
マイクロニードルは、典型的に、パッチから突出する１つ以上のマイクロニードルのアレイの形をしている。パッチは通常、使用中にパッチおよびマイクロニードルが生物学的表面に接着できるようにするため、感圧接着剤などの接着剤を含む接着性パッチであるが、あらゆる場合にこれが必要であるわけではなく、使用中、術者が所定の場所に保持することによってか、医療テープによってかまたは他のいくつかの手段によってパッチを生物学的表面に固定することも同様に可能である。
【００１２】
本開示で使用可能なマイクロニードルアレイは、参照により本明細書中にその開示が組込まれている以下の特許および特許出願中に記載されているものなどのさまざまな構成および特徴を有することができる。例示的マイクロニードルアレイには、テーパ付き切頂形状および制御されたアスペクト比を有するマイクロニードルについて記述する米国特許出願公開第２００５／０２６１６３１号で開示された構造が含まれる。他の例示的マイクロニードルアレイには、皮膚を穿孔するための刃状のマイクロ突出部について記述する米国特許第６，０９１，９７５号中で開示された構造が含まれる。さらに他の例示的マイクロニードルアレイには、中空中央チャネルを有するテーパ付き構造について記述する米国特許第６，３１２，６１２号中で開示された構造が含まれる。さらにまた他の例示的マイクロニードルアレイには、マイクロニードルの先端部の頂部表面に少なくとも１つの長手方向の刃を有する中空マイクロニードルについて記述する米国特許第６，３７９，３２４号中で開示された構造が含まれる。マイクロニードルアレイのさらなる一例には、共に中空マイクロニードルについて記述する米国特許出願公開第２０１２／０１２３３８７号および第２０１１／０２１３３３５号中で開示されている構造が含まれる。またさらなる例示的マイクロニードルアレイには、共に中空マイクロニードルアレイおよびその製造方法について記述する米国特許第６，５５８，３６１号および７，６４８，４８４号中で開示されている構造が含まれる。
【００１３】
本明細書中で開示されている、単独でまたはマイクロニードルアレイの一部として使用可能なマイクロニードルの例は、液晶性ポリマ（ＬＣＰ）マイクロニードルについて記述する国際公開第２０１２／０７４５７６号ならびに本開示のマイクロニードル中で使用可能なさまざまな異なるタイプおよび組成のマイクロニードルについて記述する国際公開第２０１２／１２２１６２号中に記載されている。
【００１４】
マイクロニードルの１つ以上は、ケイ素、ガラスまたはステンレス鋼、チタン、またはニッケルチタン合金などの金属であるか、またはそれらを含む材料製であり得る。ポリマ材料、例えば医療グレードのポリマ材料も同様に、１つ以上のマイクロニードルの一成分または唯一の成分であり得る。医療グレードのポリマ材料の例示的タイプとしては、ポリカーボネート、液晶性ポリマ（ＬＣＰ）、ポリエーテルエーテルケトン（ＰＥＥＫ）、環状オレフィンコポリマ（ＣＯＣ）、ポリブチレンテレフタレート（ＰＢＴ）が含まれる。最も一般的に使用される医療グレードのポリマ材料は、ポリカーボネートおよびＬＣＰである。
【００１５】
マイクロニードルの１つ以上は、生分解性ポリマ材料、詳細には、医療グレードの生分解性ポリマ材料であるかまたはそれを含む材料製であり得る。医療グレードの生分解性材料の例示的タイプとしては、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ＰＧＡとＰＬＡのコポリマ、ポリエステル・アミドポリマ（ＰＥＡ）が含まれる。
【００１６】
溶解可能なプラグ、またはマイクロニードルの外部壁が溶解可能である場合には外部壁は、生物学的環境内で溶解可能、分解可能または崩壊可能な材料から調製され得る。溶解可能、分解可能または崩壊可能な材料は、使用中に溶解、分解または崩環する任意の固体材料、典型的には、角質層の下にある組織中で溶解、分解または崩壊する固体材料である。溶解可能な材料は、炭水化物または糖から選択可能である。他の事例において、溶解可能な材料はポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）である。他の事例において、溶解可能な材料は、ヒアルロン酸、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルアルコール、スクロース、グルコース、デキストラン、トレハロース、マルトデキストリンおよびその組合せからなる群から選択される。
【００１７】
本開示を実践するために有用なマイクロニードルまたはマイクロニードルアレイ内の複数のマイクロニードルは、角質層を穿孔する能力を有するさまざまな形状を有することができる。例としては、正四角錐形状、三角錐形状、階段状角錐形状、円錐形状、マイクロブレード形状、または皮下注射針形状が含まれる。一般的に、複数のマイクロニードルの１つ以上が正四角錐形状を有し得る。一般的に、複数のマイクロニードルの１つ以上が三角錐形状を有し得る。一般的に、複数のマイクロニードルの１つ以上が階段状角錐形状を有し得る。一般的に、複数のマイクロニードルの１つ以上が、円錐形状を有し得る。一般的に、複数のマイクロニードルの１つ以上がマイクロブレード形状を有し得る。一般的に複数のマイクロニードルの１つ以上が皮下注射針の形状を有し得る。形状は、対称または非対称であり得る。形状は、切頂され得る（例えば、複数のマイクロニードルは、角錐台形状または円錐台形状を有することができる）。
【００１８】
多くの場合、中空マイクロニードルアレイ内の複数の中空マイクロニードルの１つ以上は、円錐形状を有する。一般的に、中空マイクロニードルアレイ内の複数の中空マイクロニードルの１つ以上は、円筒形状を有し得る。一般的に、中空マイクロニードルアレイ内の複数の中空マイクロニードルの１つ以上は、正四角錐形状を有し得る。一般的に、中空マイクロニードルアレイ内の複数の中空マイクロニードルの１つ以上は、三角錐形状を有し得る。多くの場合、中空マイクロニードルアレイ内の複数の中空マイクロニードルの１つ以上は、皮下注射針の形状を有し得る。詳細には、中空マイクロニードルアレイ内の複数の中空マイクロニードルは各々、従来の皮下注射針の形状を有する。
【００１９】
マイクロニードルアレイ中、複数のマイクロニードルは典型的に、１つのマイクロニードル基体上に位置付けされている。各マイクロニードルは、マイクロニードルの先端部からこのマイクロニードルが基体と接触するマイクロニードルベースまでの長さである高さｈを有する。単一のマイクロニードルの高さまたはマイクロニードルアレイ上の全マイクロニードルの平均高さのいずれかを、マイクロニードルの高さｈと呼ぶことができる。いくつかの事例において、複数のマイクロニードルの各々（または複数のマイクロニードル中の全マイクロニードルの平均）は、約１００〜約３０００マイクロメートル、いくつかの実施形態においては約１００〜約１５００マイクロメートル、いくつかの実施形態においては約１００〜約１２００マイクロメートル、そしていくつかの実施形態においては約１００〜約１０００マイクロメートルの高さを有する。いくつかの事例において、複数のマイクロニードルの各々（または複数のマイクロニードル全ての平均）は、約２００〜約１２００マイクロメートル、約２００〜約１０００マイクロメートル、約２００〜約７５０マイクロメートル、または約２００〜約６００マイクロメートルの高さを有する。
【００２０】
一例として、複数のマイクロニードルの各々（または複数のマイクロニードル全ての平均）は、約２５０〜約１５００マイクロメートル、約５００〜約１０００マイクロメートルまたは約５００〜約７５０マイクロメートルの高さを有し得る。別の例として、複数のマイクロニードルの各々（または複数のマイクロニードル全ての平均）は、約８００〜約１４００マイクロメートルの高さを有し得る。複数のマイクロニードルの各々または複数のマイクロニードル全ての平均の高さについての特定の値は、各事例においてマイクロメートル単位で、３０００以下、１５００以下、１２００以下、１０００以下、７５０以下、さらには６００以下である。複数のマイクロニードルの各々または複数のマイクロニードル全ての平均の高さについての他の詳細な値は、各事例においてマイクロメートル単位で、約１００以上、約２００以上、２５０以上、５００以上、６００以上、７００以上、７５０以上、さらには８００以上である。複数のマイクロニードルの各々または複数のマイクロニードル全ての平均の高さについての特定の範囲は、各事例においてマイクロメートル単位で、１００〜３０００、２５０〜１５００、９００〜１０００および９００〜９５０である。複数のマイクロニードルの各々または複数のマイクロニードル全ての平均の高さについての１つの特定の値は、約５００マイクロメートルである。複数のマイクロニードルの各々または複数のマイクロニードル全ての平均の高さについての別の特定の値は、約９００マイクロメートルである。
【００２１】
マイクロニードルアレイ内の単一のマイクロニードルまたは複数のマイクロニードルは同様に、それらのアスペクト比によっても特徴付けられる。マイクロニードルのアスペクト比は、マイクロニードルの高さｈと（マイクロニードルのベースにおける）幅ｗの比である。アスペクト比は、ｈ：ｗとして示すことができる。大部分の事例において、複数のマイクロニードルの各々（または複数のマイクロニードル全ての平均）は、２：１〜５：１の範囲内のアスペクト比を有する。さらに一層詳細には、複数のマイクロニードルの各々（または複数のマイクロニードル中の全マイクロニードルの平均）は、少なくとも３：１のアスペクト比を有する。
【００２２】
基体に接触するマイクロニードルのベースの面積のみを前提として、アレイの面積あたりのマイクロニードルの数の観点から見て任意の好適なマイクロニードル密度を使用することができ、典型的に、マイクロニードルアレイは、マイクロニードルアレイ１ｃｍ２あたり約３〜約３０のマイクロニードルを含む。
【００２３】
１つのアレイ内に、任意の好適な数のマイクロニードルを使用してよい。マイクロニードルの数は、使用されるセンサの特定のタイプおよび行なうべき測定の要件に基づいて選択され得る。例えば、測定値の平均を使用できるようにまたは３回の測定の値が近くない場合にエラーを検出できるようになどの目的で、実施対象の測定が３重に行なわれた場合に最も正確であるとみなされるならば、そのとき少なくとも３つのマイクロニードルがアレイ上に存在することになる。多数のセンサを使用しなければならず各センサがその収容のために別個のマイクロニードルを必要とする場合には、アレイ上のマイクロニードルの数は、少なくとも使用されるセンサの数に等しくなる。最も典型的には、中空マイクロニードルのアレイは、１中空マイクロニードルアレイあたり３〜３０個の中空マイクロニードル、例えば１中空マイクロニードルアレイあたり３〜２０の中空マイクロニードル、１３〜２０の中空マイクロニードル、８〜１８の中空マイクロニードル、さらには１０〜３０の中空マイクロニードルを含む。特定のアレイは、１アレイあたり１８の中空マイクロニードルを有し得る。他の特定のアレイは、１アレイあたり１２の中空マイクロニードルを有し得る。
【００２４】
マイクロニードルが皮膚に貫入する深さは、マイクロニードルのベースならびにベースに近いマイクロニードルの一部が皮膚に貫入しない可能性があることを理由として、必ずしもマイクロニードルの高さと同じではない。プローブがその意図された機能を果たすことのできる場所までプローブを送出するのに充分であるかぎりにおいて、該マイクロニードルは本開示で使用可能である。いくつかの事例において、マイクロニードルアレイ内の複数のマイクロニードルの各々（または複数のマイクロニードル中の全マイクロニードルの平均）は、約５０〜約１５００マイクロメートル、約５０〜約４００マイクロメートル、または約５０〜約２５０マイクロメートルの深さまで皮膚内に貫入することができる。いくつかの事例において、マイクロニードルアレイ内の複数のマイクロニードルの各々（または複数のマイクロニードル中の全マイクロニードルの平均）は、約１００〜約４００マイクロメートル、または約１００〜約３００マイクロメートルの深さまで皮膚内に貫入することができる。いくつかの事例において、マイクロニードルアレイ内の複数のマイクロニードルの各々（または複数のマイクロニードル全ての平均）は、約１５０〜約１５００マイクロメートル、または約８００〜約１５００マイクロメートルの深さまで皮膚内に貫入することができる。いくつかの事例において、マイクロニードルアレイ内の複数のマイクロニードルの各々（または複数のマイクロニードル中の全マイクロニードルの平均）は、約４００〜約８００マイクロメートルの深さまで皮膚内に貫入することができる。
【００２５】
典型的には、マイクロニードルは、マイクロニードルアレイの一部であり、マイクロニードルアレイはそれ自体、マイクロニードルアレイ、当該技術分野において多くが公知である皮膚接触接着剤、そして任意には裏当てを有することができるパッチの形態の一部である。パッチ上にあるか否かに関わらず、マイクロニードルは、任意の所望のパターンまたは配設で配設され得る。例えば、マイクロニードルは、整列させるかまたはオフセットさせることのできる均一に離間された横列の形に配設され得る。いくつかの事例において、マイクロニードルは、三角形、正方形、長方形、五角形、六角形、七角形、八角形または台形などの多角形パターンで配設され得る。他の事例においては、マイクロニードルを円形または卵形パターンで配設することができる。マイクロニードルの配設は、使用されるプローブおよびプローブにより影響されるかまたは監視されるものによって左右される。
【００２６】
部分的にマイクロニードルで覆われたパッチの表面積は、求められるマイクロニードルの数、パッチ上のそれらの間隔および配設およびパッチを送達すべき身体の部分によって左右される。典型的な事例において、パッチの表面積は、約０．１ｃｍ２〜約２０ｃｍ２、例えば約０．５ｃｍ２〜約５ｃｍ２、約１ｃｍ２〜約３ｃｍ２、さらには約１ｃｍ２〜約２ｃｍ２であり得る。
【００２７】
いくつかの事例において、マイクロニードルは、実質的にアレイの表面全体にわたって配置され得る。アレイまたはパッチの一部分にマイクロニードルを具備しないことも可能であるため、これは必須ではない。その場合マイクロニードルを有していないアレイまたはパッチの部分は、皮膚に面するように設計されているアレイまたはパッチ表面（すなわちマイクロニードルが突出している部分）の総面積の約１パーセント超、約７５パーセント未満の面積を有する。したがって、上述の典型的なパッチ面積を考えると、マイクロニードルの無いパッチ表面の部分は典型的に約０．６５ｃｍ２（０．１０平方インチ）超から約６．５ｃｍ２（１平方インチ）未満までの面積を有する。
【００２８】
典型的には、中空チャネルまたはボアがマイクロニードルを通って延在し、チャネルは外部壁により取り囲まれている。一構成において、ボアは中空マイクロニードルの先端部またはその近くのチャネル開口部で終了する。チャネルは通常、中空マイクロニードルの先端部近くの開口部で終了する。最も一般的には、チャネルまたはボアは、マイクロニードルの中心軸に沿って続行するが、挿入時の組織によるチャネル遮断の防止を補助するため、マイクロニードルの傾斜した側壁上で皮下注射針様に終了している。いくつかの事例において、チャネルボアの直径は約１０〜約２００マイクロメートルである。他の事例において、チャネルボアの直径は、約１０〜約１５０マイクロメートルである。さらに他の事例において、チャネルボアの直径は、約３０〜約６０マイクロメートルである。
【００２９】
中空マイクロニードルなる用語は、同様に、少なくとも部分的にマイクロニードルの外部壁によって画定された中空の樋または窪みを有するマイクロニードルも包含する。典型的には、樋または窪みは、ベースから先端部までマイクロニードルの高さｈ全体を通って走り、こうして、プローブまたはワイヤが窪みまたは樋の内部に位置設定され得るようになっている。
【００３０】
チャネルボアの平均横断面積は、典型的に約７５〜約３２，０００平方マイクロメートル、例えば約７５〜約１８，０００平方マイクロメートル、さらには約７００〜約３，０００平方マイクロメートルである。
【００３１】
マイクロニードルアレイは、マイクロニードル先端部から隣接するマイクロニードル先端部まで測定される隣接するマイクロニードル間の平均的間隔によって画定され得る。典型的には、隣接するマイクロニードル間の平均的間隔は、約０．７ｍｍ〜約２０ｍｍ、例えば約０．７ｍｍ〜約１０ｍｍ、約２ｍｍ〜約２０ｍｍ、さらには約２ｍｍ〜約１０ｍｍである。多くの事例において、隣接するマイクロニードル間の平均的間隔は、約０．７ｍｍ超、例えば約２ｍｍ超である。このような事例では、隣接するマイクロニードル間の平均的間隔は、典型的に約２０ｍｍ未満、例えば約１０ｍｍ未満である。隣接するマイクロニードル間の１つの特定の平均的間隔は、約２ｍｍである。隣接するマイクロニードル間の別の特定の平均的間隔は、約０．７ｍｍである。
【００３２】
マイクロニードルアレイは、射出成形、圧縮成形、金属射出成形、スタンピング、フォトリソグラフィ、または押出し加工などの任意の好適な方法で製造可能である。一実施形態において、中空マイクロニードルアレイは、医療グレードのポリカーボネートまたはＬＣＰなどのポリマのヒートサイクル射出成形とそれに続くマイクロニードルのチャネルを形成するためのレーザードリル加工によって製造可能である。
【００３３】
ポリマ材料を中実マイクロニードル製品に成形するための成形プロセスの非限定的な例は、米国特許第８，０８８，３２１号、米国特許出願公開第２０１２／０２５８２８４号および第２０１２／００４１３３７号中に見い出すことができる。マイクロニードルを含む製品内の中空チャネルの形成を開示する刊行物の非限定的な例は、参照によりその全体が本明細書に組込まれている米国特許出願公開第２０１５／０３０６３６３号である。
【００３４】
生物学的被分析物を検出するためのマイクロニードルベースのプローブは、例えば国際公開第２０１３／０５８８７９号、国際公開第２０１５／００８０１８号および国際公開第２０１３／５８８７９号などのＰＣＴ刊行物；欧州特許第２８９８８２６号、米国特許第８，５６０，０５９号および米国特許出願公開第２０１４／０２７５８９７号中に記載されている。被分析物を検出するための任意のタイプのプローブが使用可能である。プローブの性質は、検出対象の被分析物によって左右される。各々の中空マイクロニードルは、１つ以上のプローブを格納し得る。
【００３５】
中空マイクロニードルの外部壁の内側に嵌合するのに充分小さいものである任意のタイプのプローブを使用することができる。例示的プローブとしては、欧州特許第２８９８８２６号中に記載のラクテート測定用に設計され、この文書中に記載されているマイクロニードルの内側に位置し得るものが含まれる。
【００３６】
別の例示的プローブは、フィラメントアレイを含み、ここで各々のフィラメントは、基体およびこの基体に結合され被分析物の検出を容易にするように構成された導電層を含む。各フィラメントは、被分析物の検出のために導電層により画定された領域を隔離するように構成された絶縁層、導電層に結合されイオン濃度の電子電圧への変換を可能にするように構成されている検知層、および特定の標的被分析物またはイオンの検出を容易にするように構成され検知層に結合された選択的コーティング、を含むことができる。このようなプローブならびにそれらをマイクロニードルに取付ける方法は、米国特許出願公開第２０１４／０２７５８９７号中に記載されている。
【００３７】
さらに他の例示的プローブは、中空マイクロニードルの内部表面に固定されたナノワイヤを含む。このようなナノワイヤは膜外被を有することができ、さらに国際公開第２０１５／００８０１８中に記載の通り、グルコースを検出するように構成され得る。
【００３８】
例えば米国特許第８，５６０，０５９号で開示されているものなどの光検出プローブも同様に、中空マイクロニードルの内部で使用することができる。
【００３９】
国際公開第２０１３／５８８７９号中に記載の１つ以上のプローブは、最も頻繁に使用されている。簡単に言うと、このようなプローブは、被分析物、詳細には生体液などの液体中の被分析物と相互作用するように構成された機能化コーティングで被覆され得る。機能化コーティングは、例えば、電解重合、ポリマ捕捉、静電相互作用、共有結合または吸着によってコーティングと流体の界面で被分析物を固定化するように構成され得る。典型的な機能化コーティングは、酵素機能化コーティングおよびイオン選択コーティングである。典型的には機能化コーティングによってひとたび固定化されるかまたは他の形でプローブと相互作用した時点で、被分析物は機能化コーティングとの電気化学的相互作用を有することができる。１つ以上のプローブは、例えばアンペロメトリ、ボルタンメトリ、ポテンショメトリなどによって、電気化学的相互作用を検出するように構成され得る。
【００４０】
国際公開第２０１３／５８８７９号で詳述されているように、プローブは、電極の一構成要素であり得る。検出対象の被分析物に応じて、プローブを任意の好適な材料で製造することができる。典型的な材料には、カーボンファイバ、カーボンペースト、導電性金属、半導体ポリマおよび導電性ポリマの１つ以上が含まれる。
【００４１】
例えばコーティングと被分析物の相互作用によって被分析物を検出または検知した１つ以上のプローブは、プローブ検知信号を生成することができる。プローブ検知信号の１つ以上の特性は、例えば信号のタイプ、信号の大きさなどである。プローブ検知信号は典型的には電気信号であるが、ルミネッセンスなどの電磁放射でもあり得る。プローブ検知信号が電気信号でない場合、それは通常、例えば使用を容易にする目的で、電荷結合素子または当該技術分野において公知の他のデバイスを用いて、電気信号へと変換されるが、これは必須ではない。
【００４２】
最も一般的には、１つのプローブだけが各中空マイクロニードル内部に格納される。同様に、１つのマイクロニードルアレイ内で、異なるマイクロニードルの内部に異なるプローブを格納できるという可能性もある。例えば、１つのアレイ内のマイクロニードルの半分は、１つ以上の外部壁の内部に欧州特許第２８９８８２６号中に記載のラクテート検知プローブを有することができ、もう半分は、国際公開第２０１３／５８８７９号で開示されているグルタメートを検知するための機能化コーティングを伴うプローブを有することができる。
【００４３】
処理ユニットが１つ以上のプローブと通信状態にあり得る。処理ユニットは、最も多くの場合、外部の処理ユニットであり、このことはすなわち、それがマイクロニードルアレイおよび／またはパッチと一体化されていないことを意味する。しかしながら、処理ユニットがアレイ上にあることも同様に可能であり、その場合、それは典型的には、接着パッチの中空マイクロニードルを有していない側面上に位置設定される。処理ユニットは、通常は電子信号の形をしているプローブ検知信号を受信するように構成され得る。処理ユニットは、プローブ検知信号を分析するように構成され得る。例えば処理ユニットは、プローブ検知信号を１つ以上の閾値信号と比較して、被分析物条件が健康な状態を反映しているか病的状態を反映しているかを決定するように構成され得る。別の例として、処理ユニットは、特に被分析物が一定の期間にわたり多数の時点でまたは連続的に検出される場合にプローブ検知信号内の１つのパターンを決定し、被分析物の濃度が健康な状態を表わしているかまたは病的状態を表わしているかを標示するように構成され得る。別の例として、処理ユニットは、プローブ検知信号を多重化するように構成され得る。
【００４４】
処理ユニットが１つ以上のプローブと通信状態になることを容易にするため、デバイスはさらに、プローブに結合された１つ以上のワイヤを含むことができ、ここで各ワイヤは導電性であり、１つ以上のプローブによって生成されたプローブ検知信号を伝送するように構成されている。ワイヤの代替として、デバイスは、１つ以上のプローブによって生成されたプローブ検知信号を処理ユニットに伝送するために、１つ以上の無線通信モジュールを利用することができる。
【００４５】
プラグは、プラグがプローブと中空マイクロニードルの外部の間に配置されるような形で、中空針の先端部を覆う。このようにして、プラグは、皮膚などの生物学的表面に対するマイクロニードルの全衝撃力を担持することからプローブを保護する。構成の如何に関わらず、プラグは、少なくとも部分的に生物学的環境内で溶解して、中空内部の先端部内に開口部を形成し、これによりプローブを生物学的環境に曝露する。
【００４６】
プラグは、さまざまな形で構成され得る。例えば、プラグは、その少なくとも一部分がマイクロニードルの中空内部の内部に配置されるように構成され得る。この構成の一例が、図１Ａに示されている。マイクロニードル１００が、外部壁１０１および先端部１０２を含む。プラグ１２０は先端部１０２内に存在する。図１Ｂは、生物学的環境に対する曝露によってプラグ１２０が溶解して、先端部１０２内の開口部１０３ならびにマイクロニードル１００の中空内部１０４を曝露した後の同じマイクロニードル１００を示す。マイクロニードル１００の中空内部１０４の内側に位置設定されているのは、プローブ１３０であり、このプローブは図１Ｂでは、それが被分析物を検知できる外部環境に曝露されている。
【００４７】
プラグは同様に、マイクロニードルの少なくとも先端部を覆うキャップまたはマイクロニードルの先端部とマイクロニードルの外部壁の少なくとも一部分の両方を覆うシースとして構成され得る。後者の一例が、マイクロニードル２００の分解組立図である図２に示されている。マイクロニードル２００は、外部壁２０１および先端部開口部２０２を特色とする。この図２ではマイクロニードル２００の長さ全体に走る窪みであるマイクロニードル２００の中空内部２０４の内部には、プローブ２１０がある。シースのように構成されたプラグ２２０が、先端部開口部２０２を覆いかつ生物学的表面との衝撃時点で損傷を受けないようプローブ２３０を保護する目的で、マイクロニードル２００上に設置されている。
【００４８】
プラグは、それが中空マイクロニードル上またはその内部でどのように配置されるかに関わらず、生物学的環境内で少なくとも部分的に溶解するように構成されている。典型的には、プラグは、全体的にまたは部分的に、生体液例えば間質液、血液、水などと接触した時点で溶解する溶解可能な材料で製造される。対象に対して過度に有害な効果を及ぼさない任意の溶解可能な材料を使用することができる。典型的材料は、糖、天然ポリマまたは合成ポリマである。糖が使用される場合、それは典型的にはフルクトース、トレハロース、ラフィノース、スクロースまたはグルコースである。天然ポリマが利用される場合、それは典型的にはセルロースまたはアルギン酸ナトリウムである。合成ポリマが利用される場合、それは典型的にはカルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（エチレンオキシド）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリカプロラクトンまたはラクチド、グリコリドおよびカプロラクトンのうちの２つ以上のコポリマである。
【００４９】
プラグは、任意の好適な手段によって生産可能である。プラグを生産する手段は、プラグの構成およびプラグの製造材料によって左右される。例えば、マイクロニードルの先端部の頂部上のキャップまたはマイクロニードルの外部壁の一部分および先端部上のシースの形をしたプラグを、プラグの構成成分の溶液または分散を用いて、例えば浸漬コーティング、スプレーコーティングなどの従来のコーティングによって製造することができる。プラグが中空マイクロニードル内の開口部の内部にのみ配置される場合には、このプラグは、中空マイクロニードルの先端部を、プラグを構成する材料の溶液または分散と接触させて溶液または分散を毛管作用によってマイクロニードルの先端部内の開口部中に引き上げる浸漬コーティングに類似するプロセスによって製造され得る。後続する乾燥ステップにより、プラグは所定の場所に残留することができる。代替的には、プラグをマイクロニードルとは別個に製造し、その後従来の製造方法によってマイクロニードル内にまたはその上に挿入することができる。
【００５０】
最も一般的には、外部壁は、生物学的環境内で溶解可能、分解可能または崩壊可能ではない。
【００５１】
しかしながら、マイクロニードルの外部壁の全てまたは一部を、任意の溶解可能な材料そして特にプラグに関して本明細書中で言及したものであり得る溶解可能な材料から製造することが可能である。例えば、外部壁を金属または非溶解性プラスチックなどの非溶解性材料のメッシュ支持体で製造し、メッシュ支持体の間または周りに中実の溶解可能な材料を位置設定することができる。代替的には、外部壁全体を溶解可能な材料で製造することができる。いずれの場合でも、外部壁はプラグとは別個であるかまたはプラグと一体であるかのいずれでもあり得る。
【００５２】
図３Ａおよび３Ｂは、後者の場合の一例を示す。図３Ａは、プラグ３０３が先端部内にある状態で外部壁３０１と先端部３０２を特色とするマイクロニードル３００を示す。外部壁３０１（先端部３０２を含む）およびプラグ３０３は両方共、溶解可能な材料で製造されている。生体液との接触時点で、外部壁３０１（先端部３０２を含む）および先端部３０３は溶解してプラグ３１０を生物学的環境（図示せず）に曝露し、プローブ３１０は被分析物を検知するように機能できる。
【００５３】
本明細書中に記載のデバイスは、被分析物を検出する方法において使用可能である。被分析物は典型的には、生体分子、例えば生化学物質、代謝産物または電解質である。該方法は、本明細書中に記載のデバイスの１つ以上のマイクロニードルで生物学的表面に衝撃を加えて、この１つ以上のマイクロニードルで生物学的表面を穿孔するステップを含む。プラグおよび利用されている場合には溶解可能な外部壁が溶解できるのに充分な時間が経過した後、次に、被分析物を検出することができる。典型的には、プラグまたは外部壁の溶解可能な材料の溶解は、生物学的表面を穿孔した後３０分未満、例えば１５分未満、１０分未満、５分未満、３分未満、１分未満、さらには３０秒未満以内に発生する。
【００５４】
マイクロニードルによる衝撃を受ける生物学的表面は通常、皮膚、詳細には表皮または真皮である。しかしながら、膜、例えば粘膜または眼の表面などの他の生物学的表面も同様に、該方法においてマイクロニードルにより穿孔することができる。
【００５５】
以下に記すのは、本開示の例示的実施形態のリストである。これらの実施形態は、限定的であるように意図されたものではなく、本開示のデバイスおよび方法を実装し得る特定の形を理解する上で技術者の一助となるように提供されている。
【００５６】
１．  １つ以上の中空マイクロニードルのアレイであって、１つ以上のマイクロニードルが：
中空内部の側面を画定する１つ以上の外部壁を含む突出した針構造、
中空マイクロニードルの外部にある生物学的表面に面するように構成された先端部、および
１つ以上の外部壁により画定された中空内部の中に位置設定されたプローブ、
を含んでいるアレイ；
を含むデバイスにおいて、
プローブが、プローブと接触してプローブ検知信号を生成する１つ以上の化学的または生物学的物質と相互作用するように構成されており；
さらに、中空針の先端部を覆うプラグを含み、プラグがプローブと中空マイクロニードルの外部の間に配置されており、プラグは、生物学的環境内で少なくとも部分的に溶解して、中空内部の先端部内に開口部を形成し、プローブを生物学的環境に曝露するように構成されていることを特徴とするデバイス。
【００５７】
２．  プローブの１つ以上が、流体内の被分析物と相互作用するように構成された機能化コーティングを含む、実施形態１に記載のデバイス。
３．  機能化コーティングが酵素機能化コーティングまたはイオン選択性コーティングのうちの少なくとも１つを含む、実施形態２に記載のデバイス。
【００５８】
４．  被分析物が、生化学物質、代謝産物、電解質、イオン、病原体、微生物または以上のもののいずれかの組合せである、実施形態１〜３のいずれかに記載のデバイス。
５．  プローブの機能化コーティングのうちの少なくとも１つが、アンペロメトリ、ボルタンメトリ、またはポテンショメトリによって被分析物とコーティングの間の電気化学的相互作用を検出するように構成されている、実施形態２〜４のいずれかに記載のデバイス。
【００５９】
６．  被分析物が、電解重合、ポリマ捕捉、静電相互作用、共有結合または吸着のうちの少なくとも１つによってコーティングの界面において固定化される、実施形態２〜５のいずれかに記載のデバイス。
７．  プローブ検知信号を受信するためにプローブと通信状態にある処理ユニットをさらに含む、実施形態２〜６のいずれかに記載のデバイス。
【００６０】
８．  処理ユニットが、プローブ検知信号を１つ以上の閾値と比較して被分析物条件が健康な状態を反映するかまたは病的状態を反映するかを決定するように構成されている、実施形態７に記載のデバイス。
９．  処理ユニットが、被分析物濃度が健康な状態を反映するかまたは病的状態を反映するかを表わすプローブ検知信号内のパターンを決定するように構成されている、実施形態７〜８のいずれかに記載のデバイス。
【００６１】
１０．  処理ユニットが、プローブ検知信号を多重化するように構成されている、実施形態７〜９のいずれかに記載のデバイス。
１１．  １つ以上の中空マイクロニードルのアレイが接着パッチに取付けられている、実施形態１〜１０のいずれかに記載のデバイス。
【００６２】
１２．  プローブに結合された１つ以上のワイヤをさらに含み、各ワイヤが導電性でかつ１つ以上のプローブによって生成されたプローブ検知信号を伝送するように構成されている、実施形態１〜１１のいずれかに記載のデバイス。
１３．  １つ以上のプローブによって生成されたプローブ検知信号を伝送するように構成された少なくとも１つの無線通信モジュールをさらに含む、実施形態１〜１２のいずれかに記載のデバイス。
【００６３】
１４．  プラグが、糖、天然ポリマ、または合成ポリマを含む、実施形態１〜１３のいずれかに記載のデバイス。
１５．  糖がフルクトース、トレハロース、ラフィノース、スクロースまたはグルコースである、実施形態１４に記載のデバイス。
【００６４】
１６．  天然ポリマがセルロースまたはアルギン酸ナトリウムである、実施形態１４に記載のデバイス。
１７．  合成ポリマが、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（エチレンオキシド）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリカプロラクトンまたは、ラクチド、グリコリドおよびカプロラクトンのうちの２つ以上のコポリマである、実施形態１４に記載のデバイス。
【００６５】
１８．  プラグの少なくとも一部分が中空マイクロニードルの中空内部の内部に配置されている、実施形態１〜１７のいずれかに記載のデバイス。
１９．  プラグが、中空マイクロニードルの先端部を覆うキャップとして配置されている、実施形態１〜１８のいずれかに記載のデバイス。
【００６６】
２０．  プラグが、中空マイクロニードルの先端部およびマイクロニードルの外部壁の少なくとも一部分を覆うシースとして配置される、実施形態１〜１９のいずれかに記載のデバイス。
２１．  外部壁の少なくとも一部分が、生物学的環境内で少なくとも部分的に溶解して外部壁内に１つ以上の開口部を残すように構成された溶解可能な材料から形成されている、実施形態１〜２０のいずれかに記載のデバイス。
【００６７】
２２．  溶解可能な材料が糖、天然ポリマまたは合成ポリマを含む、実施形態２１に記載のデバイス。
２３．  糖がフルクトース、トレハロース、ラフィノース、スクロースまたはグルコースである、実施形態２１に記載のデバイス。
【００６８】
２４．  天然ポリマがセルロースまたはアルギン酸ナトリウムである、実施形態２１に記載のデバイス。
２５．  合成ポリマがカルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（エチレンオキシド）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリカプロラクトンまたはラクチド、グリコリドおよびカプロラクトンのうちの２つ以上のコポリマである、実施形態２１に記載のデバイス。
【００６９】
２６．  さらに電極を含み、電極がプローブを含む、実施形態１〜２５のいずれかに記載のデバイス。
２７．  プローブ信号が電気信号である、実施形態１〜２６のいずれかに記載のデバイス。
２８．  プローブが、カーボンファイバ、カーボンペースト、導電性金属、半導体ポリマおよび導電性ポリマのうちの１つ以上を含む、実施形態１〜２７のいずれかに記載のデバイス。
【００７０】
２９．  プローブが、酵素機能化コーティングまたはイオン選択性コーティングの少なくとも１つを含む、実施形態１〜２８のいずれかに記載のデバイス。
３０．  電極が、被分析物と相互作用するための機能化コーティングを含む、実施形態２６〜２９のいずれかに記載のデバイス。
３１．  機能化コーティングが、酵素機能化コーティングまたはイオン選択性コーティングの少なくとも１つを含む、実施形態３０に記載のデバイス。
【００７１】
３２．  被分析物が電極または電極上の機能化コーティングと相互作用し、かつプローブが、アンペロメトリ、ポテンショメトリ、またはボルタンメトリのうちの少なくとも１つによって電極または機能化コーティングと被分析物の相互作用を検出するように構成されている、実施形態２６〜３１のいずれかに記載のデバイス。
【００７２】
３３．  被分析物を検出する方法において、
実施形態１〜３２のいずれかに記載のデバイスの中空マイクロニードルで生物学的基質を穿孔するステップと；
被分析物がプローブと作動的近接状態になって、被分析物の存在と相互関係があるプローブ信号を生成することができるようにするステップと；
を含む方法。
【００７３】
３４．  プローブ信号が被分析物の濃度に対応する、実施形態３３に記載の方法。
３５．  生物学的基質が表皮を含む、実施形態３３または３４のいずれかに記載の方法。
３６．  生物学的基質が真皮を含む、実施形態３３〜３４のいずれかに記載の方法。
３７．  生物学的基質が粘膜を含む、実施形態３３または３４のいずれかに記載の方法。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【国際調査報告】
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