(57)【要約】  少なくとも１のリポソームを含む医薬組成物であり、前記リポソームが少なくとも１の小胞形成リン脂質および１５モル％未満のステロールを含む、外部脂質二重層；ならびに弱酸性薬物および弱酸性塩を含む、内部水性媒体を含む医薬組成物が本開示で提供される。本医薬組成物は、弱酸性薬物のバーストリリースを低減する。また、呼吸器疾患の治療および弱酸性薬物の副作用の低減のための本明細書に開示される医薬組成物の使用が提供される。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
１以上のリポソームが外部媒体に懸濁されてなる医薬組成物であって、前記リポソームが、
（ａ）  少なくとも１の小胞形成リン脂質および１５モル％未満のステロールを含む、外部脂質二重層、ならびに
（ｂ）  弱酸性薬物および弱酸性塩を含む、内部水性媒体
を含み、
前記弱酸性薬物の６５％未満が前記医薬組成物を投与してから１時間以内に前記外部媒体に放出される、医薬組成物。
【請求項２】
前記外部脂質二重層は１０モル％未満のステロールを含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記外部脂質二重層は実質的にステロールを含まない、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記ステロールは、コレステロール、ヘキサコハク酸コレステロール、エルゴステロール、ラノステロール、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記小胞形成リン脂質は、第１のリン脂質および第２のリン脂質の混合物または第１のリン脂質および荷電脂質の混合物である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記弱酸性塩はカルボン酸塩または重炭酸塩である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記カルボン酸塩は、ギ酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、酪酸塩、イソ酪酸塩、吉草酸塩、イソ吉草酸塩、安息香酸塩、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記重炭酸塩は、重炭酸カリウム、重炭酸ナトリウム、重炭酸カルシウム、重炭酸マグネシウム、重炭酸セシウム、重炭酸リチウム、重炭酸ニッケル、重炭酸第一鉄またはそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記内部水性媒体はさらにシクロデキストリンを含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
シクロデキストリンに対する弱酸性薬物のモル比（薬物／ＣＤ比）が０．０６以下である、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
シクロデキストリンに対する弱酸性薬物のモル比（薬物／ＣＤ比）が０．０３以下である、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記弱酸性薬物は、プロスタグランジン、プロスタサイクリン受容体アゴニスト、ステロイド、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、抗凝固剤、エンドセリン（ＥＴ）受容体アンタゴニストまたはそれらの組み合わせである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記プロスタグランジンがイロプロストである、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記ＥＴ受容体アンタゴニストがアンブリセンタンである、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
請求項１に記載の医薬組成物を投与する工程を有する、呼吸器疾患の治療方法。
【請求項１６】
有効量の請求項１に記載の医薬組成物を必要とする対象に投与する工程を有する、弱酸性薬物の副作用の低減方法。
【請求項１７】
前記弱酸性を吸入することにより、上気道における前記弱酸性薬物の副作用を低減する、請求項１６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年９月１４日付で出願された、米国出願第６２／７３１，１０１号の利益を主張しており、その開示全体は参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
分野
弱酸性薬物をカプセル化する少なくとも１のリポソームを含み、前記リポソームの外部脂質二重層(external lipid bilayer)における少量のステロールにより、弱酸性薬物のバーストリリース(burst release)を低減もしくは防止するおよび／または弱酸性薬物の放出を維持する医薬組成物が本明細書で開示される。
【背景技術】
【０００３】
背景
リポソームは、天然または合成の脂質の二重層から構成される微細構造であり、内部コンパートメントを形成することで治療剤の貯蔵庫として機能する。様々なリポソーム組成物が、異なるサイズ、透過性、および安定性を有する薬物送達ビヒクルとして設計されており、それらはすべて、持続的な薬物放出を提供するように設計されている。しかしながら、これらの徐放性リポソーム組成物は、一般的に、薬物放出の高い初期バーストを示し、バーストリリース中の副作用および／または治療域外の血漿薬物レベルを増加させる。
【０００４】
リポソーム組成物の放出プロファイルは、リポソーム膜の構造に依存し、リポソームの性能に影響を与える。したがって、放出プロファイルの制御は、薬物送達媒体としてリポソームを効果的に使用するための重要な前提条件となる。例えば、コレステロールを外部脂質二重層に加えると、膜の剛性、安定性が高まり、脂質二重層の透過性が低下する（S. Kaddah et al., Food Chem Toxicol. 2018 Mar;113:40-48）。S. Kaddah et al.は、カプセル化された薬物の放出が、リポソーム二重層のコレステロールの増加（最大３０％）に伴い減少することを示す。E. Corvera et al. (Biochim Biophys Acta. 1992 Jun 30;1107(2):261-70)は、ＤＭＰＣおよびＤＰＰＣリポソームに低濃度のコレステロール（５〜８％）を添加すると、リポソームの安定性が低下し、膜透過性が向上することを示唆する。
【０００５】
潜在的な副作用を低減し、弱酸性薬物の治療効果を拡大するために、初期バーストリリースのないリポソーム組成物に対する必要性が依然としてある。本発明は、これらおよび他の必要性に対処するものである。
【発明の概要】
【０００６】
発明の簡単な概要
本発明は、１以上のリポソームが外部媒体(external medium)に懸濁されてなる医薬組成物であって、前記リポソームが、（ａ）少なくとも１の小胞形成リン脂質(vesicle-forming phospholipid)および１５モル％未満のステロールを含む、外部脂質二重層(external lipid bilayer)、ならびに（ｂ）弱酸性薬物および弱酸性塩を含む、内部水性媒体(internal aqueous medium)を含み、前記弱酸性薬物の６５重量％未満が前記医薬組成物を投与してから１時間以内に前記外部媒体に放出される、医薬組成物を提供する。
【０００７】
本発明はまた、本明細書に記載される医薬組成物を投与する工程を有する、呼吸器疾患の治療方法を開示する。
【０００８】
また、有効量の本明細書に記載される医薬組成物を弱酸性薬物を摂取する必要のある対象に投与する工程を有する、弱酸性薬物の副作用の低減方法を提供する。
【０００９】
本特許で使用される「発明(invention)」、「本発明(the invention)」、「本発明(this invention)」および「本発明(the present invention)」という用語は、本特許および以下の特許請求の範囲のすべての主題を広く指すことを意図している。これらの用語を含む記載は、本明細書に記載される主題を制限したり、以下の特許請求の範囲の意味や範囲を制限したりするものではないことを理解されたい。この特許に包含される発明の実施形態は、この概要ではなく、以下の特許請求の範囲によって定義される。この概要は、本発明の様々な態様の高レベルの概要であり、以下の詳細な説明の項でさらに説明されるいくつかの概念を紹介するものである。この概要は、請求項に記載される主題の重要なまたは必須の特徴を特定することを意図するものではなく、また、請求項に記載される主題の範囲を決定するために単独で使用されることを意図するものでもない。主題は、明細書全体、一部またはすべての図面、および各請求項の適切な部分を参照することによって理解されるべきである。
【００１０】
本発明は、以下の図面や詳細な説明を読むと、より明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
本発明の詳細な実施形態を、下記図面を参照しながら、以下で詳細に説明する。
【図１】図１は、イロプロスト、重炭酸塩およびＨＰ−β−ＣＤを含むリポソーム組成物（ＬＬ０２１ｂ３Ａ２）、イロプロスト、重炭酸塩およびＲＭ−β−ＣＤを含むリポソーム組成物（ＬＬ０２１ｍ３Ａ２）、またはイロプロスト溶液を投与されたラットの平均血漿イロプロスト濃度の対数を示す折れ線グラフである。
【図２】図２は、イロプロスト、重炭酸塩およびＨＰ−β−ＣＤを含むリポソーム組成物（ＬＬ０２１ｂ３Ａ２）、イロプロスト、重炭酸塩およびＲＭ−β−ＣＤを含むリポソーム組成物（ＬＬ０２１ｍ３Ａ２）、またはイロプロスト溶液の、０時間から特定の時間までの血漿濃度−時間曲線下の面積（ＡＵＣｔ）と、０時間から無限時間(infinity)までの血漿濃度−時間曲線下の面積（ＡＵＣｉｎｆ）と、の比を示す折れ線グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
詳細な説明
本明細書で使用される、冠詞「ａ」及び「ａｎ」は、冠詞の文法的対象の１つまたは複数（すなわち、少なくとも１つ）を指す。例として、「要素（ａｎ  ｅｌｅｍｅｎｔ）」とは、１つの要素または複数の要素を意味する。
【００１３】
すべての数字は、「約」という用語によって修飾されている。本明細書で使用される、「約」という用語は、特定の値の±１０％の範囲を指す。
【００１４】
「含む(comprise)」または「含む(comprising)」という用語は、一般に、１つ以上の特徴(features)、成分(ingredients)または構成(components)が存在しうることを意味する含む(include/including)の意味で使用される。
【００１５】
「対象(subject)」という用語は、呼吸器疾患を有する脊椎動物または呼吸器疾患の治療を必要とすると考えられる脊椎動物を指すことができる。対象としては、哺乳動物など、霊長類などの温血動物が含まれるが、より好ましくはヒトである。非ヒト霊長類も対象である。対象という用語には、猫、犬などの家飼いの動物、家畜（例えば、牛、馬、豚、羊、ヤギなど）および実験動物（例えば、マウス、ウサギ、ラット、スナネズミ、モルモットなど）が含まれる。したがって、本明細書では、獣医学的用途および医療製剤が包含される。
【００１６】
「治療(treating)」という用語は、治療のための処置および予防のための(prophylactic)または予防のための(preventative)措置の双方を指す。治療が必要な対象には、すでに呼吸器疾患(respiratory disease)もしくは関連疾患(related disorder)を患っている対象、呼吸器疾患もしくは関連障害を患いやすい対象または呼吸器疾患を予防する必要がある対象がある。
【００１７】
本明細書で使用される弱酸性薬物(weak acid drug)は、特記しない限りまたは文脈から明らかでない限り、その薬学的に許容される塩およびそのプロトン化形態を包含する。一実施形態では、弱酸性薬物は、カルボキシル基（−ＣＯＯＨ）、ヒドロキシル基（−ＯＨ）、リン酸基（−ＰＯ４）およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される少なくとも１の官能基を含む。他の実施形態では、弱酸性薬物は、１以上約７未満、２以上約６未満、２〜６．９、または２．５〜６のｐＫａを有する。また、弱酸性薬物は、上記したカルボキシル基（−ＣＯＯＨ）、ヒドロキシル基（−ＯＨ）、およびリン酸基（−ＰＯ４）に加えて、１以上の官能基を含んでもよい；そのような追加の官能基は、薬物の酸性度をその非官能化カウンターパートの酸性度から大きく変えるべきではない。一実施形態では、弱酸性薬物は、肺高血圧症を治療するために使用される。他の実施形態では、弱酸性薬物は、プロスタグランジン、プロスタサイクリン受容体アゴニスト、グルココルチコイドまたは非ステロイド性抗炎症薬である。表１は、本発明の弱酸性薬物の非限定的な例を示す。
【００１８】
【表１−１】
2021535922.tif 000003
【００１９】
【表１−２】
2021535922.tif 000004
【００２０】
本明細書で使用される、「カプセル化(encapsulation)」、「ロードされた(loaded)」および「封入された(entrapped)」という用語は、交換可能に使用することができ、リポソームの内部水性媒体における生物学的活性剤（例えば、イロプロスト）の組み込み(incorporation)または会合(association)を指す。
【００２１】
本開示は、１以上のリポソームが外部媒体に懸濁されてなる医薬組成物であって、前記リポソームが、（ａ）少なくとも１の小胞形成リン脂質および１５モル％未満のステロールを含む、外部脂質二重層、ならびに（ｂ）弱酸性薬物および弱酸性塩を含む、内部水性媒体を含み、この際、６５重量％未満の弱酸性薬物が前記医薬組成物を投与してから１時間以内に前記外部媒体に放出される、医薬組成物を提供する。
【００２２】
一具体的な実施形態では、外部脂質二重層中のステロールは、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１、０．５モル％未満である。他の具体的な実施形態では、外部脂質二重層は実質的にステロールを含まない。
【００２３】
医薬組成物中の弱酸性薬物のカプセル化率は、約７０％、７５％または８０％を超える。
【００２４】
医薬組成物は、カプセル化された弱酸性薬物のバーストリリース(burst release)を低減する。一実施形態では、弱酸性薬物の約７０％、６９％、６８％、６７％、６６％または６５％未満が、医薬組成物を投与してから１時間以内に放出される。その結果、標的部位での弱酸性薬物の副作用（例えば、咳、喉の炎症、咽頭の痛み、鼻血、喀血および上気道の喘鳴）が、外部脂質二重層におけるステロールが１５モル％以上である医薬組成物に比して低減される。さらに、本医薬組成物は、弱酸性薬物の放出を延長し、投与頻度を減らす。
【００２５】
一実施形態では、開示される医薬組成物からの弱酸性薬物のバーストリリースは、内部水性媒体におけるシクロデキストリンの添加またはカプセル化によりさらに減少する。シクロデキストリンの非限定的な例としては、α−ＣＤ、β−ＣＤ、γ−ＣＤ、２−ヒドロキシプロピルβ−ＣＤ（ＨＰ−β−ＣＤ）、スルホブチルエーテルβ−ＣＤ（ＳＢＥ−β−ＣＤ）、ランダムにメチル化されたβ−ＣＤ（ＲＭ−β−ＣＤ）またはそれらの組み合わせがある。好ましくは、シクロデキストリンは、ＨＰ−β−ＣＤ、ＲＭ−β−ＣＤまたはそれらの組み合わせである。一具体的な実施形態では、弱酸薬物とシクロデキストリンとのモル比（薬物／ＣＤ比）は、約０．０６、０．０５５、０．０５、０．０４５、０．０４、０．０３５、または０．０３以下である。
【００２６】
また、外部脂質二重層中のステロールの量が１５モル％未満である、本明細書に開示される医薬組成物を有効量、それを必要とする対象に投与する工程を含む、呼吸器疾患を治療するための方法が開示される。本明細書に開示される医薬組成物の弱酸性薬物のバーストリリースは、外部脂質二重層中に１５モル％以上のステロールを有する医薬組成物と比較して減少する。呼吸器疾患の非限定的な例としては、肺高血圧症および間質性肺疾患がある。
【００２７】
さらに、呼吸器疾患を治療するための本明細書に開示される医薬組成物の使用、または呼吸器疾患の治療のための薬剤の製造のための本明細書に開示される医薬組成物の使用が開示される。
【００２８】
本発明はまた、弱酸性薬物を服用する必要のある対象に、外部脂質二重層中のステロールが１５モル％未満である、本明細書に開示される医薬組成物を有効量投与することを含む、弱酸性薬物の副作用を低減するための方法に関する。
【００２９】
実施形態によっては、本明細書に開示される医薬組成物は、上気道における弱酸性薬物の副作用を低減するために吸入によって投与される。
【００３０】
Ａ．リポソーム成分
本明細書で使用される「リポソーム」という用語は、内部水性媒体を封入する１以上の脂質二重層で構成される微視的な(microscopic)小胞(vesicles)または粒子(particles)を指す。リポソームを形成するには、少なくとも１つの「小胞形成脂質(vesicle-forming lipid)」の存在が必要であり、これは脂質二重層を形成するまたは脂質二重層に組み込まれることができる両親媒性脂質である。適切な小胞形成脂質を使用して、リポソームを構成する脂質二重層を形成することができる。小胞形成脂質としては、以下に限定されないが、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）またはホスファチジルセリン（ＰＳ）などのリン脂質、および正に帯電した脂質または負に帯電した脂質などの荷電脂質(charged lipids)などがある。
【００３１】
リポソームの脂質二重層は、少なくとも１の小胞形成脂質および０（ゼロ）モル％以上１５モル％未満のステロール（例えば、０〜１４．９９モル％）を含む。ここで、前記ステロールは、コレステロール、ヘキサコハク酸コレステロール(cholesterol hexasuccinate) 、エルゴステロール、ラノステロール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるが、これらに限定されない。具体的な実施形態では、ステロールはコレステロールである。
【００３２】
実施形態によっては、小胞形成脂質は、第１のリン脂質および第２のリン脂質の混合物である。特定の実施形態では、第１のリン脂質は、水素化卵ホスファチジルコリン（ＨＥＰＣ）、水素化大豆ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアリロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジアラキドイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、大豆ホスファチジルコリン（ＳＰＣ）、オレオイルパルミトイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジペトロセリノイルホスファチジルコリン、パルミトイルエレイドイルホスファチジルコリン、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン、ジラウロイルホスファチジルコリン（ＤＬＰＣ）、ジウンデカノイルホスファチジルコリン、ジデカノイルホスファチジルコリン、ジノナノイルホスファチジルコリン、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、ホスファチジルコリン（ＰＣ）である。他の実施形態では、第２のリン脂質は、１，２−ジステアロリ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００）などの約５００〜約１０，０００ダルトンの分子量を有するポリエチレングリコールを含む、ポリエチレングリコール修飾リン脂質、ジステアリロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）またはジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）またはジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）などの負に帯電したリン脂質である。具体的な実施形態では、第１のリン脂質：コレステロール：第２のリン脂質のモル比は、７５〜９９：０〜１４．９：０．１〜２５である。
【００３３】
他の実施形態では、小胞形成脂質は、第１のリン脂質および荷電脂質の混合物である。具体的な実施形態では、小胞形成脂質は、第１のリン脂質、第２のリン脂質、および荷電脂質の混合物である。荷電脂質としては、ステアリルアミン、１，２−ジオレオイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン（ＤＯＴＡＰ）、３β−［Ｎ−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエタン）−カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−コレステロール）、Ｎ４−コレステリル−スペルミン（ＧＬ６７）、ジメチルジオクタデシルアンモニウム（ＤＤＡＢ）、１，２−ジ−Ｏ−オクタデセニル−３−トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＭＡ）、エチルホスホコリン（エチルＰＣ）またはそれらの組み合わせがある。他の具体的な実施形態では、第１のリン脂質：コレステロール：荷電脂質のモル比は、７５〜９９：０〜１４．９：０．１〜２５である。
【００３４】
一実施形態では、脂質二重層中のＨＳＰＣ、コレステロール、およびＤＳＰＧのモル％は、７５〜９９：０〜１４．９：０．１〜２５である。他の実施形態では、脂質二重層中のＨＳＰＣ、コレステロール及びＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００のモル％は、７５〜９９：０〜１４．９：０．１〜２５である。
【００３５】
一実施形態では、リポソームの外部脂質二重層は、界面活性剤をさらに含んでもよく、これは非イオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤または双性イオン性界面活性剤であってもよい。非イオン性界面活性剤は、そのヘッドに正式に帯電した基を持たない。カチオン性界面活性剤は、そのヘッドに正味の正電荷を持つ。双性イオン界面活性剤は、電気的に中性であるが、異なる原子に正と負の正式な電荷を持つ。
【００３６】
非イオン性界面活性剤の非限定的な例としては、非イオン性水溶性モノ−、ジ−、およびトリ−グリセリド；ポリエチレングリコールの非イオン性水溶性モノ−およびジ−脂肪酸エステル；非イオン性水溶性ソルビタン脂肪酸エステル（例えば、ＴＷＥＥＮ  ２０（ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノオレエート）、ＳＰＡＮ  ８０などのソルビタンモノオレエート）；非イオン性水溶性トリブロック共重合体（例えば、ＰＯＬＯＸＡＭＥＲ  ４０６（ＰＬＵＲＯＮＩＣ  Ｆ−１２７）などのポリ（エチレンオキシド）／ポリ−（プロピレンオキシド）／ポリ（エチレンオキシド）トリブロック共重合体）またはその誘導体がある。
【００３７】
カチオン性界面活性剤の非限定的な例としては、臭化ジメチルジアルキルアンモニウムまたは臭化ドデシルトリメチルアンモニウムがある。
【００３８】
両性イオン性界面活性剤の非限定的な例としては、３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルパルミチルアンモニオ）−プロパンスルホネートがある。
【００３９】
本発明によれば、リポソームは、リポソームの内部水性媒体と外部媒体との間にｐＨ勾配を形成するために、弱酸性塩を含む媒体中で調製される。小胞形成リン脂質および１５％未満のステロールが弱酸性塩を含む媒体と接触すると、リポソーム懸濁液が形成される。
【００４０】
懸濁液中のリポソームは、サイズの縮小に供される。リポソームのサイズは、通常、その直径を指す。リポソームのサイズの縮小は、押出、超音波処理、均質化技術または粉砕技術などの多くの方法によって達成することができ、これらはよく知られており、当業者によって実施することができる。押出には、リポソームを加圧下で、規定の孔径を有するフィルターに１回以上通すことを含む。フィルターは、通常、ポリカーボネート製であるが、リポソームと相互作用せず、十分な圧力下で押し出すことができるほど十分に強い耐久性材料で作製されてもよい。リポソームのサイズは、超音波処理によって小さくすることができる。超音波処理では、音波エネルギーを使用してリポソームを破壊またはせん断して、自発的により小さなリポソームに再形成するであろう。例えば、超音波処理は、リポソーム懸濁液を含むガラス管を、バス型ソニケーターで生成された音波震源(sonic epicenter)に浸漬することによって実施できる、または、プローブ型のソニケーターを使用してもよく、その場合には、音波エネルギーは、リポソーム懸濁液と直接接触するチタン製プローブの振動によって生成される。本発明において、リポソームは、通常、約５００ｎｍ以下、約４００ｎｍ以下、約３００ｎｍ以下、約２００ｎｍ以下または約１００ｎｍ以下などの、約５０ｎｍ〜５００ｎｍの直径を有する。
【００４１】
サイジング後、外部媒体中の弱酸性塩の濃度を調整して、内部水性媒体と外部媒体との間にｐＨ勾配を提供する。これは、例えば、透析ろ過、透析、限外ろ過、接線流ろ過(tangential flow filtration)などの方法により、外部媒体をクエン酸緩衝液（Ｈ３Ｃ６Ｈ５Ｏ）やリン酸緩衝液（Ｈ３ＰＯ４）などの弱酸性塩を含まない適切な緩衝液と交換するなど、様々な方法で実施できる。
【００４２】
弱酸性塩は、リポソームの外部媒体と内部水性媒体との間に、より低い外部とより高い内部のｐＨ勾配を提供する。一実施形態では、内部水性媒体のｐＨは、外部媒体のｐＨよりも少なくとも０．１単位高い。他の実施形態では、内部水性媒体のｐＨは、外部媒体のｐＨよりも少なくとも１単位高い。さらに別の実施形態では、内部水性媒体のｐＨは約７、８、９または１０であり、外部媒体のｐＨは７未満、６未満、５未満、４未満、３未満、約３〜７、約３．５〜６．５、または約４〜６である。さらに別の例示的な実施形態では、外部媒体のｐＨは、弱酸性薬物のｐＫａを超える。
【００４３】
弱酸性塩の非限定的な例としては、カルボン酸塩および重炭酸塩がある。
【００４４】
本明細書で使用される「重炭酸塩(Bicarbonate salt)」は、重炭酸アニオンおよびカチオン成分を含む薬学的に許容される塩化合物を指す。一実施形態では、塩化合物のカチオン成分は金属である。金属の非限定的な例としては、カリウム（Ｋ）、ナトリウム（Ｎａ）、カルシウム（Ｃａ）、マグネシウム（Ｍｇ）、セシウム（Ｃｓ）、リチウム（Ｌｉ）などのＩＡまたはＩＩＡ族金属または鉄（Ｆｅ）やニッケル（Ｎｉ）などのＩＡまたはＩＩＡ族以外の金属がある。重炭酸塩の例としては、以下に限定されないが、重炭酸カリウム、重炭酸ナトリウム、重炭酸カルシウム、重炭酸マグネシウム、重炭酸セシウム、重炭酸リチウム、重炭酸ニッケル、重炭酸第一鉄(ferrous iron bicarbonate)またはそれらの任意の組み合わせがある。
【００４５】
本明細書で使用される「カルボン酸塩(Carboxylic acid salt)」としては、以下に限定されないが、ギ酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、酪酸塩、イソ酪酸塩、吉草酸塩、イソ吉草酸塩またはそれらの組み合わせがある。例示的な一実施形態では、酢酸塩は、酢酸ナトリウム、酢酸カルシウム、またはそれらの組み合わせである。
【００４６】
重炭酸塩またはカルボン酸塩の濃度は、５０ｍＭ以上、１００ｍＭ以上、１５０ｍＭ以上、２００ｍＭ以上、２５０ｍＭ以上、３００ｍＭ以上、３５０ｍＭ以上、４００ｍＭ以上、４５０ｍＭ以上、５００ｍＭ以上、６００ｍＭ以上、７００Ｍ以上、８００ｍＭ以上  ９００ｍＭ、１０００ｍＭ未満、５０ｍＭ以上１０００ｍＭ未満、５０ｍＭ〜８００ｍＭ、２００ｍＭ以上１０００ｍＭ未満、２００ｍＭ〜８００ｍＭ、または２００ｍＭ〜６００ｍＭ、２５０ｍＭ以上１０００ｍＭ未満、２５０ｍＭ〜８００ｍＭ、または２５０ｍＭ〜６００ｍＭ、３００ｍＭ〜６００ｍＭである。
【００４７】
調製されたリポソームは、弱酸性薬物のローディング(loading)および対象への投与の前のかなりの期間保存してもよい。例えば、リポソームは、弱酸性薬物のローディング(loading)前のかなりの期間、冷蔵状態で保存してもよい。あるいは、投与前に、リポソームを脱水し、保存し、続いて再水和し、弱酸性薬物をロードしてもよい。リポソームはまた、弱酸性薬物をロードした後に、脱水してもよい。脱水は、当技術分野で利用可能で知られている多くの方法によって実施することができる。いくつかの実施形態では、リポソームは、標準的な凍結乾燥装置、すなわち低圧条件下での脱水を使用して脱水される。また、リポソームは、例えば、液体窒素を使用して凍結してもよい。脱水の前に、サッカリドをリポソーム環境、例えば、リポソームを含む緩衝液に加え、脱水中のリポソームの安定性と完全性(integrity)を確保してもよい。サッカリドの例としては、以下に限定されないが、マルトース、ラクトース、スクロース、トレハロース、デキストロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、またはそれらの組み合わせがある。
【００４８】
上記したように１５モル％未満のステロールを含むまたは実質的にステロールを含まないリポソーム懸濁液を、弱酸性薬物のローディングのために用意する。具体的には、弱酸性薬物をリポソームの外部媒体に加え、所望のローディング濃度およびカプセル化効率（医薬組成物組成物中の弱酸性薬物の総量に対する弱酸性薬物の内部／カプセル化量のパーセント）が達成されるまで、得られた懸濁液をインキュベートして、弱酸性薬物をリポソームの内部水性媒体に拡散させる。
【００４９】
Ｂ．外部脂質二重層のステロール含有量と制御放出プロファイルとの関連
リポソームの外部脂質二重層中に１５モル％未満（例えば、０〜１４．９９モル％）のステロールを有する本発明の医薬組成物は、カプセル化された弱酸性薬物のバーストリリースを低減し、したがって弱酸性薬物の副作用を低減する。さらに、所望の治療効果のために十分な量の弱酸性薬物が医薬組成物から放出され、放出プロファイルはリポソームの外部脂質二重層に１５モル％を超えるステロールを有する医薬組成物の放出プロファイルと比較して予想外に延長される。
【００５０】
本明細書で使用される、「バーストリリース(burst release)」という用語は、医薬組成物を投与してから１時間（６０分）以内に医薬組成物からカプセル化された弱酸性薬物の７０、６９、６８、６７、６６または６５％を超える急速なおよび／またはいくらか制御されない放出を指す。
【００５１】
本明細書で使用される、「持続放出(extended release)」という用語は、「制御放出(controlled release)」、「遅延放出(delayed release)」、「改変放出(modified release)」、「持続放出(prolonged release)」、「プログラム放出(programmed release)」、「時間放出(time release)」、「速度制御(rate controlled)」または「徐放(sustained release)」と交換可能に使用することができ、医薬組成物を投与してから１時間以内に弱酸性薬物の５０、４５または４０％未満の放出を指す。
【００５２】
一実施形態では、医薬組成物のバーストリリースまたは持続放出プロファイルは、捕捉された弱酸性薬物のインビトロ放出（ＩＶＲ）アッセイおよび／またはインビボ薬物動態研究に基づく。
【００５３】
特定の実施形態では、インビトロ放出（ＩＶＲ）アッセイおよび／またはインビボ薬物動態研究に基づいて、医薬組成物は、捕捉された弱酸性薬物の約７０、６９、６８、６７、６６または６５重量％未満が医薬組成物を投与した時点から１時間以内に放出されるという放出プロファイルを有する。
【００５４】
Ｃ．投与
本発明の医薬組成物は、血液と直接接触しない対象のキャビティに投与されうる。投与経路の例としては、以下に制限されないが、吸入、気管内注射、皮下注射、関節内注射、筋肉内注射、硝子体内注射および髄膜注射がある。
【００５５】
本発明の医薬組成物はまた、対象の血液に直接投与されてもよい。
【００５６】
本開示によれば、医薬組成物は、１日に１回から３回、２日ごとに１回、または３日ごとに１回投与されてもよい。
【００５７】
本開示を、下記例においてさらに説明する。しかしながら、下記例は、例示のみを目的としており、実際に本開示を限定するものとして解釈されるべきではないことを理解されたい。
【００５８】
実施例
一般的な実験手順：
１．イロプロスト(Iloprost)リポソーム組成物の調製
エタノール注入技術を用いて、リポソームコロイド懸濁液を調製した。９８：２または９８．５：１．５のモル比で第１のリン脂質（ＨＳＰＣ）と第２のリン脂質（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００またはＤＳＰＧ）を含む、すべての脂質成分を、約６０℃で２．８６ｍＬのエタノール溶液に溶解した。得られた脂質溶液を、必要に応じて（２−ヒドロキシプロピル）−β−シクロデキストリン（すなわち、４５〜１２０ｍＭ）を含む１７．４ｍＬの重炭酸ナトリウム溶液（１００〜４００ｍＭ；ｐＨ  ８．５）に注入し、リポソームの水和のために６０℃で激しく攪拌しながら混合した。混合物を、孔径０．２または０．１μｍのポリカーボネート膜を通して６〜１０回押し出し、約１００ｎｍ〜２００ｎｍの範囲内の平均粒子サイズおよび＜０．２の多分散度指数（ＰｄＩ）を有するリポソームの懸濁液を得た。リポソームの懸濁液を、１０ｍＭのクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ  ５．５）に対して接線流ろ過システム(tangential flow filtration system)で透析して、リポソームの内部水性媒体と外部媒体との間に膜間ｐＨ勾配(transmembrane pH gradient)を形成した（すなわち、内部がより高いおよび外部がより低いｐＨ勾配）。次に、そのようなｐＨ勾配を有するリポソームの懸濁液を、薬物ローディングプロセス(drug loading process)まで４℃で保存した。
【００５９】
イロプロスト（Cayman Chemical, USAから購入）を５０ｍＭのクエン酸ナトリウム溶液に溶解し、薬物濃度が１０００〜２５０μｇ／ｍＬになるようにリポソームの懸濁液に添加し、３７℃で３０分間インキュベートした。得られた生成物をクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ  ５．５）で調節して、外部媒体でのｐＨが５．５であり、リポソーム懸濁液中のリン脂質濃度が１０ｍＭであるイロプロストをロードしたリポソーム組成物(iloprost-loaded liposomal composition)を得た。
【００６０】
２．アンブリセンタン(Ambrisentan)リポソーム組成物の調製
（２−ヒドロキシプロピル）−β−シクロデキストリンを使用してまたは使用せずに、上記ステップ１．に従ってリポソーム懸濁液を調製した。アンブリセンタン（Cayman Chemical, USAから購入）をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した後、所定の薬物濃度が約５００μｇ／ｍＬになるようにリポソームの懸濁液に添加し、３７℃で３０分間インキュベートした。得られた生成物をクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ  ５．５）で調節して、外部媒体中のｐＨが５．５であり、リポソーム懸濁液中のリン脂質濃度が１０ｍＭであるアンブリセンタンをロードしたリポソーム組成物(ambrisentan-loaded liposomal composition)を得た。
【００６１】
３．リポソーム組成物の定量的特性化
ａ．カプセル化された遊離イロプロスト／アンブリセンタンの濃度
イロプロストまたはアンブリセンタンのリポソーム組成物をＰＤ  ＭｉｎｉＴｒａｐＴＭ  Ｇ−２５カラム(GE Healthcare)に注入し、カプセル化された薬物を遊離薬物から分離した。イロプロストまたはアンブリセンタンのリポソーム組成物をメタノールと混合して（９０体積％メタノールおよび１０体積％リポソーム懸濁液）、リポソーム−メタノール混合物を形成した。
【００６２】
カプセル化されたイロプロストおよび遊離イロプロストの濃度は、フォトダイオードアレイ（ＰＤＡ）検出器を備えたWaters Acquity HPLCシステムに３０μＬのリポソーム−メタノール混合物を注入することによって分析した。移動相は、アセトニトリル、メタノール、リン酸緩衝液（ｐＨ  ２．５）の体積比３６：１７：４７の混合物であり、移動相の流速は１．０  ｍＬ／ｍｉｎである。分離は、２５℃で３．９ｍｍ×１５．０ｃｍ、５．０μｍの寸法のＣ８カラムを使用して行い、２０５ｎｍで吸光度のピークを検出した。
【００６３】
カプセル化されたアンブリセンタンの濃度および遊離アンブリセンタンの濃度は、質量検出器（ＱＤａ）を備えたWaters Acquity UPLCシステムに１μＬのリポソーム−メタノール混合物を注入することによって分析した。移動相Ａはアセトニトリルに０．１％ギ酸を含み、移動相ＢはｄｄＨ２Ｏに０．１％ギ酸を含んだ。グラジエント条件は次のとおりであった：５０％移動相Ａで０．２分間、２分までに１０％移動相Ａ、５．５分までに５０％移動相Ａ。分離は、４．６ｍｍ×１０．０ｃｍ、３．０μｍの寸法のＣ１８カラムを使用して、３５℃で、流速１．０ｍＬ／ｍｉｎで行った。ＭＳ取得(MS acquisition)は、アンブリセンタンでは［Ｍ＋Ｈ］＋イオン、ｍ／ｚ  ３４７．２を使用してＳＩＲモードで行った。
【００６４】
ｂ．カプセル化効率（ＥＥ）および薬物対シクロデキストリン比(drug-to-cyclodextrin ratio)：
リポソーム組成物中の薬物（イロプロストまたはアンブリセンタン）の総量の濃度には、内部水性媒体中のカプセル化された薬物（Ｌ）および外部媒体中の遊離薬物（Ｆ）が含まれる。
【００６５】
薬物のカプセル化効率（ＥＥ）は、薬物の総量（Ｌ＋Ｆ）に対するリポソームの内部水性媒体中のカプセル化された薬物（Ｌ）の割合（％）として算出した、以下の式を参照のこと：
【００６６】
【数１】
2021535922.tif 000005
【００６７】
イロプロストリポソーム組成物のＩＬＯ／ＣＤ比およびアンブリセンタンリポソーム組成物のＡＭＢ／ＣＤ比は、下記式を用いて算出した：
【００６８】
【数２】
2021535922.tif 000006
【００６９】
ｃ．平均粒子サイズおよび多分散度指数（ＰｄＩ）：
リポソームの平均粒子サイズは、動的光散乱によって評価した。リポソームのサイズ分布を示す値である、多分散度指数（ＰｄＩ）は、Beckman Coulter Delsa TM Nano Cパーティクルアナライザーを用いて、平均粒子サイズと同じ評価手法を使用して測定した。
【００７０】
実施例１：ステロールの量が異なるイロプロストリポソーム組成物のインビトロ放出（ＩＶＲ）プロファイル
Ａ．インビトロ放出（ＩＶＲ）アッセイ
イロプロストリポソーム組成物を処方し、イロプロストの濃度を、前記一般的な実験手順のセクションの手順に従って分析した。リポソームの平均粒子サイズは１００〜２００ｎｍであり、ＰｄＩは０．２０未満であった。
【００７１】
様々なＩＶＲアッセイを使用して、ＩＶＲプロファイルを評価できる。実際のＩＶＲアッセイは、特許請求の範囲に記載されたリポソーム組成物中のイロプロストに応じて当業者には既知である、または当業者には明らかであろう。リポソームからのイロプロスト放出プロファイルは、１００ｒｐｍ振盪速度で３７℃で模擬肺液（ＳＬＦ）[Dissolution Technologies 2011, 18, 15-28]に対して出発リン脂質濃度が１０ｍＭであるイロプロストをロードしたリポソーム溶液の１０倍希釈によって得た。各時点で放出されたイロプロストのパーセンテージ（Release %）を、下記式を用いて、特定の時点（Ｔ）でインキュベーション後のカプセル化効率（ＥＥ）を初期（Ｔ０）カプセル化効率と比較することによって計算した。
【００７２】
【数３】
2021535922.tif 000007
【００７３】
結果：
ステロールの量が異なるイロプロストリポソーム組成物の物理化学的特性およびＩＶＲプロファイルを表１に示す。
【００７４】
【表２】
2021535922.tif 000008
【００７５】
表１から、重炭酸ナトリウム塩を用いると＞９０％のＥＥが達成され、１５モル％未満のコレステロールを含むイロプロストリポソーム組成物でＳＬＦインキュベーションから１時間以内に６５％未満のイロプロストが放出されたが、１５モル％以上のコレステロールを含むイロプロストリポソーム組成物では３７℃でのＳＬＦインキュベーションから１時間以内に７０％を超えるイロプロストが放出されたことが示される。
【００７６】
実施例２：ステロールの量が異なるアンブリセンタンリポソーム組成物のインビトロ放出（ＩＶＲ）プロファイル
アンブリセンタンリポソーム組成物を処方し、アンブリセンタンの濃度を、前記一般的な実験手順のセクションの手順に従って分析した。リポソームの平均粒子サイズは１００〜２００ｎｍであり、ＰｄＩは０．２０未満であった。
【００７７】
結果：
ステロールの量が異なるアンブリセンタンリポソーム組成物の物理化学的特性およびＩＶＲプロファイルを表２に示す。
【００７８】
【表３】
2021535922.tif 000009
【００７９】
表２から、重炭酸ナトリウム塩を用いると＞９０％のＥＥが達成され、１５モル％未満のコレステロールを含むアンブリセンタンリポソーム組成物で３７℃でのＳＬＦインキュベーションから１時間以内に５０％未満のアンブリセンタンが放出されたことが示される。
【００８０】
実施例３：シクロデキストリン（ＣＤ）を含むまたは含まないイロプロストリポソーム組成物のインビトロ放出（ＩＶＲ）プロファイル
実施例１のイロプロストリポソーム組成物の放出プロファイルに対するリポソームの内部水性媒体中のシクロデキストリン（（２−ヒドロキシプロピル）−β−シクロデキストリン（ＨＰ−β−ＣＤ））の効果を評価するために、インビトロ研究を実施した。
【００８１】
結果：
シクロデキストリン（ＨＰ−β−ＣＤ）を含むまたは含まないイロプロストリポソーム組成物の物理化学的特性およびＩＶＲプロファイルを表３に示す。
【００８２】
【表４】
2021535922.tif 000010
【００８３】
表３から、シクロデキストリンの添加により、バーストリリースがさらに低減し（６０％未満のイロプロストが３７℃でのＳＬＦインキュベーションから１時間以内に放出され）、イロプロストリポソーム組成物の放出属性は維持される（４０％未満のイロプロストが３７℃でのＳＬＦインキュベーションから１時間以内に放出された）ことが示される。
【００８４】
実施例４：異なる弱酸性塩を使用したイロプロストリポソーム組成物のカプセル化効率
実施例１のイロプロストリポソーム組成物のカプセル化効率に対する異なる弱酸性塩の効果を評価するためにインビトロ研究を実施した。本実施例では、重炭酸ナトリウム溶液（４００ｍＭ）および酢酸ナトリウム溶液を使用してイロプロストをロードした。
【００８５】
結果：
異なる弱酸性塩を使用したイロプロストリポソーム組成物のカプセル化効率を表４に示す。
【００８６】
【表５】
2021535922.tif 000011
【００８７】
表４から、重炭酸塩および酢酸塩を用いると＞８０％のＥＥが達成され、内部水性媒体にシクロデキストリンが存在するとバーストリリースがさらに低減し、リポソーム組成物からのイロプロストの放出が持続することが示される。
【００８８】
実施例５：イロプロスト対シクロデキストリン（ＩＬＯ／ＣＤ）比が異なるイロプロストリポソーム組成物のインビトロ放出（ＩＶＲ）プロファイルおよびインビボ薬物動態（ＰＫ）パラメーター
イロプロストリポソーム組成物のＩＶＲプロファイルに対する異なるＩＬＯ／ＣＤ比の効果を評価するために、インビトロ研究を実施した。実施例１に概説した手順に従って、本研究のリポソーム組成物を調製し、ＩＶＲプロファイルを分析した。イロプロスト溶液（２０μｇ／ｍＬ）は、約８．４のｐＨに調整した、トロメタミンの２ｍＭ溶液にイロプロストを溶解することによって調製した。
【００８９】
Ｂ．イロプロストリポソーム組成物のインビボ薬物動態（ＰＫ）研究
本インビボＰＫ研究では、各グループ３匹のオスのSprague-Dawleyラット（BioLASCO Taiwan Co., Ltd.から購入）をイソフルランで麻酔し、上顎切歯の周りに引っ掛けられたリボンを用いて４５°〜５０°平面の仰臥位でアーチ型のプラットフォームに背中をしっかりと置いた。マイクロスプレーエアロゾルチップ(Microsprayer, PennCentury, Philadelphia, USA)を各ラットの気管分岐部に挿入し、テストサンプル（すなわち、表５の組成物またはイロプロスト溶液）を、マイクロスプレーエアロゾル装置に取り付けられた高圧シリンジを用いて６０μｇ／ｋｇの所定量で各ラットに気管内投与した。
【００９０】
所定の時点（すなわち、投与してから５、３０分、１．５、３、６、７および８時間）で、血液サンプルを各ラットからヘパリンコートされたチューブに採取し、湿った氷上に置いた。次に、血液サンプルを、採取後１時間以内に約２５００×ｇで１５分間、４±２℃で遠心分離し、血漿を血球から分離した。各ラットの血漿サンプル約０．１ｍＬを新しい保存チューブに加え、−７０±２℃で保存した。
【００９１】
血漿イロプロスト濃度を測定するために、５０μＬの血漿サンプルを９６ウェルプレートのウェルに移した後、各ウェルに１５０μＬのアセトニトリルを添加した。得られた混合物を１分間ボルテックスして血漿タンパク質のイロプロストへの結合を破壊し、続いて３０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。上澄み（１５０μＬ）を等容のＨ２Ｏと混合し、液体クロマトグラフィー−タンデム質量分析（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）で分析して、ラットの血漿イロプロスト濃度を測定した。
【００９２】
結果：
異なるＩＬＯ／ＣＤ比を有するイロプロストリポソーム組成物のＩＶＲプロファイルおよびＰＫパラメーター（Ｃｍａｘ）を表５、図１および図２に示す。
【００９３】
【表６】
2021535922.tif 000012
【００９４】
表５から、ＩＬＯ／ＣＤ比が０．０６未満であるイロプロスト−リポソーム組成物はバーストリリースプロファイルの低下を示す（６８．７％未満のイロプロストが投与時から１時間以内に放出される）ことが示される。より持続的な放出属性（４５％未満のイロプロストが３７℃でのＳＬＦインキュベーションから１時間以内に放出される）が、ＩＬＯ／ＣＤ比が０．０２６未満であるイロプロスト−リポソーム組成物で認められた。内部水性媒体にシクロデキストリンを添加した場合、同様の傾向が見られた。
【００９５】
図１は、所定の用量での表６のイロプロスト−リポソーム組成物（ＬＬ０２１ｂ３Ａ２ ／ＬＬ０２１ｍ３Ａ２）またはイロプロスト溶液を投与されたラットにおける血漿平均イロプロスト濃度の対数対２４時間までの投与時間を示す。イロプロスト溶液の投与から１時間以内にピークがあるのに比して、イロプロスト−リポソーム組成物の投与後には有意なピークは存在しない。ピーク放出の減少は、薬物の副作用を防ぐ、例えば、特許請求の範囲に規定されたリポソーム組成物との直接接触した際の上気道におけるより少ない局所刺激。
【００９６】
図２は、一定期間にわたるイロプロストの総曝露を決定するためおよび各組成物（表６のイロプロスト−リポソーム組成物またはイロプロスト溶液）におけるイロプロストの異なる投与量を正規化するため、ゼロ時間から特定の時間までの血漿濃度−時間曲線下の面積(area under the plasma concentration-time curve)（ＡＵＣｔ）とゼロ時間ロから無限時間までの血漿濃度−時間曲線下の面積（ＡＵＣｉｎｆ）との比を示す。イロプロスト溶液の投与から１時間以内に１００％のイロプロストが放出されたのに比して、イロプロスト−リポソーム組成物の投与から２４時間以内で８０％を超えるイロプロストが放出された。これらの結果は、標的部位での薬物蓄積が減少し、したがって副作用が少ないことを示す。
【００９７】
実施例６：異なるシクロデキストリン（ＣＤ）を含むイロプロストリポソーム組成物のインビトロ放出（ＩＶＲ）プロファイルおよびインビボ薬物動態（ＰＫ）パラメーター
実施例１の手順の概要に従って、（２−ヒドロキシプロピル）−β−シクロデキストリン（ＨＰ−β−ＣＤ）またはランダムにメチル化された−β−シクロデキストリン（ＲＭ−β−ＣＤ）を含むイロプロストリポソーム組成物を調製し、ＩＶＲプロファイルを評価した。
【００９８】
結果：
表６は、異なるＣＤを含むイロプロストリポソーム組成物の物理化学的特性を示す。ＨＰ−β−ＣＤおよびＲＭ−β−ＣＤは双方ともイロプロスト−リポソーム組成物のバーストリリースを低減した（２０％未満のイロプロストが３７℃でのＳＬＦインキュベーションから１時間以内に放出される）。
【００９９】
【表７】
2021535922.tif 000013
【０１００】
上記説明では、説明の目的で、実施形態の完全な理解を提供するために、多くの特定の詳細が示されている。しかしながら、１以上の他の実施形態が、これらの特定の詳細のいくつかなしで実施され得ることは当業者には明らかであろう。また、本明細書全体を通した「一実施形態(one embodiment)」、「実施形態(an embodiment)」、序数などで示した実施形態への言及は、特定の特徴、構造、または特性が開示の実施に含まれ得ることを意味することを理解されたい。説明において、開示を合理化し、様々な発明の態様の理解を助ける目的で、様々な特徴が単一の実施形態、図、またはその説明に一緒にグループ化されることがあり、一実施形態の１以上の特徴または特定の詳細は、本開示の実施において、必要であれば、他の実施形態の１以上の特徴または特定の詳細とともに実施され得ることもさらに理解されたい。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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