(57)【要約】  本発明は、対象における体組成を変更するための組成物および方法であって、体組成の変更が、筋量の増加および脂肪量の低下を共に生じる、組成物および方法に関する。本発明は、また、対象における脂肪量を低下させるための組成物および方法に関する。本組成物および方法は、また、対象における筋肉体積および除脂肪体重を増加させる。本発明は、また、ＧＤＦ８阻害剤およびアクチビンＡ阻害剤を含む組成物、ならびに増加した脂肪量および／または減少した筋肉体積によって特徴付けられる疾患および障害を処置するための斯かる組成物の使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象の体組成を変更するための方法であって、有効量のＧＤＦ８阻害剤を含む第１の組成物および有効量のアクチビンＡ阻害剤を含む第２の組成物を対象に投与する工程を含む前記方法。
【請求項２】
体組成の変更は、対象における脂肪量の低下の誘導を含み、方法は、有効量のＧＤＦ８阻害剤を含む第１の組成物および有効量のアクチビンＡ阻害剤を含む第２の組成物を対象に投与する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
体組成の変更は、対象における筋量の増加の誘導を含み、方法は、有効量のＧＤＦ８阻害剤を含む第１の組成物および有効量のアクチビンＡ阻害剤を含む第２の組成物を投与する工程を含む、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
対象の体組成を変更するための方法であって、有効量のＧＤＦ８阻害剤および有効量のアクチビンＡ阻害剤を含む組成物を対象に投与する工程を含む前記方法。
【請求項５】
体組成の変更は、対象における脂肪量の低下の誘導を含み、方法は、有効量のＧＤＦ８阻害剤および有効量のアクチビンＡ阻害剤を含む組成物を対象に投与する工程を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
体組成の変更は、対象における筋量の増加の誘導を含み、方法は、それを必要とする対象に、有効量のＧＤＦ８阻害剤および有効量のアクチビンＡ阻害剤を含む組成物を投与する工程を含む、請求項３または請求項４に記載の方法。
【請求項７】
有効量のＧＤＦ８阻害剤は、少なくとも０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｇｍ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｇｍ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇからなる群から選択される投薬レジメンを含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
有効量のアクチビンＡ阻害剤は、少なくとも０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｇｍ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｇｍ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇからなる群から選択される投薬レジメンを含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
有効量のＧＤＦ８阻害剤は、約０．０１〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重量、約０．１〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重量および約０．１〜約５ｍｇ／ｋｇ体重量の単一用量からなる群から選択される投薬レジメンを含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
有効量のアクチビンＡ阻害剤は、約０．０１〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重量、約０．１〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重量および約０．１〜約５ｍｇ／ｋｇ体重量の単一用量からなる群から選択される投薬レジメンを含む、請求項１〜６または９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
有効量のＧＤＦ８阻害剤は、６ｍｇ／ｋｇ対象の体重量である、請求項７〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
有効量のアクチビンＡ阻害剤は、３ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ対象の体重量である、請求項７〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
第１の組成物は、静脈内、皮下または経口投与のために製剤化されている、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
第２の組成物は、静脈内、皮下または経口投与のために製剤化されている、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
第１および第２の組成物は、投与前に組み合わされて第３の組成物にされる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
第３の組成物は、静脈内、皮下または経口投与のために製剤化されている、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
組成物は、静脈内、皮下または経口投与のために製剤化されている、請求項３〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
投与前に対象における総脂肪量および／またはアンドロイド脂肪量を測定する工程をさらに含む、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
投与後に対象における総脂肪量および／またはアンドロイド脂肪量を測定する工程と、対象が、少なくとも約２％〜８％、少なくとも約２．５％〜６％、少なくとも約３％〜４％または少なくとも約３．５％の総脂肪量および／またはアンドロイド脂肪量の低下を得るまで、組成物を投与する工程とをさらに含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
ＧＤＦ８阻害剤は、ＧＤＦ８に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片である、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
ＧＤＦ８に特異的に結合する抗体または抗原結合断片は、配列番号３６０を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）、および配列番号３６８を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
ＧＤＦ８に特異的に結合する抗体または抗原結合断片は、配列番号３６２、配列番号３６４および配列番号３６６を含む３個のＨＣＤＲ、ならびに配列番号３７０、配列番号３７２および配列番号３７４を含む３個のＬＣＤＲを含む、請求項２０または２１に記載の方法。
【請求項２３】
アクチビンＡ阻害剤は、アクチビンＡに特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片である、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
アクチビンＡに特異的に結合する抗体または抗原結合断片は、配列番号５５３を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）、および配列番号５３７を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
アクチビンＡに特異的に結合する抗体または抗原結合断片は、配列番号５５５、配列番号５５７および配列番号５５９を含む３個のＨＣＤＲ、ならびに配列番号５３９、配列番号５４１および配列番号５４３を含む３個のＬＣＤＲを含む、請求項２３または２４に記載の方法。
【請求項２６】
アクチビンＡ阻害剤は、ＧＤＦ８阻害剤の量の１００％〜２００％の間、ＧＤＦ８阻害剤の量の１００％〜２５０％の間、ＧＤＦ８阻害剤の量の１００％〜３００％の間、およびＧＤＦ８阻害剤の量の重量で１００％〜４００％の間からなる群から選択される量である、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
アクチビンＡ阻害剤の量は、ＧＤＦ８阻害剤の量よりも重量で約１．５〜２．０倍多い、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
対象における脂肪量の低下は、ＤＸＡ（二重エネルギーＸ線吸収測定法）によって測定される総脂肪量の低下である、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
対象における脂肪量の低下は、ＤＸＡ（二重エネルギーＸ線吸収測定法）によって測定されるアンドロイド脂肪量の低下である、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
対象は、投与後に筋肉体積の増加を起こす、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
対象は、筋消耗状態または疾患がない、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
増加した脂肪量によって特徴付けられる疾患または障害を処置するための方法における使用のためのＧＤＦ８阻害剤であって、該方法は、対象に該ＧＤＦ８阻害剤およびアクチビンＡ阻害剤を投与する工程を含む、前記ＧＤＦ８阻害剤。
【請求項３３】
増加した脂肪量によって特徴付けられる疾患または障害を処置するための方法における使用のためのアクチビンＡ阻害剤であって、該方法は、対象に該アクチビンＡ阻害剤およびＧＤＦ８阻害剤を投与する工程を含む、前記アクチビンＡ阻害剤。
【請求項３４】
対象における脂肪量を減少させるための非治療方法であって、対象にアクチビンＡ阻害剤およびＧＤＦ８阻害剤を投与する工程を含む前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、ＰＣＴ国際特許出願として２０１９年３月１日に出願されており、これによりその開示全体を参照によって組み入れる２０１８年３月１日に出願された米国特許仮出願第６２／６３７，０１７号に対する優先権の利益を主張するものである。
【０００２】
配列表
本願は、２０１９年３月１日に作成された、２８８キロバイト（ＫＢ）（２９５，２０２バイト）のサイズを有する、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅ−Ｌｉｓｔｉｎｇ−４０８４８−０９１ＷＯＵ１」という表題の電子書式の配列表を含む。ｔｘｔファイル「Ｓｅｑｕｅｎｃｅ−Ｌｉｓｔｉｎｇ−４０８４８−０９１ＵＳＵ１」の内容は、参照によって本明細書に組み入れる。
【０００３】
発明の分野
本発明は、対象における体組成を変更するための組成物および方法に関する。本組成物および方法は、また、対象における脂肪量を低下させる。本組成物および方法は、また、対象における筋肉体積および／または除脂肪体重を増加させる。より具体的には、本発明は、ＧＤＦ８阻害剤およびアクチビンＡ阻害剤を含む組成物、ならびに増加した脂肪量、および／または減少した筋肉体積もしくは減少した除脂肪体重によって特徴付けられる疾患および障害を処置するための斯かる組成物の使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
増殖分化因子−８（ＧＤＦ８、ミオスタチンの別名でも知られる）は、増殖因子のトランスフォーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）スーパーファミリーに属する分泌リガンドである。ＧＤＦ８は、骨格筋の発達および維持において中心的役割を果たし、筋形成および骨格筋量の負の調節因子として作用する。ミオスタチン突然変異（ノックアウトを含む）は、主に筋量増加であるが、筋肉化（muscling）（より多くの筋線維）、筋線維組成（筋線維のより大きい断面積）の変種、タンパク質／ＤＮＡ比増加等で構成される場合もある、表現型に繋がる。
【０００５】
ＧＤＦ８に対する抗体および治療方法は、例えば、特許文献１に開示されている。抗ＧＤＦ８抗体は、例えば、特許文献２；特許文献３；特許文献４；特許文献５；特許文献６；特許文献７；特許文献８；特許文献９；特許文献１０；特許文献１１；特許文献１２；特許文献１３；および特許文献１４；特許文献１５；特許文献１６においても言及されている。
【０００６】
アクチビンは、トランスフォーミング増殖因子−ベータ（ＴＧＦ−β）スーパーファミリーに属し、細胞増殖、分化、代謝、恒常性およびアポトーシス、ならびに免疫応答および組織修復において広範囲の生物学的効果を発揮する。アクチビンＡは、Ｉ型（Ａｃｔ  ＲＩ−ＡおよびＡｃｔ  ＲＩ−Ｂ）およびＩＩ型（Ａｃｔ  ＲＩＩ−ＡおよびＡｃｔ  ＲＩＩ−Ｂ）セリン−スレオニンキナーゼ受容体のヘテロマー複合体に結合してこれを活性化する、ジスルフィド連結したホモ二量体（２個のベータ−Ａ鎖）である。
【０００７】
アクチビンＡに対する抗体およびその使用は、例えば、特許文献１７；特許文献１８；および特許文献１９に開示されている。
【０００８】
抗ＧＤＦ８抗体および抗アクチビンＡ抗体を含む組成物、ならびに治療方法は、例えば、特許文献２０に開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】ＵＳ８，８４０，８９４
【特許文献２】米国特許第６，０９６，５０６号
【特許文献３】米国特許第７，３２０，７８９号
【特許文献４】米国特許第７，２６１，８９３号
【特許文献５】米国特許第７，８０７，１５９号
【特許文献６】米国特許第７，８８８，４８６号
【特許文献７】米国特許第７，６３５，７６０号
【特許文献８】米国特許第７，６３２，４９９号
【特許文献９】米国特許出願公開第２００６／０２６３３５４号
【特許文献１０】米国特許出願公開第２００７／０１７８０９５号
【特許文献１１】米国特許出願公開第２００８／０２９９１２６号
【特許文献１２】米国特許出願公開第２０１０／０１６６７６４号
【特許文献１３】米国特許出願公開第２００９／０１４８４３６号
【特許文献１４】国際特許出願公開番号ＷＯ２００４／０３７８６１
【特許文献１５】国際特許出願公開番号ＷＯ２００７／０４７１１２
【特許文献１６】国際特許出願公開番号ＷＯ２０１０／０７００９４
【特許文献１７】ＵＳ８，３０９，０８２
【特許文献１８】ＵＳ９，７１８，８８１
【特許文献１９】国際特許出願公開番号ＷＯ２００８／０３１０６１
【特許文献２０】ＵＳ８，８７１，２０９
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｂｒｉｔｔｏｎ  ＪＡＣＣ  ２０１３  ６２；９２１頁
【非特許文献２】Ｉｍａｉ  Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ２０１２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
肥満は、世界人口の３分の１超にとっての世界的な問題である。アメリカ合衆国では、平均肥満率は、２０％超である。肥満関連疾病の費用は、膨大であり、合計＄１９０２億に達し、米国の年間医療費のおよそ２１％である。肥満は、機能障害性（上昇した）脂肪量に関連する慢性軽度炎症によって特徴付けられる蔓延した疾患である。フラミンガム心臓研究（Framingham Heart Study）参加者において、腹部脂肪症は、臨床リスク因子および全体的脂肪症のための調整後に、偶発的心血管疾患（ＣＶＤ）に関連した。非特許文献１。腹部内臓脂肪蓄積は、冠血管非石灰化プラークの進行に正に関連した。非特許文献２。高脂肪量は、うっ血性心不全、高血圧／高血圧症、肺塞栓症、変形性関節症、リンパ浮腫、胃食道逆流疾患、慢性腎不全、がん、脂肪肝疾患およびさらにはうつのような重篤状態に関連するため、依然として、対象における総脂肪および／またはアンドロイド脂肪量を低下させる治療法の必要がある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
一態様では、本発明は、対象における体組成を変更するため、すなわち、筋量を増加（increase）させ、脂肪量を減少させるための方法であって、有効量のＧＤＦ８阻害剤を含む第１の組成物、および有効量のアクチビンＡ阻害剤を含む第２の組成物を対象に投与する工程を含む方法を対象にする。別の態様では、本発明は、対象における脂肪量の低下を誘導するための方法であって、ＧＤＦ８阻害剤およびアクチビンＡ阻害剤を含む有効量の組成物を対象に投与する工程を含む方法を対象にする。
【００１３】
別の態様では、本発明は、増加した脂肪量によって特徴付けられるまたはこれに関連する疾患または障害を処置するための方法であって、それを必要とする対象に、有効量のＧＤＦ８阻害剤を含む第１の組成物、および有効量のアクチビンＡ阻害剤を含む第２の組成物を投与する工程を含む方法を対象にする。別の態様では、本発明は、増加した脂肪量によって特徴付けられるまたはこれに関連する疾患または障害を処置するための方法であって、それを必要とする対象に、ＧＤＦ８阻害剤およびアクチビンＡ阻害剤を含む有効量の組成物を投与する工程を含む方法を対象にする。一態様では、本発明は、対象における体組成を変更するため、すなわち、筋量を増加（increase）させ、脂肪量を減少させるための方法であって、有効量のＧＤＦ８阻害剤、および有効量のアクチビンＡ阻害剤を対象に投与する工程を含み、総体重に有意でない変化がある、方法を対象にする。よって、本発明の一態様では、有効量のＧＤＦ８阻害剤、および有効量のアクチビンＡ阻害剤を投与された対象は、脂肪量の減少と共に、筋量の増加を起こし、総体重に最小のおよび／または有意でない変化をもたらすであろう。
【００１４】
一態様では、本発明は、対象における脂肪量の低下を達成するための医薬の調製における、ＧＤＦ８阻害剤および／またはアクチビンＡ阻害剤の使用を対象にする。別の態様では、本発明は、対象における増加した脂肪量に関連する疾患または障害を処置するための医薬の調製における、ＧＤＦ８阻害剤および／またはアクチビンＡ阻害剤の使用を対象にする。
【００１５】
一部の実施形態では、増加した脂肪量によって特徴付けられる疾患または障害を処置するための方法における使用のためのＧＤＦ８阻害剤であって、方法が、対象にＧＤＦ８阻害剤およびアクチビンＡ阻害剤を投与する工程を含む、ＧＤＦ８阻害剤が提供される。
【００１６】
一部の実施形態では、増加した脂肪量によって特徴付けられる疾患または障害を処置するための方法における使用のためのアクチビンＡ阻害剤であって、方法が、対象にアクチビンＡ阻害剤およびＧＤＦ８阻害剤を投与する工程を含む、アクチビンＡ阻害剤が提供される。
【００１７】
一部の実施形態では、対象における脂肪量を減少させるための非治療方法であって、対象に、アクチビンＡ阻害剤およびＧＤＦ８阻害剤を投与する工程を含む方法が提供される。
【００１８】
本発明に係る方法の一実施形態では、有効量のＧＤＦ８阻害剤は、少なくとも０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｇｍ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｇｍ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇからなる群から選択される投薬レジメンを含む。本発明に係る方法のさらなる実施形態では、有効量のＧＤＦ８阻害剤は、約０．０１〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重量（body weight）、約０．１〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重量および約０．１〜約５ｍｇ／ｋｇ体重量の単一用量からなる群から選択される投薬レジメンを含む。
【００１９】
本発明に係る方法の別の実施形態では、有効量のアクチビンＡ阻害剤は、少なくとも０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｇｍ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｇｍ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇからなる群から選択される投薬レジメンを含む。本発明に係る方法のさらなる実施形態では、有効量のアクチビンＡ阻害剤は、約０．０１〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重量、約０．１〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重量および約０．１〜約５ｍｇ／ｋｇ体重量の単一用量からなる群から選択される投薬レジメンを含む。
【００２０】
本発明に係る方法の一実施形態では、有効量のＧＤＦ８阻害剤は、６ｍｇ／ｋｇ体重量であり、有効量のアクチビンＡ阻害剤は、３ｍｇ／ｋｇ体重量である。本発明に係る方法の一実施形態では、有効量のＧＤＦ８阻害剤は、６ｍｇ／ｋｇ体重量であり、有効量のアクチビンＡ阻害剤は、１０ｍｇ／ｋｇ体重量である。
【００２１】
本発明に係る方法の一実施形態では、第１の組成物は、静脈内、皮下または経口投与のために製剤化されている。本発明に係る方法の別の実施形態では、第２の組成物は、静脈内、皮下または経口投与のために製剤化されている。本発明に係る方法のある特定の実施形態では、第１および第２の組成物は、対象に同時にまたは逐次に投与される。
【００２２】
本発明に係る方法の一実施形態では、第１および第２の組成物は、投与前に組み合わされて第３の組成物にされる。さらなる実施形態では、第３の組成物は、静脈内、皮下または経口投与のために製剤化されている。
【００２３】
一実施形態では、本発明に係る方法は、投与前に対象における総脂肪量を測定する工程をさらに含む。別の実施形態では、本発明に係る方法は、投与後に対象における総脂肪量を測定する工程と、対象が、少なくとも２％〜８％、２．５％〜６％、３％〜４％または少なくとも２．０％、少なくとも２．５％、少なくとも３．０％または少なくとも３．５％以上の総脂肪量の低下を得るまで、第１および第２の組成物を投与する工程とをさらに含む。
【００２４】
一実施形態では、本発明に係る方法は、投与前に対象におけるアンドロイド脂肪量を測定する工程をさらに含む。別の実施形態では、本発明に係る方法は、投与後に対象におけるアンドロイド脂肪量を測定する工程と、対象が、少なくとも２％〜８％、２．５％〜６％、３％〜４％または少なくとも２．０％、少なくとも２．５％、少なくとも３．０％または少なくとも３．５％以上のアンドロイド脂肪量の低下を得るまで、第１および第２の組成物を投与する工程とをさらに含む。
【００２５】
一実施形態では、本発明に係る方法は、投与前に対象における皮下脂肪組織体積を測定する工程をさらに含む。別の実施形態では、本発明に係る方法は、投与後に対象における皮下脂肪組織体積を測定する工程と、対象が、少なくとも２％〜８％、２．５％〜６％、３％〜４％または少なくとも２．０％、少なくとも２．５％、少なくとも３．０％または少なくとも３．５％以上のアンドロイド脂肪量の低下を得るまで、第１および第２の組成物を投与する工程とをさらに含む。
【００２６】
一部の実施形態では、それを必要とする対象に、有効量のＧＤＦ８阻害剤および有効量のアクチビンＡ阻害剤を投与する工程を含む方法であって、ＧＤＦ８阻害剤およびアクチビンＡ阻害剤が、４８時間以下、２４時間以下、１２時間以下、６時間以下、３時間以下または１時間以下の内に同時投与される、方法が提供される。
【００２７】
一部の実施形態では、それを必要とする対象に、有効量のＧＤＦ８阻害剤および有効量のアクチビンＡ阻害剤を投与する工程を含む方法であって、対象が、総脂肪量、アンドロイド脂肪量および／または皮下脂肪組織体積の減少を示す、方法が提供される。
【００２８】
一部の実施形態では、それを必要とする対象に、有効量のＧＤＦ８阻害剤および有効量のアクチビンＡ阻害剤を投与する工程を含む方法であって、対象が、投与から４週間以上または８週間以上後に、総脂肪量、アンドロイド脂肪量および／または皮下脂肪組織体積の減少を示す、方法が提供される。
【００２９】
一部の実施形態では、それを必要とする対象に、有効量のＧＤＦ８阻害剤および有効量のアクチビンＡ阻害剤を投与する工程を含む方法であって、対象が、総脂肪量、アンドロイド脂肪量および／または皮下脂肪組織体積の減少を示し、対象が、低下した大腿筋肉内脂肪組織体積を示さない、方法が提供される。
【００３０】
一部の実施形態では、それを必要とする対象に、有効量のＧＤＦ８阻害剤および有効量のアクチビンＡ阻害剤を投与する工程を含む方法であって、対象が、総脂肪量、アンドロイド脂肪量および／または皮下脂肪組織体積の減少を示し、対象が、投与から４週間以上または８週間以上後に、低下した大腿筋肉内脂肪組織体積を示さない、方法が提供される。
【００３１】
一部の実施形態では、有効量のＧＤＦ８阻害剤を含有する第１の容器と、有効量の特異的アクチビンＡ阻害剤を含有する第２の容器とを含む、キットが提供される。
【００３２】
一部の実施形態では、ＧＤＦ８阻害剤は、ＧＤＦ８に特異的に結合する、単離された抗体またはその抗原結合断片である。
【００３３】
本発明に係る方法の一実施形態では、ＧＤＦ８阻害剤は、ＧＤＦ８に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である。別の実施形態では、ＧＤＦ８に特異的に結合する抗体または抗原結合断片は、配列番号３６０を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）、および配列番号３６８を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む。また別の実施形態では、ＧＤＦ８に特異的に結合する抗体または抗原結合断片は、配列番号３６２、配列番号３６４および配列番号３６６を含む３個のＨＣＤＲ、ならびに配列番号３７０、配列番号３７２および配列番号３７４を含む３個のＬＣＤＲを含む。
【００３４】
一部の実施形態では、アクチビンＡ阻害剤は、アクチビンＡに特異的に結合する、単離された抗体またはその抗原結合断片である。
【００３５】
本発明に係る方法の一実施形態では、アクチビンＡ阻害剤は、アクチビンＡに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である。別の実施形態では、アクチビンＡに特異的に結合する抗体または抗原結合断片は、配列番号５５３を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）、および配列番号５３７を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む。また別の実施形態では、アクチビンＡに特異的に結合する抗体または抗原結合断片は、配列番号５５５、配列番号５５７および配列番号５５９を含む３個のＨＣＤＲ、ならびに配列番号５３９、配列番号５４１および配列番号５４３を含む３個のＬＣＤＲを含む。
【００３６】
本発明に係る方法の一実施形態では、アクチビンＡ阻害剤の有効用量は、ＧＤＦ８阻害剤の有効用量の１００％〜２００％の間、ＧＤＦ８阻害剤の有効用量の１００％〜２５０％の間、ＧＤＦ８阻害剤の有効用量の１００％〜３００％の間、およびＧＤＦ８阻害剤の有効用量の重量で１００％〜４００％の間を含む群から選択される。
【００３７】
本発明に係る方法の別の実施形態では、アクチビンＡ阻害剤の有効用量の、ＧＤＦ８阻害剤の有効用量に対する重量比は、１０：１〜１：１０、８：１〜１：８、６：１〜１：６、３：１〜１：３または約２：１〜１：２である。本発明に係る方法の別の実施形態では、アクチビンＡ阻害剤の有効用量の重量比は、ＧＤＦ８阻害剤の量よりも重量で約１．５〜２．０倍大きい。
【００３８】
本発明に係る方法の一実施形態では、ＧＤＦ８阻害剤は、ＧＤＦ８に特異的に結合し、アクチビンＡにも特異的に結合する、二特異性抗体またはその抗原結合断片である。別の実施形態では、アクチビンＡ阻害剤は、アクチビンＡに特異的に結合し、ＧＤＦ８にも特異的に結合する、二特異性抗体またはその抗原結合断片である。
【００３９】
本発明に係る方法の一実施形態では、対象における脂肪量の低下は、ＤＸＡ（二重エネルギーＸ線吸収測定法）によって測定される総脂肪量の低下である。本発明に係る方法の別の実施形態では、対象における脂肪量の低下は、ＤＸＡ（二重エネルギーＸ線吸収測定法）によって測定されるアンドロイド脂肪量の低下である。
【００４０】
本発明に係る方法の一実施形態では、対象における脂肪量の低下は、ＭＲＩ（磁気共鳴画像法）によって測定される皮下脂肪組織体積の低下である。
【００４１】
本発明に係る方法の一実施形態では、対象は、筋肉体積の増加を起こす。筋肉体積は、例えば、ＭＲＩによって測定される、大腿筋肉組織体積であってもよい。一部の実施形態では、筋肉体積は、例えば、ＭＲＩによって測定される、大腿筋肉組織体積であってもよい。一部の実施形態では、大腿筋肉体積は、例えば、ＭＲＩによって測定される、筋肉内脂肪組織および大血管を含む大腿筋肉組織体積、または筋肉内脂肪組織および大血管を除外した大腿筋肉組織体積であってもよい。
【００４２】
本発明に係る方法の一実施形態では、対象は、総除脂肪量の増加を起こす。総除脂肪量は、ＤＸＡ（二重ｘ線吸収測定法）によって測定することができる。
【００４３】
本発明に係る方法の一実施形態では、対象は、体肢除脂肪体重の増加を起こす。体肢除脂肪体重は、ＤＸＡによって測定し、例えば、ａＬＢＭ方程式によって計算することができる。
【００４４】
本発明に係る方法の一実施形態では、対象は、例えば、ＤＸＡによって測定される、総脂肪量の減少を起こす。
【００４５】
本発明に係る方法の一実施形態では、対象は、例えば、ＤＸＡによって測定される、アンドロイド脂肪量の減少を起こす。
【００４６】
本発明に係る方法の一実施形態では、対象は、例えば、ＤＸＡによって測定される、皮下脂肪組織体積の減少を起こす。
【００４７】
本発明に係る方法の一実施形態では、対象は、例えば、ＤＸＡによって測定される、腕および脚の脂肪量の和の減少を起こす。
【００４８】
本発明の一実施形態では、対象は、例えば、ＭＲＩによって測定される、大腿筋肉内脂肪組織体積の減少を示さない。
【００４９】
本発明の一実施形態では、対象は、例えば、ＤＸＡによって測定される、総骨塩密度（ＢＭＤ）質量の減少を示さない。
【００５０】
本発明の一実施形態では、対象は、例えば、ＤＸＡによって測定される、総骨塩量（ＢＭＣ）質量の減少を示さない。
【００５１】
本発明の一実施形態では、対象は、例えば、ＤＸＡによって測定される、総骨塩量（ＢＭＣ）質量の増加を示す。
【００５２】
本発明に係る方法の別の実施形態では、対象は、筋消耗状態または疾患がない。
【００５３】
一部の実施形態では、体組成の変更、脂肪量の減少、除脂肪量の増加、または増加した脂肪量によって特徴付けられるもしくはこれに関連する疾患もしくは障害の処置における使用のためのキットであって、有効量のＧＤＦ８阻害剤を含む組成物を含む第１の容器と、有効量のアクチビンＡ阻害剤を含む第２の組成物を含む第２の容器とを含むキットが提供される。
【００５４】
一部の実施形態では、体組成を変更する、脂肪量を減少させる、除脂肪量を増加させる、または増加した脂肪量によって特徴付けられるもしくはこれに関連する疾患もしくは障害を処置するためのキットであって、アクチビンＡ阻害剤を含む第２の組成物をさらに含むキットにおける医薬としての使用のための第１の組成物の製造における使用のために、ＧＤＦ８阻害剤が提供される。
【００５５】
一部の実施形態では、体組成を変更する、脂肪量を減少させる、除脂肪量を増加させる、または増加した脂肪量によって特徴付けられるもしくはこれに関連する疾患もしくは障害を処置するためのキットであって、ＧＤＦ８阻害剤を含む第２の組成物をさらに含むキットにおける医薬としての使用のための第１の組成物の製造における使用のために、アクチビンＡ阻害剤が提供される。
【００５６】
一部の実施形態では、対象における体組成を変更する、脂肪量を減少させる、または除脂肪量を増加させるためのキットであって、アクチビンＡ阻害剤を含む第２の組成物をさらに含むキットにおける使用のための第１の組成物の製造における使用のために、ＧＤＦ８阻害剤が提供される。
【００５７】
一部の実施形態では、対象における体組成を変更する、脂肪量を減少させる、または除脂肪量を増加させるためのキットであって、ＧＤＦ８阻害剤を含む第２の組成物をさらに含むキットにおける使用のための第１の組成物の製造における使用のために、アクチビンＡ阻害剤が提供される。
【００５８】
一部の実施形態では、アクチビンＡ阻害剤を含む第２の組成物を受けた対象における体組成の変更、脂肪量の減少、除脂肪量の増加、または増加した脂肪量もしくは減少した除脂肪量によって特徴付けられるもしくはこれに関連する疾患もしくは障害の処置における使用のために、ＧＤＦ８阻害剤を含む第１の組成物が提供される。
【００５９】
一部の実施形態では、ＧＤＦ８阻害剤を含む第２の組成物を受けた対象における体組成の変更、脂肪量の減少、除脂肪量の増加、または増加した脂肪量もしくは減少した除脂肪量によって特徴付けられるもしくはこれに関連する疾患もしくは障害の処置における使用のために、アクチビンＡ阻害剤を含む第１の組成物が提供される。
【００６０】
一部の実施形態では、体組成を変更する、脂肪量を減少させる、除脂肪量を増加させる、または増加した脂肪量もしくは減少した除脂肪量によって特徴付けられるもしくはこれに関連する疾患もしくは障害を処置するための方法であって、アクチビンＡ阻害剤を含む第２の組成物を投与する工程をさらに含む方法における使用のために、ＧＤＦ８阻害剤を含む第１の組成物が提供される。
【００６１】
一部の実施形態では、体組成を変更する、脂肪量を減少させる、除脂肪量を増加させる、または増加した脂肪量もしくは減少した除脂肪量によって特徴付けられるもしくはこれに関連する疾患もしくは障害を処置するための方法であって、ＧＤＦ８阻害剤を含む第２の組成物を投与する工程をさらに含む方法における使用のために、アクチビンＡ阻害剤を含む第１の組成物が提供される。
【００６２】
一部の実施形態では、体組成の変更、脂肪量の減少、除脂肪量の増加、増加した脂肪量または減少した除脂肪量によって特徴付けられるまたはこれに関連する疾患または障害の処置もしくは予防における使用のために、アクチビンＡ阻害剤およびＧＤＦ８阻害剤を含む組成物が提供される。
【００６３】
本発明の他の実施形態は、後に続く詳細な説明の概説から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００６４】
【図１】図１は、プラセボと比較したＬＳ平均およびＳＥにおける総除脂肪量のベースラインからのパーセント変化としての、１２週間後の抗ＧＤＦ８抗体ＲＥＧＮ１０３３単独を受けている７０歳以上のサルコペニア患者における臨床研究の結果を描写する棒グラフを示す。ＲＥＧＮ１０３３を受けている患者は、プラセボ（ｎ＝６５）と比較して、３種の投薬レジメンのそれぞれにおいて、１２週間目に有意に増加した総除脂肪体重を示した。１００ｍｇ抗ＧＤＦ８抗体ＲＥＧＮ１０３３  Ｑ４Ｗ  Ｓ．Ｃ．を受けている患者は、１．６６％総除脂肪量の差、ｖｓ．プラセボを示した（ｎ＝６２、Ｐ＝０．００７７）。３００ｍｇ抗ＧＤＦ８  Ｑ４Ｗ  ＳＣを受けている患者は、１．７８％総除脂肪量の差、ｖｓ．プラセボを示した（ｎ＝６４、Ｐ＝０．００４３）。３００ｍｇ  Ｑ２Ｗ  ＳＣを受けている患者は、２．２９％総除脂肪量の差、ｖｓ．プラセボを示した（ｎ＝５９、Ｐ＝０．０００４）。
【図２Ａ】図２Ａは、実施例２に従った４８名の健康な閉経後女性の研究に使用されている昇順用量パネルによる表１を示す。抗ＧＤＦ８抗体ＲＥＧＮ１０３３および／または抗アクチビンＡ抗体ＲＥＧＮ２４７７の単一静脈内用量を利用した。一次解析において、パネルにわたってプラセボおよび高用量組合せ群をプールし、表中の枠で囲まれた領域に示す通り、プラセボにおける１２名の対象および高用量組合せにおける１２名を得た。
【図２Ｂ】図２Ｂは、健康な閉経後女性における、抗アクチビンＡ抗体ＲＥＧＮ２４７７および／または抗ＧＤＦ８抗体ＲＥＧＮ１０３３の単一Ｉ．Ｖ．用量後８週目の大腿筋肉体積（ＭＲＩにより測定）％変化を描写する棒グラフを示す。抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）、抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）＋中用量抗アクチビンＡ（３ｍｇ／ｋｇ）、および抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）＋高用量抗アクチビンＡ（１０ｍｇ／ｋｇ）群により、プラセボからの大腿筋肉体積％変化の有意な増加が示された（＊名目上ｐ＜０．５、ｖｓ．プラセボ、＊＊＊＊名目上ｐ＜０．０００１、ｖｓ．プラセボ）。
【図２Ｃ】図２Ｃは、健康な閉経後女性における、抗アクチビンＡ抗体ＲＥＧＮ２４７７および／または抗ＧＤＦ８抗体ＲＥＧＮ１０３３の単一Ｉ．Ｖ．用量後８週目の総脂肪量（ＤＸＡにより測定）％変化を描写する棒グラフを示す。数値は、プラセボからの変化を示す。抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）＋高用量抗アクチビンＡ（１０ｍｇ／ｋｇ）群により、総脂肪量％変化の有意な減少が示された（＊名目上ｐ＜０．０５、ｖｓ．プラセボ）。
【図３】図３は、健康な閉経後女性における、抗アクチビンＡ抗体ＲＥＧＮ２４７７および／または抗ＧＤＦ８抗体ＲＥＧＮ１０３３の単一Ｉ．Ｖ．用量後０、４および８週目のＭＲＩによる大腿筋肉体積におけるベースラインからのＬＳ平均（ＳＥ）パーセント変化を描写する折れ線グラフを示す。単一Ｉ．Ｖ．用量後４週間目に、抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）、抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）＋低用量抗アクチビンＡ（１ｍｇ／ｋｇ）、抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）＋中用量抗アクチビンＡ（３ｍｇ／ｋｇ）、および抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）＋高用量抗アクチビンＡ（１０ｍｇ／ｋｇ）群のそれぞれにより、プラセボからの大腿筋肉体積（筋肉内脂肪組織を除外し、ＭＲＩによって測定される）％変化の有意な増加が示された。単一Ｉ．Ｖ．用量後８週間目に、抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）＋中用量抗アクチビンＡ（３ｍｇ／ｋｇ）、および抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）＋高用量抗アクチビンＡ（１０ｍｇ／ｋｇ）群において、プラセボからの大腿筋肉体積％変化の有意な増加が示された（＊名目上ｐ＜０．０５、＊＊名目上ｐ＜０．００１）。群毎のＮ値は、図２Ａに示されている。
【図４】図４は、複数の個体に関するプラセボ、抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）、高用量抗アクチビンＡ（１０ｍｇ／ｋｇ）、抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）＋低用量抗アクチビンＡ（１ｍｇ／ｋｇ）、抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）＋中用量抗アクチビンＡ（３ｍｇ／ｋｇ）、および抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）＋高用量抗アクチビンＡ（１０ｍｇ／ｋｇ）群における、ベースラインからの％変化としての健康な閉経後女性における、抗アクチビンＡ抗体ＲＥＧＮ２４７７および／または抗ＧＤＦ８抗体ＲＥＧＮ１０３３の単一Ｉ．Ｖ．用量後０、４および８週目のＭＲＩによる大腿筋肉体積のパーセント変化（ベースラインからの）の個々のデータを描写する折れ線グラフを示す。大腿筋肉体積の増加は、ＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３の組合せによる処置後に個々の対象において一貫して観察された。各処置群内で、異なる線は、異なる個体を示す。
【図５】図５は、６種の群におけるベースラインからの％パーセント変化ＬＳ（最小二乗）平均（ＳＥ）としての、健康な閉経後女性における、抗アクチビンＡ抗体ＲＥＧＮ２４７７および／または抗ＧＤＦ８抗体ＲＥＧＮ１０３３の単一Ｉ．Ｖ．用量後０、４および８週目の体肢除脂肪（体重）量（すなわち、腕および脚における除脂肪組織の和）を描写する折れ線グラフを示す。群毎のＮ値は、図２Ａに示されている。４週間および８週間後に、抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）＋低用量抗アクチビンＡ（１ｍｇ／ｋｇ）、抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）＋中用量抗アクチビンＡ（３ｍｇ／ｋｇ）、および抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）＋高用量抗アクチビンＡ（１０ｍｇ／ｋｇ）群を含む３種の組合せ用量群のそれぞれが、プラセボと比較して、体肢除脂肪量の有意に増加した％変化ＬＳ平均差を示した（＊名目上ｐ＜０．０５、＊＊名目上ｐ＜０．００１）。群毎のＮ値は、図２Ａに示されている。
【図６】図６は、プラセボ、抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）、高用量抗アクチビンＡ（１０ｍｇ／ｋｇ）、抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）＋低用量抗アクチビンＡ（１ｍｇ／ｋｇ）、抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）＋中用量抗アクチビンＡ（３ｍｇ／ｋｇ）、および抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）＋高用量抗アクチビンＡ（１０ｍｇ／ｋｇ）群における、健康な閉経後女性における、抗アクチビンＡ抗体ＲＥＧＮ２４７７および／または抗ＧＤＦ８抗体ＲＥＧＮ１０３３の単一Ｉ．Ｖ．用量後０、４および８週目の平均（ＳＥ＝標準誤差）総脂肪量パーセント（ＤＸＡによって測定される）変化を描写する折れ線グラフを示す。群毎のＮ値は、図２Ａに示されている。高用量群、（抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）＋高用量抗アクチビンＡ（１０ｍｇ／ｋｇ）は、４週目および８週目にプラセボと比較して、パーセント変化ＬＳ平均差としての総脂肪量の有意な低下を示した（＊名目上ｐ＜０．０５）。アクチビンＡおよびＧＤＦ８の両方の遮断は、ＤＸＡによって評価される総脂肪量の低下をもたらした。
【図７】図７は、プラセボ、抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）、高用量（１０ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ、抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）＋低用量（１ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ、抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）＋中用量（３ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ、および抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）＋高用量（１０ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ群を含む６種の群における、健康な閉経後女性における、抗アクチビンＡ抗体ＲＥＧＮ２４７７および／または抗ＧＤＦ８抗体ＲＥＧＮ１０３３の単一Ｉ．Ｖ．用量後０、４および８週目のアンドロイド脂肪量の平均（ＳＥ）パーセント変化を描写する折れ線グラフを示す。高用量ＲＥＧＮ１０３３＋ＲＥＧＮ２４７７群は、４週目および８週目に、プラセボと比較して、ＤＸＡによるアンドロイド脂肪量の有意に低下したパーセント変化ＬＳ平均差を示した（＊名目上ｐ＜０．０５）。群毎のＮ値は、図２Ａに示されている。アクチビンＡおよびＧＤＦ８の両方の遮断は、ＤＸＡにより評価されるアンドロイド脂肪量の減少にも関連した。
【図８】図８は、プラセボ、抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）、高用量（１０ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ、抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）＋低用量（１ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ、抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）＋中用量（３ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ、および抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）＋高用量（１０ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ群を含む６種の群における、健康な閉経後女性における、抗アクチビンＡ抗体ＲＥＧＮ２４７７および／または抗ＧＤＦ８抗体ＲＥＧＮ１０３３の単一Ｉ．Ｖ．用量後０、４および８週目の大腿筋肉体積（筋肉内脂肪組織および大血管を除外）のＬＳ平均パーセント変化とＳＥを描写する折れ線グラフを示す。群毎のＮ値は、図２Ａに示されている。プラセボと比較すると、ＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３中間および高用量群は、４週間および８週間目に大腿筋肉体積の有意に増加した平均％変化を示した（＊名目上ｐ＜０．０５、＊＊名目上ｐ＜０．００１）。
【図９】図９は、プラセボ、抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）、高用量（１０ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ、抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）＋低用量（１ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ、抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）＋中用量（３ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ、および抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）＋高用量（１０ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ群を含む６種の群に関する、健康な閉経後女性における、抗アクチビンＡ抗体ＲＥＧＮ２４７７および／または抗ＧＤＦ８抗体ＲＥＧＮ１０３３の単一Ｉ．Ｖ．用量後０、４および８週目の総除脂肪量のＬＳ平均パーセント変化とＳＥを描写する折れ線グラフを示す。群毎のＮ値は、図２Ａに示されている。  プラセボと比較すると、ＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３中間および高用量群は、４週間および８週間目にプラセボと比較して、総除脂肪量の有意に増加した％変化を示した（＊名目上ｐ＜０．０５）。
【図１０】図１０は、プラセボ、抗ＧＤＦ８、高用量（１０ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ、抗ＧＤＦ８＋低用量（１ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ、抗ＧＤＦ８＋中用量（３ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ、および抗ＧＤＦ８＋高用量（１０ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ群を含む６種の群における、健康な閉経後女性における、抗アクチビンＡ抗体ＲＥＧＮ２４７７および／または抗ＧＤＦ８抗体ＲＥＧＮ１０３３の単一Ｉ．Ｖ．用量後０、４および８週目のｋｇ単位の体肢除脂肪体重（ａＬＢＭ方程式により計算）のＬＳ平均パーセント変化とＳＥを描写する折れ線グラフを示す。群毎のＮ値は、図２Ａに示されている。ＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３処置は、プラセボと比較して、４週間および８週間目の低、中間および高用量群のそれぞれにおいて、ａＬＢＭ方程式）によって計算される体肢除脂肪体重（ｋｇ）の有意に増加した％変化をもたらした（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００１）。
【図１１】図１１は、プラセボ、抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）、高用量（１０ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ、抗ＧＤＦ８＋低用量（１ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ、抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）＋中用量（３ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ、および抗ＧＤＦ８（６ｍｇ／ｋｇ）＋高用量（１０ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ群を含む６種の群における、健康な閉経後女性における、抗アクチビンＡ抗体ＲＥＧＮ２４７７および／または抗ＧＤＦ８抗体ＲＥＧＮ１０３３の単一Ｉ．Ｖ．用量後０、４および８週目のｋｇ単位の総脂肪量のＬＳ平均パーセント変化とＳＥを描写する折れ線グラフを示す。群毎のＮ値は、図２Ａに示されている。高用量組合せＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３処置群は、８週間目にプラセボ−０．６５％と比較して、有意に減少した％総脂肪量を示した：−３．９２％（高用量群）（＊名目上ｐ＜０．０５）。
【図１２】図１２は、プラセボ、抗ＧＤＦ８、高用量（１０ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ、抗ＧＤＦ８＋低用量（１ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ、抗ＧＤＦ８＋中用量（３ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ、および抗ＧＤＦ８＋高用量（１０ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ群を含む６種の群における、健康な閉経後女性における、抗アクチビンＡ抗体ＲＥＧＮ２４７７および／または抗ＧＤＦ８抗体ＲＥＧＮ１０３３の単一Ｉ．Ｖ．用量後０、４および８週目のｃｍ３単位の大腿筋肉体積（筋肉内脂肪組織および大血管を含む）のＬＳ平均パーセント変化とＳＥを描写する折れ線グラフを示す。群毎のＮ値は、図２Ａに示されている。高および中間用量ＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３処置群は、プラセボと比較して、４週間および８週間目に中間および高用量処置群において、筋肉内脂肪組織および大血管を含む大腿筋肉体積の有意に増加した％変化を示した（＊名目上ｐ＜０．０５、＊＊名目上ｐ＜０．００１）。
【図１３】図１３は、プラセボ、抗ＧＤＦ８、高用量（１０ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ、抗ＧＤＦ８＋低用量（１ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ、抗ＧＤＦ８＋中用量（３ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ、および抗ＧＤＦ８＋高用量（１０ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ群を含む６種の群における、健康な閉経後女性における、抗アクチビンＡ抗体ＲＥＧＮ２４７７および／または抗ＧＤＦ８抗体ＲＥＧＮ１０３３の単一Ｉ．Ｖ．用量後０、４および８週目のｋｇ単位の体肢除脂肪量（腕および脚の除脂肪量の和）のＬＳ平均パーセント変化とＳＥを描写する折れ線グラフを示す。群毎のＮ値は、図２Ａに示されている。体肢除脂肪量は、４および８週間目に、ＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３低、中間および高用量処置群のそれぞれにおいて、プラセボからの平均パーセント変化として有意に増加した（＊名目上ｐ＜０．０５、＊＊名目上ｐ＜０．００１）。
【図１４】図１４は、プラセボ、抗ＧＤＦ８、高用量（１０ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ、抗ＧＤＦ８＋低用量（１ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ、抗ＧＤＦ８＋中用量（３ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ、および抗ＧＤＦ８＋高用量（１０ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ群を含む６種の群における、健康な閉経後女性における、抗アクチビンＡ抗体ＲＥＧＮ２４７７および／または抗ＧＤＦ８抗体ＲＥＧＮ１０３３の単一Ｉ．Ｖ．用量後０、４および８週目のｋｇ単位のアンドロイド脂肪量のＬＳ平均パーセント変化とＳＥを描写する折れ線グラフを示す。群毎のＮ値は、図２Ａに示されている。高用量ＲＥＧＮ１０３３＋ＲＥＧＮ２４７７群は、４週目および８週目に、プラセボと比較して、ＤＸＡによるアンドロイド脂肪量の有意に低下した％変化を示した（＊名目上ｐ＜０．０５）。
【図１５】図１５は、プラセボ、抗ＧＤＦ８、高用量（１０ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ、抗ＧＤＦ８＋低用量（１ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ、抗ＧＤＦ８＋中用量（３ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ、および抗ＧＤＦ８＋高用量（１０ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ群を含む６種の群における、健康な閉経後女性における、抗アクチビンＡ抗体ＲＥＧＮ２４７７および／または抗ＧＤＦ８抗体ＲＥＧＮ１０３３の単一Ｉ．Ｖ．用量後０、４および８週目のｃｍ３単位の大腿筋肉内脂肪組織体積のＬＳ平均パーセント変化とＳＥを描写する折れ線グラフを示す。群毎のＮ値は、図２Ａに示されている。高用量ＲＥＧＮ１０３３＋ＲＥＧＮ２４７７群は、８週間目にプラセボと比較して、平均％変化としての増加した大腿筋肉内脂肪組織体積を示した（＊名目上ｐ＜０．０５）。
【図１６】図１６は、プラセボ、抗ＧＤＦ８、高用量（１０ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ、抗ＧＤＦ８＋低用量（１ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ、抗ＧＤＦ８＋中用量（３ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ、および抗ＧＤＦ８＋高用量（１０ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ群を含む６種の群における、健康な閉経後女性における、抗アクチビンＡ抗体ＲＥＧＮ２４７７および／または抗ＧＤＦ８抗体ＲＥＧＮ１０３３の単一Ｉ．Ｖ．用量後０、４および８週目の筋肉内および筋肉周囲の脂肪組織（ＩＭＡＴ）の和のＬＳ平均パーセント変化とＳＥを描写する折れ線グラフを示す。群毎のＮ値は、図２Ａに示されている。組合せＲＥＧＮ１０３３＋ＲＥＧＮ２４７７処置群は、４および８週目に、筋肉内および筋肉周囲の脂肪組織（ＩＭＡＴ）の和のＬＳ平均パーセント変化とＳＥがプラセボと有意に異ならなかった。
【図１７】図１７は、プラセボ、抗ＧＤＦ８、高用量（１０ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ、抗ＧＤＦ８＋低用量（１ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ、抗ＧＤＦ８＋中用量（３ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ、および抗ＧＤＦ８＋高用量（１０ｍｇ／ｋｇ）抗アクチビンＡ群を含む６種の群における、健康な閉経後女性における、抗アクチビンＡ抗体ＲＥＧＮ２４７７および／または抗ＧＤＦ８抗体ＲＥＧＮ１０３３の単一Ｉ．Ｖ．用量後０、４および８週目のｃｍ３単位の皮下脂肪組織体積のＬＳ平均パーセント変化とＳＥを描写する折れ線グラフを示す。群毎のＮ値は、図２Ａに示されている。ＲＥＧＮ１０３３＋ＲＥＧＮ２４７７低および中間用量処置群は、８週間目にプラセボと比較して、皮下脂肪組織体積の有意に減少した％変化を示した（＊名目上ｐ＜０．０５）。
【発明を実施するための形態】
【００６５】
本発明について記載する前に、記載されている特定の組成物、方法および実験条件は変動し得るため、本発明が、斯かる組成物、方法および条件に限定されないことを理解されたい。本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、本明細書に使用されている用語法が、単に特定の実施形態について記載することを目的とし、限定を意図するものではないことも理解されたい。他に規定がなければ、本明細書に使用されているあらゆる技術および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されているものと同じ意義を有する。
【００６６】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、文脈がそれ以外を明らかに指示しない限り、単数形「１つの（a）」、「１つの（an）」および「その（the）」は、複数の参照を含む。よって、例えば、「１つの方法（a method）」の参照は、１つもしくはそれ以上の方法、ならびに／または本明細書に記載されているおよび／もしくは本開示を読めば当業者には明らかになるであろう種類の工程を含む。
【００６７】
本明細書において、「約」という用語は、特定の列挙されている数値を参照して使用される場合、値が、列挙されている値から１％以下変動し得ることを意味する。例えば、本明細書において、「約１００」という表現は、９９および１０１、ならびにその間のあらゆる値（例えば、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４等）を含む。
【００６８】
本発明の実施において、本明細書に記載されている方法および材料と同様のまたは均等ないかなる方法および材料を使用することもできるが、好まれる方法および材料についてここに記載する。本明細書に言及されているあらゆる刊行物は、それらの全体を参照によって本明細書に組み入れる。
【００６９】
抗体および抗体の抗原結合断片
「抗体」という用語は、本明細書において、ジスルフィド結合によって相互接続された２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖である４本のポリペプチド鎖を含む免疫グロブリン分子、ならびにその多量体（例えば、ＩｇＭ）を指すことが意図される。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書において、ＨＣＶＲまたはＶＨと省略）および重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、３個のドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書において、ＬＣＶＲまたはＶＬと省略）および軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、１個のドメイン（ＣＬ１）を含む。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と命名されたより保存された領域が散りばめられた、相補性決定領域（ＣＤＲ）と命名された高頻度可変性の領域へとさらに細分することができる。各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端へと、次の順序で配置された３個のＣＤＲおよび４個のＦＲで構成されている：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。本発明の異なる実施形態では、抗体（またはその抗原結合部分）のＦＲは、ヒト生殖系列配列と同一であってもよく、または天然にもしくは人為的に改変することができる。アミノ酸コンセンサス配列は、２個以上のＣＤＲのサイド・バイ・サイド解析に基づき定義することができる。
【００７０】
抗体は、本明細書において、次の命名法に従って参照することができる：Ｆｃ接頭辞（例えば、「Ｈ１Ｍ」、「Ｈ２ａＭ」、「Ｈ４Ｈ」）と、それに続く数的識別子（例えば、「１０４４６」）と、それに続く「Ｐ」、「Ｐ２」または「Ｎ」接尾辞。よって、この命名法に従って、抗体は、本明細書において、例えば、「Ｈ４Ｈ１０４４６Ｐ２」と称することができる。本明細書に使用されている抗体命名におけるＨ１Ｍ、Ｈ２ＭおよびＨ４Ｈ接頭辞は、抗体の特定のＦｃ領域アイソタイプを示す。例えば、「Ｈ２ａＭ」抗体は、マウスＩｇＧ２ａ  Ｆｃを有する一方、「Ｈ４Ｈ」抗体は、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃを有する。当業者であれば認めるであろうが、特定のＦｃアイソタイプを有する抗体は、異なるＦｃアイソタイプを有する抗体に変換することができる（例えば、マウスＩｇＧ２ａ  Ｆｃを有する抗体は、ヒトＩｇＧ４を有する抗体等に変換することができる）が、いずれの場合であっても、可変ドメイン（ＣＤＲを含む）は同じままであり、結合特性は、Ｆｃドメインの性質に関係なく同一または実質的に同様であると予想される。
【００７１】
「抗体」という用語は、本明細書において、完全抗体分子の抗原結合断片も含む。抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合断片」等の用語は、本明細書において、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、いずれかの天然に存在する、酵素を用いて得ることができる、合成のまたは遺伝子操作されたポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。抗体の抗原結合断片は、例えば、タンパク質分解による消化、または抗体可変および場合により定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現が関与する組換え遺伝子操作技法等のいずれか適した標準技法を使用して、完全抗体分子から得ることができる。斯かるＤＮＡは、知られている、および／または例えば、商業的供給源、ＤＮＡライブラリー（例えば、ファージ−抗体ライブラリーを含む）から容易に入手可能である、または合成することができる。ＤＮＡを配列決定し、化学的に、または分子生物学技法を使用することにより操作して、例えば、１個もしくはそれ以上の可変および／もしくは定常ドメインを適した構成へと配置する、またはコドンを導入する、システイン残基を作製する、アミノ酸を改変、付加もしくは欠失させる等を為すことができる。
【００７２】
抗原結合断片の非限定的な例として、（ｉ）Ｆａｂ断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）Ｆｄ断片；（ｉｖ）Ｆｖ断片；（ｖ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（ｖｉ）ｄＡｂ断片；および（ｖｉｉ）抗体の高頻度可変領域（例えば、ＣＤＲ３ペプチド等の単離された相補性決定領域（ＣＤＲ））または制約ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４ペプチドを模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位が挙げられる。ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体、ダイアボディ（diabody）、トリアボディ（triabody）、テトラボディ（tetrabody）、ミニボディ（minibody）、ナノボディ（例えば、一価ナノボディ、二価ナノボディ等）、小モジュラー免疫医薬（small modular immunopharmaceutical）（ＳＭＩＰ）およびサメ可変ＩｇＮＡＲドメイン等、他の操作された分子も、本明細書において、表現「抗原結合断片」の内に包含される。
【００７３】
抗体の抗原結合断片は、典型的に、少なくとも１個の可変ドメインを含むであろう。可変ドメインは、いずれのサイズまたはアミノ酸組成のものであってもよく、一般に、１個またはそれ以上のフレームワーク配列に隣接するまたはそれとインフレームにある、少なくとも１個のＣＤＲを含むであろう。ＶＬドメインと会合したＶＨドメインを有する抗原結合断片において、ＶＨおよびＶＬドメインは、いずれか適した配置で、互いに関連して位置することができる。例えば、可変領域は、二量体となり、ＶＨ−ＶＨ、ＶＨ−ＶＬまたはＶＬ−ＶＬ二量体を含有することができる。あるいは、抗体の抗原結合断片は、単量体ＶＨまたはＶＬドメインを含有することができる。
【００７４】
ある特定の実施形態では、抗体の抗原結合断片は、少なくとも１個の定常ドメインに共有結合により連結された少なくとも１個の可変ドメインを含有することができる。本発明において使用されている抗体の抗原結合断片内に見出すことができる可変および定常ドメインの非限定的な例示的な構成は、（ｉ）ＶＨ−ＣＨ１；（ｉｉ）ＶＨ−ＣＨ２；（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＨ３；（ｉｖ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２；（ｖ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｖｉ）ＶＨ−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｖｉｉ）ＶＨ−ＣＬ；（ｖｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１；（ｉｘ）ＶＬ−ＣＨ２；（ｘ）ＶＬ−ＣＨ３；（ｘｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２；（ｘｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｘｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ２−ＣＨ３；および（ｘｉｖ）ＶＬ−ＣＬを含む。上に収載されている例示的な構成のいずれかを含む可変および定常ドメインのいずれかの構成において、可変および定常ドメインは、互いに直接的に連結することができる、または完全もしくは部分的ヒンジもしくはリンカー領域によって連結することができる。ヒンジ領域は、単一ポリペプチド分子において隣接する可変および／または定常ドメインの間に可動性または半可動性連結をもたらす少なくとも２個の（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０個以上の）アミノ酸からなることができる。さらに、本発明において使用されている抗体の抗原結合断片は、互いと、および／または１個もしくはそれ以上の単量体ＶＨもしくはＶＬドメインと（例えば、ジスルフィド結合（複数可）によって）非共有結合的に会合した、上に収載されている可変および定常ドメイン構成のいずれかのホモ二量体またはヘテロ二量体（または他の多量体）を含むことができる。
【００７５】
完全抗体分子および抗原結合断片は、単一特異性または多特異性（例えば、二特異性）であってもよい。多特異性抗体または抗体の抗原結合断片は、典型的に、少なくとも２個の異なる可変ドメインを含み、各可変ドメインは、別々の抗原にまたは同じ抗原における異なるエピトープに特異的に結合することができる。いずれかの多特異性抗体フォーマットを、当技術分野で利用できるルーチン技法を使用して、本明細書に記載されている抗体または抗原結合断片の文脈における使用に適応させることができる。
【００７６】
本発明の組成物および方法において使用されている抗体は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）または抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介して機能することができる。「補体依存性細胞傷害」（ＣＤＣ）は、補体の存在下における、本発明の抗体による抗原発現細胞の溶解を指す。「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」（ＡＤＣＣ）は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球およびマクロファージ）が、標的細胞表面の結合された抗体を認識し、これにより、標的細胞の溶解をもたらす、細胞媒介性反応を指す。ＣＤＣおよびＡＤＣＣは、当技術分野でよく知られており利用できるアッセイを使用して測定することができる（例えば、米国特許第５，５００，３６２号および同第５，８２１，３３７号ならびにＣｌｙｎｅｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）９５：６５２〜６５６頁（１９９８）を参照）。
【００７７】
本明細書に記載されている抗体は、ヒト抗体および／もしくは組換えヒト抗体、またはこれらの断片を含むまたはこれからなることができる。「ヒト抗体」という用語は、本明細書において、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変および定常領域を有する抗体を含む。そうであるにもかかわらず、ヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、ランダムもしくは部位特異的突然変異誘発によってｉｎ  ｖｉｔｒｏで、または体細胞突然変異によってｉｎ  ｖｉｖｏで導入された突然変異）を、例えば、ＣＤＲ、特に、ＣＤＲ３に含むことができる。しかし、「ヒト抗体」という用語は、本明細書において、マウス等の別の哺乳類種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列にグラフトされた抗体を含むことを意図しない。
【００７８】
本明細書に記載されている抗体分子は、組換えヒト抗体またはその抗原結合断片を含むまたはこれからなることができる。「組換えヒト抗体」という用語は、本明細書において、宿主細胞にトランスフェクトされる組換え発現ベクターを使用して発現される抗体、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離される抗体、ヒト免疫グロブリン遺伝子に関してトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離される抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒら（１９９２）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２０：６２８７〜６２９５頁を参照）、または他のＤＮＡ配列へのヒト免疫グロブリン遺伝子配列のスプライシングが関与する他のいずれかの手段によって調製、発現、作製もしくは単離される抗体等、組換え手段によって調製、発現、作製または単離されるあらゆるヒト抗体を含むことを意図する。斯かる組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変および定常領域を有する。しかし、ある特定の実施形態では、斯かる組換えヒト抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ突然変異誘発（または、ヒトＩｇ配列に関してトランスジェニックである動物が使用される場合は、ｉｎ  ｖｉｖｏ体細胞突然変異誘発）に付され、これにより、組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列に由来しこれに関係するが、ｉｎ  ｖｉｖｏでヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然で存在しなくてもよい配列である。組換え抗体は、本発明の組成物および方法の追加的な実施形態において使用することができる。
【００７９】
「単離された抗体」は、本明細書において、その天然環境の少なくとも１種の構成成分から同定および分離および／または回収された抗体を意味する。例えば、抗体が天然で存在するまたは天然で産生される生物、組織または細胞の少なくとも１種の構成成分から分離または除去された抗体は、本発明の目的のための「単離された抗体」である。単離された抗体は、組換え細胞内のｉｎ  ｓｉｔｕにおける抗体と共に、少なくとも１回の精製または単離工程に付された抗体も含む。ある特定の実施形態において、単離された抗体は、他の細胞材料および／または化学物質を実質的に含まなくてよい。単離された抗体は、本発明の組成物および方法の追加的な実施形態において使用することができる。
【００８０】
サンプルの少なくとも約６０〜７５％が、単一種のポリペプチドを示す場合、タンパク質またはポリペプチドは、「実質的に純粋である」、「実質的に均一である」または「実質的に精製される」。ポリペプチドまたはタンパク質は、単量体または多量体であってもよい。実質的に純粋なポリペプチドまたはタンパク質は、典型的に、タンパク質サンプルの約５０％、６０、７０％、８０％または９０％ｗ／ｗを構成し、通常約９５％、好ましくは９９％を超えて純粋であろう。タンパク質純度または均一性は、タンパク質サンプルのポリアクリルアミドゲル電気泳動と、それに続く、当技術分野でよく知られている染色によるゲルの染色による単一ポリペプチドバンドの可視化等、当技術分野でよく知られているいくつかの手段によって示すことができる。ある特定の目的のため、精製のための当技術分野でよく知られているＨＰＬＣまたは他の手段を使用することにより、より高い分解能をもたらすことができる。
【００８１】
「ポリペプチドアナログまたはバリアント」という用語は、本明細書において、アミノ酸配列の部分に対し実質的な同一性を有する少なくとも２５アミノ酸のセグメントで構成されており、次の特性のうち少なくとも１種を有するポリペプチドを指す：（１）適した結合条件下におけるＧＤＦ８への特異的結合、または（２）ＧＤＦ８の生物学的活性を遮断する能力。典型的に、ポリペプチドアナログまたはバリアントは、天然に存在する配列に関して保存的アミノ酸置換（または挿入または欠失）を含む。アナログは、典型的に、少なくとも２０アミノ酸長、少なくとも５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０または２００アミノ酸長以上であり、多くの場合、全長の天然に存在するポリペプチドと同じ長さであってもよい。
【００８２】
好まれるアミノ酸置換は、（１）タンパク質分解に対する感受性を低下させ、（２）酸化に対する感受性を低下させ、（３）タンパク質複合体を形成するための結合親和性を変更し、（４）結合親和性を変更し、（４）斯かるアナログの他の物理化学的または機能的特性を付与または改変する、アミノ酸置換である。アナログは、天然に存在するペプチド配列以外の配列の様々な突然変異を含むことができる。例えば、単一または複数のアミノ酸置換（好ましくは、保存的アミノ酸置換）を、天然に存在する配列（好ましくは、分子間接触を形成するドメイン（複数可）の外側のポリペプチドの部分）に生じることができる。保存的アミノ酸置換は、親配列の構造的特徴を実質的に変化させるべきではない（例えば、アミノ酸置換えは、親配列に発生するヘリックスを壊す、または親配列を特徴付ける他の種類の二次構造を破壊する傾向があるべきではない）。技術分野で認識されるポリペプチド二次および三次構造の例は、それぞれ参照によって本明細書に組み入れる、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ  １９８４  Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｂｒａｎｄｅｎ＆Ｔｏｏｚｅ編、１９９１、Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、ＮＹ）；およびＴｈｏｒｎｔｏｎら（et at.）、１９９１  Ｎａｔｕｒｅ  ３５４：１０５頁に記載されている。
【００８３】
非ペプチドアナログは、製薬業界において、鋳型ペプチドの特性に類似した特性を有する薬物として一般的に使用されている。このような種類の非ペプチド化合物は、「ペプチドミメティック」または「ペプチド模倣薬」と命名される（例えば、参照によって本明細書に組み入れる、Ｆａｕｃｈｅｒｅ（１９８６）Ｊ．  Ａｄｖ．  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓ．１５：２９頁；およびＥｖａｎｓら（１９８７）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３０：１２２９頁を参照）。コンセンサス配列の１個またはそれ以上のアミノ酸の、同じ種類のＤ−アミノ酸による系統的置換（例えば、Ｌ−リジンの代わりにＤ−リジン）を使用して、より安定したペプチドを生成することもできる。加えて、コンセンサス配列または実質的に同一のコンセンサス配列変種を含む制約ペプチドは、当技術分野で知られている方法（参照によって本明細書に組み入れる、Ｒｉｚｏら（１９９２）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６１：３８７頁）によって、例えば、ペプチドを環化する分子内ジスルフィド架橋を形成することができる内部システイン残基を付加することにより、生成することができる。
【００８４】
ポリペプチドに適用される場合、「実質的同一性」または「実質的に同一」という用語は、２種のペプチド配列が、デフォルトギャップ重量を使用してプログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴ等により最適に整列されると、少なくとも約８０％配列同一性、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％配列同一性を共有することを意味する。好ましくは、同一でない残基位置は、保存的アミノ酸置換によって異なる。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、同様の化学的特性（例えば、電荷または疎水性）を有する側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基によって置換されたアミノ酸置換である。一般に、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能的特性を実質的に変化させないであろう。２種以上のアミノ酸配列が、保存的置換によって互いに異なる場合、パーセント配列同一性または類似性の程度を上向きに調整して、置換の保存的性質に関して補正することができる。この調整を行うための手段は、当業者によく知られている。例えば、本明細書に参照によって組み入れる、Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９４）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４：３０７〜３３１頁を参照されたい。同様の化学的特性を有する側鎖を有するアミノ酸の群の例として、１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン；２）脂肪族−ヒドロキシル側鎖：セリンおよびスレオニン；３）アミド含有側鎖：アスパラギンおよびグルタミン；４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファン；５）塩基性側鎖：リジン、アルギニンおよびヒスチジン；ならびに６）硫黄含有側鎖：システインおよびメチオニンが挙げられる。好まれる保存的アミノ酸置換群を次に示す：バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リジン−アルギニン、アラニン−バリン、グルタミン酸−アスパラギン酸、およびアスパラギン−グルタミン。あるいは、保存的置換えは、本明細書に参照によって組み入れるＧｏｎｎｅｔら（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：１４４３〜４５頁に開示されている、ＰＡＭ２５０対数尤度マトリックスにおいて正の値を有するいずれかの変化である。「中程度に保存的な」置換えは、ＰＡＭ２５０対数尤度マトリックスにおいて非負値を有するいずれかの変化である。
【００８５】
配列同一性とも称される、ポリペプチドに関する配列類似性は、典型的に、配列解析ソフトウェアを使用して測定される。タンパク質解析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含む様々な置換、欠失および他の改変に割り当てられた類似性の尺度を使用して、同様の配列をマッチさせる。例えば、ＧＣＧは、デフォルトパラメータで使用して、異なる生物種由来の相同ポリペプチド等の近縁のポリペプチドの間、または野生型タンパク質およびそのムテインの間の配列相同性または配列同一性を決定することができる、「Ｇａｐ」および「Ｂｅｓｔｆｉｔ」等のプログラムを含有する。例えば、ＧＣＧバージョン６．１を参照されたい。ポリペプチド配列は、ＧＣＧバージョン６．１中のプログラムである、デフォルトまたは推奨パラメータを使用したＦＡＳＴＡを使用して比較することもできる。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３）は、問い合わせおよび検索配列の間で最良の重複の領域の整列およびパーセント配列同一性を提供する（Ｐｅａｒｓｏｎ（２０００）、上記参照）。別の好まれるアルゴリズムは、本発明の配列を、異なる生物由来の非常に多くの配列を含有するデータベースと比較する場合、デフォルトパラメータを使用した、コンピュータプログラムＢＬＡＳＴ、特に、ｂｌａｓｔｐまたはｔｂｌａｓｔｎである。例えば、それぞれを本明細書に参照によって組み入れる、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３〜４１０頁およびＡｌｔｓｃｈｕｌら（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９  ４０２頁を参照されたい。
【００８６】
相同性のために比較されるポリペプチド配列の長さは、一般に、少なくとも約１６アミノ酸残基、少なくとも約２０残基、少なくとも約２４残基、少なくとも約２８残基または少なくとも約３５残基となるであろう。非常に多くの異なる生物由来の配列を含有するデータベースを検索する場合、アミノ酸配列を比較することが好ましい。
【００８７】
一部の実施形態では、本発明は、対象の体組成を変更するための方法であって、有効量のＧＤＦ８阻害剤を含む第１の組成物、および有効量のアクチビンＡ阻害剤を含む第２の組成物を対象に投与する工程を含む方法に関する。
【００８８】
一部の実施形態では、本発明は、対象における脂肪量の低下を誘導するための方法であって、有効量のＧＤＦ８阻害剤を含む第１の組成物、および有効量のアクチビンＡ阻害剤を含む第２の組成物を対象に投与する工程を含む方法に関する。
【００８９】
一部の実施形態では、本発明は、対象における筋量の増加を誘導するための方法であって、それを必要とする対象に、有効量のＧＤＦ８阻害剤を含む第１の組成物、および有効量のアクチビンＡ阻害剤を含む第２の組成物を投与する工程を含む方法に関する。
【００９０】
一部の実施形態では、本発明は、対象の体組成を変更するための方法であって、有効量のＧＤＦ８阻害剤、および有効量のアクチビンＡ阻害剤を含む組成物を、対象に投与する工程を含む方法に関する。
【００９１】
一部の実施形態では、本発明は、対象における脂肪量の低下を誘導するための方法であって、有効量のＧＤＦ８阻害剤、および有効量のアクチビンＡ阻害剤を含む組成物を、対象に投与する工程を含む方法に関する。
【００９２】
一部の実施形態では、本発明は、対象における筋量の増加を誘導するための方法であって、それを必要とする対象に、有効量のＧＤＦ８阻害剤、および有効量のアクチビンＡ阻害剤を含む組成物を投与する工程を含む方法に関する。
【００９３】
一部の実施形態では、対象は、ヒト対象である。ヒト対象は、成人ヒト対象であってもよい。対象は、男性または女性対象であってもよい。対象は、健康な対象であってもよい。対象は、望ましくない脂肪量を患う対象であってもよい。対象は、増加した脂肪量、および／または減少した筋肉体積もしくは減少した除脂肪体重によって特徴付けられる疾患および障害を患う、または患うリスクがある対象であってもよい。対象は、閉経後女性対象であってもよい。対象は、４０歳以上、５０歳以上、６０歳以上または７０歳以上の男性対象または女性対象であってもよい。
【００９４】
一部の実施形態では、本発明は、増加した脂肪量、および／または減少した筋肉体積もしくは減少した除脂肪体重によって特徴付けられる疾患および障害を処置または予防するために、ＧＤＦ８阻害剤を含む組成物、およびアクチビンＡ阻害剤を含む組成物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む方法に関する。
【００９５】
本発明に係る一部の実施形態では、対象は、増加した脂肪量に関連し得る、少なくとも１種の疾患または障害を有する。一部の実施形態では、疾患または障害は、肥満、メタボリックシンドローム、栄養障害、高コレステロール、脂質異常症、心血管疾患、蜂巣炎、がん（結腸、食道、腎臓、膵臓、胆嚢、乳房または子宮内膜を含む）、多嚢胞性卵巣症候群、痛風、胆嚢疾患、睡眠時無呼吸、呼吸器障害、喘息、変形性関節症、白内障、うっ血性心不全、肥大心、高血圧／高血圧症、肺塞栓症、リンパ浮腫、胃食道逆流疾患、ヘルニア、慢性腎不全、尿失禁、結合組織疾患および脂肪肝疾患からなる群から選択することができる。別の実施形態では、疾患または障害は、サルコペニアであってもよい。
【００９６】
ＧＤＦ８阻害剤
本発明は、対象における体組成を変更し、脂肪量の低下を誘導し、除脂肪量を増加させるための方法、および対象における増加した脂肪量によって特徴付けられる疾患または障害を処置するための方法であって、有効量のＧＤＦ８阻害剤を含む組成物を対象に投与する工程を含む方法を含む。
【００９７】
「ＧＤＦ８」（「増殖分化因子−８」および「ミオスタチン」とも称される）という用語は、配列番号３４０のアミノ酸配列を有するタンパク質（成熟タンパク質）を意味する。本発明において、ＧＤＦ８特異的結合タンパク質は、ＧＤＦ８に特異的に結合するが、ＧＤＦ３、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、ＢＭＰ１０、ＧＤＦ１１、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、Ｎｏｄａｌ等の他のＡｃｔＲＩＩＢリガンドには結合しない。
【００９８】
本明細書において、「ＧＤＦ８阻害剤」は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏでヒトＧＤＦ８に結合しまたはこれと相互作用し、ＧＤＦ８の正常な生物学的機能に干渉するまたはこれを阻害する、いずれかの薬剤である。ＧＤＦ８阻害剤のカテゴリーの非限定的な例として、小分子ＧＤＦ８アンタゴニスト、ＧＤＦ８発現または活性の核酸に基づく阻害剤（例えば、ｓｉＲＮＡまたはアンチセンス）、ＧＤＦ８と特異的に相互作用するペプチドに基づく分子（例えば、ペプチボディ）、ＧＤＦ８と特異的に相互作用する受容体分子、ＧＤＦ８結合足場分子、ＧＤＦ８に特異的に結合する受容体のリガンド結合部分を含むタンパク質、および抗ＧＤＦ８アプタマーまたはその部分が挙げられる。好まれる実施形態では、本発明の文脈において使用することができるＧＤＦ８阻害剤は、ヒトＧＤＦ８に特異的に結合する、抗ＧＤＦ８抗体またはその抗原結合断片である。抗ＧＤＦ８抗体は、中和および／または遮断抗体を含む。抗ＧＤＦ８中和および／または遮断抗体によって引き起こされる阻害は、適切なアッセイを使用して検出可能である限りにおいて、完全である必要はない。
【００９９】
本明細書において、表現「抗ＧＤＦ８抗体」は、多特異性抗原結合分子（例えば、二特異性抗体）も含み、多特異性抗原結合分子の少なくとも１個の結合ドメイン（例えば、「結合アーム（arm）」）は、ＧＤＦ８に特異的に結合する。
【０１００】
本発明の組成物および方法において使用することができる例示的な抗ＧＤＦ８抗体は、例えば、ＲＥＧＮ１０３３の別名でも知られる、完全ヒト抗ＧＤＦ８抗体Ｈ４Ｈ１６５７Ｎ２を含む（例えば、米国特許第８，８４０，８９４号に表記されている通り、それぞれアミノ酸配列、配列番号３６０および配列番号３６８を有する重および軽鎖可変領域を含む抗ＧＤＦ８抗体）。本発明の組成物および方法において使用することができる他のＧＤＦ８アンタゴニストは、ＵＳ２００６／０２６３３５４および米国特許第７，８０７，１５９号に表記されている通り、抗ＧＤＦ８抗体（例えば、ＡＴＣＣ寄託命名ＰＴＡ−６５７４を有する、例えば、２＿１１２＿１、または例えば、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列、配列番号６２０および６２１を有する、例えば、２＿１１２＿Ｋと命名された抗体）；米国特許第８，９９９，３４３号および米国特許出願公開第２０１３／０２０９４８９号に表記されている通り、抗ＧＤＦ８抗体（例えば、配列番号６２２および６２３のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列を有する、例えば、１２Ａ５−５）；米国特許出願公開第２０１３／０１４２７８８号に表記されている通り、抗ＧＤＦ８抗体（例えば、配列番号６２４および６２５のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列を有する、例えば、１０Ｂ３Ｈ８Ｌ５、ならびに１０Ｂ３Ｈ８Ｌ５−Ｆｃ−ｄｉｓａｂｌｅｄ）；米国特許第８，９４０，８７４号および同第７，２６１，８９３号に表記されている通り、抗ＧＤＦ８抗体（例えば、配列番号６２６および６２７のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列を有する、例えば、スタムルマブ／ＭＹＯ−２９）；米国特許第８，４１５，４５９号に表記されている通り、抗ＧＤＦ８抗体（例えば、配列番号６２８および６２９のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列を有する、例えば、ＲＫ２２／ＰＦ−０６２５６１６）；米国特許第７，７３１，９６１号に表記されている通り、抗ＧＤＦ８抗体（例えば、配列番号６３０のＨＣＶＲアミノ酸配列のＣＤＲを有する、例えば、ＪＡ−１６）；米国特許第８，４９６，９３４号または同第７，８８８，４８６号に表記されている通り、抗ＧＤＦ８抗体（例えば、配列番号６３１および６３２のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列を有する、例えば、ＲＫ３５）、米国特許第８，９９２，９１３号に表記されている通り、抗ＧＤＦ８抗体（例えば、配列番号６３３および６３４のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列を有する、例えば、ＯＧＤ１．０．０）；欧州特許第１７７３０４１（Ｂ１）号に表記されている通り、抗ＧＤＦ８  Ｆａｂ分子、ならびに例えば、米国特許第７，６３５，７６０号および同第８，０６３，１８８号に表記されている通り、抗ＧＤＦ８抗体（例えば、配列番号６３５および６３６のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列を有する、例えば、Ｃ１２、配列番号６３７および６３８のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列を有する、Ｃ１２−Ｎ９３Ｈおよび／または５１０Ｃ２）、米国特許第７，６３２，４９９号に表記されている通り、抗ＧＤＦ８抗体（例えば、配列番号６３９および６４０のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列を有する、例えば、４１Ｃ１Ｅ４／ランドグロズマブ／ＬＹ２４９５６５５）を含む。一部の実施形態では、抗ＧＤＦ８���体は、ランドグロズマブの全長重鎖および全長軽鎖アミノ酸配列、例えば、それぞれ配列番号６４１および６４２を有することができる。一部の実施形態では、抗ＧＤＦ８抗体は、例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ定義により、それぞれ配列番号６４３／６４４／６４５／６４６／６４７／６４８に従って、ランドグロズマブの３個の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）および３個の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）を含むことができる。
【０１０１】
一実施形態では、抗ＧＤＦ８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３６０および３７６からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に同様の配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む。
【０１０２】
別の実施形態では、抗ＧＤＦ８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３２２、３６８および３８４からなる群から選択される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に同様の配列を含む。
【０１０３】
別の実施形態では、抗ＧＤＦ８抗体またはその抗原結合断片は、ＨＣＶＲアミノ酸配列およびＬＣＶＲアミノ酸配列を含み、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ配列ペアは、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、１１４／３２２、３６０／３６８および３７６／３８４からなる群から選択される。
【０１０４】
別の実施形態では、抗ＧＤＦ８抗体またはその抗原結合断片は、ＨＣＶＲアミノ酸配列およびＬＣＶＲアミノ酸配列を含み、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ配列ペアは、（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）：２１−Ｅ５（配列番号３４／４２）；２１−Ｂ９（配列番号１８／２６）；２１−Ｅ９（配列番号９８／１０６）；２１−Ａ２（配列番号２／１０）；２２−Ｄ３（配列番号５０／５８）；２２−Ｅ６（配列番号６６／７４）；２２−Ｇ１０（配列番号８２／９０）；１Ａ２（配列番号２２６／２３４）；２０Ｂ１２（配列番号２７４／２８２）；５８Ｃ８（配列番号２４２／２５０）；１９Ｆ２（配列番号２５８／２６６）；８Ｄ１２−１（配列番号１１４／１２２）；４Ｅ３−７（配列番号１９４／２０２）；９Ｂ１１−１２（配列番号１６２／１７０）；４Ｂ９（配列番号２２６／２３４）；１Ｈ４−５（配列番号２１０／２１８）；９Ｂ４−３（配列番号１７８／１８６）；３Ｅ２−１（配列番号２９０／２９８）；４Ｇ３−２５（配列番号３０６／３１４）；４Ｂ６−６（配列番号１３０／１３８）；Ｈ４Ｈ１６５７Ｎ２（配列番号３６０／３６８）；Ｈ４Ｈ１６６９Ｐ（配列番号３７６／３８４）からなる群から選択される。
【０１０５】
別の実施形態では、抗ＧＤＦ８抗体またはその抗原結合断片は、重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）ドメインおよび軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）ドメインを含み、ＨＣＤＲ３ドメインは、配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、２９６、３１２、３６６および３８２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に同様の配列を有し、ＬＣＤＲ３ドメインは、配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、３０４、３２０、３２８、３７４および３９０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に同様の配列を有する。別の実施形態では、抗ＧＤＦ８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８／１６、２４／３２、４０／４８、５６／６４、７２／８０、８８／９６、１０４／１１２、１２０／１２８、１３６／１４４、１５２／１６０、１６８／１７６、１８４／１９２、２００／２０８、２１６／２２４、２３２／２４０、２４８／２５６、２６４／２７２、２８０／２８８、２９６／３０４、３１２／３２０、１２０／３２８、３６６／３７４および３８２／３９０からなる群から選択されるＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列ペアを含む。
【０１０６】
別の実施形態では、抗ＧＤＦ８抗体またはその抗原結合断片は、重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）およびＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）ドメインならびに軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）およびＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）ドメインを含み、ＨＣＤＲ１ドメインは、配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、３０８、３６２および３７８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に同様の配列を有し；ＨＣＤＲ２ドメインは、配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、３１０、３６４および３８０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に同様の配列を有し；ＬＣＤＲ１ドメインは、配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、３２４、３７０および３８６からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に同様の配列を有し、ＬＣＤＲ２ドメインは、配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、３２６、３７２および３８８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に同様の配列を有する。別の実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３ドメインは、配列番号３６／３８／４０、１１６／１１８／１２０、２２８／２３０／２３２、３６２／３６４／３６６および３７８／３８０／３８２からなる群から選択されるそれぞれのアミノ酸配列組合せを有し；ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３ドメインは、配列番号４４／４６／４８、１２４／１２６／１２８、２３６／２３８／２４０、３７０／３７２／３７４および３８６／３８８／３９０からなる群から選択されるそれぞれのアミノ酸配列組合せを有する。
【０１０７】
さらに別の実施形態では、抗ＧＤＦ８抗体またはその抗原結合断片の重および軽鎖ＣＤＲドメイン（ＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３）は、配列番号３６／３８／４０／４４／４６／４８（例えば、２１−Ｅ５）、１１６／１１８／１２０／１２４／１２６／１２８（例えば、８Ｄ１２）、２２８／２３０／２３２／２３６／２３８／２４０（例えば、１Ａ２）、３６２／３６４／３６６／３７０／３７２／３７４（例えば、Ｈ４Ｈ１６５７Ｎ２）および３７８／３８０／３８２／３８６／３８８／３９０（例えば、Ｈ４Ｈ１６６９Ｐ）からなる群から選択されるアミノ酸配列組合せを有する。
【０１０８】
別の実施形態では、抗ＧＤＦ８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、１１４／３２２、３６０／３６８および３７６／３８４からなる群から選択される重および軽鎖可変領域（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）アミノ酸配列ペア内に含有される重および軽鎖ＣＤＲドメインを含む。
【０１０９】
ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを同定するための方法および技法は、当技術分野でよく知られており、本明細書に開示されている指定のＨＣＶＲおよび／またはＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲの同定に使用することができる。ＣＤＲの境界の同定に使用することができる例示的な慣例は、例えば、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義およびＡｂＭ定義を含む。一般用語において、Ｋａｂａｔ定義は、配列可変性に基づき、Ｃｈｏｔｈｉａ定義は、構造的ループ領域の場所に基づき、ＡｂＭ定義は、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａアプローチの間の折衷である。例えば、Ｋａｂａｔ、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９９１）；Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７〜９４８頁（１９９７）；およびＭａｒｔｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：９２６８〜９２７２頁（１９８９）を参照されたい。抗体内のＣＤＲ配列を同定するために、公開データベースも利用できる。
【０１１０】
一実施形態では、抗ＧＤＦ８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１、１７、３３、４９、６５、８１、９７、１１３、１２９、１４５、１６１、１７７、１９３、２０９、２２５、２４１、２５７、２７３、２８９、３０５、３５９および３７５からなる群から選択される核酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に同様の配列によってコードされるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む。
【０１１１】
別の実施形態では、抗ＧＤＦ８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号９、２５、４１、５７、７３、８９、１０５、１２１、１３７、１５３、１６９、１８５、２０１、２１７、２３３、２４９、２６５、２８１、２９７、３１３、３２１、３６７および３８３からなる群から選択される核酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に同様の配列によってコードされるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む。
【０１１２】
別の実施形態では、抗ＧＤＦ８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１／９、１７／２５、３３／４１、４９／５７、６５／７３、８１／８９、９７／１０５、１１３／１２１、１２９／１３７、１４５／１５３、１６１／１６９、１７７／１８５、１９３／２０１、２０９／２１７、２２５／２３３、２４１／２４９、２５７／２６５、２７３／２８１、２８９／２９７、３０５／３１３、１１３／３２１、３５９／３６７および３７５／３８３からなる群から選択される核酸分子ペアによってコードされるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ／ＬＣＶＲペアを含む。
【０１１３】
別の実施形態では、抗ＧＤＦ８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７、２３、３９、５５、７１、８７、１０３、１１９、１３５、１５１、１６７、１８３、１９９、２１５、２３１、２４７、２６３、２７９、２９５、３１１、３６５および３８１からなる群から選択される核酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に同様の配列によってコードされるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号１５、３１、４７、６３、７９、９５、１１１、１２７、１４３、１５９、１７５、１９１、２０７、２２３、２３９、２５５、２７１、２８７、３０３、３１９、３２７、３７３および３８９からなる群から選択される核酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に同様の配列によってコードされるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメインを含む。一実施形態では、ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３ドメインペアは、配列番号７／１５、２３／３１、３９／４７、５５／６３、７１／７９、８７／９５、１０３／１１１、１１９／１２７、１３５／１４３、１５１／１５９、１６７／１７５、１８３／１９１、１９９／２０７、２１５／２２３、２３１／２３９、２４７／２５５、２６３／２７１、２７９／２８７、２９５／３０３、３１１／３１９、１１９／３２７、３６５／３７３および３８１／３８９からなる群から選択される核酸配列ペアによってコードされるアミノ酸配列を有する。
【０１１４】
別の実施形態では、抗ＧＤＦ８抗体またはその抗原結合断片は、ＨＣＤＲ１およびＨＣＤＲ２ドメインならびにＬＣＤＲ１およびＬＣＤＲ２ドメインを含み、ＨＣＤＲ１ドメインは、配列番号３、１９、３５、５１、６７、８３、９９、１１５、１３１、１４７、１６３、１７９、１９５、２１１、２２７、２４３、２５９、２７５、２９１、３０７、３６１および３７７からなる群から選択される核酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に同様の配列によってコードされるアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ２ドメインは、配列番号５、２１、３７、５３、６９、８５、１０１、１１７、１３３、１４９、１６５、１８１、１９７、２１３、２２９、２４５、２６１、２７７、２９３、３０９、３６３および３７９からなる群から選択される核酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に同様の配列によってコードされるアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ１ドメインは、配列番号１１、２７、４３、５９、７５、９１、１０７、１２３、１３９、１５５、１７１、１８７、２０３、２１９、２３５、２５１、２６７、２８３、２９９、３１５、３２３、３６９および３８５からなる群から選択される核酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に同様の配列によってコードされるアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ２ドメインは、配列番号１３、２９、４５、６１、７７、９３、１０９、１２５、１４１、１５７、１７３、１８９、２０５、２２１、２３７、２５３、２６９、２８５、３０１、３１７、３２５、３７１および３８７からなる群から選択される核酸配列によってコードされるアミノ酸配列を有する。
【０１１５】
別の実施形態では、抗ＧＤＦ８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３５／３７／３９／４３／４５／４７、１１５／１１７／１１９／１２３／１２５／１２７、２２７／２２９／２３１／２３５／２３７／２３９、３６１／３６３／３６５／３６９／３７１／３７３または３７７／３７９／３８１／３８５／３８７／３８９の核酸配列セットによってコードされるアミノ酸配列組合せを有する重および軽鎖ＣＤＲドメイン（ＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３）を含む。
【０１１６】
好まれる実施形態では、ＧＤＦ８に特異的に結合する抗ＧＤＦ８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３６０を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）のＨＣＤＲ、および配列番号３６８を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＬＣＤＲを含む。別の実施形態では、ＧＤＦ８に特異的に結合する抗ＧＤＦ８抗体または抗原結合断片は、配列番号３６２、配列番号３６４および配列番号３６６を含む３個のＨＣＤＲ、ならびに配列番号３７０、配列番号３７２および配列番号３７４を含む３個のＬＣＤＲを含む。
【０１１７】
別の実施形態では、抗ＧＤＦ８抗体またはその抗原結合断片は、表面プラズモン共鳴アッセイ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標））によって測定される場合に約１ｎＭ以下の親和性（解離定数「ＫＤ」として表現）でＧＤＦ８に結合する、完全にヒトまたはヒト化抗体または抗体断片である。ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、約７００ｐＭ以下；約５００ｐＭ以下；約３２０ｐＭ以下；約１６０ｐＭ以下；約１００ｐＭ以下；約５０ｐＭ以下；約１０ｐＭ以下；または約５ｐＭ以下のＫＤを示す。
【０１１８】
別の実施形態では、抗ＧＤＦ８抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＧＤＦ８に特異的に結合してこれを阻害し、ＧＤＦ８誘導性ルシフェラーゼアッセイによって測定される場合に約１０ｎＭ以下；約５ｎＭ以下；約３ｎＭ以下；約２ｎＭ以下；約１ｎＭ以下；約５００ｐＭ以下；または約２００ｐＭ以下のＩＣ５０を示す、完全にヒトまたはヒト化モノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。
【０１１９】
一実施形態では、抗ＧＤＦ８抗体またはその抗原結合断片は、改変されたグリコシル化パターンを有する。一部の適用では、望ましくないグリコシル化部位を除去するための改変が、有用となり得る、または例えば、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）機能を増加させるために、抗体は、オリゴ糖鎖に存在するフコース部分を欠く（Ｓｈｉｅｌｄら（２００２）ＪＢＣ  ２７７：２６７３３頁）。他の適用では、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を改変するために、ガラクトシル化の改変を為すことができる。
【０１２０】
別の実施形態では、抗ＧＤＦ８抗体またはその抗原結合断片は、ＧＤＦ８への特異的結合に関して、配列番号３６／３８／４０／４４／４６／４８、１１６／１１８／１２０／１２４／１２６／１２８、２２８／２３０／２３２／２３６／２３８／２４０、３６２／３６４／３６６／３７０／３７２／３７４または３７８／３８０／３８２／３８６／３８８／３９０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３ドメイン組合せを含む別の抗体と競合する。別の実施形態では、抗ＧＤＦ８抗体またはその抗原結合断片は、ＧＤＦ８への特異的結合に関して、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、１１４／３２２、３６０／３６８または３７６／３８４のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む別の抗体と競合する。
【０１２１】
別の実施形態では、抗ＧＤＦ８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３６／３８／４０／４４／４６／４８、１１６／１１８／１２０／１２４／１２６／１２８、２２８／２３０／２３２／２３６／２３８／２４０、３６２／３６４／３６６／３７０／３７２／３７４または３７８／３８０／３８２／３８６／３８８／３９０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３ドメイン組合せを含む別の抗体によって認識されるＧＤＦ８におけるエピトープを認識する。別の実施形態では、抗ＧＤＦ８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、１１４／３２２、３６０／３６８または３７６／３８４のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む別の抗体によって認識されるＧＤＦ８におけるエピトープを認識する。
【０１２２】
アクチビンＡ阻害剤
本発明は、対象における体組成を変更する、脂肪量の低下を誘導する、および／または除脂肪量を増加させるための方法、ならびに対象における増加した脂肪量によって特徴付けられる疾患または障害を処置するための方法であって、有効量のアクチビンＡ阻害剤を含む組成物を対象に投与する工程を含む方法を含む。
【０１２３】
本明細書において、「アクチビンＡ阻害剤」は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏでヒトアクチビンＡに結合しまたはこれと相互作用し、アクチビンＡの正常な生物学的機能に干渉するまたはこれを阻害する、いずれかの薬剤である。アクチビンＡ阻害剤のカテゴリーの非限定的な例として、小分子アクチビンＡアンタゴニスト、アクチビンＡ発現または活性の核酸に基づく阻害剤（例えば、ｓｉＲＮＡまたはアンチセンス）、アクチビンＡと特異的に相互作用するペプチドに基づく分子（例えば、ペプチボディ）、アクチビンＡと特異的に相互作用する受容体分子、アクチビンＡ結合足場分子、アクチビンＡに特異的に結合する受容体のリガンド結合部分を含むタンパク質、および抗アクチビンＡアプタマーまたはその部分が挙げられる。好まれる実施形態では、本発明の文脈において使用することができるアクチビンＡ阻害剤は、ヒトアクチビンＡに特異的に結合する、抗アクチビンＡ抗体またはその抗原結合断片である。抗アクチビンＡ抗体は、中和および／または遮断抗体を含む。抗アクチビンＡ中和および／または遮断抗体によって引き起こされる阻害は、適切なアッセイを使用して検出可能である限りにおいて、完全である必要はない。
【０１２４】
アクチビンは、βＡおよび／またはβＢサブユニットを含むホモおよびヘテロ二量体分子である。βＡサブユニットは、配列番号６１７のアミノ酸配列を有し、βＢサブユニットは、配列番号６１９のアミノ酸配列を有する。アクチビンＡは、２個のβＡサブユニットのホモ二量体であり；アクチビンＢは、２個のβＢサブユニットのホモ二量体であり；アクチビンＡＢは、１個のβＡサブユニットおよび１個のβＢサブユニットのヘテロ二量体である。抗アクチビンＡ抗体またはその抗原結合断片は、βＡサブユニットに特異的に結合する。βＡサブユニットは、アクチビンＡおよびアクチビンＡＢ分子の両方に見出されるため、「抗アクチビンＡ抗体またはその抗原結合断片」は、アクチビンＡと共にアクチビンＡＢ（それとβＡサブユニットとの相互作用のため）に特異的に結合することができる。したがって、抗アクチビンＡ抗体またはその抗原結合断片は、アクチビンＡ、またはアクチビンＡおよびアクチビンＡＢに特異的に結合するが、アクチビンＢ、ＧＤＦ３、ＧＤＦ８、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、ＢＭＰ７、ＢＭＰ９、ＢＭＰ１０、ＧＤＦ１１、Ｎｏｄａｌ等、他のＡｃｔＲＩＩＢリガンドには結合しない。
【０１２５】
一部の実施形態では、米国特許第９，７１８，８８１号に表記されている通り、抗アクチビンＡ抗体またはその抗原結合断片が用いられる。本発明の組成物および方法において使用することができる例示的な抗アクチビンＡ抗体は、例えば、ＲＥＧＮ２４７７の別名でも知られる、完全ヒト抗アクチビン抗体Ｈ４Ｈ１０４４６Ｐ２（例えば、米国特許第９，７１８，８８１号に表記されている通り、それぞれアミノ酸配列、配列番号１６２および配列番号１４６を有する重および軽鎖可変領域を含む抗アクチビンＡ抗体）を含む。
【０１２６】
表２は、本発明の組成物および方法において使用することができる、選択された抗アクチビンＡ抗体の重および軽鎖可変領域アミノ酸配列ペア、ならびにそれらの対応する抗体識別子について表記する。対応する核酸配列識別子は、表３に表記されている。
【０１２７】
【表１】
2021515003.tif 000002
【０１２８】
【表２】
2021515003.tif 000003
【０１２９】
一実施形態では、抗アクチビンＡ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３９３、４０９、４２５、４４１、４５７、４７３、４８９、４９７、５０５、５１３、５２１、５２９、５４５、５５３、５６１、５６９、５７７、５８５および５９３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に同様の配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む。
【０１３０】
別の実施形態では、抗アクチビンＡ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４０１、４１７、４３３、４４９、４６５、４８１、５３７および６０１からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に同様の配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む。
【０１３１】
別の実施形態では、抗アクチビンＡ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３９３／４０１、４０９／４１７、４２５／４３３、４４１／４４９、４５７／４６５、４７３／４８１、４８９／４８１、４９７／４８１、５０５／４８１、５１３／４８１、５２１／４８１、５２９／５３７、５４５／５３７、５５３／５３７、５６１／５３７、５６９／５３７、５７７／５３７、５８５／５３７および５９３／６０１からなる群から選択されるＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）アミノ酸（amino）配列ペアを含む。
【０１３２】
別の実施形態では、抗アクチビンＡ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３９９、４１５、４３１、４４７、４６３、４７９、４９５、５０３、５１１、５１９、５２７、５３５、５５１、５５９、５６７、５７５、５８３、５９１および５９９からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に同様の配列を有する重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）ドメイン；ならびに配列番号４０７、４２３、４３９、４５５、４７１、４８７、５４３および６０７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に同様の配列を有する軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）ドメインを含む。
【０１３３】
別の実施形態では、抗アクチビンＡ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３９９／４０７、４１５／４２３、４３１／４３９、４４７／４５５、４６３／４７１、４７９／４８７、４９５／４８７、５０３／４８７、５１１／４８７、５１９／４８７、５２７／４８７、５３５／５４３、５５１／５４３、５５９／５４３、５６７／５４３、５７５／５４３、５８３／５４３、５９１／５４３および５９９／６０７からなる群から選択されるＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列ペアを含む。
【０１３４】
別の実施形態では、抗アクチビンＡ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３９５、４１１、４２７、４４３、４５９、４７５、４９１、４９９、５０７、５１５、５２３、５３１、５４７、５５５、５６３、５７１、５７９、５８７および５９５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に同様の配列を有する重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）ドメイン；配列番号３９７、４１３、４２９、４４５、４６１、４７７、４９３、５０１、５０９、５１７、５２５、５３３、５４９、５５７、５６５、５７３、５８１、５８９および５９７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に同様の配列を有する重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）ドメイン；配列番号４０３、４１９、４３５、４５１、４６７、４８３、５３９および６０３からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に同様の配列を有する軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）ドメイン；ならびに配列番号４０５、４２１、４３７、４５３、４６９、４８５、５４１および６０５からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に同様の配列を有する軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）ドメインを含む。
【０１３５】
別の実施形態では、抗アクチビンＡ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３９５−３９７−８−４０３−４０５−４０７；４１１−４１３−４１５−４１９−４２１−４２３；３６−４２９−４３１−４３５−４３７−４３９；４４３−４４５−４４７−４５１−４５３−４５５；４５９−４６１−４６３−４６７−４６９−４７１；４７５−４７７−４７９−４８３−４８５−４８７；４９１−４９３−４９５−４８３−４８５−４８７；４９９−５０１−５０３−４８３−４８５−４８７；５０７−５０９−５１１−４８３−４８５−４８７；５１５−５１７−５１９−４８３−４８５−４８７；５２３−５２５−５２７−４８３−４８５−４８７；５３１−５３３−５３５−５３９−５４１−５４３；５４７−５４９−５５１−５３９−５４１−５４３；５５５−５５７−５５９−５３９−５４１−５４３（Ｈ４Ｈ１０４４６Ｐ２）；５６３−５６５−５６７−５３９−５４１−５４３；５７１−５７３−５７５−５３９−５４１−５４３；５７９−５８１−５８３−５３９−５４１−５４３；５８７−５８９−５９１−５３９−５４１−５４３；および５９５−５９７−５９９−６０３−６０５−６０７からなる群から選択されるアミノ酸配列をそれぞれ有する、ＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３ドメインを含む。
【０１３６】
別の実施形態では、抗アクチビンＡ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３９３／４０１、４０９／４１７、４２５／４３３、４４１／４４９、４５７／４６５、４７３／４８１、４８９／４８１、４９７／４８１、５０５／４８１、５１３／４８１、５２１／４８１、５２９／５３７、５４５／５３７、５５３／５３７、５６１／５３７、５６９／５３７、５７７／５３７、５８５／５３７および５９３／６０１からなる群から選択される重および軽鎖可変領域（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）配列ペア内に含有される重および軽鎖ＣＤＲドメインを含む。
【０１３７】
一実施形態では、抗アクチビンＡ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３９２、４０８、４２４、４４０、４５６、４７２、４８８、４９６、５０４、５１２、５２０、５２８、５４４、５５２、５６０、５６８、５７６、５８４および５９２からなる群から選択される核酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に同様の配列によってコードされるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む。
【０１３８】
別の実施形態では、抗アクチビンＡ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４００、４１６、４３２、４４８、４６４、４８０、５３６および６００からなる群から選択される核酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に同様の配列によってコードされるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む。
【０１３９】
別の実施形態では、抗アクチビンＡ抗体またはその抗原結合断片は、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲを含み、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲペアは、配列番号３９２／４００、４０８／４１６、４２４／４３２、４４０／４４８、４５６／４６４、４７２／４８０、４８８／４８０、４９６／４８０、５０４／４８０、５１２／４８０、５２０／４８０、５２８／５３６、５４４／５３６、５５２／５３６、５６０／５３６、５６８／５３６、５７６／５３６、５８４／５３６および５９２／６００からなる群から選択される核酸配列ペアによってコードされるアミノ酸配列を有する。
【０１４０】
別の実施形態では、抗アクチビンＡ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３９８、４１４、４３０、４４６、４６２、４７８、４９８、５０２、５１０、５１８、５２６、５３４、５５０、５５８、５６６、５７４、５８２、５９０および５９８からなる群から選択される核酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に同様の配列によってコードされるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号４０６、４２２、４３５、４５４、４７０、４８６、５４２および６０６からなる群から選択される核酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に同様の配列によってコードされるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメインを含む。一実施形態では、ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３ドメインセットは、配列番号３９８／４０６、４１４／４２２、４３０／４３８、４４６／４５４、４６２／４７０、４７８／４８６、４９４／４８６、５０２／４８６、５１０／４８６、５１８／４８６、５２６／４８６、５３４／５４２、５５０／５４２、５５８／５４２、５６６／５４２、５７４／５４２、５８２／５４２、５９０／５４２および５９８／６０６からなる群から選択される核酸配列ペアによってコードされるアミノ酸配列を有する。
【０１４１】
別の実施形態では、抗アクチビンＡ抗体またはその抗原結合断片は、ＨＣＤＲ１およびＨＣＤＲ２ドメインならびにＬＣＤＲ１およびＬＣＤＲ２ドメインを含み、ＨＣＤＲ１ドメインは、配列番号３９４、４１０、４２６、４４２、４５８、４７４、４９０、４９８、５０６、５１４、５２２、５３０、５４６、５５４、５６２、５７０、５７８、５８６および５９４からなる群から選択される核酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に同様の配列によってコードされるアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ２ドメインは、配列番号３９６、４１２、４２８、４４４、４６０、４７６、４９２、５００、５０８、５１６、５２４、５３２、５４８、５５６、５６４、５７２、５８０、５８８および５９６からなる群から選択される核酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に同様の配列によってコードされるアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ１ドメインは、配列番号４０２、４１８、４３４、４５０、４６６、４８２、５３８および６０２からなる群から選択される核酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に同様の配列によってコードされるアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ２ドメインは、配列番号４０４、４２０、４３６、４５２、４６８、４８４、５４０および６０４からなる群から選択される核酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に同様の配列によってコードされるアミノ酸配列を有する。
【０１４２】
別の実施形態では、抗アクチビンＡ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３９４／３９６／３９８／４０２／４０４／４０６、４１０／４１２／４１４／４１８／４２０／４２２、４２６／４２８／４３０／４３４／４３６／４３８、４４２／４４４／４４６／４５０／４５２／４５４、４５８／４６０／４６２／４６６／４６８／４７０、４７４／４７６／４７８／４８２／４８４／４８６、４９０／４９２／４９４／４８２／４８４／４８６、４９８／５００／５０２／４８２／４８４／４８６、５０６／５０８／５１０／４８２／４８４／４８６、５１４／５１６／５１８／４８２／４８４／４８６、５２２／５２４／５２６／４８２／４８４／４８６、５３０／５３２／５３４／５３８／５４０／５４２、５４６／５４８／５５０／５３８／５４０／５４２、５５４／５５６／５５８／５３８／５４０／５４２、５６２／５６４／５６６／５３８／５４０／５４２、５７０／５７２／５７４／５３８／５４０／５４２、５７８／５８０／５８２／５３８／５４０／５４２、５８６／５８８／５９０／５３８／５４０／５４２および５９４／５９６／５９８／６０２／６０４／６０６からなる群から選択される核酸配列セットによってコードされるアミノ酸配列を有する重および軽鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）ドメインを含む。
【０１４３】
一実施形態では、抗アクチビンＡ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５５３／５３７のＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）アミノ酸（amino）配列ペアを含み、抗ＧＤＦ８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３６０／３６８のＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）アミノ酸（amino）配列ペアを含む。
【０１４４】
別の実施形態では、抗アクチビンＡ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５５５−５５７−５５９−５３９−５４１−５４３（Ｈ４Ｈ１０４４６Ｐ２）のアミノ酸配列をそれぞれ有する、ＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３ドメインを含み、抗ＧＤＦ８抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３６２／３６４／３６６／３７０／３７２／３７４（例えば、Ｈ４Ｈ１６５７Ｎ２）のアミノ酸配列をそれぞれ有する、ＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３ドメインを含む。
【０１４５】
別の実施形態では、抗アクチビンＡ抗体またはその抗原結合断片は、改変されたグリコシル化パターンを有する。一部の適用では、望ましくないグリコシル化部位を除去するための改変が、有用となり得る、または例えば、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）機能を増加させるために、抗体は、オリゴ糖鎖に存在するフコース部分を欠く（Ｓｈｉｅｌｄら（２００２）ＪＢＣ  ２７７：２６７３３頁）。他の適用では、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を改変するために、ガラクトシル化の改変を為すことができる。
【０１４６】
本明細書に記載されている完全ヒト抗アクチビンＡおよび／または抗ＧＤＦ８抗体は、対応する生殖系列配列と比較して、重および軽鎖可変ドメインのフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域に１個またはそれ以上のアミノ酸置換、挿入および／または欠失を含むことができる。斯かる突然変異は、本明細書に開示されているアミノ酸配列を、例えば、公開抗体配列データベースから入手できる生殖系列配列と比較することにより、容易に確かめることができる。本発明の組成物および方法は、追加的な実施形態では、本明細書に開示されているアミノ酸配列のいずれかに由来する抗体およびその抗原結合断片を使用し、１個またはそれ以上のフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内の１個またはそれ以上のアミノ酸は、対応する生殖系列残基（複数可）へと、または対応する生殖系列残基（複数可）の保存的アミノ酸置換（天然または非天然）へと逆突然変異されている（斯かる配列変化は、「生殖系列逆突然変異」と本明細書で称される）。当業者であれば、本明細書に記載されている重および軽鎖可変領域配列から開始して、１個もしくはそれ以上の個々の生殖系列逆突然変異またはそれらの組合せを含む多数の抗体および抗原結合断片を容易に産生することができる。ある特定の実施形態では、ＶＨおよび／またはＶＬドメイン内のフレームワークおよび／またはＣＤＲ残基の全てが、生殖系列配列に戻るように突然変異される。他の実施形態では、ある特定の残基のみ、例えば、ＦＲ１の最初の８アミノ酸内もしくはＦＲ４の最後の８アミノ酸内に見出される突然変異した残基のみ、またはＣＤＲ１、ＣＤＲ２もしくはＣＤＲ３内に見出される突然変異した残基のみが、生殖系列配列に戻るように突然変異される。さらに、本発明の組成物および方法において使用される抗体および抗原結合断片は、フレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内に２個以上の生殖系列逆突然変異のいずれかの組合せを含有することができる、すなわち、ある特定の個々の残基が、生殖系列配列に戻るように突然変異される一方で、生殖系列配列とは異なるある特定の他の残基は維持される。ひとたび得られると、１個またはそれ以上の生殖系列逆突然変異を含有する抗体および抗原結合断片は、改善された結合特異性、増加された結合親和性、改善または増強されたアンタゴニスト性またはアゴニスト性生物学的特性（場合によっては）、低下された免疫原性等、１種またはそれ以上の所望の特性に関して容易に検査することができる。この一般様式で得られる抗体および抗原結合断片は、本発明の内に包含される。
【０１４７】
本発明の組成物および方法は、追加的な実施形態では、１個またはそれ以上の保存的置換を有する本明細書に記載されているＨＣＶＲ、ＬＣＶＲおよび／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかのバリアントを含む、抗ＧＤＦ８抗体および／または抗アクチビンＡ抗体（またはそれらの抗原結合断片）を使用する。例えば、本発明の組成物および方法において使用される抗ＧＤＦ８抗体および／または抗アクチビンＡ抗体は、一部の実施形態では、本明細書に記載されているＨＣＶＲ、ＬＣＶＲおよび／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかと比べて、例えば、１０個以下、８個以下、６個以下、４個以下等の保存的アミノ酸置換を有するＨＣＶＲ、ＬＣＶＲおよび／またはＣＤＲアミノ酸配列を有する。
【０１４８】
二特異性抗体
二特異性抗体（ｂｓＡｂ）は、２種の抗体の特異性を組み合わせ、異なる抗原またはエピトープに共に結合する。２種以上の抗原認識エレメントが、単一抗体となるように操作される。本発明の方法の一実施形態では、組成物は、ＧＤＦ８特異的結合ドメインおよびアクチビンＡ特異的結合ドメインを含む抗体を含む。（抗原）「特異的結合ドメイン」という用語は、本明細書において、（ｉ）抗体分子の抗原結合断片、（ｉｉ）特定の抗原と特異的に相互作用するペプチド（例えば、ペプチボディ）、および／または（ｉｉｉ）特定の抗原に特異的に結合する受容体のリガンド結合部分を含むまたはこれからなるポリペプチドを含む。例えば、ＧＤＦ８に特異的に結合する第１の重鎖可変領域／軽鎖可変領域（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）ペアを含む一方のアームと、アクチビンＡに特異的に結合する第２のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲペアを含む別のアームとを有する二特異性抗体が含まれる。
【０１４９】
二特異性抗体は、化学的架橋、ハイブリッドハイブリドーマ／クアドローマ、ノブイントゥホール（knobs into holes）、ＣｒｏｓｓＭａｂ、デュアル可変ドメイン免疫グロブリン、組換え操作（タンデム単鎖可変断片／ダイアボディ）およびドックアンドロック（dock and lock）を含む、知られている方法に従って調製することができる。本発明の文脈において使用することができる他の例示的な二特異性フォーマットは、例えば、ＩｇＧ−ｓｃＦｖ融合体、デュアル可変ドメイン（ＤＶＤ）−Ｉｇ、共通軽鎖、ＣｒｏｓｓＦａｂ、（ＳＥＥＤ）ｂｏｄｙ、ロイシンジッパー、Ｄｕｏｂｏｄｙ、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、デュアル作用Ｆａｂ（ＤＡＦ）−ＩｇＧ、およびＭａｂ２二特異性フォーマットを限定することなく含む（例えば、前述のフォーマットの概説のため、Ｋｌｅｉｎら、ｍＡｂｓ  ４：６、１〜１１頁（２０１２）およびその中に引用されている参考文献を参照）。二特異性抗体は、ペプチド／核酸コンジュゲーションを使用して構築することもでき、例えば、直交性の化学的反応性を有する非天然アミノ酸が使用されて、部位特異的抗体−オリゴヌクレオチドコンジュゲートを生成し、次いでこれが自己集合して、定義された組成、結合価および幾何学を有する多量体の複合体となる（例えば、Ｋａｚａｎｅら、Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ．１３５（１）：３４０〜３４６頁（２０１３）を参照）。
【０１５０】
特異的結合
「特異的に結合する」等の用語は、本明細書において、抗原特異的結合タンパク質または抗原特異的結合ドメインが、５００ｐＭ以下の解離定数（ＫＤ）によって特徴付けされる、特定の抗原と複合体を形成し、通常の試験条件下で他の無関係抗原とは結合しないことを意味する。「無関係抗原」は、互いに９５％未満のアミノ酸同一性を有するタンパク質、ペプチドまたはポリペプチドである。２種の分子が、互いに特異的に結合するかどうかを決定するための方法は、当技術分野でよく知られており、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴等を含む。例えば、本発明の文脈において使用されている場合、抗原特異的結合タンパク質または抗原特異的結合ドメインは、表面プラズモン共鳴アッセイにおいて測定される場合に、約５００ｐＭ未満、約４００ｐＭ未満、約３００ｐＭ未満、約２００ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、約９０ｐＭ未満、約８０ｐＭ未満、約７０ｐＭ未満、約６０ｐＭ未満、約５０ｐＭ未満、約４０ｐＭ未満、約３０ｐＭ未満、約２０ｐＭ未満、約１０ｐＭ未満、約５ｐＭ未満、約４ｐＭ未満、約２ｐＭ未満、約１ｐＭ未満、約０．５ｐＭ未満、約０．２ｐＭ未満、約０．１ｐＭ未満または約０．０５ｐＭ未満のＫＤで、特定の抗原（例えば、ＧＤＦ８、アクチビンＡ）またはその部分に結合する抗体またはその抗原結合断片を含む。
【０１５１】
（抗原の）抗体結合は、親和性の尺度である、ＫＤを単位として定量化することができる。ＫＤ値が低いほど、抗体の結合親和性は高くなる。「ＫＤ」という用語は、本明細書において、特定の抗体−抗原相互作用の平衡解離定数を指すことを意図する。表面プラズモン共鳴を使用して、リガンド結合、例えば、抗体−抗原相互作用を測定することができる。
【０１５２】
「表面プラズモン共鳴」という用語は、本明細書において、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）システム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、ＳｗｅｄｅｎおよびＰｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）を使用した、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変更の検出により、リアルタイム生体分子特異的相互作用の解析を可能にする光学現象を指す。
【０１５３】
「エピトープ」という用語は、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体に特異的に結合することができる、いずれかの決定基、好ましくは、ポリペプチド決定基を含む。ある特定の実施形態では、エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基またはスルホニル基等、分子の化学的に活性がある表面グループ分けを含み、ある特定の実施形態では、特異的な三次元構造的特徴および／または特異的な電荷特徴を有することができる。エピトープは、抗体によって結合される抗原の領域である。ある特定の実施形態では、抗体は、タンパク質および／または巨大分子の複合混合物中のその標的抗原を優先的に認識する場合、抗原に特異的に結合すると言われる。例えば、ＫＤが、１０−８Ｍ以下、１０−９Ｍ以下または１０−１０Ｍ以下である場合、抗体は、抗原に特異的に結合すると言われる。
【０１５４】
ヒト抗体の調製
完全にヒトモノクローナル抗体を含むモノクローナル抗体を生成するための方法は、当技術分野で知られている。いずれの斯かる知られている方法を本発明の文脈において使用して、ＧＤＦ８および／またはアクチビンＡに特異的に結合するヒト抗体を作製することもできる。
【０１５５】
ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（商標）技術またはモノクローナル抗体を生成するための他のいずれかの知られている方法を使用して、ヒト可変領域およびマウス定常領域を有する、ＧＤＦ８および／またはアクチビンＡに対する高親和性キメラ抗体が最初に単離される。後述する実験セクションの通り、抗体は、親和性、選択性、エピトープ等を含む望ましい特徴に関して特徴付けされ、選択される。マウス定常領域は、所望のヒト定常領域に置き換えられて、本発明の完全にヒト抗体、例えば野生型のまたは改変されたＩｇＧ１またはＩｇＧ４を生成する。選択される定常領域は、特異的な用途に応じて変動し得るが、高親和性抗原結合および標的特異性特徴は、可変領域に存する。
【０１５６】
一般に、本発明の方法において使用される抗体は、非常に高い親和性を保有し、典型的には、固相に固定化されたまたは溶液相中の抗原への結合によって測定された場合に、約１０−１２〜約１０−９ＭのＫＤを保有する。
【０１５７】
医薬組成物および投与方法
本発明は、対象の体組成を変更するための方法を含む。本明細書において、語句「体組成を変更する」は、対象における除脂肪量、脂肪量および／または骨量のうち１種またはそれ以上の変化を指す。一部の実施形態では、対象における体組成は、有効量のＧＤＦ８阻害剤およびアクチビンＡ阻害剤を対象に投与することにより変更することができる。除脂肪量は、例えば、大腿筋肉体積、体肢除脂肪体重または総除脂肪量等であってもよい。一部の態様では、大腿筋肉体積は、筋肉内脂肪組織および大血管を除外した大腿筋肉組織体積を指すことができる。一部の態様では、大腿筋肉体積は、筋肉内脂肪組織および大血管を含む大腿筋肉組織体積を指すことができる。一部の態様では、体肢除脂肪体重は、例えば、ａＬＢＭ方程式によって計算することができる。一部の態様では、体肢除脂肪量は、腕および脚の除脂肪量の和によって計算することができる。脂肪量は、例えば、総脂肪量、アンドロイド脂肪量、筋肉内および筋肉周囲の脂肪組織（ＩＭＡＴ）の和、皮下脂肪組織体積、腕および脚の脂肪量の和、大腿筋肉内脂肪組織等であってもよい。骨量は、例えば、総骨塩密度（ＢＭＤ）質量、総骨塩量（ＢＭＣ）質量等であってもよい。一部の実施形態では、体組成の変更は、筋量の増加および／または脂肪量の低下を含む。一部の実施形態では、体組成の変更は、筋量の増加および脂肪量の低下を共に含む。一部の実施形態では、体組成の変更は、骨量が低下せず、筋量の増加および脂肪量の低下を共に含む。一部の実施形態では、体組成の変更は、骨塩含量の増加を含む。一部の実施形態では、体組成の変更は、総脂肪量、アンドロイド脂肪量および／または皮下脂肪量の減少を含む。一部の実施形態では、体組成の変更は、大腿筋肉内脂肪組織体積が低下せず、総脂肪量、アンドロイド脂肪量および／または皮下脂肪量の減少を含む。
【０１５８】
本発明は、対象における体組成を変更する、例えば、脂肪量の低下を誘導するための方法、および増加した脂肪量によって特徴付けられる疾患または障害を処置するための方法であって、有効量のＧＤＦ８阻害剤を含む第１の組成物、および有効量のアクチビンＡ阻害剤を含む第２の組成物を対象に投与する工程を含む方法を含む。第１および第２の組成物は、対象に同時にまたは逐次に投与することができる。第１および第２の組成物は、投与前に組み合わされて第３の組成物にすることもできる。よって、ある特定の実施形態では、ＧＤＦ８阻害剤およびアクチビンＡ阻害剤の両方を含む組成物を、対象に投与することができる。斯かる組成物中のＧＤＦ８阻害剤は、例えば、抗ＧＤＦ８抗体であってもよい。斯かる組成物中のアクチビンＡ阻害剤は、例えば、抗アクチビンＡ抗体であってもよい。
【０１５９】
本発明の医薬組成物は、適した担体、賦形剤、および適した移入、送達、耐性等をもたらす他の薬剤と共に製剤化される。数多くの適切な製剤は、全ての薬剤師に知られている処方集に見出すことができる：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ。このような製剤は、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、脂質（カチオン性またはアニオン性）含有小胞（ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）等）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油および油中水型エマルション、エマルションカーボワックス（carbowax）（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、ならびにカーボワックスを含有する半固体混合物を含む。製剤中の活性成分が、製剤によって不活性化されず、製剤が、投与経路と生理学的に適合性であり許容できることを条件として、前述の混合物のいずれも、本発明に従った処置および治療において適切となり得る。Ｐｏｗｅｌｌら「Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」ＰＤＡ（１９９８）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  Ｔｅｃｈｎｏｌ  ５２：２３８〜３１１頁も参照されたい。
【０１６０】
様々な送達系が知られており、本発明の医薬組成物の投与に使用することができ、例えば、リポソーム、微小粒子、マイクロカプセル中の被包、突然変異体ウイルスを発現することができる組換え細胞、受容体媒介性エンドサイトーシスが挙げられる（例えば、Ｗｕら、１９８７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９〜４４３２頁を参照）。投与方法として、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外および経口経路が挙げられるがこれらに限定されない。組成物は、いずれか簡便な経路によって、例えば、注入またはボーラス注射によって、上皮または皮膚粘膜裏層（例えば、口腔粘膜、直腸および腸管粘膜等）を介した吸収によって投与することができ、他の生物学的に活性な薬剤と共に投与することができる。
【０１６１】
本発明の医薬組成物は、標準の針およびシリンジを用いて皮下または静脈内に送達することができる。加えて、皮下送達に関して、ペン型送達デバイスは、容易に、本発明の医薬組成物の送達における用途を有する。斯かるペン型送達デバイスは、再利用可能または使い捨てであってもよい。再利用可能なペン型送達デバイスは、一般に、医薬組成物を含有する交換可能なカートリッジを利用する。カートリッジ内の医薬組成物が全て投与されて、カートリッジが空になったら、空カートリッジは、容易に廃棄し、医薬組成物を含有する新たなカートリッジに置き換えることができる。次いで、ペン型送達デバイスを再利用することができる。使い捨てペン型送達デバイスには、交換可能なカートリッジは存在しない。むしろ、使い捨てペン型送達デバイスは、デバイス内のリザーバーに保持された医薬組成物が予め充填された状態である。医薬組成物が使われてリザーバーが空になったら、デバイス全体が廃棄される。
【０１６２】
多数の再利用可能なペンおよびオートインジェクター型送達デバイスが、本発明の医薬組成物の皮下送達における用途を有する。例として、ほんの数例を挙げると、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ  Ｍｕｍｆｏｒｄ、Ｉｎｃ．、Ｗｏｏｄｓｔｏｃｋ、ＵＫ）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ペン（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｂｅｒｇｄｏｒｆ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＨＵＭＡＬＯＧ  ＭＩＸ  ７５／２５（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＩＮ  ７０／３０（商標）ペン（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏ．、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩ（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＮＯＶＯＰＥＮ  ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＢＤ（商標）ペン（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ  ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ  ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）、ならびにＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ、Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）が挙げられるがこれらに限定されない。本発明の医薬組成物の皮下送達における用途を有する使い捨てペン型送達デバイスの例として、ほんの数例を挙げると、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）、およびＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫ（商標）オートインジェクター（Ａｍｇｅｎ、Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ、ＣＡ）、ＰＥＮＬＥＴ（商標）（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ、Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ、Ｌ．Ｐ．）、およびＨＵＭＩＲＡ（商標）ペン（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｓ、Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ  ＩＬ）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１６３】
ある特定の状況において、本発明の医薬組成物は、放出制御系において送達することができる。一実施形態では、ポンプを使用することができる（Ｌａｎｇｅｒ、上記参照；Ｓｅｆｔｏｎ、１９８７、ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１頁を参照）。別の実施形態では、ポリマー材料を使用することができる；Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ、Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ（編）、１９７４、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．、Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，  Ｆｌｏｒｉｄａを参照されたい。さらに別の実施形態では、放出制御系は、組成物の標的の近くに設置することができるため、全身性用量のごく一部を要求する（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ、１９８４、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ内、上記参照、２巻、１１５〜１３８頁を参照）。他の放出制御系は、Ｌａｎｇｅｒ、１９９０、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７〜１５３３頁による概説に記述されている。
【０１６４】
注射用調製物は、静脈内、皮下、皮内および筋肉内注射、点滴注入等のための剤形を含むことができる。このような注射用調製物は、知られている方法によって調製することができる。例えば、注射用調製物は、例えば、上に記載されている抗体またはその塩を、注射のために従来使用されている無菌水性培地または油性培地に溶解、懸濁または乳化することにより調製することができる。注射のための水性培地として、例えば、アルコール（例えば、エタノール）、多価アルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性物質［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ−５０（水素化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加物）］等の適切な可溶化剤と組み合わせて使用することができる、グルコースおよび他の補助的薬剤を含有する生理食塩水、等張性溶液等が存在する。油性培地として、例えば、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコール等の可溶化剤と組み合わせて使用することができる、ゴマ油、ダイズ油等が用いられる。このように調製された注射剤は、好ましくは、適切なアンプル内に充填される。
【０１６５】
有利には、上に記載されている経口または非経口的使用のための医薬組成物は、活性成分の用量適合に適している単位用量の剤形へと調製される。単位用量の斯かる剤形は、例えば、錠剤、丸剤、カプセル、注射（アンプル）、坐剤等を含む。
【０１６６】
投薬量
対象に投与することができる活性成分（例えば、抗ＧＤＦ８抗体および／または抗アクチビンＡ抗体）の量は、一般に、治療有効量である。「有効量」という用語は、特定の記述されている目的の達成をもたらす、活性成分、例えば、抗体または抗体の抗原結合断片の濃度または量である。「有効量」という用語は、「治療有効量」という用語と互換的に使用されており、記述されている治療効果の達成に有効な、活性成分、例えば、抗体またはその抗原結合断片の濃度または量を表す。（治療）有効量は、経験的に決定することができる。
【０１６７】
本明細書において、「治療有効量」または「有効量」という語句は、脂肪量の検出可能な減少をもたらす、抗原特異的結合タンパク質および／または抗原結合分子（例えば、抗体）の用量を意味する。有効量は、ある特定の実施形態では、次のパラメータのうち１種またはそれ以上の増加をもたらすこともできる：体重量、筋量（例えば、前脛骨［ＴＡ］筋量、腓腹［ＧＡ］筋量、腓腹四頭［Ｑｕａｄ］筋量、体肢除脂肪体重等）、筋肉体積（例えば、大腿筋肉体積）、筋肉強度／力および／または筋肉機能、ならびにグルコース耐性。
【０１６８】
ＧＤＦ８阻害剤（例えば、抗ＧＤＦ８抗体）および／またはアクチビンＡ阻害剤（例えば、抗アクチビンＡ抗体）の「治療有効量」または「有効量」は、例えば、対象に投与されると、少なくとも約２％〜８％、少なくとも２．５％〜６％、少なくとも３％〜４％、または少なくとも約２．０％、少なくとも約２．５％、少なくとも約３．０％もしくは少なくとも約３．５％以上の総脂肪量の減少を引き起こす、ＧＤＦ８阻害剤および／またはアクチビンＡ阻害剤の量を含む。例えば、ＧＤＦ８阻害剤（例えば、抗ＧＤＦ８抗体）および／またはアクチビンＡ阻害剤（例えば、抗アクチビンＡ抗体）の「治療有効量」または「有効量」は、例えば、対象に投与されると、少なくとも約３．５％以上の総脂肪量の減少を引き起こす、ＧＤＦ８阻害剤および／またはアクチビンＡ阻害剤の量を含む。
【０１６９】
一部の実施形態では、ＧＤＦ８阻害剤（例えば、抗ＧＤＦ８抗体）および／またはアクチビンＡ阻害剤（例えば、抗アクチビンＡ抗体）の「治療有効量」または「有効量」は、例えば、対象に投与されると、少なくとも約２％〜８％、少なくとも２．５％〜６％、少なくとも３％〜４％、または少なくとも約２．０％、少なくとも約２．５％、少なくとも約３．０％もしくは少なくとも約３．５％以上のアンドロイド脂肪量の減少を引き起こす、ＧＤＦ８阻害剤および／またはアクチビンＡ阻害剤の量を含む。例えば、ＧＤＦ８阻害剤（例えば、抗ＧＤＦ８抗体）および／またはアクチビンＡ阻害剤（例えば、抗アクチビンＡ抗体）の「治療有効量」または「有効量」は、例えば、対象に投与されると、少なくとも約３．５％のアンドロイド脂肪量の減少を引き起こす、ＧＤＦ８阻害剤および／またはアクチビンＡ阻害剤の量を含む。
【０１７０】
ある特定の実施形態では、この量は、対照処置対象と比較して、少なくとも２％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％以上のＴＡまたはＧＡ筋量の増加ももたらす。
【０１７１】
一部の実施形態では、ＧＤＦ８阻害剤（例えば、抗ＧＤＦ８抗体）および／またはアクチビンＡ阻害剤（例えば、抗アクチビンＡ抗体）の「治療有効量」または「有効量」は、例えば、対象に投与されると、少なくとも約２％〜８％、２．５％〜６％、３％〜４％、または少なくとも２．０％、少なくとも２．５％、少なくとも３．０％もしくは少なくとも３．５％以上の大腿筋肉体積の増加を引き起こす、ＧＤＦ８阻害剤および／またはアクチビンＡ阻害剤の量を含む。
【０１７２】
一部の実施形態では、ＧＤＦ８阻害剤（例えば、抗ＧＤＦ８抗体）および／またはアクチビンＡ阻害剤（例えば、抗アクチビンＡ抗体）の「治療有効量」または「有効量」は、例えば、対象に投与されると、少なくとも約２％〜８％、２．５％〜６％、３％〜４％、または少なくとも２．０％、少なくとも２．５％、少なくとも３．０％もしくは少なくとも３．５％以上の総除脂肪体重の増加を引き起こす、ＧＤＦ８阻害剤および／またはアクチビンＡ阻害剤の量を含む。
【０１７３】
一部の実施形態では、ＧＤＦ８阻害剤（例えば、抗ＧＤＦ８抗体）および／またはアクチビンＡ阻害剤（例えば、抗アクチビンＡ抗体）の「治療有効量」または「有効量」は、例えば、対象に投与されると、少なくとも約２％〜８％、２．５％〜６％、３％〜４％、または少なくとも２．０％、少なくとも２．５％、少なくとも３．０％もしくは少なくとも３．５％以上の体肢除脂肪体重の増加を引き起こす、ＧＤＦ８阻害剤および／またはアクチビンＡ阻害剤の量を含む。
【０１７４】
ある特定の実施形態では、この量は、対照処置対象と比較して、少なくとも２％、３％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％以上のＴＡまたはＧＡ筋量の増加ももたらす。
【０１７５】
ある特定の実施形態では、抗ＧＤＦ８抗体、抗アクチビンＡ抗体、またはＧＤＦ８およびアクチビンＡに特異的に結合する二特異性抗体の（治療）有効量は、約０．０５ｍｇ〜約６００ｍｇ；例えば、約０．０５ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１．０ｍｇ、約１．５ｍｇ、約２．０ｍｇ、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７０ｍｇ、約８０ｍｇ、約９０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１８０ｍｇ、約１９０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２１０ｍｇ、約２２０ｍｇ、約２３０ｍｇ、約２４０ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２６０ｍｇ、約２７０ｍｇ、約２８０ｍｇ、約２９０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３１０ｍｇ、約３２０ｍｇ、約３３０ｍｇ、約３４０ｍｇ、約３５０ｍｇ、約３６０ｍｇ、約３７０ｍｇ、約３８０ｍｇ、約３９０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４１０ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４３０ｍｇ、約４４０ｍｇ、約４５０ｍｇ、約４６０ｍｇ、約４７０ｍｇ、約４８０ｍｇ、約４９０ｍｇ、約５００ｍｇ、約５１０ｍｇ、約５２０ｍｇ、約５３０ｍｇ、約５４０ｍｇ、約５５０ｍｇ、約５６０ｍｇ、約５７０ｍｇ、約５８０ｍｇ、約５９０ｍｇまたは約６００ｍｇのそれぞれの抗体であってもよい。用量は、投与されるべき対象の年齢およびサイズ、標的疾患、状態、投与経路等に応じて変わり得る。状態の重症度に応じて、処置の頻度および持続時間を調整することができる。
【０１７６】
個々の用量内に含有される抗体（例えば、抗ＧＤＦ８抗体、抗アクチビンＡ抗体、またはＧＤＦ８およびアクチビンＡに特異的に結合する二特異性抗体）の量は、患者体重量１キログラム当たりの抗体のミリグラム数（すなわち、ｍｇ／ｋｇ）を単位として表現することができる。例えば、本発明の方法に従って投与される第１、第２または第３の組成物中の抗ＧＤＦ８抗体、抗アクチビンＡ抗体、および／または抗ＧＤＦ８／抗アクチビンＡ二特異性抗体は、約０．０００１〜約５０ｍｇ／ｋｇ患者体重量（例えば、０．５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、５．５ｍｇ／ｋｇ、６．０ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、７．０ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、８．０ｍｇ／ｋｇ、８．５ｍｇ／ｋｇ、９．０ｍｇ／ｋｇ、９．５ｍｇ／ｋｇ、１０．０ｍｇ／ｋｇ、１０．５ｍｇ／ｋｇ、１１．０ｍｇ／ｋｇ、１１．５ｍｇ／ｋｇ等）の用量で患者に投与することができる。
【０１７７】
ＧＤＦ８阻害剤（例えば、抗ＧＤＦ８抗体）の有効量は、ある特定の実施形態では、少なくとも０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｇｍ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｇｍ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇからなる群から選択される投薬レジメンを含むことができる。アクチビンＡ阻害剤（例えば、抗アクチビンＡ抗体）の有効量は、ある特定の実施形態では、少なくとも０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｇｍ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｇｍ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇからなる群から選択される投薬レジメンを含むことができる。
【０１７８】
ＧＤＦ８阻害剤（例えば、抗ＧＤＦ８抗体）の有効量は、追加的な実施形態では、約０．０１〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重量、約０．１〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重量および約０．１〜約５ｍｇ／ｋｇ体重量の単一用量からなる群から選択される投薬レジメンを含むことができる。アクチビンＡ阻害剤（例えば、抗アクチビンＡ抗体）の有効量は、追加的な実施形態では、約０．０１〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重量、約０．１〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重量および約０．１〜約５ｍｇ／ｋｇ体重量の単一用量からなる群から選択される投薬レジメンを含むことができる。特異的な一態様では、抗ＧＤＦ８抗体の有効量は、約２ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ〜８ｍｇ／ｋｇまたは約６ｍｇ／ｋｇ対象の体重量であり、抗アクチビンＡ抗体の有効量は、０．５ｍｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ〜１２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇまたは約１０ｍｇ／ｋｇ対象の体重量である。
【０１７９】
本発明の方法に従って投与される第１、第２および第３の組成物は、ある特定の実施形態では、等しい量のＧＤＦ８阻害剤（例えば、抗ＧＤＦ８抗体）および／またはアクチビンＡ阻害剤（例えば、抗アクチビンＡ抗体）を含むことができる。あるいは、組成物中のＧＤＦ８阻害剤（例えば、抗ＧＤＦ８抗体）の量は、アクチビンＡ阻害剤（例えば、抗アクチビンＡ抗体）の量に満たないまたはこれを超えることができる。ＧＤＦ８阻害剤（例えば、抗ＧＤＦ８抗体）の有効量は、アクチビンＡ阻害剤（例えば、抗アクチビンＡ抗体）と組み合わせた場合、別々の組成物中よりも低くなることができる。アクチビンＡ阻害剤（例えば、抗アクチビンＡ抗体）の有効量は、ＧＤＦ８阻害剤（例えば、抗ＧＤＦ８抗体）と組み合わせた場合、別々の組成物中よりも低くなることができる。当業者であれば、ルーチンの実験法を使用して、所望の治療効果の産生に必要な、組成物中の個々の構成成分の適切な量を決定することができるであろう。
【０１８０】
本開示の態様
本開示は、ＧＤＦ８阻害剤およびアクチビンＡ阻害剤を使用して、対象における脂肪量を低下させる（脂肪量の低下を誘導する）ための、組成物、キットおよび方法を提供する。本開示は、また、ＧＤＦ８阻害剤およびアクチビンＡ阻害剤を使用して、対象における増加した脂肪量に関連するまたはこれによって特徴付けられる疾患、障害および／または状態を処置するための、組成物、キットおよび方法を提供する。好まれる実施形態では、ＧＤＦ８阻害剤は、ＧＤＦ８に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である。
【０１８１】
治療方法
本発明は、ＧＤＦ８および／またはアクチビンＡに特異的に結合することにより、体組成を変更するための方法、例えば、対象における脂肪量の低下を誘導するための方法、対象における筋量を増加させるための方法、および増加した脂肪量によって特徴付けられる疾患または障害を処置するための方法を含む。例えば、本発明は、対象に、ｉ）抗ＧＤＦ８抗体を含む組成物および抗アクチビンＡ抗体を含む組成物、またはｉｉ）抗ＧＤＦ８抗体および抗アクチビンＡ抗体の両方を含む組成物、またはｉｉｉ）ＧＤＦ８に特異的に結合するＨＣＶＲ／ＬＣＶＲペアを含む第１の可変ドメイン、およびアクチビンＡに特異的に結合するＨＣＶＲ／ＬＣＶＲペアを含む第２の可変ドメインを含む二特異性抗体を含む組成物を投与することにより、対象における脂肪量の低下を誘導するため、対象における筋量の増加を誘導するための方法、および対象における増加した脂肪量によって特徴付けられる疾患または障害を処置するための方法を含む。本発明のこれらの態様の文脈において、本明細書に開示または参照されているＧＤＦ８阻害剤および／またはアクチビンＡ阻害剤のいずれかを使用することができる。
【０１８２】
ＧＤＦ８阻害剤およびアクチビンＡ阻害剤を対象に投与する工程を含む方法において、ＧＤＦ８阻害剤（例えば、抗ＧＤＦ８抗体）およびアクチビンＡ阻害剤（例えば、抗アクチビンＡ抗体）は、同じまたは実質的に同じ時点に、例えば、単一の治療投薬量（第３の組成物）として、または互いに同時にもしくは約５分間未満の内に投与される２種の別々の投薬量（第１および第２の組成物）として対象に投与することができる。あるいは、ＧＤＦ８阻害剤およびアクチビンＡ阻害剤（第１および第２の組成物）は、逐次に、例えば、互いに約５分間を超える時間を空けて別々の治療投薬量として対象に投与することができる。
【０１８３】
本発明に係る方法の対象における脂肪量の低下は、ＤＸＡ（二重エネルギーＸ線吸収測定法）によって測定される総脂肪量の低下であってもよい。
【０１８４】
別の実施形態では、本発明に係る方法の対象における脂肪量の低下は、ＤＸＡ（二重エネルギーＸ線吸収測定法）によって測定されるアンドロイド脂肪量（すなわち、身体上部／中心部に関連する内臓脂肪）の低下である。アンドロイド肥満において、対象は、対象の腹部領域周囲に脂肪を貯蔵する。アンドロイド肥満は、胸部上部（前面または背面）、頸部のうなじ区域、さらには肩部のような、体幹上部の他の区域において顕在化する場合もある。アンドロイド肥満である対象は、心疾患およびメタボリックシンドロームのような肥満関連疾患／障害のリスクがより大きい。痛風、動脈関連疾患（高血圧による）および多くの種類のがんを発症する見込みも、アンドロイド肥満を示す対象における中心部型の脂肪分布に関連付けられる。
【０１８５】
体脂肪評価は、正確さおよび精度が変動する。一般的な人体計測的尺度は、体重量、腹囲、および皮脂厚計を使用した皮下脂肪測定を含む。より複雑な方法は、生体電気インピーダンス解析（ＢＩＡ）、ＢＯＤ  ＰＯＤおよび二重エネルギーＸ線吸収測定法（ＤＥＸＡまたはＤＸＡ）を含む。ＤＸＡは、体脂肪および筋肉を推定する際に骨塩量を考慮するため、特に正確かつ有効である。ＤＥＸＡ走査は、異なる区域の脂肪分布を評価して、ボディ・マス・インデックスとは別個のものであるアンドロイド／ガイノイド脂肪比を決定することができる。ＤＸＡは、総脂肪量、全身筋量、内臓脂肪（臓器周囲の脂肪）レベル、筋肉内脂肪（筋肉の間の脂肪）、総骨塩密度を測定することができ、さらには領域性の分析を提供することができる。最後に、ＤＸＡは、インスリン抵抗性増加に関連する体脂肪の分布を正確に評価することができる。
【０１８６】
副作用の回避
本発明は、対象における体組成を変更する、例えば、脂肪量の低下を誘導するための方法、および増加した脂肪量によって特徴付けられる疾患または障害を処置するための方法であって、例えば、米国特許第８，８７１，２０９号に表記されている通り、複数（例えば、３種以上）のＡｃｔＲＩＩＢリガンドに結合する分子の投与に関連する有害副作用を引き起こすことなく、ＧＤＦ８阻害剤およびアクチビンＡ阻害剤を対象に投与する工程を含む方法を含む。例えば、ＡＣＥ−０３１（Ａｃｃｅｌｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａ、Ｉｎｃ．、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）と称される臨床用分子は、ＩｇＧ  Ｆｃドメインに融合されたＡｃｔＲＩＩＢの細胞外部分（この分子は、「ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ」とも本明細書で称される）からなる多量体である。ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃは、ＧＤＦ８と共に、例えば、アクチビンＡ、アクチビンＢ、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ９、ＢＭＰ１０およびＴＧＦβ等の他のＡｃｔＲＩＩＢリガンドに結合し、ヒト患者に投与された場合に、様々な有害副作用を引き起こすことが知られている。例えば、第Ｉｂ相昇順用量研究における閉経後女性へのＡＣＥ−０３１の投与は、望ましくないヘモグロビン増加およびＦＳＨレベル減少を引き起こすことが示された。加えて、筋ジストロフィー小児患者におけるＡＣＥ−０３１の第ＩＩ相研究は、鼻および歯肉出血を含む有害効果により中断された。拡張された血管も、ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃで処置された患者において観察される。デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）を患う男児におけるＡＣＥ−０３１の効果は、除脂肪体重増加および脂肪量低下の傾向を実証したが、非筋肉関連の有害事象が、研究中断の決断に寄与した（Ｃａｍｐｂｅｌｌら、２０１７  Ｍｕｓｃｌｅ  Ｎｅｒｖｅ  ５５：４５８〜４６４頁）。ＧＤＦ８およびアクチビンＡを特異的に阻害する（例えば、抗ＧＤＦ８抗体および抗アクチビンＡ抗体を投与することにより）が、アクチビンＢ、ＧＤＦ１１、ＢＭＰ９、ＢＭＰ１０およびＴＧＦβ等の他のＡｃｔＲＩＩＢリガンドは阻害しないことにより、ＡｃｔＲＩＩＢ−Ｆｃ等の非特異的アクチビン結合剤に関連する有害副作用を引き起こすことなく、脂肪量の低下の増加がもたらされる。
【０１８７】
投与レジメン
本発明のある特定の実施形態において、本発明の組成物（例えば、ＧＤＦ８阻害剤および／またはアクチビンＡ阻害剤、例えば、抗ＧＤＦ８抗体および／もしくは抗アクチビンＡ抗体、またはＧＤＦ８およびアクチビンＡに対する二特異性抗体を含む組成物）の複数用量を、定義された時間経過にわたって対象に投与することができる。本発明の本態様に係る方法は、本発明の組成物（複数可）の複数用量を対象に逐次に投与する工程を含む。本明細書において、「逐次に投与する」は、本発明の組成物の各用量が、異なる時点で、例えば、所定の間隔（例えば、数時間、数日間、数週間または数カ月間）だけ離れた異なる日に、対象に投与されることを意味する。本発明は、第１および／もしくは第２の組成物；または第３の組成物の初回用量；続いて、第１および／もしくは第２の組成物；または第３の組成物の１つまたはそれ以上の二次用量；ならびに場合により、続いて、第１および／もしくは第２の組成物；または第３の組成物の１つまたはそれ以上の三次用量を患者に逐次に投与する工程を含む方法を含む。
【０１８８】
「初回用量」、「二次用量」および「三次用量」という用語は、本発明の組成物の投与の時系列を指す。よって、「初回用量」は、処置レジメンの初めに投与される用量であり（「ベースライン用量」とも称される）；「二次用量」は、初回用量の後に投与される用量であり；「三次用量」は、二次用量の後に投与される用量である。初回、二次および三次用量は全て、同じ量の活性成分（複数可）、例えば、抗ＧＤＦ８抗体および／または抗アクチビンＡ抗体を含有することができるが、一般に、投与頻度の観点から互いに異なるであろう。しかし、ある特定の実施形態では、初回、二次および／または三次用量に含有される活性成分（複数可）の量は、処置経過において互いに変動するであろう（例えば、適宜、多くまたは少なく調整される）。
【０１８９】
本発明の例示的な一実施形態では、各二次および／または三次用量は、直前の用量から１〜３０日（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０日以上）後に投与される。語句「直前の用量」は、本明細書において、一連の複数の投与において、介在する用量なしで、この一連のすぐ次の用量の投与の前に、対象に投与される本発明の組成物の用量（複数可）を意味する。
【０１９０】
本発明の本態様に係る方法は、本発明の組成物のいずれかの数の二次および／または三次用量を患者に投与する工程を含むことができる。例えば、ある特定の実施形態では、単一の二次用量のみが、患者に投与される。他の実施形態では、２以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８以上）の二次用量が、患者に投与される。同様に、ある特定の実施形態では、単一の三次用量のみが、患者に投与される。他の実施形態では、２以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８以上）の三次用量が、患者に投与される。
【０１９１】
複数の二次用量が関与する実施形態では、各二次用量は、他の二次用量と同じ頻度で投与することができる。例えば、各二次用量は、直前の用量から１〜２９日後に患者に投与することができる。同様に、複数の三次用量が関与する実施形態では、各三次用量は、他の三次用量と同じ頻度で投与することができる。例えば、各三次用量は、直前の用量から１〜６０日後に患者に投与することができる。あるいは、二次および／または三次用量が患者に投与される頻度は、処置レジメンの経過にわたって変動し得る。投与頻度は、臨床試験に従って個々の患者の必要に応じて、医師により処置経過において調整することもできる。
【０１９２】
一実施形態では、対象は、予備的ＤＸＡに付され、次いで、抗ＧＤＦ８抗体および抗アクチビンＡ抗体（または抗ＧＤＦ８抗体を含む組成物および抗アクチビンＡ抗体を含む組成物）を含む組成物を受け、次いで、追跡ＤＸＡに付される。脂肪量が、追跡ＤＸＡにおいて測定可能に低下されない場合（予備的ＤＸＡと比較して）、対象は、再度、組成物（複数可）を受けることができる。その後の投薬の量および投与頻度は、追加的な実施形態では、追跡ＤＸＡの結果に基づき変動する場合がある。
【０１９３】
併用療法
本発明の方法は、ある特定の実施形態において、ＧＤＦ８阻害剤および／またはアクチビンＡ阻害剤を含む組成物と有利に組み合わせることができる、１種またはそれ以上の追加的な治療剤を対象に投与する工程を含む。本明細書において、表現「と組み合わせる」は、追加的な治療剤（複数可）が、ＧＤＦ８阻害剤および／またはアクチビンＡ阻害剤を含む医薬組成物の前に、その後にまたはそれと同時に投与されることを意味する。「と組み合わせる」という用語は、ＧＤＦ８阻害剤、アクチビンＡ阻害剤またはその両方と、第２の治療剤との逐次または付随的投与も含む。「治療剤」という用語は、特異的な治療法を含むことも意味する。
【０１９４】
追加的な治療剤は、例えば、別のＧＤＦ８アンタゴニスト／阻害剤、別のアクチビンＡアンタゴニスト／阻害剤、増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤および細胞傷害性／細胞分裂阻害性薬剤、ＩＬ−１アンタゴニスト（例えば、ＵＳ６，９２７，０４４に表記されている通りのＩＬ−１アンタゴニストを含む）、ＩＬ−６アンタゴニスト、ＩＬ−６Ｒアンタゴニスト（例えば、ＵＳ７，５８２，２９８に表記されている通りの抗ＩＬ−６Ｒ抗体を含む）、ＩＬ−１３アンタゴニスト、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）アンタゴニスト、ＩＬ−８アンタゴニスト、ＩＬ−９アンタゴニスト、ＩＬ−１７アンタゴニスト、ＩＬ−５アンタゴニスト、ＩｇＥアンタゴニスト、ＣＤ４８アンタゴニスト、ＩＬ−３１アンタゴニスト（例えば、ＵＳ７，５３１，６３７に表記されている通りのものを含む）、胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）アンタゴニスト（例えば、ＵＳ２０１１／０２７４６８に表記されている通りのものを含む）、インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮγ）抗生物質、外用コルチコステロイド、タクロリムス、ピメクロリムス、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキセート、クロモグリク酸ナトリウム、プロテイナーゼ阻害剤、全身性コルチコステロイド、全身性免疫療法、抗ヒスタミン剤、化学療法、光療法、またはこれらの組合せであってもよい。
【０１９５】
さらなる実施形態では、本発明は、組成物を特色とし、追加的な治療剤は、（１）セリバスタチン、アトルバスタチン、シンバスタチン、ピタバスタチン、ロスバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチン等、３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−コエンザイムＡ（ＨＭＧ−ＣｏＡ）レダクターゼ阻害剤；（２）コレステロール取込みおよび／または胆汁酸再吸収の阻害剤；（３）リポタンパク質異化反応を増加させる、ナイアシン；（４）低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）レベルを低下させ、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）およびＴＧレベルを改善し、非致死性心発作の数を低下させる、フィブレートまたは両親媒性カルボン酸；ならびに（５）２２−ヒドロキシコレステロール等、コレステロール排除における役割を果たす、ＬＸＲ転写因子の活性化因子、またはエゼチミブプラスシンバスタチン等の固定された組合せ；スタチンと胆汁樹脂（例えば、コレスチラミン、コレスチポール、コレセベラム）、ナイアシン、プラス、スタチンの固定された組合せ（例えば、ナイアシンとロバスタチン）；またはオメガ−３−脂肪酸エチルエステル（例えば、オマコール）等の他の脂質低減剤との組合せからなる群から選択される。
【０１９６】
またさらなる実施形態では、第２の治療剤は、グルカゴンの１種もしくはそれ以上の他の阻害剤／アンタゴニスト、またはグルカゴン受容体の阻害剤／アンタゴニストと共に、ＡＮＧＰＴＬ８の阻害剤（例えば、抗ＡＮＧＰＴＬ８抗体）等、他の分子の阻害剤と共に、ＡＮＧＰＴＬ３（例えば、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体）、ＡＮＧＰＴＬ４、ＡＮＧＰＴＬ５、ＡＮＧＰＴＬ６、アポリポタンパク質Ｃ−ＩＩＩ（ＡＰＯＣ３とも称される；例えば、ＵＳ８５３０４３９、ＵＳ７７５０１４１、ＵＳ７５９８２２７に記載されているＡＰＯＣ３の阻害剤、およびＩＳＩＳ−ＡＰＯＣＩＩＩＲｘとも称されるボラネソルセンを参照）、ならびに脂質代謝、特に、コレステロールおよび／またはトリグリセリド恒常性に関与する、プロタンパク質コンバターゼスブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）等、他の分子の阻害剤から選択される。これらの分子の阻害剤は、これらの分子に特異的に結合し、それらの活性を遮断する、小分子、アンチセンス分子および抗体を含む。
【０１９７】
追加的な治療剤は、さらなる実施形態では、必要であれば、根底にある状態に伴う症状を寛解および／または低下させるために、鎮痛剤、Ｃｏｘ−２阻害剤等の非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）を含む抗炎症剤、その他からなる群から選択することができる。
【０１９８】
追加的な治療剤（複数可）は、本明細書に記載されている第１および／もしくは第２の；または第３の組成物（複数可）の投与の前に、それと同時に、またはその後に投与することができる。本開示の目的のため、斯かる投与レジメンは、第２の治療活性がある構成成分「と組み合わせた」抗ＧＤＦ８抗体および／または抗アクチビンＡ抗体の投与と考慮することができる。
【実施例】
【０１９９】
次の実施例は、当業者に、本発明の方法および組成物を作製および使用する仕方についての完全な開示および記載を提供するために提示されており、本発明者らが自身の発明と考慮するものの範囲の限定を意図するものではない。使用されている数（例えば、量、温度等）に関する精度を確実にするための試みが為されたが、いくつかの実験誤差および偏差が説明されるべきである。他に断りがなければ、部は重量部であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏温度であり、圧力は大気圧またはその前後である。
【実施例１】
【０２００】
抗ＧＤＦ８単独は、臨床研究において総除脂肪量を最大３％増加させた：サルコペニア第２相データ
サルコペニアを有する男性および閉経後女性を含む７０歳以上の患者において、ランダム化、二重盲検、プラセボ対照インターベンショナル研究第２相臨床治験を行った。患者を、１００ｍｇ抗ＧＤＦ８抗体、Ｑ４Ｗ  ｓ．ｃ．（ｎ＝６２）；３００ｍｇ抗ＧＤＦ８抗体Ｑ４Ｗ  ｓ．ｃ．（ｎ＝６４）または３００ｍｇ抗ＧＤＦ８抗体Ｑ２Ｗ  ｓ．ｃ．（ｎ＝５９）のいずれかの皮下抗ＧＤＦ８抗体ＲＥＧＮ１０３３（Ｈ４Ｈ１６５７Ｎ２）単独で、またはプラセボ（ｎ＝６５）で１２週間処置した。図１に示す通り、また、図１および表４に示す通り、３用量のそれぞれにおいてＲＥＧＮ１０３３単独を使用した場合、１２週間後の患者において、プラセボと比較した総除脂肪体重の有意な増加が示された。
【０２０１】
【表３】
2021515003.tif 000004
【０２０２】
強度および機能における効果は変動した。抗ＧＤＦ８は一般に、安全であり、十分な耐容性を示した（反応は、あるとしても、軽度であった）。表４は、１００ｍｇまたは３００ｍｇ用量のいずれかのＲＥＧＮ１０３３を受けている患者が、プラセボから１２週目データへの％変化として、有意に増加した総除脂肪量を示したことを示す。抗ＧＤＦ８抗体ＲＥＧＮ１０３３単独は、本研究において総除脂肪体重を最大３％増加させた。３００ｍｇレジメンは、総およびアンドロイド脂肪量の減少ももたらした。
【実施例２】
【０２０３】
抗ＧＤＦ８および抗アクチビンＡの組合せのファースト・イン・ヒューマン単一昇順用量研究
ランダム化、二重盲検、プラセボ対照、昇順用量研究を開始して、静脈内抗ＧＤＦ８抗体および抗アクチビンＡ抗体の組合せｖｓ．個々の構成成分の耐容性および体組成における効果を評価した。
【０２０４】
本研究の第一目的は、４５〜７０歳の健康な閉経後女性における、単独での、および抗ＧＤＦ８抗体（例えば、Ｈ４Ｈ１６５７Ｎ２＝ＲＥＧＮ１０３３）と組み合わせた、抗アクチビンＡ抗体（例えば、Ｈ４Ｈ１０４４６Ｐ２＝ＲＥＧＮ２４７７）の安全性および耐容性を評価することであった。
【０２０５】
本研究の第二目的は、次のものを含んだ：磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）によって測定される大腿筋肉体積における、ＲＥＧＮ２４７７単独、ＲＥＧＮ１０３３単独、およびＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３の組合せの効果の評価、ならびに二重エネルギーＸ線吸収測定法（ＤＸＡ）によって測定される総および領域性体組成における、ＲＥＧＮ２４７７単独、ＲＥＧＮ１０３３単独、およびＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３の組合せの効果の評価。
【０２０６】
研究設計
本研究は、健康な閉経後女性における単独での、およびＲＥＧＮ１０３３（抗ＧＤＦ８）と組み合わせた、静脈内ＲＥＧＮ２４７７（抗アクチビンＡ）の安全性、耐容性および薬力学を評価するための、ランダム化、二重盲検、プラセボ対照、昇順用量研究であった。
【０２０７】
総計４８名の対象を、次の４種の逐次昇順ＲＥＧＮ２４７７  ＩＶ用量パネルのうち１種へとランダム化し、８名の対象を、６：２比で、最初の３種のパネル（パネルＡ、ＢおよびＣ）のそれぞれへとランダム化し、２４名の対象を、１：１：１：１比（それぞれ６名の対象）で、パネルＤへとランダム化した。
・  パネルＡ：４名の対象  ＲＥＧＮ１０３３（６ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）＋ＲＥＧＮ２４７７低用量（１ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）または２名の対象  プラセボ
・  パネルＢ：４名の対象  ＲＥＧＮ１０３３（６ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）＋ＲＥＧＮ２４７７中間用量（３ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）または２名の対象  プラセボ
・  パネルＣ：４名の対象  ＲＥＧＮ１０３３（６ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）＋ＲＥＧＮ２４７７高用量（１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）または２名の対象  プラセボ
・  パネルＤ：ＲＥＧＮ１０３３（６ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ＋ＲＥＧＮ２４７７高用量（１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）プラセボ、ＲＥＧＮ２４７７（１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）またはＲＥＧＮ１０３３（６ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）
【０２０８】
対象は、抗ＧＤＦ８抗体ＲＥＧＮ１０３３および／または抗アクチビンＡ抗体ＲＥＧＮ２４７７の一方または両方の単一静脈内用量を受けた。一次解析において、プラセボおよび高用量組合せ群をパネルにわたってプールし、図２Ａに示す通り、プラセボに１２名の対象を、高用量組合せに１２名の対象を得た。図２Ａに示す投薬スケジュールを、その後の図２Ｂ〜図１７のそれぞれに示す研究において使用した。
【０２０９】
対象は、最大２８日間のスクリーニング期間に参加し、続いて、１日目にベースラインおよび処置来診、ならびに１１３日間の追跡期間に参加した。
【０２１０】
効能および安全性解析
フル・アナリシス・セット（ＦＡＳ）は、全ランダム化対象を含む；これは、割り当てられた処置に基づく（ランダム化された通り）。ＦＡＳを使用して、効能エンドポイントを解析した。セーフティー・アナリシス・セット（ＳＡＦ）は、いずれかの治験薬を受けた全ランダム化対象を含む；これは、受けた処置に基づく（処置された通り）。処置コンプライアンス／投与および全臨床安全性変数は、ＳＡＦを使用して解析した。
【０２１１】
効能変数は、次のものを含んだ：磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）によって測定される、筋肉内脂肪組織および大血管を除外したおよび含む大腿筋肉組織体積；二重Ｘ線吸収測定法（ＤＸＡ）によって測定される総除脂肪量；ＤＸＡによって測定される体肢除脂肪体重（ａＬＢＭ方程式によって計算）；ならびにＤＸＡによって測定される総脂肪量。
【０２１２】
下の表５の通り、対象の人口統計学およびベースライン特徴は、処置群にわたってバランスをとった：
【０２１３】
【表４】
2021515003.tif 000005
【０２１４】
統計学的方法
固定された効果としての処置群および連続共変数としてのベースライン値による共分散分析（ＡＮＣＯＶＡ）モデルを使用して、フル・アナリシス・セット（ＦＡＳ）におけるベースラインから４または８週目のいずれかへの効能変数のパーセント変化および変化を解析した。処置群毎の４週目および８週目の最小二乗平均と、対応する標準誤差、信頼区間、および処置比較のためのｐ値を、このモデルから得た。パネルにわたってプラセボ対象をプールした。欠測効能データは補完しなかった。本研究において多重検定のための調整は適用されない。
【０２１５】
結果
総計４８名の対象をランダム化し、治験薬を投与し、本研究を完了した。ＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３高用量群における１名の対象は、「注入部位腫脹」の有害事象により治験薬の注入を中断した。
【０２１６】
効能
アクチビンＡおよびＧＤＦ８の両方の組合せの遮断は、図２Ｂおよび図２Ｃに示す通り、８週目に大腿筋肉体積を増加させ、脂肪量を減少させた。最大の効果は、最高用量組合せにおいて観察された。
【０２１７】
図２Ｂは、閉経後女性における単一用量後８週間目の、ＭＲＩによる大腿筋肉体積の％変化を示す棒グラフを示す。数は、プラセボからの変化を示す。＊は、名目上ｐ＜０．０５  ｖｓ．プラセボを示す；＊＊＊＊は、名目上ｐ＜０．０００１  ｖｓ．プラセボを示す。抗アクチビンＡ抗体および／または抗ＧＤＦ８抗体のいずれかのｍｇ／ｋｇとしての単一用量の量は、棒グラフの下に示す。中間および高用量組合せにおけるＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３による処置は、プラセボと比較して、用量関連様式で、有意に増加した大腿筋肉体積（それぞれｐ＜０．０５；ｐ＜０．０００１）をもたらした。高用量パネルにおける対象は、８週目に、プラセボによる０．８８％に対し、ベースラインからの％変化として最大７．７３％を示した。
【０２１８】
図２Ｃは、閉経後女性における単一用量後８週間目の、ＤＸＡによる総脂肪量の％変化を示す棒グラフを示す。数は、プラセボからの変化を示す。＊は、名目上ｐ＜０．０５  ｖｓ．プラセボを示す；＊＊＊＊は、名目上ｐ＜０．０００１  ｖｓ．プラセボを示す。抗アクチビンＡ抗体および／または抗ＧＤＦ８抗体のいずれかのｍｇ／ｋｇとしての単一用量の量は、棒グラフの下に示す。高用量ＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３組合せによる処置は、プラセボと比較して、有意に減少した総脂肪量（ｐ＜０．０５）をもたらした。
【０２１９】
図３に示す通り、抗ＧＤＦ８抗体ＲＥＧＮ１０３３と組み合わせた抗アクチビンＡ抗体ＲＥＧＮ２４７７は、大腿筋肉体積の用量依存性増加をもたらした。筋肉間脂肪組織および大血管を除外する、ＭＲＩにより測定された大腿筋肉体積結果は、下の表６に同様に要約されている。中および高用量ＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３組合せによる処置は、表６に示す通り、プラセボと比較して、有意に増加した大腿筋肉体積（ｐ＜０．０５）をもたらした。
【０２２０】
【表５】
2021515003.tif 000006
【０２２１】
表４に示す通り、中間および高用量組合せにおけるＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３による処置は、プラセボと比較して、用量関連様式で、有意に増加した大腿筋肉体積をもたらした。
【０２２２】
図４は、大腿筋肉体積の増加が、抗アクチビンＡ＋抗ＧＤＦ８の組合せによる処置後に、個々の対象において一貫して観察されたことを示す。各処置群内で、異なる線は、異なる個体を示す。
【０２２３】
抗アクチビンＡ抗体ＲＥＧＮ２４７７＋抗ＧＤＦ８抗体ＲＥＧＮ１０３３の組合せによる、体肢除脂肪量（腕および脚の除脂肪量の和）における効果のパターンは、図５に示す通り、大腿筋肉体積に観察されるパターンと同様であった。ＤＸＡにより測定された体肢除脂肪量結果は、表７に同様に要約されている。中および高投薬組合せは、表７に示す通り、プラセボと比較して、体肢除脂肪量を有意に増加させた。
【０２２４】
【表６】
2021515003.tif 000007
【０２２５】
図６に示す通り、アクチビンＡおよびＧＤＦ８の両方の遮断は、ＤＸＡによって評価される通り、総脂肪量の低下をもたらした。抗ＧＤＦ８抗体ＲＥＧＮ１０３３および抗アクチビンＡ抗体ＲＥＧＮ２４７７の高用量組合せは、８週目にプラセボと比較して、ＤＸＡによる総脂肪量を有意に低下させた（＊ｐ＜０．０５）。ＤＸＡにより測定された総脂肪量結果は、下の表８に同様に要約されている。
【０２２６】
【表７】
2021515003.tif 000008
【０２２７】
アクチビンＡおよびＧＤＦ８の遮断は、図７に示す通り、ＤＸＡによって評価される通り、アンドロイド脂肪量の減少に関連することも見出された。抗ＧＤＦ８抗体ＲＥＧＮ１０３３および抗アクチビンＡ抗体ＲＥＧＮ２４７７の高用量組合せは、８週目にプラセボと比較して、ＤＸＡによるアンドロイド脂肪量を有意に低下させた（＊ｐ＜０．０５）。
【０２２８】
さらなる効能結果は、図８〜図１７に示し、下表に要約する。ＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３高、中間および低用量は、図２Ａに示す。
【０２２９】
プラセボと比較して、ＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３中間（ｐ＜０．０５）および高用量群（ｐ＜０．００１）は、筋肉内脂肪組織および大血管を除外して、有意に増加した大腿筋肉体積を示した（図８）。大腿筋肉体積は、８週間目にプラセボ群における０．８８％と比較して、ＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３高用量群において７．７３％増加した（名目上ｐ＜０．００１）。プラセボと比較して、中間用量のＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３およびＲＥＧＮ１０３３単独も、大腿筋肉体積を有意に増加させた。大腿筋肉体積の増加は、用量応答性様式で、組合せで処置された個々の対象において一貫して観察された（データ図示せず）。
【０２３０】
プラセボと比較して、ＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３高用量群は、ＤＸＡによる有意に増加した総除脂肪量を示した（ｐ＜０．０５）（図９）。
【０２３１】
体肢除脂肪体重（ａＬＢＭ方程式により計算）は、プラセボと比較して、組合せＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３処置群のそれぞれにおいて有意に増加された（低用量ｐ＜０．０５、中間および高用量群ｐ＜０．００１）（図１０）。体肢除脂肪体重は、８週間目にプラセボ群における０．７６％と比較して、ＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３中間用量群においてベースラインから７．１５％増加した。同様に、体肢除脂肪体重は、プラセボ群における０．７６％と比較して、ＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３高用量群においてベースラインから５．７％増加した。
【０２３２】
総脂肪量は、高用量ＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３処置群において有意に減少された；総脂肪量は減少された：０．５％におけるプラセボと比較して、３．９２％（高用量群）（名目上ｐ＜０．０５）（図１１）。
【０２３３】
プラセボと比較して、筋肉内脂肪組織および大血管を含む大腿筋肉体積は、４週間目および８週間目に、中間および高用量ＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３群ならびにＲＥＧＮ１０３３群のそれぞれにおいて有意に増加された（図１２）。低用量ＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３も、４週間目にプラセボと比較して、筋肉内脂肪組織および大血管を含む大腿筋肉体積の有意な増加を示した。
【０２３４】
体肢除脂肪量（腕および脚の和）は、プラセボと比較して、４および８週間目に、組合せＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３処置群のそれぞれにおいて有意に増加された（ｐ＜０．０５）（図１３）。
【０２３５】
高用量ＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３処置群におけるアンドロイド脂肪量も、有意に低下された（図１４）。アンドロイド脂肪量は、プラセボにおける低下なしと比較して、高用量ＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３群において６．６％低下された。
【０２３６】
大腿筋肉内脂肪組織体積（ｃｍ３）は、８週間目にプラセボと比較して、高用量ＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３群（ｐ＜０．０５）において有意に増加された（図１５）。
【０２３７】
高用量群における脂肪組織の低下は、筋肉内および筋肉周囲の脂肪組織（ＩＭＡＴ）の和において観察され（図１６）、低および中間用量群においては、皮下脂肪組織において観察された（図１７）。対照的に、大腿筋肉内脂肪組織は、４％の低下によるプラセボと比較して、高用量群において８％へと増加された（図１７）。
【０２３８】
ＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３は、高用量群において、４週目および８週目の両方にプラセボと比較して、筋肉体積および除脂肪量の主な尺度の全てを有意に増加させた；４週目の効果は一般に、８週目よりも明確でなかった（表９）。８週目の重要な体組成尺度のパーセント変化の概要（フル・アナリシス・セット、ＬＳ平均およびＳＥを提示）を下の表９に示す。
【０２３９】
【表８】
2021515003.tif 000009
【０２４０】
上の表９において、ベースラインからの変化およびプラセボとの差は、共変数としてのベースラインおよび固定された因数としての処置によるＡＮＣＯＶＡモデルに基づく最小二乗（ＬＳ）平均である。ＡＮＣＯＶＡから標準誤差（ＳＥ）およびｐ−値も得た。名目上ｐ−値を報告する。
【０２４１】
骨塩密度（ＢＭＤ）質量および骨塩量（ＢＭＣ）質量は、表１０に示す通り、ＤＸＡによって測定した。高用量において、Ｒ２４７７＋Ｒ１０３３は、ＤＸＡによって測定される骨塩量を増加させたが、総骨塩密度は変化しなかった（表１０）。
【０２４２】
表１０に示す通り、腕および脚の脂肪量の和を測定した。高用量において、Ｒ２４７７＋Ｒ１０３３は、腕および脚の脂肪量の和を減少させた（ｐ＜０．０５）。
【０２４３】
主要エンドポイント解析のデータを下の表１０に示す。
【０２４４】
【表９】
2021515003.tif 000010
【表１０】
2021515003.tif 000011
【表１１】
2021515003.tif 000012
【表１２】
2021515003.tif 000013
【表１３】
2021515003.tif 000014
【表１４】
2021515003.tif 000015
【表１５】
2021515003.tif 000016
【表１６】
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【表１７】
2021515003.tif 000018
【０２４５】
プラセボと比較して、Ｒ２４７７＋Ｒ１０３３組合せは、中間および高用量群において大腿筋肉体積および総除脂肪量を有意に増加させ（図８および図９）、全用量群において体肢除脂肪体重を有意に増加させ（図１０）、高用量群において総脂肪量と共にアンドロイド脂肪量を有意に減少させた（表１０）。Ｒ２４７７＋Ｒ１０３３は、高用量群において、４週目および８週目の両方にプラセボと比較して、筋肉体積および除脂肪量の主な尺度の全てを有意に増加させた；４週目の効果は一般に、８週目よりも明確でなかった（表１０）。８週目に、高用量抗アクチビンＡ  Ｒ２４７７＋抗ＧＤＦ８  Ｒ１０３３群は、ＤＸＡによって測定されるプラセボからの総骨塩量の増加した％変化を示したが、総骨塩密度は変化しなかった（表１０）。
【０２４６】
安全性
処置により出現した有害事象（ＴＥＡＥ）は全て、プラセボ対象により報告された「橈骨骨折」の１例の重症ＴＥＡＥを除いて、軽度から中程度の重症度であった。重篤有害事象はなく、死亡はなく、ＴＥＡＥによる中断もなかった。頭痛は、処置群のそれぞれにおける最も高頻度のＴＥＡＥであり、全研究対象の５８．３％およびプラセボ対象の５０％において発生した。筋痙攣、悪心および口腔内潰瘍形成は、ＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３群における他の高頻度ＴＥＡＥであり、これは、組合せＲ２４７７＋Ｒ１０３３群における対象の２５％以上において発生した；これらのＴＥＡＥは、プラセボ群においてより低頻度で発生したが、いかなる明らかな用量−応答関係性があるとも思われない。アクチビン受容体の遮断に関連付けられた有害事象である、出血または下痢の明らかなシグナルは存在しなかった。鼻血（鼻出血の好まれる用語）の１例のＴＥＡＥが、Ｒ２４７７＋Ｒ１０３３用量群において発生した  −  これは、９分後に消散した。
【０２４７】
潜在的に臨床的に有意な値（ＰＣＳＶ）の概説は、検査値（Lab）、バイタルサインおよびＥＣＧにおいてＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３およびプラセボの間に有意差がないことを明らかにし、この結果は、ＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３のマイナスの効果を示すであろう。検査値（laboratory）、バイタルサインおよびＥＣＧカテゴリー内で、組み合わせたＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３用量群（２４のＮ）においてＰＣＳＶを有する０〜２名の対象が存在した；しかし、ＰＣＳＶを有する対象のパーセンテージは、プラセボ群において見出されるパーセンテージ以下であった。肝臓機能検査に関係する処置により出現したＰＣＳＶは存在しなかった。
【０２４８】
結論
健康な閉経後女性において、単一静脈内用量のＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３は、大腿筋肉体積、総除脂肪量および体肢除脂肪体重を増加させた。驚くべき知見の１つは、大腿筋肉変化の均一性であった：組合せに曝露された全個体は、図４に示す通り、大腿筋肉体積の増加を示した。加えて、単一静脈内用量のＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３は、総脂肪、特に、アンドロイド脂肪量を減少させた。ＲＥＧＮ１０３３単独による処置は、大腿筋肉体積を増加させた。
【０２４９】
一般に、本臨床研究におけるＲＥＧＮ２４７７、ＲＥＧＮ１０３３およびＲＥＧＮ２４７７＋ＲＥＧＮ１０３３は、容認できる安全性プロファイルを有すると考慮され、十分な耐容性を示した。重篤有害事象は存在しなかった。
【０２５０】
本発明は、本明細書に記載されている特異的な実施形態によって範囲において限定されるべきではない。実際に、本発明の様々な改変が、本明細書に記載されているものに加えて、当業者に対して、前述の記載および添付の図面から明らかになるであろう。斯かる改変は、添付の特許請求の範囲内に収まることを意図する。
【図１】
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【図２Ａ】
2021515003.tif 000020
【図２Ｂ】
2021515003.tif 000021
【図２Ｃ】
2021515003.tif 000022
【図３】
2021515003.tif 000023
【図４】
2021515003.tif 000024
【図５】
2021515003.tif 000025
【図６】
2021515003.tif 000026
【図７】
2021515003.tif 000027
【図８】
2021515003.tif 000028
【図９】
2021515003.tif 000029
【図１０】
2021515003.tif 000030
【図１１】
2021515003.tif 000031
【図１２】
2021515003.tif 000032
【図１３】
2021515003.tif 000033
【図１４】
2021515003.tif 000034
【図１５】
2021515003.tif 000035
【図１６】
2021515003.tif 000036
【図１７】
2021515003.tif 000037
【配列表】
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【国際調査報告】
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2021515003.tif 000039
2021515003.tif 000040
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