(57)【要約】  本発明は、ベバシズマブの水性緩衝製剤を提供する。本発明はさらに、ベバシズマブの緩衝製剤を製造する方法を提供する。本発明は、本開示の緩衝抗体組成物を投与して、眼疾患、特に湿性加齢性黄斑変性症および黄斑浮腫を治療する方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含む、対象の眼疾患治療に使用するための緩衝抗体製剤。
【請求項２】
前記眼疾患は、網膜、強膜、硝子体、水晶体、瞳孔、虹彩、角膜、脈絡膜、視神経、網膜血管系、毛様体、または眼角の疾患である、請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
前記眼疾患は、網膜または脈絡膜の疾患である、請求項１に記載の製剤。
【請求項４】
前記網膜または脈絡膜の眼疾患は、加齢性黄斑変性症、黄斑浮腫、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、網膜症、糖尿病性網膜症、近視性変性、特発性脈絡膜血管新生、炎症性脈絡膜血管新生、網膜血管新生、倍数体脈絡膜血管症、眼血管新生、分枝網膜静脈閉塞症（ＢＲＶＯ）、網膜中心静脈閉塞症、中心性漿液性脈絡網膜症、網膜炎、網膜色素変性症、スターガルト病、アッシャー症候群、網膜変性症、眼内炎、家族性滲出性硝子体網膜症、特発性近傍中心窩毛細管拡張症、格子変性症、黄斑円孔、持続性胎児血管構造、網膜動脈閉塞症、または網膜芽細胞腫である、請求項３に記載の製剤。
【請求項５】
前記網膜または脈絡膜の眼疾患は、加齢性黄斑変性症、湿性加齢性黄斑変性症、または新生血管性加齢性黄斑変性症である、請求項３に記載の製剤。
【請求項６】
前記網膜または脈絡膜の眼疾患は、湿性加齢性黄斑変性症である、請求項３に記載の製剤。
【請求項７】
前記網膜または脈絡膜の眼疾患は、黄斑浮腫である、請求項３に記載の製剤。
【請求項８】
前記緩衝抗体製剤は、経口的に、静脈内に、硝子体内に、筋肉内に、局所的に、皮下に、脈絡膜上に、点眼薬により、または粘膜組織を通し直接吸収により対象に投与される、請求項１に記載の製剤。
【請求項９】
前記緩衝抗体製剤は、硝子体内注射によって対象に投与される、請求項８に記載の製剤。
【請求項１０】
前記緩衝抗体製剤は、月に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２８、２９、３０、または３１回対象に投与される、請求項１に記載の製剤。
【請求項１１】
前記緩衝抗体製剤は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２週間毎に対象に投与される、請求項１に記載の製剤。
【請求項１２】
前記緩衝抗体製剤は、４、８、１６、２４、３６、または５２週間の連続期間にわたって対象に投与される、請求項１に記載の製剤。
【請求項１３】
前記緩衝抗体製剤は、１、２、３、４、５、または１０年間の連続期間にわたって対象に投与される、請求項１に記載の製剤。
【請求項１４】
前記緩衝抗体製剤は、１０〜５０日の半減期を有する、請求項１に記載の製剤。
【請求項１５】
前記製剤は、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬの抗体を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項１６】
前記製剤は、約１５ｍｇ／ｍＬ〜約３５ｍｇ／ｍＬの抗体を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項１７】
前記製剤は、約２３ｍｇ／ｍＬ〜約２７ｍｇ／ｍＬの抗体を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項１８】
前記製剤は、約２４ｍｇ／ｍＬ〜約２７ｍｇ／ｍＬの抗体を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項１９】
前記製剤は、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約２６ｍｇ／ｍＬの抗体を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項２０】
前記製剤は、約２５．５ｍｇ／ｍＬの抗体を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項２１】
前記製剤は、約２５ｍｇ／ｍＬの抗体を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項２２】
前記製剤は、約３０ｍＭ〜約７０ｍＭのクエン酸リン酸塩を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項２３】
前記製剤は、約４０ｍＭ〜約６０ｍＭのクエン酸リン酸塩を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項２４】
前記製剤は、約４８ｍＭ〜約５２ｍＭのクエン酸リン酸塩を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項２５】
前記製剤は、約４９ｍＭ〜約５１ｍＭのクエン酸リン酸塩を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項２６】
前記製剤は、約５０ｍＭ〜約５１ｍＭのクエン酸リン酸塩を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項２７】
前記製剤は、約３０ｍＭ〜約７０ｍＭのリン酸ナトリウムを含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項２８】
前記製剤は、約４０ｍＭ〜約６０ｍＭのリン酸ナトリウムを含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項２９】
前記製剤は、約４８ｍＭ〜約５２ｍＭのリン酸ナトリウムを含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項３０】
前記製剤は、約４９ｍＭ〜約５１ｍＭのリン酸ナトリウムを含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項３１】
前記製剤は、約５０ｍＭ〜約５１ｍＭのリン酸ナトリウムを含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項３２】
前記製剤は、一塩基性リン酸ナトリウム、二塩基性リン酸ナトリウム、または一塩基性リン酸水素ナトリウムおよび二塩基性リン酸ナトリウムの両方を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項３３】
前記緩衝液は、約５０ｍＭのリン酸ナトリウムを含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項３４】
前記緩衝液は、約５１ｍＭのリン酸ナトリウムを含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項３５】
前記製剤は、約１２０ｍＭ〜約１８０ｍＭのトレハロースを含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項３６】
前記製剤は、約１４０ｍＭ〜約１８０ｍＭのトレハロースを含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項３７】
前記製剤は、約１５０ｍＭ〜約１７０ｍＭのトレハロースを含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項３８】
前記製剤は、約１５７ｍＭ〜約１６１ｍＭのトレハロースを含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項３９】
前記製剤は、約１５８ｍＭ〜約１６０ｍＭのトレハロースを含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項４０】
前記製剤は、約１５９ｍＭのトレハロースを含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項４１】
前記製剤は、約１６０ｍＭのトレハロースを含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項４２】
前記製剤は、約０．０２％（ｖ／ｖ）〜約０．０６％（ｖ／ｖ）のポリソルベート２０を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項４３】
前記製剤は、約０．０３％（ｖ／ｖ）〜約０．０５％（ｖ／ｖ）のポリソルベート２０を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項４４】
前記製剤は、約０．０４％（ｖ／ｖ）のポリソルベート２０を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項４５】
前記製剤のｐＨは約５．６である、請求項１に記載の製剤。
【請求項４６】
前記製剤のｐＨは約５．８である、請求項１に記載の製剤。
【請求項４７】
前記製剤のｐＨは約６である、請求項１に記載の製剤。
【請求項４８】
前記製剤のｐＨは約６．１である、請求項１に記載の製剤。
【請求項４９】
前記緩衝液は、約１１ｍＭ〜約１９ｍＭの酢酸ナトリウムを含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項５０】
前記緩衝液は、約１３ｍＭ〜約１７ｍＭの酢酸ナトリウムを含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項５１】
前記緩衝液は、約１３ｍＭ〜約１６ｍＭの酢酸ナトリウムを含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項５２】
前記緩衝液は、約１５ｍＭの酢酸ナトリウムを含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項５３】
前記製剤は、約１６５ｍＭ〜約１８５ｍＭのショ糖を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項５４】
前記製剤は、約１７０ｍＭ〜約１８０ｍＭのショ糖を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項５５】
前記製剤は、約１７４ｍＭ〜約１７６ｍＭのショ糖を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項５６】
前記製剤は、約１７５ｍＭのショ糖を含む、請求項１に記載製剤。
【請求項５７】
ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含む緩衝抗体製剤、および
ｂ）眼疾患を治療する方法で前記抗体製剤を投与するための説明書を含む、キット。
【請求項５８】
前記眼疾患は、網膜、強膜、硝子体、水晶体、瞳孔、虹彩、角膜、脈絡膜、視神経、網膜血管系、毛様体、または眼角の疾患である、請求項５７に記載のキット。
【請求項５９】
前記眼疾患は、網膜または脈絡膜の疾患である、請求項５７に記載のキット。
【請求項６０】
前記網膜または脈絡膜の眼疾患は、加齢性黄斑変性症、黄斑浮腫、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、網膜症、糖尿病性網膜症、近視性変性、特発性脈絡膜血管新生、炎症性脈絡膜血管新生、網膜血管新生、倍数体脈絡膜血管症、眼血管新生、分枝網膜静脈閉塞症（ＢＲＶＯ）、網膜中心静脈閉塞症、中心性漿液性脈絡網膜症、網膜炎、網膜色素変性症、スターガルト病、アッシャー症候群、網膜変性症、眼内炎、家族性滲出性硝子体網膜症、特発性近傍中心窩毛細管拡張症、格子変性症、黄斑円孔、持続性胎児血管構造、網膜動脈閉塞症、または網膜芽細胞腫である、請求項５７に記載のキット。
【請求項６１】
前記網膜または脈絡膜の眼疾患は、加齢性黄斑変性症、湿性加齢性黄斑変性症、または新生血管性加齢性黄斑変性症である、請求項５７に記載のキット。
【請求項６２】
前記網膜または脈絡膜の眼疾患は、湿性加齢性黄斑変性症である、請求項５７に記載のキット。
【請求項６３】
前記説明書は、請求項１〜５６のいずれか一項に記載の安定な抗体を投与するための説明書を含む、請求項５７に記載のキット。
【請求項６４】
注射器、針、およびカテーテルを含む群から選択される、緩衝抗体製剤を注射するための装置をさらに含む、請求項５７に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連特許の相互参照
本出願は、２０１８年１２月７日に出願の米国仮出願特許第62/776,686号および２０１８年４月１７日に出願の米国仮出願特許第62/658,772号の優先権を主張し、それぞれの内容の全体があらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれている。
【０００２】
配列リストの組込み
２０１９年４月１６日に作成され、容量が９ＫＢの「ONBI-013_001WO_SeqListing_ ST25.txt」と命名された文書ファイルの内容が、参照によりその全体が本明細書に組み込まれている。
【０００３】
技術分野
本発明は、一般に、抗体製剤化学の分野に関する。より具体的には、本発明は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）に対する抗体の緩衝製剤に関し、この製剤は、抗体の熱安定性およびコロイド安定性を向上させて、それにより抗体の長期保存性を高める。この安定な抗体製剤は、眼疾患、例えばＶＥＧＦが調節不全の疾患を治療する方法に使用できる。
【背景技術】
【０００４】
生物学的価格競争および革新法（BPCIA：the Biologics Price Competition and Innovation Act）の一環として、（生物中で産出され、あるいは生物に由来する）生物製剤製品がデータとして特に承認済みの生物製剤に「非常に類似」している場合には、この製品に「後発生物製剤」と表示してもよい。後発生物製剤は、米国食品医薬品局（U.S. Food and Drug Agency）が承認済みの生物製剤の少なくとも生物学的機能および治療効力を保持している必要がある。但し後発生物製剤は、承認済みの生物製剤とは異なる方法で処方されていてもよい。この製剤は、生物製剤製品の安定性および保管貯蔵性を改善でき、かつ特定の疾患または病気を治療する際の効力を向上することもできる。この製剤はまた、承認済みの生物製剤の投与時に患者が蒙る可能性がある患者の不快感または他の有害な影響を低減するなど、投与に伴う別の様相を改善することもできる。
【０００５】
複数の抗体分子を生物製剤として使用でき、これら抗体の多くはヒト用に承認されているものである。複数の抗体分子を後発生物製剤として製造でき、状況に応じて再処方できる。当技術分野では、高品質の抗体後発生物製剤に対する要求が依然として存在する。
【０００６】
アバスチン（Avastin（登録商標） :Genentech, Inc., San Francisco, CA）の商標で市販されているベバシズマブ抗体は、貯蔵条件の下で２種の形態で凝集することが知られていて、一方は非共有結合性で可逆的な凝集であり、他方は共有結合性で非可逆的な凝集である。後者（共有結合性の凝集）は抗原結合領域中で発生するので、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）への結合に活用可能な結合部位の数を減少させると考えられている。その結果として、抗体の効力が低下してしまう。この凝集を低減することは、一般的に、特にベバシズマブなどの抗体には望ましいことである。本開示は、当技術分野でのこれらの要求に対処する。
【発明の概要】
【０００７】
実施形態によっては、本開示は、それを必要する対象での眼疾患を治療する方法を特徴とし、前記方法は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含む緩衝抗体製剤を対象に投与することを含む。
【０００８】
本開示の実施形態によっては、眼疾患は、網膜、強膜、硝子体、水晶体、瞳孔、虹彩、角膜、脈絡膜、視神経、網膜血管系、毛様体、または眼角の疾患である。本開示の実施形態によっては、眼疾患は、網膜または脈絡膜の疾患である。本開示の実施形態によっては、網膜または脈絡膜の眼疾患は、加齢性黄斑変性症、黄斑浮腫、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、網膜症、糖尿病性網膜症、近視性変性、特発性脈絡膜血管新生、炎症性脈絡膜血管新生、網膜血管新生、倍数体脈絡膜血管症、眼血管新生、分枝網膜静脈閉塞症（ＢＲＶＯ）、網膜中心静脈閉塞症、中心性漿液性脈絡網膜症、網膜炎、網膜色素変性症、スターガルト病、アッシャー症候群、網膜変性症、眼内炎、家族性滲出性硝子体網膜症、特発性近傍中心窩毛細管拡張症、格子変性症、黄斑円孔、持続性胎児血管構造、網膜動脈閉塞症、または網膜芽細胞腫である。
【０００９】
本開示の実施形態によっては、網膜または脈絡膜の眼疾患は、加齢性黄斑変性症、湿性加齢性黄斑変性症、または新生血管性加齢性黄斑変性症である。本開示の実施形態によっては、網膜または脈絡膜の眼疾患は、湿性加齢性黄斑変性症である。本開示の実施形態によっては、網膜または脈絡膜の眼疾患は、黄斑浮腫である。
【００１０】
本開示の実施形態によっては、緩衝抗体製剤を、経口的に、静脈内に、硝子体内に、筋肉内に、局所的に、皮下に、脈絡膜上に、点眼薬により、または粘膜組織を通し直接吸収により対象に投与する。本開示の実施形態によっては、緩衝抗体製剤を、硝子体内注射により対象に投与する。
【００１１】
本開示の実施形態によっては、緩衝抗体製剤を、月に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２８、２９、３０、または３１回対象に投与する。本開示の実施形態によっては、緩衝抗体製剤を、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２週間毎に対象に投与する。本開示の実施形態によっては、緩衝抗体製剤を、４、８、１６、２４、３６、または５２週間の連続期間で対象に投与する。本開示の実施形態によっては、緩衝抗体製剤を、１、２、３、４、５または１０年の連続期間で対象に投与する。本開示の実施形態によっては、緩衝抗体製剤の半減期は、１０〜５０日である。
【００１２】
本開示の実施形態によっては、製剤は、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。本開示の実施形態によっては、製剤は、約１５ｍｇ／ｍＬ〜約３５ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。本開示の実施形態によっては、製剤は、約２３ｍｇ／ｍＬ〜約２７ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。本開示の実施形態によっては、製剤は、約２４ｍｇ／ｍＬ〜約２７ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。本開示の実施形態によっては、製剤は、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約２６ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。本開示の実施形態によっては、製剤は、約２５．５ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。本開示の実施形態によっては、製剤は、約２５ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。
【００１３】
本開示の実施形態によっては、製剤は、約３０ｍＭ〜約７０ｍＭのクエン酸リン酸塩を含む。本開示の実施形態によっては、製剤は、約４０ｍＭ〜約６０ｍＭのクエン酸リン酸塩を含む。本開示の実施形態によっては、製剤は、約４８ｍＭ〜約５２ｍＭのクエン酸リン酸塩を含む。本開示の実施形態によっては、製剤は、約４９ｍＭ〜約５１ｍＭのクエン酸リン酸塩を含む。本開示の実施形態によっては、製剤は、約５０ｍＭ〜約５１ｍＭのクエン酸リン酸塩を含む。
【００１４】
本開示の実施形態によっては、製剤は、約３０ｍＭ〜約７０ｍＭのリン酸ナトリウムを含む。本開示の実施形態によっては、製剤は、約４０ｍＭ〜約６０ｍＭのリン酸ナトリウムを含む。本開示の実施形態によっては、製剤は、約４８ｍＭ〜５２ｍＭのリン酸ナトリウムを含む。本開示の実施形態によっては、製剤は、約４９ｍＭ〜約５１ｍＭのリン酸ナトリウムを含む。本開示の実施形態によっては、製剤は、約５０ｍＭ〜約５１ｍＭのリン酸ナトリウムを含む。
【００１５】
本開示の実施形態によっては、製剤は、一塩基性リン酸ナトリウム、二塩基性リン酸ナトリウム、または一塩基性リン酸二水素ナトリウムと二塩基性リン酸ナトリウムの両方を含む。本開示の実施形態によっては、緩衝液は、約５０ｍＭのリン酸ナトリウムを含む。本開示の実施形態によっては、緩衝液は、約５１ｍＭのリン酸ナトリウムを含む。
【００１６】
本開示の実施形態によっては、製剤は、約１２０ｍＭ〜約１８０ｍＭのトレハロースを含む。本開示の実施形態によっては、製剤は、約１４０ｍＭ〜約１８０ｍＭのトレハロースを含む。本開示の実施形態によっては、製剤は、約１５０ｍＭ〜約１７０ｍＭのトレハロースを含む。本開示の実施形態によっては、製剤は、約１５７ｍＭ〜約１６１ｍＭのトレハロースを含む。本開示の実施形態によっては、製剤は、約１５８ｍＭ〜約１６０ｍＭのトレハロースを含む。本開示の実施形態によっては、製剤は、１５９ｍＭのトレハロースを含む。本開示の実施形態によっては、製剤は、１６０ｍＭのトレハロースを含む。
【００１７】
本開示の実施形態によっては、製剤は、約０．０２％（ｖ／ｖ）〜約０．０６％（ｖ／ｖ）のポリソルベート２０を含む。本開示の実施形態によっては、製剤は、約０．０３％（ｖ／ｖ）〜約０．０５％（ｖ／ｖ）のポリソルベート２０を含む。本開示の実施形態によっては、製剤は、約０．０４％（ｖ／ｖ）のポリソルベート２０を含む。
【００１８】
本開示の実施形態によっては、製剤のｐＨは約５．６である。本開示の実施形態によっては、製剤のｐＨは約５．８である。本開示の実施形態によっては、製剤のｐＨは約６である。本開示の実施形態によっては、製剤のｐＨは約６．１である。
【００１９】
本開示の実施形態によっては、緩衝液は、約１１ｍＭ〜約１９ｍＭの酢酸ナトリウムを含む。本開示の実施形態によっては、緩衝液は、約１３ｍＭ〜約１７ｍＭの酢酸ナトリウムを含む。本開示の実施形態によっては、緩衝液は、約１３ｍＭ〜約１６ｍＭの酢酸ナトリウムを含む。本開示の実施形態によっては、緩衝液は、約１５ｍＭの酢酸ナトリウムを含む。
【００２０】
本開示の実施形態によっては、製剤は、約１６５ｍＭ〜約１８５ｍＭのショ糖を含む。本開示の実施形態によっては、製剤は、約１７０ｍＭ〜約１８０ｍＭのショ糖を含む。本開示の実施形態によっては、製剤は、約１７４ｍＭ〜約１７６ｍＭのショ糖を含む。本開示の実施形態によっては、製剤は、約１７５ｍＭのショ糖を含む。
【００２１】
実施形態によっては、本開示は、ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含む緩衝抗体製剤、およびｂ）眼疾患を治療する方法での抗体製剤の投与のための使用説明書を含むキットを特徴とする。本開示の実施形態によっては、眼疾患は、網膜、強膜、硝子体、水晶体、瞳孔、虹彩、角膜、脈絡膜、視神経、網膜血管系、毛様体、または眼角の疾患である。本開示の実施形態によっては、眼疾患は、網膜または脈絡膜の疾患である。本開示の実施形態によっては、網膜または脈絡膜の眼疾患は、加齢性黄斑変性症、黄斑浮腫、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、網膜症、糖尿病性網膜症、近視性変性、特発性脈絡膜血管新生、炎症性脈絡膜血管新生、網膜血管新生、倍数体脈絡膜血管症、眼血管新生、分枝網膜静脈閉塞症（ＢＲＶＯ）、網膜中心静脈閉塞症、中心性漿液性脈絡網膜症、網膜炎、網膜色素変性症、スターガルト病、アッシャー症候群、網膜変性症、眼内炎、家族性滲出性硝子体網膜症、特発性近傍中心窩毛細管拡張症、網膜格子変性症、黄斑円孔、持続性胎児血管構造、網膜動脈閉塞症、または網膜芽細胞腫である。本開示の実施形態によっては、網膜または脈絡膜の眼疾患は、加齢性黄斑変性症、湿性加齢性黄斑変性症、または新生血管性加齢性黄斑変性症である。本開示の実施形態によっては、網膜または脈絡膜の眼疾患は、湿性加齢性黄斑変性症である。
【００２２】
本開示の実施形態によっては、使用説明書は、請求項１〜５６のいずれか１項に記載のような安定な抗体を投与するための指示を含む。本開示の実施形態によっては、キットはさらに、注射器、針、およびカテーテルを含む群から選択される緩衝抗体製剤を注入する装置を含む。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】図１は、５０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液中でのベバシズマブの熱安定性に対する種々の安定剤の効果を示すＤＳＣ曲線を示す。表１の条件１、２、９、および１０を図に示している。
【図２Ａ】図２Ａは、条件１（ベバシズマブ（Avastin（登録商標））対照）、条件２（ベバシズマブクエン酸リン酸塩、ｐＨ５．８）、条件３（ベバシズマブクエン酸リン酸塩、ｐＨ６．０）、条件４（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．６）、および条件５（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．８）で、５℃で１８ヶ月間保存した場合のベバシズマブの凝集物の存在率（％）を示している。
【図２Ａ（ｉ）】図２Ａ（ｉ）は、条件１（ベバシズマブ（Avastin（登録商標））対照）、条件２（ベバシズマブクエン酸リン酸塩、ｐＨ５．８）、および条件３（ベバシズマブクエン酸リン酸塩、ｐＨ６．０）で、５℃で１８ヶ月間保存した場合の（非希釈注入の条件を用いて凝集物全体を定量するサイズ排除クロマトグラフ法（ＳＥＣ）により測定した）クロマトグラフ曲線の重なりを示している。
【図２Ａ（ｉｉ）】図２Ａ（ii）は、条件１（ベバシズマブ（Avastin（登録商標））対照）、条件４（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．６）、および条件５（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．８）で、５℃で１８ヶ月間保存した場合の（非希釈注入の条件を用いて凝集物全体を定量するサイズ排除クロマトグラフ法（ＳＥＣ）により測定した）クロマトグラフ曲線の重なりを示している。
【図２Ｂ】図２Ｂは、条件１（ベバシズマブ（Avastin（登録商標））対照）、条件２（ベバシズマブクエン酸リン酸塩、ｐＨ５．８）、条件３（ベバシズマブクエン酸リン酸塩、ｐＨ６．０）、条件４（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．６）、および条件５（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．８）で、５℃で１８ヶ月間保存した場合のベバシズマブの共有結合二量体の存在率（％）を示している。
【図２Ｂ（ｉ）】図２Ｂ（ｉ）は、条件１（ベバシズマブ（Avastin（登録商標））対照）、条件２（ベバシズマブクエン酸リン酸塩、ｐＨ５．８）、および条件３（ベバシズマブクエン酸リン酸塩、ｐＨ６．０）で、５℃で１８ヶ月間保存した場合の（希釈注入の条件を用いて共有結合二量体を定量するサイズ排除クロマトグラフ法（ＳＥＣ）により測定した）クロマトグラフ曲線の重なりを示している。
【図２Ｂ（ｉｉ）】図２Ｂ（ii）は、条件１（ベバシズマブ（Avastin（登録商標））対照）、条件４（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．６）、および条件５（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．８）で、５℃で１８ヶ月間保存した場合の（希釈注入の条件を用いて共有結合二量体を定量するサイズ排除クロマトグラフ法（ＳＥＣ）により測定した）クロマトグラフ曲線の重なりを示している。
【図２Ｂ（ｉｉｉ）】図２Ｂ（iii ）は、条件１（ベバシズマブ（Avastin（登録商標））対照）、条件２（ベバシズマブクエン酸リン酸塩、ｐＨ５．８）、条件３（ベバシズマブクエン酸リン酸塩、ｐＨ６．０）、条件４（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．６）、および条件５（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．８）で、５℃で１８ヶ月間保存した場合の陽イオン交換クロマトグラフ法（ＣＥＸ）により測定したベバシズマブの酸性種の存在率（％）の変化を示している。
【図２Ｂ（ｉｖ）】図２Ｂ（iv）は、条件１（ベバシズマブ（Avastin（登録商標））対照）、条件２（ベバシズマブクエン酸リン酸塩、ｐＨ５．８）、条件３（ベバシズマブクエン酸リン酸塩、ｐＨ６．０）で、５℃で１８ヶ月間保存した場合の（酸性種、塩基性種、および主要な種の存在率（％）を定量する陽イオン交換クロマトグラフ法（ＣＥＸ）で測定した）クロマトグラフ曲線の重なりを示している。
【図２Ｂ（ｖ）】図２Ｂ（ｖ）は、条件１（ベバシズマブ（Avastin（登録商標））対照）、条件４（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．６）、および条件５（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．８）で、５℃で１８ヶ月間保存した場合の（酸性種、塩基性種、および主要な種の存在率（％）を定量する陽イオン交換クロマトグラフ法（ＣＥＸ）で測定した）クロマトグラフ曲線の重なりを示している。
【図２Ｃ−Ｄ】図２Ｃは、条件１（ベバシズマブ（Avastin（登録商標））対照）、条件２（ベバシズマブクエン酸リン酸塩、ｐＨ５．８）、条件３（ベバシズマブクエン酸リン酸塩、ｐＨ６．０）、条件４（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．６）、および条件５（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．８）で、３０℃で保存した場合のベバシズマブの凝集物の存在率（％）を示している。図２Ｄは、条件１（ベバシズマブ（Avastin（登録商標））対照）、条件２（ベバシズマブクエン酸リン酸塩、ｐＨ５．８）、条件３（ベバシズマブクエン酸リン酸塩、ｐＨ６．０）、条件４（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．６）、および条件５（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．８）で、３０℃で保存した場合のベバシズマブの共有結合二量体の存在率を示している。
【図２Ｅ−Ｆ】図２Ｅは、条件１（ベバシズマブ（Avastin（登録商標））対照）、条件２（ベバシズマブクエン酸リン酸塩、ｐＨ５．８）、条件３（ベバシズマブクエン酸リン酸塩、ｐＨ６．０）、条件４（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．６）、および条件５（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．８）で、３７℃で保存した場合のベバシズマブの凝集物の存在率（％）を示している。図２Ｆは、条件１（ベバシズマブ（Avastin（登録商標））対照）、条件２（ベバシズマブクエン酸リン酸塩、ｐＨ５．８）、条件３（ベバシズマブクエン酸リン酸塩、ｐＨ６．０）、条件４（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．６）、および条件５（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．８）で、３７℃で保存した場合のベバシズマブの共有結合二量体の存在率（％）を示している。
【図２Ｇ−Ｈ】図２Ｇは、条件１（ベバシズマブ（Avastin（登録商標））対照）、条件２（ベバシズマブクエン酸リン酸塩、ｐＨ５．８）、条件３（ベバシズマブクエン酸リン酸塩、ｐＨ６．０）、条件４（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．６）、および条件５（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．８）で、振盪ストレスを受けた場合のベバシズマブの凝集物の存在率（％）を示している。図２Ｈは、条件１（ベバシズマブ（Avastin（登録商標））対照）、条件２（ベバシズマブクエン酸リン酸塩、ｐＨ５．８）、条件３（ベバシズマブクエン酸リン酸塩、ｐＨ６．０）、条件４（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．６）、および条件５（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．８）で、振盪ストレスを受けた場合のベバシズマブの共有結合二量体の存在率（％）を示している。
【図２Ｉ−Ｊ】図２Iは、条件１（ベバシズマブ（Avastin（登録商標））対照）、条件２（ベバシズマブクエン酸リン酸塩、ｐＨ５．８）、条件３（ベバシズマブクエン酸リン酸塩、ｐＨ６．０）、条件４（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．６）、および条件５（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．８）で、凍結／解凍ストレスを受けた場合のベバシズマブの凝集物の存在率（％）を示している。図２Ｊは、条件１（ベバシズマブ（Avastin（登録商標））対照）、条件２（ベバシズマブクエン酸リン酸塩、ｐＨ５．８）、条件３（ベバシズマブクエン酸リン酸塩、ｐＨ６．０）、条件４（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．６）、および条件５（ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．８）で、凍結／解凍ストレスを受けた場合のベバシズマブの共有結合二量体の存在率（％）を示している。
【図３】図３は、濃度の変化に伴うベバシズマブの流体力学的な寸法を示している。
【図４】図４は、Ｔ＝０時の加速安定性試験：自家蛍光発光走査によるトリプトファン曲線を示している。
【図５】図５は、安定な抗体組成物ＯＮＳ−５０１０の製造工程の流れ図を示している。限外濾過および透析濾過（ＵＦ／ＤＦ）工程は、安定な抗体組成物の製造時の最後から２番目の工程である。
【図６Ａ】図６Ａは、１回目の操作でのＵＦ／ＤＦ工程での中間物質のタンパク質濃度およびＨＭＷＳの存在率（％）を示している。各対の縦棒の左側の縦棒はタンパク質濃度を示す。各対の縦棒の右側の縦棒はＨＭＷＳの存在率（％）を示す。
【図６Ｂ】図６Ｂは、２回目の操作でのＵＦ／ＤＦ工程での中間物質のタンパク質濃度およびＨＭＷＳの存在率（％）を示している。各対の縦棒の左側の縦棒はタンパク質濃度を示す。各対の縦棒の右側の縦棒はＨＭＷＳの存在率（％）を示す。
【図６Ｃ】図６Ｃは、３回目の操作でのＵＦ／ＤＦ工程での中間物質のタンパク質濃度およびＨＭＷＳの存在率（％）を示している。各対の縦棒の左側の縦棒はタンパク質濃度を示す。各対の縦棒の右側の縦棒はＨＭＷＳの存在率（％）を示す。
【図７】図７は、安定な抗体組成物を最終的にｐＨ６．１まで滴定し、それに続く最終的に０．２μｍでの濾過に伴う、サイズ排除ＨＰＬＣ（ＳＥ−ＨＰＬＣ）により測定したＨＭＷＳの存在率（％）の変化を示している。
【図８】図８は、６％（ｗ／ｖ）のα、α’トレハロース水溶液中で透析濾過し、それに続く５．８ｇ／Ｌの一塩基性リン酸ナトリウム一水和物、１．２ｇ／Ｌの二塩基性リン酸ナトリウム、６０．０ｇ／Ｌの無水α、α’トレハロース、および０．０４％のポリソルベート２０の組成物への０．５Ｍのリン酸ナトリウム溶液および１０％ポリソルベート２０溶液の添加に伴うＨＭＷＳの存在率（％）の変化を示している。
【図９】図９は、ＨＭＷＳの存在率（％）に対する原薬物質（ＢＤＳ）のｐＨの影響を示している。各組の縦棒の左側の縦棒はＨＥＰＥＳを示す。各組の縦棒の中央の縦棒はリン酸塩を示す。各組の縦棒の右側の縦棒は水酸化物を示す。
【図１０】図１０は、ＨＭＷＳの存在率（％）に対するＯＮＳ−５０１０濃縮液の濃度変更による影響を示している。中央の組の縦棒（２８ｇ／Ｌ）の４番目の縦棒（最も右端）は、原液ではなく、固形の一塩基および二塩基リン酸ナトリウムを用いてリン酸調節を実施した分割液を示す。
【図１１】図１１は、ＯＮＳ−５０１０を製造するＵＦ／ＤＦ工程の流れ図を示している。
【図１２】図１２は、５種の供給流速での濃縮圧力に対する初期透過流束曲線を示している。グラフ上に描く線は、上部から下部へ５００ＬＭＨ、４００ＬＭＨ、３００ＬＭＨ、２００ＬＭＨ、および１００ＬＭＨを示す。
【図１３】図１３は、出発緩衝液（２５ｍＭの酢酸ナトリウム、２３７ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ５．０）の５種の供給流速での濃縮圧力に対する濃縮流束曲線を示している。グラフ上に描く線は、上部から下部へ５００ＬＭＨ、４００ＬＭＨ、３００ＬＭＨ、２００ＬＭＨ、および１００ＬＭＨを示す。
【図１４】図１４は、最終緩衝液の５種の供給流速での濃縮圧力に対する濃縮流束曲線を示している。グラフ上に描く線は、上部から下部へ５００ＬＭＨ、４００ＬＭＨ、３００ＬＭＨ、２００ＬＭＨ、および１００ＬＭＨを示す。
【図１５】図１５は、安定な抗体組成物濃度の透析濾過の最適値への影響を示している。グラフ上に描く線は、上部から下部へ、最終緩衝液（５１ｍＭのリン酸ナトリウム、０．０４％のポリソルベート、ｐＨ６．１）および出発緩衝液（２５ｍＭの酢酸ナトリウム、２３７ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ５．０）を示す。
【図１６】図１６は、ＯＮＳ−５０１０、米国認可のアバスチン（Avastin）、および欧州認可のアバスチンの濃度対時間の特性を平均値として示している。時間ゼロでの垂直線は投与開始を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
本発明は、ベバシズマブの保存のための緩衝製剤を特徴とする。ベバシズマブは、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでもよく、あるいは配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。この緩衝製剤では、ベバシズマブは、約１０ｍｇ〜約５０ｍｇ、より好ましくは約１５ｍｇ／ｍＬ〜約３５ｍｇ／ｍＬ、より好ましくは約２４ｍｇ／ｍＬ〜約２７ｍｇ／ｍＬ、より好ましくは約２５ｍｇ／ｍＬ〜約２５．５ｍｇ／ｍＬの濃度で存在してもよい。この製剤は水性であり、緩衝液はクエン酸リン酸塩または酢酸ナトリウムを含んでもよく、製剤はまた、トレハロースまたはショ糖などの糖を含む安定剤、ならびにポリソルベート２０などの緩慢な界面活性剤を含んでもよい。製剤は、好ましくは約５．６〜約６．１の酸性ｐＨを有し、側面によっては、このｐＨは、約５．６、約５．８、または約６である。
【００２５】
側面によっては、製剤は、約１０ｍＭ〜約１００ｍＭのクエン酸リン酸塩、約１００ｍＭ〜約２００ｍＭのトレハロース、および約０．０１％（ｖ／ｖ）〜約０．１％（ｖ／ｖ）のポリソルベート２０を含む緩衝液を含み、そのｐＨは約５．７〜約６．１である。クエン酸リン酸塩は、約３０ｍＭ〜約７０ｍＭ、約４０ｍＭ〜約６０ｍＭ、約４８ｍＭ〜約５２ｍＭ、約４９ｍＭ〜約５１ｍＭ、または約５０ｍＭ〜約５１ｍＭの濃度範囲にあってもよく、あるいは約５０ｍＭ、または約５１ｍＭの濃度であってもよい。トレハロースは、約１２０ｍＭ〜約１８０ｍＭ、約１５０ｍＭ〜約１７０ｍＭ、約１５７ｍＭ〜約１６１ｍＭ、約１４０ｍＭ〜約１８０ｍＭ、または約１５８ｍＭ〜約１６０ｍＭの濃度範囲であってもよく、あるいは約１５９ｍＭ、または約１６０ｍＭの濃度であってもよい。ポリソルベートは、約０．０２％（ｖ／ｖ）〜約０．０６％（ｖ／ｖ）、または約０．０３％（ｖ／ｖ）〜約０．０５％（ｖ／ｖ）の濃度範囲であってもよく、あるいは約０．０４％（ｖ／ｖ）の濃度であってもよい。製剤のｐＨは、約５．８であってもよく、あるいは約６であってもよい。
【００２６】
側面によっては、製剤は、約５ｍＭ〜約２５ｍＭの酢酸ナトリウム三水和物、約１５０ｍＭ〜約２０１ｍＭのショ糖、および約０．０３％（ｖ／ｖ）〜約０．０５％（ｖ／ｖ）のポリソルベート２０を含む緩衝液を含み、そのｐＨは約５．５〜約５．９である。酢酸ナトリウム三水和物は、約１１ｍＭ〜約１９ｍＭ、約１３ｍＭ〜約１７ｍＭ、または約１３ｍＭ〜約１６ｍＭの濃度範囲であってもよく、あるいは約１５ｍＭの濃度であってもよい。ショ糖は、約１６５ｍＭ〜約１８５ｍＭ、約１７０ｍＭ〜約１８０ｍＭ、または約１７４ｍＭ〜約１７６ｍＭの濃度範囲であってもよく、あるいは約１７５ｍＭの濃度であってもよい。
【００２７】
本開示は緩衝抗体製剤を提供し、この製剤は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体、および約１０ｍＭ〜約１００ｍＭのクエン酸リン酸塩、約１００ｍＭ〜約２００ｍＭのトレハロース、および約０．０１％（ｖ／ｖ）〜約０．１％（ｖ／ｖ）のポリソルベート２０を含む緩衝液を含み、この抗体製剤のｐＨは約５．７〜約６．１である。好ましくは、抗体製剤は、５℃の冷蔵条件で保存される場合に少なくとも１８ヶ月間安定である。
【００２８】
本開示はまた緩衝抗体製剤を提供し、この製剤は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む約１５ｍｇ／ｍＬ〜約３５ｍｇ／ｍＬの抗体、および約４０ｍＭ〜約６０ｍＭのクエン酸リン酸塩、約１４０ｍＭ〜約１８０ｍＭのトレハロース、および約０．０２％（ｖ／ｖ）〜約０．０６％（ｖ／ｖ）のポリソルベート２０を含む緩衝液を含み、この抗体製剤のｐＨは約５．７〜約６．１である。好ましくは、抗体製剤は、５℃の冷蔵条件で保存される場合に少なくとも１８ヶ月間安定である。
【００２９】
本開示は緩衝抗体製剤を提供し、この製剤は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む約２４ｍｇ／ｍＬ〜約２７ｍｇ／ｍＬの抗体、および約４８ｍＭ〜約５２ｍＭのクエン酸リン酸塩、約１５７ｍＭ〜約１６１ｍＭのトレハロース、および約０．０３％（ｖ／ｖ）〜約０．０５％（ｖ／ｖ）のポリソルベート２０を含む緩衝液を含み、この抗体製剤のｐＨは約５．８〜約６．０である。好ましくは、抗体製剤は、５℃の冷蔵条件で保存される場合に少なくとも１８ヶ月間安定である。
【００３０】
本開示は緩衝抗体製剤を提供し、この製剤は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体、および約５０ｍＭのクエン酸リン酸塩、約１５９ｍＭのトレハロース、および約０．０４％（ｖ／ｖ）のポリソルベート２０を含む緩衝液を含み、この抗体製剤のｐＨは約５．８〜約６である。好ましくは、抗体製剤は、５℃の冷蔵条件で保存される場合に少なくとも１８ヶ月間安定である。
【００３１】
本開示はまた緩衝抗体製剤を提供し、この製剤は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む約２０ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの抗体、および約５ｍＭ〜約２５ｍＭの酢酸ナトリウム、約１５０ｍＭ〜約２０１ｍＭのショ糖、および約０．０３％（ｖ／ｖ）〜約０．０５％（ｖ／ｖ）のポリソルベート２０を含む緩衝液を含み、この抗体製剤のｐＨは約５．６〜約５．８である。好ましくは、抗体製剤は、５℃の冷蔵条件で保存される場合に少なくとも１８ヶ月間安定である。
【００３２】
本開示はまた緩衝抗体製剤を提供し、この製剤は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む約２４ｍｇ／ｍＬ〜約２６ｍｇ／ｍＬの抗体、および約１３ｍＭ〜約１７ｍＭの酢酸ナトリウム、約１７０ｍＭ〜約１８０ｍＭのショ糖、および約０．０３％（ｖ／ｖ）〜約０．０５％（ｖ／ｖ）のポリソルベート２０を含む緩衝液を含み、この抗体製剤のｐＨは約５．６〜約５．８である。好ましくは、抗体製剤は、５℃の冷蔵条件で保存される場合に少なくとも１８ヶ月間安定である。
【００３３】
本開示はまた緩衝抗体製剤を提供し、この製剤は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体、および約１５ｍＭの酢酸ナトリウム、約１７５ｍＭのショ糖、および約０．０４％（ｖ／ｖ）のポリソルベート２０を含む緩衝液を含み、この抗体製剤のｐＨは約５．６〜約５．８である。好ましくは、抗体製剤は、５℃の冷蔵条件で保存される場合に少なくとも１８ヶ月間安定である。
【００３４】
本開示はまた緩衝抗体製剤を提供し、この製剤は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体、および約１５ｍＭの酢酸ナトリウム、約１７５ｍＭのショ糖、および約０．０４％（ｖ／ｖ）のポリソルベート２０を含む緩衝液を含み、この抗体製剤のｐＨは約５．６〜約５．８である。好ましくは、抗体製剤は、５℃の冷蔵条件で保存される場合に少なくとも１８ヶ月間安定である。
【００３５】
本開示はまた、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含む本明細書に開示の任意の緩衝抗体製剤を含むキットを提供する。このキットはさらに、抗体製剤を対象に注入するための装置を含んでもよい。この装置は、注射器、針、カテーテル、またはそれらの任意の組合せを含んでもよい。キットはさらに、本明細書に開示の１種以上の癌を治療するための使用説明書を含んでもよい。
【００３６】
本開示はまた、それを必要とする対象での癌を治療する方法を提供し、この方法は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含む本明細書に開示の任意の緩衝抗体製剤を、前記癌を治療するのに有効な量で対象に投与することを含む。
【００３７】
本開示はまた任意の緩衝抗体製剤を提供し、この製剤は、癌の治療用薬剤の製造に使用するための配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む明細書に開示の抗体を含む。
【００３８】
任意の抗体製剤を、白金製剤耐性の再発性上皮性卵巣がん、卵管がん、または原発性腹膜がんのうちの１種以上を治療する方法に使用できる。一般的に、この方法は、白金製剤耐性の再発性上皮性卵巣がん、卵管がん、または原発性腹膜がんのうちの１種以上を治療するのに有効な量で、ベバシズマブ抗体を含む製剤をそれを必要とする対象に投与することを含む。対象は好ましくはヒトであり、この製剤を好ましくは静脈内注入または注射を介して投与する。任意の抗体製剤を、白金製剤耐性の再発性上皮性卵巣がん、卵管がん、または原発性腹膜がん、持続再発性または転移性の子宮頸がん、転移性大腸がん、転移性ＨＥＲ２（ヒト表皮成長因子受容体２）陰性乳がん、転移性腎細胞がん、神経膠芽細胞腫、または非小細胞肺がんのうちの１種以上などの癌の治療用薬剤の製造に同様に使用できる。
【００３９】
別段の定義がない限り、本明細書に使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者が通常理解するのと同一の意味を有する。本明細書に引用される全ての特許および刊行物は、その全体が参照により全ての目的のために組み込まれる。
【００４０】
実施形態によっては、本開示は、安定な抗体組成物を製造する方法を特徴とする。実施形態によっては、この方法は、出発組成物、例えば、ｐＨが約４．７〜約５．３の出発組成物を限外濾過する工程を含む。実施形態によっては、出発組成物は、抗体および出発緩衝液組成物を含む、本質的にそれらからなる、あるいはそれらからなる。実施形態によっては、出発組成物は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体などの４ｍｇ／ｍＬ〜６ｍｇ／ｍＬまたは約４ｍｇ／ｍＬ〜約６ｍｇ／ｍＬの抗体を含む、本質的にそれからなる、またはそれからなる。実施形態によっては、出発組成物の限外濾過により、濃縮組成物を生成する。実施形態によっては、濃縮組成物は、数値の終端も含めて、３０ｇ／Ｌ〜４０ｇ／Ｌまたは約３０ｇ／Ｌ〜約４０ｇ／Ｌの抗体を含む。実施形態によっては、濃縮組成物のｐＨは、４．０〜６．０または約４．０〜約６．０、例えば、４．５〜５．５または約４．５〜約５．５である。実施形態によっては、濃縮組成物のｐＨは、５．０または約５．０である。
【００４１】
実施形態によっては、この方法は、出発緩衝液組成物を、６％（ｗ／ｖ）のトレハロース水溶液を含む交換溶液により交換して（例えば透析をかけて）、トレハロース組成物を生成することを含む。実施形態によっては、トレハロース組成物は、数値の終端も含めて、２０ｇ／Ｌ〜５０ｇ／Ｌまたは約２０ｇ／Ｌ〜約５０ｇ／Ｌ、３０ｇ／Ｌ〜４０ｇ／Ｌまたは約３０ｇ／Ｌ〜約４０ｇ／Ｌ、あるいは約３５ｇ／Ｌの抗体を含む。実施形態によっては、トレハロース組成物は、数値の終端も含めて、約３０ｇ／Ｌ〜約４０ｇ／Ｌの抗体を含む。実施形態によっては、トレハロース組成物のｐＨは、４．０〜６．０または約４．０〜約６．０、例えば４．５〜５．５または約４．５〜約５．５である。実施形態によっては、トレハロース組成物のｐＨは、５．０または約５．０である。
【００４２】
実施形態によっては、この方法は、トレハロース組成物をリン酸塩組成物と接触させて、ｐＨ調整組成物を生成することを含む。実施形態によっては、リン酸塩組成物は、４００〜６００ｍＭまたは約４００〜約６００ｍＭのリン酸ナトリウム、例えば４５０〜５５０ｍＭまたは約４５０〜約５５０ｍＭのリン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、リン酸塩組成物は、約５００ｍＭのリン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、ｐＨ調整組成物中のリン酸ナトリウムの最終濃度は、４０〜６０ｍＭまたは約４０〜約６０ｍＭ、例えば４５〜５５ｍＭまたは約４５〜約５５ｍＭである。実施形態によっては、ｐＨ調整組成物中のリン酸ナトリウムの最終濃度は、約５０ｍＭである。実施形態によっては、ｐＨ調整組成物のｐＨは、数値の終端も含めて、５．０〜７．０または約５．０〜約７．０、例えば５．９〜６．３または約５．９〜約６．３である。実施形態によっては、ｐＨ調整組成物のｐＨは約６．１である。
【００４３】
実施形態によっては、この方法は、対象への送達のためにｐＨ調整組成物を処方する工程を含み、それにより安定な抗体組成物を生成する。実施形態によっては、安定な抗体組成物は、１５％以下の高分子量種（ＨＭＷＳ）、例えば１０％以下、７．５％以下、６％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２．５％以下、２％以下、１．５％以下、または１％以下のＨＭＷＳを含む。実施形態によっては、安定な抗体組成物は、６％以下のＨＭＷＳを含む。
【００４４】
実施形態によっては、安定な抗体組成物を、ＯＮＳ−５０１０と呼ぶ場合もある。
【００４５】
実施形態によっては、出発組成物のｐＨは、４．０〜６．０または約４．０〜約６．０、例えば４．５〜５．５または約４．５〜約５．５、あるいは４．７〜５．３または約４．７〜約５．３である。実施形態によっては、出発組成物のｐＨは、約５．０である。
【００４６】
実施形態によっては、出発緩衝液組成物は、１０〜４０ｍＭまたは約１０〜約４０ｍＭの酢酸ナトリウム、例えば１５〜３５ｍＭまたは約１５〜約３５ｍＭの酢酸ナトリウム、あるいは２０〜３０ｍＭまたは約２０〜約３０ｍＭの酢酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、出発緩衝液組成物は、約２５ｍＭの酢酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、出発緩衝液は、２００〜３００ｍＭまたは約２００〜約３００ｍＭのＮａＣｌ、例えば２２５〜２４０ｍＭまたは約２２５〜約２４０ｍＭのＮａＣｌを含む。実施形態によっては、出発緩衝液組成物は、約２３７ｍＭのＮａＣｌを含む。実施形態によっては、出発緩衝液組成物のｐＨは、４．０〜６．０または約４．０〜約６．０、例えば４．５〜５．５または約４．５〜約５．５である。実施形態によっては、出発緩衝液組成物のｐＨは約５．０である。
【００４７】
実施形態によっては、限外濾過工程では、３０ｋＤＡ膜の使用を含む。実施形態によっては、前記膜はポリエーテルスルホン膜である。実施形態によっては、この膜は、１０００ｇ／ｍ2以下、７５０ｇ／ｍ2以下、５００ｇ／ｍ2以下、または２５０ｇ／ｍ2以下の負荷に耐える。実施形態によっては、膜は、約５００ｇ／ｍ2以下〜約１００ｇ／ｍ2以下の負荷に耐える。実施形態によっては、膜は、約３００ｇ／ｍ2以下の負荷に耐える。実施形態によっては、限外濾過工程は、約４５０ＬＭＨ以下の供給流量を有する。実施形態によっては、限外濾過工程は、約３７５ＬＭＨの供給流量を有する。実施形態によっては、限外濾過工程は、約２５ｐｓｉ以下の濃縮圧力を有する。実施形態によっては、限外濾過工程は、５ｐｓｉまたは約５ｐｓｉの濃縮圧力を有する。実施形態によっては、限外濾過工程は、約２０ｐｓｉ以下の膜貫通圧力（ＴＭＰ）を有する。実施形態によっては、限外濾過工程は、約１５ｐｓｉの膜貫通圧力（ＴＭＰ）を有する。
【００４８】
実施形態によっては、濃縮組成物は、２０〜５０ｍｇ／ｍＬまたは約２０〜約５０ｍｇ／ｍＬ、例えば、２５〜４５ｍｇ／ｍＬまたは約２５〜約４５ｍｇ／ｍＬ、あるいは３０〜４０ｍｇ／ｍＬまたは約３０〜約４０ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。実施形態によっては、濃縮組成物は３５ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。実施形態によっては、濃縮組成物のｐＨは、４．０〜６．０または約４．０〜約６．０、例えば、４．５〜５．５または約４．５〜約５．５である。実施形態によっては、濃縮組成物のｐＨは、５．０または約５．０である。
【００４９】
本開示は、安定な抗体組成物を製造する方法を特徴とし、この方法は、６％（ｗ／ｖ）のトレハロース水溶液を含む、本質的にそれからなる、またはそれからなる交換溶液によって出発緩衝液組成物を交換して、トレハロース組成物を生成する工程を含む。実施形態によっては、トレハロース組成物は、数値の終端も含めて、約３０ｇ／Ｌ〜約４０ｇ／Ｌの抗体を含む。実施形態によっては、トレハロース組成物のｐＨは、４．０〜６．０または約４．０〜約６．０、例えば、４．５〜５．５または約４．５〜約５．５である。実施形態によっては、トレハロース組成物のｐＨは約５．０である。
【００５０】
実施形態によっては、交換溶液は、６％（ｗ／ｖ）のα、α’−トレハロース水溶液を含む。実施形態によっては、交換組成物のｐＨは、４．０〜６．０または約４．０〜約６．０、例えば４．５〜５．５または約４．５〜約５．５である。実施形態によっては、交換組成物のｐＨは約５．０である。実施形態によっては、トレハロース組成物は、２０〜５０ｇ／Ｌまたは約２０〜約５０ｇ／Ｌ、例えば２５〜４５ｇ／Ｌまたは約２５〜約４５ｇ／Ｌ、あるいは３０〜４０ｇ／Ｌまたは約３０〜約４０ｇ／Ｌの抗体を含む。実施形態によっては、トレハロース組成物は、約３５ｇ／Ｌの抗体を含む。
【００５１】
本開示の方法は、トレハロース組成物を濃縮する工程および脱分極する工程を含んでもよい。実施形態によっては、脱分極工程は、３０ｐｓｉｇ以下の圧力でトレハロース組成物を再循環させることを含む。実施形態によっては、再循環を６０分以内で実施する。実施形態によっては、再循環を約１０分間で実施する。実施形態によっては、濃縮工程にはプラグフローチェイスの使用を含む。濃縮工程がプラグフローチェイスの使用を含む実施形態によっては、トレハロース組成物は、数値の終端も含めて、２７．５ｇ／Ｌ〜３２．５ｇ／Ｌの抗体を含む。
【００５２】
本開示の方法は、トレハロース組成物をリン酸塩組成物と接触させて、ｐＨ調整組成物を生成する工程を含む。実施形態によっては、リン酸塩組成物は、約５００ｍＭのリン酸ナトリウムを含む、本質的にそれからなる、またはそれからなる。実施形態によっては、ｐＨ調整組成物中のリン酸ナトリウムの最終濃度は、約５０ｍＭである。実施形態によっては、ｐＨ調整組成物のｐＨは、数値の終端も含めて、５．０〜７．０または約５．０〜約７．０、例えば５．９〜６．３または約５．９〜約６．３である。実施形態によっては、ｐＨ調整組成物のｐＨは約６．１である。
【００５３】
実施形態によっては、リン酸塩組成物は、４５０〜５５０ｍＭまたは約４５０〜約５５０ｍＭのリン酸ナトリウム、５００〜５２０ｍＭまたは約５００〜約５２０ｍＭのリン酸ナトリウム、あるいは約５１０ｍＭのリン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、ｐＨ調整組成物中のリン酸ナトリウムの最終濃度は、４５〜５５ｍＭまたは約４５〜約５５ｍＭ、例えば、約５１ｍＭである。実施形態によっては、リン酸塩組成物は、一塩基性リン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、リン酸塩組成物は、二塩基性リン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、リン酸塩組成物は、一塩基性リン酸ナトリウムおよび二塩基性リン酸ナトリウムの両方を含む。実施形態によっては、リン酸塩組成物は、二塩基性リン酸ナトリウム無水物を含む。実施形態によっては、リン酸塩組成物は、一塩基性リン酸ナトリウム一水和物を含む。実施形態によっては、リン酸塩組成物は、一塩基性リン酸ナトリウム二水和物を含む。実施形態によっては、リン酸塩組成物はトレハロースを含む。実施形態によっては、リン酸塩組成物は、α、α’−トレハロースを含む。実施形態によっては、リン酸塩組成物は、１０〜１５ｇ／Ｌまたは約１０〜約１５ｇ／Ｌの二塩基性リン酸ナトリウム無水物、例えば、約１２ｇ／Ｌの二塩基性リン酸ナトリウム無水物を含む。実施形態によっては、リン酸塩組成物は、５０〜７５ｇ／Ｌまたは約５０〜約７５ｇ／Ｌの一塩基性リン酸ナトリウム一水和物、例えば、約５８ｇ／Ｌの一塩基性リン酸ナトリウム一水和物を含む。実施形態によっては、リン酸塩組成物は、５０〜７０ｇ／Ｌまたは約５０〜約７０ｇ／Ｌ、あるいは５５〜６５ｇ／Ｌまたは約５５〜約６５ｇ／Ｌのα、α’−トレハロース、例えば約６０ｇ／Ｌのα、α’−トレハロースを含む。実施形態によっては、リン酸塩組成物のｐＨは、５．０〜７．０または約５．０〜約７．０、例えば５．５〜６．０または約５．５〜約６．０である。実施形態によっては、リン酸塩組成物のｐＨは５．７４である。
【００５４】
実施形態によっては、接触工程は、数値の終端も含めて、１秒〜３６００秒、例えば、１０００秒〜３０００秒または約１０００〜約３０００秒、あるいは１５００秒〜２５００秒または約１５００秒〜約２５００秒、あるいは約１８００秒の持続時間で実施される。
【００５５】
本開示の方法は、対象に送達するためにｐＨ調整組成物を処方して安定な抗体組成物を生成する工程を含む。実施形態によっては、安定な抗体組成物は、１５％以下の高分子量種（ＨＭＷＳ）を含み、例えば１０％以下、７．５％以下、６％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２．５％以下、２％以下、１．５％以下、または１％以下のＨＭＷＳを含む。実施形態によっては、安定な抗体組成物は、６％以下の高分子量種（ＨＭＷＳ）を含む、本質的にそれからなる、またはそれからなる。
【００５６】
実施形態によっては、処方工程は、ｐＨ調整組成物をポリソルベート組成物と接触させることを含む。実施形態によっては、ポリソルベート組成物は、約２０％、約１５％、約１０％、約５％、または約１％（ｍ／ｖ）のポリソルベート２０を含む。実施形態によっては、ポリソルベート組成物は、約１０％（ｍ／ｖ）のポリソルベート２０を含む。
【００５７】
実施形態によっては、安定な抗体組成物のｐＨは、数値の終端も含めて、５．９〜６．３である。実施形態によっては、安定な抗体組成物のｐＨは６．１である。実施形態によっては、安定な抗体組成物は、数値の終端も含めて、１５〜３５ｍｇ／ｍＬまたは約１５〜約３５ｍｇ／ｍＬ、例えば２０〜３０ｍｇ／ｍＬまたは約２０〜約３０ｍｇ／ｍＬの抗体の最終濃度を有する。実施形態によっては、安定な抗体組成物は、数値の終端も含めて、２２．５ｍｇ／ｍＬ〜２７．５ｍｇ／ｍＬの抗体の最終濃度を有する。実施形態によっては、安定な抗体組成物は、０．０１％〜０．１％（ｍ／ｖ）または約０．０１％〜約０．１％（ｍ／ｖ）のポリソルベート２０、例えば０．０２％〜０．０６％（ｍ／ｖ）または約０．０２％〜約０．０６％（ｍ／ｖ）のポリソルベート２０の最終濃度を有する。実施形態によっては、安定な抗体組成物は、０．０４％（ｍ／ｖ）のポリソルベート２０の最終濃度を有する。
【００５８】
実施形態によっては、安定な抗体組成物は、数値の終端も含めて、２〜６ｍＳ／ｃｍまたは約２〜約６ｍＳ／ｃｍ、例えば３〜５ｍＳ／ｃｍまたは約３〜約５ｍＳ／ｃｍの導電率を有する。実施形態によっては、安定な抗体組成物は、数値の終端も含めて、約３．５〜約４．５ｍＳ／ｃｍの導電率を有する。
【００５９】
実施形態によっては、処方工程後の安定な抗体組成物中での抗体の期待収率は、８０％以上、８５％以上、または９０％以上である。実施形態によっては、処方工程後の安定な抗体組成物中の抗体の期待収率は、９５％以上である。
【００６０】
実施形態によっては、安定な抗体組成物は、処方工程完了の２４ヶ月後に、１５％以下、１２％以下、１０％以下、８％以下、７％以下、６％以下、または５％以下のＨＭＷＳを含む。実施形態によっては、安定な抗体組成物は、処方工程完了の２４ヶ月後に、８％以下のＨＭＷＳを含む。実施形態によっては、安定な抗体組成物は、処方工程完了後の１ヶ月毎に、数値の終端も含めて、０．１％〜１％または約０．１％〜約１％、０．２％〜０．６％または約０．２％〜約０．６％、あるいは０．３％〜０．４％または約０．３％〜約０．４％のＨＭＷＳを蓄積する。実施形態によっては、安定な抗体組成物は、処方工程完了後の１ヶ月毎に、数値の終端も含めて、０．２５％〜０．５０％のＨＭＷＳを蓄積する。
【００６１】
実施形態によっては、安定な抗体組成物は、数値の終端も含めて、配列番号１のアミノ酸配列のメチオニン残基の５、４、３、２．５、２、１．５、１、または０．５％以下の酸化を含む。実施形態によっては、安定な抗体組成物は、数値の終端も含めて、配列番号１のアミノ酸配列のメチオニン残基の２．５％以下の酸化を含む。実施形態によっては、安定な抗体組成物は、数値の終端も含めて、配列番号２のアミノ酸配列のメチオニン残基の５、４、３、２．５、２、１．５、１、または０．５％以下の酸化を含む。実施形態によっては、安定な抗体組成物は、数値の終端も含めて、配列番号２のアミノ酸配列のメチオニン残基の２．５％以下の酸化を含む。特定の実施形態では、配列番号１のアミノ酸配列のメチオニン残基の酸化は、配列番号１の２５８位のメチオニンの酸化を含む。
【００６２】
実施形態によっては、安定な抗体組成物を、処方工程の完了後の１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００日、またはそれ以上の日数以内は−２０℃±５℃で保存する。実施形態によっては、安定な抗体組成物を、処方工程の完了後の６０日以内は−２０℃±５℃で保存する。実施形態によっては、安定な抗体組成物を、安定な抗体組成物の製造日後の６０日以内は−２０℃±５℃で保存する。
【００６３】
安定な抗体組成物は、それを必要とする対象の癌を治療するために使用できる。実施形態によっては、治療は、前記癌を治療するのに有効な量で安定な抗体組成物を対象に投与することを含む。実施形態によっては、対象はヒトである。癌は、白金製剤耐性の再発性上皮性卵巣がん、卵管がん、原発性腹膜がん、持続性子宮頸がん、再発性子宮頸がん、転移性子宮頸がん、転移性大腸がん、転移性ＨＥＲ２陰性乳がん、転移性腎細胞がん、神経膠芽細胞腫、または非小細胞肺がんであってもよい。
【００６４】
別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者が通常理解するのと同一の意味を有する。明細書では、文脈で明確に別段の指示をしない限り、単数形には複数形も含まれる。本明細書に記載されるものと類似または同等の方法および材料を本開示の実施または試験に使用できるが、適切な方法および材料を以下に説明する。本明細書に記載の全ての刊行物、特許出願、特許、およびその他の参考文献は、全ての目的のためにそれらの全体が参照により組み込まれる。本明細書で引用される参考文献は、請求される本開示内容に対して先行技術であるとは見做されない。矛盾がある場合には、定義を含み本明細書が優先される。さらに、材料、方法、および実施例は単なる例示であり、限定することを意図するものではない。本開示のその他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および特許請求範囲により明らかにされる。
【００６５】
本開示の全体を通して、請求内容の種々の側面を範囲の形式で示している。当然なことであるが、範囲の形式での説明は、単に便宜性および簡潔性のためであり、請求内容の範囲に対する不動の制限として解釈されるべきではない。従って、範囲の説明は、全ての可能性のある部分範囲、ならびにその範囲内の個々の数値を具体的に開示していると見做すべきである。例えば、数値範囲が提示される場合に、その範囲の上限値および下限値の間のそれぞれの介在値およびその指定範囲内の任意のその他の指定値または介在値は、請求内容内に包含されるのは当然である。これらのより狭い範囲の上限値および下限値は、そのより狭い範囲内に個別に含まれてもよく、また指定範囲内の任意の限界値を特定的に除外することを条件として、請求内容内に包含される。指定範囲が一方または両方の限界値を含む場合に、その含まれる限界値の一方または両方を除外する範囲もまた、請求内容内に含まれる。このことは、範囲の幅に関係なく適用される。
【００６６】
本明細書で使用される用語「約」は、この技術分野の当業者に容易に認知できるそれぞれの数値の通常の誤差範囲を指す。「約」に関して、本明細書での数値またはパラメータは、その数値またはパラメータそれ自体を対象とする実施形態を含んでいる（また説明している）。例えば、「約Ｘ」に関する説明は「Ｘ」の説明も含む。
【００６７】
本発明の側面に関連する様々な用語を、明細書および特許請求範囲の全体にわたって使用する。これらの用語は、特に明記しない限り、当技術分野でのそれらの通常の意味を持つことになる。その他の特定的に定義される用語は、本明細書に示される定義に一致する形で解釈されるべきである。
【００６８】
本明細書で使用される単数形の「a」、「an」、および「the」は、他に明記しない限り、複数の指示対象を含む。
【００６９】
本明細書で使用される用語「comprising（含む）」、「having（有する）」、および「including（含む）」は、より限定的な用語である「consisting essentially of（本質的にからなる）」および「consisting of（からなる）」を包含する。
【００７０】
対象および患者という用語は互換的に使用され、あらゆる動物を含む。対象として、伴侶哺乳類および家畜哺乳類を含む哺乳類、ならびにマウス、ウサギ、およびラットを含むげっ歯類、およびその他のげっ歯類が挙げられる。好ましい対象はヒト以外の霊長類であり、特に好ましい対象はヒトである。
【００７１】
組成物および製剤という用語は、互換的に使用される。従って、本開示の製剤は、本開示の組成物であってもよく、また本開示の組成物は、本開示の製剤であってもよい。
【００７２】
本発明によれば、血管内皮増殖因子に特異的に結合するベバシズマブ後発生物製剤の抗体製剤は、トレハロースまたはショ糖とともにクエン酸リン酸塩により緩衝され、またはショ糖とともに（クエン酸リン酸塩に代えて）酢酸塩で緩衝され、これらの緩衝液は、抗体の熱安定性およびコロイド安定性を向上させて、現在患者への使用が承認されているベバシズマブ（Avastin（登録商標）の商標で市販中）製剤よりもさらに優れることが見出された。特に、本発明の製剤では抗体の凝集が顕著に少なかった。緩衝液は、抗体分子の保存寿命を引き延ばす。従って、本開示は、酸性ｐＨでクエン酸リン酸塩を含む緩衝液ならびにトレハロースまたはショ糖を含む水溶性担体、あるいは別の選択肢として酸性ｐＨで酢酸塩を含む緩衝液ならびにショ糖を含む水溶性担体を含むベバシズマブ後発生物製剤の抗体緩衝製剤を特徴とする。
【００７３】
抗体は血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）表面のエピトープに特異的に結合し、このエピトープは鎖状でも立体構造でもよい。側面によっては、抗体は、配列番号１のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも約８０、８５、９０、９５、または９９％の同一性を有する配列を含む重鎖を含む。好ましい側面によっては、抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。好ましい側面によっては、抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。好ましくは、抗体は、重鎖定常ドメインおよび／または軽鎖定常ドメインを含む。特に好ましい側面では、抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。側面によっては、抗体は、配列番号３のアミノ酸配列の重鎖可変領域および配列番号４のアミノ酸配列の軽鎖可変領域を含む。
【表１−１】
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【００７４】
実施形態によっては、抗体は、可変領域および定常領域の両方を含む完全長抗体であるが、側面によっては、抗体は、抗原結合特異性を保持し、また好ましくは完全長抗体分子の殆どまたは全ての親和性を保持する完全長抗体の誘導体または断片または一部分を含んでいてもよい。抗体は、抗体の活性または安定性に影響を及ぼす可能性のある翻訳後修飾（ＰＴＭ）または部分を含んでいてもよい。抗体は、メチル化、アセチル化、グリコシル化、硫酸化、リン酸化、カルボキシル化、および／またはアミド化されていてもよく、かつ当技術分野で周知の他の部分を含んでいてもよい。
【００７５】
製剤は、好ましくは、治療有効量の抗体を含む。治療有効量は、抗体の投与時に治療される疾患または病気に応じて、かつ／あるいは年齢、性別、身長、体重、疾患または病気の進行状態または病期、過去の投与の回数および有効性、対象に投与された他の治療薬、および主治医には既知である、または適切な投薬を決定する際に考慮される他の特徴などの抗体を投与する対象の特徴に応じて変更してもよい。好ましくは、治療有効量は、非扁平上皮非小細胞肺がん、神経膠芽腫、腎細胞がん、子宮頸がん、または上皮性卵巣がん、卵管がん、または原発性腹膜がんなどの癌を治療するのに有効な量である。
【００７６】
製剤は、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬの抗体を含んでもよい。側面によっては、製剤は、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。側面によっては、製剤は、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。側面によっては、製剤は、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。側面によっては、製剤は、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。側面によっては、製剤は、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。側面によっては、製剤は、約１５ｍｇ／ｍＬ〜約４５ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。側面によっては、製剤は、約１５ｍｇ／ｍＬ〜約３５ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。側面によっては、製剤は、約１５ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。側面によっては、製剤は、約２１ｍｇ／ｍＬ〜約２９ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。側面によっては、製剤は、約２２ｍｇ／ｍＬ〜約２８ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。側面によっては、製剤は、約２３ｍｇ／ｍＬ〜約２７ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。側面によっては、製剤は、約２４ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。側面によっては、製剤は、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。側面によっては、製剤は、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約２６ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。側面によっては、製剤は、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約２７ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。側面によっては、製剤は、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約２８ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。側面によっては、製剤は、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約２９ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。側面によっては、製剤は、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。側面によっては、製剤は、約２４ｍｇ／ｍＬ〜約２７ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。側面によっては、製剤は、約２４ｍｇ／ｍＬ〜約２８ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。側面によっては、製剤は、約２４ｍｇ／ｍＬ〜約２９ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。側面によっては、製剤は、約２４ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。側面によっては、製剤は、約２５．５ｍｇ／ｍＬ〜約２６ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。側面によっては、製剤は、約２５．４ｍｇ／ｍＬ〜約２５．９ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。側面によっては、製剤は、約２５．６ｍｇ／ｍＬ〜約２５．９ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。側面によっては、製剤は、約２５．５ｍｇ／ｍＬ〜約２５．８ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。側面によっては、製剤は、約２５．５ｍｇ／ｍＬ〜約２５．７ｍｇ／ｍＬの抗体含む。これらの範囲には、範囲を規定する下限値および上限値が含まれる。側面によっては、製剤は、約２５ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。側面によっては、製剤は、約２５．５ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。側面によっては、製剤は、約２５．６ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。側面によっては、製剤は、約２５．７ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。側面によっては、製剤は、約２５．８ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。
【００７７】
例えば、本明細書に記載または例示の濃度での抗体は、好ましくは水溶性の緩衝担体とともに処方され、担体は好ましくは水を含む。緩衝抗体製剤は、好ましくは液状形態であり、より好ましくは静脈内投与に適した液状形態である。従って、緩衝製剤中の水の量を、所望の注入量に応じて変更してもよい。好ましい側面によっては、緩衝液は、クエン酸リン酸塩、トレハロース、およびポリソルベート２０などの緩慢な界面活性剤を含み、抗体製剤を約５．８〜約６．０の酸性ｐＨに維持する。別の好ましい側面によっては、緩衝液は、酢酸塩、ショ糖、およびポリソルベート２０などの緩慢な界面活性剤を含み、抗体製剤を約５．６〜約５．８の酸性ｐＨに維持する。緩衝製剤中に保存した場合に、抗体には通常の保存条件で保存安定性がある。
【００７８】
クエン酸リン酸塩は、約０．２Ｍの二塩基性リン酸ナトリウムおよび約０．１Ｍのクエン酸を含む予備混合溶液となるように、二塩基性リン酸ナトリウム十二水和物およびクエン酸一水和物の水溶液の組合せを含む。
【００７９】
緩衝液は、約１０ｍＭ〜約１００ｍＭのクエン酸リン酸塩を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約２０ｍＭ〜約９０ｍＭのクエン酸リン酸塩を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約３０ｍＭ〜約７０ｍＭのクエン酸リン酸塩を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約３０ｍＭ〜約８０ｍＭのクエン酸リン酸塩を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約４０ｍＭ〜約７０ｍＭのクエン酸リン酸塩を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約４０ｍＭ〜約６０ｍＭのクエン酸リン酸塩を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約４５ｍＭ〜約５５ｍＭのクエン酸リン酸塩を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約４６ｍＭ〜約５４ｍＭのクエン酸リン酸塩を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約４７ｍＭ〜約５３ｍＭのクエン酸リン酸塩を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約４８ｍＭ〜約５２ｍＭのクエン酸リン酸塩を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約４９ｍＭ〜約５１ｍＭのクエン酸リン酸塩を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約４０ｍＭ〜約５０ｍＭのクエン酸リン酸塩を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約５０ｍＭ〜約７５ｍＭのクエン酸リン酸塩を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約３０ｍＭ〜約５５ｍＭのクエン酸リン酸塩を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約４０ｍＭ〜約５５ｍＭのクエン酸リン酸塩を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約４２ｍＭ〜約５２ｍＭのクエン酸リン酸塩を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約４６ｍＭ〜約５２ｍＭのクエン酸リン酸塩を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約４３ｍＭ〜約５３ｍＭのクエン酸リン酸塩を含んでもよい。これらの範囲には、範囲を規定する下限値および上限値が含まれる。側面によっては、緩衝液は、約５０ｍＭのクエン酸リン酸塩を含む。
【００８０】
クエン酸リン酸緩衝液は、約１００ｍＭ〜約２００ｍＭのトレハロースを含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１１０ｍＭ〜約１９０ｍＭのトレハロースを含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１２０ｍＭ〜約１８０ｍＭのトレハロースを含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１３０ｍＭ〜約１７０ｍＭのトレハロースを含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１４０ｍＭ〜約１７０ｍＭのトレハロースを含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１５０ｍＭ〜約１７０ｍＭのトレハロースを含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１５５ｍＭ〜約１６５ｍＭのトレハロースを含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１５０ｍＭ〜約１６０ｍＭのトレハロースを含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１５３ｍＭ〜約１６４ｍＭのトレハロースを含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１５２ｍＭ〜約１６７ｍＭのトレハロースを含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１５４ｍＭ〜約１６４ｍＭのトレハロースを含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１５５ｍＭ〜約１６３ｍＭのトレハロースを含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１５６ｍＭ〜約１６２ｍＭのトレハロースを含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１５７ｍＭ〜約１６１ｍＭのトレハロースを含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１５８ｍＭ〜約１６０ｍＭのトレハロースを含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１５８．５ｍＭ〜約１５８．９ｍＭのトレハロースを含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１５８．６ｍＭ〜約１５８．８ｍＭのトレハロースを含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１５８ｍＭ〜約１６１ｍＭのトレハロースを含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１５９ｍＭ〜約１６１ｍＭのトレハロースを含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１５７ｍＭ〜約１６０ｍＭのトレハロースを含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１５７ｍＭ〜約１５９ｍＭのトレハロースを含んでもよい。いくつかの側面では、緩衝液は、約１５０ｍＭ〜約１５９ｍＭのトレハロースを含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１５９ｍＭ〜約１６０ｍＭのトレハロースを含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１５９ｍＭ〜約１６５ｍＭのトレハロースを含んでもよい。これらの範囲には、範囲を規定する下限値および上限値が含まれる。側面によっては、緩衝液は、約１５９ｍＭのトレハロースを含む。側面によっては、緩衝液は、約１５８．７ｍＭのトレハロースを含む。側面によっては、ショ糖を、トレハロースの代えてこれらの濃度のいずれかで使用してもよい。従って、例えば、クエン酸リン酸緩衝液は、トレハロースに代えて安定剤としてショ糖を含んでもよい。
【００８１】
酢酸塩−ショ糖の緩衝液は、約１ｍＭ〜約３０ｍＭの酢酸塩を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約５ｍＭ〜約２５ｍＭの酢酸塩を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１０ｍＭ〜約２０ｍＭの酢酸塩を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１１ｍＭ〜約１９ｍＭの酢酸塩を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１２ｍＭ〜約１８ｍＭの酢酸塩を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１３ｍＭ〜約１５ｍＭの酢酸塩を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１０ｍＭ〜約１５ｍＭの酢酸塩を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１２ｍＭ〜約１６ｍＭの酢酸塩を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１２ｍＭ〜約１５ｍＭの酢酸塩を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１３ｍＭ〜約１６ｍＭの酢酸塩を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１３ｍＭ〜約１７ｍＭの酢酸塩を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１４ｍＭ〜約１８ｍＭの酢酸塩を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１４ｍＭ〜約１６ｍＭの酢酸塩を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１５ｍＭ〜約２０ｍＭの酢酸塩を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約５ｍＭ〜約１５ｍＭの酢酸塩を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１１ｍＭ〜約１７ｍＭの酢酸塩を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１５ｍＭ〜約１６ｍＭの酢酸塩を含んでもよい。これらの範囲には、範囲を規定する下限値および上限値が含まれる。側面によっては、緩衝液は、約１５ｍＭの酢酸塩を含む。好ましくは、酢酸塩は酢酸ナトリウム三水和物である。
【００８２】
酢酸塩−ショ糖またはクエン酸リン酸塩−ショ糖緩衝液は、約１００ｍＭ〜約２５０ｍＭのショ糖を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１２５ｍＭ〜約２２５ｍＭのショ糖を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１５０ｍＭ〜約２００ｍＭのショ糖を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１５５ｍＭ〜約１９５ｍＭのショ糖を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１６０ｍＭ〜約１９０ｍＭのショ糖を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１６５ｍＭ〜約１８５ｍＭのショ糖を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１６６ｍＭ〜約１８４ｍＭのショ糖を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１６７ｍＭ〜約１８３ｍＭのショ糖を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１６８ｍＭ〜約１８２ｍＭのショ糖を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１６９ｍＭ〜約１８１ｍＭのショ糖を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１７０ｍＭ〜約１８０ｍＭのショ糖を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１７１ｍＭ〜約１７９ｍＭのショ糖を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１７２ｍＭ〜約１７８ｍＭのショ糖を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１７４ｍＭ〜約１７７ｍＭのショ糖を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１７４ｍＭ〜約１７６ｍＭのショ糖を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１７５ｍＭ〜約１７５．５ｍＭのショ糖を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１７５．２ｍＭ〜１７５．４ｍＭのショ糖を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１７５ｍＭ〜約１８５ｍＭのショ糖を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１６５ｍＭ〜約１７５ｍＭのショ糖を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１７０ｍＭ〜約１９０ｍＭのショ糖を含んでもよい。側面によっては、緩衝液は、約１５０ｍＭ〜約１７５ｍＭのショ糖を含んでもよい。これらの範囲には、範囲を規定する下限値および上限値が含まれる。側面によっては、緩衝液は、約１７５ｍＭのショ糖を含む。側面によっては、緩衝液は、約１７５．３ｍＭのショ糖を含む。
【００８３】
（例えば、クエン酸リン酸塩−トレハロースまたは酢酸塩ショ糖緩衝液を含む）抗体製剤は、好ましくは、非イオン性界面活性剤を含む。より好ましくは、非イオン性界面活性剤は、（Croda International Plc, Yorkshire, Englandからの商標がTween（登録商標） 20であるポリソルベートを含んでもよい）ポリソルベート２０を含む。抗体および水性緩衝液を含む抗体製剤は、好ましくは、約０．０１％〜約０．１％（体積比）のポリソルベート２０を含む。側面によっては、抗体製剤は、約０．０２％〜約０．０９％（体積比）のポリソルベート２０を含む。側面によっては、抗体製剤は、約０．０３％〜約０．０８％（体積比）のポリソルベート２０を含む。側面によっては、抗体製剤は、約０．０１％〜約０．０７％（体積比）のポリソルベート２０を含む。側面によっては、抗体製剤は、約０．０２％〜約０．０６％（体積比）のポリソルベート２０を含む。側面によっては、抗体製剤は、約０．０３％〜約０．０５％（体積比）のポリソルベート２０を含む。側面によっては、抗体製剤は、約０．０４％〜約０．０６％（体積比）のポリソルベート２０を含む。側面によっては、抗体製剤は、約０．０２％〜約０．０５％（体積比）のポリソルベート２０を含む。側面によっては、抗体製剤は、約０．０２％〜約０．０４％（体積比）のポリソルベート２０を含む。側面によっては、抗体製剤は、約０．０３％〜約０．０６％（体積比）のポリソルベート２０を含む。側面によっては、抗体製剤は、約０．０１％〜約０．０５％（体積比）のポリソルベート２０を含む。側面によっては、抗体製剤は、約０．０３％〜約０．０４％（体積比）のポリソルベート２０を含む。側面によっては、抗体製剤は、約０．０４％〜約０．０５％（体積比）のポリソルベート２０を含む。側面によっては、抗体製剤は、約０．０３５％〜約０．０４５％（体積比）のポリソルベート２０を含む。これらの範囲には、範囲を規定する下限値および上限値が含まれる。側面によっては、抗体製剤は、約０．０４％（体積比）のポリソルベート２０を含む。
【００８４】
（例えば、クエン酸リン酸塩−トレハロース／ショ糖または酢酸塩ショ糖緩衝液を含む）抗体製剤を、好ましくは酸性ｐＨに緩衝する。製剤のｐＨは、好ましくは、約５．３〜約６．５である。側面によっては、製剤のｐＨは、約５．４〜約６．４である。好ましい側面によっては、製剤のｐＨは、約５．４〜約５．９である。好ましい側面によっては、製剤のｐＨは、約５．５〜約５．８である。好ましい側面によっては、製剤のｐＨは、約５．６〜約５．８である。好ましい側面によっては、製剤のｐＨは、約５．６〜約５．９である。側面によっては、製剤のｐＨは、約５．５〜約５．３である。好ましい側面によっては、製剤のｐＨは、約５．６〜約６．２である。側面によっては、製剤のｐＨは、約５．７〜約６．１である。側面によっては、製剤のｐＨは約５．８〜約６．０である。好ましい側面によっては、製剤のｐＨは、約５．４〜約５．９である。側面によっては、製剤のｐＨは、約５．６〜約５．９である。好ましい側面によっては、製剤のｐＨは、約５．７〜約５．９である。好ましい側面によっては、製剤のｐＨは、約５．９〜約６．１である。側面によっては、製剤のｐＨは、約６．０〜約６．２である。側面によっては、製剤のｐＨは、約５．７〜約６．０である。好ましい側面によっては、製剤のｐＨは、約５．８〜約６．１である。これらの範囲には、範囲を規定する下限値および上限値が含まれる。側面によっては、製剤のｐＨは、約５．８である。側面によっては、製剤のｐＨは、約５．９である。側面によっては、製剤のｐＨは、約６．０である。
【００８５】
好ましい側面によっては、抗体製剤は、ＶＥＧＦに特異的に結合し、かつ配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む約２０ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの抗体、および約３０ｍＭ〜約７０ｍＭのクエン酸リン酸塩、約１５０ｍＭ〜約１７０ｍＭのトレハロース、および約０．０１％〜約０．０７％（体積比）のポリソルベート２０を含む緩衝液を含み、そのｐＨは約５．６〜約６．０である。側面によっては、抗体製剤は、ＶＥＧＦに特異的に結合し、かつ配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む約２０ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの抗体、および約３０ｍＭ〜約７０ｍＭのクエン酸リン酸塩、約１５０ｍＭ〜約１７０ｍＭのトレハロース、および約０．０１％〜約０．０７％（体積比）のポリソルベート２０を含む緩衝液から本質的になり、そのｐＨは約５．６〜約６．０である。側面によっては、抗体製剤は、ＶＥＧＦに特異的に結合し、かつ配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む約２０ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの抗体、および約３０ｍＭ〜約７０ｍＭのクエン酸リン酸塩、約１５０ｍＭ〜約１７０ｍＭのトレハロース、および約０．０１％〜約０．０７％（体積比）のポリソルベート２０を含む緩衝液からなり、そのｐＨは約５．６〜約６．０である。任意の実施形態によっては、抗体は、約２１ｍｇ／ｍＬ〜約２９ｍｇ／ｍＬ、または約２２ｍｇ／ｍＬ〜約２８ｍｇ／ｍＬ、または約２３ｍｇ／ｍＬ〜２７ｍｇ／ｍＬ、または約２４ｍｇ／ｍＬ〜約２６ｍｇ／ｍＬ、または約２４．５ｍｇ／ｍＬ〜約２６．５ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約２６ｍｇ／ｍＬ、約２５．５ｍｇ／ｍＬ、約２５．６ｍｇ／ｍＬ、約２５．７ｍｇ／ｍＬ、または約２５．８ｍｇ／ｍＬで製剤中に存在してもよい。
【００８６】
好ましい側面によっては、抗体製剤は、ＶＥＧＦに特異的に結合し、かつ配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む約２０ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの抗体、および約４０ｍＭ〜約６０ｍＭのクエン酸リン酸塩、約１５４ｍＭ〜約１６４ｍＭのトレハロース、および約０．０２％〜約０．０６％（体積比）のポリソルベート２０を含む緩衝液を含み、そのｐＨは、約５．６〜約６．０、または約５．８、または約６．０である。側面によっては、抗体製剤は、ＶＥＧＦに特異的に結合し、かつ配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む約２０ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの抗体、および約４０ｍＭ〜約６０ｍＭのクエン酸リン酸塩、約１５４ｍＭ〜約１６４ｍＭのトレハロース、および約０．０２％〜約０．０６％（体積比）のポリソルベート２０を含む緩衝液から本質的になり、そのｐＨは、約５．６〜約６．０、または約５．８、または約６．０である。側面によっては、抗体製剤は、ＶＥＧＦに特異的に結合し、かつ配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む約２０ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの抗体、および約４０ｍＭ〜約６０ｍＭのクエン酸リン酸塩、約１５４ｍＭ〜約１６４ｍＭのトレハロース、および約０．０２％〜約０．０６％（体積比）のポリソルベート２０を含む緩衝液からなり、そのｐＨは、約５．６〜約６．０、または約５．８、または約６．０である。任意の実施形態によっては、抗体は、約２１ｍｇ／ｍＬ〜約２９ｍｇ／ｍＬ、または約２２ｍｇ／ｍＬ〜約２８ｍｇ／ｍＬ、または約２３ｍｇ／ｍＬ〜２７ｍｇ／ｍＬ、または約２４ｍｇ／ｍＬ〜約２６ｍｇ／ｍＬ、または約２４．５ｍｇ／ｍＬ〜約２６．５ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約２６ｍｇ／ｍＬ、約２５．５ｍｇ／ｍＬ、約２５．６ｍｇ／ｍＬ、約２５．７ｍｇ／ｍＬ、または約２５．８ｍｇ／ｍＬで製剤中に存在してもよい。
【００８７】
好ましい側面によっては、抗体製剤は、ＶＥＧＦに特異的に結合し、かつ配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む約２５ｍｇ／ｍＬ〜約２６．５ｍｇ／ｍＬの抗体、および約４５ｍＭ〜約５５ｍＭのクエン酸リン酸塩、約１５７ｍＭ〜約１６１ｍＭのトレハロース、および約０．０３％〜約０．０５％（体積比）のポリソルベート２０を含む緩衝液を含み、そのｐＨは、約５．６〜約６．０、または約５．８、または約６．０である。側面によっては、抗体製剤は、ＶＥＧＦに特異的に結合し、かつ配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む約２５ｍｇ／ｍＬ〜約２６．５ｍｇ／ｍＬの抗体、および約４５ｍＭ〜約５５ｍＭのクエン酸リン酸塩、約１５７ｍＭ〜約１６１ｍＭのトレハロース、および約０．０３％〜約０．０５％（体積比）のポリソルベート２０を含む緩衝液から本質的になり、そのｐＨは、約５．６〜約６．０、または約５．８、または約６．０である。側面によっては、抗体製剤は、ＶＥＧＦに特異的に結合し、かつ配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む約２５ｍｇ／ｍＬ〜約２６．５ｍｇ／ｍＬの抗体、および約４５ｍＭ〜約５５ｍＭのクエン酸リン酸塩、約１５７ｍＭ〜約１６１ｍＭのトレハロース、および約０．０３％〜約０．０５％（体積比）のポリソルベート２０を含む緩衝液からなり、そのｐＨは、約５．６〜約６．０、または約５．８、または約６．０である。任意の実施形態によっては、抗体は、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約２６ｍｇ／ｍＬ、または約２５．５ｍｇ／ｍＬ〜約２６ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約２６ｍｇ／ｍＬ、約２５．５ｍｇ／ｍＬ、約２５．６ｍｇ／ｍＬ、約２５．７ｍｇ／ｍＬ、または約２５．８ｍｇ／ｍＬで製剤中に存在してもよい。
【００８８】
好ましい側面によっては、抗体製剤は、ＶＥＧＦに特異的に結合し、かつ配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む約２５．５ｍｇ／ｍＬ〜約２６．１ｍｇ／ｍＬの抗体、および約５０ｍＭのクエン酸リン酸塩、約１５９ｍＭのトレハロース、および約０．０４％（体積比）のポリソルベート２０を含む緩衝液を含み、そのｐＨは、約５．８または約６．０である。側面によっては、抗体製剤は、ＶＥＧＦに特異的に結合し、かつ配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む約２５．５ｍｇ／ｍＬ〜約２６．１ｍｇ／ｍＬの抗体、および約５０ｍＭのクエン酸リン酸塩、約１５９ｍＭのトレハロース、および約０．０４％（体積比）のポリソルベート２０を含む緩衝液から本質的になり、そのｐＨは、約５．８または約６．０である。側面によっては、抗体製剤は、ＶＥＧＦに特異的に結合し、かつ配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む約２５．５ｍｇ／ｍＬ〜約２６．１ｍｇ／ｍＬの抗体、および約５０ｍＭのクエン酸リン酸塩、約１５９ｍＭのトレハロース、および約０．０４％（体積比）のポリソルベート２０を含む緩衝液からなり、そのｐＨは、約５．８または約６．０である。任意の実施形態によっては、抗体は、約２６ｍｇ／ｍＬ、約２５．５ｍｇ／ｍＬ、約２５．６ｍｇ／ｍＬ、約２５．７ｍｇ／ｍＬ、または約２５．８ｍｇ／ｍＬで製剤中に存在してもよい。
【００８９】
製剤は、特に数ヶ月〜数年の期間にわたって、保存性の向上のために抗体を安定させる。製剤として保存される場合に、抗体は、保存期間中に熱安定性およびコロイド安定性を維持する。例えば、製剤として保存される場合に、抗体は安定であり、凝集、凝結、分解、および変性が最小限に抑えられ、かつ抗体はそのＶＥＧＦ結合活性を保持している。
【００９０】
抗体製剤を、冷蔵条件で、好ましくは約２℃〜約６℃の温度、例えば約２℃、約３℃、約４℃、約５℃、約６℃、約７℃、約８℃の温度で保存することが好ましい。抗体製剤をその温度で少なくとも約３ヶ月間保存してもよい。側面によっては、抗体製剤をその温度で少なくとも約６ヶ月間保存してもよい。側面によっては、抗体製剤をその温度で少なくとも約９ヶ月間保存してもよい。側面によっては、抗体製剤をその温度で少なくとも約１２ヶ月間保存してもよい。側面によっては、抗体製剤をその温度で少なくとも約１５ヶ月間保存してもよい。側面によっては、抗体製剤をその温度で少なくとも約１８ヶ月間保存してもよい。側面によっては、抗体製剤をその温度で少なくとも約２１ヶ月間保存してもよい。側面によっては、抗体製剤をその温度で少なくとも約２４ヶ月間保存してもよい。保存期間中、抗体は安定であり、凝集、凝結、分解、および変性が最小限に抑えられ、抗体製剤が保管場所から取出され患者に投与されても、製剤が投与される病気に対して依然治療効力を示すことが可能なように、抗体はそのＶＥＧＦ結合活性を保持している。
【００９１】
製剤は、好ましくは、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの抗体、より好ましくは、約２５ｍｇ／ｍＬ、または約２５．５ｍｇ／ｍＬ、または約２６ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。この量の抗体タンパク質の範囲では、活性な天然型の抗体モノマーの存在率、ならびにＶＥＧＦ結合活性が低いかあるいは全く無い抗体凝集体の存在率により構成される。この製剤では、機能性抗体モノマーが最大量となり、かつ（未変性のモノマーに対比して）結合活性および／または治療効力が低下した抗体凝集体および構造的に変性した形態が最小量となり、非常に好ましい。例えば、抗体製剤は、好ましくは、約８５重量％以上の抗体モノマーを含み、かつ約２℃〜約６℃で少なくとも約６ヶ月間保存した場合にＶＥＧＦ結合活性および／または治療効力が低下する、約１５重量％未満の抗体凝集体を含む。
【００９２】
側面によっては、抗体製剤は、約９０重量％以上の抗体モノマーを含み、かつ約２℃〜約８℃で少なくとも約６ヶ月間保存した場合にＶＥＧＦ結合活性および／または治療効力が低下する、約１０重量％未満の抗体凝集体を含む。側面によっては、抗体製剤は、約９３重量％以上の抗体モノマーを含み、かつ約２℃〜約８℃で少なくとも約６ヶ月間保存した場合にＶＥＧＦ結合活性および／または治療効力が低下する、約７重量％未満の抗体凝集体を含む。側面によっては、抗体製剤は、約９５重量％以上の抗体モノマーを含み、かつ約２℃〜約８℃で少なくとも約６ヶ月間保存した場合にＶＥＧＦ結合活性および／または治療効力が低下する、約５重量％未満の抗体凝集体を含む。側面によっては、抗体製剤は、約２℃〜約８℃で少なくとも約６ヶ月間保存した場合にＶＥＧＦ結合活性および／または治療効力が低下する、約９６重量％以上の抗体凝集体を含む。側面によっては、抗体製剤は、約９７重量％以上の抗体モノマーを含み、かつ約２℃〜約８℃で少なくとも約６ヶ月間保存した場合にＶＥＧＦ結合活性および／または治療効力が低下する、約３重量％未満の抗体凝集体を含む。側面によっては、抗体製剤は、約９８重量％以上の抗体モノマーを含み、かつ約２℃〜約８℃で少なくとも約６ヶ月間保存した場合にＶＥＧＦ結合活性および／または治療効力が低下する、約２重量％未満の抗体凝集体を含む。側面によっては、抗体製剤は、約９９重量％以上の抗体モノマーを含み、かつ約２℃〜約８℃で少なくとも約６ヶ月間保存した場合にＶＥＧＦ結合活性および／または治療効力が低下する、約１重量％未満の抗体凝集体を含む。抗体モノマーおよび／または抗体凝集体の量は、示差光散乱測定法（ＤＬＳ）、示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）、サイズ排除クロマトグラフ法（ＳＥ−ＨＰＬＣ）、非還元および還元キャピラリー電気泳動ＳＤＳ法（ＮＲＣＥ−ＳＤＳおよびＲＣＥ−ＳＤＳ）、および粒子数計測法（ＰＣ）のうちの１種またはそれらの組合せを含み、本明細書に記載または例示される手法を含む当技術分野で適切な任意の技術に従って測定されてもよい。
【００９３】
側面によっては、抗体製剤は、約９０重量％以上の抗体モノマーを含み、かつ約２℃〜約８℃で少なくとも約１２ヶ月間保存した場合にＶＥＧＦ結合活性および／または治療効力が低下する、約１０重量％未満の抗体凝集体を含む。側面によっては、抗体製剤は、約９３重量％以上の抗体モノマーを含み、かつ約２℃〜約８℃で少なくとも約１２ヶ月間保存した場合にＶＥＧＦ結合活性および／または治療効力が低下する、約７重量％未満の抗体凝集体を含む。側面によっては、抗体製剤は、約９５重量％以上の抗体モノマーを含み、かつ約２℃〜約８℃で少なくとも約１２ヶ月間保存した場合にＶＥＧＦ結合活性および／または治療効力が低下する、約５重量％未満の抗体凝集体を含む。側面によっては、抗体製剤は、約２℃〜約８℃で少なくとも約１２ヶ月間保存した場合にＶＥＧＦ結合活性および／または治療効力が低下する、約９６重量％以上の抗体凝集体を含む。側面によっては、抗体製剤は、約９７重量％以上の抗体モノマーを含み、かつ約２℃〜約８℃で少なくとも約１２ヶ月間保存した場合にＶＥＧＦ結合活性および／または治療効力が低下する、約３重量％未満の抗体凝集体を含む。側面によっては、抗体製剤は、約９８重量％以上の抗体モノマーを含み、かつ約２℃〜約８℃で少なくとも約１２ヶ月間保存した場合にＶＥＧＦ結合活性および／または治療効力が低下する、約２重量％未満の抗体凝集体を含む。側面によっては、抗体製剤は、約９９重量％以上の抗体モノマーを含み、かつ約２℃〜約８℃で少なくとも約１２ヶ月間保存した場合にＶＥＧＦ結合活性および／または治療効力が低下する、約１重量％未満の抗体凝集体を含む。抗体モノマーおよび／または抗体凝集体の量は、示差光散乱測定法（ＤＬＳ）、示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）、サイズ排除クロマトグラフ法（ＳＥ−ＨＰＬＣ）、非還元および還元キャピラリー電気泳動ＳＤＳ法（ＮＲＣＥ−ＳＤＳおよびＲＣＥ−ＳＤＳ）、および粒子数計測法（ＰＣ）のうちの１種またはそれらの組合せを含み、本明細書に記載または例示される手法を含む当技術分野で適切な任意の技術に従って測定されてもよい。
【００９４】
側面によっては、抗体製剤は、約９０重量％以上の抗体モノマーを含み、かつ約２℃〜約８℃で少なくとも約１８ヶ月間保存した場合にＶＥＧＦ結合活性および／または治療効力が低下する、約１０重量％未満の抗体凝集体を含む。側面によっては、抗体製剤は、約９３重量％以上の抗体モノマーを含み、かつ約２℃〜約８℃で少なくとも約１８ヶ月間保存した場合にＶＥＧＦ結合活性および／または治療効力が低下する、約７重量％未満の抗体凝集体を含む。側面によっては、抗体製剤は、約９５重量％以上の抗体モノマーを含み、かつ約２℃〜約８℃で少なくとも約１８ヶ月間保存した場合にＶＥＧＦ結合活性および／または治療効力が低下する、約５重量％未満の抗体凝集体を含む。側面によっては、抗体製剤は、約２℃〜約８℃で少なくとも約１８ヶ月間保存した場合にＶＥＧＦ結合活性および／または治療効力が低下する、約９６重量％以上の抗体凝集体を含む。側面によっては、抗体製剤は、約９７重量％以上の抗体モノマーを含み、かつ約２℃〜約８℃で少なくとも約１８ヶ月間保存した場合にＶＥＧＦ結合活性および／または治療効力が低下する、約３重量％未満の抗体凝集体を含む。側面によっては、抗体製剤は、約９８重量％以上の抗体モノマーを含み、かつ約２℃〜約８℃で少なくとも約１８ヶ月間保存した場合にＶＥＧＦ結合活性および／または治療効力が低下する、約２重量％未満の抗体凝集体を含む。側面によっては、抗体製剤は、約９９重量％以上の抗体モノマーを含み、かつ約２℃〜約８℃で少なくとも約１８ヶ月間保存した場合にＶＥＧＦ結合活性および／または治療効力が低下する、約１重量％未満の抗体凝集体を含む。抗体モノマーおよび／または抗体凝集体の量は、示差光散乱測定法（ＤＬＳ）、示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）、サイズ排除クロマトグラフ法（ＳＥ−ＨＰＬＣ）、非還元および還元キャピラリー電気泳動ＳＤＳ法（ＮＲＣＥ−ＳＤＳおよびＲＣＥ−ＳＤＳ）、および粒子数計測法（ＰＣ）のうちの１種またはそれらの組合せを含み、本明細書に記載または例示される手法を含む当技術分野で適切な任意の技術に従って測定されてもよい。
【００９５】
側面によっては、抗体製剤は、約９０重量％以上の抗体モノマーを含み、かつ約２℃〜約８℃で少なくとも約２４ヶ月間保存した場合にＶＥＧＦ結合活性および／または治療効力が低下する、約１０重量％未満の抗体凝集体を含む。側面によっては、抗体製剤は、約９３重量％以上の抗体モノマーを含み、かつ約２℃〜約８℃で少なくとも約２４ヶ月間保存した場合にＶＥＧＦ結合活性および／または治療効力が低下する、約７重量％未満の抗体凝集体を含む。側面によっては、抗体製剤は、約９５重量％以上の抗体モノマーを含み、かつ約２℃〜約８℃で少なくとも約２４ヶ月間保存した場合にＶＥＧＦ結合活性および／または治療効力が低下する、約５重量％未満の抗体凝集体を含む。側面によっては、抗体製剤は、約２℃〜約８℃で少なくとも約２４ヶ月間保存した場合にＶＥＧＦ結合活性および／または治療効力が低下する、約９６重量％以上の抗体凝集体を含む。側面によっては、抗体製剤は、約９７重量％以上の抗体モノマーを含み、かつ約２℃〜約８℃で少なくとも約２４ヶ月間保存した場合にＶＥＧＦ結合活性および／または治療効力が低下する、約３重量％未満の抗体凝集体を含む。側面によっては、抗体製剤は、約９８重量％以上の抗体モノマーを含み、かつ約２℃〜約８℃で少なくとも約２４ヶ月間保存した場合にＶＥＧＦ結合活性および／または治療効力が低下する、約２重量％未満の抗体凝集体を含む。側面によっては、抗体製剤は、約９９重量％以上の抗体モノマーを含み、かつ約２℃〜約８℃で少なくとも約２４ヶ月間保存した場合にＶＥＧＦ結合活性および／または治療効力が低下する、約１重量％未満の抗体凝集体を含む。抗体モノマーおよび／または抗体凝集体の量は、示差光散乱測定法（ＤＬＳ）、示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）、サイズ排除クロマトグラフ法（ＳＥ−ＨＰＬＣ）、非還元および還元キャピラリー電気泳動ＳＤＳ法（ＮＲＣＥ−ＳＤＳおよびＲＣＥ−ＳＤＳ）、および粒子数計測法（ＰＣ）のうちの１種またはそれらの組合せを含み、本明細書に記載または例示される手法を含む当技術分野で適切な任意の技術に従って測定されてもよい。
【００９６】
安定な抗体組成物の製造方法
本開示の方法により、安定な抗体組成物を製造する。これらの安定な抗体組成物を、ＯＮＳ−５０１０と呼ぶ場合もある。実施形態によっては、ＯＮＳ−５０１０は、抗体後発生物製剤、一塩基性リン酸ナトリウム、二塩基性リン酸ナトリウム、α，α’−トレハロース、およびポリソルベート２０を含む。実施形態によっては、安定な抗体組成物は、最小量のＨＭＷＳを含み、より遅い速度で経時的にＨＭＷＳを蓄積し、かつ／あるいは長期保存中に（例えば、その他の抗体組成物と対比して）ＨＭＷＳの量を少なく維持する。
【００９７】
一般に、ＨＭＷＳは、ＶＥＧＦ表面のエピトープへのベバシズマブなどの抗体の結合を低減させる共有結合性で不可逆な凝集体の形成に影響し、それにより抗体の治療効力を低下させる。典型的には、ＨＭＷＳの量を制限することにより、この問題を軽減し、抗体の活性を高める。さらに規制基準により、ベバシズマブの抗体製剤中のＨＭＷＳの許容量は、２４ヶ月後で８％以下に制限されている。従って、安定な抗体組成物中のＨＭＷＳの量を制限し、経時的なＨＭＷＳの蓄積を遅延させ、かつ長期保存中にＨＭＷＳの量を少なく維持することが望ましい。
【００９８】
実施形態によっては、透析濾過は、本開示の安定な抗体組成物（例えば抗体後発生物製剤）の製造プロセスでの最後から２番目の工程の構成要素となる。一般に、透析濾過中の６．２以上のｐＨ値は、ベバシズマブなどの抗体製剤中のＨＭＷＳを増加させ、経時的により多くのＨＭＷＳを蓄積させる。従って、本開示は、濃縮組成物をトレハロースを含む交換溶液中に透析濾過し、かつ透析濾過に続いてリン酸塩組成物の添加により組成物のｐＨを迅速に調整することによるＨＭＷＳを低減させる透析濾過の方法を提供する。実施形態によっては、リン酸塩組成物の添加により、安定な抗体組成物の製造中および保存中のＨＭＷＳの生成および蓄積を防止する。
【００９９】
本開示は、安定な抗体組成物を製造する方法を提供する。この方法は、出発組成物を限外濾過して濃縮組成物を生成する工程を含む。側面によっては、出発組成物は、数値の終端も含めて、４ｍｇ／ｍＬ〜６ｍｇ／ｍＬまたは約４ｍｇ／ｍＬ〜約６ｍｇ／ｍＬの抗体を含む。側面によっては、出発組成物のｐＨは、数値の終端も含めて、約４．７〜約５．３である。特定の側面によっては、出発組成物のｐＨは約５．０である。
【０１００】
側面によっては、出発組成物を限外濾過する工程を含む本開示の方法により、安定な抗体組成物を製造する。側面によっては、本開示の方法では、抗体および出発緩衝液組成物を含む、本質的にそれらからなる、またはそれらからなる出発組成物を使用する。実施形態によっては、出発組成物は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む４ｍｇ／ｍＬ〜６ｍｇ／ｍＬまたは約４ｍｇ／ｍＬ〜約６ｍｇ／ｍＬの抗体を含む、本質的にそれからなる、またはそれからなる。
【０１０１】
側面によっては、出発緩衝液組成物のｐＨは、約５．０である。本開示の例示的な出発緩衝液組成物には、限定はされないが、酢酸塩が含まれる。側面によっては、出発緩衝液組成物は、２０〜３０ｍＳ／ｃｍまたは約２０〜約３０ｍＳ／ｃｍ、例えば約２５ｍＳ／ｃｍの導電率を有する。側面によっては、出発緩衝液組成物は、２５ｍＳ／ｃｍの導電率を有する。側面または実施形態によっては、出発緩衝液組成物は、１種以上の一価または二価の金属イオンを含まない組成物に比較して、抗体の安定性を低下させない濃度で１種以上の一価または二価の金属イオンを含む。一価または二価の金属イオンの例として、限定はされないが、水素（Ｈ）、リチウム（Ｌｉ）、ナトリウム（Ｎａ）、マグネシウム（Ｍｇ）、カリウム（Ｋ）、カルシウム（Ｃａ）、マンガン（Мｎ）、鉄（Ｆｅ）、コバルト（Ｃｏ）、および亜鉛（Ｚｎ）が挙げられる。
【０１０２】
側面によっては、本開示の方法は、限外濾過／透析濾過（ＵＦ／ＤＦ）と呼ばれる場合がある。一般に、膜の寸法、材料、および負荷は、ＵＦ／ＤＦ中のタンパク質の吸着または保持に影響を及ぼす可能性がある。側面によっては、本開示の方法は、ポリエーテルスルホン膜を使用する。側面によっては、本開示の方法は、３０ｋＤの分子量の孔径を有する膜を使用する。一般に、所望のプロセス時間および透過流束（経時的な透過液の量）の要因となる膜への負荷は、ＵＦ／ＤＦから得られる製品の品質に影響を及ぼす可能性がある。この透過流束は、典型的には、供給速度（ＬＭＨ）、濃縮圧力／膜貫通圧力、および材料の粘度により影響を受ける。実施形態によっては、この膜は、１０００ｇ／ｍ2以下、７５０ｇ／ｍ2以下、５００ｇ／ｍ2以下、または２５０ｇ／ｍ2以下の負荷に耐える。実施形態によっては、膜は、約５００ｇ／ｍ2以下〜約１００ｇ／ｍ2以下の負荷に耐える。実施形態によっては、膜は、約３００ｇ／ｍ2以下の負荷に耐える。側面によっては、４５０ＬＭＨ以下の供給流速を本開示の方法で使用する。側面によっては、３７５ＬＭＨの供給流速を本開示の方法で使用する。側面によっては、２５ｐｓｉ以下の濃縮圧力を本開示の方法で使用する。側面によっては、５ｐｓｉの濃縮圧力を本開示の方法で使用する。側面によっては、２０ｐｓｉｇ以下のＴＭＰを本開示の方法で使用する。側面によっては、１５ｐｓｉｇのＴＭＰを本開示の方法で使用する。
【０１０３】
側面によっては、本開示の組成物（例えば、出発組成物、濃縮組成物、トレハロース組成物）は、透析濾過の前に限外濾過されてもよい。側面によっては、本開示の組成物は、透析の前に限外濾過によって濃縮されてもよい。側面によっては、限外濾過により、数値の終端も含めて、３０〜４０ｍｇ／ｍＬまたは約３０〜約４０ｍｇ／ｍＬの抗体を含む濃縮組成物を生成する。
【０１０４】
透析濾過を使用して、本開示の組成物または製剤中の塩または溶媒を除去でき、あるいは塩または溶媒の濃度を低減できる。透析濾過は、連続的であっても、非連続的であってもよい。再生セルロース膜またはポリエーテルスルホン膜を透析濾過に使用できる。一般に、これらの膜またはカセットは、広いｐＨかつ温度領域を有する。透析濾過に用いられる膜は、典型的に、１ｋＤａ、３０ｋＤ、および１００ｋＤなどの種々の分子量カットオフ値で入手可能である。側面によっては、本開示の方法は、３０ｋＤの分子量孔径を有する膜を使用する。これらの膜は、透析濾過に先立ち平衡させてもよい。側面によっては、膜を酢酸ナトリウムで平衡させる。側面によっては、約２５ｍＭの酢酸ナトリウムを使用して膜を平衡させる。側面によっては、膜を塩化ナトリウムで平衡させる。側面によっては、約２４０ｍＭの塩化ナトリウムを使用して膜を平衡させる。側面によっては、２３７ｍＭの塩化ナトリウムを使用する。側面によっては、膜をトレハロース溶液で平衡させる。側面によっては、トレハロース溶液は、約６％のトレハロースを含む。側面によっては、トレハロース溶液は、トレハロース水溶液を含む。膜はまた、所望のｐＨおよび導電率に平衡させてもよい。側面によっては、膜を４．５〜５．５または約４．５〜約５．５、例えば約５．０のｐＨに平衡させる。側面によっては、膜を２０〜３０ｍＳ／ｃｍまたは約２０〜約３０ｍＳ／ｃｍ、例えば約２５ｍＳ／ｃｍの導電率に平衡させる。
【０１０５】
側面によっては、透析濾過は、濃縮組成物の出発緩衝液組成物を交換溶液により交換することを含む。実施形態によっては、交換溶液は水溶液であってもよい。側面によっては、交換溶液はトレハロースを含む。実施形態によっては、交換溶液は、数値の終端も含めて、約４％〜約８％（ｗ／ｖ）のトレハロースを含む。特定の側面では、交換溶液は、６％（ｗ／ｖ）のトレハロース水溶液を含む。側面によっては、トレハロースはα，α’−トレハロースである。側面によっては、交換溶液は、非限定的な例として、ポリソルベート２０などのポリソルベートを含む。側面によっては、約１０％のポリソルベートを含むポリソルベート組成物を使用して、交換組成物および／またはトレハロース組成物中に約０．０３％〜約０．０５％のポリソルベート２０の最終濃度を生成する。側面によっては、交換溶液および／またはトレハロース組成物は、０．０４％のポリソルベートの最終濃度を含む。側面によっては、交換溶液の５以上の透析容量を透析濾過中に使用してもよい。非限定的な例として、使用される交換溶液の量は、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．５、７．０、７．５、または８．０の透析容量であってもよい。
【０１０６】
側面によっては、トレハロース組成物は、数値の終端も含めて、３０ｇ／Ｌ〜４０ｇ／Ｌまたは約３０ｇ／Ｌ〜約４０ｇ／Ｌの抗体を含む。側面によっては、トレハロース組成物は、約３５ｇ／Ｌの抗体を含む。実施形態によっては、トレハロース組成物は、３５ｇ／Ｌの抗体を含む。
【０１０７】
側面によっては、トレハロース組成物のｐＨは、数値の終端も含めて、約４．７〜約５．３である。特定の側面では、トレハロース組成物のｐＨは約５．０である。
【０１０８】
追加の工程を用いて、ＵＦ／ＤＦの生成物の回収率を増大でき、品質を向上できる。例えば、生成物の損失は、膜を通過して膜に結合し回収前に脱着できない生成物、または系内で他の理由で消失した生成物による透過物の損失に起因する場合がある。回収には、空気、緩衝液、または重力による手法を用いてもよい。非限定的な例として、緩衝液の再循環を使用して、生成物を濃縮して回収率を改善してもよい。緩衝液の再循環法を使用して、膜を脱分極して生成物の混合を改善してもよい。実施形態によっては、３０ｐｓｉｇ以下の再循環圧力を使用する。実施形態によっては、再循環時間は、６０分以内であってもよい。実施形態によっては、再循環時間は約１０分である。プラグフローリンスまたはチェイスを使用して、機器または系内で消失した生成物を回収してもよい。この手法を使用して、系内から生成物（タンパク質、例えば抗体）を洗い出すことができる。側面によっては、プラグフローリンスまたはチェイスで使用される６％のα，α−トレハロースの容量は、約３０ｇ／Ｌのタンパク質濃度を生成するように選択されてもよい。側面によっては、プラグフローリンスまたはチェイスで使用される容量は、数値の終端も含めて、約２８．５〜約３１．５ｇ／Ｌのタンパク質濃度を生成するように選択されてもよい。
【０１０９】
実施形態によっては、本開示の方法はまた、トレハロース組成物をリン酸塩組成物と接触させて、ｐＨ調整組成物を生成する工程を含む。
【０１１０】
側面によっては、接触工程の持続時間は、数値の終端も含めて、１秒〜３６００秒または約１秒〜約３６００秒である。側面によっては、接触工程の持続時間は、数値の終端も含めて、１５００秒〜２１００秒または約１５００秒〜約２１００秒である。側面によっては、接触工程の持続時間は、約１８００秒である。当技術分野で既知の方法を使用して、接触を引き起こす速度を増大させてもよい。例示的な方法として、限定はされないが、トレハロース組成物への熱、圧力、または攪拌の付加を含んでもよい。実施形態によっては、熱、圧力、または攪拌を、リン酸塩組成物に付加してもよい。
【０１１１】
側面によっては、リン酸塩組成物のｐＨは、数値の終端も含めて、約５．５〜約５．９である。特定の側面では、リン酸塩組成物のｐＨは、約５．７である。そのような側面によっては、リン酸塩組成物のｐＨは５．７４である。
【０１１２】
実施形態によっては、本開示のリン酸塩組成物は、リン酸ナトリウムを含む。側面によっては、リン酸塩組成物は、数値の終端も含めて、４５０ｍＭ〜５５０ｍＭまたは約４５０ｍＭ〜約５５０ｍＭのリン酸ナトリウムを含む。側面によっては、リン酸塩組成物は、約５００ｍＭのリン酸ナトリウムを含む。そのような側面によっては、リン酸塩組成物は５１０ｍＭを含む。
【０１１３】
側面によっては、リン酸ナトリウムは、一塩基性リン酸ナトリウムである。側面によっては、リン酸ナトリウムは、二塩基性リン酸ナトリウムである。実施形態によっては、リン酸ナトリウムは、一塩基性リン酸ナトリウムおよび二塩基性リン酸ナトリウムを含む。側面によっては、リン酸組成物は、数値の終端も含めて、５０〜６０ｇ／Ｌまたは約５０〜約６０ｇ／Ｌの一塩基性リン酸ナトリウムを含む。側面によっては、リン酸組成物は、約５５ｇ／Ｌの一塩基性リン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、リン酸組成物は、５８ｇ／Ｌの一塩基性リン酸ナトリウムを含む。側面によっては、リン酸組成物は、数値の終端も含めて、１０〜２０ｇ／Ｌまたは約１０〜約２０ｇ／Ｌの二塩基性リン酸ナトリウムを含む。側面によっては、リン酸塩組成物は、約１５ｇ／Ｌの二塩基性リン酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、リン酸塩組成物は、約１２ｇ／Ｌの二塩基性リン酸ナトリウムを含む。
【０１１４】
側面によっては、リン酸塩組成物は、４０〜８０ｇ／Ｌまたは約４０〜約８０ｇ／Ｌのα，α’−トレハロース、例えば５０〜７０ｇ／Ｌまたは約５０〜約７０ｇ／Ｌのα，α’−トレハロースを含む。側面によっては、リン酸塩組成物は、約６０ｇ／Ｌのα，α’−トレハロースを含む。
【０１１５】
側面によっては、ｐＨ調整組成物中のリン酸ナトリウムの最終濃度は、数値の終端も含めて、約４０ｍＭ〜約６０ｍＭである。側面によっては、ｐＨ調整組成物中のリン酸ナトリウムの最終濃度は、数値の終端も含めて、４５ｍＭ〜５５ｍＭである。側面によっては、ｐＨ調整組成物中のリン酸ナトリウムの最終濃度は約５０ｍＭである。側面によっては、ｐＨ調整組成物中のリン酸ナトリウムの最終濃度は、５１ｍＭまたは約５１ｍＭである。
【０１１６】
側面によっては、ｐＨ調整組成物のｐＨは、数値の終端も含めて、約５．９〜約６．３である。側面によっては、ｐＨ調整組成物のｐＨは、数値の終端も含めて、５．９〜６．３である。側面によっては、ｐＨ調整組成物のｐＨは、６．２または約６．２である。
【０１１７】
実施形態によっては、本開示の方法は、対象に送達するためのｐＨ調整組成物を処方して、安定した抗体組成物を生成する工程を含む。側面によっては、処方工程は、水溶液（リン酸塩溶液および／またはポリソルベート溶液）を添加することを含む。側面によっては、処方工程は、非イオン性界面活性剤（ポリソルベート２０）を添加することを含む。
【０１１８】
側面によっては、ｐＨ調整組成物は、数値の終端も含めて、約３．０〜約３．５％のＨＭＷＳを含む。側面によっては、ｐＨ調整組成物は、約３．２０、約３．２５、約３．３０、約３．３５、約３．４０、約３．４５、または約３．５０％のＨＭＷＳを含む。側面によっては、ｐＨ調整組成物は、３．２０、３．２５、３．３０、３．３５、３．４０、３．４５、または３．５０％のＨＭＷＳを含む。
【０１１９】
実施形態によっては、本開示の方法は、対象に送達するためのｐＨ調整組成物を処方して、安定した抗体組成物を生成する工程を含む。側面によっては、処方工程は、ｐＨ調整組成物をポリソルベート組成物と接触させることを含む。
【０１２０】
側面によっては、ポリソルベート組成物は、ポリソルベート２０を含む。
【０１２１】
側面によっては、ポリソルベート組成物は、約１０％のポリソルベートを含む。実施形態によっては、ポリソルベート組成物を使用して、安定な抗体組成物中に約０．０３％〜約０．０５％のポリソルベート２０の最終濃度を生成する。側面によっては、安定な抗体組成物は、最終濃度が０．０４％のポリソルベートを含む。
【０１２２】
側面によっては、本開示は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む２５ｇ／Ｌの抗体、５．８ｇ／Ｌの一塩基リン酸性ナトリウム一水和物、１．２ｇ／Ｌの二塩基性リン酸ナトリウム無水物、６０．０ｇ／Ｌのα，α’−トレハロース脱水物、および０．０４％（ｖ／ｖ）のポリソルベート２０を含む安定な抗体組成物を提供する。実施形態によっては、安定な抗体組成物は、６％以下のＨＭＷＳを含む。
【０１２３】
側面によっては、安定な抗体組成物は、数値の終端も含めて、２２．５ｇ／Ｌ〜２７．５ｇ／Ｌまたは約２２．５ｇ／Ｌ〜約２７．５ｇ／Ｌの抗体の最終濃度を有する。特定の側面では、安定な抗体組成物は、約２５ｇ／Ｌの抗体の最終濃度を有する。特定の側面では、安定な抗体組成物は、約０．０４％のポリソルベート２０の最終濃度を有する。特定の側面では、安定な抗体組成物は、０．０４％のポリソルベート２０の最終濃度を有する。実施形態によっては、安定な抗体組成物が含む抗体の範囲では、活性な天然型の抗体モノマーの存在率、ならび腫瘍壊死結合活性が低いかあるいは全く無い抗体断片、抗体凝集体、および変性または部分的に変性した抗体の存在率により構成される。側面によっては、安定な抗体組成物は、最大量の機能性抗体モノマー、および最小量の（未変性のモノマーに対比して）結合活性および／または治療効力が低下した抗体断片、凝集体、および抗体の構造的に変性した形態を含む。
【０１２４】
側面によっては、安定な抗体組成物は、数値の終端も含めて、約３．０〜約６．０％のＨＭＷＳを含む。側面によっては、安定な抗体組成物は、約３．２０、約３．２５、約３．３０、約３．３５、約３．４０、約３．４５、約３．５０、約４．００、約４．５０、または約６．００％のＨＭＷＳを含む。
【０１２５】
側面によっては、安定な抗体組成物は、処方工程後に、数値の終端も含めて、１ヶ月毎に０．２５％〜０．５０％のＨＭＷＳを蓄積する。側面によっては、安定な抗体組成物は、少なくとも１２ヶ月、少なくとも１６ヶ月、少なくとも１８ヶ月、少なくとも２４ヶ月、少なくとも３０ヶ月、または少なくとも３６ヶ月にわたって、１５％以下、１２％以下、１０％以下、８％以下、７％以下、６％以下、または５％以下のＨＭＷＳを保持する。側面によっては、安定な抗体組成物は、処方工程の完了後に２４ヶ月を超えて８％以下のＨＭＷＳを含む。
【０１２６】
側面によっては、安定な抗体組成物は、数値の終端も含めて、配列番号１のアミノ酸配列または配列番号２のアミノ酸配列のメチオニン残基の０．５％〜２．５％の酸化を含む。側面によっては、安定な抗体組成物は、配列番号１のアミノ酸配列または配列番号２のアミノ酸配列のメチオニン残基の２．５％以下の酸化を含む。側面によっては、配列番号１のアミノ酸配列のメチオニン残基の酸化は、配列番号１の２５８位のメチオニンの酸化を含む。
【０１２７】
側面によっては、安定な抗体組成物のｐＨは、数値の終端も含めて、約５．９〜約６．３である。特定の側面では、安定な抗体組成物のｐＨは約６．１である。実施形態によっては、安定な抗体組成物のｐＨは６．１である。
【０１２８】
側面によっては、安定な抗体組成物を、処方工程の完了後または安定な抗体組成物の製造日後の６０日以内は−２０℃±５℃で保存する。安定な抗体組成物を、処方工程の完了後または安定な抗体組成物の製造日後の３０日以内は−２０℃±５℃で保存する。安定な抗体組成物を、処方工程の完了後または安定な抗体組成物の製造日後の１５日以内は−２０℃±５℃で保存する。実施形態によっては、本開示の組成物、例えば安定な抗体組成物は、少なくとも約３ヶ月、少なくとも約６ヶ月、少なくとも約９ヶ月、少なくとも約１２ヶ月、少なくとも約１５ヶ月、少なくとも約１８ヶ月、少なくとも約２１ヶ月、少なくとも約２４ヶ月、またはこれらの間の任意の最小月数にわたって、上述の温度で保存してもよい。実施形態によっては、保存期間中に抗体は安定であり、かつ最小限のＨＭＷＳを蓄積し、その結果として、安定な抗体組成物は、保存状態から取り出され、患者に投与されて、安定な抗体が組成物が投与される病気に対して依然として治療効力を発揮できる。
【０１２９】
治療方法
実施形態によっては、本開示の組成物および製剤は、治療有効量の抗体を含む。治療有効量は、抗体を投与して治療される疾患または病状に応じて、および／または年齢、性別、身長、体重、疾患または病気の進行状態または病期、過去の投与の回数および効力、対象に投与されたその他の治療薬、および主治医には既知の他の特徴あるいは適切な投薬を判断する際に考慮される他の特徴に応じて変更してもよい。典型的には、治療有効量は、非扁平上皮非小細胞肺がん、神経膠芽腫、腎細胞がん、子宮頸がん、または上皮性卵巣がん、卵管がん、または原発性腹膜がんなどの癌を治療するのに有効な量である。側面によっては、本開示の組成物を用いて、結腸がん、肺がん、神経膠芽腫、大腸がん、脳腫瘍、および腎細胞がんを治療してもよい。
【０１３０】
側面によっては、本開示の組成物を用いて、限定はされないが、網膜、強膜、硝子体、水晶体、瞳孔、虹彩、角膜、脈絡膜、視神経、網膜血管系、繊毛体、または眼角を含む眼疾病または眼疾患を治療してもよい。実施形態によっては、眼角は、繊維柱帯網およびその関連構造を含む。側面によっては、本開示の組成物を用いて、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）が上方制御され、調節不全、または機能亢進性の眼疾病または眼疾患を治療してもよい。側面によっては、本開示の組成物を用いて、限定はされないが、加齢性黄斑変性症、黄斑浮腫、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、網膜症、糖尿病性網膜症、近視性変性、特発性脈絡膜血管新生、炎症性脈絡膜血管新生、網膜血管新生、倍数体脈絡膜血管症、眼血管新生、分枝網膜静脈閉塞症（ＢＲＶＯ）、網膜中心静脈閉塞症、中心性漿液性脈絡網膜症、網膜炎、網膜色素変性症、スターガルト病、アッシャー症候群、網膜変性症、眼内炎、家族性滲出性硝子体網膜症、特発性近傍中心窩毛細管拡張症、格子変性症、黄斑円孔、持続性胎児血管構造、網膜動脈閉塞症、または網膜芽細胞腫を含む眼疾病または眼疾患を治療してもよい。側面によっては、本開示の組成物を用いて、限定はされないが、加齢性黄斑変性症、湿性加齢性黄斑変性症、および新生血管性加齢性黄斑変性症を含む眼疾病または眼疾患を治療してもよい。
【０１３１】
側面によっては、本開示の安定な抗体組成物を用いて湿性加齢性黄斑変性症を治療する方法は、眼内の血管成長を阻害、防止、または低減することを含む。側面によっては、本開示の安定な抗体組成物を用いて湿性加齢性黄斑変性症を治療する方法は、眼の血管新生を阻害、防止、または低減することを含む。
【０１３２】
本開示の安定な抗体組成物は、限定はされないが、経口経路、静脈内経路、筋肉内経路、局所、皮下、脈絡膜上、点眼薬、および粘膜組織を介した直接吸収を含む任意の適切な経路を通して投与されてもよい。側面によっては、本開示の安定な抗体組成物は、静脈内注入用の溶液として投与されてもよい。側面によっては、本開示の安定な抗体組成物は、硝子体内注射として投与してもよい。側面によっては、本開示の安定な抗体組成物は、硝子体内注入として投与してもよい。
【０１３３】
側面によっては、本開示の安定な抗体組成物は、２週間毎に投与されてもよい。側面によっては、本開示の安定な抗体組成物は、１５日毎に投与されてもよい。側面によっては、本開示の安定な抗体組成物は、月に２回投与されてもよい。抗体の組成物中のＨＭＷＳの存在率（％）を限定することにより、治療効力を達成するのに必要な用量の投与頻度を低減できる可能性がある。本開示の方法により、１５〜３０日毎に投与される組成物を製造してもよい。本開示の方法により、約２０日毎に投与される組成物を製造してもよい。本開示の方法により、約３、４、５、または６週間毎に投与される組成物を製造してもよい。本開示の方法により、１ヶ月に１回または２ヶ月に１回投与される組成物を製造してもよい。側面によっては、本開示の安定な抗体組成物は、５２週間にわたって投与されてもよい。側面によっては、本開示の安定な抗体組成物は、約５０週間にわたって投与されてもよい。側面によっては、本開示の安定な抗体組成物は、４週間、８週間、１６週間、２４週間、３６週間または４８週間にわたって投与されてもよい。側面によっては、安定な抗体組成物は、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１６、１８、２０、または２５回投与されてもよい。安定な抗体組成物中のＨＭＷＳの存在率（％）を限定することにより、治療効力を達成するために必要な用量の投与量、投与期間、または投与頻度を低減できる可能性がある。
【０１３４】
側面によっては、本開示の安定な抗体組成物は、ほぼ１１〜５０日の半減期を有する。側面によっては、本開示の安定な抗体組成物は、ほぼ２０日の半減期を有する。安定な抗体組成物中のＨＭＷＳの存在率（％）を制限することにより、それらの半減期を延長できる可能性がある。本開示の方法により、従来の方法によって製造された抗体組成物よりも１、２、３、４、５、１０、１５、２０日、またはそれ以上長い半減期を有する組成物を製造できる。
【０１３５】
適切な組成物は、抗体アイソフォームまたはそれらの組合せを、１種以上の薬学的に許容可能な担体および／または薬学的に許容可能な賦形剤とともに含んでもよい。
【０１３６】
本発明はまた、本明細書に記載または例示のいずれかの抗体製剤の治療有効量を投与して、それを必要とする対象の腫瘍を治療する方法を特徴とする。好ましくは、抗体製剤は、白金製剤耐性の再発性上皮性卵巣がん、卵管がん、または原発性腹膜がん、持続性または再発性または転移性の子宮頸がん、転移性大腸がん、転移性ＨＥＲ２陰性乳がん、転移性腎細胞がん、神経膠芽腫、または非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）などの癌を治療する方法に使用される。治療効力は、例えば、投与された製剤中に存在するベバシズマブ抗体によって達成される。抗体製剤の投与は、任意の適切な経路に従って、好ましくは注射によって、より好ましくは静脈内注射によって実施してもよい。投与は、医師の指示または監督の下で実施してもよい。
【０１３７】
本発明はまた、本明細書に記載または例示のいずれかの抗体製剤の治療有効量を投与して、それを必要とする対象の眼疾病または眼疾患を治療する方法を特徴とする。好ましくは、抗体製剤は、限定はされないが、網膜、強膜、硝子体、水晶体、瞳孔、虹彩、角膜、脈絡膜、視神経、網膜血管系、繊毛体、または（繊維柱帯網およびその関連構造を含む）眼角などの眼疾病または眼疾患を治療する方法で使用される。側面によっては、本開示の組成物を用いて、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）が上方制御され、調節不全、または機能亢進性の眼疾病または眼疾患を治療してもよい。側面によっては、本開示の組成物を用いて、限定はされないが、加齢性黄斑変性症、黄斑浮腫、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、網膜症、糖尿病性網膜症、近視性変性、特発性脈絡膜血管新生、炎症性脈絡膜血管新生、網膜血管新生、倍数体脈絡膜血管症、眼血管新生、分枝網膜静脈閉塞症（ＢＲＶＯ）、網膜中心静脈閉塞症、中心性漿液性脈絡網膜症、網膜炎、網膜色素変性症、スターガルト病、アッシャー症候群、網膜変性症、眼内炎、家族性滲出性硝子体網膜症、特発性近傍中心窩毛細管拡張症、格子変性症、黄斑円孔、持続性胎児血管構造、網膜動脈閉塞症、および網膜芽細胞腫を含む眼疾病または眼疾患を治療してもよい。側面によっては、本開示の組成物を用いて、限定はされないが、加齢性黄斑変性症、湿性加齢性黄斑変性症、および新生血管性加齢性黄斑変性症を含む眼疾病または眼疾患を治療してもよい。
【０１３８】
本明細書に記載および例示の抗体製剤を、薬剤として用いてもよい。本明細書に記載および例示の抗体製剤を、白金製剤耐性の再発性上皮性卵巣がん、卵管がん、または原発性腹膜がん、持続性または再発性または転移性子宮頸がん、転移性大腸がん、転移性ＨＥＲ２陰性乳がん、転移性腎細胞がん、神経膠芽腫、または非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）などの１種以上の癌を治療するための薬剤の製造に用いてもよい。この製剤を、白金製剤耐性の再発性上皮性卵巣がん、卵管がん、または原発性腹膜がんの治療に用いてもよい。製剤を、持続性または再発性または転移性の子宮頸がんの治療に用いてもよい。製剤を、転移性大腸がんの治療に用いてもよい。製剤を、転移性ＨＥＲ２陰性乳がんの治療に用いてもよい。製剤を、転移性腎細胞がんの治療に用いてもよい。製剤を、神経膠芽腫の治療に用いてもよい。製剤を、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）の治療に用いてもよい。本明細書に記載および例示の抗体製剤を、限定はされないが、網膜、強膜、硝子体、水晶体、瞳孔、虹彩、角膜、脈絡膜、視神経、網膜血管系、毛様体、または（繊維柱帯網およびその関連構造を含む）眼角などの1種以上の眼疾病または眼疾患を治療するための薬剤の製造に用いてもよい。側面によっては、本開示の製剤を用いて、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）が上方制御され、調節不全、または機能亢進性の眼疾病または眼疾患を治療してもよい。側面によっては、本開示の製剤を用いて、限定はされないが、加齢性黄斑変性症、黄斑浮腫、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、網膜症、糖尿病性網膜症、近視性変性、特発性脈絡膜血管新生、炎症性脈絡膜血管新生、網膜血管新生、倍数体脈絡膜血管症、眼血管新生、分枝網膜静脈閉塞症（ＢＲＶＯ）、網膜中心静脈閉塞症、中心性漿液性脈絡網膜症、網膜炎、網膜色素変性症、スターガルト病、アッシャー症候群、網膜変性症、眼内炎、家族性滲出性硝子体網膜症、特発性近傍中心窩毛細管拡張症、格子変性症、黄斑円孔、持続性胎児血管構造、網膜動脈閉塞症、および網膜芽細胞腫を含む眼疾病または眼疾患を治療してもよい。側面によっては、本開示の製剤を用いて、限定はされないが、加齢性黄斑変性症、湿性加齢性黄斑変性症、および新生血管性加齢性黄斑変性症を含む眼疾病または眼疾患を治療してもよい。
【０１３９】
本発明はさらにキットを特徴とする。このキットを使用して、例えば、本明細書に記載または例示のいずれかの方法を実施できる。側面によっては、キットは、本明細書に記載または例示の任意の抗体製剤、およびこの抗体製剤を本明細書に記載または例示のいずれかの方法で使用するための説明書を含む。キットは、限定はされないが、注射器および針、またはカテーテルを含む、抗体製剤を対象に注射するための装置を含んでもよい。
【０１４０】
キットに含まれる説明書は、白金製剤耐性の再発上皮性卵巣がん、卵管がん、または原発性腹膜がんを治療する方法で抗体製剤を投与するための説明書を含んでもよく、例えば白金製剤耐性の再発上皮性卵巣がん、卵管がん、または原発性腹膜がんのそれを必要とする患者に抗体製剤を注射するための説明書を含んでもよい。側面によっては、キットに含まれる説明書は、持続性または再発性または転移性の子宮頸がんを治療する方法で抗体製剤を投与するための説明書を含んでもよく、例えば持続性または再発性または転移性の子宮頸がんのそれを必要とする患者に抗体製剤を注射するための説明書を含んでもよい。側面によっては、キットに含まれる説明書は、転移性大腸がんを治療する方法で抗体製剤を投与するための説明書を含んでもよく、例えば転移性大腸がんのそれを必要とする患者に抗体製剤を注射するための説明書を含んでもよい。側面によっては、キットに含まれる説明書は、転移性ＨＥＲ２陰性乳がんを治療する方法で抗体製剤を投与するための説明書を含んでもよく、例えば転移性ＨＥＲ２陰性乳がんのそれを必要とする患者に抗体製剤を注射するための説明書を含んでもよい。側面によっては、キットに含まれる説明書は、転移性腎細胞がんを治療する方法で抗体製剤を投与するための説明書を含んでもよく、例えば転移性腎細胞がんのそれを必要とする患者に抗体製剤を注射するための説明書を含んでもよい。側面によっては、キットに含まれる説明書は、神経膠芽腫を治療する方法で抗体製剤を投与するための説明書を含んでもよく、例えば神経膠芽腫のそれを必要とする患者に抗体製剤を注射するための説明書を含んでもよい。側面によっては、キットに含まれる説明書は、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）を治療する方法で抗体製剤を投与するための説明書を含んでもよく、例えば非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）のそれを必要とする患者に抗体製剤を注射するための説明書を含んでもよい。キットに含まれる説明書は、限定はされないが、網膜、強膜、硝子体、水晶体、瞳孔、虹彩、角膜、脈絡膜、視神経、網膜血管系、毛様体、または（繊維柱帯網およびその関連構造を含む）眼角などの眼疾患を治療する方法で、抗体製剤を投与するための説明書を含む。側面によっては、本開示の組成物を用いて、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）が上方制御され、調節不全、または機能亢進性の眼疾病または眼疾患を治療してもよい。側面によっては、キットに含まれる説明書は、限定はされないが、加齢性黄斑変性症、黄斑浮腫、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、網膜症、糖尿病性網膜症、近視性変性、特発性脈絡膜血管新生、炎症性脈絡膜血管新生、網膜血管新生、倍数体脈絡膜血管症、眼血管新生、分枝網膜静脈閉塞症（ＢＲＶＯ）、網膜中心静脈閉塞症、中心性漿液性脈絡網膜症、網膜炎、網膜色素変性症、スターガルト病、アッシャー症候群、網膜変性症、眼内炎、家族性滲出性硝子体網膜症、特発性近傍中心窩毛細管拡張症、格子変性症、黄斑円孔、持続性胎児血管構造、網膜動脈閉塞症、および網膜芽細胞腫を含む眼疾病または眼疾患を治療する方法で、抗体製剤を投与するための説明書を含んでもよい。側面によっては、キットに含まれる説明書は、限定はされないが、加齢性黄斑変性症、湿性加齢性黄斑変性症、および新生血管性加齢性黄斑変性症を含む眼疾病または眼疾患を治療するための方法で、抗体製剤を投与するための説明書を含んでもよい。
【０１４１】
以下の実施例は、本発明をより詳細に説明するために提供される。それらの実施例は、本発明を限定するのではなく、説明することを意図している。
【実施例】
【０１４２】
実施例１：材料および方法
前提。抗体ＯＮＳ−５０１０は、ベバシズマブの後発生物製剤を示し、保存安定性を向上するように再処方されている。緩衝製剤は、長期保存中の抗体の凝集を一応は低減できると考えられている。緩衝製剤は、ベバシズマブ分子の非共有結合性および共有結合性の両方の二量体形成を低減できると考えられている。Avastin（登録商標）（Genentech, Inc.）として市販されているベバシズマブは、安定剤としてトレハロースを含み、かつ緩慢な界面活性剤および６．２の酸性ｐＨを含み、リン酸ナトリウム緩衝液中に処方されている。以下に説明の実験手法では、コロイド安定性を高めるためにベバシズマブを再処方する開発業務を実施した。安定性、特に凝集の低減に関する大幅な向上が、緩衝液およびｐＨの変更によって達成された。
【０１４３】
動的光散乱法（ＤＬＳ）。ＤＬＳ試験法では、Wyatt DynaProTM Plate Readerを使用して、タンパク質のサイズ分布および溶液中での全体的なコロイド安定性に関する情報を得た。流体力学的半径により、凝集の存在および溶液中の分子構造の確認に関する情報を得た。ＤＬＳ試験により、非変性条件の溶液中でのサイズ分布の直交方向の測定値を得た。
【０１４４】
示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）。示差走査熱量測定では、タンパク質の融解転移を測定して、それにより溶液中のタンパク質の熱安定性に関する情報を得た。熱量測定は、GE VP CapillaryＤＳＣシステムを用いて実行された。タンパク質を最適化された走査速度で２５℃から９５℃に加熱し、タンパク質の折畳みを展開する際の融解転移（Ｔｍ）を発生させた。緩衝液の対照を試料とともに加熱し、それを用いて融解温度および転移熱量を計算した。このＤＳＣ曲線は抗体に特有であり、タンパク質が別々の領域に折り畳まれていることを示していた。
【０１４５】
サイズ排除クロマトグラフ法（ＳＥ−ＨＰＬＣ）。ＳＥ−ＨＰＬＣを用いて、抗体のサイズ変異体分布を調べた。ＳＥ−ＨＰＬＣ試験法では、サイズに基づいてタンパク質を分離する。モノマーピークの前に溶出する種は凝集体（ＨＭＷＳ）であり、モノマーピークの後に溶出するピークは分解物（ＬＭＷＳ）であった。
【０１４６】
これらの種を、TSK3000SWxl（Tosoh Bioscience Cat# 08541）の７．８ｍｍ×３００ｍｍカラムを使用して、流速０．５ｍＬ／ｍｉｎ、動作時間３０分で、カラムを周囲温度として分離した。移動相を、０．２Ｍのリン酸カリウムおよび０．２５Ｍの塩化カリウムで構成し、そのｐＨを６．２とした。試料注入には２種の方式を用いて、一方は２５ｍｇ／ｍＬの１０μＬの非希釈注入であり、他方は０．５ｍｇ／ｍＬの１００μＬの希釈注入である（非希釈注入により可逆的凝集体を含む凝集体の総量を測定し、希釈注入により主に共有結合性の二量体を測定する）。希釈試料は、移動相Ａ（０．２Ｍのリン酸カリウム、０．２５Ｍの塩化カリウム、ｐＨ６．２）により、０．５ｍｇ／ｍＬまで希釈した。
【０１４７】
これら試料を、３０℃での分析に先立ち２４時間培養した。自動回収装置の温度は、稼働中は連続的に３０℃に保持した。データは２８０ｎｍで解析された。
【０１４８】
陽イオン交換クロマトグラフ法（ＣＥＸ）。ベバシズマブ試料を移動相Ａで希釈し、カルボキシペプチダーゼＢで分解した。陽イオン交換ＨＰＬＣカラムを用いて複数の種を分離した。０．５ｍＬ／分の流速を用いて、移動相Ａおよび移動相Ｂにより勾配を付けた。カラム温度を４０℃に維持し、試料を２〜８℃に維持した。データは２８０ｎｍで解析された。
【０１４９】
粒子含量（流体撮像）。流体撮像（ＦＩ）システムは、移動中の流体内の粒子を迅速に分析するための統合システムである。このシステムでは、試料または連続流中で粒子または細胞を自動的に計数、撮像、かつ分析する。ＦＩシステムでは、試料をポンプによってフローチャンバー内に引き込む。AutoImage Modeでのレーザーを用いて、ＦＩシステムにより通過する粒子の光散乱を監視した。カメラをユーザー定義の間隔で同期して画像を取得するように設定した。次に（その他の全ての粒子特性および画像に加えて）散乱検出値を、VisualSpreadsheetによって保存した。コンピュータおよびデジタル信号プロセッサを連動させて、視野の画像を起動・検索して処理した。
【０１５０】
浸透圧。浸透圧計を用いて、凝固点を測定することにより緩衝液およびタンパク質溶液の浸透圧を測定した。高精度のサーミスタを使用して、試料温度を検知し、過冷却度および凍結への誘発度を制御し、かつ試料の凝固点を測定した。試料の必要量は、各測定毎に２０μＬであった。
【０１５１】
自家蛍光。自家蛍光分光法は、タンパク質の立体構造に関する情報を提供する非侵襲の生物物理学的な特性評価法である。この方法では、タンパク質構造の折畳み展開の程度を測定した。タンパク質試料の（トリプトファン発光などの）強度および最大波長は、蛍光分光計で測定した。反復毎に６００μＬの０．１ｍｇ／ｍＬのタンパク質溶液を試験した。発光の走査は、２９５ｎｍでの励起により、３１０ｎｍから開始し４５０ｎｍで終了した。
【０１５２】
ＨＵＶＥＣ細胞ベースのＶＥＧＦ中和測定。抗血管新生モノクローナル抗体であるベバシズマブの主要な作用機序は、ＶＥＧＦに結合して、その同族の受容体への結合を防止することである。このように、ベバシズマブはＶＥＧＦが内皮細胞の増殖を誘発する能力を中和し、従って抗ＶＥＧＦ抗体の効力は、細胞のＶＥＧＦの誘発による増殖を阻害するその能力によって定量できる。ＨＵＶＥＣ細胞ベースの効力測定では、固定濃度のＶＥＧＦを段階的に希釈した薬剤とともに培養する。ベバシズマブは用量に依存してＶＥＧＦに結合して、ＶＥＧＦがその他の結合相互作用に活用されないようする。次にこの薬物ＶＥＧＦ混合物を、マルチウェルプレートに播種されたＨＵＶＥＣ細胞に添加して、さらに培養して増殖を継続する。培養中に、ＨＵＶＥＣ細胞はＶＥＧＦの濃度に依存して増殖する。低い薬物濃度では、より多くのＶＥＧＦが利用可能であるので増殖性は高く、その逆もまた同じである。抗体の用量に依存するＨＵＶＥＣ細胞増殖の阻害効果は、培養終了時の生細胞数の定量により評価される。ＶＥＧＦ中和測定は、試料の効力が対照標準に対比して測定される相対測定となる。この測定は、３個の個別の測定プレートからなる。各プレートでは、標準および試料の細胞生存率データを４Ｐロジスティックモデルに適合させて、統計ソフトウェアを用いて個別の曲線パラメータを有するＳ字状曲線を形成し、標準曲線パラメータと試料曲線パラメータを比較して曲線の類似性を評価して、類似と見做される場合に試験製剤の相対的な効力が計算される。最終的な報告数値は、許容可能な変動の範囲内にある３個の個別値の平均である。
【０１５３】
ＶＥＧＦ結合免疫測定法。抗血管新生モノクローナル抗体であるベバシズマブの主要な作用機序は、ＶＥＧＦに結合し、その同族の受容体への結合を防止して、それによって血管内皮細胞に対するＶＥＧＦ媒介の分裂促進効果を阻害する。このベバシズマブによるＶＥＧＦの中和は、血管新生過程を阻害して、続いてその中和により腫瘍の生存および進行を抑制する。従って抗ＶＥＧＦ抗体の効力は、ＥＬＩＳＡでＶＥＧＦへのその結合を測定して定量できる。この測定法では、まず固定濃度のＶＥＧＦをマルチウェルプレートに被覆する。非特異的結合部位を防護した後に、固定化されたＶＥＧＦを段階的に希釈された対照標準および試験試料と反応させる。未結合の抗体を洗い流して、ウェルをＶＥＧＦ−抗体複合体に結合する西洋ワサビ過酸化酵素（ＨＲＰ）に複合化された抗κ軽鎖抗体とともに培養する。次に未結合の二次抗体を洗い流して、ウェルを３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）ＨＲＰ基質とともに培養して、着色生成物を生成する。リン酸を加えて発色を停止し、吸光度値を読み取る。得られた光学密度（ＯＤ）値は、ＶＥＧＦに結合した試料の量に正比例する。このＶＥＧＦ結合測定法は、試料の効力が対照標準と比較して測定される相対測定法である。この測定法は、２個の個別の測定プレートからなる。各プレートでは、標準および試料のＯＤデータを４Ｐロジスティックモデルに適合させて、統計ソフトウェアを用いて個別の曲線パラメータを有するＳ字状曲線を形成し、標準曲線パラメータと試料曲線パラメータを比較して曲線の類似性を評価して、類似と見做される場合に試験製剤の相対的な効力が計算される。最終的な報告数値は、許容可能な変動の範囲内にある２個の個別値の平均である。
【０１５４】
実施例２：ベバシズマブの立体構造安定性およびコロイド安定性に及ぼす緩衝液、安定剤、およびｐＨの影響
最初の実験では、ベバシズマブの立体構造安定性およびコロイド安定性について緩衝液成分を評価した。クエン酸塩、リン酸塩、および酢酸塩の緩衝液がベバシズマブの安定性に対し理想的であると判断された。さらに、これらの個々の緩衝液は、加熱または振盪関連ストレスによって誘発されるベバシズマブの凝集に対して保護効果を示した。これらの緩衝液（クエン酸塩、リン酸塩、および酢酸塩）の組合せが優れた安定化効果を示すかを、さらに実験により評価した。クエン酸リン酸塩緩衝液は、（市販のAvastin（登録商標）製剤に相当する）ベバシズマブの対照組成物でのリン酸ナトリウム緩衝液と比較して、顕著に少ない（共有結合型二量体を含む）凝集体および少ない荷電種を生成した。
【０１５５】
５０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液中のトレハロース安定剤の効果を、ショ糖、ソルビトール、マンニトール、およびグリシンなどの代替の安定剤と比較した。次に種々の安定化緩衝液組成物での抗体の立体構造安定性をＤＳＣにより評価した（図１）。これらのデータは、表１に示すように、試験された全ての安定剤がトレハロースと同等以上であったことを示している。
【０１５６】
【表１−２】
2021522180.tif 000003
【０１５７】
次に、種々の安定剤（ショ糖、ソルビトール、マンニトール、およびグリシン）をクエン酸リン酸塩緩衝液とともに用いて、ベバシズマブ抗体の立体構造安定性をＤＳＣによって評価した。データは、表２に示すように、クエン酸リン酸塩緩衝液中の代替安定剤がベバシズマブ対照製剤と同等以上であったことを示している。
【０１５８】
【表２】
2021522180.tif 000004
【０１５９】
安定剤としてトレハロースを含むクエン酸リン酸塩緩衝液を用いて、抗体（ベバシズマブ）の立体構造安定性に対するｐＨの影響を評価した。ＤＳＣを使用して抗体の安定性を測定した。表３に示されるデータは、各製剤組成物で測定されたベバシズマブの折畳み展開の温度が、ｐＨが５．６を超える場合（５．６、５．８、６．０、６．２）には、ベバシズマブ対照組成物で観察された温度に匹敵することを示している。それよりも低いｐＨ（特に５．０）では、約６５℃などのより低い温度で第１の展開事象が発生するので、これより低いｐＨ（５．６未満）はベバシズマブの製剤には不適切になる。
【０１６０】
【表３】
2021522180.tif 000005
【０１６１】
並行実験として、緩衝剤として酢酸塩を評価した。酢酸塩を、５ｍＭ、１５ｍＭ、および２５ｍＭの濃度で、様々なｐＨにより評価した（表４および表５）。これらの実験では、安定剤としてショ糖（６０ｍｇ／ｍＬ）およびトレハロース（６０ｍｇ／ｍＬ）を比較した。次に、各組成物中のベバシズマブ分子の安定性をＤＳＣによって評価した。データを表４および表５に示す。酢酸塩のモル濃度を高くするとＴｍが低下し、またｐＨを高くするとＴｍが低下することが観察された（表４および表５）。ｐＨ５．６および５．８で立体構造安定性の向上を示した（表５）。
【０１６２】
【表４】
2021522180.tif 000006
【０１６３】
【表５】
2021522180.tif 000007
【０１６４】
実施例３：クエン酸リン酸塩で緩衝されたトレハロース製剤および酢酸−ショ糖製剤での保存安定性
４種の緩衝製剤を選択して、ベバシズマブ分子の１８ヶ月にわたる長期保存安定性を評価した。これらの製剤を、ベバシズマブ対照／参照製剤（条件１）と並行して評価した。保存条件は以下の通りであり、約２５ｍｇ／ｍＬ（非希釈）の抗体または希釈した抗体を、５℃、３０℃、または３７℃で保管、室温かつ１５０ＲＰＭで震盪、および凍結／解凍（２０℃から室温の間で３サイクル）する。試験された製剤を以下に示す。
条件１：ベバシズマブ（Avastin（登録商標））対照
５０ｍＭのリン酸ナトリウム
１５９ｍＭのトレハロース
０.０４％のポリソルベート２０
ｐＨ６．２０
注入用に滅菌水を用いて適量を生成
条件２：ベバシズマブクエン酸リン酸塩、ｐＨ５．８
５０ｍＭのクエン酸リン酸塩
１５９ｍＭのトレハロース
０．０４％のポリソルベート２０
ｐＨ５．８０
注入用に滅菌水を用いて適量を生成
条件３：ベバシズマブクエン酸リン酸塩、ｐＨ６．０
５０ｍＭのクエン酸リン酸塩
１５９ｍＭのトレハロース
０．０４％のポリソルベート２０
ｐＨ６．０
注入用に滅菌水を用いて適量を生成
条件４：ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．６
１５ｍＭの酢酸塩
１７５ｍＭのショ糖
０．０４％のポリソルベート２０
ｐＨ５．６０
注入用に滅菌水を用いて適量を生成
条件５：ベバシズマブ酢酸塩、ｐＨ５．８
１５ｍＭの酢酸塩
１７５ｍＭのショ糖
０．０４％のポリソルベート２０
ｐＨ５．８０
注入用に滅菌水を用いて適量を生成
【０１６５】
各保存条件での抗体の安定性を、限定はされないが、サイズ排除クロマトグラフ法（ＳＥＣ）、陽イオン交換クロマトグラフ法（ＣＥＸ）、ＣＥ−ＳＤＳ、ＨＵＶＥＣ細胞ベースのＶＥＧＦ中和測定法、ＶＥＧＦ結合免疫測定法、および粒子数計測法（ＰＣ）などの一連の定型的、分析的かつ広範囲の特性測定法によって試験した。サイズ排除クロマトグラフ法を用いて、抗体モノマーの存在率、（共有結合および非共有結合の）総凝集体の存在率、および分解物の存在率を評価した。２種の製剤での安定性の比較を、ベバシズマブ（Avastin（登録商標））参照／対照組成物とともに評価した。５℃±３℃で１８ヶ月間保存された長期保存安定性の評価試料では、クエン酸リン酸塩系の組成物（条件２および３）および酢酸塩緩衝液系の組成物（条件４および５）の両方ともAvastin（登録商標）対照組成物よりも安定であることを示している（図２Ａ、図２Ａ（ｉ）、図２Ａ（ｉｉ）、および表６）。図２Ｂ、図２Ｂ（ｉ）、図２Ｂ（ｉｉ）、および表７は、共有結合二量体の存在が５種の全てのベバシズマブ後発生物製剤組成物中に測定されるが、条件２、３、４、および５では、ベバシズマブ対照組成物（条件１）よりも共有結合二量体の存在量が少ないことを示している（表７）。
【０１６６】
【表６】
2021522180.tif 000008
【０１６７】
【表７】
2021522180.tif 000009
【０１６８】
陽イオン交換クロマトグラフ法（ＣＥＸ）での測定により、酸性荷電種につき、１８ヶ月の長期保存安定性の検討中に全ての試料に対してさらに試験した（表７（ｉ）、図２Ｂ（iii ）、図２Ｂ（iv）、および図２Ｂ（ｖ））。５種の全ての組成物では、荷電種、特に酸性荷電種は、５℃での１８ヶ月の保存中に有意な変化は無かった。
【０１６９】
【表８】
2021522180.tif 000010
【０１７０】
ＨＵＶＥＣ細胞ベースのＶＥＧＦ中和測定法で測定されたベバシズマブ後発生物製剤の相対効力は、条件１に対比して、全ての条件（条件２〜５）で９０〜１１０％以内にあることが分かった（表７（ii））。この知見により、製剤（条件２〜５）の効力は製剤組成物を変更しても影響を受けずに、２〜８℃で１８ヶ月間保存されたアバスチン組成物製剤と同等であることがさらに確認できた。
【０１７１】
【表９】
2021522180.tif 000011
【０１７２】
ＶＥＧＦ結合免疫測定法で測定されたベバシズマブ後発生物製剤の相対効力は、条件１に対比して、全ての条件（条件２〜５）で９０〜１００％以内であることが分かった（表７（iii ））。この知見により、製剤（条件２〜５）の効力は製剤組成物を変更しても影響を受けず、２〜８℃で１８ヶ月間保存されたアバスチン組成物の製剤と同等であることがさらに確認できた。
【０１７３】
【表１０】
2021522180.tif 000012
【０１７４】
加速保存安定性（３０℃）の評価試料では、クエン酸リン酸塩系組成物および酢酸塩緩衝液系組成物の両方ともベバシズマブ（Avastin（登録商標））対照組成物よりも安定であることを示している（図２Ｃおよび図２Ｄ、かつ表８および表９）。図２Ｄおよび表９は、５種の全てのベバシズマブ後発生物製剤組成物中に測定可能な共有結合二量体が存在することを示している。全ての後発生物製剤条件（２〜５）では、ベバシズマブ対照組成物よりも共有結合性二量体の存在量が少ないことが分かった。
【０１７５】
【表１１】
2021522180.tif 000013
【０１７６】
【表１２】
2021522180.tif 000014
【０１７７】
加速保存安定性（３７℃）の評価試料では、クエン酸リン酸塩系組成物および酢酸塩緩衝液系組成物の両方ともベバシズマブ対照組成物よりも安定であることを示していた（図２Ｅおよび図２Ｆ、かつ表１０および表１１）。図２Ｆおよび表１１は、５種の全てのベバシズマブ後発生物製剤組成物中に測定可能な共有結合二量体が存在することを示している。しかしながら、全ての後発生物製剤条件（２〜５）では、ベバシズマブ対照組成物よりも共有結合二量体の存在量が少ない。
【０１７８】
【表１３】
2021522180.tif 000015
【０１７９】
【表１４】
2021522180.tif 000016
【０１８０】
ストレス試験（室温かつ１５０ｒｐｍで震盪）の評価試料では、クエン酸リン酸塩系組成物および酢酸塩緩衝液系組成物の両方ともベバシズマブ（Avastin（登録商標））対照組成物よりも安定であることを示している（図２Ｇおよび図２Ｈ、かつ表１２および表１３）。酢酸塩−ショ糖組成物（条件５）では、凝集体の存在率が僅かに高く、ベバシズマブ製剤の安定性には、ｐＨ５．８よりもｐＨ５．６が好ましいことを示している。図２Ｈおよび表１３は、５種の全てのベバシズマブ後発生物製剤組成物で共有結合二量体の測定値が示されている。全ての条件（２〜５）では、ベバシズマブ（Avastin（登録商標））対照組成物よりも共有結合二量体の存在量が少ないことが観察された。
【０１８１】
【表１５】
2021522180.tif 000017
【０１８２】
【表１６】
2021522180.tif 000018
【０１８３】
ストレス試験（凍結／解凍試験）の評価試料では、クエン酸リン酸塩系組成物および酢酸塩緩衝液系組成物の両方とも、凍結／解凍ストレスに対する保護能力に関して、ベバシズマブ（Avastin（登録商標））対照組成物と同等であることを示している（図２Ｉおよび図２Ｊ、かつ表１４および１５）。酢酸塩−ショ糖組成物（条件５）では、凝集体の存在率が僅かに高く、ベバシズマブ製剤の安定性には、ｐＨ５．８よりもｐＨ５．６が好ましいことを示している。図２Ｊおよび表１５は、５種の全てのベバシズマブ後発生物製剤組成物に測定可能な共有結合二量体が存在することを示している。全ての条件（２〜５）では、ベバシズマブ対照組成物よりも共有結合二量体の存在量が少なかった。
【表１７】
2021522180.tif 000019
【０１８４】
【表１８】
2021522180.tif 000020
【０１８５】
実施例４：クエン酸リン酸塩で緩衝されたトレハロース製剤および酢酸塩−ショ糖製剤中のベバシズマブ後発生物製剤の生物物理学的特性
４種の緩衝された後発生物試験製剤の生物物理学的特性を、ベバシズマブ対照／参照製剤と並行して評価した。限定はされないが、示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）、動的光散乱法（ＤＬＳ）、蛍光分光法（自家蛍光）などによって試験された生物物理学的特性を評価した。後発生物製剤の類似性は、いくつかの直交法によって評価され、これらの生物物理学的方法は、生物学的類似性を評価するための直交解析法の内の１種の手法である。直交法では、ベバシズマブ後発生物製剤の４種の緩衝製剤（条件２〜５）の生物物理学的特性が、ベバシズマブ対照組成物（条件１）の生物物理学的特性と同等であるかまたはそれより良好であることを示している。
【０１８６】
全ての製剤でのベバシズマブの融解温度、すなわち熱展開パターンは類似していて、Ｔｍ１は約７３℃、Ｔｍ２は約８３℃である（表１６）。このことは、開発された全ての製剤条件がベバシズマブに類似の立体構造安定性を有することを示している。最終的には、実施例３に記載の長期安定性試験（５℃で１８ヶ月の保存）により、条件２〜５の製剤（すなわち組成物）をベバシズマブがより安定で凝集しにくい製剤として結論的に認定している。
【０１８７】
【表１９】
2021522180.tif 000021
【０１８８】
４種の全ての製剤条件でのベバシズマブ後発生物製剤の流体力学的特性の動的光散乱法（ＤＬＳ）に基づく評価を、ベバシズマブ対照組成物（条件１）と対比して評価した。ベバシズマブ後発生物製剤の流体力学的半径は、条件１〜３で（１５ｍｇ／ｍＬの濃度では）約６ｎｍ〜７ｎｍに増大していた（表１７および図３）。酢酸塩の条件４および５は、ベバシズマブ対照組成物（条件１）に対比して、顕著に異なるサイズの傾向を示し、コロイド安定性が優れることを示していた。クエン酸リン酸塩の条件２および３の流体力学的サイズの傾向は、ベバシズマブ対照条件（条件１）と同様であったが、可逆性の凝集体および共有結合二量体の生成の傾向（実施例３で説明の１８ヶ月間の長期保存性および加速温度での保存安定性）は、凝集に対する保護性が向上することを示している。
【０１８９】
【表２０】
2021522180.tif 000022
【０１９０】
自家蛍光分光法は、全ての製剤条件が、対照組成物（条件１）と類似のベバシズマブに対する立体構造安定性を有することを示している（表１８および図４）。この試験の主要な生物物理学的記述子（最大吸光度および最大波長）は、全ての製剤条件で類似している。
【０１９１】
【表２１】
2021522180.tif 000023
【０１９２】
ベバシズマブは、ｐＨの微妙な変化に対しても有意な感受性を示し、制御されない場合に工程中間体または原薬のいずれかに存在する凝集体量の増加を来たすことが分かっている。抗体ＯＮＳ−５０１０はベバシズマブの後発生物製剤であり、限外濾過／透析濾過工程が改善されて保存安定性が向上している。ＯＮＳ−５０１０での最終製剤の特定のｐＨ範囲は５．９〜６．３である。ＯＮＳ−５０１０の開発中に、６．２以上に近いｐＨ値では、ＨＭＷＳの存在率（％）が連続的に増加することが観察されている。さらに、ベバシズマブは「可逆性凝集」という付加的な現象を示す。規定の保管条件（２〜８℃）で経時的に原薬に存在する総ＨＭＷＳ種の存在率（％）の一部分は、平衡に到達するまで凝集状態に向かって進行する。このことは、保管時の原薬または製品の保管寿命に関してさらなる懸念点となる。従って、ＯＮＳ−５０１０の製造工程の開発では、主に全体を通して許容可能なＨＭＷＳの存在率を意識して維持することを中心に設計された。以下の実施例では、下流の製造工程、すなわち限外濾過／透析濾過（ＵＦ／ＤＦ）かつそれに続く製剤処方および最終濾過での最終の装置操作の開発について詳しく説明する。
【０１９３】
実施例５：従来型のＵＦ／ＤＦ
一連の実験を実施して最も効果的な処理方法を決定した。まず一組の実験を行い、ＯＮＳ−５０１０を濃縮して最終製剤緩衝液（ＦＦＢ）まで透析濾過する従来型のＵＦ／ＤＦ工程の実行可能性を判断した。この条件を表１９に示す。
【表２２】
2021522180.tif 000024
【表２３】
2021522180.tif 000025
【０１９４】
ＨＭＷＳの増加の大部分は、透析濾過中に観察された（図６および表２０）。この工程では、ｐＨ５．０および導電率２５ｍＳ／ｃｍを有する酢酸塩溶液中に本来存在した材料を、ｐＨ６．１および導電率約３．７ｍＳ／ｃｍを有する最終製剤緩衝液に交換した。
凝集に及ぼすｐＨおよび導電率の影響
【０１９５】
表２１の稼働条件を用いて、ｐＨおよび導電率の影響を解析するための実験を行った。出発物質を約３０ｇ／Ｌまで濃縮して、その一部を取り出し、ｐＨ８．０の０．５Ｍのリン酸ナトリウムを用いて最終的にｐＨ６．１まで滴定した（図７）。これにより導電率に及ぼす影響は無視できる程度にｐＨは上昇し、ＨＭＷＳは約２．２％増加した。残りの濃縮物を６％（ｍ／ｖ）のトレハロース水溶液中に透析濾過したところ、より大幅なｐＨの変化無しに導電率が２５ｍＳ／ｃｍから約１ｍＳ／ｃｍまで低下した。凝集濃度は変化なく（図８のデータ点１および２）、透析濾過中に導電率が変化しかつｐＨが一定のままである場合にＨＭＷＳは影響を受けないことが証明された。６％（ｗ／ｖ）のトレハロース中のＵＦ／ＤＦ過程からの回収材料を、６％（ｗ／ｖ）のα，α’トレハロース中の０．５Ｍリン酸ナトリウムおよびＰＳ−２０を含まないＦＦＢを用いて、その後に約２５ｇ／Ｌのタンパク質濃度および５１ｍＭのリン酸塩モル濃度を目標として最終のタンパク質濃度およびリン酸含有量まで希釈した。これらの添加により、ＨＭＷＳは１．６４％増加し（図８）、この増加は、濃縮後に回収された分取液のｐＨ調整中に観察されたＨＭＷＳの増分に相関している（図７）。ポリソルベート−２０を添加して０．０４％（ｖ／ｖ）の最終濃度を達成したが、凝集の増加はもたらされなかった。最後に、減圧濾過器を用いてＢＤＳを０．２μｍ濾過にかけ、これにより凝集がさらに０．５０％増加した。この実験は、ＵＦ／ＤＦ過程中のＨＭＷＳ増加の大部分の根本原因が材料のｐＨ変化に起因することを示している。
【表２４】
2021522180.tif 000026
【表２５】
2021522180.tif 000027
【０１９６】
実施例６：２種の透析濾過過程
実験を２種の透析濾過過程を用いて設計して、即時のｐＨ変化が従来型のＵＦ／ＤＦ工程で見られる段階的な増加よりも堅牢であると証明できるか否かを判断した。３種の条件で試験した（表２２）。第１の条件では、６％（ｗ／ｖ）のα，α’−トレハロース水溶液を２透析容量とした後にリン酸塩を急激に投与して、続けてＰＳ−２０を含まないＦＦＢを５透析容量とした。これにより、（急激投与を介して）即時のｐＨ変化を可能としたが、さらに透析濾過を実施することで、堅牢で再現性のあるｐＨおよびリン酸塩濃度が得られるはずである。第２の条件では、第２の透析濾過過程を、４２ｍＭの一塩基性リン酸ナトリウム、２ｍＭの二塩基性リン酸ナトリウム、６％（ｗ／ｖ）のα、α−トレハロース（ｐＨ５．５）中で実施した。回収後に、残りの二塩基性リン酸ナトリウムを急激に添加して、目標のｐＨに調整した。最後の条件では、６％（ｗ／ｖ）のα，α’−トレハロース水溶液を２透析容量とした後にＦＦＢを５透析容量とする条件で試験した。それらの結果を表２３に示す。
【表２６】
2021522180.tif 000028
【表２７】
2021522180.tif 000029
【０１９７】
３種の全ての条件で、従来のＵＦ／ＤＦ実験よりも低いもののＨＭＷＳの存在率（％）が大幅に増加し、リン酸ナトリウム中で実行されるいずれの透析濾過でもＨＭＷＳの存在率が増加することが分かった。この実験の結果に基づいて、これ以降の全ての実験は、透析濾過用の６％（ｗ／ｖ）のα、α−トレハロース水溶液を用い、回収後にリン酸およびポリソルベート−２０を添加して、濃縮液をＢＤＳ製剤（５．８ｇ／Ｌの一塩基性リン酸ナトリウム一水和物、１．２ｇ／Ｌの二塩基性リン酸ナトリウム無水物、６０ｇ／Ｌのα、α−トレハロース、０．０４％のポリソルベート２０、ｐＨ６．１）に調整した。
【０１９８】
実施例７：ＢＤＳ中のＨＭＷＳ濃度に及ぼす最終ｐＨの影響
ＢＤＳ中のＨＭＷＳ濃度に及ぼす最終ｐＨの影響を確認するために、６％のα、α−トレハロース水溶液中で透析濾過を実施し、かつ回収濃縮液をｐＨ５．５、５．７、５．９、および６．１に調整する実験を実行した。リン酸ナトリウム（０．５Ｍ、ｐＨ９）、ｐＨ９の２ＭのＨＥＰＥＳ、および１ＮのＮａＯＨを使用してｐＨを調整して、その溶液がＨＭＷＳの存在率に影響を及ぼすか否か、あるいはｐＨがＨＭＷＳの存在率の増加の唯一の要因であるか否かを確認した（図９）。
【０１９９】
図９の結果は、ＢＤＳのｐＨがＨＭＷＳの存在率に実質的な影響を及ぼし、ｐＨが高くなるにつれＨＭＷＳの存在率が高くなることを裏付けている。溶液成分は、ＨＭＷＳの存在率に影響を及ぼさないようで、この結果は、ｐＨがＨＭＷＳの存在率の増加の主要因であることを示すさらなる証拠である。
【０２００】
実施例８：ＨＭＷＳの存在率（％）に及ぼすｐＨ調整中のタンパク質濃度の影響
ｐＨ調整中のタンパク質濃度がＨＭＷＳの存在率に影響を及ぼす可能性を判断するための実験を実施した。透析濾過を６％のα、α−トレハロース水溶液中で実施した。回収後に、濃縮液を６％のα、α−トレハロース水溶液を用いて、２５、２８、または３０ｇ／Ｌに希釈した。次に、２５ｇ／Ｌ部分および３０ｇ／Ｌ部分を３つに等分して、リン酸塩で調整した。２８ｇ／Ｌ部分を４つに等分して、３つは通常のリン酸塩で調整し、４つ目は、粉末状の一塩基性リン酸ナトリウムおよびリン酸二ナトリウムを添加して、５１ｍＭの最終リン酸ナトリウム濃度でｐＨ６．０に達するようにした。
【０２０１】
図１０の結果は、回収されたＯＮＳ−５０１０濃縮液の濃度変化が、２５〜３０ｇ／Ｌの範囲である場合にＨＭＷＳの存在率に影響を及ぼさなかったことを示している。濃度が２８ｇ／Ｌの結果では、さらに、リン酸塩を急激に添加した組成物でもＨＭＷＳ濃度に影響を及ぼすようには見えないことを示していた。
【０２０２】
実施例９：最終のＵＦ／ＤＦ工程
表２７に概説されるパラメータおよび図１１に概説される工程を用いて、３回の実験を実施して０．０２ｍ2のモデル規模での最新の工程を確認した。リン酸ナトリウムおよびポリソルベートの各成分を、下記の式１〜４に基づいて添加した。３回の実験の結果を表２６に示す。これらの確認実験によると、この工程は確実であった。最終溶液は、５．８３ｇ／Ｌの一塩基性リン酸ナトリウムおよび１．２２ｇ／Ｌの二塩基性リン酸ナトリウムを含んでいた。全ての実験でのリン酸塩の最終濃度は５１ｍＭであり、全ての実験でのポリソルベート−２０の最終濃度は０．０４％（ｖ／ｖ）であった。可逆性ならびに不可逆性の凝集体を測定する分析法の変更により、ＨＭＷＳの存在率は、全ての実験で以前の検討よりも高かった。ｐＨ、導電率、濃度、およびＨＭＷＳの存在率の全ては、３回の実験を通して非常に一貫しており、ＵＦ／ＤＦ工程が堅牢で再現性が高いことを示していた。
【０２０３】
【表２８】
2021522180.tif 000030
【０２０４】
式１：リン酸ナトリウムの添加量算出
【数１】
2021522180.tif 000031
・Ｖi＝ＵＦ／ＤＦからの回収濃縮液体積
【０２０５】
式２：ポリソルベート２０の添加量算出
【数２】
2021522180.tif 000032
・Ｖii＝０．５１Ｍのリン酸ナトリウム原液の添加後に回収された濃縮液体積
【０２０６】
式３：最終体積の決定
【数３】
2021522180.tif 000033
・Ｖfinal＝２５ｇ／Ｌの目標タンパク質濃度に到達するのに必要な総体積（Ｌ）
・Ｃiii ＝０．５１Ｍのリン酸ナトリウムおよびポリソルベート２０の原液を添加した後の回収材料の濃度（ｇ／Ｌ）
・Ｖiii ＝０．５１Ｍのリン酸ナトリウムおよびポリソルベート２０の原液を添加した後かつ希釈直前の回収材料の体積（Ｌ）
【０２０７】
式４：タンパク質濃度を希釈する添加量の算出
【数４】
2021522180.tif 000034
・ＶFFB(with PS-20)＝タンパク質濃度を２５ｇ／Ｌに希釈して、式３で算出されたＶfinalに到達するのに必要な、０．０４％（ｍ／ｖ）のＰＳ２０を含む最終製剤緩衝液の体積（Ｌ）
・Ｖfinal＝式３で算出された体積（Ｌ）
・Ｖiii ＝０．５１Ｍのリン酸ナトリウムおよびポリソルベート２０原液を添加した後かつ希釈直前の回収材料の体積（Ｌ）
【０２０８】
【表２９】
2021522180.tif 000035
【表３０】
2021522180.tif 000036
【０２０９】
表２７に記載の工程は、膜への負荷および供給流速が低いにもかかわらず、堅牢で再現性が高いことを示していた。膜への負荷は、所望の処理時間および透過流束（経時的な透過液の体積）の因子となる。透過流束は、供給速度（ＬＭＨ）、濃縮圧力／膜貫通圧力、および材料の粘度の影響を受ける。妥当な時間枠で最小膜面積内に最大の材料量を得るために必要となる最適条件を決定するために、２回の最適化実験を実施した。１回目では、流束および供給速度が（ＨＭＷＳの存在率の増加によって決定される）製品品質に及ぼす影響を決定し、２回目では、この工程での許容可能な膜の負荷を決定した。
【０２１０】
実施例１０：製品品質に及ぼす流束および供給速度の影響
流束速度は、０、５、１０、１５、２０、および２５ｐｓｉの濃縮圧力で、１００、２００、３００、４００、および５００ＬＭＨの供給速度に対して測定された。ＴＭＰは濃縮圧力によって決定されるので、濃縮圧力制御は、ＴＭＰに応じて選択された。実験パラメータを表２８に示す。結果を図１２〜１４に示す。図１２は、初期のＯＮＳ−５０１０の濃度で、５種の供給速度での濃縮圧力に対する初期の透過流束曲線を示している。図１３は、同じく初期のＯＮＳ−５０１０の濃度で、５種の供給流速での濃縮圧力に対する流束曲線を示している。図１４は、約５０ｇ／Ｌに濃縮したＯＮＳ−５０１０で、５種の供給流速での濃縮圧力に対する流束曲線を示している。この実験では、いずれの試験条件でも、濃縮圧力を上昇させても透過流束が大幅に増加しないことを示しており、従って濃縮圧力は５ｐｓｉに設定された。
【表３１】
2021522180.tif 000037
【０２１１】
実施例１１：透析濾過工程に及ぼす濃度の影響
透析濾過（ＤＦ）の最適濃度は、典型的には、最小の体積を最大の透過流束とともに可能とする濃度である。ＤＦの最適パラメータは、濃度に透過流束を掛け算して決定される。得られる最大の数値は、ＵＦ／ＤＦを実行する際の最適な濃度となる。図１５は、試験した範囲内では、濃度が透過流束に影響を及ぼさないこと、すなわちＤＦの最適化係数は増大し続けることを示していた。従って、透析濾過では、３５ｇ／Ｌという以前からの目標をそのまま継続した。リン酸塩添加工程と組合せて、これにより、堅牢で再現性のあるＵＦ／ＤＦ工程が実現した。
【０２１２】
実施例１２：許容可能な膜への負荷の決定
５００ｇ／ｍ2の膜への負荷を目標として認定し、複数の流速でその負荷を評価するために以下の実験を実施した。これらは、対照条件とともに試験した。５透析容量のＵＦ／ＤＦおよびシステム洗浄後の材料試料を、工程Ａ．０に従って５１ｍＭのリン酸塩および０．０４％のトゥイーン２０に急激に添加し、ＳＥＣ−ＨＰＬＣ分析の前に注射器で濾過した（表３０）。表３０に示すように、ＨＭＷＳの変化は、供給流速の上昇につれて増加せず、３種の全ての実験では、対照実験（実験４）でのＨＭＷＳと同等であった。
【表３２】
2021522180.tif 000038
【表３３】
2021522180.tif 000039
【０２１３】
実施例１３：ＯＮＳ−５０１０とアバスチン製剤の比較検討
ＯＮＳ−５０１０の効力を、米国内での使用のために製剤化されたアバスチン、およびＥＵ内での使用のために製剤化されたアバスチンを含む代替のベバシズマブ製剤と比較した。図１６は、ＯＮＳ−５０１０、米国認可のアバスチン、およびＥＵ認可のアバスチンの濃度−時間特性を平均値として示している。時間ゼロでの垂直線は投与開始を示す。これらの結果は、３種の製品間に高い類似性があることを示している。
【図１】
2021522180.tif 000040
【図２Ａ】
2021522180.tif 000041
【図２Ａ（ｉ）】
2021522180.tif 000042
【図２Ａ（ｉｉ）】
2021522180.tif 000043
【図２Ｂ】
2021522180.tif 000044
【図２Ｂ（ｉ）】
2021522180.tif 000045
【図２Ｂ（ｉｉ）】
2021522180.tif 000046
【図２Ｂ（ｉｉｉ）】
2021522180.tif 000047
【図２Ｂ（ｉｖ）】
2021522180.tif 000048
【図２Ｂ（ｖ）】
2021522180.tif 000049
【図２Ｃ−Ｄ】
2021522180.tif 000050
【図２Ｅ−Ｆ】
2021522180.tif 000051
【図２Ｇ−Ｈ】
2021522180.tif 000052
【図２Ｉ−Ｊ】
2021522180.tif 000053
【図３】
2021522180.tif 000054
【図４】
2021522180.tif 000055
【図５】
2021522180.tif 000056
【図６Ａ】
2021522180.tif 000057
【図６Ｂ】
2021522180.tif 000058
【図６Ｃ】
2021522180.tif 000059
【図７】
2021522180.tif 000060
【図８】
2021522180.tif 000061
【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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