(57)【要約】本開示は、ヒトＢ７−Ｈ４（及び任意でカニクイザル、マウス及び／またはラットのＢ７−Ｈ４）に特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片を含む医薬組成物を提供する。本開示はまた、そのような医薬組成物を投与することによってがんのような障害を治療する方法も提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
医薬組成物であって、（ｉ）ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片と、（ｉｉ）酢酸塩またはクエン酸塩から成る群から選択される緩衝液と、（ｉｉｉ）糖とを含み、前記組成物のｐＨが約４．５〜約６である、前記医薬組成物。
【請求項２】
医薬組成物であって、（ｉ）ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、配列番号５〜１０のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３及びＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３の配列を含む抗体またはその抗原結合断片と、（ｉｉ）緩衝液と、及び（ｉｉｉ）約４．５〜約６のｐＨとを含む、前記医薬組成物。
【請求項３】
医薬組成物であって、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含み、前記組成物が５℃で６ヵ月後、前記抗体またはその抗原結合断片の酸性変異体を４５％以下で含む、前記医薬組成物。
【請求項４】
医薬組成物であって、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含み、前記組成物が５℃で６ヵ月後、前記抗体またはその抗原結合断片の酸性変異体を約３０％〜約４５％含む、前記医薬組成物。
【請求項５】
医薬組成物であって、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含み、前記組成物が５℃で６ヵ月後、前記抗体またはその抗原結合断片の塩基性変異体を約２０％以下で含む、前記医薬組成物。
【請求項６】
医薬組成物であって、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含み、前記組成物が５℃で６ヵ月後、前記抗体またはその抗原結合断片の塩基性変異体を約９％〜約１８％含む、前記医薬組成物。
【請求項７】
医薬組成物であって、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含み、前記組成物が５℃で６ヵ月後、前記抗体またはその抗原結合断片の酸性変異体及び塩基性変異体を６０％以下で含む、前記医薬組成物。
【請求項８】
組成物が、５℃で６ヵ月後、前記抗体またはその抗原結合断片の酸性変異体を約３０％〜約４０％含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
前記組成物が、５℃で６ヵ月後、前記抗体またはその抗原結合断片の酸性変異体を約３５％〜約４０％含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記組成物が、５℃で６ヵ月後、前記抗体またはその抗原結合断片の塩基性変異体を約１０％〜約１７％含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記組成物が、５℃で６ヵ月後、前記抗体またはその抗原結合断片の塩基性変異体を約１１％〜約１６％含む、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記組成物が、５℃で６ヵ月後、前記抗体またはその抗原結合断片の酸性変異体及び塩基性変異体を５５％以下で含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記抗体またはその抗原結合断片がそれぞれ、配列番号５〜１０のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３及びＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３の配列を含む、請求項１または３〜１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記組成物の前記ｐＨが約４．５〜約６である、請求項３〜１３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記組成物が緩衝液を含む、請求項３〜１４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記緩衝液が酢酸塩またはクエン酸塩である、請求項２または１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記組成物が糖をさらに含む、請求項２〜１５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記糖が、スクロース、ソルビトール、及びトレハロースから成る群から選択される、請求項１または１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記緩衝液の濃度が約１５〜約２５ｍＭである、請求項１、２及び１５〜１８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２０】
前記緩衝液の前記濃度が約１８ｍＭ〜約２２ｍＭである、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記緩衝液の前記濃度が約２０ｍＭである、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
前記糖の濃度が、約２２５ｍＭ〜約３００ｍＭである、請求項１及び請求項１７〜２１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記糖の前記濃度が約２５０ｍＭ〜約２９０ｍＭである、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記糖の前記濃度が約２７０ｍＭである、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
前記糖の前記濃度が前記緩衝液の前記濃度の約１０〜約１５倍であり、任意で、前記糖の前記濃度が前記緩衝液の前記濃度の約１３．５倍である、請求項１及び１７〜２４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２６】
前記組成物が界面活性剤をさらに含む、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２７】
前記界面活性剤がポリソルベートであり、任意で前記ポリソルベートがポリソルベート２０である、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
前記界面活性剤の前記濃度が約０．０２５％〜約０．０７５重量／体積（ｗ／ｖ）％である、請求項２６または２７に記載の組成物。
【請求項２９】
前記界面活性剤の前記濃度が約０．０３５％〜約０．０６５重量／体積（ｗ／ｖ）％である、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
前記界面活性剤の前記濃度が約０．００５重量／体積（ｗ／ｖ）％である、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
前記抗体またはその抗原結合断片の濃度が約５ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬである、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３２】
前記抗体またはその抗原結合断片の前記濃度が約１０〜約２５ｍｇ／ｍＬである、請求項３１記載の組成物。
【請求項３３】
前記抗体またはその抗原結合断片の前記濃度が約２０ｍｇ／ｍＬである、請求項３２記載の組成物。
【請求項３４】
前記ｐＨが約５．０〜約６．０である、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３５】
前記ｐＨが約５である、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３６】
前記ｐＨが約５．５である、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３７】
前記組成物が液体である、請求項１〜３６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３８】
前記組成物が非経口投与用である、請求項１〜３７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３９】
前記組成物が静脈内投与用である、請求項１〜３７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４０】
前記緩衝液が酢酸塩であり、前記賦形剤がスクロースである、請求項１〜３９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４１】
約２０ｍＭの酢酸塩と、約２７０ｍＭのスクロースと、約２０ｍｇ／ｍＬの前記抗体またはその抗原結合断片と、約０．０５％のポリソルベート２０とを含み、前記ｐＨが約５．０である、請求項１〜４０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４２】
酢酸塩の濃度の約１３．５倍である濃度のスクロースと、約２０ｍｇ／ｍＬの前記抗体またはその抗原結合断片と、約０．０５％のポリソルベート２０とを含み、前記ｐＨが約５．０である、請求項１〜４０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４３】
前記緩衝液がクエン酸塩であり、前記賦形剤がスクロースである、請求項１〜３９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４４】
約２０ｍＭのクエン酸塩と、約２７０ｍＭのスクロースと、約２０ｍｇ／ｍＬの前記抗体またはその抗原結合断片と、約０．０５％のポリソルベート２０とを含み、前記ｐＨが約５．５である、請求項１〜３９または４３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４５】
クエン酸塩の濃度の約１３．５倍である濃度のスクロースと、約２０ｍｇ／ｍＬの前記抗体またはその抗原結合断片と、約０．０５％のポリソルベート２０とを含み、前記ｐＨが約５．５である、請求項１〜３９または４３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４６】
前記抗体が、配列番号１１で示されるアミノ酸配列を含むＶＨ及び／または配列番号１２で示されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む請求項１〜４５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４７】
前記抗体が、配列番号２１で示されるアミノ酸配列を含む重鎖及び／または配列番号２２で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項４６に記載の組成物。
【請求項４８】
前記組成物における前記抗体またはその抗原結合断片の少なくとも９５％が非フコシル化されている、請求項１〜４７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４９】
前記組成物においてフコシル化が検出できない、請求項１〜４７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５０】
完全長の抗体を含む、請求項１〜４９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５１】
抗原結合断片を含む、請求項１〜４９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５２】
前記抗原結合断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ、Ｖ−ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）３、テトラボディ、トリアボディ、ジアボディ、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ−Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２、またはｓｃＦｖ−Ｆｃを含む、請求項５１に記載の組成物。
【請求項５３】
前記抗体またはその抗原結合断片がカニクイザルＢ７−Ｈ４に特異的に結合する、請求項１〜５２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５４】
前記抗体またはその抗原結合断片がラットＢ７−Ｈ４に特異的に結合する、請求項１〜５３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５５】
前記抗体またはその抗原結合断片がマウスＢ７−Ｈ４に特異的に結合する、請求項１〜５４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５６】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ヒトＢ７−Ｈ４のＩｇＶドメインに特異的に結合する、請求項１〜５５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５７】
前記抗体またはその抗原結合断片のｐＩが約８．２である、請求項１〜５６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５８】
医薬組成物であって、（ｉ）配列番号２１で示されるアミノ酸配列を含む重鎖及び／または配列番号２２で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体と、（ｉｉ）約２０ｍＭの酢酸塩と、（ｉｉｉ）約２７０ｍＭのスクロースと、（ｉｖ）約０．０５重量／体積％のポリソルベート２０とから成り、前記組成物のｐＨが約５．０である、前記医薬組成物。
【請求項５９】
医薬組成物であって、（ｉ）配列番号２１で示されるアミノ酸配列を含む重鎖及び／または配列番号２２で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体と、（ｉｉ）約２０ｍＭのクエン酸塩と、（ｉｉｉ）約２７０ｍＭのスクロースと、（ｉｖ）約０．０５重量／体積％のポリソルベート２０とから成り、前記組成物のｐＨが約５．５である、前記医薬組成物。
【請求項６０】
請求項１〜５９のいずれか１項に記載の組成物を含む、シリンジまたはバイアル。
【請求項６１】
対象にてＢ７−Ｈ４を発現しているがんを治療する方法であって、前記方法が請求項１〜５９のいずれか１項に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項６２】
前記がんが固形腫瘍である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記がんが、乳癌、乳管癌、子宮内膜癌、卵巣癌、非小細胞肺癌、膵臓癌、甲状腺癌、腎臓癌及び膀胱癌から成る群から選択される、請求項６１または６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記乳癌がトリプルネガティブ乳癌またはホルモン受容体陽性乳癌である、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記非小細胞肺癌が扁平上皮癌である、請求項６３に記載の方法。
【請求項６６】
前記対象がヒトである、請求項６１〜６５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６７】
前記医薬組成物が非経口投与される、請求項６１〜６６いずれか１項に記載の方法。
【請求項６８】
前記医薬組成物が静脈内に投与される、請求項６１〜６６のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
１．Ｂ７−Ｈ４抗体を含む医薬組成物及びそのような製剤を使用する方法が提供される。
【背景技術】
【０００２】
２．Ｂ７−Ｈ４（Ｂ７ｘ、Ｂ７−Ｓ１、及びＶＴＣＮ１としても知られる）は、ＰＤ−Ｌ１を含む他のＢ７ファミリーメンバーと相同性を共有する免疫調節分子である。それは、ＩｇＶとＩｇＣ双方の細胞外ドメインで構成されるＩ型の膜貫通タンパク質である。健康な組織におけるＢ７−Ｈ４の発現はタンパク質レベルでは比較的限定されている一方で、Ｂ７−Ｈ４は乳房、卵巣、子宮内膜の婦人科がんのようないくつかの固形腫瘍にて発現する。腫瘍におけるＢ７−Ｈ４の発現は予後不良と相関する傾向がある。Ｂ７−Ｈ４の受容体は不明であるが、Ｔ細胞に発現していると考えられている。Ｂ７−Ｈ４はＴ細胞活性を直接阻害すると考えられている。
【０００３】
Ｂ７−Ｈ４の発現及び機能を考慮して、Ｂ７−Ｈ４の調節を含む治療法、例えばがんの治療のためにＢ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体が開発されている。したがって、そのような治療の施用のためのＢ７−Ｈ４抗体及びその抗原結合断片を含む医薬組成物についてのニーズがある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
３．本明細書で提供されるのは、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物である。
【０００５】
特定の態様では、医薬組成物は、（ｉ）ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片と、（ｉｉ）酢酸塩またはクエン酸塩から成る群から選択される緩衝液と、（ｉｉｉ）糖とを含み、組成物のｐＨは約４．５〜約６または４．５〜６である。
【０００６】
特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片は２０５０２のＣＤＲを含む。
【０００７】
特定の態様では、医薬組成物は、（ｉ）ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、２０５０２のＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片と、（ｉｉ）緩衝液と、（ｉｉｉ）約４．５〜ｐＨ約６または４．５から６のｐＨとを含む。
【０００８】
特定の態様では、２０５０２のＣＤＲは、Ｋａｂａｔが定義したＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａが定義したＣＤＲ、またはＡｂＭの定義のＣＤＲである。特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号５〜１０の重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３及び軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３の配列を含む。
【０００９】
特定の態様では、医薬組成物は、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含み、組成物は５℃で６ヵ月後、抗体またはその抗原結合断片の酸性変異体を４５％以下で含む。特定の態様では、医薬組成物は、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含み、組成物は５℃で６ヵ月後、抗体またはその抗原結合断片の酸性変異体を４０％以下で含む。特定の態様では、医薬組成物は、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含み、組成物は、５℃での６ヵ月後に抗体またはその抗原結合断片の酸性変異体を約３５％〜約４５％含む。特定の態様では、医薬組成物は、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含み、組成物は５℃で６ヵ月後、抗体またはその抗原結合断片の酸性変異体を３５％〜４５％含む。特定の態様では、組成物は５℃で６ヵ月後、抗体またはその抗原結合断片の塩基性変異体を２０％以下で含む。
【００１０】
特定の態様では、医薬組成物は、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含み、組成物は５℃での６ヵ月後、抗体またはその抗原結合断片の塩基性変異体を２０％以下で含む。特定の態様では、医薬組成物は、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含み、組成物は５℃での６か月後、抗体またはその抗原結合断片の塩基性変異体を約９％〜約１８％含む。特定の態様では、医薬組成物は、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含み、組成物は５℃での６か月後、抗体またはその抗原結合断片の塩基性変異体を９％〜１８％含む。特定の態様では、組成物は５℃で６ヵ月後、抗体またはその抗原結合断片の酸性変異体を４５％以下で含む。特定の態様では、組成物は、５℃で６ヵ月後、抗体またはその抗原結合断片の酸性変異体を４０％以下で含む。
【００１１】
特定の態様では、医薬組成物は、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含み、組成物は５℃で６ヵ月後、抗体またはその抗原結合断片の酸性及び塩基性の変異体を６０％以下で含む。特定の態様では、組成物は５℃で６ヵ月後、抗体またはその抗原結合断片の酸性及び塩基性の変異体を５５％以下で含む。特定の態様では、組成物は５℃で６ヵ月後、抗体またはその抗原結合断片の酸性変異体を４５％以下で含む。特定の態様では、組成物は５℃で６ヵ月後、抗体またはその抗原結合断片の酸性変異体を４０％以下で含む。特定の態様では、組成物は５℃で６ヵ月後、抗体またはその抗原結合断片の塩基性変異体２０％以下で含む。
【００１２】
特定の態様では、医薬組成物は５℃で６ヵ月後、抗体またはその抗原結合断片の酸性変異体を約３０％〜約４０％含む。特定の態様では、医薬組成物は５℃で６ヵ月後、抗体またはその抗原結合断片の酸性変異体を３０％〜４０％含む。特定の態様では、医薬組成物は５℃で６ヵ月後、抗体またはその抗原結合断片の酸性変異体を約３５％〜約４０％含む。特定の態様では、医薬組成物は５℃で６ヵ月後、抗体またはその抗原結合断片の酸性変異体を３５％〜４０％含む。
【００１３】
特定の態様では、医薬組成物は５℃で６ヵ月後、抗体またはその抗原結合断片の塩基性変異体を約１０％〜約１７％含む。特定の態様では、医薬組成物は５℃で６ヵ月後、抗体またはその抗原結合断片の塩基性変異体を１０％〜１７％を含む。特定の態様では、医薬組成物は５℃で６ヵ月後、抗体またはその抗原結合断片の塩基性変異体を約１１％〜約１６％含む。特定の態様では、医薬組成物は５℃で６ヵ月後、抗体またはその抗原結合断片の基本変異体を１１％〜１６％含む。
【００１４】
特定の態様では、組成物は５℃で６ヵ月後、抗体またはその抗原結合断片の酸性及び塩基性の変異体を５５％以下で含む。
【００１５】
特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片は２０５０２のＣＤＲを含む。特定の態様では、２０５０２のＣＤＲは、Ｋａｂａｔが定義したＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａが定義したＣＤＲ、またはＡｂＭの定義のＣＤＲである。特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号５〜１０の重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３及び軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３の配列を含む。
【００１６】
特定の態様では、組成物のｐＨは約４．５〜約６、または４．５〜６である。
【００１７】
特定の態様では、組成物は緩衝液を含む。特定の態様では、緩衝液は酢酸塩またはクエン酸塩である。
【００１８】
特定の態様では、組成物はさらに糖を含む。特定の態様では、糖はスクロース、ソルビトール、及びトレハロースから成る群から選択される。
【００１９】
特定の態様では、緩衝液の濃度は約１５〜約２５ｍＭである。特定の態様では、緩衝液の濃度は１５〜２５ｍＭである。特定の態様では、緩衝液の濃度は約１８ｍＭ〜約２２ｍＭである。特定の態様では、緩衝液の濃度は１８ｍＭ〜２２ｍＭである。特定の態様では、緩衝液の濃度は約２０ｍＭである。特定の態様では、緩衝液の濃度は２０ｍＭである。
【００２０】
特定の態様では、糖の濃度は約２２５ｍＭ〜約３００ｍＭである。特定の態様では、糖の濃度は２２５ｍＭ〜３００ｍＭである。特定の態様では、糖の濃度は約２５０ｍＭ〜約２９０ｍＭである。特定の態様では、糖の濃度は２５０ｍＭ〜２９０ｍＭである。特定の態様では、糖の濃度は約２７０ｍＭである。特定の態様では、糖の濃度は２７０ｍＭである。
【００２１】
特定の態様では、糖の濃度は緩衝液の濃度の約１０〜約１５倍である。特定の態様では、糖の濃度は緩衝液の濃度の１０〜１５倍である。特定の態様では、糖の濃度は緩衝液の濃度の約１３．５倍である。特定の態様では、糖の濃度は緩衝液の濃度の１３．５倍である。
【００２２】
特定の態様では、組成物はさらに界面活性剤を含む。特定の態様では、界面活性剤はポリソルベートである。特定の態様では、ポリソルベートはポリソルベート２０である。特定の態様では、ポリソルベートの濃度は、約０．０２５％〜約０．０７５重量／体積（ｗ／ｖ）％である。特定の態様では、組成物はさらに界面活性剤を含む。特定の態様では、界面活性剤はポリソルベートである。特定の態様では、ポリソルベートはポリソルベート２０である。特定の態様では、ポリソルベートの濃度は０．０２５％〜０．０７５重量／体積（ｗ／ｖ）％である。特定の態様では、ポリソルベートの濃度は約０．０３５％〜約０．０６５重量／体積（ｗ／ｖ）％である。特定の態様では、ポリソルベートの濃度は０．０３５％〜０．０６５重量／体積（ｗ／ｖ）％である。特定の態様では、ポリソルベートの濃度は約０．００５重量／体積（ｗ／ｖ）％である。特定の態様では、ポリソルベートの濃度は０．００５重量／体積（ｗ／ｖ）％である。
【００２３】
特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片（その酸性及び塩基性の変異体を含む）の濃度は約５ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌである。特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片（その酸性及び塩基性の変異体を含む）の濃度は５ｍｇ／ｍｌ〜３０ｍｇ／ｍｌである特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片（その酸性及び塩基性の変異体を含む）の濃度は約１０ｍｇ／ｍｌから約２５ｍｇ／ｍｌである。特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片（その酸性及び塩基性の変異体を含む）の濃度は１０ｍｇ／ｍｌ〜２５ｍｇ／ｍｌである。特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片（その酸性及び塩基性の変異体を含む）の濃度は約２０ｍｇ／ｍｌである。特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片（その酸性及び塩基性の変異体を含む）の濃度は２０ｍｇ／ｍｌである。
【００２４】
特定の態様では、組成物のｐＨは約５．０〜約６．０である。特定の態様では、組成物のｐＨは５．０〜６．０である。特定の態様では、ｐＨは約５である。特定の態様では、ｐＨは５である。特定の態様では、ｐＨは約５．５である。特定の態様では、ｐＨは５．５である。
【００２５】
特定の態様では、組成物は液体である。特定の態様では、組成物は非経口投与用である。特定の態様では、組成物は静脈内投与用である。
【００２６】
特定の態様では、緩衝液は酢酸塩であり、賦形剤はスクロースである。特定の態様では、組成物は、約２０ｍＭの酢酸塩と、約２７０ｍＭのスクロースと、約２０ｍｇ／ｍｌの抗体またはその抗原結合断片と、約０．０５％のポリソルベート２０とを含み、ｐＨは約５．０である。特定の態様では、組成物は、酢酸塩の濃度の約１３．５倍である濃度のスクロースと、約２０ｍｇ／ｍｌの抗体またはその抗原結合断片と、約０．０５％のポリソルベート２０とを含み、ｐＨは約５．０である。特定の態様では、組成物は、２０ｍＭの酢酸塩と、２７０ｍＭのスクロースと、２０ｍｇ／ｍｌ抗体またはその抗原結合断片と、０．０５％ポリソルベート２０とを含み、ｐＨは５．０である。特定の態様では、組成物は、酢酸塩の濃度の１３．５倍である濃度のスクロースと、２０ｍｇ／ｍｌの抗体またはその抗原結合断片と、０．０５％のポリソルベート２０とを含み、ｐＨは５．０である。
【００２７】
特定の態様では、緩衝液はクエン酸塩であり、賦形剤はスクロースである。特定の態様では、組成物は、約２０ｍＭのクエン酸塩と、約２７０ｍＭのスクロースと、約２０ｍｇ／ｍｌの抗体またはその抗原結合断片と、約０．０５％のポリソルベート２０とを含み、ｐＨは約５．５である。特定の態様では、組成物は、クエン酸塩の濃度の約１３．５倍である濃度のスクロースと、２０ｍｇ／ｍｌの抗体またはその抗原結合断片と、約０．０５％ポリソルベート２０とを含み、ｐＨは約５．５である。特定の態様では、組成物は、２０ｍＭのクエン酸塩と、２７０ｍＭのスクロースと、２０ｍｇ／ｍｌの抗体またはその抗原結合断片と、０．０５％のポリソルベート２０とを含み、ｐＨは５．５である。特定の態様では、組成物は、クエン酸塩の濃度の１３．５倍である濃度のスクロースと、２０ｍｇ／ｍｌの抗体またはその抗原結合断片と、０．０５％ポリソルベート２０とを含み、ｐＨは５．５である。
【００２８】
特定の態様では、抗体は配列番号１１で示されるアミノ酸配列を含むＶＨ、及び／または配列番号１２で示されるアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２１で示されるアミノ酸配列を含む重鎖、及び／または配列番号２２で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００２９】
特定の態様では、組成物における抗体またはその抗原結合断片の少なくとも９５％が非フコシル化される。特定の態様では、フコシル化は組成物では検出されない。
【００３０】
特定の態様では、組成物は完全長抗体を含む。
【００３１】
特定の態様では、組成物は抗原結合断片を含む。特定の態様では、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ、Ｖ−ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）３、テトラボディ、トリアボディ、ジアボディ、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ−Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２、またはｓｃＦｖ−Ｆｃを含む。
【００３２】
特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片はカニクイザルＢ７−Ｈ４に特異的に結合する。特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片はラットＢ７−Ｈ４に特異的に結合する。特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片はマウスＢ７−Ｈ４に特異的に結合する。
【００３３】
特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４のＩｇＶドメインに特異的に結合する。
【００３４】
特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片のｐＩは約８．２である。特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片のｐＩは８．２である。
【００３５】
特定の態様では、医薬組成物は、（ｉ）配列番号２１で示されるアミノ酸配列を含む重鎖及び／または配列番号２２で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体と、（ｉｉ）約２０ｍＭの酢酸塩と、（ｉｉｉ）約２７０ｍＭのスクロースと、（ｉｖ）約０．０５重量／体積％のポリソルベート２０とから成り、組成物のｐＨは約５．０である。特定の態様では、医薬組成物は、（ｉ）配列番号２１で示されるアミノ酸配列を含む重鎖及び／または配列番号２２で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体と、（ｉｉ）２０ｍＭの酢酸塩と、（ｉｉｉ）２７０ｍＭのスクロースと、（ｉｖ）０．０５％重量／体積％のポリソルベート２０とから成り、組成物のｐＨは５．０である。
【００３６】
特定の態様では、医薬組成物は、（ｉ）配列番号２１で示されるアミノ酸配列を含む重鎖及び／または配列番号２２で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体と、（ｉｉ）約２０ｍＭのクエン酸塩と、（ｉｉｉ）約２７０ｍＭのスクロースと、（ｉｖ）約０．０５％重量／体積％のポリソルベート２０とから成り、組成物のｐＨは約５．５である。特定の態様では、医薬組成物は、（ｉ）配列番号２１で示されるアミノ酸配列を含む重鎖及び／または配列番号２２で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体と、（ｉｉ）２０ｍＭのクエン酸塩と、（ｉｉｉ）２７０ｍＭのスクロースと、（ｉｖ）０．０５％重量／体積％のポリソルベート２０とから成り、組成物のｐＨは５．５である。
【００３７】
特定の態様では、シリンジまたはバイアルは本明細書で提供されている医薬組成物を含む。
【００３８】
特定の態様では、対象にてＢ７−Ｈ４を発現しているがんを治療する方法は、本明細書で提供されている医薬組成物を対象に投与することを含む。特定の態様では、がんは固形腫瘍である。特定の態様では、がんは、乳癌、乳管癌、子宮内膜癌、卵巣癌、非小細胞肺癌、膵臓癌、甲状腺癌、腎臓癌、及び膀胱癌から成る群から選択される。特定の態様では、乳癌は、トリプルネガティブ乳癌またはホルモン受容体陽性乳癌である。特定の態様では、非小細胞肺癌は扁平上皮癌である。
【００３９】
特定の態様では、対象はヒトである。
【００４０】
特定の態様では、医薬組成物は非経口投与される。他の実施形態では、医薬組成物は静脈内投与される。
４．
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】ＵＮｉｔシステムで測定されたさまざまなｐＨ条件下でのＢ７−Ｈ４抗体「２０５０２」（非フコシル化）のアンフォールディング温度（Ｔｍ１）を示す図である。（実施例３を参照）
【図２】サイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ−ＨＰＬＣ）で測定したときの４０℃でのＢ７−Ｈ４抗体「２０５０２」（非フコシル化）の凝集体形成に対する緩衝液ｐＨの影響を示す図である。各ｐＨについての製剤を表１３に示す。高分子量（ＨＭＷ）の比率は、調べたすべてのｐＨについてＴ０でほぼ０だった。（実施例３を参照）
【図３】ＳＥ−ＨＰＬＣで測定したとき４０℃での断片形成に対する緩衝液ｐＨの影響を示す図である。各ｐＨについての製剤を表１３に示す。低分子量（ＬＭＷ）の比率は、調べたすべてのｐＨについてＴ０でほぼ０だった。（実施例３を参照）
【図４】２０ｍＭのクエン酸と、２７０ｍＭスクロースと、０．０５％ポリソルベート２０（ＰＳ２０）とを含む製剤における４０℃での凝集体形成（ＳＥ−ＨＰＬＣで測定）に対する緩衝液ｐＨの影響を示す図である。（実施例４を参照）
【図５】２０ｍＭクエン酸塩と、２７０ｍＭスクロースと、０．０５％のＰＳ２０とを含有する製剤における４０℃での断片形成（ＳＥ−ＨＰＬＣで測定したとき）に対する緩衝液ｐＨの影響を示す図である。ＬＭＷの比率は、調べたすべてのｐＨについてＴ０でほぼ０だった。（実施例４を参照）
【図６】４０℃での酸性変異体（画像化キャピラリー等電点電気泳動（ｉＣＥ）によって測定したとき）に対する緩衝液のｐＨの影響を示す図である。（実施例４を参照）
【図７】４０℃での凝集体形成（ＳＥ−ＨＰＬＣで測定したとき）に対する緩衝液の種類の影響を示す図である。（実施例５を参照）
【図８】４０℃での断片形成（ＳＥ−ＨＰＬＣで測定したとき）に対する緩衝液の種類の影響を示す図である。（実施例５を参照）
【図９】４０℃での酸性変異体形成（ｉＣＥで測定したとき）に対する緩衝液の種類の影響を示す図である。（実施例５を参照）
【図１０】４０℃での塩基性変異体形成（ｉＣＥで測定したとき）に対する緩衝液の種類の影響を示す図である。（実施例５を参照）
【図１１】４０℃での凝集体形成（ＳＥ−ＨＰＬＣで測定したとき）に対する賦形剤の影響を示す図である。（実施例６を参照）
【図１２】４０℃での断片形成（ＳＥ−ＨＰＬＣで測定したとき）に対する賦形剤の影響を示す図である。（実施例６を参照）
【図１３】４０℃での酸性変異体（ｉＣＥで測定したとき）に対する賦形剤の影響を示す図である。（実施例６を参照）
【図１４】４０℃での塩基性変異体（ｉＣＥで測定したとき）に対する賦形剤の影響を示す図である。（実施例６を参照）
【図１５】選択した製剤における２０５０２（非フコシル化）の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）プロファイルを示す図である。（実施例６を参照）
【発明を実施するための形態】
【００４２】
５．本明細書で提供されるのは、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物である。医薬組成物は、例えば、長期保存条件下で、繰り返しの凍結融解サイクル（例えば、少なくとも５サイクル）を経て、及び／または撹拌を経て安定であることができる。
【００４３】
本明細書で提供されるように、Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物は、約４．５〜約６のｐＨ、Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片（例えば、約５〜約２５ｍｇ／ｍｌの濃度で）、緩衝液（酢酸塩またはクエン酸塩を含むがこれらに限定されない）、賦形剤（スクロース、トレハロース、及びソルビトールを含むがこれらに限定されない）、及び／または界面活性剤（ポリソルベート、例えば、ポリソルベート２０（ＰＳ２０）を含むがこれに限定されない）を有することができる。
【００４４】
特定の実施形態では、ｐＨ５．０での２０ｍＭの酢酸塩、２７０ｍＭのスクロース、及び０．０５％ＰＳ２０にて２０ｍｇ／ｍＬの抗Ｂ７−Ｈ４抗体（例えば、非フコシル化抗体２０５０２）を含有する液体水性医薬組成物が本明細書で提供される。別の特定の実施形態では、ｐＨ５．５での２０ｍＭのクエン酸塩、２７０ｍＭのスクロース、及び０．０５％ＰＳ２０にて２０ｍｇ／ｍＬの抗Ｂ７−Ｈ４抗体（例えば、非フコシル化抗体２０５０２）を含有する液体水性医薬組成物が本明細書で提供される。
【００４５】
本明細書で提供されている医薬組成物は、がんのような状態を治療するのに有用であることができる。
【００４６】
５．１  用語
本明細書で使用されるとき、「Ｂ７−Ｈ４」という用語は、ネイティブのＢ７−Ｈ４ポリペプチド及びＢ７−Ｈ４ポリペプチドのアイソフォームを含むがこれらに限定されない哺乳動物Ｂ７−Ｈ４ポリペプチドを指す。「Ｂ７−Ｈ４」は完全長、未処理のＢ７−Ｈ４ポリペプチド、と同様に細胞内の処理から生じるＢ７−Ｈ４ポリペプチドの形態を包含する。「Ｂ７−Ｈ４ポリヌクレオチド」、「Ｂ７−Ｈ４ヌクレオチド」または「Ｂ７−Ｈ４核酸」は、Ｂ７−Ｈ４をコードするポリヌクレオチドを指す。
【００４７】
「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子の可変領域内の少なくとも１つの抗原認識部位を介して、例えば、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、または前述の組み合わせのような標的を認識しこれに特異的に結合する免疫グロブリン分子を意味する。本明細書で使用されるとき、「抗体」という用語は、インタクトのポリクローナル抗体、インタクトのモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体を含む融合タンパク質、及び当該抗体が所望の生物活性を示す限り任意の他の修飾された免疫グロブリン分子を包含する。抗体は、それぞれ、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、及びミューと呼ばれる重鎖定常ドメインの独自性に基づいて５つの主な免疫グロブリンのクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ、またはそれらのサブクラス（アイソタイプ）（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）のいずれかであることができる。異なるクラスの免疫グロブリンは、異なる周知のサブユニット構造及び三次元構造を有する。抗体は裸であることができ、毒素、放射性同位元素等のような他の分子に結合することができる。
【００４８】
「抗体断片」という用語は、インタクトな抗体の一部を指す。「抗原結合断片」、「抗原結合ドメイン」、または「抗原結合領域」は、抗原に結合するインタクトな抗体の一部を指す。抗原結合断片は、インタクトな抗体の抗原認識部位（例えば、抗原を特異的に結合するのに十分な相補性決定領域（ＣＤＲ））を含有することができる。抗体の抗原結合断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片、線状抗体、及び単鎖抗体が挙げられるが、これらに限定されない。抗体の抗原結合断片は、げっ歯類（例えば、マウス、ラット、またはハムスター）及びヒトのような任意の動物種に由来することができ、または人工的に作製することができる。
【００４９】
「抗Ｂ７−Ｈ４抗体」、「Ｂ７−Ｈ４抗体」及び「Ｂ７−Ｈ４に結合する抗体」という用語は、抗体がＢ７−Ｈ４を標的とすることにおいて診断薬及び／または治療薬として有用であるように、十分な親和性でＢ７−Ｈ４を特異的に結合することができる抗体を指す。本明細書で使用されるとき、「特異的に結合する」、「免疫特異的に結合する」、「免疫特異的に認識する」、及び「特異的に認識する」という用語は、抗体またはその抗原結合断片の文脈において類似の用語である。これらの用語は、抗体またはその抗原結合断片がその抗原結合ドメインを介してエピトープに結合すること、及び結合が抗原結合ドメインとエピトープの間にある程度の相補性を伴うことを示す。したがって、ヒトＢ７−Ｈ４（配列番号１）に「特異的に結合する」抗体は、他の種（例えば、カニクイザル、マウス及び／またはラットのＢ７−Ｈ４）  及び／または他のヒト対立遺伝子から産生されたＢ７−Ｈ４タンパク質にも結合してもよく、ただし関連のない非Ｂ７−Ｈ４タンパク質（例えば、ＰＤ−Ｌ１のような他のＢ７タンパク質ファミリーメンバー）への結合の程度は、例えば放射性免疫アッセイ（ＲＩＡ）により測定されたときＢ７−Ｈ４に対する抗体の結合の約１０％未満である。具体的な実施形態では、本明細書で提供される製剤で使用するための抗体またはその抗原結合断片は、ヒト、カニクイザル、マウス、及びラットのＢ７−Ｈ４に特異的に結合する。
【００５０】
「モノクローナル」抗体またはその抗原結合断片は、単一の抗原決定基またはエピトープの特異性の高い認識及び結合に関与する均質な抗体または抗原結合断片の集団を指す。これは、通常は異なる抗原決定基に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体とは対照的である。「モノクローナル」抗体またはその抗原結合断片という用語は、インタクトな且つ完全長のモノクローナル抗体と同様に、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、単鎖（ｓｃＦｖ）変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、及び抗原認識部位を含む任意の他の修飾された免疫グロブリン分子を包含する。さらに、「モノクローナル」抗体またはその抗原結合断片は、ハイブリドーマ、ファージ選択、組み換え発現、及びトランスジェニック動物を含むが、これらに限定されないあらゆる方法で作製されるそのような抗体及びその抗原結合断片を指す。
【００５１】
本明細書で使用されるとき、「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は相互交換可能に使用され、当該技術分野で一般的である。可変領域は通常、抗体の一部、一般に軽鎖または重鎖の一部を指し、通常、成熟重鎖のアミノ末端約１１０〜１２０アミノ酸または１１０〜１２５アミノ酸及び成熟した軽鎖の約９０〜１１５アミノ酸を指し、それらは抗体間で配列が異なり、特定の抗体の特定の抗原に対する結合と特異性に使用される。配列の変動性は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる領域に集中している一方で、可変ドメインにおけるさらに高度に保存された領域はフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。特定のメカニズムまたは理論に束縛されることを望まないが、軽鎖及び重鎖のＣＤＲは、抗体の抗原との相互作用及び特異性に主として関与すると考えられている。特定の実施形態では、可変領域はヒト可変領域である。特定の実施形態では、可変領域は、げっ歯類またはマウスのＣＤＲ及びヒトのフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。特定の実施形態では、可変領域は霊長類（例えば、非ヒト霊長類）の可変領域である。特定の実施形態では、可変領域は、げっ歯類またはマウスのＣＤＲ及び霊長類（例えば、非ヒト霊長類）のフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。
【００５２】
「ＶＬ」及び「ＶＬドメイン」という用語は、抗体の軽鎖可変領域を指すために相互交換可能に使用される。
【００５３】
「ＶＨ」及び「ＶＨドメイン」という用語は、抗体の重鎖可変領域を指すために相互交換可能に使用される。
【００５４】
「Ｋａｂａｔ番号付け」という用語及び同様の用語は、当該技術分野で認識されており、抗体またはその抗原結合断片の重鎖及び軽鎖可変領域におけるアミノ酸残基の番号付けの方式を指す。特定の態様では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付け方式に従って決定することができる（例えば、Ｋａｂａｔ  ＥＡ  ＆  Ｗｕ  ＴＴ，（１９７１），Ａｎｎ．ＮＹ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９０：３８２−３９１及びＫａｂａｔ，ＥＡ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９１），Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｎｏ．９１−３２４２を参照のこと）。Ｋａｂａｔ番号付け方式を用いて、抗体重鎖分子内のＣＤＲは通常、３５に続く１または２の追加のアミノ酸を含めることができる（Ｋａｂａｔの番号付けスキームでは３５Ａ及び３５Ｂと呼ばれる）アミノ酸の３１〜３５位（ＣＤＲ１）、アミノ酸の５０〜６５位（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸の９５〜１０２位（ＣＤＲ３）に存在する。Ｋａｂａｔ番号付け方式を用いて、抗体軽鎖分子内のＣＤＲは通常、アミノ酸の２４〜３４位（ＣＤＲ１）、アミノ酸の５０〜５６位（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸の８９〜９７位（ＣＤＲ３）に存在する。具体的な実施形態では、本明細書に記載されている抗体のＣＤＲはＫａｂａｔ番号付けスキームに従って決定されている。
【００５５】
Ｃｏｔｈｉａは代わりに構造ループの位置を参照する（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））。Ｋａｂａｔ番号付け規則を用いて番号付けした場合、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｈ１ループの末端は、ループの長さに応じてＨ３２とＨ３４の間で異なる（これは、Ｋａｂａｔ番号付けスキームがＨ３５ＡとＨ３５Ｂに挿入を置くためであり、３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、このループは３２で終わり、３５Ａのみが存在する場合、このループは３３で終わり、３５Ａ及び３５Ｂの双方が存在する場合、このループは３４で終わる）。ＡｂＭの超可変領域は、ＫａｂａｔのＣＤＲ及びＣｈｏｔｈｉａの構造ループとの間の妥協を表し、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデル化ソフトウェアによって使用されている。
【表Ａ−１】
2021514379.tif 000002
【表Ａ−２】
2021514379.tif 000003
【００５６】
本明細書で使用されるとき、「定常領域」及び「定常ドメイン」という用語は相互交換可能であり、当該技術分野でのそれらの共通の意味を有する。定常領域は、抗体の一部であり、例えば、抗体の抗原への結合には直接関与しないが、Ｆｃ受容体との相互作用のような、さまざまなエフェクター機能を発揮できる軽鎖及び／または重鎖のカルボキシル末端部分である。免疫グロブリン分子の定常領域は一般に、免疫グロブリン可変ドメインと比べてさらに保存されたアミノ酸配列を有する。特定の態様では、抗体または抗原結合断片は、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に十分である定常領域またはその一部を含む。
【００５７】
本明細書で使用されるとき、抗体に関して使用される場合の「重鎖」という用語は、任意の異なる種類、例えば、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいてアルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、及びミュー（μ）を指すことができ、それらは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４のようなＩｇＧのサブクラスを含む、それぞれＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭのクラスの抗体を生じる。重鎖アミノ酸配列は当該技術分野で周知である。具体的な実施形態では、重鎖はヒト重鎖である。
【００５８】
本明細書で使用されるとき、抗体に関して使用される場合の「軽鎖」という用語は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づく、例えばカッパ（κ）またはラムダ（λ）のような異なる種類を指すことができる。軽鎖アミノ酸配列は当技術分野で周知である。具体的な実施形態では、軽鎖はヒト軽鎖である。
【００５９】
「キメラ」抗体という用語またはその抗原結合断片は、アミノ酸配列が２以上の種に由来する抗体またはその抗原結合断片を指す。通常、軽鎖及び重鎖双方の可変領域は、所望の特異性、親和性、及び機能を持つ哺乳類の一種（例えば、マウス、ラット、ウサギ等）に由来する抗体またはその抗原結合断片の可変領域に対応する一方で、その定常領域は、別の種（通常はヒト）に由来する抗体またはその抗原結合断の配列に対して相同であり、その種での免疫反応の誘発を回避する。
【００６０】
「ヒト化」抗体という用語またはその抗原結合断片は、最小限の非ヒト（例えば、マウス）配列を含有する特定の免疫グロブリン鎖、キメラ免疫グロブリン、またはそれらの断片である非ヒト（例えば、マウス）抗体または抗原結合断片の形態を指す。通常、ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、ヒト免疫グロブリンであって、その相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が、所望の特異性、親和性、及び機能を有する非ヒト種（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ハムスター）のＣＤＲ由来の残基で置き換えられている（「ＣＤＲグラフト」）（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５，（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２７，（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６，（１９８８））。場合によっては、ヒト免疫グロブリンの特定のＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）は、所望の特異性、親和性、及び機能を有する非ヒト種由来の抗体または断片における対応する残基で置き換えられる。ヒト化抗体またはその抗原結合断片を、Ｆｖフレームワーク領域にて及び／または非ヒトＣＤＲ残基内にてさらなる残基の置換によってさらに修飾し、抗体またはその抗原結合断片の特異性、親和性、及び／または機能を改良する及び最適化することができる。一般に、ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、非ヒト免疫グロブリンに対応するＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべてを含有する可変ドメインを含むのに対して、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべては、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、通常はヒト免疫グロブリンのものである免疫グロブリン定常領域またはドメイン（Ｆｃ）の少なくとも一部も含むことができる。ヒト化抗体を生成するのに使用される方法の例は、米国特許第５，２２５，５３９号、Ｒｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，９１（３）：９６９−９７３（１９９４）、及びＲｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．９（１０）：８９５−９０４（１９９６）に記載されている。いくつかの実施形態では、「ヒト化抗体」は再表面化抗体である。
【００６１】
「ヒト」抗体という用語またはその抗原結合断片は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座に由来するアミノ酸配列を有する抗体またはその抗原結合断片を意味し、そのような抗体または抗原結合断片は当該技術分野で既知の任意の技法を用いて作製される。ヒト抗体またはその抗原結合断片のこの定義には、インタクトなまたは完全長の抗体及びその断片が含まれる。
【００６２】
「非フコシル化」抗体またはその抗原結合断片または「フコースを欠く」抗体またはその抗原結合断片は、その定常領域のグリコシル化においてフコースを欠くＩｇＧ１またはＩｇＧ３のアイソタイプ抗体またはその抗原結合断片を指す。ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３のグリコシル化は、最大２つのＧａｌ残基で終わるコアのフコシル化二分岐複合オリゴ糖のグリコシル化としてＡｓｎ２９７にて起こる。いくつかの実施形態では、非フコシル化抗体はＡｓｎ２９７でフコースを欠いている。これらの構造は、末端のＧａｌ残基の量に応じてＧ０、Ｇ１（１、６、または１、３）、またはＧ２グリカン残基と呼ばれる。例えば、Ｒａｊｕ，Ｔ．Ｓ．，ＢｉｏＰｒｏｃｅｓｓ  Ｉｎｔ．１：４４−５３（２００３）を参照のこと。抗体ＦｃのＣＨＯ型グリコシル化は、例えば、Ｒｏｕｔｉｅｒ，Ｆ．ＦＬ，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｊ．１４：２０１−２０７（１９９７）に記載されている。
【００６３】
フコースを測定する方法には当該技術分野で既知の任意の方法が挙げられる。本明細書の目的のために、フコースは、参照によってその全体が本明細書に組み込まれるＷＯ２０１５／０１７６００の実施例１に記載されている方法により検出される。簡単に言えば、グリカン分析は、抗体からグリカンを遊離し（例えば、酵素的遊離によって）、グリカンをアントラニル酸（２−ＡＡ）で標識し、次いで標識されたグリカンを精製することによって実施される。蛍光検出を備えた順相ＨＰＬＣを用いて、グリカンを分離し、抗体における各グリカンの相対量を測定する。グリカンは質量分析によってフコースを欠いている、または含んでいると確実に同定されてもよい。いくつかの実施形態では、フコースは、複数の非フコシル化された抗体またはその抗原結合断片を含む組成物では検出できない。いくつかの実施形態では、非フコシル化された抗体またはその抗原結合断片は増強されたＡＤＣＣ活性を有し、それは、本明細書の実施例１２で提供されるアッセイによって測定されてもよい。いくつかの実施形態では、非フコシル化された抗体またはその抗原結合断片はＦｃガンマＲＩＩＩＡに対して増強された親和性を有する。いくつかの実施形態では、非フコシル化された抗体またはその抗原結合断片は、ＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）に対して増強された親和性を有する。いくつかの実施形態では、非フコシル化された抗体またはその抗原結合断片は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）に対して増強された親和性を有する。ＦｃガンマＲＩＩＩＡまたはその対立遺伝子に対する親和性は、本明細書の実施例１０で提供されるアッセイによって測定されてもよい。
【００６４】
「結合親和性」は、一般に、分子（例えば、抗体またはその抗原結合断片）の単一結合部位とその結合相手（例えば、抗原）との間の非共有結合相互作用の合計の強度を指す。特に指示されない限り、本明細書で使用されるとき、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体またはその抗原結合断及び抗原）間の１：１の相互作用を反映する、本来の結合親和性を指す。分子Ｘの、その相手Ｙに対する親和性は一般に解離定数（ＫＤ）によって表すことができる。平衡解離定数（ＫＤ）及び平衡会合定数（ＫＡ）を含むがこれらに限定されない、当該技術分野で既知の多数の方法で親和性を測定することができ、及び／または表現することができる。ＫＤはｋｏｆｆ／ｋｏｎの商から計算されるのに対して、ＫＡはｋｏｎ／ｋｏｆｆの商から計算される。ｋｏｎは、例えば、抗体またはその抗原結合断片の抗原への会合速度定数を指し、ｋｏｆｆは、例えば、抗体またはその抗原結合断片の抗原からの解離を指す。ｋｏｎ及びｋｏｆｆは、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）またはＫｉｎＥｘＡのような当業者に既知の技法によって決定することができる。
【００６５】
本明細書中で使用されるとき、「エピトープ」は、当該技術分野における用語であり、抗体またはその抗原結合断片が特異的に結合することができる抗原の局在化された領域を指す。エピトープは、例えば、ポリペプチドの隣接アミノ酸（線状または隣接エピトープ）であることができ、またはエピトープは、例えば、ポリペプチド（単数）またはポリペプチド（複数）の２以上の非隣接領域から集まることができる（立体構造的、非線状、不連続、または非隣接のエピトープ）。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片が特異的に結合するエピトープは、例えば、ＮＭＲ分光法、Ｘ線回折結晶学研究、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析（例、液体クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析）と併せた水素／重水素交換、アレイ系のオリゴペプチド走査アッセイ、及び／または変異誘発マッピング（例：部位特異的変異誘発マッピング）によって決定することができる。Ｘ線結晶学については、結晶化は当該技術分野で既知の方法のいずれかを用いて達成されてもよい（例えば、ＧｉｅｇｅＲ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ａｃｔａ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ．Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．５０（Ｐｔ４）：３３９−３５０；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ，Ａ．（１９９０），Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１８９：１−２３；Ｃｈａｙｅｎ，ＮＥ．（１９９７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，５：１２６９−１２７４；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ，Ａ．（１９７６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５１：６３００−６３０３）。抗体／その抗原結合断片：抗原の結晶は、周知のＸ線回折技術を用いて研究することができ、Ｘ−ＰＬＯＲのようなコンピューターソフトウェアを用いて改良することができる（Ｙａｌｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１９９２，ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ  ｂｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．；ｓｅｅ，ｅ．ｇ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ（１９８５），ｖｏｌｕｍｅ  １１４＆１１５，ｅｄｓ  Ｗｙｃｋｏｆｆ  ＨＷ  ｅｔ  ａｌ．，；Ｕ．Ｓ．２００４／００１４１９４），ａｎｄ  ＢＵＳＴＥＲ（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ  Ｇ，（１９９３），Ａｃｔａ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ．Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．４９（Ｐｔ１）：３７−６０；Ｂｒｉｃｏｇｎｅ  Ｇ，（１９９７），Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２７６Ａ：３６１−４２３，ｅｄ  Ｃａｒｔｅｒ  ＣＷ；Ｒｏｖｅｒｓｉ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，（２０００），Ａｃｔａ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ．Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．５６，（Ｐｔ１０）：１３１６−１３２３）。変異誘発マッピング研究は、当業者に既知の任意の方法を用いて達成することができる。アラニン走査突然変異誘発技法を含む突然変異誘発技法の説明については、例えば、Ｃｈａｍｐｅ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９５），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１３８８−１３９４及びＣｕｎｎｉｎｇｈａｍ，ＢＣ  ＆  Ｗｅｌｌｓ  ＪＡ，（１９８９），Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５）を参照のこと。
【００６６】
「単離される」ポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は、自然界には見られない形態であるポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物である。単離されたポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物には、もはやそれらが自然界で見られる形態ではない程度まで精製されたものが含まれる。いくつかの実施形態では、単離されている抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は、実質的に純粋である。本明細書で使用されるとき、「実質的に純粋」は、少なくとも５０％純粋（すなわち、混入物質を含まない）、少なくとも９０％純粋、少なくとも９５％純粋、少なくとも９８％純粋、または少なくとも９９％である材料を指す。
【００６７】
「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語は本明細書では、相互交換可能に使用されて、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。該ポリマーは、直鎖状であっても分岐状であってもよく、修飾アミノ酸を含むことができ、非アミノ酸によって中断され得る。これらの用語は、自然に、または介入、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、もしくは任意の他の操作または修飾、例えば、標識成分とのコンジュゲーションにより修飾されたアミノ酸ポリマーも包含する。その定義内に含まれるのはまた、例えば、アミノ酸（例えば、非天然アミノ酸等を含む）の１以上の類似体を含有するポリペプチド、と同様に当該技術分野で既知の他の修飾である。本発明のポリペプチドは抗体に基づいているので、特定の実施形態では、該ポリペプチドは一本鎖または結合鎖として存在し得ることが理解される。
【００６８】
本明細書中で使用されるとき、「宿主細胞」という用語は、任意の種類の細胞、例えば、初代細胞、培養中の細胞、または細胞株由来の細胞であることができる。具体的な実施形態では、「宿主細胞」という用語は、核酸分子で形質移入された細胞及びそのような細胞の子孫または潜在的な子孫を指す。そのような細胞の子孫は、例えば、次の世代または宿主細胞ゲノムへの核酸分子の組み込みにおいて起こり得る突然変異または環境の影響に起因して、核酸分子で形質移入された親細胞と同一ではなくてもよい。
【００６９】
「医薬製剤」または「医薬組成物」という用語は、活性成分の生物活性を有効にするような形態であり、且つ製剤が投与される対象にとって受け入れられない毒性である追加成分を含有しない調製物を指す。製剤は無菌であることができる。
【００７０】
「医薬品」という用語は、完成した剤形、例えば、必ずしもではないが一般に、１以上の他の成分と関連して原薬を含有する液体製剤を指す。
【００７１】
「原薬」という用語は、疾患の診断、治癒、緩和、治療、または予防にて薬理学的または生物学的な活性または他の直接効果をもたらすことが意図される活性成分、例えばＢ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片（例えば、非フコシル化抗体２０５０２）を指すが、そのような成分の合成に使用される中間体は含まれない。
【００７２】
本明細書で使用されるとき、「緩衝液」は、溶液がｐＨｂの変化に抵抗することを可能にする溶液における成分を指す。緩衝液には、例えば、酢酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、及びヒスチジンが挙げられる。
【００７３】
「安定した」製剤は、その中の活性成分（例えばＢ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片）が保管時にその物理的安定性及び／または化学的安定性及び／または生物学的活性を実質的に保持するものである。安定性は、選択された期間の間、選択された条件（例えば、温度）で測定することができる。本明細書で提供される製剤は、室温（約２５℃）で少なくとも６ヵ月間安定であることができ、及び／または約２〜８℃で少なくとも１年間安定であることができる。本明細書で提供される製剤は、以後、「凍結／融解サイクル」と呼ばれる、製剤の凍結（例えば、−７０℃まで）及び融解後も安定であることができる。本明細書で提供される製剤は、攪拌後も安定であることができる。
【００７４】
本明細書で使用されるとき、用語「投与する」、「投与すること」、「投与」等は、生物作用の所望の部位への薬剤、例えば、抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片の送達を可能にするのに使用されてもよい方法を指す（例えば、静脈内投与）。本明細書に記載されている作用剤及び方法とともに採用することができる投与技法は、例えば、Ｇｏｏｄｍａｎ及びＧｉｌｍａｎ，Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ｃｕｒｒｅｎｔ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ；ならびにＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｃｕｒｒｅｎｔ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．にて見いだされる。
【００７５】
本明細書で使用されるとき、「対象」及び「患者」という用語は相互交換可能に使用される。対象は動物であることができる。いくつかの実施形態では、対象は非ヒト動物（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラット、マウス、サルまたは他の霊長類等）のような哺乳動物である。いくつかの実施形態では、対象はカニクイザルである。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。
【００７６】
「治療上有効な量」という用語は、対象における疾患または障害を治療するのに有効な薬剤、例えば、抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片の量を指す。がんの場合、治療上有効な量の薬剤はがん細胞の数を減らすことができ；腫瘍のサイズまたは負担を軽減することができ；末梢臓器へのがん細胞の浸潤をある程度阻害することができ；ある程度、腫瘍転移を阻害することができ；ある程度、腫瘍の成長を阻害することができ；がんに関連する症状の１以上をある程度緩和することができ；及び／または無増悪生存期間（ＰＦＳ）、無病生存期間（ＤＦＳ）、全生存期間（ＯＳ）、完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、場合によっては安定した疾患（ＳＤ）、進行性疾患の減少（ＰＤ）、進行までの時間の短縮（ＴＴＰ）、またはそれらの任意の組み合わせのような良好な反応をもたらすことができる。薬剤が既存のがん細胞の成長の防ぎ及び／またはそれらの殺傷する範囲で、薬剤は細胞増殖抑制性及び／または細胞傷害性であることができる。
【００７７】
「治療すること」、「治療」、「治療すること」、「緩和すること」、及び「緩和すること」のような用語は、病的状態または障害を治癒させ、その症状を減速し、軽減する及び／またはその進行を止める治療手段を指す。したがって、治療を必要とするものには、すでにその障害があると診断された、またはその疑いがあるものが含まれる。特定の実施形態では、患者が以下：がん細胞の数の減少または完全な非存在；腫瘍サイズの低下；例えば、軟組織及び骨へのがんの広がりを含む、末梢器官へのがん細胞浸潤の阻害または非存在；腫瘍転移の阻害または非存在；腫瘍増殖の阻害または非存在；特定のがんに関連する１以上の症状の緩和；罹患率と死亡率の低下；生活の質の改善；腫瘍の腫瘍形成性、腫瘍形成頻度、または腫瘍形成能の低下；腫瘍におけるがん幹細胞の数または頻度の低下；腫瘍原性細胞の非腫瘍原性状態への分化；増加した無増悪生存期間（ＰＦＳ）、無病生存期間（ＤＦＳ）、全生存期間（ＯＳ）、完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、安定した疾患（ＳＤ）、進行性疾患（ＰＤ）の減少、進行時間の短縮（ＴＴＰ）、またはその任意の組み合わせの１以上を示す場合、対象は、本発明の方法に従ってがんについて首尾よく「治療」されている。
【００７８】
「がん」及び「がん性」という用語は、細胞の集団が制御されていない細胞増殖を特徴とする哺乳動物における生理学的状態を指す、または記載する。がんの例には、婦人科癌（例えば、乳癌（トリプルネガティブ乳癌を含む）、乳管癌、卵巣癌、及び子宮内膜癌）、非小細胞肺癌、膵臓癌、甲状腺癌、腎臓癌（例えば、腎細胞癌）及び膀胱癌（例えば、尿路上皮細胞癌）が挙げられるが、これらに限定されない。がんは、「Ｂ７−Ｈ４を発現するがん」または「Ｂ７−Ｈ４を発現しているがん」であることができる。そのような用語は、Ｂ７−Ｈ４を発現している細胞を含むがんを指す。がんは原発腫瘍であってもよいし、または進行がんまたは転移がんであってもよい。
【００７９】
「不応性」がんとは、化学療法剤のような抗腫瘍治療ががん患者に投与されているにもかかわらず進行するがんである。
【００８０】
「再発性」がんとは、初期療法に応答した後に、初期の部位または遠位部位で再増殖しているがんである。
【００８１】
「再発」患者は、寛解後にがんの兆候または症状を有する者である。任意に、患者は、アジュバントまたはネオアジュバント療法後に再発した。
【００８２】
本開示及びクレームで使用されるとき、単数形態「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が別途明確に指示しない限り、複数の指示対象を含む。
【００８３】
実施形態が本明細書で「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含む）」という言葉で説明される場合は常に、そうでなければ「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ（から成る）」及び／または  「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ（から本質的に成る）」という用語で説明される類似の実施形態も提供されることが理解される。本開示では、「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ（含む）」、「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含むこと）」、「ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ（含有すること）」、及び「ｈａｖｉｎｇ（有すること）」等は、米国特許法においてそれらに帰せられる意味を有することができ、「ｉｎｃｌｕｄｅｓ（含む）」及び「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ（含むこと）」等を意味することができ；「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ（から本質的に成る）」または「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ（本質的に成る）」は同様に、米国特許法において帰せられる意味を有し、用語は制限がなく、引用されるものの基本的または新規の特徴が引用されるもの以上のものの存在によって変化しない限り、引用されるもの以上のものの存在を許容するが、先行技術の実施形態は除外する。
【００８４】
具体的に述べられるか、文脈から明らかでない限り、本明細書で使用されるとき、「または」という用語は包括的であることが理解される。「及び／または」という用語は、本明細書で「Ａ  及び／またはＢ」のような表現で使用されるとき、「Ａ及びＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」及び「Ｂ」の双方を含むことが意図される。同様に、「及び／または」という用語は「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」のような表現で使用されるとき、以下の各実施形態：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡとＣ；ＡとＢ；ＢとＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；及びＣ（単独）のそれぞれを包含することが意図される。
【００８５】
本明細書で使用されるとき、「約」及び「およそ」という用語は、数値または数値範囲を変更するために使用される場合、値または範囲の５％〜１０％を上回る及び５％〜１０％を下回る逸脱は引用された値または範囲の意図された意味の範囲内にとどまることを示す。
【００８６】
本明細書で提供される任意の組成物または方法は、本明細書で提供される他の組成物及び方法のいずれかの１以上と組み合わせることができる。
【００８７】
５．２  Ｂ７−Ｈ４抗体を含む医薬組成物
本明細書で提供されるのは、抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片（例えば、以下のセクション５．３で論じられるような）を含む医薬組成物（例えば、水性医薬組成物）である。
【００８８】
特定の実施形態では、本明細書で提供されている医薬組成物は、複数の凍結融解サイクルに対して安定である。凍結融解サイクルは、医薬組成物を（例えば、約−７０℃の温度で）凍結し、次いで医薬組成物を（例えば、室温で）融解することを含むことができる。医薬組成物は、少なくとも５回の凍結融解サイクルを経て安定であることができる。凍結融解サイクル（例えば、少なくとも５回の凍結融解サイクル）は、外観、可溶性凝集物、または目に見えない粒子状物質に変化を生じなくてもよい。
【００８９】
特定の実施形態では、本明細書で提供されている医薬組成物は撹拌を経て安定である。攪拌は、室温での約３日間の振盪（例えば、オービタルシェーカーで約３００回転／分）を含むことができる。攪拌は、外観、可溶性凝集体、電荷変異体プロファイル、または目に見えない粒子状物質に変化を生じなくてもよい。
【００９０】
特定の実施形態では、本明細書で提供されている医薬組成物は長期保存条件下で安定である。長期保存条件は、約５℃（例えば、約２℃〜約８℃）での約６ヵ月または約１年の保存を含むことができる。長期保存条件は、約２５℃で約６ヵ月または約１年の保存を含むことができる。長期保存条件は、約４０℃での約３ヵ月、約６ヵ月または約１年の保存を含むことができる。
【００９１】
特定の実施形態では、本明細書で提供されている医薬組成物は、複数（例えば、少なくとも５回）の凍結融解サイクルに対して安定であり、攪拌を経て安定であり、及び／または長期保存条件下で安定である。
【００９２】
特定の実施形態では、本明細書で提供されている医薬組成物は、約−７０℃で保存した場合、及び約２℃〜約８℃で約１年間保存した場合安定である。
【００９３】
特定の実施形態では、医薬組成物はＢ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片を含有することができる。特定の実施形態では、製剤におけるＢ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片（その酸性及び塩基性の変異体を含む）の濃度は約５ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌである。特定の実施形態では、医薬組成物におけるＢ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片（その酸性及び塩基性の変異体を含む）の濃度は約１０ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌである。特定の実施形態では、医薬組成物におけるＢ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片（その酸性及び塩基性の変異体を含む）の濃度は約２０ｍｇ／ｍｌである。
【００９４】
特定の実施形態では、製剤におけるＢ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片（その酸性及び塩基性の変異体を含む）の濃度は５ｍｇ／ｍｌ〜３０ｍｇ／ｍｌである。特定の実施形態では、医薬組成物におけるＢ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片（その酸性及び塩基性の変異体を含む）の濃度は１０ｍｇ／ｍｌ〜２５ｍｇ／ｍｌである。特定の実施形態では、医薬組成物におけるＢ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片（その酸性及び塩基性の変異体を含む）の濃度は２０ｍｇ／ｍｌである。
【００９５】
本明細書で提供されているように、医薬組成物は緩衝液を含有することができる。特定の実施形態では、緩衝液は酢酸塩である。特定の実施形態では、緩衝液はクエン酸塩である。特定の実施形態では、緩衝液（例えば、酢酸塩またはクエン酸塩）の濃度は約１５ｍＭ〜約２５ｍＭである。特定の実施形態では、緩衝液（例えば、酢酸塩またはクエン酸塩）の濃度は約１８ｍＭから約２２ｍＭである。特定の実施形態では、緩衝液（例えば、酢酸塩またはクエン酸塩）の濃度は約２０ｍＭである。
【００９６】
特定の実施形態では、緩衝液（例えば、酢酸塩またはクエン酸塩）の濃度は１５ｍＭ〜２５ｍＭである。特定の実施形態では、緩衝液（例えば、酢酸塩またはクエン酸塩）の濃度は１８ｍＭ〜２２ｍＭである。特定の実施形態では、緩衝液（例えば、酢酸塩またはクエン酸塩）の濃度は２０ｍＭである。
【００９７】
本明細書で提供されているように、医薬組成物は、賦形剤、例えば、スクロース、ソルビトール、またはトレハロースのような糖を含有することができる。いくつかの実施形態では、賦形剤（例えば、スクロース）の濃度は約２２５ｍＭ〜約３００ｍＭである。いくつかの実施形態では、賦形剤（例えば、スクロース）の濃度は約２５０ｍＭ〜約２９０ｍＭである。いくつかの実施形態では、賦形剤（例えば、スクロース）の濃度は約２７０である。
【００９８】
いくつかの実施形態では、賦形剤（例えば、スクロース）の濃度は２２５ｍＭからｍＭである。いくつかの実施形態では、賦形剤（例えば、スクロース）の濃度は２５０ｍＭ〜２９０ｍＭである。いくつかの実施形態では、賦形剤（例えば、スクロース）の濃度は２７０である。
【００９９】
本明細書で提供されているように、医薬組成物は緩衝液（例えば、酢酸塩またはクエン酸塩）及び糖（例えば、スクロース）のような賦形剤を含有することができる。いくつかの実施形態では、糖（例えば、スクロース）のような賦形剤の濃度は緩衝液（例えば、酢酸塩またはクエン酸塩）の濃度の約１０〜約１５倍である。いくつかの実施形態では、糖（例えば、スクロース）のような賦形剤の濃度は緩衝液（例えば、酢酸塩またはクエン酸塩）の濃度の約１３．５倍である。
【０１００】
いくつかの実施形態では、糖（例えば、スクロース）のような賦形剤の濃度は緩衝液（例えば、酢酸塩またはクエン酸塩）の濃度の１０〜１５倍である。いくつかの実施形態では、糖（例えば、スクロース）のような賦形剤の濃度は緩衝液（例えば、酢酸塩またはクエン酸塩）の濃度の１３．５倍である。
【０１０１】
本明細書で提供されているように、医薬組成物は界面活性剤、例えば、ポリソルベートを含有することができる。ポリソルベートは、例えば、ポリソルベート２０（ＰＳ２０）であることができる。いくつかの実施形態では、界面活性剤（例えば、ＰＳ２０）の濃度は約０．０２５〜０．０７５重量／体積（ｗ／ｖ）％である。いくつかの実施形態では、界面活性剤（例えば、ＰＳ２０）の濃度は約０．０３５〜約０．０６５ｗ／ｖ％である。いくつかの実施形態では、界面活性剤（例えば、ＰＳ２０）の濃度は約０．０５ｗ／ｖ％である。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、界面活性剤（例えば、ＰＳ２０）の濃度は０．０２５〜０．０７５重量体積  （ｗ／ｖ）％である。いくつかの実施形態では、界面活性剤（例えば、ＰＳ２０）の濃度は０．０３５〜０．０６５ｗ／ｖ％である。いくつかの実施形態では、界面活性剤（例えば、ＰＳ２０）の濃度は０．０５ｗ／ｖ％である。
【０１０３】
本明細書で提供されているように、いくつかの実施形態では、医薬組成物は約４．５〜約６のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物のｐＨは約５〜約６である。いくつかの実施形態では、医薬組成物のｐＨは約５である。いくつかの実施形態では、医薬組成物のｐＨは約５．５である。いくつかの実施形態では、医薬組成物のｐＨは約６である。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は４．５〜６のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物のｐＨは５〜６である。いくつかの実施形態では、医薬組成物のｐＨは５である。いくつかの実施形態では、医薬組成物のｐＨは５．５である。いくつかの実施形態では、医薬組成物のｐＨは６である。
【０１０５】
本明細書で提供されているように、医薬組成物は液体であることができる。医薬組成物（例えば、液体医薬組成物）は、非経口投与用、例えば、静脈内投与用であることができる。
【０１０６】
一実施形態では、医薬組成物は、約１５ｍＭ〜約２５ｍＭの酢酸塩、約２２５ｍＭ〜約３００ｍＭのスクロース、及び約０．０２５％〜約０．０７５％のＰＳ２０にて約５ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬのＢ７−Ｈ４抗体またはその断片（例えば、非フコシル化抗体２０５０２）を含む。一実施形態では、医薬組成物は、約４．５〜約６、例えば約５のｐＨを有する。一実施形態では、医薬組成物は液体である。
【０１０７】
一実施形態では、医薬組成物は、１５ｍＭ〜２５ｍＭの酢酸塩、２２５ｍＭ〜３００ｍＭのスクロース、及び０．０２５％〜０．０７５％のＰＳ２０にて５ｍｇ／ｍＬ〜３０ｍｇ／ｍＬ  のＢ７−Ｈ４抗体またはその断片（例えば、非フコシル化抗体２０５０２）を含む。一実施形態では、医薬組成物は４．５から６、例えば５のｐＨを有する。一実施形態では、医薬組成物は液体である。
【０１０８】
一実施形態では、医薬組成物は約１８ｍＭ〜約２２ｍＭの酢酸塩、約２５０ｍＭ〜約２９０ｍＭのスクロース、及び約０．０３５％〜約０．０６５％のＰＳ２０にて約１０ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬのＢ７−Ｈ４抗体またはその断片（例えば、非フコシル化抗体２０５０２）を含む。一実施形態では、医薬組成物は、約４．５〜約６、例えば約５のｐＨを有する。一実施形態では、医薬組成物は液体である。
【０１０９】
一実施形態では、医薬組成物は、１８ｍＭ〜２２ｍＭの酢酸塩、２５０ｍＭ〜２９０ｍＭのスクロース、及び０．０３５％〜０．０６５％のＰＳ２０にて１０ｍｇ／ｍＬ〜２５ｍｇ／ｍＬのＢ７−Ｈ４抗体またはその断片（例えば、非フコシル化抗体２０５０２）を含む。一実施形態では、医薬組成物は４．５から６、例えば５のｐＨを有する。一実施形態では、医薬組成物は液体である。
【０１１０】
一実施形態では、医薬組成物は、２０ｍＭの酢酸塩、２７０ｍＭのスクロース、及び０．０５％のＰＳ２０にて２０ｍｇ／ｍＬのＢ７−Ｈ４抗体またはその断片（例えば、非フコシル化抗体２０５０２）を含む。一実施形態では、医薬組成物５．０のｐＨを有する。一実施形態では、医薬組成物は液体である。
【０１１１】
一実施形態では、医薬組成物は、約１５ｍＭ〜約２５ｍＭのクエン酸塩、約２２５ｍＭ〜約３００ｍＭのスクロース、及び約０．０２５％〜約０．０７５％のＰＳ２０にて約５ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬのＢ７−Ｈ４抗体またはその断片（例えば、非フコシル化抗体２０５０２）を含む。一実施形態では、医薬組成物は約４．５〜約６、例えば、約５．５のｐＨを有する。一実施形態では、医薬組成物は液体である。
【０１１２】
一実施形態では、医薬組成物は、１５ｍＭ〜２５ｍＭのクエン酸塩、２２５ｍＭ〜３００ｍＭのスクロース、及び０．０２５％〜０．０７５％のＰＳ２０にて５ｍｇ／ｍＬ〜３０ｍｇ／ｍＬのＢ７−Ｈ４抗体またはその断片（例えば、非フコシル化抗体２０５０２）を含む。一実施形態では、医薬組成物は４．５〜６、例えば、５．５のｐＨを有する。一実施形態では、医薬組成物は液体である。
【０１１３】
一実施形態では、医薬組成物は約１８ｍＭ〜約２２ｍＭのクエン酸塩、約２５０ｍＭ〜約２９０ｍＭのスクロース、及び約０．０３５％〜約０．０６５％のＰＳ２０にて約１０ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬのＢ７−Ｈ４抗体またはその断片（例えば、非フコシル化抗体２０５０２）を含む。一実施形態では、医薬組成物は約４．５〜約６、例えば、約５．５のｐＨを有する。一実施形態では、医薬組成物は液体である。
一実施形態では、医薬組成物は、１８ｍＭ〜２２ｍＭのクエン酸塩、２５０ｍＭ〜２９０ｍＭのスクロース、及び０．０３５％〜０．０６５％のＰＳ２０にて１０ｍｇ／ｍＬ〜２５  ｍｇ／ｍＬのＢ７−Ｈ４抗体またはその断片（例えば、非フコシル化抗体２０５０２）  を含む。一実施形態では、医薬組成物約４．５〜約６、例えば、約５．５のｐＨを有する。一実施形態では、医薬組成物は液体である。
【０１１４】
一実施形態では、液体医薬組成物は、２０ｍＭのクエン酸塩、２７０ｍＭのスクロース、及び０．０５％のＰＳ２０にて２０ｍｇ／ｍＬの抗体またはその断片（例えば、非フコシル化抗体２０５０２）を含む。一実施形態では、医薬組成物は５．５のｐＨを有する。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片（例えば、非フコシル化抗体２０５０２）を含み、組成物は５℃で６ヵ月後、抗体または抗原結合断片の酸性変異体を４０％以下で含み、及び／または抗体またはその抗原結合断片の塩基性変異体を２０％以下で含む。
【０１１６】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片（例えば、非フコシル化抗体２０５０２）を含み、組成物は、５℃で６ヵ月後、抗体またはその抗原結合断片の酸性変異体を約３０％〜４５％、約３０％〜約４０％、または約３５％〜約４０％含み、及び／または抗体またはその抗原結合断片の塩基性変異体を約１１％〜約１６％、約１０％〜１７％、または約９％〜約１８％含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ヒトＢ７−Ｈ４（例えば、非フコシル化抗体２０５０２）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含み、組成物は、５℃で６ヵ月後、抗体またはその抗原結合断片の酸性変異体を３０％〜４５％、３０％〜４０％、または３５％〜４０％含み、及び／または抗体またはその抗原結合断片の塩基性変異体を１１％〜１６％、１０％〜１７％、または９％〜１８％含む。
【０１１７】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含み、組成物は５℃で６ヵ月後、抗体または抗原結合断片の酸性変異体及び塩基性変異体を６０％以下でまたは５５％以下で含む。いくつかの実施形態では、組成物は、５℃で６ヵ月後、抗体またはその抗原結合断片の酸性変異体を４０％以下で含み、及び／または塩基性変異体を２０％以下で含む。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、医薬組成物が提供され、医薬組成物は、非フコシル化された抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片と医薬的に許容される担体とを含む。具体的な実施形態では、医薬組成物が提供され、医薬組成物は非フコシル化された抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片を含み、例えば、組成物における抗体の少なくとも８０％が非フコシル化される。具体的な実施形態では、医薬組成物が提供され、医薬組成物は非フコシル化された抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片を含み、例えば、組成物における抗体の少なくとも８５％が非フコシル化される。具体的な実施形態では、医薬組成物が提供され、医薬組成物は非フコシル化された抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片を含み、例えば、組成物における抗体の少なくとも９０％が非フコシル化される。具体的な実施形態では、医薬組成物が提供され、医薬組成物は非フコシル化された抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片を含み、例えば、組成物における抗体の少なくとも９５％が非フコシル化される。具体的な実施形態では、医薬組成物が提供され、医薬組成物は非フコシル化された抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片を含み、例えば、組成物における抗体の少なくとも９６％が非フコシル化される。具体的な実施形態では、医薬組成物が提供され、医薬組成物は非フコシル化された抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片を含み、例えば、組成物における抗体の少なくとも９７％が非フコシル化される。具体的な実施形態では、医薬組成物が提供され、医薬組成物は非フコシル化された抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片を含み、例えば、組成物における抗体の少なくとも９８％が非フコシル化される。具体的な実施形態では、医薬組成物が提供され、医薬組成物は非フコシル化された抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片を含み、例えば、組成物における抗体の少なくとも９９％が非フコシル化される。具体的な実施形態では、医薬組成物が提供され、医薬組成物は非フコシル化された抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片を含み、フコースは組成物にて検出できない。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、医薬組成物が提供され、医薬組成物は、（ｉ）（ａ）それぞれ配列番号５〜１０の重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３及び軽鎖可変領域（ＶＬ）配列番号のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３の配列と、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域及び配列番号１２のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域、または（ｃ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片と（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤とを含む。
【０１２０】
本明細書で提供されるのはまた医薬組成物であり、医薬組成物は、（ｉ）ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、それぞれ配列番号５〜１０の重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３及び軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３の配列の配列を含む抗体またはその抗原結合断片と、（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤とを含み、その際、組成物における抗体またはその抗原結合断片の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％が非フコシル化されている。一実施形態では、（ｉ）抗体もしくはその抗原結合断片は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むか、または（ｉｉ）抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０１２１】
５．３  Ｂ７−Ｈ４抗体
本明細書で提供されるのは、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合する抗体（例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体のようなモノクローナル抗体）及びその抗原結合断片を含む医薬組成物である。本明細書で提供されている医薬組成物で使用することができる例示的なＢ７−Ｈ４抗体及びその抗原結合断片は、当該技術分野で既知である。ヒト、カニクイザル、マウス、及びラットのＢ７−Ｈ４のアミノ酸配列は当該技術分野で既知であり、それぞれ配列番号１〜４によって表されるように本明細書でも提供されている。
ヒトＢ７−Ｈ４：
ＭＡＳＬＧＱＩＬＦＷＳＩＩＳＩＩＩＩＬＡＧＡＩＡＬＩＩＧＦＧＩＳＧＲＨＳＩＴＶＴＴＶＡＳＡＧＮＩＧＥＤＧＩＬＳＣＴＦＥＰＤＩＫＬＳＤＩＶＩＱＷＬＫＥＧＶＬＧＬＶＨＥＦＫＥＧＫＤＥＬＳＥＱＤＥＭＦＲＧＲＴＡＶＦＡＤＱＶＩＶＧＮＡＳＬＲＬＫＮＶＱＬＴＤＡＧＴＹＫＣＹＩＩＴＳＫＧＫＧＮＡＮＬＥＹＫＴＧＡＦＳＭＰＥＶＮＶＤＹＮＡＳＳＥＴＬＲＣＥＡＰＲＷＦＰＱＰＴＶＶＷＡＳＱＶＤＱＧＡＮＦＳＥＶＳＮＴＳＦＥＬＮＳＥＮＶＴＭＫＶＶＳＶＬＹＮＶＴＩＮＮＴＹＳＣＭＩＥＮＤＩＡＫＡＴＧＤＩＫＶＴＥＳＥＩＫＲＲＳＨＬＱＬＬＮＳＫＡＳＬＣＶＳＳＦＦＡＩＳＷＡＬＬＰＬＳＰＹＬＭＬＫ（配列番号１）
カニクイザルＢ７−Ｈ４：
ＭＡＳＬＧＱＩＬＦＷＳＩＩＳＩＩＦＩＬＡＧＡＩＡＬＩＩＧＦＧＩＳＧＲＨＳＩＴＶＴＴＶＡＳＡＧＮＩＧＥＤＧＩＬＳＣＴＦＥＰＤＩＫＬＳＤＩＶＩＱＷＬＫＥＧＶＩＧＬＶＨＥＦＫＥＧＫＤＥＬＳＥＱＤＥＭＦＲＧＲＴＡＶＦＡＤＱＶＩＶＧＮＡＳＬＲＬＫＮＶＱＬＴＤＡＧＴＹＫＣＹＩＩＴＳＫＧＫＧＮＡＮＬＥＹＫＴＧＡＦＳＭＰＥＶＮＶＤＹＮＡＳＳＥＴＬＲＣＥＡＰＲＷＦＰＱＰＴＶＶＷＡＳＱＶＤＱＧＡＮＦＳＥＶＳＮＴＳＦＥＬＮＳＥＮＶＴＭＫＶＶＳＶＬＹＮＶＴＩＮＮＴＹＳＣＭＩＥＮＤＩＡＫＡＴＧＤＩＫＶＴＥＳＥＩＫＲＲＳＨＬＱＬＬＮＳＫＡＳＬＣＶＳＳＦＬＡＩＳＷＡＬＬＰＬＡＰＹＬＭＬＫ（配列番号２）
マウスＢ７−Ｈ４
ＭＡＳＬＧＱＩＩＦＷＳＩＩＮＩＩＩＩＬＡＧＡＩＡＬＩＩＧＦＧＩＳＧＫＨＦＩＴＶＴＴＦＴＳＡＧＮＩＧＥＤＧＴＬＳＣＴＦＥＰＤＩＫＬＮＧＩＶＩＱＷＬＫＥＧＩＫＧＬＶＨＥＦＫＥＧＫＤＤＬＳＱＱＨＥＭＦＲＧＲＴＡＶＦＡＤＱＶＶＶＧＮＡＳＬＲＬＫＮＶＱＬＴＤＡＧＴＹＴＣＹＩＲＴＳＫＧＫＧＮＡＮＬＥＹＫＴＧＡＦＳＭＰＥＩＮＶＤＹＮＡＳＳＥＳＬＲＣＥＡＰＲＷＦＰＱＰＴＶＡＷＡＳＱＶＤＱＧＡＮＦＳＥＶＳＮＴＳＦＥＬＮＳＥＮＶＴＭＫＶＶＳＶＬＹＮＶＴＩＮＮＴＹＳＣＭＩＥＮＤＩＡＫＡＴＧＤＩＫＶＴＤＳＥＶＫＲＲＳＱＬＱＬＬＮＳＧＰＳＰＣＶＦＳＳＡＦＶＡＧＷＡＬＬＳＬＳＣＣＬＭＬＲ（配列番号３）
ラットＢ７−Ｈ４
ＭＡＳＬＧＱＩＩＦＷＳＩＩＮＶＩＩＩＬＡＧＡＩＶＬＩＩＧＦＧＩＳＧＫＨＦＩＴＶＴＴＦＴＳＡＧＮＩＧＥＤＧＴＬＳＣＴＦＥＰＤＩＫＬＮＧＩＶＩＱＷＬＫＥＧＩＫＧＬＶＨＥＦＫＥＧＫＤＤＬＳＱＱＨＥＭＦＲＧＲＴＡＶＦＡＤＱＶＶＶＧＮＡＳＬＲＬＫＮＶＱＬＴＤＡＧＴＹＴＣＹＩＨＴＳＫＧＫＧＮＡＮＬＥＹＫＴＧＡＦＳＭＰＥＩＮＶＤＹＮＡＳＳＥＳＬＲＣＥＡＰＲＷＦＰＱＰＴＶＡＷＡＳＱＶＤＱＧＡＮＦＳＥＶＳＮＴＳＦＥＬＮＳＥＮＶＴＭＫＶＶＳＶＬＹＮＶＴＩＮＮＴＹＳＣＭＩＥＮＤＩＡＫＡＴＧＤＩＫＶＴＤＳＥＶＫＲＲＳＱＬＥＬＬＮＳＧＰＳＰＣＶＳＳＶＳＡＡＧＷＡＬＬＳＬＳＣＣＬＭＬＲ（配列番号４）
【０１２２】
特定の実施形態では、本明細書で提供されている医薬組成物における抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合する。特定の実施形態では、本明細書で提供されている医薬組成物における抗体またはその抗原結合断片はヒト及びカニクイザルのＢ７−Ｈ４に特異的に結合する。特定の実施形態では、本明細書で提供されている医薬組成物における抗体またはその抗原結合断片はヒト、マウス、及びラットのＢ７−Ｈ４に特異的に結合する。特定の実施形態では、本明細書で提供されている医薬組成物における抗体またはその抗原結合断片はヒト、カニクイザル、マウス、及びラットのＢ７−Ｈ４に。
【０１２３】
Ｂ７−Ｈ４は、ＩｇＣ細胞外ドメイン（配列番号１のアミノ酸１５３−２４１）及びＩｇＶ細胞外ドメイン（配列番号１のアミノ酸３５−１４６）を含有する。特定の実施形態では、本明細書で提供されている医薬組成物における抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４のＩｇＶドメインに特異的に結合する。したがって、本明細書で提供されるのは、配列番号１のアミノ酸３５〜１４６から成るポリペプチドに特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片を含む医薬組成物である。
【０１２４】
特定の実施形態では、本明細書に提供されている医薬組成物における抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、表１及び２に提供されるように列挙される２０５０２抗体の６つのＣＤＲを含む。
【表１】
2021514379.tif 000004
1表１のＶＨ  ＣＤＲはＫａｂａｔに従って決定される。
【表２】
2021514379.tif 000005
2表２のＶＬ  ＣＤＲはＫａｂａｔに従って決定される。
【０１２５】
特定の実施形態では、本明細書で提供されている医薬組成物における抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、表３でリストされている２０５０２抗体のＶＨを含む。
【表３】
2021514379.tif 000006
【０１２６】
特定の実施形態では、本明細書で提供されている医薬組成物における抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、表４でリストにされている２０５０２のＶＬを含む。
【表４−１】
2021514379.tif 000007
【表４−２】
2021514379.tif 000008
【０１２７】
特定の実施形態では、本明細書で提供されている医薬組成物における抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、表３及び４でリストにされている２０５０２抗体のＶＨ及びＶＬを含む。
【０１２８】
特定の実施形態では、本明細書で提供されている医薬組成物における抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、表５でリストにされている２０５０２抗体のＶＨフレームワーク領域を含む。
【表５】
2021514379.tif 000009
３表５に記載されているＶＨフレームワーク領域は、ＣＤＲについてのＫａｂａｔ番号付け方式の境界に基づいて決定される。したがって、ＶＨのＣＤＲはＫａｂａｔによって決定され、フレームワーク領域は、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４の形式の可変領域内のＣＤＲを囲むアミノ酸残基である。
【０１２９】
特定の実施形態では、本明細書で提供されている医薬組成物における抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、表６でリストにされている２０５０２抗体のＶＬフレームワーク領域を含む。
【表６】
2021514379.tif 000010
４表６に記載されているＶＬフレームワーク領域はＣＤＲについてのＫａｂａｔ番号付け方式の境界に基づいて決定される。したがって、ＶＬ  ＣＤＲはＫａｂａｔによって決定され、フレームワーク領域は、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４の形式で可変領域のＣＤＲを囲むアミノ酸残基である。
【０１３０】
特定の実施形態では、本明細書で提供されている医薬組成物における抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、表５及び６でリストにされている２０５０２抗体の４つのＶＨフレームワーク領域及び４つのＶＬフレームワーク領域を含む。
【０１３１】
特定の実施形態では、本明細書で提供されている医薬組成物における抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、表７でリストにされている２０５０２抗体の重鎖配列を含む。
【表７】
2021514379.tif 000011
【０１３２】
特定の実施形態では、本明細書で提供されている医薬組成物における抗体またはその抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、表８でリストにされている２０５０２抗体の軽鎖配列を含む。
【表８】
2021514379.tif 000012
【０１３３】
特定の実施形態では、本明細書で提供されている医薬組成物における抗体または抗原結合断片はヒトＢ７−Ｈ４に特異的に結合し、表７及び８でリストにされている２０５０２抗体の重鎖配列及び軽鎖配列を含む。
【０１３４】
特定の態様では、本明細書で提供されている医薬組成物における抗体またはその抗原結合断片は、そのＶＬドメインのみ、もしくはそのＶＨドメインのみによって、またはその３つのＶＬ  ＣＤＲのみ、もしくはその３つのＶＨ  ＣＤＲのみによって記載される。例えば、ヒト軽鎖または重鎖のライブラリーからそれぞれ相補性の軽鎖または重鎖を同定し、元の抗体の親和性と同じかそれより高い親和性を有するヒト化抗体変異体を生じることによってマウス抗αｖβ３抗体のヒト化を説明している、参照によってその全体が本明細書に組み込まれるＲａｄｅｒ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９８）ＰＮＡＳ９５：８９１０−８９１５を参照のこと。特定のＶＬドメイン（またはＶＨドメイン）を使用し，相補性ＶＨドメイン（またはＶＬドメイン）についてライブラリーをスクリーニングすることによって特定の抗原を特異的に結合する抗体を作製する方法を説明している、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１），Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８も参照のこと。この選抜は、ＥＬＩＳＡで判定したところ、特定のＶＨドメインについて１４の新しいパートナーと特定のＶＬドメインについて１３の新しいパートナーを作り出し、それらは強力なバインダーだった。特定のＶＨドメインを使用し、相補性ＶＬドメインについてライブラリー（例えば、ヒトＶＬライブラリー）をスクリーニングすることによって特定の抗原を特異的に結合する抗体を作製する方法を説明している、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる、Ｋｉｍ，ＳＪ及びＨｏｎｇ，ＨＪ，（２００７），Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４５：５７２−５７７も参照のこと；選択されたＶＬドメインを次に使用して追加の相補性（例えば、ヒト）ＶＨドメインの選択を導き得る。
【０１３５】
特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片のＣＤＲは、免疫グロブリンの構造ループの位置を指すＣｈｏｔｈｉａ番号付けスキームに従って決定することができる（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ及びＬｅｓｋ，ＡＭ，（１９８７），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７；Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９７），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７−９４８；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９２），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７９９−８１７；Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９０），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５（１）：１７５−８２；ならびに米国特許第７，７０９，２２６号を参照のこと）。通常、Ｋａｂａｔ番号付け規則を使用する場合、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｈ１ループは重鎖アミノ酸２６〜３２、３３、または３４に存在し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｈ２ループは重鎖アミノ酸５２〜５６に存在し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｈ３ループは重鎖アミノ酸９５〜１０２に存在する一方で、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｌ１ループは軽鎖アミノ酸２４〜３４に存在し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｌ２ループは軽鎖アミノ酸５０〜５６に存在し、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｌ３ループは軽鎖アミノ酸８９〜９７に存在する。Ｋａｂａｔ番号付け規則を用いて番号付けした場合、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ−Ｈ１ループの末端は、ループの長さに応じてＨ３２とＨ３４の間で異なる（これは、Ｋａｂａｔ番号付けスキームがＨ３５ＡとＨ３５Ｂに挿入を置くためであり、３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、このループは３２で終わり、３５Ａのみが存在する場合、このループは３３で終わり、３５Ａ及び３５Ｂの双方が存在する場合、このループは３４で終わる）。
【０１３６】
特定の態様では、本明細書で提供されるのは、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合し、表３及び４でリストにされた２０５０２抗体のＣｈｏｔｈｉａのＶＨ及びＶＬのＣＤＲを含む抗体及びその抗原結合断片を含む医薬組成物である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合し、１以上のＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物であり、その際、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＫａｂａｔのＣＤＲは同じアミノ酸配列を有する。特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合し、ＫａｂａｔのＣＤＲ及びＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲの組み合わせを含む抗体及びその抗原結合断片を含む医薬組成物である。
【０１３７】
特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片のＣＤＲは、Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ−Ｐ，（１９９９），Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ，７：１３２−１３６及びＬｅｆｒａｎｃ，Ｍ−Ｐ，ｅｔ  ａｌ．，（１９９９），Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２７：２０９−２１２に記載されているようなＩＭＧＴ番号付け方式に従って決定することができる。ＩＭＧＴ番号付けスキームによれば、ＶＨ−ＣＤＲ１は、２６〜３５位であり、ＶＨ−ＣＤＲ２は５１〜５７位であり、ＶＨ−ＣＤＲ３は９３〜１０２位であり、ＶＬ−ＣＤＲ１は２７〜３２位であり、ＶＬ−ＣＤＲ２は５０〜５２位であり、ＶＬ−ＣＤＲ３は８９〜９７位である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合し、表３及び４でリストにされた、例えば、Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ−Ｐ（１９９９）  上記及びＬｅｆｒａｎｃ，Ｍ−Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）に記載されている２０５０２抗体のＩＭＧＴのＶＨ及びＶＬのＣＤＲを含む抗体及びその抗原結合断片を含む医薬組成物である。
【０１３８】
特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片のＣＤＲは、ＭａｃＣａｌｌｕｍ，ＲＭ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９６），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２−７４５に従って決定することができる例えば、Ｍａｒｔｉｎ，Ａ．”Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｄｏｍａｉｎｓ，”ｉｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ及びＤｕｂｅｌ，ｅｄｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ  ３１，ｐｐ．４２２−４３９，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ（２００１）も参照のこと。特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合し、ＭａｃＣａｌｌｕｍ，ＲＭ．ｅｔ  ａｌ．，の方法によって判定されたように表３及び４でリストにされた２０５０２抗体のＶＨ及びＶＬのＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物である。
【０１３９】
特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片のＣＤＲは、ＡｂＭ番号付けスキームに従って決定することができ、それは、ＫａｂａｔのＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａの構造ループとの折衷物を表し、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｉｎｃ．）によって使用されているＡｂＭの超可変領域を参照する。特定の実施形態では、本明細書に提供されるのは、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に特異的に結合し、ＡｂＭ番号付けスキームによって決定されたように表３及び４でリストにされた２０５０２抗体のＶＨ及びＶＬのＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物である  。
【０１４０】
特定の態様では、本明細書で提供されるのは、重鎖及び軽鎖を含む抗体を含む医薬組成物である。
【０１４１】
軽鎖に関して、具体的な実施形態では、本明細書に記載されている抗体の軽鎖はカッパ軽鎖である。ヒトカッパ軽鎖の定常領域は以下のアミノ酸配列を含むことができる：
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２３）。
【０１４２】
ヒトカッパ軽鎖の定常領域は以下のヌクレオチド配列によってコードされ得る。
ＣＧＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴ（配列番号２４）。
【０１４３】
特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４ポリペプチド（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する抗体、本明細書に記載されている医薬組成物は、ＶＬドメインのアミノ酸配列が表４で示される配列を含む軽鎖を含み、その際、軽鎖の定常領域はヒトカッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。
【０１４４】
特定の実施形態では、本明細書に記載されている医薬組成物におけるＢ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する抗体は、ＶＨドメインのアミノ酸配列が表３で示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含み、その際、重鎖の定常領域は、ヒトガンマ（γ）重鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。
【０１４５】
ヒトＩｇＧ１重鎖の定常領域は以下のアミノ酸配列を含むことができる：
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２５）。
【０１４６】
ヒトＩｇＧ１重鎖の定常領域は以下のヌクレオチド配列によってコードされ得る。
ＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＧＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＴＧＡＧＣＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡ（配列番号２６）。
【０１４７】
具体的な実施形態では、本明細書に記載されている医薬組成物におけるＢ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する抗体は、本明細書に記載されている任意のＶＨ及びＶＬドメインのアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及びＶＬドメインを含み、且つ、定常領域はＩｇＧ（例えば、ヒトＩｇＧ）免疫グロブリン分子の定常領域のアミノ酸配列を含む。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載されている医薬組成物で使用するためのＢ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する抗体は、本明細書に記載されている任意のＶＨ及びＶＬドメインのアミノ酸配列を含む及びＶＨドメインのＶＬドメインを含み、その際、定常領域は、ＩｇＧ１（例えば、ヒトＩｇＧ１）免疫グロブリン分子の定常領域のアミノ酸配列を含む。
【０１４８】
フコース含量が低下した抗体は、例えば、ＦｃγＲＩＩＩＡのようなＦｃ受容体に対する親和性が増加すると報告されている。したがって、特定の実施形態では、本明細書に記載されている医薬組成物における抗体またはその抗原結合断片は、フコース含量が低下しているか、またはフコースを欠いている（すなわち、「非フコシル化されている」）。そのような抗体またはその抗原結合断片は、当業者に既知の技法を用いて作り出すことができる。例えば、それらは、フコシル化する能力を欠損するまたは欠如する細胞において発現させることができる。特定の例では、α１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子（ＦＵＴ８）の双方の対立遺伝子をノックアウトした細胞株を用いて、フコース含量が低下した抗体またはその抗原結合断片を作り出すことができる。Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）システム（Ｌｏｎｚａ）は、フコース含量が低下した抗体及びその抗原結合断片を作り出すために使用できるそのようなシステムの例である。あるいは、フコース含量が低下した、またはフコース含量が存在しない抗体またはその抗原結合断片は、例えば、（ｉ）フコシル化を防止するまたは低下させる条件下で細胞を培養すること；（ｉｉ）フコースの翻訳後の除去（例えば、フコシダーゼ酵素による）；（ｉｉｉ）  例えば、非グリコシル化糖タンパク質の組換え発現後の、所望の炭水化物の翻訳後付加；または（ｉｖ）フコシル化されていない抗体またはその抗原結合断片を選択するための糖タンパク質の精製によって作り出すことができる。フコース含量を含まないか、またはフコース含量が低下したその抗体を産生させる方法については、例えば、Ｌｏｎｇｍｏｒｅ，ＧＤ．＆  Ｓｃｈａｃｈｔｅｒ，Ｈ．（１９８２），Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．１００：３６５−９２及びＩｍａｉ−Ｎｉｓｈｉｙａ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．，（２００７），ＢＭＣ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７：８４を参照のこと。
【０１４９】
いくつかの実施形態では、非フコシル化されたＢ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片は、同じアミノ酸配列を有するフコシル化されたＢ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片と比べて試験管内でのＡＤＣＣ活性が増強されている。いくつかの実施形態では、非フコシル化されたＢ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片は、フコシル化Ｂ７−Ｈ４抗体による特異的溶解より少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、または少なくとも７５パーセントポイント高い特異的溶解を引き起こす。
【０１５０】
いくつかの実施形態では、Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片は、同じアミノ酸配列を有するフコシル化されたＢ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片と比べてＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する親和性が増強されている。いくつかの実施形態では、非フコシル化されたＢ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片はフコシル化されたＢ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片よりも少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも７倍、少なくとも１０倍、少なくとも１２倍、少なくとも１５倍、少なくとも１７倍、または少なくとも２０倍高い親和性でＦｃガンマＲＩＩＩＡに結合する。いくつかの実施形態では、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する親和性は表面プラズモン共鳴を用いて決定される。いくつかの実施形態では、ＦｃガンマＲＩＩＩＡは、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）及びＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）から選択される。いくつかの実施形態では、ＦｃガンマＲＩＩＩＡは、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）である。
【０１５１】
いくつかの実施形態では、フコースの存在は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、キャピラリー電気泳動、またはＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析を含む方法によって決定することができる。
【０１５２】
具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）２０５０２のＣＤＲ配列、２０５０２のＶＨ及びＶＬの配列、または２０５０２の重鎖及び軽鎖の配列を含み、（ｉｉ）非フコシル化される。
【０１５３】
具体的な実施形態では、組成物は、（ｉ）２０５０２のＣＤＲ配列、２０５０２のＶＨ及びＶＬ配列、または２０５０２の重鎖及び軽鎖の配列を含み、且つ（ｉｉ）非フコシル化される抗体またはその抗原結合断片を含み、例えば、組成物における抗体の少なくとも９５％が非フコシル化されているか、または組成物にてフコシル化が検出できない。
【０１５４】
操作された糖型は、エフェクター機能を増強することまたは低減することを含むがこれらに限定されない、様々な目的に有用であってもよい。本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片において操作された糖型を生成する方法には、例えば、Ｕｍａｎａ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９９），Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：１７６−１８０；Ｄａｖｉｅｓ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，（２００１），Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．７４：２８８−２９４；Ｓｈｉｅｌｄｓ，ＲＬ．ｅｔ  ａｌ．，（２００２），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３−２６７４０；Ｓｈｉｎｋａｗａ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，（２００３），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：３４６６−３４７３；Ｎｉｗａ，Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，（２００４），Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１：６２４８−６２５５；Ｐｒｅｓｔａ，ＬＧ．ｅｔ  ａｌ．，（２００２），Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．３０：４８７−４９０；Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，（２００７），Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ，１７：１０４−１１８；米国特許第６，６０２，６８４号；同第６，９４６，２９２号；及び同第７，２１４，７７５号；米国特許公開番号ＵＳ２００７／０２４８６００；２００７／０１７８５５１；２００８／００６００９２；及び２００６／０２５３９２８；国際公開番号ＷＯ００／６１７３９；ＷＯ０１／２９２２４６；ＷＯ０２／３１１１４０；及びＷＯ０２／３０９５４；Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（商標）ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｂｉｏｗａ，Ｉｎｃ．Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）；並びにＧｌｙｃｏＭＡｂ（登録商標）グリコシル化操作技術（Ｇｌｙｃａｒｔ  ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＡＧ，Ｚｕｒｉｃｈ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）にて開示されているものが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｆｅｒｒａｒａ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，（２００６），Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．９３：８５１−８６１；国際公開番号ＷＯ０７／０３９８１８；ＷＯ１２／１３０８３１；ＷＯ９９／０５４３４２；ＷＯ０３／０１１８７８；及びＷＯ０４／０６５５４０も参照のこと。
【０１５５】
特定の実施形態では、本明細書に記載されている定常領域の変異または修飾のいずれかを、２つの重鎖定常領域を有する本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片の一方または双方の重鎖定常領域に導入することができる。
【０１５６】
別の特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）重鎖が表１でリストにされている２０５０２抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含み；（ｉｉ）軽鎖が表２でリストにされている２０５０２抗体のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含み、（ｉｉｉ）重鎖がさらに、ヒトＩｇＧ１重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常重鎖ドメインを含み；（ｉｖ）軽鎖がさらに、ヒトカッパ軽鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常軽鎖ドメインを含む、重鎖及び軽鎖を含む。
【０１５７】
別の特定の実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）重鎖が表３でリストにされている２０５０２抗体のＶＨドメインのアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含み；（ｉｉ）軽鎖が表で４でリストにされている２０５０２抗体のＶＬドメインのアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含み；（ｉｉｉ）重鎖がさらに、ヒトＩｇＧ１重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常重鎖ドメインを含み；（ｉｖ）軽鎖がさらに、ヒトカッパ軽鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常軽鎖ドメインを含む、重鎖及び軽鎖を含む。
【０１５８】
具体的な実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、Ｔ細胞チェックポイント遮断活性を示す。具体的な実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、Ｔ細胞におけるインターフェロン−ガンマ（ＩＦＮγ）の産生を増加させる。具体的な実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、Ｔ細胞増殖を増加させる。具体的な実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を増加させる。具体的な実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を増加させる。
【０１５９】
具体的な実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を示す。具体的な実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも３００，０００の細胞表面Ｂ７−Ｈ４分子を伴う細胞株（例えば、ＳＫ−ＢＲ−３細胞）に対して抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を示す。具体的な実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも１００，０００の細胞表面Ｂ７−Ｈ４分子を伴う細胞株（例えば、ＨＣＣ１５６９細胞）に対して抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を示す。具体的な実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも５０，０００の細胞表面Ｂ７−Ｈ４分子を伴う細胞株（例えば、ＺＲ−７５−１細胞）において抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を示す。具体的な実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも３０，０００の細胞表面Ｂ７−Ｈ４分子を伴う細胞株（例えば、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞）に対して抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を示す。具体的な実施形態では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも１５，０００の細胞表面Ｂ７−Ｈ４分子を伴う細胞株（例えば、ＨＣＣ１９６４細胞）に対して抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を示す。
【０１６０】
具体的な態様では、Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する本明細書に記載されている抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びｓｃＦｖから成る群から選択され、その際、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖは、本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片の重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列を含む。Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖは、当業者に既知の任意の技法によって生成することができる。特定の実施形態では、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖは生体内での抗体の半減期を延長する部分をさらに含む。その部分は「半減期延長部分」とも呼ばれる。生体内でのＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖの半減期を延長するために当業者に既知の任意の部分を使用することができる。例えば、半減期延長部分は、Ｆｃ領域、ポリマー、アルブミン、またはアルブミン結合タンパク質または化合物を含むことができる。ポリマーには、天然または合成の、任意で置換された直鎖または分岐鎖のポリアルキレン、ポリアルケニレン、ポリオキシアルキレン、多糖類、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、メトキシポリエチレングリコール、ラクトース、アミロース、デキストラン、グリコーゲン、またはそれらの誘導体を挙げることができる。置換基には、１以上のヒドロキシ基、メチル基、またはメトキシ基を挙げることができる。特定の実施形態では、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖは、半減期延長部分の取付のために１以上のＣ末端アミノ酸の付加によって修飾することができる。特定の実施形態では、半減期延長部分はポリエチレングリコールまたはヒト血清アルブミンである。特定の実施形態では、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖはＦｃ領域に融合される。
【０１６１】
５．４  抗体の生産及びポリヌクレオチド
Ｂ７−Ｈ４（例えば、ヒトＢ７−Ｈ４）に免疫特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片は、抗体及びその抗原結合断片の合成について当該技術分野で既知の任意の方法によって、例えば、化学合成によってまたは組換え発現技術によって作り出すことができる。本明細書に記載されている方法は、特に指示されない限り、分子生物学、微生物学、遺伝子分析、組換えＤＮＡ、有機化学、生化学、ＰＣＲ、オリゴヌクレオチドの合成及び修飾、核酸のハイブリッド形成、及び当該技術の範囲内の関連分野における従来の技法を採用する。これらの技法は、例えば、本明細書に引用される参考文献に記載されており、文献で完全に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，（２００１），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；Ａｕｓｕｂｅｌ，ＦＭ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（１９８７  ａｎｄ  ａｎｎｕａｌ  ｕｐｄａｔｅｓ）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（１９８７  ａｎｄ  ａｎｎｕａｌ  ｕｐｄａｔｅｓ）Ｇａｉｔ（ｅｄ．）（１９８４），Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ；Ｅｃｋｓｔｅｉｎ（ｅｄ．）（１９９１），Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ；Ｂｉｒｒｅｎ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，（ｅｄｓ．）（１９９９），Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓを参照のこと。
【０１６２】
特定の態様では、本明細書で提供されるのは、抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片を含む医薬組成物であり、その際、抗体または断片は、宿主細胞におけるヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドの組換え発現によって生成される。
【０１６３】
特定の態様では、本明細書で提供されている医薬組成物における抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は、表９に示されるヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２７）を含むポリヌクレオチドによってコードされる重鎖可変領域を含む。特定の態様では、本明細書で提供されている医薬組成物における抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は、表９に示されるヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２７）を含むポリヌクレオチドによってコードされる重鎖可変領域と、ヒトガンマ（γ）重鎖定常領域をコードするヌクレオチド配列とを含む。特定の態様では、本明細書で提供されている医薬組成物における抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は、表９に示されるヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２７）を含むポリヌクレオチドによってコードされる重鎖可変領域と、配列番号２６のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる重鎖定常ドメインとを含む。
【表９−１】
2021514379.tif 000013
【表９−２】
2021514379.tif 000014
【０１６４】
特定の態様では、本明細書で提供されている医薬組成物における抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は、表１０に示されるヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２８）を含むポリヌクレオチドによってコードされる軽鎖可変領域を含む。特定の態様では、本明細書で提供されている医薬組成物における抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は、表１０に示されるヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２８）を含むポリヌクレオチドによってコードされる軽鎖可変領域と、ヒトラムダ軽鎖定常領域をコードするヌクレオチド配列とを含む。特定の態様では、本明細書で提供されている医薬組成物における抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は、表１０に示されるヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２８）を含むポリヌクレオチドによってコードされる軽鎖可変領域と、配列番号２４のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる軽鎖定常ドメインとを含む。
【表１０】
2021514379.tif 000015
【０１６５】
特定の態様では、本明細書で提供されている医薬組成物における抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は、表９に示される可変重鎖をコードするヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２７）を含むポリヌクレオチドによってコードされる可変重鎖と、表１０に示される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２８）を含むポリヌクレオチドによってコードされる可変軽鎖とを含む。
【０１６６】
特定の態様では、本明細書で提供されている医薬組成物における抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は、（ｉ）表９に示される可変重鎖をコードするヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２７）を含むポリヌクレオチドによってコードされる重鎖及びヒトガンマ（γ）重鎖定常領域をコードするヌクレオチド配列と、（ｉｉ）表１０に示される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２８）を含むポリヌクレオチドによってコードされる軽鎖及びヒトラムダ軽鎖定常領域をコードするヌクレオチド配列とを含む。
【０１６７】
特定の態様では、本明細書で提供されている医薬組成物における抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は、（ｉ）表９に示される可変重鎖をコードするヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２７）を含むポリヌクレオチドによってコードされる重鎖及び配列番号２６の重鎖定常ドメインをコードするヌクレオチド配列と、（ｉｉ）表１０に示される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２８）を含むポリヌクレオチドによってコードされる軽鎖及び配列番号２４の軽鎖定常ドメインをコードするヌクレオチド配列とを含む。
【０１６８】
特定の態様では、本明細書で提供されている医薬組成物における抗Ｂ７−Ｈ４抗体または抗原結合断片は、例えば、コドン／ＲＮＡの最適化、異種シグナル配列による置換、ｍＲＮＡ不安定要素の排除によって最適化されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片またはそのドメインをコードするポリヌクレオチドによってコードされる。コドンの変化（例えば、遺伝子コードの縮重に起因して同じアミノ酸をコードするコドンの変化）を導入することによって及び／またはｍＲＮＡにおける阻害性領域を排除することによってＢ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片またはそのドメイン（例えば、重鎖、軽鎖、ＶＨドメイン、またはＶＬドメイン）をコードする、組換え発現のために最適化された核酸を生成する方法は、例えば、適切に米国特許第５，９６５，７２６号；同第６，１７４，６６６号；同第６，２９１，６６４号；同第６，４１４，１３２号；及び同第６，７９４，４９８号に記載されている最適化方法を適合させることによって実施することができる。
【０１６９】
ポリヌクレオチドは、例えば、ＲＮＡの形態またはＤＮＡの形態であることができる。ＤＮＡにはｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、及び合成ＤＮＡが挙げられる。ＤＮＡは一本鎖または二本鎖であることができる。一本鎖の場合、ＤＮＡはコード鎖または非コード（アンチセンス）鎖であることができる。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは１以上のイントロンを欠くｃＤＮＡまたはＤＮＡである。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは天然に存在しないポリヌクレオチドである。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは組換えにより産生される。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは単離される。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは実質的に純粋である。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは天然成分から精製される。
【０１７０】
特定の態様では、ベクター（例えば、発現ベクター）は、宿主細胞、好ましくは哺乳動物細胞における組換え発現のために抗Ｂ７−Ｈ４抗体及びその抗原結合断片またはそのドメインをコードするヌクレオチド配列を含む。特定の態様では、細胞、例えば宿主細胞は、本明細書に記載されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片（例えば、ヒト抗体またはヒト化抗体またはその抗原結合断片）を組換え発現するためのそのようなベクターを含む。したがって、本明細書に記載されている医薬組成物で使用するための抗体またはその抗原結合断片を作製する方法は、宿主細胞でそのような抗体またはその抗原結合断片を発現させることを含むことができる。
【０１７１】
発現ベクターは、従来の技法によって細胞（例えば、宿主細胞）に移すことができ、次いで得られた細胞を従来の技法によって培養して、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片（例えば、２０５０２の抗体または  ６つのＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ、ＶＨとＶＬ、重鎖、軽鎖、または重鎖と軽鎖を含む抗原結合断片）またはそのドメイン（例えば、２０５０２のＶＨ、ＶＬ、ＶＨとＶＬ、重鎖、または軽鎖）を産生させることができる。
【０１７２】
特定の実施形態では、本明細書で提供されている医薬組成物における抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片（例えば、２０５０２のＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片）は、Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）のＣＨＯＫ１ＳＶ細胞にて産生される  。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されている医薬組成物における抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片（例えば、２０５０２のＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合断片）は、機能的アルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子（ＦＵＴ８）遺伝子を欠く宿主細胞で産生される。いくつかの実施形態では、宿主細胞はＣＨＯ細胞である。
【０１７４】
具体的な実施形態では、本明細書で提供されている医薬組成物における抗体またはその抗原結合断片は、単離されるまたは精製される。一般に、単離された抗体またはその抗原結合断片は、単離された抗体またはその抗原結合断片とは異なる抗原特異性を持つ他の抗体またはその抗原結合断片を実質的に含まないものである。例えば、特定の実施形態では、本明細書に記載されている抗体またはその抗原結合断片の調製物は、細胞性物質及び／または化学前駆物質を実質的に含まない。
【０１７５】
５．５  治療上の使用及び治療方法
一態様では、本明細書で提供されるのは、Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片を含む本明細書で提供されている医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含む、対象にて１以上の免疫機能を調節する方法である。
【０１７６】
別の実施形態では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片を含む本明細書で提供されている医薬組成物を患者（例えば、ヒト患者）に投与して、患者にてＴ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、またはＣＤ８＋Ｔの増殖を増加させる。別の実施形態では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片を含む本明細書で提供されている医薬組成物を患者（例えば、ヒト患者）に投与して、患者にてインターフェロン−ガンマ（ＩＦＮγ）産生を増加させる。別の実施形態では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片を含む本明細書で提供されている医薬組成物を患者（例えば、ヒト患者）に投与して、患者にてＴ細胞に対するＢ７−Ｈ４の阻害活性を遮断する。別の実施形態では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片を含む本明細書で提供されている医薬組成物を患者（例えば、ヒト患者）に投与して、患者にてＢ７−Ｈ４発現がん細胞を枯渇させる。別の実施形態では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片を含む本明細書で提供されている医薬組成物は、上記の効果の２以上を達成するために投与される。
【０１７７】
特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書で提供されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物をそれを必要とする患者（例えば、ヒト患者）に投与することを含む、がん、例えば、Ｂ７−Ｈ４を発現しているがんを治療する方法である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書で提供されている抗Ｂ７−Ｈ４抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物をそれを必要とする患者（例えば、ヒト患者）に投与することを含む、固形腫瘍、例えば、Ｂ７−Ｈ４を発現している固形腫瘍を治療する方法である。
【０１７８】
特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、乳癌（例えば、進行性乳癌、トリプルネガティブ乳癌、ホルモン受容体（ＨＲ）陽性乳癌、または乳管癌）、子宮内膜癌腫、卵巣癌、尿路上皮癌、非小細胞肺癌（例、扁平上皮癌）、膵臓癌、甲状腺癌、腎臓癌（例、腎細胞癌）、及び膀胱癌（例、尿路上皮細胞癌）から成る群から選択されるがんを治療するための医薬組成物である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、進行性乳癌（トリプルネガティブ乳癌及びホルモン受容体（ＨＲ）陽性乳癌を含む）、卵巣癌、子宮内膜癌、または尿路上皮癌を治療するための医薬組成物である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは乳癌を治療するための医薬組成物である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは卵巣癌を治療するための医薬組成物である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは子宮内膜癌を治療するための医薬組成物である。特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは尿路上皮癌を治療するための医薬組成物である。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、がんはＢ７−Ｈ４を発現しているがんである。
【０１８０】
別の実施形態では、本明細書で提供されている医薬組成物はがんと診断された患者（例えば、ヒト患者）に投与されて、患者におけるＴ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、またはＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を増加させる。別の実施形態では、本明細書で提供されている医薬組成物はがんと診断された患者（例えば、ヒト患者）に投与されて、患者におけるインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の産生を増加させる。別の実施形態では、本明細書で提供されている医薬組成物はがんと診断された患者（例えば、ヒト患者）に投与されて、患者にてＴ細胞に対するＢ７−Ｈ４の阻害活性を遮断する。別の実施形態では、本明細書で提供されている医薬組成物はがんと診断された患者（例えば、ヒト患者）に投与されて、患者にてＢ７−Ｈ４発現がん細胞を枯渇させる。
【０１８１】
本明細書に記載されている医薬組成物は静脈内経路によって患者に送達することができる。通常、患者はヒトであるが、トランスジェニック哺乳動物を含む非ヒト哺乳動物も治療することができる。
【実施例】
【０１８２】
６．このセクション（すなわち、セクション６）における実施例は、例示を目的として提供されるのであって、限定を目的とするものではない。
【０１８３】
実施例１：製剤化試験で使用される方法
Ｉ．抗体産生
２０５０２抗体は、ＦＵＴ８遺伝子（α１，６−フコシルトランスフェラーゼ）を欠くＣＨＯ細胞株で生成されたので、実施例２〜９のすべてで使用された２０５０２抗体は非フコシル化されている。それらは抗体のＦｃ部分のＡＳＮ２９７にて末端フコースを欠く。
【０１８４】
ＩＩ． 一般的な製剤化手順
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の試料は、２０ｋＤ分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）の透析膜デバイスを用いて、ポリソルベートを含まない原薬（非フコシル化２０５０２）を透析することにより、さまざまな製剤で調製した。透析後、ｍＡｂの濃度は１．４７ｃｍ−１［ｇ／Ｌ］−１の吸光係数を用いてＵＶ分光法によって測定した。緩衝液交換した試料のタンパク質濃度を透析緩衝液で所望の値に調整し、１０％ＰＳ２０ストック溶液を０．０５％（ｗ／ｖ）ＰＳ２０の最終濃度で各製剤に添加した。製剤は、０．２２μｍフィルターユニットを用いて滅菌ろ過し、層流フードにて適切な容器／閉鎖系に入れた。試料は試験設計ごとにさまざまな保管条件に置かれ、それらの安定性は指定された時点でさまざまな方法を用いて分析した。
【０１８５】
ＩＩＩ．分析方法
目視検査（ＡＤ−Ｇｅｎ−００２／００）：蛍光照明下で、黒と白の双方の背景に対して視覚的評価を行った。色、透明度、及び目に見える粒子の存在について試料を調べた。
【０１８６】
タンパク質濃度（ＴＭ−１５０−００１／００）：タンパク質濃度は、１．４７ｃｍ−１［ｇ／Ｌ］−１の理論吸収係数を用いて２８０ｎｍでのＵＶ吸光度によって決定した。試料をダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）で吸光度の直線範囲内に希釈し、ブランクとしてＤＰＢＳに対して測定した。吸光度は、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｃａｒｙ  ８４５４  ＵＶ−Ｖｉｓ分光光度計（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＣＡ）を用いて測定した。
【０１８７】
ｐＨ（ＡＤ−ＧＥＮ−００１／００）：緩衝液のｐＨは、較正されたＢｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  ｐＨｉ５６０メーター（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ，  Ｉｎｃ．，ＣＡ）を用いて決定した。
【０１８８】
浸透圧（ＴＭ−ＧＥＮ−００４／００）：緩衝浸透圧は、Ｗｅｓｃｏｒ  ＶＡＰＲＯシステム（Ｗｅｓｃｏｒ，Ｉｎｃ．，ＵＴ）を用いて蒸気圧で測定した。
【０１８９】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）分析：ＤＳＣ測定は、ＭｉｃｒｏＣａｌ  ＶＰ−Ｃａｐｉｌｌａｒｙ  ＤＳＣプラットフォーム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，ＵＫ）で実施した。ｍＡｂ試料をさまざまな製剤緩衝液で１ｍｇ／ｍＬの濃度に希釈した。対応する製剤緩衝液を参照として使用した。１℃／分の速度で１５℃から１１０℃まで試料を走査した。データはまずタンパク質濃度に対して基準化し、次にベースラインが補正し、Ｏｒｉｇｉｎ７．０ソフトウェア（ＯｒｉｇｉｎＬａｂ，ＭＡ）を用いて緩衝液を差し引いた。Ｏｒｉｇｉｎソフトウェア内の非二状態アンフォールディングモデルを用いて、カーソルで開始されたＤＳＣピークフィット関数で融解転移を分析した。
【０１９０】
ＵＮｉｔシステムによるアンフォールディング温度（商標）：タンパク質のアンフォールディング温度（Ｔｍ）は分子の物理的安定性の測定値を提供する。アンフォールディング温度は、等量の天然タンパク質と変性タンパク質が平衡状態で存在する温度として定義される。Ｕｎｃｈａｉｎｅｄ  Ｌａｂｓ（ＣＡ）によるＵＮｉｔシステムは、固有の蛍光分光変化を用いてタンパク質の熱誘導のアンフォールディングが発生する温度を決定する。１  ｍｇ／ｍＬ  の試料を１℃／分の速度で２０℃から９０℃まで走査した。ＴｍはＵｎｃｈａｉｎｅｄ  Ｌａｂｓ（ＣＡ）のＵＮｃｌｅソフトウェアを用いて決定した。
【０１９１】
画像化キャピラリー等電点電気泳動（ｉＣＥ）（ＴＭ−１５０−００３／０２）：７２０  ＮＶ自動サンプラー（ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅ，ＣＡ）を備えたＰｒｏｔｅｉｎ  Ｓｉｍｐｌｅ  ｉＣＥ３機器での画像化キャピラリー等電点電気泳動（ｉＣＥ）によって電荷変異体を分析した。ｉＣＥ  ＣＦＲソフトウェアを用いてデータを分析し、プロファイルで観察されたピークの面積を積分して主要な、酸性の、及び塩基性のピークの相対量を決定し、それを用いて酸性及び塩基性の変異体の比率を算出した。
【０１９２】
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）（ＴＭ−１５０−００４／００）：ダイオードアレイ検出器を備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １１００シリーズＨＰＬＣで試料を分析し、２８０ｎｍで吸光度をモニターした。移動相（１００ｍＭのリン酸ナトリウム、４００ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ６．８）で試料を１ｍｇ／ｍｌに希釈し、５０μＬ事前に平衡化したＳｅｐａｘ  Ｚｅｎｉｘ  ＳＥＣ−３００  ７．８  Ｘ  ２００ｍｍカラム（Ｓｅｐａｘ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｄｅｌａｗａｒｅ）に注入した。ＳＥＣ分離カラム及びガードカラムは２５℃で使用した。１．０ｍＬ／分の流速を１２分の実行時間で使用した。データ分析用の機器ソフトウェアを用いて、凝集体、単量体、及び断片のピークを定量化した。
【０１９３】
ドデシル硫酸ナトリウムゲル（ＣＥ−ＳＤＳ）によるキャピラリー電気泳動（ＴＭ−１５０−００２／００）：還元及び非還元の条件下でのＢ７−Ｈ４抗体２０５０２の純度を決定するためにＣＥ−ＳＤＳを使用した。試料はコーティングされていない５０μＭ  Ｉ．Ｄ．キャピラリーを用いて、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＰＡ８００  ｐｌｕｓシステム（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ、ＣＡ）で分析した。吸光度を２２０ｎｍでモニターした。還元条件下での２０５０２の純度は、重鎖及び軽鎖のピークのピーク面積を測定し、検出されたすべてのピークの合計面積と比較することによって決定した。非還元条件下での２０５０２の純度は、主要なインタクトなタンパク質ピークのピーク面積を測定し、検出されたすべてのピークの合計面積と比較することによって決定した。
【０１９４】
ＨＩＡＣによる目に見えない粒子状物質（ＡＤ−ＧＥＮ−００６）：ＨＲＤＬ−１５０検出器と１ｍＬシリンジを備えたＨＩＡＣ  ９７０３＋粒子カウンター（Ｈａｃｈ、ＣＯ）を使用した。使用前に、システムに粒子を含まないＭｉｌｌｉ−Ｑ水（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＭＡ）を流し、クリーンなベースラインを生成した。試料から４つの連続した０．４ｍＬアリコートを採取し、最後の３つのアリコートからの粒子数を平均して報告した。
【０１９５】
実施例２：抗体２０５０２のアミノ酸残基の生化学分析
抗Ｂ７−Ｈ４抗体２０５０２はモノクローナル抗体である。知識ベースの製剤開発アプローチを用いて、タンパク質に最大の安定性を提供する適切な組成物を特定した。これを行うには、分子の固有の特性と、タンパク質の安定性に影響を与える得る外因性の配合成分の双方が考慮される。
【０１９６】
抗体２０５０２の完全長の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列を表１１に示す。
【表１１】
2021514379.tif 000016
【０１９７】
２０５０２の一次配列の分析は、いくつかのアミノ酸残基が生化学的修飾を受ける可能性があることを明らかにした。これらには、アスパラギンの脱アミド、アスパラギン酸の異性化、ならびにメチオニン、システイン、ヒスチジン、トリプトファン、フェニルアラニン及びチロシンの酸化が含まれる。脱アミド化、異性化、及び酸化を受けるアスパラギン、アスパラギン酸、及びメチオニンは、それぞれ表１１の配列で太字及び灰色の四角で示されている。２０５０２における潜在的な生化学的分解スポットを表１２に示す。これらの潜在的な分解スポットはＣＤＲ領域の外側にある。
【表１２】
2021514379.tif 000017
【０１９８】
２０５０２に良好な安定性を提供し得る液体製剤を開発するために、ｐＨ、緩衝液の種類、賦形剤のようなさまざまな条件を評価した。タンパク質の安定性は、各例で２０５０２の生物物理学的及び生化学的な特性に基づいてモニターした。試験の詳細及びその結果はここに記載されている。
【０１９９】
実施例３：最初のｐＨスクリーニング試験
製剤のｐＨはタンパク質の安定性に影響を及ぼす。製剤のｐＨは、脱アミド化、異性化、酸化のような生化学的分解経路、と同様にタンパク質間の相互作用や環境との相互作用による凝集や断片化のような生物物理学的分解にも影響を与えることができる。
【０２００】
２０５０２に最大の安定性を提供するｐＨ範囲を決定し、これらの条件下でのタンパク質の分解メカニズムを理解するために、ｐＨスクリーニング試験を行った。試験で評価された製剤組成の詳細を表１３でリストにする。
【表１３】
2021514379.tif 000018
【０２０１】
異なるｐＨ条件下でのタンパク質の熱安定性を決定するために、ＵＮｉｔ装置を用いて、異なる温度での固有の蛍光変化によってアンフォールディング温度を測定した。トリプトファンの蛍光発光波長のシフト（重心平均、ＢＣＭ）は、試料が加熱されたときにアンフォールディング事象が発生することを示す。図１は、さまざまなｐＨ条件下での２０５０２の測定されたアンフォールディング温度（Ｔｍ１）を示す。結果はＴｍ１がｐＨ依存性であることを示している。さらに高いｐＨ（例えば、ｐＨ≧７）では、７４℃のアンフォールディング温度が観察された。ｐＨ５及び６では、アンフォールディング温度はそれぞれ６６℃及び７０℃だった。ｐＨ４では、アンフォールディング温度は５５℃だった。さらに、開始温度はｐＨ４を用いて約５０℃であると思われたが、開始温度はｐＨ５〜８を用いて６２℃以上だった。これらの結果は、ｐＨ≧５の組成物は、ｐＨ４の製剤よりも良好な熱安定性を提供することを実証している。
【０２０２】
さまざまなｐＨでの２０５０２の安定性も４０℃で最大４週間のストレス条件下にて評価した。すべての試料は透明で無色のままであり、試験期間中、粒子は観察されなかった。凝集体及び断片における変化はＳＥ−ＨＰＬＣで判定した。時間ゼロ（Ｔ０）では、調べた製剤にて１ｍｇ／ｍｌの濃度での２０５０２について明確な凝集体は観察されなかった。４０℃で４週間後、ｐＨ４、７及び８の製剤では可溶性凝集体が著しく増加した；ｐＨ５または６の製剤では凝集体のわずかな増加のみが観察された（図２）。断片の形成に対するｐＨの同様の効果が観察された（図３）。この試験の結果は、示された特性のＳＥ−ＨＰＬＣ測定によって示されるように、２０５０２がｐＨ５〜６付近で最も安定していることを示した。
【０２０３】
実施例４：詳細なｐＨスクリーニング試験
予備的なｐＨスクリーニング試験の結果は、抗体２０５０２がｐＨ５〜６付近で最も安定していることを示した。４．５〜６．５の範囲で最大の安定性を提供するｐＨを特定するために、詳細なｐＨ試験を行った。配合組成の詳細を表１４でリストにする。この試験は、ｍＡｂの安定性に対する緩衝液の種類の考えられる影響を最小限に抑えるために、クエン酸緩衝液を用いて実施した。１０ｍｇ／ｍＬでの抗体２０５０２の安定性を、最大３週間のストレス（４０℃）条件下での視覚的外観、凝集、断片化（ＳＥ−ＨＰＬＣによる）、及び電荷変異体（ｉＣＥ）に基づいて調べた。
【表１４−１】
2021514379.tif 000019
【表１４−２】
2021514379.tif 000020
【０２０４】
すべての試料は透明で無色のままであり、試験期間中、粒子は観察されなかった。ＳＥ−ＨＰＬＣの結果は、試験開始時（Ｔ０）に１０ｍｇ／ｍｌ濃度での２０５０２について低レベルの凝集体が観察されることを示した。４０℃で３週間の熱ストレスは、４．５＜５．０＜５．５＜６．０＜６．５の順で凝集のｐＨ依存性増加を生じた一方で、断片化は反対の傾向を示した（図４及び図５）。
【０２０５】
ｉＣＥデータは、４０℃で３週間後に酸性変異体が増加することを示した。酸性変異体の増加はｐＨ依存性であり、６．５／６．０／５．５＜５．０＜４．５の順で増加した（図６）。
【０２０６】
高いｐＨが凝集の増加に関連し、低いｐＨが断片化の増加に関連するという事実は、望ましい医薬製剤を特定することの困難さを高めた。まとめると、この試験結果は、ｐＨ  ５〜６の製剤が２０５０２に最良の全体的な安定性プロファイルを提供することを実証している。
【０２０７】
実施例５：緩衝液種スクリーニング試験
ｐＨと同様に、緩衝液の種類はタンパク質の安定性に対してさまざまな程度に影響を及ぼす。１０ｍｇ／ｍＬでの２０５０２の加速安定性は、ｐＨ５．０からｐＨ６．５で最大の安定性を提供する緩衝液を決定する目的で、ｐＫａに基づいて０．５単位の増分でｐＨ５．０からｐＨ６．５までの酢酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、及びヒスチジンの緩衝液で評価した。詳細な配合組成を表１５に提供する。これらの緩衝液は、外観、凝集、断片化、及び電荷変異体に基づいてタンパク質の安定性への影響について調べた。
【表１５−１】
2021514379.tif 000021
【表１５−２】
2021514379.tif 000022
【０２０８】
すべての試料は透明で無色のままであり、試験期間中、粒子は観察されなかった。図１６に示すＳＥ−ＨＰＬＣ結果は、この試験における緩衝液（ｐＨ）に依存した凝集体の増加が明らかにしている。凝集体は、ヒスチジン（ｐＨ６．５）＞コハク酸塩（ｐＨ６）＞クエン酸塩（ｐＨ５．５）＞酢酸塩（ｐＨ５）の順で、さらに低いｐＨでの凝集と比べてさらに高いｐＨでさらに速い速度で形成された。一方、４０℃で３週間にわたって全体的なレベルは低かった（０．５％〜０．７％）。けれども、ヒスチジン（ｐＨ６．５）及びコハク酸塩（ｐＨ６）の緩衝液に比べて酢酸塩（ｐＨ５）及びクエン酸塩（ｐＨ５．５）の緩衝液ではわずかに少ない断片が観察された（図８）。
【０２０９】
ｉＣＥの結果は、図９及び図１０に示されるように、緩衝液が２０５０２の電荷プロファイルにいくらかの影響を及ぼすことを示した。しかし、それらの間の全体的な違いは、４０℃で３週間保管した際、酸性変異体で１０％をわずかに超え、塩基性変異体では約２％だった。
【０２１０】
２０５０２抗体は、ヒスチジンを含有する他の２つの標準製剤で調べられたが、どちらも所望の安定性を備えた組成物を生じなかった。これらの結果に基づいて、調べたすべての製剤条件の中で２０５０２はｐＨ５の酢酸緩衝液にて最も安定であると結論付けられた。ｐＨ５．５のクエン酸緩衝液も２０５０２に比較的安定した緩衝液を提供する。
【０２１１】
実施例６：賦形剤の選択試験
増量剤のような製剤賦形剤は製品の安定性に影響を与えることができる。抗体２０５０２の安定性に対する賦形剤の効果を評価するために、２０ｍｇ／ｍＬでの抗体を塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、トレハロース、ソルビトール、またはスクロースを等張濃度で含有する酢酸塩製剤及びクエン酸塩製剤に製剤化した。クエン酸塩製剤はｐＨ５．５で製剤化し、酢酸塩製剤はｐＨ５．０で製剤化した。スクロースを含む２つの追加の酢酸塩製剤もｐＨ４．５及び５．５で調製した。詳細な配合組成を表１６にて提供する。賦形剤は、４０℃、２５℃、及び５℃の保管条件下で視覚的外観、凝集、断片化、及び電荷変異体に基づいてタンパク質の安定性に対するその影響について調べた。
【表１６−１】
2021514379.tif 000023
【表１６−２】
2021514379.tif 000024
【０２１２】
すべての試料は透明で無色のままであり、４週間の試験期間中、粒子は観察されなかった。図１１に示すＳＥ−ＨＰＬＣ結果は、酢酸塩製剤と比べてクエン酸塩製剤では２０５０２凝集体がさらに速い速度で形成されることを明らかにした。凝集形成率はＮａＣｌ製剤で最も高く、これはクエン酸塩及び酢酸塩の製剤の双方に当てはまった。ソルビトール、トレハロース、及びスクロースの製剤は、クエン酸塩と酢酸塩の双方の緩衝液で同様の凝集変化を示した。断片については、酢酸塩及びＮａＣｌを含有する製剤を除いて、すべての製剤が類似しており、わずかに多い断片を示した（図１２）。したがって、ＮａＣｌは医薬組成物で広く使用されているが、２０５０２の凝集と断片化の増加を生じた。この試験で観察された断片の量は以前の試験のものと比べてわずかに多かった。これは、この試験で使用したタンパク質の高い濃度（２０ｍｇ／ｍＬ）に起因し得る。
【０２１３】
製剤賦形剤は、保存時の２０５０２の電荷プロファイルへの影響が少なかった。図１３に示すように、すべての製剤の間で酸性変異体の１０％未満の差異が観察された。同様に、さらに少ない２％の塩基性変異体の差異は、各緩衝液種類の範囲内のすべての製剤で観察された（図１４）。
【０２１４】
賦形剤選択試験の結果に基づいて、観察された凝集体レベルに起因してＮａＣｌよりもスクロースが選択された。スクロースは、ソルビトール及びトレハロースと同様の凝集及び電荷プロファイルを示した。しかしながら、スクロースの方が原料供給の観点から信頼性が高く、品質と規制の経験がさらに良好である。
【０２１５】
まとめると、ｐＨ、緩衝液種、及び賦形剤のスクリーニング試験の結果は、２０５０２抗体が、ｐＨ５．０での２０ｍＭの酢酸塩、２７０ｍＭのスクロース、及び０．０５％ＰＳ２０を含有する製剤にて最も安定であったことを示している。ｐＨ５．５にて２０ｍＭのクエン酸塩、２７０ｍＭのスクロース、０．０５％ＰＳ２０を含有する製剤も良好な安定性を提供する。
【０２１６】
ｐＨ５．０にて２０ｍＭの酢酸塩、２７０ｍＭのスクロース、０．０５％ＰＳ２０を含有する製剤における２０５０２抗体の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）プロファイルを収集し、図１５に示す。Ｔｍ１＝６９℃及びＴｍ２＝８４℃で２つのピークが観察された。
【０２１７】
実施例７：２０５０２の凍結融解安定性
凍結／融解試験は、５００ｍＬのスケールでｐＨ５．０での２０ｍＭの酢酸塩、２７０ｍＭのスクロース、０．０５％のＰＳ２０の製剤における２０ｍｇ／ｍＬのタンパク質として製剤化された２０５０２バルク原薬を−７０℃で凍結し、５サイクルを経て常温で融解することによって実施した。外観、可溶性凝集体、または目に見えない粒子状物質の明らかな変化は検出されなかった（表１７）。
【表１７】
2021514379.tif 000025
【０２１８】
実施例８：２０５０２の攪拌安定性
２０５０２原薬を３ｃｃのガラス製バイアルに充填し、試料バイアルをオービタルシェーカーに水平に置き、試料を室温にて７２時間３００ＲＰＭで振盪することにより、２０５０２に攪拌ストレスをかけた。２０５０２はｐＨ５．０での２０ｍＭの酢酸塩、２７０ｍＭのスクロース、０．０５％ＰＳ２０の製剤にて２０ｍｇ／ｍＬのタンパク質として製剤化された。２０５０２製剤試料では、外観、可溶性凝集体、電荷変異体プロファイル、または目に見えない粒子状物質の明らかな変化は検出されなかった（表１８）。すべての試験は２０±５℃の室温で行われた。すべての試料は、目に見える粒子がなく、無色透明の外観を有した。
【表１８−１】
2021514379.tif 000026
【表１８−２】
2021514379.tif 000027
【０２１９】
実施例９：確認安定性試験
２つの製剤（ｉ）ｐＨ５．０での２０ｍＭの酢酸塩、２７０ｍＭのスクロース、及び０．０５％ＰＳ２０にて２０ｍｇ／ｍＬのタンパク質を含む製剤と、（ｉｉ）ｐＨ５．５での２０ｍＭのクエン酸塩、２７０ｍＭのスクロース、及び０．０５％ＰＳ２０にて２０ｍｇ／ｍＬのタンパク質を含有する製剤における２０５０２の安定性を評価するために安定性試験を実施した。製剤化した溶液１．５ｍＬを、１３ｍｍのネックが付いた１３ｍｍのＷｅｓｔ４０２３／５０グレイのブロモブチル血清ストッパーでキャップをし、且つアルミニウムシールで密封した３ｃｃの１型ガラスバイアルに充填した。容器閉鎖系と抗体２０５０２との適合性はバイアルを逆さにして評価した。この安定性試験では、５℃、２５℃、及び４０℃での保管条件を使用した。酢酸塩製剤については表１９〜表２１及びクエン酸塩製剤については表２２〜表２４に示されている６ヵ月の安定性データ。
【表１９−１】
2021514379.tif 000028
【表１９−２】
2021514379.tif 000029
略語：ＮＰ＝計画されなかった；ＮＴ＝調べなかった；Ｔ０＝時間ゼロ。
【表２０】
2021514379.tif 000030
【表２１−１】
2021514379.tif 000031
【表２１−２】
2021514379.tif 000032
【表２２−１】
2021514379.tif 000033
【表２２−２】
2021514379.tif 000034
【表２３】
2021514379.tif 000035
【表２４−１】
2021514379.tif 000036
【表２４−２】
2021514379.tif 000037
【０２２０】
２〜８℃の長期保存条件下での２０５０２医薬品の安定性データは、酢酸塩とクエン酸塩の製剤にて６ヵ月間リアルタイムで収集した。すべての安定性データは合格判定基準を満たした（表１９及び表２２）。調べたどの属性でも、安定性の変化の明確な傾向は観察されなかった。結果は、２０５０２医薬品が２〜８℃での少なくとも６ヵ月間の長期保存条件下で双方の製剤にて安定であることを実証している。
【０２２１】
２５℃の加速条件での安定性データは酢酸塩とクエン酸塩の製剤にて６ヵ月間収集した。全体として、加速条件で６ヵ月間保管すると、ｉＣＥで測定されたような酸性ピークの増加と主要ピークの減少；ＳＥ−ＨＰＬＣで測定されたような凝集体と断片のわずかな増加；還元及び非還元ＣＥ−ＳＤＳで測定されたような純度のわずかな低下；ならびに細胞ベースのＡＤＣＣアッセイで測定されたような効力のわずかな低下を生じた。他の製品属性の変化は観察されなかった。すべての安定性データは合格判定基準内だった。
【０２２２】
４０℃のストレス条件での安定性データを３ヵ月間収集した。いくつかの変化は時間の経過とともに収集されたデータでさらに顕著だった。傾向は加速保管条件（２５℃）で示されたものと類似した。ｉＣＥによって酸性ピークの上昇及び主要ピークと塩基性ピークの低下が観察された。単量体の減少に伴う凝集体及び断片の増加がＳＥ−ＨＰＬＣによって観察された。さらに、還元型及び非還元型のＣＥ−ＳＤＳ分析で判定されたように、この条件下では純度が低下した。細胞ベースのＡＤＣＣアッセイにおける効力の低下も観察された。これらの結果は、この条件下で保存されたタンパク質治療薬に期待される変化と一致する。
【０２２３】
上記の試験は、２０５０２の最大の安定性を提供する製剤化条件を特定するために行われた。これらには、ｐＨスクリーニング、緩衝液種の選択、及び賦形剤の選択の試験が含まれる。２０５０２は、酢酸塩またはクエン酸塩緩衝液にてｐＨ５〜６の範囲で最も安定だった。２０５０２は、スクロースを賦形剤として使用した場合も安定だった。ｐＨ５．０での２０ｍＭの酢酸塩、２７０ｍＭのスクロース、及び０．０５％のＰＳ２０にて２０ｍｇ／ｍＬのタンパク質を含む製剤を選択した。ｐＨ５．５での２０ｍＭのクエン酸塩、２７０ｍＭのスクロース、０．０５％のＰＳ２０における２０ｍｇ／ｍＬのタンパク質としてのバックアップ製剤も選択した。
【０２２４】
抗体２０５０２は、凍結融解及び攪拌の条件下の酢酸塩製剤でも安定である。酢酸塩製剤における２０５０２は、−７０℃で保管した場合は原薬として、且つ２〜８℃で保管した場合は医薬品として少なくとも１２ヵ月間は安定であると予想される。
【０２２５】
本発明は、本明細書に記載されている特定の実施形態によって範囲を限定されるものではない。実際、記載されているものに加えて、本明細書で提供されている様々な修飾が、上記の説明及び添付の図面から当業者に明らかとなるだろう。かかる修正は、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図される。
【０２２６】
本明細書で引用されている全ての参考文献（例えば、出版物または特許または特許出願）は、各個々の参考文献（例えば、出版物または特許または特許出願）が、あらゆる目的でその全体が参照によって組み込まれるように具体的かつ個別に指示されたかのような同じ程度に、あらゆる目的でその全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【０２２７】
他の実施形態は以下のクレームの範囲内である。
【図１】
2021514379.tif 000038
【図２】
2021514379.tif 000039
【図３】
2021514379.tif 000040
【図４】
2021514379.tif 000041
【図５】
2021514379.tif 000042
【図６】
2021514379.tif 000043
【図７】
2021514379.tif 000044
【図８】
2021514379.tif 000045
【図９】
2021514379.tif 000046
【図１０】
2021514379.tif 000047
【図１１】
2021514379.tif 000048
【図１２】
2021514379.tif 000049
【図１３】
2021514379.tif 000050
【図１４】
2021514379.tif 000051
【図１５】
2021514379.tif 000052
【配列表】
2021514379000001.app
【国際調査報告】
2021514379.tif 000053
2021514379.tif 000054
2021514379.tif 000055
2021514379.tif 000056