(57)【要約】  本発明は、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメントが、薬物部分に、場合によってはリンカーを介して結合されている抗体薬物コンジュゲートを提供する。本発明はさらに、抗体薬物コンジュゲートを含む医薬組成物；並びにそのような医薬組成物を製造する方法、及びそのような医薬組成物を、造血幹細胞の除去を必要とする患者において造血幹細胞を除去するのに用いる方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）；
Ａ−（ＬＢ−（Ｄ）ｎ）ｙ
式（Ｉ）
又はその薬学的に許容される塩のコンジュゲートであって、
式中：
Ａは、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメントであり；
ＬＢはリンカーであり；
ｎは、１から１０の整数であり；
ｙは、１から１０の整数であり、そして、
Ｄは、式（Ａ）：
【化１】
2021527429.tif 000217
の化合物から選択される細胞毒性剤であり、
式中：
Ｒ１は、
【化２】
2021527429.tif 000218
であり；
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３、−（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、−（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、又は場合によっては−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、若しくは１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
各Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及び場合によっては１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；そして
各Ｒ４は、Ｈ及びＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；或いは
Ｄは、式（Ｂ）：
【化３】
2021527429.tif 000219
の化合物から選択される細胞毒性剤であり、
式中：
Ｒ１は、
【化４】
2021527429.tif 000220
であり；
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３、−（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、−（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、又は場合によっては−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、若しくは１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
各Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及び場合によっては１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；そして
各Ｒ４は、Ｈ及びＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択される、コンジュゲート。
【請求項２】
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、又は８である、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項３】
ｙは、１、２、３、又は４である、請求項１又は２に記載のコンジュゲート。
【請求項４】
各ＬＢは、切断可能なリンカー又は切断可能でないリンカーから独立して選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項５】
各ＬＢは切断可能なリンカーである、請求項１〜４のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項６】
各ＬＢは切断可能でないリンカーである、請求項１〜４のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項７】
式（Ｅ）：
【化５】
2021527429.tif 000221
の構造を有するコンジュゲートであって、
式中：
Ａは、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）を表し；
ｙは、１から１０の整数であり；
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３、−（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、−（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、又は場合によっては−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、若しくは１〜５個の水酸基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
各Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及び場合によっては１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；
各Ｒ４は、Ｈ及びＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；
Ｌ１は、−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ２Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ２Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍＸ４（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＸ４（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ２Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍＸ４（ＣＨ２）ｍ−＊＊、又は−Ｘ２Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＸ４（ＣＨ２）ｍ−＊＊であり、式中、＊＊は、Ｒ１１４への付着点を示し；
Ｘ１は、
【化６】
2021527429.tif 000222
であり、式中、＊＊は、−ＮＨ−又はＸ２への付着点を示し；
Ｘ２は、
【化７】
2021527429.tif 000223
であり、式中、＊＊は、−ＮＨ−への付着点を示し；
Ｘ３は、
【化８】
2021527429.tif 000224
であり、式中、＊＊は、−ＮＨ−への付着点を示し；
Ｘ４は、
【化９】
2021527429.tif 000225
であり、式中、＊は、付着点がＲ１１４に向いていることを示し；
Ｒ１１４は、
【化１０】
2021527429.tif 000226
−ＮＲ６Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２−＊、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２−＊、−Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−＊、−（ＣＨ２）２Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−＊、−ＮＲ６Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−＊、−ＮＲ６Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２−＊、−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−＊、−ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＨ２−＊、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２−＊、−Ｓ−、
【化１１】
2021527429.tif 000227
であり、式中、＊は、Ａへの付着点を示し；
各Ｒ６は、Ｈ及びＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；
各Ｒ１０は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、及びＯＨから独立して選択され；
各Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、−ＮＨ２、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＣＮ、−ＮＯ２、及びＯＨから独立して選択され；
各Ｒ１２は、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、フルオロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジルオキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１〜４アルコキシ、及び−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１〜４アルキルから独立して選択され；
各Ｒ１５は、Ｈ、−ＣＨ３、及びフェニルから独立して選択され；
各ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０から独立して選択され、そして
各ｐは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、及び１４から独立して選択される、コンジュゲート。
【請求項８】
【化１２】
2021527429.tif 000228
から選択され、
式中：
Ａは、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）を表し；そして
ｙは、１から１０の整数である、請求項７に記載のコンジュゲート。
【請求項９】
式（Ｇ）：
【化１３】
2021527429.tif 000229
の構造を有するコンジュゲートであって、
式中：
Ａは、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）を表し；
ｙは、１から１０の整数であり；
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３、−（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、−（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、又は場合によっては−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、若しくは１〜５個の水酸基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
各Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及び場合によっては１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；
各Ｒ４は、Ｈ及びＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；
Ｌ１は、−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ２Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ２Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍＸ４（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＸ４（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ２Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍＸ４（ＣＨ２）ｍ−＊＊、又は−Ｘ２Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＸ４（ＣＨ２）ｍ−＊＊であり、式中、＊＊は、Ｒ１１４への付着点を示し；
Ｘ１は、
【化１４】
2021527429.tif 000230
であり、式中、＊＊は、−ＮＨ−又はＸ２への付着点を示し；
Ｘ２は、
【化１５】
2021527429.tif 000231
であり、式中、＊＊は、−ＮＨ−への付着点を示し；
Ｘ３は、
【化１６】
2021527429.tif 000232
であり、式中、＊＊は、−ＮＨ−への付着点を示し；
Ｘ４は、
【化１７】
2021527429.tif 000233
であり、式中、＊は、付着点がＲ１１４に向いていることを示し；
Ｒ１１４は、
【化１８】
2021527429.tif 000234
−ＮＲ６Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２−＊、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２−＊、−Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−＊、−（ＣＨ２）２Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−＊、−ＮＲ６Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−＊、−ＮＲ６Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２−＊、−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−＊、−ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＨ２−＊、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２−＊、−Ｓ−、
【化１９】
2021527429.tif 000235
であり、式中、＊は、Ａへの付着点を示し；
各Ｒ６は、Ｈ及びＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；
各Ｒ１０は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、及びＯＨから独立して選択され；
各Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、−ＮＨ２、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＣＮ、−ＮＯ２、及びＯＨから独立して選択され；
各Ｒ１２は、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、フルオロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジルオキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１〜４アルコキシ、及び−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１〜４アルキルから独立して選択され；
各Ｒ１５は、Ｈ、−ＣＨ３、及びフェニルから独立して選択され；
各ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０から独立して選択され、そして
各ｐは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、及び１４から独立して選択される、コンジュゲート。
【請求項１０】
【化２０】
2021527429.tif 000236
から選択され、
式中：
Ａは、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）を表し；そして
ｙは、１から１０の整数である、請求項９に記載のコンジュゲート。
【請求項１１】
前記抗体フラグメントは、ヒトｃＫＩＴの細胞外ドメイン（配列番号１１２）に特異的に結合する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１２】
前記抗体フラグメントは、ヒトｃＫＩＴのドメイン１〜３（配列番号１１３）中のエピトープに特異的に結合する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１３】
前記抗体フラグメントは、Ｆａｂ又はＦａｂ’である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１４】
前記抗体フラグメントは：
（１）（ｉ）（ａ）配列番号１のＨＣＤＲ１（重鎖相補性決定領域１）；（ｂ）配列番号２のＨＣＤＲ２（重鎖相補性決定領域２）；及び（ｃ）配列番号３のＨＣＤＲ３（重鎖相補性決定領域３）を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号１６のＬＣＤＲ１（軽鎖相補性決定領域１）；（ｅ）配列番号１７のＬＣＤＲ２（軽鎖相補性決定領域２）；及び（ｆ）配列番号１８のＬＣＤＲ３（軽鎖相補性決定領域３）を含む軽鎖可変領域を含むＦａｂ又はＦａｂ’；
（２）（ｉ）（ａ）配列番号４のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号５のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号１９のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号２０のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号２１のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含むＦａｂ又はＦａｂ’；
（３）（ｉ）（ａ）配列番号６のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号１６のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１７のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号１８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含むＦａｂ又はＦａｂ’；
（４）（ｉ）（ａ）配列番号７のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号８のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号２２のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号２０のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号１８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含むＦａｂ又はＦａｂ’；
（５）（ｉ）（ａ）配列番号２７のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２８のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号２９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号４２のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１７のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号４３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含むＦａｂ又はＦａｂ’；
（６）（ｉ）（ａ）配列番号３０のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号３１のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号２９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号４４のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号２０のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号４５のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含むＦａｂ又はＦａｂ’；
（７）（ｉ）（ａ）配列番号３２のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２８のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号２９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号４２のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１７のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号４３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含むＦａｂ又はＦａｂ’；
（８）（ｉ）（ａ）配列番号３３のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号３４のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号３５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号４６のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号２０のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号４３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含むＦａｂ又はＦａｂ’；
（９）（ｉ）（ａ）配列番号１のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号５１のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号１６のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１７のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号１８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含むＦａｂ又はＦａｂ’；
（１０）（ｉ）（ａ）配列番号４のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号５２のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号１９のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号２０のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号２１のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含むＦａｂ又はＦａｂ’；
（１１）（ｉ）（ａ）配列番号６のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号５１のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号１６のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１７のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号１８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含むＦａｂ又はＦａｂ’；
（１２）（ｉ）（ａ）配列番号７のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号５３のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号２２のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号２０のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号１８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含むＦａｂ又はＦａｂ’；
（１３）（ｉ）（ａ）配列番号６０のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号６１のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号６２のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号７５のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号７６のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号７７のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含むＦａｂ又はＦａｂ’；
（１４）（ｉ）（ａ）配列番号６３のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号６４のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号６２のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号７８のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号７９のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号８０のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含むＦａｂ又はＦａｂ’；
（１５）（ｉ）（ａ）配列番号６５のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号６１のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号６２のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号７５のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号７６のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号７７のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含むＦａｂ又はＦａｂ’；
（１６）（ｉ）（ａ）配列番号６６のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号６７のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号６８のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号８１のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号７９のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号７７のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含むＦａｂ又はＦａｂ’；
（１７）（ｉ）（ａ）配列番号８６のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号８７のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号８８のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号１０１のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１０２のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号１０３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含むＦａｂ又はＦａｂ’；
（１８）（ｉ）（ａ）配列番号８９のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号９０のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号８８のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号１０４のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１０５のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号１０６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含むＦａｂ又はＦａｂ’；
（１９）（ｉ）（ａ）配列番号９１のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号８７のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号８８のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号１０１のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１０２のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号１０３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含むＦａｂ又はＦａｂ’；
（２０）（ｉ）（ａ）配列番号９２のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号９３のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号９４のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号１０７のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１０５のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号１０３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含むＦａｂ又はＦａｂ’；
（２１）配列番号１０を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号２３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含むＦａｂ又はＦａｂ’；
（２２）配列番号３６を含むＶＨ、及び配列番号４７を含むＶＬを含むＦａｂ又はＦａｂ’；
（２３）配列番号５４を含むＶＨ、及び配列番号２３を含むＶＬを含むＦａｂ又はＦａｂ’；
（２４）配列番号６９を含むＶＨ、及び配列番号８２を含むＶＬを含むＦａｂ又はＦａｂ’；
（２５）配列番号９５を含むＶＨ、及び配列番号１０８を含むＶＬを含むＦａｂ又はＦａｂ’；
（２６）配列番号１４を含む重鎖、及び配列番号２５を含む軽鎖を含むＦａｂ’；
（２７）配列番号４０を含む重鎖、及び配列番号４９を含む軽鎖を含むＦａｂ’；
（２８）配列番号５８を含む重鎖、及び配列番号２５を含む軽鎖を含むＦａｂ’；
（２９）配列番号７３を含む重鎖、及び配列番号８４を含む軽鎖を含むＦａｂ’；
（３０）配列番号９９を含む重鎖、及び配列番号１１０を含む軽鎖を含むＦａｂ’；
（３１）配列番号１１８を含む重鎖、及び配列番号１２２を含む軽鎖を含むＦａｂ；
（３２）配列番号１１８を含む重鎖、及び配列番号１２３を含む軽鎖を含むＦａｂ；
（３３）配列番号１２４を含む重鎖、及び配列番号１２８を含む軽鎖を含むＦａｂ；
（３４）配列番号１２４を含む重鎖、及び配列番号１２９を含む軽鎖を含むＦａｂ；
（３５）配列番号１３０を含む重鎖、及び配列番号１３４を含む軽鎖を含むＦａｂ；
（３６）配列番号１３０を含む重鎖、及び配列番号１３５を含む軽鎖を含むＦａｂ；
（３７）配列番号１３６を含む重鎖、及び配列番号１４０を含む軽鎖を含むＦａｂ；
（３８）配列番号１４１を含む重鎖、及び配列番号１４５を含む軽鎖を含むＦａｂ；
（３９）配列番号１１９、１２０、又は１２１から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含むＦａｂ；
（４０）配列番号１２５、１２６、又は１２７から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号４９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含むＦａｂ；
（４１）配列番号１３１、１３２、又は１３３から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含むＦａｂ；
（４２）配列番号１３７、１３８、又は１３９から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号８４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含むＦａｂ；
（４３）配列番号１４２、１４３、又は１４４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含むＦａｂ；
のいずれかから選択される、請求項１〜１０及び請求項１３のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１５】
前記抗体フラグメントは、ヒトＦａｂ若しくはヒトＦａｂ’、又はヒト化Ｆａｂ若しくはヒト化Ｆａｂ’である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１６】
前記抗体フラグメントは、Ｆａｂ’であり、前記リンカー（ＬＢ）は、前記Ｆａｂ’のヒンジ領域中の天然のシステイン残基に取り付けられている、請求項１〜６のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１７】
前記抗体フラグメントは、定常領域中に導入された少なくとも１つの非天然のシステインを含み、前記リンカー（ＬＢ）は、前記非天然のシステインに取り付けられている、請求項１〜６のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１８】
前記抗体フラグメントは、Ｆａｂ’であり、Ｒ１１４が、前記Ｆａｂ’のヒンジ領域中の天然のシステイン残基に取り付けられている、請求項７〜１０のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項１９】
前記抗体フラグメントは、定常領域中に導入された少なくとも１つの非天然のシステインを含み、Ｒ１１４が、前記非天然のシステインに取り付けられている、請求項７〜１０のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項２０】
前記抗体フラグメントは、以下の位置（全ての位置はＥＵナンバリングによる）：
（ａ）重鎖の位置１５２、
（ｂ）カッパ軽鎖の位置１１４若しくは１６５、又は
（ｃ）ラムダ軽鎖の位置１４３
の１つ以上にて、システインを含む、請求項１７又は１９に記載のコンジュゲート。
【請求項２１】
前記コンジュゲートの半減期は、約２４〜４８時間未満である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項２２】
前記コンジュゲートは、肥満細胞脱顆粒を誘導しない、請求項１〜２１のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
【請求項２３】
請求項１〜２２のいずれか一項に記載のコンジュゲート、及び薬学的に許容可能なキャリアを含む医薬組成物。
【請求項２４】
別の治療薬をさらに含む、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
前記組成物は、凍結乾燥品である、請求項２３又は２４に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
造血幹細胞の除去を必要とする患者において造血幹細胞を除去する方法であって、前記患者に、請求項１〜２２のいずれか一項に記載のコンジュゲート、又は請求項２３若しくは２４に記載の医薬組成物の有効な量を投与することを含む方法。
【請求項２７】
前記患者は、造血幹細胞移植レシピエントである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記方法は、前記患者への造血幹細胞移植前に実行される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
造血幹細胞移植患者のコンディションを整える方法であって：前記患者に、請求項１〜２２のいずれか一項に記載のコンジュゲート、又は請求項２３若しくは２４に記載の医薬組成物の有効な量を投与することと、前記患者に造血幹細胞移植を実行する前に、前記コンジュゲートによる、前記患者の循環系からの一掃のための十分な期間を許容することとを含む方法。
【請求項３０】
前記患者は、遺伝性免疫不全疾患、自己免疫不全、造血障害、先天性代謝異常を患っており、又は以前に自家幹細胞移植で処置されている、請求項２６〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記造血障害は：急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性単球白血病（ＡＭｏＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、骨髄増殖性疾患、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、無形成性貧血、赤芽球癆、発作性夜間ヘモグロビン尿症、ファンコーニ貧血、サラセミアメジャー、鎌状赤血球貧血、重症複合型免疫不全、ウィスコット・アルドリッチ症候群、血球貪食性リンパ組織球増多症から選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記先天性代謝異常は、ムコ多糖症、ゴーシェ病、異染性ロイコジストロフィ、又は副腎脳白質ジストロフィから選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
前記患者は、重症無形成性貧血（ＳＡＡ）、ウィスコット・アルドリッチ症候群、ハーラー症候群、ＦＨＬ、ＣＧＤ、コストマン症候群、重症免疫不全症候群（ＳＣＩＤ）、他の自己免疫疾患、例えばＳＬＥ、多発性硬化症、ＩＢＤ、クローン病、シェーグレン症候群、脈管炎、狼瘡、重症性筋無力症、ウェゲナー病、先天性代謝異常、及び／又は他の免疫不全から選択される非悪性疾患又は症状を有する、請求項２６〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記患者は、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性単球白血病（ＡＭｏＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、Ｔ細胞前リンパ球性白血病（Ｔ−ＰＬＬ）、大型顆粒リンパ性白血病、成人Ｔ細胞白血病、前駆体Ｔ細胞白血病／リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病／リンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、菌状息肉腫、末梢Ｔ細胞リンパ腫、他に規定されない限り、ホジキンリンパ腫のホジキンリンパ腫混合細胞亜型の結節性硬化症形態から選択される悪性疾患又は症状を有する、請求項２６〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
造血幹細胞の除去を必要とする患者において造血幹細胞を除去するための、請求項１〜２２のいずれか一項に記載のコンジュゲート、又は請求項２３若しくは２４に記載の医薬組成物の使用。
【請求項３６】
造血幹細胞の除去を必要とする患者において造血幹細胞を除去するための医薬の製造における、請求項１〜２２のいずれか一項に記載のコンジュゲート、又は請求項２３若しくは２４に記載の医薬組成物の使用。
【請求項３７】
ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメントであって、前記抗体又は前記抗体フラグメントは：
（１）（ｉ）（ａ）配列番号１のＨＣＤＲ１（重鎖相補性決定領域１）；（ｂ）配列番号２のＨＣＤＲ２（重鎖相補性決定領域２）；及び（ｃ）配列番号３のＨＣＤＲ３（重鎖相補性決定領域３）を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号１６のＬＣＤＲ１（軽鎖相補性決定領域１）；（ｅ）配列番号１７のＬＣＤＲ２（軽鎖相補性決定領域２）；及び（ｆ）配列番号１８のＬＣＤＲ３（軽鎖相補性決定領域３）を含む抗体若しくは抗体フラグメント；
（２）（ｉ）（ａ）配列番号４のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号５のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号１９のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号２０のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号２１のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗体若しくは抗体フラグメント；
（３）（ｉ）（ａ）配列番号６のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号１６のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１７のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号１８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗体若しくは抗体フラグメント；
（４）（ｉ）（ａ）配列番号７のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号８のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号２２のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号２０のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号１８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗体若しくは抗体フラグメント；
（５）（ｉ）（ａ）配列番号２７のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２８のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号２９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号４２のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１７のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号４３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗体若しくは抗体フラグメント；
（６）（ｉ）（ａ）配列番号３０のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号３１のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号２９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号４４のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号２０のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号４５のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗体若しくは抗体フラグメント；
（７）（ｉ）（ａ）配列番号３２のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２８のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号２９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号４２のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１７のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号４３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗体若しくは抗体フラグメント；
（８）（ｉ）（ａ）配列番号３３のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号３４のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号３５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号４６のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号２０のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号４３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗体若しくは抗体フラグメント；
（９）（ｉ）（ａ）配列番号６０のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号６１のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号６２のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号７５のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号７６のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号７７のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗体若しくは抗体フラグメント；
（１０）（ｉ）（ａ）配列番号６３のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号６４のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号６２のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号７８のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号７９のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号８０のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗体若しくは抗体フラグメント；
（１１）（ｉ）（ａ）配列番号６５のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号６１のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号６２のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号７５のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号７６のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号７７のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗体若しくは抗体フラグメント；
（１２）（ｉ）（ａ）配列番号６６のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号６７のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号６８のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号８１のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号７９のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号７７のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗体若しくは抗体フラグメント；
（１３）（ｉ）（ａ）配列番号８６のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号８７のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号８８のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号１０１のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１０２のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号１０３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗体若しくは抗体フラグメント；
（１４）（ｉ）（ａ）配列番号８９のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号９０のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号８８のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号１０４のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１０５のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号１０６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗体若しくは抗体フラグメント；
（１５）（ｉ）（ａ）配列番号９１のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号８７のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号８８のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号１０１のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１０２のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号１０３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗体若しくは抗体フラグメント；
（１６）（ｉ）（ａ）配列番号９２のＨＣＤＲ１；（ｂ）配列番号９３のＨＣＤＲ２；（ｃ）配列番号９４のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；並びに（ｉｉ）（ｄ）配列番号１０７のＬＣＤＲ１；（ｅ）配列番号１０５のＬＣＤＲ２；及び（ｆ）配列番号１０３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む抗体若しくは抗体フラグメント；
（１７）配列番号１０を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号２３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体若しくは抗体フラグメント；
（１８）配列番号３６を含むＶＨ、及び配列番号４７を含むＶＬを含む抗体若しくは抗体フラグメント；
（１９）配列番号６９を含むＶＨ、及び配列番号８２を含むＶＬを含む抗体若しくは抗体フラグメント；
（２０）配列番号９５を含むＶＨ、及び配列番号１０８を含むＶＬを含む抗体若しくは抗体フラグメント；
（２１）配列番号１４を含む重鎖、及び配列番号２５を含む軽鎖を含む抗体若しくは抗体フラグメント；
（２２）配列番号４０を含む重鎖、及び配列番号４９を含む軽鎖を含む抗体若しくは抗体フラグメント；
（２３）配列番号７３を含む重鎖、及び配列番号８４を含む軽鎖を含む抗体若しくは抗体フラグメント；
（２４）配列番号９９を含む重鎖、及び配列番号１１０を含む軽鎖を含む抗体若しくは抗体フラグメント；
（２５）配列番号１１８を含む重鎖、及び配列番号１２２を含む軽鎖を含む抗体若しくは抗体フラグメント；
（２６）配列番号１１８を含む重鎖、及び配列番号１２３を含む軽鎖を含む抗体若しくは抗体フラグメント；
（２７）配列番号１２４を含む重鎖、及び配列番号１２８を含む軽鎖を含む抗体若しくは抗体フラグメント；
（２８）配列番号１２４を含む重鎖、及び配列番号１２９を含む軽鎖を含む抗体若しくは抗体フラグメント；
（２９）配列番号１３０を含む重鎖、及び配列番号１３４を含む軽鎖を含む抗体若しくは抗体フラグメント；
（３０）配列番号１３０を含む重鎖、及び配列番号１３５を含む軽鎖を含む抗体若しくは抗体フラグメント；
（３１）配列番号１３６を含む重鎖、及び配列番号１４０を含む軽鎖を含む抗体若しくは抗体フラグメント；
（３２）配列番号１４１を含む重鎖、及び配列番号１４５を含む軽鎖を含む抗体若しくは抗体フラグメント；
（３３）配列番号１２を含む重鎖、及び配列番号２５を含む軽鎖を含む抗体；
（３４）配列番号３８を含む重鎖、及び配列番号４９を含む軽鎖を含む抗体；
（３５）配列番号７１を含む重鎖、及び配列番号８４を含む軽鎖を含む抗体；又は
（３６）配列番号９７を含む重鎖、及び配列番号１１０を含む軽鎖を含む抗体
のいずれかから選択される、抗体又は抗体フラグメント。
【請求項３８】
請求項３７に記載の抗体又は抗体フラグメントをコードする核酸。
【請求項３９】
請求項３８に記載の核酸を含むベクター。
【請求項４０】
請求項３９に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項４１】
抗体又は抗体フラグメントを生成するプロセスであって、請求項４０に記載の宿主細胞を培養することと、前記培養から前記抗体又は前記抗体フラグメントを回収することとを含むプロセス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年６月２０日出願の米国仮特許出願第６２／６８７，３８２号明細書の利益を主張し、これらの出願の内容は、それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本開示は、抗ｃＫＩＴ抗体薬物コンジュゲート、及びその、造血幹細胞の除去を必要とする患者、例えば造血幹細胞移植レシピエントにおいて造血幹細胞を除去するための使用に関する。
【０００３】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含有し、これは、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。前記ＡＳＣＩＩコピー（２０１９年５月２日作成）は、ＰＡＴ０５８１５７−ＷＯ−ＰＣＴ＿ＳＬ．ｔｘｔと命名され、１８６，５４０バイトのサイズである。
【背景技術】
【０００４】
ｃＫＩＴ（ＣＤ１１７）は、単一の膜貫通受容体チロシンキナーゼであり、リガンド、幹細胞因子（ＳＣＦ）に結合する。ＳＣＦは、ｃＫＩＴのホモ二量体化を誘導し、これは、そのチロシンキナーゼ活性、並びにＰＩ３−ＡＫＴ経路及びＭＡＰＫ経路の双方を介するシグナルを活性化する（Ｋｉｎｄｂｌｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ．Ｐａｔｈ．１９９８  １５２（５）：１２５９）。ｃＫＩＴは最初に、ネコレトロウイルスによって発現される切断型形態としてのオンコジーンとして発見された（Ｂｅｓｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  １９８６  ３２０：４１５−４２１）。対応するヒト遺伝子のクローニングにより、ｃＫＩＴは、受容体チロシンキナーゼのクラスＩＩＩ型のメンバであることが実証され、これは、ファミリメンバ、ＦＬＴ３、ＣＳＦ−１受容体、及びＰＤＧＦ受容体の１つに数えられる。ｃＫＩＴは、造血細胞、胚細胞、肥満細胞、及びメラニン細胞の発達に必要とされる。造血前駆細胞、例えば骨髄中の造血幹細胞（ＨＳＣ）は、細胞表面上で高レベルのｃＫＩＴを発現する。加えて、肥満細胞、皮膚内のメラニン細胞、及び消化管内のカハールの間質細胞が、ｃＫＩＴを発現する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
造血幹細胞（ＨＳＣ）は、移植レシピエントにおいて全ての血液細胞及び免疫細胞を再生させることができるので、治療潜在性は大きい。造血幹細胞移植が、白血病、リンパ腫、及び他の致命的な疾患の治療法として、広く用いられている。しかしながら、多くのリスクが、そのような移植に付随し、不十分な移植、免疫拒絶、移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）、又は感染症が挙げられる。同種造血幹細胞移植には、通常、移植片の免疫拒絶を阻止するための、腫瘍縮小処理によるレシピエントのコンディション調整が必要とされる。現行のコンディション調整レジメンは多くの場合、宿主に有毒であるので、移植患者の大グループにとって禁忌であり、かつ／又は移植片対宿主疾患を阻止するのに十分な量で提供され得ない。ゆえに、コンディション調整方法及び移植方法を向上させ、造血幹細胞移植に付随するリスクを低下させ、かつ種々の障害についてのその有効性を増大させることが必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本開示は、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）が、薬物部分（例えば細胞毒性剤）に、場合によってはリンカーを介して結合されている抗体薬物コンジュゲートを提供する。当該抗体薬物コンジュゲートは、ｃＫＩＴを発現する細胞、例えば造血幹細胞に細胞毒性剤を選択的に送達することによって、患者、例えば造血幹細胞移植レシピエントにおいて当該細胞を選択的に除去することができる。好ましくは、ｃＫＩＴ抗体薬物コンジュゲートは、患者の循環系において長い時間、存在しない、かつ／又は有効でないような薬物動態学的特性を有するので、造血幹細胞移植前の、造血幹細胞移植レシピエントのコンディション調整に用いられ得る。一部の実施形態において、本明細書中で提供されるのは、薬物部分（例えば細胞毒性剤）に、場合によってはリンカーを介して結合されている、ｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）を含むコンジュゲートである。驚くべきことに、本発明者らは、完全長の抗ｃＫＩＴ抗体（例えば完全長ＩｇＧ）、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、及びそれらの毒物コンジュゲートが、肥満細胞脱顆粒を引き起こす一方、Ｆａｂフラグメントを認識する既存の抗薬物抗体を患者が産生させ、又はこれを有する場合に観察され得るように、より大きな複合体に架橋かつ／又は多量体化された場合でさえ、抗ｃＫＩＴ  Ｆａｂ’又はＦａｂ−毒物コンジュゲートが、肥満細胞脱顆粒を引き起こさないことを見出した。本開示はさらに、抗体薬物コンジュゲートを含む医薬組成物、並びにそのような医薬組成物を製造する方法、及びそのような医薬組成物を、造血幹細胞の除去を必要とする患者、例えば造血幹細胞移植レシピエントにおいて造血幹細胞を除去するのに用いる方法を提供する。
【０００７】
一態様において、本開示は、式（Ｉ）のコンジュゲートに関し：
Ａ−（ＬＢ−（Ｄ）ｎ）ｙ  式（Ｉ）；
式中：
Ａは、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメントであり；
ＬＢは、リンカーであり；
Ｄは、細胞毒性剤であり；
ｎは、１から１０の整数であり、ｙは、１から１０の整数である。
【０００８】
一態様において、本開示は、式（Ｅ）の構造を有するコンジュゲートに関し：
【化１】
2021527429.tif 000002
式中、Ｒ２、Ａ、Ｌ１、ｙ、及びＲ１１４は、本明細書中で定義される通りである。
【０００９】
一態様において、本開示は、式（Ｇ）の構造を有するコンジュゲートに関し：
【化２】
2021527429.tif 000003
式中、Ｒ２、Ａ、Ｌ１、ｙ、及びＲ１１４は、本明細書中で定義される通りである。
【００１０】
別の態様において、本明細書中で提供されるのは、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体及び抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）である。そのような抗ｃＫＩＴ抗体及び抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、本明細書中に記載されるあらゆるコンジュゲートに用いられ得る。
【００１１】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、ヒトｃＫＩＴの細胞外ドメイン（配列番号１１２）に特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）である。
【００１２】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、ヒトｃＫＩＴのドメイン１〜３（配列番号１１３）中のエピトープに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）である。
【００１３】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、表１に記載される抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）である。
【００１４】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号１のＨＣＤＲ１；配列番号２のＨＣＤＲ２；配列番号３のＨＣＤＲ３；配列番号１６のＬＣＤＲ１；配列番号１７のＬＣＤＲ２；及び配列番号１８のＬＣＤＲ３を含む。
【００１５】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号４のＨＣＤＲ１；配列番号５のＨＣＤＲ２；配列番号３のＨＣＤＲ３；配列番号１９のＬＣＤＲ１；配列番号２０のＬＣＤＲ２；及び配列番号２１のＬＣＤＲ３を含む。
【００１６】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号６のＨＣＤＲ１；配列番号２のＨＣＤＲ２；配列番号３のＨＣＤＲ３；配列番号１６のＬＣＤＲ１；配列番号１７のＬＣＤＲ２；及び配列番号１８のＬＣＤＲ３を含む。
【００１７】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号７のＨＣＤＲ１；配列番号８のＨＣＤＲ２；配列番号９のＨＣＤＲ３；配列番号２２のＬＣＤＲ１；配列番号２０のＬＣＤＲ２；及び配列番号１８のＬＣＤＲ３を含む。
【００１８】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号２７のＨＣＤＲ１；配列番号２８のＨＣＤＲ２；配列番号２９のＨＣＤＲ３；配列番号４２のＬＣＤＲ１；配列番号１７のＬＣＤＲ２；及び配列番号４３のＬＣＤＲ３を含む。
【００１９】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号３０のＨＣＤＲ１；配列番号３１のＨＣＤＲ２；配列番号２９のＨＣＤＲ３；配列番号４４のＬＣＤＲ１；配列番号２０のＬＣＤＲ２；及び配列番号４５のＬＣＤＲ３を含む。
【００２０】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号３２のＨＣＤＲ１；配列番号２８のＨＣＤＲ２；配列番号２９のＨＣＤＲ３；配列番号４２のＬＣＤＲ１；配列番号１７のＬＣＤＲ２；及び配列番号４３のＬＣＤＲ３を含む。
【００２１】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号３３のＨＣＤＲ１；配列番号３４のＨＣＤＲ２；配列番号３５のＨＣＤＲ３；配列番号４６のＬＣＤＲ１；配列番号２０のＬＣＤＲ２；及び配列番号４３のＬＣＤＲ３を含む。
【００２２】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号１のＨＣＤＲ１；配列番号５１のＨＣＤＲ２；配列番号３のＨＣＤＲ３；配列番号１６のＬＣＤＲ１；配列番号１７のＬＣＤＲ２；及び配列番号１８のＬＣＤＲ３を含む。
【００２３】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号４のＨＣＤＲ１；配列番号５２のＨＣＤＲ２；配列番号３のＨＣＤＲ３；配列番号１９のＬＣＤＲ１；配列番号２０のＬＣＤＲ２；及び配列番号２１のＬＣＤＲ３を含む。
【００２４】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号６のＨＣＤＲ１；配列番号５１のＨＣＤＲ２；配列番号３のＨＣＤＲ３；配列番号１６のＬＣＤＲ１；配列番号１７のＬＣＤＲ２；及び配列番号１８のＬＣＤＲ３を含む。
【００２５】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号７のＨＣＤＲ１；配列番号５３のＨＣＤＲ２；配列番号９のＨＣＤＲ３；配列番号２２のＬＣＤＲ１；配列番号２０のＬＣＤＲ２；及び配列番号１８のＬＣＤＲ３を含む。
【００２６】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号６０のＨＣＤＲ１；配列番号６１のＨＣＤＲ２；配列番号６２のＨＣＤＲ３；配列番号７５のＬＣＤＲ１；配列番号７６のＬＣＤＲ２；及び配列番号７７のＬＣＤＲ３を含む。
【００２７】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号６３のＨＣＤＲ１；配列番号６４のＨＣＤＲ２；配列番号６２のＨＣＤＲ３；配列番号７８のＬＣＤＲ１；配列番号７９のＬＣＤＲ２；及び配列番号８０のＬＣＤＲ３を含む。
【００２８】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号６５のＨＣＤＲ１；配列番号６１のＨＣＤＲ２；配列番号６２のＨＣＤＲ３；配列番号７５のＬＣＤＲ１；配列番号７６のＬＣＤＲ２；及び配列番号７７のＬＣＤＲ３を含む。
【００２９】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号６６のＨＣＤＲ１；配列番号６７のＨＣＤＲ２；配列番号６８のＨＣＤＲ３；配列番号８１のＬＣＤＲ１；配列番号７９のＬＣＤＲ２；及び配列番号７７のＬＣＤＲ３を含む。
【００３０】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号８６のＨＣＤＲ１；配列番号８７のＨＣＤＲ２；配列番号８８のＨＣＤＲ３；配列番号１０１のＬＣＤＲ１；配列番号１０２のＬＣＤＲ２；及び配列番号１０３のＬＣＤＲ３を含む。
【００３１】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号８９のＨＣＤＲ１；配列番号９０のＨＣＤＲ２；配列番号８８のＨＣＤＲ３；配列番号１０４のＬＣＤＲ１；配列番号１０５のＬＣＤＲ２；及び配列番号１０６のＬＣＤＲ３を含む。
【００３２】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号９１のＨＣＤＲ１；配列番号８７のＨＣＤＲ２；配列番号８８のＨＣＤＲ３；配列番号１０１のＬＣＤＲ１；配列番号１０２のＬＣＤＲ２；及び配列番号１０３のＬＣＤＲ３を含む。
【００３３】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号９２のＨＣＤＲ１；配列番号９３のＨＣＤＲ２；配列番号９４のＨＣＤＲ３；配列番号１０７のＬＣＤＲ１；配列番号１０５のＬＣＤＲ２；及び配列番号１０３のＬＣＤＲ３を含む。
【００３４】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【００３５】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【００３６】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号２３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【００３７】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号８２のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【００３８】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【００３９】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えばＦａｂ’）は、配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００４０】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えばＦａｂ’）は、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号４９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００４１】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えばＦａｂ’）は、配列番号５８のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００４２】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えばＦａｂ’）は、配列番号７３のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号８４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００４３】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えばＦａｂ’）は、配列番号９９のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００４４】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えばＦａｂ）は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１２２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００４５】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えばＦａｂ）は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１２３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００４６】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えばＦａｂ）は、配列番号１２４のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１２８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００４７】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えばＦａｂ）は、配列番号１２４のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１２９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００４８】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えばＦａｂ）は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１３４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００４９】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えばＦａｂ）は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１３５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００５０】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えばＦａｂ）は、配列番号１３６のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１４０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００５１】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えばＦａｂ）は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１４５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００５２】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えばＦａｂ’）は、配列番号１１９、１２０、又は１２１から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００５３】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えばＦａｂ’）は、配列番号１２５、１２６、又は１２７から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号４９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００５４】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えばＦａｂ’）は、配列番号１３１、１３２、又は１３３から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００５５】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えばＦａｂ’）は、配列番号１３７、１３８、又は１３９から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号８４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００５６】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えばＦａｂ’）は、配列番号１４２、１４３、又は１４４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００５７】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００５８】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体は、配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号４９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００５９】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体は、配列番号５６のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００６０】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体は、配列番号７１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号８４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００６１】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体は、配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００６２】
一部の実施形態において、本明細書中で提供されるのは、薬物部分（例えば細胞毒性剤）に、場合によってはリンカーを介して結合されている、ｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）（抗ｃＫＩＴ  Ｆａｂ又はＦａｂ’）を含むコンジュゲートである。抗ｃＫＩＴ  Ｆａｂ又はＦａｂ’は、本明細書中に記載されるＦａｂ又はＦａｂ’のいずれか、例えば、表１中のＦａｂ又はＦａｂ’のいずれかであってよい。本明細書中に記載されるように、そのような抗ｃＫＩＴ  Ｆａｂ’又はＦａｂ−毒物コンジュゲートは、ヒトＨＳＣ細胞をインビトロかつインビボで除去することができる一方、より大きな複合体に架橋かつ／又は多量体化された場合でさえ、肥満細胞脱顆粒を引き起こさない。
【図面の簡単な説明】
【００６３】
【図１−１】図１：図１Ａ〜図１Ｃは、ヒト幹細胞及びヒト前駆体細胞（ｃＫＩＴ＋／ＣＤ９０＋細胞）をおおよそ等しい効力でインビトロで死滅させる抗ｃＫＩＴ  Ｆａｂ’−ＤＡＲ４コンジュゲートサンプル（コンジュゲートの詳細について、表２を参照）のサブセットの線グラフを示す。図１Ａは、Ｊ４（菱形）、Ｊ５（白抜きの円、破線）、Ｊ８（矩形）、及びＪ９（白抜きの三角形、点線）由来のデータを示す。図１Ｂは、Ｊ１０（白抜きの矩形）及びＪ１１（円）由来のデータを示す。図１Ｃは、アイソタイプ対照抗ＨＥＲ２  Ｆａｂ’−ＤＡＲ４コンジュゲート及び非処理細胞（矩形、点線）に対する、抗ｃＫｉｔ  Ｆａｂ’１−ＤＡＲ４コンジュゲート及び抗ｃＫｉｔ  Ｆａｂ’２−ＤＡＲ４コンジュゲートを示す：Ｊ１０（菱形）、Ｊ１５（円）、Ｊ１６（白抜きの矩形）、Ｊ１９（白抜きの円、破線）、及びＪ２０（白抜きの三角形）。
【図１−２】（上記の通り。）
【図１−３】（上記の通り。）
【図２−１】図２：図２Ａ〜図２Ｏは、ヒト末梢血ＨＳＣ由来肥満細胞及びベーターヘキソサミニダーゼ放出をリードアウトとして用いた（４０５ｎｍでの吸光度によって評価、ベースライン減算は、６２０ｎｍでの参照吸光度に基づく）、インビトロヒト肥満細胞脱顆粒アッセイの代表的な結果を示す線グラフである。ここに示すデータは、ＳＣＦの不在下で収集した。線グラフは、抗体試験剤上のＦａｂ部分に特異的な抗体を用いて試験剤を架橋させた場合の、種々の濃度：０．００６ｎＭ（三角形）；０．０９８ｎＭ（菱形）；１．６ｎＭ（円）；及び２５ｎＭ（正方形）の抗体又は抗体フラグメントによってトリガされた肥満細胞脱顆粒レベルを示す（ｘ軸上が滴定）。参照用に、架橋剤抗体単独を、各グラフ上にプロットする（白抜き菱形、破線）。図２Ａ〜図２Ｃは、完全長抗ｃＫＩＴ  Ａｂ４（図２Ａ）及び抗ｃＫＩＴ  Ｆ（ａｂ’４）２フラグメント（図２Ｂ）が、架橋された場合、肥満細胞脱顆粒を引き起こした一方、肥満細胞脱顆粒が、抗ｃＫＩＴ  Ｆａｂ４（ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ）フラグメントによって、試験した全濃度にてトリガされなかった（図２Ｃ）ことを示す。図２Ｄ〜図２Ｆは、完全長抗ｃＫＩＴ  Ａｂ１（図２Ｄ）及び抗ｃＫＩＴ  Ｆ（ａｂ’１）２フラグメント（図２Ｅ）が、架橋された場合、肥満細胞脱顆粒を引き起こした一方、肥満細胞脱顆粒が、抗ｃＫＩＴ  Ｆａｂ１（ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ）フラグメントによって、試験した全濃度にてトリガされなかった（図２Ｆ）ことを示す。図２Ｇ〜図２Ｉは、完全長抗ｃＫＩＴ  Ａｂ２（図２Ｇ）及び抗ｃＫＩＴ  Ｆ（ａｂ’２）２フラグメント（図２Ｈ）が、架橋された場合、肥満細胞脱顆粒を引き起こした一方、肥満細胞脱顆粒が、抗ｃＫＩＴ  Ｆａｂ２（ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ）フラグメントによって、試験した全濃度にてトリガされなかった（図２Ｉ）ことを示す。図２Ｊ〜図２Ｌは、完全長抗ｃＫＩＴ  Ａｂ３（図２Ｊ）及び抗ｃＫＩＴ  Ｆ（ａｂ’３）２フラグメント（図２Ｋ）が、架橋された場合、肥満細胞脱顆粒を引き起こした一方、肥満細胞脱顆粒が、抗ｃＫＩＴ  Ｆａｂ３（ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ）フラグメントによって、試験した全濃度にてトリガされなかった（図２Ｌ）ことを示す。図２Ｍ〜図２Ｏは、肥満細胞脱顆粒が、抗Ｈｅｒ２抗体（図２Ｍ）、抗Ｈｅｒ２−Ｆ（ａｂ’）２フラグメント（図２Ｎ）、又は抗Ｈｅｒ２−Ｆａｂ（ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ）フラグメント（図２Ｏ）（架橋された場合）によって引き起こされなかったことを示す線グラフである。
【図２−２】（上記の通り。）
【図２−３】（上記の通り。）
【図２−４】（上記の通り。）
【図２−５】（上記の通り。）
【図２−６】（上記の通り。）
【図２−７】（上記の通り。）
【図２−８】（上記の通り。）
【図２−９】（上記の通り。）
【図２−１０】（上記の通り。）
【図２−１１】（上記の通り。）
【図２−１２】（上記の通り。）
【図２−１３】（上記の通り。）
【図２−１４】（上記の通り。）
【図２−１５】（上記の通り。）
【図３】図３は、抗ｃＫｉｔコンジュゲートを用いた、マウス宿主からのヒトＨＳＣのインビボ除去を示すドットプロットである。
【発明を実施するための形態】
【００６４】
本開示は、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）が、薬物部分（例えば細胞毒性剤）に、場合によってはリンカーを介して結合されている抗体薬物コンジュゲートを提供する。当該抗体薬物コンジュゲートは、ｃＫＩＴを発現する細胞、例えば造血幹細胞に細胞毒性剤を選択的に送達することによって、患者、例えば造血幹細胞移植レシピエントにおいて当該細胞を選択的に除去することができる。好ましくは、ｃＫＩＴ抗体薬物コンジュゲートは、患者の循環系内で長時間存在しない、且つ／又は活性でない（例えば、半減期が２４〜４８時間未満である）ような薬物動態学的特性を有するので、造血幹細胞移植前に造血幹細胞移植レシピエントのコンディショニング（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ）に用いることができる。一部の実施形態において、本明細書中で提供されるのは、薬物部分（例えば細胞毒性剤）に、場合によってはリンカーを介して結合されている、ｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）を含むコンジュゲートである。驚くべきことに、本発明者らは、完全長の抗ｃＫＩＴ抗体（例えば完全長ＩｇＧ）、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、及びそれらの毒物コンジュゲートが、肥満細胞脱顆粒を引き起こす一方、Ｆａｂフラグメントを認識する既存の抗薬物抗体を患者が産生させ、又はこれを有する場合に観察され得るように、より大きな複合体に架橋かつ／又は多量体化された場合でさえ、抗ｃＫＩＴ  Ｆａｂ’又はＦａｂ−毒物コンジュゲートが、肥満細胞脱顆粒を引き起こさないことを見出した。本開示はさらに、抗体薬物コンジュゲートを含む医薬組成物、並びにそのような医薬組成物を製造する方法、及びそのような医薬組成物を、造血幹細胞の除去を必要とする患者、例えば造血幹細胞移植レシピエントにおいて造血幹細胞を除去するのに用いる方法を提供する。
【００６５】
定義
特に明記されない限り、本明細書中で用いられる以下の用語及びフレーズは、以下の意味を有することが意図される：
【００６６】
用語「アルキル」は、特定の炭素原子数を有する一価の飽和炭化水素鎖を指す。例えば、Ｃ１〜６アルキルは、１から６個の炭素原子を有するアルキル基を指す。アルキル基は、直鎖状であっても分枝状であってもよい。代表的な分枝状アルキル基は、１本、２本、又は３本の枝を有する。アルキル基の例として、以下に限定されないが、メチル、エチル、プロピル（ｎ−プロピル及びイソプロピル）、ブチル（ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、及びｔ−ブチル）、ペンチル（ｎ−ペンチル、イソペンチル、及びネオペンチル）、及びヘキシルが挙げられる。
【００６７】
本明細書中で用いられる用語「抗体」は、抗原に特異的に結合する免疫グロブリン分子に由来するタンパク質又はポリペプチド配列を指す。抗体は、ポリクローナルであってもモノクローナルであっても、多重鎖であっても単鎖であっても、無傷の免疫グロブリンであってもよく、そして天然の源に由来しても、組換え源に由来してもよい。天然に存在する「抗体」は、ジスルフィド結合によって相互に連結される少なくとも２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質である。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書中でＶＨと省略した）及び重鎖定常領域で構成される。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３で構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書中でＶＬと省略した）及び軽鎖定常領域で構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬで構成される。ＶＨ領域及びＶＬ領域はさらに、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域に再分割され得、より保存されている、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる領域が散在する。ＶＨ及びＶＬはそれぞれ、アミノ末端からカルボキシル末端まで以下の順序で配置される３つのＣＤＲ及び４つのＦＲで構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫グロブリンの、宿主の組織又は因子への結合を媒介し得る（免疫系の種々の細胞（例えばエフェクタ細胞）及び古典的補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）が挙げられる）。抗体は、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ科動物の抗体、又はキメラ抗体であってよい。抗体は、あらゆるアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）又はサブクラスのものであってよい。
【００６８】
「相補性決定ドメイン」又は「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）は、互換的に、ＶＬ及びＶＨの超可変領域を指す。ＣＤＲは、抗体鎖の標的タンパク質結合部位であり、これは、そのような標的タンパク質に対する特異性を保有する。３つのＣＤＲ（Ｎ末端から順に番号を付けられる、ＣＤＲ１〜３）が、ヒトの各ＶＬ又はＶＨ中に存在し、可変ドメインの約１５〜２０％を構成する。ＣＤＲは、その領域及び順序によって呼ばれ得る。例えば、「ＶＨＣＤＲ１」又は「ＨＣＤＲ１」は双方とも、重鎖可変領域の第１のＣＤＲを指す。ＣＤＲは、構造的に、標的タンパク質のエピトープと相補的であるので、結合特異性を直接担う。ＶＬ又はＶＨの残りの範囲、いわゆるフレームワーク領域は、アミノ酸配列においてあまり変異を示さない（Ｋｕｂｙ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  ｅｄ．，Ｃｈａｐｔｅｒ  ４．Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ＆  Ｃｏ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２０００）。
【００６９】
所定のＣＤＲの正確なアミノ酸配列の境界が、いくつかの周知のスキームのいずれかを用いて判定され得、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１），”Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”、第５版  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（「Ｋａｂａｔ」ナンバリングスキーム）、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）ＪＭＢ  ２７３，９２７−９４８（「Ｃｈｏｔｈｉａ」ナンバリングスキーム）、及びＩｍＭｕｎｏＧｅｎＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）ナンバリング（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．，Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ，７，１３２−１３６（１９９９）；Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２７，５５−７７（２００３）（「ＩＭＧＴ」ナンバリングスキーム）によって記載されるものが挙げられる。例えば、古典的フォーマットについて、Ｋａｂａｔ下では、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）中のＣＤＲアミノ酸残基は、３１〜３５（ＨＣＤＲ１）、５０〜６５（ＨＣＤＲ２）、及び９５〜１０２（ＨＣＤＲ３）と番号を付けられ；そして軽鎖変数ドメイン（ＶＬ）中のＣＤＲアミノ酸残基は、２４〜３４（ＬＣＤＲ１）、５０〜５６（ＬＣＤＲ２）、及び８９〜９７（ＬＣＤＲ３）と番号を付けられる。Ｃｈｏｔｈｉａ下では、ＶＨ中のＣＤＲアミノ酸は、２６〜３２（ＨＣＤＲ１）、５２〜５６（ＨＣＤＲ２）、及び９５〜１０２（ＨＣＤＲ３）と番号を付けられ；そしてＶＬ中のアミノ酸残基は、２６〜３２（ＬＣＤＲ１）、５０〜５２（ＬＣＤＲ２）、及び９１〜９６（ＬＣＤＲ３）と番号を付けられる。Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの双方のＣＤＲ定義を組み合わせることによって、ＣＤＲは、ヒトＶＨにおいてアミノ酸残基２６〜３５（ＨＣＤＲ１）、５０〜６５（ＨＣＤＲ２）、及び９５〜１０２（ＨＣＤＲ３）、そしてヒトＶＬにおいてアミノ酸残基２４〜３４（ＬＣＤＲ１）、５０〜５６（ＬＣＤＲ２）、及び８９〜９７（ＬＣＤＲ３）からなる。ＩＭＧＴ下では、ＶＨ中のＣＤＲアミノ酸残基は、おおよそ２６〜３５（ＣＤＲ１）、５１〜５７（ＣＤＲ２）、及び９３〜１０２（ＣＤＲ３）と番号を付けられ、そしてＶＬ中のＣＤＲアミノ酸残基は、おおよそ２７〜３２（ＣＤＲ１）、５０〜５２（ＣＤＲ２）、及び８９〜９７（ＣＤＲ３）と番号を付けられる（「Ｋａｂａｔ」に従うナンバリング）。ＩＭＧＴ下では、抗体のＣＤＲ領域は、プログラムＩＭＧＴ／ＤｏｍａｉｎＧａｐ  Ａｌｉｇｎを用いて判定され得る。
【００７０】
軽鎖及び重鎖は双方とも、構造的相同領域及び機能的相同領域に分割される。用語「定常」及び「可変」は、機能的に用いられる。この点に関して、軽（ＶＬ）鎖部分及び重（ＶＨ）鎖部分の双方の可変ドメインが、抗原認識及び特異性を決定することは勿論である。逆に、軽鎖（ＣＬ）及び重鎖（ＣＨ１、ＣＨ２、又はＣＨ３、及び、場合によってはＣＨ４）の定常ドメインは、重要な生物学的特性、例えば、分泌、経胎盤運動能、Ｆｃ受容体結合、補体結合、ＦｃＲｎ受容体結合、半減期、及び薬物動態を付与する。表記規則によって、定常領域ドメインのナンバリングは、抗体の抗原結合部位又はアミノ末端から遠位になるにつれ、増大する。Ｎ末端は可変領域であり、Ｃ末端では定常領域である；ＣＨ３ドメイン及びＣＬドメインはそれぞれ、実際に、重鎖及び軽鎖のカルボキシ末端ドメインを含む。
【００７１】
本明細書中で用いられる用語「抗体フラグメント」又は「抗原結合フラグメント」は、抗原（例えばｃＫＩＴ）のエピトープと特異的に（例えば、結合、立体障害、安定化／不安定化、空間分布によって）相互作用する能力を保持する抗体の１つ以上の部分を指す。抗体フラグメントの例として、以下に限定されないが、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨ１ドメインからなる一価のフラグメントであるＦａｂフラグメント；ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、ＣＨ１ドメイン、及びヒンジ領域からなる一価のフラグメントであるＦａｂ’フラグメント；ヒンジ領域にてジスルフィド架橋によって結合される２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント；ジスルフィドブリッジによって結合される単一の重鎖及び単一の軽鎖を含むハーフ抗体；Ｆｃ領域に結合されるＦａｂフラグメントを含むワンアーム抗体；ＣＨ３ドメインダイマーに結合された２つのＦａｂフラグメントを含む、ＣＨ２ドメイン欠失抗体（Ｇｌａｓｅｒ，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２００５；２８０（５０）：４１４９４−５０３参照）；単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）；ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）；ＶＨドメイン及びＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；抗体のシングルアームのＶＬドメイン及びＶＨドメインからなるＦｖフラグメント；ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６，１９８９）；並びに単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、又は抗体の他のエピトープ結合フラグメント。例えば、Ｆａｂフラグメントは、抗体の重鎖のアミノ酸残基１〜２２２（ＥＵナンバリング）を含み得る；一方、Ｆａｂ’フラグメントは、抗体の重鎖のアミノ酸残基１〜２３６（ＥＵナンバリング）を含み得る。抗体のＦａｂフラグメント又はＦａｂ’フラグメントは、組換えにより、又は親抗体の酵素的消化によって、生成され得る。組換えにより生成されるＦａｂ又はＦａｂ’は、部位特異的結合のためにアミノ酸を導入するように操作され得、例えばシステイン（Ｊｕｎｕｔｕｌａ，Ｊ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２００８，２６，９２５）、ピロリン−カルボキシ−リジン（Ｏｕ，Ｗ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ２０１１；１０８（２６）：１０４３７−４２）、又は非天然アミノ酸（例えば、Ｔｉａｎ，Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ２０１４，１１１，１７６６，Ａｘｕｐ，Ｊ．Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．２０１２，１０９，１６１０１）がある。同様に、突然変異又はペプチドタグが、結合を促進するために、ホスホパンテテイントランスフェラーゼ（Ｇｒｕｎｅｗａｌｄ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２０１５，２６，２５５４）、ホルミルグリシン形成酵素（Ｄｒａｋｅ，Ｐ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２０１４，２５，１３３１）、トランスグルタミナーゼ（Ｓｔｒｏｐ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  ｂｉｏｌｏｇｙ  ２０１３，２０，１６１）、ソルターゼ（Ｂｅｅｒｌｉ，Ｒ．Ｒ．；Ｈｅｌｌ，Ｔ．；Ｍ��ｒｋｅｌ，Ａ．Ｓ．；Ｇｒａｗｕｎｄｅｒ，Ｕ．ＰｌｏＳ  ｏｎｅ  ２０１５，１０，ｅ０１３１１７７）、又は他の酵素的結合戦略を介して加えられ得る。さらに、Ｆｖフラグメントの２つのドメイン、ＶＬ及びＶＨは、別々の遺伝子によってコードされるが、組換え方法を用いて、合成リンカーによって結合され得、これは、２つのドメインを、ＶＬ領域及びＶＨ領域が対形成して、一価の分子を形成する単一のタンパク質鎖として製造することを可能にする（単一鎖Ｆｖ（「ｓｃＦｖ」）として知られている；例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６，１９８８；及びＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８５：５８７９−５８８３，１９８８参照）。そのような単鎖抗体もまた、用語「抗原結合フラグメント」内に包含されることが意図される。これらの抗原結合フラグメントは、当業者に知られている従来の技術を用いて得られ、そして当該フラグメントは、無傷の抗体であるのと同じ様式で、実用性の有無に関してスクリーニングされる。
【００７２】
抗体フラグメント又は抗原結合フラグメントはまた、単一のドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、ナノボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ−ＮＡＲ、及びビス−ｓｃＦｖ中に組み込まれてもよい（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｈｕｄｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３：１１２６−１１３６，２００５参照）。抗原結合フラグメントは、ポリペプチドに基づくスカフォールド、例えばフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ３）中に融合（ｇｒａｆｔｅｄ）されてよい（米国特許第６，７０３，１９９号明細書（フィブロネクチンポリペプチドモノボディを記載）参照）。
【００７３】
抗体フラグメント又は抗原結合フラグメントは、一対のタンデムＦｖセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）を含む単鎖分子中に組み込まれてよく、これは、相補的軽鎖ポリペプチドと一緒になって、一対の抗原結合領域を形成する（Ｚａｐａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．８：１０５７−１０６２，１９９５；及び米国特許第５，６４１，８７０号明細書）。
【００７４】
本明細書中で用いられる用語「モノクローナル抗体」又は「モノクローナル抗体組成物」は、ポリペプチドを指し、実質的に同じアミノ酸配列を有し、又は同じ遺伝的源に由来する抗体及び抗原結合フラグメントが挙げられる。当該用語はまた、単一の分子組成の抗体分子の調製物を含む。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対して単一の結合特異性及び親和性を示す。
【００７５】
本明細書中で用いられる用語「ヒト抗体」は、フレームワーク及びＣＤＲ領域の双方が、ヒト起源の配列に由来する可変領域を有する抗体を含む。さらに、抗体が定常領域を含有するならば、定常領域もまた、例えば、ヒト生殖細胞系配列、若しくはヒト生殖細胞系配列の突然変異バージョン、又は、例えばＫｎａｐｐｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９６：５７−８６，２０００に記載されている、ヒトフレームワーク配列分析に由来する抗体含有コンセンサスフレームワーク配列のようなヒト配列に由来する。
【００７６】
本開示のヒト抗体は、ヒト配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダム若しくは部位特異的な突然変異誘発によって、又はインビボでの体細胞突然変異によって導入される突然変異、あるいは安定性又は製造を促進する保存的置換）を含んでよい。
【００７７】
本明細書中で用いられる用語「認識する」は、抗体又はその抗原結合フラグメントが、そのエピトープを見つけ出してそれと相互作用する（例えば結合する）ことを指し、当該エピトープは、直鎖状であるか立体配座的であるかは問わない。用語「エピトープ」は、本開示の抗体又は抗原結合フラグメントが特異的に結合する抗原上の部位を指す。エピトープは、隣接アミノ酸、又はタンパク質の三次折畳みによって並べられる非隣接アミノ酸の双方から形成され得る。隣接アミノ酸から形成されるエピトープは、典型的に、変性溶媒への曝露直後に保持されるが、三次折畳みによって形成されるエピトープは、典型的に、変性溶媒による処理直後に失われる。エピトープは典型的に、特有の空間的立体配座において少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸を含む。エピトープの空間的立体配座を判定する方法として、当該技術における技術、例えば、Ｘ線結晶解析及び二次元核磁気共鳴が挙げられる（例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｇ．Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．（１９９６）参照）。「パラトープ」は、抗原のエピトープを認識する抗体の部分である。
【００７８】
抗原（例えばタンパク質）と、抗体、抗体フラグメント、又は抗体由来の結合剤との相互作用を説明する文脈において用いられる場合のフレーズ「特異的に結合する」又は「選択的に結合する」は、タンパク質及び他の生物製剤の不均一集団における、例えば、生体サンプル、例えば、血液、血清、血漿、又は組織サンプルにおける、抗原の存在で決定的となる結合反応を指す。ゆえに、指定された特定の免疫アッセイ条件下で、特定の結合特異性を有する抗体又は結合剤は、特定の抗原に、バックグラウンドの少なくとも２倍結合し、実質的に、サンプル中に存在する他の抗原に多量に結合しない。一態様において、指定された免疫アッセイ条件下で、特定の結合特異性を有する抗体又は結合剤は、特定の抗原に、バックグラウンドの少なくとも１０倍結合し、実質的に、サンプル中に存在する他の抗原に多量に結合しない。そのような条件下での抗体又は結合剤への特異的な結合は、抗体又は剤が、その、特定のタンパク質に対する特異性について、選択されていることを必要とする場合がある。所望され、又は適切であるならば、この選択は、分子と交差反応する抗体を、他の種（例えば、マウス又はラット）又は他のサブタイプから取り去ることによって、達成され得る。これ以外にも、一部の態様において、特定の所望の分子と交差反応する抗体又は抗体フラグメントが選択される。
【００７９】
本明細書中で用いられる用語「親和性」は、単一の抗原部位での抗体と抗原との相互作用の強度を指す。各抗原部位内で、抗体「アーム」の可変領域は、抗原と、多数の部位にて、弱い非共有結合力を介して相互作用する；相互作用が多いほど、親和性は強い。
【００８０】
用語「単離された抗体」は、抗原特異性が異なる他の抗体が実質的にない抗体を指す。しかしながら、ある抗原に特異的に結合する単離された抗体は、他の抗原への交差反応性を有する場合がある。さらに、単離された抗体は、他の細胞の物質及び／又は化学物質が実質的にない場合もある。
【００８１】
用語「対応するヒト生殖細胞系の配列」は、ヒト生殖細胞系の免疫グロブリン可変領域配列によってコードされる他の全ての知られている可変領域のアミノ酸配列との比較において判定された、参照可変領域のアミノ酸配列又はサブ配列との最も高いアミノ酸配列同一性を共有する、ヒト可変領域のアミノ酸配列又はサブ配列をコードする核酸配列を指す。対応するヒト生殖細胞系の配列はまた、評価された他の全ての可変領域アミノ酸配列との比較において、参照可変領域のアミノ酸配列又はサブ配列とのアミノ酸配列同一性が最も高い、ヒト可変領域のアミノ酸配列又はサブ配列を指し得る。対応するヒト生殖細胞系の配列は、フレームワーク領域のみ、相補性決定領域のみ、フレームワーク及び相補性決定領域、可変セグメント（先で定義される）、又は可変領域を含む配列若しくはサブ配列の他の組合せであってよい。配列同一性が、本明細書中に記載される方法を用いて判定され得、例えば、当該技術において知られているＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮ、又は別のアラインメントアルゴリズムを用いて２つの配列をアラインするものがある。対応するヒト生殖細胞系の核酸配列又はアミノ酸配列は、参照可変領域の核酸配列又はアミノ酸配列との配列同一性が、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％であり得る。
【００８２】
種々の免疫アッセイフォーマットが、特定のタンパク質と特異的に免疫反応性である抗体を選択するのに用いられてよい。例えば、固相ＥＬＩＳＡ免疫アッセイが、タンパク質と特異的に免疫反応性である抗体を選択するのにルーチン的に用いられる（特異的な免疫反応性を判定するのに用いられ得る免疫アッセイのフォーマット及び条件の説明について、例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ＆  Ｌａｎｅ，Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（１９９８）参照）。典型的には、特異的な、又は選択的な結合反応が、シグナルを、バックグラウンドシグナルの少なくとも２倍、より典型的にはバックグラウンドの少なくとも１０〜１００倍生じさせることとなる。
【００８３】
用語「平衡解離定数（Ｋｄ［Ｍ］）」は、会合速度定数（ｋａ［ｓ−１，Ｍ−１］）で割った解離速度定数（ｋｄ［ｓ−１］）を指す。平衡解離定数は、当該技術において知られているあらゆる方法を用いて測定され得る。本開示の抗体は通常、平衡解離定数が約１０−７又は１０−８Ｍ未満、例えば約１０−９Ｍ又は１０−１０Ｍ未満、一部の態様では、約１０−１１Ｍ、１０−１２Ｍ、又は１０−１３Ｍ未満となるであろう。
【００８４】
用語「バイオアベイラビリティ」は、患者に投与される薬物の所定の量の全身的アベイラビリティ（すなわち血液／血漿レベル）を指す。バイオアベイラビリティは、投与された剤形から全身循環系に達する薬物の時間（速度）及び総量（程度）の双方の測定値を示す絶対値である。
【００８５】
本明細書中で用いられるフレーズ「から本質的になる」は、方法又は組成物中に含まれる活性薬剤の属又は種、及び当該方法又は組成物の使用目的について不活性のあらゆる賦形剤を指す。一部の態様において、フレーズ「から本質的になる」は明示的に、本開示の抗体薬物コンジュゲート以外の１つ以上の追加の活性剤の包含を除外する。一部の態様において、フレーズ「から本質的になる」は明示的に、本開示の抗体薬物コンジュゲート及び同時投与される第２の剤以外の１つ以上の追加の活性剤の包含を除外する。
【００８６】
用語「アミノ酸」は、天然に存在するアミノ酸、合成アミノ酸、及び非天然のアミノ酸、並びにアミノ酸類似体、及び天然に存在するアミノ酸と同様に機能するアミノ酸模擬物を指す。天然に存在するアミノ酸は、遺伝的コードによってコードされるアミノ酸、並びに後に修飾されたアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタマート、及びＯ−ホスホセリンである。アミノ酸類似体は、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的な化学構造を有する化合物、すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基、及びＲ基に結合したα−炭素、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。そのような類似体は、修飾されたＲ基（例えばノルロイシン）又は修飾されたペプチド骨格を有するが、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的な化学構造を保持する。アミノ酸模擬物は、アミノ酸の一般的な化学構造と異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸と同様に機能する化合物を指す。
【００８７】
用語「保存的に修飾された変異体」は、アミノ酸配列及び核酸配列の双方に用いられる。特定の核酸配列に関して、保存的に修飾された変異体は、同じ、若しくは本質的に同じアミノ酸配列をコードする核酸を、又は、核酸がアミノ酸配列をコードしない場合、本質的に同じ配列を指す。遺伝的コードの縮重によって、多数の機能的に同じ核酸が、所定のいずれかのタンパク質をコードする。例えば、コドンＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧ、及びＧＣＵは全て、アミノ酸アラニンをコードする。ゆえに、コドンによってアラニンが特定される全ての位置にて、コドンは、記載される対応するコドンのいずれかに変更され得、コードされるポリペプチドを変更することはない。そのような核酸変異は「サイレント変異」であり、これは、保存的に修飾された変異の一種である。また、ポリペプチドをコードする本明細書中の全ての核酸配列が、核酸の全ての可能なサイレント変異を記載する。当業者であれば、核酸中の各コドン（通常メチオニンの唯一のコドンであるＡＵＧ、及び通常トリプトファンの唯一のコドンであるＴＧＧ以外）が、機能的に同じ分子を産するように修飾され得ることを認識するであろう。したがって、ポリペプチドをコードする核酸の各サイレント変異が、記載される各配列内に潜在する。
【００８８】
ポリペプチド配列について、「保存的に修飾された変異体」は、化学的に類似するアミノ酸でアミノ酸を置換する、ポリペプチド配列に対する個々の置換、欠失、又は付加を含む。機能的に類似するアミノ酸を提供する保存的置換の表が、当該技術において周知である。そのような保存的に修飾された変異体は、多型の変異体、異種間相同体、及び対立遺伝子にも加えられ、これらを排除しない。以下の８つの群が、互いに保存的置換であるアミノ酸を含有する：１）アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）；２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）；５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）；７）セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）；及び８）システイン（Ｃ）、メチオニン（Ｍ）（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（１９８４）参照）。一部の態様において、用語「保存的配列修飾」は、アミノ酸配列を含有する抗体の結合特性に大きく影響を及ぼさない、又はこれを大きく変更しないアミノ酸修飾を指すのに用いられる。
【００８９】
本明細書中で用いられる用語「最適化された」は、産生細胞又は産生生物、通常真核細胞、例えば、酵母細胞、ピキア（Ｐｉｃｈｉａ）属細胞、真菌細胞、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）、又はヒト細胞において好まれるコドンを用いてアミノ酸配列をコードするように変更されたヌクレオチド配列を指す。最適化されたヌクレオチド配列は、「親」配列としても知られている出発ヌクレオチド配列によって元々コードされるアミノ酸配列を完全に、又は可能な限り保持するように操作されている。
【００９０】
２つ以上の核酸配列又はポリペプチド配列の文脈における用語「同じパーセント」又は「パーセント同一性」は、２つ以上の配列又はサブ配列が同じである程度を指す。２つの配列は、比較される領域にわたってアミノ酸又はヌクレオチドの配列が同じであるならば、「同じである」。２つの配列は、比較ウィンドウ、又は指定された領域上で、以下の配列比較アルゴリズムの１つを用いて、又は手動のアラインメント及び視覚による検査によって測定されて、最大一致について比較かつアラインされた場合に、アミノ酸残基又はヌクレオチドの特定のパーセンテージが同じである（すなわち、特定の領域にわたって、又は、特定されない場合には、配列全体にわたって、６０％の同一性、場合によっては６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％の同一性）ならば、「実質的に同じである」。場合によっては、同一性は、長さが少なくとも約３０ヌクレオチド（又は１０アミノ酸）である領域、より好ましくは長さが１００〜５００ヌクレオチド又は１０００ヌクレオチド以上（又は２０、５０、２００アミノ酸以上）である領域にわたって存在する。
【００９１】
配列比較について、典型的には、１つの配列が、試験配列が比較される参照配列として機能する。配列比較アルゴリズムを用いて、試験配列及び参照配列がコンピュータに入力されて、必要に応じて、サブ配列座標（ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅ）が指定されて、配列アルゴリズムプログラムパラメータが指定される。デフォルトのプログラムパラメータが用いられてもよいし、代替パラメータが指定されてもよい。次に、配列比較アルゴリズムは、プログラムパラメータに基づいて、参照配列に対する試験配列のパーセント配列同一性を算出する。
【００９２】
本明細書中で用いられる「比較ウィンドウ」は、２つの配列が最適にアラインされた後に、配列が、同じ数の隣接位置の参照配列と比較され得る、２０〜６００、通常約５０〜約２００、さらに通常約１００〜約１５０からなる群から選択される隣接位置の数のいずれか１つのセグメントへの言及を含む。比較のための配列アラインメント方法が、当該技術において周知である。比較のための最適な配列アラインメントが、例えば、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２ｃ（１９７０）の局所的相同性アルゴリズムによって、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３の相同性アラインメントアルゴリズムによって、Ｐｅａｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：２４４４（１９８８）の類似性検索方法によって、これらのアルゴリズムのコンピュータ化されたインプリメンテーション（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩにおける、ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ）によって、又は手動アラインメント及び視覚による検査（例えば、Ｂｒｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００３参照）によって行われ得る。
【００９３】
パーセント配列同一性及び配列類似性を判定するのに適したアルゴリズムの２つの例として、ＢＬＡＳＴアルゴリズム及びＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズムがあり、これらはそれぞれ、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２，１９７７；及びＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０，１９９０に記載されている。ＢＬＡＳＴ分析を実行するためのソフトウェアが、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎから一般に入手可能である。このアルゴリズムは、最初に、高いスコアリング配列対（ＨＳＰ）を、クエリ配列中の長さＷのショートワードを特定することによって特定することを包含し、これは、データベース配列において同じ長さのワードとアラインされた場合に、一部の正の値の閾値スコアＴにマッチし、又はこれを満たすものである。Ｔは、近隣ワードスコア閾値と呼ばれる（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，前掲）。これらの最初の近隣ワードヒットは、これを含有するより長いＨＳＰを見出すための検索を開始させるシードとして機能する。ワードヒットは、累積アラインメントスコアが増大し得る限り、各配列に沿って両方向に延長される。累積スコアが、ヌクレオチド配列について、パラメータＭ（一対のマッチング残基についての報酬スコア；常に＞０）及びＮ（ミスマッチング残基についてのペナルティスコア；常に＜０）を用いて算出される。アミノ酸配列について、スコアリングマトリックスが、累積スコアを算出するのに用いられる。各方向におけるワードヒットの延長は、次の場合に停止する：累積アラインメントスコアが、その最大達成値から量Ｘ落ちた場合；累積スコアが、１つ以上の負の値のスコアリング残基アラインメントの蓄積に起因して、ゼロ以下になった場合；又はいずれかの配列の端部に達した場合。ＢＬＡＳＴアルゴリズムのパラメータＷ、Ｔ、及びＸは、アラインメントの感度及び速度を判定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列用）は、デフォルトとして、１１のワード長（Ｗ）、１０の予想（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝−４、及び双方の鎖の比較を用いる。アミノ酸配列について、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、デフォルトとして３のワード長、及び１０の予想（Ｅ）、並びにＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ａｎｄ  Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：１０９１５参照）は、５０のアラインメント（Ｂ）、１０の予想（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝−４、及び双方の鎖の比較を用いる。
【００９４】
ＢＬＡＳＴアルゴリズムはまた、２つの配列間の類似性の統計学的分析を実行する（例えば、Ｋａｒｌｉｎ  ａｎｄ  Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：５８７３−５７８７，１９９３参照）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって提供される類似性の一尺度が、最小和確率（Ｐ（Ｎ））であり、これは、２つのヌクレオチド配列又はアミノ酸配列間のマッチが偶然によって起こるであろう確率の指標を提供する。例えば、核酸は、参照核酸に対する試験核酸の比較において最小和確率が約０．２未満、より好ましくは約０．０１未満、最も好ましくは約０．００１未満であれば、参照配列に類似すると考える。
【００９５】
２つのアミノ酸配列間のパーセント同一性はまた、Ｅ．Ｍｅｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒ，Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．４：１１−１７（１９８８）のアルゴリズムを用いて（これは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている）、ＰＡＭ１２０加重残留表（ｗｅｉｇｈｔ  ｒｅｓｉｄｕｅ  ｔａｂｌｅ）、１２のギャップ長ペナルティ、及び４のギャップペナルティを用いて判定され得る。加えて、２つのアミノ酸配列間のパーセント同一性は、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４−４５３（１９７０）アルゴリズムを用いて（これは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍにて入手可能）において、ＧＡＰプログラムに組み込まれている）、Ｂｌｏｓｓｏｍ６２マトリックス又はＰＡＭ２５０マトリックス、並びに１６、１４、１２、１０、８、６、又は４のギャップ加重及び１、２、３、４、５、又は６の長さ加重を用いて判定され得る。
【００９６】
先で注目された配列同一性のパーセンテージ以外の、２つの核酸配列又はポリペプチドが実質的に同じであることの別の指標として、第１の核酸によってコードされるポリペプチドが、下記のように、免疫学的に、第２の核酸によってコードされるポリペプチドに対して高められた抗体と交差反応性であることがある。ゆえに、ポリペプチドは典型的に、第２のポリペプチドと、例えば、２つのペプチドが保存的置換によってのみ異なる場合、実質的に同じである。２つの核酸配列が実質的に同じであることの別の指標として、下記のように、２つの分子又はそれらの相補体が、ストリンジェントな条件下で互いにハイブリダイズすることがある。２つの核酸配列が実質的に同じであることのさらに別の指標として、配列を増幅させるのに同じプライマーが用いられ得ることがある。
【００９７】
用語「核酸」は、本明細書中で、用語「ポリヌクレオチド」と互換的に用いられ、一本鎖の形態又は二本鎖の形態のデオキシリボヌクレオチド又はリボヌクレオチド、及びそれらのポリマーを指す。当該用語は、知られているヌクレオチド類似体又は修飾された骨格残基若しくは結合を含有する核酸を包含し、これらは、合成核酸、天然に存在する核酸、及び天然に存在しない核酸であり、参照核酸と類似の結合特性を有し、そして参照ヌクレオチドと類似の様式で代謝される。そのような類似体の例として、限定されないが、ホスホロチオアート、ホスホロアミダート、メチルホスホナート、キラルメチルホスホナート、２−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、ペプチド核酸（ＰＮＡ）が挙げられる。
【００９８】
特に明記されない限り、特定の核酸配列はまた、暗に、その保存的に修飾された変異体（例えば縮重コドン置換）及び相補配列、並びに明示的に示される配列を包含する。具体的には、以下で詳述されるように、縮重コドン置換は、１つ以上の選択された（又は全ての）コドンの第３の位置が、混合塩基及び／又はデオキシイノシン残基で置換されている配列を生じさせることによって、達成され得る（Ｂａｔｚｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．１９：５０８１；Ｏｈｔｓｕｋａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５−２６０８；及びＲｏｓｓｏｌｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ  ８：９１−９８）。
【００９９】
核酸の文脈における用語「作動可能に結合される」は、２つ以上のポリヌクレオチド（例えばＤＮＡ）セグメント間の機能的関係を指す。典型例として、転写調節配列の、転写される配列との機能的関係を指す。例えば、プロモータ又はエンハンサ配列は、適切な宿主細胞又は他の発現系において、コード配列の転写を刺激又は調節するならば、コード配列に作動可能に結合されている。通常、転写される配列に作動可能に結合されるプロモータ転写調節配列は、転写される配列に物理的に隣接している、すなわちシス作用性である。しかしながら、一部の転写調節配列、例えばエンハンサは、転写を増強するコード配列に物理的に隣接する必要もないし、それに近接して位置決めされる必要もない。
【０１００】
用語「ポリペプチド」及び「タンパク質」は、アミノ酸残基のポリマーを指すのに、本明細書中で互換的に用いられる。当該用語は、１つ以上のアミノ酸残基が、対応する天然に存在するアミノ酸の人工化学模擬物であるアミノ酸ポリマーに、そして天然に存在するアミノ酸ポリマー及び天然に存在しないアミノ酸ポリマーに用いられる。特に明記されない限り、特定のポリペプチド配列はまた、暗に、その保存的に修飾された変異体を包含する。
【０１０１】
本明細書中で用いられる用語「コンジュゲート」又は「抗体薬物コンジュゲート」は、抗体又はその抗原結合フラグメントの、別の剤、例えば、化学療法剤、毒物、免疫療法剤、及びイメージングプローブとの結合を指す。結合は、共有結合、又は非共有結合性の相互作用、例えば静電力を介するものがあり得る。当該技術において知られている種々のリンカーが、コンジュゲートを形成するのに使用され得る。加えて、コンジュゲートは、コンジュゲートをコードするポリヌクレオチドから発現され得る融合タンパク質の形態で提供され得る。本明細書中で用いられる「融合タンパク質」は、別々のタンパク質（ペプチド及びポリペプチドが挙げられる）を元々コードする２つ以上の遺伝子又は遺伝子フラグメントの結合を介して生じたタンパク質を指す。融合遺伝子の翻訳は、機能特性が元の各タンパク質に由来する単一のタンパク質をもたらす。
【０１０２】
用語「対象」は、ヒト及び非ヒト動物を含む。非ヒト動物として、全ての脊椎動物、例えば哺乳類及び非哺乳類、例えば非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、及び爬虫類が挙げられる。示される場合以外は、用語「患者」又は「対象」は、本明細書中で互換的に用いられる。
【０１０３】
本明細書中で用いられる用語「毒物」、「細胞毒素」、又は「細胞毒性剤」は、細胞の成長及び増殖に有害であり、かつ細胞又は悪性腫瘍を弱め、阻害し、又は破壊するように作用し得るあらゆる剤を指す。
【０１０４】
本明細書中で用いられる用語「抗癌剤」は、細胞増殖障害、例えば癌を処置するのに用いられ得るあらゆる剤を指し、以下に限定されないが、細胞毒性剤、化学療法剤、放射線療法及び放射線療法剤、標的抗癌剤、並びに免疫療法剤が挙げられる。
【０１０５】
本明細書中で用いられる用語「薬物部分」又は「ペイロード」は、抗体若しくは抗原結合フラグメントにコンジュゲートされる、又は抗体若しくは抗原結合フラグメントへのコンジュゲーションに適した化学部分を指し、そして本明細書中に開示される、所望の治療特性又は診断特性を有する抗体薬物コンジュゲートのあらゆる治療剤又は診断薬及び代謝物質、例えば、抗癌剤、抗炎症剤、抗感染剤（例えば、抗真菌剤、抗菌剤、駆虫薬、抗ウイルス剤）又は麻酔薬を挙げることができる。特定の態様において、薬物部分は、Ｅｇ５インヒビタ、Ｖ−ＡＴＰアーゼインヒビタ、ＨＳＰ９０インヒビタ、ＩＡＰインヒビタ、ｍＴｏｒインヒビタ、微小管安定化剤、微小管不安定化剤、オーリスタチン、ドラスタチン、マイタンシノイド、ＭｅｔＡＰ（メチオニンアミノペプチダーゼ）、タンパク質ＣＲＭ１の核搬出のインヒビタ、ＤＰＰＩＶインヒビタ、ミトコンドリアにおけるホスホリル転移反応のインヒビタ、タンパク質合成インヒビタ、キナーゼインヒビタ、ＣＤＫ２インヒビタ、ＣＤＫ９インヒビタ、プロテアソームインヒビタ、キネシンインヒビタ、ＨＤＡＣインヒビタ、ＤＮＡ損傷剤、ＤＮＡアルキル化剤、ＤＮＡ挿入剤、ＤＮＡマイナーグルーブバインダ、ＲＮＡポリメラーゼインヒビタ、アマニチン、スプライセオソームインヒビタ、トポイソメラーゼインヒビタ、及びＤＨＦＲインヒビタから選択される。これらのそれぞれを、本開示の抗体及び方法と適合するリンカーに取り付ける方法が、当該技術において知られている。例えば、Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，ｖｏｌ．５２５，４４５−４５７参照。加えて、ペイロードは、生物物理学的プローブ、フルオロフォア、スピン標識、赤外線プローブ、アフィニティプローブ、キレータ、分光学的プローブ、放射性プローブ、脂質分子、ポリエチレングリコール、ポリマー、スピン標識、ＤＮＡ、ＲＮＡ、タンパク質、ペプチド、表面、抗体、抗体フラグメント、ナノ粒子、量子ドット、リポソーム、ＰＬＧＡ粒子、糖、又は多糖であってよい。
【０１０６】
用語「癌」は、原発性悪性腫瘍（例えば、細胞が、対象の体内で、元の腫瘍の部位以外の部位に移行しなかったもの）及び続発性悪性腫瘍（例えば、転移（元の腫瘍の部位と異なる第２の部位への腫瘍細胞の移行）から生じたもの）を含む。
【０１０７】
用語「ｃＫＩＴ」（ＫＩＴ、ＰＢＴ、ＳＣＦＲ、Ｃ−Ｋｉｔ、ＣＤ１１７としても知られている）は、受容体チロシンキナーゼＩＩＩファミリのメンバであるチロシンキナーゼ受容体を指す。ヒトｃＫＩＴアイソフォームの核酸配列及びアミノ酸配列は知られており、ＧｅｎＢａｎｋにおいて以下の登録番号で公開されている：
ＮＭ＿０００２２２．２→ＮＰ＿０００２１３．１  肥満／幹細胞成長因子受容体キットアイソフォーム１前駆体；
ＮＭ＿００１０９３７７２．１→ＮＰ＿００１０８７２４１．１  肥満／幹細胞成長因子受容体キットアイソフォーム２前駆体。
構造的に、ｃＫＩＴ受容体は、Ｉ型膜貫通タンパク質であり、細胞外ドメイン中にシグナルペプチド、５  Ｉｇ様Ｃ２ドメインを含有し、かつその細胞内ドメイン中にプロテインキナーゼドメインを有する。本明細書中で用いられる用語「ｃＫＩＴ」は、ｃＫＩＴタンパク質の天然に存在する全てのアイソフォーム又はその変異体をまとめて指すのに用いられる。
【０１０８】
用語「変異体」は、参照ポリペプチドと実質的に同じアミノ酸配列を有し、又は実質的に同じヌクレオチド配列によってコードされ、かつ参照ポリペプチドの１つ以上の活性を有することができるポリペプチドを指す。例えば、変異体は、参照ポリペプチドとの配列同一性が約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上であり得る一方、参照ポリペプチドの１つ以上の活性を保持し得る。
【０１０９】
本明細書中で用いられる用語、いずれかの疾患又は障害を「処置する」、「処置すること」、又はその「処置」は、一態様において、疾患又は障害を改善すること（すなわち、疾患の進行、又はその臨床病徴の少なくとも１つを遅らせ、抑制し、又は軽減すること）を指す。別の態様において、「処置する」、「処置すること」、又は「処置」は、患者によって識別され得ないものを含む少なくとも１つの物理的パラメータを軽減又は改善することを指す。さらに別の態様において、「処置する」、「処置すること」、又は「処置」は、物理的に（例えば、識別できる病徴の安定化）、生理的に（例えば、物理的パラメータの安定化）、又は両方で、疾患又は障害を調節することを指す。さらに別の態様において、「処置する」、「処置すること」、又は「処置」は、疾患又は障害の発症又は進行を予防し、又は遅延させることを指す。
【０１１０】
用語「治療的に許容可能な量」又は「治療的に有効な用量」は、互換的に、所望の結果（すなわち、腫瘍サイズの引下げ、腫瘍増殖の阻害、転移の予防、ウイルス、細菌、真菌、又は寄生虫感染の阻害又は予防）をもたらすのに十分な量を指す。一部の態様において、治療的に許容可能な量は、不所望の副作用を誘導も引起しもしない。治療的に許容可能な量は、最初に低い用量を投与してから、当該用量を、所望の効果が達成されるまで段々に増大させることによって、決定され得る。本開示の分子の「治療的に有効な投薬量」は、癌と関連する病徴が挙げられる病徴の発症を予防することができ、又は病徴の重症度を軽減することができる。
【０１１１】
用語「同時投与」は、個人の血液中での２つの活性剤の同時の存在を指す。同時投与される活性剤は、同時に送達されても、順次送達されてもよい。
【０１１２】
本明細書中で用いられる用語「チオールマレイミド」は、チオールの、マレイミドとの反応によって形成される基を指し、以下の式を有する：
【化３】
2021527429.tif 000004
式中、Ｙ及びＺは、チオールマレイミド結合を介して連結されることとなる基であり、リンカー成分、抗体、又はペイロードを含み得る。チオールマレイミドは、以下の開環構造体
【化４】
2021527429.tif 000005
を形成し得る。
【０１１３】
本明細書中で用いられる「切断可能な」は、結合基又はリンカー成分が、共有結合によって２つの部分を連結するが、生理的に適切な条件下で分解して、部分間の共有結合を切断することを指し、典型的には、切断可能な結合基は、細胞外よりも細胞内の環境においてインビボでより迅速に切断されて、ペイロードの放出を標的細胞の内側で選択的に起こす。切断は、酵素的であっても非酵素的であってもよいが、通常、抗体を分解させることなくペイロードを抗体から放出する。切断は、結合基又はリンカー成分の一部分を、ペイロードに取り付けたままにし得、又は結合基のいかなる残基もなくペイロードを放出し得る。
【０１１４】
本明細書中で用いられる「切断可能でない」は、結合基又はリンカー成分が、生理学的条件下での分解に特に感受性でないことを指し、例えば結合基又はリンカー成分は、少なくとも、コンジュゲートの抗体又は抗原結合フラグメント部分と同じくらい安定している。そのような結合基は時折、「安定している」と呼ばれ、これは、抗体又は抗原結合フラグメントそれ自体が少なくとも部分的に分解される、すなわち、抗体又は抗原結合フラグメントの分解が、インビボでの結合基の切断に先行するまで、ペイロードを抗体又は抗原結合フラグメントに連結されたままで維持するほど、分解に対して十分に耐性を示すことを意味する。安定した、又は切断可能でない結合基を有するＡＤＣの抗体部分の分解は、結合基の一部又は全て、例えば、抗体由来の１つ以上のアミノ酸基を、インビボで送達されるペイロード又は薬物部分に取り付けたままにし得る。
【０１１５】
薬物部分（Ｄ）
一態様において、本発明の薬物部分は、式（Ａ）：
【化５】
2021527429.tif 000006
の化合物であり、式中：
Ｒ１は、
【化６】
2021527429.tif 000007
であり；
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３、−（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、−（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、又は場合によっては−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、若しくは１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
各Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及び場合によっては１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；そして
各Ｒ４は、Ｈ及びＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択される。
【０１１６】
一態様において、本発明の薬物部分は、式（Ｂ）
【化７】
2021527429.tif 000008
の化合物であり、
式中：
Ｒ１は、
【化８】
2021527429.tif 000009
であり；
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３、−（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、−（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、又は場合によっては−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、若しくは１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
各Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及び場合によっては１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；そして
各Ｒ４は、Ｈ及びＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択される。
【０１１７】
本発明の薬物部分の特定の態様及び例を、列挙した更なる実施形態の以下のリストに示す。各実施形態において特定した特徴を、他の特定の特徴と組み合わせて、本発明の更なる実施形態を提供してもよいことが認識されるであろう。
【０１１８】
実施形態１．式（Ａ−１）：
【化９】
2021527429.tif 000010
又はその薬学的に許容される塩の構造を有し、
式中：
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３、−（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、−（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、又は場合によっては−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、若しくは１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
各Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及び場合によっては１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；そして
各Ｒ４は、Ｈ及びＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択される、式（Ａ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１１９】
実施形態２．式（Ａ−２）：
【化１０】
2021527429.tif 000011
又はその薬学的に許容される塩の構造を有し、
式中：
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３、−（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、−（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、又は場合によっては−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、若しくは１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
各Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及び場合によっては１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；そして
各Ｒ４は、Ｈ及びＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択される、式（Ａ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１２０】
実施形態３．式（Ａ−３）：
【化１１】
2021527429.tif 000012
又はその薬学的に許容される塩の構造を有し、
式中：
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３、−（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、−（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、又は場合によっては−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、若しくは１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
各Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及び場合によっては１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；そして
各Ｒ４は、Ｈ及びＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択される、式（Ａ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１２１】
実施形態２．式（Ａ−４）：
【化１２】
2021527429.tif 000013
又はその薬学的に許容される塩の構造を有し、
式中：
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３、−（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、−（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、又は場合によっては−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、若しくは１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
各Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及び場合によっては１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；そして
各Ｒ４は、Ｈ及びＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択される、式（Ａ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１２２】
実施形態３．Ｒ２は、Ｈ又はＣ１〜Ｃ６アルキルである、式（Ａ）、式（Ａ−１）、式（Ａ−２）、式（Ａ−３）、若しくは式（Ａ−４）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１２３】
実施形態４．Ｒ２は、Ｈ又はメチルである、式（Ａ）、式（Ａ−１）、式（Ａ−２）、式（Ａ−３）、若しくは式（Ａ−４）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１２４】
実施形態５．Ｒ２はＨである、式（Ａ）、式（Ａ−１）、式（Ａ−２）、式（Ａ−３）、若しくは式（Ａ−４）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１２５】
実施形態６．Ｒ２はメチルである、式（Ａ）、式（Ａ−１）、式（Ａ−２）、式（Ａ−３）、若しくは式（Ａ−４）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１２６】
実施形態７．化合物は
【化１３】
2021527429.tif 000014
である、式（Ａ）、式（Ａ−１）、若しくは式（Ａ−３）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１２７】
実施形態８．化合物は
【化１４】
2021527429.tif 000015
である、式（Ａ）、式（Ａ−１）、若しくは式（Ａ−３）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１２８】
実施形態９．化合物は
【化１５】
2021527429.tif 000016
である、式（Ａ）、式（Ａ−１）、若しくは式（Ａ−３）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１２９】
実施形態１０．化合物は
【化１６】
2021527429.tif 000017
である、式（Ａ）、式（Ａ−１）、若しくは式（Ａ−３）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１３０】
実施形態１１．化合物は
【化１７】
2021527429.tif 000018
である、式（Ａ）、式（Ａ−２）、若しくは式（Ａ−４）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１３１】
実施形態１２．化合物は
【化１８】
2021527429.tif 000019
である、式（Ａ）、式（Ａ−２）、若しくは式（Ａ−４）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１３２】
実施形態１３．化合物は
【化１９】
2021527429.tif 000020
である、式（Ａ）、式（Ａ−２）、若しくは式（Ａ−４）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１３３】
実施形態１４．化合物は
【化２０】
2021527429.tif 000021
である、式（Ａ）、式（Ａ−２）、若しくは式（Ａ−４）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１３４】
実施形態１５．式（Ｂ−１）：
【化２１】
2021527429.tif 000022
又はその薬学的に許容される塩の構造を有し、
式中：
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３、−（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、−（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、又は場合によっては−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、若しくは１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
各Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及び場合によっては１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；そして
各Ｒ４は、Ｈ及びＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択される、式（Ｂ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１３５】
実施形態１６．式（Ｂ−２）：
【化２２】
2021527429.tif 000023
又はその薬学的に許容される塩の構造を有し、
式中：
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３、−（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、−（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、又は場合によっては−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、若しくは１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
各Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及び場合によっては１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；そして
各Ｒ４は、Ｈ及びＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択される、式（Ｂ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１３６】
実施形態１７．式（Ｂ−３）：
【化２３】
2021527429.tif 000024
又はその薬学的に許容される塩の構造を有し、
式中：
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３、−（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、−（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、又は場合によっては−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、若しくは１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
各Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及び場合によっては１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；そして
各Ｒ４は、Ｈ及びＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択される、式（Ｂ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１３７】
実施形態１８．式（Ｂ−４）：
【化２４】
2021527429.tif 000025
又はその薬学的に許容される塩の構造を有し、
式中：
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３、−（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、−（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、又は場合によっては−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、若しくは１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
各Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及び場合によっては１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；そして
各Ｒ４は、Ｈ及びＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択される、式（Ｂ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１３８】
実施形態１９．Ｒ２は、Ｈ又はＣ１〜Ｃ６アルキルである、式（Ｂ）、式（Ｂ−１）、式（Ｂ−２）、式（Ｂ−３）、若しくは式（Ｂ−４）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１３９】
実施形態２０．Ｒ２は、Ｈ又はメチルである、式（Ｂ）、式（Ｂ−１）、式（Ｂ−２）、式（Ｂ−３）、若しくは式（Ｂ−４）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１４０】
実施形態２１．Ｒ２はＨである、式（Ｂ）、式（Ｂ−１）、式（Ｂ−２）、式（Ｂ−３）、若しくは式（Ｂ−４）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１４１】
実施形態２２．Ｒ２はメチルである、式（Ｂ）、式（Ｂ−１）、式（Ｂ−２）、式（Ｂ−３）、若しくは式（Ｂ−４）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１４２】
実施形態２３．化合物は
【化２５】
2021527429.tif 000026
である、式（Ｂ）、式（Ｂ−１）、若しくは式（Ｂ−３）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１４３】
実施形態２４．化合物は
【化２６】
2021527429.tif 000027
である、式（Ｂ）、式（Ｂ−１）、若しくは式（Ｂ−３）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１４４】
実施形態２５．化合物は
【化２７】
2021527429.tif 000028
である、式（Ｂ）、式（Ｂ−１）、若しくは式（Ｂ−３）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１４５】
実施形態２６．化合物は
【化２８】
2021527429.tif 000029
である、式（Ｂ）、式（Ｂ−１）、若しくは式（Ｂ−３）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１４６】
実施形態２７．化合物は
【化２９】
2021527429.tif 000030
である、式（Ｂ）、式（Ｂ−２）、若しくは式（Ｂ−４）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１４７】
実施形態２８．化合物は
【化３０】
2021527429.tif 000031
である、式（Ｂ）、式（Ｂ−２）、若しくは式（Ｂ−４）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１４８】
実施形態２９．化合物は
【化３１】
2021527429.tif 000032
である、式（Ｂ）、式（Ｂ−２）、若しくは式（Ｂ−４）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１４９】
実施形態３０．化合物は
【化３２】
2021527429.tif 000033
である、式（Ａ）、式（Ａ−２）、若しくは式（Ａ−４）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１５０】
リンカー−薬物部分（ＬＢ−（Ｄ）ｎ）
一態様において、本発明のリンカー−薬物部分は、リンカー（ＬＢ）に共有結合的に付着した１つ以上の細胞毒素を含み、１つ以上の細胞毒素は、式（Ａ）、式（Ａ−１）、式（Ａ−２）、式（Ａ−３）、式（Ａ−４）、式（Ｂ）、式（Ｂ−１）、式（Ｂ−２）、式（Ｂ−３）、若しくは式（Ｂ−４）の化合物、又は実施形態７〜１４のいずれか１つ、若しくは実施形態２３〜３０のいずれか１つの化合物から独立して選択される。
【０１５１】
一態様において、本発明のリンカー−薬物部分は、リンカー（ＬＢ）に共有結合的に付着した１つ以上の細胞毒素を含み、１つ以上の細胞毒素は、式（Ａ）、式（Ａ−１）、式（Ａ−２）、式（Ａ−３）、若しくは式（Ａ−４）の化合物、又は実施形態７〜１４のいずれか１つの化合物から独立して選択される。
【０１５２】
一態様において、本発明のリンカー−薬物部分は、リンカー（ＬＢ）に共有結合的に付着した１つ以上の細胞毒素を含み、１つ以上の細胞毒素は、式（Ｂ）、式（Ｂ−１）、式（Ｂ−２）、式（Ｂ−３）、若しくは式（Ｂ−４）の化合物、又は実施形態２３〜３０のいずれか１つの化合物から独立して選択される。
【０１５３】
一態様において、本発明のリンカー−薬物部分は、式（Ｃ）
【化３３】
2021527429.tif 000034
の構造を有する化合物、又はその立体異性体若しくは薬学的に許容される塩であり、
式中：
ＲＡは、
【化３４】
2021527429.tif 000035
であり；
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３、−（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、−（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、又は場合によっては−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、若しくは１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
各Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及び場合によっては１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；
各Ｒ４は、Ｈ及びＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；
Ｒ５は、−Ｌ１Ｒ１４、−Ｌ１Ｒ２４、−Ｌ１Ｒ３４、又は−Ｌ１Ｒ４４であり；
Ｌ１は、−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ２Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ２Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍＸ４（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＸ４（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ２Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍＸ４（ＣＨ２）ｍ−＊＊、又は−Ｘ２Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＸ４（ＣＨ２）ｍ−＊＊であり、式中、＊＊は、Ｒ１４への付着点を示し；
Ｘ１は、
【化３５】
2021527429.tif 000036
であり、式中、＊＊は、−ＮＨ−又はＸ２への付着点を示し；
Ｘ２は、
【化３６】
2021527429.tif 000037
であり、式中、＊＊は、−ＮＨ−への付着点を示し；
Ｘ３は、
【化３７】
2021527429.tif 000038
であり、式中、＊＊は、−ＮＨ−への付着点を示し；
Ｘ４は、
【化３８】
2021527429.tif 000039
であり、式中、＊は、付着点がＲ１４、Ｒ２４、Ｒ３４、又はＲ４４に向いていることを示し；
Ｒ１４は、
【化３９】
2021527429.tif 000040
−Ｎ３、−ＯＮＨ２、−ＮＲ６Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２、ＳＨ、−ＳＳＲ７、−Ｓ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−ＮＲ６Ｓ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−ＮＲ６Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｂｒ、−ＮＲ６Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｉ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｂｒ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｉ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＮＨ２、
【化４０】
2021527429.tif 000041
−ＣＯ２Ｈ、−ＮＨ２、
【化４１】
2021527429.tif 000042
【化４２】
2021527429.tif 000043
であり；
Ｒ２４は、
【化４３】
2021527429.tif 000044
であり；
Ｒ３４は、−Ｎ３、−ＯＮＨ２、−ＮＲ７Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＣＯ２Ｈ、−ＮＨ２、
【化４４】
2021527429.tif 000045
又は−ＮＲ７Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｒ８であり；
各Ｒ６は、Ｈ及びＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；
Ｒ７は、２−ピリジル又は４−ピリジルであり；
Ｒ８は、−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣＨＲ９ＮＨ２であり；
Ｒ９は、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ７であり；
各Ｒ１０は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、及びＯＨから独立して選択され；
各Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、−ＮＨ２、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＣＮ、−ＮＯ２、及びＯＨから独立して選択され；
各Ｒ１２は、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、フルオロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジルオキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１〜４アルコキシ、及び−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１〜４アルキルから独立して選択され；
各ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０から独立して選択され、そして
各ｐは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、及び１４から独立して選択される。
【０１５４】
本発明のリンカー−薬物部分の特定の態様及び例を、列挙した更なる実施形態の以下のリストに示す。各実施形態において特定した特徴を、他の特定の特徴と組み合わせて、本発明の更なる実施形態を提供してもよいことが認識されるであろう。
【０１５５】
実施形態３１．式（Ｃ−１）：
【化４５】
2021527429.tif 000046
又はその薬学的に許容される塩の構造を有し、
式中：Ｒ２及びＲ５は、式（Ｃ）の化合物について先で定義される通りである、式（Ｃ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１５６】
実施形態３２．式（Ｃ−２）：
【化４６】
2021527429.tif 000047
又はその薬学的に許容される塩の構造を有し、
式中：Ｒ２及びＲ５は、式（Ｃ）の化合物について先で定義される通りである、式（Ｃ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１５７】
実施形態３３．式（Ｃ−３）：
【化４７】
2021527429.tif 000048
又はその薬学的に許容される塩の構造を有し、
式中：Ｒ２及びＲ５は、式（Ｃ）の化合物について先で定義される通りである、式（Ｃ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１５８】
実施形態３２．式（Ｃ−４）：
【化４８】
2021527429.tif 000049
又はその薬学的に許容される塩の構造を有し、
式中：Ｒ２及びＲ５は、式（Ｃ）の化合物について先で定義される通りである、式（Ｃ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１５９】
実施形態３３．Ｒ２は、Ｈ又はＣ１〜Ｃ６アルキルである、式（Ｃ）、式（Ｃ−１）、式（Ｃ−２）、式（Ｃ−３）、又は式（Ｃ−４）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１６０】
実施形態３４．Ｒ２は、Ｈ又はメチルである、式（Ｃ）、式（Ｃ−１）、式（Ｃ−２）、式（Ｃ−３）、又は式（Ｃ−４）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１６１】
実施形態３５．Ｒ２はＨである、式（Ｃ）、式（Ｃ−１）、式（Ｃ−２）、式（Ｃ−３）、又は式（Ｃ−４）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１６２】
実施形態３６．Ｒ２はメチルである、式（Ｃ）、式（Ｃ−１）、式（Ｃ−２）、式（Ｃ−３）、又は式（Ｃ−４）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１６３】
実施形態３７．式（Ｃ−５）：
【化４９】
2021527429.tif 000050
又はその薬学的に許容される塩の構造を有し、
式中：Ｒ５は、式（Ｃ）の化合物について先で定義される通りである、式（Ｃ）、式（Ｃ−１）、若しくは式（Ｃ−３）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１６４】
実施形態３８．式（Ｃ−６）：
【化５０】
2021527429.tif 000051
又はその薬学的に許容される塩の構造を有し、
式中：Ｒ５は、式（Ｃ）の化合物について先で定義される通りである、式（Ｃ）、式（Ｃ−１）、若しくは式（Ｃ−３）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１６５】
実施形態３９．式（Ｃ−７）：
【化５１】
2021527429.tif 000052
又はその薬学的に許容される塩の構造を有し、
式中：Ｒ５は、式（Ｃ）の化合物について先で定義される通りである、式（Ｃ）、式（Ｃ−１）、若しくは式（Ｃ−３）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１６６】
実施形態４０．式（Ｃ−８）：
【化５２】
2021527429.tif 000053
又はその薬学的に許容される塩の構造を有し、
式中：Ｒ５は、式（Ｃ）の化合物について先で定義される通りである、式（Ｃ）、式（Ｃ−１）、若しくは式（Ｃ−３）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１６７】
実施形態４１．式（Ｃ−９）：
【化５３】
2021527429.tif 000054
又はその薬学的に許容される塩の構造を有し、
式中：Ｒ５は、式（Ｃ）の化合物について先で定義される通りである、式（Ｃ）、式（Ｃ−１）、若しくは式（Ｃ−３）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１６８】
実施形態４２．式（Ｃ−１０）：
【化５４】
2021527429.tif 000055
又はその薬学的に許容される塩の構造を有し、
式中：Ｒ５は、式（Ｃ）の化合物について先で定義される通りである、式（Ｃ）、式（Ｃ−１）、若しくは式（Ｃ−３）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１６９】
実施形態４３．式（Ｃ−１１）：
【化５５】
2021527429.tif 000056
又はその薬学的に許容される塩の構造を有し、
式中：Ｒ５は、式（Ｃ）の化合物について先で定義される通りである、式（Ｃ）、式（Ｃ−１）、若しくは式（Ｃ−３）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１７０】
実施形態４４．式（Ｃ−１２）：
【化５６】
2021527429.tif 000057
又はその薬学的に許容される塩の構造を有し、
式中：Ｒ５は、式（Ｃ）の化合物について先で定義される通りである、式（Ｃ）、式（Ｃ−１）、若しくは式（Ｃ−３）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１７１】
実施形態４５．化合物は
【化５７】
2021527429.tif 000058
である、式（Ｃ）、式（Ｃ−１）、若しくは式（Ｃ−３）、又は実施形態３７の化合物。
【０１７２】
実施形態４６．化合物は
【化５８】
2021527429.tif 000059
である、式（Ｃ）、式（Ｃ−１）、若しくは式（Ｃ−３）、又は実施形態３７の化合物。
【０１７３】
実施形態４７．化合物は
【化５９】
2021527429.tif 000060
である、式（Ｃ）、式（Ｃ−１）、若しくは式（Ｃ−３）、又は実施形態３８の化合物。
【０１７４】
実施形態４８．化合物は
【化６０】
2021527429.tif 000061
である、式（Ｃ）、式（Ｃ−１）、若しくは式（Ｃ−３）、又は実施形態３８の化合物。
【０１７５】
一態様において、本発明のリンカー−薬物部分は、式（Ｃ）
【化６１】
2021527429.tif 000062
の構造を有する化合物、又はその立体異性体若しくは薬学的に許容される塩であり、
式中：
ＲＡは、
【化６２】
2021527429.tif 000063
であり；
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３、−（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、−（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、又は場合によっては−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、若しくは１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
各Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及び場合によっては１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；
各Ｒ４は、Ｈ及びＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；
Ｒ５は、−Ｌ１Ｒ１４、−Ｌ１Ｒ２４、−Ｌ１Ｒ３４、又は−Ｌ１Ｒ４４であり；
Ｌ１は、−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ２Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ２Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍＸ４（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＸ４（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ２Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍＸ４（ＣＨ２）ｍ−＊＊、又は−Ｘ２Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＸ４（ＣＨ２）ｍ−＊＊であり、式中、＊＊は、Ｒ１４への付着点を示し；
Ｘ１は、
【化６３】
2021527429.tif 000064
であり、式中、＊＊は、−ＮＨ−又はＸ２への付着点を示し；
Ｘ２は、
【化６４】
2021527429.tif 000065
であり、式中、＊＊は、−ＮＨ−への付着点を示し；
Ｘ３は、
【化６５】
2021527429.tif 000066
であり、式中、＊＊は、−ＮＨ−への付着点を示し；
Ｘ４は、
【化６６】
2021527429.tif 000067
であり、式中、＊は、付着点がＲ１４、Ｒ２４、Ｒ３４、又はＲ４４に向いていることを示し；
Ｒ１４は、
【化６７】
2021527429.tif 000068
−Ｎ３、−ＯＮＨ２、−ＮＲ６Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２、ＳＨ、−ＳＳＲ７、−Ｓ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−ＮＲ６Ｓ（＝Ｏ）２（ＣＨ＝ＣＨ２）、−ＮＲ６Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｂｒ、−ＮＲ６Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｉ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｂｒ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｉ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＮＨ２、
【化６８】
2021527429.tif 000069
−ＣＯ２Ｈ、−ＮＨ２、
【化６９】
2021527429.tif 000070
であり；
Ｒ２４は、
【化７０】
2021527429.tif 000071
であり；
Ｒ３４は、−Ｎ３、−ＯＮＨ２、−ＮＲ７Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＣＯ２Ｈ、−ＮＨ２、
【化７１】
2021527429.tif 000072
であり；
Ｒ４４は、
【化７２】
2021527429.tif 000073
又は−ＮＲ７Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｒ８であり；
各Ｒ６は、Ｈ及びＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；
Ｒ７は、２−ピリジル又は４−ピリジルであり；
Ｒ８は、−Ｓ（ＣＨ２）ｎＣＨＲ９ＮＨ２であり；
Ｒ９は、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ７であり；
各Ｒ１０は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、及びＯＨから独立して選択され；
各Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、−ＮＨ２、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＣＮ、−ＮＯ２、及びＯＨから独立して選択され；
各Ｒ１２は、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、フルオロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジルオキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１〜４アルコキシ、及びＣ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１〜４アルキルから独立して選択され；
各ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０から独立して選択され、
各ｐは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、及び１４から独立して選択される。
【０１７６】
本発明のリンカー−薬物部分の特定の態様及び例が、追加の、列挙される実施形態の以下のリストに記載される。各実施形態において特定された特徴が、他の特定された特徴と組み合わされて、本発明の更なる実施形態が提供され得ることが認識されよう。
【０１７７】
実施形態４９．式（Ｄ−１）の構造、又はその薬学的に許容可能な塩を有する、式（Ｄ）の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩：
【化７３】
2021527429.tif 000074
式中：Ｒ２及びＲ５は、式（Ｄ）の化合物について先で定義された通りである。
【０１７８】
実施形態５０．式（Ｄ−２）の構造、又はその薬学的に許容可能な塩を有する、式（Ａ）の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩：
【化７４】
2021527429.tif 000075
式中：Ｒ２及びＲ５は、式（Ｄ）の化合物について先で定義された通りである。
【０１７９】
実施形態５１．式（Ｄ−３）：
【化７５】
2021527429.tif 000076
又はその薬学的に許容される塩の構造を有し、
式中：Ｒ２及びＲ５は、式（Ｄ）の化合物について先で定義される通りである、式（Ｄ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１８０】
実施形態５２．式（Ｄ−４）：
【化７６】
2021527429.tif 000077
又はその薬学的に許容される塩の構造を有し、
式中：Ｒ２及びＲ５は、式（Ｄ）の化合物について先で定義される通りである、式（Ｄ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１８１】
実施形態５３．Ｒ２は、Ｈ又はＣ１〜Ｃ６アルキルである、式（Ｄ）、式（Ｄ−１）、式（Ｄ−２）、式（Ｄ−３）、又は式（Ｄ−４）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１８２】
実施形態５４．Ｒ２は、Ｈ又はメチルである、式（Ｄ）、式（Ｄ−１）、式（Ｄ−２）、式（Ｄ−３）、又は式（Ｄ−４）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１８３】
実施形態５５．Ｒ２はＨである、式（Ｄ）、式（Ｄ−１）、式（Ｄ−２）、式（Ｄ−３）、又は式（Ｄ−４）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１８４】
実施形態５６．Ｒ２はメチルである、式（Ｄ）、式（Ｄ−１）、式（Ｄ−２）、式（Ｄ−３）、又は式（Ｄ−４）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１８５】
実施形態５７．式（Ｄ−５）：
【化７７】
2021527429.tif 000078
又はその薬学的に許容される塩の構造を有し、
式中：Ｒ５は、式（Ｄ）の化合物について先で定義される通りである、式（Ｄ）、式（Ｄ−１）、若しくは式（Ｄ−３）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１８６】
実施形態５８．式（Ｄ−６）：
【化７８】
2021527429.tif 000079
又はその薬学的に許容される塩の構造を有し、
式中：Ｒ５は、式（Ｄ）の化合物について先で定義される通りである、式（Ｄ）、式（Ｄ−１）、若しくは式（Ｄ−３）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１８７】
実施形態５９．式（Ｄ−７）：
【化７９】
2021527429.tif 000080
又はその薬学的に許容される塩の構造を有し、
式中：Ｒ５は、式（Ｄ）の化合物について先で定義される通りである、式（Ｄ）、式（Ｄ−１）、若しくは式（Ｄ−３）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１８８】
実施形態６０．式（Ｄ−８）：
【化８０】
2021527429.tif 000081
又はその薬学的に許容される塩の構造を有し、
式中：Ｒ５は、式（Ｄ）の化合物について先で定義される通りである、式（Ｄ）、式（Ｄ−１）、若しくは式（Ｄ−３）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１８９】
実施形態６１．式（Ｄ−９）：
【化８１】
2021527429.tif 000082
又はその薬学的に許容される塩の構造を有し、
式中：Ｒ５は、式（Ｄ）の化合物について先で定義される通りである、式（Ｄ）、式（Ｄ−１）、若しくは式（Ｄ−３）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１９０】
実施形態６２．式（Ｄ−１０）：
【化８２】
2021527429.tif 000083
又はその薬学的に許容される塩の構造を有し、
式中：Ｒ５は、式（Ｄ）の化合物について先で定義される通りである、式（Ｄ）、式（Ｄ−１）、若しくは式（Ｄ−３）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１９１】
実施形態６３．式（Ｄ−１１）：
【化８３】
2021527429.tif 000084
又はその薬学的に許容される塩の構造を有し、
式中：Ｒ５は、式（Ｄ）の化合物について先で定義される通りである、式（Ｄ）、式（Ｄ−１）、若しくは式（Ｄ−３）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１９２】
実施形態６４．式（Ｄ−１２）：
【化８４】
2021527429.tif 000085
又はその薬学的に許容される塩の構造を有し、
式中：Ｒ５は、式（Ｄ）の化合物について先で定義される通りである、式（Ｄ）、式（Ｄ−１）、若しくは式（Ｄ−３）の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【０１９３】
実施形態６５．化合物は
【化８５】
2021527429.tif 000086
である、式（Ｄ）、式（Ｄ−１）、若しくは式（Ｄ−３）、又は実施形態５７の化合物。
【０１９４】
実施形態６６．化合物は
【化８６】
2021527429.tif 000087
である、式（Ｄ）、式（Ｄ−１）、若しくは式（Ｄ−３）、又は実施形態５７の化合物。
【０１９５】
実施形態６７．化合物は
【化８７】
2021527429.tif 000088
である、式（Ｄ）、式（Ｄ−１）、若しくは式（Ｄ−３）、又は実施形態５８の化合物。
【０１９６】
実施形態６８．化合物は
【化８８】
2021527429.tif 000089
である、式（Ｄ）、式（Ｄ−１）、若しくは式（Ｄ−３）、又は実施形態５８の化合物。
【０１９７】
抗体薬物コンジュゲート
本開示は、ｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）が、薬物部分（例えば細胞毒性剤）に、場合によってはリンカーを介して結合されている抗体薬物コンジュゲートを提供する。一態様において、抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、リンカーによる共有結合的取付けを介して、細胞毒性剤である薬物部分に結合される。
【０１９８】
抗体薬物コンジュゲートは、細胞毒性剤を、ｃＫＩＴ、例えば造血幹細胞を発現する細胞に選択的に送達することによって、患者、例えば造血幹細胞移植レシピエントにおいて当該細胞を選択的に除去することができる。好ましくは、ｃＫＩＴ抗体薬物コンジュゲートは、半減期が短くて、患者の循環系から一掃されることとなるので、造血幹細胞移植前の、造血幹細胞移植レシピエントのコンディション調整に用いられ得る。
【０１９９】
一部の実施形態において、本明細書中で開示されるｃＫＩＴ抗体薬物コンジュゲートは、より大きな複合体に架橋かつ／又は多量体化された場合でさえ、肥満細胞脱顆粒を誘導する能力が引き下げられるように修飾される。例えば、本明細書中で開示されるｃＫＩＴ抗体薬物コンジュゲートは、より大きな複合体に架橋かつ／又は多量体化された場合でさえ、完全長ｃＫＩＴ抗体、Ｆ（ａｂ’）２若しくはＦ（ａｂ）２フラグメント、又はそれらのコンジュゲートと比較して、肥満細胞脱顆粒を誘導する能力が少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％引き下げられるように修飾される。一部の実施形態において、本明細書中で開示されるｃＫＩＴ抗体薬物コンジュゲートは、抗ｃＫＩＴ  Ｆａｂ又はＦａｂ’フラグメントを含んでよい。一部の実施形態において、本明細書中で開示される抗ｃＫＩＴ抗体薬物コンジュゲートは、より大きな複合体に架橋かつ／又は多量体化された場合でさえ、肥満細胞脱顆粒を誘導する活性が最小であり得、例えば、ベータ−ヘキソサミニダーゼ放出アッセイにおいて、ベースライン補正されたＯ．Ｄ．読出しが、０．２５未満、例えば、０．２未満、０．１５未満、又は０．１未満であり得る。
【０２００】
一部の実施形態において、本明細書中で提供されるのは、薬物部分（例えば細胞毒性剤）に、場合によってはリンカーを介して結合されている、ｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）（抗ｃＫＩＴ  Ｆａｂ又はＦａｂ’）を含むコンジュゲートである。本明細書中に記載されるように、そのような抗ｃＫＩＴ  Ｆａｂ’又はＦａｂ−毒物コンジュゲートは、ヒトＨＳＣ細胞をインビトロかつインビボで除去することができる一方、より大きな複合体に架橋かつ／又は多量体化された場合でさえ、肥満細胞脱顆粒を引き起こさない。
【０２０１】
一態様において、本開示は、式（Ｉ）のコンジュゲートを提供し：
Ａ−（ＬＢ−（Ｄ）ｎ）ｙ  式（Ｉ）；
式中：
Ａは、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）であり；
ＬＢは、リンカーであり；
Ｄは、細胞毒性剤であり；
ｎは、１から１０の整数であり、
ｙは、１から１０の整数であり、
リンカー−薬物部分（ＬＢ−（Ｄ）ｎ）は、抗体フラグメント（Ａ）に共有結合的に取り付けられている。
【０２０２】
一態様において、本開示は、式（ＩＩ）のコンジュゲートに関し：
【化８９】
2021527429.tif 000090
Ａ１は、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）又は鎖（例えば、ＨＣ又はＬＣ）であり；
Ａ２は、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）又は鎖（例えば、ＨＣ又はＬＣ）であり；
ＬＢは、リンカーであり；
Ｄは、細胞毒性剤であり、
ｎは、１から１０の整数であり、
リンカー−薬物部分（ＬＢ−（Ｄ）ｎ）は、抗体フラグメントＡ１及びＡ２を共有結合的に連結する。
【０２０３】
一態様において、本発明のコンジュゲートは、リンカー（ＬＢ）に共有結合的に付着した１つ以上の細胞毒素を含み、１つ以上の細胞毒素は、式（Ａ）、式（Ａ−１）、式（Ａ−２）、式（Ａ−３）、式（Ａ−４）、式（Ｂ）、式（Ｂ−１）、式（Ｂ−２）、式（Ｂ−３）、若しくは式（Ｂ−４）の化合物、又は実施形態７〜１４のいずれか１つ、若しくは実施形態２３〜３０のいずれか１つの化合物から独立して選択される。
【０２０４】
一態様において、本発明のコンジュゲートは、リンカー（ＬＢ）に共有結合的に付着した１つ以上の細胞毒素を含み、１つ以上の細胞毒素は、式（Ａ）、式（Ａ−１）、式（Ａ−２）、式（Ａ−３）、若しくは式（Ａ−４）の化合物、又は実施形態７〜１４のいずれか１つの化合物から独立して選択される。
【０２０５】
一態様において、本発明のコンジュゲートは、リンカー（ＬＢ）に共有結合的に付着した１つ以上の細胞毒素を含み、１つ以上の細胞毒素は、式（Ｂ）、式（Ｂ−１）、式（Ｂ−２）、式（Ｂ−３）、若しくは式（Ｂ−４）の化合物、又は実施形態２３〜３０のいずれか１つの化合物から独立して選択される。
【０２０６】
式（Ｉ）のコンジュゲートにおいて、１つ以上のリンカー−薬物部分（ＬＢ−（Ｄ）ｎ）は、抗体フラグメントＡ（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）に共有結合的に取り付けられることによって、１つ以上の薬物部分Ｄが、抗体フラグメントＡ（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）に、リンカーＬＢを介して共有結合的に取り付けられ得る。ＬＢは、抗体フラグメントＡ（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）を、１つ以上の薬物部分Ｄに結合することができるあらゆる化学部分である。１つ以上の薬物部分Ｄが抗体フラグメントＡ（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）に共有結合されている式（Ｉ）のコンジュゲートは、同じ、又は異なる１つ以上の反応性官能基を有する二機能リンカー試薬又は多機能リンカー試薬を用いて形成され得る。二機能リンカー試薬又は多機能リンカー試薬の反応性官能基の１つが用いられて、抗体フラグメントＡ上の基、一例として、チオール又はアミン（例えば、システイン、Ｎ末端又はアミノ酸側鎖、例えばリジン）と反応して、リンカーＬＢの一端部との共有結合を形成する。二機能リンカー試薬又は多機能リンカー試薬のそのような反応性官能基として、以下に限定されないが、マレイミド、チオール、及びＮＨＳエステルが挙げられる。二機能リンカー試薬又は多機能リンカー試薬の他の反応性官能基が用いられて、１つ以上の薬物部分ＤがリンカーＬＢに共有結合的に取り付けられる。
【０２０７】
式（ＩＩ）のコンジュゲートにおいて、抗体フラグメントＡ１及びＡ２上のペンダントチオール、並びに１，３−ジハロアセトン、例えば１，３−ジクロロアセトン、１，３−ジブロモアセトン、１，３−ジヨードアセトン、及び１，３−ジヒドロキシアセトンのビススルホン酸エステルの反応によってケトン架橋が形成されることによって、抗体フラグメントＡ１及びＡ２が共有結合的に連結される。このケトン架橋部分は、１つ以上の薬物部分Ｄを、リンカーＬＢを介して抗体フラグメントＡ１及びＡ２に共有結合的に取り付けるのに用いられる。ＬＢは、抗体フラグメントＡ１及びＡ２を、１つ以上の薬物部分Ｄに結合することができるあらゆる化学部分である。１つ以上の薬物部分Ｄが抗体フラグメントＡ１及びＡ２に共有結合されている式（ＩＩ）のコンジュゲートは、同じ、又は異なる１つ以上の反応性官能基を有する二機能リンカー試薬又は多機能リンカー試薬を用いて形成され得る。一実施形態において、二機能リンカー試薬又は多機能リンカー試薬の反応性官能基の１つが、アルコキシアミンであり、これは、ケトン架橋と反応してリンカーＬＢの一端部とのオキシム結合を形成するのに用いられ、そして二機能リンカー試薬又は多機能リンカー試薬の他の反応性官能基が用いられて、１つ以上の薬物部分ＤがリンカーＬＢに共有結合的に取り付けられる。別の実施形態において、二機能リンカー試薬又は多機能リンカー試薬の反応性官能基の１つが、ヒドラジンであり、これが、ケトン架橋と反応してリンカーＬＢの一端部とのヒドラゾン結合を形成するのに用いられ、そして二機能リンカー試薬又は多機能リンカー試薬の他の反応性官能基が用いられて、１つ以上の薬物部分ＤがリンカーＬＢに共有結合的に取り付けられる。
【０２０８】
一態様において、ＬＢは、切断可能なリンカーである。別の態様において、ＬＢは、切断可能でないリンカーである。一部の態様において、ＬＢは、酸に不安定なリンカー、感光性リンカー、ペプチダーゼ切断可能リンカー、エステラーゼ切断可能リンカー、グリコシダーゼ切断可能リンカー、ホスホジエステラーゼ切断可能リンカー、ジスルフィド結合還元可能リンカー、親水性リンカー、又はジカルボン酸ベースのリンカーである。
【０２０９】
薬物対抗体比は、特定のコンジュゲート分子について、正確な整数値（例えば、式（Ｉ）中のｎ及びｙの積、並びに式（ＩＩ）中のｎ）を有する一方、値は多くの場合、典型的には結合工程と関連する、幾らかの不均質性に起因して、多くの分子を含有するサンプルを説明するのに用いられる場合の平均値になろうことが理解される。コンジュゲートのサンプルについての平均ローディングは、本明細書中で、薬物対抗体（又はＦａｂ’）比、又は「ＤＡＲ」と呼ばれる。一部の態様において、ＤＡＲは、約１〜約５、典型的には約１、２、３、又は４である。一部の態様において、サンプルの少なくとも５０重量％が、平均ＤＡＲプラスマイナス２を有する化合物であり、好ましくは、サンプルの少なくとも５０％が、平均ＤＡＲプラスマイナス１を含有するコンジュゲートである。他の態様は、ＤＡＲが約２であるコンジュゲートを含む。一部の態様において、「約ｙ」のＤＡＲは、ＤＡＲについて測定された値が、式（Ｉ）中のｎ及びｙの積の２０％以内であることを意味する。一部の態様において、「約ｎ」のＤＡＲは、ＤＡＲについて測定された値が、式（ＩＩ）中のｎの２０％以内であることを意味する。
【０２１０】
一態様において、式（Ｉ）のコンジュゲート中の薬物の、抗体フラグメント（Ｆａｂ又はＦａｂ’）に対する平均モル比（すなわち、薬物対抗体比（ＤＡＲ）としても知られている、ｎ及びｙの積の平均値）は、約１〜約１０、約１〜約６（例えば、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０）、約１〜約５、約１．５〜約４．５、又は約２〜約４である。
【０２１１】
一態様において、式（ＩＩ）のコンジュゲート中の薬物の、抗体フラグメントＡ１及びＡ２に対する平均モル比（すなわち、薬物対抗体比（ＤＡＲ）としても知られている、ｎの平均値）は、約１〜約１０、約１〜約６、（例えば、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０）、約１〜約５、約１．５〜約４．５、又は約２〜約４である。
【０２１２】
本開示によって提供される一態様において、コンジュゲートは、実質的に高い純度を有し、以下の特徴の１つ以上を有する：（ａ）コンジュゲート種の約９０％超（例えば、約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％以上）、好ましくは約９５％超が、単量体である、（ｂ）コンジュゲート調製物中の非結合型リンカーレベルが、約１０％未満（例えば、約９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、又は０％以下）（総リンカーに対して）である、（ｃ）コンジュゲート種の１０％未満が架橋されている（例えば、約９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、又は０％以下）、（ｄ）コンジュゲート調製物中の遊離型薬物（例えば、オーリスタチン、アマニチン、マイタンシノイド、又はサポリン）レベルが、約２％未満（例えば、約１．５％、１．４％、１．３％、１．２％、１．１％、１．０％、０．９％、０．８％、０．７％、０．６％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、０．１％、又は０％以下）（総細胞毒性剤に対してｍｏｌ／ｍｏｌ）である。
【０２１３】
一態様において、本発明のコンジュゲートは、式（Ｅ）の構造を有し：
【化９０】
2021527429.tif 000091
式中：
Ａは、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）を表し；
ｙは、１から１０の整数であり；
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３、−（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、−（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、又は場合によっては−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、若しくは１〜５個の水酸基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
各Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及び場合によっては１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；
各Ｒ４は、Ｈ及びＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；
Ｌ１は、−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ２Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ２Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍＸ４（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＸ４（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ２Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍＸ４（ＣＨ２）ｍ−＊＊、又は−Ｘ２Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＸ４（ＣＨ２）ｍ−＊＊であり、式中、＊＊は、Ｒ１１４への付着点を示し；
Ｘ１は、
【化９１】
2021527429.tif 000092
であり、式中、＊＊は、−ＮＨ−又はＸ２への付着点を示し；
Ｘ２は、
【化９２】
2021527429.tif 000093
であり、式中、＊＊は、−ＮＨ−への付着点を示し；
Ｘ３は、
【化９３】
2021527429.tif 000094
であり、式中、＊＊は、−ＮＨ−への付着点を示し；
Ｘ４は、
【化９４】
2021527429.tif 000095
であり、式中、＊は、付着点がＲ１１４に向いていることを示し；
Ｒ１１４は、
【化９５】
2021527429.tif 000096
−ＮＲ６Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２−＊、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２−＊、−Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−＊、−（ＣＨ２）２Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−＊、−ＮＲ６Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−＊、−ＮＲ６Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２−＊、−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−＊、−ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＨ２−＊、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２−＊、−Ｓ−、
【化９６】
2021527429.tif 000097
であり、式中、＊は、Ａへの付着点を示し；
各Ｒ６は、Ｈ及びＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；
各Ｒ１０は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、及びＯＨから独立して選択され；
各Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、−ＮＨ２、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＣＮ、−ＮＯ２、及び−ＯＨから独立して選択され；
各Ｒ１２は、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、フルオロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジルオキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１〜４アルコキシ、及び−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１〜４アルキルから独立して選択され；
各Ｒ１５は、Ｈ、−ＣＨ３、及びフェニルから独立して選択され；
各ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０から独立して選択され、そして
各ｐは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、及び１４から独立して選択される。
【０２１４】
一態様において、本発明のコンジュゲートは、式（Ｆ）：
【化９７】
2021527429.tif 000098
の構造を有し、
式中：
Ａは、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）を表し；
ｙは、１から１０の整数であり；
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３、−（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、−（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、又は場合によっては−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、若しくは１〜５個の水酸基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
各Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及び場合によっては１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；
各Ｒ４は、Ｈ及びＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；
Ｌ１は、−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ２Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ２Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍＸ４（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＸ４（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ２Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍＸ４（ＣＨ２）ｍ−＊＊、又は−Ｘ２Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＸ４（ＣＨ２）ｍ−＊＊であり、式中、＊＊は、Ｒ１１４への付着点を示し；
Ｘ１は、
【化９８】
2021527429.tif 000099
であり、式中、＊＊は、−ＮＨ−又はＸ２への付着点を示し；
Ｘ２は、
【化９９】
2021527429.tif 000100
であり、式中、＊＊は、−ＮＨ−への付着点を示し；
Ｘ３は、
【化１００】
2021527429.tif 000101
であり、式中、＊＊は、−ＮＨ−への付着点を示し；
Ｘ４は、
【化１０１】
2021527429.tif 000102
であり、式中、＊は、付着点がＲ１１４に向いていることを示し；
Ｒ１１４は、
【化１０２】
2021527429.tif 000103
−ＮＲ６Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２−＊、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２−＊、−Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−＊、−（ＣＨ２）２Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−＊、−ＮＲ６Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−＊、−ＮＲ６Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２−＊、−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−＊、−ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＨ２−＊、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２−＊、−Ｓ−、
【化１０３】
2021527429.tif 000104
であり、式中、＊は、Ａへの付着点を示し；
各Ｒ６は、Ｈ及びＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；
各Ｒ１０は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、及びＯＨから独立して選択され；
各Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、−ＮＨ２、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＣＮ、−ＮＯ２、及びＯＨから独立して選択され；
各Ｒ１２は、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、フルオロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジルオキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１〜４アルコキシ、及びＣ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１〜４アルキルから独立して選択され；
各Ｒ１５は、Ｈ、−ＣＨ３、及びフェニルから独立して選択され；
各ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０から独立して選択され、
各ｐは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、及び１４から独立して選択される。
【０２１５】
一態様において、本発明のコンジュゲートは、式（Ｇ）の構造を有し：
【化１０４】
2021527429.tif 000105
式中：
Ａは、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）を表し；
ｙは、１から１０の整数であり；
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３、−（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、−（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、又は場合によっては−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、若しくは１〜５個の水酸基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
各Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及び場合によっては１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；
各Ｒ４は、Ｈ及びＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；
Ｌ１は、−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ２Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ２Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍＸ４（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＸ４（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ２Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍＸ４（ＣＨ２）ｍ−＊＊、又は−Ｘ２Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＸ４（ＣＨ２）ｍ−＊＊であり、式中、＊＊は、Ｒ１１４への付着点を示し；
Ｘ１は、
【化１０５】
2021527429.tif 000106
であり、式中、＊＊は、−ＮＨ−又はＸ２への付着点を示し；
Ｘ２は、
【化１０６】
2021527429.tif 000107
であり、式中、＊＊は、−ＮＨ−への付着点を示し；
Ｘ３は、
【化１０７】
2021527429.tif 000108
であり、式中、＊＊は、−ＮＨ−への付着点を示し；
Ｘ４は、
【化１０８】
2021527429.tif 000109
であり、式中、＊は、付着点がＲ１１４に向いていることを示し；
Ｒ１１４は、
【化１０９】
2021527429.tif 000110
−ＮＲ６Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２−＊、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２−＊、−Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−＊、−（ＣＨ２）２Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−＊、−ＮＲ６Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−＊、−ＮＲ６Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２−＊、−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−＊、−ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＨ２−＊、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２−＊、−Ｓ−、
【化１１０】
2021527429.tif 000111
であり、式中、＊は、Ａへの付着点を示し；
各Ｒ６は、Ｈ及びＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；
各Ｒ１０は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、及び−ＯＨから独立して選択され；
各Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、−ＮＨ２、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＣＮ、−ＮＯ２、及び−ＯＨから独立して選択され；
各Ｒ１２は、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、フルオロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジルオキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１〜４アルコキシ、及び−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１〜４アルキルから独立して選択され；
各Ｒ１５は、Ｈ、−ＣＨ３、及びフェニルから独立して選択され；
各ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０から独立して選択され、そして
各ｐは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、及び１４から独立して選択される。
【０２１６】
一態様において、本発明のコンジュゲートは、式（Ｈ）：
【化１１１】
2021527429.tif 000112
の構造を有し、
式中：
Ａは、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）を表し；
ｙは、１から１０の整数であり；
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ３、−（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、−（（ＣＨ２）ｍＯ）ｎＲ４、又は場合によっては−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、若しくは１〜５個の水酸基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
各Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及び場合によっては１〜５個のヒドロキシル基で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；
各Ｒ４は、Ｈ及びＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；
Ｌ１は、−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ２Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ２Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ３Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍＸ４（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＸ４（ＣＨ２）ｍ−＊＊、−Ｘ２Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍＸ４（ＣＨ２）ｍ−＊＊、又は−Ｘ２Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍＸ４（ＣＨ２）ｍ−＊＊であり、式中、＊＊は、Ｒ１１４への付着点を示し；
Ｘ１は、
【化１１２】
2021527429.tif 000113
であり、式中、＊＊は、−ＮＨ−又はＸ２への付着点を示し；
Ｘ２は、
【化１１３】
2021527429.tif 000114
であり、式中、＊＊は、−ＮＨ−への付着点を示し；
Ｘ３は、
【化１１４】
2021527429.tif 000115
であり、式中、＊＊は、−ＮＨ−への付着点を示し；
Ｘ４は、
【化１１５】
2021527429.tif 000116
であり、式中、＊は、付着点がＲ１１４に向いていることを示し；
Ｒ１１４は、
【化１１６】
2021527429.tif 000117
−ＮＲ６Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２−＊、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ２−＊、−Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−＊、−（ＣＨ２）２Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−＊、−ＮＲ６Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ２ＣＨ２−＊、−ＮＲ６Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２−＊、−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−＊、−ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＨ２−＊、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２−＊、−Ｓ−、
【化１１７】
2021527429.tif 000118
であり、式中、＊は、Ａへの付着点を示し；
各Ｒ６は、Ｈ及びＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；
各Ｒ１０は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、及びＯＨから独立して選択され；
各Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｆ、Ｃｌ、−ＮＨ２、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＣＮ、−ＮＯ２、及びＯＨから独立して選択され；
各Ｒ１２は、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、フルオロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジルオキシ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたベンジル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１〜４アルコキシ、及びＣ（＝Ｏ）ＯＨで置換されたＣ１〜４アルキルから独立して選択され；
各Ｒ１５は、Ｈ、−ＣＨ３、及びフェニルから独立して選択され；
各ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０から独立して選択され、
各ｐは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、及び１４から独立して選択される。
【０２１７】
本発明のコンジュゲートの特定の態様及び例が、追加の、列挙される実施形態の以下のリストに記載される。各実施形態において特定された特徴が、他の特定された特徴と組み合わされて、本発明の更なる実施形態が提供され得ることが認識されよう。
【０２１８】
実施形態６９．式（Ｅ）の構造を有するコンジュゲートは、式（Ｅ−１）：
【化１１８】
2021527429.tif 000119
の構造を有するコンジュゲートであり、
式中：Ｒ２、Ｒ１１４、Ａ、ｙ、及びＬ１は、先の式（Ｅ）のコンジュゲートについて定義される通りである。
【０２１９】
実施形態７０．式（Ｆ）の構造を有するコンジュゲートは、式（Ｆ−１）：
【化１１９】
2021527429.tif 000120
の構造を有するコンジュゲートであり、
式中：Ｒ２、Ｒ１１４、Ａ、ｙ、及びＬ１は、先の式（Ｆ）のコンジュゲートについて定義される通りである。
【０２２０】
実施形態７１．式（Ｇ）の構造を有するコンジュゲートは、式（Ｇ−１）：
【化１２０】
2021527429.tif 000121
の構造を有するコンジュゲートであり、
式中：Ｒ２、Ｒ１１４、Ａ、ｙ、及びＬ１は、先の式（Ｇ）のコンジュゲートについて定義される通りである。
【０２２１】
実施形態７２．式（Ｈ）の構造を有するコンジュゲートは、式（Ｈ−１）：
【化１２１】
2021527429.tif 000122
の構造を有するコンジュゲートであり、
式中：Ｒ２、Ｒ１１４、Ａ、ｙ、及びＬ１は、先の式（Ｈ）のコンジュゲートについて定義される通りである。
【０２２２】
実施形態７３．Ｒ２は、Ｈ又はＣ１〜Ｃ６アルキルである、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）、又は実施形態６９〜７２のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２２３】
実施形態７４．Ｒ２は、Ｈ又はメチルである、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）、又は実施形態６９〜７２のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２２４】
実施形態７５．Ｒ２はＨである、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）、又は実施形態６９〜７２のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２２５】
実施形態７６．Ｒ２はメチルである、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）、又は実施形態６９〜７２のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２２６】
実施形態７７．式（Ｅ）の構造を有するコンジュゲートは、式（Ｅ−２）：
【化１２２】
2021527429.tif 000123
の構造を有するコンジュゲートであり、
式中：Ｒ１１４、Ａ、ｙ、及びＬ１は、先の式（Ｅ）のコンジュゲートについて定義される通りである。
【０２２７】
実施形態７８．式（Ｅ）の構造を有するコンジュゲートは、式（Ｅ−３）：
【化１２３】
2021527429.tif 000124
の構造を有するコンジュゲートであり、
式中：Ｒ１１４、Ａ、ｙ、及びＬ１は、先の式（Ｅ）のコンジュゲートについて定義される通りである。
【０２２８】
実施形態７９．式（Ｅ）又は式（Ｅ−１）の構造を有するコンジュゲートは、式（Ｅ−４）：
【化１２４】
2021527429.tif 000125
の構造を有するコンジュゲートであり、
式中：Ｒ１１４、Ａ、ｙ、及びＬ１は、先の式（Ｅ）のコンジュゲートについて定義される通りである。
【０２２９】
実施形態８０．式（Ｅ）又は式（Ｅ−１）の構造を有するコンジュゲートは、式（Ｅ−５）：
【化１２５】
2021527429.tif 000126
の構造を有するコンジュゲートであり、
式中：Ｒ１１４、Ａ、ｙ、及びＬ１は、先の式（Ｅ）のコンジュゲートについて定義される通りである。
【０２３０】
実施形態８１．式（Ｆ）の構造を有するコンジュゲートは、式（Ｆ−２）：
【化１２６】
2021527429.tif 000127
の構造を有するコンジュゲートであり、
式中：Ｒ１１４、Ａ、ｙ、及びＬ１は、先の式（Ｆ）のコンジュゲートについて定義される通りである。
【０２３１】
実施形態８２．式（Ｆ）の構造を有するコンジュゲートは、式（Ｆ−３）：
【化１２７】
2021527429.tif 000128
の構造を有するコンジュゲートであり、
式中：Ｒ１１４、Ａ、ｙ、及びＬ１は、先の式（Ｆ）のコンジュゲートについて定義される通りである。
【０２３２】
実施形態８３．式（Ｆ）又は式（Ｆ−１）の構造を有するコンジュゲートは、式（Ｆ−４）：
【化１２８】
2021527429.tif 000129
の構造を有するコンジュゲートであり、
式中：Ｒ１１４、Ａ、ｙ、及びＬ１は、先の式（Ｆ）のコンジュゲートについて定義される通りである。
【０２３３】
実施形態８４．式（Ｆ）又は式（Ｆ−１）の構造を有するコンジュゲートは、式（Ｆ−５）：
【化１２９】
2021527429.tif 000130
の構造を有するコンジュゲートであり、
式中：Ｒ１１４、Ａ、ｙ、及びＬ１は、先の式（Ｆ）のコンジュゲートについて定義される通りである。
【０２３４】
実施形態８５．式（Ｇ）の構造を有するコンジュゲートは、式（Ｇ−２）：
【化１３０】
2021527429.tif 000131
の構造を有するコンジュゲートであり、
式中：Ｒ１１４、Ａ、ｙ、及びＬ１は、先の式（Ｇ）のコンジュゲートについて定義される通りである。
【０２３５】
実施形態８６．式（Ｇ）の構造を有するコンジュゲートは、式（Ｇ−３）：
【化１３１】
2021527429.tif 000132
の構造を有するコンジュゲートであり、
式中：Ｒ１１４、Ａ、ｙ、及びＬ１は、先の式（Ｇ）のコンジュゲートについて定義される通りである。
【０２３６】
実施形態８７．式（Ｇ）又は式（Ｇ−１）の構造を有するコンジュゲートは、式（Ｇ−４）：
【化１３２】
2021527429.tif 000133
の構造を有するコンジュゲートであり、
式中：Ｒ１１４、Ａ、ｙ、及びＬ１は、先の式（Ｇ）のコンジュゲートについて定義される通りである。
【０２３７】
実施形態８８．式（Ｇ）又は式（Ｇ−１）の構造を有するコンジュゲートは、式（Ｇ−５）：
【化１３３】
2021527429.tif 000134
の構造を有するコンジュゲートであり、
式中：Ｒ１１４、Ａ、ｙ、及びＬ１は、先の式（Ｇ）のコンジュゲートについて定義される通りである。
【０２３８】
実施形態８９．式（Ｈ）の構造を有するコンジュゲートは、式（Ｈ−２）：
【化１３４】
2021527429.tif 000135
の構造を有するコンジュゲートであり、
式中：Ｒ１１４、Ａ、ｙ、及びＬ１は、先の式（Ｈ）のコンジュゲートについて定義される通りである。
【０２３９】
実施形態９０．式（Ｈ）の構造を有するコンジュゲートは、式（Ｈ−３）：
【化１３５】
2021527429.tif 000136
の構造を有するコンジュゲートであり、
式中：Ｒ１１４、Ａ、ｙ、及びＬ１は、先の式（Ｈ）のコンジュゲートについて定義される通りである。
【０２４０】
実施形態９１．式（Ｈ）又は式（Ｈ−１）の構造を有するコンジュゲートは、式（Ｈ−４）：
【化１３６】
2021527429.tif 000137
の構造を有するコンジュゲートであり、
式中：Ｒ１１４、Ａ、ｙ、及びＬ１は、先の式（Ｈ）のコンジュゲートについて定義される通りである。
【０２４１】
実施形態９２．式（Ｈ）又は式（Ｈ−１）の構造を有するコンジュゲートは、式（Ｈ−５）：
【化１３７】
2021527429.tif 000138
の構造を有するコンジュゲートであり、
式中：Ｒ１１４、Ａ、ｙ、及びＬ１は、先の式（Ｈ）のコンジュゲートについて定義される通りである。
【０２４２】
実施形態９３．Ｌ１は、−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊又は−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｍ−＊＊であり、式中、＊＊は、Ｒ１１４への付着点を示し；そして
Ｘ１は、
【化１３８】
2021527429.tif 000139
であり、式中、＊＊は、−ＮＨ−又はＸ２への付着点を示す、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）のコンジュゲート、又は実施形態６９〜９２のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２４３】
実施形態９４．Ｌ１は−Ｘ１Ｃ（＝Ｏ）（（ＣＨ２）ｍＯ）ｐ（ＣＨ２）ｍ−＊＊であり、式中、＊＊は、Ｒ１１４への付着点を示し；そして
Ｘ１は、
【化１３９】
2021527429.tif 000140
であり、式中、＊＊は、−ＮＨ−又はＸ２への付着点を示す、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）のコンジュゲート、又は実施形態６９〜９２のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２４４】
実施形態９５．各ｍは独立して、１、２、３、４、５、及び６から選択される、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）のコンジュゲート、又は実施形態６９〜９４のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２４５】
実施形態９６．各ｍは独立して、１、２、３、４、及び５から選択される、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）のコンジュゲート、又は実施形態６９〜９４のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２４６】
実施形態９７．各ｍは独立して、１、２、３、及び４から選択される、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）のコンジュゲート、又は実施形態６９〜９４のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２４７】
実施形態９８．各ｍは独立して、１、２、及び３から選択される、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）のコンジュゲート、又は実施形態６９〜９４のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２４８】
実施形態９９．各ｍは独立して、１及び２から選択される、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）のコンジュゲート、又は実施形態６９〜９４のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２４９】
実施形態１００．各ｎは独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、及び１２から選択される、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）のコンジュゲート、又は実施形態６９〜９９のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２５０】
実施形態１０１．各ｎは独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、及び１１から選択される、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）のコンジュゲート、又は実施形態６９〜９９のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２５１】
実施形態１０２．各ｎは独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０から選択される、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）のコンジュゲート、又は実施形態６９〜９９のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２５２】
実施形態１０３．各ｎは独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、及び９から選択される、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）のコンジュゲート、又は実施形態６９〜９９のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２５３】
実施形態１０４．各ｎは独立して、１、２、３、４、５、６、７、及び８から選択される、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）のコンジュゲート、又は実施形態６９〜９９のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２５４】
実施形態１０５．各ｎは独立して、１、２、３、４、５、６、及び７から選択される、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）のコンジュゲート、又は実施形態６９〜９９のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２５５】
実施形態１０６．各ｎは独立して、１、２、３、４、５、及び６から選択される、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）のコンジュゲート、又は実施形態６９〜９９のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２５６】
実施形態１０７．各ｎは独立して、１、２、３、４、及び５から選択される、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）のコンジュゲート、又は実施形態６９〜９９のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２５７】
実施形態１０８．各ｎは独立して、１、２、３、及び４から選択される、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）のコンジュゲート、又は実施形態６９〜９９のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２５８】
実施形態１０９．各ｎは独立して、１、２、及び３から選択される、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）のコンジュゲート、又は実施形態６９〜９９のいずれか１つのコンジュゲート。先の実施形態のいずれかにおいて、各ｎは独立して、１及び２から選択される。
【０２５９】
実施形態１１０．各ｙは独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、及び１２から選択される、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）のコンジュゲート、又は実施形態６９〜１０９のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２６０】
実施形態１１１．各ｙは独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、及び１１から選択される、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）のコンジュゲート、又は実施形態６９〜１０９のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２６１】
実施形態１１２．各ｙは独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０から選択される、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）のコンジュゲート、又は実施形態６９〜１０９のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２６２】
実施形態１１３．各ｙは独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、及び９から選択される、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）のコンジュゲート、又は実施形態６９〜１０９のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２６３】
実施形態１１４．各ｙは独立して、１、２、３、４、５、６、７、及び８から選択される、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）のコンジュゲート、又は実施形態６９〜１０９のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２６４】
実施形態１１５．各ｙは独立して、１、２、３、４、５、６、及び７から選択される、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）のコンジュゲート、又は実施形態６９〜１０９のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２６５】
実施形態１１６．各ｙは独立して、１、２、３、４、５、及び６から選択される、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）のコンジュゲート、又は実施形態６９〜１０９のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２６６】
実施形態１１７．各ｙは独立して、１、２、３、４、及び５から選択される、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）のコンジュゲート、又は実施形態６９〜１０９のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２６７】
実施形態１１８．各ｙは独立して、１、２、３、及び４から選択される、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）のコンジュゲート、又は実施形態６９〜１０９のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２６８】
実施形態１１９．各ｙは独立して、１、２、及び３から選択される、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）のコンジュゲート、又は実施形態６９〜１０９のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２６９】
実施形態１２０．各ｙは独立して、１及び２から選択される、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）のコンジュゲート、又は実施形態６９〜１０９のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２７０】
実施形態１２１．Ｌ１は
【化１４０】
2021527429.tif 000141
であり、式中、＊＊は、−ＮＨ−又はＸ２への付着点を示す、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）のコンジュゲート、又は実施形態６９〜１２０のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２７１】
実施形態１２１．Ｌ１は
【化１４１】
2021527429.tif 000142
であり、式中、＊＊は、−ＮＨ−又はＸ２への付着点を示す、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）のコンジュゲート、又は実施形態６９〜１２０のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２７２】
実施形態１２２．Ｒ１１４は、
【化１４２】
2021527429.tif 000143
であり、式中、＊は、Ａへの付着点を示す、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、式（Ｈ）のコンジュゲート、又は実施形態６９〜１２１のいずれか１つのコンジュゲート。
【０２７３】
実施形態１２３．
【化１４３】
2021527429.tif 000144
から選択され、式中、ｙ及びＡは、先の式（Ｅ）のコンジュゲートについて定義される通りである、式（Ｅ）、式（Ｅ−１）、式（Ｅ−２）、及び式（Ｅ−４）のコンジュゲート。
【０２７４】
実施形態１２４．
【化１４４】
2021527429.tif 000145
から選択され、式中、ｙ及びＡは、先の式（Ｅ）のコンジュゲートについて定義される通りである、式（Ｅ）、式（Ｅ−１）、式（Ｅ−３）、及び式（Ｅ−５）のコンジュゲート。
【０２７５】
実施形態１２５．
【化１４５】
2021527429.tif 000146
から選択され、式中、ｙ及びＡは、先の式（Ｆ）のコンジュゲートについて定義される通りである、式（Ｆ）、式（Ｆ−１）、式（Ｆ−２）、及び式（Ｆ−４）のコンジュゲート。
【０２７６】
実施形態１２６．
【化１４６】
2021527429.tif 000147
から選択され、式中、ｙ及びＡは、先の式（Ｆ）のコンジュゲートについて定義される通りである、式（Ｆ）、式（Ｆ−１）、式（Ｆ−３）、及び式（Ｆ−５）のコンジュゲート。
【０２７７】
実施形態１２７．
【化１４７】
2021527429.tif 000148
から選択され、式中、ｙ及びＡは、先の式（Ｇ）のコンジュゲートについて定義される通りである、式（Ｇ）、式（Ｇ−１）、式（Ｇ−２）、及び式（Ｇ−４）のコンジュゲート。
【０２７８】
実施形態１２８．
【化１４８】
2021527429.tif 000149
から選択され、式中、ｙ及びＡは、先の式（Ｇ）のコンジュゲートについて定義される通りである、式（Ｇ）、式（Ｇ−１）、式（Ｇ−３）、及び式（Ｇ−５）のコンジュゲート。
【０２７９】
実施形態１２９．
【化１４９】
2021527429.tif 000150
から選択され、式中、ｙ及びＡは、先の式（Ｈ）のコンジュゲートについて定義される通りである、式（Ｈ）、式（Ｈ−１）、式（Ｈ−２）、及び式（Ｈ−４）のコンジュゲート。
【０２８０】
実施形態１３０．
【化１５０】
2021527429.tif 000151
から選択され、式中、ｙ及びＡは、先の式（Ｈ）のコンジュゲートについて定義される通りである、式（Ｈ）、式（Ｈ−１）、式（Ｈ−３）、及び式（Ｈ−５）のコンジュゲート。
【０２８１】
本明細書中で開示される式、例えば式（Ａ）、式（Ｂ）、式（Ｃ）、式（Ｄ）、式（Ｅ）、式（Ｆ）、式（Ｇ）、及び式（Ｈ）のいずれの化合物も、以下の例に記載される方法を用いて生成することができる。以下の例は、本発明を説明することが意図されており、その限定であると解釈されるべきでない。温度は、摂氏度で与えられる。特に言及されないならば、全ての蒸発は、減圧下で、典型的には約１５ｍｍＨｇ〜１００ｍｍＨｇ（＝２０〜１３３ｍｂａｒ）で実行される。最終生成物、中間体、及び出発物質の構造は、標準的な分析方法、例えば、微量分析及び分光学的特徴、例えば、ＭＳ、ＩＲ、ＮＭＲによって確認される。用いられる略語は、当該技術における従来のものである。
【０２８２】
略語：
【０２８３】
【表１】
2021527429.tif 000152
【０２８４】
本発明の化合物を合成するのに利用される全ての出発物質、構築ブロック、試薬、酸、塩基、脱水剤、溶媒、及び触媒は、市販のものであるか、当業者に知られている有機合成方法によって生成することができ、又は本明細書中に記載される有機合成方法によって生成することができる。
【０２８５】
中間体の合成
（Ｓ）−ｔ−ブチル（３−（２−アミノ−３−ヒドロキシプロピル）フェニル）カルバマート（ｉ−１）の合成
【化１５１】
2021527429.tif 000153
工程１：ＴＨＦ中ＢＨ３（１Ｍ、１０ｍｌ）を、ＴＨＦ中（Ｓ）−２−（（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−ニトロフェニル）プロパン酸（５６２ｍｇ、１．８１ｍｍｏｌ）（１０ｍｌ）に、０℃にて撹拌しながら加えた。次に、反応液を５０℃にて１時間撹拌した。反応混合液を０℃にて冷却して、水でクエンチして、ＥｔＯＡｃで希釈して、１０％水性Ｋ２ＣＯ３で洗浄して、ＭｇＳＯ４上で乾燥させて、濾過して濃縮した。粗化合物を、シリカゲルカラム（３０〜７０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）によって精製して、（Ｓ）−ｔ−ブチル（１−ヒドロキシ−３−（３−ニトロフェニル）プロパン−２−イル）カルバマートを白色の固体として得た。ＭＳ  ｍ／ｚ  ３１９．１（Ｍ＋Ｎａ）．保持時間１．１８３ｍｉｎ．１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ  ８．１３−８．０４（ｍ，２Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｄｄ，Ｊ＝８．９，７．６Ｈｚ，１Ｈ），４．７６（ｓ，１Ｈ），３．８７（ｄｑ，Ｊ＝８．０，４．６，４．１Ｈｚ，１Ｈ），３．６９（ｄｄ，Ｊ＝１０．９，３．９Ｈｚ，１Ｈ），３．５８（ｄｄ，Ｊ＝１０．８，４．７Ｈｚ，１Ｈ），２．９７（ｔｄ，Ｊ＝１３．１，１２．５，７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．３７（ｓ，９Ｈ）．
【０２８６】
工程２：アセトニトリル中（Ｓ）−ｔ−ブチル（１−ヒドロキシ−３−（３−ニトロフェニル）プロパン−２−イル）カルバマート（０．３１ｇ、１．０ｍｍｏｌ）（５ｍｌ）に、１０％塩酸（５ｍｌ）を加えた。反応混合液をｒｔにて４８時間撹拌してから濃縮して、（Ｓ）−２−アミノ−３−（３−ニトロフェニル）プロパン−１−オールをＨＣｌ塩として得た。ＭＳ  ｍ／ｚ  １９７．２（Ｍ＋Ｈ）．保持時間０．７７５ｍｉｎ．
【０２８７】
工程３：（Ｓ）−２−アミノ−３−（３−ニトロフェニル）プロパン−１−オールＨＣｌ塩（０．２４３ｇ、１．０４６ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１０ｍｌ）中に溶解させて、１０％パラジウム炭素（５０ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）を加えた。２Ｌ水素バルーンを取り付けた。反応液をＨ２で３回フラッシュしてから、ｒｔにて１時間撹拌した。ＬＣＭＳが、反応が完了したことを示した。反応液をセライトパッドで濾過して濃縮して、（Ｓ）−２−アミノ−３−（３−アミノフェニル）プロパン−１−オールをＨＣｌ塩として得た。ＭＳ  ｍ／ｚ  １６７．２（Ｍ＋Ｈ）．保持時間０．３７３ｍｉｎ．
【０２８８】
工程４：（Ｓ）−２−アミノ−３−（３−アミノフェニル）プロパン−１−オールＨＣｌ塩（０．２１２ｇ、１．０４６ｍｍｏｌ）、Ｂｏｃ２Ｏ（２２８ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）、及びジオキサン−水−ＡｃＯＨ（１０：９：１、２０ｍｌ）を組み合わせて、ｒｔにて３日間撹拌した。ＬＣＭＳが、反応が７５％完了したことを示した。追加のＢｏｃ２Ｏ（１５０ｍｇ）を加えて、反応液をさらに６時間撹拌した。次に、反応混合液を濃縮して、分取ＨＰＬＣ（０．０５％ＴＦＡ入り水中１０〜４０％アセトニトリル）で精製して、（Ｓ）−ｔ−ブチル（３−（２−アミノ−３−ヒドロキシプロピル）フェニル）カルバマート（ｉ−１）を油として得た。ＭＳ  ｍ／ｚ  ２６７．２（Ｍ＋Ｈ）．保持時間１．０１１ｍｉｎ．
【０２８９】
（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタン酸（ｉ−２）
【化１５２】
2021527429.tif 000154
の合成
工程１：Ｄｉｌ−ＯｔＢｕ  ＨＣｌ塩（
【化１５３】
2021527429.tif 000155
：３８８ｍｇ、０．９８２ｍｍｏｌ）、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−（ｔ−ブトキシカルボニル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３カルボン酸（
【化１５４】
2021527429.tif 000156
２８７ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（４１１ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（０．４２ｍｌ、２．３８ｍｍｏｌ）、及びＤＭＦ（５ｍｌ）を組み合わせて、ｒｔにて３０分間撹拌した。反応混合液を水（１０ｍｌ）で希釈して、ＲＰ−Ｃ１８  ＩＳＣＯによって精製して、ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−３−（（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバモイル）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボキシラート
【化１５５】
2021527429.tif 000157
を得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝５８２．５，ＨＰＬＣピークＲＴ＝１．５４２ｍｉｎ
【０２９０】
工程２：工程１で得た、１，４−ジオキサン中４Ｍ  ＨＣｌ中生成物（５４０ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）（１０ｍｌ）を、ｒｔにて一晩撹拌した。反応混合液を濃縮して、（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタン酸
【化１５６】
2021527429.tif 000158
を得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝４２６．２，ＨＰＬＣピークＲＴ＝０．７３６ｍｉｎ
【０２９１】
工程３：工程２において得た生成物（４３０ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）、３７％ホルムアルデヒド溶液（０．３８ｍｌ、４．７ｍｍｏｌ）、酢酸（０．２７ｍｌ、４．６５ｍｍｏｌ）、ＮａＢＨ３ＣＮ（５８５ｍｇ、９．３１ｍｍｏｌ）、及びＭｅＯＨ（１０ｍｌ）を組み合わせて、ｒｔにて３０分間撹拌してから濃縮した。残留物を、ＲＰ−Ｃ１８  ＩＳＣＯによって精製して、４５０ｍｇの（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタン酸（ｉ−２）をＴＦＡ塩として得た。ＴＦＡ塩を、１０ｍｌの１２Ｎ  ＨＣｌ溶液で処理して、二倍に濃縮して、（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタン酸ＨＣｌ塩を得た。ＭＳ（ｍ＋１）＝４４０．２，ＨＰＬＣピークＲＴ＝０．７５４ｍｉｎ．
【０２９２】
Ｄａｐ−ＯＭｅ：（（２Ｒ，３Ｒ）−メチル３−メトキシ−２−メチル−３−（（Ｓ）−ピロリジン−２−イル）プロパノアート）（ｉ−３）
【化１５７】
2021527429.tif 000159
の合成
工程１：Ｂｏｃ−Ｄａｐ−ＯＨ（
【化１５８】
2021527429.tif 000160
３．１１ｇ、１０．８ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（２．９９ｇ、２１．６ｍｍｏｌ）、ヨードメタン（２．９５ｇ）、及びアセトン（５５ｍＬ）を組み合わせた。反応液を２０℃にて２時間撹拌した。追加のヨウ化メチル（２．２８ｇ）を反応液に加えて、反応液を４０℃にて３時間撹拌した。反応混合液を濃縮した。残留物を、２００ｍＬ  ＥｔＯＡｃと１００ｍＬ  Ｈ２Ｏに分配した。有機層を分離して、５０ｍＬ飽和ａｑ  ＮａＣｌで洗浄して、ＭｇＳＯ４上で乾燥させて、濾過して濃縮して、Ｂｏｃ−Ｄａｐ−ＯＭｅ
【化１５９】
2021527429.tif 000161
を黄色の油として得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ計算値３２４．２，実測値３２４．２（Ｍ＋２３）．保持時間１．２４５ｍｉｎ．
【０２９３】
工程２：Ｂｏｃ−Ｄａｐ−ＯＭｅ（３．１０７ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）を、ジエチルエーテル中ＨＣｌ（２Ｍ、１０ｍＬ）と組み合わせて、濃縮した。この操作を繰り返した。反応は、７回目の処理後に完了した。Ｄａｐ−ＯＭｅ（ｉ−３）のＨＣｌ塩を、濃縮後に白色の固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  計算値  ２０２．１，実測値２０２．２（Ｍ＋１）．保持時間０．４８６ｍｉｎ．１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ４．０６５−４．０４１（ｍ，１Ｈ），３．７３２（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），３．７０６（ｓ，３Ｈ），３．６１５（ｓ，３Ｈ），３．３６８（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），３．３１４（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），２．７９５（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），２．０８５−１．９００（ｍ，４Ｈ），１．２８７（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）．
【０２９４】
ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−（３−（２−アミノ−２−（チアゾール−２−イル）エチル）フェニル）カルバマート（ｉ−４）
【化１６０】
2021527429.tif 000162
の合成
工程１：２−（３−ニトロフェニル）酢酸（３ｇ、１６．５６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（乾燥、１７ｍｌ）に、ＨＡＴＵ（６．９３ｇ、１８．２２ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（１．６１５ｇ、１６．５６ｍｍｏｌ）、及びＤＩＰＥＡ（１４．４６ｍｌ、８３ｍｍｏｌ）をＲＴにて加えた。反応混合液をＲＴにて一晩撹拌した。反応混合液を高真空下で濃縮して、ほとんどの溶媒を除去した。次に、残留物を、ＤＣＭと水の間に抽出した。ａｑ．相を、ＤＣＭによって２×抽出した。組み合わせたＤＣＭ相を真空下で濃縮した。残留物を、シリカゲルフラッシュカラム（ＥｔＯＡｃ／ヘプタン０〜７０％、その後７０％）によって分離して、３．５ｇのＮ−メトキシ−Ｎ−メチル−２−（３−ニトロフェニル）アセトアミドを白色の固体として得た。ＭＳ  ｍ／ｚ  ２２５．１（Ｍ＋１）．保持時間１．０９ｍｉｎ．１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ  ８．２８−８．０９（ｍ，２Ｈ），７．６７（ｍ，１Ｈ），７．６３−７．４６（ｍ，１Ｈ），３．９０（ｓ，２Ｈ），３．７４（ｓ，３Ｈ），３．２４（ｓ，３Ｈ）．
【０２９５】
工程２：Ｎ２雰囲気下の−７８℃（アセトン−ドライアイス浴）の、ＴＭＥＤＡ（２．６３ｍＬ、１７．３９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（乾燥、３０ｍｌ）に、ｎ−ブチルリチウム（ヘキサン中２．５Ｍ）（１．０２８ｇ、１６．０６ｍｍｏｌ）を滴加した。次に、−７８℃にて、２−ブロモチアゾール（２．６３ｇ、１６．０６ｍｍｏｌ）も反応混合液に滴加した。反応混合液を−７８℃にて１時間撹拌した。Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル−２−（３−ニトロフェニル）アセトアミド（３ｇ、１３．３８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ混合液（３０ｍｌ）を、反応混合液に−７８℃にて滴加した。反応混合液を、−７８℃にて１時間、続いて−１０℃（アセトン−氷浴）にて２時間撹拌した。反応混合液を、ｓａｔ．ＫＨＳＯ４  ａｑ．溶液を加えることによってクエンチしてから、ＥｔＯＡｃで３×抽出した。組み合わせたＥｔＯＡｃ相を、ｓａｔ．ＮａＣｌ、ＮａＳＯ４上で乾燥させて、濃縮した。残留物を、シリカゲルフラッシュカラム（ＥｔＯＡｃ／ヘプタン０〜３０％、その後３０％）によって分離して、１．９５ｇの２−（３−ニトロフェニル）−１−（チアゾール−２−イル）エタン−１−オンを淡い黄色の油として得た。ＭＳ  ｍ／ｚ  ２４９．０（Ｍ＋１）．保持時間１．３４ｍｉｎ．１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ  ８．３３−８．２２（ｍ，１Ｈ），８．１７（ｄｄｄ，Ｊ＝８．１，２．３，１．０Ｈｚ，１Ｈ），８．１０（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７９−７．６７（ｍ，２Ｈ），７．５４（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），４．６２（ｓ，２Ｈ）．
【０２９６】
工程３：Ｎ２雰囲気下の０℃（氷−水浴）の、（＋）−ＤＩＰ−クロリド（商標）（９．２２ｇ、２８．８ｍｍｏｌ）のジエチルエーテル溶液（７ｍｌ）に、２−（３−ニトロフェニル）−１−（チアゾール−２−イル）エタン−１−オン（２．３８ｇ、９．５９ｍｍｏｌ）のジエチルエーテル溶液（３７ｍｌ）を滴加した。反応混合液を０℃にて２４時間撹拌した。次に、混合液を、１０％ＮａＯＨ及び３０％Ｈ２Ｏ２の３０ｍｌの（１：１）混合液で、水−氷浴内で１０℃にて中和した。混合液をＲＴにて１時間撹拌した。次に、混合液を水で希釈して、ＥｔＯＡｃで３×抽出した。組み合わせたＥｔＯＡｃ相を、ｓａｔ．Ｋ２ＣＯ３、ｓａｔ．ＮａＣｌで洗浄して、ＮａＳＯ４上で乾燥させて、濃縮した。残留物を、シリカゲルフラッシュカラム（ＥｔＯＡｃ／ヘプタン０〜６０％、その後６０％）によって分離して、１．６３９ｇの（Ｒ）−２−（３−ニトロフェニル）−１−（チアゾール−２−イル）エタン−１−オールを淡い黄色の固体として得た。ＭＳ  ｍ／ｚ  ２５１．１（Ｍ＋１）．保持時間１．０９ｍｉｎ．１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ  ８．３３−８．０７（ｍ，２Ｈ），８．０７−７．８０（ｍ，１Ｈ），７．７４−７．５５（ｍ，１Ｈ），７．５５−７．３６（ｍ，２Ｈ），５．５５（ｄｄ，Ｊ＝７．９，４．１Ｈｚ，１Ｈ），４．４８（ｓ，１Ｈ），３．５３（ｄｄ，Ｊ＝１３．９，４．０Ｈｚ，１Ｈ），３．３２（ｄｄ，Ｊ＝１３．９，８．１Ｈｚ，１Ｈ）．９２％ｅ．ｅ．を、キラルＳＦＣによって判定した。
【０２９７】
工程４：（Ｒ）−２−（３−ニトロフェニル）−１−（チアゾール−２−イル）エタン−１−オール（１．６３６ｇ、６．５４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ溶液（２０ｍｌ）に、Ｐｄ／Ｃ（１０％、０．６９６ｇ、０．６５４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合液に、真空／Ｈ２の３サイクルの後にＨ２（１気圧）をチャージして、ＲＴにて撹拌した。一晩の撹拌の後に、反応混合液をセライトで濾過して、ＭｅＯＨで洗浄した。濾液を真空下で濃縮して、１．３ｇの（Ｒ）−２−（３−アミノフェニル）−１−（チアゾール−２−イル）エタン−１−オールを固体として得、これをさらに精製することなく次の工程に直接用いた。ＭＳ  ｍ／ｚ  ２２１．１（Ｍ＋１）．保持時間０．５０ｍｉｎ．１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ７．７２（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），６．４６（ｔ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），６．４２−６．２９（ｍ，２Ｈ），６．１４（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），５．０３−４．７８（ｍ，３Ｈ），３．０３（ｄｄ，Ｊ＝１３．７，４．０Ｈｚ，１Ｈ），２．７２（ｄｄ，Ｊ＝１３．７，８．７Ｈｚ，１Ｈ）．
【０２９８】
工程５：（Ｒ）−２−（３−アミノフェニル）−１−（チアゾール−２−イル）エタン−１−オール（１．３ｇ、５．９２ｍｍｏｌ）のジオキサン／水混合液（１／１、１６ｍｌ／１６ｍｌ）に、Ｂｏｃ２Ｏ（１．５１２ｍｌ、６．５１ｍｍｏｌ）及びＮａＯＨ（０．２８４ｇ、７．１０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合液をＲＴにて一晩撹拌した。反応混合液を１０ｍｌの水に加えてから、ＥｔＯＡｃで抽出した（３×４０ｍｌ）。有機相を組み合わせて、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させてから、真空下で濃縮した。次に、残留物を、シリカゲルフラッシュカラム（ＥｔＯＡｃ／ヘプタン０〜８０％、その後８０％）によって分離して、１．２４ｇのｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−（３−（２−ヒドロキシ−２−（チアゾール−２−イル）エチル）フェニル）カルバマートを固体として得た。ＭＳ  ｍ／ｚ  ３２１．３（Ｍ＋１）．保持時間１．２６ｍｉｎ．１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ９．２４（ｓ，１Ｈ），７．７３（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｔ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．２５（ｄｄｄ，Ｊ＝８．２，２．３，１．１Ｈｚ，１Ｈ），７．１１（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８０（ｄｔ，Ｊ＝７．７，１．２Ｈｚ，１Ｈ），６．２０（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），４．９７（ｄｄｄ，Ｊ＝８．６，５．７，４．０Ｈｚ，１Ｈ），３．１３（ｄｄ，Ｊ＝１３．７，４．０Ｈｚ，１Ｈ），２．８３（ｄｄ，Ｊ＝１３．７，８．７Ｈｚ，１Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ）．
【０２９９】
工程６：Ｎ２雰囲気下のｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−（３−（２−ヒドロキシ−２−（チアゾール−２−イル）エチル）フェニル）カルバマート（１．２ｇ、３．７５ｍｍｏｌ）の氷−水浴冷却ＴＨＦ溶液（乾燥、２５ｍｌ）に、ＰＰｈ３（１．６７０ｇ、６．３７ｍｍｏｌ）を加えた。次に、ＤＥＡＤ（トルエン中４０％ｗｔ）（２．９０ｍｌ、６．３７ｍｍｏｌ）に続いてＤＰＰＡ（１．３７２ｍｌ、６．３７ｍｍｏｌ）を０℃にて滴加した。次に、冷浴を取り除いて、反応混合液をＲＴにて一晩撹拌した。反応混合液を真空下で濃縮してから、フラッシュシリカゲルカラム分離（ＥｔＯＡｃ／ヘプタン０〜３０％、その後３０％）にかけて、１．０３ｇのｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−（３−（２−アジド−２−（チアゾール−２−イル）エチル）フェニル）カルバマートを油として得た。ＭＳ  ｍ／ｚ  ３４６．３（Ｍ＋１）．保持時間１．５５ｍｉｎ．１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ９．２９（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），７．７６（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｔ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｄｄｄ，Ｊ＝８．３，２．２，１．１Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８６（ｄｔ，Ｊ＝７．９，１．２Ｈｚ，１Ｈ），５．３１（ｄｄ，Ｊ＝８．７，５．７Ｈｚ，１Ｈ），３．１７（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），３．０９（ｄｄ，Ｊ＝１３．９，８．７Ｈｚ，１Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ）．
【０３００】
工程７：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−（３−（２−アジド−２−（チアゾール−２−イル）エチル）フェニル）カルバマート（８６１ｍｇ、２．４９３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ溶液（４ｍｌ）に、Ｐｄ／Ｃ（１０％湿潤、２６５ｍｇ、０．２４９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合液に、真空／Ｈ２の３サイクルの後にＨ２（１気圧）をチャージして、ＲＴにて撹拌した。一晩の撹拌の後に、反応混合液を濃縮してから、セライトで濾過して、ＭｅＯＨで洗浄した。濾液を真空下で濃縮して、７８１ｍｇのｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−（３−（２−アミノ−２−（チアゾール−２−イル）エチル）フェニル）カルバマート（ｉ−４）を粘着性のある油として得た。ＭＳ  ｍ／ｚ  ３２０．２（Ｍ＋１）．保持時間０．９１ｍｉｎ．１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ９．２６（ｓ，１Ｈ），７．７１（ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，１Ｈ），７．３６（ｔ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｄｔ，Ｊ＝８．３，１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．１３（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），６．７８（ｄｔ，Ｊ＝７．６，１．３Ｈｚ，１Ｈ），４．３１（ｄｄ，Ｊ＝８．７，４．７Ｈｚ，１Ｈ），３．１４（ｄｄ，Ｊ＝２１．２，５．０Ｈｚ，１Ｈ），２．７３（ｄｄ，Ｊ＝１３．４，８．７Ｈｚ，１Ｈ），２．１１（ｓ，２Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ）．
【０３０１】
例示的な薬物部分の合成
実施例Ａ：（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−２−（３−アミノフェニル）−１−（チアゾール−２−イル）エチル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（Ｃ１）
【化１６１】
2021527429.tif 000163
の合成
工程１：（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパン酸（２５０ｍｇ、０．３４６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（４ｍｌ）に、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−（３−（２−アミノ−２−（チアゾール−２−イル）エチル）フェニル）カルバマート（ｉ−４）（１１０ｍｇ、０．３４６ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１５８ｍｇ、０．４１５ｍｍｏｌ）、及びＤＩＰＥＡ（３６２μｌ、２．０７５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合液をＲＴにて一晩撹拌した。反応混合液を真空下で濃縮した。次に、残留物をＭｅＯＨ中に溶解させて、ＩＳＣＯ  ｇｏｌｄ  Ｃ−１８  １００グラム逆相カラム（ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ  ０〜１００％）によって分離して、１７３ｍｇのｔｅｒｔ−ブチル（３−（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−（チアゾール−２−イル）エチル）フェニル）カルバマートを白色の粉末として得た。ＭＳ  ｍ／ｚ  ９１１．０（Ｍ＋１）．保持時間１．１５ｍｉｎ．
【０３０２】
工程２：ｔｅｒｔ−ブチル（３（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−（チアゾール−２−イル）エチル）フェニル）カルバマート（１７３ｍｇ、０．１９０ｍｍｏｌ）を、１ｍｌのジオキサン中に溶解させてから、ジオキサン中１０ｍｌ  ４Ｎ  ＨＣｌを混合液に加えた。反応混合液を室温にて３０分間撹拌した。反応混合液を高真空下で濃縮してから、ｓａｔ．ＮａＨＣＯ３とＤＣＭに分配して、ａｑ．相のｐＨを８とした。塩基性のａｑ．相をＤＣＭで３×抽出した。組み合わせたＤＣＭ相を、ｓａｔ．ＮａＣｌ及びＮａ２ＳＯ４上で乾燥させてから、高真空下で濃縮して、１５５ｍｇの（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−２−（３−アミノフェニル）−１−（チアゾール−２−イル）エチル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミドを固体として得た。ＭＳ  ｍ／ｚ  ８１０．５（Ｍ＋１）．保持時間０．９０ｍｉｎ．
【０３０３】
実施例Ｂ：（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（３−アミノフェニル）−３−ヒドロキシプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（Ｃ２）
【化１６２】
2021527429.tif 000164
の合成
工程１：ＤＩＥＡ（０．１０５ｍｌ、０．６０ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（４５．５ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ中（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタン酸（ｉ−２）（５７ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）（２ｍｌ）に加えた。反応混合液をｒｔにて５分間撹拌してから、ＤＭＦ中ＤａｐＯＭｅ（ｉ−３）（２８．５ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）（１ｍｌ）を加えた。反応混合液をｒｔにて１時間撹拌してから、分取ＨＰＬＣ（０．０５％ＴＦＡを含有する１０〜５０％アセトニトリル−Ｈ２Ｏ）によって精製して、（２Ｒ，３Ｒ）−メチル３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパノアートを得た。ＭＳ  ｍ／ｚ  ６２３．５（Ｍ＋Ｈ）．保持時間１．２２５ｍｉｎ
【０３０４】
工程２：ＬｉＯＨ（３０ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）を、（２Ｒ，３Ｒ）−メチル３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパノアート（４３．２ｍｇ、０．０５９ｍｍｏｌ）（ＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏ中）（１：１、４ｍｌ）に加えた。反応混合液を、ｒｔにて１８時間撹拌して、濃縮して、ＨＣｌ（１Ｎ、１ｍｌ）で酸性化した。粗化合物を、分取ＨＰＬＣ（０．０５％ＴＦＡを含有する１０〜３８％アセトニトリル−Ｈ２Ｏ）によって精製して、（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパン酸をＴＦＡ塩として得た。ＭＳ  ｍ／ｚ  ６０９．５（Ｍ＋Ｈ）．保持時間０．９６２ｍｉｎ．
【０３０５】
工程３：ＤＭＦ中（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパン酸（４５．７ｍｇ、０．０６３ｍｍｏｌ）（１ｍｌ）に、ＤＩＥＡ（０．０５５ｍｌ、０．３２ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（２４．０ｍｇ、０．０６３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合液をｒｔにて１０分間撹拌してから、ＤＭＦ中（Ｓ）−ｔ−ブチル（３−（２−アミノ−３−ヒドロキシプロピル）フェニル）カルバマートＴＦＡ塩（ｉ−１）（２４．１ｍｇ、０．０６３ｍｍｏｌ）（１ｍｌ）に加えた。反応混合液をｒｔにて１時間撹拌してから濃縮した。粗化合物を、分取ＨＰＬＣ（０．０５％ＴＦＡを含有する２０〜７０％アセトニトリル−Ｈ２Ｏ）によって精製して、ｔ−ブチル（３−（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−ヒドロキシプロピル）フェニル）カルバマートをＴＦＡ塩として得た。ＭＳ  ｍ／ｚ  ８５７．５（Ｍ＋Ｈ）．保持時間１．１４５ｍｉｎ．
【０３０６】
工程４：ｔ−ブチル（３−（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−ヒドロキシプロピル）フェニル）カルバマート（６１．４ｍｇ、０．０６３ｍｍｏｌ）の、５％ＨＣｌ入りアセトニトリル−水（１：１、４ｍｌ）溶液を、ｒｔにて２４時間撹拌した。次に、反応混合液を濃縮して、分取ＨＰＬＣ（０．０５％ＴＦＡを含有する１０〜３０％アセトニトリル−Ｈ２Ｏ）によって精製して、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（３−アミノフェニル）−３−ヒドロキシプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（Ｃ２）をＴＦＡ塩として得た。ＭＳ  ｍ／ｚ  ７５７．５（Ｍ＋Ｈ）．保持時間０．７４４ｍｉｎ．
【０３０７】
例示的なリンカー−薬物化合物の合成
実施例Ｃ：（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−２−（３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（３−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）プロパンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）フェニル）−１−（チアゾール−２−イル）エチル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（ＬＰ１）
【化１６３】
2021527429.tif 000165
の合成
工程１：（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−２−（３−アミノフェニル）−１−（チアゾール−２−イル）エチル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（Ｃ１）（１５４ｍｇ、０．１９０ｍｍｏｌ）及びＢｏｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＯＨ（
【化１６４】
2021527429.tif 000166
９２ｍｇ、０．２４７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍｌ）／ＭｅＯＨ（０．１ｍｌ）混合液に、ＥＥＤＱ（９４ｍｇ、０．３８０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合液をＲＴにて一晩撹拌した。反応混合液を真空下で濃縮した。次に、残留物をＭｅＯＨ中に溶解させて、ＩＳＣＯ  ｇｏｌｄ  Ｃ−１８  ５０グラム逆相カラム（０．０５％ＴＦＡを含有するＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ、０〜１００％）によって分離して、２３２ｍｇのｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−（チアゾール−２−イル）エチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバマートをＴＦＡ塩として得た。ＭＳ  ｍ／ｚ  １１６７．３（Ｍ＋１）．保持時間１．１０ｍｉｎ．
【０３０８】
工程２：ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−（チアゾール−２−イル）エチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバマート（２３２ｍｇ、０．１８１ｍｍｏｌ）を、氷−水浴により０℃のＴＦＡ／ＤＣＭの冷溶液（２５％、６ｍｌ）に加えてから、混合液を０℃にて１５分間撹拌して、その後ＲＴに温めた。混合液をＲＴにて３０分間撹拌した。反応混合液を真空下で濃縮した。次に、残留物をＤＭＳＯ中に溶解させて、ＩＳＣＯ  ｇｏｌｄ  Ｃ−１８  ５０グラム逆相カラム（０．０５％ＴＦＡを含有するＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ、０〜１００％）によって分離して、２１９ｍｇの（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−２−（３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）フェニル）−１−（チアゾール−２−イル）エチル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミドをＴＦＡ塩として得た。ＭＳ  ｍ／ｚ  １０６７．２（Ｍ＋１）．保持時間０．８８ｍｉｎ．
【０３０９】
工程３：（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−２−（３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）フェニル）−１−（チアゾール−２−イル）エチル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（２１９ｍｇ  ０．１８ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（２ｍｌ）中に溶解させてから、ＭＡＬ−ＰＥＧ１−ＮＨＳエステル（
【化１６５】
2021527429.tif 000167
７３．１ｍｇ、０．２３６ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１９０μｌ、１．０８７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合液をＲＴにて１時間撹拌した。反応混合液を真空下で濃縮した。次に、残留物をＤＭＳＯ中に溶解させて、ＩＳＣＯ  ｇｏｌｄ  Ｃ−１８  ５０グラム逆相カラム（０．０５％ＴＦＡを含有するＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ、０〜１００％）によって分離して、１７４ｍｇの（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−２−（３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（３−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）プロパンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）フェニル）−１−（チアゾール−２−イル）エチル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（ＬＰ１）をＴＦＡ塩として得た。ＭＳ  ｍ／ｚ  １２６２．４（Ｍ＋１）．保持時間１．０２ｍｉｎ．
【０３１０】
実施例Ｄ：（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（３（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（３−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）プロパンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）フェニル）−３−ヒドロキシプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（ＬＰ２）
【化１６６】
2021527429.tif 000168
の合成
工程１：Ｆｍｏｃ−Ｃｉｔ−ＯＨ（
【化１６７】
2021527429.tif 000169
１０．０ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（１ｍｌ）に、ＤＩＥＡ（１３．０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）に続いてＨＡＴＵ（９．６ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）を加え、そして反応混合液をｒｔにて５分間撹拌してから、溶液を、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（３−アミノフェニル）−３−ヒドロキシプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（Ｃ２）（２０ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）に加えた。この反応混合液をｒｔにて１時間撹拌してから、０．０５％ＴＦＡを含有する１０〜４５％アセトニトリル−Ｈ２Ｏで溶出する、Ｃ１８カラムを用いる逆相ＨＰＬＣによって精製した。所望の生成物を含有する画分を濃縮して、（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−１−（（３−（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−ヒドロキシプロピル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル）カルバマートをＴＦＡ塩として得た。ＬＣＭＳ  ＭＳ  ｍ／ｚ  １１３６．６（Ｍ＋１），保持時間１．０４２分．
【０３１１】
工程２：（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−１−（（３−（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−ヒドロキシプロピル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル）カルバマート（３１．５ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）ＴＦＡ塩を、ＭｅＯＨ（１ｍＬ）中に溶解させた。次に、Ｐｄ／Ｃ（１０ｍｇ、９．４０μｍｏｌ）を加えた。２Ｌ水素バルーンを取り付けて、反応混合液をＨ２で３回真空フラッシュ（ｖａｃｕｕｍ  ｆｌｕｓｈ）してから、Ｈ２下でｒｔにて３０分間撹拌した。次に、触媒を、セライトによる濾過によって除去して、混合液を濃縮して、１Ｎ  ＮａＯＨで処理した。粗混合液を、０．０５％ＴＦＡを含有する５〜３７％アセトニトリル−Ｈ２Ｏで溶出する、Ｃ１８カラムを用いる逆相ＨＰＬＣによって精製した。所望の生成物を含有する画分を凍結乾燥させて、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（３−（（Ｓ）−２−アミノ−５−ウレイドペンタンアミド）フェニル）−３−ヒドロキシプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミドをＴＦＡ塩として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ９１４．６（Ｍ＋１），保持時間０．７７３ｍｉｎ．
【０３１２】
工程３：Ｃｂｚ−Ｖａｌ−ＯＨ（
【化１６８】
2021527429.tif 000170
２．６ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（１ｍｌ）に、ＤＩＥＡ（０．０１１ｍｌ、０．０６１ｍｍｏｌ）に続いてＨＡＴＵ（３．８６ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合液をｒｔにて５分間撹拌してから、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（３（（Ｓ）−２−アミノ−５−ウレイドペンタンアミド）フェニル）−３−ヒドロキシプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（１１．６ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）ＴＦＡ塩のＤＭＦ溶液（１ｍｌ）に加えた。反応混合液をｒｔにて１時間撹拌してから、粗化合物を、０．０５％ＴＦＡを含有する１０〜５０％アセトニトリル−Ｈ２Ｏで溶出する、Ｃ１８カラムを用いる逆相ＨＰＬＣによって精製した。所望の生成物を含有する画分を凍結乾燥させて、ベンジル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−ヒドロキシプロピル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバマートをＴＦＡ塩として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  １１４７．６（Ｍ＋１），保持時間０．９８６ｍｉｎ．
【０３１３】
工程４：ベンジル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（３−（（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−ヒドロキシプロピル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバマート（７．７ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ）ＴＦＡ塩を、ＭｅＯＨ（２ｍｌ）中に溶解させてから、Ｐｄ／Ｃ（５ｍｇ、４．７０μｍｏｌ）を加えた。２Ｌ水素バルーンを取り付けて、反応混合液をＨ２で３回真空フラッシュしてから、Ｈ２下で３０分間撹拌した。ＬＣＭＳが、反応が完了したことを示した。次に、触媒を、セライトによる濾過によって除去してから、混合液を濃縮して、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）フェニル）−３−ヒドロキシプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミドをＴＦＡ塩として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  １０１３．６（Ｍ＋１）保持時間０．７７４ｍｉｎ．
【０３１４】
工程５：ＭＡｌ−ＰＥＧ１−酸（
【化１６９】
2021527429.tif 000171
１．０ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（０．５ｍｌ）に、ＤＩＥＡ（２．８ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）に続いてＨＡＴＵ（１．８ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ）を加えた。反応液をｒｔにて５分間撹拌してから、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）フェニル）−３−ヒドロキシプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミド（４．８ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ）ＴＦＡ塩のＤＭＦ溶液（１ｍｌ）に加えた。反応液をｒｔにて１時間撹拌してから、粗化合物を、０．０５％ＴＦＡを含有する１０〜３８％アセトニトリル−Ｈ２Ｏで溶出する、Ｃ１８カラムを用いる逆相ＨＰＬＣによって精製した。所望の生成物を含有する画分を凍結乾燥させて、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−３−（（（Ｓ）−１−（３−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（３−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）プロパンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）フェニル）−３−ヒドロキシプロパン−２−イル）アミノ）−１−メトキシ−２−メチル−３−オキソプロピル）ピロリジン−１−イル）−３−メトキシ−５−メチル−１−オキソヘプタン−４−イル）（メチル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−２−メチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボキサミドをＴＦＡ塩（ＬＰ−２）として得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  １２０８．５（Ｍ＋１）保持時間０．８８２ｍｉｎ．
【０３１５】
３．ＡＤＣのコンジュゲーション及び調製
式（Ｉ）の抗体コンジュゲートを製造するプロセス
式（Ｉ）のコンジュゲートの形成についての一般的な反応スキームを、以下のスキーム１に示す：
【化１７０】
2021527429.tif 000172
式中：ＲＧ１は、反応基（ほんの一例として、チオール、アミン、又はケトン）であり、リンカー−薬物部分に付着した、適合する反応基ＲＧ２と反応することによって、抗体フラグメントＡを、１つ以上のリンカー−薬物部分に共有結合的に連結する。ＲＧ１基及びＲＧ２基のそのような反応の非限定な例として、チオール（ＲＧ１）と反応してスクシンイミド環を与えるマレイミド（ＲＧ２）、又はケトン（ＲＧ１）と反応してオキシムを与えるヒドロキシルアミン（ＲＧ２）がある。
【０３１６】
式（ＩＩ）のコンジュゲートの形成についての一般的な反応スキームを、以下のスキーム２に示す：
【化１７１】
2021527429.tif 000173
式中：Ａ１、Ａ２、ＬＢ、Ｄ、及びｎは、本明細書中で定義される通りであり、１，３−ジハロアセトンは、１，３−ジクロロアセトン、１，３−ジブロモアセトン、及び１，３−ジヨードアセトンから選択され、そして還元工程は、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）及びトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィンヒドロクロリド（ＴＣＥＰ−ＨＣｌ）から選択される還元剤を用いて達成される。
【０３１７】
ＡＤＣのコンジュゲーション及び調製
式（Ｉ）の抗体コンジュゲートを製造するプロセス
式（Ｉ）のコンジュゲートの形成についての一般的な反応スキームを、以下のスキーム１に示す：
【化１７２】
2021527429.tif 000174
式中：ＲＧ１は、反応基、ほんの一例として、チオール、アミン、又はケトンであり、これらは、リンカー−薬物部分に取り付けられた適合する反応基、ＲＧ２と反応することによって、抗体フラグメントＡを１つ以上のリンカー−薬物部分に共有結合する。ＲＧ１基及びＲＧ２基のそのような反応の非限定的な例として、マレイミド（ＲＧ２）がチオール（ＲＧ１）と反応してスクシンイミド環を与えるもの、又はヒドロキシルアミン（ＲＧ２）がケトン（ＲＧ１）と反応してオキシムを与えるものがある。
【０３１８】
式（ＩＩ）のコンジュゲートの形成のための一般的な反応スキームを、以下のスキーム２に示す：
【化１７３】
2021527429.tif 000175
式中：Ａ１、Ａ２、ＬＢ、Ｄ、及びｎは、本明細書中で定義される通りであり、１，３−ジハロアセトンは、１，３−ジクロロアセトン、１，３−ジブロモアセトン、及び１，３−ジヨードアセトンから選択され、還元工程は、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）及びトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィンヒドロクロリド（ＴＣＥＰ−ＨＣｌ）から選択される還元剤を用いて達成される。
【０３１９】
式（Ｅ）のコンジュゲートの形成のための一般的な反応スキームを、以下のスキーム３に示す：
【化１７４】
2021527429.tif 000176
式中：Ｒ５は、−Ｌ１Ｒ１４、−Ｌ１Ｒ２４、−Ｌ１Ｒ３４、又は−Ｌ１Ｒ４４であり、そしてＲＧ１は、反応基（ほんの一例として、チオール、アミン、又はケトン）であり、式（Ｃ−１）の化合物の適合するＲ１４、Ｒ２４、Ｒ３４、又はＲ４４基と反応して、対応するＲ１１４基を形成する。一例として、チオールと反応してスクシンイミド環を与えるマレイミド、又はケトンと反応してオキシムを与えるヒドロキシルアミンがある。Ａ、ｙ、Ｌ１、Ｒ２、Ｒ５、及びＲ１１４は、本明細書中で定義される通りである。
【０３２０】
式（Ｆ）のコンジュゲートの形成についての一般的な反応スキームを、以下のスキーム４に示す：
【化１７５】
2021527429.tif 000177
式中：Ｒ５は、−Ｌ１Ｒ１４、−Ｌ１Ｒ２４、−Ｌ１Ｒ３４、又はＬ１Ｒ４４であり、ＲＧ１は、反応基、ほんの一例として、チオール、アミン、又はケトンであり、これらは、式（Ｃ−２）の化合物の適合するＲ１４、Ｒ２４、Ｒ３４、又はＲ４４基と反応して、対応するＲ１１４基を形成する。一例として、マレイミドがチオールと反応してスクシンイミド環を与え、又はヒドロキシルアミンがケトンと反応してオキシムを与える。Ａ、ｙ、Ｌ１、Ｒ２、Ｒ５、及びＲ１１４は、本明細書中で定義される通りである。
【０３２１】
式（Ｇ）のコンジュゲートの形成のための一般的な反応スキームを、以下のスキーム５に示す：
【化１７６】
2021527429.tif 000178
式中：Ｒ５は、−Ｌ１Ｒ１４、−Ｌ１Ｒ２４、−Ｌ１Ｒ３４、又はＬ１Ｒ４４であり、ＲＧ１は、反応基、ほんの一例として、チオール、アミン、又はケトンであり、これらは、式（Ｄ−１）の化合物の適合するＲ１４、Ｒ２４、Ｒ３４、又はＲ４４基と反応して、対応するＲ１１４基を形成する。一例として、マレイミドがチオールと反応してスクシンイミド環を与え、又はヒドロキシルアミンがケトンと反応してオキシムを与える。Ａ、ｙ、Ｌ１、Ｒ２、Ｒ５、及びＲ１１４は、本明細書中で定義される通りである。
【０３２２】
式（Ｈ）のコンジュゲートの形成のための一般的な反応スキームを、以下のスキーム６に示す：
【化１７７】
2021527429.tif 000179
式中：Ｒ５は、−Ｌ１Ｒ１４、−Ｌ１Ｒ２４、−Ｌ１Ｒ３４、又はＬ１Ｒ４４であり、ＲＧ１は、反応基、ほんの一例として、チオール、又はアミン、又はケトンであり、これらは、式（Ｄ−２）の化合物の適合するＲ１４、Ｒ２４、Ｒ３４、又はＲ４４基と反応して、対応するＲ１１４基を形成する。一例として、マレイミドがチオールと反応してスクシンイミド環を与え、又はヒドロキシルアミンがケトンと反応してオキシムを与える。Ａ、ｙ、Ｌ１、Ｒ２、Ｒ５、及びＲ１１４は、本明細書中で定義される通りである。
【０３２３】
４．所望の抗ｃＫＩＴ  ＡＤＣの特性評価及び選択
ＤＡＲの判定及びＡＤＣの凝集
ｃＫＩＴ  ＡＤＣのＤＡＲ値を、液体クロマトグラフィ−質量分析（ＬＣ−ＭＳ）によって評価した。化合物対抗体比を、還元かつ脱グリコシル化された（必要に応じて、すなわち、Ｆｃが含まれる場合）サンプルについてのＬＣ−ＭＳデータから推測した。ＬＣ−ＭＳにより、コンジュゲートサンプル中の抗体に取り付けられたリンカー−ペイロード（化合物）の平均分子数の定量が可能となる。
【０３２４】
本発明の抗体薬物コンジュゲートを、分析方法を用いて評価した。そのような分析方法論及び結果は、コンジュゲートが有利な特性、例えば、製造するのをより容易にし、患者に投与するのをより容易にし、より有効にし、かつ／又は患者にとって潜在的により安全にするであろう特性を有することを実証することができる。一例が、サイズ排除クロマトグラフィ（ＳＥＣ）による分子サイズの判定であり、そこでは、サンプル中の所望の抗体種の量が、サンプル中に存在する高分子量の混入物（例えば、ダイマー、マルチマー、又は凝集抗体）又は低分子量の混入物（例えば、抗体フラグメント、分解生成物、又は個々の抗体鎖）の量と比較して判定される。一般に、例えば、抗体サンプルの他の特性、例えば、以下に限定されないが、クリアランス速度、免疫原性、及び毒性に及ぼす凝集体の影響に起因して、より大量のモノマー、及びより少量の、例えば凝集抗体を有することが所望される。更なる例が、疎水性相互作用クロマトグラフィ（ＨＩＣ）による疎水性の判定であり、そこでは、サンプルの疎水性が、一組の標準的な抗体の知られている特性と比較して評価される。一般に、抗体サンプルの他の特性に及ぼす疎水性の影響、例えば、以下に限定されないが、凝集、経時的な凝集、表面への付着、肝毒性、クリアランス速度、及び薬物動態学的曝露に起因して、低い疎水性を有することが所望される。Ｄａｍｌｅ，Ｎ．Ｋ．，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００８；２６（８）：８８４−８８５；Ｓｉｎｇｈ，Ｓ．Ｋ．，Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．２０１５；３２（１１）：３５４１−７１参照。
【０３２５】
抗ｃＫＩＴ  ＡＤＣの選択
本明細書中に記載される方法に用いるのに適した抗ｃＫＩＴ  ＡＤＣを選択するために、インビトロヒト造血幹細胞死滅アッセイを用いて、抗ｃＫＩＴ  ＡＤＣを有効性及び効力についてスクリーニングすることができる。例えば、実施例５に記載される方法を用いて、抗ｃＫＩＴ  ＡＤＣをスクリーニングすることができる。適切な抗ｃＫＩＴ  ＡＤＣを、ＥＣ５０に基づいて選択することができ、例えば、ＥＣ５０が５００μｇ／ｍｌ未満、例えば、１００μｇ／ｍｌ未満、５０μｇ／ｍｌ未満、１０μｇ／ｍｌ未満、又は５μｇ／ｍｌ未満の抗ｃＫＩＴ  ＡＤＣである。
【０３２６】
さらに、肥満細胞上でのｃＫＩＴ発現、及び幹細胞因子（ＳＣＦ）（ｃＫＩＴのリガンド）が、ラット腹膜肥満細胞の直接的脱顆粒をインビトロで、そしてインビボで誘導すると報告されている（Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１９９５  Ｎｏｖ；８６（３）：４２７−３３）。ＳＣＦはまた、ヒト肥満細胞脱顆粒をインビボで誘導する（Ｃｏｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１９９６；１８３（６）：２６８１−６）。移植レシピエントにおいて肥満細胞脱顆粒によって引き起こされる潜在的に有害な作用を回避するために、選択したｃＫＩＴ  ＡＤＣを、肥満細胞脱顆粒をインビトロで誘導する能力について試験することができる。例えば、実施例６に記載する実験を用いて、ｃＫＩＴ  ＡＤＣをスクリーニングすることができ、そして適切な抗ｃＫＩＴ  ＡＤＣを、最小の肥満細胞脱顆粒に基づいて選択することができ、例えば、ベータ−ヘキソサミニダーゼ放出アッセイにおいて、ベースライン補正されたＯ．Ｄ．読出しが、０．２５未満、例えば、０．２未満、０．１５未満、又は０．１未満のものである。
【０３２７】
ｃＫＩＴ抗体及び抗体フラグメント
本開示は、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば抗原結合フラグメント）を提供する。本開示の抗体又は抗体フラグメント（例えば抗原結合フラグメント）として、以下に限定されないが、以下に記載するヒトモノクローナル抗体又はそのフラグメントが挙げられる。
【０３２８】
一部の実施形態において、本開示の抗ｃＫＩＴ抗体又は抗体フラグメント（例えば抗原結合フラグメント）は、より大きな複合体に架橋かつ／又は多量体化された場合でさえ、完全長抗ｃＫＩＴ抗体と比較して、肥満細胞脱顆粒を引き起こす能力が引き下げられている。一部の実施形態において、本明細書中で開示される抗ｃＫＩＴ抗体又は抗体フラグメント（例えば抗原結合フラグメント）は、より大きな複合体に架橋かつ／又は多量体化された場合でさえ、肥満細胞脱顆粒を誘導する能力が引き下げられるように修飾される。例えば、本明細書中で開示される抗ｃＫＩＴ抗体又は抗体フラグメント（例えば抗原結合フラグメント）は、より大きな複合体に架橋かつ／又は多量体化された場合でさえ、完全長抗ｃＫＩＴ抗体、又はそのＦ（ａｂ’）２若しくはＦ（ａｂ’）２フラグメントと比較して、肥満細胞脱顆粒を誘導する能力が、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％引き下げられるように修飾される。一部の実施形態において、本明細書中で開示される抗ｃＫＩＴ抗体又は抗体フラグメント（例えば抗原結合フラグメント）は、抗ｃＫＩＴ  Ｆａｂ又はＦａｂ’フラグメントを含んでよい。一部の実施形態において、本明細書中で開示される抗ｃＫＩＴ抗体又は抗体フラグメント（例えば抗原結合フラグメント）は、より大きな複合体に架橋かつ／又は多量体化された場合でさえ、肥満細胞脱顆粒を誘導する能力が最小であり得、例えば、ベータ−ヘキソサミニダーゼ放出アッセイにおいて、ベースライン補正されたＯ．Ｄ．読出しが、０．２５未満、例えば、０．２未満、０．１５未満、又は０．１未満であり得る。
【０３２９】
本明細書中で提供される抗体薬物コンジュゲートは、ヒトｃＫＩＴ−結合抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）を含む。一部の実施形態において、本明細書中で提供される抗体薬物コンジュゲートは、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合するヒト抗体フラグメント又はヒト化抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）を含む。一部の実施形態において、本明細書中で提供される抗体薬物コンジュゲートは、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合するヒトＦａｂ’又はヒト化Ｆａｂ’を含む。一部の実施形態において、本明細書中で提供される抗体薬物コンジュゲートは、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合するヒトＦａｂ又はヒト化Ｆａｂを含む。
【０３３０】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、表１に記載されるあらゆるＶＨドメインのアミノ酸配列を有するＶＨドメインを含む（例えば、配列番号１０、３６、５４、６９、９５）。他の適切な抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、表１に記載されるＶＨドメインのいずれかと少なくとも８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、又は９９パーセントの配列同一性を有するＶＨドメインを含み得る。
【０３３１】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、表１中で一覧にされるＶＨ  ＣＤＲ（又はＨＣＤＲ）のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ（又はＨＣＤＲ）を含む。特定の態様において、本開示は、表１中で一覧にされるＶＨ  ＣＤＲ（又はＨＣＤＲ）のいずれかのアミノ酸配列を有する、１、２、３、４、５つ、又はそれ以上のＶＨ  ＣＤＲ（又はＨＣＤＲ）を含む（又は代わりに、これらからなる）抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）を提供する。
【０３３２】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、表１に記載されるいずれかのＶＬドメインのアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む（例えば、配列番号２３、４７、８２、１０８）。他の適切な抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、表１に記載されるＶＬドメインのいずれかと少なくとも８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、又は９９パーセントの配列同一性を有するＶＬドメインを含み得る。
【０３３３】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、表１中で一覧にされるＶＬ  ＣＤＲ（又はＬＣＤＲ）のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ（又はＬＣＤＲ）を含む。特定の態様において、本開示は、表１中で一覧にされるＶＬ  ＣＤＲ（又はＬＣＤＲ）のいずれかのアミノ酸配列を有する１、２、３、４、５つ、又はそれ以上のＶＬ  ＣＤＲ（又はＬＣＤＲ）を含む（又は代わりに、これらからなる）抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）を提供する。
【０３３４】
本明細書中で開示される他の抗ｃＫＩＴ抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、突然変異しているが、表１に記載される配列中に示されるＣＤＲ領域と、少なくとも６０、７０、８０、９０、又は９５パーセントの配列同一性をＣＤＲ領域内に有するアミノ酸を含む。一部の態様において、これは、表１に記載される配列中に示されるＣＤＲ領域と比較した場合に、１、２、３、４、又は５つ以下のアミノ酸がＣＤＲ領域内で突然変異している突然変異アミノ酸配列を含む。
【０３３５】
本開示はまた、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）のＶＨ、ＶＬ、重鎖、及び軽鎖をコードする核酸配列を提供する。そのような核酸配列は、哺乳類細胞中での発現のために最適化され得る。
【０３３６】
【表２】
2021527429.tif 000180
【０３３７】
【表３】
2021527429.tif 000181
【０３３８】
【表４】
2021527429.tif 000182
【０３３９】
【表５】
2021527429.tif 000183
【０３４０】
【表６】
2021527429.tif 000184
【０３４１】
【表７】
2021527429.tif 000185
【０３４２】
【表８】
2021527429.tif 000186
【０３４３】
【表９】
2021527429.tif 000187
【０３４４】
【表１０】
2021527429.tif 000188
【０３４５】
【表１１】
2021527429.tif 000189
【０３４６】
【表１２】
2021527429.tif 000190
【０３４７】
【表１３】
2021527429.tif 000191
【０３４８】
【表１４】
2021527429.tif 000192
【０３４９】
【表１５】
2021527429.tif 000193
【０３５０】
【表１６】
2021527429.tif 000194
【０３５１】
【表１７】
2021527429.tif 000195
【０３５２】
【表１８】
2021527429.tif 000196
【０３５３】
【表１９】
2021527429.tif 000197
【０３５４】
【表２０】
2021527429.tif 000198
【０３５５】
【表２１】
2021527429.tif 000199
【０３５６】
【表２２】
2021527429.tif 000200
【０３５７】
【表２３】
2021527429.tif 000201
【０３５８】
【表２４】
2021527429.tif 000202
【０３５９】
【表２５】
2021527429.tif 000203
【０３６０】
【表２６】
2021527429.tif 000204
【０３６１】
【表２７】
2021527429.tif 000205
【０３６２】
本明細書中で開示される他の抗ｃＫＩＴ抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）として、アミノ酸、又はアミノ酸をコードする核酸が突然変異しているが、表１に記載される配列と少なくとも６０、７０、８０、９０、又は９５パーセントの同一性を有するものが挙げられる。一部の態様において、これは、表１に記載される配列中に示される可変領域と比較した場合に、１、２、３、４、又は５つ以下のアミノ酸が可変領域内で突然変異している突然変異アミノ酸配列を含む一方、実質的に同じ治療活性を保持する。
【０３６３】
これらの抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）はそれぞれ、ｃＫＩＴに結合することができるので、ＶＨ、ＶＬ、重鎖、及び軽鎖の配列（アミノ酸配列、及びアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列）は、他のｃＫＩＴ−結合抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）を生じさせるように「混合かつマッチ」され得る。そのような「混合かつマッチ」されたｃＫＩＴ−結合抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、当該技術において知られている結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ及び実施例の項において記載される他のアッセイ）を用いて試験され得る。これらの鎖が混合かつマッチされる場合、特定のＶＨ／ＶＬ対由来のＶＨ配列が、構造的に類似するＶＨ配列で置換されるべきである。同様に、特定の重鎖／軽鎖対由来の重鎖配列が、構造的に類似する重鎖配列で置換されるべきである。同様に、特定のＶＨ／ＶＬ対由来のＶＬ配列が、構造的に類似するＶＬ配列で置換されるべきである。同様に、特定の重鎖／軽鎖対由来の軽鎖配列が、構造的に類似する軽鎖配列で置換されるべきである。
【０３６４】
したがって、一態様において、本開示は：配列番号１０、３６、５４、６９、及び９５（表１）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；並びに配列番号２３、４７、８２、及び１０８（表１）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する単離された抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）を提供し；当該抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する。
【０３６５】
別の態様において、本開示は：配列番号１２、３８、５６、７１、及び９７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；並びに配列番号２５、４９、８４、及び１１０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を有する単離された抗体を提供する。
【０３６６】
別の態様において、本開示は：配列番号１４、４０、５８、７３、及び９９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；並びに配列番号２５、４９、８４、及び１１０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を有する単離された抗体フラグメント（例えばＦａｂ’）を提供する。
【０３６７】
別の態様において、本開示は、表１に記載される重鎖及び軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、又はそれらの組合せを含むｃＫＩＴ−結合抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）を提供する。抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）のＶＨ  ＣＤＲ１（又はＨＣＤＲ１）のアミノ酸配列は、配列番号１、４、６、７、２７、３０、３２、３３、６０、６３、６５、６６、８６、８９、９１、及び９２に示される。抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）のＶＨ  ＣＤＲ２（又はＨＣＤＲ２）のアミノ酸配列は、配列番号２、５、８、２８、３１、３４、５１、５２、５３、６１、６４、６７、８７、９０、及び９３に示される。抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）のＶＨ  ＣＤＲ３（又はＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列は、配列番号３、９、２９、３５、６２、６８、８８、及び９４に示される。抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）のＶＬ  ＣＤＲ１（又はＬＣＤＲ１）のアミノ酸配列は、配列番号１６、１９、２２、４２、４４、４６、７５、７８、８１、１０１、１０４、及び１０７に示される。抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）のＶＬ  ＣＤＲ２（又はＬＣＤＲ２）のアミノ酸配列は、配列番号１７、２０、７６、７９、１０２、及び１０５に示される。抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）のＶＬ  ＣＤＲ３（又はＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列は、配列番号１８、２１、４３、４５、７７、８０、１０３、及び１０６に示される。
【０３６８】
これらの抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）はそれぞれ、ヒトｃＫＩＴに結合することができ、そしてその抗原−結合特異性が主に、ＣＤＲ１、２、及び３の領域によって提供されるならば、ＶＨ  ＣＤＲ１、２、及び３の配列（又はＨＣＤＲ１、２、３）、並びにＶＬ  ＣＤＲ１、２、及び３の配列（又はＬＣＤＲ１、２、３）は、「混合かつマッチ」され得る（すなわち、各抗体が、ＶＨ  ＣＤＲ１、２、及び３、並びにＶＬ  ＣＤＲ１、２及び３を含有して、ｃＫＩＴ−結合抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）を生じさせなければならないが、様々な抗体由来のＣＤＲが混合かつマッチされ得る）。そのような「混合かつマッチ」されたｃＫＩＴ−結合抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、当該技術において知られている結合アッセイを用いて試験され得る。ＶＨ  ＣＤＲ配列が混合かつマッチされる場合、特定のＶＨ配列由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／又はＣＤＲ３の配列は、構造的に類似するＣＤＲ配列で置換されるべきである。同様に、ＶＬ  ＣＤＲ配列が混合かつマッチされる場合、特定のＶＬ配列由来のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／又はＣＤＲ３の配列は、構造的に類似するＣＤＲ配列で置換されるべきである。１つ以上のＶＨ及び／又はＶＬのＣＤＲ領域の配列を、本明細書中で示されるＣＤＲ配列由来の構造的に類似する配列で置換することによって、新規のＶＨ配列及びＶＬ配列が生じ得ることは、当業者に容易に明らとなろう。
【０３６９】
したがって、本開示は、配列番号１、４、６、７、２７、３０、３２、３３、６０、６３、６５、６６、８６、８９、９１、及び９２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）；配列番号２、５、８、２８、３１、３４、５１、５２、５３、６１、６４、６７、８７、９０、及び９３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）；配列番号３、９、２９、３５、６２、６８、８８及び９４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）；配列番号１６、１９、２２、４２、４４、４６、７５、７８、８１、１０１、１０４、及び１０７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）；配列番号１７、２０、７６、７９、１０２、及び１０５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）；並びに配列番号１８、２１、４３、４５、７７、８０、１０３、及び１０６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）を含む単離された抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）を提供し；当該抗体は、ｃＫＩＴに特異的に結合する。
【０３７０】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号１のＨＣＤＲ１；配列番号２のＨＣＤＲ２；配列番号３のＨＣＤＲ３；配列番号１６のＬＣＤＲ１；配列番号１７のＬＣＤＲ２；及び配列番号１８のＬＣＤＲ３を含む。
【０３７１】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号４のＨＣＤＲ１；配列番号５のＨＣＤＲ２；配列番号３のＨＣＤＲ３；配列番号１９のＬＣＤＲ１；配列番号２０のＬＣＤＲ２；及び配列番号２１のＬＣＤＲ３を含む。
【０３７２】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号６のＨＣＤＲ１；配列番号２のＨＣＤＲ２；配列番号３のＨＣＤＲ３；配列番号１６のＬＣＤＲ１；配列番号１７のＬＣＤＲ２；及び配列番号１８のＬＣＤＲ３を含む。
【０３７３】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号７のＨＣＤＲ１；配列番号８のＨＣＤＲ２；配列番号９のＨＣＤＲ３；配列番号２２のＬＣＤＲ１；配列番号２０のＬＣＤＲ２；及び配列番号１８のＬＣＤＲ３を含む。
【０３７４】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号２７のＨＣＤＲ１；配列番号２８のＨＣＤＲ２；配列番号２９のＨＣＤＲ３；配列番号４２のＬＣＤＲ１；配列番号１７のＬＣＤＲ２；及び配列番号４３のＬＣＤＲ３を含む。
【０３７５】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号３０のＨＣＤＲ１；配列番号３１のＨＣＤＲ２；配列番号２９のＨＣＤＲ３；配列番号４４のＬＣＤＲ１；配列番号２０のＬＣＤＲ２；及び配列番号４５のＬＣＤＲ３を含む。
【０３７６】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号３２のＨＣＤＲ１；配列番号２８のＨＣＤＲ２；配列番号２９のＨＣＤＲ３；配列番号４２のＬＣＤＲ１；配列番号１７のＬＣＤＲ２；及び配列番号４３のＬＣＤＲ３を含む。
【０３７７】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号３３のＨＣＤＲ１；配列番号３４のＨＣＤＲ２；配列番号３５のＨＣＤＲ３；配列番号４６のＬＣＤＲ１；配列番号２０のＬＣＤＲ２；及び配列番号４３のＬＣＤＲ３を含む。
【０３７８】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号１のＨＣＤＲ１；配列番号５１のＨＣＤＲ２；配列番号３のＨＣＤＲ３；配列番号１６のＬＣＤＲ１；配列番号１７のＬＣＤＲ２；及び配列番号１８のＬＣＤＲ３を含む。
【０３７９】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号４のＨＣＤＲ１；配列番号５２のＨＣＤＲ２；配列番号３のＨＣＤＲ３；配列番号１９のＬＣＤＲ１；配列番号２０のＬＣＤＲ２；及び配列番号２１のＬＣＤＲ３を含む。
【０３８０】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号６のＨＣＤＲ１；配列番号５１のＨＣＤＲ２；配列番号３のＨＣＤＲ３；配列番号１６のＬＣＤＲ１；配列番号１７のＬＣＤＲ２；及び配列番号１８のＬＣＤＲ３を含む。
【０３８１】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号７のＨＣＤＲ１；配列番号５３のＨＣＤＲ２；配列番号９のＨＣＤＲ３；配列番号２２のＬＣＤＲ１；配列番号２０のＬＣＤＲ２；及び配列番号１８のＬＣＤＲ３を含む。
【０３８２】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号６０のＨＣＤＲ１；配列番号６１のＨＣＤＲ２；配列番号６２のＨＣＤＲ３；配列番号７５のＬＣＤＲ１；配列番号７６のＬＣＤＲ２；及び配列番号７７のＬＣＤＲ３を含む。
【０３８３】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号６３のＨＣＤＲ１；配列番号６４のＨＣＤＲ２；配列番号６２のＨＣＤＲ３；配列番号７８のＬＣＤＲ１；配列番号７９のＬＣＤＲ２；及び配列番号８０のＬＣＤＲ３を含む。
【０３８４】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号６５のＨＣＤＲ１；配列番号６１のＨＣＤＲ２；配列番号６２のＨＣＤＲ３；配列番号７５のＬＣＤＲ１；配列番号７６のＬＣＤＲ２；及び配列番号７７のＬＣＤＲ３を含む。
【０３８５】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号６６のＨＣＤＲ１；配列番号６７のＨＣＤＲ２；配列番号６８のＨＣＤＲ３；配列番号８１のＬＣＤＲ１；配列番号７９のＬＣＤＲ２；及び配列番号７７のＬＣＤＲ３を含む。
【０３８６】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号８６のＨＣＤＲ１；配列番号８７のＨＣＤＲ２；配列番号８８のＨＣＤＲ３；配列番号１０１のＬＣＤＲ１；配列番号１０２のＬＣＤＲ２；及び配列番号１０３のＬＣＤＲ３を含む。
【０３８７】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号８９のＨＣＤＲ１；配列番号９０のＨＣＤＲ２；配列番号８８のＨＣＤＲ３；配列番号１０４のＬＣＤＲ１；配列番号１０５のＬＣＤＲ２；及び配列番号１０６のＬＣＤＲ３を含む。
【０３８８】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号９１のＨＣＤＲ１；配列番号８７のＨＣＤＲ２；配列番号８８のＨＣＤＲ３；配列番号１０１のＬＣＤＲ１；配列番号１０２のＬＣＤＲ２；及び配列番号１０３のＬＣＤＲ３を含む。
【０３８９】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号９２のＨＣＤＲ１；配列番号９３のＨＣＤＲ２；配列番号９４のＨＣＤＲ３；配列番号１０７のＬＣＤＲ１；配列番号１０５のＬＣＤＲ２；及び配列番号１０３のＬＣＤＲ３を含む。
【０３９０】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、及び配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【０３９１】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【０３９２】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号２３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【０３９３】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号８２のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【０３９４】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
【０３９５】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えばＦａｂ’）は、配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０３９６】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えばＦａｂ’）は、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号４９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０３９７】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えばＦａｂ’）は、配列番号５８のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０３９８】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えばＦａｂ’）は、配列番号７３のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号８４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０３９９】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えばＦａｂ’）は、配列番号９９のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０４００】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えばＦａｂ’）は、配列番号１１９、１２０、又は１２１から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０４０１】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えばＦａｂ’）は、配列番号１２５、１２６、又は１２７から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号４９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０４０２】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えばＦａｂ’）は、配列番号１３１、１３２、又は１３３から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０４０３】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えばＦａｂ’）は、配列番号１３７、１３８、又は１３９から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号８４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０４０４】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体フラグメント（例えばＦａｂ’）は、配列番号１４２、１４３、又は１４４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０４０５】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０４０６】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体は、配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号４９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０４０７】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体は、配列番号５６のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０４０８】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体は、配列番号７１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号８４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０４０９】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体は、配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０４１０】
特定の態様において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、表１に記載される抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）である。
【０４１１】
１．同じエピトープに結合する抗体
本開示は、ヒトｃＫＩＴ受容体の細胞外ドメイン内のエピトープに特異的に結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）を提供する。特定の態様において、抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、ヒトｃＫＩＴ細胞外ドメインのドメイン１〜３内のエピトープに結合し得る。
【０４１２】
本開示はまた、表１に記載される抗ｃＫＩＴ抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）と同じエピトープに結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）を提供する。したがって、ｃＫＩＴ結合アッセイにおいて他の抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）と交差競合する（例えば、その結合を、統計学的に有意に、競合的に阻害する）能力に基づいて、追加の抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）が同定され得る。交差競合に基づいて抗体を「ビニング（ｂｉｎｎｉｎｇ）」する高スループットプロセスが、国際公開第２００３／４８７３１号パンフレットに記載されている。本明細書中で開示される抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）の、ｃＫＩＴタンパク質（例えばヒトｃＫＩＴ）への結合を阻害する試験抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）の能力は、試験抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）が、ｃＫＩＴへの結合について、抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）と競合することができること；そのような抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）が、非限定的な理論に従って、競合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）と同じ、又は関連する（例えば、構造的に類似する、又は空間的に近位の）、ｃＫＩＴタンパク質上のエピトープに結合し得ることを実証する。特定の態様において、本明細書中で開示される抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）と同じ、ｃＫＩＴ上のエピトープに結合する抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、ヒト抗体若しくはヒト抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）又はヒト化抗体若しくはヒト化抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）である。そのようなヒト抗体若しくはヒト抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）又はヒト化抗体若しくはヒト化抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、本明細書中で記載されるように調製かつ単離され得る。
【０４１３】
２．フレームワークの修飾
本明細書中で開示される抗体薬物コンジュゲートは、例えば抗体薬物コンジュゲートの特性を向上させるような、ＶＨ及び／又はＶＬ内のフレームワーク残基に対する修飾を含む、修飾されたｃＫＩＴ−結合抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）を含んでよい。
【０４１４】
一部の実施形態において、フレームワーク修飾は、抗体又は抗体薬物コンジュゲートの免疫原性を低下させるようになされる。例えば、一アプローチとして、１つ以上のフレームワーク残基を、対応する生殖細胞系配列に「復帰突然変異」させるものがある。そのような残基は、抗体フレームワーク配列を、抗体が由来する生殖細胞系配列と比較することによって、特定され得る。フレームワーク領域配列を、所望の生殖細胞系の構成に「マッチ」させるために、残基を、例えば部位特異的突然変異誘発によって、対応する生殖細胞系配列に「復帰突然変異」させることができる。そのような「復帰突然変異」した抗体又は抗体薬物コンジュゲートもまた、本発明によって包含されることが意図される。
【０４１５】
別のタイプのフレームワーク修飾は、フレームワーク領域内の、又は１つ以上のＣＤＲ領域内の、１つ以上の残基を突然変異させて、Ｔ細胞エピトープを除去することによって、抗体又は抗体薬物コンジュゲートの潜在的免疫原性を引き下げることを包含する。このアプローチは、「脱免疫化」とも呼ばれ、Ｃａｒｒらによる米国特許出願公開第２００３／０１５３０４３号明細書にさらに詳細に記載されている。
【０４１６】
フレームワーク領域又はＣＤＲ領域内になされる修飾に加えて、又はその代わりに、抗体は、抗体の１つ以上の機能的特性、例えば血清半減期、補体結合を変更するように操作され得る。さらに、抗体は、ここでも抗体の１つ以上の機能的特性を変更するように、化学的に修飾されてもよい（例えば、１つ以上の化学部分が、抗体に取り付けられてよい）し、そのグリコシル化を変更するように修飾されてもよい。これらの態様のそれぞれが、以下でさらに詳細に説明される。
【０４１７】
一態様において、ＣＨ１のヒンジ領域は、ヒンジ領域中のシステイン残基の数が、変更、例えば増減されるように修飾される。このアプローチは、Ｂｏｄｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．による米国特許第５，６７７，４２５号明細書においてさらに記載されている。ＣＨ１のヒンジ領域中のシステイン残基の数は、例えば、軽鎖及び重鎖のアセンブリを促進して、抗体の安定性を増大させ、若しくは低下させ、又は別の分子への結合を可能にするように、変更される。
【０４１８】
一部の実施形態において、本明細書中で開示される抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、薬物部分への結合のための部位として、修飾又は操作されたアミノ酸残基、例えば、１つ以上のシステイン残基を含む（Ｊｕｎｕｔｕｌａ  ＪＲ，  ｅｔ  ａｌ．：Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２００８，２６：９２５−９３２）。一実施形態において、本発明は、本明細書中に記載される位置でのシステインによる１つ以上のアミノ酸の置換を含む、修飾された抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）を提供する。システイン置換のための部位が、抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）の定常領域中にあるので、種々の抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）に適用可能であり、そして当該部位は、安定した、かつ均質なコンジュゲートを提供するように選択される。修飾された抗体又はフラグメントは、１つ、２つ、又はそれ以上のシステイン置換を有してよく、これらの置換は、本明細書中に記載される他の修飾方法及び結合方法と組み合わせて用いられ得る。抗体の特定の位置にシステインを挿入する方法が、当該技術において知られている。例えば、Ｌｙｏｎｓ  ｅｔ  ａｌ，（１９９０）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．，３：７０３−７０８、国際公開第２０１１／００５４８１号パンフレット、国際公開第２０１４／１２４３１６号パンフレット、国際公開第２０１５／１３８６１５号パンフレット参照。特定の実施形態において、修飾された抗体は、抗体の重鎖の位置１１７、１１９、１２１、１２４、１３９、１５２、１５３、１５５、１５７、１６４、１６９、１７１、１７４、１８９、１９１、１９５、１９７、２０５、２０７、２４６、２５８、２６９、２７４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９３、３２０、３２２、３２６、３３３、３３４、３３５、３３７、３４４、３５５、３６０、３７５、３８２、３９０、３９２、３９８、４００、及び４２２から選択される、その定常領域上でのシステインによる１つ以上のアミノ酸の置換を含み、当該位置は、ＥＵ系に従って番号を付けられている。特定の実施形態において、修飾された抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）の重鎖の位置１２１、１２４、１５２、１５３、１５５、１５７、１６４、１６９、１７１、１７４、１８９、及び２０７から選択される、その定常領域上でのシステインによる１つ以上のアミノ酸の置換を含み、当該位置は、ＥＵ系に従って番号を付けられている。特定の実施形態において、修飾された抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）の重鎖の位置１２４、１５２、１５３、１５５、１５７、１６４、１７４、１８９、及び２０７から選択される、その定常領域上でのシステインによる１つ以上のアミノ酸の置換を含み、当該位置は、ＥＵ系に従って番号を付けられている。
【０４１９】
一部の実施形態において、修飾された抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）の軽鎖の位置１０７、１０８、１０９、１１４、１２６、１２７、１２９、１４２、１４３、１４５、１５２、１５４、１５６、１５７、１５９、１６１、１６５、１６８、１６９、１７０、１８２、１８３、１８８、１９７、１９９、及び２０３から選択される、その定常領域上でのシステインによる１つ以上のアミノ酸の置換を含み、当該位置は、ＥＵ系に従って番号を付けられており、当該軽鎖は、ヒトカッパ軽鎖である。一部の実施形態において、修飾された抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）の軽鎖の位置１０７、１０８、１１４、１２６、１２７、１２９、１４２、１５９、１６１、１６５、１８３、及び２０３から選択される、その定常領域上でのシステインによる１つ以上のアミノ酸の置換を含み、当該位置は、ＥＵ系に従って番号を付けられており、当該軽鎖は、ヒトカッパ軽鎖である。一部の実施形態において、修飾された抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）の軽鎖の位置１１４、１２９、１４２、１４５、１５２、１５９、１６１、１６５、及び１９７から選択される、その定常領域上でのシステインによる１つ以上のアミノ酸の置換を含み、当該位置は、ＥＵ系に従って番号を付けられており、当該軽鎖は、ヒトカッパ軽鎖である。一部の実施形態において、修飾された抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）の軽鎖の位置１０７、１０８、１０９、１２６、１４３、１４５、１５２、１５４、１５６、１５７、１５９、１８２、１８３、１８８、１９７、１９９、及び２０３から選択される、その定常領域上でのシステインによる１つ以上のアミノ酸の置換を含み、当該位置は、ＥＵ系に従って番号を付けられており、当該軽鎖は、ヒトカッパ軽鎖である。一部の実施形態において、修飾された抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）の軽鎖の位置１４５、１５２、及び１９７から選択される、その定常領域上でのシステインによる１つ以上のアミノ酸の置換を含み、当該位置は、ＥＵ系に従って番号を付けられており、当該軽鎖は、ヒトカッパ軽鎖である。一部の実施形態において、修飾された抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）の軽鎖の位置１１４及び１６５から選択される、その定常領域上でのシステインによる１つ以上のアミノ酸の置換を含み、当該位置は、ＥＵ系に従って番号を付けられており、当該軽鎖は、ヒトカッパ軽鎖である。
【０４２０】
一部の実施形態において、修飾された抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）の軽鎖の位置１４３、１４５、１４７、１５６、１５９、１６３、１６８から選択されるその定常領域上でのシステインによる１つ以上のアミノ酸の置換を含み、当該位置は、ＥＵ系に従って番号を付けられており、当該軽鎖は、ヒトラムダ軽鎖である。一部の実施形態において、修飾された抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）の軽鎖の位置１４３（ＥＵナンバリングによる）にシステインを含み、当該軽鎖は、ヒトラムダ軽鎖である。
【０４２１】
特定の実施形態において、修飾された抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、その定常領域上でのシステインによる２つ以上のアミノ酸の置換の組合せを含み、当該位置の組合せは、先で一覧にされたあらゆる位置から選択され得る。
【０４２２】
一部の実施形態において、修飾された抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、以下の位置：重鎖の位置１２４、重鎖の位置１５２、重鎖の位置１５３、重鎖の位置１５５、重鎖の位置１５７、重鎖の位置１６４、重鎖の位置１７４、軽鎖の位置１１４、軽鎖の位置１２９、軽鎖の位置１４２、軽鎖の位置１５９、軽鎖の位置１６１、又は軽鎖の位置１６５の１つ以上にてシステインを含み、当該位置は、ＥＵ系に従って番号を付けられており、当該軽鎖は、カッパ鎖である。一部の実施形態において、修飾された抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、以下の位置：重鎖の位置１２４、重鎖の位置１５２、重鎖の位置１５３、重鎖の位置１５５、重鎖の位置１５７、重鎖の位置１６４、重鎖の位置１７４、軽鎖の位置１１４、軽鎖の位置１２９、軽鎖の位置１４２、軽鎖の位置１５９、軽鎖の位置１６１、又は軽鎖の位置１６５の４つにてシステインを含み、当該位置は、ＥＵ系に従って番号を付けられており、当該軽鎖は、カッパ鎖である。
【０４２３】
一部の実施形態において、修飾された抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、重鎖の位置１５２にてシステインを含み、当該位置は、ＥＵ系に従って番号を付けられている。一部の実施形態において、修飾された抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、重鎖の位置１２４にてシステインを含み、当該位置は、ＥＵ系に従って番号を付けられている。一部の実施形態において、修飾された抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、軽鎖の位置１６５にてシステインを含み、当該位置は、ＥＵ系に従って番号を付けられており、当該軽鎖は、カッパ鎖である。一部の実施形態において、修飾された抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、軽鎖の位置１１４にてシステインを含み、当該位置は、ＥＵ系に従って番号を付けられており、当該軽鎖は、カッパ鎖である。一部の実施形態において、修飾された抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、軽鎖の位置１４３にてシステインを含み、当該位置は、ＥＵ系に従って番号を付けられており、当該軽鎖は、ラムダ鎖である。
【０４２４】
一部の実施形態において、修飾された抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、重鎖の位置１５２及び軽鎖の位置１６５にてシステインを含み、当該位置は、ＥＵ系に従って番号を付けられており、当該軽鎖は、カッパ鎖である。一部の実施形態において、修飾された抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、重鎖の位置１５２及び軽鎖の位置１１４にてシステインを含み、当該位置は、ＥＵ系に従って番号を付けられており、当該軽鎖は、カッパ鎖である。一部の実施形態において、修飾された抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、重鎖の位置１５２及び軽鎖の位置１４３にてシステインを含み、当該位置は、ＥＵ系に従って番号を付けられており、当該軽鎖は、ラムダ鎖である。一部の実施形態において、修飾された抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、重鎖の位置１２４及び位置１５２にてシステインを含み、当該位置は、ＥＵ系に従って番号を付けられている。
【０４２５】
一部の実施形態において、修飾された抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、以下の位置：重鎖の位置１５５、重鎖の位置１８９、重鎖の位置２０７、軽鎖の位置１４５、軽鎖の位置１５２、又は軽鎖の位置１９７の１つ以上にてシステインを含み、当該位置は、ＥＵ系に従って番号を付けられており、当該軽鎖は、カッパ鎖である。一部の実施形態において、修飾された抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、以下の位置：重鎖の位置１５５、重鎖の位置１８９、重鎖の位置２０７、軽鎖の位置１４５、軽鎖の位置１５２、又は軽鎖の位置１９７の２つ以上（例えば、２、３、４つ）にてシステインを含み、当該位置は、ＥＵ系に従って番号を付けられており、当該軽鎖は、カッパ鎖である。
【０４２６】
一部の実施形態において、修飾された抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、以下の位置：重鎖の位置１２４、重鎖の位置１５２、重鎖の位置１５３、重鎖の位置１５５、重鎖の位置１５７、重鎖の位置１６４、重鎖の位置１７４、軽鎖の位置１１４、軽鎖の位置１２９、軽鎖の位置１４２、軽鎖の位置１５９、軽鎖の位置１６１、又は軽鎖の位置１６５の１つ以上にてシステインを含み、当該位置は、ＥＵ系に従って番号を付けられており、当該軽鎖は、カッパ鎖である。一部の実施形態において、修飾された抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、以下の位置：重鎖の位置１２４、重鎖の位置１５２、重鎖の位置１５３、重鎖の位置１５５、重鎖の位置１５７、重鎖の位置１６４、重鎖の位置１７４、軽鎖の位置１１４、軽鎖の位置１２９、軽鎖の位置１４２、軽鎖の位置１５９、軽鎖の位置１６１、又は軽鎖の位置１６５の２つ以上（例えば、２、３、４つ）にてシステインを含み、当該位置は、ＥＵ系に従って番号を付けられており、当該軽鎖は、カッパ鎖である。
【０４２７】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する修飾された抗体フラグメント（例えばＦａｂ）は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１２２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０４２８】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する修飾された抗体フラグメント（例えばＦａｂ）は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１２３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０４２９】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する修飾された抗体フラグメント（例えばＦａｂ）は、配列番号１２４のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１２８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０４３０】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する修飾された抗体フラグメント（例えばＦａｂ）は、配列番号１２４のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１２９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０４３１】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する修飾された抗体フラグメント（例えばＦａｂ）は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１３４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０４３２】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する修飾された抗体フラグメント（例えばＦａｂ）は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１３５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０４３３】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する修飾された抗体フラグメント（例えばＦａｂ）は、配列番号１３６のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１４０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０４３４】
一部の実施形態において、ヒトｃＫＩＴに特異的に結合する修飾された抗体フラグメント（例えばＦａｂ）は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１４５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０４３５】
３．ｃＫＩＴ抗体又は抗体フラグメントの生成
抗ｃＫＩＴ抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）は、当該技術において知られているあらゆる手段によって生成され得、以下に限定されないが、組換え発現、化学合成、又は完全長モノクローナル抗体（例えば、ハイブリドーマ生成又は組換え生成によって得られ得る）の酵素的消化が挙げられる。組換え発現は、当該技術において知られている適切なあらゆる宿主細胞、例えば、哺乳類宿主細胞、細菌宿主細胞、酵母宿主細胞、昆虫宿主細胞に由来し得、又は無細胞系（例えば、Ｓｕｔｒｏ’ｓ  Ｘｐｒｅｓｓ  ＣＦ（商標）Ｐｌａｔｆｏｒｍ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓｕｔｒｏｂｉｏ．ｃｏｍ／ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ／）によって製造され得る。
【０４３６】
本開示はさらに、本明細書中に記載される抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）をコードするポリヌクレオチド、例えば、本明細書中に記載される、相補性決定領域を含む重鎖又は軽鎖の可変領域又は可変セグメントをコードするポリヌクレオチドを提供する。一部の態様において、重鎖可変領域（ＶＨ）をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１１、３７、５５、７０、及び９６からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。一部の態様において、軽鎖可変領域（ＶＬ）をコードするポリヌクレオチドは、配列番号２４、４８、８３、及び１０９からなる群から選択されるポリヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。
【０４３７】
一部の態様において、抗体重鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１３、３９、５７、７２、及び９８のポリヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。一部の態様において、抗体軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号２６、５０、８５、及び１１１のポリヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。
【０４３８】
一部の態様において、Ｆａｂ’重鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１５、４１、５９、７４、及び１００のポリヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。一部の態様において、Ｆａｂ’軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号２６、５０、８５、及び１１１のポリヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の核酸配列同一性を有する。
【０４３９】
本開示のポリヌクレオチドは、抗ｃＫＩＴ抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）の可変領域の配列のみをコードしてよい。また、抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）の可変領域及び定常領域の双方をコードしてもよい。ポリヌクレオチド配列の一部が、例示される１つの抗ｃＫＩＴ抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）の重鎖及び軽鎖の双方の可変領域を含むポリペプチドをコードする。
【０４４０】
ポリヌクレオチド配列は、抗ｃＫＩＴ抗体又はその結合フラグメントをコードする既存の配列（例えば、以下の実施例に記載される配列）のデノボ固相ＤＮＡ合成によって、又はＰＣＲ突然変異誘発によって生成され得る。核酸の直接的化学合成が、当該技術において知られている方法によって達成され得、例えば、Ｎａｒａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．６８：９０，１９７９のホスホトリエステル法；Ｂｒｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．６８：１０９，１９７９のホスホジエステル法；Ｂｅａｕｃａｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａ．Ｌｅｔｔ．，２２：１８５９，１９８１のジエチルホスホロアミダイト法；及び米国特許第４，４５８，０６６号明細書の固体支持法がある。ＰＣＲによるポリヌクレオチド配列への突然変異の導入は、例えば、ＰＣＲ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ＤＮＡ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｈ．Ａ．Ｅｒｌｉｃｈ（Ｅｄ．），Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，ＮＹ，１９９２；ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｎｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｄ．），Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，１９９０；Ｍａｔｔｉｌａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９：９６７，１９９１；及びＥｃｋｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＣＲ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  １：１７，１９９１に記載されるようにして実行され得る。
【０４４１】
また、本開示において提供されるのが、上述の抗ｃＫＩＴ抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）を生成するための発現ベクター及び宿主細胞である。種々の発現ベクターを使用して、抗ｃＫＩＴ抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）をコードするポリヌクレオチドを発現させることができる。ウイルスベースの発現ベクター及び非ウイルス発現ベクターの双方が、哺乳類宿主細胞において抗体を生成するのに用いられ得る。非ウイルスベクター及び非ウイルス系として、プラスミド又はエピソームベクター（典型的には、タンパク質又はＲＮＡを発現するための発現カセットを有する）及びヒト人工染色体が挙げられる（例えば、Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ．１５：３４５，１９９７参照）。例えば、哺乳類（例えばヒト）細胞における抗ｃＫＩＴポリヌクレオチド及びポリペプチドの発現に有用な非ウイルスベクターとして、ｐＴｈｉｏＨｉｓ  Ａ，Ｂ  ＆  Ｃ、ｐｃＤＮＡ３．１／Ｈｉｓ、ｐＥＢＶＨｉｓ  Ａ，Ｂ  ＆  Ｃ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ＭＰＳＶベクター、及び他のタンパク質を発現させるための当該技術において知られている多数の他のベクターが挙げられる。有用なウイルスベクターとして、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルスに基づくベクター、ＳＶ４０、パピローマウイルス、ＨＢＰエプスタインバールウイルスに基づくベクター、ワクシニアウイルスベクター、及びセムリキ森林ウイルス（ＳＦＶ）が挙げられる。Ｂｒｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．、前掲；Ｓｍｉｔｈ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４９：８０７，１９９５；及びＲｏｓｅｎｆｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ６８：１４３，１９９２参照。
【０４４２】
発現ベクターの選択は、ベクターが発現されることとなる意図される宿主細胞に依存する。典型例として、発現ベクターは、抗ｃＫＩＴ抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）をコードするポリヌクレオチドに作動可能に結合されているプロモータ及び他の調節配列（例えばエンハンサ）を含有する。一部の態様において、誘導プロモータを使用して、挿入された配列の発現を、誘導条件下以外では防止する。誘導プロモータとして、例えば、アラビノース、ｌａｃＺ、メタロチオネインプロモータ、又はヒートショックプロモータが挙げられる。形質転換された生物の培養体は、非誘導条件下で、集団を、発現産物が宿主細胞によってより良好に許容されるコード配列について偏らせることなく、増殖し得る。また、プロモータに加えて、他の調節要素が、抗ｃＫＩＴ抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）の効率的な発現に必要とされてよく、又は所望されてよい。当該要素として、典型的に、ＡＴＧ開始コドン及び隣接するリボソーム結合部位又は他の配列が挙げられる。加えて、発現の効率が、使用される細胞系に適したエンハンサの包含によって増強され得る（例えば、Ｓｃｈａｒｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｅｓｕｌｔｓ  Ｐｒｏｂｌ．Ｃｅｌｌ  Ｄｉｆｆｅｒ．２０：１２５，１９９４；及びＢｉｔｔｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１５３：５１６，１９８７参照）。例えば、ＳＶ４０エンハンサ又はＣＭＶエンハンサを用いて、哺乳類宿主細胞における発現を増大させることができる。
【０４４３】
発現ベクターはまた、挿入された抗ｃＫＩＴ抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）配列によってコードされるポリペプチドとの融合タンパク質を形成するように、分泌シグナル配列位置を提供し得る。多くの場合、挿入される抗ｃＫＩＴ抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）配列は、ベクター内に含まれる前に、シグナル配列に結合される。また、抗ｃＫＩＴ抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）の軽鎖及び重鎖の可変ドメインをコードする配列を受け入れるのに用いられることとなるベクターは時折、定常領域又はその部分をコードする。そのようなベクターは、定常領域との融合タンパク質として可変領域を発現することによって、無傷の抗体又はそのフラグメントを生成し得る。
【０４４４】
抗ｃＫＩＴ抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）の鎖を保有かつ発現させるための宿主細胞は、原核生物であっても真核生物であってもよい。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）は、本開示のポリヌクレオチドをクローニングして発現させるのに有用な一原核生物宿主である。使用に適した他の微生物宿主として、桿菌、例えば枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、並びに他の腸内細菌科（ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、例えばサルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）属、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）属、及び種々のシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属の種が挙げられる。これらの原核生物宿主において、当業者であれば発現ベクターを構築することもでき、これは典型的に、宿主細胞と適合する発現制御配列（例えば複製起点）を含有する。加えて、任意の数の種々の周知のプロモータが存在することとなり、例えば、ラクトースプロモータ系、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモータ系、ベータ−ラクタマーゼプロモータ系、又はファージラムダ由来のプロモータ系がある。プロモータは典型的に、場合によってはオペレータ配列と共に、発現を制御し、そしてリボソーム結合部位配列等を有しており、転写及び翻訳を開始して完了させる。また、他の微生物、例えば酵母を使用して、抗ｃＫＩＴ抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）ポリペプチドを発現させることもできる。バキュロウイルスベクターと組み合わせた昆虫細胞を用いることもできる。
【０４４５】
他の態様において、哺乳類宿主細胞を用いて、本開示の抗ｃＫＩＴ抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）ポリペプチドを発現させて生成することができる。例えば、哺乳類宿主細胞は、内因性の免疫グロブリン遺伝子を発現するハイブリドーマ細胞株（例えば、実施例に記載されている骨髄腫ハイブリドーマクローン）であってもよいし、外因性の発現ベクターを保有する哺乳類の細胞株（例えば、以下で例示されるＳＰ２／０骨髄腫細胞）であってもよい。これらとして、死に至る標準的な、又は不死の標準的若しくは異常な、あらゆる動物細胞又はヒト細胞が挙げられる。例えば、無傷の免疫グロブリンを分泌することができる適切ないくつかの宿主細胞株が開発されており、ＣＨＯ細胞株、種々のＣＯＳ細胞株、ＨｅＬａ細胞、骨髄腫細胞株、形質転換されたＢ細胞、及びハイブリドーマが挙げられる。ポリペプチドを発現させるための哺乳類組織細胞培養の使用が、概して、例えば、Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ，Ｆｒｏｍ  Ｇｅｎｅｓ  ｔｏ  Ｃｌｏｎｅｓ，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎ．Ｙ．，Ｎ．Ｙ．，１９８７において考察されている。哺乳類宿主細胞用の発現ベクターは、発現制御配列、例えば、複製起点、プロモータ、及びエンハンサ（例えば、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．８９：４９−６８，１９８６参照）、並びに必須のプロセシング情報部位、例えば、リボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位、及び転写ターミネータ配列を含み得る。これらの発現ベクターは、通常、哺乳類の遺伝子に、又は哺乳類のウイルスに由来するプロモータを含有する。適切なプロモータは、構成的であり得、細胞型特異的であり得、ステージ特異的であり得、かつ／又は調整可能若しくは調節可能であり得る。有用なプロモータとして、以下に限定されないが、メタロチオネインプロモータ、構成的アデノウイルス主要後期プロモータ、デキサメタゾン誘導ＭＭＴＶプロモータ、ＳＶ４０プロモータ、ＭＲＰ  ｐｏｌＩＩＩプロモータ、構成的ＭＰＳＶプロモータ、テトラサイクリン誘導ＣＭＶプロモータ（例えばヒト即初期ＣＭＶプロモータ）、構成的ＣＭＶプロモータ、及び当該技術において知られているプロモータ−エンハンサの組合せが挙げられる。
【０４４６】
対象となるポリヌクレオチド配列を含有する発現ベクターを導入する方法は、細胞宿主の型に応じて変わる。例えば、塩化カルシウム形質移入が、原核細胞に一般的に利用されるが、リン酸カルシウム処理又は電気穿孔法が、他の細胞宿主に用いられ得る（概して、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．、前掲参照）。他の方法として、例えば、電気穿孔法、リン酸カルシウム処理、リポソーム媒介形質転換、注射及びマイクロインジェクション、バリスティック法、ウイロゾーム、免疫リポソーム、ポリカチオン：核酸コンジュゲート、裸のＤＮＡ、人工ビリオン、ヘルペスウイルス構造タンパク質ＶＰ２２への融合（Ｅｌｌｉｏｔ  ａｎｄ  Ｏ’Ｈａｒｅ，Ｃｅｌｌ  ８８：２２３，１９９７）、剤によるＤＮＡ吸収増強（ａｇｅｎｔ−ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｕｐｔａｋｅ  ｏｆ  ＤＮＡ）、並びにイクスビボ形質導入が挙げられる。多くの場合、組換えタンパク質の長期的多収産生のために、安定した発現が所望されることとなる。例えば、抗ｃＫＩＴ抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ又はＦａｂ’）の鎖を安定して発現する細胞株が、ウイルスの複製起点又は内因性の発現要素を含有する発現ベクター及び選択マーカー遺伝子を用いて、調製され得る。ベクターの導入後、細胞を、富化培地中で１〜２日間増殖させてから、選択培地にスイッチすることができる。選択マーカーの目的は、選択に対する耐性を付与することであり、そしてその存在により、選択培地において、導入された配列を首尾よく発現する細胞の成長が可能となる。耐性を示す、安定して形質移入された細胞が、細胞型に適した組織培養技術を用いて増殖され得る。
【０４４７】
抗体フラグメント、例えばＦａｂ又はＦａｂ’が、酵素、例えばパパイン（Ｆａｂフラグメントを生成するため）、又はペプシン（Ｆａｂ’フラグメントを生成するため）その他を用いた、免疫グロブリン分子のタンパク質分解開裂によって生成され得る。また、Ｆａｂフラグメントと比較して、Ｆａｂ’フラグメントは、免疫グロブリン分子の２つの重鎖間にジスルフィド結合を形成する２つの天然システインを含むヒンジ領域を含有する。
【０４４８】
治療用途
本開示のコンジュゲートは、種々の用途に有用であり、以下に限定されないが、造血幹細胞の除去を必要とする患者、例えば、造血幹細胞移植レシピエントにおいて、造血幹細胞を除去する用途が挙げられる。したがって、本明細書中で提供されるのは、本明細書中に記載されるいずれかのコンジュゲートの有効な量を、造血幹細胞の除去を必要とする患者に投与することによる、患者において造血幹細胞を除去する方法である。また、本明細書中で提供されるのは、本明細書中に記載されるいずれかのコンジュゲートの有効な量を患者に投与して、患者に造血幹細胞移植を実行する前に、コンジュゲートによる、患者の循環系からの一掃のための十分な期間を許容することによる、造血幹細胞移植患者（例えば移植レシピエント）のコンディション調整方法である。コンジュゲートは、患者に静脈内投与され得る。また、提供されるのは、本明細書中に記載されるコンジュゲート又は医薬組成物のいずれかの、造血幹細胞の除去を必要とする患者において造血幹細胞を除去するための使用である。さらに提供されるのは、本明細書中に記載されるコンジュゲート又は医薬組成物のいずれかの、造血幹細胞の除去を必要とする患者において造血幹細胞を除去するための医薬の製造における使用である。
【０４４９】
内因性の造血幹細胞は、通常、骨髄洞様毛細血管内に存在する。幹細胞が存在する物理的環境は、幹細胞微環境又は幹細胞ニッチと呼ばれる。このニッチに含まれる間質細胞及び他の細胞は、可溶性の、かつ結合する要因を与え、これが多数の影響を及ぼす。造血幹細胞とそのニッチとの相互作用について、種々のモデルが提唱されてきた。例えば、幹細胞が分裂する場合に、たった１つの娘細胞がニッチ内に残って、他の娘細胞がニッチを去って分化するモデルが示唆されてきた。移植の効率が、内因性の造血幹細胞の選択的な枯渇によって増強されることによって、ドナー幹細胞の移植のための幹細胞ニッチが開き得ることが提唱されてきた（例えば、国際公開第２００８／０６７１１５号パンフレット参照）。
【０４５０】
造血幹細胞（ＨＳＣ）移植、又は骨髄移植（早期（ｅａｒｌｉｅｒ）と呼ばれる）は、体の血液幹細胞を襲う広範な疾患、例えば白血病、重度の貧血、免疫欠乏、及び一部の酵素欠損疾患のための確立された処置である。これらの疾病により、多くの場合、患者は、新しい、健康な血球によって骨髄が置き換えられなくてはならない。
【０４５１】
ＨＳＣ移植は多くの場合、同種間であり、これは、患者が、同じ種の別の個人、きょうだいの、適合血縁の、同ハプロの血縁又は非血縁のボランティアドナーから幹細胞を受け取ることを意味する。造血幹細胞移植が必要な患者の約３０％が、組織型が適合性であるきょうだいを利用してきたと推定される。患者のその他７０％は、非血縁のボランティアドナーのマッチング、又は同ハプロの血縁ドナーのアベイラビリティに頼らなければならない。ドナー及び患者細胞の特性が比較可能であることが重要である。造血幹細胞移植はまた、自己由来であってもよく、移植される細胞が対象自身に由来することとなる、すなわち、ドナーとレシピエントが同じ個人である。さらに、移植は、同系であってよく、すなわち、遺伝的に同じ個人、例えば双子に由来してよい。更なる態様において、移植は異種間であってよく、すなわち、異なる種に由来してよく、これは、例えば臓器移植用の、同じ種のドナーが十分でない場合に、対象となる。
【０４５２】
ＨＳＣ移植前に、患者は通常、前処置又はコンディション調整方法を経験する。この前処置又はコンディション調整の目的は、体内のできるだけ多くの不所望の細胞（例えば悪性／癌細胞）を除去すること、拒絶を最小にすること、かつ／又は幹細胞ニッチを、内因性のＨＳＣの枯渇によって開けて、当該ニッチ中にドナー幹細胞を効率的に移植することである。次に、ドナーの健康なＨＳＣが、患者の静脈内に、又は場合によっては骨内に与えられる。しかしながら、不十分な移植、免疫拒絶、移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）、又は感染症が挙げられる多くのリスクが、ＨＳＣ移植に付随する。ドナー及び患者の細胞が、組織型に関して等しいと思われる、例えば、ＭＨＣ分子がマッチする（又は同ハプロである）といえども；これらの個人間になお軽微な差異があり、免疫細胞が危険であると認められる場合がある。これは、新しい免疫系（新しい幹細胞由来の白血球）が、新しい体を「異質である」と認めて、免疫攻撃を誘発することを意味する。移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）と呼ばれるこの反応は、患者にとって致命的になる虞がある。ＨＳＣ移植後の患者はまた、新しい骨髄が機能し始める前の白血球の不在に起因して、感染のリスクが増大する。この期間は、場合によっては、新しい免疫系が成熟するまで何ヶ月も続く場合がある。これらの日和見感染の一部が、致命的となる虞がある。
【０４５３】
ゆえに、コンディション調整方法及び移植方法を向上させ、かつＨＳＣ移植に伴うリスクを低下させ、かつ種々の障害についての有効性を増大させることが必要とされている。本明細書中で提供されるのは、新しい抗体薬物コンジュゲートであり、これは、移植の前に、レシピエントの内因性のＨＳＣを、全てではないが他の免疫細胞を除いて、特異的に死滅させることによって、部分的に活性な免疫防御を維持して、移植直後の感染と戦うが、同時に、対象が、自身のＨＳＣ由来の新しい免疫細胞を形成できないことに起因する、間接的な免疫抑制効果を提供する。前処置は、化学療法又は放射線よりも軽度であり得、そして副作用があまり重篤でないので、移植患者においてＧＶＨＤをあまり誘導し得ない。
【０４５４】
本明細書中に記載される抗体薬物コンジュゲートは、例えば、造血幹細胞の移植前の前処置／コンディション調整方法において、内因性の造血幹細胞を除去するのに用いられ得る。例えば、本発明のコンジュゲートは、幹細胞移植が有益であり得るあらゆる非悪性症状／障害、例えば、重症無形成性貧血（ＳＡＡ）、ウィスコット・アルドリッチ症候群、ハーラー症候群、家族性食血細胞性リンパ球組織球形成症（ＦＨＬ）、慢性肉芽腫症（ＣＧＤ）、コストマン症候群、重症免疫不全症候群（ＳＣＩＤ）、他の自己免疫疾患、例えばＳＬＥ、多発性硬化症、ＩＢＤ、クローン病、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群、脈管炎、狼瘡、重症性筋無力症、ウェゲナー病、先天性代謝異常、及び／又は他の免疫不全を処置するのに用いられ得る。
【０４５５】
さらに、本発明のコンジュゲートは、幹細胞移植が有益であり得るあらゆる悪性症状／障害、例えば、血液病、血液悪性腫瘍、又は固形腫瘍（例えば、腎癌、肝癌、膵癌）を処置するのに用いられ得る。特許請求される方法及び抗体で処置され得る血液疾患／悪性腫瘍の共通する型は、白血病、リンパ腫、及び骨髄異形成症候群である。白血病は、芽球細胞と呼ばれる未発達の白血球の異常な増加によって特徴付けられる血液又は骨髄の癌のタイプであり、用語白血病は：急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性単球白血病（ＡＭｏＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、及び他の白血病、例えば有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、Ｔ細胞前リンパ球性白血病（Ｔ−ＰＬＬ）、大型顆粒リンパ性白血病、及び成人Ｔ細胞白血病を含む。本発明の一態様において、処置される白血病は、急性白血病である。更なる態様において、白血病は、ＡＬＬ、ＡＭＬ、又はＡＭｏＬである。リンパ腫として、前駆体Ｔ細胞白血病／リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病／リンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、菌状息肉腫、末梢Ｔ細胞リンパ腫、他に規定されない限り、ホジキンリンパ腫のホジキンリンパ腫混合細胞亜型の結節性硬化症形態が挙げられる。骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）は、骨髄中の造血細胞が損傷を受けたときに生じる一群の症状の名前である。この損傷は、１つ以上の血球型の数の低下に至る。ＭＤＳは、７つのカテゴリーに再分割される；単系列の形成異常を伴う不応性血球減少（ＲＣＵＤ）、環状鉄芽球を伴う不応性貧血（ＲＡＲＳ）、多系列の形成異常を伴う不応性血球減少（ＲＣＭＤ）、過剰な芽球−１を伴う不応性貧血（ＲＡＥＢ−１）、過剰な芽球−２を伴う不応性貧血（ＲＡＥＢ−２）、骨髄異形成症候群、分類不能（ＭＤＳ−Ｕ）、及び単独ｄｅｌ（５ｑ）を伴う骨髄異形成症候群。
【０４５６】
一部の実施形態において、造血幹細胞を除去することが必要な患者（例えば造血幹細胞移植レシピエント）は、遺伝性の免疫不全疾患、自己免疫疾患、造血障害、又は先天性代謝異常を有し得る。
【０４５７】
一部の実施形態において、造血障害は、以下のいずれかから選択され得る：急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性単球白血病（ＡＭｏＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、骨髄増殖性疾患、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、無形成性貧血、赤芽球癆、発作性夜間ヘモグロビン尿症、ファンコーニ貧血、サラセミアメジャー、鎌状赤血球貧血、重症複合型免疫不全、ウィスコット・アルドリッチ症候群、血球貪食性リンパ組織球増多症。
【０４５８】
先天性代謝異常はまた、遺伝性代謝病（ＩＭＢ）又は先天性代謝病としても知られており、これらは、遺伝的疾患の一クラスであり、炭水化物代謝、アミノ酸代謝、有機酸代謝の先天性障害、又はリソソーム蓄積症が挙げられる。一部の実施形態において、先天性代謝異常は、ムコ多糖症、ゴーシェ病、異染性ロイコジストロフィ、又は副腎脳白質ジストロフィから選択される。
【０４５９】
一部の実施形態において、本明細書中に記載される抗体薬物コンジュゲートは、本明細書中に開示される疾患又は症状について自家幹細胞移植で以前に処置された患者における同種幹細胞移植前強度軽減コンディショニング方法として、内因性造血幹細胞を除去するのに用いられてもよい。例えば、本明細書中に記載される抗体薬物コンジュゲートは、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｌ  Ｂｌｏｏｄ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  ２１（２０１５）１５８３ｅ１５８８に記載されるような自家幹細胞移植で以前に処置された患者への同種幹細胞移植に用いられてもよい。一部の実施形態において、同種幹細胞移植は、患者が自家幹細胞移植を受けた１ヵ月、２ヵ月、３ヵ月、４ヵ月、５ヵ月、６ヵ月、又はそれ以上の後に実行されてもよい。
【０４６０】
さらに、本発明のコンジュゲートは、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、例えば、ｃＫＩＴ陽性であるＧＩＳＴを処置するのに用いられ得る。一部の実施形態において、本発明のコンジュゲートは、野生型ｃＫＩＴを発現するＧＩＳＴを処置するのに用いられ得る。一部の実施形態において、本発明のコンジュゲートは、処置、例えば、イマチニブ（Ｇｌｉｖｅｃ（登録商標）／Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））に耐性を示すＧＩＳＴを処置するのに用いられ得る。
【０４６１】
併用療法
特定の例において、本開示の抗体薬物コンジュゲートは、別のコンディション調整レジメン、例えば、放射線治療又は化学療法と併用され得る。
【０４６２】
特定の例において、本開示の抗体薬物コンジュゲートは、別の治療薬、例えば、抗癌剤、制吐剤（又は鎮吐薬）、鎮痛剤、動員剤（ｍｏｂｉｌｉｚｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、又はそれらの組合せと併用され得る。
【０４６３】
併用療法での使用が考えられる一般的な化学療法薬として、アナストロゾール（Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標））、ビカルタミド（Ｃａｓｏｄｅｘ（登録商標））、硫酸ブレオマイシン（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））、ブスルファン（Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））、ブスルファン注射（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標））、カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ（登録商標））、Ｎ４−ペントキシカルボニル−５−デオキシ−５−フルオロシチジン、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））、クラドリビン（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（登録商標））、シクロスポリン（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ（登録商標）、Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）、又はＲｅｓｔａｓｉｓ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）又はＮｅｏｓａｒ（登録商標））、シタラビン、シトシンアラビノシド（Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標））、シタラビンリポゾーム注射（ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））、ダクチノマイシン（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ  Ｄ，Ｃｏｓｍｅｇａｎ）、塩酸ダウノルビシン（Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））、ダウノルビシンシトラートリポゾーム注射（ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））、デキサメタゾン、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、塩酸ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ｒｕｂｅｘ（登録商標））、エトポシド（Ｖｅｐｅｓｉｄ（登録商標））、リン酸フルダラビン（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標））、５−フルオロウラシル（Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標）、Ｅｆｕｄｅｘ（登録商標））、フルタミド（Ｅｕｌｅｘｉｎ（登録商標））、テザシチビン、ゲムシタビン（ジフルオロデオキシシチジン）、ヒドロキシウレア（Ｈｙｄｒｅａ（登録商標））、イダルビシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標））、イホスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））、イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標））、Ｌ−アスパラギナーゼ（ＥＬＳＰＡＲ、（登録商標））、ロイコボリンカルシウム、メルファラン（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））、６−メルカプトプリン（Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（登録商標））、メトトレキサート（Ｆｏｌｅｘ（登録商標））、ミトキサントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））、マイロターグ、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、フェニックス（Ｙｔｔｒｉｕｍ９０／ＭＸ−ＤＴＰＡ）、ペントスタチン、ポリフェプロサン２０カルムスチンインプラント（ｐｏｌｉｆｅｐｒｏｓａｎ  ２０  ｗｉｔｈ  ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ  ｉｍｐｌａｎｔ）（Ｇｌｉａｄｅｌ（登録商標））、クエン酸タモキシフェン（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（登録商標））、テニポシド（Ｖｕｍｏｎ（登録商標））、６−チオグアニン、チオテパ、チラパザミン（Ｔｉｒａｚｏｎｅ（登録商標））、注射用の塩酸トポテカン（Ｈｙｃａｍｐｔｉｎ（登録商標））、ビンブラスチン（Ｖｅｌｂａｎ（登録商標））、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））、及びビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））が挙げられる。
【０４６４】
一部の実施形態において、本開示の抗体薬物コンジュゲートは、ＣＤ４７遮断薬、例えば、抗ＣＤ４７抗体又はそのフラグメントと組み合わせて用いられ得る。ＣＤ４７とシグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰ）との相互作用を遮断する抗ＣＤ４７ミクロボディが、裸の抗ｃＫＩＴ抗体によって、内因性のＨＳＣの枯渇を増強し得ることが報告された（Ｃｈｈａｂｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ８（３５１），３５１ｒａ１０５）。
【０４６５】
一部の実施形態において、本開示の抗体薬物コンジュゲートは、造血幹細胞又は造血前駆細胞に特異的に結合する別の抗体又はそのフラグメント、例えば、抗ＣＤ４５抗体若しくはそのフラグメント、抗ＣＤ３４抗体若しくはそのフラグメント、抗ＣＤ１３３抗体若しくはそのフラグメント、抗ＣＤ５９抗体若しくはそのフラグメント、又は抗ＣＤ９０抗体若しくはそのフラグメントと組み合わせて用いられ得る。一部の実施形態において、本開示の抗体薬物コンジュゲートは、Ｄｙｒｋ１ａインヒビタ、例えば、Ｈａｒｍｉｎｅ、ＩＮＤＹ、ＭＬ  ３１５ヒドロクロリド、ＰｒｏＩＮＤＹ、Ｔｏｃｒｉｓ（商標）ＴＣ−Ｓ  ７０４４、Ｔｏｃｒｉｓ（商標）ＴＧ  ００３、ＦＩＮＤＹ、ＴＢＢ、ＤＭＡＴ、ＣａＮＤＹその他と組み合わせて用いられ得る。
【０４６６】
一部の実施形態において、本開示の抗体薬物コンジュゲートは、１つ以上の免疫サプレッサ、例えば、グルココルチコイド、例えば、プレドニゾン、デキサメタゾン、及びヒドロコルチゾン；細胞増殖抑制剤、例えば、アルキル化剤、代謝拮抗薬、メトトレキサート、アザチオプリン、メルカプトプリン、ダクチノマイシンその他；イムノフィリンに作用する薬物、例えば、タクロリムス（Ｐｒｏｇｒａｆ（登録商標）、Ａｓｔｏｇｒａｆ  ＸＬ（登録商標）、又はＥｎｖａｒｓｕｓ  ＸＲ（登録商標））、シロリムス（ラパマイシン又はＲａｐａｍｕｎｅ（登録商標））、及びエベロリムス；インターフェロン；オピオイド；ＴＮＦ結合タンパク質；ミコフェノラート；フィンゴリモド；ミリオシン；その他と組み合わせて用いられ得る。一部の実施形態において、本開示の抗体薬物コンジュゲートは、Ｔ細胞を特異的に枯渇させる１つ以上の剤、例えば、フルダラビン、シクロスポリン、抗ＣＤ５２抗体、例えば、アレムツズマブ、抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）、抗ＣＤ３抗体若しくはそのフラグメント、抗ＣＤ４抗体若しくはそのフラグメント、抗ＣＤ８抗体若しくはそのフラグメント、又は抗ヒトＴｃＲα／β抗体若しくはそのフラグメントと組み合わせて用いられ得る。Ｔ細胞枯渇治療は、移植の拒絶に至り得る宿主対移植片反応を低下させることができる。
【０４６７】
一部の実施形態において、本開示の抗体薬物コンジュゲートは、プレリキサホル（ＡＭＤ３１００、Ｍｏｚｏｂｉｌ（登録商標）としても知られている）、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、例えば、サルグラモスチム（Ｌｅｕｋｉｎｅ（登録商標））、又は顆粒球−コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、例えば、フィルグラスチム又はペグフィルグラスチム（Ｚａｒｚｉｏ（登録商標）、Ｚａｒｘｉｏ（登録商標）、Ｎｅｕｐｏｇｅｎ（登録商標）、Ｎｅｕｌａｓｔａ（登録商標）、Ｎｕｆｉｌ（登録商標）、Ｒｅｌｉｇｒａｓｔ（登録商標）、Ｅｍｇｒａｓｔ（登録商標）、Ｎｅｕｋｉｎｅ（登録商標）、Ｇｒａｆｅｅｌ（登録商標）、Ｉｍｕｍａｘ（登録商標）、Ｆｉｌｃａｄ（登録商標））から選択される１つ以上の剤と組み合わせて用いられ得る。
【０４６８】
一態様において、本開示の抗体薬物コンジュゲートは、医薬的組合せ製剤、又は併用療法としての投薬レジメンにおいて、抗癌特性を有する第２の化合物と組み合わされる。医薬的組合せ製剤又は投薬レジメンの第２の化合物は、互いに悪影響を及ぼさないように、組合せのコンジュゲートに対する補完的な活性を有し得る。
【０４６９】
本明細書中で用いられる用語「医薬的組合せ」は、一投薬量単位形態の固定された組合せ、又は併用投与用の非固定組合せ若しくはパーツのキットを指し、２つ以上の治療薬は、同時に独立して、又はある時間間隔内で別々に投与され得、とりわけ当該時間間隔により、組合せパートナーは、協働的な効果、例えば相乗効果を示し得る。
【０４７０】
用語「併用療法」は、本開示に記載される治療の症状又は障害を処置するための、２つ以上の治療薬の投与を指す。そのような投与は、実質的に同時の、例えば、活性成分の比率が固定されている単一のカプセルでの、当該治療薬の同時投与を包含する。これ以外にも、そのような投与は、各活性成分について複数回の、又は別々のコンテナ（例えば、カプセル、粉末、及び液体）での同時投与を包含する。粉末及び／又は液体が、投与前に所望の用量に再構成されても希釈されてもよい。加えて、そのような投与はまた、各タイプの治療薬の、おおよそ同時での、又は異なる時点での、逐次的な使用を包含する。いずれにせよ、処置レジメンは、本明細書中に記載される症状又は障害を処置する際に、薬物組合せの有益な効果を提供することとなる。
【０４７１】
併用療法は、「相乗効果」を提供し得、かつ「相乗効果的」であること、すなわち、活性成分が一緒に用いられる場合に達成される効果が、化合物を別々に用いることに由来する効果の和よりも大きいことを立証し得る。活性成分が：（１）同時調合されて、組み合わされた、ユニット投薬量の製剤で同時に投与若しくは送達され；（２）交互に、若しくは別々の製剤として同時に送達され；又は（３）他の何らかのレジメンによる場合に、相乗効果が達成され得る。交互療法で送達される場合、化合物が、例えば別々のシリンジでの異なる注射によって、順次投与又は送達される場合に、相乗効果が達成され得る。一般に、交互療法の間、各活性成分の有効な投薬量が順次、すなわち連続的に投与されるが、併用療法において、２つ以上の活性成分の有効な投薬量が、一緒に投与される。
【０４７２】
医薬組成物
本明細書中に記載される１つ以上の抗体薬物コンジュゲートを含む医薬組成物又は滅菌組成物を調製するために、提供されたコンジュゲートは、薬学的に許容可能なキャリア又は賦形剤と混合され得る。
【０４７３】
治療薬及び診断薬の製剤が、例えば凍結乾燥された粉末、スラリー、水溶液、ローション、又は懸濁液の形態の、生理的に許容可能なキャリア、賦形剤、又は安定化剤と混合することによって、調製され得る（例えば、Ｈａｒｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，２００１；Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，２０００；Ａｖｉｓ，ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ，１９９３；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ，１９９０；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ，１９９０；Ｗｅｉｎｅｒ  ａｎｄ  Ｋｏｔｋｏｓｋｉｅ，Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  Ｓａｆｅｔｙ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，２０００参照）。
【０４７４】
一部の実施形態において、本発明の抗体コンジュゲートを含む医薬組成物は、凍結乾燥調製物である。特定の実施形態において、抗体コンジュゲートを含む医薬組成物は、抗体コンジュゲート、ヒスチジン、スクロース、及びポリソルベート２０を含有するバイアル内の凍結乾燥品である。特定の実施形態において、抗体コンジュゲートを含む医薬組成物は、抗体コンジュゲート、コハク酸ナトリウム、及びポリソルベート２０を含有するバイアル内の凍結乾燥品である。特定の実施形態において、抗体コンジュゲートを含む医薬組成物は、抗体コンジュゲート、トレハロース、シトラート及びポリソルベート８を含有するバイアル内の凍結乾燥品である。凍結乾燥品は、注射用に、例えば水、生理食塩水で再構成され得る。特定の実施形態において、溶液は、約５．０のｐＨにて、抗体コンジュゲート、ヒスチジン、スクロース、及びポリソルベート２０を含む。別の特定の実施形態において、溶液は、抗体コンジュゲート、コハク酸ナトリウム、及びポリソルベート２０を含む。別の特定の実施形態において、溶液は、約６．６のｐＨにて、抗体コンジュゲート、トレハロース無水物、シトラート無水物、クエン酸、及びポリソルベート８を含む。静脈内投与用に、得られた溶液は通常、キャリア溶液中にさらに希釈されることとなる。
【０４７５】
治療薬についての投与レジメンの選択は、いくつかの因子に依存し、実体の血清又は組織代謝回転速度、病徴のレベル、実体の免疫原性、及び生体マトリックス内での標的細胞のアクセシビリティが挙げられる。特定の実施形態において、投与レジメンは、患者に送達される治療薬の量を、副作用の許容可能なレベルに合わせて最大にする。したがって、送達される生物製剤の量は、特定の実体、及び処置されることとなる症状の重症度に部分的に依存する。抗体、サイトカイン、及び小分子の適切な用量を選択するガイダンスが入手可能である（例えば、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｉｏｓ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂ．Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ，１９９６；Ｋｒｅｓｉｎａ（ｅｄ．），Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９９１；Ｂａｃｈ（ｅｄ．），Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９９３；Ｂａｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：６０１−６０８，２００３；Ｍｉｌｇｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１９６６−１９７３，１９９９；Ｓｌａｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３−７９２，２００１；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３−６１９，２０００；Ｇｈｏｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４−３２，２００３；Ｌｉｐｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１５９４−１６０２，２０００参照）。
【０４７６】
適切な用量の決定は、例えば、当該技術において知られている、又は推測される、処置に影響を及ぼす、又は処置に影響を及ぼすと予測されるパラメータ又は因子を用いて、臨床医によってなされる。通常、用量は、適量よりも幾分少ない量から始めて、その後、所望の、又は最適な効果が達成されるまで、あらゆる負の副作用に対して、小さな増分で増やされる。重要な診断尺度として、例えば、生成される炎症サイトカインの炎症又はレベルの、病徴の尺度が挙げられる。
【０４７７】
本発明の医薬組成物中の活性成分の実際の投薬量レベルは、特定の患者、組成物、及び投与様式にとって所望される治療反応を、患者に有毒であることなく達成するのに有効である活性成分の量を得るように変わり得る。選択される投薬量レベルは、使用される本発明の特定の組成物の活性、投与経路、投与の時点、使用されることとなる特定の化合物の排泄速度、処置の期間、使用される特定の組成物と組み合わせて用いられる他の薬物、化合物、及び／又は材料、処置されることとなる患者の年齢、性別、体重、症状、健康状態、及び先の病歴、並びに当該医療技術において知られているような因子が挙げられる、種々の薬物動態学的因子に依存することとなる。
【０４７８】
本発明の抗体コンジュゲートを含む組成物が、連続注入によって、あるいは、例えば、１日、１週の間隔での、又は１週あたり１〜７回、隔週、３週毎に１回、４週毎に１回、５週毎に１回、６週毎に１回、７週毎に１回、若しくは８週毎に１回の用量によって、提供され得る。用量は、静脈内に、皮下に、又は骨内に提供されてよい。具体的な用量プロトコルは、不所望の大きな副作用を回避する最大用量又は用量頻度を包含するものである。
【０４７９】
本発明の抗体コンジュゲートについて、患者に投与される投薬量は、０．０００１ｍｇ／患者の体重ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇであってよい。投薬量は、０．００１ｍｇ／患者の体重ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ、０．００５ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、０．０２ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、０．０５〜５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ〜８ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇであってよい。抗体コンジュゲートの投薬量は、患者の体重キログラム（ｋｇ）に、投与されることとなる用量ｍｇ／ｋｇを乗じて算出され得る。
【０４８０】
本発明の抗体コンジュゲートの服用が繰り返されてもよく、そして投与は、１日未満、少なくとも１日、２日、３日、５日、１０日、１５日、３０日、４５日、２ヵ月、７５日、３ヵ月、４ヵ月、５ヵ月、又は少なくとも６ヵ月区切られてよい。一部の実施形態において、本発明の抗体コンジュゲートは、週に２回、週に１回、２週毎に１回、３週毎に１回、４週毎に１回、又はより少ない頻度で投与される。
【０４８１】
特定の患者に有効な量は、処置されることとなる症状、患者の総合的な健康、投与の方法、経路及び用量、並びに副作用の重症度等の要因に応じて変わり得る（例えば、Ｍａｙｎａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ａ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  ＳＯＰｓ  ｆｏｒ  Ｇｏｏｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．，１９９６；Ｄｅｎｔ，Ｇｏｏｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ａｎｄ  Ｇｏｏｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｕｒｃｈ  Ｐｕｂｌ．，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ，２００１参照）。
【０４８２】
投与経路は、例えば、局所塗布又は皮膚塗布、皮下注射又は皮下注入、静脈内、腹腔内、脳内、筋肉内、眼内、動脈内、脳脊髄内、病巣内投与によってもよいし、持続的放出系又はインプラントによってもよい（例えば、Ｓｉｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ  ２２：５４７−５５６，１９８３；Ｌａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１５：１６７−２７７，１９８１；Ｌａｎｇｅｒ，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．１２：９８−１０５，１９８２；Ｅｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：３６８８−３６９２，１９８５；Ｈｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４０３０−４０３４，１９８０；米国特許第６，３５０，４６６号明細書及び米国特許第６，３１６，０２４号明細書参照）。必要な場合、組成物はまた、可溶化剤若しくは局所的麻酔薬、例えば注射部位の痛みを和らげるリドカイン、又は双方を含んでもよい。加えて、肺投与も使用され得、例えば、インヘラー又はネブライザの使用、及びエアロゾル化剤での調合によるものがある。例えば、米国特許第６，０１９，９６８号明細書、米国特許第５，９８５，３２０号明細書、米国特許第５，９８５，３０９号明細書、米国特許第５，９３４，２７２号明細書、米国特許第５，８７４，０６４号明細書、米国特許第５，８５５，９１３号明細書、米国特許第５，２９０，５４０号明細書、及び米国特許第４，８８０，０７８号明細書；並びに国際公開第９２／１９２４４号パンフレット、国際公開第９７／３２５７２号パンフレット、国際公開第９７／４４０１３号パンフレット、国際公開第９８／３１３４６号パンフレット、及び国際公開第９９／６６９０３号パンフレット参照（これらの出願はそれぞれ、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）。
【０４８３】
第２の治療薬、例えば、サイトカイン、ステロイド、化学療法剤、抗生物質、又は放射線（例えば全身照射（ＴＢＩ））との同時投与又は同時処置方法が、当該技術において知られている（例えば、Ｈａｒｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（ｅｄｓ．）（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１０．ｓｕｐ．ｔｈ  ｅｄ．，  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．；Ｐｏｏｌｅ  ａｎｄ  Ｐｅｔｅｒｓｏｎ  （ｅｄｓ．）（２００１）Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｆｏｒ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ．，Ｐａ．；Ｃｈａｂｎｅｒ  ａｎｄ  Ｌｏｎｇｏ（ｅｄｓ．）（２００１）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ．，Ｐａ．参照）。有効な量の治療薬が、病徴を少なくとも１０％；少なくとも２０％；少なくとも約３０％；少なくとも４０％、又は少なくとも５０％低下させ得る。
【０４８４】
本発明の抗体コンジュゲートと組み合わせて施され得る追加的な治療が、本発明の抗体コンジュゲートから５分未満離れて、３０分未満離れて、１時間離れて、約１時間離れて、約１〜約２時間離れて、約２時間〜約３時間離れて、約３時間〜約４時間離れて、約４時間〜約５時間離れて、約５時間〜約６時間離れて、約６時間〜約７時間離れて、約７時間〜約８時間離れて、約８時間〜約９時間離れて、約９時間〜約１０時間離れて、約１０時間〜約１１時間離れて、約１１時間〜約１２時間離れて、約１２時間〜１８時間離れて、１８時間〜２４時間離れて、２４時間〜３６時間離れて、３６時間〜４８時間離れて、４８時間〜５２時間離れて、５２時間〜６０時間離れて、６０時間〜７２時間離れて、７２時間〜８４時間離れて、８４時間〜９６時間離れて、又は９６時間〜１２０時間離れて施されてよい。２つ以上の治療が、１回の同じ患者来院中に施されてよい。
【０４８５】
本発明は、医薬組成物の投与プロトコルであって、それを必要とする対象への、本発明の抗体コンジュゲートを単独で、又は他の治療と組み合わせて含む投与プロトコルを提供する。本発明の併用療法の治療は、対象に、同時に施されてもよいし、順次施されてもよい。本発明の併用療法の治療はまた、周期的に施されてもよい。サイクリング治療は、第１の治療をしばらくの間施してから、第２の治療をしばらくの間施し、そしてこの逐次的な施しを繰り返して（すなわちサイクル）、治療（例えば剤）の１つに対する耐性の発達を低下させて、治療（例えば剤）の１つの副作用を回避し、若しくは和らげ、かつ／又は治療の有効性を向上させることを包含する。
【０４８６】
本発明の併用療法の治療は、対象に同時に施されてよい。
【０４８７】
用語「同時に」は、正確に同時に治療を施すことに限られず、むしろ、本発明の抗体又は抗体コンジュゲートが、他の治療と一緒に作用して、普通に施されるよりも利益が増すような順序で、かつ時間間隔内で、本発明の抗体又はそのフラグメントを含む医薬組成物が対象に投与されることを意味する。例えば、各療法は、同時に、又は異なる時点にてあらゆる順序で順次、対象に施されてよい；しかしながら、同時に施されないならば、所望の治療効果をもたらすほど十分に近い時間で施されるべきである。各療法は、対象に別々に、あらゆる適切な形態で、かつあらゆる適切な経路によって投与され得る。種々の実施形態において、治療は、５分未満離れて、１５分未満離れて、３０分未満離れて、１時間未満離れて、約１時間離れて、約１時間〜約２時間離れて、約２時間〜約３時間離れて、約３時間〜約４時間離れて、約４時間〜約５時間離れて、約５時間〜約６時間離れて、約６時間〜約７時間離れて、約７時間〜約８時間離れて、約８時間〜約９時間離れて、約９時間〜約１０時間離れて、約１０時間〜約１１時間離れて、約１１時間〜約１２時間離れて、２４時間離れて、４８時間離れて、７２時間離れて、又は１週離れて、対象に投与される。他の実施形態において、２つ以上の治療が、同じ患者来院中に施される。
【０４８８】
併用療法は、対象に、同じ医薬組成物で施されてよい。これ以外にも、併用療法の治療薬は、対象に、別個の医薬組成物で同時に投与されてもよい。治療薬は、同じ投与経路又は異なる投与経路によって、対象に投与されてよい。
【０４８９】
本明細書中に記載される実施例及び実施形態は、説明の目的でしかないこと、そしてそれを考慮した種々の修飾又は変更が、当業者に示唆されることとなり、かつ本願及び添付の特許請求の範囲の精神及び範囲内に含まれ得ることが理解される。
【実施例】
【０４９０】
実施例１：抗ｃＫＩＴ  ＡＤＣの生成
部位特異的システイン突然変異を有する、又は有していない抗ｃＫｉｔ抗体及び抗体フラグメントの調製
以前に国際公開第２０１４１５０９３７号パンフレット及び国際公開第２０１６０２０７９１号パンフレットに記載されるようにして、ヒト抗ｃＫＩＴ抗体及び抗体フラグメントを生成した。
【０４９１】
抗ｃＫｉｔ抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを、ファージディスプレイベースのスクリーニングで単離したベクターから増幅して、ヒトＩｇＧ１重鎖及びヒトカッパ軽鎖又はラムダ軽鎖の定常領域を含有する哺乳類発現ベクター中にクローニングした。ベクターは、ＣＭＶプロモータ及びシグナルペプチド（重鎖用のＭＰＬＬＬＬＬＰＬＬＷＡＧＡＬＡ（配列番号１４９）及び軽鎖用のＭＳＶＬＴＱＶＬＡＬＬＬＬＷＬＴＧＴＲＣ（配列番号１５０））、並びに、細菌宿主、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＤＨ５アルファ細胞中でのＤＮＡの増幅、哺乳類細胞、例えばＨＥＫ２９３細胞中での一過性発現、又は哺乳類細胞、例えばＣＨＯ細胞中への安定した形質移入に適したシグナル配列及び選択配列を含有する。Ｃｙｓ突然変異を導入するために、部位特異的突然変異誘発ＰＣＲを、重鎖コーディング配列又は軽鎖コーディング配列の定常領域内の特定の部位にて単一のＣｙｓ残基を置換するように設計したオリゴで行った。Ｃｙｓ置換突然変異の例として、重鎖のＥ１５２Ｃ若しくはＳ３７５Ｃ；カッパ軽鎖のＥ１６５Ｃ若しくはＳ１１４Ｃ；又はラムダ軽鎖のＡ１４３Ｃ（全てＥＵナンバリング）がある。場合によっては、２つ以上のＣｙｓ突然変異を組み合わせて、複数のＣｙｓ置換、例えばＨＣ−Ｅ１５２Ｃ−Ｓ３７５Ｃ、ラムダＬＣ−Ａ１４３Ｃ−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ、カッパＬＣ−Ｅ１６５Ｃ−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ、又はカッパＬＣ−Ｓ１１４Ｃ−ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ（全てＥＵナンバリング）を有する抗体を製造した。抗体フラグメントをコードするプラスミドを生成するために、突然変異誘発ＰＣＲを、重鎖定常領域の一部を除去し、又は修飾するように設計したオリゴで行った。例えば、Ｆａｂフラグメント用の発現構築体を製造するために、終止コドンが残基２２１（ＥＵ番号）の直後にコードされるように、重鎖定常領域の残基２２２〜４４７（ＥＵナンバリング）を除去するＰＣＲを実行した。例えば、ＩｇＧ１ヒンジの２つのＣｙｓ残基を含むＦａｂ’フラグメント用の発現構築体を製造するために、終止コドンが残基２３２（ＥＵ番号）の直後にコードされるように、重鎖定常領域の残基２３３〜４４７（ＥＵナンバリング）を除去するＰＣＲを実行した。
【０４９２】
抗ｃＫｉｔ抗体、抗体フラグメント、及びＣｙｓ突然変異抗体又は抗体がフラグメントを、以前に記載される一過性形質移入法（Ｍｅｉｓｓｎｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ．７５：１９７−２０３（２００１））を用いて、重鎖プラスミド及び軽鎖プラスミドを同時形質移入することによって、２９３  Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ（商標）細胞中で発現させた。発現された抗体を、細胞上清から、適切な樹脂、例えばプロテインＡ、プロテインＧ、Ｃａｐｔｏ−Ｌ樹脂、又はＬａｍｂｄａＦａｂＳｅｌｅｃｔ樹脂を用いた標準的な親和性クロマトグラフィ法によって精製した。これ以外にも、重鎖ベクター及び軽鎖ベクターをＣＨＯ細胞中に同時に形質移入することによって、抗ｃＫｉｔ抗体、抗体フラグメント、及びＣｙｓ突然変異抗体又は抗体フラグメントを、ＣＨＯ内で発現させた。細胞は選択を経験し、そして次に、安定して形質移入された細胞を、抗体産生用に最適化された条件下で培養した。抗体を、上記のように細胞上清から精製した。
【０４９３】
抗ｃＫｉｔ抗体及び抗体フラグメントの還元、再酸化、及び毒物への結合
抗体又は抗体フラグメント上のチオール基（Ｃｙｓ側鎖）への反応のための反応性部分、例えばマレイミド基、記載したリンカー、及び官能部分、例えばオーリスタチン又は他の毒物で構成される化合物を、天然の、又は以前に記載される方法（例えば、国際公開第２０１４１２４３１６号パンフレット、国際公開第２０１５１３８６１５号パンフレット、Ｊｕｎｕｔｕｌａ  ＪＲ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２６：９２５−９３２（２００８））を用いて操作した抗体中のＣｙｓ残基に結合させた。
【０４９４】
哺乳類細胞内で発現される抗体中の操作されたＣｙｓ残基が、生合成中に付加物（ジスルフィド）、例えばグルタチオン（ＧＳＨ）及び／又はシステインによって修飾される（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．２００９）ので、最初に発現される修飾されたＣｙｓは、チオール反応性試薬、例えばマレイミド、又はブロモアセトアミド基若しくはヨードアセトアミド基に非反応性である。操作されたＣｙｓ残基に結合するために、グルタチオン付加物又はシステイン付加物が、ジスルフィドを還元することによって除去される必要があり、通常、発現された抗体内の全てのジスルフィドを還元することを要する。また、抗体及び抗体フラグメント中の天然のＣｙｓ残基は、通常、抗体又は抗体フラグメント中の他のＣｙｓ残基に対してジスルフィド結合を形成するので、ジスルフィドが還元されるまで、チオール反応性試薬に対して非反応性である。ジスルフィドの還元は、最初に、抗体を還元剤、例えばジチオスレイトール（ＤＴＴ）、システイン、又はトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィンヒドロクロリド（ＴＣＥＰ−ＨＣｌ）に曝すことによって、達成され得る。場合によっては、還元剤を除去することで、抗体又は抗体フラグメントの全ての天然のジスルフィド結合の再酸化が、官能抗体構造を回復かつ／又は安定化させ得る。
【０４９５】
抗体又は抗体フラグメントが、操作されたＣｙｓ残基にのみ結合して、天然のジスルフィド結合、及び操作されたＣｙｓ残基のシステイン付加物又はＧＳＨ付加物間のジスルフィド結合が低下した場合、新たに調製したＤＴＴを、Ｃｙｓ突然変異精製抗体に加えて、１０ｍＭ又は２０ｍＭの最終濃度にした。ＤＴＴによる３７℃での１時間の抗体インキュベーションの後、混合物を、毎日のバッファ交換により３日間、ＰＢＳに対して透析して、ＤＴＴを除去して、天然のジスルフィド結合を再酸化した。再酸化プロセスを、逆相ＨＰＬＣによって監視した。これは、抗体四量体を、個々の重鎖分子及び軽鎖分子から分離することができる。反応を、８０℃に加熱したＰＲＬＰ−Ｓ  ４０００Ａカラム（５０ｍｍ×２．１ｍｍ、Ａｇｉｌｅｎｔ）上で分析して、カラム溶出を、０．１％ＴＦＡを含有する水中３０〜６０％アセトニトリルの直線勾配によって、１．５ｍｌ／分の流量にて実行した。カラムからのタンパク質の溶出を、２８０ｎｍにて監視した。再酸化が完了するまで、透析を続けた。再酸化により、鎖内ジスルフィド及び鎖間ジスルフィドが回復する一方、透析により、新たに導入されたＣｙｓ残基に連結したシステイン及びグルタチオンは、透析されて除かれる（ｄｉａｌｙｚｅ  ａｗａｙ）。再酸化の後、マレイミド含有化合物を、ＰＢＳバッファ（ｐＨ７．２）中の再酸化された抗体又は抗体フラグメントに、操作されたＣｙｓに対して典型的には１．５：１、２：１、又は５：１の比率にて加えて、インキュベーションを１時間実行した。典型例として、過剰な遊離化合物を、標準的な方法によるプロテインＡ又は他の適切な樹脂上での精製に続く、ＰＢＳ中へのバッファ交換によって、除去した。
【０４９６】
これ以外にも、操作されたＣｙｓ部位を有する抗体又は抗体フラグメントを、オン−レジン法（ｏｎ−ｒｅｓｉｎ  ｍｅｔｈｏｄ）を用いて還元かつ再酸化した。プロテインＡセファロースビーズ（抗体１０ｍｇあたり１ｍｌ）を、ＰＢＳ（カルシウム塩もマグネシウム塩もない）中で平衡化してから、抗体サンプルにバッチモードで加えた。３．４ｇのＮａＯＨを２５０ｍｌの０．５Ｍリン酸ナトリウムｐＨ８．０に加えることによって調製した溶液の１０ｍｌ中に、８５０ｍｇのシステインＨＣｌを溶解させることによって、０．５Ｍシステインのストックを調製してから、２０ｍＭシステインを抗体／ビーズスラリーに加えて、室温にて３０〜６０分間穏やかに混合した。ビーズを重力カラムにロードして、ＰＢＳの５０床容量で３０分未満で洗浄した。次に、カラムを、ＰＢＳの１床容量中に再懸濁したビーズでキャッピングした。再酸化の速度を調節するために、場合によっては、５０ｎＭ〜１μＭ塩化銅を加えた。樹脂の小試験サンプルを取り出して、ＩｇＧ溶出バッファ（Ｔｈｅｒｍｏ）中に溶出して、先で説明したＲＰ−ＨＰＬＣによって分析することによって、再酸化の進行を監視した。再酸化が所望の完全性にまで進行したならば、操作されたシステイン上に２〜３モル過剰の化合物を加えることによって直ちに結合を開始させることができ、混合物は、室温にて５〜１０分間反応し得、それからカラムを、ＰＢＳの少なくとも２０カラム容量で洗浄した。抗体コンジュゲートを、ＩｇＧ溶出バッファで溶出して、０．１容量の０．５Ｍリン酸ナトリウムｐＨ８．０で中和して、ＰＢＳにバッファ交換した。一部の例において、樹脂上で抗体との結合を開始する代わりに、カラムを、ＰＢＳの少なくとも２０カラム容量で洗浄して、抗体を、ＩｇＧ溶出バッファで溶出して、バッファｐＨ８．０で中和した。次に、抗体を、結合反応に用い、又は今後の使用のために急速凍結した。
【０４９７】
一部の例において、天然のＣｙｓ残基、例えば、重鎖対軽鎖の鎖間ジスルフィド結合を通常形成するものに、そして、抗体のヒンジ領域において、重鎖対重鎖の鎖間ジスルフィド結合を通常形成するＣｙｓ残基に、操作されたＣｙｓ残基の不在下で、又は、操作されたＣｙｓ残基に結合が向けられるのと同時に、結合することが所望される。これらの場合、５倍過剰のＴＣＥＰを、ジスルフィド結合に加えることによって、抗体又は抗体フラグメントを還元して、サンプルを、３７℃にて１時間インキュベートした。次に、サンプルを、直ちに結合させ、又は今後の結合のために＜−６０℃にて凍結した。マレイミド含有化合物を、ＰＢＳバッファ（ｐＨ７．２）中の抗体又は抗体フラグメントに、結合に用いられるＣｙｓ残基に対して典型的には２：１の比率にて加えて、インキュベーションを１時間実行した。典型例として、過剰な遊離化合物を、脱塩カラムに続く、ＰＢＳへのより大量のバッファ交換によって除去した。
【０４９８】
完全長抗体からの抗体フラグメントの生成
一部の例において、抗体フラグメントを、先に記載されるように、発現の産物が抗体のフラグメントであるような抗体重鎖コード配列の遺伝的操作によって生成した。他の例において、抗体を、完全長抗体の酵素的消化によって生成した。
【０４９９】
出発抗体の残基１〜２２２（ＥＵナンバリング）を含むＦａｂフラグメントを生成するために、完全抗体を、固定化パパイン樹脂（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で、メーカーのプロトコルに従って処理した。手短に言えば、ｐＨ７．０に調整した、新たに溶解した２０ｍＭシステイン−ＨＣｌの消化バッファ中での平衡化によって、固定化パパイン樹脂を調製する。抗体を、おおよそ１０ｍｇ／ｍｌに調整して、消化バッファにバッファ交換して、樹脂に、樹脂１ｍｌあたり４ｍｇのＩｇＧの比率にて加えて、３７℃にて５〜７時間インキュベートする。次に、樹脂を取り出して、抗体フラグメントを、適切な親和性樹脂によって精製し、例えば、プロテインＡ樹脂への結合によって、無傷のＩｇＧ及びＦｃフラグメントをＦａｂフラグメントから分離し、又は分離を、サイズ排除クロマトグラフィによって行う。
【０５００】
出発抗体の残基１〜２３６（ＥＵナンバリング）を含むＦ（ａｂ’）２フラグメントを生成するために、完全抗体を、タンパク質分解酵素で処理した。手短に言えば、抗体を、ＰＢＳ中におおよそ１０ｍｇ／ｍｌにて調製する。酵素を、１：１００の重量／重量比にて加えて、３７℃にて２時間インキュベートする。抗体フラグメントを、適切な親和性樹脂によって精製し、例えば、無傷のＩｇＧ及びＦｃフラグメントを、Ｆａｂ’フラグメントから、プロテインＡ樹脂への結合によって分離し、又は分離を、サイズ排除クロマトグラフィによって行う。
【０５０１】
抗ｃＫｉｔ−毒物抗体及び抗体フラグメントコンジュゲートの特性
抗体及び抗体フラグメントコンジュゲートを分析して、結合の程度を判定した。化合物対抗体比を、還元かつ脱グリコシル化された（必要に応じて）サンプルについてのＬＣ−ＭＳデータから推測した。ＬＣ／ＭＳにより、コンジュゲートサンプル中の抗体に取り付けられたリンカー−ペイロード（化合物）の平均分子数の定量化が可能となる。高圧液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）は、抗体を軽鎖及び重鎖に分離し、そして還元条件下で、鎖あたりのリンカー−ペイロード群の数に従って、重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）を分離する。質量スペクトルデータにより、混合物中の構成要素種、例えば、ＬＣ、ＬＣ＋１、ＬＣ＋２、ＨＣ、ＨＣ＋１、ＨＣ＋２その他の同定が可能となる。ＬＣ鎖及びＨＣ鎖上の平均ローディングから、化合物対抗体の平均比率を、抗体コンジュゲートについて算出することができる。所定のコンジュゲートサンプルについての化合物対抗体比が、２つの軽鎖及び２つの重鎖を含有する四量体抗体に取り付けた化合物（リンカー−ペイロード）分子の平均数を表す。
【０５０２】
Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００  １０／３００  ＧＬ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）及び／又はＰｒｏｔｅｉｎ  ＫＷ−８０３  ５μｍ  ３００×８ｍｍ（Ｓｈｏｄｅｘ）のカラム上での分析サイズ排除クロマトグラフィ（ＡｎＳＥＣ）を用いて、コンジュゲートをプロファイルした；凝集度を、分析サイズ排除クロマトグラフィに基づいて分析した。
【０５０３】
例示的な抗ｃＫＩＴ  Ｆａｂ−毒物コンジュゲートの調製
抗ｃＫＩＴ  Ｆａｂ’−毒物ＤＡＲ４コンジュゲート又は抗Ｈｅｒ２  Ｆａｂ−毒物ＤＡＲ４対照コンジュゲートを生成するために、５０ｍｇの完全ＩｇＧ（ＷＴ、導入したシステインなし）を、タンパク質分解酵素で消化した。Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ−Ｓ２００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）カラム上でのＳＥＣによって精製した。これ以外にも、抗ＨＥＲ２対照コンジュゲート又は抗ｃＫｉｔ  Ｆａｂ’−毒物ＤＡＲ４コンジュゲートを生成するために、Ｆａｂ’ＨＣをコードするベクターを、ＣＨＯ中に、Ｆａｂ’ＬＣをコードするベクターと同時形質移入した。発現されたＦａｂ’を、プロテインＧ樹脂上での捕捉によって精製した。Ｆ（ａｂ’）２又はＦａｂ’を、ＴＣＥＰの付加（鎖間ジスルフィドに対して５×過剰）によって還元して直ちに、本発明の化合物（遊離Ｃｙｓ残基に対して２．５×過剰）と反応させた。反応を、ＲＰ−ＨＰＬＣによって監視して、化合物の追加の１×当量を、反応が完了するまで加えた。遊離化合物を、ＰＤ１０脱塩カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によって除去した。ＤＡＲは、≧３．９であると実験的に判定された。記載する実施例においてさらに研究した具体的なコンジュゲートを、表２中で一覧にする。
【０５０４】
抗ｃＫＩＴ  Ｆａｂ−毒物ＤＡＲ２コンジュゲートを生成するために、Ｃｙｓ残基を導入したＦａｂ  ＨＣ（Ｅ１５２ＣであるＨＣ１〜２２１、ＥＵナンバリングによる）をコードするベクターを、Ｃｙｓ残基を導入したＦａｂ  ＬＣ（カッパＬＣ  Ｋ１０７Ｃ、カッパＬＣ  Ｓ１１４Ｃ、又はカッパＬＣ  Ｅ１６５Ｃ、ＥＵナンバリングによる）をコードするベクターと、ＨＥＫ２９３中に同時形質移入した。抗Ｈｅｒ２  Ｆａｂ−毒物ＤＡＲ２対照コンジュゲートを生成するために、Ｃｙｓ残基を導入したＦａｂ  ＨＣ（Ｅ１５２ＣであるＨＣ１〜２２２、及びＣ末端Ｈｉｓ６タグ（配列番号１５１）、ＥＵナンバリングによる）をコードするベクターを、Ｃｙｓ残基を導入したＦａｂ  ＬＣをコードするベクター（カッパＬＣ  Ｋ１０７Ｃ、カッパＬＣ  Ｓ１１４Ｃ、又はカッパＬＣ  Ｅ１６５Ｃ、ＥＵナンバリングによる）と、ＨＥＫ２９３中に同時形質移入した。発現されたＦａｂを、Ｃａｐｔｏ−Ｌ樹脂（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上での捕捉、及び標準的なＩｇＧ溶出バッファ（Ｔｈｅｒｍｏ）による溶出によって精製した。Ｆａｂを、Ａｍｉｃｏｎウルトラデバイスを用いて、ＰＢＳにバッファ交換した。ＦａｂをＤＴＴで還元して、室温にて再酸化した。鎖間ジスルフィド結合の再形成の後、Ｆａｂを、化合物６に結合させた（遊離Ｃｙｓ残基に対して３×過剰）。反応を、室温にて３０分間進めて、ＲＰ−ＨＰＬＣによって３１０ｎｍでの検出で監視した。結合したＦａｂを、プロテインＡ（抗ｈｅｒ２）又はｃａｐｔｏ−Ｌ（抗ｃＫｉｔ）の樹脂上で精製して、ＰＢＳ＋１％トリトンＸ−１００で洗浄して、大量のＰＢＳで洗浄してから、ＩｇＧ溶出バッファ中に溶出した。次に、Ｆａｂを、Ａｍｉｃｏｎウルトラデバイスを用いて、ＰＢＳにバッファ交換した。記載する実施例においてさらに研究した具体的なコンジュゲートを、実験的に判定したＤＡＲ値と共に、以下の表２中で一覧にする。
【０５０５】
抗ｃＫＩＴ  Ｆ（ａｂ’）２−毒物ＤＡＲ２コンジュゲートを生成するために、Ｃｙｓ残基を導入したＨＣ（Ｅ１５２Ｃ及びＳ３７５Ｃ、ＥＵナンバリングによる）をコードするベクターを、Ｆａｂ  ＬＣをコードするベクターと、ＣＨＯ中に同時形質移入した。抗Ｈｅｒ２  Ｆ（ａｂ’）２−毒物ＤＡＲ２対照コンジュゲートを生成するために、Ｃｙｓ残基を導入したＨＣ（Ｅ１５２Ｃ及びＳ３７５Ｃ、ＥＵナンバリングによる）をコードするベクターを、Ｆａｂ  ＬＣをコードするベクターと、ＨＥＫ２９３中に同時形質移入した。発現されたＩｇＧを、プロテインＡ又はｍａｂｓｅｌｅｃｔｓｕｒｅの樹脂（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上での捕捉、及び標準的なＩｇＧ溶出バッファ（Ｔｈｅｒｍｏ）による溶出によって精製した。完全ＩｇＧを、ＤＴＴで室温にて還元して、ＲＰ−ＨＰＬＣによって監視して、ＤＴＴの除去の後に再酸化した。次に、再酸化したＩｇＧを、タンパク質分解酵素で消化して、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを生成した。抗ｃＫＩＴフラグメントについて、Ｆ（ａｂ’）２を、Ａｍｉｃｏｎウルトラデバイスを用いて、ＰＢＳにバッファ交換した。抗ＨＥＲ２フラグメントについて、Ｆ（ａｂ’）２画分を、分取用ＨＩＣによって濃縮してから、Ａｍｉｃｏｎウルトラデバイスを用いて、ＰＢＳにバッファ交換した。Ｆ（ａｂ’）２を、化合物（ＬＰ１）又は化合物（ＬＰ２）に結合させた（遊離Ｃｙｓ残基に対して４×過剰）。反応を、室温にて３０分間進めて、ＲＰ−ＨＰＬＣによって３１０ｎｍでの検出で監視した。結合したＦ（ａｂ’）２を、ｃａｐｔｏ−Ｌ（抗ｃＫｉｔ  Ａｂ３）樹脂上で精製して、ＰＢＳ＋１％トリトンＸ−１００で洗浄して、大量のＰＢＳで洗浄してから、ＩｇＧ溶出バッファ中に、又は分取用ＳＥＣ（抗ｈｅｒ２及び抗ｃＫＩＴ  Ａｂ４）によって溶出した。次に、Ｆ（ａｂ’）２を濃縮して、Ａｍｉｃｏｎウルトラデバイスを用いて、ＰＢＳにバッファ交換した。記載する実施例においてさらに研究した具体的なコンジュゲートを、実験的に判定したＤＡＲ値と共に、以下の表２中で一覧にする。
【０５０６】
【表２８】
2021527429.tif 000206
【０５０７】
【表２９】
2021527429.tif 000207
【０５０８】
【表３０】
2021527429.tif 000208
【０５０９】
実施例２：ヒト、カニクイザル（ｃｙｎｏ）、マウス、及びラットのｃＫＩＴ細胞外ドメインタンパク質の、そして結合アッセイ用のｃＫＩＴサブドメイン１〜３及び４〜５の生成
ヒト、マウス、及びラットのｃＫＩＴ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を、ＧｅｎＢａｎｋ又はＵｎｉｐｒｏｔのデータベース由来のアミノ酸配列（以下の表３参照）に基づいて遺伝子合成した。カニクイザルｃＫＩＴ及び１ＥＣＤ  ｃＤＮＡテンプレートを、種々のカニクイザル組織由来のｍＲＮＡを用いて生成したアミノ酸配列情報（例えばＺｙａｇｅｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；以下の表４）に基づいて遺伝子合成した。全ての合成したＤＮＡフラグメントを、適切な発現ベクター、例えば、精製を可能にするＣ末端タグを有するｈＥＦ１−ＨＴＬＶベースのベクター（ｐＦＵＳＥ−ｍＩｇＧ２Ａ−Ｆｃ２）中にクローニングした。
【０５１０】
【表３１】
2021527429.tif 000209
【０５１１】
【表３２】
2021527429.tif 000210
【０５１２】
【表３３】
2021527429.tif 000211
【０５１３】
【表３４】
2021527429.tif 000212
【０５１４】
組換えｃＫＩＴ  ＥＣＤタンパク質の発現
所望のｃＫＩＴ組換えタンパク質を、以前に懸濁培養に適合した、ＨＥＫ２９３由来の細胞株（２９３ＦＳ）内で発現させて、無血清培地ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ−２９３（Ｇｉｂｃｏ、カタログ＃１２３３８０１８）中で増やした。小スケールのタンパク質生成及び大スケールのタンパク質生成の双方を、一過性形質移入を介して、複数のシェーカーフラスコ（Ｎａｌｇｅｎｅ）内で、それぞれ最大１Ｌまで、プラスミドキャリアとして２９３Ｆｅｃｔｉｎ（登録商標）（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ＃１２３４７０１９）と共に実行した。総ＤＮＡ及び２９３Ｆｅｃｔｉｎを、１：１．５（ｗ：ｖ）の比率にて用いた。ＤＮＡ対培養液比は、１ｍｇ／Ｌであった。細胞培養上清を、形質移入後３〜４日で収穫して、遠心分離して、滅菌濾過してから精製した。
【０５１５】
タグ付けしたＥＣＤタンパク質の精製
組換えＦｃタグ付きｃＫＩＴ細胞外ドメインタンパク質（例えば、ヒトｃＫＩＴ  ＥＣＤ−Ｆｃ、ヒトｃＫＩＴ（ＥＣＤサブドメイン１〜３、４〜５）−Ｆｃ、カニクイザルｃＫＩＴ−ｍＦｃ、ラットｃＫＩＴ−ｍＦｃ、マウスｃＫＩＴ−ｍＦｃ）を、細胞培養上清から精製した。澄明にした上清を、ＰＢＳで平衡化したプロテインＡセファロース（登録商標）カラムに通過させた。ベースラインにまで洗浄した後に、結合材料を、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｉｍｍｕｎｏｐｕｒｅ（登録商標）低ｐＨ溶出バッファ、又は１００ｍＭグリシン（ｐＨ２．７）で溶出して、直ちに、１ＭトリスｐＨ９．０の１／８溶出容量で中和した。必要に応じて、Ａｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ  １５ｍＬ遠心濃縮器を、１０ｋＤ又は３０ｋＤの名目上の分子量カットオフで用いて、プールしたタンパク質を濃縮した。次に、プールを、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ（登録商標）２００  ２６／６０カラムを用いたＳＥＣによって精製して、凝集体を除去した。次に、精製したタンパク質を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びＳＥＣ−ＭＡＬＬＳ（マルチアングルレーザー光散乱）によって特徴付けた。濃度を、Ｖｅｃｔｏｒ  ＮＴＩによって配列から算出される理論上の吸収係数を用いた、２８０ｎｍでの吸光度によって判定した。
【０５１６】
実施例３：ｃＫＩＴ  ＥＣＤサブドメインへのｃＫＩＴ  Ｆａｂの結合
ｃＫＩＴ抗体の結合部位の定義を補助するために、ヒトｃＫＩＴ  ＥＣＤを、サブドメイン１〜３（リガンド結合ドメイン）及びサブドメイン４〜５（二量体化ドメイン）に分けた。どのサブドメインが結合されたかを判定するために、サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイを使用した。ｃＫＩＴサブドメイン１〜３、サブドメイン４〜５、又は完全長ｃＫＩＴ  ＥＣＤに相当する、１×リン酸緩衝生理食塩水中に希釈した１μｇ／ｍｌ  ＥＣＤを、９６ウェルＩｍｍｕｌｏｎ（登録商標）４−ＨＢＸプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｃａｔ＃３８５５、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）上にコーティングして、４℃にて一晩インキュベートした。プレートを、洗浄バッファ（０．０１％Ｔｗｅｅｎ−２０（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  １０１−０７８１）入り１×リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ））で３回洗浄した。プレートを、１×ＰＢＳ中に希釈した２８０μｌ／ウェル３％ウシ血清アルブミンで、室温にて２時間ブロックした。プレートを、洗浄バッファで３回洗浄した。抗体を、洗浄バッファ中に２μｇ／ｍｌにて調製して、８ポイントについて５倍希釈して、１００μｌ／ウェルにてＥＬＩＳＡプレートに３反復で加えた。プレートを、室温にて１時間、２００ｒｐｍで振盪するオービタルシェーカ上でインキュベートした。アッセイプレートを、洗浄バッファで３回洗浄した。二次抗体Ｆ（ａｂ’）２フラグメントヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃａｔ＃１０９−０３６−０８８、Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ、ＰＡ）を、洗浄バッファ中に１：１０，０００で調製して、１００μｌ／ウェルにてＥＬＩＳＡプレートに加えた。プレートを、室温にて１時間、オービタルシェーカ上で２００ｒｐｍにて振盪させて、二次抗体とインキュベートした。アッセイプレートを、洗浄バッファで３回洗浄した。ＥＬＩＳＡシグナルを発現させるために、１００μｌ／ウェルのＳｕｒｅ  ｂｌｕｅ（登録商標）ＴＭＢ基質（ＫＰＬ  Ｃａｔ＃５２−００−０３、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）をプレートに加えて、室温にて１０分間インキュベートした。反応を止めるために、５０μｌの１Ｎ塩酸を、各ウェルに加えた。吸光度を、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）Ｍ５プレートリーダーを用いて、４５０ｎｍにて測定した。各抗体の結合応答を判定するために、光学密度測定値を、Ｅｘｃｅｌを用いて平均して、標準偏差値を得てグラフ化した。ｃＫＩＴに対する個々の抗ｃＫＩＴ抗体の結合特性を、表６中で見出すことができる。
【０５１７】
実施例４：ｃＫＩＴ抗体の親和性測定
ｃＫＩＴ種オーソログに対する、そしてまたヒトｃＫＩＴに対する抗体の親和性を、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）２０００機器（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ、ＰＡ）をＣＭ５センサーチップと用いたＳＰＲ技術を用いて判定した。
【０５１８】
手短に言えば、２％Ｏｄｙｓｓｅｙ（登録商標）ブロッキングバッファ（Ｌｉ−Ｃｏｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｌｉｎｃｏｌｎ、ＮＥ）を補充したＨＢＳ−Ｐ（０．０１Ｍ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、０．００５％Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  Ｐ２０）を、ランニングバッファとして全ての実験に用いた。固定レベル及び分析物の相互作用を、応答単位（ＲＵ）によって測定した。パイロット実験を実行して、抗ヒトＦｃ抗体（カタログナンバーＢＲ１００８３９、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ、ＰＡ）の固定化の実現可能性、及び試験抗体の捕捉を試験かつ確認する。
【０５１９】
動態測定用に、抗体を、固定した抗ヒトＦｃ抗体を介してセンサーチップ表面に捕捉する実験を実行して、遊離溶液中で結合するｃＫＩＴタンパク質の能力を判定した。手短に言えば、２５μｇ／ｍｌの抗ヒトＦｃ抗体ｐＨ５を、ＣＭ５センサーチップ上に、アミン結合を介して、双方のフローセルで５μｌ／分の流量にて、１０，５００ＲＵに達するように固定した。次に、０．１〜１μｇ／ｍｌの試験抗体を、１０μｌ／分にて１分間注入した。抗体の捕捉レベルを、概して２００ＲＵ未満に維持した。その後、３．１２５〜５０ｎＭのｃＫＩＴ受容体細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を、２倍で段階希釈して、参照フローセル及び試験フローセルの双方にわたって４０μｌ／分の流量にて３分間注入した。試験したＥＣＤの表を、以下で一覧にする（表５）。ＥＣＤ結合の解離を、１０分間続けた。各注入サイクルの後、チップ表面を、３Ｍ  ＭｇＣｌ２で１０μｌ／分にて３０秒間再生した。全ての実験を２５℃にて実行して、応答データを、単純な１：１相互作用モデル（Ｓｃｒｕｂｂｅｒ  ２（登録商標）ソフトウェアバージョン２．０ｂ（ＢｉｏＬｏｇｉｃ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いた）と包括的にフィットさせて、速度（ｋａ）、オフ−速度（ｋｄ）、及び親和性（ＫＤ）の推定値を得た。表６は、選択した抗ｃＫＩＴ抗体のドメイン結合及び親和性を一覧にしている。
【０５２０】
【表３５】
2021527429.tif 000213
【０５２１】
【表３６】
2021527429.tif 000214
【０５２２】
実施例５  ｃＫＩＴ  ＡＤＣによるインビトロヒトＨＳＣ細胞死滅アッセイ
インビトロＨＳＣ生存度アッセイ
ヒト動員末梢血造血幹細胞（ＨＳＣ）を、ＨｅｍａＣａｒｅ（カタログナンバーＭ００１Ｆ−ＧＣＳＦ−３）から得た。各バイアルの約１００万細胞を解凍して、１０ｍｌの１×ＨＢＳＳ中に希釈して、１２００ｒｐｍにて７分間遠心分離した。細胞ペレットを、３つの成長因子を含有する１８ｍｌの成長培地（ＳｔｅｍＳｐａｎ  ＳＦＥＭ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログナンバー０９６５０）（それぞれ５０ｎｇ／ｍｌのＴＰＯ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログナンバー２８８−ＴＰ）、Ｆｌｔ３リガンド（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログナンバーＰＨＣ９４１３）、及びＩＬ−６（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログナンバーＰＨＣ００６３）入り、アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ、カタログナンバー１０３７８−０１６）を補充）中に再懸濁させた。
【０５２３】
試験剤を、３８４ウェル黒色アッセイプレート中に、５μｌの最終容量に２反復で希釈して、１０μｇ／ｍｌから始めて１：３で段階希釈した。先に由来する細胞を、各ウェルに、４５μｌの最終容量にて加えた。細胞を、３７℃、５％酸素にて７日間インキュベートした。培養終了後、アッセイプレートを１２００ｒｐｍにて４分間遠心分離することによって、細胞を染色用に収穫した。次に、上清を吸引して、細胞を洗浄して、異なる３８４ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ−Ｏｎｅ  ＴＣ処理済み、黒色透明フラット、カタログナンバー７８１０９２）に移した。
【０５２４】
ヒト細胞アッセイ用に、各ウェルを、抗ＣＤ３４−ＰｅｒＣＰ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、カタログナンバー３４０６６６）及び抗ＣＤ９０−ＡＰＣ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、カタログナンバー５５９８６９）で染色して、洗浄して、ＦＡＣＳバッファ中に再懸濁させて、５０μｌの最終容量にした。次に、細胞を、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメータ上で分析して、分析用に定量化した。
【０５２５】
ｃＫＩＴを認識する抗体及び抗体フラグメントの毒物コンジュゲートは、このアッセイで判定して、ＨＳＣを死滅させた。ＦＡＣＳによる細胞の定量化は、ＰＢＳで、又は抗体若しくは抗体フラグメントのアイソタイプ対照毒物コンジュゲートで処理した対照ウェル中よりも、抗ｃＫＩＴ−毒物コンジュゲートで処理したウェル中で、より少ない生存細胞を示した。データを、図１に示し、そして表７に要約する。本明細書中で用いた命名規則は、Ｊ＃であり、表２中に記載する特定のコンジュゲートＮｏ．に対応する。
【０５２６】
【表３７】
2021527429.tif 000215
【０５２７】
実施例６  ヒト肥満細胞脱顆粒のインビトロアッセイ
成熟した肥満細胞を、動員末梢血由来のＣＤ３４＋前駆体を用いて生成した。ＣＤ３４＋細胞を、組換えヒト幹細胞因子（ｒｈＳＣＦ、５０ｎｇ／ｍｌ、Ｇｉｂｃｏ）、組換えヒトインターロイキン６（ｒｈＩＬ−６、５０ｎｇ／ｍｌ、Ｇｉｂｃｏ）、組換えヒトＩＬ−３（３０ｎｇ／ｍｌ、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）、ＧｌｕｔａＭＡＸ（２ｎｍ、Ｇｉｂｃｏ）、ペニシリン（１００ｕ／ｍｌ、Ｈｙｃｌｏｎｅ）、及びストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ、Ｈｙｃｌｏｎｅ）を補充したＳｔｅｍＳｐａｎ  ＳＦＥＭ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で培養した。組換えｈＩｌ−３を、培養の第１週の間のみ加えた。第３週の後、培地の半分を、毎週、ｒｈＩＬ−６（５０ｎｇ／ｍｌ）及びｒｈＳＣＦ（５０ｎｇ／ｍｌ）を含有するフレッシュな培地で置換した。成熟肥満細胞の純度を、高親和性ＩｇＥ受容体（ＦＣεＲＩ、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）及びＣＤ１１７（ＢＤ）の表面染色によって評価した。培養の第８週から第１２週までの細胞を用いた。
【０５２８】
取り出した肥満細胞を洗浄して、ＳＣＦを除去して、細胞の必要とされる量を、ｒｈＳＣＦ（５０ｎｇ／ｍｌ）を有する、又は有していない、ｒｈＩＬ−６（５０ｎｇ／ｍｌ）を含有する肥満細胞培地中で一晩インキュベートした。肥満細胞脱顆粒の陽性対照として、細胞の一部を、ヒト骨髄腫ＩｇＥ（１００ｎｇ／ｍｌ、ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で感作した。翌日、抗ｃＫＩＴ抗体若しくは抗体フラグメント、又はその毒物コンジュゲート、マウスモノクローナル抗ヒトＩｇＧ１（Ｆａｂ特異的、Ｓｉｇｍａ）、ヤギ抗ヒトＩｇＥ（Ａｂｃａｍ）、及び化合物４８／８０（Ｓｉｇｍａ）希釈剤を、０．０４％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、Ｓｉｇｍａ）を補充したＨＥＰＥＳ脱顆粒バッファ（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、２．７ｍＭ  ＫＣｌ、０．４ｍＭ二塩基性リン酸ナトリウム、５．６ｍＭグルコース、ｐＨを７．４に調整、そして１．８ｍＭ塩化カルシウム及び１．３ｍＭ硫酸マグネシウムと混合）中に調製した。試験剤及び抗ＩｇＧ１を、Ｖ底３８４ウェルアッセイプレート内で一緒に混合した一方、抗ＩｇＥ及び化合物４８／８０を単独で試験した。アッセイプレートを、３７℃にて３０分インキュベートした。インキュベーションの間、細胞を、ＨＥＰＥＳ脱顆粒バッファ＋０．０４％ＢＳＡで３回洗浄して、培地及び非結合ＩｇＥを除去した。細胞を、ＨＥＰＥＳ脱顆粒バッファ＋０．０４％ＢＳＡ中に再懸濁させて、アッセイプレート内のウェルあたり３０００細胞にて播種して、５０μｌの最終反応容量にした。ＩｇＥで感作した細胞を、脱顆粒の陽性対照として、抗ＩｇＥのみと用いた。アッセイプレートを、３７℃にて３０分インキュベートして、脱顆粒を起こさせた。このインキュベーションの間、３．５ｍｇ／ｍｌのｐＮＡＧをクエン酸バッファ（４０ｍＭクエン酸、２０ｍＭ二塩基性リン酸ナトリウム、ｐＨ４．５）中で超音波処理することによって、ｐ−ニトロ−Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミン（ｐＮＡＧ、Ｓｉｇｍａ）バッファを調製した。２０μｌの細胞上清を４０μｌのｐＮＡＧ溶液と平底３８４ウェルプレート内で混合することによって、β−ヘキソサミニダーゼの放出を測定した。このプレートを、３７℃にて１．５時間インキュベートして、反応を、４０μｌの停止溶液（４００ｍＭグリシン、ｐＨ１０．７）の付加によって停止した。プレートリーダーをλ＝４０５ｎｍにて用いて吸光度を読み、参照フィルタはλ＝６２０ｎｍであった。
【０５２９】
肥満細胞脱顆粒アッセイに用いた完全長ＩｇＧ対照を、表８に記載する。
【０５３０】
【表３８】
2021527429.tif 000216
【０５３１】
実施例７  全長抗ｃＫＩＴ抗体並びにそのＦ（ａｂ’）２フラグメント及びＦａｂフラグメントによるヒト肥満細胞脱顆粒のインビトロアッセイ
実施例６に記載するように、成熟肥満細胞を生成して、抗ｃＫＩＴ抗体並びにＦ（ａｂ’）２フラグメント及びＦａｂフラグメントで試験した。
【０５３２】
図２Ａ〜図２Ｃに示されるように、完全長抗ｃＫＩＴ  Ａｂ４及びＦ（ａｂ’４）２フラグメントは、架橋された場合に肥満細胞脱顆粒を引き起こした一方、Ｆａｂ４（ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ）フラグメントによって、全ての試験した濃度にて、肥満細胞脱顆粒はトリガされなかった。図２Ｄ〜図２Ｆは、完全長抗ｃＫＩＴ  Ａｂ１及びＦ（ａｂ’１）２フラグメントが、架橋された場合に肥満細胞脱顆粒を引き起こした一方、Ｆａｂ１（ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ）フラグメントによって、全ての試験した濃度にて、肥満細胞脱顆粒がトリガされなかったことを示す。図２Ｇ〜図２Ｉは、完全長抗ｃＫＩＴ  Ａｂ２及びＦ（ａｂ’２）２フラグメントが、架橋された場合に肥満細胞脱顆粒を引き起こした一方、Ｆａｂ２（ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ）フラグメントによって、全ての試験した濃度にて、肥満細胞脱顆粒がトリガされなかったことを示す。図２Ｊ〜図２Ｌは、完全長抗ｃＫＩＴ  Ａｂ３及びＦ（ａｂ’３）２フラグメントが、架橋された場合に肥満細胞脱顆粒を引き起こした一方、Ｆａｂ３（ＨＣ−Ｅ１５２Ｃ）フラグメントによって、全ての試験した濃度にて、肥満細胞脱顆粒がトリガされなかったことを示す。このことは、Ｆａｂフラグメントを認識する既存の抗薬物抗体を患者が発達させるか有するならば観察され得るような、結合されてより大きな複合体に多量体化された場合でも、Ｆａｂフラグメントが肥満細胞脱顆粒を引き起こさないことを示唆している。他方、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、結合されてより大きな複合体に多量体化された場合の全長抗ｃＫＩＴ抗体と類似のレベルにて、肥満細胞脱顆粒を引き起こす。
【０５３３】
実施例８  マウス宿主からのヒトＨＳＣのインビボ除去
ヒトＨＳＣに対するインビボ効力について試験剤を評価するために、ヒトＣＤ３４＋細胞でヒト化されている、高度に免疫が損なわれたＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ  ＩＬ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪマウスを、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入した。ヒトキメラ化パーセントを、血液サンプルのフローサイトメトリによって判定した。このために、血液を以下の抗体で染色した：抗ヒトＣＤ４５−ｅ４５０（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ＃４８−０４５９−４２）、抗マウスＣＤ４５−ＡＰＣ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、カタログ＃５５９８６４抗ヒトＣＤ３３−Ｐｅ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、カタログ＃３４７７８７）、抗ヒトＣＤ１９−ＦＩＴＣ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、カタログ＃５５５４２２）、及び抗ヒトＣＤ３−ＰｅＣｙ７（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、カタログ＃５５７８５１）。ヒトキメラ化が確認されれば、ヒト化ＮＳＧマウスに、試験剤を腹膜内に１日２回投薬した。ヒトキメラ化の程度を、投薬後に再評価した。ヒトＨＳＣの有無を評価するために、マウスを安楽死させて、骨髄を単離して、以下の抗体で染色した：抗ヒトＣＤ４５−ｅ４５０（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ＃４８−０４５９−４２）、抗マウスＣＤ４５−ＡＰＣ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、カタログ＃５５９８６４）、抗ヒトＣＤ３４−ＰＥ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、カタログ＃３４８０５７）、抗ヒトＣＤ３８−ＦＩＴＣ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、カタログ＃３４０９２６）、抗ヒトＣＤ１１ｂ−ＰＥ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、カタログ＃５５５３８８）、抗ヒトＣＤ３３−ＰｅＣｙ７（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、カタログ＃３３３９４６）、抗ヒトＣＤ１９−ＦＩＴＣ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、カタログ＃５５５４１２）、及び抗ヒトＣＤ３−ＰｅＣｙ７（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、カタログ＃５５７８５１）。細胞集団を、フローサイトメトリを介して評価して、ＦｌｏｗＪｏで分析した。
【０５３４】
特定の一実験において、マウスに、１０ｍｇ／ｋｇの抗ｃＫＩＴコンジュゲートＪ２６、Ｊ２９、若しくはＪ３０、又はアイソタイプ対照コンジュゲートＪ３１を２日間、１日２回投薬した。マウスを２１日目に安楽死させて、骨髄を分析した。図３に示すように、抗ｃＫＩＴコンジュゲートＪ２６、Ｊ２９、又はＪ３０で処理したマウスは、ヒトＨＳＣ（ヒトＣＤ４５＋、ヒトＣＤ３４＋、ヒトＣＤ３８−）の引下げを示した一方、アイソタイプ対照コンジュゲートＪ３１で処理したマウスは、多様なキメラ化を示した。
【０５３５】
この実験は、抗ｃＫｉｔ  Ｆａｂ’−毒素コンジュゲートが、骨髄からＨＳＣを減少させることができたことを示している。抗ｃＫＩＴ  Ｆａｂ’−オーリスタチンコンジュゲート（例えば、Ｊ２６、Ｊ２９、Ｊ３０）は、ヒトＨＳＣをインビボで除去することができた。
【０５３６】
特に定義されない限り、本明細書中で用いられる技術用語及び科学用語は、本開示が属する分野に精通する専門家によって通常理解されるのと同じ意味を有する。
【０５３７】
特に明記されない限り、具体的に詳細に記載されていない全ての方法、工程、技術、及び操作は、当業者に明らかであるように、それ自体知られている様式で実行され得、かつ実行されてきた。ここでも例えば、本明細書中に記載される標準的なハンドブック及び一般的な背景技術を、そして本明細書中で引用される更なる参考文献を参照する。特に明記されない限り、本明細書中で引用される参考文献はそれぞれ、その全体が参照によって組み込まれる。
【０５３８】
本発明の特許請求の範囲は、非限定的であり、以下に記載される。
【０５３９】
特定の態様及び特許請求の範囲が本明細書中で詳細に開示されているが、これは説明の目的でのみ一例とされており、添付される特許請求の範囲、又はあらゆる対応する更なる出願の特許請求の範囲の主題の範囲に関して、限定となることは意図されていない。特に、種々の置換、変更、及び修飾が、特許請求の範囲によって定義されるように、本開示の精神及び範囲から逸脱することなく本開示になされてよいことが、本発明者らによって意図されている。核酸出発材料、注目するクローン、又はライブラリ型の選択は、本明細書中に記載される態様の知識を有する当業者にとってルーチン作業であると考えられる。他の態様、利点、及び修飾が、以下の特許請求の範囲の範囲内であるとみなされる。当業者であれば、ルーチンの実験のみを用いて、本明細書中に記載される本発明の特定の態様の多くの均等物を認識するであろうし、かつ確認することができる。そのような均等物は、以下の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。後に出願される対応する出願における特許請求の範囲の再起案（Ｒｅｄｒａｆｔｉｎｇ）は、種々の国々の特許法による制限による場合があり、特許請求の範囲の主題を放棄するものと解釈されるべきでない。
【図１−１】
2021527429.tif 000237
【図１−２】
2021527429.tif 000238
【図１−３】
2021527429.tif 000239
【図２−１】
2021527429.tif 000240
【図２−２】
2021527429.tif 000241
【図２−３】
2021527429.tif 000242
【図２−４】
2021527429.tif 000243
【図２−５】
2021527429.tif 000244
【図２−６】
2021527429.tif 000245
【図２−７】
2021527429.tif 000246
【図２−８】
2021527429.tif 000247
【図２−９】
2021527429.tif 000248
【図２−１０】
2021527429.tif 000249
【図２−１１】
2021527429.tif 000250
【図２−１２】
2021527429.tif 000251
【図２−１３】
2021527429.tif 000252
【図２−１４】
2021527429.tif 000253
【図２−１５】
2021527429.tif 000254
【図３】
2021527429.tif 000255
【配列表】
2021527429000001.app
【国際調査報告】
2021527429.tif 000256
2021527429.tif 000257
2021527429.tif 000258
2021527429.tif 000259
2021527429.tif 000260
2021527429.tif 000261
2021527429.tif 000262
2021527429.tif 000263