(57)【要約】  本発明は、とりわけ化粧調製物における、化学的に誘発されたストレスから、とりわけ重金属および／または粒子状物質によって引き起こされた化学的に誘発されたストレスから、皮膚を保護するための、または予防および／または予防法のための表皮の形態学的変化の予防および／または予防法のための、特定のベンジリデンマロナートの使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学的に誘発されたストレスから皮膚を保護するための、または皮膚のバリアを安定化するための、式Ｉの化合物の非治療的使用：
【化１】
2021521183.tif 000007
式中、
Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３または−ＣＯ２Ｒ３を示し、
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、いずれの場合も、互いに独立して、１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルキル基を示し、
Ｒ５は、１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルキル基、または１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルコキシ基を示す。
【請求項２】
表皮の形態学的変化の予防および／または予防法のための、式Ｉの化合物の非治療的使用：
【化２】
2021521183.tif 000008
式中、
Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３または−ＣＯ２Ｒ３を示し、
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、いずれの場合も、互いに独立して、１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルキル基を示し、
Ｒ５は、１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルキル基または１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルコキシ基を示す。
【請求項３】
化学的に誘発されたストレスから皮膚を保護するまたは皮膚のバリアを安定化するための、少なくとも１の式Ｉの化合物を含む化粧調製物の使用：
【化３】
2021521183.tif 000009
式中、
Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３または−ＣＯ２Ｒ３を示し、
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、いずれの場合も、互いに独立して、１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルキル基を示し、
Ｒ５は、１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルキル基または１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルコキシ基を示す。
【請求項４】
表皮の形態学的変化の予防および／または予防法のための、少なくとも１の式Ｉの化合物を含む化粧調製物の使用：
【化４】
2021521183.tif 000010
式中、
Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３または−ＣＯ２Ｒ３を示し、
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、いずれの場合も、互いに独立して、１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルキル基を示し、
Ｒ５は、１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルキル基または１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルコキシ基を示す。
【請求項５】
化学的に誘発されたストレスから皮膚を保護するまたは皮膚のバリアを安定化するための、少なくとも１の式Ｉの化合物を含むメディカルデバイスの使用：
【化５】
2021521183.tif 000011
式中、
Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３または−ＣＯ２Ｒ３を示し、
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、いずれの場合も、互いに独立して、１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルキル基を示し、
Ｒ５は、１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルキル基または１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルコキシ基を示す。
【請求項６】
少なくとも１の式Ｉの化合物を含むメディカルデバイスの表皮の形態学的変化の予防および／または予防法のための使用：
【化６】
2021521183.tif 000012
式中、
Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３または−ＣＯ２Ｒ３を示し、
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、いずれの場合も、互いに独立して、１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルキル基を示し、
Ｒ５は、１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルキル基または１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルコキシ基を示す。
【請求項７】
式Ｉの化合物におけるＲ１が−ＣＯ２Ｒ３を示すことを特徴とする、請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
式Ｉの化合物における置換基Ｒ２およびＲ３が、同一であることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
置換基Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が、いずれの場合も、互いに独立して、１〜８個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルキル基を示すことを特徴とする、請求項１〜８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０】
置換基Ｒ５が、１〜８個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルコキシ基を示すことを特徴とする、請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、とりわけ化粧調製物における、化学的に誘発されたストレスから、とりわけ重金属および／または粒子状物質によって引き起こされた化学的に誘発されたストレスから、皮膚を保護するための、または表皮の形態学的変化の予防および／または予防法のための、特定のベンジリデンマロナートの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
人体の境界層および表面として、皮膚は、さまざまな外界からのストレス因子にさらされる。ヒトの皮膚は、様々な様式で特殊化された細胞型、例えば角化細胞、メラニン細胞、ランゲルハンス細胞、メルケル細胞および包埋された感覚細胞を用いて、外界からの影響から体を保護する器官である。
【０００３】
ヒトの皮膚の表面は、グリースのフィルムで覆われており、所定の状況に応じて、水中油型または油中水型エマルションとしてみなすことができ、例えば、酵素およびビタミンなどの無数の活性化合物を含有する。皮脂腺および角化細胞から分泌される脂質から形成されるこのグリースのフィルムは、皮膚中の水分を保護し、皮膚のバリアとして、身体を好ましくない環境因子から保護する。皮膚バリアの高感度平衡（ホメオスタシス）は、外的または内的因子によって破壊される可能性がある。
【０００４】
外的因子の中で、ヒトの皮膚に対する、外的な物理的、化学的および生物学的影響を区別すべきである。外的物理的な影響は、熱的および物理的影響、および放射線、例えばＵＶ線の作用を包含する。
【０００５】
皮膚の物理的なストレス因子は、例えば、太陽光または同等のスペクトルを持つ人工放射線供給源、ならびに通常はフリーラジカルまたはイオン性である、未定義の反応性光生成物など、放射線によって生成される可能性のある化合物によって引き起こされる。
【０００６】
多数の有機および無機ＵＶフィルターおよび抗酸化剤は、ＵＶ放射線を吸収および／またはフリージカルを除去することができると知られている。これらは、したがって、これらの物理的な影響からヒトの皮膚を保護することができる。
【０００７】
外的な生物学的影響は、例えば、外来生物およびその代謝産物の作用を含む。外的な化学的影響は、とりわけ、皮膚に対する物質、特に刺激物、汚染物質、または重金属の作用を意味すると解釈される。頻繁な大気中の非アレルギー性刺激物、いわゆる疑似アレルゲンは、例えば、接着剤、洗浄材料またはスプレー、香料、例えば芳香族炭化水素および／または揮発性有機化合物、所謂ＶＯＣなどの環境汚染物質から生じるエアロゾル、またはタバコの煙、都市のほこり、細かいほこり、ディーゼル排気ガスや産業廃棄物ガスからの粒子などの粒子状物質（ＰＭと略される）でもある。粒子状物質は、しばしば、その平均サイズによって定義される。ＰＭ２．５は、例えば、２．５μｍの平均サイズを有する粒子状物質を意味する。
【０００８】
このタイプの化学的効果は、皮膚のホメオスタシスに影響を及ぼし、一般に化学的に誘発された皮膚刺激、とりわけ重金属および／または粒子状物質によって化学的に誘発される。皮膚に起こりうる結果は、乾燥した、ひびの入った、または薄片状の皮膚、皮膚および／または皮膚の毛穴の変色（例えば、皮膚および／または毛穴の黄変）、かゆみのある皮膚および／または敏感肌である。化学刺激物への頻繁または慢性的な曝露の場合、このタイプの皮膚刺激は病的な皮膚炎症になる可能性がある。ホメオスタシスへの影響は、皮膚のバリア機能の崩壊を意味すると解釈することもできる。表皮の皮膚バリアが弱いと、汚染物質、刺激物、重金属の侵入が容易になると考えられている。
【０００９】
化学的に誘発されたストレスは、したがって、上記で概説した結果の例を伴う、化学的性質の刺激への曝露に対する生物または器官、例えば皮膚の反応を意味すると解釈される。化学的刺激中に引き起こされる生化学的メカニズムは複雑であり、まだ完全には解明されていない。
【００１０】
しかし、重金属および／またはタバコの煙、都市のほこり、細かいほこり、またはディーゼル排気ガスや産業廃棄物ガスからの粒子などの粒子状物質が酸化ストレスを引き起こすことが知られている。これは、例えば、脂質過酸化のきっかけとなり、これは、例えば、細胞膜で形成されたアルデヒドを介して検出することができる。形成される１つのアルデヒドは、例えば、Janero, Free Radic Biol Med. 1990, 9(6), 515-40に記載されているように、マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）である。
【００１１】
化学的ストレス因子に対する皮膚の反応は、したがって、例えば、マロンジアルデヒドの形成から観察することができる。ＭＤＡ産生は、したがって、化学的に誘発された皮膚のストレスを検出するための好適なマーカーである。
【００１２】
本発明の目的のために、化学的に誘発されたストレスは、好ましくは、重金属および／または粒子状物質の作用に対する皮膚の反応を意味すると解釈される。本発明の目的のために、化学的に誘発されたストレスは、具体的に好ましくは、脂質過酸化を誘発する重金属、特にディーゼル排気の作用に対する皮膚の反応を意味すると解釈される。
【００１３】
皮膚の自然な再生をサポートするために、皮膚による水分喪失を防ぐことを目的とした保水剤または電解質に加えて、セラミドまたはセラミド類似体などの細胞間脂質混合物も含み得る、スキンケア製剤が推奨される。
【００１４】
しかしながら、化学的に誘発されたストレス、とりわけ脂質過酸化が誘発される化学的に誘発されたストレスから皮膚を保護することができる代替の活性化合物の必要性が引き続き存在する。汚染物質、刺激物または重金属への曝露後、とりわけ重金属および／または粒子状物質への曝露後、皮膚、特に表皮の形態学的変化を防ぐことができる、または皮膚、とりわけ表皮の形態学的変化を防ぐことができる、代替の活性化合物の必要性が引き続き存在する。
【発明の概要】
【００１５】
したがって、本発明の目的は、とりわけ化粧調製物またはメディカルデバイスにおける、非治療的使用のための代替の活性化合物を提供することであり、これは、化学的ストレス因子または化学的ストレス因子の作用の結果、とりわけ脂質過酸化を引き起こす化学的ストレス因子から皮膚を保護する。これは、さらにまた、化学的ストレス因子への曝露による形態学的変化から皮膚、特に表皮を保護し、皮膚のバリア特性を維持または回復する必要がある。
【００１６】
これらの目的は、驚くべきことに、以下の式Ｉに記載される、特定のベンジリデンマロナートの使用によって、当業者によって予見できなかった様式で達成される。
【００１７】
ベンジリデンマロナートは、例えば、ＵＳ６，８３１，１９１またはＷＯ０３／００７９０６から知られている。そこに記載されているベンジリデンマロナートは、同様にＵＶ吸収剤（２９０〜４００ｎｍ）でもある、抗酸化剤として記載されている。これらの化合物は、他の日焼け止めフィルターを安定化することができ、したがって、太陽光に起因する変質からそれらを保護することができることがさらに説明されている。以下に記載される、式Ｉの化合物は、先行技術からのベンジリデンマロナートの特定の選択である。
【００１８】
抗酸化剤または酸化防止剤は、他の物質の酸化を遅らせるかまたは完全に防ぐ化合物である。しかしながら、作用機序、したがって抗酸化剤の有効性は、酸化の原因となる分子または放射線の性質に依存する。
【００１９】
それらの作用機序に応じて、抗酸化剤は、例えば、フリーラジカルスカベンジャー、還元剤、および抗酸化相乗剤に分けることができる。
フリーラジカルスカベンジャーは、例えば、天然物質のトコフェロール、またはブチルヒドロキシアニソールなどの合成物質である。このタイプの物質は安定したフリーラジカルを形成し、それ以上反応しないため、反応カスケードの終止につながる。
【００２０】
還元剤は、例えば、アスコルビン酸またはグルタチオンである。それらは極めて低い酸化還元潜在力を有する。それらの保護作用は、保護される物質の前にそれらが酸化されることから生じる。
【００２１】
抗酸化相乗剤は、例えば使用済みの抗酸化物質を再び再生することにより、抗酸化物質の作用をサポートする。その例はＥＤＴＡナトリウムである。
【００２２】
したがって、抗酸化剤を分類するためのさまざまな試験システムが特定されている。
ＴＥＡＣアッセイ：トロロックス等価抗酸化能力：Trolox Equivalent Antioxidative Capacity (TEAC)を使用すると、サンプルの抗酸化能を示すことができる。測定においては、ビタミンＥ誘導体トロロックスが基準となる。したがって、結果はトロロックス等価で引用される。
【００２３】
測定の原理は、２，２’−アジノジ（３−エチルベンゾチアゾリン）−６−スルホナートジアンモニウム（ＡＢＴＳ）と調査対象の媒体に存在する抗酸化剤との反応に基づく。酸化媒体において、ＡＢＴＳは安定した緑色のフリーラジカルカチオンを形成し、抗酸化作用のある物質と反応するとその色を失う。抗酸化剤の添加後の定義された期間の前後の７３４ｎｍでのＡＢＴＳ溶液のフォトメトリック測定は、消光差を与える。これから、調査された物質の抗酸化能力は、様々な濃度においてトロロックスによって引き起こされた消光の減少と比較することによって決定される（Pellegrini, N. et al., Free Radical Biology and Medicine, 1999, 26 (9-10), 1231-1237）。
【００２４】
ＤＰＰＨアッセイ：この試験方法において、調査対象の物質をエタノール溶液中の安定なフリーラジカルＤＰＰＨ＊（２，２−ジフェニル−１−ピクリル−ヒドラジル水和物）と反応させる。ＤＰＰＨ＊の減少は、フリーラジカルの特徴的な波長での消滅の減少を介して続く。そのフリーラジカルの形で、ＤＰＰＨ＊は５１５ｎｍで吸収する。さまざまな濃度が、各抗酸化剤について調査され、ＤＰＰＨ＊のモルに対する抗酸化剤のモル数の比率として表される。５１５ｎｍでの吸光度の減少は、１秒後、２分後、１０分後、そして吸光度が一定になるまで１０分ごとに測定される。ＤＰＰＨ＊の正確な初期濃度は、補助剤の吸光係数を使用して判断する。残存するＤＰＰＨ＊濃度は、各酸化防止剤濃度で、初期消光のパーセンテージとして判断され、ＤＰＰＨ＊と酸化防止剤のモル比に対してプロットされる。抗フリーラジカル活性は、ここでは、ＤＰＰＨ＊濃度を初期量の５０％（ＥＣ５０）に低下させる抗酸化剤の割合として定義される。
【００２５】
化合物ジイソプロピルバニリデネマロナート（ＤＩＰＶＭ）は、IFSCC Conference Proceedings, 2016, Orlandoに、タイトル「Ease stress and support skin revitalization（ストレスを和らげ、肌の活性化をサポートする）」L. Heider et al.で公開された記事において、サイトカイン、とりわけ化学化合物であるホルボール１２−ミリステート１３−アセテート（ＰＭＡ）によって皮膚が炎症を起こしている場合インターロイキン８、の排泄を減らす化合物として、記載されている。データは、ＤＩＰＶＭの抗炎症活性を確認する。
【００２６】
本発明は、化学的に誘発されたストレスから皮膚を保護するための、式Ｉの化合物の非治療的使用に関する：
【００２７】
【化１】
2021521183.tif 000002
【００２８】
式中、
Ｒ１は−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３または−ＣＯ２Ｒ３を示し、
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、いずれの場合も、相互に独立して、１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルキル基を示し、
Ｒ５は、１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルキル基または１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルコキシ基を示す。
【００２９】
本発明は、さらにまた、化学的に誘発されたストレスから皮膚を保護するための、少なくとも１の式Ｉの化合物を含む化粧調製物またはメディカルデバイスの使用に関する：
【００３０】
【化２】
2021521183.tif 000003
【００３１】
式中、
Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３または−ＣＯ２Ｒ３を示し、
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、いずれの場合も、相互に独立して、１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルキル基を示し、
Ｒ５は、１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルキル基または１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルコキシ基を示す。
【００３２】
上に記載または好ましく記載された、化学的に誘発されたストレスおよびその結果の定義が、適用される。
【００３３】
本発明は、化学的ストレス要因の作用、好ましくは汚染物質、刺激物および／または脂質過酸化を誘発する重金属の作用の結果から皮膚を保護するための、上に記載のとおり、式Ｉの化合物の非治療的使用に特に好ましくは向けられている。
【００３４】
本発明は、さらにまた、表皮の形態学的変化の予防および／または予防法のための、式Ｉの化合物の非治療的使用に関する：
【００３５】
【化３】
2021521183.tif 000004
【００３６】
式中、
Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３または−ＣＯ２Ｒ３を示し、
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、いずれの場合も、互いに独立して、１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルキル基を示し、
Ｒ５は、１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルキル基または１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルコキシ基を示す。
【００３７】
本発明は、さらにまた、表皮の形態学的変化の予防および／または予防法のための、少なくとも１の式Ｉの化合物を含む化粧調製物またはメディカルデバイスの使用に関する：
【００３８】
【化４】
2021521183.tif 000005
【００３９】
式中、
Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３または−ＣＯ２Ｒ３を示し、
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、いずれの場合も、互いに独立して、１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルキル基を示し、
Ｒ５は、１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルキル基または１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルコキシ基を示す。
【００４０】
表皮はさまざまな様々な細胞型を含有しており、化学的に誘発されたストレスに非常に敏感に反応する皮膚の一部である。表皮の形態学的変化は、例えば、細胞核の変化、それに続く真皮−表皮界面の分離および／または好酸性細胞質の出現から、および／または浮腫の存在から、および／または表皮症から認識され得る。改変された細胞核は、例えば、ピクノティックまたは核溶解性の細胞核である。式Ｉの化合物は、好ましくは予防作用を有する。
【００４１】
本発明は、さらにまた、皮膚のバリアを安定化するための、式Ｉの化合物の非治療的使用にも関する：
【００４２】
【化５】
2021521183.tif 000006
【００４３】
式中、
Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３または−ＣＯ２Ｒ３を示し、
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、いずれの場合も、互いに独立して、１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルキル基を示し、
Ｒ５は、１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルキル基または１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルコキシ基を示す。
【００４４】
非治療的使用のために、式Ｉの化合物は、好ましくは化粧調製物またはメディカルデバイスにおいて皮膚に適用される。
【００４５】
結果的に、上に記載のまたは好ましくは下に記載の式Ｉの化合物は、好ましくは、化学的に誘発される、とりわけ脂質過酸化を誘発する化学的ストレス因子によって誘発されるストレスから皮膚を保護するため、または好ましくは脂質過酸化を誘発する化学的ストレス因子への曝露時に、特に表皮において、形態学的変化から皮膚を保護するための化粧調製物またはメディカルデバイスにおいて使用される。
【００４６】
結果的に、上に記載のまたは好ましくは下に記載の式Ｉの化合物は、皮膚のバリアを安定化するための化粧調製物またはメディカルデバイスにおいて好ましく使用される。
【００４７】
非治療的使用は、とりわけ、化粧的使用である。結果的に、式Ｉの化合物は、とりわけ、化粧調製物において用いられる。
【００４８】
本発明は、具体的に好ましくは、接着剤、洗浄材料またはスプレーから生じるエアゾル、芳香族炭化水素および／または揮発性有機化合物、重金属または粒子状物質の群から選択される化学的ストレス因子に皮膚が接触する場合の、上に記載または下に好ましく記載された、式Ｉの化合物の非治療的使用に向けられる。
【００４９】
本発明は、極めて具体的に好ましくは、重金属、タバコの煙、都市のほこり、細かいほこり、ディーゼル排気ガスや産業廃棄物ガスからの粒子の化学的ストレス因子と、とりわけ重金属およびディーゼル排気ガスからの粒子と皮膚が接触した場合の、上に記載または下に好ましく記載された、式Ｉの化合物の非治療的使用に向けられる。
【００５０】
上に記載および下に好ましく記載された、式Ｉの化合物の代表として、ジ（２−エチルヘキシル）３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシベンジリデンマロナートの効き目は、実験部分において、化合物ジイソプロピル５−メトキシ−４−ヒドロキシベンジリデンマロナート（ＤＩＰＶＭ）と比較してex vivoで確認される。
【００５１】
上に記載のとおり、式Ｉの化合物における置換基Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３または−ＣＯ２Ｒ３を示すことができる。Ｒ１が−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３を示す場合、式Ｉの化合物は、アルファ−アセチルケイ皮酸エステルと称することもできる。
Ｒ１が−ＣＯ２Ｒ３を示す場合、式Ｉの化合物は、好ましくはベンジリデンマロン酸エステルと称される。
式Ｉの化合物は、Ｒ１が−ＣＯ２Ｒ３を示し、およびＲ３が上記または下記の、または好ましいと記載された意味を有する場合、本発明に従って好ましく使用される。
【００５２】
本発明は、したがってさらにまた、式Ｉの化合物における置換基Ｒ１が−ＣＯ２Ｒ３を示し、およびＲ３が上記または下記に与えられた意味を有することを特徴とする、式Ｉの化合物の非治療的使用に関する。
【００５３】
上に記載のとおり、置換基Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、いずれの場合も、互いに独立して、１〜２０個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルキル基を示す。
【００５４】
１〜４、１〜８、１〜１２、または１〜２０個のＣ原子を有する直鎖または分枝のアルキル基は、式ＣｐＨ２ｐ＋１式中ｐ＝１、２、３または４、または１、２、３、４、５、６、７または８、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０、例えばメチル、エチル、ｉ−プロピル、プロピル、ブチル、ｉ−ブチルまたはｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、１−、２−または３−メチルブチル、１，１−、１，２−または２，２−ジメチルプロピル、１−エチルプロピルまたはヘキシル、へプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、へプタデシル、オクタデシル、ノナデシルまたはエイコシルに一致する。
アルキル基が詳細に指定されない場合、それは直鎖アルキル基である。
【００５５】
式Ｉの化合物は、置換基Ｒ２およびＲ３が同一のである場合、本発明に従って好ましく使用される。
【００５６】
本発明は、したがってさらにまた、式Ｉの化合物において置換基Ｒ２およびＲ３が同一であることを特徴とする、式Ｉの化合物の非治療的使用に関する。
【００５７】
式Ｉの化合物は、置換基Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が、いずれの場合も、互いに独立して、１〜８個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルキル基を示す場合、本発明に従って好ましく使用される。
【００５８】
本発明は、したがってさらにまた、置換基Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が、いずれの場合も、互いに独立して、１〜８個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルキル基を示すことを特徴とする、式Ｉの化合物の非治療的使用に関する。
【００５９】
本発明に従って、式中、Ｒ１が−ＣＯ２Ｒ３を示し、置換基Ｒ２およびＲ３が、同一であって、１〜８個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルキル基を示し、Ｒ４がメチルまたはエチルを示す、式Ｉの化合物の使用が具体的に好ましい。
【００６０】
本発明に従って、式中、Ｒ１が−ＣＯ２Ｒ３を示し、置換基Ｒ２およびＲ３は、同一であって、４〜８個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルキル基を示し、Ｒ４がメチルを示す、式Ｉの化合物の使用が、極めて具体的に好ましい。
【００６１】
式Ｉの化合物は、置換基Ｒ５が１〜８個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルキル基または１〜８個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルコキシ基を示す場合、本発明に従って好ましく使用される。
式Ｉの化合物は、置換基Ｒ５が１〜８個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルコキシ基を示す場合、具体的に本発明に従って好ましく使用される。
【００６２】
本発明は、したがってさらにまた、置換基Ｒ５が１〜８個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルコキシ基、好ましくは１〜４個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルコキシ基、具体的に好ましくはメトキシまたはエトキシ、極めて具体的に好ましくはメトキシを示すことを特徴とする、式Ｉの化合物の非治療的使用に関する。
【００６３】
本発明に従って、式中、Ｒ１が−ＣＯ２Ｒ３を示し、置換基Ｒ２およびＲ３が、同一であって、１〜８個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルキル基を示し、Ｒ４がメチルまたはエチルを示し、およびＲ５が１〜４個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルコキシ基を示す、式Ｉの化合物の使用が極めて具体的に好ましい。
【００６４】
本発明に従って、式中、Ｒ１が−ＣＯ２Ｒ３を示し、置換基Ｒ２およびＲ３が、同一であって、４〜８個のＣ原子を有する線状または分枝状のアルキル基を示し、Ｒ４がメチルを示し、Ｒ５がメトキシまたはエトキシを示す、式Ｉの化合物の使用が、極めて具体的に好ましい。
【００６５】
極めて具体的に好ましい式Ｉの化合物は、
ジメチル３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシベンジリデンマロナート、
ジエチル３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシベンジリデンマロナート、
ジイソプロピル３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシベンジリデンマロナート、
ジプロピル３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシベンジリデンマロナート、
ジブチル３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシベンジリデンマロナート、
ジ（ｔｅｒｔ．ブチル）３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシベンジリデンマロナート、
ジペンチル３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシベンジリデンマロナート、
ジヘキシル３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシベンジリデンマロナート、
ジへプチル３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシベンジリデンマロナート、
ジ（２−エチルヘキシル）３，４−ジメトキシ−４−ヒドロキシベンジリデンマロナート、
ジオクチル３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシベンジリデンマロナート、
ジメチル３，５−ジエトキシ−４−ヒドロキシベンジリデンマロナート、
ジエチル３，５−ジエトキシ−４−ヒドロキシベンジリデンマロナート、
ジイソプロピル３，５−ジエトキシ−４−ヒドロキシベンジリデンマロナート、
ジプロピル３，５−ジエトキシ−４−ヒドロキシベンジリデンマロナート、
ジブチル３，５−ジエトキシ−４−ヒドロキシベンジリデンマロナート、
ジ（ｔｅｒｔ．ブチル）３，５−ジエトキシ−４−ヒドロキシベンジリデンマロナート、
ジペンチル３，５−ジエトキシ−４−ヒドロキシベンジリデンマロナート、
ジヘキシル３，５−ジエトキシ−４−ヒドロキシベンジリデンマロナート、
ジへプチル３，５−ジエトキシ−４−ヒドロキシベンジリデンマロナート、
ジ（２−エチルヘキシル）３，５−ジエトキシ−４−ヒドロキシベンジリデンマロナート、
ジオクチル３，５−ジエトキシ−４−ヒドロキシベンジリデンマロナート．
である。
【００６６】
上に言及された化合物のうち、化合物ジ（２−エチルヘキシル）３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシベンジリデンマロナートが、本発明のために具体的に好適である。
【００６７】
上に記載または好ましく記載された、少なくとも１の式Ｉの化合物を含む、化粧調製物またはメディカルデバイスのタイプは、ここでは制限されない。
【００６８】
本明細書において調製物は、大抵、局所的に使用することができる調製物である。この場合における調製物は、美容上または皮膚科学的に好適なビヒクル、および所望される特性プロファイルに応じて任意にさらなる好適な成分を含む。メディカルデバイスである場合、メディカルデバイスに許容されるビヒクルが選択される。
【００６９】
本発明の目的のために、「局所的に使用することができる」は、調製物が外部および局部的に使用されることを意味し、すなわち調製物は、例えば皮膚への、適用に好適でなければならない。
【００７０】
調製物は、該必須のまたは任意の構成物質を包含するまたは含む、から本質的になる、またはからなり得る、調製物において使用することができる、すべての化合物または構成要素は、既知であり市販されているか、または既知のプロセスによって合成可能であるかのいずれかである。
好適な調製は、例えば、ＷＯ０３／００７９０６から知られている。
【００７１】
非治療的使用において、上に記載または好ましく記載された、式Ｉの化合物は、好ましくは対応する調製物に、０．０１〜５重量パーセント、好ましくは０．０５〜２重量％の量で、具体的に好ましくは０．０８〜０．５重量％の量で組み込まれ、ここで、量の表示は、調製物の全量に関する。
【００７２】
上に記載または好ましく記載された、式Ｉの化合物が、皮膚にとりわけ十分にそれらのポジティブな効果を発達させることができるために、式Ｉの化合物を、より深い皮膚層へ浸透させることが好ましいかもしれない。数多の可能性が、この目的のために存在する。好ましい可能性は、上に記載された、または好ましく記載された、少なくとも１の式Ｉの化合物を含むリポソームおよび／またはナノエマルションの対応する調製物における使用であり、これは、外側の皮膚層を介する式Ｉの化合物の輸送を促進する。
【００７３】
リポソームおよび／またはナノエマルションの調製のために、上に記載された、または好ましく記載された、式Ｉの化合物を、それら自体を凝集してベシクルを形成することができる、表面−活性の、大抵は、両親媒性の化合物と接触させる。
【００７４】
リポソームは、水性相を封入するベシクルである。ベシクルは、１以上の脂質二重層からなる。脂質二重層は、非極性部および極性部の両方を有し、したがって両親媒性である分子からなる。リポソームのサイズおよび構造はさまざまである。リポソームは好ましくは約１５〜３５００ｎｍ、具体的に好ましくは５０〜１０００ｎｍの直径を有する。膜形成分子は、大抵は、ステロイド、リン脂質、糖脂質、スフィンゴ糖脂質、リポ多糖、スクアレン、トコフェロール、脂肪酸または前記分子の混合物である。
【００７５】
好ましいリポソームは、高い割合の（８０％より多い）ホスファチジルコリンを有するリン脂質から調製される。ホスファチジルコリンの同義語は、レシチンである。これらは、脂肪酸、グリセロール、リン酸およびコリンから構成されるリン脂質である。レシチンは、動植物の細胞膜の構成物質である。一般に、大豆植物からのホスファチジルコリンが使用され、これは、高い割合の不飽和必須脂肪酸、例えばリノール酸を含有する。リノール酸はリポソーム膜に高い柔軟性を提供することができる。水素化されたホスファチジルコリン（ＰＣ８０Ｈ）が、リポソームの調製に使用される場合、ベシクル膜は、より硬く、親油性活性化合物をベシクル膜に有効に組み込むことができない。
【００７６】
ナノエマルションは、脂質単層から形成され、水性相から区切られる親油性相によって特徴づけられる。この態様において、式Ｉの化合物は、膜形成分子の単層にある。リポソームについて説明したものと同じコメントが膜形成分子にも当てはまる。
【００７７】
少なくとも１の式Ｉの化合物のために好ましい溶媒は、例えば、メタノール、エタノールまたはイソプロパノールなどのアルコール、グリセロール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、ペンチレングリコール、ソルビトール、エトキシジグリコールおよび／またはジイソプロピルアジパートなどのポリオールである。具体的に好ましい溶媒は、エタノール、エトキシジグリコールおよび／またはジイソプロピルアジパートである。
【００７８】
上に記載された、または好ましく記載された、式Ｉの化合物の、化学的にストレスを受けた皮膚の予防または処理のために同じく好適な他の活性化合物との組み合わせは有利である。これは、リポソームまたはナノエマルション、あるいは使用を目的とした調製物に一緒に入れることができる。
【００７９】
上に記載または好ましく記載された、少なくとも１の式Ｉの化合物との組み合わせのための具体的に好適な化粧品活性化合物は、例えば、抗発赤物質、保湿剤、保水剤、抗しわ調製物、弾性特性を改善するための剤、コラーゲン合成の刺激に効果のある物質、炎症抑制物質、抗酸化剤および／またはビタミンである。
【００８０】
組み合わせのための具体的に好適な活性化合物は、例えば、ビスアボロール、バイオフラボノイド、オスモライト、アラントイン、ビオチン、２−（４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシベンジル）マロン酸ビス（２−エチルヘキシル）エステル、RonaCare(R)APとしてMerckから市販、尿素、ナイアシンアミド、サリチル酸または酸化亜鉛である。
【００８１】
好ましいバイオフラボノイドは、例えば、ケルセチン、グルコシルルチン、イソクエルセチン、ルチンまたはトロキセルチンである。好ましいオスモライトは、エクトインまたはヒドロキシエクトインである。
【００８２】
上に記載のとおりの式Ｉの化合物と組み合わせることができるさらに好適な製品は、製品RonaCare(R)PoppySE、ポピーからの抽出物、Emblica(R)、アムラ果実（インディアングーズベリー）からの抽出物、活性化合物５，７−ジヒドロキシ−２−メチルクロメン−４−オンを有するRonaCare(R)Luremin(R)、RonaCare(R)SereneShieldおよびRonaCare(R)RenouMer、藻類抽出物、同じくMerckから市販、である。
【図面の簡単な説明】
【００８３】
【図１】図１は、未処理の外植片の組織学的写真を示す図である。
【図２】図２は、エタノールおよび刺激物で処理した外植片の組織学的写真を示す図である。
【図３】図３は、化合物Ａおよび刺激物を含有する溶液で処理した外植片の組織学的写真を示す図である。
【図４】図４は、化合物Ｂおよび刺激物を含有する溶液で処理した外植片の組織学的写真を示す図である。
【図５】図５は、ゲルＤおよび刺激物で処理した外植片の組織学的写真を示す図である。
【００８４】
以下の実施例は、本発明を限定することなく説明することを意図している。本発明は、請求された範囲全体にわたって対応して実施することができる。実行可能なバリアントは、例から導き出すこともできる。
【００８５】
化合物ジ（２−エチルヘキシル）３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシ−ベンジリデンマロナートをＷＯ０３／００７９０６の例ＸＶＩＩにしたがって調製し、以下の例において用いた。
【００８６】
化合物ジイソプロピル３−メトキシ−４−ヒドロキシベンジリデンマロナート（ＤＩＰＶＭ）をＥＰ１９５２８４３の例ＶＩにしたがって調製し、以下の例において用いた。
【００８７】
例１：生きているヒトの皮膚の外植片におけるｅｘ−ｖｉｖｏ研究
ｅｘ−ｖｉｖｏ研究を、白い皮膚の色を有する５５歳の女性（Ｐ１９２２−ＡＢ５４）からの皮膚の外植片において実施した。外植片は、ＢＥＭ培養培地（BIO-ECからの外植片培地）において３７℃で、５％のＣＯ２を含有する湿った雰囲気下で機能状態に保った。４つの外植片を、物質、対照または参照の実験シリーズの各ケースにおいて使用する。
【００８８】
化学的に誘発されたストレスを引き起こすために用いられた刺激物は、商品番号1.10714.0500でMerckから購入された金属および重金属の溶液であり、これはとりわけ、Ａｌ、Ａｓ、Ｂ、Ｂａ、Ｂｅ、Ｃａ、Ｃｄ、Ｃｒ、Ｃｕ、Ｆｅ、Ｈｇ、Ｋ、Ｌｉ、Ｍｇ、Ｍｎ、Ｎａ、Ｎｉ、Ｐ、Ｐｂ、Ｓａ、Ｓｃ、Ｓｅ、Ｓｒ、Ｔｅ、Ｔｉ、Ｙ、Ｚｎを含み、ここで０．１％のディーゼル粒子もこの溶液に添加された（１ｍｇ／ｍｌ、粒子サイズＰＭ２．５、1650b、NISTから）。
【００８９】
調査対象である化合物ＡおよびＢは、エタノール中の０．５％溶液で使用する。外植片へのエタノールの影響を並行して調査する（化合物Ｃ＝エタノール）。用いられた参照は、商品番号56300のDECLEORからのゲルであり（ゲルＤ；decleor gelee hydratante anti-pollution）、これは、化学物質、重金属およびディーゼル粒子から皮膚を保護すると知られている。使用した対照は、培養培地と接触したのみの未処理試料である。
【００９０】
化合物Ａは、ジエチルヘキシルシリングリイデンマロナート（ＤＥＳＭ、ジ（２−エチルヘキシル）３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシベンジリデンマロナート）である。
化合物Ｂは、ジイソプロピルバニリデンマロナート（ＤＩＰＶＭ、ジイソプロピル３−メトキシ−４−ヒドロキシベンジリデンマロナート）である。
【００９１】
商品番号1.10714.0500のMerckからの刺激物、ここで金属／重金属は、以下の濃度で、５％塩酸に溶解している：
Ａｌ    ０．０１ｍｇ／ｍｌ
Ａｓ    ０．０１ｍｇ／ｍｌ
Ｂ      ０．００１ｍｇ／ｍｌ
Ｂａ    ０．００１ｍｇ／ｍｌ
Ｂｅ    ０．０００５ｍｇ／ｍｌ
Ｃａ    ０．００５ｍｇ／ｍｌ
Ｃｄ    ０．００１ｍｇ／ｍｌ
Ｃｒ    ０．００１ｍｇ／ｍｌ
Ｃｕ    ０．００１ｍｇ／ｍｌ
Ｆｅ    ０．００１ｍｇ／ｍｌ
Ｈｇ    ０．００２５ｍｇ／ｍｌ
Ｋ      ０．０４９５ｍｇ／ｍｌ
Ｌｉ    ０．００１ｍｇ／ｍｌ
Ｍｇ    ０．０００５ｍｇ／ｍｌ
Ｍｎ    ０．０００５ｍｇ／ｍｌ
Ｎａ    ０．０１ｍｇ／ｍｌ
Ｎｉ    ０．００２５ｍｇ／ｍｌ
Ｐ      ０．００５ｍｇ／ｍｌ
Ｐｂ    ０．０１ｍｇ／ｍｌ
Ｓｃ    ０．０００５ｍｇ／ｍｌ
Ｓａ    ０．０１ｍｇ／ｍｌ
Ｓｒ    ０．０００５ｍｇ／ｍｌ
Ｔｅ    ０．０１ｍｇ／ｍｌ
Ｔｉ    ０．００１ｍｇ／ｍｌ
Ｙ      ０．０００５ｍｇ／ｍｌ
Ｚｎ    ０．００１ｍｇ／ｍｌ
上に記載のとおりディーゼル粒子が添加されている。
【００９２】
試料適用
外植片は、化合物ＡおよびＢ、ならびに化合物ＣおよびゲルＤを含むテスト対象の溶液（２ｍｇ／ｃｍ２対応する外植片あたり２μｌ）で４日間（０日目＝Ｄ０、１日目＝Ｄ１、２日目＝Ｄ２、３日目＝Ｄ３）、毎日１回処理される。Ｄ３に、刺激物を塗布する４時間前に、テストする溶液および参照を処理する。
エタノールを蒸発させるために、化合物Ｃを有する外植片を各ケース１０分間乾燥させる。
すべての外植片は培地に残し、Ｄ２にその半分を補充し、Ｄ３にそのすべてを補充する。
Ｄ３に、外植片を、上に記載のとおりの金属／重金属およびディーゼル粒子を含有する刺激物で処理し、ここで直径９ｍｍの紙ディスクを３０μｌの刺激物に浸す。刺激物は、夫々の外植片に２４時間作用する。
４日目（Ｄ４）に、調査する化合物ごとに、３つの外植片を収集する。各外植片を分割し、一部を−８０℃で凍結し、残りの半分を緩衝ホルモル溶液（ホルムアルデヒド溶液）で固定する。４つ目の外植片を−８０℃で凍結したままとする。
【００９３】
処理された外植片の培養培地を、化合物ＭＤＡについて調査する。ＭＤＡは、マロンジアルデヒド（プロパンジアール）の略であり、上に記載のとおりの酸化ストレスの既知のマーカーである。
【００９４】
組織学的調査：
２４時間固定した外植片を脱水素化し、パラフィンに含浸させる。次に、厚さ５μｍの領域を切り取り、顕微鏡（たとえば、Leica DMLBまたはOlympus BX43）で調査する。対応する画像を、組織学の標準的な染色方法であるマッソン染色法（マッソンの三色染色、ゴールドナーバリアント）を使用して作成する。染色により、細胞と周囲の組織とを区別することができる。これにより、角質層、表皮、真皮−表皮閾値、および乳頭真皮に関する外植片の変化が見えるようになる。
表皮は様々な細胞型を含有し、化学的に誘発されたストレスに非常に敏感に反応する皮膚の一部である。
研究における刺激物の影響は、例えば、表皮の形態から明らかである。表皮形態の変化は、例えば、細胞核の変化、真皮−表皮界面の分離および／または好酸性細胞質の出現から、および／または浮腫の存在から認識され得る。改変された細胞核は、例えば、ピクノティック細胞核または核溶解性細胞核である。
【００９５】
ＭＤＡ調査：
調査した各外植片の培地を塩培地（HBBS Medium Hank’s Balanced Salts）およびＴＢＡＲ溶液と混合し、８０℃の水浴で１５分間加熱する。ＴＢＡＲ溶液は、チオバルビツール酸、塩酸、トリクロロ酢酸を含有する。リポ過酸化とは関係のない多くの物質は、チオバルビツール酸、例えばグルコースと反応する。冷却後、マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）をブタノールで液／液抽出して抽出し、分光蛍光光度法（励起５１５ｎｍ、発光：５５０ｎｍ）で調査する。以下に示すＭＤＡ濃度は、ｎｍｏｌ／ｌで示す。
【００９６】
試験結果：
１．結果の解釈のために、未処理の外植片（刺激物なし、化合物Ａ、Ｂ、ＣおよびゲルＤなし）の培地にも４日目にＭＤＡが含まれていることを考慮に入れる。
結果の分析のために、したがって、刺激物によるＭＤＡ生成の影響を判断するために、未処理の外植片に平均して存在するこのＭＤＡの量を、外植片サンプルで得られた値から差し引く。
【００９７】
刺激物による化学的ストレス下でのエタノール（化合物Ｃ）の調査は、エタノールが標的分子ＭＤＡに影響を及ぼさないことを示す。したがって、エタノール溶液中の化合物ＡおよびＢの調査結果は、溶媒ではなく化合物の影響である。
【００９８】
未処理試料の培養培地におけるＭＤＡ濃度は、平均すると９８．３ｎｍｏｌ／ｌである。
刺激物のみで処理された外植片の培養培地におけるＭＤＡ濃度は、平均すると１４３．６ｎｍｏｌ／ｌである。
刺激物単独に起因する平均ＭＤＡ濃度は、４５．３ｎｍｏｌ／ｌ（１４３．６−９８．３＝４５．３［ｎｍｏｌ／ｌ］）である。
化合物Ａおよび刺激物で処理された外植片の培養培地におけるＭＤＡ濃度は、平均すると１２９．０ｎｍｏｌ／ｌである。
刺激物なしで、化合物Ａで処理された外植片の培養培地におけるＭＤＡ濃度は、平均すると９４．７ｎｍｏｌ／ｌである。
化合物Ａの存在下での刺激物単独に起因する、平均ＭＤＡ濃度は３４．３ｎｍｏｌ／ｌ（１２９．０−９４．７＝３４．３［ｎｍｏｌ／ｌ］）である。
化合物Ｂおよび刺激物で処理した外植片の培養培地におけるＭＤＡ濃度は、平均すると１３５．５ｎｍｏｌ／ｌである。
刺激物なしで、化合物Ｂで処理した外植片の培養培地におけるＭＤＡ濃度は、平均すると９３．６ｎｍｏｌ／ｌである。
化合物Ｂの存在下での刺激物単独に起因する、平均ＭＤＡ濃度は、４１．９ｎｍｏｌ／ｌ（１３５．５−９３．６ｎｍｏｌ／ｌ＝４１．９［ｎｍｏｌ／ｌ］）である。
ゲルＤおよび刺激物で処理された外植片の培養培地におけるＭＤＡ濃度は、平均すると１４５．０ｎｍｏｌ／ｌである。
刺激物なしで、ゲルＤで処理された外植片の培養培地におけるＭＤＡ濃度は、平均すると９６．０ｎｍｏｌ／ｌである。
ゲルＤの存在下での刺激物単独に起因する、平均ＭＤＡ濃度は、４９．０ｎｍｏｌ／ｌ（１４５．０−９６．０＝４９．０［ｎｍｏｌ／ｌ］）である。
【００９９】
結果の解釈：
化合物Ａを含有するエタノール溶液は、１０％低いＭＤＡ産生を誘発し、これは有意な低減に対応する。これを刺激物によってのみ放出されるＭＤＡの量に標準化した場合、化合物Ａを含む溶液はＭＤＡ産生を２４％妨げる。
化合物Ｂを含有するエタノール溶液は、６％低いＭＤＡ産生を誘発し、これは有意な低減に対応する。これを刺激物によってのみ放出されるＭＤＡの量に標準化した場合、化合物Ｂを含む溶液はＭＤＡ産生を８％妨げる。
ゲルＤを含有する参照は、有効な効果を有さない（１％変化）。
【０１００】
２．組織学的結果の解釈
組織学的調査は、化合物Ｃ（エタノール）および刺激物で処理された外植片が表皮に明らかな形態学的変化を示すことを示す。
【０１０１】
図１は、未処理の外植片の組織学的写真を示す。図２は、エタノールおよび刺激物で処理した外植片における表皮の形態学的変化を示す。図２の表皮は、表皮上部に核周囲浮腫を伴う多数のピクノティック細胞、および基底層に明確な海綿状態を示し、アカントーシスを伴うゾーンはほとんどない。組織学的調査は、上記および図３に示すように、化合物Ａおよび刺激物で処理した外植片は、未処理試料と比較して表皮の変化を有さないことを示す（図１）。
【０１０２】
組織学的調査は、上記および図４に示すように、化合物Ｂおよび刺激物で処理した外植片は、未処理試料と比較して表皮の形態学的変化を有することを示す（図１）。
図４の表皮は、上部表皮に核周囲の浮腫を伴う多数のピクノティック細胞を示す。
【０１０３】
組織学的調査は、上記および図５に示すように、ゲルＤおよび刺激物で処理された外植片は、未処理試料と比較して表皮の形態学的変化を有することを示す（図１）。
図５の表皮は、表皮上部に核周囲の浮腫を伴ういくつかのピクノティック細胞を示す。
【０１０４】
上記のように、検出可能な変化にスコアを割り当てることによって形態学的な表皮の変化を定量化する場合、変化を相互に比較することができる。示された組織学的調査について、これは、未処理の対照、および化合物Ａおよび刺激物で処理された外植片と比較して、化合物Ｂおよび刺激物で処理された外植片において、またはエタノールおよび刺激物で処理された外植片において、表皮の状態が約５５％悪化することを意味する。
示された組織学的調査について、これは、未処理の対照、および化合物Ａおよび刺激物で処理された外植片と比較して、参照および刺激物で処理された外植片において表皮の状態が約３３％悪化することを意味する。
【図１】
2021521183.tif 000013
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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2021521183.tif 000019
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