(57)【要約】  特に、眼における線維症および／または血管新生の診断、処置および予防のための方法が開示される。特定の実施形態では、方法は、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の拮抗作用と、血管新生の拮抗作用とを用いる。また、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストと、血管新生因子のアンタゴニストとを含む組合せも提供される。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における線維症を処置または防止する方法であって、対象に、治療または予防有効量のＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストおよび血管新生因子のアンタゴニストを投与するステップを含む、前記方法。
【請求項２】
線維症を処置または防止する方法における使用のための、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストと、血管新生因子のアンタゴニストとの組合せ。
【請求項３】
線維症を処置または防止する方法における使用のための医薬の製造における、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストおよび血管新生因子のアンタゴニストの使用。
【請求項４】
前記線維症が、眼における線維症である、請求項１に記載の方法、請求項２に記載の使用のための組合せ、または請求項３に記載の使用。
【請求項５】
前記線維症が、グレーブス眼症、網膜上線維症、網膜線維症、特発性黄斑前線維症、網膜下線維症（例えば、網膜剥離もしくは黄斑変性（例えば、滲出型加齢黄斑変性（ＡＭＤ）と関連する）、糖尿病性網膜症、緑内障、地図状萎縮、角膜線維症、術後線維症（例えば、白内障手術後の後嚢の、もしくは緑内障の線維柱帯切除術後のブレブの）、結膜線維症、または結膜下線維症から選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
【請求項６】
前記線維症が、網膜線維症、網膜上線維症、または網膜下線維症である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
【請求項７】
前記線維症が心臓、肝臓、または腎臓の線維症である、請求項１に記載の方法、請求項２に記載の使用のための組合せ、または請求項３に記載の使用。
【請求項８】
前記線維症が、
肝臓におけるものであり、慢性肝臓病または肝硬変と関連する；
腎臓におけるものであり、慢性腎臓病と関連する；または
心臓におけるものであり、心臓の筋肉組織もしくは電気特性の機能障害、または心臓の壁もしくは弁の肥厚と関連する、請求項７に記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
【請求項９】
前記血管新生因子が、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、および血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）から選択される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
【請求項１０】
前記血管新生因子がＶＥＧＦである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
【請求項１１】
前記ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストが、ＩＬ−１１のＩＬ−１１受容体への結合を防止する、または低減することができる薬剤である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
【請求項１２】
前記ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストが、ＩＬ−１１またはＩＬ−１１の受容体に結合することができる薬剤である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
【請求項１３】
前記ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストが、抗体もしくはその抗原結合性断片、ポリペプチド、ペプチド、オリゴヌクレオチド、アプタマーまたは低分子からなる群から選択される、請求項１２に記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
【請求項１４】
前記ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストが、抗ＩＬ−１１抗体または抗ＩＬ−１１Ｒα抗体である、請求項１３に記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
【請求項１５】
前記ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストが、デコイＩＬ−１１受容体である、請求項１３に記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
【請求項１６】
前記ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストが、ＩＬ−１１またはＩＬ−１１の受容体の発現を低減することができる、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
【請求項１７】
前記ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストが、オリゴヌクレオチドまたは低分子である、請求項１６に記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
【請求項１８】
前記血管新生因子のアンタゴニストが、血管新生因子の、血管新生因子の相互作用パートナーへの結合を防止するか、または低減することができる薬剤である、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
【請求項１９】
前記血管新生因子のアンタゴニストが、血管新生因子または血管新生因子の相互作用パートナーに結合することができる薬剤である、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
【請求項２０】
前記血管新生因子のアンタゴニストが、抗体もしくはその抗原結合性断片、ポリペプチド、ペプチド、オリゴヌクレオチド、アプタマーまたは低分子からなる群から選択される、請求項１９に記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
【請求項２１】
前記血管新生因子のアンタゴニストが、抗ＶＥＧＦ抗体または抗ＶＥＧＦ受容体抗体である、請求項２０に記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
【請求項２２】
前記血管新生因子のアンタゴニストが、デコイＶＥＧＦ受容体である、請求項２０に記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
【請求項２３】
前記血管新生因子のアンタゴニストが、アフリベルセプトである、請求項２２に記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
【請求項２４】
前記血管新生因子のアンタゴニストが、血管新生因子または血管新生因子の相互作用パートナーの発現を低減することができる、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
【請求項２５】
前記血管新生因子のアンタゴニストが、オリゴヌクレオチドまたは低分子である、請求項２４に記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
【請求項２６】
ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストと、血管新生因子のアンタゴニストとを含む組合せ。
【請求項２７】
ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストと、血管新生因子のアンタゴニストとを含む医薬組成物。
【請求項２８】
所定量のＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストおよび血管新生因子のアンタゴニスト、請求項２６に記載の組合せまたは請求項２７に記載の医薬組成物を含む要素のキット。
【請求項２９】
前記血管新生因子が、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、および血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）から選択される、請求項２６に記載の組合せ、請求項２７に記載の医薬組成物、または請求項２８に記載の要素のキット。
【請求項３０】
前記血管新生因子がＶＥＧＦである、請求項２６〜２９のいずれか一項に記載の組合せ、医薬組成物または要素のキット。
【請求項３１】
前記ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストが、ＩＬ−１１のＩＬ−１１受容体への結合を防止する、または低減することができる薬剤である、請求項２６〜３０のいずれか一項に記載の組合せ、医薬組成物または要素のキット。
【請求項３２】
前記ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストが、ＩＬ−１１またはＩＬ−１１の受容体に結合することができる薬剤である、請求項２６〜３１のいずれか一項に記載の組合せ、医薬組成物または要素のキット。
【請求項３３】
前記ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストが、抗体もしくはその抗原結合性断片、ポリペプチド、ペプチド、オリゴヌクレオチド、アプタマーまたは低分子からなる群から選択される、請求項３２に記載の組合せ、医薬組成物または要素のキット。
【請求項３４】
前記ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストが、抗ＩＬ−１１抗体または抗ＩＬ−１１Ｒα抗体である、請求項３３に記載の組合せ、医薬組成物または要素のキット。
【請求項３５】
前記ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストが、デコイＩＬ−１１受容体である、請求項３３に記載の組合せ、医薬組成物または要素のキット。
【請求項３６】
前記ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストが、ＩＬ−１１またはＩＬ−１１の受容体の発現を低減することができる、請求項２６〜３０のいずれか一項に記載の組合せ、医薬組成物または要素のキット。
【請求項３７】
前記ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストが、オリゴヌクレオチドまたは低分子である、請求項３６に記載の組合せ、医薬組成物または要素のキット。
【請求項３８】
前記血管新生因子のアンタゴニストが、血管新生因子の、血管新生因子の相互作用パートナーへの結合を防止するか、または低減することができる薬剤である、請求項２６〜３７のいずれか一項に記載の組合せ、医薬組成物または要素のキット。
【請求項３９】
前記血管新生因子のアンタゴニストが、血管新生因子または血管新生因子の相互作用パートナーに結合することができる薬剤である、請求項２６〜３８のいずれか一項に記載の組合せ、医薬組成物または要素のキット。
【請求項４０】
前記血管新生因子のアンタゴニストが、抗体もしくはその抗原結合性断片、ポリペプチド、ペプチド、オリゴヌクレオチド、アプタマーまたは低分子からなる群から選択される、請求項３９に記載の組合せ、医薬組成物または要素のキット。
【請求項４１】
前記血管新生因子のアンタゴニストが、抗ＶＥＧＦ抗体または抗ＶＥＧＦ受容体抗体である、請求項４０に記載の組合せ、医薬組成物または要素のキット。
【請求項４２】
前記血管新生因子のアンタゴニストが、デコイＶＥＧＦ受容体である、請求項４０に記載の組合せ、医薬組成物または要素のキット。
【請求項４３】
前記血管新生因子のアンタゴニストが、アフリベルセプトである、請求項４２に記載の組合せ、医薬組成物または要素のキット。
【請求項４４】
前記血管新生因子のアンタゴニストが、血管新生因子の相互作用パートナーの発現を低減することができる、請求項２６〜３７のいずれか一項に記載の組合せ、医薬組成物または要素のキット。
【請求項４５】
前記血管新生因子のアンタゴニストが、オリゴヌクレオチドまたは低分子である、請求項４４に記載の組合せ、医薬組成物または要素のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１８年４月２７日に出願されたＧＢ１８０６９１８．７からの優先権を主張し、その内容および要素は、あらゆる目的に関して参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の拮抗作用および血管新生の拮抗作用による、線維症および／または血管新生（特に、眼における）の診断、処置および予防に関する。
【背景技術】
【０００３】
血管新生は、必須プロセスであり、創傷治癒プロセスの重要部分である。異常な血管新生は、重篤な状態および合併症をもたらすことが多い；破局的な視力低下を引き起こす多くの疾患は、組織虚血、炎症または代謝的摂動に応答することが多い、異常な血管新生および創傷治癒の結果としてそうする。
【０００４】
抗ＶＥＧＦ療法などの抗血管新生療法は、網膜の黄斑下での新血管形成を低減することができる増え続ける医薬群である。これらの薬剤によって処置される状態としては、加齢黄斑変性、糖尿病性眼疾患および一部のがんが挙げられる。
【０００５】
線維症は、創傷治癒の重要部分である必須プロセスである。過度の線維症は多くの稀で一般的な疾患状態において共通しており、疾患発症において重要である。過度の線維症を特徴とする疾患としては、限定されるものではないが、全身性硬化症、強皮症、肥大型心筋症、拡張型心筋症（ＤＣＭ）、心房細動、心室細動、心筋炎、肝硬変、腎臓病、喘息、眼の疾患、嚢胞性線維症、関節炎および特発性肺線維症が挙げられる。ヒトの健康に対する大きな影響にも拘わらず、線維症に対する治療および診断手法は、依然として満たされない医学的要求がある。
【発明の概要】
【０００６】
第１の態様では、本発明は、対象における線維症を処置または防止する方法であって、対象に、治療または予防有効量のＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストおよび血管新生因子のアンタゴニストを投与するステップを含む、方法を提供する。
【０００７】
第２の態様では、本発明は、線維症を処置または防止する方法における使用のための、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストと、血管新生因子のアンタゴニストとの組合せを提供する。
【０００８】
別の態様では、本発明は、線維症を処置または防止する方法における使用のための医薬の製造における、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストおよび血管新生因子のアンタゴニストの使用に関する。
【０００９】
本明細書に開示される態様のいずれかにおいて、線維症は、好ましくは眼における線維症である。
【００１０】
一部の実施形態では、線維症は、グレーブス眼症、網膜上線維症、網膜線維症、特発性黄斑前線維症、網膜下線維症（例えば、網膜剥離もしくは黄斑変性（例えば、滲出型加齢黄斑変性（ＡＭＤ）と関連する）、糖尿病性網膜症、緑内障、地図状萎縮、角膜線維症、術後線維症（例えば、白内障手術後の後嚢の、もしくは緑内障の線維柱帯切除術後のブレブの）、結膜線維症、または結膜下線維症から選択される。
【００１１】
一部の実施形態では、線維症は、網膜線維症である。一部の実施形態では、線維症は、網膜上線維症である。一部の実施形態では、線維症は、網膜下線維症である。
【００１２】
本明細書に開示される態様の一部の実施形態では、線維症は、心臓、肝臓、または腎臓の線維症である。一部の実施形態では、線維症は、肝臓におけるものであり、慢性肝疾患または肝硬変と関連する。一部の実施形態では、線維症は、腎臓におけるものであり、慢性腎臓病と関連する。一部の実施形態では、線維症は、心臓におけるものであり、心臓の筋肉組織もしくは電気特性の機能障害、または心臓の壁もしくは弁の肥厚と関連する。
【００１３】
本明細書に開示される態様の一部の実施形態では、血管新生因子のアンタゴニストは、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、および血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）から選択される血管新生因子のアンタゴニストである。
【００１４】
一部の実施形態では、血管新生因子は、ＶＥＧＦである。一部の実施形態では、ＶＥＧＦは、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃおよび／またはＶＥＧＦ−Ｄのうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、ＶＥＧＦは、ＶＥＧＦ−Ａである。
【００１５】
一部の実施形態では、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストは、ＩＬ−１１のＩＬ−１１受容体への結合を防止する、または低減することができる薬剤である。一部の実施形態では、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストは、ＩＬ−１１：ＩＬ１１Ｒα複合体のｇｐ１３０への結合を防止する、または低減することができる薬剤である。一部の実施形態では、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストは、ＩＬ−１１：ＩＬ１１Ｒα  ｔｒａｎｓシグナル伝達複合体のｇｐ１３０への結合を防止する、または低減することができる薬剤である。一部の実施形態では、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストは、ＩＬ１１Ｒαのｇｐ１３０への結合を防止する、または低減することができる薬剤である。一部の実施形態では、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストは、ＩＬ−１１のＩＬ−１１への結合を防止する、または低減することができる薬剤である。
【００１６】
一部の実施形態では、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストは、ＩＬ−１１またはＩＬ−１１の受容体に結合することができる薬剤である。一部の実施形態では、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストは、抗体もしくはその抗原結合性断片、ポリペプチド、ペプチド、オリゴヌクレオチド、アプタマーまたは低分子からなる群から選択される。一部の実施形態では、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストは、抗ＩＬ−１１抗体または抗ＩＬ−１１Ｒα抗体である。一部の実施形態では、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストは、デコイＩＬ−１１受容体である。
【００１７】
一部の実施形態では、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストは、ＩＬ−１１またはＩＬ−１１の受容体の発現を低減させることができる。一部の実施形態では、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストは、オリゴヌクレオチドまたは低分子である。
【００１８】
一部の実施形態では、血管新生因子のアンタゴニストは、血管新生因子の、血管新生因子の相互作用パートナーへの結合を防止する、または低減することができる薬剤である。一部の実施形態では、血管新生因子のアンタゴニストは、血管新生因子または血管新生因子の相互作用パートナーに結合することができる薬剤である。
【００１９】
一部の実施形態では、血管新生因子のアンタゴニストは、血管新生因子の、血管新生因子の受容体への結合を防止する、または低減することができる薬剤である。
【００２０】
一部の実施形態では、血管新生因子のアンタゴニストは、血管新生因子または血管新生因子の受容体に結合することができる薬剤である。一部の実施形態では、血管新生因子のアンタゴニストは、抗体もしくはその抗原結合性断片、ポリペプチド、ペプチド、オリゴヌクレオチド、アプタマーまたは低分子からなる群から選択される。一部の実施形態では、血管新生因子のアンタゴニストは、抗血管新生因子抗体または抗血管新生因子受容体抗体である。一部の実施形態では、血管新生因子のアンタゴニストは、抗ＶＥＧＦ抗体または抗ＶＥＧＦ受容体抗体である。一部の実施形態では、血管新生因子のアンタゴニストは、デコイ血管新生因子受容体である。一部の実施形態では、血管新生因子のアンタゴニストは、デコイＶＥＧＦ受容体である。一部の実施形態では、血管新生因子のアンタゴニストは、アフリベルセプト（配列番号２４）である。
【００２１】
一部の実施形態では、血管新生因子のアンタゴニストは、血管新生因子または血管新生因子の受容体の発現を低減させることができる薬剤である。一部の実施形態では、血管新生因子のアンタゴニストは、オリゴヌクレオチドまたは低分子である。
【００２２】
本明細書に記載の方法、使用のための組合せ、または使用の一部の実施形態では、線維症を処置または防止する方法は、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストおよび血管新生因子のアンタゴニストを、ＩＬ−１１またはＩＬ−１１の受容体の発現が上方調節されていると決定された対象に投与するステップを含む。一部の実施形態では、血管新生因子または血管新生因子の受容体の発現は、上方調節されると決定されている。
【００２３】
本明細書に記載の方法、使用のための組合せ、または使用の一部の実施形態では、処置または防止する方法は、ＩＬ−１１またはＩＬ−１１の受容体の発現が、対象において上方調節されているかどうかを決定するステップと、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストおよび血管新生因子のアンタゴニストを、ＩＬ−１１またはＩＬ−１１の受容体の発現が上方調節されている対象に投与するステップとを含む。
【００２４】
別の態様では、本発明は、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストおよび血管新生因子のアンタゴニストを用いた線維症の処置または防止に関する対象の適性を決定する方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、必要に応じて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、インターロイキン１１（ＩＬ−１１）、インターロイキン１１受容体（ＩＬ−１１Ｒ）、血管新生因子、または血管新生因子受容体の発現が、対象において上方調節されているかどうかを決定するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、必要に応じて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、血管新生因子または血管新生因子の受容体の発現が、対象において上方調節されているかどうかを決定するステップを含む。
【００２５】
別の態様では、本発明は、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストおよび血管新生因子のアンタゴニストを用いた線維症の処置または防止のために対象を選択する方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、必要に応じて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、インターロイキン１１（ＩＬ−１１）、インターロイキン１１受容体（ＩＬ−１１Ｒ）、血管新生因子、または血管新生因子受容体の発現が、対象において上方調節されているかどうかを含む。一部の実施形態では、方法は、必要に応じて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、血管新生因子または血管新生因子の受容体の発現が、対象において上方調節されているかどうかを決定するステップを含む。
【００２６】
別の態様では、本発明は、対象における線維症または線維症を発症するリスクを診断する方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、必要に応じて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの、対象から得られた試料中のインターロイキン１１（ＩＬ−１１）、インターロイキン１１受容体（ＩＬ−１１Ｒ）、血管新生因子、または血管新生因子受容体の上方調節を含む。一部の実施形態では、方法は、必要に応じて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、血管新生因子または血管新生因子の受容体の発現が、対象において上方調節されているかどうかを決定するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストおよび血管新生因子のアンタゴニストを用いた処置のための対象を選択するステップを含む。
【００２７】
別の態様では、本発明は、線維症を有する、または有すると疑われる対象の予後診断を提供する方法と、その決定に基づいて、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストおよび血管新生因子のアンタゴニストを用いた対象の処置に関する予後診断を提供する方法とを提供する。一部の実施形態では、方法は、必要に応じて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの、対象から得られた試料中のインターロイキン１１（ＩＬ−１１）、インターロイキン１１受容体（ＩＬ−１１Ｒ）、血管新生因子、または血管新生因子受容体が上方調節されているかどうかを決定するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストおよび血管新生因子のアンタゴニストを用いた処置のためにインターロイキン１１（ＩＬ−１１）、インターロイキン１１受容体（ＩＬ−１１Ｒ）、血管新生因子、または血管新生因子受容体の発現が上方調節されていると決定された対象を選択するステップを含む。
【００２８】
さらに別の態様では、本発明は、対象における線維症または線維症を発症するリスクを診断する方法であって、必要に応じてｉｎ  ｖｉｔｒｏで、対象中の１つまたは複数の遺伝因子を決定するステップと、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストおよび血管新生因子のアンタゴニストを用いた処置のため対象を選択するステップとを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、１つまたは複数の遺伝因子は、インターロイキン１１（ＩＬ−１１）もしくはインターロイキン１１受容体（ＩＬ−１１Ｒ）発現の上方調節、またはＩＬ−１１もしくはＩＬ−１１Ｒ活性の上方調節を予測する。一部の実施形態では、１つまたは複数の遺伝因子は、血管新生因子もしくは血管新生因子受容体発現の上方調節、または血管新生因子もしくは血管新生因子受容体活性の上方調節を予測する。一部の実施形態では、１つまたは複数の遺伝因子は、血管新生因子もしくは血管新生因子受容体発現の上方調節、または血管新生因子もしくは血管新生因子受容体活性の上方調節を予測する。
【００２９】
一部の実施形態では、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストは、抗ＩＬ−１１抗体であり、血管新生因子のアンタゴニストは、ＶＥＧＦデコイ受容体である。好ましい実施形態では、ＶＥＧＦデコイ受容体は、アフリベルセプトである。
【００３０】
また、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストと、血管新生因子のアンタゴニストとを含む組合せも提供される。また、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストと、血管新生因子のアンタゴニストとを含む医薬組成物も提供される。また、所定量のＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストおよび血管新生因子のアンタゴニスト、本明細書に記載の組合せ、または本明細書に記載の医薬組成物を含む要素のキット（ｋｉｔ  ｏｆ  ｐａｒｔｓ）も提供される。
【００３１】
一部の実施形態では、血管新生因子は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、および血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）から選択される。一部の実施形態では、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストは、ＩＬ−１１のＩＬ−１１受容体への結合を防止する、または低減することができる薬剤であり、必要に応じて、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストは、例えば、本明細書に記載のような、ＩＬ−１１またはＩＬ−１１の受容体に結合することができる薬剤である。一部の実施形態では、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストは、ＩＬ−１１またはＩＬ−１１の受容体の発現を低減させることができ、例えば、本明細書に記載の薬剤である。一部の実施形態では、血管新生因子のアンタゴニストは、血管新生因子の、血管新生因子の相互作用パートナーへの結合を防止する、または低減することができる薬剤である。血管新生因子のアンタゴニストは、本明細書に記載のような、血管新生因子または血管新生因子の相互作用パートナーに結合することができる薬剤であってもよい。血管新生因子のアンタゴニストは、アフリベルセプトであってもよい。血管新生因子のアンタゴニストは、血管新生因子の相互作用パートナー、例えば、本明細書に記載のアンタゴニストの発現を低減することができてもよい。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
本発明は、血管新生因子のアンタゴニストと、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストとの併用療法が、線維症、特に、眼における線維症の処置における優れた治療効果を提供するという予想外の知見に基づく。さらに、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストが眼における線維症を処置することができる、およびＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の拮抗作用が、併用処置における血管新生の拮抗作用の効能を改善することができるという予想外の知見が、本明細書で証明される。データはまた、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）に対するＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の拮抗作用の驚くべき処置効果を示す。
【００３３】
インターロイキン１１およびＩＬ−１１の受容体
脂質生成阻害因子としても知られる、インターロイキン１１（ＩＬ−１１）は、多面的なサイトカインであり、ＩＬ−６、ＩＬ−１１、ＩＬ−２７、ＩＬ−３１、オンコスタチン、白血病阻害因子（ＬＩＦ）、カルジオトロフィン−１（ＣＴ−１）、カルジオトロフィン様サイトカイン（ＣＬＣ）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）およびニューロポエチン（ＮＰ−１）を含むＩＬ−６ファミリーのサイトカインのメンバーである。
【００３４】
インターロイキン１１（ＩＬ−１１）は、様々な間葉細胞型において発現される１。ＩＬ−１１のゲノム配列は、第１９染色体および第７染色体のセントロメア領域上にマッピングされており１、細胞からの効率的な分泌を確保する古典的シグナルペプチドと共に転写される。ＩＬ−１１のアクチベータタンパク質複合体、そのプロモーター配列内に位置するｃＪｕｎ／ＡＰ−１は、ＩＬ−１１の基本的転写調節にとって重要である１。未成熟型のヒトＩＬ−１１は、１９９アミノ酸のポリペプチドであるが、成熟型のＩＬ−１１は、１７８アミノ酸残基のタンパク質をコードする（ＧａｒｂｅｒｓおよびＳｃｈｅｌｌｅｒ、Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０１３；３９４（９）：１１４５〜１１６１頁）。ヒトＩＬ−１１アミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ｐ２０８０９（Ｐ２０８０９．１  ＧＩ：１２４２９４；配列番号１）の下で入手可能である。組換えヒトＩＬ−１１（オプレルベキン）も商業的に入手可能である。マウス、ラット、ブタ、ウシ、いくつかの種の硬骨魚および霊長類などの他の種に由来するＩＬ−１１も、クローニングおよび配列決定されている。
【００３５】
本明細書では、「ＩＬ−１１」とは、任意の種に由来するＩＬ−１１を指し、任意の種に由来するＩＬ−１１のアイソフォーム、断片、バリアントまたはホモログを含む。好ましい実施形態では、種はヒト（ホモ・サピエンス）である。ＩＬ−１１のアイソフォーム、断片、バリアントまたはホモログは、必要に応じて、所与の種、例えば、ヒトに由来する未成熟または成熟ＩＬ−１１のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有することを特徴としてもよい。ＩＬ−１１のアイソフォーム、断片、バリアントまたはホモログは、必要に応じて、ＩＬ−１１Ｒα（好ましくは、同じ種に由来する）に結合し、ＩＬ−１１Ｒαおよびｇｐ１３０を発現する細胞中でシグナル伝達を刺激する能力を特徴としてもよい（例えば、Ｃｕｒｔｉｓら、Ｂｌｏｏｄ、１９９７、９０（１１）；またはＫａｒｐｏｖｉｃｈら、Ｍｏｌ．Ｈｕｍ．Ｒｅｐｒｏｄ．２００３  ９（２）：７５〜８０頁に記載されたように）。ＩＬ−１１の断片は、任意の長さ（アミノ酸の数で）のものであってよいが、必要に応じて、成熟ＩＬ−１１の長さの少なくとも２５％であってもよく、成熟ＩＬ−１１の長さの５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のうちの１つの最大の長さを有してもよい。ＩＬ−１１の断片は、１０アミノ酸の最小の長さ、および１５、２０、２５、３０、４０、５０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、または１９５アミノ酸のうちの１つの最大の長さを有してもよい。
【００３６】
ＩＬ−１１は、遍在的に発現される糖タンパク質１３０（ｇｐ１３０；糖タンパク質１３０、ＩＬ−６ＳＴ、ＩＬ−６−ベータまたはＣＤ１３０としても知られる）のホモ二量体を介してシグナル伝達する。ｇｐ１３０は、ＩＬ−６受容体ファミリーとＩ型サイトカイン受容体の１つのサブユニットを形成する膜貫通タンパク質である。シグナル伝達に直接関与しない個々のインターロイキン１１受容体サブユニットアルファ（ＩＬ−１１Ｒα）を介して特異性が得られるが、α−受容体への初期のサイトカイン結合事象は、ｇｐ１３０との最終的な複合体形成をもたらす。
【００３７】
ヒトｇｐ１３０（２２アミノ酸シグナルペプチドを含む）は、９１８アミノ酸のタンパク質であり、成熟型は、５９７アミノ酸の細胞外ドメイン、２２アミノ酸の膜貫通ドメイン、および２７７アミノ酸の細胞内ドメインを含む８６６アミノ酸である。このタンパク質の細胞外ドメインは、ｇｐ１３０のサイトカイン結合モジュール（ＣＢＭ）を含む。ｇｐ１３０のＣＢＭは、ｇｐ１３０のＩｇ様ドメインＤ１、ならびにフィブロネクチンＩＩＩ型ドメインＤ２およびＤ３を含む。ヒトｇｐ１３０のアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ｐ４０１８９−１（配列番号２）の下で入手可能である。
【００３８】
ヒトＩＬ−１１Ｒαは、４２２アミノ酸のポリペプチド（ＵｎｉＰｒｏｔ  Ｑ１４６２６；配列番号３）であり、マウスＩＬ−１１Ｒαとの約８５％のヌクレオチドおよびアミノ酸配列同一性を有する（ＤｕおよびＷｉｌｌｉａｍｓ、Ｂｌｏｏｄ  Ｖｏｌ，８９、Ｎｏ，１１、Ｊｕｎｅ  １、１９９７）。細胞質ドメインが異なるＩＬ−１１Ｒαの２つのアイソフォームが報告されている（ＤｕおよびＷｉｌｌｉａｍｓ、上掲）。ＩＬ−１１受容体α鎖（ＩＬ−１１Ｒα）は、ＩＬ−６受容体α鎖（ＩＬ−６Ｒα）との多くの構造的および機能的類似性を有する。細胞外ドメインは、特徴的な保存されたＴｒｐ−Ｓｅｒ−Ｘ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ（ＷＳＸＷＳ）モチーフを含む２４％のアミノ酸同一性を示す。短い細胞質ドメイン（３４アミノ酸）は、ＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達経路の活性化に必要とされるＢｏｘ１および２領域を欠く。
【００３９】
マウスＩＬ−１１上の受容体結合部位はマッピングされており、３つの部位（部位Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩ）が同定されている。ｇｐ１３０への結合は、部位ＩＩ領域中の置換および部位ＩＩＩ領域中の置換によって低減される。部位ＩＩＩ変異体は、検出可能なアゴニスト活性を示さず、ＩＬ−１１Ｒαアンタゴニスト活性を有する（Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  Ｃｈａｐｔｅｒ  ８；Ｇｅｎｎａｒｏ  ＣｉｌｉｂｅｒｔｏおよびＲｏｃｃｏ  Ｓａｖｉｎｏ（編）、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．２００１）。
【００４０】
本明細書では、ＩＬ−１１受容体／ＩＬ−１１の受容体（ＩＬ−１１Ｒ）は、ＩＬ−１１に結合することができるポリペプチドまたはポリペプチド複合体を指す。一部の実施形態では、ＩＬ−１１受容体は、ＩＬ−１１に結合し、その受容体を発現する細胞中でシグナル伝達を誘導することができる。
【００４１】
ＩＬ−１１受容体は、任意の種に由来するものであってよく、任意の種に由来するＩＬ−１１受容体のアイソフォーム、断片、バリアントまたはホモログを含む。好ましい実施形態では、種はヒト（ホモ・サピエンス）である。
【００４２】
一部の実施形態では、ＩＬ−１１受容体（ＩＬ−１１Ｒ）は、ＩＬ−１１Ｒαであってもよい。一部の実施形態では、ＩＬ−１１の受容体は、ＩＬ−１１Ｒαを含むポリペプチド複合体であってもよい。一部の実施形態では、ＩＬ−１１受容体は、ＩＬ−１１Ｒαとｇｐ１３０とを含むポリペプチド複合体であってもよい。一部の実施形態では、ＩＬ−１１受容体は、ｇｐ１３０またはＩＬ−１１が結合するｇｐ１３０を含む複合体であってもよい。
【００４３】
ＩＬ−１１Ｒαのアイソフォーム、断片、バリアントまたはホモログは、必要に応じて、所与の種、例えば、ヒトに由来するＩＬ−１１Ｒαのアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有することを特徴としてもよい。ＩＬ−１１Ｒαのアイソフォーム、断片、バリアントまたはホモログは、必要に応じて、ＩＬ−１１（好ましくは、同じ種に由来する）に結合し、ＩＬ−１１Ｒαおよびｇｐ１３０を発現する細胞中でシグナル伝達を刺激する能力を特徴としてもよい（例えば、Ｃｕｒｔｉｓら、Ｂｌｏｏｄ、１９９７、９０（１１）；またはＫａｒｐｏｖｉｃｈら、Ｍｏｌ．Ｈｕｍ．Ｒｅｐｒｏｄ．２００３  ９（２）：７５〜８０頁に記載されたように）。ＩＬ−１１受容体の断片は、任意の長さ（アミノ酸の数で）のものであってよいが、必要に応じて、成熟ＩＬ−１１Ｒαの長さの少なくとも２５％であってよく、成熟ＩＬ−１１Ｒαの長さの５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のうちの１つの最大の長さを有してもよい。ＩＬ−１１受容体断片の断片は、１０アミノ酸の最小の長さ、および１５、２０、２５、３０、４０、５０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２５０、３００、４００、または４１５アミノ酸のうちの１つの最大の長さを有してもよい。
【００４４】
ＩＬ−１１シグナル伝達
ＩＬ−１１は、低い親和性（約１０ｎｍｏｌ／ＬのＫｄ）でＩＬ−１１Ｒαに結合し、これらの結合パートナー間の相互作用だけでは、生体シグナルを伝達するには不十分である。シグナル伝達を可能にする高親和性の受容体（約４００〜８００ｐｍｏｌ／ＬのＫｄ）の生成には、ＩＬ−１１Ｒαとｇｐ１３０との同時発現が必要である（Ｃｕｒｔｉｓら、Ｂｌｏｏｄ  １９９７  Ｄｅｃ  １；９０（１１）：４４０３〜１２頁；Ｈｉｌｔｏｎら、ＥＭＢＯ  Ｊ  １３：４７６５頁、１９９４；Ｎａｎｄｕｒｋａｒら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １２：５８５頁、１９９６）。ＩＬ−１１の、細胞表面ＩＬ−１１Ｒαへの結合は、主に、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）カスケードおよびＪａｎｕｓキナーゼ／シグナル伝達因子および転写（Ｊａｋ／ＳＴＡＴ）経路のアクチベータを介して、ｇｐ１３０のヘテロ二量体化、チロシンリン酸化、活性化ならびに下流のシグナル伝達を誘導する（ＧａｒｂｅｒｓおよびＳｃｈｅｌｌｅｒ、上掲）。
【００４５】
原理的には、可溶型ＩＬ−１１Ｒαも、ＩＬ−１１との生物活性可溶型複合体を形成することができ（Ｐｆｌａｎｚら、１９９９、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ、４５０、１１７〜１２２頁）、ＩＬ−６と同様、ＩＬ−１１が一部の例では、細胞表面ｇｐ１３０に結合する前に可溶型ＩＬ−１１Ｒαに結合することができる可能性を上昇させる（ＧａｒｂｅｒｓおよびＳｃｈｅｌｌｅｒ、上掲）。Ｃｕｒｔｉｓら（Ｂｌｏｏｄ  １９９７  Ｄｅｃ  １；９０（１１）：４４０３〜１２頁）は、可溶型マウスＩＬ−１１受容体アルファ鎖（ｓＩＬ−１１Ｒ）の発現を記載し、ｇｐ１３０を発現する細胞中でのシグナル伝達を検査した。膜貫通型ＩＬ−１１Ｒではなく、ｇｐ１３０の存在下で、ｓＩＬ−１１Ｒは、膜貫通型ＩＬ−１１Ｒによるシグナル伝達と同様、Ｍ１白血病細胞のＩＬ−１１依存的分化およびＢａ／Ｆ３細胞中での増殖ならびにｇｐ１３０、ＳＴＡＴ３およびＳＨＰ２のリン酸化を含む初期の細胞内事象を媒介した。可溶型ＩＬ−１１Ｒアルファに結合したＩＬ−１１による細胞膜結合型ｇｐ１３０を介するシグナル伝達の活性化が、最近証明された（Ｌｏｋａｕら、２０１６、Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  １４、１７６１〜１７７３頁）。ＩＬ−１１Ｒαの発現は、比較的小さいサブセットの細胞型に限定されるが、ｇｐ１３０は様々な細胞型上で発現されるため、このいわゆるＩＬ−１１のｔｒａｎｓシグナル伝達は、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の非常に重要な成分であり、最も一般的な形態のＩＬ−１１媒介性シグナル伝達でさえあってよい。
【００４６】
本明細書で使用される場合、「ＩＬ−１１のｔｒａｎｓシグナル伝達」は、ＩＬ−１１Ｒαに結合したＩＬ−１１の、ｇｐ１３０への結合によって誘発されるシグナル伝達を指す。ＩＬ１１は、非共有複合体としてＩＬ−１１Ｒαに結合してもよい。ｇｐ１３０は、膜結合型であり、シグナル伝達がＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα複合体のｇｐ１３０への結合後に起こる細胞によって発現される。一部の実施形態では、ＩＬ−１１Ｒαは、可溶型ＩＬ−１１Ｒαであってもよい。一部の実施形態では、可溶型ＩＬ−１１Ｒαは、ＩＬ−１１Ｒαの可溶型（分泌型）アイソフォーム（例えば、膜貫通ドメインを欠く）である。一部の実施形態では、可溶型ＩＬ−１１Ｒαは、細胞膜に結合したＩＬ−１１Ｒαの細胞外ドメインのタンパク質分解的切断の遊離産物である。一部の実施形態では、ＩＬ−１１Ｒαは、細胞膜結合型であってよく、ｇｐ１３０を介するシグナル伝達は、細胞膜結合型ＩＬ−１１Ｒαに結合したＩＬ−１１の結合によって誘発され、「ＩＬ−１１のｃｉｓシグナル伝達」と呼ばれる。
【００４７】
ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達は、造血および血小板産生を刺激する、破骨細胞活性を刺激する、神経発生を刺激する、脂肪生成を阻害する、炎症性サイトカイン発現を低減する、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）代謝をモジュレートする、および消化管上皮細胞の正常な増殖制御を媒介することが示されている１。
【００４８】
インターロイキン１１（ＩＬ−１１）の生理学的役割は、依然として不明である。ＩＬ−１１は、造血細胞の活性化および血小板産生と最も強く関連しているが、炎症促進性ならびに抗炎症性であり、血管新生促進性であることが見出され、新生物形成にとって重要であることも示唆されている。ＴＧＦβ１または組織傷害は、ＩＬ−１１発現を誘導することができることが知られている（Ｚｈｕ，Ｍ．ら、ＰＬＯＳ  ＯＮＥ  １０（２０１５）；Ｙａｓｈｉｒｏ，Ｒ．ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ．３３、１６５〜７１頁（２００６）；Ｏｂａｎａ，Ｍ．ら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １２１、６８４〜９１頁（２０１０）；Ｔａｎｇ，Ｗ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３、５５０６〜１３頁（１９９８））。
【００４９】
ＩＬ−１１は、ＴＧＦβ媒介性シグナル伝達の重要な転写後モジュレーターである。ＴＧＦβ１は、ＩＬ−１１のＡＰ−１プロモーター領域を刺激することが示されており、ＩＬ−１１のＴＧＦβ誘導性分泌は、腸筋線維芽細胞中のＥＲＫ  ｐ４２／４４およびｐ３８  ＭＡＰキナーゼの活性化を誘導することが示された（Ｂａｍｂａら、Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ  Ｌｉｖｅｒ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．（２００３）２８５（３）：Ｇ５２９〜３８頁）。ＭＡＰキナーゼ阻害剤は、ＴＧＦβ誘導性ＩＬ−１１分泌を有意に減少させることができ、ｍＲＮＡのｐ３８  ＭＡＰキナーゼ媒介性安定化は、ＩＬ−１１のＴＧＦβ誘導性分泌にとって重要であることが示されている。
【００５０】
本明細書で使用される場合、「ＩＬ−１１シグナル伝達」および「ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達」とは、ＩＬ−１１、または成熟ＩＬ−１１分子の機能を有するその断片の、ＩＬ−１１の受容体への結合によって媒介されるシグナル伝達を指す。
【００５１】
抗体および抗原結合性断片
一部の実施形態では、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達を阻害することができる、または血管新生因子媒介性シグナル伝達を阻害することができる薬剤は、抗体、またはその抗原結合性断片である。
【００５２】
「抗体」は、本明細書で最も広い意味で使用され、それらが関連する標的分子への結合を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、単一特異性および多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、ならびに抗体断片を包含する。
【００５３】
モノクローナル抗体技術と関連する今日の技術を考慮すると、多くの抗原に対する抗体を調製することができる。抗原結合部分は、抗体の一部（例えば、Ｆａｂ断片）または合成抗体断片（例えば、一本鎖Ｆｖ断片［ＳｃＦｖ］）であってもよい。選択された抗原に対するモノクローナル抗体を、公知の技術、例えば、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、Ｈ  Ｚｏｌａ（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、１９８８）および「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、Ｊ  Ｇ  Ｒ  Ｈｕｒｒｅｌｌ（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、１９８２）に開示されたものによって調製することができる。キメラ抗体は、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら（１９８８、８ｔｈ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｐａｒｔ  ２、７９２〜７９９頁）によって考察されている。モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、本発明の方法において特に有用であり、抗原上の単一のエピトープを特異的に標的化する抗体の均一な集団である。
【００５４】
ポリクローナル抗体も、本発明の方法において有用である。単一特異性ポリクローナル抗体が好ましい。好適なポリクローナル抗体を、当業界で周知の方法を使用して調製することができる。
【００５５】
抗体および抗体断片を遺伝子操作することができるため、ＦａｂおよびＦａｂ２断片などの抗体の抗原結合性断片を使用／提供することもできる。抗体の可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）ドメインは、抗原認識に関与し、初期プロテアーゼ消化実験によって初めて認識された事実である。さらなる確認は、齧歯類抗体の「ヒト化」によって見出される。得られる抗体が齧歯類親抗体の抗原特異性を保持するように、齧歯類起源の可変ドメインを、ヒト起源の定常ドメインに融合することができる（Ｍｏｒｒｉｓｏｎら（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｄ．ＵＳＡ  ８１、６８５１〜６８５５頁）。
【００５６】
本開示による抗体および抗原結合性断片は、関連する標的分子、すなわち、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１含有複合体、ＩＬ−１１の受容体、血管新生因子、血管新生因子含有複合体または血管新生因子の受容体に結合することができる抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【００５７】
抗体は一般に、６つのＣＤＲを含む；軽鎖可変領域（ＶＬ）中の３つ：ＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、ＬＣ−ＣＤＲ３、および重鎖可変領域（ＶＨ）中の３つ：ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２およびＨＣ−ＣＤＲ３を含む。６つのＣＤＲは一緒になって、標的分子に結合する抗体の部分である、抗体のパラトープを規定する。Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（１９９１）、Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１〜９１７頁（１９８７）に記載されたもの、およびＲｅｔｔｅｒら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．（２００５）３３（ｓｕｐｐｌ  １）：Ｄ６７１〜Ｄ６７４頁に記載されたようなＶＢＡＳＥ２などの、抗体ＣＤＲを定義するためのいくつかの異なる慣例がある。
【００５８】
本開示による抗体および抗原結合性断片を、関連する標的分子に結合することができるモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の配列を使用して設計および調製することができる。一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ＦａｂおよびＦａｂ２断片などの抗体の抗原結合領域を使用／提供することもできる。「抗原結合領域」は、所与の抗体が特異的である標的に結合することができる抗体の任意の断片である。
【００５９】
一部の実施形態では、抗体／断片は、血管新生因子、血管新生因子含有複合体、または血管新生因子の受容体に結合することができる抗体のＶＬおよびＶＨ領域を含む。抗体の抗原結合領域のＶＬおよびＶＨ領域は、一緒になってＦｖ領域を構成する。一部の実施形態では、抗体／断片は、血管新生因子、血管新生因子含有複合体、または血管新生因子の受容体に結合することができる抗体のＦｖ領域を含むか、またはそれからなる。Ｆｖ領域を、一本鎖として発現させることができるが、ＶＨおよびＶＬ領域は、例えば、可撓性オリゴペプチドによって共有的に連結される。したがって、抗体／断片は、血管新生因子、血管新生因子含有複合体、または血管新生因子の受容体に結合することができる抗体のＶＬおよびＶＨ領域を含むｓｃＦｖを含んでもよいか、またはそれからなってもよい。
【００６０】
抗体の抗原結合領域のＶＬおよび軽鎖定常（ＣＬ）領域、ならびにＶＨ領域および重鎖定常１（ＣＨ１）領域は、一緒になってＦａｂ領域を構成する。一部の実施形態では、抗体／断片は、血管新生因子、血管新生因子含有複合体、または血管新生因子の受容体に結合することができる抗体のＦａｂ領域を含むか、またはそれからなる。
一部の実施形態では、抗体／断片は、血管新生因子、血管新生因子含有複合体、または血管新生因子の受容体に結合することができる全抗体を含むか、またはそれからなる。「全抗体」とは、免疫グロブリン（Ｉｇ）の構造と実質的に類似する構造を有する抗体を指す。様々な種類の免疫グロブリンおよびその構造が、例えば、ＳｃｈｒｏｅｄｅｒおよびＣａｖａｃｉｎｉ  Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１０）１２５（２０２）：Ｓ４１〜Ｓ５２頁に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。Ｇ型の免疫グロブリン（すなわち、ＩｇＧ）は、２つの重鎖と２つの軽鎖とを含む約１５０ｋＤａの糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端に向かって、重鎖は、ＶＨ、次いで、３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３）を含む重鎖定常領域を含み、同様に軽鎖は、ＶＬ、次いで、ＣＬを含む。重鎖に応じて、免疫グロブリンを、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、またはＩｇＭと分類することができる。軽鎖は、カッパ（κ）またはラムダ（λ）であってもよい。
【００６１】
Ｆａｂ、Ｆｖ、ＳｃＦｖおよびｄＡｂ抗体断片を全て、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中で発現させ、それから分泌させ、かくして、大量の前記断片の容易な産生を可能にすることができる。
【００６２】
全抗体、およびＦ（ａｂ’）２断片は、「二価」である。「二価」とは、前記抗体およびＦ（ａｂ’）２断片が２つの抗原結合部位を有することを意味する。対照的に、Ｆａｂ、Ｆｖ、ＳｃＦｖおよびｄＡｂ断片は、ただ１つの抗原結合部位を有する一価である。血管新生因子、血管新生因子含有複合体、または血管新生因子の受容体に結合することができる合成抗体を、当業界で周知のファージディスプレイ技術を使用して作製することもできる。
【００６３】
抗体を、非改変親抗体と比較して、抗体の抗原に対する親和性が改善された、改変抗体が生成される親和性成熟のプロセスによって産生することができる。親和性成熟抗体を、当業界で公知の手順、例えば、Ｍａｒｋｓら、Ｒｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９〜７８３頁（１９９２）；Ｂａｒｂａｓら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：３８０９〜３８１３頁（１９９４）；Ｓｃｈｉｅｒら、Ｇｅｎｅ  １６９：１４７〜１５５頁（１９９５）；Ｙｅｌｔｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４〜２００４頁（１９９５）；Ｊａｃｋｓｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１  ０−１５  ９（１９９５）；およびＨａｗｋｉｎｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９〜８９６頁（１９９２）に記載の手順によって産生することができる。
【００６４】
抗体／断片は、多重特異性抗体が２つ以上の型の抗原に結合するように、例えば、２つ以上の異なる抗体の断片から構成される多重特異性（例えば、二重特異性）抗体を含む。一部の実施形態では、二重特異性抗体は、血管新生因子、血管新生因子含有複合体、または血管新生因子の受容体、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１含有複合体、またはＩＬ−１１の受容体に結合することができる本明細書に記載の抗体／断片を含む。一部の実施形態では、二重特異性抗体は、（ｉ）血管新生因子、血管新生因子含有複合体に結合することができる本明細書に記載の抗体／断片、および（ｉｉ）ＩＬ−１１、ＩＬ−１１含有複合体、またはＩＬ−１１の受容体に結合することができる本明細書に記載の抗体／断片を含む。抗体は、任意の所望の抗原であってもよい、第２の抗原に対する親和性を有する異なる断片を含有してもよい。
【００６５】
二重特異性抗体の調製のための技術は、当業界で周知であり、例えば、Ｍｕｅｌｌｅｒ，Ｄ．ら、（２０１０  Ｂｉｏｄｒｕｇｓ  ２４（２）：８９〜９８頁）、Ｗｏｚｎｉａｋ−Ｋｎｏｐｐ  Ｇ．ら、（２０１０  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ  Ｄｅｓ  ２３（４）：２８９〜２９７頁）、Ｂａｅｕｅｒｌｅ，ＰＡ．ら、（２００９  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６９（１２）：４９４１〜４９４４頁）を参照されたい。二重特異性抗体および二重特異性抗原結合性断片を、全体が参照により本明細書に組み込まれるＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ＭＡｂｓ  ２０１２、４（２）：１８２〜１９７頁に記載された形式などの任意の好適な形式で提供することができる。例えば、二重特異性抗体または二重特異性抗原結合性断片は、二重特異性抗体コンジュゲート（例えば、ＩｇＧ２、Ｆ（ａｂ’）２もしくはＣｏｖＸ−Ｂｏｄｙ）、二重特異性ＩｇＧもしくはＩｇＧ様分子（例えば、ＩｇＧ、ｓｃＦｖ４−Ｉｇ、ＩｇＧ−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−ＩｇＧ、ＤＶＤ−Ｉｇ、ＩｇＧ−ｓＶＤ、ｓＶＤ−ＩｇＧ、２  ｉｎ  １−ＩｇＧ、ｍＡｂ２、もしくはＴａｎｄｅｍａｂ  ｃｏｍｍｏｎ  ＬＣ）、非対称性二重特異性ＩｇＧもしくはＩｇＧ様分子（例えば、ｋｉｈ  ＩｇＧ、ｋｉｈ  ＩｇＧ  ｃｏｍｍｏｎ  ＬＣ、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ｋｉｈ  ＩｇＧ−ｓｃＦａｂ、ｍＡｂ−Ｆｖ、チャージペアもしくはＳＥＥＤ−ｂｏｄｙ）、低分子二重特異性抗体（例えば、ダイアボディ（Ｄｂ）、ｄｓＤｂ、ＤＡＲＴ、ｓｃＤｂ、ｔａｎｄＡｂ、タンデムｓｃＦｖ（ｔａＦｖ）、タンデムｄＡｂ／ＶＨＨ、トリプルボディ、トリプルヘッド、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、もしくはＦ（ａｂ’）２−ｓｃＦｖ２）、二重特異性ＦｃおよびＣＨ３融合タンパク質（例えば、ｔａＦｖ−Ｆｃ、ジ−ダイアボディ、ｓｃＤｂ−ＣＨ３、ｓｃＦｖ−Ｆｃ−ｓｃＦｖ、ＨＣＡｂ−ＶＨＨ、ｓｃＦｖ−ｋｉｈ−Ｆｃ、もしくはｓｃＦｖ−ｋｉｈ−ＣＨ３）、または二重特異性融合タンパク質（例えば、ｓｃＦｖ２−アルブミン、ｓｃＤｂ−アルブミン、ｔａＦｖ−トキシン、ＤＮＬ−Ｆａｂ３、ＤＮＬ−Ｆａｂ４−ＩｇＧ、ＤＮＬ−Ｆａｂ４−ＩｇＧ−サイトカイン２）であってもよい。特に、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ＭＡｂｓ  ２０１２、４（２）：１８２〜１９頁の図２を参照されたい。
【００６６】
二重特異性抗体を産生するための方法は、例えば、ＳｅｇａｌおよびＢａｓｔ、２００１．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１４：ＩＶ：２．１３：２．１３．１〜２．１３．１６（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されたように、抗体または抗体断片を、例えば、還元性ジスルフィドまたは非還元性チオエーテル結合と化学的に架橋するステップを含む。例えば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（−２−ピリジルジチオ）−プロピオン酸（ＳＰＤＰ）を使用して、例えば、ヒンジ領域ＳＨ−基を介してＦａｂ断片を化学的に架橋して、ジスルフィド結合した二重特異性Ｆ（ａｂ）２ヘテロ二量体を創出することができる。
【００６７】
二重特異性抗体を産生するための他の方法は、例えば、Ｄ．Ｍ．およびＢａｓｔ，Ｂ．Ｊ．２００１．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１４：ＩＶ：２．１３：２．１３．１〜２．１３．１６に記載されたように、抗体産生ハイブリドーマを、例えば、ポリエチレングリコールと融合して、二重特異性抗体を分泌することができるクアドローマ細胞を産生するステップを含む。
【００６８】
二重特異性抗体および二重特異性抗原結合性断片を、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、第２版（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、２０１２）、Ｃｈａｐｔｅｒ  ４０：Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｄｉａｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔａｎｄｅｍ  ｓｃＦｖ（Ｈｏｒｎｉｎｇ  ａｎｄ  Ｆａｒｂｅｒ−Ｓｃｈｗａｒｚ）、またはＦｒｅｎｃｈ、Ｈｏｗ  ｔｏ  ｍａｋｅ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．２０００；４０：３３３〜３３９頁に記載されたように、例えば、抗原結合分子のためのポリペプチドをコードする核酸構築物からの発現によって、組換え産生することもできる。
【００６９】
例えば、２つの抗原結合ドメインのための軽鎖および重鎖可変ドメイン（すなわち、血管新生因子、血管新生因子含有複合体、または血管新生因子の受容体に結合することができる抗原結合ドメインのための軽鎖および重鎖可変ドメイン、ならびに別の標的タンパク質に結合することができる抗原結合ドメインのための軽鎖および重鎖可変ドメイン）をコードし、抗原結合ドメイン間に好適なリンカーまたは二量体化ドメインをコードする配列を含むＤＮＡ構築物を、分子クローニング技術によって調製することができる。その後、組換え二重特異性抗体を、好適な宿主細胞（例えば、哺乳動物宿主細胞）中での構築物の発現（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの）によって産生させた後、発現された組換え二重特異性抗体を、必要に応じて精製することができる。
【００７０】
アプタマー
一部の実施形態では、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達を阻害することができる、または血管新生因子媒介性シグナル伝達を阻害することができる薬剤は、アプタマーである。
【００７１】
核酸／ペプチドリガンドとも呼ばれるアプタマーは、高い特異性および高い親和性で標的分子に結合する能力を特徴とする核酸またはペプチド分子である。今まで同定されたほぼ全てのアプタマーは、天然には存在しない分子である。
【００７２】
所与の標的（例えば、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１含有複合体またはＩＬ−１１の受容体、血管新生因子、血管新生因子含有複合体または血管新生因子の受容体）に対するアプタマーを、Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌｉｇａｎｄｓ  ｂｙ  ＥＸｐｏｎｅｎｔｉａｌ  ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ（ＳＥＬＥＸ（商標））の方法によって、またはＳＯＭＡｍｅｒｓ（遅い解離速度の修飾アプタマー）（Ｇｏｌｄ  Ｌら（２０１０）ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ５（１２）：ｅ１５００４）を開発することによって同定および／または産生することができる。アプタマーおよびＳＥＬＥＸは、ＴｕｅｒｋおよびＧｏｌｄ、Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９０）２４９（４９６８）：５０５〜１０頁、およびＷＯ９１／１９８１３に記載されている。ＳＥＬＥＸおよびＳＯＭＡｍｅｒ技術の適用は、例えば、アプタマーの化学的多様性を拡張するためにアミノ酸側鎖を模倣する官能基を付加することを含む。結果として、標的のための高親和性アプタマーを富化し、同定することができる。
【００７３】
アプタマーは、ＤＮＡまたはＲＮＡ分子であってもよく、一本鎖または二本鎖であってもよい。アプタマーは、例えば、糖および／またはリン酸および／または塩基が化学的に修飾された、化学的に修飾された核酸を含んでもよい。そのような修飾は、アプタマーの安定性を改善するか、またはアプタマーを、分解に対してより耐性にしてもよく、リボースの２’位に修飾を含んでもよい。
【００７４】
アプタマーを、当業者には周知の方法によって合成することができる。例えば、アプタマーを、例えば、固相支持体上で化学的に合成することができる。固相合成は、ホスホロアミダイト化学を使用してもよい。簡単に述べると、固相支持されたヌクレオチドを脱トリチル化した後、好適に活性化されたヌクレオシドホスホロアミダイトとカップリングさせて、亜リン酸トリエステル結合を形成させる。次いで、キャッピングを行った後、酸化剤、典型的には、ヨウ素を用いた亜リン酸トリエステルの酸化を行うことができる。次いで、サイクルを繰り返して、アプタマーを集合させることができる（例えば、Ｓｉｎｈａ，Ｎ．Ｄ．；Ｂｉｅｒｎａｔ，Ｊ．；ＭｃＭａｎｕｓ，Ｊ．；Ｋｏｓｔｅｒ，Ｈ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９８４、１２、４５３９頁；およびＢｅａｕｃａｇｅ，Ｓ．Ｌ．；Ｌｙｅｒ，Ｒ．Ｐ．（１９９２）．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ４８（１２）：２２２３頁を参照されたい）。
【００７５】
好適な核酸アプタマーは、必要に応じて、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、または４０ヌクレオチドのうちの１つの最小の長さを有してもよい。好適な核酸アプタマーは、必要に応じて、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、または８０ヌクレオチドのうちの１つの最大の長さを有してもよい。好適な核酸アプタマーは、必要に応じて、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、または８０ヌクレオチドのうちの１つの長さを有してもよい。
【００７６】
アプタマーは、特定の標的分子に結合するように選択および操作されたペプチドであってもよい。ペプチドアプタマーならびにその生成および同定のための方法は、Ｒｅｖｅｒｄａｔｔｏら、Ｃｕｒｒ  Ｔｏｐ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．（２０１５）１５（１２）：１０８２〜１０１頁に概説されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。ペプチドアプタマーは、必要に応じて、２、３、４、５、６、７、８、９または１０アミノ酸のうちの１つの最小の長さを有してもよい。ペプチドアプタマーは、必要に応じて、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９または５０アミノ酸のうちの１つの最大の長さを有してもよい。好適なペプチドアプタマーは、必要に応じて、２〜３０、２〜２５、２〜２０、５〜３０、５〜２５または５〜２０アミノ酸のうちの１つの長さを有してもよい。
【００７７】
アプタマーは、ｎＭまたはｐＭ範囲、例えば、５００ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、５００ｐＭ、１００ｐＭ未満のうちの１つのＫｄを有してもよい。
【００７８】
因子または受容体の発現を低減させることができる薬剤
本発明の態様では、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストおよび／または血管新生因子のアンタゴニストは、１つまたは複数の標的の発現を防止する、または低減させることができる。
【００７９】
発現は、遺伝子またはタンパク質発現であってもよい。
【００８０】
当業者には公知の様々な手段によって、例えば、定量的リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）によって、またはリポーターに基づく方法によってｍＲＮＡレベルを測定することによって、遺伝子発現を測定することができる。同様に、当業界で周知の様々な方法によって、例えば、抗体に基づく方法によって、例えば、ウェスタンブロット、免疫組織化学分析、免疫細胞化学分析、フローサイトメトリー、ＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＳＰＯＴ、またはリポーターに基づく方法によって、タンパク質発現を測定することができる。発現は、対象の細胞／組織／臓器／臓器系によるものであってもよい。
【００８１】
一部の実施形態では、薬剤は、限定されるものではないが、ｓｈＲＮＡまたはｓｉＲＮＡを含む、アンチセンスまたは低分子干渉ＲＮＡなどの阻害的核酸であってもよい。
【００８２】
オリゴヌクレオチド分子、特に、ＲＮＡを用いて、遺伝子発現を調節することができる。これらのものは、オリゴヌクレオチド、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）によるｍＲＮＡの標的化された分解、転写後遺伝子サイレンシング（ＰＴＧ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）によるｍＲＮＡの発生調節された配列特異的翻訳抑制、および標的化された転写遺伝子サイレンシングを含む。
【００８３】
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的オリゴヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡを相補的配列結合によって標的化し、それに結合する、好ましくは一本鎖のオリゴヌクレオチドである。標的オリゴヌクレオチドがｍＲＮＡである場合、アンチセンスのｍＲＮＡへの結合は、ｍＲＮＡの翻訳および遺伝子産物の発現をブロックする。アンチセンスオリゴヌクレオチドを、センスゲノム核酸に結合し、標的ヌクレオチド配列の転写を阻害するように設計することができる。
【００８４】
ヘテロクロマチン複合体の標的化および特定の染色体遺伝子座でのエピジェネティックな遺伝子サイレンシングにおけるＲＮＡｉ機構および低分子ＲＮＡの役割は証明されている。ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）としても知られる、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）依存的転写後サイレンシングは、ｄｓＲＮＡ複合体が短期間でサイレンシングのための特定の相同遺伝子を標的化することができる現象である。それは、配列同一性を有するｍＲＮＡの分解を促進するためのシグナルとして作用する。２０ｎｔのｓｉＲＮＡは、一般には遺伝子特異的サイレンシングを誘導するには十分に長いが、宿主応答を回避するには十分に短い。標的遺伝子産物の発現の減少は、広範囲に及んでもよく、９０％のサイレンシングが少ないｓｉＲＮＡ分子によって誘導される。ＲＮＡｉに基づく治療剤は、いくつかの適応症のための第Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩ相臨床試験に進行している（Ｎａｔｕｒｅ  ２００９  Ｊａｎ  ２２；４５７（７２２８）：４２６〜４３３頁）。
【００８５】
当業界では、これらのＲＮＡ配列は、その起源に応じて、「短い、または低分子干渉ＲＮＡ」（ｓｉＲＮＡ）または「マイクロＲＮＡ」（ｍｉＲＮＡ）と呼ばれる。両方の型の配列を使用して、相補的ＲＮＡに結合し、ｍＲＮＡ除去を誘発する（ＲＮＡｉ）またはタンパク質へのｍＲＮＡ翻訳を停止させることによって、遺伝子発現を下方調節することができる。ｓｉＲＮＡは、長い二本鎖ＲＮＡのプロセッシングによって誘導され、天然に見出される場合、典型的には、外因性起源のものである。マイクロ干渉ＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）は、短いヘアピンのプロセッシングによって誘導される、内因性にコードされた低分子非コードＲＮＡである。ｓｉＲＮＡとｍｉＲＮＡは両方とも、ＲＮＡを切断することなく、部分的に相補的な標的配列を担持するｍＲＮＡの翻訳を阻害し、完全に相補的な配列を担持するｍＲＮＡを分解することができる。
【００８６】
ｓｉＲＮＡリガンドは、典型的には、二本鎖であり、標的遺伝子の機能のＲＮＡ媒介性下方調節の有効性を最適化するためには、ｓｉＲＮＡ分子の長さは、ｍＲＮＡ標的のｓｉＲＮＡによる認識を媒介するＲＩＳＣ複合体によるｓｉＲＮＡの正確な認識を確保するように選択され、したがって、ｓｉＲＮＡは宿主応答を低減させるのに十分に短いのが好ましい。
【００８７】
ｍｉＲＮＡリガンドは、典型的には、一本鎖であり、部分的に相補的であり、リガンドがヘアピンを形成するのを可能にする領域を有する。ｍｉＲＮＡは、ＤＮＡから転写されるが、タンパク質には翻訳されないＲＮＡ遺伝子である。ｍｉＲＮＡ遺伝子をコードするＤＮＡ配列は、ｍｉＲＮＡよりも長い。このＤＮＡ配列は、ｍｉＲＮＡ配列および近似逆相補体を含む。このＤＮＡ配列が一本鎖ＲＮＡ分子に転写される場合、ｍｉＲＮＡ配列およびその逆相補体は、塩基対を形成して、部分的二本鎖ＲＮＡセグメントを形成する。マイクロＲＮＡ配列の設計は、Ｊｏｈｎら、ＰＬｏＳ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、１１（２）、１８６２〜１８７９頁、２００４に考察されている。
【００８８】
典型的には、ｓｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡの効果を模倣するように意図されたＲＮＡリガンドは、１０〜４０個のリボヌクレオチド（またはその合成アナログ）、より好ましくは、１７〜３０個のリボヌクレオチド、より好ましくは、１９〜２５個のリボヌクレオチド、最も好ましくは、２１〜２３個のリボヌクレオチドを有する。二本鎖ｓｉＲＮＡを用いる本発明の一部の実施形態では、分子は、例えば、１または２個の（リボ）ヌクレオチドの、典型的には、ｄＴｄＴ３’突出部のＵＵの、対称性３’突出部を有してもよい。本明細書に提供される開示に基づいて、当業者であれば、例えば、Ａｍｂｉｏｎ  ｓｉＲＮＡファインダーなどの資源を使用して、好適なｓｉＲＮＡおよびｍｉＲＮＡ配列を容易に設計することができる。ｓｉＲＮＡおよびｍｉＲＮＡ配列を合成的に産生し、外因的に付加して、遺伝子下方調節を引き起こすか、または発現系（例えば、ベクター）を使用して産生することができる。好ましい実施形態では、ｓｉＲＮＡは、合成される。
【００８９】
より長い二本鎖ＲＮＡを、細胞中でプロセッシングして、ｓｉＲＮＡを産生してもよい（例えば、Ｍｙｅｒｓ（２００３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２１：３２４〜３２８頁を参照されたい）。より長いｄｓＲＮＡ分子は、例えば、１もしくは２個の（リボ）ヌクレオチドの、対称性３’もしくは５’突出部を有してもよいか、または平滑末端を有してもよい。より長いｄｓＲＮＡ分子は、２５ヌクレオチドまたはそれより長くてもよい。好ましくは、より長いｄｓＲＮＡ分子は、２５〜３０ヌクレオチド長である。より好ましくは、より長いｄｓＲＮＡ分子は、２５〜２７ヌクレオチド長である。最も好ましくは、より長いｄｓＲＮＡ分子は、２７ヌクレオチド長である。３０ヌクレオチド以上の長さのｄｓＲＮＡを、ベクターｐＤＥＣＡＰ（Ｓｈｉｎａｇａｗａら、Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｄｅｖ．、１７、１３４０〜５頁、２００３）を使用して発現させることができる。
【００９０】
別の選択肢は、細胞中での短いヘアピンＲＮＡ分子（ｓｈＲＮＡ）の発現である。ｓｈＲＮＡは、合成ｓｉＲＮＡよりも安定である。ｓｈＲＮＡは、小さいループ配列によって隔てられた短い逆方向反復からなる。１つの逆方向反復は、遺伝子標的と相補的である。細胞中で、ｓｈＲＮＡはＤＩＣＥＲによって、標的遺伝子のｍＲＮＡを分解し、発現を抑制するｓｉＲＮＡにプロセッシングされる。好ましい実施形態では、ｓｈＲＮＡは、ベクターからの転写によって内因的に（細胞内で）産生される。ヒトＨ１もしくは７ＳＫプロモーターなどのＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーターまたはＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーターの制御下で、ｓｈＲＮＡ配列をコードするベクターを細胞にトランスフェクトすることによって、ｓｈＲＮＡを細胞内で産生させることができる。あるいは、ｓｈＲＮＡを、ベクターからの転写によって外因的に（ｉｎ  ｖｉｔｒｏで）合成することができる。次いで、ｓｈＲＮＡを、細胞中に直接導入することができる。好ましくは、ｓｈＲＮＡ配列は、４０〜１００塩基長、より好ましくは、４０〜７０塩基長である。ヘアピンのステムは、好ましくは、１９〜３０塩基対の長さである。ステムは、ヘアピン構造を安定化するためのＧ−Ｕ対を含有してもよい。
【００９１】
ｓｉＲＮＡ分子、より長いｄｓＲＮＡ分子またはｍｉＲＮＡ分子を、好ましくは、ベクター内に含有される核酸配列の転写によって組換え的に作製することができる。好ましくは、ｓｉＲＮＡ分子、より長いｄｓＲＮＡ分子またはｍｉＲＮＡ分子は、標的因子または受容体の部分配列を含む。
【００９２】
一実施形態では、ｓｉＲＮＡ、より長いｄｓＲＮＡまたはｍｉＲＮＡは、ベクターからの転写によって内因的に（細胞内で）産生される。ベクターは、当業界で公知の任意の方法で細胞中に導入してもよい。必要に応じて、ＲＮＡ配列の発現を、組織特異的（例えば、心臓、肝臓、腎臓または眼特異的）プロモーターを使用して調節することができる。さらなる実施形態では、ｓｉＲＮＡ、より長いｄｓＲＮＡまたはｍｉＲＮＡは、ベクターからの転写によって外因的（ｉｎ  ｖｉｔｒｏで）産生される。
【００９３】
好適なベクターは、抑制することができるオリゴヌクレオチド剤を発現するように構成されたオリゴヌクレオチドベクターであってもよい。そのようなベクターは、ウイルスベクターまたはプラスミドベクターであってもよい。治療的オリゴヌクレオチドを、ウイルスベクターのゲノム中に組み込み、調節配列、例えば、その発現を駆動するプロモーターに作動可能に連結することができる。用語「作動可能に連結されている」は、選択されたヌクレオチド配列および調節ヌクレオチド配列が、ヌクレオチド配列の発現を、調節配列の影響または制御下に置くような方法で共有的に連結される状況を含んでもよい。かくして、調節配列が、選択されたヌクレオチド配列の一部または全部を形成するヌクレオチド配列の転写を行うことができる場合、調節配列は選択されたヌクレオチド配列に作動可能に連結されている。
【００９４】
プロモーターにより発現されるｓｉＲＮＡ配列をコードするウイルスベクターは、当業界で公知であり、治療的オリゴヌクレオチドの長期的発現の利益を有する。例としては、レンチウイルス（Ｎａｔｕｒｅ  ２００９  Ｊａｎ  ２２；４５７（７２２８）：４２６〜４３３頁）、アデノウイルス（Ｓｈｅｎら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ  ２００３  Ｍａｒ  ２７；５３９（１〜３）１１１〜４頁）およびレトロウイルス（ＢａｒｔｏｎおよびＭｅｄｚｈｉｔｏｖ、ＰＮＡＳ  Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  １２、２００２、ｖｏｌ．９９、ｎｏ．２３、１４９４３〜１４９４５頁）が挙げられる。
【００９５】
他の実施形態では、ベクターを、発現の抑制が必要とされる部位への治療的オリゴヌクレオチドの送達を補助するように構成することができる。そのようなベクターは、典型的には、オリゴヌクレオチドを、正に荷電したベクター（例えば、カチオン性細胞透過性ペプチド、カチオン性ポリマーおよびデンドリマー、ならびにカチオン性脂質）と複合体化すること；オリゴヌクレオチドを、低分子（例えば、コレステロール、胆汁酸、および脂質）、ポリマー、抗体、およびＲＮＡとコンジュゲートすること；またはオリゴヌクレオチドを、ナノ粒子製剤中に封入すること（Ｗａｎｇら、ＡＡＰＳ  Ｊ．２０１０  Ｄｅｃ；１２（４）：４９２〜５０３頁）を含む。
【００９６】
一実施形態では、ＲＮＡとして発現された場合、センスおよびアンチセンスセクションが会合して二本鎖ＲＮＡを形成するように、ベクターは、センス配向とアンチセンス配向の両方の核酸配列を含んでもよい。
【００９７】
あるいは、ｓｉＲＮＡ分子を、当業界で公知である標準的な固相または液相合成技術を使用して合成することができる。ヌクレオチド間の連結は、ホスホジエステル結合であってもよく、またはあるいは、例えば、式Ｐ（Ｏ）Ｓ、（チオエート）；Ｐ（Ｓ）Ｓ、（ジチオエート）；Ｐ（Ｏ）ＮＲ’２；Ｐ（Ｏ）Ｒ’；Ｐ（Ｏ）ＯＲ６；ＣＯ；もしくはＣＯＮＲ’２（式中、ＲはＨ（もしくは塩）またはアルキル（１〜１２Ｃ）であり、Ｒ６はアルキル（１〜９Ｃ）である）の連結基が、−Ｏ−もしくは−Ｓ−を介して隣接するヌクレオチドに連結される。
【００９８】
修飾ヌクレオチド塩基を、天然に存在する塩基に加えて使用してもよく、それらは、それらを含有するｓｉＲＮＡ分子に対して有利な特性を付与してもよい。
【００９９】
例えば、修飾塩基は、ｓｉＲＮＡ分子の安定性を増大させることによって、サイレンシングにとって必要とされる量を低減することができる。修飾塩基の提供はまた、多かれ少なかれ、非修飾ｓｉＲＮＡよりも安定であるｓｉＲＮＡ分子を提供することもできる。
【０１００】
用語「修飾ヌクレオチド塩基」は、共有的に修飾された塩基および／または糖を有するヌクレオチドを包含する。例えば、修飾ヌクレオチドは、３’位でヒドロキシル基以外および５’位でリン酸基以外の低分子量有機基に共有的に結合される糖を有するヌクレオチドを含む。かくして、修飾ヌクレオチドはまた、２’−Ｏ−メチル−；２’−Ｏ−アルキル；２’−Ｏ−アリル；２’−Ｓ−アルキル；２’−Ｓ−アリル；２’−フルオロ−；２’−ハロまたはアジド−リボースなどの２’置換された糖、炭素環式糖アナログ、ａ−アノマー糖；アラビノース、キシロースまたはリキソースなどのエピマー糖、ピラノース糖、フラノース糖、およびセドヘプツロースを含んでもよい。
【０１０１】
修飾ヌクレオチドは、当業界で公知であり、アルキル化プリンおよびピリミジン、アシル化プリンおよびピリミジン、ならびに他の複素環を含む。これらのクラスのピリミジンおよびプリンは、当業界で公知であり、シュードイソシトシン、Ｎ４，Ｎ４−エタノシトシン、８−ヒドロキシ−Ｎ６−メチルアデニン、４−アセチルシトシン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシル、５フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、イノシン、Ｎ６−イソペンチル−アデニン、１−メチルアデニン、１−メチルシュードウラシル、１−メチルグアニン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ６−メチルアデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、Ｄ−マンノシルケオシン、５−メトキシカルボニルメチルウラシル、５−メトキシウラシル、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、シュードウラシル、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５メチルウラシル、Ｎ−ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル５−オキシ酢酸、ケオシン、２−チオシトシン、５−プロピルウラシル、５−プロピルシトシン、５−エチルウラシル、５エチルシトシン、５−ブチルウラシル、５−ペンチルウラシル、５−ペンチルシトシン、および２，６ジアミノプリン、メチルシュードウラシル、１−メチルグアニン、１−メチルシトシンが挙げられる。
【０１０２】
Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ、植物、および哺乳動物において遺伝子をサイレンシングするためのＲＮＡｉの使用に関する方法は、当業界で公知である（Ｆｉｒｅ  Ａ．ら、１９９８  Ｎａｔｕｒｅ  ３９１：８０６〜８１１頁；Ｆｉｒｅ，Ａ．Ｔｒｅｎｄｓ  Ｇｅｎｅｔ．１５、３５８〜３６３頁（１９９９）；Ｓｈａｒｐ，Ｐ．Ａ．ＲＮＡ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ  ２００１、Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１５、４８５〜４９０頁（２００１）；Ｈａｍｍｏｎｄ，Ｓ．Ｍ．ら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．２、１１０〜１１１９頁（２００１）；Ｔｕｓｃｈｌ，Ｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２、２３９〜２４５（２００１）；Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ａ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８６、９５０〜９５２頁（１９９９）；Ｈａｍｍｏｎｄ，Ｓ．Ｍ．ら、Ｎａｔｕｒｅ  ４０４、２９３〜２９６（２０００）；Ｚａｍｏｒｅ，Ｐ．Ｄ．ら、Ｃｅｌｌ  １０１、２５〜３３頁（２０００）；Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ，Ｅ．ら、Ｎａｔｕｒｅ  ４０９、３６３〜３６６頁（２００１）；Ｅｌｂａｓｈｉｒ，Ｓ．Ｍ．ら、Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１５、１８８〜２００頁（２００１）；ＷＯ０１２９０５８；ＷＯ９９３２６１９、およびＥｌｂａｓｈｉｒ  Ｓ  Ｍ．ら、２００１、Ｎａｔｕｒｅ  ４１１：４９４〜４９８頁）。
【０１０３】
核酸は、二本鎖ｓｉＲＮＡであってもよい（当業者であれば理解できるように、また、以下でさらに説明されるように、ｓｉＲＮＡ分子は、短い３’ＤＮＡ配列をも含んでもよい）。
【０１０４】
本発明の核酸と標的配列との完全な同一性／相補性が好ましいが、必須ではないと予想される。したがって、本発明の核酸は、標的のｍＲＮＡと比較して単一のミスマッチを含んでもよい。しかしながら、単一のミスマッチの存在であっても、効率の低下をもたらす可能性があるため、ミスマッチは存在しないのが好ましいと予想される。存在する場合、３’突出部を、ミスマッチの数の考慮から除外してもよい。
【０１０５】
用語「相補性」は、天然に存在するリボおよび／またはデオキシリボヌクレオチドからなる核酸間の従来の塩基対形成に限定されないだけでなく、ｍＲＮＡと、非天然ヌクレオチドを含む本発明の核酸との塩基対形成も含む。
【０１０６】
二本鎖ＲＮＡを形成する鎖は、ＤＮＡまたはＲＮＡであってもよい、短い３’ジヌクレオチド突出部を有してもよい。３’ＤＮＡ突出部の使用は、３’ ＲＮＡ突出部と比較してｓｉＲＮＡ活性に対する効果を有しないが、核酸鎖の化学合成の費用を低減する（Ｅｌｂａｓｈｉｒら、２００１ｃ）。この理由から、ＤＮＡジヌクレオチドが好ましい場合がある。
【０１０７】
存在する場合、ジヌクレオチド突出部は、互いに対称的であってよいが、これは必須ではない。実際、センス（上）鎖の３’突出部は、ｍＲＮＡの認識および分解には参画しないため、ＲＮＡｉ活性とは無関係である（Ｅｌｂａｓｈｉｒら、２００１ａ、２００１ｂ、２００１ｃ）。
【０１０８】
ＤｒｏｓｏｐｈｉｌａにおけるＲＮＡｉ実験は、アンチセンス３’突出部がｍＲＮＡの認識および標的化に参画し得ることを示すが（Ｅｌｂａｓｈｉｒら、２００１ｃ）、３’突出部は哺乳動物細胞中でのｓｉＲＮＡのＲＮＡｉ活性にとって必要ではないと考えられる。３’突出部の不正確なアニーリングは、したがって、哺乳動物細胞においてはほとんど効果がないと考えられる（Ｅｌｂａｓｈｉｒら、２００１ｃ；Ｃｚａｕｄｅｒｎａら、２００３）。
【０１０９】
したがって、任意のジヌクレオチド突出部を、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖において使用することができる。それにも拘わらず、ジヌクレオチドは、好ましくは、−ＵＵまたは−ＵＧ（または突出部がＤＮＡである場合、−ＴＴまたはＴＧ）、より好ましくは、−ＵＵ（または−ＴＴ）である。−ＵＵ（または−ＴＴ）ジヌクレオチド突出部は、最も有効であり、転写シグナル（終結シグナルはＴＴＴＴＴである）のＲＮＡポリメラーゼＩＩＩ末端と一致する（すなわち、その一部を形成することができる）。したがって、このジヌクレオチドが最も好ましい。ジヌクレオチドＡＡ、ＣＣおよびＧＧを使用してもよいが、有効性が低く、結果として、あまり好ましくはない。
【０１１０】
さらに、３’突出部を、ｓｉＲＮＡから完全に省略してもよい。
【０１１１】
本発明はまた、好ましくは、３’突出部を有するが、必要に応じて、有しない、上記二本鎖核酸の一方の成分鎖からそれぞれなる一本鎖核酸（本明細書では、一本鎖ｓｉＲＮＡと称する）も提供する。本発明はまた、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで互いにハイブリダイズして、上記二本鎖ｓｉＲＮＡを形成した後、細胞中に導入することができるそのような一本鎖核酸の対を含有するキットも提供する。
【０１１２】
相補部分は一般に、２つの相補部分を互いにハイブリダイズさせる好適な長さおよび配列を有するスペーサーによって連結されると予想される。２つの相補（すなわち、センスおよびアンチセンス）部分を、いずれかの順序で５’−３’に連結することができる。スペーサーは、典型的には、約４〜１２ヌクレオチド、好ましくは、４〜９ヌクレオチド、より好ましくは、６〜９ヌクレオチドの短い配列と予想される。
【０１１３】
好ましくは、スペーサーの５’末端（上流の相補部分のすぐ３’側）は、ヌクレオチド−ＵＵ−または−ＵＧ−、再び好ましくは、−ＵＵ−からなる（しかし再度、これらの特定のジヌクレオチドの使用は必須ではない）。ＯｌｉｇｏＥｎｇｉｎｅ（Ｓｅａｔｔｌｅ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、ＵＳＡ）のｐＳｕｐｅｒ系における使用のために推奨される好適なスペーサーは、ＵＵＣＡＡＧＡＧＡである。この場合およびその他の場合、スペーサーの末端は、互いにハイブリダイズし、例えば、少数（例えば、１または２個）の塩基対によって標的の正確な配列を超えて二本鎖モチーフを伸長させることができる。
【０１１４】
同様に、転写されるＲＮＡは、好ましくは、下流の相補部分に由来する３’突出部を含む。再度、これは、好ましくは、−ＵＵまたは−ＵＧ、より好ましくは、−ＵＵである。
【０１１５】
次いで、そのようなｓｈＲＮＡ分子を、ＤＩＣＥＲ酵素によって哺乳動物細胞中で切断して、ハイブリダイズしたｄｓＲＮＡの一方またはそれぞれの鎖が３’突出部を含む、上記の二本鎖ｓｉＲＮＡを得ることができる。
【０１１６】
本発明の核酸の合成のための技術は、勿論、当業界で周知である。
【０１１７】
当業者であれば、周知の技術および市販の材料を使用して、本発明のＤＮＡのための好適な転写ベクターを構築することができる。特に、ＤＮＡを、プロモーターおよび転写終結配列を含む制御配列と結合させる。
【０１１８】
特に好適なものは、ＯｌｉｇｏＥｎｇｉｎｅ（Ｓｅａｔｔｌｅ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、ＵＳＡ）の市販のｐＳｕｐｅｒおよびｐＳｕｐｅｒｉｏｒ系である。これらのものは、ポリメラーゼ−ＩＩＩプロモーター（Ｈ１）および転写物の３’末端で２個のＵ残基に寄与するＴ５転写終結配列を使用する（ＤＩＣＥＲプロセッシング後、ｓｉＲＮＡの一方の鎖の３’ＵＵ突出部を提供する）。
【０１１９】
別のポリメラーゼ−ＩＩＩプロモーター（Ｕ６）を使用する、別の好適な系は、Ｓｈｉｎら（ＲＮＡ、２００９  Ｍａｙ；１５（５）：８９８〜９１０頁）に記載されている。
【０１２０】
本発明はさらに、１つまたは複数の薬学的に許容される担体と混合した、本発明の二本鎖ｓｉＲＮＡまたは本発明の転写ベクターを含む組成物を提供する。好適な担体は、細胞膜の透過を補助することができる、親油性担体またはベシクルを含む。
【０１２１】
本発明のｓｉＲＮＡ二重鎖およびＤＮＡベクターの投与にとって好適な材料および方法は、当業界で周知であり、ＲＮＡｉ技術の潜在能力を考慮した、改善された方法が開発中である。
【０１２２】
一般に、多くの技術が、核酸を哺乳動物細胞中に導入するために利用可能である。技術の選択は、核酸が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養細胞中に、またはｉｎ  ｖｉｖｏで患者の細胞中に移入されるかどうかに依存すると予想される。ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの核酸の哺乳動物細胞への移入にとって好適な技術としては、リポソーム、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、細胞融合、ＤＥＡＥ、デキストランおよびリン酸カルシウム沈降の使用が挙げられる。ｉｎ  ｖｉｖｏでの遺伝子移入技術としては、ウイルス（典型的には、レトロウイルス）ベクターおよびウイルスコートタンパク質−リポソーム媒介性トランスフェクション（Ｄｚａｕら（２００３）Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １１、２０５〜２１０頁）が挙げられる。
【０１２３】
特に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏとｉｎ  ｖｉｖｏの両方での本発明の核酸の細胞投与のための好適な技術は、以下の論文に開示されている：
【０１２４】
一般的概説：Ｂｏｒｋｈａｒｄｔ，Ａ．２００２．Ｂｌｏｃｋｉｎｇ  ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ  ｉｎ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ＲＮＡ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ−ｎｅｗ  ｈｏｐｅ  ｆｏｒ  ａ  ｈｉｇｈｌｙ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ？Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ．２：１６７〜８頁。Ｈａｎｎｏｎ，Ｇ．Ｊ．２００２．ＲＮＡ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ．Ｎａｔｕｒｅ．４１８：２４４〜５１頁。ＭｃＭａｎｕｓ，Ｍ．Ｔ．およびＰ．Ａ．Ｓｈａｒｐ．２００２．Ｇｅｎｅ  ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ  ｉｎ  ｍａｍｍａｌｓ  ｂｙ  ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡｓ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｇｅｎｅｔ．３：７３７〜４７頁。Ｓｃｈｅｒｒ，Ｍ．、Ｍ．Ａ．Ｍｏｒｇａｎ、およびＭ．Ｅｄｅｒ．２００３ｂ．Ｇｅｎｅ  ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡｓ  ｉｎ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ．Ｃｕｒｒ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．１０：２４５〜５６頁。Ｓｈｕｅｙ，Ｄ．Ｊ．、Ｄ．Ｅ．ＭｃＣａｌｌｕｓ、およびＴ．Ｇｉｏｒｄａｎｏ．２００２．ＲＮＡｉ：ｇｅｎｅ−ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ  ｉｎ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  Ｔｏｄａｙ．７：１０４０〜６頁。
【０１２５】
リポソームを使用する全身送達：Ｌｅｗｉｓ，Ｄ．Ｌ．、Ｊ．Ｅ．Ｈａｇｓｔｒｏｍ，Ａ．Ｇ．Ｌｏｏｍｉｓ，Ｊ．Ａ．Ｗｏｌｆｆ、およびＨ．Ｈｅｒｗｅｉｊｅｒ．２００２．Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｓｉＲＮＡ  ｆｏｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｐｏｓｔｎａｔａｌ  ｍｉｃｅ．Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ．３２：１０７〜８頁。Ｐａｕｌ，Ｃ．Ｐ．、Ｐ．Ｄ．Ｇｏｏｄ、Ｉ．Ｗｉｎｅｒ、およびＤ．Ｒ．Ｅｎｇｅｌｋｅ．２００２．Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：５０５〜８頁。Ｓｏｎｇ，Ｅ．、Ｓ．Ｋ．Ｌｅｅ、Ｊ．Ｗａｎｇ、Ｎ．Ｉｎｃｅ、Ｎ．Ｏｕｙａｎｇ、Ｊ．Ｍｉｎ、Ｊ．Ｃｈｅｎ、Ｐ．Ｓｈａｎｋａｒ、およびＪ．Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ．２００３．ＲＮＡ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｆａｓ  ｐｒｏｔｅｃｔｓ  ｍｉｃｅ  ｆｒｏｍ  ｆｕｌｍｉｎａｎｔ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ．Ｎａｔ  Ｍｅｄ．９：３４７〜５１頁。Ｓｏｒｅｎｓｅｎ，Ｄ．Ｒ．、Ｍ．Ｌｅｉｒｄａｌ、およびＭ．Ｓｉｏｕｄ．２００３．Ｇｅｎｅ  ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ  ｂｙ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｓｉＲＮＡｓ  ｉｎ  ａｄｕｌｔ  ｍｉｃｅ．Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．３２７：７６１〜６頁。
【０１２６】
ウイルス媒介性移入：Ａｂｂａｓ−Ｔｅｒｋｉ，Ｔ．、Ｗ．Ｂｌａｎｃｏ−Ｂｏｓｅ、Ｎ．Ｄｅｇｌｏｎ、Ｗ．Ｐｒａｌｏｎｇ、およびＰ．Ａｅｂｉｓｃｈｅｒ．２００２．Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ＲＮＡ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ．Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１３：２１９７〜２０１頁。Ｂａｒｔｏｎ，Ｇ．Ｍ．、およびＲ．Ｍｅｄｚｈｉｔｏｖ．２００２．Ｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡ  ｉｎｔｏ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｃｅｌｌｓ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．９９：１４９４３〜５頁。Ｄｅｖｒｏｅ，Ｅ．、およびＰ．Ａ．Ｓｉｌｖｅｒ．２００２．Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ−ｄｅｌｉｖｅｒｅｄ  ｓｉＲＮＡ．ＢＭＣ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２：１５頁。Ｌｏｒｉ，Ｆ．、Ｐ．Ｇｕａｌｌｉｎｉ、Ｌ．Ｇａｌｌｕｚｚｉ、およびＪ．Ｌｉｓｚｉｅｗｉｃｚ．２００２．Ｇｅｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  ＨＩＶ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ａｍ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ．２：２４５〜５２頁。Ｍａｔｔａ，Ｈ．、Ｂ．Ｈｏｚａｙｅｖ，Ｒ．Ｔｏｍａｒ、Ｐ．Ｃｈｕｇｈ、およびＰ．Ｍ．Ｃｈａｕｄｈａｒｙ．２００３．Ｕｓｅ  ｏｆ  ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｒｇｅｒｉｎｇ  ＲＮＡ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ．２：２０６〜１０頁。Ｑｉｎ，Ｘ．Ｆ．、Ｄ．Ｓ．Ａｎ、Ｉ．Ｓ．Ｃｈｅｎ、およびＤ．Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ．２００３．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ  ＨＩＶ−１  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡ  ａｇａｉｎｓｔ  ＣＣＲ５．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．１００：１８３〜８頁。Ｓｃｈｅｒｒ，Ｍ．、Ｋ．Ｂａｔｔｍｅｒ、Ａ．Ｇａｎｓｅｒ、およびＭ．Ｅｄｅｒ．２００３ａ．Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｂｙ  ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡ．Ｃｅｌｌ  Ｃｙｃｌｅ．２：２５１〜７頁。Ｓｈｅｎ，Ｃ．、Ａ．Ｋ．Ｂｕｃｋ、Ｘ．Ｌｉｕ、Ｍ．Ｗｉｎｋｌｅｒ、およびＳ．Ｎ．Ｒｅｓｋｅ．２００３．Ｇｅｎｅ  ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ  ｂｙ  ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ−ｄｅｌｉｖｅｒｅｄ  ｓｉＲＮＡ．ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．５３９：１１１〜４頁。
【０１２７】
ペプチド送達：Ｍｏｒｒｉｓ，Ｍ．Ｃ．、Ｌ．Ｃｈａｌｏｉｎ、Ｆ．Ｈｅｉｔｚ、およびＧ．Ｄｉｖｉｔａ．２０００．Ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｎｇ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｕｓｅ  ｆｏｒ  ｇｅｎｅ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ．Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１１：４６１〜６頁。Ｓｉｍｅｏｎｉ，Ｆ．、Ｍ．Ｃ．Ｍｏｒｒｉｓ、Ｆ．Ｈｅｉｔｚ、およびＧ．Ｄｉｖｉｔａ．２００３．Ｉｎｓｉｇｈｔ  ｉｎｔｏ  ｔｈｅ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ−ｂａｓｅｄ  ｇｅｎｅ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍ  ＭＰＧ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｓｉＲＮＡ  ｉｎｔｏ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３１：２７１７〜２４頁。ｓｉＲＮＡの標的細胞への送達にとって好適であり得る他の技術は、米国特許第６，６４９，１９２Ｂ号および第５，８４３，５０９Ｂ号に記載されたものなどのナノ粒子またはナノカプセルに基づく。
【０１２８】
血管新生および血管新生因子
血管新生は、新しい血管が元々存在する血管から形成する生理学的プロセスである。それは、増殖、創傷治癒、および悪性腫瘍における不可欠なプロセスである。血管新生の上方調節は、眼の疾患、特に、網膜の新生血管疾患における共通の特徴である。血管系の発達および維持は、全ての実質組織の正常な機能にとって重要であり、その欠陥は、疾患および臓器不全、特に、本明細書に記載の眼疾患をもたらす。多くの新生血管性網膜疾患は、線維症をもたらす。
【０１２９】
血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）ファミリーのメンバー、アンギオポエチン、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、血小板由来成長因子、腫瘍壊死因子−α、インターロイキンおよび線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）ファミリーのメンバーを含む、血管新生のいくつかの誘導因子が同定されている。血管新生の細胞および分子メカニズムは、Ａｄａｍｓ  ＆  Ａｌｉｔａｌｏ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｖｏｌｕｍｅ  ８、４６４〜４７８頁（２００７）、およびＯｔｒｏｃｋら、Ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ  ｔｈｅ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ：Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍｏｓｔ  ｉｍｐｏｒｔａｎｔ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ、Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｌｌｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，ａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ、Ｖｏｌｕｍｅ  ３９、Ｉｓｓｕｅ  ２、２００７、２１２〜２２０頁に記載されており、それらはその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１３０】
本明細書で使用される場合、「血管新生因子」とは、血管新生を誘導／強化／促進することができる任意の因子（例えば、ペプチド／ポリペプチド、糖タンパク質、リポタンパク質、グリカン、糖脂質、脂質、核酸またはその断片）を指す。血管新生を誘導／強化／促進することができる因子を、例えば、血管新生のｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏでのアッセイにおける分析によって同定することができる。血管新生の分析のための好適なアッセイとしては、内皮細胞遊走アッセイ、内皮細胞増殖アッセイ、および内皮管形成アッセイが挙げられる。血管新生アッセイは、Ａｄａｉｒ  ＴＨ、Ｍｏｎｔａｎｉ  ＪＰ、Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｓａｎ  Ｒａｆａｅｌ（ＣＡ）：Ｍｏｒｇａｎ  ＆  Ｃｌａｙｐｏｏｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ；２０１０、Ｃｈａｐｔｅｒ  ２、Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  Ａｓｓａｙｓに詳細に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１３１】
一部の実施形態では、血管新生因子は、血管新生を誘導／促進することができるポリペプチドまたはポリペプチド複合体である。血管新生因子は、可溶型または膜結合型であってもよく、ポリペプチドもしくはポリペプチド複合体リガンド、またはそのようなリガンドのためのポリペプチドもしくはポリペプチド複合体受容体であってもよい。血管新生因子は、任意の種に由来するものであってよく、任意の種に由来する血管新生因子のアイソフォーム、断片、バリアントまたはホモログを含む。好ましい実施形態では、種はヒト（ホモ・サピエンス）である。血管新生因子のアイソフォーム、断片、バリアントまたはホモログは、必要に応じて、所与の種、例えば、ヒトに由来する未成熟または成熟血管新生因子のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有することを特徴としてもよい。血管新生因子のアイソフォーム、断片、バリアントまたはホモログは、必要に応じて、血管新生因子の相互作用パートナー（例えば、血管新生因子の受容体、もしくは血管新生因子のリガンド）に結合する能力および／または血管新生を誘導／促進する能力を特徴としてもよい。例えば、血管新生因子は、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ受容体、ＦＧＦ、ＦＧＦ受容体、ＰＤＧＦ、もしくはＰＤＧＦ受容体、またはＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ受容体、ＦＧＦ、ＦＧＦ受容体、ＰＤＧＦ、もしくはＰＤＧＦ受容体の断片、バリアント、アイソフォームもしくはホモログであってもよい。
【０１３２】
血管新生因子のポリペプチドの断片は、任意の長さ（アミノ酸の数で）のものであってよいが、必要に応じて、成熟血管新生因子の長さの少なくとも２５％であってもよく、成熟血管新生因子の長さの５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のうちの１つの最大の長さを有してもよい。血管新生因子は、ヘテロまたはホモ二量体などの、１つまたは複数のサブユニットを含む複合体であってもよい。
【０１３３】
本明細書で使用される場合、「血管新生因子の相互作用パートナー」とは、血管新生因子と相互作用する（例えば、それに結合する）ことができる任意の因子（例えば、ポリペプチドまたはポリペプチド複合体）を指す。相互作用は、非共有的会合であってもよい。
【０１３４】
血管新生因子と、血管新生因子の相互作用パートナーとは、好ましくは、会合して、生物学的に機能的な複合体、例えば、シグナル伝達（例えば、血管新生促進性シグナル伝達）を開始／促進することができる受容体：リガンド複合体を形成する。血管新生因子の相互作用パートナーは、例えば、血管新生因子の受容体、または血管新生因子のリガンドであってもよい。一部の実施形態では、血管新生因子の相互作用パートナーと、血管新生因子との相互作用は、血管新生促進性シグナル伝達および／または血管新生を誘導／促進する。例えば、ＶＥＧＦのＶＥＧＦ受容体への結合は、ＶＥＧＦ受容体を発現する細胞による細胞内シグナル伝達を誘発し、血管新生プロセスを誘導／促進することができる。
【０１３５】
例えば、血管新生因子の相互作用パートナーは、血管新生因子受容体であってもよい。一部の実施形態では、血管新生因子受容体は、ＶＥＧＦ、ＦＧＦ、ＰＤＧＦ、またはＶＥＧＦ、ＦＧＦ、もしくはＰＤＧＦの断片、バリアント、アイソフォームもしくはホモログに結合することができるポリペプチドまたはポリペプチド複合体であってもよい。血管新生因子受容体は、例えば、ＶＥＧＦ受容体、ＦＧＦ受容体、およびＰＤＧＦ受容体を含む。血管新生因子受容体は、本開示による血管新生因子であることが理解されると予想される。例えば、ＶＥＧＦＲは、血管新生因子（すなわち、血管新生を誘導／強化／促進することができる因子）と、血管新生因子受容体（すなわち、ＶＥＧＦの受容体）との両方である。
【０１３６】
同様に、血管新生因子の相互作用パートナーは、血管新生因子受容体のリガンドであってもよい。一部の実施形態では、血管新生因子受容体のリガンドは、ＶＥＧＦ受容体、ＦＧＦ受容体、ＰＤＧＦ受容体、またはＶＥＧＦ受容体、ＦＧＦ受容体、もしくはＰＤＧＦ受容体の断片、バリアント、アイソフォームもしくはホモログに結合することができるポリペプチドまたはポリペプチド複合体であってもよい。血管新生因子リガンドとしては、例えば、ＶＥＧＦ、ＦＧＦ、およびＰＤＧＦが挙げられる。血管新生因子リガンドは、本開示による血管新生因子であることが理解されると予想される。例えば、ＶＥＧＦは、血管新生因子（すなわち、血管新生を誘導／強化／促進することができる因子）と、血管新生因子受容体のリガンド（すなわち、ＶＥＧＦ受容体のリガンド）との両方である。
【０１３７】
一部の実施形態では、本明細書に提供される任意の方法または組成物を、線維症の状況またはその他の状況において、血管新生を処置／防止するために使用することができる。
【０１３８】
血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）
本明細書における一部の実施形態では、血管新生因子は、ＶＥＧＦである。ＶＥＧＦは、胎盤増殖因子（ＰＩＧＦ、ＡＡＤ３０１７９．１  ＧＩ：４８０９３３４）、ＶＥＧＦ−Ａ（ＡＡＰ８６６４６．１  ＧＩ：３２６９９９９０）、ＶＥＧＦ−Ｂ（ＡＡＣ５０７２１．１  ＧＩ：１４８８２５９）、ＶＥＧＦ−Ｃ（ＣＡＡ６３９０７．１  ＧＩ：１１８２００５）、ＶＥＧＦ−Ｄ（ＢＡＡ２４２６４．１  ＧＩ：２７６６１９０）、およびｏｒｆウイルスによりコードされるＶＥＧＦ−Ｅ（ＡＢＡ００６５０．１  ＧＩ：７４２３０８４５）を含む遺伝子ファミリーによってコードされる増殖因子である。一部の実施形態では、ＶＥＧＦは、ＶＥＧＦ−Ａである。エクソンスプライシングの差異は、それぞれ、シグナル配列の切断後に１２１、１６５、１８９、および２０６アミノ酸を有する、４つの主なＶＥＧＦ−Ａアイソフォーム： ＶＥＧＦ１２１、ＶＥＧＦ１６５、ＶＥＧＦ１８９、およびＶＥＧＦ２０６の生成をもたらす［６５］。ＶＥＧＦ１６５は、ドミナントアイソフォームであると考えられる。
【０１３９】
ＶＥＧＦは、動脈、静脈、およびリンパ系に由来する血管内皮細胞の増殖、ならびに様々なｉｎ  ｖｉｖｏモデルにおける血管新生の誘導（すなわち、薄い壁の内皮の内側構造の形成）、微小血管透過性の急速な上昇の誘導を刺激する［６６〜６８］。
【０１４０】
本明細書では、「ＶＥＧＦ」は、任意の種に由来するＶＥＧＦ（例えば、ＶＥＧＦ−Ａ、Ｂ、Ｃ、ＤまたはＥ）を指し、任意の種に由来するＶＥＧＦのアイソフォーム、断片、バリアントまたはホモログを含む。好ましい実施形態では、種はヒト（ホモ・サピエンス）である。ＶＥＧＦの断片は、任意の長さ（アミノ酸の数で）のものであってよいが、必要に応じて、成熟ＶＥＧＦの長さの少なくとも２５％であってもよく、成熟ＶＥＧＦの長さの５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のうちの１つの最大の長さを有してもよい。ＶＥＧＦの断片は、１０アミノ酸の最小の長さ、および１５、２０、２５、３０、４０、５０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０または２２５アミノ酸のうちの１つの最大の長さを有してもよい。
【０１４１】
ＶＥＧＦは、３つの受容体−ＶＥＧＦＲ１（ＡＡＨ３９００７．１  ＧＩ：２４６６０３７２）、ＶＥＧＦＲ２（Ｐ３５９６８．２  ＧＩ：９０８７２１８）およびＶＥＧＦＲ３（ＡＡＡ８５２１５．１  ＧＩ：１１５０９９１）への結合によってその生物学的効果を発揮する。それぞれの受容体は、ＶＥＧＦのための細胞外結合ドメイン、膜貫通配列および細胞内チロシンキナーゼ部分を有する。細胞外受容体ドメインに結合するＶＥＧＦは、受容体を二量体化させ、細胞内チロシンキナーゼ部分のリン酸化をもたらす。
【０１４２】
本明細書では、「ＶＥＧＦの受容体」または「ＶＥＧＦ受容体」は、ＶＥＧＦに結合することができるポリペプチドまたはポリペプチド複合体を指す。一部の実施形態では、ＶＥＧＦ受容体は、ＶＥＧＦに結合し、その受容体を発現する細胞中でシグナル伝達を誘導することができる。一部の実施形態では、「ＶＥＧＦの受容体」は、ＶＥＧＦＲを指す。本明細書では、別途記述しない限り、「ＶＥＧＦＲ」は、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２および／またはＶＥＧＦＲ３を指す。
【０１４３】
ＶＥＧＦＲは、必要に応じて、所与の種、例えば、ヒトに由来するＶＥＧＦＲのアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のうちの１つのアミノ酸配列同一性を有することを特徴としてもよい。ＶＥＧＦＲのアイソフォーム、断片、バリアントまたはホモログは、必要に応じて、ＶＥＧＦ（好ましくは、同じ種に由来する）に結合し、ＶＥＧＦＲを発現する細胞中でシグナル伝達を刺激する能力を特徴としてもよい。ＶＥＧＦ受容体の断片は、任意の長さ（アミノ酸の数で）のものであってよいが、必要に応じて、成熟ＶＥＧＦＲの長さの少なくとも２５％であってもよく、成熟ＶＥＧＦＲの長さの５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のうちの１つの最大の長さを有してもよい。ＶＥＧＦ受容体断片の断片は、１０アミノ酸の最小の長さ、および２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、８１０、８２０、８３０、８４０、８５０、８６０、８７０、８８０、８９０、９００、９１０、９２０、９３０、９４０、９５０、９６０、９７０、９８０、９９０、１０００、１０１０、１０２０、１０３０、１０４０、１０５０、１０６０、１０７０、１０８０、１０９０、１１００、１１１０、１１２０、１１３０、１１４０、１１５０、１１６０、１１７０、１１８０、１１９０、１２００、１２１０、１２２０、１２３０、１２４０、１２５０、１２６０、１２７０、１２８０、１２９０、１３００、１３１０、１３２０、１３３０、１３４０、１３５０、１３６０、１３７０、１３８０、１３９０、１４００、１４１０、１４２０、１４３０、１４４０、１４５０、１４６０、１４７０、１４８０、１４９０、１５００、１５１０、１５２０、１５３０、１５４０、１５５０、１５６０、１５７０、１５８０、１５９０、１６００、１６１０、１６２０、１６３０、１６４０、１６５０、１６６０、１６７０、１６８０、１６９０、１７００、１７１０、１７２０、１７３０、１７４０、１７５０、１７６０、１７７０、１７８０、１７９０、または１７９５アミノ酸のうちの１つの最大の長さを有してもよい。
【０１４４】
線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）
酸性および塩基性の線維芽細胞増殖因子、それぞれ、ａＦＧＦおよびｂＦＧＦは、血管新生において重要な役割を果たすと考えられるヘパリン結合タンパク質マイトジェンである。２２種の異なるＦＧＦおよび４種の異なるチロシンキナーゼ受容体（ＦＧＦＲ）が存在する。ＦＧＦおよびその受容体は、Ｐｒｅｓｔａら、Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ／ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｙｓｔｅｍ  ｉｎ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖ．、１６（２００５）、１５９〜１７８頁に概説されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１４５】
本明細書で使用される場合、「ＦＧＦ」とは、任意の種に由来するａＦＧＦまたはｂＦＧＦを指し、そのアイソフォーム、断片、バリアントまたはホモログを含む。例えば、ＦＧＦは、ＦＧＦ１（ＡＡＨ３２６９７．１  ＧＩ：２１５９５６８７）、ＦＧＦ２（Ｐ０９０３８．３  ＧＩ：２６１２６００９５）、ＦＧＦ３（Ｐ１１４８７．１  ＧＩ：１２２７４８）、ＦＧＦ４（ＮＰ＿００１９９８．１  ＧＩ：４５０３７０１）、ＦＧＦ５（Ｐ１２０３４．４  ＧＩ：８５７００４１７）、ＦＧＦ６（Ｐ１０７６７．４  ＧＩ：１１６９６７６）、ＦＧＦ７（Ｐ２１７８１．１  ＧＩ：１２２７５６）、ＦＧＦ８（ＮＰ＿００１１９３３１８．１  ＧＩ：３２９７５５３０３）、ＦＧＦ９（ＮＰ＿００２００１．１  ＧＩ：４５０３７０７）、ＦＧＦ１０（ＣＡＧ４６４６６．１  ＧＩ：４９４５６２９１）、ＦＧＦ１１（Ｑ９２９１４．１  ＧＩ：２４９４４５７）、ＦＧＦ１２（Ｐ６１３２８．１  ＧＩ：４７１１７６８３）、ＦＧＦ１３（Ｑ９２９１３．１  ＧＩ：２４９４４６１）、ＦＧＦ１４（ＮＰ＿００１３０８８６７．１  ＧＩ：１０１３１６５７４３）、ＦＧＦ１５（ＡＡＯ１３８１１．１  ＧＩ：２７４４８２２８）、ＦＧＦ１６（ＮＰ＿００３８５９．１  ＧＩ：４５０３６９１）、ＦＧＦ１７（ＡＡＱ８９２２８．１  ＧＩ：３７１８２８５６）、ＦＧＦ１８（ＡＡＱ８９９５４．１  ＧＩ：３７２２２２０９）、ＦＧＦ１９（ＮＰ＿００５１０８．１  ＧＩ：４８２６７２６）、ＦＧＦ２０（ＡＡＨ９８３３９．１  ＧＩ：６８２２６６９９）、ＦＧＦ２１（ＡＡＱ８９４４４．１  ＧＩ：３７１８３２８９）、もしくはＦＧＦ２２（Ｑ９ＨＣＴ０．１  ＧＩ：１３６２６６８９）、またはそのアイソフォーム、断片、バリアントもしくはホモログであってもよい。「ＦＧＦ受容体」とは、ＦＧＦ、およびそのアイソフォーム、断片、バリアントまたはホモログに結合することができるポリペプチドまたはポリペプチド複合体を指す。ＦＧＦ受容体は、ＦＧＦＲ１（ＡＡＨ１５０３５．１  ＧＩ：２１９５５３４０）、ＦＧＦＲ２（ＡＡＡ６１１８８．１  ＧＩ：３３９７１１０）、ＦＧＦＲ３（Ｐ２２６０７．１  ＧＩ：１２００５０）、およびＦＧＦＲ４（ＡＡＨ１１８４７．１  ＧＩ：１５０８０１４８）、ならびにそのアイソフォーム、断片、バリアントまたはホモログを含む。一部の実施形態では、ＦＧＦ受容体は、ＦＧＦに結合し、ＦＧＦ受容体を発現する細胞中でシグナル伝達を誘導することができる。
【０１４６】
血小板由来成長因子
血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）は、最初は血小板から精製され、次いで、線維芽細胞、星状細胞、ケラチノサイト、上皮細胞および他の細胞型において同定された。ＰＤＧＦは、Ａ鎖（Ｐ０４０８５．１  ＧＩ：１２９７１９）およびＢ鎖（ＣＡＧ４６６０６．１  ＧＩ：４９４５６５７１）から構成されるヘテロ二量体（ＰＤＧＦ−ＡＢ）またはホモ二量体（ＰＤＧＦ−ＡＡもしくは−ＢＢ）として存在する。それぞれ、異なる遺伝子によってコードされる、２つの形態のＰＤＧＦ−Ｒ、アルファ（Ｐ１６２３４．１  ＧＩ：１２９８９２）およびベータ（Ｐ０９６１９．１  ＧＩ：１２９８９０）が存在する。どの増殖因子が結合するかに応じて、ＰＤＧＦ−Ｒは、ホモまたはヘテロ二量体化する。ＰＤＧＦおよびその受容体は、Ｒｏｓｓら、Ｔｈｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｐｌａｔｅｌｅｔ−Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ、Ｃｅｌｌ、Ｖｏｌ．４６、１５５〜１６９頁、Ｊｕｌｙ  １８、１９８６に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１４７】
本明細書で使用される場合、「ＰＤＧＦ」とは、任意の種に由来するＰＤＧＦ−Ａ、ＰＤＧＦ−Ｂ、ＰＤＧＦ−ＡＢ、ＰＤＧＦ−ＡＡ、ＰＤＧＦ−ＢＡ、またはＰＤＧＦ−ＢＢを指し、そのアイソフォーム、断片、バリアントまたはホモログを含む。「ＰＤＧＦ受容体」とは、ＰＤＧＦ、またはそのアイソフォーム、断片、バリアントもしくはホモログに結合することができるポリペプチドまたはポリペプチド複合体を指す。一部の実施形態では、ＰＤＧＦ受容体は、ＰＤＧＦ−Ｒアルファ、ＰＤＧＦ−Ｒベータ、ＰＤＧＦ−Ｒアルファ−アルファホモ二量体、ＰＤＧＦ−Ｒベータ−ベータホモ二量体、またはＰＤＧＦ−Ｒアルファ−ベータヘテロ二量体である。一部の実施形態では、ＰＤＧＦ受容体は、ＰＤＧＦに結合し、ＰＤＧＦ受容体を発現する細胞中でシグナル伝達を誘導することができる。
【０１４８】
他の血管新生因子としては、アンギオゲニン（ＮＰ＿００１０９１０４６．１  ＧＩ：１４８２７７０４６）、アンギオポエチン（ＡＡＤ１９６０８．１  ＧＩ：４３７８５９８）、インテグリン（例えば、ＮＰ＿００１００４４３９．１  ＧＩ：５２４８５８５３、ＮＰ＿００２１９４．２  ＧＩ：１１６２９５２５８、ＮＰ＿００２１９５．１  ＧＩ：４５０４７４７、ＮＰ＿０００８７６．３  ＧＩ：６７１９１０２７、ＮＰ＿００２１９６．４  ＧＩ：１０１７０２９５６７、ＮＰ＿００１３０３２３５．１  ＧＩ：９３７８３４１８６、ＮＰ＿００１１３８４６８．１  ＧＩ：２２２４１８６１３、ＮＰ＿００３６２９．２  ＧＩ：６１２４０７８５１、ＮＰ＿００２１９８．２  ＧＩ：５２４８５９４１、ＮＰ＿００１２７３３０４．１  ＧＩ：５５６５０３４５４、ＮＰ＿００１００４４３９．１  ＧＩ：５２４８５８５３、ＮＰ＿００１３０５１１４．１  ＧＩ：９７０９４９４４０、ＮＰ＿００１２７３３０４．１  ＧＩ：５５６５０３４５４、ＮＰ＿００２２００．２  ＧＩ：１６７４６６２１５、ＮＰ＿００１１３９２８０．１  ＧＩ：２２４８３１２３９、ＮＰ＿００２２０１．１  ＧＩ：４５０４７６３、ＥＡＷ５１５９７．１  ＧＩ：１１９５７１９８２、ＮＰ＿００１２７３３０４．１  ＧＩ：５５６５０３４５４、ＮＰ＿３９１９８８．１  ＧＩ：１９７４３８１９、ＮＰ＿００１１２０９６３．２  ＧＩ：７３５３６７８０３、ＮＰ＿０００２０３．２  ＧＩ：４７０７８２９２、ＮＰ＿０００２０４．３  ＧＩ：５４６０７０３５、ＮＰ＿００１３４１６９４．１  ＧＩ：１２６９２０８５１２、ＮＰ＿００１２６９２８２．１  ＧＩ：５３８９１６６６４、ＮＰ＿０００８８０．１  ＧＩ：４５０４７７７、ＮＰ＿００２２０５．１  ＧＩ：４５０４７７９から選択される）、およびＴＮＦα（ＡＱＹ７７１５０．１  ＧＩ：１１５９６１１４４９）が挙げられる。本発明における使用にとって好適なＴＮＦαの阻害剤としては、抗体であるインフリキシマブが挙げられる。
【０１４９】
線維症
本明細書で使用される場合、「線維症」とは、細胞外マトリックス成分、例えば、コラーゲンの過剰な蓄積の結果としての過剰な線維性結合組織の形成を指す。
【０１５０】
線維性結合組織は、高いコラーゲン含量を有する細胞外マトリックス（ＥＣＭ）を有することを特徴とする。コラーゲンを、不規則に配置されていてもよい、または整列されていてもよい、鎖または線維中で提供することができる。線維性結合組織のＥＣＭはまた、グリコサミノグリカンを含んでもよい。
【０１５１】
本明細書で使用される場合、「過剰の線維性結合組織」とは、所与の位置（例えば、所与の組織もしくは臓器、または所与の組織もしくは臓器の一部）での、線維症の非存在下、例えば、正常な非病状下のその位置に存在する結合組織の量よりも多い、結合組織の量を指す。本明細書で使用される場合、「細胞外マトリックス成分の過剰な蓄積」とは、線維症の非存在下、例えば、正常な非病状下での蓄積のレベルよりも高い、１つまたは複数の細胞外マトリックス成分の蓄積のレベルを指す。
【０１５２】
線維症の細胞および分子メカニズムは、Ｗｙｎｎ，Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．（２００８）２１４（２）：１９９〜２１０頁、ならびにＷｙｎｎおよびＲａｍａｌｉｎｇａｍ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２０１２）１８：１０２８〜１０４０頁に記載されており、それらはその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１５３】
線維症の重要な細胞エフェクターは、コラーゲンに富む細胞外マトリックスを産生する、筋線維芽細胞である。
【０１５４】
組織傷害に応答して、損傷した細胞および白血球は、ＴＧＦβ、ＩＬ−１３およびＰＤＧＦなどの線維症促進因子を産生し、線維芽細胞を、αＳＭＡを発現する筋線維芽細胞に活性化し、筋線維芽細胞を傷害部位に動員する。筋線維芽細胞は、大量の細胞外マトリックスを産生し、創傷の拘縮および閉鎖を助ける際の重要なメディエータである。しかしながら、持続感染の状態下で、または慢性炎症中に、筋線維芽細胞の過剰活性化および動員、かくして、細胞外マトリックス成分の過剰産生が存在し、過剰の線維性結合組織の形成をもたらし得る。
【０１５５】
一部の実施形態では、線維症は、ＴＧＦβ１などの線維症促進因子の産生をもたらす病状、例えば、状態、感染または疾患状態によって誘発され得る。一部の実施形態では、線維症は、物理的傷害／刺激、化学的傷害／刺激または環境的傷害／刺激によって引き起こされ得る。物理的傷害／刺激は、外科手術中に、例えば、医原性の原因で起こり得る。化学的傷害／刺激は、例えば、ブレオマイシン、シクロホスファミド、アミオダロン、プロカインアミド、ペニシラミン、金およびニトロフラントインなどの薬物の慢性投与後の薬物誘導性線維症を含んでもよい（Ｄａｂａら、Ｓａｕｄｉ  Ｍｅｄ  Ｊ  ２００４  Ｊｕｎ；２５（６）：７００〜６頁）。環境的傷害／刺激は、アスベスト繊維またはシリカへの曝露を含んでもよい。
【０１５６】
線維症は、身体の多くの組織において生じ得る。例えば、線維症は、肝臓（例えば、肝硬変）、肺、腎臓、心臓、血管、眼、皮膚、膵臓、腸、脳、および骨髄において生じ得る。線維症はまた、複数の臓器に同時に生じることもある。
【０１５７】
一部の実施形態では、線維症は、例えば、肝臓、小腸、大腸、または膵臓の消化管系の臓器に影響を与えてもよい。一部の実施形態では、線維症は、呼吸器系の臓器、例えば、肺に影響を与えてもよい。一部の実施形態では、線維症は、心血管系の臓器、例えば、心臓または血管に影響を与えてもよい。一部の実施形態では、線維症は、皮膚に影響を与えてもよい。一部の実施形態では、線維症は、神経系の臓器、例えば、脳に影響を与えてもよい。一部の実施形態では、線維症は、泌尿器系の臓器、例えば、腎臓に影響を与えてもよい。一部の実施形態では、線維症は、骨格筋系の臓器、例えば、筋肉組織に影響を与えてもよい。
【０１５８】
一部の実施形態では、線維症は、心臓もしくは心筋の線維症、肝線維症、または腎線維症であってもよい。一部の実施形態では、心臓または心筋の線維症は、心臓の筋肉組織もしくは電気特性の機能障害、または心臓の弁の壁の肥厚と関連する。一部の実施形態では、線維症は、心臓の心房および／または心室のものである。心房または心室の線維症の処置または防止は、心房細動、心室細動、または心筋梗塞のリスクまたは開始を低減するのに役立ち得る。一部の実施形態では、肝線維症は、慢性肝臓病または肝硬変と関連する。一部の実施形態では、腎線維症は、慢性腎臓病と関連する。
【０１５９】
一部の実施形態では、線維症は、血管新生と関連してもよい。一部の実施形態では、線維症を処置または防止する方法、そのような処置／防止のための対象の適合性を決定する方法および本明細書に記載の線維症を診断／予後診断する方法はまた、血管新生の処置／防止／診断／予後診断にも適用可能であり、その逆も可能である。
【０１６０】
本発明による線維症を特徴とする疾患／状態としては、限定されるものではないが、グレーブス眼症、網膜上線維症、網膜線維症、特発性黄斑前線維症、網膜下線維症（例えば、網膜剥離もしくは黄斑変性（例えば、滲出型加齢黄斑変性（ＡＭＤ）と関連する）、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、糖尿病性網膜症、緑内障、地図状萎縮（萎縮型加齢黄斑変性（ＡＭＤ））、角膜線維症、術後線維症（例えば、白内障手術後の後嚢の、もしくは緑内障の線維柱帯切除術後のブレブの）、結膜線維症、または結膜下線維症などの眼の疾患；肺線維症、嚢胞性線維症、特発性肺線維症、進行性塊状線維症、強皮症、閉塞性細気管支炎、Ｈｅｒｍａｎｓｋｙ−Ｐｕｄｌａｋ症候群、石綿症、珪肺症、慢性肺高血圧、ＡＩＤＳ関連肺高血圧、サルコイドーシス、肺疾患における腫瘍間質、および喘息などの呼吸器状態；慢性肝臓病、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、住血吸虫性肝疾患、肝硬変；肥大型心筋症、拡張型心筋症（ＤＣＭ）、心房の線維症、心房細動、心室の線維症、心室細動、心筋線維症、ブルガダ症候群、心筋炎、心内膜心筋線維症、心筋梗塞、線維性血管疾患、高血圧性心疾患、不整脈源性右室心筋症（ＡＲＶＣ）、尿細管間質および糸球体線維症、アテローム性動脈硬化症、静脈瘤、脳梗塞などの心血管状態；グリオーシスおよびアルツハイマー病などの神経学的状態；デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）またはベッカー型筋ジストロフィー（ＢＭＤ）などの筋ジストロフィー；クローン病、顕微鏡的大腸炎および原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）などの消化管状態；強皮症、腎性全身性線維症および真皮ケロイドなどの皮膚状態；関節線維症；デュピュイトラン拘縮；縦隔線維症；後腹膜線維化症；骨髄線維症；ペイロニー病；癒着性関節包炎；腎臓病（例えば、腎線維症、腎炎症候群、アルポート症候群、ＨＩＶ関連腎症、多発性嚢胞腎、ファブリー病、糖尿病性腎症、慢性糸球体腎炎、全身性エリテマトーデスを伴う腎炎）；全身性進行性硬化症（ＰＳＳ）；慢性移植片対宿主疾患；関節炎；線維性前新生物および線維性新生物疾患；ならびに化学的または環境刺激（例えば、がん化学療法、殺虫剤、放射線／がん放射線療法）により誘導される線維症が挙げられる。
【０１６１】
上に列挙された多くの疾患／状態は相互に関連すると理解されると予想される。例えば、心室の線維症は、心筋梗塞後に生じることがあり、ＤＣＭ、ＨＣＭおよび心筋炎と関連する。
【０１６２】
眼の線維症
一部の実施形態では、本発明は、眼における線維症を処置または防止する方法、方法における使用の組合せ、または方法における組成物の使用に関する。眼の線維症は、Ｆｒｉｅｄｌａｎｄｅｒ、Ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｄｉｓｅａｓｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｙｅ、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．２００７  Ｍａｒ  １；１１７（３）：５７６〜５８６頁に詳細に記載されており、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１６３】
眼の線維症は、炎症、虚血、および変性疾患に対する応答を含む、機械的創傷または様々な代謝機能障害の結果生じ得る。眼の線維症は、前眼部における、または後眼部（すなわち、網膜）内の創傷治癒または疾患事象を指してもよい。
【０１６４】
眼の線維症は、網膜、網膜上または網膜下線維症であってもよい。それは、虚血性網膜症の結果であってもよいか、またはそれと関連してもよい。眼の線維症は、網膜表面上での虚血および／または新血管形成と関連する線維症であってもよい。眼の線維症は、網膜下新血管形成、例えば、脈絡毛細管枝を起源とする新血管形成と関連してもよい。線維症は、例えば、網膜の線維血管瘢痕化と関連してもよい。眼の線維症は、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）と関連してもよい。
【０１６５】
眼の線維症はまた、前眼部において生じてもよい。例えば、線維症は、角膜、または小柱網（眼内液が眼から離れる管）に影響してもよい。線維症は、角膜の表面上での線維血管増殖、例えば、瞼裂斑および翼状片を特徴としてもよい。
【０１６６】
眼の線維症は、炎症または虚血障害などの疾患／障害と関連してもよい。そのような疾患／障害としては、グレーブス眼症、網膜上線維症、網膜線維症、特発性黄斑前線維症、網膜下線維症（例えば、網膜剥離もしくは黄斑変性（例えば、滲出型加齢黄斑変性（ＡＭＤ）と関連する）、糖尿病性網膜症、緑内障、地図状萎縮（萎縮型加齢黄斑変性（ＡＭＤ））、角膜線維症、術後線維症（例えば、白内障手術後の後嚢の、もしくは緑内障の線維柱帯切除術後のブレブの）、結膜線維症、または結膜下線維症が挙げられる。
【０１６７】
本発明による線維症の処置、防止または軽減は、ＩＬ−１１の上方調節、例えば、線維症が生じる、もしくは生じ得る細胞もしくは組織中でのＩＬ−１１の上方調節、または細胞外ＩＬ−１１もしくはＩＬ−１１Ｒの上方調節と関連する線維症のものであってもよい。
【０１６８】
線維症の処置または軽減は、線維症の進行を防止する、例えば、線維症の状態の悪化を防止する、または線維症の発達の速度を遅らせるのに有効であってもよい。一部の実施形態では、処置または軽減は、線維症の改善、例えば、蓄積したコラーゲン線維の量の低減をもたらしてもよい。
【０１６９】
線維症の防止とは、線維症の状態の悪化の防止または線維症の発達の防止、例えば、初期状態の線維症の、後期の慢性状態への発達の防止を指してもよい。
【０１７０】
ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニスト
本発明の態様は、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の拮抗作用（すなわち、阻害）を含む。
【０１７１】
ここで、「阻害」とは、対照状態と比較した低減、減少または低下を指す。例えば、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストによるＩＬ−１１の作用の阻害とは、薬剤の非存在下での、および／または適切な対照薬剤の存在下での、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の程度の低減、減少または低下を指す。
【０１７２】
阻害は、本明細書では、中和または拮抗作用を指してもよい。ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニスト（例えば、ＩＬ−１１またはＩＬ−１１含有複合体によって媒介される活性のアンタゴニスト）は、関連する機能またはプロセスに関して「中和」または「アンタゴニスト」剤であると言ってもよい。例えば、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達を阻害することができる薬剤は、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達を中和することができる薬剤と呼んでもよく、またはＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストと呼んでもよい。
【０１７３】
ＩＬ−１１シグナル伝達経路は、ＩＬ−１１シグナル伝達の阻害のための複数の経路を提供する。ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストは、例えば、ＩＬ−１１の受容体を介するシグナル伝達に関与する、またはそれにとって必要な１つまたは複数の因子の作用を阻害することによって、ＩＬ−１１の作用を阻害することができる。
【０１７４】
例えば、ＩＬ−１１シグナル伝達の阻害を、ＩＬ−１１（またはＩＬ−１１含有複合体、例えば、ＩＬ−１１とＩＬ−１１Ｒαとの複合体）と、ＩＬ−１１の受容体（例えば、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１１Ｒαを含む受容体複合体、ｇｐ１３０またはＩＬ−１１Ｒαとｇｐ１３０とを含む受容体複合体）との相互作用を破壊することによって達成することができる。一部の実施形態では、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の阻害は、例えば、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒαおよびｇｐ１３０のうちの１つまたは複数の遺伝子またはタンパク質発現を阻害することによって達成される。
【０１７５】
実施形態では、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の阻害は、ＩＬ−１１媒介性ｔｒａｎｓシグナル伝達を破壊するのではなく、ＩＬ−１１媒介性ｃｉｓシグナル伝達を破壊することによって達成され、例えば、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の阻害は、膜結合型ＩＬ−１１Ｒαを含むｇｐ１３０媒介性ｃｉｓ複合体を阻害することによって達成される。実施形態では、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の阻害は、ＩＬ−１１媒介性ｃｉｓシグナル伝達を破壊するのではなく、ＩＬ−１１媒介性ｔｒａｎｓシグナル伝達を破壊することによって達成され、すなわち、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の阻害は、可溶型ＩＬ−１１Ｒαに結合したＩＬ−１１または可溶型ＩＬ−６Ｒに結合したＩＬ−６などのｇｐ１３０媒介性ｔｒａｎｓシグナル伝達複合体を阻害することによって達成される。実施形態では、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の阻害は、ＩＬ−１１媒介性ｃｉｓシグナル伝達およびＩＬ−１１媒介性ｔｒａｎｓシグナル伝達を破壊することによって達成される。本明細書に記載される任意の薬剤を使用して、ＩＬ−１１媒介性ｃｉｓおよび／またはｔｒａｎｓシグナル伝達を阻害することができる。
【０１７６】
他の例では、ＩＬ−１１シグナル伝達の阻害は、ＩＬ−１１／ＩＬ−１１Ｒα／ｇｐ１３０の下流のシグナル伝達経路を破壊することによって達成することができる。
【０１７７】
一部の実施形態では、本発明の方法は、ＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達を阻害することができる薬剤を用いる。一部の実施形態では、ＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達を阻害することができる薬剤は、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＴＹＫ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５Ａ、ＳＴＡＴ５Ｂおよび／またはＳＴＡＴ６の作用を阻害することができる。例えば、薬剤は、ＪＡＫ／ＳＴＡＴタンパク質の活性化を阻害する、ＪＡＫもしくはＳＴＡＴタンパク質と、細胞表面受容体、例えば、ＩＬ−１１Ｒαもしくはｇｐ１３０との相互作用を阻害する、ＪＡＫタンパク質とＳＴＡＴタンパク質との相互作用を阻害する、ＳＴＡＴタンパク質のリン酸化を阻害する、ＳＴＡＴタンパク質の二量体化を阻害する、ＳＴＡＴタンパク質の細胞核への移行を阻害する、ＳＴＡＴタンパク質のＤＮＡへの結合を阻害する、ならびに／またはＪＡＫおよび／もしくはＳＴＡＴタンパク質の分解を促進することができてもよい。一部の実施形態では、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ阻害剤は、ルキソリチニブ（Ｊａｋａｆｉ／Ｊａｋａｖｉ；Ｉｎｃｙｔｅ）、トファシチニブ（Ｘｅｌｊａｎｚ／Ｊａｋｖｉｎｕｓ；ＮＩＨ／Ｐｆｉｚｅｒ）、オクラシチニブ（Ａｐｏｑｕｅｌ）、バリシチニブ（Ｏｌｕｍｉａｎｔ；Ｉｎｃｙｔｅ／Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、フィルゴチニブ（Ｇ−１４６０３４／ＧＬＰＧ−０６３４；Ｇａｌａｐａｇｏｓ  ＮＶ）、ガンドチニブ（ＬＹ−２７８４５４４；Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、レスタウルチニブ（ＣＥＰ−７０１；Ｔｅｖａ）、モメロチニブ（ＧＳ−０３８７／ＣＹＴ−３８７；Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、パクリチニブ（ＳＢ１５１８；ＣＴＩ）、ＰＦ−０４９６５８４２（Ｐｆｉｚｅｒ）、ウパダシチニブ（ＡＢＴ−４９４；ＡｂｂＶｉｅ）、ペフィシチニブ（ＡＳＰ０１５Ｋ／ＪＮＪ−５４７８１５３２；Ａｓｔｅｌｌａｓ）、フェドラチニブ（ＳＡＲ３０２５０３；Ｃｅｌｇｅｎｅ）、ククルビタシンＩ（ＪＳＩ−１２４）およびＣＨＺ８６８から選択される。
【０１７８】
一部の実施形態では、本発明の方法は、ＭＡＰＫ／ＥＲＫシグナル伝達を阻害することができる薬剤を用いる。一部の実施形態では、ＭＡＰＫ／ＥＲＫシグナル伝達を阻害することができる薬剤は、ＥＲＫ  ｐ４２／４４を阻害することができる。一部の実施形態では、ＥＲＫ阻害剤は、ＳＣＨ７７２９８４、ＳＣ１、ＶＸ−１１ｅおよびＤＥＬ−２２３７９から選択される。一部の実施形態では、ＭＡＰＫ／ＥＲＫシグナル伝達を阻害することができる薬剤は、ＧＲＢ２の作用を阻害する、ＲＡＦキナーゼの作用を阻害する、ＭＥＫタンパク質の作用を阻害する、ＭＡＰ３Ｋ／ＭＡＰ２Ｋ／ＭＡＰＫおよび／もしくはＭｙｃの活性化を阻害する、ならびに／またはＳＴＡＴタンパク質のリン酸化を阻害することができる。一部の実施形態では、ＥＲＫ阻害剤は、ソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ；Ｂａｙｅｒ／Ｏｎｙｘ）、ＳＢ５９０８８５、ＰＬＸ４７２０、ＸＬ２８１、ＲＡＦ２６５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、エンコラフェニブ（ＬＧＸ８１８／Ｂｒａｆｔｏｖｉ；Ａｒｒａｙ  ＢｉｏＰｈａｒｍａ）、ダブラフェニブ（Ｔａｆｉｎｌａｒ；ＧＳＫ）、ベムラフェニブ（Ｚｅｌｂｏｒａｆ；Ｒｏｃｈｅ）、コビメチニブ（Ｃｏｔｅｌｌｉｃ；Ｒｏｃｈｅ）、ＣＩ−１０４０、ＰＤ０３２５９０１、ビニメチニブ（ＭＥＫ１６２／ＭＥＫＴＯＶＩ；Ａｒｒａｙ  ＢｉｏＰｈａｒｍａ）、セルメチニブ（ＡＺＤ６２４４；Ａｒｒａｙ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）およびトラメチニブ（ＧＳＫ１１２０２１２／Ｍｅｋｉｎｉｓｔ；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）から選択される。
【０１７９】
結合剤
一部の実施形態では、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達を阻害することができる薬剤は、ＩＬ−１１に結合してもよい。一部の実施形態では、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達を阻害することができる薬剤は、ＩＬ−１１の受容体（例えば、ＩＬ−１１Ｒα、ｇｐ１３０、またはＩＬ−１１Ｒαおよび／もしくはｇｐ１３０を含有する複合体）に結合してもよい。そのような薬剤の結合は、ＩＬ−１１がＩＬ−１１の受容体に結合する能力を低減させる／防止することによって、下流のシグナル伝達を阻害することにより、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達を阻害することができる。そのような薬剤の結合は、ＩＬ−１１がＩＬ−１１の受容体、例えば、ＩＬ−１１Ｒαおよび／またはｇｐ１３０に結合する能力を低減させる／防止することによって、下流のシグナル伝達を阻害することにより、ＩＬ−１１媒介性ｃｉｓおよび／またはｔｒａｎｓシグナル伝達を阻害することができる。薬剤は、ＩＬ−１１および可溶型ＩＬ−１１Ｒαなどのｔｒａｎｓシグナル伝達複合体に結合し、ｇｐ１３０媒介性シグナル伝達を阻害することができる。
【０１８０】
ＩＬ−１１／ＩＬ−１１含有複合体またはＩＬ−１１の受容体に結合することができる薬剤は、任意の種類のものであってもよいが、一部の実施形態では、薬剤は、抗体、その抗原結合性断片、ポリペプチド、ペプチド、核酸、オリゴヌクレオチド、アプタマーまたは低分子であってもよい。薬剤を、単離もしくは精製された形態で提供するか、または医薬組成物もしくは医薬として製剤化することができる。
【０１８１】
ＩＬ−１１結合剤の特性
本発明によるＩＬ−１１／ＩＬ−１１含有複合体またはＩＬ−１１の受容体に結合することができる薬剤は、以下の特性のうちの１つまたは複数を示してもよい：
・ＩＬ−１１／ＩＬ−１１含有複合体またはＩＬ−１１の受容体への特異的結合；
・１０μＭ以下、好ましくは、５μＭ以下、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下または１００ｐＭ以下のうちの１つのＫＤでの、ＩＬ−１１／ＩＬ−１１含有複合体、またはＩＬ−１１の受容体への結合；
・ＩＬ−１１とＩＬ−１１Ｒαとの相互作用の阻害；
・ＩＬ−１１とｇｐ１３０との相互作用の阻害；
・ＩＬ−１１とＩＬ−１１Ｒα：ｇｐ１３０受容体複合体との相互作用の阻害；
・ＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα複合体とｇｐ１３０との相互作用の阻害；
・ＩＬ−１１とＩＬ−１１との相互作用の阻害。
【０１８２】
これらの特性を、関連薬剤の性能の、好適な対照薬剤との比較を含んでもよい好適なアッセイにおける前記薬剤の分析によって決定することができる。当業者であれば、所与のアッセイに関する適切な対照条件を同定することができる。
【０１８３】
例えば、試験抗体／抗原結合性断片がＩＬ−１１／ＩＬ−１１含有複合体／ＩＬ−１１の受容体に結合する能力の分析のための好適な陰性対照は、非標的タンパク質に対する抗体／抗原結合性断片（すなわち、ＩＬ−１１／ＩＬ−１１含有複合体／ＩＬ−１１の受容体に特異的ではない抗体／抗原結合性断片）であってもよい。好適な陽性対照は、既知の、検証された（例えば、市販の）ＩＬ−１１またはＩＬ−１１受容体に結合する抗体であってもよい。対照は、分析される推定ＩＬ−１１／ＩＬ−１１含有複合体／ＩＬ−１１受容体結合抗体／抗原結合性断片と同じアイソタイプのものであってよく、例えば、同じ定常領域を有してもよい。
【０１８４】
一部の実施形態では、薬剤は、ＩＬ−１１またはＩＬ−１１含有複合体、またはＩＬ−１１の受容体（例えば、ＩＬ−１１Ｒα、ｇｐ１３０、またはＩＬ−１１Ｒαおよび／もしくはｇｐ１３０を含有する複合体）に特異的に結合することができてもよい。所与の標的分子に特異的に結合する薬剤は、好ましくは、それが他の非標的分子に結合するよりも高い親和性、および／または長い持続期間で標的に結合する。
【０１８５】
一部の実施形態では、薬剤は、ＩＬ−６サイトカインファミリーの１つまたは複数の他のメンバー（例えば、ＩＬ−６、白血病阻害因子（ＬＩＦ）、オンコスタチンＭ（ＯＳＭ）、カルジオトロフィン−１（ＣＴ−１）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、およびカルジオトロフィン様サイトカイン（ＣＬＣ））に結合する親和性よりも高い親和性でＩＬ−１１またはＩＬ−１１含有複合体に結合してもよい。一部の実施形態では、薬剤は、ＩＬ−６受容体ファミリーの１つまたは複数の他のメンバーに結合する親和性よりも高い親和性でＩＬ−１１の受容体（例えば、ＩＬ−１１Ｒα、ｇｐ１３０、またはＩＬ−１１Ｒαおよび／もしくはｇｐ１３０を含有する複合体）に結合してもよい。一部の実施形態では、薬剤は、ＩＬ−６Ｒα、白血病阻害因子受容体（ＬＩＦＲ）、オンコスタチンＭ受容体（ＯＳＭＲ）および毛様体神経栄養因子受容体アルファ（ＣＮＴＦＲα）のうちの１つまたは複数に結合する親和性よりも高い親和性でＩＬ−１１Ｒαに結合してもよい。
【０１８６】
一部の実施形態では、結合剤の非標的への結合の程度は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＳＰＲ、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）、マイクロスケール熱泳動法（ＭＳＴ）、またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定された場合、薬剤の標的への結合の約１０％未満である。あるいは、結合特異性は、結合剤が、別の非標的分子に対するＫＤよりも少なくとも０．１桁高い（すなわち、０．１ｘ１０ｎ（式中、ｎは桁を表す整数である））ＫＤで、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１含有複合体またはＩＬ−１１の受容体に結合する場合、結合親和性を単位として反映されてもよい。これは、必要に応じて、少なくとも０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、または２．０のうちの１つであってもよい。
【０１８７】
所与の結合剤の、その標的に対する結合親和性は、その解離定数（ＫＤ）を単位として記載されることが多い。結合親和性は、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ；例えば、Ｈｅａｒｔｙら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ（２０１２）９０７：４１１〜４４２頁；またはＲｉｃｈら、Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．２００８  Ｆｅｂ  １；３７３（１）：１１２〜２０頁を参照されたい）、バイオレイヤー干渉法（例えば、Ｌａｄら（２０１５）Ｊ  Ｂｉｏｍｏｌ  Ｓｃｒｅｅｎ  ２０（４）：４９８〜５０７頁；もしくはＣｏｎｃｅｐｃｉｏｎら、Ｃｏｍｂ  Ｃｈｅｍ  Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｓｃｒｅｅｎ．２００９  Ｓｅｐ；１２（８）：７９１〜８００頁を参照されたい）、マイクロスケール熱泳動（ＭＳＴ）分析（例えば、Ｊｅｒａｂｅｋ−Ｗｉｌｌｅｍｓｅｎら、Ａｓｓａｙ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．２０１１  Ａｕｇ；９（４）：３４２〜３５３頁を参照されたい）、または放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）などの、当業界で公知の方法によって測定することができる。
【０１８８】
一部の実施形態では、薬剤は、５０μＭ以下、好ましくは、１０μＭ以下、５μＭ以下、４μＭ以下、３μＭ以下、２μＭ以下、１μＭ、５００ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、７５ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、４０ｎＭ以下、３０ｎＭ以下、２０ｎＭ以下、１５ｎＭ以下、１２．５ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、９ｎＭ以下、８ｎＭ以下、７ｎＭ以下、６ｎＭ以下、５ｎＭ以下、４ｎＭ以下、３ｎＭ以下、２ｎＭ以下、１ｎＭ以下、５００ｐＭ以下、４００ｐＭ以下、３００ｐＭ以下、２００ｐＭ以下、または１００ｐＭ以下のうちの１つのＫＤでＩＬ−１１またはＩＬ−１１含有複合体、またはＩＬ−１１の受容体に結合することができる。
【０１８９】
一部の実施形態では、薬剤は、ＥＣ５０＝１０，０００ｎｇ／ｍｌ以下、好ましくは、５，０００ｎｇ／ｍｌ以下、１０００ｎｇ／ｍｌ以下、９００ｎｇ／ｍｌ以下、８００ｎｇ／ｍｌ以下、７００ｎｇ／ｍｌ以下、６００ｎｇ／ｍｌ以下、５００ｎｇ／ｍｌ以下、４００ｎｇ／ｍｌ以下、３００ｎｇ／ｍｌ以下、２００ｎｇ／ｍｌ以下、１００ｎｇ／ｍｌ以下、９０ｎｇ／ｍｌ以下、８０ｎｇ／ｍｌ以下、７０ｎｇ／ｍｌ以下、６０ｎｇ／ｍｌ以下、５０ｎｇ／ｍｌ以下、４０ｎｇ／ｍｌ以下、３０ｎｇ／ｍｌ以下、２０ｎｇ／ｍｌ以下、１５ｎｇ／ｍｌ以下、１０ｎｇ／ｍｌ以下、７．５ｎｇ／ｍｌ以下、５ｎｇ／ｍｌ以下、２．５ｎｇ／ｍｌ以下、または１ｎｇ／ｍｌ以下のうちの１つの結合の親和性（例えば、ＥＬＩＳＡによって決定された場合）で、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１含有複合体またはＩＬ−１１の受容体に結合する。そのようなＥＬＩＳＡを、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、ｖｏｌ．１（第２版）、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ（２０１０）、Ｐａｒｔ  Ｖ、６５７〜６６５頁に記載のように実施することができる。
【０１９０】
一部の実施形態では、薬剤は、ＩＬ−１１またはＩＬ−１１含有複合体の受容体、例えば、ｇｐ１３０またはＩＬ−１１Ｒαへの結合にとって重要である領域中でＩＬ−１１またはＩＬ−１１含有複合体に結合することによって、ＩＬ−１１もしくはＩＬ−１１含有複合体と、ＩＬ−１１の受容体との相互作用、および／または受容体を介するシグナル伝達を阻害する。一部の実施形態では、薬剤は、ＩＬ−１１またはＩＬ−１１含有複合体への結合にとって重要である領域中でＩＬ−１１の受容体に結合することによって、ＩＬ−１１もしくはＩＬ−１１含有複合体と、ＩＬ−１１の受容体との相互作用を阻害する、および／または受容体を介するシグナル伝達を阻害する。
【０１９１】
所与の結合剤（例えば、ＩＬ−１１／ＩＬ−１１含有複合体またはＩＬ−１１の受容体に結合することができる薬剤）が２つのタンパク質間の相互作用を阻害する能力を、例えば、結合剤の存在下での、または相互作用パートナーの一方もしくは両方の、結合剤とのインキュベーション後の相互作用の分析によって決定することができる。所与の結合剤が２つの相互作用パートナー間の相互作用を阻害することができるかどうかを決定するための好適なアッセイの例は、競合ＥＬＩＳＡである。
【０１９２】
所与の相互作用（例えば、ＩＬ−１１とＩＬ−１１Ｒαとの間、またはＩＬ−１１とｇｐ１３０との間、またはＩＬ−１１とＩＬ−１１Ｒα：ｇｐ１３０との間、またはＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒαとｇｐ１３０との間）を阻害することができる結合剤は、結合剤の非存在下（または適切な対照結合剤の存在下）での相互作用レベルと比較して、結合剤の存在下での、または相互作用パートナーの一方もしくは両方の、結合剤とのインキュベーション後の相互作用パートナー間の相互作用レベルの低下／減少の観察によって同定される。好適な分析を、例えば、組換え相互作用パートナーを使用して、または相互作用パートナーを発現する細胞を使用して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで実施することができる。相互作用パートナーを発現する細胞は、内因的にそうするか、または細胞中に導入された核酸からそうしてもよい。そのようなアッセイのために、相互作用パートナーおよび／または結合剤の一方または両方を、相互作用レベルを検出および／または測定するために検出可能な実体で標識するか、またはそれと共に使用することができる。例えば、薬剤を、放射性原子または着色された分子または蛍光分子または任意の他の方法で容易に検出することができる分子で標識することができる。好適な検出可能分子としては、蛍光タンパク質、ルシフェラーゼ、酵素基質、および放射標識が挙げられる。結合剤を、検出可能な標識で直接標識するか、またはそれを間接的に標識することができる。例えば、結合剤は未標識であってもよく、それ自体、標識されている別の結合剤によって検出することができる。あるいは、第２の結合剤は、それにビオチンを結合されていてもよく、標識されたストレプトアビジンのビオチンへの結合を使用して、第１の結合剤を間接的に標識することができる。
【０１９３】
結合剤が２つの結合パートナー間の相互作用を阻害する能力を、そのような相互作用の下流の機能的結果、例えば、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の分析によって決定することもできる。例えば、ＩＬ−１１とＩＬ−１１Ｒα：ｇｐ１３０との間またはＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒαとｇｐ１３０との間の相互作用の下流の機能的結果は、例えば、ＩＬ−１１によって媒介されるプロセス、線維芽細胞からの筋線維芽細胞の生成、分泌平滑筋細胞（ＳＭＣ）による増殖もしくは遊走、または例えば、コラーゲンもしくはＩＬ−１１の遺伝子／タンパク質発現を含んでもよい。
【０１９４】
結合剤が、ＩＬ−１１またはＩＬ−１１含有複合体と、ＩＬ−１１の受容体との相互作用を阻害する能力を、例えば、線維芽細胞をＴＧＦβ１で刺激すること、結合剤の存在下で細胞をインキュベートすること、および規定の期間後にαＳＭＡ陽性表現型を有する細胞の割合を分析することによって分析することができる。そのような例では、ＩＬ−１１またはＩＬ−１１含有複合体と、ＩＬ−１１の受容体との相互作用の阻害を、細胞が、結合剤の非存在下（もしくは適切な対照結合剤の存在下）で、または適切な対照結合剤の存在下でＴＧＦβ１で処理される陽性対照状態と比較した、αＳＭＡ陽性表現型を有する細胞のより低い割合の観察によって同定することができる。そのようなアッセイはまた、結合剤がＩＬ−１１媒介性シグナル伝達を阻害する能力を分析するのに好適である。また、ＩＬ−１１またはＩＬ−１１含有複合体と、ＩＬ−１１の受容体との相互作用の阻害を、例えば、Ｃｕｒｔｉｓら、Ｂｌｏｏｄ、１９９７、９０（１１）およびＫａｒｐｏｖｉｃｈら、Ｍｏｌ．Ｈｕｍ．Ｒｅｐｒｏｄ．２００３、９（２）：７５〜８０頁に記載されたものなどの３Ｈ−チミジン取込みおよび／またはＢａ／Ｆ３細胞増殖アッセイを使用して分析することもできる。Ｂａ／Ｆ３細胞は、ＩＬ−１１Ｒαとｇｐ１３０とを同時発現する。
【０１９５】
一部の実施形態では、結合剤は、結合剤の非存在下（または適切な対照結合剤の存在下）でのＩＬ−１１とＩＬ−１１Ｒαとの相互作用レベルの１００％未満、例えば、９９％以下、９５％以下、９０％以下、８５％以下、８０％以下、７５％以下、７０％以下、６５％以下、６０％以下、５５％以下、５０％以下、４５％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、または１％以下のうちの１つでＩＬ−１１とＩＬ−１１Ｒαとの相互作用を阻害することができてもよい。一部の実施形態では、結合剤は、結合剤の非存在下（または適切な対照結合剤の存在下）でのＩＬ−１１とＩＬ−１１Ｒαとの相互作用レベルの１倍未満、例えば、０．９９倍以下、０．９５倍以下、０．９倍以下、０．８５倍以下、０．８倍以下、０．７５倍以下、０．７倍以下、０．６５倍以下、０．６倍以下、０．５５倍以下、０．５倍以下、０．４５倍以下、０．４倍以下、０．３５倍以下、０．３倍以下、０．２５倍以下、０．２倍以下、０．１５倍以下、０．１倍以下のうちの１つでＩＬ−１１とＩＬ−１１Ｒαとの相互作用を阻害することができてもよい。
【０１９６】
一部の実施形態では、結合剤は、結合剤の非存在下（または適切な対照結合剤の存在下）でのＩＬ−１１とｇｐ１３０との相互作用レベルの１００％未満、例えば、９９％以下、９５％以下、９０％以下、８５％以下、８０％以下、７５％以下、７０％以下、６５％以下、６０％以下、５５％以下、５０％以下、４５％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、または１％以下のうちの１つでＩＬ−１１とｇｐ１３０との相互作用を阻害することができてもよい。一部の実施形態では、結合剤は、結合剤の非存在下（または適切な対照結合剤の存在下）でのＩＬ−１１とｇｐ１３０との相互作用レベルの１倍未満、例えば、０．９９倍以下、０．９５倍以下、０．９倍以下、０．８５倍以下、０．８倍以下、０．７５倍以下、０．７倍以下、０．６５倍以下、０．６倍以下、０．５５倍以下、０．５倍以下、０．４５倍以下、０．４倍以下、０．３５倍以下、０．３倍以下、０．２５倍以下、０．２倍以下、０．１５倍以下、０．１倍以下のうちの１つでＩＬ−１１とｇｐ１３０との相互作用を阻害することができてもよい。
【０１９７】
一部の実施形態では、結合剤は、結合剤の非存在下（または適切な対照結合剤の存在下）でのＩＬ−１１とＩＬ−１１Ｒα：ｇｐ１３０との相互作用レベルの１００％未満、例えば、９９％以下、９５％以下、９０％以下、８５％以下、８０％以下、７５％以下、７０％以下、６５％以下、６０％以下、５５％以下、５０％以下、４５％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、または１％以下のうちの１つでＩＬ−１１とＩＬ−１１Ｒα：ｇｐ１３０との相互作用を阻害することができてもよい。一部の実施形態では、結合剤は、結合剤の非存在下（または適切な対照結合剤の存在下）でのＩＬ−１１とＩＬ−１１Ｒα：ｇｐ１３０との相互作用レベルの１倍未満、例えば、０．９９倍以下、０．９５倍以下、０．９倍以下、０．８５倍以下、０．８倍以下、０．７５倍以下、０．７倍以下、０．６５倍以下、０．６倍以下、０．５５倍以下、０．５倍以下、０．４５倍以下、０．４倍以下、０．３５倍以下、０．３倍以下、０．２５倍以下、０．２倍以下、０．１５倍以下、０．１倍以下のうちの１つでＩＬ−１１とＩＬ−１１Ｒα：ｇｐ１３０との相互作用を阻害することができてもよい。
【０１９８】
一部の実施形態では、結合剤は、結合剤の非存在下（または適切な対照結合剤の存在下）でのＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα複合体とｇｐ１３０との相互作用レベルの１００％未満、例えば、９９％以下、９５％以下、９０％以下、８５％以下、８０％以下、７５％以下、７０％以下、６５％以下、６０％以下、５５％以下、５０％以下、４５％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、または１％以下のうちの１つでＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα複合体とｇｐ１３０との相互作用を阻害することができてもよい。一部の実施形態では、結合剤は、結合剤の非存在下でのＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα複合体とｇｐ１３０との相互作用レベルの１倍未満、例えば、０．９９倍以下、０．９５倍以下、０．９倍以下、０．８５倍以下、０．８倍以下、０．７５倍以下、０．７倍以下、０．６５倍以下、０．６倍以下、０．５５倍以下、０．５倍以下、０．４５倍以下、０．４倍以下、０．３５倍以下、０．３倍以下、０．２５倍以下、０．２倍以下、０．１５倍以下、０．１倍以下のうちの１つでＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα複合体とｇｐ１３０との相互作用を阻害することができてもよい。
【０１９９】
一部の実施形態では、結合剤は、結合剤の非存在下（または適切な対照結合剤の存在下）でのＩＬ−１１とＩＬ−１１との相互作用レベルの１００％未満、例えば、９９％以下、９５％以下、９０％以下、８５％以下、８０％以下、７５％以下、７０％以下、６５％以下、６０％以下、５５％以下、５０％以下、４５％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、または１％以下のうちの１つでＩＬ−１１とＩＬ−１１との相互作用を阻害することができてもよい。一部の実施形態では、結合剤は、結合剤の非存在下でのＩＬ−１１とＩＬ−１１との相互作用レベルの１倍未満、例えば、０．９９倍以下、０．９５倍以下、０．９倍以下、０．８５倍以下、０．８倍以下、０．７５倍以下、０．７倍以下、０．６５倍以下、０．６倍以下、０．５５倍以下、０．５倍以下、０．４５倍以下、０．４倍以下、０．３５倍以下、０．３倍以下、０．２５倍以下、０．２倍以下、０．１５倍以下、０．１倍以下のうちの１つでＩＬ−１１とＩＬ−１１との相互作用を阻害することができてもよい。
【０２００】
抗体および抗原結合性断片
一部の実施形態では、ＩＬ−１１／ＩＬ−１１含有複合体またはＩＬ−１１の受容体に結合することができる薬剤は、抗体、またはその抗原結合性断片である。一部の実施形態では、ＩＬ−１１／ＩＬ−１１含有複合体またはＩＬ−１１の受容体に結合することができる薬剤は、ポリペプチド、例えば、デコイ受容体分子である。一部の実施形態では、ＩＬ−１１／ＩＬ−１１含有複合体またはＩＬ−１１の受容体に結合することができる薬剤は、アプタマーであってもよい。
【０２０１】
一部の実施形態では、ＩＬ−１１／ＩＬ−１１含有複合体またはＩＬ−１１の受容体に結合することができる薬剤は、抗体、またはその抗原結合性断片である。ＩＬ−１１に結合することができる抗体としては、例えば、Ｂｏｃｋｈｏｒｎら、Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．（２０１３）４（０）：１３９３頁において使用された、例えば、モノクローナルマウス抗ヒトＩＬ−１１抗体クローン＃２２６２６；カタログ番号ＭＡＢ２１８（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＭＮ、ＵＳＡ）、クローン６Ｄ９Ａ（Ａｂｂｉｏｔｅｃ）、クローンＫＴ８（Ａｂｂｉｏｔｅｃ）、クローンＭ３１０３Ｆ１１（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、クローン１Ｆ１（Ａｂｎｏｖａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、クローン３Ｃ６（Ａｂｎｏｖａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、クローンＧＦ１（ＬｉｆｅＳｐａｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、クローン１３４５５（Ｓｏｕｒｃｅ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ）ならびにＵＳ２００９／０２０２５３３Ａ１、ＷＯ９９／５９６０８Ａ２およびＷＯ２０１８／１０９１７４Ａ２に開示された抗ＩＬ−１１抗体が挙げられる。
【０２０２】
ＩＬ−１１Ｒαに結合することができる抗体としては、モノクローナル抗体クローン０２５（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）、クローンＥＰＲ５４４６（Ａｂｃａｍ）、クローン４７３１４３（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、例えば、ＵＳ２０１４／０２１９９１９Ａ１に記載されたクローン８Ｅ２および８Ｅ４、Ｂｌａｎｃら（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．２０００  Ｊｕｌ  ３１；２４１（１〜２）；４３〜５９頁）に記載されたモノクローナル抗体、ＷＯ２０１４１２１３２５Ａ１およびＵＳ２０１３／０３０２２７７Ａ１に開示された抗体、ならびにＵＳ２００９／０２０２５３３Ａ１、ＷＯ９９／５９６０８Ａ２およびＷＯ２０１８／１０９１７０Ａ２に開示された抗ＩＬ−１１Ｒα抗体が挙げられる。
【０２０３】
抗体／断片は、ＩＬ−１１の生物活性を阻害する、または低減させるアンタゴニスト抗体／断片であってもよい。抗体／断片は、ＩＬ−１１の生物学的効果、例えば、ＩＬ−１１受容体による産生シグナル伝達を刺激するその能力を中和する、中和抗体であってもよい。中和活性を、Ｔ１１マウス形質細胞腫細胞系（Ｎｏｒｄａｎ，Ｒ．Ｐ．ら（１９８７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：８１３頁）においてＩＬ−１１誘導性増殖を中和する能力によって測定することができる。
【０２０４】
デコイ受容体
ＩＬ−１１またはＩＬ−１１含有複合体に結合することができるペプチドまたはポリペプチドベースの薬剤は、ＩＬ−１１受容体、例えば、ＩＬ−１１受容体のＩＬ−１１結合断片に基づくものであってもよい。
【０２０５】
一部の実施形態では、結合剤は、ＩＬ−１１Ｒα鎖のＩＬ−１１結合断片を含んでもよく、好ましくは、可溶型であってよい、および／または膜貫通ドメインの１つもしくは複数、または全部を含まなくてもよい。一部の実施形態では、結合剤は、ｇｐ１３０のＩＬ−１１結合断片を含んでもよく、好ましくは、可溶型であってよい、および／または膜貫通ドメインの１つもしくは複数、または全部を含まなくてもよい。そのような分子は、デコイ受容体と記載することができる。そのような薬剤の結合は、ＩＬ−１１がＩＬ−１１の受容体、例えば、ＩＬ−１１Ｒαまたはｇｐ１３０に結合する能力を低減させる／防止することによって、下流のシグナル伝達を阻害することにより、ＩＬ−１１媒介性ｃｉｓおよび／またはｔｒａｎｓシグナル伝達を阻害することができる。
【０２０６】
Ｃｕｒｔｉｓら（Ｂｌｏｏｄ  １９９７  Ｄｅｃ  １；９０（１１）：４４０３〜１２頁）は、可溶型マウスＩＬ−１１受容体アルファ鎖（ｓＩＬ−１１Ｒ）が、膜貫通型ＩＬ−１１Ｒおよびｇｐ１３０を発現する細胞上で試験した場合、ＩＬ−１１の活性と拮抗することができたと報告している。彼らは、ｓＩＬ−１１Ｒによる観察されたＩＬ−１１拮抗作用が、膜貫通型ＩＬ−１１Ｒを既に発現している細胞上のｇｐ１３０分子数の限定に依存すると提唱した。
【０２０７】
シグナル伝達の阻害および治療介入のための基礎としての可溶型デコイ受容体の使用は、他のシグナル伝達分子：受容体対、例えば、ＶＥＧＦとＶＥＧＦ受容体についても報告されている（Ｄｅ−Ｃｈａｏ  Ｙｕら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ（２０１２）；２０  ５、９３８〜９４７頁；ＫｏｎｎｅｒおよびＤｕｐｏｎｔ  Ｃｌｉｎ  Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  ２００４  Ｏｃｔ；４  Ｓｕｐｐｌ  ２：Ｓ８１〜５頁）。
【０２０８】
そのため、一部の実施形態では、結合剤は、デコイ受容体、例えば、ＩＬ−１１および／またはＩＬ−１１含有複合体の可溶型受容体であってもよい。デコイ受容体によって提供されるＩＬ−１１および／またはＩＬ−１１含有複合体の競合は、ＩＬ−１１アンタゴニスト作用をもたらすと報告されている（Ｃｕｒｔｉｓら、上掲）。デコイＩＬ−１１受容体は、ＷＯ２０１７／１０３１０８Ａ１およびＷＯ２０１８／１０９１６８Ａ１にも記載されており、それらはその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０２０９】
デコイＩＬ−１１受容体は、好ましくは、ＩＬ−１１および／またはＩＬ−１１含有複合体に結合し、それによって、これらの種が、ｇｐ１３０、ＩＬ−１１Ｒαおよび／またはｇｐ１３０：ＩＬ−１１Ｒα受容体に結合できないようにする。そのため、それらは、エタネルセプトがＴＮＦαのデコイ受容体として作用するのとほぼ同じ方法で、ＩＬ−１１およびＩＬ−１１含有複合体のための「デコイ」受容体として作用する。ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達は、デコイ受容体の非存在下でのシグナル伝達のレベルと比較して低減する。
【０２１０】
デコイＩＬ−１１受容体は、好ましくは、１つまたは複数のサイトカイン結合モジュール（ＣＢＭ）を介してＩＬ−１１に結合する。ＣＢＭは、天然に存在するＩＬ−１１の受容体分子のＣＢＭであるか、またはそれから誘導されるか、またはそれと相同である。例えば、デコイＩＬ−１１受容体は、ｇｐ１３０および／またはＩＬ−１１ＲαのＣＢＭに由来する、それから誘導される、またはそれと相同である１つまたは複数のＣＢＭを含むか、またはそれからなってもよい。
【０２１１】
一部の実施形態では、デコイＩＬ−１１受容体は、ｇｐ１３０のサイトカイン結合モジュールに対応するアミノ酸配列を含んでもよい、またはそれからなってもよい。一部の実施形態では、デコイＩＬ−１１受容体は、ＩＬ−１１Ｒαのサイトカイン結合モジュールに対応するアミノ酸配列を含んでもよい。ここで、所与のペプチド／ポリペプチドの参照領域または配列に「対応する」アミノ酸配列は、参照領域／配列のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性のうちの１つを有する。
【０２１２】
一部の実施形態では、デコイ受容体は、例えば、少なくとも１００μＭ以下、必要に応じて、１０μＭ以下、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、または約１〜１００ｎＭのうちの１つの結合親和性で、ＩＬ−１１に結合することができてもよい。一部の実施形態では、デコイ受容体は、ＩＬ−１１結合ドメインの全部または一部を含んでもよく、必要に応じて、膜貫通ドメインの全部または一部を欠いてもよい。デコイ受容体を、必要に応じて、免疫グロブリン定常領域、例えば、ＩｇＧ  Ｆｃ領域に融合することができる。
【０２１３】
阻害剤
本発明は、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１含有複合体、ＩＬ−１１Ｒα、ｇｐ１３０、またはＩＬ−１１Ｒαおよび／もしくはｇｐ１３０を含有する複合体に結合し、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達を阻害することができる阻害剤分子の使用を企図する。
【０２１４】
一部の実施形態では、薬剤は、ＩＬ−１１に基づくペプチドまたはポリペプチドベースの結合剤、例えば、ＩＬ−１１の変異体、バリアントまたは結合断片である。好適なペプチドまたはポリペプチドベースの薬剤は、シグナル伝達の開始をもたらさない、または最適でないシグナル伝達をもたらす様式で、ＩＬ−１１の受容体（例えば、ＩＬ−１１Ｒα、ｇｐ１３０、またはＩＬ−１１Ｒαおよび／もしくはｇｐ１３０を含有する複合体）に結合してもよい。この種類のＩＬ−１１変異体は、内因性ＩＬ−１１の競合的阻害剤として作用してもよい。
【０２１５】
例えば、Ｗ１４７Ａは、ＩＬ−１１のいわゆる「部位ＩＩＩ」を破壊する、アミノ酸１４７がトリプトファンからアラニンに突然変異されたＩＬ−１１アンタゴニストである。この変異体は、ＩＬ−１１Ｒαに結合することができるが、ｇｐ１３０ホモ二量体の咬合が失敗し、ＩＬ−１１シグナル伝達の効率的な遮断をもたらす（Ｕｎｄｅｒｈｉｌｌ−Ｄａｙら、２００３；Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ２００３  Ａｕｇ；１４４（８）：３４０６〜１４頁）。Ｌｅｅら（Ａｍ  Ｊ  ｒｅｓｐｉｒｅ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．２００８  Ｄｅｃ；３９（６）：７３９〜７４６頁）も、ＩＬ−１１のＩＬ−１１Ｒαへの結合を特異的に阻害することができるＩＬ−１１アンタゴニスト変異体（「変異タンパク質」）の生成を報告している。ＩＬ−１１変異タンパク質は、ＷＯ２００９／０５２５８８Ａ１にも記載されている。
【０２１６】
Ｍｅｎｋｈｏｒｓｔら（Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｍａｙ１、２００９、ｖｏｌ．８０、ｎｏ．５、９２０〜９２７頁）は、メスのマウスにおけるＩＬ−１１作用を阻害するのに有効である、ＰＥＧ化されたＩＬ−１１アンタゴニスト、ＰＥＧＩＬ１１Ａ（ＣＳＬ  Ｌｉｍｉｔｅｄ、Ｐａｒｋｖｉｌｌ、Ｖｉｃｔｏｒｉａ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ）を記載している。
【０２１７】
Ｐａｓｑｕａｌｉｎｉら、Ｃａｎｃｅｒ（２０１５）１２１（１４）：２４１１〜２４２１頁は、ＩＬ−１１Ｒαに結合することができる、リガンド指向性のペプチド模倣薬、骨転移標的化ペプチド模倣体−１１（ＢＭＴＰ−１１）を記載している。
【０２１８】
一部の実施形態では、ＩＬ−１１の受容体に結合することができる結合剤を、ＩＬ−１１Ｒα、ｇｐ１３０、またはＩＬ−１１Ｒαおよび／もしくはｇｐ１３０を含有する複合体のうちの１つの低分子阻害剤の形態で提供することができる。一部の実施形態では、結合剤を、ＩＬ−１１またはＩＬ−１１含有複合体の低分子阻害剤、例えば、Ｌａｙら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｎｃｏｌ．（２０１２）；４１（２）：７５９〜７６４頁（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されたＩＬ−１１阻害剤の形態で提供することができる。
【０２１９】
アプタマー
一部の実施形態では、ＩＬ−１１／ＩＬ−１１含有複合体またはＩＬ−１１の受容体（例えば、ＩＬ−１１Ｒα、ｇｐ１３０、またはＩＬ−１１Ｒαおよび／もしくはｇｐ１３０を含有する複合体）に結合することができる薬剤は、アプタマーである。
【０２２０】
ＩＬ−１１またはＩＬ−１１受容体の発現を低減させることができる薬剤
本発明の態様では、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒαまたはｇｐ１３０のうちの１つまたは複数の発現を防止する、または低減させることができるＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストを提供することができる。
【０２２１】
発現は、遺伝子またはタンパク質発現であってもよく、本明細書に記載のように決定することができる。発現は、対象の細胞／組織／臓器／臓器系によるものであってもよい。例えば、発現を、平滑筋細胞中で防止する／低減させることができる。
【０２２２】
好適な薬剤は、任意の種類のものであってもよいが、一部の実施形態では、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒαまたはｇｐ１３０のうちの１つまたは複数の発現を防止するか、または低減することができる薬剤は、低分子またはオリゴヌクレオチドであってもよい。
【０２２３】
ＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒαまたはｇｐ１３０のうちの１つまたは複数の発現を防止する、または低減することができる薬剤は、例えば、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒαもしくはｇｐ１３０をコードする遺伝子の転写を阻害すること、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒαもしくはｇｐ１３０をコードするＲＮＡの転写後プロセッシングを阻害すること、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒαもしくはｇｐ１３０をコードするＲＮＡの安定性を低減すること、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒαもしくはｇｐ１３０をコードするＲＮＡの分解を促進すること、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒαもしくはｇｐ１３０ポリペプチドの翻訳後プロセッシングを阻害すること、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒαもしくはｇｐ１３０ポリペプチドの安定性を低減すること、またはＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒαもしくはｇｐ１３０ポリペプチドの分解を促進することによって、そうしてもよい。
【０２２４】
Ｔａｋｉら、Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９９８）Ａｐｒ；１１２（１）：１３３〜１３８頁は、インドメタシン、デキサメタゾンまたはインターフェロン−ガンマ（ＩＦＮγ）を用いた処置時のリウマチ滑膜細胞中でのＩＬ−１１の発現の低減を報告した。
【０２２５】
本発明は、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒαまたはｇｐ１３０の発現を防止する／低減するためのアンチセンス核酸の使用を企図する。一部の実施形態では、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒαまたはｇｐ１３０の発現を防止する、または低減することができる薬剤は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）による発現の低減を引き起こし得る。
【０２２６】
一部の実施形態では、薬剤は、限定されるものではないが、ｓｈＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｍｉＲＮＡまたはｓｉＲＮＡを含む、アンチセンスまたは低分子干渉ＲＮＡなどの阻害的核酸であってもよい。
【０２２７】
一部の実施形態では、阻害的核酸は、ベクター中に提供される。例えば、一部の実施形態では、薬剤は、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒαまたはｇｐ１３０のうちの１つまたは複数のためのｓｈＲＮＡをコードするレンチウイルスベクターであってもよい。
【０２２８】
ＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒαおよびｇｐ１３０のための既知の核酸配列（例えば、受託番号ＢＣ０１２５０６．１  ＧＩ：１５３４１７５４（ヒトＩＬ−１１）、ＢＣ１３４３５４．１  ＧＩ：１２６６３２００２（マウスＩＬ−１１）、ＡＦ３４７９３５．１  ＧＩ：１３５４９０７２（ラットＩＬ−１１）、ＮＭ＿００１１４２７８４．２  ＧＩ：３９１３５３３９４（ヒトＩＬ−１１Ｒα）、ＮＭ＿００１１６３４０１．１  ＧＩ：２５４２８１２６８（マウスＩＬ−１１Ｒα）、ＮＭ＿１３９１１６．１  ＧＩ：２０８０６１７２（ラットＩＬ−１１Ｒα）、ＮＭ＿００１１９０９８１．１  ＧＩ：３００２４４５３４（ヒトｇｐ１３０）、ＮＭ＿０１０５６０．３  ＧＩ：２２５００７６２４（マウスｇｐ１３０）、ＮＭ＿００１００８７２５．３  ＧＩ：３００２４４５７０（ラットｇｐ１３０）の下でＧｅｎＢａｎｋから入手可能な既知のｍＲＮＡ配列）を考慮して、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒαまたはｇｐ１３０の発現を抑制するか、またはサイレンシングするようにオリゴヌクレオチドを設計することができる。
【０２２９】
そのようなオリゴヌクレオチドは、任意の長さを有してもよいが、好ましくは、短い、例えば、１００ヌクレオチド未満、例えば、１０〜４０ヌクレオチド、または２０〜５０ヌクレオチドであってよく、標的オリゴヌクレオチド、例えば、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒαまたはｇｐ１３０  ｍＲＮＡ中の対応する長さのヌクレオチドの配列に対して完全な相補性または近い相補性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の相補性）を有するヌクレオチド配列を含んでもよい。ヌクレオチド配列の相補領域は、任意の長さを有してもよいが、好ましくは、少なくとも５、必要に応じて、５０以下のヌクレオチド長、例えば、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０ヌクレオチドのうちの１つである。
【０２３０】
ＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒαまたはｇｐ１３０の発現の抑制は、好ましくは、細胞／組織／臓器／臓器系／対象によって発現されるＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒαまたはｇｐ１３０の量の減少をもたらすと予想される。例えば、所与の細胞中での、好適な核酸の投与によるＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒαまたはｇｐ１３０の抑制は、未処理の細胞と比較して、その細胞によって発現されるＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒαまたはｇｐ１３０の量の減少をもたらすと予想される。抑制は、部分的であってもよい。好ましい抑制の程度は、少なくとも５０％、より好ましくは、少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％または９０％のうちの１つである。９０％〜１００％の抑制のレベルは、発現または機能の「サイレンシング」と考えられる。
【０２３１】
別の選択肢は、細胞中での短いヘアピンＲＮＡ分子（ｓｈＲＮＡ）の発現である。好ましくは、ｓｈＲＮＡ分子は、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒαまたはｇｐ１３０の部分配列を含む。好ましくは、ｓｈＲＮＡ配列は、４０〜１００塩基長、より好ましくは、４０〜７０塩基長である。ヘアピンのステムは、好ましくは、１９〜３０塩基対の長さである。ステムは、ヘアピン構造を安定化するためのＧ−Ｕ対を含有してもよい。
【０２３２】
ｓｉＲＮＡ分子、より長いｄｓＲＮＡ分子またはｍｉＲＮＡ分子を、好ましくは、ベクター内に含有される核酸配列の転写によって組換え的に作製することができる。好ましくは、ｓｉＲＮＡ分子、より長いｄｓＲＮＡ分子またはｍｉＲＮＡ分子は、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒαまたはｇｐ１３０の部分配列を含む。
【０２３３】
一実施形態では、ｓｉＲＮＡ、より長いｄｓＲＮＡまたはｍｉＲＮＡは、ベクターからの転写によって内因的に（細胞内で）産生される。好適なベクターは、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒαまたはｇｐ１３０を抑制することができるオリゴヌクレオチド剤を発現するように構成されたオリゴヌクレオチドベクターであってもよい。
【０２３４】
他の実施形態では、ベクターを、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒαまたはｇｐ１３０の発現の抑制が必要とされる部位への治療的オリゴヌクレオチドの送達を補助するように構成することができる。
【０２３５】
他の実施形態では、本発明は、そうでなければＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒαまたはｇｐ１３０を発現する哺乳動物、例えば、ヒトの細胞内に好適に導入されるか、またはその中で発現される場合、ＲＮＡｉによるＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒαまたはｇｐ１３０の発現を抑制することができる核酸を提供する。
【０２３６】
ＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒαおよびｇｐ１３０のための核酸配列（例えば、受託番号ＢＣ０１２５０６．１  ＧＩ：１５３４１７５４（ヒトＩＬ−１１）、ＢＣ１３４３５４．１  ＧＩ：１２６６３２００２（マウスＩＬ−１１）、ＡＦ３４７９３５．１  ＧＩ：１３５４９０７２（ラットＩＬ−１１）、ＮＭ＿００１１４２７８４．２  ＧＩ：３９１３５３３９４（ヒトＩＬ−１１Ｒα）、ＮＭ＿００１１６３４０１．１  ＧＩ：２５４２８１２６８（マウスＩＬ−１１Ｒα）、ＮＭ＿１３９１１６．１  ＧＩ：２０８０６１７２（ラットＩＬ−１１Ｒα）、ＮＭ＿００１１９０９８１．１  ＧＩ：３００２４４５３４（ヒトｇｐ１３０）、ＮＭ＿０１０５６０．３  ＧＩ：２２５００７６２４（マウスｇｐ１３０）、ＮＭ＿００１００８７２５．３  ＧＩ：３００２４４５７０（ラットｇｐ１３０）の下でＧｅｎＢａｎｋから入手可能な既知のｍＲＮＡ配列）のオリゴヌクレオチドを、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒαまたはｇｐ１３０の発現を抑制するか、またはサイレンシングするように設計することができる。
【０２３７】
核酸は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０００６４１．３  ＧＩ：３９１３５３４０５（ＩＬ−１１）、ＮＭ＿００１１４２７８４．２  ＧＩ：３９１３５３３９４（ＩＬ−１１Ｒα）、ＮＭ＿００１１９０９８９１．１  ＧＩ：３００２４４５３４（ｇｐ１３０）に定義された、ＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒαもしくはｇｐ１３０  ｍＲＮＡの一部または前記ｍＲＮＡに対する相補配列に対する実質的な配列同一性を有してもよい。
【０２３８】
核酸は、二本鎖ｓｉＲＮＡであってもよい（当業者であれば理解できるように、また、以下でさらに説明されるように、ｓｉＲＮＡ分子は、短い３’ＤＮＡ配列をも含んでもよい）。
【０２３９】
あるいは、核酸は、哺乳動物細胞中で転写された場合、相補部分が互いにハイブリダイズする場合にＲＮＡがヘアピンの形態を採るような、スペーサーを介して連結された２つの相補部分を有するＲＮＡをもたらす、ＤＮＡ（通常は二本鎖ＤＮＡ）であってもよい。哺乳動物細胞中では、ヘアピン構造は、ＤＩＣＥＲ酵素によって分子から切断され、２つの異なるが、ハイブリダイズしたＲＮＡ分子をもたらしてもよい。
一部の好ましい実施形態では、核酸は、配列番号４〜７（ＩＬ−１１）の１つまたは配列番号８〜１１（ＩＬ−１１Ｒα）の１つの配列に対して全体として標的化される。
【０２４０】
ｍＲＮＡ転写物の一本鎖（すなわち、非自己ハイブリダイズ）領域のみが、ＲＮＡｉのための好適な標的であると予想される。したがって、配列番号４〜７または８〜１１の１つによって表される配列に、ＩＬ−１１またはＩＬ−１１Ｒα  ｍＲＮＡ転写物中の非常に近い他の配列も、ＲＮＡｉのための好適な標的であり得ると提唱される。そのような標的配列は、好ましくは、１５〜２１ヌクレオチド長であり、好ましくは、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８または全部で１９ヌクレオチドが、配列番号４〜７または８〜１１の１つと重複する（配列番号４〜７または８〜１１の１つのいずれかの末端で）。
【０２４１】
したがって、本発明は、そうでなければＩＬ−１１またはＩＬ−１１Ｒαを発現する哺乳動物細胞内に好適に導入されるか、またはその中で発現される場合、ＲＮＡｉによるＩＬ−１１またはＩＬ−１１Ｒα発現を抑制することができる核酸であって、配列番号４〜７または８〜１１の１つの配列に全体として標的化される、核酸を提供する。
【０２４２】
「全体として標的化された」核酸は、配列番号４〜７または８〜１１と重複する配列を標的としてもよい。特に、核酸は、配列番号４〜７または８〜１１の１つよりもわずかに長いか、または短いが、その他は配列番号４〜７または８〜１１の１つと同一である、ヒトＩＬ−１１またはＩＬ−１１ＲαのｍＲＮＡ中の配列（好ましくは、１７〜２３ヌクレオチド長）を標的としてもよい。
【０２４３】
本発明の核酸と標的配列との完全な同一性／相補性が好ましいが、必須ではないと予想される。したがって、本発明の核酸は、ＩＬ−１１またはＩＬ−１１ＲαのｍＲＮＡと比較して単一のミスマッチを含んでもよい。しかしながら、単一のミスマッチの存在であっても、効率の低下をもたらす可能性があるため、ミスマッチは存在しないのが好ましいと予想される。存在する場合、３’突出部を、ミスマッチの数の考慮から除外してもよい。
【０２４４】
一実施形態では、核酸（本明細書では二本鎖ｓｉＲＮＡと呼ばれる）は、配列番号１２〜１５に示される二本鎖ＲＮＡ配列を含む。別の実施形態では、核酸（本明細書では二本鎖ｓｉＲＮＡと呼ばれる）は、配列番号１６〜１９に示される二本鎖ＲＮＡ配列を含む。
【０２４５】
しかしながら、ＩＬ−１１またはＩＬ−１１Ｒα  ｍＲＮＡの同じ領域を指向するわずかにより短いか、またはより長い配列も有効であることも予想される。特に、１７〜２３ｂｐの長さの二本鎖配列も有効であると予想される。
【０２４６】
本発明はまた、哺乳動物細胞中で転写された場合、自己ハイブリダイズして、例えば、配列番号１２〜１５もしくは１６〜１９からなる群から選択される配列または単一の塩基対置換によって上記配列のいずれか１つと異なる配列を含む、二本鎖モチーフを産生することができる２つの相補部分を有するＲＮＡ（本明細書では、ｓｈＲＮＡとも呼ばれる）をもたらすＤＮＡも提供する。
【０２４７】
相補部分を、２つの相補部分を互いにハイブリダイズさせる好適な長さおよび配列を有するスペーサーによって連結することができる。好ましくは、スペーサーの５’末端（上流の相補部分のすぐ３’側）は、ヌクレオチド−ＵＵ−または−ＵＧ−、再び好ましくは、−ＵＵ−からなる（しかし再度、これらの特定のジヌクレオチドの使用は必須ではない）。ＯｌｉｇｏＥｎｇｉｎｅ（Ｓｅａｔｔｌｅ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、ＵＳＡ）のｐＳｕｐｅｒ系における使用のために推奨される好適なスペーサーは、ＵＵＣＡＡＧＡＧＡである。この場合およびその他の場合、スペーサーの末端は、互いにハイブリダイズし、例えば、少数（例えば、１または２個）の塩基対によって配列番号１２〜１５または１６〜１９の正確な配列を超えて二本鎖モチーフを伸長させることができる。
【０２４８】
本発明の二本鎖ｓｉＲＮＡを、以下に記載されるような、公知の技術を使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで哺乳動物細胞中に導入して、ＩＬ−１１またはＩＬ−１１の受容体の発現を抑制することができる。
【０２４９】
同様に、本発明のＤＮＡを含有する転写ベクターを、ＲＮＡの一過的な、または安定な発現のために、以下に記載されるような、公知の技術を使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで腫瘍細胞中に導入して、再度、ＩＬ−１１またはＩＬ−１１の受容体の発現を抑制することができる。
【０２５０】
したがって、本発明はまた、哺乳動物、例えば、ヒトの細胞中でＩＬ−１１またはＩＬ−１１の受容体の発現を抑制する方法であって、前記細胞に、本発明の二本鎖ｓｉＲＮＡまたは本発明の転写ベクターを投与するステップを含む、方法も提供する。
【０２５１】
同様に、本発明は、血管新生が病理学的に関与している疾患／状態を処置する方法であって、対象に、ＩＬ−１１シグナル伝達のアンタゴニストと共に、本発明の二本鎖ｓｉＲＮＡまたは本発明の転写ベクターを投与するステップを含む、方法をさらに提供する。
【０２５２】
本発明は、ＩＬ−１１シグナル伝達のアンタゴニストと組み合わせた処置の方法における使用のための、本発明の二本鎖ｓｉＲＮＡおよび本発明の転写ベクターをさらに提供する。
【０２５３】
本発明は、ＩＬ−１１シグナル伝達のアンタゴニストと組み合わせた疾患／状態の処置のための医薬の調製における、本発明の二本鎖ｓｉＲＮＡおよび本発明の転写ベクターの使用をさらに提供する。
【０２５４】
ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の阻害
本発明の実施形態では、ＩＬ−１１の作用を阻害することができる薬剤は、以下の機能特性のうちの１つまたは複数を有してもよい：
・ＩＬ−１１によって媒介されるシグナル伝達の阻害；
・ＩＬ−１１のＩＬ−１１１Ｒα：ｇｐ１３０受容体複合体への結合によって媒介されるシグナル伝達の阻害；
・ＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα複合体のｇｐ１３０への結合によって媒介されるシグナル伝達（すなわち、ＩＬ−１１  ｔｒａｎｓシグナル伝達）の阻害；
・ＩＬ−１１によって媒介されるプロセスの阻害；
・筋線維芽細胞生成の阻害；
・ＳＭＣ増殖／遊走の阻害；
・コラーゲンまたはＩＬ−１１の遺伝子／タンパク質発現の阻害。
【０２５５】
これらの特性を、関連薬剤の性能の、好適な対照薬剤との比較を含んでもよい好適なアッセイにおける前記薬剤の分析によって決定することができる。当業者であれば、所与のアッセイに関する適切な対照条件を同定することができる。
【０２５６】
ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達および／またはＩＬ−１１によって媒介されるプロセスは、ＩＬ−１１の断片およびＩＬ−１１またはその断片を含むポリペプチド複合体によって媒介されるシグナル伝達を含む。ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達は、ヒトＩＬ−１１および／またはマウスＩＬ−１１によって媒介されるシグナル伝達であってもよい。ＩＬ−１１によって媒介されるシグナル伝達は、ＩＬ−１１またはＩＬ−１１含有複合体の、ＩＬ−１１または前記複合体が結合する受容体への結合後に起こってもよい。
【０２５７】
一部の実施形態では、薬剤は、ＩＬ−１１またはＩＬ−１１含有複合体の生物活性を阻害することができてもよい。
【０２５８】
一部の実施形態では、薬剤は、ＩＬ−１１Ｒαおよび／またはｇｐ１３０を含む受容体、例えば、ＩＬ−１１Ｒα：ｇｐ１３０を介するシグナル伝達によって活性化される１つまたは複数のシグナル伝達経路のアンタゴニストである。一部の実施形態では、薬剤は、ＩＬ−１１Ｒαおよび／またはｇｐ１３０を含む１つまたは複数の免疫受容体複合体、例えば、ＩＬ−１１Ｒα：ｇｐ１３０を介するシグナル伝達を阻害することができる。本発明の様々な態様では、本明細書で提供される薬剤は、ＩＬ−１１媒介性ｃｉｓおよび／またはｔｒａｎｓシグナル伝達を阻害することができる。
【０２５９】
一部の実施形態では、薬剤は、薬剤の非存在下（または適切な対照薬剤の存在下）でのシグナル伝達のレベルの１００％未満、例えば、９９％以下、９５％以下、９０％以下、８５％以下、８０％以下、７５％以下、７０％以下、６５％以下、６０％以下、５５％以下、５０％以下、４５％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、または１％以下のうちの１つでＩＬ−１１媒介性シグナル伝達を阻害することができてもよい。一部の実施形態では、薬剤は、薬剤の非存在下（または適切な対照薬剤の存在下）でのシグナル伝達のレベルの１倍未満、例えば、０．９９倍以下、０．９５倍以下、０．９倍以下、０．８５倍以下、０．８倍以下、０．７５倍以下、０．７倍以下、０．６５倍以下、０．６倍以下、０．５５倍以下、０．５倍以下、０．４５倍以下、０．４倍以下、０．３５倍以下、０．３倍以下、０．２５倍以下、０．２倍以下、０．１５倍以下、０．１倍以下のうちの１つでＩＬ−１１媒介性シグナル伝達を低減させることができる。
【０２６０】
一部の実施形態では、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達は、ＩＬ−１１のＩＬ−１１Ｒα：ｇｐ１３０受容体への結合によって媒介されるシグナル伝達であってもよい。そのようなシグナル伝達を、例えば、ＩＬ−１１Ｒαおよびｇｐ１３０を発現する細胞をＩＬ−１１で処理することによって、またはＩＬ−１１Ｒαおよびｇｐ１３０を発現する細胞中でＩＬ−１１産生を刺激することによって分析することができる。
【０２６１】
ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の阻害のための薬剤のＩＣ５０を、例えば、ヒトＩＬ−１１および薬剤の存在下でＩＬ−１１Ｒαおよびｇｐ１３０を発現するＢａ／Ｆ３細胞を培養すること、ならびにＤＮＡ中への３Ｈチミジンの取込みを測定することによって決定することができる。一部の実施形態では、薬剤は、そのようなアッセイにおいて、１０μｇ／ｍｌ以下、好ましくは、５μｇ／ｍｌ以下、４μｇ／ｍｌ以下、３．５μｇ／ｍｌ以下、３μｇ／ｍｌ以下、２μｇ／ｍｌ以下、１μｇ／ｍｌ以下、０．９μｇ／ｍｌ以下、０．８μｇ／ｍｌ以下、０．７μｇ／ｍｌ以下、０．６μｇ／ｍｌ以下、または０．５μｇ／ｍｌ以下のうちの１つのＩＣ５０を示してもよい。
【０２６２】
一部の実施形態では、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達は、ＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα複合体のｇｐ１３０への結合によって媒介されるシグナル伝達であってもよい。一部の実施形態では、ＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα複合体は、可溶型の、例えば、ＩＬ−１１ＲαとＩＬ−１１の細胞外ドメインの複合体、または可溶型ＩＬ−１１Ｒαアイソフォーム／断片と、ＩＬ−１１との複合体であってもよい。一部の実施形態では、可溶型ＩＬ−１１Ｒαは、ＩＬ−１１Ｒαの可溶型（分泌型）アイソフォームであるか、または細胞膜に結合したＩＬ−１１Ｒαの細胞外ドメインのタンパク質分解的切断の遊離産物である。
【０２６３】
一部の実施形態では、ＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα複合体は、細胞に結合した、例えば、細胞膜に結合したＩＬ−１１ＲαとＩＬ−１１との複合体であってもよい。ＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα複合体のｇｐ１３０への結合によって媒介されるシグナル伝達を、ＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα複合体、例えば、ＩＬ−１１Ｒαの細胞外ドメインにペプチドリンカーによって連結されたＩＬ−１１を含む組換え融合タンパク質（例えば、本明細書に記載されるハイパーＩＬ−１１）と共にｇｐ１３０を発現する細胞を処理することによって分析することができる。
【０２６４】
一部の実施形態では、薬剤は、ＩＬ−１１：ＩＬ−１１Ｒα複合体のｇｐ１３０への結合によって媒介されるシグナル伝達を阻害することができてもよく、また、ＩＬ−１１のＩＬ−１１Ｒα：ｇｐ１３０受容体への結合によって媒介されるシグナル伝達を阻害することもできる。
【０２６５】
一部の実施形態では、薬剤は、例えば、ＴＧＦβ１による刺激後に、ＩＬ−１１によって媒介されるプロセスを阻害することができてもよい。ＩＬ−１１によって媒介されるプロセスは、例えば、線維芽細胞からの筋線維芽細胞の生成、ＳＭＣの増殖／遊走、ならびに例えば、コラーゲンおよびＩＬ−１１の遺伝子／タンパク質発現を含み、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏのいずれかにおいて評価することができる。
【０２６６】
一部の実施形態では、薬剤は、例えば、線維芽細胞の、線維化促進因子（例えば、ＴＧＦβ１）への曝露後に、線維芽細胞からの筋線維芽細胞の生成を阻害することができてもよい。線維芽細胞からの筋線維芽細胞の生成を、筋線維芽細胞マーカーのための分析によって精査することができる。
【０２６７】
線維芽細胞は、肝臓、肺、腎臓、心臓、血管、眼、皮膚、膵臓、脾臓、腸（例えば、大腸または小腸）、脳、および骨髄を含む任意の組織に由来するものであってもよい。特定の実施形態では、線維芽細胞は、心臓線維芽細胞（例えば、心房線維芽細胞）、皮膚線維芽細胞、肺線維芽細胞、腎臓線維芽細胞または肝臓線維芽細胞であってもよい。線維芽細胞は、ＣＯＬ１Ａ、ＡＣＴＡ２、プロリル−４−ヒドロキシラーゼ、ＭＡＳ５１６、およびＦＳＰ１のうちの１つまたは複数の遺伝子またはタンパク質発現を特徴としてもよい。筋線維芽細胞マーカーは、αＳＭＡ、ビメンチン、パラディン、コフィリンまたはデスミンの増加の１つまたは複数を含んでもよい（同等の線維芽細胞（例えば、同じ組織に由来する線維芽細胞）による発現レベルと比較した場合）。
【０２６８】
線維芽細胞からの筋線維芽細胞の生成を、線維芽細胞のＴＧＦβ１による刺激後にＯｐｅｒｅｔｔａ  Ｈｉｇｈ−Ｃｏｎｔｅｎｔ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍを使用してαＳＭＡタンパク質発現レベルを測定することによって分析することができる；例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１７／１０３１０８Ａ１を参照されたい。
【０２６９】
一部の実施形態では、薬剤は、薬剤の非存在下（または適切な対照薬剤の存在下）での線維芽細胞からの筋線維芽細胞生成のレベルの１００％未満、例えば、９９％以下、９５％以下、９０％以下、８５％以下、８０％以下、７５％以下、７０％以下、６５％以下、６０％以下、５５％以下、５０％以下、４５％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、または１％以下のうちの１つで線維芽細胞からの筋線維芽細胞生成を阻害することができてもよい。一部の実施形態では、薬剤は、薬剤の非存在下（または適切な対照薬剤の存在下）での線維芽細胞からの筋線維芽細胞生成のレベルの１倍未満、例えば、０．９９倍以下、０．９５倍以下、０．９倍以下、０．８５倍以下、０．８倍以下、０．７５倍以下、０．７倍以下、０．６５倍以下、０．６倍以下、０．５５倍以下、０．５倍以下、０．４５倍以下、０．４倍以下、０．３５倍以下、０．３倍以下、０．２５倍以下、０．２倍以下、０．１５倍以下、０．１倍以下のうちの１つで線維芽細胞からの筋線維芽細胞生成を低減させることができる。
【０２７０】
一部の実施形態では、薬剤は、例えば、ＴＧＦβ１による刺激後に、ＳＭＣ（例えば、分泌ＳＭＣ）の増殖を阻害することができてもよい。ＳＭＣ増殖を、例えば、本明細書に記載されるような３Ｈ−チミジン取込み、ＣＦＳＥ希釈またはＥｄＵ取込みアッセイを使用して測定することができる。
【０２７１】
一部の実施形態では、薬剤は、薬剤の非存在下（または適切な対照薬剤の存在下）での増殖のレベルの１００％未満、例えば、９９％以下、９５％以下、９０％以下、８５％以下、８０％以下、７５％以下、７０％以下、６５％以下、６０％以下、５５％以下、５０％以下、４５％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、または１％以下のうちの１つでＳＭＣの増殖を阻害することができてもよい。一部の実施形態では、薬剤は、薬剤の非存在下（または適切な対照薬剤の存在下）での増殖のレベルの１倍未満、例えば、０．９９倍以下、０．９５倍以下、０．９倍以下、０．８５倍以下、０．８倍以下、０．７５倍以下、０．７倍以下、０．６５倍以下、０．６倍以下、０．５５倍以下、０．５倍以下、０．４５倍以下、０．４倍以下、０．３５倍以下、０．３倍以下、０．２５倍以下、０．２倍以下、０．１５倍以下、０．１倍以下のうちの１つでＳＭＣの増殖を阻害することができる。
【０２７２】
一部の実施形態では、薬剤は、例えば、ＴＧＦβ１による刺激後に、ＳＭＣ（例えば、分泌ＳＭＣ）の遊走を阻害することができてもよい。ＳＭＣ遊走を、例えば、実施例９およびＬｉａｎｇら、Ｎａｔ  Ｐｒｏｔｏｃ．（２００７）２（２）：３２９〜３３頁に記載されたようなスクラッチアッセイを使用して、または実施例９およびＣｈｅｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．（２００５）２９４：１５〜２２頁に記載されたようなＢｏｙｄｅｎチャンバーアッセイを使用して測定することができる。
【０２７３】
一部の実施形態では、薬剤は、薬剤の非存在下（または適切な対照薬剤の存在下）での遊走のレベルの１００％未満、例えば、９９％以下、９５％以下、９０％以下、８５％以下、８０％以下、７５％以下、７０％以下、６５％以下、６０％以下、５５％以下、５０％以下、４５％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、または１％以下のうちの１つでＳＭＣの遊走を阻害することができてもよい。一部の実施形態では、薬剤は、薬剤の非存在下（または適切な対照薬剤の存在下）での遊走のレベルの１倍未満、例えば、０．９９倍以下、０．９５倍以下、０．９倍以下、０．８５倍以下、０．８倍以下、０．７５倍以下、０．７倍以下、０．６５倍以下、０．６倍以下、０．５５倍以下、０．５倍以下、０．４５倍以下、０．４倍以下、０．３５倍以下、０．３倍以下、０．２５倍以下、０．２倍以下、０．１５倍以下、０．１倍以下のうちの１つでＳＭＣの遊走を阻害することができる。
【０２７４】
一部の実施形態では、薬剤は、コラーゲンまたはＩＬ−１１の遺伝子／タンパク質発現を阻害することができてもよい。遺伝子および／またはタンパク質発現を、本明細書に記載のように測定することができる。
【０２７５】
一部の実施形態では、薬剤は、薬剤の非存在下（または適切な対照薬剤の存在下）での発現のレベルの１００％未満、例えば、９９％以下、９５％以下、９０％以下、８５％以下、８０％以下、７５％以下、７０％以下、６５％以下、６０％以下、５５％以下、５０％以下、４５％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、または１％以下のうちの１つでコラーゲンまたはＩＬ−１１の遺伝子／タンパク質発現を阻害することができてもよい。一部の実施形態では、薬剤は、薬剤の非存在下（または適切な対照薬剤の存在下）での発現のレベルの１倍未満、例えば、０．９９倍以下、０．９５倍以下、０．９倍以下、０．８５倍以下、０．８倍以下、０．７５倍以下、０．７倍以下、０．６５倍以下、０．６倍以下、０．５５倍以下、０．５倍以下、０．４５倍以下、０．４倍以下、０．３５倍以下、０．３倍以下、０．２５倍以下、０．２倍以下、０．１５倍以下、０．１倍以下のうちの１つでコラーゲンまたはＩＬ−１１の遺伝子／タンパク質発現を阻害することができる。
【０２７６】
血管新生因子のアンタゴニスト
本発明の態様は、例えば、１つまたは複数の血管新生因子の拮抗作用による、血管新生の拮抗作用（すなわち、阻害）を含む。
【０２７７】
ここで、「阻害」とは、対照状態と比較した低減、減少または低下を指す。例えば、血管新生シグナル伝達のアンタゴニストによる血管新生因子の作用の阻害とは、薬剤の非存在下での、および／または適切な対照薬剤の存在下での、血管新生シグナル伝達の程度の低減、減少または低下を指す。
【０２７８】
阻害は、本明細書では、中和または拮抗作用を指してもよい。血管新生シグナル伝達のアンタゴニスト（例えば、血管新生因子によって媒介される活性のアンタゴニスト）は、関連する機能またはプロセスに関して「中和」または「アンタゴニスト」剤であると言ってもよい。例えば、血管新生シグナル伝達を阻害することができる薬剤は、血管新生シグナル伝達を中和することができる薬剤と呼んでもよく、または血管新生シグナル伝達のアンタゴニストと呼んでもよい。
【０２７９】
血管新生シグナル伝達経路は、シグナル伝達の阻害のための複数の経路を提供する。血管新生シグナル伝達のアンタゴニストは、その因子の受容体を介するシグナル伝達に関与する、またはそれにとって必要な１つまたは複数の因子の作用を阻害することによって、血管新生因子の作用を阻害することができる。
【０２８０】
例えば、血管新生因子（例えば、ＶＥＧＦ）と、その因子の受容体（例えば、ＶＥＧＦＲ１、２または３）との相互作用を破壊することによって、阻害を達成することができる。一部の実施形態では、血管新生シグナル伝達の阻害は、例えば、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、およびＶＥＧＦＲ３のうちの１つまたは複数の遺伝子またはタンパク質発現を阻害することによって達成される。
【０２８１】
一部の実施形態では、血管新生の拮抗作用（すなわち、阻害）は、線維症の拮抗作用、阻害または低減をもたらす。
【０２８２】
結合剤
一部の実施形態では、血管新生因子媒介性シグナル伝達を阻害することができる薬剤は、血管新生因子に結合することができる。一部の実施形態では、血管新生因子媒介性シグナル伝達を阻害することができる薬剤は、血管新生因子の受容体（例えば、ＶＥＧＦのためのＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２またはＶＥＧＦＲ３）に結合してもよい。そのような薬剤の結合は、血管新生因子リガンドが、受容体に結合する能力を低減させる／防止することによって、下流のシグナル伝達を阻害することにより、血管新生因子媒介性シグナル伝達を阻害することができる。
【０２８３】
血管新生因子または血管新生因子の相互作用パートナーに結合することができる薬剤は、任意の種類のものであってもよいが、一部の実施形態では、薬剤は、抗体、その抗原結合性断片、ポリペプチド、ペプチド、核酸、オリゴヌクレオチド、アプタマーまたは低分子であってもよい。薬剤を、単離もしくは精製された形態で提供するか、または医薬組成物もしくは医薬として製剤化することができる。
【０２８４】
血管新生因子結合剤の特性
本発明による血管新生因子／血管新生因子を含む複合体または所与の血管新生因子の相互作用パートナーに結合することができる薬剤は、以下の特性のうちの１つまたは複数を示してもよい：
・血管新生因子／血管新生因子を含む複合体または血管新生因子の相互作用パートナーへの特異的結合；
・１０μＭ以下、好ましくは、５μＭ以下、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下または１００ｐＭ以下のうちの１つのＫＤでの、血管新生因子／血管新生因子を含む複合体または血管新生因子の相互作用パートナーへの結合；
・血管新生因子と、血管新生因子の相互作用パートナーとの相互作用の阻害。
【０２８５】
これらの特性を、関連薬剤の性能の、好適な対照薬剤との比較を含んでもよい好適なアッセイにおける前記薬剤の分析によって決定することができる。当業者であれば、所与のアッセイに関する適切な対照条件を同定することができる。本明細書で説明されるように、血管新生因子の相互作用パートナーは、例えば、血管新生因子のリガンド（例えば、血管新生因子が受容体である場合、例えば、ＶＥＧＦ受容体、ＦＧＦ受容体もしくはＰＤＧＦ受容体）であってよいか、または血管新生因子の受容体（例えば、血管新生因子がリガンドである場合、例えば、ＶＥＧＦ、ＦＧＦもしくはＰＤＧＦ）であってもよい。
【０２８６】
例えば、試験抗体／抗原結合性断片が血管新生因子／血管新生因子を含む複合体／血管新生因子の相互作用パートナーに結合する能力の分析のための好適な陰性対照は、非標的タンパク質（すなわち、血管新生因子／血管新生因子を含む複合体／血管新生因子の相互作用パートナーに特異的ではない）に対する抗体／抗原結合性断片であってもよい。好適な陽性対照は、既知の、検証された（例えば、市販の）血管新生因子または相互作用パートナーに結合する抗体であってもよい。対照は、分析される推定血管新生因子／血管新生因子を含む複合体／相互作用パートナーに結合する抗体／抗原結合性断片と同じアイソタイプのものであってよく、例えば、同じ定常領域を有してもよい。
【０２８７】
一部の実施形態では、薬剤は、血管新生因子または血管新生因子を含む複合体、または血管新生因子の相互作用パートナーに特異的に結合することができてもよい。所与の標的分子に特異的に結合する薬剤は、好ましくは、それが他の非標的分子に結合するよりも高い親和性、および／または長い持続期間で標的に結合する。
【０２８８】
一部の実施形態では、結合剤の非標的への結合の程度は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＳＰＲ、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）、マイクロスケール熱泳動法（ＭＳＴ）、またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定された場合、薬剤の標的への結合の約１０％未満である。あるいは、結合特異性は、結合剤が、別の非標的分子に対するＫＤよりも少なくとも０．１桁高い（すなわち、０．１ｘ１０ｎ（式中、ｎは桁を表す整数である））ＫＤで、血管新生因子、血管新生因子を含む複合体または血管新生因子の相互作用パートナーに結合する場合、結合親和性を単位として反映されてもよい。これは、必要に応じて、少なくとも０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、または２．０のうちの１つであってもよい。
【０２８９】
所与の結合剤の、その標的に対する結合親和性は、その解離定数（ＫＤ）を単位として記載されることが多い。結合親和性は、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ；例えば、Ｈｅａｒｔｙら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ（２０１２）９０７：４１１〜４４２頁；またはＲｉｃｈら、Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．２００８  Ｆｅｂ  １；３７３（１）：１１２〜２０頁を参照されたい）、バイオレイヤー干渉法（例えば、Ｌａｄら（２０１５）Ｊ  Ｂｉｏｍｏｌ  Ｓｃｒｅｅｎ  ２０（４）：４９８〜５０７頁；もしくはＣｏｎｃｅｐｃｉｏｎら、Ｃｏｍｂ  Ｃｈｅｍ  Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｓｃｒｅｅｎ．２００９  Ｓｅｐ；１２（８）：７９１〜８００頁を参照されたい）、マイクロスケール熱泳動（ＭＳＴ）分析（例えば、Ｊｅｒａｂｅｋ−Ｗｉｌｌｅｍｓｅｎら、Ａｓｓａｙ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．２０１１  Ａｕｇ；９（４）：３４２〜３５３頁を参照されたい）、または放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）などの、当業界で公知の方法によって測定することができる。
【０２９０】
一部の実施形態では、薬剤は、５０μＭ以下、好ましくは、１０μＭ以下、５μＭ以下、４μＭ以下、３μＭ以下、２μＭ以下、１μＭ、５００ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、７５ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、４０ｎＭ以下、３０ｎＭ以下、２０ｎＭ以下、１５ｎＭ以下、１２．５ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、９ｎＭ以下、８ｎＭ以下、７ｎＭ以下、６ｎＭ以下、５ｎＭ以下、４ｎＭ以下、３ｎＭ以下、２ｎＭ以下、１ｎＭ以下、５００ｐＭ以下、４００ｐＭ以下、３００ｐＭ以下、２００ｐＭ以下、または１００ｐＭ以下のうちの１つのＫＤで血管新生因子または血管新生因子を含む複合体、または血管新生因子の相互作用パートナーに結合することができる。
【０２９１】
一部の実施形態では、薬剤は、ＥＣ５０＝１０，０００ｎｇ／ｍｌ以下、好ましくは、５，０００ｎｇ／ｍｌ以下、１０００ｎｇ／ｍｌ以下、９００ｎｇ／ｍｌ以下、８００ｎｇ／ｍｌ以下、７００ｎｇ／ｍｌ以下、６００ｎｇ／ｍｌ以下、５００ｎｇ／ｍｌ以下、４００ｎｇ／ｍｌ以下、３００ｎｇ／ｍｌ以下、２００ｎｇ／ｍｌ以下、１００ｎｇ／ｍｌ以下、９０ｎｇ／ｍｌ以下、８０ｎｇ／ｍｌ以下、７０ｎｇ／ｍｌ以下、６０ｎｇ／ｍｌ以下、５０ｎｇ／ｍｌ以下、４０ｎｇ／ｍｌ以下、３０ｎｇ／ｍｌ以下、２０ｎｇ／ｍｌ以下、１５ｎｇ／ｍｌ以下、１０ｎｇ／ｍｌ以下、７．５ｎｇ／ｍｌ以下、５ｎｇ／ｍｌ以下、２．５ｎｇ／ｍｌ以下、または１ｎｇ／ｍｌ以下のうちの１つの結合の親和性（例えば、ＥＬＩＳＡによって決定された場合）で、血管新生因子、血管新生因子を含む複合体または血管新生因子の相互作用パートナーに結合する。そのようなＥＬＩＳＡを、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、ｖｏｌ．１（第２版）、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ（２０１０）、Ｐａｒｔ  Ｖ、６５７〜６６５頁に記載のように実施することができる。
【０２９２】
一部の実施形態では、薬剤は、血管新生因子の相互作用パートナーまたは血管新生因子を含む複合体への結合にとって重要である領域中で、血管新生因子または血管新生因子を含む複合体に結合し、それによって、血管新生因子または血管新生因子を含む複合体と、血管新生因子の相互作用パートナーとの相互作用（例えば、血管新生因子受容体を介するシグナル伝達）を阻害する。一部の実施形態では、薬剤は、血管新生因子または血管新生因子を含む複合体への結合にとって重要である領域中で、血管新生因子の相互作用パートナーに結合し、それによって、血管新生因子または血管新生因子を含む複合体と、血管新生因子の相互作用パートナーとの相互作用（例えば、血管新生因子受容体を介するシグナル伝達）を阻害する。
【０２９３】
所与の結合剤（例えば、血管新生因子／血管新生因子を含む複合体または血管新生因子の相互作用パートナーに結合することができる薬剤）が２つのタンパク質間の相互作用を阻害する能力を、例えば、結合剤の存在下での、または相互作用パートナーの一方もしくは両方の、結合剤とのインキュベーション後の相互作用の分析によって決定することができる。所与の結合剤が２つの相互作用パートナー間の相互作用を阻害することができるかどうかを決定するための好適なアッセイの例は、競合ＥＬＩＳＡである。
【０２９４】
所与の相互作用（例えば、ＶＥＧＦと、ＶＥＧＦＲ１〜３のうちの１つまたは複数との間などの、血管新生因子と血管新生因子の相互作用パートナーとの間）を阻害することができる結合剤は、結合剤の非存在下（または適切な対照結合剤の存在下）での相互作用レベルと比較して、結合剤の存在下での、または相互作用パートナーの一方もしくは両方の、結合剤とのインキュベーション後の相互作用パートナー間の相互作用レベルの低下／減少の観察によって同定される。好適な分析を、例えば、組換え相互作用パートナーを使用して、または相互作用パートナーを発現する細胞を使用して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで実施することができる。相互作用パートナーを発現する細胞は、内因的にそうするか、または細胞中に導入された核酸からそうしてもよい。そのようなアッセイのために、相互作用パートナーおよび／または結合剤の一方または両方を、相互作用レベルを検出および／または測定するために検出可能な実体で標識するか、またはそれと共に使用することができる。例えば、薬剤を、放射性原子または着色された分子または蛍光分子または任意の他の方法で容易に検出することができる分子で標識することができる。好適な検出可能分子としては、蛍光タンパク質、ルシフェラーゼ、酵素基質、および放射標識が挙げられる。結合剤を、検出可能な標識で直接標識するか、またはそれを間接的に標識することができる。例えば、結合剤は未標識であってもよく、それ自体、標識されている別の結合剤によって検出することができる。あるいは、第２の結合剤は、それにビオチンを結合されていてもよく、標識されたストレプトアビジンのビオチンへの結合を使用して、第１の結合剤を間接的に標識することができる。
【０２９５】
結合剤が２つの結合パートナー間の相互作用を阻害する能力を、そのような相互作用の下流の機能的結果、例えば、血管新生因子媒介性シグナル伝達の分析によって決定することもできる。
【０２９６】
一部の実施形態では、結合剤は、結合剤の非存在下（または適切な対照結合剤の存在下）での血管新生因子と血管新生因子の相互作用パートナーとの相互作用レベルの１００％未満、例えば、９９％以下、９５％以下、９０％以下、８５％以下、８０％以下、７５％以下、７０％以下、６５％以下、６０％以下、５５％以下、５０％以下、４５％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、または１％以下のうちの１つで血管新生因子と血管新生因子の相互作用パートナーとの相互作用を阻害することができてもよい。一部の実施形態では、結合剤は、結合剤の非存在下（または適切な対照結合剤の存在下）での血管新生因子と血管新生因子の相互作用パートナーとの相互作用レベルの１倍未満、例えば、０．９９倍以下、０．９５倍以下、０．９倍以下、０．８５倍以下、０．８倍以下、０．７５倍以下、０．７倍以下、０．６５倍以下、０．６倍以下、０．５５倍以下、０．５倍以下、０．４５倍以下、０．４倍以下、０．３５倍以下、０．３倍以下、０．２５倍以下、０．２倍以下、０．１５倍以下、０．１倍以下のうちの１つで血管新生因子と血管新生因子の相互作用パートナーとの相互作用を阻害することができてもよい。
【０２９７】
抗体および抗原結合性断片
一部の実施形態では、血管新生因子または血管新生因子の相互作用パートナーに結合することができる薬剤は、抗体、またはその抗原結合性断片である。一部の実施形態では、血管新生因子または血管新生因子の相互作用パートナーに結合することができる薬剤は、ポリペプチド、例えば、デコイ受容体分子である。一部の実施形態では、血管新生因子または血管新生因子の相互作用パートナーに結合することができる薬剤は、アプタマーであってもよい。
【０２９８】
一部の実施形態では、血管新生因子または血管新生因子の相互作用パートナーに結合することができる薬剤は、抗体、またはその抗原結合性断片である。血管新生因子に結合することができる例示的な抗体としては、ＶＥＧＦに結合することができる抗体、例えば、ベバシズマブおよびラニビズマブが挙げられる。
【０２９９】
抗体／断片は、血管新生因子の生物活性を阻害する、または低減させるアンタゴニスト抗体／断片であってもよい。抗体／断片は、血管新生因子の生物学的効果、例えば、血管新生因子受容体による産生シグナル伝達を刺激するその能力を中和する、中和抗体であってもよい。
【０３００】
デコイ受容体
血管新生因子または血管新生因子を含む複合体に結合することができるペプチドまたはポリペプチドベースの薬剤は、血管新生因子受容体、例えば、血管新生因子受容体の血管新生因子結合断片に基づくものであってよい。
【０３０１】
一部の実施形態では、結合剤は、受容体細胞外ドメインの血管新生因子結合断片を含んでもよく、好ましくは、可溶型であってよい、および／または膜貫通ドメインの１つもしくは複数、または全部を含まなくてもよい。そのような分子は、デコイ受容体と記載することができる。
【０３０２】
一部の実施形態では、結合剤は、ヒトＩｇＧ１の定常領域（Ｆｃ）に融合された、ＶＥＧＦＲ−１の第２の免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメインと、ＶＥＧＦＲ−２の第３のＩｇドメインとの組換え融合タンパク質を含んでもよい。例示的な血管新生デコイ受容体は、アフリベルセプト（Ｅｙｌｅａ、配列番号２４）である。
【０３０３】
そのため、一部の実施形態では、結合剤は、デコイ受容体、例えば、血管新生因子および／または血管新生因子を含む複合体の可溶型受容体であってもよい。
【０３０４】
デコイ血管新生因子受容体は、好ましくは、血管新生因子および／または血管新生因子を含む複合体に結合し、それによって、これらの種を、その受容体への結合に利用できなくする。そのため、それらは、「デコイ」受容体として作用し、血管新生シグナル伝達は、デコイ受容体の非存在下でのシグナル伝達のレベルと比較して低減する。
【０３０５】
一部の実施形態では、デコイ受容体は、例えば、少なくとも１００μＭ以下、必要に応じて、１０μＭ以下、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、または約１〜１００ｎＭのうちの１つの結合親和性で、血管新生因子に結合することができてもよい。一部の実施形態では、デコイ受容体は、血管新生因子結合ドメインの全部または一部を含んでもよく、必要に応じて、膜貫通ドメインの全部または一部を欠いてもよい。デコイ受容体を、必要に応じて、免疫グロブリン定常領域、例えば、ＩｇＧ  Ｆｃ領域に融合することができる。
【０３０６】
阻害剤
本発明は、血管新生因子、血管新生因子を含む複合体、または血管新生因子の相互作用パートナーのうちの１つまたは複数に結合し、血管新生シグナル伝達を阻害することができる阻害剤分子の使用を企図する。
【０３０７】
一部の実施形態では、薬剤は、血管新生因子に基づくペプチドまたはポリペプチドベースの結合剤、例えば、血管新生因子の変異体、バリアントまたは結合断片である。好適なペプチドまたはポリペプチドベースの薬剤は、シグナル伝達の開始を誘導しない、または最適でないシグナル伝達をもたらす様式で血管新生因子の受容体（例えば、ＶＥＧＦＲ１、２および／または３）に結合してもよい。この種類の変異体は、内因性血管新生因子の競合的阻害剤として作用してもよい。
【０３０８】
一部の実施形態では、血管新生因子の拮抗作用を行うことができる結合剤は、低分子阻害剤の形態を採ってもよい。
【０３０９】
血管新生の低分子阻害剤は、チロシンキナーゼ阻害剤であってもよい。複数の低分子チロシンキナーゼ阻害剤が開発されている。血管新生経路成分の機能的冗長性を考慮すると、これらの薬物は、ＶＥＧＦＲなどの複数のキナーゼを標的とする。それらのものとしては、ＶＥＧＦ、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）、およびＫＩＴの阻害剤であるパゾパニブ（Ｖｏｔｒｉｅｎｔ（登録商標））；ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＶＥＧＦＲ−３、ＰＤＧＦＲ−β、およびＲＡＦ１の阻害剤であるソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標））；ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＶＥＧＦＲ−３、ＰＤＧＦＲ−β、およびＲＥＴの阻害剤であるスニチニブ（Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標））；ＶＥＧＦＲおよび上皮成長因子受容体の阻害剤であるバンデタニブ（Ｃａｐｒｅｌｓａ（登録商標））；ＭＥＴおよびＶＥＧＦＲ２の阻害剤であるカボザンチニブ（Ｃｏｍｅｔｒｉｑ（登録商標））；ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２およびＶＥＧＦＲ−３の阻害剤であるアキシチニブ（Ｉｎｌｙｔａ（登録商標））；既知のＶＥＧＦ受容体、ならびに血小板由来成長因子受容体−ベータおよびｃ−ｋｉｔの阻害剤であるが、ＶＥＧＦＲ−２について最も選択的であるバタラニブ；ならびにＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＶＥＧＦＲ−３、ＴＩＥ２、ＰＤＧＦＲ、線維芽細胞増殖因子受容体、ＫＩＴ、ＲＥＴ、およびＲＡＦｆの阻害剤であるレゴラフェニブ（Ｓｔｉｖａｒｇａ（登録商標））が挙げられる。
【０３１０】
血管新生の他の低分子阻害剤としては、アネコルタブ酢酸エステル、および乳酸スクアラミンが挙げられる。
【０３１１】
アプタマー
一部の実施形態では、血管新生因子／血管新生因子を含む複合体または血管新生因子の相互作用パートナーに結合することができる薬剤は、アプタマーである。
【０３１２】
血管新生因子の例示的なアプタマー阻害剤は、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＷＯ９８１８４８０Ａ１に記載された抗ＶＥＧＦアプタマーであるペガプタニブである。
【０３１３】
血管新生因子または血管新生因子受容体の発現を低減させることができる薬剤
本発明の態様では、１つまたは複数の血管新生因子、または血管新生因子の相互作用パートナーの発現を防止するか、または低減させることができる、血管新生因子媒介性シグナル伝達のアンタゴニストが提供され得る。
【０３１４】
発現は、遺伝子またはタンパク質発現であってもよく、本明細書に記載のように決定することができる。発現は、対象の細胞／組織／臓器／臓器系によるものであってもよい。
【０３１５】
好適な薬剤は、任意の種類のものであってよいが、一部の実施形態では、１つまたは複数の血管新生因子、または血管新生因子の相互作用パートナーの発現を防止するか、または低減させることができる薬剤は、低分子またはオリゴヌクレオチドであってもよい。
【０３１６】
１つまたは複数の血管新生因子、または血管新生因子の相互作用パートナーの発現を防止する、または低減させることができる薬剤は、例えば、血管新生因子、もしくは血管新生因子の相互作用パートナーをコードする遺伝子の転写を阻害すること、血管新生因子、もしくは血管新生因子の相互作用パートナーをコードするＲＮＡの転写後プロセッシングを阻害すること、血管新生因子、もしくは血管新生因子の相互作用パートナーをコードするＲＮＡの安定性を低減させること、血管新生因子、もしくは血管新生因子の相互作用パートナーをコードするＲＮＡの分解を促進すること、血管新生因子、もしくは血管新生因子の相互作用パートナーの翻訳後プロセッシングを阻害すること、血管新生因子、もしくは血管新生因子の相互作用パートナーの安定性を低減させること、または血管新生因子、もしくは血管新生因子の相互作用パートナーの分解を促進することによってそうしてもよい。
【０３１７】
本発明は、血管新生因子、または血管新生因子の相互作用パートナーの発現を防止する／低減させるためのアンチセンス核酸の使用を企図する。一部の実施形態では、血管新生因子、または血管新生因子の相互作用パートナーの発現を防止する、または低減させることができる薬剤は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）によって発現の低減を引き起こしてもよい。
【０３１８】
一部の実施形態では、薬剤は、限定されるものではないが、ｓｈＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｍｉＲＮＡまたはｓｉＲＮＡを含む、アンチセンスまたは低分子干渉ＲＮＡなどの阻害的核酸であってもよい。
【０３１９】
一部の実施形態では、阻害的核酸は、ベクター中に提供される。例えば、一部の実施形態では、薬剤は、１つまたは複数の血管新生因子、または血管新生因子の相互作用パートナーのためのｓｈＲＮＡをコードするレンチウイルスベクターであってもよい。
【０３２０】
血管新生因子およびその相互作用パートナーの既知の核酸配列（例えば、受託番号ＡＹ０４７５８１．１  ＧＩ：１５４２２１０８（ヒトＶＥＧＦ−Ａ）、ＡＦ３１７８９２．１  ＧＩ：１２８０２４５３（マウスＶＥＧＦ）、ＡＹ０３３５０８．１  ＧＩ：１５８２２７２４（ラットＶＥＧＦ）、ＮＭ＿００２２５３．３  ＧＩ：１３３３８８１０８４（ヒトＶＥＧＦ受容体）、ＮＭ＿０２５８０９．５  ＧＩ：２３７５１２９３６（マウスＶＥＧＦ受容体）、ＮＭ＿０１９３０６．２  ＧＩ：８２８１７８２１８（ラットＶＥＧＦ受容体）の下でＧｅｎＢａｎｋから入手可能な既知のｍＲＮＡ配列）を考慮して、血管新生因子、または血管新生因子受容体の発現を抑制する、またはサイレンシングするようにオリゴヌクレオチドを設計することができる。
【０３２１】
そのようなオリゴヌクレオチドは、任意の長さを有してもよいが、好ましくは、短い、例えば、１００ヌクレオチド未満、例えば、１０〜４０ヌクレオチド、または２０〜５０ヌクレオチドであってよく、標的オリゴヌクレオチド、例えば、血管新生因子のｍＲＮＡ、または血管新生因子の相互作用パートナーのｍＲＮＡ中の対応する長さのヌクレオチドの配列に対して完全な相補性または近い相補性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の相補性）を有するヌクレオチド配列を含んでもよい。ヌクレオチド配列の相補領域は、任意の長さを有してもよいが、好ましくは、少なくとも５、必要に応じて、５０未満のヌクレオチド長、例えば、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０ヌクレオチドのうちの１つである。
【０３２２】
血管新生因子、または血管新生因子の相互作用パートナーの発現の抑制は、好ましくは、細胞／組織／臓器／臓器系／対象によって発現される血管新生因子、または血管新生因子の相互作用パートナーの量の減少をもたらすと予想される。例えば、所与の細胞中での、好適な核酸の投与による血管新生因子、または血管新生因子の相互作用パートナーの抑制は、未処理の細胞と比較して、その細胞により発現される血管新生因子、または血管新生因子の相互作用パートナーの量の減少をもたらすと予想される。抑制は、部分的であってもよい。好ましい抑制の程度は、少なくとも５０％、より好ましくは、少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％または９０％のうちの１つである。９０％〜１００％の抑制のレベルは、発現または機能の「サイレンシング」と考えられる。
【０３２３】
別の選択肢は、細胞中での短いヘアピンＲＮＡ分子（ｓｈＲＮＡ）の発現である。好ましくは、ｓｈＲＮＡ分子は、血管新生因子、または血管新生因子の相互作用パートナーの部分配列を含む。好ましくは、ｓｈＲＮＡ配列は、４０〜１００塩基長、より好ましくは、４０〜７０塩基長である。ヘアピンのステムは、好ましくは、１９〜３０塩基対の長さである。ステムは、ヘアピン構造を安定化するためのＧ−Ｕ対を含有してもよい。
【０３２４】
ｓｉＲＮＡ分子、より長いｄｓＲＮＡ分子またはｍｉＲＮＡ分子を、好ましくは、ベクター内に含有される核酸配列の転写によって組換え的に作製することができる。好ましくは、ｓｉＲＮＡ分子、より長いｄｓＲＮＡ分子またはｍｉＲＮＡ分子は、血管新生因子、または血管新生因子の相互作用パートナーの部分配列を含む。
【０３２５】
一実施形態では、ｓｉＲＮＡ、より長いｄｓＲＮＡまたはｍｉＲＮＡは、ベクターからの転写によって内因的に（細胞内で）産生される。好適なベクターは、血管新生因子、または血管新生因子の相互作用パートナーを抑制することができるオリゴヌクレオチド剤を発現するように構成されたオリゴヌクレオチドベクターであってもよい。そのようなベクターは、ウイルスベクターまたはプラスミドベクターであってもよい。
【０３２６】
他の実施形態では、本発明は、そうでなければ血管新生因子、または血管新生因子受容体を発現する哺乳動物、例えば、ヒト細胞内に好適に導入されたか、または発現された場合、ＲＮＡｉによる血管新生因子、または血管新生因子の相互作用パートナーの発現を抑制することができる核酸を提供する。
【０３２７】
血管新生因子およびその相互作用パートナーの既知の核酸配列（例えば、受託番号ＡＦ４３７８９５．１  ＧＩ：１６６６０６８５（ヒトＶＥＧＦ）、Ｕ４１３８３．１  ＧＩ：１１３４９６４（マウスＶＥＧＦ）、ＮＭ＿００１２８７１０７．１  ＧＩ：５６０１８６５７６（ラットＶＥＧＦ）、ＮＭ＿００２２５３．３  ＧＩ：１３３３８８１０８４（ヒトＶＥＧＦ受容体）、ＮＭ＿００１００１１８３．１  ＧＩ：４７５６４０８９（マウスＶＥＧＦ受容体）、ＮＭ＿０１９３０６．２  ＧＩ：８２８１７８２１８（ラットＶＥＧＦ受容体）の下でＧｅｎＢａｎｋから入手可能な既知のｍＲＮＡ配列）を考慮して、血管新生因子、または血管新生因子受容体の発現を抑制する、またはサイレンシングするようにオリゴヌクレオチドを設計することができる。
【０３２８】
核酸は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｍ３２９７７．１  ＧＩ：１８１９７０（ＶＥＧＦ）、ＢＣ１３１８２２．１  ＧＩ：１２４２９７５２７（ＶＥＧＦ受容体）に定義された血管新生因子、または血管新生因子の相互作用パートナーのｍＲＮＡの一部、または前記ｍＲＮＡに対する相補配列に対する実質的な配列同一性を有してもよい。
【０３２９】
核酸は、二本鎖ｓｉＲＮＡであってもよい（当業者であれば理解できるように、また、以下でさらに説明されるように、ｓｉＲＮＡ分子は、短い３’ＤＮＡ配列をも含んでもよい）。
【０３３０】
あるいは、核酸は、哺乳動物細胞中で転写された場合、相補部分が互いにハイブリダイズする場合にＲＮＡがヘアピンの形態を採るような、スペーサーを介して連結された２つの相補部分を有するＲＮＡをもたらす、ＤＮＡ（通常は二本鎖ＤＮＡ）であってもよい。哺乳動物細胞中では、ヘアピン構造は、ＤＩＣＥＲ酵素によって分子から切断され、２つの異なるが、ハイブリダイズしたＲＮＡ分子をもたらしてもよい。
【０３３１】
本発明はまた、哺乳動物細胞中で転写された場合、自己ハイブリダイズして、例えば、配列番号１４〜１７もしくは１８〜２１からなる群から選択される配列または単一の塩基対置換によって上記配列のいずれか１つと異なる配列を含む、二本鎖モチーフを産生することができる２つの相補部分を有するＲＮＡ（本明細書では、ｓｈＲＮＡとも呼ばれる）をもたらすＤＮＡも提供する。
【０３３２】
相補部分は一般に、２つの相補部分を互いにハイブリダイズさせる好適な長さおよび配列を有するスペーサーによって連結されると予想される。好ましくは、スペーサーの５’末端（上流の相補部分のすぐ３’側）は、ヌクレオチド−ＵＵ−または−ＵＧ−、再び好ましくは、−ＵＵ−からなる（しかし再度、これらの特定のジヌクレオチドの使用は必須ではない）。ＯｌｉｇｏＥｎｇｉｎｅ（Ｓｅａｔｔｌｅ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、ＵＳＡ）のｐＳｕｐｅｒ系における使用のために推奨される好適なスペーサーは、ＵＵＣＡＡＧＡＧＡである。この場合およびその他の場合、スペーサーの末端は、互いにハイブリダイズし、例えば、少数（例えば、１または２個）の塩基対によって配列番号１４〜１７または１８〜２１の正確な配列を超えて二本鎖モチーフを伸長させることができる。
【０３３３】
本発明の二本鎖ｓｉＲＮＡを、以下に記載されるような公知の技術を使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで哺乳動物細胞中に導入して、血管新生因子または血管新生因子の相互作用パートナーの発現を抑制することができる。
【０３３４】
同様に、本発明のＤＮＡを含有する転写ベクターを、ＲＮＡの一過的な、または安定な発現のために、以下に記載されるような、公知の技術を使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで腫瘍細胞中に導入して、再度、血管新生因子または血管新生因子の相互作用パートナーの発現を抑制することができる。
したがって、本発明はまた、哺乳動物、例えば、ヒトの細胞中で血管新生因子または血管新生因子の相互作用パートナーの発現を抑制する方法であって、前記細胞に、本発明の二本鎖ｓｉＲＮＡまたは本発明の転写ベクターを投与するステップを含む、方法も提供する。
【０３３５】
同様に、本発明は、線維症および／または血管新生が病理学的に関与している疾患／状態を処置する方法であって、対象に、血管新生因子のアンタゴニストと共に、本発明の二本鎖ｓｉＲＮＡまたは本発明の転写ベクターを投与するステップを含む、方法をさらに提供する。
【０３３６】
本発明は、血管新生のアンタゴニストと組み合わせた処置方法、好ましくは、線維症および／または血管新生が病理学的に関与する疾患／状態を処置する方法における使用のための、本発明の二本鎖ｓｉＲＮＡおよび本発明の転写ベクターをさらに提供する。
【０３３７】
本発明は、線維症および／または血管新生が病理学的に関与する疾患／状態の処置のための医薬の調製における、血管新生因子のアンタゴニストと組み合わせた、本発明の二本鎖ｓｉＲＮＡおよび本発明の転写ベクターの使用をさらに提供する。
【０３３８】
血管新生因子媒介性シグナル伝達の阻害
本発明の実施形態では、血管新生因子の作用を阻害する（すなわち、拮抗する）ことができる薬剤は、以下の機能特性のうちの１つまたは複数を有してもよい：
・血管新生因子によって媒介されるシグナル伝達の阻害；
・血管新生因子の、血管新生因子の相互作用パートナーへの結合によって媒介されるシグナル伝達の阻害；
・血管新生因子によって媒介されるプロセスの阻害；
・腸重積症の阻害；
・毛細血管増殖の阻害；
・浮腫の阻害。
【０３３９】
これらの特性を、関連薬剤の性能の、好適な対照薬剤との比較を含んでもよい好適なアッセイにおける前記薬剤の分析によって決定することができる。当業者であれば、所与のアッセイに関する適切な対照条件を同定することができる。
【０３４０】
血管新生因子媒介性シグナル伝達および／または血管新生因子によって媒介されるプロセスは、血管新生因子の断片および血管新生因子またはその断片を含むポリペプチド複合体によって媒介されるシグナル伝達を含む。血管新生因子媒介性シグナル伝達は、ヒト血管新生因子および／またはマウス血管新生因子によって媒介されるシグナル伝達であってもよい。血管新生因子によって媒介されるシグナル伝達は、血管新生因子または血管新生因子含有複合体の、血管新生因子または前記複合体が結合する相互作用パートナー（例えば、受容体またはリガンド）への結合後に起こってもよい。
【０３４１】
一部の実施形態では、薬剤は、血管新生因子または血管新生因子を含む複合体の生物活性を阻害することができてもよい。
【０３４２】
一部の実施形態では、薬剤は、血管新生因子受容体を含む受容体を介するシグナル伝達によって活性化される１つまたは複数のシグナル伝達経路のアンタゴニストである。
【０３４３】
一部の実施形態では、薬剤は、薬剤の非存在下（または適切な対照薬剤の存在下）でのシグナル伝達のレベルの１００％未満、例えば、９９％以下、９５％以下、９０％以下、８５％以下、８０％以下、７５％以下、７０％以下、６５％以下、６０％以下、５５％以下、５０％以下、４５％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、または１％以下のうちの１つで血管新生因子媒介性シグナル伝達を阻害することができてもよい。一部の実施形態では、薬剤は、薬剤の非存在下（または適切な対照薬剤の存在下）でのシグナル伝達のレベルの１倍未満、例えば、０．９９倍以下、０．９５倍以下、０．９倍以下、０．８５倍以下、０．８倍以下、０．７５倍以下、０．７倍以下、０．６５倍以下、０．６倍以下、０．５５倍以下、０．５倍以下、０．４５倍以下、０．４倍以下、０．３５倍以下、０．３倍以下、０．２５倍以下、０．２倍以下、０．１５倍以下、０．１倍以下のうちの１つで血管新生因子媒介性シグナル伝達を低減させることができる。
【０３４４】
一部の実施形態では、血管新生因子媒介性シグナル伝達は、血管新生因子の、血管新生因子の相互作用パートナー（例えば、血管新生因子の受容体またはリガンド）への結合によって媒介されるシグナル伝達であってもよい。そのようなシグナル伝達を、例えば、血管新生因子の相互作用パートナーを発現する細胞を、血管新生因子で処理することによって、または血管新生因子の相互作用パートナーを発現する細胞中での血管新生因子の産生を刺激することによって分析することができる。
【０３４５】
血管新生因子媒介性シグナル伝達の阻害に関する薬剤のＩＣ５０を、例えば、血管新生因子および薬剤の存在下で血管新生因子受容体の相互作用パートナーを発現する細胞を培養することと、血管新生因子によって媒介されるシグナル伝達の機能的結果を測定することとによって決定することができる。例えば、血管新生因子によって媒介される細胞増殖のアッセイでは、ＤＮＡへの３Ｈチミジンの取込みを分析することができる。一部の実施形態では、薬剤は、そのようなアッセイにおいて、１０μｇ／ｍｌ以下、好ましくは、５μｇ／ｍｌ以下、４μｇ／ｍｌ以下、３．５μｇ／ｍｌ以下、３μｇ／ｍｌ以下、２μｇ／ｍｌ以下、１μｇ／ｍｌ以下、０．９μｇ／ｍｌ以下、０．８μｇ／ｍｌ以下、０．７μｇ／ｍｌ以下、０．６μｇ／ｍｌ以下、または０．５μｇ／ｍｌ以下のうちの１つのＩＣ５０を示してもよい。
【０３４６】
一部の実施形態では、薬剤は、血管新生因子によって媒介されるプロセス（例えば、ＶＥＧＦによる刺激後）を阻害することができてもよい。血管新生因子によって媒介されるプロセスは、例えば、腸重積症、毛細血管増殖、ならびに例えば、コラーゲンおよび血管新生因子の遺伝子／タンパク質発現を含み、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏのいずれかで評価することができる。
【０３４７】
一部の実施形態では、血管新生因子のアンタゴニストは、エンドスタチン（ＮＰ＿５６９７１１．２  ＧＩ：２０６５９７４４５）、プロラクチン（ＣＡＡ３８２６４．１  ＧＩ：５３１１０３）、Ｔ２−ＴｒｐＲＳ（全体が参照により本明細書に組み込まれるＯｔａｎｉ  Ａら、Ａ  ｆｒａｇｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ＴｒｐＲＳ  ａｓ  ａ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ｏｆ  ｏｃｕｌａｒ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ．２００２；９９（１）：１７８〜１８３頁に記載のような）、またはバソスタチン（ＡＡＬ１３１２６．１  ＧＩ：１６１５１０９７）、またはその断片、アイソフォーム、ホモログもしくはバリアントから選択される血管新生阻害剤である。
【０３４８】
治療および予防方法
本発明は、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の拮抗作用および血管新生の拮抗作用による線維症（特に、眼の線維症）の処置／防止のための方法および組成物を提供する。また、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の拮抗作用および血管新生の拮抗作用による血管新生の処置／防止のための方法および組成物も提供される。
【０３４９】
一部の実施形態では、本発明に従って処置／防止される疾患／状態は、例えば、該疾患／状態によって影響される臓器／組織（例えば、疾患／状態の症状が現れる臓器／組織）中でのＩＬ−１１媒介性シグナル伝達および／または血管新生のレベルの増大を特徴とする。
【０３５０】
一部の実施形態では、処置／防止される疾患／状態は、例えば、正常な（すなわち、非疾患）臓器／組織／対象と比較して、疾患によって影響される臓器／組織／対象における以下のもののうちの１つまたは複数の増加を特徴としてもよい：ＩＬ−１１、ＩＬ−１１Ｒα、ＴＧＦβ、ＶＥＧＦ、ＦＧＦ、ＰＤＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＦＧＦＲまたはＰＤＧＦＲ。
【０３５１】
処置は、疾患／状態の進行を防止する、例えば、疾患／状態の悪化を低減する／遅延させる／防止する、または疾患／状態の発達を低減する／遅延させる／防止するのに有効であってよい。一部の実施形態では、処置は、疾患／状態の改善、例えば、疾患／障害の重症度の低減、および／または疾患／障害の症状の逆転をもたらしてもよい。一部の実施形態では、処置は、生存を増加させてもよい。防止とは、疾患／状態の発達の防止、および／または疾患／状態の悪化の防止、例えば、疾患／状態の、後期段階または慢性段階への進行の防止を指してもよい。
【０３５２】
一部の実施形態では、処置／防止される疾患／状態は、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）および／または加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、例えば、「滲出型」ＡＭＤである。
【０３５３】
投与
本開示による薬剤の投与は、好ましくは、「治療有効」または「予防有効」量にあり、これは対象に対して利益を示すのに十分なものである。
【０３５４】
投与される実際の量、ならびに投与の速度および時間経過は、疾患／状態の性質および重症度ならびに薬剤の性質に依存すると予想される。処置の処方、例えば、用量に関する決定などは、一般開業医および他の医師の責任の範囲内にあり、典型的には、処置しようとする疾患／状態、個々の対象の状態、送達部位、投与方法および医師にとって公知の他の因子を考慮に入れる。上記の技術およびプロトコールの例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第２０版、２０００、ｐｕｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓに見出すことができる。
【０３５５】
治療適用においては、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達に拮抗することができる薬剤および血管新生因子に拮抗することができる薬剤は、好ましくは、限定されるものではないが、薬学的に許容される担体、アジュバント、賦形剤、希釈剤、充填剤、緩衝剤、保存剤、抗酸化剤、滑沢剤、安定剤、可溶化剤、界面活性剤（例えば、湿潤剤）、マスキング剤、着色剤、香味剤、および甘味剤を含む、当業者には周知の１つまたは複数の他の薬学的に許容される成分と一緒に医薬または薬剤として製剤化される。
【０３５６】
本明細書で使用される用語「薬学的に許容される」は、正当な医学的判断の範囲内で、合理的な利益／危険比に見合う、過度の毒性、刺激、アレルギー応答、または他の問題もしくは合併症なしに、問題の対象（例えば、ヒト）の組織との接触における使用にとって好適である、化合物、成分、材料、組成物、剤形などに関する。それぞれの担体、アジュバント、賦形剤などはまた、製剤の他の成分と適合する意味で「許容される」ものでなければならない。
【０３５７】
好適な担体、アジュバント、賦形剤などは、標準的な薬学の教科書、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．、１９９０；およびＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ、第２版、１９９４に見出すことができる。
【０３５８】
製剤を、製薬業界における周知の任意の方法によって調製することができる。そのような方法は、活性化合物を、１つまたは複数の補助成分を構成する担体と会合させるステップを含む。一般に、製剤は、活性化合物を、担体（例えば、液体担体、微細に分割された固体担体など）と均一かつ密接に会合させること、次いで、必要に応じて、生成物を形状化することによって調製される。
【０３５９】
製剤を、処置しようとする疾患／状態にとって好適な投与のために調製することができる。例えば、製剤を、注射を含んでもよい、局所、非経口、全身、静脈内、動脈内、筋肉内、髄腔内、眼内、眼局部（例えば、結膜下、硝子体内、眼球後方、前房内）、結膜内、皮下、経口、または経皮投与経路のために製剤化することができる。注射製剤は、滅菌または等張媒体中に選択された薬剤を含んでもよい。特定の実施形態では、製剤は、眼投与のために製剤化される。
【０３６０】
本発明の態様は、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストおよび血管新生因子のアンタゴニストを含む／用いる組成物および方法を含む。
【０３６１】
本明細書で言及される「組合せ」は、組合せの成分を含む生成物および組成物（例えば、医薬組成物）を包含する。「組合せ」はまた、組合せの成分を用いる治療レジメンも包含する。
【０３６２】
一部の実施形態では、組合せの成分は、別々の組成物中に提供される。一部の実施形態では、組合せの１より多い成分は、組成物中に提供される。一部の実施形態では、組合せの成分は、１つの組成物中に提供される。
【０３６３】
同様に、一部の実施形態では、組合せの成分は、別々に投与される。一部の実施形態では、組合せの成分は、組合せの別の成分と共に投与される。一部の実施形態では、組合せの成分は、一緒に投与される。
【０３６４】
例示として、アンタゴニスト抗ＩＬ−１１抗体およびアンタゴニスト抗ＶＥＧＦ抗体を含む組合せの例では、抗ＩＬ−１１抗体および抗ＶＥＧＦ抗体を一緒に投与するか、または別々に（例えば、続けて）投与することができる。
【０３６５】
組合せの成分が一緒に投与される場合、投与は同時投与であってもよい。組合せの成分が別々に投与される場合、投与は同時投与または連続投与であってもよい。
【０３６６】
線維症および／または血管新生を処置する、または防止する方法であって、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストと、血管新生因子のアンタゴニストとの、対象への別々の、または同時の投与を含む方法における使用のためのＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストが本明細書で提供される。
【０３６７】
また、線維症および／または血管新生を処置する、または防止する方法であって、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストと、血管新生因子のアンタゴニストとの、対象への別々の、または同時の投与を含む方法における使用のための血管新生因子のアンタゴニストも本明細書で提供される。
【０３６８】
また、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストと、血管新生因子のアンタゴニストとの、対象への別々の、または同時の投与を含む方法における使用のための医薬の製造におけるＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストの使用も提供される。
【０３６９】
また、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストと、血管新生因子のアンタゴニストとの、対象への別々の、または同時の投与を含む方法における使用のための医薬の製造における血管新生因子のアンタゴニストの使用も提供される。
【０３７０】
同時投与とは、例えば、薬剤を含有する医薬組成物（すなわち、組合せ調製物）としての、一緒の、または互いに直後の、必要に応じて、同じ投与経路を介する、例えば、同じ動脈、静脈もしくは他の血管を介する、薬剤の投与を指す。特定の実施形態では、腫瘍溶解ウイルスおよび免疫調節因子をコードする核酸を含むウイルスを、組合せ調製物中で同時に投与することができる。ある特定の実施形態では、同時投与の際に、２つ以上の薬剤を、異なる投与経路を介して投与することができる。一部の実施形態では、同時投与とは、同じ時間での、または例えば、１ｈ、２ｈ、３ｈ、４ｈ、５ｈ、６ｈ、８ｈ、１２ｈ、２４ｈ、３６ｈもしくは４８ｈ以内の投与を指す。
【０３７１】
連続投与とは、１つまたは複数の薬剤の投与、次いで、所与の時間間隔後、別の薬剤の別々の投与を指す。２つの薬剤が同じ経路によって投与される必要はないが、これは一部の実施形態では当てはまる。時間間隔は、時間、日、週、月、または年を含む任意の時間間隔であってよい。一部の実施形態では、連続投与とは、少なくとも１０ｍｉｎ、３０ｍｉｎ、１ｈ、６ｈ、８ｈ、１２ｈ、２４ｈ、３６ｈ、４８ｈ、３日、４日、５日、６日、１週、２週、３週、１ヶ月、６週、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月または６ヶ月のうちの１つの時間間隔によって隔てられた投与を指す。
【０３７２】
一部の実施形態では、処置は、他の治療または予防介入、例えば、外科手術をさらに含んでもよい。そのような他の治療または予防介入は、本開示によって包含される療法の前、間および／または後に行ってもよく、他の治療または予防介入の送達は、本開示の療法と同じか、または異なる投与経路によって行ってもよい。
【０３７３】
本開示の複数用量の薬剤（ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニスト、血管新生因子のアンタゴニスト、組成物、組合せなど）を提供することができる。１つもしくは複数の、またはそれぞれの用量に、別の治療剤の同時または連続投与を伴ってもよい。
【０３７４】
複数の用量は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、もしくは３１日、または１、２、３、４、５、もしくは６ヶ月のうちの１つであると選択することができる所定の時間間隔で隔てられていてもよい。例えば、用量を、７、１４、２１または２８日（プラスまたはマイナス３、２または１日）毎に１回与えることができる。
【０３７５】
併用処置の機能特性
本開示の組合せおよび方法を、１つまたは複数の機能特性および／または効果を参照することによって定義することができ、例えば、実験例に記載される分析によって、そのような特性／効果について評価することができる。
【０３７６】
一部の実施形態では、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストと、血管新生因子のアンタゴニストとの組合せは、１つまたは複数の以下の機能特性を有してもよい：
・単独で使用されるいずれかの成分による線維症（例えば、網膜線維症）を低減する能力と比較した、線維症（例えば、網膜線維症）を低減する能力の改善。
・単独で使用される成分による線維症（例えば、網膜線維症）を低減する能力と比較した、相乗的である（すなわち、優加法的である）線維症（例えば、網膜線維症）を低減する能力。
・用量依存的様式で線維症（例えば、網膜線維症）を低減する能力。
・単独で使用されるいずれかの成分による線維症（例えば、網膜線維症）を防止する能力と比較した、線維症（例えば、網膜線維症）を防止する能力の改善。
・単独で使用されるいずれかの成分による血管新生を低減する能力と比較した、血管新生を低減する能力の改善。
・単独で使用される成分による血管新生を低減する能力と比較した、相乗的である（すなわち、優加法的である）血管新生を低減する能力。
・用量依存的様式で血管新生を低減する能力。
・単独で使用されるいずれかの成分による血管新生を防止する能力と比較した、血管新生を防止する能力の改善。
・単独で使用されるいずれかの成分による網膜下血管新生（例えば、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ））を低減する能力と比較した、網膜下血管新生（例えば、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ））を低減する能力の改善。
・単独で使用される成分による網膜下血管新生（例えば、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ））を低減する能力と比較した、相乗的である（すなわち、優加法的である）網膜下血管新生（例えば、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ））を低減する能力。
・用量依存的様式で網膜下血管新生（例えば、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ））を低減する能力。
・単独で使用されるいずれかの成分による網膜下血管新生（例えば、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ））を防止する能力と比較した、網膜下血管新生（例えば、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ））を防止する能力の改善。
【０３７７】
線維症、血管新生および／または網膜下血管新生を低減／防止する能力の分析は、例えば、ｉｎ  ｖｉｖｏで、実験例に記載される分析によって評価することができる。例えば、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストと、血管新生因子のアンタゴニストとの組合せは、フルオレセイン蛍光眼底造影（ＦＦＡ）および／または後眼部光コヒーレンストモグラフィー（ＰＳ−ＯＣＴ）により評価された場合、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）を低減することができる。組合せはまた、組織病理学的検査または免疫蛍光染色検査により観察された場合、網膜の線維化領域の減少をもたらすこともできる。一部の実施形態では、組合せは、単独で使用されるいずれかの成分による血管漏出を低減する能力と比較して、血管漏出を低減する能力の改善を有する。
【０３７８】
一部の実施形態では、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストは、血管新生因子のアンタゴニストの効能を改善することができる。一部の実施形態では、血管新生因子のアンタゴニストは、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストの効能を改善することができる。
【０３７９】
組成物／生成物／キット
本開示はまた、本明細書に記載のＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストと、本明細書に記載の血管新生因子のアンタゴニストとを含む組成物も提供する。本開示の組合せは、単一の組成物中で提供してもよいか、または組合せの成分を含む複数の組成物として提供してもよい。
【０３８０】
本開示はまた、本明細書に記載のＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストと、本明細書に記載の血管新生因子のアンタゴニストと、または本開示による組成物を含む要素のキットも提供する。
【０３８１】
一部の実施形態では、キットは、所定量の本明細書に記載のＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニスト、本明細書に記載の血管新生因子のアンタゴニスト、または本開示による組成物を有する少なくとも１つの容器を有してもよい。キットは、本開示の組合せの個々の成分を含有する容器を有してもよいか、または本開示の組合せの成分の組合せを含有する容器を有してもよい。
【０３８２】
キットは、線維症（例えば、眼の線維症）を処置するための患者への投与のための指示書と共に、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニスト、血管新生因子のアンタゴニスト、または組成物を提供してもよい。ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニスト、血管新生因子のアンタゴニスト、または組成物を、眼投与にとって好適となるように製剤化することができる。
【０３８３】
対象
対象は、動物またはヒトであってもよい。対象は、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。対象は、非ヒト哺乳動物であってよいが、より好ましくは、ヒトである。対象は、雄性または雌性であってもよい。対象は、患者であってもよい。患者は、本明細書に記載の疾患／状態を有してもよい。対象は、処置を要する疾患／状態と診断されていてもよく、そのような疾患／状態を有すると疑われてもよく、またはそのような疾患／状態を発症するリスクがあってもよい。
【０３８４】
本発明による実施形態では、対象は、好ましくはヒト対象である。一部の実施形態では、本発明の治療または予防方法に従って処置される対象は、本明細書に記載の疾患／状態を有する、または発症するリスクがある対象である。本発明による実施形態では、対象を、そのような疾患／障害のある特定のマーカーに関する特性評価に基づく方法による処置のために選択することができる。対象は、処置を要する疾患もしくは障害と診断されていてもよいか、またはそのような疾患もしくは障害を有すると疑われていてもよい。
【０３８５】
配列同一性
２つ以上のアミノ酸または核酸配列間の同一性パーセントを決定するためのペアワイズおよびマルチ配列アラインメントを、例えば、ＣｌｕｓｔａｌＯｍｅｇａ（Ｓｏｄｉｎｇ，Ｊ．２００５、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ２１、９５１〜９６０頁）、Ｔ−ｃｏｆｆｅｅ（Ｎｏｔｒｅｄａｍｅら、２０００、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（２０００）３０２、２０５〜２１７頁）、Ｋａｌｉｇｎ（ＬａｓｓｍａｎｎおよびＳｏｎｎｈａｍｍｅｒ、２００５、ＢＭＣ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ、６（２９８））およびＭＡＦＦＴ（ＫａｔｏｈおよびＳｔａｎｄｌｅｙ、２０１３、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ      
【０３８６】
ａｎｄ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ、３０（４）、７７２〜７８０頁）ソフトウェアなどの公共的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して、当業者には公知の様々な方法で達成することができる。そのようなソフトウェアを使用する場合、好ましくは、例えば、ギャップペナルティおよび伸長ペナルティに関するデフォルトパラメータが使用される。
【０３８７】
配列
【表１−１】
2021522272.tif 000003
【表１−２】
2021522272.tif 000004
【表１−３】
2021522272.tif 000005
【０３８８】
番号付きの陳述
以下の番号付きの段落は、本発明の特定の態様および実施形態を記載する：
１．対象における線維症を処置または防止する方法であって、対象に、治療または予防有効量のＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストおよび血管新生因子のアンタゴニストを投与するステップを含む、方法。
２．線維症を処置または防止する方法における使用のための、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストと、血管新生因子のアンタゴニストとの組合せ。
３．線維症を処置または防止する方法における使用のための医薬の製造における、ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストおよび血管新生因子のアンタゴニストの使用。
４．線維症が、眼における線維症である、段落１に記載の方法、段落２に記載の使用のための組合せ、または段落３に記載の使用。
５．線維症が、グレーブス眼症、網膜上線維症、網膜線維症、特発性黄斑前線維症、網膜下線維症（例えば、網膜剥離もしくは黄斑変性（例えば、滲出型加齢黄斑変性（ＡＭＤ）と関連する）、糖尿病性網膜症、緑内障、地図状萎縮、角膜線維症、術後線維症（例えば、白内障手術後の後嚢の、もしくは緑内障の線維柱帯切除術後のブレブの）、結膜線維症、または結膜下線維症から選択される、段落１〜４のいずれか１つに記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
６．線維症が、網膜線維症、網膜上線維症、または網膜下線維症である、段落１〜５のいずれか１つに記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
７．線維症が心臓、肝臓、または腎臓の線維症である、段落１に記載の方法、段落２に記載の使用のための組合せ、または段落３に記載の使用。
８．線維症が、
肝臓におけるものであり、慢性肝臓病または肝硬変と関連する；
腎臓におけるものであり、慢性腎臓病と関連する；または
心臓におけるものであり、心臓の筋肉組織もしくは電気特性の機能障害、または心臓の壁もしくは弁の肥厚と関連する、
段落７に記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
９．血管新生因子が、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、および血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）から選択される、段落１〜８のいずれか１つに記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
１０．血管新生因子がＶＥＧＦである、段落１〜９のいずれか１つに記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
１１．ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストが、ＩＬ−１１のＩＬ−１１受容体への結合を防止する、または低減することができる薬剤である、段落１〜１０のいずれか１つに記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
１２．ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストが、ＩＬ−１１またはＩＬ−１１の受容体に結合することができる薬剤である、段落１〜１１のいずれか１つに記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
１３．ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストが、抗体もしくはその抗原結合性断片、ポリペプチド、ペプチド、オリゴヌクレオチド、アプタマーまたは低分子からなる群から選択される、段落１２に記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
１４．ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストが、抗ＩＬ−１１抗体または抗ＩＬ−１１Ｒα抗体である、段落１３に記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
１５．ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストが、デコイＩＬ−１１受容体である、段落１３に記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
１６．ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストが、ＩＬ−１１またはＩＬ−１１の受容体の発現を低減することができる、段落１〜１０のいずれか１つに記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
１７．ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストが、オリゴヌクレオチドまたは低分子である、段落１６に記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
１８．血管新生因子のアンタゴニストが、血管新生因子の、血管新生因子の相互作用パートナーへの結合を防止するか、または低減することができる薬剤である、段落１〜１７のいずれか１つに記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
１９．血管新生因子のアンタゴニストが、血管新生因子または血管新生因子の相互作用パートナーに結合することができる薬剤である、段落１〜１８のいずれか１つに記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
２０．血管新生因子のアンタゴニストが、抗体もしくはその抗原結合性断片、ポリペプチド、ペプチド、オリゴヌクレオチド、アプタマーまたは低分子からなる群から選択される、段落１９に記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
２１．血管新生因子のアンタゴニストが、抗ＶＥＧＦ抗体または抗ＶＥＧＦ受容体抗体である、段落２０に記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
２２．血管新生因子のアンタゴニストが、デコイＶＥＧＦ受容体である、段落２０に記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
２３．血管新生因子のアンタゴニストが、アフリベルセプトである、段落２２に記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
２４．血管新生因子のアンタゴニストが、血管新生因子または血管新生因子の相互作用パートナーの発現を低減することができる、段落１〜１７のいずれか１つに記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
２５．血管新生因子のアンタゴニストが、オリゴヌクレオチドまたは低分子である、段落２４に記載の方法、使用のための組合せ、または使用。
２６．ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストと、血管新生因子のアンタゴニストとを含む組合せ。
２７．ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストと、血管新生因子のアンタゴニストとを含む医薬組成物。
２８．所定量のＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストおよび血管新生因子のアンタゴニスト、段落２６に記載の組合せまたは段落２７に記載の医薬組成物を含む要素のキット。
２９．血管新生因子が、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、および血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）から選択される、段落２６に記載の組合せ、段落２７に記載の医薬組成物、または段落２８に記載の要素のキット。
３０．血管新生因子がＶＥＧＦである、段落２６〜２９のいずれか１つに記載の組合せ、医薬組成物または要素のキット。
３１．ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストが、ＩＬ−１１のＩＬ−１１受容体への結合を防止する、または低減することができる薬剤である、段落２６から３０のいずれか１つに記載の組合せ、医薬組成物または要素のキット。
３２．ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストが、ＩＬ−１１またはＩＬ−１１の受容体に結合することができる薬剤である、段落２６〜３１のいずれか１つに記載の組合せ、医薬組成物または要素のキット。
３３．ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストが、抗体もしくはその抗原結合性断片、ポリペプチド、ペプチド、オリゴヌクレオチド、アプタマーまたは低分子からなる群から選択される、段落３２に記載の組合せ、医薬組成物または要素のキット。
３４．ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストが、抗ＩＬ−１１抗体または抗ＩＬ−１１Ｒα抗体である、段落３３に記載の組合せ、医薬組成物または要素のキット。
３５．ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストが、デコイＩＬ−１１受容体である、段落３３に記載の組合せ、医薬組成物または要素のキット。
３６．ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストが、ＩＬ−１１またはＩＬ−１１の受容体の発現を低減することができる、段落２６〜３０のいずれか１つに記載の組合せ、医薬組成物または要素のキット。
３７．ＩＬ−１１媒介性シグナル伝達のアンタゴニストが、オリゴヌクレオチドまたは低分子である、段落３６に記載の組合せ、医薬組成物または要素のキット。
３８．血管新生因子のアンタゴニストが、血管新生因子の、血管新生因子の相互作用パートナーへの結合を防止するか、または低減することができる薬剤である、段落２６〜３７のいずれか１つに記載の組合せ、医薬組成物または要素のキット。
３９．血管新生因子のアンタゴニストが、血管新生因子または血管新生因子の相互作用パートナーに結合することができる薬剤である、段落２６〜３８のいずれか１つに記載の組合せ、医薬組成物または要素のキット。
４０．血管新生因子のアンタゴニストが、抗体もしくはその抗原結合性断片、ポリペプチド、ペプチド、オリゴヌクレオチド、アプタマーまたは低分子からなる群から選択される、段落３９に記載の組合せ、医薬組成物または要素のキット。
４１．血管新生因子のアンタゴニストが、抗ＶＥＧＦ抗体または抗ＶＥＧＦ受容体抗体である、段落４０に記載の組合せ、医薬組成物または要素のキット。
４２．血管新生因子のアンタゴニストが、デコイＶＥＧＦ受容体である、段落４０に記載の組合せ、医薬組成物または要素のキット。
４３．血管新生因子のアンタゴニストが、アフリベルセプトである、段落４２に記載の組合せ、医薬組成物または要素のキット。
４４．血管新生因子のアンタゴニストが、血管新生因子の相互作用パートナーの発現を低減することができる、段落２６〜３７のいずれか１つに記載の組合せ、医薬組成物または要素のキット。
４５．血管新生因子のアンタゴニストが、オリゴヌクレオチドまたは低分子である、段落４４に記載の組合せ、医薬組成物または要素のキット。
【０３８９】
本発明は、記載される態様および好ましい特徴の組合せが明確に容認できないか、または明示的に回避される場合を除いて、そのような組合せを含む。
【０３９０】
本明細書で使用されるセクションの見出しは、構成のみを目的とするものであり、記載される主題を限定すると解釈されるべきではない。
【０３９１】
ここで、本発明の態様および実施形態を、例えば、添付の図面を参照して例示する。さらなる態様および実施形態は、当業者には明らかと予想される。本文に記載される全ての文献は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０３９２】
以下の特許請求の範囲を含む、本明細書を通じて、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」ならびに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形は、任意の他の整数もしくはステップまたは整数もしくはステップの群の排除ではなく、記述される整数もしくはステップまたは整数もしくはステップの群の含有を意味すると理解されると予想される。
【０３９３】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、本文が別途明確に記述しない限り、複数の指示対象を含むことに留意する必要がある。範囲は、本明細書では、「約」１つの特定の値から、および／または「約」別の特定の値までと表すことができる。そのような範囲が表される場合、別の実施形態は、一方の特定の値から、および／または他方の特定の値までを含む。同様に、値が近似値として表される場合、先行詞「約」の使用により、特定の値は別の実施形態を形成することが理解されると予想される。
【０３９４】
核酸配列が本明細書に開示される場合、その逆相補体も明示的に企図される。
【０３９５】
本明細書に記載される方法は、好ましくは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで実施することができる。用語「ｉｎ  ｖｉｔｒｏ」は、培養物中の細胞を用いて実施される手順を包含することが意図されるが、用語「ｉｎ  ｖｉｖｏ」は、無傷の多細胞生物を用いて／その上での手順を包含することが意図される。
【０３９６】
ここで、本発明の原理を例示する実施形態および実験を、添付の図面を参照して考察する。
【図面の簡単な説明】
【０３９７】
【図１】抗ＶＥＧＦ抗体と抗ＩＬ−１１抗体との併用処置の実験的概略。
【図２】ブルッフ膜のレーザー誘導破壊の７および２８日後にｉｎ  ｖｉｖｏでモニタリングしたレーザー生成脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）のフルオレセイン蛍光眼底造影（ＦＦＡ）分析。（ａ）測定値は、抗ＶＥＧＦおよび抗ＩＬ−１１の硝子体内注射（ＩＶＴ）の前後でのＣＮＶの程度を示し、データは平均±ｓｅｍである；（ｂ）ａからの抗体処置後の漏出面積をプロットし、本発明者らはＥｙｌｅａと共にＣＮＶを低減する抗ＩＬ−１１抗体の用量依存的効果を観察する；（ｃ）７および２８日での対照（ＥＹＬＥＡ＋ＩＧＧ）、高用量（２μｇ）および低用量（０．５μｇ）のＥｙｌｅａ＋抗ＩＬ−１１併用療法のＦＦＡ画像。
【図３】対照（ＥＹＬＥＡ＋ＩＧＧ）、高用量（２μｇ）または低用量（０．５μｇ）のＥｙｌｅａ＋抗ＩＬ−１１併用療法を受けている対象の後眼部光コヒーレンストモグラフィー（ＰＳ−ＯＣＴ）による網膜構造のイメージング。
【図４】実験の２８日目での線維症の組織学的画像。（ａ）レーザー傷害が線維性瘢痕をもたらし、抗ＩＬ−１１抗体処置によってサイズが有意に低減したこと、およびこの効果が併用処置においてより顕著であることを示す、線維症の代表的な組織学的画像。（ｂ）線維症の面積を、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して定量した；両側Ｄｕｎｎｅｔｔ検定；箱髭プロットは、中央値（中央の線）、第一四分位数〜第三四分位数（箱）および１０〜９０パーセンタイル（髭）を示す。
【図５】レーザー傷害が線維性瘢痕をもたらし、抗ＩＬ−１１抗体処置によってサイズが有意に低減したこと、およびこの効果が併用処置においてより顕著であることを示す、実験の２８日目での線維症の免疫蛍光（アルファ−ＳＭＡ、ＤＡＰＩ）染色画像（４０倍）。（ａ）それぞれ、Ｅｙｌｅａ＋ＩｇＧ対照、低用量併用療法および高用量併用療法を受けている個体１〜３からの画像。（ｂ）それぞれ、Ｅｙｌｅａ＋ＩｇＧ対照、低用量併用療法および高用量併用療法を受けている個体４〜６からの画像。
【図６】レーザー傷害が線維性瘢痕をもたらし、抗ＩＬ−１１抗体処置によってサイズが有意に低減したこと、およびこの効果が併用処置においてより顕著であることを示す、実験の２８日目での線維症の定量的アルファ−ＳＭＡ染色画像（４０倍）。（ａ）それぞれ、Ｅｙｌｅａ＋ＩｇＧ対照、低用量併用療法および高用量併用療法を受けている個体１〜３からの画像；下パネルは、線維症の領域のみを示すために切り取られた上パネルを示す。（ｂ）それぞれ、Ｅｙｌｅａ＋ＩｇＧ対照、低用量併用療法および高用量併用療法を受けている個体４〜６からの画像；下パネルは、線維症の領域のみを示すために切り取られた上パネルを示す。
【実施例】
【０３９８】
実施例１
材料および方法
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ野生型（ＷＴ）マウスを、ＩｎＶｉｖｏｓ（Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ）から購入した。動物を、食餌および水を自由裁量で供給しながら、１２時間の明／１２時間の暗サイクルで飼育した。全ての動物の取り扱いおよび世話は、ＳｉｎｇＨｅａｌｔｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ、Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ）によって認可された指針に従って実施され、動物実験に関するＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｉｎ  Ｖｉｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ（ＡＲＶＯ）の推奨に従って行われる。
【０３９９】
レーザー誘導性ＣＮＶ：
４つのレーザー光凝固部位を、両眼の視神経頭の周囲に同心円状に置いて、ＣＮＶを誘導した。ダイオードレーザー（８１０ｎｍ）を、１２０ｍＷの相対効力スケール、０．０５秒の曝露時間、および５０μｍのスポットサイズで使用した。レーザースポットを、クリスタルカバーを用いて集中させて、レーザービームの分散を回避した。気泡形成により、ブルッフ膜の破壊を確認した。
【０４００】
硝子体内注射（ＩＶＴ）：
動物を麻酔した後、結膜嚢に１％キシロカインの液滴を置くことによって眼を局部麻酔した。５％ポビドンヨード溶液を、結膜嚢に入れた。硝子体内注射を、３２ゲージ針を使用して実施した。試験される化合物を、右眼にＩＶＴ注射で投与した。全ての動物に対して毎日の症状観察を実施して、任意の眼の異常を含む健康不良の臨床兆候についてモニタリングした。
【０４０１】
レーザー後、８日目および１６日目にＩＶＴ経路によって以下の処置を投与した：
Ｅｙｌｅａ＋ＩｇＧ：抗ＶＥＧＦ剤ＥｙｌｅａおよびＩｇＧ（アイソタイプ対照）。注射１回あたりの総容量＝１μｌ。
Ｅｙｌｅａ＋抗ＩＬ−１１（低用量）：Ｅｙｌｅａと抗ＩＬ−１１抗体（１μｌ中に０．５μｇ）との組合せ。注射１回あたりの総容量＝１μｌ。
Ｅｙｌｅａ＋抗ＩＬ−１１（高用量）：Ｅｙｌｅａと抗ＩＬ−１１抗体（１μｌ中に２μｇ）との組合せ。注射１回あたりの総容量＝１μｌ。
【０４０２】
潜在的な有害事象の兆候について１日２回、および食餌消費の定性評価について１日１回、動物を観察した。レーザー傷害のための動物選択時、および残りの試験を通じて毎週、動物の体重を記録した。
【０４０３】
２８日目に、血液および組織収集のために、過剰用量のペントバルビタールによって動物を安楽死させた。
【０４０４】
フルオレセイン蛍光眼底造影：
フルオレセイン蛍光眼底造影（ＦＦＡ）を、ＭＩＣＲＯＮ  ＩＶ眼底カメラ（Ｐｈｏｅｎｉｘ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  ＵＳＡ）を使用して画像化した。ＦＦＡのために、動物に、５〜６ｇ体重あたり０．０１ｍｌの用量で１０％フルオレセインナトリウムを腹腔内注射した。
【０４０５】
後眼部光コヒーレンストモグラフィー（ＰＳ−ＯＣＴ）によって、網膜構造をリアルタイムにモニタリングした。
【０４０６】
組織病理学および免疫組織化学
全マウス眼（２８日、ｎ＝１０）を摘出し、４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）の混合物中で２４時間にわたって固定した。次いで、全マウス眼を、増大する濃度のエタノール中で脱水し、キシレン中で清浄し、パラフィン中で包埋した（Ｌｅｉｃａ−Ｓｕｒｇｉｐａｔｈ、Ｌｅｉｃａ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，Ｉｎｃ．）。５μｍの切片を、回転式ミクロトーム（ＲＭ２２５５、Ｌｅｉｃａ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｎｕｓｓｌｏｃｈ  ＧｍｂＨ、Ｇｅｒｍａｎｙ）で切断し、ＰＯＬＹＳＩＮＥ（商標）顕微鏡ガラススライド（Ｇｅｒｈａｒｄ  Ｍｅｎｚｅｌ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｎｅｗｉｎｇｔｏｎ、ＣＴ）上に収集した。切片を、３７℃のオーブン中で少なくとも２４時間にわたって乾燥させた。組織病理学および免疫組織化学検査のための切片を調製するために、切片を６０℃の加熱プレート上で加熱し、キシレン中で脱パラフィン化し、減少する濃度のエタノール中で再水和した。  Ｍａｓｓｏｎのトリクロム染色のための推奨された手順（２６３６７−Ｓｅｒｉｅｓ、Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）も実施して、結合組織と筋肉病理の両方を試験した。光学顕微鏡（Ａｘｉｏｐｌａｎ  ２；Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ  Ｍｅｄｉｔｅｃ  ＧｍｂＨ、Ｏｂｅｒｋｏｃｈｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、スライドを検査し、画像を捕捉した。
【０４０７】
同時に、免疫蛍光染色を実施した。９５〜１００℃で２０分間、クエン酸ナトリウム緩衝液（１０ｍＭクエン酸ナトリウム、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ６．０）中で切片をインキュベートすることにより、熱誘導性抗原回復を実施した。次いで、ＲＴで２０分間、クエン酸ナトリウム緩衝液中で切片を冷却し、１Ｘ  ＰＢＳでそれぞれ５分間、３回洗浄した。非特異的部位を、加湿チャンバー中、室温で１時間、０．１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００および１ＸＰＢＳ中の５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）のブロッキング溶液でブロックした。次いで、スライドを１ＸＰＢＳで簡単に洗浄した。表１に示される特定の一次抗体を適用し、ブロッキング溶液中で調製された加湿チャンバー中、４℃で一晩インキュベートした。それぞれ１０分間、１ＸＰＢＳで２回および０．１％Ｔｗｅｅｎを含む１ＸＰＢＳで１回洗浄した後、表１に示されるＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｒｏ（登録商標）５９４コンジュゲート化フルオレセイン標識二次抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ−Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）を、ブロッキング溶液中、１：１０００の濃度で適用し、ＲＴで９０分間インキュベートした。次いで、スライドを１ＸＰＢＳで２回および０．１％Ｔｗｅｅｎを含む１ＸＰＢＳで１回、それぞれ５分間洗浄し、スライドを、Ｐｒｏｌｏｎｇ  Ｄｉａｍｏｎｄ  Ａｎｔｉ−ｆａｄｅ  ＤＡＰＩ５  Ｍｏｕｎｔｉｎｇ  Ｍｅｄｉａ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ−Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）を含むスライド上に載せて、細胞核を可視化した。陰性対照のために、一次抗体を省いた。
【０４０８】
蛍光顕微鏡（Ａｘｉｏｐｌａｎ  ２；Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ  Ｍｅｄｉｔｅｃ  ＧｍｂＨ、Ｏｂｅｒｋｏｃｈｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、スライドを検査し、画像を捕捉した。実験を、抗体について二度繰り返した。
【０４０９】
【表２】
2021522272.tif 000006
【０４１０】
実施例２
フルオレセイン蛍光眼底造影（ＦＦＡ）
対象動物を、３つのコホート（１０匹の動物／コホート）に割り当てた。１群あたり１０匹の動物において、眼あたり４つの熱傷スポットを使用して、レーザー傷害を０日目に誘導した。
【０４１１】
３つのコホートに、以下のようにレーザー後８日目および１６日目に硝子体内（ＩＶＴ）経路により注射される以下の処置をそれぞれ投与した：
Ｅｙｌｅａ＋ＩｇＧ  抗ＶＥＧＦ剤ＥｙｌｅａとＩｇＧ（アイソタイプ対照）とを、硝子体内（ＩＶＴ）経路、０．５μｇの１μｌ用量のレーザー後１週、２週および３週で３回注射により注射した。
Ｅｙｌｅａ＋抗ＩＬ−１１（低用量）  Ｅｙｌｅａと抗ＩＬ−１１抗体（１μｌ中の０．５μｇ）との組合せを、硝子体内（ＩＶＴ）経路、１μｌ用量のレーザー後８日目および１６日目に２回の注射により注射した。
Ｅｙｌｅａ＋抗ＩＬ−１１（高用量）  Ｅｙｌｅａと抗ＩＬ−１１抗体（１μｌ中の２μｇ）との組合せを、硝子体内（ＩＶＴ）経路、１μｌ用量のレーザー後８日目および１６日目に２回の注射により注射した。
【０４１２】
レーザー傷害後であるが、処置前（７日目）に、および療法の終わり（２８日目）に、フルオレセイン蛍光眼底造影（ＦＦＡ）を使用して、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）を評価した。
【０４１３】
フルオレセイン蛍光眼底造影（ＦＦＡ）を、ＭＩＣＲＯＮ  ＩＶ眼底カメラ（Ｐｈｏｅｎｉｘ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  ＵＳＡ）を使用して画像化した。ＦＦＡのために、動物に、５〜６ｇ体重あたり０．０１ｍｌの用量で１０％フルオレセインナトリウムを腹腔内注射した。
【０４１４】
ＦＦＡの結果を図２に見ることができる。漏出の面積は、３つ全ての処置群において７日目よりも２８日目において小さかった（図２ａ）が、この効果は、Ｅｙｌｅａ＋抗ＩＬ−１１の併用療法群についてより顕著であった。さらに、本発明者らは、Ｅｙｌｅａと共にＣＮＶを低減する抗ＩＬ−１１抗体の用量依存的効果を観察する（図２ｂ）。レーザー傷害は、３つ全ての処置群において２８日目までに漏出の低減を示した。この効果は、ＩｇＧ対照よりもＥｙｌｅａ＋抗ＩＬ−１１（低用量）群についてより顕著であり、Ｅｙｌｅａ＋抗ＩＬ−１１（高用量）は、２８日後に最も高い治癒率を示した。図２ａおよび図２ｂは、ＣＮＶの処置におけるＩＬ−１１媒介性シグナル伝達の拮抗作用と血管新生因子の拮抗作用との相乗効果を示す。
【０４１５】
また、レーザー傷害後７日目および２８日目での後眼部光コヒーレンストモグラフィー（ＰＳ−ＯＣＴ）により、網膜構造をリアルタイムでモニタリングした。結果を図３に見ることができ、これは用量依存的様式で併用療法コホートにおける脈絡膜血管新生の減少を示す。
【０４１６】
実施例３
線維症面積
線維症面積を、組織病理学検査により上記の動物について処置の終わり（２８日目）に測定した。コラーゲンを、Ｍａｓｓｏｎのトリクロム染色を用いて染色し、線維症の面積を定量したが、その結果を図４に見ることができる。Ｅｙｌｅａ＋ＩｇＧ対照コホートと比較して、低用量および高用量併用療法コホートの両方について、より小さい線維症面積が見られたが、これらの差異は統計的に有意であった。低用量併用療法コホートは、Ｅｙｌｅａ＋ＩｇＧコホートよりも小さい線維症面積を示したが、この効果は、高用量コホートについてより顕著であった。したがって、組織病理データは、併用療法が単剤療法のみよりも有効であり、この効果が用量依存的であることを示す。
【０４１７】
免疫蛍光染色を同時に実施し、その結果を図５および図６に見ることができ、これらは併用処置コホートにおける線維症面積の減少の観察を確認するものであった。
【０４１８】
実施例４
比較調査
動物を、以下のように４つのコホートに割り当てた：
（ｉ）未処置対照
（ｉｉ）Ｅｙｌｅａで処置
（ｉｉｉ）抗ＩＬ−１１抗体で処置
（ｉｖ）Ｅｙｌｅａ＋抗ＩＬ−１１抗体で処置。
【０４１９】
１群あたり１０匹の動物において、眼あたり４つの熱傷スポットを使用して、レーザー傷害を０日目に誘導した。
【０４２０】
動物に、それらの割り当てられた処置を投与し、レーザー後８日目および１６日目に硝子体内（ＩＶＴ）経路により注射した。
【０４２１】
レーザー傷害後であるが、処置前（７日目）に、および療法の終わり（２８日目）に、フルオレセイン蛍光眼底造影（ＦＦＡ）を使用して、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）を評価した。線維症面積を２８日目に測定した。
【０４２２】
その結果、
・未処置対照コホートと比較して、全ての処置コホートにおいて２８日目にＣＮＶおよび線維症面積の低下
・単剤療法処置コホートと比較して、Ｅｙｌｅａ＋抗ＩＬ−１１抗体を用いた処置を受けているコホートにおいて２８日目にＣＮＶおよび線維症面積の低下
・相乗的（すなわち、優加法的）効果が観察され、Ｅｙｌｅａ＋抗ＩＬ−１１抗体を用いた処置を受けているコホートにおけるＣＮＶおよび線維症面積の改善は、合わせた場合の単剤療法コホートにおいて観察された効果の合計よりも大きかったことが示された。
【０４２３】
まとめ
本明細書における結果は、ＩＬ−１１アンタゴニスト療法が網膜線維症を劇的に低減することを示す（図３）。さらに、ＩＬ−１１アンタゴニストを用いた抗線維症療法はまた、Ｅｙｌｅａの抗血管新生特性に対する有益な効果を有すると考えられる（図２）。したがって、抗線維症療法は、抗線維症単剤療法を受けているものと比較した、併用療法の網膜線維症と脈絡膜血管新生との両方の顕著な改善によって示されるように、抗血管新生療法との相乗効果を有することが明らかである。
【０４２４】
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【図１】
2021522272.tif 000007
【図２】
2021522272.tif 000008
【図３】
2021522272.tif 000009
【図４】
2021522272.tif 000010
【図５】
2021522272.tif 000011
【図６】
2021522272.tif 000012
【配列表】
2021522272000001.app
【国際調査報告】
2021522272.tif 000013
2021522272.tif 000014