(57)【要約】  放射線療法治療が癌患者の血液循環中のＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはそれらの両方を誘発する、癌患者を治療するための放射線療法と組み合わせて使用するためのＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはＩＬ−１Ｒの活性に対する遮断薬が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌患者の治療で使用するための、抗ＩＬ−１α、抗ＩＬ−１β、および抗ＩＬ−１Ｒから選択される、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはそれらの受容体ＩＬ−１Ｒに対する遮断薬であって、前記治療は、前記遮断薬を放射線療法と組み合わせて癌患者に投与することであって、前記放射線療法が、前記放射線療法による治療に反応して前記癌患者の血液循環中にＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはそれらの両方を誘発する、投与することと、前記癌患者において前記誘発されたＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはそれらの両方のそれぞれの倍率変化が少なくとも１．５倍であることを判定することであって、この倍率変化値が有意と見なされ、前記放射線療法による前記治療に対する前記癌患者の好ましくない反応を予測すると見なされ、前記倍率変化が（ｉ）前記放射線療法による治療セッション後に前記癌患者から採取された血漿、全血、血清、または末梢血単核細胞から選択される生体試料、好ましくは血漿中のＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはそれらの両方のレベルを、（ｉｉ）前記放射線療法による前記治療セッション前に前記癌患者から採取された血漿、全血、血清、もしくは末梢血単核細胞から選択される生体試料、好ましくは血漿から取得された基準レベルと比較することによって確立される、判定することと、を含む、遮断薬。
【請求項２】
ステップ（ｉ）およびステップ（ｉｉ）の前記生体試料が両方とも血漿である、請求項１に記載の遮断薬。
【請求項３】
ＩＬ−１βまたはその受容体ＩＬ−１Ｒの活性を遮断する、請求項１または２に記載の遮断薬。
【請求項４】
（ａ）ＩＬ−１Ｒアンタゴニスト（ＩＬ−１Ｒａ）、（ｂ）可溶性デコイＩＬ−１Ｒ受容体、（ｃ）抗ＩＬ−１β中和モノクローナル抗体、（ｄ）抗ＩＬ−１Ｒ中和モノクローナル抗体、（ｅ）ＩＬ−１β変換酵素（ＩＣＥ）阻害剤、および（ｆ）ＩＬ−１βワクチンである、請求項３に記載の遮断薬。
【請求項５】
（ａ）前記ＩＬ−１Ｒアンタゴニストがアナキンラ、ＶＲＳ−８２６などのペグ化ＩＬ−１Ｒａ（ＩＬ−１ｒａ−ｒＰＥＧ）、イスナキンラ（ＥＢＩ−００５）などのキメラＩＬ−１Ｒａ−ＩＬ−１β、またはＨＬ２３５１などのハイブリッドＩＬ−１Ｒａ分子（ｒｈＩＬ−１Ｒａ−ｈｙＦｃ）であり、（ｂ）前記可溶性デコイＩＬ−１Ｒ受容体がリロナセプトであり、（ｃ）前記抗ＩＬ−１β中和モノクローナル抗体が、カナキヌマブ、ゲボキズマブ、ＬＹ２１８９１０２、およびルチキズマブ（ＡＢＴ−９８１）から選択され、（ｄ）前記抗ＩＬ−１Ｒ中和抗体がＭＥＤＩ−８９６８またはＧＳＫ１８２７７７１であり、（ｅ）前記ＩＬ−１β変換酵素阻害剤が、プラルナカサンまたはベルナカサンであり、（ｆ）前記ＩＬ−１βワクチンがｈＩＬ１ｂＱｂである、請求項４に記載の遮断薬。
【請求項６】
アナキンラ、抗ＩＬ−１β中和モノクローナル抗体、または抗ＩＬ−１Ｒ中和モノクローナル抗体から選択される、請求項５に記載の遮断薬。
【請求項７】
アナキンラである、請求項６に記載の遮断薬。
【請求項８】
前記ＩＬ−１αまたはその受容体ＩＬ−１Ｒの活性を阻害する、請求項１または２に記載の遮断薬。
【請求項９】
（ａ）アナキンラ、キメラＩＬ−１Ｒａ−ＩＬ−１β、ＶＲＳ−８２６（ＩＬ−１ｒａ−ｒＰＥＧ）またはＨＬ２３５１から選択されるＩＬ−１Ｒアンタゴニスト（ＩＬ−１Ｒａ）；（ｂ）リロナセプトなどの可溶性デコイＩＬ−１Ｒ受容体；（ｃ）抗ＩＬ−１α中和モノクローナル抗体；および（ｄ）ＭＥＤＩ８９６８、ＧＳＫ１８２７７７１から選択される抗ＩＬ−１Ｒ中和モノクローナル抗体である、請求項８に記載の遮断薬。
【請求項１０】
アナキンラである、請求項９に記載の遮断薬。
【請求項１１】
前記放射線療法による前記治療セッションが、前記放射線療法による療法セッションの過程で最初の治療セッションであり、前記生体試料、好ましくは血漿が、標準的な放射線療法スケジュールによる前記最初の治療セッションから約２０〜２４時間後に、または加速／寡分割の放射線療法スケジュールによる前記最初の治療セッションから、２４、３０、３６、４０、４８、５０、６０時間を含む約２０〜７２時間後に前記癌患者から採取され、前記基準生体試料が、約６０、５０、４８、４０、３６、３０、２４、もしくは２０時間を含む７２時間以内の時点、または前記放射線療法による前記最初の治療セッションの直前に前記癌患者から採取される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の遮断薬。
【請求項１２】
前記放射線療法による前記治療セッションが、前記放射線療法による前記最初の治療セッションではない複数の治療セッションのうちの１つであり、前記生体試料、好ましくは血漿が、標準的な放射線療法スケジュールによる前記最初の治療セッションから約２０〜２４時間後に、または前記最初の治療セッションではない加速／寡分割の放射線療法スケジュールによる前記治療セッションから、２４、３０、３６、４０、４８、５０、６０時間以上を含む約２０〜７２時間後に、前記癌患者から採取され、基準／ベースラインの生体試料は、前記最初の治療セッションではない前記セッションに先行した前記治療セッションから約２０、２４、３０、３６、４０、４８、５０、６０、７２時間以上の時点で前記癌患者から採取される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の遮断薬。
【請求項１３】
前記癌患者が、膀胱癌、乳癌、脳癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、頭頸部癌、腎臓癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、皮膚癌、甲状腺癌および子宮癌、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、ならびに肉腫を含む原発性癌または転移性癌に罹患している、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の遮断薬。
【請求項１４】
乳癌の治療のために、アナキンラが、週５回セッションで５〜９週間、好ましくは５〜８週間の標準的な放射線療法治療スケジュール、または週２回セッションで３〜４週間の加速／寡分割の放射線療法治療スケジュールのいずれかで、毎日１回投与され、両放射線療法スケジュールにおいて同じ総照射線量が投与される、請求項１、７、および１０のいずれか一項に記載の遮断薬。
【請求項１５】
アナキンラが各放射線療法セッションの前または後に投与される、請求項１４に記載の遮断薬。
【請求項１６】
前記遮断薬が、抗ＩＬ−１β中和モノクローナル抗体または抗ＩＬ−１α中和モノクローナル抗体であり、週５回セッションで５〜９週間、好ましくは５〜８週間の標準的な放射線療法治療スケジュール、または週２回セッションで３〜４週間の加速／寡分割の放射線療法治療スケジュールで、２〜３週間ごとに１回投与され、両放射線療法スケジュールにおいて同じ総照射線量が投与される、請求項１、６、および９のいずれか一項に記載の遮断薬。
【請求項１７】
放射線療法と、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、または抗ＩＬ−１Ｒに対する遮断薬、好ましくはアナキンラとの組み合わせによる前記癌患者の前記治療が、ＣＤ８＋Ｔ細胞傷害性細胞数の増加、および骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）数の減少をもたらす抗腫瘍免疫により腫瘍増殖を阻害する、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の遮断薬。
【請求項１８】
ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはそれらの受容体ＩＬ−１Ｒに対する遮断薬と組み合わせた放射線療法で癌患者を治療する方法であって、前記放射線療法は、前記放射線療法による治療に反応して前記癌患者の血液循環中にＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはそれらの両方を誘発し、前記方法は、
（ｉ）前記放射線療法による治療に対する反応において前記癌患者の血液循環中のＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはそれらの両方のレベルを判定するために、放射線療法による治療セッションから約２０〜２４時間以上の期間に前記癌患者から採取された血漿、全血、血清、または末梢血単核細胞から選択される生体試料、好ましくは血漿にアッセイを行うステップと、
（ｉｉ）前記放射線療法による前記治療セッションの前に、前記癌患者から採取された血漿、全血、血清、または末梢血単核細胞から選択される生体試料、好ましくは血漿中のステップ（ｉ）のＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはそれらの両方のそれぞれの基準レベルを取得するステップと、
（ｉｉｉ）ステップ（ｉ）のＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはそれらの両方のレベルを、ステップ（ｉｉ）のＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはそれらの両方の基準レベルと比較することにより、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはそれらの両方の倍率変化を確立するステップと、
（ｉｖ）ステップ（ｉｉｉ）で確立された前記倍率変化が少なくとも１．５である場合、前記癌患者が前記放射線療法による前記治療に対して好ましくない反応を有することを判定するステップであって、この倍率変化値は誘発されたＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはそれらの両方の発現増加を示し、有意と見なされ、前記放射線療法による前記治療に対する前記癌患者の好ましくない反応を予測すると見なされる、判定するステップと、
（ｖ）ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはそれらの受容体ＩＬ−１Ｒ活性に対する遮断薬と組み合わせた放射線療法で前記癌患者を治療するステップと、を含む、方法。
【請求項１９】
ステップ（ｉ）および（ｉｉ）の両生体試料が血漿である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記遮断薬がＩＬ−１βまたはその受容体ＩＬ−１Ｒの活性を遮断する、請求項１８または１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記遮断薬が（ａ）ＩＬ−１Ｒアンタゴニスト（ＩＬ−１Ｒａ）、（ｂ）可溶性デコイＩＬ−１Ｉ型受容体、（ｃ）抗ＩＬ−１β中和モノクローナル抗体、（ｄ）抗ＩＬ−１Ｒ中和モノクローナル抗体、（ｅ）ＩＬ−１β変換酵素（ＩＣＥ）阻害剤、および（ｆ）ＩＬ−１βワクチンから選択される、請求項２０に記載の方法
【請求項２２】
（ａ）前記ＩＬ−１Ｒアンタゴニストは、アナキンラ、ＶＲＳ−８２６（ＩＬ−１ｒａ−ｒＰＥＧ）などのペグ化ＩＬ−１Ｒａ、イスナキンラ（ＥＢＩ−００５）などのキメラＩＬ−１Ｒａ−ＩＬ−１β、またはＨＬ２３５１（ｒｈＩＬ−１Ｒａ−ｈｙＦｃ）などのハイブリッドＩＬ−１Ｒａ分子であり、（ｂ）前記可溶性デコイＩＬ−１Ｉ型受容体はリロナセプトであり、（ｃ）前記抗ＩＬ−１β中和モノクローナル抗体は、カナキヌマブ、ゲボキズマブ、ＬＹ２１８９１０２、およびルチキズマブ（ＡＢＴ−９８１）から選択され、（ｄ）前記抗ＩＬ−１Ｒ中和モノクローナル抗体は、ＭＥＤＩ−８９６８またはＧＳＫ１８２７７７１であり、（ｅ）前記ＩＬ−１β変換酵素阻害剤は、プラルナカサンまたはベルナカサンであり、（ｆ）前記ＩＬ−１βワクチンはｈＩＬ１ｂＱｂである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記遮断薬が、アナキンラ、抗ＩＬ−１β中和モノクローナル抗体、または抗ＩＬ−１Ｒ中和モノクローナル抗体から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記遮断薬がアナキンラである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記遮断薬がＩＬ−１αまたはその受容体ＩＬ−１Ｒの活性を阻害する、請求項１８または１９に記載の方法。
【請求項２６】
前記遮断薬は、（ａ）アナキンラ、ＶＲＳ−８２６（ＩＬ−１ｒａ−ｒＰＥＧ）などのペグ化ＩＬ−１Ｒａ、イスナキンラ（ＥＢＩ−００５）などのキメラＩＬ−１Ｒａ−ＩＬ−１β、またはＨＬ２３５１（ｒｈＩＬ−１Ｒａ−ｈｙＦｃ）などのハイブリッドＩＬ−１Ｒａ分子から選択されるＩＬ−１Ｒアンタゴニスト（ＩＬ−１Ｒａ）、（ｂ）リロナセプトなどの可溶性デコイＩＬ−１Ｒ受容体、（ｃ）抗ＩＬ−１α中和モノクローナル抗体、ならびに（ｃ）ＭＥＤＩ８９６８およびＧＳＫ１８２７７７１から選択される抗ＩＬ−１Ｒ中和モノクローナル抗体から選択される、請求項２５に記載の方法、
【請求項２７】
前記遮断薬がアナキンラである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記放射線療法による前記治療セッションが、前記放射線療法による治療セッションの過程で最初の治療セッションであり、前記生体試料、好ましくは血漿が、標準的な放射線療法スケジュールによる前記最初の治療セッションから約２０〜２４時間後に、または加速／寡分割の放射線療法スケジュールによる前記最初の治療セッションから、２４、３０、３６、４０、４８、５０、６０時間を含む約２０〜７２時間後に前記癌患者から採取され、前記基準生体試料が、約６０、５０、４８、４０、３６、３０、２４、もしくは２０時間以内を含む７２時間以内の時点で、または前記放射線療法による前記最初の治療セッションの直前に前記癌患者から採取される、請求項１８〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記放射線療法による前記治療セッションが、前記放射線療法による前記最初の治療セッションではない複数の治療セッションのうちの１つであり、前記生体試料、好ましくは血漿が、標準的な放射線療法スケジュールによる前記最初の治療セッションから約２０〜２４時間後に、または前記最初の治療セッションではない加速／寡分割の放射線療法スケジュールによる前記治療セッションから、２４、３０、３６、４０、４８、５０、６０時間以上を含む約２０〜７２時間後に、前記癌患者から採取され、基準／ベースラインの生体試料は、前記最初の治療セッションではないセッションに先行した前記治療セッションから約２０、２４、３０、３６、４０、４８、５０、６０、７２時間以上の時点で前記癌患者から採取される、請求項１８〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記癌患者が、膀胱癌、乳癌、脳癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、頭頸部癌、腎臓癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、皮膚癌、甲状腺癌および子宮癌を含む原発性もしくは転移性の固形癌、または例えば、急性および慢性の白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、ならびに肉腫の血液悪性腫瘍などの非固形癌に罹患している、請求項１８〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
乳癌の治療のために、アナキンラは、週５回の標準的な放射線療法治療セッションを５〜９週間、好ましくは５〜８週間のスケジュールで、または週２回の加速／寡分割の放射線療法治療セッションを３〜４週間のスケジュールでのいずれかで、毎日１回投与され、両放射線療法スケジュールにおいて同じ総照射線量が照射される、請求項１８、２４、２７、および３０に記載の方法。
【請求項３２】
アナキンラが各放射線療法セッションの前または後に投与される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記遮断薬が、抗ＩＬ−１β中和モノクローナル抗体または抗ＩＬ−１α中和モノクローナル抗体であり、週５回セッションで５〜９週間、好ましくは５〜８週間の標準的な放射線療法治療スケジュール、または週２回セッションで３〜４週間の加速／寡分割の放射線療法治療スケジュールでは、２〜３週間ごとに１回投与され、両放射線療法スケジュールにおいて同じ総照射線量が照射される、請求項１８、２３、および２６のいずれかに記載の方法。
【請求項３４】
放射線療法と、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、または抗ＩＬ−１Ｒに対する遮断薬、好ましくはアナキンラとの組み合わせによる前記癌患者の治療が、ＣＤ８＋Ｔ細胞傷害性細胞数の増加と、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）数の減少とをもたらす抗腫瘍免疫により腫瘍増殖を阻害する、腫瘍増殖を阻害する、請求項１８〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腫瘍学分野の発明であり、概して、癌を治療するための方法、特に放射線療法をＩＬ−１α、ＩＬ−１βまたはそれらの受容体ＩＬ−１Ｒの遮断と組み合わせる方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
腫瘍は宿主生物中で非依存的に存在しない。代わりに、癌細胞は、線維芽細胞、内皮細胞、および免疫系の細胞を含む間質細胞で構成される複雑な微小環境に囲まれた宿主生物内で増殖する。微小環境の種々の構成成分および癌細胞は互いに相互作用し、直接的な細胞間接触、サイトカイン分泌、および他の要因によって互いに影響を及ぼす。
【０００３】
癌の局所療法および全身療法の多くは、初期段階の疾患の患者では治癒する可能性があるが、進行期および／または転移性疾患の治療に使用した場合、成功する頻度は低くなる。さらに、治療に対する初期腫瘍反応が認められた場合でも、腫瘍は治療に対する耐性ができることが多い。多くの研究は、薬剤耐性を促進し、腫瘍の再増殖を説明できる腫瘍細胞の変異および遺伝的異常の寄与に焦点を合わせてきた。他の研究では、治療の望ましい抗腫瘍効果を低減するか、または無効にし得る宿主組織および細胞における治療誘発性の生理学的変化の寄与が強調されてきた。これらの望ましくない宿主効果は、腫瘍細胞の増殖（再増殖）、さらには悪性の病原力を促進し得る。
【０００４】
放射線療法、化学療法、標的抗癌剤、免疫療法、および手術を含むほとんどすべての種類の抗癌治療法は、治療される癌患者において、癌治療法の望ましい治療効果を打ち消し得るさまざまな全身作用を生み出すことが開示されている。これらの作用には、さまざまな骨髄由来細胞の急性動員および腫瘍ホーミングを伴う循環サイトカインおよび成長因子の急速な誘発が挙げられる（Ｓｈａｋｅｄ、２０１６；Ｓｈａｋｅｄ  ｅｔ  ａｌ．，２００８；Ｇｉｎｇｉｓ−Ｖｅｌｉｔｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１；Ｔｉｍａｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；  Ｂｅｙａｒ−Ｋａｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６；Ｒａｃｈｍａｎ−Ｔｚｅｍａｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１７）。「宿主反応」と呼ばれる癌治療に対するこの反応は、腫瘍とは非依存的に発生するが、種々のメカニズムを介して腫瘍の運命に影響を及ぼす可能性がある。
【０００５】
２０１８年６月４日に提出された２つの国際特許出願、第ＰＣＴ／ＩＬ２０１８／０５０６０８号（ＷＯ２０１８／２２５０６２）および第ＰＣＴ／ＩＬ２０１８／０５０６０９号（ＷＯ２０１８／２２５０６３）、それぞれ表題「癌治療に対する個別化反応を予測する方法およびそのためのキット」および「免疫チェックポイント阻害剤を用いた癌治療に対する個別化反応を予測する方法およびそのためのキット」（これらの全内容は参照により本明細書に組み込まれ、本出願の主発明者は、これらの主発明者でもある）において、本発明者らは、癌治療に対する癌患者の反応（宿主反応）により生成される複数の因子／バイオマーカーを特定し、基準レベルと比較して、複数の因子の２つ以上のそれぞれのレベルの変化が、前述の癌治療による治療に対する癌患者の好ましい反応、または好ましくない反応をどのように予測するかを決定する方法を記述している。これらの分子因子は、血管新生促進因子、炎症誘発性／走化性因子、増殖因子、もしくは転移促進性因子であり得るサイトカイン、ケモカイン、成長因子、酵素、または可溶性受容体である。
【０００６】
上記の第ＰＣＴ／ＩＬ２０１８／０５０６０８号では、化学療法、放射線療法、および標的療法などの癌療法に反応して癌患者が生成するいくつかの循環炎症誘発性因子／バイオマーカーが特定された。これらの炎症誘発性因子／バイオマーカーの中には、ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βがある。
【０００７】
特定される最初のインターロイキンであるインターロイキン−１（ＩＬ−１）は、自然免疫および炎症の中心的メディエーターである。それぞれＩＬ−１αとＩＬ−１βをコードする、関連しているが異なる２つのＩＬ−１遺伝子、ＩＬ１ＡとＩＬ１Ｂがある。ほとんどの研究では、それらの生物活性は区別ができないが、しかし、ＩＬ−１αとＩＬ−１βにはいくつかの違いがある。ＩＬ−１βは分泌され全身を循環するが、ＩＬ−１αは一般に産生細胞の原形質膜に関連しているため、局所的に作用する。次に、ＩＬ−１βは主に単球およびマクロファージによって産生されるが、ＩＬ−１αはケラチノサイトおよび内皮細胞によって高度に発現される。ＩＬ−１αとＩＬ−１βにはこれらの違いがあるが、どちらもＩＬ−１受容体１型（ＩＬ−１Ｒ１）とＩＬ−１ＲＡｃＰを含む同じ受容体複合体に結合し、骨髄分化一次反応タンパク質（ＭｙＤ８８）を介してシグナルを伝達する。このシグナル伝達は、ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βの天然のアンタゴニストであるＩＬ−１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１Ｒａ）によって負に調節され得る。天然に存在するＩＬ−１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１Ｒａ）は、構造的にＩＬ−１βと類似しているが、アゴニスト活性がない。さらに、ＩＬ−１活性の調節は、ＩＬ−１βへの反応を減少させるように、少数の表面受容体、循環可溶性受容体、および細胞表面の「デコイ」受容体にまで及ぶ。
【０００８】
ＩＬ−１は、関節リウマチ、痛風、その他などのいくつかの炎症性疾患の媒介において重要な役割を果たす。また、ＩＬ−１は、腫瘍形成、腫瘍浸潤、転移、および腫瘍と宿主の相互作用に関与していることも開示されている（Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ、２０１０；  Ａｐｔｅ  ｅｔ  ａｌ．２００６；Ｖｏｒｏｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）。
【発明の概要】
【０００９】
本発明によれば、放射線療法による治療に反応してＩＬ−１αもしくはＩＬ−１β、またはそれらの両方を生成する（本明細書では「宿主誘発性ＩＬ−１αまたはＩＬ−１β」）癌患者において、宿主誘発性ＩＬ−１αまたはＩＬ−１βの活性、特に腫瘍形成促進活性を遮断するか、または両インターロイキンに共通するＩＬ−１受容体を遮断することで、前述の遮断薬と組み合わせた放射線療法を受けている癌患者の治療の治療結果を改善することができることが現在見出されている。
【００１０】
一態様では、本発明は、癌患者の治療で使用するための、抗ＩＬ−１α、抗ＩＬ−１β、および抗ＩＬ−１Ｒから選択される、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはそれらの受容体ＩＬ−１Ｒに対する遮断薬に関し、放射線療法と組み合わせて前述の遮断薬を癌患者に投与することであって、放射線療法による治療に対する反応において前述の癌患者の血液循環中にＩＬ−１α、ＩＬ−１βまたはそれらの両方を誘発する、投与することと、癌患者において誘発されたＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはそれらの両方のそれぞれの倍率変化が少なくとも１．５倍であることを判定することであって、この倍率変化値が有意と見なされ、前述の放射線療法による治療に対する癌患者の好ましくない反応を予測すると見なされ、この倍率変化が、（ｉ）前述の放射線療法の治療セッション後に癌患者から採取された血漿、全血、血清、または末梢血単核細胞から選択される生体試料、好ましくは血漿中のＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはそれらの両方のレベルを、（ｉｉ）放射線療法による前述の治療セッションの前に、癌患者から採取された血漿、全血、血清、または末梢血単核細胞から選択される生体試料、好ましくは血漿から取得された基準レベルと比較することによって確立される、判定することとを含む。
【００１１】
別の態様において、本発明は、抗ＩＬ−１α、抗ＩＬ−１β、および抗ＩＬ−１Ｒから選択される、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはそれらの受容体ＩＬ−１Ｒに対する遮断薬を放射線療法と組み合わせて、癌患者を治療する方法に関し、この方法は、
（ｉ）放射線療法による治療に対する反応において癌患者の血液循環中のＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはそれらの両方のレベルを判定するために、前述の放射線療法による治療セッション後、約２０〜２４時間以上の期間に前述の癌患者から採取された血漿、全血、血清、または末梢血単核細胞から選択される生体試料、好ましくは血漿にアッセイを行うステップと、
（ｉｉ）ステップ（ｉ）の放射線療法による前述の治療セッションの前に、癌患者から採取された血漿、全血、血清、または末梢血単核細胞の生体試料、好ましくは血漿中のＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはそれらの両方のそれぞれの基準レベルを取得するステップと、
（ｉｉｉ）ステップ（ｉ）のＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはそれらの両方のレベルと、ステップ（ｉｉ）のＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはそれらの両方の基準レベルを比較することにより、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはそれらの両方の倍率変化を確立するステップと、
（ｉｖ）ステップ（ｉｉｉ）で確立された倍率変化が少なくとも１．５である場合、癌患者が前述の放射線療法による治療に対して好ましくない反応を有すると判定するステップであって、この倍率変化値が、誘発されたＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはそれらの両方の発現増加を示し、有意と見なされ、前述の放射線療法による治療に対して癌患者の好ましくない反応を予測すると見なされる、判定するステップと、
（ｖ）ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはそれらの受容体ＩＬ−１Ｒ活性に対する遮断薬と組み合わせた放射線療法で少なくとも１．５の倍率変化を示す癌患者を治療するステップと、を含む。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１Ａ−１Ｂ】ベースラインと比較して、非担腫瘍ＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるＩＬ−１βレベルに対する放射線の影響を示す。未処置のＢＡＬＢ／ｃマウス（８〜１０週齢）の腹部を１回線量２Ｇｙの放射線に曝した。対照マウスには照射しなかった。２４時間後、マウスを犠牲にし、脾臓ライセート中のＩＬ−１βのレベル（図１Ａ）をＥＬＩＳＡによって測定した。平均値（１群あたりｎ＝７匹のマウス）±ＳＤ、＊ｐ＜０．０５を示す。図１Ｂは、治療：基準／ベースラインのＩＬ−１βレベルの比率を算出することによって得られたＩＬ−１βの倍率変化を示す。
【図２Ａ−２Ｂ】放射線照射後の宿主由来のＩＬ−１βを遮断することにより、原発腫瘍の増殖を阻害することを示す。ＢＡＬＢ／ｃマウスの乳腺脂肪体中にＥＭＴ６マウス乳癌細胞を同所注射した。腫瘍が１５０〜２５０ｍｍ３のサイズに達したとき、マウスを１回線量２Ｇｙの放射線（図２Ａ）または計４回線量（１回線量２Ｇｙの放射線を週２回、図２Ｂ）のいずれかに曝した。さらに、放射線の１日前から４日間連続して、マウスをアナキンラ（ＡＮＫ）、または放射線とアナキンラの組み合わせで処置した。対照マウスにはビヒクル対照を注射した。腫瘍体積を定期的にモニターした。平均値（１群あたりｎ＝６匹のマウス）±ＳＤを示す。
【図３】放射線、アナキンラ、またはアナキンラに加えて放射線で処置した後の、図２Ｂに記載のマウスの生存率を示すカプラン・マイヤー曲線である。対照マウスは、ビヒクルのみで処置した。平均値（１群あたりｎ＝７匹のマウス）を示す。
【図４Ａ−４Ｂ】腫瘍浸潤免疫細胞のフローサイトメトリー分析を示す。ＢＡＬＢ／ｃマウスの乳腺脂肪体中にＥＭＴ６マウス乳癌細胞を同所注射した。腫瘍のサイズが１５０〜２５０ｍｍ３に達したとき、マウスを１回線量２Ｇｙの局所放射線に曝し、放射線照射の２日前から４日間連続してアナキンラ（ＡＮＫ）、または放射線とアナキンラの組み合わせで処置した。対照マウスにはビヒクル対照を注射した。実験の終わりに（腫瘍が約１０００ｍｍ３のサイズに達したとき）、マウスを犠牲にし、腫瘍を摘出して単細胞懸濁液として調製した。細胞を、さまざまな免疫細胞集団を特徴付けるバイオマーカーについて免疫染色した。図４ＡはＣＤ８＋Ｔ細胞リンパ球のパーセンテージを示し、図４ＢはＭＤＳＣのパーセンテージを示す。平均値（１群あたりｎ＝６匹のマウス）±ＳＤ、＊ｐ＜０．０５を示す。
【図５Ａ−５Ｃ】対照と比較して、非担腫瘍マウスにおける放射線療法に反応したＩＬ−１α濃度の増加を示す。６週齢の未処置雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（ｎ＝５）の腹腔内を１回線量２Ｇｙの放射線に曝す（処置群）か、または処置しなかった（対照群）。２４時間後、マウスを犠牲にし、心臓穿刺によりＥＤＴＡコーティングチューブに血液を採取した。血漿を単離し、メーカーの指示に従ってスライドガラスベースのＱｕａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｏｕｓｅ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ａｒｒａｙ（ＲａｙＢｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号：ＱＡＭ−ＣＡＡ−４０００）に適用し、ＩＬ−１αのレベル（ｐｇ／ｍＬで）を測定した。各マウスは、ＩＬ−１α濃度の異なるレベルの増加を示し（図５Ｃ）、平均して、約３倍のレベルの増加があった（ｐ＝０．００２、図５Ａ）。図５Ｂは、治療：基準／ベースラインＩＬ−１αレベルの比率を算出することによって得られたＩＬ−１αの倍率変化を示す。
【図６Ａ−６Ｃ】結腸癌のマウスモデルにおいて、放射線と組み合わせてＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはＩＬ−１Ｒを遮断すると、放射線単独よりも抗腫瘍効果および生存促進効果が大きいことを示している。２ｘ１０６  ＣＴ２６結腸腫瘍細胞を、ＢＡＬＢ／ｃ雌マウスの右脇腹に皮下移植して腫瘍を形成した。腫瘍のサイズが１００ｍｍ３に達したとき、マウスを放射線のみ（総線量２Ｇｙ、週２回）または１０ｍｇ／ｋｇ  ｈＩＬ−１ＲＡ（アナキンラ、毎日ＩＰ注射）と組み合わせて、ＩＬ−１αに対する中和抗体（抗ＩＬ−１α、２００μｇを週２回）、ＩＬ−１βに対する中和抗体（抗ＩＬ−１β、２００μｇを週２回）、またはｍＩＬ−１Ｒに対する中和抗体（抗ｍＩＬ−１Ｒ、５８０μｇを週２回）で処置した。対照マウスを未処置のままにした。腫瘍の増殖を定期的にモニターし、腫瘍のサイズが約１５００ｍｍ３に達したときに、マウスを犠牲にした。図６Ａおよび図６Ｂは、個々のマウス（図６Ｂ）およびすべての群（図６Ａ）における腫瘍増殖を示す。図６Ｃは、抗ＩＬ−１αまたは抗ＩＬ−１βと組み合わせて放射線療法で処置したマウスが、対照マウスまたは放射線療法のみで処置したマウスよりも良好な生存率を示したことを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明の方法を説明する前に、本発明は、本明細書に記載される特定の方法論およびプロトコルに限定されないことを理解されたい。本明細書で使用される用語は、本発明の特定の実施形態を説明することのみを目的としており、他に定義されない場合、添付の特許請求の範囲に列挙される本発明の範囲を限定することを意図しないことも理解されたい。
【００１４】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈により別の意味が明示されない限り、複数の指示対象を含むことにも留意すべきである。
【００１５】
本明細書で「放射線療法（ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ）」という用語と同じ意味で使用される「放射線療法（ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ）」は、強力なエネルギーのビームを使用して癌細胞を死滅させる癌治療の一種である。放射線療法はほとんどの場合Ｘ線を使用するが、ガンマ線、電子ビーム、または陽子も使用できる。「放射線療法」という用語は、ほとんどの場合、外部ビーム放射線療法を指す。この種類の照射の間、高エネルギービームは、体の正確な点にビームを向ける患者の体外の機械から発せられる。各セッションは迅速で痛みがなく、約１５分間持続する。
【００１６】
本明細書で使用される場合、「セッション」または「治療セッション」という用語は、放射線療法の各治療を指す。放射線療法の「レジメン」または「スケジュール」は通常、癌の種類と病期に応じて、設定された期間に施される特定数の治療からなる。通常、乳癌の場合、患者は月曜日から金曜日まで週に５回治療セッションを受ける。このスケジュールは、３〜９週間、好ましくは５〜８週間継続し得る。このスケジュールは、本明細書では以後「標準的な放射線療法スケジュール」と呼ぶ。
【００１７】
放射線の全線量は通常、「分画」と呼ばれるいくつかのより小さな線量に分割される。たとえば、乳癌手術後の全乳房放射線療法は、通常、１日１回、週５日、５〜７週間、治療が施される。放射線療法で使用される量「放射線量」はグレイ（Ｇｙ）で測定され、治療される癌の種類と病期によって異なる。この乳癌の５週間の治療スケジュールでは、４０〜５０Ｇｙの総線量は、各治療で２グレイの分画で５週間にわたり施される通常の量である。
【００１８】
より少ない治療、例えば週に２回、各治療でより高線量の放射線を伴う異なる放射線療法スケジュールが作成されたが、標準的な放射線療法スケジュールと同じ総照射線量が照射される。この「加速」または「寡分割」の放射線スケジュールは、週に２回の治療、３〜５週間のスケジュールに同じ放射線総線量を照射する。
【００１９】
一態様では、本発明は、癌患者の治療で使用するための、抗ＩＬ−１α、抗ＩＬ−１β、および抗ＩＬ−１Ｒから選択される、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはそれらの受容体ＩＬ−１Ｒに対する遮断薬に関し、上の発明の概要に記載のように、放射線療法と組み合わせて前述の遮断薬を癌患者に投与することを含む。
【００２０】
別の態様では、本発明は、放射線療法による治療に反応してＩＬ−１αもしくはＩＬ−１β、またはそれらの両方を生成する（本明細書では「宿主誘発性ＩＬ−１αまたはＩＬ−１β」）癌患者の治療に関し、前述の放射線療法によって癌患者の治療の治療結果を改善するために、前述の方法は、上の発明の概要に記載のように、放射線療法と組み合わせて、宿主誘発性ＩＬ−１αまたはＩＬ−１βの活性を遮断するか、またはＩＬ−１受容体を遮断する薬剤を患者に投与することを含む。      
【００２１】
循環宿主誘発性ＩＬ−１αもしくはＩＬ−１β、またはそれらの両方を示し、本発明による治療から恩恵をうけることができる癌患者を特定することは、上記の国際特許出願第ＰＣＴ／ＩＬ２０１８／０５０６０８号（ＷＯ２０１８／２２５０６２）の教示に基づいており、同出願において、癌療法治療に反応して患者によって生成される（「宿主反応」）各因子のレベルは、癌治療による治療セッションの後、癌患者から採取された生体試料、好ましくは血漿で測定される。次いで、各因子について得られた値（ｐｇ／ｍＬでの因子濃度）が、同じ癌患者からあらかじめ採取された生体試料、好ましくは血漿で測定された同じ因子の濃度のベースラインレベルである基準レベルと比較される（以下「基準／ベースライン試料」）。基準／ベースライン試料と比較される治療後に患者から採取された生体試料で特定された１つ以上の因子のレベルの変化は、各因子の倍率変化によって定義され、治療：因子の基準／ベースラインの比率を算出することによって決定される。１．５以上（少なくとも１．５）の倍数変化値は、因子の発現増加を示し、有意と見なされ、かつ癌治療法による治療に対する癌患者の好ましくない反応を予測すると見なされが、一方０．５以下の倍数変化は、因子の減少を示し、有意と見なされ、かつ癌治療法による治療に対する癌患者の好ましい反応を予測すると見なされる。例えば、１．５以上の倍率変化を示す特定された因子が腫瘍形成促進因子である場合、その倍率変化は、宿主反応を誘発した癌治療法による治療に対する患者の好ましくない反応を予測する。
【００２２】
ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βはどちらも腫瘍形成因子であり、放射線療法による治療後にそれらのレベルの少なくとも約１．５倍の増加（発現増加）を示す癌患者は、放射線療法による治療に反応しない。この場合、本発明は、ＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βの腫瘍形成活性を遮断する薬剤、またはＩＬ−１αおよびＩＬ−１βの両方が放射線療法による治療中にそれに結合してシグナル伝達を誘発するＩＬ−１受容体を遮断する薬剤を患者に投与することを提案する。
【００２３】
本発明によれば、放射線療法による治療セッション後（ｉ）および治療セッション前（ｉｉ）に、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはそれらの両方のレベルを測定するためにアッセイが行われる癌患者の生体試料は、血漿、全血、血清、または末梢血単核細胞から選択され得る。生体試料（ｉ）と（ｉｉ）が同じ種類であることが重要である。好ましい一実施形態では、ステップ（ｉ）およびステップ（ｉｉ）の生体試料は両方とも血漿である。
【００２４】
一実施形態では、本発明の遮断薬は、ＩＬ−１βまたはその受容体ＩＬ−１Ｒの活性を遮断し、（ａ）ＩＬ−１Ｒアンタゴニスト（ＩＬ−１Ｒａ）、（ｂ）可溶性デコイＩＬ−１Ｒ受容体、（ｃ）抗ＩＬ−１β中和モノクローナル抗体、（ｄ）抗ＩＬ−１Ｒ中和モノクローナル抗体、（ｅ）ＩＬ−１β変換酵素（ＩＣＥ）阻害剤、および（ｆ）ＩＬ−１βワクチンから選択され得る。
【００２５】
好ましい一実施形態では、ＩＬ−１βの腫瘍形成促進活性を遮断する、またはその受容体ＩＬ−１Ｒを遮断する活性剤は、ヒトインターロイキン−１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１Ｒａ）の組換え非グリコシル化形態であるアナキンラである。アナキンラは、Ｅ．ｃｏｌｉ発現系を使用した組換えＤＮＡ技術によって生成され、そのアミノ末端に追加された１つのメチオニン残基が天然のヒトＩＬ−１Ｒａとは異なる。
【００２６】
他の実施形態では、ＩＬ−１βの腫瘍形成促進活性を遮断するか、またはその受容体ＩＬ−１Ｒを遮断する活性剤は、（ａ）ＶＲＳ−８２６などのペグ化ＩＬ−１Ｒａ（ＩＬ−１ｒａ−ｒＰＥＧ）、イスナキンラ（ＥＢＩ−００５）などのキメラＩＬ−１Ｒａ−ＩＬ−１β、またはＨＬ２３５１などのハイブリッドＩＬ−１Ｒａ分子（ｒｈＩＬ−１Ｒａ−ｈｙＦｃ）から選択されるＩＬ−１Ｒアンタゴニストである。さらなる実施形態では、ＩＬ−１βの腫瘍形成促進活性を遮断する活性剤は、以下のとおりである：（ｂ）リロナセプト、可溶性デコイＩＬ−１型Ｉ受容体、（ｃ）抗ＩＬ−１β中和モノクローナル抗体であるカナキヌマブ、ゲボキズマブ、ＬＹ２１８９１０２、またはルチキズマブ（ＡＢＴ−９８１）、（ｄ）抗ＩＬ−１Ｒ中和抗体であるＭＥＤＩ−８９６８またはＧＳＫ１８２７７７１、（ｅ）ＩＬ−１β変換酵素阻害剤であるプラルナカサンまたはベルナカサン、および（ｆ）ＩＬ−１βワクチンであるｈＩＬ１ｂＱｂ。
【００２７】
別の実施形態では、本発明の遮断薬は、ＩＬ−１αまたはその受容体ＩＬ−１Ｒの活性を遮断する。
【００２８】
一実施形態では、本発明による抗ＩＬ−１α遮断薬は、抗ＩＬ−１α中和モノクローナル抗体（抗ｈＩＬ−１α−ＩｇＧ）である。他の実施形態では、遮断薬は、受容体ＩＬ−１Ｒの活性を遮断し、上記で定義された通りである。好ましい実施形態では、ＩＬ−１α活性を遮断するための好ましい遮断薬も、アナキンラである。
【００２９】
上記から理解できるように、放射線療法治療が、放射線療法による治療に反応して癌患者の血液循環中にＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはそれらの両方を誘発する患者において、本発明は、放射線療法治療の前後の特定の時点で患者から採取された生体試料中のサイトカインのレベルを測定することにより、誘発されたＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはそれらの両方のそれぞれの倍率変化を判定することを提案する。この判定は、治療が開始されたときに、放射線療法治療を継続するかどうかを決めるために行われることが好ましいが、治療をモニターするために治療の放射線療法スケジュールの途中でも行われてよい。この時点は、上で定義されたように、放射線療法スケジュールの種類、すなわち標準的または寡分割スケジュールに応じて変化し得る。
【００３０】
一実施形態では、放射線療法による治療セッションが、前述の放射線療法による療法セッションの過程で最初の治療セッションであり、生体試料、好ましくは血漿が、標準的な放射線療法スケジュールによる前述の最初の治療セッションから約２０〜２４時間後に、または加速／寡分割の放射線療法スケジュールによる前述の最初の治療セッションから約２０〜７２時間後、例えば、２４、３０、３６、４０、４８、５０、６０時間以上後に癌患者から採取され、前述の基準生体試料が７２時間以内の時点で、例えば、約６０、５０、４８、４０、３６、３０、２４、もしくは２０時間以内に、または放射線療法による前述の最初の治療セッションの直前に前述の癌患者から採取される。
【００３１】
別の実施形態では、放射線療法による治療セッションは、放射線療法による最初の治療セッションではない複数の治療セッションのうちの１つであり、生体試料、好ましくは、血漿は、標準的な放射線療法スケジュールによる最初の治療セッションではない前述の治療セッションから約２０〜２４時間後に、または加速／寡分割の放射線療法スケジュールによる最初の治療セッションではない前述の治療セッションから約２０〜７２時間後、例えば２４、３０、３６、４０、４８、５０、６０時間以上後に、癌患者から採取され、基準／ベースラインの生体試料は、最初の治療セッションではないセッションに先行した前述の治療セッションから７２時間以内の時点、例えば、約２０、２４、３０、３６、４０、４８、５０、６０、７２時間以内の時点で、もしくは前述の治療セッションの直前に癌患者から採取される。
【００３２】
本発明の遮断薬と放射線療法の組み合わせは、放射線療法単独での治療に反応してＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはそれらの両方を生成することが示され、膀胱癌、乳癌、脳癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、頭頚部癌、腎臓癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、皮膚癌、甲状腺癌および子宮癌、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、ならびに肉腫を含む、原発性癌または転移性癌に罹患している癌患者を治療するために使用することができる。
【００３３】
一実施形態では、乳癌の治療のために、アナキンラは、週５回セッションで５〜９週間、好ましくは５〜８週間の標準的な放射線療法治療スケジュール、または週２回セッションで３〜４週間の加速／寡分割の放射線療法治療スケジュールのいずれかで、毎日１回投与され、両放射線療法スケジュールにおいて同じ総照射線量が照射される。この治療では、放射線療法セッションの前または後に、アナキンラを癌患者に投与することができる。
【００３４】
別の実施形態では、遮断薬は、抗ＩＬ−１β中和モノクローナル抗体または抗ＩＬ−１α中和モノクローナル抗体であり、週５回セッションで５〜９週間、好ましくは５〜８週間の標準的な放射線療法治療スケジュール、または週２回セッションで３〜４週間の加速／寡分割の放射線療法治療スケジュールのいずれかで、２〜３週間ごとに１回投与することができ、両放射線療法スケジュールにおいて同じ総照射線量が照射される。
【００３５】
本出願の実施例および図に示されるように、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、または抗ＩＬ−１Ｒに対する遮断薬と組み合わせた放射線療法による治療は、より大きな抗腫瘍効果および生存促進効果を有する。放射線療法とアナキンラの組み合わせがＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞の増加を明らかにすることも示され（実施例３、図４）、放射線療法およびアナキンラ後の腫瘍増殖の阻害が少なくとも部分的にＣＤ８＋Ｔ細胞傷害性細胞によって媒介されることを示唆している。さらに、放射線療法またはアナキンラで治療されたマウスは、対照マウスと比較して腫瘍浸潤骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の有意な増加を示したが、放射線療法とアナキンラの併用治療はＭＤＳＣのレベルの低下をもたらした。これらの結果は、他の細胞型の役割を排除することなく、放射線療法とアナキンラの併用治療における腫瘍増殖の阻害が、各単独の治療と比較して、ＭＤＳＣを減少させ、ＣＤ８＋Ｔ浸潤細胞を誘発することによって、少なくとも部分的に媒介されることを示唆している。
【００３６】
したがって、さらなる実施形態では、本発明は、放射線療法と、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、または抗ＩＬ−１Ｒ、好ましくはアナキンラに対する遮断薬との組み合わせによる癌患者の治療に関し、腫瘍増殖の阻害は、ＣＤ８＋Ｔ細胞傷害性細胞数の増加、および骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）数の減少をもたらす抗腫瘍免疫に起因する。
【００３７】
次に、本発明を以下の非限定的な実施例によって説明する。
【実施例】
【００３８】
材料および方法
（ｉ）材料：アナキンラ−キネレット１００ｍｇ、Ｓｏｂｉ、カタログ番号ａｎ−０３４７、ロット：３１３０１−１Ｆ；ＩｎＶｉｖｏＭＡｂ抗マウス／ラットＩＬ−１βクローンＢ１２２、Ｂｉｏ  Ｘ  Ｃｅｌｌ、カタログ番号ＢＥ０２４６、ロット：６７６４１８Ａ１；ＩｎＶｉｖｏＭＡｂ抗マウスＩＬ−１αクローンＡＬＦ−１６１、Ｂｉｏ  Ｘ  Ｃｅｌｌ、カタログ番号ＢＥ０２４３、ロット：６３４７１Ｊ１；ＩｎＶｉｖｏＭＡｂ抗マウスＩＬ−１Ｒ（ＣＤ１２１ａ）クローンＪＡＭＡ−１４７、Ｂｉｏ  Ｘ  Ｃｅｌｌ、カタログ番号ＢＥ０２５６、ロット：６５４６１７Ｊ３。
【００３９】
（ｉｉ）腫瘍細胞培養物：マウスＥＭＴ６乳癌およびＣＴ２６マウス結腸癌の細胞株をＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、ＵＳＡ）から購入した。細胞を、標準ストックから解凍した後、４ヶ月以内にわたり継代培養した。培養物がマイコプラズマに対して陰性であることを試験した。ＥＭＴ６細胞およびＣＴ２６細胞を、それぞれダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）およびＲＰＭＩ  Ｍｅｄｉａ１６４０培地で培養し、各培地に１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１％Ｌ−グルタミン、１％ピルビン酸ナトリウム、および１％ペニシリン−ストレプトマイシン（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｓｒａｅｌ）を３７℃、５％ＣＯ２下で補充した。
【００４０】
（ｉｉｉ）動物、処置プロトコルおよび腫瘍モデル：未処置８〜１０週齢の雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｈａｒｌａｎ，Ｉｓｒａｅｌ）を本試験で使用した。ＥＭＴ６マウス乳癌細胞（５×１０５）をＢＡＬＢ／ｃマウスの乳腺脂肪体中に移植した。腫瘍サイズは、幅２×長さ×０．５の式を使用してノギスを用いて定期的に評価した。腫瘍のサイズが１５０〜２５０ｍｍ３に達すると、さまざまな処置を開始した。Ｅｌｅｋｔａ  Ｐｒｅｃｉｓｅ（Ｅｌｅｋｔａ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、線形加速器６ＭｅＶの電子ビームを用い、室温で総線量２Ｇｙを毎分４０ｃＧｙの線量率でマウスの腹腔に局所的に照射した。アナキンラ（Ｓｗｅｄｉｓｈ  Ｏｒｐｈａｎ  Ｂｉｏｖｉｔｒｕｍ）を、放射線照射の１日前に開始し、４日間連続して毎日１０ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内注射した。対照マウスにはビヒクル対照を注射した。腫瘍サイズは、キャリブレーターを使用して週に２回評価した。腫瘍が約１０００ｍｍ３のサイズに達すると、実験を終了し、その時点でマウスを犠牲にし、肺および腫瘍をさらなる分析のために摘出した。
【００４１】
（ｉｖ）タンパク質アレイによるＩＬ−１αの定量化：血漿を単離し、スライドガラスベースのＱｕａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｏｕｓｅ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ａｒｒａｙ（ＲａｙＢｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号：ＱＡＭ−ＣＡＡ−４０００）に、メーカーの指示に従って適用し、血漿中のＩＬ−１αのレベル（ｐｇ／ｍＬで）を測定した。
【００４２】
（ｖ）ＥＬＩＳＡによるＩＬ−１βの定量化：脾臓（対照または照射マウスから抽出）を、２０ｍｍｏｌ／ＬのＨＥＰＥＳ、１００ｍｍｏｌ／ＬのＮａＣｌ、１ｍｍｏｌ／ＬのＥＤＴＡ、１％Ｔｒｉｔｏｎ、およびプロテアーゼ阻害剤の混合物（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を含有するＰＢＳ中でホモジナイズした。ホモジネートを遠心分離し、上清を収集した。メーカーの指示に従って、等量のタンパク質をマウスＩＬ−１βＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．）に適用した。
【００４３】
（ｖｉ）フローサイトメトリー：腫瘍浸潤免疫細胞を分析するために、腫瘍を単細胞懸濁液として調製し、以下のようにさまざまな細胞集団を区別する特定の表面マーカーに対する以下の抗体について細胞を免疫染色した：ＭＤＳＣ−ＣＤ１１ｂ＋／Ｇｒ−１＋／Ｌｙ６Ｇ＋／Ｌｙ６Ｃ＋；Ｍ１マクロファージ−ＣＤ４５＋／ＣＤ１１ｃ＋／ＣＤ２０６−／Ｆ４／８０＋；Ｍ２マクロファージ−ＣＤ４５＋／ＣＤ１１ｃ−／ＣＤ２０６＋／Ｆ４／８０＋；細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＤ８＋／ＣＤ２５＋）、Ｔヘルパー細胞（ＣＤ４＋）、およびＴ制御性細胞（ＣＤ４＋／ＣＤ２５＋／ＦＯＸｐ３＋）。すべてのモノクローナル抗体は、Ｂｉｏ  Ｌｅｇｅｎｄ，ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、またはＲ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓから購入し、メーカーの指示に従って使用した。Ｃｙａｎ  ＡＤＰフローサイトメーターを使用して少なくとも１００，０００のイベントを取得し、Ｓｕｍｍｉｔ  ｖ４．３ソフトウェア（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）で分析した。
【００４４】
（ｖｉｉ）統計分析：データを平均値±標準偏差（ＳＤ）として表す。ＥＬＩＳＡによるＩＬ−１βの定量化について、差異の統計的有意性を両側の対応のないｔ検定によって評価した。腫瘍増殖評価について、差異の統計的有意性を一元配置分散分析によって評価した。すべての群間の差異を互いに比較し、０．０５未満のｐ値で有意と見なした。
【００４５】
実施例１．放射線療法後の宿主由来ＩＬ−１β発現の誘発
放射線療法に反応して宿主由来のＩＬ−１β発現が増加したかどうかを確認するために、未処置（非担腫瘍）ＢＡＬＢ／ｃマウス（８〜１０週齢）の腹部を１回線量２Ｇｙの放射線に曝した。２４時間後、マウスを犠牲にし、脾臓ライセート中のＩＬ−１βのレベルをＥＬＩＳＡによって測定した。対照マウスには照射しなかった。図１Ａは、対照と比較して、照射マウスのＩＬ−１βレベルの有意な増加を示し、図１Ｂは、対照マウス対処置マウスの脾臓ライセート中の測定されたＩＬ−１βのレベルの比率によって算出したときに、少なくとも１．５の倍数変化を示す。この実験は、未処置マウスを使用して行ったため、ＩＬ−１βは腫瘍の存在とは無関係に、放射線に反応して宿主細胞によって生成されることを示していることに留意されたい。平均値（１群あたりｎ＝７匹のマウス）±ＳＤ、＊ｐ＜０．０５を示す。
【００４６】
実施例２．放射線療法によって誘発された宿主由来のＩＬ−１βを遮断することで、原発腫瘍の増殖が阻害され、マウスの生存が改善される
原則として、抗癌療法に反応して発現増加した腫瘍形成促進因子に拮抗する薬剤は、治療結果を改善するための補完療法として使用することができる。ここでは、放射線に反応して誘発されるＩＬ−１βの発現増加に対抗する療法の可能性を調査した。
【００４７】
宿主由来のＩＬ−１β（放射線に反応して発現増加する）を遮断することで放射線療法の有効性が改善するかどうかを調べるために、ＢＡＬＢ／ｃマウスの乳腺脂肪体中にＥＭＴ６マウス乳癌細胞を同所注射した。腫瘍が１５０〜２５０ｍｍ３のサイズに達したとき、マウスの腹部を１回線量２Ｇｙの放射線（２Ａ）または計４回線量（１回線量２Ｇｙを週２回、図２Ｂ）のいずれかに曝し、放射線照射の１日前に開始し、４日間連続してアナキンラ単独で処置するか、または放射線とアナキンラの組み合わせで処置した。対照マウスにはビヒクル対照を注射した。腫瘍の増殖を定期的にモニターした。図２Ａの結果は、放射線とアナキンラの併用治療が他の群と比較して原発腫瘍の増殖を阻害することを示している。図２Ｂは、動物を週に２回放射線に曝した同様の実験を示しており、対照の放射線単独およびアナキンラ単独で処置されたマウスよりも、放射線とアナキンラを組み合わせた処置群の抗腫瘍効果が向上したことを示している（ｐ値はそれぞれ０．０５３、０．０２５、および０．０５８）。総合すると、これらの結果は、放射線療法と組み合わせて宿主由来のＩＬ−１βを遮断することで、特に長期の反復治療において原発腫瘍の増殖が阻害されることを示す。対照マウスにはビヒクル対照を注射した。腫瘍体積を定期的にモニターした。平均値（１群あたりｎ＝６匹のマウス）±ＳＤを示す。
【００４８】
放射線療法と組み合わせて宿主由来のＩＬ−１βを遮断すると、腫瘍量が改善されるだけでなく、マウスの生存率も改善された。図３に示すように、アナキンラと組み合わせた放射線療法で処置されたマウスは、アナキンラ単独、放射線単独、またはビヒクル対照単独で処置されたマウス（それぞれ２８．５、２８．５、および２７の生存期間中央値）、それぞれｐ値＝０．０３、０．０９、および０．０１と比較して、高い生存率（生存期間中央値３５日）を示した。
【００４９】
実施例３．放射線療法によって誘発された宿主由来のＩＬ−１βを遮断すると、腫瘍浸潤免疫細胞の数に影響を与える
ＢＡＬＢ／ｃマウスの乳腺脂肪体中にＥＭＴ６マウス乳癌細胞を同所注射した。腫瘍が１５０〜２５０ｍｍ３のサイズに達すると、マウス（４実験群）を、１回線量２Ｇｙの局所放射線に曝露し、放射線照射の２日前に開始し、４日間連続してアナキンラで処置し、放射線照射とアナキンラの組み合わせでの処置し、対照マウスにはビヒクル対照を注射した。実験の終了（腫瘍が約１０００ｍｍ３のサイズに達すると）後、マウスを犠牲にし、腫瘍を摘出して、単細胞懸濁液として調製した。試験した癌治療が腫瘍増殖を阻害するのに役立つメカニズムを理解するために、異なる免疫細胞集団を特徴付けるバイオマーカーについて細胞を免疫染色し、腫瘍浸潤免疫細胞のフローサイトメトリー分析を行った。分析により、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞の増加が明らかになり（図４Ａ、ｐ＜０．０５を参照）、放射線療法およびアナキンラ後の腫瘍増殖の阻害が、少なくとも部分的にＣＤ８＋Ｔ細胞傷害性細胞によって媒介されることが示唆された。さらに、放射線療法またはアナキンラで処置されたマウスは、対照マウスと比較して腫瘍浸潤骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の有意な増加を示したが、放射線療法とアナキンラの併用治療はＭＤＳＣのレベルの低下をもたらし、低下は対照マウスにおけるそれらのレベルに達した（図４Ｂを参照、＊ｐ＜０．０．５、＊＊ｐ＜０．０１）。ＭＤＳＣは免疫応答を抑制し、多くの種類の腫瘍に浸潤することが示されている。これらの結果は、他の細胞型の役割を排除することなく、放射線療法とアナキンラの併用治療における腫瘍増殖の阻害が、各単独の治療と比較して、ＭＤＳＣを減少させ、ＣＤ８＋Ｔ浸潤細胞を誘発することによって、少なくとも部分的に媒介されることを示唆している。
【００５０】
実施例４．放射線療法後の宿主由来ＩＬ−１α発現の誘発
宿主由来ＩＬ−１βだけでなく、宿主由来ＩＬ−１αも放射線療法に反応して発現増加するかどうかを判定するために、放射線に曝露された未処置マウスからの血漿試料でタンパク質アレイを実施した。
【００５１】
６週齢の未処置雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（ｎ＝５）の腹腔内を１回線量２Ｇｙの放射線に曝すか（処置群）、または処置しなかった（対照群）。２４時間後、マウスを犠牲にし、心臓穿刺によりＥＤＴＡコーティングチューブに血液を採取した。血漿を単離し、メーカーの指示に従ってスライドガラスベースのＱｕａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｏｕｓｅ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ａｒｒａｙ（ＲａｙＢｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号：ＱＡＭ−ＣＡＡ−４０００）に適用し、ＩＬ−１αのレベル（ｐｇ／ｍＬで）を測定した。図５Ａおよび図５Ｃは、放射線療法に反応したＩＬ−１α濃度の増加を示し、図５Ｂは、その算出した倍率変化を示す。示されるように、各マウスは、ＩＬ−１α濃度の異なるレベルの増加を示し（図５Ｃ）、平均して、対照マウスと比較して、放射線で処置されたマウスにおいて約３倍の増加があった（ｐ＝０．００２、図５Ａ）（倍率変化は、処置マウス値：対照マウス値の比率を算出することによって判定された。１．５を超える倍数変化を放射線療法に反応した発現増加として定義した）。この実験は、未処置マウスを使用して行ったため、ＩＬ−１αは腫瘍の存在とは無関係に、放射線に反応して宿主細胞によって生成されることを示していることに留意されたい。
【００５２】
実施例５．結腸癌のマウスモデルにおいて、放射線と組み合わせてＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはＩＬ−１Ｒを遮断すると、放射線単独よりも抗腫瘍効果が大きい。
ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βの両方が同じ受容体であるＩＬ−１Ｒを共有しているので、次に、各リガンドの腫瘍形成促進の役割を分析するために、放射線療法と組み合わせてそれぞれを遮断することにより腫瘍増殖阻害を試験した。この目的のために、２ｘ１０６  ＣＴ２６結腸腫瘍細胞を、ＢＡＬＢ／ｃ雌マウスの右脇腹に皮下移植して、腫瘍を形成した。腫瘍のサイズが１００ｍｍ３に達すると、マウスを放射線単独（総線量２Ｇｙ、週２回）または１０ｍｇ／ｋｇ  ｈＩＬ−１ＲＡ（アナキンラ、毎日ＩＰ注射）、ＩＬ−１αに対する中和抗体（抗ＩＬ−１α、２００μｇを週２回）、ＩＬ−１βに対する中和抗体（抗ＩＬ−１β、２００μｇを週２回）、もしくはｍＩＬ−１Ｒに対する中和抗体（抗ｍＩＬ−１Ｒ、５８０μｇを週２回）と組み合わせて処置した。対照マウスを未処置のままにした。腫瘍の成長を定期的にモニターし、腫瘍のサイズが約１５００ｍｍ３に達すると、マウスを犠牲にした。特定の処置群の１匹のマウスを犠牲にした場合、この特定の群のそれ以上の測定を考慮に入れなかったことに留意されたい。図６Ａに示すように、対照マウスは１９日目にすでに最大腫瘍体積に達したが、他のすべての群の処置は腫瘍増殖の低下を示した。さらに、抗ＩＬ−１α、抗ＩＬ−１β、または抗ｍＩＬ−１Ｒと組み合わせた放射線の処置は、放射線単独と比較して、腫瘍増殖を阻害するのにより効果的であることがわかった。図６Ｂに示すように、単一マウスの腫瘍増殖を比較すると、腫瘍増殖の阻害において放射線単独と比較した併用処置の利点がより強調される。さらに、エンドポイントに達するまでのマウスの生存率を算出すると（図６Ｃ）、抗ＩＬ−１αまたは抗ＩＬ−１βと組み合わせて放射線で処置したマウスは、対照マウスまたは放射線療法単独で処置されたマウスよりも、良好な生存率を示した。全体として、これらの結果は、放射線とＩＬ−１α、ＩＬ−１β、またはＩＬ−１Ｒ阻害剤（およびおそらくそれらの組み合わせも）を組み合わせた処置は、対照または放射線単独と比較して、抗腫瘍活性の改善を示し、より良好な生存率をもたらすことを示している。
【００５３】
参考文献
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【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
2021526160.tif 000003
【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【国際調査報告】
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