(57)【要約】  本発明は、モータに連結され、カートリッジ上の複数の位置に流体試料を移動させるようになされたカートリッジを備える、微少流体システムを提供する。カートリッジは傾斜面上で回転するように構成され、したがって、遠心力と重力の組合せによって、カートリッジ内の流体試料を移動させるようになる。このような構成は、カートリッジ内で流体を放射状内向きに移動させることを容易にすることによって、連続分析の実行を容易にすることができる。提供されるカートリッジは、少なくとも３つの区域がチャンバ内に存在する反応チャンバ（１５）を備える。第１の区域（区域Ａ）は、放射状外向きに配置され、光学測定用のキュベット（４５）を備える。第２及び第３の区域（区域Ｂ及びＣ）は、回転の中心（２５）のより近くに配置され、乾燥試薬スポット（Ｒ１、Ｒ２）を含んでもよい。
2021522496.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
モータに連結され、カートリッジ上の複数の位置に流体試料を移動させるように構成されたカートリッジを備える微少流体システムであって、前記カートリッジが、水平面に対して傾斜した平面上で回転するように構成され、
前記カートリッジが、少なくとも３つの区域、すなわち、検出区域を画定するために反応チャンバの一端の近くに配置された第１の区域、前記第１の区域の近位端に配置された第２の区域、及び前記反応チャンバの他端の近くに配置された第３の区域を有する前記反応チャンバを備え、前記第２の区域及び前記第３の区域のそれぞれが試薬区域を含み、前記モータ及び制御モジュールが、前記少なくとも３つの区域の間で前記流体試料を移動させるために、遠心力と重力を組み合わせるように構成され、前記第１の区域が、前記カートリッジの外径に隣接して配置された単一のキュベットを備え、反応の各段階の光学測定を可能にするように構成される、微少流体システム。
【請求項２】
前記第１の区域が、放射状の範囲で、前記反応チャンバの回転の中心から最も遠い場所に配置されている、請求項１に記載の微少流体システム。
【請求項３】
前記第２の区域が、前記第１の区域に対して放射状内向きに配置され、第１の試薬スポット位置Ｒ１を含む、請求項１に記載の微少流体システム。
【請求項４】
前記第３の区域が、前記反応チャンバの最も放射状内向きの端部と前記第２の区域の前記放射状内向きの位置との間に配置され、前記第３の区域が、第２の試薬スポット位置Ｒ２を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の微少流体システム。
【請求項５】
Ｒ１試薬（Ｒ１−Ｘ）又は別の試薬を再水和するための、第１の独立した再水和チャンバを備える、請求項１〜４のいずれか一項に記載の微少流体システム。
【請求項６】
前記Ｒ１試薬（Ｒ１−Ｘ）又は前記再水和チャンバ内の別の試薬を再水和するために前記第１の独立した再水和チャンバに移送するための、緩衝液の既定量を計量するように構成された前記第１の独立した再水和チャンバに連結された緩衝液計量チャンバをさらに備える、請求項５に記載の微少流体システム。
【請求項７】
Ｒ２試薬（Ｒ２−Ｙ）又は別の試薬を再水和するための、第２の独立した再水和チャンバを備える、請求項１〜６のいずれか一項に記載の微少流体システム。
【請求項８】
２つ以上の反応チャンバを備える、請求項１〜７のいずれか一項に記載の微少流体システム。
【請求項９】
前記反応チャンバが、細長い形状、円形状、正方形状、ジグザグ形状、又は十字形状のうち少なくとも１つの形状を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の微少流体チャンバ。
【請求項１０】
前記反応チャンバが、２つの側部において前記第１の区域から放射状内向きに延在して、前記第２の区域及び第３の区域を画定するように独立して流体で満たすことのできる２つの区域を形成する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の微少流体システム。
【請求項１１】
前記カートリッジが、遠心力と重力の組合せによって、動作にあたって前記流体試料が放射状の外向き及び内向きに移動するのに影響を及ぼすように、前記傾斜した平面においてある一定の速度で回転するように構成される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の微少流体システム。
【請求項１２】
前記カートリッジは、相対遠心力（ＲＣＦ）が重力よりも強いように、ある一定速度で回転するように構成され、前記流体試料を前記カートリッジ上で放射状外向きに移動させることができる、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の微少流体システム。
【請求項１３】
前記カートリッジは、前記流体試料が前記遠心力の影響下にあるときには、前記第２の区域又は第３の区域に流体が到達しないように構成される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の微少流体システム。
【請求項１４】
前記カートリッジが、静止しているか又は緩やかに回転するように構成されると、重力が、前記流体に影響を及ぼし、前記流体を前記第２の区域又は第３の区域に向かって移動させることになる、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の微少流体システム。
【請求項１５】
前記重力の影響を受けて前記流体が流れるのを防ぐ場合がある表面張力の任意の影響を克服するために、前記カートリッジは攪拌されるようにさらに構成可能である、請求項１４に記載の微少流体システム。
【請求項１６】
前記第２の区域が、乾燥した試薬を含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の微少流体システム。
【請求項１７】
前記第３の区域が、乾燥した試薬を含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の微少流体システム。
【請求項１８】
前記カートリッジは、前記第２又は第３の区域が前記流体試料及び緩衝液で再水和されるまで、前記乾燥した試薬が変化しないままであるように構成される、請求項１６又は１７に記載の微少流体システム。
【請求項１９】
前記第２及び／又は第３の区域での単数又は複数のスポットにおいて、前記乾燥した試薬のスポットをつけることができる、請求項１６〜１８のいずれか一項に記載の微少流体システム。
【請求項２０】
前記第２又は第３の区域が、乾燥した複数の試薬を含む、請求項１６〜１９のいずれか一項に記載の微少流体システム。
【請求項２１】
前記キュベットが、前記反応の各段階で使用される前記緩衝液、前記流体試料、及び前記再水和された試薬の光学測定を可能にするように構成された、単一容量のキュベットを含む、請求項１８〜２０のいずれか一項に記載の微少流体システム。
【請求項２２】
免疫比濁法又は酵素ベースの臨床化学分析を実行するように構成される、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の微少流体システム。
【請求項２３】
前記流体試料を受け取り、前記試料の既定量を計量するように構成された試料計量チャンバ、及び緩衝液の既定量を計量するように構成された緩衝液計量チャンバをさらに備える、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の微少流体システム。
【請求項２４】
前記試料計量チャンバに連結され、前記緩衝液計量チャンバに連結された試料混合チャンバをさらに備え、前記試料混合チャンバが、前記試料計量チャンバから移送された前記試料の量と、前記緩衝液計量チャンバから移送された緩衝液の量とを混合して、前記試料を希釈するように構成される、請求項２３に記載の微少流体システム。
【請求項２５】
前記試料混合チャンバと前記反応チャンバとの間に連結された希釈済み試料計量チャンバをさらに備え、前記希釈済み試料計量チャンバが、前記試料の希釈の既定量を計量して、前記反応チャンバに移送するように構成される、請求項２４に記載の微少流体システム。
【請求項２６】
前記希釈済み試料計量チャンバに連結された反応チャンバをさらに備える、請求項２５に記載の微少流体システム。
【請求項２７】
２つ以上の反応チャンバを備え、各反応チャンバが少なくとも前記第１の区域を含み、少なくとも１つの反応チャンバが前記少なくとも３つの区域を有する、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の微少流体システム。
【請求項２８】
前記流体試料と緩衝液を混合するための試料希釈チャンバと、前記試料希釈チャンバと前記２つ以上の反応チャンバとの間に連結された分配チャネルとをさらに備え、前記分配チャネルが、前記試料希釈チャンバから、下流側へ前記２つ以上の反応チャンバのそれぞれに、希釈された試料を順序通りに供給するように構成される、請求項２７に記載の微少流体システム。
【請求項２９】
各反応チャンバに関連付けられた供給チャネルをさらに備え、前記希釈された試料が、この供給チャネルによって、前記分配チャネルから各反応チャンバに供給される、請求項２８に記載の微少流体システム。
【請求項３０】
前記２つ以上の反応チャンバに供給した後に残る前記希釈された試料を受け取るための、前記分配チャネルに連結されたオーバフロー・チャンバをさらに備える、請求項２９に記載の微少流体システム。
【請求項３１】
前記分配チャネルに連結された緩衝チャンバをさらに備え、前記緩衝チャンバが、前記反応チャンバのうち２つ以上の間での相互汚染を防止するように構成される、請求項３０に記載の微少流体システム。
【請求項３２】
前記反応チャンバのうちの１つとその供給チャネルとの間に連結された中間試料計量チャンバをさらに備え、前記中間試料計量チャンバが、前記２つ以上の反応チャンバ間の相互汚染を防止するように構成される、請求項３１に記載の微少流体システム。
【請求項３３】
各供給チャネルとその反応チャンバとの間に連結された中間チャンバをさらに備える、請求項３０に記載の微少流体システム。
【請求項３４】
各中間チャンバが、計量チャンバと、前記供給チャネルに印加される遠心圧力が前記オーバフロー・チャンバ内の圧力に等しくなるまで、前記分配チャネルからの希釈された試料で前記計量チャンバが満たされるように構成されたオーバフロー・チャンバとを備える、請求項３３に記載の微少流体システム。
【請求項３５】
前記分配チャネルに連結された緩衝チャンバをさらに備え、前記緩衝チャンバが、毛管チャネルによってつながれた第１の区間と第２の区間を備える、請求項３４に記載の微少流体システム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はポイントオブケアのカートリッジに関する。詳細には、本発明は、遠心式微少流体技術に基づくポイントオブケアの診断検査システムに関する。
【背景技術】
【０００２】
様々なタイプの試料の生化学的含量を決定するための手動処理は、多くの用途で法外な費用がかかり、また誤差の生じる傾向がある。多くの用途では自動化にも法外な費用がかかり、ポイントオブケア又は医院での解析などの用途において−たとえば、液体処理ロボットを使用して−現在実施される場合には不適切である。その結果、現在の自動化又は手動処理よりも廉価で、誤差の生じにくい生化学分析向けの試料処理を実現したいという満たされない要求が存在する。
【０００３】
通常、流体移動の主要な手段として、遠心式微少流体技術を使用して流体を放射状内向きに移動させるのが非常に難しい。これにより、連続分析を実行できるようにするのに利用可能な選択肢が限定／制限される場合がある。
【０００４】
遠心式微少流体技術に基づくある特定のポイントオブケア診断検査システムは、統合された必要な試料調製と分析測定のステップを実行する際に非常に良好である。光検出を用いるこのような遠心式微少流体プラットフォームにより、単一の機器及び使い捨てカートリッジを使用して、様々な分析技術を並行して実施できるようになる。ポイントオブケア診断検査システムの例には、米国特許第９１８２３８４Ｂ２号明細書（Ｒｏｃｈｅ）、米国特許第８４１５１４０Ｂ２号明細書（Ｐａｎａｓｏｎｉｃ）、米国特許第８８４６３８０号明細書（Ｉｎｆｏｐｉａ）、米国特許第５５９１６４３号明細書（Ａｂａｘｉｓ）、米国特許第５４０９６６５号明細書（Ａｂａｘｉｓ）が含まれる。
【０００５】
米国特許出願公開第２０１０／０７４８０１号明細書には、モータに結合されたマイクロチップを備える分析装置が記載されており、ここで、このマイクロチップは毛管作用によって液体試料を獲得する。マイクロチップは、毛管圧を低減する構造体を設けることにより、毛管作用を使用して液体試料を移動させることの限界を克服する。これは、大気圧に開かれた隣接する空洞を各流路に設けることによって実現され、この空洞は、流体の長さが増すにつれて毛管圧が上昇するのを防止するように働く。したがって、本発明の一実施形態では、マイクロチップ構造体は、液体試料を収集するための入口と、所定の量の液体試料を保持するための毛管空洞と、分析用試薬を有する単一の保持チャンバと、液体試料と試薬の混合物を測定するための測定チャンバと、保持チャンバ及び測定チャンバと連通する流路と、測定チャンバと大気ベントを連結する流路とを備える。使用に際しては、毛管空洞内の液体試料が遠心力で保持チャンバに移送され、ここで分析用試薬と混合される。次いで、この混合物は、毛管力によって保持チャンバから測定チャンバの入口に移送され、そこから分析装置の回転によって測定チャンバ自体に移送される。測定チャンバでは、液体試料の成分の濃度が測定される。したがって、この特許文献では、保持チャンバが単一の試薬と液体試料の混合物を測定チャンバに供給すると、この混合物を保持チャンバに戻すことができないように、マイクロチップ構造体が構成されていることが理解されよう。
【０００６】
米国特許出願公開第２０１５／１０４８１４号明細書には、全血分離用の試料解析装置が開示してある。この装置は、試料を収容するための試料チャンバと、試料が流れる経路を設ける流路と、バルブ・ドライバ及び制御ユニットに連結された流路を開くためのバルブとを含む、回転可能な微少流体装置を備える。分離チャンバが、遠心力によって試料チャンバから流れてくる試料を受け、標的細胞を収集するための収集チャンバが、この分離チャンバに連結されている。使用に際しては、装置を回転させて、たとえばＤＧＭ層、ＲＢＣ層、ＷＢＣ層、血漿層など、試料中の材料の密度勾配に従って、分離チャンバ内の複数の層に試料を分離する。ＤＧＭとともに分離チャンバの最も低い部分に配置された標的材料が、次いで、収集チャンバに移送されて回収される。
【０００７】
国際公開第２００９／０１６８１１号パンフレットには、生物から収集された液体を分析するための装置が記載してある。この装置は、複数の個別のキュベットを備えており、各キュベットは、反応の互いに異なる段階を測定する。米国特許出願公開第２０１７１３８９７２号明細書には、非結合又は未反応の物質から複合物を分離するための複数の洗浄ステップを実現するために、３つの反応チャンバ間で流体を移送するための重力及び遠心力の使用が簡単に記載してある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
したがって、遠心式微少流体技術に基づく、改良されたポイントオブケア診断検査システムを提供することが目的である。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明によれば、添付の特許請求の範囲に記載されているように、
モータに連結され、カートリッジ上の複数の位置に流体試料を移動させるように構成されたカートリッジを備える微少流体システムが提供され、このカートリッジは、水平面に対して傾斜した平面上で回転するように構成され、
このカートリッジは、少なくとも３つの区域、すなわち、検出区域を画定するために反応チャンバの一端の近くに配置された第１の区域、第１の区域の近位端に配置された第２の区域、及び反応チャンバの他端の近くに配置された第３の区域を有する反応チャンバを備え、第２の区域及び第３の区域のそれぞれは試薬区域を含み、モータ及び制御モジュールが、少なくとも３つの区域の間で前記流体試料を移動させるために、遠心力と重力を組み合わせるように構成され、第１の区域は、カートリッジの外径に隣接して配置された単一のキュベットを備え、反応の各段階の光学測定を可能にするように構成される。
【００１０】
一実施形態では、第１の区域は、放射状の範囲で、反応チャンバの回転の中心から最も遠い場所に配置されている。
【００１１】
一実施形態では、第２の区域は、第１の区域に対して放射状内向きに配置され、第１の試薬スポット位置Ｒ１を含む。
【００１２】
一実施形態では、第３の区域は、反応チャンバの最も放射状内向きの端部と第２の区域の放射状内向きの位置との間に配置され、第３の区域は、第２の試薬スポット位置Ｒ２を含む。
【００１３】
一実施形態では、Ｒ１試薬（Ｒ１−Ｘ）又は別の試薬を再水和するための、第１の独立した再水和チャンバが設けられる。
【００１４】
一実施形態では、Ｒ１試薬（Ｒ１−Ｘ）又は再水和チャンバ内の別の試薬を再水和するために第１の独立した再水和チャンバに移送するための、緩衝液の既定量を計量するように構成された第１の独立した再水和チャンバに連結された緩衝液計量チャンバが設けられる。
【００１５】
一実施形態では、Ｒ２試薬（Ｒ２−Ｙ）又は別の試薬を再水和するための、第２の独立した再水和チャンバが設けられる。
【００１６】
一実施形態では、２つ以上の反応チャンバが設けられる。
【００１７】
一実施形態では、反応チャンバは、細長い形状、円形状、正方形状、ジグザグ形状、又は十字形状のうち少なくとも１つの形状を含む。
【００１８】
一実施形態では、第１の区域は、キュベットを備え、カートリッジの外径に隣接して配置される。
【００１９】
本発明のカートリッジは、従来技術に勝る以下のいくつかの利点を実現することが理解されよう。
・全体的なカートリッジの概念では、重力及び遠心力を利用した微少流体の方法を使用する。
・単一容量反応では、すなわち、試薬の希釈、分注、又は計量を含む各ステップの一部又は全部が不要になり、これによって操作が簡単になり、検査精度が改善する可能性がある。
・各分析段階で精度を改善するための、単一のキュベットでの連続した光学測定。
・連続再水和用のＲ１試薬及びＲ２試薬の位置。
・試料と緩衝液の一様な混合。
・緩衝液及び／又は試料に光学測定を実行できること。
・一貫した光学照合用の均一な液体メニスカスを提供するための、遠心力を使用するキュベット充填。
・静的又は動的な（回転しながら）方法を使用する、分析反応の光学測定。
【００２０】
一実施形態では、第１の検出区域は、キュベットを備え、Ｖ字形反応チャンバの放射状範囲に配置される。
【００２１】
一実施形態では、Ｖ字形チャンバは、２つの側部において放射状内向きに延在して、第２の区域及び第３の区域を画定するように独立して流体で満たすことのできる２つの区域を形成する。
【００２２】
一実施形態では、第２及び／又は第３の区域は、試薬貯蔵区域及び／又は再水和区域を含む。
【００２３】
一実施形態では、第２及び／又は第３の区域は、光学的に照合されるように構成された領域を含む。
【００２４】
一実施形態では、カートリッジは、遠心力と重力の組合せによって流体試料がそれぞれ放射状の外向き及び内向きに移動するように、ある一定の速度で回転するように配置及び構成される。
【００２５】
一実施形態では、カートリッジは、相対遠心力（ＲＣＦ）が重力よりも強いように、ある一定速度で回転し、流体試料をカートリッジ上で放射状外向きに移動させることができる。
【００２６】
一実施形態では、遠心力によって、確実に第２の区域又は第３の区域に流体が到達しない。
【００２７】
一実施形態では、カートリッジは、静止しているか又は緩やかに回転しており、重力は、流体に影響を及ぼし、この流体を第２の区域又は第３の区域に向かって移動させる。
【００２８】
一実施形態では、重力の影響を受けて流体試料が流れるように下向きの傾斜を作るために、水平面に対して傾斜した平面上でカートリッジが回転又は撹拌される。
【００２９】
一実施形態では、重力の影響を受けて流体が流れるのを防ぐ場合がある表面張力の任意の影響を克服するために、カートリッジは攪拌されるようにさらに構成可能である。
【００３０】
一実施形態では、カートリッジは、水平面からθｉの角度で傾斜面上で回転し、この角度は１０°〜６０°の間である。
【００３１】
一実施形態では、緩衝液貯蔵器がカートリッジの回転の中心に近接して配置され、試料をカートリッジに直接加えるようにモジュールが構成される。
【００３２】
一実施形態では、流体試料メニスカスへの支配的な力は、両方の表面に均等にメニスカスを実現するように、第１の検出区域の上面及び下面に平行になるような遠心力である。
【００３３】
一実施形態では、第２の区域は、乾燥した試薬を含む。
【００３４】
一実施形態では、第３の区域は、乾燥した試薬を含む。
【００３５】
一実施形態では、第２又は第３の区域が流体試料及び緩衝液で再水和されるまで、乾燥した試薬は変化しないままである。
【００３６】
一実施形態では、前記第２及び／又は第３の区域での単数又は複数のスポットにおいて、乾燥した試薬のスポットをつけることができる。
【００３７】
一実施形態では、第２又は第３の区域は、乾燥した複数の試薬を含む。
【００３８】
一実施形態では、キュベットは、分析の各段階で使用される緩衝液、流体試料、及び再水和された試薬の光学測定を可能にするように構成された、単一容量のキュベットを含む。
【００３９】
一実施形態では、このシステムは、免疫比濁法又は酵素ベースの臨床化学分析を実行するように構成される。
【００４０】
一実施形態では、流体試料を受け取り、この試料の既定量を計量するように構成された試料計量チャンバ、及び緩衝液の既定量を計量するように構成された緩衝液計量チャンバが設けられる。
【００４１】
一実施形態では、試料計量チャンバに連結され、緩衝液計量チャンバに連結された試料混合チャンバが設けられ、この試料混合チャンバは、試料計量チャンバから移送された試料の量と、緩衝液計量チャンバから移送された緩衝液の量とを混合して、試料を希釈するように構成される。
【００４２】
一実施形態では、試料混合チャンバと反応チャンバの間に連結された希釈済み試料計量チャンバが設けられ、この希釈済み試料計量チャンバは、試料の希釈の既定量を計量して、反応チャンバに移送するように構成される。
【００４３】
一実施形態では、希釈済み試料計量チャンバに連結された反応チャンバが設けられる。
【００４４】
一実施形態では、２つ以上の反応チャンバが設けられ、各反応チャンバが少なくとも第１の区域を含み、少なくとも１つの反応チャンバが少なくとも３つの区域を有する。
【００４５】
一実施形態では、流体試料と緩衝液を混合するための試料希釈チャンバ、及び試料希釈チャンバと２つ以上の反応チャンバとの間に連結された分配チャネルが設けられ、この分配チャネルは、試料希釈チャンバから、下流側へ２つ以上の反応チャンバのそれぞれに、希釈された試料を順序通りに供給するように構成される。
【００４６】
一実施形態では、各反応チャンバに関連付けられた供給チャネルが設けられ、希釈された試料が、この供給チャネルによって、分配チャネルから各反応チャンバに供給される。
【００４７】
一実施形態では、２つ以上の反応チャンバに供給した後に残る希釈された試料を受け取るための、分配チャネルに連結されたオーバフロー・チャンバが設けられる。
【００４８】
一実施形態では、分配チャネルに連結された緩衝チャンバが設けられ、この緩衝チャンバは、反応チャンバのうち２つ以上の間での相互汚染を防止するように構成される。
【００４９】
一実施形態では、反応チャンバのうちの１つとその供給チャネルとの間に連結された中間試料計量チャンバが設けられ、この中間試料計量チャンバは、２つ以上の反応チャンバ間の相互汚染を防止するように構成される。
【００５０】
一実施形態では、各供給チャネルとその反応チャンバとの間に連結された中間チャンバが設けられる。
【００５１】
一実施形態では、各中間チャンバは、計量チャンバと、供給チャネルに印加される遠心圧力がオーバフロー・チャンバ内の圧力に等しくなるまで、分配チャネルからの希釈された試料でこの計量チャンバが満たされるように構成されたオーバフロー・チャンバとを備える。
【００５２】
一実施形態では、分配チャネルに連結された緩衝チャンバが設けられ、この緩衝チャンバは、毛管チャネルによってつながれた第１の区間と第２の区間を備える。
【００５３】
さらなる実施形態では、
モータに連結され、カートリッジ上の複数の位置に流体試料を移動させるように構成されたカートリッジを備える微少流体システムが提供され、このカートリッジは、水平面に対して傾斜した平面上で回転するように構成され、
このカートリッジは、少なくとも３つの区域を有する山形すなわちほぼＶ字形の反応チャンバを備え、第１の区域が、検出区域を画定するためにＶ字形反応チャンバの頂点の近くに配置され、第２の区域が、Ｖ字形反応チャンバの第１の端部の近くに配置され、第３の区域が、Ｖ字形反応チャンバの第２の端部の近くに配置され、第２の区域及び第３の区域のそれぞれは試薬区域を含み、
モータ及び制御モジュールが、少なくとも３つの区域の間で前記流体試料を移動させるために、遠心力と重力を組み合わせるように構成される。
【００５４】
別の実施形態では、
モータに連結され、カートリッジ上の複数の位置に流体試料を移動させるように構成されたカートリッジを備える微少流体システムが提供され、
このカートリッジは、少なくとも３つの区域を有する山形すなわちほぼＶ字形の反応チャンバを備え、第１の区域が、検出区域を画定するためにＶ字形反応チャンバの頂点の近くに配置され、第２の区域が、Ｖ字形反応チャンバの第１の端部の近くに配置され、第３の区域が、Ｖ字形反応チャンバの第２の端部の近くに配置され、
モータ及び制御モジュールが、少なくとも３つの区域の間で前記流体試料を移動させるために、遠心力と重力を組み合わせるように構成される。
【００５５】
さらに別の実施形態では、
モータに連結され、カートリッジ上の複数の位置に流体試料を移動させるように構成されたカートリッジを備える微少流体システムが提供され、このカートリッジは、水平面に対して傾斜した平面上で回転するように構成され、
このカートリッジは、少なくとも３つの区域、すなわち、検出区域を画定するために反応チャンバの一端の近くに配置された第１の区域、第１の区域の近位端に配置された第２の区域、及び反応チャンバの他端の近くに配置された第３の区域を有する反応チャンバを備え、第２の区域及び第３の区域のそれぞれは試薬区域を含み、
モータ及び制御モジュールが、少なくとも３つの区域の間で前記流体試料を移動させるために、遠心力と重力を組み合わせるように構成される。
【００５６】
本発明は、添付の図面を参照して、ほんの一例として与えられたその実施形態の以下の説明から、より明らかに理解されよう。
【図面の簡単な説明】
【００５７】
【図１】２ステップの乾燥試薬分析を、自立型／一度使うだけの／使い捨てのポイントオブケア（ＰＯＣ）カートリッジに移さなければならないいくつかの連続ステップを示す流れ図である。
【図２】本発明の第１の実施形態による分析順序を実行するためのカートリッジ設計の一実施形態を示す。
【図３】試薬の再水和を示すカートリッジ表面の標準的な図を示す。
【図４】一実施形態による、少なくとも３つの区域を有する山形すなわちほぼＶ字形の反応チャンバを示す。
【図５】動作中のモータ・プラットフォームに取り付けられたカートリッジの側面図を示す。
【図６】遠心力によってキュベットを満たす利点を示す。
【図７】遠心力によってキュベットを満たす利点を示す。
【図８】遠心力によってキュベットを満たす利点を示す。
【図９】第３の試薬区域で第２の乾燥試薬スポットを使用する、本発明の一実施形態による分析順序を実行するためのカートリッジ設計の一実施形態を示す。
【図１０】図１の流れ図に示す分析順序を実行するためのカートリッジ設計の一実施形態を示す。
【図１１ａ】追加の再水和チャンバを組み込む、図１０の代替カートリッジ設計を示す。
【図１１ｂ】追加の再水和チャンバが使用される、図１１ａに基づくカートリッジ設計の一実施形態を示す。
【図１２】別のカートリッジ設計であり、図１１ａに示す実施形態の一変形形態を示す。
【図１３】別のカートリッジ設計であり、図１１ａ及び図１２に示す実施形態の一変形形態を示す。
【図１４ａ】単一カートリッジの設計での複数の反応チャンバを示す別の実施形態を示す。
【図１４ｂ】図１４ａに基づくカートリッジ設計の一実施形態を示す。
【図１４ｃ】図１４ａに基づくカートリッジ設計の一実施形態を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５８】
図１には、２ステップの乾燥試薬分析を、自立型／一度使うだけの／使い捨てのポイントオブケア（ＰＯＣ）カートリッジに移さなければならないいくつかの連続ステップが示してある。この順序は、検査測定を完了するために試薬Ｒ１及びＲ２の２段階の添加及び再水和を必要とする、免疫比濁法及び酵素ベースの臨床化学分析に適用することができる。もっぱら試薬Ｒ１又はＲ２が使用される１ステップ分析では、同様の検査順序を使用することができる。
【００５９】
ＰＯＣカートリッジは、緩衝液貯蔵器を備えることができ、試料（たとえば、全血、血漿、血清）をカートリッジに加えるための手段を有することになる。カートリッジは、独立して再水和することができるカートリッジ上の特定の場所に貯蔵された、乾燥した固定化試薬（Ｒ１及びＲ２）を含んでもよい。順序のどこに試料を加えるかに応じて（図１の選択肢（ａ）又は（ｂ））、希釈された試料（緩衝液＋試料）か、緩衝液のみかのいずれかによってＲ１を再水和することができる。次いで、この同じ流体量によってＲ２が再水和される。
【００６０】
図２には、本発明の第１の実施形態による、図１の流れ図に示す分析順序を実行するためのカートリッジ設計の一実施形態が示してある。このカートリッジ設計により、遠心力と重力の微少流体技術の組合せを利用して、カートリッジ上の複数の場所に流体を移動させる。カートリッジ５は、回転の中心２５に、又は回転の中心２５に近接して位置することになる緩衝液貯蔵器１０を備える。カートリッジに試料を直接加えるための手段（図２には図示せず）も設けられている。カートリッジは、そのレイアウトを以下でより詳細に説明するが、以下の問題を解決する。
・単一容量反応では、すなわち、試薬の希釈、分注、又は計量を含む各ステップの一部又は全部が不要になり、これによって操作が簡単になり、検査精度が改善する可能性がある。
・各分析段階で精度を改善するための、単一のキュベットでの連続した光学測定。
・連続再水和用の別個の区域でのＲ１試薬及びＲ２試薬の位置。
・試料と緩衝液の一様な混合、並びに緩衝液及び／又は試料に光学測定を実行できること。
【００６１】
図２を参照すると、カートリッジ５は、少なくとも３つの区域を有する山形すなわちほぼＶ字形の反応チャンバ１５を備える。検出区域を画定するために、Ｖ字形反応チャンバの頂点付近に第１の区域が配置される。Ｖ字形反応チャンバの第１の端部の近くに第２の区域が配置され、Ｖ字形反応チャンバの第２の端部の近くに第３の区域が配置される。モータ及び制御モジュールは、前記流体試料を３つの区域間で移動させるために、遠心力と重力の組合せを実現するように構成される。
【００６２】
動作にあたっては、遠心力を使用して、反応チャンバ１５に供給される前に、緩衝液の貯蔵器１０及び／又はそれに続く緩衝液チャンバからの貯蔵済み緩衝液の供給を制御する。反応チャンバ１５は、使用されることになる緩衝液の反応量よりもはるかに大きくなるようにサイズ調整される。反応チャンバ１５は、３つの別個の区域、すなわち、Ａ）キュベット検出区域、Ｂ）Ｒ１試薬区域、及びＣ）Ｒ２試薬区域を組み込む。キュベット４５は、反応チャンバ１５の放射状の範囲（典型的には、カートリッジの外径２０に近い）に配置される。このチャンバは、放射状内向きに２つの側部に延在して、Ｒ１及びＲ２の反応のために独立して流体で満たすことのできる２つの区域を形成する。各区域は、緩衝液によって占有されるとき、各区域内の容積全体を保持することができるようにサイズ調整されること、すなわち、区域Ａ、Ｂ、又はＣの容積が、緩衝液量と等しいか、又はそれよりも大きく、反応チャンバ１５全体が緩衝液量よりも少なくとも３倍大きいことが有益である。
【００６３】
通常、流体移動の主要な手段として、遠心式微少流体技術を使用して流体を放射状内向きに移動させるのが非常に難しい。これにより、連続分析を実行できるようにするのに利用可能な選択肢が限定／制限される場合がある。この問題を克服するには、遠心力と重力の組合せを使用して、流体をそれぞれ、放射状の外向き及び内向きに移動させる。相対遠心力（ＲＣＦ）が重力よりもはるかに大きくなる速度でカートリッジ５が回転すると、遠心力が支配的になり、流体をカートリッジ上で放射状外向きに移動させることができる。カートリッジ５が静止しているか、又は緩やかに回転していると、やはり流体に重力の影響を及ぼすことになり、重力を使用して流体を移動させることができる。これを利用するには、流体が流れるための下向きの傾斜を形成するために、カートリッジ５を静的に配置することができるように、傾斜面上で（水平方向から）カートリッジ５が回転される。この方法を利用して、カートリッジが特定の向きに位置合せされたときに、このカートリッジ上で流体を放射状内向きに移動させることができる。流体が流れるのを防止することがある表面張力の何らかの影響を克服するために、穏やかな撹拌／揺動によって重力下での流体の流れを促進することもできる。
【００６４】
図２では、緩衝液チャンバ内の中央に貯蔵された緩衝液が、遠心力によって（毛管バルブ３０を介して）反応チャンバ１５に供給される。この緩衝液量がキュベット４５（区域Ａ）を満たし、緩衝液のブランク測定を実行することができる。次に、試料チャンバ３５内に加えられた試料も、遠心力によって（毛管バルブ４０を介して）反応チャンバ１５（区域Ａ）に供給され、ここで緩衝液と混合される。試料チャンバは、たとえば血漿分離又は全血溶解などだがそれに限定されない追加の試料処理ステップを含んでもよいことが理解される。必要に応じて、検査順序におけるこの時点で、試料測定を実行することができる（内部制御として使用してもよい）。緩衝液供給ステップと試料供給ステップの両方においては、遠心力により、区域Ｂ又は区域Ｃに流体が確実に到達しなくなり、Ｒ１及びＲ２が再水和されるまで、乾燥した試薬が変化しないままである。
【００６５】
次いで、カートリッジ５は、重力下で区域Ａ内の流体が区域Ｂに流れるように位置合せされる（必要に応じて、穏やかな撹拌によって促進される）。試料及び緩衝液の懸濁液は、試薬Ｒ１を濡らし、試薬を再水和し始める。再水和が完全に達成されるまで、規定期間において再水和が継続する。混合／攪拌によって、この再水和を促進することができる。完全に再水和されると、遠心力を使用して、試料、緩衝液、及びＲ１の懸濁液をキュベット４５（区域Ａ）に戻し、ここでこの懸濁液に較正測定を実行することができる。図３には、試薬の再水和を示すカートリッジ表面の標準的な図が示してある。
【００６６】
試薬Ｒ１の再水和と同様に、次いで、カートリッジ５は、流体がキュベット４５から区域Ｃに流れるように配向され、ここで、Ｒ２試薬が、緩衝液、試料、及びＲ１の懸濁液によって濡れる。やはり、乾燥した試薬が両方とも完全に再水和されるまで、規定期間において再水和が継続する。カートリッジ５上で混合攪拌することによって、やはり再水和を促進することができる。最後に、流体量全体をキュベット４５（区域Ａ）に戻し、ここで最終反応を監視することができる。単数又は複数のスポットにおいて、試薬Ｒ１及び／又はＲ２のスポットをつけることができることが特筆に値する。
【００６７】
図４には、半径ｒ１及びｒ２、角度θ及びθ２、並びに長さＬが示してある。話を簡単にするために、試薬のスポット位置を図示していない。ｒ１は、区域Ｂ及び区域Ｃの反応チャンバの遠位壁が配置される半径であり、ｒ２は、区域Ａでキュベットが中心となる半径である。長さＬは、反応チャンバの遠位壁の長さである。θは、（回転の中心２５及びキュベットの中心を通って形成される）中心線から壁が画定される角度であり、θ２は、（回転の中心を通る）仮想の中心線と、反応チャンバの範囲でのこのチャンバの遠位壁との間に形成される角度である。この実施形態では、反応チャンバは、中心線の周りで対称に設計されており、このことは有利になる場合があるが、要求条件ではなく、非対称に設計することができる。チャンバ壁の長さ（Ｌ）は、角度θ２が＜９０°となるような点を越えて延在しないことが好ましい。角度θ２が≧９０°のままのとき、これによって、確実に半径ｒ１＜ｒ２となる。遠心力の下では、流体は外半径に向かう傾向となるので、これにより、流体はｒ２でキュベット領域に戻ることができる。
【００６８】
図５には、動作中に取り付けられたカートリッジ５の側面図が示してある。このカートリッジは、傾斜面上で（水平から）θｉの角度で回転する。この傾斜角は、１０°〜６０°、好ましくは３０°である（重力が十分になり、使いやすさにおいて有益である）ことが理想的である。やはり、遠心力と重力の向きが強調表示されている。遠心力は、回転軸に対して常に垂直になり、すなわち回転すると半径方向（外向き）に作用する。
【００６９】
たとえば、図３には、ゼロ位置から１２０°の角度で位置合せするように回転するカートリッジが示してある。一実施形態では、動作を可能にするために、このゼロ位置は、回転の中心に対してカートリッジ平面の最も低い点とすることができる。この位置では、カートリッジが傾斜面上に固定されているので、区域Ａからの流体で区域Ｂを満たすことができる。区域Ｂで試薬の再水和が実行された後、流体を区域Ａ（キュベット）に戻して、遠心駆動法又は重力駆動法によって検出することができる。しかし、遠心力を使用して、キュベットを一貫して満たすことが非常に好ましい。
【００７０】
図６、図７、及び図８には、重力とは対照的に遠心力によってキュベットを満たす利点が示してある。光検出経路は、カートリッジ表面に垂直であり、したがってカートリッジ５が傾斜する角度に対して垂直に位置合せされる。部分的に、又は不十分に満たされたキュベットから生じる光学的な不規則性が確実になくなるように、キュベットは完全に、且つ一貫して流体柱によって満たされることが重要である。キュベットが重力によって満たされる場合、液体メニスカスへの支配的な力は重力となり、したがってメニスカスの形状が不均一になり、キュベットの上面及び下面を様々なレベルにまで濡らす可能性がある（図６）。しかし、遠心力によって満たされる場合（図７）、液体メニスカスへの支配的な力は遠心力である。遠心力は、キュベットの上面及び下面に平行となるので、メニスカスは両面に均等に形成される。これにより確実に、光学測定中に検出区域が常に流体で十分に満たされることになる。図８には、回転軸に対して垂直にカートリッジを見たときの、形成されたメニスカスが示してある。光路（図示したものよりも大きいか小さい場合がある）を、遠心力によって完全に満たすことができる。さらに、遠心力によって満たすことで、やはり確実に、閉じ込められた気泡が光学窓内に形成されるのを防止することによって、キュベットが空気から完全に解放される。
【００７１】
図９には、第３の試薬区域で第２の乾燥試薬スポットを使用する、本発明の一実施形態による分析順序を実行するためのカートリッジ設計の一実施形態が示してある。図９では、緩衝液チャンバ１０内の中央に貯蔵された緩衝液が、遠心力によって（毛管バルブ３０を介して）反応チャンバ１５に供給される。この緩衝液量がキュベット４５（区域Ａ）を満たし、緩衝液のブランク測定を実行することができる。次に、試料チャンバ３５内に加えられた試料も、遠心力によって（毛管バルブ４０を介して）反応チャンバ１５（区域Ａ）に供給され、ここで緩衝液と混合される。必要に応じて、検査順序におけるこの時点で、試料測定を実行することができる（内部制御として使用してもよい）。緩衝液供給ステップと試料供給ステップの両方においては、遠心力により、区域Ｂ又は区域Ｃに流体が確実に到達しなくなり、Ｒ１及びＲ２が再水和されるまで、乾燥した試薬が変化しないままである。
【００７２】
次いで、カートリッジは、重力下で区域Ａ内の流体が区域Ｂに流れるように位置合せされる（必要に応じて、穏やかな撹拌によって促進される）。試料及び緩衝液の懸濁液は、試薬Ｒ１を濡らし、試薬を再水和し始める。再水和が完全に達成されるまで、規定期間において再水和が継続する。混合／攪拌によって、この再水和を促進することができる。完全に再水和されると、遠心力を使用して、試料、緩衝液、及びＲ１の懸濁液をキュベット４５（区域Ａ）に戻し、ここでこの懸濁液に較正測定を実行することができる。
【００７３】
試薬Ｒ１の再水和と同様に、次いで、カートリッジは、流体がキュベット４５から区域Ｃに流れるように配向され、ここで、Ｒ２試薬（試薬Ｒ２−ＡとＲ２−Ｂに分割される）が、緩衝液、試料、及びＲ１の懸濁液によって濡れる。やはり、乾燥した試薬が両方とも完全に再水和されるまで、規定期間において再水和が継続する。カートリッジ上で混合攪拌することによって、やはり再水和を促進することができる。最後に、流体量全体をキュベット４５（区域Ａ）に戻し、ここで最終反応を監視することができる。単数又は複数のスポットにおいて、試薬Ｒ１及び／又はＲ２のスポットをつけることができる。
【００７４】
本発明においては、用語「区域」は、同じチャンバ内の隣接する区域を濡らしたり、満たしたりすることなく、流体で完全に満たすことができるチャンバ内の領域と解釈することができる。実際には、このことは、使用される流体の量が、通常はチャンバの総容積よりもはるかに小さく、もっぱら所与の任意の時点で単一の区域を占有するのに十分であることを意味する。次いで、遠心力又は重力によって各区域間で流体が操作される。反応チャンバの形状及びデザインに組み込まれた物理的な障壁によって、隣接する区域から、各区域をさらに区別又は保護することができる。
【００７５】
図１０には、本発明の一実施形態による、図１の流れ図に示す分析順序を実行するためのカートリッジ設計の一実施形態が示してある。このカートリッジ設計により、遠心力と重力の微少流体技術の組合せを利用して、カートリッジ上の複数の場所に流体を移動させる。カートリッジ５は、回転の中心２５に、又は回転の中心２５に近接して位置することになる緩衝液貯蔵器１０を備える。カートリッジに試料を直接加えるための手段も設けられている。
【００７６】
カートリッジは、少なくとも３つの区域を有する反応チャンバ１５を備える。図示された反応チャンバ１５は、半径方向に実質的に細長いが、その形状は、楕円形、円形、ジグザグ、又は３つの区域に対応する所望の他の形状など、最適な性能のために修正できることが理解される。又、反応チャンバ１５は、動作に際して個々の区域をさらに良好に区別するように、追加の機械的特徴（図示せず）を有してもよい。たとえば、このチャンバの中央部は、反応チャンバのいずれかの端部について、幅及び／又は深さに制限を有してもよい。
【００７７】
第１の区域Ａは、反応チャンバ１５の放射状の範囲（すなわち、回転の中心２５から最も遠い）に配置され、流体の光学照合のためにキュベット４５を含む検出区域を画定する。第２の区域Ｂは、区域Ａの放射状内向きに配置され、第１の試薬スポット位置Ｒ１を含む。第３の区域Ｃは、反応チャンバ１５の最も放射状内向きの端部に配置することができ、第２の試薬スポット位置Ｒ２を含む。必要に応じて、第２の区域と同じ放射状の位置に第３の区域を配置することもできることが理解されよう。モータ及び制御モジュールは、前記流体試料を３つの区域間で移動させるために、遠心力と重力の組合せを実現するように構成される。
【００７８】
動作にあたっては、遠心力を使用して、反応チャンバ１５に供給される前に、緩衝液の貯蔵器１０及び／又はそれに続く緩衝液チャンバからの貯蔵済み緩衝液の供給を制御する。反応チャンバ１５は、使用されることになる緩衝液の反応量よりもはるかに大きくなるようにサイズ調整される。反応チャンバ１５は、３つの別個の区域、すなわち、Ａ）キュベット検出区域、Ｂ）Ｒ１試薬区域、及びＣ）Ｒ２試薬区域を組み込む。キュベット４５は、反応チャンバ１５の放射状の範囲（典型的には、カートリッジの外径２０に近い）に配置される。このチャンバは、Ｒ１とＲ２の反応のために独立して流体で満たすことのできる２つの区域を形成できるように寸法を合わせてある。各区域は、緩衝液によって占有されるとき、各区域内の容積全体を保持することができるようにサイズ調整されること、すなわち、区域Ａ、Ｂ、又はＣの容積が、緩衝液量と等しいか、又はそれよりも大きく、又反応チャンバ１５全体が好ましくは緩衝液量よりも少なくとも３倍大きいことが有益である。
【００７９】
通常、流体移動の主要な手段として、遠心式微少流体技術を使用して流体を放射状内向きに移動させるのが非常に難しい。これにより、連続分析を実行できるようにするのに利用可能な選択肢が限定／制限される場合がある。この問題を克服するには、遠心力と重力の組合せを使用して、流体をそれぞれ、放射状の外向き及び内向きに移動させる。相対遠心力（ＲＣＦ）が重力よりもはるかに大きくなる速度でカートリッジ５が回転すると、遠心力が支配的になり、流体をカートリッジ上で放射状外向きに移動させることができる。カートリッジ５が静止しているか、又は緩やかに回転していると、やはり流体に重力の影響を及ぼすことになり、重力を使用して流体を移動させることができる。これを利用するには、流体が流れるための下向きの傾斜を形成するために、カートリッジ５を静的に配置することができるように、傾斜面上で（水平方向から）カートリッジ５が回転される。この方法を利用して、カートリッジが特定の向きに位置合せされたときに、このカートリッジ上で流体を放射状内向きに移動させることができる。流体が流れるのを防止することがある表面張力の何らかの影響を克服するために、穏やかな撹拌／揺動によって重力下での流体の流れを促進することもできる。
【００８０】
図１０では、緩衝液チャンバ１０内の中央に貯蔵された緩衝液が、遠心力によって反応チャンバ１５に供給される。この緩衝液量がキュベット４５（区域Ａ）を満たし、緩衝液のブランク測定を実行することができる。次に、試料チャンバ３５内に加えられた試料も、遠心力によって反応チャンバ１５（区域Ａ）に供給され、ここで緩衝液と混合される。試料チャンバは、たとえば血漿分離又は全血溶解などだがそれに限定されない追加の試料処理ステップを含んでもよいことが理解される。必要に応じて、検査順序におけるこの時点で、試料測定を実行することができる（内部制御として使用してもよい）。緩衝液供給ステップと試料供給ステップの両方においては、遠心力により、区域Ｂ又は区域Ｃに流体が確実に到達しなくなり、Ｒ１及びＲ２が再水和されるまで、乾燥した試薬が変化しないままである。
【００８１】
次いで、カートリッジ５は、重力下で区域Ａ内の流体が区域Ｂに流れるように位置合せされる（必要に応じて、穏やかな撹拌によって促進される）。試料及び緩衝液の懸濁液は、試薬Ｒ１を濡らし、試薬を再水和し始める。再水和が完全に達成されるまで、規定期間において再水和が継続する。混合／攪拌によって、この再水和を促進することができる。完全に再水和されると、遠心力を使用して、試料、緩衝液、及びＲ１の懸濁液をキュベット４５（区域Ａ）に戻し、ここでこの懸濁液に較正測定を実行することができる。
【００８２】
試薬Ｒ１の再水和と同様に、次いで、カートリッジ５は、流体がキュベット４５から区域Ｃに流れるように配向され、ここで、Ｒ２試薬が、緩衝液、試料、及びＲ１の懸濁液によって濡れる。やはり、乾燥した試薬が両方とも完全に再水和されるまで、規定期間において再水和が継続する。カートリッジ５上で混合攪拌することによって、やはり再水和を促進することができる。最後に、流体量全体をキュベット４５（区域Ａ）に戻し、ここで最終反応を監視することができる。単数又は複数のスポットにおいて、試薬Ｒ１及び／又はＲ２のスポットをつけることができることが特筆に値する。
【００８３】
図１１ａには、追加の再水和チャンバ４６を使用してＲ１試薬（Ｒ１−Ｘ）を再水和する、代替のカートリッジ設計が示してある。動作にあたっては、緩衝液チャンバ１０及び再水和チャンバ４６は、このチャンバ１０及び４６よりも小さい放射状の位置、すなわち回転の中心２５により近い位置に配置することのできる、貯蔵された緩衝液の貯蔵器（図示せず）から満たすことができる。これらのチャンバが緩衝液で満たされると、分析順序の残りが２つの方式で進むことができる。
【００８４】
まず、この緩衝液量は、緩衝液チャンバ１０から反応チャンバ１５に供給することができ、遠心力の下で区域Ａを満たす。この時点で、キュベット４５内の緩衝液量の光学的測定値又はブランクを取得することができる。次いで、試料は、遠心力の下で試料チャンバ３５から反応チャンバ１５に供給され、ここで、区域Ａに既に含まれている緩衝液量と混合される。この時点で、試料測定をおこなうことができる。
【００８５】
次いで、再水和された試薬Ｒ１−Ｘを、再水和チャンバ４６から反応チャンバ１５に供給して、区域Ａに既に存在する希釈された試料及び緩衝液量と混合することができる。次いで、カートリッジ５は、第２のＲ１試薬が存在する場合には、重力下で区域Ａ内の流体が区域Ｂに流れることができるように位置合せされる。混合／攪拌によって、この再水和を促進することができる。完全に再水和されると、遠心力を使用して、試料、緩衝液、及びＲ１の懸濁液をキュベット４５（区域Ａ）に戻し、ここでこの懸濁液に較正測定を実行することができる。
【００８６】
次いで、カートリッジ５は、流体がキュベット４５から区域Ｃに流れるように配向され、ここで、Ｒ２試薬が、緩衝液、試料、及びＲ１の懸濁液によって濡れる。やはり、乾燥した試薬が両方とも完全に再水和されるまで、規定期間において再水和が継続する。カートリッジ５上で混合攪拌することによって、やはり再水和を促進することができる。最後に、流体量全体をキュベット４５（区域Ａ）に戻し、ここで最終反応を監視することができる。
【００８７】
次に／別法として、緩衝液又は試料の前に、再水和チャンバ４６から反応チャンバ１５まで、再水和されたＲ１−Ｘ量を供給できるように、上記順序を変更することができる。これにより、緩衝液を用いたさらなる希釈又は試料の追加に先立って、キュベット４５内で試薬ブランクを光学的に測定することができる。この方法の利点は以下の通りである。
・ブランク測定、試料／緩衝液の供給など他の分析プロセスと並行して試薬Ｒ１−Ｘが再水和されて、合計の分析時間を短縮することができる。
・或いは、試料の前に再水和されたＲ１−Ｘが供給されて、試薬のブランク測定を可能にしてもよい。これは、貯蔵条件に敏感な試薬を制御するのに有利となる場合がある。
【００８８】
図１１ｂには、追加の再水和チャンバを使用してＲ１試薬（Ｒ１−Ｘ）を再水和する、図１１ａの実施形態のカートリッジ設計の一実施形態が示してある。この実施形態は、糖化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）の分析を実行するために使用されるが、このような他の免疫比濁法の分析又は酵素ベースの臨床化学分析にも同様に適している場合がある。試料チャンバ３５に試料が注入され、緩衝液チャンバ１０に緩衝液が注入される。試料アプリケータを使用して試料を供給することができ、緩衝液チャンバは、貯蔵された緩衝液の貯蔵器とすることができるということが理解されよう。
【００８９】
遠心力を使用して、チャンバ３５内の試料が試料計量チャンバ５４に供給され、ここで検査に必要な既定の試料量が計量される。並行して、また遠心力を使用して、チャンバ１０から第１の緩衝液計量チャンバ５２に緩衝液のアリコートを供給する。続いて、緩衝液の第２のアリコートが、第２の緩衝液計量チャンバ５３に供給され、チャンバ１０からの緩衝液の過剰量が、オーバフロー計量チャンバ５８に供給される。チャンバ５８は、緩衝液がチャンバ５２、５３、及び５８に供給されたかどうか判定するための手続制御装置として使用することができる。
【００９０】
次いで、第１の緩衝液計量チャンバ５２及び第２の緩衝液計量チャンバ５３内の緩衝液サイホンが、２５においてカートリッジに取り付けられたモータによってもたらされる加速度プロファイルを使用して刺激される。こうした加速された刺激済みサイホンは、機能するのに親水性コーティングを必要としない。緩衝液サイホンが刺激されると、遠心力を使用して、第１の緩衝液計量チャンバ５２内の緩衝液を下流側の試料混合チャンバ５５に移動させ、並行して第２の緩衝液計量チャンバ５３内の緩衝液を再水和チャンバ４６に移動させる。第１の緩衝液計量チャンバ５２からの緩衝液アリコートが供給された後、次いで、吸引効果を使用して、試料計量チャンバ５４からの試料アリコートを試料混合チャンバ５５に移送する。
【００９１】
次いで、試料と緩衝液を試料混合チャンバ５５内で混合し、この試料を溶解し（ＨｂＡ１ｃにおいて）、希釈液を均質化する。他の分析では、全血の代わりに血漿を使用する必要があり（ＨｂＡ１ｃ用に必要となるように）、この場合には、溶解ステップは必要でなくなるはずである。試料混合と並行して、第２の緩衝液計量チャンバ５３からの緩衝液アリコートによって、再水和チャンバ４６内のＲ１−Ｘ試薬が再水和される。
【００９２】
カートリッジ内での次の動作は、モータからの加速度プロファイルを使用して、試料混合チャンバ５５（その左側で）から出るサイホンを刺激することである。これにより、希釈液は、この希釈液のアリコートが計量される希釈済み試料計量チャンバ５６の下流側に移送される。この希釈液の過剰分はまた、反応チャンバ５７に移送され、ここでこの反応チャンバは、十分な試料を確実に供給するための、且つ／又は試薬Ｒ３（必要に応じて）が再水和された後に反応を監視するための手続制御装置として使用することができる。
【００９３】
モータからの最終的な加速度プロファイルを使用して、希釈済み試料計量チャンバ５６から出るサイホン、及び並行して再水和チャンバ４６から出るサイホンを刺激する。遠心力を使用して、希釈済み試料計量チャンバ５６からの希釈済み試料の計量された量、及び再水和チャンバ４６からの再水和された試薬希釈液が、同時に反応チャンバ１５に供給される。次いで、この最終希釈液が、区域Ａ内でのモータからの混合プロファイルを使用して均質化され、試料及びＲ１−Ｘの光学測定値が光学キュベット４５から得られる。また、区域Ｂ内の第２の試薬Ｒ１を再水和し、この希釈液と混合することができる。同様に、試薬Ｒ１−ＸをＲ１に置き、代わりに反応チャンバ１５内で再水和することもできる。ＨｂＡ１ｃ検査においては、これは、溶解した試料がラテックスビーズ（Ｒ１−Ｘ及び／又はＲ１）と混合されることに対応する。
【００９４】
次いで、カートリッジ５は、流体がキュベット４５（且つ、区域Ａ及びＢに位置している）から区域Ｃに流れるように配向され、ここで、Ｒ２試薬が、緩衝液、試料、及びＲ１−Ｘ（及び／又はＲ１）の懸濁液によって濡れる。やはり、試薬が完全に再水和されるまで、規定期間において再水和が継続する。カートリッジ５上で混合攪拌することによって、やはり再水和を促進することができる。最後に、遠心力を使用して流体量全体をキュベット４５（区域Ａ）に戻し、ここで最終反応を監視することができる。ＨｂＡ１ｃ検査においては、これは、溶解した試料及びラテックスビーズの希釈液によって、抗体の錯体試薬が再水和されることに対応する。次いで、この凝集段階が、キュベット４５において光学的に監視される。
【００９５】
図１２には、別のカートリッジ設計であり、図１１ａの前述の実施形態の一変形形態が示してある。図１１ａで説明した再水和チャンバと同様に、図示した再水和チャンバ４７は乾燥試薬Ｒ２−Ｙを含む。動作にあたっては、緩衝液チャンバ１０及び再水和チャンバ４６は、このチャンバ１０及び４６よりも小さい放射状の位置、すなわち回転の中心２５により近い位置に配置することのできる、貯蔵された緩衝液の貯蔵器（図示せず）から満たすことができる。
【００９６】
緩衝液量は、緩衝液チャンバ１０から反応チャンバ１５に供給することができ、遠心力の下で区域Ａを満たす。この時点で、キュベット４５内の緩衝液量の光学的測定値又はブランクを取得することができる。次いで、試料は、遠心力の下で試料チャンバ３５から反応チャンバ１５に供給され、ここで、区域Ａに既に含まれている緩衝液量と混合される。この時点で、試料測定をおこなうことができる。
【００９７】
次いで、カートリッジ５は、試薬Ｒ１が存在し、再水和できる場合には、重力下で区域Ａ内の流体が区域Ｂに流れることができるように位置合せされる。混合／攪拌によって、この再水和を促進することができる。完全に再水和されると、遠心力を使用して、試料、緩衝液、及びＲ１の懸濁液をキュベット４５（区域Ａ）に戻し、ここでこの懸濁液に較正測定を実行することができる。
【００９８】
次いで、再水和されたＲ２−Ｙの量は、再水和チャンバ４７から反応チャンバ１５に供給することができ、ここで、反応チャンバ内に既に存在している緩衝液／試料／Ｒ１の懸濁液と混合することができる。遠心力又は重力の手段によって、こうした量の混合をさらに増進させた後に、混合されたこの懸濁液を区域Ａに戻すことができ、ここでキュベット４５において終点反応を監視することができる。この実施形態の利点は、ブランク測定、試料／緩衝液供給、及びＲ１の再水和など他の分析プロセスと並行して、試薬Ｒ２−Ｙを再水和し、したがって合計の分析時間を短縮できることである。
【００９９】
図１３には、別のカートリッジ設計であり、図１１ａ及び図１２の前述の実施形態の一変形形態が示してある。図１１ａで説明した再水和チャンバと同様に、図示した再水和チャンバ４６は乾燥試薬Ｒ１−Ｘを含み、図示した再水和チャンバ４７は乾燥試薬Ｒ２−Ｙを含む。動作にあたっては、緩衝液チャンバ１０並びに再水和チャンバ４６及び４７は、このチャンバ１０及び４６よりも小さい放射状の位置、すなわち回転の中心２５により近い位置に配置することのできる、貯蔵された緩衝液の貯蔵器（図示せず）から満たすことができる。
【０１００】
緩衝液量は、緩衝液チャンバ１０から反応チャンバ１５に供給することができ、遠心力の下で区域Ａを満たす。この時点で、キュベット４５内の緩衝液量の光学的測定値又はブランクを取得することができる。次いで、試料は、遠心力の下で試料チャンバ３５から反応チャンバ１５に供給され、ここで、区域Ａに既に含まれている緩衝液量と混合される。この時点で、試料測定をおこなうことができる。上記ステップと並行して、試薬Ｒ１−Ｘ及びＲ１−Ｙは、そのそれぞれのチャンバ４６及び４７内で完全に再水和されている。
【０１０１】
次いで、再水和された試薬Ｒ１−Ｘを、再水和チャンバ４６から反応チャンバ１５に供給して、区域Ａに既に存在する希釈された試料及び緩衝液量と混合することができる。次いで、カートリッジ５は、第２のＲ１試薬が存在する場合には、重力下で区域Ａ内の流体が区域Ｂに流れることができるように位置合せされる。混合／攪拌によって、この再水和を促進することができる。完全に再水和されると、遠心力を使用して、試料、緩衝液、及びＲ１の懸濁液をキュベット４５（区域Ａ）に戻し、ここでこの懸濁液に較正測定を実行することができる。
【０１０２】
次いで、再水和されたＲ２−Ｙの量は、再水和チャンバ４７から反応チャンバ１５に供給することができ、ここで、反応チャンバ内に既に存在している緩衝液／試料／Ｒ１の懸濁液と混合することができる。存在する場合は、第２のＲ２試薬を、この時点で区域Ｃにおいて再水和することができる。遠心力又は重力の手段によって、こうした量の混合をさらに増進させた後に、混合されたこの懸濁液を区域Ａに戻すことができ、ここでキュベット４５において終点反応を監視することができる。この実施形態の利点は以下の通りである。
・試薬Ｒ１−Ｘは、ブランク測定や試料／緩衝液供給など他の分析プロセスと並行して再水和することができ、したがって合計の分析時間を短縮することができる。
・試薬Ｒ２−Ｙは、ブランク測定、試料／緩衝液供給、Ｒ１の再水和など他の分析プロセスと並行して再水和することができ、したがって合計の分析時間を短縮することができる。
【０１０３】
図１４ａには、本発明のさらなる変形形態が示してある。試料希釈チャンバ５１及び複数の反応チャンバ１５（２つが図示してある）が示してある。図には示していないが、試料チャンバ３５及び緩衝液チャンバ１０が、希釈チャンバ５１の放射状内向きに存在できることを理解されたい。試料が希釈されると、分配チャネル４８を介して、各反応チャンバ１５、１５Ａ、１５Ｂなどにこの試料を供給することができる。カートリッジ１つにつき、２つ以上の別々の反応チャンバが存在できることを理解されたい。希釈された試料は、個々の供給チャネル４９、５０を介して、連続する各反応チャンバに供給される。
【０１０４】
希釈された試料が遠心力の下で各反応チャンバに供給されると、区域Ａが満たされ、ここでキュベット４５内で試料測定を実行することができる。次いで、カートリッジ５は、重力下で区域Ａ内の流体が区域Ｂに流れるように位置合せされる（必要に応じて、穏やかな撹拌によって促進される）。試料及び緩衝液の懸濁液は、試薬Ｒ１を濡らし、試薬を再水和し始める。再水和が完全に達成されるまで、規定期間において再水和が継続する。混合／攪拌によって、この再水和を促進することができる。完全に再水和されると、遠心力を使用して、試料、緩衝液、及びＲ１の懸濁液をキュベット４５（区域Ａ）に戻し、ここでこの懸濁液に較正測定を実行することができる。
【０１０５】
試薬Ｒ１の再水和と同様に、次いで、カートリッジ５は、流体がキュベット４５から区域Ｃに流れるように配向され、ここで、Ｒ２試薬が、緩衝液、試料、及びＲ１の懸濁液によって濡れる。やはり、乾燥した試薬が両方とも完全に再水和されるまで、規定期間において再水和が継続する。カートリッジ５上で混合攪拌することによって、やはり再水和を促進することができる。最後に、流体量全体をキュベット４５（区域Ａ）に戻し、ここで最終反応を監視することができる。単数又は複数のスポットにおいて、試薬Ｒ１及び／又はＲ２のスポットをつけることができることが特筆に値する。この実施形態の利点は、隔離された反応チャンバ内で単一のカートリッジに多重分析を実行して、相互汚染のリスクを防ぐことができることである。
【０１０６】
図１４ｂには、図１４ａの実施形態のカートリッジ設計の一実施形態が示してある。この実施形態を使用して、免疫比濁法又は酵素ベースの臨床化学分析の三重式を実行する。試料チャンバ３５に試料が注入され、緩衝液チャンバ１０に緩衝液が注入される。試料アプリケータを使用して試料を供給することもでき、緩衝液チャンバは、貯蔵された緩衝液の貯蔵器とすることもできることが理解されよう。
【０１０７】
遠心力を使用して、チャンバ３５内の試料が、血漿分離計量チャンバ５９に供給され、ここで既定の血液試料量がまず計量される。並行して、この遠心力を使用して、緩衝液のアリコートをチャンバ１０から第１の緩衝液計量チャンバ５２に供給し、チャンバ１０からの緩衝液の過剰分がオーバフロー計量チャンバ５８に供給される。チャンバ５８は、緩衝液がチャンバ５２、及び５８に供給されたかどうか判定するための手続制御装置として使用することができる。次いで、遠心力を増やして、血漿分離計量チャンバ５９内で血漿から細胞成分を分離する。
【０１０８】
次いで、血漿分離計量チャンバ５９を出る血漿サイホン、及び第１の緩衝液計量チャンバ５２を出る緩衝液サイホンが、２５において、カートリッジに取り付けられたモータによってもたらされる加速度プロファイルを使用して刺激される。サイホンが刺激されると、遠心力を使用して、血漿分離計量５９からの計量された血漿、及び第１の緩衝液計量５２からの計量された緩衝液を、下流側の試料希釈チャンバ５１に移動させ、ここで血漿と希釈剤が混合される。
【０１０９】
試料が希釈され、混合されると、この試料は、分配チャネル４８を介して、下流側の各反応チャンバ１５、１５Ａ、及び１５Ｂと、１５Ａと１５Ｂの間の相互汚染を防止する緩衝チャンバ６２と、オーバフロー・チャンバ６３とに供給される。カートリッジ１つにつき、２つ以上の別々の反応チャンバが存在できることを理解されたい。希釈された試料は、個々の供給チャネル４９、５０、及び６０を介して、連続する各反応チャンバに供給される。供給チャネル４９と反応チャンバ１５の間には、反応チャンバ１５、１５Ａ、１５Ｂの間の相互汚染を防止するのに使用される中間試料計量チャンバ６１が存在する。中間試料計量チャンバ６１と反応チャンバ１５を連結するサイホンが、モータから提供される加速度プロファイルを使用して刺激され、次いで、計量された試料が、遠心力を使用して反応チャンバ１５に供給される。
【０１１０】
希釈されたこの試料量が、反応チャンバ１５、１５Ａ、及び１５Ｂ内のキュベット４５（区域Ａ）をそれぞれ満たし、それぞれにおいて個々のブランク測定を実行することができる。希釈された試料の供給ステップにおいては、遠心力により、区域Ｂ又は区域Ｃ（もっぱら、反応チャンバ１５内）に流体が確実に到達しなくなり、Ｒ１及びＲ２（もっぱら、反応チャンバ１５内）が再水和されるまで、乾燥した試薬が変化しないままである。
【０１１１】
次いで、カートリッジは、反応チャンバ１５、１５Ａ、及び１５Ｂにおいて、重力下で区域Ａ内の流体が区域Ｂに流れるように位置合せされる（必要に応じて、穏やかな撹拌によって促進される）。希釈された試料が、３つの反応チャンバ１５、１５Ａ、及び１５Ｂのすべてにおいて試薬Ｒ１を濡らし、並行してこの再水和を開始する。再水和が完全に達成されるまで、規定期間において再水和が継続する。混合／攪拌によって、この再水和を促進することができる。完全に再水和されると、遠心力を使用して、希釈された試料及びＲ１の懸濁液をキュベット４５（区域Ａ）に戻し、ここでこうした懸濁液に測定を実行することができる。
【０１１２】
第２の試薬Ｒ２を含む２相反応では、もっぱら反応チャンバ１５に示すように、次いで、カートリッジは、キュベット４５から区域Ｃに流体が流れるように配向され、ここでＲ２試薬が、希釈された試料及びＲ１懸濁液によって濡れる。やはり、Ｒ２試薬が完全に再水和されるまで、規定期間において再水和が継続する。カートリッジ上で混合攪拌することによって、やはり再水和を促進することができる。最後に、反応チャンバ１５において、流体量全体をキュベット４５（区域Ａ）に戻し、ここで最終の２相反応を監視することができる。単数又は複数のスポットにおいて、試薬Ｒ１及び／又はＲ２のスポットをつけることができる。
【０１１３】
図１４ｃには、図１４ａの実施形態のカートリッジ設計の別の実施形態が示してある。図１４ｂと同様のこの実施形態を使用して、免疫比濁法又は酵素ベースの臨床化学分析の三重式を実行する。試料チャンバ３５に試料が注入され、緩衝液チャンバ１０に緩衝液が注入される。試料アプリケータを使用して試料を供給することもでき、緩衝液チャンバは、貯蔵された緩衝液の貯蔵器とすることもできることが理解されよう。
【０１１４】
遠心力を使用して、チャンバ３５内の試料が、血漿分離計量チャンバ５９に供給され、ここで既定の血液試料量がまず計量される。並行して、この遠心力を使用して、緩衝液のアリコートをチャンバ１０から第１の緩衝液計量チャンバ５２に供給し、チャンバ１０からの緩衝液の過剰分がオーバフロー計量チャンバ５８に供給される。チャンバ５８は、緩衝液がチャンバ５２、及び５８に供給されたかどうか判定するための手続制御装置として使用することができる。次いで、遠心力を増やして、血漿分離計量チャンバ５９内で血漿から細胞成分を分離する。
【０１１５】
次いで、第１の緩衝液計量チャンバ５２を出る緩衝液サイホンが、２５において、カートリッジに取り付けられたモータによってもたらされる加速度プロファイルを使用して刺激される。この加速された刺激済みサイホンは、機能するのに親水性コーティングを必要としない。緩衝液サイホンが刺激されると、遠心力を使用して、計量された緩衝液を第１の緩衝液計量５２から下流側の試料希釈チャンバ５１に移動させる。次いで、吸引効果を使用して、血漿量を血漿分離計量チャンバ５９から下流側の試料希釈チャンバ５１に移送し、ここで血漿と希釈剤が混合される。
【０１１６】
試料が希釈され、混合されると、この試料は、分配チャネル４８を介して順次、下流側の緩衝チャンバ６６と、反応チャンバ１５、１５Ａ、及び１５Ｂと、試料希釈オーバフロー・チャンバ６３とに供給される。カートリッジ１つにつき、２つ以上の別々の反応チャンバが存在できることを理解されたい。緩衝チャンバ６６が分配チャネル４８の先頭に配置されて、反応チャンバ１５、１５Ａ、及び１５Ｂに流れ込む代わりに、希釈された非均質な試料が確実にここへ流れ込む。この緩衝チャンバは、毛管チャネル６７によって連結された第１の区間６６ａと第２の区間６６ｂを含む。希釈された試料が、遠心力を使用して供給チャネル４９を通過し、計量チャンバ及びオーバフロー・チャンバを含む第１の中間チャンバ６１に入る。この計量チャンバは、オーバフローがその通気孔を満たして塞ぐ前に、まず希釈された試料で満たされる。次いで、オーバフロー・チャンバ内の圧力が上昇することになり、供給チャネル４９に加えられる遠心力が、このオーバフロー・チャンバ内の圧力と等しくなると、供給チャネル４９を通る希釈された試料の流れが止まることになる。希釈された試料が供給チャネル４９を通って流れなくなると、第２の中間チャンバ６４が、同様に供給チャネル５０を通って満たされる。残りの希釈された試料が、分配チャネル４８を介してオーバフロー・チャンバ６３に移送されるのに先立って、第３の中間チャネル６５が、供給チャネル６０を介して同様に満たされる。
【０１１７】
希釈された試料のすべてが、試料希釈チャンバ５１から供給されると、モータによって生じる遠心力が増大して、緩衝チャンバ６６内の毛管チャネル６７を破断し、その結果、この希釈された試料が、第１の区間６６ａから第２の区間６６ｂへと放射状外向きに通過する。並行して、供給チャネル４９、５０、及び６０内での遠心圧力が増大することになり、こうしたチャネルに残っている希釈された試料が洗い流されることになり、第１、第２、及び第３の中間チャンバ６１、６４、及び６５のそれぞれのオーバフロー・チャンバでの圧力が普通の大気圧まで戻ることになる。これにより、下流側の流体が予想通りに動作し、必要なときには６１から１５まで、６４から１５Ａまで、６５から１５Ｂまで、流体を確実に移送することができる。
【０１１８】
２相分析では、第１、第２、及び第３の中間チャンバ６１、６４、及び６５に第１の試薬Ｒ１を配置することができ、これら乾燥した試薬が、希釈された試料の計量された量によって再水和される。次いで、モータからの加速度プロファイルを使用して、この希釈液を、第１、第２、及び第３の中間チャンバ６１、６４、及び６５から、その出口サイホンを介して下流側の反応チャンバ１５、１５Ａ、及び１５Ｂに移送する。この希釈液量が、反応チャンバ１５、１５Ａ、及び１５Ｂ内のキュベット４５（区域Ａ）をそれぞれ満たし、それぞれにおいて個々のブランク測定を実行することができる。希釈液供給ステップにおいては、遠心力により、反応チャンバ１５、１５Ａ、及び１５Ｂ内の区域Ｂに流体が確実に到達しなくなり、区域Ｂ内の乾燥した試薬（第１の試薬Ｒ１又は第２の試薬Ｒ２）が、再水和されるまで変化しないままである。
【０１１９】
次いで、カートリッジは、反応チャンバ１５、１５Ａ、及び１５Ｂにおいて、重力下で区域Ａ内の流体が区域Ｂに流れるように位置合せされる（必要に応じて、穏やかな撹拌によって促進される）。希釈液が、３つの反応チャンバ１５、１５Ａ、及び１５Ｂのすべてにおいてこれらの試薬を濡らし、並行してこれらの再水和を開始する。再水和が完全に達成されるまで、規定期間において再水和が継続する。混合／攪拌によって、この再水和を促進することができる。完全に再水和されると、遠心力を使用して、この希釈液をキュベット４５（区域Ａ）に戻し、ここでこうした懸濁液に測定を実行することができる。
【０１２０】
本発明の微少流体システムは、任意のタイプの免疫比濁法及び酵素ベースの臨床化学分析を実行するのに適していることが、上記説明から理解されよう。さらに、本発明の微少流体システムは、これを使用して、単一の試薬の追加及び再水和を必要とする分析、並びに複数の試薬の追加及び再水和を必要とする分析を実行することができるので、非常に柔軟である。これは、カートリッジの第２及び／又は第３の試薬区域がそれぞれ、複数の試薬スポットを設けることができるという事実に起因している。
【０１２１】
本明細書では、用語「ｃｏｍｐｒｉｓｅ、ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ、ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ、及びｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」又はその変形例、並びに用語「ｉｎｃｌｕｄｅ、ｉｎｃｌｕｄｅｓ、ｉｎｃｌｕｄｅｄ、及びｉｎｃｌｕｄｉｎｇ」又はその変形例は、完全に交換可能であると考えられ、こうした用語はすべて、可能な限り広い解釈が与えられるべきであり、又逆の場合も同じである。
【０１２２】
本発明は、これまでに説明した実施形態に限定されるものではなく、構造と詳細の両方に変更を加えてもよい。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１ａ】
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【図１１ｂ】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４ａ】
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【図１４ｂ】
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【図１４ｃ】
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【国際調査報告】
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