(57)【要約】  本発明は、ブタサーコウイルスによって引き起こされる疾患を治療または予防するための組成物および方法に関する。本発明は、特に、豚の群れにおけるＰＣＶ感染または疾患を制御するための方法を開示し、本方法は、（ｉ）母豚に、離乳時にＰＣＶに対するワクチンを接種することと、（ｉｉ）子豚に、２〜７週齢においてＰＣＶに対するワクチンを接種することとを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
豚の群れにおけるＰＣＶ感染または疾患を制御するための方法での使用のためのＰＣＶワクチンであって、前記方法が、母豚およびそれらの子豚にＰＣＶに対するワクチンを接種することを含み、（ｉ）母豚は、離乳時にワクチンを接種され、（ｉｉ）子豚は、２〜７週齢においてワクチンを接種される、使用のためのＰＣＶワクチン。
【請求項２】
母豚およびそれらの子豚にＰＣＶに対するワクチンを接種することを含み、（ｉ）母豚は、離乳時にＰＣＶに対するワクチンを接種され、（ｉｉ）前記子豚は、３〜６週齢においてＰＣＶに対するワクチンを接種される、請求項１に記載の使用のためのＰＣＶワクチン。
【請求項３】
豚にＰＣＶ感染または疾患に対するワクチンを接種するための使用のためのＰＣＶワクチンであって、母豚およびそれらの子豚にワクチンを接種することを含み、（ｉ）母豚は、離乳時にＰＣＶに対するワクチンを接種され、（ｉｉ）前記子豚は、２〜７週齢においてＰＣＶに対するワクチンを接種される、使用のためのＰＣＶワクチン。
【請求項４】
豚において防御的抗ＰＣＶ免疫を誘導するための使用のためのＰＣＶワクチンであって、母豚およびそれらの子豚にＰＣＶに対するワクチンを接種することを含み、（ｉ）母豚は、離乳時にＰＣＶに対するワクチンを接種され、（ｉｉ）前記子豚は、２〜７週齢においてＰＣＶに対するワクチンを接種される、使用のためのＰＣＶワクチン。
【請求項５】
３週齢において子豚にワクチンを接種することを含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用のためのＰＣＶワクチン。
【請求項６】
６週齢において子豚にワクチンを接種することを含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用のためのＰＣＶワクチン。
【請求項７】
離乳時に、本質的に同日に母豚およびそれらの子豚にワクチンを接種することを含む、請求項１に記載の使用のためのＰＣＶワクチン。
【請求項８】
前記ＰＣＶがＰＣＶ２である、請求項１に記載の使用のためのＰＣＶワクチン。
【請求項９】
前記母豚および子豚のワクチン接種が不活化ＰＣＶ２ワクチンで実施される、請求項８に記載の使用のためのＰＣＶワクチン。
【請求項１０】
前記母豚および子豚のワクチン接種がＰＣＶ２ワクチンの単回注射を含む、請求項８または９に記載の使用のためのＰＣＶワクチン。
【請求項１１】
前記母豚および子豚のワクチン接種がＰＣＶワクチンの単回の筋肉内注射を含む、請求項１に記載の使用のためのＰＣＶワクチン。
【請求項１２】
前記母豚が、それらの子豚の各離乳時にワクチンを接種される、請求項１に記載の使用のためのＰＣＶワクチン。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ブタサーコウイルスによって引き起こされる疾患を治療または予防するための組成物および方法に関する。
【０００２】
ブタサーコウイルスは、豚に感染するウイルスの主要なクラスである。ＰＣＶ１、ＰＣＶ２、ＰＣＶ３を含むいくつかのタイプのＰＣＶが報告されている。これらのウイルスは世界中に存在し、特にＰＣＶ２は大多数の豚の群れを感染させている。ウイルスには非病原性のものもあるが、他のウイルスはＰＣＶ２ａ、ＰＣＶ２ｂ、ＰＣＶ２ｄ、おそらくＰＣＶ３も含めて、病気（ＰＣＶＤ）を引き起こす可能性がある。ＰＣＶ関連疾患には、とりわけ離乳後多臓器消耗症候群（ＰＭＷＳ）、ブタ皮膚炎および腎症症候群（ＰＤＮＳ）、ブタ呼吸器疾患複合体（ＰＲＤＣ）、生殖障害、肉芽腫性腸炎、滲出性表皮炎、壊死性リンパ節炎、および先天性振戦が含まれる。
【０００３】
したがって、豚の群れにおけるＰＣＶ感染および関連疾患（ＰＣＶＤ）の管理は、飼育者にとって大きな関心事である。管理は、今日では主にワクチン接種に基づく。現在、さまざまなＰＣＶワクチン、特に抗ＰＣＶ２ワクチンが子豚への使用に利用可能である。そのようなワクチンは、不活化（例えば、死菌）ワクチン、またはサブユニットワクチンのいずれかである。ＰＣＶ２ワクチンなどのＰＣＶワクチンは、リンパ組織のウイルス誘発性病変を低減するなどによってウイルス量を低減し、ＰＣＶＤを制御することができる。したがって、ワクチン接種された豚の状態と状況に応じて、これらのワクチンは完全に効果的である可能性がある。しかしながら、子豚では、母体由来の免疫がそのようなワクチンの有効性に負の干渉を与える可能性があることが報告された。特に、そのような干渉は、例えば、ワクチン接種時の子豚の年齢、ワクチン接種のタイミング、および母体由来の免疫のレベルに関連している可能性があることが言及された。研究によると、高レベルの母体由来の抗体が、子豚のＰＣＶ２ワクチン接種後の体液性免疫応答に干渉することが示された［２２］。高レベルの受動免疫を有する子豚では、ワクチン接種時に抗体の低下が観察された。さらに、Ｈａａｋｅ  ｅｔ  ａｌ［１１］は、１週齢でのワクチン接種が子豚の能動的な体液性免疫の誘導を変える可能性があることを示唆した。
【０００４】
ＭＤＡ干渉の正確な原因はまだ調査の対象であるが、豚の群れに強力な保護を提供できる最適化された抗ＰＣＶワクチン接種戦略またはレジメンへの需要がある。
【０００５】
本出願は、豚にＰＣＶに対するワクチンを接種するためのおよび豚の群れにおけるＰＣＶ感染または疾患を制御するための、そのような新規の方法を提供する。
【０００６】
より具体的には、本発明は、豚の群れにおけるＰＣＶ感染または疾患を制御するための方法に関し、本方法は、（ｉ）母豚に、離乳時にＰＣＶに対するワクチンを接種することと、（ｉｉ）それらの子豚に、２〜７週齢においてＰＣＶワクチン接種することとを含む。
【０００７】
本発明の方法によれば、母豚は、それらの子豚の離乳時にＰＣＶに対するワクチンを接種されることを理解されなければならない。
【０００８】
本発明者らは、そのような新規のワクチン接種レジメンによって与えられる臨床的保護（ワクチン有効性）を調査し、それが、未経産豚および母豚に由来する受動的に獲得された免疫を評価する必要なしに、単回用量のワクチンで十分な保護を提供できることを見出した。離乳時の母豚と２〜７週齢のそれらの子豚へのワクチン接種の組み合わせは、豚の群れにおけるＰＣＶ感染および関連疾患の制御に非常に効果的であり、母体由来の免疫による干渉を受けないように思われる。
【０００９】
本発明は、より具体的には、豚におけるＰＣＶ感染または疾患を制御するための方法に関し、本方法は、母豚およびそれらの子豚にＰＣＶに対するワクチンを接種することを含み、（ｉ）母豚は、離乳時にＰＣＶに対するワクチンを接種され、（ｉｉ）子豚は、２〜７週齢においてＰＣＶに対するワクチンを接種される。
【００１０】
本発明はまた、豚にＰＣＶ感染または疾患に対するワクチンを接種するための方法にも関し、本方法は、母豚およびそれらの子豚にワクチンを接種することを含み、（ｉ）母豚は、離乳時にＰＣＶに対するワクチンを接種され、（ｉｉ）子豚は、２週齢〜７週齢においてＰＣＶに対するワクチンを接種される。
【００１１】
本発明はまた特に、豚において防御的抗ＰＣＶ免疫を誘導するための方法に関し、本方法は、母豚およびそれらの子豚にＰＣＶに対するワクチンを接種することを含み、（ｉ）母豚は、離乳時にＰＣＶに対するワクチンを接種され、（ｉｉ）子豚は、２〜７週齢においてＰＣＶに対するワクチンを接種される。
【００１２】
本発明はまた、豚の群れにおけるＰＣＶ感染または疾患を制御するための方法にも関し、本方法は、（ｉ）母豚に、離乳時にＰＣＶに対するワクチンを接種することと、（ｉｉ）子豚に、２〜７週齢においてＰＣＶに対するワクチン接種することとを含み、好ましくは、本方法は、母豚およびそれらの子豚にＰＣＶに対するワクチンを接種することを含み、（ｉ）母豚は、離乳時にＰＣＶに対するワクチンを接種され、（ｉｉ）子豚は、３〜６週齢においてＰＣＶに対するワクチンを接種される。
【００１３】
本発明はまた、豚の群れにおけるＰＣＶ感染または疾患を制御するための方法での使用のためのＰＣＶワクチンにも関し、本方法は、（ｉ）母豚に、離乳時にＰＣＶに対するワクチンを接種することと、（ｉｉ）子豚に、２〜７週齢においてＰＣＶに対するワクチンを接種することとを含む。好ましくは、本方法は、母豚およびそれらの子豚にＰＣＶに対するワクチンを接種することを含み、（ｉ）母豚は、離乳時にＰＣＶに対するワクチンを接種され、（ｉｉ）子豚は、３〜６週齢においてＰＣＶに対するワクチンを接種される。
【００１４】
本発明はまた、豚にＰＣＶ感染または疾患に対するワクチンを接種するための使用のためのＰＣＶワクチンにも関し、この使用のためのＰＣＶワクチンは、母豚およびそれらの子豚にワクチンを接種することを含み、（ｉ）母豚は、離乳時にＰＣＶに対するワクチンを接種され、（ｉｉ）子豚は、２〜７週齢においてＰＣＶに対するワクチンを接種される。
【００１５】
本発明はまた、豚において防御的抗ＰＣＶ免疫を誘導するための使用のためのＰＣＶワクチンにも関し、この使用のためのＰＣＶワクチンは、母豚およびそれらの子豚にＰＣＶに対するワクチンを接種することを含み、（ｉ）母豚は、離乳時にＰＣＶに対するワクチンを接種され、（ｉｉ）子豚は、２〜７週齢においてＰＣＶに対するワクチンを接種される。
【００１６】
本発明はまた、（ｉ）母豚に、離乳時にＰＣＶに対するワクチンを接種することと、（ｉｉ）子豚に、２〜７週齢においてＰＣＶに対するワクチンを接種することとによって、豚の群れにおけるＰＣＶ感染または疾患を制御するためのワクチンの製造のためのＰＣＶ抗原の使用にも関する。好ましくは、この使用は、母豚およびそれらの子豚にＰＣＶに対するワクチンを接種することを含み、（ｉ）母豚は、離乳時にＰＣＶに対するワクチンを接種され、（ｉｉ）子豚は、３〜６週齢においてＰＣＶに対するワクチンを接種される。
【００１７】
本発明はまた、母豚およびその子豚にワクチンを接種することにより、豚にＰＣＶ感染または疾患に対するワクチンを接種するための組成物の製造のためのＰＣＶ抗原の使用にも関し、（ｉ）母豚は、離乳時にＰＣＶに対するワクチンを接種され、（ｉｉ）子豚は、２〜７週齢においてＰＣＶに対するワクチンを接種される。
【００１８】
本発明はまた、母豚およびそれらの子豚にＰＣＶに対するワクチンを接種することにより、豚において防御的抗ＰＣＶ免疫を誘導するためのＰＣＶワクチンの製造のためのＰＣＶ抗原の使用にも関し、（ｉ）母豚は、離乳時にＰＣＶに対するワクチンを接種され、（ｉｉ）子豚は、２〜７週齢においてＰＣＶに対するワクチンを接種される。
【００１９】
本発明者らは、母豚が離乳時に（すなわち、それらの子豚の離乳時に）ワクチンを接種されるとき、次世代の子豚は、２〜７週齢でのワクチン接種に非常に反応性であることを発見した。その結果、子豚は、１回のワクチン接種で効果的に保護でき、母豚は、離乳時ごとにワクチンを接種され得る。
【００２０】
最も好ましい実施形態では、子豚は、３週齢または６週齢においてワクチンを接種される。
【００２１】
典型的な実施形態では、母豚およびそれらの子豚は、離乳時、すなわち本質的に同日にワクチンを接種される。
【００２２】
特定の有利な実施形態において、母豚および子豚のワクチン接種は、ＰＣＶワクチンの単回の筋肉内注射などの、ＰＣＶワクチンの単回注射を含む。
【００２３】
本発明は、任意のＰＣＶワクチンと共に使用することができ、ＰＣＶ２ワクチンを接種するのに特に適しており、より詳細には、不活化ＰＣＶ２ワクチンを使用してワクチンを接種するのに適している。
【００２４】
ワクチン組成物
本明細書で使用される「ワクチン」という用語は、ＰＣＶに対して動物（例えば、豚）における免疫応答を引き起こし、刺激し、または増幅するために使用され得る任意の組成物を含む。
【００２５】
したがって、ワクチンは、標的ウイルスからの少なくとも１つの抗原を含む。抗原は、ウイルス全体（不活化または弱毒化された形態）、その抽出物または画分、単離されたウイルスタンパク質または他のウイルス成分、それをコードする核酸、またはそれらのフラグメントまたは誘導体であり得るが、これらに限定されない。
【００２６】
ワクチンは、抗原（または免疫原）に加えて、薬学的に許容される担体、賦形剤、希釈剤、アジュバント、凍結乾燥安定剤、湿潤剤若しくは乳化剤、ｐＨ緩衝剤、ゲル化若しくは増粘添加剤、または防腐剤など、当業者によってそれ自体が知られている他の成分を、投与経路に応じて含み得る。
【００２７】
薬学的に許容される担体、賦形剤または希釈剤の例には、脱塩水または蒸留水食塩水；ピーナッツ油、アラキス油、ベニバナ油、オリーブ油、綿実油、トウモロコシ油、ゴマ油、またはココナッツ油などの植物性油；メチルポリシロキサン、フェニルポリシロキサンおよびメチルフェニルポリソルポキサンなどのポリシロキサンを含むシリコーン油；揮発性シリコーン；軽質流動パラフィン油、または重質流動パラフィン油などの鉱油；スクアレン；メチルセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム塩、またはヒドロキシプロピルメチルセルロースなどのセルロース誘導体；低級アルカノール、例えばエタノールまたはイソプロパノール；低級アラルカノール；低級ポリアルキレングリコールまたは低級アルキレングリコール、例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、エチレングリコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコールまたはグリセリン；パルミチン酸イソプロピル、ミリスチン酸イソプロピル、オレイン酸エチルなどの脂肪酸エステル：ポリビニルピロリドン；寒天；カラギーナン；トラガカントガムまたはアカシアガム、およびワセリンが含まれるが、これらに限定されない。典型的には、担体（複数可）は、ワクチン組成物の１０重量％〜９９．９重量％を形成し、例えばリン酸水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素カリウム、リン酸二水素カリウム、それらの混合物などの当技術分野で知られている試薬を使用する従来の方法によって緩衝され得る。
【００２８】
アジュバントの例には、水中油型エマルジョン、水酸化アルミニウム（ミョウバン）、免疫刺激複合体、非イオン性ブロックポリマーまたはコポリマー、サイトカイン（ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γなどのような）、サポニン、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＬＡ）、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）などが含まれるが、これらに限定されない。他の適切なアジュバントには、例えば、硫酸アルミニウムカリウム、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉから単離された熱不安定性または熱安定性エンテロトキシン、コレラ毒素またはそのＢサブユニット、ジフテリア毒素、破傷風毒素、百日咳毒素、フロイントの不完全または完全アジュバントなどが含まれる。ジフテリア毒素、破傷風毒素および百日咳毒素などの毒素ベースのアジュバントは、使用前に、例えば、ホルムアルデヒドでの処理によって不活化され得る。
【００２９】
凍結乾燥安定剤の例は、例えば、ソルビトール、マンニトール、デンプン、スクロース、デキストランまたはグルコースなどの炭水化物、アルブミンまたはカゼインなどのタンパク質、およびそれらの誘導体であり得る。
【００３０】
ワクチンはまた、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕ  ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｎｏｍｉａ；アデノウイルス；東部馬脳炎ウイルスなどのアルファウイルス；Ｂａｌａｎｔｉｄｉｕｍ  ｃｏｌｉ；Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ；Ｂｒａｃｈｙｓｐｉｒａ  ｓｐｐ．、好ましくはＢ．ｈｙｏｄｙｅｎｔｈｅｒｉａｅ、Ｂ．ｐｉｌｏｓｉｃｏｌｉ、Ｂ．ｉｎｎｏｃｅｎｓ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｓｕｉｓ、好ましくは生物型１、２および３；ブタコレラウイルス、アフリカブタコレラウイルス；ＣｈｌａｍｙｄｉａおよびＣｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｓｐ．、好ましくはＣ．ｐｅｃｏｒｕｍおよびＣ．ａｂｏｒｔｕｓ；Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｓｐｐ．、好ましくはＣｌ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｃｌ．ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓタイプＡ、Ｂ、Ｃ、Ｃｌ．ｎｏｖｙｉ、Ｃｌ．ｓｅｐｔｉｃｕｍ、Ｃｌ．ｔｅｔａｎｉ；消化器および呼吸器コロナウイルス；Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ  ｐａｒｖｕｍ；Ｅｉｍｅｒｉａ  ｓｐｐ；現在Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈａｅｍｏｓｕｉｓと名付けられているＥｐｅｒｙｔｈｒｏｚｏｏｎｉｓ  ｓｕｉｓ；Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ  ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ；Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ；Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｐａｒａｓｕｉｓ、好ましくはサブタイプ１、７、および１４；血球凝集性脳脊髄炎ウイルス；ｌｓｏｓｐｏｒａ  ｓｕｉｓ；日本脳炎ウイルス；Ｌａｗｓｏｎｉａ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｓ；Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ｓｐｐ．、好ましくはＬｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ａｕｓｔｒａｌｉｓ，Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ｃａｎｉｃｏｌａ，Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ｇｒｉｐｐｏｔｙｐｈｏｓａ，Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ｉｃｔｅｒｏｈａｅｍｏｒｒｈａｇｉｃａｅ，Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓ，Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ＰｏｍｏｎａおよびＬｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ｔａｒａｓｓｏｖｉ；Ｍａｎｎｈｅｉｍｉａ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ；Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｐ、好ましくは、Μ．ａｖｉｕｍ，Μ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒおよびＭ．ｂｏｖｉｓ；Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｐｏｎｅｕｍｏｎｉａｅ；パルボウイルス；Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ；ブタサイトメゴロウイルス；ブタパルボウイルス；ブタ繁殖・呼吸障害症候群ウイルス；仮性狂犬病ウイルス；ロタウイルス；萩山ウイルス；Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｓｐｐ．、好ましくは、Ｓ．ｔｈｙｈｉｍｕｒｉｕｍおよびＳ．ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ；Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ．好ましくは、Ｓ．ｈｙｉｃｕｓ；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ．、好ましくはＳｔｒｅｐ、ｓｕｉｓ；ブタサイトメガロウイルス；ブタヘルペスウイルス；ブタインフルエンザウイルス；ブタ痘ウイルス；トキソプラズマ原虫；水疱性口内炎ウイルスおよび／またはブタの発疹のウイルス、などの他の病原体からの抗原も含み得る。
【００３１】
本発明のワクチン組成物は、例えば、水溶液、油中水または水中油型エマルジョン、シロップ、エリキシル、チンキ剤、滅菌懸濁液またはエマルジョンなどの、非経口、皮下、皮内、筋肉内または静脈内投与（例えば、注射可能な投与）のための調製物などの液体製剤であり得る。そのような製剤は当技術分野で知られており、典型的には、抗原および他の典型的な添加剤を適切な担体または溶媒系に溶解することによって調製される。液体製剤はまた、懸濁剤または乳化剤を含む懸濁液およびエマルジョンも含み得る。
【００３２】
投与レジメン
本発明は、離乳時の母豚への１回の投与および３〜６週齢の子豚への１回の投与を本質的に含む、豚における改善されたＰＣＶワクチン接種レジメンを提供する。典型的な実施形態では、母豚およびそれらの子豚は、離乳時に本質的に同日に処置される。このようなワクチン接種は、ＭＤＡを評価する必要なく子豚を効果的に保護する。このようなワクチン接種レジメンは、次の離乳時まで母豚を効果的に保護する。このようなワクチン接種は、３〜６週齢での単回のワクチン接種による次世代子豚の効果的なワクチン接種を確実にする。
【００３３】
投与経路は、粘膜投与を介して経皮的、または他の非経口経路（皮内、筋肉内、皮下、静脈内、または腹腔内）であり得る。本発明のワクチンは、鼻腔内、経皮的に（すなわち、全身吸収のために皮膚表面上または皮膚表面に塗布される）、非経口、眼などに都合よく投与することができる。非経口投与経路には、筋肉内、静脈内、腹腔内投与などが含まれるが、これらに限定されない。筋肉内投与が好ましい。
【００３４】
本発明のワクチンは、単回投与として投与することができる。さらに、本発明のワクチンは、単独で投与することができ、または、例えば他のブタ免疫原性またはワクチン組成物などの１つまたは複数のさらなる組成物と共に同時にまたは連続して投与することができる。
【００３５】
実際には、免疫学的に有効な用量に必要な正確な量は、対象の年齢および全身状態、製剤の性質および投与様式などの要因に応じて、対象ごとに異なり得る。適切な「有効量」は、日常的な実験のみを使用して当業者によって決定され得る。例えば、ワクチンの適切な投与量を決定または漸増して、非ヒト動物対象の体重、ワクチンの濃度、および他の典型的な要因に基づいて最小の有効投与量を見つけるための方法が当技術分野で知られている。典型的な実施形態において、ワクチンは、０．５〜５ｍｌの単一用量を含む。最も好ましくは、母豚は２〜４ｍｌの間で投与され、子豚は、０．５〜３ｍｌで投与される。
【００３６】
特定の実施形態では、本発明は、群れにおけるＰＣＶ感染または疾患を制御する方法に関する。ＰＣＶ感染または疾患を制御することは、とりわけ、ＰＣＶ感染および関連する疾患を予防または低減または制限し、群れにおけるＰＣＶの拡散を防止または低減または制限し、ＰＣＶ関連疾患の発生または重症度を予防または低減または制限し、またはＰＣＶウイルス量を減らすことを示す。
【００３７】
ＰＣＶ２ワクチン接種
好ましい実施形態では、本発明は、豚にＰＣＶ２に対するワクチンを接種するために、またはＰＣＶ２感染または疾患を制御するために使用される。したがって、本発明は、ＰＣＶ２ワクチンを使用する。
【００３８】
Ｃｉｒｃｏｖａｃ（登録商標）（Ｃｅｖａ）、Ｉｎｇｅｌｖａｃ（登録商標）、ＣｉｒｃｏＦＬＥＸ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ  Ｖｅｔｍｅｄｉｃａ）、Ｓｕｖａｘｙｎ（登録商標）などの現在開発されているＰＣＶ２ワクチンは、不活化ＰＣＶ２ワクチンまたはサブユニットワクチンのいずれかである。ＰＣＶ２サブユニットワクチンは通常、ＰＣＶ２ａのＯＲＦ２遺伝子の組換え発現によって生成された精製された組換えＰＣＶ２ａキャプシドタンパク質を使用する。これに関して、ＰＣＶ２分離株Ｉｍｐ  １０１１のＯＲＦ２によってコードされるタンパク質は、ＥＰ１７４１７８５で報告されている。ＰＣＶ２分離株ＰＣＶ２ＲｍのＯＲＦ２によってコードされるタンパク質は、ＷＯ２０１０／０６１０００で報告されている。ＰＣＶ２分離株４１２のＯＲＦ２によってコードされるタンパク質は、ＥＰ１８１６２００で報告されている。さらなるＰＣＶ２分離株のＯＲＦ２によってコードされる別のタンパク質がＥＰ１０３６１８０またはＥＰ２２２５３６７で報告されている。改良された合成ＯＲＦ２タイプのタンパク質は、Ｗ０２０１３／０３０３２０およびＷ０２０１４／１６７０６０に記載されている。
【００３９】
特定の実施形態では、本発明は、不活化ＰＣＶ２ワクチンであるＰＣＶ２ワクチンを使用する。ワクチンは、不活化ＰＣＶ２ａ、不活化ＰＣＶ２ｂまたは不活化ＰＣＶ２ｄなどの任意の不活化ＰＣＶ２株を含み得る。具体的な例は、Ｃｉｒｃｏｖａｃである。
【００４０】
別の特定の実施形態において、本発明は、ＰＣＶ２  ＯＲＦ２ポリペプチドまたはそのフラグメントを含む（または発現する）サブユニットワクチンであるＰＣＶ２ワクチンを使用する。特定の実施形態において、ＯＲＦ２は、ＰＣＶ２単離物Ｉｍｐ１０１１、ＰＣＶ２Ｒｍ、または４１２のＯＲＦ２、またはそのようなタンパク質に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＯＲＦ２、またはそれらの少なくとも１０、１５、より好ましくは、その少なくとも２０個の連続するアミノ酸残基を含むそれらの免疫原性フラグメントから選択される。
【００４１】
本発明のさらなる態様および利点は、特許請求される発明を説明する以下の実施例セクションに開示される。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１】臨床試験Ｂの免疫化プロトコルを示す。
【図２】母豚のＰＣＶ２  ＩｇＧレベルを示す。
【図３】子豚のＰＣＶ２  ＩｇＧレベルを示す。
【実施例】
【００４３】
臨床試験Ａ
研究デザイン
この研究は、ＰＣＶＤ研究に関するＥＵコンソーシアムの基準（ｔｈｅ  ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＥＵ  ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ  ｏｎ  ＰＣＶＤ  ｒｅｓｅａｒｃｈ）に従って、ＰＣＶＤの診断が確認されたイタリアの養豚場で実施される。研究は、無作為化、対照化、盲検化されたデザインに従って実施される。
【００４４】
母豚の事前登録：ＰＣＶ２に対するＥＬＩＳＡ抗体の検出およびＳ／Ｐ値の計算のために、妊娠中期に１５０頭の母豚から採血する。それぞれ５０頭の母豚からなる３つのグループが編成され、ａ）の平均出産歴；ｂ）平均Ｓ／Ｐ値に従って均等化された３つの異なるグループに割り当てられる。
【００４５】
母豚の登録：５０頭の母豚からなる３つのグループは次のように処置される。
・グループＡ：離乳時にワクチンを接種する（Ｖ１）。
・グループＢ：出産予定日の５週間前と３週間前にのみワクチンを接種する（Ｖ２）。
・グループＣ：非ワクチン接種／対照（ＮＶ）
【００４６】
予想される出産日の１週間前に、すべての母豚から採血する。
【００４７】
子豚の登録：３週齢の約９００匹の哺乳子豚（研究グループあたり１００匹以上の子豚）を研究に参加させる。
【００４８】
研究への参加時に、上記の母豚（グループＡ、Ｂ、およびＣ）からの子豚は、耳のタグ付けによって個別に識別され、動物の４０％が体重を測定され、２０％がサンプリングのたびに採血される。
【００４９】
その後、子豚は、個々の同腹子内の３つの研究グループの１つにランダムに割り当てられる。すべての子豚は、ＣＩＲＣＯＶＡＣ（左側）の筋肉内注射を受ける。１つのグループ（Ａ）は３週齢で、もう１つのグループ（Ｂ）は６週齢である。１つのグループ（Ｃ）には生理食塩水（プラセボ）が注射され、負の対照として維持される。
【表１】
2021527073.tif 000002
【００５０】
子豚の体重は、参加時、保育期の終了時、および生後６か月で測定される。可能であれば、屠殺時の枝肉重量を記録する。子豚に投与される個々の処置は、罹患率の尺度として記録される。死因が明確でＰＣＶ２に関連しない場合（母豚によって押しつぶされた子豚、足の骨折など）を除いて、死因を特定するために、死んだ子豚ごとに死後検査が行われる。
【００５１】
ワクチン接種スキームの有効性の主要なパラメーターとして、１日の平均体重増加、罹患率と死亡率、およびＰＣＶ２ウイルス血症を研究グループ間で比較する。
【００５２】
血液サンプルは、表１に示されているタイミングに従って、グループあたり２０匹の子豚から採取される。計量時間も表１に示されている。
【００５３】
すべての子豚について、ワクチン接種直後、１日目、１週間目、そしてすべての反応が消えるまで毎週、ワクチン接種反応を監視する。
【表２】
2021527073.tif 000003
【００５４】
試験製品
調査物品
製品：ＣＩＲＣＯＶＡＣ（ＣＥＶＡ）
組成／力価：不活化ＰＣＶ２ワクチン
提示：１００ｍｌのＰＥＴバイアル
【００５５】
動物
約３週齢の健康な子豚９００匹（各グループ１００匹）が研究に含まれる。すべての子豚は、若い子豚としてワクチンを接種され、最初の繁殖で追加免疫された母豚からのものである。母豚は、ポイント２で示されたスキームに従って、前回の泌乳期からの離乳時、または出産の５週間前と３週間前にワクチンを接種される（母豚の２つのグループ）。
【００５６】
畜産
研究動物（すべてのグループが混合される）は、基準通りに農場に収容される。
【００５７】
研究動物は、農場で基準通りに飼育される。
【００５８】
盲検化
研究は盲検化される。ワクチンのバイアルは、ラベルコードによってのみ識別される。
【００５９】
処置
・用量：母豚２ｍｌ、子豚０．５ｍｌ
・経路：筋肉内注射による
・注射部位：首の左側
○３週齢のグループＡ
○６週齢のグループＢ
○非ワクチン接種のグループＣ
【００６０】
効果の評価
以下のパラメーターは、さまざまなワクチン接種プロトコルの有効性を評価するために使用される。
ｉ．１日の平均体重増加（ＡＤＷＧ）
ｉｉ．淘汰された動物を含む死亡率および死因
ｉｉｉ．罹患率（個別の処置／注射）
ｉｖ．ＰＣＶ２に対するＰＣＲ陽性動物の割合
ｖ．血液サンプルからのＰＣＶ２のウイルス量（Ｑ−ＰＣＲ）
ｖｉ．ＰＲＲＳＶおよびＭ  ｈｙｏの血清学的プロファイリング
ｖｉｉ．自然死した動物および人道的に安楽死させた動物の剖検および微生物学的調査
ｖｉｉｉ．屠殺場における肺病変スコアリング
【００６１】
体液性および細胞性免疫応答の動態は、ＥＬＩＳＡ血清学（ＩＮＧＥＮＡＳＡ）およびＩＦＮ−γ  ＳＣのＥＬＩＳｐｏｔによってそれぞれ測定される。これらの調査は、保存された血液サンプルとＰＢＭＣで行われる。
【００６２】
さらに、母体由来の抗体のレベルとワクチン接種に対する免疫応答および圃場感染のタイミングを評価するために、ＰＣＶ２に対する抗体価が決定される。
【００６３】
血液サンプルからのＰＣＶ２のウイルス量（Ｑ−ＰＣＲ）標準的な手順によるＰＣＶ２のＱ−ＰＣＲ。
【００６４】
血清学
ワクチン接種および感染に対する血清学的反応は、市販のキット［ＩＤＥＸＸ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（ＰＲＲＳおよびＭｈｙｏ）およびＩＮＧＥＮＡＳＡ（ＰＣＶ２）ＩｇＭ＋ＩｇＧ］を使用して測定される。
【００６５】
凝固後、血清を２つの血清チューブに分け、分析までサンプルを≦−１８℃で保存する。
【００６６】
細胞性免疫反応
細胞性免疫応答は、ＩＦＮ−γ  ＳＣを決定するためにＥＬＩＳｐｏｔアッセイによって測定される。
【００６７】
ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳｐｏｔアッセイ。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ−１０７７（登録商標）溶液の密度勾配により、４２０ｘｇ（１８００ｒｐｍ）で３０分間の遠心分離ステップによって分離される。
【００６８】
最後に、ＰＢＭＣを吸引により回収し、ＲＰＭＩ−１６４０培地に再懸濁して、抗ＩＦＮ−γモノクローナル抗体（Ｐ２Ｇ１０−ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）でコーティングした９６ウェルプレートに２００．０００細胞／２００μｌ  ＲＰＭＩ−１６４０（１０％ＦＣＳを添加）の密度で播種する。インビトロでの抗原刺激は、ＰＣＶ２抗原（ウイルス：０．１−１ＭＯＩ；オーダー：μｇ／ｍｌ）によって少なくとも２０時間実行される。ＰＢＭＣによるＩＦＮ−γ分泌は、抗ＩＦＮ−γ（Ｐ２Ｃ１１−ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）ビオチンコンジュゲートモノクローナル抗体、アルカリホスファターゼコンジュゲート二次抗体（Ｖｅｃｔｏｒ）、およびＮＢＴ／ＢＣＩＰ現像基質溶液（ＢｉｏＲａｄ）を使用して検出される。ＡＩＤ（登録商標）ＥＬＩＳｐｏｔ  Ｒｅａｄｅｒにより、細胞がＩＦＮ−γを分泌したところで基質が沈殿することによって、反応は青いスポットとして視覚化される。
【００６９】
屠殺場での肺病変
屠殺場では、マデックのグリッデとＳＰＥＳグリッドに従って肺病変がチェックされる。
【００７０】
これらの実験の結果は、そのような新しいワクチン接種レジメンによって与えられる臨床的保護（ワクチンの有効性）を確認できること、それが未経産豚および母豚に由来する受動獲得免疫を評価する必要なしに、ワクチンの単回用量で十分な保護を提供できることを確認できる。
【００７１】
臨床試験Ｂ
以下の表に示すワクチン接種レジメンに従って、３つのグループの未経産豚（それぞれ１０頭）にＣｉｒｃｏｖａｃ（２ｍＬ）をワクチン接種した。
【表３】
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【００７２】
ウイルス血症と免疫反応を評価するために、図１に矢印で示された日付に、研究全体を通して各動物に１２の血液サンプルを採取した。母豚および子豚における抗ＰＣＶ２  ＩｇＧの平均値を図２および図３に示す。
【００７３】
図２の結果は、ワクチン接種が母豚に特異的抗体の産生を誘導したことを明確に示す。グループＢの母豚では、グループＡよりも力価が均一であったことは驚くべきことである。グループＡの母豚は、分娩前の追加免疫ワクチン接種への応答として、各出産前に常に高い力価を示した。我々は、グループＢの母豚にはこれらのピークを見出さない。これは、つまり、グループＢの母豚は、同腹の子豚が初乳に移行する直前にそれほど高濃度の抗体を持たず、その結果、子豚の血中にＭＤＡとして現れたことを意味する。
【００７４】
同様に、図３から、グループＡの母豚に子豚が生まれると、生後１週目と３週目にはるかに高い抗体価が示されることがわかる。さらに、グループＡ内で力価の非常に高い変動が観察される。対照的に、一回目の出産歴の母豚Ｂ（最初の出産）から産まれる子豚は、１週目に中程度の力価および３週目に比較的低い力価を示し、２回目の出産歴の母豚Ｂ（２回目の出産）から産まれる子豚は、ワクチン接種時に、１週目で非常に高い力価（この年齢ではワクチンを接種しないため干渉しない）および３週目で中程度の力価を示す。また、３週目の力価は、グループＡの子豚およびまたグループＣ（対照、ワクチン未接種の母豚）の子豚よりもはるかに均質である。グループＣの子豚の中には、おそらく母親が感染して感染後の抗体を産生したため、力価が高いものもある。それらの力価は、グループＢの子豚よりもはるかに変動する。
【００７５】
したがって、グループＢの免疫プロファイルは、母豚で均一なレベルの免疫状態を達成して母豚自身を保護し、また子豚で適切な（高すぎない）均一な免疫状態（ＭＤＡのレベル）を達成してワクチン接種で干渉を引き起こさずに保護することを望んでいたので有利である。
【００７６】
したがって、これらの実験の結果は、そのような新しいワクチン接種レジメンによって与えられる臨床的保護（ワクチンの有効性）並びに未経産豚および母豚に由来する受動的に獲得された免疫を評価する必要なしに、ワクチンの単回用量で十分な保護を提供できることをさらに確認する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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