(57)【要約】開示されているのは、薬理学的活性を有する結合剤及び遊離薬物部分の双方を伴う細胞外で活性化される結合剤・薬物コンジュゲートである。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）細胞表面特徴が結合剤・薬物コンジュゲートが結合すると緩慢な内部移行を受ける、組織の病態において標的細胞上の前記細胞表面特徴に結合する細胞結合部分と、（ｉｉ）薬物部分が遊離薬物部分と関連する前記結合剤・薬物コンジュゲートの一部が前記結合剤・薬物コンジュゲートから遊離されると少なくとも１０倍減衰する薬理学的効果についてのＥＣ５０を有する、前記標的細胞に近接するバイスタンダー細胞に対して薬理学的効果を有する前記薬物部分と、（ｉｉｉ）ポリペプチド結合剤部分を前記薬物部分に共有結合するリンカー部分とを含む結合剤・薬物コンジュゲートであって、前記リンカー部分は疾患組織の細胞外に存在する酵素によって切断可能な基質認識配列を含み、前記酵素の存在下で前記リンカー部分は切断され、遊離薬物部分を遊離する、前記結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項２】
前記疾患組織が腫瘍である、請求項１に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項３】
前記標的細胞が腫瘍細胞である、請求項１または２に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項４】
前記標的細胞がマクロファージ、単球由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、樹状細胞、線維芽細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、肥満細胞、顆粒球、好酸球、Ｂ細胞または血管内皮細胞である、請求項１または２に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項５】
前記結合剤・薬物コンジュゲートが、前記標的細胞上の前記表面特徴と結合すると、少なくとも６時間、さらに好ましくは少なくとも１０、１２、１４、１６、１８、２０、２４、３６、４８または６０時間の内部移行半減期を有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項６】
前記細胞表面特徴が、組織の健常状態由来の正常細胞と比べて、前記疾患組織における前記標的細胞によって選択的に発現されるタンパク質である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項７】
前記細胞表面特徴がチェックポイントタンパク質または共刺激受容体である、請求項２、３、または４に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項８】
前記表面特徴が、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＬＡＧ−３、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＴＩＭ−３、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＧＡＬ９、ＣＤ１６０、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＮＬ２、ＴＩＧＩＴ、ＰＶＲ、ＢＴＮ１Ａ１、ＢＴＮ２Ａ２、ＢＴＮ３Ａ２及びＣＳＦ−１Ｒ、さらに好ましくはＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＧＩＴ、ＰＶＲ、ＰＤ−Ｌ１及びＣＤ１６０から成る群から選択されるチェックポイントタンパク質であり、且つ前記結合剤部分はチェックポイントアンタゴニストである、請求項７に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項９】
前記表面特徴が、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−Ｌ、ＧＩＴＲ、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ４０−Ｌ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＬＩＧＨＴ、及びＣＤ２７、さらに好ましくは４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０及びＩＣＯＳから成る群から選択される共刺激受容体またはリガンドであり、前記結合剤部分は共刺激アゴニストである、請求項７に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項１０】
前記細胞結合部分が、例えば、ヒト化抗体、ヒト抗体、もしくはキメラ抗体のような抗体である、またはＦａｂ、Ｆ（ａｂ）２、Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆｄ、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、ｄＡｂまたはｓｄＡｂ（またはナノボディ）、ＣＤＲ、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ジ−ｓｃＦｖ、ビ−ｓｃＦｖ、ｔａｓｃＦｖ（タンデムｓｃＦｖ）、ＡＶＩＢＯＤＹ（例えば、ジアボディ、トリアボディ、テトラボディ）、Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、小型モジュール免疫医薬品（ＳＭＩＰ）、ゲンマブ／ユニボディまたはデュオボディ、Ｖ−ＮＡＲドメイン、ＩｇＮＡＲ、ミニボディ、ＩｇＧＡＣＨ２、ＤＶＤ−Ｉｇ、プロボディ、イントラボディ、または多重特異性抗体のような、前記細胞表面特徴を結合するその抗原結合部分を含む、請求項１〜９に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項１１】
前記結合剤部分が、例えば、アフィボディ、アフィマー、アフィリン、アンチカリン、アトリマー、アビマー、ＤＡＲＰｉｎ、ＦＮ３足場（例えば、アドネクチン及びセンチリン）、フィノマー、クニッツドメイン、ナノフィチン、プロネクチン、オボディ、トリボディ、アビマー、二環式ペプチド、Ｃｙｓ−ノットから成る群から選択されるような非抗体足場である、請求項１〜９に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項１２】
式の１つによって表され、
【化１】
2021527042.tif 000093
式中、
ＣＢＭは、出現ごとに同一でもよいし、または異なっていてもよい細胞結合部分を表し；
Ｌ１はスペーサーまたは結合を表し；
ＳＲＳは基質認識配列を表し；
Ｌ２は自壊牲のリンカーまたは結合を表し；
ＤＭは薬物部分を表し；
ｍは１〜６の整数を表し；且つ
ｎは１〜５００、さらに好ましくは１〜１００、１〜１０、または１〜５の整数を表す、先行請求項のいずれかに記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項１３】
Ｌ１が６−マレイミドカプロイル、マレイミドプロパノイル及びマレイミドメチルシクロヘキサン−１−カルボキシレートのような炭化水素（直鎖または環状）である、またはＬ１がＮ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート、Ｎ−スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１カルボキシレート、Ｎ−スクシンイミジル（４−ヨード−アセチル）アミノベンゾエートである、またはＬ１が、ポリ（エチレングリコール）のようなポリエーテルである、請求項１２に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項１４】
ＣＢＭがチオールを含み、Ｌ１がマレイミド部分を介してチオール基に結合したポリ（エチレングリコール）であり、Ｌ１が式で表され、
【化２】
2021527042.tif 000094
式中、ｐは、１〜１００、好ましくは６〜５０、さらに好ましくは６〜１２の整数を表す、請求項１２に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項１５】
ＣＢＭがチオールを含み、Ｌ１がマレイミド部分を介してチオール基に結合した炭化水素部分であり、Ｌ１が式で表され、
【化３】
2021527042.tif 000095
式中、ｐは１〜２０、好ましくは１〜４の整数を表す、請求項１２に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項１６】
前記基質認識配列がプロテアーゼ、好ましくはセリンプロテアーゼ、金属プロテアーゼまたはシステインプロテアーゼによって切断される、先行請求項のいずれかに記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項１７】
前記プロテアーゼが、患者の前記組織の前記健常状態よりも少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、またはさらに１００倍高いレベルで患者の前記組織の前記病態において細胞外に存在する、請求項１６に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項１８】
前記プロテアーゼが、患者の他の組織よりも少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、またはさらに１００倍高いレベルで前記患者の前記組織の前記病態にて細胞外に存在する、請求項１６に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項１９】
前記プロテアーゼが、膜結合型マトリックスメタロプロテイナーゼ（例えば、ＭＭＰ１４〜１７及びＭＭＰ２４〜２５）及び分泌型マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ１〜１３及びＭＭＰ１８〜２３及びＭＭＰ２６〜２８）から選択される、好ましくはＭＭＰ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ４、ＭＭＰ９、ＭＭＰ１１、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ１４、ＭＭＰ１７またはＭＭＰ１９、さらに好ましくはＭＭＰ２、ＭＭＰ９またはＭＭＰ１４であるマトリックスメタロプロテイナーゼである、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項２０】
前記プロテアーゼがＡディスインテグリン及びメタロプロテイナーゼ（ＡＤＡＭ）、またはトロンボスポンジンモチーフを伴ったＡディスインテグリンもしくはメタロプロテイナーゼ（ＡＤＡＭＴＳ）である、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項２１】
前記プロテアーゼが、レグマイン、マトリプターゼ（ＭＴ−ＳＰ１）、好中球エラスターゼ、ＴＭＰＲＳＳ、トロンビン、ｕ型プラスミノーゲンアクチベーター（ｕＰＡ、ウロキナーゼとも呼ばれる）、ＰＳＭＡまたはＣＤ１０（ＣＡＬＬＡ）である、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項２２】
前記プロテアーゼが、ポストプロリン切断プロテアーゼ、例えば、線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰα）である、請求項１〜１８のいずれかに記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項２３】
基質認識配列が、線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰα）によって切断され、且つ以下によって表され、
【化４】
2021527042.tif 000096
式中、
Ｒ２は、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキルを表し、好ましくはＨであり；
Ｒ３は、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキルを表し、好ましくはメチル、エチル、プロピル、またはイソプロピルであり、さらに好ましくはメチルであり；
Ｒ４は存在しない、または（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＯＨ、−ＮＨ２、またはハロゲンを表し；
ＸはＯまたはＳであり；且つ
−ＮＨ−は、Ｌ２が自壊型リンカーである場合Ｌ２の一部である、またはＬ２が結合である場合ＤＭの一部であるアミンを表す、請求項１２〜１５のいずれか１項に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項２４】
Ｌ２が、−ＮＨ−（ＣＨ２）４−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＨ−（ＣＨ２）３−Ｃ（＝Ｏ）−、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢＣ）及び２，４−ビス（ヒドロキシメチル）アニリンから成る群から選択される自壊型リンカーである、請求項１２〜１５または２３のいずれか１項に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項２５】
前記薬物部分の前記薬理学的効果が、細胞透過性である前記遊離薬物部分に依存するのに対して、前記結合剤・薬物コンジュゲートの一部である前記薬物部分は実質的に細胞不透過性である、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項２６】
前記薬物部分の前記薬理学的効果が、Ｌ１への共有結合によって実質的に弱められる、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項２７】
前記薬物部分が免疫調節剤である、請求項１〜２６に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項２８】
前記薬物部分が免疫活性化剤である、請求項２７に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項２９】
前記遊離薬物部分が自然免疫経路を誘導する、請求項２７に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項３０】
前記免疫調節剤が、ＤＰＰ８及びＤＰＰ９の酵素活性を阻害し、且つマクロファージのピロトーシスを誘導するイムノＤＡＳＨ阻害剤である、請求項２７、２８、または２９に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項３１】
前記免疫活性化剤がＳＴＩＮＧアゴニストである、請求項２７、２８、または２９に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項３２】
前記免疫活性化剤がＲＩＧ−１アゴニストである、請求項２７、２８、または２９に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項３３】
前記免疫活性化剤が、ＴＬＲ１／２アゴニスト、ＴＬＲ２アゴニスト、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、ＴＬＲ５アゴニスト、ＴＬＲ６／２アゴニスト、ＴＬＲ７アゴニスト、ＴＬＲ７／８アゴニスト、ＴＬＲ７／９アゴニスト、ＴＬＲ８アゴニスト、ＴＬＲ９アゴニスト、及びＴＬＲ１１アゴニストから成る群から選択される、好ましくはＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ７アゴニスト、ＴＬＲ７／８アゴニスト、及びＴＬＲ９アゴニストから成る群から選択されるようなトール様受容体（ＴＬＲ）アゴニストである、請求項２７、２８、または２９に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項３４】
前記薬物部分が癌関連線維芽細胞（ＣＡＦ）に対して細胞傷害性である、請求項１〜２６に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項３５】
前記薬物部分が腫瘍関連マクロファージをＭ１マクロファージに向けて極性化する、またはＭ２マクロファージの免疫抑制活性を阻害する、請求項１〜２６に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項３６】
前記薬物部分がＴ細胞プライミング及び／または樹状細胞の輸送を加速する、請求項１〜２６に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項３７】
前記薬物部分が、免疫抑制機能またはリンパ節及び／または腫瘍微小環境への移動を遮断することにより、Ｔｒｅｇ細胞を阻害するまたは枯渇させる、請求項１〜２６に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項３８】
前記結合剤・薬物コンジュゲートの治療指数が、全身性に与えられた場合の前記遊離薬物部分の前記治療指数よりも少なくとも５倍大きい、さらに好ましくは少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、７５、またはさらに１００倍大きい、請求項１〜２６に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項３９】
前記免疫調節剤が、５０００ａｍｕ未満、好ましくは２５００ａｍｕ未満の分子量を有する低分子阻害剤である、先行請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項４０】
腫瘍内の細胞上の細胞表面タンパク質に結合する１以上のアフィマー配列を含むポリペプチドを含み、且つそれに付加された１以上の薬物コンジュゲート部分を有する結合剤・薬物コンジュゲートであって、前記薬物コンジュゲート部分は、式で表され、
【化５】
2021527042.tif 000097
式中、
Ｌ１はスペーサーまたは結合を表し；
ＳＲＳは、腫瘍の細胞外空間で発現される細胞外プロテアーゼの基質認識配列を表し；
Ｌ２は自壊牲のリンカーまたは結合を表し；
ＤＭは薬物部分を表し；
ｍは１〜６の、好ましくは１、２、または３の整数を表し；且つ
ｎは１〜５００、さらに好ましくは１〜１００、１〜１０、または１〜５の整数を表す、前記結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項４１】
前記アフィマー配列がＰＤ−Ｌ１結合部分である、請求項４０に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項４２】
前記ＰＤ−Ｌ１結合部分が、１×１０−６Ｍ以下のＫｄでＰＤ−Ｌ１に結合し、且つ、それが結合するＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１との相互作用を阻害するアフィマーポリペプチド配列である、請求項４１に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項４３】
前記ＰＤ−Ｌ１結合アフィマーポリペプチドが一般式（Ｉ）で  表されるアミノ酸配列を有し、
ＦＲ１−（Ｘａａ）ｎ−ＦＲ２−（Ｘａａ）ｍ−ＦＲ３  （Ｉ）
式中、
ＦＲ１は、ＭＩＰＧＧＬＳＥＡＫ  ＰＡＴＰＥＩＱＥＩＶ  ＤＫＶＫＰＱＬＥＥＫ  ＴＮＥＴＹＧＫＬＥＡ  ＶＱＹＫＴＱＶＬＡ（配列番号１）によって表されるポリペプチド配列、またはそれに対して少なくとも７０％の相同性を有するポリペプチド配列であり；
ＦＲ２は、ＧＴＮＹＹＩＫＶＲＡ  ＧＤＮＫＹＭＨＬＫＶ  ＦＫＳＬ（配列番号２）によって表されるポリペプチド配列またはそれに対して少なくとも７０％の相同性を有するポリペプチド配列であり；
ＦＲ３は、ＥＤＬＶＬＴＧＹＱＶ  ＤＫＮＫＤＤＥＬＴＧ  Ｆ（配列番号３）によって表されるポリペプチド配列またはそれに対して少なくとも７０％の相同性を有するポリペプチド配列であり；且つ、
Ｘａａは出現ごとに個別にアミノ酸残基であり；且つ、
ｎ及びｍはそれぞれ独立して３〜２０の整数である、請求項４１または４２に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項４４】
前記ＰＤ−Ｌ１結合アフィマーポリペプチドが一般式で表されるアミノ酸配列を有し、
ＭＩＰ−Ｘａａ１−ＧＬＳＥＡＫＰＡＴＰＥＩＱＥＩＶＤＫＶＫＰＱＬＥＥＫＴＮＥＴＹＧＫＬＥＡＶＱＹＫＴＱＶＬＡ−（Ｘａａ）ｎ−Ｘａａ２−ＴＮＹＹＩＫＶＲＡＧＤＮＫＹＭＨＬＫＶＦ−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−（Ｘａａ）ｍ−Ｘａａ６−Ｄ−Ｘａａ７−ＶＬＴＧＹＱＶＤＫＮＫＤＤＥＬＴＧＦ（配列番号４）
式中、
Ｘａａは出現ごとに個別にアミノ酸残基であり；
ｎ及びｍはそれぞれ独立して３〜２０の整数であり；
Ｘａａ１はＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり；
Ｘａａ２はＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＳｅｒまたはＴｈｒであり；
Ｘａａ３はＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、またはＴｈｒであり；
Ｘａａ４はＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｓｅｒ、またはＴｈｒであり；
Ｘａａ５はＡｌａ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、ＧｌｙまたはＰｒｏであり；
Ｘａａ６はＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり；且つ、
Ｘａａ７はＡｌａ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ａｒｇ、またはＬｙｓである、請求項４１または４２に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項４５】
前記ＰＤ−Ｌ１結合アフィマーポリペプチドが一般式で表されるアミノ酸配列を有し、
ＭＩＰＲＧＬＳＥＡＫＰＡＴＰＥＩＱＥＩＶＤＫＶＫＰＱＬＥＥＫＴＮＥＴＹＧＫＬＥＡＶＱＹＫＴＱＶＬＡ−（Ｘａａ）ｎ−ＳＴＮＹＹＩＫＶＲＡＧＤＮＫＹＭＨＬＫＶＦＮＧＰ−（Ｘａａ）ｍ−ＡＤＲＶＬＴＧＹＱＶＤＫＮＫＤＤＥＬＴＧＦ（配列番号５）
式中、
Ｘａａは出現ごとに個別にアミノ酸残基であり；且つ、
ｎ及びｍはそれぞれ独立して３〜２０の整数である、請求項４１または４２に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項４６】
前記ＰＤ−Ｌ１結合アフィマーポリペプチドが、配列番号７６〜８４から選択されるアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも７０％の相同性を有するアミノ酸配列を有する、先行請求項のいずれかに記載のタンパク質。
【請求項４７】
少なくとも薬物コンジュゲート部分が、前記アフィマー配列に導入されたシステインのチオール側鎖を介して前記アフィマー配列に、好ましくはＦＲ１、ＦＲ２及び／またはＦＲ３に対応する前記アフィマー配列領域の一部に付加される、請求項４１〜４６のいずれか１項に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項４８】
ＰＤ−Ｌ１への前記アフィマーの結合が（ａ）混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイにおいてＴ細胞増殖を増加させる、（ｂ）ＭＬＲアッセイにてインターフェロン−γ産生を増加させる、及び／または（ｃ）ＭＬＲアッセイにてインターロイキン−２（ＩＬ−２）分泌を増加させる、請求項４１〜４７のいずれか１項に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項４９】
前記アフィマーが、Ｆｃドメインまたはその一部、アルブミンタンパク質またはその一部、アルブミン結合ポリペプチド部分、トランスフェリンまたはその一部、トランスフェリン結合ポリペプチド部分、フィブロネクチンまたはその一部、またはフィブロネクチン結合ポリペプチド部分から成る群から選択される半減期延長ポリペプチド部分を含む融合タンパク質の一部である、請求項４１〜４８のいずれか１項に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項５０】
Ｌ１が６−マレイミドカプロイル、マレイミドプロパノイル及びマレイミドメチルシクロヘキサン−１−カルボキシレートのような炭化水素（直鎖または環状）である、またはＬ１がＮ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート、Ｎ−スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１カルボキシレート、Ｎ−スクシンイミジル（４−ヨード−アセチル）アミノベンゾエートである、またはＬ１が、ポリ（エチレングリコール）のようなポリエーテルである、請求項４１〜４９のいずれか１項に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項５１】
前記アフィマーが遊離チオールを持つシステインを含み、Ｌ１がマレイミド部分を介して前記チオール基に結合したポリ（エチレングリコール）であり、Ｌ１が式で表され、
【化６】
2021527042.tif 000098
式中、ｐは１〜１００、好ましくは６〜５０、さらに好ましくは６〜１２の整数を表す、請求項５０に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項５２】
前記アフィマーが遊離チオールを持つシステインを含み、Ｌ１がマレイミド部分を介して前記チオール基に結合した炭化水素部分であり、Ｌ１が式で表され、
【化７】
2021527042.tif 000099
式中、ｐは１〜２０、好ましくは１〜４の整数を表す、請求項５０に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項５３】
前記基質認識配列がセリンプロテアーゼ、金属プロテアーゼまたはシステインプロテアーゼによって切断される、請求項４１〜５２のいずれかに記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項５４】
前記プロテアーゼが、患者の非腫瘍組織よりも少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、またはさらに１００倍高いレベルで前記患者の前記腫瘍組織にて細胞外に存在する、請求項５３に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項５５】
前記プロテアーゼが、患者の他の組織よりも少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、またはさらに１００倍高いレベルで前記患者の前記腫瘍組織にて細胞外に存在する、請求項５３に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項５６】
プロテアーゼが、膜結合型マトリックスメタロプロテイナーゼ（例えば、ＭＭＰ１４〜１７及びＭＭＰ２４〜２５）及び分泌型マトリックスメタロプロテイナーゼ（例えば、ＭＭＰ１〜１３及びＭＭＰ１８〜２３及びＭＭＰ２６〜２８）から選択される、好ましくはＭＭＰ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ４、ＭＭＰ９、ＭＭＰ１１、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ１４、ＭＭＰ１７またはＭＭＰ１９、さらに好ましくはＭＭＰ２、ＭＭＰ９またはＭＭＰ１４である、マトリックスメタロプロテイナーゼである、請求項４１〜５５のいずれか１項に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項５７】
プロテアーゼがＡディスインテグリン及びメタロプロテイナーゼ（ＡＤＡＭ）、またはトロンボスポンジンモチーフを伴うＡディスインテグリンまたはメタロプロテイナーゼ（ＡＤＡＭＴＳ）である、請求項４１〜５５のいずれか１項に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項５８】
プロテアーゼが、レグマイン、マトリプターゼ（ＭＴ−ＳＰ１）、好中球エラスターゼ、ＴＭＰＲＳＳ、トロンビン、ｕ型プラスミノーゲンアクチベーター（ｕＰＡ、ウロキナーゼとも呼ばれる）、ＰＳＭＡまたはＣＤ１０（ＣＡＬＬＡ）である、請求項４１〜５５のいずれか１項に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項５９】
プロテアーゼが、ポストプロリン切断プロテアーゼ、例えば、線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰα）である、請求項４１〜５５のいずれか１項に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項６０】
基質認識配列が線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰα）によって切断され、且つ以下によって表され、
【化８】
2021527042.tif 000100
式中、
Ｒ２は、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキルを表し、好ましくはＨであり；
Ｒ３は、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキルを表し、好ましくはメチル、エチル、プロピル、またはイソプロピルであり、さらに好ましくはメチルであり；
Ｒ４は存在しない、または（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＯＨ、−ＮＨ２、もしくはハロゲンを表し；
ＸはＯまたはＳであり；且つ
−ＮＨ−は、Ｌ２が自壊型リンカーである場合Ｌ２の一部であり、またはＬ２が結合である場合ＤＭの一部であるアミンを表す、請求項４１〜５５のいずれか１項に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項６１】
Ｌ２が、−ＮＨ−（ＣＨ２）４−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＨ−（ＣＨ２）３−Ｃ（＝Ｏ）−、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢＣ）及び２，４−ビス（ヒドロキシメチル）アニリンから成る群から選択される自壊型リンカーである、請求項４１〜５５または６０のいずれか１項に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項６２】
前記薬物部分の前記薬理学的効果が細胞透過性である遊離薬物部分に依存するのに対して、結合剤・薬物コンジュゲートの一部である場合、前記薬物部分は実質的に細胞不透過性である、請求項４１〜６１のいずれか１項に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項６３】
前記薬物部分の前記薬理学的効果が、Ｌ１への共有結合によって実質的に弱められる、請求項４１〜６１のいずれか１項に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項６４】
前記薬物部分が免疫調節剤である、請求項４１〜６１に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項６５】
前記薬物部分が免疫活性化剤である、請求項６４に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項６６】
前記遊離薬物部分が自然免疫経路を誘導する、請求項６４に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項６７】
前記免疫調節剤が、ＤＰＰ８及びＤＰＰ９の酵素活性を阻害し、且つマクロファージのピロトーシスを誘導するイムノＤＡＳＨ阻害剤である、請求項６４〜６６のいずれか１項に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項６８】
前記免疫調節剤がＳＴＩＮＧアゴニストである、請求項６４〜６６のいずれか１項に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項６９】
前記免疫調節剤がＲＩＧ−１アゴニストである、請求項６４〜６６のいずれか１項に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項７０】
前記免疫調節剤が、ＴＬＲ１／２アゴニスト、ＴＬＲ２アゴニスト、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、ＴＬＲ５アゴニスト、ＴＬＲ６／２アゴニスト、ＴＬＲ７アゴニスト、ＴＬＲ７／８アゴニスト、ＴＬＲ７／９アゴニスト、ＴＬＲ８アゴニスト、ＴＬＲ９アゴニスト、及びＴＬＲ１１アゴニストから成る群から選択される、好ましくはＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ７アゴニスト、ＴＬＲ７／８アゴニスト、及びＴＬＲ９アゴニストから成る群から選択されるようなトール様受容体（ＴＬＲ）アゴニストである、請求項６４〜６６のいずれか１項に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項７１】
前記薬物部分が癌関連線維芽細胞（ＣＡＦ）に対して細胞傷害性である、請求項４１〜６１に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項７２】
前記薬物部分が腫瘍関連マクロファージをＭ１マクロファージに向かって極性化する、またはＭ２マクロファージの免疫抑制活性を阻害する、請求項４１〜６１に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項７３】
前記薬物部分がＴ細胞プライミング及び／または樹状細胞の輸送を加速する、請求項４１〜６１に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項７４】
前記薬物部分が、免疫抑制機能またはリンパ節及び／または腫瘍微小環境への移動を遮断することによってＴｒｅｇ細胞を阻害するまたは枯渇させる、請求項４１〜６１に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項７５】
前記結合剤・薬物コンジュゲートの治療指数が、全身性に与えられた場合の遊離薬物部分の治療指数よりも少なくとも５倍大きい、さらに好ましくは少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、７５、またはさらに１００倍大きい、請求項４１〜６１に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項７６】
前記免疫調節剤が５０００ａｍｕ未満、好ましくは２５００ａｍｕ未満の分子量を有する低分子阻害剤である、請求項４１〜７５に記載の結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項７７】
ＰＤ−Ｌ１阻害剤／ＰＤ−Ｌ１結合ポリペプチドと自然免疫応答の無菌誘導物質であるそれにコンジュゲートした薬物部分とを含む自然免疫刺激因子（例えば、イムノＤＡＳＨ阻害剤、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＴＲＬ７／８アゴニストまたはＲＩＧ−１アゴニスト）の組み合わせであって、前記ＰＤ−Ｌ１結合ポリペプチドが患者の他の組織と比べて腫瘍内での前記ＰＤ−Ｌ１阻害剤／自然免疫刺激因子の蓄積を引き起こし、且つ前記薬物部分が患者の他の組織と比べて腫瘍微小環境内にて前記ＰＤ−Ｌ１結合ポリペプチドから選択的に遊離される、前記ＰＤ−Ｌ１阻害剤／自然免疫刺激因子の組み合わせ。
【請求項７８】
ヒト患者にて治療用途に好適な医薬製剤であって、（ｉ）請求項１〜７６のいずれかに記載の結合剤・薬物コンジュゲートまたは請求項７７に記載のＰＤ−Ｌ１阻害剤／自然免疫刺激因子の組み合わせと、（ｉｉ）１以上の薬学的に許容される賦形剤、緩衝液、塩等とを含む、前記医薬製剤。
【請求項７９】
がんを患っている患者の治療の一部としての請求項７８に記載の医薬製剤の使用。
【請求項８０】
前記治療が、前記患者にＰＧＥ２阻害剤を投与することを含む、請求項７９に記載の医薬製剤の使用。
【請求項８１】
ＡＭＬ細胞を殺傷するための結合剤・薬物コンジュゲートであって、（ｉ）ＡＭＬ細胞上で選択的に発現される細胞表面特徴（例えば、ＣＤ３３またはＣＤ１２３）に結合する細胞結合部分（この細胞表面特徴は、前記結合剤・薬物コンジュゲートが結合するとＡＭＬ細胞に内部移行する）と；（ｉｉ）遊離のイムノＤＡＳＨ阻害剤として前記コンジュゲートから遊離されると、ＡＭＬ細胞に対して毒性であるイムノＤＡＳＨ阻害剤部分と；（ｉｉｉ）前記細胞結合部分を前記Ｉ−ＤＡＳＨ阻害剤部分に共有結合するリンカー部分とを含み；前記リンカー部分が、前記ＡＭＬ細胞の細胞内に存在する酵素（例えば、カテプシン）によって切断可能な基質認識配列を含み、前記細胞表面特徴に結合する際の前記ＡＭＬ細胞による前記結合剤・薬物コンジュゲートの内部移行は、細胞内酵素のへの前記リンカー部分の曝露及び前記リンカー部分の切断及び前記ＡＭＬ細胞における遊離イムノＤＡＳＨＧ部分の細胞内遊離を生じる、前記結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項８２】
ＡＭＬ細胞結合部分（例えば、ＣＤ３３結合剤またはＣＤ１２３結合剤）を含み、それに付加された１以上の薬物コンジュゲートを有する結合剤・薬物コンジュゲートであって、前記薬物コンジュゲート部分は、式で表され、
【化９】
2021527042.tif 000101
式中、
Ｌ１はスペーサーまたは結合を表し；
ＳＲＳは、前記ＡＭＬ細胞で発現される細胞内プロテアーゼの基質認識配列を表し；
Ｌ２は自壊牲リンカーまたは結合を表し；
ＤＭはイムノＤＡＳＨ阻害剤部分を表し；
ｍは１〜６の、好ましくは１、２、または３の整数を表し；且つ
ｎは１〜５００、さらに好ましくは１〜１００、１〜１０、または１〜５の整数を表す、前記結合剤・薬物コンジュゲート。
【請求項８３】
ＡＭＬの治療の一部としてヒト患者における治療用途に好適な医薬製剤であって、（ｉ）請求項８０または１８のいずれかに記載の結合剤・薬物コンジュゲートと、（ｉｉ）１以上の薬学的に許容される賦形剤、緩衝液、塩、等とを含む、前記医薬製剤。
【請求項８４】
ＡＭＬを患っている患者の治療の一部としての請求項８２に記載の医薬製剤の使用。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【０００１】
本出願は、２０１８年６月４日に出願された米国仮特許出願第６２／６８０，３００号に対する優先権の利益を主張する。
【背景技術】
【０００２】
ＰＤ−１・ＰＤ−Ｌ１相互作用はＴ細胞機能障害を引き起こすことが知られており、それは抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１抗体によって阻止することができる。しかしながら、ＰＤ−１・ＰＤ−Ｌ１軸の機能が複雑な免疫調節ネットワークの影響を受けることも研究によって示されている。ホジキンリンパ腫（高いＰＤ−Ｌ１／Ｌ２発現を有する）及び黒色腫（高い腫瘍遺伝子変異量を有する）を除くほとんどの進行がんでは、抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１単剤療法による客観的奏効率は約２０％にすぎず、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害療法の間に患者の小さなサブセットで免疫関連の毒性及び急速な進行が発生し得る。患者の最大８０％で有効性が欠如していることが必ずしもＰＤ−１及びＰＤ−Ｌ１の負の発現と関連しているわけではなかったということは、免疫抑制及び抗体の作用機序におけるＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１の役割がいまだよく定義されていないままであることを示唆している。同様に、ＣＴＬＡ−４及びその他のチェックポイント経路でも同様の限界が観察されている。したがって、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４及び他のチェックポイントネットワークの範囲内またはその外側での重要な相乗的免疫調節メカニズムは、免疫チェックポイント阻害療法の奏功率を高め、場合によっては毒性を減らすように標的化される必要がある。
【０００３】
この点で、ＳＴＩＮＧ、ＲＩＧ−Ｉ及びＴＬＲのアゴニストのような先天性免疫応答を誘導する薬物は、免疫腫瘍チェックポイント阻害剤の有効性を高める可能性があると考えられている。しかしながら、用量制限毒性は全身の自然免疫活性化の産物であり、最大耐量は多くの患者で治療用量を達成しないので、これらの種類の薬剤は全身使用には毒性が高すぎることが多い。
【０００４】
本発明は、とりわけ、いずれかの成分、特に自然免疫誘導因子の全身毒性の問題に対処するが、腫瘍微小環境のプロテアーゼによって遊離されるまで薬理学的に不活性な形で保持する形式で、これらの２つのクラスの治療剤−適応免疫応答を促進または維持する１以上のチェックポイント阻害剤または共刺激アゴニストとの強力な免疫応答を誘発する、腫瘍にて限局性炎症事象を引き起こす自然免疫の誘導因子の同時送達のための新しいシステムに基づく。もっと簡単に言えば、一方の薬剤は抗腫瘍免疫反応を誘導し、他方の薬剤は腫瘍に到達したときにそれが確実に機能するようにする。ＴＭＥ酵素の放出と併せたチェックポイント阻害剤または共刺激アゴニストは、腫瘍内の薬物を配置し、個々の成分薬物と比較して治療指数を改善するのに役立つ。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の一態様は以下を含む結合剤・薬物コンジュゲートに関する：
（ｉ）細胞表面特徴が結合剤・薬物コンジュゲートによって結合されると緩慢な内部移行を受ける、組織の病態における標的細胞上の細胞表面特徴に結合する細胞結合部分；
（ｉｉ）薬物部分は遊離薬物部分と関連する結合剤・薬物コンジュゲートの一部が結合剤・薬物コンジュゲートから遊離されると少なくとも２倍減衰する薬理学的効果についてのＥＣ５０を有する、標的細胞に近接するバイスタンダー細胞に対して薬理学的効果を有する薬物部分；
（ｉｉｉ）リンカー部分が疾患組織にて細胞外に存在する酵素によって切断可能な基質認識配列を含み、酵素の存在下でリンカー部分は切断され、遊離薬物部分を遊離することができる、ポリペプチド結合剤部分を薬物部分に共有結合するリンカー部分。
【０００６】
特定の実施形態では、薬物部分は、遊離薬物部分に関連する結合剤・薬物コンジュゲートの一部が結合剤・薬物コンジュゲートから遊離されると、少なくとも５倍減衰し、さらに好ましくは、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、７５、１００、２５０、５００、またはさらに１０００倍減衰する薬理学的効果についてのＥＣ５０を有する。
【０００７】
特定の実施形態では、疾患組織は腫瘍である。ある特定の実施形態では、標的細胞は腫瘍細胞である。特定の実施形態では、標的細胞はマクロファージ、単球由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、樹状細胞、線維芽細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、肥満細胞、顆粒球、好酸球及びＢ細胞である。
【０００８】
特定の実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートは標的細胞上の表面特徴と結合すると、少なくとも６時間、さらに好ましくは少なくとも１０、１２、１４、１６、１８、２０、２４、３６、４８、６０、７５、またはさらに１００時間の内部移行半減期を有する。
【０００９】
特定の実施形態では、細胞表面特徴は、組織の健常状態由来の正常細胞と比較して、疾患組織にて標的細胞によって選択的に発現されるまたは上方調節されるタンパク質である。例えば、タンパク質は、組織由来の正常細胞よりも２倍高いレベルで、一層さらに好ましくは組織由来の正常細胞よりも少なくとも５、１０、２０、３０、４０、５０、７５、１００、２５０、５００、またはさらに１０００倍高いレベルで標的細胞の表面にて検出可能である。
【００１０】
特定の実施形態では、細胞表面特徴は、他の組織由来の細胞、特に重要な臓器由来の細胞と比べて疾患組織内の標的細胞によって選択的に発現されるまたは上方調節されるタンパク質である。例えば、タンパク質は、組織由来の細胞よりも２倍高いレベルで、一層さらに好ましくは他の組織由来の細胞よりも少なくとも５、１０、２０、３０、４０、５０、７５、１００、２５０、５００、またはさらに１０００倍高いレベルで標的細胞の表面にて検出可能である。
【００１１】
特定の実施形態では、細胞表面特徴はチェックポイントタンパク質であり、結合剤部分はそのチェックポイントのアンタゴニストである。チェックポイントタンパク質の例には、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＬＡＧ−３、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＴＩＭ−３、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＧＡＬ９、ＣＤ１６０、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＮＬ２、ＴＩＧＩＴ、ＰＶＲ、ＢＴＮ１Ａ１、ＢＴＮ２Ａ２、ＢＴＮ３Ａ２、ＣＳＦ−１Ｒ、さらに好ましくはＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＧＩＴ、ＰＶＲ、ＰＤ−Ｌ１及びＣＤ１６０から成る群から選択されるものが挙げられる。
【００１２】
特定の実施形態では、細胞表面特徴は共刺激受容体であり、結合剤部分は受容体の共刺激アゴニストである。例には、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−Ｌ、ＧＩＴＲ、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ４０−Ｌ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＬＩＧＨＴ、及びＣＤ２７、さらに好ましくは４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０及びＩＣＯＳから成る群から選択される共刺激受容体またはリガンドである表面特徴が挙げられる。
【００１３】
特定の実施形態では、細胞結合部分は、例えば、ヒト化抗体、ヒト抗体、もしくはキメラ抗体のような抗体である、またはＦａｂ、Ｆ（ａｂ）２、Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆｄ、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、ｄＡｂもしくはｓｄＡｂ（もしくはナノボディ）、ＣＤＲ、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ジ−ｓｃＦｖ、ビ−ｓｃＦｖ、ｔａｓｃＦｖ（タンデムｓｃＦｖ）、ＡＶＩＢＯＤＹ（例、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ）、Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、小型モジュラー免疫医薬品（ＳＭＩＰ）、Ｇｅｎｍａｂ／ユニボディもしくはデュオボディ、Ｖ−ＮＡＲドメイン、ＩｇＮＡＲ、ミニボディ、ＩｇＧＡＣＨ２、ＤＶＤ−Ｉｇ、プロボディ、イントラボディ、もしくは多重特異性抗体のような細胞表面特徴に結合するその抗原結合部分を含む。
【００１４】
他の実施形態では、結合剤部分は、アフィボディ、アフィマー、アフィリン、アンチカリン、アトリマー、アビマー、ＤＡＲＰｉｎｓ、ＦＮ３足場（例えば、アドネクチン及びセンチリン）、ファイノマー、クニッツドメイン、ナノフィチン、プロネクチン、ＯＢｏｄｙｓ、トリボディ、アビマー、二環式ペプチド、及びＣｙｓ−ｋｎｏｔｓから成る群から選択されるような非抗体足場である。
【００１５】
特定の実施形態では、リンカー部分は、疾患組織に存在する（その少なくとも１つは細胞外に存在する）同じまたは異なる酵素によって切断可能な２、３またはさらに４の基質認識配列を含み、その際、種々の酵素の同時存在下または一連の存在下では、遊離薬物部分を遊離するためにリンカー部分を完全に切断することができる。例えば、２つの異なる基質認識配列を持つリンカーはＭＭＰ及びＦＡＰαの双方による切断を必要とするように作り出すことができる。好ましい実施形態では、２つの酵素のうちの１つによる切断は他の酵素による切断が最初に起こっていることが必要である−すなわち、インタクトな場合ＦＡＰαにとって貧基質であり、且つＭＭＰ切断が発生した後、ＦＡＰαによる切断について基質として改善されるリンカーを作り出すことによってＭＭＰ切断はＦＡＰα切断の前に必要とされ得る。
【００１６】
さらに説明すると、結合剤・薬物コンジュゲートは、式の１つで表すことができ、
【化１】
2021527042.tif 000002
式中、
ＣＢＭは、出現ごとに同一でもよいし、または異なっていてもよい細胞結合部分を表し；
Ｌ１はスペーサーまたは結合を表し；
ＳＲＳは基質認識配列を表し；
Ｌ２は自壊牲のリンカーまたは結合を表し；
ＤＭは薬物部分を表し；
ｍは１〜６の整数を表し；且つ
ｎは１〜５００、さらに好ましくは１〜１００、１〜１０、または１〜５の整数を表す。
【００１７】
特定の実施形態では、Ｌ１は、６−マレイミドカプロイル、マレイミドプロパノイル及びマレイミドメチルシクロヘキサン−１−カルボキシレートのような炭化水素（直鎖または環状）である、またはＬ１は、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート、Ｎ−スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１カルボキシレート、Ｎ−スクシンイミジル（４−ヨード−アセチル）アミノベンゾエートである。
【００１８】
特定の実施形態では、Ｌ１は、ポリ（エチレングリコール）のようなポリエーテルまたは他の親水性リンカーである。例えば、ＣＢＭにチオール（例えば、システイン残基）が含まれている場合、Ｌ１は、次の式で表されるようなマレイミド部分を介してチオール基に結合したポリ（エチレングリコール）であることができ、
【化２】
2021527042.tif 000003
式中、ｐは１〜１００、好ましくは６〜５０、さらに好ましくは６〜１２の整数を表す。
【００１９】
他の実施形態では、ＣＢＭがチオールを含み、Ｌ１がマレイミド部分を介してチオール基に結合された炭化水素部分である場合、Ｌ１は式で表すことができ、
【化３】
2021527042.tif 000004
式中、ｐは１〜２０、好ましくは１〜４の整数を表す。
【００２０】
本発明の結合剤・薬物コンジュゲートの特定の実施形態では、基質認識配列は、細胞外プロテアーゼ、好ましくは、標的組織の細胞外ドメインに位置するプロテアーゼ活性を持つ−すなわち、細胞表面プロテアーゼまたは分泌された／遊離されたプロテアーゼとしてのセリンプロテアーゼ、メタロプロテアーゼまたはシステインプロテアーゼによって切断される。
【００２１】
特定の実施形態では、プロテアーゼは、患者の組織の健常状態にて細胞外に存在するよりも少なくとも５、１０、２０、３０、４０、５０、７５、１００、２５０、５００、またはさらに１０００倍以上高いレベルで患者の組織の病態にて細胞外に存在する。
【００２２】
特定の実施形態では、プロテアーゼは、患者の他の組織よりも少なくとも５、１０、２０、３０、４０、５０、７５、１００、２５０、５００またはさらに１０００倍高いレベルで患者の組織の病態にて細胞外に存在する。
【００２３】
特定の実施形態では、プロテアーゼはマトリックスメタロプロテイナーゼである。マトリックスメタロプロテイナーゼは、膜結合型マトリックスメタロプロテイナーゼ（例えば、ＭＭＰ１４〜１７やＭＭＰ２４〜２５）または分泌型マトリックスメタロプロテイナーゼ（例えば、ＭＭＰ１〜１３及びＭＭＰ１８〜２３及びＭＭＰ２６〜２８など）であることができる。特定の実施形態では、メタロプロテイナーゼは、ＭＭＰ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ４、ＭＭＰ９、ＭＭＰ１１、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ１４、ＭＭＰ１７またはＭＭＰ１９であり、さらに好ましくは、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９またはＭＭＰ１４である。
【００２４】
特定の実施形態では、プロテアーゼは、Ａディスインテグリン及びメタロプロテイナーゼ（ＡＤＡＭ）、またはトロンボスポンジンモチーフを持つＡディスインテグリンまたはメタロプロテイナーゼ（ＡＤＡＭＴＳ）である。
【００２５】
特定の実施形態では、プロテアーゼは、レグマイン、マトリプターゼ（ＭＴ−ＳＰ１）、好中球エラスターゼ、ＴＭＰＲＳＳ、トロンビン、ｕ型プラスミノーゲンアクチベーター（ｕＰＡ、ウロキナーゼとも呼ばれる）、ＰＳＭＡまたはＣＤ１０（ＣＡＬＬＡ）である。
【００２６】
特定の実施形態では、プロテアーゼは、例えば、線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰα）のようなポストプロリン切断プロテアーゼである。
【００２７】
主題の結合剤・薬物コンジュゲートの特定の実施形態では、基質認識配列は線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰα）によって切断され、以下の式で表され、
【化４】
2021527042.tif 000005
式中、
Ｒ２は、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキルを表し、好ましくはＨであり；
Ｒ３は、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキルを表し、好ましくはメチル、エチル、プロピル、またはイソプロピルであり、さらに好ましくはメチルであり；
Ｒ４は存在しない、または（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＯＨ、−ＮＨ２、もしくはハロゲンを表し；
ＸはＯまたはＳであり；且つ
−ＮＨ−は、Ｌ２は自壊型リンカーである場合Ｌ２の一部である、またはＬ２が結合である場合ＤＭの一部であるアミンを表す。
【００２８】
特定の実施形態では、Ｒ２はＨであり、Ｒ３はメチルであり、Ｒ４は存在せず、ＸはＯである。
【００２９】
特定の実施形態では、Ｌ２は、−ＮＨ−（ＣＨ２）４−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＨ−（ＣＨ２）３−Ｃ（＝Ｏ）−、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢＣ）及び２，４−ビス（ヒドロキシメチル）アニリンから成る群から選択される自壊型リンカーである。特定の実施形態では、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢＣ）がＦＡＰαのＰ’１特異性要件を満たすので、特に対象認識配列がＦＡＰαによって切断される場合、Ｌ２はｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢＣ）である。
【００３０】
特定の実施形態では、遊離薬物部分は細胞内標的と相互作用し、薬物部分の薬理学的効果は、細胞透過性である、すなわち、その細胞内標的と相互作用することができる遊離薬物部分に依存するのに対して、結合剤・薬物コンジュゲートの一部がする場合、薬物部分は実質的に細胞不透過性である。例えば、細胞内における結合剤・薬物コンジュゲートの蓄積率は、遊離薬物部分の蓄積率の５０％未満であり、さらに好ましくは遊離薬物部分の蓄積率の２５％、１０％、５％、１％未満または０．１％未満である。例えば、遊離薬物部分の薬理学的効果についてのＥＣ５０は、結合剤・薬物コンジュゲートの少なくとも２分の１（さらに強力）、さらに好ましくは結合剤・薬物コンジュゲートの少なくとも５、１０、２０、３０、４０、５０、１００、２５０、５００、またはさらに１０００分の１である。
【００３１】
特定の実施形態では、遊離薬物部分は細胞外標的と相互作用し、薬物部分の薬理学的効果はＬ１に共有結合されている場合、実質的に減衰される。例えば、遊離薬物部分の薬理学的効果についてのＥＣ５０は、結合剤・薬物コンジュゲートの少なくとも２分の１（さらに強力）、さらに好ましくは結合剤・薬物コンジュゲートの少なくとも５、１０、２０、３０、４０、５０、１００、２５０、５００、またはさらに１０００分の１である。
【００３２】
特定の実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートは、全身送達された場合、遊離薬物部分の全身送達よりも少なくとも２倍大きい、一層さらに好ましくは遊離薬物部分の全身送達よりも少なくとも５、１０、２０、３０、４０、５０、１００、２５０、５００、またはさらに１０００倍大きい治療指数を有する。
【００３３】
特定の実施形態では、遊離薬物部分は、免疫調節剤であり、それは、免疫活性化剤及び／または自然免疫経路応答の誘導因子として作用する薬物部分を含む。特定の実施形態では、遊離薬物部分はＩＦＮ−αの産生を誘導する。特定の実施形態では、遊離薬物部分は炎症誘発性サイトカインの産生を誘導する。特定の実施形態では、遊離薬物部分はＩＬ−１βの産生を誘導する。特定の実施形態では、遊離薬物部分はＩＬ−１８の産生を誘導する。
【００３４】
特定の実施形態では、遊離薬物部分はＮＫ、γδＴ、及びＣＤ８＋Ｔ細胞を含むエフェクター細胞の増殖及び生存を促進する。
【００３５】
特定の実施形態では、遊離薬物部分は、ＤＰＰ８及びＤＰＰ９の酵素活性を阻害し、試験管内及び／または生体内でマクロファージのピロトーシスを誘導するイムノＤＡＳＨ阻害剤である。
【００３６】
特定の実施形態では、遊離薬物部分は損傷に関連する分子パターンの分子である。特定の実施形態では、遊離薬物部分は病原体に関連する分子パターンの分子である。
【００３７】
特定の実施形態では、遊離薬物部分はＳＴＩＮＧアゴニストである。
【００３８】
特定の実施形態では、遊離薬物部分はＲＩＧ−１アゴニストである。
【００３９】
特定の実施形態では、遊離薬物部分はＴＬＲ１／２アゴニスト、ＴＬＲ２アゴニスト、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、ＴＬＲ５アゴニスト、ＴＬＲ６／２アゴニスト、ＴＬＲ７アゴニスト、ＴＬＲ７／８アゴニスト、ＴＬＲ７／９アゴニスト、ＴＬＲ８アゴニスト、ＴＬＲ９アゴニスト、及びＴＬＲ１１アゴニスト、好ましくはＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ７アゴニスト、ＴＬＲ７／８アゴニスト、及びＴＬＲ９アゴニストから成る群から選択されるようなトール様受容体（ＴＬＲ）アゴニストである。
【００４０】
特定の実施形態では、遊離薬物部分は環状ジヌクレオチドである。
【００４１】
特定の実施形態では、遊離薬物部分は、ＡＤＵ−Ｓ１００である。
【００４２】
特定の実施形態では、遊離薬物部分はＲＩＧ−Ｉアゴニストであり、ＲＩＧ−ＩアゴニストはＫＩＮ７００、ＫＩＮ１１４８、ＫＩＮ６００、ＫＩＮ５００、ＫＩＮ１００、ＫＩＮ１０１、ＫＩＮ４００、ＫＩＮ２０００、またはＳＢ−９２００である。
【００４３】
特定の実施形態では、遊離薬物部分は、Ｓ−２７６０９、ＣＬ３０７、ＵＣ−ＩＶ１５０、イミキモド、ガルジキモド、レシキモド、モトリモド、ＶＴＳ−１４６３ＧＳ−９６２０、ＧＳＫ２２４５０３５、ＴＭＸ−１０１、ＴＭＸ−２０１、ＴＭＸ−２０２、イサトリビン、ＡＺＤ８８４８、ＭＥＤＩ９１９７、３Ｍ−０５１、３Ｍ−８５２、３Ｍ−０５２、３Ｍ−８５４Ａ、Ｓ−３４２４０、ＫＵ３４Ｂ、またはＣＬ６６３から成る群から選択される。
【００４４】
特定の実施形態では、遊離薬物部分は癌関連線維芽細胞（ＣＡＦ）に対して細胞傷害性である。
【００４５】
特定の実施形態では、遊離薬物部分は、腫瘍関連マクロファージ集団をＭ１マクロファージに向かって極性化させる、及び／またはＭ２マクロファージの免疫抑制活性を阻害する。
【００４６】
特定の実施形態では、遊離薬物部分はＴ細胞プライミング及び／または樹状細胞の輸送を加速する。
【００４７】
特定の実施形態では、遊離薬物部分は、例えば、免疫抑制機能またはリンパ節への移動及び／または腫瘍微小環境を遮断することによって、Ｔｒｅｇ細胞を阻害するまたは枯渇させる。
【００４８】
特定の実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートの治療指数（ＴＩ）は、全身的に与えられた場合の遊離薬物部分の治療指数よりも少なくとも５倍大きい、さらに好ましくは少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、７５倍、またはさらに１００倍大きい。
【００４９】
特定の実施形態では、遊離薬物部分は、低分子阻害剤、すなわち、５０００ａｍｕ未満、好ましくは２５００ａｍｕ未満、一層さらに好ましくは１５００ａｍｕ未満の分子量を有する低分子阻害剤である。
【００５０】
本発明の別の態様は、腫瘍内おける細胞上の細胞表面タンパク質に結合し、且つそれに付加された１以上の薬物コンジュゲート部分を有する、１以上の小型ドメイン結合ポリペプチド配列（例えば、抗体断片または非抗体足場）、好ましくは１以上のアフィマー配列を含むポリペプチドを含む結合剤・薬物コンジュゲートを提供するが、その薬物コンジュゲート部分は式で表され、
【化５】
2021527042.tif 000006
式中、
Ｌ１はスペーサーまたは結合を表し；
ＳＲＳは、腫瘍の細胞外空間で発現される細胞外プロテアーゼの基質認識配列を表し；
Ｌ２は自壊牲のリンカーまたは結合を表し；
ＤＭは薬物部分を表し；
ｍは１〜６の、好ましくは１、２、または３の整数を表し；且つ
ｎは１〜５００の、さらに好ましくは１〜１００、１〜１０または１〜５の整数を表す。
【００５１】
結合剤・薬物コンジュゲートは標的細胞の表面特徴と結合した場合、少なくとも６時間、さらに好ましくは少なくとも１０、１２、１４、１６、１８、２０、２４、３６、４８、６０、７５、またはさらに１００時間の内部移行半減期を有する。
【００５２】
特定の実施形態では、小型ドメイン結合ポリペプチド配列の少なくとも１つはＰＤ−Ｌ１結合部分である。
【００５３】
特定の実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートのポリペプチドは、１×１０−６Ｍ以下のＫｄ（及び特にポリペプチドがＰＤ−Ｌ１の結合について二価以上の位数の多価である実施形態では、さらに好ましくは１×１０−７Ｍ、１×１０−８Ｍ、１×１０−９Ｍ、１×１０−１０Ｍ、またはさらに１×１０−１１Ｍ以下のＫｄで）ＰＤ−Ｌ１に結合し、ポリペプチドが結合するＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１との相互作用を阻害する。
【００５４】
本発明の別の態様は、以下を含む多重特異性の結合剤・薬物コンジュゲートを提供する：
（ｉ）腫瘍内の２つの異なる細胞型上の２つの異なる細胞表面タンパク質に選択的に結合する２以上の異なる結合ドメインポリペプチド配列を含むポリペプチド、及び
（ｉｉ）ポリペプチドに付加された１以上の薬物コンジュゲート部分、薬物コンジュゲート部分は式で表され、
【化６】
2021527042.tif 000007
式中、
Ｌ１はスペーサーまたは結合を表し；
ＳＲＳは、腫瘍の細胞外空間で発現される細胞外プロテアーゼの基質認識配列を表し；
Ｌ２は自壊牲のリンカーまたは結合を表し；
ＤＭは薬物部分を表し；
ｍは１〜６の、好ましくは１、２、または３の整数を表し；且つ
ｎは１〜５００、さらに好ましくは１〜１００、１〜１０、または１〜５の整数を表す。
【００５５】
多重特異性の結合剤・薬物コンジュゲートは、表面タンパク質のいずれかと結合すると、少なくとも６時間、さらに好ましくは少なくとも１０、１２、１４、１６、１８、２０、２４、３６、４８、６０、７５時間、または１００時間の内部移行半減期を有する。
【００５６】
多重特異性の結合剤・薬物コンジュゲートの特定の実施形態では、ポリペプチドは、腫瘍細胞抗原に選択的に結合する第１の結合ドメインポリペプチド配列と、マクロファージ、単球由来のサプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、樹状細胞、線維芽細胞、ＮＫ細胞、肥満細胞、顆粒球、好酸球及びＢ細胞から成る群から選択される細胞に選択的に結合する第２の結合ドメインポリペプチド配列とを含む。
【００５７】
多重特異性の結合剤・薬物コンジュゲートの特定の実施形態では、ポリペプチドは、チェックポイント阻害剤または共刺激アゴニストであり、腫瘍浸潤リンパ球上に発現されるチェックポイントタンパク質または共刺激受容体タンパク質（例えば、チェックポイントの場合はＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、ＴＩＧＩＴ、ＰＤ−１、ＢＴＬＡまたはＣＴＬＡ−４、及び共刺激タンパク質の場合はＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７またはＣＤ２７）に結合する第１の結合ドメインポリペプチド配列と、腫瘍細胞上で発現されるチェックポイント（ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＣＤ１５５、ＨＶＥＭ、またはガレクチン−９など）に結合するチェックポイント阻害剤である第２の結合ドメインポリペプチド配列とを含む。
【００５８】
本発明のさらに別の態様は、ＰＤ−Ｌ１結合ポリペプチドと自然免疫応答の無菌誘導因子であるそれにコンジュゲートした薬物部分（イムノＤＡＳＨ阻害剤、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＴＲＬ７／８アゴニストまたはＲＩＧ−１アゴニスト）とを含むＰＤ−Ｌ１阻害剤／自然免疫刺激剤の組み合わせに関するものであり、その際、ＰＤ−Ｌ１結合ポリペプチドは患者の他の組織と比べて腫瘍内にてＰＤ−Ｌ１阻害剤／自然免疫刺激剤の蓄積を引き起こし、薬物部分は患者の他の組織と比べて腫瘍微小環境内のＰＤ−Ｌ１結合ポリペプチドから選択的に遊離される。
【００５９】
本発明の薬物コンジュゲートの特定の実施形態では、分子は１×１０−６ＭのＫｄ以下（及びさらに好ましくは１×１０−７ＭのＫｄ、１×１０−８Ｍ、１×１０−９Ｍ、１×１０−１０Ｍ以下のＫｄ）でＰＤ−Ｌ１に結合し、それが結合するＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１との相互作用を阻害するアフィマーポリペプチド配列であるＰＤ−Ｌ１結合部分を含む。
【００６０】
特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アフィマーポリペプチドはヒトＰＤ−Ｌ１を結合し、ヒトＰＤ−１との相互作用を阻止する。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アフィマーポリペプチドは１×１０−７Ｍ以下のＫｄ、１×１０−８Ｍ以下のＫｄ、１×１０−９Ｍ以下のＫｄ、またはさらに１×１０−１０Ｍ以下のＫｄでＰＤ−Ｌ１を結合する。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アフィマーポリペプチドは１０−３ｓ−１以下で遅い、１０−４ｓ−１以下で遅い、またはさらに１０−５ｓ−１以下で遅いＫｏｆｆでＰＤ−Ｌ１を結合する。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アフィマーポリペプチドは、１０３Ｍ−１ｓ−１以上速い、１０４Ｍ−１ｓ−１以上速い、１０５Ｍ−１ｓ−１以上速い、またはさらに１０６Ｍ−１ｓ−１以上速いＫｏｎでＰＤ−Ｌ１を結合する。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アフィマーポリペプチドはヒトＰＤ−１との競合結合アッセイにおいて、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、４０ｎＭ以下、２０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、またはさらに０．１ｎＭ以下のＩＣ５０でＰＤ−Ｌ１を結合する。
【００６１】
特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アフィマーポリペプチドは、６５℃以上、及び７０℃以上、７５℃以上、８０℃以上または８５℃以上のＴｍを有する。特定の実施形態では、タンパク質は、６５℃以上、及び７０℃以上、７５℃以上、８０℃以上または８５℃以上のＴｍを有する。
【００６２】
特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アフィマーポリペプチドは、一般式（Ｉ）で表されるアミノ酸配列を有し、
ＦＲ１−（Ｘａａ）ｎ−ＦＲ２−（Ｘａａ）ｍ−ＦＲ３（Ｉ）
式中、
ＦＲ１は、ＭＩＰＧＧＬＳＥＡＫ  ＰＡＴＰＥＩＱＥＩＶ  ＤＫＶＫＰＱＬＥＥＫ  ＴＮＥＴＹＧＫＬＥＡ  ＶＱＹＫＴＱＶＬＡ（配列番号１）によって表されるポリペプチド配列、またはそれに対して少なくとも７０％の相同性を有するポリペプチド配列であり；
ＦＲ２は、ＧＴＮＹＹＩＫＶＲＡ  ＧＤＮＫＹＭＨＬＫＶ  ＦＫＳＬ（配列番号２）によって表されるポリペプチド配列、またはそれに対して少なくとも７０％の相同性を有するポリペプチド配列であり；
ＦＲ３は、ＥＤＬＶＬＴＧＹＱＶ  ＤＫＮＫＤＤＥＬＴＧ  Ｆ（配列番号３）によって表されるポリペプチド配列、またはそれに対して少なくとも７０％の相同性を有するポリペプチド配列であり；且つ、
Ｘａａは出現ごとに個別にアミノ酸残基であり；且つ、
ｎ及びｍはそれぞれ独立して３〜２０の整数である。
【００６３】
特定の実施形態については、ＦＲ１は、配列番号１との少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％または９８％の相同性を有するポリペプチド配列であってもよい。特定の実施形態については、ＦＲ２は、配列番号２との少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％または９８％の相同性を有するポリペプチド配列である。特定の実施形態については、ＦＲ３は、配列番号２との少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％または９８％の相同性を有するポリペプチド配列である。
【００６４】
少なくとも１つの薬物コンジュゲート部分が、アフィマー配列に導入されたシステインのチオール側鎖を介してアフィマー配列に付加されているそれらの実施形態については、システインは、好ましくはＦＲ１、ＦＲ２及び／またはＦＲ３に相当するアフィマー配列領域の一部で提供され、さらに好ましくは、その側鎖が溶媒にアクセス可能であり、アフィマーの他の部分との水素結合に関与していないアフィマーにおけるアミノ酸残基への置換が提供されるであろう。一般に、システインはループ（Ｘａａ）ｎまたは（Ｘａａ）ｍには導入されないであろう。
【００６５】
特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アフィマーポリペプチドは一般式で表されるアミノ酸配列を有し：
ＭＩＰ−Ｘａａ１−ＧＬＳＥＡＫＰＡＴＰＥＩＱＥＩＶＤＫＶＫＰＱＬＥＥＫＴＮＥＴＹＧＫＬＥＡＶＱＹＫＴＱＶＬＡ−（Ｘａａ）ｎ−Ｘａａ２−ＴＮＹＹＩＫＶＲＡＧＤＮＫＹＭＨＬＫＶＦ−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−（Ｘａａ）ｍ−Ｘａａ６−Ｄ−Ｘａａ７−ＶＬＴＧＹＱＶＤＫＮＫＤＤＥＬＴＧＦ（配列番号４）
式中、
Ｘａａは出現ごとに個別にアミノ酸残基であり；
ｎ及びｍはそれぞれ独立して３〜２０の整数であり；
Ｘａａ１はＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり；
Ｘａａ２はＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＳｅｒまたはＴｈｒであり；
Ｘａａ３はＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、またはＴｈｒであり；
Ｘａａ４はＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｓｅｒ、またはＴｈｒであり；
Ｘａａ５はＡｌａ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、ＧｌｙまたはＰｒｏであり；
Ｘａａ６はＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり；且つ、
Ｘａａ７はＡｌａ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ａｒｇ、またはＬｙｓである。
【００６６】
特定の実施形態ついては、Ｘａａ１はＧｌｙ、Ａｌａ、ＡｒｇまたはＬｙｓであり、その上一層さらに好ましくはＧｌｙまたはＡｒｇである。特定の実施形態ついては、Ｘａａ２はＧｌｙまたはＳｅｒである。特定の実施形態ついては、Ｘａａ３は、Ａｒｇ  Ａｒｇ、Ｌｙｓ、ＡｓｎまたはＧｌｎ、さらに好ましくはＬｙｓまたはＡｓｎである。特定の実施形態ついては、Ｘａａ４はＧｌｙまたはＳｅｒである。特定の実施形態ついては、Ｘａａ５は、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、ＧｌｙまたはＰｒｏ、さらに好ましくはＩｌｅ、ＬｅｕまたはＰｒｏ、一層さらに好ましくはＬｅｕまたはＰｒｏである。特定の実施形態ついては、Ｘａａ６は、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＡｓｐまたはＧｌｕ、一層さらに好ましくは、ＡｌａまたはＧｌｕである。特定の実施形態ついては、Ｘａａ７はＩｌｅ、ＬｅｕまたはＡｒｇ、さらに好ましくはＬｅｕまたはＡｒｇである。
【００６７】
アフィマー配列に導入されたシステインのチオール側鎖を介してアフィマー配列に少なくとも１つの薬物コンジュゲート部分が付加されているそれらの実施形態については、システインは好ましくは、ループ配列（Ｘａａ）ｎまたは（Ｘａａ）ｍを伴っていないアフィマー配列の一部に提供されるであろう。したがって、配列番号４はその配列の様々な位置でのアミノ酸残基の代わりに１〜５のシステインを含んでもよい。
【００６８】
特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アフィマーポリペプチドは一般式で表されるアミノ酸配列を有し：
ＭＩＰＲＧＬＳＥＡＫＰＡＴＰＥＩＱＥＩＶＤＫＶＫＰＱＬＥＥＫＴＮＥＴＹＧＫＬＥＡＶＱＹＫＴＱＶＬＡ−（Ｘａａ）ｎ−ＳＴＮＹＹＩＫＶＲＡＧＤＮＫＹＭＨＬＫＶＦＮＧＰ−（Ｘａａ）ｍ−ＡＤＲＶＬＴＧＹＱＶＤＫＮＫＤＤＥＬＴＧＦ（配列番号５）
式中、Ｘａａは出現ごとに個別にアミノ酸残基であり；且つ、ｎ及びｍはそれぞれ独立して３〜２０の整数である。
【００６９】
アフィマー配列に導入されたシステインのチオール側鎖を介してアフィマー配列に少なくとも１つの薬物コンジュゲート部分が付加されているそれらの実施形態については、システインは好ましくは、ループ配列（Ｘａａ）ｎまたは（Ｘａａ）ｍが提供される以外にアフィマー配列の一部に提供されるであろう。したがって、配列番号５はその配列の様々な位置でのアミノ酸残基の代わりに１〜５のシステインを含んでもよい。
【００７０】
上記の配列の特定の実施形態では、（Ｘａａ）ｎ（「ループ２」）は一般式（ＩＩ）で表されるアミノ酸配列であり、
−ａａ１−ａａ２−ａａ３−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−ａａ４−ａａ５−Ｔｒｐ−ａａ６−（ＩＩ）
式中、
ａａ１は塩基性側鎖を持つアミノ酸残基を表し；
ａａ２はアミノ酸残基、好ましくは中性の極性または非極性側鎖または荷電（酸性または塩基性）側鎖、さらに好ましくは小さな脂肪族側鎖、中性極性側鎖または塩基性または酸性の側鎖を持つアミノ酸残基を表し；
ａａ３は、芳香族または塩基性の側鎖を持つアミノ酸残基を表し；
ａａ４は、中性の極性または非極性の側鎖または荷電（酸性または塩基性）側鎖、好ましくは、中性極性側鎖または荷電（酸性または塩基性）側鎖を持つアミノ酸残基を表し；
ａａ５は、中性極性または荷電（酸性または塩基性）または小さな脂肪族または芳香族の側鎖；好ましくは中性極性側鎖または荷電側鎖を持つアミノ酸残基を表し；且つ
ａａ６は、芳香族または酸性の側鎖を持つアミノ酸残基を表す。
【００７１】
特定の実施形態については、ａａ１はＬｙｓ、ＡｒｇまたはＨｉｓ、さらに好ましくはＬｙｓまたはＡｒｇを表す。特定の実施形態については、ａａ２は、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｉｌｅ、Ｇｌｎ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、ＡｒｇまたはＨｉｓ、さらに好ましくはＡｌａ、Ｇｌｎ、ＡｓｐまたはＧｌｕを表す。特定の実施形態については、ａａ３は、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｌｙｓ、ＡｒｇまたはＨｉｓ、好ましくはＰｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、さらに好ましくはＨｉｓまたはＴｙｒ、ＴｒｐまたはＨｉｓを表す。特定の実施形態については、ａａ４は、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｉｌｅ、Ｇｌｎ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、ＡｒｇまたはＨｉｓ、さらに好ましくはＧｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、ＡｓｐまたはＧｌｕを表す。特定の実施形態については、ａａ５は、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＡｒｇまたはＨｉｓ、さらに好ましくはＳｅｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、ＧｌｕまたはＡｒｇを表す。特定の実施形態については、ａａ６はＰｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、ＡｓｐまたはＧｌｕ、好ましくはＴｒｐまたはＡｓｐ、さらに好ましくはＴｒｐを表す。
【００７２】
上記の配列の特定の他の実施形態では、（Ｘａａ）ｎ（「ループ２」）は一般式（ＩＩＩ）で表されるアミノ酸配列であり、
−ａａ１−ａａ２−ａａ３−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−ａａ４−ａａ５−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−  （ＩＩＩ）
式中、
ａａ１は、塩基性側鎖または芳香族側鎖を持つアミノ酸残基を表し；
ａａ２はアミノ酸残基、好ましくは中性の極性または非極性側鎖または荷電（酸性または塩基性）側鎖、さらに好ましくは小さな脂肪族側鎖、中性極性側鎖または塩基性または酸性の側鎖を持つアミノ酸残基を表し；
ａａ３は、芳香族または塩基性の側鎖を持つアミノ酸残基、好ましくはＰｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｌｙｓ、ＡｒｇまたはＨｉｓ、さらに好ましくはＰｈｅ、Ｔｙｒ、ＴｒｐまたはＨｉｓ、一層さらに好ましくはＴｙｒ、ＴｒｐまたはＨｉｓを表し；
ａａ４は、中性の極性側鎖または非極性側鎖または荷電（酸性または塩基性）側鎖、好ましくは、中性極性側鎖または荷電（酸性または塩基性）側鎖を持つアミノ酸残基、さらに好ましくはＡｌａ、Ｐｒｏ、Ｉｌｅ、Ｇｌｎ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、ＡｒｇまたはＨｉｓ、一層さらに好ましくはＧｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、ＡｓｐまたはＧｌｕを表し；且つ
ａａ５は、中性極性側鎖または荷電（酸性または塩基性）側鎖または小さな脂肪族または芳香族の側鎖；好ましくは中性極性側鎖または荷電側鎖を持つアミノ酸残基、さらに好ましくは、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＡｒｇまたはＨｉｓ、一層さらに好ましくは、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、ＧｌｕまたはＡｒｇを表す。
【００７３】
特定の実施形態については、ａａ１はＬｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＡｓｎまたはＧｌｎ、さらに好ましくはＬｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、ＡｓｎまたはＧｌｎ、一層さらに好ましくはＬｙｓまたはＡｓｎを表す。特定の実施形態については、ａａ２は、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｉｌｅ、Ｇｌｎ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、ＡｒｇまたはＨｉｓ、一層さらに好ましくはＡｌａ、Ｇｌｎ、ＡｓｐまたはＧｌｕを表す。特定の実施形態については、ａａ３はＰｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｌｙｓ、ＡｒｇまたはＨｉｓ、さらに好ましくはＰｈｅ、Ｔｙｒ、ＴｒｐまたはＨｉｓ、一層さらに好ましくはＴｙｒ、ＴｒｐまたはＨｉｓを表す。特定の実施形態については、ａａ４は、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｉｌｅ、Ｇｌｎ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、ＡｒｇまたはＨｉｓ、一層さらに好ましくはＧｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、ＡｓｐまたはＧｌｕを表す。特定の実施形態については、ａａ５はＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＡｒｇまたはＨｉｓ、一層さらに好ましくはＳｅｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、ＧｌｕまたはＡｒｇを表す。
【００７４】
上記の配列の特定の実施形態では、（Ｘａａ）ｎ（「ループ２」）は、配列番号６から４０から選択されるアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも８０％の相同性を有するアミノ酸配列、さらに好ましくは、それに対して少なくとも８５％、９０％、９５％またはさらに９８％の相同性有するアミノ酸配列である。
【００７５】
上記の配列の特定の実施形態では、（Ｘａａ）ｎ（「ループ２」）は、配列番号６から４０から選択されるアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列、さらに好ましくは、それに対して少なくとも８５％、９０％、９５％またはさらに９８％の同一性を有するアミノ酸配列である。
【００７６】
上記の配列の特定の実施形態では、（Ｘａａ）ｍ（「ループ４」）は、一般式（ＩＶ）で表されるアミノ酸配列であり、
−ａａ７−ａａ８−ａａ９−ａａ１０−ａａ１１−ａａ１２−ａａ１３−ａａ１４−ａａ１５−（ＩＶ）
式中、
ａａ７は、中性の極性側鎖または非極性側鎖または酸性側鎖を持つアミノ酸残基を表し；
ａａ８は、アミノ酸残基、好ましくは中性の極性側鎖または非極性側鎖または荷電（酸性または塩基性）側鎖または芳香族側鎖、さらに好ましくは荷電（酸性または塩基性）側鎖を持つアミノ酸残基を表し；
ａａ９は、アミノ酸残基、好ましくは中性の極性側鎖または非極性側鎖または荷電（酸性または塩基性）側鎖または芳香族側鎖、さらに好ましくは中性極性側鎖または酸性側鎖を持つアミノ酸残基を表し；
ａａ１０は、アミノ酸残基、好ましくは中性の極性側鎖または非極性側鎖または荷電（酸性または塩基性）側鎖または芳香族側鎖、さらに好ましくは中性極性側鎖または塩基性または酸性の側鎖を持つアミノ酸残基を表し；
ａａ１１は、アミノ酸残基、好ましくは中性極性側鎖または荷電（酸性または塩基性）側鎖または非極性脂肪族側鎖または芳香族側鎖、さらに好ましくは中性極性側鎖または塩基性または酸性の側鎖を持つアミノ酸残基を表し；
ａａ１２は、アミノ酸残基、好ましくは中性極性側鎖または荷電（酸性または塩基性）側鎖または非極性脂肪族側鎖または芳香族側鎖、さらに好ましくは酸性側鎖を持つアミノ酸残基をし；
ａａ１３は、アミノ酸残基、好ましくは中性極性側鎖または荷電（酸性または塩基性）側鎖または非極性脂肪族側鎖または芳香族側鎖、さらに好ましくは酸性側鎖を持つアミノ酸残基を表し；
ａａ１４は、アミノ酸残基、好ましくは中性極性側鎖または荷電（酸性または塩基性）側鎖を持つアミノ酸残基を表し；且つ
ａａ１５は、アミノ酸残基、好ましくは中性極性側鎖または中性非極性側鎖または荷電（酸性または塩基性）側鎖を持つアミノ酸残基を表す。
【００７７】
特定の実施形態については、ａａ７は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｐｒｏ、Ｔｒｐ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕ、一層さらに好ましくはＧｌｙ、Ａｌａ、Ｔｒｐ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕを表す。特定の実施形態については、ａａ８は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、ＴｙｒまたはＰｈｅ、一層さらに好ましくはＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、ＨｉｓまたはＧｌｎを表す。特定の実施形態については、ａａ９は、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、ＰｒｏまたはＴｙｒ、一層さらに好ましくはＧｌｎ、ＴｈｒまたはＡｓｐを表す。特定の実施形態については、ａａ１０は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ｓｅｒ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、ＰｒｏまたはＧｌｙ、一層さらに好ましくはＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｌｅｕ、ＴｒｐまたはＧｌｙを表す。特定の実施形態については、ａａ１１は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、ＴｙｒまたはＧｌｙ、一層さらに好ましくはＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｎ、ＬｙｓまたはＨｉｓを表す。特定の実施形態については、ａａ１２は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、ＰｈｅまたはＧｌｙ、一層さらに好ましくはＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、ＡｒｇまたはＬｙｓを表す。特定の実施形態については、ａａ１３は、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐ、ＴｙｒまたはＰｈｅ、一層さらに好ましくはＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｇｌｙ、ＡｓｐまたはＧｌｕを表す。特定の実施形態については、ａａ１４は、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｔｒｐ、Ｐｒｏ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＧｌｎまたはＡｓｎ、一層さらに好ましくはＡｌａ、Ｐｒｏ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｓｅｒ、ＧｌｎまたはＡｓｎを表す。特定の実施形態については、ａａ１５は、Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ＧｌｙまたはＰｈｅ、一層さらに好ましくはＨｉｓ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＧｌｎまたはＡｓｎを表す。
【００７８】
上記の配列の特定の実施形態では、（Ｘａａ）ｎ（「ループ４」）は、配列番号４１から７５から選択されるアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも８０％の相同性を有するアミノ酸配列、さらに好ましくは、それに対して少なくとも８５％、９０％、９５％または９８％の相同性を有するアミノ酸配列である。
【００７９】
上記の配列の特定の実施形態では、（Ｘａａ）ｎ（「ループ４」）は、配列番号４１から７５から選択されるアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列、さらに好ましくは、それに対して少なくとも８５％、９０％、９５％またはさらに９８％の同一性を有するアミノ酸配列である。
【００８０】
特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アフィマーポリペプチドは、配列番号７６〜８４から選択されるアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも７０％の相同性、一層さらに好ましくはそれに対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはさらに９８％の相同性を有するアミノ酸配列を有する。
【００８１】
特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アフィマーポリペプチドは、配列番号７６〜８４から選択されるアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも７０％の同一性、一層さらに好ましくはそれに対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはさらに９８％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
【００８２】
特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アフィマーポリペプチドは、配列番号８５〜９２の１つのヌクレオチド１〜３３６に対応するコード配列、またはそれに対して少なくとも７０％同一のコード配列、一層さらに好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはさらに９８％の同一のコード配列を有する核酸によってコードされ得るアミノ酸配列を有する。
【００８３】
特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アフィマーポリペプチドは、４５℃での６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）に続く６５℃での０．２×ＳＳＣにおける洗浄のストリンジェントな条件下で配列番号８５〜９２のいずれか１つとハイブリッド形成するコード配列を有する核酸によってコードされ得るアミノ酸配列を有する。
【００８４】
特定の実施形態では、本明細書に記載されているＰＤ−Ｌ１結合アフィマーは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体アテゾリズマブ、アベルマブ及び／またはデュルバルマブによるＰＤ−Ｌ１結合と競合する方法でＰＤ−Ｌ１を結合する。
【００８５】
特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アフィマーポリペプチドは、Ｉｌｅ−５４、Ｔｙｒ−５６、Ｇｌｕ−５８、Ｇｌｕ−６０、Ａｓｐ−６１、Ｌｙｓ−６２、Ａｓｎ−６３、Ｇｌｎ６６、Ｖａｌ−６８、Ｖａｌ−７６、Ｖａｌ−１１１、Ａｒｇ−１１３、Ｍｅｔ−１１５、Ｉｌｅ−１１６、Ｓｅｒ−１１７、Ｇｌｙ−１２０、Ａｌａ−１２１、Ａｓｐ−１２２、Ｔｙｒ−１２３、及びＡｒｇ−１２５から選択されるＰＤ−Ｌ１の少なくとも１０残基を含む接触面を含むＰＤ−Ｌ１との結晶構造を形成する。
【００８６】
特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１に結合するＰＤ−Ｌ１結合アフィマーポリペプチドは、（ａ）混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイにおいてＴ細胞増殖を増加させ；（ｂ）ＭＬＲアッセイでインターフェロン−γの産生を増加させ；及び／または（ｃ）ＭＬＲアッセイでインターロイキン−２（ＩＬ−２）分泌を増加させる。
【００８７】
特定の実施形態では、本発明の結合剤・薬物コンジュゲートは、ＰＤ−Ｌ１結合アフィマーポリペプチドまたは他の標的結合部分に加えて、例示するために、分泌シグナル配列、ペプチドリンカー配列、アフィニティータグ、膜貫通ドメイン、細胞表面保持配列、翻訳後修飾のための基質認識配列、タンパク質・タンパク質相互作用を介して凝集するタンパク質の多量体構造を作成するための多量体化ドメイン、半減期延長ポリペプチド部分、抗体の組織局在化及び抗原結合部位を変更するためのポリペプチド配列、ならびに他の異なる標的に結合する１以上の追加のアフィマーポリペプチド配列から成る群から選択される１以上の追加のアミノ酸配列を含んでもよい融合タンパク質である。
【００８８】
特定の実施形態では、融合タンパク質は、Ｆｃドメインまたはその一部、アルブミンタンパク質またはその一部、アルブミン結合ポリペプチド部分、トランスフェリンまたはその一部、トランスフェリン結合ポリペプチド部分、フィブロネクチンまたはその一部、またはフィブロネクチン結合ポリペプチド部分から成る群から選択されるような半減期延長ポリペプチド部分を含む。
【００８９】
融合タンパク質がＦｃドメインまたはその一部を含む場合、特定の実施形態では、それはＦｃＮ結合を保持するＦｃドメインである。
【００９０】
融合タンパク質がＦｃドメインまたはその一部を含む場合、特定の実施形態では、Ｆｃドメインまたはその一部は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ、または例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１もしくはＩｇＡ２のようなそのサブクラス（アイソタイプ）に由来する。
【００９１】
特定の実施形態では、融合タンパク質は、配列番号１０８または１０９のアミノ酸配列を有する、またはそれに対して少なくとも７０％の相同性、一層さらに好ましくはそれに対して少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはさらに９８％の相同性を有する配列を有する。
【００９２】
融合タンパク質がＦｃドメインまたはその一部を含む場合、特定の実施形態では、Ｆｃドメインまたはその一部は、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；食作用；Ｂ細胞受容体の下方調節、またはそれらの組み合わせから選択されるエフェクター機能を保持する。
【００９３】
特定の実施形態では、融合タンパク質が半減期延長ポリペプチド部分を含む場合、その部分は、タンパク質が存在しない場合と比べて、タンパク質の血清半減期を少なくとも５倍、さらに好ましくは１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、２００倍、５００倍、またはさらに１０００倍増やす。
【００９４】
特定の実施形態では、本発明の融合タンパク質は、１以上の薬学的に許容される賦形剤、緩衝液、塩等をさらに含む、ヒト患者における治療用途に好適な医薬製剤として提供される。
【００９５】
本発明のさらに別の態様は、（ｉ）本明細書に記載されている結合剤・薬物コンジュゲートまたはＰＤ−Ｌ１阻害剤／自然免疫刺激剤の組み合わせと、（ｉｉ）１以上の薬学的に許容される賦形剤、緩衝液、塩等とを含むヒト患者における治療用途に好適な医薬製剤に関する。
【００９６】
本発明の薬物コンジュゲートの特定の実施形態では、遊離薬物部分はイムノＤＡＳＨ阻害剤である。特定の実施形態では、イムノＤＡＳＨ阻害剤は、ＤＰＰ８及びＤＰＰ９阻害についてヒトマクロファージにて２００ｎＭ未満の試験管内での細胞内ＩＣ５０を有する。特定の実施形態では、ＤＰＰ８及び／またはＤＰＰ９（及び好ましくはＤＰＰ８とＤＰＰ９の双方）の阻害のための試験管内無細胞ＩＣ５０は、１００ｎＭ、１０ｎＭ、１．０ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０１ｎＭ、またはさらに０．００１ｎＭ未満である。特定の実施形態では、ＤＰＰ８及び／またはＤＰＰ９（及び好ましくはＤＰＰ８とＤＰＰ９の双方）の阻害のためのＥｎＰｌｅｘ  ＩＣ５０は、１００ｎＭ、１０ｎＭ、１．０ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０１ｎＭ、０．００１ｎＭ（１ピコモル）、またはさらに０．０００１ｎＭ（１００フェムトモル）未満である。特定の実施形態では、ＤＰＰ８及び／またはＤＰＰ９（及び好ましくはＤＰＰ８とＤＰＰ９の双方）の阻害のためのＫｉは、１００ｎＭ、１０ｎＭ、１．０ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０１ｎＭ、０．００１ｎＭ（１ピコモル）、またはさらに０．０００１ｎＭ（１００フェムトモル）未満である。
【００９７】
特定の実施形態では、主題のイムノＤＡＳＨ阻害剤はまた、有効な抗腫瘍剤である薬物の濃度範囲内で線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）も阻害する。例えば、イムノＤＡＳＨ阻害剤は、１００ｎＭ、１０ｎＭ、１．０ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０１ｎＭ、０．００１ｎＭ（１ピコモル）またはさらに０．０００１ｎＭ（１００フェムトモル）未満のＦＡＰ阻害のためのＫｉを有することができる。
【００９８】
特定の実施形態では、主題のイムノＤＡＳＨ阻害剤は、ヒトマクロファージのピロトーシスの誘導についてのＩＣ５０より少なくとも２倍高いＩＣ５０、さらに好ましくは少なくとも３、４、５、１０、２０、３０、４０、５０またはさらに１００倍高いＩＣ５０でヒト線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）を阻害する−すなわち、イムノＤＡＳＨはＦＡＰ阻害よりもピロトーシスの強力な誘導因子である。
【００９９】
特定の実施形態では、イムノＤＡＳＨ阻害剤は緩慢な結合阻害動態を示す。特定の実施形態では、イムノＤＡＳＨ阻害剤は、ＤＰＰ４との相互作用について１×１０−４／秒未満、好ましくは５×１０−５／秒未満、３×１０−５／秒またはさらに１×１０−５／秒未満のＫｏｆｆ速度を有する。
【０１００】
特定の実施形態では、イムノＤＡＳＨ阻害剤は、腫瘍関連マクロファージの数の減少を引き起こすのに十分な量の結合剤・薬物コンジュゲートとして患者に投与される。
【０１０１】
特定の実施形態では、イムノＤＡＳＨ阻害剤は、腫瘍内の単球性骨髄由来サプレッサー細胞を減らすのに十分な量の結合剤・薬物コンジュゲートとして患者に投与される。
【０１０２】
特定の実施形態では、イムノＤＡＳＨ阻害剤は、腫瘍における顆粒球性骨髄由来サプレッサー細胞のＴ細胞抑制活性を低下させるのに十分な量の結合剤・薬物コンジュゲートとして患者に投与される。
【０１０３】
特定の実施形態では、イムノＤＡＳＨ阻害剤は、治療有効量で完全な腫瘍退縮を生じる量で結合剤・薬物コンジュゲートとして患者に投与され、治療有効量は、結合剤・薬物コンジュゲートの最大耐量より少ない。
【０１０４】
特定の実施形態では、イムノＤＡＳＨ阻害剤は、結合剤・薬物コンジュゲートとして単独で、またはｃＰＬＡ−２阻害剤のようなＰＧＥ２阻害剤との併用で患者に投与される。
【０１０５】
特定の実施形態では、イムノＤＡＳＨ阻害剤は、結合剤・薬物コンジュゲートとして単独で、またはシタグリプチン、ビルダグリプチン、サクサグリプチン、リナグリプチン、及びアログリプチンのようなＤＰＰ４阻害剤との併用で患者に投与される。
【図面の簡単な説明】
【０１０６】
【図１Ａ】ＡＶＡ０４−１８２Ｆｃ融合タンパク質の構造と特性を示す図である。
【図１Ｂ】ＡＶＡ０４−１８２Ｆｃ融合タンパク質の構造と特性を示す図である。
【図１Ｃ】ＡＶＡ０４−１８２Ｆｃ融合タンパク質の構造と特性を示す図である。
【図２】Ｂｉａｃｏｒｅによって評価されたマウスＰＤ−Ｌ１へのＡＶＡ０４−１８２Ｆｃの結合動態を示す図である。
【図３】ＥＬＩＳＡによるＡＶＡ０４−１８２ＦｃのマウスＰＤ−Ｌ１／マウスＰＤ−１との競合を示す図である。
【図４】ＥＬＩＳＡによるＡＶＡ０４−１８２Ｆｃのマウス混合リンパ球反応を示す図である。
【図５Ａ】ＡＶＡ０４−２５１Ｆｃ融合タンパク質の構造と特性評価を示す図である。
【図５Ｂ】ＡＶＡ０４−２５１Ｆｃ融合タンパク質の構造と特性評価を示す図である。
【図６】Ｂｉａｃｏｒｅによって評価されたヒトＰＤ−Ｌ１へのＡＶＡ０４−２５１Ｆｃの結合動態を示す図である。
【図７】ＮＦＡＴ遺伝子報告アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）によって評価されたＡＶＡ０４−２５１ＦｃによるＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用の阻害を示す図である。
【図８Ａ】ＡＶＡ０４−２５１  ＢＨ  Ｃｙｓインライン融合タンパク質の構造と特性評価を示す図である。
【図８Ｂ】ＡＶＡ０４−２５１  ＢＨ  Ｃｙｓインライン融合タンパク質の構造と特性評価を示す図である。
【図８Ｃ】ＡＶＡ０４−２５１  ＢＨ  Ｃｙｓインライン融合タンパク質の構造と特性評価を示す図である。
【図９】化合物６３２３の化学構造を示す図である。
【図１０】化合物６３２３の合成スキームを示す図である。
【図１１】化合物６３２５の化学構造を示す図である。
【図１２】化合物６３２５の合成スキームを示す図である。
【図１３】マレイミド化学を用いたＡＶＡ０４−２５１  ＢＨ  ＣＹｓ−６３２３の合成スキームを示す図である。
【図１４】ＮＨＳ化学を用いたＡＶＡ０４−１８３Ｆｃ−６３２５の合成スキームを示す図である。
【図１５】同系マウス膀胱癌（ＭＢ４９）モデルにおける腫瘍増殖に対する併用処理（ＡＶＡ０４−１８２  Ｆｃ＋ＶｂＰ）の効果を示す図である。
【図１６】同系マウス膀胱癌（ＭＢ４９）モデルにおける腫瘍負荷後の腫瘍増殖への影響を示す図である。
【図１７】結腸直腸癌のヒト化同系モデル（ＭＣ３８ＨｕＰＤ−Ｌ１）における腫瘍増殖に対する併用処理（ＡＶＡ０４−２５１Ｆｃ＋ＶｂＰ）の効果を示す図である。
【図１８】結腸直腸癌のヒト化同系モデル（ＭＣ３８ＨｕＰＤ−Ｌ１）における腫瘍増殖に対する併用処理（ＡＶＡ０４−２５１  Ｆｃ＋ＶｂＰ）の効果を示す図である。
【図１９】結腸直腸癌のヒト化同系モデル（ＭＣ３８ＨｕＰＤ−Ｌ１）における腫瘍負荷後の腫瘍増殖への効果を示す図である。
【図２０】マレイミド化学を用いた、ＩＲ  Ｄｙｅ８００ＣＷへのコンジュゲート前後のヒトＰＤ−Ｌ１へのＡＶＡ０４−２５１  ＢＨ  Ｃｙｓの結合の比較を示す図である。
【図２１】ＮＨＳケミストリーを用いたＩＲ  Ｄｙｅ８００ＣＷへのコンジュゲート前後のヒトＰＤ−Ｌ１へのＡＶＡ０４−２５１Ｆｃ結合の比較を示す図である。
【図２２】Ａ３７５マウス異種移植モデルにおけるＡＶＡ０４−２５１Ｆｃ−８００の生体内分布を示す図である。
【図２３】Ａ３７５マウス異種移植モデルにおけるＡＶＡ０４−２５１Ｆｃ−８００の腫瘍浸透を示す図である。
【図２４】アフィマー・リンカー・ＶｂＰのプロドラッグの試験管内でのｒｈＦＡＰαによる切断を示す図である。
【図２５】アフィマー・リンカー・ＶｂＰのプロドラッグの試験管内でのｒｈＦＡＰαによる切断動態を示す図である。
【図２６】スプラーグドーリーラットの急性毒性試験におけるＶｂＰと比較したリンカー・ＶｂＰプロドラッグの評価を示す図である。
【図２７】Ｊ７７４マウスマクロファージ細胞株における試験管内でアフィマー・リンカー・ＶｂＰプロドラッグが誘導したピロトーシスを示す図である。
【図２８】ＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるＣｙｓ修飾したリンカー・ＶｂＰプロドラッグが生体内で誘導したＧ−ＣＳＦの刺激を示す図である。
【図２９】プロテインＡ精製後、約１６０ｍｇ／Ｌの精製収量でＥｘｐｉ２９３細胞にて一時的に発現させたイピリムマブ（バイオ後続薬）／ＡＶＡ０４−１４１を示す図である。
【図３０】Ｅｘｐｉ２９３細胞で一時的に発現させたベバシズマブ（バイオ後続薬）／ＡＶＡ０４−２５１は、９７％を超える収率で精製でき、Ｂｉａｃｏｒｅは、構築されたものに柔軟なリンカー［（Ｇ４Ｓ）３］または剛直なリンカー［Ａ（ＥＡＡＡＫ）３］が含まれているかどうかにかかわらず、二重特異性抗体・アフィマー融合体が双方の標的に関与できることを示している。
【図３１】Ｆｃ融合体（二価のＰＤ−Ｌ１結合剤フォーマット、及び二重特異性の二価ＰＤ−Ｌ１結合剤及び標的Ｘ結合剤のフォーマットを示す）、インライン抗体融合体の種々のフォーマット、ＢｉＴＥフォーマット及び受容体トラップドメインとの抗ＰＤ−Ｌ１アフィマーのインライン融合体を含む、本発明の抗ＰＤ−Ｌ１・薬物コンジュゲートを生成するために使用できる抗ＰＤ−Ｌ１アフィマーのフォーマットの例示的な例を示す図である。これらの各フォーマットは、１以上の薬物コンジュゲートで誘導体化することができる。
【図３２】アフィマーはＦｃの種々の部位でフォーマットできるので、ＩｇＧ−アフィマー融合体に変換すべきである。４００〜８００ｍｇ／Ｌの範囲での典型的な（最適化されていない）発現収量。純度を評価するために使用される分析ＳＥＣ−ＨＰＬＣ。
【図３３】ＦＡＰαとＰＲＥＰのような密接な酵素間でも、ＦＡＰα基質認識配列の切断の選択性を説明する図である。ＦＡＰαだけが遊離薬物部分を切断して遊離することができる。
【図３４】ＤＡＲを増加させ、各薬物部分の酵素遊離を保持するように設計されたＦＡＰα切断可能リンカーを説明する図である。このリンカー設計では、２５、５０、またはさらに１００を超えるＤＡＲが実現可能である。
【図３５Ａ】ＦＡＰαがほとんどの固形腫瘍の腫瘍微小環境で選択的に過剰発現していることを示す図である。ＦＡＰαは、ｍＲＮＡ分析（図３５Ａ）、組織化学（図３５Ａ）、及び酵素活性の検出（図３５Ｂ）によって示されるように、正常な上皮組織と比較して悪性のヒト上皮組織で上方調節される。
【図３５Ｂ】ＦＡＰαがほとんどの固形腫瘍の腫瘍微小環境で選択的に過剰発現していることを示す図である。ＦＡＰαは、ｍＲＮＡ分析（図３５Ａ）、組織化学（図３５Ａ）、及び酵素活性の検出（図３５Ｂ）によって示されるように、正常な上皮組織と比較して悪性のヒト上皮組織で上方調節される。
【図３６】ＦＡＰα活性化リンカーのみがＦＡＰαによって選択的に活性化されることを示す図である。
【図３７Ａ】遊離薬物部分Ｖａｌ−ボロＰｒｏは試験管内でＡＭＬ細胞株にてピロトーシスを誘導することを示す図である。ヒトＰＤＸモデルは、生体内でＭＶ４−１１ＡＭＬ細胞（ヒト急性単球性白血病モデル）に対するＶａｌ−ボロＰｒｏ自体の有効性を示している。１０週齢のメスＮＯＤ−ＳＣＩＤＩｌ２ｒｇ−／−マウスの尾静脈に注入された１００万個のＭＶ４−１１細胞。Ｖａｌ−ボロＰｒｏは２０ｍｇ／マウスで１日１回腹腔内投与された−サイクルスケジュールは薬物投与で５日間、休薬期間で２日間だった。
【図３７Ｂ】遊離薬物部分Ｖａｌ−ボロＰｒｏは試験管内でＡＭＬ細胞株にてピロトーシスを誘導することを示す図である。ヒトＰＤＸモデルは、生体内でＭＶ４−１１ＡＭＬ細胞（ヒト急性単球性白血病モデル）に対するＶａｌ−ボロＰｒｏ自体の有効性を示している。１０週齢のメスＮＯＤ−ＳＣＩＤＩｌ２ｒｇ−／−マウスの尾静脈に注入された１００万個のＭＶ４−１１細胞。Ｖａｌ−ボロＰｒｏは２０ｍｇ／マウスで１日１回腹腔内投与された−サイクルスケジュールは薬物投与で５日間、休薬期間で２日間だった。
【図３８】抽出されたヒトＰＤ−Ｌ１に結合した抗ＰＤ−Ｌ１アフィマーＡＣＡ０４−２６１の結晶由来構造から、図１６は、２つのタンパク質間の接触の界面に関与するアミノ酸残基のリストを提供している。
【発明を実施するための形態】
【０１０７】
Ｉ．概要
本発明の態様の１つは以下を含む結合剤・薬物コンジュゲートに関する：
（ｉ）細胞表面特徴が結合剤・薬物コンジュゲートによって結合されると緩慢な内部移行を受ける、組織の病態における標的細胞上の細胞表面特徴に結合する細胞結合部分；
（ｉｉ）薬物部分が、遊離薬物部分に関連する結合剤・薬物コンジュゲートの一部が結合剤・薬物コンジュゲートから遊離されると少なくとも２倍減衰する薬理学的効果についてのＥＣ５０を有する、標的細胞に近接するバイスタンダー細胞に対して薬理学的効果を有する薬物部分；及び
（ｉｉｉ）リンカー部分が疾患組織の細胞外に存在する酵素によって切断可能な基質認識配列を含み、酵素の存在下でリンカー部分は切断され、遊離薬物部分を遊離することができる、ポリペプチド結合剤部分を薬物部分に共有結合するリンカー部分。
【０１０８】
ＩＩ．定義
本発明の理解を円滑にするために、多数の用語及び語句を下記に定義する。
【０１０９】
ａ．アフィマー
「ステフィンポリペプチド」という用語は、複数のシスタチン様配列を含有するタンパク質を含むファミリーであるシスタチンスーパーファミリーのタンパク質の亜群を指す。
【０１１０】
シスタチンファミリーのステフィン亜群は、比較的小さい（約１００アミノ酸）単一ドメインタンパク質である。それらは既知の翻訳後修飾を受けておらず、ジスルフィド結合を欠くということは、広範囲の細胞外及び細胞内の環境で同じように折り畳むことができることを示唆している。ステフィンＡ自体は、９８アミノ酸の単量体、単鎖、単一ドメインタンパク質である。ステフィンＡの構造が解析され、ステフィンＡのアフィマー足場への合理的な変異が容易になっている。シスタチンの唯一の既知の生物活性は、カテプシン活性の阻害であり、これにより、我々の操作されたタンパク質の残留生物活性を徹底的に調べることができた。
【０１１１】
「アフィマー」（または「アフィマー足場」または「アフィマーポリペプチド」）という用語は、ステフィンポリペプチドの組換え操作された変異体である小さくて非常に安定なタンパク質を指す。アフィマータンパク質は、モノクローナル抗体と同様に、すべて無作為化して、高い親和性と特異性で所望の標的タンパク質に結合できる２つのペプチドループとＮ末端配列を示す。ステフィンタンパク質足場による２つのペプチドの安定化は、ペプチドがとることができる可能な立体構造を制約し、遊離ペプチドのライブラリーと比較して結合親和性と特異性を高める。これらの操作された非抗体結合タンパク質は、さまざまな適用でモノクローナル抗体の分子認識特性を模倣するように設計されている。ステフィンポリペプチド配列の他の部分への変形を行うことができ、そのような変形は、安定性の向上のような、これらの親和性試薬の特性を改善し、温度及びｐＨ等のような範囲にわたってそれらを頑強にする。好ましくは、アフィマーは、ステフィンＡに由来する配列を含み、ヒトステフィンＡのようなステフィンＡ野生型配列と実質的な同一性を共有する。本発明から逸脱することなく足場配列に修飾を加えてもよいことが当業者には明らかであろう。特に、アフィマー足場は、例えば、配列変異が、所望の標的（例えば、ＰＤ−Ｌ１）に結合する足場の能力に悪影響を及ぼさない場合、ヒトステフィンＡに相当する配列と少なくとも２５％、３５％、４５％、５５％または６０％の同一性である、好ましくは少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９２％、好ましくは少なくとも９４％、好ましくは少なくとも９５％同一であり、且つ、例えば、野生型ステフィンＡが保有しているが、本明細書に記載されている突然変異の変化により無効されているもののような生物学的機能を保持しないまたは生成しないアミノ酸配列を有することができる。
【０１１２】
「結合剤・薬物コンジュゲート」は、アフィマーポリペプチド配列を含み、患者への送達を目的とする治療上活性があるタンパク質を表すために他の任意の修飾（例えば、コンジュゲート、翻訳後修飾、等）を有するポリペプチドを指す。
【０１１３】
「ＰＤ−Ｌ１」、「分化抗原群２７４」、「ＣＤ２７４」、「Ｂ７ホモログ１」または「Ｂ７−Ｈ１」としても知られる「プログラム死リガンド１」は、ヒトの場合、ＣＤ２７４遺伝子によってコードされるタンパク質を指す。ヒトＰＤ−Ｌ１はさまざまな状況下で免疫系を抑制するのに主要な役割を担う４０ｋＤａの１型膜貫通タンパク質である。代表的なヒトＰＤ−Ｌ１配列は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢプライマリアクセッション番号Ｑ９ＮＺＱ７によって提供され、それの他のヒトアイソフォームを含むであろう。ＰＤ−Ｌ１は、活性化Ｔ細胞、Ｂ細胞、骨髄細胞に見られる受容体ＰＤ−１に結合し、活性化または阻害を調節する。ＰＤ−Ｌ１は共刺激分子ＣＤ８０（Ｂ７−１）に対してもかなりの親和性を有する。ＰＤ−Ｌ１のＴ細胞上のその受容体ＰＤ−１（「プログラム死リガンド１」または「ＣＤ２７９」）との係合は、ＩＬ−２産生及びＴ細胞増殖のＴＣＲ媒介活性化を阻害するシグナルを送達する。この点で、ＰＤ−Ｌ１はチェックポイントと見なされ、腫瘍におけるその上方調節された発現はＴ細胞が介在する抗腫瘍応答の阻害に寄与する。ＰＤ−Ｌ１は、一般に種々の哺乳動物種由来のＰＤ−Ｌ１を参照して使用される一方で、ＰＤ−Ｌ１への参照は、ヒトＰＤ−Ｌ１を含み、好ましくは、ヒトＰＤ−Ｌ１自体を指していることが、出願全体を通して理解されるであろう。
【０１１４】
「ＰＤ−Ｌ１結合剤・薬物コンジュゲート」は、少なくとも１０−６Ｍの解離定数（Ｋｄ）でＰＤ−Ｌ１、特にヒトＰＤ−Ｌ１に結合する少なくとも１つのアフィマーポリペプチドを有する結合剤・薬物コンジュゲートを指す。
【０１１５】
ｂ．ポリペプチド
「ポリペプチド」、及び「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語は本明細書では相互交換可能に使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。ポリマーは、直鎖状であっても分岐状であってもよく、修飾アミノ酸を含んでもよく、非アミノ酸によって中断されていてもよい。これらの用語は、自然に、または介入、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、もしくは任意の他の操作または修飾、例えば、標識成分とのコンジュゲーションにより修飾されたアミノ酸ポリマーも包含する。定義の範囲内に含まれるのはまた、例えば、アミノ酸（例えば、非天然アミノ酸等を含む）の１以上の類似体、及び当該技術分野で既知の他の修飾を含有するポリペプチドである。
【０１１６】
「アミノ酸残基」及び「アミノ酸」という用語は相互交換可能に使用され、ポリペプチドの文脈において、ポリペプチドのもう１つのペプチド結合に関与しているアミノ酸を意味する。一般に、アミノ酸を指定するために本明細書で使用される略語は、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ  生化学命名委員会の推奨に基づく（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，（１９７２），１１：１７２６−１７３２を参照）。例えば、Ｍｅｔ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ａｌａ、及びＧｌｙは、それぞれメチオニン、イソロイシン、ロイシン、アラニン、及びグリシンの「残基」を表す。残基とは、カルボキシル基のＯＨ部分と−アミノ基のＨ部分を取り除くことによって対応する−アミノ酸に由来するラジカルを意味する。「アミノ酸側鎖」という用語は、Ｋ．Ｄ．Ｋｏｐｐｌｅ，”Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ”，Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ  Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  ａｎｄ  Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，１９６６，２及び３３ページによって定義されているように、−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨ部分を除くアミノ酸の部分である。
【０１１７】
ほとんどの場合、本発明の適用に使用されるアミノ酸は、タンパク質に見られる天然に存在するアミノ酸、またはアミノ基及びカルボキシル基を含有するそのようなアミノ酸の天然に存在する同化産物または異化産物である。特に好適なアミノ酸側鎖には、以下のアミノ酸：グリシン、アラニン、バリン、システイン、ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン、メチオニン、グルタミン酸、アスパラギン酸、グルタミン、アスパラギン、リジン、アルギニン、プロリン、ヒスチジン、フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファン、及びペプチジルグリカン細菌細胞壁の構成要素として同定されているアミノ酸及びアミノ酸類似体のものから選択される側鎖が挙げられる。
【０１１８】
「塩基性側鎖」を有するアミノ酸残基には、Ａｒｇ、Ｌｙｓ及びＨｉｓが挙げられる。「酸性側鎖」を有するアミノ酸残基には、Ｇｌｕ及びＡｓｐが挙げられる。「中性極性側鎖」を有するアミノ酸残基には、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｃｙｓ及びＴｙｒが挙げられる。「中性非極性側鎖」を有するアミノ酸残基には、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、Ｔｒｐ及びＰｈｅが挙げられる。「非極性脂肪族側鎖」を有するアミノ酸残基には、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ及びＬｅｕが挙げられる。「疎水性側鎖」を有するアミノ酸残基には、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ及びＴｒｐが挙げられる。「小さな疎水性側鎖」を有するアミノ酸残基には、Ａｌａ及びＶａｌが挙げられる。「芳香族側鎖」を有するアミノ酸残基には、ＴＹｒ、Ｔｒｐ及びＰｈｅが挙げられる。
【０１１９】
アミノ酸残基という用語は、本明細書で言及される任意の特定のアミノ酸の類似体、誘導体及び同族体をさらに含み、例えば、主題のアフィマー（特に化学合成によって生成される場合）は、例えば、シアノアラニン、カナバニン、ジェンコル酸、ノルロイシン、３−ホスホセリン、ホモセリン、ジヒドロキシ−フェニルアラニン、５−ヒドロキシトリプトファン、１−メチルヒスチジン、３−メチルヒスチジン、ジミニオピメリン酸、オルニチン、またはジアミノ酪酸のようなアミノ酸類似体を含むことができる。本明細書で好適である側鎖を有する他の天然に存在するアミノ酸の代謝産物または前駆体は、当業者によって認識されるであろうし、本発明の範囲に含まれる。
【０１２０】
含まれるのはまた、アミノ酸の構造が立体異性体を認める場合の、そのようなアミノ酸の（Ｄ）立体異性体及び（Ｌ）立体異性体である。本明細書におけるアミノ酸及びアミノ酸残基の構成は、適切な記号（Ｄ）、（Ｌ）または（ＤＬ）によって示され、さらに、構成が指定されていない場合、アミノ酸または残基は、構成（Ｄ）、（Ｌ）または（ＤＬ）を有することができる。本発明の化合物の一部の構造は不斉炭素原子を含むことが言及されるであろう。したがって、そのような不斉性から生じる異性体は本発明の範囲内に含まれることが理解されるべきである。そのような異性体は、古典的な分離手法によって、及び立体的に制御された合成によって実質的に純粋な形で得ることができる。本出願の目的で、特に反対に明白に言及されない限り、指定されたアミノ酸は（Ｄ）または（Ｌ）の双方の立体異性体を含むと解釈されるべきである。
【０１２１】
２以上の核酸またはポリペプチドの文脈における「同一の」または「同一性」パーセントという用語は、配列同一性の一部として保存的アミノ酸置換を考慮せずに、最大の対応のために比較した及び並べた場合（必要に応じてギャップを導入して）、同じである、または同じであるヌクレオチドまたはアミノ酸残基の特定の比率を有する２以上の配列または部分配列を指す。同一性パーセントは、配列比較ソフトウェアまたはアルゴリズムを使用して、または目視検査によって測定されてもよい。アミノ酸配列またはヌクレオチド配列の配列比較を得るために使用されてもよい種々のアルゴリズム及びソフトウェアは当該技術分野で周知である。これらには、ＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ、ＢｅｓｔＦｉｔ、ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｐａｃｋａｇｅ、及びそれらの変形が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本発明の２つの核酸またはポリペプチドは、実質的に同一であるということは、配列比較アルゴリズムを使用して、または目視検査によって測定されるように、最大の対応のために比較し、及び並べた場合、それらが少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、及びいくつかの実施形態では、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のヌクレオチドまたはアミノ酸残基の同一性を有することを意味する。いくつかの実施形態では、同一性は、少なくとも約１０残基、少なくとも約２０残基、少なくとも約４０〜６０残基、少なくとも約６０〜８０残基の長さ、またはその間での任意の整数値であるアミノ酸配列の領域にわたって存在する。いくつかの実施形態では、同一性は、少なくとも約８０〜１００残基のような６０〜８０残基よりも長い領域にわたって存在し、いくつかの実施形態では、配列は標的タンパク質または抗体のコード領域のような比較される配列の完全長にわたって実質的に同一である。いくつかの実施形態では、同一性は、少なくとも約１０塩基、少なくとも約２０塩基、少なくとも約４０〜６０塩基、少なくとも約６０〜８０塩基の長さ、またはそれらの間の任意の整数値であるヌクレオチド配列の領域にわたって存在する。いくつかの実施形態では、同一性は、少なくとも約８０〜１０００塩基以上のような６０〜８０塩基よりも長い領域にわたって存在し、いくつかの実施形態では、配列は、対象とするタンパク質をコードするヌクレオチド配列のような比較される配列の完全長にわたって実質的に同一である。
【０１２２】
「保存的アミノ酸置換」とは、１つのアミノ酸残基が類似の側鎖を有するもう１つのアミノ酸残基で置換されるものである。塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含む、類似の側鎖を有するアミノ酸残基ファミリーは当該技術分野において一般に定義されている。例えば、チロシンのフェニルアラニンによる置換は保存的な置換である。一般に、本発明のポリペプチド、可溶性タンパク質及び／または抗体の配列における保存的置換は、そのアミノ酸配列を含有するポリペプチド、可溶性タンパク質、または抗体の標的結合部位への結合を抑制しない。結合を排除しないアミノ酸の保存的置換を同定する方法は当該技術分野で周知である。
【０１２３】
「単離されて」いるポリペプチド、可溶性タンパク質、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は、天然には見られない形態であるポリペプチド、可溶性タンパク質、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物である。単離されたポリペプチド、可溶性タンパク質、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物には、もはやそれらが天然に見られる形態ではない程度まで精製されているものが挙げられる。いくつかの実施形態では、単離されているポリぺプチド、可溶性タンパク質、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は実質的に純粋である。
【０１２４】
本明細書で使用されるとき、「実質的に純粋」という用語は、少なくとも５０％純粋（すなわち、汚染物質を含まない）、少なくとも９０％純粋、少なくとも９５％純粋、少なくとも９８％純粋、または少なくとも９９％である物質を指す。
【０１２５】
本明細書で使用されるとき、「融合タンパク質」または「融合ポリペプチド」という用語は、少なくとも２つの遺伝子のヌクレオチド配列を含む核酸分子によって発現されるハイブリッドタンパク質を指す。
【０１２６】
本明細書で使用されるとき、「リンカー」または「リンカー領域」という用語は、第１のポリペプチド（例えば、アフィマーのコピー）と第２のポリペプチド（例えば、別のアフィマー、Ｆｃドメイン、リガンド結合ドメイン等）との間に挿入されるリンカーを指す。いくつかの実施形態では、リンカー部分はペプチドリンカーである。リンカーはポリペプチドの発現、分泌、または生物活性に悪影響を及ぼしてはならない。好ましくは、リンカーは抗原性ではなく、免疫応答を誘発しない。
【０１２７】
「アフィマー・抗体融合体」は、アフィマーポリペプチド部分と抗体の可変領域とを含む融合タンパク質を指す。アフィマー・抗体融合体は、例えば、そのＶＨ鎖及び／または  ＶＬ鎖の１以上のＣ末端またはＮ末端に付加された１以上のアフィマーポリペプチド配列を有する完全長抗体を含み、すなわち、構築された抗体の少なくとも１つの鎖はアフィマーポリペプチドとの融合タンパク質である。アフィマー・抗体融合体はまた、１以上のアフィマーポリペプチド配列が、抗原結合部位または抗体断片の可変領域を伴う融合タンパク質の一部として提供される実施形態も含む。
【０１２８】
本明細書で使用されるとき、「抗体」という用語は、抗原認識部位がふつう免疫グロブリン分子の可変領域内にある少なくとも１つの抗原認識部位を介して、標的、例えば、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、または前述のいずれかの組み合わせを認識し、特異的に結合する免疫グロブリン分子を指す。本明細書で使用されるとき、この用語は、インタクトなポリクローン抗体、インタクトなモノクローナル抗体、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片）、それら断片がＦｃまたは他のＦｃγＲＩＩＩ結合ドメインを含むようにフォーマットされているという条件で単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体、多重特異性抗体、二重特異性抗体、単一特異性抗体、一価抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体の抗原結合部位を含む融合タンパク質（Ｆｃまたは他のＦｃγＲＩＩＩ結合ドメインを含むようにフォーマットされた）、及び抗体が所望の生物活性を示す限り、抗原結合部位を含む任意の他の修飾された免疫グロブリン分子を包含する。
【０１２９】
抗体は、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、及びミューと呼ばれる重鎖定常ドメインの独自性に基づいて、免疫グロブリンの５つの主なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ、またはそれらのサブクラス（アイソタイプ）（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）のいずれかであることができる。
【０１３０】
抗体の「可変領域」という用語は、抗体軽鎖の可変領域または抗体重鎖の可変領域を単独でまたは組み合わせて指す。一般に、重鎖及び軽鎖の可変領域はそれぞれ、４つのフレームワーク領域（ＦＲ）と「超可変領域」としても知られる３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）から成る。各鎖内のＣＤＲは、フレームワーク領域によって極めて近接して一緒に保持され、他の鎖に由来するＣＤＲと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。ＣＤＲを決定するために少なくとも２つの技法：（１）異種間配列の変異性に基づく方法（すなわち、Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  ｅｄ．，１９９１，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．）、及び（２）抗原抗体複合体の結晶学的研究に基づく方法（Ａｌ  Ｌａｚｉｋａｎｉ，ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７３：９２７−９４８）がある。加えて、当該技術分野ではこれら２つの方法の組み合わせを用いてＣＤＲを決定することもある。
【０１３１】
本明細書で使用されるとき、「ヒト化抗体」という用語は、最小限の非ヒト（例えば、マウス）配列を含有する特定の免疫グロブリン鎖、キメラ免疫グロブリン、またはそれらの断片である非ヒト抗体の形態を指す。通常、ヒト化抗体は、ＣＤＲの残基が、所望の特異性、親和性及び／または結合機能を有する非ヒト種（例えば、マウス、ラット、ウサギ、またはハムスター）のＣＤＲに由来する残基によって置き換えられるヒト免疫グロブリンである。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域の残基は非ヒト種由来の抗体おける対応する残基で置き換えられる。ヒト化抗体を、Ｆｖフレームワーク領域での及び／または置き換えられた非ヒト残基内でのさらなる残基の置換によってさらに修飾し、抗体の特異性、親和性、及び／または結合機能を改善し、最適化することができる。ヒト化抗体は、非ヒト免疫グロブリンに対応するＣＤＲのすべてまたは実質的にすべてを含有する可変ドメインを含んでもよいのに対して、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべてはヒト免疫グロブリン配列のそれらである。いくつかの実施形態では、可変ドメインはヒト免疫グロブリン配列のフレームワーク領域を含む。いくつかの実施形態では、可変ドメインはヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のフレームワーク領域を含む。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域または定常ドメインの少なくとも一部（Ｆｃ）、通常、ヒト免疫グロブリンの少なくとも一部を含むこともできる。ヒト化抗体はふつうキメラ抗体とは異なると見なされる。
【０１３２】
「エピトープ」または「抗原決定基」という用語は本明細書では相互交換可能に使用され、特定の抗体、特定のアフィマーまたは他の特定の結合ドメインによって認識され特異的に結合されることが可能な抗原のその部分を指す。抗原がポリペプチドである場合、エピトープは、隣接アミノ酸、及びタンパク質の第３次折り畳みによって並置した非隣接アミノ酸の双方から形成することができる。隣接アミノ酸から形成されたエピトープ（線形エピトープとも呼ばれる）は通常、タンパク質変性の際に保持されるのに対して、第３次折り畳みによって形成されたエピトープ（立体構造エピトープとも呼ばれる）は通常、タンパク質変性の際に失われる。エピトープは通常、固有の空間構造にて少なくとも３、さらにふつうには少なくとも５、６、７または８〜１０のアミノ酸を含む。
【０１３３】
本明細書で使用されるとき、「に特異的に結合する」または「に対して特異的」であるという用語は、生体分子を含む分子の異種集団の存在下で標的の存在を決定する、標的とアフィマー、抗体または他の結合相手との間の結合のような測定可能な且つ再現可能な相互作用を指す。例えば、ある標的に特異的に結合するアフィマーは、それが他の標的に結合するよりも高い親和性、結合力（多量体で形成されていれば）で、さらに容易に、及び／またはさらに長い持続時間、この標的に結合するアフィマーである。
【０１３４】
ｃ．チェックポイント阻害剤、共刺激アゴニスト及び化学療法剤
「チェックポイント分子」は、組織及び／または免疫細胞によって発現され、チェックポイント分子の発現レベルに応じて免疫反応の有効性を低下させるタンパク質を指す。これらのタンパク質が遮断されると、免疫系の「ブレーキ」が解放され、例えば、Ｔ細胞はがん細胞をさらに効果的に殺傷することができる。Ｔ細胞またはがん細胞に見られるチェックポイントタンパク質の例には、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１及びＣＴＬＡ−４／Ｂ７−１／Ｂ７−２、ＰＤ−Ｌ２、ＮＫＧ２Ａ、ＫＩＲ、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、ＣＤ９６、ＶＩＳＴＡ及びＴＩＧＩＴが挙げられる。
【０１３５】
「チェックポイント阻害剤」は、チェックポイント分子からの免疫抑制シグナル伝達を反転させる薬物実体を指す。
【０１３６】
「共刺激分子」は、共刺激リガンドに特異的に結合し、それによって、増殖のような、しかしこれらに限定されない共刺激に介在するＴ細胞同族結合相手のような免疫細胞を指す。共刺激分子は、効果的な免疫応答を促進する抗原受容体またはリガンド以外の細胞表面分子である。共刺激分子には、ＭＨＣＩ分子、ＢＴＬＡ受容体及びトールリガンド、及びＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）及び４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）が挙げられるが、これらに限定されない。共刺激分子の例には、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４，２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（タクチル）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、及びＣＤ８３リガンドが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３７】
「共刺激アゴニスト」は、共刺激リガンドのような共刺激分子を活性化し（刺激し）、免疫刺激シグナルを生成する、さもなければ免疫応答の効力または有効性を高める薬物実体を指す。
【０１３８】
「化学療法剤」は、がんの治療に有用な化合物である。化学療法剤の例には、チオテパ及びシクロホシファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ）のようなアルキル化剤；ブスルファン、イムプロスルファン、及びピポスルファンのようなアルキルスルホネート；ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、及びウレドーパのようなアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド、及びトリメチロロメラミンを含むエチレンイミン及びメチルアメラミン；アセトゲニン（特にブラタシン及びブラタシノン）；デルタ−９−テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ）；ベータ−ラパコン；ラパコール；コルヒシン；ベツリン酸；カンプトテシン（合成類似体トポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ）、ＣＰＴ−１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ）、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン、及び９−アミノカンプトテシン）；ブリオスタチン；ペメトレキセド；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン、及びビゼレシン合成類似体を含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；ＴＬＫ−２８６；ＣＤＰ３２３、経口アルファ−４インテグリン阻害剤；サルコジクチイン；スポンジスタチン；クロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド、エストラムスチン、イフォスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベムビシン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロフォスファミド、ウラシルマスタードのようなナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニンヌスチンのようなニトロソウレア；エネジイン抗生物質（例えば、カリケアミシン、特にカリケアミシンガンマ１Ｉ及びカリケアミシンオメガＩ１のような抗生物質（例えば、Ｎｉｃｏｌａｏｕ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３−１８６（１９９４）を参照のこと）；ダイネマイシンＡを含むダイネマイシン；エスペラマイシン；ならびにネオカルチノスタチン発色団及び関連する色素タンパクエンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシニス（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎｉｓ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ、モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣｌリポソーム注射剤（ＤＯＸＩＬ）、及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣのようなマイトマイシン、ミコフェノール��、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシンのような抗生物質；メソトレキセート、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ）、テガフール（ＵＦＴＯＲＡＬ）、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ）、エポチロン、及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）のような代謝アンタゴニスト；デノプテリン、メソトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキサートのような葉酸類似体；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンのようなプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、及びイマチニブ（２−フェニルアミノピリミジン誘導体）のようなピリミジン類似体、ならびに他のｃ−Ｋｉｔ阻害剤；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンのような抗副腎剤（ａｎｔｉ−ａｄｒｅｎａｌｓ）；フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）のような葉酸補充剤；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルチン；ジアジコン；エルフォルニチン（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；マイタンシン及びアンサミトシンのようなマイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメト（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ロソキサントロン；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ多糖類複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇ．）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｅｎｅｓ）（特に、Ｔ−２トキシン、ベラクリンＡ（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ  Ａ）、ロリジンＡ（ｒｏｒｉｄｉｎ  Ａ）、及びアングイジン）；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ、ＦＩＬＤＥＳＩＮ）；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ）、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（ＡＢＲＡＸＡＮＥ）、及びドキセタキセル（ｄｏｘｅｔａｘｅｌ）（ＴＡＸＯＴＥＲＥ）；クロランブシル；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メソトレキセート；シスプラチン及びカルボプラチンのような白金類似体；ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ）；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ）���オキサリプラチン；ロイコボビン（ｌｅｕｃｏｖｏｖｉｎ）；ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ）；ノバントロン（ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロネート；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ｄｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｌｈｙｌｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸のようなレチノイド；上記のうちいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体；ならびに、ＣＨＯＰ、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、及びプレドニゾロンの併用療法の略語、及びＦＯＬＦＯＸ、５−ＦＵ及びロイコボビンと組み合わせたオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標））を用いた治療計画の略語のような上記の２以上の組み合わせが挙げられる。
【０１３９】
この定義に含まれるのはまた、癌の成長を促進することができるホルモンの効果を調節する、低減する、遮断する、または阻害するように作用し、全身性または体全体の治療の形態にあることが多い抗ホルモン剤である。それらがホルモン自体であってもよい。例には、例えば、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸタモキシフェンを含む）、ラロキシフェン（ＥＶＩＳＴＡ）、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、及びトレミフェン（ＦＡＲＥＳＴＯＮ）を含む、抗エストロゲン薬ならびに選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）；抗プロゲステロン薬；エストロゲン受容体下方調節剤（ＥＲＤ）；フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ）のようなエストロゲン受容体アンタゴニスト；卵巣を抑制するまたは活動停止させるように機能する薬剤、例えば、酢酸リュープロリド（ＬＵＰＲＯＮ及びＥＬＩＧＡＲＤ）、酢酸ゴセレリン、酢酸ブセレリン、及びトリプテレリン（ｔｒｉｐｔｅｒｅｌｉｎ）のような黄体化（ｌｅｕｔｉｎｉｚｉｎｇ）ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）作動薬；フルタミド、ニルタミド、及びビカルタミドのような抗アンドロゲン薬；ならびに、副腎内のエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば、４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、酢酸メゲストロール（ＭＥＧＡＳＥ）、エキセメスタン（ＡＲＯＭＡＳＩＮ）、ホルメスタニー（ｆｏｒｍｅｓｔａｎｉｅ）、ファドロゾール、ボロゾール（ＲＩＶＩＳＯＲ）、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ）、及びアナストロゾール（ＡＲＩＭＩＤＥＸ）等が挙げられる。加えて、化学療法剤のそのような定義には、クロドロネート（例えば、ＢＯＮＥＦＯＳまたはＯＳＴＡＣ）、エチドロネート（ＤＩＤＲＯＣＡＬ）、ＮＥ−５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ）、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ）、パミドロネート（ＡＲＥＤＩＡ）、チルドロネート（ＳＫＥＬＩＤ）、またはリセドロネート（ＡＣＴＯＮＥＬ）のようなビスホスホネート類；ならびにトロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、例えば、ＰＫＣ−α、Ｒａｆ、Ｈ−Ｒａｓ、及び上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）のような、接着細胞の増殖に関与するシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの；ＴＨＥＲＡＴＯＰＥワクチン及び遺伝子療法ワクチンのようなワクチン類、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮワクチン、及びＶＡＸＩＤワクチン；トポイソメラーゼ１阻害剤（例えば、ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ）；フルベストラントのような抗エストロゲン薬；イマチニブまたはＥＸＥＬ−０８６２（チロシンキナーゼ阻害剤）のようなＫｉｔ阻害剤；エルロチニブまたはセツキシマブのようなＥＧＦＲ阻害剤；ベバシズマブのような抗ＶＥＧＦ阻害剤；アリノテカン（ａｒｉｎｏｔｅｃａｎ）；ｒｍＲＨ（例えば、ＡＢＡＲＥＬＩＸ；ラパチニブ及びラパチニブジトシレート（ＧＷ５７２０１６としても知られるＥｒｂＢ−２及びＥＧＦＲ二重チロシンキナーゼ小分子阻害剤）；１７ＡＡＧ（熱シ���ックタンパク質（Ｈｓｐ）９０毒であるゲルダナマイシン誘導体）、ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体が含まれる。
【０１４０】
本明細書で使用されるとき、「サイトカイン」という用語は、別の細胞に対して細胞間メディエーターとして作用する、またはタンパク質を産生している細胞に対する自己分泌作用を有する、１つの細胞集団によって放出されるタンパク質を総称的に指す。そのようなサイトカインの例には、リンフォカイン、モノカイン；インターロイキン（「ＩＬ」）、例えば、ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ  ｒＩＬ−２を含むＩＬ−１、ＩＬ−１α、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７Ａ〜Ｆ、ＩＬ−１８〜ＩＬ−２９（例えば、ＩＬ−２３）、ＩＬ−３１；ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−β、ＴＧＦ−β１〜３のような腫瘍壊死因子；及び白血病阻害因子（「ＬＩＦ」）、毛様体神経栄養因子（「ＣＮＴＦ」）、ＣＮＴＦ様サイトカイン（「ＣＬＣ」）、カルジオトロフィン（「ＣＴ」）、及びキットリガンド（「ＫＬ」）を含む他のポリペプチド因子が挙げられる。
【０１４１】
本明細書で使用されるとき、「ケモカイン」という用語は、白血球の化学遊走及び活性化を選択的に誘発する能力を有する可溶性因子（例えば、サイトカイン）を指す。それらはまた、血管新生、炎症、創傷治癒、及び腫瘍発生のプロセスを引き起こす。例示的なケモカインには、ＩＬ−８、マウスケラチノサイト化学遊走物質（ＫＣ）のヒトホモログが挙げられる。
【０１４２】
ｄ．治療
本明細書で使用されるとき、「機能障害性」という用語には、抗原認識に対する不応性または無応答性、具体的には、抗原認識を増殖、サイトカイン産生（例えば、ＩＬ−２）、及び／または標的細胞殺傷のような下流のＴ細胞エフェクター機能に変換する能力の障害も含まれる。
【０１４３】
「アネルギー」という用語は、Ｔ細胞受容体を介して送達される不完全または不十分なシグナル（例えば、ｒａｓ活性化の非存在下での細胞内Ｃａ２＋の上昇）に起因する、抗原刺激に対する無応答の状態を指す。Ｔ細胞アネルギーは、共刺激の非存在下での抗原による刺激の際にも生じることができ、共刺激という状況下であっても抗原によるその後の活性化に不応性になる細胞を生じる。無応答状態はインターロイキン２の存在によって覆され得ることが多い。アネルギーＴ細胞はクローン増殖を経ず、及び／またはエフェクター機能を獲得しない。
【０１４４】
「疲弊」という用語は、多くの慢性感染及び癌の発症中に生じる持続的ＴＣＲシグナル伝達に起因するＴ細胞機能障害の状態としてのＴ細胞疲弊を指す。それは、不完全なまたは不十分なシグナル伝達を介してではなく、持続的シグナル伝達に起因するという点でアネルギーとは区別される。それは、エフェクター機能不良、阻害性受容体の持続的発現、及び機能的なエフェクターＴ細胞またはメモリーＴ細胞とは異なる転写状態によって定義される。疲弊は感染及び腫瘍の最適な制御を妨げる。
【０１４５】
「Ｔ細胞機能を増強すること」とは、持続したもしくは増幅された生物学的機能を有するようにＴ細胞を誘導する、引き起こす、もしくは刺激すること、または疲弊したもしくは不活性のＴ細胞を再生するもしくは再活性化することを意味する。Ｔ細胞機能の増強の例には、介入前のレベルと比較した、ＣＤ８＋Ｔ細胞からのγインターフェロンの分泌の増加、増殖の増加、抗原応答性（例えば、ウイルス、病原体、または腫瘍のクリアランス）の上昇が挙げられる。一実施形態では、増強のレベルは、少なくとも５０％、代わりに６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２０％、１５０％、２００％である。この増強を測定する様式は当業者に既知である。
【０１４６】
「Ｔ細胞機能障害性障害」とは、抗原刺激への応答性の低下を特徴とするＴ細胞の障害または状態である。特定の実施形態では、Ｔ細胞機能障害性障害は、ＰＤ−１の不適切な上昇レベルに具体的に関連する障害である。Ｔ細胞機能障害性障害はまた、Ｔ細胞の抗腫瘍機能（複数可）の抑制を生じる、腫瘍内のＰＤ−Ｌ１のレベルの不適切な上昇と関連することもできる。別の実施形態では、Ｔ細胞機能障害性障害は、Ｔ細胞がアネルギーであるもの、またはサイトカインを分泌する、増殖する、もしくは細胞溶解活性を実行する能力が低下したものである。具体的な態様では、応答性の低下により、免疫原を発現する病原体または腫瘍の無効な制御がもたらされる。Ｔ細胞機能障害を特徴とするＴ細胞機能障害性障害の例には、未解明の急性感染、慢性感染、及び腫瘍免疫が挙げられる。
【０１４７】
「腫瘍免疫」とは、腫瘍が免疫認識及びクリアランスを回避するプロセスを指す。したがって、治療的概念として、腫瘍免疫は、そのような回避が減衰し、腫瘍が免疫系によって認識され、攻撃されるときに「治療される」。腫瘍認識の例には、腫瘍結合、腫瘍収縮、及び腫瘍クリアランスが挙げられる。
【０１４８】
「持続的応答」とは、治療の休止後に腫瘍成長を低減することに対する持続的効果を指す。例えば、腫瘍サイズは、投与期の開始時のサイズと比較して同じままであるか、またはより小さくなり得る。いくつかの実施形態では、持続的応答は、治療期間と少なくとも同じ期間、治療期間の少なくとも１．５倍、２．０倍、２．５倍、または３．０倍の長さの期間を有する。
【０１４９】
本明細書で使用されるとき、「がん」及び「がん性」という用語は細胞の集団が無秩序な細胞増殖を特徴とする哺乳動物の生理的状態を指す、または記載する。がんの例には、癌腫、芽細胞腫、肉腫、及びリンパ腫や白血病のような血液癌が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５０】
本明細書で使用されるとき、「腫瘍」及び「新生物」という用語は、過剰な細胞成長または細胞増殖、良性（非がん性）または前がん性病変を含む悪性（がん性）のいずれかのから生じる組織の任意の塊を指す。腫瘍の成長は一般に制御されておらず且つ進行性であり、正常細胞の増殖を誘導せず、または阻害しない。腫瘍は、膀胱、骨、脳、乳房、軟骨、グリア細胞、食道、ファロピウス管、胆嚢、心臓、腸、腎臓、肝臓、肺、リンパ節、神経組織、卵巣、膵臓、前立腺、骨格筋、皮膚、脊髄、脾臓、胃、精巣、胸腺、甲状腺、気管、尿道、尿管、尿道、子宮、膣の臓器または組織または対応する細胞から選択されるものを含むがこれらに限定されない、種々の細胞、組織または臓器に影響を及ぼすことができる。腫瘍には、肉腫、癌腫、形質細胞腫、または（悪性形質細胞）のようながんが含まれる。本発明の腫瘍には、白血病（例えば、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、急性前骨髄性白血病、急性骨髄性単球性白血病、急性単球性白血病、急性白血病、慢性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性赤血球血症）、リンパ腫（ホジキン病、非ホジキン病）、原発性マクログロブリン血症疾患、重鎖疾患、及び肉腫癌のような固形腫瘍（例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、血管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫瘍、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑骨髄肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、癌腫、気管支原性癌腫、髄質癌腫、腎細胞癌腫、肝腫、ナイル管癌腫、脈絡膜癌腫、精子腫瘍、胚性癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、子宮癌、精巣癌、肺癌腫、小細胞肺癌腫、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、シュワン腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫）、食道癌、胆嚢癌、腎臓癌、多発性骨髄腫が挙げられてもよいが、これらに限定されない。好ましくは、「腫瘍」には、膵臓癌、肝臓癌、肺癌、胃癌、食道癌、頭頸部扁平上皮癌、前立腺癌、結腸癌、乳癌、リンパ腫、胆嚢癌、腎細胞癌、白血病、多発性骨髄腫、卵巣癌、子宮頸癌、及び神経膠腫が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５１】
本明細書で使用されるとき、「転移」という用語は、がんが、発生部位から身体の他の領域に広がり、または移転し、新しい場所で同様のがん性病変を発生するプロセスを指す。「転移性の」または「転移している」細胞は、隣接する細胞との接着接触を失い、血流またはリンパを介して疾患の原発部位から移動して、隣接する身体構造に侵入するものである。
【０１５２】
「がん細胞」及び「腫瘍細胞」という用語は、がんまたは腫瘍または前がん病変に由来する細胞の総集団を指し、がん細胞集団の大部分を構成する非腫瘍形成性細胞及び腫瘍形成性幹細胞（がん幹細胞）の双方を含む。本明細書で使用されるとき、「がん細胞」または「腫瘍細胞」という用語は、それら腫瘍細胞をがん幹細胞から区別するために再生する及び分化する能力を欠く細胞のみを指す場合、「非腫瘍形成性」という用語によって修飾されるであろう。
【０１５３】
本明細書で使用されるとき、「有効量」という用語は、治療上または予防上の利益を提供するための量を指す。
【０１５４】
本明細書で使用されるとき、「完全奏功」または「ＣＲ」は、全ての標的病変の消失を指し、「部分奏功」または「ＰＲ」は、ベースライン最長直径（ＳＬＤ）を基準として、標的病変のＳＬＤの合計の少なくとも３０％減少を指し、「安定な疾患」または「ＳＤ」は、治療を開始して以来、最小のＳＬＤを基準として、ＰＲに適格とするのに十分な標的病変の収縮も、ＰＤに適格とするのに十分な増加もないことを指す。
【０１５５】
本明細書で使用されるとき、「無進行生存期間」（ＰＦＳ）は、治療されている疾患（例えば、がん）が悪化しない、治療中及び治療後の時間の長さを指す。無進行生存期間は、患者が完全奏功または部分奏功を経験した時間量、ならびに患者が安定を経験した時間量を含んでもよい。
【０１５６】
本明細書で使用されるとき、「全奏効率」（ＯＲＲ）は、完全奏効（ＣＲ）率及び部分奏効（ＰＲ）率の合計を指す。
【０１５７】
本明細書で使用されるとき、「全生存率」は、特定期間後に生きている可能性が高い個体の群における割合を指す。
【０１５８】
本明細書で使用されるとき「治療」という用語は、細胞の介入によって引き起こされる臨床疾患のプロセスまたは治療を変えようとする個人を指し、臨床病理学の予防的介入経過のいずれかであってもよい。疾患の発生または再発を予防するための治療、症状の緩和、疾患の任意の直接的または間接的な病理学的結果の減少、転移の予防、疾患進行速度の低減、疾患の寛解の改善または疾患の寛解、または予後の改善が含まれるが、これらに限定されない。
【０１５９】
「対象」という用語は、特定の治療のレシピエントとなる、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、げっ歯類等を含むがこれらに限定されない任意の動物（例えば、哺乳動物）を指す。通常、「対象」及び「患者」という用語は、本明細書ではヒト対象を参照して相互交換可能に使用される。
【０１６０】
本明細書で使用されるとき「アゴニスト」及び「アゴニストの」という用語は、標的または標的経路の生物活性を直接的または間接的に実質的に誘導する、活性化する、促進する、高める、または増強することができる薬剤を指す。「アゴニスト」という用語は本明細書では、対象とするタンパク質または他の標的の活性を部分的または完全に誘導する、活性化する、促進する、高める、または増強する任意の薬剤を含めるために使用される。
【０１６１】
本明細書で使用される「アンタゴニスト」及び「アンタゴニストの」という用語は、標的及び／または経路の生物活性を直接的または間接的に、部分的または完全に遮断する、阻害する、低減する、または中和することができる薬剤を指す、または説明する。「アンタゴニスト」という用語は、対象とするタンパク質または他の標的の活性を部分的または完全に遮断する、阻害する、低減する、または中和する任意の薬剤を含めるために本明細書で使用される。
【０１６２】
本明細書で使用されるとき「調節」及び「調節する」という用語は、生物活性の変化または変更を指す。調節には、活動を刺激することまたは活動を阻害することが含まれるが、これらに限定されない。調節は、活性の増加または活性の減少、結合特性の変化、または対象とするタンパク質、経路、システム、もしくは他の生物学的標的の活性に関連する生物学的、機能的、もしくは免疫学的な特性のその他の変化であってもよい。
【０１６３】
本明細書で使用されるとき「免疫応答」という用語は、自然免疫系及び適応免疫系の双方からの応答を含む。それは細胞介在性免疫反応及び／または液性免疫反応の双方を含む。それには、Ｔ細胞とＢ細胞の双方の応答、と同様にナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、マクロファージ等のような免疫系の他の細胞からの応答が含まれる。
【０１６４】
「薬学的に許容される」という用語は、連邦政府もしくは州政府の規制機関によって承認されたもしくは承認可能な、または米国薬局方もしくは他の一般に認められている薬局方に載せられた、ヒトを含む動物で使用するための物質を指す。
【０１６５】
「薬学的に許容される賦形剤、担体またはアジュバント」または「薬学的に許容される担体」という用語は、本開示の少なくとも１つの作用物質と一緒に対象に投与することができ、その薬理学的活性を破壊しない且つ治療効果を送達するのに十分な用量で投与されたとき非毒性である、賦形剤、担体またはアジュバントを指す。一般に、当業者及び米国ＦＤＡは薬学的に許容される賦形剤、担体、またはアジュバントを任意の製剤の不活性成分であると見なしている。
【０１６６】
「有効量」または「治療有効量」または「治療効果」という用語は、哺乳動物のような対象における疾患または障害を「治療」するのに有効な本明細書に記載されている結合剤・薬物コンジュゲートの量を指す。がんまたは腫瘍の場合、ＰＤ−Ｌ１を結合する結合剤−薬物コンジュゲートの治療有効量は治療効果があるので、免疫応答を高め、抗腫瘍応答を高め、免疫細胞の細胞溶解活性を高め、免疫細胞による腫瘍細胞の殺傷を増加させ、腫瘍細胞の数を減らし；腫瘍形成性、腫瘍形成頻度または腫瘍形成能を低下させ；がん肝細胞の数及び頻度を減らし；腫瘍のサイズを減らし；がん細胞集団を減らし；例えば、軟組織及び骨へのがんの拡散を含む末梢臓器へのがん細胞の浸潤を阻害または停止し；腫瘍またはがん細胞の転移を抑制及び停止し；腫瘍またはがん細胞の増殖を阻害及び停止し；がんに関連する症状の１以上をある程度緩和し；罹患率と死亡率を減らし；生活の質を向上させ；またはそのような効果の組み合わせを改善する。
【０１６７】
「治療する」または「治療」または「治療すること」または「緩和する」または「緩和すること」という用語は、（１）診断された病状または障害の症状を治癒する、減速する、軽減する及び／または進行を停止する治療上の措置と、（２）標的となる病状または障害の発症を予防または遅延させる予防上のまたは予防的な措置の双方を指す。したがって、治療が必要なものとしては、障害を既に持つもの；障害を有する傾向があるもの；及び障害を予防する必要があるものが挙げられる。癌または腫瘍の場合、患者が以下：免疫応答の増加、抗腫瘍応答の増加、免疫細胞の細胞溶解活性の上昇、免疫細胞による腫瘍細胞の殺傷の増加、がん細胞の数の減少または完全な欠如；腫瘍サイズの低下；軟組織及び骨へのがん細胞の拡散を含む、末梢臓器へのがん細胞浸潤の阻害または欠如；腫瘍またはがん細胞の転移の抑制または欠如；がんの増殖の抑制または欠如；特定のがんに関連する１以上の症状の緩和；罹患率と死亡率の低下；生活の質の向上；腫瘍形成性の低下；がん幹細胞の数または頻度の減少；または効果のいくつかの組み合わせの１以上を示すのならば、本発明の方法に従って対象は上手く「治療」されている。
【０１６８】
ｅ．その他
「アルキル」という用語は、直鎖アルキル基、分岐鎖アルキル基、シクロアルキル（脂環式）基、アルキル置換シクロアルキル基、及びシクロアルキル置換アルキル基を含む飽和脂肪族基のラジカルを指す。特定の実施形態では、直鎖または分岐鎖のアルキルは、その骨格内に３０以下の炭素原子（例えば、直鎖用にＣ１〜Ｃ３０、分岐鎖用にＣ３〜Ｃ３０）、例えば、２０以下の炭素原子を有する。同様に、特定のシクロアルキルは、その環構造中に３〜１０の炭素原子を有し、例えば、環構造中に５、６または７の炭素を有する。本明細書及びクレームの全体を通して使用されるような「アルキル」（または「低級アルキル」）は、「非置換アルキル」及び「置換アルキル」の双方を含むことが意図される。
【０１６９】
「アラルキル」という用語は本明細書で使用されるとき、アリール基（例えば、芳香族またはヘテロ芳香族）で置換されたアルキル基を指す。
【０１７０】
「アルケニル」及び「アルキニル」という用語は、類似した長さであり、上記に記載されているアルキルに対して置換が可能であるが、少なくとも１つの二重結合または三重結合をそれぞれ含有する、不飽和脂肪族基を指す。
【０１７１】
炭素数が別段に特定されない限り、本明細書で使用されるとき「低級アルキル」は、上記で定義されたような、しかし、その骨格構造中に１〜１０の炭素、例えば、１〜４または１〜６の炭素原子を有するアルキル基を意味する。同様に、「低級アルケニル」及び「低級アルキニル」は同様の鎖長を有する。いくつかの実施形態では、アルキル基は低級アルキルである。いくつかの実施形態では、本明細書でアルキルとして指定される置換基は低級アルキルである。
【０１７２】
本明細書で使用されるとき「アリール」という用語には、例えば、ベンゼン、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、トリアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジン、及びピリミジン等のような、０〜４のヘテロ原子を含んでもよい５−、６−、及び７−員環の単環芳香族基が含まれる。環構造にてヘテロ原子を有するそれらのアリール基は、「アリール複素環」または「ヘテロ芳香族」とも呼ばれてもよい。芳香族環は、１以上の環位置にて上記に記載されているような置換基、例えば、ハロゲン、アジド、アルキル、アラルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヒドロキシル、アミノ、ニトロ、スルフヒドリル、イミノ、アミド、ホスホナート、ホスフィナート、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、アルキルチオ、スルホニル、スルホンアミド、ケトン、アルデヒド、エステル、ヘテロシクリル、芳香族部分または複素芳香族部分、−ＣＦ３、−ＣＮ、等によって置換することができる。「アリール」という用語にはまた、２以上の炭素が２つの隣接する環に共通であり（環は「縮合環」である）、環のうちの少なくとも１つが芳香族であり、例えば、他の環式環または環は、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、及び／またはヘテロシクリルであることができる、２以上の環式環を有する多環式環系も含まれる。
【０１７３】
「ヘテロシクリル」または「複素環基」という用語は、３から１０員環の環構造、例えば、３から７員環の環を指し、その環構造には１から４のヘテロ原子が含まれる。複素環は多環であることもできる。ヘテロシクリル基には、例えば、チオフェン、チアントレン、フラン、ピラン、イソベンゾフラン、クロメン、キサンテン、フェノキサチン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、イソチアゾール、イソオキサゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、インドリジン、イソインドール、インドール、インダゾール、プリン、キノリジン、イソキノリン、キノリン、フタラジン、ナフチリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、プテリジン、カルバゾール、カルボリン、フェナントリジン、アクリジン、ピリミジン、フェナントロリン、フェナジン、フェナルサジン、フェノチアジン、フラザン、フェノキサジン、ピロリジン、オキソラン、チオラン、オキサゾール、ピペリジン、ピペラジン、モルフォリン、ラクトン、例えば、アゼチジノン及びピロリジノンのようなラクタム、スルタム及びスルトン等が挙げられる。複素環は、１以上の位置にて、例えば、ハロゲン、アルキル、アラルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヒドロキシル、アミノ、ニトロ、スルフヒドリル、イミノ、アミド、ホスホナート、ホスフィナート、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、アルキルチオ、スルホニル、ケトン、アルデヒド、エステル、ヘテロシクリル、芳香族部分またはヘテロ芳香族部分、−ＣＦ３、−ＣＮ、等のような上記に記載されているような置換基で置換することができる。
【０１７４】
「ヘテロアリール」という用語は、少なくとも１つの環原子が、Ｏ、Ｎ及びＳから成る群から独立して選択されるヘテロ原子である一価芳香族単環系を指す。５員環ヘテロアリールという用語は環原子の数が５であるヘテロアリールを指す。５員環ヘテロアリール基の例には、ピロリル、ピラゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、フラザニル、イミダゾリニル、及びトリアゾリルが挙げられる。
【０１７５】
「ヘテロシクロアルキル」という用語は、１〜４の環原子がＯ、Ｎ及びＳから成る群から独立して選択されるヘテロ原子である、単環式または二環式の一価飽和または非芳香族不飽和の環系を指す。「３〜１０員環ヘテロシクロアルキル」という用語は、環原子の数が３〜１０であるヘテロシクロアルキルを指す。３〜１０員環のヘテロシクロアルキルの例には３〜６員環のヘテロシクロアルキルが挙げられる。二環式環系には、縮合環系、架橋環系、及びスピロ環式環系が含まれる。ヘテロシクロアルキル基のさらに特定の例には、アゼパニル、アゼチジニル、アジリジニル、イミダゾリジニル、モルホリニル、オキサゾリジニル、オキサゾリジニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピラゾリジニル、ピロリジニル、キヌクリジニル、及びチオモルホリニルが挙げられる。
【０１７６】
「ポリシクリル」または「多環基」という用語は、２以上の炭素が２つの隣接する環に共通する、例えば、環は「縮合環」である、２以上の環（例えば、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、及び／またはヘテロシクリル）を指す。隣接していない原子を介して結合される環は「架橋」環と呼ばれる。多環の環のそれぞれは、例えば、ハロゲン、アルキル、アラルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヒドロキシル、アミノ、ニトロ、スルフヒドリル、イミノ、アミド、ホスホナート、ホスフィナート、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、アルキルチオ、スルホニル、ケトン、アルデヒド、エステル、ヘテロシクリル、芳香族部分または複素芳香族部分、−ＣＦ３、−ＣＮ、等のような上記に記載されているような置換基で置換することができる。
【０１７７】
「炭素環」という用語は本明細書で使用されるとき、環の各原子が炭素である芳香族環または非芳香族環を指す。
【０１７８】
「ヘテロ原子」という用語は本明細書で使用されるとき、炭素または水素以外の任意の元素の原子を意味する。例示的なヘテロ原子は、窒素、酸素、イオウ及びリンである。
【０１７９】
本明細書で使用されるとき、「ニトロ」という用語は−ＮＯ２を意味し；「ハロゲン」という用語は−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒまたは−Ｉを示し；「スルフヒドリル」という用語は−ＳＨを意味し；「ヒドロキシル」という用語は−ＯＨを意味し；「スルホニル」という用語は−ＳＯ２−を意味する。
【０１８０】
「ハロゲン」または「ハロ」は、それ自体で、または別の置換基の一部として、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素、またはフルオロ、クロロ、ブロモ及びヨードを指す。
【０１８１】
「置換」または「で置換された」は、そのような置換が置換原子及び置換基の許容価数に従うこと、ならびにその置換が、例えば、再構成、環化、脱離等によって自発的に変形を起こさない安定な化合物を生じるという暗黙の条件を含むことが理解されるであろう。
【０１８２】
本明細書で使用されるとき、「置換された」という用語は、有機化合物の全ての許容される置換基を含むことが企図される。幅広い態様では、許容される置換基は、有機化合物の非環式及び環式、分岐及び非分岐、炭素環式及び複素環式、芳香族及び非芳香族の置換基を含む。例示的な置換基には、例えば、上記に記載されたものが含まれる。許容される置換基は、適切な有機化合物に対して１以上であることができ、且つ同じ、または異なっていることができる。置換基には、例えば、ハロゲン、ヒドロキシル、カルボニル（例えば、カルボキシル、エステル、ホルミル、またはケトン）、チオカルボニル（例えば、チオエステル、チオアセテート、またはチオホルメート）、アルコキシ、ホスホリル、ホスホネート、ホスフィネート、アミノ、アミド、アミジン、イミン、シアノ、ニトロ、アジド、スルフヒドリル、アルキルチオ、サルフェート、スルホネート、スルファモイル、スルホンアミド、スルホニル、ヘテロシクリル、アラルキル、または芳香族部分またはヘテロ芳香族部分を挙げることができる。当業者には、炭化水素鎖上で置換された部分が、適切な場合はそれ自体置換されてもよいことが理解されるであろう。例えば、置換アルキルの置換基には、アミノ、アジド、イミノ、アミド、ホスホリル（ホスホン酸塩及びホスフィン酸塩を含む）、スルホニル（スルフェート、スルホンアミド、スルファモイル、及びスルホネートを含む）、及びシリル基、ならびにエーテル、アルキルチオ、カルボニル（ケトン、アルデヒド、カルボキシレート、及びエステルを含む）、−ＣＦ３、−ＣＮ等の置換形態及び非置換形態が挙げられてもよい。例示的な置換アルキルは以下に記載されている。シクロアルキルは、アルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキルチオ、アミノアルキル、カルボニル置換アルキル、−ＣＦ３、−ＣＮ等でさらに置換することができる。本発明の目的で、窒素のようなヘテロ原子は、ヘテロ原子の原子価を満たす、本明細書に記載されている有機化合物の水素置換基及び／または任意の許容される置換基を有してもよい。本発明は、有機化合物の許容される置換基によっていかなる方法でも制限されることを意図するものではない。
【０１８３】
「アミノ酸残基」及び「ペプチド残基」という用語は、そのカルボキシル基の−ＯＨを含まないアミノ酸またはペプチドの分子を意味する。一般に、アミノ酸及び保護基を指定するために本明細書で使用される略語は、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ  生化学命名委員会の推奨に基づく（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，（１９７２），１１：１７２６−１７３２を参照）。例えば、Ｍｅｔ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ａｌａ、及びＧｌｙは、それぞれメチオニン、イソロイシン、ロイシン、アラニン、及びグリシンの「残基」を表す。残基とは、カルボキシル基のＯＨ部分及びα−アミノ基のＨ部分を除去することによって対応するα−アミノ酸に由来するラジカルを意味する。「アミノ酸側鎖」という用語は、Ｋ．Ｄ．Ｋｏｐｐｌｅ，”Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ”，Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ  Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  ａｎｄ  Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，１９６６，２及び３３ページによって定義されているように、−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨ部分を除くアミノ酸の部分である。
【０１８４】
ほとんどの場合、本発明の適用に使用されるアミノ酸は、タンパク質に見られる天然に存在するアミノ酸、またはアミノ基及びカルボキシル基を含有するそのようなアミノ酸の天然に存在する同化産物または異化産物である。特に好適なアミノ酸側鎖には、以下のアミノ酸：グリシン、アラニン、バリン、システイン、ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン、メチオニン、グルタミン酸、アスパラギン酸、グルタミン、アスパラギン、リジン、アルギニン、プロリン、ヒスチジン、フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファンのもの、及びペプチジルグリカン細菌細胞壁の構成要素として同定されているアミノ酸及びアミノ酸類似体のものから選択される側鎖が挙げられる。
【０１８５】
アミノ酸残基という用語にはさらに、本明細書で言及される任意の特定のアミノ酸の類似体、誘導体及び同族体が含まれ、例えば、主題の化合物は、例えば、シアノアラニン、カナバニン、ジェンコル酸、ノルロイシン、３−ホスホセリン、ホモセリン、ジヒドロキシ−フェニルアラニン、５−ヒドロキシトリプトファン、１−メチルヒスチジン、３−メチルヒスチジン、ジミニオピメリン酸、オルニチン、またはジアミノ酪酸のようなアミノ酸類似体を含むことができる。本明細書で好適である側鎖を有する他の天然に存在するアミノ酸代謝産物または前駆体は、当業者によって認識されるであろうし、本発明の範囲に含まれる。
【０１８６】
含まれるのはまた、アミノ酸の構造が立体異性体を認める場合の、そのようなアミノ酸の（Ｄ）立体異性体及び（Ｌ）立体異性体である。本明細書におけるアミノ酸及びアミノ酸残基の構成は、適切な記号（Ｄ）、（Ｌ）または（ＤＬ）によって示され、さらに、構成が指定されていない場合、アミノ酸または残基は、構成（Ｄ）、（Ｌ）または（ＤＬ）を有することができる。本発明の化合物の一部の構造は、不斉炭素原子を含むことが言及されるであろう。したがって、そのような不斉性から生じる異性体は本発明の範囲内に含まれることが理解されるべきである。そのような異性体は、古典的な分離手法によって、及び立体的に制御された合成によって実質的に純粋な形で得ることができる。本出願の目的で、特に反対に明白に言及されない限り、指定されたアミノ酸は（Ｄ）または（Ｌ）の双方の立体異性体を含むと解釈されるべきである。
【０１８７】
上記で言及されたように、本発明の特定の化合物は、特定の幾何異性体または立体異性体の形態で存在してもよい。本発明は、シス異性体及びトランス異性体、Ｒエナンチオマー及びＳエナンチオマー、ジアステレオマー、（Ｄ）異性体、（Ｌ）異性体、それらのラセミ混合物、及びそれらの他の混合物を含むすべてのそのような化合物を本発明の範囲内に入るように企図する。追加の不斉炭素原子がアルキル基のような置換基に存在してもよい。そのようなすべての異性体、と同様にそれらの混合物は本発明に含まれることが意図される。
【０１８８】
例えば、本発明の化合物の特定のエナンチオマーが所望であるならば、それは、不斉合成によって、またはキラル補助剤による導出によって調製されてもよく、その際、得られるジアステレオマー混合物は分離され、補助基が切断されて、純粋な所望のエナンチオマーを提供する。あるいは、分子がアミノのような塩基性官能基、またはカルボキシルのような酸性官能基を含有する場合、ジアステレオマー塩は適切な光学活性酸または塩基で形成され、その後、こうして形成されたジアステレオマーの当該技術分野で周知の分別結晶またはクロマトグラフィーの手段による分割、及びその後の純粋なエナンチオマーの回収が続く。
【０１８９】
「ＩＣ５０」という用語は、応答（または結合）が半分に減少する阻害剤の濃度を指し、細胞全体、動物、または試験管内の無細胞（精製酵素）系で測定することができる。無細胞酵素の阻害は、いくつかの正式な動態測定でＫｉ値としても報告されてもよい。
【０１９０】
「ＩＣＩＣ５０」または「ＩＩＣ５０」という用語は、細胞透過性が因子となるように細胞全体の文脈におけるＤＰＰ８及びＤＰＰ９阻害の評価基準である（細胞透過性であるＤＰＰ８及びＤＰＰ９、精製された酵素はＩＣ５０を測定するための細胞透過性要件がない）。
【０１９１】
「ＤＰＰ８」という用語はタンパク質ジペプチジルペプチダーゼ８を指す。
【０１９２】
「ＤＰＰ９」という用語はタンパク質ジペプチジルペプチダーゼ９を指す。
【０１９３】
本発明の目的のために、化学元素は、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｓ，６７ｔｈ  Ｅｄ．，１９８６−８７の内表紙にある元素の周期律表、ＣＡＳバージョンに従って同定される。また、本発明の目的のために、「炭化水素」という用語は、少なくとも１つの水素と１つの炭素原子とを有するすべての許容される化合物を含むように企図される。幅広い態様では、許容される炭化水素には、置換することができる、または非置換であることができる非環式及び環式、分岐状及び非分岐状、炭素環式及び複素環式、芳香族及び非芳香族の有機化合物が挙げられる。
【０１９４】
「Ｐ１位」及び「Ｐ２位」という用語は、ジペプチド（またはジペプチド類似体）の場合、それぞれ、カルボキシ末端及びアミノ末端の残基を指す。主題のＩ−ＤＡＳＨ阻害剤の場合、Ｐ１位はボロン酸がカルボキシ末端を置き換えるアミノ酸（またはアミノ酸類似体）である。
【０１９５】
実施形態が「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という言語で本明細書に記載されている場合はいつでも、それ以外には「から成る（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」及び／または「本質的にから成る（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」に関して記載されている他の類似の実施形態も提供されることが理解される。実施形態が「本質的にから成る」という言語で本明細書に記載されている場合はいつでも、それ以外には「から成る」に関して記載されている類似の実施形態も提供されることも理解される。
【０１９６】
本明細書で使用されるとき「約」または「およそ」を参照して、値またはパラメータはその値またはパラメータに向けられる実施形態を含む（及び説明する）。例えば、「約Ｘ」について言及する記述は、「Ｘ」の記述を含む。
【０１９７】
本明細書にて「Ａ及び／またはＢ」のような表現で使用されるとき「及び／または」という用語は、Ａ及びＢの双方；ＡまたはＢ；Ａ（単独）；及びＢ（単独）を含むように意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」のような表現で使用されるとき「及び／または」という用語は、以下の実施形態：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡとＣ；ＡとＢ；ＢとＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；及びＣ（単独）のそれぞれを包含するように意図される。
【０１９８】
ＩＩＩ．例示的な実施形態
本発明の一の態様は、（ｉ）腫瘍内の細胞上で上方調節される、そうでなければ選択的に表示されるタンパク質のような細胞表面特徴に結合する抗体、抗体断片、非抗体足場または他のポリペプチド実体のような細胞結合部分と、（ｉｉ）薬物コンジュゲート部分が式で表される、それに付加された１以上の薬物コンジュゲート部分とを含む結合剤・薬物コンジュゲートを提供する。
【化７】
2021527042.tif 000008
式中、
Ｌ１はスペーサーまたは結合を表し；
ＳＲＳは、腫瘍の細胞外空間で発現される細胞外プロテアーゼの基質認識配列を表し；
Ｌ２は自壊牲のリンカーまたは結合を表し；
ＤＭは薬物部分を表し；
ｍは１〜６の、好ましくは１、２、または３の整数を表し；且つ
ｎは１〜５００、さらに好ましくは１〜１００、１〜１０、または１〜５の整数を表す。
【０１９９】
結合剤・薬物コンジュゲートは標的細胞の表面特徴と結合した場合、少なくとも６時間、さらに好ましくは少なくとも１０、１２、１４、１６、１８、２０、２４、３６、４８、６０、７５、またはさらに１００時間の内部移行半減期を有する。
【０２００】
ａ．基質認識配列
特定の実施形態では、基質認識配列は、結合部分が向けられている細胞が存在する組織において発現される酵素によって切断される部分（通常、ペプチド部分またはペプチジル部分）である。「標的細胞の近傍で選択的に切断可能な切断部位」によって我々は、疾患組織から離れた遊離の薬物部分の遊離を減らすために標的細胞の近傍で選択的に存在する薬剤によってのみ切断できる部位の意味を包含する。好ましくは、基質認識配列を切断する酵素は、標的細胞の近傍の外側の酵素の濃度よりも少なくとも５倍または１０倍高い濃度で、さらに好ましくは、少なくとも１００倍または５００倍または１０００倍高い濃度で標的細胞の近傍に存在する。最も好ましくは、基質認識配列を切断する酵素は、標的細胞の近傍にのみ見いだされる。例えば、標的細胞が特定の腫瘍細胞（例えば、乳房腫瘍細胞）である場合、基質認識配列は、特定の腫瘍（例えば、乳房腫瘍）に選択的に存在するが、特定の腫瘍（例えば、乳房腫瘍）の近傍の外側にはその酵素は存在しない酵素によって切断されるものであってもよい。
【０２０１】
「細胞の近傍」によって、我々は細胞の表面またはその組織内の間質液、またはその双方、または細胞を直接取り囲む環境、例えば、血液、リンパ液、及び他の体液におけるいずれかの意味を含める。
【０２０２】
求められる（健常）細胞ではなく標的細胞の近隣の細胞／組織で優先的にその薬理学的活性を発揮するために遊離薬物部分が標的細胞の近傍のコンジュゲートから優先的に遊離されるように基質認識配列は、標的細胞の近傍で選択的に切断される。したがって、遊離薬物部分が健常な細胞／組織の近傍で遊離される程度よりも少なくとも５倍または１０倍多く、さらに好ましくは、少なくとも１００倍または５００倍または１０００倍以上で標的細胞の近傍にて遊離薬物部分として薬物部分が遊離されるように、基質認識配列は選択的に切断されることが好ましい。
【０２０３】
所与の標的細胞については、当業者は、当該技術分野で確立された方法を用いて、標的細胞の近傍で選択的に切断可能である適切な基質認識配列を同定することができるであろう。例えば、どのプロテアーゼがどのペプチドを切断するかは、ペプチドライブラリーを調べ、切断後の断片化プロファイルのＭＳ分析を検討することによって評価することができる。また、プロテアーゼ切断モチーフ及びペプチド切断データに関する公開された文献は、以下でさらに説明するように検索することができる。
【０２０４】
一般的に、基質認識配列はプロテアーゼ切断部位である。したがって、標的細胞が腫瘍細胞である場合、基質認識配列は、腫瘍細胞の近傍に存在するプロテアーゼによって選択的に切断可能であってもよい。言い換えれば、基質認識配列は腫瘍関連プロテアーゼによって切断可能なものであってもよい。腫瘍の発生中に、腫瘍がプロテアーゼを異常に発現し、それが局所組織に侵入して最終的に転移できるようにすることは周知である。
【０２０５】
プロテアーゼは、膜結合型（ＭＭＰ１４〜１７及びＭＭＰ２４〜２５）及び分泌型（ＭＭＰ１〜１３及びＭＭＰ１８〜２３及びＭＭＰ２６〜２８）の双方を含むメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ１〜２８）であってもよい。プロテアーゼは、Ａディスインテグリン及びメタロプロテイナーゼ（ＡＤＡＭ）及びプロテアーゼのトロンボスポンジンモチーフファミリーを伴うＡディスインテグリンまたはメタロプロテイナーゼ（ＡＤＡＭＴＳ）に属してもよい。他の例には、ＣＤ１０（ＣＡＬＬＡ）及び前立腺特異抗原（ＰＳＡ）が挙げられる。特定の好ましい実施形態では、プロテアーゼは線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰα）である。プロテアーゼは膜結合型であってもよいし、またはそうでなくてもよいことが十分に理解される。
【０２０６】
プロテアーゼ切断部位は科学文献で周知であり、当該技術分野で知られている確立された合成技術を使用して、薬物コンジュゲート部分に含まれる所与の基質認識配列の基礎として容易に役立つことができる。
【０２０７】
その細胞外濃度が発現、細胞輸送における変化、または細胞外になってもよい細胞内酵素の場合、病状により引き起こされる細胞溶解における変化によって標的組織にて上方調節され／上昇するプロテアーゼを表す範囲で、（括弧内で提供されるＭＥＲＯＰＳペプチダーゼデータベース番号；Ｒａｗｌｉｎｇｓ，Ｎ．Ｄ．，Ｍｏｒｔｏｎ，Ｆ．Ｒ．，Ｋｏｋ，Ｃ．Ｙ．，Ｋｏｎｇ，Ｊ．＆  Ｂａｒｒｅｔｔ，Ａ．Ｊ．（２００８），ＭＥＲＯＰＳ：ペプチダーゼデータベース：Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３６データベースの課題、Ｄ３２０−３２５）：ペプシンＡ（ＭＥＲ０００８８５）、ガストリシン（ＭＥＲ０００８９４）、メマプシン−２（ＭＥＲ００５８７０）、レニン（ＭＥＲ０００９１７）、カテプシンＤ（ＭＥＲ０００９１１）、カテプシンＥ（ＭＥＲ０００９４４）、メマプシン−１（ＭＥＲ００５５３４）、ナプシンＡ（ＭＥＲ００４９８１）、マーネーム−ＡＡ０３４ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４０３８）、ペプシンＡ４（ＭＥＲ０３７２９０）、ペプシンＡ５（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ０３７２９１）、ｈＣＧ１７３３５７２（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ１０７３８６）、ナプシンＢ偽遺伝子（ＭＥＲ００４９８２）、ＣＹＭＰｇ．ｐ．（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ００２９２９）、サブファミリーＡ１Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１８１５５９）、マウス乳腺腫瘍ウイルスレトロペプシン（ＭＥＲ０４８０３０）、ウサギ内在性レトロウイルスエンドペプチダーゼ（ＭＥＲ０４３６５０）、Ｓ７１−関連するヒト内在性レトロペプシン（ＭＥＲ００１８１２）、ＲＴＶＬ−Ｈ−型推定上のペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７１１７）、ＲＴＶＬ−Ｈ−型推定上のペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７１３３）、ＲＴＶＬ−Ｈ−型推定上のペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７１６０）、ＲＴＶＬ−Ｈ−型推定上のペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７２０６）、ＲＴＶＬ−Ｈ−型推定上のペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７２５３）、ＲＴＶＬ−Ｈ−型推定上のペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７２６０）、ＲＴＶＬ−Ｈ−型推定上のペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７２９１）、ＲＴＶＬ−Ｈ−型推定上のペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７４１８）、ＲＴＶＬ−Ｈ−型推定上のペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７４４０）、ＲＴＶＬ−Ｈ−型推定上のペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７４７９）、ＲＴＶＬ−Ｈ−型推定上のペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７５５９）、ＲＴＶＬ−Ｈ−推定上のペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７５８３）、ＲＴＶＬ−Ｈ−型推定上のペプチダーゼ（ＭＥＲ０１５４４６）、ヒト内在性レトロウイルスレトロペプシンホモログ１（ＭＥＲ０１５４７９）、ヒト内在性レトロウイルスレトロペプシンホモログ２（ＭＥＲ０１５４８１）、内在性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ第１４染色体）（ＭＥＲ０２９９７７）、内在性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子２（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ第８染色体）（ＭＥＲ０２９６６５）、内在性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子３（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ第１７染色体）（ＭＥＲ００２６６０）、内在性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子３（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ染色体１７）（Ｍ���Ｒ０３０２８６）、内在性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子３（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ第１７染色体）（ＭＥＲ０４７１４４）、内在性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子５（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ第１２染色体）（ＭＥＲ０２９６６４）、内在性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子６（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ第７染色体）（ＭＥＲ００２０９４）、内在性レトロウイルスレトロペプシ偽遺伝子７（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ第６染色体）（ＭＥＲ０２９７７６）、内在性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子８（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ染色体Ｙ）（ＭＥＲ０３０２９１）、内在性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子９（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ第１９染色体）（ＭＥＲ０２９６８０）、内在性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１０（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ染色体１２）（ＭＥＲ００２８４８）、内在性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１１（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ第１７染色体）（ＭＥＲ００４３７８）、内在性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１２（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ第１１染色体）（ＭＥＲ００３３４４）、内在性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１３（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ染色体２及び類似の）（ＭＥＲ０２９７７９）、内在性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１４（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ第２染色体）（ＭＥＲ０２９７７８）、内在性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１５（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ第４染色体）（ＭＥＲ０４７１５８）、内在性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１５（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ第４染色体）（ＭＥＲ０４７３３２）、内在性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１５（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ第４染色体）（ＭＥＲ００３１８２）、内在性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１６（ＭＥＲ０４７１６５）、内在性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１６（ＭＥＲ０４７１７８）、内在性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１６（ＭＥＲ０４７２００）、内在性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１６（ＭＥＲ０４７３１５）、内在性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１６（ＭＥＲ０４７４０５）、内在性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１６（ＭＥＲ０３０２９２）、内在性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１７（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ第８染色体）（ＭＥＲ００５３０５）、内在性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１８（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ染色体４）（ＭＥＲ０３０２８８）、内在性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１９（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ第１６染色体）（ＭＥＲ００１７４０）、内在性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子２１（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ０４７２２２）、内在性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子２１（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ０４７４５４）、内在性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子２１（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ０４７４７７）、内在性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子２１（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ００４４０３）、内在性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子２２（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ染��体Ｘ）（ＭＥＲ０３０２８７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０４６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０５２）、サブファミリー２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０７６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０８０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０８８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０８９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０９１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０９２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０９３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０９４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０９７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０９９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１０１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１０２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１０７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１０８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１０９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１１０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１１１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１１４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１１８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１２１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１２２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１２６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１２９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１３０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１３４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１３５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１３７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１４０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１４１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１４２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１４８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１４９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１５１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１５４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１５５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１５６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１５７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１５９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１６��）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１６３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１６６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１７１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１７３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１７４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１７９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１８３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１８６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１９０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１９１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１９６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１９８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１９９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２０１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２０２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２０３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２０４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２０５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２０７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２０８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２１０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２１１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２１２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２１３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２１５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２１６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２１８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２１９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２２１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２２４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（
ＭＥＲ０４７２２５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２２６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２２７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２３０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２３２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２３３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２３４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２３６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２３８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２３９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２４０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２４２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２４３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２４９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２５１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２５２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２５４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２５５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２６３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２６５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２６６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２６７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２６８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２６９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２７２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２７３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２７４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２７５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２７６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２７９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２８０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２８１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２８２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２８４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２８５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２８９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２９０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２９４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２９５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２９８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３００）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３０２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３０４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３０５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３０６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３０７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３１０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３１１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３１４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３１８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３２０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３２１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３２２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３２６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３２７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３３０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３３３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３６２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３６６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３６９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３７０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３７１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３７５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３７６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３８１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３８３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３８４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３８５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３８８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３８９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３９１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３９４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３９６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４００）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４０１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４０３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４０６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４０７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４１０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４１１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４１３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４１４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４１６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４１７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４２０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４２３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４２４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４２８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４２９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４３１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４３４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４３９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４４２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４４５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４４９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４５０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４５２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４５５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４５７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４５８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４５９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４６３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４６８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４６９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４７０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４７６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４７８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４８３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４８８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４８９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４９０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４９３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４９４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４９５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４９６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４９７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４９９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５０２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５０４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５１１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５１３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５１４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５１５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５１６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５２０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５３３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５３７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５６９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５７０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５８４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７６０３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７６０４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７６０６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７６０９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７６１６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７６１９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７６４８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７６４９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７６６２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４８００４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４８０１８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４８０１９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４８０２３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４８０３７）、サブファミリーＡ２Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７１６４）、サブファミリーＡ２Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７２３１）、サブファミリーＡ２Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７３８６）、皮膚ＡｓｐＡｒｔＩＣプロテアーゼ（ＭＥＲ０５７０９７）、プレセニリン１（ＭＥＲ００５２２１）、プレセニリン２（ＭＥＲ００５２２３）、インパス１ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１９７０１）、インパス１ペプチダーゼ（ＭＥＲ１８４７２２）、インパス４ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１９７１５）、インパス２ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１９７０８）、インパス５ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１９７１２）、インパス３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１９７１１）、考えられるファミリーＡ２２偽遺伝子（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ第１８染色体）（ＭＥＲ０２９９７４）、考えられるファミリーＡ２２偽遺伝子（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ第１１染色体）（Ｍ
ＥＲ０２３１５９）、ＣＡテプシンＶ（ＭＥＲ００４４３７）、ＣＡテプシンＸ（ＭＥＲ００４５０８）、ＣＡテプシンＦ（ＭＥＲ００４９８０）、ＣＡテプシンＬ（ＭＥＲ０００６２２）、ＣＡテプシンＳ（ＭＥＲ０００６３３）、ＣＡテプシンＯ（ＭＥＲ００１６９０）、ＣＡテプシンＫ（ＭＥＲ０００６４４）、ＣＡテプシンＷ（ＭＥＲ００３７５６）、ＣＡテプシンＨ（ＭＥＲ０００６２９）、ＣＡテプシンＢ（ＭＥＲ０００６８６）、ジペプチジル−ペプチダーゼＩ（ＭＥＲ００１９３７）、ブレオマイシンヒドロラーゼ（動物）（ＭＥＲ００２４８１）、尿細管間質性腎炎抗原（ＭＥＲ０１６１３７）、尿細管間質性腎炎抗原−関連するタンパク質（ＭＥＲ０２１７９９）、ＣＡテプシンＬ−様偽遺伝子１（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ００２７８９）、ＣＡテプシンＢ−様偽遺伝子（第４染色体、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ０２９４６９）、ＣＡテプシンＢ−様偽遺伝子（染色体１、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ０２９４５７）、ＣＴＳＬＬ２ｇ．ｐ．（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ００５２１０）、ＣＴＳＬＬ３ｇｐ（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ００５２０９）、カルパイン−１（ＭＥＲ０００７７０）、カルパイン−２（ＭＥＲ０００９６４）、カルパイン−３（ＭＥＲ００１４４６）、カルパイン−９（ＭＥＲ００４０４２）、カルパイン−８（ＭＥＲ０２１４７４）、カルパイン−１５（ＭＥＲ００４７４５）、カルパイン−５（ＭＥＲ００２９３９）、カルパイン−１１（ＭＥＲ００５８４４）、カルパイン−１２（ＭＥＲ０２９８８９）、カルパイン−１０（ＭＥＲ０１３５１０）、カルパイン−１３（ＭＥＲ０２０１３９）、カルパイン−１４（ＭＥＲ０２９７４４）、マーネーム−ＡＡ２５３ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５５３７）、カルパモジュリン（ＭＥＲ０００７１８）、ヒポテットＩＣＡｌタンパク質ｆｌｊ４０２５１（ＭＥＲ００３２０１）、ユビキチニルヒドロラーゼ−Ｌ１（ＭＥＲ０００８３２）、ユビキチニルヒドロラーゼ−Ｌ３（ＭＥＲ０００８３６）、ユビキチニルヒドロラーゼ−ＢＡＰ１（ＭＥＲ００３９８９）、ユビキチニルヒドロラーゼ−ＵＣＨ３７（ＭＥＲ００５５３９）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ５（ＭＥＲ００２０６６）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ６（ＭＥＲ０００８６３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４（ＭＥＲ００１７９５）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ８（ＭＥＲ００１８８４）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１３（ＭＥＲ００２６２７）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２（ＭＥＲ００４８３４）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１１（ＭＥＲ００２６９３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１４（ＭＥＲ００２６６７）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ７（ＭＥＲ００２８９６）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ９Ｘ（ＭＥＲ００５８７７）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１０（ＭＥＲ００４４３９）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１（ＭＥＲ００４９７８）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１２（ＭＥＲ００５４５４）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１６（ＭＥＲ００５４９３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１５（ＭＥＲ００５４２７）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１��（ＭＥＲ００２９００）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１９（ＭＥＲ００５４２８）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２０（ＭＥＲ００５４９４）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３（ＭＥＲ００５５１３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ９Ｙ（ＭＥＲ００４３１４）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１８（ＭＥＲ００５６４１）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２１（ＭＥＲ００６２５８）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２２（ＭＥＲ０１２１３０）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３３（ＭＥＲ０１４３３５）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２９（ＭＥＲ０１２０９３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２５（ＭＥＲ０１１１１５）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３６（ＭＥＲ０１４０３３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３２（ＭＥＲ０１４２９０）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２６（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ−型）（ＭＥＲ０１４２９２）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２４（ＭＥＲ００５７０６）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４２（ＭＥＲ０１１８５２）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４６（ＭＥＲ０１４６２９）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３７（ＭＥＲ０１４６３３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２８（ＭＥＲ０１４６３４）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４７（ＭＥＲ０１４６３６）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３８（ＭＥＲ０１４６３７）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４４（ＭＥＲ０１４６３８）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ５０（ＭＥＲ０３０３１５）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３５（ＭＥＲ０１４６４６）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３０（ＭＥＲ０１４６４９）、マーネーム−ＡＡ０９１ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４７４３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４５（ＭＥＲ０３０３１４）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ５１（ＭＥＲ０１４７６９）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３４（ＭＥＲ０１４７８０）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４８（ＭＥＲ０６４６２０）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４０（ＭＥＲ０１５４８３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４１（ＭＥＲ０４５２６８）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３１（ＭＥＲ０１５４９３）、マーネーム−ＡＡ１２９ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１６４８５）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４９（ＭＥＲ０１６４８６）、マーネーム−ＡＡ１８７ペプチダーゼ（ＭＥＲ０５２５７９）、ＵＳＰ１７−様ペプチダーゼ（ＭＥＲ０３０１９２）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ５４（ＭＥＲ０２８７１４）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ５３（ＭＥＲ０２７３２９）、ユビキチン特異的エンドペプチダーゼ３９［誤解されやすい］（ＭＥＲ０６４６２１）、マーネーム−ＡＡ０９０非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０１４７３９）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ［誤解されやすい］（ＭＥＲ０３０１４０）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ５２［誤解されやすい］（ＭＥＲ０３０３１７）、ＮＥＫ２偽遺伝子（ＭＥＲ０１４７３６）、Ｃ１９偽遺伝子（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ：第５染色体）（ＭＥＲ０２９９７２）、マーネーム−ＡＡ０８８ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４７５０）、オートファギン−２（ＭＥＲ０１３５６４）、オートファギン−１（ＭＥＲ０１３５６１���、オートファギン−３（ＭＥＲ０１４３１６）、オートファギン−４（ＭＥＲ０６４６２２）、セザンヌ脱ユビキチン化ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２９０４２）、セザンヌ−２ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２９０４４）、腫瘍壊死因子アルファＡが誘導するタンパク質３（ＭＥＲ０２９０５０）、トラビドペプチダーゼ（ＭＥＲ０２９０５２）、ＶＣＩＰ１３５脱ユビキチン化ペプチダーゼ（ＭＥＲ１５２３０４）、オツバイン−１（ＭＥＲ０２９０５６）、オツバイン−２（ＭＥＲ０２９０６１）、ＣｙＩＤタンパク質（ＭＥＲ０３０１０４）、ＵｆＳＰ１ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４２７２４）、ＵｆＳＰ２ペプチダーゼ（ＭＥＲ０６０３０６）、ＤＵＢＡ脱ユビキチン化酵素（ＭＥＲ０８６０９８）、ＫＩＡＡ０４５９（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）−様タンパク質（ＭＥＲ１２２４６７）、Ｏｔｕｄ１タンパク質（ＭＥＲ１２５４５７）、グリコシルトランスフェラーゼ２８ドメイン含有１、異性体ＣＲＡ＿Ｃ（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）−様（ＭＥＲ１２３６０６）、ｈｉｎ１Ｌ  ｇ．ｐ．（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ１３９８１６）、アタキシン−３（ＭＥＲ０９９９９８）、ＡＴＸＮ３Ｌ推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ１１５２６１）、ジョセフィンドメイン含有１（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ１２５３３４）、ジョセフィンドメイン含有２（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ１２４０６８）、ＹＯＤ１ペプチダーゼ（ＭＥＲ１１６５５９）、レグマイン（植物アルファ型）（ＭＥＲ０４４５９１）、レグマイン（ＭＥＲ００１８００）、グリコシルホスファチジルイノシトール：タンパク質トランスアミダーゼ（ＭＥＲ００２４７９）、レグマイン偽遺伝子（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ０２９７４１）、ファミリーＣ１３未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１７５８１３）、カスパーゼ−１（ＭＥＲ０００８５０）、カスパーゼ−３（ＭＥＲ０００８５３）、カスパーゼ−７（ＭＥＲ００２７０５）、カスパーゼ−６（ＭＥＲ００２７０８）、カスパーゼ−２（ＭＥＲ００１６４４）、カスパーゼ−４（ＭＥＲ００１９３８）、カスパーゼ−５（ＭＥＲ００２２４０）、カスパーゼ−８（ＭＥＲ００２８４９）、カスパーゼ−９（ＭＥＲ００２７０７）、カスパーゼ−１０（ＭＥＲ００２５７９）、カスパーゼ−１４（ＭＥＲ０１２０８３）、パラカスパーゼ（ＭＥＲ０１９３２５）、マーネーム−ＡＡ１４３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２１３０４）、マーネーム−ＡＡ１８６ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２０５１６）、推定カスパーゼ（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ０２１４６３）、ＦＬＩＰタンパク質（ＭＥＲ００３０２６）、マーネーム−ＡＡ１４２タンパク質（ＭＥＲ０２１３１６）、カスパーゼ−１２偽遺伝子（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ０１９６９８）、マーネーム−ＡＡ０９３カスパーゼ偽遺伝子（ＭＥＲ０１４７６６）、サブファミリーＣ１４Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１８５３２９）、サブファミリーＣ１４Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１７９９５６）、セパラーゼ（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ型）（ＭＥＲ０１１７７５）、セパラーゼ様偽遺伝子（ＭＥＲ０１４７９７）、ＳＥＮＰ１ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１１０１２）、ＳＥＮＰ３ペプチダー��（ＭＥＲ０１１０１９）、ＳＥＮＰ６ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１１１０９）、ＳＥＮＰ２ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１２１８３）、ＳＥＮＰ５ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４０３２）、ＳＥＮＰ７ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４０９５）、ＳＥＮＰ８ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１６１６１）、ＳＥＮＰ４ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５５５７）、ピログルタミルペプチダーゼＩ（脊索動物）（ＭＥＲ０１１０３２）、マーネーム−ＡＡ０７３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２９９７８）、ソニックヘッジホッグタンパク質（ＭＥＲ００２５３９）、インディアンヘッジホッグタンパク質（ＭＥＲ００２５３８）、砂漠ヘッジホッグタンパク質（ＭＥＲ０１２１７０）、ジペプチジルペプチダーゼＩＩＩ（ＭＥＲ００４２５２）、マーネーム−ＡＡ１６４タンパク質（ＭＥＲ０２０４１０）、ＬＯＣ１３８９７１  ｇｐ（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ０２００７４）、Ａｔｐ２３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０６０６４２）、プレニルペプチダーゼ１（ＭＥＲ００４２４６）、アミノペプチダーゼＮ（ＭＥＲ０００９９７）、アミノペプチダーゼＡ（ＭＥＲ００１０１２）、ロイコトリエンＡ４ヒドロラーゼ（ＭＥＲ００１０１３）、ピログルタミル−ペプチダーゼＩＩ（ＭＥＲ０１２２２１）、細胞質アラニルアミノペプチダーゼ（ＭＥＲ００２７４６）、シスチニルアミノペプチダーゼ（ＭＥＲ００２０６０）、アミノペプチダーゼＢ（ＭＥＲ００１４９４）、アミノペプチダーゼＰＩＬＳ（ＭＥＲ００５３３１）、アルギニルアミノペプチダーゼ−様１（ＭＥＲ０１２２７１）、白血球由来アルギニンアミノペプチダーゼ（ＭＥＲ００２９６８）、アミノペプチダーゼＱ（ＭＥＲ０５２５９５）、アミノペプチダーゼ０（ＭＥＲ０１９７３０）、ＴＡｔＡ結合タンパク質関連因子（ＭＥＲ０２６４９３）、アンギオテンシン−変換酵素ペプチダーゼユニット１（ＭＥＲ００４９６７）、アンギオテンシン−変換酵素ペプチダーゼユニット２（ＭＥＲ００１０１９）、アンギオテンシン−変換酵素−２（ＭＥＲ０１１０６１）、マーネーム−ＡＡ１５３タンパク質（ＭＥＲ０２０５１４）、トリメトリゴペプチダーゼ（ＭＥＲ００１７３７）、ニューロリシン（ＭＥＲ０１０９９１）、ミトコンドリア中間ペプチダーゼ（ＭＥＲ００３６６５）、マーネーム−ＡＡ１５４タンパク質（ＭＥＲ０２１３１７）、レイシュマノリシン−２（ＭＥＲ０１４４９２）、レイシュマノリシン−
３（ＭＥＲ１８００３１）、マトリックスメタロペプチダーゼ−１（ＭＥＲ００１０６３）、マトリックスメタロペプチダーゼ−８（ＭＥＲ００１０８４）、マトリックスメタロペプチダーゼ−２（ＭＥＲ００１０８０）、マトリックスメタロペプチダーゼ−９（ＭＥＲ００１０８５）、マトリックスメタロペプチダーゼ−３（ＭＥＲ００１０６８）、マトリックスメタロペプチダーゼ−１０（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ−型）（ＭＥＲ００１０７２）、マトリックスメタロペプチダーゼ−１１（ＭＥＲ００１０７５）、マトリックスメタロペプチダーゼ−７（ＭＥＲ００１０９２）、マトリックスメタロペプチダーゼ−１２（ＭＥＲ００１０８９）、マトリックスメタロペプチダーゼ−１３（ＭＥＲ００１４１１）、膜型マトリックスメタロペプチダーゼ−１（ＭＥＲ００１０７７）、膜型マトリックスメタロペプチダーゼ−２（ＭＥＲ００２３８３）、膜型マトリックスメタロペプチダーゼ−３（ＭＥＲ００２３８４）、膜型マトリックスメタロペプチダーゼ−４（ＭＥＲ００２５９５）、マトリックスメタロペプチダーゼ−２０（ＭＥＲ００３０２１）、マトリックスメタロペプチダーゼ−１９（ＭＥＲ００２０７６）、マトリックスメタロペプチダーゼ−２３Ｂ（ＭＥＲ００４７６６）、膜型マトリックスメタロペプチダーゼ−５（ＭＥＲ００５６３８）、膜型マトリックスメタロペプチダーゼ−６（ＭＥＲ０１２０７１）、マトリックスメタロペプチダーゼ−２１（ＭＥＲ００６１０１）、マトリックスメタロペプチダーゼ−２２（ＭＥＲ０１４０９８）、マトリックスメタロペプチダーゼ−２６（ＭＥＲ０１２０７２）、マトリックスメタロペプチダーゼ−２８（ＭＥＲ０１３５８７）、マトリックスメタロペプチダーゼ−２３Ａ（ＭＥＲ０３７２１７）、マクロファージエラスターゼホモログ（第８染色体、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ０３００３５）、マーネーム−ＡＡ１５６タンパク質（ＭＥＲ０２１３０９）、マトリックスメタロペプチダーゼ−様１（ＭＥＲ０４５２８０）、サブファミリーＭ１０Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１７５９１２）、サブファミリーＭ１０Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１８７９９７）、サブファミリーＭ１０Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１８７９９８）、サブファミリーＭ１０Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１８００００）、メプリンアルファサブユニット（ＭＥＲ００１１１１）、メプリンベータサブユニット（ＭＥＲ００５２１３）、プロコラーゲンＣ−ペプチダーゼ（ＭＥＲ００１１１３）、哺乳類トロイド−様１タンパク質（ＭＥＲ００５１２４）、哺乳類−型トロイド−様２タンパク質（ＭＥＲ００５８６６）、ＡＤＡＭＴＳ９ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１２０９２）、ＡＤＡＭＴＳ１４ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１６７００）、ＡＤＡＭＴＳ１５ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７０２９）、ＡＤＡＭＴＳ１６ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１５６８９）、ＡＤＡＭＴＳ１７ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１６３０２）、ＡＤＡＭＴＳ１８ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１６０９０）、ＡＤＡＭＴＳ１９ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１５６６３）、ＡＤＡＭＳペプチダーゼ（ＭＥＲ００３９０２）、ＡＤＡＭ９ペプチダーゼ（ＭＥＲ００１１４０）、ＡＤＡＭ１０ペプチダ��ゼ（ＭＥＲ００２３８２）、ＡＤＡＭ１２ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５１０７）、ＡＤＡＭ１９ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１２２４１）、ＡＤＡＭ１５ペプチダーゼ（ＭＥＲ００２３８６）、ＡＤＡＭ１７ペプチダーゼ（ＭＥＲ００３０９４）、ＡＤＡＭ２０ペプチダーゼ（ＭＥＲ００４７２５）、ＡＤＡＭＤＥＣ１ペプチダーゼ（ＭＥＲ０００７４３）、ＡＤＡＭＴＳ３ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５１００）、ＡＤＡＭＴＳ４ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５１０１）、ＡＤＡＭＴＳ１ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５５４６）、ＡＤＡＭ２８ペプチダーゼ（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ−型）（ＭＥＲ００５４９５）、ＡＤＡＭＴＳ５ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５５４８）、ＡＤＡＭＴＳ８ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５５４５）、ＡＤＡＭＴＳ６ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５８９３）、ＡＤＡＭＴＳ７ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５８９４）、ＡＤＡＭ３０ペプチダーゼ（ＭＥＲ００６２６８）、ＡＤＡＭ２１ペプチダーゼ（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ型）（ＭＥＲ００４７２６）、ＡＤＡＭＴＳ１０ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４３３１）、ＡＤＡＭＴＳ１２ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４３３７）、ＡＤＡＭＴＳ１３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１５４５０）、ＡＤＡＭ３３ペプチダーゼＭＥＲ０２９９９６）、ＡＤＡＭＴＳ２０ペプチダーゼ（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ型）（ＭＥＲ０２６９０６）、プロコラーゲンＩ  Ｎ−ペプチダーゼ（ＭＥＲ００４９８５）、ＡＤＡＭ２タンパク質（ＭＥＲ００３０９０）、ＡＤＡＭ６タンパク質（ＭＥＲ０４７０４４）、ＡＤＡＭ７タンパク質（ＭＥＲ００５１０９）、ＡＤＡＭ１８タンパク質（ＭＥＲ０１２２３０）、ＡＤＡＭ３２タンパク質（ＭＥＲ０２６９３８）、非ペプチダーゼホモログ（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ第４染色体）（ＭＥＲ０２９９７３）、ファミリーＭ１２非ペプチダーゼホモログ（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ第１６染色体）（ＭＥＲ０４７６５４）、ファミリーＭ１２非ペプチダーゼホモログ（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ第１５染色体）（ＭＥＲ０４７２５０）、ＡＤＡＭ３Ｂタンパク質（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ型）（ＭＥＲ００５１９９）、ＡＤＡＭ１１タンパク質（ＭＥＲ００１１４６）、ＡＤＡＭ２２タンパク質（ＭＥＲ００５１０２）、ＡＤＡＭ２３タンパク質（ＭＥＲ００５１０３）、ＡＤＡＭ２９タンパク質（ＭＥＲ００６２６７）、ＡＤＡＭ２１ペプチダーゼプレプロタンパク質（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ０２６９４４）に類似したタンパク質、マーネーム−ＡＡ２２５ペプチダーゼホモログ（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ０４  ７４７４）、推定ＡＤＡＭ偽遺伝子（第４染色体、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ０２９９７５）、ＡＤＡＭ３Ａ  ｇｐ  （Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ００５２００）、ＡＤＡＭ１  ｇｐ  （Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ００３９１２）、サブファミリーＭ１２Ｂ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１８８２１０）、サブファミリーＭ１２Ｂ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１８８２１１）、サブファミリーＭ１２Ｂ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１８８２１２）、サブファミリーＭ１２Ｂ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１８８２２０）、ネプリリシン（ＭＥＲ００１０５０）、エンドセ��ン変換酵素１（ＭＥＲ００１０５７）、エンドセリン変換酵素２（ＭＥＲ００４７７６）、ＤＩＮＥペプチダーゼ（ＭＥＲ００５１９７）、ネプリリシン−２（ＭＥＲ０１３４０６）、ケル式血液型タンパク質（ＭＥＲ００１０５４）、ｐＨＥＸペプチダーゼ（ＭＥＲ００２０６２）、ｉ−ＡＡＡペプチダーゼ（ＭＥＲ００１２４６）、ｉ−ＡＡＡペプチダーゼ（ＭＥＲ００５７５５）、パラプレギン（ＭＥＲ００４４５４）、Ａｆｇ３−様タンパク質２（ＭＥＲ００５４９６）、Ａｆｇ３−様タンパク質１Ａ（ＭＥＲ０１４３０６）、パパリシン−１（ＭＥＲ００２２１７）、パパリシン−２（ＭＥＲ０１４５２１）、ファルネシル化タンパク質変換酵素１（ＭＥＲ００２６４６）、メタロプロテアーゼ関連タンパク質−１（ＭＥＲ０３０８７３）、アミノペプチダーゼＡＭＺ２（ＭＥＲ０１１９０７）、アミノペプチダーゼＡＭＺ１（ＭＥＲ０５８２４２）、カルボキシペプチダーゼＡ１（ＭＥＲ００１１９０）、カルボキシペプチダーゼＡ２（ＭＥＲ００１６０８）、カルボキシペプチダーゼＢ（ＭＥＲ００１１９４）、カルボキシペプチダーゼＮ（ＭＥＲ００１１９８）、カルボキシペプチダーゼＥ（ＭＥＲ００１１９９）、カルボキシペプチダーゼＭ（ＭＥＲ００１２０５）、カルボキシペプチダーゼＵ（ＭＥＲ００１１９３）、カルボキシペプチダーゼＡ３（ＭＥＲ００１１８７）、メタロカルボキシペプチダーゼＤペプチダーゼユニット１（ＭＥＲ００３７８１）、メタロカルボキシペプチダーゼＺ（ＭＥＲ００３４２８）、メタロカルボキシペプチダーゼＤペプチダーゼユニット２（ＭＥＲ００４９６３）、カルボキシペプチダーゼＡ４（ＭＥＲ０１３４２１）、カルボキシペプチダーゼＡ６（ＭＥＲ０１３４５６）、カルボキシペプチダーゼＡ５（ＭＥＲ０１７１２１）、メタロカルボキシペプチダーゼ０（ＭＥＲ０１６０４４）、細胞質ＩＣカルボキシペプチダーゼ−様タンパク質５（ＭＥＲ０３３１７４）、細胞質ＩＣカルボキシペプチダーゼ３（ＭＥＲ０３３１７６）、細胞質ＩＣカルボキシペプチダーゼ６（ＭＥＲ０３３１７８）、細胞質ＩＣカルボキシペプチダーゼ１（ＭＥＲ０３３１７９）、細胞質ＩＣカルボキシペプチダーゼ２（ＭＥＲ０３７７１３）、メタロカルボキシペプチダーゼＤ非ペプチダーゼユニット（ＭＥＲ００４９６４）、脂肪細胞エンハンサー結合タンパク質１（ＭＥＲ００３８８９）、カルボキシペプチダーゼ−様タンパク質Ｘ１（ＭＥＲ０１３４０４）、カルボキシペプチダーゼ−様タンパク質Ｘ２（ＭＥＲ０７８７６４）、細胞質ＩＣカルボキシペプチダーゼ（ＭＥＲ０２６９５２）、ファミリーＭ１４非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１９９５３０）、インスリシン（ＭＥＲ００１２１４）、ミトコンドリアプロセッシングペプチダーゼベータ−サブユニット（ＭＥＲ００４４９７）、ナルジリシン（ＭＥＲ００３８８３）、ユーピトリリシン（ＭＥＲ００４８７７）、ミトコンドリアプロセッシングペプチダーゼ非ペプチダーゼアルファサブユニット（ＭＥＲ００１４１３）、ユビキノール−チトクロームＣ還元酵素コアタンパク質Ｉ（ＭＥＲ００３５４３）、ユビキノール−チトクロームＣ還元酵素コアタンパク質ＩＩ（ＭＥＲ００３５４４）、ユビキノール−チト��ロームＣ還元酵素コアタンパク質ドメイン２（ＭＥＲ０４３９９８）、インスリシンユニット２（ＭＥＲ０４６８２１）、ナルジリシンユニット２（ＭＥＲ０４６８７４）、インスリシンユニット３（ＭＥＲ０７８７５３）、ミトコンドリアプロセッシングペプチダーゼサブユニットアルファユニット２（ＭＥＲ１２４４８９）、ナルジリシンユニット３（ＭＥＲ１４２８５６）、ＬＯＣ１３３０８３ｇ．ｐ．（Ｈｏｍｏ 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００５２３９）、グルタミン酸カルボキシペプチダーゼＩＩＩ（ＭＥＲ００５２３８）、血漿グルタミン酸カルボキシペプチダーゼ（ＭＥＲ００５２４４）、マーネーム−ＡＡ１０３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１５０９１）、Ｆｘｎａペプチダーゼ（ＭＥＲ０２９９６５）、トランスフェリン受容体タンパク質（ＭＥＲ００２１０５）、トランスフェリン受容体２タンパク質（ＭＥＲ００５１５２）、グルタミニルシクラーゼ（ＭＥＲ０１５０９５）、グルタミン酸カルボキシペプチダーゼＩＩ（Ｈｏｍｏ  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 ｓａｐｉｅｎｓ第２染色体）（ＭＥＲ０２９９７０）、マーネーム−ＡＡ１６８タンパク質（ＭＥＲ０２１８８６）、ＣＯＰ９シグナロソームサブユニット６（ＭＥＲ０３０１��７）、２６Ｓプロテアソーム非ＡＴＰアーゼ調節サブユニット７（ＭＥＲ０３０１３４）、真核生物翻訳開始因子３サブユニット５（ＭＥＲ０３０１３３）、１ＦＰ３８ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０３０１３２）、スーパーファミリーＭ６７Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１９１１８１）、スーパーファミリーＭ６７Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１９１１４４）、グランザイムＢ（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ型）（ＭＥＲ０００１６８）、テスチシン（ＭＥＲ００５２１２）、トリプターゼベータ（ＭＥＲ０００１３６）、カリクレイン関連ペプチダーゼ５（ＭＥＲ００５５４４）、コリン（ＭＥＲ００５８８１）、カリクレイン関連ペプチダーゼ１２（ＭＥＲ００６０３８）、ＤＥＳＣ１ペプチダーゼ（ＭＥＲ００６２９８）、トリプターゼガンマ１（ＭＥＲ０１１０３６）、カリクレイン関連ペプチダーゼ１４（ＭＥＲ０１１０３８）、ヒアルロナン結合ペプチダーゼ（ＭＥＲ００３６１２）、膜貫通ペプチダーゼ、セリン４（ＭＥＲ０１１１０４）、腸管セリンペプチダーゼ（げっ歯類）（ＭＥＲ０１６１３０）、副腎分泌セリンペプチダーゼ（ＭＥＲ００３７３４）、トリプターゼデルタ１（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ００５９４８）、マトリプターゼ−３（ＭＥＲ０２９９０２）、マラプシン（ＭＥＲ００６１１９）、トリプターゼ−６（ＭＥＲ００６１１８）、オボキマーゼ−１ドメイン１（ＭＥＲ０９９１８２）、膜貫通ペプチダーゼ、セリン３（ＭＥＲ００５９２６）、カリクレイン関連ペプチダーゼ１５（ＭＥＲ００００６４）、マーネーム−ＡＡ０３１ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４０５４）、ＴＭＰＲＳＳ１３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４２２６）、マーネーム−ＡＡ０３８ペプチダーゼ（ＭＥＲ０６２８４８）、マーネーム−ＡＡ２０４ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２９９８０）、カチオン性トリプシン（Ｈｏｍｏ  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ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ０９８８７３）、ｈＣＧ２０４１１０８（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ０９９１７３）、ポリセラーゼ−２ユニット２（ＭＥＲ０６１７６０）、ポリセラーゼ−２ユニット３  （ＭＥＲ０６５６９４）、マーネーム−ＡＡ２０１（ペプチダーゼホモログ）ＭＥＲ０９９１７５、分泌されたトリプシン様セリンペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０３００００）、ポリセラーゼ−１Ａユニット３（ＭＥＲ０２９８８０）、アズロシジン（ＭＥＲ０００１１９）、ヘプトグロブリン−１（ＭＥＲ０００２３３）、ヘプトグロブリン−関連タンパク質（ＭＥＲ０００２３５）、マクロファージ刺激タンパク質（ＭＥＲ００１５４６）、肝細胞増殖因子（ＭＥＲ０００１８５）、タンパク質Ｚ（ＭＥＲ０００２２７）、ＴＥＳＰ１タンパク質（ＭＥＲ０４７２１４）、ＬＯＣ１３６２４２タンパク質（ＭＥＲ０１６１３２）、血漿カリクレイン様タンパク質４（ＭＥＲ０１６３４６）、ＰＲＳＳ３５タンパク質（ＭＥＲ０１６３５０）、ＤＫＦＺｐ５８６Ｈ２１２３様タンパク質（ＭＥＲ０６６４７４）、アポリポタンパク質（ＭＥＲ０００１８３）、ｐｓｉ−ＫＬＫ１偽遺伝子（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ０３３２８７）、トリプターゼ偽遺伝子Ｉ（ＭＥＲ０１５０７７）、トリプターゼ偽遺伝子ＩＩ（ＭＥＲ０１５０７８）、トリプターゼ偽遺伝子ＩＩＩ（ＭＥＲ０１５０７９）、スーパーファミリーＳ１Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２１６９８２）、スーパーファミリーＳ１Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２１６１４８）、アミドホスホリボシルトランスフェラーゼ前駆体（ＭＥＲ００３
３１４）、グルタミン−フルクトース−６−リン酸トランスアミナーゼ１（ＭＥＲ００３３２２）、グルタミン：フルクトース−６−リン酸アミドトランスフェラーゼ（ＭＥＲ０１２１５８）、マーネーム−ＡＡ１４４タンパク質（ＭＥＲ０２１３１９）、アスパラギン合成酵素（ＭＥＲ０３３２５４）、ファミリーＣ４４非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１５９２８６）、ファミリーＣ４４未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１８５６２５）ファミリーＣ４４未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１８５６２６）、セクレニン１（ＭＥＲ０４５３７６）、セクレニン２（ＭＥＲ０６４５７３）、セクレニン３（ＭＥＲ０６４５８２）、酸セラミダーゼ前駆体（ＭＥＲ１００７９４）、Ｎ−アシルエタノールアミン酸アミダーゼ前駆体（ＭＥＲ１４１６６７）、プロテアソーム触媒サブユニット１（ＭＥＲ０００５５６）、プロテアソーム触媒サブユニット２（ＭＥＲ００２６２５）、プロテアソーム触媒サブユニット３（ＭＥＲ００２１４９）、プロテアソーム触媒サブユニット１ｉ（ＭＥＲ０００５５２）、プロテアソーム触媒サブユニット２ｉ（ＭＥＲ００１５１５）、プロテアソーム触媒サブユニット３ｉ（ＭＥＲ０００５５５）、プロテアソーム触媒サブユニット５ｔ（ＭＥＲ０２６２０３）、タンパク質セリンキナーゼｃ１７（ＭＥＲ０２６４９７）、プロテアソームサブユニットアルファ６（ＭＥＲ０００５５７）、プロテアソームサブユニットアルファ２（ＭＥＲ０００５５０）、プロテアソームサブユニットアルファ４（ＭＥＲ０００５５４）、プロテアソームサブユニットアルファ７（ＭＥＲ０３３２５０）、プロテアソームサブユニットアルファ５（ＭＥＲ０００５５８）、プロテアソームサブユニットアルファ１（ＭＥＲ０００５４９）、プロテアソームサブユニットアルファ３（ＭＥＲ０００５５３）、プロテアソームサブユニットＸＡＰＣ７（ＭＥＲ００４３７２）、プロテアソームサブユニットベータ３（ＭＥＲ００１７１０）、プロテアソームサブユニットベータ２（ＭＥＲ００２６７６）、プロテアソームサブユニットベータ１（ＭＥＲ０００５５１）、プロテアソームサブユニットベータ４（ＭＥＲ００１７１１）、マーネーム−ＡＡ２３０ペプチダーゼホモログ（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ０４７３２９）、マーネーム−ＡＡ２３１偽遺伝子（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ０４７１７２）、マーネーム−ＡＡ２３２偽遺伝子（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ０４７３１６）、グリコシルアスパラギナーゼ前駆体（ＭＥＲ００３２９９）、イソアスパルチルジペプチダーゼ（スレオニン型）（ＭＥＲ０３１６２２）、タスパーゼ−１（ＭＥＲ０１６９６９）、ガンマ−グルタミルトランスフェラーゼ５（哺乳類型）（ＭＥＲ００１９７７）、ガンマ−グルタミルトランスフェラーゼ１（哺乳類型）（ＭＥＲ００１６２９）、ガンマ−グルタミルトランスフェラーゼ２（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ００１９７６）、ガンマ−グルタミルトランスフェラーゼ様タンパク質４（ＭＥＲ００２７２１）、ガンマ−グルタミルトランスフェラーゼ様タンパク質３（ＭＥＲ０１６９７０）、ガンマ−グルタミルトランスフェラーゼ１前駆体（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ��２６２０４）に類似する、ガンマ−グルタミルトランスフェラーゼ１前駆体（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ０２６２０５）に類似する、マーネーム−ＡＡ２１１推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２６２０７）、ガンマ−グルタミルトランスフェラーゼ６（ＭＥＲ１５９２８３）、ガンマ−グルタミルトランスペプチダーゼホモログ（第２染色体、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ０３７２４１）、ポリシスチン−１（ＭＥＲ１２６８２４）、ＫＩＡＡ１８７９タンパク質（ＭＥＲ１５９３２９）、多発性嚢胞腎１様３（ＭＥＲ１７２５５４）、ガンマ−グルタミルヒドロラーゼ（ＭＥＲ００２９６３）、グアニン５”−モノリン酸合成酵素（ＭＥＲ０４３３８７）、カルバモイル−リン酸シンターゼ（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ型）（ＭＥＲ０７８６４０）、ジヒドロ−オロターゼ（Ｎ−末端ユニット）（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ型）（ＭＥＲ０６０６４７）ＤＪ−１推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ００３３９０）、マーネーム−ＡＡ１００推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４８０２）、マーネーム−ＡＡ１０１非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０１４８０３）、ＫＩＡＡ０３６１タンパク質（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ型）（ＭＥＲ０４２８２７）、Ｆ１１３４２８３タンパク質（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ０４４５５３）、非ペプチダーゼホモログ第２１染色体オープンリーディングフレーム３３（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ１６００９４）、ファミリーＣ５６非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１７７０１６）、ファミリーＣ５６非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１７６６１３）、ファミリーＣ５６非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１７６９１８）、ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＭＥＲ０３７２３０）、ＣＤ９７抗原（ヒト型）（ＭＥＲ０３７２８６）、ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様３（ＭＥＲ０３７２８８）、ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様１（ＭＥＲ０３７２７８）、ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様４（ＭＥＲ０３７２９４）、カドヘリンＥＧＦ  ＬＡＧ７回貫通型Ｇ型受容体２前駆体（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ０４５３９７）、Ｇｐｒ６４（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）型タンパク質（ＭＥＲ１２３２０５）、ＧＰＲ５６（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）型タンパク質（ＭＥＲ１２２０５７）、ラトロフィリン２（ＭＥＲ１２２１９９）、ラトロフィリン−１（ＭＥＲ１２６３８０）、ラトロフィリン３（ＭＥＲ１２４６１２）、プロトカドヘリンＦｌａｍｉｎｇｏ２（ＭＥＲ１２４２３９）、ＥＴＬタンパク質（ＭＥＲ１２６２６７）、Ｇタンパク質−共役受容体１１２（ＭＥＲ１２６１１４）、７回膜貫通らせん受容体（ＭＥＲ１２５４４８）、Ｇｐｒ１１４タンパク質（ＭＥＲ１５９３２０）、ＧＰＲ１２６血管誘導性Ｇタンパク質−共役受容体（ＭＥＲ１４００１５）、ＧＰＲ１２５（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）型タンパク質（ＭＥＲ１５９２７９）、ＧＰＲ１１６（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）型Ｇ−タンパク質共役受容体（ＭＥＲ１５９２８０）、ＧＰＲ１２８（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）型Ｇ−タンパク質共役受容体（ＭＥＲ１６２０１５）、ＧＰＲ１３３（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ��型タンパク質（ＭＥＲ１５９３３４）、ＧＰＲ１１０Ｇ−タンパク質共役受容体（ＭＥＲ１５９２７７）、ＧＰＲ９７タンパク質（ＭＥＲ１５９３２２）、ＫＰＧ＿００６タンパク質（ＭＥＲ１６１７７３）、ＫＰＧ＿００８タンパク質（ＭＥＲ１６１８３５）、ＫＰＧ＿００９タンパク質（ＭＥＲ１５９３３５）、未割り当てホモログ（ＭＥＲ１６６２６９）、ＧＰＲ１１３タンパク質（ＭＥＲ１５９３５２）、脳特異的血管新生阻害剤２（ＭＥＲ１５９７４６）、ＰＩＤＤ自己プロセッシングタンパク質ユニット１（ＭＥＲ０２０００１）、ＰＩＤＤ自己プロセッシングタンパク質ユニット２（ＭＥＲ０６３６９０）、ＭＵＣ１自己−切断ムチン（ＭＥＲ０７４２６０）、ジストログリカン（ＭＥＲ０５４７４１）、プロタンパク質転換酵素９（ＭＥＲ０２２４１６）、部位−１ペプチダーゼ（ＭＥＲ００１９４８）、フリン（ＭＥＲ０００３７５）、プロタンパク質転換酵素１（ＭＥＲ０００３７６）、プロタンパク質転換酵素２（ＭＥＲ０００３７７）、プロタンパク質転換酵素４（ＭＥＲ０２８２５５）、ＰＡＣＥ４プロタンパク質転換酵素（ＭＥＲ０００３８３）、プロタンパク質転換酵素５（ＭＥＲ００２５７８）、プロタンパク質転換酵素７（ＭＥＲ００２９８４）、トリペプチジル−ペプチダーゼＩＩ（ＭＥＲ０００３５５）、スーパーファミリーＳ８Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ２０１３３９）、スーパーファミリーＳ８Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１９１６１３）、スーパーファミリーＳ８Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１９１６１１）、スーパーファミリーＳ８Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１９１６１２）、スーパーファミリーＳ８Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１９１６１４）、トリペプチジル−ペプチダーゼＩ（ＭＥＲ００３５７５）、プロリルオリゴペプチダーゼ（ＭＥＲ０００３９３）、ジペプチジル−ペプチダーゼＩＶ（真核生物）（ＭＥＲ０００４０１）、アシルアミノアシル−ペプチダーゼ（ＭＥＲ０００４０８）、線維芽細胞活性化タンパク質アルファサブユニット（ＭＥＲ０００３９９）、ＰＲＥＰＬ  Ａタンパク質（ＭＥＲ００４２２７）、ジペプチジル−ペプチダーゼ８（ＭＥＲ０１３４８４）、ジペプチジル−ペプチダーゼ９（ＭＥＲ００４９２３）、ＦＬＪ１推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７２４０）、マーネーム−ＡＡ１９４推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７３５３）、マーネーム−ＡＡ１９５推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７３６７）、マーネーム−ＡＡ１９６推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７３６８）、マーネーム−ＡＡ１９７推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７３７１）、Ｃ１４ｏｒｆ２９タンパク質（ＭＥＲ０３３２４４）、仮定上のタンパク質（ＭＥＲ０３３２４５）、仮定上のエステラーゼ／リパーゼ／チオエステラーゼ（ＭＥＲ０４７３０９）、タンパク質ｂａｔ５（ＭＥＲ０３７８４０）、仮定上のタンパク質ｆｌｊ４０２１９（ＭＥＲ０３３２１２）、仮定上のタンパク質ｆｌｊ３７４６４（ＭＥＲ０３３２４０）、仮定上のタンパク質ｆｌｊ３３６７８（ＭＥＲ０３３２４１）、ジペプチジルペプチダーゼホモログＤＰＰ６（ＭＥＲ０００４０３）、ジペプチジルペプチダーゼホモログＤＰＰ１０（ＭＥＲ００５９８８）、Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ第２０染色体オープンリーディングフレーム１３５に類似するタンパク質（ＭＥＲ０３７８４５）、キヌレニンホルムアミダーゼ（ＭＥＲ０４６０２０）、サイログロブリン前駆体（ＭＥＲ０１１６０４）、アセチルコリンエステラーゼ（ＭＥＲ０３３１８８）、コリンエステラーゼ（ＭＥＲ０３３１９８）、カルボキシルエステラーゼＤ１（ＭＥＲ０３３２１３）、肝臓カルボキシルエステラーゼ（ＭＥＲ０３３２２０）、カルボキシルエステラーゼ３（ＭＥＲ０３３２２４）、カルボキシルエステラーゼ２（ＭＥＲ０３３２２６）、胆汁塩依存性リパーゼ（ＭＥＲ０３３２２７）、カルボキシルエステラーゼ−関連タンパク質（ＭＥＲ０３３２３１）、ニューロリギン３（ＭＥＲ０３３２３２）、ニューロリギン４、Ｘ−連鎖（ＭＥＲ０３３２３５）、ニューロリギン４、Ｙ−連鎖（ＭＥＲ０３３２３６）、エステラーゼＤ（ＭＥＲ０４３１２６）、アリールアセトアミドデアセチラーゼ（ＭＥＲ０３３２３７）、ＫＩＡＡ１３６３様タンパク質（ＭＥＲ０３３２４２）、ホルモン−感受性リパーゼ（ＭＥＲ０３３２７４）、ニューロリギン１（ＭＥＲ０３３２８０）、ニューロリギン２（ＭＥＲ０３３２８３）、ファミリーＳ９非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ２１２９３９）、ファミリーＳ９非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ２１１４９０）、スーパーファミリーＳ９Ｃ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１９２３４１）、ファミリーＳ９未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２０９１８１）、ファミリーＳ９未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２００４３４）、ファミリーＳ９未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２０９５０７）、ファミリーＳ９未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２０９１４２）、セリンカルボキシペプチダーゼＡ（ＭＥＲ０００４３０）、卵黄形成性カルボキシペプチダーゼ様タンパク質（ＭＥＲ００５４９２）、ＲＩＳＣペプチダーゼ（ＭＥＲ０１０９６０）、ファミリーＳ１５未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１９９４４２）、ファミリーＳ１５未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２００４３７）、ファミリーＳ１５未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２１２８２５）、リソソームＰｒｏ−Ｘａａカルボキシペプチダーゼ（ＭＥＲ０００４４６）、ジペプチジル−ペプチダーゼＩＩ（ＭＥＲ００４９５２）、胸腺特異的セリンペプチダーゼ（ＭＥＲ００５５３８）、エポキシドヒドロラーゼ様推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０３１
６１４）、Ｌｏｃ３２８５７４様タンパク質（ＭＥＲ０３３２４６）、アブヒドロラーゼドメイン−含有タンパク質４（ＭＥＲ０３１６１６）、エポキシドヒドロラーゼ（ＭＥＲ０００４３２）、中胚葉特異的転写物タンパク質（ＭＥＲ１９９８９０）、中胚葉特異的転写物タンパク質（ＭＥＲ０１７１２３）、細胞質エポキシドヒドロラーゼ（ＭＥＲ０２９９９７）、細胞質エポキシドヒドロラーゼ（ＭＥＲ２１３８６６）、仮定上のタンパク質ＦＬＪ２２４０８（ＭＥＲ０３１６０８）に類似する、ＣＧＩ−５８推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０３０１６３）、Ｗｉｌｌｉａｍｓ−Ｂｅｕｒｅｎ症候群重大領域タンパク質２１エポキシドヒドロラーゼ（ＭＥＲ０３１６１０）、エポキシドヒドロラーゼ（ＭＥＲ０３１６１２）、仮定上のタンパク質ｆｌｊ２２４０８（エポキシドヒドロラーゼ）（ＭＥＲ０３１６１７）、モノグリセリドリパーゼ（ＭＥＲ０３３２４７）、仮定上のタンパク質（ＭＥＲ０３３２４９）、バラシクロビルヒドロラーゼ（ＭＥＲ０３３２５９）、Ｃｃｇ１−相互作用因子ｂ（ＭＥＲ２１０７３８）、グリコシルアスパラギナーゼ前駆体（ＭＥＲ００３２９９）、イソアスパルチルジペプチダーゼ（スレオニン型）（ＭＥＲ０３１６２２）．タスパーゼ−１（ＭＥＲ０１６９６９）、ガンマ−グルタミルトランスフェラーゼ５（哺乳類型）（ＭＥＲ００１９７７）、ガンマ−グルタミルトランスフェラーゼ１（哺乳類型）（ＭＥＲ００１６２９）、ガンマ−グルタミルトランスフェラーゼ２（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ００１９７６）、ガンマ−グルタミルトランスフェラーゼ様タンパク質４（ＭＥＲ００２７２１）．ガンマ−グルタミルトランスフェラーゼ様タンパク質３（ＭＥＲ０１６９７０）．ガンマ−グルタミルトランスフェラーゼ１前駆体（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ０２６２０４）に類似する．ガンマ−グルタミルトランスフェラーゼ１前駆体（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ０２６２０５）に類似する．マーネーム−ＡＡ２１１推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２６２０７）．ガンマ−グルタミルトランスフェラーゼ６（ＭＥＲ１５９２８３）．ガンマ−グルタミルトランスペプチダーゼホモログ、（第２染色体、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ０３７２４１）．ポリシスチン−１（ＭＥＲ１２６８２４）、ＫＩＡＡ１８７９タンパク質（ＭＥＲ１５９３２９）．多発性嚢胞腎１様３（ＭＥＲ１７２５５４）．ガンマ−グルタミルヒドロラーゼ（ＭＥＲ００２９６３）．グアニン５”−モノリン酸合成酵素（ＭＥＲ０４３３８７）．カルバモイル−リン酸シンターゼ（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ型）（ＭＥＲ０７８６４０）．ジヒドロ−オロターゼ（Ｎ−末端ユニット）（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ型）（ＭＥＲ０６０６４７）．ＤＪ−１推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ００３３９０）。マーネーム−ＡＡ１００推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４８０２）。マーネーム−ＡＡ１０１非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０１４８０３）。ＫＩＡＡ０３６１タンパク質（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ型）（ＭＥＲ０４２８２７）。ＦＬＪ３４２８３タンパク質（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ０４４５５３）。非ペプチダーゼ相同染色体２１オープンリーディングフレーム��３（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ１６００９４）。ファミリーＣ５６非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１７７０１６）、ファミリーＣ５６非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１７６６１３）。ファミリーＣ５６非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１７６９１８）。ムチン様ホルモン受容体様２（ＭＥＲ０３７２３０）を含有するＥＧＦ様モジュール。ＣＤ９７抗原（ヒト型）（ＭＥＲ０３７２８６）。ムチン様ホルモン受容体様３（ＭＥＲ０３７２８８）を含有するＥＧＦ様モジュール。ムチン様ホルモン受容体様１（ＭＥＲ０３７２７８）を含有するＥＧＦ様モジュール。ムチン様ホルモン受容体様４（ＭＥＲ０３７２９４）を含有するＥＧＦ様モジュール。カドヘリンＥＧＦＬＡＧ  ７パスＧ型受容体２前駆体（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）（ＭＥＲ０４５３９７）、Ｇｐｒ６４（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）型タンパク質（ＭＥＲ１２３２０５）。ＧＰＲ５６（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）型タンパク質（ＭＥＲ１２２０５７）。ラトロフィリン２（ＭＥＲ１２２１９９）。ラトロフィリン−１（ＭＥＲ１２６３８０）。ラトロフィリン３（ＭＥＲ１２４６１２）。プロトカドヘリンフラミンゴ２（ＭＥＲ１２４２３９）。ＥＴＬタンパク質（ＭＥＲ１２６２６７）。Ｇタンパク質共役型受容体１１２（ＭＥＲ１２６１１４）。７回膜貫通らせん受容体（ＭＥＲ１２５４４８）。Ｇｐｒ１１４タンパク質（ＭＥＲ１５９３２０）。ＧＰＲ１２６血管誘導性Ｇタンパク質共役型受容体（ＭＥＲ１４００１５）。ＧＰＲ１２５（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）型タンパク質（ＭＥＲ１５９２７９）。ＧＰＲ１１６（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）型Ｇタンパク質共役型受容体（ＭＥＲ１５９２８０）。ＧＰＲ１２８（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）型Ｇタンパク質共役型受容体（ＭＥＲ１６２０１５）。ＧＰＲ１３３  （Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）−型タンパク質（ＭＥＲ１５９３３４）ＧＰＲ１１０Ｇ−タンパク質共役受容体（ＭＥＲ１５９２７７）、ＧＰＲ９７タンパク質（ＭＥＲ１５９３２２）、ＫＰＧ＿００６タンパク質（ＭＥＲ１６１７７３）ＫＰＧ＿００８タンパク質（ＭＥＲ１６１８３５）、ＫＰＧ＿００９タンパク質（ＭＥＲ１５９３３５）、未割り当てホモログ（ＭＥＲ１６６２６９）、ＧＰＲ１１３タンパク質（ＭＥＲ１５９３５２）、脳特異的血管新生阻害剤２（ＭＥＲ１５９７４６）、ＰＩＤＤ自己プロセッシングタンパク質ユニット１（ＭＥＲ０２０００１）、ＰＩＤＤ自己プロセッシングタンパク質ユニット２（ＭＥＲ０６３６９０）、ＭＵＣ１自己切断ムチン（ＭＥＲ０７４２６０）、デストログリカン（ＭＥＲ０５４７４１）、プロタンパク質変換酵素９（ＭＥＲ０２２４１６）、部位−１ペプチダーゼ（ＭＥＲ００１９４８）、フリン（ＭＥＲ０００３７５）、プロタンパク質変換酵素１（ＭＥＲ０００３７６）、プロタンパク質変換酵素２（ＭＥＲ０００３７７）、プロタンパク質変換酵素４（ＭＥＲ０２８２５５）、ＰＡＣＥ４プロタンパク質変換酵素（ＭＥＲ０００３８３）、プロタンパク質変換酵素５（ＭＥＲ００２５７８）、プロタンパク質変換酵素７（ＭＥＲ００２９８４）、トリペプチジル−ペプチダーゼＩＩ（ＭＥＲ０００３５５）、サブファミリーＳ８Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ２０１３３９）、サブファミリーＳ８Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１９１６１３）、サブファミリーＳ８Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１９１６１１）、サブファミリーＳ８Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１９１６１２）、サブファミリーＳ８Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１９１６１４）、トリペプチジル−ペプチダーゼＩ（ＭＥＲ００３５７５）、プロリルオリゴペプチダーゼ（ＭＥＲ０００３９３）、ジペプチジル−ペプチダーゼＩＶ（真核生物）（ＭＥＲ０００４０１）、アシルアミノアシル−ペプチダーゼ（ＭＥＲ０００４０８）、線維芽細胞活性化タンパク質アルファサブユニット（ＭＥＲ０００３９９）、ＰＲＥＰＬＡタンパク質（ＭＥＲ００４２２７）、ジペプチジル−ペプチダーゼ８（ＭＥＲ０１３４８４）、ジペプチジル−ペプチダーゼ９（ＭＥＲ００４９２３）、ＦＬＪ１推定上のペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７２４０）、マーネーム−ＡＡ１９４推定上のペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７３５３）、マーネーム−ＡＡ１９５推定上のペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７３６７）、マーネーム−ＡＡ１９６推定上のペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７３６８）、マーネーム−ＡＡ１９７推定上のペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７３７１）、Ｃ１４ｏｒｆ２９タンパク質（ＭＥＲ０３３２４４）、仮定上のタンパク質（ＭＥＲ０３３２４５）、仮定上のエステラーゼ／リパーゼ／チオエステラーゼ（ＭＥＲ０４７３０９）、タンパク質ＢＡｔ５（ＭＥＲ０３７８４０）、仮定上のタンパク質ｆｌｊ４０２１９（ＭＥＲ０３３２１２）、仮定上のタンパク質ｆｌｊ３７４６４（ＭＥＲ０３３２４０）、仮定上のタンパク質ｆｌｊ３３６７８（ＭＥＲ０３３２４１）、ジペプチジルペプチダーゼホモログＤＰＰ６（ＭＥＲ０００４０３）、ジペプチジルペプチダーゼホモログＤＰＰ１０（ＭＥＲ００５９８８）、Ｍｕｓｍｕｓｃｕｌｕｓ第２０染色体オープンリーディングフレーム１３５（ＭＥＲ０３７８４５）に類似するタンパク質、キヌレニンホルムアミダーゼ（ＭＥＲ０４６０２０）、サイログロブリン前駆体（ＭＥＲ０１１６０４）、アセチルコリンエステラーゼ（ＭＥＲ０３３１８８）、コリンエステラーゼ（ＭＥＲ０３３１９８）、カルボキシルエステラーゼＤ１（ＭＥＲ０３３２１３）、肝臓カルボキシルエステラーゼ（ＭＥＲ０３３２２０）、カルボキシルエステラーゼ３（ＭＥＲ０３３２２４）、カルボキシルエステラーゼ２（ＭＥＲ０３３２２６）、胆汁塩依存性リパーゼ（ＭＥＲ０３３２２７）、カルボキシルエステラーゼ−関連するタンパク質（ＭＥＲ０３３２３１）、ニューロリギン３（ＭＥＲ０３３２３２）、ニューロリギン４、Ｘ−連鎖（ＭＥＲ０３３２３５）、ニューロリギン４、Ｙ−連鎖（ＭＥＲ０３３２３６）、エステラーゼＤ（ＭＥＲ０４３１２６）、アリールアセトアミドデアセチラーゼ（ＭＥＲ０３３２３７）、ＫＩＡＡ１３６３−様タンパク質（ＭＥＲ０３３２４２）、ホルモン感受性リパーゼ（ＭＥＲ０３３２７４）、ニューロリギン１（ＭＥＲ０３３２８０）、ニューロリギン２（ＭＥＲ０３３２８３）、ファミリーＳ９非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ２１２９３９）、ファミリーＳ９非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ２１１４９０）、サブファミリーＳ９Ｃ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１９２３４１）、ファミリーＳ９未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２０９１８１）、ファミリーＳ９未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２００４３４）、ファミリーＳ９未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２０９５０７）、ファミリーＳ９未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２０９１４２）、セリンカルボキシペプチダーゼＡ（ＭＥＲ０００４３０）、卵黄形成性カルボキシペプチダーゼ−様タンパク質（ＭＥＲ００５４９２）、ＲＩＳＣペプチダーゼ（ＭＥＲ０１０９６０）、ファミリーＳ１５未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１９９４４２）、ファミリーＳ１５未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２００４３７）、ファミリーＳ１５未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２１２８２５）、リソソームＰｒｏ−Ｘａａカルボキシペプチダーゼ（ＭＥＲ０００４４６）、ジペプチジル−ペプチダーゼＩＩ（ＭＥＲ００４９５２）、胸腺特異的セリンペプチダーゼ（ＭＥＲ００５５３８）、エポキシドヒドロラーゼ−様推定上のペプチダーゼ（ＭＥＲ０３１６１４）、ＬｏＣ３２８５７４−様タンパク質（ＭＥＲ０３３２４６）、ＡＢヒドロラーゼドメイン−含有タンパク質４（ＭＥＲ０３１６１６）、エポキシドヒドロラーゼ（ＭＥＲ０００４３２）、中胚葉特異的転写物タンパク質（ＭＥＲ１９９８９０）、中胚葉特異的転写物タンパク質（ＭＥＲ０１７１２３）、細胞質ＩＣエポキシドヒドロラーゼ（ＭＥＲ０２９９９７）、細胞質ＩＣエポキシドヒドロラーゼ（ＭＥＲ２１３８６６）、仮定上のタンパク質ＦＬＪ２２４０８（ＭＥＲ０３１６０８）に類似する、ＣＧＩ−５８推定上のペプチダーゼ（ＭＥＲ０３０１６３）、ＷｉｌｌｉＡｍｓ−Ｂｅｕｒｅｎ症候群重要領域タンパク質２１エポキシドヒドロラーゼ（ＭＥＲ０３１６１０）、エポキシドヒドロラーゼ（ＭＥＲ０３１６１２）、仮定上のタンパク質ｆｌｊ２２４０８（エポキシドヒドロラーゼ）（ＭＥＲ０３１６１７）、モノグリセリドリパーゼ（ＭＥＲ０３３２４７）、仮定上のタンパク質（ＭＥＲ０３３２４９）、バラシクロビルヒドロラーゼ（ＭＥＲ０３３２５９）、ＣＣｇ１−相互作用因子ｂ（ＭＥＲ２１０７３８）から成る群から選択されるヒトプロテアーゼの１つまたは精選亜群によって選択的に切断可能であるように設計される基質認識配列が利用されてもよい。
【０２０８】
いくつかの実施形態では、基質認識配列は最大１５アミノ酸の長さのペプチド部分である。基質認識配列はプロテアーゼによって切断される。いくつかの実施形態では、プロテアーゼは組織内の細胞結合部分の標的と共局在し、結合剤・薬物コンジュゲートがプロテアーゼに曝露されると、プロテアーゼは薬物コンジュゲート部分における基質認識配列を切断する。いくつかの実施形態では、プロテアーゼは、細胞表面特徴を有意に発現しない組織において活性がない、または著しく活性が低い。いくつかの実施形態では、プロテアーゼは健常な、例えば、非罹患組織において活性がない、または著しく活性が低い。
【０２０９】
特定の実施形態では、基質認識配列は、以下から選択されるプロテアーゼによって切断される：
−ＡＤＡＭＳまたはＡＤＡＭＴＳ、例えば、ＡＤＡＭ８、ＡＤＡＭ９、ＡＤＡＭ１０、ＡＤＡＭ１２、ＡＤＡＭ１５、ＡＤＡＭ１７／ＴＡＣＥ、ＡＤＡＭＤＥＣ１、ＡＤＡＭＴＳ１、ＡＤＡＭＴＳ４またはＡＤＡＭＴＳ５。
−アスパラギン酸プロテアーゼ、例えば、ＢＡＣＥまたはレニン。
−アスパラギン酸カテプシン（細胞外空間での細胞溶解によって上方調節されるまたは遊離される程度まで）、例えば、カテプシンＤまたはカテプシンＥ。
−カスパーゼ（細胞外空間での細胞溶解によって上方調節されるまたは遊離される程度まで）、例えば、カスパーゼ１、カスパーゼ２、カスパーゼ３、カスパーゼ４、カスパーゼ５、カスパーゼ６、カスパーゼ７、カスパーゼ８、カスパーゼ９、カスパーゼ１０またはカスパーゼ１４。
−システインカテプシン、例えば、カテプシンＢ、カテプシンＣ、カテプシンＫ、カテプシンＬ、カテプシンＳ、カテプシンＶ／Ｌ２、カテプシンＸ／Ｚ／Ｐ。
−システインプロテイナーゼ、例えば、クルジパイン、レグマインまたはオツバイン−２。
−ＫＬＫ、例えば、ＫＬＫ４、ＫＬＫ５、ＫＬＫ６、ＫＬＫ７、ＫＬＫ８、ＫＬＫ１０、ＫＬＫ１１、ＫＬＫ１３、またはＫＬＫ１４。
−メタロプロテイナーゼ、例えば、メプリン、ネプリライシン、ＰＳＭＡまたはＢＭＰ−１、
−ＭＭＰ、例えば、ＭＭＰ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ７、ＭＭＰ８、ＭＭＰ９、ＭＭＰ１０、ＭＭＰ１１、ＭＭＰ１２、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ１４、ＭＭＰ１５、ＭＭＰ１６、ＭＭＰ１７、ＭＭＰ１９、ＭＭＰ２０、ＭＭＰ２３、ＭＭＰ２４、ＭＭＰ２６、ＭＭＰ２７。
−セリンプロテアーゼ、例えば、活性化プロテインＣ、カテプシンＡ、カテプシンＧ、キマーゼ、凝固因子プロテアーゼ（例えば、ＦＶＩＩａ、ＦＩＸａ、ＦＸａ、ＦＸＩａ、ＦＸＩＩａ）、エラスターゼ、グランザイムＢ、グアニジノベンゾアターゼ、ＨｔｒＡ１、ヒト好中球エラスターゼ、ラクトフェリン、マラプシン、ＮＳ３／４Ａ、ＰＡＣＥ４、プラスミン、ＰＳＡ、ｔＰＡ、トロンビン、トリプターゼまたはｕＰＡ。
−ＩＩ型膜貫通型セリンプロテアーゼ（ＴＴＳＰ）、例えば、ＤＥＳＣ１、ＤＰＰ−４、ＦＡＰ、ヘプシン、マトリプターゼ−２、ＭＴ−ＳＰ１／マトリプターゼ、ＴＭＰＲＳＳ２、ＴＭＰＲＳＳ３、ＴＭＰＲＳＳ４。
【０２１０】
例えば、結合剤・薬物コンジュゲートに含まれ得る好適な基質認識配列、すなわち、ＳＲＳは、ＴＧＲＧＰＳＷＶ、ＳＡＲＧＰＳＲＷ、ＴＡＲＧＰＳＦＫ、ＬＳＧＲＳＤＮＨ、ＧＧＷＨＴＧＲＮ、ＨＴＧＲＳＧＡＬ、ＰＬＴＧＲＳＧＧ、ＡＡＲＧＰＡＩＨ、ＲＧＰＡＦＮＰＭ、ＳＳＲＧＰＡＹＬ、ＲＧＰＡＴＰＩＭ、ＲＧＰＡ、ＧＧＱＰＳＧＭＷＧＷ、ＦＰＲＰＬＧＩＴＧＬ、ＶＨＭＰＬＧＦＬＧＰ、ＳＰＬＴＧＲＳＧ、ＳＡＧＦＳＬＰＡ、ＬＡＰＬＧＬＱＲＲ、ＳＧＧＰＬＧＶＲ、ＰＬＧＬ、ＧＰＲＳＦＧＬ、及びＧＰＲＳＦＧから成る群から選択されるペプチド部分である。
【０２１１】
いくつかの実施形態では、基質認識配列は、ＩＳＳＧＬＬＳＳ、ＱＮＱＡＬＲＭＡ、ＡＱＮＬＬＧＭＶ、ＳＴＦＰＦＧＭＦ、ＰＶＧＹＴＳＳＬ、ＤＷＬＹＷＰＧＩ、ＭＩＡＰＶＡＹＲ、ＲＰＳＰＭＷＡＹ、ＷＡＴＰＲＰＭＲ、ＦＲＬＬＤＷＱＷ、ＬＫＡＡＰＲＷＡ、ＧＰＳＨＬＶＬＴ、ＬＰＧＧＬＳＰＷ、ＭＧＬＦＳＥＡＧ、ＳＰＬＰＬＲＶＰ、ＲＭＨＬＲＳＬＧ、ＬＡＡＰＬＧＬＬ、ＡＶＧＬＬＡＰＰ、ＬＬＡＰＳＨＲＡ、ＰＡＧＬＷＬＤＰ、及びＩＳＳＧＬＳＳから成る群から選択される配列のようなＭＭＰの基質である。
【０２１２】
いくつかの実施形態では、基質認識配列は、ＩＳＳＧＬＳＳ、ＱＮＱＡＬＲＭＡ、ＡＱＮＬＬＧＭＶ、ＳＴＦＰＦＧＭＦ、ＰＶＧＹＴＳＳＬ、ＤＷＬＹＷＰＧＩ、ＩＳＳＧＬＬＳＳ、ＬＫＡＡＰＲＷＡ、ＧＰＳＨＬＶＬＴ、ＬＰＧＧＬＳＰＷ、ＭＧＬＦＳＥＡＧ、ＳＰＬＰＬＲＶＰ、ＲＭＨＬＲＳＬＧ、ＬＡＡＰＬＧＬＬ、ＡＶＧＬＬＡＰＰ、ＬＬＡＰＳＨＲＡ、及びＰＡＧＬＷＬＤＰから成る群から選択される配列のようなＭＭＰの基質である。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、基質認識配列は、ＧＰＲＳＦＧＬまたはＧＰＲＳＦＧのようなトロンビンの基質である。
【０２１４】
主題の結合剤・薬物コンジュゲートの特定の実施形態では、基質認識配列は線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰα）によって切断され、式によって表され、
【化８】
2021527042.tif 000009
式中、
Ｒ２は、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキルを表し、好ましくはＨであり；
Ｒ３は、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキルを表し、好ましくはメチル、エチル、プロピル、またはイソプロピルであり、さらに好ましくはメチルであり；
Ｒ４は存在しない、または（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＯＨ、−ＮＨ２、もしくはハロゲンを表し；
ＸはＯまたはＳを表し；且つ
−ＮＨ−は、Ｌ２が自壊型リンカーである場合Ｌ２の一部であり、またはＬ２が結合である場合ＤＭの一部であるアミンを表す。
【０２１５】
特定の実施形態では、Ｒ２はＨであり、Ｒ３はメチルであり、Ｒ４は存在せず、ＸはＯである。
【０２１６】
ｂ．自壊型
本発明の結合剤・薬物コンジュゲートは、薬物部分に共有結合した複素環自壊部分と切断可能な基質認識配列部分とを採用することができる。自壊部分は、２つの間隔を置いた化学部分を一緒に共有結合して通常安定な分子にすることができ、酵素的切断によってその分子から前記間隔を置いた化学部分の１つを遊離し；前記酵素的切断に続いて、二官能性化学基の残りから自発的に切断して、前記間隔を置いた化学部分の他方を遊離する二官能性化学基として定義されてもよい。本発明によれば、自壊部分は、その末端の一方で、スペーサーユニットを介して直接的または間接的に、アミド結合によってリガンドに共有結合され、その末端の他方で、薬物からぶら下がっている化学反応部位（官能基）に共有結合される。自壊部分による薬物部分の誘導体化は、薬物が切断されるまで薬物を薬理学的活性が低いものにしてもよく（例えば、毒性が低くなる）、または全く活性がないものにしてもよい。
【０２１７】
結合剤・薬物コンジュゲートは一般に循環中で安定である、または少なくとも、基質認識配列と自壊部分との間のアミド結合を切断することができる酵素が存在しない場合にはそうであるはずである。しかしながら、結合剤・薬物コンジュゲートを好適な酵素に曝露すると、アミド結合が切断され、自発的な自壊反応を開始し、その結果、自壊部分を薬物に共有結合する結合が切断を生じ、それによって、誘導体化されていない、または薬理学的に活性がある形態の遊離薬物部分の遊離を達成する。
【０２１８】
本発明のコンジュゲートにおける自壊部分は１以上のヘテロ原子を組み込み、それによって、改善された溶解性を提供し、切断速度を改善し、コンジュゲートの凝集の傾向を減らす。非複素環ＰＡＢ型リンカーに対する本発明の複素環自壊型リンカー構築物のこれらの改善は、効力の増加、毒性の減少、及びさらに望ましい薬物動態のような驚くべき且つ予想外の生物学的特性をもたらしてもよい。
【０２１９】
特定の実施形態では、Ｌ２はベンジルオキシカルボニル基である。
【０２２０】
特定の実施形態では、Ｌ２は式であり、
【化９】
2021527042.tif 000010
式中、Ｒ１は、水素、非置換もしくは置換のＣ１〜３アルキル、または非置換もしくは置換のヘテロシクリルである。特定の実施形態では、Ｒ１は水素である。特定の例では、Ｒ１はメチルである。
【０２２１】
特定の実施形態では、Ｌ２は、以下から選択される。
【化１０】
2021527042.tif 000011
【０２２２】
特定の実施形態では、自壊部分Ｌ２は、以下から選択され、
【化１１】
2021527042.tif 000012
式中、
ＵはＯ、Ｓ、またはＮＲ６であり；
ＱはＣＲ４またはＮであり；
式ＩＩ及びＩＩＩについてはＱ、Ｖ１及びＶ２の少なくとも一方がＮであるという条件で、Ｖ１、Ｖ２及びＶ３は独立してＣＲ４またはＮであり；
Ｔは前記薬物部分からぶら下がっているＮＨ、ＮＲ６、ＯまたはＳであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、−Ｎ（Ｒ５）２、−Ｎ（Ｒ５）３＋、Ｃ１−Ｃ８アルキルハライド、カルボキシレート、サルフェート、スルファメート、スルホネート、−ＳＯ２Ｒ５、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ５、−ＳＲ５、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ５）２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ５、−ＣＯ２Ｒ５、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２、−ＣＮ、−Ｎ３、−ＮＯ２、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、Ｃ１−Ｃ８ハロ置換アルキル、ポリエチレンオキシ、ホスホネート、ホスフェート、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８置換アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８置換アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ２〜Ｃ８置換アルキニル、Ｃ６〜Ｃ２０アリール、Ｃ６〜Ｃ２０置換アリール、Ｃ１〜Ｃ２０複素環、及びＣ１〜Ｃ２０置換複素環から選択され；またはＲ２及びＲ３は一緒になって、カルボニル（＝Ｏ）もしくは３〜７の炭素原子のスピロ炭素環を形成し；
Ｒ５及びＲ６は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ１〜Ｃ８置換アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８置換アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ２−Ｃ８置換アルキニル、Ｃ６〜Ｃ２０アリール、Ｃ６〜Ｃ２０置換アリール、Ｃ１〜Ｃ２０複素環、及びＣ１〜Ｃ２０置換複素環から選択され；
その際、Ｃ１〜Ｃ８置換アルキル、Ｃ２−Ｃ８置換アルケニル、Ｃ２−Ｃ８置換アルキニル、Ｃ６−Ｃ２０置換アリール、及びＣ２−Ｃ２０置換複素環は独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、−Ｎ（Ｒ５）２、−Ｎ（Ｒ５）３＋、Ｃ１〜Ｃ８アルキルハライド、カルボキシレート、スルフェート、スルファメート、スルホネート、Ｃ１〜Ｃ８アルキルスルホネート、Ｃ１〜Ｃ８アルキルアミノ、４−ジアルキルアミノピリジニウム、Ｃ１〜Ｃ８アルキルヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ８アルキルチオール、−ＳＯ２Ｒ５、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ５、−ＳＲ５、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ５）２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ５、−ＣＯ２Ｒ５、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ５）２、−ＣＮ、−Ｎ３、−ＮＯ２、Ｃ１〜Ｃ８アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ８トリフルオロアルキル、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ１２炭素環、Ｃ６〜Ｃ２０アリール、Ｃ２〜Ｃ２０複素環、ポリエチレンオキシ、ホスホネート、及びホスフェートから選択される１以上の置換基で置換される。
【０２２３】
ＴがＮＨである場合、それは（自壊部分に結合する前に）薬物部分からぶら下がっている一級アミン（−ＮＨ２）に由来し、ＴがＮである場合、それは（自壊部分に結合する前に）（−ＭＨ−）薬物部分からの第二級アミンに由来することが理解されるであろう。同様に、ＴがＯまたはＳである場合、それは自壊部分に結合する前に、薬物部分からそれぞれぶら下がっているヒドロキシル基（−ＯＨ）またはスルフヒドリル（−ＳＨ）基に由来する。
【０２２４】
特定の実施形態では、自壊型リンカーＬ２は、−ＮＨ−（ＣＨ２）４−Ｃ（＝Ｏ）−または−ＮＨ−（ＣＨ２）３−Ｃ（＝Ｏ）−である。
【０２２５】
特定の実施形態では、自壊型リンカーＬ２はｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢＣ）である。
【０２２６】
特定の実施形態では、自壊型リンカーＬ２は、２，４−ビス（ヒドロキシメチル）アニリンである。
【０２２７】
本発明での使用に容易に適合される他の例示的な自壊型リンカーは、例えば、米国特許ＵＳ７７５４６８１、ＷＯ２０１２０７４６９３Ａ１、ＵＳ９０８９６１４、ＥＰ１７３２６０７Ａ２、ＷＯ２０１５０３８４２６Ａ１（そのすべてが参照によって組み込まれる）、Ｗａｌｔｈｅｒ，ｅｔ  ａｌ．”Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ｉｎ  ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  ｅｎｚｙｍｅ  ｐｒｏｄｒｕｇ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ”，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．２０１７，Ｓｅｐ．１；１１８：６５−７７、及びＴｒａｎｏｙ−Ｏｐａｌｉｎｓｋｉ，ｅｔ  ａｌ．”Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ｓｅｌｆ−ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ  ｌｉｎｋｅｒｓ  ｆｏｒ  ｔｕｍｏｕｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｐｒｏｄｒｕｇ  ｔｈｅｒａｐｙ”、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．２００８，Ａｕｇ；８（６）：６１８−３７にて教示されており；それぞれの教示は参照によって本明細書に組み込まれる。
【０２２８】
ｃ．薬物部分
広範囲の薬物実体を主題の結合剤・薬物コンジュゲートの薬物部分、ＤＭとして使用することができる。
【０２２９】
特定の実施形態では、遊離薬物部分は免疫調節剤であり、それは免疫活性化剤及び／または自然免疫経路応答の誘導因子として作用する薬物部分を含む。特定の実施形態では、遊離薬物部分はＩＦＮ−αの産生を誘導する。特定の実施形態では、遊離薬物部分は炎症誘発性サイトカインの産生を誘導する。特定の実施形態では、遊離薬物部分はＩＬ−１βの産生を誘導する。特定の実施形態では、遊離薬物部分はＩＬ−１８の産生を誘導する。
【０２３０】
特定の実施形態では、遊離薬物部分はＮＫ、γδＴ、及びＣＤ８＋Ｔ細胞を含むエフェクター細胞の増殖及び生存を促進する。
【０２３１】
特定の実施形態では、遊離薬物部分はマクロファージのピロトーシスを誘導する。
【０２３２】
（ｉ）例示的なイムノＤＡＳＨ阻害剤
特定の実施形態では、本発明の方法で使用するためのイムノＤＡＳＨ阻害剤は一般式で表され、
【化１２】
2021527042.tif 000013
式中、
ＡはＮ及びＣα炭素を含む４〜８員環の複素環を表し；
ＺはＣまたはＮを表し；
Ｗは−ＣＮ、−ＣＨ＝ＮＲ５、または以下を表し；
【化１３】
2021527042.tif 000014
Ｒ’１は、Ｃ末端に結合したアミノ酸残基もしくはアミノ酸類似体またはＣ末端に結合したペプチドもしくはペプチド類似体を表し、そのアミン末端はＬ１と共有結合を形成し、または、Ｌ１が結合である場合、基質認識配列と共有結合を形成し；
Ｒ’２は存在しない、または環Ａの１以上の置換を表し、そのそれぞれは独立して、ハロゲン、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、カルボニル（例えば、カルボキシル、エステル、ホルメートまたはケトン）、チオカルボニル（例えば、チオエステル、チオアセテートまたはチオホルメート）、アミノ、アシルアミノ、アミド、シアノ、ニトロ、アジド、スルフェート、スルホネート、スルホンアミド、−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−低級アルキル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−低級アルケニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｍ−ＳＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−低級アルキル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−低級アルケニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ７であることができ；
ＸがＮである場合、Ｒ’３は水素を表し、ＸがＣである場合、Ｒ’３は水素またはハロゲン、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、カルボニル（例えば、カルボキシル、エステル、ホルメートまたはケトン）、チオカルボニル（例えば、チオエステル、チオアセテート、またはチオホルメート）、アミノ、アシルアミノ、アミド、シアノ、ニトロ、アジド、スルフェート、スルホネート、スルホンアミド、−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−低級アルキル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−低級アルケニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｍ−ＳＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−低級アルキル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−低級アルケニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ７を表し；
Ｒ４は、水素、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３、−（ＣＨ２）ｎ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−低級アルキル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−アルケニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−アルキニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−低級アルキル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−低級アルケニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−低級アルキニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、または−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ８を表し；
Ｒ５は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、−Ｃ（Ｘ１）（Ｘ２）Ｘ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｎ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−、アルキル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−アルケニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−アルキニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−アルキル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−アルケニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−アルキニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ７、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、または−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ’７を表し；
Ｒ６は、水素、ハロゲン、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−低級アルキル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−低級アルケニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｍ−ＳＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−低級アルキル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−低級アルケニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ７を表し；
Ｒ７は、各出現ごとに、置換または非置換のアリール、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、または複素環を表し；
Ｒ’７は、各出現ごとに、水素、または置換または非置換のアルキル、アルケニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、または複素環を表し；且つ
Ｙ１及びＹ２は独立して、または一緒にＯＨ、またはＹ１とＹ２が環構造にて５〜８の原子を有する環（例えば、ピナコール等）を介して接続されている環状誘導体を含む、ヒドロキシル基に加水分解することができる基であることができ；
Ｒ５０はＯまたはＳを表し；
Ｒ５１は、Ｎ３、ＳＨ２ＮＨ２、ＮＯ２、またはＯ−Ｒ’７を表し；
Ｒ５２は、水素、低級アルキル、アミン、ＯＲ’７、または薬学的に許容される塩を表し、またはＲ５１とＲ５２が結合しているリン原子と一緒になって環構造にて５〜８の原子を有する複素環を完成し；
Ｘ１はハロゲンを表し；
Ｘ２及びＸ３はそれぞれ水素またはハロゲンを表し；
ｍはゼロ、または１〜８の範囲の整数であり；且つ
ｎは１〜８の範囲の整数である。
【０２３３】
好ましい実施形態では、環Ａは、５、６、または７員環であり、例えば、式によって表され、さらに好ましくは、５または６員環である（すなわち、ｎは３または４であってもよいが、ｎは１または２である）。
【化１４】
2021527042.tif 000015
【０２３４】
任意で、環をさらに置換することができる。
【０２３５】
好ましい実施形態では、Ｗは
【化１５】
2021527042.tif 000016
を表す。
【０２３６】
好ましい実施形態では、Ｒ’１は以下であり、
【化１６】
2021527042.tif 000017
式中、Ｒ３６は小型の疎水性基、例えば、低級アルキルまたはハロゲンであり、Ｒ３８は水素である、またはＲ３６及びＲ３７は一緒になって上記のＡについて定義されるようにＮ及びＣα炭素を含む４〜７員環の複素環を形成する。
【０２３７】
好ましい実施形態では、Ｒ’２は存在しない、または低級アルキルもしくはハロゲンのような小型の疎水性基を表す。
【０２３８】
好ましい実施形態では、Ｒ’３は水素、または低級アルキルまたはハロゲンのような小型の疎水性基である。
【０２３９】
好ましい実施形態では、Ｒ’５は水素、またはハロゲン化低級アルキルである。
【０２４０】
好ましい実施形態では、Ｘ１はフッ素であり、ハロゲンである場合、Ｘ２及びＸ３はフッ素である。
【０２４１】
同等物とみなされるのはまた、ボロン酸エステル及びハロゲン化物を含む前述の化合物のいずれかに加水分解で変換できる任意の化合物、ならびにアセタール、ヘミアセタール、ケタール、及びヘミケタールを含むカルボニル同等物、ならびに環状ジペプチド類似体である。
【０２４２】
特定の好ましい実施形態では、主題の方法はイムノＤＡＳＨ阻害剤として、アミノ酸のボロン酸類似体を利用する。例えば、本発明は主題の方法におけるボロプロリル誘導体の使用を企図している。本発明の例示的なボロン酸由来の阻害剤は一般式によって表され、
【化１７】
2021527042.tif 000018
式中、
Ｒ’１は、Ｃ末端に結合したアミノ酸残基もしくはアミノ酸類似体、またはＣ末端に結合したペプチドまたはペプチド類似体を表し、そのアミン末端はＬ１と共有結合を形成し、または、Ｌ１が結合である場合、基質認識配列と共有結合を形成し；且つ
Ｒ１１及びＲ１２はそれぞれ独立して水素、アルキル、もしくは薬学的に許容される塩を表し、またはＲ１１及びＲ１２は、それらが結合しているＯ−Ｂ−Ｏ原子と一緒になって環構造に５〜８の原子を有する複素環を完成させる。
【０２４３】
特定の実施形態では、イムノＤＡＳＨ阻害剤は、Ｐ１特異性位置にてプロリル基またはその類似体を含み、且つＰ２特異性位置にて非極性（及び好ましくは疎水性）アミノ酸、例えば、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファンまたはメチオニンのような非極性アミノ酸、またはそれらの類似体を含むペプチドまたはペプチド模倣体である。他の実施形態では、Ｐ２は、例えば、アルギニン、リジン、アスパラギン酸またはグルタミン酸のような荷電側鎖を持つアミノ酸を配置する。例えば、イムノＤＡＳＨ阻害剤は、Ａｌａ−ＰｒｏまたはＶａｌ−Ｐｒｏジペプチド配列またはそれらの同等物を含んでもよく、且つ一般式で表されてもよい：
【化１８】
2021527042.tif 000019
【０２４４】
好ましい実施形態では、環Ａは、５、６、または７員環であり、例えば、式によって表される。
【化１９】
2021527042.tif 000020
【０２４５】
特定の好ましい実施形態では、Ｒ３２は、小型の疎水性基、例えば、低級アルキルまたはハロゲンである。
【０２４６】
特定の好ましい実施形態では、Ｒ３２は、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｎ）（ＮＨ２）、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ２または−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯＯＨのような−低級アルキル−グアニジン、−低級アルキル−アミン、低級アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＨであり、その際、ｍは１〜６、好ましくは１〜３である。
【０２４７】
好ましい実施形態では、Ｒ’２は存在しない、または低級アルキルもしくはハロゲンのような小型の疎水性基を表す。
【０２４８】
好ましい実施形態では、Ｒ’３は、水素、または低級アルキルもしくはハロゲンのような小型の疎水性基である。
【０２４９】
本発明の別の態様は、式ＩＩＩで表されるイムノＤＡＳＨ阻害剤、またはその医薬塩に関するものであり：
【化２０】
2021527042.tif 000021
式中、
環ＺはＮ及びＣα炭素を含む４〜１０員環の複素環を表し；
Ｗは−ＣＮ、−ＣＨ＝ＮＲ４、標的の活性部位残基と反応する官能基、または以下を表し；
【化２１】
2021527042.tif 000022
７ＸはＯまたはＳであり；
Ｘ２は、Ｈ、ハロゲン、または低級アルキルであり；
Ｙ１及びＹ２は独立してＯＨである、またはそれらが結合しているホウ素原子と一緒になってボロン酸に加水分解可能な基を表す、またはそれらが結合しているホウ素原子と一緒になってボロン酸に加水分解可能な５〜８員環を形成し；
Ｒ１は出現ごとに独立して、ハロゲン、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、カルボニル、チオカルボニル、アミノ、アシルアミノ、アミド、シアノ、ニトロ、アジド、スルフェート、スルホネート、スルホンアミド、−ＣＦ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３、−（ＣＨ２）ｍＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−低級アルキル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−低級アルケニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＳＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−低級アルキル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−低級アルケニル、または−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３を表し；
Ｒ２は各出現ごとに、水素、低級アルキル、低級アルキニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３、−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−アルケニル、−Ｃ（＝Ｏ）−アルキニル、または−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３を表し；
Ｒ３は各出現ごとに、水素、または置換または非置換の低級アルキル、低級アルケニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、または複素環を表し；
Ｒ４は水素、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３、−（ＣＨ２）ｎ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−低級アルキル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−アルケニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−アルキニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−低級アルキル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−低級アルケニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−低級アルキニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、または−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ８を表し；
Ｒ５はＯまたはＳを表し；
Ｒ６はＮ３、ＳＨ、ＮＨ２、ＮＯ２またはＯＲ８を表し；
Ｒ７は、水素、低級アルキル、アミン、ＯＲ８、もしくは薬学的に許容される塩を表し、またはＲ５及びＲ６はそれらが結合しているリン原子と一緒になって環構造に５〜８の原子を有する複素環を完成させ；
Ｒ８は、水素、置換または非置換のアルキル、アルケニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルケニルまたはヘテロシクリルを表し；
Ｒ１０は存在しない、またはそれらが付加されている環Ｚに対する１〜３の置換を表し、そのそれぞれが独立して、ハロゲン、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、カルボニル（例えば、カルボキシル、エステル、ホルメート、またはケトン）、チオカルボニル（例えば、チオエステル、チオアセテート、またはチオホルメート）、アミノ、アシルアミノ、アミド、シアノ、イソシアノ、チオシアナト、イソチオシアナト、シアナト、ニトロ、アジド、スルフェート、スルホネート、スルホンアミド、低級アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｏ−低級アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−グアニジニル；−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−低級アルキル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−低級アルケニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＳＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−低級アルキル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−低級アルケニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３であることができ；
ｎは０、１、２、または３であり；且つ
ｍは０、１、２、または３である。
【０２５０】
本発明の別の態様は、式ＩＶによって表されるイムノＤＡＳＨ阻害剤、またはその医薬塩に関するものであり：
【化２２】
2021527042.tif 000023
式中、
環ＡはＮを含む３〜１０員環の環構造を表し；
環ＺはＮ及びＣα炭素を含む４〜１０員環の複素環を表し；
Ｗは−ＣＮ、−ＣＨ＝ＮＲ４、標的の活性部位残基と反応する官能基、または以下を表し；
【化２３】
2021527042.tif 000024
ＸはＯまたはＳであり、
Ｘ１はハロゲンを表し；
Ｙ１及びＹ２は独立してＯＨである、またはそれらが結合しているホウ素原子と一緒になってボロン酸に加水分解可能である基を表す、またはそれらが結合しているホウ素原子と一緒になってボロン酸に加水分解可能である５〜８員環を形成し；
Ｒ１は、ハロゲン、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、カルボニル、チオカルボニル、アミノ、アシルアミノ、アミド、シアノ、ニトロ、アジド、スルフェート、スルホネート、スルホンアミド、−ＣＦ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３、−（ＣＨ２）ｍＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−低級アルキル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−低級アルケニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＳＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−低級アルキル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−低級アルケニル、または−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３を表し；
Ｒ２は各出現ごとに、水素、低級アルキル、低級アルキニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３、−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−アルケニル、−Ｃ（＝Ｏ）−アルキニル、または−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３を表し；
Ｒ３は各出現ごとに、水素、または置換または非置換の低級アルキル、低級アルケニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、または複素環を表し；
Ｒ４は水素、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３、−（ＣＨ２）ｎ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−低級アルキル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−アルケニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−アルキニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−低級アルキル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−低級アルケニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−低級アルキニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、または−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ８を表し；
Ｒ５はＯまたはＳを表し；
Ｒ６は、Ｎ３、ＳＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、またはＯＲ８を表し；
Ｒ７は、水素、低級アルキル、アミン、ＯＲ８、または薬学的に許容される塩を表し、またはＲ５及びＲ６はそれらが結合しているリン原子と一緒になって環構造に５〜８の原子を有する複素環を完成させ；
Ｒ８は、水素、置換または非置換のアルキル、アルケニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルケニルまたはヘテロシクリルを表し；
Ｒ９及びＲ１０はそれぞれ独立して存在しない、またはそれらが付加される環Ａもしくは環Ｚに対する１〜３の置換を表し、そのそれぞれは独立して、ハロゲン、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、カルボニル（例えば、カルボキシル、エステル、ギ酸、またはケトン）、チオカルボニル（チオエステル、チオアセテート、またはチオホルメート）、アミノ、アシルアミノ、アミド、シアノ、イソシアノ、チオシアナト、イソチオシアナト、シアナト、ニトロ、アジド、スルフェート、スルホネート、スルホンアミド、−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−低級アルキル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−低級アルケニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＳＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−低級アルキル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−低級アルケニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３であることができ；
ｎは０、１、２、または３であり；且つ
ｍは０、１、２、または３である。
【０２５１】
特定の好ましい実施形態では、イムノＤＡＳＨ阻害剤は、ＤＡＳＨ酵素ＤＰＰ８及びＤＰＰ９（及び任意でＤＰＰ−４及び／またはＦＡＰも）のボロン酸阻害剤である。
【０２５２】
特定の好ましい実施形態では、イムノＤＡＳＨ阻害剤は、ＤＡＳＨ酵素ＤＰＰ８及びＤＰＰ９（及び任意でＤＰＰ−４及び／またはＦＡＰも）のジペプチドボロン酸阻害剤である。特定の好ましい実施形態では、イムノＤＡＳＨ阻害剤ジペプチドボロン酸はＰ１位にてプロリンまたはプロリン類似体を有する。主題のイムノＤＡＳＨ阻害剤は、免疫介在性メカニズムによって腫瘍の退縮に介在することができる。主題のイムノＤＡＳＨ阻害剤はマクロファージのピロトーシスを誘導し、免疫原性調節のような活性を直接的または間接的に有し、抗原特異的ＣＴＬ殺傷に対して腫瘍細胞を感作し、免疫細胞のサブセットと機能を変化させ、樹状細胞輸送の調節を介してＴ細胞のプライミングを加速し、一般的なＴ細胞介在性の抗腫瘍活性を誘発する。
【０２５３】
特定の実施形態では、イムノＤＡＳＨ阻害剤とＰＤ−１阻害剤との主題の組み合わせは、１以上の他の化学療法剤、免疫腫瘍剤、または放射線を含む治療の一部として投与することができる。それはまた、腫瘍ワクチン、養子細胞療法、遺伝子治療、腫瘍溶解性ウイルス療法等を含む治療法の一部として使用することもできる。
【０２５４】
特定の実施形態では、本方法のイムノＤＡＳＨ阻害剤は式Ｉによって表され、またはその医薬塩であり、
【化２４】
2021527042.tif 000025
式中、
環Ａは３〜１０員環の環構造を表し；
環ＺはＮ及びＣα炭素を含む４〜１０員環の複素環を表し；
Ｗは−ＣＮ、−ＣＨ＝ＮＲ４、標的の活性部位残基と反応する官能基、または以下を表し；
【化２５】
2021527042.tif 000026
ＸはＯまたはＳであり；
Ｘ１はハロゲンを表し；
Ｙ１及びＹ２は独立してＯＨである、またはそれらが結合しているホウ素原子と一緒になってボロン酸に加水分解可能である基を表す、またはそれらが結合しているホウ素原子と一緒になってボロン酸に加水分解可能である５〜８員環を形成し；
Ｒ１は、ハロゲン、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、カルボニル、チオカルボニル、アミノ、アシルアミノ、アミド、シアノ、ニトロ、アジド、スルフェート、スルホネート、スルホンアミド、−ＣＦ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３、−（ＣＨ２）ｍＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−低級アルキル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−低級アルケニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＳＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−低級アルキル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−低級アルケニル、または−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３を表し；
Ｒ２は各出現ごとに、水素、低級アルキル、低級アルキニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３、−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−アルケニル、−Ｃ（＝Ｏ）−アルキニル、または−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３を表し；
Ｒ３は各出現ごとに、水素、または置換または非置換の低級アルキル、低級アルケニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、または複素環を表し；
Ｒ４は水素、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３、−（ＣＨ２）ｎ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−低級アルキル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−アルケニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−アルキニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−低級アルキル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−低級アルケニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−低級アルキニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、または−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ８を表し；
Ｒ５はＯまたはＳを表し；
Ｒ６は、Ｎ３、ＳＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、またはＯ−Ｒ’８を表し；
Ｒ７は、水素、低級アルキル、アミン、ＯＲ８、または薬学的に許容される塩を表し、またはＲ５及びＲ６はそれらが結合しているリン原子と一緒になって環構造に５〜８の原子を持つ複素環を完成させ；
Ｒ８は、水素、置換または非置換のアルキル、アルケニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルケニルまたはヘテロシクリルを表し；
Ｒ９及びＲ１０は、それぞれ独立して存在しない、またはそれらが付加される環Ａもしくは環Ｚへの１、２、または３の置換を表し、そのそれぞれは独立してハロゲン、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、カルボニル（例えば、カルボキシル、エステル、ホルメート、またはケトン）、チオカルボニル（例えば、チオエステル、チオアセテート、またはチオホルメート）、アミノ、アシルアミノ、アミド、シアノ、イソシアノ、チオシアナト、イソチオシアナト、シアナト、ニトロ、アジド、スルフェート、スルホネート、スルホンアミド、低級アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｏ−低級アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−グアニジニル；−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−低級アルキル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−低級アルケニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＳＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−低級アルキル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−低級アルケニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３であることができ；
ｎは０、１、２、または３であり；
ｍは０、１、２、または３である。
【０２５５】
特定の実施形態では、式ＩのイムノＤＡＳＨ阻害剤は式Ｉａで表され、またはその医薬塩であり、
【化２６】
2021527042.tif 000027
式中、Ｘ、Ｗ、Ｚ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ９及びＲ１０は式Ｉについて上記で定義された通りであり、ｐは、１、２または３である。
【０２５６】
Ｉａの特定の好ましい実施形態では、Ｒ１は、低級アルキルであり；Ｒ９は存在しない、または各出現ごとに独立して、低級アルキル、−ＯＨ、−ＮＨ２、−Ｎ３、−低級アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｏ−低級アルキル、−Ｏ−低級アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−グアニジニルであり；ＸはＯであり；各Ｒ２は水素であり、Ｒ１０は存在しない、または−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＮもしくは−Ｎ３の単一置換を表し；Ｗは、−Ｂ（ＯＨ）２または−ＣＮ（さらに好ましくは−Ｂ（ＯＨ）２）である。
【０２５７】
特定の実施形態では、式ＩのイムノＤＡＳＨ阻害剤は式Ｉｂで表され、またはその医薬塩であり、
【化２７】
2021527042.tif 000028
式中、Ｘ、Ｗ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ９及びＲ１０は、式Ｉについて上記で定義された通りであり、ｐは、１、２または３である。
【０２５８】
Ｉｂの特定の好ましい実施形態では、Ｒ１は、低級アルキルである。Ｒ９は存在しないか、出現ごとに独立して、低級アルキル、−ＯＨ、−ＮＨ２、−Ｎ３、−低級アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｏ−低級アルキル、−Ｏ−低級アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−グアニジニル；ＸはＯ；各Ｒ２が水素であり、Ｒ１０は存在しない、または−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＮまたは−Ｎ３の単一置換を表す；Ｗは−Ｂ（ＯＨ）２または−ＣＮ（さらに好ましくは−Ｂ（ＯＨ）２）である。
【０２５９】
特定の実施形態では、式ＩのイムノＤＡＳＨ阻害剤は式Ｉｃで表され、またはその医薬塩であり、
【化２８】
2021527042.tif 000029
式中、Ｘ、Ｗ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ９及びＲ１０は式Ｉについて上記で定義された通りであり、ｐは、１、２または３である。
【０２６０】
Ｉｃの特定の好ましい実施形態では、Ｒ１は低級アルキルであり；Ｒ９は存在しない、または各出現ごとに独立して、低級アルキル、−ＯＨ、−ＮＨ２、−Ｎ３、−低級アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｏ−低級アルキル、−Ｏ−低級アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−グアニジニルであり；ＸはＯであり；各Ｒ２は水素であり、Ｒ１０は存在しない、または−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＮもしくは−Ｎ３；の単一置換を表し；Ｗは−Ｂ（ＯＨ）２または−ＣＮ（さらに好ましくは−Ｂ（ＯＨ）２）である。
【０２６１】
いくつかの実施形態では、イムノＤＡＳＨ阻害剤は、以下によって表される：
【化２９】
2021527042.tif 000030
【０２６２】
本発明の別の態様は、式ＩＩによって表されるイムノＤＡＳＨ阻害剤、またはその医薬塩に関するものであり、
【化３０】
2021527042.tif 000031
式中、
環Ａは、Ｒ１ａの各出現とともに、７〜１２員環の多環式環構造を表し；
環ＺはＮ及びＣα炭素を含む４〜１０員環の複素環を表し；
Ｗは−ＣＮ、−ＣＨ＝ＮＲ４、標的の活性部位残基と反応する官能基、または以下を表し；
【化３１】
2021527042.tif 000032
ＸはＯまたはＳであり；
Ｘ１はハロゲンを表し；
ＹはＣまたはＮであり；
Ｙ１及びＹ２は独立してＯＨであり、またはそれらが結合しているホウ素原子と一緒になってボロン酸に加水分解可能である基を表し、またはそれらが結合しているホウ素原子と一緒になってボロン酸に加水分解可能である５〜８員環を形成し；
Ｒ１ａは、低級アルキル、−（ＣＨ２）ｍ−、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−；−（ＣＨ２）ｍ−Ｎ−（ＣＨ２）ｍ−；または−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｍ−を表し；
Ｒ２は各出現ごとに、水素、低級アルキル、低級アルキニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３、−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−アルケニル、−Ｃ（＝Ｏ）−アルキニル、または−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３を表し；
Ｒ３は、各出現ごとに、水素、または置換または非置換の低級アルキル、低級アルケニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、または複素環を表し；
Ｒ４は水素、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３、−（ＣＨ２）ｎ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−低級アルキル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−アルケニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−アルキニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−低級アルキル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−低級アルケニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−低級アルキニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、または−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ８を表し；
Ｒ５はＯまたはＳを表し；
Ｒ６は、Ｎ３、ＳＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、またはＯＲ８を表し；
Ｒ７は、水素、低級アルキル、アミン、ＯＲ８、または薬学的に許容される塩を表し、またはＲ５及びＲ６はそれらが結合しているリン原子と一緒になって環構造に５〜８の原子を有する複素環を完成させ；
Ｒ８は、水素、置換または非置換のアルキル、アルケニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルケニルまたはヘテロシクリルを表し；
Ｒ９及びＲ１０は、それぞれ独立して存在しない、またはそれらが付加される環Ａもしくは環Ｚへの１、２、または３の置換を表し、そのそれぞれは独立してハロゲン、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、カルボニル（例えば、カルボキシル、エステル、ホルメート、またはケトン）、チオカルボニル（例えば、チオエステル、チオアセテート、またはチオホルメート）、アミノ、アシルアミノ、アミド、シアノ、イソシアノ、チオシアナト、イソチオシアナト、シアナト、ニトロ、アジド、スルフェート、スルホネート、スルホンアミド、低級アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｏ−低級アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−グアニジニル；−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−低級アルキル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−低級アルケニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＳＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−低級アルキル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−低級アルケニル、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ３であることができ；
ｎは０、１、２、または３であり、
ｍは０、１、２、または３であり；且つ
ｐは１、２、または３である。
【０２６３】
特定の実施形態では、式ＩＩのイムノＤＡＳＨ阻害剤は式ＩＩａで表され、またはその医薬塩であり、
【化３２】
2021527042.tif 000033
式中、Ｘ、Ｗ、Ｚ、Ｒ２、Ｒ９及びＲ１０は式ＩＩについて上記で定義された通りである。
【０２６４】
ＩＩａの特定の好ましい実施形態では：Ｒ９は、各出現について独立して、低級アルキル、−ＯＨ、−ＮＨ２、−Ｎ３、−低級アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｏ−低級アルキル、−Ｏ−低級アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−グアニジニルであり；ＸはＯであり；各Ｒ２は水素であり、Ｒ１０は存在しない、または−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＮもしくは−Ｎ３の単一置換を表し；Ｗは、−Ｂ（ＯＨ）２または−ＣＮ（さらに好ましくは−Ｂ（ＯＨ）２）である。
【０２６５】
特定の実施形態では、式ＩＩのイムノＤＡＳＨ阻害剤は式ＩＩｂで表され、またはその医薬塩であり、
【化３３】
2021527042.tif 000034
式中、Ｘ、Ｗ、Ｒ２、Ｒ９及びＲ１０は式ＩＩについて上記で定義された通りである。
【０２６６】
ＩＩｂの特定の好ましい実施形態では：Ｒ９は、各出現について独立して、低級アルキル、−ＯＨ、−ＮＨ２、−Ｎ３、−低級アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｏ−低級アルキル、−Ｏ−低級アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−グアニジニルであり；ＸはＯであり；各Ｒ２は水素であり、Ｒ１０は存在しない、または−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＮもしくは−Ｎ３の単一置換を表し；Ｗは、−Ｂ（ＯＨ）２または−ＣＮ（さらに好ましくは−Ｂ（ＯＨ）２）である。
【０２６７】
特定の実施形態では、式ＩＩのイムノＤＡＳＨ阻害剤は式ＩＩｃで表され、またはその医薬塩であり、
【化３４】
2021527042.tif 000035
式中、Ｘ、Ｗ、Ｒ２、Ｒ９及びＲ１０は式ＩＩについて上記で定義された通りである。
【０２６８】
ＩＩｃの特定の好ましい実施形態では：Ｒ９は、各出現について独立して、低級アルキル、−ＯＨ、−ＮＨ２、−Ｎ３、−低級アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｏ−低級アルキル、−Ｏ−低級アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−グアニジニルであり；ＸはＯであり；各Ｒ２は水素であり、Ｒ１０は存在しない、または−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＮもしくは−Ｎ３の単一置換を表し；Ｗは、−Ｂ（ＯＨ）２または−ＣＮ（さらに好ましくは−Ｂ（ＯＨ）２）である。
【０２６９】
特定の実施形態では、式ＩＩのイムノＤＡＳＨ阻害剤は式ＩＩｄで表され、またはその医薬塩であり、
【化３５】
2021527042.tif 000036
式中、Ｘ、Ｗ、Ｒ２、Ｒ９及びＲ１０は式ＩＩについて上記で定義された通りである。
【０２７０】
ＩＩｄの特定の好ましい実施形態では：Ｒ９は、各出現について独立して、低級アルキル、−ＯＨ、−ＮＨ２、−Ｎ３、−低級アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｏ−低級アルキル、−Ｏ−低級アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−グアニジニルであり；ＸはＯであり；各Ｒ２は水素であり、Ｒ１０は存在しない、または−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＮもしくは−Ｎ３の単一置換を表し；Ｗは、−Ｂ（ＯＨ）２または−ＣＮ（さらに好ましくは−Ｂ（ＯＨ）２）である。
【０２７１】
特定の実施形態では、式ＩＩのイムノＤＡＳＨ阻害剤は式ＩＩｅで表され、またはその医薬塩であり、
【化３６】
2021527042.tif 000037
式中、Ｘ、Ｗ、Ｚ、Ｒ２、Ｒ９及びＲ１０は式ＩＩについて上記で定義された通りである。
【０２７２】
ＩＩｅの特定の好ましい実施形態では：Ｒ９は、各出現について独立して、低級アルキル、−ＯＨ、−ＮＨ２、−Ｎ３、−低級アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｏ−低級アルキル、−Ｏ−低級アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−グアニジニルであり；ＸはＯであり；各Ｒ２は水素であり、Ｒ１０は存在しない、または−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＮまたは−Ｎ３の単一置換を表し；Ｚはピロリジン環またはピペリジン環（さらに好ましくはピロリジン環）であり；Ｗは−Ｂ（ＯＨ）２または−ＣＮ（さらに好ましくは−Ｂ（ＯＨ）２）である。
【０２７３】
いくつかの実施形態では、イムノＤＡＳＨ阻害剤は、以下のうちの１つである：
【化３７】
2021527042.tif 000038
【０２７４】
（ｉｉ）例示的なＳＴＩＮＧアゴニスト
ＳＴＩＮＧアゴニストの非限定的な例には、一般式の１つで表されるアゴニストが挙げられ、
【化３８】
2021527042.tif 000039
式中、
Ｘ１及びＸ２は独立して、ＯまたはＳであり、好ましくは同じであり（Ｏ、ＯまたはＳ、Ｓ）；
Ｘ３及びＸ４は独立して、例えばグアニンまたはグアニン類似体のようなプリン、またはピリミジンであり、その際、波線はＬ１への共有結合部位を示し、またはＬ１が結合である場合、基板認識配列への共有結合部位を示し；
Ｒ１及びＲ２は独立して、Ｈ、ヒドロキシル、ハロゲン（好ましくはＦまたはＣｌ）、または１〜１８の炭素及び０〜３のヘテロ原子の任意で置換された直鎖アルキル、１〜９の炭素の任意で置換されたアルケニル、１〜９の炭素の任意で置換されたアルキニル、または任意で置換されたアリールであり、その際、置換（複数可）は、存在する場合、Ｃ１〜６アルキル直鎖または分枝鎖、ベンジル、ハロゲン、トリハロメチル、Ｃ１〜６アルコキシ、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＯＨ、＝Ｏ、−ＣＯＯＲ’または−ＯＲ’から成る群から独立して選択されてもよく、その際、Ｒ１及びＲ２は双方ともＨではなく；
Ｒ’はＨまたは低級アルキル、−ＣＨ２ＯＨ、または−ＣＯＮＨ２である。
【０２７５】
特定の実施形態では、ＳＴＩＮＧアゴニストは式のうちの１つで表される：
【化３９】
2021527042.tif 000040
【０２７６】
上記のＳＴＩＮＧアゴニスト構造では、Ｘ３またはＸ４の１つが、Ｌ２が自壊型リンカーである場合、Ｌ２が結合を共有する官能基を含み、またはＬ２が（その）結合である場合、ＤＭが結合を共有する官能基を含むとい条件で、Ｘ３及びＸ４はそれぞれ独立して、例えば、９−プリン、９−アデニン、９−グアニン、９−ヒポキサンチン、９−キサンチン、９−尿酸、または９−イソグアニンであってもよい。
【０２７７】
Ｘ３及びＸ４は、同一でもあっても異なっていてもよい。
【０２７８】
いくつかの実施形態では、ＳＴＩＮＧアゴニストは、主にＲｐ、ＲｐまたはＲｐ、Ｓｐの立体異性体の形態で提供されてもよい。いくつかの実施形態では、ＳＴＩＮＧアゴニストは、主にＲｐ、Ｒｐの立体異性体の形態で提供されてもよい。
【０２７９】
例示的なＳＴＩＮＧアゴニストには以下が含まれる：
【化４０−１】
2021527042.tif 000041
【化４０−２】
2021527042.tif 000042
【化４０−３】
2021527042.tif 000043
【０２８０】
特定の実施形態では、ＳＴＩＮＧアゴニストは以下の構造のうちの１つで表される。
【化４１】
2021527042.tif 000044
【０２８１】
現在の結合剤コンジュゲートにおいて薬物部分として使用することができるさらに別のＳＴＩＮＧアゴニストは以下である。
【化４２】
2021527042.tif 000045
【０２８２】
本発明のコンジュゲートにおける薬物部分としての使用に容易に適合させることができるさらに他の例示的なＳＴＩＮＧアゴニストは、単に例示するために、ＰＣＴ公開ＷＯ２０１７１２３６６９Ａ１、ＷＯ２０１５０７７３５４Ａ１、及び米国特許公開ＵＳ２０１５００５６２２４Ａ１（それぞれが参照によって本明細書に組み込まれる）にて教示されている。
【０２８３】
特に自壊型リンカーを使用することにより、ＳＴＩＮＧアゴニストは、上記で示されたようなアミン以外の官能基を介して、例えば、遊離ヒドロキシル基を介してリンカーに結合できることも当業者に十分に理解されるであろう。
【０２８４】
（ｉｉｉ）例示的なＴＬＲアゴニスト
「トール様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト」の例には、ＴＬＲ１／２アゴニスト、ＴＬＲ２アゴニスト、ＴＬＲ３アゴニスト（例えば、ポリ：Ｃ）、ＴＬＲ４アゴニスト（例えば、Ｓ型リポ多糖、パクリタキセル、リピドＡ、モノホスホリルリピドＡ）、ＴＬＲ５アゴニスト（例えば、フラジェリン）、ＴＬＲ６／２アゴニスト（例えば、ＭＡＬＰ−２）、ＴＬＲ７アゴニスト、ＴＬＲ７／８アゴニスト（例えば、ガルジキモド、イミキモド、ロキソリビン、及びレシキモド（Ｒ８４８））、ＴＬＲ７／９アゴニスト（例えば、硫酸ヒドロキシクロロキン）、ＴＬＲ８アゴニスト（例えば、モトリモド（ＶＴＸ−２３３７））、ＴＬＲ９アゴニスト（例えば、ＣＰＧ−ＯＤＮ）、及びＴＬＲ１１アゴニスト（例えば、プロフィリン）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２８５】
本発明の結合剤コンジュゲートにおいて薬物部分として使用することができる例示的なＴＲＬアゴニストには、Ｓ−２７６０９、Ｃｌ３０７、ＵＣ−ＩＶ１５０、イミキモド、ガルジキモド、レシキモド、モトリモド、ＶＴＳ−１４６３ＧＳ−９６２０、ＧＳＫ２２４５０３５、ＴＭＸ−１０１、ＴＭＸ−２０１、ＴＭＸ−２０２、イサトリビン、ＡＺＤ８８４８、ＭＥＤＩ９１９７、３Ｍ−０５１、３Ｍ−８５２、３Ｍ−０５２、３Ｍ−８５４Ａ、Ｓ−３４２４０、ＫＵ３４Ｂ、またはＣｌ６６３、または必要に応じて、指示された結合及び基質認識配列からの遊離のための適切な官能基を持つ、または自壊型リンカーへの結合による適切な官能基を持つそれらの類似体が挙げられる。
【０２８６】
ＴＲＬの例示的なアゴニスト、特にＴＲＬ７アゴニスト、ＴＲＬ８アゴニスト及びＴＲＬ７／８アゴニストには以下が含まれる：
【化４３−１】
2021527042.tif 000046
【化４３−２】
2021527042.tif 000047
【０２８７】
特定の実施形態では、薬物部分は一般式で表されるＴＲＬ７／８アゴニストであり、
【化４４】
2021527042.tif 000048
式中、
ＸはＣＨ２、Ｏ、ＳまたはＮ、好ましくはＣＨ２、ＯまたはＮであり、さらに好ましくはＣＨ２またはＯであり；
ｎは０（ＮからＯへの直接結合）、または１〜５の整数、好ましくは１または２であり；
ｚは１〜５の整数であり；
ｍは１〜２０、好ましくは１〜１６の整数であり；
ｐは０（環からＸへの直接結合）、または１〜５の整数、好ましくは１または２であり；且つ
ｑは１〜５の整数、好ましくは１または２である。
【０２８８】
例えば、ＴＲＬアゴニストは以下の１つであるようなＴＲＬ７／８アゴニストである。
【化４５】
2021527042.tif 000049
【０２８９】
公開番号ＷＯ２００８１３５７９１、ＷＯ２０１６１４１０９２はまた、ＴＬＲ７を介して作用する免疫調節特性を有するイミダゾキノリン化合物のクラスも記載している。
【０２９０】
本発明の結合剤コンジュゲートの薬物部分としての使用に容易に適合される他の例示的なＴＲＬアゴニストは、例えば、Ｙｏｏ，ｅｔ  ａｌ．”Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ  ｉｎ  Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ７  ａｇｏｎｉｓｔｉｃ  １Ｈ−ｉｍｉｄａｚｏ［４，５−ｃ］ｐｙｒｉｄｉｎｅｓ”．Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２０１３，１１，６５２６−６５４５；Ｆｌｅｔｃｈｅｒ，ｅｔ  ａｌ．”Ｍａｓｋｅｄ  ｏｒａｌ  ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ｏｆ  Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ７  ａｇｏｎｉｓｔｓ：ａ  ｎｅｗ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  ｄｉｓｅａｓｅ”，２００６，Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  ｄｒｕｇｓ，（Ｌｏｎｄｏｎ，Ｅｎｇｌａｎｄ）．７．７０２−７０８；及びＰｒｙｄｅ，ｅｔ  ａｌ．”Ｔｈｅ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｐｒｏｔｏｔｙｐｅ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ＴＬＲ７  ａｇｏｎｉｓｔ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ”，Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２０１１，２，１８５−１８９にて開示されている。
【０２９１】
特に自壊型リンカーを使用することによって、ＴＲＬアゴニストは、上記に示されたようなアミン以外の官能基を介して、例えば、遊離ヒドロキシル基を介してリンカーに結合できることも当業者に十分に理解されるであろう。
【０２９２】
（ｉｖ）例示的なＲＩＧ−１アゴニスト
前記免疫刺激アゴニストがＲＩＧ−１アゴニストであり、ＲＩＧ−１アゴニストがＫＩＮ７００、ＫＩＮ１１４８、ＫＩＮ６００、ＫＩＮ５００、ＫＩＮ１００、ＫＩＮ１０１、ＫＩＮ４００、ＫＩＮ２０００、またはＳＢ−９２００である、先行する実施形態のいずれか１つに記載のコンジュゲート。
【０２９３】
（ｖ）例示的なアントラサイクリン
特定の実施形態では、薬物部分はアントラサイクリンまたはその誘導体であり、好ましくは腫瘍細胞の免疫原性細胞死を誘導することができるドキソルビシンまたは他の類似体である。
【０２９４】
アントラサイクリン及びその類似体には限定しないで、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ピラルビシン、バルルビシン、アクラルビシン、ミトキサントロン、アクチノマイシン、ブレオマイシン、プリカマイシン、及びマイトマイシンが具体的に挙げられる。例えば、アントラサイクリン部分は式で表すことができ、
【化４６】
2021527042.tif 000050
式中、
Ｒｃは、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ヒドロキシアルキル、または（Ｃ１−Ｃ６）アルカノイルオキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、特にメチル、ヒドロキシメチル、ジエトキシアセトキシメチル、またはブチリルオキシメチルを表し；
Ｒｄは、水素、ヒドロキシル、または（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、特にメトキシを表し；
Ｒｅ及びＲｆの一方は水素原子を表し；他方は、水素原子またはヒドロキシ基またはテトラヒドロピラニル−２−イルオキシ（ＯＴＨＰ）基を表す。
【０２９５】
（ｖｉ）例示的なプロテアソーム阻害剤
特定の実施形態では、薬物部分はプロテアソーム阻害剤である。例示的なプロテアソーム阻害剤には以下が挙げられる。
【化４７−１】
2021527042.tif 000051
【化４７−２】
2021527042.tif 000052
【０２９６】
ｄ．細胞結合部分
特定の実施形態では、疾患組織は腫瘍である。特定の実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートの細胞結合部分は腫瘍細胞上の細胞表面タンパク質に結合するように選択される。他の実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートの細胞結合部分は、マクロファージ上、単球由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、樹状細胞、線維芽細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、肥満細胞、顆粒球、好酸球及びＢ細胞の細胞表面タンパク質に結合するように選択される。
【０２９７】
特定の実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートの細胞結合部分は、結合剤・薬物コンジュゲートが標的細胞上の表面特徴と結合されるとき、それが少なくとも６時間、さらに好ましくは少なくとも１０、１２、１４、１６、１８、２０、２４、３６、４８、６０、７５、またはさらに１００時間の内部移行半減期を有するように選択される。
【０２９８】
特定の実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートの細胞結合部分は、組織の健常な状態由来の正常細胞と比較して、疾患組織における標的細胞によって選択的に発現されるまたは上方調節される細胞表面タンパク質を結合する。例えば、タンパク質は、組織由来の正常細胞よりも２倍高いレベルで、一層さらに好ましくは組織由来の正常細胞よりも少なくとも５、１０、２０、３０、４０、５０、７５、１００、２５０、５００またはさらに１０００倍高いレベルで標的細胞の表面上にて検出可能である。
【０２９９】
特定の実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートの細胞結合部分は、他の組織由来の細胞、特に重要な臓器由来の細胞と比べて、疾患組織における標的細胞によって選択的に発現されるまたは上方調節される細胞表面タンパク質に結合するように選択される。例えば、タンパク質は、他の組織由来の細胞よりも２倍高いレベルで、一層さらに好ましくは他の組織由来の細胞よりも少なくとも５、１０、２０、３０、４０、５０、７５、１００、２５０、５００またはさらに１０００倍高いレベルで標的細胞の表面上にて検出可能である。
【０３００】
特定の実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートの細胞結合部分は、チェックポイントタンパク質に結合するように選択され、好ましくは、細胞結合部分はそのチェックポイントのアンタゴニストである。チェックポイントタンパク質の例には、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＬＡＧ−３、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＴＩＭ−３、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＧＡＬ９、ＣＤ１６０、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＮＬ２、ＴＩＧＩＴ、ＰＶＲ、ＢＴＮ１Ａ１、ＢＴＮ２Ａ２、ＢＴＮ３Ａ２、ＣＳＦ−１Ｒ、さらに好ましくはＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＧＩＴ、ＰＶＲ、ＰＤ−Ｌ１及びＣＤ１６０から成る群から選択されるものが挙げられる。
【０３０１】
特定の実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートの細胞結合部分は、共刺激受容体を結合するように選択され、細胞結合部分は受容体の共刺激アゴニストである。例には、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−Ｌ、ＧＩＴＲ、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ４０−Ｌ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＬＩＧＨＴ、及びＣＤ２７、さらに好ましくは４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０及びＩＣＯＳから成る群から選択される共刺激受容体またはリガンドである表面特徴が挙げられる。
【０３０２】
特定の実施形態では、細胞結合部分は、例えば、ヒト化抗体、ヒト抗体、もしくはキメラ抗体のような抗体である、または、例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆｄ、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、ｄＡｂもしくはｓｄＡｂ（もしくはナノボディ）、ＣＤＲ、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ジ−ｓｃＦｖ、ビ−ｓｃＦｖ、ｔａｓｃＦｖ（タンデムｓｃＦｖ）、ＡＶＩＢＯＤＹ（例、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ）、Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、小型モジュラー免疫医薬品（ＳＭＩＰ）、Ｇｅｎｍａｂ／ユニボディもしくはデュオボディ、Ｖ−ＮＡＲドメイン、ＩｇＮＡＲ、ミニボディ、ＩｇＧＡＣＨ２、ＤＶＤ−Ｉｇ、プロボディ、イントラボディ、もしくは多重特異性抗体のような細胞表面特徴に結合するその抗原結合部分を含む。
【０３０３】
他の実施形態では、細胞結合剤部分は、例えば、アフィボディ、アフィマー、アフィリン、アンチカリン、アトリマー、アビマー、ＤＡＲＰｉｎｓ、ＦＮ３足場（例えば、アドネクチン及びセンチリン）、ファイノマー、クニッツドメイン、ナノフィチン、プロネクチン、ＯＢｏｄｙｓ、トリボディ、アビマー、二環式ペプチド、及びＣｙｓ−ｋｎｏｔｓから成る群から選択されるような非抗体足場である。
【０３０４】
（ｉ）ＰＤ−Ｌ１結合アフィマー
特定の実施形態では、細胞結合部分はＰＤ−Ｌ１に結合するアフィマーである。アフィマーは、ステフィンＡに基づく足場であり、ステフィンＡ、好ましくは哺乳類のステフィンＡ、さらに好ましくはヒトのステフィンＡに由来する配列を有することを意味する。本出願の態様の１つは、溶媒にアクセス可能なループの１以上が好ましくは選択的に、且つ好ましくは１０−６Ｍ以下のＫｄでＰＤ−Ｌ１を結合する能力を有するアフィマーを提供するアミノ酸配列を持つ野生型ステフィンＡタンパク質に由来するアフィマーを含む、ＰＤ−Ｌ１を結合するアフィマー（「抗ＰＤ−Ｌ１アフィマー」とも呼ばれる）を提供する。
【０３０５】
特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１アフィマーは、骨格配列を有し、ループ２［（Ｘａａ）ｎと命名された］及びループ４［（Ｘａａ）ｍと命名された］の一方または双方が代替ループ配列（Ｘａａ）ｎ及び（Ｘａａ）ｍに置き換えられ、一般式（ｉ）を有する野生型ヒトステフィンＡタンパク質に由来し、
ＦＲ１−（Ｘａａ）ｎ−ＦＲ２−（Ｘａａ）ｍ−ＦＲ３（Ｉ）
式中、
ＦＲ１は、ＭＩＰＧＧＬＳＥＡＫ  ＰＡＴＰＥＩＱＥＩＶ  ＤＫＶＫＰＱＬＥＥＫ  ＴＮＥＴＹＧＫＬＥＡ  ＶＱＹＫＴＱＶＬＡ（配列番号１）によって表されるポリペプチド配列、またはそれに対して少なくとも７０％の相同性を有するポリペプチド配列であり；
ＦＲ２は、ＧＴＮＹＹＩＫＶＲＡ  ＧＤＮＫＹＭＨＬＫＶ  ＦＫＳＬ（配列番号２）によって表されるポリペプチド配列またはそれに対して少なくとも７０％の相同性を有するポリペプチド配列であり；
ＦＲ３は、ＥＤＬＶＬＴＧＹＱＶ  ＤＫＮＫＤＤＥＬＴＧ  Ｆ（配列番号３）によって表されるポリペプチド配列またはそれに対して少なくとも７０％の相同性を有するポリペプチド配列であり；
Ｘａａは、出現ごとに個別にアミノ酸残基であり、ｎ及びｍはそれぞれ独立して３〜２０の整数である。
【０３０６】
特定の実施形態では、ＦＲ１は配列番号１と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％またはさらに９８％の相同性を有するポリペプチド配列である。特定の実施形態では、ＦＲ１は配列番号１と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％または９８％の同一性を有するポリペプチド配列である；特定の実施形態では、ＦＲ２は配列番号２と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％またはさらに９８％の相同性を有するポリペプチド配列である。特定の実施形態では、ＦＲ２は、配列番号２と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％または９８％の同一性を有するポリペプチド配列である；特定の実施形態では、ＦＲ３は配列番号３と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％またはさらに９８％の相同性を有するポリペプチド配列である。特定の実施形態では、ＦＲ３は  配列番号３と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％または９８％の同一性を有するポリペプチド配列である。
【０３０７】
少なくとも１つの薬物コンジュゲート部分がアフィマー配列に導入されたシステインのチオール側鎖を介してアフィマー配列に付加されているそれらの実施形態については、システインは好ましくはＦＲ１、ＦＲ２及び／またはＦＲ３に相当するアフィマー配列領域の一部に提供され、さらに好ましくは、その側鎖が溶媒にアクセス可能であり、アフィマーの他の部分との水素結合に関与していないアフィマーにおけるアミノ酸残基への置換が提供されるであろう。一般に、システインはループ（Ｘａａ）ｎまたは（Ｘａａ）ｍには導入されないであろう。
【０３０８】
特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１アフィマーは、一般式（配列番号４）で表されるアミノ酸配列を有し：
ＭＩＰ−Ｘａａ１−ＧＬＳＥＡＫＰＡＴＰＥＩＱＥＩＶＤＫＶＫＰＱＬＥＥＫＴＮＥＴＹＧＫＬＥＡＶＱＹＫＴＱＶＬＡ−（Ｘａａ）ｎ−Ｘａａ２−ＴＮＹＹＩＫＶＲＡＧＤＮＫＹＭＨＬＫＶＦ−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−（Ｘａａ）ｍ−Ｘａａ６−Ｄ−Ｘａａ７−ＶＬＴＧＹＱＶＤＫＮＫＤＤＥＬＴＧＦ
式中、
Ｘａａは出現ごとに個別にアミノ酸残基であり；ｎ及びｍはそれぞれ独立して３〜２０の整数であり；Ｘａａ１は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕ、さらに好ましくはＧｌｙ、Ａｌａ、ＡｒｇまたはＬｙｓ、一層さらに好ましくはＧｌｙまたはＡｒｇであり；Ｘａａ２はＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＳｅｒまたはＴｈｒ、さらに好ましくはＧｌｙまたはＳｅｒであり；Ｘａａ３は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、さらに好ましくはＡｒｇ、Ｌｙｓ、ＡｓｎまたはＧｌｎ、一層さらに好ましくはＬｙｓまたはＡｓｎであり；Ｘａａ４はＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＳｅｒまたはＴｈｒ、さらに好ましくはＧｌｙまたはＳｅｒであり；Ｘａａ５は、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｇｌｙ、またはＰｒｏ、さらに好ましくはＩｌｅ、Ｌｅｕ、またはＰｒｏ、一層さらに好ましくはＬｅｕまたはＰｒｏであり；Ｘａａ６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ａｓｐ、またはＧｌｕ、さらに好ましくはＡｌａ、Ｖａｌ、Ａｓｐ、またはＧｌｕ、一層さらに好ましくはＡｌａまたはＧｌｕであり；Ｘａａ７は、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、ＡｒｇまたはＬｙｓ、さらに好ましくはＩｌｅ、ＬｅｕまたはＡｒｇ、一層さらに好ましくはＬｅｕまたはＡｒｇである。
【０３０９】
アフィマー配列に導入されたシステインのチオール側鎖を介してアフィマー配列に少なくとも１つの薬物コンジュゲート部分が付加されているそれらの実施形態については、システインは好ましくは、ループ配列（Ｘａａ）ｎまたは（Ｘａａ）ｍが提供される以外にアフィマー配列の一部に提供されるであろう。したがって、配列番号４はその配列の様々な位置でアミノ酸残基の代わりに１〜５のシステインを含んでもよい。
【０３１０】
例えば、抗ＰＤ−Ｌ１アフィマーは、一般式（配列番号５）で表されるアミノ酸配列を有することができ：
ＭＩＰＲＧＬＳＥＡＫＰＡＴＰＥＩＱＥＩＶＤＫＶＫＰＱＬＥＥＫＴＮＥＴＹＧＫＬＥＡＶＱＹＫＴＱＶＬＡ−（Ｘａａ）ｎ−ＳＴＮＹＹＩＫＶＲＡＧＤＮＫＹＭＨＬＫＶＦＮＧＰ−（Ｘａａ）ｍ−ＡＤＲＶＬＴＧＹＱＶＤＫＮＫＤＤＥＬＴＧＦ
式中、Ｘａａは出現ごとに個別にアミノ酸残基であり；ｎ及びｍはそれぞれ独立して３〜２０の整数である。
【０３１１】
特定の実施形態では、ｎは、３〜１５、３〜１２、３〜９、３〜７、５〜７、５〜９、５〜１２、５〜１５、７〜１２または７〜９である。
【０３１２】
特定の実施形態では、ｍは、３〜１５、３〜１２、３〜９、３〜７、５〜７、５〜９、５〜１２、５〜１５、７〜１２または７〜９である。
【０３１３】
特定の実施形態では、Ｘａａは各出現ごとに独立して原核細胞または真核細胞における組換え発現によってポリペプチドに付加することができるアミノ酸であり、一層さらに好ましくは、２０の天然に存在するアミノ酸のうちの１つである。
【０３１４】
アフィマー配列に導入されたシステインのチオール側鎖を介してアフィマー配列に少なくとも１つの薬物コンジュゲート部分が付加されているそれらの実施形態については、システインは好ましくは、ループ配列（Ｘａａ）ｎまたは（Ｘａａ）ｍが提供される以外にアフィマー配列の一部に提供されるであろう。したがって、配列番号５はその配列の様々な位置でアミノ酸残基の代わりに１〜５のシステインを含んでもよい。
【０３１５】
上記の配列及び式の特定の実施形態では、（Ｘａａ）ｎは、一般式（ＩＩ）で表されるアミノ酸配列であり、
−ａａ１−ａａ２−ａａ３−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−ａａ４−ａａ５−Ｔｒｐ−ａａ６−  （ＩＩ）
式中、
ａａ１は、塩基性側鎖を持つアミノ酸残基、さらに好ましくはＬｙｓ、ＡｒｇまたはＨｉｓ、一層さらに好ましくはＬｙｓまたはＡｒｇを表し；
ａａ２はアミノ酸残基、好ましくは中性の極性または非極性側鎖または荷電（酸性または塩基性）側鎖、さらに好ましくは小さな脂肪族側鎖、中性極性側鎖または塩基性または酸性側鎖を持つアミノ酸残基、一層さらに好ましくは、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｉｌｅ、Ｇｌｎ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、ＡｒｇまたはＨｉｓ、一層さらに好ましくは、Ａｌａ、Ｇｌｎ、ＡｓｐまたはＧｌｕを表し；
ａａ３は、芳香族側鎖または塩基性側鎖を持つアミノ酸残基、好ましくはＰｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｌｙｓ、ＡｒｇまたはＨｉｓ、さらに好ましくはＰｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、一層さらに好ましくはＨｉｓまたはＴｙｒ、ＴｒｐまたはＨｉｓを表し；
ａａ４は、中性の極性または非極性側鎖または荷電（酸性または塩基性）側鎖、好ましくは、中性極性側鎖または荷電（酸性または塩基性）側鎖を持つアミノ酸残基、さらに好ましくは、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｉｌｅ、Ｇｌｎ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、ＡｒｇまたはＨｉｓ、一層さらに好ましくは、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、ＡｓｐまたはＧｌｕを表し；
ａａ５は、中性極性または荷電（酸性または塩基性）または小さな脂肪族の側鎖または芳香族側鎖、好ましくは、中性極性側鎖または荷電側鎖を持つアミノ酸残基、さらに好ましくは、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＡｒｇまたはＨｉｓ、一層さらに好ましくは、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、ＧｌｕまたはＡｒｇを表し；且つ
ａａ６は、芳香族側鎖または酸性側鎖を持つアミノ酸残基、好ましくはＰｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、ＡｓｐまたはＧｌｕ、さらに好ましくは、ＴｒｐまたはＡｓｐ；そして一層さらに好ましくはＴｒｐを表す。
【０３１６】
上記の配列及び式の特定の実施形態では、（Ｘａａ）ｎは、一般式（ＩＩＩ）で表されるアミノ酸配列であり、
−ａａ１−ａａ２−ａａ３−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−ａａ４−ａａ５−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−  （ＩＩＩ）
式中、
ａａ１は、塩基性側鎖または芳香族側鎖を持つアミノ酸残基、好ましくはＬｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＡｓｎまたはＧｌｎ、さらに好ましくはＬｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、ＡｓｎまたはＧｌｎ、一層さらに好ましくはＬｙｓまたはＡｓｎを表し；
ａａ２はアミノ酸残基、好ましくは中性の極性または非極性側鎖または荷電（酸性または塩基性）側鎖、さらに好ましくは小さな脂肪族側鎖、中性極性側鎖または酸性または塩基性側鎖を持つアミノ酸残基、一層さらに好ましくはＡｌａ、Ｐｒｏ、Ｉｌｅ、Ｇｌｎ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、ＡｒｇまたはＨｉｓ、一層さらに好ましくはＡｌａ、Ｇｌｎ、ＡｓｐまたはＧｌｕを表し；
ａａ３は、芳香族側鎖または塩基性側鎖を持つアミノ酸残基、好ましくはＰｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｌｙｓ、ＡｒｇまたはＨｉｓ、さらに好ましくはＰｈｅ、Ｔｙｒ、ＴｒｐまたはＨｉｓ、一層さらに好ましくはＴｙｒ、ＴｒｐまたはＨｉｓを表し；
ａａ４は、中性の極性側鎖もしくは非極性側鎖または荷電（酸性または塩基性）側鎖、好ましくは、中性極性側鎖または荷電（酸性または塩基性）側鎖を持つアミノ酸残基、さらに好ましくはＡｌａ、Ｐｒｏ、Ｉｌｅ、Ｇｌｎ、Ｔｈｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、ＡｒｇまたはＨｉｓ、一層さらに好ましくはＧｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、ＡｓｐまたはＧｌｕを表し；且つ
ａａ５は、中性極性側鎖または荷電（酸性または塩基性）側鎖または小さな脂肪族または芳香族の側鎖；好ましくは中性極性側鎖または荷電側鎖を持つアミノ酸残基、さらに好ましくは、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＡｒｇまたはＨｉｓ、一層さらに好ましくは、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、ＧｌｕまたはＡｒｇを表す。
【０３１７】
上記の配列及び式の特定の実施形態では、（Ｘａａ）ｎは、配列番号６〜４０から選択されるアミノ酸配列、または配列番号６〜４０から選択される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％またはさらに９８％の相同性を有するアミノ酸配列である。特定の実施形態では、（Ｘａａ）ｎは、配列番号６〜４０から選択される配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％またはさらに９８％の同一性を有するアミノ酸配列である。
2021527042.tif 000053
【０３１８】
上記の配列及び式の特定の実施形態では、（Ｘａａ）ｍは一般式（ＩＶ）で表されるアミノ酸配列であり、
−ａａ７−ａａ８−ａａ９−ａａ１０−ａａ１１−ａａ１２−ａａ１３−ａａ１４−ａａ１５−  （ＩＶ）
式中、
ａａ７は、中性の極性側鎖または非極性側鎖または酸性側鎖を持つアミノ酸残基、好ましくは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｐｒｏ、Ｔｒｐ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕ、一層さらに好ましくは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｔｒｐ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、ＡｓｐまたはＧｌｕを表し；
ａａ８は、アミノ酸残基、好ましくは中性の極性または非極性側鎖または荷電（酸性または塩基性）側鎖または芳香族側鎖、さらに好ましくは荷電（酸性または塩基性）側鎖を持つアミノ酸残基、さらに好ましくはＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、ＴｙｒまたはＰｈｅ、一層さらに好ましくはＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、ＨｉｓまたはＧｌｎを表し；
ａａ９はアミノ酸残基、好ましくは中性の極性または非極性側鎖または荷電（酸性または塩基性）側鎖または芳香族側鎖、さらに好ましくは中性極性側鎖または酸性側鎖を持つアミノ酸残基、さらに好ましくはＧｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、ＰｒｏまたはＴｙｒ、一層さらに好ましくはＧｌｎ、ＴｈｒまたはＡｓｐを表し；
ａａ１０は、アミノ酸残基、好ましくは中性の極性または非極性側鎖または荷電（酸性または塩基性）側鎖または芳香族側鎖、さらに好ましくは中性極性側鎖または塩基性または酸性側鎖を持つアミノ酸残基、好ましくは、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ｓｅｒ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、ＰｒｏまたはＧｌｙ、一層さらに好ましくは、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｌｅｕ、ＴｒｐまたはＧｌｙを表し；
ａａ１１は、アミノ酸残基、好ましくは中性極性側鎖または荷電（酸性または塩基性）側鎖または非極性脂肪族側鎖または芳香族側鎖、さらに好ましくは中性極性側鎖または塩基性または酸性側鎖を持つアミノ酸残基、さらに好ましくは、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、ＴｙｒまたはＧｌｙ、一層さらに好ましくは、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｎ、ＬｙｓまたはＨｉｓを表し；
ａａ１２は、アミノ酸残基、好ましくは中性極性側鎖または荷電（酸性または塩基性）側鎖または非極性脂肪族側鎖または芳香族側鎖、さらに好ましくは酸性側鎖を持つアミノ酸残基、さらに好ましくはＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、ＰｈｅまたはＧｌｙ、一層さらに好ましくはＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、ＡｒｇまたはＬｙｓを表し；
ａａ１３は、アミノ酸残基、好ましくは中性極性側鎖または荷電（酸性または塩基性）側鎖または非極性脂肪族側鎖または芳香族側鎖、さらに好ましくは酸性側鎖を持つアミノ酸残基、さらに好ましくはＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｔｒｐ、ＴｙｒまたはＰｈｅ、一層さらに好ましくはＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｇｌｙ、ＡｓｐまたはＧｌｕを表し；
ａａ１４はアミノ酸残基、好ましくは中性極性側鎖または荷電（酸性または塩基性）側鎖を持つアミノ酸残基、さらに好ましくはＡｌａ、Ｉｌｅ、Ｔｒｐ、Ｐｒｏ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＧｌｎまたはＡｓｎ、一層さらに好ましくはＡｌａ、Ｐｒｏ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｓｅｒ、ＧｌｎまたはＡｓｎを表し；且つ
ａａ１５はアミノ酸残基、好ましくは中性極性側鎖または中性非極性側鎖または荷電（酸性または塩基性）側鎖を持つアミノ酸残基、さらに好ましくはＨｉｓ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ＧｌｙまたはＰｈｅ、一層さらに好ましくはＨｉｓ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＧｌｎまたはＡｓｎを表す。
【０３１９】
上記の配列及び式の特定の実施形態では、（Ｘａａ）ｍは配列番号４１〜７５から選択されるアミノ酸配列、または配列番号４１〜７５から選択される配列との少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％またはさらに９８％の相同性を有するアミノ酸配列である。特定の実施形態では、（Ｘａａ）ｍは、配列番号４１〜７５から選択される配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％またはさらに９８％の同一性を有するアミノ酸配列である。
2021527042.tif 000054
【０３２０】
特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１アフィマーは配列番号７６〜８４から選択されるアミノ酸配列、または配列番号７６〜８４から選択される配列との少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはさらに９８％の相同性を有するアミノ酸配列を有する。特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１アフィマーは配列番号７６〜８４から選択される配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはさらに９８％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。
【０３２１】
アフィマー配列に導入されたシステインのチオール側鎖を介してアフィマー配列に少なくとも１つの薬物コンジュゲート部分が付加されているそれらの実施形態については、システインは好ましくは、ループ配列（Ｘａａ）ｎまたは（Ｘａａ）ｍが提供される以外にアフィマー配列の一部に提供されるであろう。したがって、抗ＰＤ−Ｌ１アフィマーは、好ましくループ２またはループ４の配列においてではないが、その配列の様々な位置においてアミノ酸残基の代わりに１〜５のシステインを少なくとも含めることによって配列番号７６〜８４とは異なる配列を有するであろう。
2021527042.tif 000055
【０３２２】
特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１アフィマーは、配列番号８５〜９２の１つのヌクレオチド１〜３３６に対応するコード配列を有する核酸によってコードされるアミノ酸配列、または配列番号８５〜９２の１つのヌクレオチド１〜３３６と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはさらに９８％同一であるコード配列を有する核酸によってコードされ得るアミノ酸配列、またはストリンジェントな条件下（例えば、４５℃での６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）の存在下とそれに続く６５℃での０．２×ＳＳＣにおける洗浄）で配列番号８５〜９２の１つのヌクレオチド１〜３３６とハイブリッド形成するコード配列を有する核酸によってコードされ得るアミノ酸配列を有する。
【０３２３】
アフィマー配列に導入されたシステインのチオール側鎖を介してアフィマー配列に少なくとも１つの薬物コンジュゲート部分が付加されているそれらの実施形態については、システインは好ましくは、ループ配列（Ｘａａ）ｎまたは（Ｘａａ）ｍが提供される以外にアフィマー配列の一部に提供される。したがって、抗ＰＤ−Ｌ１アフィマーは、好ましくループ２またはループ４の配列においてではないが、その配列の様々な位置においてアミノ酸残基の代わりに１〜５のシステインを少なくとも含めることによって配列番号８５〜９２によってコードされるアミノ酸配列とは異なる配列を有するであろう。
2021527042.tif 000056
2021527042.tif 000057
【０３２４】
さらに、軽微な修飾はまた、ステフィンＡまたはステフィンＡ由来のアフィマーポリペプチドに対して最大１０のアミノ酸の付加または欠失のような、本明細書で開示されているステフィンＡまたはステフィンＡ由来の配列へのー上記に記載されているループ２及びループ４の挿入の域を越えたー小さな欠失または付加も含んでもよい。
【０３２５】
特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アフィマーポリペプチドは約１μＭ以下、約１００ｎＭ以下、約４０ｎＭ以下、約２０ｎＭ以下、約１０ｎＭ以下、約１ｎＭ以下、または約０．１ｎＭ以下の解離定数（ＫＤ）を持つ単量体としてＰＤ−Ｌ１を結合する。
【０３２６】
特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アフィマーポリペプチド部分は、約１０−３Ｓ−１（すなわち、１の単位／秒）以下、約１０−４ｓ−１以下、またはさらに約１０−５ｓ−１以下の、Ｂｉａｃｏｒｅで測定したときのようなオフ速度定数（Ｋｏｆｆ）で単量体としてヒトＰＤ−Ｌ１を結合する。
【０３２７】
特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アフィマーポリペプチド部分は、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定されるように、少なくとも約１０３Ｍ−１ｓ−１以上、少なくとも約１０４Ｍ−１秒−１以上、少なくとも約１０５Ｍ−１秒−１以上、またはさらに少なくとも約１０６Ｍ−１秒−１以上の会合定数（Ｋｏｎ）で単量体としてヒトＰＤ−Ｌ１を結合する。
【０３２８】
特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アフィマーポリペプチド部分は、ヒトＰＤ−１との競合結合アッセイにおいて１μＭ以下、約１００ｎＭ以下、約４０ｎＭ以下、約２０ｎＭ以下、約１０ｎＭ以下、約１ｎＭ以下、または約０．１ｎＭ以下のＩＣ５０で単量体としてヒトＰＤ−Ｌ１を結合する。
【０３２９】
融合タンパク質：一般
いくつかの実施形態では、アフィマーポリペプチドはアフィマーポリペプチドの生物活性を調節する追加の挿入、置換または欠失をさらに含んでもよい。例えば、付加、置換、または欠失は、修飾されたアフィマーの１以上の特性または活性を調節してもよい。例えば、付加、置換または欠失は、例えば、ＰＤ−１に結合する及びそれを阻害するためにアフィマーポリペプチドに対する親和性を調節してもよく、循環半減期を調節してもよく、治療半減期を調節してもよく、アフィマーポリペプチドの安定性を調節してもよく、プロテアーゼによる切断を調節してもよく、用量を調節してもよく、遊離または生物利用効率を調節してもよく、精製を円滑にしてもよく、脱アミド化を減らしてもよく、貯蔵寿命を改善してもよく、または投与の特定の経路を改善もしくは変更してもよい。同様に、アフィマーポリペプチドは、プロテアーゼ切断配列、反応性基、抗体結合ドメイン（ＦＬＡＧまたはポリ−Ｈｉｓを含むが、これらに限定されない）または他の親和性ベースの配列（ＦＬＡＧ、ポリ−Ｈｉｓ、ＧＳＴを含むが、これらに限定されない）またはポリペプチドの検出、精製もしくは他の形質を改善する連結分子（ビオチンを含むが、これに限定されない）を含んでもよい。
【０３３０】
場合によっては、これらの追加の配列が融合タンパク質の形態でのアフィマーポリペプチドの一方の末端及び／または他方の末端に付加される。したがって、本発明の特定の態様では、結合剤・薬物コンジュゲートは、少なくとも１つのアフィマーポリペプチド配列と１以上の異種ポリペプチド配列（本明細書では「融合ドメイン」）とを有する融合タンパク質である。融合ドメインは、単なる例として、細胞からの分泌または細胞表面での保持（すなわち、コード化されたアフィマーについて）のような所望の特性を付与するように、翻訳後修飾のための基質配列または他の認識配列として機能する、タンパク質・タンパク質相互作用を介して凝集する多量体構造を作り出す、血清半減期を変更（多くの場合延長する）する、または組織局在化もしくは組織排除及び他のＡＤＭＥ特性を変更するように選択されてもよい。
【０３３１】
例えば、一部の融合ドメインは、例えば、アフィニティークロマトグラフィーによるような融合タンパク質の単離及び／または精製に特に有用である。発現または精製を容易にするそのような融合ドメインの周知の例には、単に説明するために、例えば、ポリヒスチジン（すなわち、Ｈｉｓ６タグ）、Ｓｔｒｅｐ  ＩＩタグ、ストレプトアビジン結合ペプチド（ＳＢＰ）タグ、カルモジュリン結合ペプチド（ＣＢＰ）、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）、Ｓタグ、ＨＡタグ、Ｃ−Ｍｙｃタグ、チオレドキシン、プロテインＡ及びプロテインＧが挙げられる。
【０３３２】
アフィマーが組換えにより作られる場合分泌されるためには、それは一般に、タンパク質の小胞体の内腔への輸送を指示し、最終的に分泌される（または膜貫通ドメインまたは他の細胞表面保持シグナルの場合は細胞表面に保持される）シグナル配列を含有するであろう。シグナル配列（シグナルペプチドまたはリーダー配列とも呼ばれる）は新生ポリペプチドのＮ末端に位置する。それらは、ポリペプチドを小胞体に標的化し、タンパク質はそれらの目的地、例えば、細胞小器官の内部空間、内膜、細胞外膜に選別され、または分泌を介して細胞外部に選別される。ほとんどのシグナル配列は、タンパク質が小胞体に輸送された後、シグナルペプチダーゼによってタンパク質から切断される。ポリペプチドからのシグナル配列の切断はふつう、アミノ酸配列の特定の部位で起こり  、シグナル配列内のアミノ酸残基に左右される。
【０３３３】
いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、長さ約５〜約４０のアミノ酸（例えば、約５〜約７、約７〜約１０、約１０〜約１５、約１５〜約２０、約２０〜約２５、または約２５〜約３０、約３０〜約３５、または約３５〜約４０の長さのアミノ酸）である。
【０３３４】
いくつかの実施形態では、シグナルペプチドはヒトタンパク質由来のネイティブのシグナルペプチドである。他の実施形態では、シグナルペプチドはネイティブではないシグナルペプチドである。例えば、いくつかの実施形態では、ネイティブではないシグナルペプチドは、対応するネイティブの分泌されたヒトタンパク質由来の変異体ネイティブのシグナルペプチドであり、１以上（２、３、４、５、６、７、８、９、または１０以上）の置換挿入または欠失を含むことができる。
【０３３５】
いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ重鎖またはＩｇＧカッパ軽鎖）、サイトカイン（例えば、インターロイキン−２（ＩＬ−２）またはＣＤ３３）、血清アルブミンタンパク質（例えば、ＨＳＡまたはアルブミン）、ヒトアズロシジンプレタンパク質シグナル配列、ルシフェラーゼ、トリプシノーゲン（例えば、キモトリプシノーゲンまたはトリプシノーゲン）のような非ＩｇＳＦタンパク質ファミリー由来のシグナルペプチドまたはその変異体である、または細胞からタンパク質を効率的に分泌することができる他のシグナルペプチドである。例示的なシグナルペプチドには、以下が挙げられるが、これらに限定されない：
2021527042.tif 000058
【０３３６】
主題の融合タンパク質はまた、異種タンパク質の配列またはドメインを分離するーすなわち、１を超えるものが結合剤薬物コンジュゲートに含まれる細胞結合部分を分離する１以上のリンカーも含んでもよい。本明細書で使用されるとき、「リンカー」という用語は、第１のポリペプチド（例えば、アフィマー）と第２のポリペプチド（例えば、第２のアフィマー、Ｆｃ領域、受容体トラップ、アルブミン等）との間に挿入されるリンカーアミノ酸配列を指す。研究者によって設計された経験的リンカーは一般に、その構造に従って３つのカテゴリー：柔軟なリンカー、剛直なリンカー、及び生体内で切断可能なリンカーに分類される。機能性ドメインを一緒に連結する（柔軟な及び剛直なリンカーのように）または生体内で遊離の機能性ドメインを遊離する（生体内で切断可能なリンカーのように）という基本的な役割に加えて、リンカーは、融合タンパク質の産生のための他の多くの利点、例えば、生物活性の改善、発現収量の増加、及び望ましい薬物動態プロファイルの達成を提供してもよい。リンカーは、融合タンパク質の発現、分泌、または生物活性に悪影響を与えてはならない。リンカーは抗原性であってはならず、免疫反応を誘発してはならない。
【０３３７】
好適なリンカーは当業者に既知であり、グリシン残基及びセリン残基の混合物を含むことが多く、且つ立体障害のないアミノ酸を含むことが多い。有用なリンカーに組み込むことができる他のアミノ酸には、スレオニン残基及びアラニン残基が挙げられる。リンカーは、例えば、長さ１〜５０アミノ酸、長さ１〜２２アミノ酸、長さ１〜１０アミノ酸、長さ１〜５アミノ酸、または長さ１〜３アミノ酸で長さの幅があり得る。いくつかの実施形態では、リンカーは切断部位を含んでもよい。いくつかの実施形態では、リンカーは、酵素切断部位を含んでもよいので、第２のポリペプチドは第１のポリペプチドから分離されてもよい。
【０３３８】
特定の好ましい実施形態では、リンカーは柔軟であると特徴付けることができる。柔軟なリンカーは通常、結合されたドメインがある程度の移動または相互作用を必要とする場合に適用される。それらは一般に、小さな非極性（例えばＧｌｙ）または極性（例えばＳｅｒまたはＴｈｒ）のアミノ酸で構成される。例えば、Ａｒｇｏｓ  Ｐ．（１９９０），”Ａｎ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｏｌｉｇｏｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｌｉｎｋｉｎｇ  ｄｏｍａｉｎｓ  ｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｅｒｔｉａｒｙ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  ｐｏｓｓｉｂｌｅ  ｃａｎｄｉｄａｔｅｓ  ｆｏｒ  ｇｅｎｅｒａｌ  ｇｅｎｅ  ｆｕｓｉｏｎ”，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１１：９４３−９５８．を参照のこと。これらのアミノ酸のサイズが小さいことは、柔軟性を提供し、接続する機能性ドメインの移動を可能にする。ＳｅｒまたはＴｈｒの組み込みは、水分子と水素結合を形成することによって水溶液にてリンカーの安定性を維持することができるので、リンカーとタンパク質部分の間の好ましくない相互作用を低減する。最も一般的に使用される柔軟なリンカーは、主にＧｌｙ残基及びＳｅｒ残基の区間から成る配列を有する（「ＧＳ」リンカー）。最も広く使用されている柔軟なリンカーの例は（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）ｎの配列を有する。コピー数「ｎ」を調整することによって、このＧＳリンカーの長さを最適化して、機能性ドメインの適切な分離を達成することができ、または必要なドメイン間相互作用を維持することができる。ＧＳリンカーに加えて、他の多くの柔軟なリンカーが組換え融合タンパク質用に設計されている。これらの柔軟なリンカーはＧｌｙやＳｅｒのような小さなアミノ酸または極性アミノ酸も豊富であるが、柔軟性を維持するためにＴｈｒやＡｌａのような追加のアミノ酸、と同様に溶解性を改善するためにＬｙｓやＧｌｕのような極性アミノ酸を含有することができる。
【０３３９】
特定の好ましい実施形態では、リンカーは剛直として特徴付けることができる。柔軟なリンカーは、機能性ドメインを受動的に接続し、ある程度の動きを可能にするという利点を有する一方で、これらのリンカーの剛直性の欠如は、発現収量または生物活性のような特定の融合タンパク質の実施形態では制限であり得る。これらの場合の柔軟なリンカーの無効性は、タンパク質ドメインの非効率的な分離またはそれらの相互干渉の不十分な減少に起因していた。これらの状況下で、ドメイン間の固定距離を維持し、それらの独立した機能を維持するために剛直なリンカーが上手く適用されている。
【０３４０】
多くの天然リンカーはαらせん構造を示した。αらせん構造は剛直で安定しており、セグメント内の水素結合と密に詰まった骨格を持っていた。したがって、堅いαらせんリンカーは、タンパク質ドメイン間の剛直スペーサーとして作用することができる。Ｇｅｏｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００２），”Ａｎ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｄｏｍａｉｎ  ｌｉｎｋｅｒｓ：ｔｈｅｉｒ  ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｆｏｌｄｉｎｇ”，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．１５（１１）：８７１−９．一般に、剛直なリンカーはα−らせん構造を採用すること、または複数のＰｒｏ残基を含有することによって比較的堅い構造を示す。多くの状況下で、それらは柔軟なリンカーよりも効率的に機能性ドメインを分離する。リンカーの長さは、ドメイン間の最適な距離を達成するためにコピー数を変更することによって容易に調整することができる。結果として、融合タンパク質の安定性または生物活性を維持するためにドメインの空間的分離が重要である場合、剛直なリンカーが選択される。この点で、（ＥＡＡＡＫ）ｎの配列を持つアルファらせん形成リンカーは、多くの組換え融合タンパク質の構築に適用されてきた。別の型の剛直なリンカーは、Ｐｒｏリッチ配列（ＸＰ）ｎを有し、Ｘは任意のアミノ酸、好ましくはＡｌａ、Ｌｙｓ、またはＧｌｕを示す。
【０３４１】
単に説明するために、例示的なリンカーには以下が挙げられる：
2021527042.tif 000059
【０３４２】
主題の融合タンパク質で使用されてもよい他のリンカーには、ＳｅｒＧｌｙ、ＧＧＳＧ、ＧＳＧＳ、ＧＧＧＳ、ｎが１−７であるＳ（ＧＧＳ）ｎ、ＧＲＡ、ｐｏｌｙ（Ｇｌｙ）、ｐｏｌｙ（Ａｌａ）、ＧＧＧＳＧＧＧ、ＥＳＧＧＧＧＶＴ、ＬＥＳＧＧＧＧＶＴ、ＧＲＡＱＶＴ、ＷＲＡＱＶＴ、及びＡＲＧＲＡＱＶＴが挙げられるが、これらに限定されない。以下に記載されているＦｃ融合体のヒンジ領域もまた、リンカーと見なされてもよい。
【０３４３】
アフィマーポリペプチド配列自体または融合タンパク質の一部として提供される隣接ポリペプチド部分に対して行うことができるさらに他の修飾は、酵素による翻訳後修飾のための部位である１以上の配列である。これらには、グリコシル化、アセチル化、アシル化、脂質修飾、パルミトイル化、パルミチン酸付加、リン酸化、糖脂質結合修飾等が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３４４】
ＰＫ及びＡＤＭＥの特性を操作すること
特定の実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートは、非経口治療投与のような投与経路に最適である半減期及び／またはＰＫの特性を有さなくてもよい。「半減期」という用語は、本発明の結合剤・薬物コンジュゲートのような物質が、その薬理学的または生理学的な活性または濃度の半分を失うのにかかる時間の量を指す。生物学的半減期は、物質の排除、排泄、分解（例えば、酵素的）、または身体の特定の臓器もしくは組織での吸収及び濃縮によって影響を受け得る。いくつかの実施形態では、生物学的半減期は、物質の血漿濃度がその定常状態レベルの半分に達するのにかかる時間を決定することによって評価することができる（「血漿半減期」）。この欠点に対処するために、他のタンパク質治療薬の場合に使用されてきた半減期延長のための様々な一般的な戦略があり、それには、結合剤・薬物コンジュゲートの一部としての半減期延長部分の組み込みが含まれる。
【０３４５】
「半減期延長部分」という用語は、任意で非天然にコードされたアミノ酸を介して直接、またはリンカーを介してアフィマーポリペプチドに共有結合（「コンジュゲート」または「融合」）される、非コンジュゲート型の修飾されたアフィマーポリペプチドのような比較の基準と比べて、アフィマーポリペプチドの生体内でのタンパク質分解もしくは他の活性を低下させる修飾を阻止するもしくは低減する、半減期を増やす、及び／または吸収速度の増加、毒性の減少、溶解性の改善、タンパク質凝集の減少、修飾されたアフィマーポリペプチドの生物活性及び／または標的選択性の増加、製造可能性の向上、及び／または修飾アフィマーポリペプチドの免疫原性の低下を含むが、これらに限定されない他の薬物動態学的または生物物理学的な特性を改善または変化させる、薬学的に許容される部分、ドメインまたは分子を指す。「半減期延長部分」という用語には、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）または個別のＰＥＧ、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、脂質、分岐または非分岐のアシル基、分岐または非分岐Ｃ８−Ｃ３０アシル基、分岐または非分岐アルキル基、及び分岐または非分岐Ｃ８−Ｃ３０アルキル基のような水溶性ポリマーのような非タンパク質性の半減期延長部分と；例えば、血清アルブミン、トランスフェリン、アドネクチン（例えば、アルブミン結合または薬物動態延長（ＰＫＥ）アドネクチン）、Ｆｃドメイン、及び、例えば、ＸＴＥＮ及びＰＡＳポリペプチドのような非構造化ポリペプチド（例えば、アミノ酸Ｐｒｏ、Ａｌａ、及び／またはＳｅｒで構成される立体的に無秩序なポリペプチド配列）のようなタンパク質性半減期延長部分と；前述のいずれかの断片とが含まれる。図に示すＰＤ−１との抗ＰＤ−Ｌ１アフィマー複合体のようなアフィマーの結晶構造とその標的との相互作用を調べると、どの特定のアミノ酸残基が完全または部分的に溶媒にアクセス可能である側鎖を有するかを示すことができる。
【０３４６】
特定の実施形態では、半減期延長部分は、その部分にそのようにコンジュゲートされていないタンパク質の半減期と比べて（例えば、アフィマーポリペプチドのみと比べて）、哺乳動物血清にて循環する結果として生じる結合剤・薬物コンジュゲートの半減期を延長する。いくつかの実施形態では、半減期は１．２倍、１．５倍、２．０倍、３．０倍、４．０倍、５．０倍、または６．０倍を超えて延長される。いくつかの実施形態では、半減期は生体内で投与後、半減期延長部分のないタンパク質と比べて６時間を超えて、１２時間を超えて、２４時間を超えて、４８時間を超えて、７２時間を超えて、９６時間を超えて、または１週間を超えて延長される。
【０３４７】
さらなる例示のための手段として、本発明の結合剤・薬物コンジュゲートの生成に使用することができる半減期延長部分には以下が挙げられる：
薬理学的なアフィマー配列の半減期が長い天然のタンパク質またはタンパク質ドメインへの遺伝子融合（例えば、Ｆｃ融合、トランスフェリン［Ｔｆ］融合、またはアルブミン融合）。例えば、Ｂｅｃｋ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１），”Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｆｃ−ｆｕｓｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｎｄ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｓ  ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｓ  ｔｏ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．ＭＡｂｓ．３：１−２；Ｃｚａｊｋｏｗｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２），”Ｆｃ−ｆｕｓｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ：ｎｅｗ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ  ａｎｄ  ｆｕｔｕｒｅ  ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ．ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．４：１０１５−２８；Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００９），”Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−Ｆｃ  ｆｕｓｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ｔｒａｐｓ，ａｎｄ  Ｍｉｍｅｔｉｂｏｄｙ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ”，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００９；２０：６９２−９；Ｋｅｅｆｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３），”Ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ  ｆｕｓｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ：ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ  ｆｕｓｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｓ  ａ  ｍｏｄｅｌ．Ｉｎ：Ｓｃｈｍｉｄｔ  Ｓ，ｅｄｉｔｏｒ．Ｆｕｓｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ｆｏｒ  ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ：ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ．Ｈｏｂｏｋｅｎ：Ｗｉｌｅｙ；ｐ．３４５−５６；Ｗｅｉｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３），”Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ａｌｂｕｍｉｎ  ｆｕｓｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｉｎ：Ｓｃｈｍｉｄｔ  Ｓ，ｅｄｉｔｏｒ．Ｆｕｓｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ｆｏｒ  ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ：ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ．Ｈｏｂｏｋｅｎ：Ｗｉｌｅｙ；２０１３．ｐ．２９７−３２３；Ｗａｌｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３），”Ａｌｂｕｍｉｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｆｕｓｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｎｏｖｅｌ  ｌｏｎｇ−ａｃｔｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．Ｉｎ：Ｓｃｈｍｉｄｔ  Ｓ，ｅｄｉｔｏｒ．Ｆｕｓｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ｆｏｒ  ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ：ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ．Ｈｏｂｏｋｅｎ：Ｗｉｌｅｙ；２０１３．ｐ．３２５−４３を参照のこと。
薬理学的なアフィマー配列の不活性ポリペプチド、例えば、ＸＴＥＮ（組換えＰＥＧまたは「ｒＰＥＧ」としても知られる）、ホモアミノ酸ポリマー（ＨＡＰ；ＨＡＰ化）、プロリン・アラニン・セリンポリマー（ＰＡＳ；ＰＡＳ化）、またはエラスチン様ペプチド（ＥＬＰ；ＥＬＰ化）への遺伝子融合。例えば、Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００９），”Ａ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  ｅｘｔｅｎｄｓ  ｔｈｅ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｈａｌｆ−ｌｉｆｅ  ｏｆ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｉｎ  ａ  ｔｕｎａｂｌｅ  ｍａｎｎｅｒ．Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００９；２７：１１８６−９０；Ｓｃｈｌａｐｓｃｈｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｆｕｓｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｒａｇｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ａ  ｈｏｍｏ−ａｍｉｎｏ−ａｃｉｄ  ｐｏｌｙｍｅｒ：ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ  ｐｌａｓｍａ  ｈａｌｆ−ｌｉｆｅ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．２００７；２０：２７３−８４；Ｓｃｈｌａｐｓｃｈｙ（２０１３），ＰＡＳｙｌａｔｉｏｎ：ａ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｔｏ  ＰＥＧｙｌａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｅｘｔｅｎｄｉｎｇ  ｔｈｅ  ｐｌａｓｍａ  ｈａｌｆｌｉｆｅ  ｏｆ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ  ａｃｔｉｖｅ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．２６：４８９−５０１．Ｆｌｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２），”Ｅｌａｓｔｉｎ−ｌｉｋｅ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｒｅｖｏｌｕｔｉｏｎｉｚｅ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２８：３７−４５．Ｆｌｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．”ＥＬＰ−ｆｕｓｉｏｎ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｆｏｒ  ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ．Ｉｎ：Ｓｃｈｍｉｄｔ  Ｓ，ｅｄｉｔｏｒ．Ｆｕｓｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ｆｏｒ  ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ：ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ．Ｈｏｂｏｋｅｎ：Ｗｉｌｅｙ；２０１３．ｐ．３７２−９８を参照のこと。
薬理学的に活性があるペプチドまたはタンパク質を反復化学的部分、例えば、ＰＥＧ（ＰＥＧ化）またはヒアルロン酸に化学的にコンジュゲートすることによって流体力学的半径を増加させること。例えば、Ｃａｌｉｃｅｔｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００３），”Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ  ａｎｄ  ｂｉｏｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ”，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．５５：１２６１−７７；Ｊｅｖｓｅｖａｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０），ＰＥＧｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｊ．５：１１３−２８；Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，（２００９），”Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｔｏ  ｅｘｔｅｎｄ  ｐｌａｓｍａ  ｈａｌｆ−ｌｉｖｅｓ  ｏｆ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”，ＢｉｏＤｒｕｇｓ．２３：９３−１０９；Ｋａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００９），”Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ＰＥＧｙｌａｔｅｄ  ｄｒｕｇｓ”，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｅｍｅｒｇ．Ｄｒｕｇｓ．１４：３６３−８０；及びＭｅｒｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３），”Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ  ｔｏ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ”，Ｃａｒｂ．Ｐｏｌｙｍｅｒｓ．９２：２１６３−７０を参照のこと。
ポリシアル化によって薬理学的に活性があるペプチドまたはタンパク質を融合することの、または、代わりに、（ｂ）ヒトＣＧｂサブユニットのような天然タンパク質の半減期を延長することが知られている負に荷電した高度にシアル化されたペプチド（例えば、カルボキシ末端ペプチド［ＣＴＰ；絨毛性ゴナドトロピン（ＣＧ）ｂ鎖］）を生物学的薬剤候補に融合することの負電荷を大幅に増加させること。例えば、Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００５），”Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ  ｔｈｅ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ：ａ  ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  ｐｏｌｙｓｉａｌｉｃ  ａｃｉｄｓ”，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．２００５；３００：１２５−３０；Ｄｕｉｊｋｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．”Ｓｉｎｇｌｅ  ｄｏｓｅ  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  ｓｅｒｕｍ  ｈｏｒｍｏｎｅｓ  ｏｆ  ａ  ｌｏｎｇ−ａｃｔｉｎｇ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＦＳＨ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  （ＦＳＨＣＴＰ）  ｉｎ  ｈｅａｌｔｈｙ  ｐｉｔｕｉｔａｒｙ−ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄ  ｆｅｍａｌｅｓ”，（２００２），Ｈｕｍ．Ｒｅｐｒｏｄ．１７：１９８７−９３；及びＦａｒｅｓ  ｅｔ  ａｌ．”Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ａ  ｌｏｎｇａｃｔｉｎｇ  ｆｏｌｌｉｔｒｏｐｉｎ  ａｇｏｎｉｓｔ  ｂｙ  ｆｕｓｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｃ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｈｏｒｉｏｎｉｃ  ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ  ｂｅｔａ  ｓｕｂｕｎｉｔ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｆｏｌｌｉｔｒｏｐｉｎ  ｂｅｔａ  ｓｕｂｕｎｉｔ”，（１９９２），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８９：４３０４−８．３５；及びＦａｒｅｓ，”Ｈａｌｆ−ｌｉｆｅ  ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  ｔｈｒｏｕｇｈ  Ｏ−ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ．を参照のこと。
ペプチドまたはタンパク質結合ドメインの生物活性タンパク質への結合を介して、例えば、ＨＳＡ、ヒトＩｇＧ、トランスフェリンまたはフィブロネクチンのような正常に長い半減期のタンパク質に非共有結合すること。例えば、Ａｎｄｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１），”Ｅｘｔｅｎｄｉｎｇ  ｈａｌｆ−ｌｉｆｅ  ｂｙ  ｉｎｄｉｒｅｃｔ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｎｅｏｎａｔａｌ  Ｆｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＦｃＲｎ）  ｕｓｉｎｇ  ａ  ｍｉｎｉｍａｌ  ａｌｂｕｍｉｎ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｄｏｍａｉｎ”，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８６：５２３４−４１；Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ−Ｓｅｍｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４），”ＧＳＫ２３７４６９７，ａ  ｎｏｖｅｌ  ａｌｂｕｍｉｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｄｏｍａｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ（ａｌｂｕｄＡｂ），ｅｘｔｅｎｄｓ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｅｘｐｏｓｕｒｅ  ｏｆ  ｅｘｔｅｎｄｉｎ−４：ｆｉｒｓｔ  ｓｔｕｄｙ  ｉｎ  ｈｕｍａｎｓ−ＰＫ／ＰＤ  ａｎｄ  ｓａｆｅｔｙ”，Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．２０１４；９６：７０４−１２．Ｓｏｃｋｏｌｏｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１４），”Ｆｕｓｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｓｈｏｒｔ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｔｈａｔ  ｂｉｎｄｓ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｇ  ｔｏ  ａ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｉｔｓ  ｐｌａｓｍａ  ｈａｌｆ−ｌｉｆｅ  ｉｎ  ｍｉｃｅ”，ＰＬｏＳ．Ｏｎｅ．２０１４；９：ｅ１０２５６６．を参照のこと。
【０３４８】
長寿命の血清タンパク質への古典的な遺伝子融合は、ＰＥＧまたは脂質への化学的コンジュゲートとは異なる半減期延長の代替方法を提供する。従来、２つの主要なタンパク質：抗体Ｆｃドメインとヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）が融合相手として使用されてきた。Ｆｃ融合には、ペプチド、タンパク質、または受容体エキソドメインの抗体のＦｃ部分への融合が含まれる。Ｆｃとアルブミンの融合は双方とも、ペプチド薬のサイズを大きくすることによって半減期の延長を達成するだけでなく、双方とも身体の自然なリサイクルメカニズムである新生児のＦｃ受容体、ＦｃＲｎも利用する。これらのタンパク質のＦｃＲｎへのｐＨ依存性結合は、エンドソーム内の融合タンパク質の分解を防ぐ。これらのタンパク質に基づく融合体は、典型的なペグ化または脂質化されたペプチドよりもはるかに長い、３〜１６日の範囲の半減期を有することができる。抗体Ｆｃドメインへの融合は、ペプチド薬またはタンパク薬の溶解性及び安定性を改善することができる。ペプチドＦｃ融合体の例は、現在後期臨床試験中のＧＬＰ−１受容体アゴニストであるデュラグルチドである。脂肪アシル化ペプチドによって利用される同じタンパク質であるヒト血清アルブミンは他の評判が良い融合相手である。アルビグルチドは、このプラットフォームに基づくＧＬＰ−１受容体アゴニストである。Ｆｃとアルブミンの間の主な差異は、ＨＳＡの単量体構造に対するＦｃの二量体の性質であり、融合相手の選択に応じて、二量体または単量体としての融合ペプチドの提示をもたらす。アフィマー・Ｆｃ融合体の二量体の性質は、腫瘍細胞上のＰＤ−Ｌ１のようなアフィマーの標的が十分に接近して配置されている、またはそれ自体が二量体である場合、結合活性効果を生み出すことができる。これは、標的応じて望ましくてもよいし、またはそうでなくてもよい。
【０３４９】
Ｆｃ融合
いくつかの実施形態では、アフィマーポリペプチドは、免疫グロブリンＦｃドメイン（「Ｆｃドメイン」）、またはその断片または変異体、例えば機能的Ｆｃ領域との融合タンパク質の一部であってもよい。この文脈において、アフィマー・Ｆｃ融合タンパク質として作成された結合剤・薬物コンジュゲートのようなＦｃ融合体（「Ｆｃ−融合体」）は、ペプチド骨格（直接的または間接的に）を介して免疫グロブリンのＦｃ領域に共有結合した１以上のアフィマー配列を含むポリペプチドである。Ｆｃ融合体は、例えば、抗体のＦｃ領域（エフェクター機能及び薬物動態を促進する）及び同じポリペプチドの一部としてのアフィマー配列を含んでもよい。免疫グロブリンＦｃ領域はまた１以上のアフィマーに間接的に連結されてもよい。様々なリンカーが当該技術分野で知られており、任意で、アフィマー配列を含むポリペプチドにＦｃを連結してＦｃ融合体を生成するのに使用することができる。特定の実施形態では、Ｆｃ融合体を二量体化してＦｃ融合ホモ二量体を形成する、または同一でないＦｃドメインを使用してＦｃ融合ヘテロ二量体を形成することができる。
【０３５０】
主題の結合剤・薬物コンジュゲートをアフィマー融合タンパク質として生成する際に使用するためにヒト抗体のＦｃ領域を選択する理由はいくつかある。主な理論的根拠は、抗体のそれと比較して同様の薬物動態プロファイルを示すのに十分な大きさの安定したタンパク質を生成し、且つＦｃ領域によって付与される特性を利用することであり；これには、エンドサイトーシス後の細胞表面への融合タンパク質のＦｃＲｎが介在する再循環を伴うサルベージ新生児ＦｃＲｎ受容体経路、リソソーム分解を回避すること、血流への戻し放出を生じることが含まれるので、血清半減期の延長に寄与する。もう１つの明らかな利点は、プロテインＡへのＦｃドメインの結合であり、それは、結合剤・薬物コンジュゲートの生成中の下流処理が簡素化し、結合剤・薬物コンジュゲートの高純度調製物の生成を可能にすることができる。
【０３５１】
一般に、Ｆｃドメインには、最初の定常領域免疫グロブリンドメインを除く抗体の定常領域が含まれるであろう。したがって、Ｆｃドメインは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ＩｇＥ及びＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメイン、及びこれらのドメインのＮ末端の柔軟なヒンジを指す。ＩｇＡ及びＩｇＭの場合、ＦｃにはＪ鎖が含まれてもよい。ＩｇＧについては、Ｆｃは免疫グロブリンドメインＣγ２とＣγ３と、Ｃγ１及びＣγ２の間のヒンジとを含む。Ｆｃドメインの境界は異なってもよいが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常、残基Ｃ２２６またはＰ２３０からそのカルボキシル末端までを含むように定義され、番号付けはＫａｂａｔに記載されているＥＵ指標に従う（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，ＮＩＨ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））。Ｆｃは、分離してこの領域を指してもよく、または、抗体全体、抗体断片、またはＦｃ融合タンパク質の文脈でこの領域を指してもよい。多型は多くの異なるＦｃ位置で観察されており、本明細書で使用されるときＦｃドメインとしても含まれる。
【０３５２】
特定の実施形態では、本明細書で使用されるとき、Ｆｃ、「機能的Ｆｃ領域」は、ＦｃＲｎに結合する能力を保持するＦｃドメインまたはその断片を指す。機能的なＦｃ領域はＦｃＲｎに結合するが、エフェクター機能を持たない。Ｆｃ領域またはその断片のＦｃＲｎに結合する能力は当該技術分野で既知の標準的な結合アッセイによって測定することができる。例示的な「エフェクター機能」には、Ｃ１ｑ結合；補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体；ＢＣＲ）の下方調節、等が挙げられる。そのようなエフェクター機能は、そのような抗体エフェクター機能を評価するための当該技術分野で既知の種々のアッセイを用いて評価することができる。
【０３５３】
例示的な実施形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１サブクラスに由来するが、他のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４）も使用されてもよい。使用することができるヒトＩｇＧ１免疫グロブリンＦｃドメインの例示的な配列は以下の通りである。
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号９３）
【０３５４】
いくつかの実施形態では、融合タンパク質で使用されるＦｃ領域はＦｃ分子のヒンジ領域を含んでもよい。例示的なヒンジ領域は、上記で提供された例示的なヒトＩｇＧ１免疫グロブリンＦｃドメイン配列の１位〜１６位にまたがるコアヒンジ残基（すなわち、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧ）を含む。特定の実施形態では、アフィマー含有融合タンパク質は、上記で提供されている例示的なヒトＩｇＧ１免疫グロブリンＦｃドメイン配列のヒンジ領域内の６位及び９位のシステイン残基にある程度起因して多量体構造（例えば、二量体）を採用してもよい。他の実施形態では、本明細書で使用されるときヒンジ領域はさらに、上記で提供されている例示的なヒトＩｇＧ１免疫グロブリンＦｃドメイン配列のコアヒンジ配列に隣接するＣＨ１領域及びＣＨ２領域に由来する残基を含んでもよい。さらに他の実施形態では、ヒンジ配列は、ＧＳＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧまたはＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧを含んでもよく、またはそれから成ってもよい。
【０３５５】
いくつかの実施形態では、ヒンジ配列は、望ましい薬物動態特性、生物物理学的特性、及び／または生物学的特性を付与する１以上の置換を含んでもよい。いくつかの例示的なヒンジ配列には以下が挙げられる：
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳ
ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳ；
ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＳＳ；
ＥＰＫＳＳＧＳＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＳＳ；
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳ及び
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＳＳ。
【０３５６】
一実施形態では、上記で提供されている例示的なヒトＩｇＧ１免疫グロブリンＦｃドメイン配列の１８位の残基ＰはＳで置き換えられて、Ｆｃのエフェクター機能を除去してもよく；この置換は、ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＳＳ、ＥＰＫＳＳＧＳＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＳＳ、及びＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＳＳの配列を有するヒンジで例示されている。別の実施形態では、上記で提供されている例示的なヒトＩｇＧ１免疫グロブリンＦｃドメイン配列の１位〜２位の残基ＤＫをＧＳで置き換えて、潜在的なクリップ部位を除去してもよく；この置換は、配列ＥＰＫＳＳＧＳＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＳＳで例示されている。別の実施形態では、ヒトＩｇＧ１の重鎖定常領域（すなわち、ドメインＣＨ１〜ＣＨ３）の１０３位のＣはＳで置換されて、軽鎖の非存在下での不適切なシステイン結合形成を防いでもよく；この置換は、ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳ、ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＳＳ、及びＥＰＫＳＳＧＳＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＳＳによって例示されている。
【０３５７】
いくつかの実施形態では、Ｆｃは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４に由来するＦｃドメインを含む、ヒトＦｃのような哺乳動物Ｆｃである。Ｆｃ領域は、ネイティブＦｃ領域と及び／または親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を持ってもよい。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ネイティブＦｃ領域と及び／または親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約９０％の配列同一性を有してもよい。
【０３５８】
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号９３から選択されるアミノ酸配列、または配列番号９４〜１０６によって提供される実施例からのＦｃ配列を含む。ＦｃドメインのＣ末端リジンは、Ｆｃドメインを含む融合タンパク質の任意の成分であることが理解されるべきである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、そのＣ末端リジンが省略されることを除いて、配列番号９３〜１０６から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは配列番号９３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦｃドメインはそのＣ末端リジンが省略されることを除いて、配列番号９３のアミノ酸配列を含む。
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【０３５９】
ＰＤ−Ｌ１結合アフィマーとＦｃとの例示的なＦｃ融合体は、実施例及び図に提供され、アフィマー配列はＦｃドメインのＮ末端またはＣ末端のいずれかに配置することができ、且つ直接連結されてもよく、または、融合タンパク質は、Ｆｃドメインとアフィマーポリペプチド配列との間に介在する他のポリペプチド配列を有してもよいことを明らかにしている。図示の例では、非構造化（柔軟な）リンカー（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎは、ＰＤ−Ｌ１結合アフィマー「２５１」（配列番号８４）及びヒンジ領域がＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧであるヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン（配列番号９３）とともに使用される。構築物は双方とも、タンパク質の成熟型から切断されるＣＤ３３分泌シグナル配列ＭＰＬＬＬＬＬＰＬＬＷＡＧＡＬＡを含んでいた。
2021527042.tif 000063
【０３６０】
「抗体依存性細胞介在性細胞障害」または「ＡＤＣＣ」は、特定の細胞傷害性細胞（例えばナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合した分泌Ｉｇによって、これらの細胞傷害性エフェクター細胞が抗原を担う標的細胞と特異的に結合して、続いて細胞毒素で標的細胞を殺傷するのが可能になる細胞傷害性の形態を指す。
【０３６１】
特定の実施形態では、融合タンパク質は、得られる結合剤・薬物コンジュゲートがＡＤＣＣを有さない、及び／または補体活性化またはエフェクター機能を有さない（または低減したＡＤＣＣ及び／または補体活性化またはエフェクター機能を有する）Ｆｃドメイン配列を含む。例えば、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ２もしくはＩｇＧ４アイソタイプの自然に無効化された定常領域、または変異したＩｇＧ１定常領域を含んでもよい。好適な修飾の例は、ＥＰ０３０７４３４に記載されている。一例は、２３５位及び２３７位（ＥＵ指標番号付け）におけるアラニン残基の置換を含む。
【０３６２】
他の実施形態では、融合タンパク質は、結果として生じる結合剤・薬物コンジュゲートがＦｃ機能性の一部または全部を保持するであろうＦｃドメイン配列、例えば、融合タンパク質がヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３由来のＦｃドメインを含むのであれば、ＡＤＣＣ及びＣＤＣの活性の一方または双方が可能であるだろうＦｃドメイン配列を含む。エフェクター機能のレベルは、既知の技術に従って、例えば、ＣＨ２ドメインの突然変異によって変化させることができ、例えば、その際、ＩｇＧ１のＣＨ２ドメインが２３９及び３３２及び３３０から選択される位置にて１以上の突然変異を有し、例えば、突然変異は、抗体がエフェクター機能を増強しているようにＳ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅ及びＡ３３０Ｌから選択され、及び／または例えば、Ｆｃ領域のフコシル化が減少するように、本発明の抗原結合タンパク質のグリコシル化プロファイルを変更する。
【０３６３】
アルブミン融合
他の実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートは、少なくとも１つのアフィマー配列に加えて、アルブミン配列またはアルブミン断片を含む融合タンパク質である。他の実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートは、アフィマーを含むポリペプチド配列への組み込み以外の化学的結合を介してアルブミン配列またはアルブミン断片にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、アルブミン、アルブミン変異体、またはアルブミン断片は、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ヒト血清アルブミン変異体、またはヒト血清アルブミン断片である。ＨＳＡに匹敵するアルブミン血清タンパク質は、例えば、カニクイザル、ウシ、イヌ、ウサギ、及びラットに見いだされる。非ヒト種のうちで、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）はＨＳＡに最も構造的に類似している。例えば、Ｋｏｓａ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７），Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９６（１１）：３１１７−２４．を参照のこと。本開示は、カニクイザル血清アルブミンまたはウシ血清アルブミンに由来するアルブミン配列を含むが、これらに限定されない、非ヒト種由来のアルブミンの使用を企図する。
【０３６４】
約２０日の血清半減期を有する５８５アミノ酸のポリペプチド（約６７ｋＤａ）である成熟ＨＳＡは、主にコロイド浸透圧血圧、血中ｐＨ、及び多数の内在性リガンド及び外因性リガンドの輸送と分布の維持に関与する。このタンパク質は、３つの構造的に相同なドメイン（ドメインＩ、ＩＩ、ＩＩＩ）を有し、ほぼ完全にアルファらせん構造であり、１７のジスルフィド架橋によって高度に安定化されている。特定の好ましい実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートは、１以上のアフィマーポリペプチド配列と、融合タンパク質で所望の程度までの成熟アルブミンのＰＫ及び／または生体内分布特性を維持する成熟ヒト血清アルブミンの配列（配列番号１１１）またはその変異体または断片のための配列とを含むアルブミン融合タンパク質であることができる。
ＤＡＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＤＬＧＥＥＮＦＫＡＬＶＬＩＡＦＡＱＹＬＱＱＣＰＦＥＤＨＶＫＬＶＮＥＶＴＥＦＡＫＴＣＶＡＤＥＳＡＥＮＣＤＫＳＬＨＴＬＦＧＤＫＬＣＴＶＡＴＬＲＥＴＹＧＥＭＡＤＣＣＡＫＱＥＰＥＲＮＥＣＦＬＱＨＫＤＤＮＰＮＬＰＲＬＶＲＰＥＶＤＶＭＣＴＡＦＨＤＮＥＥＴＦＬＫＫＹＬＹＥＩＡＲＲＨＰＹＦＹＡＰＥＬＬＦＦＡＫＲＹＫＡＡＦＴＥＣＣＱＡＡＤＫＡＡＣＬＬＰＫＬＤＥＬＲＤＥＧＫＡＳＳＡＫＱＲＬＫＣＡＳＬＱＫＦＧＥＲＡＦＫＡＷＡＶＡＲＬＳＱＲＦＰＫＡＥＦＡＥＶＳＫＬＶＴＤＬＴＫＶＨＴＥＣＣＨＧＤＬＬＥＣＡＤＤＲＡＤＬＡＫＹＩＣＥＮＱＤＳＩＳＳＫＬＫＥＣＣＥＫＰＬＬＥＫＳＨＣＩＡＥＶＥＮＤＥＭＰＡＤＬＰＳＬＡＡＤＦＶＥＳＫＤＶＣＫＮＹＡＥＡＫＤＶＦＬＧＭＦＬＹＥＹＡＲＲＨＰＤＹＳＶＶＬＬＬＲＬＡＫＴＹＥＴＴＬＥＫＣＣＡＡＡＤＰＨＥＣＹＡＫＶＦＤＥＦＫＰＬＶＥＥＰＱＮＬＩＫＱＮＣＥＬＦＥＱＬＧＥＹＫＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＮＬＧＫＶＧＳＫＣＣＫＨＰＥＡＫＲＭＰＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＱＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＤＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＥＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＮＡＥＴＦＴＦＨＡＤＩＣＴＬＳＥＫＥＲＱＩＫＫＱＴＡＬＶＥＬＶＫＨＫＰＫＡＴＫＥＱＬＫＡＶＭＤＤＦＡＡＦＶＥＫＣＣＫＡＤＤＫＥＴＣＦＡＥＥＧＫＫＬＶＡＡＳＱＡＡＬＧＬ（配列番号１１１）
【０３６５】
アルブミン配列は、上記に記載されているようなリンカー配列を使用することによって、結合剤・薬物コンジュゲート中のアフィマーポリペプチド配列または他の隣接配列から引き離すことができる。
【０３６６】
特に指示されない限り、本明細書での「アルブミン」または「成熟アルブミン」への言及はＨＳＡを指すことを意味する。しかしながら、完全長ＨＳＡには１８アミノ酸のシグナルペプチド（ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳ）と、それに続く６アミノ酸のプロドメイン（ＲＧＶＦＲＲ）を有することが言及され；この２４のアミノ酸残基のペプチドはプレプロドメインと呼ばれてもよい。アフィマー・ＨＳＡ融合タンパク質は、組換えタンパク質コード配列のＨＳＡプレプロドメインを使用して発現させ及び分泌させることができる。あるいは、アフィマー・ＨＳＡ融合体は、上記に記載されているような他の分泌シグナル配列の包含を介して発現され、及び分泌され得る。
【０３６７】
代替の実施形態では、血清アルブミンポリペプチドは、アフィマーポリペプチドとの融合タンパク質の一部として提供されるのではなく、アルブミンポリペプチドとアフィマー含有ポリペプチドのそれぞれのアミノ酸側鎖の間での化学的コンジュゲートを介した架橋のような、骨格アミド結合以外の結合を介してアフィマー含有ポリペプチドに共有結合することができる。
【０３６８】
アルブミン結合ドメイン
特定の実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートは、アフィマーポリペプチド配列との融合タンパク質（ポリペプチドも含む場合）の一部としての、または隣接するポリペプチド鎖の一部ではない部位を介して化学的にコンジュゲートされた血清結合部分を含むことができる。
【０３６９】
特定の実施形態では、血清結合ポリペプチドはアルブミン結合部分である。アルブミンは複数の疎水性結合ポケットを含有し、例えば、脂肪酸やステロイドのような種々のさまざまなリガンドと同様にさまざまな薬物の輸送体として当然ながら役立つ。さらに、アルブミンの表面は負に帯電しており、それを高度な水溶性にする。
【０３７０】
本明細書で使用されるとき「アルブミン結合部分」という用語は、アルブミンに結合することができる、すなわち、アルブミン結合親和性を有する任意の化学基を指す。アルブミンは脂肪酸のような内在性リガンドに結合する；しかしながら、ワルファリン、ペニシリン、ジアゼパムのような外因性リガンドとも相互作用する。これらの薬物のアルブミンへの結合は可逆的であるので、アルブミン・薬物複合体は薬物の生体内分布及び生体利用能を高めることができる薬物リザーバーとして役立つ。脂肪酸のような内在性アルブミン結合リガンドを模倣する成分の組み込みはアルブミン会合を強化し、薬効を高めるために使用されてきた。
【０３７１】
特定の実施形態では、タンパク質半減期を増やすために主題の結合剤・薬物コンジュゲートの生成に適用することができる化学修飾法は、ペプチド側鎖への脂肪酸の共有結合を含む脂質化である。もともとインスリンの半減期を延長する方法として考案され開発された脂質化は、ＰＥＧ化と同じ半減期延長の基本メカニズムを共有し、すなわち、流体力学的半径を大きくして腎濾過を減らす。しかしながら、脂質部分自体は比較的小さく、その効果は、循環するアルブミンへの脂質部分の非共有結合を介して間接的に介在する。脂質化の結果の１つはそれがペプチドの水溶性を低下させることであるが、ペプチドと脂肪酸の間のリンカーの操作は、例えば、リンカー内でグルタメートまたはミニＰＥＧを使用することによってこれを調節することができる。リンカーの操作及び脂質部分の変化は、アルブミンとは無関係に、生体内分布を遅くすることによって半減期の延長に寄与することができる自己凝集に影響を及ぼすことができる。例えば、Ｊｏｎａｓｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２），Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．２９（８）：２１０４−１４．を参照のこと。
【０３７２】
特定の結合剤・薬物コンジュゲートの生成に使用するためのアルブミン結合部分の他の例には、アルブミン結合（ＰＫＥ２）アドネクチン（ＷＯ２０１１１４００８６「血清アルブミン結合分子」、ＷＯ２０１５１４３１９９「血清アルブミン結合フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン」及びＷＯ２０１７０５３６１７「高速オフ速度血清アルブミン結合フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン」）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ株Ｇ１４８のプロテインＧのアルブミン結合ドメイン３（ＡＢＤ３）、及びＡＴＮ−１０３のアルブミン結合ドメイン抗体ＧＳＫ２３７４６９７（「ＡｌｂｕｄＡｂ」）またはアルブミン結合ナノボディ部分（オゾラリズマブ）が挙げられる。
【０３７３】
ＰＥＧ化、ＸＴＥＮ、ＰＡＳ及び他のポリマー
多種多様な高分子ポリマー及び他の分子を、本開示のポリペプチドを含有するアフィマーに連結して、得られる結合剤・薬物コンジュゲートの生物学的特性を調節することができ、及び／または結合剤・薬物コンジュゲートに新しい生物学的特性を提供することができる。これらの高分子ポリマーは、天然にコードされたアミノ酸を介して、非天然にコードされたアミノ酸、または天然もしくは非天然のアミノ酸の任意の官能置換基、また天然もしくは非天然アミノ酸に付加された任意の置換基もしくは官能基を介してアフィマー含有ポリペプチドに連結することができる。ポリマーの分子量は、約１００Ｄａ〜約１００，０００Ｄａ以上の間を含むがこれらに限定されない広い範囲であってもよい。ポリマーの分子量は、１００，０００Ｄａ、９５，０００Ｄａ、９０，０００Ｄａ、８５，０００Ｄａ、８０，０００Ｄａ、７５，０００Ｄａ、７０，０００Ｄａ、６５，０００Ｄａ、６０，０００Ｄａ、５５，０００Ｄａ、５０，０００Ｄａ、４５，０００Ｄａ、４０，０００Ｄａ、３５，０００Ｄａ、３０，０００Ｄａ、２５，０００Ｄａ、２０，０００Ｄａ、１５，０００Ｄａ、１０，０００Ｄａ、９，０００Ｄａ、８，０００Ｄａ、７，０００Ｄａ、６，０００Ｄａ、５，０００Ｄａ、４，０００Ｄａ、３，０００Ｄａ、２，０００Ｄａ、１，０００Ｄａ、９００Ｄａ、８００Ｄａ、７００Ｄａ、６００Ｄａ、５００Ｄａ、４００Ｄａ、３００Ｄａ、２００Ｄａ、及び１００Ｄａを含むが、これらに限定されない約１００Ｄａ〜約１００，０００Ｄａの間であってもよい。いくつかの実施形態では、ポリマーの分子量は約１００Ｄａ〜約５０，０００Ｄａの間である。いくつかの実施形態では、ポリマーの分子量は約１００Ｄａ〜約４０，０００Ｄａの間である。いくつかの実施形態では、ポリマーの分子量は約１，０００Ｄａ〜約４０，０００Ｄａの間である。いくつかの実施形態では、ポリマーの分子量は約５，０００Ｄａ〜約４０，０００Ｄａの間である。いくつかの実施形態では、ポリマーの分子量は約１０，０００Ｄａ〜約４０，０００Ｄａの間である。
【０３７４】
この目的で、ペグ化、ポリシアル化、ＨＥＳ化、グリコシル化、または柔軟で親水性のアミノ酸鎖（５００〜６００アミノ酸）に融合した組換えＰＥＧ類似体を含む種々の方法が開発されている（Ｃｈａｐｍａｎ，（２００２），Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５４．５３１−５４５；Ｓｃｈｌａｐｓｃｈｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７），Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．２０，２７３−２８３；Ｃｏｎｔｅｒｍａｎｎ，（２０１１），Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２，８６８−８７６；Ｊｅｖｓｅｖａｒ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２），Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．９０１，２３３−２４６を参照のこと）。
【０３７５】
ポリマーの例には、ポリアルキルエーテル及びそのアルコキシキャップされた類似体（例えば、ポリオキシエチレングリコール、ポリオキシエチレン／プロピレングリコール、及びそのメトキシまたはエトキシでキャップされた類似体、特にポリオキシエチレングリコール、後者はポリエチレングリコールまたはＰＥＧとしても知られている）；個別ＰＥＧ（ｄＰＥＧ）；ポリビニルピロリドン；ポリビニルアルキルエーテル；ポリオキサゾリン、ポリアルキルオキサゾリン及びポリヒドロキシアルキルオキサゾリン；ポリアクリルアミド、ポリアルキルアクリルアミド、及びポリヒドロキシアルキルアクリルアミド（例えば、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド及びそれらの誘導体）；ポリヒドロキシアルキルアクリレート；ポリシアル酸及びその類似体；親水性ペプチド配列；多糖類及びデキストラン及びデキストラン誘導体を含むそれらの誘導体、例えば、カルボキシメチルデキストラン、デキストラン硫酸、アミノデキストラン；セルロース及びその誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース；キチン及びその誘導体、例えば、キトサン、スクシニルキトサン、カルボキシメチルキチン、カルボキシメチルキトサン；ヒアルロン酸及びその誘導体；デンプン；アルギン酸塩；コンドロイチン硫酸；アルブミン；プルラン及びカルボキシメチルプルラン；ポリアミノ酸及びその誘導体、例えば、ポリグルタミン酸、ポリリジン、ポリアスパラギン酸、ポリアスパルタミド；以下のような無水マレイン酸コポリマー：スチレン無水マレイン酸コポリマー、ジビニルエチルエーテル無水マレイン酸コポリマー；ポリビニルアルコール；それらのコポリマー；それらのターポリマー；それらの混合物；及び前述の派生物が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３７６】
選択されたポリマーは、それが連結されている結合剤・薬物コンジュゲートが生理的環境のような水性環境で沈殿しないように水溶性であってもよい。水溶性ポリマーは、線状、分岐状、または分枝状を含むがこれらに限定されない任意の構造形態であってもよい。通常、水溶性ポリマーは、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）のようなポリ（アルキレングリコール）であるが、他の水溶性ポリマーも採用することができる。例として、ＰＥＧは本開示の特定の実施形態を説明するのに使用される。結合剤・薬物コンジュゲートの治療上の使用については、ポリマーは薬学的に許容されてもよい。
【０３７７】
「ＰＥＧ」という用語は、サイズまたはＰＥＧの末端での修飾に関係なく、任意のポリエチレングリコール分子を包含するために広く使用され、式によってアフィマー含有ポリペプチドに連結されたものとして表すことができ、
ＸＯ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−
または
ＸＯ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−
式中、ｎは２〜１０，０００であり、ＸはＨ、またはＣ１〜４アルキル、保護基、または末端官能基を含むが、これらに限定されない末端修飾である。場合によっては、本開示のポリペプチドで使用されるＰＥＧは、一方の末端がヒドロキシまたはメトキシで終結している、すなわち、ＸはＨまたはＣＨ３（「メトキシＰＥＧ」）である。
【０３７８】
上記の式で末端「−」によって示されるＰＥＧの他方の末端は、天然に存在するまたは天然にコードされていないアミノ酸を介して、アフィマー含有ポリペプチドに連結されてもよいことが言及される。例えば、連結は、ポリペプチドのアミン基（リジンのイプシロンアミンまたはＮ末端を含むがこれらに限定されない）へのアミド結合、カルバメート結合または尿素結合を介してもよい。あるいは、ポリマーはマレイミド結合によってチオール基（システインのチオール基を含むが、これに限定されない）に連結されるが、それは、アフィマーポリペプチド配列自体に連結する場合、アフィマー配列の残基をシステインに変えることを必要とする。
【０３７９】
アフィマー含有ポリペプチドに連結された水溶性ポリマーの数（すなわち、ペグ化またはグリコシル化の程度）を調整して、例えば、得られる結合剤・薬物コンジュゲートでの生体内半減期におけるような薬理学的、薬物動態学的または薬力学的特性の変化（増加または減少を含むが、これらに限定されない）を提供することができる。いくつかの実施形態では、得られる結合剤・薬物コンジュゲートの半減期は、少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０パーセント、２倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、１６倍、１７倍、１８倍、１９倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、５０倍、または少なくとも約１００倍、未修飾ポリペプチドを超えて増加する。
【０３８０】
得られる結合剤・薬物コンジュゲートのＰＫまたは他の生物学的特性を改変するのに有用なポリマーシステムの別の変形は、特にアフィマーポリペプチド配列との融合タンパク質の一部としての、ＰＥＧの機能的類似体である非構造化親水性アミノ酸ポリマーの使用である。ポリペプチドプラットフォームの固有の生分解性は、ＰＥＧに対する潜在的にさらに安全な代替物としてそれを魅力的にする。別の利点は、ＰＥＧの多分散性とは対照的に、組換え分子の正確な分子構造である。融合相手の三次元折り畳みを維持する必要があるＨＳＡとＦｃペプチドの融合体とは異なり、非構造化相手への組換え融合は、多くの場合、高温またはＨＰＬＣ精製のような過酷な条件にさらされ得る。
【０３８１】
このクラスのポリペプチドのさらに高度なものの１つは、ＸＴＥＮ（Ａｍｕｎｉｘ）と呼ばれ、８６４アミノ酸の長さであり、６種のアミノ酸（Ａ、Ｅ、Ｇ、Ｐ、Ｓ、及びＴ）で構成されている。Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．”Ａ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  ｅｘｔｅｎｄｓ  ｔｈｅ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｈａｌｆ−ｌｉｆｅ  ｏｆ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｉｎ  ａ  ｔｕｎａｂｌｅ  ｍａｎｎｅｒ”，２００９，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２７（１２）：１１８６−９０．を参照のこと。ポリマーの生分解性の性質によって可能になり、これは通常使用される４０ｋＤａのＰＥＧよりもはるかに大きく、同時により大きな半減期の延長を付与する。ＸＴＥＮをアフィマー含有ポリペプチドに融合させると、最終的な結合剤・薬物コンジュゲートの半減期が、未修飾のポリペプチドよりも６０〜１３０倍長くなるはずである。
【０３８２】
同様の概念上の考慮事項に基づく第２のポリマーはＰＡＳ（ＸＬ−Ｐｒｏｔｅｉｎ  ＧｍＢＨ）である。Ｓｃｈｌａｐｓｃｈｙ  ｅｔ  ａｌ．”ＰＡＳＹｌａｔｉｏｎ：ａ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｔｏ  ＰＥＧｙｌａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｅｘｔｅｎｄｉｎｇ  ｔｈｅ  ｐｌａｓｍａ  ｈａｌｆ−ｌｉｆｅ  ｏｆ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ  ａｃｔｉｖｅ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ”，２０１３，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．２６（８）：４８９−５０１．プロリン、アラニン、セリンのたった３種の小さな非荷電アミノ酸の一層さらに制限されたセットで構成されるランダムコイルポリマー。Ｆｃ、ＨＡＳ、及びＸＴＥＮと同様に、ＰＡＳ修飾はアフィマーポリペプチド配列と共に遺伝的にコードされ、発現されるとインライン融合タンパク質を生じることができる。
【０３８３】
多重特異性融合タンパク質
特定の実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートは、例えば、第１の抗ＰＤ−Ｌ１アフィマーポリペプチドと、少なくとも１つの追加の結合ドメインとを含む多重特異性ポリペプチドである。追加の結合ドメインは、例示するために、第２のアフィマーポリペプチド配列（第１のアフィマーポリペプチド配列と同じまたは異なっていてもよい）、抗体またはその断片、または他の抗原結合ポリペプチド、受容体のリガンド結合部分（例えば、受容体トラップポリペプチド）、受容体結合リガンド（例えば、サイトカイン、成長因子等）、操作されたＴ細胞受容体、酵素またはその触媒断片、またはいくつかを付与する他のポリペプチド配列の中から選択されるポリペプチド配列であってもよい。
【０３８４】
特定の実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートは、ＰＤ−Ｌ１にも向けられる１以上の追加のアフィマーポリペプチド配列を含む。追加の抗ＰＤ−Ｌ１アフィマーは、多重特異性アフィマー融合タンパク質を作り出すために、第１の抗ＰＤ−Ｌ１アフィマーポリペプチドと同じであってもよく、または異なっていてもよい（またはそれらの混合物）。結合剤・薬物コンジュゲートは、ＰＤ−Ｌ１の同じまたは重複する部位に結合でき、または、結合剤・薬物コンジュゲートが同じＰＤ−Ｌ１タンパク質の２つの部位（２パラトープ）または２を超える部位（多重パラトープ）を同時に結合できるように２つの異なる部位に結合することができる。
【０３８５】
特定の実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートは、抗体由来の１以上の抗原結合部位を含む。得られる結合剤・薬物コンジュゲートは、抗ＰＤ−Ｌ１アフィマーと抗原結合部位（例えば、ｓｃＦｖの場合）の双方を含む単鎖であることができ、または、抗ＰＤ−Ｌ１抗体の配列も融合されている重鎖及び／または軽鎖で構築された抗体におけるような多量体タンパク質複合体であることができる。この形式の例示的なアフィマー／抗体の融合体は、図１１Ａに示すイピリムマブ−ＡＶＡ０４−１４１二重特異性抗体であり、それはＣＴＬＡ−４とＰＤ−Ｌ１のそれぞれについて２価である。もう１つは、図１３Ａに示すベバシズマブ−ＡＶＡ０４−２５１二重特異性抗体であり、それはＶＥＧＦ−ＡとＰＤ−Ｌ１のそれぞれについて２価である。
【０３８６】
図示のイピリムマブ−ＡＶＡ０４−１４１二重特異性抗体の場合、抗ＰＤ−Ｌ１アフィマーポリペプチドは、抗ＣＴＬＡ−４抗体の重鎖のＣ末端でのインライン融合として提供され、重鎖（取り除くことができる分泌シグナル配列ＭＰＬＬＬＬＬＰＬＬＷＡＧＡＬＡ、及びＧｌｙ４−Ｓｅｒ反復リンカーを含む）はアフィマー融合配列を有する：
ＭＰＬＬＬＬＬＰＬＬＷＡＧＡＬＡＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＴＦＩＳＹＤＧＮＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＩＹＹＣＡＲＴＧＷＬＧＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＩＰＲＧＬＳＥＡＫＰＡＴＰＥＩＱＥＩＶＤＫＶＫＰＱＬＥＥＫＴＮＥＴＹＧＫＬＥＡＶＱＹＫＴＱＶＬＡＡＡＨＦＰＥＨＦＷＳＴＮＹＹＩＫＶＲＡＧＤＮＫＹＭＨＬＫＶＦＮＧＰＱＰＡＤＭＳＡＥＦＡＤＲＶＬＴＧＹＱＶＤＫＮＫＤＤＥＬＴＧＦ（配列番号１１２）
【０３８７】
そして、軽鎖（取り除くことができる分泌シグナル配列ＭＰＬＬＬＬＬＰＬＬＷＡＧＡＬＡを含む）はネイティブのイピリムマブ抗体の配列を有する：
ＭＰＬＬＬＬＬＰＬＬＷＡＧＡＬＡＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＧＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＦＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＳＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１１３）
【０３８８】
同様に、図示したベバシズマブ−ＡＶＡ０４−２５１二重特異性抗体の場合、抗ＰＤ−Ｌ１アフィマーポリペプチドは、抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体の重鎖のＣ末端にてインライン融合として提供され、重鎖（取り除くことができる分泌シグナル配列ＭＰＬＬＬＬＬＰＬＬＷＡＧＡＬＡ及び柔軟なＧｌｙ４−Ｓｅｒ反復リンカーを含む）はアフィマー融合配列を有する：
ＭＰＬＬＬＬＬＰＬＬＷＡＧＡＬＡＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲＲＦＴＦＳＬＤＴＳＫＳＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＹＰＨＹＹＧＳＳＨＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＩＰＲＧＬＳＥＡＫＰＡＴＰＥＩＱＥＩＶＤＫＶＫＰＱＬＥＥＫＴＧＥＴＹＧＫＬＥＡＶＱＹＫＴＱＶＬＡＲＥＧＲＱＤＷＶＬＳＴＮＹＹＩＫＶＲＡＧＤＮＫＹＭＨＬＫＶＦＮＧＰＷＶＰＦＰＨＱＱＬＡＤＲＶＬＴＧＹＱＶＤＫＮＫＤＤＥＬＴＧＦ（配列番号１１４）
【０３８９】
そして、軽鎖（取り除くことができる分泌シグナル配列ＭＰＬＬＬＬＬＰＬＬＷＡＧＡＬＡを含む）はネイティブのベバシズマブ抗体の配列を有する：
ＭＰＬＬＬＬＬＰＬＬＷＡＧＡＬＡＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＶＬＩＹＦＴＳＳＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１１５）
【０３９０】
本発明のアフィマーをフォーマットする際の柔軟性をさらに説明するために、軽鎖が上記と同じであるが、重鎖が抗体重鎖と抗ＰＤ−Ｌ１アフィマーとの間で剛直なリンカーを含むベバシズマブ−ＡＶＡ０４−２５１二重特異性抗体の型も生成されが、その際、重鎖（取り除くことができる分泌シグナル配列ＭＰＬＬＬＬＬＰＬＬＷＡＧＡＬＡ及び剛直なＡ（ＥＡＡＡＫ）３リンカーを含む）はアフィマー融合配列を有する：
ＭＰＬＬＬＬＬＰＬＬＷＡＧＡＬＡＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲＲＦＴＦＳＬＤＴＳＫＳＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＹＰＨＹＹＧＳＳＨＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＩＰＲＧＬＳＥＡＫＰＡＴＰＥＩＱＥＩＶＤＫＶＫＰＱＬＥＥＫＴＧＥＴＹＧＫＬＥＡＶＱＹＫＴＱＶＬＡＲＥＧＲＱＤＷＶＬＳＴＮＹＹＩＫＶＲＡＧＤＮＫＹＭＨＬＫＶＦＮＧＰＷＶＰＦＰＨＱＱＬＡＤＲＶＬＴＧＹＱＶＤＫＮＫＤＤＥＬＴＧＦ（配列番号１１６）
【０３９１】
当業者に明らかであり、図１７に示されるように、抗ＰＤ−Ｌ１アフィマーポリペプチド配列は、抗体の重鎖または軽鎖のＮ末端またはＣ末端、またはそれらの組み合わせ／順列のいずれかに付加することができる。さらに、多量体アフィマーの文脈で図９に示されるように、１を超えるアフィマー配列を任意の所与の抗体鎖に含めることができる。
【０３９２】
完全長免疫グロブリンを含む多重特異性結合剤・薬物コンジュゲートに関するいくつかの実施形態では、抗体へのアフィマーポリペプチド配列の融合は、免疫グロブリンのＦｃ領域のＦｃ機能を保つであろう。例えば、特定の実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートは、そのＦｃ部分を介して、Ｆｃ受容体陽性細胞のＦｃ受容体に結合することができるであろう。いくつかのさらなる実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートは、Ｆｃ受容体陽性細胞に結合することによってＦｃ受容体陽性細胞を活性化し、それによって、サイトカイン及び／または共刺激抗原の発現を開始してもよく、またはそれを増加させてもよい。さらに、結合剤・薬物コンジュゲートは、共刺激抗原及び／またはサイトカインを介して、Ｔ細胞の生理的活性化に必要とされる少なくとも第２の活性化シグナルをＴ細胞に伝達してもよい。
【０３９３】
いくつかの実施形態では、免疫細胞、肝細胞、及び内皮細胞のような免疫系由来のエフェクター細胞の表面に存在するＦｃ受容体を発現する他の細胞へのそのＦｃ部分の結合の結果として、結合剤・薬物コンジュゲートは、それによって免疫系のエフェクター細胞が標的細胞を活発に溶解する細胞介在性の免疫防御のメカニズムである抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）機能を持ってもよく、標的細胞の膜表面抗原は抗体によって結合されているので、ＡＤＣＣを介した腫瘍細胞死を引き起こす。いくつかのさらなる実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートはＡＤＣＣ機能を実証することができる。
【０３９４】
上記に記載されているように、Ｆｃが介在する細胞傷害とは別に、Ｆｃ部分は体内でのその安定性及び持続性に重要な、結合剤・薬物コンジュゲートの血清レベルの維持に寄与してもよい。例えば、Ｆｃ部分が内皮細胞及び食細胞のＦｃ受容体に結合すると、結合剤・薬物コンジュゲートが内部移行して血流に再循環するようになり、体内での半減期が延長してもよい。
【０３９５】
追加のアフィマーポリペプチドの例示的な標的には、単に説明するために、別の免疫チェックポイントタンパク質、及び免疫共刺激受容体（特に、追加のアフィマー（複数可）が共刺激受容体を作動させることができる場合）、受容体、サイトカイン、成長因子、または腫瘍関連抗原が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３９６】
結合剤・薬物コンジュゲートがアフィマー／抗体融合タンパク質である場合、例えば、免疫グロブリン部分は、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ受容体、ＥＧＦＲまたはＨｅｒ２／ｎｅｕに対するモノクローナル抗体であってもよい。そのような免疫グロブリンのいくつかの例示的な例には、以下：トラスツズマブ、パニツムマブ、セツキシマブ、オビヌツズマブ、リツキシマブ、ペルツズマブ、アレムツズマブ、ベバシズマブ、トシツモマブ、イブリツマブ、オファツムマブ、ブレンツキシマブ及びゲムツズマブのいずれかの範囲内に含まれる抗体が挙げられる。
【０３９７】
特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１アフィマーポリペプチドは、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ−４、ＮＫＧ２Ａ、ＫＩＲ、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、ＣＤ９６、ＶＩＳＴＡ、またはＴＩＧＩＴを含むがこれに限定されない、Ｔ細胞上で発現されるような免疫チェックポイント分子を阻害する１以上の結合ドメインを含む結合剤・薬物コンジュゲートの一部である。
【０３９８】
特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１アフィマーポリペプチドは、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＨＶＥＭ、ＤＮＡＭ−１またはＣＤ２８Ｈを含むがこれに限定されない、Ｔ細胞上で発現されるような免疫共刺激分子を作動させる１以上の結合ドメインを含む結合剤・薬物コンジュゲートの一部である。
【０３９９】
特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１アフィマーポリペプチドは、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＨＶＥＭ、ＤＮＡＭ−１またはＣＤ２８Ｈについてのアゴニストリガンドのような免疫共刺激分子のもう１つのリガンドアゴニストを含む結合剤・薬物コンジュゲートの一部である。
【０４００】
抗ＰＤ−Ｌ１アフィマーのＰＤ−Ｌ１阻害活性を、１以上の阻害性免疫チェックポイントを遮断し、及び／または１以上の免疫共刺激経路を活性化する結合ドメインと組み合わせることによって、多重特異性結合剤・薬物コンジュゲートは、他の方法で疲弊した抗腫瘍Ｔ細胞を救済し、抗腫瘍免疫を強化し、それによってがん患者に陽性の応答をもたらす。いくつかのさらなる実施形態では、協調的に発現された免疫チェックポイントタンパク質の結合剤・薬物コンジュゲートによる二重遮断は、相加的または相乗的な抗腫瘍活性を生み出すことができる。
【０４０１】
特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１アフィマーポリペプチドは、例えば、可溶性免疫抑制分子に結合する結合ドメイン（例えば、受容体トラップ）またはＰＧＥ２、ＴＧＦ−β、ＶＥＧＦ、ＣＣＬ２、ＩＤＯ、ＣＳＦ１、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−２３、アデノシン、またはＳＴＡＴ３活性化因子のアンタゴニストを含むが、これらに限定されない、対応する同族受容体に結合し、受容体のリガンド活性化を防止する結合ドメインのような可溶性免疫抑制分子を阻害する１以上の結合ドメインを含む、結合剤・薬物コンジュゲートの一部である。特定の例では、結合剤・薬物コンジュゲートは、例えば、アフリベルセプトのＶＥＧＦ結合受容体ドメインのようなＶＥＧＦ受容体トラップドメインを含む。別の例では、結合剤・薬物コンジュゲートは、ＭＳＢ００１１３５９ＣのＴＧＦβ結合受容体ドメインのようなＴＧＦ−β受容体トラップドメインを含む。
【０４０２】
特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１アフィマーポリペプチドは、腫瘍微小環境において上方調節されるタンパク質、すなわち、腫瘍における腫瘍細胞、またはマクロファージ、線維芽細胞、Ｔ細胞または腫瘍に浸潤する他の免疫細胞で上方調節されるような腫瘍関連抗原に結合する１以上の結合ドメインを含む、結合剤・薬物コンジュゲートの一部である。
【０４０３】
特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１アフィマーポリペプチドは、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−５、ＢＴＬＡ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＴＧＦＲ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＣＤ４０、ＣＤ４ＯＬ、ＣＤ４７、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９４、ＣＤ１３７、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ２２６、ガレクチン−９、ＧＩＴＲＬ、ＨＨＬＡ２、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＬＩＧＨＴ、ＭＨＣクラスＩまたはＩＩ、ＮＫＧ２ａ、ＮＫＧ２ｄ、ＯＸ４ＯＬ、ＰＶＲ、ＳＩＲＰａ、ＴＣＲ、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ受容体、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＩＬＴ１、ＩＬＴ２、ＩＬＴ３、ＩＬＴ４、ＩＬＴ５、ＩＬＴ６、ＩＬＴ７、ＩＬＴ８、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ、ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ３ＤＬ３、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２ＥまたはＴＳＬＰから成る群から選択されるタンパク質に結合する１以上の結合ドメインを含む、結合剤・薬物コンジュゲートの一部である。
【０４０４】
（ｉｉ）他のＰＤ−Ｌ１結合剤
いくつかの実施形態では、細胞結合部分はＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１及びＢ７−１双方への結合を阻害するＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び（Ｆａｂ’）２の断片から成る群から選択されるような抗体断片である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体はヒト化抗体またはヒト抗体である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストはＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＤＸ−１１０５、及びＭＥＤＩ４７３６から成る群から選択される。
【０４０５】
特定の実施形態では、細胞結合部分は、以下のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
または
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧ  ＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫと、
及び以下のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＬＹＨＰＡＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲとを含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその断片である。
【０４０６】
他のヒト抗体及びヒト化抗体、及びそれらの断片は当該技術分野で周知であり、本発明での使用に容易に適合させることができる。
【０４０７】
ＩＶ．使用方法及び医薬組成物
本発明の結合剤・薬物コンジュゲートは、がんの免疫療法のような治療上の処置方法を含むが、これらに限定されない様々な応用に有用である。特定の実施形態では、本明細書に記載されている結合剤・薬物コンジュゲートは、免疫応答を活性化すること、促進すること、増やすこと、及び／または増強すること、腫瘍増殖を阻害すること、腫瘍体積を減らすこと、腫瘍退縮を誘導すること、腫瘍細胞アポトーシスを増やすこと、及び／または腫瘍の腫瘍形成能を低下させることについて有用である。特定の実施形態では、本発明のポリペプチドまたは薬剤はウイルスのような病原体に対する免疫療法にも有用である。特定の実施形態では、本明細書に記載されている結合剤・薬物コンジュゲートは、ウイルス感染を阻害すること、ウイルス感染を減らすこと、ウイルス感染細胞のアポトーシスを増やすこと及び／またはウイルスに感染した細胞の殺傷を増やすことについて有用である。使用方法は、試験管内、生体外、または生体内での方法であってもよい。
【０４０８】
本発明は、結合剤・薬物コンジュゲートを使用して対象にて免疫応答を活性化する方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載されている結合剤・薬物コンジュゲートを使用して対象にて免疫応答を促進する方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、結合剤・薬物コンジュゲートを使用して対象にて免疫応答を高める方法を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、結合剤・薬物コンジュゲートを使用して対象にて免疫応答を増強する方法を提供する。いくつかの実施形態では、免疫応答の活性化、促進、増加、及び／または増強は細胞性免疫の増大を含む。いくつかの実施形態では、免疫応答の活性化、促進、増大、及び／または増強はＴｈ１型応答の増大を含む。いくつかの実施形態では、免疫応答の活性化、促進、増大、及び／または増強はＴ細胞活性の増大を含む。いくつかの実施形態では、免疫応答の活性化、促進、増大、及び／または増強はＣＤ４＋Ｔ細胞活性の増大を含む。いくつかの実施形態では、免疫応答の活性化、促進、増大、及び／または増強はＣＤ８＋Ｔ細胞活性の増大を含む。いくつかの実施形態では、免疫応答の活性化、促進、増大、及び／または増強はＣＴＬ活性の増大を含む。いくつかの実施形態では、免疫応答の活性化、促進、増大、及び／または増強はＮＫ細胞活性の増大を含む。いくつかの実施形態では、免疫応答の活性化、促進、増大、及び／または増強はＴ細胞活性の増大とＮＫ細胞活性の増大を含む。いくつかの実施形態では、免疫応答の活性化、促進、増大、及び／または増強はＣＵ活性の増加とＮＫ細胞活性の増大を含む。いくつかの実施形態では、免疫応答の活性化、促進、増大、及び／または増強はＴｒｅｇ細胞の抑制活性を阻害または低下させることを含む。いくつかの実施形態では、免疫応答の活性化、促進、増大、及び／または増強はＭＤＳＣの抑制活性を阻害または低下させることを含む。いくつかの実施形態では、免疫応答の活性化、促進、増大、及び／または増強はメモリーＴ細胞の比率の数を増やすことを含む。いくつかの実施形態では、免疫反応の活性化、促進、増大、及び／または増強は長期的な免疫記憶機能の増大を含む。いくつかの実施形態では、免疫反応の活性化、促進、増加、及び／または増強は長期記憶の増加を含む。いくつかの実施形態では、免疫反応の活性化、促進、増大、及び／または増強は実質的な副作用及び／または免疫に基づく毒性の証拠を含まない。いくつかの実施形態では、活性化、促進、増大、及び／または免疫応答の増強はサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）またはサイトカインストームの証拠を含まない。いくつかの実施形態では、免疫応答は抗原刺激の結果である。いくつかの実施形態では、抗原刺激は腫瘍細胞である。いくつかの実施形態では、抗原刺激はがんである。いくつかの実施形態では、抗原刺激は病原体である。いくつかの実施形態では、抗原刺激は、ウイルスに感染した細胞である。
【０４０９】
結合剤・薬物コンジュゲートが免疫応答を活性化するか、または阻害するかを決定するための生体内での及び試験管内でのアッセイは当該技術分野で知られている。
【０４１０】
いくつかの実施形態では、対象にて免疫応答を高める方法は、本明細書に記載されている治療有効量の結合剤・薬物コンジュゲートを対象に投与することを含み、その際、結合剤・薬物コンジュゲートは、ヒトＰＤ−Ｌ１を結合する。
【０４１１】
いくつかの実施形態では、対象にて免疫応答を高める方法は、本明細書に記載されている治療有効量の結合剤・薬物コンジュゲートを対象に投与することを含み、その際、結合剤・薬物コンジュゲートは、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するアフィマーポリペプチドを含むアフィマー含有抗体または受容体トラップ融合ポリペプチドである。
【０４１２】
本明細書に記載されている方法の特定の実施形態では、腫瘍に対する持続性のまたは長期の免疫応答を活性化または増強する方法は、ヒトＰＤ−Ｌ１を結合する治療有効量の結合剤・薬物コンジュゲートを対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、腫瘍に対する持続性免疫応答を活性化または増強する方法は、本明細書に記載されている治療有効量の結合剤・薬物コンジュゲートを対象に投与することを含み、その際、結合剤・薬物コンジュゲートは、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するアフィマーポリペプチドを含むアフィマー含有抗体または受容体トラップ融合ポリペプチドである。
【０４１３】
本明細書に記載されている方法の特定の実施形態では、腫瘍の再発または腫瘍の再成長を阻害する方法は、ヒトＰＤ−Ｌ１を結合する治療有効量の結合剤・薬物コンジュゲートを対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、腫瘍の再発または腫瘍の再成長を阻害する方法は、本明細書に記載されている治療有効量の結合剤・薬物コンジュゲートを対象に投与することを含み、その際、結合剤・薬物コンジュゲートは、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するアフィマーポリペプチドを含むアフィマー含有抗体または受容体トラップ融合ポリペプチドである。
【０４１４】
いくつかの実施形態では、腫瘍は、抗ＰＤ−Ｌ１アフィマーポリペプチドと共に結合剤・薬物コンジュゲートにおいて提供される追加の結合実体によって標的とされる腫瘍抗原を発現する、または過剰発現する、すなわち、結合剤・薬物コンジュゲートは二重特異性または多重特異性の作用物質である。
【０４１５】
特定の実施形態では、腫瘍の成長を阻害する方法は、本明細書に  記載されている治療有効量の結合剤・薬物コンジュゲートを対象に投与することを含む。特定の実施形態では、対象はヒトである。特定の実施形態では、対象は腫瘍を有する、または対象は除去された腫瘍を有していた。
【０４１６】
いくつかの実施形態では、腫瘍は固形腫瘍である。一部の実施形態では、腫瘍は、結腸直腸腫瘍、膵臓腫瘍、肺腫瘍、卵巣腫瘍、肝臓腫瘍、乳房腫瘍、腎臓腫瘍、前立腺腫瘍、神経分泌腫瘍、消化管腫瘍、黒色腫、子宮頚部腫瘍、膀胱腫瘍、膠芽細胞腫、及び頭頚部腫瘍から成る群から選択される腫瘍である。特定の実施形態では、腫瘍は結腸直腸腫瘍である。特定の実施形態では、腫瘍は卵巣腫瘍である。いくつかの実施形態では、腫瘍は肺腫瘍である。特定の実施形態では、腫瘍は膵臓腫瘍である。特定の実施形態では、細胞は黒色腫腫瘍である。いくつかの実施形態では、腫瘍は膀胱腫瘍である。
【０４１７】
さらに説明するために、主題の結合剤・薬物コンジュゲートを使用して、例えば、骨肉腫、横紋筋肉腫、神経芽細胞腫、腎臓癌、白血病、腎移行細胞癌、膀胱癌、ウィルムス癌、卵巣癌、膵臓癌、乳癌、前立腺癌、骨癌、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、胃癌、結腸直腸癌、子宮頸癌、滑膜肉腫、頭頸部癌、扁平上皮癌、多発性骨髄腫、腎細胞癌、網膜芽細胞腫、肝芽細胞腫、肝細胞癌、黒色腫、腎臓のラブドイド腫瘍、ユーイング肉腫、軟骨肉腫、脳腫瘍、神経膠芽細胞腫、髄膜腫、下垂体腺腫、前庭滑膜腫、原始神経外胚葉性腫瘍、髄芽細胞腫、星状細胞腫、未分化星状細胞腫、乏突起膠腫、上衣腫、脈絡叢乳頭腫、真性多血症、血小板血症、特発性骨髄線維症、軟組織肉腫、甲状腺癌、子宮内膜癌、カルチノイド癌または肝臓癌、乳癌、または胃癌のようながんに罹患している患者を治療することができる。本発明の一実施形態では、がんは、例えば、上記に記載されている多様なものの転移性がんである。
【０４１８】
特定の実施形態では、がんは血液癌である。いくつかの実施形態では、がんは、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、有毛細胞白血病、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、及び皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）から成る群から選択される。
【０４１９】
本発明は、本明細書に記載されている結合剤・薬物コンジュゲートと薬学的に許容されるビヒクルとを含む医薬組成物も提供する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は免疫療法で使用される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は免疫腫瘍学で使用される。いくつかの実施形態では、組成物は腫瘍の成長を阻害するのに使用される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は対象（例えば、ヒト患者）にて腫瘍の成長を阻害するのに使用される。いくつかの実施形態では、組成物はがんを治療するのに使用される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は対象（例えば、ヒト患者）にてがんを治療するのに使用される。
【０４２０】
製剤は、本発明の精製された結合剤・薬物コンジュゲートを薬学的に許容されるビヒクル（例えば、担体または賦形剤）と組み合わせることによって貯蔵及び使用のために調製される。当業者は一般に、薬学的に許容される担体、賦形剤、及び／または安定剤を製剤または医薬組成物の不活性成分であると見なす。
【０４２１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている結合剤・薬物コンジュゲートは凍結乾燥される及び／または凍結乾燥した形で保存される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている結合剤・薬物コンジュゲートを含む製剤は凍結乾燥される。
【０４２２】
好適な薬学的に許容されるビヒクルには、非毒性の緩衝液、例えば、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸；例えば、塩化ナトリウムのような塩；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；保存剤、例えば、オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチルアルコール、またはベンジルアルコール、アルキルパラベン、例えば、メチルパラベンまたはプロピルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノール及びｍ−クレゾール；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジン；単糖類、二糖類、グルコース、マンノース、またはデキストリンのような炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖類、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース、またはソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム；金属錯体、例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体；ならびに非イオン性界面活性、例えば、ＴＷＥＥＮ（登録商標）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられるが、これらに限定されない。（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２．ｓｕｐ．ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０１２，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ．）。
【０４２３】
本発明の医薬組成物は、局所治療または全身性治療のために幾つもの方法で投与することができる。投与は、表皮または経皮の貼付剤、軟膏、ローション、クリーム、ジェル、ドロップ、坐剤、スプレー、液体及び粉末によって局所的に；ネブライザーを含む、粉末またはエアロゾルの吸入または吹送による肺に、気管内に、及び鼻腔内に；経口で；または、静脈内、動脈内、腫瘍内、皮下、腹腔内、筋肉内（例えば、注射または注入）、もしくは頭蓋内（例えば、髄腔内または脳室内）を含む非経口で行うことができる。
【０４２４】
治療用製剤は単位剤形であることができる。そのような製剤には、錠剤、丸薬、カプセル剤、粉剤、顆粒剤、水性媒体または非水性媒体における溶液または懸濁液、または坐薬が挙げられる。錠剤のような固形組成物では、主要な有効成分が医薬担体と混合される。従来の打錠成分にはコーンスターチ、ラクトース、スクロース、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウムまたはガム、及び希釈剤（例えば、水）が挙げられる。これらを用いて、本発明の化合物または毒性ではない薬学的に許容されるその塩の均質な混合物を含有する固形の予備製剤組成物を形成することができる。次いで、固形の予備製剤組成物を上記に記載されている型の単位剤形にさらに分割する。製剤または組成物の錠剤、丸薬等をコーティングして、またはそうでなければ配合して持続性作用の利点が得られる剤形を提供することができる。例えば、錠剤または丸薬は外側の成分によって覆われた内側の組成物を含むことができる。さらに、崩壊に抵抗するのに役立ち、内部の成分が無傷で胃を通過するのを可能にする、または放出を遅延させる腸溶性の層によって２つの成分を分離することができる。種々の物質をそのような腸溶性の層またはコーティングに使用することができ、そのような物質には、多数のポリマー酸及びセラック、セチルアルコールやセルロースアセテートのような物質とのポリマー酸の混合物が挙げられる。
【０４２５】
本明細書に記載されている結合剤・薬物コンジュゲートはマイクロカプセルに封入することもできる。そのようなマイクロカプセルは、例えば、液滴形成技法によって、または界面重合、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンのマイクロカプセル及びポリ（メチルメタクリレート）マイクロカプセルによって、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル）にて、またはＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  ｐＨａｒｍａｃｙ，２２．ｓｕｐ．ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０１２，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ．に記載されたようなマクロエマルションにて調製される。
【０４２６】
特定の実施形態では、医薬製剤にはリポソームと複合体形成した本発明の結合剤・薬物コンジュゲートが含まれる。リポソームを作り出す方法は当業者に既知である。例えば、一部のリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール及びＰＥＧで誘導体化したホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む液状組成物による逆相蒸発によって生成することができる。定義された孔サイズのフィルターからリポソームを押し出して所望の直径を持つリポソームを得ることができる。
【０４２７】
特定の実施形態では、本明細書に記載されている結合剤・薬物コンジュゲートを含む持続放出製剤を作り出すことができる。持続放出製剤の好適な例には、結合剤・薬物コンジュゲートを含有する固形疎水性ポリマーの半透過性マトリックスが挙げられ、その際、マトリックスは成形された物品の形態（例えば、フィルムまたはマイクロカプセル）である。持続放出マトリックスの例には、ポリエステル、例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）またはポリ（ビニルアルコール）のようなヒドロゲル、ポリラクチド、Ｌ−グルタミン酸と７エチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー、非分解性の酢酸エチレンビニル、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ．ＴＭ（乳酸・グリコール酸コポリマーと酢酸リュープロリドで構成される注射用ミクロスフェア）のような分解性の乳酸・グリコール酸コポリマー、スクロースアセテートイソブチレート及びポリ−Ｄ−（−）３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。
【０４２８】
特定の実施形態では、本明細書に記載されている結合剤・薬物コンジュゲートを投与することに加えて、方法または治療はさらに、少なくとも１つの追加の免疫応答刺激剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、追加の免疫応答刺激剤には、コロニー刺激因子（例えば、顆粒球・マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、幹細胞因子（ＳＣＦ））、インターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ２、ＩＬ−３、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８）、チェックポイント阻害剤、免疫抑制機能を遮断する抗体（例えば、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＣＤ２８抗体、抗ＣＤ３抗体）、トール様受容体（例えば、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ９）、またはＢ７ファミリーのメンバー（例えば、ＣＤ８０、ＣＤ８６）が挙げられるが、これらに限定されない。追加の免疫応答刺激剤は結合剤・薬物コンジュゲートの投与に先立って、それと同時に、及び／またはそれに続いて投与することができる。結合剤・薬物コンジュゲートと免疫応答刺激剤（複数可）とを含む医薬組成物も提供される。いくつかの実施形態では、免疫応答刺激剤は１、２、３以上の免疫応答刺激剤を含む。
【０４２９】
特定の実施形態では、明細書に記載されている結合剤・薬物コンジュゲートを投与することに加えて、方法または治療はさらに、少なくとも１つの追加の治療剤を投与することを含む。追加の治療剤は結合剤・薬物コンジュゲートの投与に先立って、それと同時に、及び／またはそれに続いて投与することができる。結合剤・薬物コンジュゲートと追加の治療剤（複数可）とを含む医薬組成物も提供される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの追加の治療剤は１、２、３以上の追加の治療剤を含む。
【０４３０】
２以上の治療剤による併用療法は異なるメカニズムの作用によって機能する作用物質を使用することが多いが、これは必要ではない。異なるメカニズムの作用を持つ作用物質を用いた併用療法は相加効果または相乗効果を生じてもよい。併用療法は単剤療法で使用されるよりも少ない用量の各作用物質を可能にしてもよく、それによって結合剤・薬物コンジュゲートの毒性副作用を減らし、及び／または治療指数を高める。併用療法は抵抗性のがん細胞が発生する可能性を低下させてもよい。いくつかの実施形態では、併用療法は免疫応答に影響を及ぼす（例えば、応答を強化するまたは活性化する）治療剤と腫瘍細胞／がん細胞に影響を及ぼす（例えば、阻害するまたは殺傷する）と治療剤とを含む。
【０４３１】
本明細書に記載されている方法のいくつかの実施形態では、本明細書に記載されている結合剤・薬物コンジュゲートと少なくとも１つの追加の治療剤との併用は相加的なまたは相乗的な成績を生じる。いくつかの実施形態では、併用療法は結合剤・薬物コンジュゲートの治療指数の上昇を生じる。いくつかの実施形態では、併用療法は追加の治療剤（複数可）の治療指数の上昇を生じる。いくつかの実施形態では、併用療法は結合剤・薬物コンジュゲートの毒性及び／または副作用の低下を生じる。いくつかの実施形態では、併用療法は追加の治療剤（複数可）の毒性及び／または副作用の低下を生じる。
【０４３２】
有用なクラスの治療剤には、例えば、抗チューブリン剤、オーリスタチン、ＤＮＡ副溝結合剤、ＤＮＡ複製阻害剤、アルキル化剤（例えば、シスプラチン、単（白金）、ビス（白金）及び三核白金複合体及びカルボプラチンのようなプラチナ複合体）、アントラサイクリン、抗生物質、抗葉酸剤、代謝拮抗剤、化学療法増感剤、デュオカルマイシン、エトポシド、フッ素化ピリミジン、イオノフォア、レキシトロプシン、ニトロソ尿素、プラチノール、プリン代謝拮抗剤、プロマイシン、放射線増感剤、ステロイド、タキサン、トポイソメラーゼ阻害剤、ビンカアルカロイド等が挙げられる。特定の実施形態では、第２の治療薬は、アルキル化剤、代謝拮抗剤、有糸分裂阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、または血管新生阻害剤である。
【０４３３】
本明細書に記載されている結合剤・薬物コンジュゲートとの併用で投与されてもよい治療剤には化学療法剤が挙げられる。したがって、いくつかの実施形態では、方法または治療には、化学療法剤との併用での、または化学療法剤のカクテルとの併用での本発明の結合剤・薬物コンジュゲートの投与が含まれる。結合剤・薬物コンジュゲートによる治療は、化学療法剤の投与に先立つことができ、それと同時であることができ、またはそれに続くことができる。併用投与は、単一医薬製剤での、もしくは別々の製剤を用いた同時投与、またはいずれかの順で、しかし一般に、活性剤がすべてその生物活性を同時に発揮できるような時間内での連続投与を含むことができる。そのような化学療法剤の調製及び投与のスケジュールは製造元の指示書に従って使用することができ、または技量のある施術者が経験的に決定することができる。そのような化学療法剤の調製及び投与のスケジュールはＴｈｅ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｓｏｕｒｃｅ  Ｂｏｏｋ，４．ｓｕｐ．ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００８，Ｍ．Ｃ．Ｐｅｒｒｙ，Ｅｄｉｔｏｒ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａにも記載されている。
【０４３４】
本発明で有用な化学療法剤には、アルキル化剤、例えば、チオテパ及びシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ）；アルキルスルホネート類、例えば、ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファン；アジリジン類、例えば、ベンゾドパ、カルボコン、メツレドパ、及びウレドパ；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド、及びトリメチルオロメラミンを含むエチレンイミン類及びメチラメラミン類；ナイトロジェンマスタード類、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノブエンビキン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソウレア類、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン；抗生物質類、例えば、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリチアマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルチノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗剤、例えば、メソトレキセート及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；葉酸類似体、例えば、デノプテリン、メソトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキセート；プリン類似体、例えば、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジン類似体、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シトシンアラビノシド、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、５−ＦＵ；アンドロゲン類、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎剤、例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充薬、例えば、フォリン酸；アセグラトン；アルドホスファミド配糖体；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキセート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジクオン；エルホルミチン；酢酸エリプチニウム；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ；ラゾキサン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン、２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（Ａｒａ−Ｃ）；タキソイド類、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ）及びドキセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ）；クロラムブシル；ゲムシタビン、６−チオグアニン；メルカプトプリン；白金類似体、例えば、シスプラチン及びカルボプラチン；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチロールニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸；エスペラミシン、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ）、ならびに上記いずれかの薬学的に許容される塩類、酸類、または誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。化学療法剤にはまた、例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害４（５）−イミダゾール類、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、及びトレミフェン（ＦＡＲＥＳＴＯＮ）を含む抗エストロゲンのような腫瘍に対するホルモン作用を調節するまたは阻害するように作用する抗ホルモン剤；ならびに例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、及びゴセレリンのような抗アンドロゲン；ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩類、酸類、または誘導体も挙げられる。特定の実施形態では、追加の治療剤はシスプラチンである。特定の実施形態では、追加の治療剤はカルボプラチンである。
【０４３５】
本明細書に記載されている方法の特定の実施形態では、化学療法剤はトポイソメラーゼ阻害剤である。トポイソメラーゼ阻害剤は、トポイソメラーゼ酵素（例えば、トポイソメラーゼＩまたはＩＩ）の作用を妨げる化学療法剤である。トポイソメラーゼ阻害剤には、ドキソルビシンＨＣｌ、ダウノルビシンクエン酸塩、ミトキサントロンＨＣｌ、アクチノマイシンＤ、エトポシド、トポテカンＨＣｌ、テニポシド（ＶＭ−２６）、及びイリノテカン、ならびにそれらの薬学的に許容される塩類、酸類、または誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、追加の治療剤はイリノテカンである。
【０４３６】
特定の実施形態では、化学療法剤は代謝拮抗剤である。代謝拮抗剤は、正常な生化学反応に必要な代謝物に類似するが、細胞分裂のような細胞の１以上の正常な機能を妨げるのに十分に異なる構造を持つ化学物質である。代謝拮抗剤には、ゲムシタビン、フルオロウラシル、カペシタビン、メソトレキセートナトリウム、ラリトレキセド、ペメトレキセド、テガフル、シトシンアラビノシド、チオグアニン、５−アザシチジン、６−メルカプトプリン、アザチオプリン、６−チオグアニン、ペントスタチン、フルダラビンリン酸塩及びクラドリビン、ならびにこれらのいずれかの薬学的に許容される塩類、酸類、または誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、追加の治療剤はゲムシタビンである。
【０４３７】
本明細書に記載されている方法の特定の実施形態では、化学療法剤は、チューブリンに結合する薬剤を含むが、これに限定されない有糸分裂阻害剤である。一実施形態では、その薬剤はタキサンである。特定の実施形態では、薬剤は、パクリタキセルまたはドセタキセル、またはパクリタキセルまたはドセタキセルの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体である。特定の実施形態では、薬剤は、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ）、ドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ）、アルブミン結合パクリタキセル（ｎａｂ−パクリタキセル；ＡＢＲＡＸＡＮＥ）、ＤＨＡ−パクリタキセル、またはＰＧ−パクリタキセルである。特定の代替の実施形態では、有糸分裂阻害剤は、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、またはビンデシンのようなビンカアルカロイド、またはそれらの薬学的に許容される塩類、酸類、または誘導体を含む。いくつかの実施形態では、有糸分裂阻害剤は、キネシンＥｇ５の阻害剤、またはオーロラＡもしくはＰｌｋ１のような有糸分裂キナーゼの阻害剤である。特定の実施形態では、追加の治療剤はパクリタキセルである。特定の実施形態では、追加の治療剤はｎａｂ−パクリタキセルである。
【０４３８】
本明細書に記載されている方法のいくつかの実施形態では、追加の治療薬は小分子のような薬剤を含む。例えば、治療は、本発明の結合剤・薬物コンジュゲートと、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２）及び／またはＶＥＧＦを含むが、これらに限定されない腫瘍関連抗原に対する阻害剤として作用する小分子との併用投与を含むことができる。いくつかの実施形態では、本発明の結合剤・薬物コンジュゲートは、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ）、エルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ）、スニチニブ（ＳＵＴＥＮＴ）、ラパタニブ、バンデタニブ（ＺＡＣＴＩＭＡ）、ＡＥＥ７８８、ＣＩ−１０３３、セディラニブ（ＲＥＣＥＮＴＩＮ）、ソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ）、及びパゾパニブ（ＧＷ７８６０３４Ｂ）から成る群から選択されるタンパク質キナーゼ阻害剤との併用で投与される。いくつかの実施形態では、追加の治療薬はｍＴＯＲ阻害剤を含む。
【０４３９】
本明細書に記載されている方法の特定の実施形態では、追加の治療薬はがん幹細胞経路を阻害する小分子である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤はＮｏｔｃｈ経路の阻害剤である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤はＷｎｔ経路の阻害剤である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤はＢＭＰ経路の阻害剤である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤はＨｉｐｐｏ経路の阻害剤である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤はｍＴＯＲ／ＡＫＲ経路の阻害剤である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤はＲＳＰＯ／ＬＧＲ経路の阻害剤である。
【０４４０】
本明細書に記載されている方法のいくつかの実施形態では、追加の治療薬は抗体のような生体分子を含む。例えば、治療は、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２／ＥｒｂＢ２、及び／またはＶＥＧＦに結合する抗体を含むが、これらに限定されない腫瘍関連抗原に対する抗体との本発明の結合剤・薬物コンジュゲートの併用投与を含むことができる。特定の実施形態では、追加の治療薬はがん幹細胞マーカーに特異的な抗体である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤はＮｏｔｃｈ経路の成分を結合する抗体である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤はＷｎｔ経路の成分を結合する抗体である。特定の実施形態では、追加の治療薬はがん幹細胞経路を阻害する抗体である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤はＮｏｔｃｈ経路の阻害剤である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤はＷｎｔ経路の阻害剤である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤はＢＭＰ経路の阻害剤である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤はベータ・カテニンシグナル伝達を阻害する抗体である。特定の実施形態では、追加の治療剤は、血管新生阻害剤である抗体（例えば、抗ＶＥＧＦまたはＶＥＧＦ受容体抗体）である。特定の実施形態では、追加の治療剤は、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ）、ラムシルマブ、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ）、ペルツズマブ（ＯＭＮＩＴＡＲＧ）、パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ）、ニモツズマブ、ザルツムマブ、またはセツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ）である。
【０４４１】
本明細書に記載されている方法のいくつかの実施形態では、追加の治療剤は免疫応答を調節する抗体である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＬＡＧ−３抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＴＩＭ−３抗体、または抗ＴＩＧＩＴ抗体である。
【０４４２】
さらに、本明細書に記載されている結合剤・薬物コンジュゲートによる治療は、１以上のサイトカイン（例えば、リンホカイン、インターロイキン、腫瘍壊死因子、及び／または  成長因子）のような他の生体分子による併用療法を含むことができ、または腫瘍の外科的除去、がん細胞の除去、もしくは主治医が必要とみなすその他の治療法を伴うことができる。いくつかの実施形態では、追加の治療薬は免疫応答刺激剤である。
【０４４３】
本明細書に記載されている方法のいくつかの実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートは、アドレノメデュリン（ＡＭ）、アンギオポイエチン（Ａｎｇ）、ＢＭＰ、ＢＤＮＦ、ＥＧＦ、エリスロポイエチン（ＥＰＯ）、ＦＧＦ、ＧＤＮＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＧＤＦ９、ＨＧＦ、ＨＤＧＦ、ＩＧＦ、遊走刺激因子、ミオスタチン（ＧＤＦ−８）、ＮＧＦ、ニュートロフィン、ＰＤＧＦ、トロンボポイエチン、ＴＧＦ−ａ、ＴＧＦ−ｂ、ＴＮＦ−ａ、ＶＥＧＦ、Ｐ１ＧＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、及びＩＬ−１８から成る群から選択される増殖因子と併用することができる。
【０４４４】
本明細書に記載されている方法のいくつかの実施形態では、追加の治療薬は免疫応答刺激剤である。いくつかの実施形態では、免疫応答刺激剤は、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、インターロイキン３（ＩＬ−３）、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）、インターロイキン１（ＩＬ−１）、インターロイキン２（ＩＬ−２）、Ｂ７−１（ＣＤ８０）、Ｂ７−２（ＣＤ８６）、４−１ＢＢリガンド、抗−ＣＤ３抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＬＡＧ−３抗体、及び抗ＴＩＭ−３抗体から成る群から選択される。
【０４４５】
本明細書に記載されている方法のいくつかの実施形態では、免疫応答刺激剤は、ＰＤ−１活性のモジュレーター、ＰＤ−Ｌ２活性のモジュレーター、ＣＴＬＡ−４活性のモジュレーター、ＣＤ２８活性のモジュレーター、ＣＤ８０活性のモジュレーター、ＣＤ８６活性のモジュレーター、４−１ＢＢ活性のモジュレーター、ＯＸ４０活性のモジュレーター、ＫＩＲ活性のモジュレーター、Ｔｉｍ−３活性のモジュレーター、ＬＡＧ３活性のモジュレーター、ＣＤ２７活性のモジュレーター、ＣＤ４０活性のモジュレーター、ＧＩＴＲ活性のモジュレーター、ＴＩＧＩＴ活性のモジュレーター、ＣＤ２０活性のモジュレーター、ＣＤ９６活性のモジュレーター、ＩＤＯ１活性のモジュレーター、サイトカイン、ケモカイン、インターフェロン、インターロイキン、リンホカイン、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）ファミリーのメンバー、及び免疫刺激性オリゴヌクレオチドから成る群から選択される。
【０４４６】
本明細書に記載されている方法のいくつかの実施形態では、免疫応答刺激剤は、ＰＤ−１アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ２アンタゴニスト、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト、ＣＤ８０アンタゴニスト、ＣＤ８６アンタゴニスト、ＫＩＲアンタゴニスト、Ｔｉｍ−３アンタゴニスト、ＬＡＧ３アンタゴニスト、ＴＩＧＩＴアンタゴニスト、ＣＤ２０アンタゴニスト、ＣＤ９６アンタゴニスト、及び／またはＩＤＯ１アンタゴニストから成る群から選択される。
【０４４７】
本明細書に記載されている方法のいくつかの実施形態では、ＰＤ−１アンタゴニストはＰＤ−１に特異的に結合する抗体である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１に結合する抗体は、ＫＥＹＴＲＵＤＡ（ＭＫ−３４７５）、ピジリズマブ（ＣＴ−０１１）、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ、ＢＭＳ−９３６５５８、ＭＤＸ−１１０６）、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ−５１４）、ＲＥＧＮ２８１０、ＢＧＢ−Ａ３１７、ＰＤＲ−００１、またはＳＴＩ−Ａ１１１０である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１を結合する抗体は、ＰＣＴ公開ＷＯ２０１４／１７９６６４に記載されており、例えば、ＡＰＥ２０５８、ＡＰＥ１９２２、ＡＰＥ１９２３、ＡＰＥ１９２４、ＡＰＥ１９５０、またはＡＰＥ１９６３として同定される抗体、またはこれらの抗体のいずれかのＣＤＲ領域を含有する抗体である。他の実施形態では、ＰＤ−１アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２、例えば、ＡＭＰ−２２４を含む融合タンパク質である。他の実施形態では、ＰＤ−１アンタゴニストは、ペプチド阻害剤、例えば、ＡＵＮＰ−１２である。
【０４４８】
いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ−４アンタゴニストはＣＴＬＡ−４を特異的に結合する抗体である。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ−４を結合する抗体は、イピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ）またはトレメリムマブ（ＣＰ−６７５，２０６）である。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ−４アンタゴニストは、ＣＴＬＡ−４融合タンパク質、例えば、ＫＡＨＲ−１０２である。
【０４４９】
いくつかの実施形態では、ＬＡＧ３アンタゴニストは、ＬＡＧ３を特異的に結合する抗体である。いくつかの実施形態では、ＬＡＧ３を結合する抗体は、ＩＭＰ７０１、ＩＭＰ７３１、ＢＭＳ−９８６０１６、ＬＡＧ５２５、及びＧＳＫ２８３１７８１である。いくつかの実施形態では、ＬＡＧ３アンタゴニストは可溶性ＬＡＧ３受容体、例えば、ＩＭＰ３２１を含む。
【０４５０】
いくつかの実施形態では、ＫＩＲアンタゴニストはＫＩＲを特異的に結合する抗体である。いくつかの実施形態では、ＫＩＲを結合する抗体はリリルマブである。
【０４５１】
いくつかの実施形態では、免疫応答刺激剤は、ＣＤ２８アゴニスト、４−１ＢＢアゴニスト、ＯＸ４０アゴニスト、ＣＤ２７アゴニスト、ＣＤ８０アゴニスト、ＣＤ８６アゴニスト、ＣＤ４０アゴニスト、及びＧＩＴＲアゴニストから成る群から選択される。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストにはＯＸ４０リガンド、またはそのＯＸ４０結合部分が挙げられる。例えば、ＯＸ４０アゴニストはＭＥＤＩ６３８３であってもよい。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストはＯＸ４０を特異的に結合する抗体である。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０を結合する抗体は、ＭＥＤＩ６４６９、ＭＥＤＩ０５６２、またはＭＯＸＲ０９１６（ＲＧ７８８８）である。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、ＯＸ４０リガンドを発現させることができるベクター（例えば、発現ベクターまたはアデノウイルスのようなウイルス）である。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０発現ベクターは、デルタ−２４−ＲＧＤＯＸまたはＤＮＸ２４０１である。
【０４５２】
いくつかの実施形態では、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストはアンチカリンのような結合分子である。いくつかの実施形態では、アンチカリンはＰＲＳ−３４３である。いくつかの実施形態では、４−１ＢＢアゴニストは、４−１ＢＢを特異的に結合する抗体である。いくつかの実施形態では、４−１ＢＢを結合する抗体は、ＰＦ−２５６６（ＰＦ−０５０８２５６６）またはウレルマブ（ＢＭＳ−６６３５１３）である。
【０４５３】
いくつかの実施形態では、ＣＤ２７アゴニストはＣＤ２７を特異的に結合する抗体である。いくつかの実施形態では、ＣＤ２７を結合する抗体はバリルマブ（ＣＤＸ−１１２７）である。
【０４５４】
いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲアゴニストはＧＩＴＲリガンドまたはそのＧＩＴＲ結合部分を含む。いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲアゴニストはＧＩＴＲを特異的に結合する抗体である。いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲを結合する抗体はＴＲＸ５１８、ＭＫ−４１６６、またはＩＮＢＲＸ−１１０である。
【０４５５】
いくつかの実施形態では、免疫応答刺激剤には、ケモカイン、インターフェロン、インターロイキン、リンホカイン、及び腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）ファミリーのメンバーのようなサイトカインが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、免疫応答刺激剤は、ＣｐＧジヌクレオチドのような免疫刺激性オリゴヌクレオチドを含む。
【０４５６】
いくつかの実施形態では、免疫応答刺激剤には、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＣＤ２８抗体、抗ＣＤ８０抗体、抗ＣＤ８６抗体、抗４−１ＢＢ抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｔｉｍ−３抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＧＩＴＲ抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ９６抗体、または抗ＩＤＯ１抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０４５７】
特定の実施形態では、本明細書で開示されている結合剤・薬物コンジュゲートは、単独で、または放射線療法と関連して使用されてもよい。
【０４５８】
特定の実施形態では、本明細書で開示されている結合剤・薬物コンジュゲートは、単独で、または標的療法と関連して使用されてもよい。標的療法の例には、ホルモン療法、シグナル伝達阻害剤（例えば、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ）やエルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ）のようなＥＧＦＲ阻害剤）；ＨＥＲ２阻害剤（例えば、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）及びペルツズマブ（Ｐｅｒｊｅｔａ））；ＢＣＲ−ＡＢＬ阻害剤（例えば、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ）及びダサチニブ（Ｓｐｒｙｃｅｌ））；ＡＬＫ阻害剤（例えば、クリゾチニブ（ＸＡｌｋｏｒｉ）やセリチニブ（ＺｙｋＡｄｉＡ））；ＢＲＡＦ阻害剤（例えば、ベムラフェニブ（Ｚｅｌｂｏｒａｆ）及びダブラフェニブ（Ｔａｆｉｎｌａｒ））、遺伝子発現モジュレーター、アポトーシス誘導物質（例えば、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ）及びカルフィルゾミブ（Ｋｙｐｒｏｌｉｓ））、血管新生阻害剤（例えば、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ）及びラムシルマブ（Ｃｙｒａｍｚａ））、毒素に付着したモノクローナル抗体（例えば、ブレンツキシマブベドチン（Ａｄｃｅｔｒｉｓ）及びアドトラスツズマブエムタンシン（Ｋａｄｃｙｌａ））が挙げられる。
【０４５９】
特定の実施形態では、本発明の結合剤・薬物コンジュゲートは、抗癌治療剤と、または免疫調節受容体阻害剤、例えば、受容体に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片のような免疫調節薬と併用して使用されてもよい。
【０４６０】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、Ｔｉｍ−３経路アンタゴニストと関連している。
【０４６１】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、ビスタ経路アンタゴニストと関連している。
【０４６２】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、ＢＴＬＡ経路アンタゴニストと関連している。
【０４６３】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、ＬＡＧ−３経路アンタゴニストと関連している。
【０４６４】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、ＴＩＧＩＴ経路アンタゴニストと関連している。
【０４６５】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、抗ＰＤＬ１抗体と関連している。
【０４６６】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＳＢ００１０７１８ＣまたはＭＰＤＬ３２８０Ａ）と関連している。
【０４６７】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗ＣＴＬＡ４抗体と関連している。
【０４６８】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗ＣＳ１抗体と関連している。
【０４６９】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３抗体と関連している。
【０４７０】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗ＣＤ１３７抗体と関連している。
【０４７１】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗ＧＩＴＲ抗体と関連している。
【０４７２】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗ＰＤ−Ｌ２抗体と関連している。
【０４７３】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗ＩＬＴ１抗体と関連している。
【０４７４】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗ＩＬＴ２抗体と関連している。
【０４７５】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗ＩＬＴ３抗体と関連している。
【０４７６】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗ＩＬＴ４抗体と関連している。
【０４７７】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗ＩＬＴ５抗体と関連している。
【０４７８】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗ＩＬＴ６抗体と関連している。
【０４７９】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗ＩＬＴ７抗体と関連している。
【０４８０】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗ＩＬＴ８抗体と関連している。
【０４８１】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗ＣＤ４０抗体と関連している。
【０４８２】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗ＯＸ４０抗体と関連している。
【０４８３】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗ＫＩＲ２ＤＬ１抗体と関連している。
【０４８４】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗ＫＩＲ２ＤＬ２／３抗体と関連している。
【０４８５】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗ＫＩＲ２ＤＬ４抗体と関連している。
【０４８６】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ抗体と関連している。
【０４８７】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ抗体と関連している。
【０４８８】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗ＫＩＲ３ＤＬ１抗体と関連している。
【０４８９】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体と関連している。
【０４９０】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗ＫＩＲ３ＤＬ３抗体と関連している。
【０４９１】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗ＮＫＧ２Ａ抗体と関連している。
【０４９２】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗ＮＫＧ２Ｃ抗体と関連している。
【０４９３】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗ＩＣＯＳ抗体と関連している。
【０４９４】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗ＳＩＲＰ.α抗体と関連している。
【０４９５】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗ＣＤ４７抗体と関連している。
【０４９６】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗４−１  ＢＢ抗体と関連している。
【０４９７】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗ＩＬ−１０抗体と関連している。
【０４９８】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗ＴＳＬＰ抗体と関連している。
【０４９９】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、ＩＬ−１０またはＰＥＧ化ＩＬ−１０と関連している。
【０５００】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗ＡＰＲＩＬ抗体と関連している。
【０５０１】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、好ましくは医薬組成物の一部として、抗ＣＤ２７抗体と関連している。
【０５０２】
本発明の一実施形態では、本発明の結合剤・薬物コンジュゲートは、好ましくは医薬組成物の一部として、ＳＴＩＮＧアゴニストと関連している。環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）環状ジＡＭＰ（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ及び他の細菌によって産生される）及びその類似体環状ジＧＭＰ及び環状ＧＭＰ−ＡＭＰは、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）として宿主細胞によって認識され、それらはインターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）として知られる病原体認識受容体（ＰＲＲ）に結合する。ＳＴＩＮＧは、宿主哺乳動物細胞の細胞質にあるアダプタータンパク質であり、ＴＡＮＫ結合キナーゼ（ＴＢＫ１）−ＩＲＦ３及びＮＦ−κＢシグナル伝達軸を活性化し、ＩＦＮ−β及び自然免疫を強力に活性化するその他の遺伝子産物の誘導を生じる。ＳＴＩＮＧは、細胞内病原体による感染を感知し、それに応じて、ＳＴＩＮＧアゴニストと関連する本発明のＩＦＮ−βの産生を誘導し、抗原特異的ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞と同様に病原体特異的抗体の双方から成る適応型防御病原体特異的免疫応答の発生につながる、宿主の細胞質監視経路の構成要素であることが今や認識されている。米国特許第７，７０９，４５８号及び同第７，５９２，３２６号；ＰＣＴ公開番号ＷＯ２００７／０５４２７９、ＷＯ２０１４／０９３９３６、ＷＯ２０１４／１７９３３５、ＷＯ２０１４／１８９８０５、ＷＯ２０１５／１８５５６５、ＷＯ２０１６／０９６１７４、ＷＯ２０１６／１４５１０２、ＷＯ２０１７／０２７６４５、ＷＯ２０１７／０２７６４６、及びＷＯ２０１７／０７５４７７（そのすべてが参照によって組み込まれる）；及びＹａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１８：５６３１−４、２００８．
【０５０３】
本発明の一実施形態では、本発明の結合剤・薬物コンジュゲートは、１以上の所定の抗原に対する免疫応答を刺激することを目的とした１以上のワクチンと併せて投与される。抗原（複数可）は、個体に直接投与されてもよく、または、例えば、自己もしくは同種異系であってもよい腫瘍細胞ワクチン（例えば、ＧＶＡＸ）、樹状細胞ワクチン、ＤＮＡワクチン、ＲＮＡワクチン、ウイルス系ワクチン、細菌ワクチンもしくは酵母ワクチン（例えば、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓまたはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）等から個体内で発現させてもよい。例えば、Ｇｕｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１３；１１９：４２１−４７５；Ｏｂｅｉｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｍｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．２０１５，Ａｕｇｕｓｔ；４２（４）：５４９−５６１．を参照のこと。  本発明で使用されてもよい標的抗原の例は、以下の表４に列挙されている。標的抗原はまた、表に列挙された抗原の免疫学的に活性がある部分を含む断片または融合ポリペプチドであってもよい。このリストは限定的であると意味するものではない。
【０５０４】
本発明の一実施形態では、本発明の結合剤・薬物コンジュゲートは、カソピタント（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ネツピタント（ＭＧＩ−Ｈｅｌｓｉｎｎ）及び他のＮＫ−１受容体アンタゴニスト、パロノセトロン（ＭＧＩ  ＰｈａｒｍａによりＡｌｏｘｉとして販売）、アプレピタント（Ｍｅｒｃｋ  ａｎｄ  Ｃｏ．；Ｒａｈｗａｙ，Ｎ．Ｊ．によりＥｍｅｎｄとして販売）、ジフェンヒドラミン（Ｐｆｉｚｅｒ；Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．によりＢｅｎａｄｒｙｌとして販売）、ヒドロキシジン（Ｐｆｉｚｅｒ；Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．によりＡｔａｒａｘとして販売）、メトクロプラミド（ＡＨ  Ｒｏｂｉｎｓ  Ｃｏ，；Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，Ｖａ．によりＲｅｇｌａｎとして販売）、ロラゼパム（Ｗｙｅｔｈ；Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｎ．Ｊ．によりＡｔｉｖａｎとして販売）、アルプラゾラム（Ｐｆｉｚｅｒ；Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．によりＸａｎａｘとして販売）、ハロペリドール（Ｏｒｔｈｏ−ＭｃＮｅｉｌ；Ｒａｒｉｔａｎ、ＮＪによりＨａｌｄｏｌとして販売）、ドロペリドール（Ｉｎａｐｓｉｎｅ）、ドロナビノール（Ｓｏｌｖａｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．；Ｍａｒｉｅｔｔａ，Ｇａ．によりＭａｒｉｎｏｌとして販売）、デキサメタゾン（Ｍｅｒｃｋ  ａｎｄ  Ｃｏ．；Ｒａｈｗａｙ，Ｎ．Ｊ．によりＤｅｃａｄｒｏｎとして販売；）、メチルプレドニゾロン（Ｐｆｉｚｅｒ；Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．によりＭｅｄｒｏｌとして販売）、プロクロルペラジン（Ｇｌａｘｏｓｍｉｔｈｋｌｉｎｅ；Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｉａｎｇｌｅ  Ｐａｒｋ，Ｎ．Ｃ．によりＣｏｍｐａｚｉｎｅとして販売）、グラニセトロン（Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ  Ｉｎｃ．；Ｎｕｔｌｅｙ，Ｎ．Ｊ．によりＫｙｔｒｉｌとして販売）、オンダンセトロン（Ｇｌａｘｏｓｍｉｔｈｋｌｉｎｅ；Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｉａｎｇｌｅ  Ｐａｒｋ，Ｎ．Ｃ．によりＺｏｆｒａｎとして販売）、ドラセトロン（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ；Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．によりＡｎｚｅｍｅｔとして販売）、トロピセトロン（Ｎｏｖａｒｔｉｓ；Ｅａｓｔ  Ｈａｎｏｖｅｒ，Ｎ．Ｊ．によりＮａｖｏｂａｎとして販売）を含むが、これらに限定されない１以上の制吐剤と関連して投与される。
【０５０５】
がん治療の他の副作用には、赤血球と白血球の欠乏症が挙げられる。したがって、本発明の一実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートは、例えば、フィルグラスチム、ＰＥＧ−フィルグラスチム、エリスロポエチン、エポエチンアルファまたはダルベポエチンアルファのようなそのような欠乏症を治療または予防する薬剤と関連して投与される。
【０５０６】
本発明の一実施形態では、本発明の結合剤・薬物コンジュゲートは抗癌放射線療法と関連して投与される。例えば、本発明の一実施形態では、放射線療法は、外部ビーム療法（ＥＢＴ）であり、高エネルギーＸ線のビームを腫瘍の位置に送達するための方法である。ビームは患者の外側で（例えば、線形加速器によって）生成され、腫瘍部位に向けられる。これらのＸ線はがん細胞を破壊することができ、慎重な治療計画により周囲の正常組織が見逃されるようにする。患者の体内には放射線源は配置されない。本発明の一実施形態では、放射線療法は陽子線療法であり：Ｘ線の代わりに陽子で病変組織に衝撃を与える一種の原体療法である。本発明の一実施形態では、放射線療法は、原体外部ビーム放射線療法であり：高度な技術を使用して放射線療法を個人の体の構造に合わせて調整する手順である。本発明の一実施形態では、放射線療法は小線源療法であり：ふつう、ある領域に追加の線量またはブーストの放射線を与えるために採用される、体内での放射性物質の一時的な配置である。
【０５０７】
本明細書に記載されている方法の特定の実施形態では、治療は、抗ウイルス療法と併用した本発明の結合剤・薬物コンジュゲートの投与を含む。結合剤・薬物コンジュゲートによる治療は、抗ウイルス療法の投与の前に、それと同時、またはその後で行うことができる。併用療法で使用される抗ウイルス薬は、対象が感染しているウイルスに左右されるであろう。
【０５０８】
併用投与は、単一医薬製剤での、もしくは別々の製剤を用いた同時投与、またはいずれかの順で、しかし、活性剤すべてがその生物活性を同時に発揮できるような時間内での連続投与を含むことができる。
【０５０９】
本明細書に記載されている結合剤・薬物コンジュゲートと少なくとも１つの追加の治療剤との組み合わせは、任意の順序でまたは同時に投与されてもよいことが十分に理解されるであろう。いくつかの実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートは、第２の治療剤による治療を以前に受けたことがある患者に投与されるであろう。特定の他の実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲート及び第２の治療剤は実質的に同時にまたは同時に投与されるであろう。例えば、対象は第２の治療剤（例えば、化学療法）による一連の治療を受けている間に、結合剤・薬物コンジュゲートを与えられてもよい。特定の実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートは第２の治療剤による治療の１年以内に投与されるであろう。特定の代替実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートは第２の治療剤による任意の治療の１０、８、６、４、または２ヵ月以内に投与されるであろう。特定の他の実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートは第２の治療剤による任意の治療の４、３、２、または１週間以内に投与されるであろう。いくつかの実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートは第２の治療剤による任意の治療の５、４、３、２、または１日以内に投与されるであろう。さらに、２つ（またはそれ以上）の薬剤または治療が、数時間または数分以内に（すなわち、実質的に同時に）対象に投与されてもよいことが十分に理解されるであろう。
【０５１０】
疾患の治療については、本発明の結合剤・薬物コンジュゲートの適切な投与量は、すべて主治医の裁量で、治療される疾患の種類、疾患の重症度及び経過、疾患の応答性、結合剤・薬物コンジュゲートが治療目的で投与されるのか、または予防目的で投与されるのか、以前の治療法、患者の既往歴、等に左右される。結合剤・薬物コンジュゲートは、１回投与することができ、または数日から数ヵ月続く一連の治療にわたって、または治癒が達成される、もしくは病状の縮小（例えば、腫瘍サイズの縮小）が達成されるまで投与することができる。最適な投薬スケジュールは、患者の体内での薬物蓄積の測定値から計算することができ、個々の薬剤の相対的な効力に応じて異なるであろう。投与する医師は、最適な投与量、投与方法、及び反復率を決定することができる。特定の実施形態では、投与量は体重の０．０１μｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、体重の０．１μｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、体重の１μｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、体重の１ｍｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、体重の１ｍｇ〜８０ｍｇ／ｋｇ、体重の１０ｍｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、体重の１０ｍｇ〜７５ｍｇ／ｋｇ、または体重の１０ｍｇ〜５０ｍｇ／ｋｇである。特定の実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートの投与量は体重の約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートの投与量は体重の約０．１ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートの投与量は体重の約０．２５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートの投与量は体重の約０．５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートの投与量は体重の約１ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートの投与量は体重の約１．５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートの投与量は体重の約２ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートの投与量は体重の約２．５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートの投与量は体重の約５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートの投与量は体重の約７．５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートの投与量は体重の約１０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートの投与量は体重の約１２．５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートの投与量は体重の約１５ｍｇ／ｋｇである。特定の実施形態では、投与量は１日１回以上、毎週、毎月、または毎年与えることができる。特定の実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートは、毎週１回、２週間に１回、３週間に１回、または４週間に１回与えられる。
【０５１１】
いくつかの実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートは初回のさらに高い「負荷」用量、続いて１回以上のさらに低い用量で投与されてもよい。いくつかの実施形態では、投与の頻度もまた変化してもよい。いくつかの実施形態では、投薬計画は、初回用量を投与し、続いて週に１回、２週間に１回、３週間に１回、または毎月１回追加用量（または「維持」用量）を投与することを含んでもよい。例えば、投薬計画は、初回負荷用量を投与することと、それに続く、例えば、初回用量の半分の毎週の維持用量を投与することとを含んでもよい。または、投薬計画は、初回負荷用量を投与することと、それに続く、例えば、２週間ごとに初回用量の半分の維持用量を投与することとを含んでもよい。または、投薬計画は、３週間に３回、初回用量を投与することと、それに続いて、例えば、２週間ごとに同じ量の維持用量を投与することとを含んでもよい。
【０５１２】
当業者に知られているように、任意の治療剤の投与は副作用及び／または毒性をもたらしてもよい。場合によっては、副作用及び／または毒性は非常に深刻であるため、特定の薬剤の治療有効用量での投与を不可能にする。場合によっては、薬物療法を中止する必要があり、他の薬剤が試されてもよい。しかしながら、同じ治療クラスの多くの薬剤は同様の副作用及び／または毒性を示すことが多いということは、患者が治療を中止しなければならない、または可能であれば、治療剤に関連する不快な副作用を患うことを意味する。
【０５１３】
いくつかの実施形態では、投薬スケジュールは特定の数の投与または「サイクル」に制限されてもよい。いくつかの実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートは、３、４、５、６、７、８、またはそれ以上のサイクルで投与される。例えば、結合剤・薬物コンジュゲートは２週間ごとに６サイクル投与され、結合剤・薬物コンジュゲートは３週間ごとに６サイクル投与され、結合剤・薬物コンジュゲートは２週間ごとに４サイクル投与され、結合剤・薬物コンジュゲートは３週間ごとに４サイクルなどで投与される。投薬スケジュールは、当業者によって決定され、その後修正され得る。
【０５１４】
したがって、本発明は、結合剤・薬物コンジュゲート、化学療法剤、等の投与に関連する副作用及び／または毒性を軽減してもよい１以上の薬剤を投与するための間欠投与戦略を使用することを含む、本明細書に記載されているポリペプチドまたは薬剤を対象に投与する方法を提供する。いくつかの実施形態では、ヒト対象にてがんを治療する方法は、治療有効用量の結合剤・薬物コンジュゲートを治療有効用量の化学療法剤と組み合わせて対象に投与することを含み、その際、薬剤の一方または双方は、間欠投与戦略に従って投与される。いくつかの実施形態では、間欠投与戦略は、対象に結合剤・薬物コンジュゲートの初回用量を投与することと、結合剤・薬物コンジュゲートのその後の用量を約２週間に１回投与することとを含む。いくつかの実施形態では、間欠投与戦略は、対象に結合剤・薬物コンジュゲートの初回用量を投与することと、結合剤・薬物コンジュゲートのその後の用量を約３週間に１回投与することとを含む。いくつかの実施形態では、間欠投与戦略は、対象に結合剤・薬物コンジュゲートの初回用量を投与することと、結合剤・薬物コンジュゲートのその後の用量を約４週間に１回投与することとを含む。いくつかの実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートは間欠投与戦略を使用して投与され、化学療法剤は毎週投与される。
【０５１５】
特定の実施形態では、本発明はまた、本発明の結合剤・薬物コンジュゲートを使用して対象を治療する方法も提供し、その際、対象はウイルス感染に罹患している。一実施形態では、ウイルス感染は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、肝炎ウイルス（Ａ、Ｂ、またはＣ）、ヘルペスウイルス（例えば、ＶＺＶ、ＨＳＶ−Ｉ、ＨＡＶ−６、ＨＳＶ−ＩＩ、及びＣＭＶ、エプスタインバーウイルス）、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、フラビウイルス、エコーウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルス、コロナウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ムンプスウイルス、ロタウイルス、はしかウイルス、ルベラウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、ＨＴＬＶウイルス、デングウイルス、パピローマウイルス、軟属腫ウイルス、ポリオウイルス、レイビーウイルス、ＪＣウイルスまたはアルボウイルス脳炎ウイルスから成る群から選択されるウイルスによる感染である。
【０５１６】
一実施形態では、本発明は、本発明の結合剤・薬物コンジュゲートを使用して対象を治療する方法を提供し、その際、対象は細菌感染症に罹患している。一実施形態では、細菌感染は、クラミジア、リケッチア細菌、マイコバクテリア、ブドウ球菌、連鎖球菌、肺炎球菌、髄膜球菌及びゴノコッカス、クレブシエラ、プロテウス、セラチア、シュードモナス、レジオネラ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、ｂａｃｉｌｌｉ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒｉｃｉｓ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒｏｍａｔｏｓｉｓ、及びＢｏｒｒｉｅｌｌａから成る群から選択される細菌による感染である。
【０５１７】
一実施形態では、本発明は、本発明の結合剤・薬物コンジュゲートを使用して対象を治療する方法を提供し、その際、対象は真菌感染症に罹患している。一実施形態では、真菌感染症は、Ｃａｎｄｉｄａ（ａｌｂｉｃａｎｓ、ｋｒｕｓｅｉ、ｇｌａｂｒａｔａ、ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ等）、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ（ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、ｎｉｇｅｒ等）、Ｇｅｎｕｓ  Ｍｕｃｏｒａｌｅｓ（ｍｕｃｏｒ、ａｂｓｉｄｉａ、ｒｈｉｚｏｐｕｓ）、Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ  ｓｃｈｅｎｋｉｉ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ及びＨｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍから成る群から選択される真菌による感染症である。
【０５１８】
一実施形態では、本発明は、本発明の結合剤・薬物コンジュゲートを使用して対象を治療する方法を提供し、その際、対象は寄生虫感染症に罹患している。一実施形態では、寄生虫感染症は、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、Ｂａｌａｎｔｉｄｉｕｍ  ｃｏｌｉ、Ｎａｅｇｌｅｒｉａ  ｆｏｗｌｅｒｉ、Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ、Ｇｉａｒｄｉａ  ｌａｍｂｉａ、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｃａｒｉｎｉｉ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ、Ｂａｂｅｓｉａ  ｍｉｃｒｏｔｉ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ及びＮｉｐｐｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓから成る群から選択される寄生虫による感染である。
【０５１９】
ａ．ＰＧＥ２阻害剤
特定の実施形態では、結合剤・薬物コンジュゲートは、ＰＧＥ２産生を阻害する薬剤と併用して投与される。ＰＧＥ２合成の過程には、細胞膜からアラキドン酸を動員するホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２）ファミリーのメンバー、アラキドン酸をプロスタグランジンＨ２（ＰＧＨ２）に変換するシクロオキシゲナーゼ（構成的に活性があるＣｏｘ１及び誘導性のＣｏｘ２）、及びＰＧＥ２の最終製剤に必要であるプロスタグランジンＥシンターゼ（ＰＧＥＳ）が関与する。ＰＧＥ２合成の速度とその結果生じる炎症過程は、ＡＡの局所的な利用可能性のような追加の要因によって影響を受け得る一方で、ほとんどの生理的状態ではＰＧＥ２合成の速度はＣｏｘ２の局所的な発現と活性によって制御される。
【０５２０】
他の実施形態では、主題の結合剤・薬物コンジュゲートはＰＧＥ２分解を促進する薬剤と併用して投与される。ＰＧＥ２分解の速度が１５−ヒドロキシプロスタグランジンデヒドロゲナーゼ（１５−ＰＧＤＨ）によって制御されるということは、ＰＧＥ２合成の速度に加えて、ＰＧＥ２崩壊の速度も、主題の結合剤−薬物コンジュゲートの併用における治療的介入の標的を構成することを示唆している。
【０５２１】
さらに他の実施形態では、主題の結合剤・薬物コンジュゲートはＰＧＥ２応答性を低下させる薬剤と併用して投与される。４つの異なるＰＧＥ２受容体は、ＥＰ１、ＥＰ２、ＥＰ３、及びＥＰ４である。２つのＧ共役受容体、ＥＰ２及びＥＰ４を介したシグナル伝達は、アデニル酸シクラーゼによって標的とされるｃＡＭＰ／ＰＫＡ／ＣＲＥＢ経路が介在して、ＰＧＥ２の抗炎症及び抑制性の活性の優勢な態様に介在する。ＥＰ２は主にｃＡＭＰ依存性にシグナルを送ると考えられている一方で、ＥＰ４はＰＩ３Ｋ依存性のＥＲＫ１／２経路も活性化する。しかしながら、ＥＰ２及びＥＰ４の双方がＧＳＫ３／βカテニン経路を活性化することが示されている。特発性肺線維症の患者で観察されるように、ＥＰ２の発現及びＰＧＥ２に対する結果として生じる応答性は過剰メチル化によって抑制することができる。これらの観察は、ＰＧＥ２産生及びその分解の調節に加えて、個々のＰＧＥ２受容体の発現レベルでのＰＧＥ２応答性の調節もまた、ヒトの疾患の病態形成に寄与し、それらの治療に利用できる可能性を高める。裏付けとして、ＥＰ２、ＥＰ３、またはＥＰ４シグナル伝達に優先的に影響を与える合成阻害剤の使用により、ＰＧＥ２活性のさまざまな態様の差別的な抑制が可能になる。
【０５２２】
ＰＧＥ２の応答性を低下させる薬剤には、プロスタグランジン（ＰＧ）のシグナル伝達阻害剤も含まれる。プロスタグランジンは多数の受容体を介してシグナルを伝達し、主要な免疫抑制効果にはアデニル酸シクラーゼの活性化が介在し、結果として細胞内環状（ｃ）ＡＭＰ、ＰＫＡの上昇、及び  ＰＫＡ／ＣＲＥＢ経路の下流の活性化を生じる。
【０５２３】
ＰＧの応答性に対する別のレベルの干渉には、ＰＧ受容体へのそれらの結合に対する干渉が挙げられる。ＰＧＥ２の場合、２つの重要なｃＡＭＰ活性化受容体はＥＰ２とＥＰ４であり、これらには多くの特異的阻害剤が存在する。
【０５２４】
プロスタグランジンまたは他の因子によって誘導されるｃＡＭＰレベルの上昇は、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ；現在知られている６種類、細胞内ｃＡＭＰのレベルを低下させるＰＤＥ１〜ＰＤＥ５及びＰＤＥ１０）によって阻止することができる。ＰＤＥは、ホスホジエステラーゼ阻害剤によって制御することができ、ホスホジエステラーゼ阻害剤には、キサンチン（カフェイン、アミノフィリン、ＩＢＭＸ、ペントキシフィリン、テオブロミン、テオフィリン、またはパラキサンチン）のような物質が挙げられ、それらはすべて細胞内ｃＡＭＰのレベルを高め、且つビンポセチン、シロスタゾール、イナミノン、シロスタゾール、メセンブリン、ロリプラム、イブジラスト、ドロタベリン、ピクラミラスト、シルダフェニル、タダラフィル、ベルデナフィル、またはパパベリンを含むさらに選択的な合成の及び天然の因子のレベルを高める。
【０５２５】
さらに、ＰＧＥ２シグナル伝達（またはベータアドレナリン作動性アゴニストのヒスタミンのような他のｃＡＭＰ上昇因子のシグナル伝達）への干渉は、ＰＫＡまたはＣＲＥＢのようなｃＡＭＰの下流シグナルの阻害によって達成することができる。
【０５２６】
（ａ）シクロオキシゲナーゼ阻害剤
特定の好ましい実施形態では、主題の結合剤・薬物コンジュゲートは１以上のプロスタグランジン（ＰＧ）合成阻害剤と併用して投与される。一般にＰＧの合成または特定の種類のＰＧの合成を阻害する因子。ＰＧ合成阻害剤には、ＰＧ合成経路の２つの重要な酵素であるＣｏｘ−１とＣｏｘ−２の非選択的阻害剤、及びＣｏｘ−２にさらに特異的で毒性が低いと考えられているＣｏｘ−２の選択的阻害剤が挙げられる。非選択的ＰＧ阻害剤の例にはアスピリン、インドメタシン、またはイブプロフェン（Ａｄｖｉｌ、Ｍｏｔｒｉｎ）が挙げられる。Ｃｏｘ−２選択的阻害剤の例には、セレコキシブ（Ｃｅｌｅｂｒｅｘ）及びロフェコキシブ（Ｖｉｏｘｘ）が挙げられる。Ｃｏｘ−１特異的阻害剤の例はスリンダク（Ｃｌｉｎｏｒｉｌ）である。プロスタグランジン合成を抑制する他の薬物には、ステロイド（例：ヒドロコルチゾン、コルチゾール、プレドニゾン、またはデキサメタゾン）及びアセトアミノフェン（Ｔｙｌｅｎｏｌ、Ｐａｎａｄｏｌ）が挙げられ、これらは抗炎症薬、解熱薬、及び鎮痛薬として一般的に使用されている。最も一般的に使用される選択的Ｃｏｘ２阻害剤の例には、セレコキシブ、アレコキシブ、バルデコキシブ、及びロフェコキシブが挙げられる。
【０５２７】
最も一般的に使用される非選択的Ｃｏｘ１及びＣｏｘ２の阻害剤の例には、アセチルサリチル酸（アスピリン）及びその他のサリチル酸塩、アセトアミノフェン（Ｔｙｌｅｎｏｌ）、イブプロフェン（Ａｄｖｉｌ、Ｍｏｔｒｉｎ、Ｎｕｐｒｉｎ、Ｒｕｆｅｎ）、ナプロキセン（Ｎａｐｒｏｓｙｎ、Ａｌｅｖｅ）、ナブメトン（Ｒｅｌａｆｅｎ）、またはジクロフェナク（Ｃａｔａｆｌａｍ）が挙げられる。
【０５２８】
本発明の成分はＣｏｘ−２阻害剤である。本明細書で相互交換可能に使用することができる「シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤」または「Ｃｏｘ−２阻害剤」という用語は、Ｃｏｘ−１酵素の阻害の程度に関係なくＣｏｘ−２酵素を阻害する化合物を包含し、それらの化合物の薬学的に許容される塩を含む。したがって、本発明の目的で、化合物は、化合物がＣｏｘ−１酵素と同等、それより大きい、または小さい程度にＣｏｘ−２酵素を阻害するかどうかに関係なく、Ｃｏｘ−２阻害剤と見なされる。
【０５２９】
本発明の一実施形態では、Ｃｏｘ−２阻害剤化合物は非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）であることが好ましい。したがって、本発明のＣｏｘ−２阻害剤として役立つことができる好ましい物質には、非ステロイド性抗炎症薬化合物、薬学的に許容されるその塩、またはその純粋な（−）または（＋）光学異性体が挙げられる。
【０５３０】
本発明において有用であるＮＳＡＩＤ化合物の例には、アセメタシン、アセチルサリチル酸、アルクロフェナク、アルミノプロフェン、アザプロパゾン、ベノリレート、ベノキサプロフェン、ブクロキシン酸、カルプロフェン、コリントリサリチル酸マグネシウム、クリダナック、クロピナック、ダプソン、ジクロフェナク、ジフルニサル、ドロキシカム、エトドラク、フェノプロフェン、フェンブフェン、フェンクロフェネック、フェンティアザック、フロクタフェニン、フルフェニサル、フルルビプロフェン、（ｒ）−フルルビプロフェン、（ｓ）−フルルビプロフェン、フロフェナック、フェプラゾン、フルフェナム酸、フルプロフェン、イブフェナク、イブプロフェン、インドメタシン、インドメタシン、インドプロフェン、イソキセパック、イソキシカム、ケトプロフェン、ケトロラック、ミロプロフェン、ピロキシカム、メロキシカム、メフェナム酸、メフェナム酸、メクロフェナム酸、メクロフェン、ナブメトン、ナプロキセン、ニフルム酸、オキサプロジン、オキシピナック、オキシフェンブタゾン、フェニルブタゾン、ポドフィロトキシン誘導体、プログルメタシン、ピプロフェン、ピルプロフェン、プラポプロフェン、サリチル酸、サリチル酸塩、スドキシカム、スプロフェン、スリンダック、テノキシカム、ティアプロフェン酸、チオピナック、チオキサプロフェン、トルフェナム酸、トルメチン、ジドメタシン、ゾメピラック、及び２−フルオロ−ａ−メチル［１，１’−ビフェニル］−４−酢酸、４−（ニトロオキシ）ブチルエステルが挙げられる。
【０５３１】
好ましい実施形態では、Ｃｏｘ−２阻害剤はＣｏｘ−２選択的阻害剤である。「Ｃｏｘ−２選択的阻害剤」という用語は、Ｃｏｘ−１酵素よりもＣｏｘ−２酵素を選択的に阻害する化合物を包含し、これらの化合物の薬学的に許容される塩及びプロドラッグも含む。特定の実施形態では、ＰＧＥ２アンタゴニストはインドメタシンではない。
【０５３２】
実際には、Ｃｏｘ−２阻害剤の選択性は、試験が実施される条件及び調べられる阻害剤に応じて異なる。しかしながら、本明細書の目的では、Ｃｏｘ−２阻害剤の選択性は、Ｃｏｘ−１の阻害についての試験管内または生体内でＩＣ５０値をＣｏｘ−２の阻害についてのＩＣ５０値で割った比として測定することができる（Ｃｏｘ−１  ＩＣ５０／Ｃｏｘ−２  ＩＣ５０）。Ｃｏｘ−２選択的阻害剤は、Ｃｏｘ−１  ＩＣ５０のＣｏｘ−２  ＩＣ５０に対する比が１より大きい任意の阻害剤である。好ましい実施形態では、この比は２より大きく、さらに好ましくは５より大きく、その上さらに好ましくは１０より大きく、一層さらに好ましくは５０より大きく、さらに好ましくはさらに１００より大きい。
【０５３３】
本明細書で使用されるとき、「ＩＣ５０」という用語は、シクロオキシゲナーゼ活性の５０％阻害をもたらすのに必要とされる化合物の濃度を指す。本発明の好ましいＣｏｘ−２選択的阻害剤は、約１μＭ未満のＣｏｘ−２  ＩＣ５０、さらに好ましくは約０．５μＭ未満の、及び一層さらに好ましくは約０．２μＭ未満のＣｏｘ−２  ＩＣ５０を有する。
【０５３４】
好ましいＣｏｘ−２選択的阻害剤は、約１μＭを超える、さらに好ましくは２０μＭを超えるＣｏｘ−１  ＩＣ５０を有する。そのような好ましい選択性は、一般的なＮＳＡＩＤ誘発性副作用の発生率を低下させる能力を示してもよい。
【０５３５】
本発明の範囲内に含まれるのはまた、Ｃｏｘ−２選択的阻害剤のプロドラッグとして作用する化合物である。Ｃｏｘ−２選択的阻害剤に関して本明細書で使用されるとき、「プロドラッグ」という用語は、対象の体内の代謝または単純な化学的プロセスによって活性があるＣｏｘ−２選択的阻害剤に変換することができる合物を指す。Ｃｏｘ−２選択的阻害剤のプロドラッグの一例は、三環系Ｃｏｘ−２選択的阻害剤バルデコキシブの治療上有効なプロドラッグであるパレコキシブである。好ましいＣｏｘ−２選択的阻害剤プロドラッグの例はパレコキシブナトリウムである。Ｃｏｘ−２阻害剤のプロドラッグのクラスは米国特許第５，９３２，５９８号（参照により組み込まれる）に記載されている。
【０５３６】
本発明のＣｏｘ−２選択的阻害剤は、例えば、Ｃｏｘ−２選択的阻害剤メロキシカム（ＣＡＳ登録番号７１１２５−３８−７）、または薬学的に許容されるその塩またはプロドラッグであることができる。
【化４８】
2021527042.tif 000064
【０５３７】
本発明の別の実施形態では、Ｃｏｘ−２選択的阻害剤は、Ｃｏｘ−２選択的阻害剤ＲＳ５７０６７、６−［［５−（４−クロロベンゾイル）−１，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル］メチル］−３（２Ｈ）−ピリダジノン（ＣＡＳ登録番号１７９３８２−９１−３）、または薬学的に許容されるその塩またはプロドラッグであることができる。
【化４９】
2021527042.tif 000065
他の例には、以下が含まれる。
【化５０−１】
2021527042.tif 000066
【化５０−２】
2021527042.tif 000067
【化５０−３】
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【化５０−４】
2021527042.tif 000069
【０５３８】
好ましい実施形態では、クロメンＣｏｘ−２阻害剤は、（Ｓ）−６−クロロ−７−（１，１−ジメチルエチル）−２−（トリフルオロメチル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−カルボン酸、（２Ｓ）−６，８−ジメチル−２−（トリフルオロメチル）−２Ｈ−クロメン−３−カルボン酸、（２Ｓ）−６−クロロ−８−メチル−２−（トリフルオロメチル）−２Ｈ−クロメン−３−カルボン酸、（２Ｓ）−８−エチル−６−（トリフルオロメトキシ）−２−（トリフルオロメチル）−２Ｈ−クロメン−３−カルボン酸、（Ｓ）−６，８−ジクロロ−２−（トリフルオロメチル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−カルボン酸、（２Ｓ）−６−クロロ−５，７−ジメチル−２−（トリフルオロメチル）−２Ｈ−クロメン−３−カルボン酸、及びそれらの混合物から選択される。
【０５３９】
本発明の好ましい実施形態では、Ｃｏｘ−２阻害剤は、以下の一般的な構造によって表される三環式Ｃｏｘ−２選択的阻害剤のクラス、またはそのプロドラッグから選択することができ、
【化５１】
2021527042.tif 000070
式中、
Ｚ１は、部分的不飽和または不飽和のヘテロシクリル及び部分的不飽和または不飽和の炭素環から成る群から選択され；
Ｒ２４は、ヘテロシクリル、シクロアルキル、シクロアルケニル及びアリールから成る群から選択され、その際、Ｒ２４は置換可能な位置にて、アルキル、ハロアルキル、シアノ、カルボキシル、アルコキシカルボニル、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、ハロアルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、ニトロ、アルコキシアルキル、アルキルスルフィニル、ハロ、アルコキシ及びアルキルチオから選択される１以上のラジカルによって任意で置換され；
Ｒ２５はメチルまたはアミノから成る群から選択され；且つ
Ｒ２６は、Ｈ、ハロ、アルキル、アルケニル、アルキニル、オキソ、シアノ、カルボキシル、シアノアルキル、ヘテロシクリルオキシ、アルキルオキシ、アルキルチオ、アルキルカルボニル、シクロアルキル、アリール、ハロアルキル、ヘテロシクリル、シクロアルケニル、アラルキル、ヘテロシクリルアルキル、アシル、アルキルチオアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシカルボニル、アリールカルボニル、アラルキルカルボニル、アラルケニル、アルコキシアルキル、アリールチオアルキル、アリールオキシアルキル、アラルキルチオアルキル、アラルコキシアルキル、アルコキシアラルコキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アミノカルボニル、アミノカルボニルアルキル、アルキルアミノカルボニル、Ｎ−アリールアミノカルボニル、Ｎ−アルキル−Ｎ−アリールアミノカルボニル、アルキルアミノカルボニルアルキル、カルボキシアルキル、アルキルアミノ、Ｎ−アリールアミノ、Ｎ−アラルキルアミノ、Ｎ−アルキル−Ｎ−アラルキルアミノ、Ｎ−アルキル−Ｎ−アリールアミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、Ｎ−アリールアミノアルキル、Ｎ−アラルキルアミノアルキル、Ｎ−アルキル−Ｎ−アラルキルアミノアルキル、Ｎ−アルキル−Ｎ−アリールアミノアルキル、アリールオキシ、アラルコキシ、アリールチオ、アラルキルチオ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アミノスルホニル、アルキルアミノスルホニル、Ｎ−アリールアミノスルホニル、アリールスルホニル、Ｎ−アルキル−Ｎ−アリールアミノスルホニルから選択されるラジカルから成る群から選択される。
【０５４０】
本発明の好ましい実施形態では、上記の式によって表されるＣｏｘ−２選択的阻害剤は、セレコキシブ（Ｂ−２１）、バルデコキシブ（Ｂ−２２）、デラコキシブ（Ｂ−２３）、ロフェコキシブ（Ｂ−２４）、エトリコキシブ（ＭＫ−６６３；Ｂ−２５）、ＪＥＴ−５２２（Ｂ−２６）、またはそれらのプロドラッグを含む化合物の群から選択される。
【０５４１】
上記で議論されたＣｏｘ−２選択的阻害剤の選択された例に関する追加情報は、以下：セレコキシブ（ＣＡＳ  ＲＮ１６９５９０−４２−５、Ｃ−２７７９、ＳＣ−５８６５３、及び米国特許第５，４６６，８２３号（参照により組み込まれる））；デラコキシブ（ＣＡＳ  ＲＮ１６９５９０−４１−４）；ロフェコキシブ（ＣＡＳ  ＲＮ１６２０１１−９０−７）；化合物Ｂ−２４（米国特許第５，８４０，９２４号）；化合物Ｂ−２６（ＷＯ００／２５７７９（参照により組み込まれる））；及びエトリコキシブ（ＣＡＳ  ＲＮ２０２４０９−３３−４、ＭＫ−６６３、ＳＣ−８６２１８、及びＷＯ９８／０３４８４（参照により組み込まれる））のように見いだすことができる。
【化５２】
2021527042.tif 000071
【０５４２】
本発明のさらに好ましい実施形態では、Ｃｏｘ−２選択的阻害剤はセレコキシブ、ロフェコキシブ及びエトリコキシブから成る群から選択される。
【０５４３】
好ましい実施形態では、Ｂ−２７に示される構造を有し、三環系Ｃｏｘ−２選択的阻害剤バルデコキシブ、Ｂ−２２（米国特許第５，６３３，２７２号（参照により組み込まれる）を参照）の治療上有効なプロドラッグであるパレコキシブ（米国特許第５，９３２，５９８号（参照により組み込まれる）を参照）は、本発明のＣｏｘ−２阻害剤として有利に採用されてもよい。
【化５３】
2021527042.tif 000072
【０５４４】
パレコキシブの好ましい形態はパレコキシブナトリウムである。
【０５４５】
本発明において有用な別の三環系Ｃｏｘ−２選択的阻害剤は、以下に示す式Ｂ−２８を有する化合物ＡＢＴ−９６３であり、これは国際公開番号ＷＯ００／２４７１９に以前記載されている。
【化５４】
2021527042.tif 000073
【０５４６】
（ｂ）細胞質型ホスホリパーゼＡ２（ｃＰＬＡ２）阻害剤
特定の実施形態では、ＰＧＥ２阻害剤は、単に例示するために、アラキドニルトリフルオロメチルケトンのような細胞質型ホスホリパーゼＡ２（ｃＰＬＡ２）の阻害剤である。
【化５５】
2021527042.tif 000074
【０５４７】
ＶＩ．特定の実施例
2021527042.tif 000075
【実施例】
【０５４８】
実施例１：ファージディスプレイライブラリーからのＰＤ−Ｌ１結合アフィマーの選択
本発明のペプチド、例えば、ＰＤ−Ｌ１結合成分は、例えば、一般に、しかし排他的にではなく、９アミノ酸の同じ長さの２つのランダムループを持つアフィマーのライブラリーからの選択によって同定されてもよい。
【０５４９】
上記に示したように、本発明のＰＤ−Ｌ１結合ペプチドは、ステフィンＡの配列に基づいて一定のアフィマーフレームワーク骨格で示される９アミノ酸長のランダムループ配列を含むファージディスプレイライブラリーからの選択によって同定された。そのような選択手順は一般的に知られている。そのような手順に従って、ファージの懸濁液を標的抗原（ストレプトアビジンビーズに捕捉されたビオチン化抗原またはプレートに捕捉された非ビオチン化抗原のいずれか）とともにインキュベートする。次いで、結合していないファージを洗い流し、続いて、抗原を低ｐＨ、続いて高ｐＨでインキュベートすることによって、結合したファージを溶出する。次いで、Ｅ．ｃｏｌｉは放出され、ｐＨを中和したファージに感染し、初回のファージの調製物が得られる。このサイクルは、ファージを標的とするのに濃縮するために、例えば２回または３回繰り返して実施され、例えば、洗浄工程の数を増やし、抗原濃度を下げ、且つブロッキング試薬でコーティングされたブロックされたストレプトアビジンのビーズまたはウェルで事前選択することによってストリンジェントな条件を選択の後の回で高めてもよい。
【０５５０】
連続した回数のファージ増幅による選択に続いて、ＰＤ−Ｌ１結合クローンは可溶性アフィマーＥＬＩＳＡによって同定された。簡単に説明すると、アフィマーをファージミドベクターから過剰発現させ、細菌細胞を溶解し、及び溶解物をＥＬＩＳＡで使用し、アフィマー上のＨｉｓ６タグに対するコンジュゲート抗体によって、プレートに不動化されたＰＤ−Ｌ１へのアフィマーの結合を検出した。
【０５５１】
説明すると、サイズ約６×１０１０の多様性のライブラリーから加えられた約１×１０１１のファージを用いて以下に記載されているようにアフィマーライブラリーからのＰＤ−Ｌ１結合ファージの選択を行った。
【０５５２】
Ｍ２８０ストレプトアビジンまたはニュートラアビジンのビーズに捕捉されたビオチン化抗原（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）。簡単に説明すると、アフィマーをファージミドベクターから過剰発現させ、細菌細胞を溶解し、溶解物をＥＬＩＳＡで使用して、アフィマーのＨｉｓ６タグに対するコンジュゲート抗体によって、プレートに不動化されたＰＤ−Ｌ１へのアフィマーの結合を検出することを選択に使用した。抗原はＲ＆ＤによってＦｃ切断の形式で供給され、ＥＺ  Ｌｉｎｋ  Ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ−ＬＣビオチンキット（Ｐｉｅｒｃｅ）を用いて社内でビオチン化した。
【０５５３】
ファージをビーズ上の抗原に添加する前に、非特異的結合相互作用を減らすためにファージ及びビーズの双方を２％Ｍａｒｖｅｌ−ＰＢＳでそれぞれ１時間ブロックした。次いで、ファージを室温で１時間抗原に結合させた後、ＰＢＳ−０．１％ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０で５回洗浄し、続いてＰＢＳで２回洗浄することによって未結合または弱結合のファージを取り除き、１００ｍＭトリエチルアミンを用いてファージを溶出し、溶出を取り去り、トリス緩衝液で中和し、次いで０．１ＭのＨＣｌで２回目を溶出し、トリス緩衝液で中和した。溶出液をプールし、回収したファージをコロニー形成単位（ＣＦＵ）として滴定した後、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＴＧ１細胞で増幅し、ヘルパーファージＭ１３ＫＯ７を用いて救済し、滴定前に精製して、次回のパンニングの投入として使用した。２回目と３回目のパンニングについては、ＰＢＳ−ＴＷＥＥＮ（登録商標）での洗浄サイクルを増やし、抗原を減らすことによって洗浄の厳密性を高めた。ブロックされたビーズで投入ファージを事前選択してビーズ結合剤を取り除くことによって、選択解除工程も２回目及び３回目で導入され、ビーズは各回にてニュートラアビジンとストレプトアビジンの間で交換され、ストレプトアビジン結合剤を減らした。
【０５５４】
２回目及び３回目の画分からの相の滴定に続いて、単一の十分に単離されたプラークを摘み取り、可溶性アフィマーを発現させ、粗抽出物ＥＬＩＳＡによって抗原結合について特徴付けた。簡単に説明すると、ＩＰＴＧ誘導によってファージミドベクターからアフィマーを過剰発現させ、試薬Ｂ−ＰＥＲ  ＩＩ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて細菌細胞を溶解し、遠心分離できれいにした溶解物をＥＬＩＳＡで使用し、アフィマーのＨｉｓ６タグに対するＨＲＰ結合抗体（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  ＢｉｏｔｅＣ）によって、プレートに不動化されたＰＤ−Ｌ１へのアフィマーの結合を検出し、１工程Ｕｌｔｒａ  ＴＭＢ−ＥＬＩＳＡ基質（Ｔｈｒｅｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いてＥＬＩＳＡを発色させた。抗原コーティングのない陰性対照プレートでバックグラウンドを超える結合を示すクローンは非特異的結合剤として排斥した。特異的結合を示すクローンを配列決定してループ配列を同定した。
【０５５５】
実施例２：ＰＤ−Ｌ１を発現するヒトがん細胞株に対する抗ＰＤ−Ｌ１アフィマーの結合親和性
ＡＶＡ０４アフィマーの親和性はフローサイトメトリーを用いて決定した。
【０５５６】
ペニシリン（１００Ｕ／ｍＬ、Ｈｙｃｌｏｎｅ）及びストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ、Ｈｙｃｌｏｎｅ）と共に１０％のＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）を含むＲＰＭＩ−２６４０（Ｓｉｇｍａ）で増殖させたＰＤ−Ｌ１を発現しているＨ４４１細胞を組織培養物から分離させ、ＤＰＢＳを用いて洗浄した。３００ｒｐｍで５分間の遠心分離によって細胞を回収した。細胞をＰＢＳに再浮遊させ、ウェルあたり５００００個の細胞を丸底９６ウェルプレートに移した。細胞をＰＢＳで洗浄した。アフィマー及び対照を２つ組にて染色緩衝液（Ｒ＆Ｄ）で希釈し、４±１℃で約６０分間染色するために細胞に加えた。細胞を洗浄し、二次抗シスタチンＡ（Ｒ＆Ｄ）を染色緩衝液（Ｒ＆Ｄ）で１：１５に希釈し、４±１℃で約４０分間染色するために細胞に加えた。細胞を洗浄し、検出抗体Ａ４８８抗ヤギ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を染色緩衝液（Ｒ＆Ｄ）で１：１００に希釈し、４±１℃で約３０分間染色するために細胞に加えた。最後に、細胞を洗浄し、染色緩衝液で希釈したＬ／Ｄ染色ゾンビアクア（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を用いて４±１℃で１０分間生細胞と死細胞を染色した。細胞を洗浄し、固定緩衝液（Ｒ＆Ｄ）を４±１℃で１０分間各ウェルに加え、次いでフローサイトメータ（Ｇｕａｖａ  １２ＨＴ，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）上にプレートを読み取る前にＥＤＴＡ（Ｌｏｎｚａ）を含むＰＢＳを加えた。死細胞を除外し、蛍光緑色チャネル（４８８ｎｍ／５２５／３０）を取得した。Ｉｎｃｙｔｅを使用して結果を分析し、グラフパッドを使用してデータをプロットした。
【０５５７】
ＭＤＡ−ＭＢ−２３１での細胞結合アッセイ
−細胞の調製：
ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞（ＡＴＣＣ）を分離し、０．２５ｘ１０ｅ６個の細胞／ｍｌ、８０ｍｌに希釈する。
２００ｕｌの細胞浮遊液（５００００個の細胞）をすべてのウェル、４プレートにピペットで入れる。
３００ｇで５分間遠心分離し、上清を捨てる。
細胞を２００ｕｌのＰＢＳに再浮遊させる。３００ｇで５分間遠心分離し、上清を捨てる。
−アフィマー及び対照の希釈及び染色：
表に従ってアフィマーと抗体の希釈液を作成する（３．５ｎＭからのアテゾリズマブ、Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ及び５００ｎＭからのアフィマー）
別の希釈プレートで：
Ａ１、Ｂ１、Ａ２及びＢ２のウェルにて６０ｕｌの染色緩衝液
横列Ａ及びＢの４〜１２のウェルへの６０ｕｌ染色緩衝液
横列Ｃ〜Ｈの２〜１２のウェルへの６０ｕｌ染色緩衝液
１．ウェルＡ３及びＢ３での３．５ｎＭからの１００ｕｌアテゾリズマブ（ＩｎＶｉｖｏｇｅｎ）
３０ｕｌをＡ３とＢ３のウェルからＡ４とＢ４などにＡ１２とＢ１２まで移す。
２．上記の表に従って、１００ｕｌのアフィマー希釈液を対応する縦列１のウェルにピペットで移す。
２０ｕｌを１のウェルから２、２から３などから１２まで移す。
希釈プレートのウェルから細胞を含むアッセイプレートにおける対応するウェルに５０ｕｌをピペットで移し、よく混合する。
＋５℃で６０分間インキュベートする。
−洗浄：
１５０ｕｌ／ウェルのＰＢＳを加え、３００ｇで５分間遠心分離する。上清を捨てる。
もう一度繰り返す。
−抗シスタチンによる染色：
５０ｕｌ／ウェルの染色緩衝液をＡ１〜Ａ１２、及びＢ２〜Ｂ１２のウェルにピペットで移す。
染色緩衝液での抗シスタチン抗体の１：１５の希釈液２２０００ｕｌを作る：１４６７ｕｌのＡｂ＋２０５３３ｕｌの染色緩衝液。５０ｕｌ／ウェルをＢ１及び横列Ｃ〜Ｈのウェルにピペットで入れる。＋５℃で４０分間インキュベートする。
−洗浄：
１５０ｕｌ／ウェルのＰＢＳを加え、３００ｇで５分間遠心分離する。上清を捨てる。
もう一度繰り返す。
−二次Ａｇによる染色：
ＡＦ４８８抗ヒトＩｇＧ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）の１：１００の希釈液５０００ｕｌを作る：５０ｕｌの抗ヒトＩｇＧ＋４９５０ｕｌの染色緩衝液
５０ｕｌ／ウェルを横列Ａ及びＢの２〜１２のウェルにピペットで入れる。
染色緩衝液での抗ヤギＡＦ４８８（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）抗体の１：５００希釈液２５０００ｕｌを作る：５０ｕｌのＡｂ＋２４９５０ｕｌの染色緩衝液。
５０ｕｌ／ウェルをＢ１及び横列Ｃ〜Ｈのウェルにピペットで入れる。
＋５℃で３０分間インキュベートする
１５０ｕｌ／ウェルのＰＢＳを加え、３００ｇで５分間遠心分離する。上清を捨てる。
−生細胞及び死細胞の染色：
染色緩衝液でのＬ／Ｄ染色ゾンビアクア（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）の１：５００の希釈液２５０００ｕｌを作る：５０ｕｌのＬ／Ｄ染色液＋２４９５０ｕｌの染色緩衝液。
アッセイプレートのすべてのウェルに５０ｕｌをピペットで入れる。
＋５℃で１０分間インキュベートする
１５０ｕｌ／ウェルのＰＢＳを加え、３００ｇで５分間遠心分離する。上清を捨てる。
もう一度繰り返す。
−固定手順：
１００ｕｌ／ウェルの固定緩衝液を加える。
＋５℃で１０分間インキュベートする。
１００ｕｌ／ウェル  ＰＢＳを加え、３００ｇで５分間遠心分離する。上清を捨てる。
細胞を１００ｕｌ染色緩衝液に再浮遊させ、＋５℃で保存する。
【０５５８】
Ｈ４４１での細胞結合アッセイ
−細胞の調製：
Ｈ４４１細胞を分離し、０．２５×１０ｅ６個の細胞／ｍｌに希釈する、８５ｍｌ。
２００ｕｌの細胞浮遊液（５００００個の細胞）をすべてのウェル、４プレートにピペットで入れる。
３００ｇで５分間遠心分離し、上清を捨てる。
−洗浄：
ＥＤＴＡを含む２００ｕｌのＰＢＳにて細胞を再浮遊させる。
３００ｇで５分間遠心分離し、上清を捨てる。
−アフィマー及び対照の希釈及び染色：
対応する希釈プレートのウェルから５０ｕｌを、細胞を含むアッセイプレートにおける対応するウェルにピペットで移し、よく混合する。
＋５℃で１２０分インキュベートする
−洗浄：
１５０ｕｌ／ウェルのＥＤＴＡを伴ったＰＢＳを加え、３００ｇで５分間遠心分離する。上清を捨てる。
もう一度繰り返す。
−抗シスタチンによる染色：
５０ｕｌ／ウェルの染色緩衝液を横列Ａのウェルにピペットで入れる。
抗シスタチン抗体（５０ｕｇ／ｍｌストック）の染色緩衝液での１：１５の希釈液１８０００ｕｌを作る：１２００ｕｌのＡｂ＋１６８００ｕｌの染色緩衝液。
５０ｕｌ／ウェルを横列Ｂ〜Ｈのウェルにピペットで入れる。
ＬａｂＧｕｒｕは複数を示したが、冷凍庫にストックはない。代わりに、このアッセイではＢＡＦ１４０７を使用する必要があった。
＋５℃で４０分間インキュベートする。
−洗浄：
１５０ｕｌ／ウェルのＥＤＴＡを伴ったＰＢＳを加え、３００ｇで５分間遠心分離する。上清を捨てる。
もう一度繰り返す。
−二次Ａｇによる染色：
ＡＦ４８８抗ヒトＩｇＧの１：１００希釈液３０００ｕｌを作る：３０ｕｌの抗ヒトＩｇＧ＋２９７０ｕｌの染色緩衝液
５０ｕｌ／ウェルを横列Ａの２から１２のウェルにピペットで入れる。
抗ヤギＡＦ４８８（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）抗体の染色緩衝液での１：５００希釈液１８０００ｕｌを作る：３６ｕｌのＡｂ＋１８ｍｌの染色緩衝液。
５０ｕｌ／ウェルを横列Ｂ〜Ｈのウェルにピペットで入れる。
５０ｕｌの染色緩衝液をすべてのプレートのＡ１にピペットで入れる。
＋５℃で３０分間インキュベートする
１５０ｕｌ／ウェルのＥＤＴＡを伴ったＰＢＳを加え、３００ｇで５分間遠心分離する。上清を捨てる。
−生細胞及び死細胞の染色：
Ｌ／Ｄ染色ゾンビアクア（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）の染色緩衝液での１：５００希釈液２２ｍｌを作る：４４ｕｌのＬ／Ｄ染色＋２２ｍｌの染色緩衝液。
アッセイプレートのすべてのウェルに５０ｕｌをピペットで入れる。
＋５℃で１０分間インキュベートする
１５０ｕｌ／ウェルのＥＤＴＡを伴ったＰＢＳを加え、３００ｇで５分間遠心分離する。上清を捨てる。
もう一度繰り返す。
−固定手順：
１００ｕｌ／ウェルの固定緩衝液を加える。
＋５℃で１０分間インキュベートする。
１００ｕｌ／ウェルのＥＤＴＡを伴ったＰＢＳを加え、３００ｇで５分間遠心分離する。上清を捨てる。
細胞を１００ｕｌ染色緩衝液に再浮遊させ、＋５℃で保存する。
【０５５９】
実施例３：アフィマーＦｃ及びインライン融合体の生成と特性評価
浮遊液ＨＥＫ細胞（Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞株；Ｔｈｅｒｍｏ）の一過性の形質移入は、製造元のプロトコールに従ってＥｘｐｉｆｅｃｔａｍｉｎｅ試薬（Ｔｈｅｒｍｏ）を用いてアフィマーＦｃ融合構築物（ＡＶＡ０４−２５１Ｆｃ及びＡＶＡ０４−１８２Ｆｃ；上記の表を参照、それぞれ図５Ａ及び１Ａの概略図）で実施した。形質移入の７日後に２０，０００ｇで１時間遠心分離し、０．４５μｍでろ過することによって上清を回収した。タンパク質は、ＡＫＴＡ  Ｘｐｒｅｓｓ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でのＭＡｂＳｅｌｅｃｔＳｕｒｅＨｉＴｒａｐカラムを用いて親和性精製した。樹脂を５カラム容量（ＣＶ）の蒸留水で洗浄し、５ＣＶの１×ＰＢＳで平衡化した。次いで、上清を５ｍＬ／分の流量で流し、続いて１０ＣＶの１×ＰＢＳで洗浄した。結合したタンパク質を５ＣＶの０．１ＭグリシンｐＨ２．８で溶出した後、Ｃｅｎｔｒｉｐｕｒｅ脱塩カラム（ｅｍｐＢｉｏｔｅｃｈＧｍｂＨ）を用いた１×ＰＢＳへの緩衝液交換が続いた。ＨｉＬｏａｄ２６／６００Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００ｐｇカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いた分取サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって、第２段階の精製を行い、ＡＫＴＡ  Ｘｐｒｅｓｓ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）にて２．６ｍＬ／分の流速にて１ｘＰＢＳで流した。分析ＳＥＣは、ＭＡｂＰａｃＳＥＣ−１（Ｔｈｅｒｍｏ）またはＹａｒｒａ−３０００のカラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）を用いて行い、１ｘＰＢＳにて０．８ｍＬ／分でＵｌｔｉｍａｔｅ３０００  ＨＰＬＣ（Ｔｈｅｒｍｏ）にて流した。ＡＶＡ０４−１８２Ｆｃ（配列番号１１８）及びＡＶＡ０４−２５１Ｆｃ（配列番号１１７）の最終タンパク質バッチは＞９５％純度（それぞれ図１Ｃ及び４Ａ）を示した。Ｎａｎｏｄｒｏｐ（Ｔｈｅｒｍｏ）Ａ２８０の読み取り値を使用してタンパク質収量を推定し、生成物をＮｏｖｅｘ（商標）２０ＸＢｏｌｔ（商標）ＭＥＳＳＤＳランニング緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ）におけるＳＤＳ−ＰＡＧＥ  Ｂｏｌｔ  Ｂｉｓ  Ｔｒｉｓと４〜１２％ゲル（Ｔｈｅｒｍｏ）にて２００Ｖで泳動したが、還元緩衝液にて試料を加熱した。ゲル上のタンパク質バンドをＱｕｉｃｋ  Ｃｏｍｍａｓｓｉｅ（Ｇｅｎｅｒｏｎ）で染色した。ＰａｇｅＲｕｌｅｒ染色済みタンパク質分子量マーカー（Ｔｈｅｒｍｏ）をゲル上で流して融合タンパク質の分子量を推定した（図１Ｂ及び５Ｂ）。
【０５６０】
アフィマーインライン融合タンパク質ＡＶＡ０４−２５１  ＢＨ  ｃｙｓ（配列番号１１９、概略図８Ａ）はＥ．ｃｏｌｉから生成し、アフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、及びサイズ排除クロマトグラフィーを用いて精製した。発現プラスミドｐＤ８６１（Ａｔｕｍ）は、製造元のプロトコールを用いてＢＬ２１  Ｅ．ｃｏｌｉ細胞（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で形質転換した。形質転換された細胞混合物全体を、５０μｇ／ｍＬのカナマイシン（ＡｐｐｌｉＣｈｅｍ）を含有するＬＢ寒天プレートに播き、３７℃で一晩インキュベートした。翌日、形質転換されたＥ．ｃｏｌｉの菌叢を、１×最良のブロス培地（Ｍｅｌｆｏｒｄ）と５０μｇ／ｍＬのカナマイシンの滅菌フラスコに移し、２５０ｒｐｍで振盪しながら３０℃でインキュベートした。細胞が約０．８〜１．０のＯＤ６００に達したら、１０ｍＭのラムノース（ＡｌｆａＡｅｓａｒ）で発現を誘導し、培養物を３７℃でさらに５時間インキュベートした。細胞を遠心分離によって回収し、細胞ペレットを溶解した。ニッケルアガロース親和性樹脂（Ｓｕｐｅｒ−ＮｉＮＴＡ５００；Ｇｅｎｅｒｏｎ）を用いたＨｉｓタグタンパク質のバッチ結合親和性精製を用いてアフィマー精製を行った。未結合のタンパク質を５ＣＶのＮＰＩ２０で除去した後、５ＣＶのＮＰＩ４００緩衝液と還元剤（５０ｍＭのリン酸ナトリウム、０．５ＭのＮａＣｌ、０．４Ｍのイミダゾール、１０ｍＭのＴＣＥＰ）で結合タンパク質を溶出した。溶出したタンパク質は、続いて２０ｍＭのＭＥＳ、ｐＨ６で実行されるＣＭ  ＦＦイオン交換カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に基づいたカチオン交換精製工程を用いて緩衝液交換を行い、０．１％ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１１４（Ｓｉｇｍａ）での洗浄工程と１ＭのＮａＣｌ勾配による溶出を伴った。１×ＰＢＳで実行されるＨｉＬｏＡｄ２６／６００Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５ＰＧカラム（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅを用いた分取ＳＥＣに基づいて第３段階の精製を実施した。ＡＶＡ０４−２５１  ＢＨ  ｃｙｓは５０ｍＭのＭＥＳ、ｐＨ６．０、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＴＣＥＰを含有する最終還元緩衝液で製剤化された。分析ＳＥＣは、Ｕｌｔｉｍａｔｅ３０００  ＨＰＬＣ（Ｔｈｅｒｍｏ）で実行されるＡｃｃｌｉａｍ  ＳＥＣ−３００カラム（Ｔｈｅｒｍｏ）を用いて１×ＰＢＳ移動相にて０．７ｍＬ／分で実行した。ＳＥＣ  ＨＰＬＣ及びＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析は、還元すると最終的なタンパク質が＞９９％純粋であることを示している（それぞれ図８Ｂ及び８Ｃ）。
【０５６１】
実施例４：アフィマーＦｃ融合タンパク質への抗ＰＤ−Ｌ１結合の動態解析
Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００動態解析は、ランニング緩衝液ＨＢＳ−ＥＰ＋（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）と、１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４．０にてアミンカップリング試薬（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いてヒトまたはマウスのＰＤ−Ｌ１Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）で不動化されたＳｅｒｉｅｓ  ＳセンサーＣＭ５チップとを用いて実施した。アフィマーＦｃ融合体の単一サイクル動態濃度滴定を３０μＬ／分の流速で実行した。ＰＤ−Ｌ１Ｆｃを不動化した表面を３〜５ｍＭのＮａＯＨで２０〜３０秒間再生した（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）。データブランクを差し引き、１：１のＬａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡｃｏｒｅ評価ソフトウェア；ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に適合させて見かけのＫＤ値を算出した。ＡＶＡ０４−１８２Ｆｃ融合タンパク質はマルチサイクル動態を用いて３６．１ｐＭでのＫｄを有することが示された（図２）。ＡＶＡ０４−２５１Ｆｃは単一サイクル動態で測定し２３．４ｐＭのＫｄ（図６）を有する。
【０５６２】
実施例５：抗ＰＤ−Ｌ１アフィマーの特性評価のための競合ＥＬＩＳＡ
アフィマーＦｃ融合体の競合阻害は、抗マウスＰＤ−Ｌ１抗体１０Ｆ９．Ｇ２と比較して酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）によって評価した（図３）。ヒトまたはマウスのＰＤ−１Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を０．５μｇ／ｍＬでプレートにコーティングした。プレートをプレートウォッシャーによって１５０μＬの洗浄緩衝液（ＰＢＳ、０．１％ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）で２回洗浄し、ＰＢＳ中の５％カゼイン（Ｓｉｇｍａ）によって室温（２５±１°Ｃ）で９０分間飽和した。前述のようにプレートを洗浄した。次いで、アフィマー及び対照（ＰＤ−１Ｆｃ；ブランク）を２つ組で希釈し、１μｇ／ｍＬのマウスＰＤ−Ｌ１Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）または３０ｎｇ／ｍＬのヒトＰＤ−Ｌ１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）と共に３０分間予備インキュベートし、次いで室温（２５±１℃）で９０分間プレートに負荷した。前述のようにプレートを３回洗浄した。次いで、ビオチン化ポリクローナル抗体抗ヒトＰＤ−Ｌ１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を希釈緩衝液で希釈し、室温（２５±１℃）で９０分間インキュベートした。前述のようにプレートを３回洗浄し、ストレプトアビジンＨＲＰを室温（２５±１℃）で３０分間インキュベートした。プレートを洗浄し、基質（ＴＭＢ，Ｐｉｅｒｃｅ  Ｔｈｅｒｍｏ−Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）をプレートに１０分間加えた。酸性溶液を用いて反応を停止させ、プレートを４５０〜６３０ｎｍで読み取った。次いで、ＩＣ５０は補間非線形４パラメータ適合標準曲線を用いて算出した。
【０５６３】
実施例６：ＡＶＡ０４−１８２Ｆｃのマウス混合リンパ球反応アッセイ
Ｔ細胞応答を調節するＡＶＡ０４−１８２Ｆｃの能力を評価するために、マウス混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイを実施した。このＭＬＲアッセイでは、１匹のＣ５７ＢＬ／６マウスの骨髄からＢＭＤＣ（骨髄樹状細胞）を生成し、ＧＭ−ＣＳＦの存在下で７日間培養した。次いで、細胞を、ネガティブ選択を用いてＢａｌｂ／ｃマウス脾臓から単離された同種ＣＤ４＋Ｔ細胞と共培養した。ＭＬＲアッセイは、試験生成物（ＡＶＡ０４−１８２Ｆｃ、ＳＱＴｇｌｙＦｃ［配列番号１２０；ＰＤ−Ｌ１を標的としないアフィマーＦｃ融合体］、アベルマブとそのアイソタイプ対照、ＨｕＩｇＧ１）及び対照（抗マウスＰＤ−Ｌ１クローン１０Ｆ９．Ｇ２とそのアイソタイプ対照、ラットＩｇＧ２ｂ）の存在下または非存在下で実施した。試験生成物は３つの濃度（７００、７０、及び７ｎＭ）で評価され、対照は１つの濃度（７０ｎＭ）で評価された。培養３日後、細胞培養上清を回収し、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）及びインターロイキン−２（ＩＬ−２）の分泌をＥＬＩＳＡを用いて評価した。抗マウスＰＤ−Ｌ１及びアベルマブは、そのアイソタイプ対照と比べてＩＬ−２（データは示さず）及びＩＦＮγの分泌で増加を誘導した（図４）。同様に、ＡＶＡ０４−１８２Ｆｃ処理は、ＳＱＴＧｌｙＦｃと比べて、調べたすべての濃度でＩＬ−２（データは示さず）及びＩＦＮγの分泌の増加をもたらした（図４）。
【０５６４】
実施例７：ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１細胞ベースの遮断アッセイにおける抗ＰＤ−Ｌ１アフィマーＡＶＡ０４−２５１Ｆｃの活性
ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１細胞ベースのアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）は製造元の指示に従って実施した。簡単に説明すると、ヒトＰＤ−１を発現しているＪｕｒｋａｔＴ細胞と、ＮＦＡＴ応答エレメント（ＮＦＡＴ−ＲＥ）によって駆動されるルシフェラーゼレポーターとを、ヒトＰＤ−Ｌ１と抗原に依存しない方法で同族ＴＣＲを活性化するように設計された操作された細胞表面タンパク質とを発現しているＰＤ−Ｌ１  ａＡＰＣ／ＣＨＯ−Ｋ１細胞と共に共培養した。共培養すると、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１の相互作用はＴＣＲシグナル伝達およびＮＦＡＴ−ＲＥが介在する発光を阻害する。抗ＰＤ−Ｌ１アフィマーＡＶＡ０４−２５１Ｆｃの添加は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１の相互作用を遮断し、抑制性シグナルを放出し、ＴＣＲの活性化及びＮＦＡＴ−ＲＥが介在する発光を生じる（図７）。Ｂｉｏ−Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ）及びＣｌａｒｉｏｓｔａｒプレートリーダー（ＢＭＧ  ＬａｂＴｅｃｈ）でのシグナル読み取りを使用して生物発光シグナルを検出し、且つ定量した。
【０５６５】
実施例８：６３２３（ＭＡＬ−ＰＥＧ８−Ｓｅｒ−Ｄ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−ボロＰｒｏ）の合成プロトコール
マレイミド６３２３（マレイミド［ＭＡＬ］−活性化ＰＥＧ８リンカー・Ｖａｌ・ボロＰｒｏ［ＶｂＰ］プロドラッグ）の化学構造及び合成スキームをそれぞれ図９及び図１０に示す。
【０５６６】
化合物３の合成
ＨＡＴＵ（０．８ｇ、２．１ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（０．８ｍＬ、４．６ｍｍｏｌ）及びＨ−Ｖａｌ−ボロＰｒｏ−ｐｎ．ＨＣｌ（化合物２，８４５ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）を氷水浴冷却下の無水ＤＭＦ（８ｍＬ）におけるＮ−Ｂｏｃ−Ｄ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−ＯＨ（化合物１，５７２ｍｇ、２ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。得られた混合物を室温で２時間撹拌し、次いで真空にて濃縮した。残留物を酢酸エチル（１００ｍＬ）で溶解し、０．１ＮのＫＨＳＯ４（３×２０ｍＬ）、５％ＮａＨＣＯ３（３×２０ｍＬ）、ブライン（２０ｍＬ）で順次洗浄した。有機相を無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空下で蒸発させて、Ｎ−Ｂｏｃ−Ｄ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ｖａｌ−Ｌ−ボロＰｒｏ−ｐｎを得、次いでそれを氷水冷却下のジオキサン（２０ｍＬ）における４ＮのＨＣｌの溶液に加えた。得られた混合物を室温で２時間撹拌し、次いで真空にて濃縮した。残留物を真空にてジクロロメタン（３×３０ｍＬ）と共蒸発させて完全に乾燥させた。このようにして化合物３が白色粉末として得られた（２工程で１．０ｇ、９２％）。
【０５６７】
化合物４の合成
Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ＯｔＢｕ）−Ｄ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ｖａｌ−Ｌ−ボロＰｒｏ−ｐｎは、Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ−（ＯｔＢｕ）−ＯＨと化合物３を上述と同じ方法でカップリングすることによって調製した。次いで、ＦｍｏｃをＤＭＦ中のピペリジンの２０％によって除去した。得られた混合物を真空にて濃縮し、残留物を完全に乾燥するまで真空中にてジクロロメタン（３×３０ｍＬ）と共蒸発させて、粗精製化合物４を得て、これをさらに精製することなく次の工程にそのまま用いた。
【０５６８】
化合物６３２３の合成
ＭＡＬ−ｄＰＥＧ８−Ｓｅｒ（ＯｔＢｕ）−Ｄ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ｖａｌ−Ｌ−ボロＰｒｏ−ｐｎは、ＭＡＬ−ｄＰＥＧ８−酸を０．２ｍｍｏｌのスケールにて上述と同じ方法で粗精製化合物４とカップリングすることによって調製した。次いで、ＤＣＭ中５０％のＴＦＡによってＯｔＢｕを除去した。得られた混合物を真空にて濃縮し、残留物を完全に乾燥するまで真空にてジクロロメタン（３×１０ｍＬ）と共蒸発させて、粗精製のＭＡＬ−ｄＰＥＧ８−Ｓｅｒ−Ｄ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ｖａｌ−Ｌ−ボロＰｒｏ−ｐｎを得、ヘキサン・アセトニトリル・水にてｐＨＢ（ＯＨ）２と反応させてピナンジオール基を除去することによって、それをさらに脱保護した。水層を分離し、次いで水中の２０％〜２５％のアセトニトリル（０．１％ＴＦＡを含む）で溶出するセミ分取ＨＰＬＣによって精製した。所望の画分を回収し、凍結乾燥して、良好な無色の結晶として化合物６３２３を得た（最後の３つの工程で４０ｍｇ、１９％）。
【０５６９】
実施例９：６３２５（ＮＨＳ−ＰＥＧ８−Ｓｅｒ−Ｄ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−ボロＰｒｏ）の合成プロトコール
６３２５（ＮＨＳ活性化ＰＥＧ８リンカー・ＶｂＰプロドラッグ）の化学構造及び合成スキームをそれぞれ図１１及び図１２に示す。
【０５７０】
化合物２の合成
ＤＳＣ（７１ｍｇ、０．２７５ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（０．１ｍＬ、０．５８ｍｍｏｌ）を氷水浴冷却下で無水ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中の化合物１（５１ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、次いで氷水浴冷却下ｐＨ７．８のリン酸緩衝液（５ｍＬ）におけるＮＨ２−ｄＰＥＧ（登録商標）８−酸（１１０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）の別の溶液にゆっくり添加した。反応混合物を室温で１時間撹拌し、次いで２％〜９８％アセトニトリル水溶液（０．１％ＴＦＡを含む）で溶出するセミ分取ＨＰＬＣによって精製した。所望の画分を回収し、凍結乾燥して、化合物２（２工程で１２０ｍｇ、７７％）を得た。
【０５７１】
化合物４の合成
ＨＡＴＵ（３０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（２８μＬ、０．１６ｍｍｏｌ）及び化合物３（５３ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ；化合物６３２３の合成から；実施例８）を氷水浴冷却下の無水ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中の化合物２（５０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。得られた混合物を室温で１時間撹拌し、次いで２０％〜９８％のアセトニトリル水溶液（０．１％ＴＦＡを含む）で溶出するセミ分取ＨＰＬＣによって精製した。所望の画分を回収し、凍結乾燥して化合物４（８０ｍｇ、７９％）を得た。
【０５７２】
化合物５の合成
氷水浴冷却下で、化合物４（８０ｍｇ、０．０６３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（０．５ｍＬ）溶液にＴＦＡ（１．０ｍＬ）を加えた。得られた混合物を室温で２時間撹拌し、次いで真空で濃縮した。残留物を真空にてジクロロメタン（３×１０ｍＬ）と共蒸発させて完全に乾燥させ、次いで水・アセトニトリル・ヘキサンの混合物（２：１：２、３．０ｍＬ）に溶解した。ＰｈＢ（ＯＨ）２（８ｍｇ、０．０６５ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を室温で３時間撹拌し、次いで真空にて濃縮した。残留物を、２０％〜９８％のアセトニトリル水溶液（０．１％ＴＦＡを含む）で溶出するセミ分取ＨＰＬＣによって精製した。所望の画分を回収し、凍結乾燥して化合物５（５７ｍｇ、８８％）を得た。
【０５７３】
化合物６３２５の合成
ＤＳＣ（１５．５ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ（３０μＬ、０．２１ｍｍｏｌ）を、氷水浴冷却下で化合物５（５７ｍｇ、０．０５６ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１．５ｍＬ）溶液に加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、次いで５％〜９８％アセトニトリル水溶液（０．１％ＴＦＡを含む）で溶出するセミ分取ＨＰＬＣによって精製した。所望の画分を回収し、凍結乾燥して白色の粉末として化合物６３２５（２４ｍｇ、５３％）を得た。
【０５７４】
実施例１０：マレイミド化学を用いた化合物６３２３のＡＶＡ０４−２５１  ＢＨ  ｃｙｓへのコンジュゲート
ＡＶＡ０４−２５１  ＢＨ  ｃｙｓ・６３２３プロドラッグの合成スキームを図１３に示す。
【０５７５】
化合物６３２３（ＭＡＬ−ＰＥＧ８−Ｓｅｒ−ＤＡｌａ−Ｐｒｏ−ＶｂＰ；実施例８）を１００ｍＭの濃度でＤＭＳＯに溶解した。１ｍｇ／ｍＬのＡＶＡ０４−２５１  ＢＨ  ｃｙｓの１ｍＬ試料を５０ｍＭのＭＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＴＣＥＰ、ｐＨ６の１Ｌに対して一晩透析した。化合物６３２３をＡＶＡ０４−２５１  ＢＨ  ｃｙｓにそれぞれ１００：１のモル比で加えた。この混合物を室温で一晩撹拌した（１７時間）。コンジュゲートしなかった化合物６３２３は、１ｍＬのＨｉｓＴｒａｐ  ＦＦカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で取り除いた。コンジュゲートしたＡＶＡ０４−２５１  ＢＨ  ｃｙｓ・６３２３プロドラッグを１ＭのイミダゾールでＨｉｓＴｒａｐカラムから溶出し、ＰＢＳ１×（２×１Ｌ）に対して透析してイミダゾールを取り除き、緩衝液を交換した。得られた溶液の濃度は、ＡＶＡ０４−２５１  ＢＨ    ｃｙｓ（３９１５１Ｍ−１ｃｍ−１；ＥｘＰＡＳｙ  ＰｒｏｔＰａｒａｍ）の配列から算出された吸光係数を用いて２８０ｎｍでの吸光度から決定した。
【０５７６】
続いて、マレイミド化学によるＡＶＡ０４−２５１  ＢＨ  ｃｙｓのＩＲＤｙｅ  ８００ＣＷへのコンジュゲートがその結合能力を改変しないことは結合ＥＬＩＳＡによって示された（図２０）。
【０５７７】
簡単に説明すると、ヒトＰＤ−Ｌ１Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）キメラタンパク質を炭酸緩衝液中０．５μｇ／ｍＬで９６ウェルプレートにコーティングした。ＰＢＳ中の５％カゼインによる飽和後、プレートを洗浄し、コンジュゲートしたアフィマーまたはコンジュゲートしていない対照の希釈液を９０分間インキュベートした。次いで、プレートを洗浄し、ビオチン化ポリクローナル抗シスタチンＡ抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を加え、プレートを１時間インキュベートした。プレートを洗浄し、ストレプトアビジン・ＨＲＰを用いて結合したアフィマーを検出した。最後の洗浄工程の後、ＴＭＢを加え、プレートを４５０ｎｍで読み取った。コンジュゲートしたアフィマー（ＡＶＡ０４−２５１  ＢＨ  ｃｙｓ−８００）は、親分子（ＡＶＡ０４−２５１  ＢＨ  ｃｙｓ；図２０）と比較して類似のＥＣ５０を示した。
【０５７８】
実施例１１：ＮＨＳ化学を用いた化合物６３２５のＡＶＡ０４−１８２Ｆｃへのコンジュゲート
ＡＶＡ０４−１８２Ｆｃ・６３２５プロドラッグの合成スキームを図１４に示す。
【０５７９】
化合物６３２５（ＮＨＳ−ＰＥＧ８−Ｓｅｒ−ＤＡｌａ−Ｐｒｏ−ＶｂＰ；実施例９）を１００ｍＭの濃度でＤＭＳＯに溶解した。ＡＶＡ０４−１８２ＦｃをＰＢＳで１ｍｇ／ｍＬに希釈した。１Ｍのリン酸カリウム、ｐＨ９の１／１０容量の添加のよってｐＨが上昇した。化合物６３２５をそれぞれ４：１のモル比でＡＶＡ０４−１８２Ｆｃに加えた。この混合物を室温で一晩撹拌した（１７時間）。反応混合物を５ｍＬのＺｅｂａ  Ｓｐｉｎ脱塩カラム（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，７０００ＭＷＣＯ）に通し、１ＬのＰＢＳに対して透析することによって、コンジュゲートしなかった化合物６３２５を取り除き、緩衝液を交換した。得られた溶液の濃度は、ＡＶＡ０４−１８２  Ｆｃ（９２４３０Ｍ−１ｃｍ−１；ＥｘＰＡＳｙ  ＰｒｏｔＰａｒａｍ）の配列から算出した吸光係数を用いて２８０ｎｍでの吸光度から決定した。
【０５８０】
実施例１２：ＭＢ４９同系マウス膀胱癌モデルにおけるＶｂＰと組み合わせたＡＶＡ０４−１８２Ｆｃによる処理後の腫瘍増殖阻害
０日目に動物あたり１×１０６個のＭＢ４９細胞をマウス（ｎ＝１０／群、Ｃ５７ＢＬ／６）に右脇腹に皮下接種した。ＡＶＡ０４−１８２Ｆｃ及びＳＱＴｇｌｙ  Ｆｃ対照（ＰＤ−Ｌ１を標的としないアフィマーＦｃ融合体）を１０日間にわたって３回ＩＰ経路を介した１０ｍｇ／ｋｇ及び２０ｍｇ／ｋｇで調べた。ＶｂＰ（２０ｇ；Ｔｕｆｔｓ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）は、平均腫瘍体積が６０ｍｍ３に達したときに、無作為化後から出発して週５日、経口で４週間投与した。
【０５８１】
処理開始から２１日後、腫瘍の増殖を分析した。ＶｂＰによる群対照（ＳＱＴｇｌｙ  Ｆｃ）はＳＱＴｇｌｙ  Ｆｃのみと比べて有意な腫瘍増殖阻害を示す（ｐ＜０．００１、ダネットの検定）（図１５）。
【０５８２】
単剤療法（ＡＶＡ０４−１８２ＦｃまたはＶｂＰ）間で有意差は見られなかったが、ＡＶＡ０４−１８２  ＦｃとＶｂＰによる処理後に相加効果が観察され、ＳＱＴｇｌｙ  ＦｃとＶｂＰの併用群と比べて、その群の一部のマウスに腫瘍退縮が生じた（ｐ＜０．０１、ダネットの検定）。
【０５８３】
免疫応答に対する影響を評価するために、ＭＢ４９細胞の接種後６０日後に完全な退行を示したマウスにて再免疫試験を行った。新しい腫瘍を発症したマウスがいなかったということは、記憶反応を誘発することができる特定のＴ細胞活性化の十分な増強を裏付けている。予想通り、ＭＢ４９細胞の同じ培養物を接種したナイーブマウスは腫瘍を発症した（図１６）。
【０５８４】
実施例１３：結腸直腸癌のＣ５７ＢＬ／６マウス同系モデルにおけるヒト化ＰＤ−Ｌ１ＭＣ３８でのＶｂＰと組み合わせたＡＶＡ０４−２５１Ｆｃによる処理後の腫瘍増殖阻害
ヒト化ＰＤ−Ｌ１ＭＣ３８腫瘍細胞株（マウスＰＤ−Ｌ１細胞外ドメインが同等のヒトドメインに置き換えられた；ＣｒｏｗｎＢｉｏ  Ｉｎｃ）をマウス（ｎ＝８／群、Ｃ５７ＢＬ／６）に右脇腹領域で皮下接種した。腫瘍が８０ｍｍ３になったらＡＶＡ０４−２５１Ｆｃ及び関連する対照（ＳＱＴｇｌｙ  Ｆｃ）をＩＰ経路を介して注入した。処理は１０ｍｇ／ｋｇの用量（ＡＶＡ０４−２５１Ｆｃ及びその対照、ＳＱＴｇｌｙ  Ｆｃ）で週２回、３週間施行した。ＶｂＰ（Ｔｕｆｔｓ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）は０．０２ｍｇ／マウスで週５回（２日間休み）経口投与した。全体として、腫瘍増殖阻害は双方の処理で示された（図１７）。ＡＶＡ０４−２５１Ｆｃで処理したマウスはすべて、対照と比較して腫瘍サイズが縮小した。ＶｂＰによる処理後、単剤療法と比較して、１３日目に腫瘍増殖の回避を示したマウスはいなかった。
【０５８５】
腫瘍の接種から７０日後、ＡＶＡ０４−２５１Ｆｃ及びＶｂＰで処理した群の３匹のマウスにｈｕＭＣ３８細胞株の２回目の接種を行い（対照群は同時に接種した）、免疫系が記憶反応を起こし、その後の腫瘍増殖を防ぐかどうかを評価した。図１９に示すように、２回目の接種から１０日後、処理群の腫瘍は８０ｍｍ３より小さかった一方で、対照群では腫瘍は＞７５０ｍｍ３に達した。
【０５８６】
実施例１４：Ａ３７５マウス異種移植モデルにおけるＡＶＡ０４−２５１Ｆｃ−８００の生体内分布
ヒトＰＤ−Ｌ１を発現する腫瘍に対して抗ＰＤ−Ｌ１アフィマーを向けることは、蛍光イメージングを使用して経時的に追跡されたＩＲ色素結合アフィマーの生体内分布に基づいてマウス異種移植モデルで評価した。ＡＶＡ０４−２５１ＦｃはＮＨＳ化学によってＩＲ色素８００ＣＷ（ＬＩ−ＣＯＲ）にコンジュゲートし、タンパク質上のアクセス可能なアミノ基を修飾した。ＡＶＡ０４−２５１Ｆｃ（ＰＢＳ中１ｍｇ／ｍＬ）をＩＲ色素８００ＣＷ（４ｍｇ／ｍＬ水中）と共に４：１の色素：タンパク質の化学量論にて暗条件、室温で２時間（約２３℃）インキュベートした。製造元の指示書に従って５ｍＬのＺｅｂａ  Ｓｐｉｎ脱塩カラム（ＭＷＣＯ７０００；Ｐｉｅｒｃｅ）を用いて色素結合アフィマー（ＡＶＡ０４−２５１Ｆｃ−８００）から遊離色素を分離した。色素：タンパク質の比は、次の式に従って２８０ｎｍ及び７８０ｎｍでの吸光度に基づいて算出した。
【０５８７】
色素：タンパク質の比＝（Ａ７８０／色素）／（Ａ２８０−（０．０３×Ａ７８０））／εタンパク質
０．０３は２８０ｎｍでのＩＲ色素８００ＣＷの吸光度の補正係数であり、ε色素及びεタンパク質は、それぞれＡＶＡ０４−２５１Ｆｃについての色素（２７０，０００Ｍ−１ｃｍ−１）及びタンパク質（１１５０００Ｍ−１ｃｍ−１）のモル吸光係数である。
【０５８８】
色素をコンジュゲートしたＡＶＡ０４−２５１Ｆｃ−８００のヒトＰＤ−Ｌ１への結合を、ＰＤ−Ｌ１結合ＥＬＩＳＡを使用してコンジュゲートしなかったアフィマーと比較した（実施例１０に記載されたように）。データは、匹敵するＥＣ５０値に基づいて、色素のコンジュゲートがＰＤ−Ｌ１標的に対するＡＶＡ０４−２５１Ｆｃの親和性に影響を与えないことを示している（図２１）。さらに、色素のコンジュゲートはＳＥＣ  ＨＰＬＣ（１×ＰＢＳにて０．８ｍＬ／分で流すＹａｒｒａ３０００カラム）に基づいて、さらに高い凝集体のレベルに影響を与えないことが示された。
【０５８９】
Ａ３７５マウス異種移植モデルは、Ａ３７５細胞（１００μＬの滅菌ＰＢＳにて５ｘ１０６個の細胞［ＡＴＣＣ］）の動物の脇腹への皮下注射後、メス無胸腺ヌードマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）で確立された。腫瘍を週に３回モニターし、発達中の腫瘍をノギスで測定した。３匹のマウスの尾静脈へのＡＶＡ０４−２５１Ｆｃ−８００（０．１または０．５ｎｍｏｌ）の静脈内投与に先立って腫瘍を５００〜１０００ｍｍ３の間に成長させた。注射直後（時間０）及び投与後１、２、４、８、２６時間にＸｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳ２００バイオフォトニックイメージャーで蛍光画像を記録した。ＡＶＡ０４−２５１Ｆｃ−８００（０．５ｎｍｏｌ）を投与された代表的な動物（Ｍ４−１）からの、２６時間の時点での腫瘍への抗ＰＤ−Ｌ１アフィマーの標的化を示す経時的画像を図２２に提示する。矢印は、腎臓、肝臓、腫瘍のおおよその位置を示す。
【０５９０】
ＡＶＡ０４−２５１Ｆｃ−８００（動物Ｍ４−２；０．１ｎｍｏｌ）の投与後の腫瘍の切開に続いて、色素をコンジュゲートしたアフィマーの腫瘍浸透が実証された。投与後２６時間でマウスを安楽死させ、腫瘍を取り出し、半分に切断した。切開した腫瘍を以前に記載されたように画像化した（図２３）。
【０５９１】
実施例１５：アフィマー・リンカー・ＶｂＰプロドラッグの試験管内でのｒｈＦＡＰαの切断
組換えヒト線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ｒｈＦＡＰα）によるアフィマー・リンカー・ＶｂＰプロドラッグの切断後の生物学的に活性があるＶｂＰの遊離の動態を、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによる遊離されたＶｂＰの経時的な定量に基づいて調べた。
【０５９２】
異なる数のエチレングリコールサブユニットに基づく、様々な長さの合成されたＭＡＬ活性化及びＮＨＳ活性化ＦＡＰαで切断可能なリンカー・ＶｂＰプロドラッグの例は実施例８及び９に提示されている。ＭＡＬ活性化リンカー・ＶｂＰプロドラッグ（例えば、６３２３）［ＰＥＧ８］、６３２４［ＰＥＧ１６］及び６３２７［ＰＥＧ２４］）は続いて、ＡＶＡ０４−２５１  ＢＨ  ｃｙｓを含むアフィマーにおける単一のＣｙｓ残基にコンジュゲートした。同様に、ＮＨＳ活性化リンカー・ＶｂＰプロドラッグ（例えば、６３２５［ＰＥＧ８］、６３２６［ＰＥＧ１６］及び６３２８［ＰＥＧ２４］）は、ＡＶＡ０４−１８２Ｆｃを含むアフィマーの遊離アミノ基にコンジュゲートした。代表的なアフィマーのコンジュゲート法を実施例１０及び１１に提示する。
【０５９３】
アフィマー・リンカー・ＶｂＰプロドラッグの試料（ＰＢＳ中５μＭ）をｒｈＦＡＰα（１２ｎＭ最終濃度；Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ）とともに３７℃で１５分間インキュベートした。ＴＣＡ（５％最終濃度）を添加して反応を停止させ、得られた沈殿タンパク質を遠心分離（６，０００ｇで１０分間）によって取り出した。対照試料は、ｒｈＦＡＰαを添加する前にＴＣＡを添加して調製した。ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ（Ａｇｉｌｅｎｔ  １２００  ＨＰＬＣを伴ったＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ４０００Ｑｔｒａｐ質量分光計）は、ＶｂＰを特異的に検出するように設計された複数反応モニタリング法を使用して実施した。簡単に説明すると、クロマトグラフィーは９５：５の水：５％メタノール（０．１％ギ酸、５ｍＭアンモニウム酸）から５：９５の水：メタノール（０．１％ギ酸、５ｍＭアンモニウム酸）までの３分間にわたる線形勾配によるＺｏｒｂａｘ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  Ｐｌｕｓ  Ｃ１８カラム（４．６×５０ｍｍ，１．８ｍ）で実施した。親イオンは２１５．３Ｄａであり、娘イオンは１２６．１Ｄａであった。内部標準は、ｐＨ２のｄ８−Ｖａｌ−ボロＰｒｏ水溶液（親イオン２２３．３Ｄａ、娘イオン１２６．１Ｄａ）だった。
【０５９４】
それぞれＰＥＧ８−及びＰＥＧ２４−リンカー・ＶｂＰプロドラッグを組み込んでいるＡＶＡ０４−２５１  ＢＨ  ｃｙｓ−６３２３及びＡＶＡ０４−１８２Ｆｃ−６３２８からのＶｂＰの遊離を示す代表的なＬＣ−ＭＳ／ＭＳクロマトグラムを図２４に示す。データは、さまざまなＰＥＧ長のリンカー・ＶｂＰプロドラッグを組み込み、且つＭＡＬコンジュゲート化学及びＮＨＳコンジュゲート化学の双方に基づくアフィマー・リンカー・ＶｂＰプロドラッグからのｒｈＦＡＰαが触媒するＶｂＰの遊離を裏付けている。
【０５９５】
続いて、アフィマー・リンカー・ＶｂＰプロドラッグの試料（ＰＢＳ中５．５μＭ）をｒｈＦＡＰα（１２ｎＭ最終濃度；Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）とともに３７℃でインキュベートした。ｒｈＦＡＰαの添加直後（時間０）、続いて２、５、及び１０分間のインキュベート後にアリコートを取り出した。ＴＣＡ（５％最終濃度）を添加して反応を停止させ、得られた沈殿タンパク質を遠心分離（６，０００ｇで１０分間）によって取り出した。遊離されたＶｂＰを、０．１〜１０００ｎｇ（０．４７〜４７００ｎＭ；Ｔｕｆｔｓ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）のＶｂＰの範囲で作成された標準曲線に対して内挿されたピーク面積に基づいて、以前記載されたようにＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって定量した。
【０５９６】
６３２５（ＰＥＧ８・リンカー・ＶｂＰプロドラッグ）、６３２６（ＰＥＧ１６・リンカー・ＶｂＰプロドラッグ）、及び６３２８（ＰＥＧ２４・リンカー・ＶｂＰプロドラッグ）にコンジュゲートしたＡＶＡ０４−１８２ＦｃからのＦＡＰαが触媒するＶｂＰ遊離の経時変化を図２５に示す。データが、アフィマー・リンカー・ＶｂＰプロドラッグからのＶｂＰの遊離速度とＰＥＧリンカーの長さとの間の依存性を示すということは、所望の治療プロファイルに応じてＶｂＰ遊離動態を変更する能力を示唆している。
【０５９７】
実施例１６：スプラーグドーリーラットにおける急性毒性試験でのＶｂＰと比較したリンカー・ＶｂＰプロドラッグの評価
ＶｂＰの最大耐量（ＭＴＤ）の１０倍、すなわち、ＳＤラットの少なくとも２０パーセントを殺すＶｂＰの用量の１０倍に相当する用量で皮下投与された代表的なリンカー・ＶｂＰプロドラッグの生体内での安全性の比較がスプラーグドーリー（ＳＤ）ラットで確立された。
【０５９８】
投与前に、ＭＡＬ部分を不活性化するために、ＭＡＬで活性化した６３２３（ＰＥＧ８・リンカー・ＶｂＰプロドラッグ）をＬ−システインにコンジュゲートした。Ｌ−システイン（５ｍｇ；Ｓｉｇｍａ）を１ｍＬのＭＡＬ活性化６３２３（５０ｍＭのＭＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ６にて４．８ｍＭ）に溶解し、１０：１のＬ−システイン：６３２３のおおよその化学量論を達成した。得られた溶液を室温で２〜３時間インキュベートした後、ＬＣ−ＭＳ分析により反応が完了したことを確認した。得られたＣｙｓ修飾６３２３は、Ｓｕｐｅｌｃｏ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｃ１８カラムを用いた２：９８のアセトニトリル：水（０．１％ＴＦＡ）の１０分間の勾配による分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって精製し、その後凍結乾燥した。
【０５９９】
６匹のオスＳＤラット（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ）に滅菌ＰＢＳ中１．４７ｍｇ／ｋｇのＣｙｓ修飾６３２３（０．２５ｍｇのＶｂＰ／ｋｇに相当）を皮下注射した。動物は、投与後１、２、４、６、８、及び２４時間で毒性の兆候について観察し、安全性の評価項目は２４時間生存率；２４時間で生き残った動物の数／処理された総数だった。図２６は、滅菌ＰＢＳ中０．０１０、０．０２５、及び０．０５０ｍｇのＶｂＰ／ｋｇで皮下投与したＣｙｓで修飾された６３２３（１．４７ｍｇ／ｋｇ；０．２５ｍｇのＶｂＰ／ｋｇに相当）及びＶｂＰ（Ｔｕｆｔｓ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）についての安全性比較データを提示する。この試験では、ＶｂＰについてのＭＴＤは０．０２５ｍｇのＶｂＰ／ｋｇと見なされた。２４時間で、ＶｂＰのＭＴＤの１０倍に相当する用量でＣｙｓ修飾６３２３を投与された６匹の動物のうち５匹が生存したということは、ＶｂＰと比べたＶｂＰプロドラッグの安全性裕度を示している。
【０６００】
実施例１７：Ｊ７７４マウスマクロファージ細胞株における試験管内でのアフィマー・リンカー・ＶｂＰプロドラッグが誘導するピロトーシス
アフィマー・リンカー・ＶｂＰプロドラッグは、ＦＡＰαによって切断されてＶｂＰを遊離するように設計されている。ＶｂＰは、ＮＬＲＰ１及びＣＡＲＤ８インフラマソームにおけるカスパーゼ−１の活性化によってマクロファージにてピロトーシスを誘導する（１〜３）が、ＶｂＰがプロドラッグコンジュゲートに組み込まれると、ＦＡＰαで切断可能なリンカーとのペプチド結合にバリンのアミノ基が関与するのでそうすることが阻止される。マクロファージにてピロトーシスを誘導するアフィマー・リンカー・  ＶｂＰの能力がＦＡＰαの切断に厳密に依存することを実証するために、ＡＶＡ０４−１８２ＦｃのプロドラッグコンジュゲートをｒｈＦＡＰαの存在下及び非存在下でのピロトーシスの試験管内アッセイで調べた。
【０６０１】
Ｊ７７４Ａ．１細胞（マウス単球マクロファージ；ＡＴＣＣ）は７５ｃｍ２の組織培養フラスコにてＤＭＥＭ−１０％ＦＢＳで増殖させ、ＰＢＳ中でこすり落として回収し、ＤＭＥＭ−１％ＦＢＳにて再浮遊させ、ウェルあたり５×１０３個の細胞の密度で９６ウェルプレート（ＶＷＲ）に播き、３７℃の５％ＣＯ２インキュベーターに入れた。２４時間のインキュベートの後、２５ｎＭの最終濃度でのｒｈＦＡＰα（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）の添加の有無にかかわらず、連続１０倍希釈のＶｂＰ、コンジュゲートしなかったＡＶＡ０４−１８２Ｆｃ、リンカー・ＶｂＰプロドラッグ（６３２５、６３２６及び６３２８）、及びアフィマー・リンカー・ＶｂＰプロドラッグ（ＡＶＡ０４−１８２  Ｆｃ−６３２５、−６３２６及び−６３２８）をウェルに加えた。各反応混合物を３つ組で調べ、３７℃でさらに２４時間インキュベートした。培養上清に遊離された乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ；ピロトーシスのマーカー［４］）は製造元の指示書に従ってＣｙｔｏＴｏｘ９６非放射性細胞傷害アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて測定した。ＬＤＨ濃度をＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）Ｍ２ｅマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）での吸光度（Ａ４９０）の測定によって決定した。ＬＤＨの放出率は、細胞を含まないＤＭＥＭ−１％ＦＢＳを含有するウェルのバックグラウンド放出を差し引き、ＣｙｔｏＴｏｘ９６溶解試薬によって放出されたＬＤＨの比率として得られる値を表現することによって算出した。
【０６０２】
１μＭの濃度にて、３つのアフィマー・リンカー・ＶｂＰプロドラッグすべてはｒｈＦＡＰαの存在下で有意なＬＤＨ放出を示した（明るい棒；図２７）が、非存在下では（暗い棒；図２７）では示さなかった。これは、リンカー・ＶｂＰプロドラッグについても観察された。予想通り（５）、ｒｈＦＡＰαが存在するかどうかに関係なく、ＶｂＰは有意なＬＤＨ放出を生じた。コンジュゲートしなかったアフィマーはＬＤＨ放出を生じなかった。これらの結果は、アフィマー・リンカー・ＶｂＰプロドラッグがＦＡＰα依存性にＶｂＰを遊離するが、ＦＡＰαの非存在下では生物学的に不活性のままであることを示している。
【０６０３】
実施例１８：ＢＡＬＢ／ｃマウスにおける生体内でのＣｙｓ修飾したリンカー・ＶｂＰプロドラッグが誘導するＧ−ＣＳＦの刺激
マクロファージでは、ＶｂＰはＮＬＲＰ１インフラマソームへのカスパーゼ−１の動員を誘導し、その結果、プロカスパーゼ−１を酵素的に活性があるカスパーゼ−１に処理し、次いでプロＩＬ−１を成熟した生物学的に活性がある、その後分泌される形態に処理することが示されている（３、６）。成熟したＩＬ−１βは、オートクリンとパラクリンの双方の方法で作用し、転写レベルで種々のサイトカインの発現を誘導することができる（７）。マウスでは、ＶｂＰの投与はサイトカインの発現の増加と関連しており、Ｇ−ＣＳＦの血清濃度の上昇はこの効果の強力なマーカーであることが示されている（８、９）。生体内でのＶｂＰの生物活性のマーカーとしてＧ−ＣＳＦの有効性は、ｃａｓｐ−１−／−及びＮｌｒｐ１ｂ−／−ノックアウトマウスにおける血清Ｇ−ＣＳＦ応答の完全な喪失によって支持されている（１、５）。Ｃｙｓ修飾した６３２３プロドラッグでは、ＶｂＰはバリンのアミノ基を含むペプチド結合によってＦＡＰα切断可能なリンカーに連結され、その結果、ＶｂＰはＦＡＰα切断によって遊離されるまで生物学的に不活性である。正常マウス（１０）の組織及び血液中に存在するＦＡＰα酵素活性の有意なレベルは、生体マーカーとしてのＧ−ＣＳＦの血清濃度を用いて内在性のＦＡＰαによって生体内で活性化される能力についてプロドラッグが調べられるようにする。
【０６０４】
Ｃｙｓ修飾した６３２３プロドラッグは実施例１６に記載されているように製造された。処理あたり５匹のマウスの群にて７〜８週齢のオスＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）にビヒクル（ＰＢＳ）、１．２８ｍｇ／マウスまたは０．６４ｍｇ／マウスでのＣｙｓ修飾６３２３を皮下注射した。投与の６時間後、心臓穿刺により血液を採取し、製造元の指示書に従ってマウスＧ−ＣＳＦ  Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いてＧ−ＣＳＦの血清濃度を測定した。
【０６０５】
調べた双方の用量で、１．２８ｍｇ／マウスと０．６４ｍｇ／マウスのＣｙｓ修飾６３２３（それぞれ灰色及び白色の棒；図２８）は、ビヒクル処理マウス（濃い棒；図２８）と比較してＧ−ＣＳＦの血清濃度の有意な上昇を誘導した。結果は、６３２３におけるＦＡＰα切断可能リンカーが生体内で内在性ＦＡＰαによって切断され、生物学的に活性があるＶｂＰを遊離することができることを示している。
【０６０６】
実施例１９：例示的な合成スキーム
本発明の結合剤・薬物コンジュゲートに組み込むことができるイムノＤＡＳＨ阻害剤の合成は、ＨＡＴＵ等のようなカップリング試薬を使用するカップリング反応と、それに続く必要に応じて、例えば、必要に応じて、ＢＣｌ３法またはＨＣｌ−ｐＨＢ（ＯＨ）２法のような試薬を使用する脱保護とを含んでもよい。一部の標的化合物は、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｃ１８  ５６９２２６−Ｕ  ＲＰ−ＨＰＬＣカラムを備えたＶａｒｉａｎセミ分取システムを用いたＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した。移動相は通常、水（０．１％ＴＦＡ）とアセトニトリル（０．０８％ＴＦＡ）を勾配濃度で混合して作成した。化合物のコード、構造、及び特性を表１に示す。
【０６０７】
スキーム１．一般的合成法
【化５６】
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Ｇｌｙ（１−アダマンチル）−ボロＰｒｏ（ＡＲＩ−５５４４または３１０２Ａ−２Ｃ）の合成手順の例
スキーム２．ＡＲＩ−５５４４の合成方法ａ
【化５７】
2021527042.tif 000077
【０６０８】
Ｇｌｙ（１−アダマンチル）−ボロＰｒｏ（ＡＲＩ−５５４４）の合成。４ＮのＨＣｌ（ｇ）のジオキサン（５ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）溶液をドライアイス／アセトンの冷却下で化合物１（０．８６ｇ、１．６ｍｍｏｌ）に加え、次いで室温で３時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、次いでエチルエーテル（３×１５ｍＬ）と共蒸発させて（＋）−ピナンジオール保護されたＡＲＩ−５５４４を得て、それを冷却した０．０８ＮのＨＣｌ（１０ｍＬ）に溶解した。次いで、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（ＭＴＢＥ）（１０ｍＬ）及びフェニルボロン酸（０．２２ｇ、１．７ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を室温で３時間撹拌し、水性相を分離した。ＭＴＢＥ層を０．０８ＮのＨＣｌ（５ｍＬ）で抽出し、合わせた水抽出物をエーテル（３×１０ｍｌ）で洗浄した。水相をロトバップ（＜３０℃）で濃縮し、粗生成物を分取ＨＰＬＣ（溶離液：溶媒Ａ、０．１％ＴＦＡ水溶液；溶媒Ｂ、０．０８％ＴＦＡアセトニトリル溶液）によって精製した。所望の画分を回収し、約１０ｍＬに濃縮し、凍結乾燥して、化合物ＡＲＩ−５５４４をＴＦＡ塩として得た（２工程で０．４５ｇ、６７％）。１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δ１．６０−１．７５（ｍ，１４Ｈ）、１．８５−２．１５（ｍ，６Ｈ）、３．０７（ｄｄ，Ｊ＝１１．１，６．９Ｈｚ、１Ｈ）、３．４６−３．５２（ｍ，１Ｈ）、３．７６（ｔ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ）、３．９１（ｓ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ１６Ｈ２７ＢＮ２Ｏ３ｍ／ｚ（相対強度）：５７７．５（［２ｘ（Ｍ−Ｈ２Ｏ）＋Ｈ］＋、７６）、３０７．４２（［Ｍ＋Ｈ］＋、１００）、２８９．４（［Ｍ−Ｈ２Ｏ＋Ｈ］＋、２４）。
【０６０９】
３１０２Ｃの合成手順の例
スキーム３．３１０２Ｃａの合成法
【化５８】
2021527042.tif 000078
【０６１０】
３１０２Ｃの合成。１の調製について上記に記載されている類似のカップリング反応によってＮ−Ｂｏｃ−Ｌ−３−ヒドロキシ−１−アダマンチル−グリシンから出発して、化合物２を調製した。この生成物（０．２８ｇ、０．５ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン（５．０ｍＬ）に溶解し、ＢＣｌ３  （ジクロロメタン中１Ｍ、５．０ｍＬ）を一滴ずつ加えながら−７８℃に冷却した。混合物を−７８℃で１時間撹拌し、室温にして、次いで、真空下で濃縮した。残留物をエーテル（５ｍＬ）と水（５ｍＬ）間で区分した。水性層をさらにエーテル（２×５ｍＬ）で２回洗浄し、真空で濃縮し、セミ分取ＲＰ−ＨＰＬＣでさらに精製して、ＴＦＡ塩として３１０２Ｃを（０．１３ｇ、５５％）を得た。
【０６１１】
５８７０の合成：合成スキーム：ｉ．ＤＡＳＴ；ｉｉ．ＬｉＯＨ；ｉｉｉ．Ｌ−ボロＰｒｏ−ｐｎ、ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ；ｉｖ．ＢＣｌ３。
【化５９】
2021527042.tif 000079
【０６１２】
５８７１の合成。
合成スキーム：ｉ．ＭｅＩ、Ｋ２ＣＯ３、ＤＭＦ；ｉｉ．４ｅｑ．ＤＡＳＴ及び高温；ｉｉｉ．ＬｉＯＨ；ｉｖ．Ｌ−ボロＰｒｏ−ｐｎ、ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ；ｖ．ＨＣｌ、次にｐＨＢ（ＯＨ）２。
【化６０】
2021527042.tif 000080
【０６１３】
５８７３の合成
合成スキーム：ｉ．Ｌ−ボロＰｒｏ−ｐｎ、ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ；ｉｉ．ＢＣｌ３
【化６１】
2021527042.tif 000081
【０６１４】
５８７４の合成
合成スキーム：ｉ．１ｅｑ．低温でのＤＡＳＴ；ｉｉ．ＬｉＯＨ；ｉｉｉ．Ｌ−ボロＰｒｏ−ｐｎ、ＨＡＬＵ、ＤＩＥＡ、ｉｖ．ＨＣｌ、次にｐＨＢ（ＯＨ）２。
【化６２】
2021527042.tif 000082
【０６１５】
Ｇｌｙ（３−ヒドロキシル−５，７，−ジメチル−アダマンチル）−ボロＰｒｏの合成。
合成スキーム：ｉ．ＭｅＩ、Ｋ２ＣＯ３；ｉｉ．ＴｒｉｓｙｌＮ３、ＫＨＭＤＳ；ｉｉｉ．Ｈ２／Ｐｄ−Ｃ、Ｂｏｃ２Ｏ；ｉｖ．ＫＯＨ；ｖ．ＫＭｎＯ４；ｖｉ．Ｌ−ボロＰｒｏ−ｐｎ、ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ；ｖｉｉ．ＨＣｌ次いでｐｈＢ（ＯＨ）２。
【化６３】
2021527042.tif 000083
【０６１６】
５８７９の合成。
合成スキーム：ｉ．ＤＡＳＴ；ｉｉ．ＬｉＯＨ；ｉｉｉ．Ｌ−ボロＰｒｏ−ｐｎ、ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ；ｉｖ．ＢＣｌ３。
【化６４】
2021527042.tif 000084
【０６１７】
５８８０の合成。
合成スキーム：ｉ．Ｌ−ボロＰｒｏ−ｐｎ、ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ；ｉｉ．ＢＣｌ３。
【化６５】
2021527042.tif 000085
【０６１８】
６０６７の合成。
合成スキーム：ｉ．酸化；ｉｉ．ＤＡＳＴ；ｉｉｉ．  Ｈ２／Ｐｄ−Ｃ；ｉｖ．Ｌ−ボロＰｒｏ−ｐｎ、ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ；ｖ．ＨＣｌ；  ｖｉ．ｐＨＢ（ＯＨ）２。
【化６６】
2021527042.tif 000086
【表１−１】
2021527042.tif 000087
【表１−２】
2021527042.tif 000088
【表１−３】
2021527042.tif 000089
【０６１９】
実施例２０：例示的なイムノＤＡＳＨ阻害剤
以下の表は、列３〜７にて、ＤＰＰ８、ＤＰＰ９、ＤＰＰ４、ＤＰＰ２、ＦＡＰ（線維芽細胞活性化タンパク質）及びＰＲＥＰの無細胞調製物について決定された阻害性ＩＣ５０を提供している。これらのＩＣ５０値（ｎＭ）は、以下の実施例４に記述されているプロトコールに従って決定された。計算される場合、表はまた、以下の実施例３に記載されているプロトコールに従って、全細胞におけるＤＰＰ８及びＤＰＰ９の阻害のための細胞内ＩＣ５０（「ＩＩＣ５０」）も提供している。特定の例では、表は、細胞培養においてマクロファージのピロトーシスを誘導するためのＩＣ５０も提供している。
【表２−１】
2021527042.tif 000090
【表２−２】
2021527042.tif 000091
【０６２０】
実施例２１：２９３Ｔ細胞におけるＤＰＰ活性に対する細胞内ＩＣ５０を決定するためのプロトコール。
２９３Ｔ細胞は低レベルの内在性ＤＰＰ８／９を発現しているが、ＤＰＰ  ＩＶ、ＤＰＰ  ＩＩ、またはＦＡＰを発現していないので、これによって、他のバックグラウンドＤＰＰ活性から干渉されずに細胞内ＤＰＰ８／９の評価が可能になる。（Ｄａｎｉｌｏｖａ，Ｏ．ｅｔ  ａｌ．（２００７），Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１７，５０７−５１０；Ｗａｎｇ，Ｘ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（２００５），Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，４２，９３５−９４５）この情報は化合物の細胞浸透性の評価を可能にする。
【０６２１】
材料
−２９３Ｔ細胞（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＣＲＬ−１１２６８）
−２ｍＭのＬ−グルタミン（ＶＷＲ、カタログ番号４５０００−６７６）、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ＶＷＲ、カタログ番号４５０００−６９０）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム（ＶＷＲ、カタログ番号４５０００−７１０）、４５００ｍｇ／Ｌのグルコース（ＶＷＲ、カタログ番号４５００１−１１６）、１×ペニシリン・ストレプトマイシン（ＶＷＲ、カタログ番号４５０００−６５２）によって補完したフェノールレッドを含まないＲＰＭＩ１６４０細胞培養培地（ＶＷＲ、カタログ番号４５０００−４１０）
−阻害剤またはプロドラッグ
−４０００×基質溶液（ＤＭＳＯ中の１００ｍＭのＡｌａ−Ｐｒｏ−ＡＦＣ（Ｂａｃｈｅｍ、カタログ番号Ｉ−１６８０））
−９６ウェル黒色透明底プレート（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号３５３９４８）
計装
−プレート振盪器
−Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）Ｍ２ｅマイクロプレートリーダー
プロトコール
アッセイの手順
７５ｃｍ２以上のフラスコから細胞をトリプシン処理して遠心分離し、ＰＢＳで洗浄し、ＲＰＭＩ１６４０に再浮遊させる。得られた浮遊液中の細胞を数え、７５μＬあたり１００，０００個の細胞になるように容量を調整する。９６ウェル黒色透明底プレートの縦列１の横列Ａ〜Ｃに１００μＬのＲＰＭＩ１６４０のみを加える。縦列２〜１０の残りのウェルに７５μＬの細胞浮遊液を加える。プレートを３７℃で一晩平衡化する。
【０６２２】
試料の調製：
１．アッセイ用の化合物を調製するには、ＤＭＳＯに溶解する、または環化が疑われる場合は、ｐＨ２．０の水（０．０１ＮのＨＣｌ）に溶解して最終濃度を１００ｍＭにする。ｐＨ２．０のストックについては、室温で最低４時間、最高一晩インキュベートする。これから、ＲＰＭＩ１６４０で４ｍＭストックを調製する。阻害剤がこの濃度で不溶性の場合は、１００ｍＭストックを１：１０で１０ｍＭまで希釈する。このストックを使用して、上記に記載されているように０．４ｍＭストックを調製する。各希釈試料のｐＨは、細胞培養培地のｐＨ（ｐＨ７〜８）であることを確認する必要がある。
【０６２３】
２．工程３で調製した化合物の希釈プレートを準備する。これを行うには、前に調製した４ｍＭまたは０．４ｍＭのストックを９６ウェルプレートの横列Ａに加える。これから、以下に示すように横列Ｇまで下ってＲＰＭＩ１６４０で１：１０の連続希釈を行う。横列Ｈには、ＲＰＭＩ１６４０細胞培養培地のみが必要である。
2021527042.tif 000092
【０６２４】
３．必要に応じて、工程４で調製した希釈プレートから２５μＬの化合物を縦列２〜１０でアッセイプレートに加える。各試料は３つ組で調べる必要がある。プレートを軽く振って、３７℃で２時間インキュベートする。
【０６２５】
４．この間に、基質を調製する必要がある。これを行うには、１００ｍＭストックを１：４００でＲＰＭＩ１６４０に希釈して２５０μＭの最終作業濃度にする。
【０６２６】
５．３７℃でのインキュベートが完了した後、工程５で調製した基質１０μＬを各ウェルに加える。プレートを軽く振って、３７℃で１０分間インキュベートする。完了したら、λｅｘ：４００、λｅｍ：５０５で蛍光を読み取る。
【０６２７】
データ解析
１．蛍光値をｙ値としてＰｒｉｓｍに直接取り込む。ｘ値である阻害剤濃度については、アッセイでの希釈を説明するために、希釈プレートの濃度を必ず４で割ること。ｘ値は、Ｐｒｉｓｍに取り込む前にログ値に変換する必要がある。阻害剤なしのウェル（横列Ｈ）の濃度は、−１４（１０〜１４Ｍに等しい）として入力する必要がある。
【０６２８】
２．値を入力したら、「分析」で「非線形回帰（曲線適合）」を選択する。次のプロンプトで、「対数（阻害剤）対応答」を選択する。これにより、「結果」セクションで見いだすことができるＩＣ５０値が計算されるであろう。
【０６２９】
実施例２２：ジペプチジルペプチダーゼＩＶ、ジペプチジルペプチダーゼ８、ジペプチジルペプチダーゼ９、ジペプチジルペプチダーゼＩＩ、線維芽細胞活性化タンパク質またはプロリルオリゴペプチダーゼの試験管内阻害アッセイのためのプロトコール
このアッセイは、組換えヒトジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）、ジペプチジルペプチダーゼ８（ＤＰＰ８）、ジペプチジルペプチダーゼ９（ＤＰＰ９）、ジペプチジルペプチダーゼＩＩ、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）またはプロリルオリゴペプチダーゼ（ＰＲＥＰ）に対する種々の阻害剤のＩＣ５０を決定するのに使用されてもよい。
【０６３０】
材料
酵素
−組換えヒトＤＰＰＩＶ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号１１８０−ＳＥ）
−組換えヒトＤＰＰ８（Ｅｎｚｏ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号ＢＭＬ−ＳＥ５２７）
−組換えヒトＤＰＰ９（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号５４１９−ＳＥ）
−組換えヒトＤＰＰＩＩ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号３４３８−ＳＥ）
−組換えヒトＦＡＰ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号３７１５−ＳＥ）
−組換えヒトＰＲＥＰ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号４３０８−ＳＥ）
アッセイ緩衝液
−２５ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ８．０（ＤＰＰＩＶ及びＤＰＰ９）
−５０ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ７．５（ＤＰＰ８）
−２５ｍＭのＭＥＳ、ｐＨ６．０（ＤＰＰＩＩ）
−５０ｍＭのＴｒｉｓ、１４０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．５（ＦＡＰ）
−２５ｍＭのＴｒｉｓ、０．２５ＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．５（ＰＲＥＰ）
基質
−４０００×基質溶液（ＤＭＳＯ、ＤＰＰＩＶ、ＤＰＰ８及びＤＰＰ９における１００ｍＭのＧｌｙ−Ｐｒｏ−ＡＭＣ（ＶＷＲ、カタログ番号１０００４２−６４６））
−４０００×基質溶液（ＤＭＳＯ、ＤＰＰＩＩにおける１００ｍＭのＬｙｓ−Ｐｒｏ−ＡＭＣ（Ｂａｃｈｅｍ、カタログ番号Ｉ−１７４５））
−１００×基質溶液（ＤＭＳＯ、ＦＡＰ及びＰＲＥＰにおける２．５ｍＭのＺ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−ＡＭＣ（ＶＷＲ、カタログ番号Ｉ−１１４５．００５０ＢＡ））
一般材料
−化合物
−９６ウェル黒色透明底プレート（Ｃｏｓｔａｒ、カタログ番号３６０３）
計装
−プレート振盪器
−Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）Ｍ２ｅマイクロプレートリーダー
プロトコール
１．アッセイ用の化合物を調製するには、それをＤＭＳＯに溶解する、または環化が疑われる場合は、ｐＨ２．０の水（０．０１ＮのＨＣｌ）に溶解して最終濃度を１００ｍＭにする。ｐＨ２．０のストックについては、室温で最低４時間、最高一晩インキュベートする。これから、５０ｍＭのＴｒｉｓでｐＨ７．４の１ｍＭストックを準備する。阻害剤がこの濃度で不溶性の場合は、１００ｍＭストックを希釈する１：１０で１０ｍＭまで希釈する。このストックを使用して、上記に記載されているように０．１ｍＭストックを準備する。
【０６３１】
２．調べる化合物ストック用の希釈プレートを準備する。前もって調製した０．１ｍＭ及び／または１ｍＭのストックを９６ウェルプレートの横列Ａに加える。これから、以下に示すように縦列を下って適切なアッセイ緩衝液で１：１０での連続希釈を行う。
【０６３２】
３．ＤＭＳＯストックを適切なアッセイ緩衝液で希釈することによって２０×基質溶液を調製する。
【０６３３】
４．酵素を適切なアッセイ緩衝液で希釈する。希釈係数はロットに依存し、アッセイを実施する前に決定する必要がある。最終的な酵素濃度は、ＤＰＰＩＶ、８、９、ＩＩ、ＦＡＰ、ＰＲＥＰについてそれぞれ０．１、０．８、０．４、０．２、１．２、０．６ｎＭである必要がある。縦列２〜１０にて必要な各ウェルに１８０μＬを加える。縦列１は、以下で示すように調製する必要がある。
【０６３４】
５．必要に応じて、工程２で調製した希釈プレートから対象とする化合物２０μＬをアッセイプレートの縦列２〜１０に加える。各試料は３つ組で調べる必要がある。これを室温で１０分間インキュベートし、最初の２分間プレートを振盪する。
【０６３５】
６．工程３で調製した２０×基質１０μＬを各ウェルに加え、これを室温で１５分間インキュベートし、最初の２分間プレートを振盪する。
【０６３６】
７．λｅｘ：３８０、λｅｍ：４６０での蛍光を読み取る。
【０６３７】
データ解析
１．ウェルＡ１、Ｂ１、Ｃ１のブランクの値を平均し、残りのウェルからこれを差し引く。得られた蛍光値をｙ値としてＰｒｉｓｍに取り込む。ｘ値である化合物濃度については、アッセイプレートでの希釈を説明するために、必ず希釈プレートの濃度を１０．５で割ること。これらは、Ｐｒｉｓｍに取り込む前にログ値に変換する必要がある。
【０６３８】
２．値を入力したら、「分析」で「非線形回帰（曲線適合）」を選択する。次のプロンプトで、「対数（阻害剤）対応答」を選択する。これにより、「結果」セクションで見いだすことができるＩＣ５０値が計算されるであろう。
【０６３９】
引用文献
１．Ｏｋｏｎｄｏ  ＭＣ，Ｒａｏ  ＳＤ，Ｔａａｂａｚｕｉｎｇ  ＣＹ，Ｃｈｕｉ  ＡＪ，Ｐｏｐｌａｗｓｋｉ  ＳＥ，Ｊｏｈｎｓｏｎ  ＤＣ，Ｂａｃｈｏｖｃｈｉｎ  ＤＡ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｐｐ８／９  Ａｃｔｉｖａｔｅｓ  ｔｈｅ  Ｎｌｒｐ１ｂ  Ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ．Ｃｅｌｌ  Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２０１８；２５（３）：２６２−７，ｅ５．ｐｕｂ，２０１８／０２／０６．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｈｅｍｂｉｏｌ．２０１７．１２．０１３．ＰｕｂＭｅｄ．ＰＭＩＤ：２９３９６２８９；ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ５８５６６１０．
２．Ｊｏｈｎｓｏｎ  ＤＣ，Ｔａａｂａｚｕｉｎｇ  ＣＹ，Ｏｋｏｎｄｏ  ＭＣ，Ｃｈｕｉ  ＡＪ，Ｒａｏ  ＳＤ，Ｂｒｏｗｎ  ＦＣ，Ｒｅｅｄ  Ｃ，Ｐｅｇｕｅｒｏ  Ｅ，ｄｅ  Ｓｔａｎｃｈｉｎａ  Ｅ，Ｋｅｎｔｓｉｓ  Ａ，Ｂａｃｈｏｖｃｈｉｎ  ＤＡ．ＤＰＰ８／ＤＰＰ９  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓ  ｆｏｒ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２０１８；２４（８）：１１５１−６．Ｅｐｕｂ，２０１８／０７／０４．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓ４１５９１−０１８−００８２−ｙ．ＰｕｂＭｅｄ．ＰＭＩＤ：２９９６７３４９；ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ６０８２７０９．
３．Ｚｈｏｎｇ  ＦＬ，Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  Ｋ，Ｔｅｏ  ＤＥＴ，Ｔａｎ  ＫＹ，Ｌｉｍ  Ｃ，Ｈａｒａｐａｓ  ＣＲ，Ｙｕ  ＣＨ，Ｘｉｅ  ＷＨ，Ｓｏｂｏｔａ  ＲＭ，Ａｕ  ＶＢ，Ｈｏｐｋｉｎｓ  Ｒ，Ｄ’Ｏｓｕａｌｄｏ  Ａ，Ｒｅｅｄ  ＪＣ，Ｃｏｎｎｏｌｌｙ  ＪＥ，Ｍａｓｔｅｒｓ  ＳＬ，Ｒｅｖｅｒｓａｄｅ  Ｂ．Ｈｕｍａｎ  ＤＰＰ９  ｒｅｐｒｅｓｓｅｓ  ＮＬＲＰ１  ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｃｔｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ａｕｔｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｄｉｓｅａｓｅｓ  ｖｉａ  ｂｏｔｈ  ｐｅｐｔｉｄａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ＦＩＩＮＤ  ｄｏｍａｉｎ  ｂｉｎｄｉｎｇ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０１８；２９３（４９）：１８８６４−７８．Ｅｐｕｂ，２０１８／１０／０７．ｄｏｉ：１０．１０７４／ｊｂｃ．ＲＡ１１８．００４３５０．ＰｕｂＭｅｄ．ＰＭＩＤ：３０２９１１４１；ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ６２９５７２７．
４．Ｒａｙａｍａｊｈｉ  Ｍ，Ｚｈａｎｇ  Ｙ，Ｍｉａｏ  ＥＡ．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓ  ｂｙ  ｍｅａｓｕｒｉｎｇ  ｒｅｌｅａｓｅｄ  ｌａｃｔａｔｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０１３；１０４０：８５−９０．ｄｏｉ：１０．１００７／９７８−１−６２７０３−５２３−１＿７．ＰｕｂＭｅｄ．ＰＭＩＤ：２３８５２５９８；ＰＭＣＩＤ：  ＰＭＣ３７５６８２０．
５．Ｏｋｏｎｄｏ  ＭＣ，Ｊｏｈｎｓｏｎ  ＤＣ，Ｓｒｉｄｈａｒａｎ  Ｒ，Ｇｏ  ＥＢ，Ｃｈｕｉ  ＡＪ，Ｗａｎｇ  ＭＳ，Ｐｏｐｌａｗｓｋｉ  ＳＥ，Ｗｕ  Ｗ，Ｌｉｕ  Ｙ，Ｌａｉ  ＪＨ，Ｓａｎｆｏｒｄ  ＤＧ，Ａｒｃｉｐｒｅｔｅ  ＭＯ，Ｇｏｌｕｂ  ＴＲ，Ｂａｃｈｏｖｃｈｉｎ  ＷＷ，Ｂａｃｈｏｖｃｈｉｎ  ＤＡ．ＤＰＰ８  ａｎｄ  ＤＰＰ９  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｐｒｏ−ｃａｓｐａｓｅ−１−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｍｏｎｏｃｙｔｅ  ａｎｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｐｙｒｏｐｔｏｓｉｓ．Ｎａｔｕｒｅ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｂｉｏｌｏｇｙ．２０１７；１３（１）：４６−５３．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｈｅｍｂｉｏ．２２２９．ＰｕｂＭｅｄ．ＰＭＩＤ：２７８２０７９８．
６．ｄｅ  Ｖａｓｃｏｎｃｅｌｏｓ  ＮＭ，Ｖｌｉｅｇｅｎ  Ｇ，Ｇｏｎｃａｌｖｅｓ  Ａ，Ｄｅ  Ｈｅｒｔ  Ｅ，Ｍａｒｔｉｎ−Ｐｅｒｅｚ  Ｒ，Ｖａｎ  Ｏｐｄｅｎｂｏｓｃｈ  Ｎ，Ｊａｌｌａｐａｌｌｙ  Ａ，Ｇｅｉｓｓ−Ｆｒｉｅｄｌａｎｄｅｒ  Ｒ，Ｌａｍｂｅｉｒ  ＡＭ，Ａｕｇｕｓｔｙｎｓ  Ｋ，Ｖａｎ  Ｄｅｒ  Ｖｅｋｅｎ  Ｐ，Ｄｅ  Ｍｅｅｓｔｅｒ  Ｉ，Ｌａｍｋａｎｆｉ  Ｍ．ＤＰＰ８／ＤＰＰ９  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｅｌｉｃｉｔｓ  ｃａｎｏｎｉｃａｌ  Ｎｌｒｐ１ｂ  ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ  ｈａｌｌｍａｒｋｓ  ｉｎ  ｍｕｒｉｎｅ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ．Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．Ａｌｌｉａｎｃｅ．２０１９；２（１）．Ｅｐｕｂ，２０１９／０２／０６．ｄｏｉ：１０．２６５０８／ｌｓａ．２０１９００３１３．ＰｕｂＭｅｄ．ＰＭＩＤ：３０７１８３７９；ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ６３６２３０７．
７．Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ  ＣＡ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃ  ｂａｓｉｓ  ｆｏｒ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１  ｉｎ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｂｌｏｏｄ．１９９６；８７（６）：２０９５−１４７．Ｅｐｕｂ，１９９６／０３／１５．ＰｕｂＭｅｄ．ＰＭＩＤ：８６３０３７２．
８．Ａｄａｍｓ  Ｓ，Ｍｉｌｌｅｒ  ＧＴ，Ｊｅｓｓｏｎ  ＭＩ，Ｗａｔａｎａｂｅ  Ｔ，Ｊｏｎｅｓ  Ｂ，Ｗａｌｌｎｅｒ  ＢＰ．ＰＴ−１００，ａ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｄｉｐｅｐｔｉｄｙｌ  ｐｅｐｔｉｄａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，  ｈａｓ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ａｎｄ  ａｕｇｍｅｎｔｓ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｖｉａ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｉｍｍｕｎｅ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００４；６４（１５）：５４７１−８０．Ｅｐｕｂ，２００４／０８／０４．ｄｏｉ：１０．１１５８／０００８−５４７２．ＣＡＮ−０４−０４４７６４／１５／５４７１［ｐｉｉ］．ＰｕｂＭｅｄ．ＰＭＩＤ：１５２８９３５７．
９．Ｊｏｎｅｓ  Ｂ，Ａｄａｍｓ  Ｓ，Ｍｉｌｌｅｒ  ＧＴ，Ｊｅｓｓｏｎ  ＭＩ，Ｗａｔａｎａｂｅ  Ｔ，Ｗａｌｌｎｅｒ  ＢＰ．Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｂｙ  ａ  ｄｉｐｅｐｔｉｄｙｌ  ｐｅｐｔｉｄａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｒｅｖｅａｌｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｉｅｓ．Ｂｌｏｏｄ．２００３；１０２（５）：１６４１−８．Ｅｐｕｂ，２００３／０５／１０．ｄｏｉ：１０．１１８２／ｂｌｏｏｄ−２００３−０１−０２０８２００３−０１−０２０８［ｐｉｉ］．ＰｕｂＭｅｄ．ＰＭＩＤ：１２７３８６６５．
１０．Ｋｅａｎｅ  ＦＭ，Ｙａｏ  ＴＷ，Ｓｅｅｌｋ  Ｓ，Ｇａｌｌ  ＭＧ，Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ  Ｓ，Ｐｏｐｌａｗｓｋｉ  ＳＥ，Ｌａｉ  ＪＨ，Ｌｉ  Ｙ，Ｗｕ  Ｗ，Ｆａｒｒｅｌｌ  Ｐ，Ｖｉｅｉｒａ  ｄｅ  Ｒｉｂｅｉｒｏ  ＡＪ，Ｏｓｂｏｒｎｅ  Ｂ，Ｙｕ  ＤＭ，Ｓｅｔｈ  Ｄ，Ｒａｈｍａｎ  Ｋ，Ｈａｂｅｒ  Ｐ，Ｔｏｐａｌｏｇｌｕ  ＡＫ，Ｗａｎｇ  Ｃ，Ｔｈｏｍｓｏｎ  Ｓ，Ｈｅｎｎｅｓｓｙ  Ａ，Ｐｒｉｎｓ  Ｊ，Ｔｗｉｇｇ  ＳＭ，ＭｃＬｅｎｎａｎ  ＳＶ，ＭｃＣａｕｇｈａｎ  ＧＷ，Ｂａｃｈｏｖｃｈｉｎ  ＷＷ，Ｇｏｒｒｅｌｌ  ＭＤ．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ（ＦＡＰ）−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｐｒｏｔｅａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｍｏｕｓｅ，ｂａｂｏｏｎ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  ｆｌｕｉｄｓ  ａｎｄ  ｏｒｇａｎｓ．ＦＥＢＳ  ｏｐｅｎ  ｂｉｏ．２０１３；４：４３−５４．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｆｏｂ．２０１３．１２．００１．ＰｕｂＭｅｄ．ＰＭＩＤ：２４３７１７２１；ＰＭＣＩＤ：３８７１２７２．
【０６４０】
参照による組み込み
本明細書に記述されている刊行物、特許及び特許出願はすべて、各個別の刊行物、特許、または特許出願が、具体的に且つ個別に参照によって組み込まれるように指示されているかのような同程度に参照によって本明細書に組み込まれる。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５Ａ】
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【図３５Ｂ】
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【図３６】
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【図３７Ａ】
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【図３７Ｂ】
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【図３８】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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