(57)【要約】  本開示は、６−［（３Ｓ，４Ｓ）−４−メチル−１−（ピリミジン−２−イルメチル）ピロリジン−３−イル］−３−テトラヒドロピラン−４−イル−７Ｈ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−オンの結晶多形相に関する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
６−［（３Ｓ，４Ｓ）−４−メチル−ｌ−（ピリミジン−２−イルメチル）ピロリジン−３−イル］−３−テトラヒドロピラン−４−イル−７Ｈ−イミダゾ［ｌ，５−ａ］ピラジン−８−オンの一水和物結晶形態。
【化１】
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（化合物１）
【請求項２】
前記一水和物結晶形態がＭＨ１であり、約９．１、１１．５、１６．２、１６．７、１８．２、１８．９、１９．８、２２．６、および２６．４゜２θの２θ角度、それぞれ±０．２゜２θのピークを含むＸＲＰＤパターンを有する、請求項１に記載の一水和物結晶形態。
【請求項３】
前記一水和物結晶形態がＭＨ１であり、実質的に図２Ａに示されるようなＸＲＰＤパターンを有する、請求項１に記載の一水和物結晶形態。
【請求項４】
前記一水和物結晶形態がＭＨ１であり、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムにおいて、約４０−１００℃に脱水吸熱ピークを有し、および約１８４．４℃に融解吸熱ピークを有する、請求項１に記載の一水和物結晶形態。
【請求項５】
前記一水和物結晶形態がＭＨ１であり、実質的に図５に一致するＤＳＣサーモグラムを有する、請求項１に記載の一水和物結晶形態。
【請求項６】
前記一水和物結晶形態がＭＨ１であり、熱重量分析（ＴＧＡ）において約３．８％の重量損失を伴う周囲温度と約９０℃との間での脱水を示す、請求項１に記載の一水和物結晶形態。
【請求項７】
前記一水和物結晶形態がＭＨ１であり、実質的に図５に一致するＴＧＡを有する、請求項１に記載の一水和物結晶形態。
【請求項８】
前記一水和物結晶形態がＭＨ１であり、約７８２ｃｍ−１、１１２３ｃｍ−１、１５６２ｃｍ−１、および１６５５ｃｍ−１の特性吸収を赤外（ＩＲ）スペクトルにおいて有する、請求項１に記載の一水和物結晶形態。
【請求項９】
前記一水和物結晶形態がＭＨ１であり、実質的に図３に一致する赤外スペクトルを有する、請求項１に記載の一水和物結晶形態。
【請求項１０】
前記一水和物結晶形態がＭＨ２であり、約９．０、１１．６、１５．０、１６．０、１８．６、１９．１、２０．４、または２０．６゜２θの２θ角度、それぞれ±０．２゜２θのピークを含むＸＲＰＤパターンを有する、請求項１に記載の一水和物結晶形態。
【請求項１１】
前記一水和物結晶形態がＭＨ２であり、実質的に図７に示されるようなＸＲＰＤパターンを有する、請求項１に記載の一水和物結晶形態。
【請求項１２】
前記一水和物結晶形態がＭＨ２であり、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムにおいて、約５９．１℃（±５℃）および約１８４．７℃（±５℃）に吸熱ピークを有する、請求項１に記載の一水和物結晶形態。
【請求項１３】
前記一水和物結晶形態がＭＨ２であり、実質的に図９に一致するＤＳＣサーモグラムを有する、請求項１に記載の一水和物結晶形態。
【請求項１４】
前記一水和物結晶形態がＭＨ２であり、熱重量分析（ＴＧＡ）において約４．４％の重量損失を伴う約２５℃から約１００℃で脱水を示す、請求項１に記載の一水和物結晶形態。
【請求項１５】
前記一水和物結晶形態がＭＨ２であり、実質的に図９に一致するＴＧＡを有する、請求項１に記載の一水和物結晶形態。
【請求項１６】
少なくとも９５、９６、９７、９８、または９９％精製されている、請求項１−１５のいずれか１項に記載の一水和物結晶形態。
【請求項１７】
請求項１−１６のいずれか１項に記載の治療上有効な量の一水和物結晶形態、および薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項１８】
前記一水和物結晶形態が、少なくとも約９０重量％、９１重量％、９２重量％、９３重量％、９４重量％、９５重量％、９６重量％、９７重量％、９８重量％、または９９重量％の量で存在する、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記一水和物結晶形態が少なくとも約９１重量％の量で存在する、請求項１６または１７に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
請求項１−１６のいずれか１項に記載の一水和物結晶形態のうちの１つ以上から本質的になる医薬組成物。
【請求項２１】
請求項１−９または１６のいずれか１項に記載の一水和物結晶形態ＭＨ１から本質的になる医薬組成物。
【請求項２２】
請求項１０−１６のいずれか１項に記載の一水和物結晶形態ＭＨ２から本質的になる医薬組成物。
【請求項２３】
組成物が錠剤またはカプセルの形態である、請求項１７−２２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
化合物１と、酢酸ｎ−プロピル、酢酸イソプロピル、アニソール、メチルイソブチルケトン、クメン、イソプロパノール、２−メチルテトラヒドロフラン、およびそれらの組み合わせを含む群から選択される溶媒を含む溶液から、一水和物結晶形態を沈殿させる工程を含む、化合物１の一水和物結晶形態を調製するためのプロセス。
【請求項２５】
前記溶媒が酢酸ｎ−プロピルである、請求項２４に記載のプロセス。
【請求項２６】
溶液を冷却する工程をさらに含む、請求項２４に記載のプロセス。
【請求項２７】
請求項２４−２６のいずれか１項に記載のプロセスによって調製された化合物１の一水和物結晶形態。
【請求項２８】
請求項１−１６のいずれか１項に記載の一水和物結晶形態を患者に投与する工程を含む、患者のＰＤＥ９活性を阻害する方法。
【請求項２９】
請求項１−１６のいずれか１項に記載の治療上有効な量の一水和物結晶形態を患者に投与する工程を含む、治療の必要がある患者の鎌状赤血球症を治療する方法。
【請求項３０】
化合物１の一水和物形態１（ＭＨ１）を調製するためのプロセスであって、
（ｉ）溶液を得るために、化合物１を第１の溶媒に溶解する工程、
（ｉｉ）混合物を得るために、第２の溶媒を加える工程、および
（ｉｉｉ）固形物を得るために、混合物を濾過する工程を含み、
ここで、第１および第２の溶媒はそれぞれ、酢酸イソプロピル、エタノール、テトラヒドロフラン、水、ジクロロメタン、アセトニトリル、アニソール、メチルイソブチルケトン、ニトロメタン、１，２−ジメトキシエタン、メチルエチルケトン、ｎ−ヘプタン、１，４−ジオキサン、ｎ−酢酸プロピル、２−プロパノール、アセトン、クメン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、およびそれらの組み合わせから選択されるものから、個別に選択されるプロセス。
【請求項３１】
工程（ｉ）が、約３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、または８０℃で、室温を超える温度まで、溶液を加熱する工程をさらに含む、請求項３０に記載のプロセス。
【請求項３２】
前記第１の溶媒が２−プロパノールを含む、請求項３０に記載のプロセス。
【請求項３３】
前記第２の溶媒がｎ−ヘプタンを含む、請求項３０に記載のプロセス。
【請求項３４】
工程（ｉ）の第１の溶媒が水および２−プロパノールを含む、請求項３０−３３のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項３５】
工程（ｉ）で得られた溶液の含水量が約０．５％、１％、または１．５％である、請求項３４に記載のプロセス。
【請求項３６】
工程（ｉ）で得られた溶液の含水量が約１％である、請求項３５に記載のプロセス。
【請求項３７】
工程（ｉｉ）で得られた固形物を、任意で、ｎ−ヘプタンを用いて１回以上洗浄する、請求項３０に記載のプロセス。
【請求項３８】
工程（ｉｉｉ）の後に、前記固形物を乾燥させる工程をさらに含む、請求項３０に記載のプロセス。
【請求項３９】
前記固形物が加湿環境で乾燥される、請求項３８に記載のプロセス。
【請求項４０】
化合物１の一水和物形態２（ＭＨ２）を調製するためのプロセスであって、
ａ．懸濁液を得るために、第１の溶媒系を用いて化合物１またはＭＨ１を処理する工程、
ｂ．固形物を得るために、懸濁液を濾過する工程、
ｃ．ヘプタンを用いて固形物を洗浄する工程、および
ｄ．ＭＨ２を得るために、乾燥して溶媒を除去する工程を含み、
ここで、前記溶媒は、水と、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）または酢酸メチル（ＭｅＯＡｃ）の混合物であって、２％（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／水、２．７％（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／水、および７．５％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＡｃ／水から選択されるプロセス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
＜関連出願＞
本出願は、２０１８年５月２５日に出願された「６−［（３Ｓ，４Ｓ）−４−メチル−１−（ピリミジン−２−イルメチル）ピロリジン−３−イル］−３−テトラヒドロピラン−４−イル−７Ｈ−イミダゾ［１，５−Ａ］ピラジン−８−オンの一水和物および結晶形態」と題する米国仮出願第６２／６７６，３８１号、および２０１９年１月４日に出願された「６−［（３Ｓ，４Ｓ）−４−メチル−１−（ピリミジン−２−イルメチル）ピロリジン−３−イル］−３−テトラヒドロピラン−４−イル−７Ｈ−イミダゾ［１，５−Ａ］ピラジン−８−オンの一水和物および結晶形態」と題する米国仮出願第６２／７８８，３２３号に対する利益および優先権を主張し、そのそれぞれの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
＜発明の分野＞
本開示は、環状グアノシン一リン酸（ｃＧＭＰ）特異的ホスホジエステラーゼ９型阻害剤（以下、ＰＤＥ９阻害剤と呼ぶ）の多形形態に関連する。
【背景技術】
【０００３】
固形物は、非晶質形態または結晶形態のいずれかで存在する。多形は、化学物質のさまざまな結晶形態に関連する。これらの結晶形態は、ＸＲＰＤスペクトル、ＩＲスペクトル、および融点などの、構造および物理的特性において、異なる特性を有する。特定の多形形態は、他の形態よりも利点があり、製剤原料の製造および使用により適している場合がある。
【０００４】
６−［（３Ｓ，４Ｓ）−４−メチル−１−（ピリミジン−２−イルメチル）ピロリジン−３−イル］−３−テトラヒドロピラン−４−イル−７Ｈ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−オン（化合物１）は、鎌状赤血球症などのさまざまな疾患を治療するためのＷＯ２０１７／００５７８６に開示されているＰＤＥ９阻害剤である。化合物１の改善された形態は、特に、増強された溶解性、経口バイオアベイラビリティ、および／または物理的安定性に関して求められる。
【発明の概要】
【０００５】
本開示は、ＰＤＥ９阻害剤の多形形態：６−［（３Ｓ，４Ｓ）−４−メチル−１−（ピリミジン−２−イルメチル）ピロリジン−３−イル］−３−テトラヒドロピラン−４−イル−７Ｈ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−オン（化合物１）、本明細書では形態ＭＨ１および形態ＭＨ２と呼ばれる、を提供する。本開示はまた、多形形態を作製する方法、多形形態の特性評価、多形形態を含む医薬組成物、および多形形態および組成物を使用する方法を提供する。
【０００６】
本明細書で提供される本開示の一態様は、６−［（３Ｓ，４Ｓ）−４−メチル−ｌ−（ピリミジン−２−イルメチル）ピロリジン−３−イル］−３−テトラヒドロピラン−４−イル−７Ｈ−イミダゾ［ｌ，５−ａ］ピラジン−８−オンの一水和物結晶形態を含む。
【０００７】
【化１】
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（化合物１）
いくつかの実施形態において、一水和物結晶形態はＭＨ１であり、約９．１、１１．５、１６．２、１６．７、１８．２、１８．９、１９．８、２２．６、および２６．４゜２θの２θ角度、それぞれ±０．２゜２θのピークを含むＸＲＰＤパターンを有する。いくつかの実施形態において、一水和物結晶形態はＭＨ１であり、実質的に図２Ａに示されるようなＸＲＰＤパターンを有する。いくつかの実施形態において、一水和物結晶形態はＭＨ１であり、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムにおいて、約４０−１００℃に脱水吸熱ピークを有し、および約１８４．４℃に融解吸熱ピークを有する。いくつかの実施形態において、一水和物結晶形態はＭＨ１であり、実質的に図５に一致するＤＳＣサーモグラムを有する。いくつかの実施形態において、一水和物結晶形態はＭＨ１であり、熱重量分析（ＴＧＡ）において約４．４％の重量損失を伴う周囲温度と約９０℃との間での脱水を示す。いくつかの実施形態において、一水和物結晶形態はＭＨ１であり、実質的に図５に一致するＴＧＡを有する。いくつかの実施形態において、一水和物結晶形態はＭＨ１であり、約７８２ｃｍ−１、１１２３ｃｍ−１、１５６２ｃｍ−１、および１６５５ｃｍ−１の特性吸収を赤外（ＩＲ）スペクトルにおいて有する。いくつかの実施形態において、一水和物結晶形態はＭＨ１であり、実質的に図３に一致する赤外スペクトルを有する。いくつかの実施形態において、一水和物結晶形態はＭＨ２であり、約９．０、１１．６、１５．０、１６．０、１８．６、１９．１、２０．４、または２０．６゜２θの２θ角度、それぞれ±０．２゜２θのピークを含むＸＲＰＤパターンを有する。いくつかの実施形態において、一水和物結晶形態はＭＨ２であり、実質的に図７に示されるようなＸＲＰＤパターンを有する。いくつかの実施形態において、一水和物結晶形態はＭＨ２であり、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムにおいて、約５９．１℃（±５℃）および約１８４．７℃（±５℃）に吸熱ピークを有する。いくつかの実施形態において、一水和物結晶形態はＭＨ２であり、実質的に図９に一致するＤＳＣサーモグラムを有する。いくつかの実施形態において、一水和物結晶形態はＭＨ２であり、熱重量分析（ＴＧＡ）において約４．４％の重量損失を伴う約２５℃−約１００℃で脱水を示す。いくつかの実施形態において、一水和物結晶形態はＭＨ２であり、実質的に図９に一致するＴＧＡを有する。いくつかの実施形態において、一水和物結晶形態は、少なくとも９５、９６、９７、９８、または９９％精製されている。
【０００８】
本明細書に記載の別の態様は、本明細書に記載のいずれか１つ実施形態の治療上有効な量の一水和物結晶形態を含む医薬組成物、および薬学的に許容される賦形剤を含む。いくつかの実施形態において、一水和物結晶形態は、少なくとも約９０重量％、９１重量％、９２重量％、９３重量％、９４重量％、９５重量％、９６重量％、９７重量％、９８重量％、または９９重量％の量で存在する。いくつかの実施形態において、一水和物結晶形態は少なくとも約９１重量％の量で存在する。
【０００９】
本明細書に記載の別の態様は、本明細書に記載のいずれか１つの実施形態の一水和物結晶形態から本質的になる医薬組成物を含む。
【００１０】
本明細書に記載の別の態様は、本明細書に記載のいずれか１つの実施形態の一水和物結晶形態ＭＨ１から本質的になる医薬組成物を含む。
【００１１】
本明細書に記載の別の態様は、本明細書に記載のいずれか１つの実施形態の一水和物結晶形態ＭＨ２から本質的になる医薬組成物を含む。いくつかの実施形態において、組成物は錠剤またはカプセルの形態である。
【００１２】
本明細書に記載の別の態様は、化合物１と、酢酸ｎ−プロピル、酢酸イソプロピル、アニソール、メチルイソブチルケトン、クメン、イソプロパノール、２−メチルテトラヒドロフラン、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される溶媒を含む溶液から、一水和物結晶形態を沈殿させる工程を含む、化合物１の一水和物結晶形態を調製するためのプロセスを含む。いくつかの実施形態において、溶媒は酢酸ｎ−プロピルである。いくつかの実施形態において、前記プロセスは溶液を冷却する工程をさらに含む。
【００１３】
本明細書に記載の別の態様は、本明細書に記載のいずれか１つの実施形態のプロセスによって調製された化合物１の一水和物結晶形態を含む。
【００１４】
本明細書に記載の別の態様は、本明細書に記載のいずれか１つの実施形態の一水和物結晶形態を患者に投与する工程を含む、患者のＰＤＥ９活性を阻害する方法を含む。
【００１５】
本明細書に記載の別の態様は、本明細書に記載のいずれか１つの実施形態の治療上有効な量の一水和物結晶形態を患者に投与する工程を含む、治療の必要がある患者の鎌状赤血球症を治療する方法を含む。
【００１６】
本明細書に記載の別の態様は、化合物１の一水和物形態１（ＭＨ１）を調製するためのプロセスであって、（ｉ）溶液を得るために、化合物１を第１の溶媒に溶解する工程、（ｉｉ）混合物を得るために、第２の溶媒を加える工程、および（ｉｉｉ）固形物を得るために、混合物を濾過する工程を含み、ここで、第１および第２の溶媒はそれぞれ、酢酸イソプロピル、エタノール、テトラヒドロフラン、水、ジクロロメタン、アセトニトリル、アニソール、メチルイソブチルケトン、ニトロメタン、１，２−ジメトキシエタン、メチルエチルケトン、ｎ−ヘプタン、１，４−ジオキサン、ｎ−酢酸プロピル、２−プロパノール、アセトン、クメン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、およびそれらの組み合わせから選択されるものから、個別に選択される。いくつかの実施形態において、この方法は、約３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、または８０℃で、室温を超える温度まで、溶液を加熱する工程をさらに含む。
【００１７】
いくつかの実施形態において、第１の溶媒は２−プロパノールを含む。いくつかの実施形態において、第２の溶媒はｎ−ヘプタンを含む。いくつかの実施形態において、工程（ｉ）の第１の溶媒は、水および２−プロパノールを含む。いくつかの実施形態において、工程（ｉ）で得られた溶液の含水量は、約０．５％、１％、または１．５％である。いくつかの実施形態において、工程（ｉ）で得られた溶液の含水量は約１％である。いくつかの実施形態において、工程（ｉｉ）で得られた固形物が、任意で、ｎ−ヘプタンを用いて１回以上洗浄される。いくつかの実施形態において、プロセスは、工程（ｉｉｉ）の後に、固形物を乾燥させる工程をさらに含む。いくつかの実施形態において、固形物が加湿された状態で乾燥される。
【００１８】
本明細書に記載の別の態様は、化合物１の一水和物形態２（ＭＨ２）を調製するためのプロセスであって、ａ）懸濁液を得るために、第１の溶媒系を用いて化合物１またはＭＨ１を処理する工程、ｂ）固形物を得るために、懸濁液を濾過する工程、ｃ）ヘプタンを用いて固形物を洗浄する工程、およびｄ）ＭＨ２を得るために、乾燥して溶媒を除去する工程を含み、ここで、溶媒は、水と、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）または酢酸メチル（ＭｅＯＡｃ）の混合物であって、２％（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／水、２．７％（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／水、および７．５％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＡｃ／水から選択される。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】図１は、ＭＨ１分子構造の球棒図である。
【図２Ａ】図２Ａは、室温でのＭＨ１結晶の実験的ＸＲＰＤパターンである。
【図２Ｂ】図２Ｂは、室温（トップライン）でのＭＨ１の実験的ＸＲＰＤパターン、および２９３Ｋ（ミドルライン）と１００Ｋ（ボトムライン）でのＭＨ１の計算されたＸＲＰＤパターンのオーバーレイである。
【図３】図３は、ＭＨ１のＦＴＩＲスペクトルである。
【図４】図４は、ＭＨ１のラマンスペクトルである。
【図５】図５は、ＭＨ１のＴＧＡおよびＤＳＣ分析である。
【図６】図６は、ＭＨ２分子構造の球棒図である。
【図７】図７は、室温でのＭＨ２の実験的ＸＲＰＤパターン、および１００ＫでのＭＨ２の計算されたＸＲＰＤパターンのオーバーレイである。
【図８】図８は、ＭＨ２のスケールアップのＸＲＰＤオーバーレイである。
【図９】図９は、ＭＨ２のＴＧＡおよびＤＳＣ分析である。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
Ｉ．化合物１の多形体
化合物１のラセミ体形態および化合物１の無水形態は、ＷＯ２０１３／０５３６９０およびＷＯ２０１７／００５７８６に記載されている。化合物１の無水形態は以下の構造を有する。
【００２１】
【化２】
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【００２２】
化合物１の２つの異なる一水和物多形形態、一水和物形態１（ＭＨ１）と一水和物形態２（ＭＨ２）が発見されている。２つの一水和物形態と無水形態（ＡＨ）は、単結晶Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）によって決定されるように、それらの結晶構造において異なる。ＭＨ１およびＭＨ２の主なピークは、３０°２θ以下で特定され、それらの相対的な強度は表１に記載されている。当業者には明らかなように、表１におけるピークの相対的な強度は、例えば、分析される材料の純度、X線ビームにおける結晶の配向効果、試料の結晶化度などの様々な要素に起因して変化し得る。ピーク位置は、サンプル高さの変動によってシフトし得るが、ピーク位置は、本質的には表１において定義されるようにとどまる。当業者は、異なる波長を使用した測定はブラッグの式（ｎλ＝２ｄｓｉｎθ）によって異なるシフトをもたらすこともまた理解するであろう。代替的な波長の使用によって生成されるそのようなさらなるＸＲＰＤパターンは、結晶材料のＸＲＰＤパターンの代替的な表示である。
【００２３】
【表１】
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【００２４】
ｉ．結晶形態ＭＨ１
形態ＭＨ１は、表１におけるそのピークのいずれかによって特性付けられ得る。例えば、ＭＨ１は以下のピーク、とりわけ、９．１、１１．５、１６．２、１６．７、１８．２、１８．９、および１９．８°２θ、それぞれ±０．２°２θのいずれかによって特性付けられ得る。
【００２５】
いくつかの実施形態において、化合物１の一水和物結晶形態はＭＨ１であり、９．１、１１．５、１６．２、１６．７、１８．２、１８．９、および１９．８°２θ、それぞれ±０．２°２θのいずれか１以上のピークを含む、Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを有する。
【００２６】
いくつかの実施形態において、化合物１の一水和物結晶形態はＭＨ１であり、９．１、１１．５、１６．２、１６．７、１８．２、１８．９、および１９．８°２θ、それぞれ±０．２°２θのピークを含む、Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを有する。
【００２７】
いくつかの実施形態において、赤外線（ＩＲ）分光学によって分析されるＭＨ１は、図３に示されるように、約７８２ｃｍ−１、１１２３ｃｍ−１、１５６２ｃｍ−１、および１６５５ｃｍ−１（±０．５ｃｍ−１）の特性吸収を示す。
【００２８】
いくつかの実施形態において、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムによって分析されるＭＨ１は、図５に示されるように、約４０−１００℃（±１０℃）の脱水吸熱ピークと約１８４．４℃（±５℃）の融解吸熱ピークを示す。
【００２９】
いくつかの実施形態において、熱重量分析（ＴＧＡ）によって分析されるＭＨ１は、図５において示されるように、約３．８％の重量損失を伴う、周囲温度から約９０℃での脱水を示す。
【００３０】
ｉｉ. 結晶形態ＭＨ２
形態ＭＨ２は、表１におけるそのピークのいずれかによって特性付けられ得る。例えば、ＭＨ１は以下のピーク、とりわけ、９．０、１１．６、１５．０、１６．０、１８．６、１９．１、２０．４、および２０．６°２θ、それぞれ±０．２°２θのいずれかによって特性付けられ得る。
【００３１】
いくつかの実施形態において、化合物１の一水和物結晶形態はＭＨ２であり、９．０、１１．６、１５．０、１６．０、１８．６、１９．１、２０．４、および２０．６°２θ、それぞれ±０．２°２θのいずれか１以上のピークを含む、Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを有する。
【００３２】
いくつかの実施形態において、化合物１の一水和物結晶形態はＭＨ２であり、９．０、１１．６、１５．０、１６．０、１８．６、１９．１、２０．４、および２０．６°２θ、それぞれ±０．２°２θのピークを含む、Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを有する。
【００３３】
いくつかの実施形態において、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムによって分析されるＭＨ２は、図９に示されるように、約５９．１℃（±５℃）と約１８４．７℃（±５℃）の吸熱ピークを示す。
【００３４】
いくつかの実施形態において、熱重量分析（ＴＧＡ）によって分析されるＭＨ２は、図９において示されるように、約４．４％の重量損失を伴う、約２５℃−約１００℃での脱水を示す。
【００３５】
いくつかの実施形態において、化合物１の結晶形態（例えば、ＭＨ１またはＭＨ２）は、実質的に純粋である。いくつかの実施形態において、結晶形態ＭＨ１またはＭＨ２は、少なくとも８０％、８５％、９０％、または９５％の純度である。いくつかの実施形態において、結晶形態ＭＨ１またはＭＨ２は、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の純度である。いくつかの実施形態において、結晶形態ＭＨ１またはＭＨ２は、１０％、５％、３％、または１％未満の不純物を含む。
【００３６】
ＩＩ．医薬組成物
本開示は、治療上有効な量の化合物１の多形形態のいずれか（例えば、一水和物結晶形態ＭＨ１またはＭＨ２など）および薬学的に許容可能な賦形剤、担体、または希釈剤を含む医薬組成物をさらに提供する。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、経口投与用である。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、錠剤の形態またはカプセルの形態である。
【００３７】
化合物１の多形形態（例えば、一水和物結晶形態ＭＨ１またはＭＨ２など）は、単独または薬学的に許容可能な担体、希釈剤、もしくは賦形剤との組み合わせにより、単回投与あるいは複数回投与のいずれかで投与され得る。本開示による医薬組成物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  ２２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｇｅｎｎａｒｏ，  Ｅｄ．，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，  Ｅａｓｔｏｎ，  ＰＡ，  ２０１３において開示されているような従来技術にしたがって、薬学的に許容可能な担体または希釈剤、同様にその他の既知のアジュバントおよび賦形剤によって製剤化され得る。
【００３８】
経口投与のための医薬組成物は、カプセル、錠剤、糖衣錠、丸薬、トローチ、粉末、および顆粒を含む。必要に応じて、医薬組成物は、例えば腸溶コーティングなどのコーティングにより調製されてもよく、または医薬組成物は、例えば、当技術分野で周知の方法にしたがって、持続したもしくは長期の放出などの活性成分の制御放出を提供するように製剤化されてもよい。経口投与のための液体剤形は、溶液、エマルジョン、懸濁液、シロップ、およびエリキシル剤を含む。
【００３９】
非経口投与のための医薬組成物は、滅菌水性溶液および非水の注入溶液、分散体、懸濁液、またはエマルジョン、同様に、使用前に滅菌注入溶液もしくは分散体に再構成される滅菌粉末を含む。他の適切な投与形態は、坐薬、スプレー、軟膏、クリーム、ジェル、吸入剤、皮膚パッチ、およびインプラントを含むが、これらに限定されない。
【００４０】
典型的な経口投与量は、１日当たり約０．００１−約１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である。また、典型的な経口投与量は、１日当たり約０．０１−約５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である。さらに、典型的な経口投与量は、１日当たり約０．０５−約１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である。経口投与量は、通常１以上の投与量、典型的には１日当たり１−３回分の投与量で投与される。正確な投与量は、頻度および投与方法、処置される被験体の性別、重さ、および相対的な健康、処置される疾患の性質ならびに重症度、および処置される合併症、および当業者には明らかである他の要素に依存する。
【００４１】
製剤は、当業者に知られている方法により、単位剤形で提供されてもよい。例示を目的として、経口投与のための典型的な単位剤形は、約０．０１−約１０００ｍｇ、約０．０５−約５００ｍｇ、または約０．５ｍｇ−約２００ｍｇを含み得る。
【００４２】
静脈内、髄腔内、筋肉内、および同様の投与などの非経口経路において、典型的な投与量は、経口投与に用いられる、約半分の投与量である。
【００４３】
本開示は、治療上有効な量の化合物１の多形形態のいずれか（例えば、一水和物結晶形態ＭＨ１またはＭＨ２など）および薬学的に許容可能な担体または希釈剤の少なくとも１つを混合する工程を含む、医薬組成物を作製するプロセスもまた提供する。
【００４４】
適切な医薬担体は、不活性固体希釈剤もしくはフィラー、滅菌水性溶液、および様々な有機溶媒を含む。固形物担体の例としては、ラクトース、白土（ｔｅｒｒａ  ａｌｂａ）、スクロース、シクロデキストリン、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アカシア、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、およびセルロースの低級アルキルエーテルを含む。液体担体の例としては、シロップ、ピーナッツオイル、オリーブオイル、リン脂質、脂肪酸、脂肪酸アミン、ポリオキシエチレン、および水を含むが、これらに限定されない。同様に、担体または希釈剤は、例えば、モノステアリン酸グリセリンまたはジステアリン酸グリセリルの単体あるいはワックスと混合したものなどの、従来技術において知られている、任意の持続放出材料を含んでもよい。本開示の化合物と薬学的に許容可能な担体を混合することで形成される医薬組成物は、その後、開示された投与経路のために適している様々な剤形で容易に投与される。製剤は、調剤技術において知られている方法によって、単位剤形で便利に提供され得る。
【００４５】
経口投与のために適している本開示の製剤は、例えば、所定の量の活性成分と任意に適する賦形剤をそれぞれ含む、カプセルまたは錠剤などの別々の単位として提供され得る。さらに、経口投与可能な製剤は、粉末もしくは顆粒、水性もしくは非水性液体の溶液もしくは懸濁液、または水中油型または油中水型液体エマルジョンの形態でもあり得る。
【００４６】
固形物担体が経口投与のために使用される場合、その調製物（ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）は、粉末中の硬ゼラチンカプセルに入れられる錠剤形態あるいはペレット形態であってもよく、またはその製剤はトローチ（ｔｒｏｃｈｅ）もしくはトローチ（ｌｏｚｅｎｇｅ）の形態であってもよい。固形物担体の量は広く変動し得るが、投与単位当たり約２５ｍｇ−約１ｇの範囲である。液体担体が使用される場合、その調製物は、シロップ、エマルジョン、軟ゼラチンカプセル、または水性もしくは非水性の懸濁液または溶液などの滅菌注入液体の形態であり得る。
【００４７】
本開示の医薬組成物は、当技術における従来の方法によって調製され得る。例えば、錠剤は、活性成分を通常のアジュバントおよび/または希釈剤と混合し、続いて、錠剤を調製する従来の打錠機でその混合物を圧縮することにより調製され得る。アジュバントまたは希釈剤の例としては、コーンスターチ、ジャガイモでんぷん、滑石、ステアリン酸マグネシウム、ゼラチン、ラクトース、ゴム（ｇｕｍｓ）などを含む。任意の他のアジュバントまたは添加剤は、例えば着色料、香味料、防腐剤などの目的のために通常に使用されてもよく、それらは活性成分と適合するという条件で使用され得る。
【００４８】
いくつかの実施形態において、医薬組成物は、少なくとも１０重量％、２０重量％、３０重量％、４０重量％、５０重量％、６０重量％、７０重量％、８０重量％、または９０重量％の化合物１の多形形態（例えば、一水和物結晶形態ＭＨ１またはＭＨ２など）を含む。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、少なくとも９１重量％、９２重量％、９３重量％、９４重量％、９５重量％、９６重量％、９７重量％、９８重量％、または９９重量％の化合物１の多形形態（例えば、一水和物結晶形態ＭＨ１またはＭＨ２など）を含む。
【００４９】
いくつかの実施形態において、医薬組成物は本開示の化合物を含み、ヒドロキシウレア（「ＨＵ」）などの１以上の追加の活性剤と組み合わせて使用される。
【００５０】
ＩＩＩ．化合物１の多形形態の作製方法
結晶体は、化合物および溶媒を含む溶液から沈殿することができる。例えば、結晶体は、低い温度の澄明な溶液から得ることができる。大部分の材料の溶解性は温度とともに減少するため、冷却は過飽和を引き起こすために使用することができる。結晶体は速い蒸発によって得ることもできる。
【００５１】
いくつかの実施形態において、ＭＨ１結晶は、結晶化プロセスにおいて作製される。いくつかの実施形態において、ＭＨ２結晶は、結晶化プロセスにおいて作製される。
【００５２】
化合物１の結晶は、化合物１の飽和溶液を得るために溶媒に化合物１を溶解し、その後、結晶を沈殿させるために飽和溶液を冷却することによって調製することができる。
【００５３】
一水和物形態ＭＨ１またはＭＨ２の結晶は、化合物１と溶媒を含む溶液から結晶を沈殿することによって調製することができる。溶媒は、エタノール、テトラヒドロフラン、水、ジクロロメタン、アセトニトリル、ニトロメタン、１，２−ジメトキシエタン、メチルエチルケトン、１，４−ジオキサン、２−プロパノール、アセトン、クメン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ｎ−酢酸プロピル、酢酸イソプロピル、アニソール、メチルイソブチルケトン、２−メチルテトラヒドロフラン、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。例えば、化合物１は、懸濁液を得るために、例えばｎ−酢酸プロピルなどの溶媒に懸濁させることができ、溶液（例えば、母液）を得るために懸濁液を濾過することができ、およびその後に結晶を沈殿させるために、溶液（例えば、母液）を冷却することができる。
【００５４】
いくつかの実施形態において、ＭＨ１またはＭＨ２結晶を調整する工程であって、
（ｉ）懸濁液を生成するために、室温（ＲＴ）で第１の溶媒に化合物１を懸濁化する工程、
（ｉｉ）工程（ｉ）で得られる懸濁液を、室温を超える温度（例えば約４０℃−約６０℃）に加熱する工程、
（ｉｉｉ）混合物を生成するために、工程（ｉｉ）で得られる懸濁液に第２の溶媒を添加し、混合物を、室温を超える温度（例えば約４０℃−約６０℃）に加熱する工程、
（ｉｖ）溶液（例えば、母液）を得るために、工程（ｉｉｉ）で得られる混合物を任意に濾過する工程、および
（ｖ）ＭＨ１またはＭＨ２結晶を沈殿させるために、工程（ｉｉｉ）で得られる混合物または工程（ｉｖ）で得られる溶液を、室温以下（例えば、約４℃）に冷却する工程を含み、
ここで、第１および第２の溶媒は、それぞれ独立して、ｎ−ヘプタン、エタノール、テトラヒドロフラン、水、ジクロロメタン、アセトニトリル、ニトロメタン、１，２−ジメトキシエタン、メチルエチルケトン、１，４−ジオキサン、２−プロパノール、アセトン、クメン、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ｎ−酢酸プロピル、酢酸イソプロピル、アニソール、メチルイソブチルケトン、２−メチルテトラヒドロフラン、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される工程。
【００５５】
いくつかの実施形態において、第１および第２の溶媒は、それぞれ独立して、メチルエチルケトン、１，４−ジオキサン、２−プロパノール、アセトン、ｎ−酢酸プロピル、酢酸イソプロピル、アニソール、メチルイソブチルケトン、クメン、ｎ−ヘプタン、２−メチルテトラヒドロフラン、およびそれらの組み合わせから選択される。いくつかの実施形態において、第１および第２の溶媒は、それぞれ独立して、ｎ−酢酸プロピルまたはｎ−ヘプタンから選択される。
【００５６】
いくつかの実施形態において、第１および第２の溶媒は同じである。いくつかの実施形態において、第１および第２の溶媒は異なる。
【００５７】
ＭＨ１のいくつかの実施形態において、第１の溶媒はｎ−酢酸プロピルから選択され、第２の溶媒はｎ−ヘプタンから選択される。
【００５８】
いくつかの実施形態において、工程（ｉ）で使用される第１の溶媒の容量は、工程（ｉｉｉ）で使用される第２の溶媒の容量未満である。例えば、工程（ｉ）で使用される第１の溶媒の容量と工程（ｉｉｉ）で使用される第２の溶媒の容量の比は、おおよそ１：１．５、１：２、１：２．５、１：３、１：３．５、１：４、１：４．５、または１：５である。１つの例としては、工程（ｉ）で使用される第１の溶媒の容量と工程（ｉｉｉ）で使用される第２の溶媒の容量の比は、おおよそ１：２である。
【００５９】
いくつかの実施形態において、工程（ｉｉ）および（ｉｉｉ）における室温を超える温度は、約３０℃−約１００℃である。いくつかの実施形態において、室温を超える温度は、約４０℃−約６０℃である。いくつかの実施形態において、室温を超える温度は、約３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、または８０℃である。
【００６０】
いくつかの実施形態において、ＭＨ１結晶は、以下の、
（ｉ）溶液を得るために第１の溶媒に化合物１を溶解させる工程と、
（ｉｉ）混合物を得るために第２の溶媒を添加する工程、および
（ｉｉｉ）結晶固形物ＭＨ１を得るために混合物を濾過する工程と、
を含む工程により調製することができる。
【００６１】
いくつかの実施形態において、第１の溶媒は、メチルエチルケトン、２−プロパノール、クメン、ｎ−酢酸プロピル、酢酸イソプロピル、アニソール、メチルイソブチルケトン、ｎ−ヘプタン、２−メチルテトラヒドロフラン、およびそれらの組み合わせから選択される。いくつかの実施形態において、第２の溶媒は、メチルエチルケトン、２−プロパノール、ｎ−酢酸プロピル、酢酸イソプロピル、アニソール、メチルイソブチルケトン、クメン、ｎ−ヘプタン、２−メチルテトラヒドロフラン、およびそれらの組み合わせから選択される。いくつかの実施形態において、第１の溶媒は２−プロパノールである。いくつかの実施形態において、第２の溶媒はｎ−ヘプタンである。
【００６２】
いくつかの実施形態において、工程（ｉ）の第１の溶媒は水をさらに含む。いくつかの実施形態において、工程（ｉ）の第１の溶媒は、２−プロパノールと水を含む。いくつかの実施形態において、工程（ｉ）で得られる溶液の水の含有量は、約１％、２％、または３％である。いくつかの実施形態において、工程（ｉ）で得られる溶液の水の含有量は約１％である。いくつかの実施形態において、水と２−プロパノールの比（重量／重量）は約１：７０である。
【００６３】
いくつかの実施形態において、工程（ｉ）のプロセスは、窒素ガスによって保護される。
【００６４】
いくつかの実施形態において、工程（ｉ）は約２５℃−約４０℃の温度で実行される。いくつかの実施形態において、工程（ｉ）は約２７℃−約３５℃の温度で実行される。
【００６５】
いくつかの実施形態において、ＭＨ１の結晶化を誘導するために、工程（ｉ）の後に種晶が添加される。いくつかの実施形態において、種晶が加えられる前に、混合物の温度が約２０℃−約３０℃に調整される。いくつかの実施形態において、種晶が加えられる前に、混合物の温度が約２２℃−約２８℃に調整される。種晶の重量は、工程（ｉ）で添加された化合物１の重量の約０．０５％−約２％である。いくつかの実施形態において、種晶の重量は、工程（ｉ）における化合物１の約０．０５、１％、または２％である。
【００６６】
いくつかの実施形態において、工程（ｉｉ）および（ｉｉｉ）は、約２０℃−約３０℃、例えば、約２２℃−約２８℃の温度で、それぞれ独立して実施される。いくつかの実施形態において、工程（ｉｉ）および（ｉｉｉ）は、約２２℃−約２８℃の温度で、それぞれ独立して実施される。
【００６７】
いくつかの実施形態において、工程（ｉｉｉ）で得られた固形物は、メチルエチルケトン、１，４−ジオキサン、２−プロパノール、アセトン、クメン、ｎ−酢酸プロピル、酢酸イソプロピル、アニソール、メチルイソブチルケトン、ｎ−ヘプタン、および２−メチルテトラヒドロフラン、およびそれらの組み合わせから選択される溶媒を用いて、任意に１回以上洗浄される。いくつかの実施形態において、工程（ｉｉｉ）で得られた固形物は、任意でｎ−ヘプタンを用いて洗浄される。いくつかの実施形態において、工程（ｉｉｉ）で、またはｎ−ヘプタンで洗浄した後に得られた固形物は、乾燥するまでプレスされる。いくつかの実施形態において、得られた乾燥固形物は、任意で、その後、窒素ガスの流れの下で乾燥される。いくつかの実施形態において、固形物は加湿環境中、任意で窒素ガスの流れの下で、さらに乾燥される。塩化ナトリウムの飽和溶液などの種々の塩溶液は、種々の相対湿度（ＲＨ）の加湿環境を提供できる。調整可能なＲＨおよび温度を備えた市販のガス供給機器も使用することができる。
【００６８】
いくつかの実施形態において、化合物１の無水物（ＡＨ）形態は、通常の実験室の空気（いくらかの水分を含む）に曝された場合に、ＭＨ１に変換され得る。いくつかの実施形態において、化合物１の無水形態は、周囲条件下（例えば、２５℃）下で、少なくとも約１２時間、約２４時間、約３６時間、または約４８時間放置される。
【００６９】
いくつかの実施形態において、無水物（ＡＨ）またはＭＨ２は、結晶化プロセスで作製される。次に、無水物（ＡＨ）またはＭＨ２の乾燥および加湿乾燥は、ＭＨ１結晶を生じさせる。
【００７０】
一水和物結晶形態ＭＨ２が調製される工程であって、
（ｉ）懸濁液を得るために、第１の溶媒系を用いて、乾燥化合物１またはＭＨ１を処理する工程、
（ｉｉ）固形物を得るために、懸濁液を濾過する工程、
（ｉｉｉ）固形物を第２の溶媒を用いて１回以上洗浄する工程、および
（ｉｖ）結晶ＭＨ２を得るために、固形物を風乾する工程を含み、
ここで、第１の溶媒系は、水、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）、および酢酸メチル（ＭｅＯＡｃ）、およびそれらの組み合わせから選択され、および第２の溶媒は、アセトン、ｎ−ヘプタン、および２−メチルテトラヒドロフランから選択される工程。
【００７１】
いくつかの実施形態において、第１の溶媒系は、水と酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）または酢酸メチル（ＭｅＯＡｃ）との混合物である。いくつかの実施形態において、第１の溶媒系は、２％（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／水、２．７％（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／水、または７．５％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＡｃ／水から選択される。いくつかの実施形態において、懸濁液は、約５℃または約２５℃で約４日間保持される。
【００７２】
いくつかの実施形態において、第２の溶媒はヘプタンである。
【００７３】
いくつかの実施形態において、工程（ｉ）の化合物１またはＭＨ１は、真空オーブン内で乾燥される。いくつかの実施形態において、工程（ｉ）の化合物１またはＭＨ１は、風乾される。
【００７４】
一実施形態において、結晶ＭＨ２は、化合物１またはＭＨ１を約５℃で７．５％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＡｃ／水を含む第１の溶媒系で処理し、固形物を濾過し、次いで固形物を空気乾燥することによって調製される。
【００７５】
一実施形態において、結晶性ＭＨ２は、
（ｉ）懸濁液を得るために、化合物１またはＭＨ１を第１の溶媒系を用いて処理する工程、
（ｉｉ）固形物を得るために、懸濁液を濾過する工程、
（ｉｉｉ）固形物をヘプタンを用いて洗浄する工程、および
（ｉｖ）ＭＨ２を得るために、空気乾燥して溶媒を除去する工程によって調整され、
ここで、溶媒は、水と酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）または酢酸メチル（ＭｅＯＡｃ）との混合物であり、２％（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／水、２．７％（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／水、および７．５％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＡｃ／水から選択される。
【００７６】
ＩＶ．化合物１の多形形態を使用する方法
ＰＤＥ９は、好中球、網状赤血球赤芽球および赤白血病細胞を含むヒト造血系で特異的に発現される。その上、鎌状赤血球症（ＳＣＤ）患者は、健康な個人と比較して、網状赤血球および好中球におけるＰＤＥ９発現の顕著および有意な上昇を示す（Ａｌｍｅｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．、Ｂｒ  Ｊ  Ｈａｅｍａｔｏｌ．  ２００８  Ｓｅｐ；  ｌ４２（５）：８３６−４４）。薬理学的ＰＤＥ９阻害がＳＣＤ好中球の接着特性の増加をさせて以降、証拠は、加えてＰＤＥ９と細胞接着との関連性を示す（Ｍｉｇｕｅｌ  ｅｔ  ａｌ．、Ｉｎｆｌａｍｍ  Ｒｅｓ．  ２０１１  Ｊｕｌ；  ６０（７）：６３３−４２）。ＰＤＥ９阻害による細胞接着の減少メカニズムは、ｃＧＭＰの増加と内皮接着分子の発現の減少によって媒介されることが示されている。重要なのは、ＳＣＤの動物モデルでは、ＰＤＥ９阻害剤に媒介された細胞接着の減少が、細胞生存率の増加という機能的効果を有することである。ヒドロキシウレア（ＨＵ）に匹敵する細胞接着の減少を示すことに加えて、ＰＤＥ９阻害は、赤血球（ＲＢＣ）内で、異常なヘモグロビン（ＨｂＳ）の細胞濃度を低下させた、胎児の非鎌状ヘモグロビン（ＨｂＦ）産生の増加をもたらし、異常なヘモグロビンおよびその関連する後遺症の重合がより少なくなるようにする。ＳＣＤの治療におけるＨｂＦの増加の重要性は、鎌状赤血球症の共同研究などの大規模な研究の結果、ならびにＨｂＦがこの疾患の最も重要な修飾因子の１つであることを示している米国以外のさまざまな患者コホートでの研究（Ａｌｓｕｌｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ａｍ  Ｊ  Ｈｅｍａｔｏｌ．、８８（６）：５３１−２（２０１３））、ならびにＨｂＦの修飾因子が他の血液学的パラメーターを改善することを示すデータ（Ａｋｉｎｓｈｅｙｅ、Ｂｌｏｏｄ、１１８（１）：１９−２７（２０１１））によって証明されている。最後に、Ａｌｍｅｉｄａらは、加えて、ＳＣＤのマウスモデルにおいてＰＤＥ９阻害と組み合わせたＨＵによる治療が、ＨＵのｃＧＭＰ上昇効果の追加の有益な増幅につながることを実証した（Ａｌｍｅｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．、Ｂｌｏｏｄ．２０１２  Ｏｃｔ  ４；ｌ２０（ｌ４）：２８７９−８８）。結論として、ＰＤＥ９阻害は、胎児ヘモグロビン産生の発現を調節するだけでなく、細胞接着を減少させることができ、両方のメカニズムがＳＣＤの治療の鍵となる。
【００７７】
本開示の一態様は、化合物１の多形形態（一水和物結晶形態ＭＨ１またはＭＨ２など）のいずれか、および化合物１の多形形態（一水和物結晶形態ＭＨ１またはＭＨ２など）のいずれかを含む医薬組成物を使用する方法を提供する。
【００７８】
化合物１の多形形態（一水和物結晶形態ＭＨ１またはＭＨ２など）は、鎌状赤血球症、または貧血、鎌状ヘモグロビン  Ｃ症（ＳＣ）、ベータサラセミア（ベータプラスサラセミアおよびベータゼロサラセミア）、血管閉塞症、痛みの発作（鎌状赤血球症）、脾臓血球貯留症、急性胸部症候群、無形成発作、溶血発作、長期疼痛、細菌感染症、および脳卒中などの鎌状赤血球症に関連するいずれかの疾患および／または症状を治療するために使用され得る。
【００７９】
一実施形態において、化合物１の多形形態（一水和物結晶形態ＭＨ１またはＭＨ２など）は、対象のベータサラセミアを治療するために、および／または対象のヘモグロビンレベルを増加させるために使用される。
【００８０】
別の実施形態において、化合物１の多形形態（一水和物結晶形態ＭＨ１またはＭＨ２など）は、鎌状赤血球症を有する対象の細胞または血漿中のｃＧＭＰレベルを増加させるために使用される。細胞は、赤血球および／または白血球（ｗｈｉｔｅ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌ）であり得るが、これらに限定されない。ｃＧＭＰレベルは、少なくとも５０％、１００％、または１５０％増加し得る。いくつかの実施形態において、ｃＧＭＰレベルは、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、または２５倍に増加する。
【００８１】
別の実施形態において、化合物１の多形形態（一水和物結晶形態ＭＨ１またはＭＨ２など）は、鎌状赤血球症を有する対象において、胎児ヘモグロビン（ＨｂＦ）陽性赤血球数を増加させるために使用される。ＨｂＦ陽性赤血球数は、少なくとも５０％、１００％、または１５０％増加する。いくつかの実施形態において、ＨｂＦ陽性赤血球数は、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、または２５倍に増加する。
【００８２】
別の実施形態において、化合物１の多形形態（一水和物結晶形態ＭＨ１またはＭＨ２など）は、鎌状赤血球症を有する対象において、鎌状赤血球の割合（％鎌状赤血球ＲＢＣ）、うっ血率（％うっ血）、総ビリルビン、または総白血球（ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ）数を減らすために使用される。％鎌状赤血球ＲＢＣ、％うっ血、総ビリルビン、総白血球（ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ）数、または脾臓重量は、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、または７０％減少する。
【００８３】
ｃＧＭＰレベルは、酵素イムノアッセイなどの当技術分野のいずれかの適切な方法を用いて測定することができる。
【００８４】
本明細書で使用される場合、ＨｂＦ陽性細胞は、ＨｂＦを伴う赤血球を意味する。ＨｂＦ陽性細胞は、電気泳動および／または比色法などの当技術分野のいずれかの適切な方法を用いて血液サンプルから測定することができる。
【００８５】
本明細書で使用される場合、鎌状赤血球、鎌状赤血球は、三日月形または鎌状の赤血球を意味する。％鎌状赤血球は、当技術分野のいずれかの適切な方法を用いて血液サンプルから測定することができる。
【００８６】
本明細書で使用される場合、うっ血または微小血管性うっ血は、血管を通る血液またはリンパの流れの深刻な減速または完全な停止である。％うっ血は、静的（流れなし）細静脈の数を流れる細静脈の数の１００倍で割ったものである。％うっ血は、当技術分野のいずれかの適切な方法を用いて測定することができる。
【００８７】
本明細書で使用される場合、総ビリルビンは、非抱合型ビリルビンおよび抱合型ビリルビンの両方を意味する。総ビリルビンレベルは、当技術分野のいずれかの適切な方法を用いて血液サンプルから測定することができる。
【００８８】
本明細書で使用される場合、総白血球（ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ）数または総白血球（ｗｈｉｔｅ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌ）数は、体内の白血球（ｗｈｉｔｅ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌ）数を測定する血液検査である。それは、当技術分野のいずれかの適切な方法を用いて血液サンプルから測定することができる。
【００８９】
本開示の別の態様は、化合物１の多形形態（一水和物結晶形態ＭＨ１またはＭＨ２など）を少なくとも他の１つの活性薬剤と組み合わせて使用する方法を提供する。それらは同時にまたは連続して投与することができる。それらは、同時投与のための混合物として存在し得るか、または連続投与のためにそれぞれ別々の容器に存在し得る。
【００９０】
本明細書で使用される場合、「同時投与」という用語は、特に限定されず、化合物１の多形形態（一水和物結晶形態ＭＨ１またはＭＨ２など）および少なくとも１つの他の活性剤が、例えば、混合物としてまたは直後に連続して、実質的に同時に投与されることを意味する。
【００９１】
本明細書で使用される場合、「連続投与」という用語は、特に限定されず、化合物１の多形形態（一水和物結晶形態ＭＨ１またはＭＨ２など）および少なくとも他の１つの活性薬剤が、同時に投与されず、次々に、またはグループで、投与間の特定の時間間隔で、投与されることを意味する。時間間隔は、化合物１の多形形態（一水和物結晶形態ＭＨ１またはＭＨ２など）のそれぞれの投与と少なくとも他の１つの活性薬剤との間で同じまたは異なっていてもよく、例えば、２分−９６時間、１−７日、または１、２、３週間の範囲から選択され得る。一般に、投与間の時間間隔は、２分−７２時間、３０分−２４時間、または１−１２時間の範囲など、数分から数時間の範囲であり得る。さらなる例には、２４−９６時間、１２−３６時間、８−２４時間、および６−１２時間の範囲の時間間隔が含まれる。
【００９２】
化合物１の多形形態（一水和物結晶形態ＭＨ１またはＭＨ２など）および少なくとも他の１つの活性薬剤のモル比は、特に制限されない。例えば、多形形態の化合物１（一水和物結晶形態ＭＨ１またはＭＨ２など）および他の１つの活性薬剤が組成物中で組み合わされる場合、それらのモル比は、１：５００から５００：１、または１：１００−１００：１、または１：５０−５０：１、または１：２０−２０：１、または１：５−５：１、または１：１の範囲であり得る。多形形態の化合物１（一水和物結晶形態ＭＨ１またはＭＨ２など）および２つ以上の他の活性薬剤が組成物中で組み合わされる場合、同様のモル比が適用される。化合物１の多形形態（一水和物結晶形態ＭＨ１またはＭＨ２など）は、組成物の約１％−１０％、または約１０％−約２０％、または約２０％−約３０％、または約３０％−４０％、または約４０％−５０％、または約５０％−６０％、または約６０％−７０％、または約７０％−８０％、または約８０％−９０％、または約９０％−９９％の所定のモル重量パーセントを含み得る。
【００９３】
他の活性薬剤は、本開示の異なるＰＤＥ９阻害剤またはＨＵであり得る。他の活性薬剤はまた、ペニシリンなどの抗生物質、ジクロフェナクまたはナプロキセンなどの非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤＳ）、オピオイドなどの鎮痛薬、または葉酸であり得る。
【００９４】
本開示のさらに別の態様は、輸血、骨髄移植、または遺伝子治療などであるが、これらに限定されない少なくとも１つの他の治療と組み合わせて、化合物１の多形形態（一水和物結晶形態ＭＨ１またはＭＨ２など）を使用する方法を提供する。
【００９５】
Ｖ．キットとデバイス
本開示は、本開示の方法を便利におよび／または効果的に実施するための、様々なキットおよびデバイスを提供する。典型的には、使用者が対象の複数の治療を行うこと、および／または複数の実験を行うことを可能にするのに、キットは十分な量および／または数の構成要素を含むであろう。
【００９６】
一実施形態において、本開示は、化合物１の多形形態（一水和物結晶形態ＭＨ１またはＭＨ２など）または化合物１の多形形態（一水和物結晶形態ＭＨ１およびＭＨ２など）の組み合わせを含み、任意で、ＨＵなどの他の活性薬剤、ペニシリンなどの抗生物質、ジクロフェナクまたはナプロキセンなどの非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤＳ）、オピオイドなどの鎮痛薬、または葉酸と組み合わせて使用する鎌状赤血球症を治療するためのキットを提供する。
【００９７】
キットは、製剤組成物を形成するための包装および説明書および／または送達剤をさらに含み得る。送達剤は、生理食塩水、緩衝液、または本明細書に開示されるいずれかの送達剤を含み得る。各構成要素の量は、一貫性があり再現性のある、高濃度の生理食塩水または単純な緩衝液の処方を可能にするために変えることができる。ある期間にわたっておよび／または様々な条件下で、緩衝液中のＰＤＥ９阻害剤化合物の安定性を高めるために、構成要素を変えることもできる。
【００９８】
本開示は、化合物１の多形形態（一水和物結晶形態ＭＨ１またはＭＨ２など）を組み込むことができるデバイスを提供する。これらのデバイスは、鎌状赤血球症またはベータサラセミアのヒト患者などの、製剤を必要とする対象に、直ちに送達することができる安定した製剤を包含する。
【００９９】
デバイスの非限定的な例には、ポンプ、カテーテル、針、経皮パッチ、加圧嗅覚送達デバイス、イオントフォレーシスデバイス（ｉｏｎｔｏｐｈｏｒｅｓｉｓ  ｄｅｖｉｃｅｓ）、多層マイクロ流体デバイスを含む。デバイスは、単回、複数回、または分割投薬レジメンに従って、化合物１の多形形態（一水和物結晶形態ＭＨ１またはＭＨ２など）を送達するために用いられ得る。デバイスは、生体組織、皮内、皮下、または筋肉内のいたるところに、化合物１の多形形態（一水和物結晶形態ＭＨ１またはＭＨ２など）を送達するために用いられ得る。多形形態の化合物を送達するために適したデバイスのより多くの例には、国際公開ＷＯ２０１４０３６５５５に開示された膀胱内薬物送達のための医療デバイス、米国公開番号２００８０１０８６９７に開示されたＩ型ガラス製のガラスボトル、米国公開番号第２０１４０３０８３３６に開示されているような、分解性ポリマーおよび活性薬剤製のフィルムを含む薬剤溶出デバイス、米国特許第５７１６９８８号に開示されているような、注射マイクロポンプを有する注入デバイスまたは活性薬剤の薬学的に安定な調製物を含むコンテナ、国際公開ＷＯ２０１５０２３５５７に開示されているような、リザーバーおよびリザーバーと流体連結しているチャネル化部材を含む埋め込み型デバイス、米国公開番号２００９０２２０６１２に開示されているような、1つまたは複数の層を備えた中空糸ベースの生体適合性薬物送達デバイス、国際公開ＷＯ２０１３１７００６９に開示されるような、固形物または半固形物の形態の薬物を含むリザーバーを定義する筐体を有する細長いフレキシブルなデバイスを含む、薬物送達のための埋め込み型デバイス、米国特許第７３２６４２１号に開示される生体吸収性埋め込みデバイス、が含まれるが、これらに限定されず、これらのそれぞれの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１００】
ＶＩ．定義
本明細書で使用される冠詞「ａ」および「ａｎ」は、反対のことが明確に示されない限り、「少なくとも１つ」を意味すると理解されるべきである。
【０１０１】
本明細書で使用される「および／または」という句は、そのように結合された要素、すなわち、ある場合には結合的に存在し、他の場合には分離的に存在する要素の「いずれかまたは両方」を意味すると理解されるべきである。「および／または」節によって具体的に識別される要素以外の他の要素は、反対に明確に示されない限り、具体的に識別される要素に関連するか関連しないかにかかわらず、任意選択で存在し得る。したがって、非限定的な例として、「Ａおよび／またはＢ」への言及は、「含む」などのオープンエンドの文言と組み合わせて使用される場合、一実施形態において、Ｂを伴わないＡ（任意にＢ以外の要素を含む）を指すことができ、別の実施形態において、Ａを伴わないＢ（任意にＡ以外の要素を含む）を指すことができ、さらに別の実施形態において、ＡおよびＢの両方（任意選択で他の要素を含む）を指すことができる。
【０１０２】
本明細書で使用される場合、「または」は、上記で定義された「および／または」と同じ意味を有すると理解されるべきである。例えば、リスト内の項目を区切る場合、「または」または「および／または」は包括的であると解釈されるべきであり、すなわち、要素の数またはリストの少なくとも１つを含むが、要素の数またはリストの１つよりも多く、および任意に、追加のリストされていない項目もまた含むと解釈されるべきである。「１つのみの」または「正確に１つの」などの反対に明確に示される用語のみ、または特許請求の範囲で使用される場合、「からなる」は、要素の数またはリストの正確に１つの要素を含むことを指す。
【０１０３】
全体として、本明細書で使用される「または」という用語は、「いずれかの」、「一方の」、「１つのみの」、または「正確に１つの」などの排他性の用語が先行する場合にのみ、排他的な代替（すなわち、「一方または他方」であるが両方ではない）を示すものと解釈されるべきである。特許請求の範囲で使用される場合、「から本質的になる」は、特許法の分野で使用される通常の意味を有するべきである。
【０１０４】
本明細書で使用される場合、１つ以上の要素のリストに関する「少なくとも１つ」という句は、要素のリスト内の任意の１つ以上の要素から選択される少なくとも１つの要素を意味すると理解されるべきであるが、要素のリスト内に具体的に列挙されている各々およびすべての要素の少なくとも１つを必ずしも含まず、要素のリスト内の要素の任意の組み合わせを除外しない。この定義はまた、「少なくとも１つ」という句が言及する要素のリスト内で具体的に識別される要素以外の要素が、具体的に識別される要素に関連するか関連しないかにかかわらず、任意に存在し得ることを可能にする。
【０１０５】
したがって、非限定的な例として、「ＡおよびＢの少なくとも１つ」（または、同等に、「ＡまたはＢの少なくとも１つ」、または同等に、「Ａおよび／またはＢの少なくとも１つ」）は、一実施形態において、少なくとも１つ、任意に１つより多くのＡを含み、Ｂが存在しない（および任意にＢ以外の要素を含む）ことを指すことができ、別の実施形態において、少なくとも１つ、任意に１つより多くのＢを含み、Ａが存在しない（および任意にＡ以外の要素を含む）こと、さらに別の実施形態において、少なくとも１つ、任意に１つより多くのＡを含み、少なくとも１つ、任意に１つより多くのＢを含む（および任意に他の要素を含む）こと、等を指すことができる。
【０１０６】
本明細書で使用される場合、「含む」、「備える」、「保有する」、「有する」、「含有する」、「包含する」、「保有する」などのすべての移行句は、オープンエンド、すなわち、含むがこれに限定されないことを意味すると理解されるべきである。
【０１０７】
米国特許庁の特許審査手続マニュアルに記載されているように、「からなる」および「から本質的になる」という移行句のみが、それぞれ、クローズドまたは半クローズドの移行句であるべきでなければならない。
【０１０８】
本明細書で使用される場合、「対象」または「患者」は、疾患または障害、例えば腫瘍形成または癌に感受性があり得る哺乳動物などの任意の哺乳動物（例えば、ヒト）を指す。例としては、ヒト、非ヒト霊長類、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、またはマウス、ラット、ハムスター、もしくはモルモットなどのげっ歯類が含まれる。様々な実施形態において、対象は、治療、観察、または実験の対象であった、または対象となる対象を指す。例えば、対象は、癌と診断されたか、もしくは他のやり方で癌を有することが知られている対象、または対象の既知の癌に基づいて治療、観察、もしくは実験のために選択された対象であり得る。
【０１０９】
本明細書で使用される場合、「プロセス」および「方法」は交換可能に使用することができる。
【０１１０】
本明細書で使用される場合、「治療」または「治療すること」は、疾患または障害、あるいはその少なくとも１つの徴候または症状の改善を指す。「治療」または「治療すること」は、例えば、少なくとも１つの徴候または症状の安定化によって決定されるような疾患または障害の進行の減少、あるいは少なくとも１つの徴候または症状の進行速度の減少によって決定されるような進行速度の減少を指すことができる。別の実施形態において、「治療」または「治療すること」は、疾患または障害の発症を遅らせることを指す。
【０１１１】
本明細書で使用される場合、「予防」または「予防すること」は、所与の疾患または障害の徴候または症状を獲得するか有するリスクの低減、すなわち予防的処置を指す。
【０１１２】
本明細書で使用される「治療有効量」という句は、所望の治療効果を生み出すために有効である、本教示の化合物、材料、または化合物を含む組成物の量を意味する。したがって、治療有効量は、疾患または障害を治療または予防し、例えば、障害の少なくとも１つの徴候または症状を改善する。様々な実施形態において、疾患または障害は癌である。
【０１１３】
２つの文字または記号の間にないダッシュ（“−”）は、置換基の結合点を示すために使用されます。例えば、−ＣＯＮＨ２は炭素原子（Ｃ）を介して結合する。
【０１１４】
「任意」または「任意に」とは、後で説明するイベントまたは状況が発生する可能性があるかまたは発生しない可能性があり、説明には、そのイベントまたは状況が発生する場合と発生しない場合が含まれることを意味する。例えば、「任意に置換されたアリール」は、本明細書で定義される「アリール」および「置換アリール」の両方を包含する。１つ以上の置換基を含む任意の基に関して、当業者は、そのような基が、立体的に非実用的、合成的に実行不可能、および／または本質的に不安定である任意の置換または置換パターンを導入することを意図しないことを理解する。
【０１１５】
本明細書で使用される場合、「実質的に」という用語は、アクション、特性、プロパティ、状態、構造、アイテム、または結果の完全またはほぼ完全な範囲または程度を指す。例えば、第２のオブジェクトが「実質的に同じ」または「実質的に一致する」オブジェクトは、そのオブジェクトが第２のオブジェクトと完全に同じかまたはほぼ完全に同じかのいずれかであることを意味する。絶対的な完全性からの正確な許容可能な逸脱の程度は、特定の状況に依存する場合があります。しかし、一般的に言えば、完全性に近いことは、あたかも絶対的および完全な完全性が得られたのと同じ全体的な結果を有するようになる。
【０１１６】
「実質的に」の使用は、アクション、特性、プロパティ、状態、構造、アイテム、または結果の完全なまたはほぼ完全な欠如を指すために否定的な意味合いで使用される場合にも同様に適用可能である。例えば、不純物を「実質的に含まない」組成物は、不純物を完全に欠いているか、または不純物をほぼ完全に欠いているため、その効果は、あたかも不純物を完全に欠いているようなものと同じである。言い換えれば、成分または元素を「実質的に含まない」組成物は、その測定可能な効果がない限り、実際にそのようなアイテムを依然として含み得る。
【０１１７】
特に明記しない限り、本明細書および特許請求の範囲で使用される成分、反応条件、および他の特性またはパラメーターの量を表すすべての数値は、すべての場合において「約」という用語によって修飾されると理解されるべきである。したがって、他に明記しない限り、以下の明細書および添付の特許請求の範囲に記載されている数値パラメーターは近似値であることが理解されるべきである。少なくとも、特許請求の範囲に対する均等論の適用を制限するための試みとしてではなく、報告された有効数字および通常の丸め手法の適用に照らして数値パラメーターを読み取るべきである。例えば、「約」という用語は、「約」という用語が修飾する数字の±１０％、±５％、±２％、±１％、±０．５％、または±０．１％の変動の数値を含むことができる。様々な実施形態において、「約」という用語は、数字の数値の±５％、±２％、±１％、または±０．５％の変動を包含する。いくつかの実施形態において、「約」という用語は、数字の数値の±５％、±２％、または±１％の変動を包含する。特定の実施形態において、「約」という用語は、数字の数値の±５％の変動を包含する。特定の実施形態において、「約」という用語は、数字の数値の±２％の変動を包含する。特定の実施形態において、「約」という用語は、数字の数値の±１％の変動を包含する。
【０１１８】
本明細書のすべての数値範囲は、記載された数値の範囲内のすべての数値およびすべての数値の範囲を含む。非限定的な例として、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルはまた、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、（Ｃ１−Ｃ２）、（Ｃ１−Ｃ３）、（Ｃ１−Ｃ４）、（Ｃ１−Ｃ５）、（Ｃ２−Ｃ３）、（Ｃ２−Ｃ４）、（Ｃ２−Ｃ５）、（Ｃ２−Ｃ６）、（Ｃ３−Ｃ４）、（Ｃ３−Ｃ５）、（Ｃ３−Ｃ６）、（Ｃ４−Ｃ５）、（Ｃ４−Ｃ６）、および（Ｃ５−Ｃ６）アルキルのいずれか１つを含む。
【０１１９】
さらに、本開示の広い範囲を示す数値範囲およびパラメーターは、上記で論じた近似値であるが、実施例のセクションに記載された数値は、可能な限り正確に報告される。しかし、そのような数値は、本質的に、測定機器および／または測定技術に起因する特定の誤差を含むことが理解されるべきである。
【実施例】
【０１２０】
以下の実施例は、本開示を説明することを意図しているが、本開示を限定することを意図するものではないことを理解されたい。前述の説明および例のさまざまな他の例および修正は、本開示の精神および範囲から逸脱することなく、本開示を読んだ後、当業者には明らかであり、およびそのような全ての例または修正は、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図されている。本明細書で参照されるすべての刊行物および特許は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
略語のリスト：
１Ｈ−ＮＭＲ      プロトン核磁気共鳴
ＡＴＲ            減衰全反射法
ｃａ．            おおよそ
ＤＭＳＯ          ジメチルスルホキシド
ＤＳＣ            示差走査熱量測定
ＤＶＳ            動的水蒸気収着
ＥｔＯＡｃ        酢酸エチル
ＥｔＯＨ          エタノール
ＦＢＲＭ          集束ビーム反射率測定
ＧＶＳ            重量蒸気収着
ＨＰＬＣ          高速液体クロマトグラフィー
ＨＳＭ            ホットステージ顕微鏡法
ＩＤ              同定
ＩＰＡ            プロパン−２−オール
ＩＰｒＯＡｃ      酢酸イソプロピル
ＫＦ              カールフィッシャー
ＭｅＯＨ          メタノール
ＭｅＯＡｃ        酢酸メチル
Ｎ／Ａ            該当なし
ＰＬＭ            偏光顕微鏡法
ＲＨ              相対湿度
ＲＴ              室温
ＳＣＸＲＤ        単結晶Ｘ線回折
ＴＦＡ            トリフルオロ酢酸
ＴＧＡ            熱重量分析
ＴＨＦ            テトラヒドロフラン
Ｖｏｌ            体積
ＶＴ−ＸＲＰＤ    温度可変粉末Ｘ線回折
ＸＲＰＤ          粉末Ｘ線回折
【０１２１】
機器と方法論の詳細
粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）
ＸＲＰＤ回折図は、Ｃｕ  Ｋα放射線（４０ｋＶ、４０ｍＡ）およびＧｅモノクロメータを取り付けられたθ−２θゴニオメータを使用して、ブルカー（Ｂｒｕｋｅｒ）Ｄ８回折計で収集された。入射ビームは２．０ｍｍの発散スリットを通過し、続いて０．２ｍｍの散乱防止スリットとナイフエッジを通過する。回折ビームは、２．５゜のソラースリット（Ｓｏｌｌｅｒ  ｓｌｉｔ）を備えた８．０ｍｍの受光スリットを通過し、続いてリンクスアイ（Ｌｙｎｘｅｙｅ）検出器を通過する。データ収集および分析に使用されたソフトウェアは、それぞれＤｉｆｆｒａｃ  Ｐｌｕｓ  ＸＲＤ  Ｃｏｍｍａｎｄｅｒ、およびＤｉｆｆｒａｃ  Ｐｌｕｓ  ＥＶＡであった。
【０１２２】
サンプルは、受け取ったままの粉末を使用し、平板標本として、周囲条件下で実行された。サンプルは、研磨されたゼロバックグラウンド（５１０）シリコンウェーハ上で、平らな表面を軽く押すか、カットキャビティに詰めることによって調整された。サンプルは、それ自体の平面内で回転させた。
【０１２３】
標準的なＰｈａｒｍｏｒｍｉｘデータ収集方法の詳細は、角度範囲：２−４２゜２θ、ステップサイズ：０．０５゜２θ、収集時間：０．５秒／ステップ（合計収集時間：６．４０分）である。
【０１２４】
パナリティカル  エンピリアン（ＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ  Ｅｍｐｙｒｅａｎ）
ＸＲＰＤ回折図は、透過型で、Ｃｕ  Ｋα放射線（４５ｋＶ、４０ｍＡ）を使用して、パナリティカル  エンピリアン（ＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ  Ｅｍｐｙｒｅａｎ）回折計で収集された。０．５゜スリット、４ｍｍマスク、および集束ミラーを備えた０．０４ｒａｄソラースリット（Ｓｏｌｌｅｒ  ｓｌｉｔ）が、入射ビーム上で使用された。回折ビーム上に配置されたＰＩＸｃｅｌ３０検出器は、受光スリットおよび０．０４ｒａｄソラースリット（Ｓｏｌｌｅｒ  ｓｌｉｔ）が取り付けられた。データ収集に使用されたソフトウェアは、Ｘ’Ｐｅｒｔ  Ｏｐｅｒａｔｏｒ  Ｉｎｔｅｒｆａｃｅを使用したＸ’Ｐｅｒｔ  Ｄａｔａ  Ｃｏｌｌｅｃｔｏｒであった。データは、Ｄｉｆｆｒａｃ  Ｐｌｕｓ  ＥＶＡまたはＨｉｇｈＳｃｏｒｅ  Ｐｌｕｓを使用して、分析および提示された。
【０１２５】
サンプルは調整され、および金属またはミリポア（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）９６ウェルプレートのいずれかで、透過モードで分析された。金属ウェルプレート上の金属シートの間にＸ線透明フィルムが使用され、および粉末（約１−２ｍｇ）が受け取ったまま使用された。軽い真空（ｌｉｇｈｔ  ｖａｃｕｕｍ）下でろ過する前に、少量の懸濁液をプレートに直接加えることにより、懸濁液から固形物を分離および分析するために、ミリポア（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）プレートが使用された。
【０１２６】
金属プレートのスキャンモードは、ゴニオスキャン軸を使用し、一方で、２θスキャンが、ミリポア（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）プレートに用いられた。
【０１２７】
標準的なスクリーニングデータ収集方法の詳細は、角度範囲：２．５−３２．０゜２θ、ステップサイズ：０．０１３０゜２θ、収集時間：１２．７５秒／ステップ（合計収集時間２．０７分）である。
【０１２８】
非周囲条件
ＸＲＰＤ回折図は、反射型で、Ｃｕ  Ｋα放射線（４５ｋＶ、４０ｍＡ）を使用して、パナリティカル  エンピリアン（ＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ  Ｅｍｐｙｒｅａｎ）回折計で収集された。機器には、グラファイト／カプトン窓が取り付けられたアントンパール（Ａｎｔｏｎ  Ｐａａｒ）ＣＨＣ  ｐｌｕｓ＋ステージが取り付けられており、空冷およびエドワーズ（Ｅｄｗａｒｄｓ）ＲＶ３ポンプを使用した低真空ポンプシステムが装備されている。１０ｍｍの固定入射ビームマスクを備えたプログラム制御可能な発散スリット（自動モードにおいて）、ニッケルフィルター、０．０４ｒａｄソラースリット（Ｓｏｌｌｅｒ  ｓｌｉｔ）が入射ビーム上で使用された。回折ビーム上に配置されたＰＩＸｃｅｌ３Ｄ検出器には、プログラム制御可能な（自動モードにおいて）散乱防止スリット、および０．０４ｒａｄソラースリット（Ｓｏｌｌｅｒ  ｓｌｉｔ）が取り付けられた。
【０１２９】
データ収集に使用されたソフトウェアは、Ｘ’Ｐｅｒｔ  Ｄａｔａ  Ｃｏｌｌｅｃｔｏｒであり、データは、Ｄｉｆｆｒａｃ  Ｐｌｕｓ  ＥＶＡまたはＨｉｇｈｓｃｏｒｅ  Ｐｌｕｓを使用して、分析および提示された。
【０１３０】
温度可変（ＶＴ）実験のために、サンプルは、アントンパール（Ａｎｔｏｎ  Ｐａａｒ）クロムめっきサンプルホルダーにおいて調製および分析された。測定を開始する前に、１０°Ｃ／分の加熱／冷却速度が、２分間の等温保持で使用された。測定パラメーターは、標準的なスクリーニングデータ収集方法（上記で詳述）によるものである。測定は、２５、５０、７５、１００、１６０、および２５°Ｃの温度で行われた。次に、完全な再水和を確認するために、サンプルは１時間後にＸＲＰＤで再分析された。
【０１３１】
真空実験のために、サンプルは、アントンパール（Ａｎｔｏｎ  Ｐａａｒ）クロムめっきサンプルホルダーにおいて調製および分析された。測定パラメーターは、真空なし２５°Ｃ（Ｉ２）で、標準的なスクリーニングデータ収集方法（上記で詳述）によるものである。次に、おおよそ５０ｍｂａｒで真空を適用し、および３回の連続測定のために、無水物パターンが得られるまで５分ごとにサンプルが測定された（完全な脱水を確認するために、サンプルＩ８まで）。次に、真空を解除し、サンプルは５分ごとに６回の測定で分析された（サンプルＩ２２まで）。次に、完全な再水和を確認するために、サンプルは１時間後にＸＲＰＤで再分析された。
【０１３２】
プロトン核磁気共鳴（１Ｈ−ＮＭＲ）
１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、オートサンプラーが装備され、およびＤＲＸ４００コンソールによって制御されるブルカー（Ｂｒｕｋｅｒ）４００ＭＨｚ機器で収集された。特に明記されない限り、サンプルはＤＭＳＯ−ｄ６溶媒中で調製された。自動化された実験は、標準的なブルカー（Ｂｒｕｋｅｒ）ロード実験（１Ｈ）を使用した、Ｔｏｐｓｐｉｎソフトウェア内のＩＣＯＮ−ＮＭＲ構成を使用して得られた。オフライン分析は、ＡＣＤ  Ｓｐｅｃｔｒｕｓ  Ｐｒｏｃｅｓｓｏｒを使用して行われた。
【０１３３】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
ＤＳＣデータは、５０ポジションオートサンプラーが装備されたＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ＤＳＣで収集された。典型的には、ピンホール付きアルミニウムパン中の各サンプルの０．５−３ｍｇは、２５°Ｃ−３００°Ｃまで１０°Ｃ／分で加熱された。５０ｍｌ／分の乾燥窒素のパージは、サンプル上で維持された。
【０１３４】
機器制御ソフトウェアはＴＲＩＯＳであり、データはＴＲＩＯＳまたはＵｎｉｖｅｒｓａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓを使用して分析された。
【０１３５】
熱重量分析（ＴＧＡ）
ＴＧＡデータは、２５ポジションオートサンプラーを装備したＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ＴＧＡで収集された。典型的には、５−１０ｍｇの各サンプルは、事前に風袋引きしたアルミニウムＤＳＣパンに乗せられ、および周囲温度から３５０°Ｃまで１０°Ｃ／分で加熱された。２５ｍｌ／分の窒素パージは、サンプル上で維持された。
【０１３６】
機器制御ソフトウェアはＴＲＩＯＳであり、データはＴＲＩＯＳまたはＵｎｉｖｅｒｓａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓを使用して分析された。
【０１３７】
偏光顕微鏡法（ＰＬＭ）
サンプルは、画像キャプチャのためにＤＳカメラ制御ユニットＤＳ−Ｌ２に接続されたデジタルビデオカメラを備えたニコンＳＭＺ１５００偏光顕微鏡で研究された。サンプルは、適切な倍率、および部分的に偏光された光で、λ偽色フィルターと組み合わせて観察された。
【０１３８】
ホットステージ顕微鏡法（ＨＳＭ）
ホットステージ顕微鏡法は、ライカＬＭ／ＤＭ偏光顕微鏡を、メトラートレド（Ｍｅｔｔｌｅｒ−Ｔｏｌｅｄｏ）ＦＰ８２ＨＴホットステージ、および画像キャプチャ用のデジタルビデオカメラと組み合わせて使用して実施された。少量の各サンプルは、個々の粒子を可能な限り離してスライドガラス上に配置された。サンプルは、周囲温度下で、典型的には１０−２０°Ｃ／分で加熱されながら、適切な倍率および部分的に偏光された光で、λ偽色フィルターと組み合わせて観察された。データは、ＳｔｕｄｉｏＣａｐｔｕｒｅを使用して収集された。
【０１３９】
重量蒸気収着（ＧＶＳ）
収着等温線は、ＤＶＳ  Ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ制御ソフトウェアによって制御されるＳＭＳ  ＤＶＳ  Ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ吸湿分析器を使用して得られた。サンプルの温度は、機器の制御によって２５°Ｃに維持された。湿度は、総流量２００ｍｌ／分の乾燥窒素と湿潤窒素の流れを混合することによって制御された。相対湿度は、サンプルの近くに位置した校正済みのＲｏｔｒｏｎｉｃプローブ（１．０−１００％ＲＨのダイナミックレンジ）によって測定された。％ＲＨの関数としてのサンプルの重量変化（質量緩和）は、微量天秤（精度±０．００５ｍｇ）によって常にモニターされていた。
【０１４０】
典型的には、５−３０ｍｇのサンプルは、周囲条件下で風袋を計量された網状ステンレススチールの籠に置かれた。サンプルは、４０％ＲＨおよび２５°Ｃ（典型的な室内条件）で乗せるおよび取り外された。以下に概説するように、吸湿等温線は行われた。（全サイクルごとに２回のスキャン）。標準等温線は、０−９０％ＲＨの範囲で１０％ＲＨ間隔、２５°Ｃで行われた。典型的には、ダブルサイクル（４回スキャン）が実行された。データ分析は、ＤＶＳ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｕｉｔｅを使用して、マイクロソフト  エクセル内で実行された。
【０１４１】
【表２】
2021526134.tif 000006
【０１４２】
等温線の完成後にサンプルを回収し、ＸＲＰＤによって再分析した。
【０１４３】
ＨＰＬＣによる化学的純度の決定
純度分析は、ダイオードアレイ検出器が装備され、およびＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎソフトウェアを使用して、アジレント（Ａｇｉｌｅｎｔ）ＨＰ１１００シリーズシステムで行われた。完全な方法の詳細は、以下の表３に規定される
【０１４４】
【表３】
2021526134.tif 000007
【０１４５】
カールフィッシャー滴定（ＫＦ）による水分の決定
各サンプルの含水量は、Ｈｙｄｒａｎａｌ  Ｃｏｕｌｏｍａｔ  ＡＧオーブン試薬および窒素パージを使用した８５１  Ｔｉｔｒａｎｏクーロメータを用いて、Ｍｅｔｒｏｈｍ８７４オーブンサンプルプロセッサーで、１．５０℃で、測定された。秤量した固形物サンプルは、密封したサンプルバイアルに導入された。ほぼ１０ｍｇのサンプルが滴定ごとに使用され、および重複して測定が行われた。特に明記されない限り、これらの結果の平均が示される。データの収集と分析は、Ｔｉａｍｏソフトウェアを使用して行われた。
【０１４６】
熱力学的水溶解度
水溶解度は、化合物の親フリーフォームの最大最終濃度≧２００ｍｇ／ｍｌを与えるために十分な化合物を関連する培地に懸濁することによって、決定された。懸濁液を２５℃で、７５０ｒｐｍに設定したＨｅｉｄｏｌｐｈプレートシェーカーで２４時間平衡化された。次に、飽和溶液のｐＨが測定され、懸濁液がグラスファイバーＣフィルター（粒子保持能１．２μｍ）でろ過され、および適切に希釈された。定量は、ＤＭＳＯ中のほぼ０．１５ｍｇ／ｍｌの標準溶液に準拠したＨＰＬＣによるものであった。異なる体積の標準、希釈および未希釈のサンプル溶液が注入された。
【０１４７】
溶解度は、標準的な注入における主要なピークと同じ保持時間に見出されたピークの積分によって決定されたピーク面積を使用して計算された。
【０１４８】
【表４】
2021526134.tif 000008
【０１４９】
分析は、ダイオードアレイ検出器が装備され、およびＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎソフトウェアを使用して、アジレント（Ａｇｉｌｅｎｔ）ＨＰ１１００シリーズシステムで行われた。
【０１５０】
ラマン分光法
データは、レニショー（Ｒｅｎｉｓｈａｗ）ｉｎＶｉａ  Ｑｏｎｔｏｒで収集された。機器制御、データ分析、およびプレゼンテーションソフトウェアはＷｉＲＥであった。
【０１５１】
方法：励起源、λｅｘ＝６３３ｎｍまたは７８５ｎｍレーザー、サンプルの劣化を回避するために適切に減衰させた。ラマンシフト範囲：１００−５０００ｃｍ−１。露光時間：０．０２−１０秒。積算：１−３。あるいは、ラマンシフト範囲：１８０−１７００ｃｍ−１。露光時間：３０秒。積算：３。
【０１５２】
Ｃｒｙｓｔａｌ  １６
温度の関数としての材料の溶解度および準安定領域を決定するために、Ｃｒｙｔｌ  １６結晶化システム（Ｔｅｃｈｎｏｂｉｓ、ＮＬ）が使用された。
【０１５３】
異なる全体的な濃度におけるＡＰＩのスラリーは、既知の量の固形物を既知の量の冷却溶媒（０．５−１．５ｍｌの間）に添加することによって調整され、および磁気バーを使用して４００ｒｐｍで攪拌調製された。飽和温度は、０．５°Ｃ／分で−８から７０°Ｃまでの加熱と冷却のサイクルを通して測定された。
【０１５４】
温度を上昇させると、固形物は完全に溶解し、および懸濁液は、光透過率が最大値に達するような透明の溶液になった。この温度は、飽和温度と一致すると想定されたクリアポイント、として割り当てられる。次に、０．５°Ｃ／分の速度で溶液を冷却することにより、粒子が最初に形成された温度が、光透過率の低下によって検出された。これは曇り点として割り当てられる。前記点は、ファントホッフの式で近似され、および曇り点とクリアポイントの差は、システムの準安定領域幅（ＭＳＺＷ）を定義した。機器制御ソフトウェアは、Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓであり、データはＣｒｙｓｔａｌ  Ｃｌｅａｒおよびマイクロソフト  エクセルを使用して分析された。
【０１５５】
集束ビーム反射率測定（ＦＢＲＭ）
粒子サイズ分布は、１０秒ごとにデータを収集することによって、ＦＢＲＭプローブＧ４００を使用して収集された。データは、ｉＣ  ＦＢＲＭ  ＳＰ１ソフトウェアで処理された。
【０１５６】
単結晶Ｘ線回折（ＳＣＸＲＤ）
データは、Ｒｉｇａｋｕ  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ  Ｓｕｐｅｒｎｏｖａ  Ｄｕａｌ  Ｓｏｕｒｃｅ、Ｃｕ  ａｔ  Ｚｅｒｏ、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｃｒｙｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｃｏｂｒａ冷却機が装備されたＡｔｌａｓ  ＣＣＤ回折計で収集された。データは、実験表に提示されているように、Ｃｕ  ＫαまたはＭｏ  Ｋα放射線を使用して収集された。構造は、ブルカー（Ｂｒｕｋｅｒ）ＡＸＳ  ＳＨＥＬＸＴＬスイートまたはＯＬＥＸ２結晶学ソフトウェアを使用して、解かれおよび精緻化された。全詳細は、ＣＩＦにおいて見出すことができる。特に明記しない限り、炭素に取り付けられた水素原子は、何学的に配置され、およびライディング等方性置換パラメーターを用いて精緻化することが可能にされた。ヘテロ原子に取り付けられた水素原子は、差フーリエ合成に配置され、および等方性置換パラメーターを用いて自由に精緻化することが可能にされた。結晶構造の参照回折図は、Ｍｅｒｃｕｒｙを使用して生成された。
【０１５７】
実施例１．化合物１の合成
化合物１は、ＷＯ２０１３／０５３６９０に開示されている「６−［４−メチル−１−（ピリミジン−２−イルメチル）ピロリジン−３−イル］−３−テトラヒドロピラン−４−イル−７Ｈ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−オン」の光学異性体である。化合物１は、ＷＯ２０１３／０５３６９０に開示された方法に従って調製された「６−［４−メチル−１−（ピリミジン−２−イルメチル）ピロリジン−３−イル］−３−テトラヒドロピラン−４−イル−７Ｈ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−オン」からのキラル選択的精製から調製することができ、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。化合物１はまた、ＷＯ２０１７／００５７８６に開示された方法で調製することができ、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１５８】
【化３】
2021526134.tif 000009
【０１５９】
実施例２．ＭＨ１の結晶構造決定および特性評価
単結晶成長実験
結晶化は、透明な溶液の温度を下げることによって得ることができる。ほとんどの物質の溶解度は温度とともに低下するため、過飽和を引き起こすために冷却を使用することができる。この研究において使用された溶媒は、酢酸イソプロピル、エタノール、テトラヒドロフラン、水、ジクロロメタン、アセトニトリル、アニソール、メチルイソブチルケトン、ニトロメタン、１，２−ジメトキシエタン、メチルエチルケトン、１，４−ジオキサン、ｎ−酢酸プロピル、２−プロパノール、アセトン、クメン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、メタノール、２−メチルテトラヒドロフラン、ＭｅＣＮ／５％水、ＩＰＡ／５％水、ＥｔＯＨ／水  １：１、およびＴＨＦ／１０％水であった。
【０１６０】
５．０ｍｇのＭＨ１（オフホワイトの粉末）は、２４個のＨＰＬＣバイアルに量り入れ、および室温（ＲＴ）で様々な溶媒（５０μｌ）を用いて処理された。次に、サンプルは５０°Ｃで５分間置かれた。ＲＴまたは５０°Ｃで得られた全ての溶液は、４°Ｃの冷蔵庫に置かれた。溶媒のさらなるアリコート（１００μｌ）は任意の懸濁液に加えられ、次にこれらは（５０°Ｃ）に１時間置かれた。次に、残っている全ての懸濁液はシリンジでろ過され、母液は４°Ｃの冷蔵庫に置かれた。１時間後に溶媒を加えた後に得られた溶液もすべて冷蔵庫に置かれた。
【０１６１】
分析に適した結晶は、酢酸イソプロピル、アニソール、メチルイソブチルケトン、酢酸ｎ−プロピル、クメンおよび２−メチルＴＨＦからの冷却時にのみ最初に得られた。単結晶Ｘ線回折による分析に十分なサイズと質の結晶が単離され、酢酸ｎ−プロピル中の化合物の飽和溶液から母液を冷却することによっておよその寸法０．４０×０．１５×０．０８ｍｍの結晶が得られた。
【０１６２】
ＭＨ１の結晶構造は、２９３および１００Ｋで決定された。結晶は、斜方晶系であり、それぞれ最終Ｒ１＝［Ｉ＞２σ（Ｉ）］＝４．２５および３．４６％の空間群Ｐ２１２１２１であり、それぞれ２９３Ｋおよび１００ＫでＦｌａｃｋパラメーター＝０．０２（８）および−０．０５（７）であった。化合物の絶対立体化学は（Ｓ，Ｓ）として決定されている。化合物は、図１に描かれるように同定された。非対称ユニットには化合物１の１分子および水の１分子があり、両方とも完全に秩序化されている。ＸＲＰＤパターンは、結晶構造から計算され、および室温で受け取った物質の実験回折図と比較された。室温での実験回折図（図２Ｂ）と２９３Ｋおよび１００ＫでのＭＨ１のシミュレートされたＸＲＰＤパターンのオーバーレイは、それらは矛盾がないことを示す。いかなるわずかな違いも、温度および優先配向性を伴う格子の変化に起因する。
【０１６３】
ＭＨ１の特性評価データの要約は表５にある。
【０１６４】
【表５】
2021526134.tif 000010
【０１６５】
【表６】
2021526134.tif 000011
【０１６６】
【表７】
2021526134.tif 000012
【０１６７】
実施例３．化合物１のＭＨ２の結晶構造決定
単結晶成長実験
供給されたＭＨ１（１．６ｇ）は、５０℃の真空オーブンに３時間置かれた。次に、サンプルは、５°Ｃで７．５％水／ＭｅＯＡｃ（１０ｖｏｌ、１６ｍｌ）で処理された。５°Ｃで１２時間後、懸濁液はろ過され、ヘプタンを用いて洗浄され、風乾された。
【０１６８】
濾過手順中にバイアルをｎ−ヘプタンで洗浄した後、分析に適した結晶が得られた。１００Ｋでの単結晶構造を決定するために、これらの結晶が使用された。
【０１６９】
【表８】
2021526134.tif 000013
【０１７０】
ＭＨ２の結晶構造
ＭＨ２の結晶は、ヘプタンを用いて洗浄する際の高速蒸発によって得られた。単結晶Ｘ線回折による分析に十分なサイズと質の結晶が、およそ０．６５×０．２６×０．１８ｍｍの寸法で単離された。ＭＨ２の結晶構造は１００Ｋで決定された。結晶は斜方晶系であり、最終Ｒ１＝［Ｉ＞２σ（Ｉ）］＝３．０７％の空間群Ｐ２１２１２１である。化合物は、図６に描かれるように同定された。非対称ユニットは、化合物１の１分子および水の１分子を含み、両方とも完全に秩序化されている。ＭＨ２の絶対配置は、（Ｓ，Ｓ）配置のＣ７およびＣ９で、Ｆｌａｃｋパラメーター＝−０．０１（８）で決定されている。
【０１７１】
ＸＲＰＤパターンは、結晶構造から計算され、および室温でのＭＨ２物質の実験回折図と比較された（図７）。シミュレートされた回折図は、概してバルク物質と矛盾がなかった。いかなるわずかな違いも、ほとんどの場合、温度および優先配向性を伴う格子の変化に起因する。
【０１７２】
実施例４．無水（ＡＨ）形態および水和形態（ＭＨ１およびＭＨ２）の間の転換
ＭＨ１の脱水調査
ＭＨ１は、最初に、５０℃の真空オーブンに一晩置かれた。次に、サンプルは、真空オーブンに戻され、５０°Ｃで５日間、次に９０°Ｃで４時間保管された。次に、アリコートは９０°Ｃの保管場所から取り出され、周囲条件で２時間保持された。各時点で、ＴＧＡによる分析が行われた。
【０１７３】
水に起因する重量減少が、乾燥後のすべてのサンプルで観察された。これは、サンプルが調査した温度で水を完全に失わないか、または周囲条件で水を再吸収するためである。結晶形態に対する真空および加熱の影響を決定するために、さらなるＸＲＰＤ調査が行われた。
【０１７４】
ＶＴ  ＸＲＰＤ
ＭＨ１は、エンピリアン（Ｅｍｐｙｒｅａｎ）で２５、５０、７５、１００、１６０、および２５℃（１０℃／分の加熱速度および測定開始前に２分間待機）で分析された。次に、サンプルは１０分および２０分後にＸＲＰＤで再分析され、再水和が確認された。
【０１７５】
最初にサンプルはＭＨ１である。温度が上昇するにつれて、サンプルは無水物形態に変換し、７５℃まではＸＲＰＤによって完全に無水である。２５℃に再冷却すると、ＭＨ１に対応するピークが存在する。さらに２５℃で放置すると、無水物に対応するピークがより強烈でなくなるにつれて、これらのＭＨ１に対応するピークがより強烈になる。このことは、周囲条件下で、無水物が容易にＭＨ１に変換することを示している。ＶＴ  ＸＲＰＤ後のＴＧＡは、３．２％の質量損失をもたらし、水の再取り込みが確認される。
【０１７６】
真空下でのＸＲＰＤ
ＭＨ１は真空なしで２５℃にて分析された。次に、約５０ｍｂａｒの真空を適用し、３回の連続測定で無水物パターンが得られるまで、サンプルを５分ごとに測定した（完全な脱水を確実にするために）。次に、真空を解除し、サンプルステージの前面を取り外す前に、サンプルを５分ごとに６回測定して分析した。
【０１７７】
最初にサンプルはＭＨ１である。サンプルが真空下で保管されるにつれて、サンプルは無水物形態に変換される（１０分後にＸＲＰＤによってこれは完全に無水になる）。真空を解除すると、最初は３０分間変化が見られない。次に、サンプルステージの前面を取り外して、周囲の空気がサンプルステージに浸透できるようにさせる。ＭＨ１に対応するピークがすぐに出現し、サンプルは１５分後にＸＲＰＤによって完全に水和される。このことは、周囲条件下で、無水物が容易にＭＨ１に変換することを示している。ＴＧＡ真空後ＸＲＰＤは３．４％の質量損失をもたらす。
【０１７８】
乾燥調査の結果は、無水形態を得ることが可能であるが、この材料が一水和物、ＭＨ１に迅速に再度変換することを確認している。ＭＨ１の圧縮研究は、ＸＲＰＤによる無水物への変換は示されなかった。
【０１７９】
ＭＨ１の水分活性実験
ＭＨ１（３０．０ｍｇ）をＨＰＬＣバイアルに量り取り、真空オーブンに入れて週末にかけて乾燥させた。次に、すべてのサンプルを使用前にデシケーターに入れて、乾燥を確保した。溶媒（３００μｌ）を加え、２５℃または５℃のいずれかでスラリーを攪拌した。形成されたいずれかの溶液にもさらにＭＨ１を加えてスラリーに戻した。酢酸エチルおよび酢酸メチルは両方とも使用前に乾燥させた。４日後、サンプルは周囲条件への曝露を最小限に抑えてＸＲＰＤによって分析した。
【０１８０】
選択したサンプルは、ＸＲＰＤ、１Ｈ  ＮＭＲ、ＴＧＡ、ＤＳＣによって周囲環境に２日間放置した後にもまた特性評価した。
【０１８１】
水分活性実験から得られた結果は、ａｗ≦０．４の水分活性で一水和物ＭＨ１が得られたことを示す。２５℃におけるａｗ＝０．５および０．６で、一水和物ＭＨ１もまた得られた。しかし、５℃で新しい形態が観察された。次に、この形態は、ａｗ＝０．７−０．９で５℃と２５℃の両方において観察された。周囲条件で２日後にこの形態の選択されたサンプルの再分析により、同じ形態のままであることを確認した。新しい形態も一水和物形態であり、ＭＨ２として同定した。
【０１８２】
【表９】
2021526134.tif 000014
【０１８３】
ＭＨ２のスケールアップ
ＭＨ１（１．６ｇ）を５０℃の真空オーブンに３時間入れた。次に、サンプルを５℃で７．５％水／ＭｅＯＡｃ（１０体積、１６ｍｌ）で処理した。５℃で１２時間後、サンプルのアリコートをＸＲＰＤで分析した。次に、懸濁液を濾過し、ヘプタンで洗浄し、風乾し、そしてＸＲＰＤおよび適切な技術によって分析した。バイアルをヘプタンで洗浄すると、バイアルの壁に結晶が形成され、これをＳＣＸＲＤで分析した。特性評価結果の要約を表９に示す。
【０１８４】
結果および考察：ＭＨ２を調製する試みは成功した。ＭＨ２のスケールアップのＸＲＰＤオーバーレイを図８に示す。ＴＧＡデータは、１当量（ｅｑ）の水に対応する２５−１００℃で４．４％の質量損失を示し、サンプルが一水和物であることを示す。これは、サンプルで４．５％の水が検出されたＫＦ測定によって確認された。水分損失はＤＳＣデータでもまた認められ、５９．１℃での幅広い吸熱とそれに続く１８４．７℃での融解を示す吸熱が見られた。この吸熱はＡＨの融解に対応し、ＭＨ１から開始したときに得られる融点（１８５．６℃）に非常に近い値である。１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、ＭＨ１の構造および参照スペクトルと一致している。ＧＶＳデータは、４０−９０％ＲＨの最初の収着サイクルでの取り込みの欠如を示した。これに続いて、脱着サイクルで４．８％の重量損失が発生した。２回目の収着サイクルにおいて４．５％の取り込みが観察された。これは、ＭＨ２が脱着サイクル中にＡＨに変換され、続いて収着サイクル中に一水和物に変換されることを示唆した。変換イオンは、ＧＶＳ後ＸＲＰＤ分析によって確認され、ＭＨ１として再水和したことが示された。ＭＨ１およびＭＨ２のラマンスペクトルには、１３５０と１６５０ｃｍ−１に主な違いを伴う同様の特性が含まれている。多形間のラマンスペクトルの違いはしばしば小さいので、このことは予想されることである。ＭＨ２の立体化学は、ＳＣＸＲＤによってＳ、Ｓ−エナンチオマー（ＭＨ１と同じ）として決定された。ＰＬＭは、サンプルの形態が不規則な形状と混合された結晶板であることを示している。２５℃におけるＭＨ２の水中での熱力学的溶解度は３６．５ｍｇ／ｍｌである。
【０１８５】
【表１０】
2021526134.tif 000015
【０１８６】
ＭＨ１とＭＨ２のさらなる分析
実施例５．ＭＨ２のＸＲＰＤ検査
手順：同じ手順を使用して、ＭＨ２材料の第２のバッチを調製した。次に、このサンプルをＶＴＸＲＰＤおよび真空下のＸＲＰＤによって分析した。
【０１８７】
結果および考察：ＭＨ２は加熱するとＡＨ（無水物）に変換される。ＭＨ２およびＡＨの混合物が５０℃で形成され、続いて７５℃でＡＨに完全に変換された。２５℃に冷却した後、ＡＨは完全にＭＨ１に変換された。ＭＨ１の形成は、周囲条件で１時間保管した後、ＸＲＰＤによって確認した。
【０１８８】
ＭＨ２サンプルは、真空への５分間曝露の後、脱水してＡＨになった。１５分後、真空を解放した。ＸＲＰＤデータは５５分間収集され、収集された最終パターンはＡＨおよびＭＨ１の混合物であった。サンプルを１時間後に再分析し、ＭＨ１への完全な再水和を観察した。
【０１８９】
実施例６．２つの水和物（ＭＨ１およびＭＨ２）の乾燥検査
手順：ＭＨ１およびＭＨ２を５０℃、ＲＴの真空オーブンに２４時間入れた。次に、サンプルを、取り出した直後と、周囲条件下で４時間放置した後に、ＴＧＡおよびＸＲＰＤを用いて分析した。
【０１９０】
結果および考察：サンプルをオーブンから取り出した直後（Ｔ＝０）にＸＲＰＤとＴＧＡを用いて分析し、次に４時間後に再測定した（Ｔ＝４時間）。Ｔ＝０で、ＭＨ１とＭＨ２（ＲＴおよび５０℃で乾燥）の両方がＸＲＰＤによってＭＨ１とＡＨの混合物に変換された。両方のサンプルについて、ＴＧＡによって少量の水分損失が記録された。これは、真空オーブン乾燥中に両方の水和物がＡＨに変換されたことを示す。周囲条件で４時間後、ＸＲＰＤデータは両方のサンプルがＭＨ１に完全に変換されたことを示す。しかし、ＴＧＡデータによれば、水分が完全に失われることはなく、水分が約１．８−２．７％失われるだけである。これらの結果に基づくと、ＭＨ２は乾燥中にＡＨに変換され、続いて周囲貯蔵でＭＨ１に変換されるようである。
【０１９１】
【表１１】
2021526134.tif 000016
【０１９２】
実施例７．２つの水和物（ＭＨ１およびＭＨ２）の競合スラリーを用いる安定性研究
手順：供給されたＭＨ１（Ｊ０８３４３）の飽和溶液を、さまざまな溶媒／系（１ｍｌ）で調製しました。次に、飽和溶液をろ過し、競合スラリー実験に使用した。
【０１９３】
ＭＨ１とＭＨ２（それぞれ約１５ｍｇ）は、ろ過した飽和溶液（３００μＬ）で処理する前に物理的に混合した。サンプルを２５℃で２４時間撹拌し、ろ過し、風乾し、ＸＲＰＤによって分析した。
【０１９４】
これが現在の結晶化溶媒であるため、追加のＩＰＡ／ヘプタン混合物を用いる水分活性実験におけるサンプルと同じ溶媒を使用した。この手順は、ＩＰＡ／ヘプタンについても５および５０℃で続けて行った（３日間のスラリー化）。
【０１９５】
結果および考察：ＭＨ２は、主に２５℃での競合スラリーの間に得られた（表１１）。ＭＨ２を生成した溶媒は、水分活性についてさまざまな値を有していた。溶媒系に水が含まれていなくても、ＭＨ１とＭＨ２の混合物が得られた（つまり、ＡＨへの変換は見られなかった）。ＭＨ２は、５℃において、ＩＰＡおよびＩＰＡとヘプタンの混合物中で、優勢である。しかし、ＭＨ１とＭＨ２の混合物、または純粋なＭＨ１は、より高い温度（５０℃）を利用した場合に生成された（表１２）。
【０１９６】
したがって、競合スラリーは、ＭＨ２がより低い単離温度ならびにより高い水分活性において優勢であることを示している。一方、ＭＨ１は、より高い分離温度ならびにより低い水分活性において優勢である。
【０１９７】
得られた形態に対する水分活性の影響を検討しながら、研究された溶媒／系の多様性を高めるために、さらなる実験を設計した。これは、フェーズ３（溶媒選択）の溶媒リストを規定するという見解を伴っていた。供給されたＭＨ１を使用して、手順のセクションで説明したように、さらに飽和溶液を調製した。
【０１９８】
あるサンプルは競合するスラリーの間に溶解し、これは、完全な飽和が発生しなかったことが原因である可能性がある。ＭＨ２は、再度、高い水活性を伴う低温で優勢である（表１３）。ＭＨ１とＭＨ２の混合物は、５℃のヘプタン、５０℃のＩＰＡまたはＩＰＡ：ヘプタンの混合物から得られた。ＩＰｒＯＡｃ：０．５％の水混合物（ａｗ＝０．３５）は、５０℃ではＭＨ１の形成が優勢であったが、５℃ではＭＨ２の形成が優勢であった。純粋なＭＨ１は、ＴＨＦ溶媒を５０℃で使用した場合にもまた得られた。
【０１９９】
ＭＨ２は低温および高ａｗで優勢であったが、ＭＨ２は（ＡＨを介して）ＭＨ１に変換され、より高い温度およびより低い水活性を使用して取得できるため、ＭＨ１をさらなる開発のために選択した。
【０２００】
【表１２】
2021526134.tif 000017
【０２０１】
【表１３】
2021526134.tif 000018
【０２０２】
【表１４】
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【０２０３】
ＭＨ１およびＭＨ２の構造比較
ＭＨ１およびＭＨ２の単位格子および非対称単位を比較した（表１４、１００Ｋで測定）。２つの水和構造は同じ空間群を有し、同じサイズの単位格子を有する。しかし、非対称単位は顕著に異なる。
【０２０４】
ＭＨ１においては、非対称単位における水およびＡＰＩ（化合物１）が１つのＯ−Ｈ−−−Ｏ分子間水素結合に関与している。さらに、イミダゾピラジン環の窒素原子と、ピリミジン環およびピロリジン環の窒素原子との間には、分子内の分岐した非対称水素結合が存在する。
【０２０５】
ＭＨ２においては、水分子はイミダゾピラジン環とピリミジン環の間に位置しているため、ＭＨ１に存在する分子内水素結合は、水とＡＰＩの間の分子間相互作用によって置き換えられる。
【０２０６】
【表１５】
2021526134.tif 000020
【０２０７】
結果と考察：この研究で行われた実験は、ＭＨ１が周囲条件で最も安定した形態であることを示した。水を有し（高い水活性）より低い温度（５℃）における溶媒混合物はＭＨ２を生成するため、回避するべきである。ＭＨ１は結晶化プロセスの最後にのみ生成されたが、ＡＨまたはＭＨ２の形成を回避するように注意が払われるべきである。
【０２０８】
実施例８．ＭＨ１の溶解度評価
手順：ＭＨ１が優勢である競合スラリー実験に基づき、ならびに多様性のために、４つの溶媒を選択した。これらの溶媒と水（ａｗ＝０．３５）との組み合わせもまた、どの水和物が優勢であるかを確認するために利用した。溶媒とヘプタン（１：１）の混合物を使用して、優れた貧溶媒を伴う結晶形態についてチェックした。
【０２０９】
ＭＨ１（２２×１０４ｍｇ）をさまざまな溶媒（１１×０．５ｍｌ）に懸濁し、５または５０℃で２４時間、７５０ｒｐｍにて撹拌した。固形物を濾過および遠心分離によって単離し、液をＨＰＬＣによって分析して、それらの溶解度を決定した（作製された標準と比較して）。固形物もまたＸＲＰＤによって調べた。この手順はまた、５または５０℃のいずれかでＴＨＦ：ヘプタンおよびＩＰＡ：ヘプタンの異なる比率の追加の５つの溶媒系についても続けて実行した。単離された固形物は、ＸＲＰＤ、ＨＰＬＣおよび１ＨＮＭＲによって調べた。
【０２１０】
結果および考察：透明な溶液を形成したサンプルは、溶解度が２００ｍｇ／ｍｌを超えるものと見なされる（表１５）。これは、ＴＨＦ、エタノール、ＩＰＡ、ならびに水またはヘプタンと組み合わせたこれらの溶媒のいくつかなどの、５０℃における６つのサンプルに当てはまる。５℃では、エタノールおよびエタノールと水との混合物で２００ｍｇ／ｍｌを超える溶解度を達成した。エタノール：ヘプタン（１：１）（１７０ｍｇ／ｍｌ）を５℃で使用して、大きな溶解度もまた測定した。
【０２１１】
サンプルは、５℃と５０℃の両方で、ＭＨ１とＭＨ２のバリエーション、およびＭＨ１とＡＨの混合物を生成した。ＩＰＡおよびＴＨＦは５０℃（＞２００ｍｇ／ｍｌ）で高い溶解度を与え、ＴＨＦ：ヘプタン（１：１）は両方の温度でＭＨ１を示したため、ＩＰＡ：ヘプタン（１：１、１：２、１：３）およびＴＨＦ：ヘプタン（２：１、１：２）の混合物を使用してさらなる溶解度評価を実行した（表１６）。
【０２１２】
５℃では溶解度が低く、ＭＨ２が観察されなかったため、溶解度の観察に基づいて、貧溶媒の結晶化のためにＩＰＡ／ヘプタン（１：３）系を用いて進めることを決定した。この溶媒／系は、ＭＨ１の溶解度に対する温度依存性を探求するために、溶解度およびＭＳＺＷ実験用に選択した。
【０２１３】
【表１６】
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【０２１４】
【表１７】
2021526134.tif 000022
【０２１５】
実施例９．ＭＨ１およびＭＨ２の溶解度研究。
手順：ＭＨ１およびＭＨ２に対してｐＨプロファイリング溶解度実験を実施した。溶解度は、表１７に示すように、最大最終濃度が得られるように、関連する媒体（１．００ｍｌ）に十分な化合物を懸濁することによって単独で決定した。
【０２１６】
【表１８】
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【０２１７】
懸濁液を、２５℃で、７５０ｒｐｍに設定したＨｅｉｄｏｌｐｈプレートシェーカー上で２４時間平衡化した。サンプルは、必要に応じて０．５Ｍ／１ＭＨＣｌおよび０．２ＭＮａＯＨを使用して、目的のｐＨ単位の０．１以内にｐＨ調整した（可能な場合）。飽和溶液のｐＨを測定し（適用可能な場合）、外観を記録した。懸濁液はグラスファイバーＣフィルター（粒子保持１．２μｍ）を通してろ過し、適切に希釈した。定量は、ＤＭＳＯ中の約０．１５ｍｇ／ｍｌの標準溶液を参照してＨＰＬＣで行った。異なる量の標準、希釈および未希釈のサンプル溶液を注入した。溶解度は、標準注入における主要ピークと同じ保持時間で検出されたピークの積分によって決定されたピーク面積を使用して計算した。
【０２１８】
結果および考察：ＭＨ１−ＡおよびＭＨ２−Ａへの媒体の添加の際に、媒体が吸収されたことを示す濃いペーストが観察されたので、サンプルバイアルに追加の媒体を加え、懸濁液を観察した。
【０２１９】
約１時間後、ＭＨ１−Ｂ、ＣおよびＤ、ならびにＭＨ２−ＣおよびＤは透明な溶液であったので、サンプルバイアルに追加の材料を加えた。
【０２２０】
ＭＨ１−Ａの最初のｐＨ調整の間、０．５Ｍ  ＨＣｌを使用したときに、ｐＨの変化はほとんど観察されなかったので、次に調整溶液として１Ｍ  ＨＣｌを使用することを決定した。サンプルのｐＨが５．０２のときに、バイアルの容量に達した。測定されたｐＨが６．６３のＭＨ１−Ａでもまた、バイアル内の容量に達した。
【０２２１】
【表１９】
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【０２２２】
Ａサンプル（最初はｐＨ１．２の媒体中）の溶解度は＞２７５ｍｇ／ｍｌと決定されたが、しかし、バイアルの限度容量に達したので、ｐＨをｐＨ１．２に維持できなかったことは注目に値する。したがって、得られた溶解度の値は最終ｐＨについてのものです。これらの実験は、逆加算アプローチを使用して繰り返した。
【０２２３】
溶解度の繰り返し
手順：ｐＨ１．２の緩衝媒体（０．４ｍｌ）を２つの別々の７ｍｌバイアルに加えた。各化合物について、材料を少しずつｐＨ１．２媒体に加えた。各化合物の添加後に、バイアルをボルテックス混合し、ｐＨおよび外観を記録した。サンプルは、１Ｍ  ＨＣｌでｐＨ  １．２に調整し、所望のｐＨ単位の０．０５以内にした。これは、さらなる材料が利用できなくなるまで繰り返した（各形態について約４００ｍｇ、調整が不要な場合は約１０００ｍｇ／ｍｌの最大濃度になる）。
【０２２４】
結果および考察：必要とされる調整溶液の量に起因して、両方のサンプルについて透明な溶液が観察された。しかし、両方の溶液のｐＨは全体を通してｐＨ１．２に維持された。
【０２２５】
【表２０】
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【０２２６】
実施例１０．ＭＨ１の調製のための結晶化プロセス。
乾燥した（ＫＦ≦０．１％）２−プロパノール（６７ｋｇ）をＮ２下で反応器に投入し、続いて粗固形物化合物１（２０．４ｋｇ）を投入した。続いて、精製水（１ｋｇ）および乾燥２−プロパノール（３ｋｇ）を添加し、反応器の温度制御を２７−３５℃に調整した。得られた反応混合物を、すべての固体物質が溶解するまで、Ｎ２保護下で撹拌した。任意に、インプロセスコントロール（ＩＰＣ）サンプル（ＫＦ）を実行して反応混合物の水分含有量を測定し、十分な乾燥２−プロパノールを添加して水分含有量を１．０％にした（ＫＦで検証済み）。
【０２２７】
反応混合物の温度を２２−２８℃に調整し、種結晶（０．２４ｋｇ）を加えた。得られた反応混合物を２２−２８℃で０．５−２．０時間撹拌した。ダイアフラムポンプなどのポンプを使用して、ｎ−ヘプタン（２４６ｋｇ）を２２−２８℃で反応器にゆっくりと投入し、得られた反応混合物を２２−２８℃で撹拌した。完全な過飽和除去を達成し、収率を最大化するために、得られた反応混合物を８−１２時間撹拌するしてもよい。任意に、この時点でＩＰＣサンプルを採取して、水分、上澄み中の残留化合物１、沈殿した固形物の純度と結晶化度を測定した。
【０２２８】
反応混合物を２２−２８℃で濾過し、得られた固形物をｎ−ヘプタン（２７．８ｋｇ）で洗浄した。フィルターケーキを乾燥するまでプレスし、続いてＮ２流の下で１−２時間乾燥させた。任意に、この時点で、ＩＰＣサンプルは分離された固形物の純度と結晶化度を確認した。
【０２２９】
固形物を、２０−２７℃の乾燥チャンバー内の塩化ナトリウムの飽和溶液上で、一定の窒素流の下で１０−１８時間乾燥させた。固形物を乾燥機から取り出し、ふるいにかけ、ＬＤＰＥバッグで裏打ちされたドラムに詰めた。放出サンプルにより、水分（ＫＦ＝４．２％）および結晶化度（ＸＲＰＤ：ＭＨ１）が、他の純度関連の放出方法とともに確認された。収量：１７．４６ｋｇＭＨ１。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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