(57)【要約】本発明は、ＣＤ３及び腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）に特異的に結合する二重特異性抗原結合タンパク質（ＢＳＡＰ）に関する。本発明はさらに、医薬組成物の調製のためのＢＳＡＰの使用、がんを処置する方法、及びＢＳＡＰを含むキットに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
二重特異性抗原結合タンパク質（ＢＳＡＰ）であって、以下：
ｉ）腫瘍抗原を特異的に認識する抗腫瘍抗原Ｆａｂであって、以下：
（ａ）免疫グロブリン（Ｉｇ）重鎖可変領域（ＶＨ）及びＩｇ重鎖定常領域１（ＣＨ１）、ならびに
（ｂ）Ｉｇ軽鎖可変領域（ＶＬ）及びＩｇ軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む、前記抗腫瘍抗原Ｆａｂ；ならびに
ｉｉ）ＣＤ３を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメインを含み；
前記抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び前記抗ＣＤ３結合ドメインが、直接または任意選択のリンカーを介して接続している、前記二重特異性抗原結合タンパク質。
【請求項２】
前記抗ＣＤ３結合ドメインが、前記抗腫瘍抗原Ｆａｂの前記ＶＨのＮ末端に接続している、請求項１に記載のＢＳＡＰ。
【請求項３】
前記抗ＣＤ３結合ドメインが、前記抗腫瘍抗原Ｆａｂの前記ＶＬのＮ末端に接続している、請求項１に記載のＢＳＡＰ。
【請求項４】
前記腫瘍抗原が、ＣＤ１９、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３７、ＣＤ４０、及びＣＤ７４からなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＢＳＡＰ。
【請求項５】
前記腫瘍抗原が、ＣＤ１９である、請求項１〜４のいずれか１項に記載のＢＳＡＰ。
【請求項６】
前記抗ＣＤ１９  Ｆａｂの前記ＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖超可変領域１（ＨＶＲ−Ｈ１）、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み；前記抗ＣＤ１９  Ｆａｂの前記ＶＬが、配列番号４または３７のアミノ酸配列を含む軽鎖超可変領域１（ＨＶＲ−Ｌ１）、配列番号５または３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６または３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項５に記載のＢＳＡＰ。
【請求項７】
前記抗ＣＤ１９  Ｆａｂの前記ＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み；前記抗ＣＤ１９  Ｆａｂの前記ＶＬが、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項５または６に記載のＢＳＡＰ。
【請求項８】
前記抗ＣＤ１９  Ｆａｂの前記ＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み；前記抗ＣＤ１９  Ｆａｂの前記ＶＬが、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項５または６に記載のＢＳＡＰ。
【請求項９】
前記抗ＣＤ１９  Ｆａｂの前記ＶＨが、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％同一であるアミノ酸配列を含み、前記抗ＣＤ１９  Ｆａｂの前記ＶＬが、配列番号８または４０のアミノ酸配列と少なくとも約９５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項５〜８のいずれか１項に記載のＢＳＡＰ。
【請求項１０】
前記抗ＣＤ１９  Ｆａｂの前記ＶＨが、配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記抗ＣＤ１９  Ｆａｂの前記ＶＬが、配列番号８のアミノ酸配列を含む、請求項５〜９のいずれか１項に記載のＢＳＡＰ。
【請求項１１】
前記抗ＣＤ１９  Ｆａｂの前記ＶＨが、配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記抗ＣＤ１９  Ｆａｂの前記ＶＬが、配列番号４０のアミノ酸配列を含む、請求項５〜９のいずれか１項に記載のＢＳＡＰ。
【請求項１２】
前記抗ＣＤ３結合ドメインが、ＣＤ３εのＮ末端を特異的に認識する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のＢＳＡＰ。
【請求項１３】
前記抗ＣＤ３結合ドメインが、ＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープを特異的に認識する、請求項１２に記載のＢＳＡＰ。
【請求項１４】
前記抗ＣＤ３結合ドメインが、ＶＨ及びＶＬを含み；前記抗ＣＤ３結合ドメインの前記ＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み；前記抗ＣＤ３結合ドメインの前記ＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１２または１３に記載のＢＳＡＰ。
【請求項１５】
前記抗ＣＤ３結合ドメインの前記ＶＨが、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％同一であるアミノ酸配列を含み、前記抗ＣＤ３結合ドメインの前記ＶＬが、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１２〜１４のいずれか１項に記載のＢＳＡＰ。
【請求項１６】
前記抗ＣＤ３結合ドメインの前記ＶＨが、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、前記抗ＣＤ３結合ドメインの前記ＶＬが、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、請求項１２〜１５のいずれか１項に記載のＢＳＡＰ。
【請求項１７】
前記抗ＣＤ３結合ドメインが、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖであり、前記抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、接続ペプチドによって接続したＶＨ及びＶＬを含む、請求項１〜１６のいずれか１項に記載のＢＳＡＰ。
【請求項１８】
前記抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、配列番号１７のアミノ酸配列を含む、請求項１７に記載のＢＳＡＰ。
【請求項１９】
前記抗腫瘍抗原Ｆａｂの前記ＣＨ１及び前記ＣＬが、ジスルフィド結合によって接続している、請求項１〜１８のいずれか１項に記載のＢＳＡＰ。
【請求項２０】
前記抗腫瘍抗原Ｆａｂの前記ＣＨ１及び前記ＣＬが、約１〜約５個のジスルフィド結合によって接続している、請求項１９に記載のＢＳＡＰ。
【請求項２１】
前記抗腫瘍抗原Ｆａｂの前記ＣＨ１及び前記ＣＬが、約２個のジスルフィド結合によって接続している、請求項１９または２０に記載のＢＳＡＰ。
【請求項２２】
前記抗腫瘍抗原Ｆａｂの前記ＣＨ１が、配列番号１８のアミノ酸配列を含み、前記抗腫瘍抗原Ｆａｂの前記ＣＬが、配列番号１９のアミノ酸配列を含む、請求項１〜２１のいずれか１項に記載のＢＳＡＰ。
【請求項２３】
前記リンカー及び／または前記接続ペプチドが、グリシン、セリン、アルギニン、及びアラニンからなる群から選択される約２〜約３０個のアミノ酸残基を含む、請求項１〜２２のいずれか１項に記載のＢＳＡＰ。
【請求項２４】
前記リンカー及び／または前記接続ペプチドが、配列番号２０〜２２、３３、及び４１〜５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２３に記載のＢＳＡＰ。
【請求項２５】
前記リンカーが、約６〜約１２個のアミノ酸残基を含む、請求項２３または２４に記載のＢＳＡＰ。
【請求項２６】
前記ＢＳＡＰが、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、前記第一のポリペプチドが、配列番号２３、２８、３５、５８、及び５９のいずれかのアミノ酸配列と少なくとも約９５％同一であるアミノ酸配列を含み、前記第二のポリペプチドが、配列番号２４または２７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１、２、及び５〜２５のいずれか１項に記載のＢＳＡＰ。
【請求項２７】
前記第一のポリペプチドが、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、前記第二のポリペプチドが、配列番号２４のアミノ酸配列を含む、請求項２６に記載のＢＳＡＰ。
【請求項２８】
前記第一のポリペプチドが、配列番号２８または５８のアミノ酸配列を含み、前記第二のポリペプチドが、配列番号２４のアミノ酸配列を含む、請求項２６に記載のＢＳＡＰ。
【請求項２９】
前記第一のポリペプチドが、配列番号３５または５９のアミノ酸配列を含み、前記第二のポリペプチドが、配列番号２４のアミノ酸配列を含む、請求項２６に記載のＢＳＡＰ。
【請求項３０】
前記第一のポリペプチドが、配列番号２８または５８のアミノ酸配列を含み、前記第二のポリペプチドが、配列番号２７のアミノ酸配列を含む、請求項２６に記載のＢＳＡＰ。
【請求項３１】
請求項１〜３０のいずれか１項に記載のＢＳＡＰをコードする、単離された核酸。
【請求項３２】
請求項１〜３０のいずれか１項に記載のＢＳＡＰ、及び医薬的に許容可能な担体を含む、医薬組成物。
【請求項３３】
がんの処置を必要とする個体においてがんを処置する方法であって、前記個体に、有効量の請求項１〜３０のいずれか１項に記載のＢＳＡＰ、または請求項３２に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項３４】
前記ＢＳＡＰまたはその医薬組成物が、静脈内投与される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記個体が、ヒトである、請求項３３または３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記がんが、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、マンテル細胞白血病（ＭＣＬ）、及びＢ細胞リンパ腫（ＢＣＬ）からなる群から選択される、請求項３３〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、参照によりその内容全体が本明細書に組み込まれる、２０１８年９月７日に出願された、中国特許出願第２０１８１１０４１５８８．Ｘ号の優先権の利益を主張するものである。
【０００２】
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの次の提出物の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる：コンピュータ可読形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：７２０６２２０００９４１ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０１９年９月３日、サイズ：５２ＫＢ）。
【０００３】
本発明は、ＣＤ３及び腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）に特異的に結合する二重特異性抗原結合タンパク質（ＢＳＡＰ）に関する。さらに、ＢＳＡＰを含む医薬組成物、ＢＳＡＰを使用してがんを処置する方法、及びＢＳＡＰを含むキットを提供する。
【背景技術】
【０００４】
一部の抗原は、腫瘍組織において、過剰発現している、突然変異誘発されている、または選択的に突然変異誘発されている。それゆえ、がん細胞の表面上にある特定の抗原を標的とする抗体は、がん治療薬として使用することができる。Ｂリンパ球抗原ＣＤ１９は、ＣＤ１９分子（分化抗原群１９）、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ４、Ｔ細胞表面抗原Ｌｅｕ−１２、及びＣＶＩＤ３としても知られている。ＣＤ１９は、正常Ｂリンパ球及び悪性Ｂリンパ球の両方において発現し、Ｂ細胞腫瘍関連抗原と見なされている。これは、Ｂリンパ球の発生に関するバイオマーカー、リンパ腫の診断、及び白血病免疫療法の標的として使用できる。
【０００５】
６本のポリペプチド鎖（１本のＣＤ３δ鎖、１本のＣＤ３γ鎖、２本のＣＤ３ζ鎖及び２本のＣＤ３ε鎖）を含むＣＤ３は、Ｔ細胞によって発現される抗原である。ＣＤ３ε、δ及びγ鎖の膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）及びＣＤ３ζ鎖と相互作用して、ＴＣＲ複合体を形成することができ、これはＴ細胞におけるシグナル伝達カスケードを活性化する機能を有する。現在、多くの治療戦略が、ＴＣＲシグナル伝達を標的として、抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体を使用して疾患を処置する。ＣＤ３特異的抗体ＯＫＴ３は、ヒトの治療用途用に承認された最初のモノクローナル抗体であり、同種異系移植拒絶反応の処置のための免疫調節剤として臨床で使用されている。
【０００６】
二重特異性抗体は、がん細胞を効果的に殺傷する可能性があると示されているが、これらの分子の深刻な有害作用、例えば全身性免疫活性化、免疫原性（抗薬物抗体効果）、及び一般的に乏しい製造能力により、この種類の薬物の広範な適用は大幅に制限されている。例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３二重特異性ｓｃＦｖ−ｓｃＦｖ（一本鎖可変フラグメント）融合タンパク質（ブリナツモマブ）の１つの欠点は、この薬物の半減期が短く、皮下投与と不適合であるために、この薬物を毎日静脈内（ｉ．ｖ．）投与する必要があることである；依然として、神経学的応答、例えば見当識障害、混乱、発話及び言語障害、振戦または痙攣が、臨床試験中に発生した（Ｂａｒｇｏｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２１（５８９１）：９７４−９７７，２００８）。
【０００７】
二重特異性抗体の現在のフォーマットの欠点は、良好な有効性及び安全性を伴った、がん患者の処置における二重特異性抗体の広範な適用にとって依然として大きな課題である。それゆえ、当該分野では、有効性、安定性、安全性及び製造能力が改善された新しい二重特異性抗体または処置レジメンの開発が緊急に必要とされている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、ＣＤ３及び腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）に特異的に結合する二重特異性抗原結合タンパク質（ＢＳＡＰ、本明細書では以降「二重特異性抗体」とも称する）、ＢＳＡＰを含む医薬組成物、ならびにＢＳＡＰを使用してがんを処置する方法を提供する。
【０００９】
本発明の一態様では、以下：ｉ）腫瘍抗原（例えば、ヒトＣＤ１９（「ｈｕＣＤ１９」）またはカニクイザルＣＤ１９（「ｃｙｎｏＣＤ１９」）などのＣＤ１９）を特異的に認識する抗腫瘍抗原Ｆａｂであって、以下：（ａ）免疫グロブリン（Ｉｇ）重鎖可変領域（ＶＨ）及びＩｇ重鎖定常領域１（ＣＨ１）、ならびに（ｂ）Ｉｇ軽鎖可変領域（ＶＬ）及びＩｇ軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む、該抗腫瘍抗原Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ヒトＣＤ３（「ｈｕＣＤ３」）またはカニクイザルＣＤ３（「ｃｙｎｏＣＤ３」））を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメインが、直接または任意選択のリンカーを介して接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、抗腫瘍抗原ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、抗腫瘍抗原ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している。
【００１０】
上記のＢＳＡＰのいずれかに従う一部の実施形態では、腫瘍抗原は、ＣＤ１９、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３７、ＣＤ４０、及びＣＤ７４からなる群から選択される。
【００１１】
上記のＢＳＡＰのいずれかに従う一部の実施形態では、腫瘍抗原は、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）である。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖超可変領域１（ＨＶＲ−Ｈ１）、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号４または３７のアミノ酸配列を含む軽鎖超可変領域１（ＨＶＲ−Ｌ１）、配列番号５または３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６または３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号８または４０のアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む。
【００１２】
上記のＢＳＡＰのいずれかに従う一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＣＤ３ε（例えば、ｈｕＣＤ３εまたはｃｙｎｏＣＤ３ε）のＮ末端、例えばＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＶＨ及びＶＬを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＨは、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み；抗ＣＤ３結合ドメインのＶＬは、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＨは、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＬは、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＨは、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＬは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。
【００１３】
上記のＢＳＡＰのいずれかに従う一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖであり、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、接続ペプチドによって接続したＶＨ及びＶＬを含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。
【００１４】
上記のＢＳＡＰのいずれかに従う一部の実施形態では、抗腫瘍抗原Ｆａｂ（例えば、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ）のＣＨ１及びＣＬは、約１〜約５個のジスルフィド結合、例えば、約２個のジスルフィド結合などのジスルフィド結合によって接続している。
【００１５】
上記のＢＳＡＰのいずれかに従う一部の実施形態では、抗腫瘍抗原Ｆａｂ（例えば、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ）のＣＨ１は、配列番号１８のアミノ酸配列を含み、抗腫瘍抗原ＦａｂのＣＬは、配列番号１９のアミノ酸配列を含む。
【００１６】
上記のＢＳＡＰのいずれかに従う一部の実施形態では、リンカー及び／または接続ペプチドは、グリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、セリン（Ｓｅｒ、Ｓ）、アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）、及びアラニン（Ａｌａ、Ａ）からなる群から選択される約２〜約３０（例えば約２〜約１５）個のアミノ酸残基を含む。一部の実施形態では、リンカー及び／または接続ペプチドは、配列番号２０〜２２、３３、及び４１〜５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、リンカーは、約６〜約１２個のアミノ酸残基を含む。
【００１７】
上記のＢＳＡＰのいずれかに従う一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２３、２８、３５、５８及び５９のいずれかのアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４または２７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第一のポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第一のポリペプチドは、配列番号２８または５８のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第一のポリペプチドは、配列番号３５または５９のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第一のポリペプチドは、配列番号２８または５８のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２７のアミノ酸配列を含む。
【００１８】
上記のＢＳＡＰのいずれかをコードする単離された核酸、単離された核酸を保有する発現ベクター、発現ベクターを含む単離された宿主細胞、ならびに単離された宿主細胞の培養及び細胞培養物からのＢＳＡＰの回収を含む、上記のＢＳＡＰのいずれかを産生する方法をさらに提供する。
【００１９】
上記のＢＳＡＰのいずれかを含む、使用、組成物（例えば医薬組成物）、キット、及び製品も本明細書にて提供する。一部の実施形態では、上記のＢＳＡＰのいずれか、及び任意選択で医薬的に許容可能な担体を含む、組成物（例えば医薬組成物）を提供する。
【００２０】
がんを処置するための医薬品の調製における上記のＢＳＡＰのいずれかの使用を、本明細書にてさらに提供する。一部の実施形態では、がんの処置を必要とする個体（例えば、ヒト）においてがん（例えば、ＢＣＬまたはＡＬＬ）を処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の上記のＢＳＡＰのいずれかまたはその組成物（例えば医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰまたは組成物（例えば医薬組成物）は、静脈内投与される。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。一部の実施形態では、がんは、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、マンテル細胞白血病（ＭＣＬ）、及びＢ細胞リンパ腫（ＢＣＬ）からなる群から選択される。
【００２１】
本発明のこれら及び他の態様及び利点は、後続の発明を実施するための形態及び添付の特許請求の範囲から明らかとなるだろう。本明細書に記載する様々な実施形態の特性うちの１つ、一部、または全てを組み合わせて、本発明の他の実施形態を形成し得ることが理解されたい。
【００２２】
本明細書で言及する全ての刊行物、特許、特許出願及び公開特許出願の開示は、参照によりその全体が本明細書に組込まれる。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】Ａは、例示的なＣＤ１９×ＣＤ３抗原結合タンパク質の構造を示し、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している。Ｂは、例示的なＣＤ１９×ＣＤ３抗原結合タンパク質の構造を示し、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している。
【図２】Ａは、細胞表面抗原ＣＤ３を発現するカニクイザルＴリンパ球及び細胞表面抗原ＣＤ１９を発現するカニクイザルＢリンパ球に対する例示的なＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ（「ＩＴＡＢ２００９」）の結合親和性を示す。■でラベル付けされた曲線は、濃度が増加するにつれて、カニクイザルＢリンパ球へのＩＴＡＢ２００９の結合率が増加することを示す。●でラベル付けされた曲線は、濃度が増加するにつれて、カニクイザルＴリンパ球へのＩＴＡＢ２００９の結合率が増加することを示す。Ｂは、細胞表面抗原ＣＤ３を発現するヒトＴリンパ球及び細胞表面抗原ＣＤ１９を発現するヒトＢリンパ球に対する例示的なＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ  ＩＴＡＢ２００９の結合親和性を示す。■でラベル付けされた曲線は、濃度が増加するにつれて、ヒトＢリンパ球へのＩＴＡＢ２００９の結合率が増加することを示す。●でラベル付けされた曲線は、濃度が増加するにつれて、ヒトＴリンパ球へのＩＴＡＢ２００９の結合率が増加することを示す。
【図３】Ａは、自己Ｂ細胞に対するＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ  ＩＴＡＢ２００３、ＩＴＡＢ２００５、及びＩＴＡＢ２００６媒介カニクイザルＰＢＭＣ細胞毒性を示す。■でラベル付けされた曲線は、ＩＴＡＢ２００６の濃度が増加するにつれて、自己Ｂ細胞に対するカニクイザルＰＢＭＣの細胞毒性が増加することを示す。▲でラベル付けされた曲線は、ＩＴＡＢ２００３の濃度が増加するにつれて、自己Ｂ細胞に対するカニクイザルＰＢＭＣの細胞毒性が増加することを示す。□でラベル付けされた曲線は、ＩＴＡＢ２００５の濃度が増加するにつれて、自己Ｂ細胞に対するカニクイザルＰＢＭＣの細胞毒性が増加することを示す。○でマークされた点は、ＢＳＡＰを用いないカニクイザルＰＢＭＣの陰性対照である。Ｂは、自己Ｂ細胞に対するＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ  ＩＴＡＢ２００３、ＩＴＡＢ２００５、及びＩＴＡＢ２００６媒介ヒトＰＢＭＣ細胞毒性を示す。■でラベル付けされた曲線は、ＩＴＡＢ２００６の濃度が増加するにつれて、自己Ｂ細胞に対するヒトＰＢＭＣの細胞毒性が増加することを示す。▲でラベル付けされた曲線は、ＩＴＡＢ２００３の濃度が増加するにつれて、自己Ｂ細胞に対するヒトＰＢＭＣの細胞毒性が増加することを示す。□でラベル付けされた曲線は、ＩＴＡＢ２００５の濃度が増加するにつれて、自己Ｂ細胞に対するヒトＰＢＭＣの細胞毒性が増加することを示す。○でマークされた点は、ＢＳＡＰを用いないヒトＰＢＭＣの陰性対照である。
【図４】腫瘍細胞Ｒａｊｉに対するＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ  ＩＴＡＢ２００３及びＩＴＡＢ２００９媒介ヒトＰＢＭＣ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞毒性を示す。▲でラベル付けされた曲線は、ＩＴＡＢ２００３の濃度が増加するにつれて、腫瘍細胞Ｒａｊｉに対するヒトＰＢＭＣのｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞毒性が増加することを示す。●でラベル付けされた曲線は、ＩＴＡＢ２００９の濃度が増加するにつれて、腫瘍細胞Ｒａｊｉに対するヒトＰＢＭＣのｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞毒性が増加することを示す。
【図５】ヒトＰＢＭＣを用いて再構築された免疫系を有する免疫不全マウスにおけるＲａｊｉ異種移植片に対する様々な投与量のＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ  ＩＴＡＢ２００９の成長阻害効果を示す。○でラベル付けされた曲線は、Ｒａｊｉ細胞の接種後のビヒクル対照群のマウスにおける皮下Ｒａｊｉ細胞異種移植片の腫瘍体積の経時的変化を示す。■でラベル付けされた曲線は、Ｒａｊｉ細胞の接種後のＩＴＡＢ２００９  ０．５μｇ／ｋｇ処置群のマウスにおける皮下Ｒａｊｉ細胞異種移植片の腫瘍体積の経時的変化を示す。▲でラベル付けされた曲線は、Ｒａｊｉ細胞の接種後のＩＴＡＢ２００９  ５μｇ／ｋｇ処置群のマウスにおける皮下Ｒａｊｉ細胞異種移植片の腫瘍体積の経時的変化を示す。▼でラベル付けされた曲線は、Ｒａｊｉ細胞の接種後のＩＴＡＢ２００９  ５０μｇ／ｋｇ処置群のマウスにおける皮下Ｒａｊｉ細胞異種移植片の腫瘍体積の経時的変化を示す。◆でラベル付けされた曲線は、Ｒａｊｉ細胞の接種後のリツキシマブ１０ｍｇ／ｋｇ処置群のマウスにおける皮下Ｒａｊｉ細胞異種移植片の腫瘍体積の経時的変化を示す。
【図６】ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ  ＩＴＡＢ２００９またはビヒクル対照のいずれかで処置された、Ｒｅｈ細胞接種（０日目）後にヒト初代Ｔ細胞を用いて再構築された免疫系を有するＲｅｈ白血病異種移植マウスのカプランマイヤー生存曲線を示す。○でラベル付けされた曲線は、ビヒクル対照群におけるマウスの経時的生存を示す。■でラベル付けされた曲線は、ＩＴＡＢ２００９処置群におけるマウスの経時的生存を示す。
【図７】様々な投与量でＩＴＡＢ２００９を投与したカニクイザルの血液中のＣＤ２０＋Ｂ細胞数の経時的変化のプロットを示す。ビヒクル緩衝液で処置されたカニクイザルを対照とした。
【図８−１】様々な投与量でＩＴＡＢ２００９を投与したカニクイザルにおける血清ＡＬＴレベルの経時的変化を示す。ビヒクル緩衝液で処置されたカニクイザルを対照とした。
【図８−２】様々な投与量でＩＴＡＢ２００９を投与したカニクイザルにおける血清ＡＳＴレベルの経時的変化を示す。ビヒクル緩衝液で処置されたカニクイザルを対照とした。
【図８−３】様々な投与量でＩＴＡＢ２００９を投与したカニクイザルにおける血清ＣＫレベルの経時的変化を示す。ビヒクル緩衝液で処置されたカニクイザルを対照とした。
【図８−４】様々な投与量でＩＴＡＢ２００９を投与したカニクイザルにおける血清ＬＤＨレベルの経時的変化を示す。ビヒクル緩衝液で処置されたカニクイザルを対照とした。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
本発明は、腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）を特異的に認識する抗腫瘍抗原Ｆａｂ、及びＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含む、二重特異性抗原結合タンパク質（ＢＳＡＰ）を提供する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、抗腫瘍抗原Ｆａｂ（例えば、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ）の重鎖可変領域（ＶＨ）または軽鎖可変領域（ＶＬ）のＮ末端に接続している。本発明は、腫瘍、特に血液学的悪性腫瘍の処置のためのＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）の使用も提供する。
【００２５】
当該技術分野における現在の抗腫瘍二重特異性抗体は、いくつかの欠点、例えば製造能力の乏しさ、凝集、半減期の短さ、重篤な有害作用（例えば全身性免疫活性化及び免疫原性（抗薬物抗体応答））、注入時間の長さ、及び腫瘍組織に保持できないことに悩まされており、これは、良好な有効性及び安全性を伴ったがん処置におけるこれらの抗がん二重特異性抗体の広範な適用に大きな課題を提示している。例えば、ブリナツモマブ（ＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）、抗ＣＤ３／ＣＤ１９二重特異性ｓｃＦｖ−ｓｃＦｖ）が、米国において２０１４年にフィラデルフィア染色体陰性の再発または難治性急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）の第二選択処置として承認された。ただし、半減期が短く、皮下投与と不適合であるため、ブリナツモマブは、毎日静脈内（ｉ．ｖ．）投与する必要があり、依然として、神経学的作用、例えば見当識障害、混乱、発話及び言語障害、振戦または痙攣が、臨床試験中に発生した（Ｂａｒｇｏｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２１（５８９１）：９７４−７９７，２００８）。
【００２６】
広範な調査の後、本出願の発明者らは、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗腫瘍抗原Ｆａｂ（例えば、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ）に接続している、効果的なＢＳＡＰフォーマットを予期せず発見した。例としてＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰを取り上げると、本発明者らは、本明細書に記載のＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰが、当該技術分野で公知の他の二重特異性タンパク質と比較していくつかの利点を有することを見出した。第一に、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰは、がん細胞、特に、Ｂ細胞リンパ腫（ＢＣＬ）及びＡＬＬなどのＣＤ１９発現の低い腫瘍に対する細胞毒性活性が増強している。第二に、本発明のＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）は、非ヒト霊長類（例えばカニクイザル）との交差反応性を有し、これにより毒性学研究が促進され得る。特に、本発明のＢＳＡＰは、ヒト及び非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル）の両方の標的腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）に対する結合活性を有し、これにより、非ヒト霊長類（例えばカニクイザル）における毒性学研究からの結果をヒト臨床試験に外挿することが促進され得る。第三に、本明細書に記載のＣＤ３×ＣＤ１９  ＢＳＡＰは、非ヒト霊長類（例えばカニクイザル）で実証されるように、安全性プロファイル及び忍容性が改善されている。
【００２７】
従って、一態様では、本発明は、以下：ｉ）（ａ）免疫グロブリン（Ｉｇ）重鎖可変領域（ＶＨ）及びＩｇ重鎖定常領域１（ＣＨ１）；ならびに（ｂ）Ｉｇ軽鎖可変領域（ＶＬ）及びＩｇ軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む、腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）を特異的に認識する抗腫瘍抗原Ｆａｂ（例えば、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ）；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメインが、直接または任意選択のリンカーを介して接続している、ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）を提供する。一部の実施形態では、抗腫瘍抗原ＦａｂのＣＨ１及びＣＬは、ジスルフィド結合によって接続している。
【００２８】
本明細書に記載のＢＳＡＰのいずれか（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）を含む医薬組成物及びキット、ならびにがんを処置するためのそれらの使用方法も提供する。
【００２９】
Ｉ．定義
本発明の実施は、反対の事項が特段に示されない限り、当該技術分野内のウイルス学、免疫学、微生物学、分子生物学及び組み換えＤＮＡ技術の従来の方法を採用し、その多くを、例示の目的のために以下に記載する。そのような技術は、文献中に十分に説明されている。例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｒ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（２００９）；Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ  ｅｄ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，１９９５；Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ａｎｄ  Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１）；Ｍａｎｉａｔｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（１９８２）；ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ｖｏｌ．Ｉ＆ＩＩ（Ｄ．Ｇｌｏｖｅｒ，ｅｄ．）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｎ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）；Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｈａｍｅｓ  ＆  Ｓ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．，１９８５）；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｈａｍｅｓ＆Ｓ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．，１９８４）；Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．，１９８６）；Ｐｅｒｂａｌ，Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）及びその他の同様の参考文献を参照されたい。
【００３０】
本明細書で使用する場合、「処置」という用語は、臨床的病理の経過中に処置されている個体または細胞の自然経過を改変するように設計された臨床的介入を指す。処置の望ましい効果には、疾患進行速度の低減、疾患状態の回復もしくは緩和、及び寛解または予後の改善が含まれる。例えば、個体は、がん性細胞の増殖の減少（または破壊）、疾患に起因する症状の低減、疾患に罹患している者の生活の質の向上、疾患の処置に必要な他の薬物治療の用量の低減、及び／または個体の生存期間の延長を含むがこれらに限定されない、がんに関連する１つまたは複数の症状が軽減または排除された場合、うまく「処置される」。
【００３１】
本明細書で使用する場合、「有効量」は、対象における疾患または障害を処置するのに有効な薬剤または薬物の量を指す。がんの場合、薬剤の有効量は、がん細胞の数を減少；腫瘍サイズを減少；がん細胞の末梢器官への浸潤を阻害（すなわち、ある程度の遅延及び好ましくは停止）；腫瘍転移を阻害（すなわち、ある程度の遅延及び好ましくは停止）；腫瘍成長をある程度阻害；及び／またはがんに関連する症状の１つもしくは複数をある程度緩和し得る。当業者は、「治療有効量」が、投与経路、採用される医薬賦形剤、及び投与が別の薬物または医薬組成物と併せて行われるか否かに応じて変動し得ることを容易に理解するだろう。
【００３２】
本明細書で使用する場合、「個体」または「対象」という用語は、ヒト、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、げっ歯類、または霊長類を含むが、これらに限定されない哺乳動物を指す。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
【００３３】
「抗体」という用語は、最も広義に使用され、具体的には、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び所望の生物学的活性または機能を呈する限り抗体フラグメントを包含する。本明細書で使用する場合、「免疫グロブリン」（Ｉｇ）及び「抗体」という用語は、互換可能に使用される。
【００３４】
「天然抗体」、「完全長抗体」、「インタクト抗体」及び「全抗体」という用語は、互換可能に使用されて、以下に定義する抗体フラグメントではなく、その実質的にインタクトな形態の抗体を指す。これらの用語は、具体的には、軽鎖（ＬＣ）及びＦｃ領域を含有する重鎖（ＨＣ）を伴う抗体を指す。天然抗体は、通常、２本の同一の軽（Ｌ）鎖及び２本の同一の重（Ｈ）鎖から構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各軽鎖は１個の共有ジスルフィド結合によって重鎖に連結し、一方でジスルフィド連結の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で異なる。各重鎖及び軽鎖はまた、一定間隔の鎖内ジスルフィド架橋を有する。各重鎖は、一方の末端に可変ドメイン（ＶＨ）、続いていくつかの定常ドメインを有する。各軽鎖は、一方の末端に可変ドメイン（ＶＬ）及び他方の末端に定常ドメインを有する；軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第一定常ドメイン（ＣＨ１）と整列し、ＶＬはＶＨと整列する。特定のアミノ酸残基が、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメイン間で界面を形成すると考えられている。
【００３５】
「定常ドメイン」という用語は、抗原結合部位を含有する可変ドメインである免疫グロブリンの他の部分と比較して、より保存されたアミノ酸配列を有する免疫グロブリン分子の部分を指す。定常ドメインは、重鎖のＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３ドメイン（集合的に、ＣＨ）、ならびに軽鎖のＣＬドメインを含有する。
【００３６】
抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」は、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインを指す。重鎖の可変ドメインは、「ＶＨ」と称され得る。軽鎖の可変ドメインは、「ＶＬ」と称され得る。これらのドメインは、一般的に、抗体の最も可変の部分であり、抗原結合部位を含有する。
【００３７】
「可変」という用語は、可変ドメインのある特定の部分が、抗体間で配列が大きく異なり、その特定の抗原に対する各特定の抗体の結合性及び特異性に使用されているという事実を指す。ただし、可変性は、抗体の可変ドメイン全体にわたって均等に分布しているわけではない。それは、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインの両方における超可変領域（ＨＶＲ、ＣＤＲとも称される）と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは各々、４つのＦＲ領域を含み、主として、３つのＨＶＲにより接続しているベータシート構成を取り、ＨＶＲはベータシート構造を接続し、一部の場合ではベータシート構造の一部を形成する、ループを形成する。各鎖内のＨＶＲは、ＦＲ領域によって近接して一緒に保持されており、他の鎖のＨＶＲとともに、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）を参照されたい）。定常ドメインは、抗原への抗体の結合に直接関与しないが、抗体の抗体依存性細胞毒性への関与などの様々なエフェクター機能を呈する。
【００３８】
任意の哺乳動物種由来の抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（「κ」）及びラムダ（「λ」）と呼ばれる、２つの明確に異なるタイプのうちの１つに割り当てられ得る。
【００３９】
本明細書で使用する場合、ＩｇＧ「アイソタイプ」または「サブクラス」という用語は、その定常領域の化学的及び抗原的特徴によって定義される免疫グロブリンのサブクラスのうちのいずれかを意味する。
【００４０】
その重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、抗体（免疫グロブリン）は、異なるクラスに割り当てられ得る。免疫グロブリンには５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭがあり、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分けられ得る。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、γ、ε、γ、及びμと呼ばれる。様々なクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造及び三次元構成は周知であり、一般的に、例えば、Ａｂｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  ｅｄ．（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｃｏ．，２０００）に記載されている。抗体は、抗体と１つまたは複数の他のタンパク質またはペプチドとの共有または非共有会合によって形成される、より大きい融合分子の一部であり得る。
【００４１】
「抗体フラグメント」または「抗原結合ドメイン」は、インタクト抗体の一部分を含み、好ましくはその抗原結合領域を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体フラグメントまたは抗原結合ドメインは、抗原結合フラグメントである。抗原結合フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフラグメント（例えば一本鎖可変フラグメント、ｓｃＦｖ）；ダイアボディ；直鎖状抗体；一本鎖抗体分子；ならびに抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体が挙げられる。
【００４２】
抗体のパパイン消化により、「フラグメント抗原結合」（Ｆａｂ）と呼ばれ、各々が単一の抗原結合部位を有する、２つの同一の抗原結合フラグメント；及び、残りの「フラグメント結晶化可能領域」（Ｆｃ）フラグメント、この名称は容易に結晶化できるその能力を反映する、が産生される。一部の実施形態では、ペプシン処理は、より大きなＦ（ａｂ’）２フラグメントを生じ、一般的に、ジスルフィド結合を介して接続された２つのＦａｂと見なすことができ、依然として抗原を架橋することができる。
【００４３】
「Ｆｖ」は、完全な抗原結合部位を含有する最小抗体フラグメントである。一部の実施形態では、二本鎖Ｆｖ種は、密接に非共有会合している１つの重鎖可変ドメイン及び１つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる。一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）種では、１つの重鎖可変ドメイン及び１つの軽鎖可変ドメインは、軽鎖及び重鎖が二本鎖Ｆｖ種における構造に類似している「二量体」構造で会合し得るように、可撓性ペプチドリンカーによって共有連結し得る。これらの２つのＦｖの折り畳み構成は、相互作用して抗原結合部位を規定し、抗体に対して特異的な抗原結合に寄与する、６つのＨＶＲ（ＶＨの３つのＨＶＲ及びＶＬの３つのＨＶＲ）をもたらす。ただし、結合部位全体よりも親和性は低くなるが、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的なＨＶＲを３つのみ含む半分のＦｖ）であっても、抗原を認識し、抗原に結合する能力を有する。
【００４４】
Ｆａｂフラグメントは、インタクトな軽鎖（ＬＣ）、重鎖可変領域（ＶＨ）、及び重鎖の第一定常ドメイン（ＣＨ１）を含む。Ｆａｂ’フラグメントは、抗体ヒンジ領域からの１つまたは複数のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端への数個の残基の付加によって、Ｆａｂフラグメントとは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が、遊離チオール基を担持するＦａｂ’の本明細書における呼称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体フラグメントは、元来、間にヒンジシステインを有するＦａｂ’フラグメントの対として産生された。抗体フラグメントの他の化学的カップリングも公知である。
【００４５】
「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体フラグメントは、抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含み、これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖内に存在する。一般的に、ｓｃＦｖポリペプチドは、ＶＨ及びＶＬドメイン間にポリペプチドリンカー（「接続ペプチド」）をさらに含み、これにより、ｓｃＦｖが抗原結合に望ましい構造を形成することが可能になる。ｓｃＦｖの概説に関して、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｂｅｒｌｉｎ  Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，１９９４．２６９−３１５を参照されたい。
【００４６】
「Ｆｃ」フラグメントは、ジスルフィド結合によって一緒に保持された両方の重鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域における配列によって決定され、この領域はまた、ある特定の細胞型で見出されるＦｃ受容体（ＦｃＲ）によって認識される部分でもある。
【００４７】
本明細書で使用する場合、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に同種である抗体の集団から得られる抗体を指し、例えば、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る、起こり得る突然変異、例えば、天然に存在する突然変異を除いて同一である。ゆえに、「モノクローナル」という修飾語は、別個の抗体の混合物ではないという抗体の特徴を示す。一部の実施形態では、かかるモノクローナル抗体は、典型的には、標的に結合するポリペプチド配列を含む抗体を含み、標的結合ポリペプチド配列は、複数のポリペプチド配列からの単一の標的結合ポリペプチド配列の選択を含むプロセスによって得られたものである。例えば、選択プロセスは、複数のクローン、例えばハイブリドーマクローン、ファージクローン、または組み換えＤＮＡクローンのプールからの特有のクローンの選択であり得る。選択された標的結合配列をさらに改変して、例えば、標的に対する親和性を改善する、標的結合配列をヒト化する、細胞培養物におけるその産生を改善する、ｉｎ  ｖｉｖｏでのその免疫原性を減少する、多重特異性抗体を作製するなどが可能であること、及び改変された標的結合配列を含む抗体も、本発明のモノクローナル抗体であることが理解されるべきである。異なる決定基（エピトープ）に対して指向した異なる抗体を典型的に含む、ポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向する。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体調製物は、他の免疫グロブリンが典型的に夾雑していないという点で有利である。
【００４８】
「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体集団から得られるという抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものと解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、様々な技術によって作成されてよく、それには例えば、ハイブリドーマ法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−９７（１９７５）；Ｈｏｎｇｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  １４（３）：２５３−２６０（１９９５）、Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ  ｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１））、組み換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）、ファージディスプレイ技術（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）；Ｓｉｄｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）；Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）；及びＬｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）を参照されたい）、及びヒト免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子座または遺伝子の一部または全てを有する動物においてヒトまたはヒト様抗体を産生するための技術（例えば、ＷＯ１９９８／２４８９３；ＷＯ１９９６／３４０９６；ＷＯ１９９６／３３７３５；ＷＯ１９９１／１０７４１；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６２：２５５−２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：３３（１９９３）；米国特許第５，５４５，８０７号；同第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；及び同第５，６６１，０１６号；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６−８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８１２−８１３（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８４５−８５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８２６（１９９６）；ならびにＬｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６���−９３（１９９５）を参照されたい）が含まれる。
【００４９】
本明細書におけるモノクローナル抗体は、具体的には、所望の生物活性を呈する限り、重鎖及び／または軽鎖の一部分が、特定の種に由来する抗体または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または同種である一方で、鎖（複数可）の残りが、別の種に由来する抗体または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または同種である「キメラ」抗体、ならびにかかる抗体のフラグメントを含む（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；及びＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：６８５１−６８５５（１９８４）を参照されたい）。キメラ抗体は、抗体の抗原結合領域が、例えば、目的の抗原でマカクザルを免疫化することにより、産生された抗体に由来する、ＰＲＩＭＡＴＴＺＥＤ（登録商標）抗体を含む。
【００５０】
非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含有するキメラ抗体である。一実施形態では、ヒト化抗体は、レシピエントのＨＶＲ（下記に定義する）からの残基が、所望の特異性、親和性、及び／または能力を有するマウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）のＨＶＲからの残基に置き換えられている、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。一部の場合では、ヒト免疫グロブリンのＦＲ残基は、対応する非ヒト残基に置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体において見出されない残基を含み得る。これらの修飾を行って、抗体の性能をさらに洗練し得る。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、及び典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み得、超可変ループの全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンの超可変ループに対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のＦＲである。ヒト化抗体はまた、任意選択で、免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部分（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンの少なくとも一部分を含むだろう。さらなる詳細については、例えば、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）；及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６（１９９２）を参照されたい。例えば、Ｖａｓｗａｎｉ  ａｎｄ  Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ａｎｎ．Ａｌｌｅｒｇｙ，Ａｓｔｈｍａ＆Ｉｍｍｕｎｏｌ．１：１０５−１１５（１９９８）；Ｈａｒｒｉｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ  ２３：１０３５−１０３８（１９９５）；Ｈｕｒｌｅ  ａｎｄ  Ｇｒｏｓｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．５：４２８−４３３（１９９４）；ならびに米国特許第６，９８２，３２１号及び同第７，０８７，４０９号も参照されたい。
【００５１】
「ヒト抗体」は、ヒトによって産生された及び／または本明細書に開示するようなヒト抗体を作成するための技術のいずれかを使用して作成された抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を具体的に除外する。ヒト抗体は、当該技術分野で公知の様々な技術を使用して産生することができ、それにはファージディスプレイライブラリー（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１（１９９１））が含まれる。Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，７７（１９８５）；Ｂｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（１）：８６−９５（１９９１）に記載される方法も、ヒトモノクローナル抗体の調製のために利用可能である。ｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４（２００１）も参照されたい。ヒト抗体は、抗原攻撃に応答してかかる抗体を産生するように修飾されているが、その内因性遺伝子座は無効化されているトランスジェニック動物、例えば、免疫化ゼノマウスに抗原を投与することにより調製することができる（例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術に関して、米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号を参照されたい）。例えば、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されるヒト抗体に関しては、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０３：３５５７−３５６２（２００６）も参照されたい。
【００５２】
本明細書で使用する場合、「超可変領域」、「ＨＶＲ」、または「ＨＶ」という用語は、配列が超可変性である、及び／または構造的に定義されたループを形成する抗体可変ドメインの領域を指す。一般的に、抗体は、６つのＨＶＲを含む；３つがＶＨにあり（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、３つがＶＬにある（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）。天然抗体では、Ｈ３及びＬ３は、これらの６つのＨＶＲのうちで最も高い多様性を呈し、特にＨ３が、抗体に優れた特異性を与える上で特有の役割を果たすと考えられている。例えば、Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３：３７−４５（２０００）；Ｊｏｈｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４８中：１−２５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．，２００３）を参照されたい。実際、重鎖のみからなる天然に存在するラクダ科抗体は、軽鎖の不在下で機能的であり、安定している。例えば、Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６３：４４６−４４８（１９９３）；Ｓｈｅｒｉｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．３：７３３−７３６（１９９６）を参照されたい。
【００５３】
免疫グロブリン可変領域の構造及び位置は、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ．１９８７、及びインターネットで現在利用可能なその最新版（ｉｍｍｕｎｏ．ｂｍｅ．ｎｗｕ．ｅｄｕ）を参照することにより、決定され得る。
【００５４】
「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書で定義するＨＶＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
【００５５】
本明細書で使用する場合、「共有連結」という用語は、１つもしくは複数の化学結合を通した直接連結または１つもしくは複数のリンカーを通した間接連結を指す。任意の好適な化学結合を使用して、ペプチド結合及びジスルフィド結合などの共有結合、または水素結合、疎水性結合、イオン性結合もしくはファンデルワールス結合などの非共有結合を含むがこれらに限定されない、直接連結を作製することができる。
【００５６】
本明細書で使用する場合、「共有結合」は、１つまたは複数の電子を共有する２個の原子間の安定した結合を指す。共有結合の例には、ペプチド結合及びジスルフィド結合が含まれるが、これらに限定されない。本明細書で使用する場合、「ペプチド結合」は、アミノ酸のカルボキシル基及び隣接するアミノ酸のアミン基間に形成される共有結合を指す。本明細書で使用する場合、「ジスルフィド結合」は、２個の硫黄原子間に形成される共有結合を指す。ジスルフィド結合は、２個のチオール基の酸化によって形成できる。一部の実施形態では、共有連結は、共有結合によって直接連結する。一部の実施形態では、共有連結は、ペプチド結合またはジスルフィド結合によって直接連結する。
【００５７】
本明細書で使用する場合、「ジスルフィド結合」は、１つまたは複数のジスルフィド結合による重鎖フラグメントＣＨ１及び軽鎖フラグメントＣＬの組み合わせを指す。１つまたは複数のジスルフィド結合は、２つのフラグメントのチオール基を接続することにより、２つのフラグメント間に形成され得る。一部の実施形態では、１つまたは複数のジスルフィド結合を、それぞれ、重鎖フラグメント及び軽鎖フラグメントの１つまたは複数のシステイン間に形成することができる。
【００５８】
本明細書で使用する場合、「結合する」、「に特異的に結合する」、「特異的に認識する」、または「に特異的」であるという用語は、生体分子を含む異種分子集団の存在下で標的の存在を決定する、標的及び抗体間の結合などの測定可能及び再現可能な相互作用を指す。例えば、標的（エピトープであり得る）に結合するまたはそれに特異的に結合する抗体は、この標的に、他の標的に結合するよりも高い親和性、結合力で、より容易に、及び／またはより長期間結合する抗体である。一実施形態では、非関連標的への抗体の結合の程度は、例えば、放射免疫測定法（ＲＩＡ）により測定される標的への抗体の結合の約１０％未満である。一部の実施形態では、標的に特異的に結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、または≦０．１ｎＭの解離定数（Ｋｄ）を有する。一部の実施形態では、抗体は、異なる種からのタンパク質の中で保存されているタンパク質上のエピトープに特異的に結合する。別の実施形態では、特異的結合は、排他的結合を含み得るが、それを必要としない。
【００５９】
本明細書で使用する場合、ペプチド、ポリペプチドまたは抗体配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」及び「相同性」は、最大の配列同一性パーセントを達成するように、配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入した後の、配列同一性の一部としていずれの保存的置換も考慮しない、特定のペプチドまたはポリペプチド配列におけるアミノ酸残基と同一である、候補配列におけるアミノ酸残基の割合（％）として定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアライメントは、当該技術分野内の様々な方法において、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮまたはＭＥＧＡＬＩＧＮ（商標）（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの、公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して、達成することができる。当業者は、比較されている配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。
【００６０】
アミノ酸置換には、ポリペプチド中のあるアミノ酸の、別のアミノ酸を用いた置換が含まれ得るが、これに限定されない。例示的な置換を表Ａに示す。アミノ酸置換は、目的の抗体に導入してよく、その生成物は、所望の活性、例えば、抗原結合の保持／改善、免疫原性の低減、または抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）もしくは補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）の改善に関してスクリーニングしてよい。
【表Ａ−１】
2021535758.tif 000002
【表Ａ−２】
2021535758.tif 000003
【００６１】
アミノ酸は、共通の側鎖特性に従ってグループ化され得る：（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（５）鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴うであろう。
【００６２】
本明細書で使用する場合、「二重特異性抗原結合タンパク質」は、ＣＤ３に特異的に結合する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）に共有連結した腫瘍抗原に特異的に結合する抗腫瘍抗原Ｆａｂを含むタンパク質を指し、抗腫瘍抗原Ｆａｂは、様々な特徴を有する。特徴は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ活性などの生物学的特徴であり得る。特徴はまた、標的分子への結合、触媒反応などの、単純な化学的または物理的特性であり得る。抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、単一のペプチド結合によって直接接続され得る、またはペプチドリンカーを介するが互いにインフレーム様式で接続され得る。
【００６３】
「二重特異性」という用語は、抗体または抗原結合タンパク質（例えば二重特異性抗原結合タンパク質、ＢＳＡＰ）と併せて使用する場合、１つの生体分子上の２つの異なるエピトープに特異的に結合することができる、または２つの異なる生体分子上のエピトープに特異的に結合することができる、抗体または抗原結合タンパク質を指す。別途示されない限り、二重特異性抗体またはＢＳＡＰによって結合される抗原が二重特異性抗体名またはＢＳＡＰ名で列記される順序は無作為である。すなわち、「抗ＣＤ３／ＣＤ１９」、「抗ＣＤ１９／ＣＤ３」、「ＣＤ１９×ＣＤ３」及び「ＣＤ３×ＣＤ１９」という用語は、互換可能に使用されてよく、ＣＤ３及びＣＤ１９の両方に特異的に結合する二重特異性抗体（例えばＢＳＡＰ）を指す。
【００６４】
「二重特異性抗原結合タンパク質」、「二重特異性抗体」及び「ＢＳＡＰ」という用語は、互換可能に使用されてよく、２つのエピトープ特異性を有する抗原結合タンパク質を指す。
【００６５】
本明細書で使用する場合、ポリペプチドの「Ｃ末端」は、ポリペプチドの最後のアミノ酸残基を指し、これはそのアミン基を供与して、隣接するアミノ酸残基のカルボキシル基とペプチド結合を形成する。本明細書で使用する場合、ポリペプチドの「Ｎ末端」は、ポリペプチドの最初のアミノ酸を指し、これはそのカルボキシル基を供与して、隣接するアミノ酸残基のアミン基とペプチド結合を形成する。
【００６６】
本明細書で使用する場合、「ベクター」という用語は、連結している別の核酸を増やすことが可能な核酸分子を指す。この用語には、自己複製核酸構造としてのベクター、ならびに導入されている宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターが含まれる。ある特定のベクターは、それが作動可能に連結している核酸の発現を指向することが可能である。このようなベクターは、本明細書では「発現ベクター」と称する。
【００６７】
「細胞」という用語は、初代対象細胞及びその子孫を含む。
【００６８】
「サイトカインストーム」という用語は、「サイトカインカスケード」または「高サイトカイン血症」としても知られ、典型的には、サイトカイン及び免疫細胞間の正のフィードバックループからなる潜在的に致死性の免疫反応であり、様々なサイトカイン（例えば、ＩＮＦ−γ、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＣＣＬ２など）のレベルが高く上昇する。
【００６９】
本明細書に記載の本発明の実施形態が、実施形態「からなる」及び／または「から本質的になる」を含むことが理解されたい。
【００７０】
本明細書で「約」の付いた値またはパラメータについての言及は、その値またはパラメータそれ自体に指向された変動を含む（及び記載する）。例えば、「約Ｘ」に言及する記載は、「Ｘ」の記載を含む。
【００７１】
本明細書で使用する場合、ある値またはパラメータ「ではない」への言及は、一般的に、ある値またはパラメータ「以外」を意味する及び記載する。例えば、方法はタイプＸのがんを処置するために使用されないとは、方法がＸ以外のタイプのがんを処置するために使用されることを意味する。
【００７２】
本明細書で使用する場合、「約Ｘ〜Ｙ」という用語は、「約Ｘ〜約Ｙ」と同じ意味を有する。
【００７３】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用する場合、単数形「ａ」、「または」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が明確にそうでないと指定しない限り、複数の指示対象を含む。
【００７４】
ＩＩ．二重特異性抗原結合タンパク質（ＢＳＡＰ）
本発明は、腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）を特異的に認識するＦａｂ（本明細書では以降「抗腫瘍抗原Ｆａｂ」、例えば「抗ＣＤ１９  Ｆａｂ」と称する）及びＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）（本明細書では以降「抗ＣＤ３結合ドメイン」、例えば「抗ＣＤ３  ｓｃＦｖ」と称する）を含み、抗腫瘍抗原Ｆａｂが、免疫グロブリン（Ｉｇ）重鎖可変領域（ＶＨ）及びＩｇ重鎖定常領域１（ＣＨ１）、ならびにＩｇ軽鎖可変領域（ＶＬ）及びＩｇ軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、抗腫瘍抗原ＦａｂのＣＨ１及びＣＬは、ジスルフィド結合によって接続している。一部の実施形態では、抗腫瘍抗原Ｆａｂ（例えば、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ）及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、直接接続している。一部の実施形態では、抗腫瘍抗原Ｆａｂ（例えば、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ）及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、リンカーによって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、抗腫瘍抗原Ｆａｂ（例えば、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ）のＶＨ及び／またはＶＬのＮ末端に接続している。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、２つの抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み、第一の抗ＣＤ３結合ドメインは、抗腫瘍抗原ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続しており；第二の抗ＣＤ３結合ドメインは、抗腫瘍抗原ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している。図１Ａ及び１Ｂは、本明細書に記載のＢＳＡＰの例示的な構成を示す。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、ＣＤ１９を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ、及びＣＤ３を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み、本明細書では以降「ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ」と称する。
【００７５】
本発明のＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）は、重要な利点を有し、それには以下：１）がん細胞殺傷有効性の増強を実証した；２）本発明のＢＳＡＰ（例えば、×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）は、動物モデルにおいて、Ｂ細胞リンパ腫及び急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）に対して優れたｉｎ  ｖｉｖｏ治療効果を実証した；３）ヒトの臨床研究予測の利益のために、非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル）での毒性学研究を促進し得る、カニクイザルなどの非ヒト霊長類との交差反応性；４）安全性プロファイル及び忍容性の改善が含まれるがこれらに限定されない。
【００７６】
ゆえに、一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）を特異的に認識する抗腫瘍抗原Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメインが、直接または任意選択のリンカーを介して接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、抗腫瘍抗原Ｆａｂ（例えば、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ）のＶＨのＮ末端に接続している。ゆえに、一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）を特異的に認識する抗腫瘍抗原Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗腫瘍抗原ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、抗腫瘍抗原ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している。ゆえに、一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）を特異的に認識する抗腫瘍抗原Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメインが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗腫瘍抗原ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、２つの抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み、第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続しており；第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している。ゆえに、一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）を特異的に認識する抗腫瘍抗原Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する２つの抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び第一の抗ＣＤ３結合ドメインが、直接または任意選択の第一のリンカーを介して接続し、抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び第二の抗ＣＤ３結合ドメインが、直接または任意選択の第二のリンカーを介して接続しており；第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）ＦａｂのＶＨのＮ末端に接���しており、第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、腫瘍抗原は、ＣＤ１９、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３７、ＣＤ４０、及びＣＤ７４からなる群から選択される。一部の実施形態では、腫瘍抗原は、ＣＤ１９である。ゆえに一部の実施形態では、抗腫瘍抗原Ｆａｂは、ＣＤ１９を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂである。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号４もしくは３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５もしくは３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６もしくは３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＣＤ３ε（例えば、ｈｕＣＤ３εまたはｃｙｎｏＣＤ３ε）のＮ末端、例えば、ＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、ｓｃＦｖ（「抗ＣＤ３  ｓｃＦｖ」）であり、抗ｓｃＦｖは、接続ペプチドによって任意選択で接続したＶＨ及びＶＬを含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）ＦａｂのＣＨ１及びＣＬは、約１〜約５（例えば約１、２、３、４、または５のいずれか）個のジスルフィド結合、例えば、約２個のジスルフィド結合などのジスルフィド結合によって接続している。一部の実施形態では、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）ＦａｂのＣＨ１は、配列番号１８のアミノ酸配列を含む、及び／または抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）ＦａｂのＣＬは、配列番号１９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）間に位置するリンカー、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬ間に位置する接続ペプチドは、約２〜約３０（例えば、約６〜約１２）個のアミノ酸残基の長さを有するアミノ酸配列から構成され、アミノ酸残基は、グリシン、セリン、アルギニン、及びアラニンから選択される。一部の実施形態では、抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン間に位置するリンカー、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬ間に位置する接続ペプチドは、配列番号２０〜２２、３３、及び４１〜５４からなる群から選択される、例えば、配列番号２１、２２、３３、及び５３のいずれかのアミノ酸配列から選択される。
【００７７】
一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）はＶＨを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＨは、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）はＶＬを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＬは、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【００７８】
ゆえに一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）を特異的に認識する抗腫瘍抗原Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）がＶＨを含み、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）がＶＬを含み、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）を特異的に認識する抗腫瘍抗原Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）がＶＨを含み、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）がＶＬを含み、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）を特異的に認識する抗腫瘍抗原Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）がＶＨを含み、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）がＶＬを含み、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）を特異的に認識する抗腫瘍抗原Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する２つの抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択の第一のリンカーを介して接続し、抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択の第二のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）の各々がＶＨを含み、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）の各々がＶＬを含み、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続しており、第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、抗腫瘍抗原ＦａｂのＣＬ及びＣＨ１は、約１〜約５（例えば、約１、２、３、４、または５のいずれか）個のジスルフィド結合、例えば、２個のジスルフィド結合などのジスルフィド結合によって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＣＤ３ε（例えば、ｈｕＣＤ３ε、ｃｙｎｏＣＤ３ε）のＮ末端、例えば、ＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＨは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＬは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、接続ペプチドによって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、腫瘍抗原は、ＣＤ１９、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３７、ＣＤ４０、及びＣＤ７４からなる群から選択される。一部の実施形態では、腫瘍抗原は、ＣＤ１９である。一部の実施形態では、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）間に位置するリンカー、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬ間に位置する接続ペプチドは、約２〜約３０（例えば、約６〜約１２）個のアミノ酸残基の長さを有するアミノ酸配列から構成され、アミノ酸残基は、グリシン、セリン、アルギニン、及びアラニンから選択される。一部の実施形態では、リンカー及び／または接続ペプチドは、配列番号２１、２２、３３、及び５３のいずれか１つから選択される。
【００７９】
一部の実施形態では、ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）に特異的に結合する（またはこれを特異的に認識する）抗ＣＤ３結合ドメインは、ｓｃＦｖである。
【００８０】
ゆえに、一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）を特異的に認識する抗腫瘍抗原Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）を特異的に認識する抗腫瘍抗原Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗腫瘍抗原ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）を特異的に認識する抗腫瘍抗原Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗腫瘍抗原ＦａｂのＶＬのＮ末端に任意選択のリンカーを介して接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）を特異的に認識する抗腫瘍抗原Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する２つの抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び第一の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択の第一のリンカーを介して接続し、抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び第二の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択の第二のリンカーを介して接続しており；第一の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続しており、第二の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、抗腫瘍抗原ＦａｂのＣＬ及びＣＨ１は、約１〜約５（例えば、約１、２、３、４、または５のいずれか）個のジスルフィド結合、例えば、２個のジスルフィド結合などのジスルフィド結合によって接続している。一部の実施形態では、腫瘍抗原は、ＣＤ１９、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３７、ＣＤ４０、及びＣＤ７４からなる群から選択される。一部の実施形態では、腫瘍抗原は、ＣＤ１９である。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、ＣＤ３ε（例えば、ｈｕＣＤ３εまたはｃｙｎｏＣＤ３ε）のＮ末端、例えばＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープに特異的に結合する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、接続���プチドによって接続している。一部の実施形態では、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖ間に位置するリンカー、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬ間に位置する接続ペプチドは、約２〜約３０（例えば、約６〜約１２）個のアミノ酸残基の長さを有するアミノ酸配列から構成され、アミノ酸残基は、グリシン、セリン、アルギニン、及びアラニンから選択される。一部の実施形態では、リンカー及び／または接続ペプチドは、配列番号２１、２２、３３、及び５３のいずれか１つから選択される。
【００８１】
一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）を特異的に認識する抗腫瘍抗原Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）を特異的に認識する抗腫瘍抗原Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）を特異的に認識する抗腫瘍抗原Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ��ＶＬ及びＣＬを含む、腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）を特異的に認識する抗腫瘍抗原Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する２つの抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び第一の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択の第一のリンカーを介して接続し、抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び第二の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択の第二のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖの各々がＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖの各々がＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；第一の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続しており、第二の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、抗腫瘍抗原ＦａｂのＣＬ及びＣＨ１は、約１〜約５（例えば、約１、２、３、４、または５のいずれか）個のジスルフィド結合、例えば、２個のジスルフィド結合などのジスルフィド結合によって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、ＣＤ３ε（例えば、ｈｕＣＤ３ε、ｃｙｎｏＣＤ３ε）のＮ末端、例えば、ＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、接続ペプチドによって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、腫瘍抗原は、ＣＤ１９、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３７、ＣＤ４０、及びＣＤ７４からなる群から選択される。一部の実施形態では、腫瘍抗原は、ＣＤ１９である。一部の実施形態では、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖ間に位置するリンカー、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬ間に位置する接続ペプチドは、約２〜約３０（例えば、約６〜約１２）個のアミノ酸残基の長さを有するアミノ酸配列から構成され、アミノ酸残基は、グリシン、セリン、アルギニン、及びアラニンから選択される。一部の実施形態では、リンカー及び／または接続ペプチドは、配列番号２１、２２、３３、及び５３のいずれか１つから選択される。
【００８２】
一部の実施形態では、腫瘍抗原は、ＣＤ１９である。ゆえに一部の実施形態では、抗腫瘍抗原Ｆａｂは、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂである。
【００８３】
ゆえに、一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する２つの抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第一の抗ＣＤ３結合ドメインが、直接または任意選択の第一のリンカーを介して接続し、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第二の抗ＣＤ３結合ドメインが、直接または任意選択の第二のリンカーを介して接続しており；第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続しており、第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＣＤ３ε（例えば、ｈｕＣＤ３ε、ｃｙｎｏＣＤ３ε）のＮ末端、例えば、ＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、接続ペプチドによって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＨ１及びＣＬは、約１〜��５（例えば約１、２、３、４、または５のいずれか）個のジスルフィド結合、例えば、約２個のジスルフィド結合などのジスルフィド結合によって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＨ１は、配列番号１８のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＬは、配列番号１９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）間に位置するリンカー、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬ間に位置する接続ペプチドは、約２〜約３０（例えば、約６〜約１２）個のアミノ酸残基の長さを有するアミノ酸配列から構成され、アミノ酸残基は、グリシン、セリン、アルギニン、及びアラニンから選択される；例えば、リンカー及び／または接続ペプチドは、配列番号２１、２２、３３、及び５３のいずれかから選択される。
【００８４】
一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）がＶＨを含み、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）がＶＬを含み、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９、（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）がＶＨを含み、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）がＶＬを含み、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）がＶＨを含み、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）がＶ���を含み、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する２つの抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択の第一のリンカーを介して接続し、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択の第二のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）の各々がＶＨを含み、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）の各々がＶＬを含み、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続しており、第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＬ及びＣＨ１は、約１〜約５（例えば、約１、２、３、４、または５のいずれか）個のジスルフィド結合、例えば、２個のジスルフィド結合などのジスルフィド結合によって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＣＤ３ε（例えば、ｈｕＣＤ３ε、ｃｙｎｏＣＤ３ε）のＮ末端、例えば、ＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＨは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＬは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、接続ペプチドによって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）間に位置するリンカー、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬ間に位置する接続ペプチドは、約２〜約３０（例えば、約６〜約１２）個のアミノ酸残基の長さを有するアミノ酸配列から構成され、アミノ酸残基は���グリシン、セリン、アルギニン、及びアラニンから選択される。一部の実施形態では、リンカー及び／または接続ペプチドは、配列番号２１、２２、３３、及び５３のいずれか１つから選択される。
【００８５】
一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に任意選択のリンカーを介して接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する２つの抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第一の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択の第一のリンカーを介して接続し、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第二の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択の第二のリンカーを介して接続しており；第一の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続しており、第二の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＬ及びＣＨ１は、約１〜約５（例えば、約１、２、３、４、または５のいずれか）個のジスルフィド結合、例えば、２個のジスルフィド結合などのジスルフィド結合によって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、ＣＤ３ε（例えば、ｈｕＣＤ３εまたはｃｙｎｏＣＤ３ε）のＮ末端、例えばＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープに特異的に結合する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、接続ペプチドによって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖ間に位置するリンカー、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬ間に位置する接続ペプチドは、約２〜約３０（例えば、約６〜約１２）個のアミノ酸残基の長さを有するアミノ酸配列から構成され、アミノ酸残基は、グリシン、セリン、アルギニン、及びアラニンから選択される。一部の実施形態では、リンカー及び／または接続ペプチドは、配列番号２１、２２、３３、及び５３のいずれか１つから選択される。
【００８６】
一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１���）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する２つの抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第一の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択の第一のリンカーを介して接続し、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第二の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択の第二のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖの各々がＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖの各々がＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；第一の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続しており、第二の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＬ及びＣＨ１は、約１〜約５（例えば、約１、２、３、４、または５のいずれか）個のジスルフィド結合、例えば、２個のジスルフィド結合などのジスルフィド結合によって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、ＣＤ３ε（例えば、ｈｕＣＤ３ε、ｃｙｎｏＣＤ３ε）のＮ末端、例えば、ＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、接続ペプチドによって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖ間に位置するリンカー、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬ間に位置する接続ペプチドは、約２〜約３０（例えば、約６〜約１２）個のアミノ酸残基の長さを有するアミノ酸配列から構成され、アミノ酸残基は、グリシン、セリン、アルギニン、及びアラニンから選択される。一部の実施形態では、リンカー及び／または接続ペプチドは、配列番号２１、２２、３３、及び５３のいずれか１つから選択される。
【００８７】
一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【００８８】
ゆえに、一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ��９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する２つの抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第一の抗ＣＤ３結合ドメインが、直接または任意選択の第一のリンカーを介して接続し、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第二の抗ＣＤ３結合ドメインが、直接または任意選択の第二のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続しており、第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＣＤ３ε（例えば、ｈｕＣＤ３εまたはｃｙｎｏＣＤ３ε）のＮ末端、例えば、ＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、接続ペプチドによって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＨ１及びＣＬは、約１〜約５（例えば約１、２、３、４、または５のいずれか）個のジスルフィド結合、例えば、約２個のジスルフィド結合などのジスルフィド結合によって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＨ１は、配列番号１８のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＬは、配列番号１９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）間に位置するリンカー、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬ間に位置する接続ペプチドは、約２〜約３０（例えば、約６〜約１２）個のアミノ酸残基の長さを有するアミノ酸配列から構成され、アミノ酸残基は、グリシン、セリン、アルギニン、及びアラニンから選択される；例えば、リンカー及び／または接続ペプチドは、配列番号２１、２２、３３、及び５３のいずれかから選択される。
【００８９】
一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）がＶＨを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）がＶＬを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）がＶＨを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）がＶＬを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）がＶＨを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）がＶＬを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する２つの抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択の第一のリンカーを介して接続し、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択の第二のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）の各々がＶＨを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）の各々がＶＬを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に��続しており、第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＣＤ３ε（例えば、ｈｕＣＤ３ε、ｃｙｎｏＣＤ３ε）のＮ末端、例えば、ＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＨは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＬは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、接続ペプチドによって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＨ１及びＣＬは、約１〜約５（例えば約１、２、３、４、または５のいずれか）個のジスルフィド結合、例えば、約２個のジスルフィド結合などのジスルフィド結合によって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＨ１は、配列番号１８のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＬは、配列番号１９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）間に位置するリンカー、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬ間に位置する接続ペプチドは、約２〜約３０（例えば、約６〜約１２）個のアミノ酸残基の長さを有するアミノ酸配列から構成され、アミノ酸残基は、グリシン、セリン、アルギニン、及びアラニンから選択される；例えば、リンカー及び／または接続ペプチドは、配列番号２１、２２、３３、及び５３のいずれかから選択される。
【００９０】
一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖ��、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する２つの抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第一の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択の第一のリンカーを介して接続し、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第二の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択の第二のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖの各々がＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖの各々がＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；第一の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続しており、第二の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、ＣＤ３ε（例えば、ｈｕＣＤ３εまたはｃｙｎｏＣＤ３ε）のＮ末端、例えばＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ���、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、接続ペプチドによって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＨ１及びＣＬは、約１〜約５（例えば約１、２、３、４、または５のいずれか）個のジスルフィド結合、例えば、約２個のジスルフィド結合などのジスルフィド結合によって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＨ１は、配列番号１８のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＬは、配列番号１９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖ間に位置するリンカー、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬ間に位置する接続ペプチドは、約２〜約３０（例えば、約６〜約１２）個のアミノ酸残基の長さを有するアミノ酸配列から構成され、アミノ酸残基は、グリシン、セリン、アルギニン、及びアラニンから選択される；例えば、リンカー及び／または接続ペプチドは、配列番号２１、２２、３３、及び５３のいずれかから選択される。
【００９１】
一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号７のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号８のアミノ酸配列を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号７のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号８のアミノ酸配列を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１６のアミノ酸配列を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号７のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号８のアミノ酸配列を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１６のアミノ酸配列を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する２つの抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第一の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択の第一のリンカーを介して接続し、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第二の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択の第二のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号７のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号８のアミノ酸配列を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１６のアミノ酸配列を含み；第一の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続しており、第二の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、ＣＤ３ε（例えば、ｈｕＣＤ３εまたはｃｙｎｏＣＤ３ε）のＮ末端、例えばＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、接続ペプチドによって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＨ１及びＣＬは、約１〜約５（例えば約１、２、３、４、または５のいずれか）個のジスルフィド結合、例えば、約２個のジスルフィド結合などのジスルフィド結合によって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＨ１は、配列番号１８のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＬは、配列番号１９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖ間に位置するリンカー、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬ間に位置する接続ペプチドは、約２〜約３０（例えば、約６〜約１２）個のアミノ酸残基の長さを有するアミノ酸配列から構成され、アミノ酸残基は、グリシン、セリン、アルギニン、及びアラニンから選択される；例えば、リンカー及び／または接続ペプチドは、配列番号２１、２２、３３、及び５３のいずれかから選択される。
【００９２】
一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含むＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰを提供し、第一のポリペプチドは、配列番号２３、２８、３５、５８、及び５９のいずれかのアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含む、及び／または第二のポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、以下：配列番号２３のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチド；及び配列番号２４のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチドを含む、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：配列番号２８または５８のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチド；及び配列番号２４のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチドを含む、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：配列番号３５または５９のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチド；及び配列番号２４のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチドを含む、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰを提供する。
【００９３】
一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【００９４】
ゆえに、一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異��に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する２つの抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択の第一のリンカーを介して接続し、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択の第二のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続しており、第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＣＤ３ε（例えば、ｈｕＣＤ３εまたはｃｙｎｏＣＤ３ε）のＮ末端、例えばＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、接続ペプチドによって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＨ１及びＣＬは、約１〜約５（例えば約１、２、３、４、または５のいずれか）個のジスルフィド結合、例えば、約２個のジスルフィド結合などのジスルフィド結合によって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＨ１は、配列番号１８のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＬは、配列番号１９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）間に位置するリンカー、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬ間に位置する接続ペプチドは、約２〜約３０（例えば、約６〜約１２）個のアミノ酸残基の長さを有するアミノ酸配列から構成され、アミノ酸残基は、グリシン、セリン、アルギニン及びアラニンから選択される；例えば、リンカー及び／または接続ペプチドは、配列番号２１、２２、３３、及び５３のいずれかから選択される。
【００９５】
一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）がＶＨを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）がＶＬを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）がＶＨを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）がＶＬを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）がＶＨを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）がＶＬを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する２つの抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択の第一のリンカーを介して接続し、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択の第二のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）の各々がＶＨを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）の各々がＶＬを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続しており、第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＣＤ３ε（例えば、ｈｕＣＤ３εまたはｃｙｎｏＣＤ３ε）のＮ末端、例えばＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＨは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＬは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、接続ペプチドによって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＨ１及びＣＬは、約１〜約５（例えば約１、２、３、４、または５のいずれか）個のジスルフィド結合、例えば、約２個のジスルフィド結合などのジスルフィド結合によって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＨ１は、配列番号１８のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＬは、配列番号１９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）間に位置するリンカー、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬ間に位置する接続ペプチドは、約２〜約３０（例えば、約６〜約１２）個のアミノ酸残基の長さを有するアミノ酸配列から構成され、アミノ酸残基は、グリシン、セリン、アルギニン、及びアラニンから選択される；例えば、リンカー及び／または接続ペプチドは、配列番号２１、２２、３３、及び５３のいずれかから選択される。
【００９６】
一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ���  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する２つの抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第一の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択の第一のリンカーを介して接続し、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第二の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択の第二のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；第一の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続しており、第二の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、ＣＤ３ε（例えば、ｈｕＣＤ３εまたはｃｙｎｏＣＤ３ε）のＮ末端、例えばＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ���ｃＦｖのＶＨは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、接続ペプチドによって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＨ１及びＣＬは、約１〜約５（例えば約１、２、３、４、または５のいずれか）個のジスルフィド結合、例えば、約２個のジスルフィド結合などのジスルフィド結合によって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＨ１は、配列番号１８のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＬは、配列番号１９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖ間に位置するリンカー、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬ間に位置する接続ペプチドは、約２〜約３０（例えば、約６〜約１２）個のアミノ酸残基の長さを有するアミノ酸配列から構成され、アミノ酸残基は、グリシン、セリン、アルギニン、及びアラニンから選択される；例えば、リンカー及び／または接続ペプチドは、配列番号２１、２２、３３、及び５３のいずれかから選択される。
【００９７】
一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号７のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号４０のアミノ酸配列を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号７のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号４０のアミノ酸配列を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１６のアミノ酸配列を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号７のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号４０のアミノ酸配列を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１６のアミノ酸配列を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する２つの抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第一の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択の第一のリンカーを介して接続し、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第二の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択の第二のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号７のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号４０のアミノ酸配列を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖの各々がＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖの各々がＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１６のアミノ酸配列を含み；第一の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続しており、第二の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、ＣＤ３ε（例えば、ｈｕＣＤ３εまたはｃｙｎｏＣＤ３ε）のＮ末端、例えばＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、接続ペプチドによって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＨ１及びＣＬは、約１〜約５（例えば約１、２、３、４、または５のいずれか）個のジスルフィド結合、例えば、約２個のジスルフィド結合などのジスルフィド結合によって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＨ１は、配列番号１８のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＬは、配列番号１９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖ間に位置するリンカー、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬ間に位置する接続ペプチドは、約２〜約３０（例えば、約６〜約１２）個のアミノ酸残基の長さを有するアミノ酸配列から構成され、アミノ酸残基は、グリシン、セリン、アルギニン、及びアラニンから選択される；例えば、リンカー及び／または接続ペプチドは、配列番号２１、２２、３３、及び５３のいずれかから選択される。
【００９８】
一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含むＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰを提供し、第一のポリペプチドは、配列番号２３、２８、３５、５８及び５９のいずれかのアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含む、及び／または第二のポリペプチドは、配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、以下：配列番号２３のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチド；及び配列番号２７のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチドを含む、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：配列番号２８または５８のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチド；及び配列番号２７のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチドを含む、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰを提供する。一部の実施形態では、以下：配列番号３５または５９のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチド；及び配列番号２７のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチドを含む、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰを提供する。
【００９９】
本発明はさらに、本明細書に記載のＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰのいずれかを含む融合タンパク質、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰコンジュゲート（例えば、小分子薬物コンジュゲート）、または本明細書に記載のＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰのいずれかを発現する単離細胞を提供する。
【０１００】
抗ＣＤ３結合ドメイン
本発明のＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）は、ＣＤ３（例えば、ヒトＣＤ３、またはカニクイザルＣＤ３）を特異的に認識する１つまたは２つの抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、抗腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、抗腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、２つの抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み、第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、抗腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続しており、第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、抗腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している。
【０１０１】
一部の実施形態では、本明細書に記載のＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）は、抗腫瘍抗原Ｆａｂ単独と比較して、ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期が増加している。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、個々の抗腫瘍抗原Ｆａｂの少なくとも約１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０倍、またはそれ以上の半減期を有する。
【０１０２】
「ＣＤ３」は、当該技術分野では、六鎖の多タンパク質複合体として知られている（Ａｂｂａｓ  ａｎｄ  Ｌｉｃｈｔｍａｎ，２００３；Ｊａｎｅｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．，ｐ１７２  ａｎｄ  １７８，１９９９を参照されたい）。哺乳動物では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体は、ＣＤ３δ鎖、ＣＤ３γ鎖、２本のＣＤ３ε鎖、及びＣＤ３ζ鎖のホモ二量体を含む。ＣＤ３δ、ＣＤ３γ、及びＣＤ３ε鎖は、単一の免疫グロブリンドメインを含有する免疫グロブリンスーパーファミリーの高度に関連した細胞表面タンパク質である。ＣＤ３δ、ＣＤ３γ、及びＣＤ３ε鎖の膜貫通領域は、負に荷電しており、これは、正に荷電したＴＣＲ鎖とこれらの鎖とが会合するのを可能にする特徴である。ＣＤ３δ、ＣＤ３γ、及びＣＤ３ε鎖の細胞内尾部は各々、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフまたは「ＩＴＡＭ」として知られる単一の保存モチーフを含有するが、各ＣＤ３ζ鎖は３つ有している。理論に縛られないが、ＩＴＡＭは、ＴＣＲ複合体のシグナル伝達能にとって重要であると考えられている。本明細書中で使用する場合、ＣＤ３は、ヒト、霊長類、マウス、ラット、または他の哺乳動物を含む様々な動物種に由来し得る。一部の実施形態では、ＣＤ３は、ヒトＣＤ３（「ｈｕＣＤ３」）である。一部の実施形態では、ＣＤ３は、カニクイザルＣＤ３（「ｃｙｎｏＣＤ３」）である。
【０１０３】
一部の実施形態では、ＢＳＡＰの抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、個々のＣＤ３鎖、例えばＣＤ３δ鎖、ＣＤ３γ鎖、またはＣＤ３ε鎖を特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、２つ以上の個々のＣＤ３鎖から形成される複合体（例えば、複数のＣＤ３ε鎖の複合体、ＣＤ３γ鎖及びＣＤ３ε鎖の複合体、ＣＤ３δ鎖及びＣＤ３ε鎖の複合体、または他のＣＤ３鎖組み合わせ）に特異的に結合する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＣＤ３ε鎖（例えば、ｈｕＣＤ３εまたはｃｙｎｏＣＤ３ε）に特異的に結合する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＣＤ３εのＮ末端に特異的に結合する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープに特異的に結合する。
【０１０４】
一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ヒト及び／または非ヒト霊長類（例えばカニクイザル）ＣＤ３に特異的に結合する。サルＣＤ３に対して交差反応性を有する例示的な抗ヒトＣＤ３抗体には、限定されないが、ＳＰ３４マウスモノクローナル抗体が含まれる（例えば、Ｐｒｅｓｓａｎｏ，Ｓ．Ｔｈｅ  ＥＭＢＯ  Ｊ．４：３３７−３４４，１９８５；Ａｌａｒｃｏｎ，Ｂ．ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：９０３−９１２，１９９１；Ｓａｌｍｅｒｏｎ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：３０４７−５２，１９９１；Ｙｏｓｈｉｎｏ  Ｎ．ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ．Ａｎｉｍ  ４９：９７−１１０，２０００；Ｃｏｎｒａｄ  Ｍ  Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  ７１Ａ：９２５−３３，２００７；及びＹａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：１０９７−１１００：１９８６を参照されたい）。サルＣＤ３（例えばカニクイザル）に対する交差反応性を有する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を有するＢＳＡＰは、非ヒト霊長類における毒性学研究を促進し得、このことは、チンパンジーにおいてまたは代理分子を使用した毒性学研究を実施する必要なく、ヒト臨床試験の候補者のためのより適切な安全性評価を提供し得る。
【０１０５】
一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、非ヒト霊長類に対して交差反応性を有さない抗ＣＤ３抗体に由来する。例示的な抗ＣＤ３抗体としては、Ｃｒｉｓ−７モノクローナル抗体（Ｒｅｉｎｈｅｒｚ，Ｅ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ），Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  ｔｙｐｉｎｇ  ＩＩ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，（１９８６））、ＢＣ３モノクローナル抗体（Ａｎａｓｅｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７２：１６９１）、ＯＫＴ３（Ｏｒｔｈｏ  ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ（１９８５）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３１３：３３７）及びその誘導体、例えばＯＫＴ３  ａｌａ−ａｌａ（Ｈｅｒｏｌｄ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１：４０９）、ビシリズマブ（Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｂｌｏｏｄ  ９９：２７１２）、ならびに１４５−２Ｃ１１モノクローナル抗体（Ｈｉｒｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：３７６６）が挙げられる。本明細書で企図されるさらなるＣＤ３結合分子には、ＵＣＨＴ−１（Ｂｅｖｅｒｌｅｙ，Ｐ  Ｃ  ａｎｄ  Ｃａｌｌａｒｄ，Ｒ．Ｅ．（１９８１）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１：３２９−３３４）及びＷＯ２００４／１０６３８０、ＷＯ２０１０／０３７８３８、ＷＯ２００８／１１９５６７、ＷＯ２００７／０４２２６１、またはＷＯ２０１０／０１５０９１８に記載のＣＤ３結合分子が含まれる。
【０１０６】
一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、抗原結合フラグメントであり、任意の好適な抗ＣＤ３抗体に由来することができる。本発明では、任意の形態の抗原結合フラグメントを使用することができる。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−ｓｃＦｖ、Ｆｖ、免疫グロブリン（Ｉｇ）ＶＬドメイン、Ｉｇ  ＶＨドメイン、Ｉｇ  ＶＬドメイン及びＶＨドメイン、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、小分子抗体（ミニボディ）、二機能性抗体（ダイアボディ）、ラクダ科抗体ＶＨＨ（ラクダ科ＶＨＨ）、ｄＡｂ（ドメイン抗体）、例えば単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、アンキリンリピートならびに他のタンパク質足場に由来する他の遺伝子特異的結合ドメインからなる群から選択され得る。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗原結合フラグメントは、ヒト化されている。一部の実施形態では、抗原結合フラグメントは、キメラである。一部の実施形態では、抗原結合フラグメントは、マウス、ラット、サルまたはウサギのモノクローナル抗体に由来する。一部の実施形態では、抗原結合フラグメントは、例えば、ファージディスプレイ、酵母ディスプレイ、またはヒトＩｇ遺伝子を担持するトランスジェニックマウスを使用して開発された完全ヒト抗体に由来する。
【０１０７】
一部の実施形態では、本発明の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＣＤ３に、≦１μＭ、例えば≦１００ｎＭ、好ましくは≦１０ｎＭ、より好ましくは≦１ｎＭの平衡結合定数（Ｋｄ）で結合する。例えば、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＫｄ値は、約≦１ｎＭ〜約１ｐＭの範囲である。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ヒトＣＤ３に、約１×１０−９Ｍ〜約１×１０−７Ｍ、例えば２．３５×１０−８ＭのＫｄで結合する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、サル（例えば、カニクイザル）ＣＤ３に、約１×１０−９Ｍ〜約１×１０−７Ｍ、例えば１．２９×１０−８ＭのＫｄで結合する。
【０１０８】
一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＶＨ及びＶＬを含む抗原結合フラグメントである。当該技術分野で公知の任意の抗ＣＤ３抗体のＶＨ及び／またはＶＬは、本明細書に記載の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＨ及び／またはＶＬとして使用され得る。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＣＤ３に特異的に結合する完全長抗体のＶＨ及びＶＬの１、２、３、４、５、または６つ全てのＨＶＲを含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号１５からの１つ、２つ、もしくは３つのＨＶＲを含むＶＨを含む、及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号１６からの１つ、２つ、もしくは３つのＨＶＲを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨを含む；及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＨは、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも約８５％（例えば少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＬは、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも約８５％（例えば少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＨは、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＬは、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＨは、配列番号１５からの３つのＨＶＲを含み、配列番号１５のものとは異なるアミノ酸残基がフレームワーク領域（ＦＲ）に存在する；及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＬは、配列番号１６からの３つのＨＶＲを含み、配列番号１６のものとは異なるアミノ酸残基がＦＲに存在する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＨは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＬは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。
配列番号９（抗ＣＤ３  ＨＶＲ−Ｈ１）
ＴＹＡＭＮ
配列番号１０（抗ＣＤ３  ＨＶＲ−Ｈ２）
ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤ
配列番号１１（抗ＣＤ３  ＨＶＲ−Ｈ３）
ＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹ
配列番号１２（抗ＣＤ３  ＨＶＲ−Ｌ１）
ＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮ
配列番号１３（抗ＣＤ３  ＨＶＲ−Ｌ２）
ＧＴＮＫＲＡＰ
配列番号１４（抗ＣＤ３  ＨＶＲ−Ｌ３）
ＡＬＷＹＳＮＬＷＶ
配列番号１５（抗ＣＤ３  ＶＨ；下線が引かれた配列は、それぞれ、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３である）
【化１】
2021535758.tif 000004
配列番号１６（抗ＣＤ３  ＶＬ；下線が引かれた配列は、それぞれ、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３である）
【化２】
2021535758.tif 000005
【０１０９】
一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、ＣＤ３に特異的に結合するｓｃＦｖである（本明細書では抗ＣＤ３  ｓｃＦｖとも称する）。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、グリシン及び／またはセリンを含む可撓性接続ペプチドなどの接続ペプチドを介して互いに接続している。以下の「リンカー」セクションに記載されているペプチドリンカーはいずれも、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬ間の接続ペプチドとして使用することができる。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、互いに直接接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、構成：Ｎ’−ＶＨ−ＶＬ−Ｃ’を含む融合ポリペプチドであり、Ｌは任意選択の接続ペプチドである。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、構成：Ｎ’−ＶＬ−ＶＨ−Ｃ’を含む融合ポリペプチドであり、Ｌは任意選択の接続ペプチドである。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。
配列番号１７（抗ＣＤ３  ｓｃＦｖ；ＶＨ−Ｌ−ＶＬ、接続ペプチドＬ配列は太字及びイタリック体である）
【化３】
2021535758.tif 000006
【０１１０】
抗腫瘍抗原Ｆａｂ
本明細書に記載のＢＳＡＰ内の抗腫瘍抗原Ｆａｂは、腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）を特異的に認識することができる。
【０１１１】
一部の実施形態では、本明細書に記載のＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）は、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）単独と比較して、ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期が増加している。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、個々の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）の少なくとも約１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０倍、またはそれ以上の半減期を有する。
【０１１２】
一部の実施形態では、抗腫瘍抗原Ｆａｂは、ヒト及び／または非ヒト霊長類（例えばカニクイザル）腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）に特異的に結合する。サル（例えばカニクイザル）腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）に対して交差反応性を有する抗腫瘍抗原Ｆａｂ（例えば、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ）を含む本明細書に記載のＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）は、非ヒト霊長類における毒性学研究を促進し得、このことは、チンパンジーにおいてまたは代理分子を使用した毒性学研究を実施する必要なく、ヒト臨床試験の候補者のためのより適切な安全性評価を提供し得る。一部の実施形態では、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）Ｆａｂは、非ヒト霊長類に対して交差反応性を有さない抗体に由来する。
【０１１３】
本明細書に記載の抗腫瘍抗原Ｆａｂは、当該技術分野で公知の様々な方法を使用して生成することができる（例えば、米国特許第６，２９１，１６１号；同第６，２９１，１５８号を参照されたい）。Ｆａｂの供給源には、ヒト、ラクダ科（ラクダ、ヒトコブラクダ、またはラマから；Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ，３６３：４４６及びＮｇｕｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７５：４１３）、サメ（Ｒｏｕｘ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）９５：１１８０４）、魚類（Ｎｇｕｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ，５４：３９）、げっ歯類、鳥類、またはヒツジを含む、様々な種からのモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが含まれる。一部の実施形態では、Ｆａｂフラグメントは、ヒト抗体またはヒト化抗体に由来する。
【０１１４】
一部の実施形態では、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）Ｆａｂフラグメントは、免疫グロブリン重鎖（ＨＣ）の１つの定常領域（ＣＨ１）及び１つの可変領域（ＶＨ）、ならびに免疫グロブリン軽鎖（ＬＣ）の１つの定常領域（ＣＬ）及び１つの可変領域（ＶＬ）を含む。一部の実施形態では、ＣＨ１及びＶＨは、ＶＬ及びＣＬとヘテロ二量体化し、重鎖定常領域及び軽鎖定常領域間のジスルフィド結合によって共有連結している。一部の実施形態では、抗腫瘍抗原Ｆａｂは、基本構造ＮＨ２−ＶＬ−ＣＬ−Ｓ−Ｓ−ＣＨ１−ＶＨ−ＮＨ２（−Ｓ−Ｓ−は、ＣＬ及びＣＨ１間のジスルフィド結合である）を有する。一部の実施形態では、抗腫瘍抗原ＦａｂのＣＨ１及びＣＬは、１つまたは複数のジスルフィド結合によって接続している。一部の実施形態では、抗腫瘍抗原ＦａｂのＣＨ１及びＣＬは、少なくとも１個のジスルフィド結合、例えば少なくとも約２、３、４、５、またはそれ以上のジスルフィド結合によって接続している。一部の実施形態では、ジスルフィド結合の数は約２個である。一部の実施形態では、抗腫瘍抗原Ｆａｂ内（例えばＣＨ１またはＣＬ内）のシステイン残基は、ジスルフィド結合を導入するように操作される。一部の実施形態では、抗腫瘍抗原ＦａｂのＣＨ１及びＣＬのＣ末端は、ＣＰＰＣ（配列番号５５）またはＣＰＰＣＳ（配列番号５６）のアミノ酸配列を含み、これは、分子間ジスルフィド結合（複数可）を形成するための共有結合領域として機能し得る。
【０１１５】
一部の実施形態では、ＢＳＡＰの抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）Ｆａｂは、ジスルフィド結合を含まない。例えば、重鎖及び軽鎖は、ジスルフィド結合を必要とせずに安定して相互作用するように操作され得る。一部の実施形態では、重鎖または軽鎖を操作して、システイン残基を除去することができ、重鎖及び軽鎖は、依然として安定して相互作用し、Ｆａｂとして機能する。一部の実施形態では、突然変異は、重鎖及び軽鎖間の安定した相互作用を促進するために作成される。例えば、「ノブイントゥホール」操作戦略を使用して、Ｆａｂの重鎖及び軽鎖間の二量体化を促進することができる（例えば、１９９６  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，９：６１７−６２１を参照されたい）。特定の目的、例えば、ＣＨ１及び／またはＣＬの定常ドメインにおけるアミノ酸変化、ならびに精製のためのジスルフィド結合の除去またはタグの追加などのために設計された変異体Ｆａｂフラグメントも本明細書での使用が企図される。
【０１１６】
一部の実施形態では、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）ＦａｂのＣＨ１及び／またはＣＬのＣ末端は、追加の融合タンパク質と接続することができる。例えば、一部の実施形態では、抗腫瘍抗原ＦａｂのＣＨ１のＣ末端は、Ｆｃモノマー（ＣＨ２−ＣＨ３）のＮ末端に、任意選択のリンカーを介して接続して、Ｎ’−ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３−Ｃ’及びＮ’−ＶＬ−ＣＬ−Ｃ’の二本鎖構造を形成する。
【０１１７】
一部の実施形態では、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）Ｆａｂ内の可変領域及び定常領域の構成は、天然のＦａｂに見出されるものとは異なってよい。一部の実施形態では、可変領域及び定常領域の配向は、１本の鎖においてＶＨ−ＣＬ、及び別の鎖においてＶＬ−ＣＨ１であり得る（例えば、Ｓｈａｅｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１），ＰＮＡＳ，１０８：１１１８７０−９２を参照されたい）。
【０１１８】
一部の実施形態では、ＢＳＡＰ内の抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）Ｆａｂは、モノクローナル抗体に由来する。好適なモノクローナル抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＥならびにそのサブタイプ、例えばｌｇＧ１、ｌｇＧ２、ｌｇＧ３、及びｌｇＧ４を含む任意のタイプのものであり得る。一部の実施形態では、軽鎖ドメインは、カッパまたはラムダ鎖に由来し得る。一部の実施形態では、抗腫瘍抗原Ｆａｂは、組み換え的に設計される。
【０１１９】
一部の実施形態では、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）Ｆａｂは、ヒト免疫グロブリンＣＨ１を含む。一部の実施形態では、ヒト免疫グロブリンＣＨ１は、配列番号１８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗腫瘍抗原Ｆａｂは、ヒト軽鎖カッパ定常領域を含む。一部の実施形態では、ヒト軽鎖カッパ定常領域は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗腫瘍抗原Ｆａｂは、ヒト軽鎖ラムダ定常領域を含む。
配列番号１８（ヒトＣＨ１）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳ
配列番号１９（ヒトカッパＣＬ）
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥ
【０１２０】
一部の実施形態では、抗腫瘍抗原Ｆａｂは、腫瘍抗原を特異的に認識する。一部の実施形態では、腫瘍抗原は、ＣＤ１９、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３７、ＣＤ４０またはＣＤ７４などを含むがこれらに限定されないＢ細胞表面抗原である。一部の実施形態では、腫瘍抗原は、ＣＤ１９であり、抗腫瘍抗原Ｆａｂは、抗ＣＤ１９  Ｆａｂである。一部の実施形態では、抗腫瘍抗原Ｆａｂは、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩｂ、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＣＴＬＡ−４、ＦＡＳ、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＧＩＴＲ、ＬＴβＲ、ＴＬＲ、ＴＲＡＩＬ受容体１、ＴＲＡＩＬ受容体２、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、またはＥｒｂＢ３を含むがこれらに限定されない、がん治療に関連する他の細胞表面抗原を特異的に認識することができる。
【０１２１】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）Ｆａｂは、腫瘍抗原に、≦１μＭ、例えば≦１００ｎＭ、好ましくは≦１０ｎＭ、より好ましくは≦１ｎＭの平衡結合定数（Ｋｄ）で結合する。例えば、本明細書に記載の抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）Ｆａｂは、約≦１ｎＭ〜約１ｐＭの範囲のＫｄ値を有する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  Ｆａｂは、ヒトＣＤ１９に、約１×１０−９Ｍ〜約１×１０−７Ｍ、例えば１．８２×１０−８ＭのＫｄで結合する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  Ｆａｂは、サル（例えば、カニクイザル）ＣＤ１９に、約１×１０−９Ｍ〜約１×１０−７Ｍ、例えば２．９６×１０−８ＭのＫｄで結合する。
【０１２２】
本発明の抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）Ｆａｂは、広く分布している腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）の機能的活性を、完全にまたは部分的に調節、遮断、阻害、減少、拮抗、中和またはその他の方法で干渉し得る。抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）Ｆａｂによって結合されない場合と比較して抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）Ｆａｂの存在下で、腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）の機能的活性が少なくとも約９５％（例えば約９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のいずれか）減少する場合、抗腫瘍抗原Ｆａｂは、腫瘍抗原の機能的活性を、完全に調節、遮断、阻害、減少、拮抗、中和または干渉することができると考えられる。抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）Ｆａｂによって結合されない場合と比較して抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）Ｆａｂの存在下で、腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）の機能的活性が少なくとも約５０％（例えば約５５％、６０％、７５％、８０％、８５％、または９０％のいずれか）減少する場合、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）Ｆａｂは、腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）の機能的活性を、有意に調節、遮断、阻害、減少、拮抗、中和または干渉することができると考えられる。抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）Ｆａｂによって結合されない場合と比較して抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）Ｆａｂの存在下で、腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）の機能的活性が約９５％未満減少する（例えば約１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７５％、８０％、８５％、または９０％のいずれか減少する）場合、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）Ｆａｂは、腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）の機能的活性を、部分的に調節、遮断、阻害、減少、拮抗、中和または干渉することができると考えられる。
【０１２３】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）Ｆａｂは、特定の配列またはこれらの配列のある特定の変異体を含む。一部の実施形態では、変異体配列におけるアミノ酸置換は、対応する腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）に結合する抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）Ｆａｂの能力を実質的に減少させない。対応する腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）に対する抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）Ｆａｂの結合親和性あるいは他の特性、例えば特異性、免疫原性、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）もしくは補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）、及び／または腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）変異体との交差反応性を実質的に改善する修飾も企図される。
【０１２４】
Ｂリンパ球抗原ＣＤ１９は、ＣＤ１９分子（分化抗原群１９）、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ４、Ｔ細胞表面抗原Ｌｅｕ−１２及びＣＶＩＤ３としても知られている。ヒトでは、ＣＤ１９は、形質細胞を除く全てのＢ系列細胞、及び濾胞性樹状細胞で発現する。ＣＤ１９には、１）細胞質シグナル伝達タンパク質を膜に動員するアダプタータンパク質として作用する；及び２）ＣＤ１９／ＣＤ２１複合体内で機能して、Ｂ細胞受容体シグナル伝達経路の閾値を低減するという、２つの主要な役割がある。ＣＤ１９は、正常Ｂリンパ球及び悪性Ｂリンパ球の両方で発現し、Ｂ細胞腫瘍関連抗原と見なされている。例えば、ＣＤ１９は、Ｂリンパ球発生のバイオマーカー、がん診断マーカー、またはＢ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、及び慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）などの免疫療法の標的として機能することができる。Ｂリンパ球抗原ＣＤ１９は、ＣＤ１９分子（分化抗原群１９）、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ４、Ｔ細胞表面抗原Ｌｅｕ−１２及びＣＶＩＤ３としても知られている。ヒトでは、形質細胞及び濾胞性樹状細胞を除いて、ＣＤ１９は全てのＢ系列細胞で発現する。ＣＤ１９は、ヒトＢ細胞において、１）細胞質シグナル伝達タンパク質を膜に動員するアダプタータンパク質として作用する；及び２）ＣＤ１９／ＣＤ２１複合体内で機能して、Ｂ細胞受容体シグナル伝達経路の閾値を低減するという、２つの主要な役割を果たす。ＣＤ１９が全てのＢ細胞に存在するため、Ｂリンパ球発生またはリンパ腫診断に関するバイオマーカーとして機能することができる、及び白血病免疫療法の標的として機能することができる。ＣＤ１９は、正常Ｂリンパ球及び悪性Ｂリンパ球の両方で発現し、Ｂ細胞腫瘍関連抗原、例えば、Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、及び慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）のバイオマーカーと見なされている。
【０１２５】
一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  Ｆａｂは、細胞の表面上に存在するＣＤ１９に特異的に結合する。一部の実施形態では、細胞は、がん細胞である。一部の実施形態では、がん細胞は、固形腫瘍である。一部の実施形態では、がん細胞は、血液がんなどの転移性がん細胞、例えば、ＡＬＬ、ＣＬＬ、ＭＣＬ、Ｂ細胞リンパ腫などである。
【０１２６】
一部の実施形態では、ＢＳＡＰの抗腫瘍抗原Ｆａｂは、ＣＤ１９に、抗腫瘍抗原Ｆａｂ、すなわち抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨ及びＶＬ間に形成された抗原結合部位を介して特異的に結合する。抗原結合部位は、免疫グロブリン重鎖の少なくとも１つ（例えば１、２、または３つ）のＨＶＲ及び／または免疫グロブリン軽鎖の少なくとも１つ（例えば１、２、または３つ）のＨＶＲを含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  Ｆａｂは、ＣＤ１９に特異的に結合する完全長抗体のＶＨ及びＶＬ配列の１、２、３、４、５、または６つ全てのＨＶＲを含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  Ｆａｂは、抗ＣＤ１９モノクローナル抗体、例えば、Ｂ４３、ＭＥＤＩ−５５１、ＣＬＢ−ＣＤ１９、４Ｇ７、ＳＪ２５−Ｃ１ＬＴ１９、Ｌｅｕ−１２、ＨＤ３７、または他の公知の抗ヒトＣＤ１９モノクローナル抗体に由来する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  Ｆａｂの１、２、３、４、５または６つ全てのＨＶＲは、公知の抗ＣＤ１９モノクローナル抗体に由来する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨ及び／またはＶＬは、公知の抗ＣＤ１９モノクローナル抗体に由来する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂはＶＨを含み、ＶＨは、配列番号７からの１つ、２つ、もしくは３つのＨＶＲを含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂはＶＬを含み、ＶＬは、配列番号８もしくは４０からの１つ、２つ、もしくは３つのＨＶＲを含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  Ｆａｂは、配列番号７からの３つのＨＶＲを含むＶＨを含む、及び／または抗ＣＤ１９  Ｆａｂは、配列番号８もしくは４０からの３つのＨＶＲを含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  Ｆａｂは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨを含む；及び／または抗ＣＤ１９  Ｆａｂは、配列番号４もしくは３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５もしくは３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６もしくは３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  Ｆａｂは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨを含む；及び／または抗ＣＤ１９  Ｆａｂは、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  Ｆａｂは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨを含む；及び／または抗ＣＤ１９  Ｆａｂは、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも約８５％（例えば少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％���９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号８もしくは４０のアミノ酸配列と少なくとも約８５％（例えば少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号８もしくは４０のアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号７からの３つのＨＶＲを含み、配列番号７のものとは異なるアミノ酸残基がフレームワーク領域（ＦＲ）に存在する；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号８もしくは４０からの３つのＨＶＲを含み、配列番号８もしくは４０のものとは異なるアミノ酸残基がＦＲに存在する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号８もしくは４０のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む。
配列番号７（抗ＣＤ１９  ＶＨ；下線が引かれた配列は、それぞれ、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３である）
【化４】
2021535758.tif 000007
抗ＣＤ１９  ＨＶＲ−Ｈ１：ＳＹＶＭＨ（配列番号１）
抗ＣＤ１９  ＨＶＲ−Ｈ２：ＷＩＧＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹ（配列番号２）
抗ＣＤ１９  ＨＶＲ−Ｈ３：ＧＴＹＹＹＧＳＲＶＦＤＹ（配列番号３）
配列番号８（抗ＣＤ１９  ＶＬ１．２；下線が引かれた配列は、それぞれ、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３である）
【化５】
2021535758.tif 000008
抗ＣＤ１９  ＶＬ１．２  ＨＶＲ−Ｌ１：ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）
抗ＣＤ１９  ＶＬ１．２  ＨＶＲ−Ｌ２：ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）
抗ＣＤ１９  ＶＬ１．２  ＨＶＲ−Ｌ３：ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）
配列番号４０（抗ＣＤ１９  ＶＬ１．１；下線が引かれた配列は、それぞれ、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３である）
【化６】
2021535758.tif 000009
抗ＣＤ１９  ＶＬ１．１  ＨＶＲ−Ｌ１：ＲＳＳＫＳＬＬＮＳＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号３７）
抗ＣＤ１９  ＶＬ１．１  ＨＶＲ−Ｌ２：ＲＭＳＮＬＡＳ（配列番号３８）
抗ＣＤ１９  ＶＬ１．１  ＨＶＲ−Ｌ３：ＭＱＨＬＥＹＰＬＴ（配列番号３９）
【０１２７】
リンカー
本明細書に記載のＢＳＡＰは、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）間にリンカー（例えば、ペプチドリンカー、または化学的にカップリングする）を含み得る。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、ＶＨ及びＶＬを含むｓｃＦｖであり、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、「接続ペプチド」に接続している。本明細書に記載の任意のリンカー（例えば、接続ペプチド、ペプチドリンカー、または化学的にカップリングする）を、本明細書に記載のＢＳＡＰ構造／モジュールのいずれかにおいて、例えば、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）ＦａｂのＶＨ及びＣＨ１間のリンカー、及び／または抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）ＦａｂのＶＬ及びＣＬ間のリンカーとして；前述の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬ間の接続ペプチドとして；抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）間に位置するリンカーとして；あるいはＢＳＡＰ及び追加のポリペプチド間のリンカーとして、例えば、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）ＦａｂのＣＨ１のＣ末端及び追加のＦｃフラグメントＣＨ２−ＣＨ３のＮ末端間に位置するリンカーとして、１つに接続するために使用することができる。
【０１２８】
リンカーは、任意の長さのペプチドリンカーであることができる。一部の実施形態では、リンカー（例えばペプチドリンカー、または接続ペプチド）は、約１アミノ酸〜約１０アミノ酸長、約２１アミノ酸〜約３０アミノ酸長、約１アミノ酸〜約２０アミノ酸長、約１アミノ酸〜約３０アミノ酸長、約１１アミノ酸〜約３０アミノ酸長、約２アミノ酸〜約２０アミノ酸長、約２アミノ酸〜約１９アミノ酸長、約３アミノ酸〜約１８アミノ酸長、約４アミノ酸〜約１７アミノ酸長、約４アミノ酸〜約１６アミノ酸長、約４アミノ酸〜約１５アミノ酸長、約５アミノ酸〜約１４アミノ酸長、約５アミノ酸〜約１３アミノ酸長、約６アミノ酸〜約１２アミノ酸長、約６アミノ酸〜約１１アミノ酸長、約６アミノ酸〜約１０アミノ酸長、約４アミノ酸〜約９アミノ酸長、約４アミノ酸〜約８アミノ酸長、または約５アミノ酸〜約７アミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカー（例えばペプチドリンカー、または接続ペプチド）は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０のいずれかのアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカー（例えば、ペプチドリンカー、または接続ペプチド）は、約２〜約３０（例えば、約６〜約１２）個のアミノ酸残基の長さを有するアミノ酸配列から構成される。一部の実施形態では、リンカー（例えば、ペプチドリンカー、または接続ペプチド）は、６アミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカー（例えば、ペプチドリンカー、または接続ペプチド）は、１２アミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカー（例えば、ペプチドリンカー）のＮ末端は、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＣ末端に共有連結しており、リンカー（例えば、ペプチドリンカー）のＣ末端は、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）ＦａｂのＶＨ及び／またはＶＬのＮ末端に共有連結している。
【０１２９】
リンカー（例えば、ペプチドリンカー、接続ペプチド）は、天然に存在する配列または天然に存在しない配列を有することができる。例えば、重鎖のみ抗体のヒンジ領域に由来する配列は、リンカー（例えば、ペプチドリンカー、接続ペプチド）として使用することができる。例えば、ＷＯ１９９６／３４１０３を参照されたい。一部の実施形態では、ペプチドリンカーまたは接続ペプチドは、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４ヒンジである。一部の実施形態では、ペプチドリンカーまたは接続ペプチドは、突然変異型ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４ヒンジである。一部の実施形態では、リンカー（例えば、ペプチドリンカー、接続ペプチド）は、可撓性リンカーである。例示的な可撓性リンカーとしては、グリシンポリマー（Ｇ）ｎ（配列番号４１）、グリシン−セリンポリマー（例えば、（ＧＳ）ｎ（配列番号４２）、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（配列番号４３）、（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号４４）、または（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号４５）を含む、この場合、ｎは少なくとも１の整数である）、グリシン−アラニンポリマー、アラニン−セリンポリマー、及びその他当該技術分野で知られている可撓性リンカーが挙げられる。グリシン及びグリシン−セリンポリマーは、比較的構造化されていないため、構成要素間の中立的なテザーとしての役割を果たすことが可能であり得る。グリシンは、アラニンよりも有意に多くのファイ−ファイスペースにアクセスし、より長い側鎖を有する残基よりも制限が少ない（例えば、Ｓｃｈｅｒａｇａ，Ｒｅｖ．Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｃｈｅｍ．１１  １７３−１４２（１９９２）を参照されたい）。例示的な可撓性リンカーとしては、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（配列番号４６）、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（配列番号４７）、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（配列番号４８）、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（配列番号４９）、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（配列番号５０）、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（配列番号５１）、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（配列番号５２）、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（配列番号２０）、Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（配列番号２１）、Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（配列番号２２）、Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（配列番号３３）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号５３）、ＧＧＧＧＳ（配列番号５４）などが挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）ＦａｂのＶＨ及び／またはＶＬならびに抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）間に位置するリンカーは、ＳＧＧＧＧＳ（配列番号２１）、ＧＲＡＧＧＧＧＡＧＧＧＧ（配列番号２２）、またはＧＲＡＧＧＧ（配列番号３３）である。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬ間に位置する接続ペプチドは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号５３）である。当業者は、目的のＢＳＡＰ構造を提供するために、リンカーが可撓性リンカーならびにより可撓性の低い構造を与える１つまたは複数の部分を含むことができるように、ＢＳＡＰの設計が全部または部分的に可撓性であるリンカー（例えば、ペプチドリンカー、接続ペプチド）を含むことができることを認識するだろう。
【０１３０】
一部の実施形態では、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ）間に位置するリンカー、または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬ間に位置する接続ペプチドは、安定したリンカーである（プロテアーゼ、特にＭＭＰによって切断されない）。
【０１３１】
一部の実施形態では、リンカー（例えば、ペプチドリンカー、または接続ペプチド）は、切断可能なリンカーである。一部の実施形態では、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）ＦａｂのＶＨ／ＶＬ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）間のリンカーは、プロテアーゼ基質切断配列、例えば、ＭＭＰ基質切断配列を含む。ＭＭＰによって切断できる基質配列は、広く研究されている。例えば、ＰＬＧＬＡＧ（配列番号３４）の周知のペプチド配列は、ほとんどのＭＭＰによって切断できる。一部の実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−９、またはそれらの組み合わせによって認識される。
【０１３２】
一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、構造：Ｎ’−抗ＣＤ３  ＶＨ−Ｌ１−抗ＣＤ３  ＶＬ−Ｌ２−抗ＣＤ１９  ＶＨ−ＣＨ１−Ｃ’を含み、第二のポリペプチドは、構造：Ｎ’−抗ＣＤ１９  ＶＬ−ＣＬ−Ｃ’を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、構造：Ｎ’−抗ＣＤ３  ＶＬ−Ｌ１−抗ＣＤ３  ＶＨ−Ｌ２−抗ＣＤ１９  ＶＨ−ＣＨ１−Ｃ’を含み、第二のポリペプチドは、構造：Ｎ’−抗ＣＤ１９  ＶＬ−ＣＬ−Ｃ’を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、構造：Ｎ’−抗ＣＤ１９  ＶＨ−ＣＨ１−Ｃ’を含み、第二のポリペプチドは、構造：Ｎ’−抗ＣＤ３  ＶＨ−Ｌ１−抗ＣＤ３  ＶＬ−Ｌ２−抗ＣＤ１９  ＶＬ−ＣＬ−Ｃ’を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、構造：Ｎ’−抗ＣＤ１９  ＶＨ−ＣＨ１−Ｃ’を含み、第二のポリペプチドは、以下の構造：Ｎ’−抗ＣＤ３  ＶＬ−Ｌ１−抗ＣＤ３  ＶＨ−Ｌ２−抗ＣＤ１９  ＶＬ−ＣＬ−Ｃ’を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、構造：Ｎ’−抗ＣＤ３  ＶＨ−Ｌ１−抗ＣＤ３  ＶＬ−Ｌ２−抗ＣＤ１９  ＶＨ−ＣＨ１−Ｃ’を含み、第二のポリペプチドは、構造：Ｎ’−抗ＣＤ３  ＶＨ−Ｌ１−抗ＣＤ３  ＶＬ−Ｌ２−抗ＣＤ１９  ＶＬ−ＣＬ−Ｃ’を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、構造：Ｎ’−抗ＣＤ３  ＶＬ−Ｌ１−抗ＣＤ３  ＶＨ−Ｌ２−抗ＣＤ１９  ＶＨ−ＣＨ１−Ｃ’を含み、第二のポリペプチドは、以下の構造：Ｎ’−抗ＣＤ３  ＶＬ−Ｌ１−抗ＣＤ３  ＶＨ−Ｌ２−抗ＣＤ１９  ＶＬ−ＣＬ−Ｃ’を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、構造：Ｎ’−抗ＣＤ３  ＶＨ−Ｌ１−抗ＣＤ３  ＶＬ−Ｌ２−抗ＣＤ１９  ＶＨ−ＣＨ１−Ｃ’を含み、第二のポリペプチドは、構造：Ｎ’−抗ＣＤ３  ＶＬ−Ｌ１−抗ＣＤ３  ＶＨ−Ｌ２−抗ＣＤ１９  ＶＬ−ＣＬ−Ｃ’を含む。Ｌ１及びＬ２は任意選択のリンカーであり（例えば、Ｌ１は接続ペプチドである）、本明細書に記載のリンカー形態のいずれかから選択され得る。Ｌ１及びＬ２は、同じまたは異なることができる。
【０１３３】
ゆえに、一部の実施形態では、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２３、２８、３５、５８、及び５９のいずれかのアミノ酸配列と少なくとも約８５％（例えば少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４または２７のアミノ酸配列と少なくとも約８５％（例えば少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２３、２８、３５、５８、及び５９のいずれかのアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４または２７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２８または５８のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号３５または５９のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２８または５８のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第一のポリペプチドは、配列番号３０、３２、３６、６０、及び６１のいずれかを含む核酸配列によってコードされる。一部の実施形態では、第二のポリペプチドは、配列番号２９または３１を含む核酸配列によってコードされる。
【０１３４】
一部の実施形態では、ＢＳＡＰの第一及び／または第二のポリペプチドのＣ末端は、分子間ジスルフィド結合を形成することができる共有結合領域ＣＰＰＣ（配列番号５５）またはＣＰＰＣＳ（配列番号５６）を含む。例えば、一部の実施形態では、分子間ジスルフィド結合を形成することができる共有結合領域は、抗腫瘍抗原ＦａｂのＣＨ１及びＣＬのＣ末端に位置している。一部の実施形態では、第一及び／または第二のポリペプチドのＮ末端またはＣ末端は、タンパク質精製のために、配列番号５７に示されるアミノ酸配列などのヒスチジンタグ（ＨＩＳタグ）を含み得る。例えば、一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＮ末端は、ヒスチジンタグと追加的に接続している。一部の実施形態では、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）ＦａｂのＣＨ１及び／またはＣＬのＣ末端は、ヒスチジンタグと追加的に接続している。一部の実施形態では、より良好な発現のために、ＢＳＡＰの第一及び／または第二のポリペプチドのＮ末端は、シグナルペプチド、例えば配列番号２５に示されるシグナルペプチド配列、または配列番号２６の核酸配列によってコードされるシグナルペプチドと追加的に接続している。
ＢＳＡＰ第一のポリペプチドアミノ酸配列（配列番号２３；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖ（ＶＨ−接続ペプチド−ＶＬ）−６ａａリンカー−抗ＣＤ１９  ＶＨ−ＣＨ１−ＣＰＰＣ−Ｓ；リンカーは太字、接続ペプチドは太字及びイタリック体である）
【化７】
2021535758.tif 000010
抗ＣＤ３  ｓｃＦｖ（ＶＨ−接続ペプチド−ＶＬ）−６ａａリンカー−抗ＣＤ１９  ＶＨ−ＣＨ１−ＣＰＰＣ−Ｓをコードする核酸配列（配列番号３０）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＡＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＴＡＡＣＡＣＣＴＡＣＧＣＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＧＣＡＣＧＣＡＴＡＡＧＡＡＧＴＡＡＡＴＡＴＡＡＴＡＡＴＴＡＴＧＣＡＡＣＡＴＡＴＴＡＴＧＣＣＧＡＴＴＣＡＧＴＧＡＡＡＧＡＣＣＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＧＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＴＧＡＧＡＣＡＴＧＧＧＡＡＣＴＴＣＧＧＴＡＡＴＡＧＣＴＡＣＧＴＴＴＣＣＴＧＧＴＴＴＧＣＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＡＡＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＴＴＣＡＧＧＴＧＧＣＧＧＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＧＧＴＧＧＴＧＧＧＴＣＣＧＧＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＴＣＴＣＡＧＧＣＴＧＴＧＧＴＧＡＣＴＣＡＧＧＡＧＣＣＣＴＣＡＣＴＧＡＣＴＧＴＧＴＣＣＣＣＡＧＧＡＧＧＧＡＣＡＧＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＴＧＴＣＧＣＴＣＡＡＧＴＡＣＴＧＧＧＧＣＴＧＴＴＡＣＡＡＣＴＡＧＴＡＡＣＴＡＴＧＣＣＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＣＡＣＣＣＡＧＧＧＧＴＣＴＧＡＴＴＧＧＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＡＡＧＣＧＡＧＣＴＣＣＡＧＧＴＡＣＣＣＣＴＧＣＣＣＧＧＴＴＣＴＣＡＧＧＣＴＣＣＣＴＣＣＴＴＧＧＧＧＧＣＡＡＡＧＣＴＧＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＧＴＣＡＧＧＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＣＧＡＧＧＣＴＧＡＧＴＡＴＴＡＣＴＧＣＧＣＴＣＴＡＴＧＧＴＡＣＡＧＣＡＡＣＣＴＣＴＧＧＧＴＧＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＡＣＣＧＴＣＣＴＡＡＧＴＧＧＣＧＧＴＧＧＡＧＧＡＴＣＴＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＣＣＣＣＧＡＧＣＴＡＡＴＣＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＧＣＡＧＣＧＴＧＡＡＧＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＴＣＣＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＣＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＣＧＧＣＴＡＣＡＴＣＡＡＣＣＣＣＴＡＣＡＡＣＧＡＴＧＧＣＡＣＣＡＡＧＴＡＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＡＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＧＧＡＧＣＧＡＧＧＡＣＡＧＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＧＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＡＧＣＣＧＧＧＴＧＴＴＣＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＣＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＣＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＣＣＡＣＣＧＴＧＣＴＣＡＴＡＧ
ＢＳＡＰ第一のポリペプチドアミノ酸配列（配列番号２８；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖ（ＶＨ−接続ペプチド−ＶＬ）−６ａａリンカー−抗ＣＤ１９  ＶＨ−ＣＨ１−ＣＰＰＣ−Ｈｉｓタグ；リンカーは太字、接続ペプチドは太字及びイタリック体である）
【化８】
2021535758.tif 000011
抗ＣＤ３  ｓｃＦｖ（ＶＨ−接続ペプチド−ＶＬ）−６ａａリンカー−抗ＣＤ１９  ＶＨ−ＣＨ１−ＣＰＰＣ−Ｈｉｓタグをコードする核酸（配列番号３２）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＡＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＴＡＡＣＡＣＣＴＡＣＧＣＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＧＣＡＣＧＣＡＴＡＡＧＡＡＧＴＡＡＡＴＡＴＡＡＴＡＡＴＴＡＴＧＣＡＡＣＡＴＡＴＴＡＴＧＣＣＧＡＴＴＣＡＧＴＧＡＡＡＧＡＣＣＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＧＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＴＧＡＧＡＣＡＴＧＧＧＡＡＣＴＴＣＧＧＴＡＡＴＡＧＣＴＡＣＧＴＴＴＣＣＴＧＧＴＴＴＧＣＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＡＡＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＴＴＣＡＧＧＴＧＧＣＧＧＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＧＧＴＧＧＴＧＧＧＴＣＣＧＧＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＴＣＴＣＡＧＧＣＴＧＴＧＧＴＧＡＣＴＣＡＧＧＡＧＣＣＣＴＣＡＣＴＧＡＣＴＧＴＧＴＣＣＣＣＡＧＧＡＧＧＧＡＣＡＧＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＴＧＴＣＧＣＴＣＡＡＧＴＡＣＴＧＧＧＧＣＴＧＴＴＡＣＡＡＣＴＡＧＴＡＡＣＴＡＴＧＣＣＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＣＡＣＣＣＡＧＧＧＧＴＣＴＧＡＴＴＧＧＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＡＡＧＣＧＡＧＣＴＣＣＡＧＧＴＡＣＣＣＣＴＧＣＣＣＧＧＴＴＣＴＣＡＧＧＣＴＣＣＣＴＣＣＴＴＧＧＧＧＧＣＡＡＡＧＣＴＧＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＧＴＣＡＧＧＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＣＧＡＧＧＣＴＧＡＧＴＡＴＴＡＣＴＧＣＧＣＴＣＴＡＴＧＧＴＡＣＡＧＣＡＡＣＣＴＣＴＧＧＧＴＧＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＡＣＣＧＴＣＣＴＡＧＧＧＣＧＣＧＣＣＧＧＣＧＧＴＧＧＡＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＣＣＣＣＧＡＧＣＴＡＡＴＣＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＧＣＡＧＣＧＴＧＡＡＧＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＴＣＣＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＣＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＣＧＧＣＴＡＣＡＴＣＡＡＣＣＣＣＴＡＣＡＡＣＧＡＴＧＧＣＡＣＣＡＡＧＴＡＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＡＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＧＧＡＧＣＧＡＧＧＡＣＡＧＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＧＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＡＧＣＣＧＧＧＴＧＴＴＣＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＣＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＣＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＣＣＡＣＣＧＴＧＣＧＧＴＧＧＣＧＧＧＧＧＣＴＣＣＣＡＴＣＡＴＣＡＴＣＡＴＣＡＴＣＡＴＴＡＧ
ＢＳＡＰ第一のポリペプチドアミノ酸配列（配列番号５８；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖ（ＶＨ−接続ペプチド−ＶＬ）−６ａａリンカー−抗ＣＤ１９  ＶＨ−ＣＨ１−ＣＰＰＣ；リンカーは太字、接続ペプチドは太字及びイタリック体である）
【化９】
2021535758.tif 000012
抗ＣＤ３  ｓｃＦｖ（ＶＨ−接続ペプチド−ＶＬ）−６ａａリンカー−抗ＣＤ１９  ＶＨ−ＣＨ１−ＣＰＰＣをコードする核酸（配列番号６０）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＡＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＴＡＡＣＡＣＣＴＡＣＧＣＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＧＣＡＣＧＣＡＴＡＡＧＡＡＧＴＡＡＡＴＡＴＡＡＴＡＡＴＴＡＴＧＣＡＡＣＡＴＡＴＴＡＴＧＣＣＧＡＴＴＣＡＧＴＧＡＡＡＧＡＣＣＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＧＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＴＧＡＧＡＣＡＴＧＧＧＡＡＣＴＴＣＧＧＴＡＡＴＡＧＣＴＡＣＧＴＴＴＣＣＴＧＧＴＴＴＧＣＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＡＡＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＴＴＣＡＧＧＴＧＧＣＧＧＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＧＧＴＧＧＴＧＧＧＴＣＣＧＧＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＴＣＴＣＡＧＧＣＴＧＴＧＧＴＧＡＣＴＣＡＧＧＡＧＣＣＣＴＣＡＣＴＧＡＣＴＧＴＧＴＣＣＣＣＡＧＧＡＧＧＧＡＣＡＧＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＴＧＴＣＧＣＴＣＡＡＧＴＡＣＴＧＧＧＧＣＴＧＴＴＡＣＡＡＣＴＡＧＴＡＡＣＴＡＴＧＣＣＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＣＡＣＣＣＡＧＧＧＧＴＣＴＧＡＴＴＧＧＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＡＡＧＣＧＡＧＣＴＣＣＡＧＧＴＡＣＣＣＣＴＧＣＣＣＧＧＴＴＣＴＣＡＧＧＣＴＣＣＣＴＣＣＴＴＧＧＧＧＧＣＡＡＡＧＣＴＧＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＧＴＣＡＧＧＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＣＧＡＧＧＣＴＧＡＧＴＡＴＴＡＣＴＧＣＧＣＴＣＴＡＴＧＧＴＡＣＡＧＣＡＡＣＣＴＣＴＧＧＧＴＧＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＡＣＣＧＴＣＣＴＡＧＧＧＣＧＣＧＣＣＧＧＣＧＧＴＧＧＡＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＣＣＣＣＧＡＧＣＴＡＡＴＣＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＧＣＡＧＣＧＴＧＡＡＧＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＴＣＣＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＣＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＣＧＧＣＴＡＣＡＴＣＡＡＣＣＣＣＴＡＣＡＡＣＧＡＴＧＧＣＡＣＣＡＡＧＴＡＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＡＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＧＧＡＧＣＧＡＧＧＡＣＡＧＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＧＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＡＧＣＣＧＧＧＴＧＴＴＣＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＣＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＣＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＣＣＡＣＣＧＴＧＣＴＡＧ
ＢＳＡＰ第一のポリペプチドアミノ酸配列（配列番号３５；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖ（ＶＨ−接続ペプチド−ＶＬ）−１２ａａリンカー−抗ＣＤ１９  ＶＨ−ＣＨ１−ＣＰＰＣ−Ｈｉｓタグ；リンカーは太字、接続ペプチドは太字及びイタリック体である）
【化１０】
2021535758.tif 000013
抗ＣＤ３  ｓｃＦｖ（ＶＨ−接続ペプチド−ＶＬ）−１２ａａリンカー−抗ＣＤ１９  ＶＨ−ＣＨ１−ＣＰＰＣ−Ｈｉｓタグをコードする核酸（配列番号３６）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＡＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＴＡＡＣＡＣＣＴＡＣＧＣＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＧＣＡＣＧＣＡＴＡＡＧＡＡＧＴＡＡＡＴＡＴＡＡＴＡＡＴＴＡＴＧＣＡＡＣＡＴＡＴＴＡＴＧＣＣＧＡＴＴＣＡＧＴＧＡＡＡＧＡＣＣＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＧＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＴＧＡＧＡＣＡＴＧＧＧＡＡＣＴＴＣＧＧＴＡＡＴＡＧＣＴＡＣＧＴＴＴＣＣＴＧＧＴＴＴＧＣＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＡＡＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＴＴＣＡＧＧＴＧＧＣＧＧＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＧＧＴＧＧＴＧＧＧＴＣＣＧＧＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＴＣＴＣＡＧＧＣＴＧＴＧＧＴＧＡＣＴＣＡＧＧＡＧＣＣＣＴＣＡＣＴＧＡＣＴＧＴＧＴＣＣＣＣＡＧＧＡＧＧＧＡＣＡＧＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＴＧＴＣＧＣＴＣＡＡＧＴＡＣＴＧＧＧＧＣＴＧＴＴＡＣＡＡＣＴＡＧＴＡＡＣＴＡＴＧＣＣＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＣＡＣＣＣＡＧＧＧＧＴＣＴＧＡＴＴＧＧＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＡＡＧＣＧＡＧＣＴＣＣＡＧＧＴＡＣＣＣＣＴＧＣＣＣＧＧＴＴＣＴＣＡＧＧＣＴＣＣＣＴＣＣＴＴＧＧＧＧＧＣＡＡＡＧＣＴＧＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＧＴＣＡＧＧＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＣＧＡＧＧＣＴＧＡＧＴＡＴＴＡＣＴＧＣＧＣＴＣＴＡＴＧＧＴＡＣＡＧＣＡＡＣＣＴＣＴＧＧＧＴＧＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＡＣＣＧＴＣＣＴＡＧＧＧＣＧＣＧＣＣＧＧＣＧＧＡＧＧＴＧＧＴＧＣＡＧＧＡＧＧＣＧＧＴＧＧＡＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＣＣＣＣＧＡＧＣＴＡＡＴＣＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＧＣＡＧＣＧＴＧＡＡＧＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＴＣＣＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＣＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＣＧＧＣＴＡＣＡＴＣＡＡＣＣＣＣＴＡＣＡＡＣＧＡＴＧＧＣＡＣＣＡＡＧＴＡＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＡＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＧＧＡＧＣＧＡＧＧＡＣＡＧＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＧＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＡＧＣＣＧＧＧＴＧＴＴＣＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＣＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＣＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＣＣＡＣＣＧＴＧＣＧＧＴＧＧＣＧＧＧＧＧＣＴＣＣＣＡＴＣＡＴＣＡＴＣＡＴＣＡＴＣＡＴＴＡＧ
ＢＳＡＰ第一のポリペプチドアミノ酸配列（配列番号５９；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖ（ＶＨ−接続ペプチド−ＶＬ）−１２ａａリンカー−抗ＣＤ１９  ＶＨ−ＣＨ１−ＣＰＰＣ；リンカーは太字、接続ペプチドは太字及びイタリック体である）
【化１１】
2021535758.tif 000014
抗ＣＤ３  ｓｃＦｖ（ＶＨ−接続ペプチド−ＶＬ）−１２ａａリンカー−抗ＣＤ１９  ＶＨ−ＣＨ１−ＣＰＰＣをコードする核酸（配列番号６１）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＡＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＴＡＡＣＡＣＣＴＡＣＧＣＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＧＣＡＣＧＣＡＴＡＡＧＡＡＧＴＡＡＡＴＡＴＡＡＴＡＡＴＴＡＴＧＣＡＡＣＡＴＡＴＴＡＴＧＣＣＧＡＴＴＣＡＧＴＧＡＡＡＧＡＣＣＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＧＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＴＧＡＧＡＣＡＴＧＧＧＡＡＣＴＴＣＧＧＴＡＡＴＡＧＣＴＡＣＧＴＴＴＣＣＴＧＧＴＴＴＧＣＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＡＡＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＴＴＣＡＧＧＴＧＧＣＧＧＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＧＧＴＧＧＴＧＧＧＴＣＣＧＧＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＴＣＴＣＡＧＧＣＴＧＴＧＧＴＧＡＣＴＣＡＧＧＡＧＣＣＣＴＣＡＣＴＧＡＣＴＧＴＧＴＣＣＣＣＡＧＧＡＧＧＧＡＣＡＧＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＴＧＴＣＧＣＴＣＡＡＧＴＡＣＴＧＧＧＧＣＴＧＴＴＡＣＡＡＣＴＡＧＴＡＡＣＴＡＴＧＣＣＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＣＡＣＣＣＡＧＧＧＧＴＣＴＧＡＴＴＧＧＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＡＡＧＣＧＡＧＣＴＣＣＡＧＧＴＡＣＣＣＣＴＧＣＣＣＧＧＴＴＣＴＣＡＧＧＣＴＣＣＣＴＣＣＴＴＧＧＧＧＧＣＡＡＡＧＣＴＧＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＧＴＣＡＧＧＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＣＧＡＧＧＣＴＧＡＧＴＡＴＴＡＣＴＧＣＧＣＴＣＴＡＴＧＧＴＡＣＡＧＣＡＡＣＣＴＣＴＧＧＧＴＧＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＡＣＣＧＴＣＣＴＡＧＧＧＣＧＣＧＣＣＧＧＣＧＧＡＧＧＴＧＧＴＧＣＡＧＧＡＧＧＣＧＧＴＧＧＡＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＣＣＣＣＧＡＧＣＴＡＡＴＣＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＧＣＡＧＣＧＴＧＡＡＧＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＴＣＣＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＣＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＣＧＧＣＴＡＣＡＴＣＡＡＣＣＣＣＴＡＣＡＡＣＧＡＴＧＧＣＡＣＣＡＡＧＴＡＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＡＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＧＧＡＧＣＧＡＧＧＡＣＡＧＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＧＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＡＧＣＣＧＧＧＴＧＴＴＣＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＣＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＣＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＣＣＡＣＣＧＴＧＣＴＡＧ
ＢＳＡＰ第二のポリペプチドアミノ酸配列（配列番号２４；抗ＣＤ１９  ＶＬ１．２−ＣＬ−ＣＰＰＣ−Ｓ）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＳＳＩＰＶＴＬＧＥＳＶＳＩＳＣＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹＷＦＱＱＲＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＲＭＳＮＬＮＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＲＩＳＧＶＥＰＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＨＬＥＹＰＩＴＦＧＡＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣＰＰＣＳ
抗ＣＤ１９  ＶＬ１．２−ＣＬ−ＣＰＰＣ−Ｓをコードする核酸（配列番号２９）
ＧＡＴＧＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＴＣＡＧＴＣＴＣＣＣＡＧＣＡＧＣＡＴＣＣＣＣＧＴＧＡＣＣＣＴＧＧＧＣＧＡＧＴＣＴＧＴＧＴＣＣＡＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＡＡＧＣＡＧＣＡＡＧＡＧＣＣＴＧＣＡＧＡＡＣＧＴＣＡＡＣＧＧＣＡＡＣＡＣＣＴＡＣＣＴＧＴＡＣＴＧＧＴＴＣＣＡＧＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧＧＣＣＡＧＴＣＴＣＣＣＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＣＧＧＡＴＧＡＧＣＡＡＣＣＴＧＡＡＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＧＡＴＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＧＡＡＴＣＴＣＣＧＧＣＧＴＧＧＡＡＣＣＣＧＡＧＧＡＣＧＴＧＧＧＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＡＴＧＣＡＧＣＡＣＣＴＧＧＡＡＴＡＣＣＣＣＡＴＣＡＣＣＴＴＣＧＧＡＧＣＣＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＣＡＣＣＧＴＧＣＴＣＣＴＡＧ
ＢＳＡＰ第二のポリペプチドアミノ酸配列（配列番号２７；抗ＣＤ１９  ＶＬ１．１−ＣＬ−ＣＰＰＣ）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＳＳＩＰＶＴＬＧＥＳＶＳＩＳＣＲＳＳＫＳＬＬＮＳＮＧＮＴＹＬＹＷＦＱＱＲＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＲＭＳＮＬＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＲＩＳＧＶＥＰＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＨＬＥＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣＰＰＣ
抗ＣＤ１９  ＶＬ１．１−ＣＬ−ＣＰＰＣをコードする核酸（配列番号３１）
ＧＡＴＧＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＴＣＡＧＴＣＴＣＣＣＡＧＣＡＧＣＡＴＣＣＣＣＧＴＧＡＣＣＣＴＧＧＧＣＧＡＧＴＣＴＧＴＧＴＣＣＡＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＡＡＧＣＡＧＣＡＡＧＡＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＧＣＡＡＣＧＧＣＡＡＣＡＣＣＴＡＣＣＴＧＴＡＣＴＧＧＴＴＣＣＡＧＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧＧＣＣＡＧＴＣＴＣＣＣＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＣＧＧＡＴＧＡＧＣＡＡＣＣＴＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＧＡＴＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＧＡＡＴＣＴＣＣＧＧＣＧＴＧＧＡＡＣＣＣＧＡＧＧＡＣＧＴＧＧＧＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＡＴＧＣＡＧＣＡＣＣＴＧＧＡＡＴＡＣＣＣＣＣＴＧＡＣＣＴＴＣＧＧＡＧＣＣＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＣＡＣＣＧＴＧＣＴＡＧ
【０１３５】
ＩＩＩ．調製方法
本明細書に記載のＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）は、当該技術分野で公知のタンパク質発現及び精製方法のいずれかによって調製され得る。実施例１を参照されたい。本明細書に記載のＢＳＡＰをコードするＤＮＡ配列は、完全に合成することができる。そのような配列を得た後、それは好適な発現ベクターにクローン化され、次に好適な宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）に移入される。最後に、形質転換された（例えば、トランスフェクトされた）宿主細胞を培養し、発現上清を回収及び精製して、本発明のＢＳＡＰを得る。
【０１３６】
ゆえに、本発明は、一部の態様では、本明細書に記載のＢＳＡＰのいずれか（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）をコードする単離された核酸、ＢＳＡＰをコードする核酸のいずれかを含むベクター（例えば、発現ベクター）、及びＢＳＡＰをコードする核酸を保有するベクターのいずれかを含有する宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞、細菌細胞）も提供する。
【０１３７】
一部の実施形態では、本出願は、本明細書に記載のＢＳＡＰのいずれか１つのポリペプチドのうちの１つまたは複数をコードする単離された核酸を提供する。一部の実施形態では、単離された核酸は、配列番号３０、３２、３６、６０、または６１の核酸配列を含む。一部の実施形態では、単離された核酸は、配列番号２９または３１の核酸配列を含む。単離された核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡであり得る。
【０１３８】
一部の実施形態では、単離された核酸は、発現ベクター、ウイルスベクター、またはクローニングベクターなどのベクターに挿入される。核酸の発現のために、ベクターを宿主細胞に導入して、宿主細胞内での核酸の発現を可能にし得る。発現ベクターは、限定されないが、プロモーター配列、転写開始配列、エンハンサー配列、選択可能マーカー、及びシグナル配列を含む、発現を制御するための様々な要素を含有し得る。これらの要素は、当業者によって適切に選択され得る。例えば、プロモーター配列は、ベクター中のポリヌクレオチドの転写を促進するように選択され得る。好適なプロモーター配列には、限定されないが、Ｔ７プロモーター、Ｔ３プロモーター、ＳＰ６プロモーター、ベータアクチンプロモーター、ＥＦ１ａプロモーター、ＣＭＶプロモーター、及びＳＶ４０プロモーターが含まれる。エンハンサー配列は、核酸の転写を増強するように選択され得る。選択可能マーカーを、ベクターが挿入された宿主細胞を、ベクターが挿入されていない宿主から選択することが可能になるように選択してよく、例えば、選択可能マーカーは、抗生物質耐性を付与する遺伝子であり得る。シグナル配列は、発現されたポリペプチドを宿主細胞の外に輸送できるようにするように選択され得る。一部の実施形態では、単離された核酸は、シグナルペプチドをコードする核酸配列をさらに含む。一部の実施形態では、シグナルペプチドは、配列番号２５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、シグナルポリペプチドをコードする核酸は、配列番号２６の核酸配列を含む。
配列番号２５（シグナルペプチド）
ＭＥＷＳＷＶＦＬＦＦＬＳＶＴＴＧＶＨＳ
配列番号２６（シグナルペプチドをコードする核酸）
ＡＴＧＧＡＡＴＧＧＡＧＣＴＧＧＧＴＣＴＴＴＣＴＣＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＣＡＧＴＡＡＣＧＡＣＴＧＧＴＧＴＣＣＡＣＴＣＣ
【０１３９】
一部の実施形態では、上記のベクターのいずれかを含有する単離された宿主細胞を提供する。ベクターを含有する宿主細胞は、単離された核酸の発現またはクローニングに有用であり得る。好適な宿主細胞には、限定されないが、原核細胞、真菌細胞、酵母細胞、または哺乳動物細胞などの高等真核細胞を含むことができる。Ｅ．ｃｏｌｉなどの原核細胞における抗体及び抗原結合フラグメントの発現は、当該技術分野で十分に確立されている。概説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ａ．ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：５４５−５５１（１９９１）を参照されたい。培養中の真核細胞における発現もまた、抗体またはその抗原結合フラグメントの産生のための選択肢として当業者に利用可能である。最近の概説、例えば、Ｒｅｆ，Ｍ．Ｅ．（１９９３）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．４：５７３−５７６；Ｔｒｉｌｌ  Ｊ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ６：５５３−５６０を参照されたい。高等真核細胞、特に、多細胞生物に由来する細胞は、グリコシル化ポリペプチドの発現のために使用することができる。好適な高等真核細胞には、限定されないが、無脊椎動物細胞及び昆虫細胞、ならびに脊椎動物細胞が含まれる。
【０１４０】
ベクターを、宿主細胞に、当該技術分野において公知のいずれの好適な方法を使用して導入することができ、その方法には、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介送達、リン酸カルシウム沈殿法、カチオン性脂質媒介送達、リポソーム媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、微粒子銃、受容体媒介遺伝子送達、ポリリジン、ヒストン、キトサン及びペプチドにより媒介される送達が含まれるが、これらに限定されない。目的のベクターの発現のための細胞のトランスフェクション及び形質転換の標準的な方法は、当該技術分野で周知である。一部の実施形態では、宿主細胞は、第一のポリペプチドをコードする第一のベクター及び第二のポリペプチドをコードする第二のベクターを含む。一部の実施形態では、宿主細胞は、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドをコードする単離された核酸を含む単一のベクターを含む。
【０１４１】
一部の実施形態では、本出願は、本明細書に記載のＢＳＡＰのいずれかを発現する方法を提供し、該方法は、ＢＳＡＰをコードするベクターを含有する単離された宿主細胞を培養すること及び細胞培養物からＢＳＡＰを回収することを含む。単離された宿主細胞は、ベクターに挿入された単離された核酸の発現を可能にする条件下で培養される。ポリヌクレオチドの発現に好適な条件としては、限定されないが、好適な培地、培養培地中の宿主細胞の好適な密度、必要栄養素の存在、補足因子の存在、好適な温度及び湿度、ならびに微生物夾雑物の非存在が含まれ得る。当業者は、発現を目的として必要に応じて好適な条件を選択することができる。
【０１４２】
一部の実施形態では、宿主細胞において発現されるポリペプチドは、二量体を形成することができ、ゆえに本明細書に記載のＢＳＡＰを産生することができる。一部の実施形態では、宿主細胞において発現されるポリペプチドは、ホモ二量体であるポリペプチド複合体を形成することができる。宿主細胞が第一のポリヌクレオチド及び第二のポリヌクレオチドを発現する一部の実施形態では、第一のポリヌクレオチド及び第二のポリヌクレオチドは、ヘテロ二量体であるポリペプチド複合体を形成することができる。
【０１４３】
一部の実施形態では、ポリペプチド複合体（例えばＢＳＡＰ）は、宿主細胞内で形成され得る。例えば、二量体は、適切な酵素及び／または補因子の補助のもと、宿主細胞内で形成され得る。一部の実施形態では、ポリペプチド複合体を細胞から外に分泌させることができる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは、宿主細胞から外に分泌され、宿主細胞の外側で二量体（例えばＢＳＡＰ）を形成し得る。
【０１４４】
一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを、別々に発現させ、好適な条件下で二量体化させてＢＳＡＰを形成し得る。例えば、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを好適な緩衝液中で合わせ、第一のタンパク質モノマー及び第二のタンパク質モノマーの、疎水性相互作用などの適切な相互作用を通した二量体化を可能にし得る。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの二量体化を促進することができる酵素及び／または補因子を含有する好適な緩衝液中で合わせ得る。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを好適なビヒクル中で合わせ、好適な試薬及び／または触媒の存在下での互いに反応することを可能にさせ得る。
【０１４５】
発現されたポリペプチド（複数可）及び／またはポリペプチド複合体は、任意の好適な方法を使用して収集することができる。ポリペプチド（複数可）及び／またはポリペプチド複合体は、細胞内で、細胞膜周辺腔で発現させることができる、または細胞の外側の培地に分泌させることができる。ポリペプチド及び／またはポリペプチド複合体が、細胞内で発現された場合、ポリペプチド及び／またはポリペプチド複合体を含有する宿主細胞を溶解し得、ポリペプチド及び／またはポリペプチド複合体を、溶解物から遠心分離または限外濾過によって望ましくない残屑を除去することによって単離し得る。ポリペプチド及び／またはポリペプチド複合体が、Ｅ．ｃｏｌｉの細胞膜周辺腔に分泌された場合、細胞ペーストを、酢酸ナトリウム（ｐＨ３．５）、ＥＤＴＡ、及びフッ化フェニルメチルスルホニル（ＰＭＳＦ）などの薬剤の存在下で約３０分間解凍し得、細胞残屑を遠心分離により除去することができる（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３−１６７（１９９２））。ポリペプチド及び／またはポリペプチド複合体が、培地に分泌された場合、細胞培養物の上清を、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えば、ＡｍｉｎｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過ユニットを使用して、収集及び濃縮し得る。プロテアーゼ阻害剤及び／または抗生物質を、収集及び濃縮ステップに含めて、タンパク質分解及び／または夾雑微生物の成長を阻害し得る。
【０１４６】
発現されたポリペプチド（複数可）及び／またはポリペプチド複合体は、好適な方法、例えば限定されないが、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、イオン交換カラムでのイオン交換分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカでのクロマトグラフィー、ヘパリンセファロースでのクロマトグラフィー、陰イオンまたは陽イオン交換樹脂（例えばポリアスパラギン酸カラム）でのクロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、及び硫酸アンモニウム沈殿を使用してさらに精製することができる（概説に関しては、Ｂｏｎｎｅｒ，Ｐ．Ｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ、Ｔａｙｌｏｒ＆Ｆｒａｎｃｉｓにより出版．２００７；Ｊａｎｓｏｎ，Ｊ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，ｈｉｇｈ  ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨにより出版、１９９８を参照されたい）。実施例１を参照されたい。
【０１４７】
一部の実施形態では、ポリペプチド及び／またはポリペプチド二量体複合体は、アフィニティークロマトグラフィーによって精製することができる。一部の実施形態では、プロテインＡクロマトグラフィーまたはプロテインＡ／Ｇ（プロテインＡ及びプロテインＧの融合タンパク質）クロマトグラフィーは、抗体ＣＨ２ドメイン及び／またはＣＨ３ドメインに由来する成分を含むポリペプチド及び／またはポリペプチド複合体の精製に有用であることができる（Ｌｉｎｄｍａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．６２：１−１３（１９８３））；Ｚｅｔｔｌｉｔ，Ｋ．Ａ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｐａｒｔ  Ｖ，５３１−５３５，２０１０）。一部の実施形態では、プロテインＧクロマトグラフィーは、ＩｇＧγ３重鎖を含むポリペプチド及び／またはポリペプチド複合体の精製に有用であることができる（Ｇｕｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．５：１５６７  １５７５（１９８６））。一部の実施形態では、プロテインＬクロマトグラフィーは、κ軽鎖を含むポリペプチド及び／またはポリペプチド複合体の精製に有用であることができる（Ｓｕｄｈｉｒ，Ｐ．，Ａｎｔｉｇｅｎ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｃｈａｐｔｅｒ  ２６、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓにより出版、１９９５；Ｎｉｌｓｏｎ，Ｂ．Ｈ．Ｋ．ａｔ  ａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６７，２２３４−２２３９（１９９２））。親和性リガンドが付着する基質は、ほとんどの場合アガロースであるが、他の基質も利用可能である。制御細孔ガラスまたはポリ（スチレンジビニル）ベンゼンなどの機械的に安定した基質は、アガロースで達成され得るものよりも速い流速及び短いプロセシング時間を可能にする。ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）が追加のＣＨ３ドメインを含む場合、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ  ＡＢＸ樹脂（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ，Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ，Ｎ．Ｊ．）が精製に有用である。
【０１４８】
ＩＶ．医薬組成物、剤形、製品、及びキット
本出願は、本明細書に記載のＢＳＡＰのいずれか１つ（例えばＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）、及び任意選択で医薬的に許容可能な担体を含む、医薬組成物をさらに提供する。
【０１４９】
医薬組成物は、例えば、全身投与または局所投与を含む、本明細書に記載の様々な投与様式に好適であり得る。一部の実施形態では、医薬組成物は、静脈内投与用に製剤化される。一部の実施形態では、医薬組成物は、皮下投与用に製剤化される。一部の実施形態では、医薬組成物は、腫瘍部位への局所投与用に製剤化される。一部の実施形態では、医薬組成物は、腫瘍内注射用に製剤化される。一部の実施形態では、医薬組成物は、腹腔内注射用に製剤化される。
【０１５０】
本明細書で使用する場合、「担体」は、医薬的に許容可能な担体、賦形剤、または安定剤を含み、これらは採用される投与量及び濃度にてこれに曝露されている細胞または哺乳動物に対して非毒性である。多くの場合、生理学的に許容可能な担体は、ｐＨ緩衝水溶液である。許容可能な担体、賦形剤、または安定剤は、レシピエントに対し、採用される投与量及び濃度にて非毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えばオクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；メチルまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；ショ糖、マンニトール、トレハロースもしくはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；及び／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含む。
【０１５１】
本発明のＢＳＡＰを、好適な担体、賦形剤、及び製剤（例えば、医薬製剤）に製剤化された他の薬剤と併せて投与して、移入、送達、忍容性などを改善できることが理解されたい。多くの適切な製剤は、全ての薬剤師に公知の処方集：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１５ｔｈ  ｅｄ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９７５））、特にＢｌａｕｇ，Ｓｅｙｍｏｕｒによる第８７章から得ることができる。これらの製剤には、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、（カチオン性またはアニオン性）脂質含有小胞（例えばＬｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（商標））、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油型及び油中水型エマルジョン、エマルジョンカルボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコール類）、半固体ゲル、ならびにカルボワックスを含有する半固体混合物が含まれる。前述のいずれの混合物も、本発明に従う処置及び治療に適したものであり得るが、ただし、その製剤中の活性成分が製剤化により不活性化されないこと、ならびにその製剤が投与経路と生理学的に適合する及び忍容可能であることを条件とする。Ｂａｌｄｒｉｃｋ  Ｐ．“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ：ｔｈｅ  ｎｅｅｄ  ｆｏｒ  ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ｇｕｉｄａｎｃｅ．”Ｒｅｇｕｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３２（２）：２１０−８（２０００），Ｗａｎｇ  Ｗ．“Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｏｌｉｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ．”Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．２０３（１−２）：１−６０（２０００），Ｃｈａｒｍａｎ  ＷＮ“Ｌｉｐｉｄｓ，ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ  ｄｒｕｇｓ，ａｎｄ  ｏｒａｌ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ−ｓｏｍｅ  ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｃｏｎｃｅｐｔｓ．”Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ．８９（８）：９６７−７８（２０００），Ｐｏｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．“Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ”ＰＤＡ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．５２：２３８−３１１（１９９８）及び医薬化学者に周知の製剤、賦形剤及び担体に関連する追加情報に関するその中の引用も参照されたい。
【０１５２】
一部の実施形態では、医薬組成物はまた、グリセロールなどの好適な張性調節剤の添加によって、血液と等張になるように作成することができる。
【０１５３】
ｉｎ  ｖｉｖｏ投与に使用する医薬組成物は、一般的に、滅菌、実質的に等張であり、米国食品医薬品局の全ての適正製造基準（ＧＭＰ）規制に完全に準拠して製剤化される。滅菌性は、滅菌濾過膜を通した濾過によって、容易に達成される。一部の実施形態では、組成物は、病原体を含まない。注射用に、医薬組成物は、液体溶液の形態、例えば、ハンクス液またはリンゲル液などの生理学的に適合性のある緩衝液であることができる。加えて、医薬組成物は、固体形態であり、使用直前に再溶解または懸濁されることができる。凍結乾燥組成物も含まれる。
【０１５４】
一部の実施形態では、医薬組成物は、静脈内、腹腔内、または硝子体注射に適合した医薬組成物として、通常の手順に従って製剤化される。典型的には、注射用組成物は、滅菌等張水性緩衝液中の溶液である。必要な場合、組成物はまた、可溶化剤及び注射部位の痛みを和らげるためのリグノカインなどの局所麻酔薬を含み得る。一般的に、成分は、例えば、活性薬剤の量を示すアンプルまたはサシェなどの気密封止容器内に乾燥した凍結乾燥粉末または水不含濃縮物として、単位剤形で、別々に供給されるまたは１つに混合される。組成物を注入によって投与する場合、それを医薬品グレードの滅菌水または食塩水を含有する注入ボトルで分注することができる。組成物を注射によって投与する場合、投与前に成分が混合され得るように、注射用滅菌水または食塩水のアンプルを提供することができる。
【０１５５】
一部の実施形態では、ＢＳＡＰ組成物（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ、またはＢＳＡＰを含有する医薬組成物）は、ヒトへの投与に好適である。一部の実施形態では、ＢＳＡＰ組成物（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ、またはＢＳＡＰを含有する医薬組成物）は、げっ歯類（例えば、マウス、ラット）または非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル）への投与に好適である。一部の実施形態では、医薬組成物は、単回使用の密封されたバイアルなどの単回使用バイアルに収容される。一部の実施形態では、医薬組成物は、複数回使用バイアルに収容される。一部の実施形態では、医薬組成物は、バルクで容器内に収容される。一部の実施形態では、医薬組成物は、凍結保存される。
【０１５６】
ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）の単位剤形またはその医薬組成物も提供する。「単位剤形」という用語は、各々の単位が、所望の治療効果を生じさせるように計算された所定量の活性物質を、好適な医薬担体、希釈剤、または賦形剤を伴って含有する、個体への単位投与量として好適な物理的に別箇の単位を指す。これらの単位剤形は、単一または複数の単位剤形で好適な包装に保存することができ、さらに滅菌及び密封してもよい。
【０１５７】
本出願は、本明細書に記載のＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）組成物（例えば医薬組成物）を適切な包装で含む、製品をさらに提供する。本明細書に記載の組成物（例えば、ＢＳＡＰ組成物）に好適な包装は、当該技術分野で公知であり、例えば、バイアル（例えば密封バイアル）、容器、アンプル、ボトル、ジャー、可撓性包装（例えば、密封マイラーまたはプラスチックバッグ）などが含まれる。これらの製品は、さらに滅菌及び／または密封してよい。
【０１５８】
本出願は、本明細書に記載のＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）組成物（例えば医薬組成物）を含むキットも提供し、本明細書に記載の使用などの、組成物を使用する方法に関する指示書（複数可）をさらに含み得る。本明細書に記載のキットは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、及び本明細書に記載の任意の方法を実施するための指示書を伴う添付文書を含む、商業的及び使用者の観点から望ましい他の物質をさらに含み得る。
【０１５９】
Ｖ．がんの処置方法
本出願はまた、個体（例えばヒト）におけるがんを処置する方法も提供し、該方法は、個体に有効量の本明細書に記載のＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）のいずれか、またはＢＳＡＰのいずれか及び任意選択で医薬的に許容可能な担体を含む医薬組成物を投与することを含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、静脈内投与される。一部の実施形態では、本方法は、サイトカインストームを誘発しない。一部の実施形態では、がんは、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、マンテル細胞白血病（ＭＣＬ）、及びＢ細胞リンパ腫（ＢＣＬ）からなる群から選択される。
【０１６０】
ゆえに一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがんを処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）を特異的に認識する抗腫瘍抗原Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメインが、直接または任意選択のリンカーを介して接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがんを処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）を特異的に認識する抗腫瘍抗原Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメインが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗腫瘍抗原ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがんを処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）を特異的に認識する抗腫瘍抗原Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメインが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗腫瘍抗原ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがんを処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）を特異的に認識する抗腫瘍抗原Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する２つの抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択の第一のリンカーを介して接続し、抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択の第二のリンカーを介して接続しており；第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗腫瘍抗原ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続しており、第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗腫瘍抗原ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、腫瘍抗原は、ＣＤ１９、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３７、ＣＤ４０、及びＣＤ７４からなる群から選択される。一部の実施形態では、腫瘍抗原は、ＣＤ１９である。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＣＤ３ε（例えば、ｈｕＣＤ３εまたはｃｙｎｏＣＤ３ε）のＮ末端、例えばＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）はＶＨを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＨは、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）はＶＬを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＬは、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＨは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＬは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、接続ペプチドによって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗腫瘍抗原ＦａｂのＣＨ１及びＣＬは、約１〜約５（例えば約１、２、３、４、または５のいずれか）個のジスルフィド結合、例えば、約２個のジスルフィド結合などのジスルフィド結合によって接続している。一部の実施形態では、抗腫瘍抗原ＦａｂのＣＨ１は、配列番号１８のアミノ酸配列を含む、及び／または抗腫瘍抗原ＦａｂのＣＬは、配列番号１９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）間に位置するリンカー、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬ間に位置する接続ペプチドは、約２〜約３０（例えば、約６〜約１２）個のアミノ酸残基の長さを有するアミノ酸配列から構成され、アミノ酸残基は、グリシン、セリン、アルギニン、及びアラニンから選択される；例えば、リンカー及び／または接続ペプチドは、配列番号２１、２２、３３、及び５３のいずれかから選択される。一部の実施形態では、ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、静脈内投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載のがんを処置する方法は、以下の生物学的効果：（１）がん細胞を殺傷する；（２）がん細胞の増殖を阻害する；（３）末梢Ｔ細胞の再分布を誘導する（例えば、腫瘍抗原を発現する組織または腫瘍にＴ細胞を動員する）；（４）腫瘍サイズを減少する；（５）がんを有する個体における１つまたは複数の症状を緩和する；（６）腫瘍転移（例えば、リンパ節への転移）を阻害する；（７）個体の生存を延長する；（８）がん無増悪期間を延長する；（９）がん再発の可能性を予防、阻害、または減少するのうちの１つまたは複数を達成することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載のＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ３×ＣＤ１９  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物が媒介するがん細胞を殺傷する方法は、少なくとも約４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、またはそれ以上のいずれかの腫瘍細胞死率を達成することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載のＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物が媒介する腫瘍サイズを減少する方法は、腫瘍サイズを少なくとも約１０％（例えば少なくとも約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、またはそれ以上のいずれか）減少することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載のＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物が媒介する腫瘍転移（例えば、リンパ節への転移）を阻害する方法は、転移を少なくとも約１０％（例えば少なくとも約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、またはそれ以上のいずれか）阻害することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載のＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物が媒介する個体（例えば、ヒト）の生存を延長する方法は、個体（例えば、ヒト）の生存を、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１８、２４か月、またはそれ以上のいずれか延長することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載のＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物が媒介するがん無増悪期間を延長する方法は、がん無増悪期間を、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２週、またはそれ以上のいずれか延長することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載のＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ３×ＣＤ１９  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、例えば、ＣＤ８＋及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞）を活性化することによって、対象における免疫応答または機能を、増加、増強、または刺激することができる。一部の実施形態では、個体におけるＣＤ４及び／またはＣＤ８  Ｔ細胞は、プライミング、活性化、増殖、サイトカイン放出及び／または細胞溶解活性が、本明細書に記載のＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ３×ＣＤ１９  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物の投与の前と対比して、増加または増強している。
【０１６１】
一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、ｓｃＦｖであり、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、接続ペプチドによって任意選択で接続されたＶＨ及びＶＬを含む。一部の実施形態では、接続ペプチドは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む。
【０１６２】
ゆえに、一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがんを処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）を特異的に認識する抗腫瘍抗原Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがんを処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）を特異的に認識する抗腫瘍抗原Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがんを処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）を特異的に認識する抗腫瘍抗原Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗腫瘍抗原ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがんを処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）を特異的に認識する抗腫瘍抗原Ｆａｂ；ならびにＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する２つの抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び第一の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択の第一のリンカーを介して接続し、抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び第二の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択の第二のリンカーを介して接続しており；第一の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続しており、第二の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、抗腫瘍抗原ＦａｂのＣＬ及びＣＨ１は、約１〜約５（例えば、約１、２、３、４、または５のいずれか）個のジスルフィド結合、例えば、２個のジスルフィド結合などのジスルフ���ド結合によって接続している。一部の実施形態では、腫瘍抗原は、ＣＤ１９、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３７、ＣＤ４０、及びＣＤ７４からなる群から選択される。一部の実施形態では、腫瘍抗原は、ＣＤ１９である。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、ＣＤ３ε（例えば、ｈｕＣＤ３εまたはｃｙｎｏＣＤ３ε）のＮ末端、例えばＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖはＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨは、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖはＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬは、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、接続ペプチドによって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、リンカー及び／または接続ペプチドは、配列番号２１、２２、３３、及び５３のいずれかから選択される。一部の実施形態では、ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、静脈内投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載のがんを処置する方法は、以下の生物学的効果：（１）がん細胞を殺傷する；（２）がん細胞の増殖を阻害する；（３）末梢Ｔ細胞の再分布を誘導する（例えば、腫瘍抗原を発現する組織または腫瘍にＴ細胞を動員する）；（４）腫瘍サイズを減少する；（５）がんを有する個体における１つまたは複数の症状を緩和する；（６）腫瘍転移（例えば、リンパ節への転移）を阻害する；（７）個体の生存を延長する；（８）がん無増悪期間を延長する；（９）がん再発の可能性を予防、阻害、または減少するのうちの１つまたは複数を達成することができる。
【０１６３】
一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖであり、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖはＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨは、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖはＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬは、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１６４】
ゆえに、一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがんを処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）を特異的に認識する抗腫瘍抗原Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがんを処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）を特異的に認識する抗腫瘍抗原Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがんを処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）を特異的に認識する抗腫瘍抗原Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが���配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがんを処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、腫瘍抗原（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９などのＣＤ１９）を特異的に認識する抗腫瘍抗原Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する２つの抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び第一の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択の第一のリンカーを介して接続し、抗腫瘍抗原Ｆａｂ及び第二の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択の第二のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖの各々がＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖの各々がＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；第一の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続しており、第二の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、抗腫瘍抗原ＦａｂのＣＬ及びＣＨ１は、約１〜約５（例えば、約１、２、３、４、または５のいずれか）個のジスルフィド結合、例えば、２個のジスルフィド結合などのジスルフィド結合によって接続している。一部の実施形態では、腫瘍抗原は、ＣＤ１９、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３７、ＣＤ４０、及びＣＤ７４からなる群から選択される。一部の実施形態では、腫瘍抗原は、ＣＤ１９である。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、ＣＤ３ε（例えば、ｈｕＣＤ３εまたはｃｙｎｏＣＤ３ε）のＮ末端、例えばＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、接続ペプチドによって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、リンカー及び／または接続ペプチドは、配列番号２１、２２、３３、及び５３のいずれかから選択される。一部の実施形態では、ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、静脈内投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載のがんを処置する方法は、以下の���物学的効果：（１）がん細胞を殺傷する；（２）がん細胞の増殖を阻害する；（３）末梢Ｔ細胞の再分布を誘導する（例えば、腫瘍抗原を発現する組織または腫瘍にＴ細胞を動員する）；（４）腫瘍サイズを減少する；（５）がんを有する個体における１つまたは複数の症状を緩和する；（６）腫瘍転移（例えば、リンパ節への転移）を阻害する；（７）個体の生存を延長する；（８）がん無増悪期間を延長する；（９）がん再発の可能性を予防、阻害、または減少するのうちの１つまたは複数を達成することができる。
【０１６５】
一部の実施形態では、腫瘍抗原は、ＣＤ１９である、すなわち、ＢＳＡＰは、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰである。ゆえに、一部の実施形態では、本発明は、ＣＤ１９を発現するがん、例えばＡＬＬ、ＣＬＬ、ＭＣＬ、またはＢ細胞リンパ腫などの、ＣＤ１９の発現に関連するまたはこれを特徴とする疾患を処置する方法を提供する。
【０１６６】
ゆえに、一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがん（例えば、ＣＤ１９＋がん）を処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがん（例えば、ＣＤ１９＋がん）を処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがん（例えば、ＣＤ１９＋がん）を処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがん（例えば、ＣＤ１９＋がん）を処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する２つの抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択の第一のリンカーを介して接続し、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択の第二のリンカーを介して接続しており；第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続しており、第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号８もしくは４０のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＣＤ３ε（例えば、ｈｕＣＤ３εまたはｃｙｎｏＣＤ３ε）のＮ末端、例えばＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）はＶＨを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＨは、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）はＶＬを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＬは、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＨは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＬは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、接続ペプチドによって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＬ及びＣＨ１は、約１〜約５（例えば、約１、２、３、４、または５のいずれか）個のジスルフィド結合、例えば、２個のジスルフィド結合などのジスルフィド結合によって接続している。一部の実施形態では、リンカー及び／または接続ペプチドは、配列番号２１、２２、３３、及び５３のいずれかから選択される。一部の実施形態では、ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、静脈内投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載のがんを処置する方法は、以下の生物学的効果：（１）がん細胞を殺傷する；（２）がん細胞の増殖を阻害する；（３）末梢���細胞の再分布を誘導する（例えば、腫瘍抗原を発現する組織または腫瘍にＴ細胞を動員する）；（４）腫瘍サイズを減少する；（５）がんを有する個体における１つまたは複数の症状を緩和する；（６）腫瘍転移（例えば、リンパ節への転移）を阻害する；（７）個体の生存を延長する；（８）がん無増悪期間を延長する；（９）がん再発の可能性を予防、阻害、または減少するのうちの１つまたは複数を達成することができる。一部の実施形態では、がんは、ＡＬＬ、ＣＬＬ、ＭＣＬ、及びＢ細胞リンパ腫からなる群から選択される。
【０１６７】
一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１６８】
ゆえに、一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがん（例えば、ＣＤ１９＋がん）を処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがん（例えば、ＣＤ１９＋がん）を処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがん（例えば、ＣＤ１９＋がん）を処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨ���Ｒ−Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがん（例えば、ＣＤ１９＋がん）を処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する２つの抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択の第一のリンカーを介して接続し、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択の第二のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続しており、第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＬ及びＣＨ１は、約１〜約５（例えば、約１、２、３、４、または５のいずれか）個のジスルフィド結合、例えば、２個のジスルフィド結合などのジスルフィド結合によって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＣＤ３ε（例えば、ｈｕＣＤ３εまたはｃｙｎｏＣＤ３ε）のＮ末端、例えばＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）はＶＨを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＨは、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）はＶＬを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＬは、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＨは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）���ＶＬは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、接続ペプチドによって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、リンカー及び／または接続ペプチドは、配列番号２１、２２、３３、及び５３のいずれかから選択される。一部の実施形態では、ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、静脈内投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載のがんを処置する方法は、以下の生物学的効果：（１）がん細胞を殺傷する；（２）がん細胞の増殖を阻害する；（３）末梢Ｔ細胞の再分布を誘導する（例えば、腫瘍抗原を発現する組織または腫瘍にＴ細胞を動員する）；（４）腫瘍サイズを減少する；（５）がんを有する個体における１つまたは複数の症状を緩和する；（６）腫瘍転移（例えば、リンパ節への転移）を阻害する；（７）個体の生存を延長する；（８）がん無増悪期間を延長する；（９）がん再発の可能性を予防、阻害、または減少するのうちの１つまたは複数を達成することができる。一部の実施形態では、がんは、ＡＬＬ、ＣＬＬ、ＭＣＬ、及びＢ細胞リンパ腫からなる群から選択される。
【０１６９】
一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがん（例えば、ＣＤ１９＋がん）を処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがん（例えば、ＣＤ１９＋がん）を処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト���におけるがん（例えば、ＣＤ１９＋がん）を処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがん（例えば、ＣＤ１９＋がん）を処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する２つの抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第一の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択の第一のリンカーを介して接続し、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第二の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択の第二のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖの各々がＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖの各々がＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；第���の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続しており、第二の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＣＤ３ε（例えば、ｈｕＣＤ３εまたはｃｙｎｏＣＤ３ε）のＮ末端、例えばＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、接続ペプチドによって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＨ１及びＣＬは、約１〜約５（例えば約１、２、３、４、または５のいずれか）個のジスルフィド結合、例えば、約２個のジスルフィド結合などのジスルフィド結合によって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＨ１は、配列番号１８のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＬは、配列番号１９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖ間に位置するリンカー、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬ間に位置する接続ペプチドは、約２〜約３０（例えば、約６〜約１２）個のアミノ酸残基の長さを有するアミノ酸配列から構成され、アミノ酸残基は、グリシン、セリン、アルギニン、及びアラニンから選択される；例えば、リンカー及び／または接続ペプチドは、配列番号２１、２２、３３、及び５３のいずれかから選択される。一部の実施形態では、ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、静脈内投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載のがんを処置する方法は、以下の生物学的効果：（１）がん細胞を殺傷する；（２）がん細胞の増殖を阻害する；（３）末梢Ｔ細胞の再分布を誘導する（例えば、腫瘍抗原を発現する組織または腫瘍にＴ細胞を動員する）；（４）腫瘍サイズを減少する；（５）がんを有する個体における１つまたは複数の症状を緩和する；（６）腫瘍転移（例えば、リンパ節への転移）を阻害する；（７）個体の生存を延長する；（８）がん無増悪期間を延長する；（９）がん再発の可能性を予防、阻害、または減少するのうちの１つまたは複数を達成することができる。一部の実施形態では、がんは、ＡＬＬ、ＣＬＬ、ＭＣＬ、またはＢ細胞リンパ腫からなる群から選択される。
【０１７０】
一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがん（例えば、ＣＤ１９＋がん）を処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドが、配列番号２３、２８、３５、５８、及び５９のいずれかのアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含む、及び／または第二のポリペプチドが、配列番号２４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含む、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがん（例えば、ＣＤ１９＋がん）を処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：配列番号２３のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチド；及び配列番号２４のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチドを含む、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがん（例えば、ＣＤ１９＋がん）を処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：配列番号２８または５８のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチド；及び配列番号２４のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチドを含む、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがん（例えば、ＣＤ１９＋がん）を処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：配列番号３５または５９のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチド；及び配列番号２４のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチドを含む、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。
【０１７１】
一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１７２】
ゆえに、一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがん（例えば、ＣＤ１９＋がん）を処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがん（例えば、ＣＤ１９＋がん）を処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがん（例えば、ＣＤ１９＋がん）を処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号３７の���ミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがん（例えば、ＣＤ１９＋がん）を処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する２つの抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択の第一のリンカーを介して接続し、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択の第二のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続しており、第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＣＤ３ε（例えば、ｈｕＣＤ３εまたはｃｙｎｏＣＤ３ε）のＮ末端、例えばＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）はＶＨを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＨは、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）はＶＬを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＬは、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＨは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＬは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、接続ペプチドによって���続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、リンカー及び／または接続ペプチドは、配列番号２１、２２、３３、及び５３のいずれかから選択される。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＬ及びＣＨ１は、約１〜約５（例えば、約１、２、３、４、または５のいずれか）個のジスルフィド結合、例えば、２個のジスルフィド結合などのジスルフィド結合によって接続している。一部の実施形態では、ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、静脈内投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載のがんを処置する方法は、以下の生物学的効果：（１）がん細胞を殺傷する；（２）がん細胞の増殖を阻害する；（３）末梢Ｔ細胞の再分布を誘導する（例えば、腫瘍抗原を発現する組織または腫瘍にＴ細胞を動員する）；（４）腫瘍サイズを減少する；（５）がんを有する個体における１つまたは複数の症状を緩和する；（６）腫瘍転移（例えば、リンパ節への転移）を阻害する；（７）個体の生存を延長する；（８）がん無増悪期間を延長する；（９）がん再発の可能性を予防、阻害、または減少するのうちの１つまたは複数を達成することができる。一部の実施形態では、がんは、ＡＬＬ、ＣＬＬ、ＭＣＬ、またはＢ細胞リンパ腫からなる群から選択される。
【０１７３】
一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがん（例えば、ＣＤ１９＋がん）を処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがん（例えば、ＣＤ１９＋がん）を処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（���えば、ヒト）におけるがん（例えば、ＣＤ１９＋がん）を処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖがＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがん（例えば、ＣＤ１９＋がん）を処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する２つの抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第一の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択の第一のリンカーを介して接続し、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第二の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、直接または任意選択の第二のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬが、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み；抗ＣＤ３  ｓｃＦｖの各々がＶＨを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨが、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖの各々がＶＬを含み、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含���ＨＶＲ−Ｌ３を含み；第一の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続しており、第二の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、ＣＤ３ε（例えば、ｈｕＣＤ３εまたはｃｙｎｏＣＤ３ε）のＮ末端、例えばＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＬは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、接続ペプチドによって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、リンカー及び／または接続ペプチドは、配列番号２１、２２、３３、及び５３のいずれかから選択される。一部の実施形態では、ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、静脈内投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載のがんを処置する方法は、以下の生物学的効果：（１）がん細胞を殺傷する；（２）がん細胞の増殖を阻害する；（３）末梢Ｔ細胞の再分布を誘導する（例えば、腫瘍抗原を発現する組織または腫瘍にＴ細胞を動員する）；（４）腫瘍サイズを減少する；（５）がんを有する個体における１つまたは複数の症状を緩和する；（６）腫瘍転移（例えば、リンパ節への転移）を阻害する；（７）個体の生存を延長する；（８）がん無増悪期間を延長する；（９）がん再発の可能性を予防、阻害、または減少するのうちの１つまたは複数を達成することができる。一部の実施形態では、がんは、ＡＬＬ、ＣＬＬ、ＭＣＬ、またはＢ細胞リンパ腫からなる群から選択される。
【０１７４】
一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがん（例えば、ＣＤ１９＋がん）を処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドが、配列番号２３、２８、３５、５８、及び５９のいずれかのアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含む、及び／または第二のポリペプチドが、配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含む、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがん（例えば、ＣＤ１９＋がん）を処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：配列番号２３のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチド；及び配列番号２７のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチドを含む、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがん（例えば、ＣＤ１９＋がん）を処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：配列番号２８または５８のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチド；及び配列番号２７のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチドを含む、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがん（例えば、ＣＤ１９＋がん）を処置する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：配列番号３５または５９のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチド；及び配列番号２７のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチドを含む、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。
【０１７５】
本明細書に提供する方法は、アジュバント設定で実施され得る。一部の実施形態では、本方法は、ネオアジュバント設定で実施される、すなわち、本方法は、一次／決定的治療の前に行われ得る。一部の実施形態では、本方法を使用して、以前に処置を受けたことがある個体（例えば、ヒト）を処置する。本明細書に提供する処置方法のいずれかを使用して、以前に処置を受けたことがない個体（例えば、ヒト）を処置し得る。一部の実施形態では、本方法は、第一選択治療として使用される。一部の実施形態では、本方法は、第二選択治療として使用される。
【０１７６】
一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがん細胞の増殖（例えば、ＣＤ１９＋がんにおける腫瘍成長）を阻害する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがん細胞の増殖（例えば、ＣＤ１９＋がんにおける腫瘍成長）を阻害する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがん細胞の増殖（例えば、ＣＤ１９＋がんにおける腫瘍成長）を阻害する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）におけるがん細胞の増殖（例えば、ＣＤ１９＋がんにおける腫瘍成長）を阻害する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する２つの抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択の第一のリンカーを介して接続し、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択の第二のリンカーを介して接続しており；第一の抗ＣＤ３結合ドメイン��例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続しており、第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、がん細胞増殖率は、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）の存在下で、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、またはそれ以上のいずれか減少する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号４もしくは３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５もしくは３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６もしくは３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号８もしくは４０のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＣＤ３ε（例えば、ｈｕＣＤ３εまたはｃｙｎｏＣＤ３ε）のＮ末端、例えばＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）はＶＨを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＨは、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）はＶＬを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＬは、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＨは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＬは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、接続ペプチドによって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、リンカー及び／または接続ペプチドは、配列番号２１、２２、３３、及び５３のいずれかから選択される。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＬ及びＣＨ１は、約１〜約５（例えば、約１、２、３、４、または５のいずれか）個のジスルフィド結合、例えば、２個のジスルフィド結合などのジスルフィド結合によって接続している。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２３、２８、３５、５８、及び５９のいずれかのアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４または２７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２８または５８のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号３５または５９のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２８または５８のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、静脈内投与される。一部の実施形態では、がんは、ＡＬＬ、ＣＬＬ、ＭＣＬ、またはＢ細胞リンパ腫からなる群から選択される。
【０１７７】
一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）における腫瘍転移（例えば、リンパ節への転移）を阻害する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）における腫瘍転移（例えば、リンパ節への転移）を阻害する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）における腫瘍転移（例えば、リンパ節への転移）を阻害する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）における腫瘍転移（例えば、リンパ節への転移）を阻害する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する２つの抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択の第一のリンカーを介して接続し、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択の第二のリンカーを介して接続しており；第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続しており、第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、腫瘍転移は、少なくとも約１０％（例えば少なくとも約２０％、３０％、４０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％のうちのいずれか）阻害される。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号４もしくは３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５もしくは３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６もしくは３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号８もしくは４０のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＣＤ３ε（例えば、ｈｕＣＤ３εまたはｃｙｎｏＣＤ３ε）のＮ末端、例えばＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）はＶＨを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＨは、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）はＶＬを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＬは、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＨは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＬは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、接続ペプチドによって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、リンカー及び／または接続ペプチドは、配列番号２１、２２、３３、及び５３のいずれかから選択される。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＬ及びＣＨ１は、約１〜約５（例えば、約１、２、３、４、または５のいずれか）個のジスルフィド結合、例えば、２個のジスルフィド結合などのジスルフィド結合によって接続している。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２３、２８、３５、５８、及び５９のいずれかのアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４または２７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２８または５８のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号３５または５９のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２８または５８のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、静脈内投与される。一部の実施形態では、がんは、ＡＬＬ、ＣＬＬ、ＭＣＬ、またはＢ細胞リンパ腫からなる群から選択される。
【０１７８】
一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）における既存腫瘍の転移（例えばリンパ節への転移）を減少する（例えば根絶する）方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）における既存腫瘍の転移（例えばリンパ節への転移）を減少する（例えば根絶する）方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）における既存腫瘍の転移（例えばリンパ節への転移）を減少する（例えば根絶する）方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）における既存腫瘍の転移（例えばリンパ節への転移）を減少する（例えば根絶する）方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する２つの抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択の第一のリンカーを介して接続し、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択の第二のリンカーを介して接続しており；第一の抗ＣＤ３結合��メイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続しており、第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、転移は、少なくとも約１０％（例えば少なくとも約２０％、３０％、４０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％のうちのいずれか）阻害される。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号４もしくは３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５もしくは３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６もしくは３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号８もしくは４０のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＬ及びＣＨ１は、約１〜約５（例えば、約１、２、３、４、または５のいずれか）個のジスルフィド結合、例えば、２個のジスルフィド結合などのジスルフィド結合によって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＣＤ３ε（例えば、ｈｕＣＤ３εまたはｃｙｎｏＣＤ３ε）のＮ末端、例えばＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）はＶＨを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＨは、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）はＶＬを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＬは、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＨは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＬは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、接続ペプチドによって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、リンカー及び／または接続ペプチドは、配列番号２１、２２、３３、及び５３のいずれかから選択される。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２３、２８、３５、５８、及び５９のいずれかのアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４または２７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２８または５８のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号３５または５９のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２８または５８のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、静脈内投与される。一部の実施形態では、がんは、ＡＬＬ、ＣＬＬ、ＭＣＬ、またはＢ細胞リンパ腫からなる群から選択される。
【０１７９】
一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）における腫瘍サイズを減少する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）における腫瘍サイズを減少する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）における腫瘍サイズを減少する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）における腫瘍サイズを減少する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する２つの抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択の第一のリンカーを介して接続し、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択の第二のリンカーを介して接続しており；第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続しており、第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（または���の医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、腫瘍サイズは、少なくとも約１０％（例えば少なくとも約２０％、３０％、４０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％のうちのいずれか）減少する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号４もしくは３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５もしくは３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６もしくは３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号８もしくは４０のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＣＤ３ε（例えば、ｈｕＣＤ３εまたはｃｙｎｏＣＤ３ε）のＮ末端、例えばＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）はＶＨを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＨは、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）はＶＬを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＬは、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＨは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＬは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、接続ペプチドによって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、リンカー及び／または接続ペプチドは、配列番号２１、２２、３３、及び５３のいずれかから選択される。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＬ及びＣＨ１は、約１〜約５（例えば、約１、２、３、４、または５のいずれか）個のジスルフィド結合、例えば、２個のジスルフィド結合などのジスルフィド結合によって接続している。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２３、２８、３５、５８、及び５９のいずれかのアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４または２７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２８または５８のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号３５または５９のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２８または５８のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、静脈内投与される。一部の実施形態では、がんは、ＡＬＬ、ＣＬＬ、ＭＣＬ、またはＢ細胞リンパ腫からなる群から選択される。
【０１８０】
一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）における疾患無増悪期間を延長する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）における疾患無増悪期間を延長する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）における疾患無増悪期間を延長する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）における疾患無増悪期間を延長する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する２つの抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択の第一のリンカーを介して接続し、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択の第二のリンカーを介して接続しており；第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続しており、第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、���ＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、本方法は、疾患無増悪期間を、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、もしくは１２週間、またはそれ以上のいずれか延長する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号４もしくは３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５もしくは３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６もしくは３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号８もしくは４０のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＣＤ３ε（例えば、ｈｕＣＤ３εまたはｃｙｎｏＣＤ３ε）のＮ末端、例えばＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）はＶＨを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＨは、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）はＶＬを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＬは、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＨは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＬは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、接続ペプチドによって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、リンカー及び／または接続ペプチドは、配列番号２１、２２、３３、及び５３のいずれかから選択される。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＬ及びＣＨ１は、約１〜約５（例えば、約１、２、３、４、または５のいずれか）個のジスルフィド結合、例えば、２個のジスルフィド結合などのジスルフィド結合によって接続している。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２３、２８、３５、５８、及び５９のいずれかのアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４または２７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２８または５８のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号３５または５９のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２８または５８のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、静脈内投与される。一部の実施形態では、がんは、ＡＬＬ、ＣＬＬ、ＭＣＬ、またはＢ細胞リンパ腫からなる群から選択される。
【０１８１】
一部の実施形態では、がんを有する個体（例えば、ヒト）の生存を延長する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、がんを有する個体（例えば、ヒト）の生存を延長する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、がんを有する個体（例えば、ヒト）の生存を延長する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、がんを有する個体（例えば、ヒト）の生存を延長する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する２つの抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択の第一のリンカーを介して接続し、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択の第二のリンカーを介して接続しており；第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続しており、第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（または���の医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、本方法は、個体（例えば、ヒト）の生存を、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１８、もしくは２４か月、またはそれ以上のいずれか延長する。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号４もしくは３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５もしくは３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６もしくは３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号８もしくは４０のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＣＤ３ε（例えば、ｈｕＣＤ３εまたはｃｙｎｏＣＤ３ε）のＮ末端、例えばＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）はＶＨを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＨは、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）はＶＬを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＬは、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＨは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＬは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、接続ペプチドによって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、リンカー及び／または接続ペプチドは、配列番号２１、２２、３３、及び５３のいずれかから選択される。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＬ及びＣＨ１は、約１〜約５（例えば、約１、２、３、４、または５のいずれか）個のジスルフィド結合、例えば、２個のジスルフィド結合などのジスルフィド結合によって接続している。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２３、２８、３５、５８、及び５９のいずれかのアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４または２７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２８または５８のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号３５または５９のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２８または５８のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、静脈内投与される。一部の実施形態では、がんは、ＡＬＬ、ＣＬＬ、ＭＣＬ、またはＢ細胞リンパ腫からなる群から選択される。
【０１８２】
一部の実施形態では、がんを有する個体（例えば、ヒト）における１つまたは複数の症状を緩和する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、がんを有する個体（例えば、ヒト）における１つまたは複数の症状を緩和する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、がんを有する個体（例えば、ヒト）における１つまたは複数の症状を緩和する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、がんを有する個体（例えば、ヒト）における１つまたは複数の症状を緩和する方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する２つの抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択の第一のリンカーを介して接続し、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択の第二のリンカーを介して接続しており；第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続しており、第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号４もしくは３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５もしくは３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６もしくは３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号８もしくは４０のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＣＤ３ε（例えば、ｈｕＣＤ３εまたはｃｙｎｏＣＤ３ε）のＮ末端、例えばＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）はＶＨを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＨは、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）はＶＬを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＬは、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＨは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＬは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、接続ペプチドによって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、リンカー及び／または接続ペプチドは、配列番号２１、２２、３３、及び５３のいずれかから選択される。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＬ及びＣＨ１は、約１〜約５（例えば、約１、２、３、４、または５のいずれか）個のジスルフィド結合、例えば、２個のジスルフィド結合などのジスルフィド結合によって接続している。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２３、２８、３５、５８、及び５９のいずれかのアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４または２７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２８または５８のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号３５または５９のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２８または５８のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、静脈内投与される。一部の実施形態では、がんは、ＡＬＬ、ＣＬＬ、ＭＣＬ、またはＢ細胞リンパ腫からなる群から選択される。
【０１８３】
一部の実施形態では、がんを有する個体（例えば、ヒト）において末梢Ｔ細胞の再分布を誘導する（例えば、Ｔ細胞を、ＣＤ１９などの腫瘍抗原を発現する組織または腫瘍に動員する）方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、がんを有する個体（例えば、ヒト）において末梢Ｔ細胞の再分布を誘導する（例えば、Ｔ細胞を、ＣＤ１９などの腫瘍抗原を発現する組織または腫瘍に動員する）方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、がんを有する個体（例えば、ヒト）において末梢Ｔ細胞の再分布を誘導する（例えば、Ｔ細胞を、ＣＤ１９などの腫瘍抗原を発現する組織または腫瘍に動員する）方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択のリンカーを介して接続しており；抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、がんを有する個体（例えば、ヒト）において末梢Ｔ細胞の再分布を誘導する（例えば、Ｔ細胞を、ＣＤ１９などの腫瘍抗原を発現する組織または腫瘍に動員する）方法を提供し、該方法は、個体に有効量の、以下：ｉ）（ａ）ＶＨ及びＣＨ１；ならびに（ｂ）ＶＬ及びＣＬを含む、ＣＤ１９（例えば、ｈｕＣＤ１９またはｃｙｎｏＣＤ１９）を特異的に認識する抗ＣＤ１９  Ｆａｂ；ならびにｉｉ）ＣＤ３（例えば、ｈｕＣＤ３またはｃｙｎｏＣＤ３）を特異的に認識する２つの抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含み；抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）���、直接または任意選択の第一のリンカーを介して接続し、抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、直接または任意選択の第二のリンカーを介して接続しており；第一の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続しており、第二の抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬのＮ末端に接続している、ＢＳＡＰ（またはその医薬組成物）を投与することを含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号４もしくは３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５もしくは３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号６もしくは３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＬは、配列番号８もしくは４０のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＣＤ３ε（例えば、ｈｕＣＤ３εまたはｃｙｎｏＣＤ３ε）のＮ末端、例えばＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７内のエピトープを特異的に認識する。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）はＶＨを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＨは、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む；及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）はＶＬを含み、抗ＣＤ３結合ドメインのＶＬは、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＨは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、及び／または抗ＣＤ３結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）のＶＬは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３結合ドメインは、ｓｃＦｖである。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、接続ペプチドによって接続している。一部の実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、リンカー及び／または接続ペプチドは、配列番号２１、２２、３３、及び５３のいずれかから選択される。一部の実施形態では、抗ＣＤ１９  ＦａｂのＣＬ及びＣＨ１は、約１〜約５（例えば、約１、２、３、４、または５のいずれか）個のジスルフィド結合、例えば、２個のジスルフィド結合などのジスルフィド結合によって接続している。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２３、２８、３５、５８、及び５９のいずれかのアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４または２７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％（例えば少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか）同一であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２８または５８のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号３５または５９のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰは、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドは、配列番号２８または５８のアミノ酸配列を含み、第二のポリペプチドは、配列番号２７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、静脈内投与される。一部の実施形態では、がんは、ＡＬＬ、ＣＬＬ、ＭＣＬ、またはＢ細胞リンパ腫からなる群から選択される。
【０１８４】
本明細書に記載の方法は、固形がん及び液体がんの両方を含む、様々ながんの処置に好適である。本方法は、初期段階のがん、非転移性がん、原発性がん、進行がん、局所進行がん、転移性がん、または寛解期のがんを含む、全ての段階のがんに適用可能である。本明細書に記載の方法は、第一療法、第二療法、第三療法、または、アジュバント設定もしくはネオアジュバント設定での、化学療法、手術、放射線、遺伝子療法、免疫療法、骨髄移植、幹細胞移植、標的療法、凍結療法、超音波療法、光力学的療法、ラジオ波焼灼療法などの当該技術分野で公知の他のタイプのがん治療法との併用療法として使用し得る。一部の実施形態では、がんは、以前の治療に対して難治性である。
【０１８５】
本発明の方法によって処置され得る固形がんの例としては、神経膠芽細胞腫、非小細胞肺癌、非小細胞肺癌以外の肺癌、乳癌、前立腺癌、膵臓癌、肝臓癌、結腸癌、上皮癌、胃癌、脾臓癌、皮膚癌、神経膠芽細胞腫以外の脳癌、腎癌、甲状腺癌などが挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、個体は、リンパ腫、例えばホジキン病または非ホジキンリンパ腫（ＴまたはＢ細胞型）を有する。
【０１８６】
一部の実施形態では、がんは、血液及び／または骨髄を冒すがんを含む液体腫瘍である。一部の実施形態では、個体は、白血病などの造血障害（またはがん）、例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、または有毛細胞白血病（ＨＣＬ）を有する。一部の実施形態では、個体は、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）を有する。一部の実施形態では、個体は、真性多血症（ＰＶ、ＰＣＶ、または真性一次性赤血球増加症（ＰＲＶ）としても知られる）、本態性血小板血症（ＥＴ）、または骨髄線維症などの骨髄増殖性障害を有する。一部の実施形態では、個体は、軽鎖疾患、ワルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）、意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、または形質細胞白血病（ＰＣＬ）によって引き起こされるアミロイドーシスを有する。
【０１８７】
特に、一部の実施形態では、がんは、ＣＤ１９を発現するがん、例えば急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、またはＢ細胞リンパ腫などの、ＣＤ１９の発現に関連するまたはこれを特徴とする。
【０１８８】
ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物の例示的な投与経路としては、静脈内、腔内、腫瘍内、動脈内、筋肉内、皮下、非経口、経粘膜、経皮、点眼、局所、腹腔内、頭蓋内、胸膜内及び上皮経路、またはがん細胞を含有することが知られているリンパ腺、体腔、臓器もしくは組織への送達が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、静脈内投与される。一部の実施形態では、ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、注入によって投与される。一部の実施形態では、ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、皮下投与される。一部の実施形態では、ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、注射によって投与される。
【０１８９】
一部の実施形態では、本明細書に記載のＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、静脈内注入によって投与される。一部の実施形態では、ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、個体（例えば、ヒト）に、約２４時間、２０時間、１５時間、１０時間、８時間、６時間、３時間、２時間、１時間、３０分間、またはそれ未満のいずれか以下の期間にわたって注入される。一部の実施形態では、ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、個体に、約３０分〜約１時間、約１時間〜約２時間、約２時間〜約４時間、約４時間〜約６時間、約６時間〜約８時間、約８時間〜約１０時間、約１０時間〜約１２時間、約１２時間〜約１８時間、約１８時間〜約２４時間、約３０分〜約２時間、約２時間〜約５時間、約５時間〜約１０時間、約１０時間〜約２０時間、約３０分〜約１０時間、または約３０分〜約２０時間のいずれか１つの期間にわたって注入される。本明細書に記載のＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、個体に任意の好適な速度で注入され得る。一部の実施形態では、ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、約０．０１μｇ／ｋｇ／時、０．０２μｇ／ｋｇ／時、０．０５μｇ／ｋｇ／時、０．１μｇ／ｋｇ／時、０．２μｇ／ｋｇ／時、０．５μｇ／ｋｇ／時、０．６μｇ／ｋｇ／時、０．７μｇ／ｋｇ／時、０．８μｇ／ｋｇ／時、０．９μｇ／ｋｇ／時、１μｇ／ｋｇ／時、１．５μｇ／ｋｇ／時、２μｇ／ｋｇ／時、３μｇ／ｋｇ／時、４μｇ／ｋｇ／時、５μｇ／ｋｇ／時、１０μｇ／ｋｇ／時、１５μｇ／ｋｇ／時、２０μｇ／ｋｇ／時、２５μｇ／ｋｇ／時、５０μｇ／ｋｇ／時、７５μｇ／ｋｇ／時、１００μｇ／ｋｇ／時、またはそれ以上のいずれかを超える速度にて注入され得る。
【０１９０】
個体（例えば、ヒト）に投与されるＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物の投薬レジメンは、特定のＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）組成物（例えば医薬組成物）、投与方法、ならびに処置されるがんの特定の種類及び段階によって異なり得る。一部の実施形態では、ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物の有効量は、組成物が個体に投与されたときに、毒性学的効果（すなわち、臨床的に許容可能なレベルの毒性を超える効果）を誘発するレベルを下回る、または潜在的な副作用が制御可能であるもしくは忍容可能であるレベルである。
【０１９１】
一部の実施形態では、ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物の有効量は、中枢神経系に有害作用を誘発するレベルを下回る。例えば、抗体療法で観察される有害作用は、注入関連副作用、例えばサイトカイン放出症候群（「ＣＲＳ」）の発生であり、その重度の症例は、「サイトカインストーム」として公知である。「サイトカインストーム」が誘発されると、健常個体の免疫系が活性化され、大量の炎症促進性サイトカイン、例えばＩＮＦ−γ、ＣＣＬ２、ＩＩＬ−１０、ＩＬ−６などが放出される。これは潜在的に致命的な免疫反応であり、典型的に、サイトカイン及び免疫細胞間の正のフィードバックループからなり、様々なサイトカインのレベルが高く上昇する。ＣＲＳに関連すると説明されている他の有害な副作用は、疲労、嘔吐、頻脈、高血圧、背痛であるが、また、中枢神経系反応（ＣＮＳ反応）、例えば発作、脳症、脳浮腫、無菌性髄膜炎、及び頭痛もある。一部の実施形態では、ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、サイトカインストームなどのサイトカイン放出症候群を誘発しない用量で投与される。一部の実施形態では、ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＴＮＦ、及びＩＮＦ−γからなる群から選択される１つまたは複数のサイトカインの著しい放出を誘発しない用量で投与される。一部の実施形態では、サイトカインの著しい放出は、少なくとも約１時間、２時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１８時間、２４時間、またはそれ以上のいずれかの過程にわたるサイトカインの持続放出である。一部の実施形態では、サイトカインの著しい放出は、少なくとも約１、５、１０、２０、５０、１００、２００、５００、１０００ｐｇ／ｍＬまたはそれ以上のｐｇ／ｍＬのいずれかの濃度でのサイトカインの血清レベルまたは血液レベルである。いずれの理論にも拘束されないが、本明細書に記載のＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、Ｔ細胞を動員及び活性化するために、標的腫瘍細胞上の腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９）への結合を必要とする。このような要件は、望ましくないサイトカインストーム、及び所望の標的腫瘍細胞の非存在下での望ましくないＴ細胞の活性化を大いに減少することができる。
【０１９２】
一部の実施形態では、ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、約０．０１μｇ／ｋｇ、０．０５μｇ／ｋｇ、０．１μｇ／ｋｇ、０．５μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ、２μｇ／ｋｇ、５μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ、１５μｇ／ｋｇ、２０μｇ／ｋｇ、２５μｇ／ｋｇ、３０μｇ／ｋｇ、５０μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ、１５０μｇ／ｋｇ、２００μｇ／ｋｇ、２５０μｇ／ｋｇ、３００μｇ／ｋｇ、４００μｇ／ｋｇ、５００μｇ／ｋｇ、６００μｇ／ｋｇ、７００μｇ／ｋｇ、８００μｇ／ｋｇ、９００μｇ／ｋｇ、または１ｍｇ／ｋｇのいずれか１つ以下の用量で投与される。
【０１９３】
有効量のＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、単回用量または複数回用量で投与され得る。ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物の複数回用量での投与を含む方法の場合、例示的な投与頻度としては、毎日、中断なく毎日、毎週、中断なく毎週、３週のうちの２週、４週のうちの３週、３週毎に１回、２週毎に１回、毎月、６か月毎、毎年などが挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、約２週毎に１回、３週毎に１回、４週毎に１回、６週毎に１回、または８週毎に１回投与される。一部の実施形態では、ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、１週間に少なくとも約１回、２回、３回、４回、５回、６回、または７回（すなわち毎日）のいずれかで投与される。一部の実施形態では、各投与間の間隔は、約３年、２年、１２か月、１１か月、１０か月、９か月、８か月、７か月、６か月、５か月、４か月、３か月、２か月、１か月、４週、３週、２週、１週、６日、５日、４日、３日、２日、または１日のいずれか未満である。一部の実施形態では、各投与間の間隔は、約１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週、２週、３週、４週、１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、７か月、８か月、９か月、１０か月、１１か月、１２か月、２年、または３年のいずれかを超える。一部の実施形態では、投薬スケジュールに中断はない。
【０１９４】
ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物の投与は、延長期間、例えば約１日から約１週間、約１週間から約１か月、約１か月から約１年、約１年から約数年にわたって延長することができる。一部の実施形態では、ＢＳＡＰ（例えば、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ）またはその医薬組成物は、少なくとも約１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週、２週、３週、４週、５週、１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、７か月、８か月、９か月、１０か月、１１か月、１２か月、１年、２年、３年、４年、またはそれ以上のいずれかの期間にわたって投与される。
【実施例】
【０１９５】
下記の実施例及び上記の例示的な実施形態は、単に本発明の例示となるよう意図されており、それゆえ、決して本発明を限定するものと見なされるべきではない。以下の実施例及び発明を実施するための形態は、限定するものではなく、例証として提供する。実験方法の詳細が記載されていない実施形態については、そのような方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９８９）に記載のものなどの従来の条件に従って、または製造業者の推奨の通りに行われる。
【０１９６】
本発明で言及する全ての参考文献は、それらの参考文献の各々が個別に参照により組み込まれている場合と同様に、参照により本明細書に組み込まれる。記載は特定の実施形態に言及しているが、本発明がこれらの特定の詳細の変形で実施され得ることが当業者には明らかであるだろう。従って、本発明は、本明細書に記載の実施形態に限定されると解釈されるべきではない。
【０１９７】
実施例１．例示的な二重特異性抗原結合タンパク質の発現及び精製
二重特異性抗原結合タンパク質（ＢＳＡＰ）は、標準的なプロトコルを使用して発現させた。ＢＳＡＰの第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドをコードするＤＮＡフラグメントを、ｐＢＯＳベースのベクターにクローン化して、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを発現する構築物を生成した。この構築物はまた、第一のポリペプチドタンパク質及び第二のポリペプチドタンパク質の分泌を促進するために、シグナルペプチドをコードする配列も含有した。
【０１９８】
例示的なＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰのアミノ酸配列及びそれをコードする核酸配列を、表１に示す。図１Ａは、これらの例示的なＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰの構造を示す。本明細書にて実証する例示的なＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰは、リンカーを介して抗ＣＤ１９  ＦａｂのＶＨのＮ末端に接続している抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含む。
【表１】
2021535758.tif 000015
【０１９９】
例としてＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ  ＩＴＡＢ２００３を取り上げると、ＩＴＡＢ２００３の第一のポリペプチドをコードするＤＮＡフラグメント（核酸配列配列番号３２）及びＩＴＡＢ２００３の第二のポリペプチドをコードするＤＮＡフラグメント（核酸配列配列番号３１）は、それぞれ、ベクターｐｃＤＮＡへとクローン化され、次に、ｐＢＯＳベースのベクターへとサブクローン化され、ＩＴＡＢ２００３の第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドをコードするＤＮＡフラグメントはまた、各々、コザック配列及びシグナルペプチド配列（アミノ酸配列配列番号２５、核酸配列配列番号２６）を含み、それによって、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ  ＩＴＡＢ２００３の第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを発現する構築物を生成する。他の例示的なＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰも同様に構築された。配列決定の結果は、正しい遺伝子挿入を示した。構築物を、Ｅ．ｃｏｌｉに形質転換して、トランスフェクショングレードのプラスミドＤＮＡを得た。ＨＥＫ２９３細胞を、ＥＸＰＩ２９３（商標）発現培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にて増殖させた。トランスフェクションのために、プラスミドＤＮＡ（ＢＳＡＰの第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドをコードするＤＮＡ構築物）及び２５ｋＤポリエチレンイミン（ＰＥＩ；１：３のＤＮＡ／直鎖状２５ｋＤ  ＰＥＩ重量比）を含有する１０ｍＬの培地を、９０ｍＬの細胞培養物に加えた。代替的には、約３０μｇのＤＮＡ混合物（ＢＳＡＰの第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドをコードするＤＮＡ構築物）を、製造業者の指示に従って、ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ  ２９３トランスフェクションキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、ＨＥＫ２９３細胞へとトランスフェクトした。トランスフェクトされた細胞を、ＣＯ２インキュベーター（３７℃、５％ＣＯ２、１２５ｒｐｍ）にて約６日間培養し、次に、上清を収集した。
【０２００】
細胞培養上清を、ＩｇＧ−ＣＨ１アフィニティークロマトグラフィー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で精製して、標的タンパク質を得た。細胞培養上清を、０．２２μｍ滅菌膜を通して濾過し、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ及び１０ｍＭリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．５）で平衡させたＩｇＧ−ＣＨ１アフィニティマトリクスにロードし、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ及び５０ｍＭ  ＮａＡｃ緩衝液（ｐＨ３．５）で溶出した。溶出物を、２Ｍ  Ｔｒｉｓ溶出液で７．２のｐＨに調整し、１０ｋＤ分子量カットオフを有するビバスピン遠心濃縮機（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）で濃縮した。精製されたタンパク質は、４℃で保管した。
【０２０１】
実施例２．ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰの結合親和性の決定
抗原結合親和性
例示的なＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ  ＩＴＡＢ２００９内の抗ＣＤ１９  Ｆａｂ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖの、対応するヒト（「ｈｕ」）及びカニクイザル（「ｃｙｎｏ」）抗原との結合親和性を、Ｏｃｔｅｔ  ＱＫｅと抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ捕捉（ＡＨＣ）バイオセンサーを使用して測定した。ヒトＣＤ３抗原構築物（ＣＤ３εＡＡ  １〜２７．Ｆｃ）及びカニクイザルＣＤ３抗原構築物（ｃｙｎｏＣＤ３εＡＡ  １〜２７．Ｆｃ）は各々、ヒトＩｇＧ  Ｆｃに接続したＣＤ３εのアミノ酸残基１〜２７のペプチドからなる。抗原構築物の発現は、ＵＳ８，８４６，０４２に記載されている。ＣＤ３またはＣＤ１９抗原構築物（カニクイザル／アカゲザルＣＤ１９タンパク質（Ｆｃタグ）、Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ．Ｉｎｃ．；組み換えヒトＣＤ１９  Ｆｃキメラ、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ．Ｉｎｃ．）を、希釈緩衝液（ＰＢＳ）で０．０２ｍｇ／ｍＬに希釈し、次に、抗ヒトＦｃ捕捉（ＡＨＣ）バイオセンサー上に固定化した。ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ  ＩＴＡＢ２００９を、黒色マイクロプレートにて様々な濃度に希釈し、次に固定化した対応する抗原構築物と反応させた。ＰＢＳのみを含有する対照ウェルも、設定した。検出結果は、ＦｏｒｔｅＢｉｏデータ分析ソフトウェアを使用して分析した。
【０２０２】
表２に示すように、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ  ＩＴＡＢ２００９は、ヒト及びカニクイザル両方のＣＤ１９及びＣＤ３抗原構築物に対して良好なｉｎ  ｖｉｔｒｏ結合親和性を呈し、ヒト及びカニクイザルにおけるＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰの交差反応性を実証している。
【表２】
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【０２０３】
細胞結合親和性
以下の結合アッセイを行って、それぞれ、ヒト末梢血単核細胞（ｈｕＰＢＭＣ）及びカニクイザルｃｙｎｏＰＢＭＣにおけるＴ細胞及びＢ細胞に対する、例示的なＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰの結合親和性を決定した。
【０２０４】
ヒトＰＢＭＣ調製：健常成人からの白血球濃縮試料を、ＰＢＳ緩衝液（Ｇｉｂｃｏ）で希釈し、密度勾配遠心分離（Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ，ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によって遠心分離して、ＰＢＭＣを得た。細胞を収集し、１０％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ  １６４０培地（Ｇｉｂｃｏ）に再懸濁した。
【０２０５】
ＣｙｎｏＰＢＭＣ調製：カニクイザルからの全血試料を、ＰＢＳ緩衝液（Ｇｉｂｃｏ）で希釈し、９０％Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ分離緩衝液（Ｆｉｃｏｌｌ−ＰａｑｕｅをＰＢＳで希釈することにより得た、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して密度勾配遠心分離によって遠心分離してＰＢＭＣを得、ＰＢＳで２回洗浄し、次に室温、１０００ｇで１０分間遠心分離した。細胞を収集し、１０％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ  １６４０培地（Ｇｉｂｃｏ）に再懸濁した。
【０２０６】
約３．６×１０５個のＰＢＭＣ（ｈｕＰＢＭＣまたはｃｙｎｏＰＢＭＣ）／ウェルを、９６ウェルプレートに加えた。ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ  ＩＴＡＢ２００９を、ＦＡＣＳ緩衝液（１％ＦＢＳを含むＰＢＳ）を使用して、様々な濃度に希釈し、次に、実験設計に従って９６ウェルプレートに加え、室温で４５分間インキュベートした。ＩＴＡＢ２００９を伴わない対照群（１％ＦＢＳ／ＰＢＳ＋ＰＢＭＣ）も設定した。細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液で１回洗浄し、５０μＬ  ＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁し、抗体ＰＥマウス抗ヒトＣＤ２０（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ（商標））、ＦＩＴＣマウス抗ヒトＣＤ４（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ（商標））、及びＡＰＣマウス抗ヒトＩｇ、κ軽鎖（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ（商標））を補充し、室温で４５分間インキュベートした。２００μＬ  ＦＡＣＳ緩衝液を最後に加え、試料を、ＡＣＣＵＲＩ（登録商標）Ｃ６サイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して分析した。
【０２０７】
結合率をｙ軸に対してプロットし、薬物濃度をｘ軸に対してプロットした。曲線を、４パラメーターロジスティックモデルを使用して当てはめて、ＥＣ５０を決定した。検出結果を表３及び図２Ａ〜２Ｂに示す。
【表３】
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【０２０８】
結果からわかるように、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ  ＩＴＡＢ２００９は、ヒト及びカニクイザルの両方のＰＢＭＣにおいて、Ｔ細胞及びＢ細胞に対して良好な結合親和性を呈した。
【０２０９】
要約すると、例示的なＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでヒト及びカニクイザルの両方からの抗原に対して交差反応性を実証した。ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰの交差反応性は、カニクイザルにおける毒性試験の結果をヒト臨床試験に外挿するのに有益である。
【０２１０】
実施例３．自己Ｂ細胞に対するＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ媒介ＰＢＭＣ細胞毒性のｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性
ヒト及びカニクイザルＰＢＭＣを、実施例２に記載の方法に従って調製し、１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）を含有するＲＰＭＩ  １６４０培地（Ｇｉｂｃｏ）に再懸濁した。
【０２１１】
２００μＬ（／ウェル）の約３×１０５個のＰＢＭＣを、９６ウェルプレートの各ウェルに加え、異なる濃度に希釈したＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ  ＩＴＡＢ２００３、ＩＴＡＢ２００５、及びＩＴＡＢ２００６を、実験設計に従って９６ウェルプレートに加えた。薬物を含まない対照ウェルも設定した（ＰＢＭＣのみ）。混合物を３７℃、５％ＣＯ２で約１８〜２４時間インキュベートした。次に、細胞を回収し、抗体ＦＩＴＣマウス抗ヒトＣＤ２０（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ（商標））と３０分間室温にてインキュベートした。ヨウ化プロピジウム（Ｓｉｇｍａ）を、２μｇ／ｍＬで加え、１５分間染色した。分析は、ＡＣＣＵＲＩ  Ｃ６（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して実施した。
【０２１２】
ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）は、一般的に使用される核蛍光色素である。ＰＩは、インタクトな細胞膜に浸透できないため、インタクトな細胞膜を伴う生細胞を染色することができない；一方で、死細胞は、膜の完全性を失い、ＰＩは細胞に入ってＤＮＡに結合することができる。ゆえに、ＰＩ染色を使用して死細胞を同定することができる。ＣＤ２０陽性は、生存可能Ｂ細胞を示し、ＣＤ２０及びＰＩの両方に陽性の細胞は死んだＢ細胞を表す。ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ媒介細胞毒性は、以下の式：死亡率＝［１−（試料ウェル生存Ｂ細胞／試料ウェル全Ｂ細胞）／（対照ウェル生存Ｂ細胞／対照ウェル全Ｂ細胞）］×１００％を使用して計算した。
【０２１３】
死亡率はｙ軸に対してプロットし、薬物濃度はｘ軸に対してプロットした。曲線を、４パラメーターロジスティックモデルを使用して当てはめて、ＥＣ５０を決定した。アッセイ結果を、表４及び図３Ａ〜３Ｂに示す。
【表４】
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【０２１４】
結果は、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰがカニクイザルＰＢＭＣまたはヒトＰＢＭＣを媒介して自己Ｂ細胞を殺傷することができることを実証する。検査したＢＳＡＰの中で、ＩＴＡＢ２００６（配列番号２２、ＧＲＡＧＧＧＧＡＧＧＧＧからなるリンカー、リンカー長さは１２アミノ酸残基である）によって媒介される自己Ｂ細胞に対するカニクイザルＰＢＭＣの細胞殺傷活性は、ＩＴＡＢ２００５（リンカーは、配列番号３３、ＧＡＧＧＧからなる、リンカー長さは６アミノ酸残基である）によって媒介されるものと類似する。図３Ａを参照されたい。同様に、ＩＴＡＢ２００６によって媒介される自己Ｂ細胞に対するヒトＰＢＭＣの殺傷活性は、ＩＴＡＢ２００５によって媒介されるものと類似する（図３Ｂ）。ＩＴＡＢ２００５及びＩＴＡＢ２００６の両方が有する、自己Ｂ細胞に対するＰＢＭＣ細胞毒性の媒介における生物学的活性が、ＩＴＡＢ２００３によって媒介されるものと比較して、有意に改善したことは注目に値する。ＩＴＡＢ２００５またはＩＴＡＢ２００６によって媒介される細胞殺傷活性は、カニクイザルＰＢＭＣに関してはＩＴＡＢ２００３によって媒介される細胞殺傷活性の少なくとも約６２倍であり、ヒトＰＢＭＣに関してはＩＴＡＢ２００３によって媒介される細胞殺傷活性の少なくとも約７倍である。
【０２１５】
実施例４．腫瘍細胞に対するＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ媒介ヒトＰＢＭＣ細胞毒性（細胞毒性アッセイ）
ヒトＰＢＭＣを、実施例２に記載の方法に従って調製し、１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）を含有するＲＰＭＩ  １６４０培地（Ｇｉｂｃｏ）に再懸濁した。
【０２１６】
Ｒａｊｉ細胞（標的細胞、バーキットリンパ腫細胞株、ＣＤ１９＋）を、洗浄及び遠心分離し、ＤｉＯＣ１８（３）（３，３’−ジオクタデシルオキサカルボシアニン過塩素酸塩、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で１５分間染色し、１０％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｇｉｂｃｏ）に再懸濁した。ＤｉＯＣ１８（３）を使用して、標的細胞の膜を染色した。１００μＬ  ３×１０４個／ウェルのＲａｊｉ細胞及び１００μＬ  ３×１０５個／ウェルのヒトＰＢＭＣを、９６ウェルプレートの各ウェルに加えた。次に、検査ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ（例えば、ＩＴＡＢ２００３、ＩＴＡＢ２００９）を、実験設計に従って異なる濃度で細胞混合物に加えた。薬物を含まないウェル（ＰＢＭＣ＋Ｒａｊｉ標的細胞）、Ｒａｊｉ標的細胞のみを含有するウェル、及びＰＢＭＣ細胞のみを含有するウェルを対照として設定した。約４８時間のインキュベーションを、３７℃にて５％  ＣＯ２で行った。次に、細胞を、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ、Ｓｉｇｍａ）によって染色して、死細胞を標識した。染色されていない対照ウェルも、設定した。ＡＣＣＵＲＩ  Ｃ６サイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を、分析に使用した。
【０２１７】
ＤｉＯＣ１８（３）陽性細胞は、生存Ｒａｊｉ細胞を表し、ＤｉＯＣ１８（３）及びヨウ化プロピジウム両方の陽性細胞は、死んだＲａｊｉ細胞を表す。ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ媒介腫瘍細胞毒性は、以下の式：死亡率＝［１−（試料ウェル生存Ｒａｊｉ細胞／試料ウェル全Ｒａｊｉ細胞）／（対照ウェル生存Ｒａｊｉ細胞／対照ウェル全Ｒａｊｉ細胞）］×１００％を使用して計算した。
【０２１８】
死亡率はｙ軸に対してプロットし、薬物濃度はｘ軸に対してプロットした。曲線を、４パラメーターロジスティックモデルを使用して当てはめて、ＥＣ５０を決定した。アッセイ結果を、図４に示す。
【０２１９】
図４に示すように、例示的なＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰは、ヒトＰＢＭＣを媒介して、Ｒａｊｉ腫瘍細胞を殺傷することができる。ＩＴＢ２００９のＥＣ５０は、０．０４ｎｇ／ｍＬであった。ＩＴＢ２００３のＥＣ５０は、０．４９ｎｇ／ｍＬであった。結果は、ＩＴＡＢ２００９が有する、ヒトＰＢＭＣを媒介して腫瘍細胞（例えば、Ｒａｊｉ）を殺傷する活性が有意に増強しており、その殺傷活性が、ＩＴＡＢ２００３によって媒介される殺傷活性の約１２倍であることを実証する。
【０２２０】
ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ  ＩＴＡＢ２００９によって媒介される腫瘍細胞Ｄａｕｄｉ（バーキットリンパ腫細胞株、ＣＤ１９＋）及びＲｅｈ（ＡＬＬ細胞株（ｃｅｌｌ  ｃｌｉｎｅ）、ＣＤ１９＋）に対するヒトＰＢＭＣの殺傷活性も、同様の方法を使用して決定した。殺傷率はｙ軸に対してプロットし、薬物濃度はｘ軸に対してプロットした。曲線を、４パラメーターロジスティックモデルを使用して当てはめて、ＥＣ５０を決定した。アッセイ結果を、表５に示す。これらの結果は、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ（例えば、ＩＴＡＢ２００９）が、リンパ腫及び急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）の両方に対して、Ｔ細胞ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞毒性を媒介することを示す。
【表５】
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【０２２１】
実施例５．免疫再構築マウスモデルにおける皮下ヒトリンパ腫腫瘍異種移植片の殺傷におけるＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰの有効性アッセイ
ヒト腫瘍異種移植片の成長の阻害に対する例示的なＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰの効果を調べるために、ｉｎ  ｖｉｖｏ薬物有効性アッセイを、ヒトリンパ球を用いて免疫系を再構築し、ヒトＢ細胞リンパ腫腫瘍細胞（Ｒａｊｉ）を移植した免疫不全マウスで行った。リツキシマブ（抗ＣＤ２０抗体、Ｍａｅｔｒｏ（登録商標）、Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｒｏｃｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）を、Ｂ細胞リンパ腫の処置に関する陽性対照として注射した。
【０２２２】
雌免疫不全マウスＮＯＤ  ＳＣＩＤ（ＮＯＤ．Ｃｇ−ＰｒｋｄｃｓｃｉｄＩＩ２ｒｇｔｍ１Ｓｕｇ／ＪｉｃＣｒｌ）を、Ｂｅｉｊｉｎｇ  Ｗｅｉｔｏｎｇ  Ｌｉｈｕａ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入し、ＳＰＦレベルの動物施設で飼育した。
【０２２３】
マウスを、最初にブスルファン（Ｓｉｇｍａ）を用いて腹腔内処置して、骨髄細胞を根絶した。３日目に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養したＲａｊｉ細胞（バーキットリンパ腫細胞株）を収集し、完全に混合し、氷上で予冷した無血清培地に再懸濁し、ＮＯＤマウスの右背側部に皮下接種した（各動物は、約２．０×１０６個の腫瘍細胞を接種した）。接種日を、０日目と定義した。４日後、健常なヒトから供与された白血球濃縮物試料を収集し、密度勾配遠心分離（Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によって遠心分離してＰＢＭＣを得て、氷上で予冷した無血清培地に再懸濁し、ＮＯＧマウスに腹腔内接種した（各動物は、約３．０×１０６個のＰＢＭＣを接種した）。腫瘍体積が、１００〜３５０ｍｍ３に達したとき（１４日目）、４０匹の動物を、腫瘍体積に基づいて５つの群（８動物／群）に分け、ビヒクル対照群、５０μｇ／ｋｇ  ＩＴＡＢ２００９処置群、５μｇ／ｋｇ  ＩＴＡＢ２００９処置群、０．５μｇ／ｋｇ  ＩＴＡＢ２００９処置群、及び１０ｍｇ／ｋｇリツキシマブ陽性対照群と称した。
【０２２４】
検査するＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ  ＩＴＡＢ２００９を、滅菌濾過ビヒクル緩衝液（ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ−８０）を使用して所望の濃度に希釈し、マウスに、毎日、０．１ｍＬ／１０ｇ体重（それぞれ、５０μｇ／ｋｇ、５μｇ／ｋｇ、及び０．５μｇ／ｋｇの用量に相当）の容量で腹腔内投与した。ビヒクル対照群の動物には、同じ容量のビヒクルを投与した。陽性対照薬リツキシマブは、滅菌濾過ビヒクル（ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ−８０）を使用して所望の濃度に希釈し、マウスに、毎週、合計４回、０．１ｍＬ／１０ｇ体重（１０ｍｇ／ｋｇの用量に相当）の容量で腹腔内投与した。
【０２２５】
動物を、体重及び腫瘍体積に関して、週２回評価した。腫瘍体積は、式：腫瘍体積（ｍｍ３）＝長さ（ｍｍ）×幅（ｍｍ）×幅（ｍｍ）×０．５に従って計算した。腫瘍成長阻害率（ＴＧＩ％）を使用して、薬物有効性を評価した。ＴＧＩ％＝［１−（ａｖＴｉ−ａｖＴ０）／（ａｖＣｉ−ａｖＣ０）］×１００、式中、ａｖＴｉ−ａｖＴ０は、処置群についてのｉ日目の平均腫瘍サイズから最初の投薬日の平均腫瘍サイズを差し引いたものであり、ａｖＣｉ−０は、ビヒクル対照群についてのｉ日目の平均腫瘍サイズから最初の投薬日の平均腫瘍サイズを差し引いたものである。
【０２２６】
図５から見ることができるように、Ｒａｊｉ腫瘍細胞は、ヒト末梢血単核細胞で免疫再構築されたＮＯＧマウスに皮下接種された後、ビヒクル対照群で通常に成長した。平均腫瘍体積は、ビヒクル対照群において、接種後２９日目に、３９４７．６６±５６０．７２ｍｍ３に達した。図５に示すように、異なる用量のＣＤ１９×ＢＳＡＰ  ＩＴＡＢ２００９を、１５日間連続して投与して、用量依存的様式でＮＯＧマウスにおけるヒトＢ細胞リンパ腫細胞Ｒａｊｉ腫瘍異種移植片の成長を阻害した。２９日目で、ＩＴＡＢ２００９  ０．５μｇ／ｋｇ処置群、５μｇ／ｋｇ処置群、及び５０μｇ／ｋｇ処置群の腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）は、それぞれ、３４．５３％（ｐ＝０．５７９１）、７７．２１％、（ｐ＝０．２３３９）、及び９５．０７％（ｐ＝０．００７７）であった；５０μｇ／ｋｇ処置群の８匹の動物のうちの１匹は、腫瘍負荷を伴わずに完全な腫瘍退縮を有した。リツキシマブ１０ｍｇ／ｋｇ群におけるリツキシマブの毎週の投与は、Ｒａｊｉ腫瘍成長を部分的に阻害した（ＴＧＩ＝４４．１７％、ｐ＝０．９９８３、２９日目）が、ビヒクル対照群と比較して統計学的な有意差はなかった。ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ  ＩＴＡＢ２００９  ５μｇ／ｋｇ処置群及び５０μｇ／ｋｇ処置群は、リツキシマブ１０ｍｇ／ｋｇ処置群と比較して有意に優れた治療有効性を実証した。これらの結果は、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰが、ｉｎ  ｖｉｖｏで免疫細胞を媒介してＢ細胞リンパ腫を殺傷することができ、用量依存的様式で、腫瘍成長を有意に阻害できることを実証する。
【０２２７】
実施例６．ヒト初代Ｔ細胞及びＲｅｈ白血病細胞を静脈内注射したマウス生存モデル（免疫再構築モデル）でのＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰの有効性アッセイ
異種移植腫瘍に対する例示的なＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰの成長阻害有効性を調べるために、ヒト前駆体Ｂ細胞（ｐｒｅＢ）急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）Ｒｅｈ細胞及びヒト初代Ｔ細胞を静脈内注射した免疫不全ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスを、白血病生存延長のＢＳＡＰ  ｉｎ  ｖｉｖｏ有効性について評価した。
【０２２８】
雌の免疫不全マウスＮＯＤ／ＳＣＩＤ（ＮＯＤ．ＣＢ１７−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ／ＮｃｒＣｒｌ）を、Ｂｅｉｊｉｎｇ  Ｗｅｉｔｏｎｇ  Ｌｉｈｕａ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入し、ＳＰＦレベルの動物施設で飼育した。
【０２２９】
健常ヒト初代Ｔ（Ｐｒｉ−Ｔ）細胞の培養：ヒトＰＢＭＣを、実施例２に記載のように調製し、１．５〜２．５×１０６／ｍＬの細胞密度で１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）を含有するＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｇｉｂｃｏ）に再懸濁した。ＰＢＭＣを、マウスＩｇＧ２ａ抗ヒトＣＤ３抗体（５μｇ／ｍＬ）（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｉｎｃ．）及びマウスＩｇＧ１抗ヒトＣＤ２８抗体（１μｇ／ｍＬ）（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｉｎｃ．）でコーティングした培養フラスコへと接種し、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで培養した。
【０２３０】
Ｒｅｈ細胞は、１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）を含有するＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｇｉｂｃｏ）にて、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで培養した。
【０２３１】
ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスが２２〜２４ｇに達したとき、各マウスに１．０×１０７個のＲｅｈ細胞を、尾静脈へと注射した（０日目として定義した）。３日目に、各マウスに、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養した４．０×１０６個の健常ヒト初代Ｔ細胞を、尾静脈を介して接種した。次に、動物を体重に基づいてランダムに２つの群に分けた：それぞれ、ビヒクル対照群（ＰＢＳＴ、ｎ＝１３）及びＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ  ＩＴＡＢ２００９処置群（ｎ＝１２）。ヒトｐｒｉ−Ｔ細胞接種の２時間後、動物に、溶媒ＰＢＳＴ（ビヒクル対照群用）またはＩＴＡＢ２００９（ＩＴＡＢ２００９処置群）のいずれかを腹腔内注射により投与した。ＩＴＡＢ２００９は、毎日５０μｇ／ｋｇの用量で３日間連続して投与した；その後、用量を毎日１００μｇ／ｋｇへと３日間連続して増加させた（ＩＴＡＢ２００９は、１回の処置につき合計６日間注射した）。上記のｐｒｉ−Ｔ細胞接種及び６日間のＩＴＡＢ２００９処置サイクルを、３回反復し、これには同じドナーに由来するヒト初代Ｔ細胞を使用した（すなわち、ヒト初代Ｔ細胞接種日は、９日目、１５日目、及び２１日目であり、合計ＩＴＡＢ２００９投薬期間は、２４日であった）；最後の３回投与セッション中のマウス当たりの接種したヒト初代Ｔ細胞の量は、１．０×１０７個であった。
【０２３２】
動物の行動を毎日モニターし、マウスの体重を記録した。ＢＳＡＰ投与は、動物の体重が１５％より多く減少した場合に中止した。動物が、衰弱、著しい体重減少、後肢麻痺、または悪液質を呈した場合、それは白血病症状の発症と見なされ、その後、動物を安楽死させ、試料収集を実施した。収集された試料は以下を含む：１）実験の最後に、顎下静脈から末梢血を収集し、抗凝固のためにＥＤＴＡ．２Ｋで処理した後、ＰＢＳを加えて容量で１：１に希釈した；２）マウス脾臓を収集し、ＰＢＳ溶液で１回すすいだ。洗浄した脾臓を粉砕して脾臓細胞を得、次にこれを、細胞ふるいを通して濾過して、単一細胞懸濁液を得、ＰＢＳで１回すすいだ；３）マウス後肢の大腿骨を採取し、次に付着した筋肉及び結合組織を除去した。大腿骨の両端を切り落とした。骨髄を、１ｍＬシリンジを使用してＰＢＳ溶液で洗浄し、細胞を収集し、細胞ふるいを通して濾過して、単一細胞懸濁液を得た後、ＰＢＳで１回すすいだ；４）収集した細胞を、ＰＥマウス抗ヒトＣＤ１９抗体（Ａｂｅａｍ）で１時間室温にて染色し、ＰＥマウスＩｇＧ１κアイソタイプ対照抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を対照として使用した。赤血球溶解物を加え、室温で１５分間静置した。２００×ｇで１０分間遠心分離を実施し、上清を注意深く廃棄した。次に、細胞ペレットをＦＡＣＳアッセイ緩衝液（１％ＦＢＳを含有するＰＢＳ）で再懸濁し、次に蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）分析に使用して、全細胞中のヒトＣＤ１９＋腫瘍細胞の割合を計算した。
【０２３３】
マウスのカプランマイヤー生存曲線を作成し、各群の生存期間中央値を計算した。Ｐ値を、ログランク検定によって計算し、これはｐ＜０．０５の場合に統計学的に有意であると見なした；ハザード比及び９５％信頼区間（９５％ＣＩ）を、ログランクを使用して計算した。
【０２３４】
上記のように、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスに、Ｒｅｈ細胞及び同じ健常ボランティアに由来する４倍の初代Ｔ細胞を、尾静脈を介して接種した。図６から見ることができるように、ビヒクル対照群内のマウスは、骨髄の中枢神経系に侵入する白血病細胞によって引き起こされる白血病症状を徐々に発症し、これには有意な体重減少及び後肢麻痺が含まれる；ビヒクル対照群マウスの生存期間中央値は、３５日であった。ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ  ＩＴＡＢ２００９処置は、疾患進行を有意に遅延し、マウスの生存を有意に延長した（生存期間中央値は、５３．５日であった、ログランク分析ｐ＜０．０００１）。終了時点（７０日目）では、ＩＴＡＢ２００９処置群内では、まだ３匹のマウスが生存していた。ＩＴＡＢ２００９処置群のハザード比は、０．２２９４であり、９５％ＣＩは、０．０８７〜０．６０３であった。
【０２３５】
実験の最後に、マウス血液試料、脾臓細胞、及び骨髄細胞を上記の通りに収集し、ヒトＣＤ１９陽性腫瘍細胞の割合をＦＡＣＳによって測定した。実験結果を、表６に示す。
【表６−１】
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【表６−２】
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【０２３６】
これらの結果は、ビヒクル対照群では、ＣＤ１９陽性細胞が、全てのマウスの末梢血で検出され、全白血球の０．７％〜２９．７％を占めた；ＣＤ１９陽性細胞が、１匹のみのマウスの脾臓で検出された；ＣＤ１９陽性細胞が、全てのマウスの骨髄で検出され、全細胞の１８．６％〜８６％を占めたことを実証する。
【０２３７】
ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ  ＩＴＡＢ２００９処置群では、ヒトＣＤ１９陽性細胞が、５匹のマウスの末梢血で検出され、全白血球の０．２％〜７．３％を占めた；ヒトＣＤ１９陽性細胞が、６匹のマウスの脾臓で検出され、全細胞の０．４％〜１５．５％を占めた；ヒトＣＤ１９陽性細胞が、全てのマウスの骨髄で検出され、全細胞の０．１％〜４７．５％を占めた。これらのＣＤ１９＋比は全て、ビヒクル対照群よりも低かった。ゆえに、ＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰは、ＣＤ１９陽性細胞の数及び分率を有意に減少することができ、その有意な治療有効性を実証する。
【０２３８】
この実験は、ＣＤ１９陽性ヒト急性リンパ芽球性白血病Ｒｅｈ細胞を、尾静脈を介して接種したＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスが、白血病の症状を発症し得、ヒトＡＬＬ腫瘍異種移植モデルとして機能できることを実証する。エフェクター細胞としてヒト初代Ｔ細胞が存在する場合、様々な用量下で投与されたＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰ  ＩＴＡＢ２００９は、腫瘍異種移植マウスの生存を有意に延長した（ビヒクル対照群及びＩＴＡＢ２００９処置群の生存期間中央値：３５日対５３．５日、ｐ＜０．０００１、ハザード比０．２２９４、９５％ＣＩ［０．０８７〜０．６０３］）。これらの結果は、本明細書に記載のＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰが、免疫細胞を媒介してＣＤ１９＋腫瘍細胞（例えば急性リンパ芽球性白血病細胞）を殺傷し、腫瘍細胞の成長を有意に阻害し、患者の生存を延長できることを示唆する。
【０２３９】
実施例７．カニクイザルにおけるＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰの前臨床試験
毒性学研究を実施して、カニクイザルにおけるｉｎ  ｖｉｖｏでの例示的なＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰの効果を評価した。４０匹のカニクイザルを、ランダムに４つの群に分けた（ｎ＝１０／群、５Ｆ／５Ｍ）：ビヒクル対照群、ＩＴＡＢ２００９  ３μｇ／ｋｇ処置群、ＩＴＡＢ２００９  １０μｇ／ｋｇ処置群、及びＩＴＡＢ２００９  ３０μｇ／ｋｇ処置群。ＩＴＡＢ２００９を、０．００２％Ｔｗｅｅｎ２０／５％グルコース溶液（ｗ／ｖ）の担体で希釈し、２時間の静脈内注入により、３回／週、４週間連続して、合計１３用量にわたって投与し、その後４週間を回復期間とした。処置群は、それぞれ、３μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ、及び３０μｇ／ｋｇのＩＴＡＢ２００９の各投与を受けた。ビヒクル対照群は、担体のみを、２時間の静脈内注入によって、処置群の投薬スケジュールと同様に受けた。最初の投与の日を、１日目と定義した。各群の３匹の雄及び３匹の雌を、最後の注入後の翌日に安楽死させ、残りの動物は、４週間の回復後に安楽死させた。安楽死させた各動物について、組織及び臓器の組織病理学的検査を実施した。
【０２４０】
動物の臨床所見、体重、行動、食物摂取、及び糞便などを、モニターした。機能的観察バッテリー（ＦＯＢ）を実施して、動物の行動及び神経学的機能を評価した。ＣＤ２０＋Ｂリンパ球サブタイプを、様々な時点でＦＡＣＳ（ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ）を使用して分析した。血清ＩＬ−６レベルは、ヒトＩＬ−６  ＥＬＩＳＡキットによって分析した。血清試料は、生化学的パラメータならびにＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、及びＩＦＮ−γを含むサイトカインレベルに関して、Ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ  Ｂｅａｄ  Ａｒｒａｙキット（ＢＤ  ＰＨＡＲＭＩＮＧＥＮ（商標））及びＦＡＣＳ（ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ）を使用して分析した。
【０２４１】
本研究中、サルのどの群でも死亡は観察されなかった。注入領域での刺激または化膿は観察されなかった。ＩＴＡＢ２００９で処置されたカニクイザルはいずれも、ＣＮＳ症状のいずれの兆候も示さなかった。
【０２４２】
図７に示すように、ＣＤ２０＋Ｂリンパ球の絶対数における用量依存的減少は、ＩＴＡＢ２００９の最初の静脈内投与後、処置群において３日目に始まった。４週間の回復期間中に、Ｂリンパ球の減少した数は、処置群においてベースラインレベルまで回復した。反復投薬期間中の持続的なＢリンパ球枯渇は、ＩＴＡＢ２００９の薬理学的効果を実証する。
【０２４３】
図８Ａ〜８Ｄに示すように、ＡＬＴ（アラニンアミノトランスフェラーゼ）、ＡＳＴ（アスパラギン酸トランスアミナーゼ）、ＣＫ（クレアチンホスホキナーゼ）及びＬＤＨ（乳酸デヒドロゲナーゼ）の血清レベルの一過性及び用量依存的誘導が、ＩＴＡＢ２００９の最初の静脈内投与後に、処置群において観察された。しかしながら、同じ時点で、各処置群及びビヒクル対照群間で統計学的な有意差はなかった。これらの生化学的パラメータの血清レベルは、９日目後にベースラインレベルに向かって減少した。動物における対応する臓器の病理学的変化は、組織病理学的検査によって観察されなかった。
【０２４４】
ＩＬ−６レベルの一過性の増加が、全ての処置群に関して、ＩＴＡＢ２００９の最初の静脈内投与後、１日目に大多数のカニクイザルで観察された。ＩＴＡＢ２００９  １０μｇ／ｋｇ処置群の１匹のカニクイザルは、最も高いＩＬ−６誘導を経験した（１日目に４１５１ｐｇ／ｍＬ）。ＩＬ−６の血清濃度は、全ての処置群に関して８日目にベースラインレベルに戻った。ＩＬ−２（≦１４５．８ｐｇ／ｍＬ）及びＴＮＦ−α（≦１３３６．８ｐｇ／ｍＬ）の血清濃度における一過性の増加も、１０μｇ／ｋｇ及び３０μｇ／ｋｇ処置群で１日目に観察され、これは８日目にベースラインレベルまで徐々に低減した。ＩＬ−５の血清濃度は、３０μｇ／ｋｇ処置群で１日目にわずかに増加した（≦２．３ｐｇ／ｍＬ）。ＩＬ−４及びＩＦＮ−γの血清濃度は、全ての処置群間でＩＴＡＢ２００９投与後に有意には変化しなかった。サイトカインレベルの増加に関連する明らかな臨床所見は無かった。
【０２４５】
組織病理学的検査により、ＩＴＡＢ２００９に関連する顕微鏡的病理学的変化は、最後の注入（２９日目）後、１０μｇ／ｋｇ及び３０μｇ／ｋｇ処置群の脾臓に限定されたことが示された。顕微鏡所見は、脾臓内の胚中心細胞の数における軽度から中等度の低減からなった。他の指定臓器では、試験品に関連する病理学的変化は観察されなかった。４週間の回復後、１０μｇ／ｋｇ及び３０μｇ／ｋｇ処置群における脾臓の胚中心細胞の数は、完全に回復した。
【０２４６】
これらの結果は、例示的なＣＤ１９×ＣＤ３  ＢＳＡＰが、カニクイザルにおいて良好な安全性及び忍容性プロファイルを有することを実証する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８−１】
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【図８−２】
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【図８−３】
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【図８−４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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