(57)【要約】  本発明は、最終的には、ＣＨＩを治療するために従来に処方されている少なくとも１つの分子および／またはインターロイキン−１８（ＩＬ−１８）と併用した、慢性組織球性絨毛間腔炎（ＣＨＩ）またはその随伴症状の予防または治療のためのインターロイキン−１（ＩＬ−１）、特に、ＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βの阻害薬の使用に関する。前記インターロイキン−１（ＩＬ−１）、特にＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βの阻害薬を、ＣＨＩに罹患している疑いがある対象におけるインビトロでのＣＨＩ診断のため、またはそれを必要としている対象のＣＨＩに対する治療有効性のモニタリングのために使用してもよい。
2021527107.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＨＩまたは少なくとも１つの随伴症状の予防または治療における使用のためのＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βの阻害薬であって、前記症状は少なくとも部分的にＣＨＩが原因である、阻害薬。
【請求項２】
前記阻害薬は、抗ＩＬ−１抗体である、請求項１に記載の前記使用のためのＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βの阻害薬。
【請求項３】
前記抗ＩＬ−１抗体は、抗ＩＬ−１β抗体である、請求項２に記載の前記使用のためのＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βの阻害薬。
【請求項４】
前記抗ＩＬ−１β抗体は、カナキヌマブである、請求項３に記載の前記使用のためのＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βの阻害薬。
【請求項５】
前記阻害薬は、ＩＬ−１受容体の拮抗薬である、請求項１に記載の前記使用のためのＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βの阻害薬。
【請求項６】
前記ＩＬ−１受容体の拮抗薬は、アナキンラである、請求項５に記載の前記使用のためのＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βの阻害薬。
【請求項７】
前記随伴症状は、早期流産、子宮内胎児発育遅延、および子宮内胎児死亡からなる群から選択される、請求項１に記載の前記使用のためのＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βの阻害薬。
【請求項８】
ＣＨＩまたは少なくとも１つの随伴症状の予防または治療における使用のためのＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βの阻害薬、ならびに少なくとも１つの薬剤的に許容可能な賦形剤、媒体、担体もしくは支持体を含む医薬組成物であって、前記症状は少なくとも部分的にＣＨＩが原因である、医薬組成物。
【請求項９】
前記ＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βの阻害薬は、カナキヌマブまたはアナキンラである、請求項４に記載の前記使用のための医薬組成物。
【請求項１０】
前記ＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βの阻害薬が、アスピリン、低分子量ヘパリン、ヒドロキシクロロキン、副腎皮質ステロイド、免疫抑制剤としてのアザチオプリン、多価免疫グロブリンおよび抗ＴＮＦ化合物からなる群から選択される分子と組み合わせて、同時にまたは順次投与される、請求項８または９に記載の前記使用のための医薬組成物。
【請求項１１】
前記ＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βの阻害薬が、インターロイキン−１８（ＩＬ−１８）の阻害薬と組み合わせて、同時にまたは順次投与される、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の前記使用のための医薬組成物。
【請求項１２】
前記ＩＬ−１８の阻害薬は、抗ＩＬ−１８抗体である、請求項１１に記載の前記使用のための医薬組成物。
【請求項１３】
対象におけるＣＨＩのインビトロ診断方法であって、
ａ）対象のサンプルにおける、ＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１β、好ましくはＩＬ−１βの発現レベルＥ１を測定するステップと；
ｂ）前記発現レベルＥ１と、健常者のサンプルにおけるＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１β、好ましくはＩＬ−１βの参照発現レベルＥ２とを比較するステップであって、Ｉ
Ｌ−１αおよび／またはＩＬ−１β、好ましくはＩＬ−１βについてＥ２値より大きいＥ１値は、対象がＣＨＩに罹患していることを示す、ステップと、
を含む、方法。
【請求項１４】
対象のＣＨＩに対する治療有効性のインビトロでのモニタリング方法であって、
ａ’）いずれものＣＨＩ治療を受ける前、ＣＨＩに罹患している対象のサンプルにおけるＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１β、好ましくはＩＬ−１βの発現レベルＥ１’を測定するステップと；
ｂ’）ＣＨＩ治療開始後、ＣＨＩに罹患している対象のサンプルにおけるＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１β、好ましくはＩＬ−１βの発現レベルＥ２’を測定するステップと；
ｃ’）発現レベルＥ１’およびＥ２’を比較するステップであって、Ｅ１’値より小さいＥ２’値は有効な治療であることを示す、比較するステップと、
を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、慢性組織球性絨毛間腔炎（ＣＨＩ）または随伴症状の予防または治療、ならびに診断または治療モニタリングのためのインターロイキン−１（ＩＬ−１）、特に、ＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βの阻害薬の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
妊娠の病態の中でも、慢性組織球性絨毛間腔炎（ＣＨＩ）は、重度の産科合併症をもたらし得る母胎胎児間交換における変化の原因である希な胎盤病態である（非特許文献１）。非特許文献２により初めて記載されたように、ＣＨＩは、絨毛間腔（intervillous chamber）における単核球細胞浸潤（約８０％マクロファージ、および２０％リンパ球）およびフィブリノイド物質沈着を微視的な特徴とする。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Doss et al., Hum. Pathol., 26(11): 1245-1251, 1995
【非特許文献２】Ｌａｂａｒｒｅｒｅ  ｅｔ  Ｍｕｌｌｅｎ（１９８７）
【非特許文献３】Marchaudon et al., Placenta, 32(2): 140-145, 2011
【非特許文献４】Boyd et al., Hum. Pathol., 31(11): 1389-1396, 2000
【非特許文献５】Mekinian et al., Autoimmunity, 48(1): 40-45, 2015
【非特許文献６】Rota et al., J. Gynecol. Obstet. Biol. Reprod., 35(7): 711-719, 2006
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
不充分な診断では、この産科病態（再発性早期流産、重度および早期子宮内胎児発育遅延、子宮内胎児死亡）は、高い率で（試験によれば約１８〜６７％）再発する（非特許文献３、非特許文献４及び非特許文献５）。胎盤の解剖病理学分析の事後にＣＨＩの診断を行う。今日まで、治療管理に対するコンセンサスはない。血管性胎盤（vasculo-placental）または免疫学的病態（例えば、アスピリン、副腎皮質ステロイド、低分子量ヘパリン
、ヒドロキシクロロキン、免疫抑制剤、多価免疫グロブリン、その他．．．）は、病態生理学の知識不足のせいで不充分に体系化されており、これらの有効性の評価は、単独または組合せで、試験の検出力不足および無作為化不足のせいで、文献中不透明なままである。
【０００５】
したがって、特に、慢性組織球性絨毛間腔炎（ＣＨＩ）または随伴症状の予防または治療において有効な新規治療プロトコールに対するニーズがある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
最初に、本発明者らは、トランスクリプトームの免疫分析を行い、慢性組織球性絨毛間腔炎（ＣＨＩ）病態生理学に関係する重要な免疫細胞および経路を特定した。著しい特異性を用いて部分的分解されたｍＲＮＡ（５０ｂｐ以下）を検出する利点を有するＮａｎｏｓｔｒｉｎｇ（登録商標）技術に従ってこの分析を行った。事実、ＣＨＩは珍しいので、利用可能な研究材料は、ＲＮＡ抽出が他のより従来の技術（ＲＴｑＰＣＲ、その他．．．）によるトランスクリプトーム分析のためのＲＮＡ品質に満足させない、病院において何年もの間に収集されたパラフィン包埋胎盤組織だけである。これを行うため、本発明者らは、ＣＨＩ胎盤のパラフィン処理サンプルを、健康な胎盤のパラフィン処理サンプル（コ
ントロール）と比較し、病的胎盤においてインフラマソーム活性化経路のアクター（ＮＬＲＰ３、ＮＯＤ２、ＮＬＲＣ５、ＡＳＣ）ならびにこれが産生するサイトカイン（ＩＬ−１βおよびＩＬ−１８）の著しい過剰発現を実証することができた。
【０００７】
これらのトランスクリプトーム分析に基づいて、本発明者らは、免疫組織化学によって、健康な胎盤（コントロール）と比較したＣＨＩ胎盤におけるＩＬ−１（特にＩＬ−１β）タンパク質レベルの過剰発現を確認した。
【０００８】
これらの病態生理学的データから、本発明者らは、少なくとも部分的にＣＨＩが原因の症状である早期流産、子宮内胎児発育遅延、または子宮内胎児死亡などのＣＨＩまたは随伴症状の予防または治療におけるＩＬ−１（特に、ＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１β）の阻害有効性を実証した。
【０００９】
ＩＬ−１阻害薬を、例えば、アスピリン、低分子量ヘパリン、ヒドロキシクロロキン、副腎皮質ステロイド、免疫抑制剤としてアザチオプリン、多価免疫グロブリンおよび抗ＴＮＦからなる群から選択される、ＣＨＩの予防または治療のために従来処方される少なくとも１つの分子、および／またはインターロイキン−１８（ＩＬ−１８）の阻害薬と併用して使用してよい。
【００１０】
本発明では、用語「ＩＬ−１阻害薬」は、ＩＬ−１α（ＩＬ−１アルファ）および／またはＩＬ−１β（ＩＬ−１ベータ）の生物活性を通常低減または中和する化合物を表す。この阻害薬は、好ましくは、ＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βの直接阻害薬である。これは、阻害薬は、ＩＬ−１もしくはその受容体の生物活性を通常直接的に低減または中和する、換言すれば、生物活性を低減または中和されたＩＬ−１は、ＩＬ−１受容体以外の中間化合物の作用の結果ではないことを意味する。
【００１１】
対象のＩＬ−１阻害薬の例は、ＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βおよび／またはＩＬ−１受容体に対する抗体、ＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βおよび／またはＩＬ−１受容体に対するアプタマーもしくはＳｐｉｅｇｅｌｍｅｒ、ＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βおよび／またはＩＬ−１受容体に対する阻害核酸配列、ＩＬ−１受容体拮抗薬、ならびにＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βおよび／またはＩＬ−１受容体に対する小分子である。
【００１２】
本発明の特定の実施形態によれば、ＩＬ−１阻害薬は、ＩＬ−１αを特異的に阻害し、ＩＬ−１ベータを特異的に阻害し、ＩＬ−１受容体を特異的に阻害し、またはＩＬ−１αおよびＩＬ−１βの両方を特異的に阻害する。
【００１３】
したがって、本発明は、ＣＨＩまたは早期流産、子宮内胎児発育遅延、もしくは子宮内胎児死亡などの少なくとも１つの随伴症状の予防または治療において使用するためのＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１β阻害薬であって、前記症状は少なくとも部分的にＣＨＩが原因である、使用するためのＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１β阻害薬に関する。
【００１４】
さらに、本発明は、ＣＨＩまたは早期流産、子宮内胎児発育遅延、もしくは子宮内胎児死亡などの少なくとも１つの随伴症状の予防または治療において使用するためのＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１β阻害薬を含む医薬組成物であって、前記症状は少なくとも部分的にＣＨＩが原因である、医薬組成物に関する。本発明による使用のための医薬組成物は、ＩＬ−１阻害薬に加えて、少なくとも１つの薬剤的に許容可能な賦形剤、媒体、担体または支持体を更に含む。用語「薬剤的に許容可能な」は、連邦政府もしくは州政府の規制当局によって承認されている、または米国薬局方、もしくは欧州薬局方もしくは動物、より特にヒトにおいて使用するための他の一般的に承認された薬局方に記載されているこ
とを意味する。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】健康な胎盤（コントロール、ＣＴＲＬ）対ＣＨＩ胎盤（絨毛間腔炎、ＣＨＩ）のインフラマソーム経路（ＣＡＳＰ１、ＰＹＣＡＲＤ、ＮＯＤ２、ＮＬＲＰ３）に関連するタンパク質の差次的発現レベルのバイオリン図を示す（＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１）。
【図２】健康な胎盤（コントロール、ＣＴＲＬ）対ＣＨＩ胎盤（絨毛間腔炎）のＩＬ−１βおよびＩＬ−１８  ｍＲＮＡの差次的発現レベルのバイオリン図を示す（＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１）。
【図３】（Ａ）健康な胎盤（コントロール、ＣＴＲＬ）のサンプルと比較したＣＨＩ胎盤（絨毛間腔炎、ＣＨＩ）の組織切片におけるＩＬ−１βタンパク質の免疫組織化学標識、（Ｂ）健康な胎盤（コントロール、ＣＴＲＬ）のサンプルと比較したＣＨＩ胎盤（絨毛間腔炎、ＣＨＩ）の組織切片におけるＩＬ−１βクラスター数を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明により使用するための通常のＩＬ−１阻害薬、または本発明により使用するためのかかる阻害薬を含む本明細書に記載されている組成物を、静脈内もしくは動脈内注射などの血流（全身注入）中に注入することによって、皮下もしくは皮膚投与によって、筋肉内投与によって、経口（ｐｅｒ  ｏｓ）もしくは直腸投与によって、および／または鼻腔投与によって、対象に投与してよい。好ましい実施形態では、組成物を、皮下投与用に製剤する。
【００１７】
本発明により使用するための、または本発明により使用するための医薬組成物に含まれているＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βの阻害薬は、好ましくは、カナキヌマブ（Ｉｌａｒｉｓ（登録商標）、インターロイキン−１βにおいて標的とされるＩｇＧ１／κアイソタイプのヒトモノクローナル抗体）およびアナキンラ（Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標）、インターロイキン−１受容体拮抗薬）からなる群から選択される。
【００１８】
本発明の特定の実施形態によれば、前記本発明により使用するための医薬組成物は、好ましくは、アスピリン、低分子量ヘパリン、ヒドロキシクロロキン、副腎皮質ステロイド、免疫抑制剤としてアザチオプリン、多価免疫グロブリンおよび抗ＴＮＦ化合物からなる群から選択される、ＣＨＩを治療するために従来に処方されている少なくとも１つの分子を更に含む。存在する場合、前記分子を、ＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βの阻害薬と一緒に、同時にまたは順次投与する。
【００１９】
本発明の特定の実施形態によれば、前記本発明により使用するための医薬組成物は、少なくとも１つのインターロイキン１８（ＩＬ−１８）阻害薬を更に含む。ＩＬ−１８阻害薬の例としては、タデキニグアルファとして知られている組換えヒトＩＬ−１８結合タンパク質を挙げることができる。本発明の特定の実施形態によれば、前記ＩＬ−１８阻害薬は、抗ＩＬ−１８抗体である。存在する場合、前記ＩＬ−１８阻害薬を、ＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βの阻害薬と一緒に、同時にまたは順次投与する。
【００２０】
本発明の特定の実施形態によれば、前記ＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βの阻害薬は、抗ＩＬ−１抗体、好ましくは抗ＩＬ−１β抗体である。例えば、抗ＩＬ−１βモノクローナル抗体カナキヌマブ（Ｉｌａｒｉｓ（登録商標）を、ＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βの阻害薬として、早期流産、子宮内胎児発育遅延、もしくは子宮内胎児死亡などのＣＨＩまたは随伴症状の予防または治療において使用することができる。
【００２１】
本発明の特定の実施形態によれば、前記ＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βの阻害薬
は、ＩＬ−１受容体の拮抗薬である。例えば、ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βの両方を阻害することができるバイオ医薬品アナキンラ（Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標））を、ＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βの阻害薬として、早期流産、子宮内胎児発育遅延、もしくは子宮内胎児死亡などのＣＨＩまたは随伴症状の予防または治療において使用することができる。
【００２２】
本発明の特定の実施形態によれば、前記ＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βの阻害薬を、前記化合物を従来の投与量で、例えば、１００ｍｇ／日の用法用量で、特に皮下に１００ｍｇ／日の用法用量で、好ましくは１日単回投与で使用する。投与量は、投与経路および／または必要により存在する追加の生物活性化合物に応じて変わり得る。
【００２３】
本発明の更なる目的は：
ａ）対象のサンプルにおける、ＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１β、好ましくはＩＬ−１βの発現レベルＥ１を測定するステップと；
ｂ）前記発現レベルＥ１と、健常者のサンプルにおけるＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１β、好ましくはＩＬ−１βの参照発現レベルＥ２とを比較するステップであって、ＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１β、好ましくはＩＬ−１βについてＥ２値より大きいＥ１値は、対象がＣＨＩに罹患していることを示す、ステップと、
を含む、対象におけるＣＨＩのインビトロ診断方法である。
【００２４】
本発明によれば、ＣＨＩに罹患しているらしいと疑われる対象のサンプルにおけるＣＨＩのインビトロ診断方法のステップａ）を、当技術分野において公知のいずれかの適切な技術によって行い、ＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１β、好ましくはＩＬ−１βの発現レベルを測定してよい。ステップａ）を、ＩＬ−１、好ましくはＩＬ−１αおよび／もしくはＩＬ−１βタンパク質の発現、またはＩＬ−１αおよび／もしくはＩＬ−１β、好ましくはＩＬ−１β、ｍＲＮＡのレベルを測定することによって行ってよい。ＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βタンパク質、好ましくはＩＬ−１βの発現レベルを使用する場合、サンプルは、好ましくは血液サンプルまたは胎盤サンプル、特に血液サンプルである。ＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βｍＲＮＡ、好ましくはＩＬ−１βｍＲＮＡの発現レベルを使用する場合、サンプルは、好ましくは胎盤サンプルである。比較目的のため、診断しようとする対象からのサンプルおよび健常者からのサンプルは、本来類似しているので、これらの発現レベルは直接的に比較可能である。例えば、ステップａ）を、ＥＬＩＳＡ、ｑＰＣＲまたはナノストリング分析によって行ってよい。
【００２５】
本発明では、健常者のサンプルにおける参照発現レベル［．．．］は、ＣＨＩ状態またはその随伴症状を示していないおよび／または示していなかった参照対象または参照対象群を表す。本発明では、用語「参照対象群」は、信頼ある参照値を規定することを可能とする群を表す。例えば、上記定義の通り少なくとも２参照対象、少なくとも４０参照対象、または少なくとも４０〜２００参照対象の群であってよい。参照対象または参照対照群は、好ましくは、例えば、同様な年齢、体重、性別、体重、および／またはタバコ／アルコール／薬物乱用を含む群において選択される、ＣＨＩに関して診断しようとする対象として類似の生理特性を有する。
【００２６】
本発明の更なる目的は、対象におけるＣＨＩの治療有効性のインビトロモニタリング方法であって、
ａ’）いずれものＣＨＩ治療を受ける前、ＣＨＩに罹患している対象のサンプルにおけるＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１β、好ましくはＩＬ−１βの発現レベルＥ１’を測定するステップと；
ｂ’）ＣＨＩ治療開始後、ＣＨＩに罹患している対象のサンプルにおけるＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１β、好ましくはＩＬ−１βの発現レベルＥ２’を測定するステップ
と；
ｃ’）発現レベルＥ１’およびＥ２’を比較するステップであって、Ｅ１’値より小さいＥ２’値は有効な治療であることを示す、ステップと、
を含む、方法である。
【００２７】
本発明によれば、ＣＨＩに罹患している対象のサンプルにおけるＣＨＩの治療有効性のインビトロモニタリング方法のステップａ’）およびｂ’）を、当技術分野において公知のいずれかの適切な技術によって行い、ＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１β、好ましくはＩＬ−１βの発現レベルを測定してよい。ステップａ）を、ＩＬ−１、好ましくはＩＬ−１αおよび／もしくはＩＬ−１βタンパク質の発現、またはＩＬ−１αおよび／もしくはＩＬ−１β、好ましくはＩＬ−１β、ｍＲＮＡのレベルを測定することによって行ってよい。ＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βタンパク質、好ましくはＩＬ−１βの発現レベルを使用する場合、サンプルは、好ましくは血液サンプルまたは胎盤サンプル、特に血液サンプルである。ＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βｍＲＮＡ、好ましくはＩＬ−１βｍＲＮＡの発現レベルを使用する場合、サンプルは、好ましくは胎盤サンプルである。比較目的のため、種々の時間においてＣＨＩに罹患している対象から得られたサンプルは、本来類似しているので、これらの発現レベルは直接的に比較可能である。例えば、ステップａ’）およびｂ’）を、ＥＬＩＳＡ、ｑＰＣＲまたはナノストリング分析によって行ってよい。
【００２８】
本発明では、用語「治療」は、医学的処置、例えば、分子（例えば、有機合成により得られた分子、生体起源の分子、例えば、タンパク質、生物、例えば、哺乳類、微生物、植物由来分子および／または生物によって合成された分子、例えば、タンパク質、核酸分子）の摂取を含む逆症療法を表す。用語「治療」は、治療される対象の自然経過を変えようとする治療介入を表す。治療の望ましい効果としては、症状の減弱または軽減、ＣＨＩまたは本明細書に開示されている随伴症状のいずれもの直接的もしくは間接的病理的帰結の減少、ＣＨＩまたは本明細書に開示されている随伴症状の進行速度の低下、およびＣＨＩまたは本明細書に開示されている随伴症状の状態の寛解または緩和が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２９】
本発明では、用語「予防」は、予防（予防的）目的のために行われる処置を表す。予防の望ましい効果としては、ＣＨＩまたは本明細書に開示されている随伴症状の発生または再発の予防が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３０】
本発明では、ＣＨＩの治療は、当業者に公知のいずれもの治療であり得る。本発明によれば、これは、例えば、ＩＬ−１αおよび／またはＩＬ−１βの阻害薬を使用する治療であってよい。これは、例えば、好ましくは、アスピリン、低分子量ヘパリン、ヒドロキシクロロキン、副腎皮質ステロイド、免疫抑制剤としてアザチオプリン、多価免疫グロブリンおよび抗ＴＮＦ化合物からなる群から選択される、ＣＨＩを治療するために従来に処方されている１つの分子を使用する更なる治療であり得る。これは、例えば、ＩＬ−１８の阻害薬を使用する更なる治療であり得る。
【実施例】
【００３１】
実施例１：健康な胎盤と比較したＣＨＩ胎盤のインフラマソーム活性化経路のｍＲＮＡの差次的発現変動
【００３２】
本発明との関連で、ＣＨＩ胎盤（絨毛間腔炎）グレードＩＩまたはＩＩＩの１８パラフィン処理サンプルおよび健康な胎盤（コントロール）の６パラフィン処理サンプルからのＲＮＡを、Ｑｉａｇｅｎ  ＲＮｅａｓｙ  ＦＦＰＥキットを用いて抽出した。各患者について、２つの２０μｍ胎盤組織切片を使用した。脱パラフィン処理ステップ後、プロテイ
ナーゼＫを用いて消化した。上澄み液を、ＤＮアーゼＩで処理した。次いで、全ＲＮＡを、ＲＮｅａｓｙ  ＭｉｎＥｌｕｔｅカラムにより処理し、３０μｌのＲＮアーゼを含まない水で溶出した。
【００３３】
２４患者サンプルのトランスクリプトーム分析を、ＰａｎＣａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｅ
Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ  Ｐａｔｔｅｒｎを使用することによって製造者ナノストリングプロトコールに従って行った。サンプルを、ｎＣｏｕｎｔｅｒ  ＸＴ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｓｓａｙｓを用いて分析し、各サンプルについてｍＲＮＡ数を得た。
【００３４】
ｎＳｏｌｖｅｒ  Ａｄｖａｎｃｅｄ解析ソフトウェアを用いて、統計解析を行った。４つの異なるプラグインを使用してデータ解析した：プラグインＯｖｅｒｖｉｅｗ、プラグインＮｏｒｍａｌｉｚａｔｉｏｎ、プラグインＧｅｎｅ  ｓｅｔ  ａｎａｌｙｓｉｓおよびプラグインＣｅｌｌ  ｔｙｐｅ  ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ。
【００３５】
得られた結果を下表１に示す。
【００３６】
【表１】
2021527107.tif 000003
【００３７】
その結果、健康な胎盤と比較して、病的胎盤において、インフラマソーム活性化経路の因子の有意な過剰発現がみられた：ＰＹＣＡＲＤ（倍率変化＝５．５８；ｐ＜０．０１）、ＮＬＲＰ３（倍率変化＝３．１４；ｐ＜０．０５）、ＮＬＲＣ５（倍率変化＝４．５４；ｐ＜０．０５）、ｅｔ  ＮＯＤ２（倍率変化＝６．２１；ｐ＜０．０１）。
【００３８】
ＰＹＣＡＲＤ、ＮＯＤ２およびＮＬＲＰ３  ｍＲＮＡの有意な過剰発現を、図１にバイオリン図で示した。
【００３９】
実施例２：健康な胎盤と比較したＣＨＩ胎盤のＩＬ−１βおよびＩＬ−１８  ｍＲＮＡの発現レベル
【００４０】
本発明との関連で、ＣＨＩ胎盤（絨毛間腔炎）グレードＩＩまたはＩＩＩの１８パラフィン処理サンプルおよび健康な胎盤（コントロール）の６パラフィン処理サンプルからのＲＮＡを、Ｑｉａｇｅｎ  ＲＮｅａｓｙ  ＦＦＰＥキットを用いて抽出した。各患者について、２つの２０μｍ胎盤組織切片を使用した。脱パラフィン処理ステップ後、プロテイナーゼＫを用いて消化した。上澄み液を、ＤＮアーゼＩで処理した。次いで、全ＲＮＡを、ＲＮｅａｓｙ  ＭｉｎＥｌｕｔｅカラムにより処理し、３０μｌのＲＮアーゼを含まない水で溶出した。
【００４１】
２４患者サンプルのトランスクリプトーム分析を、ＰａｎＣａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｅ
Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ  Ｐａｔｔｅｒｎを使用することによって製造者ナノストリングプロトコールに従って行った。サンプルを、ｎＣｏｕｎｔｅｒ  ＸＴ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｓｓａｙｓを用いて分析し、各サンプルについてｍＲＮＡ数を得た。
【００４２】
ｎＳｏｌｖｅｒ  Ａｄｖａｎｃｅｄ解析ソフトウェアを用いて、統計解析を行った。４つの異なるプラグインを使用してデータ解析した：プラグインＯｖｅｒｖｉｅｗ、プラグインＮｏｒｍａｌｉｚａｔｉｏｎ、プラグインＧｅｎｅ  ｓｅｔ  ａｎａｌｙｓｉｓおよびプラグインＣｅｌｌ  ｔｙｐｅ  ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ。
【００４３】
得られた結果を下表２に示す。
【００４４】
【表２】
2021527107.tif 000004
【００４５】
その結果、病的胎盤におけるインフラマソームアクターによって産生されたサイトカインの有意な過剰発現がみられた：ＩＬ−１β（倍率変化＝５．６６；ｐ＜０．０１）およびＩＬ−１８（倍率変化＝３．９６；ｐ＜０．０５）。
【００４６】
ＩＬ−１βおよびＩＬ−１８  ｍＲＮＡの有意な過剰発現を、図２にバイオリン図で示した。
【００４７】
実施例３：健康な胎盤と比較したＣＨＩ胎盤のＩＬ−１βタンパク質の過剰発現レベル
【００４８】
本発明との関連で、ＩＬ−１βタンパク質発現レベルを、免疫組織化学によって分析した。
【００４９】
全サンプルを、１０％緩衝ホルマリンに固定した。全サンプルに対して、抗ＩＬ−１β抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ（登録商標）、クローン３Ａ６、希釈１／１００）を用いて免疫組織化学染色を行った。
【００５０】
ホルマリン固定およびパラフィン包埋組織を切断（３μｍ厚）し、スライド上に取り付けた。検体を、６分間脱パラフィン処理した（ＯＴＴＩＸ）。希釈水で洗浄後、スライドを、アンマスキング液と共に２０分間９５〜１００℃でインキュベートした。ＴＢＳツイーン（０．１％）中で洗浄後、内在性ペルオキシダーゼ活性を、室温において１０分間、３％Ｈ２Ｏ２によって遮断した。室温において２０分間加湿されたチャンバー内のスライドの切片上に、ブロッキングバッファーを添加した。次いで、１００μｌの希釈された一次抗体をスライド上の切片に添加し、４℃において加湿されたチャンバー内で一夜インキュベートした。洗浄後、１００μｌの適切に希釈された二次抗体を切片に添加し、室温において３０分間加湿されたチャンバー内でスライドをインキュベートした。洗浄後、１００μｌのＤＡＢ基質溶液を適用した。ヘマトキシリンでスライドを対比染色し、マウントした。免疫組織化学的に染色されたスライドを診断の知見なしでレビューした。アグリゲ
ートの数を、各サンプルについて、５０倍の高倍率視野で評価した。
【００５１】
ＩｍｍＰｒｅｓｓ製造者プロトコールに従って標識化を行った。
【００５２】
使用した抗体を、表３に記載する。
【００５３】
【表３】
2021527107.tif 000005
【００５４】
胎盤分析専門の解剖病理学者によって、標識化を盲検で分析した。
【００５５】
標識化結果を図３Ａに示す。その結果、ＩＬ−１βタンパク質は、合胞体性結節およびフィブリノイド物質沈着物中に局在していることが示された。
【００５６】
定量分析は、ＩＬ−１βタンパク質は、健康な胎盤（分析された５０倍の高倍率視野について計数された８１ＩＬ−１βクラスター）と比較して、ＣＨＩ胎盤において過剰発現される（分析された５０倍の高倍率視野について計数された１８０ＩＬ−１βクラスター）ことを、図３Ｂに示した。
【００５７】
実施例４：慢性組織球性絨毛間腔炎の再発予防におけるバイオ医薬品ＫＩＮＥＲＥＴ（登録商標）（アナキンラ）の利益の評価
【００５８】
これは、再発ＣＨＩに関するフェーズＩ／ＩＩパイロット臨床治験である。これは希な疾病であるが、再発性ＣＨＩ患者は、治療の行き詰まりのせいで相談所に送られることがしばしばであり、新規治療ストラテジーを求めている。
【００５９】
妊娠中のアナキンラに対するデータは限定的であるが、超治療投与量における受胎能、胚・胎児、周産期または出生後発育（ラットおよびウサギ）に関して、アナキンラの影響がないことが報告されている。この報告は、妊娠中にアナキンラを中断することができない病態（スチル病、クリオピリン関連周期性症候群）のため、妊娠中にヒトにおけるこの分子の許容度に関して心強く感じさせるデータを提供する。
【００６０】
したがって、この試験の主目的は、アナキンラは再発性ＣＨＩの予防のための有望な治療であり得ることを実証することだけでなく、第二の目的は、産科学の結果、妊娠中および産後１２ヶ月の分子の臨床生物許容度、ならびに胎盤解剖病理学に対する治療の影響に関する妊娠中におけるアナキンラの効果を評価することでもある。
【００６１】
被検コホートは、再発性ＣＨＩの病歴を有する１５患者を含む：産科合併症（自然流産、後期胎児喪失、子宮内胎児発育遅延、子宮内胎児死亡、子癇前症）をもたらすＣＨＩの
少なくとも２つの確認された発症例。非特許文献６の分類に従った過去の妊娠の胎盤の組織学的検査中にＣＨＩを診断する。なお、少数の患者、インフォームドコンセントを得ることができない患者、妊娠中の免疫抑制剤治療患者、免疫欠損患者およびアナキンラに対する過敏症と分かっている患者は、試験から除外した。この患者参加期間は、２４ヶ月継続した。
【００６２】
アナキンラ群に無作為に割り付けられた患者は、妊娠開始から（妊娠８週以内）および無月経３４週以下、毎日１回皮下に１００ｍｇ／日の投与量でアナキンラを受けた。この参加期間は、実際に２１ヶ月継続した（妊娠中および産後１２ヶ月経過観察）。
【００６３】
ＣＨＩを再発する危険性が高いこれらの患者の出生率（６０％を超え得る比率）に基づく主要な判断基準、ならびに産科合併症（自然流産、血管性胎盤機能不全（vasculoplacental unsufficiency）、子宮内胎児死亡、未熟児）、妊娠中および産後の母性感染合併症、胎児奇形、生後１年の小児感染合併症、ならびに胎盤の組織学的検査ならびに存在する場合ＣＨＩグレード評価に基づいた第二判断基準に従って、妊娠結果を評価した。
【図１】
2021527107.tif 000006
【図２】
2021527107.tif 000007
【図３】
2021527107.tif 000008
【国際調査報告】
2021527107.tif 000009
2021527107.tif 000010
2021527107.tif 000011