(57)【要約】  本明細書では、ＥＧＦＲを調節する化合物、およびそれを、例えば癌の治療のために使用する方法が提供される。【選択図】図４
2021514001.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2021514001.tif 000026
（式中、
Ｘは、Ｏ−Ｃ０〜６アルキレン、Ｓ−Ｃ０〜６アルキレン、またはＮＲ３−Ｃ０〜６アルキレンであり、前記アルキレンは、任意選択的に、独立して、ハロ、Ｎ（Ｒ３）２、およびＯＲ３−から選択される１〜３個の基で置換され、
Ｙは、Ｃ０〜６アルキレンであり、前記アルキレンは、任意選択的に、独立して、ハロ、Ｎ（Ｒ３）２およびＯＲ３から選択される１〜３個の基で置換され、
Ａは、Ｃ６〜１０アリールまたはＮ、Ｏ、およびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有する５〜１０員ヘテロアリールであり、前記アリールまたはヘテロアリールは、任意選択的に、１〜３個のＲ４で置換され、
Ｂは、Ｃ６〜１０アリール、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有する５〜１０員ヘテロアリール、３〜８員シクロアルキル環、またはＯ、Ｓ、およびＮから選択される１〜３個の環ヘテロ原子を有する３〜１２員ヘテロシクロアルキルであり、前記アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、またはヘテロシクロアルキルは、任意選択的に、１〜３個のＲ５で置換され、
Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、Ｃ１〜６アルキルであるか、あるいはＲ１およびＲ２は、それらが結合している炭素原子と共に４〜８員シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル環を形成し、ヘテロシクロアルキル環は、Ｏ、Ｓ、およびＮから選択される１個または２個の環ヘテロ原子を有し、前記シクロアルキル環またはヘテロシクロアルキル環は、任意選択的に、１〜２個のＲ６で置換され、
各Ｒ３は、独立して、ＨまたはＣ１〜６アルキルであり、
各Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、ハロ、またはＣ１〜６アルコキシであり、
Ｒ６は、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）Ｒ３、（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ３、ＣＯＮ（Ｒ３）２、Ｃ０〜３アルキレン−Ｃ３〜８シクロアルキル、Ｃ０〜３アルキレン−Ｃ６〜１０アリール、またはＣ０〜３アルキレン−（Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有する５〜１０員ヘテロアリール）であり、前記アリールまたはヘテロアリールは、任意選択的に、１〜３個のＲ５で置換される。）
の構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
Ｒ１およびＲ２が、各々独立して、Ｃ１〜６アルキルである、請求項１に記載の化合物または塩。
【請求項３】
Ｒ１およびＲ２が、各々メチルである、請求項２に記載の化合物または塩。
【請求項４】
Ｒ１およびＲ２が、それらが結合している炭素原子と共に、４〜８員シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル環を形成する、請求項１に記載の化合物または塩。
【請求項５】
Ｒ１およびＲ２が、それらが結合している炭素原子と共に、５員または６員シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル環を形成する、請求項４に記載の化合物または塩。
【請求項６】
Ｒ１およびＲ２が、それらが結合している炭素原子と共に、シクロヘキシル環を形成する、請求項５に記載の化合物または塩。
【請求項７】
Ｒ１およびＲ２が、それらが結合している炭素原子と共に、次の構造：
【化２】
2021514001.tif 000027
を有するヘテロシクロアルキル環を形成し、式中、＊は、式Ｉの化合物の残部との結合点を示す、請求項５に記載の化合物または塩。
【請求項８】
Ｒ４およびＲ５が、各々独立して、Ｃ１〜６アルキル、ハロ、またはＣ１〜６アルコキシである、請求項１〜７のいずれか１一項に記載の化合物または塩。
【請求項９】
Ｒ６が、Ｃ１〜６アルキル、（Ｃ＝Ｏ）Ｒ３、（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ３、またはＣＯＮ（Ｒ３）２である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物または塩。
【請求項１０】
Ｒ６が、Ｃ１〜６アルキルである、請求項４〜９のいずれか一項に記載の化合物または塩。
【請求項１１】
Ｒ６が、メチルである、請求項１０に記載の化合物または塩。
【請求項１２】
Ａが、Ｃ６〜１０アリールである、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物または塩。
【請求項１３】
Ａが、フェニルである、請求項１２に記載の化合物または塩。
【請求項１４】
Ｂが、Ｃ６〜１０アリールである、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の化合物または塩。
【請求項１５】
Ｂが、フェニルである、請求項１４に記載の化合物または塩。
【請求項１６】
Ｂが、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有する５〜１０員ヘテロアリールである、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の化合物または塩。
【請求項１７】
Ｂが、ピリジニルである、請求項１６に記載の化合物または塩。
【請求項１８】
Ｂが、キノリニルである、請求項１６に記載の化合物または塩。
【請求項１９】
Ｂが、３〜８員シクロアルキルである、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の化合物または塩。
【請求項２０】
Ｂが、５員または６員シクロアルキルである、請求項１８に記載の化合物または塩。
【請求項２１】
Ｂが、Ｏ、Ｓ、およびＮから選択される１〜３個の環ヘテロ原子を有する３〜１２員ヘテロシクロアルキルである、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の化合物または塩。
【請求項２２】
Ａが、１つのＲ４で置換されている、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の化合物または塩。
【請求項２３】
Ａが、次の構造：
【化３】
2021514001.tif 000028
を有する、請求項２２に記載の化合物または塩。
【請求項２４】
Ａが、２つのＲ４で置換されている、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の化合物または塩。
【請求項２５】
少なくとも１つのＲ４が、Ｃ１〜６アルキルである、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の化合物または塩。
【請求項２６】
少なくとも１つのＲ４が、メチルである、請求項２５に記載の化合物または塩。
【請求項２７】
少なくとも１つのＲ４が、ハロである、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の化合物または塩。
【請求項２８】
Ｒ４が、ブロモである、請求項２７に記載の化合物または塩。
【請求項２９】
少なくとも１つのＲ４が、Ｃ１〜６アルコキシである、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の化合物または塩。
【請求項３０】
少なくとも１つのＲ４が、メトキシである、請求項２９に記載の化合物または塩。
【請求項３１】
Ｂが、１つのＲ５で置換されている、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の化合物または塩。
【請求項３２】
Ｂが、２つのＲ５で置換されている、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の化合物または塩。
【請求項３３】
Ｂが、次の構造：
【化４】
2021514001.tif 000029
を有する、請求項３２に記載の化合物。
【請求項３４】
少なくとも１つのＲ５が、ハロである、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の化合物または塩。
【請求項３５】
少なくとも１つのＲ５が、フルオロまたはクロロである、請求項３４に記載の化合物または塩。
【請求項３６】
一方のＲ５がフルオロであり、他方のＲ５がクロロである、請求項３０または３３に記載の化合物または塩。
【請求項３７】
少なくとも１つのＲ５が、Ｃ１〜６アルコキシである、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の化合物または塩。
【請求項３８】
少なくとも１つのＲ５が、メトキシである、請求項３７に記載の化合物または塩。
【請求項３９】
一方のＲ５がハロであり、他方のＲ５がＣ１〜６アルコキシである、請求項３０または３３に記載の化合物または塩。
【請求項４０】
一方のＲ５がクロロであり、他方のＲ５がメトキシである、請求項３９に記載の化合物または塩。
【請求項４１】
Ｘが、Ｏ−Ｃ０〜６アルキレンまたはＳ−Ｃ０〜６アルキレンである、請求項１〜４０のいずれか１項に記載の化合物または塩。
【請求項４２】
Ｘが、Ｓ−Ｃ０〜６アルキレンである、請求項４１に記載の化合物または塩。
【請求項４３】
Ｘが、Ｏ、Ｓ、Ｏ−ＣＨ２−、またはＳ−ＣＨ２−である、請求項４１に記載の化合物または塩。
【請求項４４】
Ｙが、Ｃ０〜２アルキレンである、請求項１〜４３のいずれか１項に記載の化合物または塩。
【請求項４５】
Ｙが、なしまたはＣＨ２である、請求項４４に記載の化合物または塩。
【請求項４６】
Ｘが、ＮＲ３−ＣＨ２、Ｏ−ＣＨ２−、またはＳ−ＣＨ２−であり、Ｙが、ない、請求項４５に記載の化合物。
【請求項４７】
Ｘが、ＮＲ３−ＣＨ２、Ｏ−ＣＨ２−、またはＳ−ＣＨ２−であり、Ｙが、ＣＨ２である、請求項４５に記載の化合物または塩。
【請求項４８】
Ｒ３が、Ｈである、請求項１〜４７のいずれか１項に記載の化合物または塩。
【請求項４９】
表１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項５０】
表２に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項５１】
請求項１〜５０のいずれか１項に記載の化合物または塩、および薬学的に許容される担体または賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項５２】
ＥＧＦＲを調節する方法であって、それを必要とする対象に、治療上有効量の請求項１〜５０のいずれか１項に記載の化合物または塩を投与することを含む、方法。
【請求項５３】
前記調節がＥＧＦＲの二量体化を阻害することを含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記調節がＥＧＦＲの分解を誘導することを含む、請求項５２または５３に記載の方法。
【請求項５５】
異常なＥＧＦＲ活性に関連する疾患または障害を治療または予防する方法であって、それを必要とする対象に治療有効量の請求項１〜５０のいずれか１項に記載の化合物または塩を投与することを含む、方法。
【請求項５６】
前記疾患または障害が、癌である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記癌が、肺癌、大腸癌、膠芽細胞腫、および頭頸部癌から選択される、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記癌が、黒色腫、結腸癌、腎癌、白血病、または乳癌である、請求項５６に記載の方法。
【請求項５９】
前記癌が、オシメルチニブ耐性癌である、請求項５６〜５８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６０】
前記対象が、ヒトである、請求項５２〜５９のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
ＥＧＦＲ小分子チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）のエルロチニブ、ゲフィチニブ、およびアファチニブは、このクラスの薬物に対する感受性を付与し、民族および性別に応じて患者の７〜２０％で生じる体細胞変異（Ｌ８５８Ｒまたはエクソン１９での欠失、すなわち、Ｅ７４６〜Ａ７５０）を有する肺腺癌の治療において、単剤として最も成功している（１９）。残念ながら、事実上すべての患者が治療に対して耐性を発現するため、反応が１年以上持続することは稀である（２０）。第３世代の不可逆的阻害剤であるオシメルチニブ（ＡＺＤ９２９１）は、治療未経験の患者ならびに第１世代または第２世代のＴＫＩに対して耐性を獲得した患者の治療に有効である（７）。しかしながら、オシメルチニブによる治療の１年以内に、大多数の患者は、薬剤結合部位であるＥＧＦＲのキナーゼドメイン（Ｃ７９７Ｓ）に別の変異を発現する（１２、２１、２２）。オシメルチニブ耐性ＥＧＦＲを標的とするいくつかのアプローチが報告されているが、現時点では、このＣ７９７Ｓ変異を有するこれらの患者には、ＴＫＩ治療の選択肢が存在しない（１２、１３、２３）。化学療法が、唯一の選択肢である。
【０００２】
前述の観点から、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ活性を阻害する以外の方法で、ＥＧＦＲを標的とする癌治療薬が必要とされている。また、初期使用後に薬剤耐性を発現することなく、癌を治療する治療薬が必要とされている。
【発明の概要】
【０００３】
本明細書では、ＥＧＦＲを調節するための化合物および方法が提供される。より具体的には、ＥＧＦＲのモジュレーター、および異常なＥＧＦＲ活性に関連する疾患または障害、例えば癌、を治療または予防する際の、そのようなモジュレーターの使用が提供される。
【０００４】
一態様では、本開示は、式Ｉ：
【０００５】
【化１】
2021514001.tif 000003
【０００６】
（式中、Ｘは、Ｏ−Ｃ０〜６アルキレン、Ｓ−Ｃ０〜６アルキレン、またはＮＲ３−Ｃ０〜６アルキレンであり、当該アルキレンは、Ｘは、Ｏ−Ｃ０〜６アルキレン、Ｓ−Ｃ０〜６アルキレン、またはＮＲ３−Ｃ０〜６アルキレンであり、当該アルキレンは、任意選択的に、独立して、ハロ、Ｎ（Ｒ３）２、およびＯＲ３から選択される１〜３個の基で置換され、Ｙは、Ｃ０〜６アルキレンであり、当該アルキレンは、任意選択的に、独立して、ハロ、Ｎ（Ｒ３）２、およびＯＲ３から選択される１〜３個の基で置換され、Ａは、Ｃ６〜１０アリールまたはＮ、Ｏ、およびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有する５〜１０員ヘテロアリールであり、当該アリールまたはヘテロアリールは、任意選択的に、１〜３個のＲ４で置換され、Ｂは、Ｃ６〜１０アリール、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有する５〜１０員ヘテロアリール、３〜８員シクロアルキル環、またはＯ、Ｓ、およびＮから選択される１〜３個の環ヘテロ原子を有する３〜１２員ヘテロシクロアルキルであり、当該アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、またはヘテロシクロアルキルは、任意選択的に、１〜３個のＲ５で置換され、各Ｒ１およびＲ２は、独立して、Ｃ１〜６アルキルであるか、あるいはＲ１およびＲ２は、それらが結合している炭素原子と共に４〜８員シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル環を形成し、ヘテロシクロアルキル環は、Ｏ、Ｓ、およびＮから選択される１個または２個の環ヘテロ原子を有し、当該シクロアルキル環またはヘテロシクロアルキル環は、任意選択的に、１〜２個のＲ６で置換され、各Ｒ３は、独立して、ＨまたはＣ１〜６アルキルであり、各Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、ハロ、またはＣ１〜６アルコキシであり、Ｒ６は、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）Ｒ３、（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ３、ＣＯＮ（Ｒ３）２、Ｃ０〜３アルキレン−Ｃ３〜８シクロアルキル、Ｃ０〜３アルキレン−Ｃ６〜１０アリール、またはＣ０〜３アルキレン−（Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有する５〜１０員ヘテロアリール）であり、アリールまたはヘテロアリールは、任意選択的に、１〜３個のＲ５で置換される。）
の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【０００７】
さらに、本明細書では、ＥＧＦＲを調節するために、開示された化合物を使用する方法が提供される。本開示の他の態様は、ＥＧＦＲの二量体化を阻害するために、開示された化合物を使用する方法、およびＥＧＦＲの分解を誘導するために、開示された化合物を使用する方法を含む。
【０００８】
本開示の他の態様は、対象における異常なＥＧＦＲ活性に関連する疾患または障害を治療または予防するための医薬品の調製に使用するための、本明細書に開示されるような化合物、および、対象における異常なＥＧＦＲ活性に関連する疾患または障害を予防または治療する方法における本明細書に開示されるような化合物の使用を含む。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】隣接する正常組織と比較された、ＥＧＦＲ二量体化に影響される腫瘍（＊印）特異的ＥＧＦＲを阻害する低分子ペプチドによる処理（左）、およびＥＧＦＲの分解の模式図（右）を示す。ＥＧＦＲは、膜貫通部分によって二小葉性（ｂｉｌｏｂｕｌａｒ）キナーゼドメイン（小ブロブ（ｂｌｏｂ）＝ｎローブ（ｌｏｂｅ）、大ブロブ＝ｃローブ）、および柔軟なＣ末端テール（ｔａｉｌ）に連結された細胞外ドメインによって示されている。ＥＧＦの結合は、細胞外ドメイン間および／または２つの単量体のｎローブとｃローブとの間の活性（非対称）二量体の形成を促進する。このような立体構造のＥＧＦＲは安定したままであり、Ｃ末端テールのリン酸化を誘導し、腫瘍進行性チロシンキナーゼの阻害剤（例えば、オシメルチニブ）を促進し、ＡＴＰ動員を阻害し、２つの単量体のｎローブ間の不活性な（対称）二量体化を促進する。この立体構造のＥＧＦＲは、キナーゼが不活性な立体構造のままであるが、タンパク質の安定性は維持されている。ＥＧＦＲ活性の不活化は、腫瘍成長の阻害と相関する。ＥＧＦＲのｃローブのαＣヘリックスおよびβ４シートとｎローブのｈヘリックスとの間のループは、ＥＧＦで誘導される活性二量体の形成に関与する。このモデルは、ディスラプチン（Ｄｉｓｒｕｐｔｉｎ）または化合物８Ｃ（Ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ８Ｃ）が、このポケットに結合し、ＥＧＦ誘導性の活性二量体の形成を妨害することを想定している。リガンドおよび化合物８Ｃが結合したＥＧＦＲ単量体は、急速に分解する。ＥＧＦＲタンパク質の喪失は、細胞死と相関する。矢印の太さは、腫瘍細胞対正常細胞における、化合物８Ｃの効果を示す。
【図２】（Ａ）ＥＧＦＲの非対称活性二量体の模式図を示す。ＥＧＦに結合した１つのＥＧＦＲ単量体は、二量体化を誘導するのに十分である。ＥＧＦＲ（ＰＤＢコード：２ＲＦＤ）のｃローブに結合したディスラプチンのモデルが、挿入図に示され、（Ｂ）精製されたＥＧＦＲキナーゼドメインとディスラプチンとの間の仮定される相互作用が示される。。
【図３】（Ａ）ＮＣＩ−Ｈ１９７５細胞におけるＥＧＦ誘導二量体に対するディスラプチン処理の効果、（Ｂ）ＮＣＩ−Ｈ１９７５異種移植におけるその標的ＥＧＦＲに対するディスラプチンの効果、（Ｃ）ディスラプチンのインビボでの有効性、および（Ｄ）腫瘍組織学、ＥＧＦＲ発現および有糸分裂指数（Ｋｉ−６７スコアによる測定）に対する治療の長期効果、を示す。
【図４】（Ａ）リード化合物をプレスクリーニングするためのプロセスと、２つのプレリード化合物Ｃ９５およびＣ６７の構造、（Ｂ）ミクロソーム安定性（青いボックスに表示）が組み合わさって得られたＳＡＲと、最も選択的に有効な化合物８Ｃと命名された分子の構造、（Ｃ）図３Ａ（溶解物が調製され、抗ＥＧＦＲ抗体を用いてイムノブロットされた）に記載のエルロチニブ耐性ＮＣＩ−Ｈ１９７５肺癌細胞株における、ＥＧＦ刺激ＥＧＦＲ二量体化に対する２つのプレリード化合物および化合物８Ｃの効果、および（Ｄ）処理後２４時間で評価された定常状態ＥＧＦＲタンパク質に対する選択された３つのリード分子（１μＭ）の効果、を示す。
【図５】（Ａ）化合物８ＣのＥＧＦＲ結合に対するディスラプチンとの競合、（Ｂ）熱安定性アッセイによって確認された精製ＥＧＦＲの熱安定性に対する化合物８Ｃの効果、および（Ｃ）０〜１０μＭの化合物８Ｃの存在下、４４℃での、ＥＧＦＲの熱安定性に対する化合物８Ｃの濃度の効果、を示す。
【図６】（Ａ）Ｂａ／Ｆ３−ＡＺＤ細胞からの全細胞溶解物における、ＥＧＦＲ熱安定性に対する化合物８Ｃの効果、（Ｂ）特定のＥＧＦＲ変異を発現するオシメルチニブ耐性Ｂａ／Ｆ３細胞に対して決定された化合物８Ｃの効力、（Ｃ）図３Ａに記載のＥＧＦ誘導ＥＧＦＲ二量体化に対する化合物８Ｃ処理の効果、（Ｃ〜Ｄ）ＥＧＦＲ誘導二量体およびＥＧＦＲタンパク質レベルに対する化合物８Ｃ処理の効果、（Ｅ）２つのオシメルチニブ耐性Ｂａ／Ｆ３細胞株から作表した、エルロチニブ、オシメルチニブ、および化合物８Ｃに応じたＩＣ５０値、を示す。
【図７】（Ａ）オシメルチニブ耐性細胞のパネルに対して決定され、クローン原性生存アッセイを使用して正常な肺線維芽細胞（ＭＲＣ５）と比較された化合物８Ｃの特異性および効力、（Ｂ）図６に記載のオシメルチニブ耐性ＰＣ９細胞におけるＥＧＦ誘導ＥＧＦＲ二量体化に対する化合物８Ｃ濃度の効果、（Ｃ）ＰＣ９−ＡＺＲ細胞におけるＥＧＦＲ誘導二量体およびＥＧＦＲタンパク質レベルに対する化合物８Ｃ処理の効果、を示す。
【図８】（Ａ）ヒトＮＣＩ−Ｈ１９７５腫瘍異種移植片（＞１５０ｍｍ３）を有するヌードマウスに腹腔内投与された単回１００ｍｇ／ｋｇ用量の化合物８Ｃの薬物動態、および（Ｂ）ヒトＮＣＩ−Ｈ１９７５腫瘍異種移植片（＞１５０ｍｍ３）を有するヌードマウスに経口強制投与によって与えられた単回１００ｍｇ／ｋｇ用量の化合物８Ｃの薬物動態、を示す。
【図９】（Ａ）ＮＣＩ−Ｈ１９７５異種移植片を有するマウスにおける異なる時点でのプレリード化合物９５の基底生物発光および効果、ならびに（Ｂ）生物発光において定量化およびプロットされた変化、を示す。
【図１０】化合物８Ｃ（３０ｍｇ／ｋｇ、毎日１週間）またはビヒクル（ｖｅｈｉｃｌｅ）（ＰＢＳ中５％ＤＭＳＯ）で処置された、ＵＭＳＣＣ７４Ｂを有する頭頸部腫瘍モデル（〜１００ｍｍ２）のヌードマウスの経時的な平均腫瘍体積の変化を示す。各群は、少なくとも５匹のマウスを有した。腫瘍体積および体重を週３〜４回記録し、プロットした。処置中の体重の平均減少は、１０％未満であった。エラーバーは、平均値の標準誤差を表す。
【図１１】オシメルチニブ耐性腫瘍モデルにおける化合物８Ｃの効果を示す。オシメルチニブ耐性のＢａ／Ｆ３腹水腫瘍を有するヌードマウスを、ビヒクル、オシメルチニブまたは化合物８Ｃのいずれかで処置した。ＥＧＦＲ、ｐＥＧＦＲおよびその他の分子に対する処置の効果は、イムノブロッティングによって決定された。
【図１２】原発腫瘍におけるＦＦＰＥ−肺ＰＤＸ、ＵＭＬＣＡ７の第１および第２異種移植片の病理学的評価、および２つの他のＰＤＸにおけるＩＨＣを使用したＥＧＦＲタンパク質発現の分析を示す。扁平上皮癌（ＵＭＬＴ１６）では豊富なＥＧＦＲ発現が認められるが、大細胞癌（ＵＭＬＴ１４）のＰＤＸサンプル（２０Ｘ）では認められない。
【図１３】マウス膵臓癌モデルを化合物８Ｃで処置すると、膵管病変の一種であるＰａｎＩｎ（膵臓上皮内腫瘍）の発症傾向が有意に低下したことを示す。Ａ−膵臓組織の組織学的検査は、Ｂで定量化された対照と比較して、処置されたマウスにおける病変の関与が有意に少ないことを示す。
【図１４】化合物８Ｃで処置されたＵＭＳＣＣ７４Ｂ有する頭頸部腫瘍モデルのマウス異種移植が、処置ビヒクルまたはセツキシマブのいずれかが投与された対照マウスと比較して、有意により小さな腫瘍を呈したことを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
小分子および抗体を使用して発癌性タンパク質のキナーゼ活性を阻害することは、抗がん剤開発の取り組みのかなめであり、その結果、いくつかのＦＤＡ承認のがん治療がもたらされたが、キナーゼを標的とした薬剤の臨床効果には一貫性がみられなかった（２２、２４）。ＥＧＦＲは、チロシンキナーゼ活性に添加して、足場機能を有することが示されている（２４〜３６）。これは、ＥＧＦＲのキナーゼデッド（ｋｉｎａｓｅ−ｄｅａｄ、ＫＤ）変異体（例えば、Ｋ７４５Ａ、Ｖ７４１Ｇ、およびＹ７４０Ｆ）を発現させるか、ＥｒｂＢ３（キナーゼ活性を有さない）を発現させるかのいずれかによって、これらの受容体を発現しないＢａ／Ｆ３細胞において実証される（３７〜３９）。これらのキナーゼ欠損変異体の発現は、細胞生存を促進し、これらの受容体がおそらく二量体を形成することによって生存シグナルを伝達できることを示し、ＥＧＦＲがキナーゼ活性以外の機能を有することを示唆する（３９）。
【００１１】
ＥＧＦＲの二量体は、単量体と比較して、比較的安定であることが知られている（４０）。二量体は、下流の分裂促進性のシグナル伝達を生成することができる（４１）。理論に縛られることなく、ＥＧＦＲの二量体化を遮断すると、ＥＧＦＲの分解が加速され、このアプローチが、ＴＫＩ耐性のＥＧＦＲで駆動される腫瘍に対して効果的であることが仮定される（１４、２４、２７）。簡単に言えば、ＥＧＦＲキナーゼドメインのｃローブのαＣヘリックスおよびβ４シートとｎローブのｈヘリックスとの間に位置するＥＧＦＲのキナーゼドメイン内のセグメントを介した二量体の形成によって、ＥＧＦが結合したＥＧＦＲ（すなわち、ほとんどの腫瘍で広くみられるリン酸化されたＥＧＦＲ）のタンパク質安定性が調節されることが実証された（１５、４２）。正常細胞でのＥＧＦＲタンパク質安定性は、この二量体の界面によって主に調節されているのではなく、なぜなら、ＥＧＦの非存在下では、ＥＧＦＲが非対称二量体を形成しないからである（４３）。腫瘍細胞と正常細胞との間のこの違いは、新しい標的化可能なタンパク質−タンパク質相互作用を提供する。
【００１２】
このアイデアを試験するために、この結合表面を模倣する十数のペプチドが生成された。ＥＧＦＲのαＣ−β４ループ由来の６つのアミノ酸を含有する最も効果的なペプチドは、ディスラプチン（Ｄｉｓｒｕｐｔｉｎ）と命名された（１７）。ディスラプチンは、ＥＧＦ誘導ＥＧＦＲ二量化を阻害することができる。このペプチドは、ＥＧＦＲに直接結合し、この結合は、対照（スクランブルされた）ペプチドと比較して、反復したＨＥＰＥＳ洗浄によって有意に影響されない。ディスラプチンは、チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）耐性の肺異種移植モデル（１４）では効果的であるが、ヒトにおけるペプチドの送達は困難なままである（４４）。
【００１３】
本明細書では、ＥＧＦＲを調節する化合物、例えば、ＥＧＦＲ二量体化を遮断し、ＥＧＦＲ分解を誘導し、ＥＧＦＲ駆動性の細胞を死滅させる化合物、が提供される。これらの化合物は、様々な疾患および障害の予防または治療、例えば癌の治療、に有用である。
【００１４】
このように、式Ｉ：
【００１５】
【化２】
2021514001.tif 000004
【００１６】
（式中、
Ｘは、Ｏ−Ｃ０〜６アルキレン、Ｓ−Ｃ０〜６アルキレン、またはＮＲ３−Ｃ０〜６アルキレンであり、当該アルキレンは、任意選択的に、独立して、ハロ、Ｎ（Ｒ３）２、およびＯＲ３から選択される１〜３個の基で置換され、
Ｙは、Ｃ０〜６アルキレンであり、当該アルキレンは、任意選択的に、独立して、ハロ、Ｎ（Ｒ３）２およびＯＲ３から選択される１〜３個の基で置換され、
Ａは、Ｃ６〜１０アリールまたはＮ、Ｏ、およびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有する５〜１０員ヘテロアリールであり、当該アリールまたはヘテロアリールは、任意選択的に、１〜３個のＲ４で置換され、
Ｂは、Ｃ６〜１０アリール、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有する５〜１０員ヘテロアリール、３〜８員シクロアルキル環、またはＯ、Ｓ、およびＮから選択される１〜３個の環ヘテロ原子を有する３〜１２員ヘテロシクロアルキルであり、当該アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、またはヘテロシクロアルキルは、任意選択的に、１〜３個のＲ５で置換され、
各Ｒ１およびＲ２は、独立して、Ｃ１〜６アルキルであるか、あるいはＲ１およびＲ２は、それらが結合している炭素原子と共に、４〜８員シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル環を形成し、ヘテロシクロアルキル環は、Ｏ、Ｓ、およびＮから選択される１個または２個の環ヘテロ原子を有し、当該シクロアルキル環またはヘテロシクロアルキル環は、任意選択的に、１〜２個のＲ６で置換され、
各Ｒ３は、独立して、ＨまたはＣ１〜６アルキルであり、
各Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、ハロ、またはＣ１〜６アルコキシであり、
Ｒ６は、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）Ｒ３、（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ３、ＣＯＮ（Ｒ３）２、Ｃ０〜３アルキレン−Ｃ３〜８シクロアルキル、Ｃ０〜３アルキレン−Ｃ６〜１０アリール、またはＣ０〜３アルキレン−（Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有する５〜１０員ヘテロアリール）であり、アリールまたはヘテロアリールは、任意選択的に、１〜３個のＲ５で置換される。）
の構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩が本明細書で提供される。
【００１７】
様々な実施形態では、各Ｒ１およびＲ２は、独立して、Ｃ１〜６アルキルである。一部の実施形態では、各Ｒ１およびＲ２は、メチルである。
【００１８】
様々な実施形態では、Ｒ１およびＲ２は、それらが結合している炭素原子と共に、４〜８員シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル環を形成する。一部の実施形態では、Ｒ１およびＲ２は、それらが結合している炭素原子と共に、５員または６員シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル環を形成する。一部の実施形態では、Ｒ１およびＲ２は、それらが結合している炭素原子と共に、シクロヘキシル環を形成する。
【００１９】
様々な実施形態では、Ｒ１およびＲ２は、それらが結合している炭素原子と共に、以下の構造を有するヘテロシクロアルキル環を形成し：
【００２０】
【化３】
2021514001.tif 000005
【００２１】
式中、＊は、式Ｉの化合物の残部との結合点を示す。一部の実施形態では、Ｒ６は、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、（Ｃ＝Ｏ）Ｒ３、（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ３、ＣＯＮ（Ｒ３）２、Ｃ０〜３アルキレン−Ｃ３〜８シクロアルキル、Ｃ０〜３アルキレン−Ｃ６〜１０アリール、またはＣ０〜３アルキレン−（Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有する５〜１０員ヘテロアリール）であり、アリールまたはヘテロアリールは、任意選択的に、１〜３個のＲ５で置換される。一部の実施形態では、Ｒ６は、Ｃ１〜６アルキル、（Ｃ＝Ｏ）Ｒ３、（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ３、またはＣＯＮ（Ｒ３）２である。一部の実施形態では、Ｒ６は、Ｃ１〜６アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ６は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、イソブチル、またはイソペンチルである。一部の実施形態では、Ｒ６は、メチルである。一部の実施形態では、Ｒ６は、重水素化されている。一部の実施形態では、Ｒ６は、Ｃ１〜６ハロアルキルである。一部の実施形態では、Ｒ６は、３，３，３−トリフルオロプロピルである。一部の実施形態では、Ｒ６は、Ｃ０〜３アルキレン−Ｃ３〜８シクロアルキルである。一部の実施形態では、Ｒ６は、シクロブチル、シクロペンチル、またはシクロヘキシルである。一部の実施形態では、Ｒ６は、シクロブチルまたはシクロペンチルである。一部の実施形態では、Ｒ６は、Ｃ０〜３アルキレン−Ｃ６〜１０アリールである。一部の実施形態では、Ｒ６は、ベンジルである。一部の実施形態では、Ｒ６は、Ｃ０〜３アルキレン−（Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有する５〜１０員ヘテロアリール）であり、ヘテロアリールは、任意選択的に、１〜３個のＲ５で置換される。一部の実施形態では、Ｒ６は、Ｃ１アルキレン−（Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有する５〜１０員ヘテロアリール）であり、ヘテロアリールは、任意選択的に、１〜３個のＲ５で置換される。一部の実施形態では、Ｒ６は、Ｃ０〜３アルキレン−（Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有する５〜１０員ヘテロアリール）であり、ヘテロアリールは、１〜３個のＲ５で置換される。一部の実施形態では、Ｒ６は、Ｃ０〜３アルキレン−（Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有する５〜１０員ヘテロアリール）であり、ヘテロアリールは、非置換である。一部の実施形態では、Ｒ６は、
【００２２】
【化４】
2021514001.tif 000006
【００２３】
である。
【００２４】
様々な実施形態では、Ａは、Ｃ６〜１０アリールである。一部の実施形態では、Ａは、フェニルである。
【００２５】
様々な実施形態では、Ｂは、Ｃ６〜１０アリールである。一部の実施形態では、Ｂは、フェニルである。様々な実施形態では、Ｂは、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を有する５〜１０員ヘテロアリールである。一部の実施形態では、Ｂは、ピリジニルである。一部の実施形態では、Ｂは、キノリニルである。様々な実施形態では、Ｂは、３〜８員シクロアルキルである。一部の実施形態では、Ｂは、５員または６員シクロアルキルである。様々な実施形態では、Ｂは、Ｏ、Ｓ、およびＮから選択される１〜３個の環ヘテロ原子を有する３〜１２員ヘテロシクロアルキルである。
【００２６】
一部の実施形態では、Ａは、１つのＲ４で置換されている。一部の実施形態では、Ａは、構造：
【００２７】
【化５】
2021514001.tif 000007
【００２８】
を有する。一部の実施形態では、Ａは、２つのＲ４で置換されている。一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ４は、Ｃ１〜６アルキルである。一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ４は、メチルである。一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ４は、ハロである。一部の実施形態では、Ｒ４は、ブロモである。一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ４は、Ｃ１〜６アルコキシである。一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ４は、メトキシである。
【００２９】
一部の実施形態では、Ｂは、１つのＲ５で置換されている。一部の実施形態では、Ｂは、２つのＲ５で置換されている。一部の実施形態では、Ｂは、構造：
【００３０】
【化６】
2021514001.tif 000008
【００３１】
を有する。一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ５は、ハロである。一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ５は、フルオロまたはクロロである。一部の実施形態では、一方のＲ５はフルオロであり、他方のＲ５はクロロである。一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ５は、Ｃ１〜６アルコキシである。一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ５は、メトキシである。一部の実施形態では、一方のＲ５はハロであり、他方のＲ５はＣ１〜６アルコキシである。一部の実施形態では、一方のＲ５はクロロであり、他方のＲ５はメトキシである。
【００３２】
一部の実施形態では、各Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｃ１〜６アルキル、ハロ、またはＣ１〜６アルコキシである。一部の実施形態では、Ｒ６は、Ｃ１〜６アルキル、（Ｃ＝Ｏ）Ｒ３、（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ３、またはＣＯＮ（Ｒ３）２である。
【００３３】
様々な実施形態では、Ｘは、Ｏ−Ｃ０〜６アルキレンまたはＳ−Ｃ０〜６アルキレンである。一部の実施形態では、Ｘは、Ｓ−Ｃ０〜６アルキレンである。一部の実施形態では、Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｏ−ＣＨ２−、またはＳ−ＣＨ２−である。様々な実施形態では、Ｙは、Ｃ０〜２アルキレンである。一部の実施形態では、Ｙは、なしまたはＣＨ２である。一部の実施形態では、Ｘは、ＮＲ３−ＣＨ２、Ｏ−ＣＨ２−、またはＳ−ＣＨ２−であり、Ｙは、ない。一部の実施形態では、Ｘは、ＮＲ３−ＣＨ２、Ｏ−ＣＨ２−、またはＳ−ＣＨ２−であり、Ｙは、ＣＨ２である。一部の実施形態では、Ｒ３は、Ｈである。
【００３４】
企図される特定の化合物には、表１、表２に列挙されるもの、またはその薬学的に許容される塩が含まれる。
【００３５】
【表１】
2021514001.tif 000009
【００３６】
【表２】
2021514001.tif 000010
【００３７】
【表３】
2021514001.tif 000011
【００３８】
【表４】
2021514001.tif 000012
【００３９】
【表５】
2021514001.tif 000013
【００４０】
【表６】
2021514001.tif 000014
【００４１】
【表７】
2021514001.tif 000015
【００４２】
場合によっては、化合物は、表１に列挙された化合物またはその塩である。
【００４３】
化合物８Ｃは、薬理学的特性および生物学的活性の有意な改善を示した（４６分にわたるミクロソーム半減期、クローン細胞アッセイでのサブマイクロモルＩＣ５０）。化合物８ＣはＥＧＦ誘導のＥＧＦＲ二量体化を阻害し、精製されたＥＧＦＲに直接結合し、ＥＧＦＲ駆動のオシメルチニブ耐性細胞株および異種移植モデルで選択的に活性である。
【００４４】
定義
本明細書で使用される場合、用語「アルキル」は、１〜３０個の炭素原子、例えば１〜２０個の炭素原子、または１〜１０個の炭素原子を含有する直鎖状および分枝状の飽和炭化水素基を指す。Ｃｎという用語は、アルキル基が「ｎ」個の炭素原子を有することを意味する。例えば、Ｃ４アルキルは、４個の炭素原子を有するアルキル基を指す。Ｃ１〜Ｃ７アルキルとは、全範囲（例えば、１〜７個の炭素原子）、ならびに全てのサブグループ（例えば、１〜６、２〜７、１〜５、３〜６、１、２、３、４、５、６、および７個の炭素原子）を包含する炭素原子数を有するアルキル基を指す。アルキル基の非限定的な例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル（２−メチルプロピル）、ｔ−ブチル（１，１−ジメチルエチル）、３，３−ジメチルペンチル、および２−エチルヘキシルが挙げられる。別途指示されない限り、アルキル基は、非置換アルキル基または置換アルキル基であり得る。
【００４５】
本明細書で使用される「アルキレン」という用語は、置換基を有するアルキル基を指す。例えば、「アルキレンハロ」という用語は、ハロ基で置換されたアルキル基を指す。例えば、アルキレン基は、ＣＨ２ＣＨ２−または−ＣＨ２−であり得る。Ｃｎという用語は、アルキレン基が「ｎ」個の炭素原子を有することを意味する。例えば、Ｃ１〜６アルキレンとは、「アルキル」基について前述されるように、全範囲ならびに全てのサブグループを包含する炭素原子数を有するアルキレン基を指す。別途指示されない限り、アルキレン基は、非置換アルキレン基または置換アルキレン基であり得る。
【００４６】
本明細書で使用される場合、「シクロアルキル」という用語は、３〜８個の炭素原子（例えば、３、４、５、６、７、または８個の炭素原子）を含有する脂肪族環式炭化水素基を指す。Ｃｎという用語は、シクロアルキル基が「ｎ」個の炭素原子を有することを意味している。例えば、Ｃ５シクロアルキルとは、環内に５個の炭素原子を有するシクロアルキル基を指す。Ｃ６〜Ｃ８シクロアルキルとは、全範囲（例えば、６〜８個の炭素原子）、ならびに、ならびに全てのサブグループ（例えば、６〜７、７〜８、６、７、および８個の炭素原子）を包含する炭素原子数を有するシクロアルキル基を指す。シクロアルキル基の非限定的な例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、およびシクロオクチルが挙げられる。別途指示されない限り、シクロアルキル基は、非置換シクロアルキル基または置換シクロアルキル基であり得る。本明細書に記載のシクロアルキル基は、孤立していても、または別のシクロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、アリール基、および／またはヘテロアリール基と縮合していてもよい。特に明記しない限り、ヘテロシクロアルキル基が、別のヘテロシクロアルキル基と縮合している場合、各々のヘテロシクロアルキル基は、３〜８個の炭素原子を含有することができる。別途指示されない限り、シクロアルキル基は、非置換であっても、置換されていてもよい。
【００４７】
本明細書で使用される場合、「ヘテロシクロアルキル」という用語は、環が、独立して、酸素、窒素、および硫黄から選択される１〜３個のヘテロ原子を含有することを除いて、シクロアルキルと同様に定義される。特に、「ヘテロシクロアルキル」という用語は、合計３〜１２個の原子を含有し（例えば、３〜８、５〜８、３〜６、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個）、そのうちの１、２または３個の環原子は、独立して、酸素、窒素、および硫黄からなる群から選択されるヘテロ原子であり、環の残りの原子は炭素原子である、環を指す。ヘテロシクロアルキル基の非限定的な例としては、ピペリジン、ピラゾリジン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピラン、ジヒドロフラン、モルホリンなどが挙げられる。
【００４８】
シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキル基は、飽和または部分不飽和の環系であり得、任意選択的に、例えば、独立して、アルキル、アルキレン、ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、ＮＨ２、オキソ（＝Ｏ）、アリール、アルキレンハロ、ハロ、およびＯＨから選択される１〜３個の基で置換することができる。ヘテロシクロアルキル基は、任意選択的に、アルキル（例えば、メチルまたはエチル）、アルキレン−ＯＨ、アルキレンアリール、およびアルキレンヘテロアリールで、さらにＮ−置換することができる。本明細書に記載のヘテロシクロアルキル基は、孤立していても、または別のヘテロシクロアルキル基、シクロアルキル基、アリール基、および／またはヘテロアリール基に縮合していてもよい。ヘテロシクロアルキル基が、別のヘテロシクロアルキル基と縮合している場合、各ヘテロシクロアルキル基は、合計３〜１２個の環原子、および１〜３個のヘテロ原子を含有することができる。別途指示されない限り、ヘテロシクロアルキル基は、非置換であっても置換されていてもよい。
【００４９】
本明細書で使用される場合、「アリール」という用語は、６〜１０個の環原子を有する単環式または二環式芳香族基を指す。別途指示されない限り、アリール基は、非置換、または例えば、ハロ、アルキル、アルケニル、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＣＮ、ＮＣ、ＯＨ、アルコキシ、アミノ、ＣＯ２Ｈ、ＣＯ２アルキル、アリール、およびヘテロアリールから独立して選択される１個以上、特に、１〜４個の基で置換されていてもよい。アリール基は、孤立していても（例えば、フェニル）、または別のアリール基（例えば、ナフチル、アントラセニル）、シクロアルキル基（例えば、テトラヒドロナフチル）、ヘテロシクロアルキル基、および／またはヘテロアリール基と縮合していてもよい。
【００５０】
本明細書で使用される場合、「ヘテロアリール」という用語は、合計５〜１０個の環原子を有し、芳香環中の窒素、酸素、および硫黄原子から選択される１〜４個のヘテロ原子を含有する、単環式または二環式の芳香環を指す。別途指示されない限り、ヘテロアリール基は、非置換、または例えば、ハロ、アルキル、アルケニル、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＣＮ、ＮＣ、ＯＨ、アルコキシ、アミノ、ＣＯ２Ｈ、ＣＯ２アルキル、アリール、およびヘテロアリールから選択される１つ以上、特に、１〜４個の置換基で置換され得る。場合によっては、ヘテロアリール基は、アルキル基およびアルコキシ基のうちの１つ以上で置換されている。ヘテロアリール基の例としては、チエニル、フリル、ピリジル、ピロリル、オキサゾリル、トリアジニル、トリアゾリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、イミダゾリル、ピラジニル、ピリミジニル、チアゾリル、およびチアジアゾリルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５１】
本明細書で使用される場合、「アルコキシ」または「アルコキシル」という用語は、「−Ｏ−アルキル」基を指す。アルコキシまたはアルコキシル基は、非置換であっても、置換されていてもよい。
【００５２】
本明細書で使用される場合、「治療上有効量」という用語は、特定の疾患または状態（例えば、癌）のうちの１つ以上の症状を改善、減弱または排除する、あるいは特定の疾患または状態の１つ以上の症状の発症を予防または遅延する化合物または治療的活性化合物の組み合わせの量を意味する。
【００５３】
本明細書で使用される場合、「患者」および「対象」という用語は、互換的に使用され、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、およびヒツジ（例えば、非ヒト動物）およびヒトなどの動物を意味する。特定の患者または対象は、哺乳動物（例えば、ヒト）である。
【００５４】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」という用語は、本開示の化合物などの参照物質、または化合物もしくは特定の賦形剤を含有する製剤であり、患者もしくは対象への投与に安全で好適であることを意味する。「薬学的に許容される賦形剤」という用語は、活性成分（複数可）の生物学的活性の有効性を妨げず、それが投与される宿主に対して毒性がない媒体を指す。
【００５５】
本明細書に開示される化合物は、薬学的に許容される塩であり得る。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される塩」という用語は、正しい医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応等を伴うことなく、ヒトおよび下等動物の組織との接触での使用に好適であり、妥当な利益／リスク比に相応する塩を指す。薬学的に許容される塩は、当該技術分野で周知である。例えば、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅらは、参照により本明細書に組み込まれるＪ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９７７，６６，１−１９において、薬学的に許容される塩を詳細に記載している。本発明の化合物の薬学的に許容される塩には、好適な無機および有機酸および塩基に由来するものが含まれる。薬学的に許容される非毒性酸付加塩の例は、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、および過塩素酸等の無機酸、または酢酸、トリフルオロ酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸、もしくはマロン酸等の有機酸で形成されるか、またはイオン交換等の当該技術分野で使用される他の方法を使用することによって形成されるアミノ基の塩である。他の薬学的に許容される塩には、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩（ｃａｍｐｈｏｒａｔｅ）、樟脳スルホン酸塩（ｃａｍｐｈｏｒｓｕｌｆｏｎａｔｅ）、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩（ｐｅｃｔｉｎａｔｅ）、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩等が含まれる。カルボン酸または他の酸性官能基を含有する化合物の塩は、好適な塩基と反応させることによって調製され得る。かかる塩には、アルカリ金属、アルカリ土類金属、アルミニウム塩、アンモニウム、Ｎ＋（Ｃ１−４アルキル）４塩、および有機塩基の塩、例えば、トリメチルアミン、トリエチルアミン、モルホリン、ピリジン、ピペリジン、ピコリン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、２−ヒドロキシエチルアミン、ビス−（２−ヒドロキシエチル）アミン、トリ−（２−ヒドロキシエチル）アミン、プロカイン、ジベンジルピペリジン、デヒドロアビエチルアミン、Ｎ，Ｎ’−ビスデヒドロアビエチルアミン、グルカミン、Ｎ−メチルグルカミン、コリジン、キニン、キノリン、ならびにリジンおよびアルギニン等の塩基性アミノ酸が含まれるが、これらに限定されない。本発明は、本明細書に開示される化合物の任意の塩基性窒素含有基の四級化���企図する。水溶性もしくは油溶性または分散性生成物は、かかる四級化によって得られ得る。代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属塩には、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム等が含まれる。さらなる薬学的に許容される塩には、適切な場合、非毒性アンモニウム、第四級アンモニウム、および対イオンを使用して形成されたアミンカチオン、例えば、ハロゲン化物、水酸化物、カルボン酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、低級アルキルスルホン酸塩、およびアリールスルホン酸塩等が含まれる。
【００５６】
本明細書で使用される場合、「治療すること」、「治療する」または「治療」などの用語は、予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）（例えば、予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ））および緩和的な治療を含む。
【００５７】
本明細書で使用される場合、「賦形剤」という用語は、活性医薬成分（ＡＰＩ）以外の、薬学的に許容される添加剤、担体、希釈剤、アジュバント、または他の成分を意味する。
【００５８】
本開示の化合物の合成
本明細書に開示される化合物は、市販の出発物質、文献で知られている化合物を使用して、または容易に調製された中間体から、当業者に既知のまたは本明細書の教示に照らした標準的な合成方法および手順を採用することによって、様々な方法で調製することができる。本明細書に開示される化合物の合成は、一般に、実施例の節に記載されている合成スキームに従い、特定の所望の置換基を変更することにより達成することができる。
【００５９】
有機分子の調製ならびに官能基の変換および操作のための標準的な合成方法ならびに手順は、関連する科学文献または当分野の標準的な教科書から得ることができる。１つまたはいくつかのソースに限定されることはないが、定評のある著作、例えば、Ｓｍｉｔｈ，Ｍ．Ｂ．，Ｍａｒｃｈ，Ｊ．，Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，５ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２００１、およびＧｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９９は、有用で認知された有機合成の参考教科書であり、当業者に既知である。合成方法の以下の説明は、本開示の化合物の調製のための一般的な手順を示すことを意図するもので、限定するためのものではない。
【００６０】
本明細書に開示される合成プロセスは、多種多様な官能基を許容することができ、したがって、様々な代替出発物質を使用することができる。プロセスは、一般に、プロセス全体の最後またはその近くで所望の最終化合物を提供するが、場合によっては、化合物をその薬学的に許容される塩にさらに変換することが望ましいことがある。
【００６１】
一般に、式（Ｉ）の化合物は、スキーム１に従って合成することができる。
【００６２】
【化７】
2021514001.tif 000016
【００６３】
構造ｃを有する化合物は、スキーム１に示される手順を使用して合成することができる。置換された２，５−ジヒドロイミダゾール誘導体ａと、例えばアセトニトリルなどの適切な溶媒中のアミド化合物ｂとの反応により、本明細書に記載の化合物、すなわち、構造ｃを有する式（Ｉ）の化合物が生成される。アミド化合物ｂは、基Ｑの性質に基づいて選択された適切な脱離基ＬＧ、例えば、ハロゲンまたはトシレートを含む。構造ｃを有する化合物の適切なさらなる誘導体化反応は、置換基Ｒ１、Ｒ２、Ａ、Ｙ、およびＢの性質に基づいて、選択することができる。
【００６４】
化合物ａとｂのカップリングは、化合物ａとｂの正確な性質に基づいて選択された適切な試薬によって触媒される。例えば、化合物ｂのＬＧがハロゲンである場合（例えば、ＬＧがクロロである場合）、化合物ａおよびｂのカップリングは、塩基、例えば、炭酸ナトリウムまたは炭酸カリウムによって触媒され得る。時には、カップリング反応に、触媒が必要でないこともある。
【００６５】
時には、構造ｂを有する化合物とカップリングする前に、適切な試薬で処理することによって、Ｏ、Ｓ、およびＮＲ３から選択されるＱを有する化合物ａは、Ｏ、Ｓ、およびＮＲ３からなる群の異なるメンバーから選択されるＱを有する化合物に変換することができる。例えば、Ｑ＝Ｏの構造ａを有する化合物は、例えばローソン試薬または五硫化二リンのような硫化試薬での処理によって、Ｑ＝Ｓの構造ａを有する化合物に変換することができる。次いで、そのような化合物を構造ｂを有する化合物とカップリングして、本明細書に記載の化合物、すなわち、構造ｃを有する式（Ｉ）の化合物を生成することができる。
【００６６】
化合物ａおよびｂは、市販で購入するか、または市販の出発物質から様々な方法で調製することができる。例えば、構造ｂを有するアミド化合物は、例えば、アシルクロリドとアミンとの反応によって調製することができる。
【００６７】
構造ｃを有する化合物を本明細書に開示される他の化合物に変換する、さらなる誘導体化反応は、化合物ｃにおける置換基Ｒ１、Ｒ２、Ａ、Ｙ、およびＢ、ならびに誘導体化合物において望ましい官能基の性質に基づいて、選択することができる。例えば、Ｒ１およびＲ２は、それらが結合している炭素原子と共に、当該技術分野で既知の方法（例えば、メチル化、保護基の付加など）によりさらに誘導体化が可能なヘテロシクロ環、例えばピペリジン環、を形成して、本明細書に記載の式（Ｉ）の様々な他の化合物を形成することができる。
【００６８】
薬学的製剤、投薬、および投与経路
本明細書に記載の化合物（例えば、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩）、および薬学的に許容される賦形剤を含む医学的製剤がさらに提供される。
【００６９】
本明細書に記載の化合物は、治療上有効量（例えば、異常なＥＧＦＲに関連する疾患または障害の症状を予防または緩和するのに十分な量）で対象に投与することができる。化合物は、単独で、または薬学的に許容される組成物もしくは製剤の一部として、投与され得る。加えて、化合物は、一度に投与されても、複数回投与されても、またはある期間にわたって実質的に一様に送達されてもよい。化合物の用量が、経時的に変化し得ることにも留意されたい。
【００７０】
特定の対象に対する特定の投与レジメンは、化合物、投与される化合物の量、投与経路、および任意の副作用の原因および程度に部分的に依存するであろう。本開示による対象（例えば、ヒト等の哺乳動物）に投与される化合物の量は、妥当な時間枠にわたって所望の応答をもたらすのに十分でなければならない。投与量は、典型的には、投与の経路、タイミング、および頻度に依存する。したがって、臨床医は、投与量の力価を定め、最適な治療効果を得るために投与経路を修正する。従来の範囲探索の技術は、当業者に既知である。
【００７１】
単に例示として、この方法は、上記の要因に応じて、例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇの本明細書に記載の化合物を投与することを含む。他の実施形態では、投与量は、１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、または５ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇの範囲である。ある状況では、長期の治療を必要とし、より低い用量の化合物を、複数回にわたって投与することを伴うかもしれないし、伴わないかもしれない。必要であれば、化合物の用量は、１日を通して適切な間隔で別個に、２、３、４、５、６、またはそれ以上のサブ用量（ｓｕｂ−ｄｏｓｅ）として、任意選択的に単位剤形で、投与される。治療期間は、特定の状態応じ、１日〜数ヶ月間続き得る。
【００７２】
本明細書に開示される化合物（例えば、式（Ｉ）の化合物）を含む医薬組成物のような生理学的に許容される組成物を投与する好適な方法は、当技術分野で周知である。２つ以上の経路を使用して化合物を投与することができるが、特定の経路は別の経路よりも迅速かつ効果的な反応を提供し得る。状況に応じて、本化合物を含む医薬組成物は、体腔に適用もしくは滴下注入され、皮膚もしくは粘膜を通じて吸収され、摂取され、吸入され、および／または循環中に導入される。例えば、ある特定の状況では、薬剤を含む医薬組成物を、経口で、注射を通じて、または静脈内、腹腔内、脳内（実質内）、脳室内、筋肉内、眼内、動脈内、門脈内、病巣内、髄内、髄腔内、心室内、経皮、皮下、腹腔内、鼻腔内、腸内、局所、舌下、尿道、膣内、もしくは直腸のうちの１つの手段より、送達することが望ましい。化合物は、徐放システムによって、または埋め込みデバイスによって投与することができる。
【００７３】
投与を容易にするために、本化合物は、様々な態様では、担体（例えば、ビヒクル、アジュバント、または希釈剤）を含む生理学的に許容される組成物に製剤化される。採用される特定の担体は、溶解度および化合物との反応性の欠如などの化学物理的考慮事項、ならびに投与経路のみによって制限される。生理学的に許容される担体は、当該技術分野で周知である。注射可能物の使用に好適な例示的薬学的形態としては、滅菌水溶液または分散液、および注射可能な滅菌溶液または分散液の即時調製用の滅菌粉末が挙げられる（例えば、米国特許第５，４６６，４６８号を参照のこと）。注射可能な製剤は、例えば、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｃｏ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ．Ｐａ．，Ｂａｎｋｅｒ  ａｎｄ  Ｃｈａｌｍｅｒｓ，ｅｄｓ．，ｐａｇｅｓ  ２３８−２５０（１９８２）、およびＡＳＨＰ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｎ  Ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ  Ｄｒｕｇｓ，Ｔｏｉｓｓｅｌ，４ｔｈ  ｅｄ．，ｐａｇｅｓ  ６２２−６３０（１９８６））にさらに記載されている。本化合物を含む医薬組成物は、１つの態様では、かかる医薬組成物の使用に関する指示を提供する包装材料と共に、容器内に配置される。一般に、そのような指示には、試薬濃度、ならびにある特定の実施形態では、医薬組成物を再構成するのに必要であり得る賦形剤成分または希釈剤（例えば、水、生理食塩水、またはＰＢＳ）の相対量を説明する具体的な表現が含まれる。
【００７４】
非経口注射に好適な組成物は、生理学的に許容される滅菌水性もしくは非水性溶液、分散液、懸濁液、または乳濁液、および注射可能な滅菌溶液または分散液に再構成するための滅菌粉末を含み得る。好適な水性および非水性担体、希釈剤、溶媒、またはビヒクルの例としては、水、エタノール、ポリオール（プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセロール等）、それらの好適な混合物、植物油（オリーブ油等）、およびオレイン酸エチル等の注射可能な有機エステルが挙げられる。適切な流動性は、例えば、レシチン等のコーティング剤の使用によって、分散液の場合には必要な粒径の維持によって、かつ界面活性剤の使用によって維持され得る。
【００７５】
これらの組成物は、保存剤、湿潤剤、乳化剤、および分散剤等のアジュバントも含有し得る。微生物汚染は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸等を添加することによって防止され得る。また、等張剤、例えば、糖、塩化ナトリウムなどを含むことが望ましい場合もある。注射可能な医薬組成物の長期な吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンの使用によってもたらされ得る。
【００７６】
経口投与用の固体剤形には、カプセル剤、錠剤、粉剤、および顆粒剤が含まれる。かかる固体剤形では、本活性化合物は、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウム等の少なくとも１つの通例の不活性賦形剤（もしくは担体）、または（ａ）充填剤または増量剤、例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、マンニトール、およびケイ酸、（ｂ）結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、およびアカシア、（ｃ）保湿剤、例えば、グリセロール、（ｄ）崩壊剤、例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、ある特定の複合ケイ酸塩、および炭酸ナトリウム、（ａ）溶解遅延剤、例えば、パラフィン、（ｆ）吸収促進剤、例えば、第四級アンモニウム化合物、（ｇ）湿潤剤、例えば、セチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロール、（ｈ）吸着剤、例えば、カオリンおよびベントナイト、（ｉ）滑沢剤、例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、またはそれらの混合物と混合される。カプセル剤および錠剤の場合、剤形は、緩衝剤も含み得る。同様のタイプの固体組成物を、賦形剤、例えば、ラクトースまたは乳糖、ならびに高分子量ポリエチレングリコール等を使用して、軟および硬充填ゼラチンカプセル剤中の充填剤として使用することもできる。
【００７７】
錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸剤、および顆粒剤等の固体剤形は、コーティングおよびシェル、例えば、腸溶性コーティングおよび当該技術分野で周知の他のものを用いて調製され得る。固体剤形は、乳白剤も含有し得る。さらに、固体剤形は、それらが本活性化合物（複数可）を腸管のある特定の部分に遅延様式で放出するように、包埋組成物であり得る。使用され得る包埋組成物の例は、ポリマー物質およびワックスである。本活性化合物は、任意選択的に、１つ以上の賦形剤を含むマイクロカプセル化形態でもあり得る。
【００７８】
経口投与用の液体剤形には、薬学的に許容される乳濁液、溶剤、懸濁液、シロップ剤、およびエリキシル剤が含まれる。本活性化合物に加えて、液体剤形は、当該技術分野で一般に使用される不活性希釈剤、例えば、水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ソルビタンのポリエチレングリコールおよび脂肪酸エステル、またはこれらの物質の混合物等を含有し得る。
【００７９】
かかる不活性希釈剤に加えて、本組成物は、アジュバント、例えば、湿潤剤、乳化剤、および懸濁化剤、甘味剤、香味剤、ならびに芳香剤も含み得る。懸濁液は、本活性化合物に加えて、懸濁剤、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール、およびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天、ならびにトラガカント、またはこれらの物質の混合物等を含有し得る。
【００８０】
製剤化されると、溶液は、投与製剤に適合する方法で、治療的に有効な量で投与される。製剤は、注射液、薬物放出カプセルなどの様々な剤形で容易に投与される。例えば、水溶液での非経口投与の場合、必要に応じて溶液を好適に緩衝し、液体希釈剤を十分な生理食塩水またはグルコースで最初に等張にする必要がある。これらの特定の水溶液は、静脈内、筋肉内、皮下、および腹腔内投与に特に好適である。
【００８１】
人体で実施される方法の特許取得を禁止する管轄では、ヒト対象に組成物を「投与する」という意味は、ヒト対象が任意の技術（例えば、経口、吸入、局所適用、注射、挿入等）によって自己投与する規制物質を処方することに限定されるものとする。特許可能な対象を定義する法律または規則に準拠する最広義の合理的解釈が意図される。人体で実施される方法の特許取得を禁止しない管轄では、組成物の「投与」には、人体で実施される方法のみならず、前述の行為も含まれる。
【００８２】
使用方法
本明細書に記載の化合物は、ＥＧＦＲを調節することができる。一部の実施形態では、化合物は、ＥＧＦＲの二量体化を阻害する。様々な実施形態では、化合物は、ＥＧＦＲの分解を誘導する。
【００８３】
ＥＧＦＲは癌遺伝子および癌の重要な分子標的として明確に特定されているが、依然として、この癌遺伝子の活性を調節するための改善されたアプローチに対する多大な必要性および機会が存在する。二量体化を遮断する細胞透過性ペプチド（ディスラプチン）またはｓｉＲＮＡを使用すると、ＥＧＦＲ分解が、ＴＫＩ耐性細胞でさえ、細胞生存に大きな影響を与えることが示されている（１４、２３、２５、２６）。理論に縛られることなく、ほとんどの正常な細胞は高レベルのＥＧＦ／ＥＧＦＲを発現せず、したがって化合物８Ｃの影響を受けるとは予想されない対称的な二量体を形成するため、二量体化を阻害する小分子による活性ＥＧＦＲ（腫瘍に豊富）の分解が選択的であると仮定される。このアプローチは、ＴＫＩ耐性腫瘍において二量体界面は無傷のままであるため、ＴＫＩ耐性腫瘍細胞でも効果的である（図１Ａおよび図１Ｂを参照）。ここ記載されたアプローチは、現在承認されている治療法と比較し独特である。ＥＧＦＲのキナーゼ活性を単に阻害するのではなく、ＥＧＦＲタンパク質を分解することによって、この薬剤が、正常組織と比較して腫瘍細胞に豊富なＥＧＦ結合ＥＧＦＲにのみに影響を与え、それによって安全性プロファイルおよび治療ウィンドウが改善されるという事実から、腫瘍組織を標的とする能力を改善しながら前臨床モデルでの広範囲の活性が実証されている。
【００８４】
ＥＧＦＲのキナーゼ活性を単に阻害するのではなく、ＥＧＦＲを分解するアプローチは、非小細胞肺癌の患者で常に発症するオシメルチニブに対する耐性を克服する。この用途の焦点は肺癌であるものの、追加的かつ重要な臨床の機会は、頭頸部癌、大直腸、膠芽腫などのＥＧＦＲによって駆動される他の癌にも存在する。したがって、腫瘍における腫瘍タンパク質の標的化された選択的な分解は、キナーゼ活性の阻害を超える新しいメカニズムを表し、このアプローチは、他の発癌性タンパク質に適用できるかもしれない（２２、２５、２６、４６）。
【００８５】
本明細書に開示される化合物は、異常なＥＧＦＲ活性に起因する疾患または障害の治療または予防に特に有利である。
【００８６】
本明細書で使用される場合、「異常なＥＧＦＲ活性」は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の突然変異および過剰発現に関連する活性を指す。そのような変異と過剰発現は、様々な癌の発症と関連している（Ｓｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ２０１２，１４９（４）８６０−８７０）。
【００８７】
ＥＧＦＲの生物学的役割の重要性を考慮すると、本開示の化合物は、様々な状況における多くの用途に有用である。例えば、最も単純には、本開示の活性剤は、細胞におけるＥＧＦＲの二量体化を阻害するために有用である。これに関して、本開示は、細胞におけるＥＧＦＲの二量体化を阻害する方法を提供する。本方法は、二量体化を阻害するのに有効な量で、細胞を、本開示の化合物またはその薬学的に許容される塩と接触させることを含む。一部の態様では、細胞は、インビトロもしくはエクスビボの細胞培養物、またはインビトロもしくはエクスビボの組織サンプルの一部である。一部の態様では、細胞は、インビボの細胞である。特定の実施形態では、方法は、研究目的を意図しており、他の実施形態では、方法は、治療目的を意図している。
【００８８】
ＥＧＦＲ二量体化の阻害は、ＥＧＦＲ分解の増加につながる。したがって、本開示は、細胞におけるＥＧＦＲ分解を増加させる方法をさらに提供する。この方法は、分解を増加させるのに有効な量で、細胞を、本開示の化合物またはその薬学的に許容される塩と接触させることを含む。一部の態様では、細胞は、インビトロもしくはエクスビボの細胞培養物、またはインビトロもしくはエクスビボの組織サンプルの一部である。一部の態様では、細胞は、インビボの細胞である。特定の実施形態では、方法は、研究目的を意図しており、他の実施形態では、方法は、治療目的を意図している。
【００８９】
本明細書に示されるように、ＥＧＦＲの二量体化を阻害する化合物は、腫瘍細胞死を増加させる。したがって、本開示は、対象における腫瘍細胞死を増加させる方法を提供する。本方法は、腫瘍細胞死を増加させるのに有効な量で、本開示の化合物またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む。
【００９０】
前述に従って、本開示は、対象における癌を治療する方法をさらに提供する。本方法は、対象における癌を治療するのに有効な量で、本開示の化合物またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含む。
【００９１】
本明細書で使用される場合、「治療する」という用語、ならびにそれに関連する言葉は、必ずしも１００％または完全な治療を意味するものではない。むしろ、様々な程度の治療があり、当業者は、潜在的な利益または治療効果を有するものとして認識している。この点で、本開示の癌を治療する方法は、任意の量または任意のレベルの癌の治療を提供することができる。さらに、本開示の方法によって提供される治療は、治療される癌の１つ以上のの状態または症状の治療を含み得る。また、本開示の方法によって提供される治療は、癌の進行を遅らせることを包含し得る。例えば、本方法は、腫瘍または癌の成長を低減すること、腫瘍細胞の転移を低減すること、腫瘍または癌細胞の細胞死を増加させることなどによって、癌を治療することができる。
【００９２】
本明細書に開示される方法によって治療可能な癌は、任意の癌、例えば、リンパ系または血流を通じて身体の他の部分に広がる可能性のある異常かつ制御されない細胞分裂によって引き起こされる任意の悪性増殖または腫瘍であり得る。一部の実施形態では、癌は、ＥＧＦＲが癌の細胞によって発現される癌である。一部の態様では、癌は、ＥＧＦＲタンパク質が過剰発現され、ＥＧＦＲをコードする遺伝子が増幅され、および／またはＥＧＦＲ変異タンパク質（例えば、切断ＥＧＦＲ、点変異ＥＧＦＲ）が発現される癌である。
【００９３】
癌は、一部の態様では、急性リンパ球性癌、急性骨髄性白血病、胞巣状横紋筋肉腫、骨癌、脳癌、乳癌、肛門癌、肛門管癌、または肛門直腸癌、眼癌、肝内胆管癌、関節の癌、頚部癌、胆嚢癌、または胸膜の癌、鼻、鼻腔、または中耳の癌、口腔の癌、外陰部癌、白血病（例えば、慢性リンパ球性白血病）、慢性骨髄癌、結腸癌、食道癌、子宮頸癌、消化管カルチノイド腫瘍、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、腎癌、喉頭癌、肝癌、肺癌、悪性中皮腫、黒色腫、多発性骨髄腫、上咽頭癌、非ホジキンリンパ腫、卵巣癌、膵癌、腹膜、網、および腸間膜癌、咽頭癌、前立腺癌、直腸癌、腎癌（例えば、腎細胞癌（ＲＣＣ））、小腸癌、軟部組織癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、尿管癌、および膀胱癌、からなる群から選択されるものである。特定の態様では、癌は、頭頸部癌、卵巣癌、子宮頸癌、膀胱癌および食道癌、膵癌、胃腸癌、胃癌、乳癌、子宮内膜癌および大腸癌、肝細胞癌、膠芽腫、膀胱癌、肺癌、例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、細気管支肺胞癌、からなる群から選択される。特定の態様では、癌は、オシメルチニブ耐性癌である。場合によっては、癌は、膵癌、頭頸部癌、黒色腫、結腸癌、腎癌、白血病、または乳癌である。場合によっては、癌は、黒色腫、結腸癌、腎癌、白血病、または乳癌である。
【００９４】
ＥＧＦＲを調節するための、または異常なＥＧＦＲ活性に関連する疾患または障害を治療または予防するための薬剤の調製における、本明細書に開示される化合物の使用もまた、本明細書に提供される。
【００９５】
本明細書の開示は、以下の実施例を参照することにより、より容易に理解されるであろう。
【００９６】
本開示の原理が適用され得る多くの可能な実施形態を考慮すると、例示された実施形態は単なる例であり、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではないことを認識されたい。
【実施例】
【００９７】
【化８】
2021514001.tif 000017
【００９８】
３−（４−ブロモフェニル）−８−メチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−３−エン−２−チオンの溶液、無水アセトニトリル中の６に、アセトアミド７Ａ−Ｇ（１当量）を添加した。反応混合物を、４０℃に加温した。次に、２Ｍ炭酸カリウム水溶液（１当量）を反応混合物に添加した。ＴＬＣで出発物質の減少および新しいＲｆのスポットが示されるまで（典型的に２〜６時間）、反応を４０℃に維持した。ＴＬＣにより反応の完了が確認できたら、反応の後処理（ワークアップ）を行った。粗反応混合物を分液漏斗に注ぎ、酢酸エチルおよび水を添加した。有機層を分離し、次いでブラインで洗浄した（１ｘ）。次いで、有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。粗生成物を、最小量の酢酸エチルを使用して、シリカカラムに負荷した。カラムカラムを、事前に平衡化された別のシリカカラムの上に配置した。典型的には、ヘプタン中での酢酸エチルの勾配（１〜１００％）、またはジクロロメタン中でのメタノールの勾配（０〜１０％）を使用して、生成物を溶出した。生成物の画分を減圧下で濃縮して、所望の生成物を得た。
【００９９】
実施例２−化合物８Ａの合成（２−（（３−（４−ブロモフェニル）−８−メチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（６−メトキシピリジン−３−イル）アセトアミド）
アセトアミド７Ａを使用して、一般手順Ａに従った。粗生成物を、１０％メタノール／ジクロロメタン溶液で溶出が起こるフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．３０（ｓ，１Ｈ），８．３１（ｄ，Ｊ＝２．２９  Ｈｚ，１Ｈ），７．７４−７．８６（ｍ，５Ｈ），６．７８（ｄ，Ｊ＝８．８７  Ｈｚ，１Ｈ），４．１４（ｓ，２Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ），２．５０−２．６７（ｍ，４Ｈ），２．２４（ｓ，３Ｈ），１．５５−１．７５（ｍ，４Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ＋ｍ／ｚ  ５０３．１０，ＥＳＩ−ｍ／ｚ  ５０１．１０）；ＴＬＣ：（９０：１０：０．５，ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＮＨ４ＯＨ）Ｒｆ＝０．５６。
【０１００】
実施例３−化合物８Ｂの合成（２−（（３−（４−ブロモフェニル）−８−メチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（６−クロロピリジン−３−イル）アセトアミド）
アセトアミド７Ｂを使用して、一般手順Ａに従った。粗生成物を、１０％メタノール／ジクロロメタン溶液で溶出が起こるフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．７２（ｓ，１Ｈ），８．６３（ｓ，１Ｈ），８．１０（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝９．１５  Ｈｚ，１Ｈ），７．８５（ｑ，Ｊ＝８．２３  Ｈｚ，４Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝８．６０  Ｈｚ，１Ｈ），４．２４（ｓ，２Ｈ），２．５６−２．８１（ｍ，４Ｈ），２．２７（ｂｒ  ｓ，３Ｈ），１．５５−１．８５（ｍ，４Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ＋ｍ／ｚ  ５０７．９５，ＥＳＩ−ｍ／ｚ  ５０５．９５）；ＴＬＣ：（９５：５：０．５，ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＮＨ４ＯＨ）Ｒｆ＝０．１７。
【０１０１】
実施例４−化合物８Ｃの合成（２−（（３−（４−ブロモフェニル）−８−メチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド）
アセトアミド７Ｃを使用して、一般手順Ａに従った。粗生成物を、１０％メタノール／ジクロロメタン溶液で溶出が起こるフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．８９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），８．９５（ｓ，１Ｈ），８．６７（ｓ，１Ｈ），７．９６（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝８．３３  Ｈｚ，１Ｈ），７．９２（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝８．３３  Ｈｚ，１Ｈ），７．７８−７．８７（ｍ，４Ｈ），７．５２−７．７２（ｍ，２Ｈ），４．２９（ｓ，２Ｈ），２．４３−２．５２（ｍ，４  Ｈ），２．１８（ｂｒ  ｓ，３Ｈ），１．５５−１．８５（ｍ，４Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ＋ｍ／ｚ  ５２３．０５，ＥＳＩ−ｍ／ｚ  ５２１．００）；ＴＬＣ：（９０：１０：０．５，ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＮＨ４ＯＨ）Ｒｆ＝０．４７。
【０１０２】
実施例５−化合物８Ｄの合成（２−（（３−（４−ブロモフェニル）−８−メチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（ピリジン−４−イル）アセトアミド）
アセトアミド７Ｄを使用して、一般手順Ａに従った。粗生成物を、１３％メタノール／ジクロロメタン溶液で溶出が起こるフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．６６（ｓ，１Ｈ），８．４１（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝６．１３  Ｈｚ，２Ｈ），７．７８（ｑ，Ｊ＝８．５１  Ｈｚ，４Ｈ），７．５２（ｄ，Ｊ＝６．０４  Ｈｚ，２Ｈ），４．１８（ｓ，２Ｈ），２．５０−２．７３（ｍ，４  Ｈ），２．１９（ｂｒ  ｓ，３Ｈ），１．２８−１．９１（ｍ，４Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ＋ｍ／ｚ  ４７３．０５，ＥＳＩ−ｍ／ｚ  ４７１．０５）；ＴＬＣ：（９０：１０：０．５，ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＮＨ４ＯＨ）Ｒｆ＝０．２４。
【０１０３】
実施例６−化合物８Ｅの合成（２−（（３−（４−ブロモフェニル）−８−メチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−シクロヘキシルアセトアミド）
アセトアミド７Ｅを使用して、一般手順Ａに従った。一般手順Ａにおけるワークアップ手順に従って、カラム精製なしで標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．０４（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝７．７８  Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｑ，Ｊ＝８．６３  Ｈｚ，４Ｈ），３．８９（ｓ，２Ｈ），３．４５−３．５５（ｍ，１Ｈ），２．５０−２．７１（ｍ，４  Ｈ），２．２９（ｓ，３Ｈ），１．５８−１．８０（ｍ，７Ｈ），１．５１（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１２．４４  Ｈｚ，１Ｈ），１．０５−１．２８（ｍ，６  Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ＋ｍ／ｚ  ４７８．９０，ＥＳＩ−ｍ／ｚ  ４７６．９０）；ＴＬＣ：（９０：１０：０．５，ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＮＨ４ＯＨ）Ｒｆ＝０．６０。
【０１０４】
実施例７−化合物８Ｆの合成（２−（（３−（４−ブロモフェニル）−８−メチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−シクロペンチルアセトアミド）
アセトアミド７Ｆを使用して、一般手順Ａに従った。粗生成物を、１０％メタノール／ジクロロメタン溶液で溶出が起こるフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．１５（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝６．７７  Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｑ，Ｊ＝８．４２  Ｈｚ，４Ｈ），３．９２−４．０１（ｍ，１Ｈ），３．９１（ｓ，２Ｈ），２．５０−２．７１（ｍ，４  Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ），１．５８−１．８２（ｍ，８Ｈ），１．４５−１．５４（ｍ，２Ｈ），１．３８（ｔｄ，Ｊ＝６．２７，１２．３５  Ｈｚ，２Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ＋ｍ／ｚ  ４６４．１０，ＥＳＩ−ｍ／ｚ  ４６２．１５）；ＴＬＣ：（９０：１０：０．５，ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＮＨ４ＯＨ）Ｒｆ＝０．６２。
【０１０５】
実施例８−化合物８Ｇの合成（Ｎ−ベンジル−２−（（３−（４−ブロモフェニル）−８−メチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）アセトアミド）
アセトアミド７Ｇを使用して、一般手順Ａに従った。粗生成物を、１０％メタノール／ジクロロメタン溶液で溶出が起こるフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．６５（ｂｒ  ｔ，Ｊ＝５．８１  Ｈｚ，１Ｈ），７．７３−７．８２（ｍ，４Ｈ），７．１７−７．３０（ｍ，５Ｈ），４．２７（ｄ，Ｊ＝５．９５  Ｈｚ，２Ｈ），３．９９（ｓ，２Ｈ），２．５０−２．７３（ｍ，５  Ｈ），２．２８（ｓ，３Ｈ），１．６６（ｂｒ  ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ＋ｍ／ｚ  ４８６．００，ＥＳＩ−ｍ／ｚ  ４８４．１０）；ＴＬＣ：（９０：１０：０．５，ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＮＨ４ＯＨ）Ｒｆ＝０．５９。
【０１０６】
実施例９〜１１−化合物３〜５の合成
【０１０７】
【化９】
2021514001.tif 000018
【０１０８】
実施例９−化合物３の合成（ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（（３−クロロ−４−メトキシフェニル）アミノ）−２−オキソエチル）−２−（４−メトキシフェニル）−３−オキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレート）
ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−メトキシフェニル）−３−オキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレートの溶液、無水ＤＭＦ中の１に、水素化ナトリウム（２当量）を添加した。反応混合物を、４０℃に３０分間加温した。次に、２−クロロ−Ｎ−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）アセトアミド塩酸塩、２（１．７６当量）を、反応混合物に添加した。反応混合物を４０℃に保ち、Ｎ２の流下で攪拌した。５時間後、ＴＬＣは出発物質が残留していることを示したが、反応を精製した。粗反応混合物を、室温に冷却し、次いでシリカ上に装填した。ドライロードされた材料を、ドライロードカラムに入れて、充填した。ドライロードカラムを、事前に平衡化した（ヘプタン中１％の酢酸エチル）シリカカラムの上に配置した。粗生成物を、ヘプタン中１〜１００％の酢酸エチルの勾配で溶出するフラッシュクロマトグラフィーを使用して精製した。所望の画分（５０％の酢酸エチルで溶出）を収集し、減圧下で濃縮して、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．６７（ｓ，１Ｈ），８．４６（ｄ，Ｊ＝８．９７  Ｈｚ，２Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝２．５６  Ｈｚ，１Ｈ），７．２７−７．３９（ｍ，１Ｈ），６．９９（ｄ，Ｊ＝８．９７  Ｈｚ，２Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝８．８７  Ｈｚ，１Ｈ），４．０１−４．２２（ｍ，２Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），３．３９（ｍ，２Ｈ），２．２１（ｄｔ，Ｊ＝４．８０，１２．６９Ｈｚ，２Ｈ），１．５０（ｓ，９Ｈ），１．１９−１．４０（ｍ，４Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ＋ｍ／ｚ  ５０１，ＥＳＩ−ｍ／ｚ  ５５６．１５）；ＴＬＣ：（５０：５０  ＥＡ：ＨＥＰ）Ｒｆ＝０．２１。
【０１０９】
実施例１０−化合物４の合成（Ｎ−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−２−（３−（４−メトキシフェニル）−２−オキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−３−エン−１−イル）アセトアミド塩酸塩）
３の溶液、無水ジオキサン中のｔｅｒｔ−ブチル４−（２−（（３−クロロ−４−メトキシフェニル）アミノ）−２−オキソエチル）−２−（４−メトキシフェニル）−３−オキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレートに、ジオキサン中の４ＭのＨＣｌ（３．３当量）を添加した。１時間後、ＴＬＣで反応が観察されなかったため、ジオキサン（３．３当量）中の４ＭのＨＣｌの追加部分を追加した。１時間後、新しいスポット（ベースライン）が観察されたが、出発物質が残留していた。ジオキサン（３．３当量）中の４ＭのＨＣｌの追加部分を添加し、反応混合物を、４０℃で一晩撹拌した。一晩、反応混合物中に黄色沈殿が形成された。固体をフリット漏斗で濾過し、過剰のジオキサンですすいだ。固体をバイアルに移し、減圧下で乾燥して、標題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．４８（ｓ，１Ｈ），９．２２（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝９．７０  Ｈｚ，１Ｈ），８．９３（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１０．７０  Ｈｚ，１Ｈ），８．３９（ｄ，Ｊ＝８．９７  Ｈｚ，２Ｈ），７．７８（ｄ，Ｊ＝２．４７  Ｈｚ，１Ｈ），７．４５（ｄｄ，Ｊ＝２．５２，９．０１Ｈｚ，１Ｈ），７．０７−７．１４（ｍ，３Ｈ），４．９８（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），４．２５（ｓ，２Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），３．３９−３．４８（ｍ，２Ｈ），３．２５−３．３９（ｍ，２Ｈ），１．５５（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１３．４５Ｈｚ，２Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ＋ｍ／ｚ  ４５７．１０，ＥＳＩ−ｍ／ｚ  ４５５．１０）；ＴＬＣ：（９５：５：０．５，ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＮＨ４ＯＨ）Ｒｆ＝０．０３。
【０１１０】
実施例１１−化合物５の合成（Ｎ−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−２−（３−（４−メトキシフェニル）−８−メチル−２−オキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ）−３−エン−１−イル）アセトアミド）
４の溶液、メタノール中のＮ−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−２−（３−（４−メトキシフェニル）−２−オキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−３−エン−１−イル）アセトアミド塩酸塩に、ホルムアルデヒド水溶液（３７重量％溶液、７当量）を添加した。反応混合物を５分間撹拌し、次いでトリアセトキシボロヒドリド（３当量）を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。翌朝、ＴＬＣ（９５：５：０．５、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＮＨ４ＯＨ）で、新しいより高いスポットＲｆを伴って、反応が完了したこと示した。粗反応物を分液漏斗に注いだ。分液漏斗にジクロロメタンを添加した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１ｘ）、続いてブライン（１ｘ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、表題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．１５（ｓ，１Ｈ），８．３４（ｄ，Ｊ＝８．９７  Ｈｚ，２Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝２．４７  Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｄｄ，Ｊ＝２．５６，８．９７Ｈｚ，１Ｈ），７．０３−７．１２（ｍ，３Ｈ），４．２４（ｓ，２Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），２．７８（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），２．２９（ｂｒ  ｓ，３Ｈ），２．１５−２．２６（ｍ，２Ｈ）１．１３−１．３３（ｍ，３Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ＋ｍ／ｚ  ４７１．１０）；ＴＬＣ：（９５：５：０．５，ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＮＨ４ＯＨ）Ｒｆ＝０．２３。
実施例１２〜１４−化合物１０、１１、および１２の合成
【０１１１】
【化１０】
2021514001.tif 000019
【０１１２】
実施例１２−化合物１０の合成（ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−メトキシフェニル）−３−（（２−（（６−メトキシピリジン−３−イル）アミノ）−２−オキソエチル）チオ）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシレート）
ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−メトキシフェニル）−３−オキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシラートの溶液、無水ＴＨＦ中の１、にローソン試薬（１当量）を添加した。反応混合物を室温で４８時間撹拌した後、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。粗反応混合物をシリカ上にドライロードした。ドライロードされた材料をドライロードカラムに入れ、充填した。ドライロードカラムを、事前に平衡化した（ヘプタン中２％の酢酸エチル）シリカカラムの上に配置した。粗生成物を、ヘプタン中の２〜１００％の酢酸エチルの勾配で溶出するフラッシュクロマトグラフィーを使用して精製した。所望の画分（５０％の酢酸エチルでの溶出）を収集し、減圧下で濃縮して、粗固形物を得た。固体をヘプタン、ジクロロメタン、および酢酸エチルの混合物（３：２：１  ｖ／ｖ）で粉砕し、フリット漏斗で濾過して、９  ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−メトキシフェニル）−３−チオキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレートを得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋ｍ／ｚ  ３７６．９，ＥＳＩ−ｍ／ｚ  ３７４．９）；ＴＬＣ：（９５：０．５：０．５，ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＮＨ４ＯＨ）Ｒｆ＝０．６８。
【０１１３】
次に、ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（４−メトキシフェニル）−３−チオキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレートの溶液、無水アセトニトリル中の９に、２−クロロ−Ｎ−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）アセトアミド塩酸塩、２（１当量）を添加した。反応混合物を、４０℃に加温した。次に、２Ｍの炭酸カリウム水溶液（２当量）を、反応混合物に添加した。ＴＬＣで、出発物質の減少が示され、より低いＲｆの２つの新しいスポットが観察されるまで、４０℃で一晩、反応を継続した。粗反応混合物を分液漏斗に注いだ。漏斗に、酢酸エチルおよび水を添加した。有機層を分離し、次いでブラインで洗浄した（１ｘ）。次いで、有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。粗生成物を、最少量のジクロロメタンを使用して、シリカカラムに装填した。カラムを、事前に平衡化された別のシリカカラムの上に配置した。ヘプタン中の酢酸エチルの勾配（１〜３５％）を使用して、フラッシュクロマトグラフィーにより生成物を溶出した。生成物画分を減圧下で濃縮して、表題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．３０（ｓ，１Ｈ），８．３２（ｄ，Ｊ＝２．３８  Ｈｚ，１Ｈ），７．８４−７．９１（ｍ，３Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝８．９７  Ｈｚ，２Ｈ），６．８０（ｄ，Ｊ＝８．９７  Ｈｚ，２Ｈ），４．１５（ｓ，２Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ），３．６３−３．７２（ｍ，２Ｈ），３．４７−３．５６（ｍ，２Ｈ），１．７２（ｂｒ  ｔ，Ｊ＝８．７８  Ｈｚ，２Ｈ），１．４２（ｂｒ  ｓ，１１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ＋ｍ／ｚ  ５４０．２０，ＥＳＩ−ｍ／ｚ  ５３８．１５）；ＴＬＣ：（５０：５０，ＥＡ：Ｈｅｐ）Ｒｆ＝０．２９。
【０１１４】
実施例１３−化合物１１の合成（２−（（３−（４−メトキシフェニル）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（６−メトキシピリジン−３−イル）アセトアミド塩酸塩）
１０の溶液、無水ジオキサン中のｔｅｒｔ−ブチル  ２−（４−メトキシフェニル）−３−（（２−（（６−メトキシピリジン−３−イル）アミノ）−２−オキソエチル）チオ）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシレートに、ジオキサン中の４ＭのＨＣｌ（３当量）を添加した。２時間後、ＴＬＣで出発物質は観察されず、新しいスポット（ベースライン）が形成された。反応混合物中に黄色沈殿が形成された。固体をフリット漏斗で濾過し、過剰のジオキサンですすいだ。固体が不純であったため、最小量のジクロロメタンを使用してシリカカラム上に装填した。ジクロロメタン中のメタノールの勾配（０〜１５％）を使用して、フラッシュクロマトグラフィーを介して生成物を溶出した。生成物画分を減圧下で濃縮して、表題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．４０（ｓ，１Ｈ），８．４５−８．６０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），８．２５−８．４３（ｍ，１Ｈ），７．８５−７．９３（ｍ，３Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝８．８７  Ｈｚ，２Ｈ），６．８０（ｄ，Ｊ＝８．７８  Ｈｚ，２Ｈ），４．１８（ｓ，２Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），３．２２−３．５６（ｍ，４Ｈ），１．８４−２．０１（ｍ，２Ｈ），１．６０−１．７５（ｍ，２Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ＋ｍ／ｚ  ４４０．１０，ＥＳＩ−ｍ／ｚ  ４３８．１０）；ＴＬＣ：（５０：５０，ＥＡ：Ｈｅｐ）Ｒｆ＝０．２５。
【０１１５】
実施例１４−化合物１２の合成（２−（（３−（４−メトキシフェニル）−８−メチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（６−メトキシピリジン−３−イル）アセトアミド）
１１の溶液、９５：５のジクロロメタン：メタノール中の２−（（３−（４−メトキシフェニル）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（６−メトキシピリジン−３−イル）アセトアミド塩酸塩に、ホルムアルデヒド水溶液（３７重量％の溶液、７当量）を添加した。反応混合物を１時間撹拌し、次いでトリアセトキシボロヒドリド（３当量）を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。翌朝、ＴＬＣ（９５：５：０．５、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＮＨ４ＯＨ）は、新しいより高いＲｆスポットを伴って、反応が完了したことを示した。粗反応物を分液漏斗に注いだ。分液漏斗にジクロロメタンと水を添加した。有機層を分離し、ブラインで洗浄した（１ｘ）。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。粗生成物が不純であったため、最小量のジクロロメタンを使用してシリカカラム上に装填した。ジクロロメタン中のメタノールの勾配（０〜１０％）を使用して、フラッシュクロマトグラフィーを介して生成物を溶出した。生成物画分を減圧下で濃縮して、表題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．３３（ｓ，１Ｈ），８．３５（ｄ，Ｊ＝２．３８  Ｈｚ，１Ｈ），７．８５−７．９１（ｍ，３Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝８．０２  Ｈｚ，２Ｈ），６．８１（ｄ，Ｊ＝９．０６  Ｈｚ，１Ｈ），４．１６（ｓ，２Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ），２．５３−２．８１（ｍ，４Ｈ），２．１５−２．４０（ｍ，２Ｈ），１．９２（ｓ，３Ｈ），１．５０−１．８０（ｍ，２Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ＋ｍ／ｚ  ４５４．１０，ＥＳＩ−ｍ／ｚ  ４５２．１０）；ＴＬＣ：（９５：５：０．５，ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＮＨ４ＯＨ）Ｒｆ＝０．２２。
【０１１６】
実施例１５〜２８：化合物３３ａ〜３３ｌの合成
【０１１７】
【化１１】
2021514001.tif 000020
【０１１８】
（ｉ）の一般的な反応条件：ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−ブロモフェニル）−３−オキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、ＴＨＦ（０．１Ｍ）中のローソン試薬（０．６当量）を添加し、ＴＬＣで反応が完了するまで、反応混合物を６０℃に加熱した。反応混合物をシリカゲル上に濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−ブロモフェニル）−３−チオキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレートを提供した。
【０１１９】
（ｉｉ）の一般的な反応条件：ＤＣＭ（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（４−ブロモフェニル）−３−チオキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、２−ブロモ−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド（１当量）およびトリエチルアミン（３当量）を添加した。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−ブロモフェニル）−３−（（２−オキソ−２−（キノリン−３−イルアミノ）エチル）チオ）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシラートを提供した。
【０１２０】
（ｉｉｉ）の一般的な反応条件：ＤＣＭ（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（４−ブロモフェニル）−３−（（２−オキソ−２−（キノリン−３−イルアミノ）エチル）チオ）−１，４，８へ−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシラート（１当量）の溶液にジオキサン中の４ＭのＨＣｌの溶液（２当量）を添加し、反応混合物を室温で５時間攪拌した。反応混合物を濃縮した。得られた残留物をＴＨＦ（０．１Ｍ）およびトリエチルアミン（５当量）に取り、適切な求電子試薬（３当量）を添加し、続いてＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（３当量）を添加し、反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃに取り込み、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機物を乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜３０％のＭｅＯＨ）により精製して、所望の生成物を提供した。
【０１２１】
実施例１５〜２８
化合物３３ａ  ２−（（３−（４−ブロモフェニル）−８−イソプロピル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．８１（ｓ，１Ｈ），８．９７−８．９０（ｍ，１Ｈ），８．００−７．９５（ｍ，１Ｈ），７．９５−７．９０（ｍ，１Ｈ），７．８９−７．８３（ｍ，２Ｈ），７．８３−７．７７（ｍ，２Ｈ），７．７１−７．６３（ｍ，１Ｈ），７．６２−７．５５（ｍ，１Ｈ），４．２６（ｓ，２Ｈ），２．７３−２．６０（ｍ，４Ｈ），１．８８−１．７１（ｍ，２Ｈ），１．６２−１．４０（ｍ，２Ｈ），０．９０（ｓ，３Ｈ），０．８８（ｓ，３Ｈ）。
【０１２２】
化合物３３ｂ  ２−（（３−（４−ブロモフェニル）−８−イソペンチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．８０（ｓ，１Ｈ），８．９４（ｄ，Ｊ＝２．５  Ｈｚ，１Ｈ），８．６７（ｄ，Ｊ＝２．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．９９−７．９４（ｍ，１Ｈ），７．９４−７．９０（ｍ，１Ｈ），７．８８−７．８３（ｍ，２Ｈ），７．８３−７．７８（ｍ，２Ｈ），７．６９−７．６２（ｍ，１Ｈ），７．６２−７．５４（ｍ，１Ｈ），４．２６（ｓ，２Ｈ），３．４８−３．３６（ｍ，４Ｈ），２．６７−２．５６（ｍ，２Ｈ），２．３１−２．１２（ｍ，２Ｈ），１．６２−１．３８（ｍ，２Ｈ），１．２８−１．１５（ｍ，２Ｈ），０．８１（ｄ，Ｊ＝６．５  Ｈｚ，６Ｈ）。
【０１２３】
化合物３３ｃ  ２−（（８−ベンジル−３−（４−ブロモフェニル）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド  １Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ８．１７（ｄ，Ｊ＝２．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．９５（ｄ，Ｊ＝２．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．２５−７．１９（ｍ，１Ｈ），７．１２−７．０２（ｍ，３Ｈ），６．９６−６．８７（ｍ，３Ｈ），６．８５−６．７８（ｍ，１Ｈ），６．４３−６．３０（ｍ，３Ｈ），６．３０−６．１７（ｍ，２Ｈ），３．４２−３．３４（ｍ，２Ｈ），２．７６−２．６０（ｍ，４Ｈ），２．１０−１．９５（ｍ，２Ｈ），１．９５−１．７８（ｍ，２Ｈ）。
【０１２４】
化合物３３ｄ  ２−（（３−（４−ブロモフェニル）−８−エチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド  １Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．８２（ｓ，１Ｈ），８．９４（ｄ，Ｊ＝２．５  Ｈｚ，１Ｈ），８．６７（ｄ，Ｊ＝２．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．９７（ｄ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．９３（ｄ，Ｊ＝８．１  Ｈｚ，１Ｈ），７．８５（ｄ，Ｊ＝８．５  Ｈｚ，２Ｈ），７．８１（ｄ，Ｊ＝８．５  Ｈｚ，２Ｈ），７．６９−７．６３（ｍ，１Ｈ），７．６２−７．５３（ｍ，１Ｈ），４．２７（ｓ，２Ｈ），２．６６（ｓ，４Ｈ），２．４８−２．３３（ｍ，２Ｈ），１．９０−１．４０（ｍ，２Ｈ），１．０２−０．９１（ｍ，３Ｈ）。
【０１２５】
化合物３３ｅ  ２−（（３−（４−ブロモフェニル）−８−プロピル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド  １Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．８０（ｓ，１Ｈ），８．９４（ｄ，Ｊ＝２．５  Ｈｚ，１Ｈ），８．６７（ｄ，Ｊ＝２．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．９９−７．９５（ｍ，１Ｈ），７．９３（ｄｄ，Ｊ＝８．１，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．８８−７．８３（ｍ，２Ｈ），７．８３−７．７８（ｍ，２Ｈ），７．６６（ｄｄｄ，Ｊ＝８．４，６．８，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｄｄｄ，Ｊ＝８．２，６．９，１．３  Ｈｚ，１Ｈ），４．２６（ｓ，２Ｈ），２．６７−２．５５（ｍ，４Ｈ），２．２９−２．１６（ｍ，２Ｈ），１．９０−１．６９（ｍ，２Ｈ），１．６３−１．４１（ｍ，２Ｈ），１．４０−１．２９（ｍ，２Ｈ），０．７９（ｔ，Ｊ＝７．３  Ｈｚ，３Ｈ）。
【０１２６】
化合物３３ｆ  ２−（（３−（４−ブロモフェニル）−８−イソブチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド  １Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．８０（ｓ，１Ｈ），８．９５（ｄ，Ｊ＝２．６  Ｈｚ，１Ｈ），８．６７（ｄ，Ｊ＝２．５  Ｈｚ，１Ｈ），８．００−７．９４（ｍ，１Ｈ），７．９４−７．９０（ｍ，１Ｈ），７．８７−７．８３（ｍ，２Ｈ），７．８３−７．７８（ｍ，２Ｈ），７．６９−７．６２（ｍ，１Ｈ），７．６２−７．５４（ｍ，１Ｈ），４．２６（ｓ，２Ｈ），２．６５−２．５２（ｍ，４Ｈ），２．０６−１．９３（ｍ，２Ｈ），１．９２−１．７５（ｍ，２Ｈ），１．７２−１．３７（ｍ，３Ｈ），０．８０（ｄ，Ｊ＝６．５  Ｈｚ，６Ｈ）。
【０１２７】
化合物３３ｇ  ２−（（３−（４−ブロモフェニル）−８−（３，３，３−トリフルオロプロピル）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．８０（ｓ，１Ｈ），８．９４（ｄ，Ｊ＝２．５  Ｈｚ，１Ｈ），８．６７（ｄ，Ｊ＝２．４  Ｈｚ，１Ｈ），８．００−７．９５（ｍ，１Ｈ），７．９５−７．９１（ｍ，１Ｈ），７．８８−７．８３（ｍ，２Ｈ），７．８３−７．７８（ｍ，２Ｈ），７．６６（ｄｄｄ，Ｊ＝８．４，６．９，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｄｄｄ，Ｊ＝８．１，６．９，１．３  Ｈｚ，１Ｈ），４．２８（ｓ，２Ｈ），２．６８−２．５４（ｍ，６Ｈ），１．９６−１．４０（ｍ，６Ｈ）。
【０１２８】
化合物３３ｈ  ２−（（３−（４−ブロモフェニル）−８−シクロペンチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．８２（ｓ，１Ｈ），８．９６（ｓ，１Ｈ），８．６８（ｓ，１Ｈ），８．０３−７．９０（ｍ，２Ｈ），７．９０−７．７７（ｍ，４Ｈ），７．７３−７．６３（ｍ，１Ｈ），７．６２−７．５４（ｍ，１Ｈ），４．２５（ｓ，２Ｈ），２．７７−２．２３（ｍ，５Ｈ），２．０３−０．８３（ｍ，１２Ｈ）。
【０１２９】
化合物３３ｉ  ２−（（３−（４−ブロモフェニル）−８−シクロブチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．８１（ｓ，１Ｈ），８．９６（ｄ，Ｊ＝２．５  Ｈｚ，１Ｈ），８．６７（ｄ，Ｊ＝２．５  Ｈｚ，１Ｈ），８．００−７．９６（ｍ，１Ｈ），７．９５−７．９０（ｍ，１Ｈ），７．８８−７．８３（ｍ，２Ｈ），７．８３−７．７７（ｍ，２Ｈ），７．６６（ｄｄｄ，Ｊ＝８．４，６．９，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｄｄｄ，Ｊ＝８．２，６．９，１．４  Ｈｚ，１Ｈ），４．２５（ｓ，２Ｈ），２．６７−２．５４（ｍ，１Ｈ），２．４９−２．２８（ｍ，１Ｈ），１．９１−１．６１（ｍ，５Ｈ），１．６３−１．１０（ｍ，４Ｈ）。
【０１３０】
化合物３３  ｊ  ２−（（３−（４−ブロモフェニル）−８−（（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド１Ｈ  ＮＭＲ（４００  Ｍｈｚ，クロロホルム−ｄ）δ９．８８（ｓ，１Ｈ），８．８５−８．７６（ｍ，１Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝２．６  Ｈｚ，１Ｈ），８．１１−８．０２（ｍ，１Ｈ），７．８７−７．７７（ｍ，３Ｈ），７．７０−７．６１（ｍ，３Ｈ），７．５６（ｄｄｄ，Ｊ＝８．１，６．９，１．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｄ，Ｊ＝０．７  Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｓ，１Ｈ），４．００（ｓ，２Ｈ），３．９１（ｓ，３Ｈ），３．６２（ｓ，２Ｈ），３．０４−２．７２（ｍ，４Ｈ），２．４０−２．０７（ｍ，２Ｈ），１．７８（ｓ，２Ｈ）。
【０１３１】
化合物３３ｋ  ２−（（３−（４−ブロモフェニル）−８−（（１−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）メチル）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド  １Ｈ  ＮＭＲ（４００  Ｍｈｚ，クロロホルム−ｄ）δ９．８９（ｓ，１Ｈ），８．８０（ｄ，Ｊ＝２．５  Ｈｚ，１Ｈ），８．６６（ｄ，Ｊ＝２．６  Ｈｚ，１Ｈ），８．０８−７．９８（ｍ，１Ｈ），７．８７−７．７６（ｍ，３Ｈ），７．６９−７．６３（ｍ，３Ｈ），７．５６（ｄｄｄ，Ｊ＝８．２，６．９，１．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝０．９  Ｈｚ，１Ｈ），７．４４（ｓ，１Ｈ），４．５０（ｐ，Ｊ＝６．７  Ｈｚ，１Ｈ），４．０１（ｓ，２Ｈ），３．６２（ｓ，２Ｈ），３．０９−２．７６（ｍ，４Ｈ），２．４０−２．１２（ｍ，２Ｈ），１．７４（ｄ，Ｊ＝３５．２  Ｈｚ，２Ｈ），１．５３（ｄ，Ｊ＝６．７  Ｈｚ，５Ｈ）。
【０１３２】
化合物３３ｌ  ２−（（３−（４−ブロモフェニル）−８−（メチル−ｄ２）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド  １Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．８０（ｓ，１Ｈ），８．９４（ｄ，Ｊ＝２．５  Ｈｚ，１Ｈ），８．６７（ｄ，Ｊ＝２．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．９７（ｄｄ，Ｊ＝８．３，１．１  Ｈｚ，１Ｈ），７．９３（ｄｄ，Ｊ＝８．１，１．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．８９−７．８３（ｍ，２Ｈ），７．８３−７．７８（ｍ，２Ｈ），７．６６（ｄｄｄ，Ｊ＝８．４，６．９，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｄｄｄ，Ｊ＝８．１，６．９，１．３  Ｈｚ，１Ｈ），４．２８（ｓ，２Ｈ），２．７４−２．５４（ｍ，５Ｈ），１．９８−１．３６（ｍ，４Ｈ）。
【０１３３】
実施例２９〜３４：化合物３４ａ〜３４ｆの合成
【０１３４】
【化１２】
2021514001.tif 000021
【０１３５】
化合物３４ａの合成  ２−（（３−（４−ブロモフェニル）−８−メチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−４−イル）アセトアミド
【０１３６】
ＤＣＭ（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（４−ブロモフェニル）−３−チオキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、２−ブロモ−Ｎ−（キノリン−４−イル）アセトアミド（１当量）およびトリエチルアミン（３当量）を添加し、反応混合物を１０時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機物を合わせ、乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−ブロモフェニル）−３−（（２−オキソ−２−（キノリン−６−イルアミノ）エチル）チオ）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシレートを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．６５（ｓ，１Ｈ），８．８０（ｄｄ，Ｊ＝４．２，１．７Ｈｚ，１Ｈ），８．３４（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），８．３７−８．２７（ｍ，１Ｈ），８．０４−７．９２（ｍ，１Ｈ），７．９２−７．７６（ｍ，５Ｈ），７．４９（ｄｄ，Ｊ＝８．３，４．２Ｈｚ，１Ｈ），４．２７（ｓ，２Ｈ），３．７０−３．５８（ｍ，２Ｈ），３．５７−３．４６（ｍ，２Ｈ），１．７４（ｄ，Ｊ＝１２．６，８．４，３．９Ｈｚ，２Ｈ），１．５６−１．４４（ｍ，２Ｈ），１．３７（ｓ，９Ｈ）。
【０１３７】
ＤＣＭ中のｔｅｒｔ−ブチル２−（４−ブロモフェニル）−３−（（２−オキソ−２−（キノリン−６−イルアミノ）エチル）チオ）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、ジオキサン（２当量）中の４ＭのＨＣｌを添加し、反応混合物を４時間撹拌することを可能にした。反応混合物を濃縮した。得られた残留物をＴＨＦに取り込み、ホルムアルデヒド（５当量）およびトリエチルアミン（５当量）を添加し、続いてＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（３当量）を添加し、反応混合物を１２時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃに取り込み、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機物を乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜３０％ＭｅＯＨ）で精製して、２−（（３−（４−ブロモフェニル）−８−メチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ）−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−６−イル）アセトアミドを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．６７（ｓ，１Ｈ），８．８０（ｄｄ，Ｊ＝４．２，１．７  Ｈｚ，１Ｈ），８．３５（ｄ，Ｊ＝２．４  Ｈｚ，１Ｈ），８．２９（ｄ，Ｊ＝８．１  Ｈｚ，１Ｈ），７．９９（ｄ，Ｊ＝９．１  Ｈｚ，１Ｈ），７．８９−７．７７（ｍ，５Ｈ），７．４９（ｄｄ，Ｊ＝８．３，４．２  Ｈｚ，１Ｈ），４．２６（ｓ，２Ｈ），２．６７−２．５４（ｍ，４Ｈ），２．２２（ｓ，３Ｈ），１．８５−１．４０（ｍ，４Ｈ）。
【０１３８】
化合物３４ｂの合成  ２−（（３−（４−ブロモフェニル）−８−メチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−６−イル）アセトアミド
【０１３９】
ＤＣＭ（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（４−ブロモフェニル）−３−チオキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、２−ブロモ−Ｎ−（キノリン−６−イル）アセトアミド（１当量）およびトリエチルアミン（３当量）を添加し、反応混合物を１０時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機物を組み合わせ、乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−ブロモフェニル）−３−（（２−オキソ−２−（キノリン−６−イルアミノ）エチル）チオ）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシレートを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．６５（ｓ，１Ｈ），８．８０（ｄｄ，Ｊ＝４．２，１．７  Ｈｚ，１Ｈ），８．３４（ｄ，Ｊ＝２．４  Ｈｚ，１Ｈ），８．３３−８．２７（ｍ，１Ｈ），８．０４−７．９２（ｍ，１Ｈ），７．９２−７．７６（ｍ，５Ｈ），７．４９（ｄｄ，Ｊ＝８．３，４．２  Ｈｚ，１Ｈ），４．２７（ｓ，２Ｈ），３．７０−３．５８（ｍ，２Ｈ），３．５７−３．４６（ｍ，２Ｈ），１．７４（ｄ，Ｊ＝１２．６，８．４，３．９  Ｈｚ，２Ｈ），１．５６−１．４４（ｍ，２Ｈ），１．３７（ｓ，９Ｈ）。
【０１４０】
ＤＣＭ中のｔｅｒｔ−ブチル２−（４−ブロモフェニル）−３−（（２−オキソ−２−（キノリン−６−イルアミノ）エチル）チオ）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、ジオキサン（２当量）中の４ＭのＨＣｌを添加し、反応混合物を４時間撹拌することを可能にした。反応混合物を濃縮した。得られた残留物をＴＨＦに取り込み、ホルムアルデヒド（５当量）およびトリエチルアミン（５当量）を添加し、続いてＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（３当量）を添加し、反応混合物を１２時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃに取り込み、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機物を乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜３０％のＭｅＯＨ）で精製して、２−（（３−（４−ブロモフェニル）−８−メチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ）−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−６−イル）アセトアミドを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．６７（ｓ，１Ｈ），８．８０（ｄｄ，Ｊ＝４．２，１．７  Ｈｚ，１Ｈ），８．３５（ｄ，Ｊ＝２．４  Ｈｚ，１Ｈ），８．２９（ｄ，Ｊ＝８．１  Ｈｚ，１Ｈ），７．９９（ｄ，Ｊ＝９．１  Ｈｚ，１Ｈ），７．８９−７．７７（ｍ，５Ｈ），７．４９（ｄｄ，Ｊ＝８．３，４．２  Ｈｚ，１Ｈ），４．２６（ｓ，２Ｈ），２．６７−２．５４（ｍ，４Ｈ），２．２２（ｓ，３Ｈ），１．８５−１．４０（ｍ，４Ｈ）。
【０１４１】
化合物３４ｃの合成  ２−（（３−（４−ブロモフェニル）−８−メチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−５−イル）アセトアミド
【０１４２】
ＤＣＭ（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（４−ブロモフェニル）−３−チオキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、２−ブロモ−Ｎ−（キノリン−５−イル）アセトアミド（１当量）およびトリエチルアミン（３当量）を添加し、反応混合物を１０時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機物を組み合わせ、乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−ブロモフェニル）−３−（（２−オキソ−２−（キノリン−５−イルアミノ）エチル）チオ）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシレートを提供した。
【０１４３】
ＤＣＭ中のｔｅｒｔ−ブチル２−（４−ブロモフェニル）−３−（（２−オキソ−２−（キノリン−５−イルアミノ）エチル）チオ）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、ジオキサン（２当量）中の４ＭのＨＣｌを添加し、反応混合物を４時間撹拌することを可能にした。反応混合物を濃縮した。得られた残留物をＴＨＦに取り込み、ホルムアルデヒド（５当量）およびトリエチルアミン（５当量）を添加し、続いてＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（３当量）を添加し、反応混合物を１２時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃに取り込み、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機物を乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜３０％のＭｅＯＨ）で精製して、２−（（３−（４−ブロモフェニル）−８−メチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ）−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−５−イル）アセトアミドを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．４１（ｓ，１Ｈ），８．９３（ｄｄ，Ｊ＝４．２，１．６  Ｈｚ，１Ｈ），８．５２（ｄｄｄ，Ｊ＝８．６，１．７，０．９  Ｈｚ，１Ｈ），７．９６−７．７１（ｍ，７Ｈ），７．５７（ｄｄ，Ｊ＝８．６，４．２  Ｈｚ，１Ｈ），４．３６（ｓ，２Ｈ），２．７５  −２．５６（ｍ，４Ｈ），２．２５（ｓ，３Ｈ），１．８９−１．５９（ｍ，４Ｈ）。
【０１４４】
化合物３４ｄの合成  ２−（（３−（４−ブロモフェニル）−８−メチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−７−イル）アセトアミド
【０１４５】
ＤＣＭ（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（４−ブロモフェニル）−３−チオキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、２−ブロモ−Ｎ−（キノリン−７−イル）アセトアミド（１当量）およびトリエチルアミン（３当量）を添加し、反応混合物を１０時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機物を組み合わせ、乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−ブロモフェニル）−３−（（２−オキソ−２−（キノリン−７−イルアミノ）エチル）チオ）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシレートを提供した。
【０１４６】
ＤＣＭ中のｔｅｒｔ−ブチル２−（４−ブロモフェニル）−３−（（２−オキソ−２−（キノリン−７−イルアミノ）エチル）チオ）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、ジオキサン（２当量）中の４ＭのＨＣｌを添加し、反応混合物を４時間撹拌することを可能にした。反応混合物を濃縮した。得られた残留物をＴＨＦに取り込み、ホルムアルデヒド（５当量）およびトリエチルアミン（５当量）を添加し、続いてＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（３当量）を添加し、反応混合物を１２時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃに取り込み、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機物を乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜３０％のＭｅＯＨ）で精製して、２−（（３−（４−ブロモフェニル）−８−メチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ）−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−７−イル）アセトアミドを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．６９（ｓ，１Ｈ），８．８５（ｄｄ，Ｊ＝４．２，１．８  Ｈｚ，１Ｈ），８．４０（ｄ，Ｊ＝２．０  Ｈｚ，１Ｈ），８．２８（ｄ，Ｊ＝８．１  Ｈｚ，１Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝８．９  Ｈｚ，１Ｈ），７．９１−７．８４（ｍ，２Ｈ），７．８３−７．７７（ｍ，２Ｈ），７．７３（ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．１  Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｄｄ，Ｊ＝８．２，４．２  Ｈｚ，１Ｈ），４．２８（ｓ，２Ｈ），２．６７−２．５５（ｍ，４Ｈ），２．２０（ｓ，３Ｈ），１．９１−１．３８（ｍ，４Ｈ）。
【０１４７】
化合物３４ｅの合成２−（（３−（４−ブロモフェニル）−８−メチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−８−イル）アセトアミド
【０１４８】
ＤＣＭ（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（４−ブロモフェニル）−３−チオキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、２−ブロモ−Ｎ−（キノリン−８−イル）アセトアミド（１当量）およびトリエチルアミン（３当量）を添加し、反応混合物を１０時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機物を組み合わせ、乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−ブロモフェニル）−３−（（２−オキソ−２−（キノリン−８−イルアミノ）エチル）チオ）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシレートを提供した。
【０１４９】
ＤＣＭ中のｔｅｒｔ−ブチル２−（４−ブロモフェニル）−３−（（２−オキソ−２−（キノリン−８−イルアミノ）エチル）チオ）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、ジオキサン（２当量）中の４ＭのＨＣｌを添加し、反応混合物を４時間撹拌することを可能にした。反応混合物を濃縮した。得られた残留物をＴＨＦに取り込み、ホルムアルデヒド（５当量）およびトリエチルアミン（５当量）を添加し、続いてＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（３当量）を添加し、反応混合物を１２時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃに取り込み、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機物を乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜３０％のＭｅＯＨ）で精製して、２−（（３−（４−ブロモフェニル）−８−メチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ）−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−８−イル）アセトアミドを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．６５（ｓ，１Ｈ），８．８５（ｄｄ，Ｊ＝４．２，１．７  Ｈｚ，１Ｈ），８．６０（ｄｄ，Ｊ＝７．６，１．３  Ｈｚ，１Ｈ），８．４２（ｄｄ，Ｊ＝８．３，１．７  Ｈｚ，１Ｈ），７．９０−７．７９（ｍ，４Ｈ），７．６９（ｄｄ，Ｊ＝８．３，１．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｄｄ，Ｊ＝８．３，４．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．６２−７．５６（ｍ，１Ｈ），４．３４（ｓ，２Ｈ），２．５０−２．３７（ｍ，４Ｈ），２．０７（ｓ，３Ｈ），１．８６−１．１７（ｍ，４Ｈ）。
【０１５０】
化合物３４ｆの合成２−（（３−（４−ブロモフェニル）−８−メチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−メチル−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド
【０１５１】
ＤＣＭ（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（４−ブロモフェニル）−３−チオキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、２−ブロモ−Ｎ−メチル−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド（１当量）およびトリエチルアミン（３当量）を添加し、反応混合物を１０時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機物を組み合わせ、乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−ブロモフェニル）−３−（（２−（メチル（キノリン−３−イル）アミノ）−２−オキソエチル）チオ）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシレートを提供した。
【０１５２】
ＤＣＭ中のｔｅｒｔ−ブチル２−（４−ブロモフェニル）−３−（（２−（メチル（キノリン−３−イル）アミノ）−２−オキソエチル）チオ）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシラート（１当量）の溶液に、ジオキサン（２当量）中の４ＭのＨＣｌを添加し、反応混合物を４時間撹拌することを可能にした。反応混合物を濃縮した。得られた残留物をＴＨＦに取り込み、ホルムアルデヒド（５当量）およびトリエチルアミン（５当量）を添加し、続いてＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（３当量）を添加し、反応混合物を１２時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃに取り込み、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機物を乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の０〜３０％のＭｅＯＨ）で精製して、２−（（３−（４−ブロモフェニル）−８−メチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ）−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−メチル−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミドを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．０３（ｓ，１Ｈ），８．５１（ｓ，１Ｈ），８．１０（ｄ，Ｊ＝８．５  Ｈｚ，１Ｈ），８．００（ｄｄ，Ｊ＝８．４，１．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．８９−７．６３（ｍ，６Ｈ），４．０１（ｓ，２Ｈ），３．３７（ｓ，３Ｈ），３．３０（ｓ，３Ｈ），２．６５−２．１６（ｍ，７Ｈ），１．８９−１．１８（ｍ，４Ｈ）。
【０１５３】
実施例３５〜４３：化合物３５ａ〜３５ｉの合成
【０１５４】
【化１３】
2021514001.tif 000022
【０１５５】
化合物３５ａの合成  ２−（（３−（４−フルオロフェニル）−８−メチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド
メチルアミノ（４−フルオロフェニル）アセテートＨＣｌを２８％の水酸化アンモニウム（５ｍＬ／ｇ）溶液中で９６時間撹拌すると、２−アミノ−２−（４−フルオロフェニル）アセトアミドが白色沈殿として生成され、これを濾過して収集し、さらに精製することなく使用した。エタノール（０．１Ｍ）中の２−アミノ−２−（４−フルオロフェニル）アセトアミド（１当量）の溶液に、ｔｅｒｔ−ブチル４−オキソ−１−ピペリジンカルボキシレート（１当量）を添加し、反応混合物を加熱して１２時間還流した。反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮した。得られた残留物をＤＣＭ（０．１Ｍ）に溶解し、Ｎ−ブロモスクシンイミド（１当量）を添加した。反応混合物を８時間撹拌し、飽和重炭酸ナトリウムを添加した。得られた混合物をＤＣＭで抽出した。有機物を乾燥させ、濃縮し、ＦＣＣ（ヘキサン中０〜１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチ２−（４−フルオロフェニル）−３−オキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレートを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．２８（ｓ，１Ｈ），８．４８−８．３７（ｍ，２Ｈ），７．４１−７．３１（ｍ，２Ｈ），３．７１−３．５０（ｍ，４Ｈ），１．７９−１．６９（ｍ，２Ｈ），１．６８−１．５６（ｍ，２Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ）。
【０１５６】
ＴＨＦ（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチ２−（４−フルオロフェニル）−３−オキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、ローソン試薬（０．６当量）を添加し、ＴＬＣで反応が完了するまで、反応混合物を６０℃に加熱した。反応混合物をシリカゲル上に濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−フルオロフェニル）−３−チオキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレートを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．６０（ｓ，１Ｈ），８．３８（ｄｄ，Ｊ＝８．５，５．７  Ｈｚ，２Ｈ），７．３４（ｔ，Ｊ＝８．７  Ｈｚ，２Ｈ），３．８０−３．７０（ｍ，２Ｈ），３．６０−３．４５（ｍ，２Ｈ），１．８６−１．６７（ｍ，４Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ）。
【０１５７】
ＤＣＭ（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（４−フルオロフェニル）−３−チオキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、２−ブロモ−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド（１当量）およびトリエチルアミン（３当量）を添加した。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−フルオロフェニル）−３−（（２−オキソ−２−（キノリン−３−イルアミノ）エチル）チオ）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシレートを提供した。
【０１５８】
ＤＣＭ（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（４−フルオロフェニル）−３−（（２−オキソ−２−（キノリン−３−イルアミノ）エチル）チオ）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、ジオキサン（２当量）中の４ＭのＨＣｌを添加し、反応混合物を室温で５時間攪拌した。反応混合物を濃縮した。得られた残留物をＴＨＦに取り込み、トリエチルアミン（５当量）およびホルムアルデヒド（３当量）を添加し、続いてＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（３当量）を添加し、反応混合物を室温で１２時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃに取り込み、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機物を乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜３０％のＭｅＯＨ）で精製して、２−（（３−（４−フルオロフェニル）−８−メチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミドを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．８０（ｓ，１Ｈ），８．９４（ｄ，Ｊ＝２．５  Ｈｚ，１Ｈ），８．７４−８．６４（ｍ，１Ｈ），７．９９−７．９５（ｍ，１Ｈ），７．９５−７．９２（ｍ，１Ｈ），７．９１−７．８８（ｍ，２Ｈ），７．７０−７．５１（ｍ，４Ｈ），４．２７（ｓ，２Ｈ），３．３４（ｓ，３Ｈ），２．６４−２．５５（ｍ，４Ｈ），２．２６−２．１１（ｍ，２Ｈ），１．９１−１．４２（ｍ，４Ｈ）。
【０１５９】
化合物３５ｂの合成  ２−（（８−メチル−３−フェニル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド
【０１６０】
メチル２−アミノ−２−フェニルアセテート塩酸塩を２８％の水酸化アンモニウム（５ｍＬ／ｇ）溶液中で９６時間撹拌すると、２−アミノ−２−フェニルアセトアミドが白色沈殿として形成され、これを濾過して収集し、さらに精製することなく使用した。エタノール（０．１Ｍ）中の２−アミノ−２−フェニルアセトアミド（１当量）の溶液に、ｔｅｒｔ−ブチル４−オキソ−１−ピペリジンカルボキシレート（１当量）を添加し、反応混合物を加熱して、１２時間還流した。反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮した。得られた残留物をＤＣＭ（０．１Ｍ）に溶解し、Ｎ−ブロモスクシンイミド（１当量）を添加した。反応混合物を８時間撹拌し、飽和重炭酸ナトリウムを添加した。得られた混合物をＤＣＭで抽出した。有機物を乾燥させ、濃縮し、ＦＣＣ（ヘキサン中０〜１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル３−オキソ−２−フェニル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレートを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．２６（ｓ，１Ｈ），８．４７−８．２３（ｍ，２Ｈ），７．６１−７．４８（ｍ，３Ｈ），３．７０−３．５０（ｍ，４Ｈ），１．８０−１．６８（ｍ，２Ｈ），１．６８−１．５８（ｍ，２Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ）。
【０１６１】
ＴＨＦ（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル３−オキソ−２−フェニル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、ローソン試薬（０．６当量）を添加し、ＴＬＣで反応が完了するまで、反応混合物を６０℃に加熱した。反応混合物をシリカゲル上に濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−フェニル−３−チオキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレートを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．５８（ｓ，１Ｈ），８．３０−８．２３（ｍ，２Ｈ），７．６０−７．４６（ｍ，３Ｈ），３．８１−３．７０（ｍ，２Ｈ），３．６０−３．４４（ｍ，２Ｈ），１．８６−１．６２（ｍ，４Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ）。
【０１６２】
ＤＣＭ（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−フェニル−３−チオキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、２−ブロモ−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド（１当量）およびトリエチルアミン（３当量）を添加した。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（（２−オキソ−２−（キノリン−３−イルアミノ）エチル）チオ）−３−フェニル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシレートを提供した。
【０１６３】
ＤＣＭ（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（（２−オキソ−２−（キノリン−３−イルアミノ）エチル）チオ）−３−フェニル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、ジオキサン（２当量）中の４ＭのＨＣｌを添加し、反応混合物を室温で５時間撹拌した。反応混合物を濃縮した。得られた残留物をＴＨＦに取り込み、トリエチルアミン（５当量）およびホルムアルデヒド（３当量）を添加し、続いてＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（３当量）を添加し、反応混合物を室温で１２時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃに取り込み、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機物を乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜３０％のＭｅＯＨ）で精製して、２−（（８−メチル−３−フェニル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド）を提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．８１（ｓ，１Ｈ），８．９４（ｄ，Ｊ＝２．５  Ｈｚ，１Ｈ），８．６７（ｄ，Ｊ＝２．５  Ｈｚ，１Ｈ），８．０２−７．９０（ｍ，４Ｈ），７．６６（ｄｄｄ，Ｊ＝８．４，６．９，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｄｄｄ，Ｊ＝８．１，６．８，１．３  Ｈｚ，１Ｈ），７．４９−７．３９（ｍ，２Ｈ），４．２８（ｓ，２Ｈ），２．７５−２．５６（ｍ，４Ｈ），２．２４（ｓ，３Ｈ），１．９９−１．４０（ｍ，４Ｈ）。
【０１６４】
化合物３５ｃの合成  ２−（（３−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−８−メチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド
【０１６５】
メチル２−アミノ−２−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）アセテート塩酸を２８％の水酸化アンモニウム（５ｍＬ／ｇ）溶液中で９６時間撹拌すると、２−アミノ−２−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）アセトアミドが白色沈殿として生成され、これを濾過して収集し、さらに精製することなく使用した。エタノール（０．１Ｍ）中の２−アミノ−２−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）アセトアミド（１当量）の溶液に、ｔｅｒｔ−ブチル４−オキソ−１−ピペリジンカルボキシレート（１当量）を添加し、反応混合物を加熱して、１２時間還流した。反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮した。得られた残留物をＤＣＭ（０．１Ｍ）に溶解し、Ｎ−ブロモスクシンイミド（１当量）を添加した。反応混合物を８時間撹拌し、飽和重炭酸ナトリウムを添加した。得られた混合物をＤＣＭで抽出した。有機物を乾燥させ、濃縮し、ＦＣＣ（ヘキサン中０〜１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−３−オキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレートを得た提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．３７（ｓ，１Ｈ），８．２９（ｄｄ，Ｊ＝１０．４，１．８  Ｈｚ，１Ｈ），８．２０（ｄｄｄ，Ｊ＝８．４，１．８，０．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｄｄ，Ｊ＝８．４，７．７  Ｈｚ，１Ｈ），３．６９−３．５２（ｍ，４Ｈ），１．７３（ｄ，Ｊ＝６．８  Ｈｚ，４Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ）。
【０１６６】
ＴＨＦ溶液（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−３−オキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、ローソン試薬（０．６当量）を添加し、ＴＬＣで反応が完了するまで、反応混合物を６０℃に加熱した。反応混合物をシリカゲル上に濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−３−チオキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレートを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．５８（ｓ，１Ｈ），８．３０−８．２３（ｍ，２Ｈ），７．６０−７．４６（ｍ，３Ｈ），３．８１−３．７０（ｍ，２Ｈ），３．６０−３．４４（ｍ，２Ｈ），１．８６−１．６２（ｍ，４Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ）。
【０１６７】
ＤＣＭ中（０．１Ｍ）のｔｅｒｔ−ブチル２−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−３−チオキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、２−ブロモ−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド（１当量）およびトリエチルアミン（３当量）を添加した。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−３−（（２−オキソ−２−（キノリン−３−イルアミノ）エチル）チオ）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシラートを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．７８（ｓ，１Ｈ），８．９１（ｄ，Ｊ＝２．５  Ｈｚ，１Ｈ），８．７１−８．６１（ｍ，１Ｈ），８．００−７．９５（ｍ，１Ｈ），７．９５−７．９１（ｍ，１Ｈ），７．９０−７．８３（ｍ，２Ｈ），７．８１−７．７６（ｍ，１Ｈ），７．６７（ｄｄｄ，Ｊ＝８．４，６．９，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｄｄｄ，Ｊ＝８．２，６．９，１．３  Ｈｚ，１Ｈ），４．２９（ｓ，２Ｈ），３．７０−３．５８（ｍ，２Ｈ），３．５８−３．４５（ｍ，２Ｈ），１．８２−１．６５（ｍ，２Ｈ），１．６０−１．４３（ｍ，２Ｈ），１．３８（ｓ，９Ｈ）。
【０１６８】
ＤＣＭ（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−３−（（２−オキソ−２−（キノリン−３−イルアミノ）エチル）チオ）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、ジオキサン（２当量）中の４ＭのＨＣｌを添加し、反応混合物を室温で５時間攪拌した。反応混合物を濃縮した。得られた残留物をＴＨＦに取り込み、トリエチルアミン（５当量）およびホルムアルデヒド（３当量）を添加し、続いてＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（３当量）を添加し、反応混合物を室温で１２時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃに取り込み、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機物を乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜３０％のＭｅＯＨ）で精製して、２−（（３−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−８−メチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミドを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．８０（ｓ，１Ｈ），８．９４（ｄ，Ｊ＝２．５  Ｈｚ，１Ｈ），８．６７（ｄ，Ｊ＝２．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．９９−７．９５（ｍ，１Ｈ），７．９３（ｄ，Ｊ＝７．７  Ｈｚ，１Ｈ），７．８９−７．８２（ｍ，２Ｈ），７．８０−７．７５（ｍ，１Ｈ），７．６６（ｄｄｄ，Ｊ＝８．５，６．９，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｄｄｄ，Ｊ＝８．１，６．８，１．３  Ｈｚ，１Ｈ），４．２９（ｓ，２Ｈ），２．６３−２．５５（ｍ，４Ｈ），２．２０（ｓ，３Ｈ），１．９３−１．３８（ｍ，４Ｈ）。
【０１６９】
化合物３５ｄの合成  ２−（（３−（３−ブロモフェニル）−８−メチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド
【０１７０】
メチル２−アミノ−２−（３−ブロモフェニル）アセテートを２８％の水酸化アンモニウム（５ｍＬ／ｇ）溶液中で９６時間攪拌すると、２−アミノ−２−（３−ブロモフェニル）アセトアミドが白色沈殿として生成され、これを濾過して収集し、さらに精製することなく使用した。エタノール（０．１Ｍ）中の２−アミノ−２−（３−ブロモフェニル）アセトアミド（１当量）の溶液に、ｔｅｒｔ−ブチル４−オキソ−１−ピペリジンカルボキシレート（１当量）を添加し、反応混合物を加熱して１２時間還流した。反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮した。得られた残留物をＤＣＭ（０．１Ｍ）に溶解し、Ｎ−ブロモスクシンイミド（１当量）を添加した。反応混合物を８時間撹拌し、飽和重炭酸ナトリウムを添加した。得られた混合物をＤＣＭで抽出した。有機物を乾燥させ、濃縮し、ＦＣＣ（ヘキサン中０〜１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（３−ブロモフェニル）−３−オキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレートを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．３３（ｓ，１Ｈ），８．５４−８．４８（ｍ，１Ｈ），８．３９−８．２５（ｍ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝８．０，２．１，１．１  Ｈｚ，１Ｈ），７．５７−７．４４（ｍ，１Ｈ），３．６０（ｄ，Ｊ＝１９．５  Ｈｚ，４Ｈ），１．７３（ｄ，Ｊ＝７．４  Ｈｚ，２Ｈ），１．６９−１．５５（ｍ，２Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ）。
【０１７１】
ＴＨＦ（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（３−ブロモフェニル）−３−オキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、ローソン試薬（０．６当量）を添加し、ＴＬＣで反応が完了するまで、反応混合物を６０℃に加熱した。反応混合物をシリカゲル上に濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（３−ブロモフェニル）−３−チオキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレートを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．６３（ｓ，１Ｈ），８．５１−８．４２（ｍ，１Ｈ），８．２７（ｄｔ，Ｊ＝７．８，１．３  Ｈｚ，１Ｈ），７．７７（ｄｄｄ，Ｊ＝８．０，２．１，１．１  Ｈｚ，１Ｈ），７．５１−７．４４（ｍ，１Ｈ），３．８２−３．６８（ｍ，２Ｈ），３．６１−３．４３（ｍ，２Ｈ），１．８６−１．６６（ｍ，４Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ）。
【０１７２】
ＤＣＭ（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（３−ブロモフェニル）−３−チオキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、２−ブロモ−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド（１当量）およびトリエチルアミン（３当量）を添加した。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（３−ブロモフェニル）−３−（（２−オキソ−２−（キノリン−３−イルアミノ）エチル）チオ）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシレートを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．７８（ｓ，１Ｈ），８．９１（ｄ，Ｊ＝２．６  Ｈｚ，１Ｈ），８．７０−８．５９（ｍ，１Ｈ），８．０５（ｔ，Ｊ＝１．８  Ｈｚ，１Ｈ），８．００−７．９５（ｍ，１Ｈ），７．９５−７．９０（ｍ，２Ｈ），７．８４（ｄｄｄ，Ｊ＝８．１，２．１，１．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．６７（ｄｄｄ，Ｊ＝８．４，６．９，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．６１−７．５４（ｍ，２Ｈ），４．２８（ｓ，２Ｈ），３．７１−３．５８（ｍ，２Ｈ），３．５７−３．４６（ｍ，２Ｈ），１．８０−１．６８（ｍ，２Ｈ），１．６０−１．４２（ｍ，２Ｈ），１．３８（ｓ，９Ｈ）。
【０１７３】
ＤＣＭ（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（３−ブロモフェニル）−３−（（２−オキソ−２−（キノリン−３−イルアミノ）エチル）チオ）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、ジオキサン（２当量）中の４ＭのＨＣｌを添加し、反応混合物を室温で５時間攪拌した。反応混合物を濃縮した。得られた残留物をＴＨＦに取り込み、トリエチルアミン（５当量）およびホルムアルデヒド（３当量）を添加し、続いてＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（３当量）を添加し、反応混合物を室温で１２時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃに取り込み、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機物を乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜３０％のＭｅＯＨ）で精製して、２−（（３−（３−ブロモフェニル）−８−メチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ）−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミドを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．７９（ｓ，１Ｈ），８．９４（ｄ，Ｊ＝２．５  Ｈｚ，１Ｈ），８．６７（ｄ，Ｊ＝２．５  Ｈｚ，１Ｈ），８．０３（ｔ，Ｊ＝１．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．９９−７．９３（ｍ，１Ｈ），７．９３−７．８８（ｍ，２Ｈ），７．８３（ｄｄｄ，Ｊ＝８．１，２．１，１．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｄｄｄ，Ｊ＝８．４，６．９，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．６２−７．５４（ｍ，２Ｈ），４．２８（ｓ，２Ｈ），２．５９（ｓ，４Ｈ），２．２１（ｓ，３Ｈ），１．９４−１．４８（ｍ，４Ｈ）。
【０１７４】
化合物３５ｅの合成  ２−（（８−メチル−３−（ナフタレン−２−イル）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド
【０１７５】
メチルメチルアミノ（２−ナフチル）アセテート塩酸を２８％の水酸化アンモニウム（５ｍＬ／ｇ）溶液中で９６時間撹拌すると、２−アミノ−２−（ナフタレン−２−イル）アセトアミドが白色沈殿として生成され、これを濾過して収集し、さらに精製することなく使用した。エタノール（０．１Ｍ）中の２−アミノ−２−（ナフタレン−２−イル）アセトアミド（１当量）の溶液に、ｔｅｒｔ−ブチル４−オキソ−１−ピペリジンカルボキシレート（１当量）を添加し、反応混合物を加熱して１２時間還流した。反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮した。得られた残留物をＤＣＭ（０．１Ｍ）に溶解し、Ｎ−ブロモスクシンイミド（１当量）を添加した。反応混合物を８時間撹拌し、飽和重炭酸ナトリウムを添加した。得られた混合物をＤＣＭで抽出した。有機物を乾燥させ、濃縮し、ＦＣＣ（ヘキサン中０〜１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（ナフタレン−２−イル）−３−オキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレートを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．３５（ｓ，１Ｈ），９．１８−９．１１（ｍ，１Ｈ），８．２８（ｄｄ，Ｊ＝８．６，１．６  Ｈｚ，１Ｈ），８．１２−７．９６（ｍ，３Ｈ），７．６８−７．５７（ｍ，２Ｈ），３．７７−３．６４（ｍ，２Ｈ），３．６４−３．５１（ｍ，１Ｈ），１．８６−１．７３（ｍ，２Ｈ），１．７３−１．６２（ｍ，２Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ）。
【０１７６】
ＴＨＦ（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（ナフタレン−２−イル）−３−オキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、ローソン試薬（０．６当量）を添加し、ＴＬＣで反応が完了するまで、反応混合物を６０℃に加熱した。反応混合物をシリカゲル上に濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（ナフタレン−２−イル）−３−チオキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレートを提供した。
【０１７７】
ＤＣＭ（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（ナフタレン−２−イル）−３−チオキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、２−ブロモ−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド（１当量）およびトリエチルアミン（３当量）を添加した。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（ナフタレン−２−イル）−３−（（２−オキソ−２−（キノリン−３−イルアミノ）エチル）チオ）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシレートを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．８０（ｓ，１Ｈ），８．９３（ｄ，Ｊ＝２．５  Ｈｚ，１Ｈ），８．７３−８．６４（ｍ，１Ｈ），８．５９−８．５２（ｍ，１Ｈ），８．１７−８．０９（ｍ，２Ｈ），８．０９−７．８８（ｍ，４Ｈ），７．７４−７．６３（ｍ，３Ｈ），７．６２−７．５５（ｍ，１Ｈ），４．３２（ｓ，２Ｈ），３．６８（ｓ，２Ｈ），３．６１−３．４６（ｍ，２Ｈ），１．８８−１．７１（ｍ，２Ｈ），１．５７−１．４３（ｍ，１Ｈ），１．３９（ｓ，９Ｈ）。
【０１７８】
ＤＣＭ（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（ナフタレン−２−イル）−３−（（２−オキソ−２−（キノリン−３−イルアミノ）エチル）チオ）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、ジオキサン（２当量）中の４ＭのＨＣｌを添加し、反応混合物を室温で５時間攪拌した。反応混合物を濃縮した。得られた残留物をＴＨＦに取り込み、トリエチルアミン（５当量）およびホルムアルデヒド（３当量）を添加し、続いてＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（３当量）を添加し、反応混合物を室温で１２時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃに取り込み、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機物を乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜３０％のＭｅＯＨ）で精製して、２−（（８−メチル−３−（ナフタレン−２−イル）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミドを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．７９（ｓ，１Ｈ），８．９４（ｄ，Ｊ＝２．５  Ｈｚ，１Ｈ），８．６７（ｄ，Ｊ＝２．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．９９−７．９５（ｍ，１Ｈ），７．９５−７．９１（ｍ，１Ｈ），７．９１−７．８５（ｍ，２Ｈ），７．６６（ｄｄｄ，Ｊ＝８．４，６．９，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｄｄｄ，Ｊ＝８．１，６．８，１．３  Ｈｚ，１Ｈ），７．１６−７．１０（ｍ，２Ｈ），４．２６（ｓ，２Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），３．３２（ｓ，３Ｈ），２．６５−２．５３（ｍ，４Ｈ），２．２４−２．１５（ｍ，２Ｈ），１．８９−１．２９（ｍ，４Ｈ）。
【０１７９】
化合物３５ｆの合成  ２−（（３−（４−メトキシフェニル）−８−メチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド
【０１８０】
メチルアミノ（４−メトキシフェニル）アセテート塩酸を２８％の水酸化アンモニウム（５ｍＬ／ｇ）溶液中で９６時間撹拌すると、白色沈殿として２−アミノ−２−（４−メトキシフェニル）アセトアミドが形成され、これを濾過して収集し、さらに精製することなく使用した。エタノール（０．１Ｍ）中の２−アミノ−２−（４−メトキシフェニル）アセトアミド（１当量）の溶液に、ｔｅｒｔ−ブチル４−オキソ−１−ピペリジンカルボキシレート（１当量）を添加し、反応混合物を加熱して１２時間還流した。反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮した。得られた残留物をＤＣＭ（０．１Ｍ）に溶解し、Ｎ−ブロモスクシンイミド（１当量）を添加した。反応混合物を８時間撹拌し、飽和重炭酸ナトリウムを添加した。得られた混合物をＤＣＭで抽出した。有機物を乾燥させ、濃縮し、ＦＣＣ（ヘキサン中０〜１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−メトキシフェニル）−３−オキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレートを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．２０（ｓ，１Ｈ），８．３９−８．２９（ｍ，２Ｈ），７．１１−７．０１（ｍ，２Ｈ），３．８３（ｓ，３Ｈ），３．７１−３．４８（ｍ，４Ｈ），１．７８−１．６７（ｍ，２Ｈ），１．６７−１．５４（ｍ，２Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ）。
【０１８１】
ＴＨＦ（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（４−メトキシフェニル）−３−オキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、ローソン試薬（０．６当量）を添加し、ＴＬＣで反応が完了するまで、反応混合物を６０℃に加熱した。反応混合物をシリカゲル上に濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−メトキシフェニル）−３−チオキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレートを提供した。
【０１８２】
ＤＣＭ（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（４−メトキシフェニル）−３−チオキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、２−ブロモ−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド（１当量）およびトリエチルアミン（３当量）を添加した。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−メトキシフェニル）−３−（（２−オキソ−２−（キノリン−３−イルアミノ）エチル）チオ）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシレートを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．７７（ｓ，１Ｈ），８．９２（ｄ，Ｊ＝２．５  Ｈｚ，１Ｈ），８．７０−８．６１（ｍ，１Ｈ），７．９９−７．９３（ｍ，１Ｈ），７．９３−７．８７（ｍ，２Ｈ），７．６６（ｄｄｄ，Ｊ＝８．４，６．９，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｄｄｄ，Ｊ＝８．１，６．８，１．３  Ｈｚ，１Ｈ），７．２０−７．０８（ｍ，２Ｈ），４．２７（ｓ，２Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），３．７３−３．５７（ｍ，２Ｈ），３．５７−３．４２（ｍ，２Ｈ），１．８１−１．６７（ｍ，２Ｈ），１．５０−１．４０（ｍ，２Ｈ），１．３７（ｓ，９Ｈ）。
【０１８３】
ＤＣＭ（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（４−メトキシフェニル）−３−（（２−オキソ−２−（キノリン−３−イルアミノ）エチル）チオ）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、ジオキサン（２当量）中の４ＭのＨＣｌを添加し、反応混合物を室温で５時間攪拌した。反応混合物を濃縮した。得られた残留物をＴＨＦに取り込み、トリエチルアミン（５当量）およびホルムアルデヒド（３当量）を添加し、続いてＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（３当量）を添加し、反応混合物を室温で１２時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃに取り込み、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機物を乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜３０％のＭｅＯＨ）で精製して、２−（（３−（４−メトキシフェニル）−８−メチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミドを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．７９（ｓ，１Ｈ），８．９４（ｄ，Ｊ＝２．５  Ｈｚ，１Ｈ），８．６７（ｄ，Ｊ＝２．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．９９−７．９５（ｍ，１Ｈ），７．９５−７．９１（ｍ，１Ｈ），７．９１−７．８５（ｍ，２Ｈ），７．６６（ｄｄｄ，Ｊ＝８．４，６．９，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｄｄｄ，Ｊ＝８．１，６．８，１．３  Ｈｚ，１Ｈ），７．１６−７．１０（ｍ，２Ｈ），４．２６（ｓ，２Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），２．６５−２．５３（ｍ，４Ｈ），２．２０（ｓ，３Ｈ），１．８９−１．２９（ｍ，４Ｈ）。
【０１８４】
化合物３５ｇの合成  ２−（（３−（２−ブロモフェニル）−８−メチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド
【０１８５】
メチル２−アミノ−２−（２−ブロモフェニル）アセテートを２８％の水酸化アンモニウム（５ｍＬ／ｇ）溶液中で９６時間攪拌すると、２−アミノ−２−（２−ブロモフェニル）アセトアミドが白色沈殿として生成され、これを濾過して収集し、さらに精製することなく使用した。エタノール（０．１Ｍ）中の２−アミノ−２−（２−ブロモフェニル）アセトアミド（１当量）の溶液に、ｔｅｒｔ−ブチル４−オキソ−１−ピペリジンカルボキシレート（１当量）を添加し、反応混合物を加熱して１２時間還流した。反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮した。得られた残留物をＤＣＭ（０．１Ｍ）に溶解し、Ｎ−ブロモスクシンイミド（１当量）を添加した。反応混合物を８時間撹拌し、飽和重炭酸ナトリウムを添加した。得られた混合物をＤＣＭで抽出した。有機物を乾燥させ、濃縮し、ＦＣＣ（ヘキサン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（２−ブロモフェニル）−３−オキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレートを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．２３（ｓ，１Ｈ），７．８２−７．７４（ｍ，１Ｈ），７．６４−７．４０（ｍ，３Ｈ），３．７３−３．４９（ｍ，４Ｈ），１．７８−１．６８（ｍ，４Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ）。
【０１８６】
ＴＨＦ（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（２−ブロモフェニル）−３−オキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、ローソン試薬（０．６当量）を添加し、ＴＬＣで反応が完了するまで、反応混合物を６０℃に加熱した。反応混合物をシリカゲル上に濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（２−ブロモフェニル）−３−チオキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレートを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．５５（ｓ，１Ｈ），７．７３（ｄｔ，Ｊ＝７．８，０．９  Ｈｚ，１Ｈ），７．５３−７．４０（ｍ，３Ｈ），３．８５−３．７２（ｍ，２Ｈ），３．５５−３．４３（ｍ，２Ｈ），１．９０−１．７０（ｍ，４Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ）。
【０１８７】
ＤＣＭ（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（２−ブロモフェニル）−３−チオキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、２−ブロモ−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド（１当量）およびトリエチルアミン（３当量）を添加した。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（２−ブロモフェニル）−３−（（２−オキソ−２−（キノリン−３−イルアミノ）エチル）チオ）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシレートを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．７８（ｓ，１Ｈ），８．９０（ｄ，Ｊ＝２．５  Ｈｚ，１Ｈ），８．６５（ｄ，Ｊ＝２．４  Ｈｚ，１Ｈ），８．０１−７．９１（ｍ，２Ｈ），７．８３（ｄｄ，Ｊ＝８．２，１．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｄｄｄ，Ｊ＝８．４，６．９，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．６３−７．４７（ｍ，４Ｈ），４．２３（ｓ，２Ｈ），３．６８−３．５３（ｍ，４Ｈ），１．８３−１．６８（ｍ，２Ｈ），１．６８−１．５４（ｍ，２Ｈ），１．４０（ｓ，９Ｈ）。
【０１８８】
ＤＣＭ（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（２−ブロモフェニル）−３−（（２−オキソ−２−（キノリン−３−イルアミノ）エチル）チオ）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、ジオキサン（２当量）中の４ＭのＨＣｌを添加し、反応混合物を室温で５時間攪拌した。反応混合物を濃縮した。得られた残留物をＴＨＦに取り込み、トリエチルアミン（５当量）およびホルムアルデヒド（３当量）を添加し、続いてＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（３当量）を添加し、反応混合物を室温で１２時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃに取り込み、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機物を乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜３０％のＭｅＯＨ）で精製して、２−（（３−（２−ブロモフェニル）−８−メチル−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ）−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミドを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．７９（ｓ，１Ｈ），８．９１（ｄ，Ｊ＝２．５  Ｈｚ，１Ｈ），８．６６（ｄ，Ｊ＝２．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．９５（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．８，８．２，１．３  Ｈｚ，２Ｈ），７．８８−７．７６（ｍ，１Ｈ），７．６６（ｄｄｄ，Ｊ＝８．４，６．９，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．６２−７．４６（ｍ，４Ｈ），４．２２（ｓ，２Ｈ），２．７２−２．５３（ｍ，４Ｈ），２．２４（ｓ，３Ｈ），１．９４−１．６４（ｍ，４Ｈ）。
【０１８９】
化合物３５ｈの合成  ２−（（８−メチル−３−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド
【０１９０】
メチル２−アミノ−２−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］アセテート塩酸を２８％の水酸化アンモニウム（５ｍＬ／ｇ）溶液中で９６時間撹拌すると、２−アミノ−２−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）アセトアミドが白色沈殿として形成され、これを濾過して収集し、さらに精製することなく使用した。エタノール（０．１Ｍ）中の２−アミノ−２−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）アセトアミド（１当量）の溶液に、ｔｅｒｔ−ブチル４−オキソ−１−ピペリジンカルボキシレート（１当量）を添加し、反応混合物を加熱して１２時間還流した。反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮した。得られた残留物をＤＣＭ（０．１Ｍ）に溶解し、Ｎ−ブロモスクシンイミド（１当量）を添加した。反応混合物を８時間撹拌し、飽和重炭酸ナトリウムを添加した。得られた混合物をＤＣＭで抽出した。有機物を乾燥させ、濃縮し、ＦＣＣ（ヘキサン中０〜１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル３−オキソ−２−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレートを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．３６（ｓ，１Ｈ），８．５３（ｄ，Ｊ＝８．１  Ｈｚ，２Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝８．１  Ｈｚ，２Ｈ），３．７２−３．５２（ｍ，４Ｈ），１．８５−１．６０（ｍ，４Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ）。
【０１９１】
ＴＨＦ（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル３−オキソ−２−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、ローソン試薬（０．６当量）を添加し、ＴＬＣで反応が完了するまで、反応混合物を６０℃に加熱した。反応混合物をシリカゲル上に濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％のＥｔＯＡｃ）により精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（（２−オキソ−２−（キノリン−３−イルアミノ）エチル）チオ）−３−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシラートを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．６６（ｓ，１Ｈ），８．５８（ｄ，Ｊ＝２．０  Ｈｚ，１Ｈ），８．２７（ｄｄ，Ｊ＝８．４，２．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，１Ｈ），３．８３−３．７１（ｍ，２Ｈ），３．６１−３．４５（ｍ，２Ｈ），１．８９−１．６６（ｍ，４Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ）。
【０１９２】
ＤＣＭ（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル３−チオキソ−２−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、２−ブロモ−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド（１当量）およびトリエチルアミン（３当量）を添加した。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（（２−オキソ−２−（キノリン−３−イルアミノ）エチル）チオ）−３−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシレートを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．８０（ｓ，１Ｈ），８．９７−８．８８（ｍ，１Ｈ），８．７９−８．５８（ｍ，１Ｈ），８．１９−８．０８（ｍ，１Ｈ），８．０８−７．８６（ｍ，４Ｈ），７．７７−７．５２（ｍ，２Ｈ），４．２９（ｓ，２Ｈ），３．７２−３．４６（ｍ，４Ｈ），１．８２−１．６７（ｍ，２Ｈ），１．６１−１．４３（ｍ，２Ｈ），１．３８（ｓ，９Ｈ）。
【０１９３】
ＤＣＭ（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（（２−オキソ−２−（キノリン−３−イルアミノ）エチル）チオ）−３−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、ジオキサン（２当量）中の４ＭのＨＣｌを添加し、反応混合物を室温で５時間撹拌した。反応混合物を濃縮した。得られた残留物をＴＨＦに取り込み、トリエチルアミン（５当量）およびホルムアルデヒド（３当量）を添加し、続いてＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（３当量）を添加し、反応混合物を室温で１２時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃに取り込み、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機物を乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜３０％のＭｅＯＨ）で精製して、２−（（８−メチル−３−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−２−イル）チオ）−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミドを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．８０（ｓ，１Ｈ），８．９４（ｄ，Ｊ＝２．５  Ｈｚ，１Ｈ），８．６７（ｄ，Ｊ＝２．５  Ｈｚ，１Ｈ），８．０９（ｔ，Ｊ＝１．２  Ｈｚ，１Ｈ），８．０１−７．９１（ｍ，２Ｈ），７．９１−７．８３（ｍ，２Ｈ），７．６７（ｄｄｄ，Ｊ＝８．４，６．９，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｄｄｄ，Ｊ＝８．１，６．８，１．３  Ｈｚ，１Ｈ），４．２９（ｓ，２Ｈ），２．７０−２．５７（ｍ，４Ｈ），２．２３（ｓ，３Ｈ），１．９８−１．４６（ｍ，４Ｈ）。
【０１９４】
化合物３５ｉの合成  ｔｅｒｔ−ブチル２−（３，４−ジクロロフェニル）−３−（（キノリン−３−イルカルバモイル）チオ）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシレート
【０１９５】
メチル２−アミノ−２−（３，４−ジクロロフェニル）アセテート塩酸を２８％の水酸化アンモニウム（５ｍＬ／ｇ）溶液中で９６時間攪拌すると、２−アミノ−２−（３，４−ジクロロフェニル）アセトアミドが白色沈殿として生成され、これを濾過して収集し、さらに精製することなく使用した。エタノール（０．１Ｍ）中の２−アミノ−２−（３，４−ジクロロフェニル）アセトアミド（１当量）の溶液に、ｔｅｒｔ−ブチル４−オキソ−１−ピペリジンカルボキシレート（１当量）を添加し、反応混合物を加熱して１２時間還流した。反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮した。得られた残留物をＤＣＭ（０．１Ｍ）に溶解し、Ｎ−ブロモスクシンイミド（１当量）を添加した。反応混合物を８時間撹拌し、飽和重炭酸ナトリウムを添加した。得られた混合物をＤＣＭで抽出した。有機物を乾燥させ、濃縮し、ＦＣＣ（ヘキサン中０〜１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（３，４−ジクロロフェニル）−３−オキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレートを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．３７（ｓ，１Ｈ），８．５５（ｄ，Ｊ＝１．９  Ｈｚ，１Ｈ），８．２９（ｄｄ，Ｊ＝８．４，１．９  Ｈｚ，１Ｈ），７．８２（ｄ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，１Ｈ），３．７０−３．５１（ｍ，４Ｈ），１．８１−１．５８（ｍ，４Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ）。
【０１９６】
ＴＨＦ（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（３，４−ジクロロフェニル）−３−オキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、ローソン試薬（０．６当量）を添加し、ＴＬＣで反応が完了するまで、反応混合物を６０℃に加熱した。反応混合物をシリカゲル上に濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（３，４−ジクロロフェニル）−３−チオキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレートを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．６６（ｓ，１Ｈ），８．５８（ｄ，Ｊ＝２．０  Ｈｚ，１Ｈ），８．２７（ｄｄ，Ｊ＝８．４，２．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，１Ｈ），３．８３−３．７１（ｍ，２Ｈ），３．６１−３．４５（ｍ，２Ｈ），１．８９−１．６６（ｍ，４Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ）。
【０１９７】
ＤＣＭ（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（３，４−ジクロロフェニル）−３−チオキソ−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１−エン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、２−ブロモ−Ｎ−（キノリン−３−イル）アセトアミド（１当量）およびトリエチルアミン（３当量）を添加した。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％のＥｔＯＡｃ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（３，４−ジクロロフェニル）−３−（（２−オキソ−２−（キノリン−３−イルアミノ）エチル）チオ）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシレートを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．８０（ｓ，１Ｈ），８．９７−８．８８（ｍ，１Ｈ），８．７９−８．５８（ｍ，１Ｈ），８．１９−８．０８（ｍ，１Ｈ），８．０８−７．８６（ｍ，４Ｈ），７．７７−７．５２（ｍ，２Ｈ），４．２９（ｓ，２Ｈ），３．７２−３．４６（ｍ，４Ｈ），１．８２−１．６７（ｍ，２Ｈ），１．６１−１．４３（ｍ，２Ｈ），１．３８（ｓ，９Ｈ）。
【０１９８】
ＤＣＭ（０．１Ｍ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（３，４−ジクロロフェニル）−３−（（２−オキソ−２−（キノリン−３−イルアミノ）エチル）チオ）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシレート（１当量）の溶液に、ジオキサン（２当量）中の４ＭのＨＣｌを添加し、反応混合物を室温で５時間攪拌した。反応混合物を濃縮した。得られた残留物をＴＨＦに取り込み、トリエチルアミン（５当量）およびホルムアルデヒド（３当量）を添加し、続いてＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（３当量）を添加し、反応混合物を室温で１２時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃに取り込み、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機物を乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜３０％のＭｅＯＨ）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（３，４−ジクロロフェニル）−３−（（キノリン−３−イルカルバモイル）チオ）−１，４，８−トリアザスピロ［４．５］デカ−１，３−ジエン−８−カルボキシレートを提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．８０（ｓ，１Ｈ），８．９４（ｄ，Ｊ＝２．５  Ｈｚ，１Ｈ），８．６７（ｄ，Ｊ＝２．５  Ｈｚ，１Ｈ），８．０９（ｔ，Ｊ＝１．２  Ｈｚ，１Ｈ），８．０１−７．９１（ｍ，２Ｈ），７．９１−７．８３（ｍ，２Ｈ），７．６７（ｄｄｄ，Ｊ＝８．４，６．９，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｄｄｄ，Ｊ＝８．１，６．８，１．３  Ｈｚ，１Ｈ），４．２９（ｓ，２Ｈ），２．７０−２．５７（ｍ，４Ｈ），２．２３（ｓ，３Ｈ），１．９８−１．４６（ｍ，４Ｈ）。
【０１９９】
薬物動態研究
実施例４４−精製されたＥＧＦＲキナーゼドメインとディスラプチンとの間の相互作用
ＷＴ−ＥＧＦＲキナーゼドメイン（ａａ６９６〜１０２２、活性キナーゼ）を発現させ、ＳＦ９昆虫細胞から精製した。１００ｎｇの純粋なＥＧＦＲをビオチン結合ディスラプチンとインキュベートし、結合したＥＧＦＲをクエン酸バッファーで洗浄した後、ＣａｐｔＡｖｉｄｉｎビーズを使用して捕獲した。この相互作用の特異性は、この反応をビオチン化されていないディスラプチンの量を増やしながら共インキュベートすることによって確認した。結合したＥＧＦＲタンパク質をＬａｅｍｍｌｉバッファーで遊離し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離した。ディスラプチン結合ＥＧＦＲは、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して定量化し、ブロットの下に表示した。非標識（ｃｏｌｄ）ディスラプチンによるディスラプチン−ＥＧＦＲ結合の競合阻害は、ディスラプチンがＥＧＦＲに直接結合することを示す（図２Ｂを参照）。
【０２００】
実施例４５−ＮＣＩ−Ｈ１９７５細胞におけるＥＧＦ誘導二量化に対するディスラプチン処理の効果
ＮＣＩ−Ｈ１９７５細胞を１０μＭのディスラプチンで１時間処理し、さらにＥＧＦ（３０ｎｇ／ｍｌ）で３０分、およびスベリン酸ジサクシンイミジル（ＤＳＳ、１５０μＭ）で３０分処理して、相互作用するタンパク質を架橋した。溶解物を調製し、抗ＥＧＦＲ抗体でイムノブロットした。（図３Ａを参照）。
【０２０１】
実施例４６−ＮＣＩ−Ｈ１９７５異種移植における、ディスラプチンのその標的ＥＧＦＲに対する効果
ＮＣＩ−Ｈ１９７５異種移植を有するマウスに、１日目と２日目にディスラプチン（１０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）を注射した。３日目に腫瘍を除去し、イムノブロット用に準備した（図３Ｂを参照）。２日連続の（月曜日と火曜日）ディスラプチンの注射（１０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を伴う２週間の処置後、ＮＣＩ−Ｈ１９７５異種移植に対するディスラプチンの効果を評価した。各処置条件について、腫瘍体積をプロットした。スクランブルペプチドを対照として使用した（図３Ｃを参照）。処置の２週間後、腫瘍を免疫染色することによって、腫瘍組織学、ＥＧＦＲ発現、および分裂指数（Ｋｉ−６７スコアによる測定）に対する処置の長期効果を評価した（図３Ｄを参照）。
【０２０２】
実施例４７−化合物８Ｃの開発および生物学的活性の確認
ディスラプチンは、ＴＫＩ（エルロチニブ）耐性ＮＣＩ−Ｈ１９７５異種移植モデルに対して有効であることが示された（図３Ａ〜図３Ｄを参照）（１４）。しかしながら、不良なＰＫ、およびペプチド薬の開発上のその他の課題のため、同様の作用メカニズムを有するが、優れた薬物動態の小分子を開発するための創薬プログラムを実施した（図４Ａ〜図４Ｄを参照）。活性ＥＧＦＲ二量体の界面に基づいて、仮想スクリーニング、商用ライブラリの取得、およびカスタム合成を使用して、プレリード化合物９５（Ｃ９５）および６７（Ｃ６７）を含む一連の新規分子を開発した（図４Ａ〜図４Ｄを参照）。これらのプレリード分子はどちらも、エルロチニブ耐性ＮＣＩ−Ｈ１９７５異種移植モデルに対して、インビボで活性である。ＥＧＦＲ二量体阻害のインビボ活性を試験するために、ＴＫＩ耐性ＮＣＩ−Ｈ１９７５  ＥＧＦＲレポーター細胞を使用した。これらの腫瘍異種移植片では、ＥＧＦＲ活性の減少時に、生物発光が誘導される（４７）。１００ｍｇ／ｋｇのＣ９５を１回注射すると、ＥＧＦＲレポーターが２．５倍誘導され、４８時間持続した（図９を参照）。ＥＧＦＲレベルの低下に対するＣ９５処置の効果が、生物発光の変化と相関することが確認された。これらのデータは、ＥＧＦＲの分解を誘導することができる薬剤が、ＴＫＩ耐性腫瘍に有効であり得ることを示す。
【０２０３】
化合物８Ｃは、マウスとヒトの両方の肝ミクロソームにおいて、プレリード（Ｃ９５）と比較して、約２０倍より安定である。ＥＧＦＲ駆動の頭頸部の侵襲性の腫瘍モデルであるＵＭＳＣＣ７４Ｂにおける化合物８Ｃの有効性試験。腫瘍を有するマウスを、１週間、３０ｍｇ／ｋｇの用量で毎日（月曜日〜金曜日）処置した。この用量は、単回用量のＰＫプロファイルに基づいて選択された（図８Ａを参照）。この処置は安全であり、腫瘍成長の有意な遅延を生成した（図１０を参照）。
【０２０４】
また、ヌードマウスにおけるオシメルチニブ耐性Ｂａ／Ｆ３細胞媒介性の腹水（細胞の腹腔内注射を介する）および固形腫瘍モデル（細胞の皮下注射を介する）も、有効性の研究に使用した。最初の研究は、腹水モデルで行い、化合物８Ｃの効果を等しい用量のオシメルチニブ（３０ｍｇ／ｋｇ）と比較した。腫瘍負荷が高くなった後にのみ処置が開始されたが、オシメルチニブ処置群と比較して、単回用量３０ｍｇ／ｋｇの化合物８Ｃは、これらのマウスの寿命を延長させた（ｐ＝０．０７２、データ未掲載）。ＥＧＦＲに対する処置の効果を、処置前、処置１８時間後および２４時間後に、同じマウスから収集された細胞で確認した（図１１を参照）。
【０２０５】
実施例４８−ＥＧＦＲキナーゼドメインと化合物８Ｃとの間の直接相互作用
化合物８ＣがＥＧＦＲ上の同じ結合部位に対して競合するかどうかを決定するために、ビオチン−ディスラプチン−アビジン結合ビーズを、化合物８Ｃの存在下または非存在下で、３７℃で１５分間精製ＥＧＦＲとインキュベートした。アガロースビーズを遠沈し、クエン酸バッファーで洗浄することによって非特異的タンパク質を除去した。結合したタンパク質をＬａｅｍｍｌｉバッファーで遊離し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離した。化合物８Ｃによるディスラプチン−ＥＧＦＲ結合の競合阻害は、この分子が同様なメカニズムで作用すること示唆する（図５Ａを参照）。
【０２０６】
精製ＥＧＦＲの熱安定性に対する化合物８Ｃの効果は、熱安定性アッセイにより確認された。１００ｎｇの精製ＥＧＦＲを、ＤＭＳＯまたは化合物８Ｃ（１０μＭ）のいずれかと、４℃で３０分間インキュベートした。試料を３分間熱不活性化（２０℃から４４℃へ）に供した。可溶性画分は、１３，０００ＲＰＭで、４℃で１０分間の遠心分離によって、凝集体から分離された。約２０ｎｇの可溶性タンパク質を、４〜１２％のビス−トリスゲルで分離し、抗ＥＧＦＲ抗体でブロットした。ＩｍａｇｅＪソフトウェアにより定量化し、ＥＧＦＲバンド強度をプロットした（図５Ｂを参照）。０〜１０μＭの化合物８Ｃの存在下で、４４℃におけるＥＧＦＲの熱安定性に対する化合物８Ｃ濃度の効果を決定した。ＥＧＦＲの可溶性画分を定量化し、上記のようにプロットした（図５Ｃを参照）。
【０２０７】
予備データは、化合物８Ｃが、ディスラプチンのように、ＥＧＦＲ分子上の同じ部位に結合する可能性が高く（図５Ａを参照）、野生型ならびにオシメルチニブ耐性（Ｃ７９７Ｓ）ＥＧＦＲを、熱的に安定化し得ることを示す。図５Ｂおよび図５Ｃに示されるように、精製された野生型ＥＧＦＲキナーゼドメインとの化合物８Ｃのインキュベーションは、融解曲線をシフトさせ、ＥＧＦＲと化合物８Ｃとの間の相互作用を示唆する。オシメルチニブ耐性のＥＧＦＲ変異体に対する化合物８Ｃの効果を決定するために、細胞ベースのアッセイを使用した。オシメルチニブまたは化合物８Ｃを、Ｂａ／Ｆ３（Ｃ７９７Ｓ−ＥＧＦＲ）細胞から調製した全細胞溶解物とインキュベートした。一定分量を、ＤＭＳＯ、１０μＭオシメルチニブまたは化合物８Ｃのいずれかの存在下で、異なる温度に加熱した。冷却後、サンプルを遠心分離し、可溶性タンパク質画分を収集して、抗ＥＧＦＲ抗体によるイムノブロッティングを使用して分離した（図６Ａを参照）。オシメルチニブは、精製ＷＴ−ＥＧＦＲの融解温度をシフトするのに効果的であったが（図５Ｂを参照）、Ｃ７９７Ｓ変異ＥＧＦＲタンパク質に対する効果は最小であった（図６Ａを参照）。予想通り、化合物８Ｃは、オシメルチニブ耐性ＥＧＦＲの融解温度をシフトさせるのに効果的であった。これらのデータは、化合物８ＣとＥＧＦＲ（ＥＧＦＲ−Ｃ７９７Ｓであっても）との間の潜在的な相互作用を示唆する。
【０２０８】
これらのデータに基づいて、化合物８Ｃは、Ｃ７９７Ｓ変異のためにオシメルチニブに対する耐性を獲得した細胞においても効果的であると仮定された。これらの同質遺伝子６−Ｂａ／Ｆ３細胞タイプ（ＴＫＩ感受性および耐性細胞を含む、表Ｉ）を使用して、化合物８Ｃが、各細胞株においてナノモル濃度の範囲で活性を維持することが実証された。これは、このクラスの薬剤から予想されるものであり、なぜなら、それらの作用は、ＥＧＦＲキナーゼの変異とは無関係であるからである。ＥＧＦ誘導ＥＧＦＲ二量体化およびタンパク質発現の阻害に対する化合物８Ｃの効果も、これらすべての細胞において確認された。示されたデータは、Ｃ７９７Ｓ変異を有するオシメルチニブ耐性Ｂａ／Ｆ３細胞からのものである（図６Ｂ〜図６Ｅを参照）。
【０２０９】
実施例４９−肺癌細胞株における化合物８Ｃの選択的活性の検証
化合物８Ｃの選択性を試験するために、オシメルチニブ耐性肺癌細胞株（ＰＣ９−ＡＺＲおよびＨＣＣ８２７−ＡＺＲ）を、正常な肺線維芽細胞（ＭＲＣ５）と共に、様々な濃度で処理し、細胞生存をクローン原性生存アッセイを使用して決定した（以下の図７Ａおよび表３を参照）。これらの予備データは、化合物８Ｃが、ＥＧＦＲにより駆動される癌細胞を選択的に死滅させることを示唆する。化合物８Ｃへの応答が、ＥＧＦ誘導二量体化およびＥＧＦＲ分解の阻害と相関するかどうかを決定した。このため、ＰＣ９−ＡＺＲ細胞を１μＭの化合物８Ｃで１時間処理し、さらにＥＧＦ（３０ｎｇ／ｍｌ）で３０分、スベリン酸ジサクシンイミジル（ＤＳＳ、１５０μＭ）で３０分処理して、相互作用するタンパク質を架橋した。溶解物を調製し、抗ＥＧＦＲ抗体でイムノブロットした。図７Ｂは、１μＭの化合物８ＣがＥＧＦＲの二量体化を阻害し、ＥＧＦＲの分解を誘導できることを示す。全体として、これらの結果は、Ｂａ／Ｆ３細胞からの発見を裏付けるものである。
【０２１０】
実施例５０−生存率アッセイ
ＲＫＯ、ＵＭ１０Ｂ、ＵＭ１、ＭＣＲ５、およびＵＭＣＣ９２細胞における処理時の細胞の生存率を、製造元のプロトコ−ルに従ってＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｂｌｕｅ（登録商標）試薬によって評価した。手短に、１０，０００個の細胞を９６穴プレートに４連で播種した。播種１日後、細胞を濃度範囲（０．１〜３０マイクロモル）で処理した。処理３日後、細胞をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｂｌｕｅ（登録商標）試薬と４時間インキュベートした。生存細胞のみが、酸化還元色素（レサズリン）を蛍光産物（レゾルフィン）に変換する。蛍光の発光（励起５６０ｎｍ）を、５９０ｎｍで測定した。ＩＣ５０値は、５９０ｎｍでの蛍光による測定で、ビヒクル処理対照と比較して、細胞増殖を５０パーセント阻害するのに必要な化合物の平均濃度として計算された。結果を、以下の表３および表４に提示する。
【０２１１】
【表８】
2021514001.tif 000023
【０２１２】
【表９】
2021514001.tif 000024
【０２１３】
実施例５１−腫瘍および血漿における化合物８Ｃのインビボ薬物動態
薬剤を腹腔内注射により投与する短期ＰＫ研究により、化合物８Ｃは血漿から急速に除去されるという事実にもかかわらず、化合物８Ｃが選択的に腫瘍に蓄積することが明らかになった（図８Ａおよび図８Ｂを参照）。腫瘍で達成された化合物８Ｃのピーク濃度（７時間以上で６９．７±１５．６８μＭ）は、ＴＫＩ耐性腫瘍細胞の９９％を死滅させるのに必要な濃度よりもはるかに高い。ＰＣ９−ＡＺＲ、およびＨＣＣ８２７−ＡＺＲのＩＣ５０およびＩＣ９０の範囲は、約１．５〜約４μＭである（図７Ａを参照）。興味深いことに、ピーク血漿濃度が、３０分間で５．４±１．５μＭであった。化合物８Ｃの血漿中の半減期は７．９６時間であるが、腫瘍での半減期は２４時間よりもはるかに長かった（図８Ａを参照）。急速な全身クリアランスにもかかわらず、腫瘍への遷延した薬物蓄積は、治療的使用に理想的である。２４時間の時点のデータは、薬剤が連日投与に好適であることを示す。腹腔内注射された腫瘍における化合物８Ｃの選択的蓄積を観察した後、化合物８Ｃが経口で利用可能であるかどうかが決定された。経口投与の場合、短時間の超音波処理後、化合物８Ｃを、ＰＢＳ（ｖ／ｖ）中の２０％のｔｗｅｅｎ８０に処方した。マウスは、強制経口投与により、１００ｍｇ／ｋｇが投与された。７時間、１５時間および２４時間での腫瘍および血漿サンプル中の化合物８Ｃの濃度が決定され、図８Ｂにプロットされている。
【０２１４】
腹腔内注射のために、化合物８Ｃは、ｐＨを５．５に調整することにより、５％のＤＭＳＯを含むＰＢＳ中に１０ｍｇ／ｍＬで処方された。経口投与のために、短時間の超音波処理で、均質な懸濁液を２０％のｔｗｅｅｎ８０で調製した。最初、ヒトＮＣＩ−Ｈ１９７５腫瘍異種移植片（＞１５０ｍｍ３）を有するヌードマウスに、単回用量が１００ｍｇ／ｋｇの化合物８Ｃを、腹腔内投与（図８Ａ）または強制経口投与（図８Ｂ）した。マウスを、時間０、３０分、１時間、３時間、７時間、１５時間、および２４時間で安楽死させた。腫瘍および血漿サンプルを収集した。経口強制経口投与されたマウスの場合、血漿および腫瘍のサンプルは７時間、１５時間および２４時間でのみ収集された。血漿および腫瘍中の化合物８Ｃの濃度を決定し、得られたデータをモル濃度に関してプロットした。
【０２１５】
実施例５２−インビボでのＥＧＦＲレポーターの検証
このアプローチは、化合物Ｃ９５で検証された。手短に、腫瘍が約１００ｍｍ３のサイズに達したら、マウスを撮像し、基底生物発光および異なる時点でのプレリード化合物９５の効果を得た（図９Ａを参照）。生物発光の変化を定量化してプロットした（図９Ｂを参照）。最後に、ＥＧＦＲタンパク質レベルに対する処置の効果を、処置の４８時間後に、イムノブロットによって確認した。
【０２１６】
実施例５３−化合物８Ｃのインビボ活性
ＵＭＳＣＣ７４Ｂ（約１００ｍｍ２）を有するヌードマウスを（３０ｍｇ／ｋｇ、毎日１週間）またはビヒクル（ＰＢＳ中の５％のＤＭＳＯ）で処置した。各群は、少なくとも５匹のマウスを有した。腫瘍体積および体重を週３〜４回記録し、平均腫瘍体積の経時変化をプロットした。処置中の体重の平均減少は、１０％未満であった。エラーバーは、平均値の標準誤差を表す。
【０２１７】
化合物８Ｃの処置群の場合、０日目は、処置の初日として定義される。ビヒクル対照マウスでは、０日目は、腫瘍体積が、処置開始日の化合物８Ｃ治療群における平均腫瘍体積と最も近い日として定義された。腫瘍体積の成長速度が処置によって異なるかどうかを評価するために、マウス内での腫瘍内および２つの腫瘍間の経時的な相関結果を説明するために、混合効果モデルをマウスレベルのランダムインターセプト条件に適合させた。単剤療法では、１週間の投与後に腫瘍成長速度の有意な低下が誘発された（図１０を参照）。腫瘍成長速度は、時間を一致させた対照群（ｐ＝０．０１３）および全体の対照群（ｐ＜０．００１）と比較して、化合物８Ｃ処置群の方が、有意に低かった。
【０２１８】
実施例５４−オシメルチニブ耐性腫瘍モデルにおける化合物８Ｃの効果
オシメルチニブ耐性ＥＧＦＲ駆動性腫瘍に対する化合物８Ｃの活性を試験するために、以前に報告されたように、Ｂａ／Ｆ３−ＡＺＲ細胞（Ｌ８５８Ｒ＋Ｔ７９０Ｍ＋Ｃ７９７Ｓ−ＥＧＦＲ）を使用して、腹水腫瘍モデルが開発された（６５）。５００万個のＢＡ／Ｆ３−ＡＺＲ細胞を、６週齢の雌ヌードマウスに腹腔内注射した。マウスは腹水腫瘍を発症し、平均生存期間は２０日間であった。オシメルチニブと比較した化合物８Ｃの有効性を試験するために、注射した１５匹のマウスにＢａ／Ｆ３−ＡＺＲ細胞を注射した。腫瘍細胞の注射１８日後、マウスを３つの群に無作為化した。マウスを、ビヒクル、単回経口用量が３０ｍｇ／ｋｇのオシメルチニブ、または腹腔内注射を介する３０ｍｇ／ｋｇの化合物８Ｃで処置した。マウスの健康状態を監視し、ＵＬＡＭ末期ガイドラインに従ってマウスを安楽死させた。腫瘍負荷が高くなった後に処置が開始されたが、化合物８Ｃの３０ｍｇ／ｋｇの単回投与で、オシメルチニブ処置群と比較して、これらのマウスの寿命が延びた。ビヒクル対照群とオシメルチニブ処置群との間に違いは認められなかった。オシメルチニブと化合物８Ｃとの間の差は、ログランク検定を使用して計算された（ｐ＝０．０７２）。標的に対する処置の効果を試験するために、処置前、処置後１８時間、および２４時間に、１匹のマウスから腫瘍細胞を収集した。細胞をＰＢＳで洗浄し、図３に記載のように処理した。図１１に与えられるイムノブロットの結果は、ＥＧＦＲ、ｐＥＧＦＲおよび他の分子に対する処理の効果を示す。
【０２１９】
実施例５５−マウスモデルにおける化合物８Ｃの予備的な安全試験
Ｃ５７ＢＬ６マウスを使用して、１日３０ｍｇ／ｋｇの用量で１週間の安全性に関する予備試験を行った。処置の間、マウス６匹の群の健康全般と体重を監視した。処置の１週間後、３．５±２．４％の体重のわずかな減少が観察されたが、処置を中止して２日後、マウスは完全に体重を回復した。
【０２２０】
実施例５６：ＮＣＩ６０細胞株スクリーニング
化合物８Ｃの活性は、国立癌研究所で標準ＮＣＩ  ６０スクリーニングプロトコ−ルを使用して、６０種類の異なるヒト腫瘍細胞株に対して試験された。上位成績の細胞株について、成長阻害のパーセントを以下の表５に示す。
【０２２１】
【表１０】
2021514001.tif 000025
【０２２２】
実施例５７：膵腫瘍モデルにおける化合物８Ｃの効果
６週齢のＫＣマウスを、強制経口投与により、化合物８Ｃで処置した（３０ｍｇ／ｋｇ体重、毎日）。化合物８Ｃが投与されなかった対照マウスと比較して、ＰａｎＩｎレベルに対する結果としての効果が観察された。化合物８Ｃで処置されたマウスは、図１３に示すように、膵管病変の一種であるＰａｎＩｎ（膵上皮内腫瘍）の発症傾向が有意に低下した。
【０２２３】
実施例５８：頭頸部腫瘍モデルにおける化合物８Ｃの効果
頭頸部腫瘍細胞株であるＵＭＳＣＣ７４Ｂのマウス異種移植片を、強制経口投与により化合物８Ｃで処置した（３０ｍｇ／ｋｇ体重、週２回）。化合物８Ｃが投与されなかった対照マウス、およびセツキシマブが投与された対照マウスと比較して、腫瘍体積に対する結果としての効果が観察された。図１４に示すように、化合物８Ｃで処置したマウスでは、両方の対照と比較して、腫瘍体積の有意な減少を示した。
【０２２４】
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【図１】
2021514001.tif 000030
【図２】
2021514001.tif 000031
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
2021514001.tif 000035
【図７】
2021514001.tif 000036
【図８】
2021514001.tif 000037
【図９】
2021514001.tif 000038
【図１０】
2021514001.tif 000039
【図１１】
2021514001.tif 000040
【図１２】
2021514001.tif 000041
【図１３】
2021514001.tif 000042
【図１４】
2021514001.tif 000043
【国際調査報告】
2021514001.tif 000044
2021514001.tif 000045