(57)【要約】【課題】「０３０１」と名づけられたアンタゴニスト性マウス抗ＣＳＦ１Ｒ  ＩｇＧ分子のヒト化型は理想的ではない。【解決手段】  本明細書において、Ｃｏｌｏｎｙ  Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  Ｆａｃｔｏｒ  １  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＣＳＦ１Ｒ）に特異的に結合する抗体分子、ならびにその関連核酸分子、ベクターおよび宿主細胞が提供される。さらに本明細書において、当該抗体分子の医療用途が提供される。【選択図】図１
2021514654.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、
（ａ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＹＹＭＩ（配列番号３１）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｂ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＮＹＭＩ（配列番号５０）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、ＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＤＲＡＴ（配列番号６０）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｃ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＡＹＭＩ（配列番号５７）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（ＨＣＤＲ３、配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＤＲＡＴ（配列番号６０）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、または
（ｄ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＹＭＩ（配列番号４１）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＴＴＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＡ（配列番号４０）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＬＡＴ（配列番号４３）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有する、抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２】
（ａ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３５２を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号３５１を含有し、
（ｂ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３５４を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号３５３を含有し、
（ｃ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３５６を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号３５５を含有し、または
（ｄ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３５８を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号３５７を含有する、請求項１に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項３】
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含有する重鎖可変（ＶＨ）領域、ならびにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含有する軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、
（ａ）前記ＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列Ｇ−Ｘ１−Ｔ−Ｆ−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７を含有し、式中、Ｘ１は、ＹまたはＧであり、Ｘ２は、ＴまたはＳであり、Ｘ３は、ＤまたはＳであり、Ｘ４は、Ｎ、Ａ、Ｓ、ＨまたはＹであり、Ｘ５は、ＹまたはＡであり、Ｘ６は、ＭまたはＩであり、およびＸ７は、ＩまたはＳである（配列番号２５）；
（ｂ）前記ＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列Ｘ１−Ｇ−Ｘ２−Ｉ−Ｘ３−Ｐ−Ｘ４−Ｘ５−Ｇ−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｑ−Ｋ−Ｆ−Ｘ１１−Ｇを含有し、式中、Ｘ１は、ＭまたはＭの保存的置換であり、Ｘ２は、ＤまたはＧであり、Ｘ３は、ＮまたはＩであり、Ｘ４は、ＹまたはＩであり、Ｘ５は、ＮまたはＦであり、Ｘ６は、ＧまたはＴであり、Ｘ７は、ＴまたはＡであり、Ｘ８は、ＴまたはＮであり、Ｘ９は、ＦまたはＹであり、Ｘ１０は、ＮまたはＡであり、およびＸ１１は、ＱまたはＫである（配列番号２６）；
（ｃ）前記ＨＣＤＲ３は、アミノ酸配列Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｖ−Ｍ−Ｄ−Ｙを含有し、式中、Ｘ１は、ＥまたはＥの保存的置換であり、Ｘ２は、Ｄ、Ｇ、Ｈ、Ｓ、Ｔ、Ｐ、Ｖ、Ｎ、ＩまたはＹであり、Ｘ３は、Ｐ、Ｔ、Ｎ、Ｅ、Ｌ、Ａ、ＤまたはＳであり、Ｘ４は、Ｙ、Ｋ、Ｒ、ＭまたはＰであり、Ｘ５は、Ｆ、Ｄ、Ｓ、Ｔ、Ｅ、Ｗ、Ｍ、Ｙ、Ｌ、Ｑ、Ｋ、Ｇ、ＡまたはＩであり、Ｘ６は、Ｓ、Ｅ、ＧまたはＲであり、Ｘ７は、Ｎ、Ｅ、Ｑ、Ｇ、ＨまたはＭであり、Ｘ８は、Ｌ、Ｈ、ＳまたはＹであり、およびＸ９は、ＹまたはＷである（配列番号２７）；
（ｄ）前記ＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列Ｒ−Ａ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−Ｖ−Ｘ１−Ｙ−Ｘ２−Ｇ−Ｘ３−Ｎ−Ｙ−Ｌ−Ｘ４を含有し、式中、Ｘ１は、Ｓ、ＤまたはＥであり、Ｘ２は、Ｄ、ＥまたはＱであり、Ｘ３は、ＤまたはＥであり、およびＸ４は、ＮまたはＡである（配列番号２８）；
（ｅ）前記ＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列Ｘ１−Ａ−Ｓ−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｔを含有し、式中、Ｘ１は、ＡまたはＤであり、Ｘ２は、ＤまたはＮであり、Ｘ３は、ＬまたはＲであり、およびＸ４は、ＥまたはＡである（配列番号２９）；および
（ｆ）前記ＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列Ｘ１−Ｘ２−Ｓ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｌ−Ｘ６−Ｔを含有し、式中、Ｘ１は、Ｑ、ＨまたはＮであり、Ｘ２は、ＬまたはＱであり、Ｘ３は、ＮまたはＳであり、Ｘ４は、Ｅ、ＱまたはＮであり、Ｘ５は、ＤまたはＷであり、およびＸ６は、ＬまたはＳである（配列番号３０）、抗体またはその抗原結合部分。
【請求項４】
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、
（ａ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＹＹＭＩ（配列番号３１）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＱＧＥＮＹＬＡ（配列番号３４）のＬＣＤＲ１、ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号３５）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＱＤＬＬＴ（配列番号３６）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｂ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＹＹＭＩ（配列番号３１）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｃ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＹＹＭＩ（配列番号３１）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＡ（配列番号４０）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＱＤＬＬＴ（配列番号３６）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｄ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＹＭＩ（配列番号４１）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＴＴＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＡ（配列番号４０）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＬＡＴ（配列番号４３）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｅ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＹＭＩ（配列番号４１）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＦＡＱＫＦＱＧ（配列番号４４）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｆ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＹＭＩ（配列番号４１）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｇ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＹＹＭＩ（配列番号３１）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＥＹＱＧＤＮＹＬＮ（配列番号４５）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｈ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＹＩＩ（配列番号４６）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＴＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４７）のＨＣＤＲ２、およびＥＰＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号４８）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＥＹＥＧＤＮＹＬＮ（配列番号４９）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＱＤＬＬＴ（配列番号３６）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｉ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＮＹＭＩ（配列番号５０）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＴＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号５１）のＨＣＤＲ２、およびＥＰＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号４８）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＥＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号５２）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＱＤＬＬＴ（配列番号３６）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｊ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＹＹＭＩ（配列番号３１）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＴＴＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＥＹＱＧＥＮＹＬＮ（配列番号５３）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＱＤＬＬＴ（配列番号３６）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｋ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＮＹＩＩ（配列番号５４）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号５５）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＥＹＱＧＥＮＹＬＮ（配列番号５３）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＳＥＤＬＬＴ（配列番号５６）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｌ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＮＹＭＩ（配列番号５０）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｍ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＡＹＭＩ（配列番号５７）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｎ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＳＹＭＩ（配列番号５８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｏ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＨＹＭＩ（配列番号５９）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｐ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＮＹＭＩ（配列番号５０）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＤＲＡＴ（配列番号６０）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｑ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＡＹＭＩ（配列番号５７）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＤＲＡＴ（配列番号６０）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｒ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＳＹＭＩ（配列番号５８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＤＲＡＴ（配列番号６０）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、または
（ｓ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＨＹＭＩ（配列番号５９）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＤＲＡＴ（配列番号６０）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有する、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分。
【請求項５】
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７または配列番号８を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１または配列番号１２を含有する、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分。
【請求項６】
（ａ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号９を含有し、
（ｂ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１０を含有し、
（ｃ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１１を含有し、
（ｄ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２を含有し、
（ｅ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号２を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号９を含有し、
（ｆ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号２を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１０を含有し、
（ｇ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号２を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１１を含有し、
（ｈ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号２を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２を含有し、
（ｉ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号９を含有し、
（ｊ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１０を含有し、
（ｋ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１１を含有し、
（ｌ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２を含有し、
（ｍ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号４を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号９を含有し、
（ｎ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号４を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１０を含有し、
（ｏ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号４を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１１を含有し、
（ｐ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号４を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２を含有し、
（ｑ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号５を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号９を含有し、
（ｒ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号５を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１０を含有し、
（ｓ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号５を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１１を含有し、
（ｔ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号５を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２を含有し、
（ｕ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号６を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号９を含有し、
（ｖ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号６を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１０を含有し、
（ｗ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号６を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１１を含有し、
（ｘ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号６を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２を含有し、
（ｙ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号７を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号９を含有し、
（ｚ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号７を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１０を含有し、
（ａａ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号７を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１１を含有し、
（ｂｂ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号７を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２を含有し、
（ｃｃ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号８を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号９を含有し、
（ｄｄ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号８を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１０を含有し、
（ｅｅ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号８を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１１を含有し、または
（ｆｆ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号８を含有し、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２を含有する、請求項５に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項７】
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体または抗原結合部分は、ＣＳＦ１Ｒへの結合に関し、請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部分と交差競合し、ならびに
（ａ）完全生殖細胞系列ヒトフレームワークアミノ酸配列を含有し、
（ｂ）ＶＨドメイン中にＩＧＨＶ１−６９＊０１アレルの生殖細胞系列フレームワーク領域を含有し、
（ｃ）ＬＣＤＲ１配列中に異性化リスクモチーフを含有せず、
（ｄ）ヒトＣＳＦ１Ｒ、カニクイザルＣＳＦ１Ｒ、およびアカゲザルＣＳＦ１Ｒに特異的に結合し、および／または
（ｅ）前記抗体または抗原結合部分のカニクイザルＣＳＦ１Ｒへの結合に対するＫＤの３倍以内であるＫＤで、ヒトＣＳＦ１Ｒに結合し、
（ｆ）ＶＬドメインのフレームワーク３／ＬＣＤＲ３領域中にヒトＴ細胞エピトープ配列を含有せず、および／または
（ｇ）ＶＨドメインのＨＣＤＲ−２／フレームワーク３領域中にヒトＴ細胞エピトープ配列を含有せず、および／または
（ｈ）ＶＨドメインのＨＣＤＲ１／フレームワーク２領域中にヒトＴ細胞エピトープ配列を含有せず、および／または
（ｉ）ＶＨドメインのＨＣＤＲ３／フレームワーク４領域中にヒトＴ細胞エピトープ配列を含有せず、および／または
（ｊ）ＶＬドメインのフレームワーク２／ＬＣＤＲ２領域中にヒトＴ細胞エピトープ配列を含有せず、および／または
（ｋ）インスリンおよび／または二本鎖ＤＮＡに対して最小の結合を呈し、もしくは結合を呈さず、および／または
（ｌ）ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）抗体形式のときに、抗体ｈｕ０３０１と比較して、酸化ダメージに対する感受性の低下を呈し、および／または
（ｍ）ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）抗体形式のときに、抗体ｈｕ０３０１と比較して、Ｆａｂドメインの熱的安定性の改善を呈し、および／または
（ｎ）ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）抗体形式のときに、抗体ｈｕ０３０１と比較して、疎水性種の不均一性の低下を呈する、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分。
【請求項８】
前記抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項９】
前記ＶＨ領域、前記ＶＬ領域、または前記ＶＨ領域と前記ＶＬ領域の両方は、１つまたは複数のヒトフレームワーク領域のアミノ酸配列を含有する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１０】
前記ＶＨ領域、前記ＶＬ領域、または前記ＶＨ領域と前記ＶＬ領域の両方は、前記ＣＤＲが挿入されたヒト可変領域フレームワークスキャホールドのアミノ酸配列を含有する、請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１１】
前記ＶＨ領域は、前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３のアミノ酸配列が挿入されたＩＧＨＶ１−６９＊０１ヒト生殖細胞系列スキャホールドのアミノ酸配列を含有する、請求項１、３、４および７のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１２】
前記ＶＬ領域は、前記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が挿入されたＩＧＫＶ３−１１ヒト生殖細胞系列スキャホールドのアミノ酸配列を含有する、請求項１、３、４、７および１１のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１３】
前記抗体は、免疫グロブリン定常領域を含有する、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１４】
前記免疫グロブリン定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡまたはＩｇＹである、請求項１３に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１５】
前記免疫グロブリン定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２である、請求項１４に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１６】
前記免疫グロブリン定常領域は、免疫学的に不活性である、請求項１３に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１７】
前記免疫グロブリン定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、Ｓ２２８Ｐのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、またはＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域である、請求項１３に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１８】
前記免疫グロブリン定常領域は、配列番号３５９〜３６４のいずれか１つを含有する、請求項１３に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１９】
前記抗体または抗原結合部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）、マキシボディ、ミニボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ−ＮＡＲ、またはｂｉｓ−ｓｃＦｖである、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の抗原結合部分。
【請求項２０】
前記抗体は、モノクローナルである、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項２１】
前記抗体は、四量体抗体、四価抗体、または多特異性抗体である、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項２２】
前記抗体は、第一の抗原と第二の抗原に特異的に結合する二特異性抗体であり、前記第一の抗原はＣＳＦ１Ｒであり、前記第二の抗原はＣＳＦ１Ｒではない、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項２３】
前記抗体または抗原結合部分は、（ａ）ヒトＣＳＦ１Ｒ、（ｂ）ヒトＣＳＦ１ＲおよびカニクイザルＣＳＦ１Ｒ、または（ｃ）ヒトＣＳＦ１Ｒ、カニクイザルＣＳＦ１Ｒ、およびアカゲザルＣＳＦ１Ｒに特異的に結合する、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項２４】
治療剤に結合された請求項１〜２３のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部分を含有する免疫結合体。
【請求項２５】
前記治療剤が、細胞毒素、放射性同位体、化学療法剤、免疫調節剤、抗血管新生剤、抗増殖剤、アポトーシス促進剤、細胞増殖抑制酵素、細胞溶解性酵素、治療用核酸、抗血管新生剤、抗増殖剤、またはアポトーシス促進剤である、請求項２４に記載の免疫結合体。
【請求項２６】
請求項１〜２３のいずれか１項に記載の抗体もしくは抗原結合部分、または請求項２４または２５に記載の免疫結合体、および薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤を含有する医薬組成物。
【請求項２７】
核酸分子であって、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部分の
（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列、
（ｂ）ＶＬ領域のアミノ酸配列、または
（ｃ）ＶＨ領域とＶＬ領域の両方のアミノ酸配列、をコードする核酸分子。
【請求項２８】
請求項２７に記載の核酸分子を含有する発現ベクター。
【請求項２９】
請求項２７に記載の核酸分子、または請求項２８に記載の発現ベクターを含有する組み換え宿主細胞。
【請求項３０】
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分を作製する方法であって、
前記核酸分子が発現される条件下で、請求項２８に記載の発現ベクターを含有する組み換え宿主細胞を培養し、それにより前記抗体または抗原結合部分を作製すること、および
前記宿主細胞または培養物から、前記抗体または抗原結合部分を単離すること、を含む、方法。
【請求項３１】
対象において、免疫反応を強化する方法であって、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の抗体もしくは抗原結合部分、請求項２４または２５に記載の免疫結合体、または請求項２６に記載の医薬組成物の治療有効量を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項３２】
対象において、癌、感染性疾患もしくは免疫性疾患を治療または予防する方法であって、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の抗体もしくは抗原結合部分、請求項２４または２５に記載の免疫結合体、または請求項２６に記載の医薬組成物の治療有効量を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項３３】
前記癌が、膵臓癌、メラノーマ、乳癌、肺癌、気管支癌、結腸直腸癌、前立腺癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳腫瘍または中枢神経系の癌、末梢神経系の癌、食道癌、子宮頸癌、子宮癌または子宮内膜癌、口腔または咽頭の癌、肝癌、腎癌、精巣癌、胆管癌、小腸癌または虫垂癌、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫、または血液組織の癌である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記感染性疾患が、ウイルス性、細菌性、真菌性、または寄生虫性である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
前記免疫性疾患が、色素性絨毛結節性滑膜炎である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】
癌、感染性疾患、または免疫性疾患の治療における使用のための、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の抗体もしくは抗原結合部分、請求項２４または２５に記載の免疫結合体、または請求項２６に記載の医薬組成物。
【請求項３７】
前記癌が、膵臓癌、メラノーマ、乳癌、肺癌、気管支癌、結腸直腸癌、前立腺癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳腫瘍または中枢神経系の癌、末梢神経系の癌、食道癌、子宮頸癌、子宮癌または子宮内膜癌、口腔または咽頭の癌、肝癌、腎癌、精巣癌、胆管癌、小腸癌または虫垂癌、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫、または血液組織の癌である、請求項３６に記載の使用のための抗体もしくは抗原結合部分、免疫結合体、または医薬組成物。
【請求項３８】
前記感染性疾患が、ウイルス性、細菌性、真菌性、または寄生虫性である、請求項３６に記載の使用のための抗体もしくは抗原結合部分、免疫結合体、または医薬組成物。
【請求項３９】
前記免疫性疾患が、色素性絨毛結節性滑膜炎である、請求項３６に記載の使用のための抗体もしくは抗原結合部分、免疫結合体、または医薬組成物。
【請求項４０】
医薬品としての使用のための、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の抗体もしくは抗原結合部分、請求項２４または２５に記載の免疫結合体、または請求項２６に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年１１月２２日に出願された英国特許出願第１８１９０４５．４号明細書、２０１８年６月２１日に出願された英国特許出願第１８１０２２６．９号明細書、および２０１８年２月２８日に出願された英国特許出願第１８０３２２６．８号明細書の利益を主張するものであり、それら各開示内容は、その全体で参照により本明細書に援用される。
【０００２】
電子的に提出されるテキストファイルに関する説明
本明細書とともに電子的に提出されるテキストファイルの内容は、その全体で参照により本明細書に援用される。コンピューター読み取り可能な形式の配列表のコピー（ファイルの名称：ＵＬＴＬ＿００１＿０１ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、データ記録日：２０１９年２月２８日、ファイルサイズは１５８，２２２バイト）。
【０００３】
本発明は、ＣＳＦ１Ｒ（Ｃｏｌｏｎｙ  Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  Ｆａｃｔｏｒ  １  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ、Ｃ−ＦＭＳ、ＣＤ１１５、ＣＳＦ−１Ｒ、ＣＳＦＲ、ＦＩＭ２、ＦＭＳ、ＨＤＬＳ、Ｍ−ＣＳＦ−Ｒとしても知られる）に特異的に結合する抗体分子、およびその医療用途に関する。
【背景技術】
【０００４】
ＣＳＦ１Ｒは細胞表面受容体であり、免疫グロブリンスーパーファミリーの１種で、単核細胞系統、特にマクロファージ上に主に発現される。ＣＳＦ１Ｒは、２種の公知のリガンドであるＣＳＦ１（Ｍ−ＣＳＦとしても知られる）およびＩＬ−３４に結合する。これらリガンドとＣＳＦ１Ｒの相互作用は、例えばマクロファージや単球などの単核貪食細胞の成熟、生存、増殖および分化に直接的な役割を果たす。
【０００５】
非疾患状態でのＣＳＦ１Ｒのシグナル伝達の役割は、単核細胞の制御に重要であり、一方で、腫瘍細胞のリクルート、および免疫抑制性の腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ：ｔｕｍｏｕｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ）の維持にも重要なメカニズムである。実際にＣＳＦ１Ｒは、数種の癌においてＴＡＭで高度に発現されることが示されている。早期ステージの癌および転移癌において、マクロファージおよび好中球をはじめとする腫瘍内のＣＳＦ１Ｒ＋細胞の存在は、生存率の低さと相関している。ゆえに、アンタゴニスト性の抗ＣＳＦ１Ｒ  ｍＡｂは、癌および免疫疾患性の状況の中で免疫治療剤として作用し、現在確立されている治療法の有効性を増幅させる可能性を有している。
【０００６】
現在承認されている抗体治療剤の大部分は、免疫化されたげっ歯類に由来する。そうした抗体の多くが、マウスＣＤＲのヒトｖ−遺伝子フレームワーク配列への「移植」を介した、「ヒト化」として知られるプロセスを経ている（Ｎｅｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  ９：７６７−７７４を参照のこと）。このプロセスは多くの場合、不正確であり、得られた抗体の表的結合アフィニティの低下が生じる。元の抗体の結合アフィニティに戻すために、通常、移植されたｖ−ドメインの可変ドメインフレームワーク中の重要な位置にマウス残基が導入される（「復帰突然変異（ｂａｃｋ−ｍｕｔａｔｉｏｎ）」としても知られる）。
【０００７】
ＣＤＲ移植および復帰突然変異によりヒト化された抗体は臨床において、完全マウスｖ−ドメインと比較して低い免疫反応率を誘導することが示されているが、この基礎的な移植法を使用してヒト化された抗体は、物理的に不安定である可能性があり、移植ＣＤＲループ内に免疫原性モチーフがいまだ保存されていることから、重大な臨床開発リスクを負っている。抗原提示免疫細胞上の受容体を標的とし、その薬理学的な機能によって免疫反応が刺激される、例えばＣＳＦ１Ｒ阻害剤などの抗体は、抗薬剤抗体反応を誘発するリスクが高い。患者のそうした抗薬剤抗体反応は、臨床使用における薬剤の半減期、有効性および安全性も低下させ得る。タンパク質の免疫原性に関する動物実験は、ヒトでの免疫反応の予測とはならないことが多く、治療用途の抗体操作は、予測されるヒトＴ細胞エピトープ含量、非ヒト生殖細胞系列アミノ酸含量、および精製タンパク質が凝集してしまう可能性を最小化することに焦点が置かれている。
【０００８】
ゆえに理想的なヒト化アゴニスト性抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、ｖ−ドメイン中に、詳細に特徴解析されたヒト生殖細胞系列配列のフレームワークとＣＤＲの両方に存在する残基と同一の残基を可能な限り多く有している抗体である。Ｔｏｗｎｓｅｎｄら（２０１５；ＰＮＡＳ  １１２：１５３５４−１５３５９）は、抗体の作製方法を記載しており、当該方法においてラット抗体、ウサギ抗体およびマウス抗体に由来するＣＤＲは、好ましいヒトフレームワーク内に移植され、次いで「拡張バイナリー置換（ａｕｇｍｅｎｔｅｄ  ｂｉｎａｒｙ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）」と呼ばれるヒト生殖細胞系列化（ｈｕｍａｎ  ｇｅｒｍ−ｌｉｎｉｎｇ）方法が行われた。この方法は、オリジナル抗体のパラトープにおいては基礎的な柔軟性を示したが、研究者らが正確性の高い抗体−抗原の共結晶構造データを有している場合であっても、任意の所与の抗体のＣＤＲループ中のどの個々の残基がどの組み合わせでヒト生殖細胞系列に転換され得るかを確実に予測することは未だ不可能である。さらにＴｏｗｎｓｅｎｄらの研究では、ヒト生殖細胞系列中に存在する残基を超えた、発症リスクモチーフの除去が有益となる可能性がある位置での追加の突然変異生成には対処していない。これは技術の限界であり、この限界によってプロセスが本質的に非効率的となり、開始抗体配列を改変する余剰な段階が必要となる。さらに現時点では、個々のｖ−ドメインのタンパク質配列で離れた位置にある改変のいずれが、リスクモチーフを排除しながら、抗原結合のアフィニティと特異性の維持を促進し得るのかは、たとえパートナーｖ−ドメイン上であったとしても正確に予測することはできない。
【０００９】
分子の複合的な機能特性は、本例を含み、維持または改善されることが好ましいものであるため、ＣＤＲの生殖細胞系列化と開発クオリティの最適化は複雑で、多因子的な課題である：ヒトおよび動物実験種（例えば、カニクイザルとしても知られるｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ  ｍｏｎｋｅｙ、すなわちＭａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ。および／またはアカゲザル、すなわちＭａｃａｃａ  ｍｕｌａｔｔａ）の両方の標的結合特異性、ＣＳＦ１Ｒ／ＣＳＦ１のシグナル伝達のアンタゴニズム、ＣＳＦ１Ｒに対するアフィニティは、高度に正確な前臨床安全性試験を促進するために可能な限り類似していなければならず、ｖ−ドメインの生物物理的安定性および／またはＩｇＧ発現収率は、製造目的に対し最適化されなければならない。抗体操作実験から、重要なＣＤＲ中のたった１つの残基位置での突然変異であっても、これら望ましい分子特性のすべてに対し劇的な負の影響を与え得ることが示されている。
【００１０】
ＷＯ２０１１／１４０２４９Ａ２は、「０３０１」と名づけられたアンタゴニスト性マウス抗ＣＳＦ１Ｒ  ＩｇＧ分子、ならびに０３０１のヒト化型の調製を記載している。その０３０１のヒト化型は、古典的なヒト化技術、すなわちＫａｂａｔ規定のマウスＣＤＲをヒトの重鎖および軽鎖のフレームワーク配列に移植することにより作製されており、ヒトフレームワーク残基の一部は、対応する位置の０３０１マウス残基に復帰突然変異されている可能性がある。上述の理由によって、ＷＯ２０１１／１４０２４９Ａ２に記載される０３０１のヒト化型は理想的ではない。
【発明の概要】
【００１１】
本発明は、多くの抗ＣＳＦ１Ｒ抗体、およびその医療用途を提供する。
【００１２】
本発明の１つの態様によると、ヒトＣＳＦ１Ｒ、および任意でカニクイザルＣＳＦ１Ｒにも特異的に結合する抗体分子、またはその抗原結合部分が提供され、当該抗体分子または抗原結合部分は、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＨＣＤＲ１：Ｇ−Ｙ／Ｇ−Ｔ−Ｆ−Ｔ／Ｓ−Ｄ／Ｓ−Ｎ／Ａ／Ｓ／Ｈ／Ｙ−Ｙ／Ａ−Ｍ／Ｉ−Ｉ／Ｓ（配列番号１３）、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＨＣＤＲ２：ＭまたはＭの保存的置換−Ｇ−Ｄ／Ｇ−Ｉ−Ｎ／Ｉ−Ｐ−Ｙ／Ｉ−Ｎ／Ｆ−Ｇ−Ｇ／Ｔ−Ｔ／Ａ−Ｔ／Ｎ−Ｆ／Ｙ−Ｎ／Ａ−Ｑ−Ｋ−Ｆ−Ｑ／Ｋ−Ｇ（配列番号１４）、および
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＨＣＤＲ３：ＥまたはＥの保存的置換（例えば、Ｄ）−Ｄ／Ｇ／Ｈ／Ｓ／Ｔ／Ｐ／Ｖ／Ｎ／Ｉ／Ｙ−Ｐ／Ｔ／Ｎ／Ｅ／Ｌ／Ａ／Ｄ／Ｓ−Ｙ／Ｋ／Ｒ／Ｍ／Ｐ−Ｆ／Ｄ／Ｓ／Ｔ／Ｅ／Ｗ／Ｍ／Ｙ／Ｌ／Ｑ／Ｋ／Ｇ／Ａ／Ｉ−Ｓ／Ｅ／Ｇ／Ｒ−Ｎ／Ｅ／Ｑ／Ｇ／Ｈ／Ｍ−Ｌ／Ｈ／Ｓ／Ｙ−Ｙ／Ｗ−Ｖ−Ｍ−Ｄ−Ｙ（配列番号１５）を有する重鎖可変領域を含有する。
【００１３】
本発明の態様において、抗体分子もしくは抗原結合部分のＨＣＤＲ１は、配列ＧＹＴＦＴＤＮＹＭＩ（配列番号１６、ＷＯ２０１１／１４０２４９Ａ２に開示される０３０１マウス／ヒト化抗体のＨＣＤＲ１）、配列ＤＩＮＰＹＮＧＧＴＴＦＮＱＫＦＫＧ（配列番号１７、ＷＯ２０１１／１４０２４９Ａ２に開示される０３０１マウス／ヒト化抗体のＨＣＤＲ２）を除外してもよく、および／または抗体分子もしくは抗原結合部分ＨＣＤＲ３は、配列ＥＳＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号１８、ＷＯ２０１１／１４０２４９Ａ２に開示される０３０１マウス／ヒト化抗体のＨＣＤＲ３）を除外してもよい。
【００１４】
抗体分子または抗原結合部分は、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＬＣＤＲ１：Ｒ−Ａ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−Ｖ−Ｓ／Ｄ／Ｅ−Ｙ−  Ｄ／Ｅ／Ｑ−Ｇ−Ｄ／Ｅ−Ｎ−Ｙ−Ｌ−Ｎ／Ａ（配列番号１９）、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＬＣＤＲ２：Ａ／Ｄ−Ａ−Ｓ−Ｎ／Ｄ−Ｌ／Ｒ−Ｅ／Ａ−Ｔ（配列番号２０）、および
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＬＣＤＲ３：Ｑ／Ｈ／Ｎ−Ｌ／Ｑ−Ｓ−Ｎ／Ｓ−Ｅ／Ｑ／Ｎ−Ｄ／Ｗ−Ｌ−Ｌ／Ｓ−Ｔ（配列番号２１）を有する軽鎖可変領域をさらに含有してもよい。
【００１５】
本発明の態様において、抗体分子もしくは抗原結合部分のＬＣＤＲ１は、配列ＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＮＹＭＮ（配列番号２２、ＷＯ２０１１／１４０２４９Ａ２に開示される０３０１マウス／ヒト化抗体のＬＣＤＲ１）を除外してもよく、および／または、抗体分子もしくは抗原結合部分のＬＣＤＲ２は、配列ＡＡＳＮＬＥＳ（配列番号２３、ＷＯ２０１１／１４０２４９Ａ２に開示される０３０１マウス／ヒト化抗体のＬＣＤＲ２）を除外してもよく、および／または抗体分子もしくは抗原結合部分のＬＣＤＲ３は、配列ＨＬＳＮＥＤＬＳＴ（配列番号２４、ＷＯ２０１１／１４０２４９Ａ２に開示される０３０１マウス／ヒト化抗体のＬＣＤＲ３）を除外してもよい。
【００１６】
一部の態様において、本明細書は、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
（ａ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＹＹＭＩ（配列番号３１）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｂ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＮＹＭＩ（配列番号５０）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、ＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＤＲＡＴ（配列番号６０）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｃ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＡＹＭＩ（配列番号５７）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（ＨＣＤＲ３、配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＤＲＡＴ（配列番号６０）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、または
（ｄ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＹＭＩ（配列番号４１）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＴＴＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＡ（配列番号４０）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＬＡＴ（配列番号４３）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有する。
【００１７】
一部の態様において、本明細書は、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、
（ａ）配列番号３１、配列番号５０、配列番号５７、または配列番号４１のＨＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号３２、または配列番号４２のＨＣＤＲ２、および
（ｃ）配列番号３３のＨＣＤＲ３を含有し、および
当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、
（ａ’）配列番号３７または配列番号４０のＬＣＤＲ１、
（ｂ’）配列番号３８、配列番号６０、または配列番号４３のＬＣＤＲ２、および
（ｃ’）配列番号３９のＬＣＤＲ３を含有する。
【００１８】
一部の態様において、本明細書は、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
（ａ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３５２を含有し、または配列番号３５２からなり、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号３５１を含有し、または配列番号３５１からなる；
（ｂ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３５４を含有し、または配列番号３５４からなり、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号３５３を含有し、または配列番号３５３からなる；
（ｃ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３５６を含有し、または配列番号３５６からなり、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号３５５を含有し、または配列番号３５５からなる；または
（ｄ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３５８を含有し、または配列番号３５８からなり、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号３５７を含有し、または配列番号３５７からなる。
【００１９】
一部の態様において、本明細書は、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含有する重鎖可変（ＶＨ）領域、ならびにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含有する軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
（ａ）ＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列Ｇ−Ｘ１−Ｔ−Ｆ−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７を含有し、式中、Ｘ１は、ＹまたはＧであり、Ｘ２は、ＴまたはＳであり、Ｘ３は、ＤまたはＳであり、Ｘ４は、Ｎ、Ａ、Ｓ、ＨまたはＹであり、Ｘ５は、ＹまたはＡであり、Ｘ６は、ＭまたはＩであり、およびＸ７は、ＩまたはＳである（配列番号２５）；
（ｂ）ＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列Ｘ１−Ｇ−Ｘ２−Ｉ−Ｘ３−Ｐ−Ｘ４−Ｘ５−Ｇ−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｑ−Ｋ−Ｆ−Ｘ１１−Ｇを含有し、式中、Ｘ１は、ＭまたはＭの保存的置換であり、Ｘ２は、ＤまたはＧであり、Ｘ３は、ＮまたはＩであり、Ｘ４は、ＹまたはＩであり、Ｘ５は、ＮまたはＦであり、Ｘ６は、ＧまたはＴであり、Ｘ７は、ＴまたはＡであり、Ｘ８は、ＴまたはＮであり、Ｘ９は、ＦまたはＹであり、Ｘ１０は、ＮまたはＡであり、およびＸ１１は、ＱまたはＫである（配列番号２６）；
（ｃ）ＨＣＤＲ３は、アミノ酸配列Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｖ−Ｍ−Ｄ−Ｙを含有し、式中、Ｘ１は、ＥまたはＥの保存的置換であり、Ｘ２は、Ｄ、Ｇ、Ｈ、Ｓ、Ｔ、Ｐ、Ｖ、Ｎ、ＩまたはＹであり、Ｘ３は、Ｐ、Ｔ、Ｎ、Ｅ、Ｌ、Ａ、ＤまたはＳであり、Ｘ４は、Ｙ、Ｋ、Ｒ、ＭまたはＰであり、Ｘ５は、Ｆ、Ｄ、Ｓ、Ｔ、Ｅ、Ｗ、Ｍ、Ｙ、Ｌ、Ｑ、Ｋ、Ｇ、ＡまたはＩであり、Ｘ６は、Ｓ、Ｅ、ＧまたはＲであり、Ｘ７は、Ｎ、Ｅ、Ｑ、Ｇ、ＨまたはＭであり、Ｘ８は、Ｌ、Ｈ、ＳまたはＹであり、およびＸ９は、ＹまたはＷである（配列番号２７）；
（ｄ）ＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列Ｒ−Ａ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−Ｖ−Ｘ１−Ｙ−Ｘ２−Ｇ−Ｘ３−Ｎ−Ｙ−Ｌ−Ｘ４を含有し、式中、Ｘ１は、Ｓ、ＤまたはＥであり、Ｘ２は、Ｄ、ＥまたはＱであり、Ｘ３は、ＤまたはＥであり、およびＸ４は、ＮまたはＡである（配列番号２８）；
（ｅ）ＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列Ｘ１−Ａ−Ｓ−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｔを含有し、式中、Ｘ１は、ＡまたはＤであり、Ｘ２は、ＤまたはＮであり、Ｘ３は、ＬまたはＲであり、およびＸ４は、ＥまたはＡである（配列番号２９）；および
（ｆ）ＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列Ｘ１−Ｘ２−Ｓ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｌ−Ｘ６−Ｔを含有し、式中、Ｘ１は、Ｑ、ＨまたはＮであり、Ｘ２は、ＬまたはＱであり、Ｘ３は、ＮまたはＳであり、Ｘ４は、Ｅ、ＱまたはＮであり、Ｘ５は、ＤまたはＷであり、およびＸ６は、ＬまたはＳである（配列番号３０）。
【００２０】
一部の態様において、本発明は、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分を提供するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
（ａ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＹＹＭＩ（配列番号３１）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＱＧＥＮＹＬＡ（配列番号３４）のＬＣＤＲ１、ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号３５）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＱＤＬＬＴ（配列番号３６）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｂ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＹＹＭＩ（配列番号３１）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｃ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＹＹＭＩ（配列番号３１）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＡ（配列番号４０）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＱＤＬＬＴ（配列番号３６）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｄ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＹＭＩ（配列番号４１）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＴＴＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＡ（配列番号４０）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＬＡＴ（配列番号４３）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｅ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＹＭＩ（配列番号４１）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＦＡＱＫＦＱＧ（配列番号４４）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｆ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＹＭＩ（配列番号４１）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｇ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＹＹＭＩ（配列番号３１）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＥＹＱＧＤＮＹＬＮ（配列番号４５）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｈ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＹＩＩ（配列番号４６）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＴＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４７）のＨＣＤＲ２、およびＥＰＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号４８）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＥＹＥＧＤＮＹＬＮ（配列番号４９）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＱＤＬＬＴ（配列番号３６）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｉ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＮＹＭＩ（配列番号５０）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＴＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号５１）のＨＣＤＲ２、およびＥＰＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号４８）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＥＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号５２）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＱＤＬＬＴ（配列番号３６）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｊ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＹＹＭＩ（配列番号３１）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＴＴＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＥＹＱＧＥＮＹＬＮ（配列番号５３）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＱＤＬＬＴ（配列番号３６）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｋ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＮＹＩＩ（配列番号５４）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号５５）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＥＹＱＧＥＮＹＬＮ（配列番号５３）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＳＥＤＬＬＴ（配列番号５６）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｌ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＮＹＭＩ（配列番号５０）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｍ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＡＹＭＩ（配列番号５７）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｎ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＳＹＭＩ（配列番号５８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｏ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＨＹＭＩ（配列番号５９）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｐ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＮＹＭＩ（配列番号５０）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＤＲＡＴ（配列番号６０）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｑ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＡＹＭＩ（配列番号５７）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＤＲＡＴ（配列番号６０）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｒ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＳＹＭＩ（配列番号５８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＤＲＡＴ（配列番号６０）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、または
（ｓ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＨＹＭＩ（配列番号５９）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＤＲＡＴ（配列番号６０）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有する。
【００２１】
本明細書において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分がさらに提供され、この場合において当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７または配列番号８を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１または配列番号１２を含有する。
【００２２】
さらに本明細書において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分が提供され、この場合において当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
（ａ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号９を含有し、
（ｂ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１０を含有し、
（ｃ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１１を含有し、
（ｄ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２を含有し、
（ｅ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号２を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号９を含有し、
（ｆ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号２を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１０を含有し、
（ｇ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号２を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１１を含有し、
（ｈ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号２を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２を含有し、
（ｉ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号９を含有し、
（ｊ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１０を含有し、
（ｋ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１１を含有し、
（ｌ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２を含有し、
（ｍ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号４を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号９を含有し、
（ｎ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号４を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１０を含有し、
（ｏ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号４を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１１を含有し、
（ｐ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号４を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２を含有し、
（ｑ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号５を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号９を含有し、
（ｒ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号５を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１０を含有し、
（ｓ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号５を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１１を含有し、
（ｔ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号５を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２を含有し、
（ｕ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号６を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号９を含有し、
（ｖ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号６を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１０を含有し、
（ｗ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号６を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１１を含有し、
（ｘ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号６を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２を含有し、
（ｙ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号７を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号９を含有し、
（ｚ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号７を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１０を含有し、
（ａａ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号７を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１１を含有し、
（ｂｂ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号７を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２を含有し、
（ｃｃ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号８を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号９を含有し、
（ｄｄ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号８を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１０を含有し、
（ｅｅ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号８を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１１を含有し、または
（ｆｆ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号８を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２を含有する。
【００２３】
さらに本発明により、治療剤に連結された、融合された、または結合された、本明細書に規定される抗体分子またはその抗原結合部分を含有する免疫結合体が提供される。
【００２４】
別の態様において、本発明は、本明細書に規定される抗体分子またはその抗原結合部分をコードする核酸分子を提供する。
【００２５】
さらに、本発明の核酸分子を含有するベクターが提供される。
【００２６】
また、本明細書に規定される本発明の核酸分子またはベクターを含有する宿主細胞も提供される。
【００２７】
さらなる態様において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体および／またはその抗原結合部分を作製する方法も提供され、当該方法は、当該抗体および／もしくはその抗原結合部分の発現ならびに／または産生が生じる条件下で、本発明の宿主細胞を培養する工程、および当該宿主細胞または培養物から、当該抗体および／またはその抗原結合部分を単離する工程、を含む。
【００２８】
本発明の別の態様において、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分、または本明細書に規定される本発明の核酸分子、または本明細書に規定される本発明のベクターを含有する医薬組成物が提供される。
【００２９】
さらに、対象において免疫反応を強化する方法が提供され、当該方法は、本明細書に規定される本発明の抗体分子またはその抗原結合部分の有効量、または本明細書に規定される本発明の免疫結合体の有効量、または本明細書に規定される本発明の核酸分子の有効量、または本明細書に規定される本発明のベクターの有効量、または本明細書に規定される本発明の医薬組成物の有効量を投与する工程を含む。
【００３０】
さらなる態様において、対象において癌を治療または予防する方法が提供され、当該方法は、本明細書に規定される本発明の抗体分子またはその抗原結合部分の有効量、または本明細書に規定される本発明の免疫結合体の有効量、または本明細書に規定される本発明の核酸分子の有効量、または本明細書に規定される本発明のベクターの有効量、または本明細書に規定される本発明の医薬組成物の有効量を投与する工程を含む。
【００３１】
さらに、医薬品としての使用のための、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分、または本明細書に規定される免疫結合体、または本明細書に規定される核酸分子、または本明細書に規定されるベクター、または本明細書に規定される医薬組成物が提供される。また、癌の治療における使用のための、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分、または本明細書に規定される免疫結合体、または本明細書に規定される核酸分子、または本明細書に規定されるベクター、または本明細書に規定される医薬組成物が提供される。
【００３２】
別の態様において、本発明は、例えば抗癌剤などの第二の治療剤と組み合わされる併用において、別個に使用する、連続して使用する、または同時に使用するための、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分、または免疫結合体、または核酸分子、またはベクター、または治療方法を提供する。
【００３３】
さらなる態様において、癌の治療のための医薬品の製造における、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分の使用、または本明細書に規定される本発明の免疫結合体の使用、または本明細書に規定される本発明の核酸分子の使用、または本明細書に規定される本発明のベクターの使用、または本明細書に規定される本発明の医薬組成物の使用が提供される。
【００３４】
本発明はさらに、対象において感染性疾患を治療または予防する方法を提供するものであり、当該方法は、本明細書に規定される抗体分子またはその抗原結合部分の有効量、または本明細書に規定される免疫結合体の有効量、または本明細書に規定される核酸分子の有効量、または本明細書に規定されるベクターの有効量、または本明細書に規定される医薬組成物の有効量を投与する工程を含む。
【００３５】
感染性疾患は、すべての態様において、ウイルス性、細菌性、真菌性、または寄生虫性からなる群から選択されてもよい。
【００３６】
また、感染性疾患の治療における使用のための、本明細書に規定される抗体分子もしくはその抗原結合部分、または本明細書に規定される免疫結合体、または本明細書に規定される核酸分子、または本明細書に規定されるベクター、または本明細書に規定される医薬組成物が提供される。
【００３７】
さらに、感染性疾患の治療のための医薬品の製造における、本明細書に規定される抗体分子またはその抗原結合部分の使用、または本明細書に規定される免疫結合体の使用、または本明細書に規定される核酸分子の使用、または本明細書に規定されるベクターの使用、または本明細書に規定される医薬組成物の使用が提供される。
【００３８】
本発明はさらに、対象において感染性疾患を治療または予防する方法を提供するものであり、当該方法は、本明細書に規定される抗体分子またはその抗原結合部分の有効量、または本明細書に規定される免疫結合体の有効量、または本明細書に規定される核酸分子の有効量、または本明細書に規定されるベクターの有効量、または本明細書に規定される医薬組成物の有効量を投与する工程を含む。
【００３９】
本発明はさらに、ヒトＣＳＦ１Ｒに特異的に結合し、および任意でカニクイザルおよびサルのＣＳＦ１Ｒにも特異的に結合する抗体分子、またはその抗原結合部分を作製する方法を提供するものであり、当該方法は、
（１）非ヒト源由来の抗ＣＳＦ１Ｒ  ＣＤＲをヒトｖ−ドメインフレームワーク内に移植し、ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子またはその抗原結合部分を作製する工程、
（２）ＣＤＲ中に１つまたは複数の変異を含有する当該ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子またはその抗原結合部分のクローンのライブラリーを作製する工程、
（３）ヒトＣＳＦ１Ｒへの結合、および任意でカニクイザルおよびサルのＣＳＦ１Ｒへの結合についても当該ライブラリーをスクリーニングする工程、
（４）ヒトＣＳＦ１Ｒに特異的に結合する、ならびに任意でカニクイザルおよびアカゲザルのＣＳＦ１Ｒにも特異的に結合するスクリーニング工程（３）からのクローンを選択する工程、および
（５）ヒトＣＳＦ１Ｒに特異的に結合し、ならびに任意でカニクイザルおよびアカゲザルのＣＳＦ１Ｒにも特異的に結合する抗体分子、またはその抗原結合部分を、工程（４）から選択されたクローンから作製する工程、を含む。
【００４０】
当該方法は、工程（４）で選択されたクローンに基づき、例えば工程（４）で選択されたクローンのＣＤＲ中の特定の位置でのさらなる探索的な突然変異誘導に基づき、追加のクローンを作製して、ヒト化を強化する工程、および／またはヒトＴ細胞エピトープ含量を最小化する工程、および／または工程（５）で作製された抗体分子もしくはその抗原結合部分の製造特性を改善する工程をさらに含んでもよい。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】図１。ヒトおよびカニクイザルのＣＳＦ１Ｒ−Ｆｃタンパク質に対する、ライブラリー由来抗ＣＳＦ１Ｒ  Ｆａｂの直接結合ＥＬＩＳＡ。複数のファージ選択ブランチからクローンが誘導された。選択ブランチにおいて、ファージ群は、ビオチニル化されたヒトまたはカニクイザルのＣＳＦ１Ｒタンパク質に対し各ラウンドで選択された。標準選択は、Ｒ２〜Ｒ４と番号付けされた。「ハンマー−ハグ」ラウンドは、Ｒ２−ＨおよびＲ３−Ｈと番号付けされた。各選択ラウンドの後、ライブラリー由来クローン（黒色の丸）は、ヒト（ｈ）およびカニクイザル（ｃ）の両方のＣＳＦ１Ｒに対し、ペリプラズムで発現されたＦａｂタンパク質としてスクリーニングされた。各ラウンドの平均±ＳＤ値は、黒色の棒で表されている。
【図２Ａ】図２Ａ〜図２Ｂ。生殖細胞系列に対する変異に関する、ＣＤＲ残基の寛容の分析。ＥＬＩＳＡ陽性の５９８個の固有ｓｃＦｖクローン群のＣＤＲにおける、マウスアミノ酸保持頻度の図をそれぞれＶＬ（配列番号２２、２３および２４）（図２Ａ）ドメインおよびＶＨ（配列番号１６、１７および１８）（図２Ｂ）ドメインに対して示す。ＨＣＤＲ３以外では、ヒト／マウス残基の突然変異誘導の標的とされた残基のみプロットされている。Ｘ軸上のカッコ内に記載されるＣＤＲ残基は、移植に使用されたヒト生殖細胞系列（ＩＧＫＶ３−１１およびＩＧＨＶ１−６９）中に存在する残基と同一である。両方の図において、７５％での灰色の破線は、ヒト生殖細胞系列によるマウス残基の置換の寛容性に対するカットオフを表している。
【図２Ｂ】同上。
【図３Ａ】図３Ａ〜図３Ｂ。ヒトおよびカニクイザルのＣＳＦ１Ｒ−Ｆｃタンパク質に結合する、ライブラリー由来クローンおよびデザインＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）クローンの直接的力価測定ＥＬＩＳＡ。ｍｕ０３０１、ｈｕ０３０１、ライブラリー由来クローン、およびヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）形式でのデザインクローンを、ヒト（図３Ａ）およびカニクイザル（図３Ｂ）のＣＳＦ１Ｒ−Ｆｃタンパク質に対する直接的結合ＥＬＩＳＡにおいて力価測定した（単位はｎＭ）。
【図３Ｂ】同上。
【図４】図４。ＡｌｐｈａｓｃｒｅｅｎにおけるＩｇＧ４タンパク質のエピトープ競合解析。抗ＣＳＦ１Ｒ  ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）クローンに、Ａｌｐｈａｓｃｒｅｅｎ技術を使用したエピトープ競合解析を行った。このアッセイにおいて、ライブラリー由来ＩｇＧ（Ａ）およびデザインＩｇＧ（Ｂ）は、ｍｕ０３０１  ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）に対して、溶液中のヒトＣＳＦ１Ｒタンパク質への結合を競合することにより、相対的アフィニティと、親ｍｕ０３０１エピトープの保持に関して解析された。解析されたすべてのクローンは、ＣＳＦ１Ｒに対するｍｕ０３０１の結合に関し、強力で濃度依存性の中和を示した。
【図５Ａ】図５Ａ〜図５Ｂ。ヒトおよびアカゲザルのＣＳＦ１Ｒ＋  ＨＥＫ−２９３細胞に対するフローサイトメトリー結合。ｍｕ０３０１、ｈｕ０３０１、リードライブラリー由来ＩｇＧ、およびデザインＩｇＧを、ヒト（図５Ａ）およびアカゲザル（図５Ｂ）のＣＳＦ１Ｒを発現するＨＥＫ−２９３細胞に対する特異的結合に関して検証した。すべてのクローンに関し、ヒトＣＳＦ１Ｒに対し濃度依存性の結合が観察され、結合曲線は、ｈｕ０３０１クローンと重複または改善していた。
【図５Ｂ】同上。
【図６Ａ】図６Ａ〜図６Ｂ。ヒトおよびカニクイザルのＣＳＦ１Ｒ−Ｆｃタンパク質に結合する、デザイン脱免疫化（ｄｅｉｍｍｕｎｉｚｅｄ）ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）クローンの直接的力価測定ＥＬＩＳＡ。ｍｕ０３０１、ｈｕ０３０１、アイソタイプクローン、およびヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）形式でのデザインクローンを、ヒト（図６Ａ）およびカニクイザル（図６Ｂ）のＣＳＦ１Ｒ−Ｆｃタンパク質に対する直接的結合ＥＬＩＳＡにおいて力価測定した（単位はｎＭ）。
【図６Ｂ】同上。
【図７】図７。ヒトＣＳＦ１Ｒ＋  ＨＥＫ−２９３細胞に対するフローサイトメトリー結合。ｍｕ０３０１、ｈｕ０３０１、アイソタイプクローン、およびヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）形式のデザインクローンを、ヒトＣＳＦ１Ｒを発現するＨＥＫ−２９３細胞に対する特異的結合に関して検証した。すべてのクローンに関し、ヒトＣＳＦ１Ｒに対し濃度依存性の結合が観察され、結合曲線は、ｈｕ０３０１クローンと重複していた。
【図８】図８。開発リスクＥＬＩＳＡ。ｍｕ０３０１、ｈｕ０３０１、アイソタイプクローン、およびヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）形式のデザインクローンを、陰性荷電の生体分子であるインスリンおよび二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）に対する非特異的結合に関して検証した。すべてのリードクローンは、１．０の結合スコアを示し、陰性対照ＩｇＧ１のウステキヌマブ（Ｕｓｔｅｋｉｎｕｍａｂ）およびベバシズマブ（Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）アナログのいずれかよりも有意に低かった。ボコシズマブ（Ｂｏｃｏｃｉｚｕｍａｂ）およびブリアキヌマブ（Ｂｒｉａｋｉｎｕｍａｂ）のアナログに観察されるような、ヒトインスリンまたはｄｓＤＮＡに対する強力なオフターゲット結合は、治療用抗体の貧弱な薬物動態に関する高リスク指標であることが示されている。
【図９Ａ】図９Ａ〜図９Ｃ。初代ヒト単球の増殖に対する抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の効果。ｈｕ０３０１、アイソタイプクローン、およびヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）形式のリードクローンを、３名の別個のヒトドナーに由来する単球群を使用した、ヒト単球増殖阻害の有効性に関して検証した（ＭＣＳＦ刺激下）。検証されたすべてのクローンが、３つすべてのドナーに対し完全に重複する曲線を有することが判明した。このことから、高度に類似した生物学的有効性が示唆される。
【図９Ｂ】同上。
【図１０】図１０。ＩｇＧの示差走査熱量測定法（ＤＳＣ：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  Ｓｃａｎｎｉｎｇ  Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｒｙ）。ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）型の以下の抗体に関するＤＳＣアッセイデータ：（ｍＡｂ−１）ｈｕ０３０１、（ｍＡｂ−２）ＭＨ５、（ｍＡｂ−３）３０Ｅ０６。（ｍＡｂ−４）ＭＨ１２、および（ｍＡｂ−５）ＭＨ１６。
【図１１Ａ】図１１Ａ〜図１１Ｅ。強制酸化の前および後のＩｇＧからのトリプシン処理ペプチドの逆相クロマトグラフィー解析。ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）型の抗体に対する逆相クロマトグラム：ｈｕ０３０１（図１１Ａ）は、酸化後に８つの大きなペプチド変化を呈した。ＭＨ５（図１１Ｂ）は、３つ、３０Ｅ０６（図１１Ｃ）は４つ、ＭＨ１２（図１１Ｄ）は４つ、およびＭＨ１６（図１１Ｅ）は、５つの変化を呈した。各パネルクロマトグラムにおいて、酸化前（−Ｈ２Ｏ２、上）および酸化後（＋Ｈ２Ｏ２、下）を示す。各パネルの矢印は、改変（酸化後に獲得された、減少した、または失われた）ペプチドを表すピークを示している。
【図１１Ｂ】同上。
【図１１Ｃ】同上。
【図１１Ｄ】同上。
【図１１Ｅ】同上。
【図１２】図１２。ＩｇＧのＨＩＣクロマトグラム。臨床モノクローナル抗体（アダリムマブ（Ａｄａｌｉｍｕｍａｂ）、ブレンツキシマブ（Ｂｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ）、セツキシマブ（Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）、ゴリムマブ（Ｇｏｌｉｍｕｍａｂ）およびトラスツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ））、ならびにＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）型の抗体：（ｍＡｂ−１）ｈｕ０３０１、（ｍＡｂ−２）ＭＨ５、（ｍＡｂ−３）３０Ｅ０６、（ｍＡｂ−４）ＭＨ１２、および（ｍＡｂ−５）ＭＨ１６のパネルを、ＨＩＣにより解析した。すべての抗体が、３．５〜１０．５分の間に溶出された（左から右）。
【発明を実施するための形態】
【００４２】
本発明の第一の態様によると、ヒトＣＳＦ１Ｒ、および任意でカニクイザルＣＳＦ１Ｒにも特異的に結合する抗体分子、またはその抗原結合部分が提供され、当該抗体分子または抗原結合部分は、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＨＣＤＲ１：Ｇ−Ｙ／Ｇ−Ｔ−Ｆ−Ｔ／Ｓ−Ｄ／Ｓ−Ｎ／Ａ／Ｓ／Ｈ／Ｙ−Ｙ／Ａ−Ｍ／Ｉ−Ｉ／Ｓ（配列番号１３）、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＨＣＤＲ２：ＭまたはＭの保存的置換−Ｇ−Ｄ／Ｇ−Ｉ−Ｎ／Ｉ−Ｐ−Ｙ／Ｉ−Ｎ／Ｆ−Ｇ−Ｇ／Ｔ−Ｔ／Ａ−Ｔ／Ｎ−Ｆ／Ｙ−Ｎ／Ａ−Ｑ−Ｋ−Ｆ−Ｑ／Ｋ−Ｇ（配列番号１４）、および
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＨＣＤＲ３：ＥまたはＥの保存的置換（例えば、Ｄ）−Ｄ／Ｇ／Ｈ／Ｓ／Ｔ／Ｐ／Ｖ／Ｎ／Ｉ／Ｙ−Ｐ／Ｔ／Ｎ／Ｅ／Ｌ／Ａ／Ｄ／Ｓ−Ｙ／Ｋ／Ｒ／Ｍ／Ｐ−Ｆ／Ｄ／Ｓ／Ｔ／Ｅ／Ｗ／Ｍ／Ｙ／Ｌ／Ｑ／Ｋ／Ｇ／Ａ／Ｉ−Ｓ／Ｅ／Ｇ／Ｒ−Ｎ／Ｅ／Ｑ／Ｇ／Ｈ／Ｍ−Ｌ／Ｈ／Ｓ／Ｙ−Ｙ／Ｗ−Ｖ−Ｍ−Ｄ−Ｙ（配列番号１５）を有する重鎖可変領域を含有する。
【００４３】
一部の態様では、本明細書に提供される抗ＣＳＦ１Ｒ抗体または抗原結合部分は、配列番号３６５もしくは３６６を含有する、または配列番号３６５もしくは３６６からなるＣＳＦ１Ｒタンパク質に特異的に結合する。一部の態様では、本明細書に提供される抗ＣＳＦ１Ｒ抗体または抗原結合部分は、配列番号３６５または３６６に対して、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を有するＣＳＦ１Ｒタンパク質に特異的に結合する。
【００４４】
本発明の態様において、抗体分子もしくは抗原結合部分のＨＣＤＲ１は、配列ＧＹＴＦＴＤＮＹＭＩ（配列番号１６、ＷＯ２０１１／１４０２４９Ａ２に開示される０３０１マウス／ヒト化抗体のＨＣＤＲ１）、配列ＤＩＮＰＹＮＧＧＴＴＦＮＱＫＦＫＧ（配列番号１７、ＷＯ２０１１／１４０２４９Ａ２に開示される０３０１マウス／ヒト化抗体のＨＣＤＲ２）を除外してもよく、および／または抗体分子もしくは抗原結合部分ＨＣＤＲ３は、配列ＥＳＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号１８、ＷＯ２０１１／１４０２４９Ａ２に開示される０３０１マウス／ヒト化抗体のＨＣＤＲ３）を除外してもよい。
【００４５】
抗体分子または抗原結合部分は、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＬＣＤＲ１：Ｒ−Ａ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−Ｖ−Ｓ／Ｄ／Ｅ−Ｙ−Ｄ／Ｅ／Ｑ−Ｇ−Ｄ／Ｅ−Ｎ−Ｙ−Ｌ−Ｎ／Ａ（配列番号１９）、
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＬＣＤＲ２：Ａ／Ｄ−Ａ−Ｓ−Ｎ／Ｄ−Ｌ／Ｒ−Ｅ／Ａ−Ｔ（配列番号２０）、および
以下の順序で配列中にアミノ酸を有するＬＣＤＲ３：Ｑ／Ｈ／Ｎ−Ｌ／Ｑ−Ｓ−Ｎ／Ｓ−Ｅ／Ｑ／Ｎ−Ｄ／Ｗ−Ｌ−Ｌ／Ｓ−Ｔ（配列番号２１）を有する軽鎖可変領域をさらに含有してもよい。
【００４６】
本発明の態様において、抗体分子もしくは抗原結合部分のＬＣＤＲ１は、配列ＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＮＹＭＮ（配列番号２２、ＷＯ２０１１／１４０２４９Ａ２に開示される０３０１マウス／ヒト化抗体のＬＣＤＲ１）を除外してもよく、および／または、抗体分子もしくは抗原結合部分のＬＣＤＲ２は、配列ＡＡＳＮＬＥＳ（配列番号２３、ＷＯ２０１１／１４０２４９Ａ２に開示される０３０１マウス／ヒト化抗体のＬＣＤＲ２）を除外してもよく、および／または抗体分子もしくは抗原結合部分のＬＣＤＲ３は、配列ＨＬＳＮＥＤＬＳＴ（配列番号２４、ＷＯ２０１１／１４０２４９Ａ２に開示される０３０１マウス／ヒト化抗体のＬＣＤＲ３）を除外してもよい。
【００４７】
一部の態様において、本明細書は、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含有する重鎖可変（ＶＨ）領域、ならびにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含有する軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
（ａ）ＨＣＤＲ１は、アミノ酸配列Ｇ−Ｘ１−Ｔ−Ｆ−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７を含有し、式中、Ｘ１は、ＹまたはＧであり、Ｘ２は、ＴまたはＳであり、Ｘ３は、ＤまたはＳであり、Ｘ４は、Ｎ、Ａ、Ｓ、ＨまたはＹであり、Ｘ５は、ＹまたはＡであり、Ｘ６は、ＭまたはＩであり、およびＸ７は、ＩまたはＳである（配列番号２５）；
（ｂ）ＨＣＤＲ２は、アミノ酸配列Ｘ１−Ｇ−Ｘ２−Ｉ−Ｘ３−Ｐ−Ｘ４−Ｘ５−Ｇ−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｘ１０−Ｑ−Ｋ−Ｆ−Ｘ１１−Ｇを含有し、式中、Ｘ１は、ＭまたはＭの保存的置換であり、Ｘ２は、ＤまたはＧであり、Ｘ３は、ＮまたはＩであり、Ｘ４は、ＹまたはＩであり、Ｘ５は、ＮまたはＦであり、Ｘ６は、ＧまたはＴであり、Ｘ７は、ＴまたはＡであり、Ｘ８は、ＴまたはＮであり、Ｘ９は、ＦまたはＹであり、Ｘ１０は、ＮまたはＡであり、およびＸ１１は、ＱまたはＫである（配列番号２６）；
（ｃ）ＨＣＤＲ３は、アミノ酸配列Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−Ｘ８−Ｘ９−Ｖ−Ｍ−Ｄ−Ｙを含有し、式中、Ｘ１は、ＥまたはＥの保存的置換（例えば、Ｄ）であり、Ｘ２は、Ｄ、Ｇ、Ｈ、Ｓ、Ｔ、Ｐ、Ｖ、Ｎ、ＩまたはＹであり、Ｘ３は、Ｐ、Ｔ、Ｎ、Ｅ、Ｌ、Ａ、ＤまたはＳであり、Ｘ４は、Ｙ、Ｋ、Ｒ、ＭまたはＰであり、Ｘ５は、Ｆ、Ｄ、Ｓ、Ｔ、Ｅ、Ｗ、Ｍ、Ｙ、Ｌ、Ｑ、Ｋ、Ｇ、ＡまたはＩであり、Ｘ６は、Ｓ、Ｅ、ＧまたはＲであり、Ｘ７は、Ｎ、Ｅ、Ｑ、Ｇ、ＨまたはＭであり、Ｘ８は、Ｌ、Ｈ、ＳまたはＹであり、およびＸ９は、ＹまたはＷである（配列番号２７）；
（ｄ）ＬＣＤＲ１は、アミノ酸配列Ｒ−Ａ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−Ｖ−Ｘ１−Ｙ−Ｘ２−Ｇ−Ｘ３−Ｎ−Ｙ−Ｌ−Ｘ４を含有し、式中、Ｘ１は、Ｓ、ＤまたはＥであり、Ｘ２は、Ｄ、ＥまたはＱであり、Ｘ３は、ＤまたはＥであり、およびＸ４は、ＮまたはＡである（配列番号２８）；
（ｅ）ＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列Ｘ１−Ａ−Ｓ−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｔを含有し、式中、Ｘ１は、ＡまたはＤであり、Ｘ２は、ＤまたはＮであり、Ｘ３は、ＬまたはＲであり、およびＸ４は、ＥまたはＡである（配列番号２９）；および
（ｆ）ＬＣＤＲ３は、アミノ酸配列Ｘ１−Ｘ２−Ｓ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｌ−Ｘ６−Ｔを含有し、式中、Ｘ１は、Ｑ、ＨまたはＮであり、Ｘ２は、ＬまたはＱであり、Ｘ３は、ＮまたはＳであり、Ｘ４は、Ｅ、ＱまたはＮであり、Ｘ５は、ＤまたはＷであり、およびＸ６は、ＬまたはＳである（配列番号３０）。
【００４８】
一部の態様において、本明細書は、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、この場合において当該抗体は、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって、ＦＲ１−ＨＣＤＲ１−ＦＲ２−ＨＣＤＲ２−ＦＲ３−ＨＣＤＲ３−ＦＲ４を含有する重鎖可変（ＶＨ）領域、およびアミノ末端からカルボキシ末端に向かって、ＦＲ１−ＬＣＤＲ１−ＦＲ２−ＬＣＤＲ２−ＦＲ３−ＬＣＤＲ３−ＦＲ４を含有する軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、ＨＣＤＲ１は、配列番号２５であり、ＨＣＤＲ２は、配列番号２６であり、ＨＣＤＲ３は、配列番号２７であり、ＬＣＤＲ１は、配列番号２８であり、ＬＣＤＲ２は、配列番号２９であり、そしてＬＣＤＲ３は、配列番号３０であり、この場合において当該重鎖のＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列は、配列番号１０５（表２を参照のこと）の重鎖のＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列であり、この場合において当該軽鎖のＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列は、配列番号１０８（表２を参照のこと）の軽鎖のＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列である。
【００４９】
本明細書に詳述されるように、本発明者らは、ＷＯ２０１１／１４０２４９Ａ２に開示されるマウス抗ＣＳＦ１Ｒ抗体０３０１から誘導されたＣＤＲ配列を使用し、多数の最適化された抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子を作製することに初めて成功した。本発明の実施形態において、これら抗体分子は、ヒトＣＳＦ１Ｒ、ならびにカニクイザルおよびアカゲザルのＣＳＦ１Ｒに対し、高度に類似した結合特異性とアフィニティを有するよう選択された（最大限に正確な霊長類の毒性試験およびｐｋ試験を容易にするため）。本明細書に記載される最適化抗体分子にさらなる改善を行うことによって、ヒトおよびカニクイザルのＣＳＦ１Ｒオルソログへの結合の改善、ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達の中和における有効性の改善、可変ドメインの安定性の改善、高い発現収率、および／または免疫原性の可能性の低下が提供される。
【００５０】
一部の態様において、本発明の最適化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子は、対応するマウスＣＤＲまたはその他（例えばフレームワーク）のアミノ酸の位置で、必ずしも最大数のヒト生殖細胞系列の置換を有するとは限らない。以下の実施例の項に詳述されるように、本発明者らは、「最大限にヒト化された」抗体分子は、抗ＣＳＦ１Ｒ結合特性および／または他の望ましい性質に関して、必ずしも「最大限に最適化」されているとは限らないことを見出した。
【００５１】
本発明は、本明細書に記載される抗体分子またはその抗原結合部分のアミノ酸配列に対する改変を包含する。例えば本発明は、その性質に大きな影響を与えない、機能的に同等の可変領域およびＣＤＲを含有する抗体分子およびその対応する抗原結合部分、ならびに活性および／もしくはアフィニティが強化された、または低下したバリアントを包含する。例えばアミノ酸配列は、ＣＳＦ１Ｒに対し所望の結合アフィニティを有する抗体が得られるように変異されてもよい。１残基から数百以上の残基を含有するポリペプチドの長さの範囲のアミノ末端融合および／またはカルボキシル末端融合を含み、ならびに一アミノ酸残基または複数のアミノ酸残基の配列間挿入を含む挿入が予期される。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体分子、またはエピトープタグに融合された抗体分子が挙げられる。抗体分子のその他の挿入バリアントとしては、酵素またはポリペプチドの、抗体Ｎ末端または抗体Ｃ末端への融合が挙げられ、それにより血液循環中の抗体の半減期が延長される。
【００５２】
本発明の抗体分子または抗原結合部分は、グリコシル化ポリペプチドおよび非グリコシル化ポリペプチド、ならびに他の翻訳後修飾を有するポリペプチド、例えば異なる糖類でのグリコシル化、アセチル化およびリン酸化を有するポリペプチドを含んでもよい。例えば１つまたは複数のアミノ酸残基を付加、除去または置換させ、グリコシル化部位を形成または除去させることにより、本発明の抗体分子または抗原結合部分を変異させて、当該翻訳後修飾を変化させてもよい。
【００５３】
本発明の抗体分子または抗原結合部分は、例えば抗体中の潜在的なタンパク質分解部位を除去するアミノ酸置換により改変されてもよい。
【００５４】
抗体分子またはその抗原結合部分において、ＨＣＤＲ１は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｇ−Ｙ／Ｇ−Ｔ−Ｆ−Ｔ／Ｓ−Ｄ／Ｓ−Ｎ／Ａ／Ｓ／Ｈ／Ｙ−Ｙ／Ａ−Ｍ／Ｉ−Ｉ（配列番号６１）；ＨＣＤＲ２は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｍ−Ｇ−Ｄ−Ｉ−Ｎ／Ｉ−Ｐ−Ｙ−Ｎ／Ｆ−Ｇ−Ｇ／Ｔ−Ｔ／Ａ−Ｔ／Ｎ−Ｆ／Ｙ−Ｎ／Ａ−Ｑ−Ｋ−Ｆ−Ｑ−Ｇ（配列番号６２）；そしてＨＣＤＲ３は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｅ／Ｄ−Ｄ／Ｇ／Ｈ／Ｓ／Ｔ／Ｐ／Ｖ／Ｎ／Ｉ／Ｙ−Ｐ／Ｔ／Ｎ／Ｅ／Ｌ／Ａ／Ｄ／Ｓ−Ｙ／Ｋ／Ｒ／Ｍ／Ｐ−Ｆ／Ｄ／Ｓ／Ｔ／Ｅ／Ｗ／Ｍ／Ｙ／Ｌ／Ｑ／Ｋ／Ｇ／Ａ／Ｉ−Ｓ／Ｅ／Ｇ／Ｒ−Ｎ／Ｅ／Ｑ／Ｇ／Ｈ／Ｍ−Ｌ／Ｈ／Ｓ／Ｙ−Ｙ／Ｗ−Ｖ−Ｍ−Ｄ−Ｙ（配列番号６３）。
【００５５】
例えば、ＨＣＤＲ１は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｇ−Ｙ−Ｔ−Ｆ−Ｔ／Ｓ−Ｓ−Ｎ／Ａ／Ｓ／Ｈ／Ｙ−Ｙ−Ｍ／Ｉ−Ｉ／Ｓ（配列番号６４）；ＨＣＤＲ２は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｍ−Ｇ−Ｄ−Ｉ−Ｎ−Ｐ−Ｙ−Ｎ−Ｇ−Ｇ／Ｔ−Ｔ／Ａ−Ｔ／Ｎ−Ｙ−Ｎ／Ａ−Ｑ−Ｋ−Ｆ−Ｑ−Ｇ（配列番号６５）；そしてＨＣＤＲ３は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｅ−Ｇ／Ｐ／Ｄ−Ｐ−Ｙ−Ｆ−Ｓ−Ｎ−Ｌ−Ｙ−Ｖ−Ｍ−Ｄ−Ｙ（配列番号６６）。
【００５６】
抗体分子またはその抗原結合部分において、ＬＣＤＲ１は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｒ−Ａ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−Ｖ−Ｓ／Ｄ／Ｅ−Ｙ−Ｄ／Ｅ／Ｑ−Ｇ−Ｄ／Ｅ−Ｎ−Ｙ−Ｌ−Ｎ／Ａ（配列番号１９）；ＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列Ａ／Ｄ−Ａ−Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｌ／Ｒ−Ｅ／Ａ−Ｔ（配列番号６７）を有してもよい；そしてＬＣＤＲ３は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｑ／Ｈ／Ｎ−Ｌ／Ｑ−Ｓ−Ｎ／Ｓ−Ｅ／Ｑ／Ｎ−Ｄ−Ｌ−Ｌ−Ｔ（配列番号６８）。
【００５７】
例えば、ＬＣＤＲ１は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｒ−Ａ−Ｓ−Ｑ−Ｓ−Ｖ−Ｓ／Ｅ−Ｙ−Ｅ／Ｑ−Ｇ−Ｄ／Ｅ−Ｎ−Ｙ−Ｌ−Ｎ／Ａ（配列番号６９）；ＬＣＤＲ２は、アミノ酸配列Ａ／Ｄ−Ａ−Ｓ−Ｄ／Ｎ−Ｌ／Ｒ−Ａ−Ｔ（配列番号７０）を有してもよい；そしてＬＣＤＲ３は、以下のアミノ酸配列を有してもよい：Ｑ−Ｌ−Ｓ−Ｎ−Ｅ／Ｑ−Ｄ−Ｌ−Ｌ−Ｔ（配列番号７１）。
【００５８】
本発明の特定の実施形態において、抗体分子または抗原結合部分は、以下を含有してもよい：
（Ａ）アミノ酸配列
ＧＹＴＦＳＳＹＹＭＩ（ＨＣＤＲ１；配列番号３１）、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号３２）、ＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号３３）、ＲＡＳＱＳＶＳＹＱＧＥＮＹＬＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号３４）、ＤＡＳＮＲＡＴ（ＬＣＤＲ２；配列番号３５）、およびＱＬＳＮＱＤＬＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号３６）［クローンＭＨ４］；または
（Ｂ）アミノ酸配列
ＧＹＴＦＳＳＹＹＭＩ（ＨＣＤＲ１；配列番号３１）、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号３２）、ＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号３３）、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（ＬＣＤＲ１；配列番号３７）、ＡＡＳＮＲＡＴ（ＬＣＤＲ２；配列番号３８）、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号３９）［クローンＭＨ５］；
（Ｃ）アミノ酸配列
ＧＹＴＦＳＳＹＹＭＩ（ＨＣＤＲ１；配列番号３１）、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号３２）、ＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号３３）、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号４０）、ＡＡＳＮＲＡＴ（ＬＣＤＲ２；配列番号３８）、およびＱＬＳＮＱＤＬＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号３６）［クローンＭＨ６］；
（Ｄ）アミノ酸配列
ＧＹＴＦＴＳＹＹＭＩ（ＨＣＤＲ１；配列番号４１）、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＴＴＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号４２）、ＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号３３）、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＡ（ＬＣＤＲ１；配列番号４０）、ＡＡＳＮＬＡＴ（ＬＣＤＲ２；配列番号４３）、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号３９）［クローン３０Ｅ６］；
（Ｅ）アミノ酸配列
ＧＹＴＦＴＳＹＹＭＩ（ＨＣＤＲ１；配列番号４１）、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＦＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号４４）、ＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号３３）、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（ＬＣＤＲ１；配列番号３７）、ＡＡＳＮＲＡＴ（ＬＣＤＲ２；配列番号３８）、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号３９）［クローン２９Ｄ１０］；
（Ｆ）アミノ酸配列
ＧＹＴＦＴＳＹＹＭＩ（ＨＣＤＲ１；配列番号４１）、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号３２）、ＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号３３）、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（ＬＣＤＲ１；配列番号３７）、ＡＡＳＮＲＡＴ（ＬＣＤＲ２；配列番号３８）、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号３９）［クローン２９Ｈ０９］；
（Ｇ）アミノ酸配列
ＧＹＴＦＳＳＹＹＭＩ（ＨＣＤＲ１；配列番号３１）、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号３２）、ＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号３３）、ＲＡＳＱＳＶＥＹＱＧＤＮＹＬＮ（ＬＣＤＲ１；配列番号４５）、ＡＡＳＮＲＡＴ（ＬＣＤＲ２；配列番号３８）、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号３９）［クローン２６Ｂ０７］；
（Ｈ）アミノ酸配列
ＧＹＴＦＴＳＹＹＩＩ（ＨＣＤＲ１；配列番号４６）、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＴＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号４７）、ＥＰＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号４８）、ＲＡＳＱＳＶＥＹＥＧＤＮＹＬＮ（ＬＣＤＲ１；配列番号４９）、ＡＡＳＮＲＡＴ（ＬＣＤＲ２；配列番号３８）、およびＱＬＳＮＱＤＬＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号３６）［クローン２９Ｂ０７］；
（Ｉ）アミノ酸配列
ＧＹＴＦＳＳＮＹＭＩ（ＨＣＤＲ１；配列番号５０）、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＴＹＮＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号５１）、ＥＰＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号４８）、ＲＡＳＱＳＶＥＹＥＧＥＮＹＬＮ（ＬＣＤＲ１；配列番号５２）、ＡＡＳＮＲＡＴ（ＬＣＤＲ２；配列番号３８）、およびＱＬＳＮＱＤＬＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号３６）［クローン２９Ａ０３］；
（Ｊ）アミノ酸配列
ＧＹＴＦＳＳＹＹＭＩ（ＨＣＤＲ１；配列番号３１）、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＴＴＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号４２）、ＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号３３）、ＲＡＳＱＳＶＥＹＱＧＥＮＹＬＮ（ＬＣＤＲ１；配列番号５３）、ＡＡＳＮＲＡＴ（ＬＣＤＲ２；配列番号３８）、およびＱＬＳＮＱＤＬＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号３６）［クローン３０Ｄ０２］；
（Ｋ）アミノ酸配列
ＧＹＴＦＴＳＮＹＩＩ（ＨＣＤＲ１；配列番号５４）、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号５５）、ＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号３３）、ＲＡＳＱＳＶＥＹＱＧＥＮＹＬＮ（ＬＣＤＲ１；配列番号５３）、ＡＡＳＮＲＡＴ（ＬＣＤＲ２；配列番号３８）、およびＱＬＳＳＥＤＬＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号５６）［クローン３０Ｇ０２］；
（Ｌ）アミノ酸配列
ＧＹＴＦＳＳＮＹＭＩ（ＨＣＤＲ１；配列番号５０）、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号３２）、ＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号３３）、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（ＬＣＤＲ１；配列番号３７）、ＡＡＳＮＲＡＴ（ＬＣＤＲ２；配列番号３８）、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号３９）［クローンＭＨ１０、ＭＨ１１、ＭＨ１３、ＭＨ２６、ＭＨ２７、ＭＨ２９］；
（Ｍ）アミノ酸配列
ＧＹＴＦＳＳＡＹＭＩ（ＨＣＤＲ１；配列番号５７）、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号３２）、ＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号３３）、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（ＬＣＤＲ１；配列番号３７）、ＡＡＳＮＲＡＴ（ＬＣＤＲ２；配列番号３８）、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号３９）［クローンＭＨ１４、ＭＨ１５、ＭＨ１７、ＭＨ３０、ＭＨ３１、ＭＨ３３］；
（Ｎ）アミノ酸配列
ＧＹＴＦＳＳＳＹＭＩ（ＨＣＤＲ１；配列番号５８）、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号３２）、ＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号３３）、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（ＬＣＤＲ１；配列番号３７）、ＡＡＳＮＲＡＴ（ＬＣＤＲ２；配列番号３８）、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号３９）［クローンＭＨ１８、ＭＨ１９、ＭＨ２１、ＭＨ３４、ＭＨ３５、ＭＨ３７］；
（Ｏ）アミノ酸配列
ＧＹＴＦＳＳＨＹＭＩ（ＨＣＤＲ１；配列番号５９）、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号３２）、ＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号３３）、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（ＬＣＤＲ１；配列番号３７）、ＡＡＳＮＲＡＴ（ＬＣＤＲ２；配列番号３８）、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号３９）［クローンＭＨ２２、ＭＨ２３、ＭＨ２５、ＭＨ３８、ＭＨ３９、ＭＨ４１］；
（Ｐ）アミノ酸配列
ＧＹＴＦＳＳＮＹＭＩ（ＨＣＤＲ１；配列番号５０）、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号３２）、ＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号３３）、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（ＬＣＤＲ１；配列番号３７）、ＡＡＳＤＲＡＴ（ＬＣＤＲ２；配列番号６０）、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号３９）［クローンＭＨ１２、ＭＨ２８］；
（Ｑ）アミノ酸配列
ＧＹＴＦＳＳＡＹＭＩ（ＨＣＤＲ１；配列番号５７）、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号３２）、ＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号３３）、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（ＬＣＤＲ１；配列番号３７）、ＡＡＳＤＲＡＴ（ＬＣＤＲ２；配列番号６０）、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号３９）［クローンＭＨ１６、ＭＨ３２］；
（Ｒ）アミノ酸配列
ＧＹＴＦＳＳＳＹＭＩ（ＨＣＤＲ１；配列番号５８）、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号３２）、ＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号３３）、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（ＬＣＤＲ１；配列番号３７）、ＡＡＳＤＲＡＴ（ＬＣＤＲ２；配列番号６０）、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号３９）［クローンＭＨ２０、ＭＨ３６］；または
（Ｓ）アミノ酸配列
ＧＹＴＦＳＳＨＹＭＩ（ＨＣＤＲ１；配列番号５９）、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（ＨＣＤＲ２；配列番号３２）、ＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（ＨＣＤＲ３；配列番号３３）、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（ＬＣＤＲ１；配列番号３７）、ＡＡＳＤＲＡＴ（ＬＣＤＲ２；配列番号６０）、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（ＬＣＤＲ３；配列番号３９）［クローンＭＨ２４、ＭＨ４０］。
【００５９】
一部の態様において、本発明は、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分を提供するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
（ａ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＹＹＭＩ（配列番号３１）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＱＧＥＮＹＬＡ（配列番号３４）のＬＣＤＲ１、ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号３５）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＱＤＬＬＴ（配列番号３６）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｂ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＹＹＭＩ（配列番号３１）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｃ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＹＹＭＩ（配列番号３１）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＡ（配列番号４０）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＱＤＬＬＴ（配列番号３６）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｄ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＹＭＩ（配列番号４１）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＴＴＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＡ（配列番号４０）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＬＡＴ（配列番号４３）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｅ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＹＭＩ（配列番号４１）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＦＡＱＫＦＱＧ（配列番号４４）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｆ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＹＭＩ（配列番号４１）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｇ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＹＹＭＩ（配列番号３１）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＥＹＱＧＤＮＹＬＮ（配列番号４５）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｈ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＹＩＩ（配列番号４６）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＴＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４７）のＨＣＤＲ２、およびＥＰＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号４８）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＥＹＥＧＤＮＹＬＮ（配列番号４９）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＱＤＬＬＴ（配列番号３６）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｉ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＮＹＭＩ（配列番号５０）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＴＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号５１）のＨＣＤＲ２、およびＥＰＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号４８）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＥＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号５２）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＱＤＬＬＴ（配列番号３６）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｊ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＹＹＭＩ（配列番号３１）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＴＴＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＥＹＱＧＥＮＹＬＮ（配列番号５３）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＱＤＬＬＴ（配列番号３６）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｋ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＮＹＩＩ（配列番号５４）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号５５）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＥＹＱＧＥＮＹＬＮ（配列番号５３）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＳＥＤＬＬＴ（配列番号５６）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｌ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＮＹＭＩ（配列番号５０）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｍ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＡＹＭＩ（配列番号５７）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｎ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＳＹＭＩ（配列番号５８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｏ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＨＹＭＩ（配列番号５９）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｐ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＮＹＭＩ（配列番号５０）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＤＲＡＴ（配列番号６０）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｑ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＡＹＭＩ（配列番号５７）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＤＲＡＴ（配列番号６０）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、
（ｒ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＳＹＭＩ（配列番号５８）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＤＲＡＴ（配列番号６０）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、または
（ｓ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＨＹＭＩ（配列番号５９）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、ならびに当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＤＲＡＴ（配列番号６０）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有する。
【００６０】
一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分は、クローン２９Ｄ１０、２９Ｂ０７、３０Ｃ１１、２６Ｂ０７、２９Ａ０３、２９Ｅ１１、３０Ｇ０２、３０Ｅ０６、２９Ｈ０９、３０Ｄ０２、ＭＨ１、ＭＨ２、ＭＨ３、ＭＨ４、ＭＨ５、ＭＨ６、ＭＨ７、ＭＨ８、またはＭＨ９（表４を参照）のいずれか１つの６つのＣＤＲ、およびヒト生殖細胞系列のｖ−ドメインのＦＲの配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２２、２５、２７、３０、３３、または３５個の免疫原性低減変異を含有するフレームワーク領域（ＦＲ）を含有する。免疫原性低減変異は、ＶＨのフレームワーク領域、ＶＬのフレームワーク領域、またはＶＨとＶＬの両方のフレームワーク領域中に存在してもよい。例えば、免疫原性低減変位は、ＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、ＶＨ  ＦＲ４、ＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、ＶＬ  ＦＲ４、またはこれらＦＲの任意の組み合わせにおいて存在してもよい。一部の実施形態において、免疫原性低減変異は、アミノ酸の置換、欠失または挿入である。
【００６１】
一部の態様において、本明細書は、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、この場合において当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において当該ＶＨ領域は、表１１または１６のＶＨ領域アミノ酸配列のうちのいずれか１つを含有し、当該ＶＬ領域は、表１１または１６のＶＬ領域アミノ酸配列のいずれか１つを含有する。
【００６２】
一部の実施形態において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分が本明細書において提供され、この場合において当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７または配列番号８を含有する。本明細書において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分がさらに提供され、この場合において当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１または配列番号１２を含有する。また本明細書において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分が提供され、この場合において当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７または配列番号８を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１または配列番号１２を含有する。
【００６３】
一部の実施形態において、本明細書において抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分が提供され、この場合において当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
（ａ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号９を含有し、
（ｂ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１０を含有し、
（ｃ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１１を含有し、
（ｄ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号１を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２を含有し、
（ｅ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号２を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号９を含有し、
（ｆ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号２を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１０を含有し、
（ｇ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号２を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１１を含有し、
（ｈ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号２を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２を含有し、
（ｉ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号９を含有し、
（ｊ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１０を含有し、
（ｋ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１１を含有し、
（ｌ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２を含有し、
（ｍ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号４を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号９を含有し、
（ｎ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号４を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１０を含有し、
（ｏ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号４を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１１を含有し、
（ｐ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号４を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２を含有し、
（ｑ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号５を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号９を含有し、
（ｒ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号５を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１０を含有し、
（ｓ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号５を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１１を含有し、
（ｔ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号５を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２を含有し、
（ｕ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号６を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号９を含有し、
（ｖ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号６を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１０を含有し、
（ｗ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号６を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１１を含有し、
（ｘ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号６を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２を含有し、
（ｙ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号７を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号９を含有し、
（ｚ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号７を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１０を含有し、
（ａａ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号７を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１１を含有し、
（ｂｂ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号７を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２を含有し、
（ｃｃ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号８を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号９を含有し、
（ｄｄ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号８を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１０を含有し、
（ｅｅ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号８を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１１を含有し、または
（ｆｆ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号８を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号１２を含有する。
【００６４】
一部の態様において、本明細書は、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含有し、この場合において、
（ａ）当該ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号３５２に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であり、当該ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号３５１に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一である；
（ｂ）当該ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号３５４に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であり、当該ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号３５３に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一である；
（ｃ）当該ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号３５６に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であり、当該ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号３５５に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一である；または
（ｄ）当該ＶＨ領域アミノ酸配列は、配列番号３５８に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であり、当該ＶＬ領域アミノ酸配列は、配列番号３５７に対し、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一である。一部の態様において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体のＣＤＲアミノ酸配列は、列挙される配列中のＣＤＲアミノ酸配列に対して１００％の同一性であるが、ＦＲアミノ酸配列は、列挙される配列中のＦＲアミノ酸配列に対し、１００％未満の同一性である。
【００６５】
一部の態様において、本明細書に規定される抗体または抗原結合部分は、単離されてもよい。
【００６６】
本明細書に規定される抗体分子または抗原結合部分は、ＣＳＦ１Ｒへの結合に関し、本明細書に開示されるＣＤＲセットを含有する抗体またはその抗原結合部分と交差競合してもよい。一部の実施形態では、本発明は、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分を提供するものであり、当該抗体または抗原結合部分は、その配列が本明細書において提供される抗体または抗原結合部分と、ＣＳＦ１Ｒへの結合に関して交差競合し、および（ａ）完全生殖細胞系列ヒトフレームワークアミノ酸配列を含有し、（ｂ）ヒトＣＳＦ１Ｒ、カニクイザルＣＳＦ１Ｒ、およびアカゲザルＣＳＦ１Ｒに特異的に結合し、（ｃ）単量体型カニクイザルＣＳＦ１Ｒに０．６６ｎＭ未満のＫＤで結合し、およびヒトＣＳＦ１Ｒに０．２１ｎＭ未満のＫＤで結合し、ならびに／または（ｄ）カニクイザルＣＳＦ１ＲおよびアカゲザルＣＳＦ１Ｒ上の機能的に同一なエピトープに結合する。一部の実施形態では、本発明は、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分を提供するものであり、当該抗体または抗原結合部分は、その配列が本明細書において提供される抗体または抗原結合部分と、ＣＳＦ１Ｒへの結合に関して交差競合し、および（ａ）完全生殖細胞系列ヒトフレームワークアミノ酸配列を含有し、（ｂ）ＩＧＨＶ１−６９＊０１アレルの生殖細胞系列フレームワーク領域をＶＨドメイン中に含有し、（ｃ）ＬＣＤＲ１配列中に異性化リスクモチーフを含有せず、（ｄ）ヒトＣＳＦ１Ｒ、カニクイザルＣＳＦ１Ｒ、およびアカゲザルＣＳＦ１Ｒに特異的に結合し、（ｅ）当該抗体または抗原結合部分のカニクイザルＣＳＦ１Ｒへの結合のＫＤの３倍以内のＫＤでヒトＣＳＦ１Ｒに結合し、（ｆ）ＶＬドメインのフレームワーク３／ＬＣＤＲ３領域中にヒトＴ細胞エピトープ配列を含有せず、および／または（ｇ）ＶＨドメインのＨＣＤＲ−２／フレームワーク３領域中にヒトＴ細胞エピトープ配列を含有せず、および／または（ｈ）ＶＨドメインのＨＣＤＲ１／フレームワーク２領域中にヒトＴ細胞エピトープ配列を含有せず、および／または（ｉ）ＶＨドメインのＨＣＤＲ３／フレームワーク４領域中にヒトＴ細胞エピトープ配列を含有せず、および／または（ｊ）ＶＬドメインのフレームワーク２／ＬＣＤＲ２領域中にヒトＴ細胞エピトープ配列を含有せず、および／または（ｋ）インスリン（例えば、ヒトインスリン）および／または二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）に対し、最小の結合を呈し、もしくは結合を呈さず、および／またはＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）抗体形式のときに、抗体ｈｕ０３０１と比較して酸化ダメージに対する感受性の低下を呈し、および／または（ｍ）ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）抗体形式のときに、抗体ｈｕ０３０１と比較してＦａｂドメイン中の熱的安定性の改善を呈し、および／または（ｎ）ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）抗体形式のときに、抗体ｈｕ０３０１と比較して疎水性種の不均一性の低下を呈する。
【００６７】
一部の実施形態では、本発明の抗ＣＳＦ１Ｒ抗体または抗原結合部分は、単量体型カニクイザルＣＳＦ１Ｒに、２ｎＭ未満のＫＤで結合し、ヒトＣＳＦ１Ｒに、２ｎＭ未満のＫＤで結合する。一部の実施形態では、本発明の抗ＣＳＦ１Ｒ抗体または抗原結合部分は、単量体型カニクイザルＣＳＦ１Ｒに、１ｎＭ未満のＫＤで結合し、ヒトＣＳＦ１Ｒに、１ｎＭ未満のＫＤで結合する。
【００６８】
一部の実施形態では、抗体または抗原結合部分のＫＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ解析により決定されてもよい。一部の実施形態では、抗体または抗原結合部分のＥＣ５０値は、ＣＳＦ１Ｒ発現細胞（例えば、ＨＥＫ細胞）のフローサイトメトリー染色により決定されてもよい。
【００６９】
「交差競合する」、「交差競合」、「交差遮断する」、「交差遮断される」、および「交差遮断すること」という用語は本明細書において相互交換可能に使用され、抗体またはその部分が、直接結合により干渉する能力、または標的ＣＳＦ１Ｒ（例えば、ヒトＣＳＦ１Ｒ）に対する本発明の抗ＣＳＦ１Ｒ抗体のアロステリック調節を介した間接的結合により干渉する能力を意味する。抗体またはその部分が、別物質による標的結合に干渉することができる度合、つまり本発明により交差遮断する、または交差競合すると言えるかどうかは、競合結合アッセイを使用して決定され得る。結合競合アッセイの一例は、Ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ  Ｔｉｍｅ  Ｒｅｓｏｌｖｅｄ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ（ＨＴＲＦ）である。１つの特に適した定量的交差競合アッセイは、ＦＡＣＳ系またはＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ系の方法を使用しており、標識（例えばＨｉｓタグ化、ビオチニル化、または放射性標識）抗体またはその部分と、他の抗体またはその部分の間の、標的への結合に関する競合を測定する。一般的に、交差競合抗体またはその部分は、例えば、交差競合アッセイにおいて標的に結合し、アッセイの間に、および第二の抗体またはその部分の存在下で、本発明の免疫グロブリン単一可変ドメインまたはポリペプチドの記録される変位は、所与の量で存在する潜在的に交差遮断する抗体またはその断片による、（例えばＦＡＣＳ系競合アッセイにおける）理論上の最大変位（例えばコールド（例えば非標識）抗体または交差遮断されるために必要なその断片による変位）の１００％以下である。交差競合抗体またはその部分は、１０％〜１００％、または５０％〜１００％の記録される変位を有することが好ましい。
【００７０】
本明細書において規定される抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子または抗原結合部分は、熱的に安定であってもよい。一部の場合では、抗体分子または抗原結合部分は、マウス抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の０３０１またはｈｕ０３０１（ヒト化）と実質的に同じ熱的安定性を有してもよい。一部の場合では、抗体分子または抗原結合部分は、マウス抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の０３０１またはｈｕ０３０１（ヒト化）よりも熱的な安定性が高くてもよい。一部の場合では、抗体分子または抗原結合部分は、マウス抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の０３０１またはｈｕ０３０１（ヒト化）よりも熱的な安定性が低くてもよい。一部の例では、抗体分子または抗原結合部分は、約７６℃〜約７８℃のＴｍを有してもよく、およびＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）形式であってもよい。一部の態様では、抗体分子または抗原結合部分は、約７６．６℃〜約７７．７℃のＴｍを有してもよく、およびＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）形式であってもよい。抗体分子またはその抗原結合部分の溶融温度は、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）アッセイにより解析されてもよい。
【００７１】
本明細書に規定される抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子または抗原結合部分は、酸化に対して抵抗性（例えば、露出アミノ酸残基の酸化に抵抗性）であってもよい。一部の場合では、抗体分子または抗原結合部分は、マウス抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の０３０１またはｈｕ０３０１（ヒト化）と比較して、または抗体ｈｕ０３０１（ヒト化）の可変ドメイン配列を含有する抗ＣＳＦ１Ｒ抗体と比較して低い露出アミノ酸残基の酸化を経てもよい。抗体分子またはその抗原結合部分の酸化抵抗性は、酸化試薬（例えば、Ｈ２Ｏ２）を抗体分子または抗原結合部分に添加し、酸化により誘導された変化を逆相（ＲＰ）クロマトグラフィー法により解析することにより解析されてもよい。
【００７２】
本明細書に規定される抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子または抗原結合部分は、疎水性種の不均一性の低下を呈する。一部の場合では、抗体分子または抗原結合部分は、マウス抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の０３０１またはｈｕ０３０１（ヒト化）と比較して、または抗体ｈｕ０３０１（ヒト化）の可変ドメイン配列を含有する抗ＣＳＦ１Ｒ抗体と比較して、疎水性種の不均一性の低下を呈してもよい。抗体分子またはその抗原結合部分の疎水性種の不均一性は、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）法により解析されてもよい。
【００７３】
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子または抗原結合部分は、インスリンおよび／またはｄｓＤＮＡに結合しない、または最小限に結合する。一部の実施形態では、インスリンは、ヒトのインスリンである。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子または抗原結合部分は、バックグラウンド結合を超えるインスリンおよび／またはｄｓＤＮＡへの結合を示さない。一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子または抗原結合部分は、ボコシズマブ、ブリアキヌマブ、ウステキヌマブ、もしくはベバシズマブ、またはこれら抗体の任意の組み合わせにより呈される結合と比較して、インスリンおよび／またはｄｓＤＮＡへの結合の低下を示す。一部の実施形態では、インスリンまたはｄｓＤＮＡへの結合は、ＥＬＩＳＡにより決定されてもよい。
【００７４】
本明細書に規定される抗体分子または抗原結合部分は、１つまたは複数の置換、欠失および／または挿入を含んでもよく、それらにより例えばグリコシル化部位（Ｎ結合型またはＯ結合型）、脱アミノ部位、リン酸化部位または異性化／断片化部位などの翻訳後修飾（ＰＴＭ：ｐｏｓｔ−ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）部位が除去される。
【００７５】
３５０を超えるタイプのＰＴＭが公知である。重要なＰＴＭの型としては、リン酸化、グリコシル化（Ｎ結合型およびＯ結合型）、ＳＵＭＯ化、パルミトイル化、アセチル化、硫酸化、ミリストイル化、プレニル化、および（Ｋ残基およびＲ残基の）メチル化が挙げられる。特定のＰＴＭの原因となる推定アミノ酸部位を特定するための統計的手法は、当分野に公知である（Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６，Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  １：１３１８−１３２１を参照のこと）。例えば置換、欠失および／または挿入によりそうした部位を除去し、次いで任意で（ａ）結合活性、および／または（ｂ）ＰＴＭの消失を検証（実験的に、および／または理論的に）することが予期される。
【００７６】
例えば、０３０１のマウスＬＣＤＲ１（本明細書に規定されるように、すなわちアミノ酸配列ＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＮＹＭＮ；配列番号２２）は、９番目および１０番目の残基（ＤＧ）で、推定異性化部位を有すると特定された。本発明のＬＣＤＲ１中の同等の位置でこの部位を、例えばＤの保存的置換または非保存的置換（例えば、Ｅ、ＱまたはＨへの置換）により除去することが予期される（例えばクローン３０Ｅ０６、ならびに表３および４の他のクローンと同様に）。
【００７７】
抗体分子またはその抗原結合部分は、ヒト、ヒト化またはキメラであってもよい。
【００７８】
抗体分子またはその抗原結合部分は、１つまたは複数のヒト可変ドメインフレームワークスキャホールドを含有してもよく、その中にＣＤＲが挿入される。例えば、ＶＨ領域、ＶＬ領域、またはＶＨ領域とＶＬ領域の両方が、１つまたは複数のヒトフレームワーク領域のアミノ酸配列を含有してもよい。
【００７９】
抗体分子またはその抗原結合部分は、ＩＧＨＶ１−６９ヒト生殖細胞系列スキャホールドを含有してもよく、その中に対応するＨＣＤＲ配列が挿入される。抗体分子またはその抗原結合部分は、ＩＧＨＶ１−６９ヒト生殖細胞系列スキャホールドのアミノ酸配列を含有するＶＨ領域を含有してもよく、その中に対応するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットが挿入される。一部の実施形態では、本発明の抗体分子または抗原結合部分は、ＶＨドメイン中にＩＧＨＶ１−６９＊０１アレルの生殖細胞系列フレームワーク領域を含有する。
【００８０】
抗体分子またはその抗原結合部分は、ＩＧＫＶ３−１１ヒト生殖細胞系列スキャホールドを含有してもよく、その中に対応するＬＣＤＲ配列が挿入される。抗体分子またはその抗原結合部分は、ＩＧＫＶ３−１１ヒト生殖細胞系列スキャホールドのアミノ酸配列を含有するＶＬ領域を含有してもよく、その中に対応するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットが挿入される。
【００８１】
抗体分子またはその抗原結合部分は、ＩＧＨＶ１−６９ヒト生殖細胞系列スキャホールドを含有してもよく、その中に対応するＨＣＤＲ配列が挿入され、およびＩＧＫＶ３−１１ヒト生殖細胞系列スキャホールドを含有してもよく、その中に対応するＬＣＤＲ配列が挿入される。抗体分子またはその抗原結合部分は、ＩＧＨＶ１−６９ヒト生殖細胞系列スキャホールドのアミノ酸配列を含有するＶＨ領域を含有してもよく、その中に対応するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットが挿入され、およびＩＧＫＶ３−１１ヒト生殖細胞系列スキャホールドのアミノ酸配列を含有するＶＬ領域を含有してもよく、その中に対応するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットが挿入される。ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は、表４のクローンのいずれか１つのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列であってもよい（６つすべてのＣＤＲ配列が、同じクローン由来である）。
【００８２】
一部の態様では、抗体分子またはその抗原結合部分は、免疫グロブリン定常領域を含有してもよい。一部の実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２である。追加的な実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２である。抗体分子またはその抗原結合部分は、免疫学的に不活性な定常領域を含有してもよい。一部の態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分は、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域、またはＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域を含有する免疫グロブリン定常領域を含有してもよい。一部の態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、表１７のアミノ酸配列のうちのいずれか１つを含有する免疫グロブリン定常領域を含有してもよい。表１７のＦｃ領域配列は、ＣＨ１ドメインから始まる。一部の態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、ヒトＩｇＧ４、ヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ１−３Ｍ、またはヒトＩｇＧ１−４ＭのＦｃ領域のアミノ酸配列を含有する免疫グロブリン定常領域を含有してもよい。例えば、ヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）のＦｃ領域は、野生型のヒトＩｇＧ４のＦｃ領域と比較して以下の置換を含有する：Ｓ２２８Ｐ。例えば、ヒトＩｇＧ１−３ＭのＦｃ領域は、野生型のヒトＩｇＧ１のＦｃ領域と比較して以下の置換を含有する：Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａ。一方で、ヒトＩｇＧ１−４ＭのＦｃ領域は、野生型のヒトＩｇＧ１のＦｃ領域と比較して以下の置換を含有する：Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＰ３３１Ｓ。一部の態様では、免疫グロブリン分子の定常領域中のアミノ酸残基の位置は、ＥＵの用語体系（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５  Ｔｈｅｒａｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：７７−９４）に従って番号付けされる。一部の態様では、免疫グロブリン定常領域は、ＲＤＥＬＴ（配列番号７２）モチーフ、またはＲＥＥＭ（配列番号７３）モチーフ（表１７の下線部分）を含有してもよい。ＲＥＥＭ（配列番号７３）アロタイプは、ＲＤＥＬＴ（配列番号７２）アロタイプよりも少ないヒト集団に存在する。一部の態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、配列番号３５９〜３６４のいずれか１つを含有する免疫グロブリン定常領域を含有してもよい。一部の態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、表４のクローンのいずれか１つの６つのＣＤＲアミノ酸配列、および表１７のＦｃ領域アミノ酸配列のいずれか１つを含有してもよい。一部の態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、表１７のＦｃ領域アミノ酸配列のいずれか１つを含有する免疫グロブリン重鎖定常領域、およびカッパ軽鎖定常領域またはラムダ軽鎖定常領域である免疫グロブリン軽鎖定常領域を含有してもよい。
【００８３】
一部の態様において、本明細書は、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域、ならびに重鎖定常領域を含有し、この場合において、
（ａ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＹＹＭＩ（配列番号３１）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＲＡＴ（配列番号３８）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、ならびに当該重鎖定常領域は、配列番号３５９〜３６４のいずれか１つを含有し、
（ｂ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＮＹＭＩ（配列番号５０）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、ＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＤＲＡＴ（配列番号６０）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、ならびに当該重鎖定常領域は、配列番号３５９〜３６４のいずれか１つを含有し、
（ｃ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＳＳＡＹＭＩ（配列番号５７）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（ＨＣＤＲ３、配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＮ（配列番号３７）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＤＲＡＴ（配列番号６０）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、ならびに当該重鎖定常領域は、配列番号３５９〜３６４のいずれか１つを含有し、または
（ｄ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、ＧＹＴＦＴＳＹＹＭＩ（配列番号４１）のＨＣＤＲ１、ＭＧＤＩＮＰＹＮＧＧＴＴＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４２）のＨＣＤＲ２、およびＥＧＰＹＦＳＮＬＹＶＭＤＹ（配列番号３３）のＨＣＤＲ３を含有し、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、ＲＡＳＱＳＶＳＹＥＧＥＮＹＬＡ（配列番号４０）のＬＣＤＲ１、ＡＡＳＮＬＡＴ（配列番号４３）のＬＣＤＲ２、およびＱＬＳＮＥＤＬＬＴ（配列番号３９）のＬＣＤＲ３を含有し、ならびに当該重鎖定常領域は、配列番号３５９〜３６４のいずれか１つを含有する。
【００８４】
一部の態様において、本明細書は、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域、軽鎖可変（ＶＬ）領域、および重鎖定常領域を含有し、この場合において、
（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３５２を含有し、または配列番号３５２からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号３５１を含有し、または配列番号３５１からなり、および重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、Ｓ２２８Ｐのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、またはＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域を含有し、
（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３５４を含有し、または配列番号３５４からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号３５３を含有し、または配列番号３５３からなり、および重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、Ｓ２２８Ｐのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、またはＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域を含有し、
（ｃ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３５６を含有し、または配列番号３５６からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号３５５を含有し、または配列番号３５５からなり、および重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、Ｓ２２８Ｐのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、またはＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域を含有し、または
（ｄ）ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３５８を含有し、または配列番号３５８からなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号３５７を含有し、または配列番号３５７からなり、および重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、Ｓ２２８Ｐのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、またはＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａのアミノ酸置換を含有するヒトＩｇＧ１定常領域を含有する。
【００８５】
一部の態様において、本明細書は、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分を開示するものであり、当該抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域、ならびに重鎖定常領域を含有し、この場合において、
（ａ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３５２を含有し、または配列番号３５２からなり、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号３５１を含有し、または配列番号３５１からなり、および当該重鎖定常領域は、配列番号３５９〜３６４のいずれか１つを含有する；
（ｂ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３５４を含有し、または配列番号３５４からなり、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号３５３を含有し、または配列番号３５３からなり、および当該重鎖定常領域は、配列番号３５９〜３６４のいずれか１つを含有する；
（ｃ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３５６を含有し、または配列番号３５６からなり、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号３５５を含有し、または配列番号３５５からなり、当該重鎖定常領域は、配列番号３５９〜３６４のいずれか１つを含有する；または
（ｄ）当該ＶＨ領域のアミノ酸配列は、配列番号３５８を含有し、または配列番号３５８からなり、当該ＶＬ領域のアミノ酸配列は、配列番号３５７を含有し、または配列番号３５７からなり、当該重鎖定常領域は、配列番号３５９〜３６４のいずれか１つを含有する。
【００８６】
一部の態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、免疫エフェクターが無効であってもよい。一部の態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分は、免疫エフェクター機能を誘導せず、任意で免疫エフェクター機能を抑制する。一部の態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、ヒトＦｃγＲＩ受容体、ＦｃγＲＩＩａ受容体、ＦｃγＲＩＩＩａ受容体、およびＦｃγＲＩＩＩｂ受容体への測定可能な結合を欠いてもよいが、ヒトＦｃγＲＩＩｂ受容体への結合は維持し、任意で、ヒトＦｃＲｎ受容体への結合も維持する。ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩａ、およびＦｃγＲＩＩＩｂは、活性化受容体の例示である。ＦｃγＲＩＩｂは、阻害性受容体の例示である。ＦｃＲｎは、リサイクル受容体の例示である。一部の態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分のヒトＦｃ受容体への結合アフィニティは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析により測定されてもよい。一部の態様では、Ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ  Ｔｉｍｅ  Ｒｅｓｏｌｖｅｄ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ（ＨＴＲＦ）を使用して、ヒトＦｃ受容体への抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の結合を試験することができる。ＨＴＲＦの１つの例において、ヒトＩｇＧ１（野生型）が標識され、一揃いのＦｃガンマ受容体も同様にされ、次いで操作されたＦｃ断片を含む抗体が、力価測定競合に使用される。一部の態様では、ＣＳＦ１Ｒ陽性細胞と、ヒト白血球および抗ＣＳＦ１Ｒ抗体が混合され、ＣＤＣ、ＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰによる細胞殺傷が測定されてもよい。一部の態様では、ヒトＩｇＧ１−３Ｍ（表１７を参照）のＦｃ領域のアミノ酸配列を含有する抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、エフェクターが無効である。一部の態様では、ヒトＩｇＧ１−３Ｍ（表１７を参照）のＦｃ領域のアミノ酸配列を含有する抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、エフェクターが無効ではない。
【００８７】
抗体分子またはその抗原結合部分は、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ）２断片、Ｆｖ断片、四量体抗体、四価抗体、多特異性抗体（例えば二価抗体）、ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、モノクローナル抗体、または融合タンパク質であってもよい。１つの実施形態では、抗体は、第一の抗原と第二の抗原に特異的に結合する二特異性抗体であってもよく、この場合において第一の抗原はＣＳＦ１Ｒであり、第二の抗原はＣＳＦ１Ｒではない。抗体分子、ならびにその構築方法および使用方法は、例えばＨｏｌｌｉｇｅｒ  ＆  Ｈｕｄｓｏｎ（２００５，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３（９）：１１２６−１１３６）に記載されている。
【００８８】
本発明の別の態様では、治療剤に結合された、本明細書に規定される本発明の抗体分子またはその抗原結合部分を含有する免疫結合体が提供される。
【００８９】
適切な治療剤の例示としては、細胞毒素、放射性同位体、化学療法剤、免疫調節剤、抗血管新生剤、抗増殖剤、アポトーシス促進剤、ならびに細胞増殖抑制酵素および細胞溶解性酵素（例えば、ＲＮＡｓｅ）が挙げられる。さらなる治療剤としては、例えば免疫調節剤、抗血管新生剤、抗増殖剤またはアポトーシス促進剤をコードする遺伝子などの治療用核酸が挙げられる。これらの薬剤の記述子は、相互排他的ではなく、ゆえに治療剤は、上述の用語の１つまたは複数を使用して記載されてもよい。
【００９０】
免疫結合体における使用に適した治療剤の例としては、タキサン、メイタンシン、ＣＣ−１０６５、およびデュオカルマイシン、カリケアミシンおよび他のエンジイン、ならびにオーリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）が挙げられる。他の例としては、抗葉酸剤、ビンアルカロイド、およびアントラサイクリンが挙げられる。植物毒素、他の生物活性タンパク質、酵素（すなわちＡＤＥＰＴ）、放射性同位体、光増感剤が、免疫結合体において使用されてもよい。さらに結合体は、細胞毒性剤として二次的な担体、例えばリポソームまたはポリマーなどを使用して作製され得る。適切な細胞毒素としては、細胞の機能を阻害または妨害し、細胞の破壊をもたらす剤が挙げられる。代表的な細胞毒素としては、抗生物質、チューブリン重合の阻害剤、ＤＮＡに結合し、破壊するアルキル化剤、そしてタンパク質合成を破壊する、または例えばタンパク質キナーゼ、ホスファターゼ、トポイソメラーゼ、酵素およびサイクリンなどの必須の細胞タンパク質の機能を破壊する剤が挙げられる。
【００９１】
代表的な細胞毒素としては限定されないが、ドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、アクラルビシン、ゾルビシン、ミトキサントロン、エピルビシン、カルビシン、ノガラマイシン、メノガリル、ピタルビシン、バルルビシン、シタラビン、ゲムシタビン、トリフルリジン、アンシタビン、エノシタビン、アザシチジン、ドキシフルリジン、ペントスタチン、ブロクスウリジン、カペシタビン、クラドリビン、デシタビン、フロクスウリジン、フルダラビン、グーゲロチン、ピューロマイシン、テガフール、チアゾフリン、アドリアマイシン、シスプラチン、カルボプラチン、シクロフォスファミド、ダカルバジン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、メクロレタミン、プレドニゾン、プロカルバジン、メトトレキサート、フルオロウラシル、エトポシド、タキソール、タキソールアナログ、例えばシスプラチンおよびカルボプラチンなどのプラチン類、マイトマイシン、チオテパ、タキサン、ビンクリスチン、ダウノルビシン、エピルビシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、タモキシフェン、イダルビシン、ドラスタチン／オーリスタチン、ヘミアステリン、エスペラミシン、ならびにマイタンシノイドが挙げられる。
【００９２】
適切な免疫調節剤としては、腫瘍に対するホルモンの作用を妨害する抗ホルモン剤、およびサイトカイン産生を抑制する、自己抗原発現を下方制御する、またはＭＨＣ抗原をマスクする免疫抑制剤が挙げられる。
【００９３】
さらに、本明細書に規定される本発明の抗体分子またはその抗原結合部分をコードする核酸分子も提供される。核酸分子は、本明細書に記載される抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分の（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列、（ｂ）ＶＬ領域のアミノ酸配列、または（ｃ）ＶＨ領域とＶＬ領域の両方のアミノ酸配列をコードしてもよい。一部の態様では、本明細書に規定される核酸分子が単離されてもよい。
【００９４】
さらに、本明細書に規定される本発明の核酸分子を含有するベクターが提供される。ベクターは、発現ベクターであってもよい。
【００９５】
また、本明細書に規定される本発明の核酸分子またはベクターを含有する宿主細胞も提供される。宿主細胞は、組み換え宿主細胞であってもよい。
【００９６】
さらなる態様において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体および／またはその抗原結合部分を作製する方法も提供され、当該方法は、当該抗体および／もしくはその抗原結合部分の発現ならびに／または産生が生じる条件下で、本発明の宿主細胞を培養する工程、および当該宿主細胞または培養物から、当該抗体および／またはその抗原結合部分を単離する工程、を含む。
【００９７】
本発明の別の態様において、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分、または本明細書に規定される本発明の核酸分子、または本明細書に規定される本発明のベクターを含有する医薬組成物が提供される。
【００９８】
さらに、対象において免疫反応を強化する方法が提供され、当該方法は、本明細書に規定される本発明の抗体分子またはその抗原結合部分の有効量、または本明細書に規定される本発明の免疫結合体の有効量、または本明細書に規定される本発明の核酸分子の有効量、または本明細書に規定される本発明のベクターの有効量、または本明細書に規定される本発明の医薬組成物の有効量を当該対象に投与する工程を含む。
【００９９】
さらなる態様において、対象において癌を治療または予防する方法が提供され、当該方法は、本明細書に規定される本発明の抗体分子またはその抗原結合部分の有効量、または本明細書に規定される本発明の免疫結合体の有効量、または本明細書に規定される本発明の核酸分子の有効量、または本明細書に規定される本発明のベクターの有効量、または本明細書に規定される本発明の医薬組成物の有効量を当該対象に投与する工程を含む。
【０１００】
癌は、例えば、膵臓癌、メラノーマ、乳癌、肺癌、気管支癌、結腸直腸癌、前立腺癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳腫瘍または中枢神経系の癌、末梢神経系の癌、食道癌、子宮頸癌、子宮癌または子宮内膜癌、口腔または咽頭の癌、肝癌、腎癌、精巣癌、胆管癌、小腸癌または虫垂癌、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫、および血液組織の癌からなる群から選択されてもよい。１つの実施形態では、癌は、急性骨髄性白血病である。
【０１０１】
本発明はさらに、癌の治療における使用のための、本明細書に規定される本発明の抗体分子またはその抗原結合部分、または本明細書に規定される本発明の免疫結合体、または本明細書に規定される本発明の核酸分子、または本明細書に規定される本発明のベクター、または本明細書に規定される本発明の医薬組成物を提供する。
【０１０２】
さらに本発明は、その必要のある対象において、Ｔ細胞の抗腫瘍活性を阻害する腫瘍微小環境中の免疫抑制性ＣＳＦ１Ｒ＋細胞を枯渇させる方法を提供するものであり、当該方法は、本明細書に規定される本発明の抗体分子またはその抗原結合部分の有効量、または本明細書に規定される本発明の免疫結合体の有効量、または本明細書に規定される本発明の核酸分子の有効量、または本明細書に規定される本発明のベクターの有効量、または本明細書に規定される本発明の医薬組成物の有効量を当該対象に投与する工程を含む。
【０１０３】
別の態様において、本発明は、例えば抗癌剤などの第二の治療剤と組み合わされる併用において、別個に使用する、連続して使用する、または同時に使用するための、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分、または免疫結合体、または核酸分子、またはベクター、または治療方法を提供する。一部の実施形態では、第二の治療剤は、チェックポイント阻害分子である。例えば、チェックポイント阻害分子は、抗ＰＤ１抗体であってもよい。
【０１０４】
さらなる態様において、癌の治療のための医薬品の製造における、本明細書に規定される本発明の抗体分子もしくはその抗原結合部分の使用、または本明細書に規定される本発明の免疫結合体の使用、または本明細書に規定される本発明の核酸分子の使用、または本明細書に規定される本発明のベクターの使用、または本明細書に規定される本発明の医薬組成物の使用が提供される。
【０１０５】
本発明はさらに、対象において感染性疾患もしくは免疫疾患を治療または予防する方法を提供するものであり、当該方法は、本明細書に規定される抗体分子またはその抗原結合部分の有効量、または本明細書に規定される免疫結合体の有効量、または本明細書に規定される核酸分子の有効量、または本明細書に規定されるベクターの有効量、または本明細書に規定される医薬組成物の有効量を当該対象に投与する工程を含む。１つの実施形態において、免疫疾患は、色素性絨毛結節性滑膜炎である。一部の実施形態では、感染性疾患は、ウイルス性、細菌性、真菌性または寄生虫性である。
【０１０６】
１つの実施形態において、本発明は、治療における使用のための本明細書に開示されるアミノ酸配列を含有する抗ＣＳＦ１Ｒ抗体またはその抗原結合部分を提供する。
【０１０７】
本発明の医薬組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤、担体または希釈剤を含有してもよい。薬学的に許容可能な賦形剤は、医薬組成物に入れられる化合物または化合物の組み合わせであってもよく、二次的な反応を引き起こさず、例えば、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子の投与の促進、その持続期間の延長、および／もしくは体内におけるその有効性の増加、または溶液中の可溶度の上昇を可能にする。これら薬学的に許容可能なビヒクルは公知であり、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子の投与様式に応じて当業者により適合される。
【０１０８】
一部の実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子は、凍結乾燥されて提供され、投与前に再構成されてもよい。例えば凍結乾燥された抗体分子は、滅菌水で再構成され、個体への投与前に生理食塩水と混合される。
【０１０９】
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子は通常、医薬組成物の形態で投与され、当該医薬組成物は、抗体分子に加えて少なくとも１つの構成要素を含有してもよい。したがって医薬組成物は、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子に加えて、薬学的に許容可能な賦形剤、担体、希釈剤、安定剤、または当業者に公知の他の物質を含有してもよい。そうした物質は、非毒性でなければならず、そして抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子の効能に干渉してはならない。担体または他の物質の正確な性質は、投与経路に依存しており、投与経路は、以下に検討されるように、ボーラス、点滴、注射または任意の他の適切な経路であってもよい。
【０１１０】
例えば注射などによる皮下投与または静脈内投与などの非経口投与に関しては、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子を含有する医薬組成物は、発熱物質を含まず、適切なｐＨ、等張性および安定性の非経口に受容可能な水溶液の形態であってもよい。当業者であれば、例えば塩化ナトリウム注射溶液、リンゲル注射溶液、乳酸リンゲル注射溶液などの等張ビヒクルを使用して適切な溶液を調製することができる。保存剤、安定剤、緩衝剤、抗酸化剤、および／または他の添加剤を必要に応じて採用してもよく、例えばリン酸塩、クエン酸塩および他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸およびメチオニンをなどの抗酸化剤；保存剤（例えばオクタデシルジメチルベンゾイル塩化アンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンズアルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルアルコールまたはベンジルアルコール；例えばメチルパラベンまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レソルシノール；シクロヘキサノール；３’−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量ポリペプチド；例えば血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリンなどのタンパク質；例えばポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンまたはリシンなどのアミノ酸；グルコース、マンノースまたはデキストリンなどの単糖、二糖および他の炭水化物；例えばＥＤＴＡなどのキレート剤；例えばスクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトールなどの糖類；例えばナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えばＺｎ−タンパク質錯体）；および／または例えばＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤が挙げられる。
【０１１１】
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子を含有する医薬組成物は、治療される状態に応じて、単独で投与されてもよく、または他の治療と併用されて、同時に、または連続のいずれかで投与されてもよい。
【０１１２】
本明細書に記載の抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子は、ヒトまたは動物の身体の治療方法に使用されてもよく、治療には、予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃまたはｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）治療が含まれる（例えば、個体において状態が発生する前に、当該個体において当該状態が発生するリスクを低下させる、その発生を遅延させる、または発生後の重大度を低下させるための治療）。治療方法は、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子を、その必要のある個体に投与する工程を含んでもよい。
【０１１３】
投与は通常、「治療有効量」であり、これは、患者に対し有益性を示すために充分な量である。そうした有益性は、少なくとも１つの症状の少なくとも改善であってもよい。投与される実際の量、投与速度、および投与の経時変化は、治療される性質および重大度、治療される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、組成物の送達部位、投与方法、投与スケジュール、および医療従事者に公知の他の因子に依存する。例えば用量の決定などの治療の指示は、一般開業医および他の医師の責の範囲内にあり、治療される疾患の症状の重大度、および／または治療される疾患の進行に依存し得る。抗体分子の適切な投与量は、当分野に公知である（Ｌｅｄｅｒｍａｎｎ  Ｊ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ４７：６５９−６６４；Ｂａｇｓｈａｗｅ  Ｋ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ａｎｔｉｂｏｄｙ，Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ４：９１５−９２２）。具体的な用量は、本明細書において、およびＰｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（２００３）において、投与される薬剤のタイプに応じて示され、使用され得る。抗体分子の治療有効量または適切な投与量は、そのインビトロ活性と、動物モデルにおけるインビボ活性を比較することにより決定され得る。マウスおよび他の実験動物における有効用量を、ヒトに外挿する方法は公知である。正確な投与量は、抗体が予防用または治療用であるか、治療される領域の大きさおよび位置、抗体の正確な性質（例えば全抗体、断片）および抗体に付加された任意の検出可能な標識または他の分子の性質をはじめとする多くの因子に依存する。
【０１１４】
典型的な抗体投与量は、全身投与に対しては１００μｇ〜１ｇ、局所投与に対しては１μｇ〜１ｍｇの範囲である。初回に高い負荷投与量、その後は１つまたは複数回の低負荷投与量が投与されてもよい。典型的には、抗体は、例えばＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ４アイソタイプなどの全抗体である。これは成人患者の単回治療用の投与量であり、小児および幼児に対しては相対的に調整され得、そして分子量に比例して他の抗体形式にも調整され得る。治療は、医師の裁量で毎日、週２回、毎週、または毎月の間隔で繰り返され得る。個々の治療スケジュールは、抗体組成物の薬物動態および薬力学的性質、投与経路、ならびに治療される状態の性質に依存し得る。
【０１１５】
治療は定期的であってもよく、投与の間の期間は、約２週間またはそれ以上であってもよく、例えば約３週間以上、約４週間以上、約１カ月以上、約５週間以上、または約６週間以上であってもよい。例えば、治療は、２週〜４週ごと、または４週〜８週ごとであってもよい。治療は、外科手術の前、および／もしくは後に行われてもよく、ならびに／または外科的治療もしくは浸潤的手順の解剖学的位置に直接投与または適用されてもよい。適切な製剤および投与経路は、上記に記載される。
【０１１６】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子は、皮下注射として投与されてもよい。皮下注射は、例えば長期間の予防用／治療用の自己注射器を使用して投与されてもよい。
【０１１７】
一部の好ましい実施形態では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子の治療効果は、投与量に応じて、個別の半減期の間、持続し得る。例えば抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子の単回投与の治療効果は、個体において、１カ月以上、２カ月以上、３カ月以上、４カ月以上、５カ月以上、または６カ月以上、持続し得る。
【０１１８】
本発明はさらに、ヒトＣＳＦ１Ｒに特異的に結合し、および任意でカニクイザルおよびアカゲザルのＣＳＦ１Ｒにも特異的に結合する抗体分子、またはその抗原結合部分を作製する方法を提供するものであり、当該方法は、
（１）非ヒト源由来の抗ＣＳＦ１Ｒ  ＣＤＲをヒトｖ−ドメインフレームワーク内に移植し、ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子またはその抗原結合部分を作製する工程、
（２）ＣＤＲ中に１つまたは複数の変異を含有する当該ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体分子またはその抗原結合部分のクローンのライブラリーを作製する工程、
（３）ヒトＣＳＦ１Ｒへの結合、および任意でカニクイザルおよびアカゲザルのＣＳＦ１Ｒへの結合についても当該ライブラリーをスクリーニングする工程、
（４）ヒトＣＳＦ１Ｒに特異的に結合する、ならびに任意でカニクイザルおよびアカゲザルのＣＳＦ１Ｒにも特異的に結合するスクリーニング工程（３）からのクローンを選択する工程、および
（５）ヒトＣＳＦ１Ｒに特異的に結合し、ならびに任意でカニクイザルおよびアカゲザルのＣＳＦ１Ｒにも特異的に結合する抗体分子、またはその抗原結合部分を、工程（４）から選択されたクローンから作製する工程、を含む。
【０１１９】
当該方法は、工程（４）で選択されたクローンに基づき、例えば工程（４）で選択されたクローンのＣＤＲ中の特定の位置でのさらなる探索的な突然変異誘導に基づき、追加のクローンを作製して、ヒト化を強化する工程、および／またはヒトＴ細胞エピトープ含量を最小化する工程、および／または工程（５）で作製された抗体分子もしくはその抗原結合部分の製造特性を改善する工程をさらに含んでもよい。
【０１２０】
上述の方法に適用可能な改善は、以下の実施例１に記載される。
【０１２１】
本明細書において使用される場合、「ＣＳＦ１Ｒ」という用語は、Ｃｏｌｏｎｙ  Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  Ｆａｃｔｏｒ  １  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ、およびＣＳＦ１Ｒの生物活性の少なくとも一部を保持するそのバリアントを指す。本明細書において使用される場合、ＣＳＦ１Ｒは、ヒト、ラット、マウスおよびニワトリを含むすべての種の天然配列のＣＳＦ１Ｒを含む。「ＣＳＦ１Ｒ」という用語は、ヒトＣＳＦ１Ｒのバリアント、アイソフォームおよび種ホモログを含むために使用される。本発明の抗体は、ヒト以外の種に由来するＣＳＦ１Ｒ、特にカニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）およびアカゲザル（Ｍａｃａｃａ  ｍｕｌａｔｔａ）に由来するＣＳＦ１Ｒと交差反応し得る。ある実施形態では、抗体は、完全にヒトＣＳＦ１Ｒに特異的であってもよく、非ヒトとの交差反応性を呈さなくてもよい。
【０１２２】
本明細書において使用される場合、本発明の抗体の文脈において使用される場合の「アンタゴニスト」、または「抗ＣＳＦ１Ｒアンタゴニスト抗体」（「抗ＣＳＦ１Ｒ抗体」と相互交換可能に称される）とは、ＣＳＦ１Ｒに結合することができる、ならびにＣＳＦ１Ｒの生物活性を阻害することができる、および／またはＣＳＦ１Ｒシグナル伝達により介在される下流経路を阻害することができる抗体を指す。抗ＣＳＦ１Ｒアンタゴニスト抗体には、ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達により介在される下流経路を含む、例えばＣＳＦ１Ｒに対する受容体結合および／または細胞反応の惹起などのＣＳＦ１Ｒの生物活性を遮断する、アンタゴナイズする、抑制する、または低下させる（有意に、を含む）ことができる抗体を包含する。本発明の目的に対し、「抗ＣＳＦ１Ｒアンタゴニスト抗体」という用語は、ＣＳＦ１Ｒそれ自体、およびＣＳＦ１Ｒの生物活性（限定されないが、単核細胞の活性を調節する能力を含む）、または活性もしくは生物活性の結果が、任意の意義のある程度に実質的に無効化される、減少される、または中和されるすべての用語、タイトル、ならびに機能的状態および機能的特性を包含することが明示的に理解されるであろう。
【０１２３】
他の受容体よりも高いアフィニティ、高いアビディティ、より容易に、および／またはより長い期間、ＣＳＦ１Ｒと結合する場合、ＣＳＦ１Ｒは、ＣＳＦ１Ｒと「特異的に結合する」、「特異的に相互作用する」、「優先的に結合する」、「結合する」または「相互作用する」。
【０１２４】
「抗体分子」は、例えば炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどの標的に、免疫グロブリン分子の可変領域中に位置する少なくとも１つの抗原認識部位を介して特異的に結合することができる免疫グロブリン分子である。本明細書において使用される場合、「抗体分子」という用語は、損なわれていないポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体のみならず、任意の抗原結合断片（例えば「抗原結合部分」）またはその一本鎖、抗体を含む融合タンパク質、ならびに例えば限定されないが、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体（例えばサメ抗体およびラクダ科抗体）、マキシボディ、ミニボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ−ＮＡＲ、およびｂｉｓ−ｓｃＦｖを含む抗原認識部位を含有する免疫グロブリン分子の任意の他の改変構造体も包含する。
【０１２５】
「抗体分子」は、例えばＩｇＧ、ＩｇＡ、またはＩｇＭ（またはそのサブクラス）などの任意のクラスの抗体を包含し、抗体はいずれか特定のクラスのものである必要はない。その重鎖の定常領域の抗体アミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは、様々なクラスに割り当てられ得る。免疫グロブリンにはＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭの５種類の主要なクラスがある。これらのうちのいくつかは、さらにサブクラス（アイソタイプ）に分けられる場合があり、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２がある。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常領域はそれぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、およびミューと呼ばれる。このサブユニットの構造、および様々なクラスの免疫グロブリンの三次元構造が公知である。
【０１２６】
抗体分子の「抗原結合部分」という用語は、本明細書において使用される場合、ＣＳＦ１Ｒに特異的に結合する能力を保持する、損なわれていない抗体の１つまたは複数の断片を指す。抗体分子の抗原結合機能は、損なわれていない抗体の断片により実現され得る。抗体分子の「抗原結合部分」という用語に包含される結合断片の例示としては、Ｆａｂ；Ｆａｂ’；Ｆ（ａｂ’）２；ＶＨドメインとＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；抗体の１つのアームのＶＬドメインおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片；単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）断片、および単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。
【０１２７】
「Ｆｃ領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を規定するために使用される。「Ｆｃ領域」は、天然配列のＦｃ領域またはバリアントのＦｃ領域であってもよい。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変化し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖のＦｃ領域は通常、Ｃｙｓ２２６の位置のアミノ酸残基、またはＰｒｏ２３０の位置のアミノ酸残基から、そのカルボキシル末端に及ぶと規定される。Ｆｃ領域中の残基の番号付けは、ＫａｂａｔにあるＥＵインデックスの番号である。免疫グロブリンのＦｃ領域は一般的に、ＣＨ２とＣＨ３の２つの定常ドメインを含有する。当分野に知られているように、Ｆｃ領域は、二量体型または単量体型で存在し得る。
【０１２８】
抗体の「可変領域」とは、抗体軽鎖の可変領域、または抗体重鎖の可変領域のいずれか単独、または組み合わせを指す。当分野に知られているように、重鎖および軽鎖の可変領域は各々、超可変領域としても知られている３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）に繋がる４つのフレームワーク領域（ＦＲ）からなり、抗体の抗原認識部位を形成する。ＣＤＲに隣接するＦＲを選択するとき、例えば抗体のヒト化または最適化を行うとき、同じ基準クラスのＣＤＲ配列を含有する抗体由来のＦＲが好ましい。
【０１２９】
本出願において使用されるＣＤＲの定義は、当分野で創出された多くの異質的な、しばしば矛盾するスキームにおいて使用されるドメインを組み合わせており、免疫グロブリンレパートリー分析と、遊離状態および抗原との共結晶状態の抗体の構造分析との組み合わせに基づいている（Ｓｗｉｎｄｅｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６，ａｂＹｓｉｓ：Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ，Ａｎａｌｙｓｉｓ，ａｎｄ  Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ．Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．［ＰＭＩＤ：２７５６１７０７；Ｅｐｕｂ  ２２  Ａｕｇｕｓｔ  ２０１６］によるレビューを参照のこと）。本明細書において使用されるＣＤＲの定義（「統合された」定義）は、そうしたすべての過去の洞察の教示を組み込んでおり、潜在的に標的−結合の相補性を介在する完全な残基の状況を抽出するために必要なすべての適切なループ位置を含む。
【０１３０】
表１は、本明細書に規定される０３０１マウス抗ＣＳＦ１Ｒ抗体のＣＤＲのアミノ酸配列（「統合された」スキーム）を、同じＣＤＲを規定する公知の代替システムと比較して示している。
【０１３１】
本明細書において使用される場合、「保存的置換」という用語は、アミノ酸を、機能活性を大きく有害には変化させない別のアミノ酸で置換することを指す。「保存的置換」の好ましい例は、アミノ酸を、以下のＢＬＯＳＵＭ  ６２置換マトリクス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ＆  Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，１９９２，ＰＮＡＳ  ８９：１０９１５−１０９１９を参照のこと）において０以下の値を有する別のアミノ酸で置換することである。
【０１３２】
【化１】
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【０１３３】
「モノクローナル抗体」（Ｍａｂ）という用語は、例えば任意の真核細胞クローン、原核細胞クローンまたはファージクローンなどのクローンの１つのコピーから誘導された抗体またはその抗原結合部分を指し、それが作製された方法は示唆しない。本発明のモノクローナル抗体は、均質、または実質的に均質な集団で存在することが好ましい。
【０１３４】
「ヒト化」抗体分子とは、非ヒト免疫グロブリンに由来する配列を最小限に含有するキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはその断片（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、または他の抗原結合性の抗体下位配列）である、非ヒト（例えばマウス）抗体分子またはその抗原結合部分の形態を指す。ヒト化抗体は、レシピエントのＣＤＲ由来の残基が、所望の特異性、アフィニティおよび能力を有する例えばマウス、ラットまたはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基で置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であってもよい。
【０１３５】
「ヒト抗体または完全ヒト抗体」とは、ヒト抗体遺伝子を担持するトランスジェニックマウスから誘導された、またはヒト細胞から誘導された抗体分子またはその抗原結合部分を指す。
【０１３６】
「キメラ抗体」という用語は、可変領域配列が１つの種に由来し、定常領域配列は別の種に由来する抗体分子またはその抗原結合部分を指すことが意図され、例えば、可変領域配列はマウス抗体に由来し、定常領域配列はヒト抗体に由来する抗体分子などである。
【０１３７】
「抗体−薬剤結合体」および「免疫結合体」とは、ＣＳＦ１Ｒに結合し、ならびに細胞傷害剤、細胞増殖抑制剤、および／または治療剤と結合された抗体分子またはその抗原結合部分を指し、抗体誘導体を含む。
【０１３８】
本発明の抗体分子、またはその抗原結合部分は、例えば組み換え技術、ファージディスプレイ技術、合成技術、またはそうした技術もしくは当分野に既に公知である他の技術との組み合わせなどの当分野に公知の技術を使用して作製され得る。
【０１３９】
「単離された分子」（分子が、例えばポリペプチド、ポリヌクレオチドまたは抗体である場合）という用語は、その起源または誘導体化の源によって、（１）自然状態では付随する天然の関連構成要素と関連していない分子、（２）同じ種由来の他の分子を実質的に含まない分子、（３）異なる種由来の細胞により発現された分子、または（４）自然には存在しない分子である。したがって、化学的に合成された分子、または天然での起源である細胞とは異なる細胞系で発現された分子は、その天然の関連構成要素から「単離される」。さらに分子は、当分野に公知の精製技術を使用した単離などによって、天然の関連構成要素を実質的に含まない状態となり得る。分子純度または均質性は、当分野に公知の多くの手段により解析され得る。例えばポリペプチドサンプルの純度は、当分野に公知の技術を使用してポリアクリルアミドゲル電気泳動を使用し、ゲルを染色してポリペプチドを可視化して解析されてもよい。ある目的に対し、ＨＰＬＣ、または当分野において精製用に公知の他の手段を使用することにより、さらに高い分解能が提供される場合がある。
【０１４０】
「エピトープ」という用語は、抗体分子の抗原結合領域のうちの１つまたは複数で抗体分子に認識され、結合されることができる分子の部分、またはその抗原結合部分を指す。エピトープは、一次、二次または三次のタンパク質構造の規定領域からなる場合があり、抗体またはその抗原結合部分の抗原結合領域に認識される標的の二次構造単位または二次構造ドメインの組み合わせを含む。同じくエピトープは、例えばアミノ酸または糖側鎖などの規定の化学的に活性な分子の表面群からなる場合があり、特定の三次元構造特性ならびに特定の電荷特性を有する場合がある。本明細書において使用される場合、「抗原性エピトープ」という用語は、当分野に公知の任意の方法、例えば従来的な免疫アッセイ法、抗体競合結合アッセイ、またはｘ線結晶法もしくは関連構造決定法（例えばＮＭＲ）により決定されたときに、抗体分子が特異的に結合することができるポリペプチドの部分と規定される。
【０１４１】
「結合アフィニティ」または「ＫＤ」という用語は、特定の抗原−抗体の相互作用の解離速度を指す。ＫＤは、「ｏｆｆ−ｒａｔｅ（ｋｏｆｆ）」とも呼ばれる解離速度と、「ｏｎ−ｒａｔｅ（ｋｏｎ）」、すなわち会合速度の比率である。ゆえにＫＤは、ｋｏｆｆ／ｋｏｎに等しく、モル濃度（Ｍ）として表される。従って、ＫＤが小さくなると、結合アフィニティは強くなる。ゆえにＫＤが１μＭであれば、ＫＤが１ｎＭの場合と比較して結合アフィニティが弱いことを示す。抗体のＫＤ値は、当分野に確立された方法を使用して決定され得る。抗体のＫＤの決定方法の１つは、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用するものであり、典型的には、例えばＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）システムなどのバイオセンサーシステムを使用する。
【０１４２】
「有効性」という用語は、生物活性の測定値であり、本明細書に記載のＣＳＦ１Ｒ活性アッセイにおいて測定される活性の５０％を阻害する、抗原ＣＳＦ１Ｒに対する抗体または抗体薬剤結合体のＩＣ５０または有効濃度として指定される場合もある。
【０１４３】
本明細書において使用される場合、「有効量」または「治療有効量」という文言は、所望の治療結果を実現するために必要な（用量での、および期間に対する、および投与手段に対する）量を指す。有効量は、活性剤の、対象に治療上有益な影響を与えるために必要な少なくとも最小量であるが、対象に毒性のある量よりは少ない量である。
【０１４４】
本発明の抗体分子の生物活性に関して本明細書において使用される場合、「阻害する」または「中和する」という用語は、限定されないが、ＣＳＦ１Ｒに対する抗体分子の生物活性、または抗体分子とＣＳＦ１Ｒの結合相互作用を含む、阻害されるものの進行または重大度を実質的にアンタゴナイズする、妨げる、予防する、抑える、減速させる、破壊する、除去する、停止させる、低下させる、または反転させる抗体の能力を意味する。
【０１４５】
「宿主細胞」には、ポリヌクレオチド挿入物の組み込みのためのベクターに対するレシピエントであってもよく、またはレシピエントである個々の細胞または細胞培養物を含む。宿主細胞は、単一宿主細胞の子孫物を含み、当該子孫物は、自然の、偶発的な、または意図的な変異により、元の親細胞と完全に同一であるとは限らない場合がある（形態において、またはゲノムＤＮＡの相補体において）。宿主細胞には、本発明のポリヌクレオチドをインビボでトランスフェクトされた細胞が含まれる。
【０１４６】
本明細書において使用される場合、「ベクター」とは、宿主細胞において、対象の１つまたは複数の遺伝子または配列を送達することができる、そして好ましくは発現することができる構築物を意味する。ベクターの例としては限定されないが、ウイルスベクター、ネイキッドＤＮＡまたはＲＮＡの発現ベクター、プラスミド、コスミドまたはファージベクター、カチオン縮合剤と関連付けられたＤＮＡまたはＲＮＡの発現ベクター、リポソーム中に封入されたＤＮＡまたはＲＮＡの発現ベクター、および例えばプロデューサー細胞などの特定の真核細胞が挙げられる。
【０１４７】
本明細書において使用される場合、別段が示唆されない限り、「治療すること」という用語は、そうした用語が適用される障害もしくは状態、またはそうした障害もしくは状態の１つまたは複数症状を反転させる、改善させる、進行を阻害する、進行を遅延させる、発症を遅延させる、または予防することを意味する。本明細書において使用される場合、別段の示唆が無い限り、「治療」という用語は、上述に規定される治療の行為を指す。「治療すること」という用語は、対象の補助治療および新補助（ｎｅｏａｄｊｕｖａｎｔ）治療も含む。誤解を避けるために、本明細書において「治療」という言及は、治癒的、緩和的、および予防的な治療に対する言及を含む。誤解を避けるために、本明細書において「治療」という言及は、治癒的、緩和的、および予防的な治療に対する言及もさらに含む。
【０１４８】
本明細書において、実施形態は、「含む」という文言で記載されているか、さもなければ「〜からなる」および／または「本質的に〜からなる」として記載される類似した実施形態も提供されることを理解されたい。
【０１４９】
本発明の態様または実施形態が、マーカッシュ群または他の代替的な群で記載されている場合、本発明は、概して列挙される群全体のみならず、当該群の各メンバーを個々に、および当該主要群の可能性のあるすべての亜群、そして当該群メンバーの１つまたは複数を欠いた主要群も包含する。本発明はさらに、請求される本発明の群メンバーのいずれかの１つまたは複数の明白な除外を予期するものである。
【０１５０】
別段の規定がない限り、本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって普遍的に理解される意味と同じ意味を有する。矛盾が生じる場合、本明細書が定義を含み主導をとるものとする。本明細書および請求の範囲の全体を通じて、「含む」という文言、または例えば「含むこと」といった変化形は、記述される整数値の含有、または整数値の群の含有を示唆するが、任意の他の整数値または整数値の群の除外は示唆しないと理解される。文脈により別段であることを要しない限り、単数形の用語は複数を含み、複数形は単数を含むものとする。「例えば」という用語の後に続く任意の例示は、包括的または限定であることは意味しない。
【０１５１】
本発明の実施は、別段の示唆が無い限り、分子生物学（組み換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、および免疫学の従来的な技術を採用し、それら技術は当分野の技術範囲内にある。
【０１５２】
本発明の特定の非限定的な実施形態を、添付の図面に対して記載する。
【実施例】
【０１５３】
実施例１．最適化抗ＣＳＦ１Ｒ治療用抗体の作製
イントロダクション
【０１５４】
本実施例において、本発明者らは、アゴニスト性の最適化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体パネルの作製に成功した。これら抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は良好に発現され、生物物理的に安定であり、溶解度が高く、そして好ましいヒト生殖細胞系列に対し最大の同一性を有している。
【０１５５】
材料及び方法
ＣＳＦ１Ｒライブラリーの作製および選択
ＣＳＦ１Ｒ  Ｆａｂレパートリーは、大量オリゴ合成およびＰＣＲにより組み立てられた。次いで増幅されたＦａｂレパートリーを制限酵素−ライゲーションを介してファージミドベクター内にクローニングし、大腸菌ＴＧ−１細胞内に形質転換した。ファージレパートリーは、原則として過去に詳述されるようにレスキューされた（Ｆｉｎｌａｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ６８１：３８３−４０１）。
ファージ選択は、ストレプトアビジン磁気マイクロビーズをビオチニル化ＣＳＦ１Ｒ標的タンパク質（ヒトまたはカニクイザルのいずれか）でコーティングし、ビーズをＰＢＳで３回洗浄して、５％スキムミルクタンパク質を加えたＰＢＳ  ｐＨ７．４中に再懸濁させることにより実施された。これらビーズは、選択のラウンド１では１００ｎＭの標的タンパク質でコーティングされており、その後の３回の連続ラウンドでは抗原濃度は減少された。各ラウンドにおいて、ファージはトリプシンを使用して溶出され、その後、ＴＧ１細胞内に再感染された。
【０１５６】
ペリプラズム抽出物の作製（小スケール）
個々の大腸菌クローンにおいて、可溶性Ｆａｂの産生が行われた。対数増殖期の大腸菌ＴＧ１細胞は、１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシドイソプロピルを用いて誘導された。可溶性Ｆａｂを含有するペリプラズム抽出物は、以下の凍結／融解サイクルにより作製された。細菌細胞沈殿物を一晩、−２０℃で凍結させ、その後室温で溶解させ、ＰＢＳ  ｐＨ７．４中に再懸濁させた。室温で振とうし、遠心分離を行った後に、可溶性Ｆａｂを含有する上清を収集した。
【０１５７】
ＩｇＧの発現および精製
リードパネルの抗ＣＳＦ１Ｒ抗体と、ｍｕ０３０１およびｈｕ０３０１の重鎖可変ドメインならびに軽鎖可変ドメインをコードする哺乳動物コドン最適化合成遺伝子を、それぞれヒトＩｇＧ４−Ｓ２２８Ｐ（ヒンジを安定化させるヒンジ領域中のＳ２２８Ｐ変異を含有するヒトＩｇＧ４）およびヒトＣκドメインを含有する哺乳動物発現ベクター内にクローニングした。哺乳動物発現系において、重鎖および軽鎖を含有するベクターの共トランスフェクションを実施し、次いでプロテインＡ系のＩｇＧ精製、定量、ならびに変性ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび非変性ＳＤＳ−ＰＡＧＥ上でＱＣを行った。
【０１５８】
ＦａｂおよびＩｇＧに対する直接結合ＥＬＩＳＡ
組み換えタンパク質に対するリードパネルの結合および交差反応性は、結合ＥＬＩＳＡにより最初に評価された。ヒトＣＳＦ１ＲヒトＦｃタグ化組み換えタンパク質、およびカニクイザルＣＳＦ１ＲヒトＦｃタグ化組み換えタンパク質で、ＭａｘｉＳｏｒｐ（商標）平底９６ウェルプレートの表面上を１μｇ／ｍｌでコーティングした。精製ＩｇＧサンプルは、５００ｎＭから始まり０．００８ｎＭまでの２倍連続希釈で用量設定され、コーティングされた抗原に結合された。Ｆａｂは、マウス抗ｃ−ｍｙｃ抗体、次いでセイヨウワサビペルオキシダーゼが結合したロバ抗マウスＩｇＧを使用して検出された。ＩｇＧは、セイヨウワサビペルオキシダーゼが結合したマウス抗ヒトＩｇＧを使用して検出された。結合シグナルは、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジン基質溶液（ＴＭＢ）を用いて可視化され、吸光度は４５０ｎｍで測定された。
【０１５９】
ＩｇＧ抗体に対する、Ａｌｐｈａｓｃｒｅｅｎエピトープ競合アッセイ
ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎアッセイ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ社）は、３８４ウェルの白色マイクロタイタープレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ社）において２５μｌの最終量で実施された。反応緩衝液は、１ｘＰＢＳ  ｐＨ７．３（Ｏｘｏｉｄ社、カタログ番号ＢＲ００１４Ｇ）および０．０５％（ｖ／ｖ）  Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０（Ｓｉｇｍａ社、カタログ番号Ｐ９４１６）を含有した。精製ＩｇＧサンプルは、５００ｎＭの最終濃度で始まる３倍連続希釈で用量設定され、室温で２０分間、ビオチニル化ヒトＣＳＦ１Ｒとともにインキュベーションされた。ｍｕ０３０１  ＩｇＧおよび抗ヒトＩｇＧアクセプタービーズを添加し、混合液を室温で１時間インキュベーションした。その後、２０μｇ／ｍｌ（最終濃度）のストレプトアビジンドナービーズを加え、室温で３０分間インキュベーションした。発光は、ＥｎＶｉｓｉｏｎマルチラベルプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ社）において測定され、ＥｎＶｉｓｉｏｎマネージャーソフトウェアを使用して解析された。値は、１秒当たりのカウント数（ＣＰＳ：Ｃｏｕｎｔｓ  Ｐｅｒ  Ｓｅｃｏｎｄ）として報告され、クロストークに対して補正された。ＥＣ５０値は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ社、カリフォルニア州ラホーヤ）においてＭＦＩ値を使用して算出された。
【０１６０】
単量体型のヒトおよびカニクイザルのＣＳＦ１Ｒ溶液に対する、ＩｇＧアフィニティのＢｉａｃｏｒｅ解析
精製ＩｇＧのアフィニティ（ＫＤ）は、Ｂｉａｃｏｒｅ３０００（ＧＥ社）上で、抗原溶液を用いたＳＰＲを介して決定された。マウス抗ヒト抗体（ＣＨ１特異的）を、２チャンネル用のＷｉｚａｒｄの説明書に従い、ｐＨ４．５の酢酸緩衝液中、アミンカップリングを使用してＣＭ５センサーチップ上に２０００ＲＵレベルにまで固定した。１つのチャンネルは、バックグラウンドシグナルの補正用に使用した。標準的なランニング緩衝液であるＨＢＳ−ＥＰ  ｐＨ７．４を使用した。１０μｌの１０ｍＭ  グリシン  ｐＨ１．５を、２０μｌ／分で単回注入することにより、再生を行った。ＩｇＧサンプルは、３０μｌ／分、５０ｎＭで２分間注入され、その後、６０秒間の解離速度（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）が続いた。単量体型細胞外ドメインタンパク質（ヒトＣＳＦ１ＲまたはカニクイザルＣＳＦ１Ｒ）は、１００ｎＭ〜３．１ｎＭの２倍連続希釈で２分間、３０μｌ／分で注入され、次いで３００秒の解離速度が続いた。得られたセンサーグラムは、Ｂｉａｃｏｒｅ  ３０００  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ（ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ社）ソフトウェアを使用して解析された。ＫＤは、１：１のＬａｎｇｍｕｉｒ結合モデルに対し、会合相と解離相の同時適合を行うことにより算出された。
【０１６１】
ＩｇＧのフローサイトメトリー
精製ＩｇＧを、ＨＥＫ−２９３細胞上に発現されたヒトおよびカニクイザルのＣＳＦ１Ｒに対する結合に関し、ＦＡＣｓにおいて検証した。ＩｇＧサンプルは、５００ｎＭに始まり０．９８ｎＭまでの３倍連続希釈で用量設定された。ＩｇＧの結合は、ＦＩＴＣが結合したマウス抗ヒトＩｇＧを用いて検出された。結果は、フローサイトメーターのＢＬ−１チャンネル検出器（ＡｔｔｕｎｅＴＭ  ＮｘＴ  Ａｃｏｕｓｔｉｃ  Ｆｏｃｕｓｉｎｇ  Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ／  ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）において、１サンプル当たり１００００個の細胞の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を検証することにより解析された。
【０１６２】
抗体ｖ−ドメインＴ細胞エピトープ含量：インシリコ分析
インシリコ技術（Ａｂｚｅｎａ，Ｌｔｄ．）は、治療用抗体および治療用タンパク質中のＴ細胞エピトープの位置の特定に基づいており、抗体ｖ−ドメイン中の潜在的な免疫原性を評価するために使用された。ｉＴｏｐｅ（商標）を使用して、ヒトＭＨＣクラスＩＩに対して無差別的な高いアフィニティ結合を有するペプチドに関し、重要なリードのＶＬ配列およびＶＨ配列を解析した。無差別的な高いアフィニティＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドは、薬剤タンパク質の臨床免疫原性に関する高いリスク指標であるＴ細胞エピトープの存在と相関すると考えられている。ｉＴｏｐｅ（商標）ソフトウェアは、ペプチドのアミノ酸側鎖と、３４種のヒトＭＨＣクラスＩＩアレルの開放末端結合溝（ｇｒｏｏｖｅ）内の特定の結合ポケット（特にポケット位置；ｐ１、ｐ４、ｐ６、ｐ７およびｐ９）の間の有益な相互作用を予測する。これらのアレルは、広く存在する最も普遍的なＨＬＡ−ＤＲアレルであり、任意の特定の民族集団で多く存在するような重み付けはない。当該アレルのうちの２０種が、「開いた」ｐ１構造を含有している。そして１４種が「閉じた」構造を含有しており、８３位のグリシンがバリンで置換されている。重要な結合残基の位置は、被験タンパク質配列にわたり８アミノ酸が重複している９ｍｅｒペプチドのインシリコ生成により取得される。このプロセスによって、ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合する、または結合しないペプチドを高い正確性で識別することに成功した。
【０１６３】
さらに、ＴＣＥＤ（商標）（Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ（商標））を使用して配列を解析し、過去にインビトロでの他のタンパク質配列のヒトＴ細胞エピトープマッピング解析により特定されたＴ細胞エピトープとの合致を検索した。ＴＣＥＤ（商標）を使用して、非関連タンパク質に由来するペプチドの大きな（１０，０００個を超えるペプチド）データベースに対する任意の被験配列と、抗体配列を検索する。
【０１６４】
初代ヒト単球増殖アッセイ
新たに初代ヒトＣＤ１４＋単球が３名の健常なヒトドナーの末梢血から単離された。単球サンプルは、力価測定された抗ＣＳＦ１Ｒ  ＩｇＧ４−Ｓ２２８Ｐクローンの存在下または非存在下で、２４００ＩＵ／ｍｌ  Ｍ−ＣＳＦで処理された。５日後、細胞の生存／増殖が、ＣＣＫ−８試薬を使用して定量された。ＣＣＫ−８の添加後、１〜３時間の間隔でプレートが読み取られ、ビヒクル処理ウェルが、２〜２．５のＯＤ４５０ｎｍであった時点を解析に使用した。
【０１６５】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）解析
被験物質のＴｍは、ＭｉｃｒｏＣａｌ  ＰＥＡＱ−ＤＳＣ（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社、英国マルヴァーン）ランニングバージョン１．２２ソフトウェアを使用して解析された。２０〜１１０℃の範囲にわたり２００℃／時の速さでサンプルを加熱した。温度データは、タンパク質濃度に基づき正規化された。タンパク質のＴｍは、加熱スキャンデータから決定された。
【０１６６】
強制酸化解析
消化されたＩｇＧの強制酸化解析：被験物質は、室温で２時間、０．５％のＨ２Ｏ２で処理された。天然および酸化ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）サンプルを、ＳＭＡＲＴ  Ｄｉｇｅｓｔ（商標）キット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、英国へメルヘムステッド）をメーカーのプロトコールに従い使用してトリプシンで消化した。得られたトリプシン処理ペプチドは、逆相クロマトグラフィーにより直ちに解析された。クロマトグラフィー分離は、Ｄｉｏｎｅｘ  Ｕｌｔｉｍａｔｅ  ３０００ＲＳ  ＨＰＬＣシステム（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、英国へメルヘムステッド）に接続されたＡｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＣＳＨ  Ｃ１８カラム、１３０Å、１．７μｍ、２．１ｍｍ×１５０ｍｍ（Ｗａｔｅｒｓ社、英国エルストリー）を使用して実施された。この方法は、９５％緩衝液Ａ（０．１％ＦＡの水溶液）〜１５％緩衝液Ｂ（０．０８５％ＦＡの７５％アセトニトリル溶液）の直線勾配を４分間、次いで１５％緩衝液Ｂ〜６０％緩衝液Ｂの直線勾配を２２分間で構成された。流速は、０．２ｍＬ／分、温度は解析中、４０℃で維持された。検出は、２８０ｎｍのＵＶ吸収により実施された。
【０１６７】
疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）解析
クロマトグラフィー分離は、Ｄｉｏｎｅｘ  Ｕｌｔｉｍａｔｅ  ３０００ＲＳ  ＨＰＬＣシステム（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、英国へメルヘムステッド）に接続されたＴＳＫｇｅｌ  Ｂｕｔｙｌ−ＮＰＲ  ４．６ｍｍ×３５ｍｍ  ＨＩＣカラム（ＴＯＳＯＨ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｌｔｄ．、英国リーディング）を使用して実施された。この方法は、６０％緩衝液Ａ（１００ｎＭのリン酸ナトリウム  ｐＨ７．０、２Ｍ硫酸アンモニウム）〜９０％緩衝液Ｂ（１００ｍＭリン酸ナトリウム  ｐＨ７．０）の直線勾配を９分間で構成された。流速は、１．２ｍＬ／分であった。検出は、２８０ｎｍのＵＶ吸収により実施された。
【０１６８】
結果および考察
好ましいヒト生殖細胞系列ｖ−遺伝子へのＣＤＲ移植
アンタゴニスト性マウス抗ＣＳＦ１Ｒ  ＩｇＧ  の「０３０１」のＣＤＲ（ｍｕ０３０１、ＷＯ２０１１／１４０２４９Ａ２および表２を参照のこと）を、ＣＤＲ移植法を使用して、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリンのｖ−ドメインフレームワーク配列スキャホールドに最初に導入した。最適な薬剤様性能を有する最終リード治療用ＩｇＧ化合物に向けて、遺伝子操作の努力を傾けるために、親抗体のＣＤＲを、「好ましい」生殖細胞系列スキャホールドのＩＧＨＶ１−６９およびＩＧＫＶ３−１１に移植することを選択した。それらスキャホールドは、良好な溶解性および薬剤開発クオリティを有することが知られており、発現されたヒト抗体レパートリーにおいて高頻度に使用されている。ＩＧＨＶ１−６９生殖細胞遺伝子は、ヒト集団において多数のアレルバリアントを有することが知られている。ヒト免疫レパートリーの配列解析実験により、アレルＩＧＨＶ１−６９＊０１が、最も普遍的に発現されていることが示されている。そこで、これをＣＤＲ移植およびライブラリーデザインの基礎となる特定アレルとして選択した。
【０１６９】
これらスキャホールドおよび移植されたＣＤＲの定義は、表２に概要を掲載した。マウス抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の重鎖配列と軽鎖配列も表２に示す。ＣＤＲ移植のプロセスは公知であるが、ヒトｖ−ドメイン配列の所与のセットが非ヒトＣＤＲ移植に対する適切なアクセプターフレームワークとして機能するかを予測するのは未だ困難である。不適切なフレームワークの使用は、標的結合機能の消失、タンパク質安定性の問題、さらには最終ＩｇＧの発現の低下につながり得る。そこでＣＤＲ突然変異誘導の鋳型として、ＩＧＨＶ１−６９／ＩＧＫＶ３−１１移植が採用され、改善クローンの選択が行われた。
【０１７０】
ライブラリー作製およびスクリーニング
ＣＤＲが移植されたＩＧＨＶ１−６９／ＩＧＫＶ３−１１のｖ−ドメイン配列を、Ｆａｂファージディスプレイ形式に組み込み、突然変異誘導ライブラリーカセットは、オリゴ合成およびアセンブリにより作製された。突然変異誘導ライブラリーは、ＣＤＲ中のヒト生殖細胞系列の残基およびマウス残基をサンプリングするだけでなく、ヒト生殖細胞系列のＩＧＫＶ３−１１中に存在しない、高リスクな推定異性化モチーフの「ＤＧ」を含有するＬＣＤＲ１中のアミノ酸（モチーフ「ＹＤＧＤＮ」（配列番号７４））の将来的な除去を促進し得る変異（例えば、Ｄ／Ｅ／Ｑ）もサンプリングして合成された。この追加的な突然変異誘導は、２つの別個のＦａｂライブラリーが最初に構築されたことを意味しており、それぞれ、重鎖または軽鎖のｖ−ドメイン配列のいずれかにおいて、同系の対形成移植ｖ−ドメインと組み合わされて変異多様性がサンプリングされた。ＶＨライブラリーとＶＬライブラリーの両方を別個にファージディスプレイベクターにライゲートし、エレクトロポレーション法を介して大腸菌に形質転換され、それぞれ１．０６ｘ１０９および８．７３ｘ１０８の独立したクローンを生成した。ライブラリーの構造品質は、１ライブラリー当たり９６個のクローンを配列解析することにより実証された。この配列解析データにより、マウスまたはヒト生殖細胞系列の各相違位置の残基をコードする位置が効率的におよそ５０％の頻度でサンプリングされたこと、または３３％の位置で３アミノ酸がサンプリングされたことが示された。ライブラリーは、ヘルパーファージＭ１３を使用してレスキューされ、選択はビオチニル化されたヒトおよびカニクイザルのＣＳＦ１Ｒ−Ｆｃタンパク質に対し、複数の別個のブランチにおいて実施された。選択の初期ラウンドの後、変異したＶＨドメインおよびＶＬドメインの２つのプールを第二のライブラリー内に再度組み込み、さらに３ラウンドの標準的な選択を実施して、それに加えて２回の「ハンマー−ハグ」ラウンドを実施した。
【０１７１】
選択後のスクリーニング（図１）およびＤＮＡ配列解析により、５９８個のヒトおよびカニクイザルのＣＳＦ１Ｒ結合Ｆａｂクローンの存在が明らかになり、それらクローンは、ＥＬＩＳＡにおいてヒトおよびカニクイザルのＣＳＦ１Ｒに対し強い結合を呈した。これら５９８個のクローンの中で、フレームワーク配列は完全に生殖細胞系列を維持していた一方で、すべてのＣＤＲ中に変異が観察された（表３）。リードクローンは、ヒトおよびカニクイザルのＣＳＦ１Ｒ−Ｆｃの両方への結合に対するＥＬＩＳＡシグナルと比較したＣＤＲ生殖細胞系列化のレベルに基づき格付けされた。次いでこの格付けの上位１０個のクローンのｖ−ドメインをＩｇＧ発現ベクターにサブクローニングし、以下のさらなる検証を行った（表４）。
【０１７２】
生殖細胞系列化変異は、ライブラリー選択から直接誘導されたリードクローンのすべてのＣＤＲにおいて観察されたが、配列解析を行うことで、ヒト化が最大となるようクローンをさらに設計することが可能となる可能性がある。ヒトおよびカニクイザルのタンパク質に対する結合シグナルを有する５９８個の配列−固有ヒットを使用して、この機能的に特徴解析された集団のＣＤＲにおけるマウスアミノ酸の保持頻度を解析した。位置的なアミノ酸保持頻度は、ＶＬドメインおよびＶＨドメインにある百分率として表されている（それぞれ図２Ａおよび２Ｂ）。ＲＦ＜７５％を有するマウス残基は、標的−結合パラトープに必須ではない可能性がある位置とみなされ、一連のコンビナトリアルデザインにおいて生殖細胞系列化に対し開かれている可能性がある（表４）。ＶＬドメインにおいて、０３０１配列由来の２２個のマウスＣＤＲ残基のうち、たった１０個が、＞７５％の頻度で維持されていた（図２Ａ）。ＶＨドメイン（ＣＤＲ−Ｈ３を除く）において、ＣＤＲ−Ｈ１およびＨ２中の１７個のマウス残基のうち、たった８個が、７５％を超える維持頻度を呈した（図２Ｂ）。重要なことは、ｈｕ０３０１のＬＣＤＲ１の９位および１０位にあるＤＧアミノ酸モチーフは、異性化の高いリスクであり、構造的な不安定性をもたらすということである。図２Ａのデータ、および表３に示される配列多様性から、このモチーフが、例えばＥＧ、ＱＧなどの化学的安定性の高い配列で置き換えられ得る可能性が明白に示された。
【０１７３】
ＲＦ＞７５％のマウス残基のみを含有するデザインは、「ＭＨ」という接頭辞（ＭＨ＝最大ヒト化（Ｍａｘｉｍａｌｌｙ  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ））が与えられた。トータルで、９個のデザインＶＨドメインおよび３個のデザインＶＬドメインが生成された（ＭＨ１〜ＭＨ９、表４）。ＭＨクローンは、（上述の１０個のライブラリー由来クローン、ならびに陽性対照のｍｕ０３０１およびｈｕ０３０１とともに）遺伝子合成により生成され、ヒト発現ベクターにクローニングされ、ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）形式で作製された。すべてのＩｇＧが、哺乳動物細胞の一過性トランスフェクションから容易に発現され、精製された。
【０１７４】
リードＩｇＧの特異性および有効性の特徴解析
次いで上述の精製ＩｇＧを、直接力価測定ＥＬＩＳＡ形式において、ヒトおよびカニクイザルのＣＳＦ１Ｒ−Ｆｃへの結合に関して検証した。この解析から、いくつかのライブラリー由来クローンが、ｍｕ０３０１と重複する、またはこれを超えて改善されたヒトおよびカニクイザルのＣＳＦ１Ｒ結合プロファイルを有していたことが示された（図３ＡおよびＢ）。注目すべき例外は、クローンＭＨ１−３、ＭＨ７−９、３０Ｃ１１および２９Ｅ１１であり、これらはすべて、ＣＳＦ１Ｒの両オルソログに対して貧弱な結合を呈した。このことから、これらデザインクローンおよびライブラリー由来クローンに存在するＣＤＲ変異は、組み合わされて使用された場合に、結合に破壊的な影響を与えることが示唆される。直接結合ＩｇＧのＥＬＩＳＡのＥＣ５０値は、真の１：１結合アフィニティよりもアビディティに強く影響を受けるため、本発明者らは次に、以下に概要されるように高感度な液相エピトープの競合およびＢｉａｃｏｒｅ結合アフィニティ決定を実施した。
【０１７５】
ビオチニル化単量体型ヒトＣＳＦ１Ｒに対するｍｕ０３０１結合とのエピトープ競合に関するＩｇＧの検証が可能なＡｌｐｈａｓｃｒｅｅｎアッセイが確立された。このアッセイにおいて、上位の性能を有するライブラリー由来ＩｇＧおよびデザインＩｇＧは、ＩＣ５０値を介してより効率的に識別された（表５）。大多数のクローンが、ｈｕ０３０１と同等、またはこれを超えて改善された０３０１エピトープ競合を呈していた（図４）。一方で、２つのデザインクローン（ＭＨ４およびＭＨ６）は、有意に低下したエピトープ競合を呈した（ｈｕ０３０１よりも２倍超低い）。
【０１７６】
結合アフィニティのＢｉａｃｏｒｅ解析は、液相の単量体型ヒトおよびカニクイザルのＣＳＦ１Ｒタンパク質に対し、すべてのＩｇＧに実施された（表６）。これらの解析から、Ａｌｐｈａｓｃｒｅｅｎアッセイの最も高いＩＣ５０値を与えるライブラリー由来クローンは、ヒトおよびカニクイザルのＣＳＦ１Ｒに対し最も高いアフィニティ結合も示したことが示された。重要なことは、ライブラリー由来クローンの３０Ｅ０６、２９Ｈ０９および２９Ｄ１０はすべて、ｈｕ０３０１との比較において、ヒトおよびカニクイザルのＣＳＦ１Ｒの両方に対し、予想外の結合アフィニティの改善を呈したことである。重要なことは、これらアフィニティにおける改善が、これらクローンのヒト／カニクイザルのアフィニティを３倍未満（すべてのＫＤ値が＜０．４２ｎＭ）に部分的に正規化させたことであり、ｈｕ０３０１が３倍超の差異を呈したこととは対照的である（ヒトＫＤ−０．２１ｎＭ、カニクイザルＫＤ−０．６６ｎＭ）。ヒトおよびカニクイザルの標的オルソログの間で３倍未満のアフィニティ差であることは、前臨床薬剤開発解析において非常に有益であり、これによって例えばサルの安全性試験、ＰＫおよびＰＤのモデリング試験などの正確性の高いデザインおよび解釈が可能となる。さらに同一の重鎖配列を共有するクローンのＭＨ４、ＭＨ５およびＭＨ６のアフィニティの比較において、以下を含む、標的結合アフィニティの維持に対する選択軽鎖残基の影響が強調されている：ＬＣＤＲ１の９位（Ｄ／Ｅ／Ｑ）、ＬＣＤＲ２の１位（Ｄ／Ａ）、およびＬＣＤＲ３の５位（Ｅ／Ｑ）。ＬＣＤＲ３において残基Ｑを使用することで、図２Ａに示される解析では親残基のＥの維持頻度はたった６０％であるにもかかわらず、ヒトＣＳＦ１Ｒに対する結合アフィニティが、０．２２ｎＭ（クローンＭＨ５）から０．８８ｎＭ（ＭＨ６）にまで低下した。ＬＣＤＲ１において残基Ｑを使用し、ＬＣＤＲ２において残基Ｄを使用し、そしてＬＣＤＲ３において残基Ｑを使用することで、ヒトＣＳＦ１Ｒに対する結合アフィニティが、０．２２ｎＭ（クローンＭＨ５）から１．９ｎＭ（ＭＨ４）にまで低下した。これらの発見は、個々のクローンのヒト化レベルを最大化する試みにおいて、どのＣＤＲ残基をヒト生殖細胞系列のものへと転換させ得るか、させ得ないかを「先験的に」決定することの困難さを強調するものであった。
【０１７７】
細胞膜でのリードＩｇＧ結合特異性のフローサイトメトリー解析
ＣＳＦ１Ｒに対する抗体を、フローサイトメトリーを介して、細胞表面での濃度依存性結合に関して分析した。最初の解析は、ヒトまたはアカゲザルのＣＳＦ１Ｒを一過性トランスフェクションされたＨＥＫ−２９３細胞に対して実施された。これらの解析から、ライブラリー由来のリードクローンおよびデザインリードクローンは、膜提示されたヒトＣＳＦ１Ｒに対する強力な濃度依存性の結合を呈し、結合曲線は、ｈｕ０３０１  ＩｇＧと重複、またはこれを超えて改善されていたことが示された（図５Ａ）。さらにアカゲザルのＣＳＦ１Ｒトランスフェクト細胞に対して実施された解析からも、いくつかの重要なライブラリー由来リードおよびデザインリードもｈｕ０３０１  ＩｇＧと重複した、またはこれを超えて改善された、非常に類似した結合曲線を呈したことが確認された（図５Ｂ）。非トランスフェクトＨＥＫ−２９３細胞に対しては、いずれのクローンも結合シグナルが観察されなかった。
【０１７８】
抗体ｖ−ドメインＴ細胞エピトープ解析
インシリコ技術（Ａｂｚｅｎａ，Ｌｔｄ．）は、治療用抗体および治療用タンパク質中のＴ細胞エピトープの位置の特定に基づいており、ｈｕ０３０１およびリード抗体のｖ−ドメインの両方の免疫原性の評価に使用した。ｖ−ドメイン配列の解析は、重複する９ｍｅｒペプチド（各々が最後のペプチドと８残基重複する）を用いて実施され、３４種のＭＨＣクラスＩＩアロタイプの各々に対して検証された。各９ｍｅｒを、ＭＨＣクラスＩＩ分子との潜在的な「適合」および相互作用に基づいてスコア化した。ソフトウェアにより算出されるペプチドスコアは、０〜１の間である。高い平均結合スコアを出したペプチド（ｉＴｏｐｅ（商標）スコアリング機能において＞０．５５）が強調されている。ＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドの＞５０％（すなわち３４種のアレルのうちの１７種）が高い結合アフィニティ（スコア＞０．６）を有する場合、そうしたペプチドは、「高アフィニティ」ＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドと規定され、ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含有するリスクが高いとみなされる。低アフィニティＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドは、多くのアレル（＞５０％）に、＞０．５５の結合スコア（しかし大部分は＞０．６ではない）で結合する。配列のさらなる解析は、ＴＣＥＤ（商標）を使用して実施された。この配列を使用して、ＢＬＡＳＴサーチによりＴＣＥＤ（商標）をデータ検索し、過去にＡｂｚｅｎａ  Ｌｔｄ．で実施されたインビトロＴ細胞エピトープマッピング研究でＴ細胞反応を刺激した非関連タンパク質／抗体由来のペプチド（Ｔ細胞エピトープ）との間の任意の高い配列相同性を特定した。
【０１７９】
ペプチドを、以下の４つのクラスに分類した：高アフィニティ外来物（「ＨＡＦ」−高免疫原性リスク）、低アフィニティ外来物（「ＬＡＦ」−低免疫原性リスク）、ＴＣＥＤ＋（過去にＴＣＥＤ（商標）データベースにおいて特定されたエピトープ）、および生殖細胞系列エピトープ（「ＧＥ」−高いＭＨＣクラスＩＩ結合アフィニティを有するヒト生殖細胞系列ペプチド配列）。生殖細胞系列エピトープの９ｍｅｒペプチドは、広範な生殖細胞系列ペプチドを用いた過去の研究により立証されたように、Ｔ細胞寛容によって免疫原性である可能性は低い。重要なことは、そうした生殖細胞系列のｖ−ドメインエピトープ（ヒト抗体定常領域中の類似配列によりさらに補助される）は、抗原提示細胞の細胞膜でのＭＨＣクラスＩＩ占有に関しても競合するため、Ｔ細胞刺激に必要とされる「活性化閾値」を達成するのに充分な外来性ペプチド提示のリスクを低下させることである。ゆえにＧＥ含量の高さは、抗体治療剤の臨床開発において有益な性質である。
【０１８０】
表７に示されるように、重要なリードｖ−ドメインは、ｈｕ０３０１と比較してペプチドエピトープ含量において有意に有益な変化を示した。本明細書において採用されたｖ−ドメイン操作プロセスは、ｈｕ０３０１のｖ−ドメインに含有されるマウスＣＤＲ残基の多くを生殖細胞系列化したにもかかわらず、抗ＣＳＦ１Ｒの有効性が維持された抗体の選択に成功した（表２）。そこでライブラリー由来リードおよびデザインリードにおいて、ｈｕ０３０１の重鎖および軽鎖のｖ−ドメイン中に存在する複数のエピトープを除去させることができた（表７）。ＧＥエピトープ含量が増加したことも判明し（すべてのリード中、８〜≧９）、ＴＣＥＤ＋エピトープ含量は、３０Ｅ０６以外のすべてのリードにおいて低下または除去された（表７）。重要なことは、複数の外来性エピトープが、リードクローンのＣＤＲ中に存在する生殖細胞系列化変異によって除去されていたことである。例えば、ＴＣＥＤ＋およびＬＡＦペプチドの「ＦＡＶＹＹＣＨＬＳ」（配列番号７５）は、ｈｕ０３０１のフレームワーク３／ＬＣＤＲ−３中に存在していたが、７位でＨ→Ｑに非保存的な生殖細胞系列化変異を行うことによりすべてのリードクローンにおいて除去された。同様に、３０Ｅ０６以外のすべてのクローンに関し、ＴＣＥＤ＋およびＬＡＦペプチドの「ＩＹＡＡＳＮＬＥＳ」（配列番号７６）は、フレームワーク２／ＬＣＤＲ−２に及んでいるが、７位でＬ→Ｒに生殖細胞系列化変異を行うことにより除去された。驚くべきことに、すべてのリードクローンのＬＣＤＲ−１中に存在する安定化変異（ＩＧＫＶ１−１６生殖細胞系列から離れた変異である、アスパラギン酸の置換）は、当該領域中でＧＥ、ＨＡＦまたはＬＡＦエピトープのいずれもコードしていなかった。変異プロセスおよび再選択プロセスは、開発リスクを最小化し、有効性を維持し、そして免疫原性リスクの上昇を抑えるＬＣＤＲ−１中の非生殖細胞系列で非マウス性の残基の特定に成功した。ｈｕ０３０１のＶＨ領域において、ペプチド配列の「ＦＫＧＲＶＴＩＴＡ」（配列番号７７）（ＨＣＤＲ−２およびフレームワーク３領域に及ぶ）は、ＬＡＦであることが判明した。すべてのリードに存在する、２位でのＫからＱへの生殖細胞系列化変異（表４）は、このリスクを排し、ペプチド配列をＧＥへと転換させた。
【０１８１】
ライブラリー選択プロセスおよびスクリーニングプロセスによって、複数の新規ＣＤＲ配列（表３）が特定され、これらの配列の解析によって、ＣＤＲ中の突然変異誘導に寛容な領域の規定が可能となったことから（図２Ａ、２Ｂ）、本発明者らは、重要リードクローンのＭＨ５のＣＤＲ領域の、インシリコでの探索的突然変異誘導を行うことによって、高度な機能性を維持し、さらにはその免疫原性リスクが低下し得るクローンの新規誘導体の特定が可能となると仮定した。クローンＭＨ５のＶＨドメインにおいて、ＨＡＦエピトープは、ＨＣＤＲ１のＹ３２位で始まる（Ｋａｂａｔナンバリングスキーム）９ｍｅｒのペプチドによりコードされていることが判明した。この位置は変異に対し高度に寛容であることが知られており（図２Ｂ）、そしてこの位置でのインシリコ突然変異誘導によりＨＡＦが除去され得る可能性が示されている（表８）ことから、実験的なサンプリングを行う位置として選択された（表１１）。さらにクローンＭＨ５のＶＨドメインにおいて、ＬＡＦおよびＨＡＦエピトープが、それぞれＨＣＤＲ３／ＦＷ４領域のＦ９９位およびＬ１００Ｂ位（Ｋａｂａｔナンバリングスキーム）でコードされていることが判明した。Ｆ９９位は過去に変異に対し寛容ではないことが判明しており（図２Ｂ）、そしてＱ１０５位でのインシリコ突然変異誘導により、Ｌ１００Ｂ位の高リスクＨＡＦが除去され得る可能性が示されている（表９）ことから、実験的なサンプリングを行う位置としてＱ１０５のみが選択された（表１１）。最後に、クローンＭＨ５のＶＬドメインにおいて、ＨＡＦエピトープは、ＦＷ２／ＬＣＤＲ２領域のＬ４６位およびＬ４７位で始まる（Ｋａｂａｔナンバリングスキーム）９ｍｅｒのペプチドによりコードされていることが判明した。これらの位置のいずれが変異に寛容であるか判明していないため、これらの位置で、および両方の全９ｍｅｒにわたり、インシリコ突然変異誘導が実施された。この解析によって、ＨＡＦエピトープが除去され得る可能性があることが示され（表１０）、Ｌ４６位、Ｌ４７位およびＮ５３位が実験的なサンプリングを行う位置として選択された（表１１）。
【０１８２】
脱免疫化ＭＨ５誘導体−ＩｇＧの特異性および有効性の特性
表１１に記載される、デザイン設計されたＭＨ５由来の脱免疫化変異体のＶＨドメインおよびＶＬドメインのデザインを遺伝子合成し、ヒトＩｇＧ４−Ｓ２２８Ｐ発現ベクター形式にクローニングし、組み合わせて、表１２に概要されるマトリクスでの発現および精製が行われた。これらのＩｇＧは、表１３に概要されるように、予測Ｔ細胞エピトープ含量が最小化された。次いで上述の精製ＩｇＧを、直接力価測定ＥＬＩＳＡ形式において、ヒトおよびカニクイザルのＣＳＦ１Ｒ−Ｆｃへの結合に関して検証した（図６Ａ、６Ｂ）。この解析によって、すべてのクローンが、ヒトおよびカニクイザルのＣＳＦ１Ｒ結合プロファイルを維持していたことが示された。しかしクローンのあるサブセットは、カニクイザルＣＳＦ１Ｒに対する結合の低下を示した（図６Ａ、６Ｂ）。ＣＳＦ１Ｒの両オルソログに対する結合の完全な維持を示した抗体は、ヒトＣＳＦ１Ｒを一過性トランスフェクションされたＨＥＫ−２９３細胞上でのフローサイトメトリーを介した細胞表面での濃度依存性結合に関して解析された。解析されたすべてのクローンが、膜提示ヒトＣＳＦ１Ｒに対し、強力な濃度依存性の結合を呈し、結合曲線は、ｍｕ０３０１およびｈｕ０３０１  ＩｇＧと重複していた（図７）。非トランスフェクトＨＥＫ−２９３細胞に対しては、いずれのクローンも結合シグナルが観察されなかった。さらに、すべてのクローンにおいて大幅な追加変異誘導が行われていたにもかかわらず、「ＰＫリスク指標」ＥＬＩＳＡにおいてヒトインスリンおよびｄｓＤＮＡに対し、バックグラウンドを超える結合は観察されなかった。このＥＬＩＳＡは、多反応性の可能性を検証するものである（図８）。すべてのクローンは、陽性対照抗体のボコシズマブおよびブリアキヌマブを下回るだけでなく、陰性対照抗体のウステキヌマブおよびベバシズマブも下回るシグナルを示した。
【０１８３】
結合アフィニティに関するＢｉａｃｏｒｅ解析は、液相の単量体型のヒトおよびカニクイザルのＣＳＦ１Ｒタンパク質に対し、すべての高性能型ＩｇＧに実施された（表１３）。これらの解析から、ＥＬＩＳＡおよびＦＡＣＳ解析において最も優れた性能であった高度脱免疫化クローンが、ヒトおよびカニクイザルのＣＳＦ１Ｒに対し最も高いアフィニティ結合も示したことが示された。重要なことは、複数のクローン（例えば、ＭＨ１２、ＭＨ１３、ＭＨ２４、およびＭＨ１６）が、ヒトおよびカニクイザルの両方のＣＳＦ１Ｒに対し、ｈｕ０３０１の２倍以内のアフィニティ値を維持したこと、およびヒト／カニクイザルの差異を３倍未満に維持したことである。さらに最大脱免疫化クローンのＭＨ２９、ＭＨ３２およびＭＨ４０であっても、ＣＳＦ１Ｒの両オルソログに対し、ｎＭ以下の範囲でアフィニティを維持したことから、高い有効性、低い免疫原性、そして開発可能性の改善が、一つのクローンで完全に最適化され得たことが提示される（表１４）。一部のクローンが、有意に低いアフィニティ（ｎＭ範囲内）を示したという実験結果からも、個々のクローンの脱免疫化レベルを最大化する試みにおいて、どのＣＤＲ残基をヒト生殖細胞系列、または非生殖細胞系列のものへと変異させ得るか、させ得ないかを「先験的に」決定することの困難性が強調された。
【０１８４】
リードクローンの３０Ｅ０６、ＭＨ５、ＭＨ１２およびＭＨ１６は、ＭＣＳＦ−ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達により誘導される細胞増殖に関するヒト生体外単球アッセイにおいて、生物学的有効性に関しさらに検証された（図９）。このアッセイにおいて、すべてのクローンが、３人の別個のヒトドナーに由来する単球を使用して検証された。すべてのドナーの解析において、クローンｈｕ０３０１、３０Ｅ０６、ＭＨ５、ＭＨ１２、およびＭＨ１６は、ＭＣＳＦ誘導型の細胞増殖の遮断に関し、完全に重複する曲線を示した。このことから、各例のリードクローンにおいて、完全な生物学的活性が維持されていたことが示唆される。
【０１８５】
ＩｇＧの開発可能性の解析
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を使用して、全体的な分子構造の安定性の指標としてのタンパク質の熱的安定性を測定する。この方法を、クローンｈｕ０３０１、３０Ｅ０６、ＭＨ５、ＭＨ１２、およびＭＨ１６に適用した。すべてＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）の形式であり、標準的なサンプル緩衝液（ＰＢＳ、１００ｍＭ  Ｌ−アルギニン）に、１０ｍｇ／ｍｌの濃度で製剤化された。検証されたすべてのＩｇＧが、ＤＳＣ解析と完全に適合可能であり、同等のサンプル均一性および協同性を示した（図１０）。各抗体に対し測定された温度遷移中点（Ｔｍ：ｔｈｅｒｍａｌ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ  ｍｉｄｐｏｉｎｔｓ）を表１５に示す。５個すべてのＩｇＧが、６６℃を超えるＦａｂドメインＴｍ値を示した。このことから、すべてのサンプルが高い完全性を有していたことが示唆される。しかし予想外なことに、リードＩｇＧ全体でＦａｂドメインＴｍ値は広範に変化した。クローンＭＨ５および３０Ｅ０６は、最も高いＦａｂドメインの安定性を示した（それぞれＴｍ値は、７７．７℃および７６．６℃）。対照的にｈｕ０３０１は、７２．６℃と大幅に低い安定性Ｆａｂ  Ｔｍ値を有した（表１５）。すべての抗体の可変ドメインフレームワーク領域および抗体定常領域が、ほぼ同一の配列であり、したがってすべての改善が、ＣＤＲ配列の差異によってのみ介在されたという点から、ＭＨ５および３０Ｅ０６のリード抗体に関する、ｈｕ０３０１を超えるＦａｂ安定性の大幅な上昇は予想外であった。対照的に、高度に脱免疫化されたクローンのＭＨ１２およびＭＨ１６は、熱的安定性の大幅な低下を呈した（それぞれ、Ｆａｂ  Ｔｍは、６６．４および６６．９）。これらの発見は、どのｖ−ドメイン残基が、熱安定性リスクを上昇させることなくＴ細胞エピトープリスクを除去するために改変され得るかを先験的に規定することが不可能であることを示している。
【０１８６】
例えばトリプトファンおよびメチオニンなどの露出アミノ酸残基の酸化は、ｍＡｂの一般的な劣化経路である。重要なことは、抗体のＣＤＲ中の重要な側鎖の酸化も、標的結合アフィニティの低下をもたらすことから、潜在的に生物活性に影響を与え得るということである。酸化は通常、タンパク質の保存中に経時的に発生するプロセスであり、リアルタイムで酸化リスクを解析する標準的な実験方法は、タンパク質に参加試薬を添加することである。この実験において、０．５％  Ｈ２Ｏ２のＰＢＳ溶液を用いて２時間、室温で処理することによりＩｇＧを強制的に酸化させた。酸化は、例えば酸化型の極性を上昇させることで、抗体全体の疎水性を変化させる場合があるため、強制酸化により誘導された潜在的な変化を、トリプシン消化ペプチドの逆相（ＲＰ）クロマトグラフィーにより解析した。Ｈ２Ｏ２処理前後のトリプシン処理ペプチドのフィンガープリントのＲＰ解析により、側鎖の酸化変化は、クローンｈｕ０３０１に対して予想外に顕著であったことが示された。ｈｕ０３０１は、強制酸化によって、８ペプチドの改変が生じた（図１１Ａ）。対照的に、クローン３０Ｅ０６、ＭＨ５、ＭＨ１２およびＭＨ１６は、非常に少ないペプチド改変を示した。例えば、ＭＨ５は、たった３個のペプチド改変を呈し、それらすべてが小規模であった（図１１Ｂ）。クローン３０Ｅ０６、ＭＨ１２およびＭＨ１６は、それぞれ４個、４個、および５個の改変を呈した（図１１Ｃ、Ｄ、Ｅ）。リードクローンはいずれも、ｈｕ０３０１と比較して、自身のＣＤＲまたはｖ−遺伝子のフレームワーク領域のいずれでも酸化感受性残基の内容は変化していないことから、３０Ｅ０６、ＭＨ５、ＭＨ１２およびＭＨ１６のすべてのクローンで観察された酸化による劣化可能性のｈｕ０３０１と比較した改善は予想外のことであった（表２、４、１１）。事実、クローンＭＨ１２およびＭＨ１６は、ｈｕ０３０１よりも熱安定性が低いことが実際に判明しており（図１０）、これら改善は、総合的なｖ−遺伝子の安定性の改善とは関連しておらず、むしろ酸化感受性側鎖の露出における予想外の変化に関連していた。
【０１８７】
さらにリード抗体の固有特性を検証するために、全ＩｇＧ  ＨＩＣクロマトグラフィー解析を実施した。ＨＩＣクロマトグラムから、５個すべてのリードクローンが、臨床用途に市販されている対照抗体群と全体的に同じ範囲で溶出されたこと（図１２）、しかしクローンｈｕ０３０１（３つの大きなピーク、３つの小さなピークがあり、広範に分布していた）、ＭＨ１２およびＭＨ１６（３個の明確に別個のピーク）に関しては複数のピークが観察されたことが示された。対照的に、クローンＭＨ５および３０Ｅ０６は、より均一的で単一のピークを呈した（図１２）。このことから、発現されたタンパク質は、低い構造的不均一性を呈したことが示唆される。
【０１８８】
本明細書に概要される解析を組み合わせると、驚くべきことに、これら抗体の複数のＣＤＲにおいて、生殖細胞系列と非生殖細胞系列のアミノ酸の両方を深くサンプリングすることで、複数の最終分子において標的結合特異性、免疫原性リスク、有効性、生物物理的安定性および化学的安定性のリスクを同時に最適化することが可能となったことが示された。
【０１８９】
本発明は好ましい実施形態または例示的実施形態を参照して記載されているが、当業者であれば、本発明の主旨および範囲を逸脱することなくそれらに対する様々な改変および変動を行うことが可能であること、およびそうした改変は本明細書において予期されることが明白であると認識するであろう。本明細書に開示される、および添付の請求の範囲に記載される特定の実施形態に関し、限定は意図されておらず、何らの示唆もないものとする。
【０１９０】
限定されないが特許、特許出願、記事、書誌、および論文を含む本明細書に引用されるすべての書面、または書面の一部は、その全体ですべての目的に対し、参照により明示的に本明細書に組み込まれる。組み込まれた書面、または書面の一部の１つまたは複数が、本出願の用語定義と矛盾する用語を定義する場合、本出願にある定義が優先される。しかしながら、本明細書に引用されるすべての参照文献、記事、公表文献、特許、公表特許、および特許出願に関する言及は、それらが正当な先行技術を構成する、または世界の任意の国における普遍的で一般的な知識の一部を形成するという承認、または任意の形態の示唆として見なされず、または見なされるべきではない。
【表１】
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【表２】
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【表３−１】
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【表３−２】
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【表３−３】
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【表３−４】
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【表４−１】
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【表４−２】
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【表５】
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【表６】
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【表７】
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【表８】
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【化２】
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【表９】
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【化３】
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【表１０】
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【化４】
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【表１１】
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【化５】
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【表１２】
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【表１３】
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【表１４】
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【表１５】
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【表１６】
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【表１７】
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【表１８】
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【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図１０】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１１Ｄ】
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【図１１Ｅ】
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【図１２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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