(57)【要約】  本発明は、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２結合が遮断されるようにヒトＰＤ−Ｌ２に特異的に結合する、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体、またはその抗原結合部分に関し、好ましくは当該抗体または抗原結合部分は、好ましくはＦＡＣＳ分析によって決定されるように、マウスＰＤ−Ｌ２およびヒトＰＤ−Ｌ１に結合しないが、カニクイザルＰＤ−Ｌ２に結合する。本発明はまた、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体をコードするヌクレオチド配列、これらのヌクレオチド配列を含むベクターおよび細胞に関する。本発明の抗体および／または組成物は、ヒト療法、例えば、癌療法において、かつ／またはＴ細胞シグナル伝達を決定するための細胞株ベースのバイオアッセイにおいて有用である。【選択図】図１８
2021515745.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合が遮断されるようにヒトＰＤ−Ｌ２に特異的に結合する、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体またはその抗原結合部分であって、
前記抗体、もしくはその抗原結合部分が、それぞれ、以下の項目ａ）〜ｑ）のいずれかで定義される、重鎖可変領域および軽鎖可変領域に含まれる６つのＣＤＲ配列を含むか、または
前記抗体、もしくはその抗原結合部分が、それぞれ、以下の項目ａ）〜ｑ）のいずれかで定義される、重鎖可変領域および軽鎖可変領域に含まれる６つのＣＤＲ配列を含み、前記ＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体またはその抗原結合部分：
ａ）配列番号２の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１０の配列を有する軽鎖可変領域、
ｂ）配列番号１８の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２６の配列を有する軽鎖可変領域、
ｃ）配列番号３４の配列を有する重鎖可変領域および配列番号４２の配列を有する軽鎖可変領域、
ｄ）配列番号５０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号５８の配列を有する軽鎖可変領域、
ｅ）配列番号５０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号６６の配列を有する軽鎖可変領域、
ｆ）配列番号９６の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１０４の配列を有する軽鎖可変領域、
ｇ）配列番号１１２の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１２０の配列を有する軽鎖可変領域、
ｈ）配列番号１２８の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１３２の配列を有する軽鎖可変領域、
ｉ）配列番号１４０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１４６の配列を有する軽鎖可変領域、
ｊ）配列番号１５２の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１６０の配列を有する軽鎖可変領域、
ｋ）配列番号１６６の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１７４の配列を有する軽鎖可変領域、
ｌ）配列番号９６の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２１２の配列を有する軽鎖可変領域、
ｍ）配列番号１４０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２１８の配列を有する軽鎖可変領域、
ｎ）配列番号２２０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１６０の配列を有する軽鎖可変領域、
ｏ）配列番号２２０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２６の配列を有する軽鎖可変領域、
ｐ）配列番号２２０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２２６の配列を有する軽鎖可変領域、または
ｑ）配列番号２２０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２３０の配列を有する軽鎖可変領域。
【請求項２】
ａ）配列番号４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１６のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｂ）配列番号２０のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号２４のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２８のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３２のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｃ）配列番号３６のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３８のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号４０のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号４４のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４６のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号４８のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｄ）配列番号５２のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号５４のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号５６のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号６０のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号６２のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号６４のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｅ）配列番号５２のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号５４のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号５６のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号６０のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号６２のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号６８のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｆ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１００のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１０２のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１０６のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１０８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１１０のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｇ）配列番号１１４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１１６のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１１８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１２２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１２４のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１２６のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｈ）配列番号１１４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３０のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１１８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１３４のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１３６のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１３８のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｉ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１４４のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１０６のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１５０のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｊ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１５６のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１６４のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｋ）配列番号１６８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７０のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１７２のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１７６のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１８０のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｌ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１００のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１０２のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２１４のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１０８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２１６のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｍ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１４４のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２１４のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１５０のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｎ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１６４のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｏ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２８のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３２のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｏ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２８のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２２８のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｐ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３２のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｒ）ａ）〜ｑ）に示される前記ＣＤＲ−Ｈ１および前記ＣＤＲ−Ｈ２および前記ＣＤＲ−Ｈ３および前記ＣＤＲ−Ｌ１および前記ＣＤＲ−Ｌ２および前記ＣＤＲ−Ｌ３のバリアントを含む、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含み、前記ＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、請求項１に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項３】
重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、
ａ）前記重鎖可変領域が、配列番号２の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号１０の配列を有するか、
ｂ）前記重鎖可変領域が、配列番号１８の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号２６の配列を有するか、
ｃ）前記重鎖可変領域が、配列番号３４の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号４２の配列を有するか、
ｄ）前記重鎖可変領域が、配列番号５０の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号５８の配列を有するか、
ｅ）前記重鎖可変領域が、配列番号５０の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号６６の配列を有するか、
ｆ）前記重鎖可変領域が、配列番号９６の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号１０４の配列を有するか、
ｇ）前記重鎖可変領域が、配列番号１１２の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号１２０の配列を有するか、
ｈ）前記重鎖可変領域が、配列番号１２８の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号１３２の配列を有するか、
ｉ）前記重鎖可変領域が、配列番号１４０の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号１４６の配列を有するか、
ｊ）前記重鎖可変領域が、配列番号１５２の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号１６０の配列を有するか、
ｋ）前記重鎖可変領域が、配列番号１６６の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号１７４の配列を有するか、
ｌ）前記重鎖可変領域が、配列番号９６の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号２１２の配列を有するか、
ｍ）前記重鎖可変領域が、配列番号１４０の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号２１８の配列を有するか、
ｎ）前記重鎖可変領域が、配列番号２２０の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号１６０の配列を有するか、
ｏ）前記重鎖可変領域が、配列番号２２０の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号２６の配列を有するか、
ｐ）前記重鎖可変領域が、配列番号２２０の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号２２６の配列を有するか、
ｑ）前記重鎖可変領域が、配列番号２２０の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号２３０の配列を有するか、または
ｒ）ａ）〜ｑ）に示される前記重鎖可変領域および／もしくは前記軽鎖可変領域のバリアントであって、前記バリアント配列が、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の全体的な相同性を有し、ただし、前記ＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、請求項１または２に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項４】
前記抗体または抗原結合部分抗体が、ａ）〜ｄ）に列挙される機能的特徴
ａ）参照抗体ＭＩＨ１８および２４Ｆ．１０Ｃ１２と比較してより高いＰＤ−Ｌ２への結合親和性、
ｂ）参照抗体ＭＩＨ１８および２４Ｆ．１０Ｃ１２と比較してより効率的なＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２結合の遮断、
ｃ）参照抗体ＭＩＨ１８および２４Ｆ．１０Ｃ１２と比較してより効率的なＴＣＲ媒介性ＩＬ−２発現の活性化、ならびに
ｄ）参照抗体ＭＩＨ１８および２４Ｆ．１０Ｃ１２と比較してより高いＴＣＲ媒介性ＩＬ−２発現時のＩＬ−２レベルの誘導、のうちの少なくとも１つ、好ましくは２、３、または４つを満たす、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項５】
ヒト化または完全ヒト抗体である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
【請求項６】
ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項７】
ＩｇＧ１アイソタイプである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項８】
前記抗体または抗原結合部分が、単一特異性、二重特異性、三重特異性、または多重特異性抗体もしくはその抗原結合部分である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項９】
前記抗体またはその抗原結合部分が、ＰＤ−１とは別の受容体へのＰＤ−Ｌ２の結合を遮断する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれかに記載の抗体または抗原結合部分のいずれかと同じエピトープに結合し、かつ／または同じエピトープについて競合する、抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片をコードするヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項１２】
ａ）配列番号３のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号５のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号７のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１１のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１３のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１５のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｂ）配列番号１９のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２１のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号２３のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２７のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２９のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３１のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｃ）配列番号３５のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３７のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号３９のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号４３のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４５のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号４７のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｄ）配列番号５１のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号５３のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号５５のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号５９のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号６１のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号６３のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｅ）配列番号５１のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号５３のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号５５のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号５９のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号６１のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号６７のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｆ）配列番号９７のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号９９のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１０１のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１０５のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１０７のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１０９のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｇ）配列番号１１３のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１１５のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１１７のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１２１のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１２３のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１２５のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｈ）配列番号１１３のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２９のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１１７のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１３３のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１３５のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１３７のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｉ）配列番号９７のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４１のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１４３のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１０５のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４７のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１４９のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｊ）配列番号１５３のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１５５のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５７のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６１のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２９のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１６３のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｋ）配列番号１６７のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１６９のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１７１のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１７５のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７７のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１７９のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｌ）配列番号９７のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号９９のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１０１のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２１３のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１０７のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２１５のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｍ）配列番号９７のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４１のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１４３のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２１３のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４７のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１４９のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｎ）配列番号１５３のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２１のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５７のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６１のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２９のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１６３のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｏ）配列番号１５３のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２１のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５７のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２７のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２９のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３１のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｐ）配列番号１５３のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２１のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５７のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６１のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２９のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２２７のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｑ）配列番号１５３のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２１のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５７のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６１のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２９のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３１のＣＤＲ−Ｌ３を含む、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む、請求項１１に記載の核酸分子。
【請求項１３】
重鎖可変領域および軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含み、
ａ）前記重鎖可変領域が、配列番号１の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号９の配列を有するか、
ｂ）前記重鎖可変領域が、配列番号１７の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号２５の配列を有するか、
ｃ）前記重鎖可変領域が、配列番号３３の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号４１の配列を有するか、
ｄ）前記重鎖可変領域が、配列番号４９の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号５７の配列を有するか、
ｅ）前記重鎖可変領域が、配列番号４９の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号６５の配列を有するか、
ｆ）前記重鎖可変領域が、配列番号９５の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号１０３の配列を有するか、
ｇ）前記重鎖可変領域が、配列番号１１１の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号１１９の配列を有するか、
ｈ）前記重鎖可変領域が、配列番号１２７の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号１３１の配列を有するか、
ｉ）前記重鎖可変領域が、配列番号１３９の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号１４５の配列を有するか、
ｊ）前記重鎖可変領域が、配列番号１５１の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号１５９の配列を有するか、
ｋ）前記重鎖可変領域が、配列番号１６５の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号１７３の配列を有するか、
ｌ）前記重鎖可変領域が、配列番号９５の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号２１１の配列を有するか、
ｍ）前記重鎖可変領域が、配列番号１３９の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号２１７の配列を有するか、
ｎ）前記重鎖可変領域が、配列番号２１９の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号１５９の配列を有するか、
ｏ）前記重鎖可変領域が、配列番号２１９の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号２５の配列を有するか、
ｐ）前記重鎖可変領域が、配列番号２１９の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号２２５の配列を有するか、または
ｑ）前記重鎖可変領域が、配列番号２１９の配列を有し、前記軽鎖可変領域が、配列番号２２９の配列を有する、請求項１１に記載の核酸分子。
【請求項１４】
請求項１１〜１３のいずれか一項に記載のヌクレオチド配列を含む、発現ベクター。
【請求項１５】
請求項１４に記載の発現ベクターを含む、細胞。
【請求項１６】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片を含む、薬学的組成物。
【請求項１７】
請求項１１〜１３のいずれか一項に記載の核酸分子、または請求項１４に記載の発現ベクターを含む、薬学的組成物。
【請求項１８】
薬学的に許容される担体および／または賦形剤をさらに含む、請求項１６または請求項１７に記載の薬学的組成物。
【請求項１９】
ヒト療法における使用のための、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合部分、請求項１１〜１３のいずれか一項に記載の核酸分子、請求項１４に記載の発現ベクター、または請求項１６〜１８のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項２０】
前記ヒト療法が、癌療法である、請求項１９に記載の使用のための、抗体もしくは抗原結合部分、核酸分子、発現ベクター、または薬学的組成物。
【請求項２１】
治療効果が、ＰＤ−１−ＰＤ−Ｌ２相互作用の遮断に基づく、請求項１９または請求項２０に記載の使用のための、抗体もしくは抗原結合部分、核酸分子、発現ベクター、または薬学的組成物。
【請求項２２】
治療効果が、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）をさらに含む、請求項１９〜２１に記載の使用のための、抗体もしくは抗原結合部分、核酸分子、発現ベクター、または薬学的組成物。
【請求項２３】
好ましくは化学療法、抗体療法、および／または放射線療法などの他の療法と組み合わせた、請求項１９〜２２のいずれか一項に記載の使用のための、抗体もしくは抗原結合部分、核酸分子、発現ベクター、または薬学的組成物。
【請求項２４】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体の段階希釈を使用して、ＡＰＣ（抗原提示細胞）とＴ細胞との間の相互作用を模倣するシステムにおいて、Ｔ細胞シグナル伝達を決定するための細胞株ベースのバイオアッセイ。
【請求項２５】
請求項２４に記載のアッセイにおける使用のための、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体を含む、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２結合が遮断されるようにヒトＰＤ−Ｌ２に特異的に結合する、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体、またはその抗原結合部分に関し、好ましくは当該抗体または抗原結合部分は、好ましくはＦＡＣＳ分析によって決定されるように、マウスＰＤ−Ｌ２およびヒトＰＤ−Ｌ１に結合しないが、カニクイザルＰＤ−Ｌ２に結合する。本発明はまた、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体をコードするヌクレオチド配列、これらのヌクレオチド配列を含むベクターおよび細胞に関する。本発明の抗体および／または組成物は、ヒト療法、例えば、癌療法において、かつ／またはＴ細胞シグナル伝達を決定するための細胞株ベースのバイオアッセイにおいて有用である。
【背景技術】
【０００２】
免疫チェックポイント経路阻害剤の開発は、癌の治療に向けた精力的な研究および創薬努力の対象となっている。プログラム死１受容体（ＰＤ−１）は、そのリガンドＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２とともに、１つのそのような阻害経路を表す。ＰＤ−１のそのリガンドのいずれかへの結合は、Ｔ細胞への阻害刺激の送達をもたらす。ＰＤ−１軸を標的とする免疫療法が開発され、ＰＤ−１受容体に向けられたモノクローナル抗体（ＯＰＤＩＶＯ（ニボルマブ）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪおよびＫＥＹＴＲＵＤＡ（ペンブロリズマブ）、Ｍｅｒｃｋ  ａｎｄ  Ｃｏ．，Ｉｎｃ．Ｋｅｎｉｌｗｏｒｔｈ、ＮＪ）およびＰＤ−Ｌ１リガンドに結合する抗体（ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＴＥＣＥＮＴＲ１Ｑ（アテゾリズマブ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ，ＭＥＤＩ４７３６、ＩＭＦＩＮＺＩ（デュルバルマブ）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ、Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ、およびＢＡＶＥＮＣＩＯ（アベルマブ）、Ｐｆｉｚｅｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ／Ｍｅｒｃｋ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を含む。いくつかの癌タイプにおける抗腫瘍効果は、両方のアプローチで示されている（Ｂｒａｈｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＮＥｎｇｌ  ＪＭｅｄ  ２０１２，３６６：２４５５−６５、Ｇａｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  ＪＭｅｄ  ２０１５，  ３７２：２０１８−２８、Ｈａｍｉｄ  ｅｔ  ａｌ．，ＮＥｎｇｌ  ＪＭｅｄ  ２０１３，３６９：１３４−４４、Ｒｏｂｅｒｔ  ｅｌ  ａｌ，Ｌａｎｃｅｔ  ２０１４  ３８４：１１０９−１７、Ｒｏｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  ＪＭｅｄ  ２０１５，３７２：２５２１−３２、Ｒｏｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，ＮＥｎｇｌ  ＪＭｅｄ  ２０１５，３  ７２：３２０−３０、Ｔｏｐａｌｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇｌ  ＪＭｅｄ  ２０１２，３６６：２４４３−５４、Ｔｏｐａｌｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２０１４，３２：１０２０−３０、Ｗｏｌｃｈｏｋ  ｅｔ  ａｌ，Ｎ  Ｅｎｇｌ  ＪＭｅｄ  ２０１３，３６９：１２２−３３）。
【０００３】
ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用を標的とすることは、ＰＤ−Ｌ１が多くのヒト癌において上方制御されることが判明しているため、特に関心を得ている（Ｄｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２００２，８  ８：７９３−８００）。ＰＤ−Ｌ１と同様に、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合は、Ｔ細胞の増殖、サイトカインの産生、およびＴ細胞の細胞溶解を阻害する（Ｌａｔｃｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００１，２：２６１−８、Ｒｏｄｉｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００３，３３：３１１７−２６）。しかしながら、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２は、タンパク質配列、組織分布、発現パターン、受容体−リガンド結合特異性および親和性、ならびに生物学的制御において有意な差異を示す。ヒトＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２をコードする両方の遺伝子は、染色体９ｐ２４．１上の同じ領域に位置する（Ｌａｔｃｈｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００１，２：２６１−８）が、ヒトＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２は、３８％のみのアミノ酸同一性を共有する（Ｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．２００８，１０５（８）：３０１１−３０１６、Ｌａｚａｒ−Ｍｏｌｎａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．２００８，１０５（３０）：１０４８３−１０４８８）。そのような配列不一致は、ＰＤ−Ｌ１よりもＰＤ−Ｌ２について３〜６倍近く高い親和性によって特徴付けられるＰＤ−１への異なる結合パターンを説明する（Ｙｏｕｎｇｎａｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．２００３，３０７（３）：６７２−７．Ｃｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８８：１１７７１−１１７８５，Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  ＢｉｏｌＣｈｅｍ．２０１７，２９２（１６）：６７９９−６８０９）。ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との相互作用を遮断する抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ２との相互作用に干渉しないことが示され（Ｉｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１７，２３（８）：１８８６−１８９０，Ｍｅｚｑｕｉｔａ  ａｎｄ  Ｐｌａｎｃｈａｒｄ，Ｆｕｔｕｒｅ  Ｏｎｃｏｌ．２０１７，ｆｏｎ−２０１７−０３７３，Ｇｉｌ−Ｂａｚｏ，Ｔｒａｎｓｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１７，６（Ｓｕｐｐｌ  １）：Ｓ３５−Ｓ３８．）、ＰＤ−１との相互作用の構造によって方向付けられた差動分子メカニズムを示す。このパターンはまた、ＰＤ−Ｌ２に結合しないＰＤ−Ｌ１の第２の受容体であるＣＤ８０などの他の受容体に対する異なる特異性によって反映される（Ｂｕｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２００７，２７（１）：１１１−１２２）。一方、ＰＤ−Ｌ１ではなくＰＤ−Ｌ２は、反発性ガイダンス分子ｂ（ＲＧＭｂ）（Ｘｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．２０１４，２１１（５）：９４３−５９）、反発性ガイダンス分子ファミリーの骨形成タンパク質（ＢＭＰ）共受容体と相互作用することが示された。ＰＤ−１と同様に、ＣＤ８０へのＰＤ−Ｌ１の結合は、Ｔ細胞増殖およびサイトカイン放出を抑制し、ＲＧＭｂへのＰＤ−Ｌ２結合は、マウスにおいて潜在的に免疫刺激性の役割を果たすことが以前に報告された（Ｔｓｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．２００１，１９３（７）：８３９−４６，Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．２００３，１９７（１２）：１７２１−３０，Ｓｈｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．２００３，１９８（１）：３１−８．）。しかしながら、これらの研究は、マウス細胞株またはマウス組織のいずれかで行われ、同様の効果は、ヒト細胞株または組織を使用した多くの独立した研究では確認されなかった（Ｓａｕｎｄｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００５，３５（１２）：３５６１−９，Ｐｆｉｓｔｅｒｓｈａｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００６，３６（５）：１１０４−１３，Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．２００６，１０３（３１）：１１６９５−７００，Ｎｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１７，ｃｍｉ．２０１７．１７）。マウスＰＤ−Ｌ２は状況に応じてヒトＰＤ−Ｌ２と機能的に異なり得る可能性がある。抗原提示細胞（ＡＰＣ）、Ｔ細胞、および様々な非造血細胞タイプ上での普遍的かつ構成的な発現様式を示すＰＤ−Ｌ１とは対照的に、ＰＤ−Ｌ２発現は、開発中の生理学的条件下での低ベースラインレベルの抗原提示細胞により限定されることが特定されているが、発現は、様々な微小環境刺激によって他の免疫および非免疫細胞において誘導可能であることが示されている（Ｌａｔｃｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，ｓｕｐｒａ，Ｌｅｓｔｅｒｈｕｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０１１，４９：１−３、Ｌｅｓｔｅｒｈｕｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２０１１，１２１：３１００−８、Ｍｅｓｓａｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０１１，４８：２２１４−９）。生物学的および病理学的に、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２は、異なる制御シグナル伝達経路と関連する。両方がＩＦＮ−ガンマによって刺激され得るという事実（Ｇａｒｃｉａ−Ｄｉａｚ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐ．２０１７，１９（６）：１１８９−１２０１）に加えて、ＰＤ−Ｌ１は、Ｔｈ１細胞の刺激およびＬＰＳなどのＭ１マクロファージ促進刺激に有利であることが示され、ＰＤ−Ｌ２は、Ｔｈ２によって刺激され、Ｍ２マクロファージ活性化と関連する傾向がある（Ｌｏｋｅ  ａｎｄ  Ａｌｌｉｓｏｎ，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．２００３，１００（９）：５３３６−４１）。ＰＤ−Ｌ１とＰＤ−Ｌ２との間のこれらの生物学的不一致は、最近、可能性として診断のための最初のマウス抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体に関する特許が公開される（ＷＯ２０１７０５３２５０Ａ１）まで、癌免疫学におけるＰＤ−Ｌ２の重要な役割にあまり注意を向けさせなかった。そのような最適化された抗体を使用した新しい研究は、ＰＤ−Ｌ２が多くのタイプの癌にわたって有意に過剰発現し（Ｄｅｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ．２０１５，３（１０）：１１２３−１１２９，Ｓｒｉｄｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ．２０１６，４（８）：６７９−８７，Ｙｅａｒｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．���Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１７，２３（１２）：３１５８−３１６７）、ＰＤ−１療法への応答を予測することができ、患者の生存と関連する（Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ．２０１４，２８（６）：１２８０−８）ことを示す。要約すると、２つのリガンドは、ＰＤ−１軸内で異なる機能を有し得、ＰＤ−Ｌ１は、より一般化された抗炎症効果を媒介し、ＰＤ−Ｌ２は、Ｔ細胞プライミングにおいて役割を果たす（Ｃｈｅａｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２０１５，２７：３８４−９１）。重要なことに、ＰＤ−Ｌ２発現は、いくつかのヒト腫瘍において、ＰＤ−Ｌ１発現不在のいくつかの試料において示されている（Ｈｅｒｂｓｔ  ｅｔ  ａｌ，２０１４，ｓｕｐｒａ，Ｔａｕｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０１４，２０：５０６４−７４、Ｓｃｈｉｒｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２０１６，３４  Ｓｕｐｐｌ  １５，１１５０６．、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２００３，１９７（１２）：１７２１−３０、Ｒａｄｈａｋｒｉｓｈｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００４，６４（１４）：４９６５−７２）。
【０００４】
ＢＲＡＦまたはＭＥＫ阻害剤（メキニスト、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ）などの商業化された標的化小分子に対する耐性について、腫瘍微小環境における腫瘍細胞および免疫細胞上でのＰＤ−Ｌ２表面発現の上方制御が示されている。これは、ＢＲＡＦｉおよび／またはＭＥＫｉに対する腫瘍細胞固有の耐性の促進におけるＰＤ−Ｌ２の発癌性の役割（Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ．２０１７，７（１１）：１２４８−１２６５．）と一緒に、ＰＤ−Ｌ２が、ＢＲＡＦｉおよび／またはＭＥＫｉに対する獲得耐性の媒介において重要な役割を有することを示す。さらに、癌患者組織の現在の遡及的分析は、高いＰＤ−Ｌ２発現および低いＰＤ−Ｌ１発現を有する患者を明らかにし（Ｙｅａｒｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１７，２３（１２）：３１５８−３１６７）、癌および抗ＰＤ−Ｌ２治療剤から恩恵を受けるであろう患者下位群があり得ることを示す。
【０００５】
ヒトＰＤ−Ｌ２に結合する抗体は、癌を診断するために有用な組織試料におけるヒトＰＤ−Ｌ２発現の免疫組織化学的検出のために提供された（ＷＯ２０１７／０５３２５０Ａ１）。さらに、ＵＳ２０１５／０１９７５７１Ａ１は、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２の両方に結合する抗体を開示する。
【０００６】
まだ、ＰＤ−Ｌ２に結合する治療抗体は知られていない。ＰＤ−Ｌ２に向けられた最適な治療剤はまだ見出されていないため、重要な満たされていない医学的ニーズが存在する。
【０００７】
上記技術問題は、特許請求の範囲で定義される実施形態によって解決される。
【発明の概要】
【０００８】
本発明は、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２結合が遮断されるようにヒトＰＤ−Ｌ２に特異的に結合する、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体またはその抗原結合部分に関する。好ましくは、本発明の抗体、またはその抗原結合部分は、マウスＰＤ−Ｌ２およびヒトＰＤ−Ｌ１に結合しないが、カニクイザルＰＤ−Ｌ２に結合する。
【０００９】
すなわち、本発明は初めて、ＰＤ−Ｌ２を標的とすることによってＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２結合を遮断することができる抗体を提供し、これは現在まで、実現可能であると示唆または考慮されていなかった。本発明による抗ＰＤ−Ｌ２抗体は、市販のマウスモノクローナルＭＩＨ１８と比較されたときに、ＩＬ−２ＥＬＩＳＡによって測定された場合、より良好な遮断活性およびより強い免疫細胞活性化を示し、市販の抗ＰＤ−１抗体ニボルマブと比較されたときに、類似またはより良好な活性を示す。添付の実施例で示されるように、抗ＰＤ−Ｌ２抗体を使用してリガンド側でＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ２相互作用を阻害することが、受容体側での相互作用の阻害よりも強い効果を示し得ることは予想外であった。
【００１０】
一実施形態では、本発明は、好ましくは、特に添付の実施例で指定される条件下で、ＦＡＣＳ分析によって決定されるように、約０．０５ｎＭ〜約２ｎＭのＥＣ５０でヒトＰＤ−Ｌ２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分に関する。本発明の好ましい実施形態では、本発明の抗体、またはその抗原結合部分は、好ましくは、特に添付の実施例で指定される条件下で、ＦＡＣＳ分析によって決定されるように、約０．０５ｎＭ〜約１．６ｎＭ、好ましくは１．５ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−Ｌ２に特異的に結合する。したがって、本発明内では、抗体、またはその抗原結合部分が、約０．０５、０．０７５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、または２．０ｎＭのＥＣ５０で、好ましくは約０．０５、０．０７５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、または１．６ｎＭのＥＣ５０でヒトＰＤ−Ｌ２に特異的に結合することが好ましい。よって、一実施形態では、少なくとも２ｎＭ、好ましくは少なくとも１．５ｎＭのＥＣ５０でヒトＰＤ−Ｌ２に結合する、抗体またはその抗原結合部分が提供される。ＥＣ５０値を決定する方法は、当業者に周知である。本発明内の好ましい方法は、特に添付の実施例で指定される条件下で実施される場合、ＦＡＣＳ分析である。
【００１１】
添付の実施例に示されるように、本発明の抗体の結合は、よって、同一の条件下、３ｎＭのＥＣ５０でヒトＰＤ−Ｌ２に結合する、対照マウスモノクローナル抗体ＭＩＨ１８の結合よりもはるかに強い。
【００１２】
本発明内では、抗体またはその抗原結合部分は、約０．０５、０．０７５、０．１、０．２、０．３、０．４、または０．４５ｎｍのＥＣ５０でヒトＰＤ−Ｌ２に特異的に結合することが好ましい。よって、一実施形態では、少なくとも０．４５ｎＭのＥＣ５０でヒトＰＤ−Ｌ２に結合する、抗体またはその抗原結合部分が提供される。驚くべきことに、本発明の抗体またはその抗原結合部分のＥＣ５０は、特にＷＯ２０１０／０３６９５９に開示される抗体２４Ｆ．１０Ｃ１２において、参照抗体のＥＣ５０よりも低い。
【００１３】
本発明の抗体またはその抗原結合断片は、代替的または追加的に、参照抗体ＭＩＨ１８および／または２４Ｆ．１０Ｃ１２よりも高い親和性でヒトＰＤ−Ｌ２に結合する。当業者は、抗原に対する抗体の結合親和性を決定するための異なる戦略を知っている。例えば、結合親和性は、抗原に結合する抗体のＥＣ５０を決定することによって頻繁に測定される。結合ＥＣ５０は、試料中の抗原濃度に大きく依存する。加えて、キメラ抗体と完全ヒト抗体との間で、結合ＥＣ５０にわずかな偏差が検出されている。この理由のために、同一の条件下で試験された抗体を比較することのみが可能である。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、同一の実験条件下で測定される場合、先行技術の抗体ＭＩＨ１８および２４Ｆ．１０Ｃ１２よりも高い結合親和性、またはより低いＥＣ５０を有することが好ましい。
【００１４】
添付の実施例に示されるように、抗体２Ｃ４−Ｅ４、１０Ｄ１−Ｇ１、１９Ｃ３−Ｂ３．１０Ａ９−Ｄ２、１９Ｂ３−Ｂ３、１２Ａ１−Ｄ４、１０Ｄ１−Ｇ１  Ｎ３１Ｑ．Ｎ９２Ｑ．ＬＣ、１０Ａ９−Ｄ２．Ｎ３１Ｑ．ＬＣ、１９Ｂ３−Ｂ３．Ｍ２３Ｋ．Ｍ６３Ｌ．ＨＣ、および２−１９Ｈ２は、同一の条件下で試験される場合、２つの参照抗体ＭＩＨ１８および２４Ｆ．１０Ｃ１２よりもヒトＰＤ−Ｌ２についての高い結合親和性を有する。
【００１５】
本発明の一実施形態では、同一の実験条件下で測定される場合、先行技術の抗体ＭＩＨ１８および２４Ｆ．１０Ｃ１２よりも高い結合親和性、またはより低いＥＣ５０を有する、抗体またはその抗原結合部分が提供される。
【００１６】
特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合部分は、好ましくは、特に添付の実施例で指定される条件下で、抗原濃度に応じたフローサイトメトリーに基づくアッセイによって決定されるように、約０．０１〜約１ｎＭのＩＣ５０でＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２結合を遮断する、抗体またはその抗原結合部分である。したがって、本発明内で、抗体、またはその抗原結合部分は、約０．０１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、または１ｎＭのＩＣ５０で、好ましくは約０．０１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、または０．７ｎＭのＩＣ５０で、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２結合を遮断することが好ましい。よって、一実施形態では、少なくとも１ｎＭ、好ましくは少なくとも０．７ｎＭのＩＣ５０でＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２結合を遮断する、抗体またはその抗原結合部分が提供される。ＩＣ５０値を決定する方法は、当業者に周知である。本発明内の好ましい方法は、特に添付の実施例で指定される条件下で実施される場合、抗原濃度に応じたフローサイトメトリーに基づくアッセイである。
【００１７】
本発明の好ましい実施形態では、高抗原濃度が提供される場合（１．５ｘ１０５個のＰＤ−Ｌ２発現ＣＨＯ−Ｋ１細胞）、約０．１、０．１５、０．２、０．２５、０．３、０．３５、０．４、または０．４５ｎｍのＩＣ５０で、および１００ｐＭの低抗原濃度が提供される場合、約０．０１、０．０１５、または０．０２ｎｍのＩＣ５０で、ＰＤ−１へのヒトＰＤ−Ｌ２の結合を特異的に遮断する、抗体またはその抗原結合部分が提供される。よって、一実施形態では、少なくとも０．４５ｎＭのＥＣ５０でヒトＰＤ−Ｌ２に結合する、抗体またはその抗原結合部分が提供される。
【００１８】
本発明の抗体またはその抗原結合断片は、追加的または代替的に、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合を、参照抗体ＭＩＨ１８および２４Ｆ．１０Ｃ１２よりも効率的に遮断する。遮断効率は、抗体がＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合を遮断するＩＣ５０値を決定することによって測定することができる。遮断ＩＣ５０は、試料中の抗原濃度、および他の実験詳細に大きく依存する。加えて、キメラ抗体と完全ヒト抗体との間で、遮断ＩＣ５０にわずかな偏差が検出されている。よって、好ましい実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合部分は、同一の実験条件下で測定される場合、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合を、従来技術の抗体ＭＩＨ１８および２４Ｆ．１０Ｃ１２よりも効率的に、またはより低いＩＣ５０で遮断する。
【００１９】
添付の例に示されるように、抗体１０Ｄ１−Ｇ１、１１Ｃ１１−Ｈ５、１９Ｃ３−Ｂ３．１０Ａ９−Ｄ２、１９Ｂ３−Ｂ３、および１２Ａ１−Ｄ４は、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合を、高および低抗原濃度で、従来技術の抗体ＭＩＨ１８および２４Ｆ．１０Ｃ１２よりも効率的に遮断する。さらに、抗体１Ａ１−Ｃ２、２Ｃ４−Ｅ４、および８Ｂ５−Ｂ１は、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合を、高または低抗原濃度で、従来技術の抗体ＭＩＨ１８および２４Ｆ．１０Ｃ１２よりも効率的に遮断する。本発明の抗体、またはその抗原結合部分は、添付の実施例で示されるように、ＴＣＲ媒介性ＩＬ−２発現を活性化することができるという予期せぬ利点を有し得る。
【００２０】
したがって、様々な実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合部分は、好ましくはＥＬＩＳＡ分析によって決定されるように、好ましくは約０．２ｎＭ〜約１．５ｎＭのＥＣ５０で、ＴＣＲ媒介性ＩＬ−２発現を活性化する。したがって、本発明の好ましい実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合部分は、約０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、または１．５ｎＭのＥＣ５０でＴＣＲ媒介性ＩＬ−２発現を活性化する。一実施形態では、少なくとも１．５ｎＭのＥＣ５０でＴＣＲ媒介性ＩＬ−２発現を活性化する、抗体またはその抗原結合部分が提供される。ＴＣＲ媒介性ＩＬ−２発現の活性化を決定する方法は、当業者に周知である。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、参照抗体ＭＩＨ１８および２４Ｆ．１０Ｃ１２と比較して、ＴＣＲ媒介性ＩＬ−２発現時のより高いＩＬ−２レベルを誘導するという予期せぬ利点を有する。上位のＩＬ−２レベルは、多くの因子、例えば、細胞型、インキュベーション時間、および抗体のタイプに依存する。この理由のために、同一の条件下で試験された抗体を比較することのみが可能である。図５および図１３Ａおよび図１７は、本発明の全ての抗体が、ヒトＰＤ−Ｌ２およびＰＤ−１を発現するＴ細胞と接触される場合、先行技術の抗体ＭＩＨ１８および２４Ｆ．１０Ｃ１２よりも高いＩＬ−２レベルを誘導することを示す。一実施形態では、本発明の抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、または完全ヒト抗体である。
【００２１】
好ましい実施形態では、本発明の抗体、またはその抗原結合部分は、それぞれ、以下の項目ａ）〜ｑ）のいずれかで定義される、重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域に含まれるＣＤＲ配列のうちの少なくとも１、２、３、４、５、または好ましくは６つを含む。
ａ）配列番号２の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１０の配列を有する軽鎖可変領域、
ｂ）配列番号１８の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２６の配列を有する軽鎖可変領域、
ｃ）配列番号３４の配列を有する重鎖可変領域および配列番号４２の配列を有する軽鎖可変領域、
ｄ）配列番号５０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号５８の配列を有する軽鎖可変領域、
ｅ）配列番号５０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号６６の配列を有する軽鎖可変領域、
ｆ）配列番号９６の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１０４の配列を有する軽鎖可変領域、
ｇ）配列番号１１２の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１２０の配列を有する軽鎖可変領域、
ｈ）配列番号１２８の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１３２の配列を有する軽鎖可変領域、
ｉ）配列番号１４０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１４６の配列を有する軽鎖可変領域、
ｊ）配列番号１５２の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１６０の配列を有する軽鎖可変領域、
ｋ）配列番号１６６の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１７４の配列を有する軽鎖可変領域、
ｌ）配列番号９６の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２１２の配列を有する軽鎖可変領域、
ｍ）配列番号１４０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２１８の配列を有する軽鎖可変領域、
ｎ）配列番号２２０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１６０の配列を有する軽鎖可変領域、
ｏ）配列番号２２０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２６の配列を有する軽鎖可変領域、
ｐ）配列番号２２０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２２６の配列を有する軽鎖可変領域、または
ｑ）配列番号２２０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２３０の配列を有する軽鎖可変領域。
【００２２】
代替的に、本発明の抗体、またはその抗原結合部分は、それぞれ、以下の項目ａ）〜ｑ）のいずれかで定義される、重鎖可変領域および軽鎖可変領域に含まれる６つのＣＤＲ配列を含み、ＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている：
ａ）配列番号２の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１０の配列を有する軽鎖可変領域、
ｂ）配列番号１８の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２６の配列を有する軽鎖可変領域、
ｃ）配列番号３４の配列を有する重鎖可変領域および配列番号４２の配列を有する軽鎖可変領域、
ｄ）配列番号５０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号５８の配列を有する軽鎖可変領域、
ｅ）配列番号５０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号６６の配列を有する軽鎖可変領域、
ｆ）配列番号９６の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１０４の配列を有する軽鎖可変領域、
ｇ）配列番号１１２の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１２０の配列を有する軽鎖可変領域、
ｈ）配列番号１２８の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１３２の配列を有する軽鎖可変領域、
ｉ）配列番号１４０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１４６の配列を有する軽鎖可変領域、
ｊ）配列番号１５２の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１６０の配列を有する軽鎖可変領域、
ｋ）配列番号１６６の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１７４の配列を有する軽鎖可変領域、
ｌ）配列番号９６の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２１２の配列を有する軽鎖可変領域、
ｍ）配列番号１４０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２１８の配列を有する軽鎖可変領域、
ｎ）配列番号２２０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１６０の配列を有する軽鎖可変領域、または
ｏ）配列番号２２０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２６の配列を有する軽鎖可変領域、または
ｐ）配列番号２２０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２２６の配列を有する軽鎖可変領域、または
ｑ）配列番号２２０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２３０の配列を有する軽鎖可変領域。
【００２３】
一実施形態では、本発明は、
ａ）配列番号４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１６のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｂ）配列番号２０のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号２４のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２８のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３２のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｃ）配列番号３６のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３８のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号４０のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号４４のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４６のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号４８のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｄ）配列番号５２のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号５４のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号５６のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号６０のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号６２のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号６４のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｅ）配列番号５２のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号５４のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号５６のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号６０のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号６２のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号６８のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｆ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１００のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１０２のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１０６のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１０８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１１０のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｇ）配列番号１１４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１１６のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１１８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１２２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１２４のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１２６のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｈ）配列番号１１４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３０のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１１８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１３４のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１３６のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１３８のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｉ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１４４のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１０６のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１５０のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｊ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１５６のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１６４のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｋ）配列番号１６８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７０のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１７２のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１７６のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１８０のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｌ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１００のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１０２のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２１４のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１０８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２１６のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｍ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１４４のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２１４のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１５０のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｎ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１６４のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｏ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２８のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３２のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｐ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２２８のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｑ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３２のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｒ）ａ）〜ｑ）に示されるＣＤＲ−Ｈ１およびＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３およびＣＤＲ−Ｌ１およびＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３のバリアントを含む、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含み、特に本明細書で定義される保存的置換において、ＣＤＲ配列中の最大１、２、３個アミノ酸残基が置換されている、抗体または抗原結合部分に関する。
【００２４】
好ましい実施形態では、本発明の抗体、またはその抗原結合部分は、
ａ）配列番号４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１６のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｂ）配列番号２０のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号２４のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２８のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３２のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｃ）配列番号３６のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３８のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号４０のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号４４のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４６のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号４８のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｄ）配列番号５２のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号５４のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号５６のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号６０のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号６２のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号６４のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｅ）配列番号５２のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号５４のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号５６のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号６０のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号６２のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号６８のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｆ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１００のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１０２のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１０６のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１０８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１１０のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｇ）配列番号１１４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１１６のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１１８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１２２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１２４のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１２６のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｈ）配列番号１１４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３０のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１１８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１３４のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１３６のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１３８のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｉ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１４４のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１０６のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１５０のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｊ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１５６のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１６４のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｋ）配列番号１６８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７０のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１７２のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１７６のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１８０のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｌ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１００のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１０２のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２１４のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１０８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２１６のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｍ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１４４のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２１４のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１５０のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｎ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１６４のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｏ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２８のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３２のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｐ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２２８のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｑ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３２のＣＤＲ−Ｌ３を含む、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む。
【００２５】
一実施形態では、本発明の抗体、またはその抗原結合部分は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、
ａ）重鎖可変領域は、配列番号２の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１０の配列を有するか、
ｂ）重鎖可変領域は、配列番号１８の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号２６の配列を有するか、
ｃ）重鎖可変領域は、配列番号３４の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号４２の配列を有するか、
ｄ）重鎖可変領域は、配列番号５０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号５８の配列を有するか、
ｅ）重鎖可変領域は、配列番号５０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号６６の配列を有するか、
ｆ）重鎖可変領域は、配列番号９６の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１０４の配列を有するか、
ｇ）重鎖可変領域は、配列番号１１２の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１２０の配列を有するか、
ｈ）重鎖可変領域は、配列番号１２８の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１３２の配列を有するか、
ｉ）重鎖可変領域は、配列番号１４０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１４６の配列を有するか、
ｊ）重鎖可変領域は、配列番号１５２の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１６０の配列を有するか、
ｋ）重鎖可変領域は、配列番号１６６の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１７４の配列を有するか、
ｌ）重鎖可変領域は、配列番号９６の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号２１２の配列を有するか、
ｍ）重鎖可変領域は、配列番号１４０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号２１８の配列を有するか、
ｎ）重鎖可変領域は、配列番号２２０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１６０の配列を有するか、
ｏ）重鎖可変領域は、配列番号２２０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号２６の配列を有するか、
ｐ）重鎖可変領域は、配列番号２２０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号２２６の配列を有するか、
ｑ）重鎖可変領域は、配列番号２２０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号２３０の配列を有するか、または
ｒ）ａ）〜ｑ）に示される重鎖可変領域および／もしくは軽鎖可変領域のバリアントであって、バリアント配列は、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の全体的な相同性を有し、ただし、特に本明細書で定義される保存的置換において、ＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている。
【００２６】
好ましい実施形態では、本発明の抗体、またはその抗原結合部分は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、
ａ）重鎖可変領域は、配列番号２の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１０の配列を有するか、
ｂ）重鎖可変領域は、配列番号１８の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号２６の配列を有するか、
ｃ）重鎖可変領域は、配列番号３４の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号４２の配列を有するか、
ｄ）重鎖可変領域は、配列番号５０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号５８の配列を有するか、
ｅ）重鎖可変領域は、配列番号５０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号６６の配列を有するか、
ｆ）重鎖可変領域は、配列番号９６の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１０４の配列を有するか、
ｇ）重鎖可変領域は、配列番号１１２の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１２０の配列を有するか、
ｈ）重鎖可変領域は、配列番号１２８の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１３２の配列を有するか、
ｉ）重鎖可変領域は、配列番号１４０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１４６の配列を有するか、
ｊ）重鎖可変領域は、配列番号１５２の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１６０の配列を有するか、
ｋ）重鎖可変領域は、配列番号１６６の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１７４の配列を有するか、
ｌ）重鎖可変領域は、配列番号９６の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号２１２の配列を有するか、
ｍ）重鎖可変領域は、配列番号１４０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号２１８の配列を有するか、
ｎ）重鎖可変領域は、配列番号２２０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１６０の配列を有するか、
ｏ）重鎖可変領域は、配列番号２２０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号２６の配列を有するか、
ｐ）重鎖可変領域は、配列番号２２０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号２２６の配列を有するか、
ｑ）重鎖可変領域は、配列番号２２０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号２３０の配列を有する。
【００２７】
本発明内では、ＣＤＲ配列中の最大１、２、または３個のアミノ酸が置換され得る。好ましくは、ＣＤＲ配列中のアミノ酸は、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２結合が遮断されるように、置換がヒトＰＤ−Ｌ２に結合する抗体の能力を実質的に低減しない方法で、任意のアミノ酸によって置換される。より好ましくは、ＣＤＲ配列で行われるアミノ酸置換は、保存的置換である。
【００２８】
代替的に、軽鎖残基Ｎ３１および／もしくはＮ９２ならびに／または重鎖残基Ｍ２３および／もしくはＭ６３に位置するアミノ酸が置換され得る。好ましくは、置換は、軽鎖におけるＮ３１Ｑ、Ｎ９２Ｑ、および／もしくはＮ９２Ｙ置換、ならびに／または重鎖におけるＭ２３Ｋおよび／もしくはＭ６３Ｌ置換を含む。
【００２９】
本発明の特定の実施形態では、抗体、またはその抗原結合部分は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプのものであり得る。本明細書で使用される場合、「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）を指す。抗体は、完全長抗体であり得るか、またはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４の抗体可変ドメインなどの抗原結合部分のみを含み得るか、またはＦａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、もしくはＦｖ断片で構成され得る。
【００３０】
特定の実施形態では、本発明の抗体、または抗原結合部分は、ＩｇＧ１アイソタイプのものである。
【００３１】
一実施形態では、本発明の抗体、または抗原結合部分は、単一特異性、二重特異性、三重特異性、または多重特異性抗原結合分子である。これに関して、抗体またはその抗原結合部分は、上記で定義される、ヒトＰＤ−Ｌ２に結合する部分、ならびにヒトＰＤ−Ｌ２にも結合するが、異なるエピトープに結合しない第２および／もしくはさらなる部分、ならびに／または異なるタンパク質に結合する第２および／もしくはさらなる部分を含み得る。異なるタンパク質は、例えば、ＰＤ−Ｌ２に機能的に類似したタンパク質、または同じもしくは類似のシグナル伝達カスケードに関与するタンパク質であり得る。例示的なタンパク質は、ＰＤ−Ｌ１であるが、ＰＤ−１は、一実施形態では、腫瘍細胞特異的抗原、ウイルス感染細胞に対して特異的な抗原、またはＴ細胞共阻害剤であり得る。
【００３２】
別の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合部分は、ＰＤ−１とは別の受容体へのＰＤ−Ｌ２の結合を遮断する。これに関して、抗体または抗原結合部分は、ＰＤ−１以外の他の受容体へのＰＤ−Ｌ２の結合を遮断する方法で、ＰＤ−Ｌ２に結合し得る。好ましくは、これらの受容体は、免疫細胞の表面上に位置する受容体であり得る。
【００３３】
別の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合部分のいずれかと同じエピトープに結合し、かつ／または同じエピトープについて競合する、抗体またはその抗原結合部分が提供される。
【００３４】
本発明は、本発明の抗体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子に関する。
【００３５】
一実施形態では、核酸分子は、
ａ）配列番号３のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号５のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号７のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１１のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１３のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１５のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｂ）配列番号１９のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２１のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号２３のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２７のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２９のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３１のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｃ）配列番号３５のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３７のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号３９のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号４３のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４５のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号４７のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｄ）配列番号５１のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号５３のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号５５のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号５９のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号６１のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号６３のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｅ）配列番号５１のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号５３のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号５５のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号５９のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号６１のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号６７のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｆ）配列番号９７のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号９９のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１０１のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１０５のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１０７のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１０９のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｇ）配列番号１１３のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１１５のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１１７のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１２１のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１２３のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１２５のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｈ）配列番号１１３のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２９のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１１７のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１３３のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１３５のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１３７のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｉ）配列番号９７のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４１のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１４３のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１０５のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４７のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１４９のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｊ）配列番号１５３のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１５５のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５７のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６１のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２９のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１６３のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｋ）配列番号１６７のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１６９のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１７１のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１７５のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７７のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１７９のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｌ）配列番号９７のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号９９のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１０１のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２１３のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１０７のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２１５のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｍ）配列番号９７のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４１のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１４３のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２１３のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４７のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１４９のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｎ）配列番号１５３のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２１のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５７のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６１のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２９のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１６３のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｏ）配列番号１５３のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２１のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５７のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２７のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２９のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３１のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｐ）配列番号１５３のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２１のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５７のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６１のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２９のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２２７のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｑ）配列番号１５３のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２１のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５７のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６１のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２９のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３１のＣＤＲ−Ｌ３を含む、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む。
【００３６】
別の実施形態では、核酸分子は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含み、
ａ）重鎖可変領域は、配列番号１の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号９の配列を有するか、
ｂ）重鎖可変領域は、配列番号１７の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号２５の配列を有するか、
ｃ）重鎖可変領域は、配列番号３３の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号４１の配列を有するか、
ｄ）重鎖可変領域は、配列番号４９の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号５７の配列を有するか、
ｅ）重鎖可変領域は、配列番号４９の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号６５の配列を有するか、
ｆ）重鎖可変領域は、配列番号９５の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１０３の配列を有するか、
ｇ）重鎖可変領域は、配列番号１１１の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１１９の配列を有するか、
ｈ）重鎖可変領域は、配列番号１２７の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１３１の配列を有するか、
ｉ）重鎖可変領域は、配列番号１３９の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１４５の配列を有するか、
ｊ）重鎖可変領域は、配列番号１５１の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１５９の配列を有するか、
ｋ）重鎖可変領域は、配列番号１６５の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１７３の配列を有するか、
ｌ）重鎖可変領域は、配列番号９５の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号２１１の配列を有するか、
ｍ）重鎖可変領域は、配列番号１３９の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号２１７の配列を有するか、
ｎ）重鎖可変領域は、配列番号２１９の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１５９の配列を有するか、
ｏ）重鎖可変領域は、配列番号２１９の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号２５の配列を有するか、
ｐ）重鎖可変領域は、配列番号２１９の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号２２５の配列を有するか、または
ｑ）重鎖可変領域は、配列番号２１９の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号２２９の配列を有する。
【００３７】
本発明はさらに、本発明の核酸配列を含む、発現ベクターに関する。本発明はさらに、本発明の発現ベクターを含む、細胞に関する。さらに、本発明は、本発明の細胞を培養することを含む、抗体を産生する方法に関し、細胞は、本発明のヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態では、抗体を産生する方法は、本発明の抗体の効率的な産生を可能にするために適した条件下で本発明の細胞を培養することを含む。
【００３８】
本発明はさらに、本発明の抗体またはその抗原結合部分を含む、薬学的組成物に関する。
【００３９】
さらに、本発明は、本発明の核酸分子または発現ベクターを含む、薬学的組成物に関する。
【００４０】
さらなる実施形態では、本発明の抗体または核酸分子と、薬学的に許容される担体および／または賦形剤とを含む、薬学的組成物が提供される。
【００４１】
さらに、ヒト療法における使用のための、本発明の抗体、本発明の核酸分子、発現ベクター、または本発明の薬学的組成物が提供される。特定の実施形態では、癌療法、特にヒト癌療法における使用のための、本発明の抗体、本発明の核酸分子、発現ベクター、または本発明の薬学的組成物が提供される。
【００４２】
特定の実施形態では、治療効果が、ＰＤ−１−ＰＤ−Ｌ２相互作用の遮断に基づく、ヒト療法または癌療法、特にヒト癌療法における使用のための、本発明の抗体、本発明の核酸分子、発現ベクター、または本発明の薬学的組成物が提供される。
【００４３】
別の実施形態では、治療効果が、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）をさらに含む、本発明による使用のための、本発明の抗体、本発明の核酸分子、発現ベクター、または薬学的組成物が提供される。
【００４４】
一実施形態では、好ましくは化学療法、抗体療法、および／または放射線療法などの他の療法と組み合わせた、ヒト療法または癌療法、特にヒト癌療法における使用のための、本発明の抗体もしくは抗原結合部分、本発明の核酸分子、本発明の発現ベクター、または本発明の薬学的組成物が提供される。
【００４５】
別の態様では、本発明は、本発明の抗体の段階希釈を使用して、ＡＰＣ（抗原提示細胞）とＴ細胞との間の相互作用を模倣するシステムにおいて、Ｔ細胞シグナル伝達を決定するための細胞株ベースのバイオアッセイに関する。
【００４６】
さらなる実施形態では、細胞株ベースのバイオアッセイにおける使用のための本発明の抗体を含む、キットが提供される。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】ヒトＰＤ−Ｌ２を発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞への抗ＰＤ−Ｌ２抗体の結合ヒトＰＤ−Ｌ２を発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞を、異なる濃度のキメラ抗ＰＤ−Ｌ２抗体とインキュベートした。細胞を洗浄し、結合をＡＰＣ標識抗ラットＩｇＧ  Ａｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で検出した。フローサイトメトリー分析を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して行った。
【図２】ＮＣＩ−Ｈ２２６肺癌細胞への抗ＰＤ−Ｌ２抗体の結合ＮＣＩ−Ｈ２２６細胞を、異なる濃度のキメラ抗ＰＤ−Ｌ２抗体とインキュベートした。細胞を洗浄し、結合をＡＰＣ標識抗ラットＩｇＧ  Ａｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で検出した。フローサイトメトリー分析を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して行った。
【図３】ＣＨＯ−Ｋ１／ｈＰＤ−Ｌ２細胞へのｈＰＤ−１結合の遮断ＣＨＯ−Ｋ１  ｈＰＤ−Ｌ２細胞を、異なる濃度のキメラ抗ＰＤ−Ｌ２抗体とインキュベートした。細胞を洗浄し、組換えｈＰＤ−１−ｈＦｃ−ビオチン（ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を０．５μｇ／ｍｌの濃度で加えた。洗浄後、結合したヒトＰＤ−１をストレプトアビジン−ＰＥ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で検出した。フローサイトメトリー分析を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して行った。
【図４】ｈＰＤ−１を発現するＨＥＫ２９３細胞へのｈＰＤ−Ｌ２結合の遮断１００ｐＭの濃度の組換えｈＰＤ−Ｌ２−ｈＦｃ−ビオチンを、キメラ抗ＰＤ−Ｌ２抗体と１時間インキュベートし、次いでＨＥＫ２９３Ｔ−ｈＰＤ−１細胞に加えた。洗浄後、結合したｈＰＤ−Ｌ２をストレプトアビジン−ＡＰＣ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で検出した。フローサイトメトリー分析を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して行った。
【図５】ＰＤ−１−ＰＤ−Ｌ２相互作用の阻害時のＴＣＲ媒介性ＩＬ−２上方制御ｈＰＤ−１およびｈＰＤ−Ｌ２を発現するＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞を、異なる濃度のキメラ抗ＰＤ−Ｌ２抗体と組み合わせた抗ＣＤ３抗体で処理し、１８時間インキュベートした。上清を収集し、ＩＬ−２レベルを、ＩＬ−２特異的ＥＬＩＳＡキット（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を使用して決定した。
【図６】マウスＰＤ−Ｌ２との交差反応性の不在マウスＰＤ−Ｌ２を発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、キメラ抗ＰＤ−Ｌ２抗体とインキュベートした。細胞を洗浄し、結合をＦＩＴＣ標識抗ラットＩｇＧ  Ａｂ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で検出した。フローサイトメトリー分析を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して行った。ＰＥ標識抗マウスＰＤ−Ｌ２クローンＴＹ２５は、陽性対照として機能した。図６Ｆにおける陽性対照を除いて、全てのピークが重複する。
【図７】ヒトＰＤ−Ｌ１との交差反応性の不在ヒトＰＤ−Ｌ１を発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞をキメラ抗ＰＤ−Ｌ２抗体とインキュベートした。細胞を洗浄し、結合をＦＩＴＣ標識抗ラットＩｇＧ  Ａｂ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で検出した。フローサイトメトリー分析を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して行った。ＰＥ標識抗ヒトＰＤ−Ｌ１クローンＭＩＨ１は、陽性対照として機能した。図７Ｆにおける陽性対照を除いて、全てのピークが重複する。
【図８】カニクイザルＰＤ−Ｌ２との交差反応性カニクイザルＰＤ−Ｌ２を発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、キメラ抗ＰＤ−Ｌ２抗体とインキュベートした。細胞を洗浄し、結合をＡＰＣ標識抗ラットＩｇＧ  Ａｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で検出した。フローサイトメトリー分析を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して行った。図８Ａでは、ｃｙｎｏ  ２ｎｄ  ＡＰＣ．００２およびｃｙｏ  ｎｅｇ．００１のシグナルは、重複する。
【図９】ヒトＰＤ−Ｌ２を発現するＣＨＯ−Ｋ１への抗ＰＤ−Ｌ２結合（ＦＡＣＳ）ヒトＰＤ−Ｌ２を発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞を、異なる濃度のキメラ抗ＰＤ−Ｌ２抗体とインキュベートした。細胞を洗浄し、結合をＡＰＣ標識抗ラットＩｇＧ  Ａｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で検出した。フローサイトメトリー分析を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して行った。
【図１０】ＮＣＩ−Ｈ２２６細胞上の内因性ＰＤ−Ｌ２への抗ＰＤ−Ｌ２結合ＮＣＩ−Ｈ２２６細胞を、異なる濃度のキメラ抗ＰＤ−Ｌ２抗体とインキュベートした。細胞を洗浄し、結合をＡＰＣ標識抗ラットＩｇＧ  Ａｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で検出した。フローサイトメトリー分析を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して行った。
【図１１】ＰＤ−Ｌ２−ＰＤ−１相互作用の遮断：高抗原濃度ＣＨＯ−Ｋ１  ｈＰＤ−Ｌ２細胞を、異なる濃度のキメラ抗ＰＤ−Ｌ２抗体とインキュベートした。細胞を洗浄し、組換えｈＰＤ−１−ｈＦｃ−ビオチン（ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を０．５μｇ／ｍｌの濃度で加えた。洗浄後、結合したヒトＰＤ−１をストレプトアビジン−ＰＥ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で検出した。フローサイトメトリー分析を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して行った。
【図１２】ＰＤ−Ｌ２−ＰＤ−１相互作用の遮断：低抗原濃度１００ｐＭの濃度の組換えｈＰＤ−Ｌ２−ｈＦｃ−ビオチンを、キメラ抗ＰＤ−Ｌ２抗体と１時間インキュベートし、次いでＨＥＫ２９３Ｔ−ｈＰＤ−１細胞に加えた。洗浄後、結合したｈＰＤ−Ｌ２をストレプトアビジン−ＡＰＣ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で検出した。フローサイトメトリー分析を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して行った。
【図１３】ＰＤ−Ｌ２遮断時のＴＣＲ媒介性ＩＬ−２上方制御ｈＰＤ−１およびｈＰＤ−Ｌ２を発現するＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞を、異なる濃度のキメラ抗ＰＤ−Ｌ２抗体と組み合わせた抗ＣＤ３抗体で処理し、１８時間インキュベートした。上清を収集し、ＩＬ−２レベルを、ＩＬ−２特異的ＥＬＩＳＡキット（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を使用して決定した。
【図１４】キメラ抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ヒトＰＤ−Ｌ１と交差反応しないヒトＰＤ−Ｌ１を発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞をキメラ抗ＰＤ−Ｌ２抗体とインキュベートした。細胞を洗浄し、結合をＦＩＴＣ標識抗ラットＩｇＧ  Ａｂ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で検出した。フローサイトメトリー分析を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して行った。ＰＥ標識抗ヒトＰＤ−Ｌ１クローンＭＩＨ１は、陽性対照として機能した。図７Ｆにおける陽性対照を除いて、全てのピークが重複する。
【図１５】キメラ抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、マウスＰＤ−Ｌ２と交差反応しないマウスＰＤ−Ｌ２を発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、キメラ抗ＰＤ−Ｌ２抗体とインキュベートした。細胞を洗浄し、結合をＦＩＴＣ標識抗ラットＩｇＧ  Ａｂ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で検出した。フローサイトメトリー分析を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して行った。ＰＥ標識抗マウスＰＤ−Ｌ２クローンＴＹ２５は、陽性対照として機能した。図６Ｆにおける陽性対照を除いて、全てのピークが重複する。
【図１６】キメラ抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、カニクイザルＰＤ−Ｌ２と交差反応するカニクイザルＰＤ−Ｌ２を発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、キメラ抗ＰＤ−Ｌ２抗体とインキュベートした。細胞を洗浄し、結合をＡＰＣ標識抗ラットＩｇＧ  Ａｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で検出した。フローサイトメトリー分析を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して行った。図８Ａでは、ｃｙｎｏ  ２ｎｄ  ＡＰＣ．００２およびｃｙｏ  ｎｅｇ．００１のシグナルは、重複する。
【図１７】抗ＰＤ−Ｌ２抗体および抗ＰＤ−Ｌ２アナログ抗体を介したＰＤ−１−ＰＤ−Ｌ２相互作用の阻害時のＴＣＲ媒介性ＩＬ−２上方制御の用量応答曲線ｈＰＤ−１およびｈＰＤ−Ｌ２を発現するＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞を、異なる濃度のヒト抗ＰＤ−Ｌ２抗体およびアナログ抗ＰＤ−Ｌ２抗体と組み合わせた抗ＣＤ３抗体で処理し、１８時間インキュベートした。上清を収集し、ＩＬ−２レベルを、ＩＬ−２特異的ＥＬＩＳＡキット（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を使用して決定した。本発明のヒト抗ＰＤ−Ｌ２抗体の曲線は、黒丸で描写され、参照アナログ抗体データ点は、黒四角（ＶＫ２／ＶＨ２）および菱形（ＶＫ４／ＶＨ４）で示される。
【図１８】細胞ベースのアッセイにおけるＰＤ１−ＰＤ−Ｌ２相互作用の阻害時の最大ＩＬ−２レベル図９に描写されるあてはめ曲線の最大値を、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  Ｓｏｆｔｗａｒｅを使用して計算した。
【図１９】ｈＰＤ−１を発現するＨＥＫ２９３細胞へのｈＰＤ−Ｌ２結合の遮断１００ｐＭの濃度の組換えｈＰＤ−Ｌ２−ｈＦｃ−ビオチンを、完全ヒト抗ＰＤ−Ｌ２抗体またはアナログ参照抗体と１時間インキュベートし、次いでＨＥＫ２９３Ｔ−ｈＰＤ−１細胞に加えた。洗浄後、結合したｈＰＤ−Ｌ２をストレプトアビジン−ＡＰＣ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で検出した。フローサイトメトリー分析を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して行った。ＩＣ５０値は、棒グラフおよび表として描写される。
【図２０】ＣＨＯ−Ｋ１／ｈＰＤ−Ｌ２細胞へのｈＰＤ−１結合の遮断ＣＨＯ−Ｋ１  ｈＰＤ−Ｌ２細胞を、異なる濃度の完全ヒト抗ＰＤ−Ｌ２抗体およびアナログ参照抗体とインキュベートした。細胞を洗浄し、組換えｈＰＤ−１−マウスＦｃ（ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を０．５μｇ／ｍｌの濃度で加えた。洗浄後、結合したヒトＰＤ−１を抗マウスＩｇＧ２ａ−ＡＰＣ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で検出した。フローサイトメトリー分析を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して行った。ＩＣ５０値は、棒グラフおよび表として描写される。
【図２１】ヒトＰＤ−Ｌ２を発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞へのヒト抗ＰＤ−Ｌ２抗体の結合ヒトＰＤ−Ｌ２を発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞を、異なる濃度の完全ヒト抗ＰＤ−Ｌ２抗体（ｈＩｇＧ１）とインキュベートした。細胞を洗浄し、結合をＡＰＣ標識抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ  Ａｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で検出した。フローサイトメトリー分析を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して行った。
【図２２】ヒトＰＤ−Ｌ２を発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞への最適化抗ＰＤ−Ｌ２抗体の結合ヒトＰＤ−Ｌ２を発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞を、異なる濃度の完全ヒト抗ＰＤ−Ｌ２抗体とインキュベートした。細胞を洗浄し、結合をＡＰＣ標識抗ヒトＦｃ  Ａｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で検出した。フローサイトメトリー分析を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して行った。
【図２３】最適化ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＴＣＲ媒介性ＩＬ−２下方制御によって試験される親クローンと比較して同様の活性を示すｈＰＤ−１およびｈＰＤ−Ｌ２を発現するＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞を、異なる濃度の完全ヒト抗ＰＤ−Ｌ２抗体と組み合わせた抗ＣＤ３抗体で処理し、１８時間インキュベートした。上清を収集し、ＩＬ−２レベルを、ＩＬ−２特異的ＥＬＩＳＡキット（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を使用して決定した。
【図２４】最適化ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、カニクイザルＰＤ−Ｌ２に結合し、マウスＰＤ−Ｌ２またはヒトＰＤ−Ｌ１に結合しないカニクイザルＰＤ−Ｌ２（Ａ）またはマウスＰＤ−Ｌ２（Ｂ）またはヒトＰＤ−Ｌ１（Ｃ）を発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、完全ヒト抗ＰＤ−Ｌ２抗体とインキュベートした。細胞を洗浄し、結合をＡＰＣ標識抗ヒトＦｃ  ＩｇＧ  Ａｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で検出した。フローサイトメトリー分析を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して行った。ＡＰＣ標識抗ヒトＰＤ−Ｌ２  ＭＩＨ１８（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＰＥ標識抗マウスＰＤ−Ｌ２クローンＴＹ２５、およびＡＰＣ標識抗ヒトＰＤ−Ｌ１（ＭＩＨ１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）は、陽性対照として機能した。
【図２５】ヒトＰＤ−Ｌ２を発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞への最適化抗ＰＤ−Ｌ２抗体の結合ヒトＰＤ−Ｌ２を発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞を、異なる濃度の完全ヒト抗ＰＤ−Ｌ２抗体とインキュベートした。細胞を洗浄し、結合をＡＰＣ標識抗ヒトＦｃ  Ａｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で検出した。フローサイトメトリー分析を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して行った。
【発明を実施するための形態】
【００４８】
本明細書で使用される「抗体」は、標的タンパク質に特異的または選択的に結合することができる任意の分子である。抗体は、抗体またはその部分／断片を含み得るか、またはそれらであり得、部分／断片は、完全長抗体と実質的に同じ結合活性を示す。抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、特定の認識部位でヒトＰＤ−Ｌ２ポリペプチドに結合する抗体である。他の抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体はまた、多価分子、多重特異性分子（例えば、ダイアボディ）、融合分子、アプティマー、アビマー、または他の天然に存在するか、もしくは組換えて作製された分子を含み得る。本発明において有用な例示的な抗体は、抗体様分子を含む。抗体様分子は、標的分子への結合によって機能を示すことができる分子であり（例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２００６，１７：６５３−６５８、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２００７，１８：１−１０、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １９９７，７：４６３−４６９、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２００６，１５：１４−２７を参照されたい）、例えば、ＤＡＲＰｉｎｓ（ＷＯ２００２／０２０５６５）、Ａｆｆｉｂｏｄｙ（ＷＯ１９９５／００１９３７）、Ａｖｉｍｅｒ（ＷＯ２００４／０４４０１１、ＷＯ２００５／０４０２２９）、Ａｄｎｅｃｔｉｎ（ＷＯ２００２／０３２９２５）、およびｆｙｎｏｍｅｒｓ（ＷＯ２０１３／１３５５８８）を含む。一般に、「抗体」という用語は、本明細書では、最も広い意味で使用され、それらが望ましい抗原結合活性を示す限り、これらに限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、完全ヒト抗体、および抗体断片を含む、様々な抗体構造を包含する。本発明内の抗体はまた、キメラ抗体、組換え抗体、組換え抗体の抗原結合断片、またはヒト化抗体であり得る。
【００４９】
抗体の「抗原結合部分」または「抗原結合断片」という用語は、インタクトな抗体の一部分を含み、インタクトな抗体が結合する抗原に結合する、インタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例は、これらに限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、線状抗体、一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）、および抗体から形成された多重特異性抗体を含む。
【００５０】
本発明の文脈で使用される「〜に結合する」という用語は、少なくとも２つの「抗原相互作用部位」の相互の結合（相互作用）を定義する。「抗原相互作用部位」という用語は、本発明に従って、ＰＤ−Ｌ２の特定の抗原または特定の抗原群との特定の相互作用の能力を示す、ポリペプチドのモチーフ、すなわち、本発明の抗体または抗原結合断片の一部分を定義する。当該結合／相互作用はまた、「特定の認識」を定義すると理解される。「特異的に認識する」という用語は、本発明に従って、抗体がＰＤ−Ｌ２の少なくとも２つのアミノ酸と特異的に相互作用および／または結合することができることを意味する。
【００５１】
本発明に従って使用される「特異的に結合する」という用語は、本発明の抗体またはその抗原結合部分が、類似の構造の（ポリ）ペプチドと交差反応しないか、または本質的に交差反応しないことを意味する。したがって、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−Ｌ２の構造に特異的に結合／相互作用する。
【００５２】
本明細書で使用される場合、「交差反応する」または「交差反応性」という用語は、典型的には異なる親和性を有する、同じ特異的結合パートナー上の同じ部位と反応する２つの分子またはリガンドの能力を指す。調査中の抗体、特に抗体またはその抗原結合部分のパネルの交差反応性は、例えば、目的の（ポリ）ペプチドへの、および多数の多かれ少なかれ（構造的および／または機能的に）密接に関連する（ポリ）ペプチドへの、従来の条件（例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，（１９８８）およびＵｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，（１９９９）を参照されたい）下の抗体またはその抗原結合部分の当該パネルの結合を評価することによって試験され得る。ヒトＰＤ−Ｌ２に結合するこれらの構築物（すなわち、抗体、その抗原結合部分など）のみが、目的の（ポリ）ペプチド／タンパク質に特異的であるとみなされ、本明細書で提供される方法に従ったさらなる研究のために選択される。これらの方法は、とりわけ、構造的および／または機能的に密接に関連する分子との結合研究、遮断および競合研究を含み得る。これらの結合研究はまた、ＦＡＣＳ分析、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ）、分析用超遠心、等温滴定熱量測定、蛍光異方性、蛍光分光法、または放射性標識リガンド結合アッセイによるものを含む。
【００５３】
したがって、特異性は、当該技術分野で知られる方法および本明細書に記載される方法によって実験的に決定することができる。そのような方法は、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ−、ＲＩＡ−、ＥＣＬ−、ＩＲＭＡ−試験、およびペプチドスキャンを含むが、これらに限定されない。
【００５４】
本明細書で使用される「ＰＤ−Ｌ２」（プログラム死リガンド２）という用語は、特定のＰＤ−１リガンドを指す。ＰＤ−Ｌ２は、樹状細胞、マクロファージ、および骨髄由来マスト細胞を含む、様々な抗原提示細胞（ＡＰＣ）上で発現するＢ７ファミリーメンバーである（Ｚｈｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３７：２４０５）。この用語はまた、ＰＤ−Ｌ２の天然に存在するバリアント、例えば、スプライスバリアントまたは対立遺伝子バリアントを含む。ＰＤ−Ｌ２の代替名または同義語は、ＰＤＣＤ１Ｌ２、ＰＤＬ２、Ｂ７−ＤＣ、Ｂｉｄｅ、およびＣＤ２７３を含む。本明細書で使用される「ヒトＰＤ−Ｌ２」は、ヒト由来のＰＤ−Ｌ２を含む。代表的なヒトＰＤ−Ｌ２の核酸およびアミノ酸配列は、当該技術分野で周知であり、またＧｅｎＢａｎｋデータベースで、ＮＭ＿０２５２３９．３およびＮＰ＿０７９５１５．２下で一般に入手可能である。本明細書で使用される「マウスＰＤ−Ｌ２」は、マウス由来のＰＤ−Ｌ２を指す。代表的なマウスＰＤ−Ｌ２の核酸およびアミノ酸配列は、当該技術分野で周知であり、またＧｅｎＢａｎｋデータベースで、ＮＭ＿０２１３９６．２およびＮＰ＿０６７３７１．１下で一般に入手可能である。本明細書で使用される「カニクイザルＰＤ−Ｌ２」は、カニクイザル由来のＰＤ−Ｌ２を指す。代表的なカニクイザルＰＤ−Ｌ２の核酸およびアミノ酸配列は、当該技術分野で周知であり、またＧｅｎＢａｎｋデータベースで、ＮＭ＿００１０８３５９９．２およびＮＰ＿００１０７７０６８．１下で一般に入手可能である。
【００５５】
「ＰＤ−Ｌ１」（プログラム死リガンド１）という用語は、特定のＰＤ−１リガンドを指す。ＰＤ−Ｌ１は、様々な免疫および非免疫細胞上で発現するＢ７ファミリーメンバーである。この用語はまた、ＰＤ−Ｌ１の天然に存在するバリアント、例えば、スプライスバリアントまたは対立遺伝子バリアントを含む。ＰＤ−Ｌ１の代替名または同義語は、ＰＤＣＤ１Ｌ１、ＰＤＣＤ１ＬＧ１、ＰＤＬ１、Ｂ７−Ｈ、Ｂ７−Ｈ１、およびＣＤ２７４を含む。代表的なヒトＰＤ−Ｌ１の核酸およびアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋデータベースで、ＮＭ＿０１４１４３．３およびＮＰ＿０５４８６２．１下で入手可能である。
【００５６】
本明細書で使用される「ＰＤ−１」（プログラム細胞死タンパク質１）という用語は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属し、Ｔ細胞およびＢ細胞上で発現する細胞表面受容体を指す。ＰＤ−１は、２つのリガンド、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２に結合する。代表的なヒトＰＤ−１の核酸およびアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋデータベースで、ＮＭ＿００５０１８．２およびＮＰ＿００５００９．２下で入手可能である（Ｉｓｈｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）２０  ＥＭＢＯ．７１１：３８８７、Ｓｈｉｎｏｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ２３：７０４、米国特許第５，６９８，５２０号も参照されたい）。ＰＤ−１は、免疫グロブリンスーパーファミリードメイン、膜貫通ドメインを含有する細胞外領域、および免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む細胞内領域を有する（Ｉｓｈｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）ＥＭＢＯＪ．１１：３８８７、Ｓｈｉｎｏｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ２３：７０４、米国特許第５，６９８，５２０号）。
【００５７】
「ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２結合が遮断される」または「ＰＤ−１−ＰＤ−Ｌ２相互作用の遮断」という用語および本明細書で使用される同等物は、相互作用の減少、すなわち、ＰＤ−Ｌ２とＰＤ−１との間の結合を意味するものとする。本発明の文脈において、ＰＤ−Ｌ２とＰＤ−１との間の低減した相互作用／結合は、さらに以下に実施例によって例示されるように、本発明の抗体またはその抗原結合部分によって引き起こされる。理論によって縛られることなく、本発明の抗体、またはその抗原結合部分は、ＰＤ−Ｌ２およびＰＤ−１の結合界面内でＰＤ−Ｌ２に結合し、よってＰＤ−Ｌ２へのＰＤ−１の結合を遮断する。
【００５８】
本明細書で使用される「フローサイトメーター」という用語は、流体媒体に懸濁させた粒子に第１の波長の光を照射し、同じまたは異なる波長の光を検出することができる任意のデバイスを指し、検出された光は、細胞またはその上のインジケーターの存在を示す。フローサイトメーターは、第２の光を放射しない他の粒子または細胞から粒子または細胞を単離することができるセルソーターに結合され得る。インジケーターは、これに限定されないが、蛍光抗体セルソーティング（ＦＡＣＳ）を提供するＦＩＴＣなどの、フルオロフォアに結合された抗体であり得る。本発明の文脈において、ＦＡＣＳ分析は、例えば、ヒトＰＤ−Ｌ２／ＰＤ−Ｌ１、マウスＰＤ−Ｌ２、任意のカニクイザルＰＤ−Ｌ２への本発明の抗体の結合を評価するために、結合研究において使用された。例示的なＦＡＣＳセルソーターは、ＭｏＦｌｏソーター（ＤａｋｏＣｙｔｏｍａｔｉｏｎ、Ｆｏｒｉ  Ｃｏｌｌｉｎｓ、Ｃｏｌｏ．）、ＦＡＣＳＡｒｉａ（商標）、ＦＡＣＳＡｒｒａｙ（商標）、ＦＡＣＳ  Ｖａｎｔａｇｅ（商標）、ＢＤ（商標）ＬＳＲ  ＩＩ、およびＦＡＣＳＣａｉｉｂｕｒ（商標）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、Ｃａｌｉｆ．）、ならびにＳｏｎｙ、Ｂｉｏ−Ｒａｄ、およびＢｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒなどの他の商業的ベンダーによって産生される他の同等のセルソーターを含む。
【００５９】
本明細書で使用される「ＥＣ５０」という用語は、ベースラインと最大値との中間のアッセイにおいて応答を誘導する抗体またはその抗体部分の濃度を指す。これは、したがって、最大効果の５０％が観察される抗体濃度を表す。本明細書で使用される「ＩＣ５０」という用語は、最大応答とベースラインとの中間のアッセイにおいて応答を阻害する阻害剤（例えば、抗体または抗体部分）の濃度を指す。これは、所定の応答を５０％低減する抗体濃度を表す。ＥＣ５０およびＩＣ５０の両方は、ＥＬＩＳＡもしくはＦＡＣＳ分析、または当該技術分野で知られる任意の他の方法によって測定され得る。
【００６０】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の集合から得られる抗体を指し、すなわち、集合を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る可能な天然に生じる突然変異を除いて、同一である。モノクローナル抗体は、非常に特異性であり、単一抗原部位に対して向けられている。モノクローナル抗体は、それらが、他の免疫グロブリンによって本質的に汚染されていない、ハイブリドーマ培養によって合成され得るという点で有利である。修飾された「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体の集合の中にあるものとしての抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されるものではない。上記のように、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  ２５６（１９７５），４９５によって記載されるハイブリドーマ法によって作製され得る。
【００６１】
本明細書で使用される場合、「ＭＩＨ１８」は、遮断抗体としてヒトＰＤ−Ｌ２と反応する、ＭＩＨ１８モノクローナル抗体、マウスモノクローナルＩｇＧ１カッパ（Ｙｏｕｎｇｎａｋ−Ｐｉｂｏｏｎｒａｔａｎｋｉｔ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ，２００４  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，９４  ２１５−２２０）を指す。ＭＩＨ１８は、商業的供給源から、例えば、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｃｈｅｒ  ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃまたはＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入することができる。
【００６２】
本明細書で使用される場合、「２４Ｆ．１０Ｃ１２」は、ＷＯ２０１０／０３６９５９に開示される抗体２４Ｆ．１０Ｃ１２の可変軽鎖および可変重鎖を含む抗体を指す。
【００６３】
本明細書で使用される「同一の条件」という用語は、結合および阻害研究が、本発明の抗体および研究において試験される他の抗体（例えば、ＭＩＨ１８およびニボルマブ）について同一の条件下で行われたことを意味するものとする。例えば、実験において使用される抗体濃度およびインキュベーション時間に関して、ヒトＰＤ−Ｌ２への結合（図１、図２、図９、図１０、図２１、図２２、および図２５）、遮断ＰＤ−Ｌ２−ＰＤ−２相互作用（図３、図４、図１１、図１２、図１９、および図２０）、およびＴＣＲ媒介性ＩＬ−２上方制御（図５、図１３、図１７、および図１８）と同一の条件が適用された。
【００６４】
本明細書で使用される「ＴＣＲ媒介性ＩＬ−２発現」という用語は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）によって制御されるインターロイキン−２（ＩＬ−２）の発現を指す。ＩＬ−２の遺伝子発現制御は、複数のレベルまたは異なる方法によるものであり得る。チェックポイントの１つは、ＴＣＲを通るシグナル伝達である。
【００６５】
本明細書で使用される「酵素結合免疫吸着アッセイ」（ＥＬＩＳＡ）という用語は、目的の抗原の検出が検出可能なシグナルを産生する酵素反応を介して達成される、抗体ベースのアッセイを指す。ＥＬＩＳＡは、競合または非競合形式として実行することができる。ＥＬＩＳＡはまた、抗原に対する２つの抗体、抗原を捕捉するための１つの抗体および捕捉された抗体−抗原複合体を検出するための酵素または他の検出可能なラベルで標識されたものが使用される、２部位または「サンドイッチ」アッセイを含む。
【００６６】
本明細書で使用される「完全ヒト抗体」という用語は、ヒト免疫グロブリンタンパク質配列のみを含む抗体を指す。完全ヒト抗体は、マウス、マウス細胞、またはマウス細胞に由来するハイブリドーマにおいて産生される場合、マウス炭水化物鎖を含有し得る。同様に、「マウス抗体（ｍｏｕｓｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」または「マウス抗体（ｍｕｒｉｎｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、マウス（ｍｏｕｓｅ）／マウス（ｍｕｒｉｎｅ）免疫グロブリンタンパク質配列のみを含む抗体を指す。代替的に、「完全ヒト抗体」は、ラット、ラット細胞、ラット細胞に由来するハイブリドーマにおいて産生される場合、ラット炭水化物鎖を含有し得る。同様に、「ラット抗体」という用語は、ラット免疫グロブリン配列のみを含む抗体を指す。完全ヒト抗体はまた、例えば、完全ヒト抗体の産生およびスクリーニングを可能にする、広く使用されているスクリーニング技術であるファージディスプレイによって産生され得る。また、ファージ抗体を本発明の文脈で使用することができる。ファージディスプレイ法は、例えば、ＵＳ５，４０３，４８４、ＵＳ５，９６９，１０８、およびＵＳ５，８８５，７９３に記載される。完全ヒト抗体の開発を可能にする別の技術には、マウスハイブリドーマ技術の改変が含まれる。マウスは、それら自身のマウス遺伝子と交換にヒト免疫グロブリン遺伝子座を含有するようにトランスジェニックにされる（例えば、ＵＳ５，８７７，３９７を参照されたい）。
【００６７】
本明細書で使用される「ニボルマブ」は、例えば、ＵＳ８，００８，４４９に開示され、Ｏｐｄｉｖｏとして市販されるヒトＩｇＧ４抗ＰＤ−１モノクローナル抗体を指す。
【００６８】
「キメラ抗体」という用語は、別のヒトまたは非ヒト種（例えば、マウス、ウマ、ウサギ、イヌ、ウシ、ニワトリ）由来の抗体領域（例えば、定常領域）と融合またはキメラ化された本発明の可変領域を含む抗体を指す。
【００６９】
抗体という用語はまた、組換えヒト抗体、異種抗体、およびヘテロハイブリッド抗体に関する。「組換え（ヒト）抗体」という用語は、ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体などの、組換え手段によって調製、発現、作製、もしくは単離された全てのヒト配列抗体、宿主細胞にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを使用して発現された抗体、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、または他のＤＮＡ配列へのヒト免疫グロブリン遺伝子配列のスプライシングを含む任意の他の手段によって調製、発現、作製、もしくは単離された抗体を含む。そのような組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変および定常領域（存在する場合）を有する。しかしながら、そのような抗体は、インビトロ突然変異誘発（または、ヒトＩｇ配列についてトランスジェニックな動物が使用される場合、インビボ体細胞突然変異誘発）に供され得、よって、組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列に由来し、それらに関連するが、インビボでヒト抗体生殖系列レパートリー内に自然に存在しない場合がある配列である。
【００７０】
「異種抗体」は、そのような抗体を産生するトランスジェニック非ヒト生物に関連して定義される。この用語は、トランスジェニック非ヒト動物からなるものではない生物に見出されるものに対応するアミノ酸配列またはコード核酸配列を有する抗体を指し、一般にトランスジェニック非ヒト動物の種以外の種に由来する。
【００７１】
抗体という用語はまた、ヒト化抗体に関する。非ヒト（例えば、マウスまたはウサギ）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有する、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはその断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、または抗体の他の抗原結合部分配列など）である。多くの場合、ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が、望ましい特異性、親和性、および容量を有するマウス、ラット、ウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基によって置き換えられる、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの事例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも移入されたＣＤＲまたはフレームワーク配列にも見られない残基を含み得る。これらの修飾は、抗体性能をさらに改善および最適化するために行われる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全ては、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンのものを含み得る。抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）／抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）分子のヒト化のための方法は、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１（１９８６），５２２−５２５、Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２（１９８８），３２３−３２７、およびＶｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９（１９８８），１５３４−１５３６にさらに詳述される。ヒト化抗体の特定の例、例えば、ＥｐＣＡＭに対して向けられた抗体は、当該技術分野において知られている（例えば、ＬｏＢｕｇｌｉｏ，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ａｂｓｔｒａｃｔ（１９９７），１５６２  ａｎｄ  Ｋｈｏｒ，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ａｂｓｔｒａｃｔ（１９９７），８４７を参照されたい）。
【００７２】
抗体のヒト化のための一般的な方法には、ＣＤＲグラフティングが含まれ、非ヒト「ドナー」抗体からの機能的な抗原結合部位が、ヒト「アクセプター」抗体にグラフトされる。ＣＤＲグラフティング法は、当該技術分野で知られており、例えば、ＵＳ５，２２５，５３９、ＵＳ５，６９３，７６１、およびＵＳ６，４０７，２１３に記載される。別の関連する方法は、遺伝子再構成および遺伝子変換を受けることができる１つ以上のヒト化免疫グロブリン遺伝子座を含有するように遺伝子操作されたトランスジェニック動物からのヒト化抗体の産生である（例えば、ＵＳ７，１２９，０８４を参照されたい）。
【００７３】
したがって、本発明の文脈において、ヒト化され、薬学的組成物で首尾よく採用することができる、抗体分子またはその抗原結合断片が提供される。
【００７４】
本発明の文脈において、「抗体」という用語は、完全な免疫グロブリン分子およびそのような免疫グロブリン分子の部分（すなわち、「その抗原結合部分」）に関する。さらに、この用語は、上記で議論されるように、修飾および／または変更された抗体分子に関する。この用語はまた、組換え的または合成的に産生／合成された抗体に関する。この用語はまた、インタクトな抗体ならびに分離された軽鎖および重鎖、Ｆａｂ、Ｆｖ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２のようなその抗体断片に関する。抗体という用語はまた、完全ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ＣＤＲグラフト化抗体、および一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）または抗体融合タンパク質のような抗体構築物を含むが、これらに限定されない。
【００７５】
「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、本発明の文脈において、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを有し、これらのドメインは、単一ポリペプチド鎖に存在する。一般に、ｓｃＦｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、これは、ｓｃＦｖが抗原結合のために望ましい構造を形成することを可能にする。一本鎖抗体の産生について記載された技法は、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎ．Ｙ．（１９９４），２６９−３１５に記載される。
【００７６】
本明細書で使用される「Ｆａｂ断片」は、１つの軽鎖と１つの重鎖のＣＨ１および可変領域とで構成される。Ｆａｂ分子の重鎖は、別の重鎖分子とジスルフィド結合を形成することができない。
【００７７】
「Ｆｃ」領域は、抗体のＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む２つの重鎖断片を含有する。２つの重鎖断片は、２つ以上のジスルフィド結合によって、およびＣＨ３ドメインの疎水性相互作用によって一緒に結合される。
【００７８】
「Ｆａｂ’断片」は、１つの軽鎖と、ＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインならびにまたＣＨ１とＣＨ２ドメインとの間の領域を含有する１つの重鎖の一部分とを含有し、鎖間ジスルフィド結合を２つのＦａｂ’断片の２つの重鎖間に形成して、Ｆ（ａｂ’）２分子を形成することができる。
【００７９】
「Ｆ（ａｂ’）２断片」は、２つの軽鎖と、ＣＨ１とＣＨ２ドメインとの間に定常領域の一部分を含有する２つの重鎖とを含有し、鎖間ジスルフィド結合が２つの重鎖間に形成される。よって、ＡＦ（ａｂ’）２断片は、２つの重鎖間のジスルフィド結合によって一緒に結合される２つのＦａｂ’断片で構成される。
【００８０】
「Ｆｖ領域」は、重鎖および軽鎖の両方からの可変領域を含むが、定常領域を欠く。
【００８１】
本発明に従って採用される抗体、抗体構築物、抗体断片、抗体誘導体（全てＩｇ由来である）、またはそれらの対応する免疫グロブリン鎖（複数可）は、例えば、アミノ酸欠失（複数可）、挿入（複数可）、置換（複数可）、付加（複数可）、および／もしくは組換え（複数可）、ならびに／または当該技術分野で知られている単独もしくは組み合わせのいずれかの任意の他の修飾（複数可）を使用することによって、当該技術分野で知られている従来の技法を使用してさらに修飾することができる。免疫グロブリン鎖のアミノ酸配列の基礎をなすＤＮＡ配列にそのような修飾を導入するための方法は、当業者に周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ（１９８９），ｌｏｃ．ｃｉｔ．を参照されたい。「Ｉｇ由来ドメイン」という用語は、特に、少なくとも１つのＣＤＲを含む（ポリ）ペプチド構築物に関する。列挙されたＩｇ由来ドメインの断片または誘導体は、上記抗体分子の部分であり、および／または化学的／生化学的もしくは分子生物学的方法によって修飾される、（ポリ）ペプチドを定義する。対応する方法は、当該技術分野で知られており、とりわけ実験室マニュアルに記載されている（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ；  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（１９８９）ａｎｄ  ３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（２００１）、Ｇｅｒｈａｒｄｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｇｅｎｅｒａｌ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ  ＡＳＭ  Ｐｒｅｓｓ（１９９４）、Ｌｅｆｋｏｖｉｔｓ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍａｎｕａｌ：Ｔｈｅ  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｓｏｕｒｃｅｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ；  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９９７）、Ｇｏｌｅｍｉｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ：Ａ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｍａｎｕａｌ  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（２００２）を参照されたい）。
【００８２】
本明細書で採用される「ＣＤＲ」という用語は、当該技術分野において周知である、「相補性決定領域」に関する。ＣＤＲは、当該分子の特異性を決定し、特定のリガンドと接触する免疫グロブリンの部分である。ＣＤＲは、分子の最も変化可能な部分であり、これらの分子の多様性に寄与する。各Ｖドメインには３つのＣＤＲ領域、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３がある。ＣＤＲ−Ｈは、可変重鎖のＣＤＲ領域を示し、ＣＤＲ−Ｌは、可変軽鎖のＣＤＲ領域に関する。ＶＨは、可変重鎖を意味し、ＶＬは、可変軽鎖を意味する。Ｉｇ由来領域のＣＤＲ領域は、Ｋａｂａｔ  “Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”，５ｔｈ  ｅｄｉｔ．ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｏ．９１−３２４２  Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９９１）、ＣｈｏｔｈｉａＪ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６（１９８７），９０１−９１７、またはＣｈｏｔｈｉａ  Ｎａｔｕｒｅ  ３４２（１９８９），８７７−８８３に記載されるように決定され得る。
【００８３】
したがって、本発明の文脈では、本明細書で上述される抗体分子は、完全抗体（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のような、免疫グロブリン）、Ｆ（ａｂ）−、Ｆａｂ’−ＳＨ−、Ｆｖ−、Ｆａｂ’−、Ｆ（ａｂ’）２−断片、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト化抗体、完全ヒト抗体、二価抗体構築物、抗体融合タンパク質、合成抗体、二価一本鎖抗体、三価一本鎖抗体、および多価一本鎖抗体からなる群から選択される。
【００８４】
本発明はまた、ＰＤ−Ｌ２の天然ポリペプチドおよび組換えポリペプチドに対する特異的抗体の産生に関する。この産生は、例えば、マウスのような動物の免疫化に基づく。しかしながら、抗体／抗血清の産生のための他の動物もまた、本発明内で想定される。例えば、モノクローナルおよびポリクローナル抗体は、ウサギ、マウス、ヤギ、ロバなどによって産生することができる。ＰＤ−Ｌ２の対応するように選択されたポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、適切なベクターにサブクローニングすることができ、組換えポリペプチドは、発現が可能な生物、例えば、細菌において発現させる。よって、発現させた組換えタンパク質は、マウスに腹腔内注射することができ、得られた特異的抗体は、例えば、心臓内血液穿刺によって提供されるマウス血清から得ることができる。本発明はまた、ＤＮＡワクチン戦略を使用することによる、天然ポリペプチドおよび組換えポリペプチドに対する特異的抗体の産生を想定する。ＤＮＡワクチン戦略は、当該技術分野で周知であり、遺伝子銃またはジェット注射および筋肉内または皮内注射による、リポソーム媒介性送達を包含する。よって、ＰＤ−Ｌ２のポリペプチドに対して向けられた抗体は、所望のポリペプチドまたはＰＤ−Ｌ２のタンパク質を発現するベクターを筋肉内に直接注射することによって、動物を直接免疫化することによって得ることができる。得られた特異的抗体の量は、ＥＬＩＳＡを使用して定量化することができる。抗体の産生のためのさらなる方法は、当該技術分野で周知であり、例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，“Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ”，ＣＳＨ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，１９８８を参照されたい。
【００８５】
よって、指定されたアッセイ条件下で、指定された抗体および対応するポリペプチドまたはＰＤ−Ｌ２のタンパク質は、互いに結合し、試料中に存在する他の成分に有意な量で結合しない。そのような条件下での標的分析物への特異的結合は、特定の標的分析物についてのその特異性のために選択される結合部分を必要とし得る。特定の抗原と特異的に反応する抗体を選択するために、様々なイムノアッセイ形式が使用され得る。例えば、固相ＥＬＩＳＡイムノアッセイは、分析物と特異的に免疫反応するモノクローナル抗体を選択するために日常的に使用される。特異的免疫反応性を決定するために使用することができるイムノアッセイ形式および条件の説明については、Ｓｈｅｐｈｅｒｄ  ａｎｄ  Ｄｅａｎ（２０００），Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓおよび／またはＨｏｗａｒｄ  ａｎｄ  Ｂｅｔｈｅｌｌ（２０００）Ｂａｓｉｃ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ，Ｃｒｃ．Ｐｒ．Ｉｎｃ．を参照されたい。典型的には、特異的または選択的反応は、バックグラウンドシグナル対ノイズの少なくとも２倍であり、より典型的には、バックグラウンドの１０〜１００倍超である。当業者は、新規ポリペプチドに対して向けられた特異的結合分子を提供および生成する位置にある。特異的結合アッセイについて、これは望ましくない交差反応性を回避するために容易に採用するこができ、例えば、ポリクローナル抗体は、既知の方法によって簡単に精製および選択することができる（Ｓｈｅｐｈｅｒｄ  ａｎｄ  Ｄｅａｎ，ｌｏｃ．ｃｉｔ．を参照されたい）。
【００８６】
「相同性」とは、２つのポリヌクレオチド配列間または２つのポリペプチド配列間の、それらが最適に整列される場合の配列類似性を指す。２つの比較された配列の両方における位置が同じ塩基またはアミノ酸モノマーサブユニットによって占められる場合、例えば、２つのＤＮＡ分子の各々における位置がアデニンによって占められる場合、分子はその位置で相同である。相同のパーセントは、２つの配列によって共有される相同位置の数を比較される位置の総数で割ったものｘ１００である。例えば、配列が最適に整列される場合に２つの配列における位置の１０個のうちの８個が一致するか、または相同である場合、２つの配列は８０％相同である。一般に、比較は、最大相同性パーセントを与えるように２つの配列を整列させる場合に行われる。例えば、比較は、ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって行うことができ、アルゴリズムのパラメータは、それぞれの参照配列の全長にわたってそれぞれの配列間の最大の一致を与えるように選択される。
【００８７】
本明細書で使用される「ベクター」という用語は、それが連結される別の核酸を増殖させることができる核酸分子を指す。この用語は、自己複製核酸構造としてのベクター、およびそれが導入されている宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターを含む。特定のベクターは、それらが作動可能に連結される核酸の発現を誘導することができる。そのようなベクターは、本明細書では「発現ベクター」と呼ばれる。
【００８８】
「細胞」、「細胞株」、および「細胞培養」という用語は、互換的に使用され、外因性核酸が導入された細胞を指し、そのような細胞の子孫を含む。細胞は、「形質転換体」および「形質転換細胞」を含み、これは、継代数にかかわらず、一次形質転換細胞およびそれに由来する子孫を含む。子孫は、親細胞と核酸含有量が完全に同一ではない場合があるが、突然変異を含有し得る。元の形質転換細胞においてスクリーニングまたは選択されるものと同じ機能または生物学的活性を有する突然変異子孫が本明細書に含まれる。
【００８９】
「薬学的組成物」または「薬学的製剤」という用語は、その中に含有される活性成分の生物学的活性が有効であることを許容するような形態であり、製剤が投与される対象に対して許容されないほどの毒性がある追加の成分を含有しない調製物を指す。
【００９０】
「薬学的に許容される担体」は、対象にとって非毒性である、活性成分以外の薬学的製剤中の成分を指す。薬学的に許容される担体は、緩衝剤、賦形剤、安定剤、または保存剤を含むが、これらに限定されない。本明細書で使用される「賦形剤」という用語は、薬学的剤形で日常的に使用される任意の生理学的に不活性な添加剤を含む。賦形剤は、希釈剤、結合剤、オスモゲン、酸性化剤、界面活性剤、崩壊剤、潤滑剤、および流動促進剤を含む群から選択される。
【００９１】
本明細書で使用される場合、「ヒト療法」は、療法におけるヒト個体の自然な経過を変化させる試みにおける臨床的介入を指し、予防のため、または臨床病理の経過中のいずれかに行うことができる。療法の望ましい効果は、疾患の発生または再発の防止、症状の緩和、疾患の任意の直接的または間接的な病理学的結果の減少、転移の防止、疾患進行速度の低下、疾患状態の改善または軽減、および寛解または予後改善を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、疾患の発症を遅らせるか、または疾患の進行を遅らせるために使用される。いくつかの実施形態では、ヒト療法は、癌療法である。「癌」という用語は、典型的には制御されていない細胞成長／増殖を特徴とする、哺乳動物における生理学的状態を指すか、または説明する。癌の例は、癌腫、肝臓癌、肝細胞癌、胃癌、肺癌、食道癌、乳癌、前立腺癌、リンパ腫（例えば、ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫）、芽細胞腫、肉腫、および白血病を含むが、これらに限定されない。
【００９２】
本明細書で使用される場合、「抗原提示細胞」という用語は、専門的な抗原提示細胞（例えば、Ｂリンパ球、単球、樹状細胞、ランゲルハンス細胞）、および他の抗原提示細胞（例えば、ケラチノサイト、内皮細胞、星状細胞、線維芽細胞、オリゴデンドロサイト）を含む。
【００９３】
本明細書で使用される「Ｔ細胞シグナル伝達」は、Ｔ細胞によって誘導されるシグナル伝達を指す。Ｔ細胞上で発現したＴ細胞受容体（ＴＣＲ）は、Ｔ細胞が抗原提示細胞上で提示された抗原を認識することを可能にし、これは、最終的にＴ細胞エフェクター機能をもたらすシグナル伝達事象のカスケードにつながる。「Ｔ細胞」という用語は、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞を含む。Ｔ細胞という用語はまた、Ｔヘルパー１型Ｔ細胞、Ｔヘルパー２型Ｔ細胞、Ｔヘルパー１７型Ｔ細胞、および阻害性Ｔ細胞を含む。
【００９４】
本明細書で使用される場合、「キット」は、本発明のマーカーの発現を特異的に検出または調節するための、少なくとも１つの試薬、例えば、プローブを含む任意の製造物（例えば、パッケージまたは容器）である。キットは、本発明の方法を行うためのユニットとして宣伝、配布、または販売され得る。
【００９５】
さらに、特許請求の範囲において、「含む」という語は、他の要素またはステップを除外せず、不定冠詞「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が別段に明示しない限り、複数の指示物を含む。属性または値に関連する「本質的に」、「約」、「およそ」などの用語は、特にまた、それぞれ属性または値を正確に定義する。
【００９６】
本発明の範囲は、例えば、アミノ基などのプロトン化の影響を受けやすい電子孤立対を有する原子の、無機もしくは有機酸でのプロトン化によって形成され得るか、または生理学的に許容されるカチオンを有する酸基（カルボン酸基など）の塩としての、本明細書に開示される化合物の全ての薬学的に許容される塩形態を包含する。例示的な塩基付加塩は、例えば、ナトリウムまたはカリウム塩などのアルカリ金属塩；カルシウムまたはマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩；亜鉛塩；アンモニウム塩；トリメチルアミン、トリエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、プロカイン塩、メグルミン塩、エチレンジアミン塩、またはコリン塩などの脂肪族アミン塩；Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミン塩、ベンザチン塩、ベネタミン塩などのアラルキルアミン塩；ピリジン塩、ピコリン塩、キノリン塩、またはイソキノリン塩などの複素環式芳香族アミン塩；テトラメチルアンモニウム塩、テトラエチルアンモニウム塩、ベンジルトリメチルアンモニウム塩、ベンジルトリエチルアンモニウム塩、ベンジルトリブチルアンモニウム塩、メチルトリオクチルアンモニウム塩、またはテトラブチルアンモニウム塩などの第四級アンモニウム塩；およびアルギニン塩、リジン塩、またはヒスチジン塩などの塩基性アミノ酸塩を含む。例示的な酸付加塩は、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩（例えば、硫酸塩または硫酸水素塩など）、硝酸塩、リン酸塩（例えば、リン酸塩、リン酸水素塩、またはリン酸二水素塩など）、炭酸塩、炭酸水素塩、過塩素酸塩、ホウ酸塩、またはチオシアン酸塩などの鉱酸塩；酢酸塩、プロピオン酸塩、酪酸塩、ペンタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヘプタン酸塩、オクタン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、デカン酸塩、ウンデカン酸塩、オレイン酸塩、ステアリン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、シュウ酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、アジピン酸塩、グルコン酸塩、ニコチン酸塩、安息香酸塩、サリチル酸塩、アスコルビン酸塩、パモ酸塩（エンボン酸塩）、ショウノウ酸塩、グルコヘプタン酸塩、またはピバル酸塩などの有機酸塩；メタンスルホン酸塩（メシル酸塩）、エタンスルホン酸塩（エシル酸塩）、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩（イセチオン酸塩）、ベンゼンスルホン酸塩（ベシル酸塩）、ｐ−トルエンスルホン酸塩（トシル酸塩）、２−ナフタレンスルホン酸塩（ナプシル酸塩）、３−フェニルスルホン酸塩、またはカンファースルホン酸塩などのスルホン酸塩；グリセロリン酸塩；およびアスパラギン酸塩またはグルタミン酸塩などの酸性アミノ酸塩を含む。本明細書に開示される化合物の好ましい薬学的に許容される塩は、塩酸塩、臭化水素酸塩、メシル酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、およびリン酸塩を含む。本明細書に開示される化合物の特に好ましい薬学的に許容される塩は、塩酸塩である。したがって、本明細書に開示される化合物は、塩酸塩、臭化水素酸塩、メシル酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、またはリン酸塩の形態であることが好ましく、式（Ｉ）の化合物は、塩酸塩の形態であることが特に好ましい。
【００９７】
さらに、本発明の範囲は、例えば、水、例えば、水和物との、または例えば、メタノール、エタノール、もしくはアセトニトリルなどの有機溶媒との、すなわち、それぞれ、メタノラート、エタノラート、もしくはアセトニトリラートとしての、溶媒和物を含む、任意の溶媒和形態、または任意の多形の形態の、本明細書に開示される化合物を包含する。本明細書に開示される化合物のそのような溶媒和物は、本明細書に開示される化合物の薬学的に許容される塩の溶媒和物も含むことを理解されたい。
【００９８】
一実施形態では、本発明は、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体またはその抗原結合部分を提供する。実施形態のいくつかでは、本発明の抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、任意の組み合わせで以下の特徴：
ａ）ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２結合が遮断されるようにヒトＰＤ−Ｌ２に特異的に結合する、
ｂ）マウスＰＤ−Ｌ２およびヒトＰＤ−Ｌ１に結合しない、
ｃ）カニクイザルＰＤ−Ｌ２に結合する、
ｄ）約０．０５ｎＭ〜約２ｎＭのＥＣ５０でヒトＰＤ−Ｌ２に結合する、
ｅ）約０．０１ｎＭ〜約１ｎＭのＩＣ５０でＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２結合を遮断する、
ｆ）約０．２ｎＭ〜約１．５ｎＭのＥＣ５０でＴＣＲ媒介性ＩＬ−２発現を活性化する、のうちの少なくとも１つ以上を有する。
【００９９】
別の実施形態では、本発明は、本発明による抗体またはその抗原結合部分に関し、抗体または抗原結合部分は、任意の組み合わせでａ）〜ｄ）に列挙される機能的特徴：
ａ）参照抗体ＭＩＨ１８および２４Ｆ．１０Ｃ１２と比較して、より高いＰＤ−Ｌ２への結合親和性、
ｂ）参照抗体ＭＩＨ１８および２４Ｆ．１０Ｃ１２と比較して、より効率的なＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２結合の遮断、
ｃ）参照抗体ＭＩＨ１８および２４Ｆ．１０Ｃ１２と比較して、より効率的なＴＣＲ媒介性ＩＬ−２発現の活性化、ならびに
ｄ）参照抗体ＭＩＨ１８および２４Ｆ．１０Ｃ１２と比較して、ＴＣＲ媒介性ＩＬ−２発現時のより高いＩＬ−２レベルの誘導、のうちの少なくとも１つ、好ましくは２、３、または４つを満たす。
【０１００】
代替的に、本発明は、本発明による抗体またはその抗原結合部分に関し、この抗体または抗原結合部分は、ａ）およびｂ）に列挙される特徴を有する。
【０１０１】
代替的に、本発明は、本発明による抗体またはその抗原結合部分に関し、この抗体または抗原結合部分は、ａ）およびｃ）に列挙される特徴を有する。
【０１０２】
代替的に、本発明は、本発明による抗体またはその抗原結合部分に関し、この抗体または抗原結合部分は、ａ）およびｄ）に列挙される特徴を有する。
【０１０３】
代替的に、本発明は、本発明による抗体またはその抗原結合部分に関し、この抗体または抗原結合部分は、ｂ）およびｃ）に列挙される特徴を有する。
【０１０４】
代替的に、本発明は、本発明による抗体またはその抗原結合部分に関し、この抗体または抗原結合部分は、ｂ）およびｄ）に列挙される特徴を有する。
【０１０５】
代替的に、本発明は、本発明による抗体またはその抗原結合部分に関し、この抗体または抗原結合部分は、ｃ）およびｄ）に列挙される特徴を有する。
【０１０６】
代替的に、本発明は、本発明による抗体またはその抗原結合部分に関し、この抗体または抗原結合部分は、ａ）、ｂ）、およびｃ）に列挙される特徴を有する。
【０１０７】
代替的に、本発明は、本発明による抗体またはその抗原結合部分に関し、この抗体または抗原結合部分は、ａ）、ｂ）、およびｄ）に列挙される特徴を有する。
【０１０８】
代替的に、本発明は、本発明による抗体またはその抗原結合部分に関し、この抗体または抗原結合部分は、ａ）、ｃ）、およびｄ）に列挙される特徴を有する。
【０１０９】
代替的に、本発明は、本発明による抗体またはその抗原結合部分に関し、この抗体または抗原結合部分は、ｂ）、ｃ）、およびｄ）に列挙される特徴を有する。
【０１１０】
代替的に、本発明は、本発明による抗体またはその抗原結合部分に関し、この抗体または抗原結合部分は、ａ）、ｂ）、ｃ）、およびｄ）に列挙される特徴を有する。
【０１１１】
例は、本発明の全ての抗体が、少なくとも１つの機能的特徴において、参照抗体ＭＩＨ１８および２４Ｆ．１０Ｃ１２に対して改善されることを示す。よって、好ましい実施形態では、本発明の抗体、もしくはその抗原結合部分は、それぞれ、以下の項目のいずれかで定義される、重鎖可変領域および／もしくは軽鎖可変領域に含まれるＣＤＲ配列のうちの６つを含むか、
ａ）配列番号２の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１０の配列を有する軽鎖可変領域、
ｂ）配列番号１８の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２６の配列を有する軽鎖可変領域、
ｃ）配列番号３４の配列を有する重鎖可変領域および配列番号４２の配列を有する軽鎖可変領域、
ｄ）配列番号５０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号５８の配列を有する軽鎖可変領域、
ｅ）配列番号５０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号６６の配列を有する軽鎖可変領域、
ｆ）配列番号９６の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１０４の配列を有する軽鎖可変領域、
ｇ）配列番号１１２の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１２０の配列を有する軽鎖可変領域、
ｈ）配列番号１２８の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１３２の配列を有する軽鎖可変領域、
ｉ）配列番号１４０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１４６の配列を有する軽鎖可変領域、
ｊ）配列番号１５２の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１６０の配列を有する軽鎖可変領域、
ｋ）配列番号１６６の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１７４の配列を有する軽鎖可変領域、
ｌ）配列番号９６の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２１２の配列を有する軽鎖可変領域、
ｍ）配列番号１４０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２１８の配列を有する軽鎖可変領域、
ｎ）配列番号２２０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１６０の配列を有する軽鎖可変領域、
ｏ）配列番号２２０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２６の配列を有する軽鎖可変領域、
ｐ）配列番号２２０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２２６の配列を有する軽鎖可変領域、
ｑ）配列番号２２０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２３０の配列を有する軽鎖可変領域、または
本発明の抗体もしくはその抗原結合部分は、
ａ）配列番号４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１６のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｂ）配列番号２０のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号２４のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２８のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３２のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｃ）配列番号３６のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３８のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号４０のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号４４のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４６のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号４８のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｄ）配列番号５２のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号５４のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号５６のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号６０のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号６２のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号６４のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｅ）配列番号５２のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号５４のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号５６のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号６０のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号６２のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号６８のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｆ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１００のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１０２のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１０６のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１０８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１１０のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｇ）配列番号１１４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１１６のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１１８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１２２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１２４のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１２６のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｈ）配列番号１１４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３０のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１１８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１３４のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１３６のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１３８のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｉ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１４４のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１０６のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１５０のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｊ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１５６のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１６４のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｋ）配列番号１６８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７０のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１７２のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１７６のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１８０のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｌ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１００のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１０２のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２１４のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１０８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２１６のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｍ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１４４のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２１４のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１５０のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｎ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１６４のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｏ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２８のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３２のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｐ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２２８のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｑ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３２のＣＤＲ−Ｌ３を含む、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含むか、または
本発明の抗体、もしくはその抗原結合部分は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、
ａ）重鎖可変領域は、配列番号２の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１０の配列を有するか、
ｂ）重鎖可変領域は、配列番号１８の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号２６の配列を有するか、
ｃ）重鎖可変領域は、配列番号３４の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号４２の配列を有するか、
ｄ）重鎖可変領域は、配列番号５０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号５８の配列を有するか、
ｅ）重鎖可変領域は、配列番号５０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号６６の配列を有するか、
ｆ）重鎖可変領域は、配列番号９６の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１０４の配列を有するか、
ｇ）重鎖可変領域は、配列番号１１２の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１２０の配列を有するか、
ｈ）重鎖可変領域は、配列番号１２８の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１３２の配列を有するか、
ｉ）重鎖可変領域は、配列番号１４０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１４６の配列を有するか、
ｊ）重鎖可変領域は、配列番号１５２の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１６０の配列を有するか、
ｋ）重鎖可変領域は、配列番号１６６の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１７４の配列を有するか、
ｌ）重鎖可変領域は、配列番号９６の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号２１２の配列を有するか、
ｍ）重鎖可変領域は、配列番号１４０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号２１８の配列を有するか、
ｎ）重鎖可変領域は、配列番号２２０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１６０の配列を有するか、
ｏ）重鎖可変領域は、配列番号２２０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号２６の配列を有するか、
ｐ）重鎖可変領域は、配列番号２２０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号２２６の配列を有するか、もしくは
ｑ）重鎖可変領域は、配列番号２２０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号２３０の配列を有する。
【０１１２】
より好ましくは、本発明の抗体、もしくはその抗原結合部分は、それぞれ、以下の項目のいずれかで定義される、重鎖可変領域および／もしくは軽鎖可変領域に含まれるＣＤＲ配列のうちの６つを含むか、
ａ）配列番号２の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１０の配列を有する軽鎖可変領域、
ｂ）配列番号１８の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２６の配列を有する軽鎖可変領域、
ｃ）配列番号３４の配列を有する重鎖可変領域および配列番号４２の配列を有する軽鎖可変領域、
ｄ）配列番号５０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号５８の配列を有する軽鎖可変領域、
ｅ）配列番号５０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号６６の配列を有する軽鎖可変領域、
ｆ）配列番号９６の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１０４の配列を有する軽鎖可変領域、
ｇ）配列番号１１２の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１２０の配列を有する軽鎖可変領域、
ｈ）配列番号１２８の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１３２の配列を有する軽鎖可変領域、
ｉ）配列番号１４０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１４６の配列を有する軽鎖可変領域、
ｊ）配列番号１５２の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１６０の配列を有する軽鎖可変領域、
ｋ）配列番号１６６の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１７４の配列を有する軽鎖可変領域、
ｌ）配列番号９６の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２１２の配列を有する軽鎖可変領域、
ｍ）配列番号１４０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２１８の配列を有する軽鎖可変領域、
ｎ）配列番号２２０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１６０の配列を有する軽鎖可変領域、
ｏ）配列番号２２０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２６の配列を有する軽鎖可変領域、または
本発明の抗体、もしくはその抗原結合部分は、
ａ）配列番号４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１６のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｂ）配列番号２０のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号２４のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２８のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３２のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｃ）配列番号３６のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３８のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号４０のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号４４のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４６のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号４８のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｄ）配列番号５２のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号５４のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号５６のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号６０のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号６２のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号６４のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｅ）配列番号５２のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号５４のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号５６のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号６０のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号６２のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号６８のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｆ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１００のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１０２のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１０６のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１０８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１１０のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｇ）配列番号１１４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１１６のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１１８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１２２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１２４のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１２６のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｈ）配列番号１１４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３０のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１１８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１３４のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１３６のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１３８のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｉ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１４４のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１０６のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１５０のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｊ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１５６のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１６４のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｋ）配列番号１６８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７０のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１７２のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１７６のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１８０のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｌ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１００のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１０２のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２１４のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１０８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２１６のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｍ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１４４のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２１４のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１５０のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｎ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１６４のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｏ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２８のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３２のＣＤＲ−Ｌ３を含む、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含むか、または
本発明の抗体、もしくはその抗原結合部分は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、
ａ）重鎖可変領域は、配列番号２の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１０の配列を有するか、
ｂ）重鎖可変領域は、配列番号１８の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号２６の配列を有するか、
ｃ）重鎖可変領域は、配列番号３４の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号４２の配列を有するか、
ｄ）重鎖可変領域は、配列番号５０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号５８の配列を有するか、
ｅ）重鎖可変領域は、配列番号５０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号６６の配列を有するか、
ｆ）重鎖可変領域は、配列番号９６の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１０４の配列を有するか、
ｇ）重鎖可変領域は、配列番号１１２の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１２０の配列を有するか、
ｈ）重鎖可変領域は、配列番号１２８の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１３２の配列を有するか、
ｉ）重鎖可変領域は、配列番号１４０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１４６の配列を有するか、
ｊ）重鎖可変領域は、配列番号１５２の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１６０の配列を有するか、
ｋ）重鎖可変領域は、配列番号１６６の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１７４の配列を有するか、
ｌ）重鎖可変領域は、配列番号９６の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号２１２の配列を有するか、
ｍ）重鎖可変領域は、配列番号１４０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号２１８の配列を有するか、
ｎ）重鎖可変領域は、配列番号２２０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１６０の配列を有するか、
ｏ）重鎖可変領域は、配列番号２２０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号２６の配列を有する。
【０１１３】
抗体１Ａ１−Ｃ２、２Ｃ４−Ｅ４、１０Ｄ１−Ｇ１、１１Ｃ１１−Ｈ５、１９Ｃ３−Ｂ３、１０Ａ９−Ｄ２、１９Ｂ３−Ｂ３、１２Ａ１−Ｄ４、１０Ｄ１−Ｇ１  Ｎ３１Ｑ．Ｎ９２Ｑ．ＬＣ、１０Ａ９−Ｄ２．Ｎ３１Ｑ．ＬＣ、および１９Ｂ３−Ｂ３．Ｍ２３Ｋ．Ｍ６３Ｌ．ＨＣは、少なくとも２つの機能的特徴においてＭＩＨ１８および２４Ｆ．１０Ｃ１２に対して改善される。よって、さらにより好ましい実施形態では、本発明の抗体、もしくはその抗原結合部分は、それぞれ、以下の項目のいずれかで定義される、重鎖可変領域および／もしくは軽鎖可変領域に含まれるＣＤＲ配列のうちの６つを含むか、
ａ）配列番号２の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１０の配列を有する軽鎖可変領域、
ｂ）配列番号１８の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２６の配列を有する軽鎖可変領域、
ｃ）配列番号５０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号５８の配列を有する軽鎖可変領域、
ｄ）配列番号５０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号６６の配列を有する軽鎖可変領域、
ｅ）配列番号９６の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１０４の配列を有する軽鎖可変領域、
ｆ）配列番号１４０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１４６の配列を有する軽鎖可変領域、
ｇ）配列番号１５２の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１６０の配列を有する軽鎖可変領域、
ｈ）配列番号１６６の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１７４の配列を有する軽鎖可変領域、
ｉ）配列番号９６の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２１２の配列を有する軽鎖可変領域、
ｊ）配列番号１４０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２１８の配列を有する軽鎖可変領域、
ｋ）配列番号２２０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１６０の配列を有する軽鎖可変領域、または
本発明の抗体もしくはその抗原結合部分は、
ａ）配列番号４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１６のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｂ）配列番号２０のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号２４のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２８のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３２のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｃ）配列番号５２のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号５４のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号５６のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号６０のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号６２のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号６４のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｄ）配列番号５２のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号５４のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号５６のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号６０のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号６２のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号６８のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｅ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１００のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１０２のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１０６のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１０８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１１０のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｆ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１４４のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１０６のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１５０のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｇ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１５６のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１６４のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｈ）配列番号１６８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７０のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１７２のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１７６のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１８０のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｉ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１００のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１０２のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２１４のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１０８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２１６のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｊ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１４４のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２１４のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１５０のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｋ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１６４のＣＤＲ−Ｌ３を含む、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含むか、または
本発明の抗体、もしくはその抗原結合部分は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、
ａ）重鎖可変領域は、配列番号２の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１０の配列を有するか、
ｂ）重鎖可変領域は、配列番号１８の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号２６の配列を有するか、
ｃ）重鎖可変領域は、配列番号５０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号５８の配列を有するか、
ｄ）重鎖可変領域は、配列番号５０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号６６の配列を有するか、
ｅ）重鎖可変領域は、配列番号９６の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１０４の配列を有するか、
ｆ）重鎖可変領域は、配列番号１４０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１４６の配列を有するか、
ｇ）重鎖可変領域は、配列番号１５２の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１６０の配列を有するか、
ｈ）重鎖可変領域は、配列番号１６６の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１７４の配列を有するか、
ｉ）重鎖可変領域は、配列番号９６の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号２１２の配列を有するか、
ｊ）重鎖可変領域は、配列番号１４０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号２１８の配列を有するか、もしくは
ｋ）重鎖可変領域は、配列番号２２０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１６０の配列を有する。
【０１１４】
抗体１０Ｄ１−Ｇ１、１１Ｃ１１−Ｈ５、１９Ｃ３−Ｂ３、１０Ａ９−Ｄ２、１９Ｂ３−Ｂ３、および１２Ａ１−Ｄ４は、少なくとも３つの機能的特徴においてＭＩＨ１８および２４Ｆ．１０Ｃ１２に対して改善される。よって、さらにより好ましい実施形態では、本発明の抗体、もしくはその抗原結合部分は、それぞれ、以下の項目のいずれかで定義される、重鎖可変領域および／もしくは軽鎖可変領域に含まれるＣＤＲ配列のうちの６つを含むか、
ａ）配列番号５０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号５８の配列を有する軽鎖可変領域、
ｂ）配列番号５０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号６６の配列を有する軽鎖可変領域、
ｃ）配列番号９６の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１０４の配列を有する軽鎖可変領域、
ｄ）配列番号１４０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１４６の配列を有する軽鎖可変領域、
ｅ）配列番号１５２の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１６０の配列を有する軽鎖可変領域、
ｆ）配列番号１６６の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１７４の配列を有する軽鎖可変領域、または
本発明の抗体、もしくはその抗原結合部分は、
ａ）配列番号５２のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号５４のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号５６のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号６０のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号６２のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号６４のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｂ）配列番号５２のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号５４のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号５６のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号６０のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号６２のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号６８のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｃ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１００のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１０２のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１０６のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１０８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１１０のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｄ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１４４のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１０６のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１５０のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｅ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１５６のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１６４のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｆ）配列番号１６８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７０のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１７２のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１７６のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１８０のＣＤＲ−Ｌ３を含む、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含むか、または
本発明の抗体、もしくはその抗原結合部分は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、
ａ）重鎖可変領域は、配列番号５０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号５８の配列を有するか、
ｂ）重鎖可変領域は、配列番号５０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号６６の配列を有するか、
ｃ）重鎖可変領域は、配列番号９６の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１０４の配列を有するか、
ｄ）重鎖可変領域は、配列番号１４０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１４６の配列を有するか、
ｅ）重鎖可変領域は、配列番号１５２の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１６０の配列を有するか、もしくは
ｆ）重鎖可変領域は、配列番号１６６の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１７４の配列を有する。
【０１１５】
抗体１０Ｄ１−Ｇ１、１９Ｃ３−Ｂ３、１０Ａ９−Ｄ２、１９Ｂ３−Ｂ３、および１２Ａ１−Ｄ４は、４つの機能的特徴においてＭＩＨ１８および２４Ｆ．１０Ｃ１２に対して改善される。よって、最も好ましい実施形態では、本発明の抗体、もしくはその抗原結合部分は、それぞれ、以下の項目のいずれかで定義される、重鎖可変領域および／もしくは軽鎖可変領域に含まれるＣＤＲ配列のうちの６つを含むか、
ａ）配列番号５０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号６６の配列を有する軽鎖可変領域、
ｂ）配列番号９６の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１０４の配列を有する軽鎖可変領域、
ｃ）配列番号１４０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１４６の配列を有する軽鎖可変領域、
ｄ）配列番号１５２の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１６０の配列を有する軽鎖可変領域、
ｅ）配列番号１６６の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１７４の配列を有する軽鎖可変領域、または
本発明の抗体、もしくはその抗原結合部分は、
ａ）配列番号５２のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号５４のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号５６のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号６０のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号６２のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号６８のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｂ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１００のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１０２のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１０６のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１０８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１１０のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｃ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１４４のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１０６のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１５０のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｄ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１５６のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１６４のＣＤＲ−Ｌ３、もしくは
ｅ）配列番号１６８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７０のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１７２のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１７６のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１８０のＣＤＲ−Ｌ３を含む、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含むか、または
本発明の抗体、もしくはその抗原結合部分は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、
ａ）重鎖可変領域は、配列番号５０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号６６の配列を有するか、
ｂ）重鎖可変領域は、配列番号９６の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１０４の配列を有するか、
ｃ）重鎖可変領域は、配列番号１４０の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１４６の配列を有するか、
ｄ）重鎖可変領域は、配列番号１５２の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１６０の配列を有するか、もしくは
ｅ）重鎖可変領域は、配列番号１６６の配列を有し、軽鎖可変領域は、配列番号１７４の配列を有する。
【０１１６】
第１の抗体がＰＤ−Ｌ２に結合するより強い傾向を有する場合、抗体は、別の抗体と比較して「より高いＰＤ−Ｌ２への結合親和性」を有すると言われる。当業者は、結合親和性を決定および表現する様々な方法および手段を知っている。本発明内で、結合親和性は、好ましくは、結合ＥＣ５０として表され、これは、試料中の抗原、この場合ではＰＤ−Ｌ２の５０％が抗体によって結合される抗体濃度である。第１の抗体が第２の抗体よりも低い結合ＥＣ５０を有する場合、第１の抗体は、第２の抗体よりも高い結合親和性を有すると言われる。
【０１１７】
より低い濃度の第１の抗体が、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合を阻害するのに十分である場合、抗体は、別の抗体と比較して「ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合をより効率的に遮断する」と言われる。当業者は、遮断効率を決定および表現する様々な方法および手段を知っている。本発明内で、遮断効率は、好ましくは遮断ＩＣ５０として表され、これは、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合が５０％阻害される抗体濃度である。第１の抗体が第２の抗体よりも低い遮断ＩＣ５０を有する場合、第１の抗体は、第２の抗体よりも高い遮断効率を有すると言われる。
【０１１８】
第１の抗体がＴ細胞によってＴＣＲ媒介性ＩＬ−２発現を誘導するより高い可能性を有する場合、抗体は、別の抗体と比較して「ＴＣＲ媒介性ＩＬ−２発現のより効率的な活性化」を引き起こすと言われる。当業者は、活性化効率を決定および表現する様々な方法および手段を知っている。本発明内で、活性化効率は、好ましくは、活性化ＥＣ５０として表され、これは、Ｔ細胞による最大ＩＬ−２発現の５０％が観察される抗体濃度である。第１の抗体が第２の抗体よりも低い活性化ＥＣ５０を有する場合、第１の抗体は、第２の抗体よりも高い活性化効率を有すると言われる。
【０１１９】
第１の抗体をＴ細胞と接触させることが、より高い総ＩＬ−２レベル、または上位ＩＬ−２レベルをもたらす場合、抗体は、別の抗体と比較して「ＴＣＲ媒介性ＩＬ−２発現時のより高いＩＬ−２レベルを誘導する」と言われる。本明細書で使用される「上位ＩＬ−２レベル」は、典型的には抗体およびＴ細胞を含む試料において測定される最も高いＩＬ−２濃度を指す。当業者は、上位ＩＬ−２レベルを決定する様々な方法を知っている。本発明内で、上位ＩＬ−２レベルは、好ましくは、ｐｇ／ｍＬで表される。第１の抗体が第２の抗体よりも高いＩＬ−２レベルをもたらす場合、第１の抗体は、第２の抗体よりも高いＴＣＲ媒介ＩＬ−２発現時のＩＬ−２レベルを誘導すると言われる。
【０１２０】
特定の実施形態では、抗体の特徴または機能的特徴は、本明細書、例えば、以下の実施例に記載されるように決定される。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、キメラ抗体である。特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ヒト化または完全ヒト抗体である。
【０１２２】
本明細書で提供される特定の実施形態は、部分的には、ヒトＰＤ−Ｌ２に特異的に結合する、抗体１Ａ１−Ｃ２の開発に基づく。
【０１２３】
したがって、配列番号２の重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１０の軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる６つのＣＤＲ配列を含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。一実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号４のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号８のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号１２のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１４のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号１６のＣＤＲ−Ｌ３を含む３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗体を提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０１２４】
別の態様では、（ａ）配列番号２のＶＨおよび（ｂ）配列番号１０のＶＬを含む重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。特定の実施形態では、本発明は、（ａ）および（ｂ）に示される重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域のバリアントを有する抗体を提供し、バリアント配列は、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の全体的な相同性を有し、ただし、特に本明細書で定義される保存的置換において、ＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている。特定の実施形態では、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号２において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号２において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号２のＶＨ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１０において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号１０において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号１０のＶＬ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０１２５】
別の態様では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供され、抗体は、上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨ、および上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それらの配列の翻訳後修飾を含む、それぞれ、配列番号２および配列番号１０のＶＨおよびＶＬ配列を含む。別の実施形態では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、それぞれ、配列番号２および配列番号１０のＶＨおよびＶＬ配列を含む抗体のヒト化形態を含む。
【０１２６】
本明細書で提供される他の実施形態は、部分的には、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体２Ｃ４−Ｅ４の開発に基づく。
【０１２７】
したがって、配列番号１８の重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２６の軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる６つのＣＤＲ配列を含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。一実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号２０のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２４のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号２８のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号３２のＣＤＲ−Ｌ３を含む３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗体を提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０１２８】
別の態様では、（ａ）配列番号１８のＶＨおよび（ｂ）配列番号２６のＶＬを含むＶＨおよびＶＬを含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。特定の実施形態では、本発明は、（ａ）および（ｂ）に示される重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域のバリアントを有する抗体を提供し、バリアント配列は、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の全体的な相同性を有し、ただし、特に本明細書で定義される保存的置換において、ＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている。特定の実施形態では、配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１８において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号１８において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号１８のＶＨ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、配列番号２６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号２６において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号２６において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号２６のＶＬ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０１２９】
別の態様では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供され、抗体は、上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨ、および上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それらの配列の翻訳後修飾を含む、それぞれ、配列番号１８および配列番号２６のＶＨおよびＶＬ配列を含む。別の実施形態では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、それぞれ、配列番号１８および配列番号２６のＶＨおよびＶＬ配列を含む抗体のヒト化形態を含む。
【０１３０】
本明細書で提供される他の実施形態は、部分的には、ヒトＰＤ−Ｌ２に特異的に結合する、抗体８Ｂ５−Ｂ１の開発に基づく。
【０１３１】
したがって、配列番号３４の重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号４２の軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる６つのＣＤＲ配列を含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。一実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号３６のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３８のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号４０のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号４４のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４６のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号４８のＣＤＲ−Ｌ３を含む３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗体を提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０１３２】
別の態様では、（ａ）配列番号３４のＶＨおよび（ｂ）配列番号４２のＶＬを含むＶＨおよびＶＬを含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。特定の実施形態では、本発明は、（ａ）および（ｂ）に示される重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域のバリアントを有する抗体を提供し、バリアント配列は、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の全体的な相同性を有し、ただし、特に本明細書で定義される保存的置換において、ＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている。特定の実施形態では、配列番号３４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号３４において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号３４において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号３４のＶＨ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、配列番号４２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号４２において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号４２において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号４２のＶＬ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０１３３】
別の態様では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供され、抗体は、上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨ、および上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それらの配列の翻訳後修飾を含む、それぞれ、配列番号３４および配列番号４２のＶＨおよびＶＬ配列を含む。別の実施形態では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、それぞれ、配列番号３４および配列番号４２のＶＨおよびＶＬ配列を含む抗体のヒト化形態を含む。
【０１３４】
本明細書で提供される特定の実施形態は、部分的には、ヒトＰＤ−Ｌ２に特異的に結合する、抗体１１Ｃ１１−Ｈ５の開発に基づく。
【０１３５】
したがって、配列番号５０の重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号５８の軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる６つのＣＤＲ配列を含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。一実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号５２のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５４のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号５６のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号６０のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６２のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号６４のＣＤＲ−Ｌ３を含む３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗体を提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０１３６】
別の態様では、（ａ）配列番号５０のＶＨおよび（ｂ）配列番号５８のＶＬを含むＶＨおよびＶＬを含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。特定の実施形態では、本発明は、（ａ）および（ｂ）に示される重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域のバリアントを有する抗体を提供し、バリアント配列は、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の全体的な相同性を有し、ただし、特に本明細書で定義される保存的置換において、ＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている。特定の実施形態では、配列番号５０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号５０において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号５０において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号５０のＶＨ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、配列番号５８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号５８において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号５８において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号５８のＶＬ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０１３７】
別の態様では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供され、抗体は、上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨ、および上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それらの配列の翻訳後修飾を含む、それぞれ、配列番号５０および配列番号５８のＶＨおよびＶＬ配列を含む。別の実施形態では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、それぞれ、配列番号５０および配列番号５８のＶＨおよびＶＬ配列を含む抗体のヒト化形態を含む。
【０１３８】
本明細書で提供される他の実施形態は、部分的には、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体１９Ｃ３−Ｂ３の開発に基づく。
【０１３９】
したがって、配列番号５０の重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号６６の軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる６つのＣＤＲ配列を含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。一実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号５２のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５４のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号５６のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号６０のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６２のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号６８のＣＤＲ−Ｌ３を含む３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗体を提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０１４０】
別の態様では、（ａ）配列番号５０のＶＨおよび（ｂ）配列番号６６のＶＬを含むＶＨおよびＶＬを含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。特定の実施形態では、本発明は、（ａ）および（ｂ）に示される重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域のバリアントを有する抗体を提供し、バリアント配列は、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の全体的な相同性を有し、ただし、特に本明細書で定義される保存的置換において、ＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている。特定の実施形態では、配列番号５０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号５０において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号５０において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号５０のＶＨ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、配列番号６６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号６６において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号６６において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号６６のＶＬ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０１４１】
別の態様では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供され、抗体は、上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨ、および上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それらの配列の翻訳後修飾を含む、それぞれ、配列番号５０および配列番号６６のＶＨおよびＶＬ配列を含む。別の実施形態では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、それぞれ、配列番号５０および配列番号６６のＶＨおよびＶＬ配列を含む抗体のヒト化形態を含む。
【０１４２】
本明細書で提供される他の実施形態は、部分的には、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体１０Ｄ１−Ｇ１の開発に基づく。
【０１４３】
したがって、配列番号９６の重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１０４の軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる６つのＣＤＲ配列を含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。一実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１００のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０２のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号１０６のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１０８のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号１１０のＣＤＲ−Ｌ３を含む３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗体を提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０１４４】
別の態様では、（ａ）配列番号９６のＶＨおよび（ｂ）配列番号１０４のＶＬを含むＶＨおよびＶＬを含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。特定の実施形態では、本発明は、（ａ）および（ｂ）に示される重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域のバリアントを有する抗体を提供し、バリアント配列は、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の全体的な相同性を有し、ただし、特に本明細書で定義される保存的置換において、ＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている。特定の実施形態では、配列番号９６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号９６において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号９６において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号９６のＶＨ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、配列番号１０４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１０４において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号１０４において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号１０４のＶＬ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０１４５】
別の態様では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供され、抗体は、上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨ、および上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それらの配列の翻訳後修飾を含む、それぞれ、配列番号９６および配列番号１０４のＶＨおよびＶＬ配列を含む。別の実施形態では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、それぞれ、配列番号９６および配列番号１０４のＶＨおよびＶＬ配列を含む抗体のヒト化形態を含む。
【０１４６】
本明細書で提供される他の実施形態は、部分的には、ヒトＰＤ−Ｌ２に特異的に結合する、抗体７Ｈ５−Ｃ５の開発に基づく。
【０１４７】
したがって、配列番号１１２の重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１２０の軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる６つのＣＤＲ配列を含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。一実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号１１４のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１１６のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１１８のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号１２２のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１２４のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号１２６のＣＤＲ−Ｌ３を含む３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗体を提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０１４８】
別の態様では、（ａ）配列番号１１２のＶＨおよび（ｂ）配列番号１２０のＶＬを含むＶＨおよびＶＬを含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。特定の実施形態では、本発明は、（ａ）および（ｂ）に示される重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域のバリアントを有する抗体を提供し、バリアント配列は、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の全体的な相同性を有し、ただし、特に本明細書で定義される保存的置換において、ＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている。特定の実施形態では、配列番号１１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１１２において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号１１２において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号１１２のＶＨ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、配列番号１２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１２０において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号１２０において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号１２０のＶＬ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０１４９】
別の態様では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供され、抗体は、上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨ、および上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それらの配列の翻訳後修飾を含む、それぞれ、配列番号１１２および配列番号１２０のＶＨおよびＶＬ配列を含む。別の実施形態では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、それぞれ、配列番号１１２および配列番号１２０のＶＨおよびＶＬ配列を含む抗体のヒト化形態を含む。
【０１５０】
本明細書で提供される特定の実施形態は、部分的には、ヒトＰＤ−Ｌ２に特異的に結合する、抗体９Ａ３−Ｃ７の開発に基づく。
【０１５１】
したがって、配列番号１２８の重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１３２の軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる６つのＣＤＲ配列を含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。一実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号１１４のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１３０のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１１８のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号１３４のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１３６のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号１３８のＣＤＲ−Ｌ３を含む３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗体を提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０１５２】
別の態様では、（ａ）配列番号１２８のＶＨおよび（ｂ）配列番号１３２のＶＬを含むＶＨおよびＶＬを含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。特定の実施形態では、本発明は、（ａ）および（ｂ）に示される重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域のバリアントを有する抗体を提供し、バリアント配列は、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の全体的な相同性を有し、ただし、特に本明細書で定義される保存的置換において、ＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている。特定の実施形態では、配列番号１２８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１２８において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号１２８において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号１２８のＶＨ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、配列番号１３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１３２において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号１３２において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号１３２のＶＬ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０１５３】
別の態様では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供され、抗体は、上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨ、および上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それらの配列の翻訳後修飾を含む、それぞれ、配列番号１２８および配列番号１３２のＶＨおよびＶＬ配列を含む。別の実施形態では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、それぞれ、配列番号１２８および配列番号１３２のＶＨおよびＶＬ配列を含む抗体のヒト化形態を含む。
【０１５４】
本明細書で提供される他の実施形態は、部分的には、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体１０Ａ９−Ｄ２の開発に基づく。
【０１５５】
したがって、配列番号１４０の重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１４６の軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる６つのＣＤＲ配列を含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。一実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１４２のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１４４のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号１０６のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１４８のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号１５０のＣＤＲ−Ｌ３を含む３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗体を提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０１５６】
別の態様では、（ａ）配列番号１４０のＶＨおよび（ｂ）配列番号１４６のＶＬを含むＶＨおよびＶＬを含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。特定の実施形態では、本発明は、（ａ）および（ｂ）に示される重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域のバリアントを有する抗体を提供し、バリアント配列は、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の全体的な相同性を有し、ただし、特に本明細書で定義される保存的置換において、ＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている。特定の実施形態では、配列番号１４０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１４０において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号１４０において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号１４０のＶＨ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、配列番号１４６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１４６において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号１４６において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号１４６のＶＬ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号１５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０１５７】
別の態様では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供され、抗体は、上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨ、および上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それらの配列の翻訳後修飾を含む、それぞれ、配列番号１４０および配列番号１４６のＶＨおよびＶＬ配列を含む。別の実施形態では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、それぞれ、配列番号１４０および配列番号１４６のＶＨおよびＶＬ配列を含む抗体のヒト化形態を含む。
【０１５８】
本明細書で提供される特定の実施形態は、部分的には、ヒトＰＤ−Ｌ２に特異的に結合する、抗体１９Ｂ３−Ｂ３の開発に基づく。
【０１５９】
したがって、配列番号１５２の重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１６０の軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる６つのＣＤＲ配列を含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。一実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１５６のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号１６２のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号１６４のＣＤＲ−Ｌ３を含む３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗体を提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０１６０】
別の態様では、（ａ）配列番号１５２のＶＨおよび（ｂ）配列番号１６０のＶＬを含むＶＨおよびＶＬを含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。特定の実施形態では、本発明は、（ａ）および（ｂ）に示される重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域のバリアントを有する抗体を提供し、バリアント配列は、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の全体的な相同性を有し、ただし、特に本明細書で定義される保存的置換において、ＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている。特定の実施形態では、配列番号１５２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１５２において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号１５２において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号１５２のＶＨ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号１５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号１５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、配列番号１６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１６０において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号１６０において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号１６０のＶＬ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０１６１】
別の態様では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供され、抗体は、上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨ、および上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それらの配列の翻訳後修飾を含む、それぞれ、配列番号１５２および配列番号１６０のＶＨおよびＶＬ配列を含む。別の実施形態では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、それぞれ、配列番号１５２および配列番号１６０のＶＨおよびＶＬ配列を含む抗体のヒト化形態を含む。
【０１６２】
本明細書で提供される他の実施形態は、部分的には、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体１２Ａ１−Ｄ４の開発に基づく。
【０１６３】
したがって、配列番号１６６の重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１７４の軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる６つのＣＤＲ配列を含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。一実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号１６８のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１７０のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１７２のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号１７６のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１７８のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号１８０のＣＤＲ−Ｌ３を含む３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗体を提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０１６４】
別の態様では、（ａ）配列番号１６６のＶＨおよび（ｂ）配列番号１７４のＶＬを含むＶＨおよびＶＬを含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。特定の実施形態では、本発明は、（ａ）および（ｂ）に示される重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域のバリアントを有する抗体を提供し、バリアント配列は、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の全体的な相同性を有し、ただし、特に本明細書で定義される保存的置換において、ＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている。特定の実施形態では、配列番号１６６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１６６において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号１６６において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号１６６のＶＨ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号１６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、配列番号１７４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１７４において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号１７４において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号１７４のＶＬ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号１７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号１８０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０１６５】
別の態様では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供され、抗体は、上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨ、および上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それらの配列の翻訳後修飾を含む、それぞれ、配列番号１６６および配列番号１７４のＶＨおよびＶＬ配列を含む。別の実施形態では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、それぞれ、配列番号１６６および配列番号１７４のＶＨおよびＶＬ配列を含む抗体のヒト化形態を含む。
【０１６６】
本明細書で提供される他の実施形態は、部分的には、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体１０Ｄ１−Ｇ１  Ｎ３１Ｑ．Ｎ９２Ｑ．ＬＣの開発に基づく。
【０１６７】
したがって、配列番号９６の重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２１２の軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる６つのＣＤＲ配列を含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。一実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１００のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０２のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号２１４のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１０８のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号２１６のＣＤＲ−Ｌ３を含む３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗体を提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０１６８】
別の態様では、（ａ）配列番号９６のＶＨおよび（ｂ）配列番号２１２のＶＬを含むＶＨおよびＶＬを含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。特定の実施形態では、本発明は、（ａ）および（ｂ）に示される重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域のバリアントを有する抗体を提供し、バリアント配列は、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の全体的な相同性を有し、ただし、特に本明細書で定義される保存的置換において、ＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている。特定の実施形態では、配列番号９６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号９６において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号９６において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号９６のＶＨ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、配列番号２１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号２１２において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号２１２において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号２１２のＶＬ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号２１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０１６９】
別の態様では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供され、抗体は、上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨ、および上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それらの配列の翻訳後修飾を含む、それぞれ、配列番号９６および配列番号２１２のＶＨおよびＶＬ配列を含む。別の実施形態では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、それぞれ、配列番号９６および配列番号２１２のＶＨおよびＶＬ配列を含む抗体のヒト化形態を含む。
【０１７０】
本明細書で提供される他の実施形態は、部分的には、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体１０Ａ９−Ｄ２．Ｎ３１Ｑ．ＬＣの開発に基づく。
【０１７１】
したがって、配列番号１４０の重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２１８の軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる６つのＣＤＲ配列を含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。一実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１４２のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１４４のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号２１４のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１４８のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号１５０のＣＤＲ−Ｌ３を含む３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗体を提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０１７２】
別の態様では、（ａ）配列番号１４０のＶＨおよび（ｂ）配列番号２１８のＶＬを含むＶＨおよびＶＬを含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。特定の実施形態では、本発明は、（ａ）および（ｂ）に示される重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域のバリアントを有する抗体を提供し、バリアント配列は、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の全体的な相同性を有し、ただし、特に本明細書で定義される保存的置換において、ＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている。特定の実施形態では、配列番号１４０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１４０において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号１４０において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号１４０のＶＨ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、配列番号２１８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号２１８において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号２１８において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号２１８のＶＬ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号１５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０１７３】
別の態様では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供され、抗体は、上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨ、および上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それらの配列の翻訳後修飾を含む、それぞれ、配列番号１４０および配列番号２１８のＶＨおよびＶＬ配列を含む。別の実施形態では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、それぞれ、配列番号１４０および配列番号２１８のＶＨおよびＶＬ配列を含む抗体のヒト化形態を含む。
【０１７４】
本明細書で提供される特定の実施形態は、部分的には、ヒトＰＤ−Ｌ２に特異的に結合する、抗体１９Ｂ３−Ｂ３．Ｍ２３Ｋ．Ｍ６３Ｌ．ＨＣの開発に基づく。
【０１７５】
したがって、配列番号２２０の重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１６０の軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる６つのＣＤＲ配列を含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。一実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２２のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号１６２のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号１６４のＣＤＲ−Ｌ３を含む３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗体を提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０１７６】
別の態様では、（ａ）配列番号２２０のＶＨおよび（ｂ）配列番号１６０のＶＬを含むＶＨおよびＶＬを含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。特定の実施形態では、本発明は、（ａ）および（ｂ）に示される重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域のバリアントを有する抗体を提供し、バリアント配列は、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の全体的な相同性を有し、ただし、特に本明細書で定義される保存的置換において、ＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている。特定の実施形態では、配列番号２２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号２２０において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号２２０において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号２２０のＶＨ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号１５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号１５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、配列番号１６０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号１６０において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号１６０において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号１６０のＶＬ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０１７７】
別の態様では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供され、抗体は、上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨ、および上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それらの配列の翻訳後修飾を含む、それぞれ、配列番号２２０および配列番号１６０のＶＨおよびＶＬ配列を含む。別の実施形態では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、それぞれ、配列番号２２０および配列番号１６０のＶＨおよびＶＬ配列を含む抗体のヒト化形態を含む。
【０１７８】
本明細書で提供される他の実施形態は、部分的には、ヒトＰＤ−Ｌ２に特異的に結合する、抗体２−１９Ｈ２の開発に基づく。
【０１７９】
したがって、配列番号２２０の重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２６の軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる６つのＣＤＲ配列を含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。一実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２２のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号２８のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号３２のＣＤＲ−Ｌ３を含む３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗体を提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０１８０】
別の態様では、（ａ）配列番号２２０のＶＨおよび（ｂ）配列番号２６のＶＬを含むＶＨおよびＶＬを含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。特定の実施形態では、本発明は、（ａ）および（ｂ）に示される重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域のバリアントを有する抗体を提供し、バリアント配列は、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の全体的な相同性を有し、ただし、特に本明細書で定義される保存的置換において、ＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている。特定の実施形態では、配列番号２２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号２２０において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号２２０において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号２２０のＶＨ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号１５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号１５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、配列番号２６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号２６において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号２６において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号２６のＶＬ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０１８１】
別の態様では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供され、抗体は、上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨ、および上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それらの配列の翻訳後修飾を含む、それぞれ、配列番号２２０および配列番号２６のＶＨおよびＶＬ配列を含む。別の実施形態では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、それぞれ、配列番号２２０および配列番号２６のＶＨおよびＶＬ配列を含む抗体のヒト化形態を含む。
【０１８２】
本明細書で提供される特定の実施形態は、部分的には、ヒトＰＤ−Ｌ２に特異的に結合する、抗体１９Ｂ３−Ｂ３．Ｎ９２Ｑ．ＬＣ．Ｍ２３Ｋ．Ｍ６３Ｌ．ＨＣの開発に基づく。
【０１８３】
したがって、配列番号２２０の重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２２６の軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる６つのＣＤＲ配列を含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。一実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２２のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号１６２のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号２２８のＣＤＲ−Ｌ３を含む３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗体を提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０１８４】
別の態様では、（ａ）配列番号２２０のＶＨおよび（ｂ）配列番号２２６のＶＬを含むＶＨおよびＶＬを含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。特定の実施形態では、本発明は、（ａ）および（ｂ）に示される重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域のバリアントを有する抗体を提供し、バリアント配列は、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の全体的な相同性を有し、ただし、特に本明細書で定義される保存的置換において、ＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている。特定の実施形態では、配列番号２２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号２２０において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号２２０において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号２２０のＶＨ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号１５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号１５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、配列番号２２６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号２２６において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号２２６において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号２２６のＶＬ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号２２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０１８５】
別の態様では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供され、抗体は、上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨ、および上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それらの配列の翻訳後修飾を含む、それぞれ、配列番号２２０および配列番号２２６のＶＨおよびＶＬ配列を含む。別の実施形態では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、それぞれ、配列番号２２０および配列番号２２６のＶＨおよびＶＬ配列を含む抗体のヒト化形態を含む。
【０１８６】
本明細書で提供される特定の実施形態は、部分的には、ヒトＰＤ−Ｌ２に特異的に結合する、抗体１９Ｂ３−Ｂ３．Ｎ９２Ｙ．ＬＣ．Ｍ２３Ｋ．Ｍ６３Ｌ．ＨＣの開発に基づく。
【０１８７】
したがって、配列番号２２０の重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２３０の軽鎖可変領域（ＶＬ）に含まれる６つのＣＤＲ配列を含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。一実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２２のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号１６２のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号３２のＣＤＲ−Ｌ３を含む３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗体を提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０１８８】
別の態様では、（ａ）配列番号２２０のＶＨおよび（ｂ）配列番号２３０のＶＬを含むＶＨおよびＶＬを含む、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。特定の実施形態では、本発明は、（ａ）および（ｂ）に示される重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域のバリアントを有する抗体を提供し、バリアント配列は、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の全体的な相同性を有し、ただし、特に本明細書で定義される保存的置換において、ＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている。特定の実施形態では、配列番号２２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号２２０において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号２２０において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号２２０のＶＨ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号１５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号１５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、配列番号２３０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の全体的な相同性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ＰＤ−Ｌ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号２３０において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号２３０において置換、挿入、および／または欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号２３０のＶＬ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０１８９】
別の態様では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供され、抗体は、上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨ、および上記で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬを含む。一実施形態では、抗体は、それらの配列の翻訳後修飾を含む、それぞれ、配列番号２２０および配列番号２３０のＶＨおよびＶＬ配列を含む。別の実施形態では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、それぞれ、配列番号２２０および配列番号２３０のＶＨおよびＶＬ配列を含む抗体のヒト化形態を含む。
【０１９０】
現在、配列描写に使用される抗体のＣＤＲ割り当ての２つの広く使用されるシステム、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ定義がある。上記の実施形態で使用されるＫａｂａｔ  ＣＤＲ定義（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ２０  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））は、抗体配列変動性に基づく。本発明の抗体のＣＤＲは、別段に指定されない限り、Ｋａｂａｔシステムを使用して定義される。Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ定義（Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｃａｎｏｎｉｃａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｇｉｏｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ”，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９６，９０１−９１７（１９８７）、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｓｔａｎｄａｒｄ  ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｃａｎｏｎｉｃａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ”，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２７３（４），９２７−９４８（１９９７））は、抗体の三次元構造およびＣＤＲループのトポロジーに基づく。Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ定義は、ＣＤＲ−Ｈ１およびＣＤＲ−Ｈ２を除いて、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ定義と同一である。Ｃｈｏｔｈｉａらは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ内の特定のサブ部分が、アミノ酸配列のレベルで大きな多様性を有するにもかかわらず、ほぼ同一のペプチド骨格立体構造をとることを発見した。これらのサブ部分は、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３またはＨ１、Ｈ２、およびＨ３として示され、「Ｌ」および「Ｈ」は、それぞれ軽鎖および重鎖領域を示す。これらの領域は、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと重複する境界を有する、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲと呼ばれ得る。表１は、Ｋａｂａｔの残基ナンバリングシステムによるＣｈｏｔｈｉａおよびＫａｂａｔ  ＣＤＲの重複を示す。
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【０１９１】
したがって、以下の代替実施形態では、本発明の抗体のＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ定義のＣＤＲループである。
【０１９２】
一実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号６９のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７０のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７１のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号８１のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号８２のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号８３のＣＤＲ−Ｌ３を含むＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ定義による３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗ヒト抗体１Ａ１−Ｃ２を提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０１９３】
別の実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号７２のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７３のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７４のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号８４のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号８５のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号８６のＣＤＲ−Ｌ３を含むＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ定義による３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗ヒト抗体２Ｃ４−Ｅ４を提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０１９４】
さらなる実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号７５のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７６のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７７のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号８７のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号８８のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号８９のＣＤＲ−Ｌ３を含むＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ定義による３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗ヒト抗体８Ｂ５−Ｂ１を提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０１９５】
さらに別の実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号７８のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７９のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号８０のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号９０のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号９１のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号９２のＣＤＲ−Ｌ３を含むＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ定義による３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗ヒト抗体１１Ｃ１１−Ｈ５を提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０１９６】
本発明は、（ａ）配列番号７８のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７９のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号８０のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号９０のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号９１のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号９３のＣＤＲ−Ｌ３を含むＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ定義による３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗ヒト抗体１９Ｃ３−Ｂ３をさらに提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０１９７】
別の実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号１８１のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１８２のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１８３のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号１９４のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１９５のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号１９６のＣＤＲ−Ｌ３を含むＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ定義による３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗ヒト抗体１０Ｄ１−Ｇ１を提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０１９８】
さらなる実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号１８４のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１８５のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１８６のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号１９７のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１９８のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号１９９のＣＤＲ−Ｌ３を含むＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ定義による３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗ヒト抗体７Ｈ５−Ｃ５を提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０１９９】
さらに別の実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号１８４のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１８５のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１８６のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号２００のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号２０１のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号２０２のＣＤＲ−Ｌ３を含むＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ定義による３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗ヒト抗体９Ａ３−Ｃ７を提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０２００】
本発明は、（ａ）配列番号１８１のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１８７のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１８８のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号１９４のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号２０３のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号２０４のＣＤＲ−Ｌ３を含むＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ定義による３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗ヒト抗体１０Ａ９−Ｄ２をさらに提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０２０１】
さらに別の実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号１８９のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１９０のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１９１のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号２０５のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号８５のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号２０６のＣＤＲ−Ｌ３を含むＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ定義による３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗ヒト抗体１９Ｂ３−Ｂ３を提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０２０２】
本発明は、（ａ）配列番号１８１のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１９２のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１９３のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号２０７のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号２０８のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号２０９のＣＤＲ−Ｌ３を含むＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ定義による３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗ヒト抗体１２Ａ１−Ｄ４をさらに提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０２０３】
別の実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号１８１のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１８２のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１８３のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号２２３のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１９５のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号２２４のＣＤＲ−Ｌ３を含むＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ定義による３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗ヒト抗体１０Ｄ１−Ｇ１  Ｎ３１Ｑ．Ｎ９２Ｑ．ＬＣを提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０２０４】
本発明は、（ａ）配列番号１８１のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１８７のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１８８のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号２２２のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号２０３のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号２０４のＣＤＲ−Ｌ３を含むＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ定義による３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗ヒト抗体１０Ａ９−Ｄ２  Ｎ３１Ｑ．ＬＣをさらに提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０２０５】
さらに別の実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号１８９のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１９０のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１９１のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号２０５のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号８５のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号２０６のＣＤＲ−Ｌ３を含むＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ定義による３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗ヒト抗体１９Ｂ３−Ｂ３  Ｍ２３Ｋ．Ｍ６３Ｌ．ＨＣを提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０２０６】
別の実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号１８９のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１９０のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１９１のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号８４のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号８５のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号８６のＣＤＲ−Ｌ３を含むＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ定義による３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗ヒト抗体２−１９Ｈ２を提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０２０７】
さらに別の実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号１８９のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１９０のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１９１のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号２０５のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号８５のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号２３１のＣＤＲ−Ｌ３を含むＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ定義による３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗ヒト抗体１９Ｂ３−Ｂ３  Ｎ９２Ｑ．ＬＣ．Ｍ２３Ｋ．Ｍ６３Ｌ．ＨＣを提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０２０８】
さらに別の実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号１８９のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１９０のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１９１のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号２０５のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号８５のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号８６のＣＤＲ−Ｌ３を含むＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ定義による３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗ヒト抗体１９Ｂ３−Ｂ３  Ｎ９２Ｙ．ＬＣ．Ｍ２３Ｋ．Ｍ６３Ｌ．ＨＣを提供する。特定の実施形態では、本発明は、特に本明細書で定義される保存的置換において、（ａ）〜（ｆ）から選択されるＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体を提供する。
【０２０９】
本発明のさらなる態様では、上記実施形態のいずれかによる抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、ヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態では、抗抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、抗体は、実質的に完全長の抗体、例えば、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプである。特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１抗体である。
【０２１０】
さらなる態様では、上記の実施形態のいずれかによる抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、以下に記載されるように、単独でまたは組み合わせて、特徴のいずれかを組み込み得る。
【０２１１】
特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体のアミノ酸配列バリアントが企図される。例えば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な修飾を導入することによって、またはペプチド合成によって調製され得る。そのような修飾は、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、および／またはそれへの挿入、および／またはその置換を含む。最終構築物が所望の特徴、例えば、抗原結合を有することを条件として、削除、挿入、および置換の任意の組み合わせを行って、最終構築物に到達することができる。
【０２１２】
特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体バリアントが提供される。置換突然変異誘発についての目的の部位は、ＣＤＲおよびＦＲを含む。保存的置換は、「好ましい置換」の見出し下の表２に示される。より実質的な変更は、「例示的置換」の見出し下の表２に提供され、アミノ酸側鎖クラスに関して以下でさらに記載される。アミノ酸置換は、目的の抗体に導入され得、生成物は、所望の活性、例えば、保持された／改善された抗原結合、低下した免疫原性、または改善されたＡＤＣＣもしくはＣＤＣについてスクリーニングされ得る。
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【０２１３】
アミノ酸は、一般的な側鎖特性：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅに従って群化され得る。
【０２１４】
非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴うであろう。
【０２１５】
置換バリアントの１つのタイプは、親抗体（例えば、ヒト化またはヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基を置換することを含む。一般に、さらなる研究のために選択される得られたバリアント（複数可）は、親抗体と比較して特定の生物学的特性における修飾（例えば、改善）（例えば、増加した親和性、低減した免疫原性）を有し、かつ／または親抗体の実質的に保持された特定の生物学的特性を有するであろう。例示的な置換バリアントは、親和性成熟抗体であり、これは、例えば、本明細書に記載されるものなどのファージディスプレイベースの親和性成熟技法を使用して、便利に生成され得る。簡潔に、１つ以上のＣＤＲ残基は、突然変異され、バリアント抗体は、ファージ上にディスプレイされ、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
【０２１６】
変更（例えば、置換）は、例えば、抗体親和性を改善するために、ＣＤＲにおいて行われ得る。そのような変更は、ＣＤＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９−１９６（２００８）を参照されたい）中に高頻度で突然変異を受けるコドンによってコードされる残基、および／またはＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）において行われ得、得られるバリアントＶＨまたはＶＬは、結合親和性について試験される。二次ライブラリーからの構築および再選択による親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１））に記載される。親和性成熟のいくつかの実施形態では、多様性は、様々な方法（例えば、エラーが発生しやすいＰＣＲ、鎖シャッフリング、またはオリゴヌクレオチド指向性突然変異誘発）のいずれかによって成熟のために選択される可変遺伝子に導入される。二次ライブラリーが次いで作製される。ライブラリーが次いでスクリーニングされて、望ましい親和性を有する任意の抗体バリアントを特定する。多様性を導入する別の方法は、いくつかのＣＤＲ残基（例えば、１回に４〜６個の残基）がランダム化される、ＣＤＲ指向性アプローチを含む。抗原結合に関与するＣＤＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング突然変異誘発またはモデリングを使用して、特異的に特定され得る。特にＣＤＲ  Ｈ３およびＣＤＲ−Ｌ３が多くの場合標的とされる。
【０２１７】
特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、そのような変更が、抗原に結合する抗体の能力を実質的に低減させない限り、１つ以上のＣＤＲ内で起こり得る。例えば、結合親和性を実質的に低減させない保存的変更（例えば、本明細書で提供される保存的置換）は、ＣＤＲにおいて行われ得る。そのような変更は、ＣＤＲ「ホットスポット」またはＳＤＲの外部にあり得る。上記で提供されるバリアントＶＨおよびＶＬ配列の特定の実施形態では、各ＣＤＲは、変更されていないか、または１、２、もしくは３つ以下のアミノ酸置換を含有する。
【０２１８】
突然変異誘発について標的化され得る抗体の残基または領域の特定のための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５によって記載されるように「アラニンスキャニング突然変異誘発」と呼ばれる。この方法では、標的残基の残基または基（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、およびｇｌｕなどの荷電残基）が特定され、抗体と抗原との相互作用が影響を受けるかを決定するために、中性または負荷電アミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）によって置き換えられる。さらなる置換は、アミノ酸位置で導入され、初期置換に対する機能的感受性を示し得る。代替的に、または追加的に、抗体と抗原との間の接触点を特定するために、抗原−抗体複合体の結晶構造が使用される。そのような接触残基および隣接残基は、置換の候補として標的化または排除され得る。バリアントは、それらが所望の特性を含有するかを決定するためにスクリーニングされ得る。
【０２１９】
アミノ酸配列挿入は、長さが１個の残基から１００個以上の残基を含有するポリペプチドまでの範囲のアミノ末端および／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例は、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体を含む。抗体分子の他の挿入バリアントは、抗体の血清半減期を増加させる酵素（例えば、ＡＤＥＰＴの場合）またはポリペプチドに対する抗体のＮ末端またはＣ末端への融合を含む。
【０２２０】
特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少させるように変更される。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作製または除去されるように、アミノ酸配列を変更することによって便利に達成され得る。
【０２２１】
抗体がＦｃ領域を含む場合、それに結合した炭水化物は、変更され得る。哺乳動物細胞によって産生されるネイティブ抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７へのＮ結合によって一般的に結合される分岐、二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ  ｅｔ  ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ  １５：２６−３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖は、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、およびシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖構造の「ステム」においてＧｌｃＮＡｃに結合したフコースを含み得る。いくつかの実施形態では、本発明の抗体におけるオリゴ糖の修飾は、特定の改善された特性を有する抗体バリアントを作製するために行われ得る。
【０２２２】
一実施形態では、Ｆｅ領域に（直接的または間接的に）結合したフコースを欠く炭水化物構造を有する抗体バリアントが提供される。例えば、そのような抗体におけるフコースの量は、１％〜８０％、１％〜６５％、５％〜６５％、または２０％〜４０％であり得る。フコースの量は、例えば、ＷＯ２００８／０７７５４６に記載されるように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって測定されるＡｓｎ２９７に結合した全ての糖構造（例えば、複合体、ハイブリッド、および高マンノース構造）の合計と比較して、Ａｓｎ２９７の糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域における約２９７位に位置するアスパラギン残基を指すが（Ｆｅ領域残基のＥｕナンバリング）、Ａｓｎ２９７はまた、抗体における小さな配列変動のために、２９７位の約±３アミノ酸上流または下流、すなわち、２９４位〜３００位に位置し得る。そのようなフコシル化バリアントは、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許公開第ＵＳ２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）、同第ＵＳ２００４／００９３６２１号（Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  Ｋｏｇｙｏ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照されたい。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体バリアントに関する刊行物の例には、ＵＳ２００３／０１５７１０８、ＷＯ２０００／６１７３９、ＷＯ２００１／２９２４６、ＵＳ２００３／０１１５６１４、ＵＳ２００２／０１６４３２８、ＵＳ２００４／００９３６２１、ＵＳ２００４／０１３２１４０、ＵＳ２００４／０１１０７０４、ＵＳ２００４／０１１０２８２、ＵＳ２００４／０１０９８６５、ＷＯ２００３／０８５１１９、ＷＯ２００３／０８４５７０、ＷＯ２００５／０３５５８６、ＷＯ２００５／０３５７７８、Ｗ０２００５／０５３７４２、Ｗ０２００２／０３１１４０、Ｏｋａｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９（２００４）、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生することができる細胞株の例は、タンパク質フコシル化が欠損したＬｅｃ１３  ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ  ｅｔ  ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３−５４５（１９８６）、米国特許出願第ＵＳ２００３／０１５７１０８号Ａｌ，Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ、およびＷＯ２００４／０５６３１２  Ａｌ，Ａｄａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．、特に実施例１１）、およびアルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞などのノックアウト細胞株（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）、Ｋａｎｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０−６８８（２００６）、およびＷ０２００３／０８５ｌ０７を参照されたい）を含む。
【０２２３】
例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分される、二分オリゴ糖を有する抗体バリアントがさらに提供される。そのような抗体バリアントは、低減されたフコシル化および／または改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。そのような抗体バリアントの例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔ  ｅｔ  ａｌ．）、米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．）、およびＵＳ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．）に記載される。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖に少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体バリアントも提供される。そのような抗体バリアントは、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。そのような抗体バリアントは、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．）、ＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）、およびＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載される。  
【０２２４】
特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸修飾は、本明細書で提供される抗体のＦｃ領域に導入され、それによってＦｃ領域バリアントを生成し得る。Ｆｃ領域バリアントは、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４  Ｆｃ領域）を含み得る。
【０２２５】
特定の実施形態では、本発明は、全てではないがいくつかのエフェクター機能を有する抗体バリアントを企図し、これは、インビボでの抗体の半減期が重要であるが、特定のエフェクター機能（補体およびＡＤＣＣなど）が不必要または有害である、用途のための望ましい候補となる。インビトロおよび／またはインビボ細胞毒性アッセイは、ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣ活性の低減／枯渇を確認するために、実施することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイは、抗体がＦｃｙＲ結合を欠く（よって、ＡＤＣＣ活性を欠く可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持することを確実にするために、実施することができる。ＡＤＣＣを媒介するための一次細胞、ＮＫ細胞は、Ｆｃ（ＲＩＩＩのみを発現するが、単球は、Ｆｃ（ＲＩ、Ｆｃ（ＲＩＩ、およびＦｃ（ＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２（１９９１）の４６４ページの表３に要約される。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８３：７０５９−７０６３（１９８６）およびＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：１４９９−１５０２（１９８５）を参照されたい）、同第５，８２１，３３７号（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１−１３６１（１９８７）を参照されたい）に記載される。
【０２２６】
代替的に、非放射性アッセイ法が採用され得る（例えば、フローサイトメトリー用のＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞毒性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、ＣＡ、およびＣｙｔｏＴｏｘ  ９６（登録商標）非放射性細胞毒性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を参照されたい）。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。
【０２２７】
代替的に、または追加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、例えば、  Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されるものなどの動物モデルにおいて、インビボで評価され得る。
【０２２８】
Ｃ１ｑ結合アッセイはまた、抗体がＣｌｑに結合することができず、よってＣＤＣ活性を欠くことを確認するために、実施され得る。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９およびＷＯ２００５／１００４０２におけるＣｌｑおよびＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイが行われ得る（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２：１６３（１９９６）、Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １０１：１０４５−１０５２（２００３）、およびＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ  Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ  １０３：２７３８−２７４３（２００４）を参照されたい）。ＦｃＲｎ結合およびインビボクリアランス／半減期決定はまた、当該技術分野で知られる方法を使用して行うことができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９−１７６９（２００６）を参照されたい）。
【０２２９】
低減したエフェクター機能を有する抗体は、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、および３２９のうちの１つ以上の置換を有するものを含む（米国特許第６，７３７，０５６号）。そのようなＦｃ突然変異体は、アラニンへの残基２６５および２９７の置換を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ突然変異体を含む、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７、および３２７のうちの２つ以上での置換を有するＦｃ突然変異体を含む（米国特許第７，３３２，５８１号）。
【０２３０】
ＦｃＲへの改善されたまたは低下された結合を有する特定の抗体バリアントが記載される。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号、ＷＯ２００４／０５６３１２、およびＳｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６６０４（２００１）を参照されたい。）
【０２３１】
特定の実施形態では、抗体バリアントは、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８位、３３３位、および／または３３４位での置換（残基のＥＵナンバリング）を有するＦｃ領域を含む。
【０２３２】
いくつかの実施形態では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ９９／５１６４２、およびＩｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）に記載されるように、変更は、Ｆｃ領域において行われ、変更された（すなわち、改善または低下された）Ｃ１ｑ結合および／または補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）をもたらす。
【０２３３】
母体ＩｇＧの胎児への移行に関与する（Ｇｕｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）およびＫｉｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））、増加した半減期および新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への改善した結合を有する抗体は、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．）に記載される。それらの抗体は、その中に１つ以上の置換を有するＦｃ領域を含み、これは、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する。そのようなＦｃバリアントは、Ｆｃ領域残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、または４３４のうちの１つ以上での置換が、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換を有するものを含む（米国特許第７，３７１，８２６号）。
【０２３４】
Ｆｃ領域バリアントの他の例に関して、Ｄｕｎｃａｎ＆Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：７３８−４０（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、およびＷＯ９４／２９３５１も参照されたい。
【０２３５】
特定の実施形態では、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている、システイン操作抗体、例えば、「チオＭＡｂ」を作製することが望ましい場合がある。特定の実施形態では、置換された残基は、抗体のアクセス可能な部位に存在する。特定の実施形態では、以下の残基：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔナンバリング）、重鎖のＡ１１８（ＥＵナンバリング）、および重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵナンバリング）のいずれか１つ以上は、システインで置換され得る。システイン操作抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されるように生成され得る。
【０２３６】
特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、当該技術分野で知られており、容易に入手可能である、追加の非タンパク質性部分を含有するようにさらに修飾され得る。抗体の誘導体化に適した部分は、水溶性ポリマーを含むが、これに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、およびデキストランまたはポリ（ｎビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、酸化プロピレン／酸化エチレンコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにそれらの混合物を含むが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のため、製造において利点を有し得る。ポリマーは、任意の分子量であってよく、分岐または非分岐であってよい。抗体に結合したポリマーの数は異なってよく、複数のポリマーが結合している場合、それらは同じまたは異なる分子であり得る。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数および／またはタイプは、これらに限定されないが、改善される抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が療法において定義された条件下で使用されるか、などを含む、考慮事項に基づいて決定することができる。
【０２３７】
別の実施形態では、放射線への曝露によって選択的に加熱され得る、抗体および非タンパク質性部分のコンジュゲートが提供される。一実施形態では、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブである（Ｋａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０２：１１６００−１１６０５（２００５））。放射線は、任意の波長のものでよく、通常の細胞に害を及ぼさないが、非タンパク質性部分を抗体非タンパク質性部分の近位の細胞が殺滅される温度まで加熱する波長を含むが、これに限定されない。
【０２３８】
一実施形態では、本発明の抗体、または抗原結合部分は、単一特異性、二重特異性、三重特異性、または多重特異性抗原結合分子である。
【０２３９】
二重特異性抗体は、例えば、多価一本鎖抗体、ダイアボディ、およびトリアボディ、ならびにさらなる抗原結合部位（例えば、一本鎖Ｆｖ、ＶＨドメインおよび／もしくはＶＬドメイン、Ｆａｂ、または（Ｆａｂ）２）が、１つ以上のペプチドリンカーを介して結合される完全長抗体の定常ドメイン構造を有する抗体を含む。抗体は、単一の種からの完全長であるか、またはキメラ化もしくはヒト化であり得る。３つ以上の抗原結合部位を有する抗体について、いくつかの結合部位は、タンパク質が２つの異なる抗原のための結合部位を有する限り、同一であり得る。すなわち、第１の結合部位は、ヒトＰＤ−Ｌ２に特異的であるが、第２の結合部位は、異なる抗原に特異的である。特定の実施形態では、第２の結合部位は、腫瘍細胞特異的抗原、ウイルス感染細胞に特異的な抗原、およびＴ細胞共阻害剤の群から選択される抗原に特異的に結合する。好ましい実施形態では、第２の結合部位は、ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する。
【０２４０】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、本発明の抗体または抗原結合部分のいずれかと同じエピトープに結合し、かつ／または同じエピトープについて競合する。
【０２４１】
本明細書で使用される「エピトープ」という用語は、抗体の抗体組み合わせ部位によって特異的に結合した、抗原分子（例えば、ペプチド）の部分または領域を指す。エピトープは、典型的には、少なくとも３個、より一般的には、少なくとも５個または８〜１０個の残基（例えば、アミノ酸またはヌクレオチド）を含む。典型的には、エピトープはまた、長さが２０個未満の残基（例えば、アミノ酸またはヌクレオチド）、例えば、１５個未満の残基または１２個未満の残基である。ここで、「エピトープ」という用語は、連続するアミノ酸が抗体によって認識される線状エピトープ、および抗体が適切な配置または立体構造をとる程度にアミノ酸を認識する立体構造エピトープの両方を包含する。結果として、いくつかのエピトープでは、立体構造（三次元構造）は、アミノ酸配列（一次構造）と同じくらい重要である。
【０２４２】
抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されるように、組換え方法および組成物を使用して産生され得る。一実施形態では、本明細書に記載される抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子が提供される。
【０２４３】
したがって、一実施形態では、本発明は、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体１Ａ１−Ｃ２をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を提供し、核酸分子は、（ａ）配列番号３のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号１１のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１３のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号１５のＣＤＲ−Ｌ３を含む、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む。別の態様では、（ａ）配列番号１のＶＨおよび（ｂ）配列番号９のＶＬを含むＶＨおよびＶＬを含む、核酸分子が提供される。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０２４４】
別の実施形態では、本発明は、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体２Ｃ４−Ｅ４をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を提供し、核酸分子は、（ａ）配列番号１９のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２１のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２３のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号２７のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号２９のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号３１のＣＤＲ−Ｌ３を含む、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む。別の態様では、（ａ）配列番号１７のＶＨおよび（ｂ）配列番号２５のＶＬを含むＶＨおよびＶＬを含む、核酸分子が提供される。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０２４５】
さらに別の実施形態では、本発明は、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体８Ｂ５−Ｂ１をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を提供し、核酸分子は、（ａ）配列番号３５のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３７のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号３９のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号４３のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号４７のＣＤＲ−Ｌ３を含む、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む。別の態様では、（ａ）配列番号３３のＶＨおよび（ｂ）配列番号４１のＶＬを含むＶＨおよびＶＬを含む、核酸分子が提供される。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０２４６】
さらなる実施形態では、本発明は、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体１１Ｃ１１−Ｈ５をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を提供し、核酸分子は、（ａ）配列番号５１のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５３のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号５５のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号５９のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号６３のＣＤＲ−Ｌ３を含む、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む。別の態様では、（ａ）配列番号４９のＶＨおよび（ｂ）配列番号５７のＶＬを含むＶＨおよびＶＬを含む、核酸分子が提供される。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０２４７】
別の実施形態では、本発明は、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体１９Ｃ３−Ｂ３をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を提供し、核酸分子は、（ａ）配列番号５１のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５３のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号５５のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号５９のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号６７のＣＤＲ−Ｌ３を含む、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む。別の態様では、（ａ）配列番号４９のＶＨおよび（ｂ）配列番号６５のＶＬを含むＶＨおよびＶＬを含む、核酸分子が提供される。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０２４８】
別の実施形態では、本発明は、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体１０Ｄ１−Ｇ１をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を提供し、核酸分子は、（ａ）配列番号９７のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号９９のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０１のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号１０５のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１０７のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号１０９のＣＤＲ−Ｌ３を含む、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む。別の態様では、（ａ）配列番号９５のＶＨおよび（ｂ）配列番号１０３のＶＬを含むＶＨおよびＶＬを含む、核酸分子が提供される。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０２４９】
さらに別の実施形態では、本発明は、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体７Ｈ５−Ｃ５をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を提供し、核酸分子は、（ａ）配列番号１１３のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１１５のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１１７のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号１２１のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１２３のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号１２５のＣＤＲ−Ｌ３を含む、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む。別の態様では、（ａ）配列番号１１１のＶＨおよび（ｂ）配列番号１１９のＶＬを含むＶＨおよびＶＬを含む、核酸分子が提供される。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０２５０】
さらなる実施形態では、本発明は、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体９Ａ３−Ｃ７をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を提供し、核酸分子は、（ａ）配列番号１１３のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１２９のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１１７のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号１３３のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１３５のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号１３７のＣＤＲ−Ｌ３を含む、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む。別の態様では、（ａ）配列番号１２７のＶＨおよび（ｂ）配列番号１３１のＶＬを含むＶＨおよびＶＬを含む、核酸分子が提供される。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０２５１】
別の実施形態では、本発明は、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体１０Ａ９−Ｄ２をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を提供し、核酸分子は、（ａ）配列番号９７のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１４１のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１４３のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号１０５のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１４７のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号１４９のＣＤＲ−Ｌ３を含む、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む。別の態様では、（ａ）配列番号１３９のＶＨおよび（ｂ）配列番号１４５のＶＬを含むＶＨおよびＶＬを含む、核酸分子が提供される。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号１４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０２５２】
さらなる実施形態では、本発明は、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体１９Ｂ３−Ｂ３をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を提供し、核酸分子は、（ａ）配列番号１５３のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１５５のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１５７のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号１６１のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号２９のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号１６３のＣＤＲ−Ｌ３を含む、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む。別の態様では、（ａ）配列番号１５１のＶＨおよび（ｂ）配列番号１５９のＶＬを含むＶＨおよびＶＬを含む、核酸分子が提供される。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号１５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０２５３】
別の実施形態では、本発明は、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体１２Ａ１−Ｄ４をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を提供し、核酸分子は、（ａ）配列番号１６７のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１６９のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１７１のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号１７５のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１７７のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号１７９のＣＤＲ−Ｌ３を含む、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む。別の態様では、（ａ）配列番号１６５のＶＨおよび（ｂ）配列番号１７３のＶＬを含むＶＨおよびＶＬを含む、核酸分子が提供される。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号１６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１６９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号１７１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号１７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０２５４】
別の実施形態では、本発明は、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体１０Ｄ１−Ｇ１  Ｎ３１Ｑ．Ｎ９２Ｑ．ＬＣをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を提供し、核酸分子は、（ａ）配列番号９７のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号９９のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０１のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号２１３のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１０７のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号２１５のＣＤＲ−Ｌ３を含む、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む。別の態様では、（ａ）配列番号９５のＶＨおよび（ｂ）配列番号２１１のＶＬを含むＶＨおよびＶＬを含む、核酸分子が提供される。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号２１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号２１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０２５５】
別の実施形態では、本発明は、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体１０Ａ９−Ｄ２  Ｎ３１Ｑ．ＬＣをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を提供し、核酸分子は、（ａ）配列番号９７のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１４１のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１４３のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号２１３のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１４７のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号１４９のＣＤＲ−Ｌ３を含む、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む。別の態様では、（ａ）配列番号１３９のＶＨおよび（ｂ）配列番号２１７のＶＬを含むＶＨおよびＶＬを含む、核酸分子が提供される。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号２１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号１４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０２５６】
さらなる実施形態では、本発明は、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体１９Ｂ３−Ｂ３  Ｍ２３Ｋ．Ｍ６３Ｌ．ＨＣをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を提供し、核酸分子は、（ａ）配列番号１５３のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２１のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１５７のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号１６１のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号２９のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号１６３のＣＤＲ−Ｌ３を含む、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む。別の態様では、（ａ）配列番号２１９のＶＨおよび（ｂ）配列番号１５９のＶＬを含むＶＨおよびＶＬを含む、核酸分子が提供される。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号１５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０２５７】
さらなる実施形態では、本発明は、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体２−Ｈ１９２をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を提供し、核酸分子は、（ａ）配列番号１５３のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２１のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１５７のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号２７のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号２９のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号３１のＣＤＲ−Ｌ３を含む、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む。別の態様では、（ａ）配列番号２１９のＶＨおよび（ｂ）配列番号２５のＶＬを含むＶＨおよびＶＬを含む、核酸分子が提供される。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号１５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０２５８】
さらなる実施形態では、本発明は、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体１９Ｂ３−Ｂ３  Ｎ９２Ｑ．ＬＣ．Ｍ２３Ｋ．Ｍ６３Ｌ．ＨＣをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を提供し、核酸分子は、（ａ）配列番号１５３のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２１のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１５７のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号１６１のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号２９のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号２２７のＣＤＲ−Ｌ３を含む、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む。別の態様では、（ａ）配列番号２１９のＶＨおよび（ｂ）配列番号２２５のＶＬを含むＶＨおよびＶＬを含む、核酸分子が提供される。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号１５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号２２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０２５９】
さらなる実施形態では、本発明は、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体１９Ｂ３−Ｂ３  Ｍ２３Ｋ．Ｍ６３Ｌ．ＨＣをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を提供し、核酸分子は、（ａ）配列番号１５３のＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２１のＣＤＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１５７のＣＤＲ−Ｈ３、および（ｄ）配列番号１６１のＣＤＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号２９のＣＤＲ−Ｌ２、（ｆ）配列番号３１のＣＤＲ−Ｌ３を含む、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む。別の態様では、（ａ）配列番号２１９のＶＨおよび（ｂ）配列番号２２９のＶＬを含むＶＨおよびＶＬを含む、核酸分子が提供される。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２、および（ｃ）配列番号１５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２、および（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＣＤＲを含む。
【０２６０】
さらなる実施形態では、本発明は、上記で提供されるそのような核酸配列を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）に関する。さらなる実施形態では、そのような核酸を含む細胞が提供される。そのような一実施形態では、細胞は、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列および抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクターおよび抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、これで形質転換されている）。一実施形態では、宿主細胞は、真核生物、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞（例えば、ＹＯ、ＮＳ０、Ｓｐ２０）である。一実施形態では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体を作製する方法が提供され、方法は、抗体の発現に適した条件下で、上記で提供される、抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養することと、任意に宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から抗体を回収することと、を含む。
【０２６１】
抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体の組換え産生のために、例えば、上記のような、抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞におけるさらなるクローニングおよび／または発現のために１つ以上のベクターに挿入される。そのような核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離および配列決定され得る。
【０２６２】
抗体をコードするベクターのクローニングまたは発現に適した宿主細胞は、本明細書に記載される原核または真核細胞を含む。例えば、特にグリコシル化およびＦｃエフェクター機能が必要とされない場合、抗体は細菌において産生され得る。細菌における抗体断片およびポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、および同第５，８４０，５２３号を参照されたい。（Ｅ．ｃｏｌｉにおける抗体断片の発現について記載する、Ｃｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５−２５４も参照されたい。）発現後、抗体は、可溶性画分として細菌細胞ペーストから単離され得、さらに精製することができる。
【０２６３】
原核生物に加えて、糸状真菌または酵母などの真核微生物は、そのグリコシル化経路が、「ヒト化」されており、部分的または完全なヒトグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす、真菌および酵素を含む、抗体をコードするベクターに適したクローニングまたは発現宿主である。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９−１４１４（２００４）、およびＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５（２００６）を参照されたい。
【０２６４】
グリコシル化抗体の発現に適した宿主細胞はまた、多細胞生物（無脊椎動物および脊椎動物）に由来する。無脊椎動物細胞の例は、植物および昆虫細胞を含む。特にスポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞のトランスフェクションのために、昆虫細胞と共に使用され得る多数のバキュロウイルス株が特定されている。
【０２６５】
植物細胞培養はまた、宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、および同第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術について記載）を参照されたい。
【０２６６】
脊椎動物細胞はまた、宿主として使用され得る。例えば、懸濁液中で成長するように適合される哺乳動物細胞株が有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ−７）によって形質転換されたマカク腎臓ＣＶｌ株；ヒト胚性腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒａｌ．３６：５９（１９７７）に記載される、２９３または２９３細胞）；ベビーハムスター腎細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０）に記載されるＴＭ４細胞）；マカク腎臓細胞（ＣＶｌ）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲ０−７６）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ  ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗｌ３８）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２）；例えば、Ｍａｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ  Ａｅａｄ．Ｓｅｉ．３８３：４４−６８（１９８２）に記載される、ＴＲＩ細胞；ＭＲＣ  ５細胞；およびＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株は、ＤＨＦＲ  ＣＨＯ細胞を含む、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｕｒｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ｃｉｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６（１９８０））、ならびにＹＯ、ＮＳＯ、およびＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株を含む。抗体産生に適した特定の哺乳動物宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ  ａｎｄ  Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５−２６８（２００３）を参照されたい。
【０２６７】
本明細書で提供される抗ＰＤ−Ｌ２抗体は、当該技術分野で知られる様々なアッセイによって、それらの物理的／化学的特性および／または生物学的活性について、特定、スクリーニング、または特徴分析され得る。
【０２６８】
一態様では、本発明の抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＢＩＡＣｏｒｅ（登録商標）、ＦＡＣＳ、免疫蛍光、または免疫組織化学などの既知の方法によって、その抗原結合活性について試験される。
【０２６９】
別の態様では、競合アッセイは、ＰＤ−Ｌ２への結合について本明細書に記載される抗体のいずれかと競合する抗体を特定するために使用され得る。特定の実施形態では、そのような競合する抗体は、本明細書に記載される抗体によって結合される同じエピトープ（例えば、線状または立体構造エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示的な方法は、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）“Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，”ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）に提供される。
【０２７０】
例示的な競合アッセイでは、固定化ＰＤ−Ｌ２は、ＰＤ−Ｌ２に結合する第１の標識抗体（例えば、本明細書に記載される抗体のいずれか）と、ＰＤ−Ｌ２への結合について第１の抗体と競合するその能力について試験されている第２の非標識抗体とを含む溶液中でインキュベートされる。対照として、固定化ＰＤ−Ｌ２は、第１の標識抗体を含むが、第２の非標識抗体を含まない溶液中でインキュベートされる。ＰＤ−Ｌ２への第１の抗体の結合を許容する条件下でのインキュベーション後、過剰な非結合抗体が除去され、固定化ＰＤ−Ｌ２と関連したラベルの量が測定される。固定化ＰＤ−Ｌ２と関連したラベルの量が、対照試料と比較して試験試料において実質的に低減する場合、それは、第２の抗体が、ＰＤ−Ｌ２への結合について第１の抗体と競合していることを示す。Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照されたい。
【０２７１】
特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体のいずれかは、生体試料中のＰＤ−Ｌ２の存在を検出するために有用である。本明細書で使用される「検出」という用語は、定量的または定性的検出を包含する。「生体試料」は、例えば、細胞または組織（例えば、リンパ球、リンパ芽球、単球、骨髄単球、およびそれらの混合物などの、癌性または潜在的に癌性のリンパ組織を含む、生検材料）を含む。
【０２７２】
一実施形態では、診断または検出の方法における使用のための、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。さらなる態様では、生体試料中の抗ヒトＰＤ−Ｌ２の存在を検出する方法が提供される。特定の実施形態では、方法は、生体試料を本明細書に記載される抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体と、ヒトＰＤ−Ｌ２への抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体の結合を許容する条件下で接触させることと、生体試料において抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体とＰＤ−Ｌ２との間に複合体が形成されるかを検出することと、を含む。そのような方法は、インビトロまたはインビボ方法であり得る。一実施形態では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、例えば、ＰＤ−Ｌ２が患者の選択のためのバイオマーカーである場合、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体での療法に適格な対象を選択するために使用される。さらなる実施形態では、生体試料は、細胞または組織である。
【０２７３】
さらなる実施形態では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、例えば、癌を診断、予後診断、もしくは病期分類、適切な療法経過を決定、または療法に対する癌の応答を監視する目的で、対象におけるＰＤ−Ｌ２陽性癌を、例えば、インビボイメージングによって、検出するためにインビボで使用される。インビボ検出のための当該技術分野で知られる１つの方法は、例えば、ｖａｎ  Ｄｏｎｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ  １２：１３７９−１３８９（２００７）およびＶｅｒｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．４４：１２７１−１２８１（２００３）に記載されるように、イムノ−陽電子放出トモグラフィー（イムノ−ＰＥＴ）である。そのような実施形態では、対象におけるＰＤ−Ｌ２陽性癌を検出するための方法が提供され、方法は、標識抗ＰＤ−Ｌ２抗体を、ＰＤ−Ｌ２陽性癌を有するか、またはこれを有する疑いのある対象に投与することと、対象における標識抗ＰＤ−Ｌ２抗体を検出することと、を含み、標識抗ＰＤ−Ｌ２抗体の検出は、対象におけるＰＤ−Ｌ２陽性癌を示す。特定のそのような実施形態では、標識抗ＰＤ−Ｌ２抗体は、陽電子放出体、例えば、６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、８６Ｙ、７６Ｂｒ、８９Ｚｒ、および１２４Ｉにコンジュゲートした抗ＰＤ−Ｌ２抗体を含む。
【０２７４】
さらなる実施形態では、診断または検出の方法は、基質に固定化された第１の抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体を、ＰＤ−Ｌ２の存在について試験される生体試料と接触させることと、基質を第２の抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体に曝露することと、生体試料において第２の抗ヒトＰＤ−Ｌ２が第１の抗ＰＤ−Ｌ２抗体とＰＤ−Ｌ２との間の複合体に結合しているかを検出することと、を含む。基質は、任意の支持媒体、例えば、ガラス、金属、セラミック、ポリマービーズ、スライド、チップ、および他の基質であり得る。特定の実施形態では、生体試料は、細胞または組織を含む。特定の実施形態では、第１または第２の抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体は、本明細書に記載される抗体のいずれかである。
【０２７５】
上記実施形態のいずれかに従って診断または検出され得る例示的な障害は、ＰＤ−Ｌ２陽性肝臓癌、ＰＤ−Ｌ２陽性肝細胞癌、ＰＤ−Ｌ２陽性胃癌、ＰＤ−Ｌ２陽性食道癌、ＰＤ−Ｌ２陽性膵臓癌、ＰＤ−Ｌ２陽性肺癌、ＰＤ−Ｌ２陽性結腸癌、ＰＤ−Ｌ２陽性乳癌、ＰＤ−Ｌ２陽性前立腺癌、ＰＤ−Ｌ２陽性白血病、およびＰＤ−Ｌ２陽性リンパ腫などのＰＤ−Ｌ２陽性癌を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ２陽性癌は、肝臓癌である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ２陽性癌は、肝細胞癌である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ２陽性癌は、「０」よりも大きい抗ＰＤ−Ｌ２免疫組織化学（ＩＨＣ）またはインサイチュハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）スコアを受ける癌であり、これは、腫瘍細胞の＞９０％における非常に弱い染色または無染色に対応する。別の実施形態では、ＰＤ−Ｌ２陽性癌は、１＋、２＋、または３＋レベルでＰＤ−Ｌ２を発現する。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ２陽性癌は、ＰＤ−Ｌ２  ｍＲＮＡを検出する逆転写酵素ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイに従ってＰＤ−Ｌ２を発現する癌である。いくつかの実施形態では、ＲＴ−ＰＣＲは、定量的ＲＴ−ＰＣＲである。
【０２７６】
特定の実施形態では、標識抗ＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。ラベルは、直接検出されるラベルまたは部分（蛍光、クロモフォア、高電子密度、化学発光、および放射性ラベルなど）、および例えば、酵素反応または分子相互作用を通して、間接的に検出される、酵素またはリガンドなどの部分を含むが、これらに限定されない。
【０２７７】
例示的なラベルは、放射性同位体３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、および１３１Ｉ、フルオロフォア、例えば、希土類キレートまたはフルオレセインおよびその誘導体、ローダミンおよびその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルセリフェラーゼ、例えば、ホタルルシフェラーゼおよび細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号）、ルシフェリン、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖オキシダーゼ、例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、およびグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、ＨＲＰなどの色素前駆体を酸化するために過酸化水素を採用する酵素と結合した、複素環式オキシダーゼ、例えば、ウリカーゼおよびキサンチンオキシダーゼ、ラクトペルオキシダーゼ、またはマイクロペルオキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピンラベル、バクテリオファージラベル、安定なフリーラジカルなどを含むが、これらに限定されない。別の実施形態では、ラベルは、陽電子放出体である。陽電子放出体は、６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、８６Ｙ、７６Ｂｒ、８９Ｚｒ、および１２４１を含むが、これらに限定されない。特定の実施形態では、陽電子放出体は、８９Ｚｒである。
【０２７８】
さらなる実施形態では、本発明は、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体またはその抗原結合部分を含む薬学的組成物を提供する。別の実施形態では、上記のような核酸分子または発現ベクターを含む薬学的組成物が提供される。
【０２７９】
本明細書に記載される抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体の薬学的組成物は、所望の純度を有するそのような抗体を、１つ以上の任意の薬学的に許容される担体（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））と混合することによって、凍結乾燥製剤または水性溶液の形態で調製される。薬学的に許容される担体は、一般に、採用される投与量および濃度でレシピエントに対して非毒性であり、リン酸、クエン酸、および他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、もしくはベンジルアルコール；メチルもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾールなど）；低分子量（約１０個未満の残基）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む単糖、二糖、および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎタンパク質錯体）；ならびに／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含むが、これらに限定されない。本明細書における例示的な薬学的に許容される担体は、可溶性中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）などのヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質などの腸内薬物分散剤をさらに含む。ｒＨｕＰＨ２０を含む、特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰおよび使用方法は、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号および同第２００６／０１０４９６８号に記載される。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼなどの１つ以上の追加のグリコサミノグリカナーゼと組み合わされる。
【０２８０】
例示的な凍結乾燥抗体製剤は、米国特許第６，２６７，９５８号に記載される。水性抗体製剤は、米国特許第６，１７１，５８６号およびＷＯ２００６／０４４９０８に記載されるものを含み、後者の製剤は、ヒスチジン−酢酸緩衝剤を含む。
【０２８１】
本明細書の製剤はまた、治療される特定の適応症に必要な複数の活性成分、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有するものを含有し得る。
【０２８２】
活性成分は、例えば、コアセルベーション技法によって、または界面重合によって調製されるマイクロカプセル、例えば、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセルおよびポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセルに、それぞれ、コロイド状薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセル）またはマクロエマルジョンにおいて、封入され得る。そのような技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示される。
【０２８３】
持続放出調製物が調製され得る。持続放出調製物の適切な例は、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスを含み、このマトリックスは、成形品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態である。インビボ投与に使用される製剤は、一般的には無菌である。無菌性は、例えば、無菌濾過膜による濾過によって、容易に達成され得る。
【０２８４】
本明細書で提供される抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体のいずれも、ヒト療法、例えば、癌療法において使用され得る。
【０２８５】
別の態様では、医薬品としての使用のための抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。さらなる態様では、ヒト療法における使用のための抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。特定の実施形態では、癌療法における使用のための抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体が提供される。特定の実施形態では、本発明は、ＰＤ−Ｌ２陽性癌を有する個体を治療する癌療法における使用のための抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体を提供し、方法は、個体に有効量の抗ＰＤ−Ｌ２抗体を投与することを含む。そのような一実施形態では、方法は、例えば、以下に記載されるように、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。
【０２８６】
さらなる態様では、本発明は、医薬品の製造または調製における抗ＰＤ−Ｌ２抗体の使用を提供する。一実施形態では、医薬品は、癌療法における使用のためのものである。一実施形態では、医薬品は、ＰＤ−Ｌ２陽性癌の治療のためのものである。さらなる実施形態では、医薬品は、ＰＤ−Ｌ２陽性癌を治療する方法における使用のためのものであり、方法は、ＰＤ−Ｌ２陽性癌を有する個体に有効量の医薬品を投与することを含む。そのような一実施形態では、方法は、例えば、以下に記載されるように、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。
【０２８７】
さらなる態様では、本発明は、ＰＤ−Ｌ２陽性癌を治療するための方法を提供する。一実施形態では、方法は、そのようなＰＤ−Ｌ２陽性癌を有する個体に有効量の抗ＰＤ−Ｌ２抗体を投与することを含む。そのような一実施形態では、方法は、以下に記載されるように、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。
【０２８８】
上記実施形態のいずれかによるＰＤ−Ｌ２陽性癌は、例えば、ＰＤ−Ｌ２陽性肝臓癌、ＰＤ−Ｌ２陽性肝細胞癌、ＰＤ−Ｌ２陽性膵臓癌、ＰＤ−Ｌ２陽性肺癌、ＰＤ−Ｌ２陽性結腸癌、ＰＤ−Ｌ２陽性乳癌、ＰＤ−Ｌ２陽性前立腺癌、ＰＤ−Ｌ２陽性白血病、またはＰＤ−Ｌ２陽性リンパ腫であり得る。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ２陽性癌は、「０」よりも大きい抗ＰＤ−Ｌ２免疫組織化学（ＩＨＣ）またはインサイチュハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）スコアを受ける癌であり、これは、腫瘍細胞の＞９０％における非常に弱い染色または無染色に対応する。別の実施形態では、ＰＤ−Ｌ２陽性癌は、１＋、２＋、または３＋レベルでＰＤ−Ｌ２を発現する。
【０２８９】
本明細書に記載される実施形態のいずれかによる「個体」または「対象」は、ヒトであり得る。
【０２９０】
さらなる態様では、本発明は、例えば、上記療法のいずれかにおける使用のための、本明細書で提供される抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体のいずれかを含む、薬学的製剤を提供する。一実施形態では、薬学的製剤は、本明細書で提供される抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体のいずれかおよび薬学的に許容される担体を含む。別の実施形態では、薬学的製剤は、本明細書で提供される抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体のいずれかおよび、例えば、以下に記載されるような、少なくとも１つの追加の治療剤を含む。
【０２９１】
本発明の抗体は、療法において単独または他の薬剤との組み合わせのいずれかで使用することができる。例えば、本発明の抗体は、少なくとも１つの追加の治療剤と同時投与され得る。
【０２９２】
上記のそのような併用療法は、組み合わされた投与（２つ以上の治療剤が同じまたは別個の製剤に含まれる場合）、および別個の投与を包含し、この場合、本発明の抗体の投与は、追加の治療剤および／またはアジュバントの投与の前に、それと同時に、および／またはその後に起こり得る。本発明の抗体はまた、放射線療法と組み合わせて使用することができる。
【０２９３】
一実施形態では、好ましくは化学療法、抗体療法、および／または放射線療法などの、他の療法と組み合わせた、ヒト療法または癌療法における使用のための、本発明の抗体もしくは抗原結合部分、本発明の核酸分子、本発明の発現ベクター、または本発明の薬学的組成物が提供される。組み合わされた治療は、同時または別々に起こり得る。
【０２９４】
「化学療法」は、疾患の治療、例えば、癌の治療における化学化合物または薬物の使用を指す。癌化学療法剤はまた、一般的には抗腫瘍剤と呼ばれる。
【０２９５】
本明細書で使用される場合、「放射線療法」という用語は、電離放射線への任意の曝露を指し、例えば、外部ビーム放射線療法、光子放射線療法、電子放射線療法、陽子放射線療法、炭素イオン放射線療法、リチウムイオン放射線療法、シリコンイオン放射線療法、ヘリウムイオン放射線療法、他の形態のハドロン療法または他の粒子療法、近接照射療法、放射性同位体療法、注入可能な同位体、例えば、任意の種類のマトリックスにもしくはこの内に結合した、またはこれと混合した同位体を含み得る。
【０２９６】
本発明の抗体（および任意の追加の治療剤）は、非経口、肺内、および鼻腔内、ならびに局所治療が望ましい場合、病変内、子宮内、または膀胱内投与を含む、任意の適切な手段によって投与することができる。非経口注入は、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与を含む。投薬は、投与が短期または慢性であるかに部分的に応じて、任意の適切な経路によるもの、例えば、静脈内または皮下注射などの注射によるものであり得る。本明細書では、様々な時点にわたる単回または複数回投与、ボーラス投与、およびパルス注入を含むが、これらに限定されない、様々な投薬スケジュールが企図される。
【０２９７】
本発明の抗体は、良好な医療行為と一致する方法で製剤され、投薬され、投与されるであろう。この文脈において考慮される因子は、治療される特定の障害、治療される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール、および医療従事者に知られる他の因子を含む。抗体は、必ずしも必要ではないが、任意に問題の障害を予防または治療するために現在使用されている１つ以上の薬剤と製剤化される。そのような他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗体の量、障害または治療のタイプ、および上記で議論される他の因子に依存する。これらは、一般に、本明細書に記載されるものと同じ投与量および投与経路で、または本明細書に記載される投与量の約１〜９９％、もしくは経験的／臨床的に適切であると決定される任意の投与量および任意の経路で使用される。
【０２９８】
疾患の療法について、本発明の抗体の適切な投与量（単独で、または１つ以上の他の追加の治療剤と組み合わせて使用される場合）は、治療される疾患のタイプ、抗体のタイプ、疾患の重症度および経過、抗体が予防または治療目的で投与されるか、以前の療法、患者の病歴および抗体への応答、ならびに主治医の裁量に応じるであろう。抗体は、一回で、または一連の治療にわたって患者に適切に投与される。疾患のタイプおよび重症度に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ）の抗体は、例えば、１回以上の別々の投与、または持続注入による、患者への投与のための初期候補投与量であり得る。１つの典型的な１日投与量は、上記の因子に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲であり得る。状態に応じた、数日以上にわたる反復投与について、治療は、一般に、疾患症状の所望の抑制が起こるまで持続されるであろう。抗体の１つの例示的な投与量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であろう。よって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇ（またはそれらの任意の組み合わせ）の１回以上の用量が患者に投与され得る。そのような用量は、断続的に、例えば、毎週または３週間毎に（例えば、患者が約２〜約２０、または約６回の用量の抗体を受けるように）投与され得る。初期のより高い負荷用量、続いて１回以上のより低い用量が投与され得る。しかしながら、他の投与計画が有用であり得る。この療法の進行は、従来の技法およびアッセイによって簡単に監視される。
【０２９９】
本発明の別の態様では、上記の障害の治療、予防、および／または診断に有用な材料を含有する製造物品が提供される。製造物品は、容器と、容器上または容器に付随するラベルまたは添付文書とを含む。適切な容器は、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグなどを含む。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成され得る。容器は、単独の、または障害の治療、予防、および／もしくは診断に有効な別の組成物と組み合わされた組成物を保持し、無菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、静脈内溶液バッグまたは皮下注射針によって穿刺可能な栓を有するバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本発明の抗体である。ラベルまたは添付文書は、組成物が選択される状態を治療するために使用されることを示す。
【０３００】
さらに、製造物品は、（ａ）その中に含有される組成物を有する第１の容器であって、組成物が、本発明の抗体を含む、第１の容器と、（ｂ）その中に含有される組成物を有する第２の容器であって、組成物が、さらなる細胞毒性または他の治療剤を含む、第２の容器と、を含み得る。本発明のこの実施形態における製造物品は、組成物が特定の状態を治療するために使用され得ることを示す添付文書をさらに含み得る。代替的に、または追加的に、製造物品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液、またはデキストロース溶液などの薬学的に許容される緩衝剤を含む第２（または第３）の容器をさらに含み得る。それは、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、およびシリンジを含む、商業的およびユーザー観点から望ましい他の材料をさらに含み得る。
【０３０１】
一実施形態では、上記の使用のための、本発明の抗体もしくは抗原結合部分、核酸分子、発現ベクター、または薬学的組成物は、ＰＤ−１−ＰＤ−Ｌ２相互作用の遮断に基づく治療効果を示す。
【０３０２】
別の実施形態では、治療効果が、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）をさらに含む、本発明による使用のための、本発明の抗体、本発明の核酸分子、発現ベクター、または薬学的組成物が提供される。「抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）」は、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性とも呼ばれ、免疫系のエフェクター細胞が、その膜表面抗原が特異的抗体によって結合された、標的細胞を能動的に溶解する細胞媒介性免疫防御のメカニズムである。
【０３０３】
さらなる実施形態では、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体の段階希釈を使用して、ＡＰＣ（抗原提示細胞）とＴ細胞との間の相互作用を模倣するシステムにおいて、Ｔ細胞シグナル伝達を決定するための細胞株ベースのバイオアッセイが提供される。
【０３０４】
またさらなる実施形態では、上記のようなアッセイにおける使用のための、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体を含むキットが提供される。
【０３０５】
キットは、所定量の試薬と、アッセイを行うための指示とのパッケージされた組み合わせであり得る。抗体が酵素で標識される場合、キットは、酵素によって必要とされる基質および補因子（例えば、検出可能なクロモフォアまたはフルオロフォアを提供する基質前駆体）を含むであろう。加えて、安定剤、緩衝剤（例えば、ブロック緩衝剤または溶解緩衝剤）などのような他の添加剤が含まれ得る。様々な試薬の相対量は、アッセイの感度を実質的に最適化する試薬の溶液中の濃度を提供するために広く変動し得る。特に、試薬は、溶解時に適切な濃度を有する試薬溶液を提供する賦形剤を含む、通常は凍結乾燥された、乾燥粉末として提供され得る。キットはまた、追加の試薬、例えば、非特異的結合を低減するための遮断試薬、洗浄試薬、酵素基質などを含み得る。
【０３０６】
本発明は、以下の実施形態に関する。
１．ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合が遮断されるようにヒトＰＤ−Ｌ２に特異的に結合する、抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体またはその抗原結合部分であって、
抗体、もしくはその抗原結合部分が、それぞれ、以下の項目ａ）〜ｑ）のいずれかで定義される、重鎖可変領域および軽鎖可変領域に含まれる６つのＣＤＲ配列を含むか、または
抗体、もしくはその抗原結合部分が、それぞれ、以下の項目ａ）〜ｑ）のいずれかで定義される、重鎖可変領域および軽鎖可変領域に含まれる６つのＣＤＲ配列を含み、特に本明細書で定義される保存的置換において、ＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、抗体またはその抗原結合部分：
ａ）配列番号２の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１０の配列を有する軽鎖可変領域、
ｂ）配列番号１８の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２６の配列を有する軽鎖可変領域、
ｃ）配列番号３４の配列を有する重鎖可変領域および配列番号４２の配列を有する軽鎖可変領域、
ｄ）配列番号５０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号５８の配列を有する軽鎖可変領域、
ｅ）配列番号５０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号６６の配列を有する軽鎖可変領域、
ｆ）配列番号９６の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１０４の配列を有する軽鎖可変領域、
ｇ）配列番号１１２の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１２０の配列を有する軽鎖可変領域、
ｈ）配列番号１２８の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１３２の配列を有する軽鎖可変領域、
ｉ）配列番号１４０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１４６の配列を有する軽鎖可変領域、
ｊ）配列番号１５２の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１６０の配列を有する軽鎖可変領域、
ｋ）配列番号１６６の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１７４の配列を有する軽鎖可変領域、
ｌ）配列番号９６の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２１２の配列を有する軽鎖可変領域、
ｍ）配列番号１４０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２１８の配列を有する軽鎖可変領域、
ｎ）配列番号２２０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号１６０の配列を有する軽鎖可変領域、
ｏ）配列番号２２０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２６の配列を有する軽鎖可変領域、
ｐ）配列番号２２０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２２６の配列を有する軽鎖可変領域、または
ｑ）配列番号２２０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号２３０の配列を有する軽鎖可変領域。
【０３０７】
２．
ａ）配列番号４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号６のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１６のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｂ）配列番号２０のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号２４のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２８のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３２のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｃ）配列番号３６のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３８のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号４０のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号４４のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４６のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号４８のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｄ）配列番号５２のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号５４のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号５６のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号６０のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号６２のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号６４のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｅ）配列番号５２のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号５４のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号５６のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号６０のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号６２のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号６８のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｆ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１００のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１０２のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１０６のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１０８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１１０のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｇ）配列番号１１４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１１６のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１１８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１２２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１２４のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１２６のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｈ）配列番号１１４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３０のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１１８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１３４のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１３６のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１３８のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｉ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１４４のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１０６のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１５０のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｊ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１５６のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１６４のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｋ）配列番号１６８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７０のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１７２のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１７６のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１８０のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｌ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１００のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１０２のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２１４のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１０８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２１６のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｍ）配列番号９８のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１４４のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２１４のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４８のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１５０のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｎ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１６４のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｏ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２８のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３２のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｏ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２８のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２２８のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｐ）配列番号１５４のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２２のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５８のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６２のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３２のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｒ）ａ）〜ｑ）に示されるＣＤＲ−Ｈ１およびＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３およびＣＤＲ−Ｌ１およびＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３のバリアントを含む、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含み、特に本明細書で定義される保存的置換において、ＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、実施形態１記載の抗体または抗原結合部分。
【０３０８】
３．重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、
ａ）重鎖可変領域が、配列番号２の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号１０の配列を有するか、
ｂ）重鎖可変領域が、配列番号１８の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号２６の配列を有するか、
ｃ）重鎖可変領域が、配列番号３４の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号４２の配列を有するか、
ｄ）重鎖可変領域が、配列番号５０の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号５８の配列を有するか、
ｅ）重鎖可変領域が、配列番号５０の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号６６の配列を有するか、
ｆ）重鎖可変領域が、配列番号９６の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号１０４の配列を有するか、
ｇ）重鎖可変領域が、配列番号１１２の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号１２０の配列を有するか、
ｈ）重鎖可変領域が、配列番号１２８の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号１３２の配列を有するか、
ｉ）重鎖可変領域が、配列番号１４０の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号１４６の配列を有するか、
ｊ）重鎖可変領域が、配列番号１５２の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号１６０の配列を有するか、
ｋ）重鎖可変領域が、配列番号１６６の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号１７４の配列を有するか、
ｌ）重鎖可変領域が、配列番号９６の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号２１２の配列を有するか、
ｍ）重鎖可変領域が、配列番号１４０の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号２１８の配列を有するか、
ｎ）重鎖可変領域が、配列番号２２０の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号１６０の配列を有するか、
ｏ）重鎖可変領域が、配列番号２２０の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号２６の配列を有するか、
ｐ）重鎖可変領域が、配列番号２２０の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号２２６の配列を有するか、
ｑ）重鎖可変領域が、配列番号２２０の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号２３０の配列を有するか、または
ｏ）ａ）〜ｑ）に示される重鎖可変領域および／もしくは軽鎖可変領域のバリアントであって、バリアント配列が、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の全体的な相同性を有し、ただし、特に本明細書で定義される保存的置換において、ＣＤＲ配列中の最大１、２、３個のアミノ酸残基が置換されている、実施形態１または２に記載の抗体または抗原結合部分。
【０３０９】
４．抗体またはその抗原結合部分が、ａ）〜ｄ）に列挙される機能的特徴
ａ）参照抗体ＭＩＨ１８および２４Ｆ．１０Ｃ１２と比較してより高いＰＤ−Ｌ２への結合親和性、
ｂ）参照抗体ＭＩＨ１８および２４Ｆ．１０Ｃ１２と比較してより効率的なＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２結合の遮断、
ｃ）参照抗体ＭＩＨ１８および２４Ｆ．１０Ｃ１２と比較してより効率的なＴＣＲ媒介性ＩＬ−２発現の活性化、ならびに
ｄ）参照抗体ＭＩＨ１８および２４Ｆ．１０Ｃ１２と比較してより高いＴＣＲ媒介性ＩＬ−２発現時のＩＬ−２レベルの誘導、のうちの少なくとも１つ、好ましくは２、３、または４つを満たす、実施形態１〜３のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合部分抗体。
【０３１０】
５．ヒト化または完全ヒト抗体である、実施形態１〜４のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合部分。
【０３１１】
６．ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプである、実施形態１〜５のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合部分。
【０３１２】
７．ＩｇＧ１アイソタイプである、実施形態１〜６のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合部分。
【０３１３】
８．抗体または抗原結合部分が、単一特異性、二重特異性、三重特異性、または多重特異性抗体もしくはその抗原結合部分である、実施形態１〜７のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合部分。
【０３１４】
９．抗体またはその抗原結合部分が、ＰＤ−１とは別の受容体へのＰＤ−Ｌ２の結合を遮断する、実施形態１〜８のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合部分。
【０３１５】
１０．実施形態１〜９のいずれかの抗体または抗原結合部分のいずれかと同じエピトープに結合し、かつ／または同じエピトープについて競合する、抗体またはその抗原結合部分。
【０３１６】
１１．実施形態１〜１０のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合断片をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子。
【０３１７】
１２．
ａ）配列番号３のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号５のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号７のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１１のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１３のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１５のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｂ）配列番号１９のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２１のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号２３のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２７のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２９のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３１のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｃ）配列番号３５のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号３７のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号３９のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号４３のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号４５のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号４７のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｄ）配列番号５１のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号５３のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号５５のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号５９のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号６１のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号６３のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｅ）配列番号５１のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号５３のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号５５のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号５９のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号６１のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号６７のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｆ）配列番号９７のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号９９のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１０１のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１０５のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１０７のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１０９のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｇ）配列番号１１３のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１１５のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１１７のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１２１のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１２３のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１２５のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｈ）配列番号１１３のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２９のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１１７のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１３３のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１３５のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１３７のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｉ）配列番号９７のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４１のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１４３のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１０５のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４７のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１４９のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｊ）配列番号１５３のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１５５のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５７のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６１のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２９のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１６３のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｋ）配列番号１６７のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１６９のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１７１のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１７５のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１７７のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１７９のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｌ）配列番号９７のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号９９のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１０１のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２１３のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１０７のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２１５のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｍ）配列番号９７のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４１のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１４３のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２１３のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号１４７のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１４９のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｎ）配列番号１５３のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２１のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５７のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６１のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２９のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号１６３のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｏ）配列番号１５３のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２１のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５７のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号２７のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２９のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３１のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｐ）配列番号１５３のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２１のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５７のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６１のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２９のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号２２７のＣＤＲ−Ｌ３、または
ｑ）配列番号１５３のＣＤＲ−Ｈ１、配列番号２２１のＣＤＲ−Ｈ２、配列番号１５７のＣＤＲ−Ｈ３、および配列番号１６１のＣＤＲ−Ｌ１、配列番号２９のＣＤＲ−Ｌ２、配列番号３１のＣＤＲ−Ｌ３を含む、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む、実施形態１１に記載の核酸分子。
【０３１８】
１３．重鎖可変領域および軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含み、
ａ）重鎖可変領域が、配列番号１の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号９の配列を有するか、
ｂ）重鎖可変領域が、配列番号１７の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号２５の配列を有するか、
ｃ）重鎖可変領域が、配列番号３３の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号４１の配列を有するか、
ｄ）重鎖可変領域が、配列番号４９の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号５７の配列を有するか、
ｅ）重鎖可変領域が、配列番号４９の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号６５の配列を有するか、
ｆ）重鎖可変領域が、配列番号９５の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号１０３の配列を有するか、
ｇ）重鎖可変領域が、配列番号１１１の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号１１９の配列を有するか、
ｈ）重鎖可変領域が、配列番号１２７の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号１３１の配列を有するか、
ｉ）重鎖可変領域が、配列番号１３９の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号１４５の配列を有するか、
ｊ）重鎖可変領域が、配列番号１５１の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号１５９の配列を有するか、
ｋ）重鎖可変領域が、配列番号１６５の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号１７３の配列を有するか、
ｌ）重鎖可変領域が、配列番号９５の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号２１１の配列を有するか、
ｍ）重鎖可変領域が、配列番号１３９の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号２１７の配列を有するか、
ｎ）重鎖可変領域が、配列番号２１９の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号１５９の配列を有するか、
ｏ）重鎖可変領域が、配列番号２１９の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号２５の配列を有するか、
ｐ）重鎖可変領域が、配列番号２１９の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号２２５の配列を有するか、または
ｑ）重鎖可変領域が、配列番号２１９の配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号２２９の配列を有する、実施形態１１に記載の核酸分子。
【０３１９】
１４．実施形態１１〜１３のいずれか１つに記載のヌクレオチド配列を含む、発現ベクター。
【０３２０】
１５．実施形態１４に記載の発現ベクターを含む、細胞。
【０３２１】
１６．実施形態１〜１０のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合断片を含む、薬学的組成物。
【０３２２】
１７．実施形態１１〜１３のいずれか１つに記載の核酸分子または実施形態１４に記載の発現ベクターを含む、薬学的組成物。
【０３２３】
１８．薬学的に許容される担体および／または賦形剤をさらに含む、実施形態１６または実施形態１７に記載の薬学的組成物。
【０３２４】
１９．ヒト療法における使用のための、実施形態１〜１０のいずれか１つに記載の抗体もしくは抗原結合部分、実施形態１１〜１３のいずれか１つに記載の核酸分子、実施形態１４に記載の発現ベクター、または実施形態１６〜１８のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
【０３２５】
２０．ヒト療法が、癌療法である、実施形態１９に記載の使用のための、抗体もしくは抗原結合部分、核酸分子、発現ベクター、または薬学的組成物。
【０３２６】
２１．治療効果が、ＰＤ−１−ＰＤ−Ｌ２相互作用の遮断に基づく、実施形態１９または実施形態２０に記載の使用のための、抗体もしくは抗原結合部分、核酸分子、発現ベクター、または薬学的組成物。
【０３２７】
２２．治療効果が、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）をさらに含む、実施形態１９〜２１に記載の使用のための、抗体もしくは抗原結合部分、核酸分子、発現ベクター、または薬学的組成物。
【０３２８】
２３．好ましくは化学療法、抗体療法、および／または放射線療法などの他の療法と組み合わせた、実施形態１９〜２２のいずれか１つに記載の使用のための、抗体もしくは抗原結合部分、核酸分子、発現ベクター、または薬学的組成物。
【０３２９】
２４．実施形態１〜１０のいずれか１つに記載の抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体の段階希釈を使用して、ＡＰＣ（抗原提示細胞）とＴ細胞との間の相互作用を模倣するシステムにおいて、Ｔ細胞シグナル伝達を決定するための、細胞株ベースのバイオアッセイ。
【０３３０】
２５．実施形態２４に記載のアッセイにおける使用のための、実施形態１〜１０のいずれか１つに記載の抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体を含む、キット。
【実施例】
【０３３１】
以下は、本発明の方法および組成物の例である。上記で提供される一般的な説明を前提として、様々な他の実施形態が実施され得ることが理解される。
【０３３２】
実施例１：ヒト抗ＰＤ−Ｌ２抗体の生成および精製
抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を発現するトランスジェニックラットを使用して生成し（内因性ラット免疫グロブリン遺伝子座、ＯｍｎｉＲａｔ（登録商標）を置き換えることによって）、これは詳細に報告されている（Ｏｓｂｏｒｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９０：１４８１−１４９０，２０１３、およびＷＯ１４／０９３９０８）。６匹のラットを、ヒトＰＤ−Ｌ２の細胞外ドメインをコードする合成ｃＤＮＡでの遺伝子免疫化によって免疫化した（Ａｌｄｅｖｒｏｎ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ）。リンパ節を、最も良好な免疫応答を有する３匹のラットから採取し、ハイブリドーマを生成するために使用した。個々のハイブリドーマクローンからの上清を、細胞ベースのバイオアッセイにおいて、細胞表面上に発現したヒトＰＤ−Ｌ２への結合について、続いてＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ２相互作用の遮断能力についてスクリーニングした。高機能遮断活性を示す対応するハイブリドーマをサブクローニングし、個々のクローンをそれらの生物学的活性について再調査し、配列決定に供した。この技法を使用して、いくつかのキメラ抗ＰＤ−Ｌ２抗体（すなわち、ヒトＶＨおよびヒトＶＬ−ＣＬならびにラット重鎖定常ドメインを有する抗体）を得た。この方法で生成された例示的な抗体は、１Ａ１−Ｃ２、２Ｃ４−Ｅ４、８Ｂ５−Ｂ１、１１Ｃ１１−Ｈ５、１９Ｃ３−Ｂ３、１０Ｄ１−Ｇ１、７Ｈ５−Ｃ５、９Ａ３−Ｃ７、１０Ａ９−Ｄ２、１９Ｂ３−Ｂ３、１２Ａ１−Ｄ４と指定された。
【０３３３】
個々のハイブリドーマ上清からの、ヒトＶＨおよびラットＦｃおよびヒトＶＬ−ＣＬを有する抗ＰＤ−Ｌ２キメラ抗体を、ヒト軽鎖特異的樹脂（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから購入された、ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（商標）−Ｋａｐｐａ−ＸＬ、またはＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ  ＬＣ−Ｌａｍｂｄａ−Ｈｕ）で、データシートに記載されるガイドラインに従って精製した。溶出抗体をＰＢＳに対して透析し、最終濃度を、Ｐ３３０ナノ体積分光光度計（Ｉｍｐｌｅｎ）およびＢｒａｄｆｏｒｄアッセイを使用して決定した。
【０３３４】
実施例２：重鎖および軽鎖可変領域のヌクレオチドおよびアミノ酸配列
ヒト重鎖および軽鎖可変領域は、次世代配列アプローチ（Ａｂｓｏｌｕｔｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｌｔｄ、Ｏｘｆｏｒｄ、ＧＢ）を使用して配列決定した。表３は、ヒト抗ＰＤ−Ｌ２抗体の重鎖および軽鎖可変領域ならびにＣＤＲのＤＮＡ配列識別子を示す。対応するアミノ酸配列識別子は、表４に示される。抗体は、ラットＩｇＧ２ｂ  ＦｃならびにヒトＶＨおよび完全ヒト軽鎖（カッパまたはラムダ）を有する。特定のＦｃアイソタイプを有する抗体は、異なるＦｃアイソタイプを有する抗体に変換することができる（例えば、ラットＩｇＧ２ｂを有する抗体は、ヒトＩｇＧ１などを有する抗体に変換することができる）。可変ドメイン（ＣＤＲを含む）は、表３および表４における配列識別子によって示されるものと同じままであり、したがって、抗原への結合特性は、Ｆｃドメインの性質にかかわらず、同一であると予想される。
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【０３３５】
実施例３：ＦＡＣＳによって決定されるヒトＰＤ−Ｌ２を発現する細胞への精製抗ＰＤ−Ｌ２抗体の結合ＥＣ５０
完全長ヒトＰＤ−Ｌ２を安定に発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞への抗ＰＤ−Ｌ２抗体の結合を、ＦＡＣＳによって決定した。１．５ｘ１０５個のＣＨＯ−Ｋ１／ｈＰＤ−Ｌ２を、５０μｌのＦＡＣＳｗａｓｈでの段階希釈（０．２５ｎｇ／ｍｌ−４μｇ／ｍｌ）を有する個々の抗ＰＤ−Ｌ２抗体と４℃で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳｗａｓｈで３回洗浄後、細胞を、ＡＰＣ標識ヤギ抗ラットＩｇＧ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、Ｃｌｏｎｅ  Ｐｏｌｙ４０５４）を１：２０００希釈で含有する１００μｌのＦＡＣＳｗａｓｈ緩衝剤に４℃で２０分間再懸濁し、ＦＡＣＳｗａｓｈで３回洗浄し、その後ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒでのＦＡＣＳ分析に供した。各抗体の抗体濃度およびＥＣ５０値に関する最大結合のパーセンテージを計算し、用量応答曲線を、図１に示されるように、非線形曲線あてはめ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を使用して視覚化した。
【０３３６】
ＮＣＩ−Ｈ２２６（ヒト肺扁平上皮癌、ＡＴＣＣ）細胞の内因性ＰＤ−Ｌ２への抗ＰＤ−Ｌ２抗体の結合を、ＦＡＣＳによって測定した。
【０３３７】
５０μｌのＦＡＣＳｗａｓｈでの段階希釈（０．２５ｎｇ／ｍｌ−４μｇ／ｍｌ）を有する個々の抗ＰＤ−Ｌ２抗体を、１．５ｘ１０５個のＮＣＩ−Ｈ２２６細胞と４℃で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳｗａｓｈで３回洗浄後、細胞をＡＰＣ標識ヤギ抗ラットＩｇＧ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、Ｃｌｏｎｅ  Ｐｏｌｙ４０５４）を１：２０００希釈で含有する１００μｌのＦＡＣＳｗａｓｈ緩衝剤に４℃で２０分間再懸濁し、ＦＡＣＳｗａｓｈで３回洗浄し、その後ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒでのＦＡＣＳ分析に供した。各抗体の抗体濃度およびＥＣ５０値に関する最大結合のパーセンテージを分析し、図２に示されるように非線形曲線あてはめ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を使用して視覚化した。
【０３３８】
実施例４：フローサイトメトリーによって決定されるヒトＰＤ−Ｌ２へのヒトＰＤ−１結合の遮断ＩＣ５０
ヒトＰＤ−Ｌ２を安定に発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞へのマウスＦｃタンパク質（ｈＰＤ−１−ｍＦｃ）と融合したヒトＰＤ−１の結合を阻害するヒト抗ＰＤ−Ｌ２抗体の能力を、ＦＡＣＳによって評価した。高抗原濃度（ＦＡＣＳ）：段階希釈（０．２５ｎｇ／ｍｌ−４μｇ／ｍｌ）を有する個々の抗ＰＤ−Ｌ２抗体を、ヒトＰＤ−Ｌ２を発現する１．５ｘ１０５個のＣＨＯ−Ｋ１細胞と４℃で３０分間インキュベートした。未結合抗体を除去し、細胞をＦＡＣＳｗａｓｈ緩衝剤で２回洗浄した。細胞を、０．５μｇ／ｍｌの組換えｈＰＤ−１−ｍＦｃ（ＩｇＧ２ａ、ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を含有する５０ｕｌのＦＡＣＳｗａｓｈ緩衝剤に再懸濁し、４℃で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳｗａｓｈで２回洗浄後、ＰＥコンジュゲートラット抗マウスＩｇＧ２ａ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を１：２００希釈で含有する１００μｌのＦＡＣＳｗａｓｈに細胞を再懸濁し、暗所で２０分間４℃でインキュベートした。ＦＡＣＳｗａｓｈで３回洗浄後、結合したｈＰＤ−１−ｍＦｃを検出し、ＦＡＣＳ分析によって定量化した。いくつかのウェルを、抗マウスＩｇＧを有するか、または有さない、非特異的ヒトまたはラットＩｇＧとインキュベートして、ＰＤ−Ｌ２／ＰＤ−１結合の最小（０％）および最大（１００％）レベルを設定した。各抗体の抗体濃度およびＩＣ５０値に関する最大リガンド結合のパーセンテージを分析し、図３に示されるように非線形曲線あてはめ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を使用して視覚化した。
【０３３９】
実施例５：フローサイトメトリーによって決定されるヒトＰＤ−１へのヒトＰＤ−Ｌ２結合の遮断ＩＣ５０
完全長ヒトＰＤ−１を安定に発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞へのヒトＰＤ−Ｌ２−Ｆｃ−ビオチンタンパク質の結合を阻害するヒト抗ＰＤ−Ｌ２抗体の能力を、ＦＡＣＳによって評価した。低抗原濃度（ＦＡＣＳ）：段階希釈（０．０３ｎｇ／ｍｌ−０．５μｇ／ｍｌ）を有する個々の抗ＰＤ−Ｌ２抗体および１００μｌの総体積中（５ｎｇ／ｍｌ、１００ｐＭ）の濃度の組換えヒトＰＤ−Ｌ２−Ｆｃ−ビオチン（ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を、４℃で６０分間インキュベートした。抗体−タンパク質混合物を次いで、ヒトＰＤ−１を発現する１．５×１０５個のＨＥＫ２９３細胞に加え、４℃で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳｗａｓｈ緩衝剤で２回洗浄後、ＰＥコンジュゲートストレプトアビジンを含有する１００ｕｌのＦＡＣＳｗａｓｈ緩衝剤に細胞を再懸濁し、暗所で２０分間４℃でインキュベートした。ＦＡＣＳｗａｓｈで２回洗浄後、細胞表面上に結合したＰＤ−Ｌ２−Ｆｃ−ビオチンを検出し、ＰＥ標識ストレプトアビジンのＦＡＣＳ分析によって定量化した。いくつかのウェルを、ストレプトアビジン−ＰＥを有するか、または有さない、非特異的ヒトまたはラットＩｇＧとインキュベートして、ＰＤ−Ｌ２／ＰＤ−１結合の最小（０％）および最大（１００％）レベルを設定した。各抗体の抗体濃度およびＩＣ５０値に関する最大リガンド結合のパーセンテージを分析し、図４に示されるように非線形曲線あてはめ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を使用して視覚化した。
【０３４０】
実施例６：ＥＬＩＳＡを介してＩＬ−２分泌を測定することによる、操作されたＴ細胞バイオアッセイモデルに対する抗ＰＤ−Ｌ２抗体の効果の決定
抗ＰＤ−Ｌ２抗体によるＴ細胞活性化の増強を、細胞ベースのバイオアッセイモデルで調査した。ヒトＰＤ−１およびヒトＰＤ−Ｌ２を安定に発現する操作されたＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞株は、連続トランスフェクションおよび選択によって確立し、ＦＡＣＳによって検証した。５ｘ１０５個のＪｕｒｋａｔヒトＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ２細胞を、個々の抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体の段階希釈（０．２５ｎｇ／ｍｌ−４μｇ／ｍｌ）で、１０％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩの１００μｌの総体積中の０．５μｇ／ｍｌの抗ヒトＣＤ３（Ｈｉｔ３、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）抗体の存在下で、９６ウェル組織培養プレートにおいて１８時間インキュベートした。遠心分離後、上清を収集し、ＩＬ−２  ＥＬＩＳＡアッセイ（ＥＬＩＳＡ  Ｍａｘ  Ｄｅｌｕｘｅ、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）に、製造業者データシートに従って供した。ＩＬ−２レベルは、４５０ｎｍ−６５０ｎｍの吸光度によって、ＩＬ−２標準曲線を使用して決定した。試験された抗ＰＤ−Ｌ２抗体の効力を比較するために、ＥＣ５０値を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  Ｓｏｆｔｗａｒｅを使用して、８点応答曲線の対数変換された非線形あてはめから計算した。ＩＬ−２放出によって表されるＴ細胞活性化の増強は、図５に示される。
【０３４１】
実施例７：ヒトＰＤ−Ｌ１、マウスＰＤ−Ｌ２、およびカニクイザルＰＤ−Ｌ２へのヒト抗ＰＤ−Ｌ２抗体の結合
マウスＰＤ−Ｌ２、ヒトＰＤ−Ｌ１、またはカニクイザルＰＤ−Ｌ２に結合する抗ＰＤ−Ｌ２抗体の能力を、ＦＡＣＳによって決定した。完全長サルＰＤ−Ｌ２、マウスＰＤ−Ｌ２、またはヒトＰＤ−Ｌ１を安定に発現するＨＥＫ２９３細胞を確立し、サブクローニングし、検証した。結合アッセイについて、１００μｌのＦＡＣＳｗａｓｈ緩衝剤中の１．５ｘ１０５個の細胞を、個々の抗ＰＤ−Ｌ２抗体（０．５μｇ／ｍｌ）と３０分間インキュベートした。３回の洗浄後、細胞を、ＦＩＴＣ標識ヤギ抗ラットＩｇＧ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ、１：１０００）またはＡＰＣ標識ヤギ抗ラットＩｇＧ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、Ｃｌｏｎｅ  Ｐｏｌｙ４０５４）を１：２０００希釈で含有するＦＡＣＳｗａｓｈ緩衝剤に４℃で２０分間再懸濁し、３回洗浄し、その後ＦＡＣＳ分析に供した。ＦＡＣＳデータは、ＦｌｏｗＪｏ  Ｓｏｆｔｗａｒｅを使用して分析し、二次抗体のみの対照を含むヒストグラムとして描写した。マウスＰＤ−Ｌ２およびヒトＰＤ−Ｌ１への抗ＰＤ−Ｌ２抗体の結合の不在は、図６および図７に示される。ヒト抗ＰＤ−Ｌ２抗体は、図８に示されるように、カニクイザルＰＤ−Ｌ２に結合する。
【０３４２】
実施例８：完全ヒト抗ＰＤ−Ｌ２抗体および参照抗ＰＤ−Ｌ２アナログ抗体のクローニングおよび発現
本発明の抗ＰＤ−Ｌ２抗体の重鎖および軽鎖可変ドメインをコードするＤＮＡ配列（ＶＨ配列番号：２、１８、３４、５０、９６、１１２、１２８、１４０、１５２、１６６、およびＶＬ配列番号：１０、２６、４２、５８、６６、１０４、１２０、１３２、１４６、１６０、１７４）を、ヒトＩｇＧ１重鎖およびカッパ軽鎖（ｍＡｂ：１Ａ１−Ｃ２、２Ｃ４−Ｅ４、１０Ｄ１−Ｇ１、１０Ａ９−Ｄ２、１９Ｂ３−Ｂ３、および１２Ａ１−Ｄ４）またはラムダ軽鎖（ｍＡｂ：８Ｂ５−Ｂ１、１１Ｃ１１−Ｈ５、１９Ｃ３−Ｃ３、７Ｈ５−Ｃ５、および９Ａ３−Ｃ７）を含む発現ベクターにクローニングした。ＨＥＫ２９３細胞を、無血清条件下で標準的な方法を使用して、重鎖および軽鎖をコードする発現ベクターでトランスフェクトした。得られた抗体上清を、タンパク質Ａクロマトグラフィーを使用して精製した。
【０３４３】
ヒト化抗ＰＤ−Ｌ２抗体２４Ｆ．１０Ｃ１２、ＶＨ２／ＶＫ２、およびＶＨ４／ＶＫ４の抗体アナログの重鎖および軽鎖可変ドメインをコードするＤＮＡ配列は、ＰＣＴ特許出願公開ＷＯ２０１０／０３６９５９  Ａ２から得た（ＤＮＡ配列番号：ＶＨ２およびＶＫ２についてそれぞれ６８および７０、ＶＨ４およびＶＫ４について７３および７５）。対応するＤＮＡ配列を合成し、ヒトＩｇＧ１重鎖またはカッパ軽鎖定常ドメインのコード配列を含む発現ベクターにクローニングして、完全長抗体を得た。ＨＥＫ２９３細胞を、無血清条件下で標準的なトランスフェクション方法を使用して、得られた発現プラスミドでトランスフェクトした。抗体上清を、標準的なタンパク質Ａクロマトグラフィーを使用して精製した。
【０３４４】
実施例９：ＥＬＩＳＡによって測定される操作されたＴ細胞バイオアッセイにおけるヒト抗ＰＤ−Ｌ２抗体による誘導されたＩＬ−２分泌
抗ＰＤ−Ｌ２抗体によるＴ細胞活性化の増強を、細胞ベースのバイオアッセイモデルで調査した。５ｘ１０５個のＪｕｒｋａｔヒトＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ２細胞を、個々の抗ヒトＰＤ−Ｌ２抗体または参照アナログ抗体の段階希釈（０．２５ｎｇ／ｍｌ−４μｇ／ｍｌ）で、１０％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩの１００μｌの総体積中の０．５μｇ／ｍｌの抗ヒトＣＤ３（Ｈｉｔ３、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）抗体の存在下で、９６ウェル組織培養プレートにおいて１８時間インキュベートした。遠心分離後、上清を収集し、ＩＬ−２  ＥＬＩＳＡアッセイ（ＥＬＩＳＡ  Ｍａｘ  Ｄｅｌｕｘｅ、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）に、製造業者データシートに従って供した。ＩＬ−２レベルは、４５０ｎｍ−６５０ｎｍの吸光度によって、ＩＬ−２標準曲線を使用して決定した。８点応答曲線の対数変換された非線形あてはめを計算し、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  Ｓｏｆｔｗａｒｅを使用して描写した。ＩＬ−２放出によって表されるＴ細胞活性化有効性に関して、アナログ抗体ＶＫ２／ＶＨ２およびＶＫ４／ＶＨ４に対する本発明の抗ＰＤ−Ｌ２抗体の優位性は、図１７に示される。Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍを使用して曲線から計算された上位Ｉｌ−２値は、図１８に示される。本発明のヒトＰＤ−Ｌ２抗体が参照アナログ抗体（ＶＫ２／ＶＨ２およびＶＫ４／ＶＨ４）と比較してより高い効力を有することを示す。
【０３４５】
実施例１０：フローサイトメトリーによって決定されるヒトＰＤ−１へのヒトＰＤ−Ｌ２結合の遮断ＩＣ５０
完全ヒト抗ＰＤ−Ｌ２抗体は、完全長ヒトＰＤ−１を安定に発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞へのヒトＰＤ−Ｌ２−Ｆｃ−ビオチンタンパク質の結合を阻害するそれらの能力において、アナログ参照抗ＰＤ−Ｌ２抗体と比較した。低抗原濃度（ＦＡＣＳ）：段階希釈（０．０３ｎｇ／ｍｌ−０．５μｇ／ｍｌ）を有する個々の抗ＰＤ−Ｌ２抗体および１００μｌの総体積中（５ｎｇ／ｍｌ、１００ｐＭ）の濃度の組換えヒトＰＤ−Ｌ２−Ｆｃ−ビオチン（ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を、４℃で６０分間インキュベートした。抗体−タンパク質混合物を次いで、ヒトＰＤ−１を発現する１．５×１０５個のＨＥＫ２９３細胞に加え、４℃で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳｗａｓｈ緩衝剤で２回洗浄後、ＡＰＣコンジュゲートストレプトアビジンを含有する１００ｕｌのＦＡＣＳｗａｓｈ緩衝剤に細胞を再懸濁し、暗所で２０分間４℃でインキュベートした。ＦＡＣＳｗａｓｈで２回洗浄後、細胞表面上に結合したＰＤ−Ｌ２−Ｆｃ−ビオチンを検出し、ＡＰＣ標識ストレプトアビジンのＦＡＣＳ分析によって定量化した。いくつかのウェルを、ストレプトアビジン−ＡＰＣを有するか、または有さない、非特異的ヒトまたはラットＩｇＧとインキュベートして、ＰＤ−Ｌ２／ＰＤ−１結合の最小（０％）および最大（１００％）レベルを設定した。各抗体の抗体濃度およびＩＣ５０値に関する最大リガンド結合のパーセンテージを分析し、非線形曲線あてはめ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を使用して視覚化した。ＩＣ５０値は、図１９に描写される。
【０３４６】
実施例１１：フローサイトメトリーによって決定されるヒトＰＤ−１へのヒトＰＤ−Ｌ２結合の遮断ＩＣ５０
ヒトＰＤ−Ｌ２を安定に発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞へのマウスＦｃタンパク質（ｈＰＤ−１−ｍＦｃ）と融合したヒトＰＤ−１の結合を阻害する完全ヒト抗ＰＤ−Ｌ２抗体と参照アナログ抗ＰＤ−Ｌ２抗体との能力の比較を、ＦＡＣＳによって評価した。高抗原濃度（ＦＡＣＳ）：段階希釈（０．２５ｎｇ／ｍｌ−４μｇ／ｍｌ）を有する個々の抗ＰＤ−Ｌ２抗体を、ヒトＰＤ−Ｌ２を発現する１．５ｘ１０５個のＣＨＯ−Ｋ１細胞と４℃で３０分間インキュベートした。未結合抗体を除去し、細胞をＦＡＣＳｗａｓｈ緩衝剤で２回洗浄した。細胞を、０．５μｇ／ｍｌの組換えｈＰＤ−１−ｍＦｃ（ＩｇＧ２ａ、ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を含有する５０ｕｌのＦＡＣＳｗａｓｈ緩衝剤に再懸濁し、４℃で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳｗａｓｈで２回洗浄後、ＡＰＣコンジュゲートラット抗マウスＩｇＧ２ａ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を１：２００希釈で含有する１００μｌのＦＡＣＳｗａｓｈに細胞を再懸濁し、暗所で２０分間４℃でインキュベートした。ＦＡＣＳｗａｓｈで３回洗浄後、結合したｈＰＤ−１−ｍＦｃを検出し、ＦＡＣＳ分析によって定量化した。いくつかのウェルを、抗マウスＩｇＧを有するか、または有さない、非特異的ヒトＩｇＧ１とインキュベートして、ＰＤ−Ｌ２／ＰＤ−１結合の最小（０％）および最大（１００％）レベルを設定した。各抗体のＩＣ５０値を分析し、非線形曲線あてはめ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を使用して視覚化した。標準誤差を含む表および棒グラフが図２０に示される。
【０３４７】
実施例１２：ＦＡＣＳによって決定されるヒトＰＤ−Ｌ２を発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞への完全ヒト抗ＰＤ−Ｌ２抗体の結合ＥＣ５０
完全長ヒトＰＤ−Ｌ２を安定に発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞への抗ＰＤ−Ｌ２抗体の結合を、ＦＡＣＳによって決定した。１．５ｘ１０５個のＣＨＯ−Ｋ１／ｈＰＤ−Ｌ２を、５０μｌのＦＡＣＳｗａｓｈでの段階希釈（０．２５ｎｇ／ｍｌ−４μｇ／ｍｌ）を有する個々の抗ＰＤ−Ｌ２抗体と４℃で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳｗａｓｈで３回洗浄後、細胞を、ＡＰＣ標識抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、Ｃｌｏｎｅ  ＨＰ６０１７）を１：１０００希釈で含有する１００μｌのＦＡＣＳｗａｓｈ緩衝剤に４℃で２０分間再懸濁し、ＦＡＣＳｗａｓｈで３回洗浄し、その後ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒでのＦＡＣＳ分析に供した。各抗体の抗体濃度およびＥＣ５０値に関する最大結合のパーセンテージを計算し、用量応答曲線を、図２１に示される非線形曲線あてはめ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を使用して視覚化した。
【０３４８】
実施例１３：ヒト抗ＰＤ−Ｌ２抗体１０Ｄ１−Ｇ１、１０Ａ９−Ｄ２、および１９Ｂ３−Ｂ３の最適化
配列変更の目的は、Ａｓｎ脱アミド化またはＭｅｔ酸化を防止することによって製造性を改善すること、またはヒトフレームワークアミノ酸残基を最も近い相同生殖系列残基に突然変異させることのいずれかであった。クローン１０Ｄ１−Ｇ１、１０Ａ９−Ｄ２、および１９Ｂ３−Ｂ３の軽鎖可変領域Ａｓｎ残基の望ましくない脱アミド化を防止し、クローン１９Ｂ３−Ｂ３の重鎖可変領域のＭｅｔ酸化部位を除去するため、以下の最適化された抗ＰＤ−Ｌ２バリアント：１０Ｄ１−Ｇ１  Ｎ３１Ｑ．Ｎ９２Ｑ．ＬＣ、１０Ａ９−Ｄ２  Ｎ３１Ｑ．ＬＣ、１９Ｂ３−Ｂ３  Ｍ２３Ｋ．Ｍ６３Ｌ．ＨＣ、１９Ｂ３−Ｂ３  Ｎ９２Ｑ．ＬＣ．Ｍ２３Ｋ．Ｍ６３Ｌ．ＨＣ、および１９Ｂ３−Ｂ３  Ｎ９２Ｙ．ＬＣ．Ｍ２３Ｋ．Ｍ６３Ｌ．ＨＣを生成した（表１３）。最適化された抗体バリアントをＨＥＫ２９３細胞において発現させ、記載されるように精製した。その後、ヒトＰＤ−Ｌ２を発現するＣＨＯ−Ｋ１への結合を試験する実験において、および操作されたＴ細胞バイオアッセイにおけるＩＬ−２発現の刺激において、それらを親モノクローナルと比較した。図２２ａ、図２２ｂ、図２２ｃおよび図２３ａ、図２３ｂ、図２３ｃから明らかなように、これらの最適化されたバリアントは、親バージョンと同一または類似の活性を示す。加えて、最適化されたバリアントは、親クローンと同一の種選択性を示す（図２４）。
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【０３４９】
前述の発明は、理解を明確にする目的で、例証および例としていくらか詳細に説明されてきたが、説明および例は、発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書に引用される全ての特許および科学文献の開示は、それらの参考文献全体が明示的に組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
2021515745.tif 000034
【図７Ａ−７Ｄ】
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【図７Ｅ−７Ｆ】
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【図８Ａ−８Ｃ】
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【図８Ｄ−８Ｆ】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３Ａ−１３Ｂ】
2021515745.tif 000043
【図１３Ｃ】
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【図１４Ａ−１４Ｃ】
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【図１４Ｄ】
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【図１４Ｅ】
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【図１４Ｆ】
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【図１４Ｇ】
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【図１５Ａ−１５Ｃ】
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【図１５Ｄ】
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【図１５Ｅ】
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【図１５Ｆ】
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【図１５Ｇ】
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【図１６Ａ−１６Ｂ】
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【図１６Ｃ】
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【図１６Ｄ】
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【図１６Ｅ】
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【図１６Ｆ】
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【図１６Ｇ】
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【図１７Ａ−１７Ｄ】
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【図１７Ｅ】
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【図１７Ｆ】
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【図１７Ｇ】
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【図１７Ｈ】
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【図１７Ｉ】
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【図１７Ｊ】
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【図１７Ｋ】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４Ａ】
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【図２４Ｂ】
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【図２４Ｃ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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