(57)【要約】  例えば、がんもしくは感染を処置する、または対象において免疫応答を誘導する、または標的分子を細胞においてもしくは細胞から送達もしくは発現するために使用される、核酸分子が本明細書に提供される。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ．構成的プロモーターをコードするポリヌクレオチド；
ｂ．標的分子または標的タンパク質をコードするポリヌクレオチド；
ｃ．場合により、リンカーをコードするポリヌクレオチド；
ｄ．場合により、ユビキチンをコードするポリヌクレオチド；
ｅ．場合により、該標的タンパク質の約７〜約２５アミノ酸残基の断片をコードするポリヌクレオチド；および
ｆ．核局在化シグナルをコードするポリヌクレオチド、
を含む核酸分子であって、
ここで、配列は互いに操作可能に結合され、ｂ）およびｃ）の配列、ならびに場合により配列ｄ）、ならびにｅ）は互いに操作可能に結合されて、全長タンパク質のアミノ酸配列；場合により該リンカーのアミノ酸配列、場合によりユビキチンのアミノ酸配列、および該標的タンパク質の約７〜約２５アミノ酸残基断片を含むタンパク質をコードする、前記核酸分子。
【請求項２】
ａ．構成的プロモーターをコードするポリヌクレオチド；
ｂ．標的タンパク質をコードするポリヌクレオチド；
ｃ．リンカーをコードするポリヌクレオチド；
ｄ．ユビキチンをコードするポリヌクレオチド；
ｅ．標的タンパク質の約７〜約２５アミノ酸残基の断片をコードするポリヌクレオチド；および
ｆ．核局在化シグナルをコードするポリヌクレオチド、
を含む、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項３】
構成的プロモーターは、ＥＦ−１、ＳＶ４０、ラウス肉腫ウイルス、およびマソン−ファイザーサルウイルス−ＣＴＥからなる群から選択される、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項４】
標的タンパク質をコードする配列は、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ２、Ｇｐ１２０、Ｇａｇ、Ｎｅｆ、Ｔａｔ、ヘマグルチニン（ＨＡ）、ノイラミニダーゼ（ＮＡ）、ＧＦＰ、およびＳＥＡＰからなる群から選択されるタンパク質をコードする配列である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項５】
標的タンパク質の断片をコードする配列は、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ２、Ｇｐ１２０、Ｇａｇ、Ｎｅｆ、Ｔａｔ、ヘマグルチニン（ＨＡ）、ノイラミニダーゼ（ＮＡ）、ＧＦＰ、およびＳＥＡＰからなる群から選択されるタンパク質の断片をコードする配列である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項６】
リンカーをコードする配列は、グリシン−セリンリンカーをコードする、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項７】
グリシンリンカーは、ＧＧＧＧＳ、ＧＧＧＧＡ、ＧＧＳＧＳの１つまたはそれ以上、またはこれらの任意の組合せのリピートを含む、請求項６に記載の核酸分子。
【請求項８】
グリシン−セリンリンカーをコードする配列は、ＧＧＧＧＳ、ＧＧＧＧＡ、および／またはＧＧＳＧＳの１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０リピートをコードする、請求項６に記載の核酸分子。
【請求項９】
ユビキチンは、単一のユビキチンタンパク質または２またはそれ以上のユビキチンタンパク質の鎖である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１０】
ユビキチンをコードする配列は、ＵＢＢ、ＵＢＣ、ＵＢＡ５２、およびＲＰＳ２７Ａからなる群から選択されるユビキチン分子をコードする、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１１】
標的タンパク質の約７〜約２５アミノ酸断片をコードする配列は、ＭＨＣ  ＩまたはＭＨＣ  ＩＩ  ＣＤ８＋免疫細胞または細胞傷害性Ｔリンパ球による免疫原性応答を誘発する、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１２】
核局在化シグナルをコードする配列はエレメント１である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項１３】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の核酸分子を含む医薬組成物。
【請求項１４】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の核酸分子を含む単離細胞。
【請求項１５】
請求項１４に記載の細胞を含む医薬組成物。
【請求項１６】
対象においてタンパク質に対する免疫応答を誘導する方法であって、該方法は、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の核酸配列を対象の細胞または対象に導入する工程を含み、前記核酸配列は、対象において細胞によって取り込まれる、前記方法。
【請求項１７】
核酸配列は、エレクトロポレーション、注射、超音波処理、トランスフェクション、形質導入、遺伝子銃、ナノ粒子による包含、リポ粒子、または核酸分子を対象または細胞に導入するために好適な他の投与の様式によって細胞または対象に導入される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記組織は、皮膚、筋肉、肺、胸、大腸、前立腺、卵巣、および腎臓からなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
標的タンパク質の断片をコードする配列は、ＭＨＣ  ＩまたはＭＨＣ  ＩＩ  ＣＤ８＋免疫細胞または細胞傷害性Ｔリンパ球による免疫原性応答を誘発する、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
対象においてがんを処置する方法であって、該方法は、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の核酸配列を対象の細胞に導入する工程を含み、前記核酸配列は、対象において細胞によって取り込まれ、ここでタンパク質はがん細胞において過剰発現されるタンパク質である、前記方法。
【請求項２１】
核酸配列は、エレクトロポレーション、注射、超音波処理、トランスフェクション、形質導入によって、または本明細書に記載のように細胞に導入される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記組織は、皮膚、筋肉、肺、胸、大腸、前立腺、卵巣、および腎臓からなる群から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
がんは、乳がん、三種陰性の乳がん、子宮がん、前立腺がん、卵巣がん、および結腸直腸がんからなる群から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
対象において感染性因子を処置する方法であって、該方法は、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の核酸配列を対象の細胞に導入する工程を含み、前記核酸配列は、対象において細胞によって取り込まれ、ここで標的タンパク質は、感染性因子によって発現されるタンパク質である、前記方法。
【請求項２５】
感染性因子は、ＨＩＶまたはインフルエンザからなる群から選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
感染性因子によって発現されるタンパク質は、Ｇｐ１２０、Ｇａｇ、Ｎｅｆ、Ｔａｔ、ヘマグルチニン（ＨＡ）、ノイラミニダーゼ（ＮＡ）等である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
構成的プロモーターをコードするポリヌクレオチド；
標的分子をコードするポリヌクレオチド；および
核局在化シグナルをコードするポリヌクレオチド
を含む核酸分子であって、
ここで、プロモーターおよび標的分子は互いに操作可能に結合される、前記核酸分子。
【請求項２８】
構成的プロモーターは、ＥＦ−１、ＳＶ４０、ラウス肉腫ウイルス、およびマソン−ファイザーサルウイルス−ＣＴＥからなる群から選択される、請求項２７に記載の核酸分子。
【請求項２９】
標的分子をコードする配列は、ＣＦＴＲ、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ２、Ｇｐ１２０、Ｇａｇ、Ｎｅｆ、Ｔａｔ、ヘマグルチニン（ＨＡ）、ノイラミニダーゼ（ＮＡ）、インシュリン、グルタミン酸、または増殖調節ｍｉＲＮＡ、ＧＦＰ、およびＳＥＡＰからなる群から選択されるタンパク質または分子をコードする配列である、請求項２７に記載の核酸分子。
【請求項３０】
標的分子をコードする配列は、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ２、Ｇｐ１２０、Ｇａｇ、Ｎｅｆ、Ｔａｔ、ヘマグルチニン（ＨＡ）、ノイラミニダーゼ（ＮＡ）、ＧＦＰ、およびＳＥＡＰからなる群から選択される分子の断片をコードする配列である、請求項２７に記載の核酸分子。
【請求項３１】
標的分子をコードする配列は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、またはアンチセンス分子をコードする配列である、請求項２７に記載の核酸分子。
【請求項３２】
核局在化シグナルをコードする配列はエレメント１である、請求項２７に記載の核酸分子。
【請求項３３】
請求項２７〜３２のいずれか１項に記載の核酸分子を含む宿主細胞。
【請求項３４】
請求項３３に記載の宿主細胞を含む医薬組成物。
【請求項３５】
請求項２７〜３２のいずれか１項に記載の核酸分子を含む医薬組成物。
【請求項３６】
プラスミドである、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項３７】
非挿入性プラスミドである、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項３８】
プラスミドである、請求項２７に記載の核酸分子。
【請求項３９】
非挿入性プラスミドである、請求項２７に記載の核酸分子。
【請求項４０】
分子を細胞に送達する方法であって、該方法は、請求項１〜１２または２７〜３２のいずれか１項に記載の核酸配列を有する細胞を対象の細胞または対象へと接触させる工程を含み、前記核酸配列は、対象において細胞によって取り込まれる、前記方法。
【請求項４１】
核酸配列は、エレクトロポレーション、注射、超音波処理、トランスフェクション、形質導入、遺伝子銃、ナノ粒子による包含、リポ粒子、または核酸分子を対象または細胞に導入するために好適な他の投与の様式によって細胞または対象に導入される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記細胞は、皮膚、筋肉、肺、胸、大腸、前立腺、卵巣、および腎臓細胞からなる群から選択される、請求項４０または４１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
免疫療法および遺伝子治療は、様々な疾患の処置に革命をもたらした。しかしながら、治療は依然として不完全であり、したがって、不都合な点および欠点を克服する新しい治療を提供する必要性が今日依然としてある。本開示は、これらの必要性ならびにその他を満たす。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００２】
いくつかの実施形態では、核酸分子が提供される。いくつかの実施形態では、核酸分子は、構成的プロモーターをコードする配列、標的全長タンパク質のアミノ酸配列をコードする配列または標的分子をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、分子は、リンカーのアミノ酸配列をコードする配列を含む。いくつかの実施形態では、分子は、ユビキチンのアミノ酸配列をコードする配列を含む。いくつかの実施形態では、分子は、標的タンパク質の少なくとも７アミノ酸残基の断片のような断片または標的タンパク質をコードする配列を含む。いくつかの実施形態では、分子は、核局在化シグナルをコードする配列を含む。いくつかの実施形態では、ヌクレオチド配列は、互いに操作可能に結合される。いくつかの実施形態では、分子は、全長タンパク質、リンカー、ユビキチンタンパク質、および全長タンパク質の断片を含むポリペプチドをコードする配列を含む。いくつかの実施形態では、全長タンパク質およびその断片の代わりに、核酸分子は、長さまたは配列が異なるが、断片にオーバーラップがあってよい断片である、同じタンパク質の２つの断片をコードする。いくつかの実施形態では、断片はコードされない。いくつかの実施形態では、断片がコードされない場合、リンカーおよびユビキチンをコードする配列は場合により、分子はそのような配列がなくてもよい。
【０００３】
いくつかの実施形態では、発現される様々な成分は互いに操作可能に結合されて、タンパク質または標的分子をコードする。例えば、いくつかの実施形態では、全長タンパク質のアミノ酸配列；リンカーのアミノ酸配列、ユビキチンのアミノ酸配列、および標的タンパク質の少なくとも７アミノ酸残基を含むタンパク質をコードする配列は、それぞれが発現されるように互いに操作可能に結合される。
【０００４】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供する核酸分子を含む医薬組成物が提供される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される賦形剤または担体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＴＮＦ−アルファ、ＣＴＬ４等に結合する抗体のようなさらなる治療薬を含む。他のタイプの治療薬は、本明細書で提供される核酸分子とも結合される。
【０００５】
いくつかの実施形態では、対象においてタンパク質に対する免疫応答を誘導する方法が提供される。いくつかの実施形態では、方法は、本明細書で提供する核酸分子を対象の細胞に導入する工程（例えば投与する工程）を含む。いくつかの実施形態では、核酸分子は細胞で発現され、免疫応答は核酸分子によってコードされる標的タンパク質に対して誘導される。
【０００６】
いくつかの実施形態では、対象においてがんを処置する方法が提供される。いくつかの実施形態では、方法は、本明細書で提供する核酸分子を対象に導入（例えば投与）し、がんを処置する工程を含む。いくつかの実施形態では、核酸分子によってコードされる標的タンパク質は、がん細胞または腫瘍において過剰発現されるタンパク質である。
【０００７】
いくつかの実施形態では、感染性因子または対象における感染を阻害する方法が提供される。いくつかの実施形態では、方法は、本明細書で提供する核酸分子を対象に導入（例えば投与）し、感染性因子を阻害する工程または対象において感染を処置する工程を含む。いくつかの実施形態では、核酸分子によってコードされる標的タンパク質は、感染性因子によって発現されるタンパク質である。
【０００８】
いくつかの実施形態では、標的分子を発現または送達する方法が提供される。いくつかの実施形態では、方法は、本明細書で提供する核酸分子を細胞または対象に導入（例えば投与）または接触させ、標的分子を細胞に発現または送達する工程を含む。いくつかの実施形態では、標的分子は細胞から分泌される。
【０００９】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供する核酸分子を含む細胞が提供される。いくつかの実施形態では、細胞は単離細胞である。いくつかの実施形態では、細胞はｅｘ−ｖｉｖｏであり、対象内ではない。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、当モル量のプラスミドＤＮＡがＨＥＫ２９３ヒト胚腎臓細胞の同一の培養にトランスフェクトされ、ＧＦＰ発現がトランスフェクション後２４時間モニターされる、実行した実験のデータを示す図である。上のパネルは対照を示し、下のパネルは細胞からのＧＦＰの発現を示す。
【図２】図２は、本明細書に記載のプラスミドのような核酸分子の非限定的な実施形態を示す図である。
【図３】図３は、本明細書に記載のプラスミドのような核酸分子の非限定的な実施形態を示す図である。
【図４】図４は、本明細書に記載のプラスミドのような核酸分子の非限定的な実施形態を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本明細書で提供する実施形態は、例えば、免疫原または標的分子として発現される外来ヌクレチオドのインテグレーションを可能にするプラットフォームを提供する。免疫原または分子の発現は、例えばがんおよび／または感染症を防止または処置する方法において使用される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する核酸分子は、いくつかのＤＮＡ断片を１つの核酸分子にアセンブルするために使用される。これは、例えばＤＮＡ断片の末端およびＤＮＡ断片内に見出される制限部位の重複性に関係なく行われる。本明細書で提供する核酸分子は、核内への急速なプラスミドのインテグレーションまたは取り込みを促進し得る核局在シグナル（ドメイン）のような核取り込み成分も含み得る。この取り込みは、免疫応答をもたらし得る。
【００１２】
例えば、本明細書で提供する核酸分子は細胞膜を通過することができ、核にトランスフェクトする。そのプロセスが生じると、外来ヌクレオチドは、次いで宿主細胞の転写および翻訳プロセスによって発現される。「外来ヌクレオチド」は、細胞に導入されるものであり、細胞のゲノムに天然ではない。例としては、本明細書で提供する核酸分子のいずれかを含み、例としては、本明細書で提供するプラスミドまたは他のタイプのベクターも含む。翻訳後、抗原は、細胞表面に到達すると、主要組織適合性複合体クラスＩタンパク質またはクラスＩＩタンパク質と合わせて提示される。いずれの特定の理論にも縛られないが、マクロファージまたは樹状細胞のような抗原提示細胞（ＡＰＣ）は外来抗原を取り込み、ＡＰＣが抗原性標的タンパク質および／または断片を提示するリンパ節に移動し、次いで本明細書で提供する核酸分子によってコードされる抗原に対する免疫応答をもたらす。
【００１３】
本明細書で使用する場合、単数形「１つの（a）」、「１つの（an）」、および「その（the）」は、他に文脈が明確に示さない限り複数の参照を含むことにも注意しなければならない。したがって、例えば、「細胞」の言及は、１つまたはそれ以上の細胞、および当業者に公知のそれらの等価物への言及である。
【００１４】
本明細書で使用する場合、用語「約」は、使用される数の数値のプラスまたはマイナス１０％を意味する。したがって、約５０％は４５％〜５５％の範囲を意味する。本開示は、特定の用語または数値を用語「約」で修飾するが、本開示は正確な数値も同様に開示し、単に便宜上書かれたのではないとも理解されるべきである。例えば、語句「約９〜約２５」は「９〜２５」も開示する。さらに、範囲、ＸおよびＹが任意の整数であるそのような語句「ＸからＹ」は終点を含む。例えば、語句「１から５」は、１、２、３、４、または５を意味する。
【００１５】
治療薬と合わせて使用される場合、「投与する工程」は、治療薬を直接標的組織に投与すること、または患者に治療薬を投与することを意味する。核酸分子を投与するために使用される投与の方法の非限定的な例としては、限定はされないが、トランスフェクション、エレクトロポレーション、注射、超音波処理、または他の公知の技術と組み合わせた任意の方法が挙げられる。そのような組合せ技術は、加熱および放熱を含む。いくつかの実施形態では、核酸分子は筋肉細胞に送達される。これは、例えば、エレクトロポレーションまたは他の好適な技術によって行われる。筋肉または他の組織型への核酸分子のエレクトロポレーションは、例えばエレクトロポレーション装置を使用して行われる。
【００１６】
用語「動物」は、本明細書で使用する場合、限定はされないが、ヒトならびに野生動物、飼育動物および家畜のような非ヒト脊椎動物を含む。
【００１７】
用語「クローニング」は、核酸分子をプラスミドのような別の核酸分子にライゲートするプロセスに関して使用される。クローニングした分子は、次いで複製、増幅または投与のため宿主細胞または対象に移行される。
【００１８】
用語「クローニングベクター」および「クローニングベクタープラスミド」は、最低限複製起点を含有する環状ＤＮＡプラスミドを言及するために使用される。複製起点は、プラスミドを持つ宿主細胞の正の選択に使用され、抗生物質耐性遺伝子または複数のクローニング部位であってよい。
【００１９】
本明細書で使用する場合、用語「含む（comprising）」（ならびに「含む（comprise）」、「含む（comprises）」、および「含んだ（comprised）」のような、含むのいずれかの形態）、「有する（having）」（ならびに「有する（have）」および「有する（has）」のような、有するのいずれかの形態）、含む（including）（ならびに「含む（includes）」および「含む（include）」のような、含むのいずれかの形態）、または「含有する（containing）」（ならびに「含有する（contains）」および「含有する（contain）」のような、含有するのいずれかの形態）は、包括的または無制限であり、さらなる、詳述していない要素または方法の工程を除外しない。
【００２０】
本明細書で使用する場合、用語「遺伝子構築物」は、標的タンパク質または標的分子をコードするヌクレオチド配列を含むＤＮＡまたはＲＮＡ分子を指し、ワクチン接種した個体の細胞において発現を指示することができるプロモーターおよびポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに操作可能に結合した開始および終結シグナルを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する核酸分子は、プラスミドまたはウイルスベクターの形態である。いくつかの実施形態では、遺伝子構築物はプラスミドまたはウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、遺伝子構築物はインテグレーションエレメントを含有しない。いくつかの実施形態では、プラスミドは、対象または細胞のゲノムへのプラスミドのインテグレーションを促進するいずれの逆位末端配列または他の配列を含有しないまたは持たない。いくつかの実施形態では、プラスミドは非挿入性（non-integrating）プラスミドである。非挿入性プラスミドは、プラスミドと接触する対象または細胞のゲノムに挿入するように指定されないプラスミドである。いくつかの実施形態では、非挿入性プラスミドは、ゲノムへのプラスミドのインテグレーションを促進するいずれの他の成分も無しで細胞と接触される。例えば、プラスミドは、ゲノムにプラスミドの一部を挿入するために使用されるＣＲＩＳＰＲのような遺伝子編集プラットフォームと合わせて使用される。したがって、いくつかの実施形態では、プラスミドは、ＣＡＳ９等のようなＣＲＩＳＰＲまたはＣＲＩＳＰＲ様酵素無しで使用される。
【００２１】
本明細書で使用する場合、「ＤＮＡ構築物」は、クローニング工程によって合成される、クローニングベクタープラスミドと連続するＤＮＡ分子を指す。これは、適切な哺乳動物宿主に遺伝子発現を導く手段として一般に使用されるプロセスである。この哺乳動物宿主は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはトランスジェニックマウスのｉｎ  ｖｉｖｏで培養された細胞であってよい。
【００２２】
用語「ＤＮＡ断片」は、限定はされないが、イントロン、エキソン、レポーター遺伝子、ポリＡテイル、および異なるクローニング部位のようなプラスミドの異なる部分を含む、任意のＤＮＡ分子単離物を指す。これらのＤＮＡ断片は、ｍＲＮＡ安定化シグナルおよび核局在化シグナルのようなシグナルヌクレオチドも含み得る。プラスミドベクターは天然および合成ＤＮＡ断片からなってよい。
【００２３】
用語「エンハンサー領域」は、遺伝子発現の標的化には必要とされないが、遺伝子発現レベルを増加するように指定するヌクレオチドの配列を指す。
【００２４】
本明細書で使用する場合、用語「発現可能形態」は、個体の細胞に存在する場合、コード配列が発現されるように、標的タンパク質または標的分子をコードするコード配列に操作可能に結合する必要な調節エレメントを含有する遺伝子構築物を指す。
【００２５】
用語「遺伝子プロモーター」または「プロモーター」は、本明細書で使用する場合、遺伝子発現に必要とされるヌクレオチドの配列を指すおよび遺伝子発現に必要とされるヌクレオチドの配列に関する。
【００２６】
本明細書で使用する場合、用語「遺伝子ワクチン」は、標的タンパク質または標的分子をコードするヌクレオチド配列を含む遺伝子構築物を含む医薬品を指し、治療免疫応答を発動するのに有用な医薬品を含み得る。いくつかの実施形態では、ヌクレオチド配列はｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンス、抗体、ホルモン、インシュリン等をコードする。他の標的分子も、限定はされないが、アジュバントのような本明細書に記載のようにコードされる。
【００２７】
本明細書で使用する場合、用語「遺伝子治療薬」は、治療または補償タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む遺伝子構築物を含む医薬品を指す。
【００２８】
用語「阻害する」は、症状の発症を防止する、症状を緩和する、症状を低減する、疾患および／またはその症状の進行を遅らせるまたは減少する、または疾患、状態もしくは障害を取り除くプラスミドまたは核酸分子の投与を含む。
【００２９】
用語「核局在化シグナル」は、目的のタンパク質の細胞の核への細胞内経路のシグナルをコードするヌクレオチドの配列を指すために使用される。核局在化シグナルは、核酸分子の細胞の核への直接輸送にも使用される。
【００３０】
本明細書で使用する場合、用語「複製起点」または「ＯＲＩ」は、プラスミドの宿主細胞複製を指示するまたはもたらすことができるヌクレオチドの配列を指す。
【００３１】
「薬学的に許容される」によって、担体、希釈剤または賦形剤が製剤の他の成分と適合し、そのレシピエントに有害であってはならないことを意味する。
【００３２】
本明細書で使用する場合、用語「ポリＡテイル」は、アデニン（Ａ）ヌクレオチドのヌクレオチド配列に関する。これらのヌクレオチドは、通常、メッセンジャーＲＮＡ分子（ｍＲＮＡ）の末端で見出される。ポリＡテイルは、ＤＮＡ構築物の末端の３’側に組み込まれ、目的の遺伝子発現の増強を可能にする。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する核酸分子はポリＡテイルを含む。
【００３３】
本明細書で使用する場合、用語「レポーター遺伝子」は、特定の目的のプロモーターのモニタリングの活動に有用なタンパク質をコードするヌクレオチドの配列に関する。レポーター遺伝子の例としては、ＧＦＰおよびＳＥＡＰのような蛍光タンパク質が挙げられる。
【００３４】
本明細書で使用する場合、用語「タグ配列」または「Ｔａｇ」は、特有であり、任意の内在性の対応物から検出および区別されるのを可能にする、タンパク質またはペプチド領域をコードするヌクレオチドの配列を指す。タグの非限定的な例としては、Ｈｉｓタグ、ＧＳＴタグ、カルモジュリン結合タンパク質（ＣＢＰ）、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）、ｍｙｃタグ、ＨＡタグ、ＦＬＡＧタグ等が挙げられる。
【００３５】
本明細書で使用する場合、用語「標的タンパク質」は、それに対して免疫応答が誘発されるタンパク質および誘発されることが望まれるタンパク質を指す。標的タンパク質は、例えば、病原体またはがん細胞のような望ましくない細胞型由来のタンパク質と少なくともエピトープを共有する免疫原性タンパク質またはその断片であってよい。標的タンパク質に対して指示される免疫応答は、標的タンパク質が関連する特定の感染または疾患に対して個体を保護するおよび個体を処置する免疫応答を誘導するために使用される。いくつかの実施形態では、標的タンパク質は細胞表面タンパク質または細胞から分泌されるタンパク質（抗原）である。いくつかの実施形態では、これらのタイプのタンパク質または抗原が、細胞傷害性Ｔリンパ球またはＣＤ８＋免疫細胞から活性化免疫応答を誘発するために使用される。例えば、これらのタイプのタンパク質または抗原は、ＣＤ８＋免疫細胞と相互作用する主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）クラスＩ経路によって処理される。この経路によるタンパク質／抗原の提示は、例えば、標的タンパク質のＮ末端におけるユビキチン部分の添加によって促進される。本明細書に記載のように、核酸分子は、ユビキチン部分と結合される、融合される（インフレーム）、またはコンジュゲートされる標的タンパク質をコードし得る。
【００３６】
「標的タンパク質」は、細胞で発現される、または細胞から分泌されるタンパク質も指すことができる。標的タンパク質は、受容体、抗体、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、インシュリンのようなホルモン等であってよい。
【００３７】
本明細書に記載の核酸分子は、限定はされないが、ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンス、マイクロＲＮＡ等を含む、本明細書で提供する核酸分子のような異なるタイプの標的分子を発現するためにも使用される。
【００３８】
本明細書で使用する場合、用語「治療薬」は、患者の望まない状態または疾患を処置する、それと戦う、それを緩和する、それを防止する、または改善するために利用される薬剤を意味する。一部では、実施形態は、がんの処置または細胞の増殖の減少に向けられる。一部では、実施形態は、感染または感染性因子の処置に向けられる。
【００３９】
治療薬の「治療有効量」または「有効量」は、所望の効果を達成する、すなわち免疫応答を刺激するために算出された所定値である。本方法によって考えられた活性は、必要に応じて内科治療および／または予防的処置の両方を含む。
【００４０】
用語「処置する」、「処置した」、または「処置する」は、本明細書で使用する場合、対象が望ましくない身体的な状態、障害もしくは疾患を防止または減速（減少）され、または有益なもしくは所望の臨床結果を得る治療処置と予防または防止方法の両方を指す。
【００４１】
用語「非翻訳領域」は、ｍＲＮＡ分子内に見出されるタンパク質をコードしないヌクレオチド領域をカバーするヌクレオチドの配列を指す。翻訳されないこれらの領域は、ｍＲＮＡ分子の５’および３’領域で見出される。いくつかの実施形態では、標的タンパク質または標的タンパク質の断片をコードする本明細書で提供する核酸分子は、非翻訳領域を含む。
【００４２】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示の核酸分子および方法は、そのような処置を必要とする、「それを必要とする」とも言われる対象に利用される。本明細書で使用する場合、語句「それを必要とする」は、対象が特定の方法または処置の必要性を有すると同定され、処置が特定の意図により特定の目的のために対象に与えられることを意味する。
【００４３】
いくつかの実施形態では、核酸配列は：構成的プロモーターをコードする配列、標的全長タンパク質のアミノ酸配列をコードする配列、リンカーのアミノ酸配列をコードする配列、ユビキチンのアミノ酸配列をコードする配列、標的タンパク質の少なくとも７アミノ酸残基をコードする配列、および核局在化シグナルをコードする配列を含み、ここで、配列は互いに操作可能に結合され、ｂ）、ｃ）、ｄ）、およびｅ）の配列は互いに操作可能に結合されて、全長タンパク質のアミノ酸配列；リンカーのアミノ酸配列、ユビキチンのアミノ酸配列、および標的タンパク質の少なくとも７アミノ酸残基を含むタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、断片は、約７〜約２５アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、断片は、約７〜約１５、約７〜約１２、約７〜約１０、約７〜約９アミノ酸長である、または７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸長である。
【００４４】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供する核酸分子は、標的タンパク質の断片をコードする配列を含有しないまたは含まない（例えば、無い）、または代わりに、核酸分子は、全長タンパク質が核酸分子によってコードされない場合、標的タンパク質の１つの断片のみをコードする。
【００４５】
いくつかの実施形態では、核酸配列はプロモーターを含む。いくつかの実施形態では、プロモーターは構成的プロモーターまたは組織特異的プロモーターである。「組織特異的プロモーター」は、発現を制限するまたは特定の組織型に対して発現を大きく制限するプロモーターである。プロモーターは、核酸分子の発現が特定の細胞または細胞のサブセットに制限されるように細胞特異的プロモーターであってもよい。使用されるプロモーターの例としては、限定はされないが、ＥＦ−１、ＳＶ４０、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）、マソン−ファイザーサルウイルス−ＣＴＥ、およびＣＴＥ＋ｒｅｖが挙げられる。いくつかの実施形態では、ＥＦ−１プロモーターは
ＧＡＣＴＣＴＴＣＧＣＧＡＴＴＡＴＣＧＣＣＧＡＡＴＴＣＡＣＧＣＧＴＣＧＴＧＡＧＧＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＧＡＣＴＡＧＴＧＧＡＧＣＣＧＡＧＡＧＴＡＡＴＴＣＡＴＡＣＡＡＡＡＧＧＡＧＧＧＡＴＣＧＣＣＴＴＣＧＣＡＡＧＧＧＧＡＧＡＧＣＣＣＡＧＧＧＡＣＣＧＴＣＣＣＴＡＡＡＴＴＣＴＣＡＣＡＧＡＣＣＣＡＡＡＴＣＣＣＴＧＴＡＧＣＣＧＣＣＣＣＡＣＧＡＣＡＧＣＧＣＧＡＧＧＡＧＣＡＴＣＣＧＣＣＣＡＧＧＧＣＴＧＡＧＣＧＣＧＧＧＴＡＧＡＴＣＡＧＡＧＣＡＣＡＣＡＡＧＣＴＣＡＣＡＧＴＣＣＣＣＧＧＣＧＧＴＧＧＧＧＧＧＡＧＧＧＧＣＧＣＧＣＴＧＡＧＣＧＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＧＣＴＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＡＡＡＣＴＧＧＧＡＡＡＧＴＧＧＴＧＴＣＧＴＧＴＧＣＴＧＧＣＴＣＣＧＣＣＣＴＣＴＴＣＣＣＧＡＧＧＧＴＧＧＧＧＧＡＧＡＡＣＧＧＴＡＴＡＴＡＡＧＴＧＣＧＧＴＡＧＴＣＧＣＣＴＴＧＧＡＣＧＴＴＣＴＴＴＴＴＣＧＣＡＡＣＧＧＧＴＴＴＧＣＣＧＴＣＡＧＡＡＣＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＣＴＴＣＧＡＧＧＧＣＴＣＧＣＡＴＣＴＣＴＣＣＴＴＣＡＣＧＣＧＣＣＣＧＣＣＧＣＣＣＴＡＣＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＡＴＣＣＡＣＧＣＣＧＧＴＴＧＡＧＴＣＧＣＧＴＴＣＴＧＣＣＧＣＣＴＣＣＣＧＣＣＴＧＴＧＧＴＧＣＣＴＣＣＴＧＡＡＣＴＧＣＧＴＣＣＧＣＣＧＴＣＴＡＧＧＴＡＡＧＴＴＴＡＡＡＧＣＴＣＡＧＧＴＣＧＡＧＡＣＣＧＧＧＣＣＴＴＴＧＴＣＣＧＧＣＧＣＴＣＣＣＴＴＧＧＡＧＣＣＴＡＣＣＴＡＧＡＣＴＣＡＧＣＣＧＧＣＴＣＴＣＣＡＣＧＣＴＴＴＧＣＣＴＧＡＣＣＣＴＧＣＴＴＧＣＴＣＡＡＣＴＣＴＡＣＧＴＣＴＴＴＧＴＴＴＣＧＴＴＴＴＣＴＧＴＴＣＴＧＣＧＣＣＧＴＴＡＣＡＧＡＴＣＣＡＡＧＣＣＡＧＣＴＡＧＣＧＴＴＴＡＡＡＣＴＴＧＣＣＧＣＣＡＣＣ（配列番号１）
の配列によってコードされる。これらのプロモーターの非限定的な例は、構成的プロモーターとも呼ばれる。これらのプロモーターの非限定的な例は公知であり、核酸分子に組み込まれる。しかしながら、核酸分子から標的タンパク質の発現を駆動するために使用される多くのプロモーターがあるため、このリストは単に例示の目的のためだけである。本明細書で提供する場合、プロモーターをコードする核酸分子は標的タンパク質をコードする核酸分子に操作可能に結合され、細胞において標的タンパク質の発現を制御、調節、または駆動する。
【００４６】
いくつかの実施形態では、核酸分子は、標的タンパク質または標的分子をコードする核酸分子を含む。いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ２、インシュリン、抗体、ホルモン、キメラ抗原受容体、受容体、融合タンパク質、ＧＦＰ、ＳＥＡＰ等である。これらの標的分子は、ユビキチン、標的分子の断片、リンカー等のようなプラスミドの他のエレメント有りまたは無しで発現される。いくつかの実施形態では、抗体は一本鎖抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）である。いくつかの実施形態では、抗体はｓｃＦＶである。
【００４７】
本明細書で提供する場合、標的分子は、核酸分子（例えばプラスミド）から発現される抗体であってよい。用語「抗体」は、本明細書で使用する場合、広範な意味であり、免疫グロブリンまたはポリクローナル抗体、マウス、ヒト、ヒト化およびキメラモノクローナル抗体を含むモノクローナル抗体、ならびにＳｃＦｖまたはヘキサボディ（hexabodies）（その全体を参照によって本明細書に組み入れる、ＰＬＯＳ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｜  ＤＯＩ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｂｉｏ．１００２３４４  Ｊａｎｕａｒｙ  ６，  ２０１６）のような抗体断片を含む抗体分子を含む。
【００４８】
用語「ヒト化抗体」、「改変抗体」、「ヒトフレームワーク適応」、および「ＨＦＡ」は、本明細書で使用する場合、ヒト起源の配列由来の可変領域フレームワークを有する抗体を含むことを意図する。さらに、抗体が定常領域を含有する場合、定常領域は、そのようなヒト配列、例えばヒト生殖系列配列、または自然発生（例えばアロタイプ）のヒト生殖系列配列またはヒト生殖系列配列の変異バージョンに由来する。ヒト化抗体は、ヒト配列によってコードされないアミノ酸残基を含んでよい（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのランダムまたは部位特異的変異導入またはｉｎ  ｖｉｖｏでの体細胞変異によって導入された変異）。
【００４９】
一般に、抗体は、特定の抗原に結合特異性を示すタンパク質またはポリペプチドである。インタクトな抗体はヘテロ四量体タンパク質であり、２つの軽鎖および２つの重鎖から構成される。典型的には、各軽鎖は１つの共有ジスルフィド結合によって重鎖に結合されるが、ジスルフィド結合の数は異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で変わる。各重鎖および軽鎖も、一定間隔の鎖内ジスルフィド結合を有する。各重鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＨ）、続いていくつかの定常ドメインを有する。各軽鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＬ）とその他の端に定常ドメインを有する；軽鎖の定常ドメインは重鎖の第１の定常ドメインと並び、軽鎖可変ドメインは重鎖の可変ドメインと並ぶ。任意の脊椎動物種の抗体軽鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、２つの明確に異なるタイプ、主にカッパおよびラムダの１つに割り当てられる。免疫グロブリンは、重鎖定常ドメインアミノ酸配列によって、５つの主要なクラス、主にＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭに割り当てられる。ＩｇＡおよびＩｇＧは、アイソタイプＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４としてさらに再分類される。
【００５０】
用語「抗体断片」は、インタクトな抗体の部分、一般にインタクトな抗体の抗原結合または可変領域を意味する。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ断片、二重特異性抗体、一本鎖抗体分子および少なくとも２つのインタクトな抗体から形成された多重特異性抗体が挙げられる。いくつかの実施形態では、抗体は、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）抗体であってよい。
【００５１】
いくつかの実施形態では、ＭＡＧＥ−Ａ２をコードする核酸分子は：
ＡＴＧＣＣＧＣＴＣＧＡＡＣＡＧＡＧＧＡＧＣＣＡＧＣＡＣＴＧＴＡＡＡＣＣＡＧＡＡＧＡＡＧＧＡＣＴＣＧＡＡＧＣＧＡＧＧＧＧＧＧＡＡＧＣＧＴＴＧＧＧＧＴＴＧＧＴＡＧＧＴＧＣＴＣＡＡＧＣＡＣＣＡＧＣＡＡＣＴＧＡＧＧＡＡＣＡＧＣＡＡＡＣＴＧＣＧＡＧＴＴＣＴＴＣＴＴＣＣＡＣＡＴＴＧＧＴＧＧＡＡＧＴＴＡＣＴＣＴＴＧＧＧＧＡＧＧＴＴＣＣＣＧＣＴＧＣＧＧＡＣＡＧＴＣＣＣＴＣＣＣＣＴＣＣＡＣＡＴＴＣＣＣＣＣＣＡＧＧＧＴＧＣＡＡＧＴＴＣＣＴＴＴＡＧＣＡＣＣＡＣＡＡＴＣＡＡＣＴＡＣＡＣＣＣＴＧＴＧＧＣＧＡＣＡＧＴＣＡＧＡＴＧＡＧＧＧＡＡＧＴＴＣＴＡＡＴＣＡＡＧＡＡＧＡＡＧＡＧＧＧＧＣＣＡＣＧＣＡＴＧＴＴＴＣＣＣＧＡＣＣＴＣＧＡＧＴＣＴＧＡＧＴＴＣＣＡＡＧＣＣＧＣＴＡＴＡＡＧＣＡＧＧＡＡＧＡＴＧＧＴＴＧＡＧＴＴＧＧＴＴＣＡＴＴＴＴＣＴＧＣＴＣＣＴＣＡＡＧＴＡＴＣＧＡＧＣＣＡＧＧＧＡＧＣＣＧＧＴＣＡＣＡＡＡＧＧＣＡＧＡＡＡＴＧＣＴＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＣＴＣＡＧＡＡＡＴＴＧＣＣＡＧＧＡＣＴＴＣＴＴＴＣＣＣＧＴＧＡＴＣＴＴＣＡＧＣＡＡＡＧＣＣＴＣＣＧＡＧＴＡＣＴＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＣＴＴＴＧＧＣＡＴＣＧＡＧＧＴＧＧＴＧＧＡＡＧＴＧＧＴＣＣＣＣＡＴＣＡＧＣＣＡＣＴＴＡＴＡＣＡＴＣＣＴＴＧＴＣＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＧＣＣＴＣＴＣＣＴＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＧＣＴＧＧＧＣＧＡＣＡＡＴＣＡＧＧＴＣＡＴＧＣＣＣＡＡＧＡＣＡＧＧＣＣＴＣＣＴＧＡＴＡＡＴＣＧＴＣＣＴＧＧＣＣＡＴＡＡＴＣＧＣＡＡＴＡＧＡＧＧＧＣＧＡＣＴＧＴＧＣＣＣＣＴＧＡＧＧＡＧＡＡＡＡＴＣＴＧＧＧＡＧＧＡＧＣＴＧＡＧＴＡＴＧＴＴＧＧＡＧＧＴＧＴＴＴＧＡＧＧＧＧＡＧＧＧＡＧＧＡＣＡＧＴＧＴＣＴＴＣＧＣＡＣＡＴＣＣＣＡＧＧＡＡＧＣＴＧＣＴＣＡＴＧＣＡＡＧＡＣＣＴＧＧＴＧＣＡＧＧＡＡＡＡＣＴＡＣＣＴＧＧＡＧＴＡＣＣＧＧＣＡＧＧＴＧＣＣＴＧＧＴＡＧＡＧＡＣＣＣＡＧＣＣＴＧＴＴＡＴＧＡＡＴＴＴＣＴＧＴＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＴＴＡＴＣＧＡＴＡＣＴＡＧＴＴＡＴＧＴＧＡＡＡＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＴＡＣＡＣＴＡＡＡＧＡＴＣＧＧＴＧＧＡＧＡＡＣＣＴＣＡＣＡＴＴＴＣＣＴＡＣＣＣＡＣＣＣＣＴＧＣＡＴＧＡＡＣＧＧＧＣＴＴＴＧＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＡＡＧＡＧ（配列番号２）
を含む。
【００５２】
いくつかの実施形態では、核酸配列は、
ＭＰＬＥＱＲＳＱＨＣＫＰＥＥＧＬＥＡＲＧＥＡＬＧＬＶＧＡＱＡＰＡＴＥＥＱＱＴＡＳＳＳＳＴＬＶＥＶＴＬＧＥＶＰＡＡＤＳＰＳＰＰＨＳＰＱＧＡＳＳＦＳＴＴＩＮＹＴＬＷＲＱＳＤＥＧＳＳＮＱＥＥＥＧＰＲＭＦＰＤＬＥＳＥＦＱＡＡＩＳＲＫＭＶＥＬＶＨＦＬＬＬＫＹＲＡＲＥＰＶＴＫＡＥＭＬＥＳＶＬＲＮＣＱＤＦＦＰＶＩＦＳＫＡＳＥＹＬＱＬＶＦＧＩＥＶＶＥＶＶＰＩＳＨＬＹＩＬＶＴＣＬＧＬＳＹＤＧＬＬＧＤＮＱＶＭＰＫＴＧＬＬＩＩＶＬＡＩＩＡＩＥＧＤＣＡＰＥＥＫＩＷＥＥＬＳＭＬＥＶＦＥＧＲＥＤＳＶＦＡＨＰＲＫＬＬＭＱＤＬＶＱＥＮＹＬＥＹＲＱＶＰＧＲＤＰＡＣＹＥＦＬＷＧＰＲＡＬＩＤＴＳＹＶＫＶＬＨＨＴＬＫＩＧＧＥＰＨＩＳＹＰＰＬＨＥＲＡＬＲＥＧＥＥ（配列番号３）
の配列を含む、ＭＡＧＥ−Ａ２のタンパク質をコードする。
【００５３】
いくつかの実施形態では、ＭＡＧＥ−Ａ４をコードする核酸分子は：
ａｔｇｔｃｔｔｃｔｇａｇｃａｇａａｇａｇｔｃａｇｃａｃｔｇｃａａｇｃｃｔｇａｇｇａａｇｇｃｇｔｔｇａｇｇｃｃｃａａｇａａｇａｇｇｃｃｃｔｇｇｇｃｃｔｇｇｔｇｇｇｔｇｃａｃａｇｇｃｔｃｃｔａｃｔａｃｔｇａｇｇａｇｃａｇｇａｇｇｃｔｇｃｔｇｔｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｔｃｃｔｃｔｇｇｔｃｃｃｔｇｇｃａｃｃｃｔｇｇａｇｇａａｇｔｇｃｃｔｇｃｔｇｃｔｇａｇｔｃａｇｃａｇｇｔｃｃｔｃｃｃｃａｇａｇｔｃｃｔｃａｇｇｇａｇｃｃｔｃｔｇｃｃｔｔａｃｃｃａｃｔａｃｃａｔｃａｇｃｔｔｃａｃｔｔｇｃｔｇｇａｇｇｃａａｃｃｃａａｔｇａｇｇｇｔｔｃｃａｇｃａｇｃｃａａｇａａｇａｇｇａｇｇｇｇｃｃａａｇｃａｃｃｔｃｇｃｃｔｇａｃｇｃａｇａｇｔｃｃｔｔｇｔｔｃｃｇａｇａａｇｃａｃｔｃａｇｔａａｃａａｇｇｔｇｇａｔｇａｇｔｔｇｇｃｔｃａｔｔｔｔｃｔｇｃｔｃｃｇｃａａｇｔａｔｃｇａｇｃｃａａｇｇａｇｃｔｇｇｔｃａｃａａａｇｇｃａｇａａａｔｇｃｔｇｇａｇａｇａｇｔｃａｔｃａａａａａｔｔａｃａａｇｃｇｃｔｇｃｔｔｔｃｃｔｇｔｇａｔｃｔｔｃｇｇｃａａａｇｃｃｔｃｃｇａｇｔｃｃｃｔｇａａｇａｔｇａｔｃｔｔｔｇｇｃａｔｔｇａｃｇｔｇａａｇｇａａｇｔｇｇａｃｃｃｃｇｃｃａｇｃａａｃａｃｃｔａｃａｃｃｃｔｔｇｔｃａｃｃｔｇｃｃｔｇｇｇｃｃｔｔｔｃｃｔａｔｇａｔｇｇｃｃｔｇｃｔｇｇｇｔａａｔａａｔｃａｇａｔｃｔｔｔｃｃｃａａｇａｃａｇｇｃｃｔｔｃｔｇａｔａａｔｃｇｔｃｃｔｇｇｇｃａｃａａｔｔｇｃａａｔｇｇａｇｇｇｃｇａｃａｇｃｇｃｃｔｃｔｇａｇｇａｇｇａａａｔｃｔｇｇｇａｇｇａｇｃｔｇｇｇｔｇｔｇａｔｇｇｇｇｇｔｇｔａｔｇａｔｇｇｇａｇｇｇａｇｃａｃａｃｔｇｔｃｔａｔｇｇｇｇａｇｃｃｃａｇｇａａａｃｔｇｃｔｃａｃｃｃａａｇａｔｔｇｇｇｔｇｃａｇｇａａａａｃｔａｃｃｔｇｇａｇｔａｃｃｇｇｃａｇｇｔａｃｃｃｇｇｃａｇｔａａｔｃｃｔｇｃｇｃｇｃｔａｔｇａｇｔｔｃｃｔｇｔｇｇｇｇｔｃｃａａｇｇｇｃｔｃｔｇｇｃｔｇａａａｃｃａｇｃｔａｔｇｔｇａａａｇｔｃｃｔｇｇａｇｃａｔｇｔｇｇｔｃａｇｇｇｔｃａａｔｇｃａａｇａｇｔｔｃｇｃａｔｔｇｃｃｔａｃｃｃａｔｃｃｃｔｇｃｇｔｇａａｇｃａｇｃｔｔｔｇｔｔａｇａｇｇａｇｇａａｇａｇｇｇａｇｔｃｔｇａ（配列番号４）
を含む。
【００５４】
いくつかの実施形態では、核酸分子は：
ＭＳＳＥＱＫＳＱＨＣＫＰＥＥＧＶＥＡＱＥＥＡＬＧＬＶＧＡＱＡＰＴＴＥＥＱＥＡＡＶＳＳＳＳＰＬＶＰＧＴＬＥＥＶＰＡＡＥＳＡＧＰＰＱＳＰＱＧＡＳＡＬＰＴＴＩＳＦＴＣＷＲＱＰＮＥＧＳＳＳＱＥＥＥＧＰＳＴＳＰＤＡＥＳＬＦＲＥＡＬＳＮＫＶＤＥＬＡＨＦＬＬＲＫＹＲＡＫＥＬＶＴＫＡＥＭＬＥＲＶＩＫＮＹＫＲＣＦＰＶＩＦＧＫＡＳＥＳＬＫＭＩＦＧＩＤＶＫＥＶＤＰＡＳＮＴＹＴＬＶＴＣＬＧＬＳＹＤＧＬＬＧＮＮＱＩＦＰＫＴＧＬＬＩＩＶＬＧＴＩＡＭＥＧＤＳＡＳＥＥＥＩＷＥＥＬＧＶＭＧＶＹＤＧＲＥＨＴＶＹＧＥＰＲＫＬＬＴＱＤＷＶＱＥＮＹＬＥＹＲＱＶＰＧＳＮＰＡＲＹＥＦＬＷＧＰＲＡＬＡＥＴＳＹＶＫＶＬＥＨＶＶＲＶＮＡＲＶＲＩＡＹＰＳＬＲＥＡＡＬＬＥＥＥＥＧＶ（配列番号５）
の配列を含むＭＡＧＥ−Ａ４のタンパク質をコードする。
【００５５】
当業者に公知のように、特定のアミノ酸配列を有するペプチドは、遺伝子コードが縮重されるため、異なる核酸分子によってコードされる。いくつかの実施形態では、核酸分子の配列は最適化される。配列は、使用される細胞型または核酸分子を投与される対象によるコドン利用および頻度に基づいて最適化される。コドン最適化は、タンパク質発現を最大化するのに有用である。これは、哺乳動物細胞のｍＲＮＡ配列のコドン利用を最適化することによって行われる。例えば、核酸分子内で使用される感染性標的タンパク質をコードする免疫原性遺伝子配列を変更する工程が使用され、発現および発現されたタンパク質の免疫原性を増加する。コドン利用を最適化する方法は公知である。さらに、本明細書で提供する核酸分子は配列中に停止コドンを有してよい。当業者は、停止コドンが縮重停止コドンによって置き換えられることを理解する。停止コドンは、Ｕ（Ｔ）ＡＡ、Ｕ（Ｔ）ＡＧ、およびＵ（Ｔ）ＧＡであることが公知である。
【００５６】
したがって、上記の表に示した核酸配列は、単に例示の目的のためだけであり、標的タンパク質の適切なアミノ酸配列をコードするものに限定することを意図しない。さらに、いくつかの実施形態では、全長より小さい標的タンパク質が使用される。いくつかの実施形態では、独立してＮ末端および／またはＣ末端から少なくとも５、１０、１５、または２０アミノ酸残基が核酸分子によってコードされない。いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、核酸分子によってコードされる標的タンパク質の断片より大きい。
【００５７】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供する核酸分子によってコードされるタンパク質は保存的置換を含む。保存的置換は、当業者に公知である。
【００５８】
いくつかの実施形態では、核酸分子は、標的タンパク質の断片をコードする核配列を含む異なる核酸分子を含む。いくつかの実施形態では、断片は、標的タンパク質の約７〜約２５残基を含む。いくつかの実施形態では、断片は、標的タンパク質の約７〜約２０、約７〜約１８、約７〜約１５、約７〜約１３、約７〜約１２、約７〜約１１、約７〜約９、約８〜約２５、約８〜約２０、約８〜約１８、約８〜約１５、約８〜約１３、約８〜約１２、約８〜約１１、約８〜約９、約９〜約２５、約９〜約２０、約９〜約１８、約９〜約１５、約９〜約１３、約９〜約１２、約９〜約１１残基等を含む。いくつかの実施形態では、断片は、長さが、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸残基であるか、または約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９、約２０、約２１、約２２、約２３、約２４、または約２５アミノ酸残基である。
【００５９】
いくつかの実施形態では、標的タンパク質の断片および／または標的タンパク質自身が、ＭＨＣ  ＩまたはＭＨＣ  ＩＩ  ＣＤ８＋免疫細胞または細胞傷害性Ｔリンパ球による免疫原性応答を誘発する。いくつかの実施形態では、標的タンパク質の断片は、以下の表のアミノ酸配列によって表される：
【００６０】
【表１】
2021514678.tif 000003
【００６１】
断片は、断片をコードする配列を含む他の核酸分子によってもコードされる。表に示される核酸配列は、単に例示の目的のみのためであり、限定するものと解釈されるべきではない。
【００６２】
いくつかの実施形態では、核酸配列は、限定はされないが、グリシン−セリンまたはグリシン−アラニンリンカーのようなリンカーをコードする配列を含む。いくつかの実施形態では、グリシン−セリンリンカーは、ＧＧＧＧＳ（配列番号１３）の配列を含む。リンカーはこの配列のリピートも含んでよい。いくつかの実施形態では、リンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ＧＧＧＧＳリピートを含む。いくつかの実施形態では、グリシン−アラニンリンカーは、ＧＧＧＧＡ（配列番号１０）の配列を含む。リンカーは、この配列のリピートも含んでよい。いくつかの実施形態では、リンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ＧＧＧＧＡ（配列番号１０）リピートを含む。リンカーは、リンカー配列の混合も含んでよい。したがって、いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＡＧＧＧＧＳ（配列番号１１）等の配列を含んでよい。他のペプチドリンカーも使用される。いくつかの実施形態では、グリシン−セリンリンカーは：ＧＧＳＧＳ（配列番号１２）およびそれらの複数リピートの配列を含む。本明細書で提供するいずれかのリンカーの１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０リピートがあってよい。リンカーは、互いに混合されてもよい。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する核酸分子は、リンカーをコードする配列を含有しないまたは含まない（例えば、無い）。
【００６３】
いくつかの実施形態では、核酸分子は、単一のユビキチンタンパク質または２またはそれ以上のユビキチンタンパク質の鎖としてユビキチンをコードする。いくつかの実施形態では、ユビキチンをコードする配列は、ＵＢＢ、ＵＢＣ、ＵＢＡ５２、およびＲＰＳ２７Ａをコードする配列から選択される。コードされるユビキチンは、同種ユビキチン鎖または異なるユビキチン分子を含む異種ユビキチン鎖であってよい。そのような配列の例としては、限定はされないが、以下の表のものを含む：
【００６４】
【表２】
2021514678.tif 000004
【表３】
2021514678.tif 000005
【００６５】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供する核酸分子は、ユビキチンタンパク質をコードする配列を含まない（例えば無い）。
【００６６】
いくつかの実施形態では、核酸配列は、核局在化シグナルをコードする配列を含む。ヌクレオチド配列によってコードされる核局在化シグナルの非限定的な例はエレメント１であり：
ＣＡＣＡＡＴＴＣＣＡＣＡＣＡＴＧＴＧＴＧＡＡＡＴＴＧＴＴＡＴＣＣＧＣＴＣＡＣＡＡＴＴＣＣＡＣＡＣＡＴＧＴＧＴＧＡＡＡＴＴＧＴＴＡＴＣＣＧＣＴＣＡＣＡＡＴＴＣＣＡＣＡＣＡＣＡＣＧＴＧＣＴＡＡＡＡＣＴＴＣＡＴＴＴＴ（配列番号１９）
の配列を含む核酸分子によってコードされる。
【００６７】
いくつかの実施形態では、全長タンパク質、グリシン−セリンリンカー、ユビキチンタンパク質、および全長タンパク質の断片を含むタンパク質をコードする核酸分子が提供される。いくつかの実施形態では、断片をコードする核酸分子は、核酸分子またはプラスミドに含まれない。標的分子の断片が無い場合、ユビキチンタンパク質をコードする配列は必要ではない。したがって、いくつかの実施形態では、ユビキチンタンパク質をコードする核酸分子は存在せず、または言い換えると、核酸分子はユビキチンタンパク質をコードする配列が無い。
【００６８】
したがって、いくつかの実施形態では、リンカー配列、ユビキチンタンパク質またはタンパク質の断片をコードする分子無しで、全長タンパク質およびＮＬＳシグナルを含むタンパク質をコードする核酸分子が提供される。核酸分子はプラスミドであってよい。
【００６９】
断片の例は本明細書で提供され、約７〜約２５アミノ酸長、または本明細書に他に記載されるようであってよい。そのようなタンパク質の非限定的な例は、図２に示すように例示される。他の非限定的な例は、図３および図４に示すように例示される。
【００７０】
いくつかの実施形態では、これらの実施形態のＧｌｙ／Ｓｅｒリンカーは、本明細書で提供する場合、限定はされないが、ＧＧＧＧＳ、ＧＧＧＧＡ、またはＧＧＳＧＳが挙げられる。いくつかの実施形態では、ユビキチンタンパク質はＵＢＢまたは配列番号１４である。いくつかの実施形態では、断片は配列番号６または８である。
【００７１】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供する核酸分子は、リンカーをコードする配列を含有しないまたは含まない（例えば、無い）。
【００７２】
存在してもしなくてもよい核酸分子の他のエレメントは、タンパク質をコードする配列に操作可能に結合される。
【００７３】
いくつかの実施形態では、限定はされないが、構成的プロモーターをコードする配列、標的タンパク質のアミノ酸配列をコードする配列、リンカーのアミノ酸配列をコードする配列、ユビキチンのアミノ酸配列をコードする配列、標的タンパク質の少なくとも７アミノ酸残基ペプチド断片をコードする配列、および核局在化シグナルをコードする配列を含む核酸分子のような、本明細書に記載の核酸分子を含む医薬組成物が提供され、ここで、配列は互いに操作可能に結合され、ｂ）、ｃ）、ｄ）、およびｅ）の配列は互いに操作可能に結合されて、全長タンパク質のアミノ酸配列；リンカーのアミノ酸配列、ユビキチンのアミノ酸配列、および標的タンパク質の少なくとも７アミノ酸残基を含むタンパク質をコードする。他の断片サイズが本明細書で提供される。
【００７４】
本明細書に記載の核酸分子によってコードされるタンパク質またはペプチドも本明細書で提供される。
【００７５】
いくつかの実施形態では、核酸分子が提供され、ここで核酸分子はプロモーターをコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、プロモーターは構成的プロモーターである。使用される構成的プロモーターの非限定的な例が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、核酸分子は、標的分子または標的タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む。標的分子およびタンパク質の例が本明細書で提供される。これらの例は、例示の目的のためだけであり、非限定的であることを意図する。標的分子またはタンパク質は、核酸分子によってコードされるように選択する核酸分子によってコードされる任意の分子またはタンパク質であってよい。いくつかの実施形態では、核酸分子は、リンカーをコードするポリヌクレオチドを含む。リンカーの例が本明細書で提供される。例えば、リンカーは、核酸分子によってコードされる任意のペプチドリンカーであってよい。いくつかの実施形態では、核酸分子は、ユビキチンをコードするポリヌクレオチドを含む。リンカーの例が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、核酸分子は、標的タンパク質の断片をコードするポリヌクレオチドを含む。様々な断片サイズが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、断片は、標的タンパク質の約７〜約２５アミノ酸残基である。いくつかの実施形態では、核酸分子は、核局在化シグナル（ＮＬＳ）をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ＮＬＳは、発現されるタンパク質またはタグをコードしない。代わりに、ＮＬＳは、細胞によって認識され、ＮＬＳを含む核酸分子が核に存在する（例えば輸送される）ことを確実にする核酸分子であってよい。本明細書で提供されるエレメントは、互いに操作可能に結合される。全てのエレメントが存在する場合、核酸分子は、全長タンパク質のアミノ酸配列；リンカーのアミノ酸配列、ユビキチンのアミノ酸配列、および標的タンパク質の断片を含むタンパク質をコードし得る。
【００７６】
本明細書で提供する核酸分子は、単一分子として、例えばプラスミドとして提供される。いくつかの実施形態では、各エレメントは、異なるエレメントをコードする別のヌクレオチド分子とは対照的に、単一のポリヌクレオチド配列（または限定はされないがプラスミドのような二本鎖分子）によってコードされる。プラスミドのような単一分子の使用は、ユーザーが適切な細胞または細胞環境に標的分子または標的タンパク質を効果的に導入することを可能にする。
【００７７】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供する核酸分子は、構成的プロモーターをコードするポリヌクレオチド；目的の分子とも呼ばれる標的分子をコードするポリヌクレオチド；および核局在化シグナルをコードするポリヌクレオチドの１つまたはそれ以上を含み；ここで配列は、互いに操作可能に結合される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する核酸分子は、構成的プロモーターをコードするポリヌクレオチド、目的の分子とも呼ばれる標的分子をコードするポリヌクレオチド；および核局在化シグナルをコードするポリヌクレオチドを含み；ここで配列は互いに操作可能に結合される。目的の分子（標的分子）は、核酸分子によってコードされる任意の分子であってよい。例えば、標的分子は、Ｔ細胞または他の型の細胞で発現され、Ｔ細胞で機能性であるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であってよい。したがって、プラスミドの形態であってよい核酸分子は、標的分子を目的の細胞に送達するために使用される。いくつかの実施形態では、細胞は、Ｔ細胞、樹状細胞、ＮＫ細胞、ＴＩＬ、ＭＩＬ等のような免疫細胞である。
【００７８】
いくつかの実施形態では、核酸分子は、細胞で発現される標的分子を送達するために使用される。したがって、プラスミドであってよい核酸分子は、細胞でタンパク質または核酸分子を発現するために使用される。標的分子は、タンパク質、アンチセンス核酸分子、ｓｉＲＮＡ分子、マイクロＲＮＡ、抗体、受容体、または本明細書に記載のもののような核酸分子によってコードされる任意の他のタイプの分子をコードする核酸分子であってよい。コードされる産物の他の例は、インシュリン、ホルモン、遺伝子産物等である。遺伝子産物の特定の構造は、必ずしも重要ではないが、代わりに、プラスミドのような核酸分子が使用される様々な実施形態を示す。いくつかの実施形態では、標的分子は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＢＳＭＡ等に結合する抗体のようながんを処置することができる抗体である。そのような抗体の例としては、限定はされないが、ペンブロリズマブ、ニボルマブ等が挙げられる。使用されるＣＡＲの例としては、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＢＳＭＡ、ＰＳＭＡ等に結合する細胞外領域を含むものが挙げられる。いくつかの実施形態では、ＣＡＲはＣＤ１９細胞外結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは４−１ＢＢ細胞内領域を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲはＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲはＣＤ２８細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインはＣＤ３ζ膜貫通ドメインまたはＣＤ２８膜貫通ドメインである。本明細書に記載のように、いくつかの実施形態では、核酸分子、例えばプラスミドは非挿入性核酸分子である。
【００７９】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供する核酸分子は対象に投与され、細胞によって取り込まれる。いくつかの実施形態では、細胞はｅｘ−ｖｉｖｏで核酸分子（例えばプラスミド）によって処置され、次いで対象に投与し戻し、ｉｎ  ｖｉｖｏで分子を発現する。いくつかの実施形態では、核酸分子はナノ粒子と複合され、核酸分子を特定の細胞型に送達する。例えば、核酸分子はカプセル化され、脂質ナノ粒子、ポリマーナノ粒子、リポソーム、中性リポソーム、生分解性ポリマーマトリックス（例えばヒドロゲル）等と複合される。ナノ粒子の例は、その全体を参照によって本明細書に組み入れるＸｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ＆  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｖｏｌ．  １２  Ｍａｒｃｈ  ２０１９，  ｐｐ．  １−１８に記載される。使用されるポリマーの例としては、限定はされないが、ポリエーテルイミド（ＰＥＩ）、ラクトシル化ポリリジン（ＰＬＬ）、ポリアクリル酸（ＰＡＡ）、ポリ（脂肪族エステル）（ＰＡＥ）、およびポリ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルメタクリル酸）（ＰＤＭＡＥＭＡ）に最も焦点を当てた研究が挙げられる。これらのポリマーは、化学修飾によって修飾され、または修飾が無い。他のポリマーとしては、限定はされないが、キトサン（例えばカチオン性キトサン）、ポリ（エチレングリコール）−修飾キトサン（ＰＥＧ−ＣＳ）、カルボキシメチルデキストラン（ＣＭＤ）−キトサン、ゼラチン（例えばカチオン性ゼラチン）、デキストラン（例えばカチオン性デキストラン）、セルロース（例えばカチオン性セルロース）、シクロデキストリン（例えばカチオン性シクロデキストリン）が挙げられる。
【００８０】
いくつかの実施形態では、核酸分子は、担体またはナノ粒子によってカプセル化されない。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、核酸分子をカプセル化するナノ粒子が無い。
【００８１】
本明細書で記載する場合、核酸分子は、構成的プロモーターのようなプロモーターを含んでよい。構成的プロモーターの例としては、限定はされないが、ＥＦ−１、ＳＶ４０、ラウス肉腫ウイルス、およびマソン−ファイザーサルウイルス−ＣＴＥが挙げられる。いくつかの実施形態では、プロモーターはＥＦ−１である。いくつかの実施形態では、プロモーターはＳＶ４０である。いくつかの実施形態では、プロモーターはＲＳＶである。いくつかの実施形態では、プロモーターはマソン−ファイザーサルウイルス−ＣＴＥである。
【００８２】
核酸分子は、１つまたはそれ以上のアジュバントをコードする核酸配列もさらに含んでよい。いくつかの実施形態では、アジュバントはＩＬ−１２である。いくつかの実施形態では、核酸分子は：抗ＣＤ４０抗体、ＧＭ−ＣＳＦ、ベバシズマブ、インターフェロン−アルファ、インターフェロン−ベータ、ポリ−（Ｉ：Ｃ）および誘導体、ＲＮＡインターロイキン（ＩＬ）−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、およびＩＬ−２３等からなる群の１つまたはそれ以上をコードする。
【００８３】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供する核酸分子は、核局在化シグナル（ＮＬＳ）をコードする配列を含んでよい。いくつかの実施形態では、ＮＬＳはエレメント１である。いくつかの実施形態では、配列は、配列番号１９に示すものである。
【００８４】
疑義を回避するため、本明細書で提供するいずれかの核酸分子は、細胞でその産物を発現するように使用されるようにプラスミドまたは他の型の環状ＤＮＡ配列であってよい。
【００８５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の核酸分子を含む医薬組成物が提供される。医薬組成物の例は、本明細書に提供される。
【００８６】
いくつかの実施形態では、分子を細胞に送達する方法が提供される。いくつかの実施形態では、方法は、本明細書で提供するように核酸分子を有する細胞を対象の細胞または対象へと接触させる工程を含み、前記核酸配列は対象の細胞によって取り込まれる。核酸分子は、次いで発現され、標的分子または他の発現カセットが細胞で発現される。いくつかの実施形態では、核酸配列は、エレクトロポレーション、注射、超音波処理、トランスフェクション、形質導入、遺伝子銃、ナノ粒子による包含、リポ粒子、または核酸分子を対象または細胞に導入するために好適な他の投与の様式によって細胞または対象に導入される。いくつかの実施形態では、核酸分子が送達される細胞または組織は、皮膚、筋肉、胸、肺、膵臓、脳、卵巣、子宮、子宮内膜、大腸、前立腺、食道、歯肉、舌、のど、または腎臓組織または細胞である。
【００８７】
これらの例は、非限定的であり、本明細書で提供する分子および組成物は、ユーザーによって所望される任意の組織または細胞型で使用される。
【００８８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物および分子は、がんを処置するために使用される。処置されるがんの例としては、限定はされないが、脳、胸、肺、卵巣、子宮内膜、大腸、皮膚（例えばメラノーマ）等が挙げられる。
【００８９】
本明細書に記載の医薬組成物は、薬学的に許容される担体または希釈剤をさらに含んでよい。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約１ｎｇ〜約１０，０００μｇの核酸分子を含む。医薬組成物は、使用される投与の様式に従って製剤化される。当業者は、本明細書に記載の遺伝子構築物または核酸分子を含む医薬組成物を容易に製剤化することができる。筋肉内注射が選択された投与の様式である場合、等張製剤が使用される。いくつかの実施形態では、等張性のための添加剤は、塩化ナトリウム、デキストロース、マンニトール、ソルビトール、ラクトース等を含んでよい。いくつかの場合、リン酸緩衝生理食塩水のような等張溶液が使用される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は安定剤を含む。安定剤の例としては、限定はされないが、ゼラチンおよびアルブミンが挙げられる。医薬組成物は、滅菌およびパイロゲンフリーとして提供される。
【００９０】
いくつかの実施形態では、対象において標的タンパク質に対する免疫応答を誘導する方法が提供される。いくつかの実施形態では、方法は、本明細書に記載の核酸分子を対象に導入する工程を含む。いくつかの実施形態では、核酸分子は、対象の細胞に導入される。核酸分子は、細胞によっても取り込まれる。細胞内で細胞の機構が使用されると、核酸分子によってコードされる標的タンパク質および構築物を発現する。いくつかの実施形態では、核酸分子は本明細書に記載の通りである。導入または投与の方法は、本明細書に記載の方法を含む、任意の方法であってよい。いくつかの実施形態では、核酸分子は、エレクトロポレーションまたは注射によって導入される。いくつかの実施形態では、核酸分子は、超音波処理、トランスフェクション、形質導入、遺伝子銃、ナノ粒子、リポ粒子、または対象または細胞への核酸分子の導入に好適な投与の他の様式等によって対象に導入、または投与される。
【００９１】
いくつかの実施形態では、ブピバカインまたは他の類似のアジュバントが使用され、免疫応答の誘導の促進を補助する。
【００９２】
いくつかの実施形態では、核酸分子は対象の組織に投与される。いくつかの実施形態では、組織は皮膚、筋肉、肝臓、脂肪等である。
【００９３】
いくつかの実施形態では、がんを処置する方法が提供される。いくつかの実施形態では、対象においてがんを処置する方法は、本明細書に記載の核酸分子を対象に導入または投与する。いくつかの実施形態では、核酸分子は細胞に直接導入される。いくつかの実施形態では、核酸分子は細胞によって取り込まれ、細胞で発現される。いくつかの実施形態では、標的タンパク質および標的タンパク質の断片は、がん細胞において過剰発現される、または特異的に発現されるタンパク質である。いくつかの実施形態では、核酸分子は、エレクトロポレーション、注射、超音波処理、トランスフェクション、形質導入等によって投与される。いくつかの実施形態では、核酸分子は皮膚、筋肉または対象の他の組織に投与される。いくつかの実施形態では、がんは、肺がん、乳がん、子宮がん、前立腺がん、卵巣がん、結腸直腸がん、メラノーマ、ミエローマ、脳がん、大腸がん、膵がん等である。いくつかの実施形態では、がんは、三種陰性の乳がん、子宮がん、前立腺がん、卵巣がん、または結腸直腸がんである。
【００９４】
いくつかの実施形態では、対象において感染性因子または感染を処置する方法が提供される。いくつかの実施形態では、方法は、本明細書に記載の核酸分子を対象に導入／投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、核酸分子は、対象の細胞に直接投与される。全体に記載されるように、核酸分子は、細胞によって取り込まれ、細胞で発現される。いずれの特定の理論にも縛られないが、核酸分子が発現される場合、対象の免疫応答は標的タンパク質および標的タンパク質の断片を異質と認識し、免疫応答が生じる。生じた免疫応答は感染を処置または防止できる。いくつかの実施形態では、生じた免疫応答は、疾患を引き起こすことから感染性因子を処置または防止することができ、または感染性因子の増殖を阻害し、感染の症状を緩和する。投与の方法は、本明細書に記載の方法のいずれかであってよい。いくつかの実施形態では、核酸分子は、皮膚、筋肉、脂肪、腎臓、または対象の他の組織に投与される。いくつかの実施形態では、核酸分子は、対象の粘膜に投与される。いくつかの実施形態では、対象において感染性因子を処置する方法は、核酸分子を対象の細胞に導入する工程を含み、前記核酸配列は、対象において細胞によって取り込まれ、タンパク質は、感染性因子によって発現されるタンパク質である。いくつかの実施形態では、核酸分子は、エレクトロポレーション、注射、超音波処理、トランスフェクション、および形質導入によって対象または細胞に導入される。
【００９５】
いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、Ｇｐ１２０、Ｇａｇ、Ｎｅｆ、Ｔａｔ、ヘマグルチニン（ＨＡ）、ノイラミニダーゼ（ＮＡ）等のようなＨＩＶまたはインフルエンザタンパク質である。
【００９６】
いくつかの実施形態では、対象は、腫瘍発生に関与するタンパク質を標的化する抗体によっても処置される。例えば、いくつかの実施形態では、対象は、本明細書に記載の核酸分子と抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＰＤ−１、および／または抗ＣＴＬ４抗体を投与される。抗体は、本明細書に提供される核酸分子の前、後、または同時に投与される。
【００９７】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供する核酸分子を含む細胞が提供される。いくつかの実施形態では、細胞は単離細胞である。いくつかの実施形態では、細胞はｅｘ−ｖｉｖｏであり、対象内ではない。細胞は、Ｔ細胞、筋肉細胞、皮膚細胞、脳細胞等のような任意の細胞型であってよい。
【００９８】
以下の実施例は、本明細書に記載の組成物および方法の例示であり、限定ではない。当業者に公知の他の好適な改変および適用は、以下の実施形態の範囲内である。
【実施例１】
【００９９】
エレメント１である、核局在化ドメインと呼ばれるＤＮＡエレメントは、細胞の内部のウイルスの輸送を模倣する配列を含有し、細胞核へのＤＮＡの局在ならびに核からのコードされたｍＲＮＡの排出を助けることができる。
【０１００】
実験は、これらのエレメントが標準的な緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）発現プラスミドＤＮＡ発現ベクターの配列に導入され、市販のカチオン性脂質トランスフェクション試薬（すなわちリポフェクタミン）を使用して哺乳動物細胞にトランスフェクトされる場合、それらが図１に示すように数倍ＧＦＰ発現を増強することができることを示した。
【０１０１】
本明細書に提供するもののような核酸分子は、腫瘍量の低減および／または腫瘍再発の防止に使用されるＣＤ８＋およびＣＤ４＋リンパ球を介する免疫系を直接増強することができるＤＮＡベースの送達システムであるように設計された。抗ＰＤ−Ｌ１（例えばアテゾリズマブ）および／または抗ＣＴＬ４（例えばイピリムマブ）と併せた最適化ＳＭＡＲＴプラスミドＤＮＡの前臨床試験は、現在の化学療法の毒性の減少をもたらすことができる全身性免疫応答を開始する能力を実証するために試験している。ＰＤ−Ｌ１および／またはＣＴＬ４は、抗体を使用する腫瘍免疫療法の標的となる可能性が見出されている。
【０１０２】
さらに、抗ＰＤ−Ｌ１および／または抗ＣＴＬ４と併せたＳＭＡＲＴプラスミドＤＮＡは、ＭＡＧＥ−Ａのようなタンパク質抗原を発現する多くの腫瘍のための他に比を見ない処置として使用された。
【０１０３】
先の研究により、レンチウイルスのインテグラーゼタンパク質のようなウイルスタンパク質の特定の領域は、ウイルスＤＮＡの核輸送を増強することができる。
【０１０４】
ＳＭＡＲＴプラスミドＤＮＡは、ウイルスＤＮＡの核への取り込みを増強し、標的配列の翻訳のプロセスを開始するそのようなウイルスタンパク質の部分をエレメント１に組み込む。
【０１０５】
ＳＭＡＲＴプラスミドＤＮＡにおけるエレメント１のＤＮＡ局在化特性は、外因的に添加したウイルスタンパク質と組み合わせて使用した場合、増大された。
【０１０６】
プラスミドＤＮＡエレメントの配列ならびにそれらのプラスミド内の構造的方向性は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの増強されたタンパク質発現をもたらす。
【０１０７】
いずれの特定の理論にも縛られないが、これらのエレメントの作用の機構は、増強された受動輸送を介して哺乳動物細胞核膜孔を通ってＤＮＡをより効果的に輸送されるようにする、または定期的に核へとシャトルする分子と相互作用することにより孔を通って能動的に輸送されるようにする三次元構造エレメントを提供すると考えられる。さらに、核酸分子内に含有されるエレメント１  ＮＬＳは、転写されたメッセンジャーＲＮＡを核から細胞質へと局在させることができ、これらのｍＲＮＡ分子は、例えば治療効果のためタンパク質へと翻訳される。
【０１０８】
哺乳動物細胞形質導入のためのレンチウイルス様ベクター粒子を産生する完全合成方法は、抗原発現腫瘍および他の疾病の処置のための免疫療法を構築する強力な鋳型である。それは、遺伝子送達技術、トランスフェクション、および免疫療法における主要な技術の進歩を示す。
【０１０９】
ＤＮＡ配列も環状プラスミドに表され、ＭＡＧＥ  Ａ−２である標的タンパク質をコードする。プラスミドは：ＥＦ−１プロモーターヌクレオチド配列、ＭＡＧＥ−Ａ２全長ヌクレオチド配列、グリシン−セリンリンカーヌクレオチド配列、ユビキチンヌクレオチド配列、ＭＡＧＥ−Ａ２  ９ｍｅｒペプチドヌクレオチド配列、およびエレメント１（核局在化ドメイン）ヌクレオチド配列の配列を含む。プラスミドは、カナマイシン／ネオマイシンヌクレオチド配列領域、およびＣｏｌＥ１起点ヌクレオチド配列の配列も含んでよい。ＭＡＧＥ−Ａ２  ９ｍｅｒプラスミド配列の非限定的な例は、以下の配列番号２０として提供される：
【０１１０】
ＭＡＧＥ−Ａ２  ９ｍｅｒプラスミド配列：
ＧＡＣＴＣＴＴＣＧＣＧＡＴＴＡＴＣＧＣＣＧＡＡＴＴＣＡＣＧＣＧＴＣＧＴＧＡＧＧＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＧＡＣＴＡＧＴＧＧＡＧＣＣＧＡＧＡＧＴＡＡＴＴＣＡＴＡＣＡＡＡＡＧＧＡＧＧＧＡＴＣＧＣＣＴＴＣＧＣＡＡＧＧＧＧＡＧＡＧＣＣＣＡＧＧＧＡＣＣＧＴＣＣＣＴＡＡＡＴＴＣＴＣＡＣＡＧＡＣＣＣＡＡＡＴＣＣＣＴＧＴＡＧＣＣＧＣＣＣＣＡＣＧＡＣＡＧＣＧＣＧＡＧＧＡＧＣＡＴＣＣＧＣＣＣＡＧＧＧＣＴＧＡＧＣＧＣＧＧＧＴＡＧＡＴＣＡＧＡＧＣＡＣＡＣＡＡＧＣＴＣＡＣＡＧＴＣＣＣＣＧＧＣＧＧＴＧＧＧＧＧＧＡＧＧＧＧＣＧＣＧＣＴＧＡＧＣＧＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＧＣＴＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＡＡＡＣＴＧＧＧＡＡＡＧＴＧＧＴＧＴＣＧＴＧＴＧＣＴＧＧＣＴＣＣＧＣＣＣＴＣＴＴＣＣＣＧＡＧＧＧＴＧＧＧＧＧＡＧＡＡＣＧＧＴＡＴＡＴＡＡＧＴＧＣＧＧＴＡＧＴＣＧＣＣＴＴＧＧＡＣＧＴＴＣＴＴＴＴＴＣＧＣＡＡＣＧＧＧＴＴＴＧＣＣＧＴＣＡＧＡＡＣＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＣＴＴＣＧＡＧＧＧＣＴＣＧＣＡＴＣＴＣＴＣＣＴＴＣＡＣＧＣＧＣＣＣＧＣＣＧＣＣＣＴＡＣＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＡＴＣＣＡＣＧＣＣＧＧＴＴＧＡＧＴＣＧＣＧＴＴＣＴＧＣＣＧＣＣＴＣＣＣＧＣＣＴＧＴＧＧＴＧＣＣＴＣＣＴＧＡＡＣＴＧＣＧＴＣＣＧＣＣＧＴＣＴＡＧＧＴＡＡＧＴＴＴＡＡＡＧＣＴＣＡＧＧＴＣＧＡＧＡＣＣＧＧＧＣＣＴＴＴＧＴＣＣＧＧＣＧＣＴＣＣＣＴＴＧＧＡＧＣＣＴＡＣＣＴＡＧＡＣＴＣＡＧＣＣＧＧＣＴＣＴＣＣＡＣＧＣＴＴＴＧＣＣＴＧＡＣＣＣＴＧＣＴＴＧＣＴＣＡＡＣＴＣＴＡＣＧＴＣＴＴＴＧＴＴＴＣＧＴＴＴＴＣＴＧＴＴＣＴＧＣＧＣＣＧＴＴＡＣＡＧＡＴＣＣＡＡＧＣＣＡＧＣＴＡＧＣＧＴＴＴＡＡＡＣＴＴＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＣＣＧＣＴＣＧＡＡＣＡＧＡＧＧＡＧＣＣＡＧＣＡＣＴＧＴＡＡＡＣＣＡＧＡＡＧＡＡＧＧＡＣＴＣＧＡＡＧＣＧＡＧＧＧＧＧＧＡＡＧＣＧＴＴＧＧＧＧＴＴＧＧＴＡＧＧＴＧＣＴＣＡＡＧＣＡＣＣＡＧＣＡＡＣＴＧＡＧＧＡＡＣＡＧＣＡＡＡＣＴＧＣＧＡＧＴＴＣＴＴＣＴＴＣＣＡＣＡＴＴＧＧＴＧＧＡＡＧＴＴＡＣＴＣＴＴＧＧＧＧＡＧＧＴＴＣＣＣＧＣＴＧＣＧＧＡＣＡＧＴＣＣＣＴＣＣＣＣＴＣＣＡＣＡＴＴＣＣＣＣＣＣＡＧＧＧＴＧＣＡＡＧＴＴＣＣＴＴＴＡＧＣＡＣＣＡＣＡＡＴＣＡＡＣＴＡＣＡＣＣＣＴＧＴＧＧＣＧＡＣＡＧＴＣＡＧＡＴＧＡＧＧＧＡＡＧＴＴＣＴＡＡＴＣＡＡＧＡＡＧＡＡＧＡＧＧＧＧＣＣＡＣＧＣＡＴＧＴＴＴＣＣＣＧＡＣＣＴＣＧＡＧＴＣＴＧＡＧＴＴＣＣＡＡＧＣＣＧＣＴＡＴＡＡＧＣＡＧＧＡＡＧＡＴＧＧＴＴＧＡＧＴＴＧＧＴＴＣＡＴＴＴＴＣＴＧＣＴＣＣＴＣＡＡＧＴＡＴＣＧＡＧＣＣＡＧＧＧＡＧＣＣＧＧＴＣＡＣＡＡＡＧＧＣＡＧＡＡＡＴＧＣＴＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＣＴＣＡＧＡＡＡＴＴＧＣＣＡＧＧＡＣＴＴＣＴＴＴＣＣＣＧＴＧＡＴＣＴＴＣＡＧＣＡＡＡＧＣＣＴＣＣＧＡＧＴＡＣＴＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＣＴＴＴＧＧＣＡＴＣＧＡＧＧＴＧＧＴＧＧＡＡＧＴＧＧＴＣＣＣＣＡＴＣＡＧＣＣＡＣＴＴＡＴＡＣＡＴＣＣＴＴＧＴＣＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＧＣＣＴＣＴＣＣＴＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＧＣＴＧＧＧＣＧＡＣＡＡＴＣＡＧＧＴＣＡＴＧＣＣＣＡＡＧＡＣＡＧＧＣＣＴＣＣＴＧＡＴＡＡＴＣＧＴＣＣＴＧＧＣＣＡＴＡＡＴＣＧＣＡＡＴＡＧＡＧＧＧＣＧＡＣＴＧＴＧＣＣＣＣＴＧＡＧＧＡＧＡＡＡＡＴＣＴＧＧＧＡＧＧＡＧＣＴＧＡＧＴＡＴＧＴＴＧＧＡＧＧＴＧＴＴＴＧＡＧＧＧＧＡＧＧＧＡＧＧＡＣＡＧＴＧＴＣＴＴＣＧＣＡＣＡＴＣＣＣＡＧＧＡＡＧＣＴＧＣＴＣＡＴＧＣＡＡＧＡＣＣＴＧＧＴＧＣＡＧＧＡＡＡＡＣＴＡＣＣＴＧＧＡＧＴＡＣＣＧＧＣＡＧＧＴＧＣＣＴＧＧＴＡＧＡＧＡＣＣＣＡＧＣＣＴＧＴＴＡＴＧＡＡＴＴＴＣＴＧＴＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＴＴＡＴＣＧＡＴＡＣＴＡＧＴＴＡＴＧＴＧＡＡＡＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＴＡＣＡＣＴＡＡＡＧＡＴＣＧＧＴＧＧＡＧＡＡＣＣＴＣＡＣＡＴＴＴＣＣＴＡＣＣＣＡＣＣＣＣＴＧＣＡＴＧＡＡＣＧＧＧＣＴＴＴＧＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＡＡＧＡＧＧＧＴＧＧＴＴＣＴＧＧＴＡＧＣＡＴＧＣＡＧＡＴＣＴＴＣＧＴＧＡＡＧＡＣＧＴＴＡＡＣＣＧＧＴＡＡＡＡＣＣＡＴＡＡＣＴＣＴＣＧＡＡＧＴＴＧＡＡＣＣＡＴＣＣＧＡＴＡＣＣＡＴＣＧＡＡＡＡＣＧＴＴＡＡＧＧＣＴＡＡＡＡＴＴＣＡＡＧＡＣＡＡＧＧＡＡＧＧＣＡＴＴＣＣＡＣＣＴＧＡＴＣＡＡＣＡＡＡＧＡＴＴＧＡＴＣＴＴＴＧＣＣＧＧＴＡＡＧＣＡＧＣＴＧＧＡＧＧＡＣＧＧＴＡＧＡＡＣＧＣＴＧＴＣＴＧＡＴＴＡＣＡＡＣＡＴＴＣＡＧＡＡＧＧＡＧＴＣＧＡＣＣＴＴＡＣＡＴＣＴＴＧＴＣＴＴＡＡＧＡＣＴＡＡＧＡＧＧＴＧＧＴＡＡＡＡＴＧＧＴＴＧＡＡＣＴＴＧＴＴＣＡＴＴＴＴＣＴＴＴＧＡＣＴＣＧＡＧＣＧＣＧＣＴＧＧＧＣＣＣＴＴＴＡＡＡＣＣＣＧＣＴＧＡＴＣＡＧＣＣＴＣＧＡＣＣＧＴＧＣＣＴＴＣＴＡＧＴＴＧＣＣＡＧＣＣＡＴＣＴＧＴＴＧＴＴＴＧＣＣＣＣＴＣＣＣＣＣＧＴＧＣＣＴＴＣＣＴＴＧＡＣＣＣＴＧＧＡＡＧＧＴＧＣＣＡＣＴＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＴＴＴＣＣＴＡＡＴＡＡＡＡＴＧＡＧＧＡＡＡＴＴＧＣＡＴＣＧＣＡＴＴＧＴＣＴＧＡＧＴＡＧＧＴＧＴＣＡＴＴＣＴＡＴＴＣＴＧＧＧＧＧＧＴＧＧＧＧＴＧＧＧＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＧＧＧＡＧＧＡＴＴＧＧＧＡＡＧＡＣＡＡＴＡＧＣＡＧＧＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＡＴＧＣＧＧＴＧＧＧＣＴＣＴＡＴＧＧＣＴＴＣＴＡＣＴＧＧＧＣＧＧＴＴＴＴＡＴＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＣＧＡＡＣＣＧＧＡＡＴＴＧＣＣＡＧＣＴＧＧＧＧＣＧＣＣＣＴＣＴＧＧＴＡＡＧＧＴＴＧＧＧＡＡＧＣＣＣＴＧＣＡＡＡＧＴＡＡＡＣＴＧＧＡＴＧＧＣＴＴＴＣＴＣＧＣＣＧＣＣＡＡＧＧＡＴＣＴＧＡＴＧＧＣＧＣＡＧＧＧＧＡＴＣＡＡＧＣＴＣＴＧＡＴＣＡＡＧＡＧＡＣＡＧＧＡＴＧＡＧＧＡＴＣＧＴＴＴＣＧＣＡＴＧＡＴＴＧＡＡＣＡＡＧＡＴＧＧＡＴＴＧＣＡＣＧＣＡＧＧＴＴＣＴＣＣＧＧＣＣＧＣＴＴＧＧＧＴＧＧＡＧＡＧＧＣＴＡＴＴＣＧＧＣＴＡＴＧＡＣＴＧＧＧＣＡＣＡＡＣＡＧＡＣＡＡＴＣＧＧＣＴＧＣＴＣＴＧＡＴＧＣＣＧＣＣＧＴＧＴＴＣＣＧＧＣＴＧＴＣＡＧＣＧＣＡＧＧＧＧＣＧＣＣＣＧＧＴＴＣＴＴＴＴＴＧＴＣＡＡＧＡＣＣＧＡＣＣＴＧＴＣＣＧＧＴＧＣＣＣＴＧＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＡＧＡＣＧＡＧＧＣＡＧＣＧＣＧＧＣＴＡＴＣＧＴＧＧＣＴＧＧＣＣＡＣＧＡＣＧＧＧＣＧＴＴＣＣＴＴＧＣＧＣＡＧＣＴＧＴＧＣＴＣＧＡＣＧＴＴＧＴＣＡＣＴＧＡＡＧＣＧＧＧＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＣＴＡＴＴＧＧＧＣＧＡＡＧＴＧＣＣＧＧＧＧＣＡＧＧＡＴＣＴＣＣＴＧＴＣＡＴＣＴＣＡＣＣＴＴＧＣＴＣＣＴＧＣＣＧＡＧＡＡＡＧＴＡＴＣＣＡＴＣＡＴＧＧＣＴＧＡＴＧＣＡＡＴＧＣＧＧＣＧＧＣＴＧＣＡＴＡＣＧＣＴＴＧＡＴＣＣＧＧＣＴＡＣＣＴＧＣＣＣＡＴＴＣＧＡＣＣＡＣＣＡＡＧＣＧＡＡＡＣＡＴＣＧＣＡＴＣＧＡＧＣＧＡＧＣＡＣＧＴＡＣＴＣＧＧＡＴＧＧＡＡＧＣＣＧＧＴＣＴＴＧＴＣＧＡＴＣＡＧＧＡＴＧＡＴＣＴＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＣＡＴＣＡＧＧＧＧＣＴＣＧＣＧＣＣＡＧＣＣＧＡＡＣＴＧＴＴＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＡＡＧＧＣＧＡＧＣＡＴＧＣＣＣＧＡＣＧＧＣＧＡＧＧＡＴＣＴＣＧＴＣＧＴＧＡＣＣＣＡＴＧＧＣＧＡＴＧＣＣＴＧＣＴＴＧＣＣＧＡＡＴＡＴＣＡＴＧＧＴＧＧＡＡＡＡＴＧＧＣＣＧＣＴＴＴＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＴＣＧＡＣＴＧＴＧＧＣＣＧＧＣＴＧＧＧＴＧＴＧＧＣＧＧＡＣＣＧＣＴＡＴＣＡＧＧＡＣＡＴＡＧＣＧＴＴＧＧＣＴＡＣＣＣＧＴＧＡＴＡＴＴＧＣＴＧＡＡＧＡＧＣＴＴＧＧＣＧＧＣＧＡＡＴＧＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＴＴＣＣＴＣＧＴＧＣＴＴＴＡＣＧＧＴＡＴＣＧＣＣＧＣＴＣＣＣＧＡＴＴＣＧＣＡＧＣＧＣＡＴＣＧＣＣＴＴＣＴＡＴＣＧＣＣＴＴＣＴＴＧＡＣＧＡＧＴＴＣＴＴＣＴＧＡＡＴＴＡＴＴＡＡＣＧＣＴＴＡＣＡＡＴＴＴＣＣＴＧＡＴＧＣＧＧＴＡＴＴＴＴＣＴＣＣＴＴＡＣＧＣＡＴＣＴＧＴＧＣＧＧＴＡＴＴＴＣＡＣＡＣＣＧＣＡＴＡＣＡＧＧＴＧＧＣＡＣＴＴＴＴＣＧＧＧＧＡＡＡＴＧＴＧＣＧＣＧＧＡＡＣＣＣＣＴＡＴＴＴＧＴＴＴＡＴＴＴＴＴＣＴＡＡＡＴＡＣＡＴＴＣＡＡＡＴＡＴＧＴＡＴＣＣＧＣＴＣＡＴＧＡＧＡＣＡＡＴＡＡＣＣＣＴＧＡＴＡＡＡＴＧＣＴＴＣＡＡＴＡＡＴＡＧＣＡＣＧＴＧＴＧＴＧＴＧＡＡＡＴＴＧＴＴＡＴＣＣＧＣＴＣＡＣＡＡＴＴＣＣＡＣＡＣＡＴＧＴＧＴＧＡＡＡＴＴＧＴＴＡＴＣＣＧＣＴＣＡＣＡＡＴＴＣＣＡＣＡＣＡＴＧＴＧＴＧＡＡＡＴＴＧＴＴＡＴＣＣＧＣＴＣＡＣＡＡＴＴＣＣＡＣＡＣＡＣＡＣＧＴＧＣＴＡＡＡＡＣＴＴＣＡＴＴＴＴＴＡＡＴＴＴＡＡＡＡＧＧＡＴＣＴＡＧＧＴＧＡＡＧＡＴＣＣＴＴＴＴＴＧＡＴＡＡＴＣＴＣＡＴＧＡＣＣＡＡＡＡＴＣＣＣＴＴＡＡＣＧＴＧＡＧＴＴＴＴＣＧＴＴＣＣＡＣＴＧＡＧＣＧＴＣＡＧＡＣＣＣＣＧＴＡＧＡＡＡＡＧＡＴＣＡＡＡＧＧＡＴＣＴＴＣＴＴＧＡＧＡＴＣＣＴＴＴＴＴＴＴＣＴＧＣＧＣＧＴＡＡＴＣＴＧＣＴＧＣＴＴＧＣＡＡＡＣＡＡＡＡＡＡＡＣＣＡＣＣＧＣＴＡＣＣＡＧＣＧＧＴＧＧＴＴＴＧＴＴＴＧＣＣＧＧＡＴＣＡＡＧＡＧＣＴＡＣＣＡＡＣＴＣＴＴＴＴＴＣＣＧＡＡＧＧＴＡＡＣＴＧＧＣＴＴＣＡＧＣＡＧＡＧＣＧＣＡＧＡＴＡＣＣＡＡＡＴＡＣＴＧＴＣＣＴＴＣＴＡＧＴＧＴＡＧＣＣＧＴＡＧＴＴＡＧＧＣＣＡＣＣＡＣＴＴＣＡＡＧＡＡＣＴＣＴＧＴＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＡＣＣＴＣＧＣＴＣＴＧＣＴＡＡＴＣＣＴＧＴＴＡＣＣＡＧＴＧＧＣＴＧＣＴＧＣＣＡＧＴＧＧＣＧＡＴＡＡＧＴＣＧＴＧＴＣＴＴＡＣＣＧＧＧＴＴＧＧＡＣＴＣＡＡＧＡＣＧＡＴＡＧＴＴＡＣＣＧＧＡＴＡＡＧＧＣＧＣＡＧＣＧＧＴＣＧＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＧＧＧＧＴＴＣＧＴＧＣＡＣＡＣＡＧＣＣＣＡＧＣＴＴＧＧＡＧＣＧＡＡＣＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣＧＡＡＣＴＧＡＧＡＴＡＣＣＴＡＣＡＧＣＧＴＧＡＧＣＴＡＴＧＡＧＡＡＡＧＣＧＣＣＡＣＧＣＴＴＣＣＣＧＡＡＧＧＧＡＧＡＡＡＧＧＣＧＧＡＣＡＧＧＴＡＴＣＣＧＧＴＡＡＧＣＧＧＣＡＧＧＧＴＣＧＧＡＡＣＡＧＧＡＧＡＧＣＧＣＡＣＧＡＧＧＧＡＧＣＴＴＣＣＡＧＧＧＧＧＡＡＡＣＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＴＴＴＡＴＡＧＴＣＣＴＧＴＣＧＧＧＴＴＴＣＧＣＣＡＣＣＴＣＴＧＡＣＴＴＧＡＧＣＧＴＣＧＡＴＴＴＴＴＧＴＧＡＴＧＣＴＣＧＴＣＡＧＧＧＧＧＧＣＧＧＡＧＣＣＴＡＴＧＧＡＡＡＡＡＣＧＣＣＡＧＣＡＡＣＧＣＧＧＣＣＴＴＴＴＴＡＣＧＧＴＴＣＣＴＧＧＧＣＴＴＴＴＧＣＴＧＧＣＣＴＴＴＴＧＣＴＣＡＣＡＴＧＴＴＣＴＴ（配列番号２０）
【実施例２】
【０１１１】
標的分子の肺への送達。ＣＦＴＲタンパク質をコードするプラスミドを含む医薬組成物は、嚢胞性繊維症を罹患している患者の肺に投与される。プラスミドは、配列番号１９のＮＬＳを含有し、構成的プロモーターに結合される。肺の細胞はプラスミドを取り込み、ＣＦＴＲタンパク質が発現され、対象の肺の細胞における機能特性が見出される。
【実施例３】
【０１１２】
筋肉での標的分子の分泌。インシュリンタンパク質をコードするプラスミドを含む医薬組成物は、１型糖尿病を罹患している患者の筋肉細胞に投与される。プラスミドは、配列番号１９のＮＬＳを含有し、構成的プロモーターに結合される。筋肉細胞は、免疫系によって破壊された膵臓のベータ細胞の代わりに、必要なインシュリンを分泌し、正常な機能性を患者にもたらす。
【実施例４】
【０１１３】
標的分子の骨髄への送達。グルタミン酸をコードするプラスミドを含む医薬組成物は、赤血球の産生が起こる骨髄に投与される。プラスミドは、配列番号１９のＮＬＳを含有し、構成的プロモーターに結合される。グルタミン酸の配列は、患者のアルファサブユニットの６位でのバリンの間違ったコードを置換され、患者において赤血球の正常な形状および機能性をもたらす。
【実施例５】
【０１１４】
膵臓への標的分子の送達。増殖調節ｍｉＲＮＡをコードするプラスミドを含む医薬組成物は、膵がんを罹患している患者の膵臓に投与される。プラスミドは、配列番号１９のＮＬＳを含有し、構成的プロモーターに結合される。ｍｉＲＮＡ配列は、失われたｍｉＲＮＡを置き換え、がんネットワークの元々の制御を回復し、がんの悪性度および増殖を逆転させることができる。
【０１１５】
本明細書で提供する実施例は、本明細書に記載の核酸分子の、分子を送達し、それらを発現させる適用性を実証する。これは分子を細胞または組織に単に送達するために使用され、様々な標的分子に対する免疫応答を誘導するために使用される。
【０１１６】
本明細書に記載の実施例は、例示であり、実施形態の範囲を制限することを意図せず、実施形態の範囲を制限するために使用されるべきではない。各および全ての参照、刊行物、受託番号、特許、文献等は、その意図した目的のためにその全体が参照によって本明細書に組み入れられる。
【０１１７】
本記載は、特定の工程、組成物、または記載の方法論に限定されず、これらは変わり得る。本記載で使用される専門用語は、特定のバージョンまたは実施形態のみを記載する目的のためであり、本明細書に記載の実施形態の範囲を限定することを意図しない。他に示さない限り、本明細書で使用する全ての技術および科学用語は、当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。いくつかの場合では、一般に理解される意味を持つ用語は、明確性のためおよび／または即時参考のため本明細書で定義され、本明細書におけるそのような定義の包含は、必ずしも当業者に通常理解される実質的な違いを表すと解釈されるべきではない。しかしながら、矛盾する場合には、定義を含む特許明細書が優先である。
【０１１８】
上記から、本開示の様々な実施形態が例示の目的のために本明細書に記載され、その様々な改変は本開示の範囲および精神から逸脱することなく行われると理解される。したがって、本明細書に開示の様々な実施形態は、限定することを意図しない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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