(57)【要約】  四重極マスフィルタ（２）で選択したプリカーサイオンに所定のコリジョンエネルギ（CE）を与えて開裂させ、生成されたプロダクトイオンのうち所定のm/z範囲のイオンのみをイオントラップ（４）に蓄積し、そのあとＴＯＦ（５）で分離して検出する。目的化合物由来の一つのプリカーサイオンについて、設定された複数のCE値と細かく区分したm/z範囲との組み合わせ毎に質量分析を行ってスペクトルデータを取得し、スペクトルデータ積算部（８１）は、異なる（CE値，m/z範囲）の組み合わせの下での質量分析で得られたスペクトルデータを積算する。マススペクトル作成部（８２）は、積算されたスペクトルデータに基づき目的化合物に対応する一つのプロダクトイオンスペクトルを作成する。このスペクトルには、複数のCE値の下で得られた幅広い質量電荷比範囲のプロダクトイオンが高い感度で観測される。
2017017787.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料中の化合物をイオン化するイオン源と、生成された各種イオンの中で特定の質量電荷比を有するイオンをプリカーサイオンとして選別する第１質量分離部と、該プリカーサイオンを衝突誘起解離により開裂させるイオン開裂部と、その開裂により生成された各種プロダクトイオンを質量分析する第２質量分離部及び検出器と、を具備し、前記第１質量分離部、前記イオン開裂部、若しくは前記第２質量分離部のいずれかをイオン蓄積部として動作させることによって、又は、前記第１質量分離部と前記イオン開裂部との間、若しくは、前記イオン開裂部と前記第２質量分離部との間に設けられたイオン蓄積部によって、イオンを一時的に蓄積可能であるタンデム型質量分析装置において、
a)前記イオン開裂部における衝突誘起解離の際にプリカーサイオンに付与される衝突エネルギをｍ段階（ただしｍは２以上の整数）に変更する衝突エネルギ設定部と、
b)前記イオン蓄積部に蓄積するイオンの質量電荷比範囲を質量電荷比方向にずらしたｎ段階（ただしｎは２以上の整数）に変更する質量電荷比範囲設定部と、
c)前記衝突エネルギ設定部によりｍ段階の衝突エネルギのうちの一つを設定するとともに、前記質量電荷比範囲設定部によりｎ段階の質量電荷比範囲のうちの一つを設定し、その衝突エネルギと質量電荷比範囲とを組み合わせた条件の下での所定のプリカーサイオンに対するプロダクトイオンの質量分析を実施するように各部の動作を制御するものであって、衝突エネルギと質量電荷比範囲との組み合わせが相違するｍ×ｎ個の全ての組み合わせについて、それぞれ少なくとも１回ずつプロダクトイオンの質量分析を実施するように各部の動作を制御する分析制御部と、
d)前記分析制御部による制御の下で少なくともｍ×ｎ回実施されたプロダクトイオンの質量分析により得られたスペクトルデータを積算することで、所定質量電荷比範囲に亘る一つのマススペクトルを作成するデータ処理部と、
を備えることを特徴とするタンデム型質量分析装置。
【請求項２】
試料中の化合物をイオン化するイオン源と、生成された各種イオンの中で特定の質量電荷比を有するイオンをプリカーサイオンとして選別する第１質量分離部と、該プリカーサイオンを衝突誘起解離により開裂させるイオン開裂部と、その開裂により生成された各種プロダクトイオンを質量分析する第２質量分離部及び検出器と、を具備し、前記第１質量分離部、前記イオン開裂部、若しくは前記第２質量分離部のいずれかをイオン蓄積部として動作させることによって、又は、前記第１質量分離部と前記イオン開裂部との間、若しくは、前記イオン開裂部と前記第２質量分離部との間に設けられたイオン蓄積部によって、イオンを一時的に蓄積可能であるタンデム型質量分析装置において、
a)前記イオン開裂部における衝突誘起解離の際にプリカーサイオンに付与される衝突エネルギをｍ段階（ただしｍは２以上の整数）に変更する衝突エネルギ設定部と、
b)前記イオン蓄積部に蓄積するイオンの質量電荷比範囲を質量電荷比方向にずらしたｎ段階（ただしｎは２以上の整数）に変更する質量電荷比範囲設定部と、
c)前記衝突エネルギ設定部によりｍ段階の衝突エネルギのうちの一つを設定するとともに、前記質量電荷比範囲設定部によりｎ段階の質量電荷比範囲のうちの一つを設定し、その衝突エネルギと質量電荷比範囲とを組み合わせた条件の下での所定のプリカーサイオンに対するプロダクトイオンの質量分析を実施するように各部の動作を制御するものであって、ｍ段階の衝突エネルギのそれぞれに対しｎ段階の質量電荷比範囲のうちのｎよりも小さい任意の整数の質量電荷比範囲を、少なくともｎ段階の質量電荷比範囲が少なくとも一回ずつ選択されるようにそれぞれ組み合わせ、そのｍ又はｎのいずれか大きいほうの値以上である全ての組み合わせについて、それぞれ少なくとも１回ずつプロダクトイオンの質量分析を実施するように各部の動作を制御する分析制御部と、
d)前記分析制御部による制御の下でｍ又はｎのいずれか大きいほうの値以上の回数だけ実施されたプロダクトイオンの質量分析により得られたスペクトルデータを積算することで、所定質量電荷比範囲に亘る一つのマススペクトルを作成するデータ処理部と、
を備えることを特徴とするタンデム型質量分析装置。
【請求項３】
請求項１又は２に記載のタンデム型質量分析装置であって、
前記第２質量分離部は飛行時間型質量分析器であることを特徴とするタンデム型質量分析装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特定の質量電荷比m/zを有するイオンを衝突誘起解離（ＣＩＤ＝Collision-Induced Dissociation）等により開裂させ、これにより生成されるプロダクトイオン（フラグメントイオン）の質量分析を行うタンデム型質量分析装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
分子量が大きな化合物を同定したりその化学構造を解析したりするために、質量分析の一手法であるＭＳ／ＭＳ分析（タンデム分析）は有用な手法であり、様々な分野において近年広く利用されている。ＭＳ／ＭＳ分析を利用して目的化合物の構造を解析する際には、一般に、試料から生成された各種イオンの中で目的化合物に由来する特定の質量電荷比を有するイオンをプリカーサイオンとして選択し、該プリカーサイオンをＣＩＤガスに接触させる等の手法により開裂させ、それによって生成されたプロダクトイオンを質量電荷比に応じて分離して検出する。そして、その検出信号に基づいてプロダクトイオンの質量電荷比と強度との関係を示すマススペクトル（プロダクトイオンスペクトル）を取得する。そのマススペクトルにおいて観測されるプロダクトイオンのピークパターン、場合によっては、二つのピークの質量電荷比差から求まるニュートラルロスも利用して、目的化合物の化学構造を推定する。【０００３】
ＭＳ／ＭＳ分析を行う質量分析装置としてよく知られているのは、ＣＩＤを行うコリジョンセルを挟んでその前後に四重極マスフィルタを配置した三連四重極型質量分析装置である。また、三連四重極型質量分析装置において後段の四重極マスフィルタを飛行時間型質量分析器に置き換えたいわゆるＱ−ＴＯＦ型質量分析装置は、三連四重極型質量分析装置に比べて構造が複雑で高価であるものの、より精度の高いマススペクトルを取得することができる。本明細書では、コリジョンセルを挟んでその前後にそれぞれ質量分析器を備えた質量分析装置をタンデム型質量分析装置と呼ぶ。【０００４】
よく知られているように、化合物における様々な結合部位の結合エネルギは相違するため、その結合部位の切断され易さも異なる。そのため、タンデム型質量分析装置において、例えば前段の四重極マスフィルタに印加されるバイアス直流電圧とコリジョンセル内に配設されたイオンガイドに印加されるバイアス直流電圧との電圧差等で決まるコリジョンエネルギを変化させると、同じ化合物由来のプリカーサイオンでも、開裂の態様が異なることが知られている。一般に、複雑な化合物の化学構造を解析するには、該化合物由来の様々な断片（プロダクトイオン及びニュートラルロス）の質量が分かったほうが都合がよい。そこで、同一の化合物に対してコリジョンエネルギを複数段階に変えながらプロダクトイオンの質量分析を繰り返し、そうして得られた複数のマススペクトルを積算したり平均化したりすることで、より多くの種類のプロダクトイオンが観測されるマススペクトルを作成し、このマススペクトルを用いた定性や構造解析を行う手法が従来知られている。【０００５】
また、異なるコリジョンエネルギの下での開裂によって生成された様々な種類のプロダクトイオンが観測されるマススペクトルを少ない分析回数で以て取得するための装置として、特許文献１に記載の質量分析装置が知られている。この質量分析装置では、コリジョンセルと後段の質量分離部（飛行時間型質量分析器）との間にイオンを一時的に捕捉するイオントラップを設け、異なる時点に異なるコリジョンエネルギの下で開裂により生成されたプロダクトイオンを一旦イオントラップに蓄積したあと、その蓄積されたイオンをイオントラップから一斉に排出して飛行時間型質量分析器で質量分析することでマススペクトルを取得する。これにより、異なるコリジョンエネルギの下で開裂した、つまりは異なる開裂の態様によって得られた様々なプロダクトイオンが観測されるマススペクトルを、飛行時間型質量分析器における１回の質量分析動作によって得ることができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２０１４−１６５０５３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上述したように特許文献１に記載の質量分析装置によれば、飛行時間型質量分析器における１回の質量分析動作によって多種類のプロダクトイオンが観測されるマススペクトルを取得することができるという利点がある。【０００８】
一方で、こうした質量分析装置においてマススペクトルにおけるイオンの検出感度を高くするためには、できるだけ多くの量のイオンをイオントラップに蓄積し質量分析に供する必要がある。互いに平行に配置した複数本（通常は４本）のロッド状電極で囲まれる長軸方向に長い空間にイオンを捕捉するリニアイオントラップでは、イオンを蓄積する空間が広いため蓄積可能なイオンの量が比較的多い。これに対し、円環状のリング電極とこれを挟んで配置される一対のエンドキャップ電極から成る３次元四重極型イオントラップでは、イオンを蓄積する空間が狭く、空間電荷効果のために蓄積可能なイオンの量がかなり限られる。３次元四重極型イオントラップを用いた場合、プロダクトイオンの種類が比較的少なければ、一つのプロダクトイオン当たりの信号強度は十分に高くなるが、一般に、化合物の化学構造が複雑であるほどプロダクトイオンの種類が多くなるため、一つのプロダクトイオン当たりの信号強度が相対的に低くなり、定性や構造解析には不利である。【０００９】
本発明はこうした課題を解決するために成されたものであり、その目的とするところは、一つの化合物に由来する多種類のプロダクトイオンが高い感度で以て観測されるマススペクトルを取得することができ、それによって化合物の同定や構造解析の精度を向上させることができるタンデム型質量分析装置を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記課題を解決するために成された本発明の第１の態様のタンデム型質量分析装置は、試料中の化合物をイオン化するイオン源と、生成された各種イオンの中で特定の質量電荷比を有するイオンをプリカーサイオンとして選別する第１質量分離部と、該プリカーサイオンを衝突誘起解離により開裂させるイオン開裂部と、その開裂により生成された各種プロダクトイオンを質量分析する第２質量分離部及び検出器と、を具備し、前記第１質量分離部、前記イオン開裂部、若しくは前記第２質量分離部のいずれかをイオン蓄積部として動作させることによって、又は、前記第１質量分離部と前記イオン開裂部との間、若しくは、前記イオン開裂部と前記第２質量分離部との間に設けられたイオン蓄積部によって、イオンを一時的に蓄積可能であるタンデム型質量分析装置において、
a)前記イオン開裂部における衝突誘起解離の際にプリカーサイオンに付与される衝突エネルギをｍ段階（ただしｍは２以上の整数）に変更する衝突エネルギ設定部と、
b)前記イオン蓄積部に蓄積するイオンの質量電荷比範囲を質量電荷比方向にずらしたｎ段階（ただしｎは２以上の整数）に変更する質量電荷比範囲設定部と、
c)前記衝突エネルギ設定部によりｍ段階の衝突エネルギのうちの一つを設定するとともに、前記質量電荷比範囲設定部によりｎ段階の質量電荷比範囲のうちの一つを設定し、その衝突エネルギと質量電荷比範囲とを組み合わせた条件の下での所定のプリカーサイオンに対するプロダクトイオンの質量分析を実施するように各部の動作を制御するものであって、衝突エネルギと質量電荷比範囲との組み合わせが相違するｍ×ｎ個の全ての組み合わせについて、それぞれ少なくとも１回ずつプロダクトイオンの質量分析を実施するように各部の動作を制御する分析制御部と、
d)前記分析制御部による制御の下で少なくともｍ×ｎ回実施されたプロダクトイオンの質量分析により得られたスペクトルデータを積算することで、所定質量電荷比範囲に亘る一つのマススペクトルを作成するデータ処理部と、
を備えることを特徴としている。【００１１】
また上記課題を解決するために成された本発明の第２の態様のタンデム型質量分析装置は、試料中の化合物をイオン化するイオン源と、生成された各種イオンの中で特定の質量電荷比を有するイオンをプリカーサイオンとして選別する第１質量分離部と、該プリカーサイオンを衝突誘起解離により開裂させるイオン開裂部と、その開裂により生成された各種プロダクトイオンを質量分析する第２質量分離部及び検出器と、を具備し、前記第１質量分離部、前記イオン開裂部、若しくは前記第２質量分離部のいずれかをイオン蓄積部として動作させることによって、又は、前記第１質量分離部と前記イオン開裂部との間、若しくは、前記イオン開裂部と前記第２質量分離部との間に設けられたイオン蓄積部によって、イオンを一時的に蓄積可能であるタンデム型質量分析装置において、
a)前記イオン開裂部における衝突誘起解離の際にプリカーサイオンに付与される衝突エネルギをｍ段階（ただしｍは２以上の整数）に変更する衝突エネルギ設定部と、
b)前記イオン蓄積部に蓄積するイオンの質量電荷比範囲を質量電荷比方向にずらしたｎ段階（ただしｎは２以上の整数）に変更する質量電荷比範囲設定部と、
c)前記衝突エネルギ設定部によりｍ段階の衝突エネルギのうちの一つを設定するとともに、前記質量電荷比範囲設定部によりｎ段階の質量電荷比範囲のうちの一つを設定し、その衝突エネルギと質量電荷比範囲とを組み合わせた条件の下での所定のプリカーサイオンに対するプロダクトイオンの質量分析を実施するように各部の動作を制御するものであって、ｍ段階の衝突エネルギのそれぞれに対しｎ段階の質量電荷比範囲のうちのｎよりも小さい任意の整数の質量電荷比範囲を、少なくともｎ段階の質量電荷比範囲が少なくとも一回ずつ選択されるようにそれぞれ組み合わせ、そのｍ又はｎのいずれか大きいほうの値以上である全ての組み合わせについて、それぞれ少なくとも１回ずつプロダクトイオンの質量分析を実施するように各部の動作を制御する分析制御部と、
d)前記分析制御部による制御の下でｍ又はｎのいずれか大きいほうの値以上の回数だけ実施されたプロダクトイオンの質量分析により得られたスペクトルデータを積算することで、所定質量電荷比範囲に亘る一つのマススペクトルを作成するデータ処理部と、
を備えることを特徴としている。【００１２】
本発明に係るタンデム型質量分析装置では、第１質量分離部及び第２質量分離部における質量分離手法は特に限定されないが、典型的には、第１質量分離部として四重極マスフィルタ、第２質量分離部として飛行時間型質量分離器を用いるとよい。【００１３】
また、イオン蓄積部を第１質量分離部等とは別に設ける場合には、該イオン蓄積部は３次元四重極型イオントラップ又はリニア型イオントラップであるし、第１質量分離部やイオン開裂部等をイオン蓄積部として機能させたい場合には例えば、四重極やそれ以上の多重極を構成するロッド電極（又はロッド電極の一部）に所定の電圧を印加することで、実質的にリニア型イオントラップと同等の機能を持たせるようにすればよい。
なお、３次元四重極型、リニア型のいずれのイオントラップにおいても、イオンを捕捉するための高周波電場を形成するべくイオントラップを構成する電極に印加される高周波電圧の周波数や振幅などを変更することによって、イオンが安定的に捕捉される質量電荷比範囲を変えることができる。【００１４】
本発明に係るタンデム型質量分析装置において、第１質量分離部が四重極マスフィルタ、イオン開裂部がコリジョンセルである場合、衝突エネルギ設定部は、四重極マスフィルタを構成するロッド状電極とコリジョンセル内に配置されるイオンガイドを構成するロッド状電極にそれぞれ印加されるバイアス直流電圧の電圧差を変更することで、衝突エネルギを変更することができる。また、イオン蓄積部が３次元四重極型イオントラップ又はリニア型イオントラップである場合、質量電荷比範囲設定部は上述したように、イオントラップを構成する電極に印加する高周波電圧の周波数や振幅などを変更することで、蓄積されるイオンの質量電荷比範囲を変更することができる。衝突エネルギと質量電荷比範囲の変更のいずれも電圧の変更によって行えるので、その変更は極めて高速に行うことができる。【００１５】
本発明の第１の態様のタンデム型質量分析装置では、分析制御部は、ｍ段階の衝突エネルギとｍ段階の質量電荷比範囲との全ての組み合わせについて、所定のプリカーサイオンに対するプロダクトイオンの質量分析を実施するように各部を制御する。或る一つの衝突エネルギと或る一つの質量電荷比範囲との組み合わせについての質量分析を実施する際には、衝突エネルギ設定部により設定される衝突エネルギと質量電荷比範囲設定部により設定される質量電荷比範囲とをそれぞれ固定し、目的化合物由来の特定の質量電荷比を有するイオンがプリカーサイオンとして選択されるように第１質量分離部を動作させる。【００１６】
第１質量分離部で選択されたプリカーサイオンは所定の衝突エネルギを付与されてイオン開裂部に達し、衝突誘起解離によって開裂を生じて各種のプロダクトイオンが生成される。プロダクトイオンは例えばイオン開裂部と第２質量分離部との間に配置されたイオン蓄積部に入る。イオン蓄積部は所定の時間幅の間に、入射して来るプロダクトイオンをその内部に蓄積する。このイオン蓄積期間中、衝突エネルギと質量電荷比範囲とは固定されているので、決まった種類のプロダクトイオンのうちの所定の質量電荷比範囲に入るイオンのみがイオン蓄積部に蓄積される。そして、所定の時間幅だけイオンを蓄積したあと、該イオン蓄積部からイオンを吐き出して第２質量分離部に導入し、プロダクトイオンを質量電荷比毎に分離して検出する。したがって、この１回の質量分析によって、一つのプリカーサイオンに由来して特定の衝突エネルギの下での衝突誘起解離によって生成される、所定の質量電荷比範囲のみのプロダクトイオンスペクトルを示すデータが得られる。イオン蓄積部に蓄積可能なイオンの量は限られているものの、質量電荷比範囲を限定しているため、蓄積されるプロダクトイオンの種類はそれほど多くなく、一種のプロダクトイオン当たりのイオン数は十分確保することができ、十分な強度でイオンを検出することができる。【００１７】
衝突エネルギと質量電荷比範囲との全ての組み合わせについて同様の質量分析が実施されるから、質量分析毎に得られるスペクトルデータのイオン強度は十分に高い。データ処理部はこうしたスペクトルデータを積算し、幅広い質量電荷比範囲に亘るプロダクトイオンスペクトルを作成する。たとえプリカーサイオンが同一であっても、衝突エネルギが異なると生成されるプロダクトイオンの種類やその生成割合が大きく変化する。この第１の態様のタンデム型質量分析装置では、異なる衝突エネルギの下で生成されるプロダクトイオンを幅広い質量電荷比範囲に亘って網羅的に検出することができる。したがって、データ処理部で作成されるプロダクトイオンスペクトルには、一つの目的化合物に由来する様々なプロダクトイオンがいずれも十分な感度で観測されることになる。【００１８】
なお、当然のことながら、測定時間が許せば、衝突エネルギと質量電荷比範囲との一つの組み合わせに対する質量分析を複数回実行してもよい。即ち、例えば、衝突エネルギと質量電荷比範囲との組み合わせが相違するｍ×ｎ個の全ての組み合わせをＬ回（ただしＬは２以上の整数）実行し、そのｍ×ｎ×Ｌ回実施された質量分析により得られたスペクトルデータを積算することでプロダクトイオンスペクトルを得るようにすればよい。【００１９】
一方、本発明の第２の態様のタンデム型質量分析装置では、上記第１の態様とは異なり、ｍ×ｎ個の衝突エネルギと質量電荷比範囲との全ての組み合わせのうち、少なくとも一つの組み合わせに対するプロダクトイオンの質量分析を省略する。何故なら、観測されるプロダクトイオンの数が少ない又は殆どないと推測されるような衝突エネルギと質量電荷比範囲との組み合わせがある場合には、そうした条件での質量分析を実行することは時間の無駄であるからである。したがって、そうした実質的に有用な結果が得られない衝突エネルギと質量電荷比範囲との組み合わせを、予め実施した予備的な測定に基づいて又は文献などから収集した先験情報に基づいて把握し、分析制御部は、そうした組み合わせについてのプロダクトイオンの質量分析を実施しないように各部を制御すればよい。【００２０】
具体的には例えば、或る種の化合物において衝突エネルギを大きくするほど質量電荷比が小さなプロダクトイオンにまで開裂され易いのであれば、小さな衝突エネルギを与えたときには質量電荷比が小さなプロダクトイオンは観測されにくい。そこで、こうした現象が分かっている又はそうした推定が可能である場合には、小さな衝突エネルギ値と低い質量電荷比範囲との組み合わせに対するプロダクトイオンの質量分析を省略すればよい。
このように実質的に有用なスペクトルデータが得られない衝突エネルギと質量電荷比範囲との組み合わせに対する質量分析を実行しないことで、同等の品質のプロダクトイオンスペクトルを得るのに必要な測定時間を短縮することができるし、また、同じ測定時間であればより高感度のプロダクトイオンスペクトルを得ることができる。【００２１】
質量分析装置の前段にガスクロマトグラフ（ＧＣ）や液体クロマトグラフ（ＬＣ）を接続し、それらクロマトグラフのカラムで時間方向に分離された化合物を質量分析装置で分析する場合、即ち、ＧＣ−ＭＳやＬＣ−ＭＳにおいては、一つの化合物が質量分析装置に導入されている時間幅が限られる。また、カラムでの成分分離を行わない場合でも、フローインジェクション分析（ＦＩＡ）では同じように、一つの化合物が質量分析装置に導入されている時間幅は限られる。このような場合に、目的化合物に対する高感度で且つ質量電荷比範囲の広いプロダクトイオンスペクトルを得ることができる測定時間を短縮できることは、特に大きな利点であるといえる。【００２２】
なお、本発明の第２の態様のタンデム型質量分析装置では、衝突エネルギと質量電荷比範囲との全ての組み合わせについて同じ回数だけ質量分析を実行した結果を一つのマススペクトルに反映させるようにしてもよいが、組み合わせ毎に質量分析の実行回数が異なるようにしてもよい。即ち、化合物の構造解析のために重要度の高いプロダクトイオンが得られると推測されるような衝突エネルギと質量電荷比範囲との組み合わせについては他の組み合わせよりも質量分析の実行回数を増やし、それによって重要度の高いプロダクトイオンが高い感度で観測されるようにするとよい。
【発明の効果】
【００２３】
本発明の第１及び第２の態様のタンデム型質量分析装置によれば、一つの化合物に由来する幅広い質量電荷比範囲のプロダクトイオンが高い感度で以て観測されるマススペクトルを効率良く取得することができる。それによって、化合物に関する多くの断片情報、即ち、プロダクトイオン及びニュートラルロスの質量情報、が得られるので、その化合物の定性や構造解析の精度を向上させることができる。【００２４】
また特に本発明の第２の態様のタンデム型質量分析装置によれば、上述したようなマススペクトルを取得するための測定に要する時間を短縮することができるので、例えばＧＣ−ＭＳやＬＣ−ＭＳのように一つの化合物由来のイオンの測定に充てられる時間が短い場合であっても、化合物の定性や構造解析を行うのに十分な品質のマススペクトルを得ることができる。したがって、ＧＣ−ＭＳやＬＣ−ＭＳを用いた多成分一斉分析にも好適である。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】本発明の一実施例であるタンデム型質量分析装置の要部の構成図。
【図２】本実施例のタンデム型質量分析装置におけるＭＳ／ＭＳ分析モードの一例の説明図。
【図３】本実施例のタンデム型質量分析装置におけるＭＳ／ＭＳ分析モードの別の例の説明図。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
以下、本発明の一実施例であるタンデム型質量分析装置について、添付図面を参照して説明する。図１は本実施例によるタンデム型質量分析装置の要部の構成図である。図１では記載していないが、この質量分析装置の前段には液体クロマトグラフ（ＬＣ）が接続され、ＬＣのカラムで成分分離された試料を含む溶出液がイオン源１に導入されるものとする。
【００２７】
本実施例のタンデム型質量分析装置は、図示しない真空チャンバの内部に、イオン源１と、四重極マスフィルタ２と、その内部に例えば八重極型のイオンガイド３１が配設されたコリジョンセル３と、イオントラップ４と、直交加速式リフレクトロン型の飛行時間型質量分析器５と、イオン検出器５５と、を備える。四重極マスフィルタ２は第１質量分離部、コリジョンセル３はイオン開裂部、イオントラップ４はイオン蓄積部、飛行時間型質量分析器５は第２質量分離部に相当する。なお、イオン源１と四重極マスフィルタ２との間やそれ以外の適宜の箇所に、イオンを後段へと効率よく輸送するためのイオンガイドやイオンレンズなどのイオン光学素子が設けられるが、図１ではそれら素子の記載を省略している。
【００２８】
ここでは、試料が液体試料であるので、イオン源１はエレクトロスプレイイオン化（ＥＳＩ）法や大気圧化学イオン化（ＡＰＣＩ）法などの大気圧イオン化法によるイオン源である。試料が気体試料である場合には、イオン源１として、電子イオン化（ＥＩ）法や化学イオン化（ＣＩ）法などによるイオン源を用いればよい。
【００２９】
イオントラップ４は、リング電極４１を挟んで一対のエンドキャップ電極４２、４３を配置した３次元四重極型の構成である。ただし、イオントラップ４は、イオンをその内部に蓄積可能であればよく、リニア型イオントラップでもよい。
【００３０】
飛行時間型質量分析器５は、直交型イオン加速部として押出し電極５１とグリッド電極５２とを有し、飛行空間５３に多数の反射電極からなる反射器５４を配置した構成である。ただし、直交加速式でなくてもよいし又リフレクトロン型でなくリニア型や周回型でもよい。
【００３１】
四重極マスフィルタ２を構成する各ロッド電極には、Ｑ１駆動部６１からそれぞれ所定電圧が印加される。イオンガイド３１を構成する各ロッド電極には、ＣＣ駆動部６２からそれぞれ所定電圧が印加される。イオントラップ４を構成するリング電極４１、エンドキャップ電極４２、４３には、ＩＴ駆動部６３からそれぞれ所定電圧が印加される。また、飛行時間型質量分析器５に含まれる押出し電極５１、グリッド電極５２、反射器５４などには、ＴＯＦ駆動部６４からそれぞれ所定電圧が印加される。それら各駆動部６１〜６４は制御部７により制御される。また、イオン検出器５５で得られた検出信号は、図示しないＡ／Ｄ変換器により所定時間間隔でサンプリングされてデジタルデータに変換され、データ処理部８に入力される。
【００３２】
制御部７は、分析条件決定部７１と分析制御部７２とを機能ブロックとして含む。またデータ処理部８は、スペクトルデータ積算部８１とマススペクトル作成部８２とを含む。制御部７には、ユーザーインターフェイスとして入力部９１及び表示部９２が接続されている。なお、一般に、制御部７及びデータ処理部８に含まれる機能の全て又は一部は、パーソナルコンピュータ（又はワークステーション）にインストールされた専用のソフトウエアを該コンピュータ上で実行することにより達成する構成とすることができる。
【００３３】
次に、本実施例のタンデム型質量分析装置において実施されるＭＳ／ＭＳ分析動作の一例を概略的に説明する。
ＬＣのカラムからの溶出液がイオン源１に導入され、イオン源１は導入された溶出液に含まれる化合物をイオン化する。イオン源１で生成された化合物由来のイオンは図示しないイオン光学素子等を経て四重極マスフィルタ２に導入される。制御部７の制御の下でＱ１駆動部６１は例えば、予め指定された特定の質量電荷比を有するイオンのみを通過させるような電圧を四重極マスフィルタ２に印加する。それにより、試料由来の様々なイオンの中で、特定の質量電荷比を有するイオンのみがプリカーサイオンとして選択的に四重極マスフィルタ２を通り抜ける。
【００３４】
プリカーサイオンは、例えば四重極マスフィルタ２とイオンガイド３１（又はコリジョンセル３のイオン入射開口部）との間の電位差等により決まるコリジョンエネルギを付与されてコリジョンセル３に入射する。コリジョンセル３の内部にはＨｅ、ＡｒなどのＣＩＤガスが導入されており、プリカーサイオンがＣＩＤガスに接触すると開裂を生じ、プロダクトイオンが生成される。この開裂の態様はコリジョンエネルギの大きさやＣＩＤガス圧などのＣＩＤ条件に依存する。そのため、例えばプリカーサイオンが同じでもコリジョンエネルギの大きさを変えると、開裂によって生成されるプロダクトイオンの種類やそれぞれの生成量が変化する。
【００３５】
ＣＣ駆動部６２からイオンガイド３１に印加される電圧によって形成される高周波電場の作用により、プロダクトイオンは収束されつつ進行しイオントラップ４に到達する。プロダクトイオンはエンドキャップ電極４２に穿設された入射孔を通してイオントラップ４の内部空間に導入され、ＩＴ駆動部６３からリング電極４１に印加される電圧によって形成される四重極電場の作用によりその内部空間に捕捉される。次々に入射して来るイオンはイオントラップ４の内部に蓄積される。所定時間、イオントラップ４の内部空間にイオンを蓄積したあと、ＩＴ駆動部６３からエンドキャップ電極４２、４３に所定の直流電圧を印加する。これによって、蓄積されていたイオンはイオントラップ４からほぼ一斉に射出され、飛行時間型質量分析器５のイオン加速部に送り込まれる。
【００３６】
ＴＯＦ駆動部６４はパケット状のイオンがイオン加速部に到達したタイミングで、押出し電極５１及びグリッド電極５２に所定電圧を印加し、各イオンにそれぞれ初期エネルギを与えてその進行方向と略直交する方向に加速する。加速されたイオンはグリッド電極５２を通過して飛行空間５３に導入され、反射器５４により形成された反射電場の作用で折返し飛行し、最終的にイオン検出器５５に到達する。イオン飛行開始時点がほぼ同一である各イオンは飛行中に質量電荷比に応じて分離され、質量電荷比が小さなイオンから順にイオン検出器５５に達する。したがって、イオン検出器５５からデータ処理部８へは、イオン加速部でのイオン加速時点（つまりイオン飛行開始時点）を飛行時間ゼロとしたときの飛行時間と信号強度との関係を示す飛行時間スペクトルデータが入力される。質量電荷比と飛行時間との関係は予め求めておくことができるから、その関係に基づいて飛行時間を質量電荷比に換算することにより、飛行時間スペクトルからマススペクトルを求めることができる。
【００３７】
こうして得られるマススペクトルは、特定のプリカーサイオンが開裂して生成された各種プロダクトイオンの質量電荷比と強度との関係を示すプロダクトイオンスペクトルである。上述したように、コリジョンエネルギ等のＣＩＤ条件を変えると、得られるプロダクトイオンの種類やそれぞれの強度が変化する。特に化合物の構造を解析する際には、その化合物に由来する様々な種類のプロダクトイオンの質量情報が得られるほうが都合がよい。そこで、本実施例のタンデム型質量分析装置では、一つのプロダクトイオンスペクトルに反映させることができるプロダクトイオンを生成するコリジョンエネルギを複数設定可能としている。つまり、複数の異なるコリジョンエネルギの下での開裂によって生成された、異なる部分構造を持つプロダクトイオンが一つのマススペクトルに反映されるようにしている。
【００３８】
一方、イオントラップ４は或る時間幅の間に入射して来たイオンを蓄積し時間的に圧縮して射出することができるものの、空間電荷効果のために蓄積可能なイオンの量には限界がある。また、一般にイオントラップには捕捉可能な質量電荷比範囲に原理的な制約があるため、幅広い質量電荷比範囲のイオンを網羅的に蓄積することは難しい。そこで、本実施例のタンデム型質量分析装置では、イオントラップ４に蓄積するイオンの質量電荷比の幅を狭く（具体的には100程度）しておき、その幅に制限した、異なる（質量電荷比軸方向にずらした）質量電荷比範囲毎にイオントラップ４へのイオンの蓄積と蓄積したイオンに対する質量分析とを実施するようにしている。その場合、１回の質量分析（イオントラップ４からの１回のイオン射出及びその射出されたイオンに対する質量分析）で得られるマススペクトルデータの質量電荷比範囲は限定されたものであるが、異なる複数の質量電荷比範囲に対するマススペクトルデータを積算することで、幅広い質量電荷比範囲に対するマススペクトルデータを得ることができる。
【００３９】
本実施例のタンデム型質量分析装置では、上述した、異なるコリジョンエネルギの下での開裂により生成したプロダクトイオンを一つのマススペクトルに反映させつつ、幅広い質量電荷比範囲に対するマススペクトルを得るために、以下のような特徴的なＭＳ／ＭＳ分析モードでの分析を実施する。図２はこのＭＳ／ＭＳ分析モードの説明図である。
【００４０】
まず、分析の実行に先立って分析者は、複数のコリジョンエネルギ値（CE値）を分析条件の一つとして入力部９１から設定する。ここでは一例として、CE値としてCE1：-10V、CE2：-20V、CE3：-30V、の三つを設定するものとする。もちろん、これらは分析者の設定によらず、デフォルトとして決まっていてもよい。また、分析者は、測定対象の全質量電荷比範囲も入力部９１から設定する。ここでは一例として、全質量電荷比範囲をm/z 10-2000に設定したものとする。これもデフォルトとして決まっていてもよい。
【００４１】
分析条件決定部７１は、予め定められている質量電荷比幅に従って、上記のように設定された全質量電荷比範囲を複数の質量電荷比範囲（m/z範囲）に区分する。ここでは、質量電荷比幅を100とし、m/z範囲を、10-100、100-200、200-300、…、1800-1900、1900-2000、の全２１個に区分するものとする。次に分析条件決定部７１は、設定された全てのCE値と全てのm/z範囲との組み合わせを求める。CE値とm/z範囲との組み合わせを（CE値，m/z範囲）とすると、図２（ａ）に示すように、（-10, m/z 10-100）、（-20, m/z 10-100）、（-30, m/z 10-100）、（-10, m/z 100-200）、（-20, m/z 100-200）、…、（-10, m/z 1900-2000）、（-20, m/z 1900-2000）、（-30, m/z 1900-2000）、という、３×２１＝６３個の独立な、つまりはCE値とm/z範囲とが異なる組み合わせが得られる。
【００４２】
さらに分析条件決定部７１は、上述した６３個の（CE値，m/z範囲）の組み合わせの下での質量分析（ＭＳ／ＭＳ分析）を各１回ずつ実行する期間を１サイクルとし、一つの化合物に対しこれをＮサイクル実施するように測定メソッドを作成する。感度の高いマススペクトルを得るためにはサイクル数は多いほうが望ましいが、サイクル数が多いほど測定時間が長くなる。そこで、サイクルの繰り返し回数Ｎは分析者が設定できるようにしてもよいし、例えば一つの化合物に対して許容される測定時間が予め決められている場合には、その測定時間と１回の質量分析のための時間とから実施可能なサイクル数が自動的に算出されるようにしてもよい。特に、ＬＣやＧＣのカラムで成分分離された試料中の化合物を分析する場合には、そのＬＣやＧＣでの分離条件によって一つの化合物がイオン源１に導入される時間幅が相違する。そのため、目的とする化合物がイオン源１に導入される時間幅を考慮してサイクル数を適切に設定する必要がある。
【００４３】
なお、１回の質量分析に要する時間はm/z範囲とは無関係に一定にしておいてもよいが、実際には、イオンの質量電荷比が小さいほど飛行時間は短いから、m/z範囲が低質量電荷比側であるほど１回の質量分析に割り当てる時間を短くすることができる。そこで、m/z範囲に応じて１回の質量分析に割り当てる時間を変えるようにすることで、一つの化合物に対する測定時間を同じにしたままサイクル数Ｎを増やすことも可能である。
【００４４】
目的化合物が既知である場合には、目的化合物がイオン源１に導入される時間（つまりは保持時間）と、四重極マスフィルタ２で選択するプリカーサイオンの質量電荷比とを、分析条件の一つとして設定しておくことができる。その場合、分析開始から所定の時間が経過した時点で所定の時間範囲だけ、所定のプリカーサイオンに対する分析を実施するように測定メソッドを決めておけばよい。一方、試料に含まれる未知の化合物を同定したりその構造に関する情報を得たりしたい場合には、化合物の保持時間が未知であるから、プリカーサイオンの選択や開裂操作を伴わない通常の質量分析を所定時間間隔で繰り返し、リアルタイムで得られたマススペクトルに有意なピークが検出されたならば、該ピークをターゲットとして引き続いてＭＳ／ＭＳ分析を実施するように測定メソッドを定めればよい。こうした機能は例えば自動ＭＳn等として知られている。
【００４５】
分析が開始されると、分析制御部７２は分析条件決定部７１により定められた測定メソッドに従って分析を遂行する。例えば目的化合物が既知である場合には、その目的化合得物がイオン源１に導入されている期間に、該目的化合物に由来する特定の質量電荷比を有するイオンがプリカーサイオンとして四重極マスフィルタ２で選択され、コリジョンセル３において所定のコリジョンエネルギ（例えばCE1＝-10V）の下で開裂される。それにより生成された各種プロダクトイオンはイオントラップ４に蓄積される。このとき、イオントラップ４には所定の質量電荷比範囲（例えばm/z範囲＝m/z 10-100）のイオンのみが蓄積され、それ以外のイオンは排除される。こうして蓄積された、狭い質量電荷比幅である特定の質量電荷比範囲のプロダクトイオンが、飛行時間型質量分析器５で質量電荷比毎に分離され、イオン検出器５５により検出される。
【００４６】
１回の質量分析に対してデータ処理部８に入力される飛行時間スペクトルデータは、一つのコリジョンエネルギ値及び一つの質量電荷比範囲に対応するプロダクトイオンによるものだけである。したがって、この飛行時間スペクトルデータに基づいてマススペクトルを作成するとすれば、図２（ｂ）に示すように、狭い質量電荷比範囲におけるマススペクトルである。一つの目的化合物について、上述したように６３個の（CE値，m/z範囲）の組み合わせそれぞれについて質量分析が実行されると、観測されるピークが異なる６３個のマススペクトルが得られることになる（ただし、これらマススペクトルは実際に作成されるわけではなく、あくまでもマススペクトルを作成すればこのようなスペクトル波形となるという例である）。
【００４７】
スペクトルデータ積算部８１は、上述したように一つの目的化合物について順次入力される飛行時間スペクトルデータを積算する。これによって、m/z 10-2000の幅広い質量電荷比範囲に対応した幅広い飛行時間範囲に亘る飛行時間スペクトルデータが得られるし、しかもそのスペクトルデータには、-10V、-20V、-30Vという三つの異なるCE値の下での開裂によって生成されたプロダクトイオンの情報が含まれる。Ｎサイクルの質量分析により得られる飛行時間スペクトルデータが積算されたならば、マススペクトル作成部８２は、積算された飛行時間スペクトルデータに基づいて一つのマススペクトルを作成し（図２（ｃ）参照）、例えば表示部９２の画面上に表示する。このマススペクトルには、m/z 10-2000の幅広い質量電荷比範囲に亘るプロダクトイオンが観測され、しかもそのプロダクトイオンが三つの異なるCE値の下で生成されたものである。
【００４８】
そのマススペクトルから、一つの目的化合物の様々な断片の質量情報が得られるから、例えばそれら断片の質量情報から部分構造を求めることで、目的化合物の構造を推定することができる。様々な断片についての質量情報が網羅的に得られることで、構造推定が容易になり、その精度も向上する。
【００４９】
上記実施例のＭＳ／ＭＳ分析モードでは、設定されたCE値とm/z範囲とについて総当たり的な（CE値，m/z範囲）の組み合わせの下でＭＳ／ＭＳ分析が行われる。このため、複数のコリジョンエネルギの下で得られる幅広い質量電荷比範囲に亘るプロダクトイオンを網羅的に、つまりは取りこぼしなく検出できるという点で優れている。一方で、或るm/z範囲ではプロダクトイオンが観測されないとすると、その測定は時間の無駄であるといえる。
例えば、少なくとも特定の種類の化合物では、コリジョンエネルギが大きいほど開裂が起こり易く、質量電荷比が小さなプロダクトイオンが生成され易いとすれば、大きなCE値と高いm/z範囲との組み合わせでは得られるプロダクトイオンが殆どないことが想定される。そこで、（CE値，m/z範囲）の全ての組み合わせについてのＭＳ／ＭＳ分析を実行するのではなく、有意なプロダクトイオンが観測されないことが分かっている又はそうした推定が可能である（CE値，m/z範囲）の組み合わせについてのＭＳ／ＭＳ分析を省略するようにしてもよい。
【００５０】
図３はこうしたＭＳ／ＭＳ分析モードの説明図である。
ここでは、CE値及びm/z範囲自体は図２に示したＭＳ／ＭＳ分析モードの例と同じであるが、CE値とm/z範囲との組み合わせの数はかなり絞られている。即ち、少なくとも或る種の化合物では、CE値が大きいほど壊れ易く質量電荷比が小さなプロダクトイオンが生じ易いと推定できる。そこで、コリジョンエネルギが最も大きいCE値＝-30Vに対しては質量電荷比範囲をm/z 10-600、コリジョンエネルギが次に大きいCE値＝-20Vに対しては質量電荷比範囲をm/z 600-1300、コリジョンエネルギが最も小さいCE値＝-10Vに対しては質量電荷比範囲をm/z 1300-2000、にそれぞれ限定し、（CE値，m/z範囲）の組み合わせを定めている。これによって、組み合わせの総数は２１になり、図２に示したＭＳ／ＭＳ分析モードにおける組み合わせ総数の１／３である。したがって、この場合には、図２に示したＭＳ／ＭＳ分析モードとサイクル数Ｎを同じにすれば、測定時間は約１／３に短縮される。また、測定時間を同じにすれば、サイクル数を約３倍にすることができ、その分だけ同じプロダクトイオンの強度が加算されるので感度が高くなる。
【００５１】
図３に示したＭＳ／ＭＳ分析モードでは、一つのm/z範囲に対して一つのコリジョンエネルギの組み合わせしかないが、当然のことながら、一部のm/z範囲に対しては複数のコリジョンエネルギの組み合わせが設定されるようにしてもよい。例えば、コリジョンエネルギが最も大きいCE値＝-30Vに対しては質量電荷比範囲をm/z 10-1000、コリジョンエネルギが次に大きいCE値＝-20Vに対しては質量電荷比範囲をm/z 600-1500、コリジョンエネルギが最も小さいCE値＝-10Vに対しては質量電荷比範囲をm/z 1000-2000、にそれぞれ限定し、（CE値，m/z範囲）の組み合わせを定めてもよい。この場合、（CE値，m/z範囲）の組み合わせによって一つの化合物に対する質量分析の実行回数が異なることになるが、その化合物についてのマススペクトルを作成するうえでは何ら不都合はない。
【００５２】
また、化合物の同定や構造解析を行ううえで、特定の質量電荷比を有するプロダクトイオンが検出されるか否かが重要であることが分かっていることがある。例えば分子量がほぼ同じである二つの異なる化合物Ａ、Ｂについて、それぞれ特定の質量電荷比を有するプロダクトイオンａ、ｂが検出されれば化合物Ａであることが確定するような場合である。こうした場合には、そうした特定の１乃至複数のプロダクトイオンの検出感度が高くなるように、それらプロダクトイオンが含まれるm/z範囲を組み合わせた（CE値，m/z範囲）の条件の下での質量分析の実行回数を他の組み合わせの下での質量分析の実行回数よりも多くするとよい。
【００５３】
例えば、化合物を特定するのに重要なプロダクトイオンの質量電荷比が231、562であることが既知である場合に、（-10，m/z 200-300）、（-20，m/z 200-300）、（-30，m/z 200-300）、（-10，m/z 500-600）、（-20，m/z 500-600）、（-30，m/z 500-600）の６個の（CE値，m/z範囲）の組み合わせの条件の下での質量分析をそれぞれ５回行い、それ以外の（CE値，m/z範囲）の組み合わせの条件の下での質量分析をそれぞれ２回行うようにすればよい。このように一つのマススペクトルに反映させる質量分析の実行回数の調整によって、重要なプロダクトイオンの取り逃しを回避しつつ、それ以外のプロダクトイオンの質量情報も確実に得ることができる。
【００５４】
なお、上記実施例のタンデム型質量分析装置は、いわゆるＱ−ＴＯＦ型質量分析装置に３次元四重極型イオントラップを組み合わせた構成であるが、本発明は三連四重極型質量分析装置にイオントラップを組み合わせた構成にも適用可能である。また、イオンを蓄積するためにイオントラップを設ける代わりに、例えばコリジョンセル３内に配置されたイオンガイド３１にイオンを蓄積する機能を持たせたり、飛行時間型質量分析器５の直交型イオン加速部にイオンを蓄積する機能を持たせたりして、そのイオン蓄積機能を利用して上述したような特徴的な分析を実行してもよい。
【００５５】
また、上記実施例や変形例はいずれも本発明の一例であるから、上記記載以外にも、本発明の趣旨の範囲で適宜に変形、追加、修正を行っても本願特許請求の範囲に包含されることは明らかである。
【符号の説明】
【００５６】
１…イオン源
２…四重極マスフィルタ
３…コリジョンセル
３１…イオンガイド
４…イオントラップ
４１…リング電極
４２、４３…エンドキャップ電極
５…飛行時間型質量分離器
５１…押出し電極
５２…グリッド電極
５３…飛行空間
５４…反射器
５５…イオン検出器
６１…Ｑ１駆動部
６２…ＣＣ駆動部
６３…ＩＴ駆動部
６４…ＴＯＦ駆動部
７…制御部
７１…分析条件決定部
７２…分析制御部
８…データ処理部
８１…スペクトルデータ積算部
８２…マススペクトル作成部
９１…入力部
９２…表示部
【図１】
2017017787.tif 000003
【図２】
2017017787.tif 000004
【図３】
2017017787.tif 000005
【手続補正書】
【提出日】平成29年9月5日(2017.9.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
本発明の第１の態様のタンデム型質量分析装置では、分析制御部は、ｍ段階の衝突エネルギとｎ段階の質量電荷比範囲との全ての組み合わせについて、所定のプリカーサイオンに対するプロダクトイオンの質量分析を実施するように各部を制御する。或る一つの衝突エネルギと或る一つの質量電荷比範囲との組み合わせについての質量分析を実施する際には、衝突エネルギ設定部により設定される衝突エネルギと質量電荷比範囲設定部により設定される質量電荷比範囲とをそれぞれ固定し、目的化合物由来の特定の質量電荷比を有するイオンがプリカーサイオンとして選択されるように第１質量分離部を動作させる。
【国際調査報告】
2017017787.tif 000006
2017017787.tif 000007
2017017787.tif 000008
2017017787.tif 000009