【手続補正書】
【提出日】平成24年4月12日(2012.4.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１) SEQ ID NO:17に記載のアミノ酸配列からの少なくとも12アミノ酸残基長を有するフラグメント；又は
２) １)の配列と同じ長さを有しかつ少なくとも95％の配列同一性を有し、下記特性：
ｉ) ５×104個の毒性マイコバクテリアに感染の28日後のマウスの脾臓から単離した約２×105個のＴ-リンパ球からなる懸濁液に、20μg/ml懸濁液未満の濃度でオリゴペプチドを加え、３日後に回収した上清中のIFN-γが少なくとも1,500pg/mlであることにより決定される、毒性マイコバクテリアによる一次感染の間にインビトロ反応を誘発する能力；
ii) 診断から０〜６ヶ月後のTB患者又はPPD陽性個体から回収した約1.0〜2.5×105個の末梢血液単核細胞(PBMC)又は全血液からなる懸濁液に、20μg/ml懸濁液未満の濃度でオリゴペプチドを加え、５日後に回収した上清中のIFN-γが少なくとも500pg/ml、好ましくは1,000pg/mlであることにより決定される、インビトロリコール反応を誘発する能力；
iii) TB患者の血清をPBSで1:20に希釈し、高くて20μg/mlの濃度のオリゴペプチドとインキュベートしたとき、ELISAで少なくとも0.1のODが得られるか又はウエスタンブロットで視覚確認できる反応を引き起こすことにより決定される、TB患者において特異的な抗体反応を誘発する能力；
iv) 臨床的又は半臨床的に毒性マイコバクテリア感染した個体から回収した約1.0〜2.5×105個の末梢血液単核細胞(PBMC)からなる懸濁液に、20μg/ml懸濁液未満の濃度でオリゴペプチドを加え、５日後に回収した上清中のIFN-γが少なくとも500pg/mlであり、好ましくは毒性マイコバクテリアに感染していない個体では前記IFN-γの放出を誘発しないことにより決定される、陽性インビトロ反応を誘発する能力；
ｖ) PPD陽性個体からのＴ細胞系の１〜５×105細胞/mlの懸濁液に、20μg/ml懸濁液未満の濃度でオリゴペプチドを加え、３〜５日後に回収した上清中のIFN-γが少なくとも500pg/mlであることにより決定される、陽性インビトロ反応を誘発する能力；
vi) PPD陽性個体からのＴ細胞系の１〜５×105細胞/mlの懸濁液に、20μg/ml懸濁液未満の濃度でオリゴペプチドを加え、３〜５日後に回収した上清中のIFN-γ量により評価したとき、少なくとも５の刺激指数(SI)のＴ細胞増殖により決定される、陽性インビトロ反応を誘発する能力(ここで、SIは、[抗原存在下での１分当たりの平均数]/[抗原なしでの１分当たりの平均数]として算出される)；
vii) 臨床的又は半臨床的に毒性マイコバクテリア感染した個体に、高くて100μgのオリゴペプチドを皮内注射又は局所塗布したとき、72〜96時間後に少なくとも10mmの直径の陽性反応を示すことにより決定される、陽性DTH反応を誘発する能力；
viii) 臨床的に又は半臨床的に毒性マイコバクテリア感染した個体に、高くて100μgのオリゴペプチドの皮内注射又は局所塗布したとき、72〜96時間後に少なくとも５mmの直径の陽性反応を示し、好ましくは毒性マイコバクテリアに感染した個体では前記反応を誘発しないことにより決定される、陽性DTH反応を誘発する能力
の少なくとも１つを有するオリゴペプチドを含み、該オリゴペプチドが非マイコバクテリア宿主細胞における組換え法により産生されたか、又は固相若しくは液相ペプチド合成法により合成されている、免疫学的組成物。
【請求項２】
前記オリゴペプチドフラグメントが少なくとも20アミノ酸残基長を有する請求項１による組成物。
【請求項３】
前記オリゴペプチドフラグメントが少なくとも24アミノ酸残基長を有する請求項１又は２による組成物。
【請求項４】
前記オリゴペプチドフラグメントが少なくとも304アミノ酸残基長を有する請求項１〜３のいずれか１つによる組成物。
【請求項５】
前記オリゴペプチドフラグメントがいずれのシグナル配列も有しない請求項１〜４のいずれか１つによる組成物。
【請求項６】
請求項１〜４のいずれか１つに規定されるオリゴペプチドとESAT-6、ESAT6のＴ細胞エピトープ、CFP10及びCFP10のＴ細胞エピトープからなる群から選択される少なくとも１つの融合パートナーとからなる融合タンパク質を含む請求項１〜４のいずれか１つによる組成物。
【請求項７】
前記オリゴペプチド又は融合タンパク質が該オリゴペプチド又は融合タンパク質の自己アジュバント作用を可能にするよう脂質化されている請求項１〜６のいずれか１つによる組成物。
【請求項８】
前記オリゴペプチドの配列同一性が少なくとも98％である請求項１〜７のいずれか１つによる組成物。
【請求項９】
各々が請求項１〜５のいずれか１つに規定されるオリゴペプチド、ESAT-6(SEQ ID NO:２)、ESAT6のＴ細胞エピトープ、CFP10(SEQ ID NO:１)及びCFP10のＴ細胞エピトープからなる群から選択される少なくとも２つの異なるポリペプチドフラグメントからなる請求項６による組成物。
【請求項１０】
さらに免疫学的かつ医薬的に許容される担体、ビヒクル又はアジュバントからなる請求項６〜９のいずれか１つによる組成物。
【請求項１１】
担体が、オリゴペプチドが疎水性の非共有相互作用により結合するポリマー、オリゴペプチドが共有結合するポリマー及びポリペプチドからなる群から選択され；ビヒクルが希釈剤及び懸濁剤からなる群から選択され；かつアジュバントがジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド(DDA)、Quil A、ポリI:C、フロイントの不完全アジュバント、IFN-γ、IL-2、IL-12、モノホスホリルリピドA(MPL)及びムラミルジペプチド(MDP)からなる群から選択される請求項１０による組成物。
【請求項１２】
皮膚検査試薬の形態である請求項１〜１１のいずれか１つによる組成物。
【請求項１３】
単核細胞による少なくとも１つのサイトカインの有意な放出に基づくヒトを含む動物における結核検出用組成物である請求項１〜１１のいずれか１つによる組成物。
【請求項１４】
検出手段を含む請求項１〜１２のいずれか１つによる組成物。
【請求項１５】
請求項１〜５のいずれか１つに規定されるオリゴペプチドを調製、合成又は単離し、そして適切な媒体にオリゴペプチドを可溶化又は分散し、任意に他のエム.ツベルクローシス抗原並びに/又は担体、ビヒクル及び/若しくはアジュバント物質を加えるか、又は
核酸配列を含む少なくとも１つの複製可能な発現ベクターを有する形質転換細胞であって、該核酸配列が請求項１〜５のいずれか１つに規定されるオリゴペプチドをコードする配列を有する形質転換細胞を培養し、そしてワクチン用媒体に細胞を移し、任意に担体、ビヒクル及び/又はアジュバント物質を加える
ことからなる、請求項８〜１５のいずれかによる組成物の産生方法。
【請求項１６】
動物又はヒト由来の血液試料を提供し、請求項１〜５のいずれか１つに規定されるオリゴペプチド又は請求項６に規定される融合タンパク質と動物由来の試料を接触させることからなり、血液試料中の単核細胞による少なくとも１つのサイトカインの細胞外相への有意な放出が、動物が感作されていることを示す、動物又はヒトにおいて結核菌群に属する細菌での過去もしくは現在の感作を検出する方法。