【手続補正書】
【提出日】平成24年6月8日(2012.6.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
UDP-グルコース脱水素酵素をコードする遺伝子及びUDP-グルクロン酸転移酵素をコードする遺伝子を発現可能に挿入して形質転換した出芽酵母であって、グルコース及び被抱合物質の存在下で培養して、前記形質転換出芽酵母の菌体内で前記被抱合物質のグルクロン酸抱合体を生成させることを含むグルクロン酸抱合体の製造に用いるための形質転換出芽酵母。
【請求項２】
シトクロムＰ４５０遺伝子をコードする遺伝子をさらに発現可能に挿入して形質転換した、請求項1に記載の形質転換出芽酵母。
【請求項３】
以下の(A)〜(G)のいずれかから選ばれる形質転換出芽酵母である請求項1又は2に記載の形質転換出芽酵母。
(A)UDP-グルコース脱水素酵素発現ベクター及びUDP-グルクロン酸転移酵素発現ベクターで形質転換した出芽酵母、
(B)UDP-グルクロン酸転移酵素及びUDP-グルコース脱水素酵素発現ベクターで形質転換した出芽酵母、
(C)UDP-グルコース脱水素酵素発現ベクター、UDP-グルクロン酸転移酵素発現ベクター及びシトクロムＰ４５０遺伝子発現ベクターで形質転換した出芽酵母、
(D)UDP-グルクロン酸転移酵素及びUDP-グルコース脱水素酵素発現ベクター、及びシトクロムＰ４５０遺伝子発現ベクターで形質転換した出芽酵母、
(E)UDP-グルクロン酸転移酵素発現ベクター、及びUDP-グルコース脱水素酵素及びシトクロムＰ４５０遺伝子発現ベクターで形質転換した出芽酵母、
(F)UDP-グルクロン酸転移酵素及びシトクロムＰ４５０遺伝子発現ベクター、及びUDP-グルコース脱水素酵素発現ベクターで形質転換した出芽酵母、並びに
(G)UDP-グルコース脱水素酵素、UDP-グルクロン酸転移酵素及びシトクロムＰ４５０遺伝子発現ベクターで形質転換した出芽酵母
【請求項４】
UDP-グルコース脱水素酵素発現ベクターが、出芽酵母発現ベクターにUDP-グルコース脱水素酵素遺伝子を発現可能に挿入したものであり、
UDP-グルクロン酸転移酵素発現ベクターが、出芽酵母発現ベクターにUDP-グルクロン酸転移酵素遺伝子を発現可能に挿入したものであり、
UDP-グルクロン酸転移酵素及びUDP-グルコース脱水素酵素発現ベクターが、出芽酵母発現ベクターにUDP-グルクロン酸転移酵素遺伝子及びUDP-グルコース脱水素酵素含を発現可能に挿入したものである、請求項3に記載の形質転換出芽酵母。
【請求項５】
出芽酵母発現ベクターが自律複製型ベクターまたは染色体組み込み型ベクターである、請求項4に記載の形質転換出芽酵母。
【請求項６】
UDP-グルコース脱水素酵素遺伝子が動物または植物由来の遺伝子である、請求項1〜5のいずれかに記載の形質転換出芽酵母。
【請求項７】
UDP-グルコース脱水素酵素遺伝子がシロイヌナズナ由来遺伝子またはラット由来遺伝子である、請求項1〜5のいずれかに記載の形質転換出芽酵母。
【請求項８】
UDP-グルクロン酸転移酵素遺伝子が哺乳動物由来の遺伝子である、請求項1〜7のいずれかに記載の形質転換出芽酵母。
【請求項９】
UDP-グルクロン酸転移酵素遺伝子がヒト由来の遺伝子である、請求項1〜7のいずれかに記載の形質転換出芽酵母。
【請求項１０】
シトクロムＰ４５０遺伝子発現ベクターが、出芽酵母発現ベクターにシトクロムＰ４５０遺伝子を発現可能に挿入したものである、請求項3〜9のいずれかに記載の形質転換出芽酵母。
【請求項１１】
前記UDP-グルクロン酸転移酵素発現ベクターは、UDP-グルクロン酸転移酵素遺伝子が、UGT1A1、UGT1A4、UGT1A8またはUGT1A9の遺伝子である場合、
前記グルクロン酸転移酵素遺伝子は、シグナル配列遺伝子を、UGT1A7、UGT1A6またはUGT1A10のシグナル配列遺伝子と置換したものであるか、または
シグナル配列遺伝子を以下に示すアミノ酸配列(a)〜(c)のいずれかをコードする遺伝子と置換したものである、請求項1〜10のいずれかに記載の形質転換出芽酵母。
(a) MARAGWTGLLPLYVCLLLTCGFAKAG(配列番号1)
(b) MACLLRSFQRISAGVFFLALWGMVVG(配列番号2)
(c) MAPRRVDQPRSFMCVSTADLWLCEAG(配列番号3)
【請求項１２】
被抱合物質がアルコール性水酸基を含む医薬品及び医薬品の候補物質、フェノール性水酸基を複数含むポリフェノール化合物、カルボン酸を含む非ステイロイド性抗炎症薬及びその候補物質、並びに１〜４級のいずれか少なくとも１つのアミンを含む化合物から成る群から選ばれる少なくとも1種である請求項1〜11のいずれかに記載の形質転換出芽酵母。
【請求項１３】
被抱合物質が、P450の代謝により抱合化を受ける官能基を生成する物質である請求項1〜12のいずれかに記載の形質転換出芽酵母。
【請求項１４】
被抱合物質が、メトキシ基またはエトキシ基を含む医薬品及び医薬品の候補物質、メチレンジオキシフェニル基をもつセサミン化合物、並びに水酸基を有しないジアゼピン系の医薬品及び医薬品の候補物質から成る群から選ばれる少なくとも1種である請求項13に記載の形質転換出芽酵母。
【請求項１５】
前記グルクロン酸抱合体の製造は、生成したグルクロン酸抱合体を、前記形質転換出芽酵母を破砕することなしに回収することを含む請求項1〜14のいずれかに記載の形質転換出芽酵母。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
本発明は以下の通りである。
[1]
UDP-グルコース脱水素酵素をコードする遺伝子及びUDP-グルクロン酸転移酵素をコードする遺伝子を発現可能に挿入して形質転換した出芽酵母であって、グルコース及び被抱合物質の存在下で培養して、前記形質転換出芽酵母の菌体内で前記被抱合物質のグルクロン酸抱合体を生成させることを含むグルクロン酸抱合体の製造に用いるための形質転換出芽酵母。
[2]
シトクロムＰ４５０遺伝子をコードする遺伝子をさらに発現可能に挿入して形質転換した、[1]に記載の形質転換出芽酵母。
[3]
以下の(A)〜(G)のいずれかから選ばれる形質転換出芽酵母である[1]又は[2]に記載の形質転換出芽酵母。
(A)UDP-グルコース脱水素酵素発現ベクター及びUDP-グルクロン酸転移酵素発現ベクターで形質転換した出芽酵母、
(B)UDP-グルクロン酸転移酵素及びUDP-グルコース脱水素酵素発現ベクターで形質転換した出芽酵母、
(C)UDP-グルコース脱水素酵素発現ベクター、UDP-グルクロン酸転移酵素発現ベクター及びシトクロムＰ４５０遺伝子発現ベクターで形質転換した出芽酵母、
(D)UDP-グルクロン酸転移酵素及びUDP-グルコース脱水素酵素発現ベクター、及びシトクロムＰ４５０遺伝子発現ベクターで形質転換した出芽酵母、
(E)UDP-グルクロン酸転移酵素発現ベクター、及びUDP-グルコース脱水素酵素及びシトクロムＰ４５０遺伝子発現ベクターで形質転換した出芽酵母、
(F)UDP-グルクロン酸転移酵素及びシトクロムＰ４５０遺伝子発現ベクター、及びUDP-グルコース脱水素酵素発現ベクターで形質転換した出芽酵母、並びに
(G)UDP-グルコース脱水素酵素、UDP-グルクロン酸転移酵素及びシトクロムＰ４５０遺伝子発現ベクターで形質転換した出芽酵母
[4]
UDP-グルコース脱水素酵素発現ベクターが、出芽酵母発現ベクターにUDP-グルコース脱水素酵素遺伝子を発現可能に挿入したものであり、
UDP-グルクロン酸転移酵素発現ベクターが、出芽酵母発現ベクターにUDP-グルクロン酸転移酵素遺伝子を発現可能に挿入したものであり、
UDP-グルクロン酸転移酵素及びUDP-グルコース脱水素酵素発現ベクターが、出芽酵母発現ベクターにUDP-グルクロン酸転移酵素遺伝子及びUDP-グルコース脱水素酵素含を発現可能に挿入したものである、[3]に記載の形質転換出芽酵母。
[5]
出芽酵母発現ベクターが自律複製型ベクターまたは染色体組み込み型ベクターである、[4]に記載の形質転換出芽酵母。
[6]
UDP-グルコース脱水素酵素遺伝子が動物または植物由来の遺伝子である、[1]〜[5]のいずれかに記載の形質転換出芽酵母。
[7]
UDP-グルコース脱水素酵素遺伝子がシロイヌナズナ由来遺伝子またはラット由来遺伝子である、[1]〜[5]のいずれかに記載の形質転換出芽酵母。
[8]
UDP-グルクロン酸転移酵素遺伝子が哺乳動物由来の遺伝子である、[1]〜[7]のいずれかに記載の形質転換出芽酵母。
[9]
UDP-グルクロン酸転移酵素遺伝子がヒト由来の遺伝子である、[1]〜[7]のいずれかに記載の形質転換出芽酵母。
[10]
シトクロムＰ４５０遺伝子発現ベクターが、出芽酵母発現ベクターにシトクロムＰ４５０遺伝子を発現可能に挿入したものである、[3]〜[9]のいずれかに記載の形質転換出芽酵母。
[11]
前記UDP-グルクロン酸転移酵素発現ベクターは、UDP-グルクロン酸転移酵素遺伝子が、UGT1A1、UGT1A4、UGT1A8またはUGT1A9のである場合、
前記低発現量グルクロン酸転移酵素遺伝子は、シグナル配列遺伝子を、UGT1A7、UGT1A6またはUGT1A10のシグナル配列遺伝子と置換したものであるか、または
シグナル配列遺伝子を以下に示すアミノ酸配列(a)〜(c)のいずれかをコードする遺伝子と置換したものである、[1]〜[10]のいずれかに記載の形質転換出芽酵母。
(a) MARAGWTGLLPLYVCLLLTCGFAKAG(配列番号1)
(b) MACLLRSFQRISAGVFFLALWGMVVG(配列番号2)
(c) MAPRRVDQPRSFMCVSTADLWLCEAG(配列番号3)
[12]
被抱合物質がアルコール性水酸基を含む医薬品及び医薬品の候補物質、フェノール性水酸基を複数含むポリフェノール化合物、カルボン酸を含む非ステイロイド性抗炎症薬及びその候補物質、並びに１〜４級のいずれか少なくとも１つのアミンを含む化合物から成る群から選ばれる少なくとも1種である[1]〜[11] のいずれかに記載の形質転換出芽酵母。
[13]
被抱合物質が、P450の代謝により抱合化を受ける官能基（主に水酸基）を生成する物質である[1]〜[11] のいずれかに記載の形質転換出芽酵母。
[14]
被抱合物質が、メトキシ基またはエトキシ基を含む医薬品及び医薬品の候補物質、メチレンジオキシフェニル基をもつセサミン化合物、並びに水酸基を有しないジアゼピン系の医薬品及び医薬品の候補物質から成る群から選ばれる少なくとも1種である[13]に記載の形質転換出芽酵母。
[15]
前記グルクロン酸抱合体の製造は、生成したグルクロン酸抱合体を、前記形質転換出芽酵母を破砕することなしに回収することを含む[1]〜[14]のいずれかに記載の形質転換出芽酵母。