【手続補正書】
【提出日】平成24年1月5日(2012.1.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｎ−グリコシド結合糖鎖還元末端のＮ−アセチルグルコサミンの６位とフコースの１位がα結合した糖鎖構造を認識する１ｍｇ／ｍｌのレクチンに耐性である動物細胞を用いた、抗体組成物の製造方法。
【請求項２】
親株から得られる抗体組成物よりも、抗体依存性細胞障害活性が高い抗体組成物を生産する、請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
動物細胞が、細胞内糖ヌクレオチドＧＤＰ−フコースの合成に関与する酵素の活性またはＮ−グリコシド結合糖鎖還元末端のＮ−アセチルグルコサミンの６位にフコースの１位がα結合する糖鎖修飾に関与する酵素の活性が、親株の酵素活性よりも低下または欠失した細胞である、請求項１または２に記載の製造方法。
【請求項４】
細胞内糖ヌクレオチドＧＤＰ−フコースの合成に関与する酵素が、以下の（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）からなる群から選ばれる酵素である、請求項３に記載の製造方法。
（ａ）ＧＭＤ（ＧＤＰ−ｍａｎｎｏｓｅ  ４，６−ｄｅｈｙｄｒａｔａｓｅ）；
（ｂ）Ｆｘ（ＧＤＰ−ｋｅｔｏ−６−ｄｅｏｘｙｍａｎｎｏｓｅ  ３，５−ｅｐｉｍｅｒａｓｅ，４−ｒｅｄｕｃｔａｓｅ）；
（ｃ）ＧＦＰＰ（ＧＤＰ−ｂｅｔａ−Ｌ−ｆｕｃｏｓｅ  ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｓｅ）。
【請求項５】
ＧＭＤが、以下の（ａ）または（ｂ）であるＤＮＡがコードする蛋白質である、請求項４に記載の製造方法。
（ａ）配列番号６５で表される塩基配列からなるＤＮＡ；
（ｂ）配列番号６５で表される塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつＧＭＤ活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡ。
【請求項６】
ＧＭＤが、以下の（ａ）または（ｂ）の蛋白質である、請求項４に記載の製造方法。
（ａ）配列番号７１で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質；
（ｂ）配列番号７１で表されるアミノ酸配列と８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつＧＭＤ活性を有する蛋白質。
【請求項７】
Ｆｘが、以下の（ａ）または（ｂ）であるＤＮＡがコードする蛋白質である、請求項４に記載の製造方法。
（ａ）配列番号４８で表される塩基配列からなるＤＮＡ；
（ｂ）配列番号４８で表される塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつＦｘを有する蛋白質をコードするＤＮＡ。
【請求項８】
Ｆｘが、以下の（ａ）または（ｂ）の蛋白質である、請求項４に記載の製造方法。
（ａ）配列番号７２で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質；
（ｂ）配列番号７２で表されるアミノ酸配列と８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつＦｘ活性を有する蛋白質。
【請求項９】
ＧＦＰＰが、以下の（ａ）または（ｂ）であるＤＮＡがコードする蛋白質である、請求項４に記載の製造方法。
（ａ）配列番号５１で表される塩基配列からなるＤＮＡ；
（ｂ）配列番号５１で表される塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつＧＦＰＰ活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡ。
【請求項１０】
ＧＦＰＰが、以下の（ａ）または（ｂ）の蛋白質である、請求項４に記載の製造方法。
（ａ）配列番号７３で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質；
（ｂ）配列番号７３で表されるアミノ酸配列と８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつＧＦＰＰ活性を有する蛋白質。
【請求項１１】
Ｎ−グリコシド結合糖鎖還元末端のＮ−アセチルグルコサミンの６位にフコースの１位がα結合する糖鎖修飾に関与する酵素がα−１，６−フコシルトランスフェラーゼである、請求項３に記載の製造方法。
【請求項１２】
α−１，６−フコシルトランスフェラーゼが、以下の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｄ）からなる群から選ばれるＤＮＡがコードする蛋白質である、請求項１１に記載の製造方法。
（ａ）配列番号１で表される塩基配列からなるＤＮＡ；
（ｂ）配列番号２で表される塩基配列からなるＤＮＡ；
（ｃ）配列番号１で表される塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつα−１，６−フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡ；
（ｄ）配列番号２で表される塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつα−１，６−フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡ。
【請求項１３】
α−１，６−フコシルトランスフェラーゼが、以下の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）からなる群から選ばれる蛋白質である、請求項１１に記載の製造方法。
（ａ）配列番号２３で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質；
（ｂ）配列番号２４で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質；
（ｃ）配列番号２３で表されるアミノ酸配列と８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつα−１，６−フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質；
（ｄ）配列番号２４で表されるアミノ酸配列と８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつα−１，６−フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質。
【請求項１４】
遺伝子工学的な手法が、以下の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｄ）からなる群から選ばれる手法である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の製造方法。
（ａ）酵素の遺伝子を標的した遺伝子破壊の手法；
（ｂ）酵素の遺伝子のドミナントネガティブ体を導入する手法；
（ｃ）酵素についての突然変異を導入する手法；
（ｄ）酵素の遺伝子の転写又は翻訳を抑制する手法。
【請求項１５】
動物細胞が、下記の（ａ）〜（ｉ）からなる群から選ばれる細胞である、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の製造方法。
（ａ）チャイニーズハムスター卵巣組織由来ＣＨＯ細胞；
（ｂ）ラットミエローマ細胞株ＹＢ２／３ＨＬ．Ｐ２．Ｇ１１．１６Ａｇ．２０細胞；
（ｃ）マウスミエローマ細胞株ＮＳ０細胞；
（ｄ）マウスミエローマ細胞株ＳＰ２／０−Ａｇ１４細胞；
（ｅ）シリアンハムスター腎臓組織由来ＢＨＫ細胞；
（ｆ）抗体を産生するハイブリドーマ細胞；
（ｇ）ヒト白血病細胞株ナマルバ細胞；
（ｈ）胚性幹細胞；
（ｉ）受精卵細胞。
【請求項１６】
抗体分子のクラスがＩｇＧである、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１７】
Ｎ−グリコシド結合糖鎖還元末端のＮ−アセチルグルコサミンの６位とフコースの１位がα結合した糖鎖構造を認識するレクチンが、下記（ａ）〜（ｄ）から選ばれる請求項１〜１６のいずれか１項に記載の製造方法。
（ａ）レンズマメレクチンＬＣＡ
（ｂ）エンドウマメレクチンＰＳＡ
（ｃ）ソラマメレクチンＶＦＡ
（ｄ）ヒイロチャワンタケレクチンＡＡＬ
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４０】
１．Ｎ−グリコシド結合糖鎖還元末端のＮ−アセチルグルコサミンの６位とフコースの１位がα結合した糖鎖構造を認識する１ｍｇ／ｍｌのレクチンに耐性である動物細胞を用いた、抗体組成物の製造方法。
２．親株から得られる抗体組成物よりも、抗体依存性細胞障害活性が高い抗体組成物を生産する、前項１に記載の製造方法。
３．動物細胞が、細胞内糖ヌクレオチドＧＤＰ−フコースの合成に関与する酵素の活性またはＮ−グリコシド結合糖鎖還元末端のＮ−アセチルグルコサミンの６位にフコースの１位がα結合する糖鎖修飾に関与する酵素の活性が、親株の酵素活性よりも低下または欠失した細胞である、前項１または２に記載の製造方法。
４．細胞内糖ヌクレオチドＧＤＰ−フコースの合成に関与する酵素が、以下の（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）からなる群から選ばれる酵素である、前項３に記載の製造方法。
（ａ）ＧＭＤ（ＧＤＰ−ｍａｎｎｏｓｅ  ４，６−ｄｅｈｙｄｒａｔａｓｅ）；
（ｂ）Ｆｘ（ＧＤＰ−ｋｅｔｏ−６−ｄｅｏｘｙｍａｎｎｏｓｅ  ３，５−ｅｐｉｍｅｒａｓｅ，４−ｒｅｄｕｃｔａｓｅ）；
（ｃ）ＧＦＰＰ（ＧＤＰ−ｂｅｔａ−Ｌ−ｆｕｃｏｓｅ  ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｓｅ）。
５．ＧＭＤが、以下の（ａ）または（ｂ）であるＤＮＡがコードする蛋白質である、前項４に記載の製造方法。
（ａ）配列番号６５で表される塩基配列からなるＤＮＡ；
（ｂ）配列番号６５で表される塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつＧＭＤ活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡ。
６．ＧＭＤが、以下の（ａ）または（ｂ）の蛋白質である、前項４に記載の製造方法。
（ａ）配列番号７１で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質；
（ｂ）配列番号７１で表されるアミノ酸配列と８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつＧＭＤ活性を有する蛋白質。
７．Ｆｘが、以下の（ａ）または（ｂ）であるＤＮＡがコードする蛋白質である、前項４に記載の製造方法。
（ａ）配列番号４８で表される塩基配列からなるＤＮＡ；
（ｂ）配列番号４８で表される塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつＦｘを有する蛋白質をコードするＤＮＡ。
８．Ｆｘが、以下の（ａ）または（ｂ）の蛋白質である、前項４に記載の製造方法。
（ａ）配列番号７２で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質；
（ｂ）配列番号７２で表されるアミノ酸配列と８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつＦｘ活性を有する蛋白質。
９．ＧＦＰＰが、以下の（ａ）または（ｂ）であるＤＮＡがコードする蛋白質である、前項４に記載の製造方法。
（ａ）配列番号５１で表される塩基配列からなるＤＮＡ；
（ｂ）配列番号５１で表される塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつＧＦＰＰ活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡ。
１０．ＧＦＰＰが、以下の（ａ）または（ｂ）の蛋白質である、前項４に記載の製造方法。
（ａ）配列番号７３で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質；
（ｂ）配列番号７３で表されるアミノ酸配列と８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつＧＦＰＰ活性を有する蛋白質。
１１．Ｎ−グリコシド結合糖鎖還元末端のＮ−アセチルグルコサミンの６位にフコースの１位がα結合する糖鎖修飾に関与する酵素がα−１，６−フコシルトランスフェラーゼである、前項３に記載の製造方法。
１２．α−１，６−フコシルトランスフェラーゼが、以下の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｄ）からなる群から選ばれるＤＮＡがコードする蛋白質である、前項１１に記載の製造方法。
（ａ）配列番号１で表される塩基配列からなるＤＮＡ；
（ｂ）配列番号２で表される塩基配列からなるＤＮＡ；
（ｃ）配列番号１で表される塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつα−１，６−フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡ；
（ｄ）配列番号２で表される塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつα−１，６−フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質をコードするＤＮＡ。
１３．α−１，６−フコシルトランスフェラーゼが、以下の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）からなる群から選ばれる蛋白質である、前項１１に記載の製造方法。
（ａ）配列番号２３で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質；
（ｂ）配列番号２４で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質；
（ｃ）配列番号２３で表されるアミノ酸配列と８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつα−１，６−フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質；
（ｄ）配列番号２４で表されるアミノ酸配列と８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなり、かつα−１，６−フコシルトランスフェラーゼ活性を有する蛋白質。
１４．遺伝子工学的な手法が、以下の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｄ）からなる群から選ばれる手法である、前項１〜１３のいずれか１項に記載の製造方法。
（ａ）酵素の遺伝子を標的した遺伝子破壊の手法；
（ｂ）酵素の遺伝子のドミナントネガティブ体を導入する手法；
（ｃ）酵素についての突然変異を導入する手法；
（ｄ）酵素の遺伝子の転写又は翻訳を抑制する手法。
１５．動物細胞が、下記の（ａ）〜（ｉ）からなる群から選ばれる細胞である、前項１〜１４のいずれか１項に記載の製造方法。
（ａ）チャイニーズハムスター卵巣組織由来ＣＨＯ細胞；
（ｂ）ラットミエローマ細胞株ＹＢ２／３ＨＬ．Ｐ２．Ｇ１１．１６Ａｇ．２０細胞；
（ｃ）マウスミエローマ細胞株ＮＳ０細胞；
（ｄ）マウスミエローマ細胞株ＳＰ２／０−Ａｇ１４細胞；
（ｅ）シリアンハムスター腎臓組織由来ＢＨＫ細胞；
（ｆ）抗体を産生するハイブリドーマ細胞；
（ｇ）ヒト白血病細胞株ナマルバ細胞；
（ｈ）胚性幹細胞；
（ｉ）受精卵細胞。
１６．抗体分子のクラスがＩｇＧである、前項１〜１５のいずれか１項に記載の製造方法。
１７．Ｎ−グリコシド結合糖鎖還元末端のＮ−アセチルグルコサミンの６位とフコースの１位がα結合した糖鎖構造を認識するレクチンが、下記（ａ）〜（ｄ）から選ばれる前項１〜１６のいずれか１項に記載の製造方法。
（ａ）レンズマメレクチンＬＣＡ
（ｂ）エンドウマメレクチンＰＳＡ
（ｃ）ソラマメレクチンＶＦＡ
（ｄ）ヒイロチャワンタケレクチンＡＡＬ