(57)【要約】【課題】体脂肪率を低下させる健康補助食品を提供する。【解決手段】健康補助食品は、失活処理がされていないアスペルギルス属菌由来のプロテアーゼを含有する。プロテアーゼの酵素活性値が、１グラム当たり５０ユニット以上であればより好適である。また、健康補助食品は、穀物原料にアスペルギルス属菌を添加して製麹し、この麹を乾燥させたのち粉末にして製造されてもよい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
失活処理がされていないアスペルギルス属菌由来のプロテアーゼを含有するヒト用食品添加剤。
【請求項２】
前記プロテアーゼの酵素活性値が、１グラム当たり５００ユニット以上である請求項１に記載のヒト用食品添加剤。
【請求項３】
失活処理がされていないアスペルギルス属菌由来のプロテアーゼを含有する健康補助食品。
【請求項４】
前記プロテアーゼの酵素活性値が、１グラム当たり５０ユニット以上である請求項４または請求項５に記載の健康補助食品。
【請求項５】
穀物原料にアスペルギルス属菌を添加して製麹し、この麹を乾燥させたのち粉末にしてなる請求項３または請求項４に記載の健康補助食品。
【請求項６】
失活処理がされていないアスペルギルス属菌由来の酸性または中性のプロテアーゼを含有する食品を、１日当たりに摂取するプロテアーゼの酵素活性量が１５００ユニット以上になるように摂取する体質改善方法。
【請求項７】
前記食品の摂取を少なくとも３０日間継続することを特徴とする請求項８に記載の体質改善方法。
【請求項８】
前記食品として、請求項３乃至請求項５のいずれかに記載の健康補助食品、または、請求項１または請求項２に記載の食品添加剤が添加された食品を用いることを特徴とする請求項６または請求項７に記載の体質改善方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、アスペルギルス属菌由来のプロテアーゼを含有する食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
非特許文献１には、あわ、ひえ、きび、こうりゃん、大麦、紫黒米等の穀物をアスペルギルス・オリゼー(Aspergillus oryzae）で製麹した多穀麹について記載されている。多穀麹は酸性プロテアーゼおよび中性プロテアーゼの両酵素の高い活性が確認され、多穀麹の摂取によって食餌タンパク質の消化が助けられることが報告されている。また、非特許文献２には、アスペルギルス・アワモリ(Aspergillus awamori）で製麹したゴボウ麹について記載されている。この文献により、ゴボウ麹が腸内のビフィズス菌を増殖させる作用を有することが確認されている。【０００３】
特許文献１，２には、麹菌を含有させた家畜用飼料添加剤が示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００７−３２５５８０号公報
【０００５】
【特許文献２】特開２００７−３０６９０９号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】井上美保、外５名、「マウスにおける多穀麹の蛋白質分解促進効果」、J.Brew. Soc. Japan. 2007年,Vol.102, No.11, p.847-853
【０００７】
【非特許文献２】Yukako Okazaki、外９名、「Burdock Fermented by Aspergills awamori Elevates Cecal Bifidobacterium, and Reduces Fecal Deoxycholic Acid and Adipose Tissue Weight in Rats Fed a High-Fat Diet」、Biosci Biotechnol Biochem, 77(1), 53-57, 2013年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、上述の製麹した多穀麹、ゴボウ麹にプロテアーゼの食餌タンパク質の消化促進効果やビフィズス菌増殖効果に着目し、腸内環境の改善および体脂肪率を低下させるヒト用食品添加剤、健康補助食品および体質改善方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明のヒト用食品添加剤は、失活処理がされていないアスペルギルス属（Aspergillus spp.）菌由来のプロテアーゼを含有することを特徴とする。【００１０】
上記ヒト用食品添加剤は、プロテアーゼの酵素活性値が、１グラム当たり５００ユニット以上であるればより好適である。【００１１】
本発明の健康補助食品は、失活処理がされていないアスペルギルス属菌由来のプロテアーゼを含有することを特徴とする。【００１２】
上記健康補助食品は、プロテアーゼの酵素活性値が、１グラム当たり５０ユニット以上であればより好適である。上記健康補助食品は、穀物原料にアスペルギルス属菌を添加して製麹し、この麹を乾燥させたのち粉末にして製造されてもよい。【００１３】
本発明のダイエット方法および腸内環境改善方法は、失活処理がされていないアスペルギルス属菌由来の酸性または中性のプロテアーゼを含有する食品を、１日当たり１日に摂取する酸性あるいは中性プロテアーゼの酵素活性量が１５００ユニット以上になるように摂取することを特徴とする。【００１４】
上記発明において、食品の摂取を少なくとも３０日、好ましくは９０日間継続することが良い。食品としては、上記健康補助食品、または、上記食品添加剤が添加された食品を用いることが好適である。
【発明の効果】
【００１５】
この発明によれば、アスペルギルス属菌由来の酸性または中性のプロテアーゼを摂取することによって、人体の腸内環境や体脂肪率を改善することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下、本発明に係る食品添加剤およびその摂取方法について詳細に説明する。本発明の食品添加剤は、アスペルギルス属（Aspergillus spp.）菌、すなわちコウジカビに由来する酸性または中性のプロテアーゼを含む。プロテアーゼはタンパク質中のペプチド結合を切断する酵素であり、タンパク質分子の内部のペプチド結合を加水分解して、タンパク質や高分子ペプチドを低分子のペプチドに分解する機能を有する。プロテアーゼは、動物、植物および微生物に由来するものが多数存在するが、ここでは、アスペルギルス属菌に由来する中性または酸性のものを用いる。特に、中性のものが好適である。アスペルギルス属は、真菌の一属であり、アスペルギルス・オリゼー（Aspergillus oryzae）、アスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）、アスペルギルス・アワモリ（Aspergillus awamori）、アスペルギルス・カワチ（Aspergillus kawachii）、アスペルギルス・サイトイ（Aspergillus saitoi）、アスペルギルス・イヌイ（Aspergillus inuii）、アスペルギルス・ソーヤ（Aspergillus sojae）、アスペルギルス・タマリ（Aspergillus tamari）、アスペルギルス・グラカス（Aspergillus glaucus）、アスペルギルス・メレウス（Aspergillus melleus）、アスペルギルス・アクレアタス（Aspergillus aculeatus）、アスペルギルス・セシェルス（Aspergillus caesiellus）、アスペルギルス・カンジダス（Aspergillus candidus）、アスペルギルス・カルネウス（Aspergillus carneus）、アスペルギルス・クラバタス（Aspergillus clavatus）、アスペルギルス・デフレクタス（Aspergillus deflectus）、アスペルギルス・フィシャリアヌス（Aspergillus fischerianus）、アスペルギルス・フミガーツス（Aspergillus fumigatus）、アスペルギルス・ニデュランス（Aspergillus nidulans）、アスペルギルス・パラシティクス（Aspergillus parasiticus）、アスペルギルス・ペニシロイデス（Aspergillus penicilloides）、アスペルギルス・レストリクタス（Aspergillus restrictus）、アスペルギルス・シドウィ（Aspergillus sydowii）、アスペルギルス・テレウス（Aspergillus terreus）、アスペルギルス・ウスタス（Aspergillus ustus）、アスペルギルス・ベルシコロル（Aspergillus versicolor）などがある。
【００１７】
アスペルギルス属菌由来のプロテアーゼは、アスペルギルス属菌（コウジカビ）を用いた製麹によって製造してもよいが、市販品を用いてもよい。市販品を用いる場合、アスペルギルス属（Aspergillus spp.）菌由来の中性プロテアーゼとしては、例えば、アマノＳＤ（アマノエンザイム社製）、スミチーム（新日本化学工業社製）などを用いることができる。アスペルギルス属（Aspergillus spp.）菌由来の酸性プロテアーゼとしては、オリエンターゼＡＹ（エイチビィアイ社製）、プロテアーゼＹＰ−ＳＳ（ヤクルト薬品工業社製）などを用いることができる。いずれを用いるにしても、消化器官内の酸性条件下において上述の増殖促進作用、殺菌活性が失われないものであればよい。
【００１８】
上記の中性プロテアーゼおよび酸性プロテアーゼの一種類または複数種類を、食品添加剤として食品に添加する。または、これを単独または多穀麹などの形態で健康補助食品として服用してもよい。
【００１９】
上述の食品添加剤の食品への添加は、たとえば、食品原料に混合することで行えばよい。食品における食品添加剤の含有量は、摂取する人の体重、年齢、性別、健康状態、食品成分などにより適宜調整すればよいが、１日の摂取量が食品全量に対して１５０００ユニット（酵素活性量）程度とすることで、人体の腸内環境の改善や体脂肪率の低下などにおいて高い効果が期待できる。健康補助食品としてヒトが摂取する場合も、１日の摂取量が１万５千ユニット程度とすることが好ましい。勿論、それ以下でも人体に対して有効であり、１５００ユニット以上であれば人体に対して上記効果が発現すると考えられる。
【００２０】
料理の材料の一部として添加される食品添加剤の場合、料理の組成を大きく変えないようにするため、添加量は１食あたり３０グラム程度までにすることが好適である。そうすると、食品添加剤としてのプロテアーゼは、１グラム当たり５００ユニット以上の酵素活性値であることが好ましい。また、酵素活性値が５０００ユニットであれば、１食あたり３グラムの添加で１５０００ユニットのプロテアーゼを利用者に摂取させることができる。
【００２１】
健康補助食品の場合、そのままで、または、水や牛乳などに溶かして利用者に摂取される。その場合、１回当たり３００グラム程度までは摂取可能である。したがって、健康補助食品としてのプロテアーゼは、１グラム当たり５０ユニット以上の酵素活性値であればよい。また、酵素活性値が５００ユニットの健康補助食品であれば、３グラムの摂取で１５００ユニット、３０グラムの摂取で１５０００ユニットのプロテアーゼの摂取が可能である。また、酵素活性値が５０００ユニットの健康補助食品であれば、１回あたり３グラムの摂取で１５０００ユニットのプロテアーゼの摂取が可能である。
【００２２】
《試験１》
プロテアーゼの摂取が生体に及ぼす影響を調べるために以下の試験を行った。中性プロテアーゼ（天野エンザイム社製：プロテアーゼＡ「アマノ」ＳＤ）を高脂肪高ショ糖食に０．２％添加したものを実施例１とし、酸性プロテアーゼ（エイチビィアイ社製：オリエンターゼＡＹ）を高脂肪高ショ糖食に０．２％添加したものを実施例２とする。また、食品添加剤を添加していない高脂肪高ショ糖食（コントロール）を比較例１とする。これらを雄のＳＤラット（４週齢，ｎ＝９）に２１日間摂食させた。プロテアーゼＡ「アマノ」ＳＤは、アスペルギルス・オリゼー由来の中性プロテアーゼである。オリエンターゼＡＹは、アスペルギルス・ニガー由来の酸性プロテアーゼである。高脂肪高ショ糖食は、下記に示す同値成分のものを各例で使用した。
【００２３】
実施例１：高脂肪高ショ糖食（Ａ「アマノ」ＳＤ（0.2%）を含む）
実施例２：高脂肪高ショ糖食（オリエンターゼＡＹ（0.2%）を含む）
比較例１：高脂肪高ショ糖食（プロテアーゼなし）
【００２４】
高脂肪高ショ糖食：重量％
Beef tallow ：30.0 
Casein      ：20.0 (Net protein ：17.4)
L-cystine   ：0.3
Cellulose   ：5.0
Vitamin mix*：1.0
Mineral mix*：3.5
Sucrose     ：20.0
Corn starch ：20.2
*は、AIN-93(米国国立栄養研究所(AIN)規定のマウス・ラット用標準精製飼料)である。
【００２５】
表１は、実験終了時の各例の群のＳＤラットの飼料摂食量、体重、脂肪組織重量、盲腸重量の平均値を示す。摂食量および体重は、各例の群のＳＤラット間でほとんど差が認められなかった。一方、脂肪組織重量については、実施例１，２群のＳＤラットの脂肪組織重量が、比較例１群のＳＤラットの脂肪組織重量に比して有意に低値であることが認められた。また、盲腸重量については、実施例１，２群のＳＤラットの盲腸重量が、比較例１群のＳＤラットの盲腸重量に比して有意に高値であった。これにより、アスペルギルス属菌由来のプロテアーゼ、特に中性プロテアーゼを添加された飼料が、ＳＤラットの脂肪の蓄積を抑制し、腸内環境に良好な影響を与えていることが推定される。
【００２６】
【表１】
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【００２７】
表２は、実験終了時のＳＤラットの盲腸の細菌叢をリアルタイムＰＣＲ法を用いて調査した結果を示す。表２に示すように、実施例１，２群のＳＤラットの細菌叢が、比較例１群のＳＤラットの細菌叢に比して、ビフィズス菌および乳酸菌の比率が顕著に高値であることが認められた。特に、ビフィズス菌については、実施例１を摂食したＳＤラット中のビフィズス菌が、比較例１を摂食したＳＤラット中のビフィズス菌の約２００倍に増加しており、乳酸菌についても約８倍の値を示している。これにより、飼料中にアスペルギルス属菌由来のプロテアーゼ、特に中性プロテアーゼを添加することが、ＳＤラットのビフィズス菌および乳酸菌の増殖を促進することが認められる。また、その一方で、腸内の粘膜を保護するバリア物質であるムチンを分解するバクテリアであるアッケルマンシア ・ムシニフィラ（Akkermansia muciniphila）の量は、実施例１，２群のＳＤマウスにおいて著しく減少しており、アスペルギルス属菌由来のプロテアーゼ、特に中性プロテアーゼにより、腸内環境が改善されていることが推定される。
【００２８】
【表２】
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【００２９】
表３は、実験終了時のＳＤラットの腸内細菌の代謝産物である有機酸組成を分析した結果を示す。表３に示すように、実施例１，２群のＳＤラットの有機酸組成が、比較例１群のＳＤラットの有機酸組成に比して、酪酸、プロピオン酸、乳酸が有意に高値であることが認められた。酪酸、プロピオン酸、乳酸は、ビフィズス菌および乳酸菌によって産生される有機酸である。したがって、アスペルギルス属菌由来のプロテアーゼの摂食で増殖したビフィズス菌および乳酸菌によって腸内環境が改善されていることが推定される。
【００３０】
【表３】
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【００３１】
表４は、実験終了時のＳＤラットの糞中の免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ：Immunoglobulin A）含量を測定した結果を示す。ＩｇＡは、腸管免疫の指標の一つである。表４に示すように、実施例１，２群のＳＤラットのＩｇＡの含量が、比較例１群のＳＤラットのＩｇＡの含量に比して有意に高値であることが認められた。アスペルギルス属菌由来のプロテアーゼの摂食によって増殖したビフィズス菌がＩｇＡの増加に寄与したと推定される。
【００３２】
【表４】
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【００３３】
表５は、実験終了時のＳＤラットの糞中のムチン含量を測定した結果を示す。表５に示すように、実施例１，２群のＳＤラットの方が、比較例１群のＳＤラットよりも顕著にムチン含量が高いことが認められた。また、表２に示すように、実施例１，２群のＳＤラットの方が、比較例１群のＳＤラットよりもアッケルマンシア ・ムシニフィラ（Akkermansia muciniphila）の割合が低値であった。これにより、アスペルギルス属菌由来のプロテアーゼを含む食品添加剤の摂食によって、アッケルマンシア ・ムシニフィラ（Akkermansia muciniphila）の割合が減少し（または増殖が抑制されて）ムチンの分解が抑制され、糞中のムチン含量が増加したと推測される。そして、ムチンの減少が抑制されることで腸の保護機能が向上する。
【００３４】
【表５】
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【００３５】
以上のように、アスペルギルス属菌由来の中性または酸性のプロテアーゼが、食品添加剤として生体内に取り込まれることによって、生体の脂肪組織重量を減少させることができた。同時に、腸に有益なビフィズス菌および乳酸菌を増加させることができ、ムチン分解細菌であるアッケルマンシア ・ムシニフィラ（Akkermansia muciniphila）の増加が抑制された。これらによって腸内環境が改善された。
【００３６】
《試験２》
試験１では、アスペルギルス属菌由来の中性プロテアーゼおよび酸性プロテアーゼをＳＤラットに摂食させて、体脂肪の変化および腸内環境の変化を調べた。試験２では、他の植物または微生物に由来するプロテアーゼが、生体の脂肪蓄積量の変化および腸内環境の変化にどの程度寄与するかを試験した。試験２の条件は、試験１とほぼ同様である。
試験１に用いた高脂肪高ショ糖食に以下のプロテアーゼを０．２パーセント添加したものを、それぞれ、実施例３、比較例２−６とする。またプロテアーゼを添加しないもの（コントロール）を比較例７とする。
【００３７】
実施例３：プロテアーゼＡアマノＳＤ（Aspergillus oryzae由来）天野エンザイム社製
比較例２：プロチンＮＹ１００（Bacillius由来）天野エンザイム社製
比較例３：オリエンターゼ２２ＢＦ（Bacillius subtilis由来）エイチビィアイ社製
比較例４：オリエンターゼ９０Ｎ（Bacillius subtilis由来）エイチビィアイ社製
比較例５：パパイン（パパイヤラテックス由来）協和発酵バイオ社製
比較例６：ブロメライン（パイナップル由来）合同酒精社製
比較例７：無添加（コントロール）
これらを雄のＳＤラット（４週齢、ｎ＝５）に１４日間摂食させた。
【００３８】
表６は、試験終了時の各例の群のＳＤラットの体重増加量、飼料摂食量、盲腸全体重量、盲腸内容物重量、および、腸内細菌叢中のビフィズス菌、乳酸菌の比率を示す。摂食量および体重増加量は、食餌摂取量の差を考慮すると、各例の群のＳＤラット間で有意な差は認められなかった。一方、盲腸全体重量および盲腸内容物重量は、実施例３群のＳＤラットが、各比較例群のＳＤラットに比して有意に高値であった。さらに、腸内細菌叢中のビフィズス菌および乳酸菌の比率も、実施例３群のＳＤラットが、各比較例群のＳＤラットに比して顕著に高値であった。このことにより、アスペルギルス属菌由来のプロテアーゼを添加した飼料が、それ以外に由来するプロテアーゼを添加した肥料に比して、生体の脂肪蓄積を抑制し、腸内環境に良好な影響を与えることが確認された。
【表６】
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【００３９】
《対人試験》
以上のように、ＳＤラットを対象にした試験により、アスペルギルス属菌由来のプロテアーゼが、生体に対する脂肪の蓄積を抑制し、腸内環境に良好な影響を与えることが確認された。次に、アスペルギルス属菌由来のプロテアーゼが、人体に与える影響について試験した。この試験では、アスペルギルス属菌を用いて多穀麹を製麹し、これを試験対象物（実施例）として用いた。
【００４０】
対人試験は、以下のような内容で行った。平均年齢２０才、ＢＭＩ２０以上、体脂肪率２８％以上の女性を対象とした。被験者２０名を２群に分け、一方（被験者１−１０）を試験対象群、もう一方（被験者１１−２０）を比較群（プラセボ群）とした。試験はダブルブラインドで行い、被験者、測定者とも何を摂取しているのかわからない条件下で実施した。
試験対象物の多穀麹は以下の工程で製造した。あわ、ひえ、きび、こうりゃん（たかきび）、大麦、紫黒米をそれぞれ等量配合したものを穀物原料とする。穀物原料１０ｋｇを水道水で1時間浸漬させたのち、蒸し器を用いて３０分間蒸煮する。放冷後、Aspergillus oryzaeからなる種麹を１０ｇ混合し種付けを行う（品温３５〜３６℃）。製麹管理最高温度を４０±２℃に設定して製麹を開始する。１２時間後に一度切り換えしを行い、４４時間後に出麹する。出麹したものを４５℃にて温風乾燥し多穀麹とする。試験には、成分を均一化させるため、粉砕し粉末品としたものを使用した。
【００４１】
この多穀麹の酵素活性は以下のとおりであった。
α−アミラーゼ    ８．８ unit/g
酸性プロテアーゼ  ５２９７ unit/g
中性プロテアーゼ  ６４８７ unit/g
【００４２】
なお、酵素活性は次の方法により測定した。α−アミラーゼは、国税庁所定分析法に準じてα−アミラーゼ測定キット（キッコーマン社製）を用いて測定した。酸性および中性プロテアーゼは、国税庁所定分析法の麹の酵素活性測定法に準じて測定した。
【００４３】
なお、比較群に服用させるプラセポは、上述の多穀麹をオートクレーブで加熱処理し、酵素活性を失活させ、麹菌を死滅させたものを用いた。
【００４４】
対象群には、上記の多穀麹粉末３ｇを１包とし、１日１包を９０日間服用させた。また、比較群には、上記のプラセボ３ｇを１包とし、１日１包を９０日間服用させた。
【００４５】
表７、表８は、３０日毎の被験者の体重および体脂肪率の測定結果を示す。表７に示すように、試験対象群において有意に体脂肪率の低下が認められる。多穀麹またはプラセポの服用以外の外乱を考慮しても有意である。なお、比較群においても、若干の体脂肪率の低下が見られる。これは、定期的に雑穀を摂取したことと心理的なファクターが影響しているものと思われる。また、対象群、比較群ともに若干の体重減少が見られるが、これは体脂肪率の低下に伴う程度のものと考えられる。
【００４６】
このように、酵素活性が維持されたアスペルギルス属菌由来のプロテアーゼを人に摂取させることで、摂食者の体脂肪率の低下を促すことができる。摂取させる方法としては、多穀麹の健康補助食品として直接摂取してもよく、食品添加剤として食物に添加してもよい。食品添加剤として使用する場合、プロテアーゼが失活するほど加熱されない食品に用いられるよう考慮する。健康補助食品として使用する場合、利用者が摂取しやすい量や形態になるようにする。この試験では、１グラム当たりの酸性あるいは中性プロテアーゼ活性が５０００ユニット程度の多穀麹を３ｇで１包としたが、例えば、丸薬状に成形する場合には、よりプロテアーゼ活性の高い多穀麹粉末を製造して、丸薬状に固めればよい。また、食品添加剤としても健康補助食品としても、１日に摂取するプロテアーゼ活性量が１万５千ユニット程度になるように、その用法を規定すればよい。
【００４７】
なお、体脂肪率の変化を見ると、開始から３０日で−２．３０パーセント低下しているが、６０日では−３．３８パーセントと３０日目からの３０日間で１．０８ポイントの低下に留まっている。しかしながら、９０日になると−５．８１パーセントと６０日目からの３０日間で２．４３ポイントの低下が認められた。このことから、アスペルギルス属菌由来のプロテアーゼは少なくとも３０日で人体に対して効果が発現し、好ましくは９０日をめどに摂取することでより高い効果を得られることが判った。
【表７】
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【表８】
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【国際調査報告】
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