【手続補正書】
【提出日】平成24年10月17日(2012.10.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の段階を含む、肺炎連鎖球菌からの１０％以下の蛋白質を含む、ホスホリルコリン基を欠く細胞壁Ｃ多糖抗原を入手するための方法：
（ａ）所望のサイズの試料を得るために必要な時間にわたって細菌を培養する段階、およびそこから湿潤細胞ペレットの形態にある細菌細胞を回収する段階；
（ｂ）湿潤細胞ペレットを水酸化ナトリウムのアルカリ溶液中に懸濁化する段階、および混合する段階；
（ｃ）強酸を用いてｐＨを酸性ｐＨに調整する段階、および遠心処理する段階；
（ｄ）段階（ｄ）により上清を分離する段階、およびｐＨをほぼ中性に調整する段階；
（ｅ）残存蛋白質を破壊するために、この生成物を広域プロテアーゼ酵素調製物によって消化する段階；
（ｆ）弱アルカリ水溶液を用いてｐＨをアルカリ側に調整する段階；
（ｇ）弱アルカリ溶液で平衡化したサイズ排除カラムにより、本質的に蛋白質を含まない糖質または多糖抗原を分離除去する段階；ならびに
（ｈ）最初のピークに溶出した物質をプールする段階、およびｐＨをほぼ中性に調整する段階。
【請求項２】
請求項１記載の方法によって得られる、１０％以下の蛋白質を含む細胞壁Ｃ多糖抗原。
【請求項３】
段階（ｂ）のアルカリ溶液が湿潤細胞ペレット１ｇ当たり２０ｍｌの０．１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を含む、請求項１記載の方法。
【請求項４】
段階（ｃ）においてｐＨが３．０に調整される、請求項１記載の方法。
【請求項５】
段階（ｆ）においてｐＨが１０〜１１の間に調整される、請求項１記載の方法。
【請求項６】
段階（ｈ）の後に凍結乾燥段階が行われる、請求項１記載の方法。
【請求項７】
以下の段階を含む、肺炎連鎖球菌に対する粗抗体を精製するための方法：
（ａ）請求項１記載の方法により肺炎連鎖球菌から１０％以下の蛋白質を含む細胞壁Ｃ多糖抗原を分離する段階；
（ｂ）該抗原を２つの末端を有するスペーサー分子の一端と共有結合させ、該抗原とスペーサー分子との結合物を形成する段階；
（ｃ）結合物を活性化されたクロマトグラフィーカラムとカップリングする段階；
（ｄ）該粗抗体を段階（ｃ）の該カラムによるアフィニティークロマトグラフィーにかけて、精製された抗原特異的抗体を入手する段階；
（ｅ）該カラムから精製された抗原特異的抗体を溶出させる段階。
【請求項８】
請求項７記載の方法によって得られる、肺炎連鎖球菌の細胞壁Ｃ多糖に対する精製された抗原特異的抗体。
【請求項９】
請求項２に記載の肺炎連鎖球菌における精製されたＣ多糖細胞壁抗原がスペーサー分子によって共有結合した、肺炎連鎖球菌に対する粗抗体のアフィニティー精製のためのクロマトグラフィーカラム。
【請求項１０】
以下の段階を含む、液体中の肺炎連鎖球菌またはその細胞壁Ｃ多糖抗原の存在をアッセイする方法：
（ａ）肺炎連鎖球菌から、請求項２記載の該細胞壁Ｃ多糖抗原を抽出する段階、
（ｂ）該抗原をスペーサー分子とカップリングさせて結合物を形成させる段階、
（ｃ）段階（ｂ）による結合物をクロマトグラフィーアフィニティーカラムとカップリングする段階、
（ｄ）段階（ｃ）のクロマトグラフィーアフィニティーカラムを用いて肺炎連鎖球菌に対する粗抗体を精製し、精製された抗原特異的抗体を産生する段階、および
（ｅ）段階（ｄ）の精製抗体を用いて、液体中の肺炎連鎖球菌またはそのＣ多糖細胞壁抗原の有無を検出する段階。
【請求項１１】
段階（ｂ）のスペーサー分子が蛋白質分子である、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
段階（ｂ）のスペーサー分子がヒドラジンとウシ血清アルブミンとの結合物である、請求項１０記載の方法。
【請求項１３】
段階（ｅ）の液体が哺乳動物由来の天然の液体である、請求項１０記載の方法。
【請求項１４】
液体がヒト尿である、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
液体が、肺炎型疾患の臨床徴候を呈している患者から採取される、請求項１３記載の方法。
【請求項１６】
段階（ｅ）がイムノアッセイ法である、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
段階（ｅ）が免疫クロマトグラフィー（「ＩＣＴ」）アッセイ法である、請求項１５記載の方法。
【請求項１８】
段階（ｄ）による精製された抗原特異的抗体の一部が、該抗体が対応する抗原と反応した時に可視呈色を示すことが周知の標識物質と結合している、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
標識物質が微細化された金である、請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
以下の段階を含む、肺炎連鎖球菌または該細菌のＣ多糖細胞壁抗原の検出のためのＩＣＴアッセイ法：
（ａ）該細菌またはその抗原を含むことが疑われる液体試料を、吸収性材料のストリップを含むＩＣＴ装置と接触させる段階であって、該ストリップが、
（ｉ）（１）抗体がその対応する抗原性結合パートナーと反応すると可視的色調変化を示す標識物質、および
（２）肺炎連鎖球菌のＣ多糖細胞壁抗原に対する精製された抗原特異的抗体であって、請求項９記載のクロマトグラフィーアフィニティーカラムを通すことによって精製された抗体
の結合物が包埋された第１の区域と、
（ｉｉ）色調変化を観察するためのウィンドウが備えられた区域である、非結合（ｕｎｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ）形態にある同一の精製された抗原特異的抗体が結合した第２の区域とを有する段階；
（ｂ）該試料を該検査ストリップに沿って該第１の区域へと水平方向に流れるようにする段階；
（ｃ）該試料を、抗原特異的抗体と標識との該結合物とともに、該検査ストリップに沿って該第２の区域へと水平方向に流れるようにする段階；ならびに
（ｄ）段階（ａ）の開始からほぼ１５分以内に該ウィンドウを通して呈色ラインが該第２の区域に出現したか否かを観察し、それによって肺炎連鎖球菌またはその細胞壁Ｃ多糖抗原が試料中に存在することを示す段階。
【請求項２１】
肺炎連鎖球菌またはそのＣ多糖細胞壁抗原を含むことが疑われる液体が、哺乳動物由来の天然の液体である、請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
哺乳動物由来の天然の液体がヒト尿である、請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
哺乳動物由来の天然の液体が血液または血清である、請求項２１記載の方法。
【請求項２４】
哺乳動物由来の天然の液体が脳脊髄液である、請求項２１記載の方法。
【請求項２５】
抗体が対応する抗原性結合パートナーと反応する場合に可視的色調変化を示す標識物質が微細金属である、請求項２２記載の方法。
【請求項２６】
標識物質が微細化された金である、請求項２５記載の方法。
【請求項２７】
標識物質が微細化された金であり、かつ液体がヒト血液または血清である、請求項２０記載の方法。
【請求項２８】
標識物質が微細化された金であり、かつ液体がヒト脳脊髄液である、請求項２０記載の方法。
【請求項２９】
標識物質が微細化された金であり、かつ液体がヒト尿である、請求項２０記載の方法。
【請求項３０】
（ｉ）（１）抗体がその対応する抗原性結合パートナーと反応する場合に可視的色調変化を示す標識物質、および（２）肺炎連鎖球菌のＣ多糖細胞壁抗原に対する精製された抗原特異的抗体であって、請求項９記載のクロマトグラフィーアフィニティーカラムを通すことによって精製された該抗体の結合物が包埋された第１の区域と、
（ｉｉ）色調変化を観察するためのウィンドウが備えられた区域である、非結合形態にある同一の精製された抗原特異的抗体が結合した第２の区域
とを有する吸収性材料のストリップを含む、肺炎連鎖球菌またはそのＣ多糖細胞壁抗原の検出のためのＩＣＴ装置。