(57)【要約】  本発明は、多糖に由来する基と、多糖に由来する基に共有結合する生理活性物質に由来する基とを有する多糖誘導体を含む呼吸器投与用の医薬組成物を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
多糖に由来する基と、多糖に由来する基に共有結合する生理活性物質に由来する基とを有する多糖誘導体を含む呼吸器投与用の医薬組成物。
【請求項２】
多糖に由来する基と、生理活性物質に由来する基とがスペーサーを介して共有結合している、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
生理活性物質に由来する基とスペーサーとは、エステル結合で共有結合している、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
多糖に由来する基とスペーサーとは、アミド結合で共有結合している、請求項２又は請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
スペーサーがアミノ酸、アミノアルコール、ジカルボン酸及びこれらの誘導体からなる群より選択される少なくとも１種に由来する２価以上の基である、請求項２〜請求項４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
スペーサーが置換基を有していてもよいω−アミノ脂肪酸に由来する２価の基である、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
多糖がグリコサミノグリカン及びホモグリカンからなる群より選択される少なくとも１種である、請求項１〜請求項６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
多糖がヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、キトサン及びカルボキシメチルセルロースからなる群より選択される少なくとも１種である、請求項１〜請求項７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
多糖誘導体からの生理活性物質の遊離速度が、ｐＨ７．５、３６℃のリン酸緩衝生理食塩液中において、０．１〜３０％／日である、請求項１〜請求項８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
生理活性物質が、ステロイド、気管支拡張薬、抗アレルギー薬及び抗コリン薬からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項１〜請求項９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
呼吸器疾患の治療用である、請求項１〜請求項１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、呼吸器投与用の医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
呼吸器に投与される医薬製剤として、主に経肺投与製剤や経鼻投与製剤が知られている。
経肺投与製剤は、肺胞内の表面積が小腸の表面積に匹敵するため、吸収効率がよく、吸収された薬物は、直接心臓から大循環に入るため、肝臓での初回通過効果を回避することができるという利点を有する。また、吸収が迅速で作用発現が早いため、以前から喘息発作時における気管支拡張薬の投薬方法として用いられている。
近年ではこれに加えて、予防医学的に低用量のステロイドを長期間にわたり肺に吸入投与する管理療法が用いられるようになり、臨床的にも大きな成果をあげている。
また、慢性閉塞性肺疾患(以下、ＣＯＰＤともいう)の治療を目的として、気管支拡張薬の経肺投与製剤も知られている。【０００３】
一方で、経肺投与製剤は吸入時のむせ返りを防ぐため、薬剤量自体を多くすることが困難である。加えて、薬剤が口腔や咽頭等へも付着するため、実際に目的部位に到達する薬剤は微量となる。更に、肺胞では受動拡散により薬剤が拡散・吸収されるため、脂溶性の高い薬物がより吸収されやすいことが知られており、微細・微量の薬剤は投与部位から容易に消失してしまう。【０００４】
経鼻投与製剤は、標的部位に薬剤を確実かつ比較的多量に投与できるうえに、鼻粘膜の下には発達した脈管系は血流量が多いため、薬剤が静脈内に移行しやすく、経肺吸収と同様、肝臓での初回通過効果を回避できる利点を有する。さらに近年では季節性及び通年性アレルギー性鼻炎の治療を目的として、様々な抗炎症剤が経鼻投与製剤として用いられるようになり、特に全身への副作用を軽減したステロイド剤が広く用いられるようになった。しかし、経鼻投与製剤も、経肺投与製剤と同様に投与した薬剤が繊毛運動により投与部位から容易に消失する。【０００５】
以上のように、呼吸器に投与される医薬製剤は近年、非常に広く用いられるようになったが、いずれの医薬製剤も１日あたり１〜４回程度の投与が必要である。【０００６】
喘息疾患、ＣＯＰＤ、通年性アレルギー性鼻炎といった疾患の場合、症状の寛解が見られるまで生涯にわたり投薬を続けなければならない。したがって、長期持続効果により投与回数を減らせるような利便性のより高い医薬製剤の開発が望まれている。しかし、このようなニーズを十分に満たす医薬薬剤の開発は十分に成されておらず、毎日投薬を行わなければならないのが現状である。【０００７】
上記に関連して、特開２００８−１５６３２７号公報には、フルチカゾンとコンドロイチン硫酸の混合物を肺疾患に適用することが記載されている。
一方、日本製剤学会第２７年会講演要旨集、Ｐ２４−１２「コンドロイチン硫酸−プレドニゾロン結合体の調製とin vitro特性」松山誠孝、種目知幸、大西啓（２０１２年５月２４日）には、多糖結合薬剤を変形性膝関節症に用いることが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２００８−１５６３２７号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】日本製剤学会第２７年会講演要旨集、Ｐ２４−１２「コンドロイチン硫酸−プレドニゾロン結合体の調製とin vitro特性」松山誠孝、種目知幸、大西啓（２０１２年５月２４日）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
呼吸器疾患治療に用いられる吸入医薬品は、１日に１〜４回程度の吸入を毎日続けることが必要である。喘息疾患の場合は症状が寛解するまで、ＣＯＰＤの場合は生涯にわたり服薬を継続しなければならない。アレルギー性鼻炎の場合も通年性であれば長期間にわたり連日投薬することが必要であり、患者にとっては非常に煩雑であり負担となっていた。この理由から、症状が軽快すると患者が勝手に服用を中止してしまう場合が多く、アドヒアランス低下が大きな問題となっている。アドヒアランスの低下は、病態のコントロールを著しく低下させ、症状の重症化・難治化を引き起こす原因となっていることから、アドヒアランス向上を図ることができる医薬製剤の開発が望まれていた。【００１１】
また、呼吸器疾患治療に用いられるステロイドは、一般的なステロイドに比べるとはるかに副作用が出現しにくいものの、それでも長期間にわたり連用することで、口腔カンジダや嗄声といった局所的な副作用のみならず、眼への影響（白内障や緑内障）、皮膚への影響（皮膚の菲薄化、易出血性）、視床下部・下垂体・副腎機能の抑制、骨への影響(骨粗鬆症)などの全身性の副作用発現を引き起こす場合もある。【００１２】
本発明は上記課題に鑑みてなされたものであり、生理活性物質を長時間にわたって持続的に放出可能な呼吸器投与用の医薬組成物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、上記課題を考慮し、より作用時間の長い吸入医薬品製剤を開発すべく鋭意検討した結果、多糖類に共有結合により生理活性物質を導入した多糖誘導体を用いることで、既存医薬組成物よりも生理活性物質の作用時間を延長でき、かつ生理活性物質自体の量も大きく低減させることができることを見出し、本発明を完成した。すなわち、前記課題を解決するための具体的手段は以下の通りであり、本発明は以下の態様を包含する。【００１４】
＜１＞  多糖に由来する基と、多糖に由来する基に共有結合する生理活性物質に由来する基とを有する多糖誘導体を含む呼吸器投与用の医薬組成物である。
＜２＞  多糖に由来する基と、生理活性物質に由来する基とがスペーサーを介して共有結合している、＜１＞に記載の医薬組成物である。
＜３＞  生理活性物質に由来する基とスペーサーとは、エステル結合で共有結合している、前記＜２＞に記載の医薬組成物である。
＜４＞  多糖に由来する基とスペーサーとは、アミド結合で共有結合している、＜２＞又は＜３＞に記載の医薬組成物である。
＜５＞  スペーサーがアミノ酸、アミノアルコール、ジカルボン酸及びこれらの誘導体からなる群より選択される少なくとも１種に由来する２価以上の基である、＜２＞〜＜４＞のいずれか１つに記載の医薬組成物である。
＜６＞  スペーサーが置換基を有していてもよいω−アミノ脂肪酸に由来する２価の基である、＜５＞に記載の医薬組成物である。
＜７＞  多糖がグリコサミノグリカン及びホモグリカンからなる群より選択される少なくとも１種である、＜１＞〜＜６＞のいずれか１つに記載の医薬組成物である。
＜８＞  多糖がヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、キトサン及びカルボキシメチルセルロースからなる群より選択される少なくとも１種である、＜１＞〜＜７＞のいずれか１つに記載の医薬組成物である。
＜９＞  多糖誘導体からの生理活性物質の遊離速度が、ｐＨ７．５、３６℃のリン酸緩衝生理食塩液中において、０．１〜３０％／日である、＜１＞〜＜８＞のいずれか１つに記載の医薬組成物である。
＜１０＞  生理活性物質が、ステロイド、気管支拡張薬、抗アレルギー薬及び抗コリン薬からなる群より選択される少なくとも１種である、＜１＞〜＜９＞のいずれか１つに記載の医薬組成物である。
＜１１＞  呼吸器疾患の治療用である、＜１＞〜＜１０＞のいずれか１つに記載の医薬組成物である。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、生理活性物質を長時間にわたって持続的に放出可能な呼吸器投与用の医薬組成物を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】アミノ酸の疎水性指標と遊離速度の相関を示すグラフである。
【図２】肺組織中の遊離ベタメタゾン濃度の経時変化を示すグラフである。
【図３】血漿中の遊離ベタメタゾン濃度の経時変化を示すグラフである。
【図４】肺胞洗浄液中の好酸球数を示すグラフである。
【図５】薬物の遊離速度と遊離濃度の相関を示すグラフである。
【図６】ラットＯＶＡ感作モデルにおけるブデソニド単剤の用量反応性を示すグラフである。
【図７】ラットＯＶＡ感作モデルにおける多糖誘導体の用量反応性の一例を示すグラフである。
【図８】気道過敏性の亢進に対する多糖誘導体の持続的な抑制作用を示すグラフである。
【図９】鼻炎モデルにおける薬剤投与後当日から７日までにおける平均噴嚏回数を示すグラフである。
【図１０】鼻炎モデルにおける薬剤投与後当日から７日までの８日間合計の平均噴嚏回数の合計を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本明細書において「〜」を用いて示された数値範囲は、「〜」の前後に記載される数値をそれぞれ最小値及び最大値として含む範囲を示す。また組成物中の各成分の含有量は、組成物中に各成分に該当する物質が複数存在する場合、特に断らない限り、組成物中に存在する当該複数の物質の合計量を意味する。
以下、本発明を発明の実施形態により詳説する。
【００１８】
＜医薬組成物＞
本実施形態の医薬組成物は、多糖に由来する基と、多糖に由来する基に共有結合する生理活性物質（以下、薬物ともいう）に由来する基とを有する多糖誘導体の少なくとも１種を含む呼吸器投与用の医薬組成物である。医薬組成物は必要に応じて、薬学的に許容されうる賦形剤等の添加剤を含んでいてもよい。
医薬組成物は、多糖と生理活性物質とが生体中で分解可能な共有結合で連結した構造を有する多糖誘導体を含むことで、呼吸器に投与した場合に、生理活性物質を長時間にわたって持続的に放出可能になる。さらに服薬回数の低減及び服用の煩雑さ改善によるアドヒアランスの向上、ならびに使用回数減少による副作用の低減を図ることができる。さらにまた、必要とされる生理活性物質自体の量も大きく低減させることができる。
【００１９】
（多糖誘導体）
多糖誘導体は、多糖に由来する基と、多糖に由来する基に共有結合する生理活性物質に由来する基とを有する。多糖誘導体においては、多糖に由来する基と生理活性物質に由来する基との間の共有結合が分解（好ましくは加溶媒分解）することで生理活性物質が遊離する。多糖誘導体は必要に応じてその他の置換基を更に有していてもよい。また多糖誘導体がカルボキシ基、硫酸基等の酸性基を有する場合、塩を形成していない遊離酸の状態であっても、また薬学的に許容されうる塩の状態であってもよい。
【００２０】
薬学的に許容されうる塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属イオンとの塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属イオンとの塩などが挙げられる。多糖誘導体は、生体への適用性及び親和性の観点から、薬学的に許容されうるアルカリ金属イオンとの塩であることが好ましく、ナトリウム塩であることがより好ましい。
【００２１】
多糖誘導体において、多糖に由来する基と生理活性物質に由来する基とが共有結合しているとは、多糖に由来する基と生理活性物質に由来する基とが直接共有結合している第一の態様と、多糖に由来する基と生理活性物質に由来する基とが、スペーサーを介して共有結合している第二の態様とを含む。なお、スペーサーを介して共有結合しているとは、スペーサーが２価以上の基であって、多糖に由来する基の少なくとも１つと生理活性物質に由来する基の少なくとも１つのそれぞれがスペーサーと共有結合することで、多糖に由来する基と生理活性物質に由来する基とがスペーサーを介して連結されている状態を意味する。スペーサーは２価以上の基であれば、特に制限されないが、２価の基であることが好ましい。
【００２２】
第一の態様における多糖に由来する基と生理活性物質に由来する基との共有結合は、多糖誘導体からの生理活性物質の遊離速度制御の観点から、生体中で分解可能な共有結合であって、縮合反応によって形成される共有結合であることが好ましく、エステル結合であることがより好ましい。第一の態様においては、多糖に由来する基と生理活性物質に由来する基との共有結合が分解（好ましくは加溶媒分解）することで、生理活性物質が遊離する。
また、第二の態様における生理活性物質に由来する基とスペーサーとの共有結合は、多糖誘導体からの生理活性物質の遊離速度制御の観点から、生体中で分解可能な共有結合であって、縮合反応によって形成される共有結合であることが好ましく、エステル結合であることがより好ましい。第二の態様においては、生理活性物質に由来する基とスペーサーとの共有結合が分解（好ましくは加溶媒分解）することで、生理活性物質が遊離する。なお、第二の態様においては、多糖に由来する基とスペーサーとの共有結合が分解した後に生理活性物質に由来する基とスペーサーとの共有結合が分解して生理活性物質が遊離してもよい。
すなわち、多糖誘導体は、多糖に由来する基と生理活性物質に由来する基とがエステル結合を含む共有結合で連結した化合物であることが好ましい。
【００２３】
ここで、多糖に由来する基とは、多糖分子からヒドロキシ基及び水素原子からなる群より選ばれる少なくとも１つを取り除いて形成される基である。また、生理活性物質に由来する基とは、生理活性物質からヒドロキシ基及び水素原子からなる群より選ばれる少なくとも１つを取り除いて形成される基である。なお、多糖分子又は生理活性物質からヒドロキシ基又は水素原子が取り除かれる位置は特に限定されない。例えば、ヒドロキシ基が取り除かれる場合、多糖分子又は生理活性物質が有することがあるカルボキシ基又は硫酸基からヒドロキシ基が取り除かれることが好ましく、カルボキシ基からヒドロキシ基が取り除かれることがより好ましい。また例えば、水素原子が取り除かれる場合、多糖分子又は生理活性物質が有することがあるヒドロキシ基又はアミノ基から水素原子が取り除かれることが好ましい。
【００２４】
多糖誘導体を構成する多糖分子は、複数の単糖分子がグリコシド結合で連結した化合物であれば特に制限されない。多糖分子を構成する単糖分子の数は少なくとも２であるが、１０以上であることが好ましい。
多糖分子を構成する単糖分子としては、Ｄ−グルコース、β−Ｄ−グルクロン酸、α−Ｌ−イズロン酸、Ｄ−グルコサミン、α−Ｄ−ガラクトサミン及びこれらの誘導体等を挙げることができる。単糖の誘導体としては、アセチル化体、硫酸エステル化体、カルボキシメチル化体、アルキル化体等を挙げることができる。
これらの中でも単糖は、Ｄ−グルコース、β−Ｄ−グルクロン酸、α−Ｌ−イズロン酸、Ｄ−グルコサミン及びこれらの誘導体からなる群より選択される少なくとも１種であることが好ましい。
また、多糖分子は単糖分子がグリコシド結合で連結した化合物に、更に置換基を有する化合物であってもよい。置換基としては、炭素数１〜４のアルキル基、カルボキシメチル基、アセチル基、硫酸基等を挙げることができる。置換基は１種単独でも２種以上の組合せであってもよい。
【００２５】
多糖分子は、１種類の単糖分子から構成されるホモグリカンであっても、２種以上の単糖分子から構成されるヘテログリカンであってもよい。多糖分子がホモグリカンである場合、カルボキシメチル基、アセチル基等の置換基を有するホモグリカン誘導体であることが好ましい。ホモグリカンを構成する単糖分子としては、Ｄ−グルコース、Ｄ−グルコサミン等を挙げることができる。
多糖分子がヘテログリカンの場合、アミノ糖（ガラクトサミン、グルコサミン等）と、ウロン酸（グルクロン酸、イズロン酸等）又はガラクトースとを構成単位とするグリコサミノグリカン（以下、「ＧＡＧ」ともいう）であることが好ましい。グリコサミノグリカンとしては、ヒアルロン酸（以下、「ＨＡ」ともいう）、コンドロイチン硫酸（以下、「ＣＳ」ともいう）、ヘパリン、ヘパラン硫酸、ケラタン硫酸、デルマタン硫酸等が挙げられる。
多糖分子は、多糖誘導体からの生理活性物質の遊離速度制御の観点から、グリコサミノグリカン及び置換基を有していてもよいホモグリカンからなる群より選択される少なくとも１種であることが好ましく、これらの中でも、多糖誘導体からの生理活性物質の遊離速度制御の観点から、構成単位中にカルボキシ基及びアミノ基からなる群より選択される少なくとも一方の反応性官能基を有する多糖分子であることがさらに好ましい。
【００２６】
多糖分子としては例えば、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、へパリン、へパラン硫酸、ケラタン硫酸、デルマタン硫酸、カルボキシメチルセルロース（以下、「ＣＭＣ」ともいう）、カルボキシメチルエチルセルロース、キトサン、キチン、セルロース及びこれらの誘導体等を挙げることができる。
これらの中でも、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、キトサン及びカルボキシメチルセルロースからなる群より選択される少なくとも１種であることが更に好ましい。
【００２７】
多糖分子は、その種類に応じ、公知の方法で製造することができる。
多糖分子の分子量は特に制限されず、多糖を構成する単糖分子の種類、目的等に応じて適宜選択される。多糖分子の重量平均分子量は例えば、１０，０００〜５，０００，０００又は１０ｋＤａ〜５，０００ｋＤａとすることができ、１５，０００〜２，０００，０００又は１５ｋＤａ〜２，０００ｋＤａであることが好ましく、２０，０００〜１，０００，０００又は２０ｋＤａ〜１，０００ｋＤａであることがより好ましい。多糖分子の重量平均分子量は、ＧＰＣを用いる常法により測定することができる。
また、分子量に代わる指標として溶液の粘度によって所望の多糖を選択することもできる。
【００２８】
多糖分子としてヒアルロン酸を用いる場合、その重量平均分子量は特に限定されず、目的（例えば、適用疾患）等に応じて適宜選択することができる。重量平均分子量は、例えば１０，０００〜５，０００，０００又は１０ｋＤａ〜５，０００ｋＤａとすることができ、製造効率上の観点から、５０，０００〜３，０００，０００又は５０ｋＤａ〜３，０００ｋＤａであることが好ましく、２００，０００〜１，０００，０００又は２００ｋＤａ〜１，０００ｋＤａであることがより好ましい。
【００２９】
多糖分子としてコンドロイチン硫酸を用いる場合、その種類は特に限定されず、コンドロイチン硫酸Ａ、コンドロイチン硫酸Ｂ、コンドロイチン硫酸Ｃ、コンドロイチン硫酸Ｄ、コンドロイチン硫酸Ｅ等のいずれのコンドロイチン硫酸を用いることも可能である。コンドロイチン硫酸の種類は、目的（例えば、適用疾患）等により適宜選択してもよい。コンドロイチン硫酸の重量平均分子量は特に限定されず、目的等に応じて適宜選択することができる。重量平均分子量は、１０，０００〜１００，０００又は１０ｋＤａ〜１００ｋＤａであることが好ましく、１０，０００〜４０，０００又は１０ｋＤａ〜４０ｋＤａであることがより好ましく、１５，０００〜３０，０００又は１５ｋＤａ〜３０ｋＤａであることが更に好ましく、２０，０００〜３０，０００又は２０ｋＤａ〜３０ｋＤａであることが特に好ましい。
【００３０】
多糖分子としてカルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルエチルセルロース等を用いる場合、粘度（分子量）及びエーテル化度（置換度）は特に限定されず、目的（例えば、適用疾患）等に応じて適宜選択できる。エーテル化度が０．６〜１．３であって、粘度が１質量％水溶液とした際に１００〜１８，０００（ｍＰａ・ｓ）であることが好ましく、エーテル化度が０．８〜１．０であって、粘度が１質量％水溶液時に１，０００〜６，０００（ｍＰａ・ｓ）であることがより好ましい。粘度は２５℃条件下でＢ型回転粘度計を用いて測定することができる。
【００３１】
多糖分子としてキトサンを用いる場合、粘度（分子量）、脱アセチル化度（置換度）は特に限定されず、目的(例えば、適用疾患)等により適宜選択できる。脱アセチル化度が７０％以上であって、粘度が１重量％酢酸溶液とした際に５〜１，０００（ｍＰａ・ｓ）であることが好ましく、脱アセチル化度が８０％以上であって、粘度が０．５重量％酢酸溶液時に１０〜５００（ｍＰａ・ｓ）であることがより好ましい。粘度は０．５重量％酢酸溶液、２０℃条件下でＢ型回転粘度計を用いて測定することができる。
【００３２】
多糖誘導体は少なくとも１種の生理活性物質に由来する基を有している。多糖誘導体を構成する生理活性物質は、呼吸器投与に適用可能な生理活性物質であれば特に限定されず、目的等に応じて適宜選択することができる。生理活性物質の有する生理活性としては、疾患の治療、予防等を目的とする生理活性でも、検査等を目的とする生理活性であってもよい。生理活性として具体的には例えば、ステロイド様活性、β２アドレナリン受容体刺激活性、テオフィリン様活性、抗ウィルス活性、抗アレルギー活性、抗コリン活性、抗炎症活性、抗菌活性、去痰活性、抗酸化活性、インターフェロン様活性等を挙げることができる。
【００３３】
また、生理活性物質は、多糖誘導体からの遊離速度制御の観点から、カルボキシ基及びヒドロキシ基の少なくとも一方を有する化合物であることが好ましく、少なくともヒドロキシ基を有する化合物であることがより好ましい。
【００３４】
生理活性物質として具体的には、ステロイド、気管支拡張薬、抗ウィルス薬、抗アレルギー薬、抗コリン薬、抗菌薬、抗炎症薬、去痰薬、抗酸化薬、インターフェロン薬等を挙げることができ、ステロイド、気管支拡張薬、抗アレルギー薬及び抗コリン薬からなる群より選択される少なくとも１種であることが好ましい。
【００３５】
ステロイドの種類は特に限定されず、目的等に応じて適宜選択することができる。ステロイドとして具体的には、ベタメタゾン、プレドニゾロン、ブデソニド、フルチカゾンが例示される。これらのステロイドは、適用する疾患、ステロイド自身の活性強度、副作用の影響等を考慮して選択されることが好ましい。
【００３６】
気管支拡張薬の種類は特に限定されず、目的等に応じて適宜選択することができる。気管支拡張薬としては、β２アドレナリン受容体刺激薬、テオフィリン薬（キサンチン誘導体）、副交感神経遮断薬を挙げることができる。
β２アドレナリン受容体刺激薬として具体的には、ツロブテロールが挙げられる。また、キサンチン誘導体として具体的には、プロキシフィリンが例示される。副交感神経遮断薬としては、後述する抗コリン薬が例示される。
【００３７】
抗アレルギー薬の種類は特に限定されず、目的等に応じて適宜選択することができる。抗アレルギー薬としては、化学伝達物質遊離抑制薬、ヒスタミン拮抗薬、トロンボキサン合成阻害薬、トロンボキサン拮抗薬、ＴＨ２サイトカイン阻害薬、ロイコトリエン拮抗薬が例示される。
トロンボキサン拮抗薬として具体的には、セラトロダストが例示される。ロイコトリエン拮抗薬として具体的には、モンテルカストが例示される。
【００３８】
抗コリン薬の種類は特に限定されず、目的等に応じて適宜選択することができる。抗コリン薬として具体的には、イプラトロピウムが例示される。
【００３９】
多糖誘導体は、多糖に由来する基と生理活性物質に由来する基とが直接共有結合していてもよく、多糖に由来する基と生理活性物質に由来する基とがスペーサーを介して共有結合していてもよいが、多糖誘導体からの生理活性物質の遊離速度制御をより容易にする観点から、多糖に由来する基と生理活性物質に由来する基とがスペーサーを介して共有結合していることが好ましい。
【００４０】
多糖誘導体において、多糖に由来する基と生理活性物質に由来する基とが直接共有結合している場合（第一の態様）、多糖誘導体からの生理活性物質の遊離速度制御の観点から、多糖誘導体は、多糖と生理活性物質とが縮合結合した化合物であることが好ましく、多糖と生理活性物質とがエステル結合した化合物であることがより好ましく、多糖が有するカルボキシ基と生理活性物質が有するヒドロキシ基とからエステル結合が形成された化合物であることが更に好ましい。
【００４１】
第一の態様の場合、多糖に由来する基と生理活性物質に由来する基との間の共有結合の分解性（好ましくは、加水分解性）を制御することで、多糖誘導体からの生理活性物質の遊離速度を制御することができる。具体的には例えば、生理活性物質としてヒドロキシメチルカルボニル基等のヒドロキシ基の近傍に電子吸引基を有する化合物を選択し、多糖としてグリコサミノグリカン又はカルボキシ基を有するホモグリカン（好ましくはグリコサミノグリカン）を選択することを挙げることができる。これにより所望とする生理活性物質の遊離速度を容易に達成することができる。
【００４２】
また多糖に由来する基と生理活性物質に由来する基との間の共有結合の分解性の制御は、多糖に由来する基が生理活性物質に結合する位置を選択することで制御することもできる。例えば多糖に由来する基を、生理活性物質における立体的に混み合った位置に結合させることで、多糖誘導体からの生理活性物質の遊離速度を低下させることができる。具体的には例えば、生理活性物質としてステロイドを用いる場合、１１位のヒドロキシ基を結合位置とすることで、２１位のヒドロキシ基を結合位置とする場合に比べて、遊離速度を抑制することができる。
【００４３】
多糖誘導体において、多糖に由来する基と生理活性物質に由来する基とが、スペーサーを介して共有結合している場合（第二の態様）、多糖誘導体からの生理活性物質の遊離速度制御の観点から、多糖誘導体は、多糖に由来する基とスペーサー及び生理活性物質に由来する基とスペーサーの少なくとも一方は、エステル結合で共有結合していることが好ましく、生理活性物質に由来する基とスペーサーとがエステル結合で共有結合していることがより好ましく、多糖に由来する基とスペーサーとがアミド結合で共有結合し、生理活性物質に由来する基とスペーサーとがエステル結合で共有結合していることが更に好ましい。
また第二の態様の多糖誘導体においては、多糖分子に由来する基に、１つのスペーサーを介して２以上の生理活性物質に由来する基が共有結合していてもよい。１つのスペーサーに共有結合する生理活性物質に由来する基の数は少なくとも１であれば、特に制限されない。
【００４４】
すなわち、スペーサーを形成する化合物（以下、スペーサー形成分子ともいう）は分子構造中に、カルボキシ基、ヒドロキシ基及びアミノ基からなる群より選択される２以上の反応性官能基と当該２以上の反応性官能基を互いに連結する連結基とを有していることが好ましい。
ここでカルボキシ基、ヒドロキシ基及びアミノ基からなる群より選択される２以上の反応性官能基は、多糖分子及び生理活性物質の構造に応じて適宜選択される。例えば、多糖分子がカルボキシ基を有する場合、スペーサー形成分子はこれに対応してヒドロキシ基又はアミノ基を有することが好ましく、アミノ基を有することがより好ましい。多糖分子がアミノ基又はヒドロキシ基を有する場合、スペーサー形成分子はこれに対応してカルボキシ基を有することが好ましい。
一方、生理活性物質がカルボキシ基を有する場合、スペーサー形成分子はこれに対応してアミノ基又はヒドロキシ基を有することが好ましく、ヒドロキシ基を有することがより好ましい。また生理活性物質がヒドロキシ基を有する場合、スペーサー形成分子はこれに対応してカルボキシ基を有することが好ましい。
【００４５】
スペーサー形成分子は、多糖誘導体からの生理活性物質の遊離速度制御の観点から、カルボキシ基とアミノ基と連結基とを有する化合物（好ましくはアミノ酸）、ヒドロキシ基とアミノ基と連結基とを有する化合物（好ましくはアミノアルコール）、２以上のカルボキシ基と連結基とを有する化合物（好ましくはジカルボン酸）、カルボキシ基とヒドロキシ基と連結基とを有する化合物（好ましくはヒドロキシ酸）及び２以上のヒドロキシ基と連結基とを有する化合物（好ましくはジオール化合物）からなる群より選択される少なくとも１種であることが好ましく、カルボキシ基とアミノ基と連結基とを有する化合物（好ましくはアミノ酸）、ヒドロキシ基とアミノ基と連結基とを有する化合物（好ましくはアミノアルコール）及び２以上のカルボキシ基と連結基とを有する化合物（好ましくはジカルボン酸）からなる群より選択される少なくとも１種であることがより好ましい。
【００４６】
したがって第二の態様の多糖誘導体は、多糖誘導体からの生理活性物質の遊離速度制御の観点から、「カルボキシ基を有する多糖分子、ヒドロキシ基を有する生理活性物質及びアミノ基とカルボキシ基とを有するスペーサー形成分子」の組合せ、「カルボキシ基を有する多糖分子、ヒドロキシ基を有する生理活性物質及びヒドロキシ基とカルボキシ基とを有するスペーサー形成分子」の組合せ、「カルボキシ基を有する多糖分子、カルボキシ基を有する生理活性物質及びアミノ基とヒドロキシ基とを有するスペーサー形成分子」の組合せ、「カルボキシ基を有する多糖分子、カルボキシ基を有する生理活性物質及び２以上のヒドロキシ基を有するスペーサー形成分子」の組合せ、「アミノ基を有する多糖分子、ヒドロキシ基を有する生理活性物質及び２以上のカルボキシ基を有するスペーサー形成分子」の組合せ、並びに「アミノ基を有する多糖分子、カルボキシ基を有する生理活性物質及びカルボキシ基とヒドロキシ基とを有するスペーサー形成分子」の組合せからなる群より選択される構成分子の組合せから構成される化合物であることが好ましく、「カルボキシ基を有する多糖分子、ヒドロキシ基を有する生理活性物質及びアミノ基とカルボキシ基とを有するスペーサー形成分子」の組合せ、「カルボキシ基を有する多糖分子、カルボキシ基を有する生理活性物質及びアミノ基とヒドロキシ基とを有するスペーサー形成分子」の組合せ、「アミノ基を有する多糖分子、ヒドロキシ基を有する生理活性物質及び２以上のカルボキシ基を有するスペーサー形成分子」の組合せ、並びに「アミノ基を有する多糖分子、カルボキシ基を有する生理活性物質及びカルボキシ基とヒドロキシ基とを有するスペーサー形成分子」の組合せからなる群より選択される構成分子の組合せから構成される化合物であることがより好ましく、「カルボキシ基を有する多糖分子、ヒドロキシ基を有する生理活性物質及びアミノ基とカルボキシ基とを有するスペーサー形成分子」の組合せ、「カルボキシ基を有する多糖分子、カルボキシ基を有する生理活性物質及びアミノ基とヒドロキシ基とを有するスペーサー形成分子」の組合せ、並びに「アミノ基を有する多糖分子、ヒドロキシ基を有する生理活性物質及び２以上のカルボキシ基を有するスペーサー形成分子」の組合せの組合せからなる群より選択される構成分子の組合せから構成される化合物であることが更に好ましい。
【００４７】
スペーサー形成分子が有する連結基は、２以上の反応性官能基を共有結合で連結可能な２価以上の基であれば特に制限はされない。連結基としては例えば、炭素数２〜１２の脂肪族炭化水素に由来する２価以上の基、炭素数６〜１０の芳香族炭化水素に由来する２価以上の基、これらの組み合わせ等を挙げることができる。脂肪族炭化水素に由来する２価以上の基とは、脂肪族炭化水素分子から２以上の水素原子を取り除いて形成される炭化水素基であり、水素原子が取り除かれる位置は特に制限されない。芳香族炭化水素に由来する２価以上の基とは、芳香族炭化水素分子から２以上の水素原子を取り除いて形成される芳香族基であり、水素原子が取り除かれる位置は特に制限されない。
連結基は、抗原性抑制の観点から、反応性官能基間の長さが原子数１２以下であることが好ましく、原子数２〜６であることがより好ましい。
【００４８】
連結基は置換基を有していてもよい。連結基が置換基を有することで、多糖誘導体における生理活性物質の遊離速度を所望の範囲に容易に制御することができる。すなわち、生理活性物質の構造に依存せずに、多糖誘導体からの生理活性物質の遊離速度を制御することが可能となる。
連結基が有する置換基の位置は、例えば、生理活性物質に由来する基とスペーサーとの共有結合（好ましくは、エステル結合）の安定性が影響をうける位置であればよく、具体的には、生理活性物質に由来する基に結合する反応性官能基のα位及びβ位からなる群より選ばれる少なくとも１ヵ所であることが好ましい。置換基の数は目的に応じて選択可能であり、例えば１〜４であることが好ましく、１〜２であることがより好ましい。例えば置換基が２つの場合、置換位置はα位とβ位とであっても、α位のみ又はβ位のみであってもよい。
【００４９】
連結基が有する置換基の種類は、例えば、多糖誘導体における生理活性物質の遊離速度制御の観点から、電子吸引基、電子供与基及び立体障害性基からなる群より選択される少なくとも１種であることが好ましい。
【００５０】
例えば、連結基に導入する置換基が電子吸引基であると、生理活性物質に由来する基とスペーサーとの共有結合が無置換の場合よりも分解しやすくなり、生理活性物質の遊離速度が大きくなる傾向がある。したがって、電子吸引基の電子吸引性の強さ、例えば電気陰性度、ハメット定数等を指標として電子吸引基を選択することにより、生理活性物質の遊離速度を所望の範囲に容易に調整することが可能である。すなわち、強い電子吸引基を選択することで遊離速度をより大きくすることができる傾向がある。具体的には、フッ素、塩素、臭素のようなハロゲン原子を導入する場合、電気陰性度の高い順（Ｆ＞Ｃｌ＞Ｂｒ）に生理活性物質の遊離速度が速くなる傾向がある。
【００５１】
電子吸引基は、連結基に導入可能であれば特に制限されず、通常用いられる電子吸引基から適宜選択することができる。電子吸引基として具体的には、フッ素、塩素、臭素等のハロゲン原子、アルキル及びアリールスルホキシド基、アルキル及びアリールスルホン基、スルホン酸基、アセタミド基、カルボキシ基、アルキル及びアリールカルボニルオキシ基（エステル基）などを例示することができる。これらの中でもハロゲン原子、アルキルカルボニルオキシ基からなる群から選択される少なくとも１種が好ましい。
【００５２】
連結基に導入する置換基が電子供与基であると、生理活性物質に由来する基とスペーサーとの共有結合が無置換の場合よりも分解し難くなり、生理活性物質の遊離速度が低下する傾向がある。電子供与基は、例えば、ハメット定数を指標として選択することができる。
【００５３】
電子供与基は、連結基に導入可能であれば特に制限されず、通常用いられる電子供与基から適宜選択することができる。電子供与基として具体的には、アルケン基、アルキン基等をあげることができる。
【００５４】
連結基に導入する置換基が立体障害性基であると、生理活性物質の遊離速度が低下する傾向がある。立体障害性基は、例えばスペーサー形成分子がアミノ酸の場合、アミノ酸の疎水性指標（Hydropathy index）を指標として選択することもできる。
【００５５】
立体障害性基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基等の直鎖状アルキル基、イソプロピル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基等の分岐鎖アルキル基、シクロヘキシル基等の環状アルキル基、フェニル基等のアリール基などを挙げることできる。これらの中でも分岐鎖アルキル基、環状アルキル基等が好ましい。
【００５６】
連結基における置換基は、電子吸引基、電子供与基及び立体障害性基のそれぞれに明確に区別できるわけではないが、ハメット定数、疎水性指標等を指標として、置換基及びその置換位置を選択することで遊離速度を制御することができる。
更に、電子吸引基及び電子供与基の両方を導入して遊離速度を微調整することも可能であるし、電子吸引性又は電子供与性と立体障害性とを併せ持つ置換基を導入して遊離速度を微調整することも可能である。
【００５７】
スペーサーによる生理活性物質の遊離速度の制御は、生理活性物質におけるスペーサーとの結合位置の選択と組み合わせてもよい。具体的には例えば、生理活性物質としてステロイドを用いる場合、一般に１１位のヒドロキシ基を介して生成したエステル結合は立体障害により殆ど加水分解しないため、多糖誘導体に導入した生理活性物質であるステロイドがほとんど遊離しないと考えられる。しかし、上述したスペーサーからエステル結合の加水分解を促進するようなスペーサーを適宜選択することで、多糖誘導体からステロイドを遊離させることが可能となる。また例えば、２１位のヒドロキシ基を介してエステル結合を生成した場合と比較して遊離持続時間が延長され、ステロイドによる作用持続時間を延長することができる。
すなわちスペーサーの構造を選択することで、多糖誘導体に適用可能な生理活性物質の範囲を拡張することができる。
【００５８】
スペーサーによる生理活性物質の遊離速度の制御は、多糖誘導体を構成する多糖の分子量の選択と組み合わせてもよい。
【００５９】
スペーサー形成分子は、特に制限されないが、アミノ酸、アミノアルコール、ジカルボン酸、ヒドロキシ酸、ジオール化合物及びこれらの誘導体からなる群より選択される少なくとも１種であることが好ましく、アミノ酸、アミノアルコール、ジカルボン酸及びこれらの誘導体からなる群より選択される少なくとも１種であることがより好ましく、アミノ酸、アミノアルコール及びこれらの誘導体からなる群より選択される少なくとも１種であることが更に好ましい。
【００６０】
生理活性物質がヒドロキシ基を有する場合、スペーサー形成分子は、アミノ酸、ジカルボン酸、ヒドロキシ酸及びこれらの誘導体からなる群より選択される少なくとも１種であることが好ましく、アミノ酸、ジカルボン酸及びこれらの誘導体からなる群より選択される少なくとも１種であることがより好ましく、アミノ酸及びこれらの誘導体からなる群より選択される少なくとも１種であることが更に好ましい。
生理活性物質がカルボキシ基を有する場合、スペーサー形成分子は、アミノアルコール、ヒドロキシ酸、ジオール化合物及びこれらの誘導体からなる群より選択される少なくとも１種であることが好ましく、アミノアルコール及びこれらの誘導体からなる群より選択される少なくとも１種であることがより好ましい。
【００６１】
スペーサー形成分子としてのアミノ酸は、アミノ基とカルボキシ基とを有する化合物であれば特に制限はなく、天然由来のアミノ酸であってもよく、合成アミノ酸であってもよい。
アミノ酸として具体的には、グリシン、アラニン、β−アラニン、アルギニン、アスパラギン、セリン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、プロリン、チロシン、トリプトファン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、トレオニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、ヒスチジン、ノルバリン、ノルロイシン、イソセリン、オルニチン、アミノ酪酸、アミノ吉草酸、アミノヘプタン酸、アミノオクタン酸、アミノデカン酸、アミノウンデカン酸、アミノドデカン酸、及びこれらの構造異性体を挙げることができる。
これらの中でも、グリシン、β−アラニン、アミノ酪酸、アミノ吉草酸、アミノヘプタン酸、アミノオクタン酸、アミノデカン酸、アミノウンデカン酸、アミノドデカン酸等のω−アミノ脂肪酸を好ましく用いることができる。なお、これらのω−アミノ脂肪酸は置換基を有していてもよく、カルボキシ基のα位又はβ位にハロゲン原子を有していることが好ましい。ω−アミノ脂肪酸の炭素数は特に制限されないが、遊離速度制御の観点から、３以上であることが好ましく、３〜１２であることがより好ましく、３〜６であることが更に好ましい。なお、ω−アミノ脂肪酸の炭素数はカルボキシ基のカルボニル炭素を含む総炭素数を意味する。
【００６２】
アミノ酸の誘導体としては、２−フルオロ−３−アミノ−プロパン酸、２−クロロ−３−アミノ−プロパン酸、２−ブロモ−３−アミノ−プロパン酸等のカルボキシ基に隣接するα位炭素の水素原子がハロゲンに置換されたハロゲン化誘導体、２−メチル−２−アミノプロパン酸、ジエチルグリシン等のカルボキシ基に隣接するα位炭素の水素原子がアルキル鎖に置換されたアルキル置換誘導体、１１−アミノ−３，６，９−トリオキサウンデカン酸等のエーテル結合を有するアミノ酸誘導体が例示される。
アミノ酸誘導体として、前述のアミノ酸から選択されて、組み合わされたジペプチド、トリペプチド、テトラペプチドを用いてもよい。
【００６３】
アミノアルコールとして具体的には、アミノエタノール、アミノプロパノール、アミノブタノール、アミノヘキサノール等の脂肪族アミノアルコール；アミノフェニルエタノール、アミノベンジルアルコール等のアミノアリールアルキルアルコール；これらの構造異性体を挙げることができる。
【００６４】
アミノアルコールの誘導体としては、例えば、３−アミノ−２−フルオロ−１−プロパノール、４−アミノ−３−フルオロ−１−ブタノール等のヒドロキシ基から数えて１〜２番目に隣接するα位炭素又はβ位炭素の水素原子がハロゲンに置換されたハロゲン化アミノアルコールを挙げることができる。
【００６５】
ジカルボン酸として具体的には、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、ピメリン酸、スベリン酸、アゼライン酸、セバシン酸等の脂肪族ジカルボン酸；フタル酸、イソフタル酸、テレフタル酸等の芳香族ジカルボン酸；これらの構造異性体などを挙げることができる。
【００６６】
ジカルボン酸の誘導体としては、タルトロン酸、酒石酸、イソクエン酸、クエン酸、シトラマル酸、リンゴ酸等が例示される。
【００６７】
ヒドロキシ酸としては、グリコール酸、乳酸、２−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシ酪酸、γ−ヒドロキシ酪酸、２−ホスホグリセリン酸、３−ホスホグリセリン酸、ロイシン酸、リシノール酸、セレブロン酸、これらの構造異性体などを挙げることができる。
【００６８】
ヒドロキシ酸の誘導体としては、リンゴ酸、グリセリン酸、タルトロン酸、酒石酸、パントイン酸、メバロン酸等が例示される。
【００６９】
多糖誘導体におけるスペーサーは、多糖誘導体からの生理活性物質の遊離速度制御の観点から、アミノ酸、アミノアルコール、ジカルボン酸及びこれらの誘導体からなる群より選択される少なくとも１種に由来する２価以上の基であることが好ましく、アミノ酸、アミノアルコール及びこれらの誘導体からなる群より選択される少なくとも１種に由来する２価以上の基であることがより好ましく、アミノ酸及びその誘導体からなる群より選択される少なくとも１種に由来する２価以上の基であることが特に好ましい。
【００７０】
多糖誘導体におけるスペーサーが、アミノ酸又はその誘導体に由来する２価以上の基である場合、スペーサーは、下記一般式（Ｉ）で表されるアミノ酸に由来する２価の基であることが好ましい。一般式（Ｉ）で表されるスペーサーは、生理活性物質がヒドロキシ基を有する場合に好適に適用することができる。
【００７１】
−ＨＮ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＲ１１Ｒ１２−ＣＲ１３Ｒ１４−ＣＯ−  （Ｉ）
式中、ｍは０〜１２の整数を示す。Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４はそれぞれ独立に、水素原子、電子吸引基、電子供与基又は立体障害性基を示す。ｍは、０〜８であることが好ましく、０〜４であることがより好ましい。また、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４の基はその全部又は一部において、同一であっても異なっていてもよい。
【００７２】
電子吸引基、電子供与基及び立体障害性基の詳細については既述の通りである。一般式（Ｉ）で表されるスペーサーにおけるＲ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４を適宜選択することで、多糖誘導体からの生理活性物質の遊離速度を制御することができる。したがって、Ｒ１１〜Ｒ１４の少なくとも１つは、電子吸引基、電子供与基又は立体障害性基であることが好ましい。
例えば、Ｒ１１〜Ｒ１４の少なくとも１つを電子吸引基とすれば、結合強度が弱まるため生理活性物質が遊離され易くなり、遊離速度は速くなる。
【００７３】
エステル結合の分解速度への影響は、Ｒ１１及びＲ１２よりもＲ１３又はＲ１４に電子吸引基を導入する方が大きくなり、更に電子吸引性の強さ、例えば電気陰性度に合わせて電子吸引基を選択することにより生理活性物質の遊離速度を調整することが可能である。すなわち一般に電気陰性度が大きい置換基を導入すれば遊離速度は速くなる傾向がある。
【００７４】
Ｒ１１〜Ｒ１４として導入する電子吸引基は導入可能であればどのような電子吸引基でもよく、ハロゲン原子、アルキル及びアリールスルホキシド基、アルキル及びアリールスルホン基、スルホン酸基、アセタミド基、カルボキシ基、アルキルオキシカルボニル基等が例示される。
例えばＲ１３又はＲ１４としてフッ素、塩素、臭素のようなハロゲン原子を導入すると上述の理由により電気陰性度の高い順（Ｆ＞Ｃｌ＞Ｂｒ）に生理活性物質の遊離速度は大きくなる。
【００７５】
逆にＲ１３又はＲ１４として電子供与基を導入すれば生理活性物質の遊離速度をより低下させることが可能である。Ｒ１３又はＲ１４の電子供与基は電子を供与できる構造ならば特に限定されない。
【００７６】
更に生理活性物質の遊離速度を低下させるためには、スペーサーにメチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基等の直鎖状アルキル基、イソプロピル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基等の分岐鎖アルキル基、シクロヘキシル基等の環状アルキル基、フェニル基等のアリール基などを導入することで立体障害を起こさせ、遊離速度を低下させることも可能である。
Ｒ１１（又はＲ１２）及びＲ１３（又はＲ１４）を、各々電子吸引基及び電子供与基とすることで遊離速度を微調整することも可能である。更に電子吸引性又は電子供与性と立体障害性とを併せ持つ置換基をＲ１１〜Ｒ１４とすることで、遊離速度を微調整することも可能である。
【００７７】
一般式（Ｉ）で表されるスペーサーとして具体的には下記表１に示すスペーサーを例示することができるが、本実施形態はこれらに限定されない。なお、下記表１中、Ｈは水素原子、Ｆはフッ素原子、Ｃｌは塩素原子、Ｂｒは臭素原子、ＯＨはヒドロキシ基、ＯＴｓはトルエンスルホニルオキシ基を表す。
【００７８】
【表１】
2015005459.tif 000002
【００７９】
多糖誘導体におけるスペーサーが、アミノアルコール又はその誘導体に由来する２価以上の基である場合、スペーサーは、下記一般式（ＩＩ）で表されるアミノアルコールに由来する２価の基であることが好ましい。一般式（ＩＩ）で表されるスペーサーは、生理活性物質がカルボキシ基を有する場合に好適に適用することができる。
【００８０】
−ＨＮ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＲ２１Ｒ２２−ＣＲ２３Ｒ２４−Ｏ−  （ＩＩ）
式中、ｎは０〜１２の整数を示す。Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３及びＲ２４はそれぞれ独立に、水素原子、電子吸引基、電子供与基又は立体障害性基を示す。ｎは、０〜８であることが好ましく、０〜４であることがより好ましい。また、Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３及びＲ２４の基はその全部又は一部において、同一であっても異なっていてもよい。
【００８１】
電子吸引基、電子供与基及び立体障害性基の詳細については既述の通りである。一般式（ＩＩ）で表されるスペーサーにおけるＲ２１、Ｒ２２、Ｒ２３及びＲ２４を適宜選択することで、多糖誘導体からの生理活性物質の遊離速度を制御することができる。したがって、Ｒ２１〜Ｒ２４の少なくとも１つは、電子吸引基、電子供与基又は立体障害性基であることが好ましい。
【００８２】
例えば、Ｒ２１又はＲ２２を電子吸引基としたスペーサーを用いることで生理活性物質の遊離速度は速くなる。Ｒ２１又はＲ２２における電子吸引基は導入可能であればどのような電子吸引基でもよく、ハロゲン原子、アルキル及びアリールスルホキシド基、アルキル及びアリールスルホン基、スルホン酸基、アセタミド基、カルボキシ基、アルキルオキシカルボニル基等が例示される。
【００８３】
例えば、Ｒ２１を電気陰性度の高いハロゲン原子に、Ｒ２２を水素原子とした誘導体では生理活性物質の遊離速度は速くなる。更にＲ２１及びＲ２２をともにハロゲン原子とすることで遊離速度はより大きくなる。更にエステル結合により近いＲ２３又はＲ２４を電子吸引基とすることにより更に生理活性物質の遊離速度を速めることも可能である。
【００８４】
逆にＲ２１又はＲ２２を電子供与基とすることで生理活性物質の遊離速度をより低下させることが可能である。Ｒ２１又はＲ２２の電子供与基は電子を供与できる構造ならば特に限定されない。
【００８５】
Ｒ２３又はＲ２４にアルキル基等を導入し、スペーサー形成分子のヒドロキシ基を２級あるいは３級のヒドロキシ基とすることで遊離速度は遅くなる。更にＲ２３又はＲ２４にメチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基等の直鎖状アルキル基、イソプロピル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基等の分岐鎖アルキル基、シクロヘキシル基等の環状アルキル基、フェニル基等のアリール基などを導入することで立体障害を起こさせ、遊離速度を低下させることも可能である。
【００８６】
Ｒ２１〜Ｒ２４から選ばれる２つを電子吸引基及び電子供与基とすることで遊離速度を微調整することも可能である。更にＲ２１〜Ｒ２４を、電子吸引性又は電子供与性と立体障害性とを併せ持つ置換基をすることで遊離速度を微調整することも可能である。
【００８７】
一般式（ＩＩ）で表されるスペーサーとして具体的には下記表２に示すスペーサーを例示することができるが、本実施形態はこれらに限定されない。なお、下記表２中、Ｈは水素原子、Ｆはフッ素原子、Ｃｌは塩素原子、Ｂｒは臭素原子、Ｍｅはメチル基、ＣＯＯＥｔはエトキシカルボニル基を表す。
【００８８】
【表２】
2015005459.tif 000003
【００８９】
多糖誘導体は、多糖に由来する基に、ステロイド、キサンチン誘導体、抗アレルギー薬及び抗コリン薬からなる群より選択される少なくとも１種の生理活性物質に由来する基が、炭素数３以上のω−アミノ脂肪酸、アミノアルコール、ジカルボン酸及びこれらの誘導体からなる群より選択される化合物に由来する２価以上の基を介して共有結合している多糖誘導体であることが好ましい。多糖はグリコサミノグリカン及びホモグリカンからなる群より選択される少なくとも１種であることが好ましく、多糖はヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、キトサン及びカルボキシメチルセルロースからなる群より選択される少なくとも１種であることがより好ましい。
【００９０】
更に多糖誘導体は、コンドロイチン硫酸である多糖に由来する基に、ステロイドである生理活性物質に由来する基が、炭素数３以上のω−アミノ脂肪酸又はその誘導体に由来する２価以上の基を介して共有結合していることが特に好ましい。
【００９１】
ステロイドとしては、ベタメタゾン、プレドニゾロン、ブデソニド及びフルチカゾンからなる群より選択される少なくとも１種が好ましい。
炭素数３以上のω−アミノ脂肪酸は、β−アラニン、４−アミノ酪酸からなる群より選択される少なくとも１種であることが好ましく、β−アラニンであることがより好ましい。
ω−アミノ脂肪酸の誘導体は、カルボキシ基のα位炭素にハロゲン原子が置換した誘導体であることが好ましい。
【００９２】
多糖誘導体における多糖に由来する基を構成する２糖からなる構成単位の含有数と、生理活性物質に由来する基の含有数との比率は、特に限定されない。当該比率は、多糖の構成二糖単位の総モル数に対する、導入された生理活性物質に由来する基のモル数の割合（以下、導入率ともいう）で表すことができる。導入率は、特に限定されないが、例えば、１％〜１００％が例示される。
なお、生理活性物質の含有比率は、生理活性物質の用途、種類、効果の強さ及び水に対する溶解性等の生理活性物質の性質並びにスペーサーの種類等に応じて適宜選択することができる。例えば、生理活性物質の含有量が１回の投与あたり１μｇ〜１００ｍｇとなるように調製されることが好ましい。
【００９３】
多糖誘導体は、単一種の多糖分子と単一種の生理活性物質とを組み合わせて構成されたものであっても、単一種の多糖分子と２種以上の生理活性物質とを組み合わせて構成されたものであっても、２種以上の多糖分子と単一種の生理活性物質とを組み合わせて構成されたものであってもよい。
【００９４】
多糖誘導体からの生理活性物質の遊離速度は特に制限されず、目的等に応じて適宜選択できる。多糖誘導体からの生理活性物質の遊離速度は例えば、ｐＨ７．５、３６℃のリン酸緩衝生理食塩液中において、０．１〜３０％／日であることが好ましく、０．３〜１０％／日であることがより好ましく、０．５〜５％／日であることが更に好ましい。ここで生理活性物質の遊離速度とは、遊離率（％）の一日あたりの変化量であり、横軸に時間を、縦軸に多糖誘導体に含まれる生理活性物質に由来する基の総モル数（１００％）に対する生理活性物質の遊離量（モル）の割合である遊離率（％）を取った場合、グラフの傾きとして定義される。したがって、遊離速度が測定期間中に一定値を維持する場合には、グラフは単調増加の直線となり、例えば、ｐＨ７．５、３６℃の１０ｍＭリン酸緩衝生理食塩液中、１０日間で、多糖誘導体が含むすべての生理活性物質が遊離した場合、遊離速度は１０％／日と表現される。一方、遊離速度が一定値を取らずに経時的に低下する場合（グラフは上に凸で単調増加する緩やかなカーブを示す）は、初期の立ち上がり期間（例えば、３日間）の遊離率変化を直線近似して遊離速度を算出する。
なお、生理活性物質の遊離量は生理活性物質の種類に応じて適宜選択される方法によって測定される。
【００９５】
（多糖誘導体の製造方法）
多糖誘導体は、多糖分子が有する官能基（例えば、カルボキシ基、アミノ基、ヒドロキシ基）と、生理活性物質が有する官能基（例えば、カルボキシ基、ヒドロキシ基）とを直接又はスペーサーを介して共有結合させることで得ることができる。
以下、多糖誘導体の製造方法の一例として、生理活性物質に由来する基が多糖に由来する基にエステル結合を含む共有結合を介して連結している多糖誘導体の製造方法について説明する。
【００９６】
多糖分子と生理活性物質とを直接共有結合させる場合、多糖分子が有するカルボキシ基又はヒドロキシ基と、生理活性物質が有するヒドロキシ基又はカルボキシ基とを通常用いられるエステル化方法によって共有結合させることで多糖誘導体を製造することができる。エステル化方法としては例えば、水溶性カルボジイミド（例えば、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド）、ＤＭＴ−ＭＭ（４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物）等の縮合剤を用いる方法、対称酸無水物法、混合酸無水物法、活性エステル法などの方法を挙げることができる。エステル化方法の反応条件は適用するエステル化方法に応じて適宜選択される。
【００９７】
多糖分子と生理活性物質とをスペーサーを介して共有結合させる場合、例えば以下の工程を含む製造方法で製造することができる。
（１ａ）生理活性物質が有するカルボキシ基又はヒドロキシ基をスペーサー形成分子の反応性官能基とエステル結合させることと、
（２ａ）多糖分子が有するカルボキシ基又はアミノ基をスペーサー形成分子の反応性官能基と縮合して共有結合させることと、を含む製造方法。
【００９８】
（１ａ）の工程では、生理活性物質が有するカルボキシ基又はヒドロキシ基とスペーサー形成分子の反応性官能基（好ましくはヒドロキシ基又はカルボキシ基）とを通常用いられるエステル化方法によってエステル結合させる。このときスペーサー形成分子の多糖と結合する予定の反応性官能基は、必要に応じて通常用いられる方法で保護しておいてもよい。
（２ａ）の工程では、多糖分子が有するカルボキシ基又はアミノ基とスペーサー形成分子の反応性官能基（好ましくは、アミノ基又はカルボキシ基）とを縮合して共有結合させる。縮合方法は、形成される共有結合に応じて、通常用いられる方法から適宜選択すればよい。このときスペーサー形成分子の生理活性物質と結合する予定の反応性官能基は、必要に応じて通常用いられる方法で保護しておいてもよい。
【００９９】
また多糖誘導体は、多糖誘導体からの生理活性物質の遊離速度を制御する観点から、以下の工程を含む製造方法で製造されることが好ましい。
（１ｂ）カルボキシ基又はヒドロキシ基を有する生理活性物質を準備することと、
（２ｂ）生理活性物質に由来する基と共有結合を形成するスペーサーを該共有結合の分解速度に応じて選択することと、
（３ｂ）生理活性物質に由来する基と多糖に由来する基とをスペーサーを介して共有結合することと、を含む製造方法。
【０１００】
工程（１ｂ）では、所望の生理活性物質を公知の生理活性物質から適宜選択して準備してもよく、公知の手法で所望の生理活性物質を製造して準備してもよい
工程（２ｂ）では、所望の生理活性物質の遊離速度が得られるようにスペーサー形成分子を選択する。スペーサー形成分子は生理活性物質とエステル結合を形成する反応性官能基であるヒドロキシ基又はカルボキシ基と、多糖と共有結合（好ましくは、アミド結合）を形成する反応性官能基（好ましくは、アミノ基又はカルボキシ基）と、２つの反応性官能基を連結し、生理活性物質とのエステル結合の分解速度を制御するように選択される連結基とを有する。スペーサー形成分子の選択方法の詳細は既述の通りである。
工程（３ｂ）では、準備した生理活性物質と、選択したスペーサー形成分子と、多糖とを用いて多糖誘導体を製造する。工程（３ｂ）には、例えば上述した多糖誘導体の製造方法を適用することができる。
【０１０１】
医薬組成物は、多糖誘導体を１種単独で含んでいても２種以上を組み合わせて含んでいてもよい。２種以上の多糖誘導体を含む場合、同一の生理活性物質と２種以上の異なる多糖とをそれぞれ組み合わせた２種以上の多糖誘導体の組み合わせであっても、同一の多糖と２種以上の異なる生理活性物質とをそれぞれ組み合わせた２種以上の多糖誘導体の組み合わせであってもよい。
医薬組成物における多糖誘導体の含有量は特に制限されず、目的等に応じて適宜選択することができる。
【０１０２】
医薬組成物は、多糖誘導体に加えて、薬学的に許容されうる賦形剤等のその他の成分を更に含んでいてもよい。その他の成分としては、薬学的に許容されうる賦形剤の他、界面活性剤、生理活性物質、安定化剤、液状媒体等を挙げることができる。生理活性物質は多糖誘導体から遊離する生理活性物質と同一であっても、異なっていてもよい。
【０１０３】
本実施形態の医薬組成物は呼吸器投与に用いられることが好ましい。具体的な呼吸器投与としては、経肺投与、経鼻投与等が挙げられる。
医薬組成物の形態は、呼吸器への投与が可能な、粉体、液体、懸濁液等の形態であることが好ましい。
投与方法については、使用者自らの吸気により、若しくは外部装置が発生する気流を用いて、又はその両方を用いて投与する方法、ネブライザーを用いて投与する方法等を挙げることができる。
【０１０４】
呼吸器に投与された医薬組成物は、生理活性物質と多糖とが共有結合したままで呼吸器の標的組織に到達、付着する。その後、スペーサーと生理活性物質との間の共有結合が徐々に分解することで、長時間（例えば２４時間以上）に渡って、生理活性物質が徐放される。
【０１０５】
標的組織としては肺組織（肺胞、終末細気管支、細気管支、気管支を含む）、鼻腔（副鼻腔、前頭洞、篩骨洞、上顎洞、蝶形骨洞、上鼻甲介、中鼻甲介、下鼻甲介を含む）が例示される。
【０１０６】
医薬組成物は、標的組織において生理活性物質を徐々に遊離することができる。生理活性物質が標的組織において遊離し続ける時間（効果の持続性）は、７２時間以上が好ましく、１２０時間（５日間）以上がさらに好ましい。
医薬組成物は、７２時間以上生理活性物質を遊離し続ける医薬組成物が好ましく、１２０時間（５日間）以上遊離し続ける医薬組成物がさらに好ましい。
【０１０７】
医薬組成物の標的組織における効果の持続性は、標的組織に応じて評価することができる。
例えば、標的組織が肺である場合、一般に肺胞被覆層のｐＨは弱アルカリ性（ｐＨ７．５前後）であることが知られているため、評価対象の医薬組成物をｐＨ約７．５に調製した１０ｍＭリン酸緩衝液中に溶解し、３６℃で１週間保管した際の生理活性物質の遊離率により、効果の持続性を評価することができる。
また、標的組織が鼻腔である場合、一般にアレルギー性鼻炎に罹患している患者の鼻腔粘液ｐＨは弱アルカリ性（ｐＨ８．０前後）であることが知られているため、評価対象の医薬組成物をｐＨ約８．０に調製した１０ｍＭホウ酸緩衝液に溶解し、３６℃で１週間保管した際の生理活性物質の遊離率により、効果の持続性を評価することができる。
【０１０８】
医薬組成物は例えば、呼吸器疾患の治療に好適に適用することができるが、医薬組成物の用途は呼吸器疾患の治療に限られるものではなく、呼吸器疾患の予防の他、生理活性物質の種類に応じてその他の疾患の治療、予防、診断等の用途に適用することができる。
医薬組成物を呼吸器疾患の治療又は予防に用いる場合、呼吸器疾患としては、気管支喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、ウィルス感染症、急性アレルギー疾患、慢性アレルギー疾患等が例示される。
【実施例】
【０１０９】
以下、本発明を実施例及び試験例により具体的に詳説する。しかしながら、これにより本発明の技術的範囲が制限されるべきものではない。なお、遊離率と導入率を除き、特に断りのない限り「％」は質量基準である。【０１１０】
（実施例１）２１−β−アラニル−ベタメタゾン導入コンドロイチン硫酸の調製
１−１．  ２１−（Ｂｏｃ−β−アラニル）−ベタメタゾンの調製
Ｂｏｃ−β−アラニン  ２ｇ（１０．６ｍｍｏｌ）にジクロロメタン  ２０ｍＬ、ジメチルホルムアミド２０ｍＬ  ベタメタゾン  ４．１５ｇ、およびＮ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン  ３８８ｍｇを加えた。その後、氷冷下、水溶性カルボジイミド（渡辺化学工業株式会社製）  ２．６３ｇを加えて室温にて終夜撹拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認後、氷冷下、飽和塩化アンモニウム水溶液を加えた後、ジクロロメタンおよび水を用いて分液抽出を３回行った。集めた有機層は飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水溶液で順次洗浄した。その後、硫酸マグネシウムで乾燥し、エバポレーターで４０℃水浴中、減圧濃縮した結果、目的とする化合物１を６．０１ｇ得た（収率ｑｕａｎｔ．）。ここで、Ｂｏｃはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基の略号である。【０１１１】
１−２．  ２１−β−アラニル−ベタメタゾンの調製
化合物１  ６．０１ｇをジクロロメタン  ３０ｍＬ、テトラヒドロフラン６５ｍＬに溶解し、氷冷下、４Ｍ  塩酸／酢酸エチル  ９０ｍＬを加えて４時間撹拌した。この反応液をエバポレーターで４０℃水浴中、減圧濃縮した結果、目的とする化合物２を４．２６ｇ得た（収率８０％）。【０１１２】
１−３．  ２１−β−アラニル−ベタメタゾン導入コンドロイチン硫酸の調製
コンドロイチン硫酸ナトリウム（重量平均分子量２５ｋＤａ）  ３ｇを蒸留水  ２００ｍＬ、エタノール２００ｍＬに溶解し、化合物２  ５９７ｍｇ  および４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物（ＤＭＴ−ＭＭ）を５６０ｍｇ  加えて終夜撹拌した。その後、炭酸水素ナトリウム  ２．２５ｇを投与して３時間撹拌し、酢酸  １．２ｍＬ、塩化ナトリウム  ９ｇ、９０％エタノール／蒸留水  ６００ｍＬを順次加えて沈殿形成し、上清を捨てて９０％エタノール／蒸留水洗浄を２回実施した。得られた沈殿を終夜減圧乾燥することで、薬物であるベタメタゾンが導入された多糖誘導体として、目的とする化合物ｉａが２．９ｇ得られた。１Ｈ−ＮＭＲで導入率を求めた結果、約１８％であった。
なお、薬物の導入率はモル基準であり、以下同様である。【０１１３】
１−４．  ２１−β−アラニル−ベタメタゾン高導入コンドロイチン硫酸の調製
コンドロイチン硫酸ナトリウム（重量平均分子量２０ｋＤａ）  ２ｇを蒸留水  ２５ｍＬ、エタノール２５ｍＬに溶解し、化合物２  １４９１ｍｇおよび４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物を１３９８ｍｇ加えて終夜撹拌した。その後、塩化ナトリウム  ２ｇ、９０％エタノール／蒸留水  １５０ｍＬを順次加えて沈殿形成し、上清を捨てて９０％エタノール／蒸留水洗浄を２回実施した。得られた沈殿を終夜減圧乾燥することで、薬物であるベタメタゾンが導入された多糖誘導体として、目的とする化合物ｉｂが２．９ｇ得られた。１Ｈ−ＮＭＲで導入率を求めた結果、約６６％であった。【０１１４】
（実施例２）２１−（２−フルオロ−β−アラニル）−ベタメタゾン導入コンドロイチン硫酸の調製
２−１．  Ｂｏｃ−２−フルオロ−β−アラニンの調製
２−フルオロ−β−アラニン塩酸塩  ６００ｍｇ  （４．１８ｍｍｏｌ）をｔｅｒｔ−ブタノール  ２４ｍＬおよび１Ｍ水酸化ナトリウム溶液  １２ｍＬに溶解し、氷冷下、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル  １．１９ｇを加えた。室温にて終夜撹拌した後、エバポレーターで４０℃水浴中、減圧濃縮し、酢酸エチルおよび１Ｍ塩酸を用いて分液抽出した。集めた有機層を飽和食塩水溶液で洗浄した後、硫酸マグネシウムで乾燥し、エバポレーターで４０℃、減圧濃縮して、目的とする化合物３を８６５ｍｇ得た（収率９９％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１．４５（９Ｈ，ｓ，Ｂｏｃ），３．６４−３．７９（２Ｈ，ｂｒ），４．９８（１Ｈ，ｂｒ），５．０５（１Ｈ，ｂｒ．ａｍｉｄｅ）【０１１５】
２−２．  ２１−（Ｂｏｃ−２−フルオロ−β−アラニル）−ベタメタゾンの調製
化合物３  ５００ｍｇ  （２．４１ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド  ３０ｍＬに溶解し、ベタメタゾン  ９４７ｍｇおよびＮ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン  ８９ｍｇ  を加えた。その後、氷冷下、水溶性カルボジイミド  ６９４ｍｇ  を加えて室温にて終夜撹拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認後、トルエンおよび水を用いて分液抽出を３回行い、集めた有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水溶液で順次洗浄した。その後、硫酸マグネシウムで乾燥し、エバポレーターで６０℃水浴中、減圧濃縮して、目的とする化合物４を１．４ｇ得た（収率９９％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１．０４（３Ｈ，ｄ），１．１６（３Ｈ，ｍ），１．１７（３Ｈ，ｍ），１．４６（９Ｈ，ｓ，Ｂｏｃ），１．８４（２Ｈ，ｍ），１．８６（２Ｈ，ｍ），２．０１（２Ｈ，ｍ），２．３１（２Ｈ，ｍ），２．３４（１Ｈ，ｍ），２．４０（１Ｈ，ｍ），２．６５（１Ｈ，ｄｔ），３．６０−３．７２（２Ｈ，ｂｒ），３．８９−４．００（１Ｈ，ｍ），４．４１（１Ｈ，ｄ），４．９５（１Ｈ，ｔ），５．１５（１Ｈ，ｂｒ，ａｍｉｄｅ），６．１２（１Ｈ，ｓ），６．３５（ｄ），７．２１（１Ｈ，ｄ）【０１１６】
２−３．  ２１−（２−フルオロ−β−アラニル）−ベタメタゾンの調製
化合物４  ２５０ｍｇをジクロロメタン  ２０ｍＬに溶解し、氷冷下、４Ｍ塩酸／酢酸エチル  １６ｍＬを加えて３時間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認後、エバポレーターで４０℃水浴中、減圧濃縮した結果、目的とする化合物５を１８８ｍｇ得た（収率８２％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ１．０４（３Ｈ，ｄ），１．１２（３Ｈ，ｍ），１．２１（３Ｈ，ｍ），１．５４（２Ｈ，ｍ），１．６０（２Ｈ，ｍ），２．０１（２Ｈ，ｍ），２．３１（２Ｈ，ｍ），２．３４（１Ｈ，ｍ），２．４０（１Ｈ，ｍ），２．６５（１Ｈ，ｄｔ），３．６０−３．７２（２Ｈ，ｍ），４．２０（１Ｈ，ｍ），５．０１（１Ｈ，ｍ），５．３５（１Ｈ，ｍ），６．０２（１Ｈ，ｓ），６．２８（ｄ），７．３３（１Ｈ，ｄ）【０１１７】
２−４．  ２１−（２−フルオロ−β−アラニル）−ベタメタゾン導入コンドロイチン硫酸の調製
コンドロイチン硫酸ナトリウム（重量平均分子量２５ｋＤａ）  １ｇを蒸留水  ８０ｍＬおよびエタノール  ８０ｍＬに溶解し、化合物５を３４９ｍｇ  加えた。その後、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物を３１７ｍｇ加えて終夜撹拌した。その後、塩化ナトリウム  ３ｇを加えて３０分撹拌し、９０％エタノール／蒸留水  １６０ｍＬを加えて沈殿形成し、得られた沈殿を終夜減圧乾燥したところ、多糖誘導体として、目的とする化合物ｉｉ  １．０８ｇを得た。
カルバゾール硫酸法にて導入率を求めた結果、コンドロイチン硫酸中の全カルボシル基に対するｍｏｌ濃度換算で１６％であった。【０１１８】
（実施例３）２１−β−アラニル−ベタメタゾン導入ヒアルロン酸の調製
３−１．  ２１−β−アラニル−ベタメタゾン導入ヒアルロン酸（８８０ｋＤａ）の調製
ヒアルロン酸ナトリウム（重量平均分子量８８０ｋＤａ）  １ｇを注射用水（ＷＦＩ）  １００ｍＬおよびＥｔＯＨ  １００ｍＬに溶解し、化合物２を２４９ｍｇ加えた。その後、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物を２３４ｍｇ加えて終夜撹拌した。その後、炭酸水素ナトリウム  ７５０ｍｇを加えて４時間撹拌し、酢酸４００μＬ、食塩  ３ｇを順次加えた。３０分撹拌後、９０％エタノール／蒸留水を２００ｍＬ加えて沈殿形成し、上清を捨てて９０％エタノール／蒸留水洗浄を２回実施した。得られた沈殿を終夜減圧乾燥したところ、多糖誘導体として、目的とする化合物ｉｉｉａが１．０６ｇ得られた。カルバゾール硫酸法にて導入率を求めた結果、１６％であった。【０１１９】
３−２．  ２１−β−アラニル−ベタメタゾン導入ヒアルロン酸（４９０ｋＤａ）の調製
ヒアルロン酸ナトリウム（重量平均分子量４９０ｋＤａ）  １ｇに、注射用水  １００ｍＬを加え、終夜撹拌した。エタノール  １００ｍＬを徐々に加え、溶液を均一に撹拌した後に、化合物２  ２３１．３  ｍｇ  を加えた。ついで、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物  １３８．４ｍｇを加え、終夜撹拌した。炭酸水素ナトリウム  ７５０ｍｇを加えて３時間撹拌し、酢酸  ０．２ｍＬを加えて中和した。塩化ナトリウム  １ｇ  を加えた後、９０％エタノール／蒸留水  ２３０ｍＬを加えて沈殿を形成し静置した。上清を除いた後に、９０％エタノール／蒸留水  １５０ｍＬを加え５分間撹拌洗浄し、再度静置した。同様の洗浄をさらに２回実施した後、ガラスフィルターでろ過し、得られた沈殿を４０℃減圧下（７５ｍｍＨｇ）終夜乾燥することで多糖誘導体として、目的とする化合物ｉｉｉｂ（０．９０ｇ）を得た。この化合物のベタメタゾン導入率を１Ｈ−ＮＭＲにて測定したところ、導入率は２０％であった。【０１２０】
３−３．  ２１−β−アラニル−ベタメタゾン導入ヒアルロン酸（２７０ｋＤａ）の調製
ヒアルロン酸ナトリウム  （重量平均分子量２７０ｋＤａ）  １ｇに、注射用水１００ｍＬを加え、終夜撹拌した。エタノール  １００ｍＬを徐々に加え、溶液を均一に撹拌した後に、化合物２  ２３１．３ｍｇを加えた。ついで、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物  １３８．４ｍｇを加え、終夜撹拌した。炭酸水素ナトリウム  ７５０ｍｇを加えて３時間撹拌し、酢酸  ０．２ｍＬを加えて中和した。塩化ナトリウム  １ｇを加えた後、９０％エタノール／蒸留水  ２３０ｍＬを加えて沈殿を形成し静置した。上清を除いた後に、９０％エタノール／蒸留水  １５０ｍＬを加え５分間撹拌洗浄し、再度静置した。同様の洗浄をさらに２回実施した後、ガラスフィルターでろ過し、得られた沈殿を４０℃減圧下（７５ｍｍＨｇ）終夜乾燥することで多糖誘導体として、目的とする化合物ｉｉｉｃ（０．９５ｇ）を得た。この化合物のベタメタゾン導入率を１Ｈ−ＮＭＲにて測定したところ、導入率は１８％であった。【０１２１】
（実施例４）２１−β−アラニル−ベタメタゾン導入コンドロイチン硫酸（１０ｋＤａ）の調製
コンドロイチン硫酸ナトリウム（重量平均分子量１０ｋＤａ）  １ｇに、注射用水１５ｍＬを加え３０分撹拌し溶解した。エタノール  １５ｍＬを徐々に加え、溶液を均一に撹拌した後に、化合物２  １８５．０ｍｇをエタノール／注射用水  ＝  １／１溶液  ５ｍＬに溶解し加えた。ついで、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物  １１０．７ｍｇをエタノール／注射用水  ＝  １／１溶液  ５ｍＬに溶解し加え、終夜撹拌した。塩化ナトリウム  １ｇを加えた後、反応溶液を、９０％エタノール／注射用水  ２００ｍＬ中に加えて、沈殿を形成し静置した。上清を除いた後に、９０％エタノール／注射用水  １５０ｍＬを加え５分間撹拌洗浄し、再度静置した。同様の洗浄をさらに２回実施した後、ガラスフィルターでろ過し、得られた沈殿を４０℃減圧下（７５ｍｍＨｇ）終夜乾燥して、目的とする化合物ｉｖ（１．０２  ｇ）を得た。この化合物のベタメタゾン導入率を１Ｈ−ＮＭＲにて測定したところ、導入率は１７％であった。【０１２２】
（実施例５）２１−β−アラニル−ブデソニド導入コンドロイチン硫酸の調製
５−１．  ２１−（Ｂｏｃ−β−アラニル）−ブデソニドの調製
Ｂｏｃ−β−アラニン  ４８９ｍｇ（１．０ｅｑ，２．５８ｍｍｏｌ）にジクロロメタン  １８ｍＬ、ブデソニド  １ｇ（０．９ｅｑ，２．３２ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン  １５７ｍｇ（０．５ｅｑ，１．２９ｍｍｏｌ）を加えた。その後、氷冷下、水溶性カルボジイミド  １．２４ｇ（２．５ｅｑ，６．４５ｍｍｏｌ）を加えて室温にて終夜撹拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認後、氷冷下、飽和塩化アンモニウム水溶液を加えた後、ジクロロメタンおよび水を用いて分液抽出を３回行った。集めた有機層は飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水溶液で順次洗浄した。その後、硫酸マグネシウムで乾燥し、エバポレーターで４０℃水浴中、減圧濃縮した結果、目的とする化合物６を１．３１ｇ得た（収率９４％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．９２（３Ｈ，ｍ），０．９４（３Ｈ，ｍ），１．１５（２Ｈ，ｍ），１．３７（２Ｈ，ｍ），１．４３（３Ｈ，ｍ），１．４４（２Ｈ，ｍ），１．４５（１Ｈ，ｍ），１．４６（９Ｈ，ｓ，Ｂｏｃ），１．６２（２Ｈ，ｍ），１．７５（２Ｈ，ｍ），２．０８（１Ｈ，ｍ），２．１５（１Ｈ，ｄｄｄ），２．３３（１Ｈ，ｄｄ），２．５８（１Ｈ，ｄｄｄ），２．６４（２Ｈ，ｍ），３．４１（１Ｈ，ｍ），３．４７（２Ｈ，ｍ），４．５０（１Ｈ，ｍ），４．８５（２Ｈ，ｍ），５．１５（１Ｈ，ｍ），６．０２（１Ｈ，ｓ），６．２８（１Ｈ，ｄ），７．２１（１Ｈ，ｄ）．【０１２３】
５−２．  ２１−β−アラニル−ブデソニドの調製
化合物６  １．３１ｇをジクロロメタン  ２０ｍＬに溶解し、氷冷下、４Ｍ塩酸／酢酸エチル  １０ｍＬを加えて１時間撹拌した。その後、室温に昇温し、さらに１時間撹拌した。この反応液をエバポレーターで４０℃水浴中、減圧濃縮した結果、目的とする化合物７を１．１２ｇ得た（収率９７％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．９３（３Ｈ，ｍ），０．９４（３Ｈ，ｍ），１．１７（２Ｈ，ｍ），１．４０（２Ｈ，ｍ），１．４８（３Ｈ，ｓ），１．６２（２Ｈ，ｍ），１．７２（１Ｈ，ｍ），１．８５（２Ｈ，ｍ），１．９７（２Ｈ，ｍ），２．１０（１Ｈ，ｍ），２．２０（１Ｈ，ｄｄｄ），２．３６（１Ｈ，ｄｄ），２．５８（１Ｈ，ｄｄｄ），２．６４（２Ｈ，ｍ），３．４１（１Ｈ，ｍ），３．４７（２Ｈ，ｍ），４．５０（１Ｈ，ｍ），４．８５（２Ｈ，ｍ），５．１５（１Ｈ，ｍ），６．０２（１Ｈ，ｓ），６．２８（１Ｈ，ｄ），７．２１（１Ｈ，ｄ）．【０１２４】
５−３．  ２１−β−アラニル−ブデソニド導入コンドロイチン硫酸（２５ｋＤａ）の調製
コンドロイチン硫酸ナトリウム（重量平均分子量２５ｋＤａ）  ２ｇを蒸留水  ３０ｍＬに溶解し、化合物７  ４２８ｍｇ（０．２ｅｑ，０．８０ｍｍｏｌ）のエタノール４０ｍＬ、水１０ｍＬ混合溶液を加えた。その後、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物を３７３ｍｇ（０．２ｅｑ，０．８０ｍｍｏｌ）加え、終夜撹拌後、塩化ナトリウム  ２ｇを加えて溶解が確認されるまで更に撹拌した。この溶液を９０％エタノール／蒸留水  ２４０ｍＬに加えて沈殿形成し、上清を捨てて９０％エタノール／蒸留水洗浄を２回実施した。得られた沈殿を終夜減圧乾燥することで多糖誘導体として、目的とする化合物ｖａ  ２ｇを得た。１Ｈ−ＮＭＲにて導入率を求めた結果、約１９％であった。【０１２５】
５−４．  ２１−β−アラニル−ブデソニド導入コンドロイチン硫酸（２０ｋＤａ）の調製
コンドロイチン硫酸ナトリウム  （重量平均分子量１０ｋＤａ）１ｇに、蒸留水  １５ｍＬを加え、３０分間撹拌した。エタノール  １５ｍＬを徐々に加え、溶液を均一に撹拌した後に、化合物７  ２００．２６ｍｇをエタノール／蒸留水＝１／１溶液  ５ｍＬに溶解し加えた。ついで、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物  １１０．７ｍｇをエタノール／蒸留水＝１／１溶液  ５ｍＬに溶解し加え、終夜撹拌した。塩化ナトリウム  １ｇを加えた後、反応溶液を９０％エタノール／蒸留水  ２００ｍＬ中に加えて沈殿を形成し、静置した。上清を除いた後に、９０％エタノール／蒸留水  １５０ｍＬを加え５分間撹拌洗浄し、再度静置した。同様の洗浄をさらに２回実施した後、ガラスフィルターでろ過し、得られた沈殿を４０℃減圧下  （７５  ｍｍＨｇ）  終夜乾燥することで多糖誘導体として、目的とする化合物ｖｂ（０．８７ｇ）を得た。この化合物のブデソニド導入率を１Ｈ−ＮＭＲにて測定したところ、導入率は１７％であった。【０１２６】
５−５．  ２１−β−アラニル−ブデソニド導入コンドロイチン硫酸（１０ｋＤａ）の調製
コンドロイチン硫酸ナトリウム（重量平均分子量１０ｋＤａ）  １ｇに、蒸留水  １５ｍＬを加え、３０分間撹拌した。エタノール  １５ｍＬを徐々に加え、溶液を均一に撹拌した後に、化合物７  ２００．２６ｍｇをエタノール／蒸留水＝１／１溶液  ５ｍＬに溶解し加えた。ついで、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物  １１０．７ｍｇをエタノール／蒸留水＝１／１溶液  ５ｍＬに溶解し加え、終夜撹拌した。塩化ナトリウム  １ｇを加えた後、反応溶液を９０％エタノール／蒸留水  ２００ｍＬ  中に加えて沈殿を形成し、静置した。上清を除いた後に、９０％エタノール／蒸留水  １５０ｍＬを加え５分間撹拌洗浄し、再度静置した。同様の洗浄をさらに２回実施した後、ガラスフィルターでろ過し、得られた沈殿を４０℃減圧下  （７５  ｍｍＨｇ）  終夜乾燥することで多糖誘導体として、目的とする化合物ｖｃ  ０．８７ｇを得た。この化合物のブデソニド導入率を１Ｈ−ＮＭＲにて測定したところ、導入率は１７％であった。【０１２７】
（実施例６）２１−β−アラニル−ブデソニド導入ヒアルロン酸の調製
６−１．  ２１−β−アラニル−ブデソニド導入ヒアルロン酸（８８０ｋＤａ）の調製
ヒアルロン酸ナトリウム（重量平均分子量８８０ｋＤａ）  １．５ｇを蒸留水  １４０ｍＬ、エタノール  １４０ｍＬに溶解し、化合物７  ４０２ｍｇのエタノール１０ｍＬ、水１０ｍＬ混合溶液を加えた。その後、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物を３４３ｍｇ加え、終夜撹拌した後に、炭酸水素ナトリウム  １．１３ｇを投与した。３時間混合後、酢酸  ６００μＬ、塩化ナトリウム  ４．５ｇ、９０％エタノール／蒸留水  ３００ｍＬを順次加えて沈殿形成し、上清を捨てて９０％エタノール／蒸留水洗浄を２回実施した。得られた沈殿を終夜減圧乾燥したところ、目的とする化合物ｖｉａ  が１．４ｇ得られた。ＮＭＲで導入率を求めた結果、約１９％であった。【０１２８】
６−２．  ２１−β−アラニル−ブデソニド導入ヒアルロン酸（３９０ｋＤａ）の調製
ヒアルロン酸ナトリウム  （重量平均分子量３９０ｋＤａ）  １ｇ  に、蒸留水  １００ｍＬを加え、終夜撹拌した。エタノール  １００ｍＬを徐々に加え、溶液を均一に撹拌した後に、化合物７  ２５０．３ｍｇを加えた。ついで、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物  １３８．４ｍｇを加え、終夜撹拌した。炭酸水素ナトリウム  ７５０ｍｇを加えて３時間撹拌し、酢酸  ０．２ｍＬを加えて中和した。塩化ナトリウム  ３ｇ  を加えた後、９０％エタノール／蒸留水  ２３０ｍＬを加えて沈殿を形成し、静置した。上清を除いた後に、９０％エタノール／蒸留水  １５０ｍＬを加え５分間撹拌洗浄し、再度静置した。同様の洗浄をさらに２回実施した後、ガラスフィルターでろ過し、得られた沈殿を４０℃減圧下（７５ｍｍＨｇ）終夜乾燥することで多糖誘導体として、目的とする化合物ｖｉｂ（１．０１ｇ）を得た。この化合物のブデソニド導入率を１Ｈ−ＮＭＲにて測定したところ、導入率は１６％であった。【０１２９】
（実施例７）１１−β−アラニル−プロピオン酸フルチカゾン導入コンドロイチン硫酸の調製
７−１．  １１−（Ｂｏｃ−β−アラニル）−プロピオン酸フルチカゾンの調製
Ｂｏｃ−β−アラニン  １６６ｍｇにジクロロメタン  ６ｍＬ、プロピオン酸フルチカゾン  ３３８ｍｇ、およびＮ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン  ８３ｍｇを加えた。その後、氷冷下、ジシクロヘキシルカルボジイミド  ２０９ｍｇ（１．５ｅｑ，  １．０１ｍｍｏｌ）を加えて室温にて１週間撹拌した（白色懸濁液）。その後、溶液をクエンチし、得られた１−ヒドロキシベンゾトリアゾール液にジクロロメタンおよび水を加えて分液抽出を３回行った。集めた有機層は飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水溶液で順次洗浄した。その後、硫酸マグネシウムで乾燥し、エバポレーターで４０℃水浴中、減圧濃縮した結果、化合物８を４５０ｍｇ得た（収率９９％）。【０１３０】
７−２．  １１−β−アラニル−プロピオン酸フルチカゾンの調製
化合物  ８  ４５０ｍｇをジクロロメタン  ８ｍＬ、テトラヒドロフラン  ５ｍＬに溶解し、氷冷下、４Ｍ  塩酸／酢酸エチル  ６ｍＬを加えて２時間半撹拌した。その後、室温に昇温し、さらに１時間撹拌した。この反応液をエバポレーターで４０℃水浴中、減圧濃縮した結果、目的とする化合物９を３９６ｍｇ得た（収率９７％）。【０１３１】
７−３．  １１−β−アラニル−プロピオン酸フルチカゾン導入コンドロイチン硫酸の調製
コンドロイチン硫酸ナトリウム（重量平均分子量２５ｋＤａ）  ７００ｍｇを蒸留水    １５ｍＬに溶解し、化合物  ９  １６９ｍｇ（０．２ｅｑ，  ０．２８ｍｍｏｌ）のエタノール２５ｍＬ、水１０ｍＬ混合溶液を加えた。その後、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物を１３１ｍｇ（０．２ｅｑ，  ０．２８ｍｍｏｌ）加えて終夜撹拌した。その後、塩化ナトリウム  ７００ｍｇを加え、溶解確認後、この溶液を９０％エタノール／蒸留水  １５０ｍＬに加えて沈殿形成し、上清を捨てて９０％エタノール／蒸留水洗浄を２回実施した。得られた沈殿を終夜減圧乾燥したところ、多糖誘導体として、目的とする化合物ｖｉｉが６７０ｍｇ得られた。１Ｈ−ＮＭＲで導入率を求めた結果、１９％であった。【０１３２】
（実施例８）１１−（２−フルオロ−β−アラニル）−プロピオン酸フルチカゾン導入コンドロイチン硫酸の調製
８−１．  Ｂｏｃ−２−フルオロ−β−アラニンの調製
２−フルオロ−β−アラニン塩酸塩  １．３４ｇをｔｅｒｔ−ブタノール  ３０ｍＬおよび１Ｍ水酸化ナトリウム  １５ｍＬに溶解し、氷冷下、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル  ２．２４ｇを加えた。その後、室温にて１週間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認後、エバポレーターで４０℃水浴中、減圧濃縮し、酢酸エチルおよび１Ｍ  塩酸を用いて分液抽出を３回行い、集めた有機層を飽和食塩水溶液で洗浄した。その後、硫酸マグネシウムで乾燥し、エバポレーターで４０℃水浴中、減圧濃縮した結果、目的とする化合物１０を１．９１ｇ得た（収率９９％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１．４５（９Ｈ，ｓ，Ｂｏｃ），３．６４−３．７９（２Ｈ，ｂｒ），４．９８（１Ｈ，ｂｒ），５．０５（１Ｈ，ｂｒ．ａｍｉｄｅ）．【０１３３】
８−２．  １１−（Ｂｏｃ−２−フルオロ−β−アラニル）−プロピオン酸フルチカゾンの調製
化合物  １０  ３０７ｍｇにジクロロメタン  ６ｍＬ、プロピオン酸フルチカゾン  ４４７ｍｇおよびＮ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン  １０９ｍｇを加えた。その後、氷冷下、ジシクロヘキシルカルボジイミド  ３６９ｍｇを加えて室温にて７日撹拌した（白色懸濁液）。薄層クロマトグラフィーにて新たなスポットを確認後、溶液をクエンチした。得られた１−ヒドロキシベンゾトリアゾール液はジクロロメタンおよび水を加えて分液抽出を３回行い、集めた有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水溶液で順次洗浄した。その後、硫酸マグネシウムで乾燥し、エバポレーターで４０℃水浴中、減圧濃縮した。この反応液をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム）で精製し、化合物１１を３８４ｍｇ得た（収率６３％）。【０１３４】
８−３．  １１−（２−フルオロ−β−アラニル）−プロピオン酸フルチカゾンの調製
化合物１１  ３８４ｍｇをジクロロメタン  １０ｍＬに溶解し、氷冷下、４Ｍ  塩酸／酢酸エチル  ４．５ｍＬを加えて２時間撹拌した。その後、室温に昇温し、さらに１時間撹拌した。この反応液をエバポレーターで４０℃水浴中、減圧濃縮した結果、目的とする化合物１２  を２８４ｍｇ得た（収率８２％）。【０１３５】
８−４．  １１−（２−フルオロ−β−アラニル）−プロピオン酸フルチカゾン導入コンドロイチン硫酸の調製
コンドロイチン硫酸ナトリウム（重量平均分子量２５ｋＤａ）  ７９５ｍｇを蒸留水  １０ｍＬに溶解し、化合物  １２  ２７７ｍｇのエタノール  １５ｍＬ、水５ｍＬ混合溶液を加えた。その後、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物を２０８ｍｇ加えて終夜撹拌した。その後、塩化ナトリウム  ７９５ｍｇを加え、溶解確認後、この溶液を９０％エタノール／蒸留水９０ｍＬに加えて沈殿形成し、上清を捨てて９０％エタノール／蒸留水洗浄を２回実施した。得られた沈殿を終夜減圧乾燥したところ、多糖誘導体として、目的とする化合物ｖｉｉｉが８９０ｍｇ得られた。１Ｈ−ＮＭＲで導入率を求めた結果、約２２％であった。【０１３６】
（実施例９）２１−アラニル−ベタメタゾン導入コンドロイチン硫酸の調製
９−１．  ２１−Ｂｏｃ−アラニル−ベタメタゾンの調製
Ｂｏｃ−アラニン  ０．９６４  ｇ  を、ジクロロメタン  １０ｍＬおよびジメチルホルムアミド１５ｍＬに溶解し、ベタメタゾン  ２ｇを加えた。０℃に冷却した後、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン  １８６．８ｍｇをよび水溶性カルボジイミド  １．２７ｇを加え、室温にて終夜撹拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認後、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え反応を停止した。トルエンおよび水を用いて分液抽出し、有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過後、溶媒を減圧下留去し、目的とする化合物１３を得た（２．７２ｇ，９８％）【０１３７】
９−２．  ２１−アラニル−ベタメタゾンの調製
化合物１３  ２．７２ｇを、テトラフドロフラン１５ｍＬに溶解し、０℃に冷却した後、４Ｍ塩酸／酢酸エチル  １００ｍＬを加えて、室温で３時間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認後、溶媒を減圧下留去し、目的とする化合物１４を得た（１．９８ｇ，８６％）。【０１３８】
９−３．  ２１−アラニル−ベタメタゾン導入コンドロイチン硫酸の調製
コンドロイチン硫酸ナトリウム（重量平均分子量２０ｋＤａ）  １ｇに、蒸留水  １５ｍＬを加え３０分撹拌し溶解した。エタノール１５ｍＬを徐々に加え、溶液を均一に撹拌した後に、化合物１４  １８５．０ｍｇをエタノール／蒸留水＝１／１溶液  ５ｍＬに溶解し加えた。ついで、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物  １１０．７ｍｇをエタノール／蒸留水＝１／１溶液  ５ｍＬに溶解し加え、終夜撹拌した。塩化ナトリウム  １ｇを加えた後、反応溶液を、９０％エタノール／蒸留水  ２００ｍＬ  中に加えて、沈殿を形成し静置した。上清を除いた後に、９０％エタノール／蒸留水  １５０ｍＬを加え５分間撹拌洗浄し、再度静置した。同様の洗浄をさらに２回実施した後、ガラスフィルターでろ過し、得られた沈殿を加温減圧下（４０℃，７５ｍｍＨｇ）終夜乾燥することで多糖誘導体として、目的とする化合物ｉｘ（０．９０ｇ）を得た。１Ｈ−ＮＭＲを測定したところ、導入率は１８％であった。【０１３９】
（実施例１０）２１−グリシル−ベタメタゾン導入コンドロイチン硫酸の調製
１０−１．  ２１−Ｂｏｃ−グリシル−ベタメタゾンの調製
Ｂｏｃ−グリシン  １．３４ｇを、ジクロロメタン  ２０ｍＬおよびジメチルホルムアミド  ２０ｍＬに溶解し、ベタメタゾン  ３ｇを加えた。０℃に冷却した後、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン  ２８０．２ｍｇをよび水溶性カルボジイミド  １．９１ｇを加え、室温にて終夜撹拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認後、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え反応を停止した。トルエンおよび水を用いて分液抽出し、有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過後、溶媒を減圧下留去し、目的とする化合物１５を得た（３．３５ｇ，８２％）。【０１４０】
１０−２．  ２１−グリシル−ベタメタゾンの調製
化合物１５  ３．３５ｇを、テトラフドロフラン  ２０ｍＬに溶解し、０℃に冷却した後、４Ｍ  塩酸／酢酸エチル  １００ｍＬを加えて、室温で１時間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認後、溶媒を減圧下留去し、目的とする化合物１６を得た（２．６９ｇ，９５％）。【０１４１】
１０−３．  ２１−グリシル−ベタメタゾン導入コンドロイチン硫酸の調製
コンドロイチン硫酸ナトリウム（重量平均分子量２０ｋＤａ）  １ｇに、蒸留水  １５ｍＬを加え３０分撹拌し溶解した。エタノール  １５ｍＬを徐々に加え、溶液を均一に撹拌した後に、化合物１６  ２２４．３ｍｇをエタノール／蒸留水＝１／１溶液  ５ｍＬに溶解し加えた。ついで、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物  １１０．７ｍｇをエタノール／蒸留水＝１／１溶液  ５ｍＬに溶解し加え、終夜撹拌した。塩化ナトリウム  １ｇを加えた後、反応溶液を、９０％エタノール／蒸留水  ２００ｍＬ  中に加えて、沈殿を形成し静置した。上清を除いた後に、９０％エタノール／蒸留水  １５０ｍＬを加え５分間撹拌洗浄し、再度静置した。同様の洗浄をさらに２回実施した後、ガラスフィルターでろ過し、得られた沈殿を加温減圧下（４０℃，７５ｍｍＨｇ）終夜乾燥することで多糖誘導体として、目的とする化合物ｘ（０．６１ｇ）を得た。１Ｈ−ＮＭＲを測定したところ、導入率は２０％であった。【０１４２】
（実施例１１）２１−イソロイシル−ベタメタゾン導入コンドロイチン硫酸の調製
１１−１．  ２１−（Ｂｏｃ−イソロイシル）−ベタメタゾンの調製
Ｂｏｃ−イソロイシン  １．７７ｇを、ジクロロメタン  ２０ｍＬおよびジメチルホルムアミド  ２０ｍＬ  に溶解し、ベタメタゾン  ３ｇを加えた。０℃に冷却した後、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン  ２８０．２ｍｇをよび水溶性カルボジイミド  １．９１ｇを加え、室温にて終夜撹拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認後、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え反応を停止した。トルエンおよび水を用いて分液抽出し、有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過後、溶媒を減圧下留去し、目的とする化合物１７を得た（３．９６ｇ，８７％）。【０１４３】
１１−２．  ２１−イソロイシル−ベタメタゾンの調製
化合物１７  ３．９６ｇを、テトラフドロフラン  ２０ｍＬに溶解し、０℃に冷却した後、４Ｍ  塩酸／酢酸エチル  １００ｍＬを加えて、室温で１時間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認後、溶媒を減圧下留去し、目的とする化合物１８を得た（３．３６ｇ，９９％）。【０１４４】
１１−３．  ２１−イソロイシル−ベタメタゾン導入コンドロイチン硫酸の調製
コンドロイチン硫酸ナトリウム  （重量平均分子量２０ｋＤａ）１ｇに、蒸留水  １５ｍＬを加え３０分撹拌し溶解した。エタノール  １５ｍＬを徐々に加え、溶液を均一に撹拌した後に、化合物１８  ２０１．９ｍｇをエタノール／蒸留水＝１／１溶液  ５ｍＬに溶解し加えた。ついで、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物  １１０．７ｍｇをエタノール／蒸留水＝１／１溶液  ５ｍＬに溶解し加え、終夜撹拌した。塩化ナトリウム  １ｇを加えた後、反応溶液を、９０％エタノール／蒸留水  ２００ｍＬ中に加えて、沈殿を形成し静置した。上清を除いた後に、９０％エタノール／蒸留水  １５０ｍＬを加え５分間撹拌洗浄し、再度静置した。同様の洗浄をさらに２回実施した後、ガラスフィルターでろ過し、得られた沈殿を加温減圧下（４０℃，７５ｍｍＨｇ）終夜乾燥することで多糖誘導体として、目的とする化合物ｘｉ（０．７６ｇ）を得た。この１Ｈ−ＮＭＲを測定したところ、導入率は１５％であった。【０１４５】
（実施例１２）２１−フェニルアラニル−ベタメタゾン導入コンドロイチン硫酸の調製
１２−１．  ２１−（Ｂｏｃ−フェニルアラニル）−ベタメタゾンの調製
Ｂｏｃ−フェニルアラニン（２．０３ｇ）を、ジクロロメタン（２０ｍＬ）およびジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）に溶解し、ベタメタゾン（３ｇ）を加えた。０℃に冷却した後、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン  ２８０．２ｍｇをよび水溶性カルボジイミド（１．９１ｇ）を加え、室温にて終夜撹拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認後、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え反応を停止した。トルエンおよび水を用いて分液抽出し、有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過後、溶媒を減圧下留去し、目的とする化合物１９を得た（０．８３７ｇ，１８％）。【０１４６】
１２−２．  ２１−フェニルアラニル−ベタメタゾンの調製
化合物１９（０．８３７ｇ）を、テトラフドロフラン  １５ｍＬに溶解し、０℃に冷却した後、４Ｍ塩酸／酢酸エチル（２５ｍＬを加えて、室温で３時間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認後、溶媒を減圧下留去し、目的とする化合物２０を得た（０．６３ｇ，８７％）。【０１４７】
１２−３．  ２１−フェニルアラニル−ベタメタゾン導入コンドロイチン硫酸の調製
コンドロイチン硫酸ナトリウム（重量平均分子量２０ｋＤａ）  １ｇに、蒸留水  １５ｍＬを加え３０分撹拌し溶解した。エタノール  １５ｍＬを徐々に加え、溶液を均一に撹拌した後に、化合物２０（２１５．５ｍｇをエタノール／蒸留水＝１／１溶液  ５ｍＬに溶解し加えた。ついで、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物  １１０．７ｍｇをエタノール／蒸留水＝１／１溶液  ５ｍＬに溶解し加え、終夜撹拌した。塩化ナトリウム  １ｇを加えた後、反応溶液を、９０％エタノール／蒸留水  ２００ｍＬ中に加えて、沈殿を形成し静置した。上清を除いた後に、９０％エタノール／蒸留水  １５０ｍＬを加え５分間撹拌洗浄し、再度静置した。同様の洗浄をさらに２回実施した後、ガラスフィルターでろ過し、得られた沈殿を加温減圧下（４０℃，７５ｍｍＨｇ）終夜乾燥することで多糖誘導体として、目的とする化合物ｘｉｉ（０．７５ｇ）を得た。この１Ｈ−ＮＭＲを測定したところ、導入率は１５％であった。【０１４８】
（実施例１３）２１−（α−Ｎ−アセチル）−オルニチル−ベタメタゾン導入コンドロイチン硫酸の調製
１３−１．  ２１−（α−Ｆｍｏｃ−δ−Ｂｏｃ）−オルニチル−ベタメタゾンの調製
α−Ｆｍｏｃ−γ−Ｂｏｃ−オルニチン  １ｇにジクロロメタン  １２ｍＬ、ジメチルホルムアミド  ６ｍＬ、ベタメタゾン  ７４７ｍｇ、およびＮ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン  ７４ｍｇを加えた。その後、氷冷下、水溶性カルボジイミド  １．１６ｇを加えて室温にて終夜撹拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認後、氷冷下、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、トルエンおよび水を用いて分液抽出を３回行った。集めた有機層は飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水溶液で順次洗浄した。その後、硫酸マグネシウムで乾燥し、エバポレーターで６０℃水浴中、減圧濃縮した結果、目的とする化合物２１を１．５７ｇ得た（収率９９％）。【０１４９】
１３−２．  ２１−（δ−Ｂｏｃ）−オルニチル−ベタメタゾンの調製
化合物２１  １．２６ｇにジクロロメタン  ９ｍＬ、ジエチルアミン  １．６ｍＬを加えて室温にて６時間半撹拌した。薄層クロマトグラフィーにて新たなスポットを確認後、氷冷下、水を加え、ジクロロメタンおよび水を用いて分液抽出を３回行った。集めた有機層は飽和食塩水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた後、エバポレーターで４０℃水浴中、減圧濃縮した。その結果、目的とする化合物２２を６５４ｍｇ得た（収率７１％）。【０１５０】
１３−３．  ２１−（α−Ｎ−アセチル−δ−Ｂｏｃ）−オルニチル−ベタメタゾンの調製
化合物２２  １９５ｍｇをジクロロメタン  ５ｍＬに溶解し、ジイソプロピルエチルアミン  １１２μＬを加え、氷冷下、無水酢酸  ３０μＬを反応させた。その後、室温にて終夜撹拌し、薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認後、氷冷下、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、ジクロロメタンおよび水を用いて分液抽出を３回行った。集めた有機層は飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水溶液で順次洗浄した。その後、硫酸マグネシウムで乾燥し、エバポレーターで４０℃水浴中、減圧濃縮した結果、目的とする化合物２３を２０２ｍｇ得た（収率９７％）。【０１５１】
１３−４．  ２１−（α−Ｎ−アセチル）−オルニチル−ベタメタゾンの調製
化合物２３  ２２０ｍｇをジクロロメタン  ２０ｍＬに溶解し、氷冷下、４Ｍ塩酸／酢酸エチル  ８ｍＬを加えて１時間撹拌した。その後、室温に昇温し、さらに１時間半撹拌した。この反応液をエバポレーターで４０℃水浴中、減圧濃縮し、ジエチルエーテルで洗浄した結果、目的とする化合物２４を１９８ｍｇ得た（収率９７％）。【０１５２】
１３−５．  ２１−（α−Ｎ−アセチル）−オルニチル−ベタメタゾン導入コンドロイチン硫酸の調製
コンドロイチン硫酸ナトリウム（重量平均分子量２５ｋＤａ）  ３８０ｍｇを蒸留水  ５ｍＬに溶解し、化合物２４  １７７ｍｇのエタノール７ｍＬ、水２ｍＬ混合溶液を加えた。その後、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物を１４２ｍｇ加え、終夜撹拌後、食塩  ３８０ｍｇを加えた。この溶液をエタノール  ４２ｍＬに加えて沈殿形成し、上清を捨てて９０％エタノール／蒸留水洗浄を２回、エタノール洗浄を２回実施した。得られた沈殿を終夜減圧乾燥したところ、多糖誘導体として、目的物ｘｉｉｉが３７０ｍｇ得られた。１Ｈ−ＮＭＲで導入率を求めた結果、約１９％であった。【０１５３】
（実施例１４）２１−β−アラニル−プレドニゾロン導入コンドロイチン硫酸の調製
１４−１．  ２１−（Ｂｏｃ−β−アラニル）−プレドニゾロンの調製
Ｂｏｃ−β−アラニン  ３００ｍｇ（１．５９ｍｍｏｌ）にジクロロメタン  ６ｍＬ、ジメチルホルムアミド３ｍＬ  プレドニゾロン  ５７１ｍｇ、およびＮ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン  ５８ｍｇを加えた。その後、氷冷下、水溶性カルボジイミド  ３３４ｍｇを加えて室温にて終夜撹拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認後、トルエンおよび水を用いて分液抽出を３回行った。集めた有機層は飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水溶液で順次洗浄した。その後、硫酸マグネシウムで乾燥し、エバポレーターで６０℃水浴中、減圧濃縮した結果、目的とする化合物を８３７ｍｇ得た（収率１０１％）。【０１５４】
１４−２．  ２１−β−アラニル−プレドニゾロンの調製
化合物ａ  ４００ｍｇをジクロロメタン  ５ｍＬに溶解し、氷冷下、４Ｍ  塩酸／酢酸エチル  ２ｍＬを加えて３時間撹拌した。この反応液をエバポレーターで４０℃水浴中、減圧濃縮した結果、目的とする化合物を２０８ｍｇ得た。【０１５５】
１４−３．  ２１−β−アラニル−プレドニゾロン導入コンドロイチン硫酸の調製
コンドロイチン硫酸ナトリウム（重量平均分子量２５ｋＤａ）  ５ｇを蒸留水  ２００ｍＬ、エタノール２００ｍＬに溶解し、化合物ｂ  ９３０ｍｇおよび４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物を９３２ｍｇ加えて終夜撹拌した。その後、炭酸水素ナトリウム  １．５ｇを投与して３時間撹拌し、酢酸  １．０６ｍＬ、塩化ナトリウム  ６ｇ、９０％エタノール／蒸留水  ４００ｍＬを順次加えて沈殿形成し、上清を捨てて９０％エタノール／蒸留水洗浄を２回実施した。得られた沈殿を終夜減圧乾燥することで多糖誘導体として、目的とする化合物ｘｉｖが４．９５ｇ得られた。１Ｈ−ＮＭＲで導入率を求めた結果、約１８％であった。【０１５６】
（実施例１５）２１−グリシル−ブデソニド導入コンドロイチン硫酸の調製
１５−１．  ２１−（Ｂｏｃ−グリシル）−ブデソニドの調製
Ｂｏｃ−グリシン  ４０２．９ｍｇを、ジクロロメタン  １０ｍＬに溶解し、ブデソニド  １ｇを加えた。０℃に冷却した後、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン  ８４．３ｍｇをよび水溶性カルボジイミド  ５７３．２ｍｇを加え、室温にて終夜撹拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認後、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え反応を停止した。有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過後、溶媒を減圧下留去し、目的とする化合物２７を得た（１．１１ｇ，８４％）。【０１５７】
１５−２．  ２１−グリシル−ブデソニドの調製
化合物２７  １．１１ｇ  を、テトラフドロフラン  ２０ｍＬに溶解し、０℃に冷却した後、４Ｍ  塩酸／酢酸エチル  １００ｍＬを加えて、室温で１時間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認後、溶媒を減圧下留去し、目的とする化合物２８を得た（１．００ｇ，９９％）。【０１５８】
１５−３．  ２１−グリシル−ブデソニド導入コンドロイチン硫酸の調製
コンドロイチン硫酸ナトリウム  （重量平均分子量２０ｋＤａ）  １ｇに、蒸留水  １５ｍＬを加え３０分撹拌し溶解した。エタノール  １５ｍＬを徐々に加え、溶液を均一に撹拌した後に、化合物２８  ２０９．６ｍｇをエタノール／蒸留水＝１／１溶液  ５ｍＬに溶解し加えた。ついで、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物  １１０．７ｍｇをエタノール／蒸留水＝１／１溶液  ５ｍＬに溶解し加え、終夜撹拌した。塩化ナトリウム  １ｇ  を加えた後、反応溶液を、９０％エタノール／蒸留水  ２００ｍＬ  中に加えて、沈殿を形成し静置した。上清を除いた後に、９０％エタノール／蒸留水  １５０ｍＬを加え５分間撹拌洗浄し、再度静置した。同様の洗浄をさらに２回実施した後、ガラスフィルターでろ過し、得られた沈殿を加温減圧下（４０℃，７５ｍｍＨｇ）終夜乾燥することで多糖誘導体として、目的とする化合物ｘｖ（０．９９２ｇ）を得た。この１Ｈ−ＮＭＲを測定したところ、導入率は１８％であった。【０１５９】
（実施例１６）２１−イソロイシル−ブデソニド導入コンドロイチン硫酸の調製
１６−１．  ２１−（Ｂｏｃ−イソロイシル）−ブデソニドの調製
Ｂｏｃ−イソロイシン  ５３２．０ｍｇを、ジクロロメタン  １０ｍＬに溶解し、ブデソニド  １ｇ  を加えた。０℃に冷却した後、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン  ８４．３ｍｇをよび水溶性カルボジイミド  ５７３．２ｍｇを加え、室温にて終夜撹拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認後、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え反応を停止した。有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過後、溶媒を減圧下留去し、目的とする化合物２９を得た（１．３８ｇ，９５％）。【０１６０】
１６−２．  ２１−イソロイシル−ブデソニドの調製
化合物２９  １．３８ｇを、テトラフドロフラン  ２０ｍＬに溶解し、０℃に冷却した後、４Ｍ  塩酸／酢酸エチル  １００ｍＬを加えて、室温で１時間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認後、溶媒を減圧下留去し、目的とする化合物３０を得た（１．１７ｇ，９２％）。【０１６１】
１６−３．  ２１−イソロイシル−ブデソニド導入コンドロイチン硫酸の調製
コンドロイチン硫酸ナトリウム  （重量平均分子量２０ｋＤａ）  １ｇに、蒸留水  １５ｍＬを加え３０分撹拌し溶解した。エタノール  １５ｍＬを徐々に加え、溶液を均一に撹拌した後に、化合物３０  ２３２．１ｍｇをエタノール／蒸留水＝１／１溶液  ５ｍＬに溶解し加えた。ついで、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物  １１０．７ｍｇをエタノール／蒸留水＝１／１溶液  ５ｍＬに溶解し加え、終夜撹拌した。塩化ナトリウム  １ｇを加えた後、反応溶液を、９０％エタノール／蒸留水  ２００ｍＬ中に加えて、沈殿を形成し静置した。上清を除いた後に、９０％エタノール／蒸留水  １５０ｍＬを加え５分間撹拌洗浄し、再度静置した。同様の洗浄をさらに２回実施した後、ガラスフィルターでろ過し、得られた沈殿を加温減圧下（４０℃，７５ｍｍＨｇ）終夜乾燥することで多糖誘導体として、目的とする化合物ｘｖｉ（０．９８９ｇ）を得た。この１Ｈ−ＮＭＲを測定したところ、導入率は１３％であった。【０１６２】
（実施例１７）１１−グリシル−プロピオン酸フルチカゾン導入コンドロイチン硫酸の調製
１７−１．  １１−（Ｂｏｃ−グリシル）−プロピオン酸フルチカゾンの調製
Ｂｏｃ−グリシン  ２１０．２ｍｇとプロピオン酸フルチカゾン  ６００ｍｇを、ジクロロメタン  １００ｍＬ  およびジメチルホルムアミド  ２０ｍＬに溶解した。０℃に冷却した後、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン  ７７．０ｍｇをよびジシクロヘキシルカルボジイミド  ３２１．９ｍｇを加え、室温にて終夜撹拌した。０℃に冷却した後、Ｂｏｃ−グリシン  （２１０．２  ｍｇ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン  ７７．０ｍｇをよびジシクロヘキシルカルボジイミド  ３２１．９ｍｇを加え、さらに４日間撹拌した。その後、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え反応を停止した。トルエンおよび水を用いて分液抽出し、有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過後、溶媒を減圧下留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル  ＝  １０／１  →  ５／１  →  ３／１  →  ２／１）にて分離精製し、目的とする化合物３１を得た（０．４９３ｇ，６３％）。【０１６３】
１７−２．  １１−グリシル−プロピオン酸フルチカゾンの調製
化合物３１  （０．３８４ｇ）  を、テトラヒドロフラン（５ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した後、４Ｍ塩酸／酢酸エチル  １５ｍＬを加えて、室温で４時間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認後、溶媒を減圧下留去し、目的とする化合物３２を得た（０．３０１ｇ，７２％）。【０１６４】
１７−３．  １１−グリシル−プロピオン酸フルチカゾン導入コンドロイチン硫酸の調製
コンドロイチン硫酸ナトリウム（重量平均分子量２０ｋＤａ）  ５００ｍｇに、蒸留水７．５ｍＬを加え３０分撹拌し溶解した。エタノール  ７．５ｍＬを徐々に加え、溶液を均一に撹拌した後に、化合物３２  １１８．８ｍｇをエタノール／蒸留水＝１／１溶液  ５ｍＬに溶解し加えた。ついで、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物  ５５．３ｍｇをエタノール／蒸留水＝１／１溶液  ５ｍＬに溶解し加え、終夜撹拌した。塩化ナトリウム  ５００ｍｇを加えた後、反応溶液を、９０％エタノール／蒸留水  １００ｍＬ  中に加えて、沈殿を形成し静置した。上清を除いた後に、９０％エタノール／蒸留水  ７．５ｍＬを加え５分間撹拌洗浄し、再度静置した。同様の洗浄をさらに２回実施した後、ガラスフィルターでろ過し、得られた沈殿を加温減圧下（４０℃，７５ｍｍＨｇ）終夜乾燥することで多糖誘導体として、目的とする化合物ｘｖｉｉ（０．３６２ｇ）を得た。この化合物の１Ｈ−ＮＭＲを測定したところ、導入率は１８％であった。【０１６５】
（実施例１８）ブデソニド  １２−アミノドデシレートの調製
１８−１．  Ｂｏｃ−１２−アミノ−ドデカン酸の調製
１２−アミノドデカン酸  ３ｇを、０．１Ｍ水酸化ナトリウム溶液  １００ｍＬおよび、ジクロロメタン  １００ｍＬ  に溶解した。０℃に冷却した後、ジクロロメタン  １０ｍＬに溶解した、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルを滴下した。終夜撹拌した後、溶媒を減圧下留去し、ついで酢酸エチルに溶解し、０．１Ｍ塩酸、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過後、溶媒を減圧下留去し、目的とする化合物３２を得た（２．０１ｇ，４５％）。【０１６６】
１８−２．  ブデソニド  Ｂｏｃ−１２−アミノドデシレートの調製
化合物３２  ６５９ｍｇを、ジクロロメタン  １０ｍＬに溶解し、ブデソニド  ９００ｍｇを加えた。０℃に冷却した後、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン  ７７．０ｍｇをよび水溶性カルボジイミド  ５２１ｍｇを加え、室温にて終夜撹拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認後、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え反応を停止した。有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過後、溶媒を減圧下留去することで目的とする化合物ｘｖｉｉｉａを得た（１．４５ｇ，９５％）。【０１６７】
１８−３．  ブデソニド  １２−アミノドデシレートの調製
化合物ｘｖiiiａ  ０．４５ｇを、ジクロロメタン  ２０ｍＬに溶解し、０℃に冷却した後、４Ｍ  塩酸／酢酸エチル  ２０ｍＬを加えて、室温で４時間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認後、溶媒を減圧下留去することで目的とする化合物ｘｖｉｉｉｂを得た（０．３８ｇ，９４％）。【０１６８】
（実施例１９）２１−β−アラニル−ベタメタゾン導入カルボキシメチルセルロースの調製
１９−１．  ２１−β−アラニル−ベタメタゾン導入カルボキシメチルセルロース（５００）の調製
カルボキシメチルセルロース（ｎ＝５００）  １ｇに、蒸留水  １００ｍＬを加え、１時間撹拌した。エタノール  １００ｍＬを徐々に加え、溶液を均一に撹拌した後に、化合物２  ２３１．３ｍｇを加えた。ついで、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物  １３８．４ｍｇを加え、終夜撹拌した。炭酸水素ナトリウム  ７５０ｍｇを加えて３時間撹拌し、酢酸  ０．２ｍＬを加えて中和した。塩化ナトリウム  ３ｇ  を加えた後、９０％エタノール／蒸留水  ２３０ｍＬを加えて沈殿を形成し、静置した。上清を除いた後に、９０％エタノール／蒸留水  １５０ｍＬを加え５分間撹拌洗浄し、再度静置した。同様の洗浄をさらに２回実施した後、ガラスフィルターでろ過し、得られた沈殿を加温減圧下（４０℃，７５ｍｍＨｇ）終夜乾燥することで多糖誘導体として、目的とする化合物ｘｉｘａ（０．９６３ｇ）を得た。このベタメタゾン導入率を分光光度計にて測定したところ、導入率は１７％であった。【０１６９】
１９−２．  ２１−β−アラニル−ベタメタゾン導入カルボキシメチルセルロース（１０５０）の調製
カルボキシメチルセルロース（ｎ＝１０５０）  １ｇに、蒸留水  １００ｍＬを加え、１時間撹拌した。エタノール  １００ｍＬを徐々に加え、溶液を均一に撹拌した後に、化合物２  ２３１．３ｍｇを加えた。ついで、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物  １３８．４ｍｇを加え、終夜撹拌した。炭酸水素ナトリウム  ７５０ｍｇを加えて３時間撹拌し、酢酸  ０．２ｍＬを加えて中和した。塩化ナトリウム  ３ｇを加えた後、９０％エタノール／蒸留水  ２３０ｍＬを加えて沈殿を形成し、静置した。上清を除いた後に、９０％エタノール／蒸留水  １５０ｍＬを加え５分間撹拌洗浄し、再度静置した。同様の洗浄をさらに２回実施した後、ガラスフィルターでろ過し、得られた沈殿を加温減圧下（４０℃，７５ｍｍＨｇ）終夜乾燥することで多糖誘導体として、目的とする化合物ｘｉｘｂ（０．９６３ｇ）を得た。このベタメタゾン導入率を分光光度計にて測定したところ、導入率は１８％であった。【０１７０】
（実施例２０）２１−β−アラニル−ブデソニド導入カルボキシメチルセルロースの調製
２０−１．  ２１−β−アラニル−ブデソニド導入カルボキシメチルセルロース（５００）の調製
カルボキシメチルセルロース（ｎ＝５００）  １ｇに、蒸留水  １００ｍＬを加え、１時間撹拌した。エタノール  １００ｍＬを徐々に加え、溶液を均一に撹拌した後に、化合物７  ２５０．３ｍｇを加えた。ついで、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物  １３８．４ｍｇを加え、終夜撹拌した。炭酸水素ナトリウム  ７５０ｍｇを加えて３時間撹拌し、酢酸  ０．２ｍＬを加えて中和した。塩化ナトリウム  ３ｇを加えた後、９０％エタノール／蒸留水  ２３０ｍＬを加えて沈殿を形成し、静置した。上清を除いた後に、９０％エタノール／蒸留水  １５０ｍＬを加え５分間撹拌洗浄し、再度静置した。同様の洗浄をさらに２回実施した後、ガラスフィルターでろ過し、得られた沈殿を４０℃減圧下（７５ｍｍＨｇ）終夜乾燥することで多糖誘導体として、目的とする化合物ｘｘａ（０．９７８ｇ）を得た。このブデソニド導入率を分光光度計にて測定したところ、導入率は１５％であった。【０１７１】
２０−２．  ２１−β−アラニル−ブデソニド導入カルボキシメチルセルロース（１０５０）の調製
カルボキシメチルセルロース  （ｎ＝１０５０）  １ｇに、蒸留水  １００ｍＬを加え、１時間撹拌した。エタノール  １００ｍＬを徐々に加え、溶液を均一に撹拌した後に、化合物７  ２３１．３ｍｇを加えた。ついで、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物  １３８．４ｍｇを加え、終夜撹拌した。炭酸水素ナトリウム  ７５０ｍｇを加えて３時間撹拌し、酢酸  ０．２ｍＬを加えて中和した。塩化ナトリウム  ３ｇを加えた後、９０％エタノール／蒸留水  ２３０ｍＬを加えて沈殿を形成し、静置した。上清を除いた後に、９０％エタノール／蒸留水  １５０ｍＬを加え５分間撹拌洗浄し、再度静置した。同様の洗浄をさらに２回実施した後、ガラスフィルターでろ過し、得られた沈殿を４０℃減圧下（７５ｍｍＨｇ）終夜乾燥することで多糖誘導体として、目的とする化合物ｘｘｂ（０．９５２ｇ）を得た。このブデソニド導入率を分光光度計にて測定したところ、導入率は１８％であった。【０１７２】
（実施例２１）ベタメタゾン導入コンドロイチン硫酸の調製
コンドロイチン硫酸ナトリウム（重量平均分子量２０ｋＤａ）  １ｇに、蒸留水  １５ｍＬを加え、３０分間撹拌した。１，４−ジオキサン  １５ｍＬを徐々に加え、溶液を均一に撹拌した後に、ベタメタゾン（７８４．９ｍｇ，１ｅｑ．）を、１，４−ジオキサン  １５ｍＬに溶解し加えた。ついで、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物  ５５３．４ｍｇを加え、終夜撹拌した。塩化ナトリウム  １ｇを加えた後、反応溶液を、９０％エタノール／注射用水  ２００  ｍＬ中に加えて、沈殿を形成し静置した。上清を除いた後に、９０％エタノール／注射用水  １５０ｍＬを加え５分間撹拌洗浄し、再度静置した。同様の洗浄をさらに２回実施した後、ガラスフィルターでろ過し、得られた沈殿を４０℃減圧下（７５ｍｍＨｇ）終夜乾燥することで多糖誘導体として、目的とする化合物ｘｘｉ（０．９２ｇ）を得た。この化合物のブデソニド導入率を１Ｈ−ＮＭＲで測定したところ、導入率は２％であった。【０１７３】
（実施例２２）プロキシフィリン導入コンドロイチン硫酸の調製
２２−１．  Ｂｏｃ−β−アラニル−プロキシフィリンの調製
Ｂｏｃ−β−アラニン  ３９８ｍｇにジクロロメタン  １７ｍＬ、プロキシフィリン  ５００ｍｇ、およびＮ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン  ７７ｍｇを加えた。その後、氷冷下、水溶性カルボジイミド  １．２ｇを加えて室温にて終夜撹拌した。薄層クロマトグラフィーにて新たなスポットを確認後、氷冷下、飽和塩化アンモニウム水溶液を加えた後、ジクロロメタンおよび水を用いて分液抽出を３回行った。集めた有機層は飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水溶液で順次洗浄した。その後、硫酸マグネシウムで乾燥し、エバポレーターで４０℃水浴中、減圧濃縮した結果、目的とする化合物３３を７９０ｍｇ得た（収率９２％）。【０１７４】
２２−２．  β−アラニル−プロキシフィリンの調製
化合物３３  ７５４ｍｇをジクロロメタン  ２０ｍＬに溶解し、氷冷下、４Ｍ塩酸／酢酸エチル  ８ｍＬを加えて１時間撹拌した。その後室温まで昇温し、さらに１時間撹拌した。この反応液をエバポレーターで４０℃水浴中、減圧濃縮し、ジエチルエーテルで洗浄した結果、目的とする化合物３４を６３５ｍｇ得た。【０１７５】
２２−３．  β−アラニル−プロキシフィリン導入コンドロイチン硫酸の調製
コンドロイチン硫酸ナトリウム（重量平均分子量２５ｋＤａ）  １ｇを蒸留水  １５ｍＬに溶解し、化合物３４  １３８ｍｇのエタノール２０ｍＬ、水５ｍＬ混合溶液を加えた。その後、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物を１８７ｍｇ加え、終夜撹拌した。続いて塩化ナトリウム  １ｇを加え、この溶液をエタノール  １２０ｍＬに滴下することで沈殿形成し、上清を捨てて９０％エタノール／蒸留水洗浄を２回実施した。得られた沈殿を終夜減圧乾燥したところ、多糖誘導体として、目的とする化合物ｘｘｉｉａが９７１ｍｇ得られた。１Ｈ−ＮＭＲで導入率を求めた結果、約１６％であった。【０１７６】
２２−４．  プロキシフィリン導入ヒアルロン酸の調製
ヒアルロン酸ナトリウム（重量平均分子量８８０ｋＤａ）  ６００ｍｇを蒸留水  ６０ｍＬおよびエタノール５０ｍＬに溶解し、化合物３４  １０４ｍｇのエタノール１０ｍＬ溶液を加えた。その後、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物を１４１ｍｇ加え、終夜撹拌した。続いて炭酸水素ナトリウム  ４５０ｍｇを投与して３時間混合後、酢酸  ２４０μＬ、塩化ナトリウム  １．８ｇ、９０％エタノール／蒸留水  ２４０ｍＬを順次加えて沈殿形成し、上清を捨てて９０％エタノール／蒸留水洗浄を２回実施した。得られた沈殿を終夜減圧乾燥したところ、多糖誘導体として、目的とする化合物ｘｘｉｉｂが５６８ｍｇ得られた。１Ｈ−ＮＭＲで導入率を求めた結果、約１７％であった。【０１７７】
（実施例２３）セラトロダスト導入コンドロイチン硫酸の調製
２３−１．  セラトロダスト  Ｂｏｃ−アミノエチルエステルの調製
Ｂｏｃ−２−アミノエタノール  ４４ｍｇにジクロロメタン  ５ｍＬ、セラトロダスト  ９９ｍｇ、およびＮ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン  １０ｍｇを加えた。その後、氷冷下、水溶性カルボジイミド  １５７ｍｇを加えて室温にて終夜撹拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認後、氷冷下、飽和塩化アンモニウム水溶液を加えた後、ジクロロメタンおよび水を用いて分液抽出を３回行った。集めた有機層は飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水溶液で順次洗浄した。その後、硫酸マグネシウムで乾燥し、エバポレーターで４０℃水浴中、減圧濃縮した結果、目的とする化合物３５を１３６ｍｇ得た（収率ｑｕａｎｔ．）。【０１７８】
２３−２．  セラトロダスト  アミノエチルエステルの調製
化合物３５  １３６ｍｇをジクロロメタン  ５ｍＬに溶解し、氷冷下、４Ｍ  塩酸／酢酸エチル  ２ｍＬを加えて１時間撹拌した。その後室温まで昇温し、さらに１時間撹拌した。この反応液をエバポレーターで４０℃水浴中、減圧濃縮し、ジエチルエーテルで洗浄した結果、目的とする化合物３６を１１８ｍｇ得た（収率９８％）。【０１７９】
２３−３．  セラトロダスト導入コンドロイチン硫酸の調製
コンドロイチン硫酸ナトリウム（重量平均分子量２５ｋＤａ）  ４２３ｍｇを蒸留水  ７ｍＬに溶解し、化合物３６  ７３ｍｇのエタノール９ｍＬ、水２ｍＬ混合溶液を加えた。その後、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物を７９ｍｇ加え、終夜撹拌した。続いて塩化ナトリウム  ４２３ｍｇを加え、この溶液をエタノール  ５５ｍＬに滴下することで沈殿形成し、上清を捨てて９０％エタノール／蒸留水洗浄を２回実施した。得られた沈殿を終夜減圧乾燥したところ、多糖誘導体として、目的とする化合物ｘｘｉｉｉが４０３ｍｇ得られた。１Ｈ−ＮＭＲで導入率を求めた結果、約１７％であった。【０１８０】
（実施例２４）モンテルカスト導入コンドロイチン硫酸の調製
２４−１．  Ｆｍｏｃ−４−アミノ−１−ブタノールの調製
４−アミノ−１−ブタノール  ２６４ｍｇをテトラヒドロフラン  ９ｍＬおよび水３ｍＬに溶解し、氷冷下、炭酸９−フルオレニルメチルＮ−スクシンイミジル  １．０ｇを加えた。その後、室温で終夜撹拌し、原料の消失を確認後、ジクロロメタンおよび水を用いて分液抽出を３回行い、集めた有機層を飽和食塩水溶液で洗浄した。その後、硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃縮した結果、目的とする化合物３７を１．２１ｇ得た。【０１８１】
２４−２．  モンテルカスト  Ｆｍｏｃ−４−アミノ−１−ブチルエステルの調製
化合物３７  １９６ｍｇをジクロロメタン  １０ｍＬに溶解し、モンテルカスト  ナトリウム  ４００ｍｇおよびＮ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン  ２４ｍｇを加えた。その後、氷冷下、水溶性カルボジイミド  １８９ｍｇを加えて室温にて終夜撹拌した。氷冷下で飽和塩化アンモニウム水溶液を加えた後、ジクロロメタンおよび水を用いて分液抽出を３回行い、集めた有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水溶液で洗浄した。その後、硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）にて精製し、目的とする化合物３８を４０６ｍｇ得た。【０１８２】
２４−３．  モンテルカスト  ４−アミノ−１−ブチルエステルの調製
化合物３８  ２００ｍｇをジクロロメタン  ８ｍＬに溶解し、ピペリジン２ｍＬを加えた。室温にて３時間撹拌し、原料の消失を確認後、減圧濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し（クロロホルム：メタノール＝１０：１）、目的とする化合物３９を１４０ｍｇ得た。【０１８３】
２４−４．  モンテルカスト導入コンドロイチン硫酸の調製
コンドロイチン硫酸ナトリウム（重量平均分子量２５ｋＤａ）  ５６０ｍｇを蒸留水  ５５ｍＬおよびエタノール  ５５ｍＬに溶解し、化合物３９を１４０ｍｇ加えた。その後、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物を１０４ｍｇ加えて終夜撹拌した。その後、炭酸水素ナトリウムを４２０ｍｇ加えて２時間撹拌し、酢酸２２５μＬ、塩化ナトリウム  １．７ｇを順次加えた。３０分撹拌後、９０％エタノール／蒸留水を２００ｍＬ加えて沈殿形成し、上清を捨てて９０％エタノール／蒸留水洗浄を２回実施した。得られた沈殿を終夜乾燥したところ、多糖誘導体として、目的とする化合物ｘｘｉｖが５３０ｍｇ得られた。カルバゾール硫酸法にて導入率を求めた結果、１１％であった。【０１８４】
（実施例２５）イプラトロピウム導入コンドロイチン硫酸の調製
２５−１．  Ｂｏｃ−β−アラニル−イプラトロピウムの調製
Ｂｏｃ−β−アラニン  ４６ｍｇをジクロロメタン  ４ｍＬおよびジメチルホルムアミド４ｍＬに溶解し、イプラトロピウム  １００ｍｇ、ジイソプロピルエチルアミンおよび１−ヒドロキシベンゾトリアゾール  ８２ｍｇを加えた。その後、氷冷下、ジシクロヘキシルカルボジイミド  １２５ｍｇを加えて室温にて終夜撹拌した。薄層クロマトグラフィーにて新たなスポットを確認後、反応液をセライト１−ヒドロキシベンゾトリアゾールし、トルエンおよび水を用いて分液抽出を３回行った。集めた水層は凍結乾燥を行なって溶媒を除去し、目的とする化合物４０の粗生成物を２４０ｍｇ得た。【０１８５】
２５−２．  β−アラニル−イプラトロピウムの調製
化合物４０  ２４０ｍｇをジクロロメタン  ７ｍＬに溶解し、氷冷下、４Ｍ  塩酸／酢酸エチル  ３ｍＬを加えて１時間撹拌した。その後室温まで昇温し、さらに２時間撹拌した。この反応液をエバポレーターで４０℃水浴中、減圧濃縮し、ジエチルエーテルで洗浄した結果、目的とする化合物４１の粗生成物（化合物４１と１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、イプラトロピウムの混合物）１８５ｍｇ得た。【０１８６】
２５−３．  β−アラニン−イプラトロピウム導入コンドロイチン硫酸の調製
コンドロイチン硫酸ナトリウム（重量平均分子量２５ｋＤａ）  ６７６ｍｇを蒸留水  １０ｍＬに溶解し、化合物４１  の粗生成物１８５ｍｇのエタノール１４ｍＬ、水４ｍＬ混合溶液を加えた。その後、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物を１８９ｍｇ加え、終夜撹拌した。続いて塩化ナトリウム  ６７６ｍｇを加え、この溶液をエタノール  ９０ｍＬに滴下することで沈殿形成し、上清を捨てて９０％エタノール／蒸留水洗浄を２回実施した。得られた沈殿を終夜減圧乾燥したところ、多糖誘導体として、目的とする化合物ｘｘｖが６４９ｍｇ得られた。１Ｈ−ＮＭＲで導入率を求めた結果、約１６％であった。【０１８７】
（実施例２６）ツロブテロール導入コンドロイチン硫酸の調製
２６−１．  Ｂｏｃ−β−アラニル−ツロブテロールの調製
ツロブテロール（１．００ｇ）と、Ｂｏｃ−β−アラニン（０．９９ｇ）を、ジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解した。０℃に冷却した後、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（１６１．３ｍｇ）および水溶性カルボジイミド（１．１１ｇ）を加え、室温にて３時間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認後、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え反応を停止した。酢酸エチルで希釈後、有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過後、溶媒を減圧下留去し、目的とする化合物４２を得た（１．７１ｇ，９８％）。【０１８８】
２６−２．  β−アラニル−ツロブテロールの調製
化合物４２（１．７１ｇ）を、テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した後、４Ｍ塩酸／酢酸エチル（１５ｍＬ）を加えて、室温で２時間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにて原料の消失を確認後、溶媒を減圧下留去し、目的とする化合物４３を得た（１．４７ｇ，９２％）。【０１８９】
２６−３．  ツロブテロール導入コンドロイチン硫酸の調製
コンドロイチン硫酸（重量平均分子量２０ｋＤａ，５００ｍｇ）に、蒸留水（７．５ｍＬ）を加え３０分撹拌し溶解した。エタノール（７．５ｍＬ）を徐々に加え、溶液を均一に撹拌した後に、化合物４３（７４．３ｍｇ）  をエタノール／蒸留水＝１／１溶液（３ｍＬ）に溶解し加えた。ついで、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物（５５．３ｍｇ）をエタノール／蒸留水＝１／１溶液  （３ｍＬ）に溶解し加え、終夜撹拌した。塩化ナトリウム（５００ｍｇ）  を加えた後、反応溶液を、９０％エタノール／蒸留水（１００ｍＬ）中に加えて、沈殿を形成し静置した。上清を除いた後に、９０％エタノール／蒸留水（１００ｍＬ）を加え５分間撹拌洗浄し、再度静置した。同様の洗浄をさらに２回実施した後、ガラスフィルターでろ過し、得られた沈殿を加温減圧下（４０℃，７５ｍｍＨｇ）終夜乾燥することで多糖誘導体として、目的とする化合物ｘｘｖｉ（４５５ｍｇ）を得た。この１Ｈ−ＮＭＲを測定したところ、導入率は１０％であった。【０１９０】
（実施例２８）ブデソニド導入キトサンの調製
２８−１．  ブデソニド  コハク酸エステルの調製
無水コハク酸 １１６ｍｇ（１．０ｅｑ，１．１６ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン１５ｍｌに溶解してブデソニド ５００ｍｇ（１．０ｅｑ，１．１６ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン ２８ｍｇ（０．２ｅｑ，０．２３ｍｍｏｌ）を加え、室温にて終夜攪拌した。薄層クロマトグラフィーにて新たなスポットを確認後、０℃下、飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて反応を停止し、酢酸エチルおよび１Ｍ塩酸を用いて分液抽出を３回行った。集めた有機層は飽和食塩水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、エバポレーターで４０℃水浴中、減圧濃縮した。濃縮物はシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製（クロロホルム：メタノール＝１５：１）し、目的とする化合物ａを６１５ｍｇ得た。【０１９１】
２８−２．  ブデソニド導入キトサンの調製
キトサン１０（０．５％酢酸に溶解した０．５％キトサン溶液粘度：約１０ｃｐｓ、和光純薬製）９００ｍｇを蒸留水５０ｍｌおよび１Ｍ塩酸５ｍｌに溶解し、その後１Ｍ水酸化ナトリウム溶液をｐＨ５．６になるように滴下した。その後さらに１８時間攪拌し、化合物ａを５９３ｍｇ（０．２ｅｑ，１．１２ｍｍｏｌ）、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドｎ水和物を５２４ｍｇ（０．２ｅｑ，１．１２ｍｍｏｌ）加えて終夜攪拌した。次に塩化ナトリウム ９００ｍｇを投入し、この溶液を９０％エタノール／蒸留水３００ｍｌに加えて沈殿形成し、上清を捨てて９０％エタノール／蒸留水洗浄、エタノール洗浄、アセトン洗浄を各２回実施した。（得られた沈殿を終夜減圧乾燥したところ、目的物ｘｘｖｉｉｉが１．１８ｇ得られた。【０１９２】
＜薬物遊離試験＞
薬物遊離試験にかかる実施例では、以下のようにして薬物遊離率を評価した。
（１）リン酸緩衝液の調製
リン酸二水素ナトリウム・二水和物  ７８０ｍｇ（５．０ｍｍｏｌ）を蒸留水  ５００ｍＬに溶解し、Ａ液とした。別途、リン酸水素二ナトリウム・十ニ水和物  １．７９ｇ（５．０ｍｍｏｌ）を蒸留水  ５００ｍＬに溶解し、Ｂ液とした。Ａ液とＢ液を２：３の比率で混合し、ｐＨ７．５のリン酸緩衝液を調製した。【０１９３】
（２）ホウ酸緩衝液の調製
ホウ酸０．６２ｇ（１０ｍｍｏｌ）と塩化カリウム０．７５ｇ（１０ｍｍｏｌ）を秤り取り、５００ｍＬの蒸留水に溶解してＣ液とした。別途、０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を蒸留水で１０倍希釈してＤ液とした。
Ｃ液５０ｍＬとＤ液７ｍＬを１００ｍＬのメスフラスコに加え、蒸留水で１００ｍＬにメスアップして、ｐＨ８．０のホウ酸緩衝液を調製した。また、Ｃ液５０ｍＬとＤ液４０ｍＬを１００ｍＬのメスフラスコに加え、蒸留水で１００ｍＬにメスアップして、ｐＨ９．０のホウ酸緩衝液を調製した。【０１９４】
（３）評価方法
上記で得られた各多糖誘導体について、濃度が５ｍｇ／１０ｍＬとなるようそれぞれのｐＨを有する緩衝液に溶解したのち、３６℃の恒温槽中で１週間加温し、その間の薬物の遊離率を２４時間ごとに液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で評価した。
評価はサイズ排斥クロマトグラフィーカラム（ＴＯＳＯＨ製ＴＳＫｇｅｌ  α−６０００、７．８ｍｍＩ．Ｄ．×３０ｃｍ）を用い、多糖誘導体に残存する薬物量と、遊離した薬物量の比を測定することで行った。
液体クロマトグラフィーの条件の詳細は以下の通りである。
分析時間：４０分
流速：０．５ｍＬ／ｍｉｎ  
グラジェント：ｉｓｏｃｌａｔｉｃ
溶出液：アセトニトリル（ＨＰＬＣ用）：生理食塩液＝１：２
検出器：紫外線検出器（２４０ｎｍ）
温度：３６℃【０１９５】
（試験例Ａ１）  薬物の導入率の違いによる遊離特性の変化
実施例１で調製した化合物ｉａ及びｉｂについて、３６℃、１週間における薬物遊離率（％）をＨＰＬＣで評価した。薬物遊離率の評価は２４時間ごとに実施した。結果を以下に示す。【０１９６】
【表３】
2015005459.tif 000004
【０１９７】
化合物ｉａの遊離速度はｐＨ７．４の時に０．８％／日、ｐＨ８．０の時に２．４％／日であった。これに対し、化合物ｉｂの遊離速度はｐＨ７．４の時に０．７％／日、ｐＨ８．０の時に２．１％／日であり、薬物の導入率が変化することによる薬物遊離率への影響は殆どなかった。【０１９８】
（試験例Ａ２）  多糖の違いによる遊離特性の変化
実施例５、６、２０で調製した化合物ｖｂ、ｖｃ、ｖｉａ、ｖｉｂ及びｘｘａの、３６℃１週間における薬物遊離率（％）をＨＰＬＣで上記と同様に評価した。評価結果を以下に示す。【０１９９】
【表４】
2015005459.tif 000005
【０２００】
ヒアルロン酸の誘導体である化合物ｖｉａ及びｖｉｂの遊離率はｐＨ７．４の時にそれぞれ４．９％／日、４．９％／日、ｐＨ８．０の時にそれぞれ８．２％／日、７．９％／日となり、コンドロイチン硫酸の誘導体である化合物ｖｂ及びｖｃの遊離率はｐＨ７．４の時にそれぞれ０．９％／日、１．２％／日、ｐＨ８．０の時にそれぞれ１．５％／日、２．０％／日であった。また、カルボキシメチルセルロースの誘導体である化合物ｘｘａの遊離率はｐＨ７．４の時に２．８％／日、ｐＨ８．０の時に５．７％／日となり、薬物の遊離しやすさはヒアルロン酸＞カルボキシメチルセルロース＞コンドロイチン硫酸の順であった。【０２０１】
（試験例Ａ３）  スペーサーの違いによる遊離特性の変化
化合物ｉｘ、ｘ及びｘｉを５ｍｇ／１０ｍＬ（０．０５ｗ／ｗ％）となるよう各ｐＨの緩衝液に溶解したのち、３６℃恒温槽中で１週間加温し、その間の薬物遊離率（％）を上記と同様に評価した。評価結果を以下に示す。【０２０２】
【表５】
2015005459.tif 000006
【０２０３】
化合物ｘ（ＣＳ−Ｇｌｙ−ＢＴＭ）の遊離速度はｐＨ７．４の時に３．１％／日、ｐＨ８．０の時に７．２％／日、化合物ｉｘ（ＣＳ−Ａｌａ−ＢＴＭ）の遊離速度はｐＨ７．４の時に１．６％／日、ｐＨ８．０の時に４．２％／日であった。【０２０４】
各アミノ酸の疎水性指標（Ｈｙｄｒｏｐａｔｈｙ  Ｉｎｄｅｘ）と遊離速度の相関を評価した。結果を図１に示す。
いずれのｐＨでも相関性が認められた。これはスペーサーの疎水性指標を評価することで遊離速度の予測と制御が可能であることを示す。
天然アミノ酸をスペーサーとして用いる場合、イソロイシンは最も疎水性が高く（疎水性指標値が最大）、最も長期間、薬物の効果を維持すると予測される。更に遊離速度を抑制したければ、イソロイシンの構造に対し疎水性を向上させるような修飾を行うか、より疎水性指標の高いアミノカルボン酸を用いればよいことが分かる。【０２０５】
（試験例Ａ４）  ２１位導入と１１位導入でのリリース特性の変化
実施例１、５、７、８及び１７で調製した化合物ｉａ、ｖａ、ｖｉｉ、ｖｉｉｉ及びｘｖｉｉを５ｍｇ／１０ｍＬとなるよう各ｐＨの緩衝液に溶解したのち、３６℃恒温槽中で１週間加温し、その間の薬物遊離率を上記と同様に評価した。評価結果を以下に示す。【０２０６】
【表６】
2015005459.tif 000007
【０２０７】
２１位水酸基を介してステロイドを導入した化合物ｉａとｖａを比較した場合、薬物の種類の違いに関わらず、同様の遊離速度を示した。
ＣＳ−βＡｌａ−ＢＥＴ  ０．８（ｐＨ７．４）／２．４（ｐＨ８．０）  （ｉａ）
ＣＳ−βＡｌａ−ＢＵＤ  ０．８（ｐＨ７．４）／２．５（ｐＨ８．０）  （ｖａ）
一方、１１位水酸基を介してステロイドが導入された化合物ｖｉｉ（ＣＳ−βＡｌａ−ＦＰ）では、遊離速度はｐＨ７．４の時に０．１％／日、ｐＨ８．０の時に０．２％／日となり、薬物の遊離はほとんど認められなかった。
以上の結果から、薬物の構造が類似しており、修飾部位が同じであれば、同様の遊離速度を示すのに対し、薬物の修飾部位違いにより遊離速度が変化することが示された。【０２０８】
これに対し、１１位水酸基を介してステロイドが導入された化合物であっても、疎水性指標値の小さなグリシンをスペーサーに用いた化合物ｘｖｉｉ（ＣＳ−Ｇｌｙ−ＦＰ）の遊離率はｐＨ７．４の時に０．４％／日、ｐＨ８．０の時に３．３％／日、エステル結合に対して電子吸引性を高めたハロゲン導入スペーサーを用いた化合物ｖｉｉｉ（ＣＳ−２Ｆ■βＡｌａ−ＦＰ）の遊離速度はｐＨ７．４の時に３．１％／日、ｐＨ８．０の時に１０．１％／日となり、いずれのスペーサーも遊離速度を促進した。化合物ｘｖｉｉの薬物遊離試験では溶媒の組成をｐＨ７．４ではリン酸緩衝液／アセトニトリル（１：１）、ｐＨ８．０ではホウ酸緩衝液／アセトニトリル（１：１）で行った。【０２０９】
（試験例Ａ５）  β−アラニル−プロキシフィリン導入多糖誘導体の遊離率比較
化合物ｘｘｉｉａ、ｘｘｉｉｂをそれぞれ５ｍｇ／１０ｍＬ（０．０５ｗ／ｗ％）となるよう各ｐＨの緩衝液に溶解したのち、３６℃恒温槽中で１週間加温し、その間の薬物遊離率を上記と同様に評価した。評価結果を以下に示す。【０２１０】
【表７】
2015005459.tif 000008
【０２１１】
化合物ｘｘｉｉａでは、遊離速度はｐＨ７．４の時に０．２％／日、ｐＨ８．０の時に０．４％／日となり、化合物ｘｘｉｉｂでは、遊離速度はｐＨ７．４の時に０．８％／日、ｐＨ８．０の時に２．０％／日であった。【０２１２】
（試験例Ａ６）  セラトロダスト−２−アミノエチルエステル導入ＧＡＧの遊離率
化合物ｘｘｉｉｉを０．０５％となるよう各ｐＨの緩衝液に溶解したのち、３６℃恒温槽中で１週間加温し、その間の薬物遊離率を上記と同様に評価した。評価結果を以下に示す。【０２１３】
【表８】
2015005459.tif 000009
【０２１４】
化合物ｘｘｉｉｉでは、遊離速度はｐＨ７．４の時に０．１％／日、ｐＨ８．０の時に０．２％／日であった。【０２１５】
（試験例Ａ８）  ＣＭＣ−βＡｌａ−ＢＵＤの遊離率比較
化合物ｘｘａを５ｍｇ／３０ｍＬ（０．０５ｗ／ｗ％）となるよう各ｐＨの緩衝液に溶解したのち、３６℃恒温槽中で１週間加温し、その間の薬物遊離率を上記と同様に評価した。評価結果を以下に示す。【０２１６】
【表９】
2015005459.tif 000010
【０２１７】
その結果、遊離速度はｐＨ７．４の時に２．６％／日、ｐＨ８．０の時に５．５％／日であった。【０２１８】
（試験例Ａ９）  オルニチン誘導体導入ＣＳの遊離試験  
化合物ｘｉｉｉを５ｍｇ／３０ｍＬ（０．０５ｗ／ｗ％）となるよう各ｐＨの緩衝液に溶解したのち、３６℃恒温槽中で１週間加温し、その間の薬物遊離率を上記と同様に評価した。評価結果を以下に示す。【０２１９】
【表１０】
2015005459.tif 000011
【０２２０】
化合物ｘｉｉｉでは、遊離速度はｐＨ７．４の時に１．８％／日、ｐＨ８．０の時に３．３％／日であった。【０２２１】
（試験例Ａ１０）  ベタメタ−ＣＳのリリース
化合物ｘｘｉを５ｍｇ／３０ｍＬ（０．０５ｗ／ｗ％）となるよう各ｐＨの緩衝液に溶解したのち、３６℃恒温槽中で１週間加温し、その間の薬物遊離率を上記と同様に評価した。評価結果を以下に示す。【０２２２】
【表１１】
2015005459.tif 000012
【０２２３】
遊離速度はｐＨ７．４の時に２．７％／日、ｐＨ８．０の時に３．９％／日であった。【０２２４】
（試験例Ａ１１）  ＣＳ−βＡｌａ−Ｐｒｅｄのリリースデータ
化合物ｘｉｖを５ｍｇ／３０ｍＬ（０．０５ｗ／ｗ％）となるよう各ｐＨの緩衝液に溶解したのち、３６℃恒温槽中で１週間加温し、その間の薬物遊離率を上記と同様に評価した。評価結果を以下に示す。【０２２５】
【表１２】
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【０２２６】
遊離速度はｐＨ７．４の時に２．３％／日、ｐＨ８．０の時に５．４％／日であった。【０２２７】
＜ｉｎ  ｖｉｖｏ評価＞
（試験例Ｂ１）正常ラットにおける薬物の肺組織中残留性ならびに血中動態評価
Ｂ１−１．肺組織中残留性評価
試験物質には、化合物ｉａを用い、薬剤濃度が３ｍｇ／ｍＬとなるよう、リン酸緩衝生理塩化ナトリウム液に溶解したものを用いた。また、対照にはリン酸ベタメタゾンを用い、濃度が３ｍｇ／ｍＬとなるようリン酸緩衝生理塩化ナトリウム液に懸濁したものを用いた。
試験には、ＢＮ／ＣｒｌＣｒｌｊラット（日本チャールス・リバー株式会社、５週齢）を用い、全身麻酔下で背位固定し、気管内投与用ゾンデ（ＭｉｃｒｏＳｐｒａｙｅｒ(R)Ａｅｒｏｓｏｌｉｚｅｒ  Ｍｏｄｅｌ  ＩＡ−１Ｂ、Ｐｅｎｎ−Ｃｅｎｔｕｒｙ製）を用いて１００μＬの用量で気管内投与した。全身麻酔は、イソフルランによる吸入麻酔（濃度３．０％、流量２．０Ｌ／ｍｉｎ）を用いた。
試験物質投与後、４、２４、４８、７２及び１６８時間にペントバルビタール麻酔下で肺組織を採取した。肺組織は重量を測定した後、ギ酸アンモニウム水溶液（ｐＨ６．０）：メタノール（３：２，ｖ／ｖ）を４０倍量の割合（１ｇ：４０ｍＬ）で加え、ホモジナイザーを用いて、氷冷下で約１分間ホモジネートした。続いて得られた肺組織ホモジネートを、クロロホルム・メタノール抽出した後、液体クロマトグラフ−タンデム質量分析計を用いて、肺組織中の遊離ベタメタゾン含量を測定した。なお、評価時点毎にｎ＝３にて実施した。【０２２８】
得られたベタメタゾン含量より、薬物動態パラメータを算出した。各薬物動態パラメータは平均肺組織中含量推移より算出した。平均肺組織中含量は、測定値が定量下限値未満の個体があった場合、０を代入して算出した。ＡＵＣ０−ｔ算出における時間ｔ（ｈｒ）は、定量可能な最終時点とした。なお、薬物動態パラメータの算出にはＷｉｎＮｏｎｌｉｎ  Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ(R)  Ｖｅｒ  ５．２．１のＮｏｎ−ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｍｏｄｅｌ解析を用いた。
比較として、化合物ｉａの代わりにベタメタゾン単剤を用いた場合についても同様にして評価した。結果を図２及び下表に示した。【０２２９】
【表１３】
2015005459.tif 000014
【０２３０】
正常ラットに化合物ｉａを気管内投与した際、最終評価時点である投与後１６８時間まで、肺組織中においてベタメタゾンの曝露が認められた。一方、ベタメタゾン単剤は、投与後４８時間までしか曝露は認められなかった（定量下限値：１０ｎｇ／ｇ）。正常ラットに化合物ｉａを気管内投与後のベタメタゾンの消失半減期は、１２８．０時間であった。一方、ベタメタゾン単剤を気管内投与した際の肺組織中ベタメタゾン含量の消失半減期は、８．７時間であった。【０２３１】
Ｂ１−２．血中動態評価
次に、薬物の血漿中濃度推移について評価を行った。
化合物ｉａおよびベタメタゾン投与後０．５、１、２、４、８、２４、４８、７２及び１６８時間に、ヘパリン処理した２７Ｇの注射針付きのディスポーザブル・シリンジを用いて頸静脈より３００μＬ採血し、血液を速やかに遠心分離（１８００×ｇ、４℃、１５ｍｉｎ）して、得られた血漿１００μＬに９００μＬのギ酸アンモニウム水溶液（ｐＨ６．０）：メタノール混合溶液（１：２，ｖ／ｖ）を添加し、撹拌した。これをクロロホルム・メタノール抽出した液を、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳにて測定した。
（薬物動態パラメータ）
得られた血漿中ベタメタゾン濃度より、薬物動態パラメータを算出した。各薬物動態パラメータは平均血漿中含量推移より算出した。平均血漿中濃度は、測定値が定量下限値未満（＜５ｎｇ／ｍＬ）の個体があった場合、０を代入して算出した。なお、薬物動態パラメータの算出にはＷｉｎＮｏｎｌｉｎ  Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ  Ｖｅｒ  ５．２．１のＮｏｎ−ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｍｏｄｅｌ解析を用いた。結果を図３及び下表に示した。【０２３２】
【表１４】
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【０２３３】
ベタメタゾン単剤は投与後速やかに血漿中濃度が上昇した後に漸減し、２４時間後以降では定量下限値を下回る結果となったのに対し、化合物ｉａでは緩やかに血漿中濃度が上昇した後、４８時間に渡り、安定した血漿中濃度を維持していた。【０２３４】
（試験例Ｂ２）ラット抗原誘発喘息モデルに対するベタメタゾン導入ＣＳの効果
試験物質は、陰性対照としてリン酸緩衝生理食塩水、陽性対照として０．６ｍｇ／ｍＬのプレドニゾロン懸濁液を用い、２．５％の化合物ｉａ水溶液ならびに３ｍｇ／ｍＬベタメタゾン懸濁液を用いた。
評価には、ＢＮ／ＣｒｌＣｒｌｊラット（日本チャールス・リバー株式会社、５週齢）を用い、卵白アルブミン含有水酸化アルミニウムゲル（１ｍｇ／ｍＬ）１ｍＬの腹腔内投与を１日おきに３回行い、１回目の感作を実施した後、１４日後に再び卵白アルブミン含有水酸化アルミニウムゲル（１ｍｇ／ｍＬ）を１ｍＬ腹腔内に投与し、２回目の感作を実施した。２回目の感作から７日後に、卵白アルブミン含有生理食塩溶液（１０ｍｇ／ｍＬ）をネブライザーで１日おきに５回吸入曝露させ、喘息を惹起した。【０２３５】
リン酸緩衝生理食塩水、化合物ｉａ水溶液およびベタメタゾン懸濁液の投与は、ラットを全身麻酔下で背位固定し、気管内投与用ゾンデ（ＭｉｃｒｏＳｐｒａｙｅｒ(R)Ａｅｒｏｓｏｌｉｚｅｒ  Ｍｏｄｅｌ  ＩＡ−１Ｂ、Ｐｅｎｎ−Ｃｅｎｔｕｒｙ製）を用いて１００  μＬの用量で気管内投与した。全身麻酔はイソフルランの吸入麻酔（濃度３．０％、流量２．０Ｌ／ｍｉｎ）を用いた。
０．６ｍｇ／ｍＬプレドニゾロン懸濁液は、無麻酔下で経口投与用ゾンデを用いてプレドニゾロン量として３ｍｇ／ｋｇとなるよう、経口投与した。【０２３６】
リン酸緩衝生理食塩水、化合物ｉａ水溶液およびベタメタゾン懸濁液は喘息惹起の２日前（評価時点の７日前）に１回のみ、プレドニゾロン懸濁液は喘息惹起前３０分毎に５回（最後の投与は評価時点の前日）投与した。なお、試験はｎ＝６〜１２にて実施した。【０２３７】
５回目の曝露から２４時間後に、ペントバルビタール麻酔下で、３７℃に加温した０．１％ウシ血清アルブミン含有リン酸緩衝生理食塩水２ｍＬをラットの気管内に注入・回収した。これを５回繰り返し、気管支肺胞洗浄液とした。気管支肺胞洗浄液を２００ｘｇ、室温で３分間、遠心した後、上清を廃棄し、ペレットを５００μＬの０．１％ウシ血清アルブミン含有リン酸緩衝生理食塩水で再懸濁した。
次いで懸濁液の塗抹標本を作製し、Ｄｉｆｆ−Ｑｕｉｋ染色した後、細胞分別を行い、白血球に占める好酸球の割合を算出した。気管支肺胞洗浄液中の白血球数と積算し、気管支肺胞洗浄液中の好中球数を算出した。なお、気管支肺胞洗浄液中の白血球数は血球計算板を用いて測定した。結果を図４及び下表に示した。【０２３８】
【表１５】
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【０２３９】
リン酸緩衝生理食塩水投与群と比較し、ベタメタゾン投与群では投与７日後で好酸球浸潤に対する影響は認められなかったのに対し、化合物ｉａ投与群では、投与７日後でも有意に好酸球浸潤の抑制が認められ、薬理効果の持続が確認された。
すなわち、肺組織内残留性を示す本発明の多糖誘導体は、持続的な薬理作用を示すことが確認された。【０２４０】
（試験例Ｂ３）薬物動態データ
実施例５、６、２０で得られた化合物ｖａ、ｖｂ、ｖｃ、ｖｉａ、ｖｉｂ、ｘｘａ、ｘｘｂについて、（試験例Ｂ１）に記載の方法に準じて同様にして正常ラット肺組織中における残留性評価を行った。なお、評価時点は２４、７２及び１６８時間の３時点とした。結果を下表に示した。【０２４１】
【表１６】
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【０２４２】
いずれの被験物質でも１６８時間後において薬剤の残留（定量下限値：２ｎｇ／ｇ）が認められた。多糖の違い（ヒアルロン酸又はコンドロイチン硫酸）（グリコサミノグリカン又はホモグリカン）による組織残留性に大きな違いは認められなかった。ただし、同じ多糖種で比較した場合、分子量が小さい方が、大きい方よりも肺組織濃度が高値となる傾向が認められた。【０２４３】
(試験例Ｂ４)薬物動態データ
実施例５、１０、１１で得られた化合物ｖａ、ｘ、ｘｉについて、（試験例Ｂ１）に記載の方法に準じ、正常ラット肺組織中における残留性評価を行った。なお、評価時点は２４、７２及び１６８時間の３時点とした。結果を下表に示した。【０２４４】
【表１７】
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【０２４５】
いずれの被験物質でも１６８時間後において薬剤の暴露が認められ（定量下限値：２ｎｇ／ｇ）、グリシンをスペーサーに用いたものが高濃度に推移し、イソロイシンをスペーサーに用いたものが最も低い濃度で推移した、という結果となった。
また、図５に示したように、各化合物の遊離率と、投与後２４時間における遊離薬物濃度には相関性が認められた。【０２４６】
（試験例Ｂ５）薬物動態データ
実施例５、１８で得られた化合物ｖａ、ｘｖｉｉｉｂについて、（試験例Ｂ１）に記載の方法に準じ、正常ラット肺組織中における残留性評価を行った。なお、評価時点は２４、７２及び１６８時間の３時点とした。結果を下表に示した。【０２４７】
【表１８】
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【０２４８】
１６８時間後では化合物ｖａが肺組織中濃度を維持していたのに対し、化合物ｘｖｉｉｉｂは検出下限値を下回っていた。
化合物ｖａ、化合物ｘｖｉｉｉｂはいずれも水に対する溶解性は良好であるが、化合物ｖａは投与後１６８時間でも肺組織中濃度を維持しており、多糖と共有結合させることで、肺組織内残留性が向上したことが分かる。【０２４９】
（試験例Ｂ６）ＣＳとの混合物および単剤との動態データ比較
実施例５で得られた化合物ｖｂについて、（試験例Ｂ１）に記載の方法に準じ、正常ラット肺組織中における残留性評価を行った。
比較対照群として、化合物ｖｂと同量のブデソニド単剤、ならびに、化合物ｖｂと同量のブデソニドおよびコンドロイチン硫酸の混合物を投与した。なお、本測定系における、ブデソニドの検出限界下限は１ｎｇ／ｍＬであった。なお、評価時点は４、２４及び７２時間の３時点とした。結果を下表に示した。【０２５０】
【表１９】
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【０２５１】
投与後７２時間において化合物ｖｂでは肺組織中のブデソニド濃度を維持していたのに対し、ブデソニド単剤、および、ブデソニドとコンドロイチン硫酸の混合物では、いずれもブデソニドの肺組織中濃度が検出限界以下であった。【０２５２】
（試験例Ｂ７）ブデソニドの薬効用量設定
ラットＯＶＡ感作モデルにおけるブデソニド単剤の用量反応性の検討を行った。
設定用量は０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇの４用量とした。
試験系は、雄性ＢＮラットを用い、ＯＶＡ感作は、１ｍｇ／ｍＬ  ＯＶＡ含有Ａｌｕｍを腹腔内に１ｍＬ投与して行った。感作後、１０ｍｇ／ｍＬ  ＯＶＡ生理食塩溶液をネブライザーで２４時間毎に５回吸入曝露させた。試験物質は、ＯＶＡ吸入曝露４回目及び５回目の１時間前に気管内投与した。
最終曝露後２４時間に、ペントバルビタール麻酔下で、２ｍＬの０．１％ＢＳＡ含有ＰＢＳ（３７℃に加温）を気管内に投与・回収した。これを５回繰り返し、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）とした。
ＢＡＬＦは２００ｘｇ、室温で３分間、遠心した後、上清を廃棄し、ペレットを５００μＬの０．１％ＢＳＡ含有ＰＢＳ（３７℃に加温）で再懸濁した。ＢＡＬＦの塗抹標本を作製し、Ｄｉｆｆ−Ｑｕｉｋ染色した後、細胞分別を行い、白血球に占める好酸球の割合を算出した。ＢＡＬＦ中の白血球数と積算し、ＢＡＬＦ中の好中球数を算出した（白血球数は血球計算板を用いて測定した）。【０２５３】
結果を図６に示した。ブデソニド投与群では、０．１ｍｇ／ｋｇ以上の投与量で抑制作用が認められ、その作用は、用量反応性が認められたことから、試験用量は１ｍｇ／ｋｇを設定した。【０２５４】
（試験例Ｂ８）ブデソニドの薬効用量設定
（試験例Ｂ２）に準じ、ラットＯＶＡ感作モデルにおける化合物ｖａの用量反応性の検討を行った。
設定用量は、投与されるブデソニド量がそれぞれ０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇとなるよう、０．３５ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇの３用量とした。【０２５５】
結果を図７に示した。０．３５ｍｇ／ｋｇ（ブデソニド量として０．１ｍｇ／ｋｇ）の投与量でも、投与後１週間における好酸球抑制作用が認められ、その作用には、用量反応性が認められた。【０２５６】
（試験例Ｂ９）抗原誘発マウス気道過敏性モデルに対するブデソニド導入ＣＳの効果
試験物質は、比較対照として２ｍｇ／ｍＬのブデソニド懸濁液、２ｍｇ／ｍＬブデソニドと１４．６ｍｇ/ｍＬコンドロイチン硫酸の混合液を用い、１．６％の化合物ｖａ溶液を用いた。
評価には、ＢＡＬＢ／ｃＣｒＳｌｃ（日本エスエルシー株式会社、１１週齢）を用い、卵白アルブミン含有水酸化アルミニウム及び水酸化マグネシウムゲル（０．２ｍｇ／ｍＬ）０．１ｍＬの腹腔内投与を２週間の間隔で２回行い感作を実施した。２回目感作後７、８及び９日、卵白アルブミン含有生理食塩溶液（１０ｍｇ／ｍＬ）を、ネブライザーを用いて２０分間吸入曝露させた。さらに、２回目感作後１２日、卵白アルブミン含有生理食塩溶液（５０ｍｇ／ｍＬ）を、ネブライザーを用いて２０分間吸入曝露し、喘息反応を惹起させた。【０２５７】
ブデソニド懸濁液、ブデソニドとコンドロイチン硫酸の混合液及び化合物ｖａ水溶液の投与は、マウスを全身麻酔下で背位固定し、ガラス製マイクロシリンジ（イトーマイクロシリンジ、株式会社伊藤製作所製）を用いて４０μＬの用量で気管内投与した。全身麻酔はイソフルランの吸入麻酔（濃度３．０％、流量１．０Ｌ／ｍｉｎ）を用いた。投与は、単回とし、２回目の感作から６日後に行った。なお、試験はｎ＝６にて実施した。【０２５８】
気道過敏性（ＡＨＲ）の評価は、以下のように実施した。２回目感作後１３日、マウスに０、５、１０および２０ｍＭのメサコリン（以下、ＭＣｈ）を吸入させ、各濃度のメサコリン吸入後３分間における気道抵抗パラメータ（Ｐｅｎｈ）を無拘束呼吸機能測定装置（ＢＵＸＣＯ社製）を用いて測定した。Ｐｅｎｈ値のＡＵＣ値を算出し、ＭＣｈ濃度 ｖｓ ＡＵＣグラフを作成し、ＭＣｈ濃度 ｖｓ ＡＵＣグラフの指数近似式をもとに、ＡＵＣ値が生理食塩液吸入時推定値の２倍になる際のＭＣｈ濃度推定値 (ＰＣ１００:Ｐｒｏｖｏｃａｔｉｖｅ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ １００% ｉｎｃｒｅａｓｅ ｉｎ Ｐｅｎｈ) を算出した。結果を図８に示した。【０２５９】
喘息反応を惹起したＡＨＲ群で認められたＭＣｈへの感受性亢進は、化合物ｖａの評価１週間前投与により、感作のみを行い喘息反応を惹起しないｃｏｎｔｒｏｌ群程度まで抑制された。一方、ブデソニド懸濁液投与群（ＢＵＤ群）やブデソニドとコンドロイチン硫酸の混合液投与群（ＣＳ＋ＢＵＤ群）では、抑制は認められなかった（図８）。すなわち、化合物ｖａは、抗原誘発ラット喘息モデルにおける持続的抗炎症反応だけでなく、気道過敏性の亢進に対しても作用持続性を有することが確認された。【０２６０】
（試験例Ｂ１０）抗原誘発マウス鼻炎モデルに対するブデソニド導入ＣＳの効果
試験物質には２．７％の化合物ｖａ溶液を用い、陰性対照としてリン酸緩衝生理食塩水を、比較対照として４ｍｇ／ｍＬのブデソニド懸濁液を用いた。
評価には、ＢＡＬＢ／ｃＡｎＮＣｒｌＣｒｌｊマウス（日本チャールス・リバー株式会社、５週齢）を用い、卵白アルブミン含有水酸化アルミニウム及び水酸化マグネシウムゲル（０．５ｍｇ／ｍＬ）をマウスに１週間おきに３回、各２００μＬ腹腔内投与し、卵白アルブミンを感作させた。卵白アルブミン含有水酸化アルミニウム及び水酸化マグネシウムゲル最終投与後１週間から、卵白アルブミン感作マウスに卵白アルブミン生理食塩溶液（４０ｍｇ／ｍＬ）を２４時間おきに２０μＬ鼻腔内投与し、５回鼻腔感作・惹起させた。最終鼻腔感作・惹起後１日から卵白アルブミン生理食塩溶液（４０ｍｇ／ｍＬ）を２４時間おきに２０μＬ鼻腔内投与し、鼻炎反応を惹起させた。鼻炎反応の惹起は、８日間、計８回行った。【０２６１】
リン酸緩衝生理食塩水、化合物ｖａ水溶液およびブデソニド懸濁液の投与は、マウスを背位固定し、マイクロピペッターを用いて片鼻１０μＬ、両鼻２０μＬの用量で鼻腔内投与した。【０２６２】
リン酸緩衝生理食塩水、化合物ｖａ水溶液およびブデソニド懸濁液は、初回鼻炎反応惹起当日に１回のみ、卵白アルブミン含有生理食塩溶液投与の１時間前に投与した。なお、試験は基本的にｎ＝６にて実施した。【０２６３】
初回鼻炎反応惹起当日から惹起後７日まで、卵白アルブミン含有生理食塩溶液投与後１０分間の噴嚏回数を測定した。結果を図９及び１０に示した。
なお、試験物質投与後４日目及び５日目は、各試験物質投与群共に例数３で測定しており、図９に示す投与後４日目及び５日目の平均噴嚏回数は例数３の平均値でそれぞれ算出している。また、図１０に示す８日間合計の平均噴嚏回数は、投与後４日目及び５日目で測定されていないマウス（各投与群３例ずつ測定されていない）の値をゼロとして算出している。【０２６４】
リン酸緩衝生理食塩水投与群と比較し、ブデソニド投与群（ＢＵＤ群）では投与後当日では平均噴嚏回数の抑制が認められたものの、投与後１日から７日までの平均噴嚏回数の推移および８日間の合計噴嚏回数について影響は認められなかった。これに対し、化合物ｖａ投与群では、平均噴嚏回数の推移および８日間合計噴嚏回数について抑制が認められた（図９及び１０）。ただし、投与後５日目以降は、鼻炎モデルの症状が低下したため、対照群と化合物ｖａ投与群との明確な差は得られなかった。以上から薬理効果の持続が確認された。
すなわち、本発明の多糖誘導体は、持続的な薬理作用を示すことが確認された。【０２６５】
日本国特許出願２０１３−１４４３６４号（出願日：２０１３年７月１０日）及び日本国特許出願２０１３−１４４３６５号（出願日：２０１３年７月１０日）の開示はその全体が参照により本明細書に取り込まれる。
本明細書に記載された全ての文献、特許出願、及び技術規格は、個々の文献、特許出願、及び技術規格が参照により取り込まれることが具体的かつ個々に記された場合と同程度に、本明細書に参照により取り込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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