【手続補正書】
【提出日】平成24年5月7日(2012.5.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
＜２＞本発明の水性洗浄料の必須成分であるカチオン性高分子
本発明の水性洗浄料は、前記水性洗浄料基剤に加えて、カチオン性高分子を必須成分として含有することを特徴とする。カチオン性高分子化合物としては、塩化ジメチルジアリルアンモニウム等のジメチルジアリルアンモニウムハライドのホモポリマー、塩化ジメチルジアリルアンモニウム・アクリルアミド共重合体、塩化ジメチルジアリルアンモニウム・アクリルアミド・アクリル酸３次元共重合体等、またこれらのものと他のモノマーとの共重合体、塩化Ｏ−［２−ヒドロキシ−３−（トリメチルアンモニオ）プロピル］ヒドロキシエチルセルロース、メタクリロイルエチルベタイン・メタクリル酸エステル共重合体、カチオン化グアーガム、デキストラン塩化ヒドロキシプロピルトリメチルアンモニウムエーテル等のカチオン化デキストラン、カチオン化プルラン、四級化ビニルピロリドン−アミノエチルメタクリレート共重合体、ポリエチレンイミン、ジプロピレントリアミン縮合物、アジピン酸ジメチル−アミノヒドロキシプロピルジエチルトリアミン共重合体、第四級窒素含有スターチ等が挙げられる。加えて、加水分解ケラチン、加水分解シルク、加水分解コラーゲン、加水分解小麦、カチオン化加水分解ケラチン、カチオン化加水分解シルク、カチオン化加水分解コラーゲン、カチオン化加水分解小麦、シリコーン化加水分解コラーゲン、シリコーン化加水分解シルクのタンパク加水分解にカチオン基を導入したもの等も好ましく例示できる。この中でも、塩化ジメチルジアリルアンモニウム・アクリルアミド共重合体、メタクリロイルエチルベタイン・メタクリル酸エステル共重合体、塩化Ｏ−［２−ヒドロキシ−３−（トリメチルアンモニオ）プロピル］ヒドロキシエチルセルロース、カチオン化グアーガムが好ましい。かかる成分は、本発明の水性洗浄料においては、過脂成分として、洗浄後に皮膚を保湿する作用を発現する。この様な効果を奏するためには、かかるカチオン性高分子は、これらの１種乃至は２種以上を、総量で、水性洗浄料全量に対して、０．０１〜５質量％含有することが好ましく、０．０５〜３質量％含有することがより好ましい。かかる成分の前記の量範囲の添加は、本発明の水性洗浄料の剤形においては、泡立ちを抑制しない。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
本発明の水性洗浄料の洗浄特性における特徴は、本発明の水性洗浄基剤の基本的特徴を踏襲しており、優れた起泡性を有することを特徴とする。かかる起泡性は石けんの電離を阻害するカチオン性高分子によっても抑制されず、優れた洗浄性を有する。前述の成分以外に、本発明の水性洗浄料の、洗浄効果を高める成分を含有することが好ましい。この様な成分としては、例えば、角層細胞に蓄積したＡＧＥｓ（アドバンスド・グリケーション・エンドプロダクツ）を分解し、皮膚のみずみずしさやハリ感を水性洗浄によって取り戻させるＡＧＥｓ分解剤である。このようなＡＧＥｓ分解剤の分解能は、採取された角層中におけるＡＧＥｓの存在量を化学的又は生化学的分析方法等により測定し、検体の投与によって、残存するＡＧＥｓを測定することによって、定量的に評価することが出来る。前述の如く、角層中におけるＡＧＥｓを測定するための角層標本は、採取された角層をそのまま角層標本として皮膚状態の評価に使用することも出来るし、採取された角層を媒体等に転写するなどして作製された角層標本を、皮膚状態の評価に使用することも出来る。ここで、角層を採取する方法の一例を挙げれば、市販の粘着テ−プ等を利用し、頬部よりテ−プストリッピングにより採取した角層をスライドグラスに転写することにより、皮膚状態を評価するための角層標本を作製することが出来る。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
本発明における採取された角層標本を用い角層中におけるＡＧＥｓの存在量を測定する方法としては、得られた角層標本をホモジネ−トし、これによりＡＧＥｓを抽出して、これを高速液体クロマトグラフ法などの化学的分析方法、又は、角層中におけるＡＧＥｓを特異的に認識する抗体を利用した直接又は間接法による免疫組織染色方法等の生化学的分析方法の何れかを単独で用いることも出来るし、それらを組み合わせて用いることも出来る。これらの内、ＡＧＥｓを特異的に認識する抗体によりＡＧＥｓを標識した後、発色試薬を用いて染色する免疫組織染色方法による生化学的分析方法を用いることが好ましい。具体的には、免疫組織染色方法に用いる一次抗体としては、Anti AGE monoclonal antibody（mouse、TransGenic社製）、二次抗体としては、Biotin−Rabbit Anti Mouse IGg conjugate、ZYMED社製）を用い、二次抗体を認識するABC試薬（Ｒ.Ｔ.Ｕ  ＶＥＣＴＡＳＴＡＩＮ社製）、さらには、発色試薬として、ＡＥＣ基質を反応させ、免疫組織染色することが好適に例示出来る。また、前記の一次抗体以外に、一次抗体としてCML（carboxy methyl lysine、TransGenic社製）及びペントシジン（TransGenic社製）、二次抗体として、蛍光ビオチンやFITC標識抗体等を使用することも可能である。顕微鏡で２０〜５０倍に観察されたこの染色されたＡＧＥｓである拡大イメージ画像をデジタル式のマイクロスコープ等を利用して、コンピュータに取り込み、汎用的画像解析のソフトウェアを用いて、手動又は自動処理を行い、ＡＧＥｓを定量化できる。デジタル式のマイクロスコープとしては、例えば、(株)モリテックスのコスメティック用マイクロスコープ、汎用的画像解析のソフトウェアとしては、例えば、三谷商事(株)のＷｉｎＲＯＯＦ（登録商標）が例示できる。画像処理は、一般的な手法によって行えばよく、例えば、ＡＧＥｓの拡大イメージ画像であるカラー画像をモノクロ濃淡画像に変換後、該モノクロ画像に必要に応じてフィルター処理後二値化処理を行い、統計処理によってＡＧＥｓの存在割合に相関する染色部総面積を算出すればよい。この被染色面積が検体の投与により減じれば該検体はＡＧＥｓ分解剤として定義できる。ここで、減じるとは、当初の面積よりも１０％以上少なくなった場合に減じると定義できる。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
＜製造例１＞
マメ科レンゲ属レンゲソウの地上部を集め、かかる植物体１質量部に対して、５質量部の５０％エタノール水溶液を加えて、攪拌下２時間加熱還流し、室温まで放冷した後、不溶分を濾過により取り除いた。濾液を減圧濃縮した後、凍結乾燥に付し、アモルファス状の凍結乾燥物を得た。これを水に分散させてイオン交換樹脂である、「ダイアイオンＨＰ２０」を充填したカラムに流し、カラム容量の１０倍の水を流して洗浄した後、エタノールを流して洗い出し、これを減圧濃縮しＡＧＥｓ分解剤１を得た。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
＜評価例＞
３０歳代の有志の男性の前腕内側部に２ｃｍ×４ｃｍの部位を５つ設け、１つの部位に１種類のＡＧＥｓ分解剤の１質量％エタノール溶液を１日１回４０μＬを３０日連続して投与した。１部位はコントロールとしてエタノールを投与した。最終投与の２４時間後に、部位より角層細胞をテープストリッピングで採取し、角層中のＡＧＥｓを次のようにして検出した。角層細胞のサンプルは、キシレンを溶剤として、溶剤で半日処理して粘着テープ部分を除去する。得られた角層に対して免疫組織染色を行い、染色された角層標本を顕微鏡下で観察した。免疫組織染色の条件として、一次抗体(anti AGE monocronal antibody(mouse) TransGenic KH001)を用い、ＡＧＥｓと結合させ、ビオチン化２次抗体(Biotin-Rabbit Anti Mouse IgG conjugate ZYMED 81-6740)、ABC 試薬(R.T.U VECTASTAIN Elite ABC REAGENT BECTOR PK-7100)、AEC基質(ENVISION kit/HRP(AEC) Dako K3464)を用いて一次抗体を赤く発色させた。これをマイクロスコープで画像として取り込み、画像処理を行い、二値化し、被染色部分のコントロール部位に対する減少率を算出した。結果を次に示す。これより、前記ＡＧＥｓ分解剤１〜４はＡＧＥｓ分解剤としての性格を有していたことが確認できた。