(57)【要約】Ｋｅａｐ１／Ｎｒｆ２／ＡＲＥシグナル伝達経路を活性化することにより、抗炎症作用や細胞保護作用を示す新規なテルペノイド誘導体の提供。    下記式（Ｉ）：  【化１】2014148455.tif 000045で表されるテルペノイド誘導体Ａ。
2014148455.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）：  
【化１】
2014148455.tif 000033
で表されるテルペノイド誘導体。
【請求項２】
下記の物理化学的性状を有するテルペノイド誘導体：
１）物質の性状：無色粉末状物質
２）分子式：Ｃ３２Ｈ４３ＮＯ６
３）分子量：５３７（ＥＳＩマススペクトル法により測定）
４）高分解能ＬＣ−ＥＳＩマススペクトル法により測定した精密質量、［Ｍ＋Ｈ］＋は次に示す通りである。
実測値：５３８．３１５４９
計算値：５３８．３１６３１
５）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：０．９２（３Ｈ，ｓ），１．０８（３Ｈ，ｓ），１．１２（３Ｈ，ｓ），１．１４−１．１７（１Ｈ，ｍ），１．１９（３Ｈ，ｓ），１．２２−１．２４（１Ｈ，ｍ），１．１８−１．２５（１Ｈ，ｍ），１．２８（３Ｈ，ｓ），１．２８（３Ｈ，ｓ），１．４６−１．４８（１Ｈ，ｍ），１．４８−１．５２（１Ｈ，ｍ），１．５０−１．５４（１Ｈ，ｍ），１．５９−１．６７（２Ｈ，ｍ），１．６２−１．６６（１Ｈ，ｍ），１．６４−１．６７（１Ｈ，ｍ），１．７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ），１．８０−１．８３（１Ｈ，ｍ），１．８５−１．８７（２Ｈ，ｍ），１．９８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，４．５Ｈｚ），２．９５（１Ｈ，ｓ），２．９８（１Ｈ，ｂｒｓ），３．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ），３．７０（３Ｈ，ｓ），３．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ），４．３４（１Ｈ，ｓ），６．１１（１Ｈ，ｓ）ｐｐｍ
６）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：１８．５（ｔ），２１．１（ｑ），２１．６（ｑ），２３．０（ｑ），２４．０（ｑ），２４．１（ｔ），２７．３（ｑ），２８．２（ｑ），２８．６（ｔ），２９．６（ｔ），３１．０（ｄ），３１．５（ｔ），３１．６（ｔ），３２．４（ｔ），３５．７（ｓ），４１．２（ｓ），４２．３（ｓ），４２．８（ｄ），４５．３（ｓ），４５．８（ｓ），４７．１（ｓ），４９．６（ｄ），５２．３（ｑ），５３．５（ｓ），６７．６（ｔ），６９．３（ｄ），１１３．７（ｓ），１２４．８（ｄ），１６９．８（ｓ），１７８．０（ｓ），１９９．６（ｓ），２０２．５（ｓ）ｐｐｍ
７）高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＫ−Ｃ１８  
（直径４．６ｍｍ×長さ７５ｍｍ：インタクト（株）製）
溶  媒：Ａ：０．０１％ギ酸含有１０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液
Ｂ：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル
Ａ／Ｂ＝４５／５５ のアイソクラティック
流  速：１．０ｍｌ／分
温  度：４０℃
検  出：紫外部吸収  λ２３０ｎｍ
保持時間：５．８分。
【請求項３】
下記式（ＩＩ）  
【化２】
2014148455.tif 000034
で表されるテルペノイド誘導体。
【請求項４】
下記の物理化学的性状を有するテルペノイド誘導体：
１）物質の性状：無色粉末状物質
２）分子式：Ｃ３２Ｈ４３ＮＯ６
３）分子量：５３７（ＥＳＩマススペクトル法により測定）
４）高分解能ＬＣ−ＥＳＩマススペクトル法により測定した精密質量、［Ｍ＋Ｈ］＋は次に示す通りである。
実測値：５３８．３１５７３
計算値：５３８．３１６３１
５）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：０．９９（３Ｈ，ｓ），０．９９（３Ｈ，ｓ），１．０６（３Ｈ，ｓ），１．１２（３Ｈ，ｓ），１．１９（３Ｈ，ｓ），１．１９−１．２２（１Ｈ，ｍ），１．２７（３Ｈ，ｓ），１．２７（３Ｈ，ｓ），１．２９−１．３５（２Ｈ，ｍ），１．４５−１．４９（１Ｈ，ｍ），１．６２−１．６６（１Ｈ，ｍ），１．５８−１．６７（２Ｈ，ｍ），１．６４−１．６９（１Ｈ，ｍ），１．７２−１．７５（１Ｈ，ｍ），１．６９−１．７９（１Ｈ，ｍ），１．８８（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，３．０Ｈｚ），１．９６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，４．５Ｈｚ），２．９７（１Ｈ，ｓ），３．０４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，４．５Ｈｚ），３．４９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，５．０Ｈｚ），３．７０（３Ｈ，ｓ），４．３４（１Ｈ，ｓ），６．０８（１Ｈ，ｓ）ｐｐｍ
６）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：１６．６（ｑ），１８．５（ｔ），２１．６（ｑ×２），２３．０（ｑ），２４．０（ｑ），２４．１（ｔ），２８．２（ｑ），２８．４（ｔ），２９．３（ｑ），３１．３（ｄ），３１．６（ｄ），３６．１（ｔ），３６．２（ｓ），４０．４（ｔ），４１．１（ｓ），４２．２（ｓ），４２．８（ｄ），４５．３（ｓ），４５．８（ｓ），４９．１（ｓ），４９．３（ｄ），５２．３（ｓ），５３．４（ｓ），６９．２（ｄ），７３．９（ｔ），１１３．７（ｓ），１２５．０  （ｄ），１６８．９（ｓ），１７６．８（ｓ），１９８．９（ｓ），２０２．５（ｓ）ｐｐｍ
７）高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＫ−Ｃ１８  
（直径４．６ｍｍ×長さ７５ｍｍ：インタクト（株）製）
溶  媒：Ａ：０．０１％ギ酸含有１０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液
Ｂ：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル
Ａ／Ｂ＝４５／５５のアイソクラティック
流  速：１．０ｍｌ／分  
温  度：４０℃
検  出：紫外部吸収  λ２３０ｎｍ
保持時間：３．８分。
【請求項５】
下記式（ＩＩＩ）  
【化３】
2014148455.tif 000035
で表されるテルペノイド誘導体。
【請求項６】
下記の物理化学的性状を有するテルペノイド誘導体：
１）物質の性状：無色粉末状物質
２）分子式：Ｃ３２Ｈ４１ＮＯ６
３）分子量：５３５（ＥＳＩマススペクトル法により測定）
４）高分解能ＬＣ−ＥＳＩマススペクトル法により測定した精密質量、［Ｍ＋Ｈ］＋は次に示す通りである。
実測値：５３６．３００２３
計算値：５３６．３００６６
５）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：１．０４（３Ｈ，ｓ），１．０５（３Ｈ，ｓ），１．１３（３Ｈ，ｓ），１．１９（３Ｈ，ｓ），１．２０−１．２６（１Ｈ，ｍ），１．３０（ｍ，３Ｈ），１．２９（３Ｈ，ｓ），１．３３（３Ｈ，ｓ），１．４７−１．５０（１Ｈ，ｍ），１．６３−１．６８（２Ｈ，ｍ），１．５９−１．６８（２Ｈ，ｍ），１．６５−１．６７（１Ｈ，ｍ），１．６４−１．７３（２Ｈ，ｍ），１．７１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ），１．９８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ），２．０３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．０Ｈｚ，３．５Ｈｚ），２．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４．５Ｈｚ），２．８５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４．５Ｈｚ），３．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ），３．３８（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ），３．７４（３Ｈ，ｓ），４．３４（１Ｈ，ｓ），６．１２（１Ｈ，ｓ）ｐｐｍ
６）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：１８．４（ｔ），２１．６（ｑ×２），２３．０（ｑ），２４．１（ｑ×２），２５．５（ｑ），２５．６（ｔ），２８．２（ｑ），２８．３（ｔ），３１．５（ｔ），３１．７（ｄ），３７．４（ｔ），４１．２（ｓ），４２．１（ｓ），４２．８（ｄ），４５．３（ｓ），４５．６（ｓ），４５．９（ｓ），４７．０（ｔ），４９．１（ｄ），５１．１（ｓ），５２．７（ｑ），５３．４（ｓ），６９．２（ｄ），１１３．７（ｓ），１２４．８（ｄ），１６９．４（ｓ），１７５．５（ｓ），１９８．５（ｓ），２０２．４（ｓ），２１３．４（ｓ）ｐｐｍ
７）高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＫ−Ｃ１８  
（直径４．６ｍｍ×長さ７５ｍｍ：インタクト（株）製）
溶  媒：Ａ：０．０１％ギ酸含有１０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液
Ｂ：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル
Ａ／Ｂ＝４５／５５ のアイソクラティック
流  速：１．０ｍｌ／分
温  度：４０℃
検  出：紫外部吸収  λ２３０ｎｍ
保持時間：６．２分。
【請求項７】
下記式（ＩＶ）：  
【化４】
2014148455.tif 000036
で表されるテルペノイド誘導体。
【請求項８】
下記の物理化学的性状を有するテルペノイド誘導体：
１）物質の性状：無色粉末状物質
２）分子式：Ｃ３２Ｈ４３ＮＯ６
３）分子量：５３７（ＥＳＩマススペクトル法により測定）
４）高分解能ＬＣ−ＥＳＩマススペクトル法により測定した精密質量、［Ｍ＋Ｈ］＋は次に示す通りである。
実測値：５３８．３１５９２
計算値：５３８．３１６３１
５）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：１．０５（３Ｈ，ｓ），１．１１（３Ｈ，ｓ），１．１５（３Ｈ，ｓ），１．２２（３Ｈ，ｓ），１．２５−１．２７（１Ｈ，ｍ），１．２７−１．２９（１Ｈ，ｍ），１．３０（３Ｈ，ｓ），１．３０（３Ｈ，ｓ），１．４０（１Ｈ，ｂｒｔ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ），１．４８−１．５２（１Ｈ，ｍ），１．５０−１．５４（１Ｈ，ｍ），１．５８−１．６０（１Ｈ，ｍ），１．６０−１．６３（１Ｈ，ｍ），１．６２−１．７１（２Ｈ，ｍ），１．６６−１．７０（１Ｈ，ｍ），１．６９−１．７３（１Ｈ，ｍ），１．７６−１．８２（１Ｈ，ｍ），１．９０−１．９４（１Ｈ，ｍ），１．９３−１．９９（１Ｈ，ｍ），２．０１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１０．０Ｈｚ），３．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．５  Ｈｚ），３．１２（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１３．５  Ｈｚ），３．３２（３Ｈ，ｓ），３．７４（３Ｈ，ｓ），４．３６（１Ｈ，ｓ），６．１１（１Ｈ，ｓ）ｐｐｍ
６）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：１８．３（ｔ），１８．７（ｑ），２１．４（ｑ），２１．５（ｑ），２２．７（ｔ），２２．８（ｑ），２３．９（ｑ），２８．０（ｑ），２８．２（ｔ），２８．７（ｔ），３０．１（ｔ），３０．８（ｄ），３１．４（ｔ），３２．０（ｔ），３５．８（ｓ），４０．９（ｓ），４２．０（ｓ），４２．５（ｄ），４５．１（ｓ），４５．６（ｓ），４７．４（ｓ），４９．６（ｄ），５２．０（ｑ），５３．２（ｓ），６９．１（ｄ），７４．２（ｔ），１１３．６（ｓ），１２４．８（ｄ），１６８．７（ｓ），１７８．０（ｓ），１９８．７（ｓ），２０２．４（ｓ）ｐｐｍ
７）高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＫ−Ｃ１８  
（直径４．６ｍｍ×長さ７５ｍｍ：インタクト（株）製）
溶  媒：Ａ：０．０１％ギ酸含有１０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液
Ｂ：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル
Ａ／Ｂ＝５／５で平衡化したのちＡ／Ｂ＝１／９まで７分間の直線グラジエント
流  速：１．０ｍｌ／分
温  度：４０℃
検  出：紫外部吸収  λ２３０ｎｍ
保持時間：５．２分。
【請求項９】
下記式（Ｖ）：  
【化５】
2014148455.tif 000037
で表されるテルペノイド誘導体。
【請求項１０】
下記の物理化学的性状を有するテルペノイド誘導体：
１）物質の性状：無色粉末状物質
２）分子式：Ｃ３１Ｈ４２Ｎ２Ｏ５
３）分子量：５２２（ＥＳＩマススペクトル法により測定）
４）高分解能ＬＣ−ＥＳＩマススペクトル法により測定した精密質量、［Ｍ＋Ｈ］＋は次に示す通りである。
実測値：５２３．３１６１６
計算値：５２３．３１６６５
５）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：０．９５（３Ｈ，ｓ），１．０３（３Ｈ，ｓ），１．１０（３Ｈ，ｓ），１．１３（３Ｈ，ｓ），１．１９（３Ｈ，ｓ），１．２６−１．３０（１Ｈ，ｍ），１．２８−１．３０（１Ｈ，ｍ），１．２８（３Ｈ，ｓ），１．３４（３Ｈ，ｓ），１．３５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ），１．４８−１．５２（１Ｈ，ｍ），１．５７−１．６０（１Ｈ，ｍ），１．６０−１．６８（２Ｈ，ｍ），１．６４−１．６８（１Ｈ，ｍ），１．６５−１．６９（１Ｈ，ｍ），１．７２−１．７４（１Ｈ，ｍ），１．７９−１．８１（１Ｈ，ｍ），１．９７−１．９９（１Ｈ，ｍ），１．９８−２．００（１Ｈ，ｍ），２．９２（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ），３．４２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．０  Ｈｚ），３．９０（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝１０．０  Ｈｚ），４．３４（１Ｈ，ｓ），６．０８（１Ｈ，ｓ）ｐｐｍ
６）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：１７．４（ｔ），１８．３（ｔ），２１．４（ｑ），２１．５（ｑ），２２．８（ｑ），２４．０（ｑ），２４．２（ｑ），２７．７（ｔ），２８．０（ｑ），３１．１．（ｓ），３１．４（ｔ），３１．８（ｄ），３３．２（ｑ），３５．６（ｔ），４０．９（ｓ），４２．５８（ｄ），４２．６２（ｓ），４３．８（ｔ），４５．１（ｓ），４５．８（ｓ），４９．２（ｄ），５１．６（ｓ），５３．３（ｓ），６９．１（ｄ），７１．０（ｄ），１１３．６（ｓ），１２４．８（ｄ），１６８．７（ｓ），１７８．７（ｓ），１９８．８（ｓ），２０２．３（ｓ）ｐｐｍ
７）高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＫ−Ｃ１８  
（直径４．６ｍｍ×長さ７５ｍｍ：インタクト（株）製）
溶  媒：Ａ：０．０１％ギ酸含有１０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液
Ｂ：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル
Ａ／Ｂ＝５／５で平衡化したのちＡ／Ｂ＝１／９まで７分間の直線グラジエント
流  速：１．０ｍｌ／分
温  度：４０℃
検  出：紫外部吸収  λ２３０ｎｍ
保持時間：３．２分。
【請求項１１】
下記式（ＶＩ）：  
【化６】
2014148455.tif 000038
で表されるテルペノイド誘導体。
【請求項１２】
下記の物理化学的性状を有するテルペノイド誘導体：
１）物質の性状：無色粉末状物質
２）分子式：Ｃ３１Ｈ４０Ｎ２Ｏ４
３）分子量：５０４（ＥＳＩマススペクトル法により測定）
４）高分解能ＬＣ−ＥＳＩマススペクトル法により測定した精密質量、［Ｍ＋Ｈ］＋は次に示す通りである。
実測値：５０５．３０５５１
計算値：５０５．３０６０８
５）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：０．９９８（３Ｈ，ｓ），１．００１（３Ｈ，ｓ），１．０６（３Ｈ，ｓ），１．１４（３Ｈ，ｓ），１．２０（３Ｈ，ｓ），１．３０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ），１．３２（３Ｈ，ｓ），１．３６（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１２．５Ｈｚ），１．５０（３Ｈ，ｓ），１．５４−１．５８（１Ｈ，ｍ），１．６４−１．６９（１Ｈ，ｍ），１．６８−１．７０（２Ｈ，ｍ），１．７０−１．７３（１Ｈ，ｍ），１．７４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１３．５Ｈｚ），１．９７−２．０１（１Ｈ，ｍ），２．００−２．０３（１Ｈ，ｍ），１．９９−２．１１（２Ｈ，ｍ），２．０７（１Ｈ，ｂｒｔ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ），２．８０（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１３．５Ｈｚ），３．２６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．４５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１２．０Ｈｚ），４．３４（１Ｈ，ｓ），６．１４（１Ｈ，ｓ）ｐｐｍ
６）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：１６．３（ｑ），１８．２（ｔ），２１．３６（ｑ），２１．３８（ｑ），２２．８（ｑ），２４．３（ｑ），２５．１（ｔ），２８．０（ｑ），２８．３（ｔ），２９．０（ｑ），３１．４（ｔ），３３．７（ｄ），３５．０（ｔ），３５．９（ｓ），３９．５（ｔ），３９．７（ｓ），４１．０（ｓ），４２．１（ｓ），４２．５（ｄ），４５．１（ｓ），４５．８（ｓ），４９．３（ｄ），５３．２（ｓ），６８．９（ｄ），７２．４（ｄ），１１３．５（ｓ），１２３．５（ｓ），１２４．５（ｄ），１６９．６（ｓ），１９７．５（ｓ），２０２．１（ｓ）ｐｐｍ
７）高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＫ−Ｃ１８  
（直径４．６ｍｍ×長さ７５ｍｍ：インタクト（株）製）
溶  媒：Ａ：０．０１％ギ酸含有１０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液
Ｂ：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル
Ａ／Ｂ＝５／５で平衡化したのちＡ／Ｂ＝１／９まで７分間の直線グラジエント
流  速：１．０ｍｌ／分
温  度：４０℃
検  出：紫外部吸収  λ２３０ｎｍ
保持時間：４．２分。
【請求項１３】
下記式（ＶＩＩ）：    
【化７】
2014148455.tif 000039
で表されるテルペノイド誘導体。
【請求項１４】
下記の物理化学的性状を有するテルペノイド誘導体：
１）物質の性状：無色粉末状物質
２）分子式：Ｃ３１Ｈ４０Ｎ２Ｏ３
３）分子量：４８８（ＥＳＩマススペクトル法により測定）
４）高分解能ＬＣ−ＥＳＩマススペクトル法により測定した精密質量、［Ｍ＋Ｈ］＋は次に示す通りである。
実測値：４８９．３１０７３
計算値：４８９．３１１１７
５）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：０．９９６（３Ｈ，ｓ），０．９９７（３Ｈ，ｓ），０．９９８（３Ｈ，ｓ），１．１９（３Ｈ，ｓ），１．２７（３Ｈ，ｓ），１．２８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１４．０Ｈｚ），１．３６（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１３．０Ｈｚ），１．５３（３Ｈ，ｓ），１．５６（３Ｈ，ｓ），１．６０−１．６４（１Ｈ，ｍ），１．６３−１．６９（１Ｈ，ｍ），１．７０−１．７４（１Ｈ，ｍ），１．７１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１４．０Ｈｚ），１．７８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１１．０Ｈｚ），１．８２−１．８６（２Ｈ，ｍ），１．９９−２．０２（１Ｈ，ｍ），１．９９−２．１０（２Ｈ，ｍ），２．０８（１Ｈ，ｂｒｔ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ），２．７９（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１３．５Ｈｚ），３．２５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．４５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１１．５Ｈｚ），６．０２（１Ｈ，ｓ），８．０３（１Ｈ，ｓ）ｐｐｍ
６）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：１６．３（ｑ），１８．２（ｔ），２１．４（ｑ），２１．５（ｑ），２４．９（ｑ），２５．１（ｔ），２６．７（ｑ），２７．０（ｑ），２８．１（ｔ），２９．０（ｑ），３１．７（ｔ），３３．６（ｄ），３４．９（ｔ），３５．９（ｓ），３９．５（ｔ），３９．６（ｓ），４２．１（ｓ），４２．６（ｓ），４５．０（ｓ），４５．９（ｓ），４７．８（ｄ），４９．３（ｄ），７２．４（ｄ），１１４．３（ｓ），１１４．７（ｓ），１２３．５（ｓ），１２３．７（ｄ），１６５．２（ｄ），１６９．４（ｓ），１９６．３（ｓ），１９７．６（ｓ）ｐｐｍ
７）高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＫ−Ｃ１８  
（直径４．６ｍｍ×長さ７５ｍｍ：インタクト（株）製）
溶  媒：Ａ：０．０１％ギ酸含有１０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液
Ｂ：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル
Ａ／Ｂ＝５／５で平衡化したのちＡ／Ｂ＝１／９まで７分間の直線グラジエント
流  速：１．０ｍｌ／分
温  度：４０℃
検  出：紫外部吸収  λ２３０ｎｍ
保持時間：３．７分。
【請求項１５】
下記式（ＶＩＩＩ）：
【化８】
2014148455.tif 000040
で表される化合物を基質とし、このものを請求項１、２、７乃至８のいずれか１項に記載の化合物に変換しうるカニングハメラ属に属する変換菌と共に培地中で培養し、その培養物より請求項１、２、７乃至８のいずれか１項に記載の化合物を採取することを特徴とする、請求項１、２、７乃至８のいずれか１項に記載の化合物の製造方法。
【請求項１６】
変換菌が、カニングハメラ属に属するカニングハメラ・エレガンス（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ  ｅｌｅｇａｎｓ）  ＳＡＮＫ  １０４１２株（受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４８７）である、請求項１５に記載の化合物の製造方法。
【請求項１７】
下記式（ＶＩＩＩ）：
【化９】
2014148455.tif 000041
で表される化合物を基質とし、このものを請求項３乃至６のいずれか１項に記載の化合物に変換しうるケトミウム属に属する変換菌と共に培地中で培養し、その培養物より請求項３乃至６のいずれか１項に記載の化合物を採取することを特徴とする、請求項３乃至６のいずれか１項に記載の化合物の製造方法。
【請求項１８】
変換菌がケトミウム属に属するケトミウム・グロボーサム（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ  ｇｌｏｂｏｓｕｍ）  ＳＡＮＫ  １０３１２株(受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４８６)である、請求項１９に記載の製造方法。
【請求項１９】
下記式（ＶＩＩＩ）：
【化１０】
2014148455.tif 000042
で表される化合物を基質とし、このものを請求項３乃至６のいずれか１項に記載の化合物に変換しうるムコール属に属する変換菌と共に培地中で培養し、その培養物より請求項３乃至６のいずれか１項に記載の化合物を採取することを特徴とする、請求項３乃至６のいずれか１項に記載の化合物の製造方法。
【請求項２０】
変換菌が、ムコール属に属するムコール・ヒエマリス・エフ・ヒエマリス（Ｍｕｃｏｒ  ｈｉｅｍａｌｉｓ  ｆ．ｈｉｅｍａｌｉｓ）  ＳＡＮＫ  １０６１２株（受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４８８）である、請求項２１に記載の製造方法。
【請求項２１】
下記式（ＩＸ）：
【化１１】
2014148455.tif 000043
で表される化合物を基質とし、このものを請求項９又は１０に記載の化合物に変換しうるケトミウム属に属する変換菌と共に培地中で培養し、その培養物より請求項９又は１０に記載の化合物を採取することを特徴とする、請求項９又は１０に記載の化合物の製造方法。
【請求項２２】
下記式（Ｘ）：
【化１２】
2014148455.tif 000044
で表される化合物を基質とし、このものを請求項１１乃至１４のいずれか１項に記載の化合物に変換しうるケトミウム属に属する変換菌と共に培地中で培養し、その培養物より請求項１１乃至１４のいずれか１項に記載の化合物を採取することを特徴とする、請求項１１乃至１４のいずれか１項に記載の化合物の製造方法。
【請求項２３】
カニングハメラ属に属するカニングハメラ・エレガンス（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ  ｅｌｅｇａｎｓ）  ＳＡＮＫ  １０４１２株（受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４８７）。
【請求項２４】
ケトミウム属に属するケトミウム・グロボーサム（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ  ｇｌｏｂｏｓｕｍ）  ＳＡＮＫ  １０３１２株(受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４８６)。
【請求項２５】
ムコール属に属するムコール・ヒエマリス・エフ・ヒエマリス（Ｍｕｃｏｒ  ｈｉｅｍａｌｉｓ  ｆ．ｈｉｅｍａｌｉｓ）  ＳＡＮＫ  １０６１２株（受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４８８）。
【請求項２６】
請求項１乃至１４のいずれか１項に記載されたテルペノイド誘導体を有効成分として含有する医薬。
【請求項２７】
請求項１乃至１４のいずれか１項に記載されたテルペノイド誘導体を有効成分として含有する
眼疾患（当該眼疾患は、アレルギー性結膜疾患、ウィルス性結膜炎、翼状片、角膜感染症、ドライアイ、角膜障害（角膜上皮障害、及び／又は、角膜内皮障害である）、ぶどう膜炎、ベーチェット病、糖尿病網膜症、網膜剥離、網膜静脈閉塞、中心性漿液性脈絡網膜症、加齢黄斑変性、糖尿病黄斑浮腫、黄斑疾患、網膜色素変性、緑内障、若しくは、白内障である）、
腎疾患（当該腎疾患は、急性腎炎、慢性腎炎、急性腎不全、慢性腎不全、ネフローゼ症候群、ＩｇＡ腎症、糖尿病腎症、痛風腎、腎硬化症、水腎症、尿細管間質性腎炎、冠動脈バイパス手術後の腎機能低下、若しくは、腎尿路感染症である）、
呼吸器疾患（当該呼吸器疾患は、気管支炎、肺炎、胸膜炎、慢性閉塞性肺疾患、急性肺障害（ａｃｕｔｅ  ｌｕｎｇ  ｉｎｊｕｒｙ：  ＡＬＩ）、びまん性汎細気管支炎、肺気、若しくは、喘息である）、  
肝疾患（当該肝疾患は、アルコール性脂肪肝、非アルコール性脂肪性肝炎、肝線維症、肝硬変、若しくは、肝移植に伴う肝機能障害である）、
脳疾患（当該脳疾患は、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症(ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｌａｔｅｒａｌ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ：  ＡＬＳ）、脳梗塞、若しくは、多発性硬化症（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）である）、又は
心臓疾患（当該心臓疾患は、心筋梗塞である）
の予防剤又は治療剤。
【請求項２８】
請求項１乃至１４のいずれか１項に記載されたテルペノイド誘導体を有効成分として含有する
眼疾患（当該眼疾患は、ドライアイ、角膜障害（角膜上皮障害、及び／又は、角膜内皮障害である）、ぶどう膜炎、糖尿病網膜症、網膜静脈閉塞、加齢黄斑変性、糖尿病黄斑浮腫、若しくは、緑内障である）、
腎疾患（当該腎疾患は、糖尿病腎症である）、
呼吸器疾患（当該呼吸器疾患は、慢性閉塞性肺疾患、若しくは、急性肺障害である）、
肝疾患（当該肝疾患は、非アルコール性脂肪性肝炎、肝硬変、若しくは、肝移植に伴う肝機能障害である）、又は
脳疾患（当該脳疾患は、脳梗塞、若しくは、多発性硬化症である）の予防剤又は治療剤。
【請求項２９】
請求項１乃至１４のいずれか１項に記載されたテルペノイド誘導体を有効成分として含有するドライアイの予防又は治療剤。
【請求項３０】
請求項１乃至１４のいずれか１項に記載されたテルペノイド誘導体を有効成分として含有する角膜上皮、及び／又は、角膜内皮の障害の予防又は治療剤。
【請求項３１】
請求項１乃至１４のいずれか１項に記載されたテルペノイド誘導体を有効成分として含有する加齢黄斑変性の予防又は治療剤。
【請求項３２】
請求項１乃至１４のいずれか１項に記載されたテルペノイド誘導体を有効成分として含有する糖尿病黄斑浮腫、及び／又は、網膜静脈閉塞の予防又は治療剤。
【請求項３３】
請求項１乃至１４のいずれか１項に記載されたテルペノイド誘導体を有効成分として含有する慢性閉塞性肺疾患の予防又は治療剤。
【請求項３４】
請求項１乃至１４のいずれか１項に記載されたテルペノイド誘導体を有効成分として含有する脳梗塞の予防又は治療剤。
【請求項３５】
請求項１乃至１４のいずれか１項に記載されたテルペノイド誘導体を有効成分として含有する多発性硬化症の予防又は治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｋｅａｐ１／Ｎｒｆ２／ＡＲＥシグナル伝達経路の活性化能を有し、抗炎症作用、細胞保護作用に優れるテルペノイド誘導体に関する。  
【背景技術】
【０００２】
エネルギー代謝の過程で生成する活性酸素種などが感知されると、抗酸化酵素群や解毒代謝酵素群など生体防御のシステムが発動する。Ｋｅａｐ１/Ｎｒｆ２/ＡＲＥシグナル伝達経路は、この生体防御のシステムの発動を制御している。  
Ｋｅａｐ１/Ｎｒｆ２/ＡＲＥシグナル伝達経路を活性化すると、その標的遺伝子であるＮＡＤ（Ｐ）Ｈ：ｑｕｉｎｏｎｅ ｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ-１（ＮＱＯ１）、ｈｅｍｅ ｏｘｙｇｅｎａｓｅ-１（ＨＯ−１）、γ-ｇｌｕｔａｍａｔｅ ｃｙｓｔｅｉｎｅ ｌｉｇａｓｅ ｃａｔａｌｙｔｉｃ ｓｕｂｕｎｉｔ （ＧＣＬＣ）等が誘導されることが知られている（非特許文献１）。ＮＱＯ１は異物代謝系第２相の酵素であり、解毒作用に重要である。ＨＯ−１およびＧＣＬＣは典型的な抗酸化酵素として知られている。これらの酵素量が増加あるいは活性化されると、細胞は毒物、酸化ストレス、炎症等に対して耐性となるため、このシグナル伝達経路を活性化する化合物は様々な疾患に対する治療薬になると考えられている（非特許文献２−５）。対象となる具体的な疾患の例は、以下に示す通りである。  
Ｎｒｆ２欠損マウスは、網膜虚血再灌流系で脆弱性を示すことが報告されている（非特許文献６）。そのため、眼疾患として、アレルギー性結膜疾患、ウィルス性結膜炎、翼状片、角膜感染症、角膜内皮障害、白内障、ぶどう膜炎、ベーチェット病、糖尿病網膜症、網膜剥離、網膜静脈閉塞、中心性漿液性脈絡網膜症、加齢黄斑変性、糖尿病黄斑浮腫、黄斑疾患、網膜色素変性、緑内障、白内障などへの適応が示唆されている（非特許文献７、８）。
Ｎｒｆ２欠損マウスは、シスプラチン誘発腎毒性に脆弱性を示すことが報告されている（非特許文献９）。そのため、腎疾患として、急性腎炎、慢性腎炎、急性腎不全、慢性腎不全、ネフローゼ症候群、ＩｇＡ腎症、糖尿病腎症、痛風腎、腎硬化症、水腎症、尿細管間質性腎炎、腎尿路感染症などへの適応が示唆されている（非特許文献１０）。  
Ｎｒｆ２欠損マウスは、タバコ煙曝露に対して脆弱性を示すことが報告されている（非特許文献１１）。そのため、呼吸器疾患として、気管支炎、肺炎、胸膜炎、慢性閉塞性肺疾患、びまん性汎細気管支炎、肺気腫、喘息などへの適応が示唆されている。（非特許文献１２、１３）。  
Ｎｒｆ２欠損マウスは、メチオニン・コリン欠乏食給餌で非アルコール性脂肪性肝炎になりやすいことが報告されている（非特許文献１４）。そのため、肝疾患として、アルコール性脂肪肝、非アルコール性脂肪性肝炎、肝線維症、肝硬変などへの適応が示唆される（非特許文献２、１５）。  
また、Ｎｒｆ２活性化剤は、マウスで血糖低下作用を示すことが報告されており（非特許文献１６）、そのため、糖尿病およびその合併症（糖尿病網膜症、糖尿病性腎症、糖尿病性神経障害）などへの適応が示唆される。  
Ｋｅａｐ１／Ｎｒｆ２／ＡＲＥシグナル伝達経路を活性化する物質として、ブロッコリースプラウトに含まれるスルフォラフェンやカレーのターメリックに含まれるクルクミンなどが、Ｎｒｆ２を活性化し、発ガン物質の解毒化を促進することが報告されている(非特許文献１７)。また、Ｈｏｎｄａらによって発見されたメチル  ２−シアノ−３,１２−ジオキソオレアン−１,９(１１)−ジエン−２８−酸を含む５員環のトリテルペノイド（非特許文献１８及び特許文献１−９）は、Ｋｅａｐ１／Ｎｒｆ２／ＡＲＥシグナル伝達経路を活性化することが報告されており、それらの化合物では数種の抗炎症性タンパク質および抗酸化タンパク質（たとえばＮＱＯ１、ＨＯ−１、ＧＣＬＣ）の産生をもたらすことが報告されている(特許文献９)。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】ＷＯ９９６５４７８
【特許文献２】ＷＯ２０１２１２５４８８
【特許文献３】ＷＯ２０１１１３０３０２
【特許文献４】ＷＯ２００９１４６２１６
【特許文献５】ＷＯ２００９１２９５４６
【特許文献６】ＷＯ２００９１２９５４８
【特許文献７】ＷＯ２００９０２３２３２
【特許文献８】ＷＯ２００４０６４７２３
【特許文献９】ＷＯ２００９０８９５４５
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｉｎｔ. Ｊ. Ｂｉｏｃｈｅｍ. Ｃｅｌｌ. Ｂｉｏｌ. ２０１２； ４４： １３１５−１３２０
【非特許文献２】Ｃｌｉｎ.Ｐｈａｒｍａｃｏｌ.Ｔｈｅｒ.２０１２； ９２： ３４０−３４８
【非特許文献３】Ａｄｖ.Ｐｈａｒｍａｃｏｌ.２０１２； ６３： ４３−７９
【非特許文献４】Ｍｅｄ.Ｒｅｓ.Ｒｅｖ.２０１２； ３２： ６８７−７２６
【非特許文献５】Ｍｏｌ.Ａｓｐｅｃｔｓ.Ｍｅｄ.２０１１； ３２： ２３４−２４６
【非特許文献６】Ｆｒｅｅ Ｒａｄｉｃ Ｂｉｏｌ.Ｍｅｄ.２０１１； ５１： ２１６−２２４
【非特許文献７】Ｆｒｏｎｔ Ｂｉｏｓｃｉ.（Ｅｌｉｔｅ Ｅｄ.) ２０１２； ４： １４１−１１５
【非特許文献８】Ｃｕｒｒ.Ｍｅｄ.Ｃｈｅｍ.２０１１； １８： ９３１−９４２
【非特許文献９】Ｊ.Ｐｈａｒｍａｃｏｌ.Ｅｘｐ.Ｔｈｅｒ.  ２０１０； ３３５： ２−１２
【非特許文献１０】Ｉｎｔ. J. Ｎｅｐｈｒｏｌ.２０１２； ３２１７１４
【非特許文献１１】Ｐｒｏｃ.Ｎａｔｌ.Ａｃａｄ.Ｓｃｉ.ＵＳＡ ２００９； １０６： ２５０−２５５
【非特許文献１２】Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｏｌ. Ｍｅｄ. ２０１１； １７： ３６３−３７１
【非特許文献１３】Ｔｏｘｉｃｏｌ.Ａｐｐｌ.Ｐｈａｒｍａｃｏｌ.２０１０； ２４４： ４３−５６
【非特許文献１４】Ｆｒｅｅ Ｒａｄｉｃ Ｂｉｏｌ.Ｍｅｄ.２０１０； ４８： ３５７−３７１
【非特許文献１５】Ｊ.Ｎｕｔｒ.Ｂｉｏｃｈｅｍ.２０１２; ２３: １２０１−１２０６
【非特許文献１６】Ｊ.Ｂｉｏｌ.Ｃｈｅｍ.２０１０;  ２８５: ４０５８１−４０５９２
【非特許文献１７】生化学２００９; ８１: ４４７−９
【非特許文献１８】Ｂｉｏｏｒｇ. Ｍｅｄ. Ｃｈｅｍ.Ｌｅｔｔ.，１９９８:８: ２７１１−２７１４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明者らは、Ｋｅａｐ１／Ｎｒｆ２／ＡＲＥシグナル伝達経路を活性化する化合物について鋭意研究を行なった結果、特定のテルペノイド誘導体が、優れた抗炎症作用、細胞保護作用を有することを見出し、本発明を完成した。  
【課題を解決するための手段】
【０００６】
すなわち本発明は、
（１）下記式（Ｉ）：【０００７】
【化１】
2014148455.tif 000003
で表されるテルペノイド誘導体、【０００８】
（２）  下記の物理化学的性状を有するテルペノイド誘導体：
１）物質の性状：無色粉末状物質
２）分子式：Ｃ３２Ｈ４３ＮＯ６
３）分子量：５３７（ＥＳＩマススペクトル法により測定）
４）高分解能ＬＣ−ＥＳＩマススペクトル法により測定した精密質量、［Ｍ＋Ｈ］＋は次に示す通りである、
実測値：５３８．３１５４９
計算値：５３８．３１６３１
５）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ）は、以下に示す通りである、
σ：０．９２（３Ｈ，ｓ），１．０８（３Ｈ，ｓ），１．１２（３Ｈ，ｓ），１．１４−１．１７（１Ｈ，ｍ），１．１９（３Ｈ，ｓ），１．２２−１．２４（１Ｈ，ｍ），１．１８−１．２５（１Ｈ，ｍ），１．２８（３Ｈ，ｓ），１．２８（３Ｈ，ｓ），１．４６−１．４８（１Ｈ，ｍ），１．４８−１．５２（１Ｈ，ｍ），１．５０−１．５４（１Ｈ，ｍ），１．５９−１．６７（２Ｈ，ｍ），１．６２−１．６６（１Ｈ，ｍ），１．６４−１．６７（１Ｈ，ｍ），１．７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ），１．８０−１．８３（１Ｈ，ｍ），１．８５−１．８７（２Ｈ，ｍ），１．９８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，４．５Ｈｚ），２．９５（１Ｈ，ｓ），２．９８（１Ｈ，ｂｒｓ），３．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ），３．７０（３Ｈ，ｓ），３．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ），４．３４（１Ｈ，ｓ），６．１１（１Ｈ，ｓ）ｐｐｍ
６）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ）は、以下に示す通りである、
σ：１８．５（ｔ），２１．１（ｑ），２１．６（ｑ），２３．０（ｑ），２４．０（ｑ），２４．１（ｔ），２７．３（ｑ），２８．２（ｑ），２８．６（ｔ），２９．６（ｔ），３１．０（ｄ），３１．５（ｔ），３１．６（ｔ），３２．４（ｔ），３５．７（ｓ），４１．２（ｓ），４２．３（ｓ），４２．８（ｄ），４５．３（ｓ），４５．８（ｓ），４７．１（ｓ），４９．６（ｄ），５２．３（ｑ），５３．５（ｓ），６７．６（ｔ），６９．３（ｄ），１１３．７（ｓ），１２４．８（ｄ），１６９．８（ｓ），１７８．０（ｓ），１９９．６（ｓ），２０２．５（ｓ）ｐｐｍ
７）高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＫ−Ｃ１８  
（直径４．６ｍｍ×長さ７５ｍｍ：インタクト（株）製）
溶  媒：Ａ：０．０１％ギ酸含有１０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液
Ｂ：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル
Ａ／Ｂ＝４５／５５ のアイソクラティック
流  速：１．０ｍｌ／分
温  度：４０℃
検  出：紫外部吸収  λ２３０ｎｍ
保持時間：５．８分、【０００９】
（３）  下記式（ＩＩ）【００１０】
【化２】
2014148455.tif 000004
で表されるテルペノイド誘導体、【００１１】
（４）  下記の物理化学的性状を有するテルペノイド誘導体：
１）物質の性状：無色粉末状物質
２）分子式：Ｃ３２Ｈ４３ＮＯ６
３）分子量：５３７（ＥＳＩマススペクトル法により測定）
４）高分解能ＬＣ−ＥＳＩマススペクトル法により測定した精密質量、［Ｍ＋Ｈ］＋は次に示す通りである、
実測値：５３８．３１５７３
計算値：５３８．３１６３１
５）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：０．９９（３Ｈ，ｓ），０．９９（３Ｈ，ｓ），１．０６（３Ｈ，ｓ），１．１２（３Ｈ，ｓ），１．１９（３Ｈ，ｓ），１．１９−１．２２（１Ｈ，ｍ），１．２７（３Ｈ，ｓ），１．２７（３Ｈ，ｓ），１．２９−１．３５（２Ｈ，ｍ），１．４５−１．４９（１Ｈ，ｍ），１．６２−１．６６（１Ｈ，ｍ），１．５８−１．６７（２Ｈ，ｍ），１．６４−１．６９（１Ｈ，ｍ），１．７２−１．７５（１Ｈ，ｍ），１．６９−１．７９（１Ｈ，ｍ），１．８８（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，３．０Ｈｚ），１．９６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，４．５Ｈｚ），２．９７（１Ｈ，ｓ），３．０４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，４．５Ｈｚ），３．４９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，５．０Ｈｚ），３．７０（３Ｈ，ｓ），４．３４（１Ｈ，ｓ），６．０８（１Ｈ，ｓ）ｐｐｍ
６）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ）は、以下に示す通りである、
σ：１６．６（ｑ），１８．５（ｔ），２１．６（ｑ×２），２３．０（ｑ），２４．０（ｑ），２４．１（ｔ），２８．２（ｑ），２８．４（ｔ），２９．３（ｑ），３１．３（ｄ），３１．６（ｄ），３６．１（ｔ），３６．２（ｓ），４０．４（ｔ），４１．１（ｓ），４２．２（ｓ），４２．８（ｄ），４５．３（ｓ），４５．８（ｓ），４９．１（ｓ），４９．３（ｄ），５２．３（ｓ），５３．４（ｓ），６９．２（ｄ），７３．９（ｔ），１１３．７（ｓ），１２５．０  （ｄ），１６８．９（ｓ），１７６．８（ｓ），１９８．９（ｓ），２０２．５（ｓ）ｐｐｍ
７）高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＫ−Ｃ１８  
（直径４．６ｍｍ×長さ７５ｍｍ：インタクト（株）製）
溶  媒：Ａ：０．０１％ギ酸含有１０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液
Ｂ：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル
Ａ／Ｂ＝４５／５５のアイソクラティック
流  速：１．０ｍｌ／分  
温  度：４０℃
検  出：紫外部吸収  λ２３０ｎｍ
保持時間：３．８分、【００１２】
（５）  下記式（ＩＩＩ）  【００１３】
【化３】
2014148455.tif 000005
で表されるテルペノイド誘導体、【００１４】
（６）  下記の物理化学的性状を有するテルペノイド誘導体：
１）物質の性状：無色粉末状物質
２）分子式：Ｃ３２Ｈ４１ＮＯ６
３）分子量：５３５（ＥＳＩマススペクトル法により測定）
４）高分解能ＬＣ−ＥＳＩマススペクトル法により測定した精密質量、［Ｍ＋Ｈ］＋は次に示す通りである、
実測値：５３６．３００２３
計算値：５３６．３００６６
５）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：１．０４（３Ｈ，ｓ），１．０５（３Ｈ，ｓ），１．１３（３Ｈ，ｓ），１．１９（３Ｈ，ｓ），１．２０−１．２６（１Ｈ，ｍ），１．３０（ｍ，３Ｈ），１．２９（３Ｈ，ｓ），１．３３（３Ｈ，ｓ），１．４７−１．５０（１Ｈ，ｍ），１．６３−１．６８（２Ｈ，ｍ），１．５９−１．６８（２Ｈ，ｍ），１．６５−１．６７（１Ｈ，ｍ），１．６４−１．７３（２Ｈ，ｍ），１．７１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ），１．９８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ），２．０３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．０Ｈｚ，３．５Ｈｚ），２．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４．５Ｈｚ），２．８５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４．５Ｈｚ），３．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ），３．３８（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ），３．７４（３Ｈ，ｓ），４．３４（１Ｈ，ｓ），６．１２（１Ｈ，ｓ）ｐｐｍ
６）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ）は、以下に示す通りである、
σ：１８．４（ｔ），２１．６（ｑ×２），２３．０（ｑ），２４．１（ｑ×２），２５．５（ｑ），２５．６（ｔ），２８．２（ｑ），２８．３（ｔ），３１．５（ｔ），３１．７（ｄ），３７．４（ｔ），４１．２（ｓ），４２．１（ｓ），４２．８（ｄ），４５．３（ｓ），４５．６（ｓ），４５．９（ｓ），４７．０（ｔ），４９．１（ｄ），５１．１（ｓ），５２．７（ｑ），５３．４（ｓ），６９．２（ｄ），１１３．７（ｓ），１２４．８（ｄ），１６９．４（ｓ），１７５．５（ｓ），１９８．５（ｓ），２０２．４（ｓ），２１３．４（ｓ）ｐｐｍ
７）高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＫ−Ｃ１８  
（直径４．６ｍｍ×長さ７５ｍｍ：インタクト（株）製）
溶  媒：Ａ：０．０１％ギ酸含有１０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液
Ｂ：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル
Ａ／Ｂ＝４５／５５ のアイソクラティック
流  速：１．０ｍｌ／分
温  度：４０℃
検  出：紫外部吸収  λ２３０ｎｍ
保持時間：６．２分、【００１５】
（７）下記式（ＩＶ）：  【００１６】
【化４】
2014148455.tif 000006
で表されるテルペノイド誘導体、【００１７】
（８）  下記の物理化学的性状を有するテルペノイド誘導体：
１）物質の性状：無色粉末状物質
２）分子式：Ｃ３２Ｈ４３ＮＯ６
３）分子量：５３７（ＥＳＩマススペクトル法により測定）
４）高分解能ＬＣ−ＥＳＩマススペクトル法により測定した精密質量、［Ｍ＋Ｈ］＋は次に示す通りである、
実測値：５３８．３１５９２
計算値：５３８．３１６３１
５）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：１．０５（３Ｈ，ｓ），１．１１（３Ｈ，ｓ），１．１５（３Ｈ，ｓ），１．２２（３Ｈ，ｓ），１．２５−１．２７（１Ｈ，ｍ），１．２７−１．２９（１Ｈ，ｍ），１．３０（３Ｈ，ｓ），１．３０（３Ｈ，ｓ），１．４０（１Ｈ，ｂｒｔ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ），１．４８−１．５２（１Ｈ，ｍ），１．５０−１．５４（１Ｈ，ｍ），１．５８−１．６０（１Ｈ，ｍ），１．６０−１．６３（１Ｈ，ｍ），１．６２−１．７１（２Ｈ，ｍ），１．６６−１．７０（１Ｈ，ｍ），１．６９−１．７３（１Ｈ，ｍ），１．７６−１．８２（１Ｈ，ｍ），１．９０−１．９４（１Ｈ，ｍ），１．９３−１．９９（１Ｈ，ｍ），２．０１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１０．０Ｈｚ），３．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．５  Ｈｚ），３．１２（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１３．５  Ｈｚ），３．３２（３Ｈ，ｓ），３．７４（３Ｈ，ｓ），４．３６（１Ｈ，ｓ），６．１１（１Ｈ，ｓ）ｐｐｍ
６）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ）は、以下に示す通りである、
σ：１８．３（ｔ），１８．７（ｑ），２１．４（ｑ），２１．５（ｑ），２２．７（ｔ），２２．８（ｑ），２３．９（ｑ），２８．０（ｑ），２８．２（ｔ），２８．７（ｔ），３０．１（ｔ），３０．８（ｄ），３１．４（ｔ），３２．０（ｔ），３５．８（ｓ），４０．９（ｓ），４２．０（ｓ），４２．５（ｄ），４５．１（ｓ），４５．６（ｓ），４７．４（ｓ），４９．６（ｄ），５２．０（ｑ），５３．２（ｓ），６９．１（ｄ），７４．２（ｔ），１１３．６（ｓ），１２４．８（ｄ），１６８．７（ｓ），１７８．０（ｓ），１９８．７（ｓ），２０２．４（ｓ）ｐｐｍ
７）高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＫ−Ｃ１８  
（直径４．６ｍｍ×長さ７５ｍｍ：インタクト（株）製）
溶  媒：Ａ：０．０１％ギ酸含有１０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液
Ｂ：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル
Ａ／Ｂ＝５／５で平衡化したのちＡ／Ｂ＝１／９まで７分間の直線グラジエント
流  速：１．０ｍｌ／分
温  度：４０℃
検  出：紫外部吸収  λ２３０ｎｍ
保持時間：５．２分、【００１８】
（９）下記式（Ｖ）：  【００１９】
【化５】
2014148455.tif 000007
で表されるテルペノイド誘導体、【００２０】
（１０）  下記の物理化学的性状を有するテルペノイド誘導体：
１）物質の性状：無色粉末状物質
２）分子式：Ｃ３１Ｈ４２Ｎ２Ｏ５
３）分子量：５２２（ＥＳＩマススペクトル法により測定）
４）高分解能ＬＣ−ＥＳＩマススペクトル法により測定した精密質量、［Ｍ＋Ｈ］＋は次に示す通りである、
実測値：５２３．３１６１６
計算値：５２３．３１６６５
５）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：０．９５（３Ｈ，ｓ），１．０３（３Ｈ，ｓ），１．１０（３Ｈ，ｓ），１．１３（３Ｈ，ｓ），１．１９（３Ｈ，ｓ），１．２６−１．３０（１Ｈ，ｍ），１．２８−１．３０（１Ｈ，ｍ），１．２８（３Ｈ，ｓ），１．３４（３Ｈ，ｓ），１．３５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ），１．４８−１．５２（１Ｈ，ｍ），１．５７−１．６０（１Ｈ，ｍ），１．６０−１．６８（２Ｈ，ｍ），１．６４−１．６８（１Ｈ，ｍ），１．６５−１．６９（１Ｈ，ｍ），１．７２−１．７４（１Ｈ，ｍ），１．７９−１．８１（１Ｈ，ｍ），１．９７−１．９９（１Ｈ，ｍ），１．９８−２．００（１Ｈ，ｍ），２．９２（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ），３．４２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．０  Ｈｚ），３．９０（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝１０．０  Ｈｚ），４．３４（１Ｈ，ｓ），６．０８（１Ｈ，ｓ）ｐｐｍ
６）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ）は、以下に示す通りである、
σ：１７．４（ｔ），１８．３（ｔ），２１．４（ｑ），２１．５（ｑ），２２．８（ｑ），２４．０（ｑ），２４．２（ｑ），２７．７（ｔ），２８．０（ｑ），３１．１．（ｓ），３１．４（ｔ），３１．８（ｄ），３３．２（ｑ），３５．６（ｔ），４０．９（ｓ），４２．５８（ｄ），４２．６２（ｓ），４３．８（ｔ），４５．１（ｓ），４５．８（ｓ），４９．２（ｄ），５１．６（ｓ），５３．３（ｓ），６９．１（ｄ），７１．０（ｄ），１１３．６（ｓ），１２４．８（ｄ），１６８．７（ｓ），１７８．７（ｓ），１９８．８（ｓ），２０２．３（ｓ）ｐｐｍ
７）高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＫ−Ｃ１８  
（直径４．６ｍｍ×長さ７５ｍｍ：インタクト（株）製）
溶  媒：Ａ：０．０１％ギ酸含有１０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液
Ｂ：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル
Ａ／Ｂ＝５／５で平衡化したのちＡ／Ｂ＝１／９まで７分間の直線グラジエント
流  速：１．０ｍｌ／分
温  度：４０℃
検  出：紫外部吸収  λ２３０ｎｍ
保持時間：３．２分、【００２１】
（１１）下記式（ＶＩ）：    【００２２】
【化６】
2014148455.tif 000008
で表されるテルペノイド誘導体、【００２３】
（１２）  下記の物理化学的性状を有するテルペノイド誘導体：
１）物質の性状：無色粉末状物質
２）分子式：Ｃ３１Ｈ４０Ｎ２Ｏ４
３）分子量：５０４（ＥＳＩマススペクトル法により測定）
４）高分解能ＬＣ−ＥＳＩマススペクトル法により測定した精密質量、［Ｍ＋Ｈ］＋は次に示す通りである、
実測値：５０５．３０５５１
計算値：５０５．３０６０８
５）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：０．９９８（３Ｈ，ｓ），１．００１（３Ｈ，ｓ），１．０６（３Ｈ，ｓ），１．１４（３Ｈ，ｓ），１．２０（３Ｈ，ｓ），１．３０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ），１．３２（３Ｈ，ｓ），１．３６（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１２．５Ｈｚ），１．５０（３Ｈ，ｓ），１．５４−１．５８（１Ｈ，ｍ），１．６４−１．６９（１Ｈ，ｍ），１．６８−１．７０（２Ｈ，ｍ），１．７０−１．７３（１Ｈ，ｍ），１．７４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１３．５Ｈｚ），１．９７−２．０１（１Ｈ，ｍ），２．００−２．０３（１Ｈ，ｍ），１．９９−２．１１（２Ｈ，ｍ），２．０７（１Ｈ，ｂｒｔ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ），２．８０（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１３．５Ｈｚ），３．２６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．４５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１２．０Ｈｚ），４．３４（１Ｈ，ｓ），６．１４（１Ｈ，ｓ）ｐｐｍ
６）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ）は、以下に示す通りである、
σ：１６．３（ｑ），１８．２（ｔ），２１．３６（ｑ），２１．３８（ｑ），２２．８（ｑ），２４．３（ｑ），２５．１（ｔ），２８．０（ｑ），２８．３（ｔ），２９．０（ｑ），３１．４（ｔ），３３．７（ｄ），３５．０（ｔ），３５．９（ｓ），３９．５（ｔ），３９．７（ｓ），４１．０（ｓ），４２．１（ｓ），４２．５（ｄ），４５．１（ｓ），４５．８（ｓ），４９．３（ｄ），５３．２（ｓ），６８．９（ｄ），７２．４（ｄ），１１３．５（ｓ），１２３．５（ｓ），１２４．５（ｄ），１６９．６（ｓ），１９７．５（ｓ），２０２．１（ｓ）ｐｐｍ
７）高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＫ−Ｃ１８  
（直径４．６ｍｍ×長さ７５ｍｍ：インタクト（株）製）
溶  媒：Ａ：０．０１％ギ酸含有１０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液
Ｂ：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル
Ａ／Ｂ＝５／５で平衡化したのちＡ／Ｂ＝１／９まで７分間の直線グラジエント
流  速：１．０ｍｌ／分
温  度：４０℃
検  出：紫外部吸収  λ２３０ｎｍ
保持時間：４．２分、【００２４】
（１３）下記式（ＶＩＩ）：  【００２５】
【化７】
2014148455.tif 000009
で表されるテルペノイド誘導体、【００２６】
（１４）  下記の物理化学的性状を有するテルペノイド誘導体：
１）物質の性状：無色粉末状物質、
２）分子式：Ｃ３１Ｈ４０Ｎ２Ｏ３
３）分子量：４８８（ＥＳＩマススペクトル法により測定）
４）高分解能ＬＣ−ＥＳＩマススペクトル法により測定した精密質量、［Ｍ＋Ｈ］＋は次に示す通りである、
実測値：４８９．３１０７３
計算値：４８９．３１１１７
５）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：０．９９６（３Ｈ，ｓ），０．９９７（３Ｈ，ｓ），０．９９８（３Ｈ，ｓ），１．１９（３Ｈ，ｓ），１．２７（３Ｈ，ｓ），１．２８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１４．０Ｈｚ），１．３６（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１３．０Ｈｚ），１．５３（３Ｈ，ｓ），１．５６（３Ｈ，ｓ），１．６０−１．６４（１Ｈ，ｍ），１．６３−１．６９（１Ｈ，ｍ），１．７０−１．７４（１Ｈ，ｍ），１．７１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１４．０Ｈｚ），１．７８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１１．０Ｈｚ），１．８２−１．８６（２Ｈ，ｍ），１．９９−２．０２（１Ｈ，ｍ），１．９９−２．１０（２Ｈ，ｍ），２．０８（１Ｈ，ｂｒｔ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ），２．７９（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１３．５Ｈｚ），３．２５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．４５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１１．５Ｈｚ），６．０２（１Ｈ，ｓ），８．０３（１Ｈ，ｓ）ｐｐｍ
６）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ）は、以下に示す通りである、
σ：１６．３（ｑ），１８．２（ｔ），２１．４（ｑ），２１．５（ｑ），２４．９（ｑ），２５．１（ｔ），２６．７（ｑ），２７．０（ｑ），２８．１（ｔ），２９．０（ｑ），３１．７（ｔ），３３．６（ｄ），３４．９（ｔ），３５．９（ｓ），３９．５（ｔ），３９．６（ｓ），４２．１（ｓ），４２．６（ｓ），４５．０（ｓ），４５．９（ｓ），４７．８（ｄ），４９．３（ｄ），７２．４（ｄ），１１４．３（ｓ），１１４．７（ｓ），１２３．５（ｓ），１２３．７（ｄ），１６５．２（ｄ），１６９．４（ｓ），１９６．３（ｓ），１９７．６（ｓ）ｐｐｍ
７）高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＫ−Ｃ１８  
（直径４．６ｍｍ×長さ７５ｍｍ：インタクト（株）製）
溶  媒：Ａ：０．０１％ギ酸含有１０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液
Ｂ：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル
Ａ／Ｂ＝５／５で平衡化したのちＡ／Ｂ＝１／９まで７分間の直線グラジエント
流  速：１．０ｍｌ／分
温  度：４０℃
検  出：紫外部吸収  λ２３０ｎｍ
保持時間：３．７分、【００２７】
（１５）  下記式（ＶＩＩＩ）：【００２８】
【化８】
2014148455.tif 000010
で表される化合物を基質とし、このものを上記（１）、（２）、（７）乃至（８）のいずれか１項に記載の化合物に変換しうるカニングハメラ属に属する変換菌と共に培地中で培養し、その培養物より上記（１）、（２）、（７）乃至（８）のいずれか１項に記載の化合物を採取することを特徴とする、上記（１）、（２）、（７）乃至（８）のいずれか１項に記載の化合物の製造方法、【００２９】
（１６）  変換菌が、カニングハメラ属に属するカニングハメラ・エレガンス（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ  ｅｌｅｇａｎｓ）  ＳＡＮＫ  １０４１２株（受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４８７）である、上記（１５）に記載の化合物の製造方法、【００３０】
（１７）  下記式（ＶＩＩＩ）：【００３１】
【化９】
2014148455.tif 000011
で表される化合物を基質とし、このものを上記（３）乃至（６）のいずれか１項に記載の化合物に変換しうるケトミウム属に属する変換菌と共に培地中で培養し、その培養物より上記（３）乃至（６）のいずれか１項に記載の化合物を採取することを特徴とする、上記（３）乃至（６）のいずれか１項に記載の化合物の製造方法、【００３２】
（１８）  変換菌がケトミウム属に属するケトミウム・グロボーサム（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ  ｇｌｏｂｏｓｕｍ）  ＳＡＮＫ  １０３１２株(受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４８６)である、上記（１９）に記載の製造方法、【００３３】
（１９）  下記式（ＶＩＩＩ）：【００３４】
【化１０】
2014148455.tif 000012
で表される化合物を基質とし、このものを上記（３）乃至（６）のいずれか１項に記載の化合物に変換しうるムコール属に属する変換菌と共に培地中で培養し、その培養物より上記（３）乃至（６）のいずれか１項に記載の化合物を採取することを特徴とする、上記（３）乃至（６）のいずれか１項に記載の化合物の製造方法、【００３５】
（２０）  変換菌が、ムコール属に属するムコール・ヒエマリス・エフ・ヒエマリス（Ｍｕｃｏｒ  ｈｉｅｍａｌｉｓ  ｆ．ｈｉｅｍａｌｉｓ）  ＳＡＮＫ  １０６１２株（受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４８８）である、上記（２１）に記載の製造方法、【００３６】
（２１）  下記式（ＩＸ）：【００３７】
【化１１】
2014148455.tif 000013
で表される化合物を基質とし、このものを上記（９）又は（１０）に記載の化合物に変換しうるケトミウム属に属する変換菌と共に培地中で培養し、その培養物より上記（９）又は（１０）に記載の化合物を採取することを特徴とする、上記（９）又は（１０）に記載の化合物の製造方法、【００３８】
（２２）  下記式（Ｘ）：【００３９】
【化１２】
2014148455.tif 000014
で表される化合物を基質とし、このものを上記（１１）乃至（１４）のいずれか１項に記載の化合物に変換しうるケトミウム属に属する変換菌と共に培地中で培養し、その培養物より上記（１１）乃至（１４）のいずれか１項に記載の化合物を採取することを特徴とする、上記（１１）乃至（１４）のいずれか１項に記載の化合物の製造方法、【００４０】
（２３）  カニングハメラ属に属するカニングハメラ・エレガンス（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ  ｅｌｅｇａｎｓ）  ＳＡＮＫ  １０４１２株（受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４８７）、
（２４）  ケトミウム属に属するケトミウム・グロボーサム（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ  ｇｌｏｂｏｓｕｍ）  ＳＡＮＫ  １０３１２株(受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４８６)、
（２５）  ムコール属に属するムコール・ヒエマリス・エフ・ヒエマリス（Ｍｕｃｏｒ  ｈｉｅｍａｌｉｓ  ｆ．ｈｉｅｍａｌｉｓ）  ＳＡＮＫ  １０６１２株（受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４８８）、【００４１】
（２６）  上記（１）乃至（１４）のいずれか１項に記載されたテルペノイド誘導体を有効成分として含有する医薬、
（２７）  上記（１）乃至（１４）のいずれか１項に記載されたテルペノイド誘導体を有効成分として含有する
眼疾患（当該眼疾患は、アレルギー性結膜疾患、ウィルス性結膜炎、翼状片、角膜感染症、ドライアイ、角膜障害（角膜上皮障害、及び／又は、角膜内皮障害である）、ぶどう膜炎、ベーチェット病、糖尿病網膜症、網膜剥離、網膜静脈閉塞、中心性漿液性脈絡網膜症、加齢黄斑変性、糖尿病黄斑浮腫、黄斑疾患、網膜色素変性、緑内障、若しくは、白内障である）、
腎疾患（当該腎疾患は、急性腎炎、慢性腎炎、急性腎不全、慢性腎不全、ネフローゼ症候群、ＩｇＡ腎症、糖尿病腎症、痛風腎、腎硬化症、水腎症、尿細管間質性腎炎、冠動脈バイパス手術後の腎機能低下、若しくは、腎尿路感染症である）、
呼吸器疾患（当該呼吸器疾患は、気管支炎、肺炎、胸膜炎、慢性閉塞性肺疾患、急性肺障害（ａｃｕｔｅ  ｌｕｎｇ  ｉｎｊｕｒｙ：  ＡＬＩ）、びまん性汎細気管支炎、肺気、若しくは、喘息である）、  
肝疾患（当該肝疾患は、アルコール性脂肪肝、非アルコール性脂肪性肝炎、肝線維症、肝硬変若しくは肝移植に伴う肝機能障害である）、
脳疾患（当該脳疾患は、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｌａｔｅｒａｌ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ：  ＡＬＳ）、脳梗塞、若しくは、多発性硬化症（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）である）、若しくは
心臓疾患（当該心臓疾患は、心筋梗塞である）
の予防剤又は治療剤、【００４２】
（２８）  上記（１）乃至（１４）のいずれか１項に記載されたテルペノイド誘導体を有効成分として含有する
眼疾患（当該眼疾患は、ドライアイ、角膜障害（角膜上皮障害、及び／又は、角膜内皮障害である）、ぶどう膜炎、糖尿病網膜症、網膜静脈閉塞、加齢黄斑変性、糖尿病黄斑浮腫、若しくは緑内障である）、
腎疾患（当該腎疾患は、糖尿病腎症である）、
呼吸器疾患（当該呼吸器疾患は、慢性閉塞性肺疾患、若しくは、急性肺障害である）、
肝疾患（当該肝疾患は、非アルコール性脂肪性肝炎、肝硬変、若しくは、肝移植に伴う肝機能障害である）、若しくは
脳疾患（当該脳疾患は、脳梗塞、若しくは、多発性硬化症である）の予防剤又は治療剤。  【００４３】
（２９）  上記（１）乃至（１４）のいずれか１項に記載されたテルペノイド誘導体を有効成分として含有するドライアイの予防又は治療剤、
（３０）  上記（１）乃至（１４）のいずれか１項に記載されたテルペノイド誘導体を有効成分として含有する角膜上皮、及び／又は、角膜内皮の障害の予防又は治療剤、
（３１）  上記（１）乃至（１４）のいずれか１項に記載されたテルペノイド誘導体を有効成分として含有する加齢黄斑変性の予防又は治療剤、
（３２）  上記（１）乃至（１４）のいずれか１項に記載されたテルペノイド誘導体を有効成分として含有する糖尿病黄斑浮腫、及び／又は、網膜静脈閉塞の予防又は治療剤、
（３３）  上記（１）乃至（１４）のいずれか１項に記載されたテルペノイド誘導体を有効成分として含有する慢性閉塞性肺疾患の予防又は治療剤、
（３４）  上記（１）乃至（１４）のいずれか１項に記載されたテルペノイド誘導体を有効成分として含有する脳梗塞の予防又は治療剤、及び、
（３５）  上記（１）乃至（１４）のいずれか１項に記載されたテルペノイド誘導体を有効成分として含有する多発性硬化症の予防又は治療剤
である。【００４４】
上記（１）に記載の化学構造式で表されるテルペノイド誘導体又は上記（２）に記載の物理化学的性状を有するテルペノイド誘導体を、テルペノイド誘導体Ａと記載する。  
上記（３）に記載の化学構造式で表されるテルペノイド誘導体又は上記（４）に記載の物理化学的性状を有するテルペノイド誘導体を、テルペノイド誘導体Ｂと記載する。  
上記（５）に記載の化学構造式で表されるテルペノイド誘導体又は上記（６）に記載の物理化学的性状を有するテルペノイド誘導体を、テルペノイド誘導体Ｃと記載する。
上記（７）に記載の化学構造式で表されるテルペノイド誘導体又は上記（８）に記載の物理化学的性状を有するテルペノイド誘導体を、テルペノイド誘導体Ｄと記載する。
上記（９）に記載の化学構造式で表されるテルペノイド誘導体又は上記（１０）に記載の物理化学的性状を有するテルペノイド誘導体を、テルペノイド誘導体Ｅと記載する。
上記（１１）に記載の化学構造式で表されるテルペノイド誘導体又は上記（１２）に記載の物理化学的性状を有するテルペノイド誘導体を、テルペノイド誘導体Ｆと記載する。
上記（１３）に記載の化学構造式で表されるテルペノイド誘導体又は上記（１４）に記載の物理化学的性状を有するテルペノイド誘導体を、テルペノイド誘導体Ｇと記載する。
テルペノイド誘導体Ａ乃至Ｇを、本発明のテルペノイド誘導体とも記す。  【００４５】
本発明のテルペノイド誘導体は、溶媒和物になることがある。また、大気中に放置することにより、水分を吸収し、吸着水が付いたり、水和物になったりする場合がある。そのような溶媒和物や水和物も本発明に包含される。【００４６】
本発明のテルペノイド誘導体は、幾何異性体（ｃｉｓ、ｔｒａｎｓ異性体）及び分子内の不斉中心に基づく光学異性体等が存在する場合がある。本発明はこれらの異性体およびこれらの異性体の任意の割合の混合物をもすべて含むものである。
【発明の効果】
【００４７】
本発明のテルペノイド誘導体は、抗炎症作用、細胞保護作用に優れ、眼疾患、腎疾患、呼吸器疾患、肝疾患、糖尿病およびその合併症などの治療薬として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】テルペノイド誘導体Ａの１Ｈ−ＮＭＲスペクトル
【図２】テルペノイド誘導体Ａの１Ｈ−１３Ｃ  ＨＳＱＣスペクトル
【図３】テルペノイド誘導体Ａの１Ｈ−１Ｈ  ＮＯＥＳＹスペクトル
【図４】テルペノイド誘導体Ｂの１Ｈ−ＮＭＲスペクトル
【図５】テルペノイド誘導体Ｂの１Ｈ−１３Ｃ  ＨＳＱＣスペクトル
【図６】テルペノイド誘導体Ｂの１Ｈ−１Ｈ  ＮＯＥＳＹスペクトル
【図７】テルペノイド誘導体Ｃの１Ｈ−ＮＭＲスペクトル
【図８】テルペノイド誘導体Ｃの１Ｈ−１３Ｃ  ＨＳＱＣスペクトル
【図９】テルペノイド誘導体Ｃの１Ｈ−１Ｈ  ＮＯＥＳＹスペクトル
【図１０】テルペノイド誘導体Ｄの１Ｈ−ＮＭＲスペクトル
【図１１】テルペノイド誘導体Ｄの１Ｈ−１３Ｃ  ＨＳＱＣスペクトル
【図１２】テルペノイド誘導体Ｄの１Ｈ−１Ｈ  ＮＯＥＳＹスペクトル
【発明を実施するための形態】
【００４９】
本発明のテルペノイド誘導体は、特定の基質化合物を本発明のテルペノイド誘導体に変換する能力のある微生物［本発明において、変換菌（strain for transformation）という］の培養物から常法に従って単離・精製することが出来る。  
【００５０】
１．基質化合物
本発明のテルペノイド誘導体を製造する際の基質として、下記式（ＶＩＩＩ）により表される化合物を用いることができる。
【化１３】
2014148455.tif 000015
上記化合物は、医薬品一般名をバルドキソロンメチル（Ｂａｒｄｏｘｏｌｏｎｅ ｍｅｔｈｙｌ）という。上記化合物は、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ８  （１９９８）２７１１−２７１４に、合成Ｓｃｈｅｍｅ２の中の化合物番号１７として記載されており、Ｍｅｔｈｙｌ  ２−ｃｙａｎｏ−３，１２−ｄｉｏｘｏｏｌｅａｎａ−１，９−ｄｉｅｎ−２８−ｏａｔｅ（ＣＤＤＯ−Ｍｅ）とも記される。以下、上記基質化合物を、ＣＤＤＯ−Ｍｅとも記す。  
ＣＤＤＯ−Ｍｅは、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ７（１９９７）１６２３−１６２８、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ８（１９９８）２７１１−２７１４に記載の合成方法に準じて製造することができる。
【００５１】
さらに、本発明のテルペノイド誘導体を製造する際の基質として、下記式（ＩＸ）により表される化合物を用いることができる。
【化１４】
2014148455.tif 000016
上記化合物は、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １２  （２００２）１０２７−１０３０に、合成Ｓｃｈｅｍｅ１の中の化合物番号１５として記載されている。上記化合物は、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １２  （２００２）１０２７−１０３０に記載の合成方法に準じて製造することができる。
【００５２】
さらに、本発明のテルペノイド誘導体を製造する際の基質として、下記式（Ｘ）により表される化合物を用いることができる。
【化１５】
2014148455.tif 000017
上記化合物は、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １２  （２００２）１０２７−１０３０に、合成Ｓｃｈｅｍｅ１の中の化合物番号４として記載されている。上記化合物は、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １２  （２００２）１０２７−１０３０に記載の合成方法に準じて製造することができる。
【００５３】
２．基質化合物からの製造
（１）変換菌  
基質化合物から本発明のテルペノイド誘導体Ａ、テルペノイド誘導体Ｄを製造するために使用する変換菌としては、特に限定されないが、好適には真菌であり、例えば、カニングハメラ（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ）属に属する真菌を挙げることができる。  
カニングハメラ属に属する真菌としては、好適には、カニングハメラ・エレガンス（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ  ｅｌｅｇａｎｓ）であり、より好適には、カニングハメラ・エレガンス（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｚｅｌｌａ  ｅｌｅｇａｎｓ）ＳＡＮＫ  １０４１２株（受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４８７）（以下、「ＳＡＮＫ  １０４１２株」という）である。  
ＳＡＮＫ  １０４１２株は、１９９３年４月に千葉県の土壌より分離された。
【００５４】
基質化合物から本発明のテルペノイド誘導体Ｂ、テルペノイド誘導体Ｃ、テルペノイド誘導体Ｅ、テルペノイド誘導体Ｆ、テルペノイド誘導体Ｇを製造するために使用する変換菌としては、特に限定されないが、好適には真菌であり、例えば、ケトミウム（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ）属に属する真菌やムコール（Ｍｕｃｏｒ）属に属する真菌を挙げることができる。  
ケトミウム属に属する真菌としては、好適には、ケトミウム・グロボーサム（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ  ｇｌｏｂｏｓｕｍ）であり、より好適には、ケトミウム・グロボーサム  ＳＡＮＫ  １０３１２株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４８６）（以下、「ＳＡＮＫ  １０３１２株」という）である。  
ＳＡＮＫ  １０３１２株は、２０００年１１月に京都府の淡水から分離された。
【００５５】
ムコール属に属する真菌として、好適には、ムコール・ヒエマリス・エフ・ヒエマリス（Ｍｕｃｏｒ  ｈｉｅｍａｌｉｓ  ｆ．ｈｉｅｍａｌｉｓ）であり、より好適には、ムコール・ヒエマリス・エフ・ヒエマリス（Ｍｕｃｏｒ  ｈｉｅｍａｌｉｓ  ｆ．ｈｉｅｍａｌｉｓ）  ＳＡＮＫ  １０６１２株（受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４８８）（以下、「ＳＡＮＫ  １０６１２株」という）である。  
ＳＡＮＫ  １０６１２株は、１９９９年８月に茨城県で採集された試料より分離された。
【００５６】
ＳＡＮＫ  １０３１２株、ＳＡＮＫ  １０４１２株、及びＳＡＮＫ  １０６１２株の菌株の同定のために、菌の培養に利用した培地は以下の５種類であり、その組成は以下の通りである。   
＜ＰＤＡ培地  ポテト  デキストロース寒天（Ｐｏｔａｔｏ  Ｄｅｘｔｒｏｓｅ  Ａｇａｒ））培地｝＞  
ニッスイ  ポテト  デキストロース寒天培地（日水製薬（株）製）  ３９ｇ
蒸留水                                                  １０００ｍｌ
＜ＭＥＡ（ＣＢＳ）培地｛麦芽エキス寒天（Ｍａｌｔ  ｅｘｔｒａｃｔ  ａｇａｒ）（ＣＢＳ）培地｝培地｝＞  
バクト  マルトエキストラクト（Ｂｅｃｔｏｎ，  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ製）                                                  ２０ｇ
寒天                                                          １５ｇ
蒸留水                                                  １０００ｍｌ
＜ＯＡ培地｛オートミール寒天（Ｏａｔｍｅａｌ  ａｇａｒ）培地｝＞
オートミール抽出液＊                                    １０００ｍｌ
寒天                                                          ２０ｇ
＊３０ｇのオートミールに蒸留水を加えて２時間ほど煮出し、布でろ過して１０００ｍｌにフィルアップし作成した。
＜ＭＥＡ培地｛麦芽エキス寒天（Ｍａｌｔ  ｅｘｔｒａｃｔ  ａｇａｒ）培地｝＞
バクト  マルトエキストラクト（Ｂｅｃｔｏｎ，  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ製）                                                  ３０ｇ
バクト  ソイトン（Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ製）
３ｇ
寒天                                                          １５ｇ
蒸留水                                                  １０００ｍｌ。  
【００５７】
＜ＣＭＡ培地｛コーンミール寒天（Ｃｏｒｎ  Ｍｅａｌ  Ａｇａｒ）培地｝＞
コーンミールアガール「ニッスイ」（日水製薬（株）製）          １７ｇ
蒸留水                                                  １０００ｍｌ。
【００５８】
以下の記載において、色調の表示は「メチューン・ハンドブック・オブ・カラー」  （Ｋｏｒｎｅｒｕｐ，  Ａ．  ＆  Ｗａｎｓｃｈｅｒ，  Ｊ．  Ｈ．  １９７８．  Ｍｅｔｈｕｅｎ  ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  ｃｏｌｏｕｒ  （３ｒｄ．  ｅｄｉｔｉｏｎ）．  Ｅｒｙｅ  Ｍｅｔｈｕｅｎ，Ｌｏｎｄｏｎ）に従った。
【００５９】
ＳＡＮＫ  １０３１２株の菌学的性状は以下の通りである。  
ＳＡＮＫ  １０３１２株を４種類の培地（ＰＤＡ培地、ＯＡ培地、ＣＭＡ培地、ＭＥＡ培地）に接種して、菌学的性状を観察した。  
ＳＡＮＫ  １０３１２株のＰＤＡ培地での生育温度可能温度は９−３３℃で、特に１８−３１℃で旺盛に生育した。  
ＳＡＮＫ  １０３１２株の菌学的性状は以下の通りである。  
ＯＡ培地でのコロニーは、２８℃、１０日の培養で直径８０ｍｍ以上である。コロニーは薄く、短い綿毛状の白色の菌糸からなり、灰黄色で、中央からやや離れたところは同心円状に灰茶色から黄茶色となる。コロニーの中心部の表面に小粒状の子のう果を密に形成し、暗緑色となる。裏面は淡黄色から茶橙色で、中心部ではオリーブ茶色で、中心部からやや離れたところは同心円状に暗茶色になる。  
ＭＥＡ培地でのコロニーは、２８℃、１０日の培養で直径８０ｍｍ以上である。コロニーは薄く、短い綿毛状の白色の菌糸からなり、茶橙色となる。分生子および子のう果は形成されない。裏面も同様となる。  
ＣＭＡ培地でのコロニーは、２８℃、１０日の培養で直径６０ｍｍとなる。コロニーは非常に薄く、菌糸が寒天表面に疎に生えるのみである。コロニーの表面の色はほぼ無色透明で、裏面も同様である。  
ＳＡＮＫ  １０３１２株のＰＤＡ培地での生育温度可能温度は９−３３℃で、特に１８−３１℃で旺盛に生育する。  
ＳＡＮＫ  １０３１２株のＯＡ培地での２８℃、１０日目の微細構造は以下のようになる。  
子のう果は暗茶色から黒色で、幅１７５−２４０μｍ、高さ２７５−４００μｍの亜球形から卵形をしており、壁は交錯菌糸組織からなり、頂部に孔口を持つ。側毛はまっすぐあるいはわずかに波形となり、淡オリーブ色で、直径３．５μｍ以下であり、子のう果の上部では頂毛と一体となる。頂毛は多数密生し、波形または先端に向かってゆるいコイル状にまき、全体に粗面で、隔壁を有し、先端は丸い。頂毛の幅は基部で３−４μｍで、オリーブ色で、先端に向かって細まり淡色になる。子のうは棍棒形で、８胞子生である。子のう胞子はレモン形で、未熟な時は淡褐色で、成熟すると淡緑色から暗オリーブ茶色で、６．０−９．０×８．０−１１．０μｍになる。分生子は観察されない。  
以上のような菌学的特徴は、Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  Ｓｏｉｌ  Ｆｕｎｇｉ（ＤＯＭＳＣＨ，Ｋ．Ｈ．，Ｗ．ＧＡＭＳ  ａｎｄ  Ｔ.−Ｈ．ＡＮＤＥＲＳＯＮ（２００７）  Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  Ｓｏｉｌ  Ｆｕｎｇｉ．２ｎｄ  ｅｄ．ｒｅｖｉｓｅｄ  ｂｙ  Ｗ．Ｇａｍｓ．２００７．３８２  ｆｉｇｓ．６７２  ｐ）に記載されているＣｈａｅｔｏｍｉｕｍ  ｇｌｏｂｏｓｕｍ  Ｋｕｎｚｅの記載によく一致した。従って、本菌株をＣｈａｅｔｏｍｉｕｍ  ｇｌｏｂｏｓｕｍ  と同定し、Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ  ｇｌｏｂｏｓｕｍ  ＳＡＮＫ  １０３１２と命名した。  
ＳＡＮＫ  １０３１２株は、２０１２年１２月１８日付けで独立行政法人  製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター（住所：日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８）に国際寄託され、受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４８６が付された。
【００６０】
ＳＡＮＫ  １０４１２株の菌学的性状は以下の通りである。  
ＳＡＮＫ  １０４１２株を２種類の培地（ＰＤＡ培地、ＭＥＡ（ＣＢＳ）培地）に接種して、菌学的性状を観察した。  
ＳＡＮＫ  １０４１２株のＰＤＡ培地での生育温度可能温度は８−３５℃で、特に２５−３５℃で旺盛に生育した。  
ＳＡＮＫ  １０４１２株の菌学的性状は以下の通りである。  
ＰＤＡ培地でのコロニーは、２３℃、４日の培養で直径７．０ｃｍである。コロニーは薄く、菌糸は綿毛状で、中心部でやや密になり盛り上がる、白色を呈し、成熟すると胞子のう柄が発達し暗灰色となる。  
ＭＥＡ（ＣＢＳ）培地でのコロニーは、２３℃、４日の培養で直径６．０−６．５ｃｍである。コロニーは薄く、菌糸は綿毛状で、白色を呈し、成熟すると胞子のう柄が発達し暗灰色となる。  
ＳＡＮＫ  １０４１２株のＭＥＡ（ＣＢＳ）培地での２３℃、４日目の微細構造は以下のようになる。  
胞子のう柄は直径６−１３．５μｍで、輪生または分枝し、それぞれの先端に頂のうを形成する。頂のうは亜球形から洋梨形で、幅１３−３５μｍとなり、表面に多数の小柄を生じて先端に各１個の胞子のう胞子を形成する。胞子のう胞子は単独ではほぼ無色で、集合すると暗灰色から黒色となり、単細胞で、球形から楕円形、滑面あるいは短い棘を持ち、直径５．０−９．０μｍとなる。接合胞子は観察されなかった。  
以上のような菌学的特徴はＣｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  Ｓｏｉｌ  Ｆｕｎｇｉ  （前出と同じ）のｐ１６４−１６５記載されているＣｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ  ｅｌｅｇａｎｓ  Ｌｅｎｄｎ．の記載によく一致した。従って、本菌株をＣｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ  ｅｌｅｇａｎｓと同定し、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ  ｅｌｅｇａｎｓ  ＳＡＮＫ  １０４１２と命名した。  
ＳＡＮＫ  １０４１２株は、２０１２年１２月１８日付けで独立行政法人  製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター（住所：日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８）に国際寄託され、受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４８７が付された。
【００６１】
ＳＡＮＫ  １０６１２株の菌学的性状は以下の通りである。  
ＳＡＮＫ  １０６１２株を２種類の培地（ＰＤＡ培地、ＭＥＡ（ＣＢＳ）培地）に接種して、菌学的性状を観察した。  
ＳＡＮＫ  １０６１２株のＰＤＡ培地での生育温度可能温度は１０−３１℃で、特に１９−２７℃で旺盛に生育した。
ＰＤＡ培地でのコロニーは、２０℃、４日の培養で直径７．５−８．０ｃｍである。コロニーは中心部でやや密になり盛り上がり、菌糸は綿毛状で、茶色から茶灰色を呈し、縁辺部では白色となる。裏面も同様の色となる。胞子のう胞子を形成する。  
ＭＥＡ（ＣＢＳ）培地でのコロニーは、２０℃、４日の培養で直径６−６．５ｃｍである。コロニーは薄く、菌糸は綿毛状で、白色を呈する。まばらに胞子のう胞子を形成する。  
ＳＡＮＫ  １０６１２株のＭＥＡ（ＣＢＳ）での２０℃、４日目の微細構造は以下のようになる。  
胞子のう柄は直径１６μｍ以下で、まれに仮軸分枝し、先端に胞子のうを形成する。胞子のうは初期は黄色く、成熟するにつれて暗茶色になり、直径７０μｍ以下で、溶解性の壁を持つ。コルメラは球形から楕円形で、カラーを持ち、幅１３．５−２９．５μｍ、長さ１５−３２μｍとなる。胞子のう胞子は無色で、単細胞で、平滑で、楕円形から腎臓形であり、大きさは変異が大きく３．０−９．５×２−５μｍである。クラミドスポア、接合胞子は観察されなかった。  
以上の上のような菌学的特徴はＣｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  Ｓｏｉｌ  Ｆｕｎｇｉ  （前出に同じ）のｐ２９３−２９４に記載されているＭｕｃｏｒ  ｈｉｅｍａｌｉｓ  ｆ．  ｈｉｅｍａｌｉｓ  Ｗｅｈｍｅｒの記載によく一致した。従って、本菌株をＭｕｃｏｒ  ｈｉｅｍａｌｉｓ  ｆ．  ｈｉｅｍａｌｉｓ  と同定し、  Ｍｕｃｏｒ  ｈｉｅｍａｌｉｓ  ｆ．  ｈｉｅｍａｌｉｓ  ＳＡＮＫ１０６１２と命名した。  
ＳＡＮＫ  １０６１２株は、２０１２年１２月１８日付けで独立行政法人  製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター（住所：日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８）に国際寄託され、受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−１４８８が付された。
【００６２】
周知の通り、真菌類は自然界において、又は人工的な操作（例えば、紫外線照射、放射線照射、化学薬品処理等）により、変異を起こしやすく、本発明のＳＡＮＫ  １０３１２株、ＳＡＮＫ  １０４１２株、及びＳＡＮＫ  １０６１２株もそのような変異を起こし易いと推測される。  
本発明において、ＳＡＮＫ  １０３１２株、ＳＡＮＫ  １０４１２株、及びＳＡＮＫ  １０６１２株は、その全ての変異株を包含する。  
また、これらの変異株の中には、遺伝的方法、たとえば組み換え、形質導入、形質転換等により得られたものも包含される。  
即ち、本発明のテルペノイド誘導体を生産するために使用する変換菌ＳＡＮＫ  １０３１２株、ＳＡＮＫ  １０４１２株、及びＳＡＮＫ  １０６１２株、それらの変異株およびそれらと明確に区別されない菌株は全てＳＡＮＫ  １０３１２株、ＳＡＮＫ  １０４１２株、及びＳＡＮＫ  １０６１２株に包含される。  
【００６３】
（２）  培養法と精製法（本発明のテルペノイド誘導体の製造と精製）
上述の変換菌の培養は、一般に微生物の二次代謝産物の製造に使用されるような培地を用いて行なうことができる。そのような培地は、微生物が資化出来る炭素源、窒素源、無機塩、微量の生育因子、微量金属等を含有する。
【００６４】
炭素源としては、例えば、グルコース、フルクトース、マルトース、シュークロース、マンニトール、グリセリン、デキストリン、オート麦、ライ麦、デンプン、ジャガイモ、トウモロコシ粉、綿実油、糖蜜、クエン酸、酒石酸等が挙げられ、これらは単独又は併用して使用することができる。  
炭素源の添加量は、通常、培地量の１乃至１０重量％の範囲である。
【００６５】
窒素源としては、通常、蛋白質およびその加水分解物を含有する物質または無機塩が使用される。  
このような窒素源としては、例えば、大豆粉、フスマ、落花生粉、綿実粉、カゼイン加水分解物、ファーマミン、魚粉、コーンスチープリカー、ペプトン、肉エキス、イースト、イーストエキス、マルトエキス、硝酸ナトリウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム等が挙げられ、これらは単独または併用して使用することができる。  
窒素源の添加量は、通常、培地量の０．２乃至１０重量％の範囲である。
【００６６】
また、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、アンモニウム、カルシウム、リン酸、硫酸、塩酸、炭酸等のイオンを得ることのできる塩類を培地中に加えてもよい。  
さらに、菌の資化しうるビタミンＢ１、ビオチンのようなビタミン類、チアミンのような菌体増殖促進物質、マンガン、モリブデンのような金属の塩を培地に添加してもよい。
【００６７】
また、液体培地の場合、培地の泡立ちを防ぐため、シリコンオイル、ポリアルキレングリコールエーテル、植物油、動物油、界面活性剤のような消泡剤を培地に添加してもよい。  
上述の変換菌の培養に用いる液体培地のｐＨは、菌株、本発明のテルペノイド誘導体のｐＨ安定性等に依存する。
【００６８】
変換菌の培養温度は、菌株、本発明のテルペノイド誘導体の熱安定性等に依存する。変換菌がＳＡＮＫ  １０３１２株の場合、好適には９乃至３３℃であり、より好適には２０乃至３５℃である。変換菌がＳＡＮＫ  １０４１２株の場合、好適には８乃至３５℃であり、より好適には２０乃至３５℃である。変換菌がＳＡＮＫ  １０６１２株の場合、好適には１０乃至３１℃であり、より好適には２０乃至２７℃である。
【００６９】
上述の変換菌の培養方法としては、特に限定はなく、例えば、固形培地を用いた培養法、攪拌培養法、振とう培養法、通気培養法、通気攪拌培養法等を挙げることができ、好適には、攪拌培養法、振とう培養法、通気培養法、通気攪拌培養法であり、より好適には振とう培養法である。工業的スケールで培養するには、通気攪拌培養法がより好適である。
変換菌の培養は、通常、変換菌を生やしたスラントを少量の培地に接種した種培養から始まり、必要に応じより大きな規模で種培養を再度行なった後、最終段階としてより大きな規模での本培養を行なうことによりなされる。
【００７０】
上述の変換菌の小規模な培養を行なう場合、三角フラスコ等を用いて種培養を行い、必要に応じより大きな規模の種培養を再度行った後、三角フラスコ等を用いて本培養を行う。
上述の変換菌の大規模な培養を行なう場合、攪拌装置及び通気装置を付けたジャーファーメンター又はタンクを用いることが好ましい。このような装置を用いれば、培地をジャーファーメンター又はタンクの中で調製及び滅菌することができる。この方法は、大規模な製造に適している。  
培養時間は通常、基質添加後、１２０乃至１９２時間の培養で最高値に達する。
【００７１】
培養終了後、得られた培養物、その中に含まれる菌体及び／又はその培養上清から、本発明のテルペノイド誘導体を抽出することができる。菌体及びその他の固形分と培養上清とを分離するためには、遠心分離法又は珪藻土をろ過助剤とするろ過法を使用することができる。
【００７２】
本発明のテルペノイド誘導体の抽出にはこれらの化合物の物理化学的性状を利用することができる。培養ろ液又は培養上清中に存在する本発明のテルペノイド誘導体は、水と混和しない有機溶剤、例えば、酢酸エチル、クロロホルム、塩化エチレン、塩化メチレン、ブタノール、それら２つ以上の混合溶媒等により抽出することができる。菌体内に存在する本発明のテルペノイド誘導体は、５０乃至９０％の含水アセトン又は含水メタノールを用いて菌体から抽出し、有機溶媒を留去した後、培養ろ液又は培養上清中に存在する場合と同様に抽出することができる。全培養物中に存在する本発明のテルペノイド誘導体は、全培養物にアセトン又はメタノールを２０乃至８０％、好適には４０乃至６０％、より好適には５０％添加し、抽出することができる。抽出終了後、珪藻土をろ過助剤としてろ過し、得られた可溶物から、培養ろ液又は培養上清中に存在する場合と同様に抽出することができる。
【００７３】
上述の抽出物からの本発明のテルペノイド誘導体を単離するための精製は、吸着クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、分配クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、高速液体クロマトフラフィー（以下、ＨＰＬＣ）等の精製手段により行なうことができる。
【００７４】
吸着クロマトグラフィーは、本発明のテルペノイド誘導体を含む上述の抽出液を吸着剤と接触させ、夾雑物を吸着させて取り除くか、又は本発明のテルペノイド誘導体を吸着させて夾雑物を除去した後、溶出させることにより行なう。吸着剤としては、例えば、活性炭、アンバーライトＸＡＤ−２、同ＸＡＤ−４、同ＸＡＤ−１６（以上、ローム・アンド・ハース社製）、ダイヤイオンＨＰ−２０、同ＨＰ−２１、同ＨＰ−２０ＳＳ、セパビーズＳＰ−２０７、同ＳＰ−８５０、同ＳＰ−７００（三菱化学（株）製）等を挙げることができる。吸着させた本発明のテルペノイド誘導体の溶出に使用する溶媒としては、例えば、メタノール、アセトン、ブタノ−ル、アセトニトリル等の有機溶媒およびこれらの水混液を挙げることができる。
【００７５】
イオン交換クロマトグラフィーは、本発明のテルペノイド誘導体が中性物質として挙動することを利用して行なう。すなわち、本発明のテルペノイド誘導体を含む上述の抽出液を例えばイオン交換担体と接触させて不要物を該担体に吸着させ、本発明のテルペノイド誘導体を通過させる。イオン交換担体としては、ＤＥＡＥ−セファデックス、ＤＥＡＥ−セファロース、ＱＡＥ−セファデックス、ＣＭ−セファデックス、ＳＰ−セファデックス（以上、ＧＥヘルスケア社製）、ＤＥＡＥ−トヨパール、ＱＡＥ−トヨパール、ＣＭ−トヨパール、ＳＰ−トヨパール（東ソー（株）製）、デュオライトＡ１１３ＬＦ、同Ａ１１６、同Ａ３６８Ｓ、同Ａ３７５ＬＦ、同Ｃ２０Ｊ、同Ｃ４３３ＬＦ（ダイアモンド・シャムロック・ケミカル社製）、アンバーライトＩＲＡ−６７、同ＩＲＡ−９８、同ＩＲＡ４００Ｊ，同ＩＲＡ４５８ＲＦ、同ＩＲ１２０Ｂ、同ＩＲＣ７６、（ローム・アンド・ハース社製）、ダウエックス５０ＷＸ４、同ＨＣＲ−Ｓ、同１×４、同２２、６６、同ＳＢＲ−Ｐ（ダウ・ケミカル社製）等を挙げることができる。
【００７６】
分配クロマトグラフィーに使用する担体としては、例えば、シリカゲル、ＴＳＫゲルトヨパールＨＷ−４０Ｆ（東ソー（株）製）、セファデックスＬＨ−２０（ＧＥヘルスケア社製）、セルロース（メルク社製）等を挙げることができる。
【００７７】
逆相クロマトグラフィーに使用する担体としては、例えば、コスモシール１４０Ｃ１８（ナカライテスク（株）製）、ＯＤＳ−Ａ（ワイエムシィ（株）製）等を挙げることができる。
【００７８】
ＨＰＬＣに使用するカラムとしては、例えば、ショウデックスアサヒパックＯＤＰ５０−４Ｅ（昭和電工（株）製）、ＹＭＣパックＯＤＳ−Ａ（ワイエムシィ（株）製）、カプセルパックＵＧ１２０（資生堂（株）製）、ユニゾンＣ１８（インタクト（株）製）の如き逆相カラム等を挙げることができる。
【００７９】
これらの精製手段を単独で、又は適宜組み合わせることにより、本発明のテルペノイド誘導体を単離することができる。必要なら同じ精製手段を反復してもよい。各精製手段の実施には、カラムクロマトグラフィー法、バッチクロマトグラフィー法、薄層クロマトグラフィー法等、精製に適した方法を選択することができる。
【００８０】
得られた本発明のテルペノイド誘導体の立体構造は、原料化合物の立体構造に由来している。原料化合物にあらたに導入した置換基の立体は、二次元核磁気共鳴スペクトル（ＮＯＥＳＹ）を用いて決定した。  
例えば、前述の（２）に記載の物理化学的性状を有するテルペノイド誘導体Ａの平面構造式は、下記式（Ｉ’）のように示される。原料化合物の立体構造と、（２）に記載の物理化学的性状、および、後述する実施例３に記載の二次元核磁気共鳴スペクトル（ＮＯＥＳＹ）の測定結果から、テルペノイド誘導体Ａの立体構造を、式（Ｉ）で表される立体構造と決定した。  
同様に、前述の（４）に記載の物理化学的性状を有するテルペノイド誘導体Ｂの平面構造式は下記式（ＩＩ’）のように示され、前述の（６）に記載の物理化学的性状を有するテルペノイド誘導体Ｃの平面構造式は下記式（ＩＩＩ’）のように示される。原料化合物の立体構造と、（４）に記載の物理化学的性状、（６）に記載の物理化学的性状、および、後述する実施例１に記載の二次元核磁気共鳴スペクトル（ＮＯＥＳＹ）の測定結果から、テルペノイド誘導体Ｂとテルペノイド誘導体Ｃの立体構造を、それぞれ、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）で表される立体構造と決定した。  
【化１６】
2014148455.tif 000018
【００８１】
３．本発明のテルペノイド誘導体を含有する医薬
上述の様にして精製された本発明のテルペノイド誘導体は、Ｋｅａｐ１／Ｎｒｆ２／ＡＲＥシグナル伝達経路を活性化する作用を有し、抗炎症作用、細胞保護作用を有する。
Ｋｅａｐ１／Ｎｒｆ２／ＡＲＥシグナル伝達経路が活性化されると、その標的遺伝子であるＮＡＤ（Ｐ）Ｈ：ｑｕｉｎｏｎｅ ｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ-１ (ＮＱＯ１)、ｈｅｍｅ ｏｘｙｇｅｎａｓｅ-１  (ＨＯ−１)、γ-ｇｌｕｔａｍａｔｅ ｃｙｓｔｅｉｎｅ ｌｉｇａｓｅ ｃａｔａｌｙｔｉｃ ｓｕｂｕｎｉｔ （ＧＣＬＣ）等が誘導される（非特許文献１）。これらの酵素量が増加あるいは活性化されると、細胞は毒物、酸化ストレス、炎症等に対して耐性となるため、本発明のテルペノイド誘導体は、以下に示す眼疾患、腎疾患、肝疾患、糖尿病およびその合併症等の疾患の予防剤又は治療剤として有用である。  
眼疾患として、アレルギー性結膜疾患、ウィルス性結膜炎、翼状片、角膜感染症、ドライアイ、角膜障害（角膜上皮障害、及び／又は、角膜内皮障害である）、ぶどう膜炎、ベーチェット病、糖尿病網膜症、網膜剥離、網膜静脈閉塞（Ｒｅｔｉｎａｌ  Ｖｅｉｎ  Ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ：  ＲＶＯ）、中心性漿液性脈絡網膜症、加齢黄斑変性（Ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  Ｍａｃｕｌａｒ  Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ：  ＡＭＤ）、糖尿病黄斑浮腫（Ｄｉａｂｅｔｉｃ  Ｍａｃｕｌａｒ  Ｅｄｅｍａ：  ＤＭＥ）、黄斑疾患、網膜色素変性、緑内障、白内障などの疾患が例示される。  
腎疾患として、急性腎炎、慢性腎炎、急性腎不全、慢性腎不全、ネフローゼ症候群、ＩｇＡ腎症、糖尿病腎症、痛風腎、腎硬化症、水腎症、尿細管間質性腎炎、冠動脈バイパス手術後の腎機能低下、腎尿路感染症などの腎障害に起因する疾患が例示される。  
呼吸器疾患として、気管支炎、肺炎、胸膜炎、慢性閉塞性肺疾患（Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ｄｉｓｅａｓｅ：  ＣＯＰＤ）、急性肺障害（ａｃｕｔｅ  ｌｕｎｇ  ｉｎｊｕｒｙ：  ＡＬＩ）、びまん性汎細気管支炎、肺気腫、喘息などが例示される。  
肝疾患として、アルコール性脂肪肝、非アルコール性脂肪性肝炎、肝線維症、肝硬変、肝移植に伴う肝機能障害などが例示される。  
脳疾患として、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｌａｔｅｒａｌ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ：  ＡＬＳ）、脳梗塞、多発性硬化症（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ：  ＭＳ）などが例示される。  
心臓疾患として、心筋梗塞などが例示される。  
糖尿病およびその合併症として、糖尿病網膜症、糖尿病性腎症、糖尿病性神経障害が例示される。  
【００８２】
これらの疾患の中でも、特に、
眼疾患として、ドライアイ、角膜障害（角膜上皮障害、及び／又は、角膜内皮障害である）、ぶどう膜炎、糖尿病網膜症、網膜静脈閉塞、加齢黄斑変性、糖尿病黄斑浮腫、緑内障、
腎疾患として、糖尿病腎症が、
呼吸器疾患として、慢性閉塞性肺疾患、急性肺障害、
肝疾患として、非アルコール性脂肪性肝炎、肝移植に伴う肝機能障害、
脳疾患として、脳梗塞、多発性硬化症
の予防剤もしくは治療剤として有用である。
【００８３】
これらの疾患の中でも、さらに、ドライアイの予防又は治療剤、角膜上皮、及び／又は、角膜内皮の障害の予防又は治療剤、加齢黄斑変性の予防又は治療剤、糖尿病黄斑浮腫、及び／又は、網膜静脈閉塞の予防又は治療剤、慢性閉塞性肺疾患の予防又は治療剤、脳梗塞の予防又は治療剤、多発性硬化症の予防又は治療剤として好適である。
【００８４】
本発明のテルペノイド誘導体を医薬として用いる場合、種々の形態で投与され得る。その投与形態は、製剤、年齢、性別、疾患等に依存する。例えば、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤等は経口投与される。注射剤等は静脈内投与、筋肉内投与、皮内投与、皮下投与、硝子体内投与、前房内投与、結膜下投与、テノン嚢投与又は腹腔内投与される。点眼剤は点眼投与される。眼軟膏剤は眼粘膜に使用する。坐剤は直腸内投与される。また、いずれの投与法も徐放製剤化して投与することもある。
【００８５】
本発明のテルペノイド誘導体を有効成分として含有する各種製剤は、常法に従い、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、溶解剤、矯味矯臭剤、コーティング剤等、医薬製剤分野において通常使用し得る公知の補助剤を用いて製造することができる。
【００８６】
錠剤の形態に成形するに際しては、担体として当該分野で公知のものを広く使用でき、例えば、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、澱粉、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、珪酸等の賦形剤、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、澱粉液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドン等の結合剤、乾燥澱粉、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、澱粉、乳糖等の崩壊剤、白糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油等の崩壊抑制剤、第四級アンモニウム塩基、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤、グリセリン、澱粉等の保湿剤、澱粉、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状珪酸等の吸着剤、精製タルク、ステアリン酸塩、硼酸末、ポリエチレングリコール等の滑沢剤等を挙げることができる。錠剤は、必要に応じ、通常の剤皮を施した錠剤、例えば、糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠あるいは二重錠、多重錠とすることができる。
【００８７】
丸剤の形態に成形するに際しては、担体として当該分野で公知のものを広く使用でき、例えば、ブドウ糖、乳糖、澱粉、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タルク等の賦形剤、アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン、エタノール等の結合剤、ラミナラン、カンテン等の崩壊剤を挙げることができる。  
【００８８】
注射剤として調製される場合、液剤及び懸濁剤は殺菌され、且つ血液と等張であるのが好ましく、これら液剤、乳剤および懸濁剤の形態に形成するに際しては、希釈剤として当該分野において公知のものを広く使用でき、例えば、水、エチルアルコール、プロピレングリコール、エポキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類等を挙げることができる。等張を維持するために充分な量の食塩、ブドウ糖又はグリセリンを含有せしめてもよい。溶解補助剤、緩衝剤、無痛化剤、着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤、他の薬剤等を含有せしめてもよい。  
なお、注射剤を静脈内投与する場合、単独で、ブドウ糖、アミノ酸等の通常の補液と混合して、又は、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類等とのエマルジョンとして投与され得る。  
【００８９】
点眼剤の形態に成形するに際しては、液剤及び懸濁剤は殺菌され、且つ血液と等張であるのが好ましく、これら液剤、乳剤および懸濁剤の形態に形成するに際しては、希釈剤として当該分野において公知のものを広く使用できる。また、添加物として防腐剤、清涼剤、ｐＨ調整剤などを挙げることができる。  
【００９０】
眼軟膏剤として調製する場合は、無菌であること、粘膜刺激がないこと、目から吸収されないこと、滑りがよいことなどが求められる。基剤としては、軟稠性の眼科用ワセリン等が挙げられる。有効成分を固形のまま微粉末にして分散させる場合には流動パラフィン、液状の場合には精製ラノリンの使用が挙げられる。  
【００９１】
坐剤の形態に成形するに際しては、担体として当該分野で公知のものを広く使用でき、例えばポリエチレングリコール、カカオ脂、高級アルコール、高級アルコールのエステル類、ゼラチン、半合成グリセライド等を挙げることができる。
【００９２】
徐放製剤化に関しては、当該分野で公知のものを広く使用でき、例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、乳酸グリコール酸共重合体などの生分解性ポリマー等を挙げることができる。徐放製剤として、粉末化での徐放化を目指した粉末製剤の他に、化合物単体あるいは徐放化した粉末をロッド状、シート状、フィルム状、ディスク状またはマイクロカプセル状等にした剤型、およびそれらを使用したインプラント剤型も含む。
【００９３】
上述の医薬製剤に含有せしめる本発明のテルペノイド誘導体の量は、特に限定されないが、好適には１乃至８０重量％であり、より好適には１乃至５０重量％である。
【００９４】
本発明のテルペノイド誘導体の投与量は、症状、年齢などにより異なるが、局所投与の場合は、０．０００１μｇ／ｓｉｔｅ乃至１００μｇ／ｓｉｔｅである。全身投与の場合の投与量は、０．００００１ｍｇ／ｋｇ乃至１０ｍｇ／ｋｇである。
【００９５】
本発明のテルペノイド誘導体を有効成分として含有する医薬製剤の投与回数は、１日複数回、１日１回、又は数日に１回である。徐放化製剤の場合は、２週間に１回、４週間に１回、３ヶ月に１回、又は６ヶ月に１回が目安である。
【００９６】
次に、実施例、試験例及び製剤例を挙げて、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例１】
【００９７】
テルペノイド誘導体Ｂ、テルペノイド誘導体Ｃの製造
【化１７】
2014148455.tif 000019
テルペノイド誘導体Ｂ
【化１８】
2014148455.tif 000020
テルペノイド誘導体Ｃ【００９８】
（１）ケトミウム属変換菌の培養
１００ｍｌ容の三角フラスコ４本に下記表１に示す組成の種培養培地を各々２０ｍｌずつ入れ、１２１℃にて２０分間滅菌した後、室温まで冷却し、ＳＡＮＫ  １０３１２株の胞子懸濁液を１ｍｌ接種し、回転振とう培養機で２３℃、２１０ｒｐｍの条件下で２日間培養した。得られた培養液を、以下、「種培養液」という。【００９９】
表１．ＳＡＮＫ  １０３１２株の種培養培地の培地組成
【表１】
2014148455.tif 000021
【０１００】
５００ｍｌ容の三角フラスコ１３本に下記表２に示す組成の本培養培地を各々８０ｍｌずつ入れ、１２１℃にて２０分間滅菌した後、室温まで冷却し、上述のＳＡＮＫ  １０３１２株の種培養液を無菌的に各４ｍｌ接種し、回転振とう培養機で２３℃、２１０ｒｐｍの条件下で２日間培養した。この培養液に１０ｍｇ／ｍｌの濃度でジメチルスルホキシドに溶解したＣＤＤＯ−Ｍｅの溶液を各々０．８ｍｌずつ添加し、再度回転振とう培養機で２３℃、２１０ｒｐｍで６日間培養を行った。【０１０１】
表２．本培養培地の培地組成
【表２】
2014148455.tif 000022
【０１０２】
（２）テルペノイド誘導体Ｂ、テルペノイド誘導体Ｃの単離
本実施例におけるテルペノイド誘導体Ｂ、テルペノイド誘導体Ｃの挙動は、以下に示す条件のＨＰＬＣでモニターした。【０１０３】
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＫ−Ｃ１８    
（直径４．６ｍｍ×長さ７５ｍｍ：インタクト（株）製）
溶  媒：Ａ：０．０１％ギ酸を含む１０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液
Ｂ：０．０１％ギ酸を含むアセトニトリル
Ａ／Ｂ＝５／５で平衡化したのちＡ／Ｂ＝１／９まで７分間の直線グラジエント
流  速：１．０ｍｌ／分
検  出：紫外部吸収  λ２３０ｎｍ
保持時間：４．９分（テルペノイド誘導体Ｂ）
６．１分（テルペノイド誘導体Ｃ）【０１０４】
（１）において得られた培養液１０４０ｍｌに等量のアセトンを添加し、室温で１時間静置後、菌体を吸引濾過によって取り除き、濾液２０００ｍｌを得た。この濾液に酢酸エチル１Ｌを添加し、液々分配することで目的化合物を含む有機層を分離し、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶剤を留去することによって、テルペノイド誘導体Ｂ、テルペノイド誘導体Ｃを含む粉末５４９．９ｍｇを得た。この粉末のうち２７５ｍｇをメタノール１．３７ｍｌに溶解し、そのうち０．２ｍｌを予め０．０１％ギ酸水溶液：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル＝４５：５５の溶媒で平衡化したＨＰＬＣカラム（Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＳ−Ｃ１８：直径２０ｍｍ×長さ１５０ｍｍ：インタクト（株）製）に供与し、０．０１％ギ酸水溶液：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル＝４５：５５の溶媒で流速１８．０ｍｌ／分で溶出した。目的化合物の紫外部吸収を波長λ＝２３０ｎｍにて検出し、保持時間１２．３分に現れるピーク（テルペノイド誘導体Ｂ）と、保持時間２３．９分に現れるピーク（テルペノイド誘導体Ｃ）を７回に分けて分取した。分取液を合併して、減圧濃縮して得られた懸濁液を凍結乾燥し、テルペノイド誘導体Ｂを無色粉末として１６．２ｍｇ、テルペノイド誘導体Ｃを無色粉末として２．４ｍｇ得た。【０１０５】
得られた本発明のテルペノイド誘導体Ｂ、テルペノイド誘導体Ｃの立体構造は、二次元核磁気共鳴スペクトル（ＮＯＥＳＹ）を用いて決定した。
テルペノイド誘導体Ｂは、二次元核磁気共鳴スペクトル（ＮＯＥＳＹ）において、１位のプロトンと１０位のメチル基のプロトン、及び、１９位のβ-プロトンと２１位のβ-プロトンに相関が観察されたことから、立体構造を式（ＩＩ）のように決定した。
テルペノイド誘導体Ｃは、二次元核磁気共鳴スペクトル（ＮＯＥＳＹ）において、１位のプロトンと１０位のメチル基のプロトンに相関が観察されたことから、立体構造を式（ＩＩＩ）のように決定した。【０１０６】
テルペノイド誘導体Ｂの物理化学的性状の測定値
１）物質の性状：無色粉末状物質
２）分子式：Ｃ３２Ｈ４３ＮＯ６
３）分子量：５３７（ＥＳＩマススペクトル法により測定）
４）高分解能ＬＣ−ＥＳＩマススペクトル法により測定した精密質量、［Ｍ＋Ｈ］＋は次に示す通りである。
実測値：５３８．３１５７３
計算値：５３８．３１６３１
５）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：０．９９（３Ｈ，ｓ），０．９９（３Ｈ，ｓ），１．０６（３Ｈ，ｓ），１．１２（３Ｈ，ｓ），１．１９（３Ｈ，ｓ），１．１９−１．２２（１Ｈ，ｍ），１．２７（３Ｈ，ｓ），１．２７（３Ｈ，ｓ），１．２９−１．３５（１Ｈ，ｍ），１．４５−１．４９（１Ｈ，ｍ），１．６２−１．６６（１Ｈ，ｍ），１．５８−１．６７（２Ｈ，ｍ），１．６４−１．６９（１Ｈ，ｍ），１．７２−１．７５（１Ｈ，ｍ），１．６９−１．７９（２Ｈ，ｍ），１．８８（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，３．０Ｈｚ），１．９６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，４．５Ｈｚ），２．９７（１Ｈ，ｓ），３．０４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，４．５Ｈｚ），３．４９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，５．０Ｈｚ），３．７０（３Ｈ，ｓ），４．３４（１Ｈ，ｓ），６．０８（１Ｈ，ｓ）ｐｐｍ
６）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：１６．６（ｑ），１８．５（ｔ），２１．６（ｑ×２），２３．０（ｑ），２４．０（ｑ），２４．１（ｔ），２８．２（ｑ），２８．４（ｔ），２９．３（ｑ），３１．３（ｄ），３１．６（ｄ），３６．１（ｔ），３６．２（ｓ），４０．４（ｔ），４１．１（ｓ），４２．２（ｓ），４２．８（ｄ），４５．３（ｓ），４５．８（ｓ），４９．１（ｓ），４９．３（ｄ），５２．３（ｓ），５３．４（ｓ），６９．２（ｄ），７３．９（ｔ），１１３．７（ｓ），１２５．０  （ｄ），１６８．９（ｓ），１７６．８（ｓ），１９８．９（ｓ），２０２．５（ｓ）ｐｐｍ
７）高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＫ−Ｃ１８  
（直径４．６ｍｍ×長さ７５ｍｍ：インタクト（株）製）
溶  媒：Ａ：０．０１％ギ酸含有１０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液
Ｂ：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル
Ａ／Ｂ＝４５／５５ のアイソクラティック    
流  速：１．０ｍｌ／分
温  度：４０℃
検  出：紫外部吸収  λ２３０ｎｍ
保持時間：３．８分、
８）テルペノイド誘導体Ｂの１Ｈ−核磁気共鳴スペクトルを図４に、二次元核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−１３Ｃ  ＨＳＱＣスペクトル）を図５に示す。１Ｈ−核磁気共鳴スペクトルと二次元核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−１３Ｃ  ＨＳＱＣスペクトル）の解析の結果、各プロトンを以下のように帰属した。
１位のプロトン：４．３４ｐｐｍ（メチン）
１０位のメチル基のプロトン：１．２７ｐｐｍ（メチル）
１９位のβ-プロトン：１．２９−１．３５ｐｐｍ（メチン）
２１位のβ−プロトン：３．４９ｐｐｍ（メチン）
９）テルペノイド誘導体Ｂの二次元核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−１Ｈ  ＮＯＥＳＹスペクトル）を図６に示す。図６において、１位のプロトンと１０位のメチル基のプロトン、及び、１９位のβ−プロトンと２１位のβ−プロトンに相関が認められることから、立体構造を（ＩＩ）のように決定した。【０１０７】
テルペノイド誘導体Ｃの物理化学的性状の測定値
１）物質の性状：無色粉末状物質
２）分子式：Ｃ３２Ｈ４１ＮＯ６
３）分子量：５３５（ＥＳＩマススペクトル法により測定）
４）高分解能ＬＣ−ＥＳＩマススペクトル法により測定した精密質量、［Ｍ＋Ｈ］＋は次に示す通りである。
実測値：５３６．３００２３
計算値：５３６．３００６６
５）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：１．０４（３Ｈ，ｓ），１．０５（３Ｈ，ｓ），１．１３（３Ｈ，ｓ），１．１９（３Ｈ，ｓ），１．２０−１．２６（１Ｈ，ｍ），１．３０（ｍ，３Ｈ），１．２９（３Ｈ，ｓ），１．３３（３Ｈ，ｓ），１．４７−１．５０（１Ｈ，ｍ），１．６３−１．６８（２Ｈ，ｍ），１．５９−１．６８（２Ｈ，ｍ），１．６５−１．６７（１Ｈ，ｍ），１．６４−１．７３（２Ｈ，ｍ），１．７１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ），１．９８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ），２．０３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．０Ｈｚ，３．５Ｈｚ），２．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４．５Ｈｚ），２．８５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４．５Ｈｚ），３．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ），３．３８（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ），３．７４（３Ｈ，ｓ），４．３４（１Ｈ，ｓ），６．１２（１Ｈ，ｓ）ｐｐｍ
６）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：１８．４（ｔ），２１．６（ｑ×２），２３．０（ｑ），２４．１（ｑ×２），２５．５（ｑ），２５．６（ｔ），２８．２（ｑ），２８．３（ｔ），３１．５（ｔ），３１．７（ｄ），３７．４（ｔ），４１．２（ｓ），４２．１（ｓ），４２．８（ｄ），４５．３（ｓ），４５．６（ｓ），４５．９（ｓ），４７．０（ｔ），４９．１（ｄ），５１．１（ｓ），５２．７（ｑ），５３．４（ｓ），６９．２（ｄ），１１３．７（ｓ），１２４．８（ｄ），１６９．４（ｓ），１７５．５（ｓ），１９８．５（ｓ），２０２．４（ｓ），２１３．４（ｓ）ｐｐｍ
７）高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＫ−Ｃ１８  
（直径４．６ｍｍ×長さ７５ｍｍ：インタクト（株）製）
溶  媒：Ａ：０．０１％ギ酸含有１０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液
Ｂ：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル
Ａ／Ｂ＝４５／５５ のアイソクラティック    
流  速：１．０ｍｌ／分
温  度：４０℃
検  出：紫外部吸収  λ２３０ｎｍ
保持時間：６．２分、
８）テルペノイド誘導体Ｃの１Ｈ−核磁気共鳴スペクトルを図７に、二次元核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−１３Ｃ  ＨＳＱＣスペクトル）を図８に示す。１Ｈ−核磁気共鳴スペクトルと二次元核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−１３Ｃ  ＨＳＱＣスペクトル）の解析の結果、各プロトンを以下のように帰属した。
１位のプロトン：４．３４ｐｐｍ（メチン）
１０位のメチル基のプロトン：１．３０ｐｐｍ（メチル）
９）テルペノイド誘導体Ｃの二次元核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−１Ｈ  ＮＯＥＳＹスペクトル）を図９に示す。図９において、１位のプロトンと１０位のメチル基のプロトンに相関が認められたことから、立体構造を（ＩＩＩ）のように決定した。
【実施例２】
【０１０８】
テルペノイド誘導体Ｂ、テルペノイド誘導体Ｃの製造
（１）ムコール属変換菌の培養
１００ｍｌ容の三角フラスコに上記表１に示す組成の種培養培地を２０ｍｌ入れ、１２１℃にて２０分間滅菌した後、室温まで冷却し、ＳＡＮＫ  １０６１２株の胞子懸濁液を１ｍｌ接種し、回転振とう培養機で２３℃、２１０ｒｐｍの条件下で２日間培養した。得られた培養液を、以下、「種培養液」という。【０１０９】
５００ｍｌ容の三角フラスコに上記表２に示す組成の本培養培地を８０ｍｌ入れ、１２１℃にて２０分間滅菌した後、室温まで冷却し、上述のＳＡＮＫ  １０６１２株の種培養液を無菌的に４ｍｌ接種し、回転振とう培養機で２３℃、２１０ｒｐｍの条件下で２日間培養した。この培養液に１０ｍｇ／ｍｌの濃度でジメチルスルホキシドに溶解したＣＤＤＯ−Ｍｅの溶液を０．８ｍｌ添加し、再度回転振とう培養機で２３℃、２１０ｒｐｍで１０日間培養を行った。【０１１０】
（２）テルペノイド誘導体Ｂ、テルペノイド誘導体Ｃの単離
本実施例におけるテルペノイド誘導体Ｂ、テルペノイド誘導体Ｃの挙動は、以下に示す条件のＨＰＬＣでモニターした。【０１１１】
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＫ−Ｃ１８  
（直径４．６ｍｍ×長さ７５ｍｍ：インタクト（株）製）
溶  媒：Ａ：０．０１％ギ酸を含む１０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液
Ｂ：０．０１％ギ酸を含むアセトニトリル
Ａ／Ｂ＝５／５で平衡化したのちＡ／Ｂ＝１／９まで７分間の直線グラジエント
流  速：１．０ｍｌ／分
温  度：４０℃
検  出：紫外部吸収  λ２３０ｎｍ
保持時間：４．９分（テルペノイド誘導体Ｂ）
６．１分（テルペノイド誘導体Ｃ）【０１１２】
（１）において得られた培養液のうち１ｍｌを抜き取り、アセトニトリル０．５ｍｌ、エタノール０．５ｍｌを添加し、室温で１時間静置した後、１００００ｒｐｍ、１０分の遠心分離処理を行い、その上清を培養液抽出物とした。  
このようにして調整した培養液抽出物１０μｌを上記ＨＰＬＣ条件で溶出した。目的化合物の紫外部吸収を波長λ＝２３０ｎｍにて検出し、保持時間４．９分に現れるピーク（テルペノイド誘導体Ｂ）、保持時間６．１分に現れるピーク（テルペノイド誘導体Ｃ）のピーク面積よりＣＤＤＯ−Ｍｅに対する変換効率を算出したところ、テルペノイド誘導体Ｂを１０％、テルペノイド誘導体Ｃを１％確認した。なお、標品は実施例１で得られたテルペノイド誘導体Ｂ、テルペノイド誘導体Ｃを使用した。
【実施例３】
【０１１３】
テルペノイド誘導体Ａの製造
【化１９】
2014148455.tif 000023
テルペノイド誘導体Ａ【０１１４】
（１）カニングハメラ属変換菌の培養
１００ｍｌ容の三角フラスコ１０本に上記表１に示す組成の種培養培地を２０ｍｌずつ入れ、１２１℃にて２０分間滅菌した後、室温まで冷却し、ＳＡＮＫ  １０４１２株の胞子懸濁液を１ｍｌ接種し、回転振とう培養機で２３℃、２１０ｒｐｍの条件下で２日間培養した。（得られた培養液を、以下、「種培養液」という。）【０１１５】
５００ｍｌ容の三角フラスコ３０本に上記表２に示す組成の本培養培地を各々８０ｍｌずつ入れ、１２１℃にて２０分間滅菌した後、室温まで冷却し、上述の種培養液を無菌的に各４ｍｌ接種し、回転振とう培養機で２３℃、２１０ｒｐｍの条件下で２日間培養した。この培養液に１０ｍｇ／ｍｌの濃度でジメチルスルホキシドに溶解したＣＤＤＯ−Ｍｅの溶液を各々０．８ｍｌずつ添加し、再度回転振とう培養機で２３℃、２１０ｒｐｍで７日間培養を行った。【０１１６】
（２）テルペノイド誘導体Ａの単離
本実施例におけるテルペノイド誘導体Ａの挙動は、以下に示す条件のＨＰＬＣでモニターした。【０１１７】
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＫ−Ｃ１８  
（直径４．６ｍｍ×長さ７５ｍｍ：インタクト（株）製）
溶  媒：Ａ：０．０１％ギ酸を含む１０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液
Ｂ：０．０１％ギ酸を含むアセトニトリル
Ａ／Ｂ＝５／５で平衡化したのちＡ／Ｂ＝１／９まで７分間の直線グラジエント
流  速：１．０ｍｌ／分
温  度：４０℃
検  出：紫外部吸収  λ２３０ｎｍ
保持時間：５．９分【０１１８】
（１）において得られた培養液２４００ｍｌに等量のアセトンを添加し、室温で一晩静置後、菌体を吸引濾過によって取り除き、濾液４５００ｍｌを得た。この濾液を、あらかじめ水で平衡化したダイヤイオンＳＰ２０７（１５０ｍＬ：三菱化学（株）製）カラムに付した。カラムを蒸留水：アセトン＝５：５の溶媒６００ｍｌで洗浄した後、蒸留水：アセトン＝４：６の溶媒４５０ｍｌで溶出し、次いで蒸留水：アセトン＝７：３の溶媒９００ｍｌで溶出した。このようにして得られた画分のうち目的化合物が含まれる溶出液を合わせた後濃縮し、次いで凍結乾燥を行うことでテルペノイド誘導体Ａを含む粉末３９０．６ｍｇを得た。この粉末をジメチルスルホキシド３．９ｍｌに溶解し、そのうち０．５ｍｌをあらかじめ０．０１％ギ酸水溶液：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル＝４５：５５の溶媒で平衡化したＨＰＬＣカラム（Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＳ−Ｃ１８：直径２０ｍｍ×長さ１５０ｍｍ：インタクト（株）製）に供与し、０．０１％ギ酸水溶液：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル＝４５：５５の溶媒で流速１８．０ｍｌ／分で溶出した。目的化合物の紫外部吸収を波長λ＝２３０ｎｍにて検出し、保持時間１６．８分に現れるピークを６回に分けて分取した。分取液をまとめ、減圧濃縮して得られた懸濁液を凍結乾燥し、テルペノイド誘導体Ａを無色粉末として１．９ｍｇ得た。【０１１９】
テルペノイド誘導体Ａの物理化学的性状の測定値
１）物質の性状：無色粉末状物質
２）分子式：Ｃ３２Ｈ４３ＮＯ６
３）分子量：５３７（ＥＳＩマススペクトル法により測定）
４）高分解能ＬＣ−ＥＳＩマススペクトル法により測定した精密質量、［Ｍ＋Ｈ］＋は次に示す通りである。
実測値：５３８．３１５４９
計算値：５３８．３１６３１
５）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：０．９２（３Ｈ，ｓ），１．０８（３Ｈ，ｓ），１．１２（３Ｈ，ｓ），１．１４−１．１７（１Ｈ，ｍ），１．１９（３Ｈ，ｓ），１．２２−１．２４（１Ｈ，ｍ），１．１８−１．２５（１Ｈ，ｍ），１．２８（３Ｈ，ｓ），１．２８（３Ｈ，ｓ），１．４６−１．４８（１Ｈ，ｍ），１．４８−１．５２（１Ｈ，ｍ），１．５０−１．５４（１Ｈ，ｍ），１．５９−１．６７（２Ｈ，ｍ），１．６２−１．６６（１Ｈ，ｍ），１．６４−１．６７（１Ｈ，ｍ），１．７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ），１．８０−１．８３（１Ｈ，ｍ），１．８５−１．８７（２Ｈ，ｍ），１．９８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，４．５Ｈｚ），２．９５（１Ｈ，ｓ），２．９８（１Ｈ，ｂｒｓ），３．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ），３．７０（３Ｈ，ｓ），３．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ），４．３４（１Ｈ，ｓ），６．１１（１Ｈ，ｓ）ｐｐｍ
６）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。  
σ：１８．５（ｔ），２１．１（ｑ），２１．６（ｑ），２３．０（ｑ），２４．０（ｑ），２４．１（ｔ），２７．３（ｑ），２８．２（ｑ），２８．６（ｔ），２９．６（ｔ），３１．０（ｄ），３１．５（ｔ），３１．６（ｔ），３２．４（ｔ），３５．７（ｓ），４１．２（ｓ），４２．３（ｓ），４２．８（ｄ），４５．３（ｓ），４５．８（ｓ），４７．１（ｓ），４９．６（ｄ），５２．３（ｑ），５３．５（ｓ），６７．６（ｔ），６９．３（ｄ），１１３．７（ｓ），１２４．８（ｄ），１６９．８（ｓ），１７８．０（ｓ），１９９．６（ｓ），２０２．５（ｓ）ｐｐｍ
７）高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＫ−Ｃ１８  
（直径４．６ｍｍ×長さ７５ｍｍ：インタクト（株）製）
溶  媒：Ａ：０．０１％ギ酸含有１０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液
Ｂ：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル
Ａ／Ｂ＝４５／５５ のアイソクラティック
流  速：１．０ｍｌ／分
温  度：４０℃
検  出：紫外部吸収  λ２３０ｎｍ
保持時間：５．８分、
８）テルペノイド誘導体Ａの１Ｈ−核磁気共鳴スペクトルを図１に、二次元核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−１３Ｃ  ＨＳＱＣスペクトル）を図２に示す。１Ｈ−核磁気共鳴スペクトルおよび二次元核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−１３Ｃ  ＨＳＱＣスペクトル）の解析の結果、各プロトンを以下のように帰属した。
１位のプロトン：４．３４ｐｐｍ（メチン）
１０位のメチル基のプロトン：１．２８ｐｐｍ（メチル）
１８位のプロトン：２．９８ｐｐｍ（メチン）
２０位のヒドロキシメチル基のメチレンプロトン：３．７３ｐｐｍ、３．４５ｐｐｍ（メチレン）
９）テルペノイド誘導体Ａの二次元核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−１Ｈ  ＮＯＥＳＹスペクトル）を図３に示す。図３において、１位のプロトンと１０位のメチル基のプロトン、及び、１８位のα―プロトンと２０位のヒドロキシメチル基のメチレンプロトンに相関が認められたことから、立体構造を（Ｉ）のように決定した。
【実施例４】
【０１２０】
テルペノイド誘導体Ｄの製造
【化２０】
2014148455.tif 000024
テルペノイド誘導体Ｄ【０１２１】
（１）カニングハメラ属変換菌の培養
１００ｍｌ容の三角フラスコ１０本に上記表１に示す組成の種培養培地を２０ｍｌずつ入れ、１２１℃にて２０分間滅菌した後、室温まで冷却し、ＳＡＮＫ  １０４１２株の胞子懸濁液を１ｍｌ接種し、回転振とう培養機で２３℃、２１０ｒｐｍの条件下で２日間培養した。得られた培養液を、以下、「種培養液」という。【０１２２】
５００ｍｌ容の三角フラスコ３０本に上記表２に示す組成の本培養培地を各々８０ｍｌずつ入れ、１２１℃にて２０分間滅菌した後、室温まで冷却し、上述の種培養液を無菌的に各４ｍｌ接種し、回転振とう培養機で２３℃、２１０ｒｐｍの条件下で２日間培養した。この培養液に１０ｍｇ／ｍｌの濃度でジメチルスルホキシドに溶解したＣＤＤＯ−Ｍｅの溶液を各々０．８ｍｌずつ添加し、再度回転振とう培養機で２３℃、２１０ｒｐｍで７日間培養を行った。【０１２３】
（２）テルペノイド誘導体Ｄの単離
本実施例におけるテルペノイド誘導体Ｄの挙動は、以下に示す条件のＨＰＬＣでモニターした。【０１２４】
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＫ−Ｃ１８  
（直径４．６ｍｍ×長さ７５ｍｍ：インタクト（株）製）
溶  媒：Ａ：０．０１％ギ酸含有１０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液
Ｂ：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル
Ａ／Ｂ＝５／５で平衡化したのちＡ／Ｂ＝１／９まで７分間の直線グラジエント
流  速：１．０ｍｌ／分
温  度：４０℃
検  出：紫外部吸収  λ２３０ｎｍ
保持時間：５．２分【０１２５】
（１）において得られた培養液２４００ｍｌに等量のアセトンを添加し、室温で一晩静置後、菌体を吸引濾過によって取り除き、濾液４５００ｍｌを得た。この濾液を、あらかじめ水で平衡化したダイヤイオンＳＰ２０７（１５０ｍＬ：三菱化学（株）製）カラムに付した。カラムを蒸留水：アセトン＝５：５の溶媒１０００ｍｌで洗浄した後、蒸留水：アセトン＝４：６の溶媒４５０ｍｌで溶出し、次いで蒸留水：アセトン＝７：３の溶媒９００ｍｌで溶出した。このようにして得られた画分のうち目的化合物が含まれる溶出液を合わせた後濃縮し、次いで凍結乾燥を行うことでテルペノイド誘導体Ｄを含む抽出物を３９０．６ｍｇを得た。この粉末をジメチルスルホキシド３．９ｍｌに溶解し、そのうち０．５ｍｌをあらかじめ０．０１％ギ酸水溶液：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル＝４５：５５の溶媒で平衡化したＨＰＬＣカラム（Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＳ−Ｃ１８：直径２０ｍｍ×長さ１５０ｍｍ：インタクト（株）製）に供与し、０．０１％ギ酸水溶液：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル＝４５：５５の溶媒で流速１８．０ｍｌ／分で溶出した。目的化合物の紫外部吸収を波長λ＝２３０ｎｍにて検出し、保持時間１２．８分に現れるピーク（テルペノイド誘導体Ｄ）を６回に分けて分取した。分取液をまとめ、減圧濃縮して得られた懸濁液を凍結乾燥し、テルペノイド誘導体Ｄを無色粉末として８．８ｍｇ得た。【０１２６】
テルペノイド誘導体Ｄの物理化学的性状の測定値
１）物質の性状：無色粉末状物質
２）分子式：Ｃ３２Ｈ４３ＮＯ６
３）分子量：５３７（ＥＳＩマススペクトル法により測定）
４）高分解能ＬＣ−ＥＳＩマススペクトル法により測定した精密質量、［Ｍ＋Ｈ］＋は次に示す通りである。
実測値：５３８．３１５９２
計算値：５３８．３１６３１
５）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：１．０５（３Ｈ，ｓ），１．１１（３Ｈ，ｓ），１．１５（３Ｈ，ｓ），１．２２（３Ｈ，ｓ），１．２５−１．２７（１Ｈ，ｍ），１．２７−１．２９（１Ｈ，ｍ），１．３０（３Ｈ，ｓ），１．３０（３Ｈ，ｓ），１．４０（１Ｈ，ｂｒｔ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ），１．４８−１．５２（１Ｈ，ｍ），１．５０−１．５４（１Ｈ，ｍ），１．５８−１．６０（１Ｈ，ｍ），１．６０−１．６３（１Ｈ，ｍ），１．６２−１．７１（２Ｈ，ｍ），１．６６−１．７０（１Ｈ，ｍ），１．６９−１．７３（１Ｈ，ｍ），１．７６−１．８２（１Ｈ，ｍ），１．９０−１．９４（１Ｈ，ｍ），１．９３−１．９９（１Ｈ，ｍ），２．０１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１０．０Ｈｚ），３．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．５  Ｈｚ），３．１２（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１３．５  Ｈｚ），３．３２（３Ｈ，ｓ），３．７４（３Ｈ，ｓ），４．３６（１Ｈ，ｓ），６．１１（１Ｈ，ｓ）ｐｐｍ
６）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：１８．３（ｔ），１８．７（ｑ），２１．４（ｑ），２１．５（ｑ），２２．７（ｔ），２２．８（ｑ），２３．９（ｑ），２８．０（ｑ），２８．２（ｔ），２８．７（ｔ），３０．１（ｔ），３０．８（ｄ），３１．４（ｔ），３２．０（ｔ），３５．８（ｓ），４０．９（ｓ），４２．０（ｓ），４２．５（ｄ），４５．１（ｓ），４５．６（ｓ），４７．４（ｓ），４９．６（ｄ），５２．０（ｑ），５３．２（ｓ），６９．１（ｄ），７４．２（ｔ），１１３．６（ｓ），１２４．８（ｄ），１６８．７（ｓ），１７８．０（ｓ），１９８．７（ｓ），２０２．４（ｓ）ｐｐｍ
７）液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＫ−Ｃ１８  
（直径４．６ｍｍ×長さ７５ｍｍ：インタクト（株）製）
溶  媒：Ａ：０．０１％ギ酸含有１０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液
Ｂ：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル
Ａ／Ｂ＝５／５で平衡化したのちＡ／Ｂ＝１／９まで７分間の直線グラジエント
流  速：１．０ｍｌ／分
温  度：４０℃
検  出：紫外部吸収  λ２３０ｎｍ
保持時間：５．２分、
８）テルペノイド誘導体Ｄの１Ｈ−核磁気共鳴スペクトルを図１０に、二次元核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−１３Ｃ  ＨＳＱＣスペクトル）を図１１示す。１Ｈ−核磁気共鳴スペクトルおよび二次元核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−１３Ｃ  ＨＳＱＣスペクトル）の解析の結果、各プロトンを以下のように帰属した。
１位のプロトン：４．３６ｐｐｍ（メチン）
１０位のメチル基のプロトン：１．３０ｐｐｍ
１８位のα−プロトン：３．１２ｐｐｍ（メチン）
２０位のメチル基のプロトン：１．０５ｐｐｍ（メチレン）
９）テルペノイド誘導体Ｄの二次元核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−１Ｈ  ＮＯＥＳＹスペクトル）を図１２に示す。図１２において、１位のプロトンと１０位に結合したメチル基のプロトン、及び、１８位のα−プロトンと２０位のメチル基のプロトンに相関が認められたことから、立体構造を（ＩＶ）のように決定した。
【実施例５】
【０１２７】
テルペノイド誘導体Ｈの製造
【化２１】
2014148455.tif 000025
テルペノイド誘導体Ｈ【０１２８】
（１）カニングハメラ属変換菌の培養
１００ｍｌ容の三角フラスコ１０本に上記表１に示す組成の種培養培地を２０ｍｌずつ入れ、１２１℃にて２０分間滅菌した後、室温まで冷却し、ＳＡＮＫ  １０４１２株の胞子懸濁液を１ｍｌ接種し、回転振とう培養機で２３℃、２１０ｒｐｍの条件下で２日間培養した。（得られた培養液を、以下、「種培養液」という。）【０１２９】
５００ｍｌ容の三角フラスコ３０本に上記表２に示す組成の本培養培地を各々８０ｍｌずつ入れ、１２１℃にて２０分間滅菌した後、室温まで冷却し、上述の種培養液を無菌的に各４ｍｌ接種し、回転振とう培養機で２３℃、２１０ｒｐｍの条件下で２日間培養した。この培養液に１０ｍｇ／ｍｌの濃度でジメチルスルホキシドに溶解したＣＤＤＯ−Ｍｅの溶液を各々０．８ｍｌずつ添加し、再度回転振とう培養機で２３℃、２１０ｒｐｍで７日間培養を行った。【０１３０】
（２）テルペノイド誘導体Ｈの単離
本実施例におけるテルペノイド誘導体Ｈの挙動は、以下に示す条件のＨＰＬＣでモニターした。【０１３１】
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＫ−Ｃ１８  
（直径４．６ｍｍ×長さ７５ｍｍ：インタクト（株）製）
溶  媒：Ａ：０．０１％ギ酸含有１０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液
Ｂ：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル
Ａ／Ｂ＝５／５で平衡化したのちＡ／Ｂ＝１／９まで７分間の直線グラジエント
流  速：１．０ｍｌ／分
温  度：４０℃
検  出：紫外部吸収  λ２３０ｎｍ
保持時間：６．０分【０１３２】
（１）において得られた培養液２４００ｍｌに等量のアセトンを添加し、室温で一晩静置後、菌体を吸引濾過によって取り除き、濾液４５００ｍｌを得た。この濾液を、あらかじめ水で平衡化したダイヤイオンＳＰ２０７（１５０ｍＬ：三菱化学（株）製）カラムに付した。カラムを蒸留水：アセトン＝５：５の溶媒１０００ｍｌで洗浄した後、蒸留水：アセトン＝４：６の溶媒４５０ｍｌで溶出し、次いで蒸留水：アセトン＝７：３の溶媒９００ｍｌで溶出した。このようにして得られた画分のうち目的化合物が含まれる溶出液を合わせた後濃縮し、次いで凍結乾燥を行うことでテルペノイド誘導体Ｈを含む抽出物３９０．６ｍｇを得た。この粉末をジメチルスルホキシド３．９ｍｌに溶解し、そのうち０．５ｍｌをあらかじめ０．０１％ギ酸水溶液：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル＝４５：５５の溶媒で平衡化したＨＰＬＣカラム（Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＳ−Ｃ１８：直径２０ｍｍ×長さ１５０ｍｍ：インタクト（株）製）に供与し、０．０１％ギ酸水溶液：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル＝４５：５５の溶媒で流速１８．０ｍｌ／分で溶出した。目的化合物の紫外部吸収を波長λ＝２３０ｎｍにて検出し、保持時間２０．０分に現れるピーク（テルペノイド誘導体Ｈ）を６回に分けて分取した。分取液をまとめ、減圧濃縮して得られた懸濁液を凍結乾燥し、テルペノイド誘導体Ｈを無色粉末として１４．１ｍｇ得た。【０１３３】
テルペノイド誘導体Ｈの物理化学的性状の測定値
１）物質の性状：無色粉末状物質
２）分子式：Ｃ３２Ｈ４３ＮＯ６
３）分子量：５３７（ＥＳＩマススペクトル法により測定）
４）高分解能ＬＣ−ＥＳＩマススペクトル法により測定した精密質量、［Ｍ＋Ｈ］＋は次に示す通りである。
実測値：５３８．３１５４３
計算値：５３８．３１６３１
５）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：０．９０（３Ｈ，ｓ），１．００（３Ｈ，ｓ），１．１３（３Ｈ，ｓ），１．１３（３Ｈ，ｓ），１．２０（３Ｈ，ｓ），１．２８（３Ｈ，ｓ），１．２２−１．２４（１Ｈ，ｍ），１．２３−１．２７（１Ｈ，ｍ），１．３０（３Ｈ，ｓ），１．３１−１．３４（１Ｈ，ｍ），１．３９−１．４１（１Ｈ，ｍ），１．５２−１．５５（１Ｈ，ｍ），１．５８−１．６０（１Ｈ，ｍ），１．６７−１．７０（１Ｈ，ｍ），１．７３−１．７８（１Ｈ，ｍ），１．７４−１．７６（１Ｈ，ｍ），１．８２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１４．０Ｈｚ），１．９０−１．９３（１Ｈ，ｍ），１．９３−１．９５（１Ｈ，ｍ），２．０１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１３．５Ｈｚ），２．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．５  Ｈｚ），３．０６（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝１３．５  Ｈｚ），３．７１（３Ｈ，ｓ），４．０７（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），４．３０（１Ｈ，ｓ），６．０８（１Ｈ，ｓ）ｐｐｍ
６）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：１９．３（ｑ），２１．７（ｑ），２２．４６（ｑ），２２．４８（ｑ），２３．１（ｔ），２３．３（ｑ），２８．２（ｑ），２８．８（ｔ），３０．９（ｓ），３１．６（ｔ），３１．８（ｄ），３３．５（ｑ），３４．７（ｔ），３６．２（ｔ），３９．８（ｄ），４１．３（ｓ），４３．５（ｓ），４５．０（ｓ），４７．３（ｓ），４９．７（ｄ），５１．２（ｓ），５２．２（ｑ），５３．４（ｓ），６９．１（ｄ），７０．７（ｄ），１１３．６（ｓ），１２５．８（ｄ），１６８．７（ｓ），１７８．３（ｓ），１９８．８（ｓ），２０２．０（ｓ）ｐｐｍ
７）高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＫ−Ｃ１８  
（直径４．６ｍｍ×長さ７５ｍｍ：インタクト（株）製）
溶  媒：Ａ：０．０１％ギ酸含有１０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液
Ｂ：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル
Ａ／Ｂ＝５／５で平衡化したのちＡ／Ｂ＝１／９まで７分間の直線グラジエント
流  速：１．０ｍｌ／分
温  度：４０℃
検  出：紫外部吸収  λ２３０ｎｍ
保持時間：６．０分。
【実施例６】
【０１３４】
テルペノイド誘導体Ｅの製造
【化２２】
2014148455.tif 000026
テルペノイド誘導体Ｅ【０１３５】
（１）ケトミウム属変換菌の培養
１００ｍｌ容の三角フラスコ１本に下記表１に示す組成の種培養培地を２０ｍｌ入れ、１２１℃にて２０分間滅菌した後、室温まで冷却し、ＳＡＮＫ  １０３１２株の胞子懸濁液を１ｍｌ接種し、回転振とう培養機で２３℃、２１０ｒｐｍの条件下で２日間培養した。（得られた培養液を、以下、「種培養液」という）。【０１３６】
５００ｍｌ容の三角フラスコ１本に上記表２に示す組成の本培養培地を８０ｍｌ入れ、１２１℃にて２０分間滅菌した後、室温まで冷却し、上述のＳＡＮＫ  １０３１２株の種培養液を無菌的に４ｍｌ接種し、回転振とう培養機で２３℃、２１０ｒｐｍの条件下で２日間培養した。この培養液に１０ｍｇ／ｍｌの濃度でジメチルスルホキシドに溶解した化合物（ＩＸ）の溶液を０．８ｍｌ添加し、再度回転振とう培養機で２３℃、２１０ｒｐｍで７日間培養を行った。【０１３７】
（２）テルペノイド誘導体Ｅの単離
本実施例におけるテルペノイド誘導体Ｅの挙動は、以下に示す条件のＨＰＬＣでモニターした。【０１３８】
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＫ−Ｃ１８  
（直径４．６ｍｍ×長さ７５ｍｍ：インタクト（株）製）
溶  媒：Ａ：０．０１％ギ酸を含む１０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液
Ｂ：０．０１％ギ酸を含むアセトニトリル
Ａ／Ｂ＝５／５で平衡化したのちＡ／Ｂ＝１／９まで７分間の直線グラジエント
流  速：１．０ｍｌ／分
温  度：４０℃
検  出：紫外部吸収  λ２３０ｎｍ
保持時間：３．２分（テルペノイド誘導体Ｅ）【０１３９】
（１）において得られた培養液８０ｍｌに等量のアセトンを添加し、室温で一晩静置後、菌体を吸引濾過によって取り除き、濾液１５０ｍｌを得た。この濾液に酢酸エチル８０ｍｌを添加し、液々分配することで目的化合物を含む有機層を分離し、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶剤を留去することによって、テルペノイド誘導体Ｅを含む残渣６２．１ｍｇを得た。この粉末をジメチルスルホキシド０．６２ｍｌに溶解し、そのうち０．３ｍｌをあらかじめ０．０１％ギ酸水溶液：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル＝６０：４０の溶媒で平衡化したＨＰＬＣカラム（Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＳ−Ｃ１８：直径２０ｍｍ×長さ１５０ｍｍ：インタクト（株）製）に供与し、０．０１％ギ酸水溶液：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル＝６０：４０の溶媒で２０分間アイソクラティックで展開したのち、０．０１％ギ酸水溶液：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル＝１０：９０の溶媒比まで２０分間の直線グラジエントで展開し、流速１８．０ｍｌ／分で溶出した。目的化合物の紫外部吸収を波長λ＝２３０ｎｍにて検出し、保持時間１９．０分に現れるピーク（テルペノイド誘導体Ｅ）を２回に分けて分取した。分取液をまとめ、減圧濃縮して得られた懸濁液を凍結乾燥し、テルペノイド誘導体Ｅを無色粉末として０．９５ｍｇ得た。【０１４０】
テルペノイド誘導体Ｅの物理化学的性状の測定値
１）物質の性状：無色粉末状物質
２）分子式：Ｃ３１Ｈ４２Ｎ２Ｏ５
３）分子量：５２２（ＥＳＩマススペクトル法により測定）
４）高分解能ＬＣ−ＥＳＩマススペクトル法により測定した精密質量、［Ｍ＋Ｈ］＋は次に示す通りである。
実測値：５２３．３１６１６
計算値：５２３．３１６６５
５）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：０．９５（３Ｈ，ｓ），１．０３（３Ｈ，ｓ），１．１０（３Ｈ，ｓ），１．１３（３Ｈ，ｓ），１．１９（３Ｈ，ｓ），１．２６−１．３０（１Ｈ，ｍ），１．２８−１．３０（１Ｈ，ｍ），１．２８（３Ｈ，ｓ），１．３４（３Ｈ，ｓ），１．３５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ），１．４８−１．５２（１Ｈ，ｍ），１．５７−１．６０（１Ｈ，ｍ），１．６０−１．６８（２Ｈ，ｍ），１．６４−１．６８（１Ｈ，ｍ），１．６５−１．６９（１Ｈ，ｍ），１．７２−１．７４（１Ｈ，ｍ），１．７９−１．８１（１Ｈ，ｍ），１．９７−１．９９（１Ｈ，ｍ），１．９８−２．００（１Ｈ，ｍ），２．９２（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ），３．４２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．０  Ｈｚ），３．９０（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝１０．０  Ｈｚ），４．３４（１Ｈ，ｓ），６．０８（１Ｈ，ｓ）ｐｐｍ
６）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：１７．４（ｔ），１８．３（ｔ），２１．４（ｑ），２１．５（ｑ），２２．８（ｑ），２４．０（ｑ），２４．２（ｑ），２７．７（ｔ），２８．０（ｑ），３１．１．（ｓ），３１．４（ｔ），３１．８（ｄ），３３．２（ｑ），３５．６（ｔ），４０．９（ｓ），４２．５８（ｄ），４２．６２（ｓ），４３．８（ｔ），４５．１（ｓ），４５．８（ｓ），４９．２（ｄ），５１．６（ｓ），５３．３（ｓ），６９．１（ｄ），７１．０（ｄ），１１３．６（ｓ），１２４．８（ｄ），１６８．７（ｓ），１７８．７（ｓ），１９８．８（ｓ），２０２．３（ｓ）ｐｐｍ
７）高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＫ−Ｃ１８  
（直径４．６ｍｍ×長さ７５ｍｍ：インタクト（株）製）
溶  媒：Ａ：０．０１％ギ酸含有１０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液
Ｂ：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル
Ａ／Ｂ＝５／５で平衡化したのちＡ／Ｂ＝１／９まで７分間の直線グラジエント
流  速：１．０ｍｌ／分
温  度：４０℃
検  出：紫外部吸収  λ２３０ｎｍ
保持時間：３．２分。
【実施例７】
【０１４１】
テルペノイド誘導体Ｆの製造
【化２３】
2014148455.tif 000027
テルペノイド誘導体Ｆ【０１４２】
（１）ケトミウム属変換菌の培養
１００ｍｌ容の三角フラスコ１０本に上記表１に示す組成の種培養培地を各々２０ｍｌずつ入れ、１２１℃にて２０分間滅菌した後、室温まで冷却し、ＳＡＮＫ  １０３１２株の胞子懸濁液を１ｍｌ接種し、回転振とう培養機で２３℃、２１０ｒｐｍの条件下で２日間培養した。（得られた培養液を、以下、「種培養液」という）。【０１４３】
５００ｍｌ容の三角フラスコ３３本に上記表２に示す組成の本培養培地を各々８０ｍｌずつ入れ、１２１℃にて２０分間滅菌した後、室温まで冷却し、上述のＳＡＮＫ  １０３１２株の種培養液を無菌的に各４ｍｌ接種し、回転振とう培養機で２３℃、２１０ｒｐｍの条件下で２日間培養した。この培養液に１０ｍｇ／ｍｌの濃度でジメチルスルホキシドに溶解した化合物（Ｘ）の溶液を各々０．８ｍｌずつ添加し、再度回転振とう培養機で２３℃、２１０ｒｐｍで３日間培養を行った。【０１４４】
（２）テルペノイド誘導体Ｆの単離
本実施例におけるテルペノイド誘導体Ｆの挙動は、以下に示す条件のＨＰＬＣでモニターした。【０１４５】
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＫ−Ｃ１８  
（直径４．６ｍｍ×長さ７５ｍｍ：インタクト（株）製）
溶  媒：Ａ：０．０１％ギ酸含有１０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液
Ｂ：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル
Ａ／Ｂ＝５／５で平衡化したのちＡ／Ｂ＝１／９まで７分間の直線グラジエント
流  速：１．０ｍｌ／分
温  度：４０℃
検  出：紫外部吸収  λ２３０ｎｍ
保持時間：４．２分（テルペノイド誘導体Ｆ）【０１４６】
（１）において得られた培養液２５００ｍｌに等量のアセトンを添加し、室温で一晩静置後、菌体を吸引濾過によって取り除き、濾液４６００ｍｌを得た。この濾液に酢酸エチル２７００ｍｌを添加し、液々分配することで目的化合物を含む有機層を分離し、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶剤を留去することによって、テルペノイド誘導体Ｆを含む抽出物７６２ｍｇを得た。この抽出物をジメチルスルホキシド３．０ｍｌに溶解し、そのうち０．４ｍｌをあらかじめ０．０１％ギ酸水溶液：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル＝４５：５５の溶媒で平衡化したＨＰＬＣカラム（Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＳ−Ｃ１８：直径２０ｍｍ×長さ１５０ｍｍ：インタクト（株）製）に供与し、０．０１％ギ酸水溶液：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル＝４５：５５の溶媒で１０分間アイソクラティックで展開したのち、０．０１％ギ酸水溶液：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル＝１０：９０の溶媒比まで２０分間の直線グラジエントで展開し、流速１８．０ｍｌ／分で溶出した。目的化合物の紫外部吸収を波長λ＝２３０ｎｍにて検出し、保持時間１２．５分に現れるピーク（テルペノイド誘導体Ｆ）を７回に分けて分取した。分取液をまとめ、減圧濃縮して得られた懸濁液を凍結乾燥し、テルペノイド誘導体Ｆを無色粉末として２２．０ｍｇ得た。【０１４７】
テルペノイド誘導体Ｆの物理化学的性状の測定値
１）物質の性状：無色粉末状物質
２）分子式：Ｃ３１Ｈ４０Ｎ２Ｏ４
３）分子量：５０４（ＥＳＩマススペクトル法により測定）
４）高分解能ＬＣ−ＥＳＩマススペクトル法により測定した精密質量、［Ｍ＋Ｈ］＋は次に示す通りである。
実測値：５０５．３０５５１
計算値：５０５．３０６０８
５）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：０．９９８（３Ｈ，ｓ），１．００１（３Ｈ，ｓ），１．０６（３Ｈ，ｓ），１．１４（３Ｈ，ｓ），１．２０（３Ｈ，ｓ），１．３０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ），１．３２（３Ｈ，ｓ），１．３６（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１２．５Ｈｚ），１．５０（３Ｈ，ｓ），１．５４−１．５８（１Ｈ，ｍ），１．６４−１．６９（１Ｈ，ｍ），１．６８−１．７０（２Ｈ，ｍ），１．７０−１．７３（１Ｈ，ｍ），１．７４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１３．５Ｈｚ），１．９７−２．０１（１Ｈ，ｍ），２．００−２．０３（１Ｈ，ｍ），１．９９−２．１１（２Ｈ，ｍ），２．０７（１Ｈ，ｂｒｔ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ），２．８０（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１３．５Ｈｚ），３．２６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．４５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１２．０Ｈｚ），４．３４（１Ｈ，ｓ），６．１４（１Ｈ，ｓ）ｐｐｍ
６）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：１６．３（ｑ），１８．２（ｔ），２１．３６（ｑ），２１．３８（ｑ），２２．８（ｑ），２４．３（ｑ），２５．１（ｔ），２８．０（ｑ），２８．３（ｔ），２９．０（ｑ），３１．４（ｔ），３３．７（ｄ），３５．０（ｔ），３５．９（ｓ），３９．５（ｔ），３９．７（ｓ），４１．０（ｓ），４２．１（ｓ），４２．５（ｄ），４５．１（ｓ），４５．８（ｓ），４９．３（ｄ），５３．２（ｓ），６８．９（ｄ），７２．４（ｄ），１１３．５（ｓ），１２３．５（ｓ），１２４．５（ｄ），１６９．６（ｓ），１９７．５（ｓ），２０２．１（ｓ）ｐｐｍ
７）高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＫ−Ｃ１８  
（直径４．６ｍｍ×長さ７５ｍｍ：インタクト（株）製）
溶  媒：Ａ：０．０１％ギ酸含有１０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液
Ｂ：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル
Ａ／Ｂ＝５／５で平衡化したのちＡ／Ｂ＝１／９まで７分間の直線グラジエント
流  速：１．０ｍｌ／分
温  度：４０℃
検  出：紫外部吸収  λ２３０ｎｍ
保持時間：４．２分。
【実施例８】
【０１４８】
テルペノイド誘導体Ｇの製造
【化２４】
2014148455.tif 000028
テルペノイド誘導体Ｇ【０１４９】
（１）ケトミウム属変換菌の培養
１００ｍｌ容の三角フラスコ１０本に上記表１に示す組成の種培養培地を各々２０ｍｌずつ入れ、１２１℃にて２０分間滅菌した後、室温まで冷却し、ＳＡＮＫ  １０３１２株の胞子懸濁液を１ｍｌ接種し、回転振とう培養機で２３℃、２１０ｒｐｍの条件下で２日間培養した。（得られた培養液を、以下、「種培養液」という）。【０１５０】
５００ｍｌ容の三角フラスコ３３本に上記表２に示す組成の本培養培地を各々８０ｍｌずつ入れ、１２１℃にて２０分間滅菌した後、室温まで冷却し、上述のＳＡＮＫ  １０３１２株の種培養液を無菌的に各４ｍｌ接種し、回転振とう培養機で２３℃、２１０ｒｐｍの条件下で２日間培養した。この培養液に１０ｍｇ／ｍｌの濃度でジメチルスルホキシドに溶解した化合物（Ｘ）の溶液を各々０．８ｍｌずつ添加し、再度回転振とう培養機で２３℃、２１０ｒｐｍで３日間培養を行った。【０１５１】
（２）テルペノイド誘導体Ｇの単離
本実施例におけるテルペノイド誘導体Ｇの挙動は、以下に示す条件のＨＰＬＣでモニターした。【０１５２】
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＫ−Ｃ１８  
（直径４．６ｍｍ×長さ７５ｍｍ：インタクト（株）製）
溶  媒：Ａ：０．０１％ギ酸含有１０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液
Ｂ：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル
Ａ／Ｂ＝５／５で平衡化したのちＡ／Ｂ＝１／９まで７分間の直線グラジエント
流  速：１．０ｍｌ／分
温  度：４０℃
検  出：紫外部吸収  λ２３０ｎｍ
保持時間：３．７分【０１５３】
（１）において得られた培養液２５００ｍｌに等量のアセトンを添加し、室温で一晩静置後、菌体を吸引濾過によって取り除き、濾液４６００ｍｌを得た。この濾液に酢酸エチル２７００ｍｌを添加し、液々分配することで目的化合物を含む有機層を分離し、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶剤を留去することによって、テルペノイド誘導体Ｇを含む抽出物７６２ｍｇを得た。この抽出物をジメチルスルホキシド３．０ｍｌに溶解し、そのうち０．４ｍｌをあらかじめ０．０１％ギ酸水溶液：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル＝４５：５５の溶媒で平衡化したＨＰＬＣカラム（Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＳ−Ｃ１８：直径２０ｍｍ×長さ１５０ｍｍ：インタクト（株）製）に供与し、０．０１％ギ酸水溶液：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル＝４５：５５の溶媒で、１０分間アイソクラティックで展開したのち、０．０１％ギ酸水溶液：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル＝１０：９０の溶媒比まで２０分間の直線グラジエントで展開し、流速１８．０ｍｌ／分で溶出した。目的化合物の紫外部吸収を波長λ＝２３０ｎｍにて検出し、保持時間９．４分に現れるピーク（テルペノイド誘導体Ｇ）を７回に分けて分取した。分取液をまとめ、減圧濃縮して得られた懸濁液を凍結乾燥し、テルペノイド誘導体Ｇを無色粉末として３０．４ｍｇ得た。【０１５４】
テルペノイド誘導体Ｇの物理化学的性状の測定値
１）物質の性状：無色粉末状物質
２）分子式：Ｃ３１Ｈ４０Ｎ２Ｏ３
３）分子量：４８８（ＥＳＩマススペクトル法により測定）
４）高分解能ＬＣ−ＥＳＩマススペクトル法により測定した精密質量、［Ｍ＋Ｈ］＋は次に示す通りである。
実測値：４８９．３１０７３
計算値：４８９．３１１１７
５）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：０．９９６（３Ｈ，ｓ），０．９９７（３Ｈ，ｓ），０．９９８（３Ｈ，ｓ），１．１９（３Ｈ，ｓ），１．２７（３Ｈ，ｓ），１．２８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１４．０Ｈｚ），１．３６（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１３．０Ｈｚ），１．５３（３Ｈ，ｓ），１．５６（３Ｈ，ｓ），１．６０−１．６４（１Ｈ，ｍ），１．６３−１．６９（１Ｈ，ｍ），１．７０−１．７４（１Ｈ，ｍ），１．７１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１４．０Ｈｚ），１．７８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１１．０Ｈｚ），１．８２−１．８６（２Ｈ，ｍ），１．９９−２．０２（１Ｈ，ｍ），１．９９−２．１０（２Ｈ，ｍ），２．０８（１Ｈ，ｂｒｔ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ），２．７９（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１３．５Ｈｚ），３．２５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），３．４５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１１．５Ｈｚ），６．０２（１Ｈ，ｓ），８．０３（１Ｈ，ｓ）ｐｐｍ
６）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：重クロロホルム中でＴＭＳのシグナルを０．００ｐｐｍとして測定した１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ）は、以下に示す通りである。
σ：１６．３（ｑ），１８．２（ｔ），２１．４（ｑ），２１．５（ｑ），２４．９（ｑ），２５．１（ｔ），２６．７（ｑ），２７．０（ｑ），２８．１（ｔ），２９．０（ｑ），３１．７（ｔ），３３．６（ｄ），３４．９（ｔ），３５．９（ｓ），３９．５（ｔ），３９．６（ｓ），４２．１（ｓ），４２．６（ｓ），４５．０（ｓ），４５．９（ｓ），４７．８（ｄ），４９．３（ｄ），７２．４（ｄ），１１４．３（ｓ），１１４．７（ｓ），１２３．５（ｓ），１２３．７（ｄ），１６５．２（ｄ），１６９．４（ｓ），１９６．３（ｓ），１９７．６（ｓ）ｐｐｍ
７）高速液体クロマトグラフィー：
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ  ＵＫ−Ｃ１８  
（直径４．６ｍｍ×長さ７５ｍｍ：インタクト（株）製）
溶  媒：Ａ：０．０１％ギ酸含有１０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液
Ｂ：０．０１％ギ酸含有アセトニトリル
Ａ／Ｂ＝５／５で平衡化したのちＡ／Ｂ＝１／９まで７分間の直線グラジエント
流  速：１．０ｍｌ／分
温  度：４０℃
検  出：紫外部吸収  λ２３０ｎｍ
保持時間：３．７分。
【試験例１】
【０１５５】
＜Ｎｒｆ２標的遺伝子誘導効果（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）＞
Ｎｒｆ２標的遺伝子としてＨｍｏｘ１遺伝子を用いた。  
ＡＲＰＥ−１９細胞（ヒト網膜色素上皮細胞株、ＡＴＣＣ社、カタログ番号ＣＲＬ−２３０２）に被験化合物を与えることにより誘導されるＨｍｏｘ１遺伝子の量を測定し、被験化合物によるＨｍｏｘ１遺伝子の誘導効果を調べた。被験化合物は、実施例１で得られた本発明のテルペノイド誘導体Ｂと、比較例としてのＣＤＤＯ−Ｍｅである。
ＡＲＰＥ−１９細胞を、非働化ＦＢＳを１０％含むＤＭＥＭ／Ｆ１２（ライフテクノロジー社、カタログ番号１１３３０−０３２）の混合培地を用いて培養した（５％ＣＯ２、３７度）。培地は、終濃度でペニシリンを１００単位／ｍＬ、ストレプトマイシンを１００μｇ／ｍＬ含む。  
ＡＲＰＥ−１９細胞を６００００ｃｅｌｌｓ／ウェルとなるように２４ウェルプレートに播種した。培地量は５００μＬである。約２４時間後に、実施例１で得られた本発明のテルペノイド誘導体ＢあるいはＣＤＤＯ−Ｍｅを含む培地に交換して、培養を継続した。その約６時間後に、抽出用キット（キアゲン社製、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ、カタログ番号７４１０６）を用いて、ＡＲＰＥ−１９細胞からｍＲＮＡを回収した。得られたｍＲＮＡから、ｃＤＮＡ合成キット（ＧＥヘルスケアライフサイエンス社製、Ｆｉｒｓｔ−Ｓｔｒａｎｄ  ｃＤＮＡ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｋｉｔ）を用いてｃＤＮＡを作製した。得られたｃＤＮＡを試薬（アプライドバイオシステム社製、ＴａｑＭａｎ（登録商標）  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（カタログ番号４３６９０１６））とプローブを用いて増幅させ、リアルタイム定量ＰＣＲをおこなった（アプライドバイオシステムズ社製、Ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  ＨＴ７９００を使用）。  
被験化合物濃度が０ｎＭのときのＨｍｏｘ１遺伝子発現量を１．０±０．０として、被験化合物の各濃度におけるＨｍｏｘ１遺伝子発現量を、相対値として表した。結果を下記表３に示す。１群は３ウェルで、平均値と標準誤差を示す。
【０１５６】
表３．Ｈｍｏｘ１遺伝子発現量
【表３】
2014148455.tif 000029
【０１５７】
この結果を医療統計解析ソフト（グラフパッド社製、プリズム（Ｖｅｒ５））で解析すると、Ｈｍｏｘ１遺伝子を２倍および５倍に上昇させる濃度は、ＣＤＤＯ−Ｍｅでは２．５ｎＭ及び１１ｎＭであり、本発明のテルペノイド誘導体Ｂでは０．０００９１ｎＭ及び０．１２ｎＭであった。本発明のテルペノイド誘導体ＢのＣＤＤＯ−Ｍｅに対する活性比としては、２７４７倍および９２倍となった。
【試験例２】
【０１５８】
＜細胞保護作用効果＞
過酸化物であるｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ  ｈｙｄｒｏｐｅｒｏｘｉｄｅ（ｔ−ＢＨＰ）は酸化ストレス依存性の細胞障害を引き起こすことが知られている（Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ Ｉｎｔｅｒａｃｔ ２００９; １８１: ３６６−、Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ Ｔｏｘｉｃｏｌ ２０１１; ４９: ２０８１−）。  
ＡＲＰＥ−１９細胞（ヒト網膜色素上皮細胞株、ＡＴＣＣ社、カタログ番号ＣＲＬ−２３０２）にｔ−ＢＨＰを与えることにより引き起こされる生存細胞数の減少が、被験化合物を与えることでどれだけ抑制されるかを測定して、細胞保護作用効果を調べた。被験化合物は、実施例１で得られた本発明のテルペノイド誘導体Ｂと、比較例としてのＣＤＤＯ−Ｍｅである。  
ＡＲＰＥ−１９細胞を、非働化ＦＢＳを１０％含むＤＭＥＭ／Ｆ１２（ライフテクノロジー社、カタログ番号１１３３０−０３２）の混合培地を用いて培養した（５％ＣＯ２、３７度）。培地は、終濃度でペニシリンを１００単位／ｍＬ、ストレプトマイシンを１００μｇ／ｍＬ含む。  
ＡＲＰＥ−１９細胞を１００００ｃｅｌｌｓ／ウェルとなるように９６ウェルプレートに播種した。培地量は１００ｕＬである。約６時間後に実施例１で得られた本発明のテルペノイド誘導体Ｂ或いはＣＤＤＯ−Ｍｅを含む培地に交換して、約１６時間培養したのちＡＲＰＥ−１９細胞の生存細胞数を測定した（同仁化学研究所製、Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８（カタログ番号ＣＫ０１）を使用）。その後、ｔ−ＢＨＰ（シグマアルドリッチ社製、カタログ番号４６６６５）を３００μＭ、含み、さらに、実施例１で得られた本発明のテルペノイド誘導体Ｂ又はＣＤＤＯ−Ｍｅを含む培地に交換した。ｔ−ＢＨＰを添加してから約６時間後にＡＲＰＥ−１９細胞の生存細胞数を測定した。  
ｔ−ＢＨＰおよび被験化合物を含まない培地における生存細胞数を１００％として、ｔ−ＢＨＰを３００μＭ含み被験化合物を各濃度含む培地における生存細胞数を１００分率で表した。結果を下記表４に示す。１群は３ウェルで、平均値と標準誤差を示す。
【０１５９】
表４．生存細胞数（１００分率）
【表４】
2014148455.tif 000030
【０１６０】
ｔ−ＢＨＰの添加で細胞活性は６１．６％に低下した。ＣＤＤＯ−Ｍｅの添加では生存細胞数の低下は完全に抑制されなかったが、当該化合物の添加では完全に抑制された。
【試験例３】
【０１６１】
＜Ｎｒｆ２標的遺伝子誘導効果（ｉｎ  ｖｉｖｏ）＞
Ｎｒｆ２標的遺伝子としてＮｑｏ１遺伝子を用いた。  
溶媒に０．５ｗ／ｖ％メチルセルロース溶液４００ｃＰ（和光純薬工業、カタログ番号１３３−１４２５５）を用いて、実施例１で得られた本発明のテルペノイド誘導体Ｂ、ＣＤＤＯ−Ｍｅそれぞれの懸濁液を調製した。Ｃ５７Ｂｌａｃｋ６マウス（日本チャールス・リバー、雄性、８週齢入荷、実験開始時は１０週齢）に、投与容量を１０ｍＬ／ｋｇとし、１、３、１０ｍｇ／ｋｇの用量で、１日１回、１２日間連続で経口投与した。最終投与の翌日にマウスを安楽死させ、腎臓を採材した。抽出用キット（キアゲン社製、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ、カタログ番号７４１０６）を用いて、採材した腎臓からｍＲＮＡを回収した。得られたｍＲＮＡから、ｃＤＮＡ合成キット（ＧＥヘルスケアライフサイエンス社製、Ｆｉｒｓｔ−Ｓｔｒａｎｄ  ｃＤＮＡ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｋｉｔ）を用いてｃＤＮＡを作製した。得られたｃＤＮＡを試薬（アプライドバイオシステム社製、ＴａｑＭａｎ（登録商標）  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（カタログ番号４３６９０１６））とプローブを用いて増幅させ、リアルタイム定量ＰＣＲをおこなった（アプライドバイオシステムズ社製、Ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  ＨＴ７９００を使用）。  溶媒のみを投与した群の腎臓のＮｑｏ１遺伝子発現量を１とした時の誘導結果を表５に示す。なお、１群は６匹で、平均値と標準誤差を示す。
【０１６２】
表５．Ｎｑｏ１遺伝子発現量
【表５】
2014148455.tif 000031
【０１６３】
実施例１で得られた本発明のテルペノイド誘導体Ｂは、１ｍｇ／ｋｇの用量からＮｑｏ１遺伝子の誘導が認められたが、ＣＤＤＯ−Ｍｅでは、Ｎｑｏ１遺伝子の誘導は認められなかった。
【試験例４】
【０１６４】
＜細胞傷害性＞
ＡＲＰＥ−１９細胞（ヒト網膜色素上皮細胞株、ＡＴＣＣ社、カタログ番号ＣＲＬ−２３０２）を培養した（５％ＣＯ２、３７度）。非働化ＦＢＳを１０％含むＤＭＥＭ／Ｆ１２（ライフテクノロジー社、カタログ番号１１３３０−０３２）の混合培地を用いた。また、培地は終濃度でペニシリンを１００単位／ｍＬ、ストレプトマイシンを１００ｕｇ／ｍｇ含んでいた。  
ＡＲＰＥ−１９細胞を５０００ｃｅｌｌｓ／ウェルとなるように９６ウェルプレートに播種した。培地量は５０ｕＬである。約３時間後にＣＤＤＯ−Ｍｅあるいはテルペノイド誘導体Ａ〜Ｈを含む培地を５０ｕＬ添加して、約１６時間培養した。その後、細胞傷害性をＬＤＨ−Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔｅｓｔ（和光純薬工業、カタログ番号２９９−５０６０１）を用いて評価した。評価方法は添付文書に従った。１群は３ウェルで、濃度１０μＭ時の細胞傷害性を示した。その平均値は、ＣＤＤＯ−Ｍｅが４３％、テルペノイド誘導体Ａが２％、テルペノイド誘導体Ｂが２％、テルペノイド誘導体Ｃが２％、テルペノイド誘導体Ｄが１％、テルペノイド誘導体Ｅが２％、テルペノイド誘導体Ｆが３％、テルペノイド誘導体Ｇが３％、テルペノイド誘導体Ｈが１％、であった。ＣＤＤＯ−Ｍｅと比較して、テルペノイド誘導体Ａ〜Ｈでは細胞傷害性が低かった。
【試験例５】
【０１６５】
＜ＮＱＯ１アッセイ＞
Ｈｅｐａ１ｃ１ｃ７細胞（マウス肝細胞株、ＡＴＣＣ社、カタログ番号ＣＲＬ−２０２６）を培養した（５％ＣＯ２、３７度）。非働化ＦＢＳを１０％含むＤＭＥＭ（ライフテクノロジー社、カタログ番号１１９６５−０９２）の培地を用いた。また、培地は終濃度でペニシリンを１００単位／ｍＬ、ストレプトマイシンを１００ｕｇ／ｍｇ含む。ＮＱＯ１アッセイは既報に従って（Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  １９９８；  １６９：  ３２８−、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  ２００４；  ３８２：  ２４３−）、実施した。  
Ｈｅｐａ１ｃ１ｃ７細胞を１００００ｃｅｌｌｓ／ウェルとなるように９６ウェルプレートに播種した。培地量は１００ｕＬである。約２４時間後にＣＤＤＯ−Ｍｅあるいはテルペノイド誘導体Ａ〜Ｇを含む培地に交換して、更に約４８時間培養した。溶解液（ＥＤＴＡを２ｍＭ、ジギトニンを０．８％含む溶液）、反応溶液（トリス塩酸を０．０２５Ｍ、アルブミンを０．０６７％、Ｔｗｅｅｎ−２０を０．０１％、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼを２Ｕ／ｍＬ、フラビンアデニンジヌクレオチドを５μＭ、グルコース−６−リン酸を１μＭ、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸を３０μＭ、３−（４、５−ジメチル−２−チアゾリル）−２、５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）を０．０３％、メナジオンを５０μＭ含む溶液）、停止液（ジクマロールを０．３ｍＭ、リン酸２水素カリウムを５ｍＭ含む溶液、ｐＨは７．４）を調製した。培地を除去後、溶解液を５０μＬ添加して、３７度で１０分間静置した。さらに、室温で１０分間振盪させた。
【０１６６】
溶液を２００ｕＬ添加して、室温で５分間静置した。停止液を５０μＬ添加して、４９０ｎｍの吸光度を測定した。
試験結果をグラフパッド社のプリズム（Ｖｅｒ５）で解析して、ＮＱＯ１の活性を２倍に上昇させる濃度のＣＤ値を算出した。１群は３ウェルで、ＣＤ値はその平均値である。  
ＣＤ値は、ＣＤＤＯ−Ｍｅが１．０ｎＭ、テルペノイド誘導体Ａが１．３ｎＭ、テルペノイド誘導体Ｂが０．３ｎＭ、テルペノイド誘導体Ｃが０．４ｎＭ、テルペノイド誘導体Ｄが０．９ｎＭ、テルペノイド誘導体Ｅが２．１ｎＭ、テルペノイド誘導体Ｆが０．１ｎＭ、テルペノイド誘導体Ｇが０．１ｎＭであった。
【試験例６】
【０１６７】
＜ラット酸素誘発網膜症に対する抑制効果（ｉｎ  ｖｉｖｏ）＞
ＳＤラット新生児（日本チャールス・リバー、妊娠ラットを入荷）を実験に用いた。１日齢から１２日齢の間、新生児を母親ラットとともに約８０％の酸素下で飼育した。１３日齢からは大気下で飼育した。溶媒に０．５ｗ／ｖ％メチルセルロース溶液４００ｃＰ（和光純薬工業、カタログ番号１３３−１４２５５）を用いて、テルペノイド誘導体Ｂの懸濁液を調製した。投与容量は１０ｍＬ／ｋｇとし、０．０３、０．１、０．３ｍｐｋの用量で、１日１回、１１日齢から１７日齢の間の計７回経口投与した。最終投与の翌日に新生児ラットを安楽死させ、網膜を採材した。文献（Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ２０００；  ４１：  ８８７−）に従って、網膜の病態をスコア化した。結果を表６に示す。１群は１４−３０眼で、平均値と標準誤差を示す。
【０１６８】
表６．ラット酸素誘発網膜症における網膜の病態
【表６】
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テルペノイド誘導体Ｂは用量依存的に網膜病態スコアを抑制した。
【製剤例１】
【０１６９】
＜錠剤＞
本発明のテルペノイド誘導体Ｂ    ３０ｍｇ
乳糖                          １１８ｍｇ
トウモロコシ澱粉                ５０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム          ２ｍｇ    
全量                          ２００ｍｇ
【製剤例２】
【０１７０】
＜点眼剤＞
本発明のテルペノイド誘導体Ｂ      ３００ｍｇ
リン酸二水素ナトリウム（ｐＨ調整剤）  １ｍｌ    
塩化ナトリウム                        適量
滅菌精製水                            適量      
全量                                １００ｍｌ
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【国際調査報告】
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