【手続補正書】
【提出日】平成23年2月8日(2011.2.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
【図１Ａ】天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１に関連したヌクレオチド配列（配列番号：１）と誘導したアミノ酸配列（配列番号：２−３）を示す。ヌクレオチド配列（配列番号：１）はヌクレオチド位置１８１から４３２にわたると考えられるイントロンを含み、ヌクレオチド位置１８１から１８６にスプライス供与部位を持ち、ヌクレオチド位置４３０から４３２にスプライス受容部位を持つ。アミノ酸配列（配列番号：２及び３）は、プロセシングを受けた（イントロンのない）コード配列を構成すると考えられるエキソン配列から導かれる。
【図１Ｂ】図１Ａの続きの図である。
【図２】Ｎ末端が異種シグナルペプチド（アミノ酸位置１−１５）、フラッグペプチドアフィニティハンドル（アミノ酸位置１６−２３）及びペプチドリンカー（アミノ酸位置２４−３６）に融合した天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチドのヌクレオチド配列（配列番号：４）と誘導したアミノ酸配列（配列番号：５）を示す。
【図３】天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチドのヌクレオチド配列（配列番号：６）と誘導したアミノ酸配列（配列番号：７）を示す。ヌクレオチド配列（配列番号：６）及び誘導したアミノ酸配列（配列番号：７）は、それぞれ図１のヌクレオチド配列（配列番号：１）とアミノ酸配列（配列番号：２−３）のプロセシングを受けた（イントロンのない）型及び無傷のｈＩＬ-１Ｒａ１ポリペプチドを表すと考えられる。コード配列の開始及び停止コドンはそれぞれヌクレオチド位置１０３−１０５及び６８２−６８４に位置している。推定上のシグナル配列はアミノ酸位置１から１４にわたる。推定上のｃＡＭＰ及びｃＧＭＰ依存性プロテインキナーゼリン酸化部位はアミノ酸位置３３−３６に位置している。推定上のＮ−ミリストイル化部位はアミノ酸位置５０−５５及び８７−９２に位置している。
【図４】ＥＳＴ ＡＩ０１４５４８に対応するヌクレオチド１４５−６２９のヌクレオチド配列（配列番号：８）を示す。
【図５Ａ】天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ２ポリペプチドのヌクレオチド配列（配列番号：９）と誘導したアミノ酸配列（配列番号：１０）を示す。コード配列の開始及び停止コドンはそれぞれヌクレオチド位置９６−９８及び４９８−５００に位置している。推定上のシグナル配列はアミノ酸位置１−２６にわたる。
【図５Ｂ】図５Ａの続きの図である。
【図６】ＥＳＴ１４３３１５６のヌクレオチド配列（配列番号：１１）を示す。
【図７】天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのヌクレオチド配列（配列番号：１２）と誘導したアミノ酸配列（配列番号：１３）を示す。コード配列の開始及び停止コドンはそれぞれヌクレオチド位置１−３及び４６６−４６８に位置している。推定上のシグナル配列はアミノ酸位置１−３３にわたる。推定上のＮ−ミリストイル化部位はアミノ酸位置２９−３４、３０−３５、６０−６５、６３−６８、７３−７８、９１−９６及び１０６−１１１に位置している。インターロイキン−１様配列はアミノ酸位置１１１−１３１に位置している。
【図８】ＥＳＴ５１２００２８のヌクレオチド配列（配列番号：１４）を示す。
【図９Ａ】天然配列ｍＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドのヌクレオチド配列（配列番号：１５）と誘導したアミノ酸配列（配列番号：１６）を示す。コード配列の開始及び停止コドンはそれぞれヌクレオチド位置１４５−１４７及び６１０−６１２に位置している。推定上のシグナル配列はアミノ酸位置１−３３にわたる。推定上のＮ−ミリストイル化部位はアミノ酸位置２９−３４、６０−６５、６３−６８、９１−９６及び１０６−１１１に位置している。インターロイキン−１様配列はアミノ酸位置１１１−１３１に位置している。
【図９Ｂ】図９Ａの続きの図である。
【図１０】ＥＳＴ Ｗ０８２０５のヌクレオチド配列（配列番号：１７）を示す。
【図１１】胎盤組織中でのｈＩＬ-１Ｒａ３ｍＲＮＡの発現と１７日齢のマウス胚組織中でのｍＩＬ-１Ｒａ３の発現を示すノーザンブロットのオートラジオグラフである。
【図１２】天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ（配列番号：１９）、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ（配列番号：２５）、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ（配列番号：２１）、天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ２（配列番号：１０）、ｈＩＬ-１Ｒａ３（配列番号：１３）及びｍＩＬ-１Ｒａ３（配列番号：１６）ポリペプチドの、分泌性ｈＩＬ-１Ｒａ（「ｓＩＬ-１Ｒａ」及び「ｈＩＬ-１Ｒａ」とも称される）（配列番号：２６）、ｈＩＬ-１Ｒａβ（配列番号：２７）及びＴＡＮＧＯ−７７（配列番号：２８）とのアミノ酸配列アラインメントである。
【図１３Ａ】ｈＩＬ-１Ｒａ１のインターロイキン−１８レセプター（ＩＬ-１８Ｒ）結合活性を示すウェスタンブロットである。（およそ２２ｋＤのタンパク質バンドを示す）上部パネルでは、ＦＬＡＧｈＩＬ-１Ｒａ１及びＦＬＡＧＩＬ-１Ｒ−ＥＣＤ−Ｆｃを含む条件培地（左側レーンに示す）とＦＬＡＧｈＩＬ-１Ｒａ１及びＦＬＡＧＩＬ-１８Ｒ−ＥＣＤ−Ｆｃを含む条件培地（右側レーンに示す）がそれぞれプロテインＧ−セファロースで免疫沈降され、得られた沈殿物がゲル電気泳動法及び抗ＦＬＡＧモノクローナル抗体でのウェスタンブロット法により分離された。（およそ２２ｋＤと８５ｋＤのタンパク質バンドを示す）中央及び底部パネルでは、上部パネルで使用されたＦＬＡＧｈＩＬ-１Ｒａ１及びＦＬＡＧＩＬ-１Ｒ−ＥＣＤ−Ｆｃ条件培地からの第２のアリコート（左側レーンに示す）と上部パネルで使用されたＦＬＡＧｈＩＬ-１Ｒａ１及びＦＬＡＧＩＬ-１８Ｒ−ＥＣＤ−Ｆｃ条件培地からの第２のアリコート（右側レーンに示す）がそれぞれ抗ＦＬＡＧモノクローナル抗体で免疫沈降され、得られた沈殿物がゲル電気泳動法及び抗ＦＬＡＧモノクローナル抗体でのウェスタンブロット法により分離された。
【図１３Ｂ】ｈＩＬ-１Ｒａ３のＩＬ-１Ｒ結合活性を示すウェスタンブロットである。（およそ２０ｋＤのタンパク質バンドを示す）上部パネルでは、ｈＩＬ-１Ｒａ３−ＦＬＡＧ及びＦＬＡＧＤＲ６−Ｆｃを含む条件培地（左側レーンに示す）、ｈＩＬ-１Ｒａ３−ＦＬＡＧ及びＦＬＡＧＩＬ-１Ｒ−ＥＣＤ−Ｆｃを含む条件培地（中央レーンに示す）、及びｈＩＬ-１Ｒａ３−ＦＬＡＧ及びＦＬＡＧＩＬ-１８Ｒ−ＥＣＤ−Ｆｃを含む条件培地（右側レーンに示す）がそれぞれプロテインＧ−セファロースで免疫沈降され、得られた沈殿物がゲル電気泳動法及び抗ＦＬＡＧモノクローナル抗体でのウェスタンブロット法により分離された。（およそ２０ｋＤと８５ｋＤのタンパク質バンドを示す）中央及び底部パネルでは、上部パネルで使用されたｈＩＬ-１Ｒａ３−ＦＬＡＧ及びＦＬＡＧＤＲ６−Ｆｃ条件培地からの第２のアリコート（左側レーンに示す）、上部パネルで使用されたｈＩＬ-１Ｒａ３−ＦＬＡＧ及びＦＬＡＧＩＬ-１Ｒ−ＥＣＤ−Ｆｃ条件培地からの第２のアリコート（中央レーンに示す）及び上部パネルで使用されたｈＩＬ-１Ｒａ３−ＦＬＡＧ及びＦＬＡＧＩＬ-１８Ｒ−ＥＣＤ−Ｆｃ条件培地からの第２のアリコート（右側レーンに示す）がそれぞれ抗ＦＬＡＧモノクローナル抗体で免疫沈降され、得られた沈殿物がゲル電気泳動法及び抗ＦＬＡＧモノクローナル抗体でのウェスタンブロット法により分離された。
【図１４】ｍＩＬ-１Ｒａ３のインターロイキン−１レセプター（ＩＬ-１Ｒ）結合活性を示すウェスタンブロットである。（およそ２１ｋＤのタンパク質バンドを示す）上部パネルと（およそ８５ｋＤのタンパク質バンドを示す）底部パネルでは、条件培地中のＦＬＡＧＩＬ-１Ｒ−ＥＣＤ−Ｆｃ（左側レーンに示す）と条件培地中のＦＬＡＧＩＬ-１８Ｒ−ＥＣＤ−Ｆｃ（右側レーンに示す）がプロテインＧ−アガロースで固定され、得られた固相がＦＬＡＧｍＩＬ-１Ｒａ３を含む条件培地に接触させられ、得られた結合複合体がゲル電気泳動法及び抗ＦＬＡＧモノクローナル抗体でのウェスタンブロット法により分離された。
【図１５】天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌポリペプチドのヌクレオチド配列（配列番号：１８）と誘導したアミノ酸配列（配列番号：１９）を示す。コード配列の開始及び停止コドンはそれぞれヌクレオチド位置４−６及び６２５−６２７に位置している。推定上のシグナル配列はアミノ酸位置１から３４にわたる。推定上のｃＡＭＰ及びｃＧＭＰ依存性プロテインキナーゼリン酸化部位はアミノ酸位置４７−５０に位置している。推定上のＮ−ミリストイル化部位はアミノ酸位置６４−６９及び１０１−１０６に位置している。
【図１６】天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓポリペプチドのヌクレオチド配列（配列番号：２０）と誘導したアミノ酸配列（配列番号：２１）を示す。コード配列の開始及び停止コドンはそれぞれヌクレオチド位置４−６及び５０５−５０７に位置している。推定上のシグナル配列はアミノ酸位置１から４６にわたる。推定上のＮ−ミリストイル化部位はアミノ酸位置６１−６６に位置している。
【図１７】相補ヌクレオチド配列（配列番号：２２）（上方のストランド）に沿った、ＥＳＴ ＡＩ３４３２５８（下方のストランド）の一本鎖ヌクレオチド配列（配列番号：２３）を示す。
【図１８】天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１（配列番号：３）、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ（配列番号：１９）、ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ（配列番号：２５）及びｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓ（配列番号：２１）ポリペプチドのアミノ酸配列アラインメントである。
【図１９】天然配列ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドのヌクレオチド配列（配列番号：２４）と誘導したアミノ酸配列（配列番号：２５）を示す。コード配列の開始及び停止コドンはそれぞれヌクレオチド位置７３−７５及び７２７−７２９に位置している。別の開始コドンはヌクレオチド位置１０６−１０８に位置している。推定上のシグナル配列はアミノ酸位置１から４８にわたる。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２６】
実施例で言及されている全ての市販試薬は、特に示さない限りは製造者の使用説明に従い使用した。ＡＴＣＣ登録番号により以下の実施例及び明細書全体を通して特定されている細胞の供給源はアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション、マナッサス、ＶＡである。
実施例１：ｈＩＬ-１Ｒａ１及びｍＩＬ-１Ｒａ３をコードするＤＮＡの単離
公的な発現配列タグ（ＥＳＴ）ＤＮＡデータベース（Genbank）を、ヒトインターロイキン-１レセプターアンタゴニスト（ｈＩＬ-１Ｒａ）配列（分泌ヒトインターロイキン-１レセプターアンタゴニスト（「ｓＩＬ-１Ｒａ」）配列としても知られる）で検索し、ＡＩ０１４５４８と命名されるヒトＥＳＴ（図４、配列番号：８のヌクレオチド１４５−６２９に対応する）とＷ０８２０５と命名されるマウスＥＳＴ（図１０，配列番号：１７）を同定し、それは既知のタンパク質ｈＩＬ-１Ｒａ（ｓＩＬ-１Ｒａ）と相同性を示した。
ＥＳＴクローンＡＩ０１４５４８及びＷ０８２０５はResearch Genetics（ハンツビル、アラバマ州）から購入し、ｃＤＮＡ挿入断片を取得し、その全体を配列決定した。
ＤＮＡ８５０６６と命名される、クローンＡＩ０１４５４８の完全ヌクレオチド配列は図１（配列番号：１）に示される。クローンＤＮＡ８５０６６は、見かけのイントロン配列によって中断される単鎖オープンリーディングフレームを含む。イントロンはヌクレオチド位置１８１から１８６（スプライス供与部位）及びヌクレオチド位置４３０から４３２（スプライス受容位置）（図１；配列番号：１）でスプライス部位によって結合される。
事実上処理されたヌクレオチド配列（図３；配列番号：６）はＤＮＡ９４６１８と命名され、クローンＤＮＡ８５０６６から見かけのイントロン配列が取り除かれることにより導かれた。クローンＤＮＡ９４６１８はヌクレオチド位置１０３−１０５に見かけの翻訳開始部位、及びヌクレオチド位置６８２−６８４に終止コドンを有する単鎖オープンリーディングフレームを含む（図３；配列番号：６）。予測されるポリペプチド前駆体（ｈＩＬ-１Ｒａ１）（図３；配列番号：７）は１９３アミノ酸長である。推定のシグナル配列はアミノ酸位置１から１４まで達する。推定のｃＡＭＰ-及びｃＧＭＰ-依存プロテインキナーゼリン酸化部位はアミノ酸位置３３−３６に位置する。推定のＮ−ミリストイル化部位はアミノ酸位置５０−５５及びアミノ酸位置８７−９２に位置する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２８】
実施例２：ｈＩＬ-１Ｒａ２及びｈＩｌ-１Ｒａ３をコードするＤＮＡの単離
発現配列タグ（ＥＳＴ）ＤＮＡデータベース（LIFESEQ(商品名)、Incyte Pharmaceuticals、Palo Alto, CA）を、ヒトインターロイキン-１レセプターアンタゴニスト（ｈＩＬ-１Ｒａ）配列（分泌ヒトインターロイキン-１レセプターアンタゴニスト（「ｓＩＬ-１Ｒａ」）配列としても知られる）で検索し、１４３３１５６（図５、配列番号：１１）と５１２００２８（図８、配列番号：１４）と命名されるＥＳＴを同定し、それは既知のタンパク質ｈＩＬ-１Ｒａと相同性を示した。
ＥＳＴクローン１４３３１５６及び５１２００２８をPharmaceuticals（Palo Alto, CA）から購入し、ｃＤＮＡ挿入断片を取得し、その全体を配列決定した。
ＤＮＡ９２９２９と命名される、クローン１４３３１５６の完全ヌクレオチド配列は図５（配列番号：９）に示される。クローンＤＮＡ９２９２９は、ヌクレオチド位置９６−９８に見かけの翻訳開始部位、及びヌクレオチド位置４９８−５００に終止コドンを有する単鎖オープンリーディングフレームを含む（図５；配列番号：９）。予測されるポリペプチド前駆体（ｈＩＬ-１Ｒａ２）（図５；配列番号：１０）は１３４アミノ酸長である。推定のシグナル配列はアミノ酸位置１−２６まで達する。
クローンＤＮＡ９２９２９（ＤＮＡ９２９２９−２５３４と命名される）はＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０３５８６が付与された。図５（配列番号：１０）に示される全長ｈＩＬ-１Ｒａ２タンパク質は約１４，９２７ダルトンの推定分子量及び約４．８のｐＩを持つ。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４２】
全長配列（配列番号：１９）の配列アラインメント分析に基づき、ｈＩＬ-１Ｒａ１ＬはｈＩＬ-１Ｒａβ及びＴＡＮＧＯ-７７タンパク質と有意なアミノ酸配列同一性を示す。また、クローンＤＮＡ１０２０４３（図１５）（配列番号：１８）のＤＮＡ配列の一部はＥＳＴ ＡＩ０１４５４８のＤＮＡ配列（図４）（配列番号：８）及びＥＳＴ ＡＩ３４３２５８のＤＮＡ配列の相補配列（図１７）（配列番号：２３）と一致することが見出された。
クローンＤＮＡ１０２０４４の全ヌクレオチド配列は図１６（配列番号：２０）に示される。クローンＤＮＡ１０２０４４は、ヌクレオチド位置４−６に見かけの翻訳開始部位を、ヌクレオチド位置５０５−５０７に停止コドンを持つ単一のオープンリーディングフレームを含む（図１６；配列番号：２０）。予想されるポリペプチド前駆体（ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓと命名）（図１６；配列番号：２１）は１６７アミノ酸長であり、ある種の動物細胞においては成熟配列（翻訳後プロセシングにおいて除かれるシグナル配列を持たないもの）として挙動すると考えられている。また、他の動物細胞は、アミノ酸位置１から約４６にわたる配列に含まれる一又は複数のシグナルペプチドを認識し翻訳後プロセシングにおいて除去すると考えられている。
クローンＤＮＡ１０２０４４（ＤＮＡ１０２０４４−２５３４と命名）はＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０３８５５が付与された。図１６（配列番号：２１）に示された全長ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｓタンパク質は約１８４７８ダルトンの推定分子量と約５．５のｐＩを有している。
全長配列（配列番号：２１）の配列アラインメント分析に基づき、ｈＩＬ-１Ｒａ１ＳはＴＡＮＧＯ-７７タンパク質の対立遺伝子変異体であると思われ、またｈＩＬ-１Ｒａβと有意なアミノ酸配列同一性を示す。また、クローンＤＮＡ１０２０４４（図１６）（配列番号：２０）のＤＮＡ配列の一部はＥＳＴ ＡＩ０１４５４８のＤＮＡ配列（図４）（配列番号：８）及びＥＳＴ ＡＩ３４３２５８のＤＮＡ配列の相補配列（図１７）（配列番号：２３）と一致することが見出された。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４３】
ＥＳＴクローンＡＩ３４３２５８をResearch Genetics (Huntsville, AL)から購入し、ｃＤＮＡ挿入断片を取得し、その全体を配列決定した。ＤＮＡ１１４８７６と命名されたクローンＡＩ３４３２５８の全配列は図１９（配列番号：２４）に示される。クローンＤＮＡ１１４８７６は、ヌクレオチド位置７３−７５に見かけの翻訳開始部位を、ヌクレオチド位置７２６−７２８に停止コドンを持つ単一のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含み（図１９；配列番号：２４）、２１８アミノ酸長である予想ポリペプチド前駆体（ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ）（図１９；配列番号：２５）をコードしている。また、ＯＲＦはヌクレオチド位置１０６−１０８に代わりの翻訳開始部位を含む。代わりの開始コドンで開始される翻訳に対する予想ポリペプチド（またｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖと命名）は（２１８アミノ酸ポリペプチドのＮ末端の最初の１１の残基を欠く）２０７アミノ酸長である。予想される２１８アミノ酸及び２０７アミノ酸ポリペプチドは、ある種の動物細胞においては成熟配列（翻訳後プロセシングにおいて除かれるシグナル配列を持たないもの）として挙動すると考えられている。また、他の動物細胞は、図１９（配列番号：２５）のアミノ酸配列のアミノ酸位置１から約４８にわたるか（２１８アミノ酸ポリペプチドの推定リーダー配列）、あるいはアミノ酸位置１２から３６にわたる（２０７アミノ酸ポリペプチドの推定リーダー配列）一又は複数のシグナルペプチドを認識し除去すると考えられている。以下の実施例１４に示されているように、一過性にトランスフェクトされたＣＨＯ宿主細胞はｈＩＬ-１Ｒａ１ＶとＩＬ-１Ｒａ１Ｌの非プロセシング型と、図１９（配列番号：２５）のアミノ酸位置１から４５にわたるシグナルペプチドの除去もしくは図１５（配列番号：１９）のアミノ酸位置１から３４にわたるシグナルペプチドの除去から得られる一回プロセシングされた型を分泌する。一過性にトランスフェクトされたＣＨＯ宿主細胞により分泌されるｈＩＬ-１Ｒａ１ＶとｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌのプロセシング型は図１５（配列番号：１９）のアミノ酸残基３５から２０７のアミノ酸配列と図１９（配列番号：２５）のアミノ酸残基４６から２１８のアミノ酸配列を有する。
クローンＤＮＡ１１４８７６（ＤＮＡ１１４８７６−２５３４と命名）はＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号２０３９７３が付与された。図１９（配列番号：２５）に示された全長ｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖタンパク質は約２４１２４の推定分子量と約６．１のｐＩを有している。
全長配列（配列番号：２５）の配列アラインメント分析に基づき、ｈＩＬ-１Ｒａ１ＶはｈＩＬ-１Ｒａβと有意なアミノ酸配列同一性を示す。ｈＩＬ-１Ｒａ１ＶはｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌの対立遺伝子変異体であると考えられる。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４６】
ｈＩＬ-１ＲａＩＬ及びｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖポリペプチドの双方のプロセシングを受けたＮ末端配列はVHTSPKVKN（配列番号：３１）であると決定された。条件培地から回収されたｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ及びｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ材料のおよそ５０％がプロセシングを受けたＮ末端配列を示しており、ＣＨＯ宿主細胞が図１５（配列番号：１９）のアミノ酸配列のアミノ酸残基３５から２０７と図１９（配列番号：２５）のアミノ酸配列のアミノ酸残基４６から２１８に対応するプロセシング型を分泌したことを示している。条件培地から回収されたＩＬ-１Ｒａ１Ｌ及びｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ材料の残りの５０％はプロセシングを受けていないＮ末端を示し、ＣＨＯ宿主細胞がまた図１５（配列番号：１９）のアミノ酸配列のアミノ酸残基１から２０７と図１９（配列番号：２５）のアミノ酸配列のアミノ酸残基１から２１８にそれぞれ対応するｈＩＬ-１Ｒａ１Ｌ及びｈＩＬ-１Ｒａ１Ｖ材料の未プロセシング型を分泌したことを示している。
ｈＩＬ-１Ｒａ３及びｍＩＬ-１Ｒａ３ポリペプチドの両方のプロセシングを受けたＮ末端配列はVLSGALCFRM（配列番号：３２）であると決定された。条件培地から回収されたｈＩＬ-１Ｒａ３及びｍＩＬ-１Ｒａ３材料のおよそ１００％がプロセシングを受けたＮ末端配列を示しており、ＣＨＯ宿主細胞が、Ｎ末端メチオニンを欠き、図７（配列番号：１３）のアミノ酸配列のアミノ酸残基２から１５５と図９（配列番号：１６）のアミノ酸配列のアミノ酸残基２から１５５に対応するプロセシングを受けたＮ末端配列を示した。