(57)【要約】  本発明は、大動脈瘤を予防および／または治療することができる新たな大動脈瘤の予防または治療剤、並びにこれを含有する飲食品を提供することを目的とする。本発明者らは、大動脈瘤のモデル動物を用いて、n-3系高度不飽和脂肪酸が大動脈瘤に及ぼす影響を評価した結果、エイコサペンタエン酸（EPA）が大動脈瘤の予防および治療効果を有することを見出した。すなわち、本発明は、エイコサペンタエン酸を有効成分として含有する、大動脈瘤の予防または治療剤を提供する。また、本発明は、上記大動脈瘤の予防または治療剤を含有する容器詰飲食品を提供する。
2015005393.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
エイコサペンタエン酸を有効成分として含有する、大動脈瘤の予防または治療剤。
【請求項２】
前記エイコサペンタエン酸が魚介類の抽出物として含有される、請求項1に記載の大動脈瘤の予防または治療剤。
【請求項３】
さらにドコサヘキサエン酸を含有する、請求項1または2に記載の大動脈瘤の予防または治療剤。
【請求項４】
請求項1〜3のいずれかに記載の大動脈瘤の予防または治療剤を含有する容器詰飲食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、大動脈瘤を予防または治療するための医薬品および飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
大動脈瘤は、大動脈の進行的な拡張を主病変とする疾患である。大動脈の進行的な拡張は最終的に大動脈の破裂を引き起こし、破裂した際の救命率は30%程度と低率である。大動脈瘤は、65歳以上の日本人男性の10%程度が有する疾患であり、毎年死因の10位前後に位置する主要な疾患である。【０００３】
大動脈瘤の治療は、瘤の破裂防止に主眼が置かれており、瘤径が所定の大きさを超えると、ステントグラフト挿入術または人工血管置換術が用いられる。これらの療法は、死亡率が1〜2％と比較的低く有効であるものの、高齢者に対する負担が大きい。また、瘤径が小さい初期の患者を対象とした薬物療法や治療法はまだ存在しないため、これらの患者は、瘤の破裂リスクが高まる直前まで経過観察する他に選択肢がない。そのため、大動脈瘤の予防および治療が可能な薬物療法および食事療法の開発が望まれている。【０００４】
しかしながら現時点で、大動脈瘤を予防および治療することが可能な薬剤および食品成分等は見出されていないという問題点がある。【０００５】
下記特許文献1には、PPARγ阻害活性を有する化合物を有効成分とする動脈瘤進行予防および／または治療剤が記載されている。腹部大動脈瘤壁外膜を構成する線維芽細胞は、血管壁内の循環障害によってPPARγを発現し脂肪細胞様細胞に分化し、血管壁にトリグリセリドを異常蓄積し、血管壁を脆弱化する。そのため、PPARγを阻害して、動脈瘤の発症、進展或いは破裂を予防し、動脈瘤患者の生命予後の改善をはかるものである。【０００６】
また、下記非特許文献1には、ドコサヘキサエン酸（DHA）がマトリックスメタロプロテアーゼ（MMP）の発現を阻害することが報告されている。しかし、本論文にはEPAが大動脈瘤を抑制する可能性についての記述はない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第2011/007565号
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Biochemical and Biophysical Research Communications 368 (2008) 343-349
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の目的は、大動脈瘤を予防および／または治療することができる新たな大動脈瘤の予防または治療剤、並びにこれを含有する飲食品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を行った。腹部大動脈瘤の組織病理は、中・外膜における弾性線維および膠原繊維の断裂、リンパ球およびマクロファージなどを中心とした炎症細胞の浸潤、並びに血管新生などで特徴づけられる。これらの病態を改善するためには、腹部大動脈瘤発症機構を解明することが重要であるが、腹部大動脈瘤発症機構に関してはまだ不明な点が多い。【００１１】
腹部大動脈瘤発症機構を明らかにするために、本発明者らはイメージングマススペクトロメトリー（IMS）による腹部大動脈瘤患者血管壁の解析を行い、患者血管壁が虚血状態となっていることを見出した。さらにラット腹部大動脈に虚血を人工的に誘導することによって、腹部大動脈瘤を発症するモデル動物の作出に成功した。このモデル動物の血管壁は、中・外膜における弾性線維および膠原繊維の断裂、マクロファージなどの炎症細胞の浸潤、並びに血管新生など、ヒトの病理像と一致していた。【００１２】
本発明者らは、上述した方法で作出したモデル動物を用いて、抗炎症作用を有するn-3系高度不飽和脂肪酸が、モデル動物の腹部大動脈瘤発症に及ぼす影響を評価した。その結果、様々な機能を有することで知られているエイコサペンタエン酸（EPA）に、大動脈瘤を予防及び／又は治療する効果があることを見出し、本発明に想到した。【００１３】
すなわち本発明は、エイコサペンタエン酸を有効成分として含有する、大動脈瘤の予防または治療剤を提供する。【００１４】
また本発明は、上記エイコサペンタエン酸が魚介類の抽出物として含有される、上記大動脈瘤の予防または治療剤を提供する。【００１５】
また本発明は、さらにドコサヘキサエン酸を含有する、上記大動脈瘤の予防または治療剤を提供する。【００１６】
また本発明は、上記大動脈瘤の予防または治療剤を含有する容器詰飲食品を提供する。
【発明の効果】
【００１７】
本発明に係る大動脈瘤の予防または治療剤および容器詰食品は、以上のように、エイコサペンタエン酸を有効成分として含有するので、大動脈瘤の発症を予防し、並びに大動脈瘤を縮小させることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】コントロール群およびEPA高投与群に形成された腹部大動脈瘤を示す図。
【図２】コントロール群およびEPA高投与群に形成された腹部大動脈拡張部の瘤径を比較するグラフ。
【図３】コントロール群およびEPA高投与群に形成された腹部大動脈拡張部の拡張比を比較するグラフ。
【図４】コントロール群およびEPA高投与群において組織片をHE染色した結果を示す図。
【図５】コントロール群およびEPA高投与群において組織片をPSR染色した結果を示す図。
【図６】コントロール群およびEPA高投与群における膠原線維面積を比較するグラフ。
【図７】各弾性板グレードに属する典型的な弾性板を表す図。
【図８】各投与群におけるそれぞれの弾性板グレード評価基準に該当する個体の割合（％）を表すグラフ。
【図９】コントロール群およびEPA低投与群に形成された腹部大動脈拡張部を比較するグラフ。
【図１０】コントロール群およびEPA低投与群において組織片をPSR染色した結果を示す図。
【図１１】コントロール群およびEPA低投与群における膠原線維面積を比較するグラフ。
【図１２】コントロール群およびEPA低投与群において組織片をEVG染色した結果を示す図。
【図１３】大動脈瘤形成初期にEPAを投与した場合のコントロール群およびEPA高投与群における腹部大動脈瘤破裂による死亡率を示す図。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明に係る大動脈瘤の予防または治療剤は、エイコサペンタエン酸（以下、「EPA」ともいう。）を有効成分として含有する。EPAは、n-3脂肪酸の多価不飽和脂肪酸の一つであり、5つのシス型二重結合をもつ20炭素のカルボン酸である。
【００２０】
本発明において使用するEPAは、天然あるいは人工的に得られたものを使用できる。EPAは、主に魚介類や微生物類から得た油脂を脱酸、脱色、脱臭、脱ガム、および脱ロウなどの常法により処理し抽出することができる。本発明において、EPAは、たとえば魚介類または微生物類の抽出物として含有されてもよい。魚介類の抽出物は、たとえば魚油および肝油などである。魚介類は、当該技術分野において一般的に認識されるとおり水産動物の総称をいい、たとえばニシン、サバ、サケ、イワシおよびナンキョクオキアミなどが挙げられる。また、微生物類としては、たとえばラビリンチュラ類等の微細藻類が挙げられる。
【００２１】
本発明の大動脈瘤の予防または治療剤は、任意の量のEPAを含有することができ、たとえば1日あたりの用量が好ましくは3mg/kg体重以上、特に好ましくは30mg/kg体重以上であるように含有することができる。このような用量であれば、後述する実施例に示すように、十分な大動脈瘤の予防または治療効果を得ることができる。また、EPAの1日あたりの用量の上限は、特に限定されないが、たとえば1000mg/kg体重以下であってもよい。EPAは他の用途ですでに長い使用経験があるので、安全性の問題を考慮することなく使用することができる。
【００２２】
大動脈瘤の予防または治療とは、大動脈の拡張を抑制し、大動脈瘤の進展を抑制し、膠原線維および弾性線維の分解を抑制し、大動脈瘤を縮小させ、または大動脈瘤の破裂を防止するなどの作用によって、大動脈瘤の発症を予防し、進展を抑制し、または改善させることをいう。
【００２３】
EPAは、後述する実施例に示すように、大動脈拡張抑制作用、大動脈瘤進展抑制作用、大動脈瘤の破裂抑制作用、血管壁の肥厚抑制作用、膠原線維分解抑制作用および弾性線維分解抑制作用を有する。したがって、本発明は、大動脈瘤の予防または治療剤として利用することができる。
【００２４】
本発明の大動脈瘤の予防または治療剤は、さらにドコサヘキサエン酸（以下、「DHA」ともいう。）を含有してもよい。DHAは、6つの二重結合を含む22個の炭素鎖をもつカルボン酸 (22:6) であり、たとえば4、7、10、13、16および19位に全てシス型の二重結合をもつ、n-3脂肪酸に分類される化合物などを含む。DHAは、上述したような魚介類の抽出物として含有されてもよい。
【００２５】
本発明の大動脈瘤の予防または治療剤は、EPA以外の成分をさらに含有してもよい。たとえば、本発明の用途に適した担体、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤および着色剤などをさらに含有することができる。
【００２６】
担体および賦形剤の例には、乳糖、ブドウ糖、白糖、マンニトール、馬鈴薯デンプン、トウモロコシデンプン、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、硫酸カルシウムおよび結晶セルロースなどを含む。
【００２７】
また、結合剤の例には、デンプン、ゼラチン、シロップ、トラガントゴム、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロースなどを含む。
【００２８】
また、崩壊剤の例には、デンプン、寒天、ゼラチン末、結晶セルロース、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよびカルボキシメチルセルロースカルシウムなどを含む。
【００２９】
また、滑沢剤の例には、ステアリン酸マグネシウム、水素添加植物油、タルクおよびマクロゴールなどを含む。
【００３０】
また、着色剤は、医薬品に添加することが許容されている任意の着色剤を使用することができる。
【００３１】
また、本発明の大動脈瘤の予防または治療剤は、必要に応じて、白糖、ゼラチン、精製セラック、ゼラチン、グリセリン、ソルビトール、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、フタル酸セルロースアセテート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、メチルメタクリレートおよびメタアクリル酸重合体などの一層以上の層で被膜してもよい。また、必要に応じて、pH調節剤、緩衝剤、安定化剤および可溶化剤などを添加してもよい。
【００３２】
また、本発明の大動脈瘤の予防または治療剤は、任意の形態の製剤として提供することができる。たとえば、本発明は、経口投与製剤として、糖衣錠、バッカル錠、コーティング錠およびチュアブル錠等の錠剤、トローチ剤、丸剤、散剤およびソフトカプセルを含むカプセル剤、顆粒剤、懸濁剤、乳剤、ドライシロップを含むシロップ剤、並びにエリキシル剤等の液剤であることができる。また、本発明は、非経口投与のために、静脈注射、皮下注射、腹腔内注射、筋肉内注射、経皮投与、経鼻投与、経肺投与、経腸投与、口腔内投与および経粘膜投与などの投与のための製剤であることができる。たとえば、注射剤、経皮吸収テープ、エアゾール剤および坐剤などであることができる。
【００３３】
また、本発明の大動脈瘤の予防または治療剤は、任意の方法を使用して製造することができる。たとえば、本発明の大動脈瘤の予防または治療剤は、公知の製造方法を使用して、EPAを、所望の含有量となるように上記のとおりの種々の材料と混合し、次いで所望の形態の製剤として成形することによって製造することができる。
【００３４】
本発明の大動脈瘤の予防または治療剤は、医薬品、医薬部外品および飲食品などに利用することができる。本発明の大動脈瘤の予防または治療剤が飲食品である場合には、たとえば一般食品、特定保健用食品、栄養機能食品、栄養補助食品、機能性食品、病者用食品および老人用食品等であることができる。本発明は、たとえば特定保健用食品であることを表示した飲食品および大動脈瘤予防効果または改善効果を表示した飲食品などであることができる。また、本発明の大動脈瘤の予防または治療剤は、他の食品に添加し、混合し、または塗布する食品素材として用いることができる。
【００３５】
本発明はまた、上述した大動脈瘤の予防または治療剤を含有する容器詰飲食品を提供する。本発明の容器詰飲食品は、上述した大動脈瘤の予防または治療剤が容器に充填され密封された状態で提供される飲食品である。すなわち、本発明の容器詰飲食品は、EPAを含有する、大動脈瘤を予防または改善するための容器詰飲食品である。飲食品は、殺菌処理後に容器に充填することができる。
【００３６】
本発明の容器詰飲食品は、希釈して摂取するように濃縮加工されているものであってもよいし、希釈せずにそのまま摂取するものであってもよい。容器は、一般に飲食品に用いられる容器を用いることができ、たとえばレトルトパウチ、紙パック、PETボトル、金属缶およびガラス瓶などであることができる。また、本発明の容器詰飲食品は、任意の方法を使用して製造することができる。たとえば、EPAを、所望の含有量となるように上記のとおりの種々の材料と混合し、任意の食品製造のための手順に従って上記のような容器に充填することができる。
【００３７】
本発明の容器詰飲食品は、特に限定されないが、たとえばEPAの1日あたりの摂取量が好ましくは3mg/kg体重以上、特に好ましくは30mg/kg体重以上であるように含有することができる。このような用量であれば、後述する実施例に示すように、十分な大動脈瘤の予防または治療効果を得ることができる。また、本発明の容器詰飲食品は、特に限定されないが、たとえばEPAの1日あたりの摂取量の上限が1000mg/kg体重以下であってもよい。
【００３８】
以上の構成によって、本発明の容器詰食品は、大動脈瘤の予防および／または改善のために好適に利用することができる。たとえば、ステントグラフト挿入術および人工血管置換術などの治療を行うことが困難な高齢者等の患者や、瘤径が小さい初期の患者などに対する食事療法に使用することができる。
【００３９】
本発明はまた、哺乳動物、好ましくはヒトに対し、大動脈瘤の予防および／または治療に有効な量のエイコサペンタエン酸を投与することを含む、大動脈瘤を予防または治療するための方法を提供する。
【００４０】
本発明はまた、哺乳動物、好ましくはヒトに対し、エイコサペンタエン酸を有効成分として含有する、大動脈瘤の予防または治療剤を投与することを含む、大動脈瘤を予防または治療するための方法を提供する。
【００４１】
本発明はまた、エイコサペンタエン酸が魚介類の抽出物として上記予防または治療剤に含有される、上記方法を提供する。
【００４２】
本発明はまた、上記方法において、上記予防または治療剤がさらにドコサヘキサエン酸を含有する、上記方法を提供する。
【００４３】
本発明はまた、哺乳動物、好ましくはヒトに対し、上記予防または治療剤を含有する容器詰飲食品を投与することを含む、大動脈瘤を予防または治療するための方法を提供する。
【００４４】
本発明の方法の対象となる哺乳動物には、たとえばヒト、マウス、ラット、ネコ、イヌ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギおよびウマなどが含まれる。
【００４５】
「有効な量」は、予防的または治療的に有効な量をさし、そのような量を受けたことのない対応する対象と比較して、大動脈の拡張を抑制し、大動脈瘤の進展を抑制し、膠原線維および弾性線維の分解を抑制し、大動脈瘤を縮小させ、または大動脈瘤の破裂を防止するなどの効果を生じる任意の量を意味する。
【００４６】
エイコサペンタエン酸は、経口投与および非経口投与を含む任意の投与経路により投与することができる。また、エイコサペンタエン酸は、たとえば本発明の予防または治療剤、および本発明の容器詰飲食品などの形態で投与することができる。エイコサペンタエン酸は、一度に、または適切な投与計画にしたがって所定期間に種々の時間間隔で投与することができる。
【実施例】
【００４７】
以下に実施例を示し、本発明の実施の形態についてさらに詳しく説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。【００４８】
（EPA高含有精製魚油の調製）
EPA高含有精製魚油は、日本水産株式会社製の精製魚油EPA-28（EPA28％以上含有）を用いた。【００４９】
（モデル動物の作出方法）
特に明記しない限り、以下の方法でモデル動物を作出した。
6週齢（160〜180g）の雄のSDラットを使用した。1週間予備飼育した後、1145mg/kg体重/日のトリオレイン（和光純薬工業株式会社製）（コントロール群）および1145mg/kg体重/日のEPA高含有精製魚油（EPA量として300mg/kg体重）（EPA高投与群）をそれぞれ1週間ラットに強制的に経口投与した。その後、ラット腹部大動脈にカテーテルを挿入し、挿入したカテーテルとともに腹部大動脈を結紮することによって、大動脈瘤モデル動物を作出した。その後さらに4週間投与を継続した後に安楽死させた。【００５０】
また、同様の方法を用いてEPA低投与群を作製した。EPA低投与群には、EPA高含有精製魚油とトリオレインとを1:9で混合した試料を1145mg/kg体重/日（EPA量として30mg/kg体重）経口投与した。【００５１】
これらのモデル動物を用いて以下の試験を行った。【００５２】
〔試験例1：体重推移〕
コントロール群およびEPA高投与群の体重推移においては、有意差は観察されなかった。【００５３】
〔試験例2：大動脈瘤の発症に対する効果〕
コントロール群およびEPA高投与群の腹部に形成された大動脈の拡張を評価した。非拡張部の血管径に対する最大拡張部の血管径の比が2.0以上（拡張比）の場合を腹部大動脈瘤形成と定義し、評価した。【００５４】
その結果、コントロール群では5匹中5匹が腹部大動脈瘤を発症（うち瘤破裂は1匹）、EPA高投与群では9匹中8匹が腹部大動脈瘤を発症（うち瘤破裂は0匹）した。図1は、コントロール群およびEPA高投与群に形成された腹部大動脈瘤を示す図であり、図1（a）はコントロール群の1匹における腹部大動脈瘤を示し、図1（b）はEPA高投与群の1匹における腹部大動脈瘤を示す。図1は、EPA高投与群に形成された腹部大動脈瘤が、コントロール群と比較して小さい傾向にあったことを示す。【００５５】
図2および図3は、コントロール群およびEPA高投与群に形成された腹部大動脈拡張部の瘤径および拡張比を比較するグラフであり、図2は拡張部の瘤径（mm）、および図3は拡張部／非拡張部瘤径（拡張比）を示す。コントロール群の平均拡張比は5.0であるのに対して、EPA高投与群の平均拡張比は2.5であった（図3）。両群における非拡張部の瘤径に有意差はなかった。これらの結果から、EPAはモデル動物における腹部大動脈瘤の進展を抑制することが示された。【００５６】
〔試験例3：血管壁の肥厚〕
コントロール群およびEPA高投与群について、組織片のヘマトキシリン・エオシン（HE）染色を行い、血管中外膜の肥厚を観察した。具体的には、腹部大動脈摘出後、4%パラホルムアルデヒド・リン酸緩衝液(ナカライテスク株式会社製)に一晩浸漬させた後、10、15、20%スクロースの順に各1時間浸漬させた。その後、組織をO.C.T Compound（サクラファインテックジャパン株式会社製）で包埋し、液体窒素によって凍結した後に、クライオスタット（CM1850;Leica Microsystems社製）を用いて10μmの切片を作成した。【００５７】
組織切片を蒸留水に1分つけ洗浄した後、ヘマトキシリンに10分つけ核染色した。蒸留水で洗浄後、1%塩酸70%エタノールに10秒つけた後、流水で洗浄した。その後、蒸留水に10分浸漬し、エオジンに5分浸した。80、90%エタノールに各1分間浸し、100%エタノールに1分間浸す作業を2回繰り返した。その後、キシレンに5分つけ透徹した。エンテランニューで封入し、生物顕微鏡(CX21LED;オリンパス株式会社製)を使用し観察した。【００５８】
図4は、コントロール群およびEPA高投与群において組織片をHE染色した結果を示す図であり、図4のAはコントロール群、図4のBはEPA高投与群、図4のCはコントロール群、図4のDはEPA高投与群を示す。図4のAおよびBのスケールバーは500μmを示し、図4のCおよびDのスケールバーは200μmを示す。図4は、コントロール群と比較して、EPA高投与群では血管壁の肥厚が抑制される傾向にあったことを示す。【００５９】
〔試験例4：腹部大動脈瘤の膠原線維に対する効果〕
コントロール群およびEPA高投与群について、膠原線維の病理評価を行った。膠原線維をピクロシリウスレッド（PSR）染色した後、ImageJによる画像解析によって膠原線維に及ぼす影響を評価した。【００６０】
（試薬調製）
ワイゲルト鉄ヘマトキシリン液は、ワイゲルト鉄ヘマトキシリン液I（1%ヘマトキシリン（SIGMA社製）および96%エタノール）とワイゲルト鉄ヘマトキシリン液II（2%塩化第二鉄（ナカライテスク株式会社製）および0.25%塩酸）とを1:1で混合して調製した。【００６１】
ワンギーソン液は、ワンギーソン液P（和光純薬工業株式会社製）と1%シリウスレッド（WALDECK社製）とを20:1の割合で混合して作製した。【００６２】
（方法および評価結果）
組織切片を蒸留水で1分間洗浄した。ワイゲルト鉄ヘマトキシリン液に10分つけた後、蒸留水で洗浄した。塩酸アルコールに10秒浸け、蒸留水で洗浄した。その後、ワンギ―ソン液に15分浸け、蒸留水で洗浄した後、100%エタノール（ナカライテスク株式会社製）に30秒浸した。エンテランニュー（MERCK社製）で封入し、乾燥後に偏光顕微鏡で観察される血管中の膠原線維の面積の割合をImage Jで定量した。【００６３】
図5は、コントロール群およびEPA高投与群において組織片をPSR染色した結果を示す図であり、図6は、コントロール群およびEPA高投与群における膠原線維面積を比較するグラフである。図5および図6に示すように、コントロール群と比較してEPA高投与群の膠原線維量は有意に多かった。これらの結果から、EPA高含有精製魚油の投与によって膠原線維の分解が抑制されたことが示唆された。【００６４】
〔試験例5：腹部大動脈瘤の弾性線維に対する効果〕
コントロール群およびEPA高投与群について、弾性線維の病理評価を行った。エラスチカ・ワンギーソン（EVG）染色によって弾性線維を染色した後、各投与群の弾性板グレードを評価した。【００６５】
（試薬調製）
ワイゲルト鉄ヘマトキシリン液（ナカライテスク株式会社製）は、ワイゲルト鉄ヘマトキシリン液I（1%ヘマトキシリン（SIGMA社製）および96%エタノール）とワイゲルト鉄ヘマトキシリン液II（2%塩化第二鉄（ナカライテスク株式会社製）および0.25%塩酸）とを1:1で混合して調製した。【００６６】
ワンギーソン液は、ワンギーソン液P（和光純薬工業株式会社製）とワンギーソン液F（酸性フクシン（WALDECK社製）5gおよび蒸留水500ml）とを100:15で混合して調製した。【００６７】
（方法および評価結果）
組織切片を蒸留水で1分間水洗した後、ワイゲルトレゾールフクシン液（ナカライテスク株式会社製）に60分つけた。100％エタノール（ナカライテスク株式会社製）に3分3回つけた後、2分間水洗した。その後、ワイゲルト鉄ヘマトキシリン液に10分つけ、10分間水洗した。その後、ワンギ―ソン液に3分つけ、70％エタノールに1分ずつ3回、90、100％エタノールに1分ずつ各2回つけた。キシレンによる透徹後、エンテランニュー（MERCK社製）で封入した。乾燥後、顕微鏡下で観察される切片の弾性板グレードを、弾性板グレード評価基準（1：無傷、2：波状構造の欠損、または弾性板の希薄化、3：弾性板の部分的消失、および4：弾性板の消失）にしたがって評価した。図7は、各弾性板グレードに属する典型的な弾性板を表す図である。また、図8は各投与群におけるそれぞれの弾性板グレード評価基準に該当する個体の割合（％）を表す。【００６８】
図8の通り、各投与群におけるそれぞれの弾性板グレード評価基準に該当する個体の割合は、コントロール群ではグレード4が50%、グレード2およびグレード3が25%であるのに対し、EPA高投与群ではグレード4が12.5%、グレード3が37.5%、グレード2が50%であった。これらの結果から、EPA高投与群では弾性線維の分解が抑制される傾向にあることが示された。【００６９】
〔試験例6：EPA低投与群における大動脈瘤の発症に対する効果〕
次に、EPA低投与群について、試験例2と同様に腹部に形成された大動脈の拡張を評価した。図9は、コントロール群およびEPA低投与群に形成された腹部大動脈拡張部を比較（3個体の平均）するグラフである。この結果から、EPAを30mg/kg体重/日において投与した場合にも、腹部大動脈瘤の進展を抑制する傾向にあることが示された。【００７０】
〔試験例7：EPA低投与群における腹部大動脈瘤の膠原線維に対する効果〕
EPA低投与群について、試験例4と同様に膠原線維の病理評価を行った。図10はコントロール群およびEPA低投与群において組織片をPSR染色した結果を示す図であり、図10の（a）はコントロール群、図10の（b）はEPA低投与群を示す。図11はコントロール群およびEPA低投与群における膠原線維面積を比較するグラフである。図10および図11に示すように、コントロール群と比較してEPA低投与群の膠原線維量は有意に多かった。この結果から、EPAを30mg/kg体重/日において投与した場合にも、膠原線維の分解が抑制されたことが示唆された。【００７１】
〔試験例8：EPA低投与群における腹部大動脈瘤の弾性線維に対する効果〕
EPA低投与群について、試験例5と同様に弾性線維の病理評価を行った。図12はコントロール群およびEPA低投与群において組織片をEVG染色した結果を示す図であり、図12の（a）はコントロール群、図12の（b）はEPA低投与群を示す。弾性板グレードの評価は、コントロール群では4（弾性板の消失）であったのに対し、EPA低投与群では3（弾性板の部分的消失）であった。これらの結果から、EPAを30mg/kg体重/日において投与した場合にも、弾性線維の分解が抑制される傾向にあることが示唆された。【００７２】
〔試験例9〕
大動脈瘤形成初期にEPAを投与した場合の効果を評価するために、下記の試験を行った。
モデル動物には、6週齢の雄のSDラットを使用した。12日間の予備飼育の後、大動脈瘤モデル動物の作出のためラット腹部大動脈にカテーテルを挿入し、挿入したカテーテルとともに腹部大動脈を結紮する処置を行った。大動脈瘤形成初期段階に当たる処置1日後に、コントロール群には1145mg/kg体重/日のトリオレインを、EPA投与群には1145mg/kg体重/日のEPA高含有精製魚油（EPA量として300mg/kg体重）を強制的に経口投与し、最大4週間投与を続けた。投与期間中に死亡した個体を開腹し、腹部大動脈瘤の発症と破裂の有無を評価した。【００７３】
その結果、コントロール群では10匹中5匹が腹部大動脈瘤の破裂により死亡し、EPA投与群では8匹中1匹が腹部大動脈瘤の破裂により死亡した。図13は、コントロール群およびEPA投与群における腹部大動脈瘤破裂による死亡率を示す図である。図13に示すように、コントロール群およびEPA投与群の腹部大動脈瘤破裂による死亡率は、それぞれ50％および12.5％であった。この結果から、EPAは、腹部大動脈瘤形成初期に投与した場合にも、瘤の破裂を抑制し、腹部大動脈瘤による死亡率を低減させることが明らかとなった。
【産業上の利用可能性】
【００７４】
本発明は、大動脈瘤を予防、改善または治療するための医薬および飲食品などに好適に利用することができる。
【図２】
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【図３】
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【図６】
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【図８】
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【図９】
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【図１１】
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【図１３】
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【図１】
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【図４】
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【図５】
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【図７】
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【図１０】
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【図１２】
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【国際調査報告】
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