(57)【要約】  本発明は、重量平均分子量の低い樹脂の含有量が少ない親水性樹脂粒子の製造が可能であり、有機溶剤等の廃液の発生が無く、煩雑な工程を行う必要の無い、親水性樹脂粒子の製造方法を提供することを目的とする。  本発明の親水性樹脂粒子の製造方法は、液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である二酸化炭素又は液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である窒素と水溶性樹脂（Ａ）を含んでなる樹脂組成物（Ｒ）が分散されてなる分散体から二酸化炭素又は窒素を気体にして除去する工程を含むことを特徴とする。
2016010128.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である二酸化炭素又は液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である窒素に親水性樹脂（Ａ）を含んでなる樹脂組成物（Ｒ）が分散されてなる分散体から二酸化炭素又は窒素を気体にして除去する工程を含むことを特徴とする親水性樹脂粒子の製造方法。
【請求項２】
前記樹脂組成物（Ｒ）は、更に水を含み、前記樹脂組成物（Ｒ）に含まれる前記親水性樹脂（Ａ）と前記水の重量比［親水性樹脂（Ａ）：水］が１：９９〜８５：１５である請求項１に記載の親水性樹脂粒子の製造方法。
【請求項３】
水溶性単量体（ａ）を液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である二酸化炭素中又は液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である窒素中で重合して前記親水性樹脂（Ａ）を合成し、前記樹脂組成物（Ｒ）が分散されてなる分散体を得る工程を含む請求項１又は２に記載の親水性樹脂粒子の製造方法。
【請求項４】
水溶性単量体（ａ）を液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である二酸化炭素中又は液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である窒素中で重合して前記親水性樹脂（Ａ）を合成し、その後、水を加えて前記樹脂組成物（Ｒ）が分散されてなる分散体を得る工程を含む請求項１又は２に記載の親水性樹脂粒子の製造方法。
【請求項５】
請求項３又は４の方法で得られた前記分散体に更に架橋剤を加え、前記親水性樹脂（Ａ）を架橋する工程を含む請求項３又は４に記載の親水性樹脂粒子の製造方法。
【請求項６】
水溶性単量体（ａ）を液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である二酸化炭素中又は液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である窒素中で重合しながら架橋剤で架橋して前記親水性樹脂（Ａ）を合成し、前記樹脂組成物（Ｒ）が分散されてなる分散体を得る工程を含む請求項１又は２に記載の親水性樹脂粒子の製造方法。
【請求項７】
前記水溶性単量体（ａ）がカルボキシル基を有する水溶性単量体（ａ１１）、スルホ基を有する水溶性単量体（ａ１２）、アミノ基を有する水溶性単量体（ａ２１）及び水酸基を有する水溶性単量体（ａ３１）からなる群から選ばれる少なくとも１種の水溶性単量体である請求項３〜６のいずれかに記載の親水性樹脂粒子の製造方法。
【請求項８】
前記親水性樹脂（Ａ）を液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である二酸化炭素中又は液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である窒素中で分散し、前記樹脂組成物（Ｒ）が分散されてなる分散体を得る工程を含む請求項１又は２に記載の親水性樹脂粒子の製造方法。
【請求項９】
前記親水性樹脂（Ａ）と水とを、液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である二酸化炭素中又は液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である窒素中で分散し、前記樹脂組成物（Ｒ）が分散されてなる分散体を得る工程を含む請求項１又は２に記載の親水性樹脂粒子の製造方法。
【請求項１０】
前記親水性樹脂（Ａ）を、架橋剤を用いて架橋して前記樹脂組成物（Ｒ）が分散されてなる分散体を得る工程を含む請求項８又は９に記載の親水性樹脂粒子の製造方法。
【請求項１１】
液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である二酸化炭素中又は液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である窒素中で前記親水性樹脂（Ａ）を架橋する請求項１０に記載の親水性樹脂粒子の製造方法。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれかに記載の製造方法で得られた親水性樹脂粒子。
【請求項１３】
請求項１２に記載の親水性樹脂粒子を含んでなる細胞培養担体（ＰＢ）。
【請求項１４】
請求項１３に記載の細胞培養担体（ＰＢ）が使用された細胞培養用培地。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、親水性樹脂粒子の製造方法、親水性樹脂粒子、細胞培養担体及び細胞培養用培地に関する。
【背景技術】
【０００２】
逆相懸濁法により製造された親水性樹脂粒子は、粉砕により製造された親水性樹脂粒子に比べ、小粒径かつ均一形状である。しかしながら、廃液が樹脂粒子の数十倍も発生し、その処理コスト、環境負荷への影響が大きいという課題、粒子の濾過及び乾燥が必要なため煩雑な工程になるという問題点及び重合に用いた溶剤が残存し易く、医薬品関連材料や衛生材料に用いるためには更に有機溶剤の除去が必要になるという課題がある。【０００３】
廃液の発生が無く、煩雑な工程を行う必要が無く、更に溶媒の残存量の少ない水溶性高分子粒子の製造方法として、カルボキシル基を有するエチレン性不飽和単量体を含む単量体組成物を、超臨界二酸化炭素中で、重合させる製造方法が知られている（特許文献１参照）。しかしながら、特許文献１に記載の製造方法では親水性単量体の重合で生じた水溶性高分子が疎水性である超臨界二酸化炭素中で不溶化して析出するため、重量平均分子量の低い樹脂（例えば、重量平均分子量が２，０００以下の樹脂）の含有量が多いという課題がある。
また、例えば親水性樹脂粒子が接着性細胞培養に用いられた場合、従来の接着性細胞培養において、細胞培養担体の全体に細胞が増殖した際、細胞を剥離し、新たな細胞培養担体に移す。この時、細胞培養担体に製造時の薬剤が残存していると細胞の増殖阻害または死滅が発生する。細胞の増殖阻害を抑制する方法として、細胞培養時に薬品の混入が生じることのない、水膨潤性ヘクトライトを水に分散してゲル化させたクレイヒドロゲルを使用する方法が報告されている（特許文献２）。しかしながら、土壌から回収した天然の層状鉱物であるヘクトライトの純度を保障することが難しく、不純物又は微生物による品質低下及び細胞増殖阻害のリスクがある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００１−１５１８０２号公報
【特許文献２】特開２００６−３２５４６１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、重量平均分子量の低い樹脂の含有量が少ない親水性樹脂粒子の製造が可能であり、有機溶剤等の廃液の発生が無く、煩雑な工程を行う必要の無い、親水性樹脂粒子の製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、前記目的を達成するために鋭意研究を重ねた結果、以下のことを見出した。すなわち本発明は、液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である二酸化炭素又は液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である窒素に親水性樹脂（Ａ）を含んでなる樹脂組成物（Ｒ）が分散されてなる分散体から二酸化炭素又は窒素を気体にして除去する工程を含むことを特徴とする親水性樹脂粒子の製造方法である。
【発明の効果】
【０００７】
本発明の親水性樹脂粒子の製造方法は、重量平均分子量が２，０００以下の樹脂の含有量が少ない親水性樹脂粒子の製造が可能であり、有機溶剤等の廃液の発生が無く、煩雑な工程を行う必要が無い。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】ラインブレンドによる混合方法によって本発明の親水性樹脂粒子の製造方法を実施する場合に用いる装置の構成を示した図である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
以下に本発明を詳述する。
本発明の親水性樹脂粒子の製造方法は、液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である二酸化炭素又は液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である窒素に親水性樹脂（Ａ）を含んでなる樹脂組成物（Ｒ）が分散されてなる分散体から二酸化炭素又は窒素を気体にして除去する工程を含むことを特徴とする。
【００１０】
本発明の製造法は、分散体の連続相として、液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である二酸化炭素又は液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である窒素を用いる。二酸化炭素、又は、窒素の純度は、粒子製造時の充填率の観点から純度９０％以上の二酸化炭素又は純度９０％以上の窒素であることが好ましい。これらの中では、純度９０％以上の二酸化炭素であることが更に好ましい。
本発明の製造方法に用いる二酸化炭素又は窒素としては、公知の設備等で得られるものであれば特に制限はなく使用でき、純度９０％の二酸化炭素又は窒素を得る方法としては、化学吸着方式、ＰＡＳ方式、ガス冷却回収方式等が挙げられる。
【００１１】
本発明の製造方法において、液体状態の二酸化炭素とは、二酸化炭素の温度軸と圧力軸とで表す相図上において、二酸化炭素の三重点（温度＝−５７℃、圧力０．５ＭＰａ）と二酸化炭素の臨界点（温度＝３１℃、圧力＝７．４ＭＰａ）を通る気液境界線、臨界温度の等温線、及び固液境界線に囲まれた部分の温度・圧力条件にある二酸化炭素をいい、超臨界状態の二酸化炭素とは、臨界温度以上の温度・圧力条件である二酸化炭素をいい、亜臨界状態の二酸化炭素とは臨界温度よりも若干、低温条件である二酸化炭素をいう。尚、圧力は、２成分以上の混合ガスの場合、全圧を意味する。
中でも粒子製造時の充填率の観点から亜臨界状態又は超臨界状態であることが好ましい。
【００１２】
本発明の製造方法において、液体状態の窒素とは、窒素の温度軸と圧力軸とで表す相図上において、窒素の三重点（温度＝−２１０℃、圧力０．０１ＭＰａ）と窒素の臨界点（温度＝−１４７℃、圧力＝３．４ＭＰａ）を通る気液境界線、臨界温度の等温線、及び固液境界線に囲まれた部分の温度・圧力条件にある窒素をいい、超臨界状態の窒素とは、臨界温度以上の温度・圧力条件である窒素をいい、亜臨界状態の窒素とは臨界温度よりも若干、低温条件である窒素をいう。尚、圧力は、２成分以上の混合ガスの場合、全圧を意味する。
中でも粒子製造時の充填率の観点から亜臨界状態又は超臨界状態であることが好ましい。
【００１３】
液体状態、亜臨界状態又は超臨界状態である二酸化炭素又は窒素は、公知の加圧設備（ブランジャーポンプ等）及び加熱設備（オイル温度調節機等）等を用いて気体を圧縮、加熱することで得ることができる。
【００１４】
本発明の製造方法において親水性樹脂（Ａ）は、８０℃の水１００ｇに対して１０ｇ以上の溶解度を有する樹脂又はその架橋体であり、特開平８−０６７０６５号公報等に記載の水溶性高分子等が挙げられ、中でも好ましいものとしてポリ（メタ）アクリル酸（塩）、ポリスチレンスルホン酸（塩）、ポリアクリロモルフォリン、ポリビニルアルコール及び多糖類並びに以下に例示する水溶性単量体（ａ）を含む重合体が挙げられる。
尚、「（メタ）アクリル」は「メタアクリル」又は「アクリル」を意味し、「（メタ）アクリロイル」は「メタアクリロイル」又は「アクリロイル」を意味し、「酸（塩）」は、「酸」又は「酸塩」を意味する。
【００１５】
水溶性単量体（ａ）としては、重合性不飽和二重結合を有し、８０℃の水１００ｇに対して１０ｇ以上の溶解度を有する単量体であれば特に制限はないが、下記のアニオン性水溶性単量体（ａ１）、カチオン性水溶性単量体（ａ２）及びノニオン性水溶性単量体（ａ３）等が挙げられる。
【００１６】
アニオン性水溶性単量体（ａ１）としては、カルボキシル基を有する水溶性単量体（ａ１１）、スルホ基を有する水溶性単量体（ａ１２）及びホスホ基を有する水溶性単量体（ａ１３）並びにこれらの塩［例えばアルカリ金属塩（ナトリウム塩及びカリウム塩等）、アルカリ土類金属塩（例えばカルシウム塩及びマグネシウム塩等）、アミン塩及びアンモニウム塩］等が挙げられる。
【００１７】
カルボキシル基を有する水溶性単量体（ａ１１）としては、炭素数３〜１０の不飽和モノ又はポリ（２価〜６価）カルボン酸［（メタ）アクリル酸、マレイン酸、クロトン酸、ソルビン酸、フマル酸、イタコン酸、ケイ皮酸、シトラコン酸等］及びこれらの酸無水物、並びに、酸変性アクリルオリゴマー（東亞合成製アロニックスＭ−５１０）等が挙げられる。
【００１８】
スルホ基を有する水溶性単量体（ａ１２）としては、炭素数２〜２０の脂肪族ビニルスルホン酸（ビニルスルホン酸及びアリルスルホン酸等）、炭素数８〜２０芳香族ビニルスルホン酸（ビニルトルエンスルホン酸及びスチレンスルホン酸等）、炭素数４〜２０の（メタ）アクリルアルキルスルホン酸［２−ヒドロキシ−３−（メタ）アクリロイルオキシプロパンスルホン酸、２−（メタ）アクリロイルオキシエタンスルホン酸、２−（メタ）アクリロイルオキシプロパンスルホン酸、３−（メタ）アクリロイルオキシプロパンスルホン酸、２−（メタ）アクリロイルオキシブタンスルホン酸、４−（メタ）アクリロイルオキシブタンスルホン酸、２−（メタ）アクリロイルオキシ−２，２−ジメチルエタンスルホン酸、ｐ−（メタ）アクリロイルオキシメチルベンゼンスルホン酸等］、炭素数４〜１０の（メタ）アクリルアミドアルキルスルホン酸［２−（メタ）アクリロイルアミノエタンスルホン酸、２−又は３−（メタ）アクリロイルアミノプロパンスルホン酸、２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸、２−又は４−（メタ）アクリロイルアミノブタンスルホン酸、２−（メタ）アクリロイルアミノ−２，２−ジメチルエタンスルホン酸及びｐ−（メタ）アクリロイルアミノメチルベンゼンスルホン酸等］並びにアルキル（炭素数１〜２０）（メタ）アリルスルホコハク酸エステル［メチル（メタ）アリルスルホコハク酸エステル等］等が挙げられる。
【００１９】
ホスホ基を有する水溶性単量体（ａ１３）としては、炭素数４〜２４の（メタ）アクリル酸ヒドロキシアルキルリン酸モノエステル［２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリロイルホスフェート及びフェニル−２−（メタ）アクリロイルロキシエチルホスフェート等］等が挙げられる。
【００２０】
カチオン性水溶性単量体（ａ２）としては、アミノ基を有する水溶性単量体（ａ２１）及びこれらの塩［例えば無機酸（塩酸、硫酸、リン酸及び硝酸等）塩、有機酸（ギ酸、乳酸及び酢酸等）塩、メチルクロライド塩、ジメチル硫酸塩及びベンジルクロライド塩］等が挙げられる。
【００２１】
アミノ基を有する水溶性単量体（ａ２１）としては、炭素数２〜８のビニルアミン［ビニルアミン、ビニルアニリン、（メタ）アリルアミン及びｐ−アミノスチレン等］、アミノアルキル（炭素数２〜３）（メタ）アクリレート［アミノメチル（メタ）アクリレート及びアミノプロピル（メタ）アクリレート等］、Ｎ，Ｎ−ジアルキル（炭素数１〜２）アミノアルキル（炭素数２〜３）（メタ）アクリレート［Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチル（メタ）アクリレート、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピル（メタ）アクリレート、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエチル（メタ）アクリレート、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノプロピル（メタ）アクリレート等］、複素環含有（メタ）アクリレート［Ｎ−モルホリノエチル（メタ）アクリレート等］、Ｎ，Ｎ−ジアルキル（炭素数１〜２）アミノアルキル（炭素数２〜３）（メタ）アクリルアミド［Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチル（メタ）アクリルアミド等］、１，１，１−トリメチルアミン（メタ）アクリルイミド、１，１−ジメチル−１−エチルアミン（メタ）アクリルイミド及び１，１−ジメチル−１−（２’−フェニル−２’−ヒドロキシエチル）アミン（メタ）アクリルイミド等が挙げられる。
【００２２】
ノニオン性水溶性単量体（ａ３）としては、水酸基を有する水溶性単量体（ａ３１）、（ポリ）オキシアルキレン基を有する水溶性単量体（ａ３２）、炭素数１又は２のアルコールと前記アニオン性水溶性単量体（ａ１１）とのエステル（ａ３３）［アクリル酸メチル及びアクリル酸エチル等］等が挙げられる。
水酸基を有する水溶性単量体（ａ３１）としては、ジ又はポリ（２〜８価）アルコール（エチレングリコール、グリセリン及びペンタエリスリトール等）と前記のカルボキシル基を有する水溶性単量体（ａ１１）とのモノエステルが挙げられる。（ポリ）オキシアルキレン基を有するノニオン性水溶性単量体（ａ３２）としては、プロピレンオキシドや、ジ又はポリ（２〜８価）アルコールに炭素数２〜３のアルキレンオキシドを付加して得られるポリオキシアルキレンアルコール（重合度２〜５０）と前記のカルボキシル基を有する水溶性単量体（ａ１１）とのエステル等が挙げられる。
【００２３】
これらのうち水溶性単量体（ａ）としては、カルボキシル基を有する水溶性単量体（ａ１１）、スルホ基を有する水溶性単量体（ａ１２）、アミノ基を有する水溶性単量体（ａ２１）及び水酸基を有する水溶性単量体（ａ３１）からなる群から選ばれる少なくとも１種の水溶性単量体であることが好ましく、更に好ましくはカルボキシル基を有するアニオン性水溶性単量体（ａ１１）である。
【００２４】
本発明の製造方法に用いられる樹脂組成物（Ｒ）は、更に水を含み、樹脂組成物（Ｒ）に含まれる、親水性樹脂（Ａ）と水との重量比［親水性樹脂（Ａ）：水］は１：９９〜８５：１５であることが好ましく、更に好ましくは５：９５〜５０：５０である。この範囲にあると親水性樹脂粒子の収率が良好となり好ましい。
【００２５】
親水性樹脂（Ａ）の含有量は、水を除いた樹脂組成物（Ｒ）の重量に基づいて、製造される親水性樹脂粒子の強度の観点から、好ましくは６０〜１００重量％、更に好ましくは７０〜１００重量％、特に好ましくは８０〜１００重量％である。
【００２６】
親水性樹脂（Ａ）が、水溶性単量体（ａ）が重合してなる場合、水溶性単量体（ａ）の重合は、公知の重合開始剤を用い、マイクロ波、熱又は活性エネルギー線（紫外線及び電子線等）を用いて水溶性単量体（ａ）をラジカル重合させる重合方法等で行うことができる。中でも熱ラジカル重合を行う重合方法が好ましい。
【００２７】
熱ラジカル重合に用いる開始剤（Ｅ）としては、特に制限はないが、分配係数（ＬｏｇＫｏｗ）が−６以上３以下であることが好ましく、更に好ましくは−６以上１以下であり、好ましいものとしては、過酸化水素、２，２’−アゾビス［Ｎ−（２−カルボキシエチル）−２−メチルプロピオンアミジン］水和物、２，２’−アゾビス（２−メチルプロピオンアミジン）２塩酸塩が挙げられる。  
【００２８】
開始剤（Ｅ）の使用量は、親水性樹脂粒子中の低重量平均分子量成分の含有量等の観点から、水溶性単量体（ａ）の合計重量に基づいて０．００１〜０．２重量％であることが好ましい。
【００２９】
本発明の製造方法において、樹脂組成物（Ｒ）には必要により本発明の効果を阻害しない範囲で架橋剤や添加剤（分散剤、レベリング剤、可塑剤、帯電防止剤、荷電制御剤、紫外線吸収剤、ブロッキング防止剤、耐熱安定剤、難燃剤、充填剤等）を加えてもよい。水溶性単量体（ａ）を重合して親水性樹脂（Ａ）を合成し、樹脂組成物（Ｒ）を得る場合、架橋剤や添加剤は水溶性単量体（ａ）の重合前に添加しても重合後に添加しても良い。
【００３０】
分散剤としては特に限定はなく、公知のものを使用することができるが、親水性樹脂（Ａ）及び水溶性単量体（ａ）の液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である二酸化炭素中又は液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である窒素層への物質移動の観点から、アルキル（炭素数４〜２０）シリコーン、フッ素アルキル、ポリエーテル、ショ糖脂肪酸エステル、シロキサン高分子等であることが好ましい。ショ糖脂肪酸エステルとしてはショ糖ステアリン酸エステルであることが望ましく、シロキサン高分子としては、ＰＣＡ  ジメチコン（クローダジャパン（株）、ＳＥＮＳＡＳＩＬ  ＰＣＡ）であることが望ましい。また、分散安定剤の添加量は、分散安定性の観点から、固体原料の重量に対し０．０１〜１００重量％が好ましく、更に好ましくは０．０２〜５０重量％、特に好ましくは０．０３〜３０重量％である。分散安定剤の好ましい重量平均分子量の範囲は１００〜１００，０００であり、更に好ましくは２００〜５０，０００、特に好ましくは５００〜３０，０００である。この範囲内にすると、分散安定効果が向上する。
【００３１】
架橋剤としては水溶性単量体（ａ）又はその重合体である親水性樹脂（Ａ）と反応するものであれば特に制限はなく、公知のものを使用することができる。例えば、水溶性単量体（ａ）として水酸基を有する単量体（ａ３１）等を用いる場合にはブロック化イソシアネート、グリシルアルデヒド等が挙げられ、水溶性単量体（ａ）としてカルボン酸を有する単量体（ａ１１）等を用いる場合には、グリコールジアミン、グリコールポリグリシジル、エチレングリコールジグリシジルエーテル等が挙げられ、水溶性単量体（ａ）としてアミノ基を有する単量体（ａ２１）等を用いる場合には、ブロック化イソシアネート、グリコールポリグリシジル等が挙げられる。また、水溶性単量体（ａ）の種類によらず、多官能ビニル化合物（ペンタエリスリトールアクリレート、ペンタエリスリトールアリルエーテル等）等を用いることができる。
これらの架橋剤の添加量は、親水性の観点から、水溶性単量体（ａ）に添加する場合、水溶性単量体（ａ）の合計重量に基づいて０．０１〜１００重量％が好ましく、更に好ましくは０．０１〜３０重量％であり、親水性樹脂（Ａ）に添加する場合、親水性樹脂（Ａ）の合計重量に基づいて０．０１〜３０重量％が好ましく、更に好ましくは０．０１〜１０重量％である。
架橋剤により水溶性単量体（ａ）及び／又は親水性樹脂（Ａ）を架橋する際の反応系に水が存在している場合、親水性の観点から、これらの架橋剤の溶解度は水１００ｇに対し１ｇ以上であることが好ましい。
【００３２】
本発明の製造方法は、液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である二酸化炭素又は液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である窒素に親水性樹脂（Ａ）を含んでなる樹脂組成物（Ｒ）が分散されてなる分散体から二酸化炭素又は窒素を気体にして除去する工程を含んでいれば制限はないが、好ましい方法としては以下の製造方法１〜８に示す方法が挙げられる。
【００３３】
製造方法１：水溶性単量体（ａ）を液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である二酸化炭素中又は液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である窒素中で重合して親水性樹脂（Ａ）を合成し、樹脂組成物（Ｒ）が分散されてなる分散体を得る工程を行い、その後、樹脂組成物（Ｒ）が分散されてなる分散体から二酸化炭素又は窒素を気体にして除去する工程を行う製造方法。
【００３４】
製造方法２：水溶性単量体（ａ）を液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である二酸化炭素中又は液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である窒素中で重合して親水性樹脂（Ａ）を合成し、その後、水を加えて樹脂組成物（Ｒ）が分散されてなる分散体を得る工程を行い、その後、樹脂組成物（Ｒ）が分散されてなる分散体から二酸化炭素又は窒素を気体にして除去する工程を行う製造方法。
【００３５】
製造方法３：水溶性単量体（ａ）を液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である二酸化炭素中又は液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である窒素中で重合して親水性樹脂（Ａ）を合成し、樹脂組成物（Ｒ）が分散されてなる分散体を得る工程を行い、
又は、
水溶性単量体（ａ）を液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である二酸化炭素中又は液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である窒素中で重合して親水性樹脂（Ａ）を合成し、その後、水を加えて樹脂組成物（Ｒ）が分散されてなる分散体を得る工程を行い、
得られた分散体に更に架橋剤を加え、前記親水性樹脂（Ａ）を架橋する工程を行い、その後、樹脂組成物（Ｒ）が分散されてなる分散体から二酸化炭素又は窒素を気体にして除去する工程を行う製造方法。
【００３６】
製造方法４：水溶性単量体（ａ）を液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である二酸化炭素中又は液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である窒素中で重合しながら架橋剤で架橋して親水性樹脂（Ａ）を合成し、樹脂組成物（Ｒ）が分散されてなる分散体を得る工程を行い、その後、樹脂組成物（Ｒ）が分散されてなる分散体から二酸化炭素又は窒素を気体にして除去する工程を行う製造方法。
【００３７】
製造方法５：親水性樹脂（Ａ）を液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である二酸化炭素中又は液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である窒素中で分散し、樹脂組成物（Ｒ）が分散されてなる分散体を得る工程を行った後、樹脂組成物（Ｒ）が分散されてなる分散体から二酸化炭素又は窒素を気体にして除去する工程を行う製造方法。
【００３８】
製造方法６：親水性樹脂（Ａ）と水とを、液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である二酸化炭素中又は液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である窒素中で分散し、樹脂組成物（Ｒ）が分散されてなる分散体を得る工程を行った後、樹脂組成物（Ｒ）が分散されてなる分散体から二酸化炭素又は窒素を気体にして除去する工程を行う製造方法。
【００３９】
製造方法７：親水性樹脂（Ａ）を、架橋剤を用いて架橋して、液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である二酸化炭素中又は液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である窒素中に樹脂組成物（Ｒ）が分散されてなる分散体を得る工程を行った後、樹脂組成物（Ｒ）が分散されてなる分散体から二酸化炭素又は窒素を気体にして除去する工程を行う製造方法。
【００４０】
製造方法８：液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である二酸化炭素中又は液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である窒素中で親水性樹脂（Ａ）を、架橋剤を用いて架橋して樹脂組成物（Ｒ）が分散されてなる分散体を得る工程を行った後、樹脂組成物（Ｒ）が分散されてなる分散体から二酸化炭素又は窒素を気体にして除去する工程を行う製造方法。
【００４１】
細胞培養時の細胞担持効率の観点から、製造方法３又は４に示すように水溶性単量体（ａ）を重合して親水性樹脂（Ａ）を合成し、更に架橋剤を用いて架橋して樹脂組成物（Ｒ）が分散されてなる分散体を得てもよく、水溶性単量体（ａ）を重合しながら架橋剤で架橋して親水性樹脂（Ａ）を合成して樹脂組成物（Ｒ）が分散されてなる分散体を得てもよい。
【００４２】
細胞培養時の細胞担持効率の観点から、製造方法７及び８に示すように、親水性樹脂（Ａ）を、架橋剤を用いて架橋して樹脂組成物（Ｒ）が分散されてなる分散体を得ても良い。
【００４３】
また、上記製造方法１〜８において、樹脂組成物（Ｒ）が分散されてなる分散体にかかる樹脂組成物（Ｒ）を、架橋剤を用いて架橋させることも可能である。
【００４４】
また、上記製造方法１〜４において、水溶性単量体（ａ）を重合する際には媒体として水を含むものであってもよい。
また、上記製造方法４において、親水性樹脂（Ａ）を合成し、その後、水を加えて、樹脂組成物（Ｒ）が分散されてなる分散体を得る工程を行ってもよい。
【００４５】
また、上記製造方法１〜４において、親水性樹脂の存在下に水溶性単量体（ａ）を重合して親水性樹脂（Ａ）を合成することも可能である。用いる親水性樹脂としては、親水性樹脂（Ａ）と同様の親水性樹脂が挙げられる。親水性樹脂の含有量は、粒度分布の観点から、水溶性単量体（ａ）の重量に対して好ましくは０．１重量％以上１０重量％以下、より好ましくは０．１重量％以上５重量％以下、特に好ましくは０．１重量％以上３重量％以下である。
【００４６】
上記の製造方法の分散体を得る工程において、液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である二酸化炭素又は液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である窒素と原料との混合は、バッチ式混合方式と連続式混合方式等で製造することが可能である。中でも、連続式混合方式であるラインブレンド（インライン混合）方法が、生産性の向上、品質の一定化、製造スペースの縮小化等の面等から好ましい。
【００４７】
上記の混合をバッチ式混合方式で行う製造装置としては、ミキシング装置の付属した耐圧耐熱反応容器等が挙げられる。製造装置に付属するミキシング装置のミキサー部分の長さ及び配管径、ミキシング装置の数に限定はない。尚、耐圧耐熱反応容器の耐圧及び耐圧は、液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態となる圧力及び温度に耐え得るものでなければならない。
バッチ式混合方式に用いる装置の出口には、親水性樹脂粒子の取り出し用のノズルを備えているのが好ましい。
【００４８】
上記の混合をラインブレンド方法で行う場合の製造装置としては、静止型インライン混合機（スタティックミキサー、インラインミキサー、ラモンドスーパーミキサー及びスルザーミキサー等）並びに撹拌型インライン混合機（バイブミキサー等ターボミキサー等）等が挙げられる。製造装置に付属するミキシング装置のミキサー部分の長さ及び配管径、ミキシング装置の数に限定はない。尚、耐圧耐熱反応容器の耐圧及び耐圧は、液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態となる圧力及び温度に耐え得るものでなければならない。
ラインブレンド方法に用いる装置の出口には、耐圧容器と同様の、親水性樹脂粒子の取り出し用のノズルを備えているのが好ましい。
【００４９】
上記の製造方法において、粒子製造時の充填率の観点から液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である二酸化炭素又は液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である窒素とそれ以外のものとの体積比率は、９９．５：０．５〜５０：５０であることが好ましくい。
【００５０】
本発明の製造方法において二酸化炭素又は窒素を気体にする方法としては、製造装置内の圧力を減圧して二酸化炭素又は窒素を気化させる方法及び減圧された容器に樹脂組成物（Ｒ）と二酸化炭素又は窒素との混合物を排出する方法等が挙げられる。気化した二酸化炭素又は窒素は、二酸化炭素又は窒素だけを製造装置から排出してもよく、製造装置から親水性樹脂粒子を取り出す際に二酸化炭素又は窒素を親水性樹脂粒子と同時に排出してもよい。
なかでも、親水性樹脂粒子の凝集を防止する観点から、樹脂組成物（Ｒ）と二酸化炭素又は窒素とを同時に排出することが好ましい。排出の速度は、単位時間内における圧力変化量が小さくなるように排出することが更に好ましい。製造装置内の二酸化炭素又は窒素の流量を調整することで圧力変化を制御できる。
尚、同時に排出する場合、樹脂組成物（Ｒ）が水を含むため、二酸化炭素又は窒素を排出する時の減圧膨張時の温度低下により水が凍結する場合があるが、凍結したまま排出してもよい。
【００５１】
本発明の製造方法において、ラインブレンド方法で製造する場合に用いる装置について図面を用いて説明する。
図１は、ラインブレンド方法による混合によって本発明の親水性樹脂粒子の製造方法を実施する場合に用いる装置の構成を示した図である。
液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である二酸化炭素又は液体状態、亜臨界状態若しくは超臨界状態である窒素と樹脂組成物（Ｒ）又は水溶性単量体（ａ）との混合方法としては、二酸化炭素又は窒素の充填された二酸化炭素又は窒素ボンベＢ１から二酸化炭素又は窒素を二酸化炭素又は窒素ポンプＰ２を通じてラインブレンドを行う装置であるスタティックミキサーＭ１（反応用耐圧容内）に導入し、二酸化炭素又は窒素が液体状態、亜臨界状態又は超臨界状態となるようにバルブＶ１を調整してスタティックミキサーＭ１内の圧力及び温度を調整する。次いで樹脂組成物（Ｒ）又は水溶性単量体（ａ）の入った溶解槽Ｔ１から溶液ポンプＰ１を通じてスタティックミキサーＭ１内の二酸化炭素又は窒素に導入することで混合することができる。
なお、溶解槽Ｔ１は、最高使用圧力２０ＭＰａ、最高使用温度２００℃、攪拌機つきであることが好ましい。
ラインブレンド方法により混合を行う温度は、使用する樹脂組成物（Ｒ）又は水溶性単量体（ａ）の種類に応じて調整することが好ましく、水溶性単量体（ａ）を用いる場合には水溶性単量体（ａ）の重合ができる温度であり、好ましくは１００〜１２０℃である。また、装置内の滞留時間は、混合と下記の重合工程における重合が充分行われるのに必要な時間であれば特に限定されないが、０．１〜１８００秒が好ましい。
水溶性単量体（ａ）を用いる場合には、スタティックミキサーＭ１に滞留している間に前記の重合方法等による重合工程を行うことが好ましい。
次いで、スタティックミキサーＭ１でラインブレンドされた液は、バルブＶ１を通って耐圧受け槽Ｔ２に排出される。耐圧受け槽Ｔ２の圧力を低く保つことで二酸化炭素又は窒素を減圧膨張させ、気化した二酸化炭素又は窒素を除去することで、親水性樹脂粒子を得ることができる。
【００５２】
本発明の製造方法で得られた親水性樹脂粒子は、製造装置から排出された後に必要に応じて、公知の乾燥方法（加熱乾燥、キルン乾燥等凍結乾燥等）で水を除去しても良い。
【００５３】
本発明の製造方法では、親水性樹脂粒子に含まれる重量平均分子量が２，０００以下である樹脂の含有率を１０重量％以下にすることができる。水溶性単量体（ａ）及び開始剤（Ｅ）の種類と使用量若しくは樹脂組成物（Ｒ）に含まれる親水性樹脂（Ａ）と水の重量比等を前記の好ましい条件又は更に好ましい条件とすることで重量平均分子量が２，０００以下となる樹脂の含有率が５重量％以下である親水性樹脂粒子を製造することができる。
【００５４】
樹脂の重量平均分子量は、下記条件のゲルパーミエーションクロマトグラフィー（以下、ＧＰＣと略記する）を用いて測定できる。
＜ＧＰＣの測定条件＞
装置  ：「ＨＬＣ−８１２０」［東ソー（株）製］
カラム  ：「ＳＢ−８０６ＨＱ」２本［東ソー（株）製］
測定温度  ：４０℃
試料溶液  ：０．０５Ｍの硝酸Ｎａを含む水／メタノール（重量比８：２）混合溶液に乾燥後の親水性樹脂粒子を０．２５重量％の濃度で溶解し、不溶解分をグラスフィルターで濾別した溶液
溶液注入量  ：１００μｌ
検出装置  ：屈折率検出器
基準物質  ：標準ポリエチレンオキシド５点（分子量：４００、１，９７０、１２，１４０、１００，０００、１，０００，０００）［東ソー（株）製］
【００５５】
このような方法により製造された親水性樹脂粒子は、本発明の親水性樹脂でもある。
【００５６】
上記の本発明の親水性樹脂粒子は、更に公知の樹脂及び／又は溶媒に分散させることにより樹脂粒子分散体を得ることができる。得られた樹脂粒子分散体は樹脂粒子に由来する重量平均分子量の低い成分の溶出がないため、塗料、香粧品及びエンジニアリングプラスチック等の原料として好適に用いることができる。尚、樹脂粒子分散体には必要に応じて他の添加剤を添加することができる。
【００５７】
本発明の親水性樹脂粒子は、細胞培養担体として用いることができる。本発明の親水性樹脂粒子を含んでなる細胞培養担体は本発明の細胞培養担体（ＰＢ）である。
本発明の親水性樹脂粒子の製造方法により得られた親水性樹脂を、細胞培養担体（ＰＢ）として用いる場合には、ポリペプチド（Ｐ）が結合している親水性樹脂（Ａ）を用いて親水性樹脂粒子を製造することが好ましい。
ポリペプチド（Ｐ）と親水性樹脂（Ａ）を結合させる方法としては、親水性樹脂（Ａ）を形成するモノマーとして、ポリペプチド（Ｐ）と結合したモノマーを使用する方法、本発明の製造方法において、親水性樹脂（Ａ）の分散体を得た後に、親水性樹脂（Ａ）の分散液とポリペプチド（Ｐ）とを反応させる方法等が挙げられる。
【００５８】
ポリペプチド（Ｐ）は、親水性樹脂粒子の表面に存在することが細胞接着性の観点から好ましい。
親水性樹脂（Ａ）とポリペプチド（Ｐ）とは、化学結合（イオン結合、水素結合及び／又は共有結合等）及び／又は物理吸着（ファンデルワールス力による吸着）によって、結合されていることが好ましい。これらのうち、ポリペプチドが細胞培養担体（ＰＢ）から脱離しないという観点から化学結合が好ましく、更に好ましくは共有結合である。
【００５９】
親水性樹脂（Ａ）とポリペプチド（Ｐ）を共有結合させる反応は公知の方法で行うことができる。例えば、「ペプチド合成の基礎と実験、平成９年１０月５日、丸善株式会社発行」に記載の方法が挙げられる。
【００６０】
ポリペプチド（Ｐ）としては、細胞接着・増殖活性機能を有するポリペプチドが好ましく、更に好ましくは以下の物である。
（１）「プロネクチンＦ」、「プロネクチンＦ２」、「プロネクチンＦ３」）等｛三洋化成工業（株）製（以下同じ）｝。プロネクチンは三洋化成工業（株）の登録商標（日本及び米国）である。
（２）「プロネクチンＬ」、「プロネクチンＬ２」、又は「プロネクチンＬ３」等。
（３）「プロネクチンＹ」、「プロネクチンＹ２」、又は「プロネクチンＹ３」等。
（４）上記「プロネクチンＦ」を塩酸Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルクロリドでエーテル化したペプチド。
【００６１】
また、上記のポリペプチドの他、宝酒造（株）製ＲｅｔｒｏＮｅｃｔｉｎ（リコンビナントヒトフィブロネクチンＣＨ−２９６）、同ＲＧＤＳ−Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａも、ポリペプチド（Ｐ）として用いることができる。
【００６２】
ポリペプチド（Ｐ）は、人工的に合成される人工ポリペプチドあってもよく、人工ポリペプチドである場合は、例えば、有機合成法（固相合成法、液相合成法等）及び生化学的合成法［遺伝子組換え微生物（酵母、細菌、大腸菌等）］等によって製造する。すなわち、人工ポリペプチドは、動物由来のコラーゲンやフィブロネクチン等の細胞接着性蛋白質を含まない。
ポリペプチド（Ｐ）は、動物由来成分を含まないという観点から、人工ポリペプチドであることが好ましい。
【００６３】
人口ポリペプチドの有機合成法に関しては、例えば、日本生化学会編「続生化学実験講座２、タンパク質の化学（下）」第６４１〜６９４頁（昭和６２年５月２０日；株式会社東京化学同人発行）に記載されている方法等が用いられる。生化学的合成法に関しては、例えば、特表平３−５０２９３５号公報に記載されている方法等が用いられる。人工ポリペプチドを容易に合成できる点で、遺伝子組換え微生物による生化学的合成法が好ましく、特に好ましくは遺伝子組換え大腸菌を用いて合成する方法である。
【００６４】
親水性樹脂粒子の形態としては中実型と多孔質型とが含まれ、いずれも使用できるが、細胞への栄養、酸素の供給効率及び細胞の回収率の観点等から、中実型が好ましい。また、親水性樹脂粒子の形状としては、球状及び扁平（楕円）等のいずれも使用できる。
【００６５】
親水性樹脂粒子に含まれる溶媒等は、親水性樹脂粒子を細胞培養担体（ＰＢ）として用いる場合には、細胞増殖を阻害しない観点から、有機溶剤の量が１００００ｐｐｍ以下であることが好ましく、更に好ましくは５００ｐｐｍ以下、特に好ましくは１００ｐｐｍ以下、最も好ましくは１０ｐｐｍ以下であり、モノマー残存量が１００００ｐｐｍ以下であることが好ましく、更に好ましくは５００ｐｐｍ以下、特に好ましくは１００ｐｐｍ以下である。
【００６６】
親水性樹脂粒子の粒子径（μｍ）は、中実型の場合、２０〜２，０００が好ましく、更に好ましくは４０〜１，０００、特に好ましくは８０〜５００である。一方、多孔質型の場合、粒子径（μｍ）は、３０〜２５，０００が好ましく、更に好ましくは６０〜１２，０００、特に好ましくは１２０〜６，０００である。扁平状の場合、最大径（μｍ）が２０〜２０，０００が好ましく、更に好ましくは５０〜１０，０００、特に好ましくは１００〜５，０００である。これらの範囲内であると、細胞の増殖量が更に高くなる。
親水性樹脂粒子の粒子径又は最大径の分布は、細胞増殖の均一性の観点から、上記粒子径又は最大径の範囲の粒子径又は最大径を有する粒子の重量が、親水性樹脂粒子の重量を基準として、９０〜１００重量％となることが好ましく、更に好ましくは９５〜１００重量％である。
【００６７】
親水性樹脂粒子の真比重は特に制限ないが、親水性樹脂粒子を細胞培養担体（ＰＢ）として用いる場合には、細胞培養担体（ＰＢ）を培地とともに撹拌しながら培養する一般的な方法において、撹拌中は担体が浮遊し、撹拌を止めると沈降することが好ましい。このような観点から、親水性樹脂粒子の真比重（ｇ／ｃｍ３）は、１．００〜１．１０が好ましく、更に好ましくは１．０１〜１．０８、特に好ましくは１．０１〜１．０５である。
【００６８】
温度４０℃、相対湿度９５％ＲＨ環境下に１時間静置した場合の、親水性樹脂粒子の吸水量は、細胞培養用の培地中での親水性の観点から、好ましくは５重量％以上であり、特に好ましくは１０重量％以上である。
【００６９】
親水性樹脂粒子の動摩擦エネルギーは、細胞接着性の観点から、親水性樹脂粒子の吸水量が１０重量％である場合において、好ましくは１０００ｍＪ以上であり、特に好ましくは１５００ｍＪ以上である。
【００７０】
また、細胞培養担体（ＰＢ）は、細胞培養用培地に用いてよい。
細胞培養担体（ＰＢ）が使用された細胞培養用培地は、本発明の細胞培養用培地でもある。
細胞培養用培地としては、特に制限は無く、血清培地及び無血清培地のいずれの培地にも使用可能である。血清培地としては、用いる細胞の種類に応じて、一般の培地（ＤＭＥＭ培地、ＤＭＥ培地、ＲＰＭＩ培地、ＭＥＭ培地、ＢＭＥ培地、ＤＭＥ培地、αＭＥＭ培地、ＩＭＥＭ培地、ＥＳ培地、ＤＭ−１６０培地、Ｆｉｓｈｅｒ培地、Ｆ１２培地、ＷＥ培地、ＡＳＦ１０３培地、ＡＳＦ１０４培地、ＡＳＦ３０１培地、ＴＣ−１００培地、Ｓｆ−９００ＩＩ培地、Ｅｘ−ｃｅｌｌ４０５培地、Ｅｘｐｒｅｓｓ−Ｆｉｖｅ培地、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ培地及びこれらの混合培地等）に血清を加えたもの等が挙げられる。血清としては、ヒト血清、及び動物血清（ウシ血清、ウマ血清、ヤギ血清、ヒツジ血清、ブタ血清、ウサギ血清、ニワトリ血清、ラット血清、及びマウス血清等）が含まれる。
無血清培地としては、Ｇｒａｃｅ培地、ＩＰＬ−４１培地、Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ’ｓ培地、ＯＰＴＩ  ＰＲＯ（登録商標、ライフテクノロジーズジャパン株式会社製）  ＳＦＭ培地、ＶＰ−ＳＦＭ培地、ＣＤ２９３培地、２９３ＳＦＭＩＩ培地、ＣＤ−ＣＨＯ培地、ＣＨＯ−Ｓ−ＳＦＭＩＩ培地、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（登録商標、ライフテクノロジーズジャパン株式会社製）  ２９３培地、ＣＤ−ＣＨＯ  ＡＧＴ（登録商標、ライフテクノロジーズジャパン株式会社製）培地及びこれらの混合培地が挙げられる。
これらの培地の中で、培地の調製の観点から、ＤＭＥＭ培地、ＭＥＭ培地が好ましい。
【実施例】
【００７１】
以下実施例により本発明を更に説明するが、本発明はこれに限定するものではない。
以下の記載において「部」は重量部を、％は重量％示す。【００７２】
＜実施例１＞
＜親水性樹脂粒子（Ｂ１）の調製＞
撹拌棒および温度計をセットした溶解槽に、アクリル酸３０部とアクリル酸ナトリウム７０部との混合液１００部、開始剤として２，２’−アゾビス［Ｎ−（２−カルボキシエチル）−２−メチルプロピオンアミジン］水和物０．０７部を仕込み、撹拌溶解して単量体組成物を作製した。
反応用耐圧容器中で圧力８ＭＰａ、温度４０℃にすることで連続相となる超臨界状態にした二酸化炭素（２００部）を作製し、二酸化炭素の超臨界状態を維持したまま反応用耐圧容器に上記単量体組成物１００部を撹拌下（撹拌回転数５００ｒｐｍ）に圧入し、４０℃で０．１時間撹拌を継続して混合した。８ＭＰａ、４０℃に調整後、密閉したまま１２０℃に昇温し、その温度を維持したまま３時間撹拌して重合して親水性樹脂（Ａ１）を合成し、親水性樹脂（Ａ１）を含んでなる樹脂組成物（Ｒ１）が分散されてなる分散体を得た。その後、耐圧容器にある取り出し用ノズルより内容物を吐出し、気体状態の二酸化炭素と親水性樹脂粒子（Ｂ１）とを分離し、親水性樹脂粒子（Ｂ１）を回収した。【００７３】
＜実施例２＞
＜親水性樹脂粒子（Ｂ２）の調製＞
撹拌棒および温度計をセットした溶解槽に、プロピレンオキシド１０部、触媒として水酸化カリウム０．１部、メタノール０．１部を仕込み、撹拌溶解して単量体組成物を作製した。
反応用耐圧容器中で圧力８ＭＰａ、温度４０℃にすることで連続相となる超臨界状態にした二酸化炭素（２００部）を作製し、二酸化炭素の超臨界状態を維持したまま反応用耐圧容器に上記単量体組成物１０部を撹拌下（撹拌回転数５００ｒｐｍ）に圧入し、４０℃で水溶性単量体であるプロピレンオキシド９０部を滴下しながら、１時間撹拌を継続して混合した。８ＭＰａ、４０℃に調整後、密閉したまま１２０℃に昇温し、その温度を維持したまま３時間撹拌して重合して親水性樹脂（Ａ２）を合成し、親水性樹脂（Ａ２）を含んでなる樹脂組成物（Ｒ２）が分散されてなる分散体を得た。その後、耐圧容器にある取り出し用ノズルより内容物を吐出し、気体状態の二酸化炭素と親水性樹脂粒子（Ｂ２）とを分離し、親水性樹脂粒子（Ｂ２）を回収した。【００７４】
＜実施例３＞
＜親水性樹脂粒子（Ｂ３）の調製＞
撹拌棒および温度計をセットした溶解槽に、アクリル酸３０部とアクリル酸ナトリウム７０部との混合液１００部、架橋剤として重量平均分子量が３，０００のエチレングリコールジグリシジルエーテル１０部、開始剤として２，２’−アゾビス［Ｎ−（２−カルボキシエチル）−２−メチルプロピオンアミジン］水和物０．０７部を仕込み、撹拌溶解して単量体組成物を作製した。
反応用耐圧容器中で圧力８ＭＰａ、温度４０℃にすることで連続相となる超臨界状態にした二酸化炭素（２００部）を作製し、二酸化炭素の超臨界状態を維持したまま反応用耐圧容器に上記単量体組成物１００部を撹拌下（撹拌回転数５００ｒｐｍ）に圧入し、４０℃で０．１時間撹拌を継続して混合した。８ＭＰａ、４０℃に調整後、密閉したまま１２０℃に昇温し、その温度を維持したまま３時間撹拌して重合して親水性樹脂（Ａ３）を合成し、親水性樹脂（Ａ３）を含んでなる樹脂組成物（Ｒ３）が分散されてなる分散体を得た。その後、耐圧容器にある取り出し用ノズルより内容物を吐出し、気体状態の二酸化炭素と親水性樹脂粒子（Ｂ３）とを分離し、親水性樹脂粒子（Ｂ３）を回収した。【００７５】
＜実施例４＞
＜親水性樹脂粒子（Ｂ４）の調製＞
撹拌棒および温度計をセットした溶解槽に、アクリル酸３０部とアクリル酸ナトリウム７０部との混合液１００部、開始剤として２，２’−アゾビス［Ｎ−（２−カルボキシエチル）−２−メチルプロピオンアミジン］水和物０．０７部を仕込み、撹拌溶解して単量体組成物を作製した。
反応用耐圧容器中で圧力８ＭＰａ、温度４０℃にすることで連続相となる超臨界状態にした二酸化炭素（２００部）を作製し、二酸化炭素の超臨界状態を維持したまま反応用耐圧容器に上記単量体組成物５０部及び水５０部を撹拌下（撹拌回転数５００ｒｐｍ）に圧入し、４０℃で０．１時間撹拌を継続して混合した。８ＭＰａ、４０℃に調整後、密閉したまま１２０℃に昇温し、その温度を維持したまま３時間撹拌して重合して親水性樹脂（Ａ４）を合成し、親水性樹脂（Ａ４）を含んでなる樹脂組成物（Ｒ４）が分散されてなる分散体を得た。その後、耐圧容器にある取り出し用ノズルより内容物を吐出し、気体状態の二酸化炭素及び水と親水性樹脂粒子（Ｂ４）とを分離し、親水性樹脂粒子（Ｂ４）を回収した。【００７６】
＜実施例５＞
＜親水性樹脂粒子（Ｂ５）の調製＞
撹拌棒および温度計をセットした溶解槽に、アクリル酸３０部とアクリル酸ナトリウム７０部との混合液１００部、架橋剤として重量平均分子量が３，０００のエチレングリコールジグリシジルエーテル１０部、開始剤として２，２’−アゾビス［Ｎ−（２−カルボキシエチル）−２−メチルプロピオンアミジン］水和物０．０７部を仕込み、撹拌溶解して単量体組成物を作製した。
反応用耐圧容器中で圧力８ＭＰａ、温度４０℃にすることで連続相となる超臨界状態にした二酸化炭素（２００部）を作製し、二酸化炭素の超臨界状態を維持したまま反応用耐圧容器に上記単量体組成物５０部及び水５０部を撹拌下（撹拌回転数５００ｒｐｍ）に圧入し、４０℃で０．１時間撹拌を継続して混合した。８ＭＰａ、４０℃に調整後、密閉したまま１２０℃に昇温し、その温度を維持したまま３時間撹拌して重合して親水性樹脂（Ａ５）を合成し、親水性樹脂（Ａ５）を含んでなる樹脂組成物（Ｒ５）が分散されてなる分散体を得た。その後、耐圧容器にある取り出し用ノズルより内容物を吐出し、気体状態の二酸化炭素及び水と親水性樹脂粒子（Ｂ５）とを分離し、親水性樹脂粒子（Ｂ５）を回収した。【００７７】
＜実施例６＞
＜親水性樹脂粒子（Ｂ６）の調製＞
撹拌棒および温度計をセットした溶解槽に、アクリル酸３０部とアクリル酸ナトリウム７０部との混合液１００部、架橋剤として重量平均分子量が３，０００のエチレングリコールジグリシジルエーテル１０部、開始剤として２，２’−アゾビス［Ｎ−（２−カルボキシエチル）−２−メチルプロピオンアミジン］水和物０．０７部を仕込み、撹拌溶解して単量体組成物を作製した。
反応用耐圧容器中で圧力２０ＭＰａ、温度４０℃にすることで連続相となる超臨界状態にした窒素（２００部）を作製し、窒素の超臨界状態を維持したまま反応用耐圧容器に上記単量体組成物５０部及び水５０部を撹拌下（撹拌回転数５００ｒｐｍ）に圧入し、４０℃で０．１時間撹拌を継続して混合した。２０ＭＰａ、４０℃に調整後、密閉したまま１２０℃に昇温し、その温度を維持したまま３時間撹拌して重合して親水性樹脂（Ａ６）を合成し、親水性樹脂（Ａ６）を含んでなる樹脂組成物（Ｒ６）が分散されてなる分散体を得た。その後、耐圧容器にある取り出し用ノズルより内容物を吐出し、気体状態の窒素及び水と親水性樹脂粒子（Ｂ６）とを分離し、親水性樹脂粒子（Ｂ６）を回収した。【００７８】
＜実施例７＞
＜親水性樹脂粒子（Ｂ７）の調製＞
撹拌棒および温度計をセットした溶解槽に、アクリル酸３０部とアクリル酸ナトリウム７０部との混合液１００部、架橋剤として重量平均分子量が３，０００のエチレングリコールジグリシジルエーテル１０部、開始剤として２，２’−アゾビス［Ｎ−（２−カルボキシエチル）−２−メチルプロピオンアミジン］水和物０．０７部を仕込み、撹拌溶解して単量体組成物を作製した。
図１に示す装置において、まず溶解槽（Ｔ１）に、上記単量体組成物５０部及び水５０部を仕込み、撹拌溶解した。次いで、二酸化炭素ボンベ（Ｂ１）から二酸化炭素ポンプ（Ｐ２）を用いて液体状態の二酸化炭素を０．０６Ｌ／ｈの流量で１２０℃に温調したスタティックミキサー（Ｍ１）（ノリタケカンパニーリミテド製；内径０．５ｍ、エレメント数２７、長さ２ｍ）へ導入し、バルブ（Ｖ１）を調整してスタティックミキサー内の圧力１５ＭＰａとすることで連続相となる超臨界状態の二酸化炭素を作製した。流量、温度及び圧力を維持して二酸化炭素の導入を連続して行いながら、溶解槽（Ｔ１）から溶液ポンプ（Ｐ１）を用いて上記単量体組成物を０．０３Ｌ／ｈの流量でスタティックミキサーへ導入し、温度と圧力を維持しながら、スタティックミキサー（Ｍ１）内でのラインブレンドを行いながら重合して親水性樹脂（Ａ７）を合成し、親水性樹脂（Ａ７）を含んでなる樹脂組成物（Ｒ７）が分散されてなる分散体を得た。ラインブレンド後の液はスタティックミキサー出口のノズルバルブ（Ｖ１）を通して０．１ＭＰａに調整した耐圧受け槽（Ｔ２）内に開放し、二酸化炭素を気化させて除去し、水を蒸発させることで、親水性樹脂粒子（Ｂ７）を回収した。【００７９】
＜実施例８＞
＜親水性樹脂粒子（Ｂ８）の調製＞
撹拌棒および温度計をセットした溶解槽に、アクリル酸３０部とアクリル酸ナトリウム７０部との混合液１００部、架橋剤として重量平均分子量が３，０００のエチレングリコールジグリシジルエーテル１０部、開始剤として２，２’−アゾビス［Ｎ−（２−カルボキシエチル）−２−メチルプロピオンアミジン］水和物０．０７部を仕込み、撹拌溶解して単量体組成物を作製した。
図１に示す装置において、まず溶解槽（Ｔ１）に、上記単量体組成物５０部及び水５０部、分散剤としてショ糖ステアリン酸エステル（三菱化学フーズ（株）、リョートーシュガーエステルＳ−３７０）１部を仕込み、撹拌溶解した。次いで、二酸化炭素ボンベ（Ｂ１）から二酸化炭素ポンプ（Ｐ２）を用いて液体状態の二酸化炭素を０．０６Ｌ／ｈの流量で１２０℃に温調したスタティックミキサー（Ｍ１）（ノリタケカンパニーリミテド製；内径０．５ｍ、エレメント数２７、長さ２ｍ）へ導入し、バルブ（Ｖ１）を調整してスタティックミキサー内の圧力１５ＭＰａとすることで連続相となる超臨界状態の二酸化炭素を作製した。流量、温度及び圧力を維持して二酸化炭素の導入を連続して行いながら、溶解槽（Ｔ１）から溶液ポンプ（Ｐ１）を用いて上記単量体組成物を０．０３Ｌ／ｈの流量でスタティックミキサーへ導入し、温度と圧力を維持しながら、スタティックミキサー（Ｍ１）内でのラインブレンドを行いながら重合して親水性樹脂（Ａ８）を合成し、親水性樹脂（Ａ８）を含んでなる樹脂組成物（Ｒ８）が分散されてなる分散体を得た。ラインブレンド後の液はスタティックミキサー出口のノズルバルブ（Ｖ１）を通して０．１ＭＰａに調整した耐圧受け槽（Ｔ２）内に開放し、二酸化炭素を気化させて除去し、水を蒸発させることで、親水性樹脂粒子（Ｂ８）を回収した。【００８０】
＜実施例９＞
＜親水性樹脂粒子（Ｂ９）の調製＞
撹拌棒および温度計をセットした溶解槽に、アクリル酸３０部とアクリル酸ナトリウム７０部との混合液１００部、架橋剤として重量平均分子量が３，０００のエチレングリコールジグリシジルエーテル１０部、開始剤として２，２’−アゾビス［Ｎ−（２−カルボキシエチル）−２−メチルプロピオンアミジン］水和物０．０７部を仕込み、撹拌溶解して単量体組成物を作製した。
図１に示す装置において、まず溶解槽（Ｔ１）に、上記単量体組成物５０部及び水５０部、分散剤としてＰＣＡ  ジメチコン（クローダジャパン（株）、ＳＥＮＳＡＳＩＬ  ＰＣＡ）１部を仕込み、撹拌溶解した。次いで、二酸化炭素ボンベ（Ｂ１）から二酸化炭素ポンプ（Ｐ２）を用いて液体状態の二酸化炭素を０．０６Ｌ／ｈの流量で１２０℃に温調したスタティックミキサー（Ｍ１）（ノリタケカンパニーリミテド製；内径０．５ｍ、エレメント数２７、長さ２ｍ）へ導入し、バルブ（Ｖ１）を調整してスタティックミキサー内の圧力１５ＭＰａとすることで連続相となる超臨界状態の二酸化炭素を作製した。流量、温度及び圧力を維持して二酸化炭素の導入を連続して行いながら、溶解槽（Ｔ１）から溶液ポンプ（Ｐ１）を用いて上記単量体組成物を０．０３Ｌ／ｈの流量でスタティックミキサーへ導入し、温度と圧力を維持しながら、スタティックミキサー（Ｍ１）内でのラインブレンドを行いながら重合して親水性樹脂（Ａ９）を合成し、親水性樹脂（Ａ９）を含んでなる樹脂組成物（Ｒ９）が分散されてなる分散体を得た。ラインブレンド後の液はスタティックミキサー出口のノズルバルブ（Ｖ１）を通して０．１ＭＰａに調整した耐圧受け槽（Ｔ２）内に開放し、二酸化炭素を気化させて除去し、水を蒸発させることで、親水性樹脂粒子（Ｂ９）を回収した。【００８１】
＜実施例１０＞
＜親水性樹脂粒子（Ｂ１０）の調製＞
撹拌棒および温度計をセットした溶解槽に、アクリル酸３０部とアクリル酸ナトリウム７０部との混合液１００部、開始剤として２，２’−アゾビス［Ｎ−（２−カルボキシエチル）−２−メチルプロピオンアミジン］水和物０．０７部を仕込み、撹拌溶解して単量体組成物を作製した。
反応用耐圧容器中で圧力８ＭＰａ、温度４０℃にすることで連続相となる超臨界状態にした二酸化炭素（２００部）を作製し、二酸化炭素の超臨界状態を維持したまま反応用耐圧容器に上記単量体組成物５０部を撹拌下（撹拌回転数１０ｒｐｍ）に圧入し、４０℃で０．１時間撹拌を継続して混合した。８ＭＰａ、４０℃に調整後、密閉したまま１２０℃に昇温し、その温度を維持したまま３時間撹拌して重合して親水性樹脂（Ａ１０）を合成し、親水性樹脂（Ａ１０）を含んでなる樹脂組成物（Ｒ１０）が分散されてなる分散体を得た。その後、８ＭＰａ、４０℃に冷却後、水５０部を圧入し、二酸化炭素を２５ＭＰａになるまで導入し、撹拌（撹拌回転数５００ｒｐｍ）した。耐圧容器にある取り出し用ノズルより内容物を吐出し、気体状態の二酸化炭素と氷状の親水性樹脂粒子（Ｂ１０）と水との混合物を分離し、凍結乾燥することで、親水性樹脂粒子（Ｂ１０）を回収した。【００８２】
＜実施例１１＞
＜親水性樹脂粒子（Ｂ１１）の調製＞
撹拌棒および温度計をセットした溶解槽に、アクリル酸３０部とアクリル酸ナトリウム７０部との混合液１００部、開始剤として２，２’−アゾビス［Ｎ−（２−カルボキシエチル）−２−メチルプロピオンアミジン］水和物０．０７部を仕込み、撹拌溶解して単量体組成物を作製した。
反応用耐圧容器中で圧力８ＭＰａ、温度４０℃にすることで連続相となる超臨界状態にした二酸化炭素（２００部）を作製し、二酸化炭素の超臨界状態を維持したまま反応用耐圧容器に上記単量体組成物１００部を撹拌下（撹拌回転数１０ｒｐｍ）に圧入し、４０℃で０．１時間撹拌を継続して混合した。８ＭＰａ、４０℃に調整後、密閉したまま１２０℃に昇温し、その温度を維持したまま３時間撹拌して重合して親水性樹脂（Ａ１１）を合成し、親水性樹脂（Ａ１１）を含んでなる樹脂組成物（Ｒ１１）が分散されてなる分散体を得た。その後、８ＭＰａ、４０℃に冷却後、水５０部及び架橋剤として重量平均分子量が３，０００のエチレングリコールジグリシジルエーテル５部を圧入し、１２０℃で撹拌（撹拌回転数５００ｒｐｍ）した。耐圧容器にある取り出し用ノズルより内容物を吐出し、気体状態の二酸化炭素を分離し、水を蒸発させることで親水性樹脂粒子（Ｂ１１）を回収した。【００８３】
＜実施例１２＞
＜親水性樹脂粒子（Ｂ１２）の調製＞
水酸化ナトリウムを用いて重量平均分子量が１００，０００のポリアクリル酸を７０％中和率で中和して作製したポリアクリル酸（一部ナトリウム塩）１００部を粉砕機（ホソカワミクロン（株）製  ＡＣＭ  ペルベライザ）で解砕して重量平均粒径１００μｍの親水性樹脂（Ａ１２）を作製した。
反応用耐圧容器に親水性樹脂（Ａ１２）１００部を仕込み、圧力８ＭＰａ、温度４０℃にすることで連続相となる超臨界状態にした二酸化炭素（２００部）を注入し、二酸化炭素の超臨界状態を維持したまま、撹拌下（撹拌回転数５００ｒｐｍ）、４０℃で０．１時間撹拌を継続して混合した。８ＭＰａ、４０℃に調整後、密閉したまま１２０℃に昇温し、その温度を維持したまま３時間撹拌して親水性樹脂（Ａ１２）を含んでなる樹脂組成物（Ｒ１２）が分散されてなる分散体を得た。その後、耐圧容器にある取り出し用ノズルより内容物を吐出し、気体状態の二酸化炭素と親水性樹脂粒子（Ｂ１２）とを分離し、親水性樹脂粒子（Ｂ１２）を回収した。【００８４】
＜実施例１３＞
＜親水性樹脂粒子（Ｂ１３）の調製＞
重量平均分子量が５，０００のポリプロピレンオキシド１００部を粉砕機（ホソカワミクロン（株）製  ＡＣＭ  ペルベライザ）で解砕して重量平均粒径１００μｍの親水性樹脂（Ａ１３）を作製した。
反応用耐圧容器に親水性樹脂（Ａ１３）１００部を仕込み、圧力８ＭＰａ、温度４０℃にすることで連続相となる超臨界状態にした二酸化炭素（２００部）を注入し、二酸化炭素の超臨界状態を維持したまま、撹拌下（撹拌回転数５００ｒｐｍ）、４０℃で０．１時間撹拌を継続して混合した。８ＭＰａ、４０℃に調整後、密閉したまま１２０℃に昇温し、その温度を維持したまま３時間撹拌して親水性樹脂（Ａ１３）を含んでなる樹脂組成物（Ｒ１３）が分散されてなる分散体を得た。その後、耐圧容器にある取り出し用ノズルより内容物を吐出し、気体状態の二酸化炭素と親水性樹脂粒子（Ｂ１３）とを分離し、親水性樹脂粒子（Ｂ１３）を回収した。【００８５】
＜実施例１４＞
＜親水性樹脂粒子（Ｂ１４）の調製＞
撹拌棒および温度計をセットした溶解槽に、水酸化ナトリウムを用いて重量平均分子量が１００，０００のポリアクリル酸を７０％中和率で中和して作製したポリアクリル酸（一部ナトリウム塩）１００部、架橋剤として重量平均分子量が３，０００のエチレングリコールジグリシジルエーテル１０部、開始剤として２，２’−アゾビス［Ｎ−（２−カルボキシエチル）−２−メチルプロピオンアミジン］水和物０．０７部を仕込み、撹拌して混合物を作製した。
反応用耐圧容器中で圧力８ＭＰａ、温度４０℃にすることで連続相となる超臨界状態にした二酸化炭素（２００部）を作製し、二酸化炭素の超臨界状態を維持したまま反応用耐圧容器に上記混合物５０部及び水５０部を撹拌下（撹拌回転数５００ｒｐｍ）に圧入し、４０℃で０．１時間撹拌を継続して混合した。８ＭＰａ、４０℃に調整後、密閉したまま１２０℃に昇温し、その温度を維持したまま３時間撹拌して架橋を行い、架橋した親水性樹脂（Ａ１４）を合成し、親水性樹脂（Ａ１４）を含んでなる樹脂組成物（Ｒ１４）が分散されてなる分散体を得た。その後、耐圧容器にある取り出し用ノズルより内容物を吐出し、気体状態の二酸化炭素及び水と親水性樹脂粒子（Ｂ１４）とを分離し、親水性樹脂粒子（Ｂ１４）を回収した。【００８６】
＜実施例１５＞
＜親水性樹脂粒子（Ｂ１５）の調製＞
撹拌棒および温度計をセットした溶解槽に、水酸化ナトリウムを用いて重量平均分子量が、１００，０００のポリアクリル酸を７０％中和率で中和して作製したポリアクリル酸（一部ナトリウム塩）３部、架橋剤として重量平均分子量が３，０００のエチレングリコールジグリシジルエーテル１０部、開始剤として２，２’−アゾビス［Ｎ−（２−カルボキシエチル）−２−メチルプロピオンアミジン］水和物０．０７部を仕込み、撹拌溶解して混合物を作製した。
反応用耐圧容器中で圧力８ＭＰａ、温度４０℃にすることで連続相となる超臨界状態にした二酸化炭素（２００部）を作製し、二酸化炭素の超臨界状態を維持したまま反応用耐圧容器に上記混合物５０部及び水５０部を撹拌下（撹拌回転数５００ｒｐｍ）に圧入し、４０℃で０．１時間撹拌を継続して混合した。８ＭＰａ、４０℃に調整後、密閉したまま１２０℃に昇温し、その温度を維持したまま３時間撹拌して架橋を行い、架橋した親水性樹脂（Ａ１５）を合成し、親水性樹脂（Ａ１５）を含んでなる樹脂組成物（Ｒ１５）が分散されてなる分散体を得た。その後、耐圧容器にある取り出し用ノズルより内容物を吐出し、気体状態の二酸化炭素及び水と親水性樹脂粒子（Ｂ１５）とを分離し、親水性樹脂粒子（Ｂ１５）を回収した。【００８７】
＜実施例１６＞
＜親水性樹脂粒子（Ｂ１６）の調製＞
水酸化ナトリウムを用いて重量平均分子量が１００，０００のポリアクリル酸を７０％中和率で中和して作製したポリアクリル酸（一部ナトリウム塩）１００部を粉砕機（ホソカワミクロン（株）製  ＡＣＭ  ペルベライザ）で解砕して重量平均粒径１００μｍにし、撹拌棒および温度計をセットした溶解槽で架橋剤である重量平均分子量が３，０００のエチレングリコールジグリシジルエーテル１０部と撹拌混合し、混合物を作製した。
反応用耐圧容器中で圧力８ＭＰａ、温度４０℃にすることで連続相となる超臨界状態にした二酸化炭素（２００部）を作製し、二酸化炭素の超臨界状態を維持したまま反応用耐圧容器に上記混合物１００部を撹拌下（撹拌回転数５００ｒｐｍ）に圧入し、４０℃で０．１時間撹拌を継続して混合した。８ＭＰａ、４０℃に調整後、密閉したまま１２０℃に昇温し、その温度を維持したまま３時間撹拌して架橋を行い、架橋した親水性樹脂（Ａ１６）を合成し、親水性樹脂（Ａ１６）を含んでなる樹脂組成物（Ｒ１６）が分散されてなる分散体を得た。その後、耐圧容器にある取り出し用ノズルより内容物を吐出し、気体状態の二酸化炭素と親水性樹脂粒子（Ｂ１６）とを分離し、親水性樹脂粒子（Ｂ１６）を回収した。【００８８】
＜実施例１７＞
撹拌棒および温度計をセットした溶解槽に、アクリル酸２９部とアクリル酸ナトリウム６８部との混合液９７部、水酸化ナトリウムを用いて重量平均分子量が１００，０００のポリアクリル酸を７０％中和率で中和して作製したポリアクリル酸（一部ナトリウム塩）３部、水溶性カルボジイミド（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド・塩酸塩）２１部及びイオン交換水５０部を仕込み、２５℃で０．５時間撹拌した。その後、後述のポリペプチド（Ｐ１−１）０．８部を仕込み、２５℃で０．５時間撹拌した。その後、架橋剤として重量平均分子量が３，０００のエチレングリコールジグリシジルエーテル１０部、開始剤として２，２’−アゾビス（２，４−ジメチルヴァレロニトリル）０．１部を仕込み、撹拌溶解して混合物を作製した。
反応用耐圧容器中で圧力８ＭＰａ、温度４０℃にすることで連続相となる超臨界状態にした二酸化炭素（２００部）を作製し、二酸化炭素の超臨界状態を維持したまま反応用耐圧容器に上記混合物５０部及び水５０部を撹拌下（撹拌回転数５００ｒｐｍ）に圧入し、４０℃で０．１時間撹拌を継続して混合した。８ＭＰａ、４０℃に調整後、密閉したまま１２０℃に昇温し、その温度を維持したまま３時間撹拌して重合しながら架橋を行い、架橋した親水性樹脂（Ａ１７）を合成し、親水性樹脂（Ａ１７）を含んでなる樹脂組成物（Ｒ１７）が分散されてなる分散体を得た。その後、耐圧容器にある取り出し用ノズルより内容物を吐出し、気体状態の二酸化炭素及び水と親水性樹脂粒子（Ｂ１７）とを分離し、親水性樹脂粒子（Ｂ１７）を回収した。【００８９】
＜比較例１＞
＜親水性樹脂粒子（Ｂ’１）の調製＞
撹拌棒および温度計をセットした溶解槽に、アクリル酸３０部とアクリル酸ナトリウム７０部との混合液１００部、架橋剤として重量平均分子量が３，０００のエチレングリコールジグリシジルエーテル１０部、開始剤として２，２’−アゾビス［Ｎ−（２−カルボキシエチル）−２−メチルプロピオンアミジン］水和物０．０７部を仕込み、撹拌溶解して単量体組成物を作製した。
反応用耐圧容器中でデカン（２００部）を仕込み、上記単量体組成物５０部及び水５０部を撹拌下（撹拌回転数５００ｒｐｍ）に加え、４０℃で０．１時間撹拌を継続して混合した。密閉したまま１２０℃に昇温し、その温度を維持したまま３時間撹拌して重合し親水性樹脂（Ａ’１）を合成した。その後、耐圧容器にある取り出し用ノズルより内容物を吐出し、１２０℃で１時間減圧乾燥させて水とデカンを除いて、親水性樹脂粒子（Ｂ’１）を分離し、親水性樹脂粒子（Ｂ’１）を回収した。【００９０】
実施例（Ｂ１）〜（Ｂ１７）の親水性樹脂粒子及び比較例（Ｂ’１）の親水性樹脂粒子について、以下の方法で重量平均分子量が２，０００以下である樹脂の含有量の算出と体積平均粒度分布の測定（体積平均粒子径のメジアン径の測定）を行った。結果を表１及び２に示した。【００９１】
＜重量平均分子量が２，０００以下である樹脂の含有率＞
１２０℃の順風乾燥機内に３時間置くことで水を留去した各実施例又は比較例の親水性樹脂粒子１ｇと水／メタノール（重量比８／２）混合溶媒１０００ｇとを３時間混合し、その後ろ過して不溶分を除去して樹脂溶液を作製した。得られた樹脂溶液の全量から順風乾燥機（１２０℃、３時間）を用いて溶媒を留去した。続いて、乾燥後残留物の重量から１ｇの親水性樹脂粒子に含まれる水／メタノール（重量比８／２）混合溶液に対する可溶分の重量［Ｗ１（ｇ）］を算出した。
乾燥後残留物について上記条件のＧＰＣを用いて重量平均分子量の測定を行い、親水性樹脂粒子の可溶分について、横軸が重量平均分子量であり、縦軸が検出強度である分子量分布曲線を作成した。次いで測定で得られた分子量分布曲線において分子量分布曲線とベースラインとに囲まれた面積に対する分子量が２００以上２，０００以下である部分の面積（溶離液由来のピーク面積を除く）の百分率（Ｗ２）を算出した。
次いで、Ｗ１とＷ２の値を掛け算し、得られた値を、重量平均分子量が２，０００以下である樹脂の親水性樹脂粒子の重量に対する含有率とした。結果を表１及び２に示す。【００９２】
＜体積平均粒度分布の測定（体積平均粒子径のメジアン径の測定）＞
乾燥後の各実施例又は比較例の親水性樹脂粒子をヘキサン中に超音波分散機を用いて分散させて測定用の試料とした。レーザー式粒度分布測定装置（ＬＡ−９２０：堀場製作所製）を用いて体積平均粒径及び粒度分布（Ｄｖ／Ｄｎ）を測定し、得られた累積分布曲線の５０％累積径を体積平均粒子径のメジアン径とした。尚、測定に用いる屈折率の値は、文献値（「Ａ ＧＵＩＤＥ ＦＯＲ ＥＮＴＥＲＩＮＧ ＭＩＣＲＯＴＲＡＣ “ＲＵＮ ＩＮＦＯＲＭＡＴＩＯＮ”（Ｆ３）ＤＡＴＡ」、Ｌｅｅｄｓ＆Ｎｏｒｔｈｒｕｐ社作成）を用いた。結果を表１及び２に示す。【００９３】
＜有機溶剤の量及びモノマー残存量の測定＞
各実施例又は比較例の親水性樹脂粒子に含まれるモノマー残存量を、核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）を用いて測定し算出した。
また、各実施例又は比較例の親水性樹脂粒子に含まれる有機溶剤の量を、各実施例又は比較例の親水性樹脂粒子１００ｇを８０℃で蒸留を３時間おこない、回収した蒸留液をＮＭＲを用いて測定し、水分重量を差し引くことで算出した。結果を表１及び２に示す。【００９４】
＜親水性樹脂粒子の吸水量の測定＞
１２０℃の順風乾燥機内に３時間置くことで水を留去した各実施例又は比較例の親水性樹脂粒子１ｇを１０ｃｍ２のステンレストレイに薄く広げ、温度４０℃、相対湿度９５％ＲＨ環境下に１時間静置した。その後、各実施例又は比較例の親水性樹脂粒子の重量を測定し、増加した重量の百分率を吸水量（重量％）として算出した。結果を表１及び２に示す。【００９５】
＜親水性樹脂粒子の動摩擦エネルギーの測定＞
１２０℃の順風乾燥機内に３時間置くことで水を留去した各実施例又は比較例の親水性樹脂粒子１ｇに対して０．１ｇの生理食塩水（０．９重量％塩化ナトリウム水溶液）を吸水させ、１時間静置した。その後、動摩擦エネルギー測定器（マルバーン社製ＦＴ４パウダーレオメーター、ベッセル５０×１６０ｍＬｓｐｌｉｔ＋ｖｅｓｓｅ、ブレード４８．０ｍｍ）を用い各実施例又は比較例の親水性樹脂粒子の動摩擦エネルギーを測定した。結果を表１及び２に示す。【００９６】
＜ポリペプチド（Ｐ１）の調製＞
特表平３−５０２９３５号公報中の実施例記載の方法に準じて、ペプチド「プロネクチンＦ」を製造し、ポリペプチド（Ｐ１）とした。【００９７】
＜ポリペプチド（Ｐ１−１）の調製＞
ポリペプチド（Ｐ１）５０ｍｇと塩酸Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルクロリド（特級試薬）１５０ｍｇとを４．５Ｍ過塩素酸リチウム水溶液  １．５ｍＬに２０〜４０℃で溶解した後、その溶液を２０〜４０℃で攪拌しながら、水酸化ナトリウム（特級試薬）１００ｍｇを溶解した４．５Ｍ過塩素酸リチウム水溶液１．３２５ｍＬを４５〜５０秒間かけて一定速度で滴下した。室温（２５℃）で１時間攪拌したのち、反応液を分画分子量１２，０００〜１４，０００の透析膜を用いて、脱イオン水１０Ｌに対して４８時間透析し、副生成物を除去した。なお、最初の１２時間は、４時間経過毎に脱イオン水を交換した。得られた水溶液を、−２０℃、０．１ｋＰａ以下の条件で、２４時間凍結乾燥して、ポリペプチド（Ｐ１）を塩酸Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルクロリドでエーテル化した重量平均分子量が１１０，０００のポリペプチド（Ｐ１−１）を作製した。【００９８】
＜ポリペプチド（Ｐ１−１）が結合した細胞培養担体の調製＞
実施例（Ｂ１）〜（Ｂ１６）の親水性樹脂粒子及び比較例（Ｂ’１）の親水性樹脂粒子各１００部に対して、撹拌棒および温度計をセットした溶解槽に、水溶性カルボジイミド（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド・塩酸塩）２１部及びイオン交換水９００部を仕込み、２５℃で０．５時間撹拌した。その後、ポリペプチド（Ｐ１−１）０．８部を仕込み、２５℃で０．５時間撹拌し、細胞培養担体（ＰＢ１〜ＰＢ１６）及び（ＰＢ’１）を作製した。
また、親水性樹脂粒子（Ｂ１７）については、親水性樹脂粒子（Ｂ１７）をそのまま細胞培養担体（ＰＢ１７）として用いた。【００９９】
＜Ｖｅｒｏ細胞を用いた継代評価＞
スピンナーフラスコへ、細胞培養担体（ＰＢ１〜ＰＢ１７）、（ＰＢ’１）を各０．０３ｇ及びｐＨ＝７．２に調製したリン酸緩衝液（リン酸水素二ナトリウム０．０２％、リン酸二水素カリウム０．０７６％及び塩化ナトリウム０．８５％を含む。以下、ＰＢＳと略記する。）１０ｍＬを仕込み、オートクレーブ滅菌（１２１℃、２０分間）した。オートクレーブ滅菌後、ＰＢＳをアスピレータで吸引除去した後、ＭＥＭ培地に抗菌剤（商品名：ゲンタマイシン／アンフォテリシン  Ｂ、カスケード社製）を０．２重量％で含有させた培地を２ｍＬ添加し、１時間静置した後、培地を吸引除去し、再度、同じ無血清培地を１０ｍＬ添加した。スピンナーフラスコを３７℃、二酸化炭素ガス濃度５容量％のＣＯ２インキュベーターの中に１時間静置した後、予めプレ培養していたＶｅｒｏ細胞を細胞濃度が２０万個／ｍＬになるように無血清培地に播種した。３７℃、二酸化炭素ガス濃度５容量％のＣＯ２インキュベーターの中で、６０ｒｐｍの攪拌をしながら、各細胞培養担体のほぼ全面が細胞で覆われるまで７日間培養を行い細胞が付着した各細胞培養担体を得た。培養液を分離し、細胞の付着した各細胞培養担体が入った容器内にカルシウムイオンとマグネシウムイオンの合計濃度が１．１５ｍＭ、比率が１：２．２５のＭＥＭ培地を１０ｍｌ添加し、１０分間、３７℃で静置した。次いで、静置することにより、細胞が付着した各細胞培養担体を容器内に沈降させ、上澄みのＭＥＭ培地をマイクロピペットで除去した。ＭＥＭ培地９０ｍｌで予め１時間、３７℃で浸漬した各細胞培養担体０．３ｇが入ったスピンナーフラスコへ細胞が付着した各細胞培養担体を投入した。その後、間欠攪拌（攪拌２分、静置２８分）を３０時間、３７℃、二酸化炭素ガス濃度５容量％ＣＯ２インキュベーター内で実施した。間欠攪拌終了後、各細胞付着担体を容器内に沈降させ、上澄みのＭＥＭ培地をマイクロピペットで除去し、培養用培地｛ＭＥＭ培地に抗菌剤（商品名：ゲンタマイシン／アンフォテリシン  Ｂ、カスケード社製）を０．２重量％で含有させた培地｝を１００ｍｌ投入して、３７℃、二酸化炭素ガス濃度５容量％のＣＯ２インキュベーターの中で、６０ｒｐｍの攪拌をしながら培養した。培養７日目にサンプリングし、各細胞培養担体への接着率を後述の「細胞培養担体への細胞接着率評価」に記載の方法で測定した。なお、培養４日目、５日目及び６日目に培地の半分を新しい培養用培地｛ＭＥＭ培地に抗菌剤（商品名：ゲンタマイシン／アンフォテリシン  Ｂ、カスケード社製）を０．２重量％で含有させた培地｝と交換した。【０１００】
＜細胞培養担体への細胞接着率評価＞
細胞培養担体への細胞接着率評価は次のように実施した。継代工程終了後の細胞培養担体含有培養液０．５ｍＬを取り、顕微鏡にて細胞が１つ以上接着している細胞培養担体の数と細胞が接着していない細胞培養担体の数を測定する。測定後、以下の式から細胞培養担体への細胞接着率を算出した。結果を表１及び２に示す。
細胞培養担体への細胞接着率（％）＝｛（細胞が１つ以上接着している細胞培養担体の数）／（細胞が１つ以上接着している細胞培養担体の数＋細胞が接着していない細胞培養担体の数）｝×１００【０１０１】
＜細胞増殖性評価＞
継代工程終了して培養７日後の細胞培養液を０．５ｍＬ採り、培地を除去し、クリスタルバイオレット０．１％及びクエン酸を１．９２％含む水溶液０．５ｍＬを添加し３７℃で６０分間保持後、赤血球計数板を用いて細胞核数を計数し、培地中の細胞濃度（培地１ｍＬあたりの細胞数）を測定した。結果を表１及び２に示す。【０１０２】
【表１】
2016010128.tif 000003
【０１０３】
【表２】
2016010128.tif 000004
【０１０４】
表１〜２に示したように、本発明の親水性樹脂粒子である各実施例の親水性樹脂粒子は、比較例の親水性樹脂粒子と比べて、重量平均分子量が２，０００以下の樹脂の含有量が少なく、有機溶剤の量及びモノマー残存量も少なかった。また、細胞培養担体として用いた場合、実施例に記載の細胞培養担体は、比較例の細胞培養担体と比べて、細胞定着率及び細胞増殖性に優れていた。
【産業上の利用可能性】
【０１０５】
本発明の親水性樹脂粒子の製造方法は、重量平均分子量が２，０００以下の樹脂の含有量が少ない親水性樹脂粒子の製造が可能であり、廃液の発生が無く、煩雑な工程を行う必要が無い。本発明の製造方法で得られた親水性樹脂粒子は、更に公知の樹脂及び／又は溶媒に分散させることにより樹脂粒子分散体を得ることができ、得られた樹脂粒子分散体は樹脂粒子に由来する重量平均分子量の低い成分の溶出がないため、塗料、香粧品、細胞培養担体及びエンジニアリングプラスチック等の原料として好適に用いることができる。また、樹脂粒子を細胞培養担体として用いて細胞を生産（好ましくは、間欠撹拌培養方法による）すると、細胞が新しい細胞培養担体に効率よく、均一に乗り移りやすくなる。更に、細胞増殖能を低下させることなく継代することができ、細胞増殖能を低下させることなく継代培養を実施することが可能となる。したがって、本発明の親水性樹脂粒子の製造方法により製造された親水性樹脂粒子は、ウイルス培養用細胞の生産、有用タンパク質発現細胞の生産等、あらゆる接着性細胞の培養生産に有効である。
【符号の説明】
【０１０６】
Ｔ１：溶解槽
Ｔ２：耐圧受け槽
Ｂ１：二酸化炭素又は窒素ボンベ
Ｐ１：溶液ポンプ
Ｐ２：二酸化炭素又は窒素ポンプ
Ｍ１：スタティックミキサー
Ｖ１：バルブ
【図１】
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【国際調査報告】
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