(57)【要約】  本発明は、炎症惹起などの既存のフリーラジカル産生抑制剤／消去剤における問題を解決する新規のフリーラジカル消去剤を提供することを課題とする。具体的には、本発明は、新規物質マングロマイシンＤ、マングロマイシンＥ、マングロマイシンＦ、マングロマイシンＧ、マングロマイシンＨ及びマングロマイシンＩ、マングロマイシン類を有効成分として含有するフリーラジカルを消去剤、並びに、マングロマイシン類を有効成分として含有する過剰なフリーラジカルの発生が発症又は増悪に寄与する疾患又は障害の治療薬又は予防薬等に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式Ｉで表される化合物又はそのエステル誘導体あるいはそれらの塩又は水和物。
【化１】
2015025528.tif 000022
【請求項２】
下記式ＩＩで表される化合物又はそのエステル誘導体あるいはそれらの塩又は水和物。
【化２】
2015025528.tif 000023
【請求項３】
下記式ＩＩＩで表される化合物又はそのエステル誘導体あるいはそれらの塩又は水和物。
【化３】
2015025528.tif 000024
【請求項４】
下記式ＩＶで表される化合物又はそのエステル誘導体あるいはそれらの塩又は水和物。
【化４】
2015025528.tif 000025
【請求項５】
下記式Ｖで表される化合物又はそのエステル誘導体あるいはそれらの塩又は水和物。
【化５】
2015025528.tif 000026
【請求項６】
下記式ＶＩで表される化合物又はそのエステル誘導体あるいはそれらの塩又は水和物。
【化６】
2015025528.tif 000027
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物を生産する能力を有する放線菌に属する微生物を培地で培養し、培養物中請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物を蓄積せしめ、該培養物から請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物を採取することを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物の製造方法。
【請求項８】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物若しくはそのエステル誘導体又はそれらの塩若しくは水和物を有効成分として含有する医薬組成物。
【請求項９】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物若しくはそのエステル誘導体又はそれらの塩若しくは水和物、あるいは、下記式ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、及びＩＸのいずれか１つで表わされる化合物若しくはそのエステル誘導体又はそれらの塩若しくは水和物を有効成分として含有するフリーラジカル消去剤。
【化７】
2015025528.tif 000028
【請求項１０】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物若しくはそのエステル誘導体又はそれらの塩若しくは水和物、あるいは、下記ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、及びＩＸのいずれか１つで表わされる化合物若しくはそのエステル誘導体又はそれらの塩若しくは水和物を有効成分として含有する過剰なフリーラジカルの発生が発症又は増悪に寄与する疾患又は障害の治療薬又は予防薬。
【化８】
2015025528.tif 000029
【発明の詳細な説明】
【クロスリファレンス】
【０００１】
本出願は、２０１３年８月２３日に日本国において出願された特願２０１３−１７３４８９号に基づく優先権を主張するものであり、当該出願に記載された内容は全て、参照によりそのまま本明細書に援用される。また、本願において引用した全ての特許、特許出願及び文献に記載された内容は全て、参照によりそのまま本明細書に援用される。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、新規マングロマイシン化合物、その製造方法、及びマングロマイシン類を有効成分として含有する医薬組成物及びフリーラジカル消去剤に関する。
【背景技術】
【０００３】
フリーラジカルは、生体内においてミトコンドリア電子伝達系、ミクロソーム電子伝達系等で発生する他、大気汚染物質、放射線、薬剤、紫外線、タバコなどの外的要因によって発生することが知られている。好中球等の食細胞が産生するスーパーオキシドやそれにより派生するフリーラジカルは、殺菌作用や抗腫瘍効果等の生体防御における重要な役割を果たす一方、虚血再灌流障害や自己免疫疾患などの炎症反応において組織障害を引き起こすと考えられている。生体内で発生したスーパーオキシドは、酵素的／非酵素的還元により、より反応性の高い活性酸素種を生み出し、急性呼吸窮迫症候群、潰瘍性大腸炎、急性胃粘膜病変、ベーチェット病等の病変形成に寄与する。活性酸素種は血管内皮、平滑筋細胞、消化管粘膜上皮などでも産生され、多くの生体内分子を標的として多くの病態・疾患と関連することが報告されている。【０００４】
例えば、免疫担当細胞の一つであるマクロファージは、多量の硝酸塩を産生し、フリーラジカルの一種である一酸化窒素（以下「ＮＯ」という）を生体内で生成することが知られている。また、ＮＯは循環器系分野では血管内皮細胞から放出される弛緩作用を有する物質であることが知られている。【０００５】
ＮＯは、Ｌ−アルギニンを基質として一酸化窒素合成酵素（以下、「ＮＯＳ」という）によって生成される。【０００６】
生体内ＮＯの作用には二面性があり、産生量が多すぎても少なすぎても疾病に結びつくと考えられている。例えば、敗血症では、過剰なＮＯ産生によって血管が拡張され、血圧が急激に低下することによりショック状態（敗血症性ショック）を引き起こすことが知られている。また、過剰に産生したＮＯは、マクロファージが産生する活性酸素と反応して強力な酸化剤となり、神経細胞障害や動脈硬化を引き起こす原因となったり、マクロファージ等の免疫細胞自身を破壊したりする可能性も指摘されている。【０００７】
過剰に産生された生体内ＮＯを低減する手段として、ＮＯＳを不活性化する阻害剤やＮＯと速やかに反応する消去剤等の使用が検討されている。このようなＮＯＳ阻害剤としては、Ｎω−モノメチル−Ｌ−アルギニン、Ｎω−ジメチル−Ｌ−アルギニン、Ｎω−ニトロ−Ｌ−アルギニン等のＬ−アルギニン誘導体やアミノグアニジンやＳ−エチルイソチオウレア等のアルギニン類似化合物が報告されている。また、ＮＯ消去剤としては、例えば、ジエチレントリアミン５酢酸やデスフェリオキサミン等の金属錯体が報告されている。【０００８】
特許文献１には、マングロマイシン（Ｍａｎｇｒｏｍｉｃｉｎ）Ａ、Ｂ及びＣが記載されており、そのようなマングロマイシンが抗トリパノソーマ活性を有することが開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】国際公開公報ＷＯ２０１３／０３１２３９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
しかしながら、上記のようなＮＯＳ阻害剤を投与した臨床的な試みにおいては、症状の改善にはつながるものの、血圧の上昇、臓器の血流低下・障害等の様々な副作用を引き起こすという問題があることが分かった。また、上記のようなＮＯ消去剤であるジエチレントリアミン５酢酸の鉄錯体は、皮膚などに付着すると人によっては炎症を起こす副作用が知られている。よって、本発明は、上述の従来技術の問題を解決するために新規のフリーラジカル消去剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは種々の化合物の探索を行い、その生物活性について鋭意検討を行った結果、新規物質マングロマイシンＤ、マングロマイシンＥ、マングロマイシンＦ、マングロマイシンＧ、マングロマイシンＨ及びマングロマイシンＩがフリーラジカルを消去する活性を有することを明らかにするに至った。また、本発明者らは、既に報告したマングロマイシンＡ、Ｂ及びＣについても同様の検討を行い、これらの化合物が同様にフリーラジカルを消去する活性を有することを見出した。（以下、マングロマイシンＡ〜Ｉを総称して「マングロマイシン類」ということがある。）【００１２】
本発明はかかる知見に基づきなされたものであり、よって、一態様において本発明は、レシェバリエリア・エスピー（Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒｉａ  ｓｐ．）Ｋ１０−０２１６株の培養液から単離された、それぞれ下記式（Ｉ）〜（ＶＩ）で表わされる、新規化合物マングロマイシンＤ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ及びＩ又はそのエステル誘導体あるいはそれらの塩又は水和物を提供するものである。【００１３】
【化１】
2015025528.tif 000002
【００１４】
【化２】
2015025528.tif 000003
【００１５】
【化３】
2015025528.tif 000004
【００１６】
【化４】
2015025528.tif 000005
【００１７】
【化５】
2015025528.tif 000006
【００１８】
【化６】
2015025528.tif 000007
【００１９】
また、別の態様において、本発明は、前記式（Ｉ）〜（ＶＩ）のいずれか一つで表わされるマングロマイシン類を生産する能力を有する放線菌に属する微生物を培地で培養し、培養物中前記式（Ｉ）〜（ＶＩ）のいずれか一つで表わされるマングロマイシン類を蓄積せしめ、該培養物から前記式（Ｉ）〜（ＶＩ）のいずれか一つで表わされるマングロマイシン類を採取することを特徴とする、前記式（Ｉ）〜（ＶＩ）のいずれか一つで表わされるマングロマイシン類の製造方法に関する。【００２０】
あるいは、本発明は、前記式（Ｉ）〜（ＶＩ）のいずれか１つで表わされるマングロマイシン類若しくはそのエステル誘導体又はそれらの塩若しくは水和物を有効成分として含有する医薬組成物に関する。【００２１】
更に、本発明は、前記式（Ｉ）〜（ＶＩ）、並びに、下記式（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、及び（ＩＸ）のいずれか１つで表わされるマングロマイシン類若しくはそのエステル誘導体又はそれらの塩若しくは水和物を有効成分として含有する一酸化窒素消去剤に関する。【００２２】
【化７】
2015025528.tif 000008
【００２３】
別の態様において、本発明は、前記式（Ｉ）〜（ＶＩ）並びに（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、及び（ＩＸ）のいずれか１つで表わされるマングロマイシン類若しくはそのエステル誘導体又はそれらの塩若しくは水和物を有効成分として含有する過剰なＮＯ産生が発症又は増悪化に寄与する疾患又は障害の治療薬又は予防薬に関する。【００２４】
本明細書において、マングロマイシンＤとは、以下の物性を有する化合物である：
（１）性状：白色粉末または淡黄色粉末
（２）分子量：４１０
（３）分子式：Ｃ２２Ｈ３４Ｏ７
（４）高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］＋  理論値（ｍ／ｚ）４１１．２３８３、実測値（ｍ／ｚ）４１１．２３９２
（５）比旋光度：［α］Ｄ２４．８＝＋２７．９６（ｃ＝０．１、メタノール）
（６）紫外部吸収極大（メタノール中）λｍａｘ（ε）：２５１（１８０６）
（７）赤外部吸収極大νｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４２１，１６５５ｃｍ−１に極大吸収を有する
（８）１Ｈ  ＮＭＲ（重メタノール中）δ  ｐｐｍ：２．１２（１Ｈ，ｔ），４．５６（１Ｈ，ｄ），２．３３（１Ｈ，ｍ），４．１６（１Ｈ，ｄｄ），２．９６（１Ｈ，ｍ），１．６８（１Ｈ，ｍ），１．８４（１Ｈ，ｍ），３．５０（１Ｈ，ｍ），３．３８（１Ｈ，ｄｄ），２．３０（１Ｈ，ｍ），１．５４（１Ｈ，ｍ），１．６４（１Ｈ，ｄｄ），１．１８（１Ｈ，ｄｄｄ），２．３８（１Ｈ，ｍ），１．９３（１Ｈ，ｄｄ），２．７１（１Ｈ，ｍ），１．４８（２Ｈ，ｓ），１．３０（１Ｈ，ｍ），１．４４（１Ｈ，ｍ），０．８８（３Ｈ，ｔ），３．３０（１Ｈ，ｍ），３．５０（１Ｈ，ｍ），１．００（３Ｈ，ｄ），１．２６（３Ｈ，ｓ）
（９）１３Ｃ  ＮＭＲ（重メタノール中）δ  ｐｐｍ：１６４．４，１０１．８，１６３．６，４１．４，７１．２，４５．５，２１０．１，４９．２，３３．０，６６．３，８１．２，３５．０，４７．９，８１．２，３４．５，１８．１，３２．９，１９．１，１３．４，６２．３，１４．６，２４．０
（１０）溶解性：エタノール及びメタノールに易溶、水に難溶。【００２５】
または、本明細書におけるマングロマイシンＤは、以下の式Ｉで表わされる構造を有する化合物であってもよい。【００２６】
【化８】
2015025528.tif 000009
【００２７】
本明細書において、マングロマイシンＥとは、以下の物性を有する化合物である：
（１）性状：白色粉末または淡黄色粉末
（２）分子量：３９２
（３）分子式：Ｃ２２Ｈ３２Ｏ６
（４）高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］＋  理論値（ｍ／ｚ）３９３．２２７７、実測値（ｍ／ｚ）３９３．２２７７
（５）比旋光度：［α］Ｄ２５．３＝＋３０．４８（ｃ＝０．１、メタノール）
（６）紫外部吸収極大（メタノール中）λｍａｘ（ε）：２３１（３１４）
（７）赤外部吸収極大νｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４５１，１６５１ｃｍ−１に極大吸収を有する
（８）１Ｈ  ＮＭＲ（重メタノール中）δ  ｐｐｍ：４．６３（１Ｈ，ｄｄ），２．８３（１Ｈ，ｄｄｄ），４．９４（１Ｈ，ｄｄｄ），２．５１（１Ｈ，ｍ），３．７１（１Ｈ，ｔ），６．７１（１Ｈ，ｄｑ），４．７９（１Ｈ，ｄｄ），３．６０（１Ｈ，ｄｄ），２．４２（１Ｈ，ｍ），１．４５（１Ｈ，ｄｄ），２．１０（１Ｈ，ｄｄ）１．２８（１Ｈ，ｍ），２．５６（１Ｈ，ｍ），１．６７（１Ｈ，ｍ），２．４５（１Ｈ，ｍ），１．３２（１Ｈ，ｍ），１．９７（１Ｈ，ｍ），１．３８（１Ｈ，ｍ），１．４８（１Ｈ，ｍ），０．９８（３Ｈ，ｄ），１．７９（３Ｈ，ｄ），１．２０（３Ｈ，ｄ），１．４２（３Ｈ，ｄ）
（９）１３Ｃ  ＮＭＲ（重メタノール中）δ  ｐｐｍ：１７２．２，５５．２，２０３．６，５０．９，７７．８，３８．４，２０４．３，１３６．７，１４８．０，６９．１，８３．５，３７．６，５０．５，８３．３，３３．２，２１．４，２８．５，２１．１，１４．３，１１．８，１８．７，２５．５
（１０）溶解性：エタノール及びメタノールに易溶、水に難溶。【００２８】
または、本明細書におけるマングロマイシンＥは、以下の式ＩＩで表わされる構造を有する化合物であってもよい。【００２９】
【化９】
2015025528.tif 000010
【００３０】
本明細書において、マングロマイシンＦとは、以下の物性を有する化合物である：
（１）性状：白色粉末または淡黄色粉末
（２）分子量：３９６
（３）分子式：Ｃ２１Ｈ３２Ｏ７
（４）高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］＋  理論値（ｍ／ｚ）３９７．２２２６、実測値（ｍ／ｚ）３９７．２２１８
（５）比旋光度：［α］Ｄ２５．３＝＋５１．５６（ｃ＝０．１、メタノール）
（６）紫外部吸収極大（メタノール中）λｍａｘ（ε）：２５０（１３８８）
（７）赤外部吸収極大νｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４３３，１６５１ｃｍ−１に極大吸収を有する
（８）１Ｈ  ＮＭＲ（重メタノール中）δ  ｐｐｍ：２．０７（１Ｈ，ｍ），４．３４（１Ｈ，ｍ），２．３６（１Ｈ，ｍ），４．３５（１Ｈ，ｄｄ），３．１０（１Ｈ，ｍ），１．７８（１Ｈ，ｍ），１．８１（１Ｈ，ｍ），３．６４（１Ｈ，ｍ），３．５４（１Ｈ，ｍ），２．４０（１Ｈ，ｍ），１．６８（１Ｈ，ｄｄ），１．７３（１Ｈ，ｍ），１．２７（１Ｈ，ｄｄｄ），２．４９（１Ｈ，ｄｄｄ），２．０４（１Ｈ，ｍ），２．８６（１Ｈ，ｄｄｄ），１．６４（２Ｈ，ｍ），３．５０（１Ｈ，ｍ），３．６７（１Ｈ，ｍ），１．０３（３Ｈ，ｔ），１．０７（３Ｈ，ｄ），１．３５（１Ｈ，ｓ）
（９）１３Ｃ  ＮＭＲ（重メタノール中）δ  ｐｐｍ：１６９．７，１０３．８，１６８．０，４５．９，７４．１，４７．８，２１３．７，５０．１，３５．１，６９．４，８３．８，３７．７，５０．２，８４．２，３６．５，２０．０，２６．２，６５．３，１２．３，１４．９，２５．４
（１０）溶解性：エタノール及びメタノールに易溶、水に難溶。【００３１】
または、本明細書におけるマングロマイシンＦは、以下の式ＩＩＩで表わされる構造を有する化合物であってもよい。【００３２】
【化１０】
2015025528.tif 000011
【００３３】
本明細書において、マングロマイシンＧとは、以下の物性を有する化合物である：
（１）性状：白色粉末または淡黄色粉末
（２）分子量：４１０
（３）分子式：Ｃ２２Ｈ３４Ｏ７
（４）高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］＋  理論値（ｍ／ｚ）４１１．２３８３、実測値（ｍ／ｚ）４１１．２３７５
（５）比旋光度：［α］Ｄ２５．３＝＋２９．１６（ｃ＝０．１、メタノール）
（６）紫外部吸収極大（メタノール中）λｍａｘ（ε）：２５１（１２３２）
（７）赤外部吸収極大νｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４２５，１６５１ｃｍ−１に極大吸収を有する
（８）１Ｈ  ＮＭＲ（重メタノール中）δ  ｐｐｍ：２．１３（１Ｈ，ｍ），４．７３（１Ｈ，ｄｄ），２．１５（１Ｈ，ｄｄ），４．４６（１Ｈ，ｄｄ），２．７２（１Ｈ，ｍ），１．９０（１Ｈ，ｍ）、２．３２（１Ｈ，ｍ），３．５８（１Ｈ，ｄｄｄ），３．３３（１Ｈ，ｍ），２．６０（１Ｈ，ｍ），１．４４（１Ｈ，ｍ），２．１５（１Ｈ，ｍ），１．３７（１Ｈ，ｍ），２．５６（１Ｈ，ｍ），２．０５（１Ｈ，ｄｔ），２．７３（１Ｈ，ｍ），１．６１（１Ｈ，ｍ），１．５７（１Ｈ，ｍ），１．３８（１Ｈ，ｍ），１．５３（１Ｈ，ｍ），０．９６（３Ｈ，ｔ），３．４７（１Ｈ，ｄ），３．９６（１Ｈ，ｄ），１．０３（３Ｈ，ｄ），１．０９（３Ｈ，ｄ）
（９）１３Ｃ  ＮＭＲ（重メタノール中）δ  ｐｐｍ：１６９．１，１０３．０，１６７．９，４４．２，７３．９，４４．０，２１２．４，４３．６，３８．６，６９．２，８２．１，３６．９，４１．８，８７．１，３４．２，１８．９，４３．２，２１．３，１４．４，６５．９，１５．３，１３．７
（１０）溶解性：エタノール及びメタノールに易溶、水に難溶。【００３４】
または、本明細書におけるマングロマイシンＧは、以下の式ＩＶで表わされる構造を有する化合物であってもよい。【００３５】
【化１１】
2015025528.tif 000012
【００３６】
本明細書において、マングロマイシンＨとは、以下の物性を有する化合物である：
（１）性状：白色粉末または淡黄色粉末
（２）分子量：３８０
（３）分子式：Ｃ２１Ｈ３２Ｏ６
（４）高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］＋  理論値（ｍ／ｚ）３８１．２２７７、実測値（ｍ／ｚ）３８１．２２７２
（５）比旋光度：［α］Ｄ２５．３＝＋３３．８０（ｃ＝０．１、メタノール）
（６）紫外部吸収極大（メタノール中）λｍａｘ（ε）：２５１（１５２２）
（７）赤外部吸収極大νｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４３０，１６５１ｃｍ−１に極大吸収を有する
（８）１Ｈ  ＮＭＲ（重メタノール中）δ  ｐｐｍ：２．１３（１Ｈ，ｄｄ），４．７９（１Ｈ，ｄｄ），２．３６（１Ｈ，ｍ），４．４８（１Ｈ，ｄｄ），２．７２（１Ｈ，ｍ），１．７６（１Ｈ，ｍ），２．４２（１Ｈ，ｍ），３．５７（１Ｈ，ｄｄｄ），３．４０（１Ｈ，ｍ）、２．４４（１Ｈ，ｍ），１．６４（１Ｈ，ｍ），１．７０（１Ｈ，ｍ），１．２５（１Ｈ，ｄｄｄ），２．４８（１Ｈ，ｄｄｄ），２．０４（１Ｈ，ｄｔ），２．８８（１Ｈ，ｄｄｄ），１．６４（１Ｈ，ｍ），１．７０（１Ｈ，ｍ），１．０３（３Ｈ，ｔ），１．０６（３Ｈ（ｄ），１．３４（３Ｈ，ｓ），１．０５（３Ｈ，ｄ）
（９）１３Ｃ  ＮＭＲ（重メタノール中）δ  ｐｐｍ：１６９．６，１０２．８，１６９．３，４６．１，７３．７，４４．３，２１２．８，４９．３，３７．７，６９．２，８２．０，３７．０，４９．４，８３．８，３６．５，１９．５，２５．８，１１．９，１５．５，２５．３，１５．５
（１０）溶解性：エタノール及びメタノールに易溶、水に難溶。【００３７】
または、本明細書におけるマングロマイシンＨは、以下の式Ｖで表わされる構造を有する化合物であってもよい。【００３８】
【化１２】
2015025528.tif 000013
【００３９】
本明細書において、マングロマイシンＩとは、以下の物性を有する化合物である：
（１）性状：白色粉末または淡黄色粉末
（２）分子量：４０８
（３）分子式：Ｃ２２Ｈ３２Ｏ７
（４）高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］＋  理論値（ｍ／ｚ）４０９．２２２６、実測値（ｍ／ｚ）４０９．２２２２
（５）紫外部吸収極大（メタノール中）λｍａｘ（ε）：２４６（４９０）
（６）赤外部吸収極大νｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４３１，１６５１ｃｍ−１に極大吸収を有する
（８）１Ｈ  ＮＭＲ（重メタノール中）δ  ｐｐｍ：２．１３（１Ｈ，ｄｄ），４．９３（１Ｈ，ｄ），２．１１（１Ｈ，ｄｄ），４．７８（１Ｈ，ｄｄ），４．２０（１Ｈ，ｄ），３．２０（１Ｈ，ｄ），３．４０（１Ｈ，ｄ），２．５６（１Ｈ，ｍ），１．６３（１Ｈ，ｄｄ），１．８３（１Ｈ，ｄｄ），１．２８（１Ｈ，ｄｄｄ），２．３８（１Ｈ，ｍ），２．０８（１Ｈ，ｄｄｄ），２．９０（１Ｈ，ｄｄｄ），５．６８（１Ｈ，ｄ），６．４４（１Ｈ，ｄ），１．７０（１Ｈ，ｄｄ），１．７３（１Ｈ，ｄｄ），１．０３（３Ｈ，ｔ），３．２４（３Ｈ，ｓ），１．０５（３Ｈ，ｄ），１．３８（３Ｈ，ｓ）
（９）１３Ｃ  ＮＭＲ（重メタノール中）δ  ｐｐｍ：１６９．２，１６８．０，１６７．５，４７．９，７３．８，４５．６，１９６．７，１４７．６，８２．３，７９．５，８０．１，３７．５，４８．０，８５．０，３７．３，１９．４，１２６．６，２５．６，１１．８，５７．０，１３．７，２４．５
（１０）溶解性：エタノール及びメタノールに易溶、水に難溶。【００４０】
または、本明細書におけるマングロマイシンＩは、以下の式ＶＩで表わされる構造を有する化合物であってもよい。【００４１】
【化１３】
2015025528.tif 000014
【００４２】
本明細書において、マングロマイシンＡ、Ｂ及びＣとは、それぞれ順に、上述の式（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）及び（ＩＸ）で表わされる化合物である。より具体的には、本明細書において、マングロマイシンＣとは、以下の物性を有する化合物である：
（１）性状：白色粉末または淡黄色粉末
（２）分子量：３９４
（３）分子式：Ｃ２２Ｈ３４Ｏ６
（４）高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］＋理論値（ｍ／ｚ）３９５．２４３４、実測値（ｍ／ｚ）３９５．２４１３
（５）比旋光度：［α］Ｄ２５．３＝２３．２４°（ｃ＝０．１、メタノール）
（６）紫外部吸収極大（メタノール中）λｍａｘ（ε）：２５１（５５９５）
（７）赤外部吸収極大νｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４３０，１６５７ｃｍ−１に極大吸収を有する
（８）１Ｈ  ＮＭＲ（重メタノール中）δ  ｐｐｍ：４．７８（１Ｈ，ｄ），２．１４（１Ｈ），２．０２（１Ｈ，ｄｄ），２．８５（１Ｈ，ｄｄｄｄ），１．２５（１Ｈ，ｄｄｄ），２．４６（１Ｈ），１．６８（２Ｈ，ｍ），２．７４（１Ｈ，ｍ），１．７２（１Ｈ，ｄｄｄ），２．４３（１Ｈ），３．５６（１Ｈ，ｄｄｄ），３．３９（１Ｈ），２．４３（１Ｈ），２．３８（１Ｈ），４．４６（１Ｈ），１．６１（２Ｈ，ｍ），１．３８（１Ｈ），１．５２（１Ｈ），０．９６（３Ｈ，ｔ），１．３４（３Ｈ，ｓ），１．０６（３Ｈ，ｄ），１．０４（３Ｈ，ｄ）
（９）１３Ｃ  ＮＭＲ（重メタノール中）δ  ｐｐｍ：７４．０，４３．９，１６７．３，１０３．７，１９．５，３６．５，８３．７，４９．９，４４．４，３７．６，６９．５，８１．９，３７．０，２１２．６，４４．２，１６９．２，３５．０，２１．２，１４．４，２５．２，１５．４
（１０）  ＨＭＢＣ  ｐｏｓｉｔｉｏｎ  （δ  ｐｐｍ）：  ｆｒｏｍ  Ｈ−１  （４．７８）  ｔｏ  Ｃ−３  （１６７．３），  Ｃ−１５  （４４．２），  Ｃ−１６  （１６９．２），  ａｎｄ  Ｃ−１’  （３５．０）；  ｆｒｏｍ  Ｈ−２  （２．１４）  ｔｏ  Ｃ−３  （１６７．３），  Ｃ−４  （１０３．７），  Ｃ−１５  （４４．２），  Ｃ−１’  （３５．０）  ａｎｄ  Ｃ−２’  （２１．２）；  ｆｒｏｍ  Ｈ２−５  （２．０２  ｏｒ  ２．８５）  ｔｏ  Ｃ−４  （１０３．７），  Ｃ−７  （８３．７）  ａｎｄ  Ｃ−１６  （１６９．２）；  ｆｒｏｍ  Ｈ２−６  （１．２５  ｏｒ  ２．４６）  ｔｏ  Ｃ−４  （１０３．７），  Ｃ−７  （８３．７）  ａｎｄ  Ｃ−７−Ｍｅ  （２５．２）；  ｆｒｏｍ  Ｈ２−８  （１．６８）  ｔｏ  Ｃ−７−Ｍｅ  （２５．２）  ａｎｄ  Ｃ−９−Ｍｅ  （１５．４）；  ｆｒｏｍ  Ｈ−９  （２．７４）  ｔｏ  Ｃ−７  （８３．７），  Ｃ−８  （４９．９），  Ｃ−１０  （８１．９），  ａｎｄ  Ｃ−１１  （６９．５）；  ｆｒｏｍ  Ｈ−１０  （３．３９）  ｔｏ  Ｃ−８  （４９．９），  Ｃ−１２  （３７．６）  ａｎｄ  Ｃ−９−Ｍｅ  （１９．５）；  ｆｒｏｍ  Ｈ−１１  （３．５６）  ｔｏ  Ｃ−１０  （８１．９）；  ｆｒｏｍ  Ｈ２−１２  （１．７２  ｏｒ  ２．４３）  ｔｏ  Ｃ−１０  （８１．９），  Ｃ−１１  （６９．５），  Ｃ−１４  （２１２．６），  ａｎｄ  Ｃ−１３−Ｍｅ  （１５．４）；  ｆｒｏｍ  Ｈ−１３  （２．４３）  ｔｏ  Ｃ−１２  （３７．６）；  ｆｒｏｍ  Ｈ２−１５  （２．３８  ｏｒ  ４．４６）  ｔｏ  Ｃ−１  （７４．０），  Ｃ−２  （４３．９）  ａｎｄ  Ｃ−１４  （２１２．６）；  ｆｒｏｍ  Ｈ３−７−Ｍｅ  （１．３４）  ｔｏ  Ｃ−６  （３６．５），  Ｃ−７  （８３．７）  ａｎｄ  Ｃ−８  （４９．９）；  ｆｒｏｍ  Ｈ３−９−Ｍｅ  （１．０６）  ｔｏ  Ｃ−８  （４９．９），  Ｃ−９  （４４．４）  ａｎｄ  Ｃ−１０  （８１．９）；  ｆｒｏｍ  Ｈ３−１３−Ｍｅ  （１．０４）  ｔｏ  Ｃ−１２  （３７．６），  Ｃ−１３  （３７．０）  ａｎｄ  Ｃ−１４  （２１２．６）；  ｆｒｏｍ  Ｈ２−１’  （１．６１）  ｔｏ  Ｃ−１  （７４．０），  Ｃ−２  （４３．９），  Ｃ−３  （１６７．３），  ａｎｄ  Ｃ−２’  （２１．１）；  ｆｒｏｍ  Ｈ２−２’  （１．３８  ｏｒ  １．５２）  ｔｏ  Ｃ−２  （４３．９），  Ｃ−１’  （３５．０）  ａｎｄ  Ｃ−３’  （１４．４）  ；  ｆｒｏｍ  Ｈ３−３’  （１．０４）  ｔｏ  Ｃ−１’  （３５．０）  ａｎｄ  Ｃ−２’  （２１．１）
（１１）溶解性：クロロホルム、ジクロロメタン、エタノール、メタノールに易溶、水に難溶。【００４３】
本明細書において、本発明の式（Ｉ）〜（ＩＸ）で表わされる化合物の塩とは、式（Ｉ）〜（ＩＸ）で表わされる化合物に金属等が配位して形成する錯塩を意味する。また、本発明の式（Ｉ）〜（ＩＸ）で表わされる化合物の水和物又は溶媒和物及び本発明の式（Ｉ）〜（ＩＸ）で表わされる化合物の塩の水和物又は溶媒和物も本発明に包含される。好ましくは、本発明の式（Ｉ）〜（ＩＸ）で表わされる化合物の塩、及び、本発明の式（Ｉ）〜（ＩＸ）で表わされる化合物の水和物又は溶媒和物及び本発明の式（Ｉ）〜（ＩＸ）で表わされる化合物の塩の水和物又は溶媒和物は、薬理学的に許容されるものである。また、本発明の式（Ｉ）〜（ＩＸ）で表わされる化合物又はその塩は結晶であってもよいし、非晶体であってもよい。【００４４】
本発明の化合物は、上記化合物の他、これらの化合物の薬理学的に許容されるエステル誘導体を包含する。ここで、「薬理学的に許容されるエステル誘導体」は、生体内において代謝されて、本願発明の化合物を与える基を含む化合物であって、医薬として体内に投与することが許容可能なエステルのことである。本明細書において、エステルは、エステル結合した化合物の他、アミド結合した化合物を含む。エステルは、生体内のエステラーゼにより分解されて活性型の化合物を与えてもよい。例えば、エステルとしては、置換され又は置換されていない、低級アルキルエステル、低級アルケニルエステル、低級アルキルアミノ低級アルキルエステル、アシルアミノ低級アルキルエステル、アシルオキシ低級アルキルエステル、アリールエステル、アリール低級アルキルエステル、アミド、低級アルキルアミド、水酸化アミドを挙げることができる。エステルとして、好ましくは、プロピオオン酸エステル又はアシルエステルである。【００４５】
本発明の化合物は不斉炭素を有することがあることから、光学異性体が存在することがある。本発明の化合物としては、右旋性（＋）又は左旋性（−）の何れの化合物であってもよいし、ラセミ体などのこれらの異性体の混合物であってもよい。また、本発明の化合物は、特に断らない限り、いずれの互変異性体、又は幾何異性体（例えば、Ｅ体、Ｚ体など）も含むものである。【００４６】
また、本発明において医薬組成物とは、その種類が特に限定されるものではなく、剤型としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、懸濁剤、座剤、軟膏、クリーム剤、ゲル剤、貼付剤、吸入剤、注射剤等が挙げられる。これらの製剤は常法に従って調製することができる。また、液体製剤にあっては、用時、水又は他の適当な溶媒に溶解又は懸濁する形であってもよい。また錠剤、顆粒剤は周知の方法でコーティングしてもよい。注射剤の場合には、本発明の化合物を水に溶解させて調製されるが、必要に応じて生理食塩水或いはブドウ糖溶液に溶解させてもよく、また緩衝剤や保存剤を添加してもよい。経口投与用又は非経口投与用の任意の製剤形態で提供される。例えば、顆粒剤、細粒剤、散剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤又は液剤等の形態の経口投与用医薬組成物、静脈内投与用、筋肉内投与用、若しくは皮下投与用などの注射剤、点滴剤、経皮吸収剤、経粘膜吸収剤、点鼻剤、吸入剤、坐剤などの形態の非経口投与用医薬組成物として調製することができる。注射剤や点滴剤などは、凍結乾燥形態などの粉末状の剤形として調製し、用時に生理食塩水などの適宜の水性媒体に溶解して用いることもできる。【００４７】
本明細書において、「フリーラジカル」とは、１以上の不対電子対を有する原子又は分子を意味し、好ましくは生体内で発生し得るフリーラジカルである。本明細書におけるフリーラジカルとしては、例えば、スーパーオキシド（・Ｏ２−）、ヒドロキシルラジカル（ＨＯ・）、ヒドロペルオキシルラジカル（ＨＯＯ・）、アルコキシルラジカル（ＬＯ・）、アルキルペルオキシルラジカル（ＬＯＯ・）、及び、一酸化窒素（ＮＯ）等のラジカル種、並びに、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）、一重項酸素（１Ｏ２）、ペルオキシナイトライト（ＯＮＯＯ−）、脂質ヒドロペルオキシド（ＬＯＯＨ）、次亜塩素酸（ＨＯＣｌ）、オゾン（Ｏ３）等のノンラジカル種を含む活性酸素分子種；並びに、塩素、ＤＰＰＨ（ジフェニルピクリルヒドラジド）を含み、好ましくは、一酸化窒素及びＤＰＰＨであり、より好ましくは、一酸化窒素である。【００４８】
本明細書において、フリーラジカル消去剤とは、フリーラジカルの消去を目的として使用される薬剤を意味する。別の態様において、本発明は式（Ｉ）〜（ＶＩ）で表わされる化合物を有効成分として含有する医薬組成物を提供するものである。また、本発明の化合物は、それを必要とする患者に有効量を投与することにより、フリーラジカルの（過剰な）発生が発症又は増悪化に関係し又は寄与する疾患又は障害の治療方法又は予防方法に用いることができる。よって、より具体的には、本発明は式（Ｉ）〜（ＩＸ）で表わされる化合物を有効成分として含有するフリーラジカルの（過剰な）発生が発症又は増悪化に関係し又は寄与する疾患又は障害の治療薬又は予防薬を提供するものである。あるいは、本発明は、フリーラジカルの（過剰な）発生が発症又は増悪化に関係し又は寄与する疾患又は障害の治療又は予防のための式（Ｉ）〜（ＩＸ）で表わされる化合物の使用に関する。フリーラジカルの（過剰な）発生が発症又は増悪化に関係し又は寄与する疾患又は障害としては、例えば、脳梗塞、心筋梗塞、心不全、虚血性疾患、心虚血再灌流障害、肝虚血再灌流障害、脳虚血再灌流障害、消化管虚血再灌流障害、虚血再灌流障害、急性呼吸窮迫症候群、急性胃粘膜病変、ベーチェット病、白内障、ドライアイ、アルツハイマー病、パーキンソン病、老化、花粉症、口内炎、炎症、肺気腫、気管支喘息、腎不全、糸球体腎炎、ネフローゼ症候群、糖尿病性腎症、薬物性腎障害、閉塞性動脈硬化症、動脈硬化症、癌、逆流性食道炎、胃潰瘍、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、関節リウマチ、膠原病、自己免疫疾患、アルコール性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、及び神経変性疾患を挙げることができる。
【発明の効果】
【００４９】
本発明のマングロマイシン類は、フリーラジカル消去作用を有することから、フリーラジカルの（過剰な）発生が発症又は増悪化に関係し又は寄与する疾患又は障害の治療又は予防に利用することができ、抗炎症作用等が期待される。即ち、本発明のマングロマイシン類は、フリーラジカル消去作用を有することから、抗炎症作用を有すると考えられ、各種炎症性疾患、各種アレルギー性疾患等の治療薬または予防に有効であると考えられる。
【図面の簡単な説明】
【００５０】
【図１】図１は、マングロマイシンＡ〜ＩのＤＰＰＨフリーラジカルに対する消去活性（％）を示す。縦軸は、ＤＰＰＨフリーラジカル消去活性を１００％とした時の、各薬剤を添加した際のＤＰＰＨフリーラジカル消去活性の割合を示し、横軸は使用した薬剤（各マングロマイシン及びビタミンＥ（ＶＥ））を示す。
【図２】図２は、ＲＡＷ２６４．７細胞をＬＰＳ／ＩＦＮ−γで刺激することにより誘導されたＮＯの消去効果を示すグラフである。縦軸はコントロール（薬剤無添加）のＮＯの発生量を１００％とした時の、各薬剤を添加した際のＮＯ発生量を示す。横軸は、添加した各薬剤（左からマングロマイシンＡ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ及びＩ）を示し、横軸の「無添加」はＬＰＳ／ＩＦＮ−γで刺激したＲＡＷ２６４．７細胞に薬剤を無処置であった群を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５１】
本発明の上記式（Ｉ）〜（ＶＩ）で表わされるマングロマイシン類は、マングロマイシン類を生産する能力を有する放線菌に属する微生物を培地で培養し、培養物中マングロマイシン類を蓄積せしめ、該培養物からマングロマイシン類を採取（分離・抽出・精製）することにより製造することができる。
【００５２】
本発明のマングロマイシン類の製造方法において、「マングロマイシン類を生産する能力を有する放線菌に属する微生物」は、放線菌に属する菌であって、マングロマイシン類を生産する能力を有する微生物であれば特に限定されない。本発明のマングロマイシン類の製造方法に用いることのできる菌株には、上記菌株の他、その変異株をはじめ、放線菌に属するマングロマイシン類を生産する能力を有する菌のすべてが含まれる。微生物が「マングロマイシン類を生産する能力を有する放線菌に属する微生物」であるか否かは、例えば、以下の方法により決定することができる。スターチ２．４％、グルコース０．１％、ペプトン０．３％、カツオエキス０．３％、酵母エキス０．５％、炭酸水素カルシウム０．４％からなる液体培地（ｐＨ  ７．０）１００ｍＬを含む５００ｍＬ容三角フラスコに、液体培地で培養した被験微生物１ｍＬを植菌し、２７℃で３日間振盪培養後、得られた種培養液を、スターチ５．０％、グリセロール０．５％、脱脂小麦胚芽１．０％、ドライ酵母１．０％、炭酸水素カルシウム０．５％からなる液体培地（ｐＨ７．０）１００ｍＬを含む５００ｍＬ容三角フラスコに、１ｍＬ植菌し、２７℃で８日間振盪培養することにより得られた培養物の中に、マングロマイシン類が存在すれば当該微生物はマングロマイシン類を生産する能力を有する放線菌に属する微生物であると決定することができる。好ましくは、マングロマイシン類を生産する能力を有する放線菌に属する微生物は、沖縄県西表島マングローブ土壌より分離された、レシェバリエリア・エスピー（Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒｉａ  ｓｐ．）Ｋ１０−０２１６株である。本微生物は、２０１１年７月２１日付にて、独立行政法人製品評価技術基盤機構  特許微生物寄託センター（千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８）に受託番号ＮＩＴＥ  ＢＰ−１１１４として寄託されている。
【００５３】
本明細書において、「変異株」とは、人工的又は自然界における変異誘発刺激によりＬｅｃｈｅｖａｌｉｅｒｉａ  ｓｐ．Ｋ１０−０２１６株とは異なる菌学的性状又は遺伝子を有する株のことであり、このような変異株にはＬｅｃｈｅｖａｌｉｅｒｉａ  ｓｐ．  Ｋ１０−０２１６株から派生した菌株の他、Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒｉａ  ｓｐ．  Ｋ１０−０２１６株を派生させた元の菌株も含まれる。本明細書において、変異株は実際の派生の痕跡の有無を問うものではなく、例えば、Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒｉａ  ｓｐ．  Ｋ１０−０２１６株遺伝子（例えば、１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子）と高い相同性（例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上など）を有する遺伝子を有する菌株もまた変異株に含まれる。また、このような変異株は、マングロマイシン類の産生能を維持している限り、人工的に作製したものであるか、天然から採取したものであるかを問わない。
【００５４】
マングロマイシン類を生産する能力を有する放線菌に属する微生物を培養するための培地には、栄養源として、放線菌の栄養源として使用し得るものを含有することができる。例えば、市販のペプトン、肉エキス、コーン・スティープ・リカー、綿実粉、落花生粉、大豆粉、酵母エキス、ＮＺ−アミン、カゼインの水和物、硝酸ソーダ、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム等の窒素源、グリセリン、スターチ、グルコース、ガラクトース、マンノース等の炭水化物、あるいは脂肪等の炭素源、及び食塩、リン酸塩、炭酸カルシウム、硫酸マグネシウム等の無機塩を単独あるいは組み合わせて使用することができる。その他、培地には、必要に応じて微量の金属塩、消泡剤として動・植・鉱物油等を添加することもできる。これらのものは生産菌を利用したマングロマイシン類の生産の役だつものであればよく、公知の放線菌の培養材料はすべて用いることができる。
【００５５】
また、マングロマイシン類を生産する能力を有する放線菌に属する微生物の培養は、生産菌が発育しマングロマイシン類を生産できる温度範囲（例えば、１０℃〜４０℃、好ましくは、２５〜３０℃）で数日〜２週間振盪培養することにより行うことができる。培養条件は、本明細書の記載を参照しながら、使用するマングロマイシン類生産菌の性質に応じて適宜選択して行なうことができる。
【００５６】
マングロマイシン類の採取は、培養液より酢酸エチル等の水不混和性の有機溶媒を用いて抽出することにより行うことができる。本抽出法に加え、脂溶性物質の採取に用いられる公知の方法、例えば吸着クロマトグラフィー、分配クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィーよりのかき取り、遠心向流分配クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等を適宜組合せあるいは繰返すことによって純粋になるまで精製することができる。
【００５７】
前記式（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）及び（ＩＸ）でそれぞれ表わされるマングロマイシンＡ、Ｂ及びＣは、前記レシェバリエリア・エスピー（Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒｉａ  ｓｐ．）Ｋ１０−０２１６株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−１１１４）を用いて、国際公開公報ＷＯ２０１３／０３１２３９に記載の方法に従って得ることができる。
【００５８】
本発明の医薬組成物は、通常の薬学的に許容される担体を用いて、常法により製剤化することができる。本発明のマングロマイシン類を有効成分として含有する医薬組成物を製剤化するための剤型に制限はなく錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤等の固形剤、溶液、懸濁液、乳剤などの液状製剤として経口的に、あるいは、静脈内、筋肉内、皮下などの注射剤、坐剤、貼付剤などとして非経口的に使用することができる。経口用固形製剤を調製する場合は、主薬に賦形剤、更に必要に応じて、結合剤、崩壊剤、滑沢剤等を加えた後、常法により溶剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等とする。注射剤を調製する場合には、主薬に必要によりｐＨ調整剤、緩衝剤、安定化剤、可溶化剤等を添加し、常法により皮下又は静脈内用注射剤とすることができる。
【００５９】
固形剤となす場合には澱粉、乳糖、グルコース、リン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、カルボキシメチルセルロースなどの賦形剤を用いることができ、必要であれば滑沢剤、崩壊剤、被覆剤、着色剤なども使用することができる。注射剤、及び液状製剤になす場合には安定化剤、溶液助剤、懸濁化剤、乳化剤、緩衝剤、保存剤などを含有させることができる。
【００６０】
本発明のマングロマイシン類は、それを必要とする患者に有効量の本発明のマングロマイシン類を投与することを備える、フリーラジカルの（過剰な）発生が発症又は増悪化に関係し又は寄与する疾患又は障害の治療方法又は予防方法に使用することができる。例えば、本発明のマングロマイシン類を治療又は予防目的で使用する場合、本発明のマングロマイシン類を有効成分として含有する医薬組成物を、経口投与形態、又は注射剤、点滴剤等の非経口投与形態で投与することができる。本発明のマングロマイシン類を哺乳動物等に投与する場合、錠剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤等として経口投与してもよいし、又は、注射剤、点滴剤として非経口的に投与してもよい。投与量は、症状、年齢、性別、体重、投与形態等により異なるが、例えば成人に経口的に投与する場合には、通常１日量は０．１−１０００ｍｇである。
【実施例】
【００６１】
以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。なお、本願全体を通して引用される全文献は参照によりそのまま本願に組み込まれる。【００６２】
（実施例１）マングロマイシンＤ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ及びＩの取得
スターチ２．４％、グルコース０．１％、ペプトン（極東製薬工業株式会社製）０．３％、カツオエキス（極東製薬工業株式会社製）０．３％、酵母エキス（オリエンタル酵母工業株式会社製）０．５％、炭酸水素カルシウム０．４％からなる液体培地（ｐＨ  ７．０）１００ｍＬを含む５００ｍＬ容三角フラスコに１００本に、液体培地で培養したＬｅｃｈｅｖａｌｉｅｒｉａ  ｓｐ．  Ｋ１０−０２１６（ＮＩＴＥ  ＢＰ−１１１４）を各１ｍｌずつ植菌し、２７℃で３日間振盪培養した。得られた種培養液を、スターチ５．０％、グリセロール０．５％、脱脂小麦胚芽（日清ファルマ株式会社製）１．０％、ドライ酵母（ＪＴフーズ株式会社製）１％、炭酸水素カルシウム０．５％からなる液体培地（ｐＨ７．０）１００ｍＬを含む５００ｍＬ容三角フラスコに１００本に、各１ｍＬずつ植菌し、２７℃で８日間振盪培養した。【００６３】
培養の終了した５００ｍＬ容三角フラスコ１００本にそれぞれ１００ｍＬのエタノールを加えて１時間激しく撹拌した。次にその抽出液中のエタノールを減圧留去し、得られた水溶液に１０Ｌの酢酸エチルを加えよく撹拌後、酢酸エチル層を回収した。エバポレーターを用い、濃縮乾固して５．９８ｇの粗精製物１を得た。これを少量のメタノールに溶解し、シリカゲル（ＭＥＲＣＫ社製）オープンカラムクロマトグラフィーを用いて、ヘキサン−クロロホルム−メタノール溶媒系で段階溶出（１００：０：０，５０：１：０，１：１：０，０：１００：０，０：１００：１，０：５０：１，０：１０：１，０：１：１，０：０：１００）させ、マングロマイシンＤを含む０：５０：１画分（粗精製物２）を５１０ｍｇ、マングロマイシンＥを含む１：１：０画分（粗精製物３）を１３８ｍｇ、マングロマイシンＦおよびＧを含む０：１０：１画分（粗精製物４）を６５０ｍｇ、マングロマイシンＨおよびＩを含む０：１００：１画分（粗精製物５）を５５０ｍｇ得た。【００６４】
粗精製物２を少量のメタノールに溶解し、ＯＤＳ（富士シリシア化学株式会社社製）オープンカラムクロマトグラフィーを用いて、メタノール−水系で段階溶出（メタノール濃度０％，２０％，３０％，４０％，５０％，６０％，７０％，８０％，９０％，１００％）し、マングロマイシンＤを含む５０％〜８０％画分（粗精製物６）を得た。粗精製物６をメタノールに溶解し、高速液体クロマトグラフィーにてオクタデシルシリルカラム（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−４，φ１４×２５０ｍｍ，流速６．５ｍＬ／ｍｉｎ，検出２５４ｎｍ）に注入し、１５％アセトニトリル水で溶出した。保持時間１３分付近のピークを分取し、減圧濃縮によりマングロマイシンＤを白色粉末として７０ｍｇ得た。【００６５】
粗精製物３を少量のメタノールに溶解し、高速液体クロマトグラフィーにてオクタデシルシリルカラム（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−４，φ１４×２５０ｍｍ，流速９．３ｍＬ／ｍｉｎ，検出２５４ｎｍ）に注入し、４０％アセトニトリル水で溶出した。保持時間１６分付近のピークを分取し、減圧濃縮によりマングロマイシンＥを白色粉末として１１ｍｇ得た。【００６６】
粗精製物４を少量のメタノールに溶解し、ＯＤＳ（富士シリシア化学株式会社社製）オープンカラムクロマトグラフィーにて、メタノール−水系で段階溶出（メタノール濃度０％，２０％，３０％，４０％，５０％，６０％，７０％，８０％，９０％，１００％）し、マングロマイシンＦ及びＧを含む５０％画分（粗精製物７）を得た。粗精製物７をメタノールに溶解し、高速液体クロマトグラフィーにてオクタデシルシリルカラム（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−４，φ１０×２５０ｍｍ，流速４．７ｍＬ／ｍｉｎ，検出２５４ｎｍ）に注入し、１０％アセトニトリル水で溶出した。保持時間１７分付近のピークを分取し、減圧濃縮によりマングロマイシンＦを白色粉末として２０ｍｇおよび１９分付近のピークを分取し、減圧濃縮によりマングロマイシンＧを白色粉末として９ｍｇ得た。【００６７】
粗精製物５を少量のメタノールに溶解し、ＯＤＳ（富士シリシア化学株式会社社製）オープンカラムクロマトグラフィーにて、メタノール−水系で段階溶出（メタノール濃度０％，２０％，３０％，４０％，５０％，６０％，７０％，８０％，９０％，１００％）し、マングロマイシンＨ及びＩを含む５０％画分（粗精製物８）を得た。粗精製物８をメタノールに溶解し、高速液体クロマトグラフィーにてオクタデシルシリルカラム（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−４，φ１０×２５０ｍｍ，流速４．７ｍＬ／ｍｉｎ，検出２５４ｎｍ）に注入し、１０％アセトニトリル水で溶出した。保持時間１７分付近のピークを分取し、減圧濃縮によりマングロマイシンＦを白色粉末として２０ｍｇ得た。また、粗精製物８をメタノールに溶解し、高速液体クロマトグラフィーにてオクタデシルシリルカラム（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−４，φ１０×２５０ｍｍ，流速４．７ｍＬ／ｍｉｎ，検出２５４ｎｍ）に注入し、２０％アセトニトリル水で溶出した。保持時間２５分付近のピークを分取し、減圧濃縮によりマングロマイシンＩを白色粉末として２．３ｍｇ得た。【００６８】
得られたマングロマイシンＤ，マングロマイシンＥ，マングロマイシンＦ，マングロマイシンＧ，マングロマイシンＨおよびマングロマイシンＩの理化学的性状を測定した結果、次の通りであった。【００６９】
マングロマイシンＤ
（１）性状：白色粉末または淡黄色粉末
（２）分子量：４１０
（３）分子式：Ｃ２２Ｈ３４Ｏ７
高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］＋  理論値（ｍ／ｚ）４１１．２３８３、実測値（ｍ／ｚ）４１１．２３９２
（４）比旋光度：［α］Ｄ２４．８＝＋２７．９６（ｃ＝０．１、メタノール）
（５）紫外部吸収極大（メタノール中）λｍａｘ（ε）：２５１（１８０６）
（６）赤外部吸収極大νｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４２１，１６５５ｃｍ−１に極大吸収を有する
（７）プロトン核磁気共鳴スペクトル：重メタノール中の化学シフト（ｐｐｍ）を表１に示す。（表中、ｓは一重線、ｄは二重線、ｍは多重線、Ｈはプロトンの数を示す。）
（８）カーボン核磁気共鳴スペクトル：重メタノール中の化学シフト（ｐｐｍ）を表１に示す。
（９）溶剤に対する溶解性：エタノール、メタノールに易溶。水に難溶。【００７０】
【表１】
2015025528.tif 000015
【００７１】
マングロマイシンＥ
（１）性状：白色粉末または淡黄色粉末
（２）分子量：３９２
（３）分子式：Ｃ２２Ｈ３２Ｏ６
高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］＋  理論値（ｍ／ｚ）３９３．２２７７、実測値（ｍ／ｚ）３９３．２２７７
（４）比旋光度：［α］Ｄ２５．３＝＋３０．４８（ｃ＝０．１、メタノール）
（５）紫外部吸収極大（メタノール中）λｍａｘ（ε）：２３１（３１４）
（６）赤外部吸収極大νｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４５１，１６５１ｃｍ−１に極大吸収を有する
（７）プロトン核磁気共鳴スペクトル：重メタノール中の化学シフト（ｐｐｍ）を表２に示す。（表中、ｓは一重線、ｄは二重線、ｍは多重線、Ｈはプロトンの数を示す。）
（８）カーボン核磁気共鳴スペクトル：重メタノール中の化学シフト（ｐｐｍ）を表２に示す。
（９）溶剤に対する溶解性：エタノール、メタノールに易溶。水に難溶。【００７２】
【表２】
2015025528.tif 000016
【００７３】
マングロマイシンＦ
（１）性状：白色粉末または淡黄色粉末
（２）分子量：３９６
（３）分子式：Ｃ２１Ｈ３２Ｏ７
高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］＋  理論値（ｍ／ｚ）３９７．２２２６、実測値（ｍ／ｚ）３９７．２２１８
（４）比旋光度：［α］Ｄ２５．３＝＋５１．５６（ｃ＝０．１、メタノール）
（５）紫外部吸収極大（メタノール中）λｍａｘ（ε）：２５０（１３８８）
（６）赤外部吸収極大νｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４３３，１６５１ｃｍ−１に極大吸収を有する
（７）プロトン核磁気共鳴スペクトル：重メタノール中の化学シフト（ｐｐｍ）を表３に示す。（表中、ｓは一重線、ｄは二重線、ｍは多重線、Ｈはプロトンの数を示す。）
（８）カーボン核磁気共鳴スペクトル：重メタノール中の化学シフト（ｐｐｍ）を表３に示す。
（９）溶剤に対する溶解性：エタノール、メタノールに易溶。水に難溶。【００７４】
【表３】
2015025528.tif 000017
【００７５】
マングロマイシンＧ
（１）性状：白色粉末または淡黄色粉末
（２）分子量：４１０
（３）分子式：Ｃ２２Ｈ３４Ｏ７
高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］＋  理論値（ｍ／ｚ）４１１．２３８３、実測値（ｍ／ｚ）４１１．２３７５
（４）比旋光度：［α］Ｄ２５．３＝＋２９．１６（ｃ＝０．１、メタノール）
（５）紫外部吸収極大（メタノール中）λｍａｘ（ε）：２５１（１２３２）
（６）赤外部吸収極大νｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４２５，１６５１ｃｍ−１に極大吸収を有する
（７）プロトン核磁気共鳴スペクトル：重メタノール中の化学シフト（ｐｐｍ）を表４に示す。（表中、ｓは一重線、ｄは二重線、ｍは多重線、Ｈはプロトンの数を示す。）
（８）カーボン核磁気共鳴スペクトル：重メタノール中の化学シフト（ｐｐｍ）を表４に示す。
（９）溶剤に対する溶解性：エタノール、メタノールに易溶。水に難溶。【００７６】
【表４】
2015025528.tif 000018
【００７７】
マングロマイシンＨ
（１）性状：白色粉末または淡黄色粉末
（２）分子量：３８０
（３）分子式：Ｃ２１Ｈ３２Ｏ６
高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］＋  理論値（ｍ／ｚ）３８１．２２７７、実測値（ｍ／ｚ）３８１．２２７２
（４）比旋光度：［α］Ｄ２５．３＝＋３３．８０（ｃ＝０．１、メタノール）
（５）紫外部吸収極大（メタノール中）λｍａｘ（ε）：２５１（１５２２）
（６）赤外部吸収極大νｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４３０，１６５１ｃｍ−１に極大吸収を有する
（７）プロトン核磁気共鳴スペクトル：重メタノール中の化学シフト（ｐｐｍ）を表５に示す。（表中、ｓは一重線、ｄは二重線、ｍは多重線、Ｈはプロトンの数を示す。）
（８）カーボン核磁気共鳴スペクトル：重メタノール中の化学シフト（ｐｐｍ）を表５に示す。
（９）溶剤に対する溶解性：エタノール、メタノールに易溶。水に難溶。【００７８】
【表５】
2015025528.tif 000019
【００７９】
マングロマイシンＩ
（１）性状：白色粉末または淡黄色粉末
（２）分子量：４０８
（３）分子式：Ｃ２２Ｈ３２Ｏ７
高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］＋  理論値（ｍ／ｚ）４０９．２２２６、実測値（ｍ／ｚ）４０９．２２２２
（４）紫外部吸収極大（メタノール中）λｍａｘ（ε）：２４６（４９０）
（５）赤外部吸収極大νｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４３１，１６５１ｃｍ−１に極大吸収を有する
（６）プロトン核磁気共鳴スペクトル：重メタノール中の化学シフト（ｐｐｍ）を表６に示す。（表中、ｓは一重線、ｄは二重線、ｍは多重線、Ｈはプロトンの数を示す。）
（７）カーボン核磁気共鳴スペクトル：重メタノール中の化学シフト（ｐｐｍ）を表６に示す。
（８）溶剤に対する溶解性：エタノール、メタノールに易溶。水に難溶。【００８０】
【表６】
2015025528.tif 000020
【００８１】
以上のとおり各種理化学的性状が得られたマングロマイシンＤ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ及びＩに一致する化合物はこれまで報告されていないことから、マングロマイシンＤ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ及びＩは新規物質であると考えられる。【００８２】
（実施例２）ＤＰＰＨ（１，１−Ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２−ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ）フリーラジカルに対する消去活性試験
実施例１で得られたマングロマイシンＤ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ及びＩ、並びに国際公開公報ＷＯ２０１３／０３１２３９に従って得たマングロマイシンＡ、Ｂ及びＣのＤＰＰＨフリーラジカルに対する消去活性を以下の通り調べた。ＤＰＰＨは１００μＭの濃度になるようにエタノールを用いてＤＰＰＨ溶液を調製した。各マングロマイシンは１００μＭの濃度になるようにメタノールを用いて被験溶液を調製した。９６ウェルプレートの各ウェルに８０μｌのエタノールを分注し、１０μｌのＤＰＰＨ溶液、１０μｌの被験溶液を添加し、９６ウェルプレートをアルミホイルで遮光し、２０分間、室温で放置した。その後、各ウェルを５１７ｎｍで測定し、マングロマイシンのラジカル消去活性を測定した。【００８３】
比較対象として抗酸化剤である終濃度１０μＭのα−トコフェロール（ＶＥ）を用いた。【００８４】
ＤＰＰＨフリーラジカル消去活性は次式により求めた。
ＤＰＰＨフリーラジカル消去活性（％）＝１００−（サンプル−ブランク）／コントロール−ブランク）
（サンプル：被験物質添加群ウェル吸光度、コントロール：被験物質無添加群ウェル吸光度、ブランク：１００μｌエタノールウェル吸光度）【００８５】
マングロマイシン類とＶＥのＤＰＰＨフリーラジカル消去活性は図１に示す通りであった。この結果から、本発明のマングロマイシン類がいずれもＤＰＰＨフリーラジカル消去活性を有することが示された。【００８６】
（実施例３）ＲＡＷ２６４．７細胞が産生するＮＯに対する消去活性試験
９６ウェルプレートにマウス・マクロファージ系細胞株ＲＡＷ２６４．７（以下、「ＲＡＷ２６４．７細胞」という。）を、ダルベッコ改変イーグル培地（以下、「ＤＭＥＭ培地」という。）（無血清、ｐｈｅｎｏｌ  ｒｅｄ  ｆｒｅｅ）で５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌに調製して、２００μＬ播き、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで１６時間培養した。培養後、ウェルから培地を抜き取り、２００μｌのＰＢＳで２回洗い、１９６μｌのＤＭＥＭ培地を加え、ＤＭＥＭ培地で希釈した０．５ｍｇ／ｍＬのＬＰＳと１０００Ｕ／ｍＬのＩＦＮ−γを２μＬずつ加えた。なお、ＬＰＳとＩＦＮ−γの刺激剤を加えず、４μｌのＤＭＥＭ培地を添加したものをブランクとした。【００８７】
６時間インキュベート後、１１Ｍのグルコースを含んだＫｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ緩衝液（以下、「ＫＲＰ緩衝液」という。）で２回洗浄後、１ｍＭのＬ−アルギニン、１０μＭのＮＯ検出用蛍光試薬Ｄｉａｍｉｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ−２（以下、「ＤＡＦ−２」という。）、及び、（１）ＤＭＳＯに溶解した各マングロマイシン（実施例１で得られたマングロマイシンＤ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ又はＩ、あるいは、国際公開公報ＷＯ２０１３／０３１２３９に従って得たマングロマイシンＡ、Ｂ及びＣ）（いずれも終濃度１００μＭ）、（２）ＤＭＳＯに溶解したＬ−ＮＭＭＡ（終濃度１００μＭ）又は、（３）コントロールとしてＤＭＳＯのみ、を含んだＫＲＰ緩衝液２００μｌを添加し、さらに、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで２時間インキュベートした。なお、ＤＭＳＯの終濃度は終濃度０．５％に調製した。【００８８】
上清１００μｌを蛍光測定用ブラック９６ウェルプレートに移し、波長４９５ｎｍで励起し、波長５１５ｎｍを測定した。【００８９】
ＮＯ消去活性は次式により求めた。
ＮＯ消去活性（％）＝１００−（Ｓ−Ｂ）／（Ｌ−Ｂ）×１００
（Ｓ：被験物質及びＬＰＳ／ＩＦＮ−γ添加ウェル吸光度、Ｂ：ＤＭＳＯ添加ウェル吸光度（ブランク）、Ｌ：ＬＰＳ／ＩＦＮ−γ添加ウェル吸光度（薬剤無添加群））【００９０】
ＤＭＳＯのみを添加したブランク群（Ｂ）では、ＮＯの産生がほとんど見られなかったのに対し、ＬＰＳ／ＩＦＮ−γで刺激を加えた群（Ｌ）ではＲＡＷ２６４．７細胞のＮＯ産生が確認できた。【００９１】
本実験におけるマングロマイシン類添加群についてのＮＯ産生抑制率の結果を図２に示す。【００９２】
図２より、ＲＡＷ２６４．７細胞をＬＰＳ／ＩＦＮ−γで刺激することにより誘導されたＮＯに対し、マングロマイシン類は消去効果を示していることがわかった。なかでもマングロマイシンＩが、高いＮＯ消去活性を示し、ＮＯ合成阻害薬として知られているＮＧ−モノメチル−Ｌ−アルギニン（Ｌ−ＮＭＭＡ）のＮＯ産生阻害効果（終濃度１００μＭで５２％阻害、結果は非図示）と同程度の効果を示した。【００９３】
この実験結果より、本発明のマングロマイシン類は優れたＮＯ消去効果を有することが明らかとなった。【００９４】
（実施例４）ＲＡＷ２６４．７細胞に対するマングロマイシン類の毒性試験
９６ウェルプレートにマウス・マクロファージ系細胞株ＲＡＷ２６４．７をＤＭＥＭ培地で５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌに調製して、２００μＬを播き、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで１６時間培養した。培養後、各マングロマイシン（実施例１で得られたマングロマイシンＤ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ又はＩ、あるいは、国際公開公報ＷＯ２０１３／０３１２３９に従って得たマングロマイシンＡ、Ｂ及びＣ）をＤＭＳＯに溶解し、終濃度１００μＭになるようにＤＭＥＭ培地で希釈して調製した各マングロマイシン溶液２００μｌを各ウェルに加え、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで２４時間インキュベートした。ＤＭＳＯは終濃度０．５％に調製した。コントロールには被験物質（マングロマイシン）を含んでいない０．５％ＤＭＳＯ含有ＤＭＥＭ培地を添加し、ブランクは細胞を含まない０．５％ＤＭＳＯ含有ＤＭＥＭ培地のみとした。インキュベート後、アラマーブルー試薬（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｏｒｉｃｈ社製、米国）２０μＬを添加、混和し、３７℃にて５％ＣＯ２インキュベーターで２４時間培養した。次に、マイクロプレートリーダーを用いて２波長（５７０ｎｍと６００ｎｍ）で各ウェルの吸光度を測定した。【００９５】
ＲＡＷ２６４．７細胞に対するマングロマイシン類の毒性は次式により求めた。【００９６】
細胞生存率（％）＝（Ａ／Ｂ）×１００
※  Ａ＝サンプルウェル（Ａ５７０ｎｍ−Ａ６００ｎｍ）−ブランクウェル（Ａ５７０ｎｍ−Ａ６００ｎｍ）
Ｂ＝コントロールウェル（Ａ５７０ｎｍ−Ａ６００ｎｍ）−ブランクウェル（Ａ５７０ｎｍ−Ａ６００ｎｍ）【００９７】
ＲＡＷ２６４．７細胞に対するマングロマイシン類の毒性の結果を表７に示す。【００９８】
【表７】
2015025528.tif 000021
【００９９】
表７に示される通り、本発明のマングロマイシン類には１００μＭでＲＡＷ２６４．７細胞に対して毒性がないことがわかった。【０１００】
以上の結果から本発明のマングロマイシン類は、ＲＡＷ２６４．７細胞の増殖に対して阻害効果を示さず、ＤＰＰＨフリーラジカルに対してラジカル消去活性及びＮＯに対する消去活性を有していることから過剰なＮＯ産生による疾患などの抗炎症薬剤として非常に優れた効果を有することが示された。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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