【手続補正書】
【提出日】平成24年7月25日(2012.7.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＨＶＪのＨＮタンパク質のＮ末端部分アミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列からなる改変ＨＮタンパク質であって、該部分アミノ酸配列が１１１〜２０９アミノ酸の長さを有する、改変ＨＮタンパク質。
【請求項２】
該部分アミノ酸配列が１４０〜１８０アミノ酸の長さを有する、請求項１記載の改変ＨＮタンパク質。
【請求項３】
下記（１）または（２）のポリペプチドである、請求項１記載の改変ＨＮタンパク質：
（１）配列番号６の第１〜１６０アミノ酸に該当するアミノ酸配列からなるポリペプチド、
（２）配列番号６の第１〜１６０アミノ酸に該当するアミノ酸配列において１または複数の残基が置換、欠失又は付加されたアミノ酸配列を含み、且つＨＶＪに発現された場合に粒子表面に局在しうる特徴を有するポリペプチド。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の改変ＨＮタンパク質の残基及び第１の機能性ポリペプチド残基を含む融合タンパク質であって、該改変ＨＮタンパク質残基のＣ末端側に該機能性ポリペプチド残基が機能可能に連結されている、融合タンパク質。
【請求項５】
機能性ポリペプチドがＩＦＮ−γ分泌促進能を有するポリペプチドである、請求項４記載の融合タンパク質。
【請求項６】
ＩＦＮ−γ分泌促進能を有するポリペプチドが一本鎖ＩＬ−１２である、請求項５記載の融合タンパク質。
【請求項７】
一本鎖ＩＬ−１２が、下記（１）または（２）のポリペプチドである、請求項６記載の融合タンパク質：
（１）配列番号２の第１０３〜６２５アミノ酸に該当するアミノ酸配列を含むポリペプチド、
（２）配列番号２の第１０３〜６２５アミノ酸に該当するアミノ酸配列において１または複数の残基が置換、欠失又は付加されたアミノ酸配列を含み、且つＩＦＮ−γ分泌促進能を有するポリペプチド。
【請求項８】
機能性ポリペプチドが抗体の定常領域（Ｆｃ）のＣＨ２−ＣＨ３ドメインである、請求項４記載の融合タンパク質。
【請求項９】
抗体の定常領域（Ｆｃ）のＣＨ２−ＣＨ３ドメインがＩｇＧ２ａに由来するものである、請求項８記載の融合タンパク質。
【請求項１０】
抗体の定常領域のＣＨ２−ＣＨ３ドメインが、下記（１）または（２）のポリペプチドである、請求項９記載の融合タンパク質：
（１）配列番号４の第１７１〜３８９アミノ酸に該当するアミノ酸配列を含むポリペプチド、
（２）配列番号４の第１７１〜３８９アミノ酸に該当するアミノ酸配列において１または複数の残基が置換、欠失又は付加されたアミノ酸配列を含み、且つプロテインＡとの結合活性を有するポリペプチド。
【請求項１１】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の改変ＨＮタンパク質、又は請求項４〜１０のいずれか１項に記載の融合タンパク質をコードする核酸。
【請求項１２】
請求項８〜１０のいずれか１項に記載の第１の融合タンパク質、並びにプロテインＡのＺＺドメイン及び第２の機能性ポリペプチド残基を含む第２の融合タンパク質を含む、タンパク質複合体であって、第１の融合タンパク質と第２の融合タンパク質とが、第１の融合タンパク質に含まれるＣＨ２−ＣＨ３ドメインと第２の融合タンパク質に含まれるＺＺドメインとの間の結合を介して複合体を形成している、タンパク質複合体。
【請求項１３】
第２の機能性ポリペプチドが、一本鎖ＩＬ−１２である、請求項１２記載のタンパク質複合体。
【請求項１４】
一本鎖ＩＬ−１２が、下記（１）または（２）のポリペプチドであり、且つＺＺドメインが、下記（３）または（４）のポリペプチドである、請求項１３記載のタンパク質複合体：
（１）配列番号２の第１０３〜６２５アミノ酸に該当するアミノ酸配列を含むポリペプチド、
（２）配列番号２の第１０３〜６２５アミノ酸に該当するアミノ酸配列において１または複数の残基が置換、欠失又は付加されたアミノ酸配列を含み、且つＩＦＮ−γ分泌促進能を有するポリペプチド、
（３）配列番号２の第４２〜９９アミノ酸に該当するアミノ酸配列を含むポリペプチド、
（４）配列番号２の第４２〜９９アミノ酸に該当するアミノ酸配列において１または複数の残基が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列を含み、且つ抗体分子の定常領域（Ｆｃ）への結合活性を有するポリペプチド。
【請求項１５】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の改変ＨＮタンパク質、請求項４〜１０のいずれか１項に記載の融合タンパク質、または請求項１２〜１４のいずれか１項に記載のタンパク質複合体をエンベロープに含有する、ＨＶＪ−Ｅ。
【請求項１６】
請求項６もしくは７に記載の融合タンパク質または請求項１３もしくは１４に記載のタンパク質複合体をエンベロープに含有する、請求項１５記載のＨＶＪ−Ｅ。
【請求項１７】
ＩＦＮ−γ分泌促進能を有するポリペプチドをエンベロープ外側に提示する形で担持する、ＨＶＪ−Ｅ。
【請求項１８】
ＩＦＮ−γ分泌促進能を有するポリペプチドが、ＩＬ−１２である、請求項１７記載のＨＶＪ−Ｅ。
【請求項１９】
ＩＬ−１２が一本鎖ＩＬ−１２である、請求項１８記載のＨＶＪ−Ｅ。
【請求項２０】
請求項６もしくは７に記載の融合タンパク質または請求項１３もしくは１４に記載のタンパク質複合体をエンベロープに含有する、請求項１８記載のＨＶＪ−Ｅ。
【請求項２１】
請求項１７〜２０のいずれか１項に記載のＨＶＪ−Ｅを有効成分として含む、抗癌剤。
【請求項２２】
メラノーマ、前立腺癌、膀胱癌および大腸癌からなる群より選択される癌の治療または予防に用いられる、請求項２１記載の抗癌剤。
【請求項２３】
１回当たりの投与量が、ＨＶＪ−Ｅとして１０００ＨＡＵ以下であり、かつ該ＨＶＪ−Ｅに含まれるＩＬ−１２として１００ｐｇ以下であることを特徴とする、請求項１８〜２０のいずれか１項に記載のＨＶＪ−Ｅを有効成分として含む抗癌剤。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８３】
８．ＺＺ−ｓｃＩＬ１２結合型Ｆｃ−ＨＶＪ−Ｅと、非結合ｓｃＩＬ１２およびＨＶＪ−Ｅの併用投与との抗癌作用の比較
ＺＺ−ｓｃＩＬ１２結合型Ｆｃ−ＨＶＪ−Ｅ（ＨＶＪ−Ｅ：１００ＨＡＵ、ＩＬ−１２：２５０ｐｇ）、またはＺＺドメインを有していないためＦｃ−ＨＶＪ−Ｅとは結合しないＴａｇ−ｓｃＩＬ１２（ＩＬ−１２：２５０ｐｇ）とＨＶＪ−Ｅ１００ＨＡＵとの混合液とを、上記同様Ｆ１０メラノーマを注入し腫瘍が約２〜４ｍｍになったマウスに腫瘍内に２日おきに３回投与した。初回投与から１４日目において、各マウスの腫瘍を観察し、完全に腫瘍が消失したマウスの割合を図１３に示す。ＺＺ−ｓｃＩＬ１２結合型Ｆｃ−ＨＶＪ−Ｅを投与した群では３０％以上で腫瘍が全く消失し、それ以後再発することなく９０日後でも生存していた。一方、Ｆｃ−ＨＮ−ＨＶＪ−Ｅと結合しないＴａｇ−ｓｃＩＬ１２とＦｃ−ＨＮ−ＨＶＪ−Ｅとを共投与した群では、５％程度しか腫瘍寛解が認められなかった（図１３）。このことから、ＩＬ−１２とＨＶＪ−Ｅとが結合して複合体を形成することで強い抗腫瘍活性を示すことがわかった。
このことは、ＺＺ−ｓｃＩＬ１２結合型Ｆｃ−ＨＶＪ−Ｅの抗癌作用は、ＩＬ−１２とＨＶＪ−Ｅとが結合して複合体を形成した状態で癌細胞に作用することによって、ＩＬ−１２とＨＶＪ−Ｅというそれぞれに抗癌作用を奏するものの単なる組合せによる効果の増大を大きく上回るということを示している。