【事件の表示】
　平成　３年特許願第５１３７６６号「細胞外信号の細胞内トランスダクションの検出および評価のためのアッセイ法および組成物」拒絶査定不服審判事件〔平成　４年　２月２０日国際公開、ＷＯ９２／０２６３９、平成　６年　３月２４日国内公表、特表平　６−５０２５２７〕について、次のとおり審決する。
【結　論】
　本件審判の請求は、成り立たない。
【理　由】
I．出願の経緯及び本願発明
　本願は、１９９１年８月７日（パリ条約による優先権主張１９９０年８月７日、米国）を国際出願日とする出願であって、その請求項１〜３８に係る発明は、平成１５年４月２４日付けで提出された手続補正書によって補正された明細書の特許請求の範囲に記載されたとおりのものと認められるところ、その請求項１に係る発明（以下、「本願発明１」という。）は次のとおりである。
　
　「化合物とＧ蛋白結合受容体との相互作用により生成される細胞内信号トランスダクションを検出することによってＧ蛋白結合受容体媒介性活性を調節する化合物を同定するための、複数の化合物についてのスクリーニング方法であって、該方法は、
　化合物の存在下での組換真核細胞におけるレポーター遺伝子の転写量または発現するレポーター遺伝子産物量を、該化合物の不存在下での転写量または発現産物量と比較し、及び
　前記複数の化合物の中から特定の化合物を選択し、但し該選択された化合物は、該化合物の存在下で、前記組換細胞内におけるレポーター遺伝子の転写量または発現するレポーター遺伝子産物量を、該化合物の不存在下でのレポーター遺伝子転写量またはレポーター遺伝子産物量に対して変化させ、それによりＧ蛋白結合受容体媒介性活性を調節する化合物を同定することを含み、
　ここで、前記組換細胞は、レポーター遺伝子構築物を含み且つＧ蛋白結合受容体を発現しており、また該レポーター遺伝子構築物は：
（ａ）転写制御要素であって、前記化合物とＧ蛋白結合受容体との相互作用により生成された細胞内信号に応答性のものから選択される転写制御要素、および
（ｂ）レポーター遺伝子であって、検出可能な転写または翻訳産物をコードし且つ前記転写制御要素と作動可能に連携するレポーター遺伝子
を含む、前記方法。」
　
II．当審の拒絶理由
　当審の平成１５年７月２９日付け拒絶理由通知書において、請求項１〜３８に係る発明が、
（１）引用例１（Science(1988) Vol.241, p.1057-1063）、引用例２（Nature(1988) Vol.334, p.434-437）、引用例イ（J.Biol.Chem.(1988) Vol.263(4), p.1611-1614）、引用例ロ（Nature (1987) Vol.328(6133), p.820-823）、引用例ハ（特表平１−５００９６４号公報）、引用例ニ（国際公開第８９／５３５５号パンフレット（１９８９））、引用例ホ（国際公開第８９／９８３４号パンフレット（１９８９））、引用例４（Trends Neurosci.(May 1990)  Vol.13(5) p.184-188）、引用例５（Genes Dev.(1988) Vol.2, p.1529-1538）、引用例６（Nature (1988) Vol.336(6194) p.83-86）、引用例７（Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1986) Vol.83(18), p.6682-6686）及び、引用例８（Nature(1987) Vol.328(6126), p.175-178）に記載された発明に基づいて、又は、
（２）上記引用例１、引用例２、引用例３（J.Neurosci.Res.(1989) Vol.24  p.107-114）、引用例イ、引用例ロ、引用例ハ、引用例ニ、引用例ホ、引用例I（Mol.Cell.Biol.(1989) Vol.9(3) p.1327-1331）、引用例II（Mol.Cell.Biol.(1988) Vol.8(7) p.2787-2796）及び、引用例９（Science(1985) Vol.230(4730), p.1174-1177）に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものであるため、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができないから、本願は拒絶すべきものである旨が通知されている。
　
III．当審の判断
１．引用例
（１）引用例１（Science(1988) Vol.241, p.1057-1063）
　引用例１には、レセプターやイオンチャンネルなどのExcitability Proteinsのサブタイプの特性は、それらの遺伝子をアフリカツメガエルの卵母細胞や哺乳類細胞に発現させた場合にも一般的に保存されていることから、このような外来遺伝子の発現は、異なるそれぞれのサブタイプに対してより特異性の高い薬物をテストするためのツールとして適切であろう旨が記載されている（要約）。また、ムスカリンアセチルコリン受容体（AChM1）、セロトニン5HT1C受容体などが、Ｇ蛋白に結合してPhospholipase Cを活性化し、イノシトール３リン酸（IP3）が細胞内に貯蓄していたCa2+を放出し、上昇したCa2+濃度が、Cl-チャンネルを活性化することが記載されており（図1）、表2には、種々のExcitability Proteinを異種宿主細胞膜上に発現させた形質転換体において、受容体にアゴニストが結合することにより生じるシグナルが記載されており、ムスカリン受容体HM2におけるシグナルとして、cAMP増加、PI加水分解があること、β2アドレナリン受容体におけるシグナルとしてcAMP増加のあること、セロトニン5HT1C受容体におけるシグナルとして、細胞内Ca2+増加があることが記載されている。そして、リガンドのスクリーニングは、適切なＧ蛋白を発現する細胞、もしくは適切なＧ蛋白の発現を促すことが可能な細胞において行うことができるであろうことが記載されている（第1061頁右欄末行〜第1062頁左欄第３行）。
　
（２）引用例２（Nature(1988) Vol.334, p.434-437）
　引用例２には、ムスカリンアセチルコリン受容体は、アゴニストが結合すると、Ｇ蛋白質を活性化することにより、ＰＩ加水分解系とアデニルサイクラーゼ系を介して第２メッセンジャーを生成することが記載されている（要約1行〜5行）。また、それぞれの受容体を内在性のムスカリンアセチルコリン受容体を欠失した細胞において発現させて、ＰＩ加水分解とアデニルサイクラーゼを制御する受容体サブタイプの能力を調査したところ、HM1受容体とHM4受容体は、強くＰＩ加水分解を活性化し、アデニルサイクラーゼは阻害しない結果、実質的にｃAMPレベルが上昇することが記載されている（要約8行〜16行、表1、図3）。そして、アセチルコリンアナログであるカルバコールの添加により、HM1受容体とHM4受容体において、アデニルサイクラーゼ活性剤であるフォルスコリン刺激レベルを超えたcAMPが上昇することが記載されている（第436頁右欄30行〜33行）。また、ＰＩ加水分解が活性化すると、IP3を介したCa移動が起きることは以前の研究により示されていたことが記載されている（第436頁右欄33〜38行）。
　
（３）引用例３（J.Neurosci.Res.(1989) Vol.24  p.107-114）
  引用例３には、ラットの新皮質星状細胞の二次培養細胞にムスカリン性及びアドレナリン性のアゴニストであるカルバコールを作用させたところ、c-fosを含むTIS（TPA-Induced Sequences）遺伝子が誘導されることが記載されている（要約7行〜14行、図１）。この誘導の機構として、ノルアドレナリン受容体A1へアゴニストが作用することによりPLCが活性化されPIの加水分解が進んでDAG（ジアシルグリセロール）及びIP3（3Ｈ−イノシトールリン酸）量が増大し、細胞内Ca++の移動及びPKC（ホスホキナーゼＣ）の活性化を通じて、TIS遺伝子が発現されたことや、同アゴニストのβ受容体への作用によりアデニル酸サイクラーゼが関連して、cAMPレベルを上昇させ、TIS遺伝子が発現されたことが記載されている（第111右欄下5行〜第112頁1行、図４。）
　
（４）引用例イ（J.Biol.Chem.(1988) Vol.263(4), p.1611-1614）
　引用例イには、ヒトインシュリンレセプターを発現する細胞において、インシュリン及びフォルボールエステルフォルボール12ミリステート-13アセテート（PMA）が、c-fosのｍRNAを誘導すること及び、c-fos５’フランキング配列に連結した細菌のCAT遺伝子を含むプラスミド構築物による一時的な発現研究によって、SREに相当する配列が、インシュリンとPMAによるc-fos転写の誘導に必要であり、たぶん蛋白質である核内因子がc-fos遺伝子のこの配列に特異的に結合するものであることが記載されている（要約）。
　
（５）引用例ロ（Nature (1987) Vol.328(6133), p.820-823）
　引用例ロには、EGF受容体を発現する細胞において、血清及び成長因子による制御を含んでいるc-fos５’制御エンハンサー要素、HSVチミジンキナーゼ遺伝子プロモーター及び、ルシフェラーゼ遺伝子又は細菌性クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（CAT）遺伝子を含む融合遺伝子を使用して、遺伝子発現におけるEGFの効果を、ルシフェラーゼ又はCAT活性を検出することにより評価したことが記載されている。また、受容体のチロシンキナーゼドメインに変異を導入したEGF受容体を発現する細胞に、これらの融合遺伝子を導入し、EGFを作用させる実験により、EGFによるc-fos遺伝子発現は、レセプターのチロシンキナーゼ活性に依存していることが記載されている（第821右欄9行〜第822頁左欄3行）。
　
（６）引用例ハ（特表平１−５００９６４号公報）
　引用例ハには、受容体陰性の細胞中へ、作動性レポーター遺伝子に機能性結合した作動性ホルモン応答性プロモーター／エンハンサー要素からなる第１プラスミド、およびホルモン受容体蛋白質をコードする作動性ＤＮＡ配列からなる第２の受容体発現プラスミドを共トランスフェクトし、得られた共トランスフェクションされた細胞を、第１プラスミドのホルモン応答性プロモーター／エンハンサー要素を活性化しうる、またはその同族体の存在下または不存在下に培養し、該細胞において上記レポーター遺伝子のDNA配列の生成物の誘導を監視し、そして、該細胞において、第２プラスミドのDNA配列によりコードされるホルモン受容体蛋白質の発現およびステロイド結合能を測定することよりなる、ホルモン受容体の機能性を測定するためのバイオアッセイ法が記載されており（請求項２８）、受容体として、グルココルチコイド受容体、ミネラルコルチコイド受容体および甲状腺ホルモン受容体が記載されている（請求項３３）。
　
（７）引用例ニ（国際公開第８９／５３５５号パンフレット（１９８９））
　引用例ニには、推定上のリガンド結合ドメインを有するＤＮＡ配列を単離し、この領域を、既知のリガンド応答性受容体タンパク質のDNA結合ドメイン領域と置換してキメラ遺伝子を構築し、受容体を欠損した宿主細胞を該キメラ遺伝子及び、該キメラ遺伝子によってコードされる受容体タンパク質のDNA結合ドメイン領域により活性化されるホルモン応答性エレメントに対し機能的に連結したレポーター遺伝子によって形質転換し、形質転換細胞をリガンドの可能性のある候補化合物を用いて検定し、レポーター遺伝子の誘導をモニターし、機能的リガンドを同定する方法が記載されており（請求項１８）、既知のリガンド応答性受容体タンパク質として、グルココルチコイド受容体、ミネラロコルチコイド受容体、ミネラロコルチコイド受容体、ヒト・チロイド受容体、ラット・チロイド受容体、エストロゲン関連受容体、レチノイン酸受容体が記載されている（請求項１９）。
　
（８）引用例ホ（国際公開第８９／９８３４号パンフレット（１９８９））
　引用例ホには、化合物をカルシウムチャンネルアゴニストまたはカルシウムチャンネルアンタゴニストとしての活性に関して検定する方法であって、細胞内で活性であり、その転写活性が機能的カルシウムチャンネルから前記細胞内に入りうるイオンまたは分子に反応する転写調節要素を含み、インジケーター蛋白質の構造遺伝子に、発現のために操作可能に結合した異種遺伝子によって形質転換された、異種カルシウムチャンネルを発現する真核細胞を、被検化合物と、機能的カルシウムチャンネルから前記細胞に入って前記細胞内の前記異種遺伝子の前記転写調節要素による転写レベルに影響しうるイオンまたは分子との溶液に懸濁させ、前記細胞中の前記インジケーター蛋白質の濃度の変化を測定することからなる方法が記載されている（請求項２８、４０、４４）。
　
（９）引用例４（Trends Neurosci.(May 1990)  Vol.13(5) p.184-188）
　引用例４は、遺伝子転写を刺激するため、cAMPがCREBの活性を調節することによるメカニズムの理解に向けて、最近の進歩をレビューした文献であり、多くの神経ペプチド及び神経伝達物質が、第２メッセンジャーであるcAMPを通じて、神経細胞を刺激しており、cAMPは、保存されたcAMP応答要素(CRE)を通じて、多くの遺伝子を制御していることが記載されている（要約）。そして、cAMPがソマトスタチン遺伝子の転写を制御していることに注目し、ソマトスタチンプロモーターを細菌のレポーター遺伝子であるクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（cat）に連結して、この融合遺伝子でラットPC12細胞を形質転換したこと及び、ソマトスタチンプロモーター−CAT融合遺伝子の活性は、アデニルサイクラーゼを直接の活性化剤であるフォルスコリンに応答して、10〜15倍となったことが記載されている（第185頁左欄2行〜21行）。
　
（10）引用例５（Genes Dev.(1988) Vol.2, p.1529-1538）
　引用例５には、c-fosプロモーター内のcAMP応答要素（CRE)の配列を特徴付けするため、c-fos５’フランキング領域から得られた断片と細菌性レポーター遺伝子、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ(CAT）を融合し、PC12細胞に形質転換し、フォルスコリンを添加すると、c-fos−CAT遺伝子の誘導は、15倍になったことが記載されている。（第1530頁左欄下9行〜右欄10行、図１B）
　
（11）引用例６（Nature (1988) Vol.336(6194) p.83-86）
　引用例６には、cAMPによる遺伝子転写制御に必要な17bpのCRE配列を有するVIP遺伝子プロモーター／エンハンサー領域を大腸菌lacZ遺伝子に連結した融合遺伝子により形質転換したC6グリオーマ細胞に、フォルスコリン又は8-ブロモcAMPを作用させると、β-ガラクトシダーゼが誘導されたことが記載されている（第85頁左欄8行〜20行、図１）。
　
（12）引用例７（Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1986) Vol.83(18), p.6682-6686）
　引用例７には、ラットソマトスタチン遺伝子により形質転換されたPC12細胞において、cAMPによりソマトスタチン遺伝子の発現が制御されていることを試験するため、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ(CAT)をコードする細菌性レポーター遺伝子を融合したソマトスタチン遺伝子プロモーターを含むキメラ遺伝子により形質転換されたPC12細胞にフォルスコリンを作用させると、CAT遺伝子の発現が誘導され、CAT活性がみられることが記載されている（要約1行〜8行、図２）。また、cAMP応答に必要な配列であるcAMP応答要素の位置は、翻訳開始部位の上流60bpと29bpの間にあることを決定したことが記載されている（要約8行〜13行、図４）。
　
（13）引用例８（Nature(1987) Vol.328(6126), p.175-178）
　引用例８には、神経内分泌細胞におけるソマトスタチン生合成は、第２メッセンジャーであるcAMPにより制御されており、形質転換されたPC12細胞において、cAMPはソマトスタチン遺伝子転写を8〜10倍にすること、遺伝子の転写誘導には、他のcAMP応答性の遺伝子において保存されている30bpのcAMP応答要素（CRE）が必要であることが記載されている（要約1行〜13行）。また、生体でのcAMPによる転写活性化に関連した核因子の結合を決定するために、一部を欠失したソマトスタチンプロモーターとCATの融合遺伝子を使用して、cAMPに対する転写応答を検討したことが記載されている（第175頁右欄下3行〜第176頁左欄5行）。
　
（14）引用例II （Mol.Cell.Biol.(1988) Vol.8(7) p.2787-2796） 
　引用例IIには、ラット褐色細胞腫PC12細胞において、ガン原遺伝子c-fosの転写は、蛋白質成長因子、フォルボールエステル、カルシウムイオン流量などの様々な刺激により誘導されることが記載されている（要約1行〜2行）。また、c-fos誘導に必要なプロモーター上流制御配列を決定するため、ヒトc-fosの種々の５’欠失変異体によりPC12細胞を形質転換し、種々の作用物質を作用させて誘導されたc-fos　mRNAを分析したところ（要約2行〜4行、第2788頁右欄下５行〜第2789頁左欄6行）、pF4、pF222、pF222DSEを用いた場合、カルシウム第２メッセンジャー経路を活性化するKCl、BaCl2、カルシウムイオノフォアA23187の３つすべての刺激に対して、ヒトc-fos　mRNAが誘導されたことが記載されており（第2789頁右欄下18行〜下6行、図１B）、カルシウム活性化によるc-fos転写は、転写開始位置の60bp上流に位置するDNA要素に依存することが記載されている（要約）。
　
２．当審の判断
　上記記載事項によると、引用例１には、種々のＧ蛋白結合受容体を細胞表面に発現させたアフリカツメガエルの組換卵母細胞又は組換哺乳類細胞において、アゴニストが該受容体に結合することにより、cAMPの上昇、Caイオンの上昇がシグナルとして検出できることが記載されており、さらに、受容体のサブタイプに特異性の高いリガンドのスクリーニングを目的として、受容体を発現する形質転換細胞が使用できることが記載されている。
　また、引用例２には、Ｇ蛋白結合受容体であるムスカリンアセチルコリン受容体の種々サブタイプを発現させた組換ヒト胎児腎臓細胞に、アゴニストであるカルバコールを作用させると、PI加水分解とアデニレートサイクラーゼ系を介して、細胞内のcAMPの上昇やCaイオンの移動が起きることが記載されている。
　
　　本願発明１と引用例１、２に記載された発明を対比する。
　
　両者は、Ｇ蛋白結合受容体を発現する組換真核細胞に化合物を作用させて、化合物とＧ蛋白結合受容体との相互作用により生成される細胞内信号トランスダクションを検出する点で一致するが、下記（１）〜（３）の点で相違する。
　
（１）本願発明１は、細胞内信号トランスダクションを検出することによって、複数の化合物についてスクリーニングを行い、その中からＧ蛋白結合受容体媒介性活性を調節する化合物を同定するものであるのに対し、引用例１、２に記載された発明では、そのようなことが記載されていない点
　
（２）その細胞内信号トランスダクションの検出を、本願発明１では、
（ａ）転写制御要素であって、前記化合物とＧ蛋白結合受容体との相互作用により生成された細胞内信号に応答性のものから選択される転写制御要素、および
（ｂ）レポーター遺伝子であって、検出可能な転写または翻訳産物をコードし且つ前記転写制御要素と作動可能に連携するレポーター遺伝子を含む
レポーター遺伝子構築物を用いて行い、レポーター遺伝子の転写量をまたは発現するレポーター遺伝子産物量により行うものであるのに対し、引用例１、２に記載された発明は、cAMPの上昇及びCaイオンの上昇を測定することによる点、
　
（３）本願発明１では、Ｇ蛋白結合受容体媒介性活性を調節する化合物を同定する方法として、化合物の存在下での組換真核細胞におけるレポーター遺伝子の転写量または発現するレポーター遺伝子産物量を、該化合物の不存在下での転写量または発現産物量と比較し、複数の化合物の中から該化合物の存在下で、前記組換細胞内におけるレポーター遺伝子の転写量または発現するレポーター遺伝子産物量を、該化合物の不存在下でのレポーター遺伝子転写量またはレポーター遺伝子産物量に対して変化させ、それによりＧ蛋白結合受容体媒介性活性を調節する化合物を選択するものであるのに対し、引用例１、２に記載された発明では、そのようなことが記載されていない点
　
　
相違点（１）について
　生理活性を担った受容体のリガンドを探索することは、当該技術分野における周知の課題であった（Molecular and Cellular Mechanisms of Septic Shock(1989),p.109-128及び、J.Pharm.Biomed.Analysis(1989), Vol.7(2), p.147-154、（平成１６年１月２８日付け意見書に添付された文献２、３にそれぞれ相当））。そして、引用例１においても、受容体のサブタイプに応じた新薬の開発を目的として、リガンドをスクリーニングするためのツールとして、受容体を発現する形質転換細胞が使用できることが示唆されている。したがって、引用例１、２に記載されたＧ蛋白結合受容体を発現する組換真核細胞を使用して、引用例１、２に記載されるＧ蛋白結合受容体のシグナルである「cAMPの上昇」又は「Caイオンの上昇」を指標にして、複数の化合物の中から「Ｇ蛋白結合受容体媒介性活性を調節する化合物」を、スクリーニングしようとすることは、当業者にとって、自然な発想である。
　
相違点（２）及び（３）について
（Ａ）cAMPを指標とする場合
　引用例４〜８に記載されるように、c-fos遺伝子またはソマトスタチン遺伝子のプロモーター上流にあるcAMP 応答要素（CRE）を含む遺伝子領域が、細胞内cAMPレベルの上昇シグナルに応答して下流のc-fos遺伝子やソマトスタチン遺伝子の発現を誘導させるものであり、この誘導性を利用して、上記遺伝子領域の下流にクロラムフェニコール・アセチルトランスフェラーゼ（CAT）などのレポーター遺伝子を配した構築物、すなわち、「転写制御要素」と「検出可能な転写または翻訳産物をコードし且つ転写制御要素と作動可能に連携するレポーター遺伝子」を含む「レポーター遺伝子構築物」を使用して、cAMPレベル上昇に応答して誘導されたレポーター遺伝子産物量又は転写量を検出する系は、本願優先日前における周知技術である。
　
　そして、引用例イ〜ホに記載されるように、本願優先日前、各種受容体とリガンドとの結合を迅速・簡便に検出できる系として、引用例ハ、ニのような細胞内受容体、引用例ホのイオンチャンネルのみならず、引用例イ、ロのチロシンキナーゼ型受容体においても、リガンドの作用によりシグナルが生じたことを確認する手段として、そのシグナル自体を確認することに代えて、シグナルに応答して活性化する転写制御要素とその制御下のレポーター遺伝子からなる「レポーター遺伝子構築物」を用いて、レポーター遺伝子の発現を確認することによって検出することが、既によく行われていることであったといえる。してみれば、引用例１、２のＧ蛋白結合受容体においても、リガンドとの結合により生じるシグナルの１つである「cAMPの上昇」を検出しようとしたときに、迅速・簡便に検出できるように、「レポーター遺伝子構築物」を使用した検出系の採用を試みることは、当業者であれば容易に想起することである。
　
　ところで、引用例４〜８のcAMP応答検出系は、cAMP上昇というシグナルが、c-fos又はソマトスタチン制御要素内にあるcAMP応答要素「CRE」を介して、c-fosプロモーター又はソマトスタチンプロモーターを活性化するという誘導性を利用したものであり、とりわけ、引用例イ、ロの、リガンドと受容体の結合によるシグナルが、c-fos制御要素内に存在する応答要素「SRE」を介してc-fosプロモーターを活性化するという誘導性を利用した検出系とは、応答要素の配列自体は異なるものではあるが、c-fos制御要素内の応答要素を介したc-fosプロモーターの活性化という同様の機構によるものである。
　したがって、引用例１、２の受容体において、cAMP上昇のシグナルを「レポーター遺伝子構築物」を用いて検出しようとしたときに、当業者であれば、引用例イ、ロの、c-fos制御要素内の応答要素を介してc-fosプロモーターを活性化するという同様の機構による検出系として周知の引用例４〜８のcAMP応答検出系を採用してみようとするものである。
　
　その際、神経細胞において、種々の神経伝達物質は、内在性の受容体を介して、cAMP依存経路により遺伝子発現パターンを変化させており、cAMPはcAMP応答性遺伝子において保存されているCRE配列を介して、ソマトスタチン遺伝子の転写を制御しているという引用例４及び引用例８の記載に接した当業者であれば、受容体を発現する形質転換細胞においても、リガンドの結合により生じる「cAMPの上昇」というシグナルに応答して、CRE配列を有するc-fosプロモーター又はソマトスタチンプロモーターの活性化が起こることを期待するものである。してみれば、引用例１，２のＧ蛋白結合受容体を発現する組換真核細胞におけるcAMP上昇シグナルの検出に、cAMP上昇シグナル検出系として周知である引用例４〜８に記載の「レポーター遺伝子構築物」による検出系を採用して、「化合物の存在下での組換真核細胞におけるレポーター遺伝子の転写量または発現するレポーター遺伝子産物量を、該化合物の不存在下での転写量または発現産物量と比較」することにより、「前記組換細胞内におけるレポーター遺伝子の転写量または発現するレポーター遺伝子産物量を、該化合物の不存在下でのレポーター遺伝子転写量またはレポーター遺伝子産物量に対して変化させ、それによりＧ蛋白結合受容体媒介性活性を調節する化合物を同定」することは、当業者が容易に想到し得ることである。
　
（Ｂ）Caイオンを指標とする場合
　また、引用例１、２には、Ｇ蛋白結合受容体がアゴニストとの結合により生じるシグナルとして、「cAMPの上昇」の他に、「Caイオンの上昇」が記載されている。リガンドスクリーニングの指標とするシグナルとして、「Caイオンの上昇」を検出しようとした場合も、上記(A)と同様に、引用例イ〜ホの記載を考慮して、「レポーター遺伝子構築物」を使用した検出系の採用を試みることは、当業者が容易に想起することである。
　
　ところで、引用例IIのCaイオン応答検出系は、Caイオン上昇というシグナルが、c-fos制御要素内にあるcAMP応答要素を介して、c-fosプロモーターを活性化するという誘導性を利用したものであり、とりわけ、引用例イ、ロの、リガンドと受容体の結合によるシグナルが、c-fos制御要素内に存在する応答要素「SRE」を介してc-fosプロモーターを活性化するという誘導性を利用した検出系とは、応答要素の配列自体は異なるものではあるが、c-fos制御要素内の応答要素を介したc-fosプロモーターの活性化という同様の機構によるものである。
　したがって、引用例１、２の受容体において、Caイオン上昇のシグナルを「レポーター遺伝子構築物」を用いて検出しようとしたときに、当業者であれば、引用例イ、ロの、c-fos制御要素内の応答要素を介してc-fosプロモーターを活性化するという同様の機構による検出系である引用例IIのCaイオン応答検出系を採用してみようとするものである。
　
　その際、内在性の受容体を有する新皮質星状細胞にリガンドを作用させると、細胞内Caイオンが上昇し、それに応答して、c-fos遺伝子が発現するという引用例３の記載に接した当業者であれば、受容体を発現する形質転換細胞においても、リガンドの結合により生じる「Caイオンの上昇」というシグナルに応答して、c-fosプロモーターの活性化が起こることを期待するものである。してみれば、引用例１、２のG蛋白結合受容体を発現する組換真核細胞におけるCaイオン上昇シグナルの検出に、Caイオン上昇応答検出系として知られている引用例IIに記載の「レポーター遺伝子構築物」による検出系を採用して、「化合物の存在下での組換真核細胞におけるレポーター遺伝子の転写量または発現するレポーター遺伝子産物量を、該化合物の不存在下での転写量または発現産物量と比較」することにより、「前記組換細胞内におけるレポーター遺伝子の転写量または発現するレポーター遺伝子産物量を、該化合物の不存在下でのレポーター遺伝子転写量またはレポーター遺伝子産物量に対して変化させ、それによりＧ蛋白結合受容体媒介性活性を調節する化合物を同定する」ことは、当業者が容易に想到し得ることである。
　
　そして、本願明細書の発明の詳細な説明を見ても、本願発明１が、これらの文献から当業者に予測される程度を超えて優れた効果を奏しているとは認められない。
　
　
　なお、請求人は、平成１６年１月２８日付け意見書において、下記の（１）〜（５）の点を主張している。
　
（１）動機付けに関して
　本願発明は、従来の２段階アッセイに代表される煩雑な方法を経ずとも、生化学的な活性を示し得るリガンドを極めて迅速かつ簡便にスクリーニングする方法を提供するという新規な課題に取り組み、その解決手段として、特定の転写制御要素とレポーター遺伝子を含む遺伝子構築物を結合させることを着想し、発明として完成したものである。引用例１、２は、Ｇ蛋白結合受容体のシグナルの従来型の測定が記載されており、シグナルの結果としての遺伝子転写には言及がないから、レポーター遺伝子の使用と結びつける示唆がない。引用例３は、Ｇ蛋白結合受容体とTIS遺伝子の関係を漠然と教示するが、医薬スクリーニングに関するものではなく、レポーター遺伝子と結びつける示唆はない。引用例４〜８、９、I、IIは、レポーター遺伝子について言及しているが、その用途は、遺伝子プロモーター、制御要素のDNAを検討することであるから、医薬スクリーニングと結びつける示唆はない。引用例イ〜ホは、これらの文献はいずれもＧ蛋白結合受容体に関係しないものであって、引用例イ〜ホとＧ蛋白結合受容体の医薬スクリーニングとを結びつける示唆がない。
　
（２）受容体依存性の生理的レベルのシグナルにおいて、「レポーター遺伝子構築物」が作動するか否か
　引用例４〜８、引用例Ｉ、IIにおけるシグナルは、受容体非依存性である。レポーター遺伝子構築物が、第２のメッセンジャー（例えばｃAMP）の生理学的レベルに関する組換え受容体を介在した変化に応答し得ることは実証も示唆もされていない。引用例１、２における生理的レベルでのシグナルにおいて使用できるかわからない。
　
（３）ｃ−ｆｏｓの複雑性のこと
　引用例３、５には、ｃＡＭＰとは別の因子が、違う経路でc-fos遺伝子を活性化することが記載されており、c-fos遺伝子の複雑性を記載した技術文献に触れた当業者は、これを本願発明のアッセイにおいて用いることには否定的だったであろう。
　
（４）引用例３の否定的な記載
　引用例３には、c-fosが「カルバコール単独の存在下で弱い誘導」しか示さないことが記載されている。これは、G蛋白結合受容体において、c-fos遺伝子またはそのプロモーターを使用することの動機付けに否定的な記載である。
　
（５）引用例６の否定的な記載
　引用例６には、CRE配列を含むレポーター遺伝子に関するが、「AキナーゼがcAMPのレベルを上昇することなくcAMP応答性遺伝子の発現を誘導するのに十分である。」と記載されており、c-fos遺伝子またはそのプロモーターを使用することの動機付けに否定的な記載である。
　
主張（１）について
　これらの文献を結びつける動機付けに関しては、上記III.2.相違点（１）及び（２）で述べたとおりである。
　
主張（２）について
（Ａ）cAMPを指標とする場合
　引用例４〜８の記載では、レポーター遺伝子構築物からなる検出系は、cAMPの上昇は、アデニルサイクラーゼ活性剤であるフォルスコリンを添加することによるものであり、たしかに、受容体とリガンドとの結合による生じる生理的なcAMP上昇においても、引用例４〜８の検出系が機能するかどうかという問題は、当業者であれば認識するものであり、この問題が、引用例４〜８の検出系を採用する動機付けの阻害要因になるかどうかを以下に検討する。
　引用例２には、アゴニストにより形質転換により発現した受容体にアゴニストを作用させると、フォルスコリン刺激によるcAMPの上昇レベルを超えた量のcAMP上昇が見られたことが記載されており、受容体により生じる生理学的な反応においても、十分な量のcAMPが上昇することが記載されている。したがって、フォルスコリン刺激により産生されるcAMPで誘導されることが知られているc-fos-レポーター検出系は、受容体により生じた生理学的レベルでのcAMPの上昇の検出にも使用できるであろうことは、当業者であれば、十分期待することである。
　
　また、引用例４、８には、神経細胞において、リガンドが内在性の受容体に結合したことにより生じるcAMPの生理学的なレベルでの上昇において、CRE配列を有するソマトスタチン転写制御要素が活性化されることが記載されている。さらに、引用例イ〜ホも、受容体により生じた生理的レベルでのシグナルの検出をレポーター遺伝子構築物による検出系を使用して行うものである。
  このように、受容体とリガンドの結合を、それにより生じる生理学的なレベルでのシグナルに応答して発現するレポーター遺伝子構築物により検出することは、既によく行われている技術であり（引用例イ〜ホ）、受容体により生理的に生じるシグナルがcAMPの場合も、それに応答して、CREを通じて遺伝子が誘導されることは知られているのであるから、受容体を発現する形質転換細胞においても、受容体へのリガンドの結合により生じる生理学的反応である「cAMPの上昇」というシグナルに応答して、CRE配列を有するc-fosプロモーター又はソマトスタチンプロモーターの活性化が起こることを期待して、cAMP上昇シグナル検出系として周知である引用例４〜８に記載の「レポーター遺伝子構築物」による検出系を採用しようとするものである。
　
（Ｂ）Caイオンを指標とする場合
　引用例３には、内在性の受容体を有する新皮質星状細胞において、リガンドが内在性の受容体に結合したことにより生じるCaイオンの生理学的なレベルでの上昇において、c-fos転写制御要素が活性されることが記載されている。さらに、引用例イ〜ホも、受容体により生じた生理的レベルでのシグナルの検出をレポーター遺伝子構築物による検出系を使用して行うものである。
  このように、受容体とリガンドの結合を、それにより生じる生理学的なレベルでのシグナルに応答して発現するレポーター遺伝子構築物により検出することは、既によく行われている技術であり（引用例イ〜ホ）、受容体により生理的に生じるシグナルがCaイオンの場合も、それに応答して、遺伝子が誘導されることは知られているのであるから、受容体を発現する形質転換細胞においても、受容体へのリガンドの結合により生じる生理学的反応である「Caイオンの上昇」というシグナルに応答して、c-fosプロモーターの活性化が起こることを期待して、引用例IIに記載されるような、Caイオン上昇に応答したc-fos転写制御要素とその制御下のレポーター遺伝子を含む「レポーター遺伝子構築物」による検出系を採用してみようとするものである。
　
主張（３）について
　本願優先日前において、c-fos転写制御要素は、少なくともcAMPの上昇に応答して、遺伝子転写を誘導することは、周知の事項であるから（引用例３、５）、当業者であれば、cAMPの上昇を「レポーター遺伝子構築物」による検出系を使用して検出するの転写制御要素として、c-fos転写制御要素を採用することは、容易に想起することである。
　本願優先日当時、c-fosに関しては、その制御機構の研究が進んでいて、様々な因子により活性化されることも既に知られており、c-fosの制御要素がcAMP上昇シグナル以外の因子の影響を受ける可能性がないとはいえないが、このことは、受容体を介したcAMP上昇シグナルの検出を迅速・簡便に行うために、c-fos制御要素とレポーター遺伝子を用いた検出系を使用するという動機付けを阻害するほどのものでもない。また、本願発明１において、この検出系を適用するにあたって、格別の工夫を要したものでもない。
　
主張（４）について
　引用例３には、下記のとおり記載されている。
「リガンドの刺激によるイノシトールリン酸の蓄積は、イノシトールの再利用を可能にしているイノシトールI-ホスファターゼをリチウムにより阻害することによってさらに上昇し、維持される（Berridge, 1984;Titchie et al.,1987）。PIターンオーバーがカルバコールによる細胞内シグナル伝達において重要であるならば、リチウムの存在下カルバコールによる星状細胞の刺激は、TIS　mRNAの発現パターンを変えるかもしれない。星状細胞にLi+とカルバコールの両方を作用させると、誘導の開始の動態を変えることなく、ほとんどのTIS　mRNAのレベルが増加し、持続することを導く（図１）。例えば、Li+で前処理をし、そのまま存在させると、カルバコール存在下の弱い誘導と比較して、TIS28/c-fosメッセージレベルは、高く、とても維持された結果となる。」（第109頁右欄行13行〜27）　　
　この記載によると、カルバコールによる細胞内シグナル伝達におけるイノシトールリン酸の蓄積の影響を検討するため、イノシトールI-ホスファターゼ阻害剤であるリチウムを使用して、リチウムとカルバコールを併用した場合と、カルバコール単独で作用させたときの実験結果を対比したところ、カルバコール単独で作用させたときよりも、併用したときの方が遺伝子誘導量が多かったことを示すことが記載されており、この実験結果の一部分のみを請求人は指摘したものである。
　しかしながら、図１をみると、カルバコール単独であっても、c-fosは誘導されていることが示されている（左側のレーン）。また、要約7行〜14行には、「ラットの新皮質星状細胞の二次培養細胞において、ムスカリン性及びアドレナリン性のアゴニストであるカルバコールを作用させて、神経伝達物質が誘導するグリアの形態学と生理学の変化を伴った初期のゲノム応答を研究するため、c-fosを含む６つのTIS遺伝子の発現を検討した。カルバコールは、c-fosとその他のTIS　mRNAの蓄積を誘導した。」と記載されているように、引用例３の論文全体としては、ムスカリン受容体、及びアドレナリン受容体のアゴニストであるカルバコールにより、c-fos遺伝子が誘導されることが明確に示されている。
　したがって、請求人が指摘する引用例３の記載は、Ｇ蛋白結合受容体のシグナル検出に、c-fos転写制御要素系を使用することの動機付けを阻害するほどのものではない。
　
主張（５）について
　引用例６には、下記のとおり記載されている。
　「cAMPによる遺伝子転写制御は、cAMP依存プロテインキナーゼＡ（Aキナーゼ）が必要であり、Aキナーゼが転写を誘導することを説明する２つの仮説があり、１つは、Aキナーゼの制御サブユニットは、cAMPとDNAに結合し、直接遺伝子発現を刺激するというものと、もう１つは、触媒サブユニットによるリン酸化が、遺伝子転写に関連する蛋白質を活性化することにより転写が誘導されるというものであり、これらのモデルを区別するため、精製したAキナーゼ触媒サブユニットと制御サブユニットを組織培養細胞にマイクロインジェクションし、細菌性レポーター遺伝子に融合したcAMP応答ヒトプロモーター又は、内在性c-fos遺伝子の発現をモニターしたところ、触媒サブユニットはこれらの遺伝子の発現を刺激したが、制御サブユニットは発現を刺激しなかったことが記載されており、これらの結果は、Aキナーゼ触媒サブユニットは、cAMPレベルが上昇しなくても、２つのcAMP応答遺伝子の発現を誘導するのに十分であったことを示している。」（要約）
　「したがって、これらの実験は、AキナーゼのCサブユニットは、cAMPにより制御されている少なくとも２つの遺伝子の発現を誘導するのに十分であることが示され、このプロセスには、蛋白質のリン酸化が含まれていることを示した。CとRサブユニットの混合物を注入した実験では、たぶん、触媒的に不活性な４量体を形成することにより、RIIは、Cサブユニットを不活性化することが示された。さらに、RIまたはRIIは、それ自身、またはcAMPと一緒に注入した場合でも転写を誘導できないという事実は、これらの制御サブユニットは、これらの遺伝子の発現には、不可欠ではないことを示している。これらのマイクロインジェクション実験は、細胞内cAMPレベルを増加する物質の不存在下で実行されたことから、試験された遺伝子の発現には、cAMPの結合による細胞内蛋白質の活性化は、不必要であることを示している。」（86頁左欄30行〜43行）
　
　これらの記載によると、この文献は、cAMPの上昇に応答して、Aキナーゼを経由して、転写が活性化される機構を解明することを目的としており、通常、Aキナーゼは不活性な４量体となっているが、そのAキナーゼの触媒サブユニットと制御サブユニットを別途精製して、触媒活性を有する触媒サブユニットのみを細胞に注入したら、cAMPの上昇というシグナルがなくても遺伝子転写を活性化したという実験結果のところの記載部分のみを請求人は指摘したものである。すなわち、これは、通常では不活性な状態で存在しているAキナーゼの触媒サブユニットのみを精製して、触媒活性を有する状態で注入するという特別な条件における実験結果であって、通常の細胞では、Aキナーゼが活性化するためには、cAMPの上昇というシグナルが必要であることは、本願優先日前に既に、当該技術分野における技術常識として確立していることである（要約）。
　したがって、請求人が指摘する引用例６の記載は、Ｇ蛋白結合受容体のcAMP上昇シグナルの検出に、c-fosプロモーター系を使用することの動機付けを阻害するものではない。
　
IV．むすび
　以上のとおりであるから、本願発明１は、引用例１、２、４〜８、イ〜ホに記載された発明、又は、引用例１〜８、イ〜ホ、IIに記載された発明に基づいて、当業者が容易に発明をすることができたものであるので、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができないものであるから、その余の本願発明について検討するまでもなく、本特許出願は拒絶すべきものである。
　
　よって、結論のとおり審決する。