【手続補正書】
【提出日】平成24年2月21日(2012.2.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の成分：
(ａ)精製された翻訳因子、及び
(ｂ)(ｉ)非天然アミノ酸又はアミノ酸アナログを結合し、且つ、(ii)トリヌクレオチドセンスコドンを認識する、少なくとも２種の伸長体ｔＲＮＡ種
を含む、少なくとも２種の活性な野生型伸長体アミノアシルｔＲＮＡのない、ペプチドミメティック産物を生成させるための細胞を含まない再構成翻訳系において、
該細胞を含まない翻訳系が、該野生型伸長体アミノアシルｔＲＮＡ種を合成する能力を欠いており、
該非天然アミノ酸又はアミノ酸アナログを結合した該伸長体ｔＲＮＡ種は、該野生型伸長体アミノアシルｔＲＮＡ種の代わりに使用されるものであり、
該細胞を含まない翻訳系が、外因的に添加されたｍＲＮＡ種を該トリヌクレオチドセンスコドンのそれぞれで高選択的な取り込みでもって翻訳してペプチドミメティック産物を形成させ、及び
該ペプチドミメティック産物が該非天然アミノ酸又はアミノ酸アナログを含むこと
を特徴とする、ペプチドミメティック産物を生成させるための細胞を含まない再構成翻訳系。
【請求項２】
翻訳系が翻訳因子ＥＦ−Ｐ、Ｗ、Ｗ２及びレスキューを含まない、ペプチドミメティック産物を生成させるための請求項１に記載の翻訳系。
【請求項３】
翻訳系がＥＦ−Ｐ、Ｗ、Ｗ２及びレスキューよりなる群から選択される翻訳因子を含まない、ペプチドミメティック産物を生成させるための請求項１に記載の翻訳系。
【請求項４】
アミノ酸アナログがβ−シアノアラニン、カナバニン、ジエンコル酸、ノルロイシン、３−ホスホセリン、ホモセリン、ジヒドロキシフェニルアラニン、５−ヒドロキシトリプトファン、１−メチルヒスチジン、３−メチルヒスチジン、アリルグリシン(又はそのアルキン対応物)、Ｏ−メチルセリン、ビオチニルリシン、ビオチニルシステイン(又はその他のビオチン標識アミノ酸)、シクロヘキシルアラニン、ホモグルタメート、Ｄ−アラニン(又はその他のＤ−アミノ酸)、Ｎ−メチルグリシン(又はその他のＮ−メチルアミノ酸)及びε−Ｎ−メチルリシンよりなる群から選択される請求項１に記載の翻訳系。
【請求項５】
異なるペプチドミメティック産物をコードする少なくとも２種の外因的に添加されたｍＲＮＡ種をさらに含む請求項１に記載の翻訳系。
【請求項６】
非天然アミノ酸又はアミノ酸アナログを結合した４種以上のｔＲＮＡ種を含む請求項５に記載の翻訳系。
【請求項７】
翻訳因子が細菌の翻訳因子である請求項１に記載の翻訳系。
【請求項８】
非天然アミノ酸又はアミノ酸アナログを結合した４種以上のｔＲＮＡ種を含む請求項１に記載の翻訳系。
【請求項９】
それぞれのコドンでの高選択的な取り込みが少なくとも９０％の選択的な取り込みを含む請求項１に記載の翻訳系。
【請求項１０】
それぞれのコドンでの高選択的な取り込みが少なくとも９５％の選択的な取り込みを含む請求項１に記載の翻訳系。
【請求項１１】
それぞれのコドンでの高選択的な取り込みが少なくとも９８％の選択的な取り込みを含む請求項１に記載の翻訳系。
【請求項１２】
ペプチドミメティック産物が少なくとも３個の非天然アミノ酸又はアミノ酸アナログを含む、請求項１に記載の翻訳系。
【請求項１３】
アミノアシルｔＲＮＡ種が末端ＣＡジヌクレオチドを欠失したｔＲＮＡから合成された請求項１に記載の翻訳系。
【請求項１４】
アミノアシルｔＲＮＡ種が試験管内で合成されたｔＲＮＡ種から合成された請求項１に記載の翻訳系。
【請求項１５】
ペプチドミメティック産物が非天然型骨格を有する請求項１に記載の翻訳系。
【請求項１６】
非天然アミノ酸又はアミノ酸アナログが天然アミノアシルｔＲＮＡの化学修飾によって合成された請求項１に記載の翻訳系。
【請求項１７】
ペプチドミメティック産物の生成方法であって、
(ａ)請求項１に記載の翻訳系とペプチドミメティック産物をコードする１種以上の外因性ｍＲＮＡ種とを接触させ、及び
(ｂ)該外因性ｍＲＮＡ種を翻訳させるのに十分な時間を与え、それによってペプチドミメティック産物を生成させること
を含む、ペプチドミメティック産物の生成方法。
【請求項１８】
前記方法を少なくとも１００個の異なるｍＲＮＡ種のライブラリーについて実施する請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
ペプチドミメティック産物を触媒活性又は結合活性に基づいて翻訳系から確認し又は単離する請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
ｍＲＮＡ種を翻訳系で試験管内転写によって生成させる請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
ペプチドミメティック産物を、該産物をコードする外因性ｍＲＮＡの共有結合型付加物として形成させる、請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
翻訳系を異なる外因性ｍＲＮＡ種のライブラリーと接触させて少なくとも１０3個の異なる配列のペプチドミメティック産物の多様な集団を生成させる請求項１７に記載の方法。
【請求項２３】
少なくとも１０8個の異なる配列を生じさせる請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
翻訳系と少なくとも２種の外因性ｍＲＮＡ種とを接触させることを含む請求項１７に記載の方法。
【請求項２５】
ペプチドミメティック産物を確認する、それを単離する又はその両方を行う、請求項１７に記載の方法。
【請求項２６】
外因的に添加されたｍＲＮＡ種を翻訳してペプチドミメティック産物を形成させる、精製された翻訳因子及びｔＲＮＡ種を含む細胞を含まない翻訳系において、該系が、
(ａ)少なくとも２種の活性な野生型伸長体アミノアシルｔＲＮＡ種を欠失し且つ該野生型アミノアシルｔＲＮＡ種を合成する能力を欠いており、しかも
(ｂ)非天然アミノ酸種又はアミノ酸アナログを結合した少なくとも２種の外因性伸長体アミノアシルｔＲＮＡ種であって該野生型伸長体アミノアシルｔＲＮＡ種の代わりに使用されるものを含む、
細胞を含まない翻訳系。
【請求項２７】
翻訳因子が細菌の翻訳因子である請求項２６に記載の翻訳系。
【請求項２８】
複数の異なるｍＲＮＡ種を含む請求項２６に記載の翻訳系。
【請求項２９】
ペプチドミメティック産物が５種の非天然アミノ酸又はアミノ酸アナログを含む請求項２８に記載の翻訳系。
【請求項３０】
前記外因性伸長体アミノアシルｔＲＮＡ種が６１種のセンスコドンのうちの一つに特異的である、請求項２６に記載の翻訳系。
【請求項３１】
前記外因性伸長体アミノアシルｔＲＮＡ種が３種の終止コドンのうちの一つに特異的である請求項２６に記載の翻訳系。
【請求項３２】
翻訳系が、外因的に添加されたｍＲＮＡ種をそれぞれのコドンで高選択的な取り込みでもって翻訳してペプチドミメティック産物を形成させる、請求項２６に記載の細胞を含まない翻訳系。
【請求項３３】
ペプチドミメティック産物の生成方法であって、
(ａ)請求項２６に記載の翻訳系とペプチドミメティック産物をコードする１種以上の外因性ｍＲＮＡ種とを接触させ、及び
(ｂ)該外因性ｍＲＮＡ種を翻訳させるのに十分な時間を与え、それによってペプチドミメティック産物を生成させること
を含む、ペプチドミメティック産物の生成方法。
【請求項３４】
翻訳系と少なくとも２種の外因性ｍＲＮＡ種とを接触させることを含む請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
ペプチドミメティック産物を確認する、それを単離する又はその両方を行う、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
外因性ｍＲＮＡ種を翻訳系で試験管内転写によって生成させる請求項３３に記載の方法。
【請求項３７】
外因的に添加されたｍＲＮＡを翻訳してペプチドミメティック産物を形成させる、精製された翻訳因子及びｔＲＮＡ種を含む、細胞を含まない翻訳系において、該系が、
(ａ)１種以上の活性な野生型アミノアシルｔＲＮＡ種を欠失し且つ該野生型アミノアシルｔＲＮＡ種を合成する能力を欠いており、
(ｂ)非天然アミノ酸種又はアミノ酸アナログを結合した少なくとも１種の外因性アミノアシルｔＲＮＡ種であって該活性な野生型アミノアシルｔＲＮＡ種の代わりに使用されるものを含み、及び
(ｃ)複数のペプチドミメティック産物をコードする複数の異なるｍＲＮＡ種を含む、
細胞を含まない翻訳系。
【請求項３８】
外因的に添加されたｍＲＮＡを翻訳してペプチドミメティック産物を形成させるためのキットにおいて、該キットが
(ａ)少なくとも２種の活性な野生型伸長体アミノアシルｔＲＮＡを欠失し、且つ、該野生型伸長体アミノアシルｔＲＮＡ種を合成する能力を欠いている、細胞を含まない再構成翻訳系であって、外因的に添加されたｍＲＮＡ種をそれぞれのコドンで高選択的な取り込みでもって翻訳してペプチドミメティック産物を形成させる、精製された翻訳因子及び該野生型伸長体アミノアシルｔＲＮＡ種の代わりに使用される非天然アミノ酸又はアミノ酸アナログを結合した少なくとも２種の合成伸長体ｔＲＮＡ種を含むものと、
(ｂ)外因的に添加されたｍＲＮＡ種を翻訳してペプチドミメティック産物を形成させるために該キットを使用するための、関連する説明書と
を含む、外因的に添加されたｍＲＮＡを翻訳してペプチドミメティック産物を形成させるためのキット。
【請求項３９】
前記キットが、外因的に添加されたｍＲＮＡ種をそれぞれのコドンで高選択的な取り込みでもって翻訳してペプチドミメティック産物を形成させる、請求項３８に記載のキット。
【請求項４０】
外因的に添加されたｍＲＮＡ種を翻訳してペプチドミメティック産物を形成させるためのキットにおいて、該キットが、
(ａ)外因的に添加されたｍＲＮＡ種を翻訳してペプチドミメティック産物を形成させる、精製された翻訳因子及びｔＲＮＡ種を含む、細胞を含まない翻訳系であって、
(ｉ)少なくとも２種の活性な野生型伸長体アミノアシルｔＲＮＡ種を欠失し且つ該野生型アミノアシルｔＲＮＡ種を合成する能力を欠いており、
(ii)非天然アミノ酸種又はアミノ酸アナログを結合し、該野生型伸長体アミノアシルｔＲＮＡ種の代わりに使用される、少なくとも２種の外因性伸長体アミノアシルｔＲＮＡ種を含む
ものと、
(ｂ)外因的に添加されたｍＲＮＡを翻訳してペプチドミメティック産物を形成させるために該キットを使用するための、関連する説明書と
を含む、外因的に添加されたｍＲＮＡ種を翻訳してペプチドミメティック産物を形成させるためのキット。