【手続補正書】
【提出日】平成24年8月21日(2012.8.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ショウガ科ショウガ属、サルノコシカケ科マツホド菌核、シソ科タチジャコウソウ属、マメ科クララ属、サトイモ科ショウブ属、ウリ科ヘチマ属、または、ユキノシタ科アジサイ属に属する植物より得られる植物抽出物を有効成分とするプロトンポンプ阻害剤。
【請求項２】
ショウガ科ショウガ属ショウガ、サルノコシカケ科マツホド菌核ブクリョウ、シソ科タチジャコウソウ属タイム、マメ科クララ属クジン、サトイモ科ショウブ属ショウブ、ウリ科ヘチマ属ヘチマ、または、ユキノシタ科アジサイ属アマチャより得られる植物抽出物を有効成分とするプロトンポンプ阻害剤。
【請求項３】
前記プロトンポンプ阻害剤が、Na＋／H＋交換輸送系に作用するプロトンポンプ阻害剤であることを特徴とする、請求項１又は２に記載のプロトンポンプ阻害剤。
【請求項４】
請求項１〜３の何れか一項に記載のプロトンポンプ阻害剤を含有することを特徴とする、皮膚外用剤。
【請求項５】
前記プロトンポンプ阻害剤が、以下の工程を有するスクリーニング方法によりプロトンポンプ阻害剤であると鑑別されたプロトンポンプ阻害剤を含有することを特徴とする、請求項４に記載の皮膚外用剤。
（工程１）評価物質の存在下におけるメラニン産生量を測定する。
（工程２）工程１においてメラニン産生抑制作用を有する評価物質に付いて、チロシナーゼへの直接阻害作用を測定する。チロシナーゼへの直接阻害作用を有した評価物質は、チロシナーゼ直接阻害剤に分類する。
（工程３）工程１においてメラニン産生抑制作用を有し、工程２においてチロシナーゼへの直接阻害作用を有しない評価物質に付いて、チロシナーゼファミリータンパク減少作用の有無を測定する。チロシナーゼファミリータンパク減少作用を有する評価物質は、チロシナーゼファミリータンパク減少剤に分類する。
（工程４）工程１においてメラニン産生抑制作用を有し、工程２においてチロシナーゼへの直接阻害作用を有さず、工程３においてチロシナーゼファミリータンパク減少作用を有さない評価物質に付いてプロトンポンプ阻害作用を調べ、プロトンポンプ阻害作用を有する評価物質は、プロトンポンプ阻害剤に分類する。
【請求項６】
美白用の化粧料（但し、医薬部外品を含む）であることを特徴とする、請求項４又は５に記載の皮膚外用剤。
【請求項７】
請求項５の工程１〜４を経て鑑別されるプロトンポンプ阻害剤の鑑別方法によりプロトンポンプ阻害剤と鑑別された成分を含有することを特徴とする、色素異常疾患に対する治療及び／又は予防用の皮膚外用剤。
【請求項８】
更にチロシナーゼ阻害作用を有する物質及び／又はチロシナーゼファミリータンパク減少作用を有する物質を、プロトンポンプ阻害作用を有する物質と共に含有することを特徴とする、請求項７に記載の色素異常疾患に対する治療及び／又は予防用の皮膚外用剤。
【請求項９】
チロシナーゼ阻害作用を有する物質及び／又はチロシナーゼファミリータンパク減少作用を有する物質を含有する皮膚外用剤において、プロトンポンプ阻害剤を含有させることを特徴とする、色素異常疾患に対する予防又は治療用の皮膚外用剤の設計方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
この様な状況に鑑みて、本発明者等は、新規のプロトンポンプ阻害剤を求めて、鋭意努力・研究を重ねた結果、シソ科タチジャコウソウ属、マメ科クララ属、ショウガ科ショウガ属、サトイモ科ショウブ属、ウリ科ヘチマ属、ユキノシタ科アジサイ属、または、サルノコシカケ科マツホド菌核に属する植物より得られる抽出物が、優れたプロトンポンプ阻害作用を有することを見出し、発明を完成させるに至った。本発明は、以下に示す通りである。
＜１＞ショウガ科ショウガ属、サルノコシカケ科マツホド菌核、シソ科タチジャコウソウ属、マメ科クララ属、サトイモ科ショウブ属、ウリ科ヘチマ属、または、ユキノシタ科アジサイ属に属する植物より得られる植物抽出物を有効成分とするプロトンポンプ阻害剤。＜２＞ショウガ科ショウガ属ショウガ、サルノコシカケ科マツホド菌核ブクリョウ、シソ科タチジャコウソウ属タイム、マメ科クララ属クジン、サトイモ科ショウブ属ショウブ、ウリ科ヘチマ属ヘチマ、または、ユキノシタ科アジサイ属アマチャより得られる植物抽出物を有効成分とするプロトンポンプ阻害剤。
＜３＞前記プロトンポンプ阻害剤が、Na＋／H＋交換輸送系に作用するプロトンポンプ阻害剤であることを特徴とする、＜１＞又は＜２＞に記載のプロトンポンプ阻害剤。
＜４＞前記＜１＞〜＜３＞の何れかに記載のプロトンポンプ阻害剤を含有することを特徴とする、皮膚外用剤。
＜５＞前記プロトンポンプ阻害剤が、以下の工程を有するスクリーニング方法によりプロトンポンプ阻害剤であると鑑別されたプロトンポンプ阻害剤を含有することを特徴とする、＜４＞に記載の皮膚外用剤。
（工程１）評価物質の存在下におけるメラニン産生量を測定する。
（工程２）工程１においてメラニン産生抑制作用を有する評価物質に付いて、チロシナーゼへの直接阻害作用を測定する。チロシナーゼへの直接阻害作用を有した評価物質は、チロシナーゼ直接阻害剤に分類する。
（工程３）工程１においてメラニン産生抑制作用を有し、工程２においてチロシナーゼへの直接阻害作用を有しない評価物質に付いて、チロシナーゼファミリータンパク減少作用の有無を測定する。チロシナーゼファミリータンパク減少作用を有する評価物質は、チロシナーゼファミリータンパク減少剤に分類する。
（工程４）工程１においてメラニン産生抑制作用を有し、工程２においてチロシナーゼへの直接阻害作用を有さず、工程３においてチロシナーゼファミリータンパク減少作用を有
さない評価物質に付いてプロトンポンプ阻害作用を調べ、プロトンポンプ阻害作用を有する評価物質は、プロトンポンプ阻害剤に分類する。
＜６＞ 美白用の化粧料（但し、医薬部外品を含む）であることを特徴とする、＜４＞又は＜５＞に記載の皮膚外用剤。
＜７＞ ＜５＞の工程１〜４を経て鑑別されるプロトンポンプ阻害剤の鑑別方法によりプロトンポンプ阻害剤と鑑別された成分を含有することを特徴とする、色素異常疾患に対する治療及び／又は予防用の皮膚外用剤。
＜８＞ 更にチロシナーゼ阻害作用を有する物質及び／又はチロシナーゼファミリータンパク減少作用を有する物質を、プロトンポンプ阻害作用を有する物質と共に含有することを特徴とする、＜７＞に記載の色素異常疾患に対する治療及び／又は予防用の皮膚外用剤。
＜９＞ チロシナーゼ阻害作用を有する物質及び／又はチロシナーゼファミリータンパク減少作用を有する物質を含有する皮膚外用剤において、プロトンポンプ阻害剤を含有させることを特徴とする、色素異常疾患に対する予防又は治療用の皮膚外用剤の設計方法。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
＜本発明の皮膚外用剤の必須成分であるプロトンポンプ阻害剤＞
本発明の皮膚外用剤は、プロトンポンプ阻害剤を必須成分として含有することを特徴とする。本発明におけるプロトンポンプ阻害剤としては、生体内におけるプロトン濃度を調節する機能を有する生体機能分子に働きかけることにより、細胞又は細胞小器官内外等におけるプロトン濃度を調節する作用、取り分け、酸性化作用を有する物質を意味し、具体例を挙げれば、能動的なプロトン輸送を担う膜H＋−ATPaseのみならず、Na＋／K＋−ATPase等のイオンポンプと共役的に働きプロトンを受動輸送するNa＋／H＋交換輸送体に作用する物質等が好適に例示出来る。本発明のプロトンポンプ阻害剤としては、前記プロトンポンプ阻害作用を示すものであれば、特段の限定なく適応することが出来る。また、本発明のプロトンポンプ阻害剤の内、好ましいものとしては、後述する「本発明の植物抽出物を用いたメラノサイト内酸性化検出（プロトンポンプ阻害作用）検討」において、メラノサイト内を酸性化する作用（プロトンポンプ阻害作用）を示すプロトンポンプ阻害剤が好適に例示出来る。本発明のメラノサイト内における酸性化作用を有するプロトンポンプ阻害剤とは、後述するメラノサイト内酸性化検討において、蛍光顕微鏡による目視観察により、pH感受性蛍光色素の発色強度の増強が認められる物質を意味する。さらに、前記プロトンポンプ阻害剤の内、特に好ましいものとしては、１）メラニン産生抑制作用を示し、２）チロシナーゼへの直接阻害作用を示さない、３）チロシナーゼファミリータンパクの減少作用を示さないプロトンポンプ阻害剤が好適に例示出来る。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
本発明のプロトンポンプ阻害剤とは、単純な化学物質、生薬及び動植物からの抽出物を意味し、かかる成分の唯１種のみを含有することも出来るし、２種以上を組み合わせて含有させることも出来る。ここで、本発明の抽出物とは、抽出物自体、抽出物の分画、精製した分画、抽出物乃至は分画、精製物の溶媒除去物の総称を意味する。かかる成分の内、化学物質としては、オメプラゾール、ランソプラゾール、ラベプラゾール及び／又はそれらの薬理学的に許容される塩が好適に例示出来る。また、かかる成分の内、生薬及び動植物
より得られる抽出物としては、シソ科タチジャコウソウ属、マメ科クララ属、ショウガ科ショウガ属、サトイモ科ショウブ属、ウリ科ヘチマ属、ユキノシタ科アジサイ属、サルノコシカケ科マツホド菌核に属する植物より得られる抽出物などが好適例示出来、より好ましくは、シソ科タチジャコウソウ属タイム、マメ科クララ属クジン、ショウガ科ショウガ属ショウガ、サトイモ科ショウブ属ショウブ、ウリ科ヘチマ属ヘチマ、ユキノシタ科アジサイ属アマチャ、サルノコシカケ科マツホド菌核ブクリョウより得られる抽出物などが好適に例示出来る。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
かかるシソ科タチジャコウソウ属、マメ科クララ属、ショウガ科ショウガ属、サトイモ科ショウブ属、ウリ科ヘチマ属、ユキノシタ科アジサイ属、サルノコシカケ科マツホド菌核に属する植物より得られる抽出物の作製に用いる部分としては、植物体の何れの部分も使用可能であり、特に好ましくは、全草、地上部、葉、花、蕾、樹皮、木幹、根などが好適に例示出来る。前記のシソ科タチジャコウソウ属タイム、マメ科クララ属クジン、ショウガ科ショウガ属ショウガ、サトイモ科ショウブ属ショウブ、ウリ科ヘチマ属ヘチマ、ユキノシタ科アジサイ属アマチャ、サルノコシカケ科マツホド菌核ブクリョウは、日本においてその生育が認められる植物である。かかるシソ科タチジャコウソウ属タイムは、南ヨーロッパ原産の常緑の小低木であり、日本全土の亜高山〜高山帯に自生しており、食品などのスパイスとして広く使用されている。マメ科クララ属クジンは、中国原産の多年草であり、本州、四国、九州の日当たりのよい草原などに自生する。ショウガ科ショウガ属ショウガは、熱帯アジア原産の球根性の多年草であり、日本では、九州の一部と沖縄に自生し、食品などとして使用されている。根茎をショウキョウと呼び、生薬として用いられる。ショウブ科ショウブ属ショウブは、東アジアから日本全土に広く分布する常緑の多年草草木である。ウリ科ヘチマ属ヘチマは、インド原産とされ中国を経て日本に渡来したとされる植物であり、現在では、本州中部以南において栽培されている。ユキノシタ科アジサイ属アマチャは、日本原産の落葉小低木であり、本州、四国、九州において栽培されている。サルノコシカケ科マツホド菌核ブクリョウは、東アジアを原産とする菌類であり、中国、韓国、日本などにおいて自生している。本発明における前記の植物より得られる抽出物は、日本に於いて自生又は生育された植物、漢方生薬原料などとして販売される日本産のものを用い抽出物を作製することも出来るし、丸善株式会社、一丸ファルコス株式会社などの植物抽出物を扱う会社より販売されている市販の抽出物を購入し、使用することも出来る。抽出に際し、植物体、地上部又は木幹部は予め、粉砕或いは細切して抽出効率を向上させるように加工することが好ましい。抽出物は、植物体、地上部乃至はその乾燥物１質量に対して、溶媒を１〜３０質量部加え、室温であれば数日間、沸点付近の温度であれば数時間浸漬する。浸漬後は、室温まで冷却し、所望により不溶物を除去した後、溶媒を減圧濃縮するなどにより除去することが出来る。しかる後、シリカゲルやイオン交換樹脂を充填したカラムクロマトグラフィーなどで分画精製し、所望の抽出物を得ることが出来る。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
また、かかる成分は、細胞又は細胞小器官等に存在する膜成分であるプロトンポンプ（膜H＋−ATPase）、又は、イオンポンプであるNa＋／K＋−ATPaseと共役的に働くNa＋／H＋
交換輸送系などを阻害することにより、細胞又は細胞小器官等におけるプロトン輸送を阻害し、細胞又は細胞小器官内外等のプロトン濃度を調節する、取り分け、細胞又は細胞小器官内におけるプロトン濃度を高める酸性化作用に優れる。細胞又は細胞小器官内の酸性化作用は、細胞又は細胞小器官内等に存在するpH依存的な機能分子（例えば、酵素、イオンチャネル等）の生物活性又は機能を変化させる。特に、細胞又は細胞小器官内を酸性化することは、pH依存的な機能分子のひとつであるチロシナーゼ等の酵素活性を低下させ、メラニン産生を抑制することに繋がり、美白をはじめとする皮膚色素異常関連疾患に対する予防又は治療効果が期待される。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
＜試験例１：本発明における植物抽出物の製造方法＞
本発明のショウガ科ショウガ属ショウガ（ショウキョウ）より得られる植物抽出物の製造方法を示す。本抽出物は、ショウガZingiber officinale Roscoe( Zingiberaceae) の根茎をエタノールに浸漬し製造した。具体的には、ショウガ科ショウガ属ショウガ（ショウキョウ）の根茎を粗末にしたもの２００ｇに、薄めたエタノール（３７〜５０％）約６００ｍLを加え、時々かき混ぜながら可溶性成分が充分に溶けるまで放置し、布ごしし、残留物を薄めたエタノール（３７〜５０％）少量で洗い、圧搾し、浸出液及び洗液をあわせ、２日間放置し、濾過し、さらに薄めたエタノール（３７〜５０％）を加え、本抽出物全量１０００ｍLを製造した。