(57)【要約】  本発明は農業上有用な植物に、病原性糸状菌、病原性細菌又は病原性ウイルスによる病害に対する防除を付与する手段を提供することを目的とする。  本発明は、コリモナス（Collimonas）属する、病原性糸状菌、病原性細菌、又は病原性ウィルスによる病害に対する防除を行う細菌を用いた植物病害の防除方法、並びに該方法により作出された植物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
コリモナス（Collimonas）属に属し、植物体内に共生して宿主植物に病原性糸状菌、病原性細菌又は病原性ウィルスによる病害に対する耐性を付与する能力を有する細菌を、植物に人為的に感染させる工程を含む、
ことを特徴とする植物における病原性糸状菌、病原性細菌又は病原性ウィルスによる病害の防除方法。
【請求項２】
前記細菌がコリモナス（Collimonas）属新規細菌（受託番号ＮＩＴＥ  Ｐ−１１０４）である
ことを特徴とする請求項１記載の植物における病原性糸状菌、病原性細菌又は病原性ウィルスによる病害の防除方法。
【請求項３】
前記植物がイネ科又はナス科に属する植物である
ことを特徴とする請求項１又は２記載の植物における病原性糸状菌、病原性細菌又は病原性ウィルスによる病害の防除方法。
【請求項４】
コリモナス（Collimonas）属に属し、植物体内に共生して宿主植物に病原性糸状菌、病原性細菌又は病原性ウィルスによる病害に対する耐性を付与する能力を有する細菌を有効成分として含有する、
ことを特徴とする植物における病原性糸状菌、病原性細菌又は病原性ウィルスによる病害の防除剤。
【請求項５】
前記細菌がコリモナス（Collimonas）属新規細菌（受託番号ＮＩＴＥ  Ｐ−１１０４）である
ことを特徴とする請求項４記載の防除剤。
【請求項６】
前記植物がイネ科又はナス科に属する植物である
ことを特徴とする請求項４又は５記載の防除剤。
【請求項７】
植物体内に共生して宿主植物に病原性糸状菌、病原性細菌又は病原性ウィルスによる病害に対する耐性を付与する能力を有するコリモナス（Collimonas）属新規細菌（受託番号ＮＩＴＥ  Ｐ−１１０４）が人為的に感染された、
ことを特徴とする病原性糸状菌、病原性細菌又は病原性ウィルスによる病害に対する耐性を有する植物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規コリモナス（Collimonas）属細菌及び当該細菌を用いた植物病害菌の防除方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
これまでの化学農薬を中心とした病原性糸状菌、病原性細菌又は病原性ウィルスを原因とする植物病原菌の防除技術は、効率的な食糧確保に貢献してきた。ところが近年、栽培の効率性だけでなく、安心・安全といった領域を含めた無農薬、減農薬による環境保全型農業が望まれ、それに適合した植物病原菌防除技術（例えば微生物農薬）が必要とされている。【０００３】
これら植物病原菌を防除するために特殊な化学成分を有する農薬が種々検討、提案されている他、化学農薬とは異なる別のアプローチが検討されており、例えば、コリモナス属細菌を用いて植物性病原菌の増殖を抑制する研究が行われている（非特許文献１〜４）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Wieste de Boer, Johan H. J. Leveau, George A. Kowalchuk, Paulien J. A. Klein Gunnewiek, Edwin C. A. Abeln, Marian J. Figge, Klaas Sjollema, Jaap D. Janse and Johannes A. van Veen: Collimonas fungivorans gen. nov., sp. nov., a chitinolytic soil bacterium with the ability to grow on living fungal hyphae.
【非特許文献２】Francesca Mela, Kathrin Fritsche, Wietse de Boer, Johannes A van Veen, Leo H de Graaff, Marlies van den Berg and Johan HJ Leveau: Dual transcriptional profiling of a bacterial/fungal confrontation: Collimonas fungivorans versus Aspergillus niger
【非特許文献３】Faina Kamilova, Johan H. J. Leveau and Ben Lugtenberg: Collimonas fungivorans, an unpredicted in vitro but efficient in vivo biocontrol agent for the suppression of tomato foot and root rot
【非特許文献４】Sachie Hoppener-Ogawa: Ecology of mycrophagous Collimonas bacteria in soi
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
上述のようなコリモナス（Collimonas）属細菌による植物性病原菌の増殖を抑制する研究報告がなされているが、病原性糸状菌、病原性細菌又は病原性ウィルスを含むあらゆる植物性病原菌を防除するコリモナス（Collimonas）属細菌について未だ有用な報告はなされていない。【０００６】
そこで、本発明は、植物における病原性糸状菌、病原性細菌又は病原性ウィルスを防除する新規コリモナス（Collimonas）属細菌、及び当該細菌を用いた植物病害菌の防除方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
発明者らは、上記課題を解決するため、平成２３年６月９日付けで独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター（日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８）に受託番号ＮＩＴＥ  Ｐ−１１０４として寄託されているコリモナス（Collimonas）属細菌Ｄ−２５株（以下、「Ｄ−２５株」という）を用いて、植物における病原性糸状菌、病原性細菌又は病原性ウィルスを防除することが可能か検討を行った。【０００８】
その結果、植物における病原性糸状菌、病原性細菌又は病原性ウィルスを防除することができることを発見し、本発明に至った。【０００９】
すなわち、上記課題を解決するため、以下の発明を提案する。【００１０】
請求項１の発明は、
コリモナス（Collimonas）属に属し、植物体内に共生して宿主植物に病原性糸状菌、病原性細菌又は病原性ウィルスによる病害に対する耐性を付与する能力を有する細菌を、植物に人為的に感染させる工程を含む、
ことを特徴とする植物における病原性糸状菌、病原性細菌又は病原性ウィルスによる病害の防除方法である。【００１１】
請求項２の発明は、
前記細菌がコリモナス（Collimonas）属新規細菌（受託番号ＮＩＴＥ  Ｐ−１１０４）である
ことを特徴とする請求項１記載の植物における病原性糸状菌、病原性細菌又は病原性ウィルスによる病害の防除方法である。【００１２】
請求項３の発明は、
前記植物がイネ科又はナス科に属する植物である
ことを特徴とする請求項１又は２記載の植物における病原性糸状菌、病原性細菌又は病原性ウィルスによる病害の防除方法である。【００１３】
請求項４の発明は、
コリモナス（Collimonas）属に属し、植物体内に共生して宿主植物に病原性糸状菌、病原性細菌又は病原性ウィルスによる病害に対する耐性を付与する能力を有する細菌を有効成分として含有する、
ことを特徴とする植物における病原性糸状菌、病原性細菌又は病原性ウィルスによる病害の防除剤である。【００１４】
請求項５の発明は、
前記細菌がコリモナス（Collimonas）属新規細菌（受託番号ＮＩＴＥ  Ｐ−１１０４）である
ことを特徴とする請求項４記載の防除剤。【００１５】
請求項６の発明は、
前記植物がイネ科又はナス科に属する植物である
ことを特徴とする請求項４又は５記載の防除剤である。【００１６】
請求項７の発明は、
植物体内に共生して宿主植物に病原性糸状菌、病原性細菌又は病原性ウィルスによる病害に対する耐性を付与する能力を有するコリモナス（Collimonas）属新規細菌（受託番号ＮＩＴＥ  Ｐ−１１０４）が人為的に感染された、
ことを特徴とする病原性糸状菌、病原性細菌又は病原性ウィルスによる病害に対する耐性を有する植物である。
【発明の効果】
【００１７】
この発明によれば、植物における病原性糸状菌、病原性細菌又は病原性ウィルスを防除する新規コリモナス（Collimonas）属細菌、及び当該細菌を用いた植物病害菌の防除方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】Ｄ−２５株の１６ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列に基づく分子系統分類を表す図である。
【図２】Ｄ−２５株を接種したナス系植物のサンプルの、トマト萎凋病に対する抑制効果を表す図である（図中、各グラフの左側はコントロール（無接種）、中側はＤ−２５株を接種していないサンプル、右側はＤ−２５株を接種したサンプルを表す）。
【図３】Ｄ−２５株を接種したナス系植物のサンプルの、トマト萎凋病に対する抑制効果を表す写真であって、（ａ）Ｄ−２５株を接種したサンプル、（ｂ）Ｄ−２５株を接種していないサンプルを表す。
【図４】Ｄ−２５株を接種した種籾のサンプルの、イネもみ枯細菌病に対する抑制効果を表す写真であって、（ａ）健全な苗、（ｂ）Ｄ−２５株の培養上清液を使用した図、（ｃ）Ｄ−２５株の菌体懸濁液を使用した図、（ｄ）Ｄ−２５株を接種していないサンプルを表す。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
（Ｄ−２５株の菌学的性質）
本発明に係るＤ−２５株の菌学的性質は以下のとおりである。
【００２０】
（１）Ｄ−２５株の分子系統解析
Ｄ−２５株について、１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列に基づいた分子系統解析により分類同定を試みた。
【００２１】
Ｒ２Ａ培地上で生育させた菌体（細菌）からのＤＮＡの抽出は、ISOIL for Beads Beating（株式会社ニッポンジーン製）を用いて行った。培養菌体を専用の２ｍＬ容プラスチックチューブに採取し、９５０μＬのLysis Solution BBと５０μＬのLysis Solution 20Sを添加した。その後チューブを、ビードビーターを用いて激しく撹拌してから遠心分離した（１２，０００×ｇ、１分間、室温）。遠心分離後、上清６００μＬを新しいチューブに移し、４００μＬのPurifiction Solutionを添加し、十分に混合した。次に、６００μＬのクロロホルムを添加混合し、遠心分離した（１２，０００×ｇ、１５分間、室温）。遠心分離後、水槽８００μＬを新しいチューブに移し、８００μＬのPrecipitation Solutionを添加し十分に混合した後、遠心分離した（２０，０００×ｇ、１５分間、４℃）。上清を捨て、１ｍＬの７０％エタノールを添加し十分に混合した後、遠心分離した（２０，０００×ｇ、５分間、４℃）。その後上清を捨て、風乾した後、沈澱を５０μＬのＴＥ緩衝液（ｐＨ８．０）に溶解した。
【００２２】
抽出したゲノムＤＮＡをユニバーサルプライマー２７ｆと１４９２ｒ（細菌の１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子領域を標的とする）を用いてＰＣＲ増幅した（表１）。ＰＣＲは反応容量２０μＬにて、Thermal Cycler 2720 (Applied Biosystems 社)を用いて行った。ＰＣＲ酵素TaKaRa Ex Taq (TaKaRa)とそれに付属していたＰＣＲ試薬により反応溶液を調整した。反応液２０μＬあたりの組成は、減菌水１４．７μＬ，緩衝液２μＬ、ゲノムＤＮＡ１μＬ（＜１ｎｇ）、１０ｐｍｏｌ／Ｌの各プライマー０．８μＬずつ、ｄＮＴＰ溶液１．６μＬ、Ex Taq ０．１μＬ（０．０２５Ｕ）とした。なお、大腸菌ゲノムを鋳型ＤＮＡとした反応液を陽性コントロール、鋳型ＤＮＡ溶液を添加しなかった反応液を陰性コントロールとした。温度サイクリングは、９４℃−１分の初期変性後、熱変性９４℃−３０秒、アニーリング５５℃−３０秒、伸長反応７２℃−９０秒を１サイクルとして３０サイクル行った。ＰＣＲ後、反応液を５μＬ採取し、１．５％アガロースゲル電気永動で分析した。検出はアガロースゲルをエチジウムブロミドで染色し、ＵＶイルミネーター（ＵＶＰ）で行った。
【００２３】
得られたＰＣＲ断片（約１，５００ｂｐ）のシーケンシング解析を行った。シーケンシング反応にはプライマー２７ｆ、５１９ｆ、１０９９ｆ、５２０ｒ、１４９２ｒを用い（表３）、ABI Prism 3100 Genetic Analyzer (Applied Biosystems)で塩基配列を決定した。塩基配列結果はGenBankにてBLASTによる相同性検索を行った。相同性が示された配列とともにCLUSTAL Wを用いてマルチプルアラインメントを行い、MEGA4.0を用いて近隣結合法により分子系統樹を作成した。
【表１】
2014141362.tif 000002
【００２４】
Ｄ−２５株について塩基配列をもとに分類を行ったところ、コリモナス（Collimonas）属細菌の塩基配列と相同性が高いことが明らかになっている。表２にＤ−２５株の相同性検索の結果を、図１に分子系統樹を示す。
【表２】
2014141362.tif 000003
【００２５】
（２）Ｄ−２５株の生理・生化学試験
Ｄ−２５株についての生理・生化学試験の結果は表３、表４及び表５のとおりである。
【表３】
2014141362.tif 000004
【表４】
2014141362.tif 000005
【表５】
2014141362.tif 000006
【００２６】
（３）考察
Ｄ−２５株はコリモナス（Collimonas）属細菌と１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列が９９％以上一致していたこと、分子系統樹においてコリモナス（Collimonas）属の系統枝に含まれていたことから、Ｄ−２５株は本属に帰属するものと推察される。
【００２７】
次に、Ｄ−２５株は運動性を有さないグラム陰性桿菌で、Ｒ２Ａ寒天培地上で粘調性のコロニーを形成し、嫌気条件下で生育せず、グルコースを酸化せず、カタラーゼ反応及びオキシターゼ反応はともに陽性を示した（表３）。
【００２８】
また、生理・生化学試験の結果、Ｄ−２５株は硝酸塩を還元せず、インドールを産生せず、アルギニンジヒドロラーゼ活性を示さず、グルコース、L-アルビノース及びD-マンニトールなどを資化し、n-カプリン酸および酢酸フェニルなどは資化しなかった（表４）。
【００２９】
また、酵素反応の試験結果、Ｄ−２５株はアルカリホスタファーゼ、エステラーゼ（C4）及びエステラーゼ  リパーゼ（C8）などの活性を示し、バリン  アリルアミターゼやα-ガラクトシダーゼなどの活性は示さなかった（表５）。
【００３０】
これらの性状は１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列に基づく系統解析の結果から帰属が推察されたコリモナス（Collimonas）属の既知種に類似点が多く認められた。ただし、運動性を示さず（表３）、バリンアリルアミダーゼ活性を示さない点は（表５）、コリモナス（Collimonas）属の既知種の性状とは異なっていた。
【００３１】
上記菌学的性質から、Ｄ−２５株をコリモナス（Collimonas）属分類群に帰属する新規なコリモナス（Collimonas）属細菌と推定した。この菌株は、平成２３年６月９日付けで独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター（日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８）に受託番号ＮＩＴＥ  Ｐ−１１０４として寄託されている。
【００３２】
本発明の細菌の感染により、病原性糸状菌、病原性細菌又は病原性ウィルスによる病害に対する耐性が付与される植物としては、イネ科植物、アブラナ科植物、ナス科植物、キク科植物、ネギ科、又はウリ科植物が挙げられる。
【００３３】
イネ科植物としては、特にイネ、コムギ、オオムギ、ライムギ、ライコムギ、ハトムギ、ソルガム、エンバク、トウモロコシ、サトウキビ、アワ、ヒエなどの穀類が挙げられる。イネ科植物としてはさらに、シバ、バッファローグラス、バミューダグラス、ウィーピンググラス、センチピードグラス、カーペットグラス、ダリスグラス、キクユグラス、セントオーガスチングラスなどの飼料または牧草が挙げられる。
【００３４】
アブラナ科植物としては、特にアブラナ、カブ、チンゲンサイ、ノザワナ、カラシナ、タカナ、コブタカナ、水菜、コールラビー、ルッコラ、クレソン、タアサイ、カリフラワー、キャベツ、ケール、ハクサイ、コマツナ、ダイコン、ハツカダイコン、ブロッコリー、メキャベツ、ワサビ、セイヨウワサビが挙げられる。
【００３５】
ナス科植物としては、ナス、トマト、ジャガイモ、トウガラシ、ピーマン、パプリカ等が挙げられる。
【００３６】
キク科植物としては、レタス、シュンギク等が挙げられる。
【００３７】
ネギ科植物としては、タマネギ、ネギ、ニラ、ラッキョウ、ニンニク等が挙げられる。
【００３８】
ウリ科植物としては、キュウリ、メロン、スイカ、カボチャ等が挙げられる。
【００３９】
本発明はまた、本発明の細菌が人為的に感染された、病原性糸状菌、病原性細菌又は病原性ウィルスによる病害に対する耐性を有する上記植物に関する。
【００４０】
本発明により防除され得る病原性糸状菌による植物病害としては、イネいもち病（病原糸状菌：Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ  ｇｒｉｓｅａ）、イネゴマ葉枯病（病原糸状菌：Ｂｉｐｏｌａｒｉｓ  ｌｅｅｒｓｉａｅ）、イネばか苗病（病原糸状菌：Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ  ｆｕｊｉｋｕｒｏｉ）、イネ紋枯病（病原糸状菌：Ｔｈａｎａｔｅｐｈｏｒｕｓ  ｃｕｃｕｍｕｒｉｓ）、イネ黄化萎縮病菌（病原糸状菌：Ｓｓｃｌｅｒｏｐｈｔｈｏｒａ  ｍａｃｒｏｓｐｏｒａ）、イネ疑似紋枯病（病原糸状菌：Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎｉ）、コムギ麦角病（病原糸状菌：Ｃｌａｖｉｃｅｐｓ  ｐｕｒｐｕｒｅａ）、コムギ裸黒穂病（病原糸状菌：Ｕｓｔｉｌａｇｏ  ｔｒｉｔｉｃｉ）、オオムギ裸黒穂病（病原糸状菌：Ｕｓｔｉｌａｇｏ  ｎｕｄａ）、ライムギ雪腐褐色小粒菌核病（病原糸状菌：Ｔｙｐｈｕｌａ  ｉｎｃａｒｎａｔａ）、ライムギ斑点病（病原糸状菌：Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ  ｓａｔｉｖｕｓ）イネ、エンバク、コムギ、オオムギ、ライムギの立枯病（病原糸状菌：Ｇａｅｕｍａｎｎｏｍｙｃｅｓ  ｇｒａｍｉｎｉｓ）、トウモロコシすす紋病（病原糸状菌：Ｓｅｔｏｓｐｈａｅｒｉａ  ｔｕｒｃｉｃａ）、アブラナ科野菜根こぶ病（病原糸状菌：Ｐｌａｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ  ｂｒａｓｓｉｃａｅ）、アブラナ科野菜立枯病（病原糸状菌：Ｔｈａｎａｔｅｐｈｏｒｕｓ  ｃｕｃｕｍｅｒｉｓ）、ハクサイ黄化病（病原糸状菌：Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ  ａｌｂｏ−ａｔｒｕｍ）、ダイコン萎黄病（病原糸状菌：Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ  ｆ．ｓｐ．Ｒａｐｈａｎｉ）、ダイコン白さび病（病原糸状菌：Ａｌｂｕｇｏ  ｍａｃｒｏｓｐｏｒａ）、コマツナ白さび病（病原糸状菌：Ａｌｂｕｇｏ  ｍａｃｒｏｓｐｏｒａ）、キュウリつる割病（病原糸状菌：Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ  Ｓｃｈｌｅｃｈｔｅｎｄａｈｌ  ｆ.ｓｐ.  ｃｕｃｕｍｅｒｉｎｕｍ  Ｏｗｅｎ）、メロンつる割病（病原糸状菌：Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ  Ｓｃｈｌｅｃｈｔｅｎｄａｈｌ：Ｆｒｉｅｓ  ｆ.ｓｐ.  ｍｅｌｏｎｉｓ（Ｌｅａｃｈ  ｅｔ  Ｃｕｒｒｅｎｃｅ）Ｓｎｙｄｅｒ  ｅｔ  Ｈａｎｓｅｎ）、トマト萎凋病（病原糸状菌：Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ  Ｓｃｈｌｅｃｈｔｅｎｄａｈｌ：Ｆｒｉｅｓ  ｆ.ｓｐ.  ｌｙｃｏｐｅｒｉｓｉｃｉ（Ｓａｃｃａｒｄｏ）Ｓｎｙｄｅｒ  ＆  Ｈａｎｓｅｎ）キュウリうどんこ病（病原糸状菌：Ｓｐｈａｅｒｏｔｈｅｃａ  ｃｕｃｕｒｂｉｔａｅ（Ｊａｃｚｅｗｓｋｉ）Ｚｈａｏ）が挙げられる。
【００４１】
本発明により防除され得る病原性細菌による植物病害としては、イネ白葉枯れ病（病原細菌：Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｏｒｙｚａｅ  ｐｖ．ｏｒｙｚａｅ）、イネもみ枯細菌病（病原細菌：Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｇｌｕｍａｅ）ハクサイ、アブラナ科野菜に重大な被害をもたらす野菜類軟腐病（病原細菌：Ｅｒｗｉｎｉａ  ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ）、キャベツ黒腐病（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）、イネ褐条病（病原細菌：Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎｕｓ  ａｖｅｎａｅ  Ｍａｎｎｓ  １９０９）が挙げられる。
【００４２】
後述する実施例では、本発明に係る細菌が、病原性糸状菌による植物病害の防除に有効であること、並びに病原性細菌による植物病害の防除に有効であることが示されている。このことから、本発明に係る細菌は、宿主植物自身の病害を防除していることがわかる。よって、本発明に係る細菌は、病原性糸状菌又は病原性細菌による植物病害の防除に有効であるだけでなく、病原性糸状菌、病原性細菌又は病原性ウィルスによる植物病害の防除においても有効である。
【００４３】
本発明により防除され得る病原性ウィルスによる植物病害としては、イネ萎縮病  Ｒｉｃｅ  ｄｗａｒｆ  ｒｅｏｖｉｒｕｓ、イネ縞葉枯病  Ｒｉｃｅ  ｓｔｒｉｐｅ  ｔｅｎｕｉｖｉｒｕｓ、イネ黒すじ萎縮病  Ｒｉｃｅ  ｂｌａｃｈ−ｓｔｒｅａｋｅｄ  ｄｗａｒｆ  ｒｅｏｖｉｒｕｓ、イネえそモザイク病  Ｒｉｃｅ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｍｏｓａｉｃ  ｐｏｔｙｖｉｒｕｓ、イネわい化病  Ｒｉｃｅ  ｗａｉｋａ  ｖｉｒｕｓ、コムギ縞萎縮病  Ｗｈｅａｔ  ｙｅｌｌｏｗ  ｍｏｓａｉｃ  ｖｉｒｕｓ、オオムギ縞萎縮病  Ｂａｒｌｅｙ  ｙｅｌｌｏｗ  ｍｏｓａｉｃ  ｖｉｒｕｓ、オオムギ斑葉モザイクウイルス  Ｂａｒｌｅｙ  ｓｔｒｉｐｅ  ｈｏｒｄｅｉｖｉｒｕｓ、ダイコン、カブ、コマツナのウィルス病としてキュウリモザイクウイルス、カブモザイクポティウイルス、ダイコンひだ葉モザイクコモウイルス、ソラマメウイルトファバウイルスが挙げられる。
【００４４】
本発明に用いることができる細菌としては、コリモナス（Collimonas）属に属し、植物体内に共生して宿主植物に病原性糸状菌、病原性細菌又は病原性ウイルスによる病害に対する耐性を付与する能力を有する細菌であれば特に限定されない。具体例を挙げれば、コリモナス（Collimonas）属新規細菌（受託番号ＮＩＴＥ  Ｐ−１１０４）が挙げられる。
【００４５】
本発明に用いられる細菌は、振とう培養等の通常の培養法により、通常の条件下で培養されうる。培養に用いる培地としては炭素源としてグルコース、シュークロース、デンプン、デキストリンなどの糖類を、窒素源として硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム等のアンモニウム塩、硝酸塩等の無機窒素源、または、酵母エキス、コーン・スティープ・リーカー、肉エキス、小麦胚芽、ポリペプトン、サトウキビ絞り粕（バカス）、ビールカス、大豆粉、米糠、魚粉等の有機窒素源を、無機塩としてリン酸一カリ、硫酸マグネシウム、硫酸マンガン、硫酸第一鉄等の、リン、カリウム、マンガン、マグネシウム、鉄等を含む塩類を、それぞれ含有する合成または天然の培地が挙げられる。
【００４６】
本発明はまた、本発明の細菌を有効成分として含有する、植物における病原性糸状菌、病原性細菌又は病原性ウィルスによる病害の防除剤に関する。当該植物病害防除剤としては、本発明の細菌の培養液をそのまま使用することができるが、細菌の培養液を膜分離、遠心分離、濾過分離等の方法により分離した、本発明の細菌の高濃度物を用いることもできる。
【００４７】
本発明の植物病害防除剤としてはまた、本発明の細菌の培養液を乾燥させたものを使用することができる。また、本発明の細菌の培養液を活性炭粉末、珪藻土、タルク等の多孔吸着体に吸着させ乾燥させたものを使用することができる。乾燥方法は通常の方法でよく、例えば凍結乾燥、減圧乾燥でよい。これらの乾燥物は乾燥後さらにボールミル等の粉砕手段で粉砕されてもよい。
【００４８】
本発明の細菌は上述の培養液、高濃度物または乾燥物としてそれ自体単独で本発明に用いることができるが、更なる他の任意成分と組み合わせて通常の微生物製剤と同様の形態（例えば粉剤、水和剤、乳剤、液剤、フロアブル剤、塗布剤等の形態）に製剤化して、植物病害防除用組成物として提供されてもよい。組み合わせて使用することができる任意成分としては例えば固体担体、補助剤のような植物への適用が許容される材料が挙げられる。
【００４９】
本発明の細菌の植物への感染は、植物の栄養成長期に行われることが好ましい。
【００５０】
本発明の細菌またはそれを含有する組成物の植物への施用方法としては、噴霧、潅注、どぶ漬け、植物体への塗布、人為的に付けた傷への接触、シリンジによる注入、土壌への混合、水耕液への混入、砂等へ混合してサンドブラストのように吹きつける方法などが考えられる。本発明の細菌を懸濁してなる懸濁液を植物に潅注処理する場合には、懸濁液中の本発明の細菌の濃度は１０４〜１０１２ＣＦＵ／ｍｌが好ましい。
【実施例１】
【００５１】
本実施例で、Ｄ−２５株のトマト萎凋病（Ｆ.ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ  ｆ.ｓｐ.  ｌｙｃｏｐｅｒｉｓｃｉ  レース１）に対する発病抑制効果を示す。【００５２】
（実験方法）
ナス系植物のサンプルとして、Ｔｏｍａｔｏ  ＣＶ.Ｍｏｍｏｔａｒｏ及びＫｙｏｕｒｙｏｋｕＢｅｉｊｉを用いた。【００５３】
前記それぞれのサンプルの育苗ポット中の土壌に、フスマもしくは米ぬか培地で培養したＤ−２５株（１×１０８／ｐｌａｎｔ）を前記土壌に混和させ、そこに播種する。【００５４】
本葉が３枚程展開したら、病原菌汚染土壌に移し、病原菌を接種する。病原菌を接種して２〜４週間後に、各サンプルの病徴を評価する。評価方法は、発病程度別に指数（健全苗:０、発病危険域：１、軽度の発病苗:２、重度の発病苗：３、枯死苗:４）を与えて評価する。【００５５】
図２、図３にＤ−２５株のトマト萎凋病（Ｆ.ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ  ｆ.ｓｐ.  ｌｙｃｏｐｅｒｉｓｃｉ）に対する発病抑制効果を示した。【００５６】
図２で示されるように、Ｄ−２５株を接種したＴｏｍａｔｏ  ＣＶ.Ｍｏｍｏｔａｒｏは、前記指数のうち、１前後の評価が得られたので、Ｄ−２５株のトマト萎凋病（Ｆ.ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ  ｆ.ｓｐ.  ｌｙｃｏｐｅｒｉｓｃｉ）対する発病抑制効果が確認された（図２中、Ｍ−ｒ２、Ｍ−ｒ３、図３（ａ））。【００５７】
また、Ｄ−２５株を接種したＫｙｏｕｒｙｏｋｕＢｅｉｊｉは、前記指数のうち、１．５〜２．０の評価が得られたので、Ｄ−２５株のトマト萎凋病（Ｆ.ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ  ｆ.ｓｐ.  ｌｙｃｏｐｅｒｉｓｃｉ）対する発病抑制効果が確認された（図２中、ＫＢ−ｒ２、ＫＢ−ｒ３）。
【実施例２】
【００５８】
本実施例で、Ｄ−２５株のイネもみ枯細菌病菌（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｇｌｕｍａｅ  ＭＡＦＦ３０１４４１）に対する発病抑制効果を示す。【００５９】
（実験方法）
健全な種籾（品種：コシヒカリ）にＰＰＧＡ 培地で２４ 時間培養したイネもみ枯細菌病菌（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｇｌｕｍａｅ  ＭＡＦＦ３０１４４１）を蒸留水に懸濁した懸濁液（約１０８ｃｆｕ／ｍｌ）に浸漬し、流水ポンプによる減圧条件下で1１時間置いて減圧接種して汚染籾を作製した。【００６０】
健全な種籾に汚染籾を汚染率が１０％になるように混和した後、これを各処理液に２５℃で４８ 時間浸漬した。その後、蒸留水を用いて２５℃で３ 日間浸種して、次いで３２℃で１６ 時間の催芽を行った。【００６１】
水稲育苗用培土を充てんしたバランスディッシュ（４４ｍｍ×４４ｍｍ×１５ｍｍ）に催芽した種籾約５０ 粒を播種して温室内で育苗して、播種後およそ１０ 日後に発病調査を行った。【００６２】
各処理液は以下の通り作製した。ＰＰＧ液体培地でＤ−２５ 株を２日間２５℃で振とう培養した。この培養液を遠心分離して培養上清液を得た。さらに遠心分離で得た菌体に除去した上精液と同量の蒸留水を加え菌体懸濁液を得た。上清液、菌体懸濁液を処理液とした。【００６３】
発病調査は、全苗について実施して、発病程度別に指数（健全苗:０、枯死以外の発病苗:３、枯死苗:５）を与え、次式により発病度と防除価を算出した。
【数１】
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【数２】
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【００６４】
Ｄ−２５株の菌体懸濁液の処理では防除価９６．１ となり、非常に高い発病抑制効果が認められた。一方、培養上清液の処理では発病抑制効果は認められなかった（表６ および図４）。
【表６】
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【産業上の利用可能性】
【００６５】
本発明により、宿主植物に病原性糸状菌、病原性細菌又は病原性ウィルスによる病害に対する防除を行う細菌、該細菌を用いた、植物における病害の防除方法、並びに、該方法により作出された病害耐性を有する植物が提供される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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