【手続補正書】
【提出日】平成24年6月13日(2012.6.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号２のポリペプチド配列をコードするヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチド分子を含むベクターで形質転換されたＣ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍおよびＥ．ｃｏｌｉからなる群から選択される宿主細胞を培地中で培養する工程を含むリジンの生成方法であって、前記宿主細胞が前記培地中でリジンを生成する、方法。
【請求項２】
前記宿主細胞が、１つ以上の追加のリジン生合成経路酵素をコードする１つ以上の遺伝子をさらに過剰発現する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記１つ以上の追加の遺伝子が、１つ以上のプロモーター配列に直接的または間接的に操作可能に結合される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記操作可能に結合されたプロモーター配列が、前記１つ以上の遺伝子に対して異種性、内因性、またはハイブリッドの配列である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記プロモーター配列が、Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍに内因性の遺伝子の５’末端由来のプロモーター配列、Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍで複製するプラスミド由来のプロモーター配列、Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍで操作可能であるファージのゲノム由来のプロモーター配列の１つ以上である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
１つ以上のリジン生合成経路酵素をコードする前記１つ以上の遺伝子が、
（ａ）アスパラギン酸セミアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性；
（ｂ）ジヒドロジピコリン酸シンターゼ活性；
（ｃ）ジヒドロジピコリン酸レダクターゼ活性；
（ｄ）ジアミノピメリン酸デヒドロゲナーゼ活性；および
（ｅ）ジアミノピメリン酸デカルボキシラーゼ活性
をコードする遺伝子からなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項７】
前記単離ポリヌクレオチド分子が、
（ａ）配列番号４のａｓｄアミノ酸配列をコードする核酸分子；
（ｂ）配列番号６のｄａｐＡアミノ酸配列をコードする核酸分子；
（ｃ）配列番号８のｄａｐＢアミノ酸配列をコードする核酸分子：
（ｄ）配列番号１０のｄｄｈアミノ酸配列をコードする核酸分子；
（ｅ）配列番号２１の’ｌｙｓＡアミノ酸配列をコードする核酸分子；
（ｆ）配列番号１４のｌｙｓＡアミノ酸配列をコードする核酸分子；および
（ｇ）配列番号１６のＯＲＦ２アミノ酸配列をコードする核酸分子
からなる群から選択される少なくとも１つの核酸分子をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記単離ポリヌクレオチド分子が、
（ａ）配列番号４のａｓｄアミノ酸配列コードする核酸分子；
（ｂ）配列番号６のｄａｐＡアミノ酸配列をコードする核酸分子；
（ｃ）配列番号８のｄａｐＢアミノ酸配列をコードする核酸分子；および
（ｄ）配列番号１６のＯＲＦ２アミノ酸配列をコードする核酸分子
さらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記単離ポリヌクレオチド分子が：
（ａ）配列番号４のａｓｄアミノ酸配列コードする核酸分子；
（ｂ）配列番号６のｄａｐＡアミノ酸配列をコードする核酸分子；
（ｃ）配列番号８のｄａｐＢアミノ酸配列をコードする核酸分子：
（ｄ）配列番号１０のｄｄｈアミノ酸配列をコードする核酸分子；および
（ｅ）配列番号１６のＯＲＦ２アミノ酸配列をコードする核酸分子
をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記単離ポリヌクレオチド分子が、
（ａ）配列番号４のａｓｄアミノ酸配列コードする核酸分子；
（ｂ）配列番号６のｄａｐＡアミノ酸配列をコードする核酸分子；
（ｃ）配列番号８のｄａｐＢアミノ酸配列をコードする核酸分子；
（ｄ）配列番号１０のｄｄｈアミノ酸配列をコードする核酸分子；
（ｅ）配列番号２１の’ｌｙｓＡアミノ酸配列をコードする核酸分子；および
（ｆ）配列番号１６のＯＲＦ２アミノ酸配列をコードする核酸分子
をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記単離ポリヌクレオチド分子が、
（ａ）配列番号４のａｓｄアミノ酸配列コードする核酸分子；
（ｂ）配列番号６のｄａｐＡアミノ酸配列をコードする核酸分子；
（ｃ）配列番号８のｄａｐＢアミノ酸配列をコードする核酸分子；
（ｄ）配列番号１０のｄｄｈアミノ酸配列をコードする核酸分子；
（ｅ）配列番号１４のｌｙｓＡアミノ酸配列をコードする核酸分子；および
（ｆ）配列番号１６のＯＲＦ２アミノ酸配列をコードする核酸分子．
をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記単離ポリヌクレオチド分子が、ｐＫ１８４−ＫＤＡＢを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記単離ポリヌクレオチド分子が、ｐＤ１１−ＫＤＡＢＨ’Ｌを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記単離ポリヌクレオチド分子が、ｐＤ２−ＫＤＡＢＨＬを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記宿主細胞が、Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｆｌａｖｕｍ  ＮＲＲＬ−Ｂ３０２１８、Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｆｌａｖｕｍ  ＮＲＲＬ−Ｂ３０２１９、Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌａｃｔｏｆｅｒｍｅｎｔｕｍ  ＮＲＲＬ−Ｂ３０２２０、Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌａｃｔｏｆｅｒｍｅｎｔｕｍ  ＮＲＲＬ−Ｂ３０２２１、Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌａｃｔｏｆｅｒｍｅｎｔｕｍ  ＮＲＲＬ−Ｂ３０２２２、Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｆｌａｖｕｍ  ＮＲＲＬ−Ｂ３０２３４、およびＢｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌａｃｔｏｆｅｒｍｅｎｔｕｍ  ＮＲＲＬ−Ｂ３０２３５からなる群から選択されるＢｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｆｌａｖｕｍである、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記宿主細胞が、、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＤＨ５αＭＣＲＮＲＲ−Ｂ３０２２８である、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記宿主細胞が、Ｃ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ  ＮＲＲＬ−Ｂ３０２３６およびＣ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ  ＮＲＲＬ−Ｂ３０２３７からなる群から選択されるＣ．ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ株である、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記１つ以上のプロモーター配列が、配列番号１７と少なくとも９５％の配列相同性を有する、請求項３に記載の方法。
【請求項１９】
前記プロモーター配列が、配列番号１７のヌクレオチド配列を有する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記活性が、アスパラギン酸セミアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性である、請求項６に記載の方法。
【請求項２１】
前記活性が、ジヒドロジピコリン酸シンターゼ活性である、請求項６に記載の方法。
【請求項２２】
前記活性が、ジヒドロジピコリン酸レダクターゼ活性である、請求項６に記載の方法。
【請求項２３】
前記活性が、ジアミノピメリン酸デヒドロゲナーゼ活性である、請求項６に記載の方法。
【請求項２４】
前記活性が、ジアミノピメリン酸デカルボキシラーゼ活性である、請求項６に記載の方法。
【請求項２５】
前記追加のＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ種リジン経路遺伝子が、配列番号３のａｓｄポリペプチドをコードする、請求項７に記載の方法。
【請求項２６】
前記追加のＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ種リジン経路遺伝子が、配列番号６のｄａｐＡポリペプチドをコードする、請求項７に記載の方法。
【請求項２７】
前記追加のＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ種リジン経路遺伝子が、配列番号８のｄａｐＢポリペプチドをコードする、請求項７に記載の方法。
【請求項２８】
前記追加のＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ種リジン経路遺伝子が、配列番号１０のｄｄｈポリペプチドをコードする、請求項７に記載の方法。
【請求項２９】
前記追加のＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ種リジン経路遺伝子が、配列番号２１の’ｌｙｓＡポリペプチドをコードする、請求項７に記載の方法。
【請求項３０】
前記追加のＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ種リジン経路遺伝子が、配列番号１４のｌｙｓＡポリペプチドをコードする、請求項７に記載の方法。
【請求項３１】
前記追加のＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ種リジン経路遺伝子が、配列番号１６のＯＲＦ２ポリペプチドをコードする、請求項７に記載の方法。
【請求項３２】
前記アスパラギン酸セミアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性が、配列番号３のポリヌクレオチドによってコードされるａｓｄポリペプチドによって生ずる、請求項６に記載の方法。
【請求項３３】
前記ジヒドロジピコリン酸シンターゼ活性が、配列番号５のポリヌクレオチドによってコードされるｄａｐＡポリペプチドによって生ずる、請求項６に記載の方法。
【請求項３４】
前記ジヒドロジピコリン酸レダクターゼ活性が、配列番号７のポリヌクレオチドによってコードされるｄａｐＢポリペプチドによって生ずる、請求項６に記載の方法。
【請求項３５】
前記ジアミノピメリン酸デカルボキシラーゼ活性が、配列番号９のポリヌクレオチドによってコードされるｄｄｈポリペプチドによって生ずる、請求項６に記載の方法。
【請求項３６】
前記ジアミノピメリン酸デカルボキシラーゼ活性が、配列番号２０のポリヌクレオチドによってコードされる’ｌｙｓＡポリペプチドによって生ずる、請求項６に記載の方法。
【請求項３７】
前記ジアミノピメリン酸デカルボキシラーゼ活性が、配列番号１３のポリヌクレオチドによってコードされるｌｙｓＡポリペプチドによって生ずる、請求項６に記載の方法。
【請求項３８】
前記ベクター由来の配列番号２のポリペプチド配列をコードする前記配列が、前記宿主細胞の染色体に組み込まれる、請求項１に記載の方法。
【請求項３９】
前記培地からリジンを精製する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。