【事件の表示】
　特願２０００−８７５０４「抗原または抗体の検出方法」拒絶査定不服審判事件〔平成１３年１０月５日出願公開、特開２００１−２７２４０４〕について、次のとおり審決する。
【結　論】
　本件審判の請求は、成り立たない。
【理　由】
Ｉ．手続の経緯
　本願は、平成１２年３月２７日の出願であって、平成１５年１１月２８日付けで拒絶査定がなされ、これに対し、平成１６年１月５日に拒絶査定に対する審判請求がなされるとともに、平成１６年２月４日付けで手続補正がなされたものである。
　
II．平成１６年２月４日付けの手続補正についての補正却下の決定
［補正却下の決定の結論］
　平成１６年２月４日付けの手続補正を却下する。
　
［理由］
１．補正の内容
　本件補正は、補正前の特許請求の範囲（平成１５年８月２９日付けで補正）の記載：
「【請求項１】細胞表面上の抗原の検出方法であって、
　１μＬ当り１０３〜１０４個の細胞と、前記細胞表面上の存在を検出したい抗原に結合し得る抗体を蛍光標識した標識抗体とを混合した混合液、あるいは１μＬ当り１０３〜１０４個の細胞と、前記細胞表面上の存在を検出したい抗原に結合し得る抗体および該抗体に対する二次抗体を蛍光標識した標識二次抗体とを混合した混合液を、所定の容器内に準備する工程、
　前記混合液中に光学的な焦点を形成する工程、
　前記焦点から得られる蛍光信号を複数の経過時間において受信する工程、
　受信した蛍光信号の変化に基づいて、前記標識抗体の前記細胞表面への結合の有無を検出する工程を備えたことを特徴とする方法。
【請求項２】細胞表面上の抗原に結合し得る抗体の検出方法であって、
　１μＬ当り１０３〜１０４個の細胞と、前記細胞表面上の抗原に結合するか否か未知の抗体を蛍光標識した標識抗体とを混合した混合液、あるいは１μＬ当り１０３〜１０４個の細胞と、前記細胞表面上の抗原に結合するか否か未知の抗体および該抗体に対する二次抗体を蛍光標識した標識二次抗体とを混合した混合液を、所定の容器内に準備する工程、
　前記混合液中に光学的な焦点を形成する工程、
　前記焦点から得られる蛍光信号を複数の経過時間において受信する工程、
　受信した蛍光信号の変化に基づいて、前記標識抗体の細胞表面への結合の有無を検出する工程を備えたことを特徴とする方法。
【請求項３】細胞表面上の抗原に結合し得る抗体の検出方法であって、
　１μＬ当り１０３〜１０４個の細胞と、前記細胞表面上の抗原に結合し得る抗体が含有されるか否かを検出したい被検試料と、前記検出したい抗体を蛍光標識した標識抗体とを混合した混合液を、所定の容器内に準備する工程、
　前記混合液中に光学的な焦点を形成する工程、
　前記焦点から得られる蛍光信号を複数の経過時間において受信する工程、
　受信した蛍光信号の変化に基づいて、前記標識抗体の細胞表面への結合の程度を検出する工程を備えたことを特徴とする方法。
【請求項４】前記細胞が血球である請求項１〜３の何れか１項に記載の方法。
【請求項５】前記細胞表面上の抗原に結合し得る抗体が、抗Ａ抗体および抗Ｂ抗体であることを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項６】抗Ａ抗体と抗Ｂ抗体が互いに異なる種類の蛍光を生じる標識抗体であり、これら標識された抗Ａ抗体と抗Ｂ抗体を同一の混合液中に含ませることを特徴とする請求項５に記載の方法。
【請求項７】前記細胞がウイルスまたは細菌である請求項１〜３の何れか１項に記載の方法。
【請求項８】多数の検体または多数の検査項目に対応する数の混合液を、スライドグラス上またはマイクロプレート上に別々に分注する工程を含む、請求項１〜７の何れか１項に記載の方法。」を、
「【請求項１】細胞表面上の
複数種類の
　１μＬ当り１０３〜１０４個の細胞と、前記細胞表面上の存在を検出したい
複数種類の
のそれぞれ
、前記抗原と同数種類の複数の抗体であって、それぞれ識別して検出することが可能な異なる種類の蛍光色素で
一の
複数種類の
のそれぞれ
、前記抗原と同数種類の複数の
と、該抗体のそれぞれに特異的に結合する、前記抗体と同数種類の複数の二次抗体であって、それぞれ識別して検出することが可能な異なる種類の蛍光色素で
一の
　前記混合液中に光学的な焦点を形成する工程、
　前記焦点から得られる蛍光信号を複数の経過時間において受信する工程、
　受信した蛍光信号の変化に基づいて、前記標識抗体
または前記標識二次抗体
【請求項２】細胞表面上の抗原に結合し得る
複数種類の
　１μＬ当り１０３〜１０４個の細胞と、前記細胞表面上の抗原に結合するか否か未知の
複数種類の抗体であって、それぞれ識別して検出することが可能な異なる種類の蛍光色素で
一の
複数種類の
と、該抗体のそれぞれに特異的に結合する、前記抗体と同数種類の複数の二次抗体であって、それぞれ識別して検出することが可能な異なる種類の蛍光色素で
一の
　前記混合液中に光学的な焦点を形成する工程、
　前記焦点から得られる蛍光信号を複数の経過時間において受信する工程、
　受信した蛍光信号の変化に基づいて、前記標識抗体
または前記標識二次抗体
【請求項３】細胞表面上の抗原に結合し得る
複数種類の
　１μＬ当り１０３〜１０４個の細胞と、前記細胞表面上の
複数種類の
のそれぞれ
特異的に
各種
各種
と同種の標準抗体であって、それぞれ識別して検出することが可能な異なる種類の蛍光色素で
標準
一の
　前記混合液中に光学的な焦点を形成する工程、
　前記焦点から得られる蛍光信号を複数の経過時間において受信する工程、
　受信した蛍光信号の変化に基づいて、前記標識抗体の細胞表面への結合の程度を検出する工程を備えたことを特徴とする方法。
【請求項４】前記細胞が血球である請求項１〜３の何れか１項に記載の方法。
【請求項５】前記細胞表面上の抗原に結合し得る抗体が、抗Ａ抗体および抗Ｂ抗体
であることを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記
、それぞれ、
蛍光色素で標識された
【請求項７】前記細胞がウイルスまたは細菌である請求項１〜３の何れか１項に記載の方法。
【請求項８】多数の検体に対応する数の混合液を、スライドグラス上またはマイクロプレート上に別々に分注する工程を含む、請求項１〜７の何れか１項に記載の方法。」と補正することを含むものである。（なお、下線は補正箇所を示す。）
　
　請求項１における上記の補正は、細胞表面上の検出すべき抗原が「複数種類」の抗原であることを限定するとともに、それらを一の抗原抗体反応混合液中で検出するために、前記抗原と結合し得る蛍光標識抗体については「前記細胞表面上の存在を検出したい複数種類の抗原のそれぞれに特異的に結合し得る、前記抗原と同数種類の複数の抗体であって、それぞれ識別して検出することが可能な異なる種類の蛍光色素で蛍光標識した標識抗体」と限定し、そして抗体および蛍光標識二次抗体を使用する場合については、これらを「前記細胞表面上の存在を検出したい複数種類の抗原のそれぞれに特異的に結合し得る、前記抗原と同数種類の複数の抗体と、該抗体のそれぞれに特異的に結合する、前記抗体と同数種類の複数の二次抗体であって、それぞれ識別して検出することが可能な異なる種類の蛍光色素で蛍光標識した標識二次抗体」と限定するものであるから、特許請求の範囲の減縮を目的とするものに該当する。
　請求項２における上記の補正は、細胞表面上の抗原に結合し得る検出すべき抗体が「複数種類」の抗体であることを限定するとともに、それらを一の抗原抗体反応混合液中で検出するために、細胞表面上の抗原に結合するか否か未知の抗体を蛍光標識した標識抗体については「前記細胞表面上の抗原に結合するか否か未知の複数種類の抗体であって、それぞれ識別して検出することが可能な異なる種類の蛍光色素で蛍光標識した標識抗体」と限定し、細胞表面上の抗原に結合するか否か未知の抗体と標識二次抗体と使用する場合については、これらを「前記細胞表面上の抗原に結合するか否か未知の複数種類の抗体と、該抗体のそれぞれに特異的に結合する、前記抗体と同数種類の複数の二次抗体であって、それぞれ識別して検出することが可能な異なる種類の蛍光色素で蛍光標識した標識二次抗体」と限定するものであるから、特許請求の範囲の減縮を目的とするものに該当する。
　請求項３における上記の補正は、細胞表面上の抗原に結合し得る検出すべき抗体が「複数種類」の抗体であることを限定し、被検試料が「前記細胞表面上の複数種類の抗原のそれぞれに特異的に結合し得る各種抗体が含有されるか否かを検出したい被検試料」であると限定するとともに、これらを一の抗原抗体反応混合液中で検出するために、前記検出したい抗体を蛍光標識した標識抗体については「前記検出したい各種抗体と同種の標準抗体であって、それぞれ識別して検出することが可能な異なる種類の蛍光色素で蛍光標識した標識標準抗体」と限定するものであるから、特許請求の範囲の減縮を目的とするものに該当する。
　また、請求項６における上記の補正は、明りょうでない記載の釈明を目的とするものである。
　
　そこで、本件補正後の特許請求の範囲の請求項１に記載されている事項により特定される発明（以下、補正後の請求項１に係る発明を「補正発明」という）が、特許出願の際独立して特許を受けることができるものであるか（特許法第１７条の２第５項において準用する同法第１２６条第５項の規定に適合するか）について以下に検討する。
　
２．補正後の本願発明
　補正発明は、次のとおりのものである。
「【請求項１】細胞表面上の複数種類の抗原の検出方法であって、
　１μＬ当り１０３〜１０４個の細胞と、前記細胞表面上の存在を検出したい複数種類の抗原のそれぞれに特異的に結合し得る、前記抗原と同数種類の複数の抗体であって、それぞれ識別して検出することが可能な異なる種類の蛍光色素で蛍光標識した標識抗体とを混合した一の混合液、あるいは１μＬ当り１０３〜１０４個の細胞と、前記細胞表面上の存在を検出したい複数種類の抗原のそれぞれに特異的に結合し得る、前記抗原と同数種類の複数の抗体と、該抗体のそれぞれに特異的に結合する、前記抗体と同数種類の複数の二次抗体であって、それぞれ識別して検出することが可能な異なる種類の蛍光色素で蛍光標識した標識二次抗体とを混合した一の混合液を、所定の容器内に準備する工程、
　前記混合液中に光学的な焦点を形成する工程、
　前記焦点から得られる蛍光信号を複数の経過時間において受信する工程、
　受信した蛍光信号の変化に基づいて、前記標識抗体または前記標識二次抗体の前記細胞表面への結合の有無を検出する工程を備えたことを特徴とする方法。」
　
３．引用刊行物の記載事項
　原査定の拒絶の理由に引用された刊行物１（特表平１１−５０２６０８号公報）には、レーザー励起蛍光相関分光光度法（ＦＣＳ）を用いたさまざまな方法およびそのための装置についての発明に関し、次の事項が記載されている。
　
（ａ）特許請求の範囲
「１．測定時間５００ｍｓ以下で、かつ分析する分子の拡散経路が短いレーザー励起ＦＣＳを用いた、特に１μＭ以下の濃度に希釈した１つまたは少数の分子を同定する方法であって、少なくとも１つの望ましくは１０−１４ｌ以下の小さな容積ユニットまたは多数の該容積ユニットにおいて、測定されるべき分子の発光測定によって決定される物質特異的パラメータを決定することによって行われる方法。
・・・・・
６．相関の評価による並進拡散および／または回転拡散の測定を用いた機能性の評価が、特に、存在する分子の絶対数および／またはその経時変化の測定により、および／または構造的に異なるリガンドおよび／またはリガンド複合体の特異的濃度の測定により、かつそれらから誘導される特異的相互作用の熱力学的結合定数および／またはリガンド結合分子に関する特異的認識反応または酵素過程の速度定数を通して行われる請求項1 乃至5 の少なくとも1 項記載の方法。
・・・・・
３２．特定の分析物が、各々少なくとも２つの光学的に異なる蛍光分子で標識された少なくとも２つのテスト試薬と同時に複合体を形成し、該同時複合体形成がエネルギー転移複合体の形成および／または異なる励起および／または発光波長を有するシグナルの時間相関によって検出されることを特徴とする請求項1 乃至31の少なくとも1 項記載の方法。
・・・・・
４２．特異的分子および／または分子複合体および／または分子および／または分子複合体の分子環境を定性的または定量的にカバーすること、特に生理的に活性なレセプター、特に表面レセプターの測定および／または評価またはレセプター結合リガンド又はリガンド複合体の評価等を目的とした請求項1 乃至38の少なくとも1 項記載の方法の使用。
・・・・・
４７．非常に希釈した溶液の小さな測定部分における蛍光の励起のためのレーザーフォーカシング用、および次の測定のための発生した蛍光の共焦点的結像用に知られている顕微鏡光学系を含み、望ましくは≧１．２Ｎ．Ａ．の高開口数の光学システムを少なくとも１つ使用し、光量は顕微鏡の対物レンズの後ろにある対物板にある共焦点的に配置したピンホール開口で制限されており、および／または測定部分は望ましくは観察用対物レンズから１０００μｍ　の距離に位置する請求項１乃至３８の少なくとも１項記載の方法を実施するための装置。」
　
（ｂ）抗原抗体反応を利用する診断法の代替方法（２３頁１６行〜２４頁１０行）
「また、本方法は既存のRIA、ELISA またはその他の方法（以下参照、レセプタースクリーニング）等の診断法の代わりに使用しうる。本発明の方法の１つの利点はこのシステムが自己校正型であることである。校正曲線または内部標準を施す必要はない。各実験で問題となる分子の測定から内部校正が得られる。例えば、レーザー強度の変化は測定精度に影響しない。連続測定におけるドリフトの問題は発生しない。測定は校正する事無しに何度でも反復でき、同じ結果を与える。装置の校正も省略することができる。望ましい応用にはテスト試薬として抗体を使用しない検定法または抗体を使用したELISA、RIA またはFIA に基づく従来の検定法の代替法が挙げられる。特定のターゲット分子（リガンド）を認識する為の特異的認識分子（レセプター分子、テスト試薬）としての抗体に加えて、別の分子を使用する全ての検定法が考えられる。一般に、抗体に加えて可能なレセプター分子とはその表面に特定の認識部位を有するか（例えば、抗体、一本鎖抗体、膜レセプター、可溶性レセプター、酵素、構造タンパク質、多糖類、ペプチド、複合体二次代謝物等）またはターゲット分子内に特異的認識部位を含む（例えば、HDL、VLDL、LDL）全ての分子および分子複合体である。
  一般的形のレセプターおよび一つ以上のリガンド間の特異的複合体の形成が分析的に興味ある物である場合、および／または少なくとも１つの関連分子が少なくとも１つの色素標識で提供され、かつ、複合体の形成が色素標識の回転拡散および／または並進拡散の変化で明確となる場合、FCS 検定を行うことができる。利点を有する態様に関する同様の熱力学的規則性はELISA、EIA、RIA またはFIA型の検定にも同様に適用しうる（図１ および２ 参照）。」
　
（ｃ）複合体に結合した蛍光標識分子としていない蛍光標識分子とのサイズの差（２５頁１６〜１８行）
「１．複合体に結合していない蛍光標識した分子と結合した蛍光標識分子間のサイズの差は、異なる並進拡散を簡単に検出できるように拡散定数が約2 倍異なるくらいに大きくなくてはならない。」
　
（ｄ）２つの異なる色素で標識された２つの異なるテスト試薬の使用（２７頁１０行〜２８頁６行）
「本発明に従って少なくとも一つのターゲット分子と反応できる、少なくとも二つの異なる色素で標識された少なくとも二つの異なるテスト試薬であって、少なくとも二つの色素の蛍光シグナルを本発明に従って測定しうる試薬も使用することが出来る。この方法は二つの様式で使用しうる。
ａ）試料における少なくとも二つの分析物の同時測定
  一つの試料中に存在する複数の分析物を検出する上で実験的問題がしばしば生ずる。二つの独立する検定法とは異なり、少なくとも二つの異なる分析物の検出は二つの独立する異なる色素で標識し、望ましくは異なる波長の光で励起するか、もしくは異なる発光波長の光を独立に検出できる二つの独立するテスト試薬の反応により本発明に従って独立に行うことができる。このことは、たとえば図16に図示した二つの独立する光学系を用いて行いうる。
３．相互相関
ｂ）一つの分析物に少なくとも二つの異なるテスト試薬が同時に結合することによる検出特異性の向上
  一つのテスト試薬を結合することにより、不十分な特異性しか有さない場合でも類似の分析分子から特定の分析物を区別することができる。このことは自分自身の病原性またはそれらの生産物の病原性など、その生物学的活性が極端に異なる相同的核酸配列で例示される。腫瘍抗原、構造蛋白質または細胞型特異的表面マーカー等の蛋白質も分析しうるが、唯一のリガンドの結合だけでは不満足である。
  本発明に従い、特定の分子は、少なくとも光学的に異なる蛍光分子で標識した少なくとも二つのテスト試薬と同時に複合体を形成しうる。本発明に従い同時の複合体形成はエネルギー転移複合体の形成（フェルスター転移、上述）または異なる波長を有する励起および／または発光のシグナルの生成を通して特異的に検出しうる。一つの分析物に対する異なるテスト試薬の結合は異なる光学シグナルの時間相関で確認される。」
　
（ｅ）レセプター検定法（３２頁１５行〜２２行）
「第１図はリガンドL に特異的な結合性を示すレセプターを有する細胞を用いた関連するエフェクター分子のレセプター検定法を示している。リガンドは本発明に従って色素標識したものが提供されている。本発明において、レセプターおよびリガンドのモル比および全濃度は約50% のレセプターが結合し、約50% のレセプターが未結合でいるように選択される。本発明に従った分析において、この事は遅い並進拡散分子から検出されるのと約同数の発光シグナルが速い並進拡散分子から検出されることで見て取れる（右上の模式図；左のステップは遊離リガンドに対応し、右のステップはレセプターに結合したリガンドに対応する）。」
　
（ｆ）シート状反応キャリヤー（３５頁５〜２３行）
「試料キャリヤーとしては本発明にしたがって対物レンズに液体試料を接触することなく、従って汚染されることなく近づけうるシート状キャリヤーを使用することが望ましい（第３図）。
　第３図は例えば特許出願ＰＣＴ／ＥＰ　８９／０１３２０、・・・に説明され、使用されている様なウェルを有するキャリヤーシートの使用が示されている。マルチ・ウェル・シートと呼ばれるこの反応キャリヤーは本発明のＦＣＳ分析のための試料を受容しうるウェルを有している。これらは二次元的に移動可能なシート挿入装置で制御され、試料を含むウェルの底が対物レンズに接近し、その結果液体試料部分は対物レンズから約１００−１０００μｍよりも離れることはない。シートと対物レンズの間の媒体は水が望ましく、これには対物レンズの補正が関係している（上述参照）。そのシートはレーザー励起光および発光の両方に関して光学的に透明で化学的に不活性である。シートはカバーシートでシールされていることが望ましい。市場に出回っている自動ピペットシステムが使用できる点で、市販のマイクロプレートシステムまたはオカサキフォーマットに対応するウェル間距離を有するシートが望ましい。さらに、反応キャリヤーとしてのシートは汚染が低く、簡単に廃棄でき、かつシール状態でコンパクトに納めうるものである。」
　
（ｇ）多数の被検出部位の同時検定（６３頁１８〜２４行）
「ターゲットゲノムに関する多数の突然変異の同時検定法
  　遺伝病の分析において、多数の変異体の存在を同時に検定するという問題がしばしば発生する。このことは特に優性遺伝子病またはX 染色体コード型の病気の場合である。劣性病の場合、１つの対立遺伝子上に特定の点突然変異が発生したか、または両方に発生したかを評価することは重要である（今日までに３０以上の変異体が示されてきた嚢胞性繊維症参照）。本発明の操作は１つの試料中の種々の突然変異を同時に分析することを可能にする（第２３図）。」
　
（ｈ）本発明の検定法の選択（７１頁１９行〜７２頁９行）
「第１１図は本発明の検定法の選択を示している。「Ag」は抗原を示しているが、例えば二本鎖構造で検出される核酸のような一般的な意味での分析物を示している。
  「Ak」は抗体を示しているが、一般的には例えば抗体フラグメント、結合ドメイン、または分析物に相補的な核酸等、分析物に対する特異的テスト試薬を示している。
  「F」は発光色素、特に蛍光色素を示している。
(A) 蛍光標識されたテスト試薬による分析物Agの本発明に従う特異的複合体形成であって、複合体型の蛍光標識テスト試薬は本発明により遊離型のものと区別される。この一群は分析物の1000倍過剰まで許容される。
(B) しかし、(A) と同様に、非標識型の過剰に添加された第２のテスト試薬の結合は、小さすぎる複合体と非複合体型標識テスト試薬とのサイズの差を増加するのに使用される。
(C) 少量のテスト試薬および蛍光標識競合分析物の添加を用いた競合RIA 類似検定法。
(D) 過剰量のテスト試薬を用いた検定法であって、エネルギー転移により色素標識が特異的複合体形成を示す少なくとも２つの異なるテスト試薬が使用される。
(E)(D)と同様に、異なる色素を本発明に従って独立に検出し、共通の複合体の形成は異なる光学的シグナルの時間相関で測定される検定法。」
　
４．補正発明と刊行物１記載の発明との対比
（１）刊行物１記載の発明
　刊行物１の特許請求の範囲第１項、第６項（経時変化の測定）、第４２項（表面レセプターの測定、またはレセプター結合リガンド又はリガンド複合体の評価等）、第４７項（溶液の小さな測定部分における蛍光の励起のためのレーザーフォーカシング）、及び第３図（ＦＣＳ分析のための試料を受容しうるウェル）の記載（上記記載（ａ）（ｆ）参照）からみて、刊行物１には、「試料液を所定の容器内に準備する工程、前記試料液中に光学的な焦点を形成する工程、前記焦点から得られる蛍光信号を複数の経過時間において受信する工程、受信した蛍光信号の変化に基づいて、レセプターとリガンドの結合の有無を検出する工程を備えた検出方法」が記載されているものと認められる。そして第１図には、リガンドに特異的な結合性を示すレセプターを有する細胞と標識されたリガンドが混合されている試料液について、遊離リガンドとレセプターに結合したリガンドとを区別して検出していることが記載され（上記記載（ｅ）参照）、かつ、レセプターとリガンドの組合せには抗原と抗体の組合せも包含されることは上記記載（ｂ）からも明らかであることから、刊行物１には、次のような細胞表面上の抗原の検出方法の発明が実質的に記載されているものと認められる。
　
「細胞表面上の抗原の検出方法であって、
　細胞と、前記細胞表面上の存在を検出したい抗原に特異的に結合し得る抗体を蛍光標識した標識抗体とを混合した一の混合液を、所定の容器内に準備する工程、
　前記混合液中に光学的な焦点を形成する工程、
　前記焦点から得られる蛍光信号を複数の経過時間において受信する工程、
　受信した蛍光信号の変化に基づいて、前記標識抗体の前記細胞表面への結合の有無を検出する工程を備えた方法。」（以下、この方法を「刊行物１記載の発明」という。）
　
（２）一致点・相違点
　そこで、補正発明のうち「一の混合液」が「１μＬ当り１０３〜１０４個の細胞と、前記細胞表面上の存在を検出したい複数種類の抗原のそれぞれに特異的に結合し得る、前記抗原と同数種類の複数の抗体であって、それぞれ識別して検出することが可能な異なる種類の蛍光色素で蛍光標識した標識抗体」とを混合したものである発明（以下、「補正発明ａ」という）と、刊行物１記載の発明とを対比すると、両者の一致点及び相違点は次のとおりである。
　
（一致点）
「細胞表面上の抗原の検出方法であって、
　細胞と、前記細胞表面上の存在を検出したい抗原に特異的に結合し得る抗体を蛍光標識した標識抗体とを混合した一の混合液を、所定の容器内に準備する工程、
　前記混合液中に光学的な焦点を形成する工程、
　前記焦点から得られる蛍光信号を複数の経過時間において受信する工程、
　受信した蛍光信号の変化に基づいて、前記標識抗体の前記細胞表面への結合の有無を検出する工程を備えた方法。」
　
（相違点１）
　補正発明ａでは、検出する細胞表面上の抗原が「複数種類の抗原」であり、混合する標識抗体も、「前記細胞表面上の存在を検出したい複数種類の抗原のそれぞれに特異的に結合し得る、前記抗原と同数種類の複数の抗体であって、それぞれ識別して検出することが可能な異なる種類の蛍光色素で蛍光標識した標識抗体」であるのに対し、刊行物１記載の発明では、複数種類の抗原、及び該抗原と同数種類の複数の抗体であって、それぞれ識別して検出することが可能な異なる種類の蛍光色素で蛍光標識した標識抗体についての明示的記載はない点。
　
（相違点２）
　標識抗体と混合する細胞の濃度について、補正発明では、「１μＬ当り１０3〜１０4個の細胞」と特定されているのに対し、刊行物１記載の発明では、細胞の濃度については記載されていない点。
　
５．相違点についての検討
　刊行物１には、一つのターゲット分子と反応できる、少なくとも二つの異なる色素で標識された少なくとも二つの異なるテスト試薬であって、少なくとも二つの色素の蛍光シグナルを測定しうる試薬も使用することができること、そして特定の分子は、少なくとも光学的に異なる蛍光分子で標識した少なくとも二つのテスト試薬と同時に複合体を形成し得て、同時の複合体形成は異なる波長を有する励起および／または発光のシグナルの生成を通して特異的に検出しうること、また一つの分析物に対する異なるテスト試薬の結合は異なる光学シグナルの時間相関で確認されることが記載されている（上記記載（ａ）の３２項、及び（ｄ）参照）。また、図１１に示された種々の検定法のうち、（Ｅ）については「異なる色素を本発明に従って独立に検出し、共通の複合体の形成は異なる光学的シグナルの時間相関で測定される検定法」であると説明され（上記記載（ｈ）参照）、図中の（Ｅ）には、異なる色素（Ｆ１、Ｆ２）でそれぞれ標識された２種類の抗体（Ａｋ１，Ａｋ２）が１の分析物“Ａｇ”に結合して複合体を形成し、それぞれ光学シグナルを出している様子が示されている。さらに刊行物１には、細胞表面上の複数種類の抗原の検出ではなく、ゲノム上の多数の突然変異の同時検定についてではあるが、分析物上の複数種類の検出対象箇所にそれぞれ特異的に結合し得る蛍光標識試薬（蛍光標識プローブ）を用いて刊行物１記載のＦＣＳ測定を利用した操作で同時検出し得ることも開示されている（上記記載（ｇ）、図２３参照）。
　これらの開示内容からすれば、細胞表面上の抗原の検出方法において、検出しようとする細胞表面上の抗原を複数種類の抗原とし、混合する標識抗体も、前記細胞表面上の存在を検出したい複数種類の抗原のそれぞれに特異的に結合し得る、前記抗原と同数種類の複数の抗体であって、それぞれ識別して検出することが可能な異なる種類の蛍光色素で蛍光標識した標識抗体を用いて細胞表面上の複数種類の抗原を検出するようにすることは、当業者が容易に想到できる範囲内の事項である。
　また、その際の細胞濃度についても、刊行物１に記載されている測定方法が非常に希薄な溶液を用いて単一分子レベルでの測定を行うものである（上記記載（ａ）参照）ことから、細胞表面上の複数種類の抗原の検出において１細胞レベルで細胞表面上の複数種類の抗原の検出をするためには具体的にどのような細胞濃度とするのかということは、当業者であれば当然検討すべき事項であり、補正発明ａにおいてその臨界的意義が何も示されていない「１μＬ当り１０3〜１０4個」という値を実験等により見い出すことに格別の困難性があったとは認められない。
　そして、細胞が大きく、細胞に結合した標識抗体と結合していない標識抗体のサイズの差が大きいことがＦＣＳ測定の原理を利用した検出に有利なことも、刊行物１の前記記載（ｃ）から予測し得る範囲内の事項である。
　したがって、補正発明ａは、本願出願前に頒布された上記刊行物１に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第２項の規定により、特許出願の際独立して特許を受けることができないものである。
　
６．むすび
　以上のとおり、本件補正は、特許法第１７条の２第５項において準用する同法第１２６条第５項の規定に違反するものであり、特許法第１５９条第１項で準用する同法第５３条第１項の規定により、却下すべきものである。
　
III．本願発明について
１．本願発明
　平成１６年２月４日付けの手続補正は上記のとおり却下されたので、本願の請求項１ないし８に係る発明は、平成１５年８月２９日付けの手続補正書により補正された明細書の特許請求の範囲の請求項１ないし８に記載された事項により特定されるものであるところ、その請求項１は、次のとおりである。（以下、「本願発明」という。）
　
「【請求項１】細胞表面上の抗原の検出方法であって、
　１μＬ当り１０3〜１０4個の細胞と、前記細胞表面上の存在を検出したい抗原に結合し得る抗体を蛍光標識した標識抗体とを混合した混合液、あるいは１μＬ当り１０3〜１０4個の細胞と、前記細胞表面上の存在を検出したい抗原に結合し得る抗体および該抗体に対する二次抗体を蛍光標識した標識二次抗体とを混合した混合液を、所定の容器内に準備する工程、
　前記混合液中に光学的な焦点を形成する工程、
　前記焦点から得られる蛍光信号を複数の経過時間において受信する工程、
　受信した蛍光信号の変化に基づいて、前記標識抗体の前記細胞表面への結合の有無を検出する工程を備えたことを特徴とする方法。」
　
２．引用刊行物の記載事項
　原査定の拒絶の理由に引用された刊行物１に記載された事項は、前記II．３．に記載したとおりである。
　
３．本願発明と刊行物１記載の発明との対比・検討
　本願発明は前記II．４．及び５．で検討した補正発明ａから検出すべき「抗原」の限定事項である「複数種類の」という構成を省き、さらに、前記抗原と結合し得る「蛍光標識抗体」の限定事項である「前記細胞表面上の存在を検出したい複数種類の抗原のそれぞれに特異的に結合し得る、前記抗原と同数種類の複数の抗体であって、それぞれ識別して検出することが可能な異なる種類の蛍光色素で蛍光標識した標識抗体」という構成を省いたものである。
　そうすると、本願発明の構成要件を全て含み、さらに他の構成要件を付加したものに相当する補正発明ａが、前記II．４．及び５．において検討したとおり引用例１に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものであることから、本願発明も同様の理由により、引用例１に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものである。
　
４．むすび
　以上のとおり、本願発明は、本願出願前に頒布された上記刊行物１に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない。
　よって、結論のとおり審決する。