【手続補正書】
【提出日】平成24年2月16日(2012.2.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
集団において１つ以上の選択された細胞を精製するための方法であって、該方法は、以下の工程：
（ａ）フレーム内の細胞の集団に照明する工程であって、該照明される細胞は、捕獲マトリックスの近位に固定化された複数の細胞に含まれ、該捕獲マトリックスは、該１つ以上の細胞により分泌された産物を局在化する、工程；
（ｂ）該フレームから方向付けられる光の２つ以上の特性を検出する工程であって、第１の光の特性は、該集団の実質的に全ての細胞を同定し、そして第２の光の特性は、該捕獲マトリックスに局在化された産物を同定する、工程；
（ｃ）該検出された第１の光の特性に関して該集団の実質的に全ての細胞を位置決定する工程；
（ｄ）該検出された第２の光の特性に関して１つ以上の細胞を選択する工程、ならびに
（ｅ）１つ以上の非選択細胞に放射線を照射する工程であって、１つ以上の非選択細胞の各々は、実質的に致死的な線量の放射線を受容し、それによって、所望の産物分泌プロファイルを有する１つ以上の選択された細胞が精製される工程
を包含する、方法。
【請求項２】
（ｆ）さらなるフレームに含まれるさらなる細胞の集団に照明する工程、および工程（ｂ）から工程（ｅ）を繰り返す工程をさらに包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記複数の細胞における前記非選択細胞の実質的に全てが、実質的に致死的な線量の放射線を受容するまで、工程（ｆ）の後に工程（ｂ）から工程（ｅ）を繰り返すことをさらに包含する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記実質的に致死的な線量の放射線が、１つ以上の放射線パルスで、各非選択細胞に送達される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
照明の前に、前記複数の細胞が、該細胞の実質的に全てと選択的に結合する試薬と接触させられ、該試薬が、第１の光の特性として検出可能なシグナルを発生する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
細胞の集団において１つ以上の選択された細胞を精製するための方法であって、該方法は、以下の工程：
（ａ）フレーム内の細胞の集団に照明する工程であって、該照明される細胞は、捕獲マトリックスの近位に固定化された複数の細胞に含まれ、該捕獲マトリックスは、該１つ以上の細胞により分泌された産物を局在化する、工程；
（ｂ）該フレームから方向付けられた少なくとも１つの光の特性を検出する工程であって、該少なくとも１つの光の特性は、該捕獲マトリックスに局在化された産物を同定する、工程；
（ｃ）（ｉ）該検出された光の特性に関して１つ以上の選択された細胞を、および（ｉｉ）該フレーム内の１つ以上のドメインを、位置決定および選択する工程であって、各ドメインは、該１つ以上の選択された細胞により占められた領域に対応し、該１つ以上のドメインは、該検出された光の特性に関して位置決定される工程、ならびに
（ｄ）該フレーム内に含まれる非ドメイン領域に照射する工程であって、該非ドメイン領域内に存在する実質的に全ての細胞は、実質的に致死的な線量の放射線を受容し、それによって、所望の産物分泌プロファイルを有している１つ以上の選択された細胞が精製される工程
を包含する、方法。
【請求項７】
（ｅ）さらなるフレームに含まれる前記細胞のさらなる集団に照明工程、および工程（ｂ）から工程（ｄ）を繰り返す工程をさらに包含する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記複数の細胞における前記非選択細胞の実質的に全てが、実質的に致死的な線量の放射線を受容するまで、工程（ｅ）の後に工程（ｂ）から工程（ｄ）を繰り返すことをさらに包含する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記１つ以上の選択された細胞が、（ａ）前記複数の他の細胞に比べて高レベルの産物を産生するか、（ｂ）該複数の他の細胞に比べて低レベルの産物を産生するか、または、（ｃ）該複数の他の細胞に比べて検出不可能なレベルの産物を産生する細胞である、請求項１または６に記載の方法。
【請求項１０】
細胞の集団において１つ以上の細胞の産物分泌プロファイルを決定するための方法であって、該方法は、以下の工程：
（ａ）フレーム内の細胞の集団に照明する工程であって、該照明される細胞は、捕獲マトリックスの近位に固定化された複数の細胞に含まれ、該捕獲マトリックスは、該１つ以上の細胞により分泌された産物を局在化する、工程；
（ｂ）該フレームから方向付けられる光の少なくとも１つの特性を検出する工程であって、光の特性は、該捕獲マトリックスに局在化された産物を同定する、工程；
（ｃ）該検出された少なくとも１つの光の特性に関して１つ以上の細胞を位置決定する工程；ならびに
（ｄ）該１つ以上の細胞の該産物分泌プロファイルを示す該検出された少なくとも１つの光の特性からの定量的なシグナル値を決定する工程
を包含する、方法。
【請求項１１】
（ｅ）より高い相対量の分泌産物を有する１つ以上の細胞を選択する工程をさらに包含する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記少なくとも１つの光の特性を検出する工程が、第１の光の特性および第２の光の特性を検出することを含み、該第１の光の特性が前記分泌産物を同定し、そして、該第２の光の特性が、前記１つ以上の細胞の実質的に全てを同定する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
より高い相対量の分泌産物を有する前記選択された１つ以上の細胞を増殖させる工程をさらに包含する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
１つ以上の非選択細胞に、実質的に致死的な線量の放射線を照射する工程をさらに包含する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
高い相対量の分泌産物を有する前記選択されたより１つ以上の細胞を単離する工程をさらに包含する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
前記産物が抗体である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１７】
前記選択された細胞が、前記集団における他の細胞に比べて高レベルの組換えヒト化抗体を産生する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
細胞の集団において１つ以上の選択された細胞の産物分泌プロファイルを決定するための方法であって、該方法は、以下の工程：
（ａ）該１つ以上の細胞によって分泌された産物を局在化する捕獲マトリックスの近位に複数の細胞を固定化し、該産物を、該産物に選択的に結合する因子と接触させる工程であって、該因子は、光の特性として検出可能なシグナルを発生する、工程；
（ｂ）フレーム内に含まれる複数の細胞の集団に照明する工程であって、該照明される細胞は、該複数の細胞に含まれる、工程；
（ｃ）該フレームから方向付けられる光の少なくとも１つの特性を検出する工程であって、該少なくとも１つの光の特性は、該捕獲マトリックスに局在化された産物を同定する、工程；
（ｄ）該検出された少なくとも１つの光の特性に関して該１つ以上の細胞を位置決定する工程；ならびに
（ｅ）該少なくとも１つの光の特性の、分泌された産物のレベルに対応するシグナル値を評価し、それによって、該細胞の集団における該１つ以上の選択された細胞の産物分泌プロファイルが決定される工程
を包含する、方法。
【請求項１９】
前記少なくとも１つの光の特性を検出する工程が、第１の光の特性および第２の光の特性を検出することを含み、該第１の光の特性が前記局在化された産物を同定し、そして、該第２の光の特性が、前記１つ以上の細胞の実質的に全てを同定する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記少なくとも１つの光の特性のシグナル値を評価する工程が、前記細胞の境界を同定して前記分泌産物の領域の内側境界を決定し、該細胞の境界を精密化し、そして、該分泌産物の領域の外側境界を決定することを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
（ｆ）より高い相対量の分泌産物を有する１つ以上の細胞を選択する工程をさらに包含する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
前記分泌産物が抗体である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
（ｆ）前記シグナル値に基づいて、精製のための細胞を選択する工程をさらに包含する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記選択された細胞が、前記集団における他の細胞に比べてより高レベルの組換えヒト化抗体を産生する、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
所望の産物を分泌する細胞または細胞の群を単離するための方法であって、該方法は、以下の工程：
細胞の集団を培養する工程であって、該細胞は、捕獲マトリックスまたはその近位に固定化され、該固定化された細胞によって分泌された検出可能な量の産物が該細胞の近傍に留まる、工程；
該細胞の近傍にある該所望の産物を標識する工程；
該固定化された細胞および該標識を画像化して、個々の細胞または細胞の群によって分泌された所望の産物のレベルを確認する工程；および
該選択された細胞によって分泌された該所望の産物のレベルに基づいて、該細胞の集団から選択された細胞を単離する工程
を包含する、方法。
【請求項２６】
前記個々の細胞によって分泌された所望の産物の確認されたレベルが、相対レベルである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記個々の細胞または細胞の群によって分泌された所望の産物のレベルを確認する工程が、それによって分泌された所望の産物のレベルを定量することを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
前記画像化された固定化された細胞に関する情報を選別して、所望の産物の分泌レベルを、該分泌レベルを生成する細胞（単数または複数）の位置と相関させる工程をさらに包含する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
前記所望の産物が抗体である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３０】
前記標識が蛍光標識である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３１】
捕獲マトリックスと流体連絡する複数の細胞または細胞コロニーを培養する工程；
該捕獲マトリックス内の該複数の細胞または細胞コロニーによって分泌された産物を該細胞の近位に局在化させる工程；
捕獲マトリックスを該複数の細胞または細胞コロニーと一緒に画像化する工程；
該画像内の１つ以上の細胞または細胞コロニーを同定する工程であって、該画像は、少なくとも、該１以上の細胞または細胞コロニーに隣接する該捕獲マトリックス内に局在化された所望の分泌産物の所望のレベルを有する、工程；ならびに
該同定された１つ以上の細胞または細胞コロニーを単離する工程
を包含する、方法。
【請求項３２】
前記捕獲マトリックスがゲルである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記捕獲マトリックスが固定化された水性培地である、請求項３２に記載の方法。