【手続補正書】
【提出日】平成24年1月4日(2012.1.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
導入遺伝子であって、該導入遺伝子は、ヒト第１４染色体上の免疫グロブリン重鎖遺伝子座の連続領域の、該遺伝子座のＤセグメント遺伝子からＪセグメント遺伝子および定常領域遺伝子Ｃμまで続くＤＮＡ配列を含むＤＮＡフラグメントを含み、ここで、該ＤＮＡフラグメントは、少なくとも１つのヒトＶセグメント遺伝子に作動可能に連結され、そしてここで、該ＤＮＡフラグメントは、さらに、さらなる定常領域遺伝子に作動可能に連結され、該さらなる定常領域遺伝子は、（１）ヒトスイッチ領域；（２）ヒトＣＨ１、Ｃヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３エキソンを含む領域；および（３）ヒト膜エキソンを含み、ここで、該ヒトスイッチ領域および該ヒト膜エキソンは、同じアイソタイプ由来であり、そして該ヒトＣＨ１、Ｃヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３エキソンは、該ヒトスイッチ領域および該ヒト膜エキソンとは異なるアイソタイプ由来である、導入遺伝子。
【請求項２】
導入遺伝子であって、該導入遺伝子は、ヒト第１４染色体上の免疫グロブリン重鎖遺伝子座の連続領域の、Ｄセグメント遺伝子からＪセグメント遺伝子および定常領域遺伝子Ｃμまで続くＤＮＡ配列を含むＤＮＡフラグメントを含み、ここで、該ＤＮＡフラグメントは、少なくとも１つのヒトＶセグメント遺伝子に作動可能に連結され、そしてここで、該ＤＮＡフラグメントは、さらに、さらなる定常領域遺伝子に作動可能に連結され、該さらなる定常領域遺伝子は、（１）ヒトスイッチ領域；（２）ヒトＣＨ１、Ｃヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３エキソンを含む領域；および（３）ヒト膜エキソンを含み、ここで、該ヒトスイッチ領域、該ヒトＣＨ１、Ｃヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３エキソンを含む領域、および該ヒト膜エキソンは、３つの異なるアイソタイプ由来である、導入遺伝子。
【請求項３】
導入遺伝子であって、該導入遺伝子は、ヒト第１４染色体上の免疫グロブリン重鎖遺伝子座の連続領域の、該遺伝子座のＤセグメント遺伝子からＪセグメント遺伝子および定常領域遺伝子Ｃμまで続くＤＮＡ配列を含むＤＮＡフラグメントを含み、ここで、該ＤＮＡフラグメントは、少なくとも１つのヒトＶセグメント遺伝子に作動可能に連結され、そしてここで、該ＤＮＡフラグメントは、さらに、さらなる定常領域遺伝子に作動可能に連結され、該さらなる定常領域遺伝子は、（１）ヒトスイッチ領域；（２）ヒトＣＨ１、Ｃヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３エキソンを含む領域；および（３）ヒト膜エキソンを含み、ここで、該ヒトスイッチ領域および該ヒトＣＨ１、Ｃヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３エキソンは、同じアイソタイプ由来であり、そして該ヒト膜エキソンは、該ヒトスイッチ領域および該ヒトＣＨ１、Ｃヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３エキソンとは異なるアイソタイプ由来である、導入遺伝子。
【請求項４】
前記ヒトスイッチ領域および前記ヒト膜エキソンが、ヒトγ−２配列である、請求項１の導入遺伝子。
【請求項５】
前記ヒトＣＨ１、Ｃヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３エキソンが、以下からなる群から選択されるヒト定常領域をコードする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の導入遺伝子：
ヒトγ−１定常領域、ヒトγ−３定常領域、ヒトγ−４定常領域、ヒトα−１定常領域、ヒトα−２定常領域およびヒトε定常領域。
【請求項６】
前記ヒトＣＨ１、Ｃヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３エキソンが、ヒトγ−１定常領域をコードする、請求項５に記載の導入遺伝子。
【請求項７】
前記ヒトＣＨ１、Ｃヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３エキソンが、ヒトγ−４定常領域をコードする、請求項５に記載の導入遺伝子。
【請求項８】
前記ＤＮＡフラグメントが、複数のヒトＶＨ遺伝子に、作動可能に連結される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の導入遺伝子。
【請求項９】
前記ＤＮＡフラグメントが、少なくとも５０％のヒト生殖細胞系列ＶＨ遺伝子に作動可能に連結される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の導入遺伝子。
【請求項１０】
前記ＤＮＡフラグメントが、少なくとも４０の異なるヒトＶＨ遺伝子に作動可能に連結される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の導入遺伝子。
【請求項１１】
前記ＤＮＡフラグメントが、十分な数の異なるヒトＶＨ遺伝子と作動可能に連結されて、その結果、導入遺伝子が、接合部多様性または体細胞変異事象を考慮することなく、Ｖ（Ｄ）Ｊ組換えを介して、少なくとも１×１０5の異なる機能的ヒト免疫グロブリン重鎖配列をコードし得る、請求項１〜７のいずれか１項に記載の導入遺伝子。
【請求項１２】
ヒトＶＨ遺伝子の数が、導入遺伝子を含むトランスジェニックマウスにおける野生型マウスのＢ細胞集団の少なくとも５０％を産生するのに十分である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の導入遺伝子。
【請求項１３】
さらに、マウス３’エンハンサーを含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の導入遺伝子。
【請求項１４】
前記マウス３’エンハンサーが、マウス生殖細胞系列３’エンハンサーの約０．９ｋｂのコアフラグメントである、請求項１３に記載の導入遺伝子。
【請求項１５】
前記マウス３’エンハンサーが、マウス生殖細胞系列３’エンハンサーの約４ｋｂのフラグメントである、請求項１３に記載の導入遺伝子。
【請求項１６】
前記マウス３’エンハンサーが、遺伝子座制御領域である、請求項１３に記載の導入遺伝子。
【請求項１７】
ｌｏｘＰ部位が、スイッチ領域の３’およびＣＨ１エキソンの５’に挿入される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の導入遺伝子。
【請求項１８】
ＡＴＣＣ登録番号ＰＴＡ−２１６３を有するｙＨ２Ｂｍ酵母人工染色体（ＹＡＣ）である導入遺伝子。
【請求項１９】
ＡＴＣＣ登録番号ＰＴＡ−２１６１を有するｙＨ２Ｃｍ酵母人工染色体（ＹＡＣ）である導入遺伝子。
【請求項２０】
ＡＴＣＣ登録番号ＰＴＡ−２１６０を有するｙＨＧ４酵母人工染色体（ＹＡＣ）である導入遺伝子。
【請求項２１】
ＡＴＣＣ登録番号ＰＴＡ−２１６２を有するｙＨＧ１／２酵母人工染色体（ＹＡＣ）である導入遺伝子。
【請求項２２】
請求項１〜２１のいずれか１項に記載の導入遺伝子を含む、非ヒト胚性幹（ＥＳ）細胞。
【請求項２３】
マウスＥＳ細胞である、請求項２２に記載のＥＳ細胞。
【請求項２４】
体細胞および生殖細胞が、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の導入遺伝子を含む、トランスジェニックまたはキメラの非ヒト動物およびその子孫。
【請求項２５】
ヒト免疫グロブリン軽鎖をさらに含む、請求項２４に記載のトランスジェニックまたはキメラの非ヒト動物および子孫。
【請求項２６】
不活性化内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座および軽鎖遺伝子座をさらに含む、請求項２４または２５に記載のトランスジェニックまたはキメラの非ヒト動物および子孫。
【請求項２７】
前記動物が、マウスである、請求項２４〜２６のいずれか１項に記載のトランスジェニックまたはキメラの非ヒト動物および子孫。
【請求項２８】
トランスジェニックまたはキメラの非ヒト動物およびその子孫を作製するための方法であって、該トランスジェニックまたはキメラの非ヒト動物およびその子孫の体細胞および生殖細胞が、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の導入遺伝子を含み、そして該トランスジェニックまたはキメラの非ヒト動物およびその子孫が、目的の抗原での免疫化の後に、該目的の抗原に特異的な所望のアイソタイプの高い親和性の完全ヒト抗体を産生し、該方法が、以下：
（ａ）該導入遺伝子を、ＥＳ細胞に導入する工程；
（ｂ）該ＥＳ細胞から、該導入遺伝子を含む生殖細胞を含む、トランスジェニックまたはキメラの非ヒト動物を作製する工程；および
（ｃ）トランスジェニックまたはキメラの非ヒト動物およびその子孫を作製するために必要とされる場合に、該トランスジェニックまたはキメラの非ヒト動物を交配する工程であって、ここで、該トランスジェニックまたはキメラの非ヒト動物およびその子孫は、目的の抗原での免疫化の後に、該目的の抗原に特異的な所望のアイソタイプの高い親和性の完全ヒト抗体を産生する、工程
を包含する、方法。
【請求項２９】
前記トランスジェニックまたはキメラの非ヒト動物が、マウスである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
所望のアイソタイプの高い親和性の、完全ヒト抗体を産生するための方法であって、ここで、該抗体は、目的の抗原に特異的であり、該方法は、請求項２４〜２６に記載のいずれか１項に記載のトランスジェニックまたはキメラの非ヒト動物を、目的の抗原に接触させて、該動物のＢ細胞における抗体産生を誘導する工程、および該抗体を回収する工程を包含する、方法。
【請求項３１】
目的の抗原で免疫化された、請求項２４〜２６にいずれか１項に記載のトランスジェニック非ヒト動物から収集された、抗体産生Ｂ細胞。
【請求項３２】
不死化されている、請求項３１に記載のＢ細胞。
【請求項３３】
前記抗体が、前記トランスジェニックまたはキメラの非ヒト動物の血流から収集される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３４】
前記抗体が、請求項３２に記載の不死化されたＢ細胞から収集される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３５】
前記抗体が、請求項３１に記載のＢ細胞から単離されたＤＮＡでトランスフェクトされた宿主細胞から収集される、請求項３０に記載の方法。