【手続補正書】
【提出日】平成24年9月11日(2012.9.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）に表される化合物、その異性体、アグリコン及び／又はそれらの薬理学的に許容される塩からなるファゴサイトーシス抑制剤。
【化１】
2011068572.tif 000001
[式中、R1は、単糖類残基又は二糖類残基を表し、R2及びＲ3は、水素原子、炭素数１〜６の直鎖又は分岐のアルキル基を表す。]
【請求項２】
前記一般式（１）に表される化合物が、下記一般式（２）で表される化合物、その異性体、アグリコン及び／又はそれらの薬理学的に許容される塩であることを特徴とする、請求項１に記載のファゴサイトーシス抑制剤。
【化２】
2011068572.tif 000002
[式中、R4は、単糖類残基又は二糖類残基を表す。]
【請求項３】
前記の単糖類残基又は二糖類残基が、グルコース、ガラクトース、マンノース、キシロース、フルクトース、マルトース、セロビオース、ゲンチオビオース、コージビオース、ラミナリビオース、ニゲロース、サンブビオース、ネオヘスペリドース、マルトトリオース、イソマルトトリオース、セロトリオース及びゲンチオトリオースより選択される１種又は２種であることを特徴とする、請求項１又は２に記載のファゴサイトーシス抑制剤。
【請求項４】
請求項１〜３に記載の化合物が、３β，１６β，２３−Trihydroxy−１３，２８−epoxyurs−11−ene−３−O−β−glucopyranoside、その異性体、アグリコン及び／又はそれらの薬理学的に許容される塩であることを特徴とする、請求項１〜３の何れか一項に記載のファゴサイトーシス抑制剤。
【化３】
2011068572.tif 000003
３β，１６β，２３−Trihydroxy−１３，２８−epoxyurs−11−ene−３−O−β−glucopyranoside（３）
【請求項５】
一般式（１）に表される化合物、その異性体、アグリコン及び／又はそれらの薬理学的に許容される塩の起源が、シソ科に属する植物より得られる抽出物であることを特徴とする、請求項１〜４の何れか一項に記載のファゴサイトーシス抑制剤。
【請求項６】
前記シソ科に属する植物が、シソ科メリッサ属メリッサ（Mellissa officinalis）であることを特徴とする、請求項５に記載のファゴサイトーシス抑制剤。
【請求項７】
請求項１〜６に記載のファゴサイトーシス抑制剤を含有する皮膚外用剤。
【請求項８】
前記の一般式（１）に表される化合物、その異性体、アグリコン及び／又はそれらの薬理学的に許容される塩を、皮膚外用剤全量に対し０．０００００１質量％〜１０質量％含有することを特徴とする、請求項７に記載の皮膚外用剤。
【請求項９】
前記シソ科メリッサ属メリッサの植物抽出物は、皮膚外用剤全量に対し０．０００１質量％〜１０質量％含有することを特徴とする、請求項８に記載の皮膚外用剤。
【請求項１０】
油中水乳化剤形であることを特徴とする、請求項７〜９の何れか一項に記載の皮膚外用剤。
【請求項１１】
化粧料（但し、医薬部外品を含む）であることを特徴とする、請求項７〜１０の何れか一項に記載の皮膚外用剤。
【請求項１２】
色素沈着予防用であることを特徴とする、請求項７〜１１の何れか一項に記載の皮膚外用剤。
【請求項１３】
紫外線照射の直後に使用することを特徴とする、請求項７〜１２の何れか一項に記載の皮膚外用剤。
【請求項１４】
請求項１−６の何れか一項に記載のファゴサイトーシス抑制剤を含有する皮膚外用剤の製造方法であって、シソ科メリッサ属メリッサ乃至はその近類植物を選択し、地上部又は全草を採取し、エタノール溶媒で抽出した後、分画精製し、ファゴサイトーシス抑制作用を確認したしかる後に、皮膚外用剤に配合させることを特徴とする、製造方法。
【請求項１５】
下記一般式（１）に表される化合物、その異性体、アグリコン及び／又はそれらの薬理学的に許容される塩よりなるファゴサイトーシス抑制剤を含有する皮膚外用剤の製造方法であって、標識化マイクロビーズを加え、検体の存在下、乃至は、検体の非存在下、ケラチノサイトを培養し、マイクロビーズのケラチノサイトへの取り込みを、標識の有無を指標に判別し、マイクロビーズの細胞内への取り込みが、検体の存在により抑制されていることを確認し、しかる後に、皮膚外用剤に配合させることを特徴とする、製造方法。
【化４】
2011068572.tif 000004
[式中、R1は、単糖類残基又は二糖類残基を表し、R2及びＲ3は、水素原子、炭素数１〜６の直鎖又は分岐のアルキル基を表す。]
【請求項１６】
請求項１−６の何れか一項に記載のファゴサイトーシス抑制剤と、メラニン産生抑制剤、メラノサイトのデンドライド伸長抑制剤及びプロトンポンプ阻害剤から選択されるものとを含有することを特徴とする、皮膚外用剤。
【請求項１７】
前記ファゴサイトーシス抑制剤は、標識化マイクロビースを加えて、検体の存在下、乃至は、検体の非存在下、ケラチノサイトを培養し、マイクロビーズのケラチノサイトへの取り込みを、標識の有無を指標に判別し、マイクロビーズの細胞内への取り込みが、検体の存在により抑制されているものであることを特徴とする、請求項１６に記載の皮膚外用剤。
【請求項１８】
前記メラニン産生抑制剤、メラノサイトのデンドライド伸長抑制剤及びプロトンポンプ阻害剤から選択されるものは、次の何れかであることを特徴とする、請求項１６または１７に記載の皮膚外用剤。
（メラニン産生抑制剤）４−アルキルレゾルシノール及び／又はその塩、アスコルビン酸誘導体及び／又はその塩、アルブチン及び／又はその塩、トラネキサム酸及び／又はその誘導体、ウルソール酸及びその誘導体、ビタミンＥ及びその誘導体、パントテテイン−Ｓ−スルホン酸及びその塩
（メラノサイトのデンドライト伸長抑制剤）メチルオフィオポゴナノンＢ、ソフォラフラバノンＡ、キク科セイヨウノコギリソウの抽出物、ユリ科バクモンドウの抽出物
（プロトンポンプ阻害剤）シソ科タチジャコウソウ属タイムの抽出物、ユキノシタ科アジサイ属アマチャの抽出物、サルノコシカケ科マツホド菌核ブクリョウの抽出物、マメ科クララ属クララの抽出物、ショウガ科ショウガ属ショウガの抽出物、ショウブ科ショウブ属ショウブの抽出物、ウリ科ヘチマ属ヘチマの抽出物
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００３】
前記の皮膚外用剤の有効成分となる美白剤が有する作用機作としては、チロシナーゼ阻害、チロシナーゼ関連蛋白の分解、メラノサイトのデンドライトの伸長抑制によるメラニンの移送阻害等の多様な作用機作が存し（例えば、非特許文献１を参照）、それぞれの作用機作に対し美白効果を発揮するのに最適な化学構造的な特徴を有する化合物群が存すると考えられる。高い美白作用を有する化合物を見出すためには、同時に複数の作用機序に働きかける化合物、新規作用機序により美白作用を発現する化合物など、従来にない美白剤を探索することが必要とされる。また、この様な研究に加え、従来の美白剤及び／又は新規な美白剤を用い異なる作用機序を有する美白剤を組み合わせることにより（例えば、特許文献１、特許文献２を参照）、シミ、ソバカスなどの色素沈着に関する症状を予防・改善する方法が盛んに研究されている。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
この様な状況に鑑みて、本発明者等は、紫外線照射後の色素沈着の発生を予防又は改善するための方法を求め、鋭意努力を重ねた結果、下記一般式（１）に表される化合物、その異性体、アグリコン及び／又はそれらの薬理学的に許容される塩、並びに、一般式（１）に表される化合物、その異性体、アグリコン及び／又はそれらの薬理学的に許容される塩、ならびに、該物質を含有する植物抽出物が、ファゴサイトーシス抑制作用を示し、当該ファゴサイトーシス抑制剤を含有する皮膚外用剤が、紫外線照射後の色素沈着発生の予防又は改善に対し優れた効果を有すること、さらには、前記ファゴサイトーシス抑制剤と、メラニン産生抑制剤、メラノサイトのデンドライド伸長抑制剤又はプロトンポンプ阻害剤を共に皮膚外用剤に配合することにより、紫外線照射後の色素沈着の予防又は改善が相乗的に向上することを見出し、本発明を完成させるに至った。即ち、本発明は、以下に示す通りである。
＜１＞ 下記一般式（１）に表される化合物、その異性体、アグリコン及び／又はそれら
の薬理学的に許容される塩からなるファゴサイトーシス抑制剤。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
＜３＞ 前記の単糖類残基又は二糖類残基が、グルコース、ガラクトース、マンノース、
キシロース、フルクトース、マルトース、セロビオース、ゲンチオビオース、コージビオース、ラミナリビオース、ニゲロース、サンブビオース、ネオヘスペリドース、マルトトリオース、イソマルトトリオース、セロトリオース及びゲンチオトリオースより選択される１種又は２種であることを特徴とする、＜１＞又は＜２＞に記載のファゴサイトーシス抑制剤。
＜４＞ ＜１＞〜＜３＞に記載の化合物が、３β，１６β，２３−Trihydroxy−１３，２
８−epoxyurs−11−ene−３−O−β−glucopyranoside、その異性体、アグリコン及び／
又はそれらの薬理学的に許容される塩であることを特徴とする、＜１＞〜＜３＞の何れかに記載のファゴサイトーシス抑制剤。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
＜５＞ 一般式（１）に表される化合物、その異性体、アグリコン及び／又はそれらの薬
理学的に許容される塩の起源が、シソ科に属する植物より得られる抽出物であることを特徴とする、＜１＞〜＜４＞の何れかに記載のファゴサイトーシス抑制剤。
＜６＞ 前記シソ科に属する植物が、シソ科メリッサ属メリッサ（Mellissa officinalis
）であることを特徴とする、＜５＞に記載のファゴサイトーシス抑制剤。
＜７＞ ＜１＞〜＜６＞に記載のファゴサイトーシス抑制剤を含有する皮膚外用剤。
＜８＞ 前記の一般式（１）に表される化合物、その異性体、アグリコン及び／又はそれ
らの薬理学的に許容される塩を、皮膚外用剤全量に対し０．０００００１質量％〜１０質量％含有することを特徴とする、＜７＞に記載の皮膚外用剤。
＜９＞ 前記シソ科メリッサ属メリッサの植物抽出物は、皮膚外用剤全量に対し０．００
０１質量％〜１０質量％含有することを特徴とする、＜８＞に記載の皮膚外用剤。
＜１０＞ 油中水乳化剤形であることを特徴とする、＜７＞〜＜９＞の何れかに記載の皮
膚外用剤。
＜１１＞ 化粧料（但し、医薬部外品を含む）であることを特徴とする、＜７＞〜＜１０
＞の何れかに記載の皮膚外用剤。
＜１２＞ 色素沈着予防用であることを特徴とする、＜７＞〜＜１１＞の何れかに記載の
皮膚外用剤。
＜１３＞ 紫外線照射の直後に使用することを特徴とする、＜７＞〜＜１２＞の何れかに
記載の皮膚外用剤。
＜１４＞ 前記＜１＞〜＜６＞の何れかに記載のファゴサイトーシス抑制剤を含有する皮
膚外用剤の製造方法であって、シソ科メリッサ属メリッサ乃至はその近類植物を選択し、地上部又は全草を採取し、エタノール溶媒で抽出した後、分画精製し、ファゴサイトーシス抑制作用を確認したしかる後に、皮膚外用剤に配合させることを特徴とする、製造方法。
＜１５＞ 下記一般式（１）に表される化合物、その異性体、アグリコン及び／又はそれ
らの薬理学的に許容される塩よりなるファゴサイトーシス抑制剤を含有する皮膚外用剤の製造方法であって、標識化マイクロビーズを加え、検体の存在下、乃至は、検体の非存在下、ケラチノサイトを培養し、マイクロビーズのケラチノサイトへの取り込みを、標識の有無を指標に判別し、マイクロビーズの細胞内への取り込みが、検体の存在により抑制されていることを確認し、しかる後に、皮膚外用剤に配合させることを特徴とする、製造方法。
【化４】
2011068572.tif 000005
（１）
[式中、R1は、単糖類残基又は二糖類残基を表し、R2及びＲ3は、水素原子、炭素数１〜６の直鎖又は分岐のアルキル基を表す。]
＜１６＞ 前記＜１＞〜＜６＞の何れかに記載のファゴサイトーシス抑制剤と、メラニン
産生抑制剤、メラノサイトのデンドライド伸長抑制剤及びプロトンポンプ阻害剤から選択されるものとを含有することを特徴とする、皮膚外用剤。
＜１７＞ 前記ファゴサイトーシス抑制剤は、標識化マイクロビースを加えて、検体の存
在下、乃至は、検体の非存在下、ケラチノサイトを培養し、マイクロビーズのケラチノサイトへの取り込みを、標識の有無を指標に判別し、マイクロビーズの細胞内への取り込みが、検体の存在により抑制されているものであることを特徴とする、＜１６＞に記載の皮膚外用剤。
＜１８＞ 前記メラニン産生抑制剤、メラノサイトのデンドライド伸長抑制剤及びプロト
ンポンプ阻害剤から選択されるものは、次の何れかであることを特徴とする、＜１６＞または＜１７＞の何れかに記載の皮膚外用剤。
（メラニン産生抑制剤）４−アルキルレゾルシノール及び／又はその塩、アスコルビン酸誘導体及び／又はその塩、アルブチン及び／又はその塩、トラネキサム酸及び／又はその誘導体、ウルソール酸及びその誘導体、ビタミンＥ及びその誘導体、パントテテイン−Ｓ−スルホン酸及びその塩
（メラノサイトのデンドライト伸長抑制剤）メチルオフィオポゴナノンＢ、ソフォラフラバノンＡ、キク科セイヨウノコギリソウの抽出物、ユリ科バクモンドウの抽出物
（プロトンポンプ阻害剤）シソ科タチジャコウソウ属タイムの抽出物、ユキノシタ科アジサイ属アマチャの抽出物、サルノコシカケ科マツホド菌核ブクリョウの抽出物、マメ科クララ属クララの抽出物、ショウガ科ショウガ属ショウガの抽出物、ショウブ科ショウブ属ショウブの抽出物、ウリ科ヘチマ属ヘチマの抽出物
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
＜本発明のファゴサイトーシス抑制剤＞
本発明の皮膚外用剤は、前記一般式（１）に表される化合物、その異性体、アグリコン及び／又はそれらの薬理学的に許容される塩からなるファゴサイトーシス抑制剤を含有することを特徴とする。メラニンは、色素細胞（メラノサイト）のメラノソームにおいて合成された後、メラノソームに包含されたままケラチノサイトへ受け渡され、表皮が黒化する。このメラノサイトからケラチノサイトへの受け渡しに際し、ケラチノサイトがメラノソームを取り込む作用がファゴサイトーシス（貧食作用）である。本発明におけるファゴサイトーシス抑制剤とは、前記のケラチノサイトがメラノソームに包含されたメラニンを取り込む作用を抑制する物質を意味する。本発明のファゴサイトーシス抑制剤としては、前記の一般式（１）に表される化合物、その異性体、アグリコン及び／又はそれらの薬理学的に許容される塩であれば、特段の限定なく使用することが出来る。また、本発明におけるファゴサイトーシス抑制剤としては、後記の「ラテックスビーズを用いたファゴサイトーシス抑制効果検討」により、目視又は定量化可能な測定装置により、評価物質添加群が、評価物質非添加群に比較し、蛍光ビーズの取り込みを抑制することが確認される物質が好適に例示出来る。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
ここで一般式（２）に表される化合物、その異性体、アグリコン及び／又はそれらの薬理学的に許容される塩に付いて述べれば、式中、R4は、単糖類残基又は二糖類残基を表す。前記R4は、単糖類残基又は二糖類残基を表し、より好ましくは、単糖類残基が好適に例示出来る。単糖類残基又は二糖類残基としては、グルコース残基、ガラクトース残基、マンノース残基、キシロース残基、フルクトース残基、マルトース残基、セロビオース残基、ゲンチオビオース残基、コージビオース残基、ラミナリビオース残基、ニゲロース残基、サンブビオース残基、ネオヘスペリドース残基、マルトトリオース残基、イソマルトトリオース残基、セロトリオース残基及びゲンチオトリオース残基より選ばれる１種又は２種の糖類が好適に例示出来、より好ましくは、グルコース残基、ガラクトース残基等が好適に例示出来る。前記一般式（２）に表される化合物、その異性体、アグリコン及び／又はそれらの薬理学的に許容される塩に関し、具体例を挙げれば３β，１６β，２３−trihydroxy−１３，２８−epoxyurs−11−ene−３−O−β−glucopyranoside、３α，１６β，２３−trihydroxy−１３，２８−epoxyurs−11−ene−３−O−α−glucopyranoside（化合物１）、３β，１６β，２３−trihydroxy−１３，２８−epoxyurs−11−ene−３−O−β−galactopyranoside、３α，１６β，２３−trihydroxy−１３，２８−epoxyurs−11−ene−３−O−α−galactopyranoside、その異性体、アグリコン及び／又はそれらの薬理学的に許容される塩が好適に例示出来、より好ましくは、３β，１６β，２３−trihydroxy−１３，２８−epoxyurs−11−ene−３−O−β−glucopyranoside（化合物１）、３β，１６β，２３−Trihydroxy−１３，２８−epoxyurs−11−ene−３−O−β−galactoside、その異性体、アグリコン及び／又はそれらの薬理学的に許容される塩が好適に例示出来る。かかる化合物は、ファゴサイトーシス抑制作用、取りわけ、ケラチノサイトのファゴサイトーシス抑制作用に対する力価、安全性又は皮膚貯留性に優れる。さらには、ファゴサイトーシス抑制作用とは、全く異なる作用機序により美白作用を発揮する後記の美白成分と共に配合することにより美白効果が増強される等の利点が存する。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
かかる一般式（１）に表される化合物、その異性体、アグリコン及び／又はそれらの薬理学的に許容される塩は、精製されたものであってもよいが、一般式（１）に表される化合物、その異性体、アグリコン及び／又はそれらの薬理学的に許容される塩を有効成分として含む植物の抽出物若しくはその分画物等であってもよく、この様な植物としては、シソ科に属する植物、例えば、シソ科メリッサ属メリッサなどを挙げることができる。尚、本発明においては、抽出物とは、抽出物自体、抽出物の分画、精製した分画、抽出物乃至は
分画、精製物の溶媒除去物の総称を意味する。実際、一般式（１）に表される化合物は、天然にも存していることから、天然物より抽出し、精製を行い得ることも出来る（例えば、非特許文献４を参照）。一般式（１）に表される化合物、その異性体、アグリコンとしては、例えば、下記の３β，１６β，２３−trihydroxy−１３，２８−epoxyurs−11−ene−３−O−β−glucopyranoside（化合物１）が好適に例示出来、かかる化合物は、シソ科メリッサ属メリッサの植物体の抽出物に含有される。かかるシソ科メリッサ属メリッサの抽出物作製に用いる植物部位としては、全草または地上部が好適に例示出来る。メリッサは、南ヨーロッパ原産の植物であり、比較的早い時期に日本に移入され、現在は日本全土においてその成育が認められ、一部には自生しているところも存する。本発明の実施例では、日本で育成されたメリッサを購入し、使用した。抽出に際して、植物体乃至はその乾燥物は予め、粉砕或いは細切して抽出効率を向上させるように加工することが好ましい。抽出物は、植物体乃至はその乾燥物１質量部に対して、溶媒を１〜３０質量部加え、室温であれば数日間、沸点付近の温度であれば数時間浸漬する。浸漬後は、室温まで冷却し、所望により不溶物を除去した後、溶媒を減圧濃縮するなどにより除去することが出来る。しかる後、シリカゲルやイオン交換樹脂を充填したカラムクロマトグラフィーなどで分画精製し、所望の抽出物を得ることが出来る。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
【化５】
2011068572.tif 000006
３β，１６β，２３−Trihydroxy−１３，２８−epoxyurs−11−ene−３−O−β−glucopyranoside（化合物１）
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２８】
＜本発明におけるメラニン産生抑制剤、メラノサイトのデンドライド伸長抑制剤及びプロトンポンプ阻害剤＞
本発明におけるメラニン産生抑制剤、メラノサイトのデンドライド伸長抑制剤及びプロトンポンプ阻害剤は、メラニン産生抑制作用、メラノサイトのデンドライド伸長抑制作用又はプロトンポンプ阻害作用を有する物質であれば、特段の限定なく適応することが出来る。本発明におけるメラニン産生抑制剤、メラノサイトのデンドライド伸長抑制剤、並びに、プロトンポンプ阻害剤は、単純な化学物質、生薬及び動植物からの抽出物を意味し、かかる成分を唯１種のみ含有することも出来るし、２種以上を組み合わせて含有させることも出来る。ここで、本発明の抽出物とは、抽出物自体、抽出物の分画、精製した分画、抽出物乃至は分画、精製物の溶媒除去物の総称を意味する。本発明におけるメラニン産生抑制作用を有する物質とは、例えば、特開２００９−１５５２３６号公報などに記載の方法に従い、正常ヒト表皮メラノサイトを用いたメラニン産生抑制作用評価において、化合物又は植物抽出物を添加し、培養した場合、溶媒コントロールに比較し、明らかに黒味の少ない挙動を示す物質などが好適に例示出来る。具体的には、評価物質を添加し培養した後のメラニン量が、溶媒コントロールに比較し５０％以下である物質が好適に例示出来る。また、本発明におけるメラノサイトのデンドライド伸長抑制作用を有する物質とは、例えば、特開２００９−０４６５０３号公報に記載のデンドライド伸長抑制作用評価において、デンドライド増殖因子を加えたコントロール群に比較し、デンドライドの伸長が抑制されている物質が好適に例示出来る。さらに、本発明におけるプロトンポンプ阻害作用を有する物質とは、例えば、特開２０１０−２０２５８６号公報に記載のヒト正常メラノサイトを用いた細胞内酸性化作用の評価方法に従い、プロトンポンプ阻害作用を評価した場合に、pH感受性蛍光色素の発色強度が、レーザー顕微鏡による目視観察により発色強度の増強が認められる物質などが好適に例示出来る。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５１】
結果を図３に示す。本発明のシソ科メリッサ属メリッサより得られる植物抽出物は、評価物質を添加しないコントロール群に比較し、合成メラニンの取り込みが抑制されていた。図３の結果より、本発明のシソ科メリッサ属メリッサより得られる植物抽出物は、顕著なファゴサイトーシス抑制作用を示すことが認められた。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５４】
＜紫外線照射後の色素沈着に対する予防効果の検討＞
紫外線照射後炎症を起こし、該炎症部位が色素沈着を起こす特性を有するパネラー（ｎ＝１）を用いて、色素沈着予防効果を検討した。即ち、前腕内側部に１．５ｃｍ×１．５ｃｍの部位を上下２段に分け合計４箇所を設け、部位１〜３は最少紅斑量（ＭＥＤ）の１．５倍の紫外線照射を行い、部位１〜３には、照射後直ちに化粧料１、比較例１をそれぞれ４０μＬ投与し、部位３は照射対照とし、部位４は無処置対照とした。照射後２４時間に紅斑の程度をドレーズの基準（−：無反応、±：擬陽性反応、＋：明瞭な紅斑を伴う反応、＋＋：浮腫を伴う反応）に従って判定し、更に、その１０日後に、色素沈着の指標となる、無処置部位とのＬ値の差をコニカミノルタ色彩色差計ＣＲ４００で計測した。結果を表２に示す。表２の結果より、「本発明のファゴサイトーシス抑制剤（化合物１）」には、紫外線照射による色素沈着に対する予防効果が認められた。結果を表２に示す。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５７】
表１に記載の成分中、「本発明のファゴサイトーシス抑制剤（化合物１）」として、「本発明のシソ科メリッサ属メリッサより得られる植物抽出物」を用い、皮膚外用剤（化粧料３）を製造した。本発明のシソ科メリッサ属メリッサより得られる植物抽出物の皮膚外用剤全量に対する割合は、０．１質量％であり、表１における増減分は、水にて調整した。実施例４に記載の方法に従い、化粧料３の紫外線による色素沈着予防効果を検討したところ、△Ｌ値は、−１．３４であり、顕著な色素沈着予防効果が認められた。