(57)【要約】  診断精度の高い気分障害の罹患の可能性の試験方法を提供することを第１の目的とする。  前記第１の目的を達成するために、本発明の気分障害の罹患可能性を試験する方法は、被検者の生体試料における下記（ａ）および（ｂ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を測定する測定工程、および測定した前記シトシンのメチル化率を、基準値と比較することにより、気分障害の罹患の可能性を試験する試験工程を含むことを特徴とする。（ａ）（１）〜（５０６）および（５０７）のGeneome  Research  Consortium  human  genome  build  37/UCSC  human  genome  19（ＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９）の座標で特定されるサイト（ｂ）（６００）〜（６４６）および（６４７）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
2016021719.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被検者の生体試料における下記（ａ）および（ｂ）からなる群から選択された少なくとも１つサイトのシトシンのメチル化率を測定する測定工程、および
測定した前記シトシンのメチル化率を、基準値と比較することにより、気分障害の罹患の可能性を試験する試験工程を含むことを特徴とする、気分障害の罹患可能性を試験する方法。
（ａ）下記（１）〜（５０６）および（５０７）のGeneome  Research  Consortium  human  genome  build  37/UCSC  human  genome  19（ＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９）の座標で特定されるサイト
（ｂ）下記（６００）〜（６４６）および（６４７）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
【表１Ａ】
2016021719.tif 000056
【表１Ｂ】
2016021719.tif 000057
【表１Ｃ】
2016021719.tif 000058
【表１Ｄ】
2016021719.tif 000059
【請求項２】
前記基準値が、健常者の生体試料における対応する前記サイトのシトシンのメチル化率または気分障害患者の生体試料における対応する前記サイトのシトシンのメチル化率である、請求項１記載の気分障害の罹患可能性を試験する方法。
【請求項３】
前記試験工程において、前記（ａ）および（ｂ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンが、対応する下記の条件を満たす場合、前記被検者は、気分障害に罹患する可能性があるとする、請求項２記載の気分障害の罹患可能性を試験する方法。
（ｘ１）前記サイトが前記（ａ）のサイトの場合、前記被検者の生体試料における前記サイトのシトシンのメチル化率が、前記健常者の生体試料における対応するシトシンのメチル化率よりも低い場合、または前記気分障害患者の生体試料における対応するシトシンのメチル化率以下の場合
（ｙ１）前記サイトが前記（ｂ）のサイトの場合、前記被検者の生体試料における前記サイトのシトシンのメチル化率が、前記健常者の生体試料における対応するシトシンのメチル化率よりも高い場合、または前記気分障害患者の生体試料における対応するシトシンのメチル化率以上の場合
【請求項４】
前記生体試料が、全血である、請求項１から３のいずれか一項に記載の気分障害の罹患可能性を試験する方法。
【請求項５】
前記生体試料が、血球および白血球の少なくとも一方である、請求項１から４のいずれか一項に記載の気分障害の罹患可能性を試験する方法。
【請求項６】
前記気分障害が、うつ病および双極性感情障害の少なくとも一方である、請求項１から５のいずれか一項に記載の気分障害の罹患可能性を試験する方法。
【請求項７】
下記（ａ）および（ｂ）からなる群から選択された少なくとも１つのＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイトのメチル化シトシンを含むことを特徴とする、気分障害マーカー。
（ａ）下記（１）〜（５０６）および（５０７）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｂ）下記（６００）〜（６４６）および（６４７）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
【請求項８】
請求項１から６のいずれか一項に記載の試験方法に使用する試験試薬であって、下記（ａ）および（ｂ）からなる群から選択された少なくとも１つのＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイトのメチル化シトシンの測定試薬を含むことを特徴とする、気分障害の試験試薬。
（ａ）下記（１）〜（５０６）および（５０７）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｂ）下記（６００）〜（６４６）および（６４７）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
【請求項９】
気分障害の治療用候補物質のスクリーニング方法であって、被検物質から、下記（ａ’）および（ｂ’）の少なくとも一方の条件を満たす被検物質を、前記治療用候補物質として選択する選択工程を含むことを特徴とする、気分障害の治療用候補物質のスクリーニング方法。
（ａ’）下記（ａ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を増加させる
（ｂ’）下記（ｂ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を低下させる
（ａ）下記（１）〜（５０６）および（５０７）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｂ）下記（６００）〜（６４６）および（６４７）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
【請求項１０】
被検者の生体試料における下記（ｃ）、（ｄ）または（ｅ）のサイトのシトシンのメチル化率を測定する測定工程、および
測定した前記シトシンのメチル化率を、基準値と比較することにより、統合失調症の罹患の可能性を試験する試験工程を含むことを特徴とする、統合失調症の罹患可能性を試験する方法。
（ｃ）下記（ｆ）および（ｇ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイト
（ｄ）下記（ｆ）および（ｇ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイト、ならびに下記（ｈ）および（ｉ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイト
（ｅ）下記（ｈ）および（ｉ）からなる群から選択された少なくとも２つのサイト
（ｆ）下記（１０００）〜（１８６７）および（１８６８）のGeneome  Research  Consortium  human  genome  build  37/UCSC  human  genome  19（ＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９）の座標で特定されるサイト
（ｇ）下記（５５００）〜（５５２９）および（５５３０）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｈ）下記（６０００）〜（６０５９）および（６０６０）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｉ）下記（６１００）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
【表２Ａ】
2016021719.tif 000060
【表２Ｂ】
2016021719.tif 000061
【表２Ｃ】
2016021719.tif 000062
【表２Ｄ】
2016021719.tif 000063
【表２Ｅ】
2016021719.tif 000064
【表３】
2016021719.tif 000065
【表４】
2016021719.tif 000066
【表５】
2016021719.tif 000067
【請求項１１】
前記基準値が、健常者の生体試料における対応する前記サイトのシトシンのメチル化率または統合失調症患者の生体試料における対応する前記サイトのシトシンのメチル化率である、請求項１０記載の統合失調症の罹患可能性を試験する方法。
【請求項１２】
前記試験工程において、前記（ｃ）、（ｄ）または（ｅ）のサイトのシトシンが、対応する下記の条件を満たす場合、前記被検者は、統合失調症に罹患する可能性があるとする、請求項１１記載の統合失調症の罹患可能性を試験する方法。
（ｘ２）前記サイトが前記（ｆ）または前記（ｈ）のサイトの場合、前記被検者の生体試料における前記サイトのシトシンのメチル化率が、前記健常者の生体試料における対応するシトシンのメチル化率よりも高い場合、または前記統合失調症患者の生体試料における対応するシトシンのメチル化率以上の場合
（ｙ２）前記サイトが前記（ｇ）または前記（ｉ）のサイトの場合、前記被検者の生体試料における前記サイトのシトシンのメチル化率が、前記健常者の生体試料における対応するシトシンのメチル化率よりも低い場合、または前記統合失調症患者の生体試料における対応するシトシンのメチル化率以下の場合
【請求項１３】
前記生体試料が、全血である、請求項１０から１２のいずれか一項に記載の試験方法。
【請求項１４】
前記生体試料が、血球および白血球の少なくとも一方である、請求項１０から１３のいずれか一項に記載の試験方法。
【請求項１５】
下記（ｆ）および（ｈ）のサイトのメチル化シトシン、ならびに下記（ｇ）および（ｉ）のサイトのメチル化シトシンからなる群から選択された少なくとも２つを含むことを特徴とする、統合失調症マーカーセット。
（ｆ）前記（１０００）〜（１８６７）および（１８６８）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｇ）前記（５５００）〜（５５２９）および（５５３０）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｈ）前記（６０００）〜（６０５９）および（６０６０）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｉ）前記（６１００）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
【請求項１６】
請求項１０から１４のいずれか一項に記載の試験方法に使用する試験試薬であって、下記（ｃ）、（ｄ）または（ｅ）のサイトのシトシンのメチル化シトシンの測定試薬を含むことを特徴とする、統合失調症の試験試薬。
（ｃ）下記（ｆ）および（ｇ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイト
（ｄ）下記（ｆ）および（ｇ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイト、ならびに下記（ｈ）および（ｉ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイト
（ｅ）下記（ｈ）および（ｉ）からなる群から選択された少なくとも２つのサイト
（ｆ）前記（１０００）〜（１８６７）および（１８６８）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｇ）前記（５５００）〜（５５２９）および（５５３０）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｈ）前記（６０００）〜（６０５９）および（６０６０）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｉ）前記（６１００）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
【請求項１７】
統合失調症の治療用候補物質のスクリーニング方法であって、被検物質から、下記（ｃ’）、（ｄ’）または（ｅ’）の条件を満たす被検物質を、前記治療用候補物質として選択する選択工程を含むことを特徴とする、統合失調症の治療用候補物質のスクリーニング方法。
（ｃ’）下記（ｆ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を低下させる、および／または下記（ｇ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を増加させる
（ｄ’）下記（ｆ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を低下させる、および／または下記（ｇ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を増加させる、ならびに
下記（ｈ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を低下させる、および／または下記（ｉ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を増加させる
（ｅ’）下記（ｈ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を低下させる、および／または下記（ｉ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を増加させる
（ｆ）前記（１０００）〜（１８６７）および（１８６８）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｇ）前記（５５００）〜（５５２９）および（５５３０）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｈ）前記（６０００）〜（６０５９）および（６０６０）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｉ）前記（６１００）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
【請求項１８】
下記（ｆ）のサイトのメチル化シトシンおよび下記（ｇ）のサイトのメチル化シトシンからなる群から選択された少なくとも１つを含むことを特徴とする、新規統合失調症マーカー。
（ｆ）前記（１０００）〜（１８６７）および（１８６８）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｇ）前記（５５００）〜（５５２９）および（５５３０）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、気分障害マーカー、それを用いた気分障害の罹患の可能性の試験方法、および試験試薬に関し、また、統合失調症マーカー、それを用いた統合失調症の罹患の可能性の試験方法、および試験試薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
大うつ病性障害は、多くの精神的障害および身体的障害を引き起こすため、うつ病（Major  depressive  disorder、ＭＤＤ）の罹患者は、社会生活をおくることが困難となる。ＭＤＤの生涯有病率は、約１６または１７％と推計されており、女性は、男性の約２倍の有病率であることが報告されている（非特許文献１）。【０００３】
ＭＤＤの発症には、生物学的要因、遺伝的要因、環境的要因を含む複数の要因が関連しているが、決定的な診断方法は、未だ確立されていない。このため、ＭＤＤは、患者の症状に基づいて診断されている。しかしながら、症状に基づく診断は、大きなばらつきがあり、診断精度が低いという問題があった（非特許文献２）。このため、診断精度の高いうつ病を含む気分障害の罹患の可能性の試験方法が求められている。【０００４】
また、他の精神疾患である統合失調症（Schizophrenia、ＳＣＺ）においても、ＭＤＤと同様に、症状に基づく診断は、大きなばらつきがあり、診断精度が低いという問題があった（非特許文献３）。【０００５】
このため、診断精度の高い統合失調症の罹患の可能性の試験方法が求められている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Kessler  RC．  et．al．  “The  epidemiology  of  major  depressive  disorder:  results  from  the  National  Comorbidity  Survey  Replication  (NCS-R)．”  JAMA．2003  Jun  18；289（23）：3095-105．
【非特許文献２】Mitchell  AJ．  et．al．  “Clinical  diagnosis  of  depression  in  primary  care：a  meta-analysis．”  Lancet  2009；374(9690)：609-19.
【非特許文献３】Bromet  EJ  et  al.  Diagnostic  shifts  during  the  decade  following  first  admission  for  psychosis.  Am  J  Psychiatry.  2011  Nov；168(11):1186-94.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
そこで、本発明は、診断精度の高い気分障害の罹患の可能性の試験方法を提供することを第１の目的とする。【０００８】
また、本発明は、診断精度の高い統合失調症の罹患の可能性の試験方法を提供することを第２の目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
前記第１の目的を達成するために、本発明の気分障害の罹患可能性を試験する方法は、被検者の生体試料における下記（ａ）および（ｂ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を測定する測定工程、および
測定した前記シトシンのメチル化率を、基準値と比較することにより、気分障害の罹患の可能性を試験する試験工程を含むことを特徴とする。
（ａ）下記（１）〜（５０６）および（５０７）のGeneome  Research  Consortium  human  genome  build  37/UCSC  human  genome  19（ＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９）の座標で特定されるサイト
（ｂ）下記（６００）〜（６４６）および（６４７）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト【００１０】
【表１Ａ】
2016021719.tif 000003
【００１１】
【表１Ｂ】
2016021719.tif 000004
【００１２】
【表１Ｃ】
2016021719.tif 000005
【００１３】
【表１Ｄ】
2016021719.tif 000006
【００１４】
本発明の気分障害マーカーは、下記（ａ）および（ｂ）からなる群から選択された少なくとも１つのＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイトのメチル化シトシンを含むことを特徴とする。
（ａ）下記（１）〜（５０６）および（５０７）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｂ）下記（６００）〜（６４６）および（６４７）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト【００１５】
本発明の気分障害の試験試薬は、前記本発明の気分障害の罹患可能性を試験する方法に使用する試験試薬であって、下記（ａ）および（ｂ）からなる群から選択された少なくとも１つのＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイトのメチル化シトシンの測定試薬を含むことを特徴とする。
（ａ）下記（１）〜（５０６）および（５０７）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｂ）下記（６００）〜（６４６）および（６４７）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト【００１６】
本発明の気分障害の治療用候補物質のスクリーニング方法は、気分障害の治療用候補物質のスクリーニング方法であって、被検物質から、下記（ａ’）および（ｂ’）の少なくとも一方の条件を満たす被検物質を、前記治療用候補物質として選択する選択工程を含むことを特徴とする。
（ａ’）下記（ａ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を増加させる
（ｂ’）下記（ｂ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を低下させる
（ａ）下記（１）〜（５０６）および（５０７）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｂ）下記（６００）〜（６４６）および（６４７）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト【００１７】
本発明の統合失調症の罹患可能性を試験する方法は、被検者の生体試料における下記（ｃ）、（ｄ）または（ｅ）のサイトのシトシンのメチル化率を測定する測定工程、および
測定した前記シトシンのメチル化率を、基準値と比較することにより、統合失調症の罹患の可能性を試験する試験工程を含むことを特徴とする。
（ｃ）下記（ｆ）および（ｇ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイト
（ｄ）下記（ｆ）および（ｇ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイト、ならびに下記（ｈ）および（ｉ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイト
（ｅ）下記（ｈ）および（ｉ）からなる群から選択された少なくとも２つのサイト
（ｆ）下記（１０００）〜（１８６７）および（１８６８）のGeneome  Research  Consortium  human  genome  build  37/UCSC  human  genome  19（ＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９）の座標で特定されるサイト
（ｇ）下記（５５００）〜（５５２９）および（５５３０）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｈ）下記（６０００）〜（６０５９）および（６０６０）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｉ）下記（６１００）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト【００１８】
【表２Ａ】
2016021719.tif 000007
【００１９】
【表２Ｂ】
2016021719.tif 000008
【００２０】
【表２Ｃ】
2016021719.tif 000009
【００２１】
【表２Ｄ】
2016021719.tif 000010
【００２２】
【表２Ｅ】
2016021719.tif 000011
【００２３】
【表３】
2016021719.tif 000012
【００２４】
【表４】
2016021719.tif 000013
【００２５】
【表５】
2016021719.tif 000014
【００２６】
本発明の統合失調症マーカーセットは、下記（ｆ）および（ｈ）のサイトのメチル化シトシン、ならびに下記（ｇ）および（ｉ）のサイトのメチル化シトシンからなる群から選択された少なくとも２つを含むことを特徴とする。
（ｆ）前記（１０００）〜（１８６７）および（１８６８）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｇ）前記（５５００）〜（５５２９）および（５５３０）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｈ）前記（６０００）〜（６０５９）および（６０６０）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｉ）前記（６１００）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト【００２７】
本発明の統合失調症の試験試薬は、前記本発明の試験方法に使用する試験試薬であって、下記（ｃ）、（ｄ）または（ｅ）のサイトのシトシンのメチル化シトシンの測定試薬を含むことを特徴とする。
（ｃ）下記（ｆ）および（ｇ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイト
（ｄ）下記（ｆ）および（ｇ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイト、ならびに下記（ｈ）および（ｉ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイト
（ｅ）下記（ｈ）および（ｉ）からなる群から選択された少なくとも２つのサイト
（ｆ）前記（１０００）〜（１８６７）および（１８６８）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｇ）前記（５５００）〜（５５２９）および（５５３０）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｈ）前記（６０００）〜（６０５９）および（６０６０）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｉ）前記（６１００）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト【００２８】
本発明の統合失調症の治療用候補物質のスクリーニング方法は、統合失調症の治療用候補物質のスクリーニング方法であって、被検物質から、下記（ｃ’）、（ｄ’）または（ｅ’）の条件を満たす被検物質を、前記治療用候補物質として選択する選択工程を含むことを特徴とする。
（ｃ’）下記（ｆ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を低下させる、および／または下記（ｇ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を増加させる
（ｄ’）下記（ｆ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を低下させる、および／または下記（ｇ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を増加させる、ならびに
下記（ｈ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を低下させる、および／または下記（ｉ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を増加させる
（ｅ’）下記（ｈ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を低下させる、および／または下記（ｉ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を増加させる
（ｆ）前記（１０００）〜（１８６７）および（１８６８）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｇ）前記（５５００）〜（５５２９）および（５５３０）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｈ）前記（６０００）〜（６０５９）および（６０６０）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｉ）前記（６１００）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト【００２９】
本発明の新規統合失調症マーカーは、下記（ｆ）のサイトのメチル化シトシンおよび下記（ｇ）のサイトのメチル化シトシンからなる群から選択された少なくとも１つを含むことを特徴とする。
（ｆ）前記（１０００）〜（１８６７）および（１８６８）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｇ）前記（５５００）〜（５５２９）および（５５３０）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
【発明の効果】
【００３０】
本発明者らは、鋭意研究の結果、生体における少なくとも１つ以上の前記サイトのメチル化シトシン（気分障害マーカー）と気分障害の発生とが相関を示すことを見出し、本発明を確立するに至った。このため、本発明によれば、少なくとも１つ以上の前記気分障害マーカーを測定することによって、高い診断精度で被検者の気分障害の罹患可能性を試験できる。また、本発明において、気分障害の罹患により少なくとも１つ以上の前記サイトのシトシンのメチル化率が変化することから、例えば、少なくとも１つ以上の前記気分障害マーカーを用いたスクリーニングにより、気分障害の治療用候補物質を得ることもできる。このため、本発明は、臨床分野および生化学分野等において極めて有用である。【００３１】
また、本発明者らは、鋭意研究の結果、生体における少なくとも１つ以上の前記サイトのメチル化シトシン（統合失調症マーカー）と統合失調症の発生とが相関を示すことを見出し、本発明を確立するに至った。このため、本発明によれば、少なくとも１つ以上の前記統合失調症マーカーを測定することによって、高い診断精度で被検者の統合失調症の罹患可能性を試験できる。また、本発明において、統合失調症の罹患により少なくとも１つ以上の前記サイトのシトシンのメチル化率が変化することから、例えば、少なくとも１つ以上の前記統合失調症マーカーを用いたスクリーニングにより、統合失調症の治療用候補物質を得ることもできる。このため、本発明は、臨床分野および生化学分野等において極めて有用である。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】図１は、実施例１における、ＭＤＤの罹患可能性のスコアを示すプロット図である。
【図２】図２は、実施例２における、ＳＣＺの罹患可能性のスコアを示すプロット図である。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
１．気分障害マーカーおよびその用途
まず、本発明の気分障害の罹患の可能性の試験方法、気分障害マーカー、気分障害の試験試薬、気分障害の治療薬のスクリーニング方法等について説明する。
【００３４】
１Ａ．気分障害の罹患可能性を試験する方法
本発明の気分障害の罹患可能性を試験する方法（以下、「気分障害の試験方法」ともいう。）は、前述のように、被検者の生体試料における下記（ａ）および（ｂ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイト（以下、「（ａ）および（ｂ）のサイト」ともいう。）のシトシンのメチル化率を測定する測定工程、および
測定した前記シトシンのメチル化率を、基準値と比較することにより、気分障害の罹患の可能性を試験する試験工程を含むことを特徴とする。
（ａ）下記（１）〜（５０６）および（５０７）のGeneome  Research  Consortium  human  genome  build  37/UCSC  human  genome  19（ＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９）の座標で特定されるサイト
（ｂ）下記（６００）〜（６４６）および（６４７）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
【００３５】
本発明において、前記（ａ）および（ｂ）のサイトは、例えば、前述の表１Ａ〜１Ｄを参照できる。
【００３６】
本発明の気分障害の試験方法は、前記（ａ）および（ｂ）のサイトのシトシンのメチル化率を測定することが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明の気分障害の試験方法は、前記少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を測定することで、例えば、従来の症状に基づく診断方法に対して、高い診断精度で被検者の気分障害の罹患の可能性を試験することができる。本発明において、診断精度とは、例えば、感度、特異度等があげられる。本発明において、「感度が高い」とは、例えば、罹患患者が陽性となる確率が高いことを意味し、「特異度が高い」は、罹患していない健常者が陰性となる確率が高いことを意味する。対象となる気分障害は、例えば、うつ病、双極性感情障害等があげられる。
【００３７】
生体内において、メチル化シトシンは、例えば、シトシン−リン酸−グアニン（ＣｐＧ）のシトシンがメチル化され、メチル化ＣｐＧとなることで生じる。このため、前記シトシンは、例えば、ＣｐＧということもでき、前記メチル化シトシンは、例えば、メチル化ＣｐＧということもでき、また、前記シトシンのメチル化は、例えば、ＣｐＧのメチル化ということもできる。
【００３８】
本発明の気分障害の試験方法によれば、例えば、気分障害の発症の可能性、気分障害の発症の有無、気分障害の予後の状態等を評価できる。
【００３９】
本発明において、前記（ａ）および（ｂ）のサイトの由来は、特に制限されず、例えば、被検者の種類によって適宜設定できる。前記被検者は、例えば、ヒト、ヒトを除く非ヒト動物等があげられ、前記非ヒト動物は、例えば、マウス、ラット、モルモット、イヌ、ネコ、サル、ウサギ、ヒツジ、ウマ等の哺乳類があげられる。
【００４０】
前記（ａ）のサイトのメチル化シトシンは、本発明者らが新たに同定した新規気分障害マーカーである。前記（ａ）のサイトのシトシンは、例えば、気分障害者から単離した生体試料における前記（ａ）のサイトのシトシンのメチル化率が、健常者から単離した生体試料における前記（ａ）のサイトのシトシンのメチル化率より低い。
【００４１】
前記（ａ）のサイトの具体例として、ヒト由来の前記（ａ）のサイトは、例えば、前記表１Ａ〜１Ｃの前記（ａ）のサイトがあげられる。なお、本発明は、この一例には限定されず、前記ヒトを除く非ヒト動物由来の前記（ａ）のサイトを使用してもよい。前記ヒトを除く非ヒト動物由来の前記（ａ）のサイトは、例えば、公知のデータベースに登録されている情報を参照し、前記ヒト由来の前記サイトを含む領域の塩基配列と前記データベースの塩基配列とを比較することで、同定することができる。
【００４２】
前記（ｂ）のサイトのメチル化シトシンは、本発明者らが新たに同定した新規気分障害マーカーである。前記（ｂ）のサイトのシトシンは、例えば、気分障害者から単離した生体試料における前記（ｂ）サイトのシトシンのメチル化率が、健常者から単離した生体試料における前記（ｂ）のサイトのシトシンのメチル化率より高い。
【００４３】
前記（ｂ）のサイトの具体例として、ヒト由来の前記（ｂ）のサイトは、例えば、前記表１Ｄの前記（ｂ）のサイトがあげられる。なお、本発明は、この一例には限定されず、前記ヒトを除く非ヒト動物由来の前記（ｂ）のサイトを使用してもよい。前記ヒトを除く非ヒト動物由来の前記（ｂ）のサイトは、例えば、公知のデータベースに登録されている情報を参照し、前記ヒト由来の前記サイトを含む領域の塩基配列と前記データベースの塩基配列とを比較することで、同定することができる。
【００４４】
本発明において、前記（ａ）および（ｂ）のサイトのシトシンのメチル化は、マイナスストランド側のシトシンのメチル化であってもよいし、プラスストランド側のシトシンのメチル化であってもよいし、両者であってもよい。また、前記（ａ）および（ｂ）のサイトのメチル化シトシンは、マイナスストランド側のメチル化シトシンであってもよいし、プラスストランド側のメチル化シトシンであってもよいし、両者であってもよい。
【００４５】
前記測定工程において、測定するサイトの個数は、その下限は、１つあればよく、好ましくは、４つであり、より好ましくは、１０つであり、その上限は、特に制限されず、例えば、５０つであり、好ましくは、３０つであり、より好ましくは、２０つであり、さらに好ましくは、１７つであり、特に好ましくは、１３つであり、その範囲が、例えば、１〜５０つであり、好ましくは、１〜３０つであり、より好ましくは、１〜２０つであり、さらに好ましくは、４〜１７つであり、特に好ましくは、１０〜１３つである。
【００４６】
本発明の気分障害の試験方法において、前記生体試料の種類は、特に制限はされず、例えば、生体から分離した、体液、体液由来細胞、器官、組織または細胞等があげられる。前記体液は、例えば、血液があげられ、具体例として、例えば、全血、血清、血漿等があげられる。前記体液由来細胞は、例えば、血液由来細胞があげられ、具体的には、血球、白血球等の血球細胞があげられる。前記白血球は、例えば、好中球、好酸球、好塩基球等の顆粒球、リンパ球、単球等があげられる。前記リンパ球は、例えば、Ｂ細胞、顆粒球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｔ細胞等があげられる。また、本発明の気分障害マーカーによれば、例えば、血液由来細胞のゲノムを使用して試験できる。このため、例えば、患者や医師の負担を軽減できることから、前記生体試料は、好ましくは、全血由来のゲノムであり、より好ましくは、血球、白血球、リンパ球由来ゲノムである。
【００４７】
前記測定工程において、前記（ａ）および（ｂ）のサイトのシトシンのメチル化部位は、特に制限されず、例えば、シトシンの５位、６位等があげられる。具体例として、前記メチル化シトシンは、例えば、５−メチルシトシン、５−ヒドロキシメチルシトシン等があげられる。測定する前記メチル化シトシンは、例えば、一種類の前記メチル化シトシンであってもよいし、二種類以上の前記メチル化シトシンであってもよい。
【００４８】
前記測定工程において、前記（ａ）および（ｂ）のサイトのシトシンのストランドは、特に制限されず、例えば、前記マイナスストランドでもよいし、前記プラスストランドでもよいし、両者であってもよい。
【００４９】
前記メチル化シトシンの測定方法は、特に制限されず、公知の方法が採用できる。具体例として、前記メチル化シトシンの測定方法は、例えば、亜硫酸水素塩を用いたバイサルファイトシーケンシング法、メチル化特異的ＰＣＲ（ＭＳＰ）法、ＣＯＢＲＡ法、メチル化感受性制限酵素を使用する方法、抗メチル化シトシン抗体を使用する方法、制限酵素ランドマークゲノムスキャニング（ＲＬＧＳ）法、下記表６に示した前処理工程および分析工程を組合せた方法等があげられる。
【００５０】
【表６】
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【００５１】
本発明の気分障害の試験方法は、例えば、さらに、前記被検者の生体試料（以下、「被検生体試料」ともいう。）における前記シトシンのメチル化率を、基準値と比較することにより、前記被検者の気分障害の罹患可能性を試験する試験工程を含む。前記基準値は、特に制限されず、例えば、健常者、気分障害患者および重症度ごと気分障害患者の前記シトシンのメチル化率等があげられる。また、予後の評価の場合、前記基準値は、例えば、同じ被検者の治療後（例えば、治療直後）の前記シトシンのメチル化率であってもよい。
【００５２】
前記基準値は、例えば、前述のような、健常者および／または気分障害患者から単離した生体試料（以下、「基準生体試料」ともいう。）を用いて、得ることができる。また、予後の評価の場合、例えば、同じ被検者から治療後に単離した基準生体試料を用いてもよい。前記基準値は、例えば、前記被検者の被検生体試料と同時に測定してもよいし、予め測定してもよい。後者の場合、例えば、前記被検者の被検生体試料を測定する度に、基準値を得ることが不要となるため、好ましい。前記被検者の被検生体試料と前記基準生体試料は、例えば、同じ条件で採取し、同じ条件で前記シトシンのメチル化率の測定を行うことが好ましい。
【００５３】
前記試験工程において、被検者の気分障害の罹患の可能性の評価方法は、特に制限されず、前記基準値の種類によって適宜決定できる。具体例として、前記気分障害患者から単離した生体試料における前記サイトのシトシンのメチル化率が、健常者から単離した生体試料における対応するシトシンのメチル化率より低い前記（ａ）のサイトの場合、前記被検者の被検生体試料における前記サイトのシトシンのメチル化率が、前記健常者の基準生体試料における対応するシトシンのメチル化率よりも有意に低い場合、前記気分障害患者の基準生体試料における対応するシトシンのメチル化率と同じ場合（有意差がない場合）、および／または、前記気分障害患者の基準生体試料における対応するシトシンのメチル化率よりも有意に低い場合、前記被検者は、気分障害に罹患する可能性があるまたは可能性が高いと評価できる。また、前記被検者の被検生体試料における前記サイトのシトシンのメチル化率が、前記健常者の基準生体試料における対応するシトシンのメチル化率と同じ場合（有意差が無い場合）、前記健常者の基準生体試料における対応するシトシンのメチル化率よりも有意に高い場合、および／または、前記気分障害患者の基準生体試料における対応するシトシンのメチル化率よりも有意に高い場合、前記被検者は、気分障害に罹患する可能性が無いまたは可能性が低いと評価できる。
【００５４】
また、前記気分障害患者から単離した生体試料における前記サイトのシトシンのメチル化率が、健常者から単離した生体試料における対応するシトシンのメチル化率より高い前記（ｂ）のサイトの場合、前記被検者の被検生体試料における前記サイトのシトシンのメチル化率が、前記健常者の基準生体試料における対応するシトシンのメチル化率よりも有意に高い場合、前記気分障害患者の基準生体試料における対応するシトシンのメチル化率と同じ場合（有意差がない場合）、および／または、前記気分障害患者の基準生体試料における対応するシトシンのメチル化率よりも有意に高い場合、前記被検者は、気分障害に罹患する可能性があるまたは可能性が高いと評価できる。また、前記被検者の被検生体試料における前記サイトのシトシンのメチル化率が、前記健常者の基準生体試料における対応するシトシンのメチル化率と同じ場合（有意差が無い場合）、前記健常者の基準生体試料における対応するシトシンのメチル化率よりも有意に低い場合、および／または、前記気分障害患者の基準生体試料における対応するシトシンのメチル化率よりも有意に低い場合、前記被検者は、気分障害に罹患する可能性が無いまたは可能性が低いと評価できる。
【００５５】
また、前記試験工程において、前記被検者の被検生体試料における前記サイトのシトシンのメチル化率を、前記重症度ごとの気分障害患者の基準生体試料における対応するシトシンのメチル化率と比較することで、気分障害の重症度を評価できる。具体的には、前記被検者の被検生体試料における前記サイトのシトシンのメチル化率が、例えば、いずれかの重症度の前記基準生体試料における対応するシトシンのメチル化率と同じ場合（有意差がない場合）、前記被検者は、前記重症度の可能性があると評価できる。前記気分障害の重症度を評価する場合、前記サイトのシトシンのメチル化率は、（３６４）〜（５０７）および（６００）〜（６４７）のサイトのシトシンのメチル化率を用いることが好ましい。
【００５６】
前記試験工程において、前記（ａ）および（ｂ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンが、対応する下記の条件を満たす場合、前記被検者は、気分障害に罹患する可能性があると評価することが好ましい。
（ｘ１）前記サイトが前記（ａ）のサイトの場合、前記被検者の生体試料における前記サイトのシトシンのメチル化率が、前記健常者の生体試料における対応するシトシンのメチル化率よりも（有意に）低い場合、または前記気分障害患者の生体試料における対応するシトシンのメチル化率以下の場合
（ｙ１）前記サイトが前記（ｂ）のサイトの場合、前記被検者の生体試料における前記サイトのシトシンのメチル化率が、前記健常者の生体試料における対応するシトシンのメチル化率よりも（有意に）高い場合、または前記気分障害患者の生体試料における対応するシトシンのメチル化率以上の場合
【００５７】
本発明の気分障害の試験方法は、さらに、測定した前記サイトのシトシンのメチル化率から、前記気分障害の罹患の可能性のスコアを算出する算出工程を含み、前記試験工程は、前記算出工程における前記気分障害の罹患の可能性のスコアを、前記スコアの基準値と比較することにより、気分障害の罹患の可能性を試験する工程であってもよい。なお、以下に一例として、前記サイトのシトシンのメチル化率に基づき、スコアを算出し、試験する方法について説明するが、本発明は、これに限定されない。
【００５８】
前記算出工程において、前記気分障害の罹患可能性のスコアの算出する方法は、特に制限されず、例えば、測定した１つの前記サイトのシトシンのメチル化率または２つ以上の前記サイトのシトシンのメチル化率のパターン（以下、「メチル化パターン」ともいう。）、および前記健常者と前記気分障害患者とを分離可能な数式から算出する方法、２つ以上の前記サイトのシトシンメチル化パターンと、前記健常者、前記気分障害患者および／または前記重症度ごとの気分障害患者の対応するシトシンのメチル化パターンとの類似性から算出する方法等があげられ、より診断精度を向上できることから、好ましくは、前者である。
【００５９】
前者の場合、前記サイトのシトシンのメチル化率から前記罹患可能性のスコアを算出する方法は、特に制限されず、例えば、前記健常者と前記気分障害患者とを分離可能な判別式に基づき算出された値を、前記罹患可能性のスコアとしてもよい。また、前記健常者と前記重症度ごとの気分障害患者とを分離可能な判別式に基づき算出された値を、前記罹患可能性のスコアとしてもよい。
【００６０】
前記判別式は、特に制限されず、例えば、重回帰分析、判別分析、主成分分析法、因子分析、機械学習、サポートベクトルマシン、単純ベイズ分類器（naive  Bayes  classifier）、ランダムフォレスト等における判別関数を使用することができる。
【００６１】
前記判別関数の算出方法は、特に制限されず、例えば、前記基準生体試料における前記サイトのメチル化率を用いて、算出することができる。具体例として、前記健常者と前記気分障害患者とを分離可能な判別式を算出する場合、例えば、前記健常者の前記基準生体試料における前記サイトのメチル化率と、前記気分障害患者の前記基準生体試料における前記サイトのメチル化率とを用いて、算出することができる。また、前記健常者と前記重症度ごとの気分障害患者とを分離可能な判別式を算出する場合、例えば、前記健常者の前記基準生体試料における前記サイトのメチル化率と、前記重症度ごとの気分障害患者の前記基準生体試料における前記サイトのメチル化率とを用いて、算出することができる。
【００６２】
前記判別式は、例えば、予め測定した前記基準生体試料の前記サイトのメチル化率に基づき、算出された判別式を使用してもよいし、前記測定工程において、前記被検者の被検生体試料と同時に測定した前記基準生体試料の前記サイトのメチル化率に基づき、算出された判別式を使用してもよい。
【００６３】
前記試験工程において、前記スコアの基準値は、特に制限されず、例えば、使用する前記判別関数に基づき、適宜決定できる。具体例として、前記判別式として、前記判別分析法の判別関数を使用する場合、前記スコアの基準値は、例えば、０があげられる。
【００６４】
前記試験工程において、被検者の気分障害の罹患の可能性の評価方法は、特に制限されず、使用する前記判別式によって適宜決定できる。具体例として、前記健常者を０より大きい値に、前記気分障害患者を０より小さい値に分離可能な判別分析法の判別関数に基づき算出された値を、前記罹患可能性のスコアとする場合、前記スコアが、例えば、０より小さい場合、前記被検者は、気分障害に罹患する可能性があるまたは可能性が高いと評価できる。また、前記スコアが、例えば、０より大きい場合、前記被検者は、気分障害に罹患する可能性がないまたは可能性が低いと評価できる。なお、前記試験工程は、これに限定されず、例えば、前記健常者を０より小さい値に、前記気分障害患者を０より大きい値に分離可能な判別分析法の判別関数を使用してもよい。
【００６５】
また、前記健常者と前記重症度ごとの気分障害患者とを分離可能な判別式に基づき算出された値を、前記罹患可能性のスコアとすることで、例えば、気分障害の重症度を評価できる。具体的として、前記健常者を０より大きい値に、前記重症度ごとの気分障害患者を０より小さい値に分離可能な判別分析法の判別関数に基づき算出された値を、前記罹患可能性のスコアとする場合、前記スコアが、例えば、０より小さい場合、前記被検者は、前記重症度の可能性があると評価できる。なお、前記試験工程は、これに限定されず、例えば、前記健常者を０より小さい値に、前記重症度ごとの気分障害患者を０より大きい値に分離可能な判別分析法の判別関数を使用してもよい。
【００６６】
後者の場合、前記サイトのシトシンのメチル化率から前記罹患可能性のスコアを算出する方法は、特に制限されず、例えば、前記被検者の被検生体試料におけるメチル化パターンと前記気分障害患者の生体試料におけるメチル化パターンとの相関係数を、前記罹患可能性のスコアとしてもよいし、前記被検者の被検生体試料におけるメチル化パターンと前記健常者の生体試料におけるメチル化パターンとの相関係数を、前記罹患可能性のスコアとしてもよいし、これらの相関係数を比較した値を、前記罹患可能性のスコアとしてもよい。また、前記被検者の被検生体試料におけるメチル化パターンと前記重症度ごとの気分障害患者の基準生体試料におけるメチル化パターンとの相関係数を、前記罹患可能性のスコアとしてもよい。
【００６７】
前記相関係数は、特に制限されず、例えば、ピアソンの積率相関係数、スピアマンの順位相関係数、ケンドールの順位相関係数等を使用することができる。
【００６８】
前記試験工程において、前記スコアの基準値は、特に制限されず、例えば、使用する前記相関係数に基づき、適宜決定できる。
【００６９】
前記試験工程において、被検者の気分障害の罹患の可能性の評価方法は、特に制限されず、使用する前記相関係数によって適宜決定できる。具体例として、前記被検者の被検生体試料におけるメチル化パターンと前記気分障害患者の生体試料におけるメチル化パターンとのピアソンの積率相関係数を、前記罹患可能性のスコアとする場合、前記罹患可能性のスコアが、例えば、０．２以上の場合、前記被検者は、気分障害に罹患する可能性があるまたは可能性が高いと評価できる。
【００７０】
また、具体例として、前記被検者の被検生体試料におけるメチル化パターンと前記健常者の生体試料におけるメチル化パターンとのピアソンの積率相関係数を、前記罹患可能性のスコアとする場合、前記類似度が、例えば、０．２以上の場合、前記被検者は、気分障害に罹患する可能性がないまたは可能性が低いと評価できる。
【００７１】
また、前記被検者の被検生体試料におけるメチル化パターンと前記重症度ごとの気分障害患者の基準生体試料におけるメチル化パターンとの相関係数を、前記罹患可能性のスコアすることで、気分障害の重症度を評価できる。具体的には、前記被検者の被検生体試料におけるメチル化パターンと、いずれかの重症度の前記基準生体試料におけるメチル化パターンとのピアソンの積率相関係数を前記罹患可能性のスコアとする場合、前記類似度が、例えば、０．２以上の場合、前記被検者は、前記重症度の可能性があると評価できる。
【００７２】
前記相関係数を比較した値（相対類似度）を前記罹患可能性のスコアとする場合、前記相対類似度は、例えば、下記数式１により算出してもよい。下記数式１において、Ｒｓ，phyは、前記被検者の被検生体試料におけるメチル化パターンと前記気分障害患者の生体試料におけるメチル化パターンとの相関係数を示し、Ｒｓ，controlは前記被検者の被検生体試料におけるメチル化パターンと前記健常者の生体試料におけるメチル化パターンとの相関係数を示す。
【００７３】
【数１】
2016021719.tif 000016
【００７４】
前記相対類似度は、例えば、前記被検者の被検生体試料におけるメチル化パターンが、前記気分障害患者の生体試料におけるメチル化パターンおよび前記健常者の生体試料におけるメチル化パターンのいずれに類似するかを示す値である。
【００７５】
前記気分障害患者の生体試料におけるメチル化パターンは、特に制限されず、例えば、一人の気分障害患者の生体試料におけるメチル化パターンでもよいし、二人以上の気分障害患者の生体試料におけるメチル化パターンの平均メチル化パターンでもよい。また、前記健常者の生体試料におけるメチル化パターンは、特に制限されず、例えば、一人の健常者の生体試料におけるメチル化パターンでもよいし、二人以上の健常者の生体試料におけるメチル化パターンの平均メチル化パターンでもよい。
【００７６】
前記試験工程において、前記スコアの基準値は、特に制限されず、例えば、０があげられる。
【００７７】
前記試験工程において、被検者の気分障害の罹患の可能性の評価方法は、特に制限されない。具体例として、前記スコアの基準値を０とした場合、前記相対類似度が０以上の場合、前記被検者の被検生体試料におけるメチル化パターンは、前記気分障害患者の生体試料におけるメチル化パターンと類似している、すなわち、前記被検者は、気分障害に罹患する可能性があるまたは可能性が高いと評価できる。また、前記相対類似度が０未満の場合、前記被検者の被検生体試料におけるメチル化パターンは、前記健常者の生体試料におけるメチル化パターンと類似している、すなわち、前記被検者は、気分障害に罹患する可能性がないまたは可能性が低いと評価できる。
【００７８】
また、前記被検者の被検生体試料におけるメチル化パターンと前記気分障害患者の生体試料におけるメチル化パターンとの相関係数に代えて、前記被検者の被検生体試料におけるメチル化パターンと前記重症度ごとの気分障害患者の基準生体試料におけるメチル化パターンとの相関係数を用い、前記相対類似度を算出することで、気分障害の重症度を評価できる。具体的には、前記スコアの基準値を０とした場合、前記相対類似度が０以上の場合、前記被検者の被検生体試料におけるメチル化パターンは、重症度ごとの気分障害患者の基準生体試料におけるメチル化パターンと類似している、すなわち、前記被検者は、前記重症度の可能性があると評価できる。
【００７９】
１Ｂ．気分障害マーカー
本発明の気分障害マーカーは、前述のように、下記（ａ）および（ｂ）からなる群から選択された少なくとも１つのＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイトのメチル化シトシンを含むことを特徴とする。
（ａ）下記（１）〜（５０６）および（５０７）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｂ）下記（６００）〜（６４６）および（６４７）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
【００８０】
本発明の気分障害マーカーは、前記（ａ）および（ｂ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのメチル化シトシンを含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の気分障害マーカーによれば、例えば、被検者の生体試料における前記（ａ）および（ｂ）のサイトのシトシンのメチル化率を測定することで、前記被検者の気分障害の罹患可能性を試験できる。なお、本発明の気分障害マーカーは、前記本発明の気分障害の試験方法の説明を援用できる。
【００８１】
１Ｃ．気分障害の試験試薬
本発明の気分障害の試験試薬は、前述のように、前記本発明の気分障害の罹患可能性を試験する方法に使用する試験試薬であって、前記（ａ）および（ｂ）からなる群から選択された少なくとも１つのＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイトのメチル化シトシンの測定試薬を含むことを特徴とする。
（ａ）下記（１）〜（５０６）および（５０７）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｂ）下記（６００）〜（６４６）および（６４７）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
【００８２】
本発明の気分障害の試験試薬によれば、前記本発明の気分障害の罹患可能性の試験方法を簡便に行える。本発明の気分障害の試験試薬は、気分障害の罹患可能性の試験を前記（ａ）および（ｂ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのメチル化シトシンの測定に基づいて行うことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の気分障害の試験試薬は、例えば、前記（ａ）および（ｂ）のサイトのメチル化シトシンが測定できればよく、前記（ａ）および（ｂ）のサイトのメチル化シトシンの測定試薬（以下、「気分障害マーカーのメチル化測定試薬」ともいう。）の種類は、特に制限されない。なお、本発明の気分障害の試験試薬は、前記本発明の気分障害の試験方法等の説明を援用できる。
【００８３】
前記気分障害マーカーのメチル化測定試薬は、例えば、前述のメチル化の測定方法に応じて、適宜決定できる。前記メチル化の測定方法が、亜硫酸水素塩を用いたバイサルファイトシーケンシング法の場合、例えば、亜硝酸水素塩、バイサルファイト変換後の前記（ａ）および（ｂ）のサイトのシトシンを含む塩基配列の増幅用プライマーおよびシークエンス用プライマー等があげられる。
【００８４】
前記気分障害マーカーのメチル化測定試薬は、それぞれ別個の容器に収容されてもよいし、同一の容器に混合または未混同で収容されてもよい。前記気分障害マーカーのメチル化測定試薬が別個の容器に未混同で収納されている場合、本発明の気分障害の試験試薬は、気分障害の試験キットということもできる。また、前記気分障害マーカーのメチル化測定試薬は、同一の容器に未混同で収納されている場合、本発明の気分障害の試験試薬は、アレイということもできる。
【００８５】
本発明の気分障害の試験試薬において、前記気分障害マーカーのメチル化測定試薬は、担体に固定化されていてもよい。前記担体は、特に制限されず、例えば、基板、ビーズ、容器等があげられ、前記容器は、例えば、マイクロプレート、チューブ等があげられる。前記気分障害マーカーのメチル化測定試薬の固定化方法は、前記気分障害マーカーのメチル化測定試薬の種類に応じ、適宜決定できる。
【００８６】
本発明の気分障害の試験試薬は、前記気分障害マーカーのメチル化測定試薬の他に、その他の構成要素を含んでもよい。前記構成要素は、例えば、前記担体、使用説明書等があげられる。
【００８７】
１Ｄ．気分障害の診断方法および診断試薬
本発明の気分障害の診断方法は、被検者の生体試料における前記（ａ）および（ｂ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を測定する測定工程を含むことを特徴とする。また、本発明の気分障害の診断試薬は、前記（ａ）および（ｂ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのメチル化シトシンの測定試薬を含むことを特徴とする。なお、本発明の気分障害の診断方法および診断試薬は、前記本発明の気分障害の試験方法等の説明を援用できる。
【００８８】
１Ｅ．気分障害の治療薬候補物質のスクリーニング方法
本発明の気分障害の治療用候補物質のスクリーニング方法は、前述のように、気分障害の治療用候補物質のスクリーニング方法であって、被検物質から、下記（ａ’）および（ｂ’）の少なくとも一方の条件を満たす被検物質を、前記治療用候補物質として選択する選択工程を含むことを特徴とする。
（ａ’）下記（ａ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を増加させる
（ｂ’）下記（ｂ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を低下させる
（ａ）下記（１）〜（５０６）および（５０７）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｂ）下記（６００）〜（６４６）および（６４７）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
【００８９】
本発明の気分障害の治療薬候補物質のスクリーニング方法は、気分障害治療用候補物質のスクリーニングの指標に前記（ａ’）および（ｂ’）の少なくとも一方の条件を満たす被検物質を、前記治療用候補物質として選択することが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明の気分障害の治療薬候補物質のスクリーニング方法によれば、例えば、前記（ａ’）および（ｂ’）の少なくとも一方の条件を満たす被検物質を、前記治療用候補物質として選択することで、効率良く気分障害の治療用候補物質を選択できる。なお、本発明の気分障害の治療薬候補物質のスクリーニング方法は、前記本発明の気分障害の試験方法等の説明を援用できる。
【００９０】
本発明の気分障害の治療薬候補物質のスクリーニング方法において、前記被検物質は、特に制限されず、例えば、低分子化合物、ペプチド、タンパク質、核酸等があげられる。
【００９１】
本発明の気分障害の治療薬候補物質のスクリーニング方法において、使用するサイトの個数は、その下限は、１つあればよく、好ましくは、４つであり、より好ましくは、１０つであり、その上限は、特に制限されず、例えば、５０つであり、好ましくは、３０つであり、より好ましくは、２０つであり、さらに好ましくは、１７つであり、特に好ましくは、１３つであり、その範囲が、例えば、１〜５０つであり、好ましくは、１〜３０つであり、より好ましくは、１〜２０つであり、さらに好ましくは、４〜１７つであり、特に好ましくは、１０〜１３つである。
【００９２】
本発明の気分障害の治療薬候補物質のスクリーニング方法は、例えば、下記（ａ’’）または（ｂ’’）の誘導系に前記被検物質を共存させて、前記サイトのシトシンのメチル化または脱メチル化を誘導する誘導工程と、前記誘導系における前記サイトのシトシンのメチル化率を検出する検出工程と、前記サイトのシトシンのメチル化率が、対応する下記条件を満たす場合、前記被検物質を、前記治療用候補物質として選択する選択工程とを含んでもよい。
（ａ’’）前記（ａ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトの脱メチル化する脱メチル化誘導系
（ｂ’’）前記（ｂ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンをメチル化するメチル化誘導系
（ｘ１’）前記サイトが前記（ａ）のサイトの場合、前記被検物質を共存させていないコントロールの脱メチル化誘導系の対応するシトシンのメチル化率より有意に高い場合
（ｙ１’）前記サイトが前記（ｂ）のサイトの場合、前記被検物質を共存させていないコントロールのメチル化誘導系の対応するシトシンのメチル化率より有意に低い場合
【００９３】
前記脱メチル化誘導系は、特に制限されず、例えば、前記気分障害患者由来の組織、細胞等、ＤＮＡ脱メチル化酵素活性化物質で処理した動物、組織、細胞等があげられる。前記メチル化誘導系は、特に制限されず、例えば、前記気分障害患者由来の組織、細胞等、ＤＮＡメチル化酵素活性化物質で処理した動物、組織、細胞等があげられる。
【００９４】
前記検出工程において、検出対象の前記シトシンのメチル化は、例えば、一種類の前記メチル化シトシンを検出してもよいし、二種類以上の前記メチル化シトシンを検出してもよい。
【００９５】
２．統合失調症マーカーおよびその用途
つぎに、本発明の統合失調症の罹患の可能性の試験方法、統合失調症マーカー、統合失調症の試験試薬、統合失調症の治療薬のスクリーニング方法等について説明する。
【００９６】
２Ａ．統合失調症の罹患可能性を試験する方法
本発明の統合失調症の罹患可能性を試験する方法（以下、「統合失調症の試験方法」ともいう。）は、被検者の生体試料における下記（ｃ）、（ｄ）または（ｅ）のサイトのシトシンのメチル化率を測定する測定工程、および
測定した前記シトシンのメチル化率を、基準値と比較することにより、統合失調症の罹患の可能性（「危険度」ともいう。）を試験する試験工程を含むことを特徴とする。
（ｃ）下記（ｆ）および（ｇ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイト
（ｄ）下記（ｆ）および（ｇ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイト、ならびに下記（ｈ）および（ｉ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイト
（ｅ）下記（ｈ）および（ｉ）からなる群から選択された少なくとも２つのサイト
（ｆ）下記（１０００）〜（１８６７）および（１８６８）のGeneome  Research  Consortium  human  genome  build  37/UCSC  human  genome  19（ＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９）の座標で特定されるサイト
（ｇ）下記（５５００）〜（５５２９）および（５５３０）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｈ）下記（６０００）〜（６０５９）および（６０６０）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｉ）下記（６１００）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
【００９７】
本発明において、前記（ｆ）〜（ｈ）および（ｉ）のサイトは、例えば、前述の表２Ａ〜２Ｅ、３、４、および５を参照できる。
【００９８】
本発明の統合失調症の試験方法は、前記（ｃ）、（ｄ）または（ｅ）のサイトのシトシンのメチル化率を測定することが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明の統合失調症の試験方法は、前記少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を測定することで、例えば、従来の症状に基づく診断方法に対して、高い診断精度で被検者の統合失調症の罹患の可能性を試験することができる。本発明において、診断精度とは、例えば、感度、特異度等があげられる。本発明において、「感度が高い」とは、例えば、罹患患者が陽性となる確率が高いことを意味し、「特異度が高い」は、罹患していない健常者が陰性となる確率が高いことを意味する。
【００９９】
生体内において、メチル化シトシンは、例えば、シトシン−リン酸−グアニン（ＣｐＧ）のシトシンがメチル化され、メチル化ＣｐＧとなることで生じる。このため、前記シトシンは、例えば、ＣｐＧということもでき、前記メチル化シトシンは、例えば、メチル化ＣｐＧということもでき、また、前記シトシンのメチル化は、例えば、ＣｐＧのメチル化ということもできる。
【０１００】
本発明の統合失調症の試験方法によれば、例えば、統合失調症の発症の可能性、統合失調症の発症の有無、統合失調症の予後の状態等を評価できる。
【０１０１】
本発明において、前記（ｃ）、（ｄ）または（ｅ）および前記（ｆ）〜（ｈ）および（ｉ）のサイトの由来は、特に制限されず、例えば、被検者の種類によって適宜設定できる。前記被検者は、例えば、ヒト、ヒトを除く非ヒト動物等があげられ、前記非ヒト動物は、例えば、マウス、ラット、モルモット、イヌ、ネコ、サル、ウサギ、ヒツジ、ウマ等の哺乳類があげられる。
【０１０２】
前記（ｆ）のサイトのメチル化シトシンは、本発明者らが新たに同定した新規統合失調症マーカーである。前記（ｆ）のサイトのシトシンは、例えば、統合失調症者から単離した生体試料における前記（ｆ）のサイトのシトシンのメチル化率が、健常者から単離した生体試料における前記（ｆ）のサイトのシトシンのメチル化率より高い。
【０１０３】
前記（ｆ）のサイトの具体例として、ヒト由来の前記（ｆ）のサイトは、例えば、前記表２Ａ〜２Ｅの前記（ｆ）のサイトがあげられる。なお、本発明は、この一例には限定されず、前記ヒトを除く非ヒト動物由来の前記（ｆ）のサイトを使用してもよい。前記ヒトを除く非ヒト動物由来の前記（ｆ）のサイトは、例えば、公知のデータベースに登録されている情報を参照し、前記ヒト由来の前記サイトを含む領域の塩基配列と前記データベースの塩基配列とを比較することで、同定することができる。前記（ｆ）のサイトは、さらに、後述する（１８６９）〜（５２６７）および（５２６８）のサイトを含んでもよい。前記（１８６９）〜（５２６７）および（５２６８）のサイトは、例えば、後述する表９Ｅ〜９Ｘのサイトがあげられる。
【０１０４】
前記（ｇ）のサイトのメチル化シトシンは、本発明者らが新たに同定した新規統合失調症マーカーである。前記（ｇ）のサイトのシトシンは、例えば、統合失調症者から単離した生体試料における前記（ｇ）のサイトのシトシンのメチル化率が、健常者から単離した生体試料における前記（ｇ）のサイトのシトシンのメチル化率より低い。
【０１０５】
前記（ｇ）のサイトの具体例として、ヒト由来の前記（ｇ）のサイトは、例えば、前記表３の前記（ｇ）のサイトがあげられる。なお、本発明は、この一例には限定されず、前記ヒトを除く非ヒト動物由来の前記（ｇ）のサイトを使用してもよい。前記ヒトを除く非ヒト動物由来の前記（ｇ）のサイトは、例えば、公知のデータベースに登録されている情報を参照し、前記ヒト由来の前記サイトを含む領域の塩基配列と前記データベースの塩基配列とを比較することで、同定することができる。前記（ｇ）のサイトは、さらに、後述する（５５３１）〜（５９６９）および（５９７０）のサイトを含んでもよい。前記（５５３１）〜（５９６９）および（５９７０）のサイトは、例えば、後述する表１０Ａ〜１０Ｃのサイトがあげられる。
【０１０６】
前記（ｈ）のサイトのシトシンは、例えば、統合失調症者から単離した生体試料における前記（ｈ）のサイトのシトシンのメチル化率が、健常者から単離した生体試料における前記（ｈ）のサイトのシトシンのメチル化率より高い。
【０１０７】
前記（ｈ）のサイトの具体例として、ヒト由来の前記（ｈ）のサイトは、例えば、前記表４の前記（ｈ）のサイトがあげられる。なお、本発明は、この一例には限定されず、前記ヒトを除く非ヒト動物由来の前記（ｈ）のサイトを使用してもよい。前記ヒトを除く非ヒト動物由来の前記（ｈ）のサイトは、例えば、公知のデータベースに登録されている情報を参照し、前記ヒト由来の前記サイトを含む領域の塩基配列と前記データベースの塩基配列とを比較することで、同定することができる。
【０１０８】
前記（ｉ）のサイトのメチル化シトシンは、例えば、統合失調症者から単離した生体試料における前記（ｉ）のサイトのシトシンのメチル化率が、健常者から単離した生体試料における前記（ｉ）のサイトのシトシンのメチル化率より低い。
【０１０９】
前記（ｉ）のサイトの具体例として、ヒト由来の前記（ｉ）のサイトは、例えば、前記表５の前記（ｉ）のサイトがあげられる。なお、本発明は、この一例には限定されず、前記ヒトを除く非ヒト動物由来の前記（ｉ）のサイトを使用してもよい。前記ヒトを除く非ヒト動物由来の前記（ｉ）のサイトは、例えば、公知のデータベースに登録されている情報を参照し、前記ヒト由来の前記サイトを含む領域の塩基配列と前記データベースの塩基配列とを比較することで、同定することができる。
【０１１０】
本発明において、前記（ｆ）〜（ｈ）および（ｉ）のサイトのシトシンのメチル化は、それぞれマイナスストランド側のシトシンのメチル化であってもよいし、プラスストランド側のシトシンのメチル化であってもよいし、両者であってもよい。また、前記（ｆ）〜（ｈ）および（ｉ）のサイトのメチル化シトシンは、マイナスストランド側のメチル化シトシンであってもよいし、プラスストランド側のメチル化シトシンであってもよいし、両者であってもよい。
【０１１１】
前記測定工程において、測定するサイトの個数は、特に制限されず、前記（ｃ）のサイトを使用する場合、その下限は、１つあればよく、好ましくは、４つであり、より好ましくは、１０つであり、その上限は、特に制限されず、例えば、５０つであり、好ましくは、３０つであり、より好ましくは、２０つであり、さらに好ましくは、１７つであり、特に好ましくは、１３つであり、その範囲が、例えば、１〜５０つであり、好ましくは、１〜３０つであり、より好ましくは、１〜２０つであり、さらに好ましくは、４〜１７つであり、特に好ましくは、１０〜１３つである。前記（ｄ）のサイトを使用する場合、例えば、前記（ｆ）および（ｇ）のサイトから少なくとも１つ、ならびに前記（ｈ）および（ｉ）のサイトから少なくとも１つであればよく、その合計の個数は、特に制限されず、その下限は、２つあればよく、好ましくは、４つであり、より好ましくは、１０つであり、その上限は、特に制限されず、例えば、５０つであり、好ましくは、３０つであり、より好ましくは、２０つであり、さらに好ましくは、１７つであり、特に好ましくは、１３つであり、その範囲が、例えば、１〜５０つであり、好ましくは、１〜３０つであり、より好ましくは、１〜２０つであり、さらに好ましくは、４〜１７つであり、特に好ましくは、１０〜１３つである。前記（ｅ）のサイトを使用する場合、その下限は、２つあればよく、好ましくは、４つであり、より好ましくは、１０つであり、その上限は、特に制限されず、例えば、５０つであり、好ましくは、３０つであり、より好ましくは、２０つであり、さらに好ましくは、１７つであり、特に好ましくは、１３つであり、その範囲が、例えば、１〜５０つであり、好ましくは、１〜３０つであり、より好ましくは、１〜２０つであり、さらに好ましくは、４〜１７つであり、特に好ましくは、１０〜１３つである。
【０１１２】
本発明の統合失調症の試験方法において、前記生体試料の種類は、特に制限はされず、例えば、生体から分離した、体液、体液由来細胞、器官、組織または細胞等があげられる。前記体液は、例えば、血液があげられ、具体例として、例えば、全血、血清、血漿等があげられる。前記体液由来細胞は、例えば、血液由来細胞があげられ、具体的には、血球、白血球等の血球細胞があげられる。前記白血球は、例えば、好中球、好酸球、好塩基球等の顆粒球、リンパ球、単球等があげられる。前記リンパ球は、例えば、Ｂ細胞、顆粒球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｔ細胞等があげられる。また、本発明の統合失調症マーカーによれば、例えば、血液中の統合失調症マーカーによって試験できる。このため、例えば、患者や医師の負担を軽減できることから、前記生体試料は、全血が好ましく、より好ましくは、血球、白血球、リンパ球である。
【０１１３】
前記測定工程において、前記（ｆ）〜（ｈ）および（ｉ）のサイトのシトシンのメチル化部位は、特に制限されず、例えば、シトシンの５位、６位等があげられる。前記メチル化シトシンの具体例は、例えば、５−メチルシトシン、５−ヒドロキシメチルシトシン等があげられる。測定する前記メチル化シトシンは、例えば、一種類の前記メチル化シトシンであってもよいし、二種類以上の前記メチル化シトシンであってもよい。
【０１１４】
前記測定工程において、前記（ｆ）〜（ｈ）および（ｉ）のサイトのシトシンのストランドは、特に制限されず、例えば、前記マイナスストランドでもよいし、前記プラスストランドでもよいし、両者であってもよい。
【０１１５】
前記メチル化シトシンの測定方法は、特に制限されず、公知の方法が採用できる。具体例として、前記メチル化シトシンの測定方法は、例えば、亜硫酸水素塩を用いたバイサルファイトシーケンシング法、メチル化特異的ＰＣＲ（ＭＳＰ）法、ＣＯＢＲＡ法、メチル化感受性制限酵素を使用する方法、抗メチル化シトシン抗体を使用する方法、制限酵素ランドマークゲノムスキャニング（ＲＬＧＳ）法、下記表６に示した前処理工程および分析工程を組合せた方法等があげられる。
【０１１６】
【表６】
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【０１１７】
本発明の統合失調症の試験方法は、例えば、さらに、前記被検者の生体試料（以下、「被検生体試料」ともいう。）における前記シトシンのメチル化率を、基準値と比較することにより、前記被検者の統合失調症の罹患可能性を試験する試験工程を含む。前記基準値は、特に制限されず、例えば、健常者、統合失調症患者および重症度ごと統合失調症患者の前記シトシンのメチル化率等があげられる。また、予後の評価の場合、前記基準値は、例えば、同じ被検者の治療後（例えば、治療直後）の前記シトシンのメチル化率であってもよい。
【０１１８】
前記基準値は、例えば、前述のような、健常者および／または統合失調症患者から単離した生体試料（以下、「基準生体試料」ともいう。）を用いて、得ることができる。また、予後の評価の場合、例えば、同じ被検者から治療後に単離した基準生体試料を用いてもよい。前記基準値は、例えば、前記被検者の被検生体試料と同時に測定してもよいし、予め測定してもよい。後者の場合、例えば、前記被検者の被検生体試料を測定する度に、基準値を得ることが不要となるため、好ましい。前記被検者の被検生体試料と前記基準生体試料は、例えば、同じ条件で採取し、同じ条件で前記シトシンのメチル化の測定を行うことが好ましい。
【０１１９】
前記試験工程において、被検者の統合失調症の罹患の可能性の評価方法は、特に制限されず、前記基準値の種類によって適宜決定できる。具体例として、統合失調症患者から単離した生体試料における前記サイトのシトシンのメチル化率が、健常者から単離した生体試料における対応するシトシンのメチル化率より高い前記（ｆ）および（ｈ）のサイトの場合、前記被検者の被検生体試料における前記サイトのシトシンのメチル化率が、前記健常者の基準生体試料における対応するシトシンのメチル化率よりも有意に高い場合、前記統合失調症患者の基準生体試料における対応するシトシンのメチル化率と同じ場合（有意差がない場合）、および／または、前記統合失調症患者の基準生体試料における対応するシトシンのメチル化率よりも有意に高い場合、前記被検者は、統合失調症に罹患する可能性があるまたは可能性が高いと評価できる。また、前記被検者の被検生体試料における前記サイトのシトシンのメチル化率が、前記健常者の基準生体試料における対応するシトシンのメチル化率と同じ場合（有意差が無い場合）、前記健常者の基準生体試料における対応するシトシンのメチル化率よりも有意に低い場合、および／または、前記統合失調症患者の基準生体試料における対応するシトシンのメチル化率よりも有意に低い場合、前記被検者は、統合失調症に罹患する可能性が無いまたは可能性が低いと評価できる。
【０１２０】
また、統合失調症患者から単離した生体試料における前記サイトのシトシンのメチル化率が、健常者から単離した生体試料における対応するシトシンのメチル化率より低い前記（ｇ）および（ｉ）のサイトの場合、前記被検者の被検生体試料における前記サイトのシトシンのメチル化率が、前記健常者の基準生体試料における対応するシトシンのメチル化率よりも有意に低い場合、前記統合失調症患者の基準生体試料における対応するシトシンのメチル化率と同じ場合（有意差がない場合）、および／または、前記統合失調症患者の基準生体試料における対応するシトシンのメチル化率よりも有意に低い場合、前記被検者は、統合失調症に罹患する可能性があるまたは可能性が高いと評価できる。また、前記被検者の被検生体試料における前記サイトのシトシンのメチル化率が、前記健常者の基準生体試料における対応するシトシンのメチル化率と同じ場合（有意差が無い場合）、前記健常者の基準生体試料における対応するシトシンのメチル化率よりも有意に高い場合、および／または、前記統合失調症患者の基準生体試料における対応するシトシンのメチル化率よりも有意に高い場合、前記被検者は、統合失調症に罹患する可能性が無いまたは可能性が低いと評価できる。
【０１２１】
また、前記試験工程において、前記被検者の被検生体試料における前記サイトのシトシンのメチル化率を、前記重症度ごとの統合失調症患者の基準生体試料における対応するシトシンのメチル化率と比較することで、統合失調症の重症度を評価できる。具体的には、前記被検者の被検生体試料における前記サイトのシトシンのメチル化率が、例えば、いずれかの重症度の前記基準生体試料における対応するシトシンのメチル化率と同じ場合（有意差がない場合）、前記被検者は、前記重症度の可能性があると評価できる。
【０１２２】
前記試験工程において、前記（ｃ）、（ｄ）または（ｅ）のサイトのシトシンが、対応する下記の条件を満たす場合、前記被検者は、統合失調症患者に罹患する可能性があると評価することが好ましい。
（ｘ２）前記サイトが前記（ｆ）または前記（ｈ）のサイトの場合、前記被検者の生体試料における前記サイトのシトシンのメチル化率が、前記健常者の生体試料における対応するシトシンのメチル化率よりも（有意に）高い場合、または前記統合失調症患者の生体試料における対応するシトシンのメチル化率以上の場合
（ｙ２）前記サイトが前記（ｇ）または前記（ｉ）のサイトの場合、前記被検者の生体試料における前記サイトのシトシンのメチル化率が、前記健常者の生体試料における対応するシトシンのメチル化率よりも（有意に）低い場合、または前記統合失調症患者の生体試料における対応するシトシンのメチル化率以下の場合
【０１２３】
本発明の統合失調症の試験方法は、さらに、測定した前記サイトのシトシンのメチル化率から、前記統合失調症の罹患の可能性のスコアを算出する算出工程を含み、前記試験工程は、前記算出工程における前記統合失調症の罹患の可能性のスコアを、前記スコアの基準値と比較することにより、統合失調症の罹患の可能性を試験する工程であってもよい。なお、以下に一例として、前記サイトのシトシンのメチル化率に基づき、スコアを算出し、試験する方法について説明するが、本発明は、これに限定されない。
【０１２４】
前記算出工程において、前記統合失調症の罹患可能性のスコアの算出する方法は、特に制限されず、例えば、測定した１つの前記サイトのシトシンのメチル化率または２つ以上の前記サイトのシトシンのメチル化率のパターン（以下、「メチル化パターン」ともいう。）、および前記健常者と前記統合失調症患者とを分離可能な数式から算出する方法、２つ以上の前記サイトのシトシンメチル化パターンと、前記健常者、前記統合失調症患者および／または前記重症度ごとの統合失調症患者の対応するシトシンのメチル化パターンとの類似性から算出する方法等があげられ、より診断精度を向上できることから、好ましくは、前者である。
【０１２５】
前者の場合、前記サイトのシトシンのメチル化率から前記罹患可能性のスコアを算出する方法は、特に制限されず、例えば、前記健常者と前記統合失調症患者とを分離可能な判別式に基づき算出された値を、前記罹患可能性のスコアとしてもよい。また、前記健常者と前記重症度ごとの統合失調症患者とを分離可能な判別式に基づき算出された値を、前記罹患可能性のスコアとしてもよい。
【０１２６】
前記判別式は、特に制限されず、例えば、重回帰分析、判別分析、主成分分析法、因子分析、機械学習、サポートベクトルマシン、単純ベイズ分類器（naive  Bayes  classifier）、ランダムフォレスト等における判別関数を使用することができる。
【０１２７】
前記判別関数の算出方法は、特に制限されず、例えば、前記基準生体試料における前記サイトのメチル化率を用いて、算出することができる。具体例として、前記健常者と前記統合失調症患者とを分離可能な判別式を算出する場合、例えば、前記健常者の前記基準生体試料における前記サイトのメチル化率と、前記統合失調症患者の前記基準生体試料における前記サイトのメチル化率とを用いて、算出することができる。また、前記健常者と前記重症度ごとの統合失調症患者とを分離可能な判別式を算出する場合、例えば、前記健常者の前記基準生体試料における前記サイトのメチル化率と、前記重症度ごとの統合失調症患者の前記基準生体試料における前記サイトのメチル化率とを用いて、算出することができる。
【０１２８】
前記判別式は、例えば、予め測定した前記基準生体試料の前記サイトのメチル化率に基づき、算出された判別式を使用してもよいし、前記測定工程において、前記被検者の被検生体試料と同時に測定した前記基準生体試料の前記サイトのメチル化率に基づき、算出した判別式を使用してもよい。
【０１２９】
前記試験工程において、前記スコアの基準値は、特に制限されず、例えば、使用する前記判別関数に基づき、適宜決定できる。具体例として、前記判別式として、前記判別分析法の判別関数を使用する場合、前記スコアの基準値は、例えば、０があげられる。
【０１３０】
前記試験工程において、被検者の統合失調症の罹患の可能性の評価方法は、特に制限されず、使用する前記判別式によって適宜決定できる。具体例として、前記健常者を０より大きい値に、前記統合失調症患者を０より小さい値に分離可能な判別分析法の判別関数に基づき算出された値を、前記罹患可能性のスコアとする場合、前記スコアが、例えば、０より小さい場合、前記被検者は、統合失調症に罹患する可能性があるまたは可能性が高いと評価できる。また、前記スコアが、例えば、０より大きい場合、前記被検者は、統合失調症に罹患する可能性がないまたは可能性が低いと評価できる。なお、前記試験工程は、これに限定されず、例えば、前記健常者を０より小さい値に、前記統合失調症患者を０より大きい値に分離可能な判別分析法の判別関数を使用してもよい。
【０１３１】
また、前記健常者と前記重症度ごとの統合失調症患者とを分離可能な判別式に基づき算出された値を、前記罹患可能性のスコアとすることで、例えば、統合失調症の重症度を評価できる。具体的として、前記健常者を０より大きい値に、前記重症度ごとの統合失調症患者を０より小さい値に分離可能な判別分析法の判別関数に基づき算出された値を、前記罹患可能性のスコアとする場合、前記スコアが、例えば、０より小さい場合、前記被検者は、前記重症度の可能性があると評価できる。なお、前記試験工程は、これに限定されず、例えば、前記健常者を０より小さい値に、前記重症度ごとの統合失調症患者を０より大きい値に分離可能な判別分析法の判別関数を使用してもよい。
【０１３２】
後者の場合、前記サイトのシトシンのメチル化率から前記罹患可能性のスコアを算出する方法は、特に制限されず、例えば、前記被検者の被検生体試料におけるメチル化パターンと前記統合失調症患者の生体試料におけるメチル化パターンとの相関係数を、前記罹患可能性のスコアとしてもよいし、前記被検者の被検生体試料におけるメチル化パターンと前記健常者の生体試料におけるメチル化パターンとの相関係数を、前記罹患可能性のスコアとしてもよいし、これらの相関係数を比較した値を、前記罹患可能性のスコアとしてもよい。また、前記被検者の被検生体試料におけるメチル化パターンと前記重症度ごとの統合失調症患者の基準生体試料におけるメチル化パターンとの相関係数を、前記罹患可能性のスコアとしてもよい。
【０１３３】
前記相関係数は、特に制限されず、例えば、ピアソンの積率相関係数、スピアマンの順位相関係数、ケンドールの順位相関係数等を使用することができる。
【０１３４】
前記試験工程において、前記スコアの基準値は、特に制限されず、例えば、使用する前記相関係数に基づき、適宜決定できる。
【０１３５】
前記試験工程において、被検者の統合失調症の罹患の可能性の評価方法は、特に制限されず、使用する前記相関係数によって適宜決定できる。具体例として、前記被検者の被検生体試料におけるメチル化パターンと前記統合失調症患者の生体試料におけるメチル化パターンとのピアソンの積率相関係数を、前記罹患可能性のスコアとする場合、前記罹患可能性のスコアが、例えば、０．２以上の場合、前記被検者は、統合失調症に罹患する可能性があるまたは可能性が高いと評価できる。
【０１３６】
また、具体例として、前記被検者の被検生体試料におけるメチル化パターンと前記健常者の生体試料におけるメチル化パターンとのピアソンの積率相関係数を、前記罹患可能性のスコアとする場合、前記類似度が、例えば、０．２以上の場合、前記被検者は、統合失調症に罹患する可能性がないまたは可能性が低いと評価できる。
【０１３７】
また、前記被検者の被検生体試料におけるメチル化パターンと前記重症度ごとの統合失調症患者の基準生体試料におけるメチル化パターンとの相関係数を、前記罹患可能性のスコアすることで、統合失調症の重症度を評価できる。具体的には、前記被検者の被検生体試料におけるメチル化パターンと、いずれかの重症度の前記基準生体試料におけるメチル化パターンとのピアソンの積率相関係数を前記罹患可能性のスコアとする場合、前記類似度が、例えば、０．２以上の場合、前記被検者は、前記重症度の可能性があると評価できる。
【０１３８】
前記相関係数を比較した値（相対類似度）を前記罹患可能性のスコアとする場合、前記相対類似度は、例えば、下記数式１により算出してもよい。下記数式１において、Ｒｓ，phyは、前記被検者の被検生体試料におけるメチル化パターンと前記統合失調症患者の生体試料におけるメチル化パターンとの相関係数を示し、Ｒｓ，controlは前記被検者の被検生体試料におけるメチル化パターンと前記健常者の生体試料におけるメチル化パターンとの相関係数を示す。
【０１３９】
【数１】
2016021719.tif 000018
【０１４０】
前記相対類似度は、例えば、前記被検者の被検生体試料におけるメチル化パターンが、前記統合失調症患者の生体試料におけるメチル化パターンおよび前記健常者の生体試料におけるメチル化パターンのいずれに類似するかを示す値である。
【０１４１】
前記統合失調症患者の生体試料におけるメチル化パターンは、特に制限されず、例えば、一人の統合失調症患者の生体試料におけるメチル化パターンでもよいし、二人以上の統合失調症患者の生体試料におけるメチル化パターンの平均メチル化パターンでもよい。また、前記健常者の生体試料におけるメチル化パターンは、特に制限されず、例えば、一人の健常者の生体試料におけるメチル化パターンでもよいし、二人以上の健常者の生体試料におけるメチル化パターンの平均メチル化パターンでもよい。
【０１４２】
前記試験工程において、前記スコアの基準値は、特に制限されず、例えば、０があげられる。
【０１４３】
前記試験工程において、被検者の統合失調症の罹患の可能性の評価方法は、特に制限されない。具体例として、前記スコアの基準値を０とした場合、前記相対類似度が０以上の場合、前記被検者の被検生体試料におけるメチル化パターンは、前記統合失調症患者の生体試料におけるメチル化パターンと類似している、すなわち、前記被検者は、統合失調症に罹患する可能性があるまたは可能性が高いと評価できる。また、前記相対類似度が０未満の場合、前記被検者の被検生体試料におけるメチル化パターンは、前記健常者の生体試料におけるメチル化パターンと類似している、すなわち、前記被検者は、統合失調症に罹患する可能性がないまたは可能性が低いと評価できる。
【０１４４】
また、前記被検者の被検生体試料におけるメチル化パターンと前記統合失調症患者の生体試料におけるメチル化パターンとの相関係数に代えて、前記被検者の被検生体試料におけるメチル化パターンと前記重症度ごとの統合失調症患者の基準生体試料におけるメチル化パターンとの相関係数を用い、前記相対類似度を算出することで、統合失調症の重症度を評価できる。具体的には、前記スコアの基準値を０とした場合、前記相対類似度が０以上の場合、前記被検者の被検生体試料におけるメチル化パターンは、重症度ごとの統合失調症患者の基準生体試料におけるメチル化パターンと類似している、すなわち、前記被検者は、前記重症度の可能性があると評価できる。
【０１４５】
２Ｂ．統合失調症マーカーセット
本発明の統合失調症マーカーセットは、前述のように、下記（ｆ）および（ｈ）のサイトのメチル化シトシン、ならびに下記（ｇ）および（ｉ）のサイトのメチル化シトシンからなる群から選択された少なくとも２つを含むことを特徴とする。
（ｆ）前記（１０００）〜（１８６７）および（１８６８）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｇ）前記（５５００）〜（５５２９）および（５５３０）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｈ）前記（６０００）〜（６０５９）および（６０６０）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｉ）前記（６１００）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
【０１４６】
本発明の統合失調症マーカーセットは、前記（ｆ）および（ｈ）のサイトのメチル化シトシン、ならびに前記（ｇ）および（ｉ）のサイトのメチル化シトシンからなる群から選択された少なくとも２つを含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の統合失調症マーカーセットによれば、例えば、被検者の生体試料における前記（ｆ）〜（ｈ）および（ｉ）からなる群から選択された少なくとも２つのサイトのシトシンのメチル化率を測定することで、前記被検者の統合失調症の罹患可能性を試験できる。なお、本発明の統合失調症マーカーセットは、前記本発明の統合失調症の試験方法の説明を援用できる。
【０１４７】
２Ｃ．統合失調症の試験試薬
本発明の統合失調症の試験試薬は、前述のように、前記本発明の統合失調症の罹患可能性を試験する方法に使用する試験試薬であって、下記（ｃ）、（ｄ）または（ｅ）のサイトのシトシンのメチル化シトシンの測定試薬を含むことを特徴とする。
（ｃ）下記（ｆ）および（ｇ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイト
（ｄ）下記（ｆ）および（ｇ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイト、ならびに下記（ｈ）および（ｉ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイト
（ｅ）下記（ｈ）および（ｉ）からなる群から選択された少なくとも２つのサイト
（ｆ）前記（１０００）〜（１８６７）および（１８６８）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｇ）前記（５５００）〜（５５２９）および（５５３０）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｈ）前記（６０００）〜（６０５９）および（６０６０）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｉ）前記（６１００）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
【０１４８】
本発明の統合失調症の試験試薬によれば、前記本発明の統合失調症の罹患可能性の試験方法を簡便に行える。本発明の統合失調症の試験試薬は、統合失調症の罹患可能性の試験を前記（ｃ）、（ｄ）または（ｅ）のサイトのメチル化シトシンの測定に基づいて行うことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の統合失調症の試験試薬は、例えば、前記（ｃ）、（ｄ）または（ｅ）のサイトのメチル化シトシンが測定できればよく、前記（ｃ）、（ｄ）または（ｅ）のサイトのメチル化シトシンの測定試薬（以下、「統合失調症マーカーのメチル化測定試薬」ともいう。）の種類は、特に制限されない。なお、本発明の統合失調症の試験試薬は、前記本発明の統合失調症の試験方法等の説明を援用できる。
【０１４９】
前記統合失調症マーカーのメチル化測定試薬は、例えば、前述のメチル化の測定方法に応じて、適宜決定できる。前記メチル化の測定方法が、亜硫酸水素塩を用いたバイサルファイトシーケンシング法の場合、例えば、亜硝酸水素塩、バイサルファイト変換後の前記（ｃ）、（ｄ）または（ｅ）のサイトのシトシンを含む塩基配列の増幅用プライマーおよびシークエンス用プライマー等があげられる。
【０１５０】
前記統合失調症マーカーのメチル化測定試薬は、それぞれ別個の容器に収容されてもよいし、同一の容器に混合または未混同で収容されてもよい。前記統合失調症マーカーのメチル化測定試薬が別個の容器に未混同で収納されている場合、本発明の統合失調症の試験試薬は、統合失調症の試験キットということもできる。また、前記統合失調症マーカーのメチル化測定試薬は、同一の容器に未混同で収納されている場合、本発明の統合失調症の試験試薬は、アレイということもできる。
【０１５１】
本発明の統合失調症の試験試薬において、前記統合失調症マーカーのメチル化測定試薬は、担体に固定化されていてもよい。前記担体は、特に制限されず、例えば、基板、ビーズ、容器等があげられ、前記容器は、例えば、マイクロプレート、チューブ等があげられる。前記統合失調症マーカーのメチル化測定試薬の固定化方法は、前記統合失調症マーカーのメチル化測定試薬の種類に応じ、適宜決定できる。
【０１５２】
本発明の統合失調症の試験試薬は、前記統合失調症マーカーのメチル化測定試薬の他に、その他の構成要素を含んでもよい。前記構成要素は、例えば、前記担体、使用説明書等があげられる。
【０１５３】
２Ｄ．統合失調症の診断方法および診断試薬
本発明の統合失調症の診断方法は、被検者の生体試料における、前記（ｃ）、（ｄ）または（ｅ）のサイトのシトシンのメチル化率を測定する測定工程を含むことを特徴とする。また、本発明の統合失調症の診断試薬は、前記（ｃ）、（ｄ）または（ｅ）のサイトのメチル化シトシンの測定試薬を含むことを特徴とする。なお、本発明の統合失調症の診断方法および診断試薬は、前記本発明の統合失調症の試験方法等の説明を援用できる。
【０１５４】
２Ｅ．統合失調症の治療薬候補物質のスクリーニング方法
本発明の統合失調症の治療用候補物質のスクリーニング方法は、前述のように、統合失調症の治療用候補物質のスクリーニング方法であって、被検物質から、下記（ｃ’）、（ｄ’）または（ｅ’）の条件を満たす被検物質を、前記治療用候補物質として選択する選択工程を含むことを特徴とする。
（ｃ’）下記（ｆ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を（有意に）低下させる、および／または下記（ｇ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を（有意に）増加させる
（ｄ’）下記（ｆ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を（有意に）低下させる、および／または下記（ｇ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を（有意に）増加させる、ならびに
下記（ｈ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を（有意に）低下させる、および／または下記（ｉ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を（有意に）増加させる
（ｅ’）下記（ｈ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を（有意に）低下させる、および／または下記（ｉ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンのメチル化率を（有意に）増加させる
（ｆ）前記（１０００）〜（１８６７）および（１８６８）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｇ）前記（５５００）〜（５５２９）および（５５３０）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｈ）前記（６０００）〜（６０５９）および（６０６０）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｉ）前記（６１００）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
【０１５５】
本発明の統合失調症の治療薬候補物質のスクリーニング方法は、統合失調症治療用候補物質のスクリーニングの指標に前記（ｃ’）、（ｄ’）または（ｅ’）の条件を満たす被検物質を、前記治療用候補物質として選択することが特徴であり、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明の統合失調症の治療薬候補物質のスクリーニング方法によれば、例えば、前記（ｃ’）、（ｄ’）または（ｅ’）の条件を満たす被検物質を、前記治療用候補物質として選択することで、効率良く統合失調症の治療用候補物質を選択できる。なお、本発明の統合失調症の治療薬候補物質のスクリーニング方法は、前記本発明の統合失調症の試験方法等の説明を援用できる。
【０１５６】
本発明の統合失調症の治療薬候補物質のスクリーニング方法において、前記被検物質は、特に制限されず、例えば、低分子化合物、ペプチド、タンパク質、核酸等があげられる。
【０１５７】
本発明の統合失調症の治療薬候補物質のスクリーニング方法において、前記（ｃ’）の条件を使用する場合、使用するサイトの個数は、その下限は、１つあればよく、好ましくは、４つであり、より好ましくは、１０つであり、その上限は、特に制限されず、例えば、５０つであり、好ましくは、３０つであり、より好ましくは、２０つであり、さらに好ましくは、１７つであり、特に好ましくは、１３つであり、その範囲が、例えば、１〜５０つであり、好ましくは、１〜３０つであり、より好ましくは、１〜２０つであり、さらに好ましくは、４〜１７つであり、特に好ましくは、１０〜１３つである。前記（ｄ’）の条件を使用する場合、使用するサイトの個数は、例えば、前記（ｆ）および（ｇ）のサイトから少なくとも１つ、ならびに前記（ｈ）および（ｉ）のサイトから少なくとも１つであればよく、その合計の個数は、特に制限されず、その下限は、２つあればよく、好ましくは、４つであり、より好ましくは、１０つであり、その上限は、特に制限されず、例えば、５０つであり、好ましくは、３０つであり、より好ましくは、２０つであり、さらに好ましくは、１７つであり、特に好ましくは、１３つであり、その範囲が、例えば、１〜５０つであり、好ましくは、１〜３０つであり、より好ましくは、１〜２０つであり、さらに好ましくは、４〜１７つであり、特に好ましくは、１０〜１３つである。前記（ｅ’）の条件を使用する場合、使用するサイトの個数は、特に制限されず、例えば、その下限は、２つあればよく、好ましくは、４つであり、より好ましくは、１０つであり、その上限は、特に制限されず、例えば、５０つであり、好ましくは、３０つであり、より好ましくは、２０つであり、さらに好ましくは、１７つであり、特に好ましくは、１３つであり、その範囲が、例えば、１〜５０つであり、好ましくは、１〜３０つであり、より好ましくは、１〜２０つであり、さらに好ましくは、４〜１７つであり、特に好ましくは、１０〜１３つである。
【０１５８】
本発明の統合失調症の治療薬候補物質のスクリーニング方法は、例えば、下記（ｃ’’）、（ｄ’’）または（ｅ’’）の誘導系に前記被検物質を共存させて、前記サイトのシトシンのメチル化または脱メチル化を誘導する誘導工程と、前記誘導系における前記サイトのシトシンのメチル化率を検出する検出工程と、前記サイトのシトシンのメチル化率が、対応する下記条件を満たす場合、前記被検物質を、前記治療用候補物質として選択する選択工程とを含んでもよい。
（ｃ’’）前記（ｆ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンをメチル化するメチル化誘導系および／または前記（ｇ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトの脱メチル化する脱メチル化誘導系
（ｄ’’）前記（ｆ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンをメチル化するメチル化誘導系および／または前記（ｇ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトの脱メチル化する脱メチル化誘導系、ならびに
前記（ｈ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンをメチル化するメチル化誘導系および／または前記（ｉ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトの脱メチル化する脱メチル化誘導系
（ｅ’’）前記（ｈ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトのシトシンをメチル化するメチル化誘導系および／または前記（ｉ）からなる群から選択された少なくとも１つのサイトの脱メチル化する脱メチル化誘導系
（ｘ２’）前記サイトが前記（ｆ）または前記（ｈ）のサイトの場合、前記被検物質を共存させていないコントロールのメチル化誘導系の対応するシトシンのメチル化率より有意に低い場合
（ｙ２’）前記サイトが前記（ｇ）または前記（ｉ）のサイトの場合、前記被検物質を共存させていないコントロールの脱メチル化誘導系の対応するシトシンのメチル化率より有意に高い場合
【０１５９】
前記メチル化誘導系は、特に制限されず、例えば、前記統合失調症患者由来の組織、細胞等、ＤＮＡメチル化酵素活性化物質で処理した動物、組織、細胞等があげられる。前記脱メチル化誘導系は、特に制限されず、例えば、前記統合失調症患者由来の組織、細胞等、ＤＮＡ脱メチル化酵素活性化物質で処理した動物、組織、細胞等があげられる。
【０１６０】
前記検出工程において、前記（ｃ’’）、（ｄ’’）および（ｅ’’）の誘導系で使用するサイトの個数は、特に制限されず、例えば、前記（ｃ’）、（ｄ’）および（ｅ’）の条件のサイトの個数において、「条件」を「誘導系」に、「（ｃ’）」を「（ｃ’’）」に、「（ｄ’）」を「（ｄ’’）」に、「（ｅ’）」を「（ｅ’’）」に読み替えて援用できる。
【０１６１】
前記検出工程において、検出対象の前記シトシンのメチル化は、例えば、一種類の前記メチル化シトシンを検出してもよいし、二種類以上の前記メチル化シトシンを検出してもよい。
【０１６２】
２Ｆ．新規統合失調症マーカー
本発明の新規統合失調症マーカーは、下記（ｆ）のサイトのメチル化シトシンおよび下記（ｇ）のサイトのメチル化シトシンからなる群から選択された少なくとも１つを含むことを特徴とする。
（ｆ）前記（１０００）〜（１８６７）および（１８６８）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｇ）前記（５５００）〜（５５２９）および（５５３０）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
【０１６３】
本発明の新規統合失調症マーカーは、前記（ｆ）のサイトのメチル化シトシンおよび前記（ｇ）のサイトのメチル化シトシンからなる群から選択された少なくとも１つを含むことが特徴であり、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の新規統合失調症マーカーは、例えば、前記本発明の統合失調症の試験方法等の説明を援用できる。
【実施例】
【０１６４】
以下、実施例を用いて本発明を詳細に説明するが、本発明は実施例に記載された態様に限定されるものではない。【０１６５】
［実施例１］
（１）〜（３６２）および（３６３）のサイトのシトシンについて、うつ病（ＭＤＤ）患者の前記サイトのシトシンのメチル化率が、前記健常者に対して低いことを確認し、また、被検者の前記気分障害マーカーに基づき、ＭＤＤの罹患の可能性を試験できることを確認した。【０１６６】
（１）シトシンのメチル化率の測定
ＭＤＤ患者２０人および健常者（非ＭＤＤ）１９人から全血を採取した。なお、前記ＭＤＤ患者のうち１７人は、抗うつ薬ならびに気分安定薬を含む向精神薬の使用経験がなく、また、前記ＭＤＤ患者のうち２人は、少なくとも前記採血前の６ヶ月間、向精神薬の治療薬を使用していない。【０１６７】
前記全血から、常法によりゲノムＤＮＡを抽出した。つぎに、ＥＺ  ＤＮＡ  methylation  kit（Zymo  Research社製）を用い、５００ｎｇの前記ゲノムＤＮＡをバイサルファイト変換した。さらに、変換後の前記ゲノムＤＮＡおよびInfinium（登録商標）HumanMethylation450  Beadschips（Illumina  Inc．社製）を用い、添付のプロトコルに従って、前記（１）〜（３６２）および（３６３）のサイトのシトシンのβ値（メチル化率）を測定した。これらの結果を表７Ａ〜７Ｃに示す。【０１６８】
【表７Ａ】
2016021719.tif 000019
【０１６９】
【表７Ｂ】
2016021719.tif 000020
【０１７０】
【表７Ｃ】
2016021719.tif 000021
【０１７１】
前記表７Ａ〜７Ｃに示すように、前記（１）〜（３６２）および（３６３）のサイトのシトシンにおいて、前記ＭＤＤ患者のメチル化率は、前記健常者のメチル化率に対して、有意に低い値を示した。これらの結果から、前記（１）〜（３６２）および（３６３）のサイトのシトシンのメチル化とＭＤＤの発症との間に相関があること、すなわち、全血における前記サイトのメチル化シトシンが、ＭＤＤの高い発症可能性を示すマーカー、およびＭＤＤのマーカーとなることがわかった。【０１７２】
（２）ＭＤＤの罹患の可能性の試験
下記表８に示した各サイトの組合せについて、前記ＭＤＤ患者のメチル化率および前記健常者のメチル化率を用い、前記健常者と前記ＭＤＤ患者とを分離可能な判別分析法の判別関数を算出した。つぎに、前記ＭＤＤ患者および前記健常者を被検者とし、前記各サイトの組合せについて、前記ＭＤＤ患者のメチル化率および前記健常者のメチル化率、ならびに前記判別関数を用い、前記ＭＤＤの罹患可能性のスコア（判別スコア）を算出した。そして、スコアの基準値を０とし、０より小さいスコアの被検者をＭＤＤの可能性が高いと評価し、０より大きいスコアの被検者を健常者の可能性が高いと評価した。前記評価後、前記各サイトの組合せについて、感度および特異度を算出し、それぞれ、下記の感度および特異度の評価基準に基づき、評価した。なお、感度および特異度は、それぞれ７０％以上であれば、実用上問題ないレベルである。これらの結果を表８に示す。【０１７３】
（感度および特異度の評価基準）
７０％未満              ：Ｃ
７０％以上８０％未満    ：Ｂ
８０％以上９０％未満    ：Ａ
９０％以上１００％未満  ：ＡＡ
１００％                ：ＡＡＡ【０１７４】
【表８】
2016021719.tif 000022
【０１７５】
表８に示すように、いずれのサイトの組合せにおいても、感度および特異度が、共にＢ以上であり、優れた感度および特異度であった。【０１７６】
また、（１）〜（９）および（１１）〜（１９）の１８つのサイトを使用した際の前記健常者および前記ＭＤＤ患者のＭＤＤの罹患可能性のスコアのプロット図を図１に示す。【０１７７】
図１において、縦軸は、ＭＤＤの罹患可能性のスコアを示し、黒丸（●）は、健常者を示し、白丸は、ＭＤＤ患者を示し、破線は、スコアの基準値（ＭＤＤの罹患可能性のスコア＝０）を示す。図１に示すように、前記ＭＤＤ患者の全員が、前記基準値未満の値（陽性）となった。また、前記健常者の全員が、前記基準値以上の値（陰性）となった。すなわち、感度１００％および特異度１００％でＭＤＤの罹患を判断できることがわかった。【０１７８】
これらの結果から、前記気分障害マーカーに基づき、優れた診断精度で気分障害の罹患の可能性を判断できることがわかった。【０１７９】
［実施例２］
（ｆ）および（ｈ）のサイトのシトシンについて、統合失調症（ＳＣＺ）患者の前記サイトのシトシンのメチル化率が、前記健常者に対して高いこと、および（ｇ）および（ｉ）のサイトのシトシンについて、ＳＣＺ患者の前記サイトのシトシンのメチル化率が、前記健常者に対して低いことを確認し、また、被検者の前記統合失調症マーカーのメチル化率に基づき、ＳＣＺの罹患の可能性を試験できることを確認した。【０１８０】
（１）シトシンのメチル化率の測定
統合失調症（ＳＣＺ）患者２３人および健常者（非ＳＣＺ）２４人から全血を採取した。【０１８１】
前記（１）〜（３６２）および（３６３）のサイトのシトシンに代えて、前記（ｆ）〜（ｈ）および（ｉ）のサイトのシトシンのメチル化率を測定した以外は、前記実施例１（１）と同様にして、β値（メチル化率）を測定した。これらの結果を表９Ａ〜９Ｘ、１０Ａ〜１０Ｃ、１１、および１２に示す。【０１８２】
【表９Ａ】
2016021719.tif 000023
【０１８３】
【表９Ｂ】
2016021719.tif 000024
【０１８４】
【表９Ｃ】
2016021719.tif 000025
【０１８５】
【表９Ｄ】
2016021719.tif 000026
【０１８６】
【表９Ｅ】
2016021719.tif 000027
【０１８７】
【表９Ｆ】
2016021719.tif 000028
【０１８８】
【表９Ｇ】
2016021719.tif 000029
【０１８９】
【表９Ｈ】
2016021719.tif 000030
【０１９０】
【表９Ｉ】
2016021719.tif 000031
【０１９１】
【表９Ｊ】
2016021719.tif 000032
【０１９２】
【表９Ｋ】
2016021719.tif 000033
【０１９３】
【表９Ｌ】
2016021719.tif 000034
【０１９４】
【表９Ｍ】
2016021719.tif 000035
【０１９５】
【表９Ｎ】
2016021719.tif 000036
【０１９６】
【表９Ｏ】
2016021719.tif 000037
【０１９７】
【表９Ｐ】
2016021719.tif 000038
【０１９８】
【表９Ｑ】
2016021719.tif 000039
【０１９９】
【表９Ｒ】
2016021719.tif 000040
【０２００】
【表９Ｓ】
2016021719.tif 000041
【０２０１】
【表９Ｔ】
2016021719.tif 000042
【０２０２】
【表９Ｕ】
2016021719.tif 000043
【０２０３】
【表９Ｖ】
2016021719.tif 000044
【０２０４】
【表９Ｗ】
2016021719.tif 000045
【０２０５】
【表９Ｘ】
2016021719.tif 000046
【０２０６】
【表１０Ａ】
2016021719.tif 000047
【０２０７】
【表１０Ｂ】
2016021719.tif 000048
【０２０８】
【表１０Ｃ】
2016021719.tif 000049
【０２０９】
【表１１】
2016021719.tif 000050
【０２１０】
【表１２】
2016021719.tif 000051
【０２１１】
前記表９Ａ〜９Ｘ、１０Ａ〜１０Ｃ、１１、および１２に示すように、前記（ｆ）および（ｈ）のサイトのシトシンにおいて、前記ＳＣＺ患者のメチル化率は、前記健常者のメチル化率に対して、有意に高い値を示し、前記（ｇ）および（ｉ）のサイトのシトシンにおいて、前記ＳＣＺ患者のメチル化率は、前記健常者のメチル化率に対して、有意に低い値を示した。これらの結果から、前記（ｆ）および（ｈ）のサイトのシトシンのメチル化、ならびに（ｇ）および（ｉ）のサイトのシトシンの脱メチル化とＳＣＺの発症との間に相関があること、すなわち、全血における前記（ｆ）および（ｈ）のサイトのメチル化シトシン、ならびに前記（ｇ）および（ｉ）のサイトのシトシンのメチル化シトシンが、ＳＣＺの高い発症可能性を示すマーカー、およびＳＣＺのマーカーとなることがわかった。【０２１２】
（２）ＳＣＺの罹患の可能性の試験
下記表１３に示した各サイトの組合せについて、前記ＳＣＺ患者のメチル化率および前記健常者のメチル化率を用い、前記健常者と前記ＳＣＺ患者とを分離可能な判別分析法の判別関数を算出した。つぎに、前記ＳＣＺ患者および前記健常者を被検者とし、前記各サイトの組合せについて、前記ＳＣＺ患者のメチル化率および前記健常者のメチル化率、ならびに前記判別関数を用い、前記ＳＣＺの罹患可能性のスコア（判別スコア）を算出した。そして、スコアの基準値を０とし、０より小さいスコアの被検者をＳＣＺの可能性が高いと評価し、０より大きいスコアの被検者を健常者の可能性が高いと評価した。前記評価後、前記各サイトの組合せについて、感度および特異度を算出し、それぞれ、下記の感度および特異度の評価基準に基づき、評価した。なお、感度および特異度は、それぞれ７０％以上であれば、実用上問題ないレベルである。これらの結果を表１３に示す。【０２１３】
（感度および特異度の評価基準）
７０％未満              ：Ｃ
７０％以上８０％未満    ：Ｂ
８０％以上９０％未満    ：Ａ
９０％以上１００％未満  ：ＡＡ
１００％                ：ＡＡＡ【０２１４】
【表１３】
2016021719.tif 000052
【０２１５】
前記表１３に示すように、いずれのサイトの組合せにおいても、感度および特異度が、共にＡＡ以上であった。【０２１６】
また、（１０００）、（１００１）、（６０００）および（６００１）の４つのサイトを使用した際の前記健常者および前記ＳＣＺ患者のＳＣＺの罹患可能性のスコアのプロット図を図２に示す。【０２１７】
図２において、縦軸は、ＳＣＺの罹患可能性のスコアを示し、黒丸（●）は、健常者を示し、白丸は、ＳＣＺ患者を示し、破線は、スコアの基準値（ＳＣＺの罹患可能性のスコア＝０）を示す。図２に示すように、前記ＳＣＺ患者の全員が、前記基準値未満の値（陽性）となった。また、前記健常者の全員が、前記基準値以上の値（陰性）となった。すなわち、感度１００％および特異度１００％でＳＣＺの罹患を判断できることがわかった。【０２１８】
これらの結果から、前記統合失調症マーカーに基づき、優れた診断精度で統合失調症の罹患を判断できることがわかった。【０２１９】
［実施例３］
（３６４）〜（５０７）および（６００）〜（６４７）のサイトのシトシンについて、うつ病の重症度とメチル化率が相関することを確認した。【０２２０】
ＭＤＤ患者２０人から全血を採取し、前記（１）〜（３６２）および（３６３）のサイトのシトシンに代えて、前記（３６４）〜（５０７）および（６００）〜（６４７）のサイトのシトシンのメチル化率を測定した以外は、前記実施例１（１）と同様にして、β値（メチル化率）を測定した。【０２２１】
また、前記ＭＤＤ患者を、それぞれ、１７項目版ハミルトンうつ病評価尺度（ＨＡＭ−Ｄ、17-item  Hamilton  Rating  Scale  for  Depression）に基づき評価した。前記評価にあたっては、下記参考文献１を参照した。そして、得られた評価値を、前記ＭＤＤ患者および前記健常者のＭＤＤの重症度とした。
参考文献１：Williams  JB.、「A  structured  interview  guide  for  the  Hamilton  Depression  Rating  Scale.」、Arch  Gen  Psychiatry.、１９８８年８月、第４５巻、第８号、７４２−７４７頁【０２２２】
つぎに、（３６４）〜（５０７）および（６００）〜（６４７）のサイトについて、それぞれ、前記メチル化率と前記ＭＤＤの重症度とのスピアマンの順位相関係数（cor.  spearman）を算出した。これらの結果を表１４Ａ、１４Ｂおよび１５に示す。【０２２３】
【表１４Ａ】
2016021719.tif 000053
【０２２４】
【表１４Ｂ】
2016021719.tif 000054
【０２２５】
【表１５】
2016021719.tif 000055
【０２２６】
前記表１４Ａおよび１４Ｂに示すように、（３６４）〜（５０６）および（５０７）のいずれのサイトにおいても、前記メチル化率と前記ＭＤＤの重症度とのスピアマンの順位相関係数は、−０．６７５以下であり、極めて強い負の相関を示した。すなわち、（３６４）〜（５０６）および（５０７）のサイトのシトシンのメチル化率に基づき、ＭＤＤの重症度を判断できることがわった。また、前記表１５に示すように、（６００）〜（６４６）および（６４７）のいずれのサイトにおいても、前記メチル化率と前記ＭＤＤの重症度とのスピアマンの順位相関係数は、０．６７５以上であり、極めて強い正の相関を示した。すなわち、（６００）〜（６４６）および（６４７）のサイトのシトシンのメチル化率に基づき、ＭＤＤの重症度を判断できることがわった。【０２２７】
これらの結果から、前記気分障害マーカーに基づき、気分障害の重症度を判断できることがわかった。【０２２８】
以上、実施形態および実施例を参照して本発明を説明したが、本発明は、上記実施形態および実施例に限定されるものではない。本発明の構成や詳細には、本発明のスコープ内で当業者が理解しうる様々な変更をできる。【０２２９】
この出願は、２０１４年８月７日に出願された日本出願特願２０１４−１６１１７６を基礎とする優先権を主張し、その開示の全てをここに取り込む。
【産業上の利用可能性】
【０２３０】
以上、説明したように、本発明によれば、少なくとも１つ以上の前記気分障害マーカーを測定することによって、高い診断精度で被検者の気分障害の罹患可能性を試験できる。また、本発明において、気分障害の罹患により少なくとも１つ以上の前記サイトのシトシンのメチル化率が変化することから、例えば、少なくとも１つ以上の前記気分障害マーカーを用いたスクリーニングにより、気分障害の治療用候補物質を得ることもできる。このため、本発明は、臨床分野および生化学分野等において極めて有用である。【０２３１】
また、本発明によれば、少なくとも１つ以上の前記統合失調症マーカーを測定することによって、高い診断精度で被検者の統合失調症の罹患可能性を試験できる。また、本発明において、統合失調症の罹患により少なくとも１つ以上の前記サイトのシトシンのメチル化率が変化することから、例えば、少なくとも１つ以上の前記統合失調症マーカーを用いたスクリーニングにより、統合失調症の治療用候補物質を得ることもできる。このため、本発明は、臨床分野および生化学分野等において極めて有用である。
【図１】
2016021719.tif 000068
【図２】
2016021719.tif 000069
【手続補正書】
【提出日】平成28年3月2日(2016.3.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被検者の生体試料における下記（ａ）のサイトのシトシンのメチル化率を測定する測定工程、および
測定した前記シトシンのメチル化率を、基準値と比較することにより、気分障害の罹患の可能性を試験する試験工程を含むことを特徴とする、気分障害の罹患可能性を試験する方法。
（ａ）下記（１）〜（９）および（１１）〜（１９）のＧｅｎｅｏｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ  ｈｕｍａｎ  ｇｅｎｏｍｅ  ｂｕｉｌｄ  ３７／ＵＣＳＣ  ｈｕｍａｎ  ｇｅｎｏｍｅ  １９（ＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９）の座標で特定されるサイト
（１）１３５１９２１６０
（２）６８０５７１６５
（３）３４９１５８９０
（４）１４０４７７７２７
（５）６７６２４４９４
（６）６３７４２０４４
（７）５９０４１１７５
（８）６８１４１７２３
（９）１０００２７４０８
（１１）２５６０４７４０
（１２）７４７３３６８２
（１３）３９６０５８６１
（１４）３１４０５５２
（１５）２５６０４７５９
（１６）６６２４３５９０
（１７）７８５３２５６０
（１８）１３７２１７３９０
（１９）７３３０１９８５
【請求項２】
前記基準値が、健常者の生体試料における対応する前記サイトのシトシンのメチル化率または気分障害患者の生体試料における対応する前記サイトのシトシンのメチル化率である、請求項１記載の気分障害の罹患可能性を試験する方法。
【請求項３】
前記試験工程において、前記（ａ）のサイトのシトシンが、対応する下記の条件を満たす場合、前記被検者は、気分障害に罹患する可能性があるとする、請求項２記載の気分障害の罹患可能性を試験する方法。
（ｘ１）前記サイトが前記（ａ）のサイトの場合、前記被検者の生体試料における前記サイトのシトシンのメチル化率が、前記健常者の生体試料における対応するシトシンのメチル化率よりも低い場合、または前記気分障害患者の生体試料における対応するシトシンのメチル化率以下の場合
【請求項４】
前記生体試料が、全血である、請求項１から３のいずれか一項に記載の気分障害の罹患可能性を試験する方法。
【請求項５】
前記生体試料が、血球および白血球の少なくとも一方である、請求項１から４のいずれか一項に記載の気分障害の罹患可能性を試験する方法。
【請求項６】
前記気分障害が、うつ病および双極性感情障害の少なくとも一方である、請求項１から５のいずれか一項に記載の気分障害の罹患可能性を試験する方法。
【請求項７】
下記（ａ）のサイトのメチル化シトシンを含むことを特徴とする、気分障害マーカーセット。
（ａ）下記（１）〜（９）および（１１）〜（１９）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（１）１３５１９２１６０
（２）６８０５７１６５
（３）３４９１５８９０
（４）１４０４７７７２７
（５）６７６２４４９４
（６）６３７４２０４４
（７）５９０４１１７５
（８）６８１４１７２３
（９）１０００２７４０８
（１１）２５６０４７４０
（１２）７４７３３６８２
（１３）３９６０５８６１
（１４）３１４０５５２
（１５）２５６０４７５９
（１６）６６２４３５９０
（１７）７８５３２５６０
（１８）１３７２１７３９０
（１９）７３３０１９８５
【請求項８】
請求項１から６のいずれか一項に記載の試験方法に使用する試験試薬であって、下記（ａ）のサイトのメチル化シトシンの測定試薬を含むことを特徴とする、気分障害の試験試薬。
（ａ）下記（１）〜（９）および（１１）〜（１９）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（１）１３５１９２１６０
（２）６８０５７１６５
（３）３４９１５８９０
（４）１４０４７７７２７
（５）６７６２４４９４
（６）６３７４２０４４
（７）５９０４１１７５
（８）６８１４１７２３
（９）１０００２７４０８
（１１）２５６０４７４０
（１２）７４７３３６８２
（１３）３９６０５８６１
（１４）３１４０５５２
（１５）２５６０４７５９
（１６）６６２４３５９０
（１７）７８５３２５６０
（１８）１３７２１７３９０
（１９）７３３０１９８５
【請求項９】
気分障害の治療用候補物質のスクリーニング方法であって、被検物質から、下記（ａ’）の条件を満たす被検物質を、前記治療用候補物質として選択する選択工程を含むことを特徴とする、気分障害の治療用候補物質のスクリーニング方法。
（ａ’）下記（ａ）のサイトのシトシンのメチル化率を増加させる
（ａ）下記（１）〜（９）および（１１）〜（１９）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（１）１３５１９２１６０
（２）６８０５７１６５
（３）３４９１５８９０
（４）１４０４７７７２７
（５）６７６２４４９４
（６）６３７４２０４４
（７）５９０４１１７５
（８）６８１４１７２３
（９）１０００２７４０８
（１１）２５６０４７４０
（１２）７４７３３６８２
（１３）３９６０５８６１
（１４）３１４０５５２
（１５）２５６０４７５９
（１６）６６２４３５９０
（１７）７８５３２５６０
（１８）１３７２１７３９０
（１９）７３３０１９８５
【請求項１０】
被検者の生体試料における下記（ｄ）のサイトのシトシンのメチル化率を測定する測定工程、および
測定した前記シトシンのメチル化率を、基準値と比較することにより、統合失調症の罹患の可能性を試験する試験工程を含むことを特徴とする、統合失調症の罹患可能性を試験する方法。
（ｄ）下記（ｆ）のサイトおよび下記（ｈ）のサイト
（ｆ）下記（１０００）のＧｅｎｅｏｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ  ｈｕｍａｎ  ｇｅｎｏｍｅ  ｂｕｉｌｄ  ３７／ＵＣＳＣ  ｈｕｍａｎ  ｇｅｎｏｍｅ  １９（ＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９）の座標で特定されるサイト
（ｈ）下記（６０００）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（１０００）９１５７２２３３
（６０００）２２６９５９
【請求項１１】
前記基準値が、健常者の生体試料における対応する前記サイトのシトシンのメチル化率または統合失調症患者の生体試料における対応する前記サイトのシトシンのメチル化率である、請求項１０記載の統合失調症の罹患可能性を試験する方法。
【請求項１２】
前記試験工程において、前記（ｄ）のサイトのシトシンが、対応する下記の条件を満たす場合、前記被検者は、統合失調症に罹患する可能性があるとする、請求項１１記載の統合失調症の罹患可能性を試験する方法。
（ｘ２）前記サイトが前記（ｆ）または前記（ｈ）のサイトの場合、前記被検者の生体試料における前記サイトのシトシンのメチル化率が、前記健常者の生体試料における対応するシトシンのメチル化率よりも高い場合、または前記統合失調症患者の生体試料における対応するシトシンのメチル化率以上の場合
【請求項１３】
前記生体試料が、全血である、請求項１０から１２のいずれか一項に記載の試験方法。
【請求項１４】
前記生体試料が、血球および白血球の少なくとも一方である、請求項１０から１３のいずれか一項に記載の試験方法。
【請求項１５】
下記（ｆ）および（ｈ）のサイトのメチル化シトシンを含むことを特徴とする、統合失調症マーカーセット。
（ｆ）下記（１０００）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｈ）下記（６０００）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（１０００）９１５７２２３３
（６０００）２２６９５９
【請求項１６】
請求項１０から１４のいずれか一項に記載の試験方法に使用する試験試薬であって、下記（ｄ）のサイトのシトシンのメチル化シトシンの測定試薬を含むことを特徴とする、統合失調症の試験試薬。
（ｄ）下記（ｆ）のサイトおよび下記（ｈ）のサイト
（ｆ）下記（１０００）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｈ）下記（６０００）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（１０００）９１５７２２３３
（６０００）２２６９５９
【請求項１７】
統合失調症の治療用候補物質のスクリーニング方法であって、被検物質から、下記（ｄ’）の条件を満たす被検物質を、前記治療用候補物質として選択する選択工程を含むことを特徴とする、統合失調症の治療用候補物質のスクリーニング方法。
（ｄ’）下記（ｆ）のサイトのシトシンのメチル化率を低下させる、および下記（ｈ）のサイトのシトシンのメチル化率を低下させる
（ｆ）下記（１０００）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（ｈ）下記（６０００）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイト
（１０００）９１５７２２３３
（６０００）２２６９５９
【請求項１８】
（削除）
【請求項１９】
前記（ｆ）のサイトが、下記（１００１）〜（１００９）および（１０１０）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイトを含み、
前記（ｈ）のサイトが、下記（６００１）〜（６００５）および（６０００６）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイトを含む、請求項１０から１４のいずれか一項に記載の試験方法。
（１００１）１６７９７２７３
（１００２）５２２３５１８
（１００３）６６９８４２６４
（１００４）１２６２９１２７
（１００５）７８４４４９８１
（１００６）３０８３８３９３
（１００７）１２３５２４３５５
（１００８）１２９５９５２８９
（１００９）１３３３３３２５１
（１０１０）４５８２３４
（６００１）４４４８２９１８
（６００２）４７２９８１６２
（６００３）２００５７０９
（６００４）２８４１６５３２
（６００５）１４４１０８２６６
（６００６）３０２９２７４３
【請求項２０】
前記（ｆ）のサイトが、下記（１０１１）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイトを含む、請求項１９記載の試験方法。
（１０１１）９４２７６０７２
【請求項２１】
前記（ｆ）のサイトが、下記（１００１）〜（１００９）および（１０１０）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイトを含み、
前記（ｈ）のサイトが、下記（６００１）〜（６００５）および（６０００６）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイトを含む、請求項１５記載のマーカーセット。
（１００１）１６７９７２７３
（１００２）５２２３５１８
（１００３）６６９８４２６４
（１００４）１２６２９１２７
（１００５）７８４４４９８１
（１００６）３０８３８３９３
（１００７）１２３５２４３５５
（１００８）１２９５９５２８９
（１００９）１３３３３３２５１
（１０１０）４５８２３４
（６００１）４４４８２９１８
（６００２）４７２９８１６２
（６００３）２００５７０９
（６００４）２８４１６５３２
（６００５）１４４１０８２６６
（６００６）３０２９２７４３
【請求項２２】
前記（ｆ）のサイトが、下記（１０１１）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイトを含む、請求項２１記載のマーカーセット。
（１０１１）９４２７６０７２
【請求項２３】
前記（ｆ）のサイトが、下記（１００１）〜（１００９）および（１０１０）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイトを含み、
前記（ｈ）のサイトが、下記（６００１）〜（６００５）および（６０００６）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイトを含む、請求項１６記載の試験試薬。
（１００１）１６７９７２７３
（１００２）５２２３５１８
（１００３）６６９８４２６４
（１００４）１２６２９１２７
（１００５）７８４４４９８１
（１００６）３０８３８３９３
（１００７）１２３５２４３５５
（１００８）１２９５９５２８９
（１００９）１３３３３３２５１
（１０１０）４５８２３４
（６００１）４４４８２９１８
（６００２）４７２９８１６２
（６００３）２００５７０９
（６００４）２８４１６５３２
（６００５）１４４１０８２６６
（６００６）３０２９２７４３
【請求項２４】
前記（ｆ）のサイトが、下記（１０１１）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイトを含む、請求項２３記載の試験試薬。
（１０１１）９４２７６０７２
【請求項２５】
前記（ｆ）のサイトが、下記（１００１）〜（１００９）および（１０１０）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイトを含み、
前記（ｈ）のサイトが、下記（６００１）〜（６００５）および（６０００６）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイトを含む、請求項１７記載のスクリーニング方法。
（１００１）１６７９７２７３
（１００２）５２２３５１８
（１００３）６６９８４２６４
（１００４）１２６２９１２７
（１００５）７８４４４９８１
（１００６）３０８３８３９３
（１００７）１２３５２４３５５
（１００８）１２９５９５２８９
（１００９）１３３３３３２５１
（１０１０）４５８２３４
（６００１）４４４８２９１８
（６００２）４７２９８１６２
（６００３）２００５７０９
（６００４）２８４１６５３２
（６００５）１４４１０８２６６
（６００６）３０２９２７４３
【請求項２６】
前記（ｆ）のサイトが、下記（１０１１）のＧＲＣｈ３７／Ｈｇ１９の座標で特定されるサイトを含む、請求項２５記載のスクリーニング方法。
（１０１１）９４２７６０７２
【国際調査報告】
2016021719.tif 000070
2016021719.tif 000071
2016021719.tif 000072
2016021719.tif 000073
2016021719.tif 000074