(57)【要約】（２Ｓ）−２−（（４−（（４−（（１Ｓ）−１，２−ジヒドロキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルマロンアミド、（２Ｓ）−２−（（４−（（４−（（１Ｒ）−１，２−ジヒドロキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルマロンアミドおよび（２Ｓ）−Ｎ−ヒドロキシ−２−（（４−（（４−（（１Ｓ）−１−ヒドロキシ−２−メトキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ’，２−ジメチルマロンアミドから選ばれるヒドロキサム酸誘導体またはその塩ならびに抗菌性物質を含有する医薬組成物は、グラム陰性菌感染症の処置に有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（２Ｓ）−２−（（４−（（４−（（１Ｓ）−１，２−ジヒドロキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルマロンアミド、（２Ｓ）−２−（（４−（（４−（（１Ｒ）−１，２−ジヒドロキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルマロンアミドおよび（２Ｓ）−Ｎ−ヒドロキシ−２−（（４−（（４−（（１Ｓ）−１−ヒドロキシ−２−メトキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ’，２−ジメチルマロンアミドから選ばれるヒドロキサム酸誘導体またはその塩ならびに抗菌性物質を含有し、グラム陰性菌感染症の処置に用いる、医薬組成物。
【請求項２】
ヒドロキサム酸誘導体が、（２Ｓ）−２−（（４−（（４−（（１Ｓ）−１，２−ジヒドロキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルマロンアミドである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
抗菌性物質が、抗菌薬である、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
抗菌薬が、βラクタム系抗菌薬、アミノグリコシド系抗菌薬、ニューキノロン系抗菌薬、グリコペプチド系抗菌薬、リファマイシン系抗菌薬、リンコマイシン系抗菌薬およびマクロライド系抗菌薬から選ばれる一種または二種以上である、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
（２Ｓ）−２−（（４−（（４−（（１Ｓ）−１，２−ジヒドロキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルマロンアミド、（２Ｓ）−２−（（４−（（４−（（１Ｒ）−１，２−ジヒドロキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルマロンアミドおよび（２Ｓ）−Ｎ−ヒドロキシ−２−（（４−（（４−（（１Ｓ）−１−ヒドロキシ−２−メトキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ’，２−ジメチルマロンアミドから選ばれるヒドロキサム酸誘導体またはその塩を含有し、抗菌性物質と併用するために用いられる、グラム陰性菌感染症の、処置剤。
【請求項６】
ヒドロキサム酸誘導体が、（２Ｓ）−２−（（４−（（４−（（１Ｓ）−１，２−ジヒドロキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルマロンアミドである、請求項５に記載の処置剤。
【請求項７】
抗菌性物質が、抗菌薬である、請求項５または６に記載の処置剤。
【請求項８】
抗菌薬が、βラクタム系抗菌薬、アミノグリコシド系抗菌薬、ニューキノロン系抗菌薬、グリコペプチド系抗菌薬、リファマイシン系抗菌薬、リンコマイシン系抗菌薬およびマクロライド系抗菌薬から選ばれる一種または二種以上である、請求項７に記載の処置剤。
【請求項９】
抗菌性物質と併用するために用いられる、グラム陰性菌感染症の処置剤の製造のための、（２Ｓ）−２−（（４−（（４−（（１Ｓ）−１，２−ジヒドロキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルマロンアミド、（２Ｓ）−２−（（４−（（４−（（１Ｒ）−１，２−ジヒドロキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルマロンアミドおよび（２Ｓ）−Ｎ−ヒドロキシ−２−（（４−（（４−（（１Ｓ）−１−ヒドロキシ−２−メトキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ’，２−ジメチルマロンアミドから選ばれるヒドロキサム酸誘導体またはその塩の、使用。
【請求項１０】
ヒドロキサム酸誘導体が、（２Ｓ）−２−（（４−（（４−（（１Ｓ）−１，２−ジヒドロキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルマロンアミドである、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
抗菌性物質が、抗菌薬である、請求項９または１０に記載の使用。
【請求項１２】
抗菌薬が、βラクタム系抗菌薬、アミノグリコシド系抗菌薬、ニューキノロン系抗菌薬、グリコペプチド系抗菌薬、リファマイシン系抗菌薬、リンコマイシン系抗菌薬およびマクロライド系抗菌薬から選ばれる一種または二種以上である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
（２Ｓ）−２−（（４−（（４−（（１Ｓ）−１，２−ジヒドロキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルマロンアミド、（２Ｓ）−２−（（４−（（４−（（１Ｒ）−１，２−ジヒドロキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルマロンアミドおよび（２Ｓ）−Ｎ−ヒドロキシ−２−（（４−（（４−（（１Ｓ）−１−ヒドロキシ−２−メトキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ’，２−ジメチルマロンアミドから選ばれるヒドロキサム酸誘導体またはその塩ならびに抗菌性物質を含有する、グラム陰性菌感染症の処置に用いる、キット。
【請求項１４】
ヒドロキサム酸誘導体が、（２Ｓ）−２−（（４−（（４−（（１Ｓ）−１，２−ジヒドロキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルマロンアミドである、請求項１３に記載のキット。
【請求項１５】
抗菌性物質が、抗菌薬である、請求項１３または１４に記載のキット。
【請求項１６】
抗菌薬が、βラクタム系抗菌薬、アミノグリコシド系抗菌薬、ニューキノロン系抗菌薬、グリコペプチド系抗菌薬、リファマイシン系抗菌薬、リンコマイシン系抗菌薬およびマクロライド系抗菌薬から選ばれる一種または二種以上である、請求項１５に記載のキット。
【請求項１７】
抗菌性物質を含有し、（２Ｓ）−２−（（４−（（４−（（１Ｓ）−１，２−ジヒドロキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルマロンアミド、（２Ｓ）−２−（（４−（（４−（（１Ｒ）−１，２−ジヒドロキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルマロンアミドおよび（２Ｓ）−Ｎ−ヒドロキシ−２−（（４−（（４−（（１Ｓ）−１−ヒドロキシ−２−メトキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ’，２−ジメチルマロンアミドから選ばれるヒドロキサム酸誘導体またはその塩と併用するために用いられる、グラム陰性菌感染症の、処置剤。
【請求項１８】
ヒドロキサム酸誘導体が、（２Ｓ）−２−（（４−（（４−（（１Ｓ）−１，２−ジヒドロキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルマロンアミドである、請求項１７に記載の処置剤。
【請求項１９】
抗菌性物質が、抗菌薬である、請求項１７また１８に記載の処置剤。
【請求項２０】
抗菌薬が、βラクタム系抗菌薬、アミノグリコシド系抗菌薬、ニューキノロン系抗菌薬、グリコペプチド系抗菌薬、リファマイシン系抗菌薬、リンコマイシン系抗菌薬およびマクロライド系抗菌薬から選ばれる一種または二種以上である、請求項１９に記載の処置剤。
【請求項２１】
（１）（２Ｓ）−２−（（４−（（４−（（１Ｓ）−１，２−ジヒドロキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルマロンアミド、（２Ｓ）−２−（（４−（（４−（（１Ｒ）−１，２−ジヒドロキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルマロンアミドおよび（２Ｓ）−Ｎ−ヒドロキシ−２−（（４−（（４−（（１Ｓ）−１−ヒドロキシ−２−メトキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ’，２−ジメチルマロンアミドから選ばれるヒドロキサム酸誘導体またはその塩を含有する処置剤；（２）容器；ならびに（３）処置剤を抗菌性物質と組み合わせて、グラム陰性菌感染症の処置に用いることを記載する、指示書、説明書、添付文書または製品ラベル；を含む、製品。
【請求項２２】
ヒドロキサム酸誘導体が、（２Ｓ）−２−（（４−（（４−（（１Ｓ）−１，２−ジヒドロキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルマロンアミドである、請求項２１に記載の製品。
【請求項２３】
抗菌性物質が、抗菌薬である、請求項２１または２２に記載の製品。
【請求項２４】
抗菌薬が、βラクタム系抗菌薬、アミノグリコシド系抗菌薬、ニューキノロン系抗菌薬、グリコペプチド系抗菌薬、リファマイシン系抗菌薬、リンコマイシン系抗菌薬およびマクロライド系抗菌薬から選ばれる一種または二種以上である、請求項２３に記載の製品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なヒドロキサム酸誘導体またはその塩および抗菌性物質を含有する医薬組成物に関する。また、グラム陰性菌感染症の処置剤、処置剤の製造のための新規なヒドロキサム酸誘導体またはその塩の使用、キットならびに製品に関する。
【背景技術】
【０００２】
グラム陰性菌は、グラム陽性菌には存在しない脂質二重層からなる外膜を有するため、グラム陽性菌と比較して薬剤抵抗性が強い傾向にある。また、グラム陰性菌は、複数の薬剤排出蛋白を有し、この薬剤排出蛋白が、薬剤抵抗性に関与していることが知られている（Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ、２００２年、Ｍａｒ  １，３４，第６３４−６４０頁）。
グラム陰性菌の中でも、特に、緑膿菌は、各種の抗菌性物質に自然耐性を示す傾向が強い。近年、医療現場において、カルバペネム系薬剤、キノロン系薬剤またはアミノ配糖体系薬剤などに耐性を獲得した緑膿菌が、しばしば分離されている（Ｊ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．、２００３年、第５１巻、第３４７−３５２頁）。さらに、多剤耐性緑膿菌も分離されており（Ｊｐｎ．Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、２００６年、第５９巻、第５号、第３５５−３６３頁）、世界的に大きな問題となっている。【０００３】
多剤耐性菌は単に複数の抗菌性物質に耐性を示すだけでなく、使用可能な抗菌性物質が限定されているという問題を抱えている。このため、新薬の創製に加えて、既存の抗菌性物質との併用が重要な選択肢になっている。しかし、耐性菌を対象とした併用療法はまだその理論が確立しておらず、必ずしも満足できる治療効果が得られていない（化学療法の領域、２０１２年、第２８巻、第９号）。【０００４】
ＵＤＰ−３−Ｏ−アシル−Ｎ−アセチルグルコサミンデアセチラーゼ（ＬｐｘＣ）は、リピドＡ（外膜の構成成分であるＬＰＳの疎水性アンカー）の合成を担う酵素である。
リピドＡ生合成は、１０段階の反応からなり、ＬｐｘＣは、その第２段階を触媒し、ＵＤＰ−３−Ｏ−アシル−Ｎ−アセチルグルコサミンのアセチル基を離脱させる（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、１９９５年、第２７０巻、第３０３８４−３０３９１頁）。リピドＡは、外膜形成に必須な成分であり、グラム陰性菌の生存に必須である（Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．、１９８７年、第１６９巻、第５４０８−５４１５頁）。ＬｐｘＣは、リピドＡ生合成過程において律速となる重要な酵素の一つであり、リピドＡ生合成に必須な酵素である。従って、ＬｐｘＣの活性を阻害する薬剤は、緑膿菌を含むグラム陰性菌、特に従来薬剤と異なる作用機序を有することから薬剤耐性緑膿菌に対して有効な抗菌剤になり得ることが強く期待される。
これまでに、ＬｐｘＣ阻害活性を有する化合物が知られている（特許文献１〜７）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第０４／０６２６０１号パンフレット
【特許文献２】国際公開第０７／０６９０２０号パンフレット
【特許文献３】国際公開第０８／１５４６４２号パンフレット
【特許文献４】国際公開第１０／０３１７５０号パンフレット
【特許文献５】国際公開第１０／０１７０６０号パンフレット
【特許文献６】国際公開第１０／０３２１４７号パンフレット
【特許文献７】国際公開第１１／１３２７１２号パンフレット
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、グラム陰性菌感染症の処置に有用である医薬組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
このような状況下において、本発明者らは、鋭意検討を行った結果、（２Ｓ）−２−（（４−（（４−（（１Ｓ）−１，２−ジヒドロキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルマロンアミド（以下、「化合物Ａ」と称することがある。）、（２Ｓ）−２−（（４−（（４−（（１Ｒ）−１，２−ジヒドロキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルマロンアミド（以下、「化合物Ｂ」と称することがある。）および（２Ｓ）−Ｎ−ヒドロキシ−２−（（４−（（４−（（１Ｓ）−１−ヒドロキシ−２−メトキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ’，２−ジメチルマロンアミド（以下、「化合物Ｃ」と称することがある。）から選ばれるヒドロキサム酸誘導体またはその塩ならびに抗菌性物質を含有する医薬組成物が、強い抗菌活性を示し、グラム陰性菌感染症の処置に有用であることを見出し、本発明を完成した。【０００８】
すなわち、本発明は、以下を提供する。
［１］  化合物Ａ、化合物Ｂおよび化合物Ｃから選ばれるヒドロキサム酸誘導体またはその塩ならびに抗菌性物質を含有し、グラム陰性菌感染症の処置に用いる、医薬組成物。
［２］  ヒドロキサム酸誘導体が、化合物Ａである、［１］に記載の医薬組成物。
［３］  抗菌性物質が、抗菌薬である、［１］または［２］に記載の医薬組成物。
［４］  抗菌薬が、βラクタム系抗菌薬、アミノグリコシド系抗菌薬、ニューキノロン系抗菌薬、グリコペプチド系抗菌薬、リファマイシン系抗菌薬、リンコマイシン系抗菌薬およびマクロライド系抗菌薬から選ばれる一種または二種以上である、［３］に記載の医薬組成物。
［５］  化合物Ａ、化合物Ｂおよび化合物Ｃから選ばれるヒドロキサム酸誘導体またはその塩を含有し、抗菌性物質と併用するために用いられる、グラム陰性菌感染症の、処置剤。
［６］  ヒドロキサム酸誘導体が、化合物Ａである、［５］に記載の処置剤。
［７］  抗菌性物質が、抗菌薬である、［５］または［６］に記載の処置剤。
［８］  抗菌薬が、βラクタム系抗菌薬、アミノグリコシド系抗菌薬、ニューキノロン系抗菌薬、グリコペプチド系抗菌薬、リファマイシン系抗菌薬、リンコマイシン系抗菌薬およびマクロライド系抗菌薬から選ばれる一種または二種以上である、［７］に記載の処置剤。
［９］  抗菌性物質と併用するために用いられる、グラム陰性菌感染症の処置剤の製造のための、化合物Ａ、化合物Ｂおよび化合物Ｃから選ばれるヒドロキサム酸誘導体またはその塩の、使用。
［１０］  ヒドロキサム酸誘導体が、化合物Ａである、［９］に記載の使用。
［１１］  抗菌性物質が、抗菌薬である、［９］または［１０］に記載の使用。
［１２］  抗菌薬が、βラクタム系抗菌薬、アミノグリコシド系抗菌薬、ニューキノロン系抗菌薬、グリコペプチド系抗菌薬、リファマイシン系抗菌薬、リンコマイシン系抗菌薬およびマクロライド系抗菌薬から選ばれる一種または二種以上である、［１１］に記載の使用。【０００９】
［１３］  化合物Ａ、化合物Ｂおよび化合物Ｃから選ばれるヒドロキサム酸誘導体またはその塩ならびに抗菌性物質を含有する、グラム陰性菌感染症の処置に用いる、キット。
［１４］  ヒドロキサム酸誘導体が、化合物Ａである、［１３］に記載のキット。
［１５］  抗菌性物質が、抗菌薬である、［１３］または［１４］に記載のキット。
［１６］  抗菌薬が、βラクタム系抗菌薬、アミノグリコシド系抗菌薬、ニューキノロン系抗菌薬、グリコペプチド系抗菌薬、リファマイシン系抗菌薬、リンコマイシン系抗菌薬およびマクロライド系抗菌薬から選ばれる一種または二種以上である、［１５］に記載のキット。
［１７］  抗菌性物質を含有し、化合物Ａ、化合物Ｂおよび化合物Ｃから選ばれるヒドロキサム酸誘導体またはその塩と併用するために用いられる、グラム陰性菌感染症の、処置剤。
［１８］  ヒドロキサム酸誘導体が、化合物Ａである、［１７］に記載の処置剤。
［１９］  抗菌性物質が、抗菌薬である、［１７］また［１８］に記載の処置剤。
［２０］  抗菌薬が、βラクタム系抗菌薬、アミノグリコシド系抗菌薬、ニューキノロン系抗菌薬、グリコペプチド系抗菌薬、リファマイシン系抗菌薬、リンコマイシン系抗菌薬およびマクロライド系抗菌薬から選ばれる一種または二種以上である、［１９］に記載の処置剤。
［２１］  （１）化合物Ａ、化合物Ｂおよび化合物Ｃから選ばれるヒドロキサム酸誘導体またはその塩を含有する処置剤；（２）容器；ならびに（３）処置剤を抗菌性物質と組み合わせて、グラム陰性菌感染症の処置に用いることを記載する、指示書、説明書、添付文書または製品ラベル；を含む、製品。
［２２］  ヒドロキサム酸誘導体が、化合物Ａである、［２１］に記載の製品。
［２３］  抗菌性物質が、抗菌薬である、［２１］または［２２］に記載の製品。
［２４］  抗菌薬が、βラクタム系抗菌薬、アミノグリコシド系抗菌薬、ニューキノロン系抗菌薬、グリコペプチド系抗菌薬、リファマイシン系抗菌薬、リンコマイシン系抗菌薬およびマクロライド系抗菌薬から選ばれる一種または二種以上である、［２３］に記載の製品。【００１０】
本発明は、さらに以下を提供する。
［Ａ］  化合物Ａ、化合物Ｂおよび化合物Ｃから選ばれるヒドロキサム酸誘導体またはその塩を含有する処置剤を抗菌性物質と組み合わせて、グラム陰性菌感染症の処置に用いることを記載する、指示書、説明書、添付文書または製品ラベル。
［Ｂ］  ヒドロキサム酸誘導体が、化合物Ａである、［Ａ］に記載の指示書、説明書、添付文書または製品ラベル。
［Ｃ］  抗菌性物質が、抗菌薬である、［Ａ］または［Ｂ］に記載の指示書、説明書、添付文書または製品ラベル。
［Ｄ］  抗菌薬が、βラクタム系抗菌薬、アミノグリコシド系抗菌薬、ニューキノロン系抗菌薬、グリコペプチド系抗菌薬、リファマイシン系抗菌薬、リンコマイシン系抗菌薬およびマクロライド系抗菌薬から選ばれる一種または二種以上である、［Ｃ］に記載の指示書、説明書、添付文書または製品ラベル。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の医薬組成物は、強い抗菌活性を有し、グラム陰性菌感染症の処置に有用である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明について詳述する。
本明細書において、特に断らない限り、「％」は、「質量％」を意味する。
処置とは、疾患に対する予防または治療などを意味する。
処置剤とは、疾患に対して予防または治療などの目的で供せられる物質を意味する。
【００１３】
＜ヒドロキサム酸誘導体＞
本発明に用いられるヒドロキサム酸誘導体としては、化合物Ａ、化合物Ｂおよび化合物Ｃが挙げられ、化合物Ａが好ましい。
ヒドロキサム酸誘導体は、たとえば、後述する製造例に従って製造することができる。
【００１４】
ヒドロキサム酸誘導体またはその塩において、異性体（たとえば、光学異性体、幾何異性体および互変異性体など）が存在する場合、本発明は、それらの異性体を包含し、また、溶媒和物、水和物および種々の形状の結晶を包含する。
ヒドロキサム酸誘導体の塩としては、たとえば、ナトリウムおよびカリウムなどのアルカリ金属との塩；カルシウムおよびマグネシウムなどのアルカリ土類金属との塩；アンモニウム塩；ならびにトリメチルアミン、トリエチルアミン、トリブチルアミン、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−メチルモルホリン、ジエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ−ベンジル−β−フェネチルアミン、１−エフェナミンおよびＮ，Ｎ'−ジベンジルエチレンジアミンなどの含窒素有機塩基との塩などが挙げられる。
上記した塩の中で、好ましい塩としては、薬理学的に許容される塩が挙げられる。
【００１５】
ヒドロキサム酸誘導体またはその塩の投与方法、投与量および投与回数は、患者の年齢、体重および症状に応じて適宜選択することができる。通常、成人に対しては、経口または非経口（たとえば、注射、点滴および直腸部位への投与など）投与により、１日、0.01〜1000mg／kgを１回から数回に分割して投与すればよい。
【００１６】
＜抗菌性物質＞
本発明に用いられる抗菌性物質としては、たとえば、抗菌薬および抗菌タンパクが挙げられ、抗菌薬が好ましい。
抗菌薬としては、たとえば、βラクタム系抗菌薬、アミノグリコシド系抗菌薬、ニューキノロン系抗菌薬、グリコペプチド系抗菌薬、リファマイシン系抗菌薬、リンコマイシン系抗菌薬およびマクロライド系抗菌薬が挙げられる。
【００１７】
βラクタム系抗菌薬としては、たとえば、ペニシリン系抗菌薬、βラクタマーゼ阻害剤配合ペニシリン系抗菌薬、セフェム系抗菌薬、βラクタマーゼ阻害剤配合セフェム系抗菌薬、カルバペネム系抗菌薬、βラクタマーゼ阻害剤配合カルバペネム系抗菌薬、モノバクタム系抗菌薬およびペネム系抗菌薬などが挙げられ、ペニシリン系抗菌薬、βラクタマーゼ阻害剤配合ペニシリン系抗菌薬、セフェム系抗菌薬、βラクタマーゼ阻害剤配合セフェム系抗菌薬およびカルバペネム系抗菌薬が好ましい。
ペニシリン系抗菌薬としては、たとえば、ベンジルペニシリン、ペニシリンＯ、ペニシリンＶ、ペニシリンＧ、メチシリン、オキサシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、カルベニシリン、バカンピシリン、チカルシリン、アゾシリン、メズロシリン、アモキシシリン、スルタミシリン、タランピシリン、レナンピシリン、シクラシリン、ピブメシリナム、アスポキシシリン、アンピシリンおよびピペラシリンが挙げられ、ピペラシリンが好ましい。
βラクタマーゼ阻害剤配合ペニシリン系抗菌薬としては、たとえば、アンピシリン−スルバクタム配合剤、クラブラン酸−アモキシシリン配合剤およびピペラシリン−タゾバクタム配合剤が挙げられ、ピペラシリン−タゾバクタム配合剤が好ましい。
セフェム系抗菌薬としては、たとえば、セファゾリン、セファロチン、セファピリン、セファレキシン、セファドロキシル、セファロリジン、セフテゾール、セフロキサジン、セフマンドール、セフロキシム、セフォニシド、セフォラニド、セファクロル、セフプロジル、セフポドキシム、ロラカルベフ、セフトリアキソン、セフォタキシム、セフチゾキシム、セフォペラゾン、セフスロジン、セフチブテン、セフィキシム、セフェタメト、セフジトレンピボキシル、セフピロム、セフォキシチン、セフォテタン、セフメタゾール、セフブペラゾン、セフミノクス、ラタモキセフ、フロモキセフ、セフォチアム、セフピラミド、セフメノキシム、セフォゾプラン、セファトリジン、セフジニル、セフテラムピボキシル、セフカペンピボキシル、セフトロザン、セフタロリン、セフラジンセフトロザン、セフタジジムおよびセフェピムが挙げられ、セフタジジムおよびセフェピムが好ましい。
βラクタマーゼ阻害剤配合セフェム系抗菌薬としては、たとえば、セフォペラゾン−スルバクタム配合剤、セフタジジム−アビバクタム配合剤、セフタロリン−アビバクタム配合剤およびセフトロザン−タゾバクタム配合剤が挙げられる。
カルバペネム系抗菌薬としては、たとえば、イミペネム、パニペネム、ビアペネム、ドリペネム、エルタペネム、テビペネム、トモペネム、サフトリネム（ｓａｆｔｒｉｎｅｍ）、レナペネムおよびメロペネムが挙げられ、ドリペネム、イミペネムおよびメロペネムが好ましい。
βラクタマーゼ阻害剤配合カルバペネム系抗菌薬としては、たとえば、イミペネム−ＭＫ−７６５５配合剤およびビアペネム−ＲＰＸ７００９配合剤が挙げられる。
モノバクタム系抗菌薬としては、たとえば、アズトレオナムおよびカルモナムが挙げられる。
ペネム系抗菌薬としては、たとえば、ファロペネムおよびスロペネム（ｓｕｌｏｐｅｎｅｍ）が挙げられる。
【００１８】
アミノグリコシド系抗菌薬としては、たとえば、ストレプトマイシン、ネオマイシン、カナマイシン、パロマイシン、ゲンタマイシン、トブラマイシン、ネチルミシン、スペクチノマイシン、シソミシン、ジベカリン、ベカナマイシン、リボスタマイシン、アストロマイシン、アルベカシン、プラゾミシン、イセパミシンおよびアミカシンが挙げられ、アミカシンが好ましい。
【００１９】
ニューキノロン系抗菌薬としては、たとえば、ナリジクス酸、オキソリン酸、ピロミド酸、ピペミド酸、ノルフロキサシン、ペフロキサシン、エノキサシン、オフロキサシン、テマフロキサシン、ロメフロキサシン、フレロキサシン、グレパフロキサシン、スパルフロキサシン、トロバフロキサシン、クリナフロキサシン、ガチフロキサシン、モキシフロキサシン、シタフロキサシン、ガネフロキサシン、ゲミフロキサシン、ガレノキサシン、プルリフロキサシン、トスフロキサシン、ベシフロキサシン、フィナフロキサシン、デラフロキサシン、アバフロキサシン、ザボフロキサシン、ネモノキサシン、パズフロキサシン、シプロフロキサシンおよびレボフロキサシンが挙げられ、シプロフロキサシン、パズフロキサシンおよびレボフロキサシンが好ましい。
【００２０】
グリコペプチド系抗菌薬としては、たとえば、バンコマイシン、テラバンシンおよびテイコプラニンが挙げられ、バンコマイシンおよびテイコプラニンが好ましい。
【００２１】
リファマイシン系抗菌薬としては、たとえば、リファンピシンが挙げられる。
【００２２】
リンコマイシン系抗菌薬としては、たとえば、クリンダマイシンが挙げられる。
【００２３】
マクロライド系抗菌薬としては、たとえば、エリスロマイシンおよびアジスロマイシンが挙げられる。
【００２４】
抗菌タンパクとしては、たとえば、リゾチームおよびその塩が挙げられる。
リゾチームの塩としては、たとえば、塩酸、臭化水素酸、硝酸および硫酸などの鉱酸との塩；ギ酸、酢酸、クエン酸、シュウ酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、リンゴ酸、酒石酸、アスパラギン酸、トリクロロ酢酸およびトリフルオロ酢酸などの有機カルボン酸との塩；ならびにメタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、メシチレンスルホン酸およびナフタレンスルホン酸などのスルホン酸との塩が挙げられる。
上記した塩の中で、好ましい塩としては、薬理学的に許容される塩が挙げられる。
【００２５】
＜併用＞
本発明では、ヒドロキサム酸誘導体またはその塩および抗菌性物質を併用する。
併用とは、ヒドロキサム酸誘導体またはその塩および抗菌性物質との組合せを意味し、ヒドロキサム酸誘導体またはその塩を抗菌性物質と同時に、別個にまたは特定の順序で投与する形態および混合物（配合剤）としての形態を含む。すなわち、ヒドロキサム酸誘導体またはその塩および抗菌性物質の投与時期が、同一であることのみを意味するものではなく、１つの投与スケジュール中にヒドロキサム酸誘導体またはその塩および抗菌性物質を投与する形態も「併用」に含まれる。ヒドロキサム酸誘導体またはその塩および抗菌性物質の投与経路は、同一であってもよいし、異なっていてもよい。
【００２６】
＜グラム陰性菌感染症＞
グラム陰性菌感染症としては、たとえば、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属、ステノトロフォモナス（Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ）属、バークホルデリア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ）属、アシネトバクター（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）属、アルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）属、レジオネラ （Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）属、ボルデテラ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ）属、ブルセラ（Ｂｒｕｃｅｌｌａ）属、バクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）属、フソバクテリウム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、ナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）属、モラクセラ（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ）属、カンピロバクター（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）属、ヘリコバクター（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）属、ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）属、アエロモナス（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）属、ヘモフィリス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）属、エルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）属、クリセオバクテリウム（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、エリザベスキンギア（Ｅｌｉｚａｂｅｔｈｋｉｎｇｉａ）属、フラボバクテリウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属および腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）からなる群などのグラム陰性菌による感染症が挙げられる。
【００２７】
＜医薬組成物＞
本発明の医薬組成物は、ヒドロキサム酸誘導体またはその塩および抗菌性物質を含有し、グラム陰性菌感染症の処置に用いられる。
医薬組成物は、通常、製剤化に使用される賦形剤、担体および希釈剤などの製剤補助剤を含有してもよい。
医薬組成物は、たとえば、錠剤、カプセル剤、散剤、シロップ剤、顆粒剤、丸剤、懸濁剤、乳剤、液剤、粉体製剤、坐剤、点眼剤、点鼻剤、点耳剤、貼付剤、軟膏剤または注射剤などの形態にすることができる。
投与経路は、特に限定されず、医薬組成物は、静脈内、経口、筋肉内、皮下、吸入、噴霧または他の投与経路により投与することができる。
ヒドロキサム酸誘導体またはその塩は、抗菌性物質と同時に、別個にまたは特定の順序で投与してもよい。
ヒドロキサム酸誘導体は、上記したとおりである。
抗菌性物質は、上記したとおりである。
グラム陰性菌感染症は、上記したとおりである。
【００２８】
＜処置剤＞
本発明の処置剤は、ヒドロキサム酸誘導体またはその塩を含有し、抗菌性物質と併用され、グラム陰性菌感染症の処置に用いられる。
処置剤の投与経路は、特に限定されず、静脈内、経口、筋肉内、皮下、吸入、噴霧または他の投与経路により投与することができる。また、処置剤は、抗菌性物質と同時に、別個にまたは特定の順序で投与してもよい。
また、別の態様として、本発明の処置剤は、抗菌性物質を含有し、ヒドロキサム酸誘導体またはその塩と併用され、グラム陰性菌感染症の処置に用いられる。
処置剤の投与経路は、特に限定されず、静脈内、経口、筋肉内、皮下、吸入、噴霧または他の投与経路により投与することができる。また、処置剤は、ヒドロキサム酸誘導体またはその塩と同時に、別個にまたは特定の順序で投与してもよい。
ヒドロキサム酸誘導体は、上記したとおりである。
抗菌性物質は、上記したとおりである。
グラム陰性菌感染症は、上記したとおりである。
【００２９】
＜使用＞
本発明には、抗菌性物質と併用するために用いられる、グラム陰性菌感染症の処置剤の製造のための、ヒドロキサム酸誘導体またはその塩の使用が含まれる。
ヒドロキサム酸誘導体は、上記したとおりである。
抗菌性物質は、上記したとおりである。
グラム陰性菌感染症は、上記したとおりである。
【００３０】
＜キット＞
本発明のキットは、単一包装内に、ヒドロキサム酸誘導体またはその塩および抗菌性物質を含有し、グラム陰性菌感染症の処置に用いられる。さらに、キットは、たとえば、投与のための器具、指示書、説明書、添付文書または製品ラベルを含んでもよい。ヒドロキサム酸誘導体またはその塩および抗菌性物質の投与経路が異なる場合、または、個々の成分の用量設定が医師によって行われることが好ましい場合、キットは、特に有用である。
ヒドロキサム酸誘導体またはその塩の投与経路は、特に限定されず、静脈内、経口、筋肉内、皮下、吸入、噴霧または他の投与経路により投与することができる。また、ヒドロキサム酸誘導体またはその塩は、抗菌性物質と同時に、別個にまたは特定の順序で投与してもよい。
ヒドロキサム酸誘導体は、上記したとおりである。
抗菌性物質は、上記したとおりである。
グラム陰性菌感染症は、上記したとおりである。
【００３１】
＜製品＞
本発明の製品は、（１）ヒドロキサム酸誘導体またはその塩を含有する処置剤；（２）容器；および（３）処置剤を抗菌性物質と組み合わせて、グラム陰性菌感染症の処置に用いることを記載する、指示書、説明書、添付文書または製品ラベル；を含む。
本発明の製品は、グラム陰性菌感染症の処置に用いられる。
容器とは、ヒドロキサム酸誘導体またはその塩を含有する処置剤を内包するものを意味し、たとえば、缶、びん、箱、アンプル、バイアル、ポリ袋、ＳＰ（strip package）シートおよびＰＴＰ（press through package）シートなどが挙げられる。
ヒドロキサム酸誘導体は、上記したとおりである。
抗菌性物質は、上記したとおりである。
グラム陰性菌感染症は、上記したとおりである。
【００３２】
本発明の医薬組成物、処置剤、キットおよび製品は、グラム陰性菌感染症の処置に有用である。特に、大腸菌、肺炎桿菌、緑膿菌、アシネトバクター・バウマニー（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ）および／またはステノトロフォモナス・マルトフィリア（Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ）による感染症の処置に有用である。とりわけ、アシネトバクター・バウマニー（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ）による感染症の処置に有用である。
本発明の医薬組成物、処置剤、キットおよび製品によって、より重篤なグラム陰性菌感染症の治療が可能となる。また、使用する個々の薬剤量を減じて投与しても強い抗菌作用を示すことより、各々の薬剤の副作用を減じることが可能となる。
【００３３】
次に、本発明を試験例を挙げて説明するが、本発明は、これらに限定されるものではない。
各略号は、以下の意味を有する。
ＡＭＫ：アミカシン
ＣＡＺ：セフタジジム
ＣＦＰＭ：セフェピム
ＣＰＦＸ：シプロフロキサシン
ＤＲＰＭ：ドリペネム
ＩＰＭ：イミペネム
ＬＶＦＸ：レボフロキサシン
ＭＥＰＭ：メロペネム
ＰＺＦＸ：パズフロキサシン
ＰＩＰＣ：ピペラシリン
ＴＡＺ：タゾバクタム
ＴＥＩＣ：テイコプラニン
ＶＣＭ：バンコマイシン
【００３４】
試験例１  緑膿菌ＬｐｘＣ酵素阻害活性評価試験
試験化合物として、化合物Ａ、化合物Ｂおよび化合物Ｃを用いた。
緑膿菌ＬｐｘＣ酵素活性は、ＬｐｘＣとその基質であるＵＤＰ−３−Ｏ−（Ｒ−３−ヒドロキシデカノイル）−Ｎ−アセチルグルコサミンを反応させ、その反応生成物の量を生成物に存在するアミノ基を定量することによって測定した。この測定は、国際公開第１１／１３２７１２号パンフレットなどに記載された方法またはそれに準じた方法にしたがって実施した。
具体的には、緑膿菌ＬｐｘＣ酵素（緑膿菌から染色体ＤＮＡを調製し、ＬｐｘＣ特異的プライマーを用いたＰＣＲ法（ポリメラーゼ連鎖反応法）により緑膿菌ＬｐｘＣ遺伝子を取得し、これをベクターに組み込み、大腸菌を用いて発現して取得した。）に20μmol/LのＵＤＰ−３−Ｏ−（Ｒ−３−ヒドロキシデカノイル）−Ｎ−アセチルグルコサミン（和光純薬）を加え、25℃で1時間インキュベートした。この反応は、0.02％ブリッジ３５および80μmol/L−ジチオトレイトールを含む40mmol/L−ヘペス緩衝液（pH8.0）中で実施した。反応液に20％酢酸（終濃度として0.95％）を添加して反応を終了後、無水ジオキサンに溶解したフルオレサミン（終濃度として1.6mg/mL）を添加し、反応生成物の量を励起波長/蛍光波長＝390nm/495nmで検出した。様々な濃度の試験化合物を前記反応中に共存させることにより、阻害曲線を得た。その阻害曲線から反応生成物の量が50％抑制される際の試験化合物の濃度（IC50値）を求め、緑膿菌ＬｐｘＣ酵素阻害活性の指標とした。
その結果、試験化合物のIC50値は、いずれも50nM未満であった。
試験化合物は、優れた緑膿菌ＬｐｘＣ酵素阻害活性を示した。
【００３５】
試験例２  抗菌活性評価試験
最小発育阻止濃度（MIC）測定は、ＣＬＳＩ（クリニカル  アンド  ラボラトリー  スタンダーズ  インスティテュート）標準法に準じ、下記に示す微量液体希釈法を用いた。
液体希釈法を用いて、試験化合物および抗菌性物質との相互作用を評価した。
試験化合物として、化合物Ａ、ＢおよびＣを用いた。
抗菌性物質として、メロペネム（市販品）、イミペネム（市販品）、ドリペネム（市販品）セフェピム（市販品）、アミカシン（市販品）、レボフロキサシン（Ｃｈｅｍ−Ｉｍｐｅｘ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）、シプロフロキサシン（ＬＫＴ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ.）、ピペラシリン（市販品）、ピペラシリン／タゾバクタム（タゾバクタム：大鵬薬品工業株式会社）、バンコマイシン（市販品）、セフタジジム（市販品）、パズフロキサシン（富山化学工業株式会社）、テイコプラニン（市販品）およびヒトリゾチーム（和光純薬）を用いた。
細菌として、緑膿菌Ｓ−３０９７株、緑膿菌Ｓ−２９９４株、肺炎桿菌Ｙ−８９１株、肺炎桿菌ＢＡＡ１８９９株、大腸菌ＴＫ−１４２８株、大腸菌ＴＫ−１５３７株、ステノトロフォモナス・マルトフィリアＰＭ−１７１株、ステノトロフォモナス・マルトフィリアＮＢＲＣ１３６９２株、アシネトバクター・バウマニーＢＡＡ−１７９１株およびアシネトバクター・バウマニーＢＡＡ−１７９４株を用いた。
ミューラーヒントン寒天培地で一晩培養した被検菌体を掻き取り、マクファーランド  ０．５相当に懸濁し、これを１０倍に希釈して接種菌液とした。接種菌液０．００５ｍＬを、試験化合物のみ、それぞれの抗菌性物質のみ、試験化合物およびそれぞれの抗菌性物質を含むカチオン調整ミューラーヒントン培地に接種し、３５℃にて１８〜２０時間培養した。菌の発育が肉眼的に認められない最小の薬剤濃度をＭＩＣとした。
試験化合物のみ、それぞれの抗菌性物質のみ、試験化合物とそれぞれの抗菌性物質の組み合わせの抗菌活性を評価し、ＦＩＣ指標を計算した。
ＦＩＣ指標は、（試験化合物の併用時ＭＩＣ値／試験化合物の単独時のＭＩＣ値）＋（抗菌性物質の併用時ＭＩＣ値／抗菌性物質の単独時のＭＩＣ値）によって求めた値の最小値とした。
ＦＩＣ指標が０．５以下の場合を両薬剤の組み合わせによる相乗効果があると判定した。０．５１以上であり１以下の場合を相加効果があると判定した。（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ、２００４年、第４９巻、第１９７頁）
【００３６】
化合物Ａおよび抗菌性物質の組合せの結果を、表１〜１０に示す。
【００３７】
【表１】
2016039432.tif 000002
【００３８】
【表２】
2016039432.tif 000003
【００３９】
【表３】
2016039432.tif 000004
【００４０】
【表４】
2016039432.tif 000005
【００４１】
【表５】
2016039432.tif 000006
【００４２】
【表６】
2016039432.tif 000007
【００４３】
【表７】
2016039432.tif 000008
【００４４】
【表８】
2016039432.tif 000009
【００４５】
【表９】
2016039432.tif 000010
【００４６】
【表１０】
2016039432.tif 000011
【００４７】
化合物Ｂおよびそれぞれの抗菌性物質との組合せの結果を、表１１〜１７に示す。
【００４８】
【表１１】
2016039432.tif 000012
【００４９】
【表１２】
2016039432.tif 000013
【００５０】
【表１３】
2016039432.tif 000014
【００５１】
【表１４】
2016039432.tif 000015
【００５２】
【表１５】
2016039432.tif 000016
【００５３】
【表１６】
2016039432.tif 000017
【００５４】
【表１７】
2016039432.tif 000018
【００５５】
化合物Ｃおよびそれぞれの抗菌性物質との組合せの結果を、表１８〜２４に示す。
【００５６】
【表１８】
2016039432.tif 000019
【００５７】
【表１９】
2016039432.tif 000020
【００５８】
【表２０】
2016039432.tif 000021
【００５９】
【表２１】
2016039432.tif 000022
【００６０】
【表２２】
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【００６１】
【表２３】
2016039432.tif 000024
【００６２】
【表２４】
2016039432.tif 000025
【００６３】
緑膿菌Ｓ−３０９７株、カルバペネム耐性である緑膿菌Ｓ−２９９４株および多剤耐性のアシネトバクター・バウマニーに対し、化合物Ａ、ＢまたはＣおよび抗菌性物質の組み合わせは、化合物Ａ、ＢまたはＣ単独より優れた抗菌活性を示した。また、肺炎桿菌、大腸菌およびステノトロフォモナス・マルトフィリアに対しても、化合物Ａ、ＢまたはＣおよび抗菌性物質との組み合わせは、化合物Ａ、ＢまたはＣ単独より優れた抗菌活性を示した。
【００６４】
上記の結果から明らかなように、化合物Ａ、ＢおよびＣまたはその塩と種々の抗菌性物質の組み合わせは、相乗的な抗菌活性を示し、グラム陰性菌によって引き起こされる感染症の処置に有効である。
【００６５】
試験例３  ベロ（Vero）細胞増殖抑制試験
試験化合物として、化合物Ａ、化合物Ｂおよび化合物Ｃを用いた。
試験化合物をジメチルスルホキシドで溶解し、E’MEMを用いて各濃度に調製した後に96ウエルマイクロプレートの各ウエルに0.1mLずつ分注した。Vero細胞懸濁液は、20％FBS添加E’MEMで3×104cells/mLに調製し、0.1mLを各ウエルに播種し、5％CO2、37℃で3日間培養した。培養終了時に1mg/mL ２，３−ビス−（２−メトシキ−４−ニトロ−５−スルホフェニル）−５−（（フェニルアミノ）カルボニル）−２Ｈ−テトラゾリウム＝インナーソルト＝モノナトリウム塩（XTT）および25μM フェナジン＝メトサルフェート（PMS）添加PBSを作製し、各ウエルに50μL添加した。約2時間後にマイクロプレートリーダーを用いて、450nmの吸光度を測定した。
試験化合物非添加コントロールおよび各々のウエルの吸光度比を計算し、細胞増殖を50％阻害する化合物の濃度（CC50；μg/mL）を計算した。
その結果、試験化合物のCC50は、いずれも100μg/mL以上であった。
【００６６】
試験例４  hERG阻害活性の評価
試験化合物として、化合物Ａおよび化合物Ｃを用いた。
hERG遺伝子（human ether-a-go-go related gene）を導入したHEK 293細胞（human embryo kidney 293 cell，CYTOMYX社）を用いた。
培養液は、10％牛胎児血清および1％非必須アミノ酸を含むMEM培地にGeneticinを400μg/mLの濃度になるよう加えたものを用いた。細胞は、炭酸ガス培養機中（37.0℃，5％CO2）で培養した。
hERG電流の測定は、ホールセルクランプ法により行った。測定用細胞を接着させたカバーガラスをディッシュに入れ、灌流液（組成（mmol/L）：NaCl 137，KCl 4，HEPES 10，CaCl2 1.8，MgCl2 1，glucose 10，pH 7.4）を2mL/minの速度で灌流した。灌流槽内の温度は、25℃に維持した。内液（組成（mmol/L）：KCl 130，MgCl2 1，EGTA 5，HEPES 10，MgATP 5，pH 7.2）を充填したガラス電極（2.0〜8.0MΩ）に細胞を接触させ、パッチ膜を破った後、パッチクランプソフトpClamp 10（Molecular Devices Corporation）を介してパッチクランプアンプ（EPC-7 Plus，HEKA）によりhERG電流を測定した。パルスプロトコールは、保持電位-80mV、脱分極パルス+20mVで1.5秒間、再分極パルス-50mVで1.5秒間とし、安定した電流波形が得られることを確認した後、試験化合物を適用した。
適用前および適用10分後のhERG電流波形におけるTail電流のピーク値を解析し、適用前に対する適用10分後の比率（相対値，％）を算出した。
その結果、試験化合物は、いずれも300μmol/LまでhERG阻害活性を示さなかった。
【００６７】
試験例５  遺伝毒性の有無を調べるためのin vitro小核試験
試験化合物として、化合物Ａを用いた。
試験化合物の培養細胞に対する染色体異常誘発性の有無を調べるため、in vitro小核試験を実施した。試験は、チャイニーズハムスター肺線維芽細胞（CHL/IU細胞）を用い、短時間処理法（代謝活性化系存在下および非存在下）および30時間処理法で実施した。なお、試験化合物の濃度は、「医薬品の遺伝毒性試験及び解釈に関するガイダンス」を参考に1.00mmol/Lを最高用量に設定した。標本観察は、0.25、0.50および1.00mmol/Lの用量について実施した。
60mmディッシュ（IWAKI）に15×104の細胞を播種し、10％新生仔ウシ血清（Sigma-Aldrich Co.）および50U/mL・50μg/mLのPenicillin・Streptomycin（Sigma-Aldrich Co.）を含むＭＥＭ培地（Sigma-Aldrich Co.）を用いて37℃、5％CO2で24時間前培養した。前培養終了後に媒体（DMSO）または試験化合物を添加した。短時間処理法では、6時間培養後にPBS(-)（Sigma-Aldrich Co.）で細胞を洗浄した後、新しい培地と交換し、さらに24時間培養した。30時間処理法では、試験化合物を添加後、30時間培養した。培養終了後に0.05％トリプシン−EDTA溶液（Sigma-Aldrich Co.）で細胞を剥離した。遠心分離後に上清を除去し、0.075mol/L塩化カリウム水溶液を3mL加え、室温で5分間低張処理を行った後、氷冷した固定液（メタノール：酢酸＝19：1）で細胞を固定し、スライドグラス標本（ギムザ染色（Merck））を作製した。1用量当たり2000個の細胞を観察し、小核を有する細胞数を計測した。試験化合物群の小核出現頻度が、媒体対照群と比較して統計学的有意に増加した場合を陽性とし、媒体対照と同等な場合を陰性とした。
その結果、いずれの処理方法においても、試験化合物は、1mmol/L以下の用量で陰性であった。
【００６８】
試験例６  血漿中タンパク結合率測定
試験化合物として、化合物Ａおよび化合物Ｃを用いた。
ヒト血清に試験化合物を加えて、1μg/mLの化合物添加血清を調製し、室温で1時間以上静置した。遠心限外ろ過法（分画分子量10,000、1500×g、25℃、10分間）により、ろ液を20μL採取し、ヒト血清および内標準溶液（フロセミド−アセトニトリル溶液）を加えた。化合物添加血清には、PBSおよび内標準溶液を加えた。攪拌後、遠心分離し、上清中の濃度をLC-MS/MSにて定量した。
下記の計算式を用いて蛋白結合率を求めた。
蛋白結合率（％）＝（１−（ろ液の濃度）／（化合物添加血清の濃度））×１００
その結果、試験化合物のタンパク結合率は、いずれも80％以下であった。
【００６９】
試験例７  ヒトにおける肝薬物代謝酵素の阻害作用
試験化合物として、化合物Ａおよび化合物Ｃを用いた。
ヒトのプールド肝ミクロソームを用いた。基質およびその最終添加濃度、陽性対照およびその最終添加濃度は、表２５および２６の通りである。反応は、リン酸緩衝液中（100mmol/L、pH7.4）で行い、反応系の最終濃度は、ヒト肝ミクロソームタンパク0.5mg/mL、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸酸化型（NADP+）1.55mmol/L、グルコース６リン酸3.3mmol/L、塩化マグネシウム3.3mmol/L、グルコース６リン酸脱水素酵素（G6PDH）0.4Units/mLとした。反応液中の各化合物の最終濃度は100μMとした。これらの反応液を37℃で30分間プレインキュベーションした後、基質を添加して37℃で10分間反応させた。1.5倍容積の内標準物質溶液（0.25mmol/L dextrorpHan, 2％ formic acidアセトニトリル溶液）で反応を停止後、遠心分離し、上清中の代謝物濃度をLC-MS/MSにて定量した。
下記の計算式を用いて阻害剤添加時の阻害活性率を求めた。
阻害活性率（％）＝（１−（試験化合物存在下でのCYP代謝物濃度）／（試験化合物非存在下でのCYP代謝物濃度））×１００
その結果、試験化合物の阻害活性率は、いずれも30％以下であった。
【００７０】
【表２５】
2016039432.tif 000026
【００７１】
【表２６】
2016039432.tif 000027
【００７２】
次に、本発明に使用される化合物の製造例を説明するが、本発明はこれらにより、限定されるものではない。
特に記載のない場合、シリカゲルカラムクロマトグラフィーはフラッシュカラムクロマトグラフィーであり、その担体は、富士シリシア化学株式会社、Ｂ．Ｗ．シリカゲル、ＢＷ−３００である。
溶離液における混合比は、容量比である。
【００７３】
各略号は、以下の意味を有する。
ＤＭＳＯ−ｄ６：重ジメチルスルホキシド
ＥＳＩ：エレクトロスプレーイオン化法
ＩＰＥ：ジイソプロピルエーテル
Ｍｅ：メチル
ＴＢＳ：ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル
ＴＨＰ：テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル
ｓ：シングレット
ｄ：ダブレット
ｄｄ：ダブルダブレット
ｍ：マルチプレット
【００７４】
ＮＭＲスペクトルにおいて、たとえば、[1.81],1.82(3H,s)の記載は、ジアステレオマー混合物の各ジアステレオマー由来のピークが、1.81および1.82にシングレットとして観測され、総プロトン数が3Hであることを示す。
【００７５】
製造例１
2016039432.tif 000028
Ｎ−メチルベンジルアミン421gおよび２−ブロモ−２−メチルマロン酸ジエチル400gをＮ−メチルピロリドン1000mLに加え、100℃で1時間撹拌した後、反応混合物を冷却した。トルエン1.5Lおよび水1.5Lを順次加えた後、塩酸70mLを加えた。有機層を分取し、減圧下溶媒を留去して無色油状物499gを得た。
得られた油状物400gに酢酸エチル2.0L、10%パラジウム‐炭素（50%wet）32gおよび酢酸81.9gを順次加え、水素雰囲気下（0.5MPa）45℃で18時間30分間撹拌した。反応混合物を冷却し、セライト濾過した後、残渣を酢酸エチル400mLで洗浄した。濾液に水1200mLを加え、塩酸でpH2以下に調整し、水層を分取した。得られた水槽に酢酸エチル1200mLを加え、20%水酸化ナトリウム水溶液でpH9に調整した。有機層を分取し、溶媒を減圧留去して、無色油状物204gを得た。
得られた油状物200gにアセトニトリル1.0Lおよび炭酸水素ナトリウム198gを加えた。次いで、氷冷下にてクロロギ酸ベンジル168gを25分間かけて滴下した。反応混合物を室温まで昇温し、7時間45分間撹拌して終夜静置した。次いで反応混合物を40〜45℃で1時間30分間撹拌し、冷却した後、不溶物を濾去した。残渣をアセトニトリル200mLで洗浄した。濾液と洗浄液を併せ、減圧下濃縮して無色油状物324gを得た。
水1968mLにリン酸二水素ナトリウム二水和物15.36gを加え、0.05mol/L水酸化ナトリウム水溶液1125mLを加えた。この水溶液に、得られた油状物120gおよびアセトニトリル360mLの混合物を24℃で加え、同温度で2時間45分間撹拌した後、終夜静置した。さらに反応混合物を同温度で6時間撹拌した後、22時間静置した。次いでブタ肝臓エステラーゼ2.9g（20ユニット/mg）に0.05mol/Lリン酸緩衝液30mL（pH7.4）を加え30分間超音波照射した懸濁液を、25℃で反応混合物へ加えた。反応混合物を1mol/L水酸化ナトリウム水溶液でpH6.7〜7.1の範囲に調整して26℃で5時間撹拌した。反応混合物に酢酸エチル1200mLを加え、氷冷下で塩酸37mL、塩化ナトリウム300gおよびセルピュア48gを順次加えた。同温度で1時間撹拌した後、不溶物を濾去した。残渣を酢酸エチル240mLで洗浄し、濾液と洗浄液を併せた。有機層を分取し、水層を酢酸エチル180mLで抽出した。有機層および抽出液を併せ、無水硫酸ナトリウム48gおよび活性炭1.2gを加え、30分間撹拌した後にセライト濾過した。残渣を酢酸エチル180mLで洗浄し、濾液と洗浄液を併せ、溶媒を減圧下で1540mL留去した。得られた残留物にヘプタン240mLを加え、2時間かけて18℃に冷却した。固形物を濾取し、ヘプタン120mLで2回洗浄し、（（（（（２Ｒ）−２−カルボキシ−１−エトキシ−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバモイル）オキシ）メチル）ベンゼン88.18g（＞99.9％ee）を無色結晶として得た。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ値：1.15-1.20(3H,m),1.61(3H,s),2.86(3H,s),3.95-4.15(2H,m),5.07(2H,s),7.28-7.43(5H,m)
【００７６】
HPLC測定条件
カラム：4.6×150mm CHIRALPAK IA 5μm
測定波長：210nm
カラム温度：40℃
移動相：ヘキサン：エタノール＝95：5（0.1%トリフルオロ酢酸）
流速：0.7mL/分
【００７７】
製造例２
2016039432.tif 000029
（（（（（２Ｒ）−２−カルボキシ−１−エトキシ−１−オキソプロパン−２−イル）（メチル）カルバモイル）オキシ）メチル）ベンゼン250gに酢酸エチル1300mLおよびＮ，Ｎ‐ジメチルホルムアミド1.0mLを加え、5℃で塩化オキザリル133gを20分間かけて滴下した後、酢酸エチル200mLを加えた。反応混合物を20℃に昇温し、4時間撹拌した。溶媒を減圧下で1395mL留去し、得られた残留物にテトラヒドロフラン1000mLを加え、8℃に冷却した。同温度で、トリエチルアミン94.1gおよびＯ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）ヒドロキシルアミン109gを順次加え、3時間かけて20℃まで昇温しながら撹拌した。反応混合物を終夜静置した後、アセトン225mLを加え40分間撹拌した。次いでトルエン750mLおよび水1000mLを加え、10℃に冷却した後、塩酸62mLを加えた。さらに6mol/L塩酸および20％水酸化ナトリウム水溶液でpH3に調整して、水層を分取した。得られた水層に酢酸エチル1250mLを加え、20％水酸化ナトリウム水溶液210mLを加えた。次いで、塩化ナトリウム1450gを加え、30℃まで昇温した。有機層を分取し、水層を酢酸エチル750mLで抽出した。有機層および抽出液を併せ、溶媒を減圧下留去した。得られた残留物にトルエン250mLを加え、溶媒を減圧下留去して橙色油状物215gを得た。
得られた油状物213gに室温で40％メチルアミン/メタノール溶液を加え、40〜43℃で8時間30分間撹拌した後、終夜静置した。さらに、45℃で5時間撹拌した後、溶媒を減圧下留去した。得られた残留物にトルエンを加え、溶媒を減圧下留去した。次いで、得られた残留物にテトラヒドロフランを加え、溶媒を減圧下留去して黄色油状物203gを得た。
得られた油状物203gにテトラヒドロフラン1400mLを加え、35℃で炭酸水素ナトリウム117gを加えた。次いで、同温度で４−ヨードベンゾイルクロリド168gおよびテトラヒドロフラン200mLの混合物ならびにテトラヒドロフラン100mLを加え、5時間撹拌した。同温度で、反応混合物に炭酸水素ナトリウム58.2gおよびモルホリン29mLを加え2時間撹拌した後、室温で終夜静置した。反応混合物に酢酸エチル1370mL、水1700mLおよび塩化ナトリウム170gを順次加え、有機層を分取した。得られた有機層に水860mLおよび塩化ナトリウム42.7gを加え15分間撹拌した後、有機層を分取した。得られた有機層を濾過し、濾液の溶媒を減圧下留去した。得られた残留物に酢酸エチル300mLおよびトルエン300mLを加え、30℃で1時間撹拌した後、終夜静置した。固形物を濾取し、酢酸エチル／トルエン混合液（1：1、300mL）で洗浄して、褐色固体206gを得た。得られた褐色固体に酢酸エチル2000mLを加え、40℃で1時間撹拌した後、氷冷下冷却し、固形物を濾取した。固形物を酢酸エチルで洗浄し、（２Ｓ）−２−（（４−ヨードベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ，２−ジメチル−Ｎ’−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）マロンアミド148.9g（＞99.9％ee）を無色結晶として得た。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ値：1.40-1.75(6H,m),1.61(3H,s),[2.62]2.63(3H,d,J=3.7Hz),2.99(3H,d,J=2.7Hz),3.40-3.60(1H,m),[3.82-3.92]3.92-4.02(1H,m),[4.74-4.80]4.80-4.86(1H,m),[7.31]7.33(2H,d,J=8.2Hz),7.85(2H,d,J=8.3Hz),[8.25-8.33]8.35-8.43(1H,m),11.52(1H,s)
【００７８】
HPLC測定条件
カラム：4.6×250mm CHIRALPAK ID 5μm
測定波長：230nm
カラム温度：40℃
移動相：ヘキサン：エタノール＝85：15
流速：1.0mL/分
【００７９】
製造例３
2016039432.tif 000030
（１Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）エタン−１，２−ジオール1.08g、ビストリフェニルホスフィンパラジウム（II）ジクロリド350mg、ヨウ化銅（I）190mgおよび酢酸ブチル10mLの混合物に、窒素雰囲気下、トリイソプロピルシリルアセチレン7.8mLおよびトリエチルアミン7.0mLを加え、還流下1時間攪拌した。反応混合物を冷却し、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え6mol/L塩酸でpH6.2に調整した後、セルピュアおよび酢酸エチルを加え、不溶物を濾去した。濾液の有機層を分取し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下留去し、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［溶離液；酢酸エチル：へキサン＝40：60→45：55］に付し、黄色油状物1.32gを得た。
得られた黄色油状物1.32gおよびテトラヒドロフラン13mLの混合物に、氷冷にて、1mol/Lテトラブチルアンモニウムフルオリド／テトラヒドロフラン溶液6.2mLを加え、同温度で30分間攪拌した後、室温にて45分間攪拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、1mol/L塩酸でpH2.0に調整した後、酢酸エチルを加えた。有機層を分取し、水層を酢酸エチルで2回抽出した。有機層および抽出液を併せ、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下留去し、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［溶離液；酢酸エチル：へキサン＝50：50→70：30］で精製し、淡褐色固体513mgを得た。これにヘキサンを加え、固形物を濾取し（１Ｓ）−１−（４−エチニルフェニル）エタン−１，２−ジオール466mgを淡褐色固体として得た。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ値：1.97-2.07(1H,m),2.56(1H,d,J=3.4Hz),3.08(1H,s),3.56-3.70(1H,m),3.71-3.82(1H,m),4.79-4.88(1H,m),7.34(2H,d,J=8.3Hz),7.49(2H,d,J=8.3Hz)
【００８０】
製造例４
2016039432.tif 000031
（２Ｓ）−２−（（４−ヨードベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ，２−ジメチル−Ｎ’−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）マロンアミド587mg、（１Ｓ）−１−（４−エチニルフェニル）エタン−１，２−ジオール253mg、ビストリフェニルホスフィンパラジウム（II）ジクロリド84mg、ヨウ化銅（I）46mgおよびテトラヒドロフラン6.0mLの混合物に、窒素雰囲気下、氷冷にて、トリエチルアミン0.59mLを加え、同温度にて2時間攪拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液および酢酸エチルを加え、1mol/L塩酸でpH6.4に調整した。有機層を分取し、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層および抽出液を併せ、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下留去し、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［溶離液；アセトン：クロロホルム＝40：60］で精製し、（２Ｓ）−２−（（４−（（４−（（１Ｓ）−１，２−ジヒドロキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ，２−ジメチル−Ｎ’−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）マロンアミド767mgを淡黄色泡状固体として得た。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ値：1.50-1.68(3H,m),1.71-1.92(3H,m),[1.82],1.83(3H,s),2.08-2.14(1H,m),2.63-2.68(1H,m),[2.86],2.87(3H,d,J=4.1Hz),[3.17],3.20(3H,s),3.53-3.83(3H,m),3.83-4.07(1H,m),4.83-4.89(1H,m),4.93-5.03(1H,m),7.37(2H,d,J=8.0Hz),7.48-7.61(6H,m),[6.97-7.04],7.61-7.67(1H,m),[10.10],10.51(1H,s)
【００８１】
製造例５
2016039432.tif 000032
（２Ｓ）−２−（（４−（（４−（（１Ｓ）−１，２−ジヒドロキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ，２−ジメチル−Ｎ’−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）マロンアミド767mgおよびメタノール6.0mLの混合物に、氷冷にてｐ−トルエンスルホン酸一水和物46mgを加え、同温度にて40分間攪拌した後、室温にて1時間攪拌した。反応混合物に水および酢酸エチルを加え、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で中和した。有機層を分取し、水層に酢酸エチルおよび塩化ナトリウムを加え、固形物を濾取した。濾液の有機層を分取し、水層に酢酸エチルおよび塩化ナトリウムを加え、固形物を濾取した。濾液の有機層を分取し、これまでに得られた有機層および固形物を併せ、溶媒を減圧下留去した。得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［溶離液；メタノール：クロロホルム＝10：90→15：85］で精製し、黄色泡状固体585mgを得た。これに酢酸エチルおよびＩＰＥを加え、固形物を濾取し、（２Ｓ）−２−（（４−（（４−（（１Ｓ）−１，２−ジヒドロキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルマロンアミド（化合物Ａ）463mgを黄色固体として得た。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ値：1.77(3H,s),2.79(3H,s),3.17(3H,s),3.55-3.68(2H,m),4.67-4.74(1H,m),7.41(2H,d,J=8.3Hz),7.51(2H,d,J=8.3Hz),7.55(2H,d,J=8.5Hz),7.68(2H,d,J=8.5Hz)；MS（ESI）：462[M+Na]+,438[M-H]-
【００８２】
製造例６
2016039432.tif 000033
製造例３と同様の手法により、（１Ｒ）−１−（４−ブロモフェニル）エタン−１，２−ジオール1.09gから（１Ｒ）−１−（４−エチニルフェニル）エタン−１，２−ジオール558mgを白色固体として得た。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ値：2.00(1H,dd,J=7.1,4.9Hz),2.54(1H,d,J=3.4Hz),3.08(1H,s),3.60-3.68(1H,m),3.73-3.81(1H,m),4.80-4.88(1H,m),7.34(2H,d,J=8.1Hz),7.49(2H,d,J=8.0Hz)
【００８３】
製造例７
2016039432.tif 000034
製造例４と同様の手法により、（２Ｓ）−２−（（４−ヨードベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ，２−ジメチル−Ｎ’−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）マロンアミド587mgおよび（１Ｒ）−１−（４−エチニルフェニル）エタン−１，２−ジオール291mgから（２Ｓ）−２−（（４−（（４−（（１Ｒ）−１，２−ジヒドロキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ，２−ジメチル−Ｎ’−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）マロンアミド797mgを淡褐色泡状固体として得た。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ値：1.53-1.69(3H,m),1.76-1.92(3H,m),[1.81],1.82(3H,s),2.27-2.37(1H,m）,2.83-2.91(4H,m),[3.17],3.19(3H,s),3.53-3.83(3H,m),[3.83-3.92],3.98-4.08(1H,m),4.81-4.88(1H,m),4.94-5.04(1H,m),7.35(2H,d,J=8.1Hz),7.45-7.59(6H,m),[6.96-7.06],7.59-7.68(1H,m),[10.14],10.56(1H,s)
【００８４】
製造例８
2016039432.tif 000035
（２Ｓ）−２−（（４−（（４−（（１Ｒ）−１，２−ジヒドロキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ，２−ジメチル−Ｎ’−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）マロンアミド797mgおよびメタノール6.3mLの混合物に、氷冷にてｐ−トルエンスルホン酸一水和物46mgを加え、同温度で30分間攪拌した後、室温にて45分間攪拌した。反応混合物に水および酢酸エチルを加え、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で中和した。有機層を分取し、水層を酢酸エチルで2回抽出した。水層に塩化ナトリウムを加え、固形物を濾取した。濾液に塩化ナトリウムおよび酢酸エチルを加え、固形物を濾取した。濾液の有機層を分取し、これまでに得られた有機層、抽出液および固形物を併せ、溶媒を減圧下留去した。得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［溶離液；メタノール：クロロホルム＝10：90→15：85］で精製し、黄色泡状固体556mgを得た。これに酢酸エチルおよびＩＰＥを加え、固形物を濾取し、（２Ｓ）−２−（（４−（（４−（（１Ｒ）−１，２−ジヒドロキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルマロンアミド（化合物Ｂ）458mgを黄色固体として得た。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ値：1.78(3H,s),2.80(3H,s),3.17(3H,s),3.57-3.67(2H,m),4.68-4.74(1H,m),7.42(2H,d,J=8.3Hz),7.52(2H,d,J=8.3Hz),7.56(2H,d,J=8.6Hz),7.61(2H,d,J=8.6Hz)；MS（ESI）：462[M+Na]+,438[M-H]-
【００８５】
製造例９
2016039432.tif 000036
製造例３と同様の手法で得た（１Ｓ）−１−（４−（（トリイソプロピルシリル）エチニル）フェニル）エタン−１，２−ジオール2.79g、ジクロロメタン28mL、トリエチルアミン2.7mLおよびＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン213mgの混合物に、窒素雰囲気下、氷冷にてｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド1.45gを加え、室温にて2時間攪拌し、同温度にて終夜静置した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液および酢酸エチルを加え、6mol/L塩酸でpH4.0に調整した。有機層を分取し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下留去し、褐色油状物3.70gを得た。
得られた褐色油状物3.70gにジクロロメタン28mLおよびｐ−トルエンスルホン酸ピリジニウム439mgを加え、氷冷にて、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン2.4mLを加えた後、室温にて5時間攪拌した。反応混合物にトリエチルアミン3.0mLを加え、減圧下溶媒を留去した。得られた残留物に水および酢酸エチルを加えた。有機層を分取し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下留去し、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［溶離液；ジエチルエーテル：ヘキサン＝10：90］で精製し、黄色油状物3.65gを得た。
得られた黄色油状物3.65gにテトラヒドロフラン18mLを加え、氷冷下にて、1mol/Lテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオリド／テトラヒドロフラン溶液17mLを加え、室温にて1時間攪拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液および酢酸エチルを加えた。有機層を分取し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下留去し、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［溶離液；酢酸エチル：へキサン＝30：70→40：60］で精製し、（２Ｓ）−２−（４−エチニルフェニル）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）エタノール1.78gを白色固体として得た。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ値：1.40-1.93(6H,m),2.11-2.20(1H,m),[3.06],3.07(1H,s),3.51-3.61(1H,m),3.62-3.76(2H,m),[3.25-3.34],3.92-4.07(1H,m),[4.48-4.53],4.79-4.86(1H,m),[4.70-4.75],4.87-4.93(1H,m),[7.29],7.35(2H,d,J=8.3Hz),7.45(2H,d,J=8.0Hz)
【００８６】
製造例１０
2016039432.tif 000037
（２Ｓ）−２−（４−エチニルフェニル）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）エタノール800mg、ジメチルスルホキシド4.0mLおよびヨウ化メチル0.4mLの混合物に、窒素雰囲気下、氷冷にて水酸化カリウム545mgを加え、室温にて1時間30分間攪拌した。反応混合物にトルエンおよび飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、6mol/L塩酸でpH6.1に調整した。有機層を分取し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下留去し、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［溶離液；酢酸エチル：ヘキサン＝10：90］で精製し、２−（（１Ｓ）−１−（４−エチニルフェニル）−２−メトキシエトキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン836mgを無色油状物として得た。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ値：1.40-1.94(6H,m),[3.05],3.07(1H,s),[3.36],3.39(3H,s),3.45-3.56(2H,m),[3.56-3.62],3.62-3.69(1H,m),[3.28-3.35],3.97-4.06(1H,m),[4.80-4.85],4.91-4.97(1H,m),[4.41-4.46],4.97-5.01(1H,m),[7.30],7.37(2H,d,J=8.4Hz),7.44-7.51(2H,m)
【００８７】
製造例１１
2016039432.tif 000038
２−（（１Ｓ）−１−（４−エチニルフェニル）−２−メトキシエトキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン478mg、テトラヒドロフラン3.0mL、（２Ｓ）−２−（（４−ヨードベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ，２−ジメチル−Ｎ’−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）マロンアミド300mg、ビストリフェニルホスフィンパラジウム（II）ジクロリド43mgおよびヨウ化銅（I）23mgの混合物に、窒素雰囲気下、氷冷にて、トリエチルアミン0.51mLを加え、同温度にて2時間30分間攪拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液および酢酸エチルを加え、6mol/L塩酸でpH6.0に調整した。有機層を分取し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下留去し、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［溶離液；アセトン：クロロホルム＝10：90］で精製して、（２Ｓ）−２−（（４−（（４−（（１Ｓ）−２−メトキシ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）エチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ，２−ジメチル−Ｎ’−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）マロンアミド485mgを褐色泡状固体として得た。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ値：1.42-1.94(12H,m),[1.81],1.82(3H,s),[2.85],2.86(3H,d,J=4.4Hz),[3.17],3.20(3H,s),[3.37],3.40(3H,s),3.47-3.72(4H,m),[3.29-3.36],3.83-3.91(1H,m),3.97-4.07(1H,m),[4.43-4.48],4.93-4.98(1H,m),[4.84],4.95(1H,dd,J=7.3,4.2Hz),4.98-5.03(1H,m),[7.34],7.41(2H,d,J=8.3Hz),7.44-7.61(6H,m),[6.96-7.04],7.62-7.72(1H,m),[10.01],10.53(1H,s)
【００８８】
製造例１２
2016039432.tif 000039
（２Ｓ）−２−（（４−（（４−（（１Ｓ）−２−メトキシ−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）エチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ，２−ジメチル−Ｎ’−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）マロンアミド485mgおよびメタノール4.8mLの混合物に、氷冷にてｐ−トルエンスルホン酸一水和物23mgを加え、同温度にて10分間攪拌した後、室温にて1時間攪拌した。反応混合物に水および酢酸エチルを加え、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で中和した。有機層を分取し、得られた水層を酢酸エチルで抽出した。水層に塩化ナトリウムを加え、酢酸エチルで2回抽出した。有機層および抽出液を併せ、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下留去し、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［溶離液；メタノール：クロロホルム＝4：96→6：94］で精製し、褐色固体288mgを得た。これに酢酸エチルおよびＩＰＥを加え、固形物を濾取し、（２Ｓ）−Ｎ−ヒドロキシ−２−（（４−（（４−（（１Ｓ）−１−ヒドロキシ−２−メトキシエチル）フェニル）エチニル）ベンゾイル）（メチル）アミノ）−Ｎ’，２−ジメチルマロンアミド（化合物Ｃ）240mgを褐色固体として得た。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ値：1.77(3H,s),2.79(3H,s),3.17(3H,s),3.37(3H,s),3.50(2H,d,J=5.9Hz),7.41(2H,d,J=8.3Hz),7.47-7.65(6H,m)；MS（ESI）：476[M+Na]+,452[M-H]-
【産業上の利用可能性】
【００８９】
ヒドロキサム酸誘導体またはその塩および抗菌性物質を含有する医薬組成物は、強い抗菌活性を有し、グラム陰性菌感染症の処置に有用である。
【国際調査報告】
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