(57)【要約】  検出装置は、液体中の粒子を収集し（Ｓ１）、収集された粒子の蛍光強度を測定する（Ｓ２）。次に、検出装置は、収集された粒子を加熱し（Ｓ３）、加熱の後の、収集された粒子の蛍光強度を測定する（Ｓ４）。検出装置は、加熱の前後の、収集された粒子の蛍光強度の変化量に基づいて、液体中の生物由来の粒子量を算出する（Ｓ５）。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
液体中の生物由来の粒子を検出するための検出装置であって、
発光素子と、
蛍光を受光するための受光素子と、
前記液体に含まれる粒子を収集するための収集機構と、
前記収集機構に収集された粒子の加熱前後の蛍光強度を測定し、前記加熱前後の蛍光強度の変化量に基づいて、前記液体中の生物由来の粒子量を算出するための演算装置を備える、検出装置。
【請求項２】
前記収集機構は、前記液体から前記粒子を分離するための分離手段を含む、請求項１に記載の検出装置。
【請求項３】
前記分離手段は、前記収集機構によって収集された前記液体を加熱蒸発させ得る温度で加熱可能なヒータを含む、請求項２に記載の検出装置。
【請求項４】
前記分離手段は、前記液体から前記粒子をろ過により分離可能なフィルタを含む、請求項２に記載の検出装置。
【請求項５】
前記分離手段は、前記加熱蒸発を第１の温度で行ない、前記粒子量を算出するための加熱を第２の温度で行ない、前記第１の温度は、前記第２の温度よりも低い、請求項３に記載の検出装置。
【請求項６】
前記第１の温度は１００℃以下であり、前記第２の温度は１００℃よりも高い、請求項５に記載の検出装置。
【請求項７】
液体中の生物由来の粒子を検出する方法であって、
前記粒子を収集するステップと、
収集された前記粒子の蛍光強度を測定するステップと、
収集された前記粒子を加熱するステップと、
前記加熱の後に、収集された前記粒子の蛍光強度を測定するステップと、
前記加熱の前後における前記粒子の蛍光強度の変化量に基づいて、前記液体中の生物由来の粒子量を算出するステップとを備える、検出方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この開示は検出装置および検出方法に関し、特に、液体中の生物由来の粒子を検出するための検出装置および検出方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
液体中の微生物等の生物由来の粒子を検出する際には、第一段階として液体中の粒子を収集し、第二段階として収集物の中から生物由来の粒子を検出する。第一段階では検体をミスト化することで液体部分を蒸発させ、第二段階では蛍光標識試薬による染色を行ない測定する方法が国際公開第２０１３／１３２６３０号（特許文献１）に開示されている。【０００３】
液体中の粒子を収集する他の方法として、特開２０１３−１５５１２号公報（特許文献２）に開示されているような、検体をろ過する方法がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第２０１３／１３２６３０号
【特許文献２】特開２０１３−１５５１２号公報
【特許文献３】国際公開第２０１１／１０４７７０号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
特許文献１の第二段階の検出工程では、蛍光標識試薬による染色を行ない測定する方法は、試薬の噴霧工程が煩雑であること、試薬が高価であること、装置の構造が複雑であることが課題である。当該課題を解決する為に、国際公開第２０１１／１０４７７０号（特許文献３）に開示された方法が採用できる。すなわち、収集された粒子を加熱し、その前後の粒子からの蛍光強度の差分を、予め記憶されている蛍光強度の差分と生物由来の粒子量との関係に適用することで、収集された粒子のうちの生物由来の粒子の量を算出することができる。以下の説明においては、この検出方法を「加熱蛍光検出法」とも称する。この方法は、試薬の使用や噴霧を伴わないため、上述の課題を解決することができる。【０００６】
しかしながら、加熱蛍光検出法に特許文献１の第一段階の収集方法を採用すると、噴霧の際に、液中の生物由来の粒子が液外に放出されてしまったり、空気中の生物由来の粒子が液中に混入してしまったりする可能性がある。そのため、検出精度が低下する可能性がある。【０００７】
また、特許文献２に開示されている方法は加熱蛍光検出法のための収集方法ではないため、収集の後の加熱や蛍光強度の測定に不向きであるという問題がある。【０００８】
本開示はこのような問題に鑑みてなされたものであって、その目的の１つは、液体から粒子を高精度で収集することで、高精度で生物由来の粒子を検出することができる検出装置および検出方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
一実施の形態に従うと、検出装置は液体中の生物由来の粒子を検出するための検出装置であって、発光素子と、蛍光を受光するための受光素子と、液体に含まれる粒子を収集するための収集機構と、収集機構に収集された粒子の加熱前後の蛍光強度を測定し、加熱前後の蛍光強度の変化量に基づいて、液体中の生物由来の粒子量を算出するための演算装置とを備える。【００１０】
好ましくは、収集機構は、液体から粒子を分離するための分離手段を含む。
好ましくは、分離手段は、収集機構によって収集された前記液体を加熱蒸発させ得る温度で加熱可能なヒータを含む。【００１１】
より好ましくは、分離手段は、加熱蒸発を第１の温度で行ない、粒子量を算出するための加熱を第２の温度で行ない、第１の温度は、第２の温度よりも低い。【００１２】
より好ましくは、第１の温度は１００℃以下であり、第２の温度は１００℃よりも高い。【００１３】
好ましくは、分離手段は、液体から粒子をろ過により分離可能なフィルタを含む。
他の実施の形態に従うと、検出方法は液体中の生物由来の粒子を検出する方法であって、粒子を収集するステップと、収集された粒子の蛍光強度を測定するステップと、収集された粒子を加熱するステップと、加熱の後に、収集された粒子の蛍光強度を測定するステップと、加熱の前後における粒子の蛍光強度の変化量に基づいて、液体中の生物由来の粒子量を算出するステップとを備える。
【発明の効果】
【００１４】
ある局面によると、液体中の粒子を高精度で収集し、その粒子のうちの生物由来の粒子を高精度で検出することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】実施の形態にかかる検出装置の構成を説明するための概略図である。
【図２】加熱前および加熱後における生物由来の粒子の蛍光強度を示すグラフである。
【図３】加熱前および加熱後における粉塵の蛍光強度を示すグラフである。
【図４】収集工程を説明するための模式図である。
【図５】収集工程を説明するための模式図である。
【図６】収集工程を説明するための模式図である。
【図７】蛍光測定工程を説明するための模式図である。
【図８】加熱工程を説明するための模式図である。
【図９】加熱による蛍光量の増加量と生物由来の粒子の濃度との相関関係を示すグラフである。
【図１０】検出装置の機能構成の具体例を示すブロック図である。
【図１１】検出装置での検出動作の流れを表わしたフローチャートである。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下に、図面を参照しつつ、本発明の実施の形態について説明する。以下の説明では、同一の部品および構成要素には同一の符号を付してある。それらの名称および機能も同じである。したがって、これらの説明は繰り返さない。
【００１７】
［第１の実施の形態］
＜装置構成＞
図１は、本実施の形態にかかる検出装置１００の構成を説明するための概略図である。検出装置１００は、受光素子９と、信号処理部３０と、ヒータ９１と、測定部４０とを含む。受光素子９は、収集機構の一部である捕集板１２の表面からの発光を受光する。捕集板１２は液体中の粒子を収集することができる。信号処理部３０は、受光素子９と電気的に接続されて受光素子９からのセンサ信号を処理する。ヒータ９１は、捕集板１２の表面に収集された粒子を加熱する。測定部４０は、ヒータ９１および信号処理部３０と電気的に接続され、検出装置１００全体を制御することで生物由来の粒子の量を測定する。
【００１８】
捕集板１２の表面には、発光素子６から光が照射される。発光素子６は、好ましくは、半導体レーザまたはＬＥＤ（Light  Emitting  Diode）素子である。発光素子６から照射される光の波長は、生物由来の粒子が励起されて蛍光を発し得る波長であればよく、紫外または可視いずれの領域の波長でもよい。発光素子６から照射される光の波長は、好ましくは、３００ｎｍ〜４５０ｎｍである。このような波長の光が発光素子６から捕集板１２の表面に照射されることで、受光素子９は、捕集板１２の表面からの蛍光を受光することになる。好ましくは、発光素子６もまた測定部４０に接続され、その発光が測定部４０によって制御される。
【００１９】
好ましくは、発光素子６の照射方向の前方には、レンズおよびアパーチャが配置される。これにより、発光素子６からの光の幅が均一、または光が所定の大きさとなる。また、好ましくは、受光素子９の受光方向の前方には、捕集板１２の表面からの蛍光を受光素子９に集光するための集光レンズと、照射光が受光素子９に入り込むのを防ぐためのフィルタとが配置される。
【００２０】
捕集板１２の表面に収集された粒子は、ヒータ９１によって加熱される。ヒータ９１の加熱は、測定部４０によって制御される。ヒータ９１には、好適には、セラミックヒータ、遠赤外線ヒータや遠赤外線ランプなどが用いられる。
【００２１】
好ましくは、ヒータ９１は、捕集板１２に対して、粒子が収集された表面の反対側の面（裏面）に配置されて、裏面側から捕集板１２を加熱する。これにより、捕集板１２の表面側に配置される発光素子６および受光素子９などの機器に対する熱の影響を抑えることができる。
【００２２】
＜検出原理＞
図２〜図９を用いて、検出装置１００での、生物由来の粒子の検出原理について説明する。なお、生物由来の粒子とは、微生物、カビなどの菌および花粉やダニを含む生物に由来する粒子を指す。
【００２３】
液体中には、生物由来の粒子と鉱物等とが混在している。以下、液体中の粒子を混在粒子とも称する。この混在粒子に紫外光または青色光を照射すると、生物由来の粒子は蛍光を発する。しかしながら、混在粒子には、生物由来の粒子以外にも蛍光を発する化学繊維の埃など(以下、粉塵ともいう)が含まれている。そのため、混在粒子から発せられる蛍光を検出するのみでは、生物由来の粒子量を測定することができない。
【００２４】
そこで、検出装置１００では、本願出願人が先に開発し、特許文献３に開示された検出方法が採用される。当該方法は、生物由来の粒子が加熱されると蛍光強度(蛍光量)が変化するが、化学繊維などの埃は加熱されても蛍光強度が変化しないことを利用している。
【００２５】
図２は、加熱前および加熱後における生物由来の粒子の蛍光強度を示すグラフである。図３は、加熱前および加熱後における粉塵の蛍光強度を示すグラフである。図２，図３は、縦軸に蛍光強度、横軸に蛍光した光の波長を示している。
【００２６】
図２に示すように、生物由来の粒子の場合は、広い波長範囲において加熱後の蛍光量が加熱前の蛍光量に比較して著しく増加している。一方、図３に示すように、粉塵の場合は、加熱後の蛍光量と加熱前の蛍光量とが略同一である。
【００２７】
よって、混在粒子の加熱前後の蛍光量を測定し、加熱前後の蛍光量の差分を求めることにより、混在粒子に含まれる生物由来の粒子の量を算出することができる。
【００２８】
以下、検出装置１００での検出動作の各工程について説明する。検出装置１００での検出動作は、混在粒子の収集工程、加熱前の混在粒子の蛍光測定工程、混在粒子の加熱工程、加熱後の混在粒子の蛍光測定工程、および、生物由来の粒子の量を算出する工程を含む。
【００２９】
図４、図５および図６は、収集工程を説明するための模式図である。図７は、加熱前の蛍光測定工程を説明するための模式図である。図８は、加熱工程を説明するための模式図である。図９は、加熱による蛍光量の増加量と生物由来の粒子の濃度との相関関係を示すグラフである。図９は、縦軸に加熱による蛍光量の増加量、横軸に生物由来の粒子の濃度を示している。
【００３０】
検出装置１００は、液体中に含まれる生物由来の粒子を検出する。そこで、図４に示すように、収集工程では、一例として、液体である検体が捕集板１２の表面に滴下される。検体には、生物由来の粒子６００Ａと、化学繊維の埃などの粉塵６００Ｂとを含む混在粒子６００が含まれている。
【００３１】
図５に示すように、捕集板１２が加熱されることで液体が蒸発し、液体から混在粒子６００が分離される。これにより、捕集板１２上に混在粒子６００が残留して収集される。捕集板１２表面の液体の加熱にはヒータ９１が用いられてもよいし、他のヒータが用いられ、加熱後の捕集板１２が検出装置１００にセットされてもよい。
【００３２】
好ましくは、滴下する液体は検体である液体が濃縮されたものである。濃縮方法は、一般的な加熱によるものであってもよいし、いったんフィルタを用いてろ過し、界面活性剤を含む液中でろ過後のフィルタから混在粒子６００を離脱させてもよい。
【００３３】
図７に示すように、加熱前の蛍光測定工程において、半導体レーザなどの発光素子６から捕集板１２上に収集された混在粒子６００に向けて励起光が照射される。レンズは励起光を照射された混在粒子６００から発せられる蛍光を集光して、受光素子９が蛍光を受光する。
【００３４】
図８に示すように、加熱工程において、検出装置１００は、捕集板１２の裏面に取り付けられたヒータ９１により捕集板１２を加熱することにより、捕集板１２に収集された混在粒子６００を加熱する。加熱後、捕集板１２は空冷される。
【００３５】
加熱後の蛍光測定工程は、図６の場合と同様に、発光素子６から捕集板１２上に収集された混在粒子６００に向けて励起光が照射される。励起光を照射された混在粒子６００から発せられる蛍光はレンズで集光され、受光素子９にて受光される。
【００３６】
検出装置１００は、図９に例示された蛍光量の増加量△Ｆと生物由来の粒子濃度Ｎとの関係に基づき、加熱後の蛍光量から加熱前の蛍光量を引いた差分△Ｆ１から、生物由来の粒子の濃度(個／ｍ3)を算出する。なお、増加量△Ｆと生物由来の粒子濃度Ｎとの相関関係は、予め実験を行なうことにより求められたものである。
【００３７】
＜機能構成＞
図１０は、上記の検出動作を行なうための検出装置１００の機能構成の一例を示すブロック図である。図１０では、信号処理部３０の機能が主に電気回路で実現される構成例が示されている。しかしながら、これら機能の一部は、図示されていないが、信号処理部３０が備えるＣＰＵ（Central  Processing  Unit）が所定のプログラムを実行することによって実現される構成であってもよい。また、測定部４０がソフトウェアで実現される例が示されている。しかしながら、これら機能の一部は、電気回路などのハードウェア構成で実現されてもよい。
【００３８】
図１０において、信号処理部３０は、受光素子９に接続される電流−電圧変換回路３４と、電流−電圧変換回路３４に接続される増幅回路３５とを含む。
【００３９】
測定部４０は、制御部４１、記憶部４２、クロック発生部４３、および駆動部４８を含む。
【００４０】
受光素子９は、受光量を信号処理部３０に入力する。受光量とは、捕集板１２表面の蛍光強度に応じた電流信号（センサ信号）であるを。電流信号は、電流−電圧変換回路３４に入力される。
【００４１】
電流−電圧変換回路３４は、受光素子９から入力された電流信号のピーク値、すなわちピーク電流値Ｈを検出し、電圧値Ｅｈに変換する。電圧値Ｅｈは増幅回路３５で予め設定した増幅率に増幅され、増幅された電圧値Ｅｈが測定部４０に対して出力される。測定部４０の制御部４１は信号処理部３０から電圧値Ｅｈの入力を受け付けて、順次、蛍光強度を表わす電圧値Ｅｈを記憶部４２に記憶させる。
【００４２】
クロック発生部４３はクロック信号を発生させ、制御部４１に対して出力する。制御部４１は、クロック信号に基づいたタイミングで、ヒータ９１の加熱のＯＮ／ＯＦＦを制御するための制御信号を駆動部４８に対して出力して、ヒータ９１の加熱のＯＮ／ＯＦＦを制御する。また、好ましくは、制御部４１は、図１０に示されたように発光素子６と電気的に接続され、クロック信号に基づいたタイミングで発光素子６のＯＮ／ＯＦＦも制御する。
【００４３】
さらに、制御部４１は、ヒータ９１の加熱温度も制御する。制御部４１は、第１の加熱として、上記収集工程で、捕集板１２上の液体を気化させるために第１の温度Ｔ１で加熱を行なう。次に、制御部４１は、第２の加熱として、上記加熱工程で、第２の温度Ｔ２で加熱を行なう。温度Ｔ１と温度Ｔ２は、Ｔ１＜Ｔ２の関係を有する。つまり、制御部４１は、第１の加熱を第２の加熱よりも低い温度で行なう。好ましくは、温度Ｔ１は、捕集板１２上に滴下された液体を蒸発させ得る温度であって１００℃以下（Ｔ１≦１００℃）である。一方、温度Ｔ２は１００℃よりも高い（Ｔ２＞１００℃）温度である。より好ましくは、温度Ｔ１は８０℃〜１００℃であり（８０℃≦Ｔ１≦１００℃）、温度Ｔ２は１００℃〜２５０℃（１００℃≦Ｔ２≦２５０℃）である。温度Ｔ１をこのような範囲とすることで、生物由来の粒子からの蛍光強度が増加することを抑制しつつ、捕集板１２上の液体を気化させ、液体から粒子を分離することができる。一方、温度Ｔ２は、上記加熱工程で期待されている効果、すなわち、生物由来の粒子からの蛍光強度が増加することが期待できる温度範囲である。
【００４４】
制御部４１は、計算部４１１を含む。計算部４１１は、記憶部４２に記憶された電圧値Ｅｈを用いて、液体中の生物由来の粒子量を算出する。すなわち、計算部４１１は、第２の加熱前の蛍光強度Ｆ１と第２の加熱後の蛍光強度Ｆ２との差分を増加量△Ｆとして算出する。上述のように、増加量△Ｆは生物由来の粒子量（粒子数または粒子濃度等）に関連している。計算部４１１は、予め、図９に例示された増加量△Ｆと生物由来の粒子濃度Ｎとの相関関係を記憶しておく。そして、計算部４１１は、算出された増加量△Ｆを該相関関係に代入することで、収集された粒子中の生物由来の粒子量を算出する。
【００４５】
なお、上述の例では増加量△Ｆには、所定の加熱量（所定の加熱温度と加熱時間△ｔとの積）の加熱処理の前後の蛍光強度の差分が用いられているが、増加量△Ｆに代えて加熱処理の前後の蛍光強度の比が用いられてもよい。
【００４６】
＜検出動作＞
図１１は、検出装置１００での検出動作の流れを表わしたフローチャートである。検出動作の開始が指示されると、はじめに、検出装置１００は、液体である検体から粒子を分離する動作を実行する（ステップＳ１）。本実施の形態では、液体を気化させることで粒子を分離する動作が行なわれるものとする。ステップＳ１で、検出装置１００は、捕集板１２の表面に滴下された液体を第１の温度Ｔ１で加熱する。温度Ｔ１は上記の第２の温度Ｔ２よりも低い温度であり、好ましくは、１００℃以下（Ｔ１≦１００℃）である。より好ましくは、第１の温度Ｔ１は８０℃〜１００℃（８０℃≦Ｔ１≦１００℃）である。
【００４７】
なお、好ましくは、検出装置１００は、上記ステップＳ１の第１の加熱の後、捕集板１２を冷却する動作を実行する。冷却する動作は、後述のステップＳ３である第２の加熱の後にも行なわれてよい。
【００４８】
次に、検出装置１００は、捕集板１２の表面からの第２の加熱前の蛍光強度Ｆ１を測定する動作を実行する（ステップＳ２）。すなわち、信号処理部３０が受光素子９からの電流信号を電圧値Ｅｈに変換し、測定部４０に入力する。そして、測定部４０は、蛍光強度Ｆ１を表わす電圧値Ｅｈを、記憶部４２に記憶する。測定部４０の制御部４１が発光素子６を制御可能な場合、ステップＳ２では、さらに、制御部４１は、発光素子６が発光するよう制御する。
【００４９】
次に、検出装置１００は、捕集板１２の表面に収集された粒子を加熱する第２の加熱動作を実行する（ステップＳ３）。第２の温度Ｔ２は、上記の第１の温度Ｔ１よりも高い温度であり、好ましくは、１００℃よりも高い温度（Ｔ２＞１００℃）である。より好ましくは、第２の温度Ｔ２は１００℃〜２５０℃（１００℃≦Ｔ２≦２５０℃）である。
【００５０】
次に、検出装置１００は、捕集板１２の表面からの第２の加熱後の蛍光強度Ｆ２を測定する動作を実行する（ステップＳ４）。ステップＳ４の動作は上記ステップＳ２での動作と同じである。
【００５１】
次に、検出装置１００は、捕集板１２に収集された、生物由来の粒子の量を算出する（ステップＳ５）。詳しく説明すると、まず、測定部４０の制御部４１は計算部４１１で、捕集板１２の表面からの第２の加熱前後の蛍光強度Ｆ１，Ｆ２の差分（増加量△Ｆ）を算出する。続いて、制御部４１は、図９に例示された増加量△Ｆと生物由来の粒子濃度Ｎとの相関関係を予め記憶しておき、計算部４１１で算出された増加量△Ｆを該相関関係に代入することで、収集された粒子中の生物由来の粒子量を算出する。
【００５２】
＜実施の形態の効果＞
本実施の形態にかかる検出装置１００を用いることによって、生物由来の粒子からの蛍光と粉塵からの蛍光との加熱処理による性質の差を利用し、液体である検体に含まれる混在粒子から生物由来の粒子を検出することができる。このとき、検出装置１００は、捕集板１２の表面に滴下した液体を加熱して気化することで、液体から粒子を分離する。この方法によって分離して収集する方法は、ミスト化して捕集板の表面に吹き付けて収集する方法よりも、周囲の粒子の混入や粒子の散逸を防ぐことができ、精度よく収集することができる。さらにこのとき、検出装置１００は、液体から粒子を分離して収集するために、生物由来の粒子を検出するための加熱よりも低い温度で加熱する。これにより、検出装置１００を用いることによって、液体である検体に含まれる生物由来の粒子を高精度に検出することができる。
【００５３】
［第２の実施の形態］
第１の実施の形態の検出原理では、混在粒子の収集工程の分離工程で、液体を加熱して蒸発する方法が採用されている場合を説明している。しかしながら、分離工程は上記の方法に限定されない。
【００５４】
本実施の形態の分離工程で採用される方法は、図６に示したように、フィルタを用いてろ過する方法である。この場合、分離工程では、捕集板１２にセット可能なフィルタ２１を用いて液体がろ過される。ろ過後のフィルタ２１を捕集板１２表面にセットした場合を、捕集板１２での収集とする。フィルタは、液体から粒子を分離できる目の細かさを有する。
【００５５】
また、検出動作において、上記ステップＳ１で検出装置１００は、検体である液体から粒子を分離した、捕集板１２にセット可能なフィルタのセットを受け付ける。
【００５６】
［第３の実施の形態］
本実施の形態の分離工程で採用される方法は、フィルタを用いてろ過する工程と、加熱して液体を気化する工程とを含む。分離工程にフィルタを用いてろ過する工程が含まれることで、粒子が液体から完全に分離された状態で収集される。あるいは、粒子が付着する液体分が大幅に削減された状態で収集される。その後、加熱して液体を気化する工程を経ることで、第２の加熱での加熱効率が粒子に付着した液体によって低下することを防止できる。それ故、分離工程に両工程が含まれることで、検出装置１００での検出精度をより向上させることができる。
【００５７】
このように、分離工程で採用される分離方法は、加熱して液体を気化する方法、フィルタを用いてろ過する方法、およびこれらを組み合わせた方法など、特定の方法には限定されない。
【００５８】
今回開示された実施の形態はすべての点で例示であって制限的なものではないと考えられるべきである。本発明の範囲は上記した説明ではなくて請求の範囲によって示され、請求の範囲と均等の意味および範囲内でのすべての変更が含まれることが意図される。
【符号の説明】
【００５９】
６  発光素子、７  レンズ、９  受光素子、１２  捕集板、２１  フィルタ、３０  信号処理部、３４  電流−電圧変換回路、３５  増幅回路、４０  測定部、４１  制御部、４２  記憶部、４３  クロック発生部、４８  駆動部、９１  ヒータ、１００  検出装置、４１１  計算部、６００  混在粒子、６００Ａ  生物由来の粒子、６００Ｂ  粉塵。
【図１】
2016039124.tif 000003
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【国際調査報告】
2016039124.tif 000014
2016039124.tif 000015
2016039124.tif 000016
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