(57)【要約】  ２型糖尿病患者の治療薬選択の補助方法、治療薬の効果予測方法、検査方法及び治療方法を提供することを課題とする。  ２型糖尿病患者由来の検体（特に、血液）において、セレノプロテインP値がカットオフ値よりも高い場合には、メトホルミン投与の効果が高いことを見出し、本発明を完成した。【特許請求の範囲】
【請求項１】
２型糖尿病患者由来の検体において、セレノプロテインP値がカットオフ値よりも高い場合には、メトホルミン塩酸塩投与を選択することを特徴とする２型糖尿病の治療薬選択の補助方法。
【請求項２】
前記検体が、血液である請求項１に記載の治療薬選択の補助方法。
【請求項３】
前記カットオフ値が、3.5μg/mL〜4.7μg/mLである請求項１又は２に記載の治療薬選択の補助方法。
【請求項４】
２型糖尿病患者由来の検体において、セレノプロテインP値がカットオフ値よりも高い場合には、メトホルミン塩酸塩投与が有効であると判断することを特徴とする２型糖尿病の治療効果を予測する方法。
【請求項５】
前記検体が、血液である請求項４に記載の治療効果を予測する方法。
【請求項６】
前記カットオフ値が、4.5μg/mL以上である請求項４又は５に記載の治療効果を予測する方法。
【請求項７】
２型糖尿病患者由来の検体において、セレノプロテインP値がカットオフ値よりも高い場合には、メトホルミン塩酸塩投与を選択することを特徴とする２型糖尿病の治療薬選択のための２型糖尿病患者由来の検体の検査方法。
【請求項８】
前記検体が、血液である請求項７に記載の検査方法。
【請求項９】
前記カットオフ値が、3.5μg/mL〜4.7μg/mLである請求項７又は８に記載の検査方法。
【請求項１０】
以下の工程を含む２型糖尿病の治療方法：
（１）２型糖尿病患者由来の検体において、セレノプロテインP値がカットオフ値よりも高いかどうかを判定する工程；及び
（２）セレノプロテインP値がカットオフ値よりも高い場合には、メトホルミン塩酸塩を該患者に投与する工程。
【請求項１１】
前記カットオフ値が、3.5μg/mL〜4.7μg/mLである請求項１０に記載の治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、２型糖尿病患者由来の検体において、セレノプロテインP値がカットオフ値よりも高い場合には、メトホルミン塩酸塩投与を選択することを特徴とする２型糖尿病の治療薬選択の補助方法、治療薬の効果予測方法、検査方法及び治療方法に関する。
本出願は、参照によりここに援用されるところの日本出願、特願2014-184499号優先権を請求する。
【背景技術】
【０００２】
（２型糖尿病）
世界規模で増加し続ける２型糖尿病は、網膜・腎・神経の合併症や虚血性心疾患等の動脈硬化性疾患を促進することで人類のＱＯＬと生命を脅かしており、その新たな治療法の開発は急務である。肝臓は、糖・脂質代謝の主役を担うだけではなく、血管新生因子をはじめとする各種生理活性物質の生体内最大の産生臓器である。２型糖尿病では、インスリンによる肝臓からの糖放出抑制作用は減弱しており、この現象はインスリン抵抗性と呼ばれる。インスリン抵抗性は、肝臓からの糖放出亢進による高血糖及び脂質の産生亢進による高脂血症をもたらし、動脈硬化性疾患を促進する。さらに肝臓は、動脈硬化のリスクにつながる血管新生因子をはじめとする各種生理活性物質の生体内最大の産生臓器である（参照：特許文献１）。【０００３】
（セレノプロテインP（SeP））
セレノプロテインP（SeP）は、セレンを豊富に含む細胞外タンパク質であり、血漿セレンの５３％を占める主要なセレノプロテインである。SePについて６種のモノクローナル抗体（ＢＤ１、ＢＤ３、ＢＦ２、ＡＥ２、ＡＨ５及びＡＡ３）が知られ、SeP測定法として、２種のモノクローナル抗体を用いた酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）が開発されている。SePは、血漿カリクレインでの分解を受けることにより、Ｎ末端側フラグメント及びＣ末端側フラグメントを生じ、上記の６種のモノクローナル抗体のうち、ＢＤ１、ＢＤ３、ＢＦ２、ＡＥ２及びＡＨ５はＮ末端側フラグメントに対して特異的に反応し、ＡＡ３はＣ末端側フラグメントに対して特異的に反応する。ＡＡ３を用いたウェスタンブロット分析で確認されているように、血漿中には、SePの全長タンパク質と、血漿カリクレインでの分解による切断で生じたフラグメントタンパク質とが存在し得る。臨床研究の促進のために、生体内における血漿カリクレインによるSePの分解の有無又は程度が簡便に測定できる方法が求められている（参照：特許文献２）。【０００４】
（先行特許文献）
特許文献１は、「セレノプロテインPを測定することを含む、２型糖尿病の検出方法」を開示している。しかし、特許文献１は、「セレノプロテインP値を指標として２型糖尿病の治療薬を選択する方法」を開示又は示唆をしていない。
特許文献２は、「検体中の被測定物質（セレノプロテインP）の長鎖型及び短鎖型を分別して測定する方法は、（ａ）該検体と、該長鎖型及び該短鎖型に結合し得る第１の特異的結合物質が結合した微小粒子及び該長鎖型に結合し得るが該短鎖型に結合しない第２の特異的結合物質が結合した微小粒子とを混合し、該微小粒子の凝集反応を測定する工程；（ｂ）該検体と、異なる認識部位で該長鎖型及び該短鎖型に結合し得る、第３の特異的結合物質が結合した微小粒子及び第４の特異的結合物質が結合した微小粒子とを混合し、該微小粒子の凝集反応を測定する工程；（ｃ）該（ａ）の測定値を用いて該長鎖型の量を決定する工程；及び（ｄ）該（ｂ）の測定値から該（ａ）の測定値を差し引いた値を用いて該短鎖型の量を決定する工程を含む。」を開示している。しかし、特許文献２は、「セレノプロテインP値を指標として２型糖尿病の治療薬を選択する方法」を開示又は示唆をしていない。【０００５】
（非特許文献）
非特許文献１は、「セレノプロテインP発現は、メトホルミン投与治療により抑制されるが、AMPK阻害剤又はFoxO3a siRNAの共投与によりこの抑制は阻害される。メトホルミンは、AMPK阻害剤／FoxO3a パスウェイを介して、セレノプロテインP発現を抑制している。」を開示している。しかし、非特許文献１は、「セレノプロテインP値を指標として２型糖尿病の治療薬を選択する方法」を開示又は示唆をしていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開２００８／０１３３２４号公報
【特許文献２】特開２０１４−５２３３８号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】January 3, 2014,Volume 289, (1), 335-345
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
２型糖尿病治療において、メトホルミンを第一選択治療薬とするかDPP4（ジペプチジルペプチターゼ-4）阻害薬を第一選択治療薬とするかは主治医の裁量に委ねられている。しかし、２型糖尿病患者は、選択する治療薬により治療反応性の個人差が大きく、効果がない症例も多数存在する。
メトホルミンは、低血糖にほとんどならず、寿命延長のエビデンスが存在する。しかし、メトホルミンは、抗がん作用、消化管副作用（下痢、食欲低下）等も報告されており、治療反応性にかなりの個人差がある。
また、DPP4阻害薬は、インスリン分泌刺激効果があり、やはり血糖値降下作用に個人差があることが報告されている。
以上により、メトホルミンを第一選択治療薬とするかDPP4阻害薬を第一選択治療薬とするかを客観的に判断できる方法の要望があった。
すなわち、本発明は、２型糖尿病患者の治療薬選択の補助方法、治療薬の効果予測方法、検査方法及び治療方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者等は、上記課題を解決すべく、「２型糖尿病患者由来の検体（特に、血液）において、セレノプロテインP値がカットオフ値よりも高い場合には、メトホルミン投与の効果が高いこと」を見出し、本発明を完成した。【００１０】
すなわち、本発明は以下からなる。
１．２型糖尿病患者由来の検体において、セレノプロテインP値がカットオフ値よりも高い場合には、メトホルミン塩酸塩投与を選択することを特徴とする２型糖尿病の治療薬選択の補助方法。
２．前記検体が、血液である前項１に記載の治療薬選択の補助方法。
３．前記カットオフ値が、3.5μg/mL〜4.7μg/mLである前項１又は２に記載の治療薬選択の補助方法。
４．２型糖尿病患者由来の検体において、セレノプロテインP値がカットオフ値よりも高い場合には、メトホルミン塩酸塩投与が有効であると判断することを特徴とする２型糖尿病の治療効果を予測する方法。
５．前記検体が、血液である前項４に記載の治療効果を予測する方法。
６．前記カットオフ値が、4.5μg/mL以上である前項４又は５に記載の治療効果を予測する方法。
７．２型糖尿病患者由来の検体において、セレノプロテインP値がカットオフ値よりも高い場合には、メトホルミン塩酸塩投与を選択することを特徴とする２型糖尿病の治療薬選択のための２型糖尿病患者由来の検体の検査方法。
８．前記検体が、血液である前項７に記載の検査方法。
９．前記カットオフ値が、3.5μg/mL〜4.7μg/mLである前項７又は８に記載の検査方法。
１０．以下の工程を含む２型糖尿病の治療方法：
（１）２型糖尿病患者由来の検体において、セレノプロテインP値がカットオフ値よりも高いかどうかを判定する工程；及び
（２）セレノプロテインP値がカットオフ値よりも高い場合には、メトホルミン塩酸塩を該患者に投与する工程。
１１．前記カットオフ値が、3.5μg/mL〜4.7μg/mLである前項１０に記載の治療方法。
【発明の効果】
【００１１】
本発明は、２型糖尿病患者由来の検体において、セレノプロテインP値がカットオフ値よりも高い場合には、メトホルミン投与を選択することを特徴とする２型糖尿病の治療薬選択の補助方法、治療薬の効果予測方法、検査方法及び治療方法を提供することができる。
これにより、メトホルミン投与の治療効果を投与前に予測することが可能になり、メトホルミン投与の効果が期待される２型糖尿病患者には早期からメトホルミンを投与することにより、高い治療効果を得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】血漿カリクレインによるセレノプロテインP（SeP）の切断を示す模式図。
【図２】FL−SeP測定系におけるSeP濃度と吸光度変化量との関係を示すグラフ（検量線）。縦軸は、吸光度変化量を表し、横軸はSeP濃度（μg/mL）を示す。
【図３】メトホルミン投与群での血糖値の変化及びHbA1c値の変化を示すグラフ（ピアソンの積率相関係数を使用）。
【図４】DPP4阻害薬投与群での血糖値の変化及びHbA1c値の変化を示すグラフ（ピアソンの積率相関係数を使用）。
【図５】メトホルミン投与群及びDPP4阻害薬投与群でのセレノプロテインP値の変化を示すグラフ（ピアソンの積率相関係数を使用）。
【図６】メトホルミン投与群及びDPP4阻害薬投与群での血糖値の変化（ピアソンの積率相関係数を使用）。
【図７】メトホルミン投与群での投与前SeP値が高値（4.55μg/mL以上）の症例でのセレノプロテインP値の変化。
【図８】治療前の２型糖尿患者の血清中のセレノプロテインP値の分布図。
【図９】選択したカットオフ値以上の症例でのメトホルミン投与群及びDPP4阻害薬投与群での血糖値の変化。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明は、「２型糖尿病患者由来の検体において、セレノプロテインP値がカットオフ値よりも高い場合には、メトホルミン塩酸塩投与を選択することを特徴とする２型糖尿病の治療薬選択の補助方法」、「２型糖尿病患者由来の検体において、セレノプロテインP値がカットオフ値よりも高い場合には、メトホルミン塩酸塩投与が有効であると判断することを特徴とする治療効果を予測する方法」、「２型糖尿病患者由来の検体において、セレノプロテインP値がカットオフ値よりも高い場合には、メトホルミン塩酸塩投与を選択することを特徴とする２型糖尿病の治療薬選択のための２型糖尿病患者由来の検体の検査方法」及び「２型糖尿病患者由来の検体において、セレノプロテインP値がカットオフ値よりも高い場合には、メトホルミン塩酸塩を該患者に投与することを特徴とする治療方法」である。以下に詳細に説明する。
【００１４】
（２型糖尿病の治療薬選択の補助方法）
本発明の２型糖尿病の治療薬選択の補助方法は、以下の工程を含む。
（１）２型糖尿病患者由来の検体において、セレノプロテインP値がカットオフ値よりも高いかどうかを判定する工程。
（２）セレノプロテインP値がカットオフ値よりも高い場合には、メトホルミン塩酸塩投与を選択することを判定する工程。
【００１５】
（２型糖尿病のメトホルミン塩酸塩投与の治療効果を予測する方法）
本発明の２型糖尿病のメトホルミン塩酸塩投与の治療効果を予測する方法は、以下の工程を含む。
（１）２型糖尿病患者由来の検体において、セレノプロテインP値がカットオフ値よりも高いかどうかを判定する工程。
（２）セレノプロテインP値がカットオフ値よりも高い場合には、メトホルミン塩酸塩投与が有効であると判定する工程。
なお、「有効」とは、メトホルミン塩酸塩投与により、血糖値改善、HbA1c値改善、血液中のSeP値低下、及び／又は糖尿病治療の効果があることを意味する。
【００１６】
（２型糖尿病の治療薬選択のための２型糖尿病患者由来の検体の検査方法）
本発明の２型糖尿病の治療薬選択のための２型糖尿病患者由来の検体の検査方法は、以下の工程を含む。
（１）２型糖尿病患者由来の検体において、セレノプロテインP値がカットオフ値よりも高いかどうかを判定する工程。
（２）セレノプロテインP値がカットオフ値よりも高い場合には、メトホルミン塩酸塩投与を選択することを判定する工程。
【００１７】
（２型糖尿病の治療方法）
本発明の２型糖尿病の治療方法は、以下の工程を含む。
（１）２型糖尿病患者由来の検体において、セレノプロテインP値がカットオフ値よりも高いかどうかを判定する工程。
（２）セレノプロテインP値がカットオフ値よりも高い場合には、メトホルミン塩酸塩を該患者に投与する工程。
さらに、必要に応じて、以下の工程を含む。
（３）メトホルミン塩酸塩投与により患者の症状が改善しない場合には、DPP4阻害薬投与に変更する工程又はDPP4阻害薬を併用する工程。
【００１８】
（検体）
本発明の検体は、２型糖尿病患者由来でありかつセレノプロテインPが存在していれば特に限定されない。例えば、全血、血液（末梢単核球）、血清、血漿、尿、髄液、腹水、リンパ液、肝臓由来液、乳汁等が挙げられる。特に、末梢単核球、血清等が採取等の取り扱いが容易で、侵襲性が低いという点で最も好ましい。２型糖尿病患者からサンプルを取得する方法は、特に限定されず、自体公知の方法を利用することができる。
【００１９】
（セレノプロテインP）
セレノプロテインP（SeP）は、セレノシステインを１０残基含むタンパク質である。セレノプロテインPは、過酸化水素や過酸化脂質を還元して無毒化し、また細胞内の酸化還元を制御するグルタチオンペルオキシダーゼ様活性を有する酵素として作用する。
また、本発明者らは、セレノプロテインPは２型糖尿病の検出マーカーとなることを開示している（参照：特許文献１）。
セレノプロテインPは、ヒト血清中に含まれており、文献「Saito Y．et al., J Biol chem 274:2866-2871, 1999」の記載の方法に従って、ヒト血清より単離・精製することができる。
また、セレノプロテインP（SeP）は、血漿カリクレインにより切断される（参照：図１）。図１の上段図は、全長SePを表し、中段及び下段は血漿カリクレイン切断により生じるSePフラグメントを表す。図１中、「Ｎ」及び「Ｃ」はそれぞれ、Ｎ末端側及びＣ末端側を表し、「Ｓｅｃ」はセレノシステイン残基を表す。カリクレインは、２３５位のアルギニン（図１中「Ｒ２３５」）と２３６位のグルタミン（図１中「Ｑ２３６」）との間、及び２４２位のアルギニン（図１中「Ｒ２４２」）と２４３位のアスパラギン酸（図１中「Ｄ２４３」）との間を切断し、SePのＮ末端側フラグメント（アミノ酸残基１〜２３５）及びＣ末端側フラグメント（アミノ酸残基２４３〜３６１）を含む３つのフラグメントを生じ得る（図１）。「長鎖型」は、未切断の全長SeP（アミノ酸残基１〜３６１：本明細書においては「FL−SeP」と称する場合がある）であり、「短鎖型」は、切断で生じたSePフラグメント（本明細書においては「S−SeP」と称する場合がある）であり、SePフラグメントは、例えば、Ｎ末端側フラグメント（アミノ酸残基１〜２３５）であり得る。
【００２０】
（メトホルミン塩酸塩）
メトホルミン塩酸塩（化学名：1,1-Dimethylbiguanide monohydrochloride）は、「メトグルコ錠」、「グリコラン錠」、「メトホルミン塩酸塩錠」、その他の販売名で、2型糖尿病治療薬として複数の製薬企業から販売されている（以下、販売名としては「メトグルコ錠」とする）。
用法・用量は、通常、成人にはメトホルミン塩酸塩として1日500mgより開始し、1日2〜3回に分割して食直前又は食後に経口投与する。維持量は、効果を観察しながら決めるが、通常1日750mg〜1,500mgとする。なお、患者の状態により適宜増減するが、1日最高投与量は2,250mgまでである。
【００２１】
（DPP4阻害薬）
DPP4阻害薬は、糖尿病内服治療薬であり、DPP4（ジペプチジルペプチターゼ-4）酵素を阻害する薬を意味し、一般名であるシタグリプチン、ビルダグリプチン、アログリプチン、リナグリプチン、テネリグリプチン及びアナグリプチンが知られている。
例えば、投与量及び投与時期は、以下を例示することができるが特に限定されない。
○シタグリプチン
通常、成人にはシタグリプチンとして50mgを1日1 回経口投与する。なお、効果不十分な場合には、経過を十分に観察しながら100mgを1日1回まで増量することができる。
○ビルダグリプチン
通常、成人には、ビルダグリプチンとして50mgを1日2回朝、夕に経口投与する。なお、患者の状態に応じて50mgを1日1回朝に投与することができる。
○アログリプチン
通常、成人にはアログリプチンとして25mgを1日1回経口投与する、好ましくは朝食後に投与する。
○リナグリプチン
通常、成人にはリナグリプチンとして5mgを1日1回経口投与する。
○テネリグリプチン
通常、成人にはテネリグリプチンとして20mgを1日1回経口投与する。なお、効果不十分な場合には、経過を十分に観察しながら40mgを1日1回に増量することができる。
○アナグリプチン
通常、成人にはアナグリプチンとして1回100mgを1日2回朝夕に経口投与する。なお、効果不十分な場合には、経過を十分に観察しながら1回量を200mgまで増量することができる。
【００２２】
（２型糖尿病患者の治療薬選択のためのカットオフ値）
本発明の２型糖尿病患者の治療薬選択のためのカットオフ値の範囲は、検体中（特に血清中）において、下記実施例４より、3.5μg/mL〜4.7μg/mL、好ましくは3.7μg/mL〜4.5μg/mL、より好ましくは3.9μg/mL〜4.3μg/mL、最も好ましくは約4.1μg/mLである。
【００２３】
（メトホルミン塩酸塩投与が有効であると判断するためのカットオフ値）
本発明のメトホルミン塩酸塩投与が有効であると判断するためのカットオフ値の範囲は、検体中（特に血清中）において、下記実施例３より、4.5μg/mL以上、例えば、4.5μg/mL〜6.0μg/mL、より好ましくは4.5μg/mL〜5.5μg/mL、最も好ましくは4.5μg/mL〜5.0μg/mLである。なお、メトホルミン塩酸塩投与が有効であったとの一つの指標は、血中のセレノプロテインP値が有意に低下したことである。
【００２４】
（セレノプロテインP値の測定方法）
本発明の２型糖尿病患者の治療薬選択の補助方法、治療薬の効果予測方法、検査方法及び治療方法におけるセレノプロテインP値の測定方法は特に限定されないが、セレノプロテインPを直接測定してもよいし、セレノプロテインPのｍＲＮＡを測定して、セレノプロテインP値を算出してもよい。
セレノプロテインPを直接測定する方法として、セレノプロテインPを特異的に認識し結合する抗セレノプロテインP抗体を用いる免疫学的測定法により行うことができる。抗セレノプロテインP抗体は、公知の方法により作製することができる。免疫学的測定法としては、抗セレノプロテインP抗体を固相化した担体を用いる方法やウエスタンブロッティング等が挙げられる。固相化担体を用いる方法として、例えば、固相化マイクロタイタープレートを用いるＥＬＩＳＡ、固相化粒子を用いる凝集法等が挙げられるが、これらには限定されず、公知の免疫学的測定法を採用して、血中セレノプロテインPを測定することができる。
また、セレノプロテインPのｍＲＮＡを測定する方法は、ノーザンブロッティング、ＲＴ−ＰＣＲ法、ＤＮＡチップ（ＤＮＡマイクロアレイ）を利用した方法等により測定することができる。これらの方法も公知の方法で行うことができる。
【００２５】
セレノプロテインPの測定方法は、好ましくは、２種のモノクローナル抗体を用いた酵素結合免疫吸着法｛参照：Saito, Y.ら，J. Health Sci. (2001) 47巻, 346〜352頁｝、下記実施例に示す金コロイドを使用した抗原抗体反応を用いた測定方法（参照：特許文献２）等が挙げられる。
【００２６】
以下に示す実施例によって本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。なお、以下の症例は金沢大学医学倫理委員会の承認を得て、実施されている。
【実施例１】
【００２７】
（検体中のセレノプロテインP値測定系の構築）
検体のセレノプロテインP値を測定するための測定系を構築した。詳細は、以下の通りである。【００２８】
（調製例１：金コロイド液の調製）
９５℃の蒸留水１Ｌに１０ｗ／ｖ％塩化金酸水溶液２ｍＬを攪拌しながら加え、１分後に２ｗ／ｖ％クエン酸ナトリウム水溶液１０ｍＬを加え、さらに２０分間攪拌した後、３０℃に冷却した。冷却後、０．１ｗ／ｖ％炭酸カリウム水溶液でｐＨ７．１に調節した。【００２９】
（調製例２：各種抗セレノプロテインP抗体結合金コロイド試薬の調製）
抗ヒトセレノプロテインPラットモノクローナル抗体ＡＨ５及びＡＡ３は、文献｛Saito, Y.ら，J. Health Sci. (2001) 47巻, 346〜352頁｝に記載の手順にしたがって得た。ＡＨ５は、セレノプロテインPのカリクレイン切断によって生じるセレノプロテインPのＮ末端側を認識するモノクローナル抗体であり、ＡＡ３は、セレノプロテインPのＣ末端側を認識するモノクローナル抗体である。【００３０】
抗セレノプロテインPモノクローナル抗体ＡＨ５及びＡＡ３について、抗体結合金コロイド試薬を以下のようにして調製した。抗体を、０．０５ｗ／ｖ％アジ化ナトリウムを含む１０ｍＭ ２−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル］エタンスルホン酸（以下、「ＨＥＰＥＳ」）緩衝液（ｐＨ７．１）で希釈し、５０μｇ／ｍＬの濃度にした。得られた抗体溶液１００ｍＬを、調製例１で調製した約１Ｌの金コロイド液に加え、冷蔵下で２時間攪拌した。さらに、５．４６ｗ／ｖ％マンニトール、０．５ｗ／ｖ％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、及び０．０５％アジ化ナトリウムを含む１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．１）を１１０ｍＬ添加し、３７℃にて９０分間攪拌した。次いで、８０００ｒｐｍで４０分間遠心分離し、上清を除去した。次いで、得られた沈殿物に、３ｗ／ｖ％マンニトール、０．１ｗ／ｖ％ＢＳＡ、及び０．０５ｗ／ｖ％アジ化ナトリウムを含む５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）（Ａ溶液）を約１Ｌ加え、抗体結合金コロイド粒子を分散させた後、８０００ｒｐｍで４０分間遠心分離し、上清を除去した。さらに、沈殿物に、０．９％デキストラン硫酸ナトリウムを含むＡ溶液を加えて抗体結合金コロイド粒子を分散させ、全量を２４０ｍＬとし、これを抗体結合金コロイド試薬として回収した。【００３１】
ＡＨ５結合金コロイド試薬及びＡＡ３結合金コロイド試薬を、それぞれ、金コロイド試薬１及び金コロイド試薬２とした。【００３２】
（調製例３：セレノプロテインP測定用試薬の調製）
５ｗ／ｖ％塩化ナトリウム、１．０ｗ／ｖ％エチレンジアミン四酢酸二水素二ナトリウム二水和物、０．１ｗ／ｖ％アルキルフェニルジスルホン酸ナトリウム塩、及び０．５ｗ／ｖ％ポリオキシエチレンラウリルエーテルを含む０．２５Ｍ ２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−１，３−プロパンジオール塩酸緩衝液（ｐＨ７．８）に、ポリエチレングリコールを以下の「FL−SeP測定用」に、２．４ｗ／ｖ％になるように添加して、試薬を得た。【００３３】
（FL−SeP測定系の設計）
全長SeP（「FL−SeP」）量の測定のために、セレノプロテインPのＮ末端側を認識する抗体が結合した金コロイド粒子及びＣ末端側を認識する抗体が結合した金コロイド粒子を用いる測定系を設計した（本明細書において、「FL−SeP測定系」ともいう）。FL−SeP測定系では、FL−SePのみが凝集反応に関与し得る。【００３４】
（FL−SeP測定系の検量線の作成）
精製SeP（FL−SeP）を、文献｛Saito, Y.ら，J. Biol. Chem. (1999) 274, 2866-2871｝の記載にしたがってヒト血漿から精製した。
該精製SePをそれぞれ０．０μｇ／ｍＬ、０．７５μｇ／ｍＬ、１．５μｇ／ｍＬ、３．０μｇ／ｍＬ、６．０μｇ／ｍＬ、及び９．０μｇ／ｍＬの濃度で標準マトリックス（３ｗ／ｖ％ＢＳＡを含む５０ｍＭ ２−［ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−（ヒドロキシメチル）プロパン−１，３−ジオール緩衝液（ｐＨ６．５））中に含む、FL−SeP標準液を調製した。得られたFL−SeP標準液３μＬに、調製例３のFL−SeP測定用試薬を１７０μＬ分注し、３７℃にて約５分間加温し、次いで、金コロイド試薬１及び金コロイド試薬２を混合したものを８５μＬ分注し、３７℃にて反応させた。次いで、得られた反応溶液を日立７０７０自動分析装置に供し、主波長５０５ｎｍ及び副波長６６０ｎｍで測光ポイント１８から３１の吸光度変化を測定し、６６０ｎｍでの吸光度変化量に５０５ｎｍでの吸光度変化量の絶対値を加えた値を求め、吸光度変化量とした。
そして、FL−SeP測定系におけるSeP濃度と吸光度変化量との関係を示す検量線を作成した（参照：図２）。
【実施例２】
【００３５】
（２型糖尿患者の各治療薬投与）
本実施例の２型糖尿患者の背景及び各治療薬投与方法は以下の通りである。【００３６】
（２型糖尿患者の背景）
２型糖尿患者の背景は、以下の表の通りである。【００３７】
【表１】
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【００３８】
（２型糖尿患者の治療薬の投与方法）
２型糖尿病患者７９名をランダムにDPP4阻害薬アログリプチン（ネシーナ登録商標）25 mg/朝食後内服群とメトホルミン塩酸塩（メトグルコ登録商標）1,000 mg /朝食及び夕食後内服群に割り付けた。主治医の判断により、メトグルコは、最大2,250 mg/日まで増量可能とした。各治療薬の3か月間の内服の前後での血糖値及びHbA1c（ヘモグロビン・エイワンシー）値の変化を自体公知の方法により測定し、並びに、血清中セレノプロテインP値変化を下記記載の方法により測定した。【００３９】
２型糖尿病患者７９名から自体公知の方法で得られた血清３μLを実施例１に記載のFL−SeP測定系に供して、検量線（参照：図２）を参照して、血清中のセレノプロテインP値を測定した。
【実施例３】
【００４０】
（２型糖尿患者の検体のセレノプロテインP値の解析）
実施例２で得られた各治療薬の3か月間の内服の前後での血糖値の変化、HbA1c値の変化及び血清中セレノプロテインP値変化を解析した。詳細は、以下の通りである。【００４１】
（メトホルミン投与群での血糖値の変化及びHbA1c値の変化）
メトホルミン投与群での血糖値の変化及びHbA1c値の変化を図３に示す。図３に記載のグラフから明らかなように、メトホルミン群では3か月間のSeP値低下度と血糖値降下度並びにSeP値低下度とHbA1c値降下度は相関する傾向にあった。さらに、メトホルミン群では、SeP値がよく低下した症例では、血糖値もよく改善する傾向があった。【００４２】
（DPP4阻害薬投与群での血糖値の変化及びHbA1c値の変化）
DPP4阻害薬投与群での血糖値の変化及びHbA1c値の変化を図４に示す。図４に記載のグラフから明らかなように、DPP4阻害薬投与群では、3か月間のSeP値低下度と血糖値降下度並びにSeP値低下度とHbA1c値降下度は相関しなかった。【００４３】
（メトホルミン投与群及びDPP4阻害薬投与群でのセレノプロテインP値の変化）
メトホルミン投与群及びDPP4阻害薬投与群でのSeP値の変化を図５に示す。図５に記載のグラフから明らかなように、メトホルミン投与群では、投与前のSeP値と投与後3か月間のSeP値低下度は相関した。しかし、DPP4阻害薬投与群では、投与前のSeP値と投与後3か月間のSeP値低下度は相関しなかった。すなわち、治療開始前のSeP値が高値症例では、メトホルミン投与によりSeP値をより低下させた。【００４４】
（メトホルミン投与群及びDPP4阻害薬投与群での血糖値の変化）
メトホルミン投与群及びDPP4阻害薬投与群での血糖値の変化を図６に示す。図６に記載のグラフから明らかなように、メトホルミン投与群では、投与前のSeP値と投与後3か月間の血糖値低下度は相関した。しかし、DPP4阻害薬投与群では、投与前のSeP値と投与後3か月間の血糖値低下度は相関しなかった。すなわち、治療薬投与前の血中SeP値は、メトホルミン投与においてのみその後の血糖値降下度を予測できた。【００４５】
（メトホルミン投与群での投与前SeP値が高症例でのセレノプロテインP値の変化）
メトホルミン投与群での投与前SeP値が高値（4.55μg/mL以上）の症例でのSeP値の変化を図７に示す。図７に記載のグラフから明らかなように、3か月間のメトホルミン投与により有意に血中SeP値を低下させた。【００４６】
図３〜図７に記載のグラフの結果より、２型糖尿患者の血液中のSeP値が高値な場合には、メトホルミン投与により、血糖値及びHbA1c値を改善し、さらに血液中の２型糖尿病の検出マーカーであるSeP値を有意に低下させることを確認した。
【実施例４】
【００４７】
（２型糖尿患者のメトホルミン投与を選択するためのカットオフ値の設定）
２型糖尿患者のメトホルミン投与を選択するためのカットオフ値を設定した。詳細は、以下の通りである。【００４８】
（治療前の２型糖尿患者の血清中のセレノプロテインP値分布からの選択）
治療前の２型糖尿患者の血清中のSeP値分布を図８に示す。図８に記載の分布図より、中央値より高い値である4.1μg/mLをカットオフ値として選択した。【００４９】
（選択したカットオフ値の検証）
選択したカットオフ値である4.1μg/mL以上の症例でのメトホルミン投与群及びDPP4阻害薬投与群での血糖値の変化を図９に示す。図９に記載のグラフの結果から明らかなように、メトホルミン投与群では、血糖値を有意に改善した。すなわち、治療前の２型糖尿患者の血清中のSeP値が4.5μg/mL以上、例えば、4.5μg/mL〜6.0μg/mL、より好ましくは4.5μg/mL〜5.5μg/mL、最も好ましくは4.5μg/mL〜5.0μg/mLの場合には、メトホルミン投与により血糖値の改善（糖尿病治療効果）があることを確認した。【００５０】
（総論）
以上の実施例により、治療前の２型糖尿患者の血清中のセレノプロテインP値がカットオフ値よりも高い場合には、メトホルミン投与により、血糖値改善、HbA1c値改善、血液中のSeP値低下、さらには糖尿病治療の有効性があることを予測することができる。
【産業上の利用可能性】
【００５１】
２型糖尿病患者由来の検体において、セレノプロテインP値がカットオフ値よりも高い場合には、メトホルミン投与を選択することを特徴とする２型糖尿病の治療薬選択の補助方法、治療薬の効果予測方法、検査方法及び治療方法の提供。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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