(57)【要約】  本発明は、カフェイン低減化カカオ組成物およびその製造方法に関する。本発明によれば、カカオ原料に含まれる健康機能性成分を維持したままカフェインのみを選択的に低減した、新規カフェイン低減化カカオ組成物の提供、およびその製造方法を提供できる。
2014103415.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
カカオマスおよびココアパウダーから選択される少なくとも１種のカカオ原料を、水を助溶媒とした超臨界二酸化炭素抽出して得られる、カフェイン低減化カカオ組成物であって、
組成物中のテオブロミン濃度が０．７重量％以上であって、
組成物中のテオブロミン含有量が、カフェイン含有量の２５倍以上である、カカオ組成物。
【請求項２】
カフェイン低減化カカオ組成物中のポリフェノール含有量が、カフェイン含有量の４０倍以上である、請求項１に記載のカフェイン低減化カカオ組成物。
【請求項３】
カカオ原料が、アルカリ処理されていない、請求項１または２に記載のカフェイン低減化カカオ組成物。
【請求項４】
カカオ原料が、ココアパウダーである、請求項１〜３のいずれか一項に記載のカフェイン低減化カカオ組成物。
【請求項５】
超臨界二酸化炭素抽出の条件が、２０ＭＰａ以上かつ５０℃以上である、請求項１〜４のいずれか一項に記載のカフェイン低減化カカオ組成物。
【請求項６】
超臨界二酸化炭素抽出におけるカカオ原料に対する助溶媒の割合が、３０重量％以上である、請求項１〜５のいずれか一項に記載のカフェイン低減化カカオ組成物。
【請求項７】
カカオ原料由来のテオブロミン含有量の９０重量％以上が維持されかつ、カカオ原料由来のカフェイン含有量の６０重量％以上が低減されてなる、請求項１〜６のいずれか一項に記載のカカオ組成物。
【請求項８】
カカオ原料由来のポリフェノール含有量の７０重量％以上が維持されてなる、請求項１〜７のいずれか一項に記載のカフェイン低減化カカオ組成物。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか一項に記載のカフェイン低減化カカオ組成物を含んでなる、飲食品組成物。
【請求項１０】
カカオマスおよびココアパウダーから選択される少なくとも１種のカカオ原料を、水を助溶媒とした超臨界二酸化炭素抽出し、カカオ原料由来のテオブロミン、および必要に応じてポリフェノールが維持され、かつ、カカオ原料由来のカフェインが低減されてなるカカオ組成物を得ることを含んでなる、カフェイン低減化カカオ組成物の製造方法。
【請求項１１】
得られるカフェイン低減化カカオ組成物中のテオブロミン含有量が、カフェイン含有量の２５倍以上である、請求項１０に記載のカフェイン低減化カカオ組成物の製造方法。
【請求項１２】
得られるカフェイン低減化カカオ組成物中のポリフェノール含有量が、カフェイン含有量の４０倍以上である、請求項１０または１１に記載のカフェイン低減化カカオ組成物の製造方法。
【請求項１３】
超臨界二酸化炭素抽出の条件が、２０ＭＰａ以上かつ５０℃以上である、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載のカフェイン低減化カカオ組成物の製造方法。
【請求項１４】
超臨界二酸化炭素抽出におけるカカオ原料に対する助溶媒の割合が、３０重量％以上であり、カカオ原料に対して助溶媒を添加し、調湿させた後、超臨界二酸化炭素抽出を行うことを含んでなる、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載のカフェイン低減化カカオ組成物の製造方法。
【請求項１５】
超臨界二酸化炭素抽出において、昇圧状態を保持させ、静的抽出を行うことを含んでなる、請求項１０〜１４に記載のカフェイン低減化カカオ組成物の製造方法。
【請求項１６】
カカオ原料と、二酸化炭素からなる溶媒との重量における抽剤比が、５５．０以上である、請求項１０〜１５のいずれか一項に記載のカフェイン低減化カカオ組成物の製造方法。
【請求項１７】
得られるカフェイン低減化カカオ組成物が、カカオ原料由来のテオブロミン含有量の９０重量％以上が維持され、かつ、カカオ原料由来のカフェイン含有量の６０重量％以上が低減されている、請求項１０〜１６に記載のカフェイン低減化カカオ組成物の製造方法。
【請求項１８】
得られるカフェイン低減化カカオ組成物が、カカオ原料由来のポリフェノール含有量の７０重量％以上が維持されている、請求項１０〜１７に記載のカフェイン低減化カカオ組成物の製造方法。
【請求項１９】
カカオ原料を、水を助溶媒とした超臨界二酸化炭素抽出することを含んでなる、カカオ原料由来のテオブロミン含有量の９０重量％以上を維持し、および必要に応じてカカオ原料由来のポリフェノール含有量の７０重量％以上を維持し、かつ、カカオ原料由来のカフェイン含有量の６０重量％以上を低減する方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の参照】
【０００１】
本特許出願は、先に出願された日本国特許出願である特願２０１２−２８８８５４号（出願日：２０１２年１２月２８日）に基づくものであって、その優先権の利益を主張するものであり、その開示内容全体を参照することによりここに組み込まれる。
【技術分野】
【０００２】
発明の分野
本発明は、カフェイン低減化カカオ組成物およびその製造方法に関する。【０００３】
背景技術
近年、チョコレートやココアなどのカカオ製品は、単なる嗜好品としてだけでなく、テオブロミン、ポリフェノール、および食物繊維などの健康機能性成分を多く含む飲食品としても注目されている。一方、カカオ製品には、カフェインも多く含まれている。【０００４】
カフェインは、主な薬理作用として中枢神経興奮作用を有する成分であり、医薬品以外に、活力増進、倦怠感解消による集中力向上または眠気覚ましなどを目的とした飲食品分野で用いられている。その反面、副作用として、動悸やめまい、不眠を引き起こすことが知られている。特に、ある特定の薬を服用している人や、生理機能が低下している高齢者には副作用が現れやすい。また、不眠症の人が摂取した場合には、症状の悪化を招く可能性がある。さらに、妊婦が摂取した場合には、自然流産や胎児の発育阻害を引き起こす可能性も指摘されている。そこで、このようなカフェインによる健康リスクを低減するために、カフェインの少ないカカオ製品の開発が求められていた。【０００５】
カフェインレス・コーヒーを代表とする飲食品分野では、カフェインを低減させる方法として、超臨界流体抽出法が多く用いられている。しかしながら、この方法には、カフェイン以外の成分も原料から同時に抽出・除去されるという欠点があった。【０００６】
実際に、生の未焙煎カカオニブを原料に超臨界流体抽出法を用いた場合、カフェインと類似するテオブロミンも同時に７１％以上抽出・除去されることが知られている（特開昭５７−１８１６４１号公報（特許文献１）参照）。【０００７】
このように、テオブロミンやポリフェノールなどの健康機能性成分を維持したまま、カフェインのみを低減したカカオ組成物に関する報告は、発明者が知る限り全くなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開昭５７−１８１６４１号公報
【発明の概要】
【０００９】
本発明者らは、今般、特定のカカオ原料を、水を助溶媒とした超臨界二酸化炭素抽出すると、組成物中のテオブロミン濃度が０．７重量％以上であって、組成物中のテオブロミン含有量が、カフェイン含有量の２５倍以上である、カフェイン低減化カカオ組成物が得られることを見出した。具体的には、カカオ原料由来のテオブロミン含有量の９０重量％以上を維持したまま、カカオ原料由来のカフェイン含有量の６０重量％以上を低減できることを見出した。また、このカフェイン低減化カカオ組成物は、組成物中のポリフェノール含有量が、カフェイン含有量の４０倍以上であり、具体的にはカカオ原料由来のポリフェノール含有量の７０重量％以上を維持していることも見出した。すなわち、テオブロミンやポリフェノールの組成に著しい変化を与えることなく、カフェインのみを選択的に低減させたカカオ組成物を製造することに成功した。本発明はこれら知見に基づくものである。
【００１０】
よって、本発明は、カカオ原料に含まれる健康機能性成分を維持したままカフェインのみを選択的に低減した、新規カフェイン低減化カカオ組成物の提供、およびその製造方法を提供することを目的とする。さらには、このカフェイン低減化カカオ組成物を含む飲食品組成物を提供することをその目的とする。
【００１１】
本発明によるカフェイン低減化カカオ組成物は、カカオマスおよびココアパウダーから選択される少なくとも１種のカカオ原料を、水を助溶媒とした超臨界二酸化炭素抽出して得られる組成物であって、組成物中のテオブロミン濃度が０．７重量％以上であり、組成物中のテオブロミン含有量が、カフェイン含有量の２５倍以上である。
【００１２】
本発明の好ましい態様によれば、前記した組成物は、組成物中のポリフェノール含有量は、カフェイン含有量の４０倍以上である。
【００１３】
本発明の好ましい態様によれば、前記した組成物において、カカオ原料は、アルカリ処理されていないカカオ原料である。
【００１４】
本発明のより好ましい態様によれば、前記した組成物において、カカオ原料は、ココアパウダーである。
【００１５】
本発明の一つの態様によれば、前記した組成物において、超臨界二酸化炭素抽出の条件は、２０ＭＰａ以上かつ５０℃以上である。
【００１６】
本発明の一つの態様によれば、前記した組成物において、超臨界二酸化炭素抽出におけるカカオ原料に対する助溶媒の割合は、３０重量％以上である。
【００１７】
本発明の一つの態様によれば、前記した組成物は、カカオ原料由来のテオブロミン含有量の９０重量％以上が維持され、かつ、カカオ原料由来のカフェイン含有量の６０重量％以上が低減されてなる。
【００１８】
本発明の好ましい態様によれば、前記した組成物は、カカオ原料由来のポリフェノール含有量の７０重量％が維持されてなる。
【００１９】
本発明の別の態様によれば、本発明によるカフェイン低減化カカオ組成物を含んでなる飲食品組成物が提供される。
【００２０】
本発明によるカフェイン低減化カカオ組成物を製造する方法は、カカオマスおよびココアパウダーから選択される少なくとも１種のカカオ原料を、水を助溶媒とした超臨界二酸化炭素抽出し、カカオ原料由来のテオブロミン、および必要に応じてポリフェノールが維持され、かつ、カカオ原料由来のカフェインが低減されてなるカカオ組成物を得ることを含んでなる、方法である。
【００２１】
本発明の一つの態様によれば、前記方法において、得られるカフェイン低減化カカオ組成物中のテオブロミン濃度が０．７重量％以上であって、テオブロミン含有量は、カフェイン含有量の２５倍以上である。
【００２２】
本発明の好ましい態様によれば、前記方法において、得られるカフェイン低減化カカオ組成物中のポリフェノール含有量は、カフェイン含有量の４０倍以上である。
【００２３】
本発明の一つの態様によれば、前記方法において、超臨界二酸化炭素抽出の条件は、２０ＭＰａ以上かつ５０℃以上である。
【００２４】
本発明の好ましい態様によれば、前記方法において、超臨界二酸化炭素抽出におけるカカオ原料に対する助溶媒の割合は、３０重量％以上であり、カカオ原料に対して助溶媒を添加し、調湿させた後、超臨界二酸化炭素抽出を行うことを含んでなる。
【００２５】
本発明の好ましい態様によれば、前記方法において、超臨界二酸化炭素抽出において、昇圧状態を保持させ、静的抽出を行うことを含んでなる。
【００２６】
本発明の好ましい態様によれば、前記方法において、カカオ原料と、二酸化炭素からなる溶媒との重量における抽剤比は、５５．０以上である。
【００２７】
本発明の一つの態様によれば、前記方法において、得られるカフェイン低減化カカオ組成物は、カカオ原料由来のテオブロミン含有量の９０重量％以上が維持され、かつ、カカオ原料由来のカフェイン含有量の６０重量％以上が低減されている。
【００２８】
本発明の好ましい態様によれば、前記方法において、得られるカフェイン低減化カカオ組成物は、カカオ原料由来のポリフェノール含有量の７０重量％以上が維持されている。
【００２９】
本発明の方法は、カカオ原料を、水を助溶媒とした超臨界二酸化炭素抽出することを含んでなる、カカオ原料由来のテオブロミン含有量の９０重量％以上を維持し、および必要に応じてカカオ原料由来のポリフェノール含有量の７０重量％以上を維持し、かつ、カカオ原料由来のカフェイン含有量の６０重量％以上を低減する方法である。
【００３０】
本発明によれば、カカオ原料に含まれる健康機能性成分を維持したままカフェインのみを選択的に低減した、新規カフェイン低減化カカオ組成物および、その製造方法を提供できる。すなわち、本来のカカオ製品が有する健康機能性成分の組成に著しい変化を与えることなく、カフェインのみを選択的に低減したカフェイン低減化カカオ組成物を提供できる。また、本発明のカフェイン低減化カカオ組成物は、超臨界二酸化炭素抽出により脂質も低減されたものである。このように、本発明のカフェイン低減化カカオ組成物は、健康を促進させる目的で、カフェインによるリスクを回避する必要があるためカカオ製品を摂取することの難しい、投薬中の人、高齢者、妊婦、不眠症の人などでも安全に摂取することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】図１は、超臨界二酸化炭素抽出処理後の各カカオ原料（例１の組成物１〜３）のカフェイン低減率およびテオブロミンおよびポリフェノール維持率を示したグラフの一例である。
【図２】図２は、様々な温度および圧力での超臨界二酸化炭素抽出処理後のカフェイン低減率およびテオブロミンおよびポリフェノール維持率を示したグラフの一例である。
【図３】図３は、様々な温度および圧力での超臨界二酸化炭素抽出処理後のプロシアニジン類維持率を示したグラフの一例である。
【図４】図４は、様々な温度および圧力での超臨界二酸化炭素抽出処理後のＯＲＡＣ値を示したグラフの一例である。
【図５】図５は、様々な助溶媒の割合での超臨界二酸化炭素抽出処理後のカフェイン低減率およびテオブロミンおよびポリフェノール維持率を示したグラフの一例である。
【図６】図６は、様々な助溶媒の割合での超臨界二酸化炭素抽出処理後のプロシアニジン類維持率を示したグラフの一例である。
【図７】図７は、様々な助溶媒の割合での超臨界二酸化炭素抽出処理後のＯＲＡＣ値を示したグラフの一例である。
【図８】図８は、超臨界二酸化炭素抽出処理前（図８Ａ）および処理後（図８Ｂ）での、プロシアニジン類濃度および総ポリフェノール濃度と、ＯＲＡＣ値との相関関係（ｒ）の回帰直線を示す。
【発明の具体的説明】
【００３２】
カフェイン低減化カカオ組成物／製造方法
本発明のカフェイン低減化カカオ組成物は、前記したように、カカオ原料を、水を助溶媒とした超臨界二酸化炭素抽出して得られる組成物であって、カカオ原料由来のテオブロミン、必要に応じてポリフェノール、さらに必要に応じてプロシアニジン類が維持され、カフェインが低減された組成物である。
【００３３】
ここで、「カフェイン低減化カカオ組成物」とは、カカオ原料を、超臨界二酸化炭素抽出処理により、カフェインを低減して、改変させた状態のカカオ原料のことを意味する。「カフェイン低減化」は、「脱カフェイン処理した」、「デカフェ（Decaf、decaffeinatedの略）」または「カフェインレス」に代替して使用することが可能である。
【００３４】
テオブロミンは、カカオに含まれるアルカロイドの一種であり、カフェインと同じメチルキサンチン類に分類され、カフェインと同じような薬理作用を有する。そのため、従来、テオブロミンは、カフェインと一緒に除去されるべき対象となっている（特開昭５７−１８１６４１号公報（特許文献１）参照）。近年、テオブロミンは、精神安定作用や血圧低下作用（Physiol Behav. 104 (5); 816-22, 2011参照）などの様々な薬理作用を有する成分として注目されている。
【００３５】
また、ポリフェノールは、血糖値上昇抑制、抗ストレス、抗肥満、抗酸化、老化防止、抗う蝕、および抗血管障害作用といった薬理作用を有する成分として、周知の成分である。カカオに含まれるポリフェノールとしては、典型的には、プロシアニジン類、ケルセチン、タンニン等のポリフェノール化合物が挙げられる。ここで、プロシアニジン類は、カテキンまたはエピカテキンの縮重合物を意味する。
【００３６】
本発明のカフェイン低減化カカオ組成物は、具体的には、カカオ原料を、水を助溶媒とした超臨界二酸化炭素抽出して得られる。
【００３７】
ここで、「カカオ原料」とは、カカオ（アオギリ科テオブロマ属カカオ、Theobroma Cacao）豆から加工され、超臨界二酸化炭素抽出の抽出原料となる物質を意味し、例えば、カカオ豆、カカオニブ、カカオマス、ココアパウダーなどが挙げられる。本発明に用いられるカカオ原料は、テオブロミン、必要に応じてポリフェノールを多く含有し、かつ、超臨界二酸化炭素抽出においてカフェインの抽出効率が良好な点で、好ましくはカカオマスおよびココアパウダーある。これらは、１種で用いてもよいし、２種を混合して用いても良い。
【００３８】
「カカオマス」とは、カカオ豆から得られるカカオニブを磨砕したものを意味する。本発明に用いられるカカオマスは、固体であっても、液体であっても、その状態は特に制限されない。ここでカカオマスの液体は、カカオリカーと呼ばれることもある。
【００３９】
本発明に用いられるカカオマスは、カフェインの抽出効率を高めることができる点で、平均粒子径が、好ましくは１０〜２００μｍ、より好ましくは１０〜１００μｍ、さらに好ましくは２０〜１００μｍ、さらにより好ましくは２０〜５０μｍとなるものである。粒径が小さくなると、粒子内部から表面までの移動距離が短縮されるため、抽出効率を高めることができる。ここで、平均粒子径は、レーザー回折・散乱法を測定原理とする粒度分布測定装置を用いて測定することができる。例えば、レーザー回折式粒度分布測定装置ＳＡＬＤ−２２００（株式会社島津製作所製）を用いて測定することができる。本発明において「平均粒子径」とは、レーザー回折・散乱法を測定原理とする粒度分布測定装置を用いて測定した分散体の粒度分布の結果における積算値で５０％の粒子径を意味し、具体的には、粒度分布で粒子径の小さい順から粒子数（個数）を加算していき、全部の粒子数の５０％に到達した点における粒子径を意味する。
【００４０】
カカオマスを所望の平均粒子径に粉砕する方法は、特に制限されず、飲食品分野で通常用いられる粉砕機（クラッシャー）を用いることができる。
【００４１】
「ココアパウダー」とは、カカオマスを９０〜１００℃に加温し、プレス機で適度に脂肪分であるココアバターを圧搾して得られるココアケーキを、粉末状にしたものを意味し、本発明において「ココアパウダー」には、粉砕する前のココアケーキも包含される。本発明に用いられるココアパウダーの粉末は、平均粒子径が、好ましくは１０〜２００μｍ、より好ましくは１０〜１００μｍ、さらに好ましくは２０〜１００μｍ、さらにより好ましくは２０〜５０μｍのものである。
【００４２】
本発明の好ましい態様によれば、本発明のカカオ原料は、アルカリ処理(アルカリゼーション)されていないカカオ原料、すなわちアルカリ処理されていないカカオマスまたはアルカリ処理されていないココアパウダーである。ここで、アルカリ処理とは、ココアパウダーの製造方法の一つであるダッチプロセス（Dutch process）において行われる手段であり、ココアパウダーの製造工程において、カカオニブ、カカオマス（主にカカオリカー）、またはココアケーキなどに対し、アルカリ剤を添加し、中和を行うことを指す。具体的には、本発明に用いられるアルカリ処理されていないカカオマスおよびアルカリ処理されていないココアパウダーは、アルカリ処理を含まないブロマプロセス（Broma process）により得ることができる。アルカリ処理を行うと、カカオ原料由来のテオブロミンやポリフェノールの総量が減少するため、アルカリ処理されていないカカオ原料を用いることで、テオブロミンやポリフェノールなどの健康機能性成分を多く含有するカフェイン低減化カカオ組成物を得ることができる（実施例の例１参照）。
【００４３】
本発明のより好ましい態様によれば、本発明に用いられるカカオ原料は、ココアパウダーである。具体的には、カカオ原料は、ココアパウダーに含まれる脂質含量が、好ましくは２３％以下、より好ましくは１４％以下、さらに好ましくは１１％以下のものである。カカオ原料の脂質含量が多いと、超臨界流体抽出法においてカフェインの抽出効率が低下する傾向があり、一方、脂質含量が少ないと、超臨界二酸化炭素抽出において抽剤比を減少させ、処理時間を短くすることができる（実施例の例１参照）。ここで脂質含量は、ソックスレー法により測定することができる。本発明に用いられるココアパウダーは、カカオマスをプレス機を用いて、所望の脂質含量になるように圧搾することにより得ることができる。必要に応じて、得られたココアパウダーに、テオブロミンやポリフェノールが低減しない限り、飲食品分野で通常用いられる脱脂処理をさらに施してもよい。
【００４４】
本発明のさらに好ましい態様によれば、本発明に用いられるカカオ原料は、ブロマプロセスにより脂質含量を１３〜１４％に調整した、アルカリ処理されていないココアパウダーである。
【００４５】
「超臨界二酸化炭素抽出（Supercritical Fluid Extraction、ＳＦＥ）」とは、超臨界流体を用いて、原料から所望の抽出物質（本発明ではカフェイン）を抽出する方法を意味する。ここで、超臨界流体とは、ある物質（例えば、二酸化炭素、水）に対して、温度、圧力を加えて液体と気体との区別がつかなくなる臨界点をさらに超えた状態にある流体を言う。本発明に用いられる流体は、比較的低圧力と低温度で臨界点に達する点で、二酸化炭素が望ましい。超臨界状態の二酸化炭素流体は極性が低いため、脂質のような無極性物質も抽出することができる。
【００４６】
「助溶媒」とは、所望の抽出物質が極性物質である場合に、超臨界流体と接触させる前に抽出原料に滴下、または超臨界流体と共に抽出原料に接触させることで、所望の抽出物質の溶解度を増加させ、抽出効率を高めるための溶媒を意味する。本発明に用いられる助溶媒は、カフェインの抽出効率を選択的に高められる点で、水が望ましい。
【００４７】
本発明の好ましい態様によれば、助溶媒の添加方法は、助溶媒の使用量が少なく、低コストで調製できる点から、超臨界流体と接触させる前に抽出原料に滴下させる方法であり、より好ましくは滴下後に調湿（湿潤）させる方法である。ここで調湿とは、抽出原料全体に助溶媒を含浸させ、混合させた後に所定の温度と時間で助溶媒を浸透させることを意味する。調湿時間および温度は、抽出原料の量および粒径により、適宜設定することができる。調湿時間は、５分以上が望ましく、好ましくは１０分以上、より好ましくは１０〜６０分間、さらに好ましくは１０〜３０分間である。調湿温度は、好ましくは５０℃以上、より好ましくは５０〜１００℃、さらに好ましくは７０〜１００℃、さらにより好ましくは７０℃である。
【００４８】
本発明のより好ましい態様によれば、調湿させる方法において、超臨界二酸化炭素抽出におけるカカオ原料に対する助溶媒の割合は、３０重量％以上が望ましく、好ましくは３０〜１００重量％、より好ましくは３０〜９０重量％、さらに好ましくは３０〜８０重量％、さらにより好ましくは３０〜６０重量％、特に好ましくは４５〜６０重量％、最も好ましくは４５重量％である。助溶媒として、水を７５重量％以上添加すると、テオブロミンやポリフェノールが多く抽出されやすく、維持率の低下を招きやすい傾向がみられる（実施例の例５（２）参照）。また、ポリフェノールの一種であるプロシアニジン類は、助溶媒として水を７５重量％以上添加すると、カカオ原料から多く抽出されやすく、維持率の低下を招きやすい傾向がみられる（実施例の例５（２）参照）。よって、プロシアニジン類を多く維持するカフェイン低減化カカオ組成物を調製する場合の超臨界二酸化炭素抽出におけるカカオ原料に対する助溶媒の割合は、調湿させる方法において、好ましくは３０〜７５重量％、より好ましくは３０〜６０重量％、さらに好ましくは３０〜４５重量％、最も好ましくは３０〜４０重量％である。
【００４９】
本発明の好ましい態様によれば、超臨界二酸化炭素抽出は、助溶媒の割合が、３０重量％以上であり、カカオ原料に対して助溶媒を添加し、調湿させた後、超臨界二酸化炭素抽出を行うことを含んでなる。
【００５０】
超臨界二酸化炭素抽出の圧力は、２０ＭＰａ以上が望ましく、好ましくは２０〜５０ＭＰａ、より好ましくは２０〜４０ＭＰａ、さらに好ましくは２５〜４０ＭＰａ、さらにより好ましくは２５〜３０ＭＰａ、特に好ましくは３０ＭＰａである。ここで、圧力（ＭＰａ）は、超臨界流体抽出機器内のストレンゲージ式圧力センサーによって測定することができる。
【００５１】
超臨界二酸化炭素抽出の温度は、５０℃以上が望ましく、好ましくは５０〜１００℃、より好ましくは５０〜９０℃、さらに好ましくは５０〜８０℃、さらにより好ましくは６０〜８０℃、特に好ましくは７０〜８０℃、最も好ましくは抽出原料中のポリフェノールの分解損失が少なく、かつ、カフェインを高効率で抽出できる点で、７０℃である。
【００５２】
本発明の好ましい態様によれば、超臨界二酸化炭素抽出の圧力および温度の条件は、２０ＭＰａ以上かつ５０℃以上が望ましく、テオブロミンおよびポリフェノールを原料中に高濃度で維持したまま、カフェインのみを選択的に抽出・除去することができる点で、好ましくは２０〜５０ＭＰａかつ５０〜１００℃、より好ましくは２０〜４０ＭＰａかつ５０〜８０℃、さらに好ましくは２５〜４０ＭＰａかつ５０〜８０℃、さらにより好ましくは２５〜４０ＭＰａかつ６０〜８０℃、いっそうより好ましくは２５〜４０ＭＰａかつ７０〜８０℃、特に好ましくは２５〜３０ＭＰａかつ７０〜８０℃、最も好ましくは３０ＭＰａかつ７０℃である。
【００５３】
超臨界二酸化炭素抽出は、静的抽出と動的抽出の組合せであっても、動的抽出のみであってもよい。好ましくは、カフェインの抽出効率が高い点で、静的抽出と動的抽出の組合せである。
【００５４】
超臨界二酸化炭素抽出の時間は、所望の圧力および温度とした昇圧状態で、１０分以上が望ましく、好ましくは１０〜６０分間、より好ましくは２０〜６０分間、さらに好ましくは２０〜４０分間、さらにより好ましくは２０〜３０分間である。
【００５５】
本発明の好ましい態様によれば、超臨界二酸化炭素抽出は、昇圧状態を保持させ、静的抽出を行うことを含んでなる。
【００５６】
本発明の好ましい態様によれば、カカオ原料と、二酸化炭素からなる溶媒との抽剤比は、５５．０以上が望ましく、好ましくは９４．０以上である。ここで、抽剤比とは、カカオ原料１ｇあたりに使用した二酸化炭素の重量を意味する。抽剤比は、抽出原料の量（処理量、サンプル嵩）、その脂質含量、粒径、用いる二酸化炭素抽出装置・容量・形状（長さ、直径）により、当業者が適宜設定することができる。したがって、後述する実施例で用いた抽出槽の条件の場合には、抽剤比は、５５．０〜１２０．０が望ましく、好ましくは９４．０〜１２０．０である。また、この場合、抽出比１２０．０は、抽出原料から抽出・除去されるカフェイン量が飽和状態に達する値を意味する。したがって、抽剤比は、１２０．０を超えた値であっても特に制限はないが、抽剤比が小さければ小さいほど低コストで調製できる点で、好ましくは１２０．０である。
【００５７】
このような超臨界二酸化炭素抽出により、抽出原料であるカカオ原料からカフェインが選択的に抽出、除去され、カフェインが低減されたカカオ原料の残渣が得られる。すなわち、カカオ原料由来のテオブロミンがカカオ原料の残渣中に維持され、かつ、カフェインが低減されてなる、カフェイン低減化カカオ組成物が得られる。
【００５８】
具体的には、本発明の態様によれば、カフェイン低減化カカオ組成物は、組成物中のテオブロミン濃度が、０．７重量％以上が望ましく、好ましくは０．９重量％以上、より好ましくは１．０重量％以上、さらに好ましくは１．１重量％以上、さらにより好ましくは１．２重量％以上、いっそうより好ましくは１．３重量％、特に好ましくは１．４重量％以上、最も好ましくは１．５重量％以上であって、かつ、組成物中のテオブロミン含有量が、カフェイン含有量の２５倍以上が望ましく、好ましくは３０倍以上、より好ましくは３５倍以上、さらに好ましくは４０倍以上、さらにより好ましくは４５倍以上、いっそうより好ましくは５０倍以上、特に好ましくは５５倍以上、最も好ましくは６０倍以上のものである。なお、一般に、カカオ原料のテオブロミン濃度は、産地・種類により異なり、テオブロミン濃度は０．８重量％以上であるといわれている（Gene A. Spiller, Caffeine. CRC Press LLC. 1998参照）。また、カカオ豆に含まれるテオブロミン含有量は、カフェイン含有量の２〜１０倍程度であると言われている。さらに、ココアやチョコレートなどのカカオ製品に含まれるテオブロミン含有量はカフェイン含有量の３〜１１倍程度であると言われている（報告書：ポリフェノール含有食品の商品テスト結果、独立行政法人国民生活センター、http://www.kokusen.go.jp/pdf/n-20000508_1.pdf；葛西真知子ら、「カカオ豆産地とチョコレートのおいしさとの関係」、日本食品科学工学会誌、vol54, No.7, 332-338, 2007；特公平８−４４５８公報；福場博保ら、「チョコレート・ココアの科学と機能」、2004、アイ・ケイコーポレーション参照）。実際に発明者らが後述する測定方法を用いて、市販されている一般的なココアパウダー（ＡＤＭ社より入手）および脂質１％程度の超脱脂ココアパウダー（バリーカレボー社より入手）を検討したところ、テオブロミン含有量はカフェイン含有量のそれぞれ１３〜１６倍程度であった。
【００５９】
より具体的には、カフェイン低減化カカオ組成物は、カカオ原料由来のテオブロミン含有量の９０重量％以上が維持され、かつ、カカオ原料由来のカフェイン含有量の６０重量％以上が低減されてなるものである。
【００６０】
本発明の一つの態様によれば、カフェイン低減化カカオ組成物に含まれるテオブロミンは、カカオ原料由来の９０重量％以上が維持されているものであることが望ましく、好ましくは９２重量％以上、より好ましくは９５重量％以上、さらに好ましくは９７重量％以上、さらにより好ましくは９９重量％以上、特に好ましくは１００重量％維持されているものである。
【００６１】
本発明の一つの態様によれば、カフェイン低減化カカオ組成物に含まれるカフェインは、カフェイン含有量の６０重量％以上が低減されているものであることが望ましく、好ましくは７０重量％以上、より好ましくは８０重量％以上、さらに好ましくは９０重量％以上、さらにより好ましくは９５重量％以上、特に好ましくは１００重量％低減されているものである。
【００６２】
本発明の好ましい態様によれば、本発明のカフェイン低減化カカオ組成物は、カカオ原料由来のポリフェノールがカカオ原料の残渣中にさらに維持されているものである。
【００６３】
具体的には、本発明の好ましい態様によれば、カフェイン低減化カカオ組成物は、組成物中のポリフェノール含有量が、カフェイン含有量の４０倍以上が望ましく、好ましくは５０倍以上、より好ましくは６５倍以上、さらに好ましくは８０倍以上、さらにより好ましくは９０倍以上、いっそうより好ましくは１００倍以上、特に好ましくは１１０倍以上、最も好ましくは１２０倍以上のものである。なお、一般に、ココアやチョコレートなどのカカオ製品に含まれるポリフェノール含有量はカフェイン含有量の１３〜３４倍程度であると言われている（報告書：ポリフェノール含有食品の商品テスト結果、独立行政法人国民生活センター、http://www.kokusen.go.jp/pdf/n-20000508_1.pdfおよび葛西真知子ら、「カカオ豆産地とチョコレートのおいしさとの関係」、日本食品科学工学会誌、vol54, No.7, 332-338, 2007）。また、実際に発明者らが後述する測定方法を用いて、市販されている一般的なココアパウダー（ＡＤＭ社より入手）および脂質１％程度の超脱脂ココアパウダー（バリーカレボー社より入手）を検討したところ、これらに含まれるポリフェノール含有量はカフェイン含有量のそれぞれ１６〜１９倍程度であった。
【００６４】
より具体的には、カフェイン低減化カカオ組成物は、カカオ原料由来のポリフェノール含有量の７０重量％以上が維持されてなるものである。
【００６５】
本発明のカフェイン低減化カカオ組成物に含まれるポリフェノールは、カカオ原料由来の７０重量％以上が維持されているものであることが望ましく、好ましくは７５重量％以上、より好ましくは８０重量％以上、さらに好ましくは８５重量％以上維持されているものである。
【００６６】
本発明の別の態様によれば、本発明のカフェイン低減化カカオ組成物は、カカオ原料由来のポリフェノールの一種であるプロシアニジン類がカカオ原料の残渣中にさらに維持されているものである。
【００６７】
具体的には、本発明の好ましい態様によれば、カフェイン低減化カカオ組成物は、組成物中のプロシアニジン類含有量が、カフェイン含有量の５倍以上が望ましく、好ましくは１０倍以上、より好ましくは１５倍以上、さらに好ましくは２０倍以上のものである。
【００６８】
より具体的には、本発明の好ましい態様によれば、カフェイン低減化カカオ組成物は、カカオ原料由来のプロシアニジン類含有量の４０重量％以上が維持されてなるものである。
【００６９】
本発明のカフェイン低減化カカオ組成物に含まれるプロシアニジン類含有量は、カカオ原料由来の４０重量％以上が維持されているものであることが望ましく、好ましくは５０重量％以上、より好ましくは６０重量％以上、さらに好ましくは７５重量％以上、さらにより好ましくは７５重量％以上維持されているものである。
【００７０】
カカオ原料または組成物中のテオブロミン含有量およびカフェイン含有量は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法により測定することができる。例えば、Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−３カラムを装填したＨＰＬＣ  ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ（株式会社島津製作所製）（溶媒：リン酸緩衝液８０％‐アセトニトリル２０％、流速：１．０ｍｌ、波長：２７５ｎｍ）の内部標準法により、面積比から、あらかじめ求めた検量線に基づいて、それぞれの濃度を算出し、それが含まれるカカオ原料または組成物の重量を積算することにより求めることができる。
【００７１】
カカオ原料または組成物中のポリフェノール含有量は、フォーリンチオカルト法により、あらかじめ求めた検量線に基づいて、総ポリフェノール濃度を算出し、それが含まれるカカオ原料または組成物の重量を積算することにより求めることができる。
【００７２】
カカオ原料または組成物中のプロシアニジン類含有量は、Kelm, M.A. et al., J. Agric. Food. Chem. 2006, 54(5), 1571-1576や、Bergmann, W.R. et al., J. Am. Chem. Soc. 1987, 109, 6614-6619など、従来のプロシアニジン類の測定方法に基づいて求めることができる。
【００７３】
テオブロミンやポリフェノール、プロシアニジン類の維持率、すなわち残存率（重量％）は、１００から超臨界二酸化炭素抽出による低減率（重量％）を減算することにより求めることができる。
【００７４】
ここで低減率とは、超臨界二酸化炭素抽出により抽出された重量を、テオブロミン、カフェイン、ポリフェノール、プロシアニジン類など成分ごとの変化率として示したものであり、具体的には、下記式のように、超臨界二酸化炭素抽出により低減（除去）された低減量を、抽出前の成分含有量で除算することにより算出することができる。
式：低減率（重量％）＝（ＳＦＥ処理前の成分含有量［処理前成分濃度×処理前カカオ原料の重量］−ＳＦＥ処理後の成分含有量［処理後成分濃度×処理後カカオ原料の重量］）／ＳＦＥ処理前の成分含有量×１００
【００７５】
本発明の一つの態様によれば、カカオマスまたはココアパウダーから選択される少なくとも一種のカカオ原料を、水を助溶媒とした超臨界二酸化炭素抽出し、カカオ原料由来のテオブロミン、必要に応じてポリフェノールが維持され、かつ、カカオ原料由来のカフェインが低減されてなるカカオ組成物を得ることを含んでなる、カフェイン低減化カカオ組成物の製造方法が提供される。
【００７６】
本発明の別の態様によれば、カカオ原料を、水を助溶媒とした超臨界二酸化炭素抽出することを含んでなる、カカオ原料由来のテオブロミン含有量の９０重量％以上に維持し、および必要に応じてポリフェノール含有量の７０重量％以上を維持し、かつ、カカオ原料由来のカフェイン含有量の６０重量％以上を低減する方法が提供される。
【００７７】
機能性組成物／飲食品組成物および医薬組成物
本発明のカフェイン低減化カカオ組成物は、カカオが有する機能性成分を維持し、カフェインのみが選択的に低減されている。したがって、カカオに多く含まれるテオブロミン、必要に応じてポリフェノール、さらに必要に応じてプロシアニジン類によって、健康促進効果を得ることができる。すなわち、本発明のカフェイン低減化カカオ組成物は、機能性組成物として用いることができる。
【００７８】
本発明の一つの実施形態では、本発明のカフェイン低減化カカオ組成物は、組成物中にテオブロミンが維持されている。したがって、本発明のカフェイン低減化カカオ組成物は、精神安定用組成物（精神安定剤）や血圧低下用組成物（血圧低下剤）として用いることができる。また、本発明の一つの態様によれば、精神安定用組成物（精神安定剤）や血圧低下用組成物（血圧低下剤）を製造するための、本発明のカフェイン低減化カカオ組成物の使用が提供される。さらに、本発明のカフェイン低減化カカオ組成物を、カフェイン摂取によるリスクを回避する必要がある対象に投与することを含んでなる、精神安定方法および血圧低下方法が提供される。
【００７９】
本発明の一つの実施形態によれば、本発明のカフェイン低減化カカオ組成物は、組成物中にポリフェノールを維持することが確認されている。したがって、本発明の一つの態様によれば、本発明のカフェイン低減化カカオ組成物は、抗酸化用組成物（抗酸化剤）として用いることもできる。また、本発明の一つの態様によれば、抗酸化用組成物を製造するための、本発明のカフェイン低減化カカオ組成物の使用が提供される。さらに、本発明のカフェイン低減化カカオ組成物を、カフェイン摂取によるリスクを回避する必要がある対象に投与することを含んでなる、酸化防止方法が提供される。ここで、本発明者らは、驚くべきことに、本発明のカフェイン低減化カカオ組成物の抗酸化活性は、抗酸化作用が強いと言われているプロシアニジン類濃度と相関するのではなく、総ポリフェノール濃度と正相関にあることを見出した（実施例の例５（３）参照）。したがって、プロシアニジン類が低減しているカフェイン低減化カカオ組成物であっても、総ポリフェノール濃度が維持されている組成物は、抗酸化用組成物として用いることができる。
【００８０】
本発明の一つの実施形態によれば、本発明のカフェイン低減化カカオ組成物は、組成物中にプロシアニジン類を維持することが確認されている。したがって、本発明のカフェイン低減化カカオ組成物は、抗肥満用組成物（抗肥満剤）、発ガン抑制組成物（抗ガン剤）および血液流動性改善用組成物（血液流動性改善剤）として用いることもできる。また、本発明の一つの態様によれば、抗肥満用組成物、発ガン抑制組成物および血液流動性改善用組成物を製造するための、本発明のカフェイン低減化カカオ組成物の使用が提供される。さらに、本発明のカフェイン低減化カカオ組成物を、カフェイン摂取によるリスクを回避する必要がある対象に投与することを含んでなる、肥満抑制方法、ガン予防および／または治療方法、血液流動改善方法が提供される。
【００８１】
本発明の一つの態様によれば、本発明によるカフェイン低減化カカオ組成物を含んでなる飲食品組成物が提供される。また、もう一つの態様によれば、本発明によるカフェイン低減化カカオ組成物を含んでなる医薬組成物が提供される。
【００８２】
本発明において飲食品物組成物とは、医薬組成物以外のものであって、溶液、懸濁液、乳濁液、粉末、固体成形物など、経口摂取可能な形態であればよく特に限定されない。飲食品組成物としては、具体的には、例えば、チョコレート、ココア飲料；チョコレートスプレッド、チョコレートシロップ、チョコレートフラワーペースト、チョコレートコーティング等のチョコレート利用食品；ケーキやクッキー等の焼菓子類、米菓、錠菓、キャンデー、グミ、アイスクリーム、プディング、パン類等にチョコレート味を付与する原料などが挙げられる。また、他に飲食品組成物としては、即席麺、レトルト食品、缶詰、電子レンジ食品、即席スープ・みそ汁類、フリーズドライ食品などの即席食品類；清涼飲料、果汁飲料、野菜飲料、豆乳飲料、コーヒー飲料、茶飲料、粉末飲料、濃縮飲料、アルコール飲料などの飲料類；パン、パスタ、麺、ケーキミックス、パン粉などの小麦粉製品；飴、キャラメル、チューイングガム、チョコレート、クッキー、ビスケット、ケーキ、パイ、スナック、クラッカー、和菓子、デザート菓子などの菓子類；ソース、トマト加工調味料、風味調味料、調理ミックス、たれ類、ドレッシング類、つゆ類、カレー・シチューの素類などの調味料；加工油脂、バター、マーガリン、マヨネーズなどの油脂類；乳飲料、ヨーグルト類、乳酸菌飲料、アイスクリーム類、クリーム類などの乳製品；農産缶詰、ジャム・マーマレード類、シリアルなどの農産加工品；冷凍食品などに用いられる原料が挙げられる。
【００８３】
また飲食品組成物には、いわゆる健康食品、栄養補助食品、保健機能食品（例えば、栄養機能食品）、特別用途食品（例えば、特定保健用食品（疾病リスク低減表示を含む）、病者用食品、乳幼児用調製粉乳、妊産婦・授乳婦用粉乳、えん下困難者用食品）のような分類のものも包含される。
【００８４】
本発明において医薬組成物とは、製剤化のために許容されうる添加剤を併用して、常法に従い、経口製剤または非経口製剤として調製したものである。経口製剤の場合には、錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、徐放剤などの固形製剤、溶液、懸濁液、乳濁液などの液状製剤の形態をとることができる。また、非経口製剤の場合には、注射剤や座剤の形態をとることができる。簡易性の点からは、経口製剤であることが好ましい。ここで、製剤化のために許容されうる添加剤としては、例えば、賦形剤、安定剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、滑沢剤、甘味料、着色料、香料、緩衝剤、酸化防止剤、ｐＨ調整剤などが挙げられる。
【００８５】
飲食品組成物、または医薬組成物などの組成物中におけるカフェイン低減化カカオ組成物の含有量は、飲食品または医薬組成物の種類、形態や、予防・改善の目的などにより、当業者が適宜設定することができる。
【００８６】
飲食品組成物または医薬組成物の摂取量は、形態（医薬品の場合は剤形）、摂取するヒトの年齢、体重、性別、摂取の目的などを考慮して、個々の場合に応じて適宜設定される。
【実施例】
【００８７】
本発明を以下の例によって詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。また、特に記載がない限り、下記例で用いたカカオマスは、株式会社ブルボンにて、常法にしたがい、カカオ豆（ガーナ共和国産、伊藤忠食糧株式会社より入手）から調製したものである。【００８８】
例１：カフェイン低減化カカオ組成物
（１）カフェイン低減化カカオ組成物の調製
カカオ原料として、アルカリ処理をしていないカカオマス（非アルカリ処理カカオマス）、アルカリ処理ココアパウダー（平均粒子径４４.６μｍ、ＡＤＭ社より入手）およびアルカリ処理をしていないココアパウダー（非アルカリ処理ココアパウダー）を用いて、超臨界二酸化炭素抽出を行った。カカオマスは、粉砕機で、粉末状（平均粒子径１１４.３μｍ）にしたものを用いた。非アルカリ処理ココアパウダーは、カカオマスからブロマプロセスにより得られたココアケーキを、ココアミル（ＹＴＫ３０２２、株式会社豊製作所製）を用いて、粉末状（平均粒子径３２．７μｍ）にしたものを用いた。【００８９】
各カカオ原料のＳＦＥ処理前の栄養成分組成を表１に示す。【００９０】
【表１】
2014103415.tif 000003
【００９１】
超臨界二酸化炭素抽出装置（超臨界流体抽出システムＳＦＸ１２２０（２２０型）、Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  ＩＳＣＯ社製）を用いて、それぞれ、下記表２に記載の条件にて抽出を行った。具体的には、抽出槽に入れたカカオ原料に、助溶媒として水を添加し、１０分間調湿させた。調湿中は、所望の温度になるまで昇温した。その後、抽出槽に、二酸化炭素（ＣＯ２）を送り込み、所望の温度および圧力になるように調整し、超臨界二酸化炭素抽出を行った。抽出後の残渣を、カフェイン低減化カカオ組成物（組成物１〜５）として得た。【００９２】
【表２】
2014103415.tif 000004
【００９３】
（２）分析
得られた各組成物を、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ  ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ（株式会社島津製作所製）を用いて、組成物に含まれるテオブロミンおよびカフェインの濃度を測定し、ならびにフォーリンチオカルト法を用いてポリフェノールの濃度を測定した。また、ＳＦＥ処理前の各組成物についても同様に各成分の濃度を測定した。ここでＨＰＬＣの条件は、以下の通りである：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−３カラム、４０℃、溶媒：リン酸緩衝液８０％‐アセトニトリル２０％、流速：１．０ｍｌ、波長：２７５ｎｍ。また、フォーリンチオカルト法は、具体的には、文献：日本食品標準成分表２０１０、第３章資料、４分析マニュアル（ヨウ素等５成分・ポリフェノール）に基づいて行った。【００９４】
得られたテオブロミンおよびポリフェノールの濃度に対するカフェインの濃度の比率を求め、それぞれＴ／ＣおよびＰ／Ｃとした。【００９５】
さらに、ＳＦＥ処理によるそれぞれの成分の低減率を求めた。ここで、低減率は、以下の式により求めた。
式：低減率（重量％）＝（ＳＦＥ処理前の成分含有量［処理前成分濃度×処理前カカオ原料の重量］−ＳＦＥ処理後の成分含有量［処理後成分濃度×処理後カカオ原料の重量］）／ＳＦＥ処理前の成分含有量×１００【００９６】
テオブロミンおよびポリフェノールについては、維持率を求めた。ここで維持率は、以下の式により求めた。
式：維持率(重量％)＝１００−低減率【００９７】
結果を表３に示す。また、組成物１〜３の低減率・維持率については、図１にも結果を示す。【００９８】
【表３】
2014103415.tif 000005
【００９９】
例２：飲食品（ミルクチョコレート）
例１で得られたカフェイン低減化カカオ組成物１〜５、および組成物１〜３のＳＦＥ処理前カカオ原料（非アルカリ処理カカオマス、アルカリ処理ココアパウダー、非アルカリ処理ココアパウダー）を用いて、下記表４の配合でミルクチョコレートを製造した。【０１００】
【表４】
2014103415.tif 000006
【０１０１】
得られたチョコレートは、味・品質に問題はなく、一般的に市販されているミルクチョコレートと比べて、遜色のないものであった。【０１０２】
また、カフェイン低減化カカオ組成物１〜５を配合して得られたチョコレートは、計算上、チョコレート中のテオブロミン濃度が少なくとも０．７重量％以上、具体的には２．３〜３．０重量％であって、チョコレート中のテオブロミン含有量が、カフェイン含有量の少なくとも２５倍以上、具体的には３４〜６３倍のチョコレートとなる（チョコレート中のポリフェノール含有量は、カフェイン含有量の少なくとも４０倍以上、具体的には４６〜１１５倍となる）。【０１０３】
例３：飲食品（ココアクッキー）
例１で得られたカフェイン低減化カカオ組成物１〜５、およびＳＦＥ処理前カカオ原料（非アルカリ処理カカオマス、アルカリ処理ココアパウダー、非アルカリ処理ココアパウダー）を用いて、下記表５の配合でココアクッキーを製造した。【０１０４】
【表５】
2014103415.tif 000007
【０１０５】
得られたクッキーは、味・品質に問題はなく、一般的に市販されているココアクッキーと比べて、遜色ないものであった。【０１０６】
また、カフェイン低減化カカオ組成物１〜５を配合して得られたココアクッキーは、計算上、ココアクッキー中のテオブロミン濃度が少なくとも０．７重量％以上、具体的には１．５〜２．０重量％であって、ココアクッキー中のテオブロミン含有量が、カフェイン含有量の少なくとも２５倍以上、具体的には３３〜６３倍のココアクッキーとなる（ココアクッキー中のポリフェノール含有量は、カフェイン含有量の少なくとも４０倍以上、具体的には４６〜１１７倍となる）。【０１０７】
例４：飲食品（ココア飲料）
例１で得られたカフェイン低減化カカオ組成物１〜５、およびＳＦＥ処理前カカオ原料（非アルカリ処理カカオマス、アルカリ処理ココアパウダー、非アルカリ処理ココアパウダー）を用いて、下記表６の配合でココア飲料を製造した。【０１０８】
【表６】
2014103415.tif 000008
【０１０９】
得られたココア飲料は、味・品質に問題はなく、一般的に市販されているココア飲料と遜色のないものであった。【０１１０】
また、カフェイン低減化カカオ組成物１〜５を配合したココア飲料は、計算上、ココア飲料中のテオブロミン濃度が少なくとも０．７重量％以上、具体的には５．１〜６．７重量％であって、ココア飲料中のテオブロミン含有量が、カフェイン含有量の少なくとも２５倍以上、具体的には３４〜６３倍のココア飲料となる（ココア飲料中のポリフェノール含有量は、カフェイン含有量の少なくとも４０倍以上、具体的には４６〜１１６倍となる）。【０１１１】
例５：カフェイン抽出効率の検討【０１１２】
（１）温度および圧力の検討
例１と同様にココアケーキより調製した非アルカリ処理ココアパウダー（平均粒子径３２．７μｍ）をカカオ原料に、下記温度および圧力での超臨界二酸化炭素抽出処理によるテオブロミンおよびポリフェノール維持率、ならびにカフェイン低減率を測定した。【０１１３】
超臨界流体抽出の条件
装置：超臨界流体抽出システムＳＦＸ１２２０（２２０型）、Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  ＩＳＣＯ社製
カカオ原料：０．５ｇ
圧力：１０、２０、３０ＭＰａ
温度：５０、７０、９０℃
溶媒：ＣＯ２
助溶媒：水（４５重量％）
調湿時間：１０分（同時に昇温）
抽出時間：静的２０分＋動的１４〜４８分
抽剤比（Ｓ／Ｆ）：５５．６【０１１４】
超臨界二酸化炭素抽出処理前および処理後の各成分の濃度ならびにカフェイン低減率およびテオブロミンおよびポリフェノール維持率を、例１と同様に算出した。また、超臨界二酸化炭素抽出処理前および処理後のプロシアニジン類の濃度を従来のプロシアニジン類の測定方法に基づいて求め、テオブロミンおよびポリフェノールと同様に、プロシアニジン類維持率を算出した。【０１１５】
従来のプロシアニジン類の測定方法は、Kelm, M.A. et al., J. Agric. Food. Chem. 2006, 54(5), 1571-1576やBergmann, W.R. et al., J. Am. Chem. Soc. 1987, 109, 6614-6619に基づいて行った。具体的には、５０％エタノールに各組成物を溶解し、クロマトグラフィー分離を行った。クロマトグラフィー分離は、バイナリポンプ、溶媒デガッサー、カラムオーブン、オートサンプラー、システムコントローラー、蛍光検出器ＲＦ−１０Ａ  ＸＬ（株式会社島津製作所製）からなるＨＰＬＣ−ＦＬシステムを用いて実施した。分析は、粒子径５μｍのＤｅｖｅｌｏｓｉｌ  １００−Ｄｉｏｌ−５  カラム（４．６×２５０ｍｍ）（野村化学株式会社）を用いて、３５℃、５μｌのインジェクションで行なった。２つの移動相は、（Ａ）アセトニトリルと酢酸（９８：２，  ｖ／ｖ）、（Ｂ）メタノールと水と酢酸（９５：３：２，  ｖ／ｖ）とした。分離は、流速１ｍｌ／ｍｉｎにおけるＡからＢの以下の一連の直線的濃度勾配法によって生じた：０−６０ｍｉｎ、０−３７．６％  Ｂ  ｉｎ  Ａ；６０ｍｉｎ、１００％  Ｂ  ｉｎ  Ａ；６０−７０ｍｉｎ、  １００％  Ｂ  ｉｎ  Ａ；７０ｍｉｎ、０％  Ｂ  ｉｎ  Ａ；７０−８０  ｍｉｎ、０％  Ｂ  ｉｎ  Ａ。蛍光検出は、励起波長２３０ｎｍ、蛍光波長３２１ｎｍにおいて記録された。プロシアニジン類の量の結果は、エピカテキン当量で示した（平均±標準誤差）。【０１１６】
得られたプロシアニジン類の濃度に対するカフェインの濃度の比率を求め、ＰＣ／Ｃとした。【０１１７】
カフェイン、テオブロミンおよびポリフェノールの結果を表７および図２に示す。またプロシアニジン類の結果を表８および図３に示す。【０１１８】
【表７】
2014103415.tif 000009
【０１１９】
【表８】
2014103415.tif 000010
【０１２０】
さらに、得られた組成物の抗酸化活性を評価した。具体的には、各組成物を、５０％エタノールに溶解し、ＯＲＡＣ値の測定を行なった。ＯＲＡＣ測定はＳｐｅｃｔｒａ  Ｍａｘ  Ｇｅｍｉｎｉ（モレキュラーデバイス社製、米国）を用いて、定法に従って行った（Singleton, V.L. et al., Am. J. Enol. Vitic. 1965, 16, 144-158.、Takebayashi, J. et al., a preliminary study. Biosci. Biotechnol. Biochem. 2010, 74(10), 2137-2140.,およびHuang, D. et al., J. Agric. Food. Chem. 2002, 50, 4437-4444 参照）。ＯＲＡＣ値は試料１ｇ当りのトロロックス当量（μｍｏｌ−ＴＥ／ｇ）で表わした。結果を、表９および図４に示す。【０１２１】
【表９】
2014103415.tif 000011
【０１２２】
（２）助溶媒の割合の検討
例１と同様にココアケーキより調製した非アルカリ処理ココアパウダー（平均粒子径３２．７μｍ）をカカオ原料に、下記助溶媒の割合での超臨界二酸化炭素抽出（ＳＦＥ）処理によるテオブロミンおよびポリフェノール維持率、ならびにカフェイン低減率を測定した。【０１２３】
超臨界流体抽出の条件
装置：超臨界流体抽出システムＳＦＸ１２２０（２２０型）、Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  ＩＳＣＯ社製
カカオ原料：０．５ｇ
圧力：３０ＭＰａ
温度：７０℃
溶媒：ＣＯ２
助溶媒：水（０、１５、３０、４５、６０、７５重量％）
調湿時間：１０分（同時に昇温）
抽出時間：静的２０分＋動的１５分
抽剤比（Ｓ／Ｆ）：５５．６【０１２４】
超臨界二酸化炭素抽出処理前および処理後の各成分の濃度ならびにカフェイン低減率およびテオブロミンおよびポリフェノール維持率を、例１と同様に算出した。結果を表１０および図５に示す。また、超臨界二酸化炭素抽出処理前および処理後のプロシアニジン類の濃度ならびにプロシアニジン類維持率を、例５（１）と同様に算出した。結果を表１１および図６に示す。【０１２５】
【表１０】
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【０１２６】
【表１１】
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【０１２７】
さらに、例５（１）同様に、得られた組成物の抗酸化活性を評価した。結果を表１２および図７に示す。【０１２８】
【表１２】
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【０１２９】
（３）総ポリフェノール濃度およびプロシアニジン類濃度と、抗酸化活性の相関性
超臨界二酸化炭素抽出処理前および処理後総ポリフェノール濃度やプロシアニジン類濃度と、ＯＲＡＣ値との相関関係を信頼度９５％におけるピアソン相関係数（ｒ）を計算したデータの回帰直線を用いて分析した。統計的有意は、両側ｐ値が５％未満だった場合を有意な結果と判断した。結果を図８に示す。【０１３０】
結果に示されるように、処理前の抗酸化活性はプロシアニジン類と正相関が認められたが（ｒ＝０．８３、ｐ＜０．００１）、処理後の抗酸化活性は総ポリフェノールと正相関が認められた（ｒ＝０．８７、ｐ＜０．００１）。すなわち、カカオ原料の抗酸化活性は、総ポリフェノール濃度に依存すると考えられる。よって、本発明のカフェイン低減化カカオ組成物では、抗酸化活性の主要因子といわれているプロシアニジン類濃度が低下した場合であっても、総ポリフェノール濃度がある程度維持されれば、抗酸化活性の減少を招くことはない。【０１３１】
（４）抽剤比の検討
例１と同様にココアケーキより調製した非アルカリ処理ココアパウダー（平均粒子径３２．７μｍ）をカカオ原料に、下記抽剤比での超臨界二酸化炭素抽出処理によるテオブロミンおよびポリフェノール維持率、ならびにカフェイン低減率を測定した。【０１３２】
超臨界流体抽出の条件
装置：ＮＯＶＡ  ３００ｍｌ  ＴＷＩＮ、ＮＯＶＡ  ＳＷＩＳＳ社製
カカオ原料：７５．５ｇ
圧力：３０ＭＰａ
温度：７０℃
溶媒：ＣＯ２
助溶媒：水（４５重量％）
調湿時間：１０分（同時に昇温）
抽出時間：静的２０分＋動的２９〜６８８分
抽剤比（Ｓ／Ｆ）：７．５、１５．０、３２．５、４７．５、６２．５、８０．０、９５．０、１２０．０、１５０．０、１８０．０【０１３３】
超臨界二酸化炭素抽出処理前および処理後の各成分の濃度ならびにカフェイン低減率およびテオブロミンおよびポリフェノール維持率を、例１と同様に算出した。【０１３４】
得られたカフェイン低減率ならびにテオブロミン及びポリフェノール維持率の結果をそれぞれ、抽剤比に対してプロットし、グラフを作成して（図示せず）、抽剤比の最適値を検討した。その結果、所望のカフェイン低減化カカオ組成物を得るための抽剤比は、５５．０以上が望ましく、好ましくは９４．０以上であることが分かった。抽剤比が低いとカフェイン除去率（抽出率）が悪かった。また、抽出比が１２０．０に達すると、抽出原料から抽出・除去されるカフェイン量が飽和状態に達した。テオブロミン維持率は、このＳＦＥ処理の条件下では、ほぼ変動しなかった。ポリフェノール維持率は、抽剤比の増加により若干低下したが、維持率８８重量％以下になることはなかった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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