(57)【要約】  アフィニティークロマトグラフィー工程後にカチオン交換クロマトグラフィー工程及びアニオン交換クロマトグラフィー工程を含む生理活性物質の精製方法であり、アフィニティークロマトグラフィー工程における生理活性物質の溶出後、生理活性物質を含む溶出液のバッファーの交換をせずに、カチオン交換クロマトグラフィー工程及びアニオン交換クロマトグラフィー工程をフロースルー様式で行って生理活性物質を精製し、カチオン交換クロマトグラフィー工程において、３０ｍｍｏｌ／Ｌより高い密度でカチオン交換基を有するカチオン交換担体を用いる、生理活性物質の精製方法。
2016093251.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アフィニティークロマトグラフィー工程の後にカチオン交換クロマトグラフィー工程及びアニオン交換クロマトグラフィー工程を含む生理活性物質の精製方法であり、前記アフィニティークロマトグラフィー工程における生理活性物質の溶出後、前記生理活性物質を含む溶出液のバッファーの交換をせずに、前記カチオン交換クロマトグラフィー工程及び前記アニオン交換クロマトグラフィー工程をフロースルー様式で行って前記生理活性物質を精製し、前記カチオン交換クロマトグラフィー工程において、３０ｍｍｏｌ／Ｌより高い密度でカチオン交換基を有するカチオン交換担体を用いる、生理活性物質の精製方法。
【請求項２】
一連の工程において、希釈を行わない、又は希釈による体積増加が２．０倍以下である、請求項１記載の精製方法。
【請求項３】
カチオン交換クロマトグラフィー担体が、膜状基材と、前記基材を被覆するカチオン交換基を有する高分子と、を含む、請求項１又は２に記載の精製方法。
【請求項４】
前記カチオン交換基を有する高分子が、モノマー単位として（メタ）アクリレート単位を含む、請求項３に記載の精製方法。
【請求項５】
前記カチオン交換基を有する高分子が、共重合体である請求項３又は４に記載の精製方法。
【請求項６】
前記カチオン交換基を有する高分子が、電荷をもたない中性のモノマー単位を含む、請求項３から５のいずれか１項に記載の精製方法。
【請求項７】
前記カチオン交換基を有する高分子が、基材に共有結合している、請求項３から６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記カチオン交換基を有する高分子が、カチオン交換基を有するモノマー単位を含み、当該カチオン交換基を有するモノマー単位の重量割合が、電荷をもたない中性のモノマー単位の重量割合よりも低い、請求項３から７のいずれか１項に記載の精製方法。
【請求項９】
カチオン交換クロマトグラフィー担体が、少なくとも弱カチオン交換基を含む１又は複数種類のカチオン交換基を有する、請求項１ないし８のいずれか１項に記載の精製方法。
【請求項１０】
カチオン交換クロマトグラフィー担体が、少なくとも強カチオン交換基を含む１又は複数種類のカチオン交換基を有する、請求項１ないし９のいずれか１項に記載の精製方法。
【請求項１１】
前記アフィニティークロマトグラフィー工程の溶出に用いられる溶出バッファーの主成分が１価酸である、請求項１ないし１０のいずれか１項に記載の精製方法。
【請求項１２】
前記アフィニティークロマトグラフィー工程の溶出に用いられる溶出バッファーが酢酸バッファーである、請求項１ないし１１のいずれか１項に記載の精製方法。
【請求項１３】
前記アフィニティークロマトグラフィー工程の溶出に用いられる溶出バッファーの電気伝導度が５．０ｍＳ／ｃｍ以下である、請求項１ないし１２のいずれか１項に記載の精製方法。
【請求項１４】
前記アフィニティークロマトグラフィー工程の溶出に用いられる前記バッファーの濃度が１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、請求項１ないし１３のいずれか１項に記載の精製方法。
【請求項１５】
前記アフィニティークロマトグラフィー工程の後に、前記生理活性物質を含む溶出液の水素イオン指数の調整を行う、請求項１ないし１４のいずれか１項に記載の精製方法。
【請求項１６】
前記カチオン交換クロマトグラフィー工程及び前記アニオン交換クロマトグラフィー工程の間に、前記生理活性物質を含む溶出液の水素イオン指数の調整を行う、請求項１ないし１５のいずれか１項に記載の精製方法。
【請求項１７】
前記カチオン交換クロマトグラフィー工程及び前記アニオン交換クロマトグラフィー工程に適用する前記生理活性物質を含む溶出液の電気伝導度が５．０ｍＳ／ｃｍ以下である、請求項１ないし１６のいずれか１項に記載の精製方法。
【請求項１８】
前記アフィニティークロマトグラフィー工程の後に、酸性処理により、ウィルス不活化を行う、請求項１ないし１７のいずれか１項に記載の精製方法。
【請求項１９】
前記カチオン交換クロマトグラフィー工程において、前記カチオン交換担体の体積１ｍＬ当たり０．３ｇ以上の前記生理活性物質を含む溶出液をロードする、請求項１ないし２０のいずれか１項に記載の精製方法。
【請求項２０】
アニオン交換クロマトグラフィー担体が、膜状基材と、前記基材を被覆するアニオン交換基を有する高分子と、を含む、請求項１ないし１９のいずれか１項に記載の精製方法。
【請求項２１】
前記アニオン交換基を有する交換基を有する高分子が、モノマー単位として（メタ）アクリレート単位を含む、請求項２０に記載の精製方法。
【請求項２２】
前記アニオン交換基を有する高分子が、前記膜上基材に共有結合している、請求項２０又は２１に記載の精製方法。
【請求項２３】
アニオン交換クロマトグラフィー担体のリガンドが、炭素数２以上のアルキル基を２つ以上有する、請求項１ないし２２のいずれか１項に記載の精製方法。
【請求項２４】
アニオン交換クロマトグラフィー担体のリガンドが、３級アミンである、請求項１ないし２３のいずれか１項に記載の精製方法。
【請求項２５】
前記カチオン交換クロマトグラフィー工程の前にデプスフィルターによる処理を行う、請求項１ないし２４のいずれか１項に記載の精製方法。
【請求項２６】
生理活性物質と活性炭とを接触させる工程を含まない、請求項１ないし２５のいずれか１項に記載の精製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生理活性物質の精製方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
免疫グロブリン（抗体）は、免疫反応を司る生理活性物質である。近年、医薬品、診断薬あるいは対応する抗原タンパク質の分離精製材料等の用途において、抗体の利用価値が高まっている。抗体は免疫した動物の血液あるいは抗体産生能を保有する細胞の細胞培養液又は動物の腹水培養液から取得される。但し、それらの抗体を含有する血液や培養液は、抗体以外のタンパク質、又は細胞培養に用いた原料液に由来する複雑な夾雑成分を包含し、それらの不純物成分から抗体を分離精製するには、煩雑で長時間を要する操作が通常必要である。【０００３】
液体クロマトグラフィーは、抗体の分離精製に重要である。抗体を分離するためのクロマトグラフィー手法として、ゲルろ過クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、及び逆相クロマトグラフィー等があり、これらの手法を組み合わせることで抗体が分離精製される。【０００４】
アフィニティークロマトグラフィー工程においては、下記（Ａ）〜（Ｃ）の工程を経て、純度及び濃度の高い抗体が生成される。
（Ａ）抗体と不純物が混じった試料をカラムに付加する工程（負荷工程）
（Ｂ）負荷したカラムから精製対象とする抗体以外の不純物を取り除く工程（洗浄工程）
（Ｃ）精製対象とする抗体をカラムから溶出し、回収する工程（溶出工程）【０００５】
イオン交換クロマトグラフィー工程は、吸着剤表面のイオン交換基を固定相として移動相中に存在する対イオンを吸着する。吸着剤の形状としては、ビーズや、平膜及び中空糸等の膜などが採用されており、これらの基材にカチオン交換基又はアニオン交換基を結合したものが吸着剤として市販されている。【０００６】
カチオン交換基を有する吸着剤では、低塩濃度の抗体溶液を吸着材に接触させることにより、抗体を吸着させ、移動相の塩濃度を高めることにより、吸着させた生理活性物質を溶出させる精製が一般的に行われており、抗体単量体と抗体２量体等の凝集体を分離することがしばしば目的とされている。更に、より良好な方法として、以下に説明するフロースルー様式による目的物質の精製も提案されている。【０００７】
フロースルー様式とは、目的物質よりも不純物を選択的に吸着剤に吸着させる精製方法の様式である。そのため、従来の吸着、溶出を利用した方法に比べ、緩衝液（バッファー）の節約や工程の簡略化につながる。【０００８】
アニオン交換基を有する吸着剤による精製方法では、フロースルー様式が一般的であり、等電点の低い物質の吸着除去を目的として行われている。【０００９】
従来の伝統的な精製方法では、アフィニティークロマトグラフフィー工程の後に、カチオン交換クロマトグラフィー工程をバインドアンドエリュート（吸着／溶出）モードにより行い、アニオン交換クロマトグラフィー工程をフロースルーモードで行うことが一般的である。しかし、より効率の良い方法として、カチオン交換クロマトグラフィー工程もフロースルーモードで行うことが提案されている。しかし、アフィニティークロマトグラフフィー工程、アニオン交換クロマトグラフィー工程、及びカチオン交換クロマトグラフィー工程による３ステップ精製の間に、バッファーの交換や、希釈という工程が必要となり、必ずしも効率の良い精製方法ではない。【００１０】
特許文献１では、アフィニティークロマトグラフィー工程の後の、溶出プロテインＡを含む抗体溶液をマルチモーダルクロマトグラフィーを用いてフロースルー精製する例が開示されているが、アフィニティークロマトグラフィー工程と、アニオン交換クロマトグラフィー工程との連続性については開示されていない。【００１１】
特許文献２では、アフィニティークロマトグラフィー工程の後の、溶出プロテインＡを含む抗体溶液を水素イオン指数（ｐＨ）調整後、直接、フロースルーモードによるカチオン交換クロマトグラフィー工程で処理し、更にカチオン交換クロマトグラフィー工程で処理された溶出プロテインＡを含む抗体溶液をｐＨ調整後、フロースルーモードによるアニオン交換工クロマトグラフィー工程で処理し、バッファー交換や希釈を行わない例が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】特許第４７７６６１５号公報
【特許文献２】特表２０１３−１８９４２７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
上述したように、特許文献１は、精製方法における、アフィニティークロマトグラフィー工程と、アニオン交換クロマトグラフィー工程との連続性を開示していない。【００１４】
特許文献２に開示された方法は、カチオン交換担体のカチオン交換基密度が１ないし３０ｍｍｏｌ／であり、カチオン交換クロマトグラフィー工程の処理量が小さいことから、一連の精製プロセスの効率は依然として不十分である。【００１５】
上記のように、従来の生理活性物質の精製方法は、カチオン交換クロマトグラフィー工程での処理量が不十分であり、一連の精製プロセスの中での効率化は依然として課題として残っている。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明者らは上記課題を解決するために、種々の角度から検討を加えて、研究開発を行った。その結果、連続性の高い高効率の抗体精製プロセスを見出し、本発明を完成するに至った。【００１７】
本発明の態様によれば、アフィニティークロマトグラフィー工程の後にカチオン交換クロマトグラフィー工程及びアニオン交換クロマトグラフィー工程を含む生理活性物質の精製方法であり、アフィニティークロマトグラフィー工程における生理活性物質の溶出後、生理活性物質を含む溶出液のバッファーの交換をせずに、カチオン交換クロマトグラフィー工程及びアニオン交換クロマトグラフィー工程をフロースルー様式で行って生理活性物質を精製し、カチオン交換クロマトグラフィー工程において、３０ｍｍｏｌ／Ｌより高い密度でカチオン交換基を有するカチオン交換担体を用いる、生理活性物質の精製方法が提供される。【００１８】
上記の生理活性物質の精製方法の一連の工程において、希釈を行わなくてもよく、あるいは希釈による体積増加が２．０倍以下であってもよい。【００１９】
上記の生理活性物質の精製方法において、カチオン交換クロマトグラフィー担体が、膜状基材と、基材を被覆するカチオン交換基を有する高分子と、を含んでいてもよい。カチオン交換基を有する高分子が、モノマー単位として（メタ）アクリレート単位を含んでいてもよい。カチオン交換基を有する高分子が、電荷をもたない中性のモノマー単位を含んでいてもよい。カチオン交換基を有する高分子が、基材に共有結合していてもよい。カチオン交換基を有する高分子が、カチオン交換基を有するモノマー単位を含み、当該カチオン交換基を有するモノマー単位の重量割合が、電荷をもたない中性のモノマー単位の重量割合よりも低くてもよい。カチオン交換基を有する高分子が、共重合体であってもよい。【００２０】
上記の生理活性物質の精製方法において、カチオン交換クロマトグラフィー担体が、少なくとも弱カチオン交換基を含む１又は複数種類のカチオン交換基を有していてもよい。あるいは、カチオン交換クロマトグラフィー担体が、少なくとも強カチオン交換基を含む１又は複数種類のカチオン交換基を有していてもよい。【００２１】
上記の生理活性物質の精製方法において、アフィニティークロマトグラフィー工程の溶出に用いられる溶出バッファーの主成分が１価酸であってもよい。アフィニティークロマトグラフィー工程の溶出に用いられる溶出バッファーが酢酸バッファーであってもよい。アフィニティークロマトグラフィー工程の溶出に用いられる溶出バッファーの電気伝導度が５．０ｍＳ／ｃｍ以下であってもよい。アフィニティークロマトグラフィー工程の溶出に用いられるバッファーの濃度が１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下であってもよい。アフィニティークロマトグラフィー工程の後に、生理活性物質を含む溶出液の水素イオン指数の調整を行ってもよい。【００２２】
上記の生理活性物質の精製方法において、カチオン交換クロマトグラフィー工程及びアニオン交換クロマトグラフィー工程の間に、生理活性物質を含む溶出液の水素イオン指数の調整を行ってもよい。カチオン交換クロマトグラフィー工程及びアニオン交換クロマトグラフィー工程に適用する生理活性物質を含む溶出液の電気伝導度が５．０ｍＳ／ｃｍ以下であってもよい。アフィニティークロマトグラフィー工程の後に、酸性処理により、ウィルス不活化を行ってもよい。カチオン交換クロマトグラフィー工程において、カチオン交換担体の体積１ｍＬ当たり０．３ｇ以上の生理活性物質を含む溶出液をロードしてもよい。【００２３】
上記の生理活性物質の精製方法において、アニオン交換クロマトグラフィー担体が、膜状基材と、基材を被覆するアニオン交換基を有する高分子と、を含んでいてもよい。アニオン交換基を有する交換基を有する高分子が、モノマー単位として（メタ）アクリレート単位を含んでいてもよい。アニオン交換基を有する高分子が、膜上基材に共有結合していてもよい。アニオン交換クロマトグラフィー担体のリガンドが、炭素数２以上のアルキル基を２つ以上有していてもよい。アニオン交換クロマトグラフィー担体のリガンドが、３級アミンであってもよい。【００２４】
上記の生理活性物質の精製方法において、カチオン交換クロマトグラフィー工程の前にデプスフィルターによる処理を行ってもよい。生理活性物質と活性炭とを接触させる工程を含まなくてもよい。
【発明の効果】
【００２５】
本発明によれば、効率の良い生理活性物質の精製方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】実施例１に係る抗体溶液をサイズ排除クロマトグラフィーにかけた際の吸光度のグラフである。
【図２】図１のグラフの拡大図である。
【図３】実施例１ないし４の結果を示す表である。
【図４】実施例７の結果を示す表である。
【図５】実施例８の結果を示す表である。
【図６】実施例９の結果を示す表である。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
以下、本発明の実施の形態（以下、「実施の形態」という。）について詳細に説明する。なお以下の示す実施の形態は、この発明の技術的思想を具体化するための装置や方法を例示するものであって、この発明の技術的思想は構成部材の組み合わせ等を下記のものに特定するものではない。この発明の技術的思想は、特許請求の範囲において種々の変更を加えることができる。
【００２８】
実施の形態に係る生理活性物質の精製方法は、アフィニティークロマトグラフィー工程後にカチオン交換クロマトグラフィー工程及びアニオン交換クロマトグラフィー工程を含む生理活性物質の精製方法であり、アフィニティークロマトグラフィー工程における生理活性物質の溶出後、生理活性物質を含む溶出液のバッファーの交換をせずに、カチオン交換クロマトグラフィー工程及びアニオン交換クロマトグラフィー工程をフロースルー様式で行って生理活性物質を精製し、カチオン交換クロマトグラフィー工程において、３０ｍｍｏｌ／Ｌより高い密度でカチオン交換基を有するカチオン交換担体を用いる。
【００２９】
実施の形態に係る生理活性物質とは、例えば、抗体タンパク質の単量体成分である。生理活性物質の一例である抗体タンパク質は、生化学における一般的な定義のとおり、脊椎動物の感染防禦機構としてＢリンパ球が産生する糖タンパク質分子（ガンマグロブリン又は免疫グロブリンともいう）である。例えば、実施の形態で精製される抗体タンパク質は、ヒトの医薬品として使用され、投与対象であるヒトの体内にある抗体タンパク質と実質的に同一の構造を有する。
【００３０】
抗体タンパク質は、ヒト抗体タンパク質であってもよく、ヒト以外のウシ及びマウス等の哺乳動物由来抗体タンパク質であってもよい。あるいは、抗体タンパク質は、ヒトＩｇＧとのキメラ抗体タンパク質、及びヒト化抗体タンパク質であってもよい。ヒトＩｇＧとのキメラ抗体タンパク質とは、可変領域がマウスなどのヒト以外の生物由来であるが、その他の定常領域がヒト由来の免疫グロブリンに置換された抗体タンパク質である。また、ヒト化抗体タンパク質とは、可変領域のうち、相補性決定領域（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ−ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ  ｒｅｇｉｏｎ：  ＣＤＲ）がヒト以外の生物由来であるが、その他のフレームワーク領域（ｆｒａｍｅｗｏｒｋ  ｒｅｇｉｏｎ：  ＦＲ）がヒト由来である抗体タンパク質である。ヒト化抗体タンパク質は、キメラ抗体タンパク質よりも免疫原性がさらに低減される。
【００３１】
実施の形態に係る精製対象の一例である抗体タンパク質のクラス（アイソタイプ）及びサブクラスは特に限定されない。例えば、抗体タンパク質は、定常領域の構造の違いにより、ＩｇＧ，ＩｇＡ，ＩｇＭ，ＩｇＤ，及びＩｇＥの５種類のクラスに分類される。しかし、実施の形態に係る精製方法が対象とする抗体タンパク質は、５種類のクラスの何れであってもよい。また、ヒト抗体タンパク質においては、ＩｇＧにはＩｇＧ１〜ＩｇＧ４の４つのサブクラスがあり、ＩｇＡにはＩｇＡ１とＩｇＡ２の２つのサブクラスがある。しかし、実施の形態に係る精製方法が対象とする抗体タンパク質のサブクラスは、いずれであってもよい。なお、Ｆｃ領域にタンパク質を結合したＦｃ融合タンパク質等の抗体関連タンパク質も、実施の形態に係る精製方法が対象とする抗体タンパク質に含まれ得る。
【００３２】
さらに、抗体タンパク質は、由来によっても分類することができる。しかし、実施の形態に係る精製方法が対象とする抗体タンパク質は、天然のヒト抗体タンパク質、遺伝子組換え技術により製造された組換えヒト抗体タンパク質、モノクローナル抗体タンパク質、及びポリクローナル抗体タンパク質の何れであってもよい。これらの抗体タンパク質の中でも、実施の形態に係る精製方法が対象とする抗体タンパク質としては、抗体医薬としての需要や重要性の観点から、ヒトＩｇＧが好適であるが、これに限定されない。
【００３３】
実施の形態で取り除かれる不純物としては、例えば、抗体凝集体、宿主細胞由来のタンパク質（ＨＣＰ）、ＤＮＡ、及びアフィニティークロマトグラフィー工程で溶離してくるプロテインＡを含む抗体等がある。
【００３４】
アフィニティークロマトグラフィーとは、しばしば親和性クロマトグラフィー、プロテインＡクロマトグラフィー、あるいはプロテインＡアフィニティークロマトグラフィーとも呼ばれ、プロテインＡを用いたクロマトグラフィー方法である。
【００３５】
プロテインＡは、スタフィロコッカス属黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）に由来する。プロテインＡは、中性条件下で、抗体のＦｃ領域に対して特異的に高い親和性を有する。そのため、天然のプロテインＡを用いて抗体を精製する際には、まず、天然のプロテインＡをリガンドとして有する固定相に抗体を含む溶液を中性条件下で接触させて、担体上の天然のプロテインＡに抗体を特異的に吸着させる。そして、中性の緩衝液で担体に吸着しなかった成分を洗浄し、除去した後、ｐＨ３．０付近の酸性の溶液を用いて、担体上の天然のプロテインＡから抗体を遊離させる。
【００３６】
アフィニティークロマトグラフィー工程で用いるクロマトグラフィー材料はプロテインＡを有しておれば特に限定を受けないが、該プロテインＡは一般には固相に固定化されている。
【００３７】
実施の形態に係るアフィニティークロマトグラフィー工程は、一般的な方法で行って問題ない。プロテインＡカラムから抗体を溶出する前に、高電気伝導度の緩衝溶液で洗浄した後に溶出することにより、より純度の高い抗体溶出液を得ることが可能になる。本実施の形態では、高電気伝導度の緩衝溶液での洗浄後、更に低電気伝導度の緩衝溶液で洗浄することが望ましい。この操作により、溶出した抗体溶液の電気伝導度を低く抑えることができ、後のイオン交換クロマトグラフィー工程における精製効率を担保することが出来る。
【００３８】
このような低電気伝導度の洗浄緩衝液の電気伝導度として、５．０ｍＳ／ｃｍ以下が好ましく、より好ましくは４．０ｍＳ／ｃｍ以下、更に好ましくは３．０ｍＳ／ｃｍ以下である。
【００３９】
また、プロテインＡカラムから溶出させる際に用いるバッファーとしては、抗体の溶出が可能であり、後に続くイオン交換クロマトグラフィー工程の不純物除去性を担保できれば特に限定を受けないが、実施の形態では、プロテインＡからの溶出後、溶出液のバッファー交換を行わずにイオン交換クロマトグラフィー工程で生理活性物質の精製を行う。そのため、アニオン交換クロマトグラフィーにおいて、多価バッファーを用いると、吸着性能が低下する傾向にあることから、１価酸が主成分である溶出バッファーを用いて、プロテインＡカラムから生理活性物質の溶出を行うことが望ましい。
【００４０】
このような１価酸として特に限定は受けないが、例えば酢酸等が挙げられる。そのため、溶出バッファーとして、酢酸バッファーを用いるのが好適である。
【００４１】
また、溶出に用いられる溶出バッファーは、後に続くイオン交換クロマトグラフィー工程との連続性の観点から、濃度が低濃度であり、更に低電気伝導度であることが望ましい。
【００４２】
溶出バッファーの濃度として、ｐＨ調整後の電気伝導度を抑制するという観点から、１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下が好ましく、より好ましくは５０ｍｍｏｌ／Ｌ以下、更に好ましくは３０ｍｍｏｌ／Ｌ以下である。
【００４３】
ここで、バッファー濃度とは、バッファーの有効成分の濃度のことをいう。例えば、酢酸バッファーであれば、通常酢酸と酢酸ナトリウムから調整されるが、その時の、酢酸と酢酸ナトリウムの合計の濃度である。また、トリスバッファーでは、トリスヒドロキシメチルアミノメタンの濃度のことをいう。また、酢酸−トリスバッファー等のように表記されるバッファーについては、前者の濃度のことであり、酢酸−トリスでは酢酸、トリス−酢酸であればトリスの濃度のことである。
【００４４】
溶出バッファーの電気伝導度は、５．０ｍＳ／ｃｍ以下が好ましく、より好ましくは４．０ｍＳ／ｃｍ以下、更に好ましくは３．０ｍＳ／ｃｍ以下／ｃｍ以下、特に好ましくは２．０ｍＳ／ｃｍ以下である。
【００４５】
プロテインＡからの溶出液は、ｐＨ調整後、そのまま次のイオン交換クロマトグラフィー工程に用いてもよいし、低ｐＨ（酸性）処理により、ウィルスの不活化を行ってもよい。
【００４６】
ウィルス不活化は一般的な方法でよく、特に限定を受けないが、ｐＨとしては、３．５以下が好ましく、より好ましくは３．４以下、更に好ましくは３．３以下、特に好ましくは３．２以下である。
【００４７】
実施の形態では、アフィニティークロマトグラフィー工程の後、又はウィルス不活化後に、イオン交換クロマトグラフィー工程を行う。カチオン交換クロマトグラフィー工程及びアニオン交換クロマトグラフィー工程のどちらを先に行うかは任意に選択できるが、実施の形態では、イオン交換クロマトグラフィー工程の前に、バッファー交換に依らないｐＨ調整を行うことが出来る。また、カチオン交換クロマトグラフィー工程及びアニオン交換クロマトグラフィー工程の間にｐＨ調整を行ってもよいし、行わなくてもよい。カチオン交換クロマトグラフィー工程の後にアニオン交換クロマトグラフィー工程を行う場合は、アニオン交換クロマトグラフィー工程の前に塩基性側にｐＨ調整をすると、不純物が効率的に除去できる。また、アニオン交換クロマトグラフィー工程の後にカチオン交換クロマトグラフィー工程を行う場合は、カチオン交換クロマトグラフィー工程の前に酸性側にｐＨ調整をすると、不純物が効率的に除去できる。
【００４８】
一連の工程の中で、抗体溶液の希釈を行わないことが好ましいが、電気伝導度を下げるために、希釈を行ってもよい。
【００４９】
希釈を行う場合には、脱塩水等や抗体溶液よりも電気伝導度の低い水溶液を加えることにより希釈し、電気伝導度を下げるが、精製プロセスの効率化の面から、希釈による体積増加としては、２．０倍以下が好ましく、より好ましくは、１．７倍以下、更に好ましくは１．５倍以下、更に更に好ましくは１．３倍以下、更に更に好ましくは１．２倍以下、特に好ましくは１．１倍以下である。
【００５０】
カチオン交換クロマトグラフィー工程でのｐＨとしては、好ましくは４．０以上、より好ましくは５．０以上、更に好ましくは６．０以上、特に好ましくは７．０以上である。また、電気伝導度は好ましくは、５．０ｍＳ／ｃｍ以下、より好ましくは４．０ｍＳ／ｃｍ以下、更に好ましくは３．０ｍＳ／ｃｍ以下、特に好ましくは２．０ｍＳ／ｃｍ以下である。
【００５１】
アニオン交換クロマトグラフィー工程でのｐＨとしては、好ましくは５．０以上、より好ましくは６．０以上、更に好ましくは７．０以上、特に好ましくは７．５以上である。電気伝導度としては、好ましくは５．０ｍＳ／ｃｍ以下、より好ましくは４．０ｍＳ／ｃｍ以下、更に好ましくは３．０ｍＳ／ｃｍ以下、特に好ましくは２．０ｍＳ／ｃｍ以下である。
【００５２】
ｐＨを塩基性側に調整する際に用いる塩基としては、特に限定を受けないが、例えばトリス溶液が挙げられ、抗体溶液の濃度を薄めないために、トリス溶液の濃度としては、１ｍｏｌ／Ｌや２ｍｏｌ／Ｌといった濃い濃度が望ましい。ｐＨを酸性側に調整する際に用いる酸としては、特に限定を受けないが、酢酸や塩酸溶液等が挙げられる。
【００５３】
実施の形態に係るカチオン交換クロマトグラフィー工程に用いるカチオン交換担体としては、当該担体の体積当たり３０ｍｍｏｌ／Ｌより高い密度、好ましくは４０ｍｍｏｌ／Ｌより高い密度、より好ましくは４５ｍｍｏｌ／Ｌより高い密度で、カチオン交換基を有する。カチオン交換基の密度が３０ｍｍｏｌ／Ｌより低いと、処理できる抗体量が低下する傾向にある。
【００５４】
カチオン交換基としては、不純物が除去出来れば、強カチオン交換基でも弱カチオン交換基でも、特に限定を受けないが、弱カチオン交換基を含む１又は複数種類のカチオン交換基を有していることが望ましい。実施の形態に係るカチオン交換クロマトグラフィー担体は、少なくとも１種類の弱カチオン交換基を有していれば、強カチオン交換基を有していてもよく、あるいは強カチオン交換基を有していなくとも、弱カチオン交換基のみを有していればよく、カチオン交換基の合計で当該担体の体積あたりの密度が３０ｍｍｏｌ／Ｌよりも高ければよい。３０ｍｍｏｌ／Ｌよりもカチオン交換基の合計密度が低ければ、荷電させることが可能なカチオン交換基量が低くなり、吸着容量の低下に加え、適用できる抗体種が狭くなる傾向にある。
【００５５】
なお、カチオン交換基の合計で当該担体の体積あたりの密度が３０ｍｍｏｌ／Ｌよりも高ければよいが、このうち、弱カチオン交換基の密度が、５ｍｏｌ／Ｌ以上、好ましくは１０ｍｏｌ／Ｌ以上、より好ましくは１５ｍｍｏｌ／Ｌ以上であれば、電荷密度の調整が可能となる。弱カチオン交換基とはカルボン酸基、ホスホン酸基、及びリン酸基等が挙げられる。弱カチオン交換基は、移動相のｐＨにより、荷電量を変化させることが可能である。そのため、移動相のｐＨを変化させることにより、カチオン交換クロマトグラフィー担体の電荷密度の調整が可能となる。そのため、除去すべき不純物の特性に合わせて、ｐＨを調整することにより、任意の不純物の除去が可能となる。
【００５６】
また、強カチオン交換基を導入することによって、ｐＨに対する荷電量変化を鈍感にさせ、再現性を向上させることが可能となる。ほぼ全ての強カチオン交換基は、抗体精製における実用的な抗体溶液のｐＨ領域で荷電しているため、荷電量が一定である。したがって、カチオン交換クロマトグラフィー担体に強カチオン交換基が存在することで、常に一定以上の荷電量が保証される。さらに、カチオン交換クロマトグラフィー担体に強カチオン交換基と弱カチオン交換基とが存在することで、ｐＨを変化させることにより、弱カチオン交換基の荷電量を調整し、カチオン交換クロマトグラフィー担体全体の荷電量を微調整することが出来る。カチオン交換クロマトグラフィー担体に強カチオン交換基が存在することで、ｐＨ微変化によってカチオン交換クロマトグラフィー担体の性能が大きく左右されることを抑制可能である。強カチオン交換基としては、スルホン酸基等が挙げられる。
【００５７】
また、実施の形態に係るカチオン交換担体は、膜状担体、ビーズ状担体等が挙げられるが、膜状基材であることが望ましい。膜状であることにより、高流速での処理が可能となり、より効率の高い精製が可能となる。
【００５８】
膜状基材の材料は、特に限定されないが、機械的性質保持のために、ポリオレフィン系重合体から構成されていることが好ましい。ポリオレフィン系重合体としては、例えば、エチレン、プロピレン、ブチレン及びフッ化ビニリデンなどのオレフィン単独重合体、該オレフィンの２種以上の共重合体、又は１種もしくは２種以上のオレフィンと、パーハロゲン化オレフィンと、の共重合体などが挙げられる。パーハロゲン化オレフィンとしては、テトラフルオロエチレン及び／又はクロロトリフルオロエチレンなどが挙げられる。これらの中でも、機械的強度に優れ、かつタンパク質などの夾雑物の高い吸着容量が得られる点で、ポリエチレン又はポリフッ化ビニリデンが好ましい。
【００５９】
膜状基材は、例えば複数の細孔を有する。細孔径は、特に限定されないが、例えば５〜１０００ｎｍであり、好ましくは１０ｎｍ以上、より好ましくは５０ｎｍ以上、さらに好ましくは１００ｎｍ以上、特に好ましくは１５０ｎｍ以上、あるいは４００ｎｍ以上である。また、基材膜表面積の観点から、好ましくは９００ｎｍ以下、より好ましくは８００ｎｍ以下、さらに好ましくは７００ｎｍ以下、特に好ましくは６５０ｎｍ以下である。細孔径が５ｎｍ以下であると、分離できる抗体タンパク質の分子量が低くなる傾向にある。また細孔径が１０００ｎｍ以上であると、当該膜状基材の表面積が少なくなり、不純物の結合容量が小さくなる傾向にある。
【００６０】
また、実施の形態に係るカチオン交換担体は、基材表面上に、基材表面を被覆するカチオン交換基を有する高分子を有していてもよい。高分子は、共重合体であってもよい。
【００６１】
膜状基材に共重合体を固定する方法として、グラフト重合がある。グラフト重合法としては、放射線グラフト重合法や、表面リビングラジカル重合法が挙げられる。
【００６２】
放射線グラフト重合法で膜状基材表面に共重合体を固定する場合、膜状基材にラジカルを生成させるためにはいかなる手段も採用しうるが、膜状基材に電離性放射線を照射すると、膜状基材全体に均一なラジカルが生成するため、好適である。電離性放射線の種類としては、γ線、電子線、β線、及び中性子線等が利用できるが、工業規模での実施には電子線又はγ線が好ましい。電離性放射線はコバルト６０、ストロンチウム９０、及びセシウム１３７などの放射性同位体から、又はＸ線撮影装置、電子線加速器及び紫外線照射装置等により得られる。
【００６３】
電離性放射線の照射線量は、１ｋＧｙ以上１０００ｋＧｙ以下が好ましく、より好ましくは２ｋＧｙ以上５００ｋＧｙ以下、さらに好ましくは５ｋＧｙ以上２００ｋＧｙ以下である。照射線量が１ｋＧｙ未満では、ラジカルが均一に生成しにくくなる傾向にある。また、照射線量が１０００ｋＧｙを超えると、膜状基材の物理的強度の低下を引き起こす傾向にある。
【００６４】
電離性放射線の照射によるグラフト重合法には、一般に膜状基材にラジカルを生成した後、次いでラジカルを反応性化合物と接触させる前照射法と、膜状基材を反応性化合物と接触させた状態で膜状基材にラジカルを生成させる同時照射法と、に大別される。実施の形態においては、いかなる方法も適用しうるが、オリゴマーの生成が少ない前照射法が好ましい。
【００６５】
グラフト重合によるグラフト鎖の結合率（グラフト率）は、基材膜の密度により、最適値が異なりうる。基材膜がポリエチレンの時は、吸着容量の観点から２０％以上が好ましく、より好ましくは２５％以上、更に好ましくは３０％以上である。また、力学的に安定な強度を確保するという観点から、好ましくは２００％以下、より好ましくは１５０％以下、更に好ましくは１００％以下である。グラフト率は以下の式によって表わされる。
ｄｇ（％）＝（ｗ１−ｗ０）／ｗ０×１００
ここで、ｗ０は反応前の多孔質中空糸の重量、ｗ１はグラフト鎖が導入された多孔質中空糸の重量である。
【００６６】
基材膜がポリフッ化ビニリデンの時は、ポリフッ化ビニリデンはポリエチレンに比べ、密度が高いため、適したグラフト率がポリエチレンの時と異なる。基材膜がポリフッ化ビニリデンの時は、吸着容量の観点から５％以上が好ましく、より好ましくは１０％以上、更に好ましくは１５％以上である。また、力学的に安定な強度を確保するという観点から、好ましくは１００％以下、より好ましくは８０％以下、更に好ましくは７０％以下である。
【００６７】
また、カチオン交換基を有する共重合体が膜状基材に固定されていることにより、膜状基材表面上にカチオン交換基が分布している場合に比べ、立体的に吸着することが可能となる。特にグラフト構造を有するときにその効果は顕著にみられる。そのため、抗体単量体に比べ、抗体凝集体はより強固に吸着され、抗体単量体を高い純度で得ることが可能となる。
【００６８】
共重合体は、その組成に、カチオン交換基を有するモノマー単位に加え、電荷を持たない中性のモノマー単位を含むことが好ましい。そのような中性のモノマー単位として、アクリルアミド類、メタアクリルアミド類、アクリレート類、及びメタアクリレート類の化合物等があり、より具体的には、２−ヒドロキシエチルメタクリレート、及びブチルメタクリレート等が挙げられる。
【００６９】
抗体単量体と抗体凝集体の吸着力の差別化の観点から、共重合体における、カチオン交換基を有するモノマー単位の質量割合は、中性のモノマー単位の質量割合よりも低いことが好ましく、より好ましくは２倍以上であり、更に好ましくは３倍以上である。質量割合をこのようにすることによって、カチオン交換基同士の距離を離し、より選択的に、不純物である抗体凝集体を吸着しやすくなると考えられる。
【００７０】
実施の形態において、共重合体は、カチオン交換基を有するモノマー及び中性モノマーのみから成り立っているため、カチオン交換基を有するモノマーの質量、及び中性モノマーの質量は、以下のように求めることが出来る。
（カチオン交換基モノマー質量）＝
（カチオン交換基密度×担体体積×カチオン交換基モノマー分子量）
（中性モノマーの質量）＝
（カチオン交換担体質量―基材担体質量―カチオン交換基モノマー質量）
これらの質量比により、カチオン交換基を有するモノマー単位の質量割合、及び中性のモノマー単位の質量割合を求めることができる。
【００７１】
さらに、共重合体は、その組成に、中性モノマーとして、親水性及び／又は疎水性の化合物をモノマー単位として１又は複数種類含んでいてもよい。これらの親水性及び／又は疎水性モノマーを、カチオン交換基を有するモノマーと共重合させることにより、不純物の吸着力を向上させ得る。
【００７２】
抗体は疎水性相互作用の性質を有するため、膜状基材の疎水性が強いと、疎水性相互作用により、抗体が膜状基材に吸着され、目的の抗体の回収率が低下することがある。この現象に対し、共重合体の重合時に親水性モノマーを導入することにより、抗体が膜状基材へ吸着することを防ぐことが出来る。そのような親水性モノマーとして、アクリルアミド、メタアクリルアミド、並びにジメチルアクリルアミド、ジメチルメタクリルアミド、ジエチルアクリルアミド、ジエチルメタクリルアミド、Ｎ−メチルアクリルアミド、Ｎ−メチルメタクリルアミド、Ｎ−エチルアクリルアミド、Ｎ−エチルメタクリルアミド、Ｎ−イソプロピルアクリルアミド、Ｎ−イソプロピルメタクリルアミド、Ｎ−（ヒドロキシメチル）アクリルアミド、Ｎ−（ヒドロキシメチル）メタクリルアミド、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アクリルアミド、及びＮ−（２−ヒドロキシエチル）メタクリルアミド等の（メタ）アクリルアミド化合物が挙げられる。あるいは、上記のような親水性モノマーとして、アクリレート、メタアクリレート、並びに２−ヒドロキシエチルアクリレート、２−ヒドロキシエチルメタクリレート、３−ヒドロキシプロピルアクリレート、３−ヒドロキシプロピルメタクリレート、４−ヒドロキシブチルアクリレート、４−ヒドロキシブチルメタクリレート、２−（ジメチルアミノ）エチルアクリレート、及び２−（ジメチルアミノ）エチルメタクリレート等の（メタ）アクリレート化合物が挙げられる。
【００７３】
あるいは、共重合体の重合時に疎水性モノマーを導入し、疎水性相互作用を活かすことにより抗体単量体と抗体凝集体の吸着選択性を上げることもできる。一般に抗体凝集体は、抗体単量体よりも強い疎水性相互作用を示す。適した疎水性モノマーを選択することにより、抗体単量体と抗体凝集体の疎水性相互作用の差を顕著にし、高い選択性を実現し得る。そのような疎水性モノマーとして、スチレン類、アルキルアクリルアミド類、アルキルメタクリルアミド類、アルキルアクリレート類、及びアルキルメタクリレート類等があるが、力学的強度の観点から、アルキルアクリルアミド類、アルキルメタクリルアミド類、アルキルアクリレート類、及びアルキルメタクリレート類が望ましい。アルキル基に関しては、炭素数４以上の直鎖又は分岐状のアルキル基であれば、抗体に対し、実質的に疎水性相互作用を発現しうる。
【００７４】
また、共重合体は、モノマー単位中に重合性官能基を２つ以上含むモノマー単位を含んでいてもよく、このようなモノマーを共重合させることにより、架橋構造が構築される。架橋構造の利点は、グラフト鎖の立ち上がりを抑制し、通液圧を抑制させるという点にある。
【００７５】
モノマー中に重合性官能基を２つ以上含むモノマーは、特に限定されないが、重合性官能基としてはオレフィンが挙げられる。そのようなモノマーとして、（メタ）アクリルアミド系モノマーや（メタ）アクリレート系モノマー、又はそれらの官能基が混合したモノマーが挙げられる。（メタ）アクリルアミド系モノマーとしては、Ｎ，Ｎ’−メチレンビスアクリルアミド、Ｎ，Ｎ’−エチレンビスアクリルアミド、Ｎ，Ｎ’−プロピレンビスアクリルアミド、Ｎ，Ｎ’−（１，２−ジヒドロキシエチレン）ビスアクリルアミド、Ｎ，Ｎ’−メチレンビスメタクリルアミド、Ｎ，Ｎ’−エチレンビスメタクリルアミド、Ｎ，Ｎ’−プロピレンビスメタクリルアミド、及びＮ，Ｎ’−（１，２−ジヒドロキシエチレン）ビスメタクリルアミド等が挙げられる。
【００７６】
（メタ）アクリレート系モノマーとしては、エチレングリコールジアクリレート、１，３−ブタンジオールジアクリレート、１，４−ブタンジオールジアクリレート、１，５−ペンタンジオールジアクリレート、１，６−ヘキサンジオールジアクリレート、１，９−ノナンジオールジアクリレート、１，１０−デカンジオールジアクリレート、ネオペンチルグリコールジアクリレート、ジエチレングリコールジアクリレート、トリエチレングリコールジアクリレート、ポリエチレングリコールジアクリレート、ジプロピレングリコールジアクリレート、トリプロピレングリコールジアクリレート、２−ヒドロキシ−１，３−プロパンジオールジアクリレート、４、４’−チオジベンゼンチオールジアクリレート、トリメチロールプロパントリアクリレート、ペンタエリトリトールテトラアクリレート、エチレングリコールジメタクリレート、１，３−ブタンジオールジメタクリレート、１，４−ブタンジオールジメタクリレート、１，５−ペンタンジオールジメタクリレート、１，６−ヘキサンジオールジメタクリレート、１，９−ノナンジオールジメタクリレート、１，１０−デカンジオールジメタクリレート、ネオペンチルグリコールジメタクリレート、ジエチレングリコールジメタクリレート、トリエチレングリコールジメタクリレート、ポリエチレングリコールジメタクリレート、ジプロピレングリコールジメタクリレート、トリプロピレングリコールジメタクリレート、２−ヒドロキシ−１，３−プロパンジオールジメタクリレート、４、４’−チオジベンゼンチオールジメタクリレート、トリメチロールプロパントリメタクリレート、及びペンタエリトリトールテトラメタクリレート等が挙げられる。
【００７７】
また、実施の形態に係るカチオン交換担体では、基材表面上にカチオン交換基前駆体モノマーをモノマー単位として有する共重合体を製造し、その後、カチオン交換基前駆体をカチオン交換基に変換してもよい。
【００７８】
そのようなカチオン交換基前駆体の官能基として、エポキシ基や、エステル基を有するが挙げられ、それらの官能基を有するカチオン交換基前駆体モノマーを基材上に単独重合又は共重合して、官能基をカチオン交換基に変換によりカチオン交換担体を得てもよい。
【００７９】
実施の形態に係るカチオン交換クロマトグラフィー担体が備える共重合体は、例えば共有結合により膜状基材に固定されている。上述したように、当該担体は、少なくとも弱カチオン交換基を有し、かつ、最終的に３０ｍｍｏｌ／Ｌよりも高い密度になるように１又は複数種類のカチオン交換基を有しておればよい。
【００８０】
カチオン交換クロマトグラフィー工程における抗体ロード量は、不純物を除去できれば特に限定を受けないが、効率的な精製という観点から、担体１ｍＬあたり０．３ｇ以上が好ましく、より好ましくは０．５ｇ以上、更に好ましくは０．７ｇ以上、更に更に好ましくは０．８ｇ以上、特に好ましくは１ｇ以上である。
【００８１】
実施の形態に係るアニオン交換クロマトグラフィー担体は、膜状でもよく、あるいはビーズ状でもよく、特に限定を受けないが、膜状であれば、高流速が可能であり、より効率の良い精製工程の構築が可能である。
【００８２】
アニオン交換クロマトグラフィー担体の膜状基材の材料は、特に限定されないが、機械的性質保持のために、ポリオレフィン系重合体から構成されていることが好ましい。ポリオレフィン系重合体としては、例えば、エチレン、プロピレン、ブチレン及びフッ化ビニリデンなどのオレフィン単独重合体、該オレフィンの２種以上の共重合体、又は１種もしくは２種以上のオレフィンと、パーハロゲン化オレフィンと、の共重合体などが挙げられる。パーハロゲン化オレフィンとしては、テトラフルオロエチレン及び／又はクロロトリフルオロエチレンなどが挙げられる。これらの中でも、機械的強度に優れ、かつタンパク質などの夾雑物の高い吸着容量が得られる点で、ポリエチレン又はポリフッ化ビニリデンが好ましい。
【００８３】
膜状基材は、例えば複数の細孔を有する。細孔径は、特に限定されないが、例えば５〜１０００ｎｍであり、好ましくは１０ｎｍ以上、より好ましくは５０ｎｍ以上、さらに好ましくは１００ｎｍ以上、特に好ましくは１５０ｎｍ以上、あるいは４００ｎｍ以上である。また、基材膜表面積の観点から、好ましくは９００ｎｍ以下、より好ましくは８００ｎｍ以下、さらに好ましくは７００ｎｍ以下、特に好ましくは６５０ｎｍ以下である。細孔径が５ｎｍ以下であると、分離できる抗体タンパク質の分子量が低くなる傾向にある。また細孔径が１０００ｎｍ以上であると、当該膜状基材の表面積が少なくなり、不純物の結合容量が小さくなる傾向にある。
【００８４】
アニオン交換クロマトグラフィー担体は、基材と、該基材を被覆するアニオン交換基を有する高分子と、から成る構造であってもよい。該アニオン交換基を有する高分子がモノマー単位として、アクリレート及び／又はメタクリレートを含むと、疎水性が向上し、不純物除去性が向上する傾向にある。不純物除去性の観点から、該高分子におけるアクリレートモノマー及び／又はメタクリレートモノマーの質量割合は２０%以上が好ましく、より好ましくは３０％以上、更にこのましくは４０％以上、更に更に好ましくは５０％以上、特に好ましくは６０％以上であり、１００％であってもよい。該高分子は、アクリルアミドのみからなる高分子よりも疎水性が向上し、不純物除去性が向上する。また、疎水性を向上させる方法として、スチレン等を導入することもあるが、本実施の形態に係る低い電気伝導度の抗体溶液では、スチレン等では疎水性が強く、効率的に不純物を除去できない傾向にあり、アクリレート及びメタクリレートをモノマー単位として含む高分子が適している。
【００８５】
実施の形態に係るアニオン交換クロマオグラフィー担体が、基材と、該基材を被覆するアニオン交換基を有する高分子と、から成る場合、該高分子が基材に共有結合したグラフト構造であってもよい。グラフト鎖にアニオン交換基が固定されることにより、アニオン交換基が立体的に配置され、不純物を立体的に吸着し、より効率的に除去できる傾向にある。
【００８６】
グラフト構造を形成させる方法として、カチオン交換担体と同様に、グラフト重合がある。グラフト重合法としては、放射線グラフト重合法や、表面リビングラジカル重合法が挙げられる。具体的な方法も上述のカチオン交換担体の製法と同様である。
【００８７】
アニオン交換担体がグラフト構造を有する場合、グラフト率は、１０％以上２５０％以下であることが好ましく、より好ましくは１０％以上、１５０％以下であり、更に好ましくは、２０％以上１００％以下である。グラフト率が１０％以上であることにより、タンパク質の吸着容量が著しく高くなり、グラフト率が２５０％以下であると、実用的な物理強度が得られる。
【００８８】
実施の形態に係るアニオン交換体のグラフト鎖は、例えばメタクリル酸グリシジルが挙げられる。メタクリル酸グリシジルをグラフト重合後に、エポキシ基とアミンを反応させ、アニオン交換基を導入することが可能である。
【００８９】
実施の形態に係るアニオン交換リガンドは、十分な不純物除去性を示せば特に限定を受けないが、主成分がアミノ基であることが好ましい。また、アミノ基上の官能基としては、特に限定を受けず、強アニオン交換基や弱アニオン交換基があるが、弱アニオン交換基が好ましい。強アニオン交換基としては、トリメチルアミノ基、トリエチルアミノ基等を有する４級アンモニウムがある。弱アニオン交換基としては３級アミンが好ましく、また、適度に疎水性を持つといった観点から、炭素数が２以上のアルキル基を２つ以上有することが好ましく、ジエチルアミノ基、ジプロピルアミノ基、ジイソプロピルアミノ基、ジブチルアミノ基等があるが、ジエチルアミノ基が好ましい。
【００９０】
実施の形態において、カチオン交換クロマトグラフィー工程及びアニオン交換クロマトグラフィー工程の前に、デプスフィルターによる処理を行うこともできる。該処理により、タンパク溶液の荒精製が行われることにより、カチオン交換クロマトグラフィー工程及びアニオン交換クロマトグラフィー工程の処理容量が大きく向上する傾向にある。一般に、デプスフィルターはカチオン交換担体やアニオン交換担体に対して安価であるため、低コスト化につながる。
【００９１】
そのようなデプスフィルターとして、Ｅｍｐｈａｚｅ（登録商標）  ＡＥＸ  Ｈｙｂｒｉｄ  Ｐｕｒｉｆｉｅｒ（３Ｍ社）やＺｅｔａ  Ｐｌｕｓ（登録商標、３Ｍ社）等がある。
【００９２】
実施の形態において、一連のプロセスの中に活性炭による処理を導入することも可能である。しかし、活性炭処理により、目的物質である抗体の更なる純度の向上が図れるが、目的物質の抗体も吸着してしまうため、抗体回収率が低下し、好ましくない。
【００９３】
活性炭を用いない場合、先に記載した適度の疎水性を有するアニオン交換体を用いて精製することにより、又は、デプスフィルターによる処理を加えることにより、高い純度で、目的物質の抗体を回収できる傾向にある。      
【実施例】
【００９４】
以下に、実施の形態を実施例に基づいて更に詳しく説明するが、これらは実施の形態を何ら限定するものではない。
（カチオン交換膜の製造例）
以下の手順で、放射線グラフト重合によって、カルボン酸基を有する中空糸状のカチオン交換膜を製造した。２−ヒドロキシエチルメタクリレート３．０８ｇ、ブチルメタクリレート１．５４ｇ、メタクリル酸０．５７ｇを５０容量％ｔ−ブチルアルコール水溶液２４０ｍＬに溶解させ、３０分間窒素バブリングしたものを反応液として用いた。外径３．０ｍｍ、内径２．０ｍｍ、平均孔径０．２５μｍのポリエチレン多孔質中空糸３．００ｇ（１５ｃｍ、１５本）を密閉容器に入れて、容器内の空気を窒素で置換した。その後、容器の外側からドライアイスで冷却しながら、γ線２５ｋＧｙを照射し、ラジカルを発生させた。得られたラジカルを有するポリエチレン多孔質中空糸をガラス容器に移し、２００Ｐａ以下に減圧することにより、反応管内の酸素を除いた。これに４０℃に調整した上記反応液を、１４０ｍＬ導入し、１６時間静置した。その後、中空糸をメタノールで洗浄し、真空乾燥機中で真空乾燥させ、５．３１ｇ、グラフト率７７％のカチオン交換膜１を得た。【００９５】
得られた中空糸１本の体積を測定したところ、１．０５ｍＬであった。この中空糸をエタノールにより親水化し、水に置換した。水を除去した後、０．１ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム水溶液を１０ｍＬ加えた。１時間放置した後、水酸化ナトリウム水溶液を取り出し、純水１０ｍＬを加えた。更に１時間放置した後、純水を回収することにより、膜内に残った水酸化ナトリウムを回収した。回収した水酸化ナトリウム溶液を統合し、０．１ｍｏｌ／Ｌ塩酸により滴定をおこなったところ、中和に７．９３ｍＬ要した。ブランクが９．７７ｍＬであったことから、水酸化ナトリウムと反応した、膜が有する弱カチオン交換基は１８４μｍｏｌであることが分かった。これを測定した体積で除すると弱カチオン交換基密度を求めることが出来、カチオン交換基密度は１７５ｍｍｏｌ／Ｌであった。これをモジュール化（膜体積０．２５ｍＬ）し、カチオン交換膜の製造例に係るカチオン交換膜とした。また、カチオン交換基モノマー単位及び電荷を持たない中性モノマー単位の質量割合は、それぞれ、０．１０３及び０．８９７であった。【００９６】
（凝集体の定量例）
下記実施例で得られた抗体溶液は、下記の条件により、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ：Ｓｉｚｅ  Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）装置を用いて測定した。
カラム：ＡＣＱＵＩＴＹ  ＹＰＬＣ  ＢＥＨ２００  ＳＥＣ１．７μｍ（Ｗａｔｅｒｓ社製）
カラム温度：３０℃
システム：ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ  Ｈ  ＣＬＡＳＳ（ｗａｔｅｒｓ社製）
移動相：０．１ｍｏｌ／Ｌリン酸水素二ナトリウム＋０．２ｍｏｌ／Ｌ Ｌ（＋）−アルギニン水溶液（塩酸でｐＨ６．７に調整）【００９７】
図１は、上記の条件によって抗体溶液を測定して得られたクロマトチャートの例であり、それを拡大したものが図２である。図２の（１）及び（２）のピークで現れるものは抗体の凝集体であり、（３）で現れるピークは単量体である。【００９８】
（実施例１）
実施例１では、抗体タンパク質として、ＡＥ６Ｆ４抗体（ヒトモノクロナール抗体）を０．１６３ｇ／Ｌ含む培養上澄みを用い、アフィニティークロマトグラフィー、カチオン交換クロマトグラフィー、及びアニオン交換クロマトグラフィーによる一連の精製工程をバッファーの交換をせずに行った。【００９９】
（アフィニティークロマトグラフィー工程）
実施例１に係るアフィニティークロマトグラフィー工程では、流速４ｍＬ／分（３００ｃｍ／時間）で操作を行った。まず、組換えプロテインＡ担体（Ｍａｂｓｅｌｅｃｔ  ＳｕＲｅ、ＧＥヘルスケア・ジャパン）１６ｍＬを充填したカラムをリン酸緩衝液（２０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸ナトリウム＋１５０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ（ｐＨ８．０））８０ｍＬで平衡化し、抗体を含む培養上澄み２．５Ｌ添加し、抗体を吸着させた。次に、リン酸緩衝液（２０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸ナトリウム＋１５０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ（ｐＨ８．０））８０ｍＬを通液し、更にトリス／酢酸緩衝液（１００ｍｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ８．０））４８ｍＬを通液して洗浄した後、溶出液として２５ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸緩衝液（ｐＨ３．４）８０ｍＬを通液してカラムから抗体を溶出させた。溶出液に１ｍｏｌ／Ｌトリス緩衝液を加え、ｐＨを７．０に調整し、抗体溶液を得た。抗体溶液は１．７ｍＳ／ｃｍの電気伝導度を有していた。得られた抗体溶液と同じ溶液組成であり、凝集体を多く含む抗体溶液と混合することにより、後述するカチオン交換クロマトグラフィー工程に用いる抗体溶液を調整した。図３に示すように、抗体溶液の凝集体（１）の割合は０．７２％であり、凝集体（２）の割合は１．０４％、単量体の割合は９８．２４％であった。また、ＨＣＰの含有量は２９８ｐｐｍ、プロテインＡの含有量は３ｐｐｍであった。【０１００】
ＨＣＰはＣＹＧＮＵＳ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＩＥＳ社のＣＨＩＮＥＳＥ  ＨＡＭＳＴＥＲ  ＯＶＡＲＹ  Ｈｏｓｔ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ−３ｒｄ  Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔを用い、プロテインＡはＣＹＧＮＵＳ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＩＥＳ社のＰＲＯＴＥＩＮ  Ａ  ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔを用い、ＵＶ測定により定量した。【０１０１】
（カチオン交換クロマトグラフィー工程）
実施例１に係るカチオン交換クロマトグラフィー工程では、製造例で製造したカチオン交換膜１を用いた。カチオン交換膜に加えた抗体溶液の量は８２ｍＬ（３．６７ｍｇ／ｍＬの濃度）であり、流速は１．５ｍＬ／分、温度は２５℃であった。カチオン交換膜１に抗体溶液を流した後、抗体溶液と同じ組成のバッファー（ｐＨ７．０）を流速１．５ｍＬ／分で１０ｍＬ通液し、カチオン交換膜１を洗浄した。フロースルー工程と洗浄工程で、合計９２ｍＬの溶液を回収した。回収した溶液を、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ：Ｓｉｚｅ  Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）にかけたところ、凝集体成分、ＨＣＰ及びプロテインＡの含有量は減少していた。結果を図３に示す。【０１０２】
（アニオン交換クロマトグラフィー工程）
実施例１に係るアニオン交換工程では、体積１ｍＬの強アニオン交換基を有するアニオン交換担体（Ｃａｐｔｏ  Ｑ、ＧＥ  ヘルスケア・ジャパン）を用いた。カチオン交換工程で回収した抗体溶液に１ｍｏｌ／Ｌのトリス緩衝液を加えてｐＨ７．８にしたところ電気伝導度は１．８ｍＳ／ｃｍであった。その後、抗体溶液をＣａｐｔｏ  Ｑに接触させた。Ｃａｐｔｏ  Ｑに加えた抗体溶液の量は８２ｍＬ（２．９６ｍｇ／ｍＬの濃度）であり、流速は１．０ｍＬ／分、温度は２５℃であった。Ｃａｐｔｏ  Ｑに抗体溶液を流した後、抗体溶液と同じ組成のバッファー（ｐＨ７．８）を流速１．０ｍＬ／分で５ｍＬ通液し、Ｃａｐｔｏ  Ｑを洗浄した。フロースルー工程と洗浄工程で、合計８７ｍＬの溶液を回収した。回収した溶液を、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ：Ｓｉｚｅ  Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）及びＥＬＩＳＡによる分析したところ、凝集体成分、ＨＣＰ及びプロテインＡの含有量は減少していた。結果を図３に示す。【０１０３】
（実施例２）
実施例２では、抗体タンパク質として、ＡＥ６Ｆ４抗体（ヒトモノクロナール抗体）を０．１６３ｇ／Ｌ含む培養上澄みを用い、アフィニティークロマトグラフィー、アニオン交換クロマトグラフィー、及びカチオン交換クロマトグラフィーによる一連の精製工程をバッファーの交換をせずに行った。【０１０４】
（アフィニティークロマトグラフィー工程）
実施例２に係るアフィニティークロマトグラフィー工程では、流速４ｍＬ／分（３００ｃｍ／時間）で操作を行った。まず、Ｍａｂｓｅｌｅｃｔ  ＳｕＲｅ１６ｍＬを充填したカラムをリン酸緩衝液（２０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸ナトリウム＋１５０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ（ｐＨ８．０））８０ｍＬで平衡化し、抗体を含む培養上澄み２．５Ｌ添加し、抗体を吸着させた。次に、リン酸緩衝液（２０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸ナトリウム＋１５０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ（ｐＨ８．０））８０ｍＬを通液し、更にトリス／酢酸緩衝液（１００ｍｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ８．０））４８ｍＬを通液して洗浄した後、溶出液として２５ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸緩衝液（ｐＨ３．４）８０ｍＬを通液してカラムから抗体を溶出させた。溶出液に１ｍｏｌ／Ｌトリス緩衝液を加え、ｐＨを７．８に調整し、抗体溶液を得た。得られた抗体溶液の電気伝導度は１．８ｍＳ／ｃｍであった。得られた抗体溶液と同じ溶液組成であり、凝集体を多く含む抗体溶液と混合することにより、後述するアニオン交換クロマトグラフィー工程に用いる抗体溶液を調整した。図３に示すように、抗体溶液の凝集体（１）の割合は０．８３％であり、凝集体（２）の割合は１．１２％、単量体の割合は９８．０５％であった。また、ＨＣＰの含有量は３１７ｐｐｍ、プロテインＡの含有量は３ｐｐｍであった。【０１０５】
（アニオン交換クロマトグラフィー工程）
実施例２に係るアニオン交換工程では、体積１ｍＬのＣａｐｔｏ  Ｑ（ＧＥ  ヘルスケア・ジャパン）を用い、抗体溶液を精製した。Ｃａｐｔｏ  Ｑに加えた抗体溶液の量は８１ｍＬ（３．７２ｍｇ／ｍＬの濃度）であり、流速は１．０ｍＬ／分、温度は２５℃であった。Ｃａｐｔｏ  Ｑに抗体溶液を流した後、抗体溶液と同じ組成のバッファー（ｐＨ７．８）を流速１．０ｍＬ／分で５ｍＬ通液し、Ｃａｐｔｏ  Ｑを洗浄した。フロースルー工程と洗浄工程で、合計８６ｍＬの溶液を回収した。回収した溶液を、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ：Ｓｉｚｅ  Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）及びＥＬＩＳＡにより分析したところ、凝集体成分、ＨＣＰ及びプロテインＡの含有量は減少していた。結果を図３に示す。【０１０６】
（カチオン交換クロマトグラフィー工程）
実施例２に係るカチオン交換クロマトグラフィー工程では、カチオン交換膜の製造例で製造したカチオン交換膜１を用いた。アニオン交換工程で回収した抗体溶液に酢酸を加え、ｐＨ７．０に調整したところ、電気伝導度は１．９ｍＳ／ｃｍであった。その後、カチオン交換膜１に接触させた。加えた抗体溶液の量は８０ｍＬ（３．３３ｍｇ／ｍＬの濃度）であり、流速は１．５ｍＬ／分、温度は２５℃であった。カチオン交換膜に抗体溶液を流した後、抗体溶液と同じ組成のバッファー（ｐＨ７．０）を流速１．５ｍＬ／分で１０ｍＬ通液し、カチオン交換膜１を洗浄した。フロースルー工程と洗浄工程で、合計９０ｍＬの溶液を回収した。回収した溶液を、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ：Ｓｉｚｅ  Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）及びＥＬＩＳＡにより分析したところ、凝集体成分、ＨＣＰ及びプロテインＡの含有量は減少していた。結果を図３に示す。【０１０７】
（実施例３）
実施例３では、抗体タンパク質として、ＡＥ６Ｆ４抗体（ヒトモノクロナール抗体）を０．１６３ｇ／Ｌ含む培養上澄みを用い、アフィニティークロマトグラフィー、カチオン交換クロマトグラフィー、及びアニオン交換クロマトグラフィーによる一連の精製工程をバッファーの交換をせずに行った。【０１０８】
（アフィニティークロマトグラフィー工程）
実施例３に係るアフィニティークロマトグラフィー工程では、流速４ｍＬ／分（３００ｃｍ／時間）で操作を行った。まず、Ｍａｂｓｅｌｅｃｔ  ＳｕＲｅ１６ｍＬを充填したカラムをリン酸緩衝液（２０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸ナトリウム＋１５０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ（ｐＨ８．０））８０ｍＬで平衡化し、抗体を含む培養上澄み２．５Ｌ添加し、抗体を吸着させた。次に、リン酸緩衝液（２０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸ナトリウム＋１５０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ（ｐＨ８．０））８０ｍＬを通液し、更にトリス／酢酸緩衝液（１００ｍｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ８．０））４８ｍＬを通液して洗浄した後、溶出液として２５ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸緩衝液（ｐＨ３．４）８０ｍＬを通液してカラムから抗体を溶出させた。溶出液に１ｍｏｌ／Ｌトリス緩衝液を加え、ｐＨを７．０に調整し、抗体溶液を得た。得られた抗体溶液は１．７ｍＳ／ｃｍの電気伝導度を有していた。得られた抗体溶液と同じ溶液組成であり、凝集体を多く含む抗体溶液と混合することにより、後述するカチオン交換クロマトグラフィー工程に用いる抗体溶液を調整した。図３に示すように、抗体溶液の凝集体（１）の割合は０．７９％であり、凝集体（２）の割合は１．１６％、単量体の割合は９８．０５％であった。また、ＨＣＰの含有量は３９０ｐｐｍ、プロテインＡの含有量は３ｐｐｍであった。【０１０９】
（カチオン交換クロマトグラフィー工程）
実施例３に係るカチオン交換クロマトグラフィー工程では、カチオン交換膜の製造例で製造したカチオン交換膜１を用いた。カチオン交換膜１に加えた抗体溶液の量は８２ｍＬ（３．７１ｍｇ／ｍＬの濃度）であり、流速は１．５ｍＬ／分、温度は２５℃であった。カチオン交換膜に抗体溶液を流した後、抗体溶液と同じ組成のバッファー（ｐＨ７．０）を流速１．５ｍＬ／分で１０ｍＬ通液し、カチオン交換膜１を洗浄した。フロースルー工程と洗浄工程で、合計９２ｍＬの溶液を回収した。回収した溶液をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ：Ｓｉｚｅ  Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）及びＥＬＩＳＡにより分析したところ、凝集体成分、ＨＣＰ及びプロテインＡの含有量は減少していた。結果を図３に示す。【０１１０】
（アニオン交換クロマトグラフィー工程）
実施例３に係るアニオン交換工程では、体積０．２５ｍＬの中空糸型アニオン交換吸着膜（ＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄ、旭化成メディカル）を用いた。ＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄは、中空糸膜内部のグラフト鎖に固定されたジエチルアミノ基（ＤＥＡ）リガンドが、負に帯電した物質を吸着する。カチオン交換工程で回収した抗体溶液に１ｍｏｌ／Ｌのトリス緩衝液を加えてｐＨ７．８にしたところ電気伝導度は１．８ｍＳ／ｃｍであった。その後、抗体溶液をＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄに接触させた。ＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄに加えた抗体溶液の量は８２ｍＬ（２．９９ｍｇ／ｍＬの濃度）であり、流速は１．５ｍＬ／分、温度は２５℃であった。ＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄに抗体溶液を流した後、抗体溶液と同じ組成のバッファー（ｐＨ７．８）を流速１．５ｍＬ／分で１０ｍＬ通液し、ＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄを洗浄した。フロースルー工程と洗浄工程で、合計９２ｍＬの溶液を回収した。回収した溶液をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ：Ｓｉｚｅ  Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）及びＥＬＩＳＡにより分析したところ、凝集体成分、ＨＣＰ及びプロテインＡの含有量は減少していた。結果を図３に示す。【０１１１】
（実施例４）
実施例４では、抗体タンパク質として、ＡＥ６Ｆ４抗体（ヒトモノクロナール抗体）を０．１６３ｇ／Ｌ含む培養上澄みを用い、アフィニティークロマトグラフィー、アニオン交換クロマトグラフィー、及びカチオン交換クロマトグラフィーによる一連の精製工程をバッファーの交換をせずに行った。【０１１２】
（アフィニティークロマトグラフィー工程）
実施例４に係るアフィニティークロマトグラフィー工程では、流速４ｍＬ／分（３００ｃｍ／時間）で操作を行った。まず、Ｍａｂｓｅｌｅｃｔ  ＳｕＲｅ１６ｍＬを充填したカラムをリン酸緩衝液（２０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸ナトリウム＋１５０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ（ｐＨ８．０））８０ｍＬで平衡化し、抗体を含む培養上澄み２．５Ｌ添加し、抗体を吸着させた。次に、リン酸緩衝液（２０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸ナトリウム＋１５０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ（ｐＨ８．０））８０ｍＬを通液し、更にトリス／酢酸緩衝液（１００ｍｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ８．０））４８ｍＬを通液して洗浄した後、溶出液として２５ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸緩衝液（ｐＨ３．４）８０ｍＬを通液してカラムから抗体を溶出させた。溶出液に１ｍｏｌ／Ｌトリス緩衝液を加え、ｐＨを７．８に調整し、抗体溶液を得た。得られた抗体溶液の電気伝導度は１．８ｍＳ／ｃｍであった。得られた抗体溶液と同じ溶液組成であり、凝集体を多く含む抗体溶液と混合することにより、後述するアニオン交換クロマトグラフィー工程に用いる抗体溶液を調整した。図３に示すように、抗体溶液の凝集体（１）の割合は０．７８％であり、凝集体（２）の割合は１．２１％、単量体の割合は９８．０１％であった。また、ＨＣＰの含有量は３６５ｐｐｍ、プロテインＡの含有量は３ｐｐｍであった。【０１１３】
（アニオン交換クロマトグラフィー工程）
実施例４に係るアニオン交換工程では、体積０．２５ｍＬのＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄ（旭化成メディカル）を用いた。ＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄに加えた抗体溶液の量は８０ｍＬ（３．６９ｍｇ／ｍＬの濃度）であり、流速は１．５ｍＬ／分、温度は２５℃であった。ＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄに抗体溶液を流した後、抗体溶液と同じ組成のバッファー（ｐＨ７．８）を流速１．５ｍＬ／分で１０ｍＬ通液し、ＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄを洗浄した。フロースルー工程と洗浄工程で、合計９０ｍＬの溶液を回収した。回収した溶液をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ：Ｓｉｚｅ  Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）及びＥＬＩＳＡにより分析したところ、凝集体成分、ＨＣＰ及びプロテインＡの含有量は減少していた。結果を図３に示す。【０１１４】
（カチオン交換クロマトグラフィー工程）
実施例４に係るカチオン交換クロマトグラフィー工程では、カチオン交換膜の製造例で製造したカチオン交換膜１を用いた。アニオン交換工程で得られた抗体溶液に酢酸を加え、ｐＨ７．０に調整したところ、電気伝導度は１．９ｍＳ／ｃｍであった。その後、抗体溶液をカチオン交換膜１に接触させた。加えた抗体溶液の量は８０ｍＬ（３．１７ｍｇ／ｍＬの濃度）であり、流速は１．５ｍＬ／分、温度は２５℃であった。抗体溶液を流した後、抗体溶液と同じ組成のバッファー（ｐＨ７．０）を流速１．５ｍＬ／分で１０ｍＬ通液し、カチオン交換膜１を洗浄した。フロースルー工程と洗浄工程で、合計９０ｍＬの溶液を回収した。回収した溶液をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ：Ｓｉｚｅ  Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）及びＥＬＩＳＡにより分析したところ、凝集体成分、ＨＣＰ及びプロテインＡの含有量は減少していた。結果を図３に示す。【０１１５】
（実施例５）
実施例５では、抗体タンパク質として、ＡＥ６Ｆ４抗体（ヒトモノクロナール抗体）を０．１６３ｇ／Ｌ含む培養上澄みを用い、アフィニティークロマトグラフィー、カチオン交換クロマトグラフィー、及びアニオン交換クロマトグラフィーの一連の精製工程をバッファーの交換をせずに行った。アニオン交換クロマトグラフィー工程においては、担体体積あたり４ｇ以上の抗体をロードした。【０１１６】
（アフィニティークロマトグラフィー工程）
実施例５に係るアフィニティークロマトグラフィー工程では、流速２０ｍＬ／分（２３０ｃｍ／時間）で操作を行った。まず、Ｍａｂｓｅｌｅｃｔ  ＳｕＲｅ５８ｍＬを充填したカラムをリン酸緩衝液（２０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸ナトリウム＋１５０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ（ｐＨ８．０））３００ｍＬで平衡化し、抗体を含む培養上澄み７Ｌ添加し、抗体を吸着させた。次に、リン酸緩衝液（２０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸ナトリウム＋１５０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ（ｐＨ８．０））３００ｍＬを通液し、更にトリス／酢酸緩衝液（１００ｍｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ８．０））１８０ｍＬを通液して洗浄した後、溶出液として２５ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸緩衝液（ｐＨ３．４）３６０ｍＬを通液してカラムから抗体を溶出させた。溶出液に１ｍｏｌ／Ｌトリス緩衝液を加え、ｐＨを７．０に調整し、抗体溶液を得た。得られた抗体溶液は１．７ｍＳ／ｃｍの電気伝導度を有していた。同じ操作を全部で２回行い、それぞれの溶出液を統合した。得られた抗体溶液と同じ溶液組成であり、凝集体を多く含む抗体溶液と混合することにより、後述するカチオン交換クロマトグラフィー工程に用いる抗体溶液を調整した。抗体溶液の凝集体（１）の割合は０．５６％であり、凝集体（２）の割合は１．７９％、単量体の割合は９７．６５％であった。また、ＨＣＰの含有量は３４９ｐｐｍ、プロテインＡの含有量は４ｐｐｍであった。【０１１７】
（カチオン交換クロマトグラフィー工程）
実施例５に係るカチオン交換クロマトグラフィー工程では、カチオン交換膜１を用いた。加えた抗体溶液の量は１００ｍＬ（２．６０ｍｇ／ｍＬの濃度）であり、流速は１．５ｍＬ／分、温度は２５℃であった。カチオン交換膜１に抗体溶液を流した後、抗体溶液と同じ組成のバッファー（ｐＨ７．０）を流速１．５ｍＬ／分で１０ｍＬ通液し、カチオン交換膜１を洗浄した。フロースルー工程と洗浄工程で、合計１１０ｍＬの溶液を回収した。同じ操作を全部で５回行い、回収した溶液を統合し、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ：Ｓｉｚｅ  Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）及びＥＬＩＳＡにより分析したところ、凝集体成分、ＨＣＰ及びプロテインＡの含有量は減少していた。結果を図３に示す。【０１１８】
（アニオン交換クロマトグラフィー工程）
実施例５に係るアニオン交換工程では体積０．２５ｍＬのＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄ（旭化成メディカル）を用いた。カチオン交換工程で回収した抗体溶液に１ｍｏｌ／Ｌのトリス緩衝液を加えてｐＨ７．８にしたところ電気伝導度は１．８ｍＳ／ｃｍであった。その後、抗体溶液をＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄに接触させた。ＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄに加えた抗体溶液の量は５００ｍＬ（２．０８ｍｇ／ｍＬの濃度）であり、流速は１．５ｍＬ／分、温度は２５℃であった。ＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄに抗体溶液を流した後、抗体溶液と同じ組成のバッファー（ｐＨ７．８）を流速１．５ｍＬ／分で１０ｍＬ通液し、ＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄを洗浄した。フロースルー工程と洗浄工程で、合計５１０ｍＬの溶液を回収した。回収した溶液をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ：Ｓｉｚｅ  Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）及びＥＬＩＳＡにより分析したところ、凝集体成分、ＨＣＰ及びプロテインＡの含有量は減少していた。結果を図３に示す。【０１１９】
（実施例６）
実施例６では、アフィニティークロマトグラフィー工程の後に低ｐＨ処理によるウィルス不活化・中和を行い、カチオン交換クロマトグラフィー、及びアニオン交換クロマトグラフィーの一連の精製工程をバッファーの交換をせずに行った。【０１２０】
（アフィニティークロマトグラフィー工程）
実施例６に係るアフィニティークロマトグラフィー工程では、流速２０ｍＬ／分（２３０ｃｍ／時間）で操作を行った。まず、Ｍａｂｓｅｌｅｃｔ  ＳｕＲｅ５８ｍＬを充填したカラムをリン酸緩衝液（２０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸ナトリウム＋１５０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ（ｐＨ８．０））３００ｍＬで平衡化し、抗体を含む培養上澄み７Ｌ添加し、抗体を吸着させた。次に、リン酸緩衝液（２０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸ナトリウム＋１５０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ（ｐＨ８．０））３００ｍＬを通液し、更にトリス／酢酸緩衝液（１００ｍｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ８．０））１８０ｍＬを通液して洗浄した後、溶出液として２５ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸緩衝液（ｐＨ３．４）３６０ｍＬを通液してカラムから抗体を溶出させた。【０１２１】
溶出液に１ｍｏｌ／Ｌの塩酸を加え、ｐＨ３．０に調整し、１時間保持し、ウィルス不活化を行った。その後、１ｍｏｌ／Ｌトリス緩衝液を加え、ｐＨを７．０に調整し、抗体溶液を得た。得られた抗体溶液は３．４ｍＳ／ｃｍの電気伝導度を有していた。同じ操作を全部で２回行い、それぞれの溶出液を統合した。抗体溶液の凝集体（１）の割合は１．８６％であり、凝集体（２）の割合は２．１１％、単量体の割合は９６．０３％であった。また、ＨＣＰの含有量は４３１ｐｐｍ、プロテインＡの含有量は４ｐｐｍであった。【０１２２】
（カチオン交換クロマトグラフィー工程）
実施例６に係るカチオン交換クロマトグラフィー工程では、カチオン交換膜１を用いた。加えた抗体溶液の量は１００ｍＬ（２．４６ｍｇ／ｍＬの濃度）であり、流速は１．５ｍＬ／分、温度は２５℃であった。カチオン交換膜１に抗体溶液を流した後、抗体溶液と同じ組成のバッファー（ｐＨ７．０）を流速１．５ｍＬ／分で１０ｍＬ通液し、カチオン交換膜１を洗浄した。フロースルー工程と洗浄工程で、合計１１０ｍＬの溶液を回収した。同じ操作を全部で５回行い、回収した溶液を統合し、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ：Ｓｉｚｅ  Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）及びＥＬＩＳＡにより分析したところ、凝集体成分、ＨＣＰ及びプロテインＡの含有量は減少していた。結果を図３に示す。【０１２３】
（アニオン交換クロマトグラフィー工程）
実施例６に係るアニオン交換工程では体積０．２５ｍＬのＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄ（旭化成メディカル）を用いた。カチオン交換工程で回収した抗体溶液に１ｍｏｌ／Ｌのトリス緩衝液を加えてｐＨ７．８にしたところ電気伝導度は３．５ｍＳ／ｃｍであった。その後、抗体溶液をＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄに接触させた。ＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄに加えた抗体溶液の量は５００ｍＬ（２．０５ｍｇ／ｍＬの濃度）であり、流速は１．５ｍＬ／分、温度は２５℃であった。ＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄに抗体溶液を流した後、抗体溶液と同じ組成のバッファー（ｐＨ７．８）を流速１．５ｍＬ／分で１０ｍＬ通液し、ＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄを洗浄した。フロースルー工程と洗浄工程で、合計５１０ｍＬの溶液を回収した。回収した溶液をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ：Ｓｉｚｅ  Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）及びＥＬＩＳＡにより分析したところ、凝集体成分、ＨＣＰ及びプロテインＡの含有量は減少していた。結果を図３に示す。【０１２４】
（実施例７）
実施例７では、アフィニティークロマトグラフィー、カチオン交換クロマトグラフィー、及びアニオン交換クロマトグラフィーの一連の精製工程をバッファーの交換をせずに行い、カチオン交換工程とアニオン交換工程の間でｐＨ調整を行わず、ｐＨ７．０、７．５、８．０の３条件で実施した。【０１２５】
（アフィニティークロマトグラフィー工程）
実施例７に係るアフィニティークロマトグラフィー工程では、流速２０ｍＬ／分（２３０ｃｍ／時間）で操作を行った。まず、Ｍａｂｓｅｌｅｃｔ  ＳｕＲｅ５８ｍＬを充填したカラムをリン酸緩衝液（２０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸ナトリウム＋１５０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ（ｐＨ８．０））３００ｍＬで平衡化し、抗体を含む培養上澄み７Ｌ添加し、抗体を吸着させた。次に、リン酸緩衝液（２０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸ナトリウム＋１５０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ（ｐＨ８．０））３００ｍＬを通液し、更にトリス／酢酸緩衝液（１００ｍｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ８．０））１８０ｍＬを通液して洗浄した後、溶出液として２５ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸緩衝液（ｐＨ３．４）３６０ｍＬを通液してカラムから抗体を溶出させた。この操作を後１回行い、抗体溶液を統合した。溶出液の一部に１ｍｏｌ／Ｌトリス緩衝液を加え、ｐＨを７．０、７．５、及び８．０にそれぞれ調整した抗体溶液を得た。得られた抗体溶液の電気伝導度はそれぞれ２．１、２．２、２．２であった。得られた抗体溶液と同じ溶液組成であり、凝集体を多く含む抗体溶液と混合することにより、後述するカチオン交換クロマトグラフィー工程に用いる抗体溶液を調整した。【０１２６】
（カチオン交換クロマトグラフィー工程）
実施例７に係るカチオン交換クロマトグラフィー工程では、カチオン交換膜１を用いた。
処理した抗体溶液の量は１３０ｍＬであり、流速は１．５ｍＬ／分、温度は２５℃であった。カチオン交換膜１にｐＨがそれぞれ７．０、７．５、及び８．０の抗体溶液を流した後、抗体溶液と同じ組成のバッファーを流速１，５ｍＬ／分で１０ｍＬ通液し、カチオン交換膜１を洗浄した。フロースルー工程と洗浄工程で、合計１４０ｍＬの溶液を回収した。得られた抗体溶液をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ：Ｓｉｚｅ  Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）及びＥＬＩＳＡにより分析したところ、凝集体成分、ＨＣＰ及びプロテインＡの含有量は減少していた。抗体溶液のｐＨが７．０、７．５、及び８．０のそれぞれの場合の結果を図４に示す。【０１２７】
（アニオン交換クロマトグラフィー工程）
実施例７に係るアニオン交換工程では体積０．２５ｍＬのＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄ（旭化成メディカル）を用いた。カチオン交換工程で回収した抗体溶液をＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄに接触させた。ＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄに加えた抗体溶液の量は１２５ｍＬであり、流速は１．５ｍＬ／分であった。ＱｙｕＳｐｅｅｄ  ＤにｐＨがそれぞれ７．０、７．５、及び８．０の抗体溶液を流した後、抗体溶液と同じ組成のバッファーを流速１．５ｍＬ／分で１０ｍＬ通液し、ＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄを洗浄した。フロースルー工程と洗浄工程で、合計１３５ｍＬの溶液を回収した。回収した溶液をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ：Ｓｉｚｅ  Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）及びＥＬＩＳＡにより分析したところ、凝集体成分、ＨＣＰ及びプロテインＡの含有量は減少していた。抗体溶液のｐＨが７．０、７．５、及び８．０のそれぞれの場合の結果を図４に示す。【０１２８】
（実施例８）
実施例８では、フィニティークロマトグラフィー、カチオン交換クロマトグラフィー、及びアニオン交換クロマトグラフィーの一連の精製工程をバッファーの交換をせずに行い、アニオン交換工程でアニオン交換膜であるＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄ、Ｍｕｓｔａｎｇ  Ｑ（Ｐａｌｌ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、Ｎａｔｒｉｆｌｏ  ＨＤ−Ｑ（ＮＡＴＲＩＸ  Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎｓ）をそれぞれ用いた。【０１２９】
（アフィニティークロマトグラフィー工程）
実施例８のアフィニティークロマトグラフィー工程では、実施例５のアフィニティークロマトグラフィー工程と同様に行った。抗体溶液の凝集体（１）の割合は０．７６％であり、凝集体（２）の割合は１．９１％、単量体の割合は９７．３３％であった。また、ＨＣＰの含有量は５７２ｐｐｍ、プロテインＡの含有量は６ｐｐｍであった。【０１３０】
（カチオン交換クロマトグラフィー工程）
実施例８に係るカチオン交換クロマトグラフィー工程では、カチオン交換膜１を用いた。加えた抗体溶液の量は１００ｍＬ（２．６３ｍｇ／ｍＬの濃度）であり、流速は１．５ｍＬ／分、温度は２５℃であった。カチオン交換膜１に抗体溶液を流した後、抗体溶液と同じ組成のバッファー（ｐＨ７．０）を流速１．５ｍＬ／分で１０ｍＬ通液し、カチオン交換膜１を洗浄した。フロースルー工程と洗浄工程で、合計１１０ｍＬの溶液を回収した。同じ操作を全部で４回行い、回収した溶液を統合し、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ：Ｓｉｚｅ  Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）及びＥＬＩＳＡにより分析したところ、凝集体成分、ＨＣＰ及びプロテインＡの含有量は減少していた。結果を図５に示す。【０１３１】
（アニオン交換クロマトグラフィー工程）
実施例８に係るアニオン交換クロマトグラフィー工程では、弱アニオン交換基を有するＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄ（０．２５ｍＬ）、強アニオン交換基を有するＭｕｓｔａｎｇ  Ｑ（０．１８ｍＬ）、及び強アニオン交換基を有するＮａｔｒｉｆｌｏ  ＨＤ−Ｑ（０．２０ｍＬ）のそれぞれを用い、カチオン交換工程で得られた抗体溶液を精製した。カチオン交換工程で得られた抗体溶液に１ｍｏｌ／Ｌのトリス緩衝液を加えてｐＨ７．８にした。得られた、濃度が２．２０ｍｇ／ｍＬの抗体溶液をＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄには１６７ｍＬ、Ｍｕｓｔａｎｇ  Ｑには１２０ｍＬ、Ｎａｔｒｉｆｌｏ  ＨＤ−Ｑには１３３ｍＬ加えた。流速は、それぞれ１．５ｍｌ／分、１．１ｍＬ／分、１．２ｍＬ／分であった。それぞれのアニオン交換膜に抗体溶液を流した後、抗体溶液と同じ組成のバッファーを通液し、アニオン交換膜を洗浄した。洗浄に用いたバッファーはそれぞれ１０ｍＬ、７．２ｍＬ、８．０ｍＬであった。回収した溶液をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ：Ｓｉｚｅ  Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）及びＥＬＩＳＡにより分析したところ、凝集体成分、ＨＣＰ及びプロテインＡの含有量は減少していた。結果を図５に示す。【０１３２】
（実施例９）
実施例９では、フィニティークロマトグラフィー、カチオン交換クロマトグラフィー、及びアニオン交換クロマトグラフィーの一連の精製工程をバッファーの交換をせずに行い、カチオン交換工程で、Ｍｕｓｔａｎｇ  Ｓ（Ｐａｌｌ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を用いた。【０１３３】
（アフィニティークロマトグラフィー工程）
実施例９のアフィニティークロマトグラフィー工程では、実施例５のアフィニティークロマトグラフィー工程と同様に行った。抗体溶液の凝集体（１）の割合は０．６８％であり、凝集体（２）の割合は１．７９％、単量体の割合は９７．５３％であった。また、ＨＣＰの含有量は５１１ｐｐｍ、プロテインＡの含有量は５ｐｐｍであった。【０１３４】
（カチオン交換クロマトグラフィー工程）
実施例９に係るカチオン交換クロマトグラフィー工程では、強カチオン交換基を有するＭｕｓｔａｎｇ  Ｓ（０．１８ｍＬ）を用いた。加えた抗体溶液の量は３８ｍＬ（２．６１ｍｇ／ｍＬの濃度）であり、流速は１．１ｍＬ／分、温度は２５℃であった。Ｍｕｓｔａｎｇ  Ｓに抗体溶液を流した後、抗体溶液と同じ組成のバッファー（ｐＨ７．０）を流速１．１ｍＬ／分で７．２ｍＬ通液し、Ｍｕｓｔａｎｇ Ｓを洗浄した。フロースルー工程と洗浄工程で、合計４５．２ｍＬの溶液を回収した。得られた抗体溶液をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ：Ｓｉｚｅ  Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）及びＥＬＩＳＡにより分析したところ、凝集体成分、ＨＣＰ及びプロテインＡの含有量は減少していた。結果を図６に示す。【０１３５】
（アニオン交換クロマトグラフィー工程）
実施例９に係るアニオン交換工程では体積０．２５ｍＬのＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄ（旭化成メディカル）を用いた。カチオン交換工程で回収した抗体溶液をＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄに接触させた。カチオン交換工程で回収した抗体溶液に１ｍｏｌ／Ｌのトリス緩衝液を加えてｐＨ７．８にし、ＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄで処理した。ＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄで処理した抗体溶液の量は４３ｍＬ（１．９６ｍｇ／ｍＬ）であり、流速は１．５ｍＬ／分であった。ＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄに抗体溶液を流した後、抗体溶液と同じ組成のバッファーを流速１．５ｍＬ／分で１０ｍＬ通液し、ＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄを洗浄した。フロースルー工程と洗浄工程で、合計５３ｍＬの溶液を回収した。回収した溶液をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ：Ｓｉｚｅ  Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）及びＥＬＩＳＡにより分析したところ、凝集体成分、ＨＣＰ及びプロテインＡの含有量は減少していた。結果を図６に示す。【０１３６】
（実施例１０）
実施例１０では、アフィニティークロマトグラフィー工程の後にデプスフィルターによる処理を行い、カチオン交換クロマトグラフィー、及びアニオン交換クロマトグラフィーの一連の精製工程をバッファーの交換をせずに行った。【０１３７】
（アフィニティークロマトグラフィー工程）
実施例１０のアフィニティークロマトグラフィー工程では、溶出後のｐＨを８に調整した以外は、実施例５のアフィニティークロマトグラフィー工程と同様に行った。抗体溶液の凝集体（１）の割合は０．８１％であり、凝集体（２）の割合は１．８９％、単量体の割合は９７．３％であった。また、ＨＣＰの含有量は５４１ｐｐｍ、プロテインＡの含有量は５ｐｐｍであった。【０１３８】
（デプスフィルター、カチオン交換クロマトグラフィー、アニオン交換クロマトグラフィー工程）
実施例１０では、抗体溶液を、Ｅｍｐｈａｚｅ（登録商標）  ＡＥＸ  Ｈｙｂｒｉｄ  Ｐｉｒｉｆｉｅｒ（８．５ｍＬ）と、０．２５ｍＬのカチオン交換膜１を４本並列に繋いだ装置と、０．２５ｍＬのＱｙｕＳｐｅｅｄ  Ｄと、を直列に繋いだ装置に通過させた。【０１３９】
加えた抗体溶液の量は８００ｍＬ（２．６０ｍｇ／ｍＬの濃度）であり、流速は１．５ｍＬ／分、温度は２５℃であった。抗体溶液を流した後、抗体溶液と同じ組成のバッファー（ｐＨ８．０）を流速２．５ｍＬ／分で４０ｍＬ通液し、洗浄した。フロースルー工程と洗浄工程で、合計８４０ｍＬの溶液を回収した。回収した溶液を、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ：Ｓｉｚｅ  Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）及びＥＬＩＳＡにより分析したところ、凝集体（１）の割合が０％であり、凝集体（２）の割合が０．３２％、単量体の割合が９９．６８％であり、モノマー回収率は９０％であった。また、ＨＣＰの含有量は３ｐｐｍであり、プロテインＡの含有量は１ｐｐｍ以下に減少していた。【０１４０】
デプスフィルターによる処理によりカチオン交換クロマログラフィー工程及びアニオン交換クロマトグラフィー工程における処理量が増え、高純度、高収率で抗体の単量体を回収することが出来た。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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