(57)【要約】  神経保護剤に関し、神経系疾患の予防及び/又は治療するための医薬を提供することを課題とする。アミノ基のパラ位に置換基を有する２−アミノベンズアミド構造と、ジオキソピペラジン構造とを有する化合物を使用することにより、神経系細胞を保護し、神経系細胞の細胞死を抑制することにより課題を解決する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ａ）で示される化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む神経保護剤：
【化１】
2016039398.tif 000088
｛式中、
Ｒ’は、チエニル基、フラニル基、フェニル基、又はハロゲン原子；
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、及びＲｄのうち二つはカルボニル基であり、他の二つは同一又は異なって下記一般式（Ａ−２）で示される基：
【化２】
2016039398.tif 000089
［Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、水素原子、炭素数１〜４のアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいシクロヘキシル基、又は置換されていてもよいテトラヒドロピラニル基であり、Ｒｂ若しくはＲｄが上記式（Ａ−２）で示される基である時は、Ｒ１若しくはＲ２がＲｘと組み合わさって炭素数３〜６の飽和環を形成してもよい］；
Ｒｘは、置換されていてもよい炭素数１〜６のアルキル基、又は水素原子；
ｎは、１〜４のいずれかの整数；
Ｖは、−ＣＯ−ＮＨ−又は直結；
Ｗ、Ｘ、Ｙ、及びＺは、同一又は異なってＣＨ又は窒素原子である｝。
【請求項２】
Ｒａが、カルボニル基であり、Ｒｃが、上記一般式（Ａ−２）で示される基である、請求項１に記載の神経保護剤。
【請求項３】
ｎが１である請求項１又は２に記載の神経保護剤。
【請求項４】
Ｒ’が、チエニル基、フラニル基、フェニル基、又は塩素原子である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の神経保護剤。
【請求項５】
下記一般式（ＩＶ）で示される化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む、請求項１に記載の神経保護剤：
【化３】
2016039398.tif 000090
（式中、Ｒ’は、チエニル基、フラニル基、フェニル基、又は塩素原子である。）
【請求項６】
下記式（１）、（１８）、（２）及び（５）のいずれかで示される化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む、請求項１に記載の神経保護剤： 
【化４】
2016039398.tif 000091
【化５】
2016039398.tif 000092
【化６】
2016039398.tif 000093
【化７】
2016039398.tif 000094
【請求項７】
神経系疾患の予防または治療用である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の神経保護剤。
【請求項８】
神経系疾患が神経変性疾患である、請求項７に記載の神経保護剤。
【請求項９】
神経変性疾患がパーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー型認知症、脳血管性認知症、ポリグルタミン病、多発性硬化症、ギラン・バレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、又は多巣性運動ニューロパチーである、請求項８に記載の神経保護剤。
【請求項１０】
神経系疾患が虚血性脳疾患である、請求項７に記載の神経保護剤。
【請求項１１】
下記一般式（Ａ）で示される化合物、又はその薬学的に許容される塩：
【化８】
2016039398.tif 000095
｛式中、
Ｖは、−ＣＯ−ＮＨ−又は直結；
Ｖが−ＣＯ−ＮＨ−のとき、Ｒ’は、フラニル基、フェニル基、又はハロゲン原子；
Ｖが直結のとき、Ｒ’は、チエニル基、フラニル基、フェニル基、又はハロゲン原子；
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、及びＲｄのうち二つはカルボニル基であり、他の二つは同一又は異なって下記一般式（Ａ−２）で示される基：
【化９】
2016039398.tif 000096
［Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、水素原子、炭素数１〜４のアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいシクロヘキシル基、又は置換されていてもよいテトラヒドロピラニル基であり、Ｒｂ若しくはＲｄが上記式（Ａ−２）で示される基である時は、Ｒ１若しくはＲ２がＲｘと組み合わさって炭素数３〜６の飽和環を形成してもよい］；
Ｒｘは、水素原子、又は置換されていてもよい炭素数１〜６のアルキル基；
ｎは、１〜４のいずれかの整数；
Ｗ、Ｘ、Ｙ、及びＺは、同一又は異なってＣＨ又は窒素原子である｝。
【請求項１２】
Ｒａが、カルボニル基であり、Ｒｃが、上記一般式（Ａ−２）で示される基である、請求項１１に記載の化合物、又はその薬理学的に許容される塩。
【請求項１３】
ｎが１である請求項１１又は１２に記載の化合物、又はその薬理学的に許容される塩。
【請求項１４】
下記式（２）、（５）、（３）、（４）及び下記式（ＩＶ）のいずれかで示される、請求項１１に記載の化合物、又はその薬理学的に許容される塩：
【化１０】
2016039398.tif 000097
【化１１】
2016039398.tif 000098
【化１２】
2016039398.tif 000099
【化１３】
2016039398.tif 000100
【化１４】
2016039398.tif 000101
（式中、Ｒ’は、フラニル基またはフェニル基である。）
【請求項１５】
請求項１１〜１４のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む癌の治療及び／又は予防のために用いられる医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞周期を停止させるとともに細胞死を誘導させることなく静止状態にすることによって、異常な細胞の増殖および細胞死の誘導を共に抑制する含窒素複素環誘導体に関する。また、本発明は、これらを含有する癌の治療及び／又は予防のために用いられる医薬組成物、及び細胞増殖抑制剤を提供する。さらに、本発明は、上記化合物を含有する神経保護剤に関し、神経系疾患の予防及び／又は治療するための医薬を提供する。
【背景技術】
【０００２】
ヒストン脱アセチル化酵素（以下HDACともいう）には基質がドッキングするポケットがあるが、殆どの場合、その底部に2価の亜鉛を持つ。このポケットに結合し、亜鉛とキレートを形成して、HDACを阻害する化合物としてヒドロキサム酸型と2-アミノベンズアミド型HDAC阻害剤がある。最近、後者の2-アミノベンズアミド基のアミノ基のパラ位にフェニル基或いはチエニル基を導入したHDAC阻害剤が抗がん作用に深く関わるHDAC1、HDAC2を選択的に強く抑制することが報告されている（非特許文献１）。この型の化合物は、2-アミノベンズアミド基のアミノ基のパラ位のフェニル基或いはチエニル基が前述のポケットに隣接したinternal cavityにはまり込むために、HDAC1、HDAC2に対する選択性が向上したと推定されている。現在、同型のHDAC阻害剤に関し、抗がん剤を目指した創薬研究が精力的に行われており、チエニル基置換体を中心に数多くの化合物が検討されている（特許文献１〜５）。【０００３】
上記化合物群は、担がんマウスを用いた抗腫瘍効果試験において、腫瘍縮小効果を示したが、比較的低用量で体重減少や死亡などの副作用が出現したことから、治療域は狭いものであった（非特許文献２）。またチエニル基に換えて、フェニルグリシンやフェニルアラニンなどのアミノ酸を導入したビアリール2-アミノベンズアミド型HDAC阻害剤が合成され、腹腔内投与による抗腫瘍効果試験が実施された（非特許文献３）。更に、リン酸エステル誘導体を導入したビアリール2-アミノベンズアミド型HDAC阻害剤も合成された（非特許文献４）。また、発明者らは、複数の2-アミノベンズアミド型HDAC阻害剤を合成し、HDACアイソフォーム阻害作用について報告した（非特許文献５）。文献中では、MS-275はclass I HDACs（HDAC1, HDAC2およびHDAC3）を幅広く阻害し、化合物２、8b等はHDAC3を阻害せずに、HDAC1およびHDAC2を選択的に阻害することを報告した。【０００４】
一方、pRb/E2Fなどの細胞周期蛋白の活性化は、動物モデル、パーキンソン病患者において細胞死をもたらすことが報告され（非特許文献６、非特許文献７）、神経細胞においても、細胞周期蛋白の活性化を抑制し、細胞周期を停止させることで細胞死を抑制することが示唆されている。【０００５】
脳においては、ヒストン脱アセチル化酵素（以下HDACともいう）class Iのなかでも特にHDAC1、HDAC 2が豊富に存在し、HDAC1阻害が神経細胞の生存を促進すること（非特許文献８、９）、HDAC2阻害が神経変性疾患における記憶機能を改善することなどが報告されてきた（非特許文献１０）。中枢神経系においてはトリコスタチンA（TSA）、Valproic acidなどの汎HDAC阻害剤だけでなく、MS-275なども脳外傷モデルなどにおいて、その神経保護効果が報告されている（非特許文献１１、１２、１３）。【０００６】
また、特許文献６には、2-aminobenzamide型HDAC阻害剤が記載されているが、神経保護作用についての具体的な記載はない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第２００５／０３０７０４  Ａ１号
【特許文献２】国際公開第２００５／０３０７０５  Ａ１号
【特許文献３】国際公開第２００７／１１８１３７  Ａ１号
【特許文献４】国際公開第２００８／０１０９８５  Ａ２号
【特許文献５】国際公開第２００９／００２４９５  Ａ１号
【特許文献６】特表平２０１０−５３１３５９号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】O. M. Moradei, et al., J. Med. Chem. 50 (2007) 5543-5546
【非特許文献２】J. L. Methot, et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 18 (2008) 973-978
【非特許文献３】K. J. Wilson, et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 18 (2008) 1859-1863
【非特許文献４】R. W. Heidebrecht, et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 19 (2009) 2053-2058
【非特許文献５】Hirata Y et al. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 22 (2012) 1926-1930
【非特許文献６】Hoglinger GU et.al. Proc Natl Acad Sci U S A. 2007 Feb 27;104(9):3585-90
【非特許文献７】Folch J.et.al. Neurotox Res. 2012 Oct;22(3):195-207
【非特許文献８】Kim D et al. Neuron. 2008 Dec 10;60(5):803-17
【非特許文献９】Bardai FH et al. J Biol Chem. 2012 Oct 12;287(42):35444-53
【非特許文献１０】Graff J et al. Nature. 2012 Feb 29;483(7388):222-6
【非特許文献１１】Simonini MV et al. Proc Natl Acad Sci U S A. 2006 Jan 31;103(5):1587-92
【非特許文献１２】Murphy SP et al. J Neurochem. 2013 Oct 21. doi: 10.1111/jnc.12498.
【非特許文献１３】Summers AR et al. J Clin Invest. 2013 Jul 1;123(7):3112-23
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
上述のように、置換基を有さない2-アミノベンズアミド基を持つ化合物や、アミノ基のパラ位に、チエニル基などのアリール基の置換基を有する２−アミノベンズアミド型化合物が報告されている。しかし、置換基を有さない2-アミノベンズアミド基を持つ化合物は、選択性が低くHDAC Class Iに分類されるHDAC1、2、3及び8に対して阻害活性を有することから、毒性が高く、抗がん剤等の医薬品への応用に問題があると考えられた。また、これまでチエニル基などのアリール基導入HDAC阻害剤は、HDAC1、2を選択的に阻害する化合物であるが満足すべき抗腫瘍効果を示すものが少なかった。【００１０】
満足する結果が得られない一因として、アリール基を導入したため、水溶解性などの物性が悪くなり、生物学的利用率が低下したことが考えられる。【００１１】
本発明の目的は、水溶解性等の物性が改善された含窒素複素環誘導体、又はその薬理学的に許容される塩を提供することにある。【００１２】
さらに、放射線や化学療法剤治療下でおこるがん細胞内アポトーシス関連タンパク質の活性化は、がんの再発や増悪につながりこれらの治療効果を低くさせる。このことから、本発明の目的は、がん細胞の細胞周期を停止して細胞増殖を抑制するが、細胞死を誘起しない医薬組成物、癌の治療及び／又は予防のための医薬組成物、及び細胞増殖抑制剤等を提供することにある。【００１３】
また、上述のように、HDAC阻害剤が神経保護作用を示すという報告はあるものの、HDAC阻害効果を有する物質が必ず神経保護作用があるわけではない。さらに、TSAは汎HDAC阻害剤であり、Valproic acidはHDAC class I及びHDAC class IIaの双方を阻害する薬剤である。また、MS-275は、HDAC1、2及び3に作用する。つまり、これらの化合物は神経系以外の細胞にも作用すると考えられ、特にMS-275は、造血幹細胞等に毒性を示すことが懸念される。本発明の目的は、長期間にわたって薬剤を継続投与する必要がある神経系疾患、特に中枢神経系疾患においても副作用を示すことなく使用できる安全な神経保護剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
上記文献では、ピペリジン、ピペラジン、モルフォリン、等、ありとあらゆる複素環をもつ、チエニル置換２−アミノベンズアミド型HDAC阻害剤が記載されているが、ジオキソピペラジンのように、カルボニル基を有する複素環をもつものは存在しない。【００１５】
本発明者等は、鋭意研究を重ねた結果、アミノ基のパラ位にアリール基、ハロゲン基等の置換基を有する２−アミノベンズアミド構造に、ペナム系抗生剤であるピペラシリンの水溶性官能基であるジオキソピペラジン基、及び２個のカルボニル基を含有するその他の複素環を導入することにより、水溶解性などの物性の改善と抗腫瘍効果の向上が達成できると共に、これらの基をもつ化合物が癌細胞の細胞周期を停止して細胞増殖を抑制するが、細胞死を誘起しないことを見いだした。さらにはこれらの化合物は抗癌活性を有しつつも毒性が低く副作用が少ないことを見いだした。【００１６】
さらに、HDAC1及び2に特異性の高いアミノ基のパラ位に置換基を有する２−アミノベンズアミド構造と、ジオキソピペラジン構造とを有する化合物が、神経系細胞の保護作用を示し、神経系細胞の細胞死を抑制することを新たに見いだした。【００１７】
本発明は、かかる知見に基づいて完成されたものであり、以下の態様が含まれる。【００１８】
項１．下記一般式（Ａ）で示される化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む神経保護剤：【００１９】
【化１】
2016039398.tif 000002
【００２０】
｛式中、
Ｒ’は、チエニル基、フラニル基、フェニル基、又はハロゲン原子；
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、及びＲｄのうち二つはカルボニル基であり、他の二つは同一又は異なって下記一般式（Ａ−２）で示される基：【００２１】
【化２】
2016039398.tif 000003
【００２２】
［Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、水素原子、炭素数１〜４のアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいシクロヘキシル基、又は置換されていてもよいテトラヒドロピラニル基であり、Ｒｂ若しくはＲｄが上記式（Ａ−２）で示される基である時は、Ｒ１若しくはＲ２がＲｘと組み合わさって炭素数３〜６の飽和環を形成してもよい］；
Ｒｘは、置換されていてもよい炭素数１〜６のアルキル基、又は水素原子；
ｎは、１〜４のいずれかの整数；
Ｖは、−ＣＯ−ＮＨ−又は直結；
Ｗ、Ｘ、Ｙ、及びＺは、同一又は異なってＣＨ又は窒素原子である｝。
項２．Ｒａが、カルボニル基であり、Ｒｃが、上記一般式（Ａ−２）で示される基である、項１に記載の神経保護剤。
項３．ｎが１である項１又は２に記載の神経保護剤。
項４．Ｒ’が、チエニル基、フラニル基、フェニル基、又は塩素原子である、項１〜３のいずれか一項に記載の神経保護剤。
項５．下記一般式（ＩＶ）で示される化合物、又はその薬理学的に許容される塩を含む、項１に記載の神経保護剤：【００２３】
【化３】
2016039398.tif 000004
【００２４】
（式中、Ｒ’は、チエニル基、フラニル基、フェニル基、又は塩素原子である。）
項６．下記式（１）、（１８）、（２）及び（５）のいずれかで示される化合物、又はその薬理学的に許容される塩を含む、項１に記載の神経保護剤：【００２５】
【化４】
2016039398.tif 000005
【００２６】
【化５】
2016039398.tif 000006
【００２７】
【化６】
2016039398.tif 000007
【００２８】
【化７】
2016039398.tif 000008
【００２９】
項７．神経系疾患の予防または治療用である、項１〜６のいずれか一項に記載の神経保護剤。
項８．神経系疾患が神経変性疾患である、項７に記載の神経保護剤。
項９．神経変性疾患がパーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー型認知症、脳血管性認知症、ポリグルタミン病、多発性硬化症、ギラン・バレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、又は多巣性運動ニューロパチーである、項８に記載の神経保護剤。
項１０．神経系疾患が虚血性脳疾患である、項７に記載の神経保護剤。
項１１．下記一般式（Ａ）で示される化合物、又はその薬学的に許容される塩：【００３０】
【化８】
2016039398.tif 000009
【００３１】
｛式中、
Ｖは、−ＣＯ−ＮＨ−又は直結；
Ｖが−ＣＯ−ＮＨ−のとき、Ｒ’は、フラニル基、フェニル基、又はハロゲン原子；
Ｖが直結のとき、Ｒ’は、チエニル基、フラニル基、フェニル基、又はハロゲン原子；
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、及びＲｄのうち二つはカルボニル基であり、他の二つは同一又は異なって下記一般式（Ａ−２）で示される基：【００３２】
【化９】
2016039398.tif 000010
【００３３】
［Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、水素原子、炭素数１〜４のアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいシクロヘキシル基、又は置換されていてもよいテトラヒドロピラニル基であり、Ｒｂ若しくはＲｄが上記式（Ａ−２）で示される基である時は、Ｒ１若しくはＲ２がＲｘと組み合わさって炭素数３〜６の飽和環を形成してもよい］；
Ｒｘは、水素原子、又は置換されていてもよい炭素数１〜６のアルキル基；
ｎは、１〜４のいずれかの整数；
Ｗ、Ｘ、Ｙ、及びＺは、同一又は異なってＣＨ又は窒素原子である｝。
項１２．Ｒａが、カルボニル基であり、Ｒｃが、上記一般式（Ａ−２）で示される基である、項１１に記載の化合物、又はその薬理学的に許容される塩。
項１３．ｎが１である項１１又は１２に記載の化合物、又はその薬理学的に許容される塩。
項１４．下記式（ＩＶ）で示される、項１１に記載の化合物、又はその薬理学的に許容される塩：【００３４】
【化１０】
2016039398.tif 000011
【００３５】
（式中、Ｒ’は、フラニル基またはフェニル基である。）
項１５．下記式（２）、（５）、（４）、（３）、（１８）、（２０）及び（１９）のいずれかで示される、項１１に記載の化合物、又はその薬理学的に許容される塩：【００３６】
【化１１】
2016039398.tif 000012
【００３７】
【化１２】
2016039398.tif 000013
【００３８】
【化１３】
2016039398.tif 000014
【００３９】
【化１４】
2016039398.tif 000015
【００４０】
【化１５】
2016039398.tif 000016
【００４１】
【化１６】
2016039398.tif 000017
【００４２】
【化１７】
2016039398.tif 000018
【００４３】
項１６．項１１〜１５のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む癌の治療及び／又は予防のために用いられる医薬組成物。
【発明の効果】
【００４４】
本発明によれば、細胞周期を停止させるとともに細胞死を誘導させることなく静止状態にすることによって、異常な細胞の増殖および細胞死の誘導を共に抑制する含窒素複素環誘導体を提供できる。また、本発明によれば、当該含窒素複素環誘導体を含有する癌の治療及び／又は予防のために用いられる医薬組成物、及び細胞増殖抑制剤を提供することができる。さらに、本発明によれば、上記含窒素複素環誘導体を含有する神経保護剤を提供することができ、また、神経系疾患の予防及び／又は治療するための医薬を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００４５】
【図１】K-852、K-854、K-855、K-856の合成スキームを示す。
【図２】K-562、K-563、及びK-564の合成スキームを示す。(a) (Boc)2O、トリエチルアミン（Et3N）、及びTHF存在下で、室温で 一晩反応させたことを示す (b) Pd(PPh3)4、2-チオフェンボロン酸、炭酸カリウム, テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム、DME/H2O存在下で80℃で18時間反応させたことを示す。 (c) トリエチルアミン、THF存在下で室温で４時間反応させたことを示す。(d) フタルイミドカリウム、ヨウ化カリウム、DMF存在下で50℃で一晩反応させたことを示す。(e) ヒドラジン、エタノール存在下で３時間環流したことを示す。 (f) トリエチルアミン、時クロルメタン存在下で室温で一晩反応させたことを示す。 (g) THA / ジクロルメタン存在下で室温で１時間反応させたことを示す。
【図３】K-560、Merck化合物、Ethyl化合物及びMS-275の構造式を示す。
【図４】本発明の化合物であるK-852、K-853、K-854、K-856又はMS-275に大腸がん細胞株（HCT116細胞）を48時間暴露した時の、細胞周期のヒストグラムを示す。縦軸は細胞数であり、横軸はDNA量を示す。
【図５】本発明の化合物であるK-852、K-853、K-854、K-856又はMS-275に乳癌細胞株（SKBR3細胞）を24時間暴露した時の、細胞周期のヒストグラムを示す。縦軸は細胞数であり、横軸はDNA量を示す。
【図６】本発明の化合物であるK-852、K-853、K-854、K-856又はMS-275に神経芽細胞腫細胞株（Neuro2a細胞）を48時間暴露した時の、細胞周期のヒストグラムを示す。縦軸は細胞数であり、横軸はDNA量を示す。
【図７】N-(2-アミノ-5-(フラン-2-イル)フェニル)-4-((4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-イル)メチル)ベンズアミド及びN-(2-アミノ-5-(ベンゼン-2-イル)フェニル)-4-((4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-イル)メチル)ベンズアミドの合成例を示す。
【図８】N-((6-(2-1アミノ-5-(チオフェン-2-イル)フェニルカルバモイル)ピリジン-3-イル)メチル)-4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-カルボキサミドの合成例を示す。
【図９】K-560の脳虚血に対する神経細胞保護作用を死細胞の割合で評価した。Aは、OGD（低酸素無グルコース）負荷後24時間の死細胞の割合を示す。Bは、OGD負荷後72時間の死細胞の割合を示す。DMSOは、陰性対照を示す。縦軸は、死細胞の割合（％）を示す。
【図１０】K-852、又はK-853の脳虚血に対する神経細胞保護的作用を、死細胞の割合で評価した結果を示す。DMSOは、陰性対照を示す。縦軸は、死細胞の割合（％）を示す。
【図１１】興奮毒（カイニン酸）に対する種々のHDAC阻害剤の効果を示す。縦軸は、死細胞の割合（％）を示す。
【図１２】1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine （MPTP）投与パーキンソン病動物モデルにおいてK-560が神経細胞保護作用を示すことを確認した結果を示す。Aは、黒質TH(チロシン水酸化酵素)の免疫染色像を示す（NS群：生理食塩水投与のみ、KS群：K-560投与のみ、NM群：MPTP及び生理食塩水投与、KM群：MPTP及びK-560投与）。Bは、MPTP投与後２日後の黒質のTH陽性細胞をカウントしたグラフを示す。Cは、MPTP投与後21日後の黒質のTH陽性細胞をカウントしたグラフを示す。縦軸は、TH染色陽性細胞の割合（％）を示す。
【図１３】in vitro パーキンソン実験モデルにおいてK-852が神経細胞保護作用を示すことを確認した結果を示す。DMSOは、陰性対照を示す。縦軸は、死細胞の割合（％）を示す。
【図１４】Ethyl化合物の毒性、神経保護作用を確認した結果を示す。縦軸は、死細胞の割合（％）を示す。
【図１５】MS-275、K-560、及びK-852の細胞毒性試験の結果を示す。Aは、各被験薬を終濃度３μMで添加したしたときの結果を示す。Bは、各被験薬を終濃度10μMで添加したしたときの結果を示す。縦軸は、死細胞の割合（％）を示す。
【図１６】K-852、K-853、及びK-854の脳虚血に対する神経細胞保護作用を死細胞の割合で評価した結果を示す。グラフ中の星印はp<0.05を示す。
【図１７】K-562、K-563、K-564、K-560、及びK-856の神経細胞保護作用の脳虚血に対する神経細胞保護作用を死細胞の割合で評価した結果を示す。図中Aは、24時間OGD負荷を行ったときの結果であり、図中Bは48時間OGD負荷を行ったときの結果である。グラフ中の星印はp<0.05を示す。
【図１８】実施例２２：in vtroパーキンソン病実験モデルにおけるK-562、K-563、K-564、K-560、及びK-856の神経細胞保護作用を示すことを確認した結果を示す。グラフ中の星印はp<0.05を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４６】
１．含窒素複素環誘導体
本発明の含窒素複素環誘導体は、下記一般式（Ａ）で示される化合物である：
【００４７】
【化１８】
2016039398.tif 000019
【００４８】
｛式中、
Ｒ’は、チエニル基、フラニル基、フェニル基、又はハロゲン原子（ただし、Ｖが−ＣＯ−ＮＨ−のとき、Ｒ’は、好ましくは、フラニル基、フェニル基、又はハロゲン原子である。）；
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、及びＲｄのうち二つはカルボニル基であり、他の二つは同一又は異なって下記一般式（Ａ−２）で示される基：
【００４９】
【化１９】
2016039398.tif 000020
【００５０】
［Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、水素原子、炭素数１〜４のアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいシクロヘキシル基、又は置換されていてもよいテトラヒドロピラニル基であり、Ｒｂ若しくはＲｄが上記式（Ａ−２）で示される基である時は、Ｒ１若しくはＲ２がＲｘと共に炭素数３〜６の飽和環を形成してもよい］；
Ｒｘは、水素原子、又は置換されていてもよい炭素数１〜６のアルキル基；
ｎは、１〜４のいずれかの整数；
Ｖは、直結又は−ＣＯ−ＮＨ−；
Ｗ、Ｘ、Ｙ、及びＺは、同一又は異なってＣＨ又は窒素原子である｝。
【００５１】
Ｒ’として好ましくは、チエニル基、フラニル基、フェニル基又は塩素原子等であり、より好ましくは、チエニル基又はフラニル基であり、さらに好ましくは、チエニル基である。
【００５２】
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、及びＲｄとして好ましくは、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、及びＲｄのうち二つはカルボニル基であり、他の二つは同一又は異なって上記一般式（Ａ−２）で示される基であり、かつ、Ｒａ及びＲｃが、同時にカルボニル基でなく；さらに好ましくは、Ｒａが、カルボニル基であり、Ｒｃが上記一般式（Ａ−２）で示される基であり；最も好ましくは、Ｒａ及びＲｂがカルボニル基である。
【００５３】
Ｒ１及びＲ２として好ましくは、同時に水素原子；同時に炭素数１〜４のアルキル基（この場合の炭素数１〜４のアルキル基として好ましくは、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基又はイソブチル基等であり、より好ましくはメチル基、エチル基又はプロピル基であり、最も好ましくはメチル基又はエチル基である）；又は一方が水素原子であり他方が炭素数１〜４のアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいシクロヘキシル基、又は置換されていてもよいテトラヒドロピラニル基であり（この場合の炭素数１〜４のアルキル基として好ましくはメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、sec-ブチル基、イソブチル基又はtert-ブチル基等であり、より好ましくはメチル基、エチル基又はプロピル基であり、最も好ましくはメチル基又はエチル基であり；アリール基として好ましくは、フェニル基、モルフォリル基、又はピリジニル基等であり、より好ましくはフェニル基であり；アリール基、シクロヘキシル基及びテトラヒドロピラニル基の置換基として好ましくは、塩素原子、及びフッ素原子のいずれかのハロゲン原子、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、又は水酸基等であり、より好ましくは塩素原子、フッ素原子、メチル基、又はエチル基、最も好ましくは塩素原子、フッ素原子又はメチル基である）。
【００５４】
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、およびＲｄのいずれか二つが上記一般式（Ａ−２）で示される基である時の一態様としては、上記一般式（Ａ−２）で示される基の二つが同一であり、かつＲ１及びＲ２の両方が水素原子であることが好ましい。
【００５５】
また、別の態様としてＲａ、Ｒｂ、Ｒｃ、およびＲｄのいずれか二つが異なって上記一般式（Ａ−２）で示される基である時は、一方の上記一般式（Ａ−２）で示される基のＲ１及びＲ２の両方が水素原子であり、他方がもう一方と異なる上記一般式（Ａ−２）で示される基［この場合のＲ１及びＲ２として好ましくは、両方がメチル基；又はＲ１及びＲ２の一方が水素原子であり、他方が炭素数１〜４のアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいシクロヘキシル基、又は置換されていてもよいテトラヒドロピラニル基（この場合の炭素数１〜４のアルキル基として好ましくはメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、sec-ブチル基、イソブチル基、又はtert-ブチル基等であり、より好ましくはメチル基、エチル基又はプロピル基であり、最も好ましくはメチル基又はエチル基であり；アリール基として好ましくは、フェニル基、モルフォリル基、又はピリジニル基等であり、より好ましくはフェニル基であり；アリール基、シクロヘキシル基及びテトラヒドロピラニル基の置換基として好ましくは、塩素原子、及びフッ素原子のいずれかのハロゲン原子、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基又は水酸基等であり、より好ましくは塩素原子、フッ素原子、メチル基又はエチル基、最も好ましくは塩素原子、フッ素原子又はメチル基である）］であることが好ましい。
【００５６】
Ｒｂ若しくはＲｄが上記式（Ａ−２）示される基である時は、Ｒ１若しくはＲ２がＲｘと組み合わさって炭素数３〜６の飽和環を形成してもよく、飽和環として好ましくは飽和３員環、飽和４員環、又は飽和５員環であり、より好ましくは飽和５員環である。
【００５７】
Ｒｘは、水素原子、又は置換されていてもよい炭素数１〜６のアルキル基であり、炭素数１〜６のアルキル基は、直鎖型又は分岐型のアルキル基であり、より好ましくは直鎖型である。直鎖型のアルキル基として好ましくはメチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、又はヘキシル基であり、より好ましくはメチル基、エチル基、又はプロピル基であり、最も好ましくはメチル基又はエチル基である。分岐型のアルキル基として好ましくはイソプロピル基、sec-ブチル基、イソブチル基、tert-ブチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、イソヘキシル基、又はビイソプロピル基等が挙げられる。より好ましくはイソプロピル基、sec-ブチル基、イソブチル基、又はイソペンチル基であり、さらに好ましくはイソプロピル基である。炭素数１〜６のアルキル基の置換基として好ましくは、塩素原子、及びフッ素原子のいずれかのハロゲン原子、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、又は水酸基等であり、より好ましくは塩素原子、フッ素原子、メチル基、又はエチル基、最も好ましくは塩素原子、フッ素原子又はメチル基である。
【００５８】
ｎは、１〜４のいずれかの整数であり、より好ましくは１又は２であり、最も好ましくは１である。
Ｖは、直結又は−ＣＯ−ＮＨ−であり；
Ｗ、Ｘ、Ｙ、及びＺとして好ましくはＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺの全てがＣＨであるか又はＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺのいずれか１つ若しくは２つが窒素原子であり；より好ましくはＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺの全てがＣＨであるか、又はＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺのいずれか１つが窒素原子であり；最も好ましくはＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺの全てがＣＨである。
【００５９】
（１）−１．Ｖが直結である上記一般式（Ａ）で示される化合物
上記一般式（Ａ）で示される化合物のうち、Ｖが直結である化合物は、以下の一般式（Ｉ）で示される化合物である。
【００６０】
【化２０】
2016039398.tif 000021
【００６１】
｛式中、
Ｒ’は、チエニル基、フラニル基、フェニル基又はハロゲン原子；
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、及びＲｄのうち二つはカルボニル基であり、他の二つは同一又は異なって下記一般式（ＩＩ）で示される基：
【００６２】
【化２１】
2016039398.tif 000022
【００６３】
［Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、水素原子、炭素数１〜４のアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいシクロヘキシル基、又は置換されていてもよいテトラヒドロピラニル基であり、Ｒｂ若しくはＲｄが上記式（ＩＩ）示される基である時は、Ｒ１若しくはＲ２がＲｘと組み合わさって炭素数３〜６の飽和環を形成してもよい］；
Ｒｘは、水素原子、又は置換されていてもよい炭素数１〜６のアルキル基；
ｎは、１〜４のいずれかの整数；
Ｗ、Ｘ、Ｙ、及びＺは、同一又は異なってＣＨ又は窒素原子である｝
である。
【００６４】
Ｒ’として好ましくは、チエニル基、フラニル基、フェニル基又は塩素原子等であり、より好ましくは、チエニル基又はフラニル基であり、さらに好ましくは、チエニル基である。
【００６５】
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、及びＲｄとして好ましくは、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、及びＲｄのうち二つはカルボニル基であり、他の二つは同一又は異なって上記一般式（ＩＩ）で示される基であり、かつ、Ｒａ及びＲｃが、同時にカルボニル基でなく；さらに好ましくは、Ｒａが、カルボニル基であり、Ｒｃが上記一般式（ＩＩ）で示される基であり；最も好ましくは、Ｒａ及びＲｂがカルボニル基である。
【００６６】
Ｒ１及びＲ２として好ましくは、同時に水素原子；同時に炭素数１〜４のアルキル基（この場合の炭素数１〜４のアルキル基として好ましくは、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基又はイソブチル基等であり、より好ましくはメチル基、エチル基又はプロピル基であり、最も好ましくはメチル基又はエチル基である）；又は一方が水素原子であり他方が炭素数１〜４のアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいシクロヘキシル基、又は置換されていてもよいテトラヒドロピラニル基であり（この場合の炭素数１〜４のアルキル基として好ましくはメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、sec-ブチル基、イソブチル基又はtert-ブチル基等であり、より好ましくはメチル基、エチル基又はプロピル基であり、最も好ましくはメチル基又はエチル基であり；アリール基として好ましくは、フェニル基、モルフォリル基、又はピリジニル基等であり、より好ましくはフェニル基であり；アリール基、シクロヘキシル基及びテトラヒドロピラニル基の置換基として好ましくは、塩素原子、及びフッ素原子のいずれかのハロゲン原子、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、又は水酸基等であり、より好ましくは塩素原子、フッ素原子、メチル基、又はエチル基、最も好ましくは塩素原子、フッ素原子又はメチル基である）。
【００６７】
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、およびＲｄのいずれか二つが上記一般式（ＩＩ）で示される基である時の一態様としては、上記一般式（ＩＩ）で示される基の二つが同一であり、かつＲ１及びＲ２の両方が水素原子であることが好ましい。
【００６８】
また、別の態様としてＲａ、Ｒｂ、Ｒｃ、およびＲｄのいずれか二つが異なって上記一般式（ＩＩ）で示される基である時は、一方の上記一般式（ＩＩ）で示される基のＲ１及びＲ２の両方が水素原子であり、他方がもう一方と異なる上記一般式（ＩＩ）で示される基［この場合のＲ１及びＲ２として好ましくは、両方がメチル基；又はＲ１及びＲ２の一方が水素原子であり、他方が炭素数１〜４のアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいシクロヘキシル基、又は置換されていてもよいテトラヒドロピラニル基（この場合の炭素数１〜４のアルキル基として好ましくはメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、sec-ブチル基、イソブチル基、又はtert-ブチル基等であり、より好ましくはメチル基、エチル基又はプロピル基であり、最も好ましくはメチル基又はエチル基であり；アリール基として好ましくは、フェニル基、モルフォリル基、又はピリジニル基等であり、より好ましくはフェニル基であり；アリール基、シクロヘキシル基及びテトラヒドロピラニル基の置換基として好ましくは、塩素原子、及びフッ素原子のいずれかのハロゲン原子、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基又は水酸基等であり、より好ましくは塩素原子、フッ素原子、メチル基又はエチル基、最も好ましくは塩素原子、フッ素原子又はメチル基である）］であることが好ましい。
【００６９】
Ｒｂ若しくはＲｄが上記式（ＩＩ）示される基である時は、Ｒ１若しくはＲ２がＲｘと組み合わさって炭素数３〜６の飽和環を形成してもよく、飽和環として好ましくは飽和３員環、飽和４員環、又は飽和５員環であり、より好ましくは飽和５員環である。
【００７０】
Ｒｘは、水素原子、又は置換されていてもよい炭素数１〜６のアルキル基であり、炭素数１〜６のアルキル基は、直鎖型又は分岐型のアルキル基であり、より好ましくは直鎖型である。直鎖型のアルキル基として好ましくはメチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、又はヘキシル基であり、より好ましくはメチル基、エチル基、又はプロピル基であり、最も好ましくはメチル基又はエチル基である。分岐型のアルキル基として好ましくはイソプロピル基、sec-ブチル基、イソブチル基、tert-ブチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、イソヘキシル基、又はビイソプロピル基等が挙げられる。より好ましくはイソプロピル基、sec-ブチル基、イソブチル基、又はイソペンチル基であり、さらに好ましくはイソプロピル基である。炭素数１〜６のアルキル基の置換基として好ましくは、塩素原子、及びフッ素原子のいずれかのハロゲン原子、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、又は水酸基等であり、より好ましくは塩素原子、フッ素原子、メチル基、又はエチル基、最も好ましくは塩素原子、フッ素原子又はメチル基である。
【００７１】
ｎは、１〜４のいずれかの整数であり、より好ましくは１又は２であり、最も好ましくは１である。
【００７２】
Ｗ、Ｘ、Ｙ、及びＺとして好ましくはＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺの全てがＣＨであるか又はＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺのいずれか１つ若しくは２つが窒素原子であり；より好ましくはＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺの全てがＣＨであるか、又はＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺのいずれか１つが窒素原子であり；最も好ましくはＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺの全てがＣＨである。
【００７３】
一般式（Ｉ）で示される化合物のＲ’がチエニル基であるときの好ましい態様としては、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、およびＲｄのうちＲａ及びＲｂがカルボニル基であり、他が同一又は異なって上記一般式（ＩＩ）で示される基である。この場合Ｒｃが上記一般式（ＩＩ）で示される基（Ｒ１及びＲ２は両方が水素原子）であり、かつカルボニル基でないＲｂ又はカルボニル基でないＲｄは、Ｒｃと同一であるか；又はＲｃと異なる上記一般式（ＩＩ）で示される基［この場合のＲ１及びＲ２は、両方がメチル基；又はＲ１及びＲ２の一方が水素原子であり、他方が炭素数１〜４のアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいシクロヘキシル基、又は置換されていてもよいテトラヒドロピラニル基（この場合の炭素数１〜４のアルキル基として好ましくはメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、sec-ブチル基、イソブチル基、又はtert-ブチル基等であり、より好ましくはメチル基、エチル基又はプロピル基であり、最も好ましくはメチル基又はエチル基であり；アリール基として好ましくは、フェニル基、モルフォリル基、又はピリジニル基等であり、より好ましくはフェニル基であり；アリール基、シクロヘキシル基及びテトラヒドロピラニル基の置換基として好ましくは、塩素原子、及びフッ素原子のいずれかのハロゲン原子、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基又は水酸基等であり、より好ましくは塩素原子、フッ素原子、メチル基又はエチル基、最も好ましくは塩素原子、フッ素原子又はメチル基である）］であることが好ましい。
【００７４】
Ｒｂ若しくはＲｄが上記式（ＩＩ）示される基である時は、Ｒ１若しくはＲ２がＲｘと組み合わさって炭素数３〜６の飽和環を形成してもよく、飽和環としてより好ましくは飽和５員環である。
【００７５】
Ｒｘは、水素原子、又は置換されていてもよい直鎖型の炭素数１〜６のアルキル基であり、好ましくは、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、又はヘキシル基であり、より好ましくは、メチル基、エチル基、又はプロピル基であり、最も好ましくはメチル基又はエチル基である。炭素数１〜６のアルキル基の置換基として好ましくは、塩素原子、及びフッ素原子のいずれかのハロゲン原子、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、又は水酸基等であり、より好ましくは塩素原子、フッ素原子、メチル基、又はエチル基、最も好ましくは塩素原子、フッ素原子又はメチル基である。
【００７６】
ｎは、より好ましくは１又は２であり、最も好ましくは１である。
【００７７】
Ｗ、Ｘ、Ｙ、及びＺとして、好ましくはＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺの全てがＣＨであるか、又はＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺのいずれか１つが窒素原子であり；最も好ましくはＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺの全てがＣＨである。
【００７８】
さらに、一般式（Ｉ）で示される化合物のＲ’がチエニル基である化合物としては、下記式（２）〜（１０）で示される化合物が例示される：
・N-(2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル)フェニル)-4-((4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-イル)メチル)ベンズアミド
【００７９】
【化２２】
2016039398.tif 000023
【００８０】
・N-(2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル)フェニル)-4-((1,4-ジオキソ-ヘキサハイドロピロロ[1,2-a]ピラジン-2-(1H)-イル)メチル)ベンズアミド
【００８１】
【化２３】
2016039398.tif 000024
【００８２】
・N-(2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル)フェニル)-4-((2,5-ジオキソピペラジン-1-イル)メチル)ベンズアミド
【００８３】
【化２４】
2016039398.tif 000025
【００８４】
・N-(2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル)フェニル)-4-((4-メチル-2,5-ジオキソピペラジン-1-イル)メチル)ベンズアミド
【００８５】
【化２５】
2016039398.tif 000026
【００８６】
・N-(2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル)フェニル)-4-((3,4-ジオキソ-ヘキサヒドロピロロ[1,2-a]ピラジン-2(1H)-イル)メチル)ベンズアミド
【００８７】
【化２６】
2016039398.tif 000027
【００８８】
・N-（2 -アミノ-5（チオフェン-2-イル）フェニル）-4-（（4-メチル-2,5-ジオキソ-3-フェニルピペラジン-1-イル）メチル）ベンズアミド
【００８９】
【化２７】
2016039398.tif 000028
【００９０】
・N-(2 -アミノ-5（チオフェン-2 -イル）フェニル）-4-（（3,3,4-トリメチル-2,5 -ジオキソピペラジン-1-イル）メチル）ベンズアミド
【００９１】
【化２８】
2016039398.tif 000029
【００９２】
・N-(2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル)フェニル)-4-((3-シクロヘキシル-4-メチル-2,5-ジオキソピペラジン-1-イル）メチル）ベンズアミド
【００９３】
【化２９】
2016039398.tif 000030
【００９４】
・N-(2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル)フェニル)-4-((4-メチル-2,5-ジオキソ-3-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)ピペラジン-1-イル)メチル)ベンズアミド
【００９５】
【化３０】
2016039398.tif 000031
【００９６】
一般式（Ｉ）で示される化合物のＲ’が塩素原子であるときの好ましい態様としては、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、およびＲｄのうちＲａ及びＲｂがカルボニル基であり、他が同一又は異なって上記一般式（ＩＩ）で示される基である。この場合Ｒｃが上記一般式（ＩＩ）で示される基（Ｒ１及びＲ２は両方が水素原子）であり、かつＲｄは、Ｒｃと同一であるか、又はＲｃと異なる上記一般式（ＩＩ）で示される基［この場合のＲ１及びＲ２は、両方がメチル基；又はＲ１及びＲ２の一方が水素原子であり、他方が炭素数１〜４のアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいシクロヘキシル基、又は置換されていてもよいテトラヒドロピラニル基（この場合の炭素数１〜４のアルキル基として好ましくはメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、sec-ブチル基、イソブチル基、又はtert-ブチル基等であり、より好ましくはメチル基、エチル基又はプロピル基であり、最も好ましくはメチル基又はエチル基であり；アリール基として好ましくは、フェニル基、モルフォリル基、又はピリジニル基等であり、より好ましくはフェニル基であり；アリール基、シクロヘキシル基及びテトラヒドロピラニル基の置換基として好ましくは、塩素原子、及びフッ素原子のいずれかのハロゲン原子、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基又は水酸基等であり、より好ましくは塩素原子、フッ素原子、メチル基又はエチル基、最も好ましくは塩素原子、フッ素原子又はメチル基である）］であることが好ましい。
【００９７】
Ｒｘは、水素原子、又は置換されていてもよい直鎖型の炭素数１〜６のアルキル基であり、好ましくは、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、又はヘキシル基であり、より好ましくは、メチル基、エチル基、又はプロピル基であり、最も好ましくはメチル基又はエチル基である。炭素数１〜６のアルキル基の置換基として好ましくは、塩素原子、及びフッ素原子のいずれかのハロゲン原子、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、又は水酸基等であり、より好ましくは塩素原子、フッ素原子、メチル基、又はエチル基、最も好ましくは塩素原子、フッ素原子又はメチル基である。
【００９８】
ｎは、より好ましくは１又は２であり、最も好ましくは１である。
【００９９】
Ｗ、Ｘ、Ｙ、及びＺとして、好ましくはＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺの全てがＣＨであるかＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺのいずれか１つが窒素原子であり、最も好ましくはＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺの全てがＣＨである。
【０１００】
一般式（Ｉ）で示される化合物のＲ’が塩素原子である化合物としては、下記式（１１）で示される化合物が例示される。
・N-(2-アミノ-5-クロロフェニル)-4-((4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-イル)メチル)ベンズアミド
【０１０１】
【化３１】
2016039398.tif 000032
【０１０２】
一般式（Ｉ）で示される化合物のＲ’がフラニル基又はフェニル基であるときの好ましい態様としては、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、およびＲｄのうちＲａ及びＲｂがカルボニル基であり、残りが同一又は異なって上記一般式（ＩＩ）で示される基である。この場合Ｒｃが上記一般式（ＩＩ）で示される基（Ｒ１及びＲ２は両方が水素原子）であり、かつＲｄは、Ｒｃと同一であるか、又はＲｃと異なる上記一般式（ＩＩ）で示される基［この場合のＲ１及びＲ２は、両方がメチル基；又はＲ１及びＲ２の一方が水素原子であり、他方が炭素数１〜４のアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいシクロヘキシル基、又は置換されていてもよいテトラヒドロピラニル基（この場合の炭素数１〜４のアルキル基として好ましくはメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、sec-ブチル基、イソブチル基、又はtert-ブチル基等であり、より好ましくはメチル基、エチル基又はプロピル基であり、最も好ましくはメチル基又はエチル基であり；アリール基として好ましくは、フェニル基、モルフォリル基、又はピリジニル基等であり、より好ましくはフェニル基であり；アリール基、シクロヘキシル基及びテトラヒドロピラニル基の置換基として好ましくは、塩素原子、及びフッ素原子のいずれかのハロゲン原子、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基又は水酸基等であり、より好ましくは塩素原子、フッ素原子、メチル基又はエチル基、最も好ましくは塩素原子、フッ素原子又はメチル基である）］であることが好ましい。
【０１０３】
Ｒｘは、水素原子、又は置換されていてもよい直鎖型の炭素数１〜６のアルキル基であり、好ましくは、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、又はヘキシル基であり、より好ましくは、メチル基、エチル基、又はプロピル基であり、最も好ましくはメチル基又はエチル基である。炭素数１〜６のアルキル基の置換基として好ましくは、塩素原子、及びフッ素原子のいずれかのハロゲン原子、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、又は水酸基等であり、より好ましくは塩素原子、フッ素原子、メチル基、又はエチル基、最も好ましくは塩素原子、フッ素原子又はメチル基である。
【０１０４】
ｎは、より好ましくは１又は２であり、最も好ましくは１である。
【０１０５】
Ｗ、Ｘ、Ｙ、及びＺとして好ましくはＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺの全てがＣＨであるかＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺのいずれか１つが窒素原子であり、最も好ましくはＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺの全てがＣＨである。
【０１０６】
一般式（Ｉ）で示される化合物のＲ’がフラニル基又はフェニル基である化合物としては、下記式（１２）又は（１３）で示される化合物が例示される。
・N-(2-アミノ-5-(フラン-2-イル)フェニル)-4-((4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-イル)メチル)ベンズアミド
【０１０７】
【化３２】
2016039398.tif 000033
【０１０８】
・N-(2-アミノ-5-(ベンゼン-2-イル)フェニル)-4-((4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-イル)メチル)ベンズアミド
【０１０９】
【化３３】
2016039398.tif 000034
【０１１０】
（１）−２．一般式（Ｉ）で示される化合物の合成方法
上記一般式（Ｉ）で示される化合物の合成方法は、特に制限されないが、スキームＩ−１及びＩ−２に示す方法を例示することができる。スキームＩ−１及びＩ−２において、Ｒ’、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒｘ、ｎ、Ｗ、Ｘ、Ｙ、及びＺは、上記１−１．の項と同じである。
（ｉ）工程（ａ）：化合物（Ｉａ）からの化合物（Ｉｂ）の合成（スキームＩ−１）
化合物（Ｉａ）のブロモ基のパラ位にあるアミノ基を、例えばtert−ブトキシカルボニル（以下Boc）基で保護するため、トリエチルアミン等の塩基及びテトラヒドロフラン（THF）の存在下で二炭酸ジ−tert−ブチル（(Boc)2O）を常法にしたがって反応させ、精製し化合物（Ｉｂ）を得る。
（ｉｉ）工程（ｂ）：化合物（Ｉｂ）からの化合物（Ｉｄ）の合成（スキームＩ−１）  工程（ａ）で得られた化合物（Ｉｂ）に、水、炭酸カリウム、ジメチルエーテル、トリフェニルホスファン（Ph3P）を添加し、化合物（Ｉｃ）を加え、例えばテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（Pd(PPh3)4）を触媒として、例えば環流にて18時間、又はマイクロウェーブ装置（Initiator+, biotage社等）を使用して120℃で30 分反応させ、化合物（Ｉｂ）のブロモ基と化合物（Ｉｃ）のＲ’を置換し、化合物（Ｉｄ）を合成、精製する。
（ｉｉｉ）工程（ｃ）：化合物（Ｉｄ）からの化合物（Ｉｆ）の合成（スキームＩ−１）  工程（ｂ）で得られた化合物（Ｉｄ）にトリエチルアミン等の塩基及びTHFを加え、さらに化合物（Ｉｅ）を添加し、国際公開第２００８／０１０９８５Ａ２号、Bioorg. Med. Chem Lett., 18 (2008) 726-731、国際公開第２００９／００２４９５Ａ１号、及びBioorg. Med. Chem Lett., 19 (2009) 1168-1172にしたがって化合物（Ｉｆ）を得る。
（ｉｖ）工程（ｄ）：化合物（Ｉｆ）からの化合物（Ｉｈ）の合成（スキームＩ−２）  化合物（Ｉｇ）を、例えばジメチルホルムアミド（DMF）等に溶解し、氷冷下で水素化ナトリウムを添加し、例えば１〜３時間撹拌する。さらに化合物（Ｉｆ）を添加し、例えば室温で16〜24時間撹拌して化合物（Ｉｆ）のクロロ基と化合物（Ｉｇ）のＮＨを反応させ、化合物（Ｉｈ）を合成することができる。反応液からの化合物（Ｉｈ）の精製は、反応液に氷を添加した後、例えばクロロホルム等の有機溶媒によって抽出することができ、有機層を例えばbrine等で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥後減圧濃縮する。濃縮後の残渣を例えばクロロホルム・メタノール混合液 (例えばクロロホルム:メタノール = 9:1、又はクロロホルム:メタノール = 9.5:0.5)、酢酸エチル・ヘキサン混合液(例えば酢酸エチル：ヘキサン = 1:4)を溶出溶媒としてシリカゲルクロマトグラフィーに付し、得られた化合物をクロロホルム−ヘキサン、又は酢酸エチル−ヘキサン等で再結晶し、化合物（Ｉｈ）の結晶を得ることができる。
（ｖ）工程（ｅ）：化合物（Ｉｈ）からの化合物（Ｉ）を合成する工程
化合物（Ｉｈ）に、ジクロロメタン・トリフルオロ酢酸混液 (例えばジクロロメタン：TFA = 4:1)を加え、室温で１〜３時間撹拌する。この反応により、Boc基を除去し、化合物（Ｉ）を合成する。化合物（Ｉ）の精製は、反応液に例えば飽和炭酸水素ナトリウム水を加え、その後クロロホルム等の有機溶媒で抽出することができる。有機層をbrine等で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、得られた残渣を、クロロホルム・メタノール混合液(例えばクロロホルム： メタノール = 9：1)を溶出溶媒としてシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、化合物（Ｉ）を得ることができる。
【０１１１】
【化３４】
2016039398.tif 000035
【０１１２】
【化３５】
2016039398.tif 000036
【０１１３】
（２）−１．Ｖが−ＣＯ−ＮＨ−である上記一般式（Ａ）で示される化合物
上記一般式（Ａ）で示される化合物のうち、Ｖが−ＣＯ−ＮＨ−である化合物は、以下の一般式（ＩＩＩ）で示される化合物である。
【０１１４】
【化３６】
2016039398.tif 000037
【０１１５】
（Ｒ’は、好ましくは、フラニル基、フェニル基、又はハロゲン原子である。Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒｘ、ｎ、Ｗ、Ｘ、Ｙ、及びＺは、一般式（Ｉ）と同じ）
である。
【０１１６】
一般式（ＩＩＩ）のＲ’として好ましくは、フラニル基、フェニル基、又は塩素原子等であり、より好ましくは、フラニル基又フェニル基はであり、さらに好ましくは、フラニル基である。
【０１１７】
一般式（ＩＩＩ）のＲａ、Ｒｂ、Ｒｃ、及びＲｄとして好ましくは、一般式（Ｉ）と同じであるが、最も好まししくは、Ｒａ及びＲｄ、若しくはＲｃ、及びＲｄが同時にカルボニル基である。
【０１１８】
一般式（ＩＩＩ）のＲ１、Ｒ２、Ｒｘ、及びｎとして好ましくは、一般式（Ｉ）と同じである。
【０１１９】
一般式（ＩＩＩ）のＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺとして好ましくは、一般式（Ｉ）と同じであるが、最も好ましくは、Ｗ、Ｘ、Ｙ、及びＺが同時にＣＨであるか；Ｗ、Ｘ、Ｙ、及びＺのうちＷ又はＹのいずれか一方が窒素原子であり、それ以外はＣＨである。
【０１２０】
一般式（ＩＩＩ）で示される化合物のＲ’がチエニル基であるとき、塩素原子であるとき、又はフラニル基若しくはフェニル基である場合のＲａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒｘ、ｎ、Ｗ、Ｘ、Ｙ、及びＺの好ましい態様は、一般式（Ｉ）と同じである。
【０１２１】
上記一般式（ＩＩＩ）で示される化合物のうち、特に好ましい態様は、下記一般式（ＩＶ）で示される化合物である：
【０１２２】
【化３７】
2016039398.tif 000038
【０１２３】
（式中、Ｒ’は、フラニル基、フェニル基、又は塩素原子である。）
さらに、一般式（ＩＩＩ）で示される化合物としては、下記式（１）、（１４）〜（２０）で示される化合物が例示できる。
・N-(4-((2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル)フェニル)カルバモイル)ベンジル)-4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-カルボキサミド
【０１２４】
【化３８】
2016039398.tif 000039
【０１２５】
・N-(4-(2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル)フェニルカルバモイル)ベンジル)-4-メチル-2,5-ジオキソピペラジン-1-カルボキサミド
【０１２６】
【化３９】
2016039398.tif 000040
【０１２７】
・N-((5-(2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル) フェニルカルバモイル)ピリジン-2-イル)メチル)-4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-カルボキサミド
【０１２８】
【化４０】
2016039398.tif 000041
【０１２９】
・N-((6-(2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル) フェニルカルバモイル)ピリジン-3-イル)メチル)-4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-カルボキサミド
【０１３０】
【化４１】
2016039398.tif 000042
【０１３１】
・N-(4-(2-アミノ-5-クロロフェニルカルバモイル)ベンジル)-4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-カルボキサミド
【０１３２】
【化４２】
2016039398.tif 000043
【０１３３】
・N-(4-(2-アミノ-5-(フラン-2-イル) フェニルカルバモイル)ベンジル)-4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-カルボキサミド
【０１３４】
【化４３】
2016039398.tif 000044
【０１３５】
・N-(4-(2-アミノ-5-(ベンゼン-2-イル) フェニルカルバモイル)ベンジル)-4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-カルボキサミド
【０１３６】
【化４４】
2016039398.tif 000045
【０１３７】
・N-(4-(2-アミノ-5-(フラン-3-イル) フェニルカルバモイル)ベンジル)-4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-カルボキサミド
【０１３８】
【化４５】
2016039398.tif 000046
【０１３９】
（２）−２．一般式（ＩＩＩ）で示される化合物の合成方法
上記一般式（ＩＩＩ）で示される化合物の合成方法は、特に制限されないが、例えば上記（１）−２．の工程（ａ）から（ｃ）によって得られた化合物（Ｉｆ）から、スキームＩＩＩに例示する方法によって合成することができる。スキームＩＩＩにおいて、Ｒ’、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒｘ、ｎ、Ｗ、Ｘ、Ｙ、及びＺは、上記１−１．の項と同じである。
（ｉ）工程（ｄ）：化合物（Ｉｆ）からの化合物（ＩＩＩａ）の合成
例えば、国際公開第２００８／０１０９８５Ａ２号、Bioorg. Med. Chem Lett., 18 (2008) 726-731、国際公開第２００９／００２４９５Ａ１号、及びBioorg. Med. Chem Lett., 19 (2009) 1168-1172にしたがって、化合物（Ｉｆ）からの化合物（ＩＩＩａ）を合成、精製する。
（ｉｉ）工程（ｅ）：化合物（ＩＩＩａ）からの化合物（ＩＩＩｃ）の合成
化合物（ＩＩＩｂ）を、例えばジクロロメタン（CH2Cl2）等に溶解し、トリエチルアミン等の塩基存在下で化合物（ＩＩＩａ）を添加し、例えば室温で１〜24時間撹拌して、化合物（ＩＩＩｃ）を合成することができる。反応液からの化合物（ＩＩＩｃ）の精製は、反応液に氷を添加した後、例えばクロロホルム等の有機溶媒によって抽出することができ、有機層を例えばbrine等で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥後減圧濃縮する。濃縮後の残渣を例えばクロロホルム・メタノール混合液 (例えばクロロホルム:メタノール = 9:1、又はクロロホルム:メタノール= 9.5:0.5)、酢酸エチル・ヘキサン混合液(例えば酢酸エチル：hexane = 1:4)を溶出溶媒としてシリカゲルクロマトグラフィーに付し、得られた化合物をクロロホルム−ヘキサン、又は酢酸エチル−ヘキサン等で再結晶し、化合物（ＩＩＩｃ）の結晶を得ることができる。
（ｉｉｉ）工程（ｆ）：化合物（ＩＩＩｃ）から化合物（ＩＩＩ）を合成する工程
上記（ｉｉ）で合成された化合物（ＩＩＩｃ）に、ジクロロメタン・トリフルオロ酢酸混液 (例えばCH2Cl2：TFA = 4:1)を加え、室温で１〜３時間撹拌する。この反応により、Boc基を除去し、化合物（ＩＩＩ）を合成する。化合物（ＩＩＩ）の精製は、反応液に例えば飽和炭酸ナトリウム水素水を加え、その後クロロホルム等の有機溶媒で抽出することができる。有機層をbrine等で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、得られた残渣を、クロロホルム・メタノール混合液(例えばクロロホルム：メタノール = 9：1)を溶出溶媒としてシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、化合物（ＩＩＩ）を得ることができる。
【０１４０】
【化４６】
2016039398.tif 000047
【０１４１】
上記一般式（Ａ）で示される化合物の薬学的に許容される塩は、特に限定されないが、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の無機酸、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マイレン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、スルフォン酸、ｐ−トルエンスルフォン酸、トリフルオロ酢酸等の有機酸との酸付加塩；ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アルミニウム等の無機塩；メチルアミン、エチルアミン、エタノールアミン、リジン、オルニチン等の有機塩基との塩；及びアンモニウム塩等が挙げられる。好ましくは、スルフォン酸、ｐ−トルエンスルフォン酸、又はトリフルオロ酢酸との有機酸付加塩である。
【０１４２】
２．下記式（Ｖ）で示される化合物、又はその薬理学的に許容される塩
２−１．下記式（Ｖ）で示される化合物
本発明の化合物の別の態様は、下記式（Ｖ）で示される化合物：
【０１４３】
【化４７】
2016039398.tif 000048
【０１４４】
である。
【０１４５】
２−２．式（Ｖ）で示される化合物の薬学的に許容される塩
一般式（Ｖ）で示される化合物の薬学的に許容される塩は、特に制限されないが、上記１．含窒素複素環誘導体の項に記載の塩を例示することができる。
【０１４６】
２−３．一般式（Ｖ）で示される化合物の合成方法
一般式（Ｖ）で示される化合物は、後述する実施例２の方法にしたがって、合成することができる。
【０１４７】
３．癌の治療及び／又は予防のための医薬組成物
本発明の医薬組成物は、上記一般式（Ｉ）で示される化合物、上記一般式（ＩＩＩ）で示される化合物若しくは上記式（Ｖ）で示される化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩を含み、より好ましくは上記一般式（Ｉ）で示される化合物若しくは上記一般式（ＩＩＩ）で示される化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩、さらに好ましくは上記一般式（Ｉ）で示される化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む。
【０１４８】
医薬組成物は、上記一般式（Ｉ）で示される化合物、上記一般式（ＩＩＩ）で示される化合物若しくは上記式（Ｖ）で示される化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩の他、薬学的担体と組み合わせて調製することができる。当該医薬組成物調製の際用いられる担体としては、通常の薬剤に汎用される各種のもの、例えば賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤、界面活性剤等を例示できる。
【０１４９】
上記医薬組成物が経口投与されるものである場合の剤形は、特に制限されないが、錠剤、被覆錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤、丸剤、懸濁剤、乳剤等を例示できる。また上記医薬組成物が、非経口投与されるものである場合には、注射剤、液体製剤、点滴剤等を例示できる。
【０１５０】
上記医薬組成物が、錠剤、散剤、顆粒剤等の経口用固形医薬組成物である場合の調製に際しては、担体として例えば乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸、メチルセルロース、グリセリン、アルギン酸ナトリウム、アラビアゴム等の賦形剤、単シロップ、プドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、エチルセルロース、水、エタノール、リン酸カリウム等の結合剤、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、デンプン、乳糖等の崩壊剤、白糖、ステアリン酸、カカオバター、水素添加油等の崩壊抑制剤、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤、グリセリン、デンプン等の保湿剤、デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸等の吸着剤、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレングリコール等の滑沢剤等を使用できる。更に錠剤は必要に応じ通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フイルムコーティング錠、二重錠、多層錠等とすることができる。
【０１５１】
上記医薬組成物が、丸剤の経口用固形医薬組成物である場合の調製に際しては、担体として、例えばブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タルク等の賦形剤、アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン等の結合剤、ラミナラン、カンテン等の崩壊剤等を使用できる。
【０１５２】
上記医薬組成物が錠剤、丸剤の場合には、必要に応じて、白糖、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、セラック、ゼラチン、グリセリン、ソルビトール、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、エチルセルロース、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ）、セルロースアセテートフタレート（ＣＡＰ）、又はメチルメタアクリレート−メタアクリル酸共重合体等でコーティングすることもできる。
【０１５３】
上記医薬組成物が、カプセル剤の経口用固形医薬組成物である場合の調製に際しては、カプセル剤は有効成分を上記で例示した各種の担体と混合し、硬質ゼラチンカプセル、軟質カプセル等に充填して調製される。
【０１５４】
上記医薬組成物が液体医薬組成物の場合には、水性又は油性の懸濁液、溶液、シロップ、エリキシル剤であってもよく、通常の添加剤を用いて常法に従い、調製される。
【０１５５】
上記医薬組成物が注射剤の場合の調製に際しては、担体として例えば水、エチルアルコール、マクロゴール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類等の希釈剤、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム等のｐＨ調整剤、リン酸二カリウム、リン酸三ナトリウム、リン酸水素ナトリウム、クエン酸ナトリウム等の緩衝剤、ピロ亜硫酸ナトリウム、ＥＤＴＡ、チオグリコール酸、チオ乳酸等の安定化剤、凍結乾燥した際の成形剤として例えばマンニトール、イノシトール、マルトース、シュクロース、ラクトース等の糖類を使用できる。なお、この場合等張性の溶液を調整するに十分な量のブドウ糖或いはグリセリンを医薬製剤中に含有せしめてもよく、また通常の溶解補助剤、無痛化剤、局所麻酔剤等を添加しても良い。これらの担体を添加して、常法により皮下、筋肉内、静脈内用注射剤を製造することができる。
【０１５６】
上記医薬組成物が点滴剤の場合には、投与化合物を生理食塩水、リンゲル液等を基本とした等張電解質輸液製剤に溶解して調製することができる。
【０１５７】
本発明の医薬組成物の投与量としては、本発明の効果が奏される限り特に限定されず、剤型、患者の年齢、性別、病状の程度等によって適宜設定され得るが、例えば、経口投与の場合、上記一般式（Ｉ）で示される化合物、上記一般式（ＩＩＩ）で示される化合物又は上記式（Ｖ）で示される化合物の量に換算して成人（１５才以上）（体重約６０ｋｇとして計算する）１日量あたり０．１〜１，０００ｍｇ／ｋｇ程度、好ましくは０．５〜５００ｍｇ／ｋｇ程度である。また、経口投与以外の方法で当該医薬組成物を投与する場合には、有効血中濃度が、上記一般式（Ｉ）で示される化合物、上記一般式（ＩＩＩ）で示される化合物又は上記式（ＩＶ）で示される化合物の量０．２〜１００μｇ／ｍｌ、より好ましくは０．５〜５０μｇ／ｍｌとなるように投与することができる。
【０１５８】
本発明の医薬組成物は、癌の治療及び／又は予防のために使用することができる。本発明において癌とは、特に制限されないが、非上皮性及び上皮性の悪性腫瘍の両方が含まれる。具体的には、気管、気管支または肺等から発生する呼吸器系悪性腫瘍；上咽頭、食道、胃、十二指腸、空腸、回腸、盲腸、虫垂、上行結腸、横行結腸、S状結腸、直腸または肛門部等から発生する消化管系良性又は悪性腫瘍；肝臓癌又は胆管癌；膵臓癌；膀胱、尿管又は腎臓から発生する泌尿器系悪性腫瘍；卵巣、卵管及び子宮等のから発生する女性生殖器系悪性腫瘍；乳癌：前立腺癌；皮膚癌；視床下部、下垂体、甲状腺、副甲状腺、副腎皮質等の内分泌系悪性腫瘍；中枢神経系、末梢神経系、副腎髄質等の神経系悪性腫瘍；骨軟部組織から発生する悪性腫瘍等の固形がん、及び骨髄異形成症候群、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、急性骨髄単球性白血病、慢性骨髄単球性白血病、急性単球性白血病、慢性単球性白血病、急性全骨髄性白血病、急性巨核球性白血病、赤白血病、好酸球性白血病、慢性好中球性白血病、成人Ｔ細胞白血病、ヘアリー細胞白血病、形質細胞性白血病、多発性骨髄腫、悪性リンパ腫等の造血系悪性腫瘍；リンパ系悪性腫瘍等の造血器がんが挙げられる。より好ましくは消化管系悪性腫瘍、女性生殖器系悪性腫瘍、乳癌、及び神経系悪性腫瘍から選択される少なくとも一種であり。さらに好ましくは神経芽細胞腫、乳癌、大腸癌等である。
【０１５９】
４．細胞増殖抑制剤
本発明の細胞増殖抑制剤は、上記一般式（Ｉ）で示される化合物、上記一般式（ＩＩＩ）で示される化合物若しくは上記式（ＩＶ）で示される化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩を含み、より好ましくは上記一般式（Ｉ）で示される化合物若しくは上記一般式（ＩＩＩ）で示される化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩、さらに好ましくは上記一般式（Ｉ）で示される化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む。
【０１６０】
ここで、本発明における「細胞増殖抑制」とは、細胞死を誘起せずに、細胞周期をG0／G1期で停止させることをいう。細胞増殖抑制された状態とは、例えばフローサイトメトリー等の常法にしたがった細胞のDNA含有量を指標とする細胞周期解析において、例えば大腸がん細胞であるHCT116細胞において、アポトーシス細胞を示すsubG1に画分される細胞の割合が例えば10〜15％以下、より好ましくは5〜10％以下であり、及び／又は静止期を示すG0/G1期に画分される細胞の割合が60〜70％以上、より好ましくは65〜75％以上、さらに好ましくは70〜80％以上の状態をいう。
【０１６１】
本発明の細胞増殖抑制剤は、上記一般式（Ｉ）で示される化合物、上記一般式（ＩＩＩ）で示される化合物若しくは上記式（ＩＶ）で示される化合物、、又はそれらの薬学的に許容される塩の他、薬学的担体と組み合わせて調製することができる。当該医薬組成物調製の際用いられる担体としては、上記３．の項で記載した賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤、界面活性剤等を例示できる。
【０１６２】
上記細胞増殖抑制剤が経口投与されるものである場合の剤形は、錠剤、被覆錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤、丸剤、懸濁剤、乳剤等を例示できる。各剤形の調製は、上記３．の癌の治療及び／又は予防のための医薬組成物の調製方法に準じて行うことができる。
【０１６３】
また、本発明の細胞増殖抑制剤の投与量、投与対照疾患は、上記３．の癌の治療及び／又は予防のための医薬組成物と同様である。
【０１６４】
５．神経保護剤
本発明の神経保護剤は、下記一般式（Ａ）で示される化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む：
【０１６５】
【化４８】
2016039398.tif 000049
【０１６６】
｛式中、
Ｒ’は、チエニル基、フラニル基、フェニル基、又はハロゲン原子；
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、及びＲｄのうち二つはカルボニル基であり、他の二つは同一又は異なって下記一般式（Ａ−２）で示される基：
【０１６７】
【化４９】
2016039398.tif 000050
【０１６８】
［Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、水素原子、炭素数１〜４のアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいシクロヘキシル基、又は置換されていてもよいテトラヒドロピラニル基であり、Ｒｂ若しくはＲｄが上記式（Ａ−２）で示される基である時は、Ｒ１若しくはＲ２がＲｘと共に炭素数３〜６の飽和環を形成してもよい］；
Ｒｘは、水素原子、又は置換されていてもよい炭素数１〜６のアルキル基；
ｎは、１〜４のいずれかの整数；
Ｖは、直結又は−ＣＯ−ＮＨ−；
Ｗ、Ｘ、Ｙ、及びＺは、同一又は異なってＣＨ又は窒素原子である｝。
【０１６９】
Ｒ’として好ましくは、チエニル基、フラニル基、フェニル基又は塩素原子等であり、より好ましくは、チエニル基又はフラニル基であり、さらに好ましくは、チエニル基である。
【０１７０】
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、及びＲｄとして好ましくは、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、及びＲｄのうち二つはカルボニル基であり、他の二つは同一又は異なって上記一般式（Ａ−２）で示される基であり、かつ、Ｒａ及びＲｃが、同時にカルボニル基でなく；さらに好ましくは、Ｒａが、カルボニル基であり、Ｒｃが上記一般式（Ａ−２）で示される基であり；最も好ましくは、Ｒａ及びＲｂがカルボニル基である。
【０１７１】
Ｒ１及びＲ２として好ましくは、同時に水素原子；同時に炭素数１〜４のアルキル基（この場合の炭素数１〜４のアルキル基として好ましくは、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基又はイソブチル基等であり、より好ましくはメチル基、エチル基又はプロピル基であり、最も好ましくはメチル基又はエチル基である）；又は一方が水素原子であり他方が炭素数１〜４のアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいシクロヘキシル基、又は置換されていてもよいテトラヒドロピラニル基であり（この場合の炭素数１〜４のアルキル基として好ましくはメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、イソブチル基又はｔｅｒｔ−ブチル基等であり、より好ましくはメチル基、エチル基又はプロピル基であり、最も好ましくはメチル基又はエチル基であり；アリール基として好ましくは、フェニル基、モルフォリル基、又はピリジニル基等であり、より好ましくはフェニル基であり；アリール基、シクロヘキシル基及びテトラヒドロピラニル基の置換基として好ましくは、塩素原子、及びフッ素原子のいずれかのハロゲン原子、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、又は水酸基等であり、より好ましくは塩素原子、フッ素原子、メチル基、又はエチル基、最も好ましくは塩素原子、フッ素原子又はメチル基である）。
【０１７２】
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、およびＲｄのいずれか二つが上記一般式（Ａ−２）で示される基である時の一態様としては、上記一般式（Ａ−２）で示される基の二つが同一であり、かつＲ１及びＲ２の両方が水素原子であることが好ましい。
【０１７３】
また、別の態様としてＲａ、Ｒｂ、Ｒｃ、およびＲｄのいずれか二つが異なって上記一般式（Ａ−２）で示される基である時は、一方の上記一般式（Ａ−２）で示される基のＲ１及びＲ２の両方が水素原子であり、他方がもう一方と異なる上記一般式（Ａ−２）で示される基［この場合のＲ１及びＲ２として好ましくは、両方がメチル基；又はＲ１及びＲ２の一方が水素原子であり、他方が炭素数１〜４のアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいシクロヘキシル基、又は置換されていてもよいテトラヒドロピラニル基（この場合の炭素数１〜４のアルキル基として好ましくはメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、イソブチル基、又はｔｅｒｔ−ブチル基等であり、より好ましくはメチル基、エチル基又はプロピル基であり、最も好ましくはメチル基又はエチル基であり；アリール基として好ましくは、フェニル基、モルフォリル基、又はピリジニル基等であり、より好ましくはフェニル基であり；アリール基、シクロヘキシル基及びテトラヒドロピラニル基の置換基として好ましくは、塩素原子、及びフッ素原子のいずれかのハロゲン原子、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基又は水酸基等であり、より好ましくは塩素原子、フッ素原子、メチル基又はエチル基、最も好ましくは塩素原子、フッ素原子又はメチル基である）］であることが好ましい。
【０１７４】
Ｒｂ若しくはＲｄが上記式（Ａ−２）示される基である時は、Ｒ１若しくはＲ２がＲｘと組み合わさって炭素数３〜６の飽和環を形成してもよく、飽和環として好ましくは飽和３員環、飽和４員環、又は飽和５員環であり、より好ましくは飽和５員環である。
【０１７５】
Ｒｘは、水素原子、又は置換されていてもよい炭素数１〜６のアルキル基であり、炭素数１〜６のアルキル基は、直鎖型又は分岐型のアルキル基であり、より好ましくは直鎖型である。直鎖型のアルキル基として好ましくはメチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、又はヘキシル基であり、より好ましくはメチル基、エチル基、又はプロピル基であり、最も好ましくはメチル基又はエチル基である。分岐型のアルキル基として好ましくはイソプロピル基、ｓｅｃ−ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、イソヘキシル基、又はビイソプロピル基等が挙げられる。より好ましくはイソプロピル基、ｓｅｃ−ブチル基、イソブチル基、又はイソペンチル基であり、さらに好ましくはイソプロピル基である。炭素数１〜６のアルキル基の置換基として好ましくは、塩素原子、及びフッ素原子のいずれかのハロゲン原子、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、又は水酸基等であり、より好ましくは塩素原子、フッ素原子、メチル基、又はエチル基、最も好ましくは塩素原子、フッ素原子又はメチル基である。
【０１７６】
ｎは、１〜４のいずれかの整数であり、より好ましくは１又は２であり、最も好ましくは１である。
Ｖは、直結又は−ＣＯ−ＮＨ−であり；
Ｗ、Ｘ、Ｙ、及びＺとして好ましくはＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺの全てがＣＨであるか又はＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺのいずれか１つ若しくは２つが窒素原子であり；より好ましくはＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺの全てがＣＨであるか、又はＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺのいずれか１つが窒素原子であり；最も好ましくはＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺの全てがＣＨである。
【０１７７】
神経保護剤に使用される上記一般式（A）で示される化合物の塩は、上記１．含窒素複素間誘導体の項に記載の塩を例示することができる。
（１）．Ｖが直結である上記一般式（Ａ）で示される化合物
上記一般式（Ａ）で示される化合物のうち、Ｖが直結である化合物は、以下の一般式（Ｉ）で示される化合物である。
【０１７８】
【化５０】
2016039398.tif 000051
【０１７９】
｛式中、
Ｒ’は、チエニル基、フラニル基、フェニル基又はハロゲン原子；
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、及びＲｄのうち二つはカルボニル基であり、他の二つは同一又は異なって下記一般式（ＩＩ）で示される基：
【０１８０】
【化５１】
2016039398.tif 000052
【０１８１】
［Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、水素原子、炭素数１〜４のアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいシクロヘキシル基、又は置換されていてもよいテトラヒドロピラニル基であり、Ｒｂ若しくはＲｄが上記式（ＩＩ）示される基である時は、Ｒ１若しくはＲ２がＲｘと組み合わさって炭素数３〜６の飽和環を形成してもよい］；
Ｒｘは、水素原子、又は置換されていてもよい炭素数１〜６のアルキル基；
ｎは、１〜４のいずれかの整数；
Ｗ、Ｘ、Ｙ、及びＺは、同一又は異なってＣＨ又は窒素原子である｝
である。
【０１８２】
Ｒ’として好ましくは、チエニル基、フラニル基、フェニル基又は塩素原子等であり、より好ましくは、チエニル基又はフラニル基であり、さらに好ましくは、チエニル基である。
【０１８３】
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、及びＲｄとして好ましくは、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、及びＲｄのうち二つはカルボニル基であり、他の二つは同一又は異なって上記一般式（ＩＩ）で示される基であり、かつ、Ｒａ及びＲｃが、同時にカルボニル基でなく；さらに好ましくは、Ｒａが、カルボニル基であり、Ｒｃが上記一般式（ＩＩ）で示される基であり；最も好ましくは、Ｒａ及びＲｂがカルボニル基である。
【０１８４】
Ｒ１及びＲ２として好ましくは、同時に水素原子；同時に炭素数１〜４のアルキル基（この場合の炭素数１〜４のアルキル基として好ましくは、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基又はイソブチル基等であり、より好ましくはメチル基、エチル基又はプロピル基であり、最も好ましくはメチル基又はエチル基である）；又は一方が水素原子であり他方が炭素数１〜４のアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいシクロヘキシル基、又は置換されていてもよいテトラヒドロピラニル基であり（この場合の炭素数１〜４のアルキル基として好ましくはメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、sec-ブチル基、イソブチル基又はtert-ブチル基等であり、より好ましくはメチル基、エチル基又はプロピル基であり、最も好ましくはメチル基又はエチル基であり；アリール基として好ましくは、フェニル基、モルフォリル基、又はピリジニル基等であり、より好ましくはフェニル基であり；アリール基、シクロヘキシル基及びテトラヒドロピラニル基の置換基として好ましくは、塩素原子、及びフッ素原子のいずれかのハロゲン原子、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、又は水酸基等であり、より好ましくは塩素原子、フッ素原子、メチル基、又はエチル基、最も好ましくは塩素原子、フッ素原子又はメチル基である）。
【０１８５】
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、およびＲｄのいずれか二つが上記一般式（ＩＩ）で示される基である時の一態様としては、上記一般式（ＩＩ）で示される基の二つが同一であり、かつＲ１及びＲ２の両方が水素原子であることが好ましい。
【０１８６】
また、別の態様としてＲａ、Ｒｂ、Ｒｃ、およびＲｄのいずれか二つが異なって上記一般式（ＩＩ）で示される基である時は、一方の上記一般式（ＩＩ）で示される基のＲ１及びＲ２の両方が水素原子であり、他方がもう一方と異なる上記一般式（ＩＩ）で示される基［この場合のＲ１及びＲ２として好ましくは、両方がメチル基；又はＲ１及びＲ２の一方が水素原子であり、他方が炭素数１〜４のアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいシクロヘキシル基、又は置換されていてもよいテトラヒドロピラニル基（この場合の炭素数１〜４のアルキル基として好ましくはメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、sec-ブチル基、イソブチル基、又はtert-ブチル基等であり、より好ましくはメチル基、エチル基又はプロピル基であり、最も好ましくはメチル基又はエチル基であり；アリール基として好ましくは、フェニル基、モルフォリル基、又はピリジニル基等であり、より好ましくはフェニル基であり；アリール基、シクロヘキシル基及びテトラヒドロピラニル基の置換基として好ましくは、塩素原子、及びフッ素原子のいずれかのハロゲン原子、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基又は水酸基等であり、より好ましくは塩素原子、フッ素原子、メチル基又はエチル基、最も好ましくは塩素原子、フッ素原子又はメチル基である）］であることが好ましい。
【０１８７】
Ｒｂ若しくはＲｄが上記式（ＩＩ）示される基である時は、Ｒ１若しくはＲ２がＲｘと組み合わさって炭素数３〜６の飽和環を形成してもよく、飽和環として好ましくは飽和３員環、飽和４員環、又は飽和５員環であり、より好ましくは飽和５員環である。
【０１８８】
Ｒｘは、水素原子、又は置換されていてもよい炭素数１〜６のアルキル基であり、炭素数１〜６のアルキル基は、直鎖型又は分岐型のアルキル基であり、より好ましくは直鎖型である。直鎖型のアルキル基として好ましくはメチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、又はヘキシル基であり、より好ましくはメチル基、エチル基、又はプロピル基であり、最も好ましくはメチル基又はエチル基である。分岐型のアルキル基として好ましくはイソプロピル基、sec-ブチル基、イソブチル基、tert-ブチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、イソヘキシル基、又はビイソプロピル基等が挙げられる。より好ましくはイソプロピル基、sec-ブチル基、イソブチル基、又はイソペンチル基であり、さらに好ましくはイソプロピル基である。炭素数１〜６のアルキル基の置換基として好ましくは、塩素原子、及びフッ素原子のいずれかのハロゲン原子、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、又は水酸基等であり、より好ましくは塩素原子、フッ素原子、メチル基、又はエチル基、最も好ましくは塩素原子、フッ素原子又はメチル基である。
【０１８９】
ｎは、１〜４のいずれかの整数であり、より好ましくは１又は２であり、最も好ましくは１である。
【０１９０】
Ｗ、Ｘ、Ｙ、及びＺとして好ましくはＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺの全てがＣＨであるか又はＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺのいずれか１つ若しくは２つが窒素原子であり；より好ましくはＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺの全てがＣＨであるか、又はＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺのいずれか１つが窒素原子であり；最も好ましくはＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺの全てがＣＨである。
【０１９１】
一般式（Ｉ）で示される化合物のＲ’がチエニル基であるときの好ましい態様としては、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、およびＲｄのうちＲａ及びＲｂがカルボニル基であり、他が同一又は異なって上記一般式（ＩＩ）で示される基である。この場合Ｒｃが上記一般式（ＩＩ）で示される基（Ｒ１及びＲ２は両方が水素原子）であり、かつカルボニル基でないＲｂ又はカルボニル基でないＲｄは、Ｒｃと同一であるか；又はＲｃと異なる上記一般式（ＩＩ）で示される基［この場合のＲ１及びＲ２は、両方がメチル基；又はＲ１及びＲ２の一方が水素原子であり、他方が炭素数１〜４のアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいシクロヘキシル基、又は置換されていてもよいテトラヒドロピラニル基（この場合の炭素数１〜４のアルキル基として好ましくはメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、sec-ブチル基、イソブチル基、又はtert-ブチル基等であり、より好ましくはメチル基、エチル基又はプロピル基であり、最も好ましくはメチル基又はエチル基であり；アリール基として好ましくは、フェニル基、モルフォリル基、又はピリジニル基等であり、より好ましくはフェニル基であり；アリール基、シクロヘキシル基及びテトラヒドロピラニル基の置換基として好ましくは、塩素原子、及びフッ素原子のいずれかのハロゲン原子、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基又は水酸基等であり、より好ましくは塩素原子、フッ素原子、メチル基又はエチル基、最も好ましくは塩素原子、フッ素原子又はメチル基である）］であることが好ましい。
【０１９２】
Ｒｂ若しくはＲｄが上記式（ＩＩ）示される基である時は、Ｒ１若しくはＲ２がＲｘと組み合わさって炭素数３〜６の飽和環を形成してもよく、飽和環としてより好ましくは飽和５員環である。
【０１９３】
Ｒｘは、水素原子、又は置換されていてもよい直鎖型の炭素数１〜６のアルキル基であり、好ましくは、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、又はヘキシル基であり、より好ましくは、メチル基、エチル基、又はプロピル基であり、最も好ましくはメチル基又はエチル基である。炭素数１〜６のアルキル基の置換基として好ましくは、塩素原子、及びフッ素原子のいずれかのハロゲン原子、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、又は水酸基等であり、より好ましくは塩素原子、フッ素原子、メチル基、又はエチル基、最も好ましくは塩素原子、フッ素原子又はメチル基である。
【０１９４】
ｎは、より好ましくは１又は２であり、最も好ましくは１である。
【０１９５】
Ｗ、Ｘ、Ｙ、及びＺとして、好ましくはＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺの全てがＣＨであるか、又はＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺのいずれか１つが窒素原子であり；最も好ましくはＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺの全てがＣＨである。
【０１９６】
さらに、一般式（Ｉ）で示される化合物のＲ’がチエニル基である化合物としては、下記式（２）〜（１０）で示される化合物が例示される：
・N-(2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル)フェニル)-4-((4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-イル)メチル)ベンズアミド
【０１９７】
【化５２】
2016039398.tif 000053
【０１９８】
・N-(2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル)フェニル)-4-((1,4-ジオキソ-ヘキサハイドロピロロ[1,2-a]ピラジン-2-(1H)-イル)メチル)ベンズアミド
【０１９９】
【化５３】
2016039398.tif 000054
【０２００】
・N-(2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル)フェニル)-4-((2,5-ジオキソピペラジン-1-イル)メチル)ベンズアミド
【０２０１】
【化５４】
2016039398.tif 000055
【０２０２】
・N-(2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル)フェニル)-4-((4-メチル-2,5-ジオキソピペラジン-1-イル)メチル)ベンズアミド
【０２０３】
【化５５】
2016039398.tif 000056
【０２０４】
・N-(2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル)フェニル)-4-((3,4-ジオキソ-ヘキサヒドロピロロ[1,2-a]ピラジン-2(1H)-イル)メチル)ベンズアミド
【０２０５】
【化５６】
2016039398.tif 000057
【０２０６】
・N-（2 -アミノ-5（チオフェン-2-イル）フェニル）-4-（（4-メチル-2,5-ジオキソ-3-フェニルピペラジン-1-イル）メチル）ベンズアミド
【０２０７】
【化５７】
2016039398.tif 000058
【０２０８】
・N-(2 -アミノ-5（チオフェン-2 -イル）フェニル）-4-（（3,3,4-トリメチル-2,5 -ジオキソピペラジン-1-イル）メチル）ベンズアミド
【０２０９】
【化５８】
2016039398.tif 000059
【０２１０】
・N-(2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル)フェニル)-4-((3-シクロヘキシル-4-メチル-2,5-ジオキソピペラジン-1-イル）メチル）ベンズアミド
【０２１１】
【化５９】
2016039398.tif 000060
【０２１２】
・N-(2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル)フェニル)-4-((4-メチル-2,5-ジオキソ-3-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)ピペラジン-1-イル)メチル)ベンズアミド
【０２１３】
【化６０】
2016039398.tif 000061
【０２１４】
一般式（Ｉ）で示される化合物のＲ’が塩素原子であるときの好ましい態様としては、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、およびＲｄのうちＲａ及びＲｂがカルボニル基であり、他が同一又は異なって上記一般式（ＩＩ）で示される基である。この場合Ｒｃが上記一般式（ＩＩ）で示される基（Ｒ１及びＲ２は両方が水素原子）であり、かつＲｄは、Ｒｃと同一であるか、又はＲｃと異なる上記一般式（ＩＩ）で示される基［この場合のＲ１及びＲ２は、両方がメチル基；又はＲ１及びＲ２の一方が水素原子であり、他方が炭素数１〜４のアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいシクロヘキシル基、又は置換されていてもよいテトラヒドロピラニル基（この場合の炭素数１〜４のアルキル基として好ましくはメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、sec-ブチル基、イソブチル基、又はtert-ブチル基等であり、より好ましくはメチル基、エチル基又はプロピル基であり、最も好ましくはメチル基又はエチル基であり；アリール基として好ましくは、フェニル基、モルフォリル基、又はピリジニル基等であり、より好ましくはフェニル基であり；アリール基、シクロヘキシル基及びテトラヒドロピラニル基の置換基として好ましくは、塩素原子、及びフッ素原子のいずれかのハロゲン原子、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基又は水酸基等であり、より好ましくは塩素原子、フッ素原子、メチル基又はエチル基、最も好ましくは塩素原子、フッ素原子又はメチル基である）］であることが好ましい。
【０２１５】
Ｒｘは、水素原子、又は置換されていてもよい直鎖型の炭素数１〜６のアルキル基であり、好ましくは、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、又はヘキシル基であり、より好ましくは、メチル基、エチル基、又はプロピル基であり、最も好ましくはメチル基又はエチル基である。炭素数１〜６のアルキル基の置換基として好ましくは、塩素原子、及びフッ素原子のいずれかのハロゲン原子、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、又は水酸基等であり、より好ましくは塩素原子、フッ素原子、メチル基、又はエチル基、最も好ましくは塩素原子、フッ素原子又はメチル基である。
【０２１６】
ｎは、より好ましくは１又は２であり、最も好ましくは１である。
【０２１７】
Ｗ、Ｘ、Ｙ、及びＺとして、好ましくはＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺの全てがＣＨであるかＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺのいずれか１つが窒素原子であり、最も好ましくはＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺの全てがＣＨである。
【０２１８】
一般式（Ｉ）で示される化合物のＲ’が塩素原子である化合物としては、下記式（１１）で示される化合物が例示される。
・N-(2-アミノ-5-クロロフェニル)-4-((4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-イル)メチル)ベンズアミド
【０２１９】
【化６１】
2016039398.tif 000062
【０２２０】
一般式（Ｉ）で示される化合物のＲ’がフラニル基又はフェニル基であるときの好ましい態様としては、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、およびＲｄのうちＲａ及びＲｂがカルボニル基であり、残りが同一又は異なって上記一般式（ＩＩ）で示される基である。この場合Ｒｃが上記一般式（ＩＩ）で示される基（Ｒ１及びＲ２は両方が水素原子）であり、かつＲｄは、Ｒｃと同一であるか、又はＲｃと異なる上記一般式（ＩＩ）で示される基［この場合のＲ１及びＲ２は、両方がメチル基；又はＲ１及びＲ２の一方が水素原子であり、他方が炭素数１〜４のアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいシクロヘキシル基、又は置換されていてもよいテトラヒドロピラニル基（この場合の炭素数１〜４のアルキル基として好ましくはメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、sec-ブチル基、イソブチル基、又はtert-ブチル基等であり、より好ましくはメチル基、エチル基又はプロピル基であり、最も好ましくはメチル基又はエチル基であり；アリール基として好ましくは、フェニル基、モルフォリル基、又はピリジニル基等であり、より好ましくはフェニル基であり；アリール基、シクロヘキシル基及びテトラヒドロピラニル基の置換基として好ましくは、塩素原子、及びフッ素原子のいずれかのハロゲン原子、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基又は水酸基等であり、より好ましくは塩素原子、フッ素原子、メチル基又はエチル基、最も好ましくは塩素原子、フッ素原子又はメチル基である）］であることが好ましい。
【０２２１】
Ｒｘは、水素原子、又は置換されていてもよい直鎖型の炭素数１〜６のアルキル基であり、好ましくは、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、又はヘキシル基であり、より好ましくは、メチル基、エチル基、又はプロピル基であり、最も好ましくはメチル基又はエチル基である。炭素数１〜６のアルキル基の置換基として好ましくは、塩素原子、及びフッ素原子のいずれかのハロゲン原子、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、又は水酸基等であり、より好ましくは塩素原子、フッ素原子、メチル基、又はエチル基、最も好ましくは塩素原子、フッ素原子又はメチル基である。
【０２２２】
ｎは、より好ましくは１又は２であり、最も好ましくは１である。
【０２２３】
Ｗ、Ｘ、Ｙ、及びＺとして好ましくはＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺの全てがＣＨであるかＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺのいずれか１つが窒素原子であり、最も好ましくはＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺの全てがＣＨである。
【０２２４】
一般式（Ｉ）で示される化合物のＲ’がフラニル基又はフェニル基である化合物としては、下記式（１２）又は（１３）で示される化合物が例示される。
・N-(2-アミノ-5-(フラン-2-イル)フェニル)-4-((4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-イル)メチル)ベンズアミド
【０２２５】
【化６２】
2016039398.tif 000063
【０２２６】
・N-(2-アミノ-5-(ベンゼン-2-イル)フェニル)-4-((4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-イル)メチル)ベンズアミド
【０２２７】
【化６３】
2016039398.tif 000064
【０２２８】
（２）．Ｖが−ＣＯ−ＮＨ−である上記一般式（Ａ）で示される化合物
上記一般式（Ａ）で示される化合物のうち、Ｖが−ＣＯ−ＮＨ−である化合物は、以下の一般式（ＩＩＩ）で示される化合物である。
【０２２９】
【化６４】
2016039398.tif 000065
【０２３０】
（Ｒ’、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒｘ、ｎ、Ｗ、Ｘ、Ｙ、及びＺは、一般式（Ｉ）と同じ）
である。
【０２３１】
一般式（ＩＩＩ）のＲ’として好ましくは、チエニル基、フラニル基、フェニル基、又は塩素原子等であり、より好ましくは、チエニル基、フラニル基又フェニル基はであり、さらに好ましくは、チエニル基である。
【０２３２】
一般式（ＩＩＩ）のＲａ、Ｒｂ、Ｒｃ、及びＲｄとして好ましくは、一般式（Ｉ）と同じであるが、最も好まししくは、Ｒａ及びＲｄ、若しくはＲｃ、及びＲｄが同時にカルボニル基である。
【０２３３】
一般式（ＩＩＩ）のＲ１、Ｒ２、Ｒｘ、及びｎとして好ましくは、一般式（Ｉ）と同じである。
【０２３４】
一般式（ＩＩＩ）のＷ、Ｘ、Ｙ、及びＺとして好ましくは、一般式（Ｉ）と同じであるが、最も好ましくは、Ｗ、Ｘ、Ｙ、及びＺが同時にＣＨであるか；Ｗ、Ｘ、Ｙ、及びＺのうちＷ又はＹのいずれか一方が窒素原子であり、それ以外はＣＨである。
一般式（ＩＩＩ）で示される化合物のＲ’がチエニル基であるとき、塩素原子であるとき、又はフラニル基若しくはフェニル基である場合のＲａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒｘ、ｎ、Ｗ、Ｘ、Ｙ、及びＺの好ましい態様は、一般式（Ｉ）と同じである。
【０２３５】
上記一般式（ＩＩＩ）で示される化合物のうち、特に好ましい態様は、下記一般式（ＩＶ）で示される化合物である：
【０２３６】
【化６５】
2016039398.tif 000066
【０２３７】
（式中、Ｒ’は、チエニル基、フラニル基、フェニル基、又は塩素原子である。）
さらに、一般式（ＩＩＩ）で示される化合物としては、下記式（１）、（１４）〜（２０）で示される化合物が例示できる。
・N-(4-((2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル)フェニル)カルバモイル)ベンジル)-4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-カルボキサミド
【０２３８】
【化６６】
2016039398.tif 000067
【０２３９】
・N-(4-(2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル)フェニルカルバモイル)ベンジル)-4-メチル-2,5-ジオキソピペラジン-1-カルボキサミド
【０２４０】
【化６７】
2016039398.tif 000068
【０２４１】
・N-((5-(2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル) フェニルカルバモイル)ピリジン-2-イル)メチル)-4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-カルボキサミド
【０２４２】
【化６８】
2016039398.tif 000069
【０２４３】
・N-((6-(2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル) フェニルカルバモイル)ピリジン-3-イル)メチル)-4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-カルボキサミド
【０２４４】
【化６９】
2016039398.tif 000070
【０２４５】
・N-(4-(2-アミノ-5-クロロフェニルカルバモイル)ベンジル)-4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-カルボキサミド
【０２４６】
【化７０】
2016039398.tif 000071
【０２４７】
・N-(4-(2-アミノ-5-(フラン-2-イル) フェニルカルバモイル)ベンジル)-4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-カルボキサミド
【０２４８】
【化７１】
2016039398.tif 000072
【０２４９】
・N-(4-(2-アミノ-5-(ベンゼン-2-イル) フェニルカルバモイル)ベンジル)-4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-カルボキサミド
【０２５０】
【化７２】
2016039398.tif 000073
【０２５１】
・N-(4-(2-アミノ-5-(フラン-3-イル) フェニルカルバモイル)ベンジル)-4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-カルボキサミド
【０２５２】
【化７３】
2016039398.tif 000074
【０２５３】
本発明の神経保護剤は、上記一般式（Ａ）で示される化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む。
【０２５４】
神経保護剤は、上記一般式（Ａ）で示される化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩の他、薬学的担体と組み合わせて調製することができる。当該神経保護剤調製の際用いられる担体としては、通常の薬剤に汎用される各種のもの、例えば上記３．の癌の治療及び／又は予防のための医薬組成物と同じ賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤、界面活性剤等を例示できる。
【０２５５】
上記神経保護剤が経口投与されるものである場合の剤形は、特に制限されないが、錠剤、被覆錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤、丸剤、懸濁剤、乳剤等を例示できる。また上記神経保護剤が、非経口投与されるものである場合には、注射剤、液体製剤、点滴剤等を例示できる。
【０２５６】
上記神経保護剤各剤形の調製は、上記３．の医薬組成物の調製方法に準じて行うことができる。
【０２５７】
本発明の神経保護剤の投与量としては、本発明の効果が奏される限り特に限定されず、剤型、患者の年齢、性別、病状の程度等によって適宜設定され得るが、例えば、上記一般式（Ａ）上記式（ＩＶ）で示される化合物の量に換算して成人（１５才以上）（体重約６０ｋｇとして計算する）１日量あたり０．１〜１，０００ｍｇ／ｋｇ程度、好ましくは０．５〜５００ｍｇ／ｋｇ程度である。また、経口投与以外の方法で当該神経保護剤を投与する場合には、有効血中濃度が、上記一般式（Ａ）上記式（ＩＶ）で示される化合物の量で示される化合物の量０．２〜１００μｇ／ｍｌ、より好ましくは０．５〜５０μｇ／ｍｌとなるように投与することができる。
【０２５８】
本発明において「神経保護剤」とは、神経系細胞の細胞死を抑制する作用を示す薬剤をいう。また、「細胞死」とは細胞が死滅することを意味し、その機序は、アポトーシス、ネクローシス、オートファジー経路等全ての機序が含まれ、特に限定されるものではない。さらに「細胞死の抑制」とは、死滅する細胞の数又は割合を減少させることをいう。
【０２５９】
本発明において、神経系細胞には、神経細胞、グリア細胞、アストロサイト、ミクログリア、オリゴデンドロサイト、及びシュワン細胞等が含まれる。
【０２６０】
また、本発明の神経保護剤はHDAC1およびHDAC2を選択的に阻害するが、アポトーシス等の細胞死を誘導せずむしろ抑制し、オートファジー等の生存シグナルを誘導し、神経系細胞の細胞死を抑制すると考えられる。本発明の神経保護剤は、神経細胞、グリア細胞、アストロサイト、ミクログリア、オリゴデンドロサイト、及びシュワン細胞等の神経系細胞の細胞死を抑制するものであり、好適には、神経細胞、グリア細胞、及びオリゴデンドロサイトの細胞死を抑制し、さらに好適には、神経細胞死を抑制する。
【０２６１】
本発明の神経保護剤は、神経系疾患の予防及び／又は治療に用いることができる。本発明において、「神経系疾患」には、神経変性疾患及び虚血性脳疾患、外傷性脳障害等が含まれる。
【０２６２】
本発明において「神経変性疾患」とは、虚血以外を原因として神経系細胞が死滅する疾患を意味し、本発明の神経保護剤は神経変性疾患を予防及び／又は治療することができる。神経変性疾患としては、例えば、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、ポリグルタミン病、プリオン病、多発性硬化症、重症筋無力症、ギラン・バレー症候群、フィッシャー症候群、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、多巣性運動ニューロパチー、クロウ・フカセ症候群、HTLV-1関連脊髄症（HAM）、中枢・末梢連合脱髄症が挙げられる。本発明の神経保護剤は特に、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー型認知症、脳血管性認知症、ポリグルタミン病多発性硬化症、ギラン・バレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、又は多巣性運動ニューロパチーを予防及び／又は治療することができる。本発明の神経保護剤は、これら疾患の中で、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー型認知症、又は脳血管性認知症の予防／治療に好適に用いられ、さらに好適には、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症の予防／治療に好適に用いられる。
【０２６３】
本発明において「虚血性脳疾患」とは、脳の虚血が原因で発症する疾患を意味し、例えば、アテローム血栓性脳梗塞、心原性脳塞栓症、ラクナ梗塞等の脳梗塞等である。脳梗塞の急性期は、虚血により神経細胞が死滅するが、現在のところ発症から数時間経過すると神経細胞の死滅を抑制することができない。
【０２６４】
本発明の神経保護剤は脳梗塞の急性期に特に有用であり、発症から好ましくは７２時間、より好ましくは、４８時間、さらに好ましくは２４時間以内に投与することができる。
【０２６５】
６．神経系疾患の予防及び／又は治療剤
本発明の一態様として、上記一般式（Ａ）で示される化合物、又はその塩を含む神経系疾患の予防及び／又は治療剤が含まれる。
【０２６６】
本発明の予防及び／又は治療剤は、上記一般式（Ａ）で示される化合物、又はその塩の他、薬学的担体と組み合わせて調製することができる。当該予防及び／又は治療剤の調製の際用いられる担体、剤形、及びその調製方法は、上記「神経保護剤」と同様である。また、本発明の予防及び／又は治療剤の投与量、投与対象疾患は、上記「神経保護剤」と同様である。
【０２６７】
７．神経系疾患の予防及び／又は治療のための医薬組成物
本発明の一態様として、上記一般式（Ａ）で示される化合物、又はその塩を含む神経系疾患の予防及び／又は治療のための医薬組成物が含まれる。
【０２６８】
本発明の医薬組成物は、上記一般式（Ａ）で示される化合物、又はその塩の他、薬学的担体と組み合わせて調製することができる。当該医薬組成物調製の際用いられる担体としては、上記「神経保護剤」で記載した賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤、界面活性剤等を例示できる。
【０２６９】
上記医薬組成物が経口投与されるものである場合の剤形は、錠剤、被覆錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤、丸剤、懸濁剤、乳剤等を例示できる。また上記医薬組成物が、非経口投与されるものである場合には、注射剤、液体製剤、点滴剤等を例示できる。各剤形の調製方法は、上記「神経保護剤」の調製方法に準じて行うことができる。
【０２７０】
また、本発明の医薬組成物の投与量、投与対象疾患は、上記「神経保護剤」と同様である。
【０２７１】
８．神経系疾患の予防及び／又は治療方法
本発明の一態様として、上述の「上記一般式（Ａ）で示される化合物、又はその塩」を使用した神経系疾患の予防及び/又は治療方法が含まれる。神経系疾患の具体例及び神経保護剤の投与方法は、上述の通りである。
【実施例】
【０２７２】
以下、実施例を示して本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は実施例の態様に限定されるものではない。【０２７３】
なお、以下に示す動物実験は、大阪大学動物実験規程に基づき大阪大学医学系研究科動物実験委員会の承認の元、大阪大学医学部附属動物実験施設において行った。また1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine （MPTP）及び1-methyl-4- phenylpyridinium（MPP+）の使用及び廃棄は、安全性データシート（MSDS）にしたがって行った。【０２７４】
また、下記実施例において、融点測定は、MP-500P（Yanaco）を使用した。HR-ESI-MSには、LCMS-IT-TOF (SIMADZU)を使用した。核磁気共鳴装置（NMR）は、JEOL-EX-400 (400 MHz) を使用した。薄層クロマトグラフィー (TLC) は、Silica gel 60 F254 (Merck) を使用した。中圧分取クロマトグラフは、W-Prep 2XY-10VW (山善)を使用し、フラッシュカラムクロマトグラフィーカートリッジには、Biotage ZIPTM (Biotage)を用いた。【０２７５】
参考合成例１：N-(4-((2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル)フェニル)カルバモイル)ベンジル)-4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-カルボキサミド[N-(4-((2-amino-5-(thiophen-2-yl)phenyl)carbamoyl)benzyl)-4-ethyl-2,3-dioxopiperazine-1-carboxamide:K-560 （式１）]の合成
K-560は、Hirata Y et al (Bioorg Med Chem Lett. 2012 Mar 1;22(5):1926-30)に記載の化合物8bである。【０２７６】
【化７４】
2016039398.tif 000075
【０２７７】
実施例１：N-(2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル)フェニル)-4-((4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-イル)メチル)ベンズアミド[N-(2-amino-5-(thiophen-2-yl)phenyl)-4-((4-ethyl-2,3-dioxopiperazin-1-yl)methyl)benzamide:K-852（式２）]の合成【０２７８】
【化７５】
2016039398.tif 000076
【０２７９】
（１）tert-ブチル2-（4-（（4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン1-イル）メチル）ベンズアミド）-4-（チオフェン-2-イル）フェニルカルバメート[tert-butyl 2-(4-((4-ethyl-2,3-dioxopiperazin-1-yl)methyl)benzamido)-4-(thiophen-2-yl) phenylcarbamate] (K-852a)の合成
エチル2,3-ジオキソピペラジン(0.30 g, 2.1 mmol)を無水DMF (5 ml)に溶解し、氷冷下で水素化ナトリウム (0.10 g, 4.2 mmol)を加えて2時間撹拌した。続いて、反応液にtert-ブチル2-（4-（クロロメチル）ベンズアミド）-4-（チオフェン-2 - イル）フェニルカルバメート(0.33 g, 0.74 mmol)を加え、室温に戻し、一晩中撹拌した。得られた反応液に氷を加え、クロロホルムで抽出した。有機層をbrineで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた残渣を、クロロホルム・メタノール混合液(CHCl3：MeOH = 9：1)を溶出溶媒としてシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、白色粉末状結晶の化合物K-852a (0.17 g, 収率41.9％)を得た。【０２８０】
化合物K-852aの物性は以下の通りであった：m.p. 119-121℃； 1HNMR (399.65 MHz, CDCl3)： 1.15 (3H, t, J = 6.4 Hz, -CH3), 1.48 (9H, s, -Boc), 3.41-3.50 (6H, m), 4.66 (2H, d, J = 6.4 Hz), 7.00-8.01 (10H, m), 9.71 (1H, brs, -CONH-)；HR-ESI-MS m/z: (M + H)+ calcd for C29H33N4O5S, 549.2171; found, 549.2173。【０２８１】
（２）化合物K-852aからN-(2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル)フェニル)-4-((4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-イル)メチル)ベンズアミド[N-(2-amino-5-(thiophen-2-yl)phenyl)-4-((4-ethyl-2,3-dioxopiperazin-1-yl)methyl)-Benzamide] (K-852)の合成
化合物K-852a (0.05 g, 0.091 mmol)にジクロロメタン・トリフルオロ酢酸混液 (CH2Cl2：TFA = 4：1)を3 ml加え、室温で1時間撹拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水を加え、クロロホルムで抽出した。有機層をbrineで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた結晶を酢酸エチル−ヘキサンで再結晶し、白色粉末状結晶のK-852 (0.02 g, 収率35.3％)を得た。【０２８２】
K-852の物性は、以下の通りであった：m.p. 130-131℃；1HNMR (399.65 MHz, CDCl3): 1.14 (3H, t, J = 6.4 Hz, -CH3), 3.41-3.50 (6H, m), 4.66 (2H, d, J = 6.4 Hz), 7.00-7.61 (10H, m), 7.94 (1H, brs, -CONH-)；HR-ESI-MS m/z: (M + H)+ calcd for C24H25N4O5S, 449.1647; found, 449.1660。【０２８３】
実施例２：エチル2-(1-(4-(2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル)フェニルカルバモイル)ベンジル)ピロリドン-2-カルボキサミド)酢酸塩［ethyl 2-(1-(4-(2-amino-5-(thiophen-2-yl)phenylcarbamoyl)benzyl)pyrrolidine-2-carboxamido)acetate:K-853］の合成【０２８４】
【化７６】
2016039398.tif 000077
【０２８５】
（１）2-（1-（4-（2-（tert-ブトキシカルボニルアミノ）-5（チオフェン-2-イル）フェニルカルバモイル）ベンジル）ピロリジン-2-カルボキサミド）アセテート[ethyl 2-(1-(4-(2-(tert-butoxycarbonylamino)-5-(thiophen-2-yl)phenylcarbamoyl)benzyl)pyrrolidine-2-carboxamido)acetate] (K-853a)の合成
2-（ピロリジン-2 - カルボキサミド）アセテート(0.30 g, 1.00 mmol)を無水DMF (5 ml)に溶解し、氷冷下で水素化ナトリウム (0.10 g, 4.2 mmol)を加えて2時間撹拌した。続いて、反応液にtert- ブチル2-（4 - （クロロメチル）ベンズアミド）-4 - （チオフェン-2 - イル）フェニルカルバメート(0.33 g, 0.70 mmol)を加え、室温に戻し、一晩中撹拌した。得られた反応液に氷を加え、クロロホルムで抽出した。有機層をbrineで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた残渣を、クロロホルム・メタノール混合液(CHCl3：MeOH = 9：1)を溶出溶媒としてシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、白色粉末状結晶の化合物K-853a (0.15 g, 収率35.3％)を得た。【０２８６】
化合物K-853aの物性は、以下の通りであった：m.p. 75-79℃；HR-ESI-MS m/z: (M + H)+ calcd for C32H39N4O6S, 607.2590; found, 607.2581。【０２８７】
（２）化合物K-853aからのエチル 2-(1-(4-(2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル)フェニルカルバモイル)ベンジル)ピロリドン-2-カルボキサミド)酢酸塩［ethyl 2-(1-(4-(2-amino-5-(thiophen-2-yl)phenylcarbamoyl)benzyl)pyrrolidine-2-carboxamido)acetate］(K-853)の合成
化合物K-853a (0.1 g, 0.09 mmol)にジクロロメタン・トリフルオロ酢酸混液 (CH2Cl2：TFA = 4：1)を3 ml加え、室温で1時間撹拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水を加え、クロロホルムで抽出した。有機層をbrineで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた結晶を酢酸エチル−ヘキサンで再結晶し、白色粉末状結晶 のK-853(0.017 g, 収率37.3%)を得た。【０２８８】
K-853の物性は、以下の通りであった：m.p. 69-72℃；HR-ESI-MS m/z: (M + H)+ calcd for C27H31N4O4S, 507.2066; found, 507.2053。
実施例３：N-(2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル)フェニル)-4-((1,4-ジオキソ-ヘキサハイドロピロロ[1,2-a]ピラジン-2-(1H)-イル)メチル)ベンズアミド[N-(2-amino-5-(thiophen-2-yl)phenyl)-4-((1,4-dioxo-hexahydropyrrolo[1,2-a]pyrazin-2-(1H)-yl)methyl)benzamide:K-854（式３）]の合成【０２８９】
【化７７】
2016039398.tif 000078
【０２９０】
（１）tert-ブチル2-（4-（（1,4-ジオキソ-ヘキサヒドロピロロ[1,2-a]ピラジン-2（1H）-イル）メチル）-ベンズアミド）-4-（チオフェン-2-イル）フェニルカルバメート[tert-butyl 2-(4-((1,4-dioxo-hexahydropyrrolo[1,2-a]pyrazin-2(1H)-yl)methyl)-benzamido)-4-(thiophen-2-yl)phenylcarbamate] (K-854a)の合成  ヘキサヒドロピロロ[1,2-a]ピラジン-1,4-ジオン(0.30 g, 2.11 mmol；光学活性体S体)を無水DMF (5 ml)に溶解し、氷冷下で水素化ナトリウム (0.10 g, 4.2 mmol)を加えて2時間撹拌した。続いて、反応液にtert-ブチル2-（4 - （クロロメチル）ベンズアミド）-4-（チオフェン-2-イル）フェニルカルバメート(0.31 g, 0.70 mmol)を加え、室温に戻し一晩中撹拌した。得られた反応液に氷を加え、クロロホルムで抽出した。有機層をbrineで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた残渣を、酢酸エチル・ヘキサン混合液及びクロロホルム・メタノール混合液(EtOAc：hexane = 1:4、次いで、CHCl3：MeOH = 95:5)を溶出溶媒としてシリカゲルクロマトグラフィーに付し、白色粉末状結晶の化合物K-854a (0.12 g, 収率32.9％)を得た。【０２９１】
化合物K-854a の物性は、以下の通りであった：m.p. 113-116℃； 1HNMR (399.65 MHz, CDCl3): 1.49, 1.50, 1.52 (9H, each s, -Boc), 1.87-2.48 (4H, m, -CH2-×2), 3.52-3.78 (3H, m, -CH-×3), 4.00 (1H, d, J = 16.4 Hz, -CH-), 4.15 (1H, t, J = 7.2 Hz, -CH-), 4.49 (1H, d, J = 14.8 Hz, -CH-) 4.80 (1H, d, J = 14.8 Hz, -CH-), 7.14-7.41 (6H, m, Ar-H6), 7.89-7.97 (3H, m, Ar-H3), 9.40 (1H, brs, NH)；HR-ESI-MS m/z: (M + H)+ calcd for C30H33N4O5S, 561.2171; found, 561.2178。【０２９２】
（２）化合物K-854a からのN-(2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル)フェニル)-4-((1,4-ジオキソ-ヘキサハイドロピロロ[1,2-a]ピラジン-2-(1H)-イル)メチル)ベンズアミド[N-(2-amino-5-(thiophen-2-yl)phenyl)-4-((1,4-dioxo-hexahydropyrrolo[1,2-a]pyrazin-2(1H)-yl)methyl)benzamide] (K-854)の合成
化合物K-854a (0.10 g, 0.17 mmol)に、ジクロロメタン・トリフルオロ酢酸混液 (CH2Cl2：TFA = 4：1)を3 ml加え、室温で3時間撹拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水を加え、CHCl3で抽出した。有機層をbrineで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた残渣を、クロロホルム・メタノール混合液(CHCl3:MeOH = 9:1) を溶出溶媒としてシリカゲルクロマトグラフィーに付し、得られた化合物をクロロホルム−ヘキサンで再結晶し、白色粉末状結晶のK-852 (0.03 g, 収率38.2%)を得た。【０２９３】
K-854の物性は、以下の通りであった：m.p. 187-190℃；1HNMR (399.65 MHz, CDCl3): 1.90, 2.23 (4H, each m, -CH2-×2), 3.69 (1H, d, J = 16.4 Hz, -CH-), 4.17 (1H, d, J = 16.8 Hz, -CH-), 4.31 (1H, t, J = 7.2 Hz, -CH-), 4.63 (2H, s, -NH2), 5.17 (2H, s, -CH2-) 6.74-7.50 (7H, m, Ar-H7), 7.96 (2H, m, Ar-H2), 9.68 (1H, m, NH)；HR-ESI-MS m/z: (M + H)+ calcd for C25H25N4O3S, 461.1647; found, 461.01630。
実施例４：N-(2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル)フェニル)-4-((2,5-ジオキソピペラジン-1-イル)メチル)ベンズアミド[N-(2-amino-5-(thiophen-2-yl)phenyl)-4-((2,5-dioxopiperazin-1-yl)methyl)benzamide :K-855（式４）]の合成【０２９４】
【化７８】
2016039398.tif 000079
【０２９５】
（１）tert-ブチル2-（4-（（2,5-ジオキソピペラジン-1-イル）メチル）ベンズアミド）-4-（チオフェン-2-イル）-フェニルカルバメート[tert-butyl 2-(4-((2,5-dioxopiperazin-1-yl)methyl)benzamido)-4-(thiophen-2-yl)-phenylcarbamate] (K-855a)の合成  グリシン無水物 (1.00 g, 8.76 mmol)を無水DMF (20 ml) に懸濁させ、氷冷下で水素化ナトリウム (0.42 g, 17.52 mmol)を加え、室温にて1時間撹拌した。反応容器外温を室温から徐々に100度まで上げながら、6時間にわたり加熱撹拌した。反応液を室温に戻し、tert-ブチル2-（4 - （クロロメチル）ベンズアミド）-4-（チオフェン-2-イル）フェニルカルバメート(0.49 g, 1.10 mmol)を加え、室温で一晩中撹拌した。反応液に氷を加え、クロロホルムで抽出した。有機層をbrineで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた残渣を、クロロホルム・メタノール混合液(CHCl3：MeOH = 9：1)を溶出溶媒としてシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、白色固形物の化合物K-855a (0.07 g, 収率12.2%)を得た。【０２９６】
化合物K-855aの物性は、以下の通りであった：m.p. 139-142℃；1HNMR (399.65 MHz, CDCl3): 1.14 (3H, t, J = 6.4 Hz, -CH3), 3.41-3.50 (6H, m), 4.66 (2H, d, J = 6.4 Hz), 7.00-7.61 (10H, m), 7.94 (1H, bs, -CONH-)；HR-ESI-MS m/z: (M + H)+ calcd for C27H29N4O5S, 521.1858; found, 521.1849。【０２９７】
（２）化合物K-855aからのN-(2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル)フェニル)-4-((2,5-ジオキソピペラジン-1-イル)メチル)ベンズアミド[N-(2-amino-5-(thiophen-2-yl)phenyl)-4-((2,5-dioxopiperazin-1-yl)methyl)benzamide ](K-855)の合成  化合物K-855a (0.05 g, 0.09 mmol)にジクロロメタン・トリフルオロ酢酸混液 (CH2Cl2：TFA = 4:1)を3 ml加え、室温で3時間撹拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水を加え、クロロホルムで抽出した。有機層をbrineで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた残渣を、クロロホルム・メタノール混合液(CHCl3： MeOH = 9：1)を溶出溶媒としてシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、白色粉末状結晶のK-855 (0.03 g, 収率64%)を得た。【０２９８】
化合物K-855の物性は、以下の通りであった：m.p. 147-149℃；HR-ESI-MS m/z: (M + H)+ calcd for C22H21N4O3S, 421.1334; found, 421.1340。
実施例５：N-(2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル)フェニル)-4-((4-メチル-2,5-ジオキソピペラジン-1-イル)メチル)ベンズアミド[N-(2-amino-5-(thiophen-2-yl)phenyl)-4-((4-methyl-2,5-dioxopiperazin-1-yl)methyl)benzamide:K-856（式５）]の合成【０２９９】
【化７９】
2016039398.tif 000080
【０３００】
（１）1 - メチルピペラジン-2,5 - ジオン[1-methylpiperazine-2,5-dione] (K-856a)の合成
グリシルサルコシン(1.00 g, 6.80 mmol)にエチレングリコール(10 ml)と脱水剤として硫酸マグネシウム (2 g)を加え、200℃で4時間加熱還流した。反応液を吸引濾過し、得られた濾液を減圧濃縮した。得られた残渣を、クロロホルム・メタノール混合液(CHCl3：MeOH：H2O = 12：5：1)を溶出溶媒としてシリカゲルクロマトグラフィーに付し、得られた化合物をイソプロパノールから再結晶し、白色粉末状の結晶の化合物K-856a (0.32 g, 収率36.8%)を得た。【０３０１】
化合物K-856aの物性は、以下の通りであった：m.p. 138-139℃； 1H NMR ((CD3)2SO)δ : 2.80 (3H, s, -CH3), 3.76 (2H, s, -COCH2-), 3.86 (2H, s, -COCH2-), 8.09 (1H, s, -NH-)；
HR-ESI-MS m/z: (M + H)+ calcd for C5H9N2O2, 129.0665; found, 129.0658。【０３０２】
（２）化合物K-856aからのtert-ブチル2-（4-（（4-メチル-2,5-ジオキソピペラジン1-イル）メチル）ベンズアミド）-4-（チオフェン-2-イル）フェニルカルバメート[tert-butyl 2-(4-((4-methyl-2,5-dioxopiperazin-1-yl)methyl)benzamido)-4-(thiophen-2-yl)phenylcarbamate]（K-856b)の合成
化合物K-856a (0.10 g, 0.78 mmol)を無水DMF (5 ml)に溶解し、氷冷下で水素化ナトリウム (0.075 g, 1.87 mmol)を加えて2時間撹拌した。反応液にtert- ブチル2-（4 - （クロロメチル） - ベンズアミド）-4 - （チオフェン-2 - イル）フェニルカルバメート(0.35 g, 0.78 mmol)を加え、室温に戻し、3時間撹拌した。反応液に氷を加えた後、クロロホルムを加えて振盪した。有機層をbrineで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた残渣を、クロロホルム・メタノール混合液(CHCl3：MeOH = 9：1)を溶出溶媒としてシリカゲルクロマトグラフィーに付し、淡黄色無定形晶の化合物K-856b (178.0 mg, 収率42.7%)を得た。【０３０３】
化合物K-856bの物性は、以下の通りであった：m.p. 110-112℃； 1HNMR (399.65 MHz, CDCl3): 1.51 (9H, brs, -Boc), 2.99 (3H, s, -CH3), 3.88 (2H, s, -COCH2-), 4.07 (2H, s, -COCH2-), 4.64 (2H, brs, -CH2-), 7.00-7.98 (10H, m, Ar-H), 9.38 (1H, s, -NH-)；
HR-ESI-MS m/z: (M + H)+ calcd for C28H31N4O5S, 535.2016; found, 535.2013。【０３０４】
（３）化合物K-856bからのN-(2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル)フェニル)-4-((4-メチル-2,5-ジオキソピペラジン-1-イル)メチル)ベンズアミド[N-(2-amino-5-(thiophen-2-yl)phenyl)-4-((4-methyl-2,5-dioxopiperazin-1-yl)methyl)- benzamide trifluoroacetate] (K-856)の合成
化合物K-856b (30 mg, 0.056 mmol)にジクロロメタン・トリフルオロ酢酸混液 (CH2Cl2: TFA = 4 : 1)を 0.3 ml加え、室温で3時間撹拌した。反応液を減圧濃縮し、得られた残渣をクロロホルム、エタノールで3回ずつ洗浄し、さらに減圧濃縮した。そこで得られた残渣をエタノールで再結晶し、淡緑色の結晶のK-856 (13.5 mg, 55 % )を得た。【０３０５】
K-856の物性は、以下の通りであった：m.p. 214-216℃； 1H NMR ((CD3)2SO) δ : 2.84 (3H, brs, -CH3), 3.87 (2H, s, -COCH2-), 4.06 (2H, s, -COCH2-), 4.61 (2H, s, -CH2-), 5.17 (3H, s, NH3+), 6.72-8.00 (10H, m, ArH), 9.74 (1H, brs, -NH-)；HR-ESI-MS m/z: (M + H)+ calcd for C23H23N4O3S, 435.1492; found, 435.1479。【０３０６】
実施例１及び３〜５の合成スキームは、図１示した。【０３０７】
実施例６：N-(4-(2-アミノ-5-(ベンゼン-2-イル) フェニルカルバモイル)ベンジル)-4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-カルボキサミド[N-(4-(4-aminobiphenyl-3-ylcarbamoyl)benzyl)-4-ethyl-2,3-dioxopiperazine-1-carboxamide (K-562)]の合成【０３０８】
【化８０】
2016039398.tif 000081
【０３０９】
（１）tert-ブチル 2-アミノ-4-ブロモフェニルカルバメート（図２の化合物９）の合成
4-ブロモ-o-フェニレンジアミン （化合物8 ：25 g、133.7 mmol）をTHF （150 ml）、トリエチルアミン（Et3N） (150 ml) に溶解させ、(Boc)2O (35 g, 160.4 mmol)を加え、室温で一晩撹拌した。反応後、減圧濃縮を行い、酢酸エチルに溶解させてbrineで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶液をろ過、減圧濃縮後、得られた生成物を酢酸エチルで再結晶し、無色結晶の化合物9 (22.2g, 58%) を得た。
m.p. 141.6-142.7°C.
1HNMR (CDCl3) δ: 1.50 (9H, s, CH3 ×3), 3.81 (2H, brs, NH2), 6.17 (1H, brs, NH), 6.89 - 6.91 (2H, m, Ar-H2), 7.14 (1H, d, J = 8.0 Hz, Ar-H).
HR-ESI-MS m/z: 285.0224 (M-H)- calcd for C11H14BrN2O2 285.0239.【０３１０】
（２）tert-ブチル3-アミノビフェニル-4-イルカルバメート（図２の化合物10a）の合成
化合物9 (3.0 g, 10.5 mmol) とフェニルボロン酸(2.15 g, 17.6 mmol) とトリ-o-トリルホスフィン(1.35 g,  4.4 mmol) をDME (30 ml) に溶解し、水(18 ml) に溶解させた炭酸カリウム(5.55 g, 40.16 mmol) とテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム(0.9 g, 0.78 mmol) を加え、超音波破砕して懸濁させた溶液を90 °Cで18時間加熱還流を行った。反応後、懸濁液にクロロホルムを加え、水で洗浄、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶液をろ過、減圧濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し淡黄色結晶の化合物10a (2.1 g, 70% ) を得た。
m.p. 153.0- 154.2°C.
1HNMR (CDCl3) δ: 1.48 (9H, s, CH3 ×3), 3.81 (2H, brs, NH2), 6.28 (1H, brs, NH), 6.98-7.23 (2H, m, Ar-H2), 7.29-7.42 (4H, m, Ar-H4), 7.52-7.54 (2H, m, Ar-H2).
HR-ESI-MS m/z: 285.1582 (M+H)+ calcd for C17H21BN2O2 285.1603.【０３１１】
（３）tert-ブチル 3-(4-(クロロメチル)ベンズアミド)ビフェニル-4-イルカルバメート（図２の化合物11a）の合成
化合物10a (1.0 g) をTHF (14 ml)、トリエチルアミン(0.566 ml) に溶解させ、氷冷下にてp-(クロロメチル)ベンゾイルクロライド (798.4 mg, 4.2 mmol) を加え、室温で4時間撹拌させた。反応液を減圧濃縮し、クロロホルムに溶解後、飽和炭酸水素ナトリウム、brineで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶液をろ過、減圧濃縮させた後得られた生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、無色の結晶の化合物11a (1.1 g, 70 %) を得た。
m.p. 140.2-141.3°C.
1HNMR (CDCl3) δ: 1.45 (9H, s, CH3 ×3), 4.61 (2H, s, CH2), 6.95 (1H, brs, NH), 7.26-7.61 (9H, m, Ar-H9), 7.96-7.98 (3H, m, Ar-H3), 9.37 (1H, brs, NH).
HR-ESI-MS m/z: 435.1448 (M-H)- calcd for C25H24ClN2O3 435.1476.【０３１２】
（４）tert-ブチル 3-(4-((1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)メチル)ベンズアミド)ビフェニル-4-イルカルバメート（図２の化合物12a）の合成
化合物11a (500 mg, 1.1 mmol) をDMF (5 ml) に溶解させ、フタルイミドカリウム(233.6 mg, 1.3 mmol) とヨウ化カリウム (38.0 mg, 0.23 mmol) を加え、50 °Cで一晩撹拌した。反応後、反応液にトルエンを加えて減圧濃縮した。水を加えて酢酸エチルで抽出し、有機層をbrineで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。有機層をろ過後、減圧濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、淡黄色結晶の化合物12a (595 mg, 95 %) を得た。
m.p. 104.4-106.0°C.
1HNMR (CDCl3) δ: 1.46 (9H, s, CH3 ×3), 5.40 (2H, s, CH2), 6.85 (1H, brs, NH), 7.26-7.39 (5H, m, Ar-H5), 7.49-7.56 (4H, m, Ar-H4), 7.72-7.75 (2H, m, Ar-H2), 7.86-7.88 (2H, m, Ar-H2), 7.92-7.97 (3H, m, Ar-H3), 9.18 (1H, brs, NH). 
HR-ESI-MS m/z: 546.2037 (M-H)- calcd for C33H28N3O5546.2029.【０３１３】
（５）tert-ブチル3-(4-(アミノメチル)ベンズアミド)ビフェニル-4-イルカルバメート（図２の化合物13a）の合成
化合物12a (500 mg, 0.91 mmol) をEtOH (6 ml) に懸濁させ、hydrazine monohydrate (0.1 ml, 2.699 mmol) を加え、3時間加熱還流を行った。反応後、反応液を減圧濃縮し、クロロホルムで溶解し、飽和炭酸水素ナトリウムとbrineで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。有機層をろ過後、減圧濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、淡黄色結晶の化合物13a (431 mg, 45 %) を得た。
m.p. 105.8-107.7°C.
1HNMR (CDCl3) δ: 1.46 (9H, s, CH3 ×3), 3.94 (2H, s, CH2), 6.91-8.06 (13H, m, Ar-H12, NH), 9.31 (1H, brs, NH). 
HR-ESI-MS m/z: 418.2120 (M+H)+ calcd for C25H28N3O3418.2130.【０３１４】
（６）tert-ブチル 3-(4-((4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-カルボキサミド)メチル)ベンズアミド)ビフェニル-4-イルカルバメート（図２の化合物14a）の合成
化合物13a (150 mg, 0.36 mmol) をジクロロメタン(2 ml) とトリエチルアミン (0.6 ml) に溶解させ、1,4-ジオキソピペラジニルクロライド (88.3 mg, 0.43 mmol) を加え、室温で一晩撹拌した。反応液を減圧濃縮し、クロロホルムで溶解し、飽和炭酸水素ナトリウムとbrineで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。有機層をろ過後、減圧濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー で精製し、淡黄色結晶14a (112.5 mg, 54 %) を得た。
m.p. 217.3-218.3°C.
1HNMR (CDCl3) δ: 1.21 (3H, t, J = 7.0 Hz, CH3), 1.51 (9H, s, CH3 ×3), 3.53-3.67 (4H, m, CH2 ×2), 4.08-4.10 (2H, m, CH2), 4.56-4.58 (2H, m, CH2),  7.07-7.97 (13H, m, Ar-H12, NH), 9.31 (1H, brs, NH), 9.39 (1H, brs, NH). 
HR-ESI-MS m/z: 584.2477 (M-H)- calcd for C32H34N5O6 584.2509.【０３１５】
（７）N-(4-(4-アミノジフェニル-3-イルカルバモイル)ベンジル)-4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-カルボキサミド (K-562) の合成
化合物14a (100 mg, 0.21 mmol) をジクロロメタン(1 ml) とTFA (1 ml) に溶解させ、室温で1時間撹拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウムを加えてpH 9に調製し、1時間撹拌した。反応液を減圧濃縮し、クロロホルムで溶解し、飽和炭酸水素ナトリウムとbrineで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。有機層をろ過後、減圧濃縮し、エタノールで再結晶させ、吸引ろ過により、淡黄色結晶のK-562 (95.8 mg, 100 %) を得た。
m.p. 125-128°C.
1HNMR (CDCl3) δ: 1.13-1.16 (3H, m, CH3), 3.43-3.50 (4H, m, CH2 ×2), 3.97-4.00 (2H, m, CH2), 4.03 (2H, brs, NH2), 6.82-7.87 (12H, m, Ar-H12), 8.45 (1H, brs, NH), 9.35 (1H, brs, NH). 
HR-ESI-MS m/z: 486.2137 (M+H)+ calcd for C27H28N5O4486.2141.【０３１６】
実施例７：N-(4-(2-アミノ-5-(フラン-３-イル) フェニルカルバモイル)ベンジル)-4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-カルボキサミドN-(4-(2-a-5-(furan-3-yl)phenylcarbamoyl)benzyl)-4-ethyl-2,3-dioxopiperazine-1-carboxamide (K-563)の合成【０３１７】
【化８１】
2016039398.tif 000082
【０３１８】
（１）tert-ブチル 2-アミノ-4-(フラン-3-イル)フェニルカルバメート（図２の化合物10b）
化合物9 (3g,10.4 mmol)と3-フランボロン酸(1.51g,13.5 mmol) とトリ-o-トリルホスフィン(1.35g,4.4 mmol)をDME (30 ml) に溶解し、水(18 ml) に溶解させた炭酸カリウム (5.55 g, 40.16 mmol) とテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム(0.9 g, 0.78 mmol) を加え、超音波破砕して懸濁させた溶液を90°Cで18時間加熱還流を行った。反応後、懸濁液にクロロホルムを加え、水で洗浄、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶液をろ過、減圧濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー (酢酸愛エチル-ヘキサン 3:7) で精製し淡黄色色結晶の化合物10b (2.4 g, 82%)を得た。
m.p. 140.4-143.1°C. 
1HNMR (CDCl3) δ: 1.52 (9H, s), 3.78 (2H, s), 6.25 (1H, s), 6.62 (1H, s), 6.88 - 6.90 (2H, m), 7.26 - 7.28 (1H, d, J = 8.0 Hz), 7.44 (1H, s), 7.66 (1H, s).
HR-ESI-MS m/z: 275.1355 (M+H)+ calcd for C15H19N2O3 275.1395.【０３１９】
（２）tert-ブチル2-(4-(クロロメチル)ベンズアミド)-4-(フラン-3-イル)フェニルカルバメート （図２の化合物11b）
化合物10b (500 mg,1.8 mmol) をTHF (10 ml)、ピリジン (0.3 ml) に溶解させ、氷冷下にてp-(クロロメチル)ベンゾールクロライド (411 mg, 2.2 mmol) を加え、室温で4時間撹拌させた。反応液を減圧濃縮し、クロロホルムに溶解後、飽和炭酸水素ナトリウム、brineで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶液をろ過、減圧濃縮させた後得られた生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー(酢酸エチル-ヘキサン= 1:2) で精製し、淡黄色結晶の化合物11b (715 mg, 92%) を得た。
m.p. 67.5-70.0°C. 1HNMR (CDCl3) δ: 1.50 (9H, s), 4.63 (2H, s), 6.64 - 6.65 (1H, m), 6.86 (1H,s), 7.20 - 7.28 (2H, m), 7.42-7.49 (3H, m), 7.68 (1H, s),7.92 (1H, s), 7.96 -7.98 (2H, d, J = 8.0 Hz), 9.35 (1H, s). ESI-MS m/z: 425.1273 (M-H)+ calcd for C23H22ClN2O4 425.1268.【０３２０】
（３）tert-ブチル2-(4-((1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)メチル)ベンズアミド)-4-(フラン-3-イル)フェニルカルバメート（図２の化合物12b）の合成
化合物11b (500 mg, 1.173 mmol)をDMF(5 ml)に溶解させ、フタルイミドカリウム(239.12 mg, 1.291 mmol)とヨウ化カリウム (39.01 mg, 0.235 mmol)を加え、50°Cで一晩撹拌した。反応後、反応液にトルエンを加えて減圧濃縮した。水を加えて酢酸エチルで抽出し、有機層をbrineで洗浄し、Na2SO4で乾燥した。有機層をろ過後、減圧濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(酢酸エチル-ヘキサン=1:2)で精製し、淡黄色結晶の化合物12b (271mg, 43%)を得た。
m.p. 97.4-100.1°C. 1HNMR (CDCl3) δ: 1.49 (1H, s), 4.91 (2H, s), 6.64 (1H, s), 6.83 (1H, s), 7.24-7.26 (3H, d, J = 8.0 Hz), 7.41-7.45 (1H, m),7.49 -7.51 (2H, d, J = 8.0 Hz), 7.66-7.68 (1H, d, J = 8.0 Hz), 7.73 - 7.75 (2H, d, J = 8.0 Hz),7.87 (2H, s), 7.91 -7.93 (2H, d, J = 8.0 Hz), 9.19 (1H, s).
HR-ESI-MS m/z: 536.1819 (M-H)+ calcd for C31H26N3O6 536.1822.【０３２１】
（４）tert-ブチル2-(4-(アミノメチル)ベンズアミド)-4-(フラン-3-イル) フェニルカルバメート（図２の化合物13b）の合成
化合物12b (500 mg, 0.931 mmol)をエタノール (6 ml)に懸濁させ、ジン一水和物(0.09 ml, 2.699 mmol)を加え、95°Cで3時間加熱還流を行った。反応後、反応液を減圧濃縮し、クロロホルムで溶解し、飽和炭酸水素ナトリウムとbrineで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。有機層をろ過後、減圧濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(クロロホルム-メタンール=9:1)で精製し、淡黄色結晶の化合物13b (341 mg, 90%)を得た。
m.p. 118.7-120.0°C.
1HNMR (CDCl3) δ: 1.50 (9H, s), 3.96 (2H, s), 6.64 (1H, s), 7.01 (1H, s), 7.22 (1H, s),7.26 (1H, s), 7.38 -7.42 (3H, m), 7.64 (1H, s), 7.88 (2H, s), 7.91 -7.9 3 (2H, d, J = 8.0 Hz), 9.28 (1H, s).
HR-ESI-MSm/z: 408.19081 (M+H)+calcd for C23H26N3O4 408.1923.【０３２２】
（５）tert-ブチル2-(4-((4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-カルボキサミド)メチル)ベンズアミド)-4-(フラン-3-イル) フェニルカルバメート(14b) の合成
化合物13b (337.8 mg, 0.832 mmol)をジクロロメタン (5 ml)とトリエチルアミン (1.5 ml)に溶解させ、1,4-ジオキソピペラジニルクロライド (204.2 mg, 0.998 mmol)を加え、室温で一晩撹拌した。反応液を減圧濃縮し、クロロホルムで溶解し、飽和炭酸水素ナトリウムとbrineで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。有機層をろ過後、減圧濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(クロロホルム-メタノール(98:2) + トリエチルアミン 0.35%)で精製し、淡黄色結晶の化合物14b (259 mg, 54%)を得た。
m.p. 103.6-105.4°C. 
1HNMR (CDCl3) δ: 1.23-1.28 (4H, m), 1.50 (9H, s), 3.53 - 3.58 (4H, m), 4.09 - 4.12 (2H, m), 4.57 - 4.59 (2H, d, J = 8.0 Hz), 6.65 (1H, s), 6.95 (1H, s), 7.23 - 7.25 (1H, d, J = 8.0 Hz), 7.37 - 7.39 (2H, d, J = 8.0 Hz),7.44 (1H, s),7.67 (1H, s), 7.89 (1H, s), 7.93 - 7.95 (2H, d, J = 8.0 Hz), 9.39 (1H, s), 9.40 (1H, s).
HR-ESI-MS m/z: 574.2299 (M-H)+ calcd for C30H32N5O7 574.2302.【０３２３】
（６）N-(4-(2-アミノ-5-(フラン-3-イル) フェニルカルバモイル)ベンジル)-4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-カルボキサミド (K-563) の合成
化合物14b (200 mg, 0.348 mmol)をジクロロメタン(2 ml)とTFA (2 ml)に溶解させ、室温で1時間撹拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウムを加えてpH 9に調製し、1時間撹拌した。反応液を減圧濃縮し、クロロホルムで溶解し、飽和炭酸水素ナトリウムとbrineで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。有機層をろ過後、減圧濃縮し、エタノールで再結晶させ、吸引ろ過により淡黄色結晶の化合物K-563 (94.2 mg, 57%)を得た。
m.p. 176-178°C.
1HNMR (CDCl3) δ: 1.19 - 124 (3H ,m), 3.48 - 3.56 (4H, m), 3.74 (2H, s), 4.06 - 4.08 (2H, m), 4.57 - 4.58 (2H, d , J = 5.6 Hz), 6.62 (1H, s), 6.83 - 6.85 (1H, d, J = 8.0 Hz), 7.26 (1H, s), 7.39 -7.43 (3H, m), 7.49 (1H, s),7.63 (1H, s), 7.87 - 7.89 (2H, d, J = 8.0 Hz), 8.08 (1H, s), 9.40 (1H, s).
HR-ESI-MS m/z: 476.1916(M+H)+ calcd for C25H26N5O5 476.1934.【０３２４】
実施例８：N-(4-(2-アミノ-5-(フラン-2-イル) フェニルカルバモイル)ベンジル)-4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-カルボキサミド[N-(4-(2-amino-5-(furan-2-yl)phenylcarbamoyl)benzyl)-4-ethyl-2,3-dioxopiperazine-1-carboxamide (K-564)]の合成【０３２５】
【化８２】
2016039398.tif 000083
【０３２６】
（１）tert-ブチル2-アミノ-4-(フラン-2-イル)フェニルカルバメート（図２の化合物10c）の合成
化合物9 (3 g, 10.4 mmol) と2-フランボロン酸(1.51 g, 13.5 mmol) とトリ-o-トリルホスフィン(1.35 g, 4.4 mmol)をDME (30 ml) に溶解し、水(18 ml) に溶解させた炭酸カリウム(5.55 g, 40.16 mmol) とテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム(0.9 g, 0.78 mmol) を加え、超音波破砕して懸濁させた溶液を90 °Cで18時間加熱還流を行った。反応後、懸濁液にクロロホルムを加え、水で洗浄、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶液をろ過、減圧濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー (エタノール: ヘキサン = 3 : 7) で精製し淡黄色結晶の化合物10c (2.3 g, 80 %)を得た。
m. p.: 142.4-143.2 °C; 
1H NMR (CDCl3) δ: 1.48 (9H, s), 6.43-6.44 (1H, m), 6.51 (1H, s), 6.55 (1H, d, J = 3.2 Hz), 7.10-7.11 (3H, m), 7.28-7.31 (2H, m), 7.42 (1H, s); HR-ESI-MS m/z: 273.1251 (M-H)+ calcd. for C15H17N2O3 273.1239【０３２７】
（２）tert-ブチル2-(4-(クロロメチル) ベンズアミド)-4-(フラン-2-イル) フェニルカルバメート（図２の化合物11c）の合成
化合物10c (500 mg, 1.8 mol) をTHF (10 ml)、トリエチルアミン (1.5 ml) に溶解させ、氷冷下にてp-(クロロメチル)ベンゾイルクロライド(413.8 mg, 2.2 mmol) を加え、室温で4時間撹拌させた。反応液を減圧濃縮し、クロロホルムに溶解後、飽和炭酸水素ナトリウム、brineで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶液をろ過、減圧濃縮させた後得られた生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、無色結晶の化合物11c (1.0 g, 65 %) を得た。
m.p. 171.0-172.0°C.
1HNMR (CDCl3) δ: 1.44 (9H, s, CH3 ×3), 4.62 (2H, s, CH2), 6.41-7.98 (11H, m, Ar-H10, NH), 9.51 (1H, brs, NH).
HR-ESI-MS m/z: 425.1278 (M-H)- calcd for C23H22N2O4 425.1268.【０３２８】
（３）tert-butyl 2-(4-((1,3-ジオキソイソインドリン-2-イル)メチル)ベンズアミド)-4-(フラン-2-イル) フェニルカルバメート（図２の化合物12c）の合成
化合物11c (500 mg, 1.2 mol) をDMF (5 ml) に溶解させ、フタルイミドカリウム(239.1 mg, 1.30 mol) とヨウ化カリウム(39.0 mg, 0.23 mol) を加え、50 °Cで一晩撹拌した。反応後、反応液にトルエンを加えて減圧濃縮した。水を加えて酢酸エチルで抽出し、有機層をbrineで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。有機層をろ過後、減圧濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、無職結晶の化合物12c (433 mg, 69 %) を得た。
m.p. 101.6-102.6°C.
1HNMR (CDCl3) δ: 1.45 (9H, s, CH3 ×3), 4.89 (2H, s, CH2), 6.36-7.92 (15H, m, Ar-H14, NH), 9.48 (1H, brs, NH). 
HR-ESI-MS m/z: 536.1817 (M-H)- calcd for C31H26N3O6 536.1822..【０３２９】
（４）tert-ブチル 2-(4-(アミノメチル)ベンズアミド)-4-(フラン-2-イル) フェニルカルバメート（図２の化合物13c）の合成
化合物12c (430 mg, 0.80 mol) をエタノール (5 ml) に懸濁させ、ヒドラジン一水和物(0.1 ml, 2.7 mmol) を加え、3時間加熱還流を行った。反応後、反応液を減圧濃縮し、クロロホルムで溶解し、飽和炭酸水素ナトリウムとbrineで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。有機層をろ過後、減圧濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、淡黄色結晶の化合物13c (241 mg, 74 %) を得た。
m.p. 171.1-172.4°C.
1HNMR (CDCl3) δ: 1.50 (9H, s, CH3 ×3), 3.94 (2H, s, CH2), 6.43-8.15 (11H, m, Ar-H10, NH), 9.38 (1H, brs, NH).
HR-ESI-MS m/z: 408.1923 (M+H)+ calcd for C23H26N3O4 408.1923.【０３３０】
（５）tert-ブチル 2-(4-((4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-カルボキサミド)メチル)ベンズアミド)-4-(フラン-2-イル) フェニルカルバメート(図２の化合物14c)
化合物13c (400 mg, 0.98 mmol) をジクロロメタン (5 ml) とトリエチルアミン (1.5 ml) に溶解させ、1,4-ジオキソピペラジニルクロライド (241.2 mg, 1.2 mmol) を加え、室温で一晩撹拌した。反応液を減圧濃縮し、クロロホルムで溶解し、飽和炭酸水素ナトリウムとbrineで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。有機層をろ過後、減圧濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、淡黄色結晶の化合物14c (588 mg, 100 %) を得た。
m.p. 196.3-198.0°C.
1HNMR (CDCl3) δ: 1.22 (3H, t, J = 7.0 Hz, CH3), 1.49 (9H, s, CH3 ×3), 3.46-3.57 (4H, m, CH2 ×2), 4.09-4.12 (2H, m, CH2), 4.58-4.59 (2H, m, CH2),  6.43-8.14 (11H, m, Ar-H10, NH), 9.27 (1H, brs, NH), 9.42 (1H, brs, NH). 
HR-ESI-MS m/z: 574.2301 (M-H)- calcd for C30H32N5O7 574.2302.【０３３１】
（６）N-(4-(2-アミノ-5-(フラン-2-イル)フェニルカルバモイル)ベンジル)-4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-カルボキサミド (K-564)
化合物14c (100 mg) をジクロロメタン(1 ml) とTFA (1 ml) に溶解させ、室温で1時間撹拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウムを加えてpH 9に調製し、1時間撹拌した。反応液を減圧濃縮し、クロロホルムで溶解し、飽和炭酸水素ナトリウムとbrineで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。有機層をろ過後、減圧濃縮し、エタノールで再結晶させ、吸引ろ過により、淡黄色結晶のK-564 (73 mg, 88 %) を得た。
m.p. 122-125°C.
1HNMR (CDCl3) δ: 1.19 (3H, t, J = 7.2 Hz), 3.51 (2H, q, J = 7.2 Hz), 3.63-3.66 (2H, m), 4.05-4.08 (2H, m), 4.59 (2H, d, J = 6.0 Hz), 6.45-6.46 (1H, m), 6.59 (1H, d, J = 3.2 Hz), 7.00 (1H, d, J = 8.0 Hz), 7.45-7.51 (4H, m), 7.58 (1H, s), 7.98 (2H, d, J = 8.4 Hz), 9.49 (1H, s).
HR-ESI-MS m/z: 476.1937 (M+H)+ calcd for C25H26N5O5 476.1934.【０３３２】
実施例９：WST-8を用いたがん細胞株増殖抑制活性試験
本発明の化合物のIC50を求めるため、以下の実験を行った。
（１）実験方法
ヒト大腸がん細胞株HCT116細胞を10% ウシ胎児血清(FBS)、50 μg/mlペニシリンＧ及び50 μg/ml硫酸ストレプトマイシンを含むMcCoy’s 5A培地 (GIBCO)で5% CO2存在下、37℃で培養した。70-80％コンフルエントまで細胞が増殖したら、0.25%トリプシン溶液(1 ml)で処理し、剥離した細胞を回収後、1,000 rpmで5分間遠心を行った。遠心終了後、上清を取り除き、上記培地で10,000 cells/mlになるように細胞を再懸濁後、96ウェルプレートに播種した。24時間後に各濃度に調整した被験化合物（K-852、K-853、K-854、K-855、K-856、K-560、Merck化合物及びEthyl化合物（K-560、Merck化合物及びEthyl化合物の構造を図３に示す））を添加し、5% CO2存在下、37℃で72時間培養した。培養後、WST-8 (Dojindo)を添加し、37℃で2時間培養した。培養後、オートプレートリーダーを用いて吸光度 (主波 450 nm、副波630 nm)を測定し、各化合物の細胞増殖抑制活性 (IC50)を算出した。実験の詳細は、メーカー提供のプロトコールにしたがった。K-560は、Hirata Y et al (Bioorg Med Chem Lett. 2012 Mar 1;22(5):1926-30)に記載の化合物8bである。本発明の化合物（例えばK-852）は、ジオキソピペラジン基とN-(4-(2-amino-5-(thiophen-2-yl)phenylcarbamoyl)benzyl)とが結合している点において、両者がCONH (carboxamide)を介して結合しているK-560と異なる。またEthyl化合物は、特表2010-531359号の実施例37の化合物である。【０３３３】
（２）結果
結果を、表１に示す。被験化合物は、K-855を除いて、典型的なチエニル基導入型2-ベンズアミド型のMerck化合物（IC50：0.84 μM）と比べて、同様かそれより低いIC50値を示した。【０３３４】
【表１】
2016039398.tif 000084
【０３３５】
実施例１０：溶解性試験
本発明に係る化合物の水溶解性を調べるため、以下の実験を行った。【０３３６】
被験化合物を100% DMSOに溶かし、１〜10 mg/mlの濃度になるよう100% DMSOで調整した。
これら100% DMSOサンプル溶液を蒸留水で10倍希釈し、それぞれ0.1〜1 mg/mlの10% DMSO/H2Oサンプル溶液を調整した。このサンプル溶液を25℃で15分間超音波処理、続いて、Vortex振盪30秒処理後、5分間静置した。処理後の溶液をルーペ（倍率10倍）で観察し、微粒子がわずか浮遊しているが、沈殿物は生成していない濃度を、被験化合物の溶解度とした。その結果、表１に示すように、本発明に係る化合物K-852、K-853、K-854、K-855、K-856の水溶解性は、同系統化合物であるMerck 化合物やEthyl化合物（それぞれ、0.5 mg/ml）と比べて向上した。【０３３７】
このことから、本発明に係る前記一般式（I）で示される化合物は、公知のチエニル基導入型2-ベンズアミド型化合物よりも、水溶解性の点で優れていることが明らかとなった。【０３３８】
実施例１１：細胞周期解析
本発明の化合物が、細胞のアポトーシスを誘導させることなく、細胞を静止状態にすることを証明するため、各被験化合物に暴露したがん細胞で細胞周期の各ステージの割合を観察した。
（１）方法
ヒト大腸がん細胞株HCT116細胞、乳癌細胞株SKBR3細胞、神経芽細胞腫細胞株Neuro2a細胞を、それぞれ10%ウシ胎児血清(FBS)、50 μg/mlペニシリンＧ及び50 μg/ml硫酸ストレプトマイシンを含むMcCoy’s 5A培地 （HCT116細胞）、 RPMI1640培地（SKBR細胞)、EMEM培地(Neuro2a細胞)で5%CO2存在下、37℃で培養した。70-80％コンフルエントまで細胞を増殖させ、0.25%トリプシン溶液 (1 ml) (Invitrogen Life Technologies, U.S.A.)で処理し、剥離した細胞を回収後、1000 rpmで5分間遠心を行った。遠心終了後、上清を取り除き、上記培地で1.0×106cells/mlになるように細胞を再懸濁後、60 mmディッシュに播種した。24時間培養後、上記培地の無血清培地に交換し24時間培養した。培地を取り除いた後、上記無血清培地1 mlで3回洗浄し、被験化合物含無血清培地(各被験薬は終濃度で10μMとなるように添加)を加え、24時間または48時間培養した。MS-275（S. Baltan, et al., The Journal of Neuroscience, 2011 31(11):3990 -3999；図３）を対照化合物として使用した。また、コントロール（Control）は、0.1%DMSOとした。培養後浮遊細胞を回収し、さらにディッシュに接着した細胞を0.25%トリプシン溶液で剥がし、浮遊細胞と合わせて実験に使用した。これらすべての細胞を、メーカー提供プロトコールにしたがってCycle Test Plus DNA reagent Kitで処理をし、フローサイトメトリーによって細胞周期の各ステージの割合を解析し、アポトーシス細胞を含有するSubG1細胞の、全細胞に対する割合を求めた。【０３３９】
（２）結果
図４に、HCT116細胞を、被験化合物に48時間暴露して得たDNAヒストグラムを示す。本発明の化合物であるK-852、K-853、K-854、K-856処理細胞は、MS-275暴露細胞(SubG1 15.8%、G0/G1 77.9%)と比べ、明らかにSubG1細胞が少なく、特にK-852、K-853暴露細胞のSubG1細胞の割合はそれぞれ、4.4%、2.5%であり、コントロール細胞（3.6%）とほぼ同レベルであった。またこれらの値は、K-560暴露細胞の6.7%と比較しても低いものであった。さらにK-856暴露細胞のSubG1細胞も6．3％と、MS-275又はK-560暴露細胞よりも低い値を示した。K-854暴露細胞のSubG1細胞の割合は10.8%であり、K-852、K-853暴露細胞ほど顕著ではないものの、MS-275暴露細胞と比較してSubG1細胞の割合は減少していた。さらに、G0/G1の割合を比較すると、コントロール細胞の78.3%と比較して、MS-275暴露細胞は77.9%とコントロール細胞よりも低い値を示した。これに対して、K-852、K-853、K-854、K-856暴露細胞では、G0/G1の割合はそれぞれ84.9%、89.1%、79.6%、79.2％であり、コントロール細胞、MS-275暴露細胞よりも高い値を示した。このことから、本発明の化合物に暴露された細胞において静止期（G0/G1）の細胞が増加していることが明らかとなった。【０３４０】
図５に、SKBR3細胞を、被験化合物に24時間暴露して得られたDNAヒストグラムを示す。MS-275暴露細胞は高いSubG1細胞率（31.4%）を示したが、K-852、K-853、K-854、K-856暴露細胞のSubG1細胞の割合は、それぞれ4.9%、6.8%、15.5%、5.4%であり、いずれもコントロール細胞（3.2%）の当該割合を上回るもののMS-275暴露細胞よりは著しく低い割合を示した。また、K-560暴露細胞のSubG1細胞の割合は8.7%であり、K-852、K-853、K-856暴露細胞の方が低い値を示した。さらに、G0/G1の割合を比較すると 、コントロール細胞の61.0%と比較して、MS-275暴露細胞は57.4％とコントロール細胞よりも低い値を示した。これに対して、K-852、K-853、K-854、K-856暴露細胞では、G0/G1の割合はそれぞれ68.9%、65.3%、53.3%、67.7%であり、K-560暴露細胞の58.6％よりも高い値を示した。【０３４１】
図６に、Neuro2a細胞を、被験化合物に48時間暴露して得られたDNAヒストグラムを示す。本発明の化合物であるK-853、K-854、K-856暴露細胞は、MS-275暴露細胞(SubG1 16.7 %)と比べ、明らかにSubG1細胞が少なく、SubG1細胞の割合はそれぞれ、6.9 %、11.4 %、5.5%であった。K-560暴露細胞のSubG1細胞の割合は、16.7 %であり、K-852、K-853、K-854、K-856暴露細胞と比較して著しく高く、アポトーシスの誘導作用が強いことが示唆された。また、G0/G1の割合を比較すると 、MS-275暴露細胞の60.0 %及びK-560暴露細胞の60.8 %と比較してK-852、K-856暴露細胞では65.9 ％、79.3%と高い値を示した。【０３４２】
これらのデータから、本発明の化合物は、がん細胞においてアポトーシスを惹起しないことが示された。さらに、本発明の化合物であるK-852、K-853、K-854、K-856で細胞を処理することにより、静止期であるG0/G1期の細胞が増え、一方で、アポトーシス細胞（SubG1細胞）が増えることが示された。そして、公知化合物であるMS-275には、このような作用がないことが明らかとなった。さらに、公知化合物であるK-560と比較しても、本発明の化合物はアポトーシス誘導作用が低いことが示された。【０３４３】
以上の結果から、公知のチエニル基を持たない化合物、及びジオキソピペラジン基に隣接してアミド基を有すしかつアミノ基のパラ位に置換基を有する2-ベンズアミド型化合物よりも、本発明の化合物の方がアポトーシス抑制作用が強いと考えられた。【０３４４】
実施例１２：K-562、K-563、K-564の細胞増殖抑制活性試験、溶解性試験
（１）方法
被験化合物の細胞増殖抑制活性を調べるため、ヒト大腸がん細胞株HCT116及び丹生がん細胞株SKBR3 (1 × 104 cells/ml) を96ウェルプレートに播種し、24時間プレインキュベート後、DMSOに溶解した各薬剤をそれぞれ終濃度が100、50、10、1、0.1 μMとなるように添加した。この時DMSOの終濃度は0.25％となるように調整した。３日間培養後、WST-1試薬 (Cell counting Kit, DOJINDO) あるいはWST-8試薬 (Cell counting Kit-8, DOJINDO) を各well に添加し、4時間後 (WST-1) または1時間後 (WST-8) に、micro plate reader (AUTOREADER III, 三光純薬社) を用いて、吸光度（測定波長: 450 nm、参照波長: 630 nm）を測定し、IC50値を求めた。【０３４５】
また、被験化合物の水への溶解性を調べるため、各被験化合物をDMSOに溶解して10 mg/mlに調整した後、水を加え、10% DMSO/H2O 懸濁液 (1 mg/ml) を作成した。ソニケーションを15 分間おこない、30 秒間ボルテックスで攪拌して、5 分間静置した後、溶解度を目視で確認した。また、サンプルのDMSO溶液 (100 mg/ml) をDMSOで段階希釈し、それぞれ上記と同様の方法で処理し、溶解度の評価を行った。【０３４６】
また、被験化合物のHDAC1とHDAC3の選択を調べるため、HDAC1およびHDAC 3の阻害活性を測定した。  HDAC1、3阻害活性は、Enzo Life Sciences社のFluorimetric Drug Discover Kit (Catalog No.はそれぞれ#AK-511, #AK-531)を用い、カタログ記載の方法に従って測定して、IC50値を求めた。
（２）結果
IC50値及び溶解性を表２に示す。【０３４７】
【表２】
2016039398.tif 000085
【０３４８】
K-563は、高い水溶解性を示した。また、K-562、K-563及びK-564はHDAC1に対して高い選択性を示した。【０３４９】
参考合成例２：N-(2-アミノ-5-(フラン-2-イル)フェニル)-4-((4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-イル)メチル)ベンズアミド及びN-(2-アミノ-5-(ベンゼン-2-イル)フェニル)-4-((4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-イル)メチル)ベンズアミドの合成例
N-(2-アミノ-5-(フラン-2-イル)フェニル)-4-((4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-イル)メチル)ベンズアミド又はN-(2-アミノ-5-(ベンゼン-2-イル)フェニル)-4-((4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-イル)メチル)ベンズアミドは、図７に示す合成例にしたがって合成する。【０３５０】
参考合成例３：N-((6-(2-アミノ-5-(チオフェン-2-イル)フェニルカルバモイル)ピリジン-3-イル)メチル)-4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-カルボキサミドの合成例
N-((6-(2-1アミノ-5-(チオフェン-2-イル)フェニルカルバモイル)ピリジン-3-イル)メチル)-4-エチル-2,3-ジオキソピペラジン-1-カルボキサミドは、図８に示す合成例にしたがって合成する。【０３５１】
実施例１３：化合物の構造、物性、及びHDACアイソフォーム阻害活性
表３に以下の実施例で使用した化合物の構造と、物性を示す。【０３５２】
各化合物のIC50を求めるための方法は、以下の通りである。【０３５３】
ヒト大腸がん細胞株HCT116細胞を10% ウシ胎児血清(FBS)、50 μg/mlペニシリンＧ及び50 μg/ml硫酸ストレプトマイシンを含むMcCoy’s 5A培地 (GIBCO)で5% CO2存在下、37℃で培養した。70-80％コンフルエントまで細胞が増殖したら、0.25%トリプシン溶液(1 ml)で処理し、剥離した細胞を回収後、1,000 rpmで5分間遠心を行った。遠心終了後、上清を取り除き、上記培地で10,000 cells/mlになるように細胞を再懸濁後、96ウェルプレートに播種した。24時間後に各濃度に調整した被験化合物を添加し、5% CO2存在下、37℃で72時間培養した。培養後、WST-8 (Dojindo)を添加し、37℃で2時間培養した。培養後、オートプレートリーダーを用いて吸光度 (主波 450 nm、副波630 nm)を測定し、各化合物の細胞増殖抑制活性 (IC50)を算出した。実験の詳細は、メーカー提供のプロトコールにしたがった。K-560 およびEthyl化合物は、Hirata Y et al (Bioorg Med Chem Lett. 2012 Mar 1;22(5):1926-30)に記載の化合物8bおよび化合物2である。またEthyl化合物は、特表2010-531359号の実施例37の化合物でもある。【０３５４】
また、各化合物の水溶解性は、以下の方法により測定した。【０３５５】
被験化合物を100% DMSOに溶かし、１〜10 mg/mlの濃度になるよう100% DMSOで調整した。
これら100% DMSOサンプル溶液を蒸留水で10倍希釈し、それぞれ0.1〜1 mg/mlの10% DMSO/H2Oサンプル溶液を調整した。このサンプル溶液を25℃で15分間超音波処理、続いて、Vortex振盪30秒処理後、5分間静置した。処理後の溶液をルーペ（倍率10倍）で観察し、微粒子がわずか浮遊しているが、沈殿物は生成していない濃度を、被験化合物の溶解度とした。その結果、表３に示すように、本発明に係る化合物K-852、K-853の水溶解性は、同系統化合物であるEthyl化合物（それぞれ、0.5 mg/ml）と比べて向上した。【０３５６】
K-560、及びK-852は、チエニル基を有する２−アミノベンズアミド構造とジオキソピペラジン構造を有するHDAC阻害化合物である。MS−275は、チエニル基を有さず、またジオキソピペラジン構造も有さない。Ethyl化合物は、チエニル基を有する２−アミノベンズアミド構造を有するがジオキソピペラジン構造は有さない。【０３５７】
【表３】
2016039398.tif 000086
【０３５８】
また、表４に各化合物のHDACアイソフォームの阻害活性IC50を示す。K-560は、HDAC1及びHDAC2を特異的に阻害したがHDAC3は全く阻害しなかった。他の化合物は、HDAC1及びHDAC2だけでなくHDAC3も阻害した。【０３５９】
【表４】
2016039398.tif 000087
【０３６０】
実施例１４：K-560の脳虚血に対する神経細胞保護作用
上述の通りK-560はHDAC1 及びHDAC2を選択的に阻害し、HDAC3を阻害しない。K-560が虚血による細胞死から神経細胞を保護する作用があるか否かを検討するため、以下の実験を行った。【０３６１】
（１）方法
常法にしたがって、胎生16日目（E16）のラット大脳皮質より初代神経細胞培養系を樹立し、培養後10〜12日目の細胞を実験に供した。培地として、Neurobasal（登録商標）培地（Life Technologies）にB-27（登録商標）Supplement（Life Technologies）及び抗生物質（ペニシリン−ストレプトマイシン−アンピシリン）を添加したもの（以下、Neurobasal+B27+P/S/Amp培地と略記する）を使用した。in vitro ischemiaとして、3.5時間のOxygen Glucose Deprivation （OGD：低酸素無グルコース負荷）を施行した。具体的には、OGD施行30分前に培地に終濃度で10μMとなるようにK-560、K-350又はDMSOを添加し、初代神経細胞培養系の培地をグルコース無添加培地（OGD用培地ともいう）に交換し、当該細胞を95% N2、5 % CO2、1%O2環境下で3.5時間インキュベーションした。インキュベーション終了後OGD培地をNeurobasal+B27+P/S/Amp培地（終濃度で10μMのK-560、K-350又はDMSOを含む）に置換し通常条件で培養し、OGD負荷から24時間後、48時間後、72時間後に、培養培地を採取し、従来法に従ってLDH assay（Roche社のCytotoxicity Detection Kit）を施行し、死細胞の割合を測定した。100%の細胞死を示すコントロールとして、終濃度2 mMのN-methyl-D-aspartic acid（NMDA）を添加したものを用い、コントロールの吸光度（LDH活性）に対する、各被験物質を添加した細胞の吸光度（LDH活性）の相対値から死細胞の割合を求めた。【０３６２】
ここで、K-350は、チエニル基及びジケトピペラジン基を有さない化合物である。【０３６３】
（２）結果
図９Ａに、OGD負荷後24時間後の各被験物質を添加した細胞の死細胞の割合を比較したグラフを示す。K-350の添加は、陰性対照であるDMSOを添加した細胞と比較して死細胞の割合を減少させた。さらにK-560の添加では、DMSOの添加と比較して著しく死細胞の割合が減少した。【０３６４】
また、図９Ｂは、OGD負荷後72時間後の結果である。K-560の添加では、陰性対照と比較して、有意に死細胞の割合が減少した。【０３６５】
このことから、チエニル基を有する２−アミノベンズアミド構造とジケトピペラジン構造を有するK-560等は脳虚血に対して保護作用を示し、神経細胞への毒性も少ない可能性が示唆された。 【０３６６】
実施例１５：チエニル基を有する２−アミノベンズアミド構造とジオキソピペラジン構造を有する新規HDAC阻害化合物の神経細胞保護作用
実施例１４と同様にラット大脳皮質より樹立した初代神経細胞培養系を用いて、OGD負荷を施行しOGD負荷24時間後における、終濃度で10μMの K-560以外のK-852、及びK−853の神経細胞保護作用についても検討した。ここで、K-852は、チエニル基を有する２−アミノベンズアミド構造とジオキソピペラジン構造を有する化合物であり、K-853は、チエニル基を有する２−アミノベンズアミド構造を有するが、ジオキソピペラジン構造は有さない化合物である。【０３６７】
図１０に示すように、K-852は、K-560と同様に虚血によって引き起こされる細胞死を抑制した。【０３６８】
このことから、チエニル基を有する２−アミノベンズアミド構造とジケトピペラジン構造を有する新規HDAC阻害化合物は脳虚血に対して保護作用を示し、神経細胞への毒性も少ないことが明らかとなった。 【０３６９】
実施例１６：K-560の興奮毒性に対する神経細胞保護作用
K-560に興奮毒性によってもたらされる細胞死から神経細胞を保護する作用があるか否かを検討するため、以下の実験を行った。【０３７０】
（１）方法
上記同様にE16ラット大脳皮質より初代神経細胞培養系を樹立し、培養後10〜12日後の細胞を実験に供した。カイニン酸添加の72時間前にTSA(Trichostatin A:終濃度50 nM)、SAHA(Vorinostat:終濃度150 nM)、VPA(バルプロ酸:終濃度0.5 mM)、K-560(終濃度10μM)、又はMS-275(終濃度1μM)を前添加し、各被験物質存在下で培養後、終濃度で1 mMとなるようにカイニン酸を培地に添加し、カイニン酸による興奮毒負荷を行った。カイニン酸の添加から24時間後に実施例１４と同様にLDH assayを施行し、死細胞の割合を測定した。【０３７１】
ここで、TSA及びSAHAは、汎HDAC阻害剤であり、VPAは、HDAC 1、2、3、8、4、5、7、及び9の阻害剤であり、MS-275は、HDAC1、2及び3の阻害剤である。【０３７２】
（２）結果
図１１に示すように、K-560以外の被験物質で前処理した細胞と比べて、K-560で前処理した細胞では、カイニン酸を添加による細胞死が有意に抑制された。【０３７３】
このことから、チエニル基を有する２−アミノベンズアミド構造とジケトピペラジン構造を有する新規HDAC阻害化合物は興奮毒性に対して保護作用を示すことが明らかとなった。【０３７４】
実施例１７：パーキンソン病動物モデルにおけるK-560の神経細胞保護作用
1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine （MPTP）投与パーキンソン病の病態モデルにおいて、K-560が黒質ドーパミン細胞に対して保護作用を示すかどうか検討するため、以下の実験を行った。【０３７５】
（１）方法
C57BL6/Jマウスに1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine （MPTP）（Fluka  Biochem）を30 mg/ kgの用量で24時間毎に計５回腹腔内に投与した。K-560 (45 mg/kg)投与は、MPTP投与2日前から1日おき（隔日）で計7回、経口投与にて行った。投与群は、以下の通りである：
NS群（生理食塩水投与のみ）
KS群（K-560投与のみ）
NM群（MPTP及び生理食塩水投与）
KM群（MPTP及びK-560投与）。【０３７６】
生理食塩水の投与は、各被験物質の投与に準じて行った。【０３７７】
MPTP 投与の2日後、及び21日後に、マウスを麻酔下で４％パラホルムアルデヒド/PBで灌流固定し、組織を摘出後４％パラホルムアルデヒド/PBで後固定し、凍結切片を作成した。浮遊法により黒質のTH(チロシン水酸化酵素)を免疫染色し、顕微鏡下で陽性細胞数をカウントした。免疫染色は、一次抗体として抗TH抗体（CALBIOCHEM）を用い、常法にしたがって、ペルオキシダーゼとDABによって可視化した。【０３７８】
TH陽性細胞のカウントは、黒質全体のCoronal section(厚さ20μm)を作成し、4枚おきに計15枚の切片のTH染色を行い、各切片におけるTH陽性細胞数をカウントし、総計15枚のTH陽性細胞の総和をグラフ化した。【０３７９】
（２）結果
図１２Ａには、各群のTHの免疫染色像を示した。写真からも明らかなように、NM群では、TH陽性細胞の減少が認められた。【０３８０】
図１２ＢにはMPTP投与後２日後のTH陽性細胞数を、図１２ＣにはMPTP投与後21日後のTH陽性細胞数をグラフ化して示した。図１２Ｂに示すように、MPTP投与後２日後NM群では、NS群又はKS群と比較して半分程度までTH陽性細胞数が減少していたが、KM群では、NM群と比較して有意にTH陽性細胞数が回復していた。同様にMPTP投与後21日後においても、KM群では、NM群と比較して有意にTH陽性細胞数が回復していた（図１２Ｃ）。【０３８１】
これらの結果から、パーキンソン病動物モデルのおいて、K-560が神経細胞保護作用を示すことが明らかとなった。【０３８２】
実施例１８：in vitro パーキンソン病実験モデルにおける神経保護作用
次に、K-560以外のチエニル基を有する２−アミノベンズアミド構造とジケトピペラジン構造を有する新規HDAC阻害化合物の神経細胞保護作用を確認するため、以下の実験を行った。
（１）方法
ヒト神経芽細胞腫培養細胞であるSH-SY5Y細胞を、10％FBS及びペニシリン/ストレプトマイシン加DMEM培地で培養した。1-methyl-4- phenylpyridinium（MPP+）で処理する前に、10μMのレチノイン酸及び3％FBS加DMEMに培地を置換し、8日間培養してSH-SY5Y細胞を分化させた。【０３８３】
分化したSH-SY5Y細胞に終濃度1 mM又は2 mMとなるようにMPP+を添加した。K-852、又はK-853は、終濃度１μMとした。MPP+添加と同時に、K-852、又はK-853を添加した。MPP+添加後48時間で細胞を回収し、LDH assayにより、死細胞の割合を求めた。DMSOは、陰性対照を示す。【０３８４】
（２）結果
図１３に示すように、MPP+が終濃度1 mM又は2 mMで存在する場合において、K-852は、陰性対照と比較して、死細胞の割合が減少していた。【０３８５】
このことから、チエニル基を有する２−アミノベンズアミド構造とジケトピペラジン構造を有する新規HDAC阻害化合物は、パーキンソン病実験モデルにおいて、神経細胞の保護作用を示すことが確認された。【０３８６】
参考実施例：Ethyl化合物のin vitro パーキンソン病実験モデルにおける効果
チエニル−２−アミノベンズアミド構造を有する公知化合物である表１および図３に示すEthyl化合物について、実施例１８と同様の実験を行いin vitro パーキンソン病実験モデルにおいて神経保護作用を示すか否か確認した。
（１）方法
実験方法は、実施例５のK-852、K-853に換えて終濃度100 nM、1μM、5μM、10μMのEthyl化合物を用いた点、及びMPP+が終濃度0 mM又は3 mMである以外は、実施例５と同様である。
（２）結果
図１４右に示すように、MPP+非存在下（MPP-）において、Ethyl化合物を添加された細胞は、Ethyl化合物の濃度依存的に死細胞が増加した。このことから、高濃度のEthyl化合物は、細胞毒性を示すこと明らかとなった。【０３８７】
また、3 mMのMPP+存在下（MPP+（3 mM））でEthyl化合物を添加しても、死細胞数の割合は変化せず、Ethyl化合物には神経保護作用がないことが確認された。【０３８８】
実施例１９：被験化合物の毒性の比較
本発明の化合物が、公知化合物であるMS-275よりも毒性が低いことを実証するため、上記実施例１５で使用した初代神経細胞培養系に、DMSO（陰性対照）、MS-275、K-560、又はK-852を投与して経時的にLDH活性を測定した。MS-275、K-560、及びK-852は、それぞれ終濃度で３μM及び10μMとなるように培地に添加した。【０３８９】
その結果、図１５に示すように、被験薬を添加後24、48及び96時間後において３μM又は10μMのK-560、及びK-852で処理した細胞のLDH活性は、MS-275を添加細胞よりも低い値を示した。このことから、本発明の化合物はMS-275よりも毒性が低いことが示された。【０３９０】
実施例２０：OGD負荷におけるK-852、K-853、 及びK-854の神経細胞保護作用
実施例１５と同様の実験系を用いてK-852、K-853及びK-854の神経細胞保護作用について確認した。【０３９１】
その結果、図１５に示すように、K-852及びK-854では神経細胞死が抑制され、特にK-852では、コントロールと比較してStudentのｔ検定において有意差（星印：p<0.05）が認められた。【０３９２】
実施例２１：OGD負荷におけるK-562、K-563、K-564、K-560、及びK-856の神経細胞保護作用
実施例１５と同様の実験系を用いてK-562、K-563、K-564、K-560、及びK-856の神経細胞保護作用について確認した。【０３９３】
その結果、図１６に示すように、OGD負荷後24時間ではコントロールと比較して有意差は認められなかったが、OGD負荷後48時間では、K-564及びK-856は神経細胞死を抑制し、Studentのｔ検定において有意差（星印：p<0.05）が認められた。【０３９４】
実施例２２：in vtroパーキンソン病実験モデルにおけるK-562、K-563、K-564、K-560、及びK-856の神経細胞保護作用
実施例１８と同様の実験系を用いてK-562、K-563、K-564、K-560、及びK-856の神経細胞保護作用について確認した。【０３９５】
その結果、図１７に示すように、K-856は神経細胞死を抑制し、Studentのｔ検定において有意差（星印：p<0.05）が認められた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【手続補正書】
【提出日】平成28年3月18日(2016.3.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ａ）で示される化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む神経保護剤：
【化１】
2016039398.tif 000120
｛式中、
Ｒ’は、チエニル基、フラニル基、又はフェニル基；
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、及びＲｄのうち二つはカルボニル基であり、他の二つは同一又は異なって下記一般式（Ａ−２）で示される基：
【化２】
2016039398.tif 000121
［Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、水素原子、炭素数１〜４のアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいシクロヘキシル基、又は置換されていてもよいテトラヒドロピラニル基であり、Ｒｂ若しくはＲｄが上記式（Ａ−２）で示される基である時は、Ｒ１若しくはＲ２がＲｘと組み合わさって炭素数３〜６の飽和環を形成してもよい］；
Ｒｘは、置換されていてもよい炭素数１〜６のアルキル基、又は水素原子；
ｎは、１〜４のいずれかの整数；
Ｖは、−ＣＯ−ＮＨ−又は直結；
Ｗ、Ｘ、Ｙ、及びＺは、同一又は異なってＣＨ又は窒素原子である｝
。
【請求項２】
Ｒａが、カルボニル基であり、Ｒｃが、上記一般式（Ａ−２）で示される基である、請求項１に記載の神経保護剤。
【請求項３】
ｎが１である請求項１又は２に記載の神経保護剤。
【請求項４】
（削除）
【請求項５】
下記一般式（ＩＶ）で示される化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む、請求項１に記載の神経保護剤：
【化３】
2016039398.tif 000122
（式中、Ｒ’は、チエニル基、フラニル基、又はフェニル基である。）
【請求項６】
下記式（１）、（１８）、（２）及び（５）のいずれかで示される化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む、請求項１に記載の神経保護剤：
【化４】
2016039398.tif 000123
【化５】
2016039398.tif 000124
【化６】
2016039398.tif 000125
【化７】
2016039398.tif 000126
【請求項７】
神経系疾患の予防または治療用である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の神経保護剤。
【請求項８】
神経系疾患が神経変性疾患である、請求項７に記載の神経保護剤。
【請求項９】
神経変性疾患がパーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー型認知症、脳血管性認知症、ポリグルタミン病、多発性硬化症、ギラン・バレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、又は多巣性運動ニューロパチーである、請求項８に記載の神経保護剤。
【請求項１０】
神経系疾患が虚血性脳疾患である、請求項７に記載の神経保護剤。
【請求項１１】
下記一般式（Ａ）で示される化合物、又はその薬学的に許容される塩：
【化８】
2016039398.tif 000127
｛式中、
Ｖは、直結；
Ｒ’は、チエニル基；
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、及びＲｄのうち二つはカルボニル基であり、他の二つは同一又は異なって下記一般式（Ａ−２）で示される基：
【化９】
2016039398.tif 000128
［Ｒ１及びＲ２は、水素原子であり、Ｒｂ若しくはＲｄが上記式（Ａ−２）で示される基である時は、Ｒ１若しくはＲ２がＲｘと組み合わさって炭素数３〜６の飽和環を形成してもよい］；
Ｒｘは、水素原子、又は炭素数１〜６のアルキル基；
ｎは、１；
Ｗ、Ｘ、Ｙ、及びＺは、ＣＨである｝
。
【請求項１２】
Ｒａが、カルボニル基であり、Ｒｃが、上記一般式（Ａ−２）で示される基である、請求項１１に記載の化合物、又はその薬理学的に許容される塩。
【請求項１３】
（削除）
【請求項１４】
下記式（２）、（５）、（３）、及び（４）のいずれかで示される、請求項１１に記載の化合物、又はその薬理学的に許容される塩：
【化１０】
2016039398.tif 000129
【化１１】
2016039398.tif 000130
【化１２】
2016039398.tif 000131
【化１３】
2016039398.tif 000132
【請求項１５】
請求項１１、１２、及び１４のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む癌の治療及び／又は予防のために用いられる医薬組成物。
【国際調査報告】
2016039398.tif 000133
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