(57)【要約】本発明は、がん患者に対して、優れた抗腫瘍効果を示すＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を用いた化学療法を提供することを目的とする。がん患者から採取された腫瘍細胞を含む生体試料におけるＰＨＬＤＡ１及び／又はＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量に基づき、当該がん患者におけるＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法の治療効果を予測する方法。【特許請求の範囲】
【請求項１】
がん患者から採取した腫瘍細胞におけるＰＨＬＤＡ１及び／又はＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量に基づき、当該がん患者におけるＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法の治療効果を予測する方法。
【請求項２】
下記工程（１）及び（２）を含む、請求項１記載の方法：
（１）当該患者から採取された腫瘍細胞を含む生体試料におけるＰＨＬＤＡ１及び／又はＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量を測定する工程、及び
（２）上記工程（１）で得られたＰＨＬＤＡ１の発現量が予め設定されたカットオフポイント以下である場合、又は上記工程（１）で得られたＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量が予め設定されたカットオフポイント以上である場合、当該がん患者におけるＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法が十分な治療効果を示す可能性が高いと予測する工程。
【請求項３】
ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤が、一般式（Ｉ）
【化１】
2014203959.tif 000003
（式中、Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤは、それぞれＣ−Ｒ１ａ、Ｃ−Ｒ１ｂ、Ｃ−Ｒ１ｃ、及びＣ−Ｒ１ｄを示すか、或いは前記Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄのうちいずれか１又は２つがＮ原子に置換されていることを示し、
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、Ｒ１ｄのうち少なくとも２つが水素原子を示し、他方がそれぞれ
ハロゲン原子、シアノ基、置換基としてヒドロキシル基を有してもよいＣ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、置換基としてヒドロキシル基、アミノ基、置換基を有してもよいモノ又はジ（Ｃ１−６アルキル）アミノ基又はモノ又はジ（Ｃ１−６アルコキシ）アミノ基のいずれかを有するカルボニル基、不飽和複素環基を示し、
Ｒ２は、フェニル基、ピリジル基、又はチエニル基を示し、
Ｒ３は、水素原子、メチル基、エチル基、又はシクロプロピル基を示し、
Ｒ４は、水素原子、又はヒドロキシ基を示す。）
で表されるイミダゾオキサジン化合物又はその薬学的に許容される塩であるか、
ＡＭＧ−３１９、ＡＺＤ−６４８２、ＢＹＬ−７１９、Ｃｏｐａｎｌｉｓｉｂ（ＢＡＹ−８０−６９４６）、ＧＤＣ−００３２、ＧＤＣ−００８４、ＧＳＫ−１０５９６１５  、ＧＳＫ−２１２６４５８、ＧＳＫ−２６３６７７１、Ｉｄｅｌａｌｉｓｉｂ（ＣＡＬ−１０１）、ＩＰＩ−１４５、ＭＬＮ−１１１７（ＩＮＫ−１１１７）、ＰＡ−７９９（ＣＨ−５１３２７９９）、Ｐｉｃｔｉｌｉｓｉｂ（ＧＤＣ−０９４１）、Ｐｉｌａｒａｌｉｓｉｂ（ＸＬ−１４７）、ＳＦ−１１２６、Ｓｏｎｏｌｉｓｉｂ（ＰＸ−８６６）  、Ｖｏｘｔａｌｉｓｉｂ（ＳＡＲ−２４５４０９、ＸＬ−７６５）、Ａｆｕｒｅｓｅｒｔｉｂ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ（ＧＳＫ−２１１０１８３  ）、ＡＲＱ−０９２、ＡＺＤ５３６３、Ｅｎｚａｓｔａｕｒｉｎ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ、ＧＤＣ−００６８、ＧＳＫ−２１４１７９５、ＧＳＫ６９０６９３、ＬＹ−２７８０３０１、ＭＫ−２２０６、Ｐｅｒｉｆｏｓｉｎｅ、Ｔｒｉｃｉｒｉｂｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ（ＶＱＤ−００２）、ＡＺＤ−２０１４、ＡＺＤ−８０５５、ＣＣ−１１５、ＣＣ−２２３、ＤＳ−３０７８、Ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ、Ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ、ＭＥ−３４４、ＭＬＮ−０１２８（ＩＮＫ−１２８）、ＯＳＩ−０２７、ＰＷＴ−３３５９７、Ｒｉｄａｆｏｒｏｌｉｍｕｓ、Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ、Ｄａｃｔｏｌｉｓｉｂ（ＢＥＺ２３５）  、ＤＳ−７４２３、ＧＤＣ−０９８０、ＮＶＰ−ＢＧＴ−２２６、ＰＦ−０４６９１５０２、ＰＦ−０５２１２３８４（ＰＫＩ−５８７）、又はＰＷＴ−３３５９７である請求項１又は２記載の方法。
【請求項４】
一般式（Ｉ）で表されるイミダゾオキサジン化合物が、Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤは、それぞれＣ−Ｒ１ａ、Ｃ−Ｒ１ｂ、Ｃ−Ｒ１ｃ、及びＣ−Ｒ１ｄを示すか、或いは前記Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄのうちいずれか１又は２つがＮ原子に置換されていることを示し、
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、Ｒ１ｄのうち少なくとも２つが水素原子を示し、他方がそれぞれ塩素原子、フッ素原子、シアノ基、メチル基、ヒドロキシメチル基、メトキシ基、エトキシ基、カルボキシル基、カルバモイル基、メチルアミノカルボニル基、エチルアミノカルボニル基、ヒドロキシエチルアミノカルボニル基、エトキシアミノカルボニル基、ピラゾリル基を示し、
Ｒ２は、フェニル基、ピリジル基、又はチエニル基を示し、
Ｒ３は、水素原子、メチル基、エチル基、又はシクロプロピル基を示し、
Ｒ４は、水素原子、又はヒドロキシ基を示す化合物である、請求項３記載の方法。
【請求項５】
一般式（Ｉ）で表されるイミダゾオキサジン化合物が、次の（ａ）〜（ｔ）のいずれかの化合物である請求項３又は４記載の方法。
（ａ）  トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（１０−フルオロ−３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｂ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（１０−フルオロ−３−（ピリジン−４−イル）−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｃ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｄ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（１０−メトキシ−３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｅ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（９−メトキシ−３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｆ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（８−メトキシ−３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｇ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［２，３−ｅ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｈ）トランス−３−アミノ−１−メチル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［２，３−ｅ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｉ）トランス−３−アミノ−１−エチル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［２，３−ｅ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｊ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［３，４−ｅ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｋ）トランス−３−アミノ−１−メチル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［３，４−ｅ］  ［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｌ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［４，３−ｅ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｍ）トランス−３−アミノ−１−メチル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［４，３−ｅ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｎ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［３，２−ｅ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｏ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピラジノゾ［２，３−ｅ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｐ）トランス−３−アミノ−３−（４−（９−（ヒドロキシメチル）−３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）−１−メチルシクロブタノール
（ｑ）２−（４−（トランス−１−アミノ−３−ヒドロキシ−３−メチルシクロブチル）フェニル）−３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−９−カルボニトリル
（ｒ）トランス−３−アミノ−１−メチル−３−（４−（３−フェニル−９−（１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｓ）２−（４−（トランス−１−アミノ−３−ヒドロキシ−３−メチルシクロブチル）フェニル）−Ｎ−メチル−３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−８−カルボキサミド
（ｔ）２−（４−（トランス−１−アミノ−３−ヒドロキシ−３−メチルシクロブチル）フェニル）−Ｎ−エトキシ−３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−８−カルボキサミド
【請求項６】
ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤が、ＭＫ−２２０６、ＢＥＺ２３５、ＧＤＣ−０９４１、Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ、トランス−３−アミノ−１−メチル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［３，４−ｅ］  ［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノールである請求項１〜５のいずれか１項記載の方法。
【請求項７】
腫瘍細胞におけるＰＨＬＤＡ１の発現量が予め設定されたカットオフポイント以下であるか、又は腫瘍細胞におけるＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量が予め設定されたカットオフポイント以上であるがん患者を治療するためのＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤。
【請求項８】
ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤であって、下記工程（１）及び（２）を含む方法により当該抗腫瘍剤を用いた化学療法が十分な治療効果を示す可能性が高いと予測されたがん患者に投与されることを特徴とする抗腫瘍剤：
（１）当該患者から採取された腫瘍細胞を含む生体試料におけるＰＨＬＤＡ１及び／又はＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量を測定する工程、及び
（２）上記工程（１）で得られたＰＨＬＤＡ１の発現量が予め設定されたカットオフポイント以下の場合、又は上記工程（１）で得られたＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量が予め設定されたカットオフポイント以上の場合、当該がん患者におけるＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法が十分な治療効果を示す可能性が高いと予測する工程。
【請求項９】
下記工程（１）及び（２）を含む方法により、がん患者におけるＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法の治療効果を予測するための、ＰＨＬＤＡ１及び／又はＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量を測定する試薬を含有するキット：
（１）当該患者から採取された腫瘍細胞を含む生体試料におけるＰＨＬＤＡ１及び／又はＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量を測定する工程、及び
（２）上記工程（１）で得られたＰＨＬＤＡ１の発現量が予め設定されたカットオフポイント以下の場合、又は上記工程（１）で得られたＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量が予め設定されたカットオフポイント以上の場合、当該がん患者におけるＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法が十分な治療効果を示す可能性が高いと予測する工程。
【請求項１０】
請求項１〜６のいずれか１項記載の方法によりＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法が十分な治療効果を示す可能性が高いと予測されたがん患者に、該抗腫瘍剤を投与することを含むがん患者の治療方法。
【請求項１１】
請求項１〜６のいずれか１項記載の方法によりＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法が十分な治療効果を示す可能性が高いと予測されたがん患者の治療に用いるための、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連分野の相互参照）
本願は、2013年6月20日に出願した特願2013-129591号明細書（その全体が参照により本明細書中に援用される）の優先権の利益を主張するものである。
（技術分野）
本発明は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法に対する治療効果を予測する方法、抗腫瘍剤及びキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲシグナルパスウェイは細胞増殖、アポトーシス抵抗性、糖代謝など様々な重要な細胞機能を制御しているが、広範な悪性腫瘍においてシグナルパスウェイの活性が亢進していることが知られている（非特許文献１）。抗腫瘍剤として多くのＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤（ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、あるいはＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲデュアル阻害剤など）の臨床試験が進行中であるが、特にＰＩ３ＫあるいはＡＫＴを標的とした阻害剤が単剤で用いられた臨床試験においては、十分な臨床効果を示すことが出来ていない（非特許文献２）。【０００３】
一般にＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤のような分子標的薬は、その標的分子が高発現あるいは高活性である腫瘍細胞に対して強い効力を示す場合があり、予め奏功が期待できる患者群を治療効果予測マーカーにより層別化することが重要となっている（非特許文献３）。ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤については、臨床においてＰＩＫ３ＣＡ変異あるいはＰＴＥＮ欠失等が薬効予測マーカーとして検証されている（非特許文献４）。【０００４】
以上のとおり、種々のＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤が精力的に開発されているが、がん患者全体におけるその治療効果は満足できるものではなく、またＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤においては、十分な治療効果を示すがん患者を層別化できる治療効果予測マーカーが見いだされていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ  ２，  ４８９−５０１  （２００２）
【非特許文献２】Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ  ９，  ５５０−５６２  （２００９）
【非特許文献３】Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ８，  ５８７−５９６  （２０１１）
【非特許文献４】Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  １２，  ５９４−６０３（２０１１）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、がん患者に対して優れた抗腫瘍効果を示すＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を用いた化学療法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、種々の遺伝子発現とＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤の治療効果の関係を鋭意研究したところ、ＰＨＬＤＡ１の発現量が低いか、又はＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量が高いがん患者においては、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤（特に、トランス−３−アミノ−１−メチル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［３，４−ｅ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール）が顕著に強い抗腫瘍効果を示すこと見いだし、本発明を完成するに至った。【０００８】
なお、ＰＨＬＤＡ１及びＰＩＫ３Ｃ２Ｂのいずれについても、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤との関連については全く報告がされていない。【０００９】
すなわち本発明は、以下の方法、抗腫瘍剤及びキットを提供するものである。
〔１〕  がん患者の腫瘍細胞におけるＰＨＬＤＡ１及び／又はＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量に基づき、当該がん患者におけるＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法の治療効果を予測する方法。
〔２〕  下記工程（１）及び（２）を含む、〔１〕記載の方法。【００１０】
（１）当該患者から採取された腫瘍細胞を含む生体試料におけるＰＨＬＤＡ１及び／又はＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量を測定する工程、
（２）上記工程（１）で得られたＰＨＬＤＡ１の発現量が予め設定されたカットオフポイント以下である場合、又は上記工程（１）で得られたＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量が予め設定されたカットオフポイント以上である場合、当該がん患者におけるＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法が十分な治療効果を示す可能性が高いと予測する工程。
〔３〕  ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤が、一般式（Ｉ）【００１１】
【化１】
2014203959.tif 000002
【００１２】
（式中、Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤは、それぞれＣ−Ｒ１ａ、Ｃ−Ｒ１ｂ、Ｃ−Ｒ１ｃ、及びＣ−Ｒ１ｄを示すか、或いは前記Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄのうちいずれか１又は２つがＮ原子に置換されていることを示し、
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、Ｒ１ｄのうち少なくとも２つが水素原子を示し、他方がそれぞれ
ハロゲン原子、シアノ基、置換基としてヒドロキシル基を有してもよいＣ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、置換基としてヒドロキシル基、アミノ基、置換基を有してもよいモノ又はジ（Ｃ１−６アルキル）アミノ基又はモノ又はジ（Ｃ１−６アルコキシ）アミノ基のいずれかを有するカルボニル基、不飽和複素環基を示し、
Ｒ２は、フェニル基、ピリジル基、又はチエニル基を示し、
Ｒ３は、水素原子、メチル基、エチル基、又はシクロプロピル基を示し、
Ｒ４は、水素原子、又はヒドロキシ基を示す。）
で表されるイミダゾオキサジン化合物又はその薬学的に許容される塩であるか、
ＡＭＧ−３１９、ＡＺＤ−６４８２、ＢＹＬ−７１９、Ｃｏｐａｎｌｉｓｉｂ（ＢＡＹ−８０−６９４６）、ＧＤＣ−００３２、ＧＤＣ−００８４、ＧＳＫ−１０５９６１５  、ＧＳＫ−２１２６４５８、ＧＳＫ−２６３６７７１、Ｉｄｅｌａｌｉｓｉｂ（ＣＡＬ−１０１）、ＩＰＩ−１４５、ＭＬＮ−１１１７（ＩＮＫ−１１１７）、ＰＡ−７９９（ＣＨ−５１３２７９９）、Ｐｉｃｔｉｌｉｓｉｂ（ＧＤＣ−０９４１）、Ｐｉｌａｒａｌｉｓｉｂ（ＸＬ−１４７）、ＳＦ−１１２６、Ｓｏｎｏｌｉｓｉｂ（ＰＸ−８６６）  、Ｖｏｘｔａｌｉｓｉｂ（ＳＡＲ−２４５４０９、ＸＬ−７６５）、Ａｆｕｒｅｓｅｒｔｉｂ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ（ＧＳＫ−２１１０１８３  ）、ＡＲＱ−０９２、ＡＺＤ５３６３、Ｅｎｚａｓｔａｕｒｉｎ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ、ＧＤＣ−００６８、ＧＳＫ−２１４１７９５、ＧＳＫ６９０６９３、ＬＹ−２７８０３０１、ＭＫ−２２０６、Ｐｅｒｉｆｏｓｉｎｅ、Ｔｒｉｃｉｒｉｂｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ（ＶＱＤ−００２）、ＡＺＤ−２０１４、ＡＺＤ−８０５５、ＣＣ−１１５、ＣＣ−２２３、ＤＳ−３０７８、Ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ、Ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ、ＭＥ−３４４、ＭＬＮ−０１２８（ＩＮＫ−１２８）、ＯＳＩ−０２７、ＰＷＴ−３３５９７、Ｒｉｄａｆｏｒｏｌｉｍｕｓ、Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ、Ｄａｃｔｏｌｉｓｉｂ（ＢＥＺ２３５）  、ＤＳ−７４２３、ＧＤＣ−０９８０、ＮＶＰ−ＢＧＴ−２２６、ＰＦ−０４６９１５０２、ＰＦ−０５２１２３８４（ＰＫＩ−５８７）、又はＰＷＴ−３３５９７である〔１〕又は〔２〕記載の方法。
〔４〕  一般式（Ｉ）で表されるイミダゾオキサジン化合物が、Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤは、それぞれＣ−Ｒ１ａ、Ｃ−Ｒ１ｂ、Ｃ−Ｒ１ｃ、及びＣ−Ｒ１ｄを示すか、或いは前記Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄのうちいずれか１又は２つがＮ原子に置換されていることを示し、
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、Ｒ１ｄのうち少なくとも２つが水素原子を示し、他方がそれぞれ塩素原子、フッ素原子、シアノ基、メチル基、ヒドロキシメチル基、メトキシ基、エトキシ基、カルボキシル基、カルバモイル基、メチルアミノカルボニル基、エチルアミノカルボニル基、ヒドロキシエチルアミノカルボニル基、エトキシアミノカルボニル基、ピラゾリル基を示し、
Ｒ２は、フェニル基、ピリジル基、又はチエニル基を示し、
Ｒ３は、水素原子、メチル基、エチル基、又はシクロプロピル基を示し、
Ｒ４は、水素原子、又はヒドロキシ基を示す化合物である、〔３〕記載の方法。
〔５〕  一般式（Ｉ）で表されるイミダゾオキサジン化合物が、次の（ａ）〜（ｔ）のいずれかの化合物である〔３〕又は〔４〕記載の方法。【００１３】
（ａ）  トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（１０−フルオロ−３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｂ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（１０−フルオロ−３−（ピリジン−４−イル）−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｃ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｄ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（１０−メトキシ−３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｅ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（９−メトキシ−３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｆ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（８−メトキシ−３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｇ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［２，３−ｅ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｈ）トランス−３−アミノ−１−メチル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［２，３−ｅ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｉ）トランス−３−アミノ−１−エチル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［２，３−ｅ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｊ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［３，４−ｅ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｋ）トランス−３−アミノ−１−メチル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［３，４−ｅ］  ［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｌ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［４，３−ｅ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｍ）トランス−３−アミノ−１−メチル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［４，３−ｅ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｎ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［３，２−ｅ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｏ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピラジノゾ［２，３−ｅ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｐ）トランス−３−アミノ−３−（４−（９−（ヒドロキシメチル）−３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）−１−メチルシクロブタノール
（ｑ）２−（４−（トランス−１−アミノ−３−ヒドロキシ−３−メチルシクロブチル）フェニル）−３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−９−カルボニトリル
（ｒ）トランス−３−アミノ−１−メチル−３−（４−（３−フェニル−９−（１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｓ）２−（４−（トランス−１−アミノ−３−ヒドロキシ−３−メチルシクロブチル）フェニル）−Ｎ−メチル−３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−８−カルボキサミド
（ｔ）２−（４−（トランス−１−アミノ−３−ヒドロキシ−３−メチルシクロブチル）フェニル）−Ｎ−エトキシ−３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−８−カルボキサミド
〔６〕  ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤が、ＭＫ−２２０６、ＢＥＺ２３５、ＧＤＣ−０９４１、Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ、トランス−３−アミノ−１−メチル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［３，４−ｅ］  ［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノールである〔１〕〜〔５〕のいずれか１項記載の方法。
〔７〕  腫瘍細胞におけるＰＨＬＤＡ１の発現量が予め設定されたカットオフポイント以下であるか、又は腫瘍細胞におけるＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量が予め設定されたカットオフポイント以上であるがん患者を治療するためのＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤。
〔８〕  ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤であって、下記工程（１）及び（２）を含む方法により当該抗腫瘍剤を用いた化学療法が十分な治療効果を示す可能性が高いと予測されたがん患者に投与されることを特徴とする抗腫瘍剤。【００１４】
（１）当該患者から採取された腫瘍細胞を含む生体試料におけるＰＨＬＤＡ１及び／又はＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量を測定する工程、
（２）上記工程（１）で得られたＰＨＬＤＡ１の発現量が予め設定されたカットオフポイント以下の場合、又は上記工程（１）で得られたＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量が予め設定されたカットオフポイント以上の場合、当該がん患者におけるＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法が十分な治療効果を示す可能性が高いと予測する工程。
〔９〕  下記工程（１）及び（２）を含む方法により、がん患者におけるＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法の治療効果を予測するための、ＰＨＬＤＡ１及び／又はＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量を測定する試薬を含有するキット：
（１）当該患者から採取された腫瘍細胞を含む生体試料におけるＰＨＬＤＡ１及び／又はＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量を測定する工程、及び
（２）上記工程（１）で得られたＰＨＬＤＡ１の発現量が予め設定されたカットオフポイント以下の場合、又は上記工程（１）で得られたＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量が予め設定されたカットオフポイント以上の場合、当該がん患者におけるＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法が十分な治療効果を示す可能性が高いと予測する工程。
〔１０〕  〔１〕〜〔６〕のいずれか１項記載の方法によりＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法が十分な治療効果を示す可能性が高いと予測されたがん患者に、該抗腫瘍剤を投与することを含むがん患者の治療方法。
〔１１〕  〔１〕〜〔６〕のいずれか１項記載の方法によりＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法が十分な治療効果を示す可能性が高いと予測されたがん患者の治療に用いるための、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤。【００１５】
本発明は、さらに以下の態様をも包含する。
〔１２〕  がん患者の腫瘍細胞におけるＰＨＬＤＡ１及び／又はＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量に基づき、当該がん患者におけるＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法の治療効果を検査する方法。
〔１３〕下記工程（１）及び（２）を含む、〔１２〕記載の方法。【００１６】
（１）当該患者から採取された腫瘍細胞を含む生体試料におけるＰＨＬＤＡ１及び／又はＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量を測定する工程、
（２）上記工程（１）で得られたＰＨＬＤＡ１の発現量が予め設定されたカットオフポイント以下の場合、又は上記工程（１）で得られたＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量が予め設定されたカットオフポイント以上の場合、当該がん患者におけるＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法が十分な治療効果を示す可能性が高いと判定する工程。
【発明の効果】
【００１７】
本発明によれば、がん患者におけるＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤に対する治療効果の新たな予測法が提供される。すなわち、本発明の予測方法は、ＰＨＬＤＡ１及び／又はＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現に基づき、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤に対して顕著に感受性を示すがん患者を予測することができる。これにより、がん治療における適切な薬剤の選択ないしは無用な投薬の回避ができ、適切な投与計画の立案や適切な投与計画への変更が可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】ＰＨＬＤＡ１又はＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量と、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤に対する感受性との相関を示す。
【図２】ＰＨＬＤＡ１遺伝子ノックダウン、タンパク質の発現量及びリン酸化状態の解析結果を示す。
【図３】ＰＩＫ３Ｃ２Ｂ遺伝子ノックダウンによるＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤に対する感受性変化の解析結果を示す。
【図４】ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤治療効果予測性における、従来法ＰＩＫ３ＣＡ変異・ＰＴＥＮ欠失測定とＰＨＬＤＡ１・ＰＩＫ３Ｃ２Ｂ発現量測定との比較を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明の予測方法は、がん患者から採取された腫瘍細胞を含む生体試料におけるＰＨＬＤＡ１及び／又はＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量に基づき、当該がん患者におけるＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法の治療効果を予測又は検査するものである。
【００２０】
本発明の対象となるがんは、具体的には、頭頚部癌、消化器癌(食道癌、胃癌、十二指腸癌、肝臓癌、胆道癌(胆嚢・胆管癌など)、勝臓癌、小腸癌、大腸癌(結腸直腸癌、結腸癌、直腸癌など)など)、肺癌(非小細胞肺癌、小細胞肺癌など)、乳癌、卵巣癌、子宮癌(子宮頚癌、子宮体癌など)、腎癌、勝脱癌、前立腺癌等が挙げられる。なお、ここで癌には、原発巣のみならず、他の臓器(肝臓など)に転移した癌をも含む。また、ここでがん患者には、腫瘍細胞を現に有する患者のみならず、外科手術や化学療法等により腫瘍細胞が消失又は確認できなくなった患者も含む。
本発明における「ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤」とは、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲシグナルパスウェイにおけるシグナル伝達の亢進を阻害する活性を有する薬剤であれば特に制限されず、ＰＩ３Ｋ、ＡＫＴ及びｍＴＯＲからなる群から選ばれる１あるいは２以上の標的分子に対する阻害剤が挙げられる。好ましくはＰＩ３Ｋ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤又はＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲデュアル阻害剤である。なお、これら阻害剤は、ＰＩ３Ｋ、ＡＫＴ及びｍＴＯＲ以外の標的分子に対する阻害活性を併せ持っていても良い。ここで「阻害剤」には、標的分子の活性を阻害する薬剤のみならず、標的分子の発現を阻害する薬剤をも包含する。また、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤の態様としては、特に制限はなく、低分子化合物、抗体、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ及びアプタマー等が挙げられる。
【００２１】
本発明の１つの好ましい実施形態において、具体的なＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤としては、一般式（Ｉ）で表されるイミダゾオキサジン化合物又はその塩が挙げられる。一般式（Ｉ）で表されるイミダゾオキサジン化合物はＡＫＴの酵素阻害剤として有用である。
【００２２】
一般式（Ｉ）中、Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤは、それぞれＣ−Ｒ１ａ、Ｃ−Ｒ１ｂ、Ｃ−Ｒ１ｃ、及びＣ−Ｒ１ｄを示すか、或いは前記Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄのうちいずれか１又は２つがＮ原子に置換されていることをそれぞれ示す。
【００２３】
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、又はＲ１ｄで表されるハロゲン原子としては、塩素原子、臭素原子、フッ素原子、ヨウ素原子が例示され、好ましくは塩素原子、又はフッ素原子である。
【００２４】
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、又はＲ１ｄで表される「置換基としてヒドロキシル基を有してもよいＣ１−６アルキル基」のＣ１−６アルキル基は、炭素数１〜６の直鎖状若しくは分枝状のアルキル基を示し、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基等を示し、好ましくはＣ１−３アルキル基であり、より好ましくはメチル基である。ヒドロキシル基（置換基）の数は、０個〜２個、好ましくは０個又は１個である。
【００２５】
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、又はＲ１ｄで表される「Ｃ１−６アルコキシ基」は、炭素数１〜６の直鎖状若しくは分枝状のアルコキシ基を示し、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、イソブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基等を示し、好ましくはＣ１−３アルコキシ基であり、より好ましくはメトキシ基、又はエトキシ基である。
【００２６】
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、又はＲ１ｄで表される「置換基としてヒドロキシル基、アミノ基、置換基を有してもよいモノ又はジ（Ｃ１−６アルキル）アミノ基、又はモノ又はジ（Ｃ１−６アルコキシ）アミノ基のいずれかを有するカルボニル基」は、置換基としてヒドロキシル基を有するカルボニル基(すなわちカルボキシル基)、置換基としてアミノ基を有するカルボニル基(すなわちカルバモイル基)、置換基を有してもよいモノ又はジ（Ｃ１−６アルキル）アミノカルボニル基、モノ又はジ（Ｃ１−６アルコキシ）アミノカルボニル基を意味する。
【００２７】
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、又はＲ１ｄで表される「置換基としてヒドロキシル基、アミノ基、置換基を有してもよいモノ又はジ（Ｃ１−６アルキル）アミノ基、又はモノ又はジ（Ｃ１−６アルコキシ）アミノ基のいずれかを有するカルボニル基」の「置換基を有してもよいモノ又はジ（Ｃ１−６アルキル）アミノカルボニル基」のモノ又はジ（Ｃ１−６アルキル）アミノカルボニル基は、上記のＣ１−６アルキル基を１又は２個有するアミノカルボニル基を示し、好ましくはモノ又はジ（Ｃ１−３アルキル）アミノカルボニル基であり、より好ましくはメチルアミノカルボニル基、ジメチルアミノカルボニル基、エチルアミノカルボニル基である。置換基としては好ましくはヒドロキシル基である。置換基を有する場合、置換基の数は１個が好ましい。
【００２８】
またモノ又はジ（Ｃ１−６アルコキシ）アミノカルボニル基は、上記のＣ１−６アルコキシ基を１又は２個有するアミノカルボニル基を示し、好ましくはモノ又はジ（Ｃ１−３アルコキシ）アミノカルボニル基であり、より好ましくはエトキシアミノカルボニル基である。
【００２９】
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、又はＲ１ｄで表される「置換基としてヒドロキシル基、アミノ基、置換基を有してもよいモノ又はジ（Ｃ１−６アルキル）アミノ基、又はモノ又はジ（Ｃ１−６アルコキシ）アミノ基のいずれかを有するカルボニル基」として特に好ましくは、カルボキシル基、カルバモイル基、メチルアミノカルボニル基、エチルアミノカルボニル基、ヒドロキシエチルアミノカルボニル基、エトキシアミノカルボニル基である。
【００３０】
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、又はＲ１ｄで表される「不飽和複素環基」としては、Ｎ、Ｓ、Ｏのいずれかのヘテロ原子を１〜４個有する単環性又は二環性の５〜１０員の不飽和複素環基を示し、例えばイミダゾリル基、チエニル基、フリル基、ピロリル基、オキサゾリル基、イソオキサゾリル基、チアゾリル基、イソチアゾリル基、ピラゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基、ピリジル基、ピラジル基、ピリミジニル基、ピリダジニル基、インドリル基、イソインドリル基、インダゾリル基、ベンゾフラニル基、ベンゾイミダゾリル基、ベンゾオキサゾリル基、ベンゾチアゾリル基、プリニル基、キノリル基、イソキノリル基、キナゾリニル基、キノキサリル基等が例示され、好ましくはピラゾリル基を示す。
【００３１】
さらに、一般式（Ｉ）で表されるイミダゾオキサジン化合物の好ましい具体例としては、次の（ａ）〜（ｔ）のいずれかに記載の化合物であってもよい。
【００３２】
（ａ）  トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（１０−フルオロ−３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｂ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（１０−フルオロ−３−（ピリジン−４−イル）−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｃ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｄ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（１０−メトキシ−３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｅ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（９−メトキシ−３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｆ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（８−メトキシ−３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｇ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［２，３−ｅ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｈ）トランス−３−アミノ−１−メチル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［２，３−ｅ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｉ）トランス−３−アミノ−１−エチル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［２，３−ｅ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｊ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［３，４−ｅ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｋ）トランス−３−アミノ−１−メチル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［３，４−ｅ］  ［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール（以下、ｃｏｍｐｏｕｎｄ−Ｉと称す。）
（ｌ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［４，３−ｅ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｍ）トランス−３−アミノ−１−メチル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［４，３−ｅ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール  （ｎ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［３，２−ｅ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｏ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピラジノゾ［２，３−ｅ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｐ）トランス−３−アミノ−３−（４−（９−（ヒドロキシメチル）−３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）−１−メチルシクロブタノール
（ｑ）２−（４−（トランス−１−アミノ−３−ヒドロキシ−３−メチルシクロブチル）フェニル）−３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−９−カルボニトリル
（ｒ）トランス−３−アミノ−１−メチル−３−（４−（３−フェニル−９−（１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｓ）２−（４−（トランス−１−アミノ−３−ヒドロキシ−３−メチルシクロブチル）フェニル）−Ｎ−メチル−３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−８−カルボキサミド
（ｔ）２−（４−（トランス−１−アミノ−３−ヒドロキシ−３−メチルシクロブチル）フェニル）−Ｎ−エトキシ−３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−８−カルボキサミド
一般式（Ｉ）で表されるイミダゾオキサジン化合物の薬学的に許容される塩としては、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の無機酸や、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、クエン酸、酒石酸、炭酸、ピクリン酸、メタンスルホン酸、パラトルエンスルホン酸、グルタミン酸などの有機酸との酸付加塩、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アルミニウムなどの無機塩基や、メチルアミン、エチルアミン、メグルミン、エタノールアミンなどの有機塩基、又はリジン、アルギニン、オルニチンなどの塩基性アミノ酸との塩やアンモニウム塩が挙げられる。また、一般式（Ｉ）で表されるイミダゾオキサジン化合物には、光学異性体も含まれ、水和物も含まれる。
【００３３】
なお、これら一般式（Ｉ）で表されるイミダゾオキサジン化合物又はその薬学的に許容される塩はＷＯ２０１２／１３７８７０に記載の方法に準じて製造することができる。
【００３４】
本発明の他の好ましい実施形態において、具体的なＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤としては、ＰＩ３Ｋ阻害剤としてＡＭＧ−３１９、ＡＺＤ−６４８２、ＢＹＬ−７１９、Ｃｏｐａｎｌｉｓｉｂ（ＢＡＹ−８０−６９４６）、ＧＤＣ−００３２、ＧＤＣ−００８４、ＧＳＫ−１０５９６１５  、ＧＳＫ−２１２６４５８、ＧＳＫ−２６３６７７１、Ｉｄｅｌａｌｉｓｉｂ（ＣＡＬ−１０１）、ＩＰＩ−１４５、ＭＬＮ−１１１７（ＩＮＫ−１１１７）、ＰＡ−７９９（ＣＨ−５１３２７９９）、Ｐｉｃｔｉｌｉｓｉｂ（ＧＤＣ−０９４１）、Ｐｉｌａｒａｌｉｓｉｂ（ＸＬ−１４７）、ＳＦ−１１２６、Ｓｏｎｏｌｉｓｉｂ（ＰＸ−８６６）  、Ｖｏｘｔａｌｉｓｉｂ（ＳＡＲ−２４５４０９、ＸＬ−７６５）などが、ＡＫＴ阻害剤としてＡｆｕｒｅｓｅｒｔｉｂ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ（ＧＳＫ−２１１０１８３  ）、ＡＲＱ−０９２、ＡＺＤ５３６３、Ｅｎｚａｓｔａｕｒｉｎ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ、ＧＤＣ−００６８、ＧＳＫ−２１４１７９５、ＧＳＫ６９０６９３、ＬＹ−２７８０３０１、ＭＫ−２２０６、Ｐｅｒｉｆｏｓｉｎｅ、Ｔｒｉｃｉｒｉｂｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ（ＶＱＤ−００２）などが、ｍＴＯＲ阻害剤としてＡＺＤ−２０１４、ＡＺＤ−８０５５、ＣＣ−１１５、ＣＣ−２２３、ＤＳ−３０７８、Ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ、Ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ、ＭＥ−３４４、ＭＬＮ−０１２８（ＩＮＫ−１２８）、ＯＳＩ−０２７、ＰＷＴ−３３５９７、Ｒｉｄａｆｏｒｏｌｉｍｕｓ、Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓなどが、ＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲデュアル阻害剤としてＤａｃｔｏｌｉｓｉｂ（ＢＥＺ２３５）  、ＤＳ−７４２３、ＧＤＣ−０９８０、ＮＶＰ−ＢＧＴ−２２６、ＰＦ−０４６９１５０２、ＰＦ−０５２１２３８４（ＰＫＩ−５８７）  、ＰＷＴ−３３５９７などが挙げられる。なお、これら阻害剤は市販されているか、または通常公知の方法により製造することが可能である。
【００３５】
上記ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤のうち、ＰＨＬＤＡ１及び／又はＰＩＫ３Ｃ２Ｂによる層別化の効果の観点から、ＭＫ−２２０６、ＢＥＺ２３５、ＧＤＣ−０９４１、Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ、又はトランス−３−アミノ−１−メチル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［３，４−ｅ］  ［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノールがより好ましく、トランス−３−アミノ−１−メチル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［３，４−ｅ］  ［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノールが特に好ましい。
【００３６】
本発明におけるＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤の投与形態に特に制限は無く、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤の種類に応じて通常公知の投与形態から適宜選択され、具体的には経口剤（錠剤、被覆錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤など）、注射剤、坐剤、貼付剤、軟膏剤等が例示できる。また、当該抗腫瘍剤は投与形態に応じ薬理学的に許容される担体を用いて、通常公知の方法により調製することができる。斯かる担体としては、通常の薬剤に汎用される各種のもの、例えば賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、希釈剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、ｐＨ調整剤、緩衝剤、安定化剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤等を例示できる。
【００３７】
本発明における「ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法」とは、少なくとも本発明のＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤を投与する化学療法を意味し、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤を単独で用いた化学療法のみならず、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤と他の抗腫瘍剤を併用した化学療法をも含むものである。  
抗腫瘍剤中に含有されるＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤の量は、これを適用すべき患者の症状により、或いはその剤形等により一定ではないが、一般に投与単位形態あたり、経口剤では約０．０５〜１，０００ｍｇ、注射剤では約０．０１〜５００mg、坐剤では約１〜１,０００mgとするのが望ましい。また、上記投与形態を有する薬剤の1日あたりの投与量は、患者の症状、体重、年齢、性別等によって異なり一概には決定できないが、通常成人（体重５０ｋｇ）１日あたり約０．０５〜５，０００mg、好ましくは０．１〜１，０００mgとすればよく、これを１日１回又は２〜３回程度に分けて投与するのが好ましい。
【００３８】
当該化学療法の投与スケジュールは、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤の種類、併用薬剤の有無、前治療暦、病期、転移の有無、患者の年齢、性別などの条件により適宜選択される。
【００３９】
なお、当該化学療法は、その実施期間中、又は実施期間の前後に腫瘍を切除する手術の有無を問わない。主に延命効果を目的とした腫瘍の摘出を伴わない化学療法であっても、主に腫瘍縮小効果を目的とした化学療法の後に小さくなった腫瘍の摘出を行う術前補助化学療法であっても、主に再発・転移抑制効果を目的とした腫瘍の摘出の後に予防的に化学療法を行う術後補助化学療法であってもよい。
【００４０】
本発明において「治療効果」は、上述の通り、腫瘍縮小効果、再発・転移抑制効果、延命効果などにより評価することができる。「当該がん患者におけるＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法が十分な治療効果を示す」とは、ＰＨＬＤＡ１低発現患者又はＰＩＫ３Ｃ２Ｂ高発現患者における治療効果が、ＰＨＬＤＡ１高発現患者又はＰＩＫ３Ｃ２Ｂ低発現患者における治療効果と比較して統計上有意な程度の差をもって顕著に優れていることをいう。
【００４１】
本発明における生体試料としては、がん患者から採取したものであり腫瘍細胞を含む生体試料であれば特に限定されず、体液（血液、尿、頭髪等）、組織（生検試料、摘出臓器等）、その抽出物及び培養物などが例示できる。また、生体試料の採取方法は、生体試料の種類に応じ適宜選択することができる。
【００４２】
本発明で指標であるＰＨＬＤＡ１（Ｐｌｅｃｋｓｔｒｉｎ  ｈｏｍｏｌｏｇｙ−ｌｉｋｅ  ｄｏｍａｉｎ  ｆａｍｉｌｙ  Ａ  ｍｅｍｂｅｒ  １）とは、プレクストリン相同ドメインを持つ核タンパク質の一種であり、インスリン様成長因子の抗アポトーシス作用への関与が報告されている。なお、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲパスウェイへの関与は知られていない。
【００４３】
本発明で指標であるＰＩＫ３Ｃ２Ｂ（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ−４−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ３−ｋｉｎａｓｅ，  ｃａｔａｌｙｔｉｃ  ｓｕｂｕｎｉｔ  ｔｙｐｅ  ２  ｂｅｔａ）は、ＰＩ３Ｋスーパーファミリーに含まれるが、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤との関連が報告されているＰＩＫ３ＣＡとは異なり、ＰＩ３Ｋ  ｃｌａｓｓ  ＩＩファミリーの１つであり、調節サブユニットを持たない。
【００４４】
本発明の予測方法において発現量の測定対象は、定量的又は半定量的に発現量を測定できるものであれば特に制限はなく、ｍＲＮＡの発現量、ＤＮＡのコピー数、タンパク質の発現量などが挙げられる。
【００４５】
ｍＲＮＡの発現量を測定対象とする場合、ＰＨＬＤＡ１又はＰＩＫ３Ｃ２ＢのｍＲＮＡと特異的にハイブリダイズするプローブ又はプライマーを用いて、ノーザンブロッティング法、ＲＴ−ＰＣＲ法、リアルタイムＰＣＲ法、ＤＮＡマイクロアレイ法、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション法など通常慣用のｍＲＮＡ発現量の測定法により測定することができる。
【００４６】
ＤＮＡコピー数を測定対象とする場合、ＰＨＬＤＡ１又はＰＩＫ３Ｃ２ＢのＤＮＡと特異的にハイブリダイズするプローブを用いて、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション法、アレイＣＧＨ法、ＤＮＡマイクロアレイ法、サザンブロッティング法など通常慣用のＤＮＡコピー数の測定法により測定することができる。
【００４７】
タンパク質の発現量を測定対象とする場合、ＰＨＬＤＡ１又はＰＩＫ３Ｃ２Ｂのタンパク質を特異的に認識する抗体を用いて、ＥＬＩＳＡ法、ウェスタンブロッティング法、免疫組織化学染色法など通常慣用の免疫学的測定法により測定することができる。
【００４８】
本発明におけるプライマー及びプローブは、公知であるヒトＰＨＬＤＡ１又はヒトＰＩＫ３Ｃ２ＢのＤＮＡ又はｍＲＮＡの塩基配列情報（ヒトＰＨＬＤＡ１  ＤＮＡ：ＧｅｎＢａｎｋＩＤ  ＮＣ＿００００１２．１１、ｍＲＮＡ：ＧｅｎＢａｎｋＩＤ  ＮＭ＿００７３５０；ヒトＰＩＫ３Ｃ２Ｂ  ＤＮＡ：ＧｅｎＢａｎｋＩＤ  ＮＣ＿０００００１．１０、ｍＲＮＡ：ＧｅｎＢａｎｋＩＤ  ＮＭ＿００２６４６）に基づき、ヒトＰＨＬＤＡ１又はヒトＰＩＫ３Ｃ２ＢのＤＮＡ又はｍＲＮＡと特異的にハイブリダイズするポリヌクレオチドとして、通常公知の手法により作製される。当該プライマーの塩基長は１０塩基長〜５０塩基長、好ましくは１５〜５０塩基長、より好ましくは１８〜３５塩基長である。当該プライマーの塩基長は１５塩基長〜全塩基長、好ましくは２０〜全塩基長、より好ましくは３０〜全塩基長である。
【００４９】
なお、当該プライマー及びプローブは、ＰＨＬＤＡ１又はＰＩＫ３Ｃ２ＢのＤＮＡ又はｍＲＮＡと特異的にハイブリダイズするものであれば、完全に相補的である必要はない。かかるプライマー及びプローブは、対応する塩基配列と比較して７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、特に好ましくは９８％以上の同一性を有するポリヌクレオチドである。
【００５０】
なお、本発明において「特異的にハイブリダイズする」とは、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下において、特異的なハイブリッドが形成され、非特異的なハイブリッドが形成されないことをいう。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、通常公知の方法に従ってハイブリッドを形成する核酸の融解温度（Ｔｍ）などに基づいて決定することができる。具体的なハイブリダイズ状態を維持できる洗浄条件として通常「１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、３７℃」程度の条件、より厳格には「０．５×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、４２℃」程度の条件、さらに厳格には「０．１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、６５℃」程度の条件が挙げられる。
【００５１】
また、当該プローブ又はプライマーは、容易に検出できるように、通常慣用されている放射性物質、蛍光物質、化学発光物質、または酵素で標識されていてもよい。
【００５２】
本発明における抗体は、ＰＨＬＤＡ１又はＰＩＫ３Ｃ２Ｂのタンパク質を特異的に認識するものであれば特に制限されず、モノクローナル抗体及びポリクローナル抗体のいずれであってもよく、Ｆａｂ断片やＦ（ａｂ’）２断片などの抗体断片であってもよい。また、当該抗体は、公知であるヒトＰＨＬＤＡ１又はヒトＰＩＫ３Ｃ２Ｂのタンパク質のアミノ酸配列情報（ヒトＰＨＬＤＡ１  ＧｅｎＢａｎｋＩＤ  ＮＰ＿０３１３７６；ヒトＰＩＫ３Ｃ２Ｂ  ＧｅｎＢａｎｋＩＤ  ＮＰ＿００２６３７）に基づき、通常公知の方法に従って製造することができる（例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｅｄｉｔ．  Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８７），  Ｐｕｂｌｉｓｈ．  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ．  Ｓｅｃｔｉｏｎ  １１．１２−１１．１３）。また、市販されている抗体を用いても良い。例えば、抗ヒトＰＨＬＤＡ１抗体としては、Ａｂｃａｍ社ｃａｔ．＃  ａｂ６７８４９、Ａｂｎｏｖａ社ｃａｔ．＃  Ｈ０００２２８２２−Ｂ０１Ｐ、抗ヒトＰＩＫ３Ｃ２Ｂ抗体としては、Ａｂｃａｍ社ｃａｔ．＃  ａｂ５５５８９、Ａｂｇｅｎｔ社ｃａｔ．＃  ＡＰ３３０９ａなどが使用できる。
【００５３】
本発明の予測方法においては、がん患者の腫瘍細胞におけるＰＨＬＤＡ１の発現量が低い場合、及び／又はＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量が高い場合に、当該がん患者はＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法に対して十分な治療効果を示す可能性が高いと予測するものである。
【００５４】
ここで「ＰＨＬＤＡ１の発現量が低い」とは、当該がん患者のＰＨＬＤＡ１の発現量が、がん患者全体におけるＰＨＬＤＡ１の発現量と比較して相対的に低い場合を指し、より具体的には、ＰＨＬＤＡ１の発現量が予め設定されたカットオフポイント以下である場合を指す。
【００５５】
ここでカットオフポイントとしては、測定対象や測定方法の種類などの諸条件により変動するものであるため、本発明のおいては、これらの諸条件により変動し得る任意のカットオフポイントを用いた発明を広く包含し、特定の値に限定されない。具体的なカットオフポイントは、予め測定しておいたがん患者におけるＰＨＬＤＡ１の発現量から種々の統計解析手法により求めることができる。例えば、がん患者におけるＰＨＬＤＡ１の発現量の平均値や中央値；ＰＨＬＤＡ１の低発現群と高発現群を切り分けるカットオフポイントであって、ＰＨＬＤＡ１の低発現群と高発現群の治療効果（生存期間等）におけるログランク検定でＰ値が最小となる値及びＰ値がある水準未満になる値（例えば、Ｐ値が０．１未満になる値、Ｐ値が０．０５未満になる値）となる値が例示できる。このうち、がん患者におけるＰＨＬＤＡ１の発現量の平均値や中央値が好ましく、がん患者におけるＰＨＬＤＡ１の発現量の平均値がより好ましい。
【００５６】
また、「ＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量が高い」とは、当該がん患者のＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量が、がん患者全体におけるＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量と比較して相対的に高い場合を指し、より具体的には、ＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量が予め設定されたカットオフポイント以上である場合を指す。ここでカットオフポイントとして、上記ＰＨＬＤＡ１の発現量におけるカットオフポイントと同様に求めることができるが、がん患者におけるＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量の平均値や中央値が好ましく、がん患者におけるＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量の平均値がより好ましい。
【００５７】
本発明はまた、本発明の予測方法によりＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法が十分な治療効果を示す可能性が高いと予測又は判定されたがん患者を治療するための、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤も提供される。
【００５８】
本発明は、このような本発明の抗腫瘍剤の使用形態をも提供する。
【００５９】
さらに、本発明の抗腫瘍剤は、本発明の予測方法を実施するための手順などを記載した取扱説明書、手順書などが含まれていてもよい。
【００６０】
本発明はまた、がん患者における本発明の抗腫瘍剤を用いた化学療法の治療効果を予測又は検査するためのキットをも提供する。本発明のキットは、上記する本発明の予測方法により化学療法の治療効果を予測又は検査するために好適に用いられる。
【００６１】
がん患者から採取された腫瘍細胞を含む生体試料におけるＰＨＬＤＡ１及び／又はＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量をＤＮＡ又はｍＲＮＡについて測定する場合、本発明のキットは、ヒトＰＨＬＤＡ１又はヒトＰＩＫ３Ｃ２ＢのＤＮＡ又はｍＲＮＡと特異的にハイブリダイズするポリヌクレオチドであるプライマー及び／又はプローブを含み得る。
【００６２】
がん患者から採取された腫瘍細胞を含む生体試料におけるＰＨＬＤＡ１及び／又はＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量をタンパク質(酵素)について測定する場合、本発明のキットは、ＰＨＬＤＡ１及び／又はＰＩＫ３Ｃ２Ｂ(酵素)に対する抗体、該抗体(一次抗体)に対する二次抗体を含み得、二次抗体は、ルシフェラーゼ標識、放射性標識、蛍光標識、酵素標識などによって標識されていることが好ましい。
【００６３】
さらに、本発明のキットは、本発明の予測方法を実施するための手順などを記載した取扱説明書、手順書が含まれていてもよい。
【実施例】
【００６４】
以下、本発明を実施例に基づきより詳細に説明するが、本発明がこれら実施例に限定されないことはいうまでもない。
［実施例１］
（ＰＨＬＤＡ１又はＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量と、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤に対する感受性との相関）
ヒト乳癌由来３７細胞株（ＡＵ５６５、ＢＴ２０、ＢＴ４７４、ＢＴ５４９、ＣＡＭＡ−１、ＤＵ４４７５、ＨＣＣ１１８７、ＨＣＣ１４１９、ＨＣＣ１４２８、ＨＣＣ１５００、ＨＣＣ１５６９、ＨＣＣ１５９９、ＨＣＣ１８０６、ＨＣＣ１９３７、ＨＣＣ１９５４、ＨＣＣ２０２、ＨＣＣ２２１８、ＨＣＣ３８、ＨＣＣ７０、ＭＤＡ−ＭＢ−１５７、ＭＤＡ−ＭＢ−１７５、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＭＤＡ−ＭＢ−３６１、ＭＤＡ−ＭＢ−４１５、ＭＤＡ−ＭＢ−４３６、ＭＤＡ−ＭＢ−４５３、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８、ＵＡＣＣ−８１２、ＵＡＣＣ−８９３（以上、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）より入手）、ＭＣＦ−７、ＳＫ−ＢＲ−３、Ｔ４７Ｄ、ＺＲ−７５−１（以上、大日本住友製薬株式会社より入手）、ＫＰＬ−１、ＫＰＬ−３Ｃ、ＫＰＬ−４（紅林博士（川崎医大）より供与））を用いて以下のとおり細胞毒性試験を行った。各細胞株は９６ウェル平底マイクロプレートに１５０μＬ播種し、３７℃、５％炭酸ガス含有の培養器中で１日培養した。ジメチルスルホキシドにて段階稀釈したＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤（ＡＫＴ阻害剤：Ｃｏｍｐｏｕｎｄ−Ｉ、ＭＫ−２２０６、ＰＩ３Ｋ−ｍＴＯＲデュアル阻害剤：ＢＥＺ２３５、ＰＩ３Ｋ阻害剤：ＧＤＣ−０９４１、ｍＴＯＲ阻害剤：Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）及びパクリタキセル、あるいはジメチルスルホキシドのみを各細胞株の培地に添加した。これを先に述べた９６ウェル平底マイクロプレートの各ウェルに５０μＬ加えて、薬剤の最終濃度がそれぞれ１００００、３０００、１０００、３００、１００、３０、３、１ｎＭになるようにした。また、別途用意した、各細胞株を一日間培養した９６ウェル平底マイクロプレートを室温に３０分間放置後、各ウェルから上清を５０μＬずつ除き、１００μＬの細胞培養液が残るようにした。残った細胞培養液１００μＬに対し、等量のＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｃａｔ＃：Ｇ７５７３）を各ウェルに添加した。１０分間暗所で放置した後、マイクロプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ＡＲＶＯｓｘ）にて薬剤添加時のウェルの生細胞由来発光量を測定した。薬剤あるいはジメチルスルホキシドのみを加えた細胞株は３７℃、５％炭酸ガス含有の培養器中でさら３日間培養した。培養後、室温に３０分間放置し、各ウェルから上清を１００μＬずつ除き、１００μＬの細胞培養液が残るようにした。残った細胞培養液１００μＬに対し、等量のＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙを添加した。１０分間暗所で放置した後、マイクロプレートリーダーにて各ウェルの生細胞由来発光量を測定した。ヒト乳癌由来３７細胞株において、以下の式より細胞増殖率を算出し、細胞増殖率が５０％となる濃度、すなわち細胞増殖を５０％阻害する各薬剤の濃度（ＧＩ５０値（μＭ））を求めた。【００６５】
細胞増殖率（％）＝（Ｔ−Ｃ０）／（Ｃ−Ｃ０）×１００；Ｔ≧Ｃ０の場合
細胞増殖率（％）＝（Ｔ−Ｃ０）／Ｃ０×１００；Ｔ＜Ｃ０の場合
Ｃ０：薬剤添加時のウェルの発光量（ｃｏｕｎｔ  ｐｅｒ  ｓｅｃｏｎｄ）
Ｃ：ジメチルスルホキシドのみを添加したウェルの発光量（ｃｏｕｎｔ  ｐｅｒ  ｓｅｃｏｎｄ）
Ｔ：被検薬剤を添加したウェルの発光量（ｃｏｕｎｔ  ｐｅｒ  ｓｅｃｏｎｄ）
次いで、ヒト乳癌由来３７細胞株におけるＰＨＬＤＡ１及びＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量を測定した。各細胞株は、１０ｃｍ細胞培養ディッシュで５０〜８０％コンフルエント程度になるまで培養後、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ、Ｃａｔ＃７４１０６）を用いてマニュアルに従いｔｏｔａｌ  ＲＮＡを抽出した。抽出したｔｏｔａｌ  ＲＮＡは、分光光度計（Ｎａｎｏｄｒｏｐ  １０００、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて濃度及び純度を確認した。また、Ａｇｉｌｅｎｔ  ２１００  Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて分解度を確認した。ＧｅｎｅＣｈｉｐ  ３'  ＩＶＴ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  Ｋｉｔ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）を用いて、抽出したｔｏｔａｌ  ＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写し、さらにビオチン化ｃＲＮＡへの転写反応を行った。次いで、増幅したビオチン化ｃＲＮＡ（２０μｇ）を断片化した。なお各操作は、キットに添付の説明書の記載に従って行った。得られた各細胞株由来のビオチン化ｃＲＮＡを検体として、ＧｅｎｅＣｈｉｐ  Ｈｕｎｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｕ−１３３  Ｐｌｕｓ  ２．０  Ａｒｒａｙ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ、ＰＩＫ３Ｃ２Ｂ  ｐｒｏｂｅ  ｓｅｔ  ＩＤ：２０４４８４＿ａｔ、ＰＨＬＤＡ１  ｐｒｏｂｅ  ｓｅｔ  ＩＤ：２１７９９７＿ａｔ）に添加し、ＧｅｎｅＣｈｉｐ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ  Ｏｖｅｎ  ６４０（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）に移して、４５℃、６０ｒｐｍの条件下で１６時間ハイブリダイゼーションを行った。ハイブリダイゼーション後、ＧｅｎｅＣｈｉｐＦｌｕｉｄｉｃ  Ｓｔａｔｉｏｎ  ４５０（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）を用いて洗浄および蛍光標識を行い、ＧｅｎｅＣｈｉｐ  Ｓｃａｎｎｅｒ  ３０００  ７Ｇ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）を用いてスキャンしてマイクロアレイ・データを取得した。マイクロアレイ・データの解析には、ＭＡＴＬＡＢ（ＭａｔｈＷｏｒｋｓ）を使用した。遺伝子発現量は、ＲＭＡ法（Ｒｏｂｕｓｔ  Ｍｕｌｔｉａｒｒａｙ  Ａｖｅｒａｇｅ法）により計算した。【００６６】
以上により得られた各薬剤のＧＩ５０値の対数とＰＨＬＤＡ１及びＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量の対数のピアソン相関を図１に示す。【００６７】
その結果、検討した全てのＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤は、ＰＨＬＤＡ１の発現量とは統計上有意に正相関し、またＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量とは統計上有意に負相関することが明らかになった。一方、パクリタキセルは、ＰＨＬＤＡ１あるいはＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量とは相関を示さなかった。すなわち、ＰＩＫ３Ｃ２Ｂ及びＰＨＬＤＡ１の発現量は、広範なＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤に対する感受性予測マーカーであることが示された。【００６８】
また、肺癌、腎癌、肝癌、膵癌、大腸癌、膀胱癌、乳癌、頭頸部癌、前立腺癌、皮膚癌、血液がん、悪性リンパ腫等の様々な癌種で構成された２４０細胞株パネル（ＯｎｃｏＰａｎｅｌＴＭ，  Ｒｉｃｅｒｃａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）においても、ＰＨＬＤＡ１あるいはＰＩＫ３Ｃ２Ｂ発現量と、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤に対する感受性とが相関するかを検証した。その結果、２４０細胞株パネルにおいてもヒト乳癌由来３７細胞株と同様に、広範なＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤（Ｃｏｍｐｏｕｎｄ−Ｉ、ＭＫ−２２０６、ＢＥＺ２３５、ＧＤＣ−０９４１、Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）のＧＩ５０値の対数とＰＨＬＤＡ１及びＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量の対数と有意に相関することが確認された。【００６９】
［実施例２］
（ＰＨＬＤＡ１遺伝子ノックダウン、タンパク質の発現量及びリン酸化状態の解析）
ＰＨＬＤＡ１遺伝子をノックダウンした場合における、ＡＫＴのリン酸化状態を確認することにより、ＰＨＬＤＡ１とＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲシグナルパスウェイの関係を検証した。【００７０】
ＰＨＬＤＡ１が比較的高発現であった乳癌細胞株３株（ＨＣＣ３８、ＨＣＣ１８０６、ＨＣＣ１９３７、いずれもＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）より入手）は、１０％  ＦＢＳを含むＲＰＭＩ培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｃａｔ＃  Ａ１０４９１０−０１）で培養した。【００７１】
各細胞株に対して、ネガティブコントロールｓｉＲＮＡ（ＯＮ−ＴＡＲＧＥＴ  Ｐｌｕｓ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｐｏｏｌ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｃａｔ＃Ｄ−００１８１０−１０−２０）またはＰＨＬＤＡ１−ｓｉＲＮＡ（ＯＮ−ＴＡＲＧＥＴ  Ｐｌｕｓ  ｓｉＲＮＡ  Ｈｕｍａｎ  ＰＨＬＤＡ１、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｃａｔ＃Ｊ−０１２３８９−０８）を終濃度１０ｎＭとなるように調製し、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ＲＮＡｉＭＡＸ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｔ＃１３７７８−１５０）を用い、マニュアルに従って細胞内へｓｉＲＮＡを導入し、遺伝子ノックダウンを実施した。３日間ノックダウンした後、各細胞株を冷ＰＢＳ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｔ＃１００１０−０２３）で２回洗い、可溶化バッファー（ＰｈｏｓＳＴＯＰ（Ｒｏｃｈｅ、Ｃａｔ＃４９０６８３７）及びＣｏｍｐｌｅｔｅ、  ＥＤＴＡ−ｆｒｅｅ（Ｒｏｃｈｅ、Ｃａｔ＃  １８７３５８０）を添加したＰｉｅｒｃｅ  ＲＩＰＡ  Ｂｕｆｆｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｃａｔ＃８９９０１））を加えて、３０分間氷冷して可溶化した。可溶化した抽出液は、４℃、１５０００ｒｐｍで３０分間遠心分離を行い、上清を回収してタンパク抽出液を得た。得られたタンパク抽出液は、ＢＣＡ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｃａｔ＃２３２２５）を用い、マニュアルに従ってタンパク濃度を測定した。タンパク抽出液は還元バッファー（ＩｍｍｕｎｏＰｕｒｅ  Ｌａｎｅ  Ｍａｋｅｒ  Ｒｅｄｕｃｉｎｇ  Ｓａｍｐｌｅ  Ｂｕｆｆｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｃａｔ＃３９０００））を添加して煮沸することにより変性させた。Ｃｒｉｔｅｒｉｏｎ  ＴＧＸ  Ｐｒｅｃａｓｔ  Ｇｅｌｓ（Ｂｉｏｒａｄ、Ｃａｔ＃５６７−１０８４）に１レーン当たり２０μｇの還元したタンパク抽出液をアプライしてＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った。【００７２】
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ終了後、ブロッティング装置（Ｔｒａｎｓ−Ｂｌｏｔ  Ｔｕｒｂｏ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍ、Ｂｉｏｒａｄ）を用いてＰＶＤＦ膜（Ｔｒａｎｓ−Ｂｌｏｔ  Ｔｕｒｂｏ  Ｍｉｄｉ  ＰＶＤＦ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｐａｃｋ、Ｂｉｏｒａｄ、Ｃａｔ＃１７０−４１５７）に転写した。転写膜はＢｌｏｃｋｉｎｇ  Ｏｎｅ−Ｐ（Ｎａｃａｌａｉ、Ｃａｔ＃０５９９９−８４）で室温、１時間インキュベートしてブロッキングを行った。続いて、５％ＢＳＡ及び０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を添加したＴＢＳバッファー（以下、ＴＢＳ−Ｔと略す）で１０００倍に希釈した抗ヒトＰＨＬＤＡ１ヤギ抗体（Ｓａｎｔａｃｒｕｚ、Ｃａｔ＃ｓｃ−６１４２）、２０００倍に希釈した抗ヒトリン酸化ＡＫＴウサギ抗体（Ｓ４７３）（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｃａｔ＃４０６０）で４℃、一晩反応させた。ＰＶＤＦ膜はＴＢＳ−Ｔで室温、１０分間、３回洗浄した後、５％スキムミルク／ＴＢＳ−Ｔで２０００倍に希釈した二次抗体（西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）標識した抗ヤギ抗体（Ｓａｎｔａｃｒｕｚ、Ｃａｔ＃ｓｃ−２０２０）及び抗ウサギ抗体（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃａｔ＃ＮＡ９３４０Ｖ））で室温、１時間反応させた。ＰＶＤＦ膜はＴＢＳ−Ｔで室温、１０分間、３回洗浄した後、ＥＣＬ  Ｐｒｉｍｅ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｂｌｏｔｔｉｎｇ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃａｔ＃ＲＰＮ２２３２）を使用し、ＬＡＳ−３０００（ＦｕｊｉＦｉｌｍ）を用いて化学発光を検出した。その結果を図２に示す。【００７３】
図２のとおり、ＰＨＬＤＡ１が高発現である乳癌細胞３株において、ＰＨＬＤＡ１遺伝子ノックダウンを行った結果、ＡＫＴリン酸化（Ｓ４７３）が亢進しており、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲシグナルパスウェイの活性化が確認された。ＡＫＴのリン酸化（Ｓ４７３）レベルは、ＰＩ３Ｋ阻害剤に対するｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏの抗腫瘍効果と相関することから（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅｒａｃｈ  ７０，  ４９８２−４９９４（２０１０））、ＰＨＬＤＡ１の発現量はＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤に対する治療効果に関与しうることが示された。【００７４】
［実施例３］
（ＰＩＫ３Ｃ２Ｂ遺伝子ノックダウンによるＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤に対する感受性変化の解析）
ヒト卵巣癌細胞株ＯＶＣＡＲ−３（ＡＴＣＣより入手）は、２０％  ＦＢＳ、０．０１  ｍｇ／ｍＬ  ｂｏｖｉｎｅ  ｉｎｓｕｌｉｎ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｃａｔ＃Ｉ０５１６）を含むＲＰＭＩ培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｃｏｒｐ．  、Ｃａｔ＃  Ａ１０４９１０−０１  ）で培養した。ヒト乳癌細胞株ＨＣＣ１１８７（ＡＴＣＣより入手）は、１０％  ＦＢＳを含むＲＰＭＩ培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｃａｔ＃  Ａ１０４９１０−０１）で培養した。【００７５】
実施例１に準じて、各細胞株を用いて、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤（ＡＫＴ阻害剤：Ｃｏｍｐｏｕｎｄ−Ｉ、ＰＩ３Ｋ阻害剤：ＧＤＣ−０９４１）及びパクリタキセルに対する細胞毒性試験を行った。３日間培養したコントロール（ジメチルスルホキシド添加）の細胞数を１００、無細胞を０として、各濃度の薬剤処理後の相対的な細胞数を測定した結果を図３に示す。【００７６】
図３のとおり、ＯＶＣＡＲ−３及びＨＣＣ１１８７細胞株において、ＰＩＫ３Ｃ２Ｂ遺伝子ノックダウンした結果、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤であるＣｏｍｐｏｕｎｄ−Ｉ及びＧＤＣ−０９４１に対する感受性は低下した。一方、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤ではないパクリタキセルに対する感受性は変化しなかった。すなわち、がん細胞においてＰＩＫ３Ｃ２Ｂは単独でＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤に対する感受性を制御しうる規定因子であることが示された。【００７７】
［実施例４］
（ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤治療効果予測性における、従来法ＰＩＫ３ＣＡ変異・ＰＴＥＮ欠失測定とＰＨＬＤＡ１・ＰＩＫ３Ｃ２Ｂ発現量測定との比較）
臨床において薬効予測マーカーとして検証されているＰＩＫ３ＣＡ変異あるいはＰＴＥＮ欠失と、ＰＨＬＤＡ１あるいはＰＩＫ３Ｃ２Ｂ発現量について、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤に対する感受性との相関性の観点から比較した。【００７８】
実施例１で示したヒト乳癌由来細胞株３７株のうち、ＫＰＬ−３Ｃを除く３６株はＰＩＫ３ＣＡ変異及びＰＴＥＮ欠失情報が公知であった。この３６株において、ＰＩＫ３ＣＡ変異（Ｅ５４５ＫあるいはＨ１０４７Ｒ）あるいはＰＴＥＮ欠失の有無によるＣｏｍｐｏｕｎｄ−Ｉに対するＧＩ５０値（μＭ）を図４に示す。ＰＴＥＮ欠失（８株）はＣｏｍｐｏｕｎｄ−Ｉに対する感受性に対する相関は確認できなかった。また、ＰＩＫ３ＣＡ変異（１０株）はＣｏｍｐｏｕｎｄ−Ｉに対する高感受性と相関する傾向を示したものの、有意ではなかった（Ｐ＝０．０５１）。同様にヒト乳癌由来細胞株３７株において、ＰＨＬＤＡ１あるいはＰＩＫ３Ｃ２Ｂ発現量とＣｏｍｐｏｕｎｄ−Ｉに対する感受性との関連性を検証した。例として、ＰＨＬＤＡ１あるいはＰＩＫ３Ｃ２Ｂ発現量の平均値をカットオフポイントとして、それぞれ２群に分けた場合の、Ｃｏｍｐｏｕｎｄ−Ｉに対するＧＩ５０値（μＭ）の分布を図４に示す。ＰＨＬＤＡ１またはＰＩＫ３Ｃ２Ｂ発現量は、それぞれＣｏｍｐｏｕｎｄ−Ｉに対する感受性と強い相関性を示した（Ｐ＝０．０００６１または０．００６０）。【００７９】
ＰＨＬＤＡ１あるいはＰＩＫ３Ｃ２Ｂ発現量は、従来法であるＰＩＫ３ＣＡ変異あるいはＰＴＥＮ欠失よりも明らかにＣｏｍｐｏｕｎｄ−Ｉに対する感受性との相関性が高く、臨床における薬効予測マーカーとして有用である。
【図１】
2014203959.tif 000004
【図２】
2014203959.tif 000005
【図３】
2014203959.tif 000006
【図４】
2014203959.tif 000007
【手続補正書】
【提出日】平成28年10月5日(2016.10.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
がん患者から採取した腫瘍細胞におけるＰＨＬＤＡ１及び／又はＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量に基づき、当該がん患者におけるＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法の治療効果を予測する方法。
【請求項２】
下記工程（１）及び（２）を含む、請求項１記載の方法：
（１）当該患者から採取された腫瘍細胞を含む生体試料におけるＰＨＬＤＡ１及び／又はＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量を測定する工程、及び
（２）上記工程（１）で得られたＰＨＬＤＡ１の発現量が予め設定されたカットオフポイント以下である場合、又は上記工程（１）で得られたＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量が予め設定されたカットオフポイント以上である場合、当該がん患者におけるＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法が十分な治療効果を示す可能性が高いと予測する工程。
【請求項３】
ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤が、一般式（Ｉ）
【化１】
2014203959.tif 000008
（式中、Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤは、それぞれＣ−Ｒ１ａ、Ｃ−Ｒ１ｂ、Ｃ−Ｒ１ｃ、及びＣ−Ｒ１ｄを示すか、或いは前記Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄのうちいずれか１又は２つがＮ原子に置換されていることを示し、
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、Ｒ１ｄのうち少なくとも２つが水素原子を示し、他方がそれぞれ
ハロゲン原子、シアノ基、置換基としてヒドロキシル基を有してもよいＣ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、置換基としてヒドロキシル基、アミノ基、置換基を有してもよいモノ又はジ（Ｃ１−６アルキル）アミノ基又はモノ又はジ（Ｃ１−６アルコキシ）アミノ基のいずれかを有するカルボニル基、不飽和複素環基を示し、
Ｒ２は、フェニル基、ピリジル基、又はチエニル基を示し、
Ｒ３は、水素原子、メチル基、エチル基、又はシクロプロピル基を示し、
Ｒ４は、水素原子、又はヒドロキシ基を示す。）
で表されるイミダゾオキサジン化合物又はその薬学的に許容される塩であるか、
ＡＭＧ−３１９、ＡＺＤ−６４８２、ＢＹＬ−７１９、Ｃｏｐａｎｌｉｓｉｂ（ＢＡＹ−８０−６９４６）、ＧＤＣ−００３２、ＧＤＣ−００８４、ＧＳＫ−１０５９６１５ 、ＧＳＫ−２１２６４５８、ＧＳＫ−２６３６７７１、Ｉｄｅｌａｌｉｓｉｂ（ＣＡＬ−１０１）、ＩＰＩ−１４５、ＭＬＮ−１１１７（ＩＮＫ−１１１７）、ＰＡ−７９９（ＣＨ−５１３２７９９）、Ｐｉｃｔｉｌｉｓｉｂ（ＧＤＣ−０９４１）、Ｐｉｌａｒａｌｉｓｉｂ（ＸＬ−１４７）、ＳＦ−１１２６、Ｓｏｎｏｌｉｓｉｂ（ＰＸ−８６６）  、Ｖｏｘｔａｌｉｓｉｂ（ＳＡＲ−２４５４０９、ＸＬ−７６５）、Ａｆｕｒｅｓｅｒｔｉｂ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ（ＧＳＫ−２１１０１８３  ）、ＡＲＱ−０９２、ＡＺＤ５３６３、Ｅｎｚａｓｔａｕｒｉｎ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ、ＧＤＣ−００６８、ＧＳＫ−２１４１７９５、ＧＳＫ６９０６９３、ＬＹ−２７８０３０１、ＭＫ−２２０６、Ｐｅｒｉｆｏｓｉｎｅ、Ｔｒｉｃｉｒｉｂｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ（ＶＱＤ−００２）、ＡＺＤ−２０１４、ＡＺＤ−８０５５、ＣＣ−１１５、ＣＣ−２２３、ＤＳ−３０７８、Ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ、Ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ、ＭＥ−３４４、ＭＬＮ−０１２８（ＩＮＫ−１２８）、ＯＳＩ−０２７、ＰＷＴ−３３５９７、Ｒｉｄａｆｏｒｏｌｉｍｕｓ、Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ、Ｄａｃｔｏｌｉｓｉｂ（ＢＥＺ２３５）  、ＤＳ−７４２３、ＧＤＣ−０９８０、ＮＶＰ−ＢＧＴ−２２６、ＰＦ−０４６９１５０２、ＰＦ−０５２１２３８４（ＰＫＩ−５８７）、又はＰＷＴ−３３５９７である請求項１又は２記載の方法。
【請求項４】
一般式（Ｉ）で表されるイミダゾオキサジン化合物が、Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤは、それぞれＣ−Ｒ１ａ、Ｃ−Ｒ１ｂ、Ｃ−Ｒ１ｃ、及びＣ−Ｒ１ｄを示すか、或いは前記Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄのうちいずれか１又は２つがＮ原子に置換されていることを示し、
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、Ｒ１ｄのうち少なくとも２つが水素原子を示し、他方がそれぞれ塩素原子、フッ素原子、シアノ基、メチル基、ヒドロキシメチル基、メトキシ基、エトキシ基、カルボキシル基、カルバモイル基、メチルアミノカルボニル基、エチルアミノカルボニル基、ヒドロキシエチルアミノカルボニル基、エトキシアミノカルボニル基、ピラゾリル基を示し、
Ｒ２は、フェニル基、ピリジル基、又はチエニル基を示し、
Ｒ３は、水素原子、メチル基、エチル基、又はシクロプロピル基を示し、
Ｒ４は、水素原子、又はヒドロキシ基を示す化合物である、請求項３記載の方法。
【請求項５】
一般式（Ｉ）で表されるイミダゾオキサジン化合物が、次の（ａ）〜（ｔ）のいずれかの化合物である請求項３又は４記載の方法。
（ａ）  トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（１０−フルオロ−３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｂ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（１０−フルオロ−３−（ピリジン−４−イル）−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｃ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｄ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（１０−メトキシ−３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｅ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（９−メトキシ−３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｆ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（８−メトキシ−３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｇ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［２，３−ｅ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｈ）トランス−３−アミノ−１−メチル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［２，３−ｅ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｉ）トランス−３−アミノ−１−エチル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［２，３−ｅ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｊ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［３，４−ｅ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｋ）トランス−３−アミノ−１−メチル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［３，４−ｅ］  ［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｌ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［４，３−ｅ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｍ）トランス−３−アミノ−１−メチル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［４，３−ｅ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｎ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［３，２−ｅ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｏ）トランス−３−アミノ−１−シクロプロピル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピラジノゾ［２，３−ｅ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｐ）トランス−３−アミノ−３−（４−（９−（ヒドロキシメチル）−３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）−１−メチルシクロブタノール
（ｑ）２−（４−（トランス−１−アミノ−３−ヒドロキシ−３−メチルシクロブチル）フェニル）−３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−９−カルボニトリル
（ｒ）トランス−３−アミノ−１−メチル−３−（４−（３−フェニル−９−（１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノール
（ｓ）２−（４−（トランス−１−アミノ−３−ヒドロキシ−３−メチルシクロブチル）フェニル）−Ｎ−メチル−３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−８−カルボキサミド
（ｔ）２−（４−（トランス−１−アミノ−３−ヒドロキシ−３−メチルシクロブチル）フェニル）−Ｎ−エトキシ−３−フェニル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］イミダゾ［１，２−ｃ］［１，３］オキサジン−８−カルボキサミド
【請求項６】
ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤が、ＭＫ−２２０６、ＢＥＺ２３５、ＧＤＣ−０９４１、Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ、トランス−３−アミノ−１−メチル−３−（４−（３−フェニル−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ｃ］ピリド［３，４−ｅ］  ［１，３］オキサジン−２−イル）フェニル）シクロブタノールである請求項１〜５のいずれか１項記載の方法。
【請求項７】
ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤が、ＡＫＴ阻害剤又はｍＴＯＲ阻害剤である請求項１〜６のいずれか１項記載の方法。
【請求項８】
ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤であって、下記工程（１）及び（２）を含む方法により当該抗腫瘍剤を用いた化学療法が十分な治療効果を示す可能性が高いと予測されたがん患者に投与されることを特徴とする抗腫瘍剤：
（１）当該患者から採取された腫瘍細胞を含む生体試料におけるＰＨＬＤＡ１及び／又はＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量を測定する工程、及び
（２）上記工程（１）で得られたＰＨＬＤＡ１の発現量が予め設定されたカットオフポイント以下の場合、又は上記工程（１）で得られたＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量が予め設定されたカットオフポイント以上の場合、当該がん患者におけるＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法が十分な治療効果を示す可能性が高いと予測する工程。
【請求項９】
下記工程（１）及び（２）を含む方法により、がん患者におけるＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法の治療効果を予測するための、ＰＨＬＤＡ１及び／又はＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量を測定する試薬を含有するキット：
（１）当該患者から採取された腫瘍細胞を含む生体試料におけるＰＨＬＤＡ１及び／又はＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量を測定する工程、及び
（２）上記工程（１）で得られたＰＨＬＤＡ１の発現量が予め設定されたカットオフポイント以下の場合、又は上記工程（１）で得られたＰＩＫ３Ｃ２Ｂの発現量が予め設定されたカットオフポイント以上の場合、当該がん患者におけるＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ阻害剤を含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法が十分な治療効果を示す可能性が高いと予測する工程。
【国際調査報告】
2014203959.tif 000009
2014203959.tif 000010
2014203959.tif 000011
2014203959.tif 000012