(57)【要約】  本発明は、システイン及びリンゴ酸を含有することにより、保存効力を有し、低刺激性の医薬用水性組成物を提供する。本発明の医薬用水性組成物にはまた、緩衝剤や等張化剤等といった医薬用水性組成物として配合可能な添加物や、必要に応じて薬物も、更に含有させることが可能である。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）システイン及び（Ｂ）リンゴ酸を含有することを特徴とする医薬用水性組成物。
【請求項２】
組成物中の（Ａ）システイン／（Ｂ）リンゴ酸（濃度比）が、（Ａ）システイン／（Ｂ）リンゴ酸＝０．００１〜３００である請求項１に記載の医薬用水性組成物。
【請求項３】
（Ａ）システインの濃度が、０．００１〜３．０（ｗ／ｖ％）である請求項１又は２に記載の医薬用水性組成物。
【請求項４】
（Ｂ）リンゴ酸の濃度が、０．０１〜１．０（ｗ／ｖ％）である請求項１〜３のいずれか１項記載の医薬用水性組成物。
【請求項５】
ｐＨが３．０〜９．０である請求項１〜４のいずれか１項記載の医薬用水性組成物。
【請求項６】
防腐剤を含有しない、請求項１〜５のいずれか１項記載の医薬用水性組成物。
【請求項７】
さらに、緩衝剤として、ホウ酸、リン酸、クエン酸、ε‐アミノカプロン酸、酢酸、酒石酸、トロメタモール及びそれらの薬学的に許容される塩又はそれらの水和物からなる群から選ばれる少なくとも１種を含有する、請求項１〜６のいずれか１項記載の医薬用水性組成物。
【請求項８】
眼科用水性組成物の形態にある請求項１〜７のいずれか１項記載の医薬用水性組成物。
【請求項９】
（Ａ）システイン及び（Ｂ）リンゴ酸を医薬用水性組成物に添加することを含む、医薬用水性組成物に保存効力を付与する方法。
【請求項１０】
医薬用水性組成物に、(Ａ)システイン及び(Ｂ)リンゴ酸を含ませることにより保存効力を得る方法。
【請求項１１】
(Ａ)システイン及び(Ｂ)リンゴ酸を含有することを特徴とする医薬用水性組成物用保存剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ベンザルコニウム塩化物やパラベン類などの防腐剤を低濃度に配合し又は全く配合しなくとも保存効力に優れ、かつ、疾患やトラブルのある眼などに低刺激性である医薬用水性組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
点眼剤には、一般に主薬の他、緩衝剤、等張化剤、防腐剤、安定化剤、ｐＨ調節剤等の添加物が配合されている。点眼剤は、モノドーズ型の場合、一回の投与で使い切るため、防腐剤を配合する必要がない。これに対し、マルチドーズ型の場合、長期にわたり少量ずつ使用される。よって、開封後も頻繁に投与するマルチドーズ型の点眼剤には、微生物の混入による汚染防止の観点から防腐剤を配合することが多い。点眼剤に配合される一般的な防腐剤としては、ベンザルコニウム塩化物等の第４級アンモニウム塩、パラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール等があり、この中で最も頻繁に配合されているものはベンザルコニウム塩化物である。【０００３】
ベンザルコニウム塩化物は、微生物の細胞膜を構成するリン脂質に結合することで細胞膜の構造を変性させ、強い抗菌効果を発揮する。また、ベンザルコニウム塩化物は抗菌効果が優れているだけでなく、化学的に安定で、かつ、水に対する溶解性が高いといった特徴を有し、このような特徴も医薬用水性組成物において防腐剤として当業者がベンザルコニウム塩化物を選択する理由になっている。
しかし、ベンザルコニウム塩化物は微生物以外の細胞に対しても作用することが知られている。即ち、点眼剤において防腐剤としてベンザルコニウム塩化物を配合した場合、角膜上皮細胞に作用し、角膜上皮障害を誘発することがあることが知られている。そのため、角膜上皮細胞に対するベンザルコニウム塩化物の影響を低減化させるために、眼科用水性組成物に配合するベンザルコニウム塩化物を低濃度とすることが頻繁に行われてきている。【０００４】
最近では、ベンザルコニウム塩化物の配合濃度を低くするだけでなく、ベンザルコニウム塩化物に代わる防腐剤が盛んに検討されている。例えば、現在国内では、Ｓｏｆｚｉａ（登録商標）（塩化亜鉛及びホウ酸を含む緩衝剤システム、特許文献１、非特許文献１）や、塩化ポリドロニウムや、Ｐｕｒｉｔｅ（登録商標）（亜塩素酸ナトリウム）をベンザルコニウム塩化物に代わる防腐剤として配合した点眼剤が上市されている。【０００５】
また、ベンザルコニウム塩化物に代わるものとして、防腐剤ではない幾つかの添加物を組み合わせることにより、眼科用組成物に防腐剤を配合しなくとも保存効力を有する発明があり、トロメタモールと弱酸の組み合わせが挙げられている（特許文献２）。【０００６】
一方、医薬用組成物の添加剤として、システインはＬ‐システイン（別名：２‐アミノ‐３‐メルカプトプロピオン酸）（非特許文献２）又はＬ‐システイン塩酸塩水和物（非特許文献３）のことを指し、一般的には、主薬の安定化剤（安定剤ともいう。以降、同じ）、可溶化剤等の用途で配合されている。【０００７】
医薬用組成物の添加剤として、リンゴ酸はＤＬ-リンゴ酸のことを指し、一般的には、主薬の安定化剤、緩衝剤、矯味剤、コーティング剤等の用途で配合されている（非特許文献２）。【０００８】
しかし、前記のような一般的な添加剤として用途が知られていたとしても、本発明に示すシステインとリンゴ酸の組み合わせによって、防腐剤を配合しなくとも、医薬用水性組成物に防腐剤を配合した場合と同様の保存効力を持つことは全く知られておらず、またそのように組み合わせて配合した医薬用水性組成物についても知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特表２０１０‐５０４９９０号公報
【特許文献２】特開２００４‐００２３６４号公報
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ２００９：３，２９１−２９５
【非特許文献２】医薬品添加物辞典２００７  株式会社薬事日報社
【非特許文献３】第十六改正日本薬局方
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の解決しようとする課題は、現在医薬用水性組成物に配合されている防腐剤、特にベンザルコニウム塩化物に代わって、防腐剤特有の副作用を生じることなく保存効力を発揮する添加物を複雑な調剤工程を要することなく医薬用水性組成物に配合する方法、並びに防腐剤特有の副作用を生じることなく保存効力を発揮する添加物又は添加物の組み合わせ及び添加物を配合した医薬用水性組成物、なかでも眼科用水性組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、添加物であるシステイン及びリンゴ酸を、保存効力試験に適合可能な医薬用水性組成物を得るために配合する方法、保存効力を有する添加物の組み合わせ及び前記の医薬用水性組成物を提供することである。【００１３】
即ち本発明は、
＜１＞（Ａ）システイン及び（Ｂ）リンゴ酸を含有することを特徴とする医薬用水性組成物。
＜２＞組成物中の（Ａ）システイン／（Ｂ）リンゴ酸（濃度比）＝０．００１〜３００である＜１＞に記載の医薬用水性組成物。
＜３＞（Ａ）システインの濃度が、０．００１〜３．０（ｗ／ｖ％）である＜１＞又は＜２＞に記載の医薬用水性組成物。
＜４＞（Ｂ）リンゴ酸の濃度が、０．０１〜１．０（ｗ／ｖ％）である＜１＞〜＜３＞のいずれかに記載の医薬用水性組成物。
＜５＞ｐＨが３．０〜９．０である＜１＞〜＜４＞のいずれかに記載の医薬用水性組成物。
＜６＞防腐剤を含有しない＜１＞〜＜５＞のいずれかに記載の医薬用水性組成物。
＜７＞さらに、緩衝剤として、ホウ酸、リン酸、クエン酸、ε‐アミノカプロン酸、酢酸、酒石酸、トロメタモール及びそれらの薬学的に許容される塩又はそれらの水和物からなる群から選ばれる少なくとも１種を含有する、＜１＞〜＜６＞のいずれかに記載の医薬用水性組成物。
＜８＞眼科用水性組成物の形態にある＜１＞〜＜７＞のいずれかに記載の医薬用水性組成物。
＜９＞（Ａ）システイン及び（Ｂ）リンゴ酸を医薬用水性組成物に添加することを含む、医薬用水性組成物に保存効力を付与する方法。
＜１０＞医薬用水性組成物に、(Ａ)システイン及び(Ｂ)リンゴ酸を含ませることにより保存効力を得る方法。
＜１１＞(Ａ)システイン及び(Ｂ)リンゴ酸を含有することを特徴とする医薬用水性組成物用保存剤。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の医薬用水性組成物は、角膜障害などの要因となる防腐剤、特にベンザルコニウム塩化物を含まなくとも保存効力を有するため、例えば緑内障やアレルギーのような長期間にわたり薬物を投与する必要がある症状を持つ患者の角膜などへ影響を及ぼすことが殆どない。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】ヒト角膜上皮細胞における本発明の細胞障害性の評価結果を示した図である。（試験例５）
【図２】白色ウサギにおける本発明の角膜上皮障害性の評価結果を示した図である。（試験例６）
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明の医薬用水性組成物は、その特性を生かして、人工涙液、コンタクトレンズの装着液及び点眼剤などの眼科用組成物として使用することもできるし、注射剤、経口剤、点耳剤、点鼻剤、塗布剤などの形態で使用することもできる。
本明細書において、防腐剤とは、マルチドーズ型の医薬品に、微生物汚染を防止する目的で添加するものであって、細菌や真菌に対する十分な殺菌作用を有するものの、界面活性作用により、細胞膜の透過性を高め、膜破壊や細胞質の変性を起こし、細胞増殖の抑制、細胞接着性の低下、過敏症の発現などに結びついて、副作用を示すものを指す。
【００１７】
前記防腐剤は、前記副作用とは別に、主薬や他の添加剤と配合変化を起こしたり、防腐剤自身が加熱や長期保存に対して安定でなかったりする。前記防腐剤としては、具体的には、ベンザルコニウム塩化物、ベンゼトニウム塩化物等のような、第四級アンモニウム塩、パラオキシ安息香酸エステルなどのようなパラベン類、クロロブタノール等があげられる。
【００１８】
本明細書において、保存剤は、前記防腐剤とは異なる物質を指す。本明細書における保存剤は、前記防腐剤のように副作用や医薬品の安定性に問題を生じることなく、グラム陰性菌、グラム陽性菌、真菌などに対し広い抗菌スペクトルを有し、微生物の発育を阻止することが出来、かつ、水溶性であり、医薬品の保存安定性を示すものを指す。
前記保存剤は、投与の際に刺激が少なく、投与する組織に障害を起こさないもの、長期使用によるアレルギー反応を起こさない。
【００１９】
本明細書における保存剤とは、システイン及びリンゴ酸の組み合わせを指す。
本発明に用いられるシステインとしては、Ｌ‐システイン及び薬学的に許容される塩である。Ｌ‐システインの薬学的に許容される塩としては、Ｌ-システイン塩酸塩等が挙げられる。システインの濃度は、通常０．００１〜３．０（ｗ／ｖ％）であり、システインが水溶液中で完全に溶解し、安定であるために、好ましくは０．００１〜１．０（ｗ／ｖ％）、より好ましくは０．００１〜０．３（ｗ／ｖ％）である。
【００２０】
本発明に用いられるリンゴ酸は、ＤＬ‐リンゴ酸である。リンゴ酸の濃度は、通常０．０１〜１．０（ｗ／ｖ％）であり、好ましくは０．０５〜１．０（ｗ／ｖ％）、より好ましくは０．１〜１．０（ｗ／ｖ％）である。
【００２１】
本発明で用いられる（Ａ）システイン濃度と（Ｂ）リンゴ酸濃度の比を（Ａ）／（Ｂ）として表す。（Ａ）／（Ｂ）は、本発明の効果が得られれば特に制限はしないが、通常０．００１〜３００であり、システイン及びリンゴ酸が水溶液中で完全に溶解し、本発明の効果を発揮するために、好ましくは０．００１〜２０、より好ましくは０．００１〜３である。
【００２２】
本発明に用いられる緩衝剤は、本発明の効果が得られれば特に制限はないが、ホウ酸、リン酸、クエン酸、ε‐アミノカプロン酸、酢酸、酒石酸、トロメタモール及びそれらの薬学的に許容される塩又はそれらの水和物からなる群から選ばれる少なくとも１種が挙げられる。
【００２３】
本発明における医薬用水性組成物のｐＨ（２５℃、ガラス電極で測定）は、通常３．０〜９．０であり、好ましくは５．０〜８．０、より好ましくは５．５〜８．０である。
【００２４】
本発明の医薬用水性組成物のｐＨを調整するために、通常添加される種々のｐＨ調整剤を使用することができる。酸類としては、例えば、アスコルビン酸、塩酸、グルクロン酸、グルコン酸、酢酸、乳酸、リン酸、リン酸二水素ナトリウム、硫酸、クエン酸、リンゴ酸、酒石酸などが挙げられる。塩基類としては、例えば、ホウ砂、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化ナトリウム、水酸化マグネシウムなどが挙げられる。その他のｐＨ調整剤としては、グリシン、ヒスチジン、イプシロンアミノカプロン酸などのアミノ酸類なども挙げることができる。
【００２５】
本発明の医薬用水性組成物を調製するにあたり、薬学的に許容し得る等張化剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤などを、必要に応じて、本発明の効果を損なわない範囲で本発明の医薬用水性組成物に添加することができる。
等張化剤としては、ブドウ糖等の糖類、マンニトール、ソルビトール、キシリトール等の糖アルコール、プロピレングリコール、グリセリン、塩化ナトリウム、塩化カリウム等が挙げられる。好ましくは塩化ナトリウム、プロピレングリコールである。
可溶化剤としては、ポリソルベート（例えばポリソルベート８０）、ポリオキシエチレンヒマシ油、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ステアリン酸ポリオキシル（例えばステアリン酸ポリオキシル４０）、チロキサポール、ポリエチレングリコールなどが挙げられる。これらの可溶化は単独又は二種以上を組み合わせて使用してもよい。
その他添加剤としては、水溶性高分子類（例えばメチルセルロース、ポビドンＫ２５等の粘稠剤）、エチレンジアミン四酢酸及びそれらの薬学的に許容される塩、トコフェロール及びその誘導体、タウリン、イプシロンアミノカプロン酸、亜硫酸ナトリウムなどの安定化剤が挙げられる。
【００２６】
本発明の医薬用水性組成物の浸透圧比は、本発明の効果が得られれば特に制限はないが、通常０．５〜２．０であり、好ましくは０．７〜１．６、より好ましくは０．８〜１．３、最も好ましくは０．９〜１．２である。
【００２７】
本発明の医薬用水性組成物には、ドライアイ治療薬、角膜損傷治癒剤、緑内障治療薬、抗炎症薬、アレルギー治療薬、散瞳薬、眼科用表面麻酔剤、白内障治療薬又は抗菌薬などの種々の薬物を適応することができる。例えば、ジクアホソルナトリウム、レバミピド、精製ヒアルロン酸ナトリウム、コンドロイチン硫酸エステルナトリウム、イソプロピルウノプロストン、ラタノプロスト、タフルプロスト、トラボプロスト、ビマトプロスト、ニプラジロール、カルテオロール塩酸塩、チモロールマレイン酸塩、レボブノロール塩酸塩、ブリモニジン酒石酸塩、アプラクロニジン塩酸塩、ドルゾラミド塩酸塩、ブリンゾラミド、ピロカルピン塩酸塩、ジクロフェナクナトリウム、プラノプロフェン、ネパフェナク、ブロムフェナクナトリウム水和物、インドメタシン、フルオロメトロン、デキサメタゾンメタスルホ安息香酸エステルナトリウム、ベタメタゾンリン酸エステルナトリウム、オロパタジン塩酸塩、アシタザノラスト水和物、クロモグリク酸ナトリウム、トラニラスト、ケトチフェンフマル酸塩、レボカバスチン塩酸塩、エピナスチン塩酸塩、フェニレフリン塩酸塩、トロピカミド、オキシブプロカイン塩酸塩、リドカイン塩酸塩、ピレノキシン、ゲンタマイシン硫酸塩、トブラマイシン、ドキシサイクリン、クロラムフェニコール、エリスロマイシン、アジスロマイシン、コリスチンメタンスルホン酸ナトリウム、バンコマイシン塩酸塩、ノルフロキサシン、オフロキサシン、トスフロキサシントシル酸塩水和物、レボフロキサシン水和物、ガチフロキサシン水和物、モキシフロキサシン塩酸塩、アムホテリシンＢ、フルコナゾール、トリアムシノロンアセトニド、フラビンアデニンジヌクレオチドナトリウム、ピリドキシン塩酸塩等が挙げられる。
【００２８】
本発明の医薬用水性組成物は、防腐剤を含まないのが好ましい。０．００１〜０．００３ｗ/ｖ％程度の低濃度であれば、防腐剤による副作用を有意に低減できるため、含んでも良い。
本発明の医薬用水性組成物は、防腐剤を含まなくても保存効力を発揮するから、マルチドーズ型として使用することもできるし、モノドーズ型として使用することもできる。同じ理由から、本発明の医薬用水性組成物を収納する容器は特に限定されない。
【実施例】
【００２９】
以下に、本発明の医薬用水性組成物を調製し、保存効力試験を実施した。【００３０】
＜試験例１＞
表１に従い、Ｌ‐システイン（製品名：Ｌ‐システイン、メーカー名：関東化学（株））及びリンゴ酸（製品名：ＤＬ‐りんご酸、メーカー名：関東化学（株））ほか各成分を、精製水８０ｍＬに添加して溶解した。この液のｐＨを適宜調整後、精製水を加えてメスアップし、無色澄明な溶液１００ｍＬとした。その後、メンブレンフィルターでろ過滅菌したものを、実施例１〜８及び比較例１〜２とした。【００３１】
実施例１〜８並びに比較例１及び２について、保存効力試験により保存効力を確認した。
保存効力試験の試験手順は、第十六改正日本薬局方解説書、参考情報、保存効力試験法を参考にした。細菌３種（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ，Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ，Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）及び真菌２種（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ，Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）をそれぞれ適当な条件下でカンテン平板培養した。これらの培養菌体を無菌的に採取し、約１０8個／ｍＬの生菌又は胞子を含む浮遊液をそれぞれの接種菌液とした。実施例１〜８並びに比較例１及び２を用意し、それぞれの接種菌液を無菌的に注入し、均一に混合して各薬液１ｍＬ当たり１０5〜１０6個の生菌数になるように接種、混合した。菌液接種７日目及び１４日目において塗抹法により菌数を測定した。
保存効力試験の判定基準は、日本薬局方及び米国薬局方の判定基準を統合したものとした。即ち、細菌においては、７日目に接種菌数の１０％以下の菌数、且つ、１４日目に接種菌数の０．１％以下の菌数であった場合に「適合」と判定した。真菌においては、７日目及び１４日目ともに接種菌数と同レベル又はそれ以下であった場合に「適合」と判定した。
細菌３種及び真菌２種のうち、いずれか一菌種でも前記の菌数を超えた場合は、「不適合」と判定した。
細菌及び真菌の７日目及び１４日目の判定がいずれも「適合」であった場合に総合判定で「適合」とし、それ以外であった場合は総合判定で「不適合」とした。
各試験結果及び総合判定を表１に示す。【００３２】
【表１】
2015125921.tif 000003
【００３３】
比較例１は、システインを含有するがリンゴ酸を含有しない組成物である。比較例１は、保存効力試験において、７日目は適合したが、１４日目は不適合であったため、総合判定にて不適合であった。７日目の判定から、比較例１のホウ酸処方は、若干ではあるが、保存効力を有することが示された。
比較例２は、システインを含有するがリンゴ酸を含有せず、更に、安定化剤の用途があるＥＤＴＡ（エデト酸ナトリウム水和物）を添加したものである。
しかし、ＥＤＴＡを添加した比較例２でも、保存効力試験において、７日目は適合したが、１４日目は不適合を示したため、比較例１と同様に総合判定では不適合の結果であった。
以上より、比較例１及び２のようなシステインを含有するがリンゴ酸を含有しない処方において、十分な保存効力を有するためには、防腐剤等の添加が必要になることがわかった。【００３４】
また、本発明の組成物である実施例１〜８は、ベンザルコニウム塩化物などの防腐剤の添加をせずとも、保存効力を有することがわかった。【００３５】
試験例１の結果より、本発明は、システイン及びリンゴ酸の組み合わせにより、保存効力を発揮することが明らかとなった。また、本発明の組成物は、医薬品で選択される一般的な緩衝剤の種類に関わらず本発明の効果が得られることが明らかとなった。【００３６】
＜試験例２＞
表２に従い、任意の成分を精製水８０ｍＬに添加して溶解した。この液を所定のｐＨに調整後、精製水を加えてメスアップして、無色澄明な溶液１００ｍＬとした。その後、メンブレンフィルターでろ過滅菌したものを実施例９〜２１とした。【００３７】
実施例９〜２１につき、試験例１と同様に保存効力試験を行った。
試験結果を表２に示す。【００３８】
【表２】
2015125921.tif 000004
【００３９】
本発明の組成物である実施例９〜２１について、保存効力試験を行ったところ、全て適合した。【００４０】
システイン及びリンゴ酸の組み合わせにおいて、いずれかの添加物が微量であっても、良好な結果を示した。
本発明の組成物は、塩基性から酸性における広範囲のｐＨにおいて、至適であった。【００４１】
＜試験例３＞
表３に従い、各成分を精製水８０ｍＬに添加して溶解した。この液のｐＨを適宜調整後、精製水を加えてメスアップし、無色澄明な溶液１００ｍＬとした。その後、メンブレンフィルターでろ過滅菌したものを実施例２２〜２６とした。【００４２】
実施例２２〜２６につき、試験例１と同様に保存効力試験を行った。
試験結果を表３に示す。【００４３】
【表３】
2015125921.tif 000005
【００４４】
本発明の組成物である実施例２２〜２６について、保存効力試験を行ったところ、全て適合した。【００４５】
以上より、本発明はポリソルベート８０もしくはステアリン酸ポリオキシル４０のような可溶化剤、ＥＤＴＡのような安定化剤又はメチルセルロースもしくはポビドンのような粘稠剤を更に添加した場合にも効果を発揮することが示された。【００４６】
このように、本発明への可溶化剤の添加が可能であることは、本発明の組成物に含ませる薬物として難溶性の有効成分を選択した場合であっても、有効成分を水溶液中に均等に分散することができ、優れた保存安定性を有することが可能であることを示唆している。
また、本発明への粘稠剤の添加が可能であることは、本発明の組成物において、投与部位での滞留性の上昇が、有効成分の持続性や移行性を高め、有効成分のバイオアベイラビリティーを改善することが可能であることを示唆している。
以上より、本発明の組成物が、汎用性の高い基剤として提供できることがわかった。【００４７】
＜試験例４＞
表４に従い、各成分を精製水８０ｍＬに添加して溶解した後、任意の量の精製ヒアルロン酸ナトリウム、トラボプロスト、チモロールマレイン酸塩、ジクロフェナクナトリウム、アシタザノラスト水和物又はモキシフロキサシン塩酸塩を添加して溶解した。この液のｐＨを適宜調整後、精製水を加えてメスアップし、無色澄明な溶液１００ｍＬとした。その後、メンブレンフィルターでろ過滅菌したものを実施例２７〜３２とした。【００４８】
実施例２７〜３２につき、試験例１と同様に保存効力試験を行った。
試験結果を表４に示す。【００４９】
【表４】
2015125921.tif 000006
【００５０】
本発明の組成物である実施例２７〜３２について、保存効力試験を行ったところ、全て適合した。【００５１】
試験例４の結果、本発明の組成物は、医薬品の有効成分として選択される薬物を添加しても、水溶液中で配合変化により、保存効力が低下するといった現象を示すことはなかった。
本発明は、医薬品の製剤として広く活用できることがわかった。【００５２】
＜試験例５＞
表５に従い、実施例３３及び３４を調製した。比較例３及び４として、それぞれ０．００２％及び０．００５％ベンザルコニウム塩化物水溶液を選択した。【００５３】
【表５】
2015125921.tif 000007
【００５４】
実施例３３及び３４並びに比較例３及び４につき、ヒト角膜上皮細胞における細胞障害性を確認した。【００５５】
試験材料として、ヒト角膜上皮細胞（製品名：Ｈｕｍａｎ ｃｏｒｎｅａｌ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ（ＨＣＥ‐Ｔ），理化学研究所バイオリソースセンター）を使用した。また、実施例３３及び３４、比較例３及び４並びに陰性対照であるリン酸緩衝生理食塩液（ＰＢＳ）の計５つの薬液を使用した。
９６ウェルプレートの各ウェルにＳＨＥＭ改変培地（５％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ／Ｆ‐１２（１:１）＋１％ＰＳ＋１０ｎｇ／ｍＬのＥＧＦ＋５μｇ／ｍＬのインスリン＋０．５％ＤＭＳＯ）に懸濁させたヒト角膜上皮細胞を２．０×１０4ｃｅｌｌｓで播種し、ＣＯ2インキュベーター内で２４時間培養した。培養後、５薬液を各５０μＬ、各薬液において計６ウェルとなるように添加した。各薬液において、１、２、５又は１０分間を接触時間とし、接触後にウェルをＰＢＳで洗浄し、各ウェルに細胞数測定用試薬（製品名：Ｃｅｌｌ ｃｏｕｎｔｉｎｇ ｋｉｔ‐８，(株)同仁化学研究所社製）を１０μＬずつ添加した。ＣＯ2インキュベーター内で２時間呈色反応をさせた後、マイクロプレートリーダー（装置名：ＩｎｆｉｎｉｔｅＭ２００ ＰＲＯ，ＴＥＣＡＮ社製）を用いて、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。各接触時間において、陰性対照の吸光度を１００として、実施例３３及び３４並びに比較例３及び４の吸光度より各細胞生存率（％）を算出した。
試験結果を図１に示す。【００５６】
比較例３及び４においては、接触時間の増加とともに細胞生存率が低下した。また、接触時間が同じであっても、比較例３と比べ、防腐剤の含有濃度がより高い比較例４のほうが、より低い細胞生存率を示した。
一方、本発明の実施例３３及び３４においては、比較例３及び４と比べ、細胞生存率が高く、接触時間の増加にともなう細胞生存率の大きな低下は示さなかった。【００５７】
試験例５の結果より、一般的な防腐剤を含有する水溶液である比較例３及び４よりも、一般的な防腐剤を添加していない本発明の実施例３３及び３４のほうが、細胞障害性が低いことが明らかとなった。
以上から、本発明の組成物は、防腐剤を添加せずとも保存効力を有するため、副作用を軽減した安全性の高い医薬用水性組成物であることが示された。【００５８】
＜試験例６＞
表６に従い、実施例３５を調製した。比較例５として、０．０１％ベンザルコニウム塩化物水溶液を選択した。【００５９】
【表６】
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【００６０】
実施例３５及び比較例５につき、白色ウサギにおける角膜上皮障害性を確認した。【００６１】
試験動物として、雄性の日本白色種ウサギを使用した。薬液として、実施例３５及び比較例５の計２つを使用した。
試験動物４眼に、実施例３５及び比較例５をそれぞれ５０μＬ、１日３回、４時間間隔で１５日間点眼した。１５日間の点眼後、試験動物の角膜をフルオレセインで染色し、生理食塩水で余分なフルオレセインを洗い流した。角膜の染色斑の観察を行い、暗状態（ブルーライト照射下）で写真撮影を行った。
写真を図２に示す。【００６２】
比較例５においては、４眼中２眼に染色斑が認められ、角膜上皮障害が認められた。
一方、本発明の実施例３５においては、４眼全てに染色斑は認められず、角膜上皮障害は認められなかった。【００６３】
試験例６の結果より、一般的な防腐剤を含有する比較例５で角膜上皮障害が認められた条件において、一般的な防腐剤を含有しない実施例３５は角膜上皮障害が認められなかったことから、比較例５と比べ実施例３５は、臨床使用時に角膜上皮障害を発現するリスクが低いと推察された。
以上から、本発明の組成物は、防腐剤を添加せずとも保存効力を有するため、副作用を軽減した安全性の高い医薬用水性組成物であることが示された。
【産業上の利用可能性】
【００６４】
システイン及びリンゴ酸を組み合わせて配合することにより、ベンザルコニウム塩化物やパラベン類等の防腐剤を配合しなくとも、保存効力を有する医薬用水性組成物を調製することが可能となる。本発明により提供される医薬用水性組成物は、洗眼剤や点眼剤等の液剤に適応させることにより、防腐剤による角膜障害を軽減することが可能となる。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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