(57)【要約】  本発明の課題は、簡単な方法で薬物を封入することができるヤヌス微粒子及びその製造方法を提供することである。本発明によれば、１種以上の脂質および１種以上の高分子を共通溶媒中に溶解した溶液を、界面活性剤水溶液中において乳化する工程、及び前記共通溶媒を除去する工程を含む、脂質と高分子から構成される粒子径0.01〜5000μmのヤヌス微粒子の製造方法が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
１種以上の脂質および１種以上の高分子を共通溶媒中に溶解した溶液を、界面活性剤含有の液体中において乳化する工程、及び前記共通溶媒を除去する工程を含む、脂質と高分子から構成される粒子径0.01〜5000μmのヤヌス微粒子の製造方法。
【請求項２】
１種以上の脂質および１種以上の高分子を共通溶媒中に溶解した溶液に対して、１種又は２種以上の第一の界面活性剤を、油相及び／又は水相に、溶解または懸濁した後、乳化してW/Oエマルションを調製する工程、上記で得られたW/Oエマルションを、１種又は２種以上の第二の界面活性剤水溶液中において乳化することによりW/O/Wエマルションを調製する工程、及び前記共通溶媒を除去する工程を含む、脂質と高分子から構成される粒子径0.01〜5000μmのヤヌス微粒子の製造方法。
【請求項３】
ヤヌス微粒子内における内水相の分布を制御するための、請求項１又は２に記載の方法。 
【請求項４】
１種以上の脂質および１種以上の高分子を共通溶媒中に溶解した溶液が、薬物を含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項５】
第一の界面活性剤として界面活性剤水溶液を使用し、第一の界面活性剤水溶液中が、薬物を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
１種以上の脂質および１種以上の高分子を共通溶媒中に溶解した溶液に、薬物微粒子または1種類以上の添加物と薬物とを複合化した微粒子を分散してS/Oエマルションを調製する工程、上記で得られたS/Oエマルションを、界面活性剤水溶液中において乳化することによりS/O/Wエマルションを調製する工程、及び前記共通溶媒を除去する工程を含む、脂質と高分子から構成される粒子径0.01〜5000μmのヤヌス微粒子の製造方法。 
【請求項７】
薬物がペプチド、タンパク質、核酸又は核酸誘導体である、請求項４から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項８】
界面活性剤水溶液を使用し、界面活性剤水溶液の容量が、１種以上の脂質および１種以上の高分子を共通溶媒中に溶解した溶液の容量の0.5〜10倍である、請求項１から７の何れか一項に記載の方法。
【請求項９】
脂質の融点が30℃〜45℃である、請求項１から８の何れか一項に記載の方法。
【請求項１０】
脂質が、飽和Ｃ８−Ｃ１８トリグリセリド脂肪酸を含むグリセリド塩基である、請求項１から９の何れか一項に記載の方法。
【請求項１１】
高分子が、乳酸・グリコール酸コポリマー、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、又はEudragit(登録商標)RS100である、請求項１から１０の何れか一項に記載の方法。
【請求項１２】
界面活性剤が、非イオン界面活性剤である、請求項１から１１の何れか一項に記載の方法。
【請求項１３】
界面活性剤が、ポリビニルアルコールである、請求項１から１２の何れか一項に記載の方法。
【請求項１４】
30分間以上かけて共通溶媒を除去する、請求項１から１３の何れか一項に記載の方法。
【請求項１５】
請求項１から１４の何れか一項に記載の方法により製造される、脂質と高分子から構成される粒子径0.01〜5000μmのヤヌス微粒子。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、２種類以上の異なる物質から構成される異形微粒子（ヤヌス微粒子）及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
一方の半球が物質Ａから構成され、もう一方の半球が物質Ａとは異なる物質Ｂから構成されるヤヌス微粒子（異形微粒子）は、多彩な応用が可能であることから、近年、急速に注目が高まっている（非特許文献１から４）。ヤヌス微粒子の応用例としては、例えば、界面活性剤の代替（非特許文献５)、ディスプレーの素粒子（非特許文献６）、癌の磁気治療（非特許文献７)などが報告されている。ヤヌス微粒子の調製法として、多流体ノズルを用いた方法やポリマー間の相分離を利用した方法が報告されている（非特許文献８から１０）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Perec V et al., Science 315,1393 (2007)
【非特許文献２】Chen Q et al., Science 331, 199 (2011)
【非特許文献３】Reynwaw BJ et al., Nature 447, 461 (2007)
【非特許文献４】Sacanna S et al., Nature 464, 575 (2010)
【非特許文献５】Ruhland T et al., Langmuir 27, 9807 (2011)
【非特許文献６】Yin SN et al., Adv.Matter. 23, 2915 (2011)
【非特許文献７】Hu SH et al.,J.Am.Chem.Soc. 132, 7234 (2010)
【非特許文献８】Takasi Nisisako et al., Adv.Mater. 2006, 18, 1152-1156
【非特許文献９】Zhihong Nie et al., J.Am.Chem.SOC. 2006, 128, 9408-9412
【非特許文献１０】Chariya . Kaewsaneha et al., ACS Appl. Mater. Interfaces, 2013, 5 (6), 1857-1869
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
生体膜における薬物の吸収促進は、古くより検討されており、吸収促進剤の利用、酵素阻害剤の共投与、粘膜付着ポリマーの利用などが提唱されている。微粒子の利用についても、その中の一つの技術である。微粒子において、生体膜の吸収面近くで薬物を放出させることにより、薬物の酵素分解を抑え、膜吸収される薬物量を増大させることができると考えられている。しかしながら、微粒子からの薬物放出の方向性には選択性がなく、吸収面に向かって放出される薬物もあるが、吸収面の反対側に放出される薬物もある。また、放出された薬物は、吸収面に至るまでの間、分解にさらされる。高田らは、球面からの薬物放出を抑えて平面からの薬物放出に限定した半球製剤を提唱している。薬物放出面の平面部分を生体膜の吸収面に付着させる一方、球面は、生体膜の反対側への薬物放出を抑えると同時に酵素に対するバリアとなって、薬物の生体膜への吸収を効率的に行っている。しかしながら、微細な半球製剤を製造するのは技術的な困難を伴う。【０００５】
本発明は、簡単な方法で薬物を封入することができるヤヌス微粒子及びその製造方法を提供することを解決すべき課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意検討した結果、１種以上の脂質および１種以上の高分子を共通溶媒中に溶解した溶液を、界面活性剤を含有する液体において乳化し、次いで前記共通溶媒を除去することによって、脂質と高分子から構成される粒子径0.01〜5000μmのヤヌス微粒子を製造できること見出し、本発明を完成するに至った。【０００７】
即ち、本発明によれば以下の発明が提供される。
（１）  １種以上の脂質および１種以上の高分子を共通溶媒中に溶解した溶液を、界面活性剤含有の液体中において乳化する工程、及び前記共通溶媒を除去する工程を含む、脂質と高分子から構成される粒子径0.01〜5000μmのヤヌス微粒子の製造方法。
（２）  １種以上の脂質および１種以上の高分子を共通溶媒中に溶解した溶液に対して、１種又は２種以上の第一の界面活性剤を、油相及び／又は水相に、溶解または懸濁した後、乳化してW/Oエマルションを調製する工程、上記で得られたW/Oエマルションを、１種又は２種以上の第二の界面活性剤水溶液中において乳化することによりW/O/Wエマルションを調製する工程、及び前記共通溶媒を除去する工程を含む、脂質と高分子から構成される粒子径0.01〜5000μmのヤヌス微粒子の製造方法。
（３）  ヤヌス微粒子内における内水相の分布を制御するための、（１）又は（２）に記載の方法。 
（４）  １種以上の脂質および１種以上の高分子を共通溶媒中に溶解した溶液が、薬物を含む、（１）又は（２）に記載の方法。
（５）  第一の界面活性剤として界面活性剤水溶液を使用し、第一の界面活性剤水溶液中が、薬物を含む、（２）に記載の方法。
（６） １種以上の脂質および１種以上の高分子を共通溶媒中に溶解した溶液に、薬物微粒子または1種類以上の添加物と薬物とを複合化した微粒子を分散してS/Oエマルションを調製する工程、上記で得られたS/Oエマルションを、界面活性剤水溶液中において乳化することによりS/O/Wエマルションを調製する工程、及び前記共通溶媒を除去する工程を含む、脂質と高分子から構成される粒子径0.01〜5000μmのヤヌス微粒子の製造方法。 
（７）  薬物がペプチド、タンパク質、核酸又は核酸誘導体である、（４）から（６）の何れかに記載の方法。
（８）  界面活性剤水溶液を使用し、界面活性剤水溶液の容量が、１種以上の脂質および１種以上の高分子を共通溶媒中に溶解した溶液の容量の0.5〜10倍である、（１）から（７）の何れか記載の方法。
（９）  脂質の融点が30℃〜45℃である、（１）から（８）の何れかに記載の方法。
（１０）  脂質が、飽和Ｃ８−Ｃ１８トリグリセリド脂肪酸を含むグリセリド塩基である、（１）から（９）の何れかに記載の方法。
（１１）  高分子が、乳酸・グリコール酸コポリマー、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、又はEudragit(登録商標)RS100である、（１）から（１０）の何れかに記載の方法。
（１２）  界面活性剤が、非イオン界面活性剤である、（１）から（１１）の何れかに記載の方法。
（１３）  界面活性剤が、ポリビニルアルコールである、（１）から（１２）の何れかに記載の方法。
（１４）  30分間以上かけて共通溶媒を除去する、（１）から（１３）の何れかに記載の方法。
（１５）  （１）から（１４）の何れかに記載の方法により製造される、脂質と高分子から構成される粒子径0.01〜5000μmのヤヌス微粒子。
【発明の効果】
【０００８】
本発明のヤヌス微粒子及びその製造方法によれば、薬物を効率よく生体膜に吸収促進させるための製剤を提供できる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１は、薬物層を含むヤヌス微粒子が生体膜に接触する状況を示す。
【図２】図２は、実施例１におけるヤヌス微粒子の形成を示す。
【図３】図３は、実施例２におけるヤヌス微粒子の形成を示す。
【図４】図４は、実施例３におけるヤヌス微粒子の形成を示す。
【図５】図５は、実施例４におけるヤヌス微粒子の形成を示す。
【図６】図６は、実施例５におけるヤヌス微粒子の形成を示す。
【図７】図７は、実施例６におけるヤヌス微粒子の形成を示す。
【図８】図８は、実施例７におけるヤヌス微粒子の形成を示す。
【図９】図９は、実施例８におけるヤヌス微粒子の形成を示す。
【図１０】図１０は、実施例９におけるヤヌス微粒子の形成を示す。
【図１１】図１１は、実施例１０におけるヤヌス微粒子の形成を示す。
【図１２】図１２は、実施例１１におけるヤヌス微粒子の形成を示す。
【図１３】図１３は、実施例１２におけるヤヌス微粒子の形成を示す。
【図１４】図１４は、実施例１３におけるヤヌス微粒子の形成を示す。
【図１５】図１５は、実施例２１〜２４におけるヤヌス微粒子の形成を示す。
【図１６】図１６は、実施例２５及び２６におけるヤヌス微粒子の形成を示す。
【図１７】図１７は、実施例２７〜３０におけるヤヌス微粒子の形成を示す。
【図１８】図１８は、実施例３１〜３４におけるヤヌス微粒子の形成を示す。
【図１９】図１９は、実施例３５〜３８におけるヤヌス微粒子の形成を示す。
【図２０】図２０は、実施例３９〜４２におけるヤヌス微粒子の形成を示す。
【図２１】図２１は、実施例４３〜４５におけるヤヌス微粒子の形成を示す。
【図２２】図２２は、実施例４６及び４７におけるヤヌス微粒子の形成を示す。
【図２３】図２３は、実施例４８におけるヤヌス微粒子の形成を示す。
【図２４】図２４は、実施例４９におけるヤヌス微粒子の形成を示す。
【図２５】図２５は、実施例５０におけるヤヌス微粒子の形成を示す。
【図２６】図２６は、実施例５１におけるヤヌス微粒子の形成を示す。
【図２７】図２７は、実施例５２におけるヤヌス微粒子の形成を示す。
【図２８】図２８は、対物レンズの倍率が×4×10×60の時の1mmスケール（1目盛り0.01mm）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下、本発明について更に詳細に説明する。
本発明者らは、ヤヌス微粒子の特徴を利用して、一方の半球は生体膜の反対側への薬物放出を抑えると同時に酵素に対するバリアとし、もう一方の半球は体温近くの温度で融解し、生体膜に接触すると吸収されるようにすることで、図１に示すシステムを考案した。本発明者らは創意検討の結果、ポリマーと脂質を適切な溶媒に溶解して油相を製造し、少量の水相に乳化し、徐々に液中乾燥して、その時間を制御することにより、目的の微粒子を製造できることを見出した。さらに、油相に、界面活性剤、不溶性の固体や水滴を加えて、Solid in oil(S/O) エマルションやWater in oil(W/O)エマルションを形成させ、水相に乳化させると、微粒子に固体や水滴を局在化させることができ、薬物層を形成できることを見出した。さらに、界面活性剤の種類と量により、微粒子中の薬物層の分布を制御できることを見出した。本発明の好ましい態様によれば、半球のみが温度により融解し吸収される球形微粒子を製造することができる。
【００１１】
本発明は、１種以上の脂質および１種以上の高分子を共通溶媒中に溶解した溶液を、界面活性剤含有の液体において乳化する工程、及び前記共通溶媒を除去する工程を含む、脂質と高分子から構成される粒子径0.01〜5000μmのヤヌス微粒子の製造方法に関するものである。さらに本発明によれば、１種以上の脂質および１種以上の高分子を共通溶媒中に溶解した溶液に対して、１種又は２種以上の第一の界面活性剤を、油相及び／又は水相に、溶解または懸濁した後、乳化してW/Oエマルションを調製する工程、上記で得られたW/Oエマルションを、１種又は２種以上の第二の界面活性剤水溶液中において乳化することによりW/O/Wエマルションを調製する工程、及び前記共通溶媒を除去する工程を含む、脂質と高分子から構成される粒子径0.01〜5000μmのヤヌス微粒子の製造方法が提供される。上記し本発明の製造方法により製造される脂質と高分子から構成される粒子径0.01〜5000μmのヤヌス微粒子も本発明の範囲内である。
【００１２】
ヤヌス微粒子の粒子径は0.01〜5000μmであればよいが、好ましくは0.05〜500μmであり、より好ましくは0.1〜100μmである。
【００１３】
本発明で用いる脂質の種類は特に限定されないが、具体例としては、炭素数１４〜２４の飽和脂肪酸（例えば、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸など）又はその塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩）；炭素数１６〜２４の高級アルコール（例えば、セチルアルコール、ステアリルアルコールなど）；炭素数８〜２４の飽和あるいは／および不飽和脂肪酸のモノグリセリド、ジグリセリド又はトリグリセリド；油脂類（例えば、ヒマシ油、綿実油、オリーブ油、大豆油、菜種油、牛脂などの硬化油）；ロウ類（例えば、蜜ロウ、カルナバロウ、鯨ロウなど）；炭化水素類（例えば、パラフィン、マイクロクリスタリンワックスなど）；コレステロール；糖脂質（例えば、スフィンゴ脂質、セラミドなど）；ホスホリピッド（例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、水素添加レシチンなど）；疎水性ビタミン類（例えば、ビタミンＥ、ビタミンＡ、ビタミンＤ、ビタミンＫなど）が挙げられる。脂質としては、脂肪酸とグリセリンとのエステルであり脂肪酸トリグリセリド(トリ-O-アシルグリセリン)が特に好ましい。これらの脂質を単独で、又は、適当に組み合わせて混合して用いることができる。また、さらに、これらの脂質に、Ｃ６−Ｃ１２の低級の脂質類（例えば、カプリン酸、ラウリン酸などの脂肪酸やその塩類、エステル類、アルコール類、又は、糖脂質類、リン脂質類など）や植物油（例えば、大豆油、オリーブ油、ヒマシ油、菜種油など）などの低融点の脂質を添加することで、油脂相の融点、稠度、又は、界面張力を適切に調節することができる。
【００１４】
好ましくは脂質の融点は28℃〜45℃であり、より好ましくは30℃〜40℃であり、さらに好ましくは30〜37℃であり、特に好ましくは34〜37℃である。
【００１５】
好ましい脂質の一例としては、SUPPCIRE AM PASILLES (GATTEFOSSE)を挙げることができる。SUPPCIRE AM PASILLESは、飽和Ｃ８−Ｃ１８トリグリセリド脂肪酸を含むグリセリド塩基であり、融点は35.0-36.5℃であり、水酸基価は５である。
【００１６】
本発明で用いる高分子の種類は特に限定されないが、例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、乳酸・グリコール酸コポリマー、オリゴ乳酸、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、アクリレート・メタクリレートコポリマー、ポリカプロラクトン、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、セルロース系ポリマー（例えばエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、酢酸フタル酸セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート）などを挙げることができる。ポリアクリレート、ポリメタクリレート及びアクリレート・メタクリレートコポリマーとしては、例えば、アクリレートアンモニウムメタクリレートコポリマー（Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＲＬ１００又はＲＳ１００、又はＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＲＬ３０Ｄ又はＲＳ３０Ｄ）、エチルアクリレートメチルメタクリレートコポリマー（Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＮＥ３０Ｄ）又はメタクリル酸コポリマー（Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ１００−５５、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ３０Ｄ、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｅ１００、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＥＰＯ）、デンプンポリマー、キトサンなどを使用することができる。
【００１７】
高分子の重量平均分子量は特に限定されないが、一般的には、200〜50,000,000程度であり、好ましくは250  〜10,000,000  程度である。上記の中でも特に好ましい高分子は、乳酸・グリコール酸コポリマー、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、又はEudragit(登録商標)RS100である。
【００１８】
Eudragit(登録商標)RS100は、エチルアクリレートとメチルメタクリレートと低含有量の第４級アンモニウム基含有メタクリル酸エステルとのコポリマーであり、アンモニウム基は塩として存在している。Eudragit(登録商標)RS100の構造を以下に示す。
【００１９】
【化１】
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【００２０】
本発明においては、１種以上の脂質および１種以上の高分子を共通溶媒中に溶解した溶液を使用する。共通溶媒としては、使用する脂質および高分子の両方を溶解できる溶媒であれば特に限定されないが、例えば、塩化メチレン、酢酸エチル、ヘキサン、シクロヘキサン、エタノール、メタノール、プロパノール、アセトン、THF、DMF、DMSO、酢酸、および、それら溶媒の混合溶媒  などを使用することができる。
１種以上の脂質および１種以上の高分子を共通溶媒中に溶解した溶液を乳化する液体としては、１種以上の脂質および１種以上の高分子を共通溶媒中に溶解した溶液と相分離する液体であれば、特に限定されないが、例えば、水、グリセリン、シリコンオイル、ひまし油、ダイズ油、オリーブ油などを使用できる。
【００２１】
本発明で使用する界面活性剤（第一の界面活性剤と第二の界面活性剤とも称する）は、上記した高分子と油脂の溶液の乳化を行うことができるものであれば特に限定されず、アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、両性界面活性剤、又は非イオン界面活性剤の何れでもよい。
第一の界面活性剤としては、１種の界面活性剤を使用してもよいし、２種以上の異なる界面活性剤を組み合わせて使用してもよく、２種以上の異なる界面活性剤としては、HLBの異なる界面活性剤を組み合わせて使用することができる。特に、安定な乳化状態を得るためには、HLBの異なる2種以上の界面活性剤を、油相、及び／又は水相に添加することができる。
同様に、第二の界面活性剤としては、１種の界面活性剤を使用してもよいし、２種以上の異なる界面活性剤を組み合わせて使用してもよく、２種以上の異なる界面活性剤としては、HLBの異なる界面活性剤を組み合わせて使用することができる。
【００２２】
アニオン界面活性剤としは、石鹸（脂肪酸ナトリウム） RCOO-Na+、モノアルキル硫酸塩ROSO3-M+、アルキルポリオキシエチレン硫酸塩 RO(CH2CH2O)mSO3-M+、アルキルベンゼンスルホン酸塩 RR'CH2CHC6H4SO3-M+、モノアルキルリン酸塩 ROPO(OH)O-M+などを挙げることができる。
カチオン界面活性剤としては、アルキルトリメチルアンモニウム塩 RN+(CH3)3X-、ジアルキルジメチルアンモニウム塩 RR'N+(CH3)2X-、アルキルベンジルジメチルアンモニウム塩 RN+(CH2Ph)(CH3)2X-などが挙げられる。
【００２３】
両性界面活性剤としては、アルキルジメチルアミンオキシド R(CH3)2NO、アルキルカルボキシベタイン R(CH3)2N+CH2COO-などが挙げられる。
非イオン界面活性剤としては、ポリオキシエチレンアルキルエーテル RO(CH2CH2O)mH、脂肪酸ソルビタンエステル、アルキルポリグルコシド、脂肪酸ジエタノールアミド RCON(CH2CH2OH)2又はアルキルモノグリセリルエーテル ROCH2CH(OH)CH2OH、ポリビニルアルコールなどが挙げられる。
【００２４】
界面活性剤としては、非イオン界面活性剤が特に好ましく、ポリビニルアルコールがさらに好ましい。
【００２５】
界面活性剤水溶液の容量は、脂質および高分子を共通溶媒中に溶解した溶液の容量の0.5〜10倍であることが好ましく、1〜10倍であることがより好ましい。
【００２６】
本発明においては、１種以上の脂質および１種以上の高分子を共通溶媒中に溶解した溶液、または、第一の界面活性剤水溶液中に、製剤添加物と薬物を含めることができる。
薬物としては、ペプチド、タンパク質、核酸(DNA、DNAデコイ、DNAプラスミド、アプタマー、RNA、SsiRNA、tRNA、miRNA、及び、DNAとRNAのヘテロ二本鎖核酸など)又は核酸誘導体（DNA及びRNA並びにその誘導体のキメラ化合物を含む。）、ペプチド核酸などが例示できる。
ペプチド、タンパク質、核酸又は核酸誘導体の具体例としては、例えば成長ホルモン放出因子、成長因子、表皮成長因子(EGF)、神経成長因子(NGF)、TGF、PDGF、インシュリン成長因子(IGF)、繊維芽セル成長因子（aFGF、bFGF等）、ソマトスタチン、カルシトニン、インシュリン、バソプレッシン、インターフェロン、IL-2、ウロキナーゼ、セラチオペプチターゼ、スーパーオキシドジスムターゼ(SOD)、チロトロピン、放出ホルモン(TRH)、黄体形成ホルモン放出因子(LH-RH)、コルチコトロピン放出ホルモン(CRF)、成長ホルモン放出ホルモン(GHRH)、オキシトシン、エリトロポチン(EPO)、コロニー刺激因子(CSF)等のタンパク質やそれらの部分より得られるペプチドや、特定の抗原より得られるペプチドワクチンなども薬剤として使用することができる。また、これらのタンパク質やペプチドをコードする核酸又は核酸誘導体を使用することができる。
【００２７】
核酸誘導体としては、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、ＲＮＡまたはＤＮＡに修飾を施した分子であり、天然に存在する分子でも非天然の分子でもよい。
【００２８】
核酸誘導体の一例としては、核酸に別の化学物質を付加した分子を挙げることができ、例えば、５’−ポリアミン付加誘導体、コレステロール付加誘導体、ステロイド付加誘導体、胆汁酸付加誘導体、ビタミン付加誘導体、Ｃｙ５付加誘導体、Ｃｙ３付加誘導体、６−ＦＡＭ付加誘導体、およびビオチン付加誘導体等をあげることができる。
【００２９】
核酸誘導体の別の例としては、例えば、糖の修飾体としては、２’−Ｏ−プロピルリボース、２’−メトキシエトキシリボース、２’−Ｏ−メチルリボース、２’−Ｏ−メトキシエチルリボース、２’−Ｏ−［２−（グアニジウム）エチル］リボース又は２’−Ｏ−フルオロリボースで置換されたオリゴヌクレオチド誘導体などをあげることができる。また、リン酸基の修飾体としては、オリゴヌクレオチド中のリン酸ジエステル結合がホスフォロチオエート結合に変換されたオリゴヌクレオチド誘導体、オリゴヌクレオチド中のリン酸ジエステル結合がＮ３’−Ｐ５’ホスフォアミデート結合に変換されたオリゴヌクレオチド誘導体等をあげることができる。
【００３０】
本発明においては、共通溶媒を除去する時間は、所望のヤヌス微粒子を製造できる限り特に限定されないが、30分間以上かけて共通溶媒を除去することが好ましい。共通溶媒を除去する時間は、30分〜６時間であることがより好ましく、１〜４時間であることがさらに好ましい。
【００３１】
上記した本発明の方法により製造される、脂質と高分子から構成される粒子径0.01〜5000μmのヤヌス微粒子も本発明の範囲内である。
本発明においては、１種以上の脂質および１種以上の高分子を共通溶媒中に溶解した溶液、または、第一の界面活性剤水溶液中に、薬物及び製剤添加物として、粘液溶解剤（例えば、L-システイン、N-アセチルシステインなど）、透過促進剤あるいは吸収促進剤（例えば、中鎖脂肪酸、長鎖不飽和脂肪酸、これらのモノグリセリド類あるいはこれらのポリエチレングリコールエステル類又はラブラゾールのような両類の混合物、胆汁酸塩、キレート剤、アルキルサッカライドをはじめとする糖脂質類、Azone（登録商標）、トランスキュトール（登録商標）、シクロデキストリン、クラウディン結合剤及びその誘導体などのタイトジャンクション修飾剤など）、緩衝剤（例えば、リン酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤、炭酸緩衝剤など）、分解酵素阻害剤（例えば、アプロチニン、バシトラシン、カモスタット、クエン酸、酒石酸、エデト酸ナトリウム、グリココール酸ナトリウム、SUPERase・In（登録商標）、RNasin（登録商標）など）、比重調節剤（例えば、グリセリン、ショ糖、グルコース、アミノ酸、多孔性シリカなど）、酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸、ヒドロキシブチルアニソール、トコフェロール、アスコルビン酸、CoQ10、フラーレン、フラーレン誘導体など）、遮光・光吸収剤（酸化チタン、オキシベンゾン及びオクトクリレンなど）等を含めることができる。
上記した本発明のヤヌス微粒子は、一例としては、疎水性透過促進剤と水溶性薬物を含むヤヌス型薬物担持微粒子製剤として使用することができる。
以下の実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は実施例によって限定されるものではない。
【実施例】
【００３２】
以下の実施例において、0.5％ポリビニルアルコール、0.1%アルブミン、1% HCO60はそれぞれの水溶液を用いた。
実施例１
乳酸・グリコール酸コポリマー（和光純薬LGA5020）50 mg、ポリ乳酸（和光純薬LA0020）100 mgおよびSUPPCIRE AM PASILLES (GATTEFOSSE)100 mgを塩化メチレン1mL中に溶解させた溶液を、0.5％ポリビニルアルコール（クラレクラレポバール220C）5 mL中に、ホモジナイザー（IKAウルトラタラックスT18）を用いて、5000rpm、3分間乳化した。乳化後、スターラーにより撹拌することで溶媒を留去し、経時的にサンプリングして、光学顕微鏡観察した。時間ごとの形態変化を図２に示す。エマルジョン中に、液滴が相分離し、その液滴が合一し、3時間後、ヤヌス微粒子が形成した。4時間後、2つの半球は解離したものも認められた。光学顕微鏡観察によると、ヤヌス微粒子の粒子径は１〜100μmであった。【００３３】
実施例２
乳酸・グリコール酸コポリマー（和光純薬LGA5020）100 mgおよびSUPPCIRE AM PASILLES (GATTEFOSSE)100 mgを塩化メチレン1mL中に溶解させた溶液を、0.5％ポリビニルアルコール（クラレクラレポバール220C）5 mL中に、ホモジナイザー（IKAウルトラタラックスT18）を用いて、5000rpm、3分間乳化した。乳化後、スターラーにより撹拌することで溶媒を留去し、3時間後、サンプリングして、光学顕微鏡観察した。半球の間に境界線が認められる微粒子が認められた（図３）。光学顕微鏡観察によると、ヤヌス微粒子の粒子径は１〜100μmであった。【００３４】
実施例３
乳酸・グリコール酸コポリマー（和光純薬LGA5020）100 mgおよびSUPPCIRE AM PASILLES (GATTEFOSSE)150 mgを塩化メチレン1mL中に溶解させた溶液を、0.5％ポリビニルアルコール（クラレクラレポバール220C）5 mL中に、ホモジナイザー（IKAウルトラタラックスT18）を用いて、5000rpm、3分間乳化した。乳化後、スターラーにより撹拌することで溶媒を留去し、3時間後、サンプリングして、光学顕微鏡観察した。3つ以上の部位に区分けされた微粒子が認められた（図４）。光学顕微鏡観察によると、ヤヌス微粒子の粒子径は１〜100μmであった。【００３５】
実施例４
乳酸・グリコール酸コポリマー（和光純薬LGA5020）100 mgおよびSUPPCIRE AM PASILLES (GATTEFOSSE)100 mgを酢酸エチル3mL中に溶解させた溶液を、0.5％ポリビニルアルコール（クラレクラレポバール220C）5 mL中に、ホモジナイザー（IKAウルトラタラックスT18）を用いて、5000rpm、3分間乳化した。乳化後、スターラーにより撹拌することで溶媒を留去し、3時間後、サンプリングして、光学顕微鏡観察した。ほぼすべての微粒子において、２つの部位からなる微粒子が認められた（図５）。その後、精製水200mL中に30分間撹拌撹拌することで、微粒子中に残存している溶媒を急速に抽出した。得られた分散液より、20μm金網フィルターを用いて、減圧濾過をすることで、微粒子を取出し、凍結乾燥した。光学顕微鏡観察によると、ヤヌス微粒子の粒子径は１〜100μmであった。【００３６】
実施例５
EudragitRS100100 mgおよびSUPPCIRE AM PASILLES (GATTEFOSSE)100 mgを塩化メチレン1mL中に溶解させた溶液を、0.5％ポリビニルアルコール（クラレクラレポバール220C）5 mL中に、ホモジナイザー（IKAウルトラタラックスT18）を用いて、5000rpm、3分間乳化した。乳化後、スターラーにより撹拌することで溶媒を留去し、3時間後、サンプリングして、光学顕微鏡観察した。微粒子内部に表面近くに偏った液滴が観察された（図６）。光学顕微鏡観察によると、ヤヌス微粒子の粒子径は１〜100μmであった。【００３７】
実施例６
乳酸・グリコール酸コポリマー（和光純薬LGA5020）100 mgおよびSUPPCIRE AM PASILLES (GATTEFOSSE)100 mgを塩化メチレン1mL中に溶解させた溶液にキトサン（和光純薬キトサン100）を分散させ、0.5％ポリビニルアルコール（クラレクラレポバール220C）5 mL中に、ホモジナイザー（IKAウルトラタラックスT18）を用いて、5000rpm、3分間乳化した。乳化後、スターラーにより撹拌することで溶媒を留去し、3時間後、サンプリングして、光学顕微鏡観察した。一部に膨潤したキトサンが分布した微粒子が得られた（図７）。光学顕微鏡観察によると、ヤヌス微粒子の粒子径は１〜100μmであった。【００３８】
実施例７
乳酸・グリコール酸コポリマー（和光純薬LGA5020）100 mgおよびSUPPCIRE AM PASILLES (GATTEFOSSE)100 mgを塩化メチレン1mL中に溶解させた溶液に0.1%アルブミン（Sigma-Aldrich from chickenegg）をホモジナイザー（IKAウルトラタラックスT18）にて、20,000rpmで1分間乳化しW/Oエマルションを調製した。調製したW/Oエマルションを0.5％ポリビニルアルコール（クラレクラレポバール220C）5 mL中に、ホモジナイザー（IKAウルトラタラックスT18）を用いて、5000rpm、3分間乳化し、W/O/Wエマルションを調製した。調製後、スターラーにより撹拌することで溶媒を留去し、3時間後、サンプリングして、光学顕微鏡観察した。半球の間に境界線が認められる微粒子が認められたことに加え、水滴が一方の半球に分布した形態が観察できた（図８）。光学顕微鏡観察によると、ヤヌス微粒子の粒子径は１〜100μmであった。30分間静置し、上清を取り除き、水洗して、凍結乾燥した。【００３９】
実施例８
乳酸・グリコール酸コポリマー（和光純薬LGA5020）100 mg、SUPPCIRE AM PASILLES (GATTEFOSSE)100 mg、および、ステアリン酸グリセリン20mg を塩化メチレン1mL中に溶解させた溶液に1% HCO60をホモジナイザー（IKAウルトラタラックスT18）にて、20,000rpmで30秒間乳化しW/Oエマルションを調製した。調製したW/Oエマルションを0.5％ポリビニルアルコール（クラレクラレポバール220C）5 mL中に、ホモジナイザー（IKAウルトラタラックスT18）を用いて、5000rpm、3分間乳化し、W/O/Wエマルションを調製した。【００４０】
調製後、スターラーにより撹拌することで溶媒を留去し、2時間後、サンプリングして、光学顕微鏡観察した。半球の間に境界線が認められる微粒子が認められたことに加え、水滴がその境界線上に分布した形態が観察できた（図９）。光学顕微鏡観察によると、ヤヌス微粒子の粒子径は１〜100μmであった。【００４１】
実施例９
乳酸・グリコール酸コポリマー（和光純薬LGA5020）100 mg、および、SUPPCIRE AM PASILLES (GATTEFOSSE)100 mgを塩化メチレン1mL中に溶解させた溶液に1% HCO60をホモジナイザー（IKAウルトラタラックスT18）にて、20,000rpmで30秒間乳化しW/Oエマルションを調製した。調製したW/Oエマルションを0.5％ポリビニルアルコール（クラレクラレポバール220C）5 mL中に、ホモジナイザー（IKAウルトラタラックスT18）を用いて、5000rpm、3分間乳化し、W/O/Wエマルションを調製した。調製後、スターラーにより撹拌することで溶媒を留去し、2時間後、サンプリングして、光学顕微鏡観察した。半球の間に境界線が認められる微粒子が認められたことに加え、水滴が一方の半球に分布した形態が観察できた（図１０）。光学顕微鏡観察によると、ヤヌス微粒子の粒子径は１〜100μmであった。【００４２】
実施例１０
実施例１の製法に従って、疎水性薬物モデルとしてオイルレッドを含有させたヤヌス微粒子を調製することによって、疎水領域の識別を確認したところ、図１１に示すように、オイルレッドは脂質層と推定される領域に局在し、調製した微粒子が性質の異なる二つの領域からなるヤヌス型微粒子であることが実証された。また、調製した本ヤヌス型微粒子製剤は、オイルレッドの分布する疎水領域面同士を内向きに接して集合する傾向を示したが、一方、一晩静置してもヤヌス型微粒子の形状は保たれ、再分散が可能であることが明らかとなった。光学顕微鏡観察によると、ヤヌス微粒子の粒子径は１〜100μmであった。【００４３】
実施例１１
乳酸・グリコール酸コポリマー（和光純薬LGA5020）100 mgおよびSUPPCIRE AM PASILLES (GATTEFOSSE)100 mgを塩化メチレン1mL中に溶解させた溶液に、0.05%ビタミンB12 （ALEXIS BIOCHEMICALS）を含有する0.05%キトサン（和光純薬Chitosan 100）-0.5％酢酸水溶液250μLをホモジナイザー（IKAウルトラタラックスT18）にて、20,000rpmで30秒間乳化しW/Oエマルションを調製した。調製したW/Oエマルションを0.5％ポリビニルアルコール（クラレクラレポバール220C）5 mL中に、ホモジナイザー（IKAウルトラタラックスT18）を用いて、5000rpm、3分間乳化し、W/O/Wエマルションを調製した。調製後、スターラーにより撹拌することで溶媒を留去し、30分後、サンプリングして、光学顕微鏡観察した。半球の間に境界線が認められる微粒子が認められたことに加え、水滴が一方の半球に分布した形態が観察できた（図１２）。光学顕微鏡観察によると、ヤヌス微粒子の粒子径は１〜100μmであった。【００４４】
実施例１２
乳酸・グリコール酸コポリマー（和光純薬LGA5020）100 mg、SUPPCIRE AM PASILLES (GATTEFOSSE)100 mgおよびモノステアリン酸グリセリン（和光純薬）20mgを塩化メチレン1mL中に溶解させた溶液に、0.05%ビタミンB12 （ALEXIS BIOCHEMICALS）を含有する0.05%キトサン（和光純薬Chitosan 100）-0.5％酢酸水溶液250μLをホモジナイザー（IKAウルトラタラックスT18）にて、20,000rpmで30秒間乳化しW/Oエマルションを調製した。調製したW/Oエマルションを0.5％ポリビニルアルコール（クラレクラレポバール220C）5 mL中に、ホモジナイザー（IKAウルトラタラックスT18）を用いて、5000rpm、3分間乳化し、W/O/Wエマルションを調製した。調製後、スターラーにより撹拌することで溶媒を留去し、30分後、サンプリングして、光学顕微鏡観察した。半球の間に境界線が認められる微粒子が認められたことに加え、水滴が一方の半球に分布した形態が観察できた（図１３）。光学顕微鏡観察によると、ヤヌス微粒子の粒子径は１〜100μmであった。【００４５】
実施例１３
キトサン（和光純薬Chitosan 100）1.0gを0.5%酢酸水溶液500ｍLに溶解し、精製水4500ｍLを加えて、キトサン溶液を調製した。調製したキトサン溶液をスプレードライ装置（PulvisGB22      ヤマト科学）にて、Inlet temperature 120℃、drying air 0.55m2/min、Pump0.5目盛、atomizing air0.15Mpaの条件下、スプレードライを行い、キトサン微粒子を調製した（電子顕微鏡観察によると粒子径0.5〜1μｍ）。
乳酸・グリコール酸コポリマー（和光純薬LGA5020）100 mg、および、SUPPCIRE AM PASILLES (GATTEFOSSE)100 mgを塩化メチレン1mL中に溶解させた溶液に、５％オイルレッドO含有塩化メチレン溶液5滴を加え、キトサン微粒子20mgをバスソニケーターにて、分散し、S/Oエマルションを調製した。調製したS/Oエマルションを0.5％ポリビニルアルコール（クラレクラレポバール220C）5 mL中に、ホモジナイザー（IKAウルトラタラックスT18）を用いて、5000rpm、3分間乳化し、S/O/Wエマルションを調製した。光学顕微鏡観察したところ以下のことが分かった（図１４）。1．半球の間に境界線が認められる微粒子が認められた、2.オイルレッドOで1方の半球のみが染色された、3．非染色半球にはキトサン微粒子が分布した。光学顕微鏡観察によると、ヤヌス微粒子の粒子径は１〜100μmであった。【００４６】
実施例２１〜５０（各種脂質を使用した実施例）
乳酸・グリコール酸コポリマー（和光純薬LGA5020）150 mgおよび下記表１に記載した脂質150 mgを塩化メチレン2mL中に溶解させた溶液を、0.5％ポリビニルアルコール（クラレクラレポバール220C）5 mL中に、ホモジナイザー（ULTRA-TURRAX（登録商標）T25digital IKA（登録商標） Model:T25DS1）を用いて、5000rpm、3分間乳化した。乳化後、スターラーにより撹拌することで溶媒を留去し、下記表１に示す所定の時間後、サンプリングして、光学顕微鏡観察した。半球の間に境界線が認められる微粒子が認められた（図１５〜図２５）。光学顕微鏡観察によると、実施例２１〜５０のヤヌス微粒子の粒子径は１〜100μmであった。【００４７】
実施例５１
ポリ乳酸（和光純薬PLA0020）150 mgおよびSUPPOCIRE AM PELLETS (水酸基価 5mgKOH/g 融点 35.0-36.5℃)(GATTEFOSSE) 150 mgを塩化メチレン2mL中に溶解させた溶液を、0.5％ポリビニルアルコール（クラレクラレポバール220C）5 mL中に、ホモジナイザー（ULTRA-TURRAX（登録商標）T25digital IKA（登録商標）Model:T25DS1）を用いて、5000rpm、3分間乳化した。乳化後、スターラーにより撹拌することで溶媒を留去し、1時間後、サンプリングして、光学顕微鏡観察した。半球の間に境界線が認められる微粒子が認められた（図２６）。光学顕微鏡観察によると、ヤヌス微粒子の粒子径は１〜100μmであった。【００４８】
実施例５２
ポリ乳酸（和光純薬PLA0020）75 mgと乳酸・グリコール酸コポリマー（和光純薬LGA5020）75 mgおよびSUPPOCIRE AM PELLETS (水酸基価 5mgKOH/g 融点 35.0-36.5℃) (GATTEFOSSE) 150 mgを塩化メチレン2mL中に溶解させた溶液を、0.5％ポリビニルアルコール（クラレクラレポバール220C）5 mL中に、ホモジナイザー（ULTRA-TURRAX（登録商標）T25digital IKA（登録商標）Model:T25DS1）を用いて、5000rpm、3分間乳化した。乳化後、スターラーにより撹拌することで溶媒を留去し、1時間後、サンプリングして、光学顕微鏡観察した。半球の間に境界線が認められる微粒子が認められた（図２７）。光学顕微鏡観察によると、ヤヌス微粒子の粒子径は１〜100μmであった。【００４９】
【表１】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【国際調査報告】
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