(57)【要約】  下記一般式（Ｉ）：2014196624.tif 000115[式中、環Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、明細書中に記載の定義を表す。]で表されるピリドン誘導体またはその塩を有効成分とする、血小板の機能を維持するための組成物。
2014196624.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ｉ）：
【化１】
2014196624.tif 000100
[式中、環Ａは、アリール、ヘテロアリールまたは下記一般式（a）で表される基：
【化２】
2014196624.tif 000101
（式中、Z１およびZ２は、それぞれ独立して−ＣＨ２−または−Ｏ−、ｎ１は、１〜３の整数を示す。）、
Ｒ１は、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、ニトロ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、カルボキシル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシ基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル基、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいシクロへキシルアルキルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基、置換されていてもよいアルケニルアルキル基、置換されていてもよいシクロアルケニル基、置換されていてもよいシクロアルケニルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニルアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基もしくは置換されていてもよいアルキニルアルキル基、または
−Ｊ1−Ｘ1−Ｒ5
〔式中、Ｊ1は単結合、アルキレン、アルケニレンもしくはアルキニレン、Ｘ1は単結合、酸素原子、硫黄原子、ＳＯ、ＳＯ2、−ＣＯ−、−ＮＲ6−、−ＮＲ6ＳＯ2−、−ＳＯ2ＮＲ6−、−ＮＲ6ＣＯ−、−ＣＯＮＲ6−、−ＮＲ6ＣＯＯ−、−ＯＣＯＮＲ6−、−ＮＲ6ＣＯＮＲ7−もしくは−ＮＲ6ＳＯ2ＮＲ7−（式中、Ｒ6およびＲ7はそれぞれ独立して水素原子もしくはＣ１〜Ｃ６アルキル基を示す。）、
Ｒ5は水素原子、トリフルオロメチル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシ基、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいシクロアルキルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基、下記一般式（b）で表される基：
【化３】
2014196624.tif 000102
（式中、ｎ２は、１〜３、ｎ３は、０〜３の整数を示す。）、
置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基、置換されていてもよいアルケニルアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基もしくは置換されていてもよいアルキニルアルキル基を示す。〕、
Ｒ２は水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、カルボキシル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル基、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいシクロへキシルアルキルアルキル、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基、置換されていてもよいアルケニルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニルアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基または置換されていてもよいアルキニルアルキル基、
Ｒ３は水素原子、ハロゲン原子またはＣ１〜Ｃ６アルキル基、
Ｒ４は水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基、ヒドロキシメチル基、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基またはＣ２〜Ｃ６アルケニル基、を示す。]
で表されるピリドン誘導体またはその塩を有効成分とする、血小板の機能を維持するための組成物。
【請求項２】
前記一般式（Ｉ）で表わされる化合物が、
（＋）−５−（３，４−ジフルオロフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン
である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
血小板の機能を維持するための試薬または血小板を含む血液製剤への添加剤である、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
巨核球に分化し得る細胞から巨核球に分化誘導させ、該巨核球から血小板を産生させる培養系に、下記一般式（Ｉ）：
【化４】
2014196624.tif 000103
[式中、環Ａは、アリール、ヘテロアリールまたは下記一般式（a）で表される基：
【化５】
2014196624.tif 000104
（式中、Z１およびZ２は、それぞれ独立して−ＣＨ２−または−Ｏ−、ｎ１は、１〜３の整数を示す。）、
Ｒ１は、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、ニトロ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、カルボキシル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシ基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル基、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいシクロへキシルアルキルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基、置換されていてもよいアルケニルアルキル基、置換されていてもよいシクロアルケニル基、置換されていてもよいシクロアルケニルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニルアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基もしくは置換されていてもよいアルキニルアルキル基、または
−Ｊ1−Ｘ1−Ｒ5
〔式中、Ｊ1は単結合、アルキレン、アルケニレンもしくはアルキニレン、Ｘ1は単結合、酸素原子、硫黄原子、ＳＯ、ＳＯ2、−ＣＯ−、−ＮＲ6−、−ＮＲ6ＳＯ2−、−ＳＯ2ＮＲ6−、−ＮＲ6ＣＯ−、−ＣＯＮＲ6−、−ＮＲ6ＣＯＯ−、−ＯＣＯＮＲ6−、−ＮＲ6ＣＯＮＲ7−もしくは−ＮＲ6ＳＯ2ＮＲ7−（式中、Ｒ6およびＲ7はそれぞれ独立して水素原子もしくはＣ１〜Ｃ６アルキル基を示す。）、
Ｒ5は水素原子、トリフルオロメチル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシ基、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいシクロアルキルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基、下記一般式（b）で表される基：
【化６】
2014196624.tif 000105
（式中、ｎ２は、１〜３、ｎ３は、０〜３の整数を示す。）、
置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基、置換されていてもよいアルケニルアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基もしくは置換されていてもよいアルキニルアルキル基を示す。〕、
Ｒ２は水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、カルボキシル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル基、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいシクロへキシルアルキルアルキル、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基、置換されていてもよいアルケニルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニルアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基または置換されていてもよいアルキニルアルキル基、
Ｒ３は水素原子、ハロゲン原子またはＣ１〜Ｃ６アルキル基、
Ｒ４は水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基、ヒドロキシメチル基、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基またはＣ２〜Ｃ６アルケニル基、を示す。]
で表されるピリドン誘導体またはその塩を添加することを含む、血小板を調製するための方法。
【請求項５】
前記一般式（Ｉ）で表わされる化合物が、
（＋）−５−（３，４−ジフルオロフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン
である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記培養系における培養温度が３５〜３９℃であることを含む、請求項４または５に記載の方法。
【請求項７】
巨核球に分化し得る細胞から巨核球に分化誘導させ、該巨核球から血小板を産生させる培養系に、下記一般式（Ｉ）：
【化７】
2014196624.tif 000106
[式中、環Ａは、アリール、ヘテロアリールまたは下記一般式（a）で表される基：
【化８】
2014196624.tif 000107
（式中、Z１およびZ２は、それぞれ独立して−ＣＨ２−または−Ｏ−、ｎ１は、１〜３の整数を示す。）、
Ｒ１は、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、ニトロ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、カルボキシル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシ基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル基、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいシクロへキシルアルキルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基、置換されていてもよいアルケニルアルキル基、置換されていてもよいシクロアルケニル基、置換されていてもよいシクロアルケニルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニルアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基もしくは置換されていてもよいアルキニルアルキル基、または
−Ｊ1−Ｘ1−Ｒ5
〔式中、Ｊ1は単結合、アルキレン、アルケニレンもしくはアルキニレン、Ｘ1は単結合、酸素原子、硫黄原子、ＳＯ、ＳＯ2、−ＣＯ−、−ＮＲ6−、−ＮＲ6ＳＯ2−、−ＳＯ2ＮＲ6−、−ＮＲ6ＣＯ−、−ＣＯＮＲ6−、−ＮＲ6ＣＯＯ−、−ＯＣＯＮＲ6−、−ＮＲ6ＣＯＮＲ7−もしくは−ＮＲ6ＳＯ2ＮＲ7−（式中、Ｒ6およびＲ7はそれぞれ独立して水素原子もしくはＣ１〜Ｃ６アルキル基を示す。）、
Ｒ5は水素原子、トリフルオロメチル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシ基、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいシクロアルキルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基、下記一般式（b）で表される基：
【化９】
2014196624.tif 000108
（式中、ｎ２は、１〜３、ｎ３は、０〜３の整数を示す。）、
置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基、置換されていてもよいアルケニルアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基もしくは置換されていてもよいアルキニルアルキル基を示す。〕、
Ｒ２は水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、カルボキシル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル基、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいシクロへキシルアルキルアルキル、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基、置換されていてもよいアルケニルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニルアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基または置換されていてもよいアルキニルアルキル基、
Ｒ３は水素原子、ハロゲン原子またはＣ１〜Ｃ６アルキル基、
Ｒ４は水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基、ヒドロキシメチル基、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基またはＣ２〜Ｃ６アルケニル基、を示す。]
で表されるピリドン誘導体またはその塩を添加した培養物。
【請求項８】
前記一般式（Ｉ）で表わされる化合物が、
（＋）−５−（３，４−ジフルオロフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン
である、請求項７に記載の培養物。
【請求項９】
下記一般式（Ｉ）：
【化１０】
2014196624.tif 000109
[式中、環Ａは、アリール、ヘテロアリールまたは下記一般式（a）で表される基：
【化１１】
2014196624.tif 000110
（式中、Z１およびZ２は、それぞれ独立して−ＣＨ２−または−Ｏ−、ｎ１は、１〜３の整数を示す。）、
Ｒ１は、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、ニトロ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、カルボキシル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシ基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル基、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいシクロへキシルアルキルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基、置換されていてもよいアルケニルアルキル基、置換されていてもよいシクロアルケニル基、置換されていてもよいシクロアルケニルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニルアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基もしくは置換されていてもよいアルキニルアルキル基、または
−Ｊ1−Ｘ1−Ｒ5
〔式中、Ｊ1は単結合、アルキレン、アルケニレンもしくはアルキニレン、Ｘ1は単結合、酸素原子、硫黄原子、ＳＯ、ＳＯ2、−ＣＯ−、−ＮＲ6−、−ＮＲ6ＳＯ2−、−ＳＯ2ＮＲ6−、−ＮＲ6ＣＯ−、−ＣＯＮＲ6−、−ＮＲ6ＣＯＯ−、−ＯＣＯＮＲ6−、−ＮＲ6ＣＯＮＲ7−もしくは−ＮＲ6ＳＯ2ＮＲ7−（式中、Ｒ6およびＲ7はそれぞれ独立して水素原子もしくはＣ１〜Ｃ６アルキル基を示す。）、
Ｒ5は水素原子、トリフルオロメチル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシ基、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいシクロアルキルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基、下記一般式（b）で表される基：
【化１２】
2014196624.tif 000111
（式中、ｎ２は、１〜３、ｎ３は、０〜３の整数を示す。）、
置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基、置換されていてもよいアルケニルアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基もしくは置換されていてもよいアルキニルアルキル基を示す。〕、
Ｒ２は水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、カルボキシル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル基、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいシクロへキシルアルキルアルキル、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基、置換されていてもよいアルケニルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニルアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基または置換されていてもよいアルキニルアルキル基、
Ｒ３は水素原子、ハロゲン原子またはＣ１〜Ｃ６アルキル基、
Ｒ４は水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基、ヒドロキシメチル基、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基またはＣ２〜Ｃ６アルケニル基、を示す。]
で表されるピリドン誘導体またはその塩が添加された、血小板を含む血液製剤。
【請求項１０】
前記一般式（Ｉ）で表わされる化合物が、
（＋）−５−（３，４−ジフルオロフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン
である、請求項９に記載の血液製剤。
【請求項１１】
下記一般式（Ｉ）：
【化１３】
2014196624.tif 000112
[式中、環Ａは、アリール、ヘテロアリールまたは下記一般式（a）で表される基：
【化１４】
2014196624.tif 000113
（式中、Z１およびZ２は、それぞれ独立して−ＣＨ２−または−Ｏ−、ｎ１は、１〜３の整数を示す。）、
Ｒ１は、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、ニトロ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、カルボキシル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシ基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル基、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいシクロへキシルアルキルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基、置換されていてもよいアルケニルアルキル基、置換されていてもよいシクロアルケニル基、置換されていてもよいシクロアルケニルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニルアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基もしくは置換されていてもよいアルキニルアルキル基、または
−Ｊ1−Ｘ1−Ｒ5
〔式中、Ｊ1は単結合、アルキレン、アルケニレンもしくはアルキニレン、Ｘ1は単結合、酸素原子、硫黄原子、ＳＯ、ＳＯ2、−ＣＯ−、−ＮＲ6−、−ＮＲ6ＳＯ2−、−ＳＯ2ＮＲ6−、−ＮＲ6ＣＯ−、−ＣＯＮＲ6−、−ＮＲ6ＣＯＯ−、−ＯＣＯＮＲ6−、−ＮＲ6ＣＯＮＲ7−もしくは−ＮＲ6ＳＯ2ＮＲ7−（式中、Ｒ6およびＲ7はそれぞれ独立して水素原子もしくはＣ１〜Ｃ６アルキル基を示す。）、
Ｒ5は水素原子、トリフルオロメチル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシ基、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいシクロアルキルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基、下記一般式（b）で表される基：
【化１５】
2014196624.tif 000114
（式中、ｎ２は、１〜３、ｎ３は、０〜３の整数を示す。）、
置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基、置換されていてもよいアルケニルアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基もしくは置換されていてもよいアルキニルアルキル基を示す。〕、
Ｒ２は水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、カルボキシル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル基、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいシクロへキシルアルキルアルキル、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基、置換されていてもよいアルケニルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニルアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基または置換されていてもよいアルキニルアルキル基、
Ｒ３は水素原子、ハロゲン原子またはＣ１〜Ｃ６アルキル基、
Ｒ４は水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基、ヒドロキシメチル基、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基またはＣ２〜Ｃ６アルケニル基、を示す。]
で表されるピリドン誘導体またはその塩を、血小板を含む血液製剤に添加することを含む、血液製剤における血小板の機能を維持するための方法。
【請求項１２】
前記一般式（Ｉ）で表わされる化合物が、
（＋）−５−（３，４−ジフルオロフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン
である、請求項１１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ピリドン誘導体を利用した、血小板の機能を維持するための組成物、血小板を調製するための方法、血小板を含む血液製剤、並びに血液製剤における血小板の機能を維持するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
血小板は血液凝固（止血）において必須であるため、白血病、骨髄移植、抗癌治療などにおける需要が極めて高い。
血小板の製造は、献血血液から採取する方法、臍帯血又は骨髄細胞から巨核球を分化させる方法、造血前駆細胞を生体外において増殖させ、これらの前駆細胞から血小板を調製する方法などが試みられている。例えば、本発明者らによって、ヒト胚性幹細胞（ＥＳ細胞）から造血前駆細胞を内包するネット様構造物を調製し、このネット様構造物から比較的大量かつ効率的に血小板の産生を行う方法（特許文献１）や、人工多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）からインビトロの培養系により、成熟巨核細胞および血小板を効率的に調製する方法（特許文献２）等が報告されている。【０００３】
血小板と細胞外マトリックスとの結合は、血液凝固（止血、血栓形成など）が誘導される上で重要な過程である。この過程は、血小板受容体ＧＰＩｂ（ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｂ、糖タンパク質Ｉｂ）が、αサブユニット（ＧＰＩｂα）を介してフォン・ウィルブランド因子（ｖｏｎ  Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ  ｆａｃｔｏｒ：ＶＷＦ）と結合することよって、開始されると考えられている。しかしながら、３７℃付近の条件下においては、メタロプロテアーゼのＡＤＡＭ１７（ａ  ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ  ａｎｄ  ｍｅｔａｌｌｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ  ｄｏｍａｉｎ  １７）がＧＰＩｂαの細胞外領域をシェディング（Ｓｈｅｄｄｉｎｇ、切断して除去）してしまうことにより、ＧＰＩｂαとＶＷＦとの会合が阻害され、血小板の血液凝固機能が失われてしまうことが報告されている（非特許文献１及び非特許文献２）。【０００４】
このためインビトロにおいて調製した血小板の機能を維持するためには、少なくともＡＤＡＭ１７の活性を抑制する必要があることが予想される。実際、本発明者らによって、メタロプロテアーゼ活性を直接阻害する阻害剤（ＧＭ６００１等）を、タイミング良く添加することにより、インビトロにおいて調製した血小板の機能を維持できることが報告されている（特許文献３）。また、ＡＤＡＭ１７阻害活性を有するＮ−ヒドロキシホルムアミド誘導体でも血小板機能を維持できることが報告されている（特許文献４）。この報告では、ＡＤＡＭ１７選択性を高めることで、機能的血小板の産生数を高めることを明らかにしている。
このように、血小板機能を維持する方法は、血小板の製造や輸血用血小板製剤の保存法として重要であり、本発明者らによる研究を始め、研究がなされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開２００８／０４１３７０号パンフレット
【特許文献２】国際公開２００９／１２２７４７号パンフレット
【特許文献３】国際公開２００９／１１９１０５号パンフレット
【特許文献４】国際公開２０１２／０３６２５７号パンフレット
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｂｅｒｇｍｅｉｅｒら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００４年、９５巻、６７７〜６８３ページ
【非特許文献２】Ｂｅｒｇｍｅｉｅｒら、Ｂｌｏｏｄ、２００３年、１０２巻、４２２９〜４２３５ページ
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上述のとおり血小板自体を細胞外において調製する方法の研究は進展しているものの、調製された血小板の機能を維持するような作用を有する新たな化合物に対する需要は依然として存在し続けている。
したがって、本発明の目的は、ＡＤＡＭ１７のメタロプロテアーゼ活性を特異的に抑制し、ＧＰＩｂαのシェディングを抑制することによって、血小板の機能を維持することを可能とする新たな化合物を特定することにある。さらなる本発明の目的は、当該特定した化合物を利用して、血小板の機能を維持する組成物を提供すること、効率的に血小板を産生すること、および血液製剤の品質維持の向上を可能とすることにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記目的を達成すべく、ｉＰＳ細胞等に由来する造血前駆細胞から巨核球への分化誘導や、該巨核球からの血小板産生の培養において生じるＡＤＡＭ１７によるＧＰＩｂαのシェディングを特異的に抑制しうる化合物の探索を行った。その結果、ある特定の構造を有する化合物群が、ＡＤＡＭ１７に対して特異的な阻害作用を有すること、さらには当該化合物を、血小板を産生させる培養系やヒト末梢血由来の血小板に添加した場合、ＧＰＩｂαのシェディングが抑制され、３７℃付近の温度条件下においても血小板の機能が維持されることを見出した。すなわち、当該化合物のこのような作用から、当該化合物及びその類縁体が効率的な血小板の産生や血小板を含む血液製剤の品質維持の向上などにおいて極めて有用であることを見出し、本発明を完成するに至った。【０００９】
より詳しくは、本発明は、少なくとも以下の発明に関する。
（１）下記一般式（Ｉ）：
【化１】
2014196624.tif 000003
[式中、環Ａは、アリール、ヘテロアリールまたは下記一般式（a）で表される基：
【化２】
2014196624.tif 000004
（式中、Z１およびZ２は、それぞれ独立して−ＣＨ２−または−Ｏ−、ｎ１は、１〜３の整数を示す。）、
Ｒ１は、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、ニトロ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、カルボキシル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシ基、置換されてもいてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル基、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいシクロへキシルアルキルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基、置換されていてもよいアルケニルアルキル基、置換されていてもよいシクロアルケニル基、置換されていてもよいシクロアルケニルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニルアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基もしくは置換されていてもよいアルキニルアルキル基、または
−Ｊ1−Ｘ1−Ｒ5
〔式中、Ｊ1は単結合、アルキレン、アルケニレンもしくはアルキニレン、Ｘ1は単結合、酸素原子、硫黄原子、ＳＯ、ＳＯ2、−ＣＯ−、−ＮＲ6−、−ＮＲ6ＳＯ2−、−ＳＯ2ＮＲ6−、−ＮＲ6ＣＯ−、−ＣＯＮＲ6−、−ＮＲ6ＣＯＯ−、−ＯＣＯＮＲ6−、−ＮＲ6ＣＯＮＲ7−もしくは−ＮＲ6ＳＯ2ＮＲ7−（式中、Ｒ6およびＲ7はそれぞれ独立して水素原子もしくはＣ１〜Ｃ６アルキル基を示す。）、
Ｒ5は水素原子、トリフルオロメチル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシ基、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいシクロアルキルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基、下記一般式（b）で表される基：
【化３】
2014196624.tif 000005
（式中、ｎ２は、１〜３、ｎ３は、０〜３の整数を示す。）、
置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基、置換されていてもよいアルケニルアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基もしくは置換されていてもよいアルキニルアルキル基を示す。〕、
Ｒ２は水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、カルボキシル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル基、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいシクロへキシルアルキルアルキル、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基、置換されていてもよいアルケニルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニルアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基または置換されていてもよいアルキニルアルキル基、
Ｒ３は水素原子、ハロゲン原子またはＣ１〜Ｃ６アルキル基、
Ｒ４は水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基、ヒドロキシメチル基、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基またはＣ２〜Ｃ６アルケニル基、を示す。]
で表されるピリドン誘導体またはその塩を有効成分とする、血小板の機能を維持するための組成物。【００１０】
（２）前記一般式（Ｉ）で表わされる化合物が、
（＋）−５−（３，４−ジフルオロフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン
である、（１）に記載の組成物。
（３）血小板の機能を維持するための試薬または血小板を含む血液製剤への添加剤である、（１）または（２）に記載の組成物。【００１１】
（４）巨核球に分化し得る細胞から巨核球に分化誘導させ、該巨核球から血小板を産生させる培養系に、下記一般式（Ｉ）：
【化４】
2014196624.tif 000006
[式中、環Ａは、アリール、ヘテロアリールまたは下記一般式（a）で表される基：
【化５】
2014196624.tif 000007
（式中、Z１およびZ２は、それぞれ独立して−ＣＨ２−または−Ｏ−、ｎ１は、１〜３の整数を示す。）、
Ｒ１は、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、ニトロ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、カルボキシル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシ基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル基、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいシクロへキシルアルキルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基、置換されていてもよいアルケニルアルキル基、置換されていてもよいシクロアルケニル基、置換されていてもよいシクロアルケニルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニルアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基もしくは置換されていてもよいアルキニルアルキル基、または
−Ｊ1−Ｘ1−Ｒ5
〔式中、Ｊ1は単結合、アルキレン、アルケニレンもしくはアルキニレン、Ｘ1は単結合、酸素原子、硫黄原子、ＳＯ、ＳＯ2、−ＣＯ−、−ＮＲ6−、−ＮＲ6ＳＯ2−、−ＳＯ2ＮＲ6−、−ＮＲ6ＣＯ−、−ＣＯＮＲ6−、−ＮＲ6ＣＯＯ−、−ＯＣＯＮＲ6−、−ＮＲ6ＣＯＮＲ7−もしくは−ＮＲ6ＳＯ2ＮＲ7−（式中、Ｒ6およびＲ7はそれぞれ独立して水素原子もしくはＣ１〜Ｃ６アルキル基を示す。）、
Ｒ5は水素原子、トリフルオロメチル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシ基、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいシクロアルキルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基、下記一般式（b）で表される基：
【化６】
2014196624.tif 000008
（式中、ｎ２は、１〜３、ｎ３は、０〜３の整数を示す。）、
置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基、置換されていてもよいアルケニルアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基もしくは置換されていてもよいアルキニルアルキル基を示す。〕、
Ｒ２は水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、カルボキシル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル基、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいシクロへキシルアルキルアルキル、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基、置換されていてもよいアルケニルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニルアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基または置換されていてもよいアルキニルアルキル基、
Ｒ３は水素原子、ハロゲン原子またはＣ１〜Ｃ６アルキル基、
Ｒ４は水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基、ヒドロキシメチル基、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基またはＣ２〜Ｃ６アルケニル基、を示す。]
で表されるピリドン誘導体またはその塩を添加することを含む、血小板を調製するための方法。【００１２】
（５）前記一般式（Ｉ）で表わされる化合物が、
（＋）−５−（３，４−ジフルオロフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン
である、（４）に記載の方法。
（６）前記培養系における培養温度が３５〜３９℃であることを含む、（４）または（５）に記載の方法。【００１３】
（７）巨核球に分化し得る細胞から巨核球に分化誘導させ、該巨核球から血小板を産生させる培養系に、下記一般式（Ｉ）：
【化７】
2014196624.tif 000009
[式中、環Ａは、アリール、ヘテロアリールまたは下記一般式（a）で表される基：
【化８】
2014196624.tif 000010
（式中、Z１およびZ２は、それぞれ独立して−ＣＨ２−または−Ｏ−、ｎ１は、１〜３の整数を示す。）、
Ｒ１は、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、ニトロ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、カルボキシル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシ基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル基、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいシクロへキシルアルキルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基、置換されていてもよいアルケニルアルキル基、置換されていてもよいシクロアルケニル基、置換されていてもよいシクロアルケニルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニルアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基もしくは置換されていてもよいアルキニルアルキル基、または
−Ｊ1−Ｘ1−Ｒ5
〔式中、Ｊ1は単結合、アルキレン、アルケニレンもしくはアルキニレン、Ｘ1は単結合、酸素原子、硫黄原子、ＳＯ、ＳＯ2、−ＣＯ−、−ＮＲ6−、−ＮＲ6ＳＯ2−、−ＳＯ2ＮＲ6−、−ＮＲ6ＣＯ−、−ＣＯＮＲ6−、−ＮＲ6ＣＯＯ−、−ＯＣＯＮＲ6−、−ＮＲ6ＣＯＮＲ7−もしくは−ＮＲ6ＳＯ2ＮＲ7−（式中、Ｒ6およびＲ7はそれぞれ独立して水素原子もしくはＣ１〜Ｃ６アルキル基を示す。）、
Ｒ5は水素原子、トリフルオロメチル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシ基、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいシクロアルキルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基、下記一般式（b）で表される基：
【化９】
2014196624.tif 000011
（式中、ｎ２は、１〜３、ｎ３は、０〜３の整数を示す。）、
置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基、置換されていてもよいアルケニルアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基もしくは置換されていてもよいアルキニルアルキル基を示す。〕、
Ｒ２は水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、カルボキシル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル基、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいシクロへキシルアルキルアルキル、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基、置換されていてもよいアルケニルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニルアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基または置換されていてもよいアルキニルアルキル基、
Ｒ３は水素原子、ハロゲン原子またはＣ１〜Ｃ６アルキル基、
Ｒ４は水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基、ヒドロキシメチル基、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基またはＣ２〜Ｃ６アルケニル基、を示す。]
で表されるピリドン誘導体またはその塩を添加した培養物。【００１４】
（８）前記一般式（Ｉ）で表わされる化合物が、
（＋）−５−（３，４−ジフルオロフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン
である、（７）に記載の培養物。【００１５】
（９）下記一般式（Ｉ）：
【化１０】
2014196624.tif 000012
[式中、環Ａは、アリール、ヘテロアリールまたは下記一般式（a）で表される基：
【化１１】
2014196624.tif 000013
（式中、Z１およびZ２は、それぞれ独立して−ＣＨ２−または−Ｏ−、ｎ１は、１〜３の整数を示す。）、
Ｒ１は、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、ニトロ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、カルボキシル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシ基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル基、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいシクロへキシルアルキルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基、置換されていてもよいアルケニルアルキル基、置換されていてもよいシクロアルケニル基、置換されていてもよいシクロアルケニルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニルアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基もしくは置換されていてもよいアルキニルアルキル基、または
−Ｊ1−Ｘ1−Ｒ5
〔式中、Ｊ1は単結合、アルキレン、アルケニレンもしくはアルキニレン、Ｘ1は単結合、酸素原子、硫黄原子、ＳＯ、ＳＯ2、−ＣＯ−、−ＮＲ6−、−ＮＲ6ＳＯ2−、−ＳＯ2ＮＲ6−、−ＮＲ6ＣＯ−、−ＣＯＮＲ6−、−ＮＲ6ＣＯＯ−、−ＯＣＯＮＲ6−、−ＮＲ6ＣＯＮＲ7−もしくは−ＮＲ6ＳＯ2ＮＲ7−（式中、Ｒ6およびＲ7はそれぞれ独立して水素原子もしくはＣ１〜Ｃ６アルキル基を示す。）、
Ｒ5は水素原子、トリフルオロメチル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシ基、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいシクロアルキルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基、下記一般式（b）で表される基：
【化１２】
2014196624.tif 000014
（式中、ｎ２は、１〜３、ｎ３は、０〜３の整数を示す。）、
置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基、置換されていてもよいアルケニルアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基もしくは置換されていてもよいアルキニルアルキル基を示す。〕、
Ｒ２は水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、カルボキシル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル基、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいシクロへキシルアルキルアルキル、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基、置換されていてもよいアルケニルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニルアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基または置換されていてもよいアルキニルアルキル基、
Ｒ３は水素原子、ハロゲン原子またはＣ１〜Ｃ６アルキル基、
Ｒ４は水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基、ヒドロキシメチル基、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基またはＣ２〜Ｃ６アルケニル基、を示す。]
で表されるピリドン誘導体またはその塩が添加された、血小板を含む血液製剤。【００１６】
（１０）前記一般式（Ｉ）で表わされる化合物が、
（＋）−５−（３，４−ジフルオロフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン
である、（９）に記載の血液製剤。【００１７】
（１１）下記一般式（Ｉ）：
【化１３】
2014196624.tif 000015
[式中、環Ａは、アリール、ヘテロアリールまたは下記一般式（a）で表される基：
【化１４】
2014196624.tif 000016
（式中、Z１およびZ２は、それぞれ独立して−ＣＨ２−または−Ｏ−、ｎ１は、１〜３の整数を示す。）、
Ｒ１は、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、ニトロ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、カルボキシル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシ基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル基、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいシクロへキシルアルキルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基、置換されていてもよいアルケニルアルキル基、置換されていてもよいシクロアルケニル基、置換されていてもよいシクロアルケニルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニルアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基もしくは置換されていてもよいアルキニルアルキル基、または
−Ｊ1−Ｘ1−Ｒ5
〔式中、Ｊ1は単結合、アルキレン、アルケニレンもしくはアルキニレン、Ｘ1は単結合、酸素原子、硫黄原子、ＳＯ、ＳＯ2、−ＣＯ−、−ＮＲ6−、−ＮＲ6ＳＯ2−、−ＳＯ2ＮＲ6−、−ＮＲ6ＣＯ−、−ＣＯＮＲ6−、−ＮＲ6ＣＯＯ−、−ＯＣＯＮＲ6−、−ＮＲ6ＣＯＮＲ7−もしくは−ＮＲ6ＳＯ2ＮＲ7−（式中、Ｒ6およびＲ7はそれぞれ独立して水素原子もしくはＣ１〜Ｃ６アルキル基を示す。）、
Ｒ5は水素原子、トリフルオロメチル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシ基、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいシクロアルキルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基、下記一般式（b）で表される基：
【化１５】
2014196624.tif 000017
（式中、ｎ２は、１〜３、ｎ３は、０〜３の整数を示す。）、
置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基、置換されていてもよいアルケニルアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基もしくは置換されていてもよいアルキニルアルキル基を示す。〕、
Ｒ２は水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、カルボキシル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル基、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいシクロへキシルアルキルアルキル、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基、置換されていてもよいアルケニルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニルアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基または置換されていてもよいアルキニルアルキル基、
Ｒ３は水素原子、ハロゲン原子またはＣ１〜Ｃ６アルキル基、
Ｒ４は水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基、ヒドロキシメチル基、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基またはＣ２〜Ｃ６アルケニル基、を示す。]
で表されるピリドン誘導体またはその塩を、血小板を含む血液製剤に添加することを含む、血液製剤における血小板の機能を維持するための方法。【００１８】
（１２）前記一般式（Ｉ）で表わされる化合物が、
（＋）−５−（３，４−ジフルオロフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン
である、（１１）に記載の方法。
【発明の効果】
【００１９】
本発明のピリドン誘導体によれば、ＡＤＡＭ１７のメタロプロテアーゼ活性を特異的に抑制し、ＧＰＩｂαのシェディングを抑制することによって、３７℃付近の温度条件下においても血小板の機能を維持することが可能である。従って、当該誘導体によれば、インビトロにおいて、機能的に安定した血小板を生産することが可能であり、また、血小板を含む血液製剤の品質の安定化が可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】＜プロトコール１＞は、ｉＰＳ細胞由来の造血前駆細胞から巨核球／血小板への誘導する過程において、本発明にかかる化合物（Ｓ−１０８４７０）等を添加した時期を示す。＜プロトコール２＞は、ヒトの末梢血から洗浄血小板を調製し、本発明にかかる化合物（Ｓ−１０８４７０）等を添加したことを示す。
【図２】Ｓ−１０８４７０のｉＰＳ細胞由来血小板の産生数に及ぼす影響を示すグラフである。ｉＰＳ細胞から血小板を誘導し、表面マーカーＣＤ４１a（＋）ＣＤ４２a（＋）細胞を計数した。７回実験を繰り返し、その平均＋標準偏差を示す。
【図３】Ｓ−１０８４７０のｉＰＳ細胞由来血小板に対する機能維持効果を示すグラフである。縦軸は、ＣＤ４１a（＋）ＣＤ４２a（＋）血小板におけるＣＤ４２ｂ（ＧＰＩｂα）（＋）細胞の割合を表す。図中、＊＊は、媒体対照（ＤＭＳＯ）に比べてｐ＜０．０１であることを示し、Ｓ−１０８４７０は、ＣＤ４２ｂ（＋）細胞の割合を増加させた。
【図４】Ｓ−１０８４７０の濃度依存的な末梢血由来血小板に対する機能維持効果を示すグラフである。縦軸は、ＣＤ４１a（＋）血小板におけるＣＤ４２ｂ（ＧＰＩｂα）（＋）細胞数の割合を示す。新鮮血小板をＣＣＣＰ処理すると、血小板のＣＤ４２ｂ（ＧＰＩｂα）はシェディングされ、媒体対照（ＤＭＳＯ）群のようにＣＤ４２ｂ（ＧＰＩｂα）（＋）細胞数の割合は低下する。これをＳ−１０８４７０は濃度依存的に抑制した。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明の組成物は、
下記一般式（Ｉ）：
【化１６】
2014196624.tif 000018
[式中、環Ａは、アリール、ヘテロアリールまたは下記一般式（a）で表される基：
【化１７】
2014196624.tif 000019
（式中、Z１およびZ２は、それぞれ独立して−ＣＨ２−または−Ｏ−、ｎ１は、１〜３の整数を示す。）、
Ｒ１は、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、ニトロ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、カルボキシル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシ基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル基、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいシクロへキシルアルキルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基、置換されていてもよいアルケニルアルキル基、置換されていてもよいシクロアルケニル基、置換されていてもよいシクロアルケニルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニルアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基もしくは置換されていてもよいアルキニルアルキル基、または
−Ｊ1−Ｘ1−Ｒ5
〔式中、Ｊ1は単結合、アルキレン、アルケニレンもしくはアルキニレン、Ｘ1は単結合、酸素原子、硫黄原子、ＳＯ、ＳＯ2、−ＣＯ−、−ＮＲ6−、−ＮＲ6ＳＯ2−、−ＳＯ2ＮＲ6−、−ＮＲ6ＣＯ−、−ＣＯＮＲ6−、−ＮＲ6ＣＯＯ−、−ＯＣＯＮＲ6−、−ＮＲ6ＣＯＮＲ7−もしくは−ＮＲ6ＳＯ2ＮＲ7−（式中、Ｒ6およびＲ7はそれぞれ独立して水素原子もしくはＣ１〜Ｃ６アルキル基を示す。）、
Ｒ5は水素原子、トリフルオロメチル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシ基、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいシクロアルキルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基、下記一般式（b）で表される基：
【化１８】
2014196624.tif 000020
（式中、ｎ２は、１〜３、ｎ３は、０〜３の整数を示す。）、
置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基、置換されていてもよいアルケニルアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基もしくは置換されていてもよいアルキニルアルキル基を示す。〕、
Ｒ２は水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、カルボキシル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル基、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいシクロへキシルアルキルアルキル、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基、置換されていてもよいアリール基、置換されていてもよいアラルキル基、置換されていてもよいヘテロアリール基、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基、置換されていてもよいアルケニルアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルケニルアルキル基、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基または置換されていてもよいアルキニルアルキル基、
Ｒ３は水素原子、ハロゲン原子またはＣ１〜Ｃ６アルキル基、
Ｒ４は水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基、ヒドロキシメチル基、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基またはＣ２〜Ｃ６アルケニル基、を示す。]
で表されるピリドン誘導体またはその塩を有効成分とする、血小板の機能を維持するための組成物である。
前記一般式（Ｉ）における各置換基について説明するに、同各置換の定義において用いられる用語の意味は以下のとおりである。
「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子またはヨウ素原子である。
「Ｃ１〜Ｃ６アルキル基」とは、直鎖または分岐状の炭素原子数１〜６のアルキル基を意味し、具体例としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、３−メチルブチル基（イソペンチル基）、ネオペンチル基、ｎ−ヘキシル基などがあげられる。
「Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基」とは、前記Ｃ１〜Ｃ６アルキル基に１個またはそれ以上の前記ハロゲン原子が置換可能な任意の位置で置換されたものを意味し、具体例としては、トリフルオロメチル基、ペンタフルオロエチル基、トリクロロメチル基、３−クロロプロピル基、４−ブロモブチル基、１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロプロパン−２−イル基などがあげられる。
「Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基」とは、アルキル部分が、前記Ｃ１〜Ｃ６アルキル基と同義であるアルコキシ基を意味し、たとえば、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、イソブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｎ−ペンチルオキシ基、ｔｅｒｔ−アミルオキシ基、３−メチルブトキシ基、ネオペンチルオキシ基、ｎ−ヘキシルオキシ基などの直鎖または分岐状のアルコキシ基があげられる。
「Ｃ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル基」とは、アルキル部分が、前記Ｃ１〜Ｃ６アルキル基であるアルコキシカルボニル基を意味し、たとえば、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、ｎ−プロポキシカルボニル基、イソプロポキシカルボニル基、ｎ−ブトキシカルボニル基、イソブトキシカルボニル基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基、ｓｅｃ−ブトキシカルボニル基、ｎ−ペンチルオキシカルボニル基、ｔｅｒｔ−アミルオキシカルボニル基、３−メチルブトキシカルボニル基、ネオペンチルオキシカルボニル基、ｎ−ヘキシルオキシカルボニル基などの直鎖または分岐状のＣ１〜Ｃ６のアルコキシカルボニル基があげられる。
【００２２】
「シクロアルキル基」とは、炭素原子数３〜７の単環の飽和炭素環を表し、たとえばシクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基などがあげられる。
「炭素環」とは、３〜１０員の単環式または二環式の炭素原子からなる環を表し、具体例としては、シクロペンテン環、シクロヘキセン環、ベンゼン環などがあげられるが、これらに限定されない。
なお、本明細書において炭素環とは前記「炭素環」を意味するものである。
「シクロアルキルアルキル基」とは、前記Ｃ１〜Ｃ６アルキル基に前記シクロアルキル基が置換したもので、これらは置換可能なすべての位置で結合しうる。たとえば、シクロプロピルメチル基、シクロブチルメチル基、シクロペンチルメチル基、シクロペンチルエチル基（たとえば、２−シクロペンチルエチル基）、シクロヘキシルメチル基、シクロヘキシルプロピル基（たとえば、３−シクロヘキシルプロピル基）などがあげられる。これらのシクロアルキル部分には、任意の置換基を有していてもよい。
「ヘテロシクロアルキル基」とは、飽和の単環の複素環を表わす。たとえば、ピロリジニル基（たとえば、１−ピロリジニル基、２−ピロリジニル基、３−ピロリジニル基）、ピペリジニル基（たとえば、１−ピペリジニル基、４−ピペリジニル基）、ホモピペリジニル基（たとえば、１−ホモピペリジニル基、４−ホモピペリジニル基）、テトラヒドロフラニル基（たとえば、２−テトラヒドロフラニル基、３−テトラヒドロフラニル基）、テトラヒドロピラニル基（たとえば、４−テトラヒドロピラニル基）、ピペラジニル基（たとえば、１−ピペラジニル基）、ホモピペラジニル基（１−ホモピペラジニル基）などがあげられる。
【００２３】
「複素環」とは、炭素原子およびＮ、ＯまたはＳより選択される１〜３個のヘテロ原子からなる、３〜１０員の単環式または二環式の環を表し、ＮおよびＳは酸化されていてもよく、Ｎは四級化されていてもよく、置換されていてもよく、炭素環またはほかの複素環と縮合していてもよく、置換可能なすべての位置で結合し得る。具体例としては、ジオキソール環、オキサチオール環、ジヒドロオキサチイン環、ジヒドロジオキシン環、ジヒドロフラン環、ジヒドロチオフェン環、ジヒドロピロール環、フラン環、チオフェン環、ピロール環、オキサゾール環、チアゾール環、ピリジン環などがあげられるが、これらに限定されない。
なお、本明細書において複素環というときは前記「複素環」を意味するものである。
【００２４】
「ヘテロシクロアルキルアルキル基」とは、前記Ｃ１〜Ｃ６アルキル基に前記ヘテロシクロアルキル基が置換したもので、これらは置換可能なすべての位置で結合しうる。たとえば、ピロリジニルメチル基（たとえば、１−ピロリジニルメチル基、２−ピロリジニルメチル基、３−ピロリジニルメチル基）、ピペリジニルメチル基（たとえば、１−ピペリジニルメチル基、４−ピペリジニルメチル基）、ピペリジニルエチル基（たとえば、１−ピペリジニル−２−エチル基、４−ピペリジニル−２−エチル基）、ホモピペリジニルメチル基（たとえば、１−ホモピペリジニルメチル基、４−ホモピペリジニルメチル基）、テトラヒドロフラニルメチル基（たとえば、２−テトラヒドロフラニルメチル基、３−テトラヒドロフラニルメチル基）、テトラヒドロピラニルメチル基（たとえば、４−テトラヒドロピラニルメチル基）、ピペラジニルメチル基（たとえば、１−ピペラジニルメチル基）、ホモピペラジニルメチル基（１−ホモピペラジニルメチル基）などがあげられる。
「アリール基」とは、芳香族炭素環を表わし、たとえば、フェニル基、ナフチル基などがあげられる。
【００２５】
「アラルキル基」とは、前記Ｃ１〜Ｃ６アルキル基に前記アリール基が置換したもので、これらは置換可能なすべての位置で結合しうる。たとえば、ベンジル基、フェネチル基、１−フェニルエチル基、１−フェニルプロピル基、３−フェニルプロピル基、α−ナフチルメチル基、β−ナフチルメチル基、１−（α−ナフチル）エチル基、２−（α−ナフチル）エチル基などがあげられる。これらのアリール部分には任意の置換基を有していてもよい。
【００２６】
「ヘテロアリール基」とは、５〜１０員の単環式または二環式の芳香族複素環を表わす。たとえば、ピロリル基（たとえば、２−ピロリル基）、フリル基（たとえば、３−フリル基）、チエニル基（たとえば、２−チエニル基）、イミダゾリル基（たとえば、４−イミダゾリル基）、ピラゾリル基（たとえば、３−ピラゾリル基）、オキサゾリル基（たとえば、２−オキサゾリル基）、イソオキサゾリル基（たとえば、３−イソオキサゾリル基）、チアゾリル基（たとえば、２−チアゾリル基）、イソチアゾリル基（たとえば、３−イソチアゾリル基）、ピリジル基（たとえば、２−ピリジル基、３−ピリジル基、４−ピリジル基）、ピリダジニル基（たとえば、３−ピリダジニル基）、ピリミジル基（たとえば、４−ピリミジル基）、ピラジニル基（たとえば、２−ピラジニル基）、インドリル基（たとえば、２−インドリル基、３−インドリル基、４−インドリル基）、ベンゾフリル基（たとえば、２−ベンゾフリル基、５−ベンゾフリル基）、ベンゾチエニル基（たとえば、２−ベンゾチエニル基、５−ベンゾチエニル基）、ベンゾイミダゾリル基（たとえば、２−ベンゾイミダゾリル基）、インダゾリル基（たとえば、４−インダゾリル基）、ベンゾオキサゾリル基（たとえば、４−ベンゾオキサゾリル基）、ベンゾチアゾリル基（たとえば、４−ベンゾチアゾリル基）、ベンゾイソオキサゾリル基（たとえば、４−ベンゾイソオキサゾリル基）、ベンゾイソチアゾリル基（たとえば、４−ベンゾイソチアゾリル基）、キノリル基（たとえば、２−キノリル基、４−キノリル基、５−キノリル基、８−キノリル基）、イソキノリル基（たとえば、１−イソキノリル基、４−イソキノリル基、５−イソキノリル基、８−イソキノリル基）、シンノリニル基（たとえば、４−シンノリニル基、５−シンノリニル基、８−シンノリニル基）、キナゾリニル基（たとえば、４−キナゾリニル基、５−キナゾリニル基、８−キナゾリニル基）、テトラゾリル基（たとえば、２Ｈ−テトラゾール−５−イル基）などがあげられる。これらのヘテロアリール基には任意の置換基を有していてもよい。
【００２７】
「ヘテロアリールアルキル基」とは、前記Ｃ１〜Ｃ６アルキル基に前記ヘテロアリール基が置換したもので、これらは置換可能なすべての位置で結合しうる。たとえば、ピリジルメチル基（たとえば、２−ピリジルメチル基）、オキサゾリルエチル基（たとえば、２−オキサゾリル−２−エチル基）、チアゾリルメチル基（たとえば、４−チアゾリルメチル基）、インドリルメチル基（たとえば、２−インドリルメチル基、３−インドリルメチル基、４−インドリルメチル基）、ベンゾフリルメチル基（たとえば、３−ベンゾフリルメチル基、４−ベンゾフリルメチル基）、ベンゾチエニルメチル基（たとえば、３−ベンゾチエニルメチル基、４−ベンゾチエニルメチル基）、ベンゾチアゾリルメチル基（たとえば、２−ベンゾチアゾリルメチル基）、キノリルメチル基（たとえば、２−キノリルメチル基、４−キノリルメチル基、５−キノリルメチル基、８−キノリルメチル基）、イソキノリルメチル基（たとえば、１−イソキノリルメチル基、４−イソキノリルメチル基、５−イソキノリルメチル基、８−イソキノリルメチル基）、シンノリニルメチル基（たとえば、４−シンノリニルメチル基、５−シンノリニルメチル基、８−シンノリニルメチル基）、キナゾリニルメチル基（たとえば、４−キナゾリニルメチル基、５−キナゾリニルメチル基、８−キナゾリニルメチル基）などがあげられる。これらのヘテロアリール基には任意の置換基を有していてもよい。
【００２８】
「Ｃ２〜Ｃ６アルケニル基」とは、１個またはそれ以上の二重結合をもつ直鎖または分岐状の炭素原子数２〜６のアルケニル基を意味し、具体例としては、ビニル基、１−プロペニル基、イソプロペニル基、１−ブテニル基、イソブテニル基、１，３−ブタジエニル基、２−メチル−１−プロペニル基、１−メチル−１−プロペニル基、１−ペンテニル基、１−ヘキセニル基などがあげられる。
「アルケニルアルキル基」とは、前記Ｃ１〜Ｃ６アルキル基に前記Ｃ２〜Ｃ６アルケニル基が置換したもので、これらは置換可能なすべての位置で結合しうる。たとえばアリル基、２−ペンテニル基、４−ペンテニル基、プレニル基、２−ヘキセニル基、５−ヘキセニル基、２−メチルアリル基、ブト−３−エン−１−イル基、２−メチルブト−３−エン−１−イル基などがあげられる。
「ヘテロシクロアルケニル基」とは、環内の任意の位置に二重結合を１つ有する単環の複素環を表わす。たとえば、ジヒドロフリル基（たとえば、２，５−ジヒドロフラン−３−イル基）、ジヒドロピラニル基（たとえば、５，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル基）、ジヒドロピロリル基（たとえば、３−ピロリン−３−イル基）、テトラヒドロピリジル基（たとえば、１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イル基）、ジヒドロチエニル基（たとえば、２，５−ジヒドロチオフェン−３−イル基）、ジヒドロチオピラニル基（たとえば、５，６−ジヒドロ−２Ｈ−チオピラン−４−イル基）、デヒドロホモピペリジニル基（たとえば、４，５−デヒドロホモピペリジン−４−イル基）などがあげられる。
「ヘテロシクロアルケニルアルキル基」とは、前記Ｃ１〜Ｃ６アルキル基に前記ヘテロシクロアルケニル基が置換したもので、これらは置換可能なすべての位置で結合しうる。たとえば、ジヒドロフリルメチル基（たとえば、２，５−ジヒドロフラン−３−イルメチル基）、ジヒドロピラニルメチル基（たとえば、５，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルメチル基）、ジヒドロピロリルメチル基（たとえば、３−ピロリン−３−イルメチル基）、テトラヒドロピリジルメチル基（たとえば、１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イルメチル基）、テトラヒドロピリジルエチル基（たとえば、１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イル−２−エチル基）、ジヒドロチエニルメチル基（たとえば、２，５−ジヒドロチオフェン−３−イルメチル基）、ジヒドロチオピラニルメチル基（たとえば、５，６−ジヒドロ−２Ｈ−チオピラン−４−イルメチル基）、デヒドロホモピペリジニルメチル基（たとえば、４，５−デヒドロホモピペリジン−４−イルメチル基）などがあげられる。
【００２９】
「Ｃ２〜Ｃ６アルキニル基」とは、１個またはそれ以上の三重結合をもつ直鎖または分岐状の炭素原子数２〜６のアルキニル基を意味し、具体例としては、エチニル基、１−プロピニル基、１−ブチニル基、３−メチル−１−ブチニル基、１，３−ブタジイニル基、１−ペンチニル基、３−メチル−１−ペンチニル基、１−ヘキシニル基などがあげられる。
「アルキニルアルキル基」とは、前記Ｃ１〜Ｃ６アルキル基に前記Ｃ２〜Ｃ６アルキニル基が置換したもので、これらは置換可能なすべての位置で結合しうる。たとえば、２−プロピニル基、２−ブチニル基、２−ペンチニル基、４−メチル−２−ペンチニル基などがあげられる。
【００３０】
「アルキレン」とは、直鎖または分岐状の炭素原子数１〜６のアルキレン基を意味し、具体例としては、−ＣＨ2−、−ＣＨ2ＣＨ2−、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−、−ＣＨ2ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2−などがあげられる。
「アルケニレン」とは、１個またはそれ以上の二重結合をもつ直鎖または分岐状の炭素原子数２〜６のアルケニレン基を意味し、具体例としては、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ2−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−、−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ3）−ＣＨ2−などがあげられる。
「アルキニレン」とは、１個またはそれ以上の三重結合をもつ直鎖または分岐状の炭素原子数２〜６のアルキニレン基を意味し、具体例としては、
【化１９】
2014196624.tif 000021
などがあげられる。
【００３１】
「置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基」、「置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基」、「置換されていてもよいアルケニルアルキル基」、「置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル基」、「置換されていてもよいアルキニルアルキル基」、「置換されていてもよいシクロアルキル基」、「置換されていてもよいシクロアルキルアルキル基」、「置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基」、「置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル基」、「置換されていてもよいヘテロシクロアルケニル基」および「置換されていてもよいヘテロシクロアルケニルアルキル基」における置換基とは、水酸基、ハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、トリフルオロメチル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシ基、シクロアルキル基、カルボキシル基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル基、−ＮＲ８Ｒ９｛式中、Ｒ８およびＲ９は、それぞれ独立して水素原子、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、ホルミル基、置換されていてもよいアシル基、−ＣＯＮＲ10Ｒ11〔式中、Ｒ10およびＲ11は、それぞれ独立して水素原子、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、Ｒ12で置換されていてもよいアリール基（Ｒ12は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基またはハロゲン原子である）、Ｒ12で置換されていてもよいヘテロアリール基（Ｒ12は前記と同じ）、またはＲ10およびＲ11が結合している窒素原子と一緒になって含窒素複素環を形成している〕、シクロアルキル基、またはＲ８およびＲ９が結合している窒素原子と一緒になって含窒素複素環を形成している｝、または−ＯＣＯＲ13〔式中、Ｒ13は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、Ｒ12で置換されていてもよいアリール基（Ｒ12は前記と同じ）、Ｒ12で置換されていてもよいヘテロアリール基（Ｒ12は前記と同じ）、または−ＮＲ14Ｒ15（式中、Ｒ14およびＲ15は、それぞれ独立して水素原子、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、Ｒ12で置換されていてもよいアリール基（Ｒ12は前記と同じ）、Ｒ12で置換されていてもよいヘテロアリール基（Ｒ12は前記と同じ）、またはＲ14およびＲ15が結合している窒素原子と一緒になって含窒素複素環を形成している）〕などがあげられる。これらは、全ての可能な位置で一個以上置換しうる。
【００３２】
「アシル基」とは、アルキル部分が、前記Ｃ１〜Ｃ６アルキル基と同義であるアルキルカルボニル基を意味し、たとえば、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基、バレリル基、イソバレリル基、ピバロイル基などの直鎖または分岐状のアルキルカルボニル基があげられる。
「含窒素複素環」とは、少なくとも１個のＮを含む、飽和または不飽和の複素環を表わす。具体例としては、アゼチジン環、ピロリジン環、ピペリジン環、チアゾリジン環、モルフォリン環、チオモルフォリン環、ジヒドロピロール環などがあげられるが、これらに限定されるものではない。置換基の例としては、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基、水酸基、ニトロ基、シアノ基、トリフルオロメチル基、ヒドロキシメチル基などがあげられる。
【００３３】
「置換されていてもよいアリール基」、「置換されていてもよいアラルキル基」、「置換されていてもよいヘテロアリール基」および「置換されていてもよいヘテロアリールアルキル基」における芳香環上の置換基とは、水酸基、ハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、トリフルオロメチル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシ基、シクロアルキル基、カルボキシル基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル基、−ＮＲ14Ｒ15（式中、Ｒ14およびＲ15は前記と同じ）、および−ＯＣＯＲ13（式中、Ｒ13は前記と同じ）などがあげられる。これらは、全ての可能な位置で一個以上置換しうる。
【００３４】
「置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシ基」、「置換されていてもよいアシル基」および「置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルコキシカルボニル基」における置換基とは、水酸基、ハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基およびＣ１〜Ｃ６アルコキシ基などがあげられる。これらは、全ての可能な位置で一個以上置換しうる。
一般式（Ｉ）で表される化合物は、少なくとも１つの不斉炭素が存在するが、そのラセミ体（すなわち個々の光学活性体の混合物）、ジアステレオ異性体または個々の光学活性体のいずれの形態であっても良い。また幾何異性体が存在する場合には（Ｅ）体、（Ｚ）体またはその混合物のいずれの形態であっても良い。
また、一般式（Ｉ）で表される本発明のピリドン誘導体の塩としては、薬理学的に許容される塩であればとくに限定されず、たとえば、無機塩基との塩、有機塩基との塩などがあげられる。無機塩基との塩の例としては、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、バリウム塩などのアルカリ金属塩およびアルカリ土類金属塩などがあげられる。有機塩基との塩の例としては、トリエチルアミン塩、ピリジン塩、エタノールアミン塩、シクロヘキシルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、ジベンジルエタノールアミン塩、ベンジルアミン塩、２−メチルベンジルアミン塩、α−メチルベンジルアミン塩、ブルシン塩、キニーネ塩、キニジン塩、シンコニン塩、シンコニジン塩、アルギニン塩などがあげられる。
【００３５】
つぎに、一般式（Ｉ）で表わされる化合物の製造方法について述べるに、同化合物は、種々の方法で製造できるところ、例えば以下に示す製造方法により、効率よく製造することができる。
以下の製造方法において使用される「保護基」の具体例としては、水酸基またはカルボキシル基の保護基として、ｔｅｒｔ−ブチル基、ベンジル基、ｏ−メチルベンジル基、ｐ−ニトロベンジル基、ｐ−メトキシベンジル基、ｏ−クロロベンジル基、２，４−ジクロロベンジル基、ｐ−ブロモベンジル基、アリル基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基、ｏ−メチルベンジルオキシカルボニル基、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル基、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル基、ｏ−クロロベンジルオキシカルボニル基、２，４−ジクロロベンジルオキシカルボニル基、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル基、アリルオキシカルボニル基、メトキシメチル基、テトラヒドロピラニル基などがあげられ、カルボニル基の保護基として、たとえばエタンジオール、プロパンジオール、メルカプトエタノール、メルカプトプロパノール、エタンジチオール、プロパンジチオールなどから誘導される保護基があげられる。
【００３６】
一般式（Ｉ）で表される化合物は、下記のスキーム１（工程１〜２）に示される方法により製造することができる。
【化２０】
2014196624.tif 000022
（式中、Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は前記と同じ；Ｘは塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子を表す。）
【００３７】
＜工程１＞
工程１においては、一般式（II）で表される化合物と一般式（III）で表される化合物を塩基の存在下反応し、一般式（IV）で表される化合物を製造する。一般式（III）で表される化合物の代わりに、一般式（III）で表される化合物の互変異性体である一般式（Ｖ）
【化２１】
2014196624.tif 000023
で表される化合物を用いても同様に製造することができる。好適な塩基としては、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸セシウムまたは水素化ナトリウムなどがあげられる。反応を円滑に行うために添加物を共存させてもよく、添加物として、ヨウ化カリウム、ヨウ化ナトリウム、テトラブチルアンモニウムヨージド、臭化カリウム、臭化ナトリウムまたはテトラブチルアンモニウムブロミドなどを加えることができる。反応溶媒としては、反応を著しく阻害しない溶媒であればとくに限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、アセトン、アセトニトリル、メタノール、エタノール、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、２−メトキシエタノールまたはそれらの混合溶媒などが好ましい。また、反応溶媒に水を添加することもできる。水を添加する場合、水の添加量は特に限定されず、例えば、反応溶媒に対して１０％以下が好ましい。反応温度はとくに限定されず、たとえば室温〜６０℃が好ましい。反応時間は、１時間〜２日間が好ましい。
【００３８】
＜工程２＞
工程２においては、一般式（IV）で表される化合物（以下「化合物（IV）」のように記載することがある。他の一般式により表される化合物についても同様。）を塩存在下、シアン化物との反応を経て化合物（I）を製造する。好適な塩としては、炭酸アンモニウムまたは炭酸水素アンモニウムなどがあげられる。好適なシアン化物としては、シアン化カリウムまたはシアン化ナトリウムなどがあげられる。反応溶媒としては、反応を著しく阻害しない溶媒であればとくに限定されないが、水、アンモニア水、メタノール、エタノール、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはそれらの混合溶媒などが好ましい。反応温度はとくに限定されず、たとえば５０℃〜１２０℃が好ましい。反応時間は、１時間〜１０日間が好ましい。本工程において得られる一般式（Ｉ）で表される化合物は、反応終了後の処理方法次第で、その塩の形態として得ることもできる。
【００３９】
前記化合物（IV）は、下記のスキーム２（工程３〜工程７）に示される方法によっても製造することができる。
【化２２】
2014196624.tif 000024
（式中、Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は前記と同じ；Ｘは塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子；Ｙは
【化２３】
2014196624.tif 000025
などのアミン誘導体基；Ｐは保護基；ＭはＭｇＢｒ、ＭｇＣｌ、Ｌｉ、ＺｎＢｒまたはＺｎＣｌを表す。）
【００４０】
＜工程３＞
工程３においては、一般式（III）で表される化合物と一般式（VI）で表される化合物を塩基の存在下反応し、一般式（VII）で表される化合物を製造する。一般式（III）で表される化合物の代わりに、一般式（III）で表される化合物の互変異性体である一般式（Ｖ）
【化２４】
2014196624.tif 000026
で表される化合物を用いても同様に製造することができる。好適な塩基としては、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸セシウムまたは水素化ナトリウムなどがあげられる。反応を円滑に行うために添加物を共存させてもよく、添加物として、ヨウ化カリウム、ヨウ化ナトリウム、テトラブチルアンモニウムヨージド、臭化カリウム、臭化ナトリウムまたはテトラブチルアンモニウムブロミドなどを加えることができる。反応溶媒としては、反応を著しく阻害しない溶媒であればとくに限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、アセトン、アセトニトリル、メタノール、エタノール、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、２−メトキシエタノールまたはそれらの混合溶媒などが好ましい。反応温度はとくに限定されず、たとえば室温〜６０℃が好ましい。反応時間は、１時間〜２日間が好ましい。
【００４１】
＜工程４＞
工程４においては、一般式（VII）で表される化合物を無機塩基水溶液の存在下に加水分解して、化合物（VIII）を製造する。好適な無機塩基水溶液としては、水酸化ナトリウム水溶液、水酸化カリウム水溶液または水酸化リチウム水溶液などがあげられる。反応溶媒としては、反応を著しく阻害しない溶媒であればとくに限定されないが、水、メタノール、エタノール、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサンまたはそれらの混合溶媒などが好ましい。反応温度はとくに限定されず、例えば室温〜６０℃が好ましい。反応時間は、１時間〜９６時間が好ましい。本工程において得られる一般式（VIII）で表される化合物の形態は、カルボン酸、カルボン酸ナトリウム、カルボン酸カリウム、カルボン酸リチウム、無機塩（塩化ナトリウム、塩化カリウムまたは塩化リチウム）とカルボン酸との混合物などである。
【００４２】
＜工程５＞
工程５においては、工程４で得られた化合物（VIII）を活性化されたカルボン酸誘導体とし、アミンまたはその塩と反応し、化合物（IX）で表される化合物を製造する。活性化されたカルボン酸誘導体としては、例えば、化合物（VIII）を塩化チオニル、オキシ塩化リン、五塩化リン、塩化オキサリル、臭化チオニル等で処理することにより得られる酸ハロゲン化物；化合物（VIII）を１−エチル−３’−（３’−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩またはジシクロへキシルカルボジイミド等の縮合剤と縮合することにより得られる活性エステル；化合物（VIII）をクロロ炭酸エチル、ピバロイルクロリド、クロロ炭酸イソブチル等と反応させることにより得られる混合酸無水物等があげられる。また、上記反応においては、必要に応じて塩基を共存させることができる。塩基としては、例えば、トリエチルアミン、ｔｅｒｔ−ブチルアミン、ピリジン、Ｎ−メチルモルホリン等の有機アミンがあげられ、好ましくはトリエチルアミン、ピリジンまたはＮ−メチルモルホリンである。反応溶媒としては、反応を著しく阻害しない溶媒であればとくに限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、ジクロロメタンまたはクロロホルムなどが好ましい。反応温度はとくに限定されず、たとえば０℃〜６０℃が好ましい。反応時間は、１時間〜９６時間が好ましい。
【００４３】
＜工程６＞
工程６においては、工程５で得られた化合物（IX）と一般式（Ｘ）で表される化合物を反応させて化合物（IV）を製造する。化合物（Ｘ）としては、一般式（XI）で表される化合物
【化２５】
2014196624.tif 000027
（構造式中、X1は、塩素原子、臭素原子またはヨウ素原子を表す。）
を原料とし、ノルマルブチルリチウム、ｓｅｃ−ブチルリチウム、ｔｅｒｔ−ブチルリチウムなどの塩基を用いたハロゲン−金属交換反応により調製したリチウム試薬；マグネシウム、イソプロピルマグネシウムブロミドまたはイソプロピルマグネシウムクロリドなどを用いて調製したグリニャール試薬；活性化した亜鉛、臭化亜鉛または塩化亜鉛などを用いて調製した亜鉛試薬などがあげられる。反応溶媒としては、反応を著しく阻害しない溶媒であればとくに限定されないが、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、１，４−ジオキサンまたはジメトキシエタンなどが好ましい。反応温度はとくに限定されず、たとえば−１００℃〜室温が好ましい。反応時間は、１時間〜２４時間が好ましい。
【００４４】
＜工程７＞
工程７においては、工程６と同様にして、一般式（VII）で表される化合物と一般式（Ｘ）で表される化合物を反応させて化合物（IV）を製造する。
【００４５】
また、前記化合物（II）は、以下に示すように、スキーム３（工程８〜１０）に示される方法によって製造することができる。
【化２６】
2014196624.tif 000028
（式中、Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は前記と同じ；Ｘは塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子を表す。）
【００４６】
＜工程８＞
工程８においては、一般式（XII）で表される化合物を、一般式（XIV）で表される中間体と反応し、化合物（II）を製造する。中間体（XIV）は、酸ハライドとルイス酸から得られる活性中間体；酸無水物とルイス酸から得られる活性中間体；カルボン酸と脱水剤から得られる活性中間体があげられる。酸ハライドとしては、クロロアセチルクロリド、クロロアセチルブロミド、ブロモアセチルブロミド、ブロモアセチルクロリドまたはヨードアセチルクロリドなどがあげられる。酸無水物としては、クロロ酢酸無水物、ブロモ酢酸無水物またはヨード酢酸無水物などがあげられる。カルボン酸としては、クロロ酢酸、ブロモ酢酸またはヨード酢酸があげられる。ルイス酸としては、塩化アルミニウム、塩化亜鉛などがあげられる。脱水剤としては、五酸化リンなどがあげられる。反応溶媒としては、反応を著しく阻害しない溶媒であればとくに限定されないが、ジクロロメタン、ジクロロエタンなどが好ましく、反応溶媒を用いなくてもよい。反応温度はとくに限定されず、たとえば０℃〜１００℃が好ましい。反応時間は、１時間〜２４時間が好ましい。
【００４７】
＜工程９＞
工程９においては、一般式（XII）で表される化合物を、一般式（XV）で表される中間体と反応し、化合物（XIII）を製造する。中間体（XV）は、酢酸ハライドとルイス酸から得られる活性中間体；酢酸無水物とルイス酸から得られる活性中間体；酢酸と脱水剤から得られる活性中間体があげられる。酢酸ハライドとしては、塩化アセチル、臭化アセチルまたはヨウ化アセチルがあげられる。ルイス酸としては、塩化アルミニウム、塩化亜鉛などがあげられる。脱水剤としては、五酸化リンなどがあげられる。反応溶媒としては、反応を著しく阻害しない溶媒であればとくに限定されないが、ジクロロメタン、ジクロロエタンなどが好ましく、反応溶媒を用いなくてもよい。反応温度はとくに限定されず、たとえば０℃〜１００℃が好ましい。反応時間は、１時間〜２４時間が好ましい。
【００４８】
＜工程１０＞
工程１０においては、一般式（XIII）で表される化合物を、ハロゲン化剤と反応し、化合物（II）を製造する。ハロゲン化剤としては、Ｎ−クロロコハク酸イミド、Ｎ−ブロモコハク酸イミド、Ｎ−ヨードコハク酸イミドまたはベンジルトリメチルアンモニウムトリブロミドなどがあげられる。反応に適当な酸を用いることで反応が促進される。反応溶媒としては、反応を著しく阻害しない溶媒であればとくに限定されないが、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、ジクロロエタンなどが好ましい。反応温度はとくに限定されず、たとえば０℃〜１００℃が好ましい。反応時間は、１時間〜７２時間が好ましい。
【００４９】
前述した方法で製造される化合物は遊離化合物、その塩、その水和物もしくはエタノール和物などの各種溶媒和物または結晶多形の物質として単離精製される。本発明化合物の薬理学的に許容される塩は常法の造塩反応により製造することができる。単離精製は抽出分別、結晶化、各種分画クロマトグラフィーなどの化学操作を適用して行われる。
光学活性体は、例えば、下記スキーム４（工程１１）に示される方法で、ラセミ体から常法の光学分割により立体化学的に純粋な異性体として得ることができる。
【化２７】
2014196624.tif 000029
（式中、Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は前記と同じであり、アスタリスク（*）は光学的に純粋な形態であること意味する。）
【００５０】
＜工程１１＞
工程１１においては、ラセミ体として製造された化合物（Ｉ）を、キラルカラムを用いて光学分割し、（＋）あるいは（−）異性体を製造する。キラルカラムを用いた光学分割は、当業者における公知の方法（例えば、『光学異性体の分離』（季刊化学総説No.6 1989 日本化学会編  学会出版センター）など参照）に準じて行えばよい。また、用いるキラルカラムは多様なものが市販されており、適宜、適切なものを選択すれば良い。
【００５１】
本発明の組成物は、前記化合物、もしくはその塩(以下、「前記一般式（Ｉ）で表わされる化合物等」とも称する）を有効成分とする、血小板の機能を維持するための組成物である。本発明において「血小板の機能を維持する」とは、主として、血小板の止血や血栓形成といった血液凝固に関する機能を実質的に維持することを意味する。当該機能は、本発明の組成物により、ＡＤＡＭ１７によるＧＰＩｂαのシェディング（Ｓｈｅｄｄｉｎｇ、切断して除去）を抑制することによって達成することができる。
【００５２】
「血小板の機能の維持」は、例えば、国際公開２００９／１１９１０５号や国際公開２０１２／０３６２５７号に記載されているような、フローチャンバーシステムを用いて血小板のフォン・ウィルブランド因子（ｖｏｎ  Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ  ｆａｃｔｏｒ、ＶＷＦ）に対する接着能を評価する方法、血小板減少マウスを用いて血小板の生体内寿命を評価する方法、トロンビン存在下フィブリノーゲンコートカバーグラス上の血小板の形状を観察する方法、あるいは、レーザー照射とヘマトポルフィリン等とを用いて血栓形成モデル動物を作製し、このモデル動物内における血小板の動態を単一レベルで観察する生体分子イメージング手法等を用いて、評価することができる。
【００５３】
ＡＤＡＭ１７（ａ  ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ  ａｎｄ  ｍｅｔａｌｌｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ  ｄｏｍａｉｎ  １７）は、構造上ディスインテグリンドメインを有し、メタロプロテアーゼ活性を有するタンパク質である。ＧＰＩｂα（ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｂ  ａｌｐｈａ、糖タンパク質Ｉｂα）以外にも膜型のＴＮＦ−α（Ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ−ａｌｐｈａ、腫瘍壊死因子−α）をシェディングし、可溶型のＴＮＦ−αを産生することから、ＴＡＣＥ（ＴＮＦ−ａｌｐｈａ  ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ  ｅｎｚｙｍｅ、ＴＮＦ−α変換酵素）とも称されるタンパク質である。典型的には、ヒト由来のＡＤＡＭ１７として、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  Ｎｏ．ＮＰ＿００３１７４．３（Ｎｏ．ＮＭ＿００３１８３．４）で特定される蛋白質（遺伝子）が挙げられる。
また、ＧＰＩｂαは、血小板の膜タンパク質であり、ＶＷＦの受容体として機能している。また、ＧＰＩｂαはＣＤ４２ｂ抗原とも称され、ヒト体内において血小板のみに発現しているため、血小板の表面マーカーとしても用いられている。典型的には、ヒト由来のＧＰＩｂαとして、ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  Ｎｏ．ＮＰ＿０００１６４．５（Ｎｏ．ＮＭ＿０００１７３．５）で特定される蛋白質（遺伝子）が挙げられる。
【００５４】
ＡＤＡＭ１７及びＧＰＩｂαの典型例としてＧｅｎＢａｎｋに登録されている各々のＲｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅを上記したが、これらはあくまで例示であって蛋白質のアミノ酸配列は、自然界において（すなわち、非人工的に）変異し得る。従って、本発明の組成物の作用機序に関わる、ＡＤＡＭ１７及びＧＰＩｂαには、このような天然の変異体も含まれることを理解されたい。
【００５５】
本発明における「ＡＤＡＭ１７によるＧＰＩｂαのシェディングの抑制」には、ＡＤＡＭ１７によるシェディングの完全な抑制（阻害）および部分的な抑制の双方が含まれる。また、後述の試験例３において示すように、本発明の組成物の存在下における血小板総数に対するＣＤ４２ｂ（ＧＰＩｂα）（＋）血小板数の割合を算出し、本発明の組成物の非存在下におけるその割合と比較して、大きい値である場合には、本発明の組成物がＡＤＡＭ１７によるＧＰＩｂαのシェディングを抑制すると評価することができる。本発明の組成物によるＧＰＩｂαのシェディングの抑制の程度としては、本発明の組成物の存在下におけるＣＤ４２ｂ（＋）血小板数の割合がより大きいほど好ましく、当該割合が、６０％以上であることは好ましく、７０％以上であることはより好ましく８０％以上であることはさらにより好ましい。
【００５６】
なお、本発明の組成物によるＧＰＩｂαのシェディングを抑制する能力を、後述の試験例１において示す方法を用いて評価した場合には、５０％抑制濃度（ＩＣ50）が１０００ｎｍｏｌ／Ｌ未満であることが好ましく、５００ｎｍｏｌ／Ｌ未満であることはより好ましく、さらにより好ましくは１００ｎｍｏｌ／Ｌ未満である。
【００５７】
本発明の組成物の有効成分である前記一般式（Ｉ）で表わされる化合物は特に限定されないが、例えば、
５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］−５−フェニルイミダゾリジン−２，４−ジオン、
５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］−５−（４−フェノキシフェニル）イミダゾリジン−２，４−ジオン、
５−（３，４−ジフルオロフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン、
５−（４−ベンジルフェニル）−５−[（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル]イミダゾリジン−２，４−ジオン、および
（＋）−５−（３，４−ジフルオロフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン
などが挙げられる。
【００５８】
これらの化合物のうち、（＋）−５−（３，４−ジフルオロフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオンは、後述の実施例及び試験例における「（＋）−Ｉ−１０」又は「Ｓ−１０８４７０」である。
【００５９】
本発明の組成物の形態としては、例えば、研究開発目的（例えば、インビトロやインビボの研究開発）に用いられる試薬や、医薬品添加剤が挙げられる。
【００６０】
本発明の組成物は、ＡＤＡＭ１７によるＧＰＩｂαのシェディングを抑制することにより血小板の機能を維持する作用を有するため、血小板の機能を維持するための試薬（例えば、巨核球に分化し得る細胞から巨核球に分化誘導させ、該巨核球から血小板を産生させる培養系に使用する試薬や生産した血小板に添加してその機能を維持するための試薬）や輸血用血小板を含む血液製剤に添加される医薬品添加剤として好適に用いることができる。本発明の組成物を上記添加剤や試薬として用いる場合には、有効成分である前記一般式（Ｉ）で表わされる化合物等の他に、例えば安定化剤や溶剤等の追加の成分が含有されていてもよい。また、本発明の組成物は、目的に応じて前記一般式（Ｉ）で表わされる化合物等自体であってよい。
【００６１】
本発明の組成物の製品（例えば、試薬や医薬品添加剤）またはその説明書は、血小板の機能を維持するために用いられる旨の表示を付したものであり得る。ここで「製品または説明書に表示を付した」とは、製品の本体、容器、包装などに表示を付したこと、あるいは製品の情報を開示する説明書、添付文書、宣伝物、その他の印刷物などに表示を付したことを意味する。血小板の機能を維持するために用いられる旨の表示においては、本発明の組成物の有効成分である前記一般式（Ｉ）で表わされる化合物等が血小板の機能を維持する効果を発揮するに至るまでの機序についての情報を含むことができる。機序についての情報としては、例えば、ＡＤＡＭ１７によるＧＰＩｂαのシェディングを抑制することにより、血小板の機能を維持することに関する情報が挙げられる。また、血小板の機能を維持するために用いられる旨の表示においては、血小板の製造又は保存のため等に用いられることに関する情報を含むことができる。
【００６２】
前記一般式（Ｉ）で表わされる化合物等は、上記本発明の組成物を製造するための有効成分となる。従って、本発明は、上記本発明の組成物を製造するために用いられる、前記一般式（Ｉ）で表わされる化合物等、および前記一般式（Ｉ）で表わされる化合物等を用いることを含む、上記本発明の組成物の製造方法をも提供するものである。
【００６３】
また、本発明は、巨核球に分化し得る細胞から巨核球に分化誘導させ、該巨核球から血小板を産生させる培養系に、前記一般式（Ｉ）で表わされる化合物等を添加した培養物を提供するものである。さらに、本発明は、巨核球に分化し得る細胞から巨核球に分化誘導させ、該巨核球から血小板を産生させる培養系に、前記一般式（Ｉ）で表わされる化合物等を添加することを含む、血小板を調製するための方法を提供するものである。
【００６４】
本発明における「巨核球」は、血小板前駆細胞、巨核細胞とも称され、その細胞質を分離することにより、血小板を産生する細胞である。
本発明において「巨核球に分化し得る細胞」は、巨核球に分化誘導することができる細胞であれば特に限定されることはなく、例えば、受精卵、胚性幹細胞（ＥＳ細胞）、人工多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）、胚性生殖細胞（ＥＧ細胞）といった万能幹細胞、造血幹細胞、造血前駆細胞、巨核芽球、脂肪細胞が挙げられる。造血幹細胞や造血前駆細胞は、骨髄や臍帯血等から採取されるものであってもよい。さらに、これらの中では、胚を壊すことがないため倫理的な問題がなく、本発明によって調製された血小板を輸血する患者とヒト白血球型抗原（ＨＬＡ）の型を適合させ易いという観点から、ｉＰＳ細胞が好ましい。
【００６５】
さらに、本発明の方法に用いる上記細胞が由来する動物種は特に限定されず、例えば、ヒト、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジなどが挙げられるが、好ましくはマウス、ラット、ヒトであり、より好ましくはマウス又はヒトであり、さらにより好ましくはヒトである。
【００６６】
本発明において「巨核球に分化し得る細胞から巨核球に分化誘導させ、該巨核球から血小板を産生させる培養系」としては、例えば、血小板に至る途中の段階で胚様体（分化誘導した中胚葉系未分化細胞を含む細胞集団）を形成させる培養系（Ｅｔｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、２００２年、９９巻、１２８１９−１２８２４ページ等）、造血前駆細胞を内包するネット様構造物（ｓａｃ構造体）を形成させる培養系（特許文献１〜３等参照）、臍帯血由来の造血前駆細胞から血小板を産生させる培養系（Ｒｏｂｅｒｔら、「Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｂａｌｐｈａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｌｏｓｓ  ｏｆ  ｑｕａｌｉｔｙ  ｏｆ  ｐｌａｔｅｌｅｔｓ  ｐｒｏｄｕｃｅｄ  ｉｎ  ｃｕｌｔｕｒｅ．」、Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、２０１０年５月２６日オンライン版等参照）等を挙げることができる（その他、Ｆｕｊｉｍｏｔｏら、Ｂｌｏｏｄ、２００３年、１０２巻、４０４４−４０５１ページ：Ｈｉｒｏｙａｍａら、Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．、２００６年、３４巻、７６０−７６９ページ：Ｇａｕｒら、Ｊ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈａｅｍｏｓｔ．、２００５年、４巻、４３６−４４２ページ等参照）が挙げられる。これらの中では、ネット様構造物内に造血前駆細胞が濃縮されて存在しており、生体外において効率的に巨核球や血小板等を産生させることができるため、ネット様構造物を形成させる培養系が好ましい。
【００６７】
本発明にかかる培養系の培養条件としては、巨核球の培養および血小板の産生に適した条件であれば特に限定されない。
さらに、本発明にかかる「巨核球に分化し得る細胞」を培養する際（特に、巨核球を分化誘導する過程において）、フィーダー細胞と共培養することが好ましい。ここで使用する「フィーダー細胞」としては、「巨核球に分化し得る細胞」の分化誘導に寄与するものであれば特に限定されないが、例えば、マウス胚線維芽細胞、好ましくは、１０Ｔ１／２細胞株、ＯＰ９細胞などを用いることができる。不死化した株化細胞以外の細胞としては、ヒト骨髄由来の間葉系幹細胞（ヒト骨髄から直接調製し培養して得た細胞）を挙げることができ、当該間葉系幹細胞をフィーダー細胞として用いた場合でも、ヒトＥＳ細胞又はｉＰＳ細胞からの巨核球成熟および血小板産生が可能である。マトリゲルなどの細胞外基質上で培養した場合でも血小板を誘導することが可能である。「フィーダー細胞」を用いる際には、放射線を照射するなどして、細胞の増殖を抑止することが好ましい。
【００６８】
前記一般式（Ｉ）で表わされる化合物等の前記培養系への添加量（濃度）は、０．０１〜１００μＭであることが好ましい。前記添加量を前記下限以上とすることにより血小板におけるＧＰＩｂαの切断が好適に抑制され、前記上限以下とすることにより、化合物の影響による細胞増殖抑制を好適に回避することができる。
【００６９】
以下に、本発明の培養系に好適に用いられるネット様構造物を形成させる方法の一例として、本発明の血小板を調製するための方法をより具体的に説明する。
先ず、ネット様構造物（ｓａｃ構造体）を形成させる方法について説明する。ネット様構造物を調製するために適した培養条件は、用いるＥＳ細胞又はｉＰＳ細胞によって異なるが、例えば、培地としては、最終濃度１５％のＦＢＳを添加したイスコフ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）を用い、その他無血清の場合においても適宜増殖因子およびサプリメント等を加えたものを使用することができる。さらに、ネット様構造物を効率的に形成させるために、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）を０〜３００ｎｇ／ｍＬ程度、より好ましくは、２０ｎｇ／ｍＬ程度加えるのがよい。培養の環境としては、用いるＥＳ細胞又はｉＰＳ細胞の種類によって異なるが、好ましくは、５％ＣＯ２、３５〜３９℃、より好ましくは３６〜３８℃、さらにより好ましくは３７℃の条件である。ネット様構造物が形成されるまでの培養期間は、ＥＳ細胞又はｉＰＳ細胞の種類によって異なるが、フィーダー細胞上に播いてから、15日目頃（約14〜約16日後）に造血前駆細胞を効率的に取得できるようになる。
【００７０】
形成されたネット様構造物は、濾胞状構造になっており、内部には、造血前駆細胞、特にＣＤ３４陽性の細胞が濃縮された状態で存在している。ネット様構造物の内部に存在する造血前駆細胞は、物理的な手段、例えば、滅菌済みの篩状器具（例えば、セルストレイナーなど）に通すことにより、分離することができる。
【００７１】
次に、ネット様構造物から分離した造血前駆細胞から血小板を調製する方法について説明する。分離して得られた造血前駆細胞をフィーダー細胞上に播き、巨核球及び血小板を産生させるのに適した条件で培養を行う。ここで「巨核球及び血小板を産生させるのに適した条件」とは、例えば、トロンボポエチン（ＴＰＯ、１０〜２００ｎｇ／ｍＬ、好ましくは１００ｎｇ／ｍＬ程度）の存在下で、又は幹細胞因子（ＳＣＦ、１０〜２００ｎｇ／ｍＬ、好ましくは５０ｎｇ／ｍＬ程度）、ヘパリン（Ｈｅｐａｒｉｎ、１０〜１００Ｕ／ｍＬ、好ましくは２５Ｕ／ｍＬ程度）及びＴＰＯ（１０〜２００ｎｇ／ｍＬ、好ましくは１００ｎｇ／ｍＬ程度）の存在下で、７〜１５日間程度培養することが挙げられる。培養環境としては、好ましくは、５％ＣＯ２、３５〜３９℃、より好ましくは３６〜３８℃、さらにより好ましくは３７℃の条件である。
【００７２】
また、前記培養系において、CD42ｂ（GPIｂα）は、時間の経過とともに発現され、その発現量が増加するものの、この過程は細胞間で不均一である。したがって、CD42ｂ（GPIｂα）のシェディングをより有効的に抑制するために、造血前駆細胞をフィーダー細胞上にまき直す際に前記一般式（Ｉ）で表わされる化合物等を前記培養系に添加することは好ましい。
【００７３】
さらに、本発明の方法においては、巨核球から放出された血小板が豊富に存在する培養液の画分（例えば、ネット様構造物を形成させる方法においては、ヒトｉＰＳ細胞又はＥＳ細胞の培養後２２〜２８日目程度の画分）を回収し、白血球除去フィルター（例えば、テルモ社、旭化成メディカル社などから購入可能）などを使用して血小板以外の成分（巨核球、その他の血液細胞）の除去を行うことにより、血小板を調製することができる。
【００７４】
前述の通り、前記一般式（Ｉ）で表わされる化合物等は、ＡＤＡＭ１７によるＧＰＩｂαのシェディングを抑制し、血小板の機能を維持する作用を有する。従って、本発明は、前記一般式（Ｉ）で表わされる化合物等が添加された血小板を含む血液製剤、並びに、前記一般式（Ｉ）で表わされる化合物等を、血小板を含む血液製剤に添加することを含む、血液製剤における血小板の機能を維持するための方法をも提供するものである。
また、前記一般式（Ｉ）で表わされる化合物等は、血小板を含む血液製剤を製造するための有効成分となる。従って、本発明は、上記本発明の血液製剤を製造するために用いられる医薬品添加剤として、前記一般式（Ｉ）で表わされる化合物等をも提供するものである。
【００７５】
本発明における血液製剤に含まれる血小板としては特に限定されず、前述の本発明の血小板を調製するための方法によって得られた血小板であってもよく、また採血によって得られた末梢血等由来の血小板であってもよい。血液製剤を調製するにあたっては、血小板が保存に対して不安定であることなどを考慮して、血小板の安定化に資する他の成分を含有せしめることもできる。血小板を安定化させる条件は、本技術分野における通常の知識を有する者に公知の方法を選択してよい。例えば、血小板の機能を維持するために必要な溶液中（例えば、ＡＣＤ−Ａ液（クエン酸ナトリウム／クエン酸／ブドウ糖から調製される液）など、場合によっては、新鮮凍結血漿などを適宜添加する）に、適当な濃度（例えば、１×１０８〜１×１０１０血小板／ｍＬ程度、好ましくは、１×１０９血小板／ｍＬ程度）で懸濁し製剤化することができる。なお、血小板を含む製剤を収納する容器は、ガラスのように血小板を活性化する材質のものを避けることが好ましい。前記一般式（Ｉ）で表わされる化合物等の添加量（濃度）は、０.０１〜１００μｍｏｌ／Ｌであることが好ましい。前記添加量を前記下限以上とすることによって血小板の接着機能を好適に維持することが可能となり、前記上限以下とすることによって、輸血した際の安全性をより高めることできる。
【実施例】
【００７６】
以下、実施例及び試験例に基づいて本発明をより具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。【００７７】
＜被験化合物の製造方法＞
以下に、本発明の組成物の有効成分たる一般式（Ｉ）で表わされる化合物の代表的な製造例を実施例として示す。以下の実施例に示す材料、使用量、割合、処理内容、処理手順等は、本発明の趣旨を逸脱しない限り適宜変更することができる。従って、本発明の範囲は以下に示す具体例により限定的に解釈されるべきものではない。【００７８】
なお、以下に示す1Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、重クロロホルム（ＣＤＣｌ３）または重ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ−ｄ６）を溶媒とし、テトラメチルシラン（ＴＭＳ）を内部標準として、ＪＮＭ−ＥＣＡ４００型スペクトルメーター（４００ＭＨｚ、日本電子（株）製）で測定した。化学シフトの測定結果は、δ値をｐｐｍで示し、結合定数のＪ値をＨｚで示した。略号のｓはsinglet、ｄはdoublet、ｔはtriplet、ｑはquartet、ｍはmultiplet、ｂｒはbroadを意味する。質量スペクトル（エレクトロスプレーイオン化法：ＥＳI-ＭＳ）測定には、サーモフィッシャーサイエンティフィック（株）製Ｅｘａｃｔｉｖｅを使用した。比旋光度の測定には、旋光度計（SEPA-300型、（株）堀場製作所）を使用した。【００７９】
実施例１
５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］−５−フェニルイミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−１）の製造
【化２８】
2014196624.tif 000030
【００８０】
工程１
３−メチル−２−ピリドン（III-1）（５．０ｇ、４５．８ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（９１ｍＬ）溶液に、６０％水素化ナトリウム（１．８ｇ、４５．８ｍｍｏｌ）を加え、室温で１０分間撹拌した。反応液に臭化フェナシル（II-1）（９．１ｇ、４５．８ｍｍｏｌ）を加え、室温で１．５時間撹拌した。反応液に水をゆっくり加えた後、酢酸エチルで抽出した。有機層を水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去し、化合物（IV-1）（５００ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）を黄色固体として得た。【００８１】
工程２
前記化合物（IV-1）（７．０ｇ、３０．８ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（２．７ｇ、４１．５ｍｍｏｌ）及び炭酸アンモニウム（１１．８ｇ、１２３ｍｍｏｌ）のエタノール（３０ｍＬ）および水（３０ｍＬ）懸濁液を密閉し、９０℃で８９時間撹拌した。放冷後、反応溶液を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を水および飽和食塩水で順次洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去した後、クロロホルムを加え、ろ取し、クロロホルムで洗浄し、乾燥することで、化合物（I-1）（収量１．１４ｇ、収率２６％）を黄色固体として得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (CDCl3) δ: 2.12 (3H, s), 4.28 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.85 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.08 (1H, t, J=6.8 Hz), 7.14 (1H, dd, J=1.4, 6.8 Hz), 7.21 (1H, dd, J=1.4, 6.8 Hz), 7.37-7.44 (3H, m), 7.63-7.66 (2H, m), 8.35 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z : 298 [M+H]+.【００８２】
実施例２
５−（４−メトキシフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−２）の製造
【化２９】
2014196624.tif 000031
【００８３】
工程１
前記化合物（III-1）（２２７ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）溶液に、炭酸セシウム（７４５ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）と４’−メトキシフェナシルブロミド（II-2）（５００ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）を加え、室温で３．５時間撹拌した。氷冷下にて水を加えて反応を停止し、酢酸エチルで抽出した。有機層を食塩水で洗浄した後、硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去し、化合物（IV-2）（収量４４０ｍｇ、収率８２％）を薄黄色固体として得た。【００８４】
工程２
前記化合物（IV-2）（４３６ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（１３２ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）及び炭酸アンモニウム（６５１ｍｇ、６．８ｍｍｏｌ）のエタノール（１．５ｍＬ）懸濁液に、水（１．５ｍＬ）を加え密閉し、１００℃で４５時間撹拌した。放冷後、反応溶液を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去することで、化合物（I-2）（収量３７０ｍｇ、収率６７％）を淡黄色固体として得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 2.00 (3H, s), 3.76 (3H, s), 4.44 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.55 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.11 (1H, t, J=6.9 Hz), 6.98 (2H, td, J=2.5, 9.2 Hz), 7.20-7.31 (2H, m), 7.53 (2H, td, J=2.5, 9.2 Hz), 8.42 (1H, s), 10.80 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 328 [M+H]+.【００８５】
実施例３
４−｛４−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］−２，５−ジオキソイミダゾリジン−４−イル｝ベンゾニトリル（Ｉ−３）の製造
【化３０】
2014196624.tif 000032
【００８６】
工程１
前記化合物（III-1）（２３２ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）溶液に、炭酸セシウム（７６２ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）及び４’−シアノフェナシルブロミド（II-3）（５００ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）を加え、室温で３時間撹拌した。氷冷下にて水を加えて反応を停止し、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去し、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル）で精製することで、化合物（IV-3）（収量４４０ｍｇ、収率８２％）を薄黄色固体として得た。【００８７】
工程２
前記化合物（I-2）と同様な製造方法により、前記化合物（IV-3）から化合物（I-3）（収量３５ｍｇ、収率１０％）を淡黄色固体として得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.98 (3H, s), 4.47 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.67 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.13 (1H, t, J=6.7 Hz), 7.25-7.31 (2H, m), 7.80-7.86 (2H, m), 7.90-7.97 (2H, m), 8.74 (1H, s), 11.01 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 323 [M+H]+.【００８８】
実施例４
５−（３−メトキシフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−４）の製造
【化３１】
2014196624.tif 000033
前記化合物（IV-3）と同様な製造方法により、前記化合物（III-1）と化合物（II-4）から化合物（IV-4）（収量４９６ｍｇ、収率９３％）を黄色油状物として得た。
前記化合物（I-2）と同様な製造方法により、前記化合物（IV-4）から化合物（I-4）（収量４２５ｍｇ、収率６７％）を淡黄色固体として得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 2.00 (3H, s), 3.78 (3H, s), 4.47 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.59 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.11 (1H, t, J=6.9 Hz), 6.95 (1H, ddd, J=0.9, 2.3, 8.2 Hz), 7.18-7.26 (3H, m), 7.29 (1H, m), 7.35 (1H, t, J=8.0 Hz), 8.58 (1H, s), 10.85 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 328 [M+H]+.【００８９】
実施例５
５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］−５−（チオフェン−３−イル）イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−５）の製造
【化３２】
2014196624.tif 000034
【００９０】
工程１
前記化合物（III-1）（２５３ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）溶液に、６０％水素化ナトリウム（１０２ｍｇ、２．６ｍｍｏｌ）を加えた後、３−（ブロモアセチル）チオフェン（II-5）（５００ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）を加え、室温で１６時間撹拌した。氷冷下にて水を加えて反応を停止し、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去し、化合物（IV-5）（収量３７１ｍｇ、収率６９％）を得た。【００９１】
工程２
前記化合物（I-2）と同様な製造方法により、前記化合物（IV-5）から化合物（I-5）（収量２７０ｍｇ、収率５６％）を淡黄色固体として得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 2.00 (3H, s), 4.48 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.53 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.10 (1H, t, J=6.9 Hz), 7.21 (1H, dd, J=1.4, 6.9 Hz), 7.25-7.32 (2H, m), 7.59-7.64 (2H, m), 8.58 (1H, s), 10.87 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 304 [M+H]+.【００９２】
実施例６
５−（ベンゾフラン−２−イル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−６）の製造
【化３３】
2014196624.tif 000035
【００９３】
工程１
前記化合物（III-1）（２１７ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）溶液に、６０％水素化ナトリウム（８８ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）を加えた後、２−（２−ブロモアセチル）ベンゾフラン（II-6）（５００ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で１６時間撹拌した。氷冷下にて水を加えて反応を停止し、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去した後、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル）で精製し、化合物（IV-6）（収量１１５ｍｇ、収率２２％）を得た。【００９４】
工程２
前記化合物（I-2）と同様な製造方法により、前記化合物（IV-6）から化合物（I-6）（収量５８ｍｇ、収率４０％）を無色固体として得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.99 (3H, s), 4.71 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.79 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.14 (1H, t, J=6.9 Hz), 7.14 (1H, d, J=0.9 Hz), 7.26-7.33 (3H, m), 7.36 (1H, dt, J=1.4, 7.3 Hz), 7.62 (1H, d, J=8.2 Hz), 7.68 (1H, d, J=7.8 Hz), 8.65 (1H, s), 11.10 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 338 [M+H]+.【００９５】
実施例７
５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］−５−（ピリジン−２−イル）イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−７）の製造
【化３４】
2014196624.tif 000036
【００９６】
工程１
前記化合物（III-1）（３７０ｍｇ、３．４ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）溶液に、６０％水素化ナトリウム（３３９ｍｇ、８．５ｍｍｏｌ）を加えた後、２−（ブロモアセチル）ピリジン臭化水素塩（II-7）（１．０ｇ、３．６ｍｍｏｌ）を加え、室温で４．５時間撹拌した。氷冷下にて水を加えて反応を停止し、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去した後、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル）で精製し、化合物（IV-7）（収量７０ｍｇ、収率９．１％）を得た。【００９７】
工程２
前記化合物（IV-7）（７０ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（２４ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）及び炭酸アンモニウム（１１８ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）のエタノール（０．３ｍＬ）懸濁液に、水（０．３ｍＬ）を加え密閉し、１００℃で６５時間撹拌した。放冷後、減圧下で溶媒を留去し、メタノールを加え析出した固体をろ過により除去した。減圧下ろ液の溶媒を留去し、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル）で精製し、化合物（I-7）（収量３５ｍｇ、収率３８％）を無色固体として得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.99 (3H, s), 4.73 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.83 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.11 (1H, t, J=6.9 Hz), 7.25-7.34 (2H, m), 7.43 (1H, ddd, J=0.9, 5.0, 7.8 Hz), 7.53 (1H, d, J=7.8 Hz), 7.90 (1H, dt, J=1.8, 7.8 Hz), 8.40 (1H, s), 8.65 (1H, m), 10.88 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 299 [M+H]+.【００９８】
実施例８
５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］−５−（ピリジン−３−イル）イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−８）の製造
【化３５】
2014196624.tif 000037
【００９９】
工程１
前記化合物（IV-7）と同様な製造方法により、前記化合物（III-1）と３−（ブロモアセチル）ピリジン臭化水素酸塩（II-8）から化合物（IV-8）（収量４６９ｍｇ、収率６１％）を得た。【０１００】
工程２
前記化合物（IV-8）（４６９ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（１６０ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）及び炭酸アンモニウム（７８９ｍｇ、８．２ｍｍｏｌ）のエタノール（１ｍＬ）懸濁液に、水（１ｍＬ）を加え密閉し、１００℃で６５時間撹拌した。放冷後、減圧下で溶媒を留去し、メタノールを加え析出した固体をろ過により除去した。減圧下ろ液の溶媒を留去し、少量のクロロホルムに溶解した後、ヘキサンを加え析出した固体をろ取した。固体をクロロホルムで洗浄することで、化合物（I-8）（収量２９５ｍｇ、収率４８％）を無色固体として得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.98 (3H, s), 4.52 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.66 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.13 (1H, t, J=6.9 Hz), 7.29 (2H, dd, J=0.9, 6.4 Hz), 7.46 (1H, m), 8.00 (1H, m), 8.58 (1H, dd, J=1.6, 4.8 Hz), 8.81 (1H, s), 8.82 (1H, d, J=1.8 Hz), 11.07 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 299 [M+H]+.【０１０１】
実施例９
５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］−５−（４−フェノキシフェニル）イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−９）の製造
【化３６】
2014196624.tif 000038
【０１０２】
工程１
４’−フェノキシアセトフェノン（XIII-1）（１．０ｇ、４．７ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（５ｍＬ）溶液に、フェニルトリメチルアンモニウムトリブロミド（１．８ｇ、４．７ｍｍｏｌ）を加え、室温で１４時間撹拌した後、８時間加熱還流した。放冷後、反応溶液を水で希釈し酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去し、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル）で精製することで、化合物（II-9）（収量１．０ｇ、収率６９％）を得た。【０１０３】
工程２
前記化合物（IV-3）と同様な製造方法により、前記化合物（III-1）と前記化合物（II-9）から化合物（IV-9）（収量２１８ｍｇ、収率４２％）を得た。
工程３
前記化合物（IV-9）（２１８ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（５３ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）及び炭酸アンモニウム（２６２ｍｇ、２．７３ｍｍｏｌ）のエタノール（０．７ｍＬ）懸濁液に、水（０．７ｍＬ）を加え密閉し、１００℃で６６時間撹拌した。放冷後、反応溶液を水で希釈し析出した固体をろ取した。水で洗浄した後、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル）で精製することで、化合物（I-9）（収量１６０ｍｇ、収率５８％）を無色固体として得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 2.00 (3H, s), 4.46 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.61 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.12 (1H, t, J=6.6 Hz), 6.99-7.09 (4H, m), 7.17 (1H, m), 7.23-7.32 (2H, m), 7.37-7.44 (2H, m), 7.63 (2H, td, J=2.5, 9.2 Hz), 8.60 (1H, s), 10.87 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 390 [M+H]+.【０１０４】
実施例１０
５−（３，４−ジフルオロフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−１０）の製造
【化３７】
2014196624.tif 000039
【０１０５】
工程１
前記化合物（III-1）（１３３ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）溶液に、炭酸セシウム（４３６ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）と３’，４’−ジフルオロフェナシルブロミド（II-10）（３００ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）を加え、室温で３時間撹拌した。反応溶液を水で希釈し、析出した固体をろ取した。水で洗浄することで、化合物（IV-10）（収量２０６ｍｇ、収率６４％）を黄色固体として得た。【０１０６】
工程２
前記化合物（IV-10）（２０６ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（６１ｍｇ、０．９４ｍｍｏｌ）及び炭酸アンモニウム（３０１ｍｇ、３．１３ｍｍｏｌ）のエタノール（０．８ｍＬ）懸濁液に、水（０．８ｍＬ）を加え密閉し、１００℃で６７時間撹拌した。放冷後、反応液を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で溶媒を留去した。残渣にクロロホルムを加え、析出した固体をろ取することで、化合物（I-10）（収量１１９ｍｇ、収率４６％）を無色固体として得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.98 (3H, s), 4.46 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.61 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.13 (1H, t, J=6.9 Hz), 7.22-7.33 (2H, m), 7.45-7.58 (2H, m), 7.69 (1H, ddd, J=2.3, 7.8, 12.4 Hz), 8.66 (1H, s), 10.99 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 334 [M+H]+.【０１０７】
実施例１１
５−（４−ブロモフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−１１）の製造
【化３８】
2014196624.tif 000040
【０１０８】
工程１
前記化合物（III-1）（２５０ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）のジメチルスルホキシド（４．６ｍＬ）溶液に、炭酸カリウム（７９１ｍｇ、５．７ｍｍｏｌ）と４’−ブロモフェナシルブロミド（II-11）（６３６ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）を加え、室温で撹拌した。ＴＬＣにより反応の完結を確認後、反応溶液を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去し、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製することで、化合物（IV-11）（収量５５３ｍｇ、収率７９％）を得た。【０１０９】
工程２
前記化合物（IV-11）（３００ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（７７ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ）及び炭酸アンモニウム（３７７ｍｇ、３．９２ｍｍｏｌ）のエタノール（０．９８ｍＬ）懸濁液に、水（０．９８ｍＬ）を加え密閉し、１００℃で４８時間撹拌した。放冷後、反応液に水を加え析出した固体をろ取し、クロロホルムで洗浄することで、化合物（I-11）（収量２３０ｍｇ、収率６２％）を得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.99 (3H, s), 4.45 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.62 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.12 (1H, t, J=6.7 Hz), 7.27 (2H, dd, J=6.9, 13.7 Hz), 7.58 (2H, d, J=8.7 Hz), 7.65 (2H, d, J=8.7 Hz), 8.65 (1H, s), 10.92 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 376, 378 [M+H]+.【０１１０】
実施例１２
５−（４−フルオロ−３−メトキシフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−１２）の製造
【化３９】
2014196624.tif 000041
【０１１１】
工程１
前記化合物（IV-10）と同様な製造方法により、前記化合物（III-1）と２−ブロモ−４’−フルオロ−３’−メトキシアセトフェノン（II-12）から化合物（IV-12）（収量１５３ｍｇ、収率４８％）を得た。【０１１２】
工程２
前記化合物（IV-12）（１５３ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（４３ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）及び炭酸アンモニウム（２１３ｍｇ、２．２２ｍｍｏｌ）のエタノール（１．０ｍＬ）懸濁液に、水（１．０ｍＬ）を加え密閉し、１００℃で６６時間撹拌した。放冷後、反応溶液に水を加え析出した固体をろ取し、水で洗浄することで、化合物（I-12）（収量１２９ｍｇ、収率６７％）を無色固体として得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.99 (3H, s), 3.85 (3H, s), 4.45 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.57 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.12 (1H, t, J=6.9 Hz), 7.20-7.26 (2H, m), 7.29 (1H, m), 7.39 (1H, m), 7.48 (1H, dd, J=2.3, 12.8 Hz), 8.59 (1H, s), 10.90 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 346 [M+H]+.【０１１３】
実施例１３
５−［４−（メトキシメトキシ）フェニル］−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−１３）の製造
【化４０】
2014196624.tif 000042
【０１１４】
工程１
氷冷下、４’−ヒドロキシアセトフェノン（XIII-2）（２．０ｇ、１４．６ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（５．１ｍＬ、２９．４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液中に、メトキシメチルクロリド（１．３ｍＬ、１７．６ｍｍｏｌ）を滴下し室温で１４時間撹拌した。減圧下で溶媒を留去し、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル）で精製することで、化合物（XIII-3）（収量２．７ｇ、収率９９％）を無色油状物として得た。【０１１５】
工程２
氷冷下、前記化合物（XIII-3）（２．７ｇ、１５．０ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（３０ｍＬ）溶液に、フェニルトリメチルアンモニウムトリブロミド（５．６ｇ、１５．０ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応液を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去し、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル）で精製することで、化合物（II-13）（収量３１２ｍｇ、収率８．０％）を得た。
工程３
前記化合物（II-3）と同様な製造方法により、前記化合物（III-1）と前記化合物（II-13）から化合物（IV-13）（収量１４７ｍｇ、収率４５％）を得た。【０１１６】
工程４
前記化合物（I-12）と同様な製造方法により、前記化合物（IV-13）から化合物（I-13）（収量３８ｍｇ、収率２６％）を黄色固体として得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 2.00 (3H, s), 3.37 (3H, s), 4.45 (1H, d, J= 13.7 Hz), 4.58 (1H, d, J=13.7 Hz), 5.21 (2H, s), 6.11 (1H, t, J=6.9 Hz), 7.07 (2H, td, J=2.5, 8.7 Hz), 7.22-7.31 (2H, m), 7.54 (2H, td, J=2.5, 8.7 Hz), 8.52 (1H, s), 10.81 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 358 [M+H]+.【０１１７】
実施例１４
５−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−１４）の製造
【化４１】
2014196624.tif 000043
【０１１８】
工程１
前記化合物（IV-5）と同様な製造方法により、前記化合物（III-1）と２−ブロモ−３’−フルオロ−４’−メトキシアセトフェノン（II-14）から化合物（IV-14）（収量２３９ｍｇ、収率７５％）を得た。【０１１９】
工程２
前記化合物（IV-14）（２３７ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（６７ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）及び炭酸アンモニウム（３３１ｍｇ、３．４４ｍｍｏｌ）のエタノール（９５０μＬ）懸濁液に、２８％アンモニア水（９５０μＬ）を加え密閉し、１００℃で６４時間撹拌した。放冷後、反応溶液を水で希釈した後、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去した後、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル）で精製することで、化合物（I-14）（収量９８ｍｇ、収率３３％）を黄色固体として得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 2.00 (3H, s), 3.86 (3H, s), 4.49 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.57 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.12 (1H, t, J=6.9 Hz), 7.18-7.31 (4H, m), 7.41 (1H, dd, J=1.8, 8.2 Hz), 8.63 (1H, s), 10.91 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 346 [M+H]+.【０１２０】
実施例１５
５−（４−フルオロフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−１５）の製造
【化４２】
2014196624.tif 000044
【０１２１】
工程１
前記化合物（III-1）（２．１ｇ、１９．１ｍｍｏｌ）のアセトン（３０ｍＬ）溶液に、炭酸カリウム（３．１ｇ、２２．６ｍｍｏｌ）と４’−フルオロフェナシルクロリド（II-15）（３．０ｇ、１７．４ｍｍｏｌ）を加え、１９時間加熱還流した。放冷後、反応溶液を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去し、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル）で精製することで、化合物（IV-15）（収量２．６ｇ、収率６１％）を得た。【０１２２】
工程２
前記化合物（IV-15）（２００ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（６４ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）及び炭酸アンモニウム（３１３ｍｇ、３．２６ｍｍｏｌ）のエタノール（０．８ｍＬ）懸濁液に、２８％アンモニア水溶液（０．８ｍＬ）を加え密閉し、１００℃で６４時間撹拌した。放冷後、反応溶液を水で希釈し析出した固体をろ取し、水で洗浄することで、化合物（I-15）（収量１７８ｍｇ、収率６９％）を無色固体として得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.99 (3H, s), 4.45 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.61 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.11 (1H, t, J=6.9 Hz), 7.23-7.31 (4H, m), 7.64-7.71 (2H, m), 8.62 (1H, s), 10.89 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 316 [M+H]+.【０１２３】
実施例１６
５−（３，４−ジメトキシフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−１６）の製造
【化４３】
2014196624.tif 000045
【０１２４】
工程１
前記化合物（III-1）と同様な製造方法により、化合物（III-1）と２−ブロモ−１−（３，４−ジメトキシフェニル）エタノン（II-16）から化合物（IV-16）（収量２３１ｍｇ、収率７３％）を無色固体として得た。【０１２５】
工程２
前記化合物（IV-16）（２３０ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（８３ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）及び炭酸アンモニウム（３０８ｍｇ、３．２０ｍｍｏｌ）のエタノール（０．８ｍＬ）懸濁液に、２８％アンモニア水溶液（０．８ｍＬ）を加え密閉し、１００℃で６５時間撹拌した。放冷後、減圧下で溶媒を留去し、メタノールを加え析出した固体をろ過により除去した。減圧下ろ液の溶媒を留去し、少量のクロロホルムに溶解した。ヘキサンを加え析出した固体をろ取した後、クロロホルムで洗浄することで、化合物（I-16）（収量４６ｍｇ、収率１６％）を無色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 2.00 (3H, s), 3.75 (3H, s), 3.78 (3H, s), 4.48 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.54 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.11 (1H, t, J=6.6 Hz), 6.99 (1H, d, J=8.7 Hz), 7.15 (1H, dd, J=2.1, 8.7 Hz), 7.19-7.32 (3H, m), 8.55 (1H, s), 10.80 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 358 [M+H]+.【０１２６】
実施例１７
５−［４−（ｔｅｒｔ−ブチル）フェニル］−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−１７）の製造
【化４４】
2014196624.tif 000046
【０１２７】
工程１
前記化合物（III-1）（３３０ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）のジメチルスルホキシド（５．５ｍＬ）溶液に炭酸カリウム（９５０ｍｇ、６．９ｍｍｏｌ）と４’−ｔｅｒｔ−ブチルフェナシルクロリド（II-17）（３００ｍｇ、２．７ｍｍｏｌ）を加え、室温で撹拌した。ＴＬＣにより反応の完結を確認後、反応溶液を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去し、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製することで、化合物（IV-17）（収量７２３ｍｇ、収率９３％）を得た。【０１２８】
工程２
前記化合物（IV-17）（３００ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（８３ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）及び炭酸アンモニウム（４０７ｍｇ、４．２ｍｍｏｌ）のエタノール（１．１ｍＬ）懸濁液に、２８％アンモニア水溶液（１．１ｍＬ）を加え密閉し、１００℃で６４時間撹拌した。放冷後、反応溶液を水で希釈し析出した固体をろ取し、クロロホルムで洗浄することで、化合物（I-17）（収量３０１ｍｇ、収率８０％）を得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.28 (9H, s), 2.00 (3H, s), 4.45 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.61 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.12 (1H, t, J=6.9 Hz), 7.24-7.31 (2H, m), 7.45 (2H, d, J=8.2 Hz), 7.54 (2H, d, J=8.7 Hz), 8.52 (1H, s), 10.79 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 354 [M+H]+.【０１２９】
実施例１８
５−（２，４−ジメトキシフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−１８）の製造
【化４５】
2014196624.tif 000047
【０１３０】
工程１
前記化合物（IV-11）と同様な製造方法により、前記化合物（III-1）と２’，４’−ジメトキシフェナシルブロミド（II-18）から化合物（IV-18）（収量５９４ｍｇ、収率９０％）を得た。【０１３１】
工程２
前記化合物（IV-18）（３００ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（８２ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）及び炭酸アンモニウム（４０１ｍｇ、４．２ｍｍｏｌ）のエタノール（１．０ｍＬ）懸濁液に、２８％アンモニア水溶液（１．０ｍＬ）を加え密閉し、１００℃で６４．２５時間撹拌した。放冷後、減圧下で溶媒を留去し、残渣にメタノールを加え析出した固体をろ過により除去した。減圧下ろ液の溶媒を留去した後、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製することで、化合物（I-18）（収量２８５ｍｇ、収率７６％）を得た。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.99 (3H, s), 3.76 (3H, s), 3.78 (3H, s), 4.36 (1H, d, J=13.3 Hz), 4.86 (1H, d, J=13.3 Hz), 6.11 (1H, t, J=6.9 Hz), 6.55 (1H, dd, J=2.3, 8.7 Hz), 6.64 (1H, d, J=2.3 Hz), 7.21 (1H, d, J=6.9 Hz), 7.28 (1H, d, J=6.4 Hz), 7.40 (1H, d, J=8.7 Hz), 7.66 (1H, s), 10.68 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 358 [M+H]+.【０１３２】
実施例１９
５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］−５−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−１９）の製造
【化４６】
2014196624.tif 000048
【０１３３】
工程１
前記化合物（IV-3）と同様な製造方法により、前記化合物（III-1）と３’−（トリフルオロメチル）フェナシルブロミド（II-19）から化合物（IV-19）（収量３５５ｍｇ、収率６４％）を得た。【０１３４】
工程２
前記化合物（I-18）と同様な製造方法により、前記化合物（IV-19）から化合物（I-19）（収量２０７ｍｇ、収率５６％）を得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.97 (3H, s), 4.50 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.67 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.13 (1H, t, J=6.9 Hz), 7.29 (2H, d, J=6.9 Hz), 7.69 (1H, t, J=8.0 Hz), 7.77 (1H, d, J=7.3 Hz), 7.92-8.02 (2H, m), 8.76 (1H, s), 11.00 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 366 [M+H]+.【０１３５】
実施例２０
５−（２，５−ジメトキシフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−２０）の製造
【化４７】
2014196624.tif 000049
【０１３６】
工程１
前記化合物（IV-3）と同様な製造方法により、前記化合物（III-1）と２’，５’−ジメトキシフェナシルブロミド（II-20）から化合物（IV-20）（収量５９５ｍｇ、収率７２％）を得た。【０１３７】
工程２
前記化合物（I-18）と同様な製造方法により、前記化合物（IV-20）から化合物（I-20）（収量１７０ｍｇ、収率４６％）を得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.99 (3H, s), 3.73 (3H, s), 3.73 (3H, s), 4.43 (1H, d, J=13.3 Hz), 4.84 (1H, d, J=13.3 Hz), 6.11 (1H, t, J=6.7 Hz), 6.97 (1H, dd, J=3.0, 9.0 Hz), 7.05 (1H, d, J=9.2 Hz), 7.09 (1H, d, J=3.2 Hz), 7.23 (1H, d, J=6.9 Hz), 7.29 (1H, d, J=6.9 Hz), 7.73 (1H, s), 10.74 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 358 [M+H]+.【０１３８】
実施例２１
５−（４−フルオロ−２−メトキシフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−２１）の製造
【化４８】
2014196624.tif 000050
【０１３９】
工程１
前記化合物（IV-3）と同様な製造方法により、前記化合物（III-1）と４’−フルオロ−２’−メトキシフェナシルブロミド（II-21）から化合物（IV-21）（収量１９２ｍｇ、収率６０％）を無色固体として得た。【０１４０】
工程２
前記化合物（IV-21）（１９２ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（５５ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）及び炭酸アンモニウム（２８８ｍｇ、２．８０ｍｍｏｌ）のエタノール（０．７ｍＬ）懸濁液に、２８％アンモニア水溶液（０．７ｍＬ）を加え密閉し、１００℃で６３時間撹拌した。放冷後、反応溶液を水で希釈し析出した固体をろ取した。水及びクロロホルムで洗浄することで、化合物（I-21）（収量１７６ｍｇ、収率７３％）を無色固体として得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.99 (3H, s), 3.79 (3H, s), 4.41 (1H, d, J=13.3 Hz), 4.85 (1H, d, J=13.3 Hz), 6.11 (1H, t, J=6.6 Hz), 6.83 (1H, dt, J=2.7, 8.5 Hz), 7.04 (1H, dd, J=2.7, 11.0 Hz), 7.22 (1H, dd, J=1.4, 6.9 Hz), 7.28 (1H, m), 7.54 (1H, dd, J=6.4, 8.7 Hz), 7.78 (1H, s), 10.76 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 346 [M+H]+.【０１４１】
実施例２２
５−（ベンゾフラン−５−イル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−２２）の製造
【化４９】
2014196624.tif 000051
【０１４２】
工程１
前記化合物（IV-3）と同様な製造方法により、前記化合物（III-1）と５−（２−ブロモアセチル）ベンゾフラン（II-22）から化合物（IV-22）（収量２２４ｍｇ、収率７０％）を無色固体として得た。【０１４３】
工程２
前記化合物（I-15）と同様な製造方法により、前記化合物（IV-22）から化合物（I-22）（収量２１９ｍｇ、収率７７％）を無色固体として得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 2.00 (3H, s), 4.51 (1H, d, J=13.3 Hz), 4.68 (1H, d, J=13.3 Hz), 6.11 (1H, t, J=6.9 Hz), 7.03 (1H, dd, J=0.9, 2.3 Hz), 7.23-7.32 (2H, m), 7.60 (1H, dd, J=2.3, 8.7 Hz), 7.67 (1H, d, J=8.7 Hz), 7.94 (1H, d, J=1.8 Hz), 8.05 (1H, d, J=2.3 Hz), 8.62 (1H, s), 10.85 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 338 [M+H]+.【０１４４】
実施例２３
５−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−５−イル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−２３）の製造
【化５０】
2014196624.tif 000052
【０１４５】
工程１
前記化合物（IV-2）と同様な製造方法により、前記化合物（III-1）と１−（１−ベンゾチオフェン−５−イル）−２−ブロモ−１−エタノン（II-23）から化合物（IV-23）（収量２４１ｍｇ、収率７６％）を無色固体として得た。【０１４６】
工程２
前記化合物（I-15）と同様な製造方法により、前記化合物（IV-23）から化合物（I-23）（収量２６２ｍｇ、収率６４％）を淡黄色固体として得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 2.00 (3H, s), 4.54 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.72 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.12 (1H, t, J=6.7 Hz), 7.29 (2H, dd, J=0.9, 6.9 Hz), 7.52 (1H, d, J=7.5 Hz), 7.64 (1H, dd, J=1.8, 8.7 Hz), 7.83 (1H, d, J=5.5 Hz), 8.08 (1H, d, J=8.2 Hz), 8.30 (1H, d, J=1.8 Hz), 8.69 (1H, s), 10.86 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 354 [M+H]+.【０１４７】
実施例２４
５−［２−メトキシ−５−（トルフルオロメトキシ）フェニル］−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−２４）の製造
【化５１】
2014196624.tif 000053
【０１４８】
工程１
前記化合物（II-13）と同様な製造方法により、２’−メトキシ−５’−（トリフルオロメトキシ）アセトフェノン（XIII-4）から化合物（II-24）（収量８２０ｍｇ、収率９３％）を無色固体として得た。【０１４９】
工程２
前記化合物（IV-3）と同様な製造方法により、前記化合物（III-1）と前記化合物（II-24）から化合物（IV-24）（収量１０２ｍｇ、収率３３％）を得た。
工程３
前記化合物（IV-24）（１０２ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（２３ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）及び炭酸アンモニウム（１１５ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）のエタノール（０．３ｍＬ）懸濁液に、２８％アンモニア水溶液（０．３ｍＬ）を加え密閉し、１００℃で６４時間撹拌した。放冷後、反応溶液を水で希釈し析出した固体をろ取し、水で洗浄した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製することで、化合物（I-24）（収量４５ｍｇ、収率３７％）を無色固体として得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.98 (3H, s), 3.81 (3H, s), 4.46 (1H, d, J=13.3 Hz), 4.82 (1H, d, J=13.3 Hz), 6.12 (1H, t, J=6.9 Hz), 7.19-7.32 (3H, m), 7.45 (1H, m), 7.51 (1H, d, J=2.7 Hz), 7.90 (1H, s), 10.85 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 412 [M+H]+.【０１５０】
実施例２５
５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］−５−［４−（メチルスルホニル）フェニル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−２５）の製造
【化５２】
2014196624.tif 000054
【０１５１】
工程１
前記化合物（IV-3）と同様な製造方法により、前記化合物（III-1）と４’−（メチルスルホニル）フェナシルブロミド（II-25）から化合物（IV-25）（収量１７５ｍｇ、収率２１％）を得た。【０１５２】
工程２
前記化合物（I-17）と同様な製造方法により、前記化合物（IV-25）から化合物（I-25）（収量８６ｍｇ、収率６３％）を得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.99 (3H, s), 3.24 (3H, s), 4.48 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.72 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.14 (1H, t, J=6.9 Hz), 7.26-7.34 (2H, m), 7.91 (2H, d, J=8.7 Hz), 8.00 (2H, d, J=8.2 Hz), 8.72 (1H, s), 10.99 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 376 [M+H]+.【０１５３】
実施例２６
５−（クロマン−６−イル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−２６）の製造
【化５３】
2014196624.tif 000055
【０１５４】
工程１
前記化合物（IV-15）と同様な製造方法により、前記化合物（III-1）と２−クロロ−１−クロマン−６−イル−エタノン（II-26）から化合物（IV-26）（収量２５６ｍｇ、収率９９％）を得た。【０１５５】
工程２
前記化合物（I-21）と同様な製造方法により、前記化合物（IV-26）から化合物（I-26）（収量８１ｍｇ、収率２５％）を無色固体として得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.88-1.95 (2H, m), 2.00 (3H, s), 2.70-2.82 (2H, m), 4.06-4.20 (2H, m), 4.42 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.54 (1H, d, J=13.3 Hz), 6.11 (1H, t, J=6.9 Hz), 6.77 (1H, d, J=8.7 Hz), 7.22-7.34 (4H, m), 8.43 (1H, s), 10.75 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 354 [M+H]+.【０１５６】
実施例２７
５−（５−クロロ−２−メトキシフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−２７）の製造
【化５４】
2014196624.tif 000056
【０１５７】
工程１
前記化合物（IV-13）と同様な製造方法により、前記化合物（III-1）と、２−ブロモ−５’−クロロ−２’−メトキシアセトフェノン（II-27）から化合物（IV-27）（収量２２８ｍｇ、収率７２％）を得た。【０１５８】
工程２
前記化合物（I-17）と同様な製造方法により、前記化合物（IV-27）から化合物（I-27）（収量６１ｍｇ、収率２３％）をベージュ色固体として得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.99 (3H, s), 3.78 (3H, s), 4.45 (1H, d, J=13.2 Hz), 4.82 (1H, d, J=13.2 Hz), 6.12 (1H, t, J=6.9 Hz), 7.15 (1H, d, J=8.7 Hz), 7.22 (1H, m), 7.29 (1H, m), 7.47 (1H, dd, J=2.3, 8.7 Hz), 7.54 (1H, d, J=2.3 Hz), 7.83 (1H, br s), 10.82 (1H, br s).
MS (ESI-FTMS) m/z 362, 364 [M+H]+.【０１５９】
実施例２８
５−（３−フルオロフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−２８）の製造
【化５５】
2014196624.tif 000057
【０１６０】
工程１
前記化合物（IV-3）と同様な製造方法により、前記化合物（III-1）と３’−フルオロフェナシルブロミド（II-28）から化合物（IV-28）（収量１９５ｍｇ、収率４６％）を得た。【０１６１】
工程２
前記化合物（IV-28）（１９５ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（７８ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ）及び炭酸アンモニウム（３０６ｍｇ、３．１８ｍｍｏｌ）のエタノール（０．９ｍＬ）懸濁液に、２８％アンモニア水溶液（０．９ｍＬ）を加え密閉し、１００℃で６４時間撹拌した。放冷後、反応溶液を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。減圧下で溶媒を留去した後、酢酸エチル−ヘキサン（２：１）を加え、析出した固体をろ取することで、化合物（I-28）（収量１４０ｍｇ、収率５６％）を得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.99 (3H, s), 4.47 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.62 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.12 (1H, d, J=6.9 Hz), 7.20-7.31 (3H, m), 7.44-7.53 (3H, m), 8.63 (1H, s), 10.93 (1H, br s).
MS (ESI-FTMS) m/z 316 [M+H]+.【０１６２】
実施例２９
５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］−５−（２，４，５−トリフルオロフェニル）イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−２９）の製造
【化５６】
2014196624.tif 000058
【０１６３】
工程１
前記化合物（IV-15）と同様な製造方法により、前記化合物（III-1）と２’，４’，５’−トリフルオロフェナシルブロミド（II-29）から化合物（IV-29）（収量１３０ｍｇ、収率２５％）を得た。【０１６４】
工程２
前記化合物（IV-29）（１４０ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（４９ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）及び炭酸アンモニウム（１９２ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）のエタノール（０．８ｍＬ）懸濁液に、２８％アンモニア水溶液（０．８ｍＬ）を加え密閉し、１００℃で６４時間撹拌した。放冷後、反応溶液を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。減圧下で溶媒を留去し、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製することで、化合物（I-29）（収量５６ｍｇ、収率３２％）を得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (CDCl3) δ: 2.11 (3H, s), 4.20 (1H, d, J=13.7 Hz), 5.09 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.12 (1H, d, J=6.9 Hz), 7.04 (1H, m), 7.15 (1H, m), 7.23 (1H, m), 7.30 (1H, s), 7.60 (1H, m).
MS (ESI-FTMS) m/z 352 [M+H]+.【０１６５】
実施例３０
５−（４−フルオロ−３−メチルフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−３０）の製造
【化５７】
2014196624.tif 000059
【０１６６】
工程１
前記化合物（III-1）（３ｇ、２７．４９ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（９．５０ｇ、６８．７３ｍｍｏｌ）のジメチルスルホキシド（２７．５ｍＬ）懸濁液にｔｅｒｔ−ブチル  ２−ブロモアセタート（VI-1）（４．８１ｍＬ、３２．９９ｍｍｏｌ）を加え、室温で３．２５時間攪拌した。反応液に水を加え酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去し、化合物（VII-1）（収量５．７６ｇ、収率９４％）を得た。【０１６７】
工程２
前記化合物（VII-1）（５．７６ｇ、２５．８ｍｍｏｌ）のクロロホルム（２６ｍＬ）溶液にトリフルオロ酢酸（２６ｍＬ）を加え室温で１５時間攪拌した。減圧下溶媒を留去し、化合物（VIII-1）（収量４．５２ｇ、収率９９％）を得た。【０１６８】
工程３
前記化合物（VIII-1）（４．３１ｇ、２５．８ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（３．０２ｇ、３０．９６ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン（８．５１ｍＬ、７７．４０ｍｍｏｌ）及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物（４．７７ｇ、３０．９６ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２５．８ｍＬ）に溶解した後、水溶性カルボジイミド塩酸塩（５．９４ｇ、３０．９６ｍｍｏｌ）を加え、室温で１９４．２５時間撹拌した。反応液に水を加えクロロホルムで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去し、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル）で精製することで化合物（IX-1）（収量４．６３ｇ、収率８５％）を白色固体として得た。【０１６９】
工程４
−７８℃に冷却した前記化合物（IX-1）のテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）溶液に、４−フルオロ−３−メチルフェニルマグネシウムブロミド（Ｘ-1）の１．０ｍｏｌ／Ｌテトラヒドロフラン溶液（１．１ｍＬ、１．１ｍｍｏｌ）を滴下し、−７８℃で３０分間攪拌した。反応液に２ｍｏｌ／Ｌ塩酸を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で溶媒を留去した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル）で精製し、化合物（IV-30）（収量９０ｍｇ、収率３４％）を無色油状物として得た。【０１７０】
工程５
前記化合物（IV-17）と同様な製造方法により、前記化合物（IV-30）から化合物（I-30）（収量３０ｍｇ、収率２６％）を無色固体として得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 2.11 (3H, s), 2.29 (3H, d, J=1.4 Hz), 4.22 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.82 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.10 (1H, t, J=6.9 Hz), 7.02 (1H, t, J=8.7 Hz), 7.14 (1H, m), 7.21 (1H, m), 7.42-7.50 (2H, m), 8.77 (1H, br s).
MS (ESI-FTMS) m/z 330 [M+H]+.【０１７１】
実施例３１
５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］−５−［４−（ピリジン−４−イル）フェニル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−３１）の製造
【化５８】
2014196624.tif 000060
【０１７２】
工程１
前記化合物（IV-11）（４００ｍｇ、1.32ｍｍｏｌ）、（4−ピリジン）サイクリックトリオールボレートナトリウム塩（３２０ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（３４ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（６．５ｍＬ）溶液を脱気した後、アルゴン雰囲気下、酢酸パラジウム（１５ｍｇ、０．０６５ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（５０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を加え、９０℃で１５．５時間加熱した。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物（IV-31）（収量１０９ｍｇ、収率２２％）を得た。【０１７３】
工程２
オートクレーブ容器に前記化合物（IV-31）（９０ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（２３ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）、炭酸アンモニウム（１１４ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ）、エタノール（０．３ｍＬ）および飽和アンモニア水（０．３ｍＬ）を加え密閉し、１００℃で６３．７５時間撹拌した。減圧下で溶媒を留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物（I-31）（収量４２ｍｇ、収率３８％）を得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 2.00 (3H, s), 4.51 (1H, d, J=13.3 Hz), 4.68 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.14 (1H, t, J=6.9 Hz), 7.27-7.32 (2H, m), 7.75 (2H, dd, J=1.8, 4.6 Hz), 7.78 (2H, d, J=8.7 Hz), 7.90 (2H, d, J=8.7 Hz), 8.66 (2H, d, J=6.0 Hz), 8.69 (1H, s), 10.91 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z: 375 [M+H]+.【０１７４】
実施例３２
５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］−５−［４−（ピリジン−３−イル）フェニル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−３２）の製造
【化５９】
2014196624.tif 000061
【０１７５】
工程１
前記化合物（IV-11）（５００ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ）、３−ピリジルボロン酸（２２１ｍｇ、１．８０ｍｍｏｌ）およびリン酸三カリウム（５５５ｍｇ、２．６１ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（３．３ｍＬ）懸濁液を脱気した後、アルゴン雰囲気下、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（９４ｍｇ、０．０８２ｍｍｏｌ）を加え、９０℃で２２．５時間加熱した。反応液に水を加え酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物（IV-32）（収量２３２ｍｇ、収率４７％）を得た。【０１７６】
オートクレーブ容器に前記化合物（IV-32）（１９６ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（５０ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）、炭酸アンモニウム（２４８ｍｇ、２．５８ｍｍｏｌ）、エタノール（０．６４ｍＬ）および飽和アンモニア水（０．６４ｍＬ）を加え密閉し、１００℃で６６時間撹拌した。反応液に水を加え、析出した固体をろ取することで、化合物（I-32）（収量１８４ｍｇ、収率７６％）を得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 2.01 (3H, s), 4.52 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.68 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.14 (1H, t, J=6.9 Hz), 7.29 (2H, d, J=6.9 Hz), 7.51 (1H, dd, J=4.8, 8.0 Hz), 7.76 (2H, d, J=8.7 Hz), 7.83 (2H, d, J=8.7 Hz), 8.11 (1H, td, J=2.3, 8.2 Hz), 8.59 (1H, dd, J=1.4, 4.6 Hz), 8.66 (1H, s), 8.93 (1H, d, J=1.8 Hz), 10.89 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z: 375 [M+H]+.【０１７７】
実施例３３
５−［４−（３，３−ジメチルブト−１−イン−１−イル）フェニル］−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−３３）の製造
【化６０】
2014196624.tif 000062
【０１７８】
工程１
前記化合物（IV-11）（５００ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ）、３，３−ジメチルブト−１−イン（２２２μＬ、１．８０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２５０μＬ、１．８０ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（３．３ｍＬ）溶液を脱気した後、アルゴン雰囲気下、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（９４ｍｇ、０．０８２ｍｍｏｌ）およびヨウ化銅（３１ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を加え２２．２５時間加熱還流した。反応液に水を加え酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、前記化合物（IV-33）（収量５３１ｍｇ、定量的）を得た。【０１７９】
前記化合物（I-32）と同様な製造方法により、前記化合物（IV-33）から化合物（I-33）（収量２７０ｍｇ、収率７３％）を得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.29 (9H, s), 1.99 (3H, s), 4.44 (1H, d, J=13.3 Hz), 4.62 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.11 (1H, t, J=6.9 Hz), 7.22-7.29 (2H, m), 7.41 (2H, d, J=8.7 Hz), 7.59 (2H, d, J=8.2 Hz), 8.58 (1H, s), 10.88 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z: 378 [M+H]+.【０１８０】
実施例３４
５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］−５−［４−（ｐ−トリルオキシ）フェニル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−３４）の製造
【化６１】
2014196624.tif 000063
【０１８１】
工程１
前記化合物（IV-15）（１５０ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）、４−メチルフェノール（６６ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１２７ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド懸濁液を３時間加熱還流した。放冷後、反応溶液を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去し、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製することで、化合物（IV-34）（収量１２２ｍｇ、収率６０％）を得た。【０１８２】
工程２
前記化合物（IV-34）（１２２ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（２９ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）及び炭酸アンモニウム（１４１ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ）のエタノール（０．３５ｍＬ）懸濁液に、２８％アンモニア水溶液（０．３５ｍＬ）を加え密閉し、１００℃で６３時間撹拌した。放冷後、減圧下で溶媒を留去し、メタノールを加え析出した固体を吸引ろ過により除去した。減圧下、ろ液の溶媒を留去した後、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製することで、化合物（I-34）（収量５６ｍｇ、収率３８％）を無色固体として得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.99 (3H, s), 2.30 (3H, s), 4.45 (1H, d, J=13.3 Hz), 4.60 (1H, d, J=13.3 Hz), 6.12 (1H, t, J=6.9 Hz), 6.93 (2H, td, J=2.5, 8.2 Hz), 7.01 (2H, td, J=2.5, 8.7 Hz), 7.17-7.32 (4H, m), 7.60 (2H, td, J=2.5, 9.2 Hz), 8.57 (1H, d, J=1.4 Hz), 10.85 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 404 [M+H]+.【０１８３】
実施例３５
５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］−５−［４−（ｏ−トリルオキシ）フェニル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−３５）の製造
【化６２】
2014196624.tif 000064
【０１８４】
工程１
前記化合物（IV-34）と同様な製造方法により、前記化合物（IV-15）から化合物（IV-35）（収量１８８ｍｇ、収率９２％）を緑色油状物として得た。
前記化合物（IV-35）（１８８ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（４４ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）及び炭酸アンモニウム（２１７ｍｇ、２．２７ｍｍｏｌ）のエタノール（０．６ｍＬ）懸濁液に、２８％アンモニア水溶液（０．６ｍＬ）を加え密閉し、１００℃で６３時間撹拌した。放冷後、反応溶液を水で希釈、析出した固体をろ取した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製することで、化合物（I-35）（収量１０１ｍｇ、収率４５％）を無色固体として得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.99 (3H, s), 2.16 (3H, s), 4.45 (1H, d, J=13.3 Hz), 4.60 (1H, d, J=13.3 Hz), 6.11 (1H, t, J=6.4 Hz), 6.89-6.95 (3H, m), 7.14 (1H, dt, J=1.4, 7.2 Hz), 7.20-7.36 (4H, m), 7.59 (2H, td, J=2.5, 8.7 Hz), 8.55 (1H, s), 10.84 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 404 [M+H]+.【０１８５】
実施例３６
５−［４−（シクロへキセ−２−エン−１−イルオキシ）フェニル］−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−３６）の製造
【化６３】
2014196624.tif 000065
【０１８６】
工程１
前記化合物（III-1）（６８１ｍｇ、６．２ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）溶液に、炭酸セシウム（２．２ｇ、６．９ｍｍｏｌ）及び１−［４−（ベンジルオキシ）フェニル］−２−ブロモエタノン（II-30）（２．０ｇ、６．６ｍｍｏｌ）を加え、室温で２．５時間撹拌した。氷冷下で水を加え析出した固体をろ取し、水で洗浄することで化合物（IV-36）（収量１．９ｇ、収率８９％）を得た。【０１８７】
工程２
前記化合物（IV-36）（１．３ｇ、３．９ｍｍｏｌ）のクロロホルム（１０ｍＬ）溶液にトリフルオロ酢酸（１０ｍＬ）を加え、１４時間加熱還流した。放冷後、減圧下で溶媒を留去し、酢酸エチルを加え析出した固体をろ取し、ヘキサンで洗浄することで、化合物（IV-37）（収量８１３ｍｇ、収率８６％）を得た。
工程３
前記化合物（IV-37）（１００ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）と炭酸カリウム（８５ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５．０ｍＬ）懸濁液に３−ブロモシクロヘキセン（５０μＬ、０．４３ｍｍｏｌ）を加え、室温で２３時間撹拌した。反応溶液を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去し、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製することで、化合物（IV-38）（収量１１５ｍｇ、収率８６％）を黄色アモルファスとして得た。【０１８８】
工程４
前記化合物（I-34）と同様な製造方法により、前記化合物（IV-38）から化合物（I-36）（収量７７ｍｇ、収率５２％）を無色固体として得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.47-1.81 (3H, m), 1.85-2.16 (6H, m), 4.44 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.53 (1H, d, J=13.3 Hz), 4.89 (1H, m), 5.79 (1H, m), 5.92 (1H, m), 6.11 (1H, t, J=6.9 Hz), 6.96-7.03 (2H, m), 7.17-7.32 (2H, m), 7.48-7.56 (2H, m), 8.51 (1H, d, J=1.4 Hz), 10.79 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 394 [M+H]+.【０１８９】
実施例３７
５−［４−（シクロヘキシルオキシ）フェニル］−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−３７）の製造
【化６４】
2014196624.tif 000066
【０１９０】
工程１
前記化合物（I-36）（５０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）のメタノール（２．０ｍＬ）溶液に、１０％パラジウム炭素（２０ｍｇ）を加え、水素雰囲気下４時間攪拌した。反応液をセライト濾過し、メタノールで洗浄した。減圧下で溶媒を留去し、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製することで、化合物（I-37）（３６ｍｇ、収率７２％）を無色固体として得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.20-1.46 (5H, m), 1.48-1.58 (1H, m), 1.66-1.76 (2H, m), 1.87-1.95 (2H, m), 1.99 (3H, s), 4.32-4.40 (1H, m), 4.43 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.56 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.11 (1H, t, J=6.9 Hz), 6.97 (2H, d, J=8.7 Hz), 7.20-7.33 (2H, m), 7.50 (2H, d, J=8.7 Hz), 8.50 (1H, s), 10.78 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 396 [M+H]+.【０１９１】
実施例３８
５−［４−（シクロへキセ−２−エン−１−イルオキシ）−１−メチルフェニル］−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−３８）の製造
【化６５】
2014196624.tif 000067
【０１９２】
工程１
１−（４−ヒドロキシ−３−メチルフェニル）エタノン（XIII-4）（１．２ｇ、８．０ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）溶液に、６０％水素化ナトリウム（３８４ｍｇ、９．６ｍｍｏｌ）を加え、室温で３０分撹拌した。３−ブロモシクロヘキセン（１．５ｇ，９．６ｍｍｏｌ）を加え、室温で終夜撹拌した。氷水を加え反応を停止し、酢酸エチルで抽出した。有機層を水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去し、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製することで、化合物（XIII-5）（収量１．７１ｇ、収率８８％）を得た。【０１９３】
工程２
前記化合物（XIII-5）（１．０ｇ、４．１ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（４０ｍＬ）溶液に、フェニルトリメチルアンモニウムトリブロミド（１．７ｇ、４．０ｍｍｏｌ）を加え室温で２時間撹拌後、４時間加熱還流した。放冷後、析出した固体をろ過し、減圧下でろ液の溶媒を留去することで粗化合物（II-31）（収量１．２ｇ）を得た。
工程３
前記化合物（III-1）（４０７ｍｇ、３．７ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（７．５ｍＬ）溶液に、炭酸セシウム（１．５ｇ、４．１ｍｍｏｌ）及び粗前記化合物（II-31）（１．２ｇ）を加え、室温で終夜撹拌した。反応溶液を水で希釈後、酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下で溶媒を留去し、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製することで、化合物（IV-39）（収量４４９ｍｇ、２段階、通算収率３３％）を得た。【０１９４】
工程４
前記化合物（IV-39）（４４９ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（１３０ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）及び炭酸アンモニウム（５１１ｍｇ、５．３ｍｍｏｌ）のエタノール（１．５ｍＬ）懸濁液に、２８％アンモニア水溶液（１．５ｍＬ）を加え密閉し、１００℃で撹拌した。放冷後、反応液に水を加え酢酸エチルで抽出後、有機層を水で洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で溶媒を留去することで、化合物（I-38）（収量４１０ｍｇ、収率７６％）を得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (CDCl3) δ: 1.58-1.97 (4H, m), 2.08-2.18 (2H, m), 2.13 (3H, s), 2.23 (3H, s), 4.20 (1H, d, J=13.7Hz), 4.78 (1H, m), 4.85 (1H, d, J=13.7Hz), 5.85 (1H, m), 5.96 (1H, m), 6.09 (1H, t, J=6.9Hz), 6.88 (1H, d, J=8.7Hz), 6.93 (1H, s), 7.14 (1H, d, J=6.9Hz), 7.20 (1H, d, J=6.9Hz), 7.34-7.41 (2H, m).
MS (ESI-FTMS) m/z 408 [M+H]+.【０１９５】
実施例３９
５−［４−（シクロペンチルオキシ）−３−メチルフェニル］−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−３９）の製造
【化６６】
2014196624.tif 000068
【０１９６】
工程１
前記化合物（XIII-6）（８００ｍｇ、５．３ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（８．０ｍＬ）溶液に、６０％水素化ナトリウム（２３５ｍｇ、５．９ｍｍｏｌ）を加え室温で撹拌した。ヨウ化シクロペンチル（１．２ｇ、５．９ｍｍｏｌ）を加え６０℃で３時間撹拌後、８０℃で４時間撹拌した。氷水を加え反応を停止後、酢酸エチルで抽出し、有機層を水で洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下で溶媒を留去し、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製することで、化合物（XIII-7）（収量６３５ｍｇ、収率５２％）を得た。【０１９７】
実施例３８記載の前記化合物（I-38）と同様な製造方法（実施例３８の工程２〜４）により、前記化合物（XIII-7）から３段階で化合物（I-39）（収量４９０ｍｇ、３段階、通算収率４５％）を得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (CDCl3) δ: 1.57-1.94 (8H, m), 2.13 (3H, s), 2.19 (3H, s), 4.20 (1H, d, J=13.7Hz), 4.77 (1H, m), 4.85 (1H, d, J=13.7Hz), 6.08 (1H, t,J=6.9Hz), 6.81 (1H, d J=9.2Hz), 6.90 (1H, br s), 7.14 (1H, d, J=6.9Hz), 7.20 (1H, d, J=6.9Hz), 7.34-7.36 (1H, m), 7.37 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 396 [M+H]+．【０１９８】
実施例４０
５−（４−ベンジルフェニル）−５−[（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル]イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−４０）の製造
【化６７】
2014196624.tif 000069
【０１９９】
工程１
前記化合物（III-1）（１８０ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５．０ｍＬ）溶液に、炭酸セシウム（５９０ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）及び１−（４−ベンジルフェニル）−２−ブロモエタノン（II-33）（５００ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）を加え、室温で３時間撹拌した。反応溶液に水を加えることで析出する固体をろ取し、水で洗浄することで、化合物（IV-41）（収量４７５ｍｇ、収率９１％）を得た。【０２００】
工程２
前記化合物（IV-41）（４７５ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（１１７ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）及び炭酸アンモニウム（５７５ｍｇ、６．０ｍｍｏｌ）のエタノール（１．５ｍＬ）懸濁液に、２８％アンモニア水溶液（１．５ｍＬ）を加え密閉し、１００℃で６４時間撹拌した。放冷後、反応液に水を加え酢酸エチルで抽出後、有機層を水で洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下で溶媒を留去し、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製することで、化合物（I-40）（収量４６６ｍｇ、収率８０％）を無色固体として得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.99 (3H, s), 3.95 (2H, s), 4.43 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.59 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.10 (1H, t, J=6.6 Hz), 7.15-7.31 (9H, m), 7.53 (2H, d, J=8.7 Hz), 8.52 (1H, s), 10.81 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 388 [M+H]+.【０２０１】
実施例４１
５−［４−（４−フルオロベンジル）フェニル］−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−４１）の製造
【化６８】
2014196624.tif 000070
【０２０２】
工程１
氷冷下、１−ベンジル−４−フルオロベンゼン（XII-1）（１．０ｇ、５．４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５．４ｍＬ）溶液に、クロロアセチルクロリド（４２７μＬ、５．４ｍｍｏｌ）及び塩化アルミニウム（７１６ｍｇ、５．４ｍｍｏｌ）を加え１５分間撹拌した。反応溶液に水を加えクロロホルムで抽出後、飽和重曹水、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去することで粗化合物（II-34）を得た。【０２０３】
工程２
粗前記化合物（II-34）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３．０ｍＬ）に溶解させ、炭酸カリウム（１．９ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）を加えた後、前記化合物（III-1）（５８６ｍｇ、５．４ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２．４ｍＬ）溶液を滴下し、室温で２時間撹拌した。反応溶液を水で希釈した後、酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下で溶媒を留去し、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製することで、化合物（IV-43）（収量１．５ｇ、２段階、収率８４％）を得た。
工程３
前記化合物（IV-43）（１．４ｇ、４．２ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（３２６ｍｇ、５．０ｍｍｏｌ）及び炭酸アンモニウム（１．６ｇ、１６．７ｍｍｏｌ）のエタノール（４．２ｍＬ）懸濁液に、水（４．２ｍＬ）を加え密閉し、１００℃で１６時間撹拌した。放冷後、反応液に水を加え析出した固体をろ取し、クロロホルムで洗浄することにより、化合物（I-41）（収量１．６ｇ、収率９５％）を得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.99 (3H, s), 3.94 (2H, s), 4.44 (1H, d, J=13.3 Hz), 4.60 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.10 (1H, t, J=6.7 Hz), 7.10 (2H, t, J=9.0 Hz), 7.20-7.32 (6H, m), 7.54 (2H, d, J=8.2 Hz), 8.51 (1H, s), 10.81 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 406 [M+H]+.【０２０４】
実施例４２
５−［４−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）フェニル］−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−４２）の製造
【化６９】
2014196624.tif 000071
【０２０５】
工程１
前記化合物（I-3）（２２１ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ）、塩化アンモニウム（１１０ｍｇ、２．０６ｍｍｏｌ）およびアジ化ナトリウム（１２４ｍｇ、２．０６ｍｍｏｌ）にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３．４ｍＬ）を加え８０℃で１時間、１１０℃で１２．５時間加熱攪拌した。反応液を放冷後、２ｍｏｌ／Ｌ塩酸を加え析出した固体をろ取した。固体を溶解後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物（I-42）（収量１０１ｍｇ、収率４０％）を得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 2.00 (3H, s), 4.51 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.72 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.13 (1H, t, J=6.9 Hz), 7.30 (2H, d, J=6.4 Hz), 7.86 (2H, d, J=8.7 Hz), 8.10 (2H, d, J=8.7 Hz), 8.68 (1H, d, J=1.4 Hz), 10.56 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z: 366 [M+H]+.【０２０６】
実施例４３
５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］−５−（４−ビニルフェニル）イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−４３）の製造
【化７０】
2014196624.tif 000072
【０２０７】
工程１
前記化合物（IV-11）（４００ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）、４，４，５，５−テトラメチル−２−ビニル−１，３，２−ジオキサボロラン（２４２ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）及びリン酸三カリウム（６９５ｍｇ、３．３ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（６．５ｍＬ）懸濁液を脱気した後、アルゴン雰囲気下、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（７６ｍｇ、０．０６６ｍｍｏｌ）を加え９０℃で加熱攪拌した。ＴＬＣで反応終了を確認後、反応液に水を加え酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で溶媒を留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル）で精製し、化合物（IV-44）（収量２５３ｍｇ、収率７６％）を得た。【０２０８】
工程２
前記化合物（I-17）と同様な製造方法により、前記化合物（IV-44）から化合物（I-43）（収量１８２ｍｇ、収率５９％）を得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 2.00 (3H, s), 4.47 (1H, d, J=13.3 Hz), 4.62 (1H, d, J=13.7 Hz), 5.31 (1H, d, J=11.4 Hz), 5.89 (1H, d, J=17.9 Hz), 6.11 (1H, t, J=6.9 Hz), 6.75 (1H, dd, J=10.8, 17.7 Hz), 7.27 (2H, dd, J=6.7, 11.7 Hz), 7.53 (2H, d, J=8.7 Hz), 7.60 (2H, d, J=8.7 Hz), 8.58 (1H, s), 10.85 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 324 [M+H]+.【０２０９】
実施例４４
５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］−５−（３，４，５−トリフルオロフェニル）イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−４４）の製造
【化７１】
2014196624.tif 000073
【０２１０】
工程１
前記化合物（IV-3）と同様な製造方法により、前記化合物（III-1）と２−ブロモ−３’，４’，５’−トリフルオロアセトフェノン（II-35）から化合物（IV-45）（収量１８９ｍｇ、収率１９％）を得た。【０２１１】
工程２
前記化合物（I-11）と同様な製造方法により、前記化合物（IV-45）から化合物（I-44）（収量１５８ｍｇ、収率７０％）を淡黄色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.98 (3H, s), 4.47 (1H, m), 4.61 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.14 (1H, t, J=6.9 Hz), 7.22-7.33 (2H, m), 7.48-7.65 (2H, m), 8.64 (1H, br s), 11.07 (1H, br s).
MS (ESI-FTMS) m/z 352 [M+H]+.【０２１２】
実施例４５
５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］−５−（４−プロピルフェニル）イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−４５）の製造
【化７２】
2014196624.tif 000074
【０２１３】
工程１
前記化合物（II-31）と同様な製造方法により、４’−プロピルアセトフェノン（XIII-8）から化合物（II-36）（収量７４３ｍｇ、収率＞９９％）を無色油状物として得た。【０２１４】
工程２
前記化合物（IV-4）と同様な製造方法により、前記化合物（III-1）と化合物（II-36）から化合物（IV-46）（収量２９４ｍｇ、収率６９％）を得た。
工程３
前記化合物（I-24）と同様な製造方法により、前記化合物（IV-46）から化合物（I-45）（収量２１ｍｇ、収率５．８％）を無色固体として得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 0.88 (3H, t, J=7.3 Hz), 1.58 (2H, sext, J=7.3 Hz), 2.00 (3H, s), 2.56 (2H, t, J=7.6 Hz), 4.45 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.60 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.11 (1H, t, J=6.6 Hz), 7.18-7.31 (4H, m), 7.52 (2H, d, J=8.7 Hz), 8.52 (1H, s), 10.80 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 340 [M+H]+.【０２１５】
実施例４６
５−［（２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］−５−フェニルイミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−４６）の製造
【化７３】
2014196624.tif 000075
【０２１６】
工程１
ピリジン−２−オール（Ｖ-1）（３００ｍｇ、３．１５ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（１．１３ｇ、３．４７ｍｍｏｌ）にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（６．３ｍＬ）を加えた後、前記化合物（II-1）（６９１ｍｇ，３．４７ｍｍｏｌ）を加え室温で１時間攪拌した。反応液に水を加え酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物（IV-47）（収量 ６０２ｍｇ，収率 ９０％）を得た。【０２１７】
工程２
オートクレーブ容器に前記化合物（IV-47）（３００ｍｇ，１．４１ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（１１０ｍｇ，１．６９ｍｍｏｌ）、炭酸アンモニウム（５４２ｍｇ，５．６４ｍｍｏｌ）およびエタノール（１．４ｍＬ）、水（１．４ｍＬ）を加え密閉し、１００℃で２１．５時間撹拌した。反応液に水を加え、析出した固体をろ取することで、化合物（I-46）（収量２２６ｍｇ、収率５７％）を得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 4.25 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.65 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.19 (1H, dt, J=1.4, 6.9 Hz), 6.39 (1H, dt, J=1.4, 8.7 Hz), 7.35-7.48 (5H, m), 7.60-7.66 (2H, m), 8.58 (1H, s), 10.85 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z: 284 [M+H]+.【０２１８】
実施例４７
５−（４−メトキシフェニル）−５−［（２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−４７）の製造
【化７４】
2014196624.tif 000076
【０２１９】
工程１
前記化合物（IV-47）と同様な製造方法により、前記化合物（Ｖ-1）および前記化合物（II-2）から化合物（IV-48）（収量３８４ｍｇ、収率９０％）を得た。【０２２０】
工程２
オートクレーブ容器に前記化合物（IV-48）（３００ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（９６ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）、炭酸アンモニウム（４７４ｍｇ、４．９３ｍｍｏｌ）およびエタノール（１．２ｍＬ）、飽和アンモニア水（１．２ｍＬ）を加え密閉し、１００℃で６３．７５時間撹拌した。反応液に水を加え、析出した固体をろ取しクロロホルムで洗浄することで、化合物（I-47）（収量１１２ｍｇ、収率２９％）を得た。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 3.76 (3H, s), 4.42 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.58 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.19 (1H, dt, J=1.4, 6.9 Hz), 6.39 (1H, d, J=9.2 Hz), 6.99 (2H, d, J=9.2 Hz), 7.35-7.43 (2H, m), 7.53 (2H, d, J=9.2 Hz), 8.53 (1H, s), 10.81 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z: 314 [M+H]+.【０２２１】
実施例４８
５−［（３−フルオロ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］−５−（４−フルオロフェニル）イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−４８）の製造
【化７５】
2014196624.tif 000077
【０２２２】
工程１
３−フルオロピリジン−２−オール（Ｖ-2）（３００ｍｇ、３．１５ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（１．１３ｇ、３．４７ｍｍｏｌ）にアセトン（６．３ｍＬ）を加えた後、２−クロロ−１−（４−フルオロフェニル）エタノン（II-37）（６９１ｍｇ、３．４７ｍｍｏｌ）を加え１時間加熱還流した。反応液をろ過後、減圧下で溶媒を留去した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物（IV-49）（収量３９５ｍｇ、収率９０％）を得た。【０２２３】
工程２
前記化合物（I-46）と同様な製造方法により、前記化合物（IV-49）から化合物（I-48）（収量１６６ｍｇ、収率４３％）を得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 4.48 (1H, d, J=13.3 Hz), 4.72 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.19 (1H, dt, J=4.6, 7.3 Hz), 7.19-7.24 (1H, m), 7.26-7.34 (2H, m), 7.40 (1H, ddd, J=1.6, 7.6, 9.4 Hz), 7.63-7.70 (2H, m), 8.77 (1H, s), 10.96 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z: 320 [M+H]+.【０２２４】
実施例４９
５−（［１，１’−ビフェニル］−４−イル）−５−［（３−フルオロ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−４９）の製造
【化７６】
2014196624.tif 000078
【０２２５】
工程１
前記化合物（Ｖ-2）（２２６ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（６２８ｍｇ、４．５４ｍｍｏｌ）にジメチルスルホキシド（３．６ｍＬ）を加えた後、１−（［１，１’−ビフェニル］−４−イル）−２−ブロモエタノン（II-38）（５００ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ）を加え室温で１．２５時間攪拌した。反応液に水を加え、析出した固体をろ取し、化合物（IV-50）（収量６６５ｍｇ、定量的）を得た。【０２２６】
工程２
オートクレーブ容器に前記化合物（IV-50）（３００ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（７６ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ）、炭酸アンモニウム（３７５ｍｇ、３．９０ｍｍｏｌ）およびエタノール（０．９８ｍＬ）、水（０．９８ｍＬ）を加え密閉し、１００℃で４３時間撹拌した。反応液に水を加え、析出した固体をろ取しクロロホルムで洗浄することで、化合物（I-49）（収量１７６ｍｇ、収率４８％）を得た。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 4.54 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.79 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.21 (1H, dt, J=4.6, 6.9 Hz), 7.26 (1H, d, J=7.3 Hz), 7.36-7.58 (4H, m), 7.67-7.84 (6H, m), 8.80 (1H, s), 10.96 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z: 378 [M+H]+.【０２２７】
実施例５０
５−［（３−クロロ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］−５−フェニルイミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−５０）の製造
【化７７】
2014196624.tif 000079
【０２２８】
工程１
前記化合物（IV-47）と同様な製造方法により、３−クロロピリジン−２−オール（Ｖ-3）および前記化合物（II-1）から化合物（IV-51）（収量５２９ｍｇ、収率９２％）を得た。【０２２９】
工程２
オートクレーブ容器に前記化合物（IV-51）（３００ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（９５ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ）、炭酸アンモニウム（４６５ｍｇ、４．８４ｍｍｏｌ）およびエタノール（１．２ｍＬ）、水（１．２ｍＬ）を加え密閉し、１００℃で６２．２５時間撹拌した。減圧下で溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することで、化合物（I-50）（収量３２３ｍｇ、収率８４％）を得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 4.49 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.76 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.24 (1H, t, J=7.1 Hz), 7.36-7.49 (4H, m), 7.59-7.66 (2H, m), 7.75 (1H, dd, J=1.8, 7.3 Hz), 8.68 (1H, s), 10.91 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z: 318, 320 [M+H]+.【０２３０】
実施例５１
５−（ベンゾフラン−２−イル）−５−［（３−クロロ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−５１）の製造
【化７８】
2014196624.tif 000080
【０２３１】
工程１
前記化合物（IV-50）と同様な製造方法により、前記化合物（Ｖ-3）および１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−ブロモエタノン（II-39）から化合物（IV-52）（収量２７７ｍｇ、収率５０％）を得た。
オートクレーブ容器に前記化合物（IV-52）（２５０ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（６８ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ）、炭酸アンモニウム（３３４ｍｇ、３．４８ｍｍｏｌ）およびエタノール（０．８７ｍＬ）、飽和アンモニア水（０．８７ｍＬ）を加え密閉し、１００℃で６４．７５時間撹拌した。減圧下で溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することで、化合物（I-51）（収量１６３ｍｇ、収率５２％）を得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 4.81 (2H, s), 6.26 (1H, t, J=7.1 Hz), 7.14 (1H, s), 7.29 (1H, dt, J=0.9, 7.3 Hz), 7.37 (1H, dt, J=1.3, 7.3 Hz), 7.46 (1H, dd, J=2.1, 7.6 Hz), 7.60-7.72 (2H, m), 7.76 (1H, dd, J=1.8, 7.3 Hz), 8.77 (1H, s), 11.16 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z: 358, 360 [M+H]+.【０２３２】
実施例５２
５−［（３−ブロモ−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］−５−（４−メトキシフェニル）イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−５２）の製造
【化７９】
2014196624.tif 000081
【０２３３】
工程１
３−ブロモピリジン−２−オール（Ｖ-4）（２．０ｇ、１１．４９ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（４．４９ｇ、１３．７９ｍｍｏｌ）にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２３ｍＬ）を加えた後、前記化合物（II-2）（２．９０ｇ、１２．６４ｍｍｏｌ）を加え室温で１．７５時間攪拌した。反応液に水を加え酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物（IV-53）（収量２．０９ｇ、収率５６％）を得た。【０２３４】
前記化合物（I-47）と同様な製造方法により、前記化合物（IV-53）から化合物（I-52）（収量１４４ｍｇ、収率３９％）を得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 3.76 (3H, s), 4.46 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.69 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.17 (1H, t, J=6.9 Hz), 6.99 (2H, d, J=9.2 Hz), 7.41 (1H, dd, J=1.6, 6.6 Hz), 7.53 (2H, d, J=8.7 Hz), 7.91 (1H, dd, J=1.8, 7.3 Hz), 8.68 (1H, s), 10.86 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z: 392, 394 [M+H]+.【０２３５】
実施例５３
５−［（３−エチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］−５−（４−メトキシフェニル）イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−５３）の製造
【化８０】
2014196624.tif 000082
【０２３６】
工程１
前記化合物（IV-53）（５００ｍｇ、１．５５ｍｍｏｌ）、エチルボロン酸（１２６ｍｇ、１．７１ｍｍｏｌ）およびリン酸三カリウム（８２２ｍｇ、３．８８ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（７．８ｍＬ）懸濁液を脱気した。アルゴン雰囲気下テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（９０ｍｇ、０．０７８ｍｍｏｌ）を加え９０℃で１７時間加熱攪拌した。反応液に水を加え酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物（IV-54）（収量２８６ｍｇ、収率６８％）を得た。【０２３７】
工程２
前記化合物（I-47）と同様の製造方法により、前記化合物（IV-54）から化合物（I-53）（収量１１３ｍｇ、収率３１％）を得た。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.07 (3H, t, J=7.3 Hz), 2.40 (2H, q, J=7.3 Hz), 3.77 (3H, s), 4.46 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.56 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.14 (1H, t, J=6.9 Hz), 6.95-7.02 (2H, m), 7.20-7.28 (2H, m), 7.50-7.58 (2H, m), 8.49 (1H, s), 10.80 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z: 342 [M+H]+.【０２３８】
実施例５４
５−（３−ヒドロキシフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキシピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（Ｉ−５４）の製造
【化８１】
2014196624.tif 000083
【０２３９】
工程１
１−（２−（３−（ベンジルオキシ）フェニル）−２−オキソエチル）−３−メチルピリジン−２（１Ｈ）−オン（IV-55）（３６１ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ）のクロロホルム（１ｍＬ）溶液にトリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を加え室温で１４．５時間攪拌後、２３．５時間加熱還流した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下で溶媒を留去した後、クロロホルムを加え析出した固体をろ取することで、化合物（IV-56）（収量１１６ｍｇ、収率４４％）で得た。【０２４０】
工程２
前記化合物（IV-56）（１００ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（３２ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）、炭酸アンモニウム（１５８ｍｇ、１．６４ｍｍｏｌ）およびエタノール（０．４１ｍＬ）、飽和アンモニア水（０．４１ｍＬ）を加え密閉し、１００℃で６５時間撹拌した。減圧下で溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することで、化合物（I-54）（収量９３ｍｇ、収率７２％）を得た。物性値を以下に示す。
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 2.00 (3H, s), 4.42 (1H, d, J=13.3 Hz), 4.59 (1H, d, J=13.3 Hz), 6.11 (1H, t, J=6.9 Hz), 6.76 (1H, dd, J=1.2, 8.0 Hz), 7.00-7.07 (2H, m), 7.18-7.32 (3H, m), 8.49 (1H, s), 9.60 (1H, s), 10.79 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z: 378 [M+H]+.【０２４１】
化合物Ｉ−7と同様な製造方法で、化合物Ｉ−５５を合成した。化合物の構造と物性値を表１に示す。
化合物Ｉ−１０と同様な製造方法で、化合物Ｉ−１４５、Ｉ−１４６、Ｉ−１４７、Ｉ−１４８、Ｉ−１５１、Ｉ−１５３、Ｉ−１５４、Ｉ−１５５、Ｉ−１５６、Ｉ−１５７を合成した。各化合物の構造と物性値を表１２および表１３に示す。
化合物Ｉ−１１と同様な製造方法で、化合物Ｉ−５６、Ｉ−５７を合成した。各化合物の構造と物性値を表１に示す。
化合物Ｉ−１５と同様な製造方法で、化合物Ｉ−５９、Ｉ−７７を合成した。各化合物の構造と物性値を表１および表３に示す。
化合物Ｉ−１６と同様な製造方法で、化合物Ｉ−６０を合成した。化合物の構造と物性値を表１に示す。
化合物Ｉ−１８と同様な製造方法で、化合物Ｉ−６１を合成した。化合物の構造と物性値を表１に示す。
化合物Ｉ−１９と同様な製造方法で、化合物Ｉ−６９、Ｉ−７０を合成した。各化合物の構造と物性値を表２に示す。
化合物Ｉ−２０と同様な製造方法で、化合物Ｉ−１０５を合成した。化合物の構造と物性値を表７に示す。【０２４２】
化合物Ｉ−２１と同様な製造方法で、化合物Ｉ−６５、Ｉ−６７を合成した。各化合物の構造と物性値を表２に示す。
化合物Ｉ−２２と同様な製造方法で、化合物Ｉ−７６、Ｉ−１２０を合成した。各化合物の構造と物性値を表３および表８に示す。
化合物Ｉ−２４と同様な製造方法で、化合物Ｉ−６６、Ｉ−１１９を合成した。各化合物の構造と物性値を表２および表８に示す。
化合物Ｉ−２５と同様な製造方法で、化合物Ｉ−７８、Ｉ−７９、Ｉ−８９、Ｉ−１２５、Ｉ−１２６、Ｉ−１２７、Ｉ−１２８を合成した。各化合物の構造と物性値を表３、表５および表９に示す。
化合物Ｉ−３１と同様な製造方法で、化合物Ｉ−９２、Ｉ−９３、Ｉ−９４、Ｉ−９５を合成した。各化合物の構造と物性値を表５に示す。
化合物Ｉ−３２と同様な製造方法で、化合物Ｉ−６２、Ｉ−７２、Ｉ−７３、Ｉ−７４、Ｉ−７５、Ｉ−９０、Ｉ−９１、Ｉ−９６、Ｉ−１０９を合成した。各化合物の構造と物性値を表１、表２、表３、表５および表７に示す。
化合物Ｉ−３３と同様な製造方法で、化合物Ｉ−５８、Ｉ−６３、Ｉ−７１、Ｉ−１０６、Ｉ−１１０を合成した。各化合物の構造と物性値を表１、表２および表７に示す。【０２４３】
化合物Ｉ−３４と同様な製造方法で、化合物Ｉ−６４、Ｉ−６８、Ｉ−８０、Ｉ−８１、Ｉ−８６、Ｉ−９７、Ｉ−１００、Ｉ−１１３を合成した。各化合物の構造と物性値を表２、表３、表４、表６および表８に示す。
化合物Ｉ−３５と同様な製造方法で、化合物Ｉ−８２、Ｉ−８３、Ｉ−８４、Ｉ−８５、Ｉ−８７、Ｉ−９８、Ｉ−９９、Ｉ−１０１、Ｉ−１０２、Ｉ−１０３、Ｉ−１０４、Ｉ−１１１、Ｉ−１１２、Ｉ−１１４、Ｉ−１２２、Ｉ−１２３を合成した。各化合物の構造と物性値を表４、表６、表７、表８および表９に示す。
化合物Ｉ−３６と同様な製造方法で、化合物Ｉ−８８を合成した。化合物の構造と物性値を表４に示す。
化合物Ｉ−３７と同様な製造方法で、化合物Ｉ−１０７、Ｉ−１１５、Ｉ−１１６、Ｉ−１１７、Ｉ−１１８、Ｉ−１３１を合成した。各化合物の構造と物性値を表７、表８および表１０に示す。
化合物Ｉ−３９と同様な製造方法で、化合物Ｉ−１２４、Ｉ−１２９を合成した。各化合物の構造と物性値を表９および表１０に示す。
化合物Ｉ−４０と同様な製造方法で、化合物Ｉ−１４９、Ｉ−１５０、Ｉ−１５２を合成した。各化合物の構造と物性値を表１３に示す。
化合物Ｉ−４１と同様な製造方法で、化合物Ｉ−１３０を合成した。化合物の構造と物性値を表１０に示す。【０２４４】
化合物Ｉ−４３と同様な製造方法で、化合物Ｉ−１０８を合成した。化合物の構造と物性値を表７に示す。
化合物Ｉ−４５と同様な製造方法で、化合物Ｉ−１２１を合成した。化合物の構造と物性値を表９に示す。
化合物Ｉ−４６と同様な製造方法で、化合物Ｉ−１３２、Ｉ−１３３、Ｉ−１３４、Ｉ−１３７、Ｉ−１３８、Ｉ−１３９、Ｉ−１４０を合成した。各化合物の構造と物性値を表１１および表１２に示す。
化合物Ｉ−４７と同様な製造方法で、化合物Ｉ−１４１、Ｉ−１４２を合成した。各化合物の構造と物性値を表１２に示す。
化合物Ｉ−４９と同様な製造方法で、化合物Ｉ−１３５を合成した。化合物の構造と物性値を表１１に示す。
化合物Ｉ−５０と同様な製造方法で、化合物Ｉ−１３６、Ｉ−１４３を合成した。各化合物の構造と物性値を表１１および表１２に示す。
化合物Ｉ−５３と同様な製造方法で、化合物Ｉ−１４４を合成した。化合物の構造と物性値を表１２に示す。【０２４５】
【表１】
2014196624.tif 000084
【０２４６】
【表２】
2014196624.tif 000085
【０２４７】
【表３】
2014196624.tif 000086
【０２４８】
【表４】
2014196624.tif 000087
【０２４９】
【表５】
2014196624.tif 000088
【０２５０】
【表６】
2014196624.tif 000089
【０２５１】
【表７】
2014196624.tif 000090
【０２５２】
【表８】
2014196624.tif 000091
【０２５３】
【表９】
2014196624.tif 000092
【０２５４】
【表１０】
2014196624.tif 000093
【０２５５】
【表１１】
2014196624.tif 000094
【０２５６】
【表１２】
2014196624.tif 000095
【０２５７】
【表１３】
2014196624.tif 000096
【０２５８】
実施例５５
（＋）−５−（３，４−ジフルオロフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン及び（−）−５−（３，４−ジフルオロフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオンの製造
【化８２】
2014196624.tif 000097
（式中、アスタリスク（*）は、光学的に純粋な形態であることを意味する。）
【０２５９】
高速液体クロマトグラフ（LaChrom Elite、日立ハイテクノロジーズ（株））に分取用カラム（CHIRALPAK AD）を取り付け、ノルマルヘキサン−エタノール（30:70）をカラム温度40 ℃、流速8 mL/minで1時間通液し、平衡化した。実施例１０で製造した化合物（Ｉ−１０；ラセミ体、（±）−Ｉ−１０とも記す）（14 mg）のノルマルヘキサン−エタノール（30:70、2 mL）溶液を注入後、UV検出器を観察しながら、第一ピーク（およそ１２．５分後〜およそ１５．５分後）および第二ピーク（およそ１８分後〜およそ２３分後）をそれぞれ分取した。同様の操作を繰り返した後、それぞれ減圧下溶媒を留去した。第一ピークを示す化合物として（＋）−５−（３，４−ジフルオロフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（（＋）−Ｉ−１０）（収量 86 mg、光学純度 >99.9％ee）および第二ピークを示す化合物として（−）−５−（３，４−ジフルオロフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（収量 84 mg、光学純度 99.8％ee）を得た。
それぞれの物性値を以下に示す。
（＋）−５−（３，４−ジフルオロフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（（＋）−Ｉ−１０）
HPLC 保持時間14.4分
（分析条件、カラム：CHIRALPAK AD-H 4.6φ×250 mm、移動相：n-ヘキサン：エタノール＝40：60、流速：0.5 mL/min、カラム温度：30℃、検出波長：254 nm）
[α]D26.7= +229.9° (c 1.0, CHCl3)
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 1.98 (3H, s), 4.46 (1H, d, J=13.3 Hz), 4.60 (1H, d, J=13.3 Hz), 6.12 (1H, t, J=6.9 Hz), 7.25 (1H, d, J= 6.9 Hz), 7.29 (1H, d, J= 6.0 Hz), 7.45-7.58 (2H, m), 7.65-7.73 (1H, m), 8.63 (1H, s), 10.98 (1H, s).
MS (ESI-FTMS) m/z 334 [M+H]+.【０２６０】
（−）−５−（３，４−ジフルオロフェニル）−５−［（３−メチル−２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル］イミダゾリジン−２，４−ジオン（（−）−Ｉ−１０）
HPLC 保持時間33.8分
（分析条件、カラム：CHIRALPAK AD-H 4.6φ×250 mm、移動相：n-ヘキサン：エタノール＝40：60、流速：0.5 mL/min、カラム温度：30℃、検出波長：254 nm）
[α]D27.3= −196.7° (c1.0, CHCl3)
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 1.98 (3H, s), 4.46 (1H, d, J=13.7 Hz), 4.60 (1H, d, J=13.7 Hz), 6.12 (1H, t, J=6.7 Hz), 7.25 (1H, d, J= 6.9 Hz), 7.29 (1H, d, J= 6.4 Hz), 7.45-7.58 (2H, m), 7.69 (1H, ddd, J=2.3, 7.8, 12.4 Hz), 8.62 (1H, s), 10.98 (1H, s).【０２６１】
（試験例１）ＴＡＣＥ（ＡＤＡＭ１７）阻害実験
上記実施例において得られたピリドン誘導体のＴＡＣＥに対する阻害作用の有無を調べた。
ＴＡＣＥの塩基配列はモス（Moss）らにより報告されている（Moss, M. L. et al., Nature 1997年, 385巻, 733-736ページ）。この情報を基にＴＨＰ−１細胞などから定法にしたがってＴＡＣＥのｃＤＮＡを取得し、これを発現ベクターに組み込み、次いでこのベクターを哺乳動物細胞あるいは昆虫細胞に形質転換し、ＴＡＣＥタンパク質を発現させた。ＴＡＣＥタンパク質を単離し、酵素として使用した。また、基質としては、膜結合型ＴＮＦのＴＡＣＥ切断配列を含んだ蛍光合成基質  Nma(N−メチルアントラニル酸)-Leu-Ala-Gln-Ala-Val-Arg-Ser-Ser-Lys(Dnp(ジニトロフェニル))-D-Arg-NH2  を用いた。酵素反応は、アッセイバッファーＢ(２００ｍＭ塩化ナトリウム、５ｍＭ塩化カルシウム、１０μＭ硫酸亜鉛、０．０５％ＰＬＵＲＯＮＩＣ  Ｆ−６８を含む、５０ｍＭ  トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．５））にて２０μＭに調製した蛍光合成基質９０μＬに、被験物質溶液１．８μＬを加え、その後でアッセイバッファーＡ（２００ｍＭ塩化ナトリウム、５ｍＭ塩化カルシウム、１０μＭ硫酸亜鉛、２ｍｇ／ｍＬ牛血清アルブミンを含む、５０ｍＭトリス−塩酸緩衝液(ｐＨ７．５））にて調製したTACE酵素液９０μＬを混合し、３７℃で１．５時間反応させた。この後、蛍光強度計(Labsystems, Fluoroskan Ascent)にて、励起波長３５５ｎｍ、測定波長４６０ｎｍの条件で測定し、酵素活性を求めた。被験物質の存在下及び非存在下の酵素活性を比較して、被験物質の阻害率を求め、５０％阻害濃度(ＩＣ50)を算出した。さらに、このＩＣ50をその強さに応じて、１００ｎＭ未満をＡ、１００ｎＭ以上１０００ｎＭ未満をＢと評点した。
表１４（１）および（２）ならびに表１５（１）および（２）にラセミ体である化合物Ｉ−１〜Ｉ−１５７の結果を示す。
【表１４】
2014196624.tif 000098
【表１５】
2014196624.tif 000099
【０２６２】
また、実施例５５に記載の方法にて得られた化合物（＋）−Ｉ−１０（光学活性体）は、ＩＣ50値が１００ｎＭ未満のＴＡＣＥ阻害活性を示し、その評点は、「Ａ」であった。
以上の結果から明らかなように、本発明にかかる化合物（ピリドン誘導体）はいずれも低濃度にてＴＡＣＥ（ＡＤＡＭ１７）の酵素活性を阻害することが確認された。【０２６３】
（試験例２）  ｉＰＳ細胞由来の血小板に対する機能維持効果の検証
＜ヒトｉＰＳ細胞及びフィーダー細胞の調製＞
ヒトｉＰＳ細胞（ｈｉＰＳ  ｃｅｌｌｓ）は、東京大学でヒト由来の皮膚細胞にＯｃｔ４、Ｋｌｆ４、Ｓｏｘ２、及びｃ−Ｍｙｃを導入して樹立したｉＰＳ細胞株（ＴｋＤＡ３−４）を、０．１ｍＭ  非必須アミノ酸（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）、ＰＳＧ（１００Ｕ／ｍＬ  ペニシリン、１００μｇ／ｍＬ  ストレプトマイシン、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）、２０％
ノックアウト血清代替添加物（ＫＳＲ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）、０．１ｍＭ  ２−メルカプトエタノール（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）、及び５ｎｇ／ｍＬ  塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ、和光純薬株式会社製）を添加したダルベッコ変法イーグル培地とハムＦ−１２培地(Ｓｉｇｍａ社製）との混合培地（混合比率１：１）中、１０μｇ／ｍＬ  マイトマイシンＣ（和光純薬株式会社製）処理によって不活化したマウス線維芽細胞上で培養し、３〜７日毎に継代して、未分化状態を維持したものを使用した。【０２６４】
さらに、理研バイオリソースセンターから購入したマウス胎児由来の線維芽細胞  Ｃ３Ｈ１０Ｔ１／２細胞株（以下、「１０Ｔ１／２細胞」とも称する）を１０％  ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ社製）及びＰＳＧ（１００Ｕ／ｍＬ  ペニシリン、１００μｇ／ｍＬ  ストレプトマイシン、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を添加したイーグル基礎培地（ＢＭＥ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）中で培養した。そして、マイトマイシンＣ処理によって予め不活化した１０Ｔ１／２細胞を細胞数８×１０５個／１０ｃｍディッシュになるように播種したものをフィーダー細胞として用いた。【０２６５】
＜巨核球及び血小板の産生、並びにこれらの解析＞
前記フィーダー細胞上に、ヒトｉＰＳ細胞を撒き（目安として細胞数５×１０４〜１×１０５個／１０ｃｍディッシュ）、１５％  ＦＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）、ＰＳＧ（１００Ｕ／ｍＬ  ペニシリン、１００μｇ／ｍＬ  ストレプトマイシン、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）、ＩＴＳサプリメント（１０μｇ／ｍＬ  インスリン、５．５ｍｇ／ｍＬ  ヒトトランスフェリン、６．７ｎｇ／ｍＬ  亜セレン酸ナトリウム）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）、５０μｇ／ｍＬ  アスコルビン酸（Ｓｉｇｍａ社製）、０．４５ｍＭのα−モノチオグリセロール（ＭＴＧ、Ｓｉｇｍａ社製）、２０ｎｇ／ｍＬ  血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ、Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ社製）を添加したイスコフ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ、Ｓｉｇｍａ社製）中で培養した。また、この培養はＣＯ２インキュベーター（製品名：ＨＥＲＡ  ＣＥＬＬ  １５０ｉ、Ｔｈｅｒｍｏ  ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ社製）を用いて、３７℃、５％ＣＯ２下で実施した。そして、３〜４日毎に培地交換を行い、内部に造血前駆細胞を含んだｓａｃ構造体（ネット様構造物）が多数確認される１４〜１５日目まで、かかる条件で培養した。【０２６６】
次に、ｓａｃ構造体をディッシュから剥がして破砕し、４０μｍセルストレイナー（ＢＤ社製）を通過させた後に、１５００ｒｐｍ、８分間遠心分離して造血前駆細胞を回収し、３％  ＦＢＳを含むリン酸緩衝液（ＰＢＳ）に懸濁した後に細胞数をカウントした。新たに、６ウェル（ｗｅｌｌ）プレートに用意したマイトマイシンＣ処理済みの１０Ｔ１／２細胞（６×１０５個／６ウェルプレート１枚）上に造血前駆細胞を２〜３×１０４個／ウェルで播き、１５％  ＦＢＳ（製品名：Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）、ＰＳＧ（１００Ｕ／ｍＬ  ペニシリン、１００μｇ／ｍＬ  ストレプトマイシン、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）、ＩＴＳサプリメント（１０μｇ／ｍＬ  インスリン、５．５ｍｇ／ｍＬ  ヒトトランスフェリン、６．７ｎｇ／ｍＬ  亜セレン酸ナトリウム）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）、５０μｇ／ｍＬ  アスコルビン酸（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）、０．４５ｍＭ  ＭＴＧ（Ｓｉｇｍａ社製）、１００ｎｇ／ｍＬ  ヒトトロンボポイエチン（ヒトＴＰＯ、Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ社製）、５０ｎｇ／ｍＬ  ヒト幹細胞因子（ヒトＳＣＦ、Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ社製）及び２５Ｕ／ｍＬ  ヘパリンを添加したＩＭＤＭ（Ｓｉｇｍａ社製）中でさらに９〜１０日間培養し、巨核球／血小板を誘導した。【０２６７】
誘導した巨核球／血小板を抗凝固剤液（Ａｃｉｄ  Ｃｉｔｒａｔｅ  Ｄｅｘｔｒｏｓｅ、ＡＣＤ）にて回収した後、各ウェルの１／２５量の回収液を抗体を用いて染色した。使用した抗体は、ａｌｌｏｐｈｙｃｏｃｙａｎｉｎ（ＡＰＣ）標識抗ＣＤ４１ａ（インテグリンαＩＩｂβ３複合体、ＨＩＰ８  ｃｌｏｎｅ、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社製）抗体、Ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ（ＰＥ）修飾抗ヒトＣＤ４２ｂ（ＧＰＩｂα、ＨＩＰ１ ｃｌｏｎｅ、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）抗体およびｅＦｌｕｏｒ（登録商標） ４５０修飾抗ヒトＣＤ４２a（ＧＰＩＸ、ＧＲ−Ｐ ｃｌｏｎｅ、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）抗体である。解析する細胞数の絶対数を正確に測定するために、ＴｒｕＣｏｕｎｔ Ｔｕｂｅｓ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）を使用し、各チューブの細胞数の１／１０量（即ち、各ウェルあたりの細胞数の１／２５０）の細胞をフローサイトメトリーにて解析した。使用したフローサイトメトリーはＢｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製のＦＡＣＳＡｒｉａＩＩ及びＦＡＣＳＶｅｒｓｅである。尚、血小板には１０種類以上の接着分子が存在しているが、ＣＤ４１a（ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａ）は、巨核球、血小板と一部の造血前駆細胞に、ＣＤ４２a（ＧＰＩＸ）及びＣＤ４２ｂ（ＧＰＩｂα）は、巨核球・血小板に限局的に発現し、血小板マーカーとして汎用される血小板膜糖蛋白として知られている。そこで、誘導された血小板を数えるために、ＣＤ４１a（＋）ＣＤ４２a（＋）細胞は、ヒト末梢血から得られた新鮮血小板と同じ大きさであり、かつ、ＣＤ４１aおよびＣＤ４２a陽性な血小板が含まれるようにゲーティングを実施した。さらに、ＣＤ４１a（＋）ＣＤ４２a（＋）ＣＤ４２ｂ（＋）細胞は、ＣＤ４１a（＋）ＣＤ４２a（＋）細胞のうち、新鮮血小板の９９％以上の血小板が含まれるようなＣＤ４２ｂ発現量でゲーティングを実施して、計数した。【０２６８】
＜本発明化合物の評価＞
前述の通りにして得られたｉＰＳ細胞由来の造血前駆細胞に対して、図１＜プロトコール１＞に示した条件下で血小板の誘導を行った。ｉＰＳ細胞由来の造血前駆細胞を播き直してから、プロトコール１において示す「ｄ１４もしくはｄ１５」に被験物質を培地に添加し、９〜１０日間処理した。被験物質は、本発明にかかる化合物の代表例として化合物（＋）−Ｉ−１０（以下、Ｓ−１０８４７０と表す）を、陽性対照として国際公開２０１２／０３６２５７号に記載されているＴＡＣＥ阻害剤（以下「ＴＡＣＥ阻害剤Ｓ」ということがある）を、それぞれ用いた。陰性対照は、ＤＭＳＯ（媒体対照）とした。培養終了後に前述の通り細胞を回収して、フローサイトメトリーにて、ＣＤ４１a（＋）ＣＤ４２a（＋）血小板とＣＤ４１a（＋）ＣＤ４２a（＋）ＣＤ４２ｂ(＋）血小板を計数した。実験１回毎に、各群に１ウェルずつ設け、実験を７回繰り返し、得られたデータの平均＋標準偏差で表した。【０２６９】
得られたＣＤ４１a（＋）ＣＤ４２a（＋）血小板数は、図２に示すように、媒体対照群に比べてＳ−１０８４７０群（１０及び３０μＭ）で若干多いものの、群間に大きな差を認めなかった。なお、ＴＡＣＥ阻害剤Ｓ（１５μＭ）群においても、媒体対照群に比べて、得られたＣＤ４１a（＋）ＣＤ４２a（＋）血小板数は、群間に大きな差を認めなかった（図示せず）。次に、各群におけるＣＤ４１a（＋）ＣＤ４２a（＋）ＣＤ４２ｂ（＋）血小板の割合を検討した。図３に示すように、媒体対照群に比べて、Ｓ−１０８４７０群（１０及び３０μＭ）群は、有意にＣＤ４１a（＋）ＣＤ４２a（＋）ＣＤ４２ｂ（＋）血小板の割合が増加していた。この結果から明らかなように、本発明にかかる化合物であるＳ−１０８４７０は、ｉＰＳ細胞を用いた培養系において、細胞障害性を示さず、血小板の分化に影響を与えず、ＡＤＡＭ１７によるＧＰＩｂαのシェディングを阻害することが確認された。すなわち、本発明にかかる化合物であるＳ−１０８４７０を、培養液中に添加することによって、血小板の機能が維持されることが確認された。
なお、ＴＡＣＥ阻害剤Ｓ（１５μＭ）群においても有意にＣＤ４１a（＋）ＣＤ４２a（＋）ＣＤ４２ｂ（＋）血小板の割合が増加していた（図示せず）。【０２７０】
（試験例３）  ヒト末梢血由来の血小板に対する機能維持効果における濃度依存性についての検証
前述のような培養系を用いて得られた血小板だけでなく、採血によって得られた末梢血由来の血小板においても、本発明にかかる化合物は機能維持効果を発揮するかを検証した。先ず、採血して得られたヒト末梢血にその１／１０量のＡＣＤを加え、ブレーキ無し、９００ｒｐｍで１０分間遠心した。遠心して得られた上清を更にブレーキ無し、１５００ｒｐｍで１５分間遠心した後、上清を除去した。得られた沈殿物をＴｙｒｏｄｅ−ＨＥＰＥＳバッファー（カルシウム含まず）に懸濁し、懸濁液中の血小板数を数え、一定数（約５×１０７個）/Ｔｙｒｏｄｅ−ＨＥＰＥＳバッファー（カルシウム含まず）２００μＬになるように血小板を含む懸濁液（洗浄血小板、Ｗａｓｈｅｄ  Ｐｌａｔｅｌｅｔ）を調製した。次に、図１に示したプロトコール２のとおり、得られた洗浄血小板に１００μＭ  ＣＣＣＰ（Ｃａｒｂｏｎｙｌ  ｃｙａｎｉｄｅ  ｍ−ｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ  ｈｙｄｒａｚｏｎｅ）と共に、Ｓ−１０８４７０（０．１〜１００μＭ）、ＴＡＣＥ阻害剤Ｓ（５０μＭ）又はＤＭＳＯを添加し、３７℃で２０時間インキュベーションし、フローサイトメトリーにて、ＣＤ４１a（＋）血小板におけるＣＤ４２ｂ（ＧＰＩｂα）（＋）の細胞数を測定した。なお、ＣＣＣＰの添加により、血小板表面上のＧＰＩｂαのシェディングは亢進することが知られている（Ｂｅｒｇｍｅｉｅｒら、Ｂｌｏｏｄ、２００３年、１０２巻、４２２９〜４２３５ページ参照）。【０２７１】
図４に示すように、Ｓ−１０８４７０（０．１〜１００μＭ）は、濃度依存的にＧＰＩｂαのシェディングを阻害した。このように、本発明にかかる化合物であるＳ−１０８４７０は、ヒト末梢血由来の血小板に対する機能維持効果を有していることが確認された。
なお、ＴＡＣＥ阻害剤Ｓ（５０μＭ）群においてもＧＰＩｂαのシェディングの阻害が確認された（図示せず）。
【産業上の利用可能性】
【０２７２】
以上説明したように、本発明によれば、ＡＤＡＭ１７のメタロプロテアーゼ活性を特異的に抑制し、ＧＰＩｂαのシェディングを抑制することによって、血小板の機能を維持することが可能となる。したがって、本発明の組成物は、機能的に安定し、安全性の高い血小板を、煩雑な作用を要さず、効率良く大量に生産するための試薬や、血液製剤における血小板の機能を維持し、その品質の安定化を図るための医薬品添加剤などとして有用である。
【図１】
2014196624.tif 000116
【図２】
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【図３】
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【図４】
2014196624.tif 000119
【国際調査報告】
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2014196624.tif 000121
2014196624.tif 000122
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