(57)【要約】  より治療効果の高い癌治療剤の提供。  クルクミン及びその誘導体から選ばれる１種以上と、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体及び抗ＰＤ−Ｌ２抗体から選ばれる１種以上とを組み合わせたことを特徴とする癌治療剤。【特許請求の範囲】
【請求項１】
クルクミン及びその誘導体から選ばれる１種以上と、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体及び抗ＰＤ−Ｌ２抗体から選ばれる１種以上とを組み合わせたことを特徴とする癌治療剤。
【請求項２】
クルクミンの誘導体が、ビスデスメトキシクルクミン、デスメトキシクルクミン及びテトラヒドロクルクミンから選ばれる１種以上である請求項１記載の癌治療剤。
【請求項３】
クルクミン及びその誘導体から選ばれる１種以上を１日量として１０mg〜１０ｇ組み合わせるものである請求項１又は２記載の癌治療剤。
【請求項４】
抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体及び抗ＰＤ−Ｌ２抗体が、ヒト化抗体である請求項１〜３のいずれか１項記載の癌治療剤。
【請求項５】
さらに、免疫賦活剤及び／又は癌化学療法剤を組み合わせてなる請求項１〜４のいずれか１項記載の癌治療剤。
【請求項６】
クルクミン及びその誘導体から選ばれる１種以上を含有する製剤と、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体及び抗ＰＤ−Ｌ２抗体から選ばれる１種以上を含有する製剤の組み合わせである請求項１〜５のいずれか１項記載の癌治療剤。
【請求項７】
癌を治療するための、クルクミン及びその誘導体から選ばれる１種以上と、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体及び抗ＰＤ−Ｌ２抗体から選ばれる１種以上との組み合わせ。
【請求項８】
癌治療剤製造のための、クルクミン及びその誘導体から選ばれる１種以上と、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体及び抗ＰＤ−Ｌ２抗体から選ばれる１種以上との組み合わせの使用。
【請求項９】
クルクミン及びその誘導体から選ばれる１種以上と、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体及び抗ＰＤ−Ｌ２抗体から選ばれる１種以上とを、同時又は別個に投与することを特徴とする癌の治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新たな癌治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在、癌免疫療法は、癌の標準的な治療法である外科手術、化学療法、放射線療法に加え、新しい癌治療法の一つとして開発が進められており、治療効果が認められている（非特許文献１）。【０００３】
一般に、Ｔ細胞の活性化は、細胞膜上に発現する抗原レセプター（ＴＣＲ）を介した刺激と、共役刺激分子群を介した補助刺激により、正や負に制御されている。活性化したＴ細胞は負のフィードバックとして働くＣＴＬＡ−４やＰＤ−１などの分子によって抑制されるが、このしくみを癌細胞が利用し、活性化したＴ細胞を抑制することで、癌細胞は免疫監視機構から逃避し、増殖をし続ける。
そのため、癌細胞によるＴ細胞の抑制を回避する方法として、Ｔ細胞上の抑制性共役刺激分子に対する阻害抗体で処理することより、Ｔ細胞活性化を誘導することが癌治療に有効であると考えられ、特許文献１及び２には、癌治療における新たな標的として、Ｔ細胞の抑制に関わるＰＤ−１（Ｔ細胞上に発現）、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２（癌細胞上に発現）に注目し、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ２を阻害する物質による免疫機能の回復、さらには賦活機構を介した癌細胞の増殖抑制に基づいた抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ２抗体を含有する癌治療剤に関する技術が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特許第４４０９４３０号公報
【特許文献２】特開２０１４−６５７４８号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Couzin-Frankle J. et al., Science, 2013, 20;342(6165):1432-1433
【非特許文献２】Topalian SL et al., N. Engl. J. Med., 2012, 28;366(26):2443-2454
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
前記抗体医薬は、近年高い治療効果が認められているが、効果の得られない症例や、十分な効果が認められていない症例もあり（非特許文献２）、これらの症例で効果を上げるための新しい方法の開発が課題となっている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
そこで本発明者は、前記抗体医薬の抗腫瘍効果を更に向上させる手段につき種々検討したところ、全く意外にも、前記抗体医薬と、クルクミン又はその誘導体とを併用すれば、抗腫瘍効果が相乗的に増強され、癌細胞の増殖が顕著に抑制されることを見出し、本発明を完成した。【０００８】
すなわち、本発明は、次の発明〔１〕〜〔９〕を提供するものである。
〔１〕クルクミン及びその誘導体から選ばれる１種以上と、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体及び抗ＰＤ−Ｌ２抗体から選ばれる１種以上とを組み合わせたことを特徴とする癌治療剤。
〔２〕クルクミンの誘導体が、ビスデスメトキシクルクミン、デスメトキシクルクミン及びテトラヒドロクルクミンから選ばれる１種以上である〔１〕記載の癌治療剤。
〔３〕クルクミン及びその誘導体から選ばれる１種以上を１日量として１０mg〜１０ｇ組み合わせるものである〔１〕又は〔２〕記載の癌治療剤。
〔４〕抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体及び抗ＰＤ−Ｌ２抗体が、ヒト化抗体である〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載の癌治療剤。
〔５〕さらに、免疫賦活剤及び／又は癌化学療法剤を組み合わせてなる〔１〕〜〔４〕のいずれかに記載の癌治療剤。
〔６〕クルクミン及びその誘導体から選ばれる１種以上を含有する製剤と、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体及び抗ＰＤ−Ｌ２抗体から選ばれる１種以上を含有する製剤の組み合わせである〔１〕〜〔５〕のいずれかに記載の癌治療剤。
〔７〕癌を治療するための、クルクミン及びその誘導体から選ばれる１種以上と、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体及び抗ＰＤ−Ｌ２抗体から選ばれる１種以上との組み合わせ。
〔８〕癌治療剤製造のための、クルクミン及びその誘導体から選ばれる１種以上と、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体及び抗ＰＤ−Ｌ２抗体から選ばれる１種以上との組み合わせの使用。
〔９〕クルクミン及びその誘導体から選ばれる１種以上と、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体及び抗ＰＤ−Ｌ２抗体から選ばれる１種以上とを、同時又は別個に投与することを特徴とする癌の治療方法。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の癌治療剤を用いれば、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ２抗体単独投与の場合に比べて格別顕著に優れた癌細胞増殖抑制効果が得られる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】実施例１〜３の投与スケジュールを示す図である。
【図２】実施例４〜５の投与スケジュールを示す図である。
【図３】クルクミン（５mg／kg／mouse）と抗ＰＤ−Ｌ１抗体との併用によるＭＣ３８マウス大腸癌細胞の増殖に及ぼす影響を示す図である。
【図４】クルクミン（３０mg／kg／mouse）と抗ＰＤ−Ｌ１抗体との併用によるＭＣ３８マウス大腸癌細胞の増殖に及ぼす影響を示す図である。
【図５】異なるクルクミン投与条件下におけるＭＣ３８マウス大腸癌細胞の増殖に及ぼす抗ＰＤ−Ｌ１抗体の投与時期の影響を示す図である。
【図６】クルクミン（５mg／kg／mouse）と抗ＰＤ−１抗体との併用によるＭＣ３８マウス大腸癌細胞の増殖に及ぼす影響を示す図である。
【図７】合成クルクミン（５mg／kg／mouse）と抗ＰＤ−１抗体との併用によるＭＣ３８マウス大腸癌細胞の増殖に及ぼす影響を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明の癌治療剤の有効成分は、（Ａ）クルクミン及びその誘導体から選ばれる１種以上と、（Ｂ）抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体及び抗ＰＤ−Ｌ２抗体から選ばれる１種以上との両者である。
【００１２】
（Ａ）クルクミンは、ウコン色素に含まれるクルクミノイドの主成分であり、下記構造式（１）で表される化合物である。
【００１３】
【化１】
2016104657.tif 000002
【００１４】
本発明に用いられるクルクミンは、化学合成されたクルクミンを用いてもよいし、ウコン色素として流通しているものを用いてもよい。ウコン色素としては、ショウガ科ウコン（Curcuma longa LINNE）の根茎の乾燥物を粉末にしたウコン末、該ウコン末を適当な溶媒（例えば、エタノール、油脂、プロピレングリコール、ヘキサン、アセトンなど）を用いて抽出して得られる粗製クルクミン或いはオレオレジン（ターメリックオレオレジン）、および精製したクルクミンを挙げることができる。
なお、クルクミンには、互変異性体であるケト型及びエノール型のいずれも含まれる。
【００１５】
クルクミン誘導体としては、デスメトキシクルクミン、ビスデスメトキシクルクミン、テトラヒドロクルクミン、ジヒドロキシテトラヒドロクルクミン等が挙げられる。なお、ウコン色素には、クルクミン、デスメトキシクルクミン及びビスデスメトキシクルクミンが含まれている。クルクミン誘導体としては、デスメトキシクルクミン、ビスデスメトキシクルクミン及びテトラヒドロクルクミンから選ばれる１種以上が好ましい。
【００１６】
（Ａ）クルクミン及びその誘導体から選ばれる１種以上としては、ウコン抽出物を用いるのが好ましく、クルクミン及びその誘導体から選ばれる１種以上を含有するウコン色素を用いるのがより好ましい。クルクミン及びその誘導体から選ばれる１種以上を含有するウコン色素の市販品としては、クルクミン及びその誘導体から選ばれる１種以上が含有されていれば特に制限はないが、体内への吸収性が高いものが好ましく、セラクルミン（セラバリューズ社製）が特に好ましい。また、クルクミン及びその誘導体から選ばれる１種以上は、結晶のものを用いてもよいし、非晶質のものを用いてもよいが、体内への高い吸収性の観点から、非晶質クルクミンが好ましく、特にクルクミンとヒドロキシプロピルメチルセルロース及びヒドロキシプロピルセルロースから選ばれる１種以上との非晶質クルクミン複合体が好ましい。
【００１７】
（Ｂ）抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体及び抗ＰＤ−Ｌ２抗体から選ばれる１種以上は、例えば前記特許文献１及び２に記載された抗体である。
【００１８】
これらの抗体としては、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１又はＰＤ−Ｌ２に対する抗体であって、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１又はＰＤ−Ｌ２による免疫抑制シグナルを阻害するものが好ましく、特に癌細胞の増殖を抑制する作用を有するものが好ましい。また、これらの抗体としては、ヒト由来抗体、マウス由来抗体、ラット由来抗体、ウサギ由来抗体またはヤギ由来抗体のいずれの抗体でもよく、さらにそれらのポリクローナル若しくはモノクローナル抗体、完全型若しくは短縮型（例えば、Ｆ（ａｂ’）2、Ｆａｂ’、ＦａｂまたはＦｖ断片）抗体、キメラ化抗体、ヒト化抗体または完全ヒト型抗体のいずれのものでもよい。より好ましくは、ヒト化抗体または完全ヒト型抗体であり、モノクローナル抗体である。
【００１９】
これらの抗体は、前記特許文献１及び２記載の方法によって製造することができる。抗ＰＤ−１抗体は既に医薬品として販売されており、これを用いることもできる。なお、好ましくは抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体であり、より好ましくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。
【００２０】
本発明の癌治療剤は、（Ａ）成分と（Ｂ）成分とを配合して一の剤型に製剤化したものでもよいし、（Ａ）成分と（Ｂ）成分を同時に又は別個に投与できるように、それぞれの成分を含有する別個の製剤であってもよい。また、別個の製剤とした場合には、両者を一緒に供給するキット製剤としてもよい。本発明においては、（Ａ）成分と（Ｂ）成分を同時に又は別個に投与できるようにした別個の製剤とするのが好ましい。
【００２１】
上記製剤の投与形態としては、特に制限はなく、例えば経口投与製剤、注射剤、坐剤、貼付剤、軟膏剤等が挙げられる。（Ａ）成分と（Ｂ）成分を別個の製剤とするには、それぞれ異なる投与形態でもよいし、同一の投与形態でもよい。例えば、（Ａ）成分も（Ｂ）成分も経口投与製剤；（Ａ）成分を経口投与製剤、（Ｂ）成分を注射剤；（Ａ）成分を注射剤、（Ｂ）成分を経口投与製剤；（Ａ）成分も（Ｂ）成分も注射剤、とすることができるが、（Ａ）成分を経口投与製剤、（Ｂ）成分を注射剤とするのが好ましい。
【００２２】
経口投与製剤の例としては、錠剤、被覆錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤等が挙げられる。経口投与製剤を製造するには、薬学的に許容される担体、例えば賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、希釈剤、安定化剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤等を配合することができる。
【００２３】
注射剤の例としては、静脈内注射、皮下注射、筋肉内注射等が挙げられるが、静脈内注射製剤がより好ましい。注射剤の製造にあたっては、薬学的に許容される担体、例えば緩衝剤、希釈剤、溶解補助剤、懸濁化剤、pH調整剤、安定化剤、等張化剤、無痛化剤等を配合することができる。
【００２４】
賦形剤としては、例えば、乳糖、ショ糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、マルトース、マンニトール、エリスリトール、キシリトール、マルチトール、イノシトール、デキストラン、ソルビトール、アルブミン、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸、メチルセルロース、グリセリン、アルギン酸ナトリウム、アラビアゴム及びこれらの混合物等が挙げられる。滑沢剤としては、例えば、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコール及びこれらの混合物等が挙げられる。結合剤としては、例えば、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、エチルセルロース、水、エタノール、リン酸カリウム及びこれらの混合物等が挙げられる。
【００２５】
崩壊剤としては、例えば、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、デンプン、乳糖及びこれらの混合物等が挙げられる。希釈剤としては、例えば、水、エチルアルコール、マクロゴール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類及びこれらの混合物等が挙げられる。安定化剤としては、例えば、ピロ亜硫酸ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸、チオグリコール酸、チオ乳酸及びこれらの混合物等が挙げられる。等張化剤としては、例えば、塩化ナトリウム、ホウ酸、ブドウ糖、グリセリン及びこれらの混合物等が挙げられる。ｐＨ調整剤及び緩衝剤としては、例えば、クエン酸ナトリウム、クエン酸、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム及びこれらの混合物等が挙げられる。無痛化剤としては、例えば、塩酸プロカイン、塩酸リドカイン及びこれらの混合物等が挙げられる。
【００２６】
本発明の癌治療剤における（Ａ）成分の投与量は、クルクミン及びその誘導体の成人１日投与量として１０mg〜１０ｇが好ましく、３０mg〜１０ｇがより好ましい。一方、（Ｂ）成分の投与量は、（Ｂ）成分の成人１日投与量として１μｇ〜１００mgが好ましい。また、本発明の癌治療剤は、（Ａ）成分、（Ｂ）成分をそれぞれ１日１回〜数回に分けて投与してもよい。
【００２７】
本発明癌治療剤が対象となる癌は特に制限されないが、ＰＤ−Ｌ１及び／又はＰＤ−Ｌ２を発現する癌が好ましい。具体的には、結腸・直腸癌、肝臓癌、腎臓癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、胆道癌、胆のう・胆管癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、子宮頚癌、子宮体癌、膀胱癌、前立腺癌、精巣腫瘍、骨・軟部肉腫、白血病、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫、皮膚癌、脳腫瘍、睾丸腫瘍等が挙げられる。
【００２８】
本発明の癌治療剤には、さらに免疫賦活剤及び／又は癌化学療法剤を組み合わせることができる。
そのような免疫賦活剤としては、例えば、各種サイトカインや腫瘍抗原などが挙げられる。免疫反応を刺激するサイトカインとしては、例えば、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターフェロン−α、β、γ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−１２などが挙げられる。また、Ｂ７リガンド誘導体、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体も免疫反応を高めることができる。
癌化学療法剤としては、例えば、アルキル化剤、ニトロソウレア剤、代謝拮抗剤、抗癌性抗生物質、植物由来アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ホルモン療法剤、ホルモン拮抗剤、アロマターゼ阻害剤、Ｐ糖蛋白阻害剤、白金錯体誘導体、その他免疫療法剤またはその他の抗癌剤が挙げられる。
【実施例】
【００２９】
次に本発明を挙げて本発明を更に詳細に説明する。【００３０】
実施例１〜５、比較例１〜１１
Ａ．方法
（１）供試動物
供試動物は、６週齢のＣ５６ＢＬ／６ｊマウス（雌性、体重約２０ｇ、日本クレア社）を購入し、２〜５日環境馴化させたものを用いた。
（２）移植方法
マウス大腸癌細胞株（ＭＣ３８）５×１０5個を供試動物の右側腹部の皮下に２７G針を用い移植した。【００３１】
（３）投与方法
前記大腸癌細胞株（ＭＣ３８）が接種されたマウス（ｎ＝５〜８）に、接種後３日目から実験が終了するまでの毎日、市販のクルクミン１０％含有製剤（セラクルミンＣＲ−０３１Ｐ、セラバリューズ社製）（実施例１〜４）又は下記のとおりに調製した合成クルクミン−ＨＰＭＣ複合体（実施例５）を水に懸濁して調製したクルクミン溶液２００μｌ（体重１kgあたりクルクミン含量が５mg又は３０mgが投与されるように調製したもの）をマウスに経口ゾンテを用い強制的に経口投与するとともに、図１に示したように、接種後（Ａ）３、５、７日目又は（Ｂ）７、１０、１３日目に抗ＰＤ−Ｌ１抗体（２００μｇ／１００μｌ／マウス）を腹腔内に投与し、若しくは、図２に示したように、接種後（Ｃ）８、１１、１４日目又は（Ｄ）９、１２、１５日目に抗ＰＤ−１抗体（２００μｇ／１００μｌ／マウス）を腹腔内に投与し、経日的にマウスの腫瘍サイズを調べた（実施例１〜５）。
なお、対照群は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（clone:10F.9G2 Bioxcell社製）又は抗ＰＤ−１抗体（clone:RMP1-14 Bioxcell社製）の代わりにRat IgG2b(clone:LTF-2 Bioxcell社製）を腹腔内に投与した場合をクルクミン単独投与群（比較例１、４、６、８及び１０）、クルクミン溶液の代わりに水を投与し、かつ、抗ＰＤ−Ｌ１抗体を投与した場合を抗ＰＤ−Ｌ１単独投与群（比較例２、５及び７）、クルクミン溶液の代わりに水を投与し、かつ、抗ＰＤ−１抗体を投与した場合を抗ＰＤ−１単独投与群（比較例９及び１１）及びクルクミン溶液の代わりに水を投与し、かつ、抗ＰＤ−Ｌ１抗体の代わりにRat IgG2b(clone:LTF-2 Bioxcell社製）を投与した場合を水投与群（比較例３）とした。【００３２】
（４）腫瘍サイズの評価
供試動物の腫瘍サイズは、２〜４日おきにノギスを用い腫瘍の長径と短径を測定し、次式によって算出した。【００３３】
（数１）
腫瘍サイズ＝長径×短径×短径÷２【００３４】
（５）合成クルクミン−ＨＰＭＣ複合体の調製方法
ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ：メトローズＳＥ−０６、信越化学工業社製）１２ｇを純水１６７ｍＬに溶解させてＨＰＭＣ溶液を調製した。一方、合成クルクミン（Ｃ２３０２、東京化成工業社製）６．０ｇを１ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液（ｐＨ１４）５０ｍＬに溶解させてクルクミン溶液を調製した。その後、上記ＨＰＭＣ溶液と合成クルクミン溶液とを混合し、該混合溶液のｐＨを１０ｍｏｌ／Ｌ塩酸水溶液を用いて６に調整することで非晶質クルクミンを含む合成クルクミンとヒドロキシプロピルメチルセルロースとの複合体を含有する液を調製した。
次いで、該複合体を含有する液をスプレードライヤＡＤＬ３１１Ｓ（ヤマト科学株式会社製）を用いて、ｉｎｌｅｔ  ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ  １６０℃、ｏｕｔｌｅｔ  ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ  ７５℃、ｓｐｒａｙ  ｐｒｅｓｓｕｒｅ  ０．１２ＭＰａ、ｆｅｅｄ  ｒａｔｅ  ６〜７ｍＬ／ｍｉｎの条件で噴霧乾燥することで粉末の非晶質クルクミンを含む合成クルクミンとヒドロキシプロピルメチルセルロースを調製した。【００３５】
Ｂ．結果
（１）クルクミン（５mg／kg／mouse）と抗ＰＤ−Ｌ１抗体との併用によるＭＣ３８マウス大腸癌腫瘍の増殖に及ぼす影響を調べた。
ＭＣ３８マウス大腸癌腫瘍の大きさは、図３に示したとおり、クルクミン（５mg／kg／mouse）と抗ＰＤ−Ｌ１抗体とを併用した場合（実施例１）では１０１０mm3（接種後２４日目）と、抗ＰＤ−Ｌ１抗体を単独投与した場合の２０１９mm3（接種後２４日目）と比べて有意に小さい値を示し、該大腸癌腫瘍の顕著な増殖抑制効果が認められた。
一方、クルクミン（５mg／kg／mouse）を単独投与した場合、ＭＣ３８マウス大腸癌腫瘍の大きさは、対照と同様の大きさを示しており、クルクミン単独による該大腸癌腫瘍の増殖抑制効果は認められなかった。【００３６】
（２）クルクミン（３０mg／kg／mouse）と抗ＰＤ−Ｌ１抗体との併用によるＭＣ３８マウス大腸癌腫瘍の増殖に及ぼす影響を調べた。
ＭＣ３８マウス大腸癌腫瘍の大きさは、図４に示したとおり、クルクミン（３０mg／kg／mouse）と抗ＰＤ−Ｌ１抗体とを併用した場合（実施例２）では１０６２mm3（接種後２３日目）と、抗ＰＤ−Ｌ１抗体を単独投与した場合の１５９５mm3（接種後２４日目）と比べて有意に小さい値を示し、該大腸癌腫瘍の顕著な増殖抑制効果が認められた。
一方、クルクミン（３０mg／kg／mouse）を単独投与した場合、ＭＣ３８マウス大腸癌腫瘍の大きさは、対照と同様の大きさを示しており、クルクミン単独による該大腸癌腫瘍の増殖抑制効果は認められなかった。
以上のことから、抗ＰＤ−Ｌ１抗体を投与する際に、クルクミンを併用することで両者による相乗効果によって顕著なＭＣ３８マウス大腸癌腫瘍の増殖抑制効果が得られることが分かった。【００３７】
（３）クルクミン投与条件下におけるＭＣ３８マウス大腸癌腫瘍の増殖に及ぼす抗ＰＤ−Ｌ１抗体の投与時期の影響を調べることを目的に、抗ＰＤ−Ｌ１抗体の投与時期を接種後３、５及び７日目として、前記試験例１（なお、試験例１における抗ＰＤ−Ｌ１抗体の投与時期は接種後７、１０及び１３日目）と同様にクルクミンと抗ＰＤ−Ｌ１抗体との併用によるＭＣ３８マウス大腸癌腫瘍の増殖の様相について調べた。
その結果、ＭＣ３８マウス大腸癌腫瘍の大きさは、図５に示したとおり、クルクミン（５mg／kg／mouse）と抗ＰＤ−Ｌ１抗体とを併用した場合（実施例３）では９４５mm3（接種後２５日目）と、抗ＰＤ−Ｌ１抗体を単独投与した場合の３７１６mm3（接種後２５日目）と比べて有意に小さい値を示し、クルクミン投与と同時に抗ＰＤ−Ｌ１抗体の投与を開始しても該大腸癌腫瘍の顕著な増殖抑制効果が認められた。
以上のことから、抗ＰＤ−Ｌ１抗体の投与時期にかかわらず、クルクミンと抗ＰＤ−Ｌ１抗体との相乗効果による顕著なＭＣ３８マウス大腸癌腫瘍の増殖抑制効果が得られることが分かった。【００３８】
（４）クルクミン（５mg／kg／mouse）と抗ＰＤ−１抗体との併用によるＭＣ３８マウス大腸癌腫瘍の増殖に及ぼす影響を調べた。
ＭＣ３８マウス大腸癌腫瘍の大きさは、図６に示したとおり、クルクミン（５mg／kg／mouse）と抗ＰＤ−１抗体とを併用した場合（実施例４）では、抗ＰＤ−１抗体を単独投与した場合と比べて有意に小さい値を示し、該大腸癌腫瘍の顕著な増殖抑制効果が認められた。
以上のことから、抗ＰＤ−Ｌ１抗体の場合と同様、抗ＰＤ−１抗体を投与する際に、クルクミンを併用することで両者による相乗効果によって顕著なＭＣ３８マウス大腸癌腫瘍の増殖抑制効果が得られることが分かった。【００３９】
（５）合成クルクミン（５mg／kg／mouse）と抗ＰＤ−１抗体との併用によるＭＣ３８マウス大腸癌腫瘍の増殖に及ぼす影響を調べた。
ＭＣ３８マウス大腸癌腫瘍の大きさは、図７に示したとおり、合成クルクミン−ＨＰＭＣ複合体（５mg／kg／mouse）と抗ＰＤ−１抗体とを併用した場合（実施例５）では、抗ＰＤ−１抗体を単独投与した場合と比べて有意に小さい値を示し、該大腸癌腫瘍の顕著な増殖抑制効果が認められた。
以上のことから、抗ＰＤ−１抗体を投与する際に、合成クルクミンを併用した場合でも顕著なＭＣ３８マウス大腸癌腫瘍の増殖抑制効果が得られることが分かった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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