(57)【要約】  アスコルビン酸リン酸エステル及びその塩、ビタミンＥ及びその誘導体、銅葉緑素及びその塩、並びに塩化リゾチームからなる群から選ばれる少なくとも１つを含有するアドヘレンスジャンクション機能強化剤、Ｅ−カドヘリン強化剤、細胞間結合力強化剤、上皮バリア機能強化剤、並びに抵抗力強化剤を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
アスコルビン酸リン酸エステル及びその塩、ビタミンＥ及びその誘導体、銅葉緑素及びその塩、並びに塩化リゾチームからなる群から選ばれる少なくとも１つを含有する、アドヘレンスジャンクション機能強化剤。
【請求項２】
粘膜上皮用のものである、請求項１に記載の強化剤。
【請求項３】
口腔上皮用のものである、請求項１に記載の強化剤。
【請求項４】
歯肉上皮用のものである、請求項１に記載の強化剤。
【請求項５】
アスコルビン酸リン酸エステル及びその塩、ビタミンＥ及びその誘導体、銅葉緑素及びその塩、並びに塩化リゾチームからなる群から選ばれる少なくとも１つを含有する、Ｅ−カドヘリン強化剤。
【請求項６】
粘膜上皮用のものである、請求項５に記載の強化剤。
【請求項７】
口腔上皮用のものである、請求項５に記載の強化剤。
【請求項８】
歯肉上皮用のものである、請求項５に記載の強化剤。
【請求項９】
アスコルビン酸リン酸エステル及びその塩、ビタミンＥ及びその誘導体、銅葉緑素及びその塩、並びに塩化リゾチームからなる群から選ばれる少なくとも１つを含有する、細胞間結合力強化剤。
【請求項１０】
粘膜上皮用のものである、請求項９に記載の強化剤。
【請求項１１】
口腔上皮用のものである、請求項９に記載の強化剤。
【請求項１２】
歯肉上皮用のものである、請求項９に記載の強化剤。
【請求項１３】
アスコルビン酸リン酸エステル及びその塩、ビタミンＥ及びその誘導体、銅葉緑素及びその塩、並びに塩化リゾチームからなる群から選ばれる少なくとも１つを含有する、上皮バリア機能強化剤。
【請求項１４】
粘膜上皮用のものである、請求項１３に記載の強化剤。
【請求項１５】
口腔上皮用のものである、請求項１３に記載の強化剤。
【請求項１６】
歯肉上皮用のものである、請求項１３に記載の強化剤。
【請求項１７】
アスコルビン酸リン酸エステル及びその塩、ビタミンＥ及びその誘導体、銅葉緑素及びその塩、並びに塩化リゾチームからなる群から選ばれる少なくとも１つを含有する、抵抗力強化剤。
【請求項１８】
粘膜上皮用のものである、請求項１７に記載の強化剤。
【請求項１９】
口腔上皮用のものである、請求項１７に記載の強化剤。
【請求項２０】
歯肉上皮用のものである、請求項１７に記載の強化剤。
【請求項２１】
さらに、メントン、カルボン、シネオール、リモネン、アネトール、オイゲノール、メントール及びシンナミックアルデヒドから選ばれる１種又は２種以上、
を含む、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の強化剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アドヘレンスジャンクション機能強化剤、Ｅ−カドヘリン強化剤、細胞間結合力強化剤、上皮バリア機能強化剤、抵抗力強化剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
上皮とは、皮膚表皮、鼻腔、気道、口腔、消化管、泌尿生殖器の粘膜など、体の内外表面を覆う細胞層をいう。上皮には水分の蒸散を防いだり、外部からの化学的刺激や物理的刺激によるダメージ、病原性微生物の体内への侵入を防いだりするバリア機能が備わっており、生体の維持に重要な役割を果たしている。上皮のバリア機能は、ストレス、紫外線、温度、湿度、感染性微生物などにより低下することが知られており、上皮のバリア機能の低下は様々な障害の発症に繋がる。このため、皮膚表皮においては、肌状態を健康に保つことを目的とし、皮膚バリア機能改善剤を含有する皮膚外用剤などの試みがなされている（特許文献１を参照）。粘膜においても同様で、腸粘膜バリア機能を維持することは、肥満によるインスリン抵抗性の発症や腸炎の進展の予防及び／又は改善に重要であることが知られており、表皮、上皮バリア機能改善剤の開発の試みがなされている（特許文献２を参照）。【０００３】
上皮バリア機能は物理的な上皮細胞間の結合によって形成されていることが知られている。この細胞間結合はタイトジャンクション、アドヘレンスジャンクション（Ａｄｈｅｒｅｎｃｅ  ｊｕｎｃｔｉｏｎ；以下、「ＡＪ」ともいう）又はギャップジャンクションと呼ばれる細胞接着装置によって形成されている。中でもＡＪは細胞接着装置の要となる役割を果たしており、ＡＪの形成はその他の細胞接着装置の形成に欠かせないことが知られている（非特許文献１、２、３を参照）。【０００４】
カドヘリンは、ファミリーとして現在約２０種が知られているが、皮膚表皮に存在するカドヘリン種としてはＥ（上皮型）−カドヘリンが知られており、ヒト上皮組織においても同様にＥ−カドヘリンが発現していることが報告されている（非特許文献４を参照）。【０００５】
Ｅ−カドヘリンは上皮バリア機能の維持に重要な役割を担っているＡＪの主要構成成分であり、上皮バリア機能破綻に伴う疾患（逆流性食道炎、炎症性腸疾患、アレルギー性鼻炎、口内炎、歯周病、口渇、口臭等）においてＥ−カドヘリン発現低下が報告、示唆され、上皮におけるＥ−カドヘリンの発現を制御することが疾患の予防及び／又は治療に重要である。例えば、特許文献１には、上皮型のカドヘリンであるＥ−カドヘリンに着目し、ヒト皮膚におけるＥ−カドヘリン発現を促進することにより、肌のシワ、たるみ、肌理構造の改善するための皮膚外用剤が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００７−００１９１４号公報
【特許文献２】特開２０１１−１７８７６４号公報
【０００７】
【非特許文献１】Ｂａｒｒｙ  Ｇｕｍｂｉｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  １９８８年，  Ｖｏｌ．１０７，  ｐ．１５７５−１５８７
【非特許文献２】Ｂａｒｒｙ  Ｍ．Ｇｕｍｂｉｎｅｒ．  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，  ２００５年，  Ｖｏｌ．６，ｐ．６２２−６３４
【非特許文献３】Ｗｉｍ．Ｆ．Ｊｏｎｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  １９９１年，  Ｖｏｌ．１１４，  Ｎｏ．３，  ｐ．５４５−５５５
【非特許文献４】Ａｎｎｅ  Ｂ．Ｋａｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，  １９９９年，  Ｖｏｌ．１１２，  Ｎｏ．５，  ｐ．８１８−８２１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
上皮は生体の内側と外側とを隔てている組織であり、生体の維持に重要な水分及びイオンの蒸散や病原性微生物の侵入に対して、物理的なバリア機能を有していることが知られている。このようなバリア機能の低下は様々な疾患を生じる原因となると考えられている。したがって、上皮のバリア機能を強化する新たな剤を提供することの潜在的要求が存在する。
本発明の課題は上皮バリア機能を強化する剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、上記に鑑みてなされたものであって、アスコルビン酸リン酸エステル及びその塩、ビタミンＥ及びその誘導体、銅葉緑素及びその塩、並びに塩化リゾチームが、Ｅ−カドヘリンの発現を強化することにより上皮バリア機能の強化作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。【００１０】
本発明は、下記の［１］〜［２１］を提供する。
［１］  アスコルビン酸リン酸エステル及びその塩、ビタミンＥ及びその誘導体、銅葉緑素及びその塩、並びに塩化リゾチームからなる群から選ばれる少なくとも１つを含有する、アドヘレンスジャンクション機能強化剤。
［２］  粘膜上皮用のものである、［１］に記載の強化剤。
［３］  口腔粘膜上皮用のものである、［１］に記載の強化剤。
［４］  歯肉粘膜上皮用のものである、［１］に記載の強化剤。
［５］  アスコルビン酸リン酸エステル及びその塩、ビタミンＥ及びその誘導体、銅葉緑素及びその塩、並びに塩化リゾチームからなる群から選ばれる少なくとも１つを含有する、Ｅ−カドヘリン強化剤。
［６］  粘膜上皮用のものである、［５］に記載の強化剤。
［７］  口腔粘膜上皮用のものである、［５］に記載の強化剤。
［８］  歯肉粘膜上皮用のものである、［５］に記載の強化剤。
［９］  アスコルビン酸リン酸エステル及びその塩、ビタミンＥ及びその誘導体、銅葉緑素及びその塩、並びに塩化リゾチームからなる群から選ばれる少なくとも１つを含有する、細胞間結合力強化剤。
［１０］  粘膜上皮用のものである、［９］に記載の強化剤。
［１１］  口腔粘膜上皮用のものである、［９］に記載の強化剤。
［１２］  歯肉粘膜上皮用のものである、［９］に記載の強化剤。
［１３］  アスコルビン酸リン酸エステル及びその塩、ビタミンＥ及びその誘導体、銅葉緑素及びその塩、並びに塩化リゾチームからなる群から選ばれる少なくとも１つを含有する、上皮バリア機能強化剤。
［１４］  粘膜上皮用のものである、［１３］に記載の強化剤。
［１５］  口腔粘膜上皮用のものである、［１３］に記載の強化剤。
［１６］  歯肉粘膜上皮用のものである、［１３］に記載の強化剤。
［１７］  アスコルビン酸リン酸エステル及びその塩、ビタミンＥ及びその誘導体、銅葉緑素及びその塩、並びに塩化リゾチームからなる群から選ばれる少なくとも１つを含有する、抵抗力強化剤。
［１８］  粘膜上皮用のものである、［１７］に記載の強化剤。
［１９］  口腔粘膜上皮用のものである、［１７］に記載の強化剤。
［２０］  歯肉粘膜上皮用のものである、［１７］に記載の強化剤。
［２１］  さらに、メントン、カルボン、シネオール、リモネン、アネトール、オイゲノール、メントール及びシンナミックアルデヒドから選ばれる１種又は２種以上、を含む、[１]〜[２０]のいずれか１つに記載の強化剤。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、上皮バリア機能を効果的に強化することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明の剤は、アスコルビン酸リン酸エステル及びその塩、ビタミンＥ及びその誘導体、銅葉緑素及びその塩、並びに塩化リゾチームからなる群から選ばれる少なくとも１つ（以下、「（Ａ）成分」という）を含有する。
【００１３】
＜アスコルビン酸リン酸エステル及びその塩＞
アスコルビン酸リン酸エステルとしては、例えば、アスコルビン酸の２位、３位、５位及び６位の各ヒドロキシ基がリン酸によりエステル化されたものが挙げられる。アスコルビン酸のエステル化部位は、上記各ヒドロキシ基から選ばれる１以上であればよい。
【００１４】
アスコルビン酸リン酸エステルにおけるリン酸としては、特に限定されるものではないが、例えば、リン酸；リン酸のモノアルキルエステル（例えば、リン酸が有する１つの水素が、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、ｓ−ブチル基、ｔ−ブチル基、イソブチル基、ペンチル基、及びヘキシル基等の炭素原子数１〜６のアルキル基から選ばれるアルキル基で置換されているリン酸モノエステル）等のリン酸モノエステル；並びに、リン酸のジアルキルエステル（例えば、リン酸が有する２つの水素が、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、ｓ−ブチル基、ｔ−ブチル基、イソブチル基、ペンチル基、及びヘキシル基等の炭素原子数１〜６のアルキル基から選ばれる２つのアルキル基で置換されているリン酸のジアルキルエステル）等のリン酸ジエステルが挙げられる。上記リン酸のジアルキルエステルにおいて、２つのアルキル基は互いに同一であってもよいし異なっていてもよい。
【００１５】
アスコルビン酸リン酸エステルの塩としては、特に限定されるものではないが、例えば、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属塩、マグネシウム、カルシウム、及びバリウム等のアルカリ土類金属塩、及びアルミニウム等の多価金属塩などの各種の金属塩；アンモニウム、トリシクロヘキシルアンモニウム等のアンモニウム塩；モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、モノイソプロパノールアミン、ジイソプロパノールアミン、トリイソプロパノールアミン等の各種のアルカノールアミン塩などが挙げられる。
【００１６】
本発明において用いられるアスコルビン酸リン酸エステル及びその塩としては、例えば、Ｌ−アスコルビン酸リン酸エステル及びそのナトリウム塩、Ｌ−アスコルビン酸リン酸エステル及びそのマグネシウム塩が好ましく、Ｌ−アスコルビン酸リン酸マグネシウム塩がより好ましい。
【００１７】
アスコルビン酸リン酸エステル及びその塩は、化学合成などにより人工的に合成されたものを用いてもよいし、市販品を用いてもよい。アスコルビン酸リン酸エステル及びその塩は、例えば昭和電工（株）等から入手可能である。
【００１８】
本発明におけるアスコルビン酸リン酸エステル及びその塩は、１種類のみを用いてもよいし、２種類以上を組み合わせて用いてもよい。
【００１９】
アスコルビン酸リン酸エステル及びその塩の配合量は、例えば上皮バリア機能を強化する効果等の本発明の所望の効果を発現するという観点から、剤全質量に対して０．０１〜３質量％が好ましく、０．１〜１質量％がより好ましい。
【００２０】
＜ビタミンＥ及びその誘導体＞
ビタミンＥは、トコフェロールとも呼ばれる化合物である。ビタミンＥ及びその誘導体としては、特に限定されるものではないが、例えば、ｄｌ−α−トコフェロール、酢酸ｄｌ−トコフェロール、ニコチン酸ｄｌ−α−トコフェロール、コハク酸ｄｌ−α−トコフェロール等が挙げられる。なかでも、本発明の所望の効果を発現するという観点から、酢酸ｄｌ−α−トコフェロールが好ましい。酢酸ｄｌ−α−トコフェロールは、例えばＤＳＭニュートリション・ジャパン（株）等から入手可能である。
【００２１】
ビタミンＥ及びその誘導体の配合量は、本発明の所望の効果を発現する観点から、剤全質量に対して、０．００５〜１質量％が好ましく、０．０１〜１質量％がより好ましい。
【００２２】
＜銅葉緑素及びその塩＞
銅葉緑素とは、銅クロロフィリンであり、例えば、植物のクロロフィル分子中のマグネシウムを銅と置換して安定化させることにより得ることができる。その塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩等のアルカリ金属塩又はアルカリ土類金属塩が挙げられる。なかでも、本発明の所望の効果を発現する観点から、銅クロロフィリンナトリウムが好ましい。銅クロロフィリンナトリウムは、例えば和光純薬工業（株）や関東化学（株）から入手可能である。
【００２３】
銅葉緑素及びその塩の配合量は、本発明の所望の効果を発現する観点から、剤全質量に対して、０．００００５〜０．１質量％が好ましく、０．０００１〜０．０１質量％がより好ましい。
【００２４】
＜塩化リゾチーム＞
塩化リゾチームとしては、鶏卵より公知の方法により得られる日局（日本薬局方）又は粧原基（化粧品原料基準）記載の塩化リゾチームを使用することができる。塩化リゾチームはキューピー（株）等から入手可能である。  
【００２５】
塩化リゾチームの配合量は、本発明の所望の効果を発現する観点から、剤全質量に対して０．０００１〜１質量％が好ましく、０．００１〜０．１質量％がより好ましい。
【００２６】
本発明の剤は、上記（Ａ）成分に加えて、さらに、（Ｂ）成分：メントン、カルボン、シネオール、リモネン、アネトール、オイゲノール、メントール、シンナミックアルデヒドから選ばれる１種又は２種以上を、含んでもよい。（Ｂ）成分としては精油から単離したものや合成したものを使用しても良いし、これらを含む精油を使用しても良い。
【００２７】
（Ｂ）成分の配合量は、特に限定されないが、本発明の所望の効果の発現をより向上させるという観点から、剤全体の質量に対し、０．００００１〜５質量％が好ましく、０．００００１〜２質量％がより好ましい。 
【００２８】
本発明においては、（Ａ）成分とともに（Ｂ）成分を含むのが好ましい。（Ａ）成分と（Ｂ）成分とを併用することにより本発明の所望の効果の発現がより向上する。（Ａ）成分と（Ｂ）成分とを併用する場合、（Ｂ）成分の質量に対する（Ａ）成分の質量の比（Ａ／Ｂ）は、以下の範囲とするのが好ましい。（Ｂ）成分の質量に対する（Ａ）アスコルビン酸リン酸エステル及びその塩の質量の比（Ａ／Ｂ）は、０．００２〜３０００００が好ましく、０．０１〜３０００００がより好ましく、０．０５〜３０００００がさらに好ましい。（Ｂ）成分の質量に対する（Ａ）ビタミンＥ及びその誘導体の質量の比（Ａ／Ｂ）は、０．００１〜１０００００が好ましく、０．０１〜１０００００がより好ましく、０．０５〜１０００００がさらに好ましい。（Ｂ）成分の質量に対する（Ａ）銅葉緑素及びその塩の質量の比（Ａ／Ｂ）は、０．００００１〜１００００が好ましく、０．００００２〜１００００がより好ましく、０．００００５〜１００００がさらに好ましい。（Ｂ）成分の質量に対する（Ａ）塩化リゾチームの質量の比（Ａ／Ｂ）は、０．００００２〜１０００００が好ましく、０．００１〜１０００００がより好ましく、０．００５〜１０００００がさらに好ましい。（Ｂ）成分の質量に対する（Ａ）成分の質量の比（Ａ／Ｂ）を上記のような範囲とすると、本発明の所望の効果の発現がより向上する。
【００２９】
本発明の剤には、上記各成分に加えて、本発明の効果を損なわない範囲において、本発明の分野において公知の各種薬用成分や添加成分を適宜配合することができる。
【００３０】
本発明の剤の形状及び剤形は特に限定されず、例えば、液体系（液体、液状、ペースト状）、固体系（固体、固形状）などの各種形状に調製できる。なかでも、本発明の剤は、口腔に適用する組成物とすることが好ましく、歯肉に適用する組成物とするのがより好ましい。
【００３１】
本発明の剤は、そのまま投与してもよい。また、飲食物（特に、機能性食品）、口腔用組成物、医薬組成物に、本発明の所望の効果を付与するために添加してもよい。
【００３２】
本発明の剤を、添加しうる飲食物又は組成物には、特に制限はなく、例えば、飲料（清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、粉末飲料、果実飲料、乳飲料、ゼリー飲料等）、食品類（ガム、キャンディー、タブレット、グミ、フィルム、トローチ、クッキー、ゼリー等）などが挙げられる。
【００３３】
本発明の剤は、上皮バリア機能を強化する効果を有する。上皮のバリア機能は上皮の抵抗力とも言い換える事ができる。上皮のバリア機能は物理的な上皮細胞間の結合によって形成されていることが知られている。この細胞間結合は主にタイトジャンクション及びＡＪと呼ばれる細胞接着装置によって形成されている。上皮の中でも粘膜上皮は、バリア機能維持におけるＡＪの寄与度が大きいこと、歯肉粘膜上皮においては更にその寄与度が大きいことが報告されている。Ｅ−カドヘリンはＡＪを構成する主要なタンパクであることから、本発明の剤は、好ましくは粘膜上皮において、より好ましくは口腔粘膜上皮において、更に好ましくは歯肉粘膜上皮において、上皮バリア機能とともに、上皮抵抗力、細胞間結合力、ＡＪ機能、及びＥ−カドヘリンを、顕著に強化することができる。
【００３４】
本発明の剤の作用について説明する。
＜上皮バリア機能強化＞
上皮バリア機能強化とは、上皮が持つ水分や揮発成分の蒸散に対する、病原性微生物や有害物質の付着及び／又は侵入に対するバリア機能を強化すること、上皮が持つ水分や揮発成分の蒸散に対する、病原性微生物や有害物質の付着及び／又は侵入に対する抵抗力を強化することを意味する。バリア機能強化とは、バリア機能を向上させる効果、バリア機能の低下を抑制する効果、低下したバリア機能を改善及び／又は回復する効果を指す。すなわち、上皮バリア機能強化は、バリア機能低下抑制、バリア機能改善及び／又は回復と言い換えられ、バリア機能は抵抗力と置き換えることも出来る。本発明の上皮バリア機能強化剤の適用は、好ましくは粘膜上皮用であり、より好ましくは口腔粘膜上皮用であり、更に好ましくは歯肉粘膜上皮用である。
【００３５】
＜細胞間結合力強化＞
細胞間結合力とは２つの細胞同士を繋ぎとめる結合力のことを意味し、上皮が有するバリア機能、及び抵抗力はこの細胞同士の物理的な繋がりによって形成されている。細胞間結合力強化とは、細胞間結合力を向上させる効果、細胞間結合力の低下を抑制する効果、細胞間結合力を改善及び／又は回復する効果を指す。すなわち、細胞間結合力強化は、細胞間結合力低下抑制、細胞間結合力改善及び／又は回復とも言いえられる。本発明の細胞間結合力強化剤の適用は、好ましくは粘膜上皮用であり、より好ましくは口腔粘膜上皮用であり、更に好ましくは歯肉粘膜上皮用である。
【００３６】
＜アドヘレンスジャンクション機能強化＞
アドヘレンスジャンクション（ＡＪ）とは、上皮が細胞間結合力を発揮するための細胞接着装置である。ＡＪ機能強化とは、ＡＪ機能を向上させる効果、ＡＪ機能の低下を抑制する効果、低下したＡＪ機能を改善及び／又は回復する効果を指す。すなわち、ＡＪ機能強化は、ＡＪ機能低下抑制、ＡＪ機能改善及び／又は回復とも言い換えられる。本発明のＡＪ機能強化剤の適用は、好ましくは粘膜上皮用であり、より好ましくは口腔粘膜上皮用であり、更に好ましくは歯肉粘膜上皮用である。
【００３７】
＜Ｅ−カドヘリン強化＞
Ｅ−カドヘリンは、上述したように、上皮型のカドヘリンである。Ｅ−カドヘリン強化とは、Ｅ−カドヘリンの発現を増やす効果、Ｅ−カドヘリンの発現低下を抑制する効果、低下したＥ−カドヘリンの発現を改善及び／又は回復する効果を指す。すなわち、Ｅ−カドヘリン強化は、Ｅ−カドヘリン低下抑制、Ｅ−カドヘリン発現改善及び／又は回復とも言い換えられる。本発明のＥ−カドヘリン強化剤の適用は、好ましくは粘膜上皮用であり、より好ましくは口腔粘膜上皮用であり、更に好ましくは歯肉粘膜上皮用である。
【００３８】
本発明の上皮バリア機能強化剤、抵抗力強化剤、細胞間結合力強化剤、アドヘレンスジャンクション機能強化剤、及びＥ−カドヘリン強化剤は、正常な状態が異常な状態になるのを防ぐために使用されてもよいし、異常な状態を正常な状態に回復させるために使用されてもよい。
【００３９】
また、本発明の剤は、上皮バリア機能強化作用、抵抗力強化作用、細胞間結合力強化作用、アドヘレンスジャンクション機能強化作用、Ｅ−カドヘリン強化作用を有することから、皮膚、眼粘膜、鼻粘膜、胃腸粘膜、口腔粘膜を健康的な状態に保つ又は回復するのに有用であり、特に粘膜上皮の健康状態を保つのに有用である。本発明の剤は、より好ましくは口腔粘膜上皮において、更に好ましくは歯肉粘膜上皮において有用である。
【実施例】
【００４０】
以下に、実施例を参照して本発明をより詳細に説明するが、本発明は、これらの実施例の態様に限定されるものではない。【００４１】
［評価試験例１］Ｅ−カドヘリン強化効果の評価
９６ウェルプレートに、ヒト歯肉上皮細胞を播種し、培地Ｈｕｍｅｄｉａ−ＫＧ２（クラボウ株式会社）でコンフルエントまで培養して、上皮バリア機能を発現させた上皮細胞膜を作製した。その後、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ（Ｐｇ菌）由来のリポポリサッカライド（Ｐｇ−ＬＰＳ）を０．０１質量％またはＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ（Ｅ．ｃｏｌｉ菌）由来ＬＰＳ（Ｅ．ｃｏｌｉ−ＬＰＳ）を０．０１質量％とともに、（Ａ）成分（酢酸トコフェロール、銅クロロフィリンナトリウム、塩化リゾチーム及びアスコルビン酸リン酸エステルのマグネシウムから選ばれる一種以上）、（Ｂ）成分（メントン、カルボン、シネオール、リモネン、アネトール、オイゲノール、メントール及びシンナミックアルデヒドから選ばれる一種以上）、ならびに、表５に記載の比較の化合物（アスコルビン酸ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウム、アズレンスルホン酸ナトリウム及びメントールから選ばれる一種）から選ばれる一種以上を、表に記載した量、同時に添加したＨｕｍｅｄｉａ−ＫＧ２で、３日間培養し評価サンプルを作製した。ここで、Ｐｇ−ＬＰＳは、歯肉上皮や全身の上皮への影響が報告されているＰｇ菌由来ＬＰＳであり、Ｅ．ｃｏｌｉ−ＬＰＳは腸粘膜上皮への影響も報告されているＥ．ｃｏｌｉ菌由来のＬＰＳであり、これらＬＰＳは菌由来の病原性物質として知られており、Ｅ−カドヘリン破壊を促す作用がある。【００４２】
得られた各評価サンプルにつき、ヒト歯肉上皮細胞に発現しているＥ−カドヘリンを免疫蛍光染色し、健常バリアモデル（無処置）の蛍光強度を１００％として各評価サンプルにおける蛍光強度をＥ−カドヘリン発現率として算出した。また、健常バリアモデルにＨｕｍｅｄｉａ−ＫＧ２と、０．０１質量％のＰｇ−ＬＰＳまたは０．０１質量％のＥ．ｃｏｌｉ−ＬＰＳとを加えて３日間培養し、Ｅ−カドヘリンの発現を低下させた細胞をコントロール（ＬＰＳ単独処置時）として、下記式（１）によりＥ−カドヘリン発現低下抑制率を求め、表１〜表５に示した。【００４３】
【数１】
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【００４４】
なお、ＬＰＳとしてＰｇ−ＬＰＳを用いた評価サンプルにつきＥ−カドヘリン発現低下抑制率を算出する場合にはＰｇ−ＬＰＳを単独で添加したときのコントロールのＥ−カドヘリン発現率を用い、ＬＰＳとしてＥ．ｃｏｌｉ−ＬＰＳを用いた評価サンプルにつきＥ−カドヘリン発現低下抑制率を算出する場合にはＥ．ｃｏｌｉ−ＬＰＳを単独で添加したコントロールのＥ−カドヘリン発現率を用いた。【００４５】
表１〜表４の添加成分の欄には、各処置例にて用いた、添加成分とその量を記載した。詳しくは、添加成分の欄には、ＬＰＳの種類と量、（Ａ）成分として用いた化合物とそのサンプル中濃度（質量％）、及び（Ｂ）成分として用いた化合物とそのサンプル中濃度（質量％）を併せて示し、表５の添加成分の欄には、ＬＰＳの種類と量、（Ａ）成分及び（Ｂ）成分の代わりに用いた比較の化合物（アスコルビン酸ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウム、アズレンスルホン酸ナトリウム及びメントール）とそのサンプル中濃度（質量％）を示した。【００４６】
［評価試験例２］バリア機能評価試験
カルチャーインサート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）の上層にヒト歯肉上皮細胞株を播種し、基本培地Ｈｕｍｅｄｉａ−ＫＧ２でコンフルエントまで培養して上皮バリア機能を発現させた上皮細胞膜を作製後、培地を除去し、Ｐｇ−ＬＰＳを０．０１質量％添加した単独培地、及び、０．０１質量％のＰｇ−ＬＰＳに加えて、（Ａ）成分（酢酸トコフェロール、銅クロロフィリンナトリウム、塩化リゾチーム及びアスコルビン酸リン酸エステルのマグネシウム塩から選ばれる一種以上）、（Ｂ）成分（メントン、カルボン、シネオール、リモネン、アネトール、オイゲノール、メントール及びシンナミックアルデヒドから選ばれる一種以上）、並びに、表５に記載の化合物（アスコルビン酸ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウム、アズレンスルホン酸ナトリウム及びメントールから選ばれる一種）から選ばれる一種以上を表に記載した量、添加した培地で、それぞれ３日間培養した。培養後、上層と下層の培地を除去・洗浄し、上皮細胞膜のバリア機能評価を行った。バリア機能評価として、細菌由来の毒素であるＬＰＳ（Ｐ．ｇ−ＬＰＳ）の透過実験、菌（Ｓｔｒｅｐｔｃｏｃｃｕｓ  ｍｉｔｉｓ（Ｓ．ｍ菌））の透過実験、上皮細胞膜の電気抵抗値（ＴＥＲ）測定アッセイを行った。
ここで、ＬＰＳは菌由来の病原性物質であり、水溶液中でコロイドを形成し巨大分子として存在することが知られている。Ｓ．ｍ菌は口腔粘膜に常在する菌として知られており、一般的に病原性は低いが上皮バリア機能が低下している場合に化膿性炎症を惹起することが知られている。ＴＥＲは細胞層のバリア機能と強い相関があることが知られており主に水分やイオンの透過性と関連が深く、化粧品分野においてＴＥＲの値が高くなると肌のうるおい実感が高まることなどが報告されている。【００４７】
（Ｐｇ−ＬＰＳの透過実験）
３日間培養後の上皮細胞膜について、Ｐｇ−ＬＰＳを添加し０．０１％に調整したＨｕｍｅｄｉａ−ＫＧ２を上層に０．２ｍＬ、Ｈｕｍｅｄｉａ−ＫＧ２を下層に０．９ｍＬ、それぞれ添加した。４時間後、下層中のＰ．ｇ−ＬＰＳ濃度をＰｙｒｏｃｈｒｏｍｅ（生化学工業）で定量し、該定量値を用いて下記式（２）よりバリア機能を算出し、結果を表１〜５に示した（下層中ＬＰＳ濃度、ＬＰＳに対するバリア機能）。【００４８】
（Ｓ．ｍ菌の透過実験）
３日間培養後の上皮細胞膜について、Ｈｕｍｅｄｉａ−ＫＧ２培地から抗生物質を除いた培地中にＳ．ｍ菌を懸濁させて１０７ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調整した培地を上層に０．２ｍＬ、Ｓ．ｍ菌フリーの培地を下層に０．９ｍＬ添加し、４時間後の下層中から２０μＬを採取し適宜希釈してｔｒｙｐｔｉｃ  ｓｏｙ寒天培地に播種した。播種後の培地を３７℃好気条件で４８時間培養し、培地のコロニー数と希釈率から下層中菌濃度（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出し表１〜表５に示した。さらにこの下層中菌濃度を用いて下記式（２）より菌に対するバリア機能を算出し、表１〜表５に示した。【００４９】
（ＴＥＲ測定）
Ｍｉｌｌｉｃｅｌｌ−ＥＲＳ  Ｖｏｌｔｏ−Ｏｈｍ  Ｍｅｔｅｒを用いて測定した値（Ω）に細胞層面積（ｃｍ２）を乗じてＴＥＲ（Ω・ｃｍ２）を算出した。さらにこのＴＥＲ値を用いて下記式（２）よりイオン・水分に対するバリア機能を算出し、結果を表１〜表５に示した。【００５０】
【数２】
2016104524.tif 000003
【００５１】
なお、本評価試験例は、評価サンプルの作製方法が評価試験例１とは相違するが、培地に添加する添加成分とその量が評価試験例１の添加成分と対応しているので、評価試験例１と添加成分が同じものについては、対応する処置例のところに、本評価試験例の結果を並べて記載した。【００５２】
【表１】
2016104524.tif 000004
【００５３】
【表２】
2016104524.tif 000005
【００５４】
【表３】
2016104524.tif 000006
【００５５】
【表４】
2016104524.tif 000007
【００５６】
【表５】
2016104524.tif 000008
【００５７】
［結果と考察］
（カドヘリン発現率について）
表に示すように、（Ａ）成分（アスコルビン酸リン酸エステル及びその塩、酢酸トコフェロール、銅葉緑素及びその塩、並びに塩化リゾチームからなる群から選ばれる少なくとも１つ）を添加成分として含む処置例１〜７６では、ＬＰＳのみを添加したサンプルよりもＥ−カドヘリン発現率が高く、Ｅ−カドヘリン発現低下抑制率が９．１％以上であった。特に（Ａ）成分に加えて（Ｂ）成分をさらに含む処置例６〜１７、１９、２５〜３６、３８、４４〜５５、５７、６３〜７４、７６では、Ｅ−カドヘリン発現率が９０％以上であり、Ｅ−カドヘリン発現低下抑制率が６９．７％以上であった。
一方、（Ａ）成分を含まない添加成分にて処置を行った処置例７７〜８０では、ＬＰＳのみを添加したサンプルよりもＥ−カドヘリン発現率が低く、Ｅ−カドヘリン発現低下抑制率はマイナスとなり、発現低下を抑制することができなかった。
このことから、本発明によれば、Ｅ−カドヘリン発現率を高めるのでＥ−カドヘリン強化効果が発現することがわかった。また、（Ａ）成分とともに（Ｂ）成分を含むものでは、Ｅ−カドヘリン発現率が高くなるのでＥ−カドヘリン強化効果の発現において、好ましいということがわかった。【００５８】
（バリア機能について）
表に示すように、
（Ａ）成分（アスコルビン酸リン酸エステル及びその塩、酢酸トコフェロール、銅葉緑素及びその塩、並びに塩化リゾチームからなる群から選ばれる少なくとも１つ）を添加成分として含む処置例１〜７６では、無処置のサンプルよりもＬＰＳ，菌、イオン水分に対するバリア機能が高かった。特に（Ａ）成分に加えて（Ｂ）成分をさらに含む処置例６〜１７、１９、２５〜３６、３８、４４〜５５、５７、６３〜７４、７６では、ＬＰＳ，菌、イオン水分に対するバリア機能が高かった。
一方、（Ａ）成分を含まない添加成分にて処置を行った処置例７７〜８０では、ＬＰＳ，菌、イオン水分に対するバリア機能がすべて無処置のものよりも低かった。
このことから、本発明によれば、ＬＰＳ，菌、イオン、水分に対するバリア機能が高いことがわかった。また、（Ａ）成分とともに（Ｂ）成分を含むものでは、特にＬＰＳ，菌、イオン、水分に対するバリア機能が高いので、好ましいということがわかった。【００５９】
［処方例］
下記に示す処方においても実施例と同様にバリア機能の強化効果を確認している。【００６０】
処方例１
（１）皮膚用（質量％）
ａ）  酢酸トコフェロール                            ０．５
ｂ）  モノラウロイル酸デカグリセリル                ０．２
ｃ）  モノイソステアリン酸ジグリセリル              ０．１
ｄ）  ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０ＥＯ）    １．０
ｅ）  濃グリセリン                                  ８．０
ｆ）  メチルパラベン                                ０．３
ｇ）  プロピルパラベン                              ０．１
ｈ）  ヒドロキシエチルセルロース                    ０．１
ｉ）  エタノール                                  １２．０
ｊ）  精製水                                          残部    
合計                                      １００．０【００６１】
処方例２
（２）皮膚用（質量％）
ａ）  アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム      ０．１
ｂ）  モノラウロイル酸デカグリセリル                ０．２
ｃ）  モノイソステアリン酸ジグリセリル              ０．１
ｄ）  ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０ＥＯ）    １．０
ｅ）  濃グリセリン                                  ８．０
ｆ）  メチルパラベン                                ０．３
ｇ）  プロピルパラベン                              ０．１
ｈ）  ヒドロキシエチルセルロース                    ０．１
ｉ）  エタノール                                  １２．０
ｊ）  精製水                                          残部    
合計                                      １００．０【００６２】
処方例３
（３）粘膜上皮用（質量％）
ａ）  酢酸トコフェロール                            ０．１
ｂ）  スクワラン                                  １０．０
ｃ）  セトステアリルアルコール                      ４．０
ｄ）  メチルポリシロキサン                          ３．０
ｅ）  パルミチン酸セチル                            ２．０
ｆ）  モノステアリン酸グリセリン                    １．５
ｇ）  濃グリセリン                                １２．０
ｈ）  １，３−ブチレングリコール                    ２．０
ｉ）  カルボキシビニルポリマー                      ０．１５
ｊ）  メチルパラベン                                ０．３
ｋ）  水酸化ナトリウム                                適量
ｌ）  精製水                                          残部    
合計                                      １００.０【００６３】
処方例４
（４）粘膜上皮用（質量％）
ａ）  アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム      ０．３
ｂ）  スクワラン                                  １０．０
ｃ）  セトステアリルアルコール                      ４．０
ｄ）  メチルポリシロキサン                          ３．０
ｅ）  パルミチン酸セチル                            ２．０
ｆ）  モノステアリン酸グリセリン                    １．５
ｇ）  濃グリセリン                                １２．０
ｈ）  １，３−ブチレングリコール                    ２．０
ｉ）  カルボキシビニルポリマー                      ０．１５
ｊ）  メチルパラベン                                ０．３
ｋ）  水酸化ナトリウム                                適量
ｌ）  精製水                                          残部    
合計                                      １００．０【００６４】
処方例５
（５）口腔上皮用（質量％）
ａ）  酢酸トコフェロール                            ０．５
ｂ）  エタノール                                  ２０．０
ｃ）  ポリビニルピロリドン                        １０．０
ｄ）  ヒドロキシプロピルメチルセルロース            ０．３
ｅ）  カルボキシメチルセルロースナトリウム          ０．５
ｆ）  グリセリン                                  ２５．０
ｇ）  ステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン      ０．２
ｈ）  水酸化ナトリウム                                適量
ｉ）  香料                                            適量
ｊ）  精製水                                          残部    
合計                                      １００．０【００６５】
処方例６
（６）口腔上皮用（質量％）
ａ）  アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム      １．０
ｂ）  エタノール                                  ２０．０
ｃ）  ポリビニルピロリドン                        １０．０
ｄ）  ヒドロキシプロピルメチルセルロース            ０．３
ｅ）  カルボキシメチルセルロースナトリウム          ０．５
ｆ）  グリセリン                                  ２５．０
ｇ）  ステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン      ０．２
ｈ）  水酸化ナトリウム                                適量
ｉ）  香料                                            適量
ｊ）  精製水                                          残部    
合計                                    １００．０【００６６】
処方例７
（７）歯肉上皮用（質量％）
ａ）  酢酸トコフェロール                            ０．１
ｂ）  カルボキシビニルポリマー                      ２．２
ｃ）  ヒドロキシプロピルメチルセルロース            ０．３
ｄ）  グリセリン                                  ２３．０
ｅ）  エタノール                                  １２．０
ｆ）  メチルパラベン                                ３．０
ｇ）  ポリソルベート６０                            ０．１５
ｈ）  モノステアリン酸ソルビタン                    ０．１
ｉ）  ショ糖脂肪酸エステル                          ０．５
ｊ）  軽質流動パラフィン                            ０．５
ｋ）  香料                                            適量
ｌ）  水酸化ナトリウム                                適量
ｍ）  水酸化カリウム                                  適量
ｎ）  クエン酸                                        適量
ｏ）  精製水                                          残部    
合計                                      １００．０【００６７】
処方例８
（８）歯肉上皮用（質量％）
ａ）  アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム      ０．３
ｂ）  カルボキシビニルポリマー                      ２．２
ｃ）  ヒドロキシプロピルメチルセルロース            ０．３
ｄ）  グリセリン                                  ２３．０
ｅ）  エタノール                                  １２．０
ｆ）  メチルパラベン                                ３．０
ｇ）  ポリソルベート６０                            ０．１５
ｈ）  モノステアリン酸ソルビタン                    ０．１
ｉ）  ショ糖脂肪酸エステル                          ０．５
ｊ）  軽質流動パラフィン                            ０．５
ｋ）  香料                                            適量
ｌ）  水酸化ナトリウム                                適量
ｍ）  水酸化カリウム                                  適量
ｎ）  クエン酸                                        適量
ｏ）  精製水                                          残部    
合計                                      １００．０【００６８】
処方例９
（９）歯肉上皮用（質量％）
ａ）  酢酸トコフェロール                            ０．６
ｂ）  カルボキシビニルポリマー                      ２．２
ｃ）  ヒドロキシプロピルメチルセルロース            ０．３
ｄ）  グリセリン                                  ２３．０
ｅ）  エタノール                                  １２．０
ｆ）  メチルパラベン                                ３．０
ｇ）  ポリソルベート６０                            ０．１５
ｈ）  モノステアリン酸ソルビタン                    ０．１
ｉ）  ショ糖脂肪酸エステル                          ０．５
ｊ）  軽質流動パラフィン                            ０．５
ｋ）  香料                                            適量
ｌ）  水酸化ナトリウム                                適量
ｍ）  水酸化カリウム                                  適量
ｎ）  クエン酸                                        適量
ｏ）  精製水                                          残部    
合計                                      １００．０
【国際調査報告】
2016104524.tif 000009
2016104524.tif 000010
2016104524.tif 000011
2016104524.tif 000012
2016104524.tif 000013
2016104524.tif 000014