(57)【要約】ビフィズス菌や乳酸菌の数量に拘わらず、これらの有用菌自体の有機酸産生効率を向上させる。ポリフェノールを有効成分として含有する、ビフィズス菌又は乳酸菌による有機酸の産生を促進するための有機酸の産生促進剤により課題は解決される。ポリフェノールとしては、ケルセチン、タキシフォリン、フロレチン、エピガロカテキンガレート、又はプロシアニジンを用いることが好ましい。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリフェノールを有効成分として含有する、ビフィズス菌又は乳酸菌による有機酸の産生を促進するための有機酸の産生促進剤。
【請求項２】
前記ビフィズス菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium  longum）ＯＬＢ６２９０（ＮＩＴＥ  Ｐ−７５）、ビフィドバクテリウム・ロンガムＮｏ．７（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２４２）、及びビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Bifidobacterium  adolescentis）ＪＣＭ１２７５Ｔのいずれか１種又は２種以上である請求項１記載の有機酸の産生促進剤。
【請求項３】
前記乳酸菌が、ラクトバチルス属の乳酸菌である請求項１又は２記載の有機酸の産生促進剤。
【請求項４】
前記ラクトバチルス属の乳酸菌が、ラクトバチルス・デルブリッキー・ブルガリカス（Lactobacillus  delbrueckii  subsp.  bulgaricus）ＯＬＬ１１８１（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２６９）である請求項３記載の有機酸の産生促進剤。
【請求項５】
前記有機酸が、乳酸及び／又は酢酸である請求項１〜４のいずれかに記載の有機酸の産生促進剤。
【請求項６】
前記ポリフェノールが、フラボノイドである請求項１〜５のいずれかに記載の有機酸の産生促進剤。
【請求項７】
前記ポリフェノールが、タキシフォリンである請求項６記載の有機酸の産生促進剤。
【請求項８】
前記タキシフォリンの含有量が、０．００１〜５．０重量％である請求項７記載の有機酸の産生促進剤。
【請求項９】
前記タキシフォリンのヒトに対する１日当たりの投与量が、０．１〜１００ｍｇである請求項７記載の有機酸の産生促進剤。
【請求項１０】
前記ポリフェノールが、フロレチンである請求項１〜５のいずれかに記載の有機酸の産生促進剤。
【請求項１１】
前記フロレチンの含有量が、０．０００１〜５０重量％である請求項１０記載の有機酸の産生促進剤。
【請求項１２】
前記フロレチンのヒトに対する１日当たりの投与量が、０．００１〜５０ｍｇである請求項１０記載の有機酸の産生促進剤。
【請求項１３】
前記ポリフェノールが、ケルセチン、エピガロカテキンガレート、及びプロシアニジンのいずれか１種又は２種以上である請求項１〜５のいずれかに記載の有機酸の産生促進剤。
【請求項１４】
前記ポリフェノールと前記ビフィズス菌とを有効成分として含有する、前記ビフィズス菌による有機酸の産生を促進するための請求項１，２，５〜１３のいずれかに記載の有機酸の産生促進剤。
【請求項１５】
前記ビフィズス菌の菌数のヒトに対する１日当たりの投与量が、２×１０７〜５×１０１０個である請求項１４記載の有機酸の産生促進剤。
【請求項１６】
請求項１４記載の有機酸の産生促進剤に含有される前記ビフィズス菌の培養物の１ｇ当たりに１０７個以上のビフィズス菌を含める場合、前記ビフィズス菌の培養物のヒトに対する１日当たりの投与量が、５〜１０００ｇである有機酸の産生促進剤。
【請求項１７】
前記ポリフェノールと前記乳酸菌とを有効成分として含有する、前記乳酸菌による有機酸の産生を促進するための請求項１，３〜１３のいずれかに記載の有機酸の産生促進剤。
【請求項１８】
前記乳酸菌の菌数のヒトに対する１日当たりの投与量が、２×１０７〜５×１０１０個である請求項１７記載の有機酸の産生促進剤。
【請求項１９】
請求項１７記載の有機酸の産生促進剤に含有される前記乳酸菌の培養物の１ｇ当たりに１０７個以上の乳酸菌を含める場合、前記乳酸菌の培養物のヒトに対する１日当たりの投与量が、５〜１０００ｇである有機酸の産生促進剤。
【請求項２０】
請求項１〜１９のいずれかに記載の有機酸の産生促進剤を含有する炎症性腸疾患の予防及び／又は改善剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ビフィズス菌又は乳酸菌による有機酸の産生を促進する有機酸の産生促進剤、並びに炎症性腸疾患の予防及び／又は改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトの健康や疾病に腸内細菌叢が密接に関係していることが知られている。ヒトの腸内には５００〜１０００種類、１００兆個以上の腸内細菌が生息していると言われ、一般に、ビフィズス菌や乳酸菌のような有用性のある微生物（有用菌）と、ウェルシュ菌のような有害性のある微生物（有害菌）が共に生息している。ヒトの健康維持のためには、有用菌を優勢種として、大腸などに存在させることが重要である。
すなわち、ビフィズス菌や乳酸菌は、生体内（腸内）において、乳酸や酢酸などの有機酸を産生する機能を有しており、これらの有機酸により、腸内細菌叢における有害菌の増殖を抑制や防止することが可能となり、便秘や下痢が生じるのを抑制することが可能となる。また、これら産生された乳酸や酢酸は、腸内細菌により酪酸に変換され、酪酸により炎症性腸疾患などが改善されることも報告されている。【０００３】
一方、近年では、便秘や下痢、炎症性腸疾患などの患者数が増加傾向にあり、ヒトの腸内細菌叢を効果的に改善することが求められている。このため、腸内において、ビフィズス菌や乳酸菌の菌数を増加させるための様々な手法が提案されている。
例えば、特許文献１には、ポリ−γ−グルタミン酸を有効成分として用いることにより、腸内ビフィズス菌の増殖を促進させることが記載されている。また、特許文献２には、植物由来の脂肪源を含む脂質組成物を用いることにより、腸内細菌叢の発達を促進させることが記載されている。
また、乳酸菌やオリゴ糖を含有する食品や飲料、サプリメントなどを摂取することにより、腸内において、ビフィズス菌や乳酸菌を増殖させることなども広く行われている。
これら従来技術によれば、腸内において、ビフィズス菌や乳酸菌を増殖させることにより、その有機酸の産生量を増加させることが可能となっている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２０１１−１７８７６４号公報
【特許文献２】特表２０１３−５２５４２１号公報
【特許文献３】特開平６−１６６６１８号公報
【特許文献４】特開平６−２４８２６７号公報
【特許文献５】特開２０１２−９２１３８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、これら従来技術は、腸内の有用菌の菌数を増加させることにより、有機酸の産生を増加させるものであり、有用菌（微生物）自体の有機酸の産生効率を向上させるものではなかった。
また、乳酸菌やオリゴ糖を含む食品などには、乳酸菌の生残性に問題のあるものや、過剰摂取により、下痢になるものなどもあった。
このため、ビフィズス菌や乳酸菌の数量（菌数）に拘わらず、有用菌自体の有機酸の産生効率を向上させることが可能となれば望ましい。これらの有用菌自体の有機酸の産生効率を向上させることが可能となれば、有用菌の大量摂取が困難な場合や、腸内において、有用菌の増殖が困難な場合でも、腸内細菌叢を改善することが可能となり、炎症性腸疾患の予防効果及び／又は改善効果を期待することが可能となる。【０００６】
そこで、本発明者らは、様々な植物化学物質がビフィズス菌などによる有機酸の産生機能に与える効果について鋭意研究した結果、ポリフェノールを用いることにより、優れた有機酸の産生促進効果が得られることを見いだした。このようなポリフェノールとして、特に、ケルセチン、タキシフォリン、フロレチン、エピガロカテキンガレート、及びプロシアニジンを挙げられる。【０００７】
ここで、ポリフェノールを用いて、腸内細菌叢の改善をすることに関連する技術として、特許文献３に記載の整腸用組成物を挙げられる。この整腸用組成物では、エピガロカテキンガレートなどを含有し、ヒトの腸内のｐＨを低下させて、腸内細菌叢や便秘症を改善することが可能であると記載されている。
しかしながら、特許文献３に記載の整腸用組成物は、腸内において、ビフィズス菌や乳酸菌の菌数を増加させるものであり、その数量に関係なくビフィズス菌や乳酸菌による有機酸の産生を促進することが可能なものではなかった。【０００８】
また、特許文献４には、ケルセチンやタキシフォリンなどを有効成分として用いた食品用添加物などが記載されている。しかしながら、この食品用添加物は、抗酸化剤として用いられるものであり、有機酸の産生促進に関連するものではなかった。
さらに、特許文献５には、フロレチンなどを有効成分とする皮膚化粧料などが記載されている。しかしながら、この皮膚化粧料などは、抗炎症剤などとして用いられるものであり、有機酸の産生促進に関連するものではなかった。
その他、各種ポリフェノールを有効成分として用いた、ビフィズス菌や乳酸菌による有機酸の産生を促進することが可能な組成物などに関連する先行文献は、見当たらなかった。【０００９】
本発明は、上記の事情に鑑みなされたものであり、ビフィズス菌や乳酸菌の数量に拘わらず、これらの有用菌が産生する有機酸量を増加させることが可能な有機酸の産生促進剤、並びに炎症性腸疾患の予防及び／又は改善剤の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記の目的を達成するために、本発明は、ポリフェノールを有効成分として含有する、ビフィズス菌及び／又は乳酸菌による有機酸の産生を促進するための有機酸の産生促進剤である。
本発明の有機酸の産生促進剤において、ビフィズス菌は、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium  longum）ＯＬＢ６２９０（ＮＩＴＥ  Ｐ−７５）、ビフィドバクテリウム・ロンガムＮｏ．７（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２４２）、及びビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Bifidobacterium  adolescentis）ＪＣＭ１２７５Ｔのいずれか１種又は２種以上とすることが好ましい。乳酸菌は、ラクトバチルス属の乳酸菌であることが好ましく、ラクトバチルス・デルブリッキー・ブルガリカス（Lactobacillus  delbrueckii  subsp.  bulgaricus）ＯＬＬ  １１８１（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２６９）とすることが好ましい。【００１１】
本発明の有機酸の産生促進剤において、ビフィズス菌及び／又は乳酸菌によって産生される有機酸として、乳酸と酢酸を挙げられる。また、ビフィズス菌及び／又は乳酸菌により、乳酸と酢酸が産生され、これらが他の腸内細菌により、酪酸に変換される。したがって、本発明の有機酸の産生促進剤を摂取することにより、腸内において、酪酸の量を増加させることも可能となっている。【００１２】
本発明の有機酸の産生促進剤において、ポリフェノールとしては、フラボノイド、フロレチン、及びプロシアニジンのいずれか１種又は２種以上を含有させることが好ましい。このとき、フラボノイドとして、ケルセチン、タキシフォリン、エピガロカテキンガレートを用いることが好ましい。また、プロシアニンジンとして、カカオポリフェノールを用いることが好ましい。【００１３】
また、本発明の有機酸の産生促進剤において、上記のポリフェノールと上記のビフィズス菌とを有効成分として含有させることも好ましく、上記のポリフェノールと上記の乳酸菌とを有効成分として含有させることも好ましい。
さらに、本発明の炎症性腸疾患の予防及び／又は改善剤は、上記の有機酸の産生促進剤を含有するものである。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、ビフィズス菌や乳酸菌の数量に拘わらず、これらの有用菌自体の有機酸の産生効率を向上させ得る有機酸の産生促進剤、並びに炎症性腸疾患の予防及び／又は改善剤を提供することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】各種のポリフェノールをそれぞれ含有させた培地を用いて培養したビフィズス菌によって産生された有機酸の濃度を表したグラフを示す図である。
【図２】プロシアニジンとして、カカオポリフェノールを含有させた培地を用いて培養したビフィズス菌によって産生された有機酸の濃度を表したグラフを示す図である。
【図３】各種のポリフェノールをそれぞれ含有させた培地を用いて培養した乳酸菌によって産生された有機酸の濃度を表したグラフを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下、本発明の好ましい実施形態について、詳細に説明する。
［第一実施形態］
まず、本発明の第一実施形態に係る有機酸の産生促進剤について説明する。本実施形態の有機酸の産生促進剤は、ポリフェノールを有効成分として含有する、ビフィズス菌又は乳酸菌による有機酸の産生を促進するための有機酸の産生促進剤である。
【００１７】
ビフィズス菌は、グラム陽性の偏性嫌気性桿菌の一種であり、動物の生体内に広く生息している。ビフィズス菌は、糖を分解して、乳酸及び酢酸を産生する微生物である。ヒトの健康維持のためには、一生涯にわたって、ビフィズス菌を腸内に優勢種として存在させることが望ましい。
【００１８】
本実施形態の有機酸の産生促進剤において、ビフィズス菌としては、特に限定されないが、例えば、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium  longum）ＯＬＢ６２９０（ＮＩＴＥ  Ｐ−７５）、ビフィドバクテリウム・ロンガムＮｏ．７（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２４２）、又はビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Bifidobacterium  adolescentis）ＪＣＭ１２７５Ｔなどが好ましい。
【００１９】
ビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium  longum）ＯＬＢ６２９０（ビフィズス菌 OLB6290）は、独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センターに、受託番号：ＮＩＴＥ  Ｐ−７５として、２００５年２月３日に寄託された微生物である。
【００２０】
ビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium  longum）Ｎｏ．７（ビフィズス菌 No.7）は、独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センターに、受託番号：ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２４２として、１９９３年４月２０日に寄託された微生物である。
【００２１】
乳酸菌は、糖を分解して、乳酸を産生する微生物であり、乳酸のみを最終産物として作り出すホモ乳酸菌と、乳酸以外のものを同時に産生するヘテロ乳酸菌に分類される。乳酸菌としては、ラクトバチルス属の乳酸菌、ビフィドバクテリウム属の乳酸菌、エンテロコッカス属の乳酸菌、ラクトコッカス属の乳酸菌、ペディオコッカス属の乳酸菌、及びリューコノストック属の乳酸菌などが挙げられる。本明細書において、乳酸菌は、いわゆるビフィズス菌以外の乳酸を産生する微生物を意味する。
【００２２】
本実施形態の有機酸の産生促進剤において、乳酸菌としては、特に限定されないが、グラム陽性の桿菌であるラクトバチルス属の乳酸菌が好ましい。例えば、ラクトバチルス・デルブリッキー・ブルガリカス（Lactobacillus  delbrueckii  subsp.  bulgaricus）が好ましく、具体的には、ラクトバチルス・デルブリッキー・ブルガリカス（Lactobacillus  delbrueckii  subsp.  bulgaricus）ＯＬＬ１１８１（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２６９）が好ましい。
【００２３】
ラクトバチルス・デルブリッキー・ブルガリカス（Lactobacillus  delbrueckii  subsp.  bulgaricus）ＯＬＬ１１８１（ブルガリア菌 OLL1181）は、独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センターに、受託番号：ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２６９として、２０１０年７月１６日に寄託された微生物である。
【００２４】
本実施形態の有機酸の産生促進剤において、ビフィズス菌や乳酸菌によって産生される有機酸としては、乳酸と酢酸が挙げられる。また、乳酸と酢酸は腸内細菌により、酪酸に変換されるため、本実施形態の有機酸の産生促進剤を摂取することにより、腸内において、酪酸の量を増加させることも可能となる。
ビフィズス菌や乳酸菌によって産生される乳酸と酢酸は、腸内において、ウェルシュ菌などの有害菌の増殖を抑制して、腸内細菌叢を改善し、便秘や下痢が生じるのを抑制や防止することが可能である。また、酪酸には、炎症性腸疾患に対する優れた予防効果及び／又は改善効果のあることが知られている。
【００２５】
本実施形態の有機酸の産生促進剤によれば、ビフィズス菌や乳酸菌の数量（菌数）が増加しなくても、ビフィズス菌や乳酸菌によって産生される乳酸及び酢酸の量を増加させることが可能である。このため、腸内において、ビフィズス菌や乳酸菌を増殖させることが困難な者が、本実施形態の有機酸の産生促進剤を摂取した場合でも、腸内において、乳酸及び酢酸の量を増加させることが可能になる。そして、腸内において、乳酸及び酢酸の量が増加することを通じて、腸内細菌叢が改善され、炎症性腸疾患に対する予防効果及び／又は改善効果を得ることが可能である。
【００２６】
本実施形態の有機酸の産生促進剤において、ポリフェノールとしては、フラボノイドを含むことが好ましく、フラボノイドとしては、ジヒドロケルセチンの一種であるタキシフォリンを含むことが好ましい。
本実施形態の有機酸の産生促進剤において、タキシフォリンの含量としては、好ましくは０．００１〜５．０重量％、より好ましくは０．０１〜４．０重量％、さらに好ましくは０．１〜３．０重量％である。
【００２７】
また、本実施形態の有機酸の産生促進剤において、ヒトに対する１日当たりのタキシフォリンの有効量（摂取量，投与量）としては、好ましくは０．１〜１００ｍｇ、より好ましくは０．５〜５０ｍｇ、さらに好ましくは１〜１０ｍｇである。
なお、ヒトに対する１日あたりの有効量は、１回で摂取（投与）してもよく、２回以上の複数回で摂取してもよい。以下の実施形態についても同様である。
【００２８】
また、本実施形態の有機酸の産生促進剤において、ポリフェノールとして、フロレチンを含むことも好ましい。
本実施形態の有機酸産生促進剤において、フロレチンの含量としては、好ましくは０．０００１〜５０重量％、より好ましくは０．００１〜３０重量％、さらに好ましくは０．０１〜１５重量％である。
また、本実施形態の有機酸産の生促進剤において、ヒトに対する１日当たりのフロレチンの有効量（摂取量，投与量）としては、好ましくは０．００１〜５０ｍｇ、より好ましくは０．０１〜３０ｍｇ、さらに好ましくは０．１〜１５ｍｇである。
【００２９】
さらに、本実施形態の有機酸の産生促進剤において、ポリフェノールとしては、ケルセチン、エピガロカテキンガレート、及びプロシアニジンのいずれか１種又は２種以上を含むことが好ましく、プロシアニジンとしては、特に、カカオポリフェノールを含むことが好ましい。
本実施形態の有機酸の産生促進剤において、ケルセチンの含量としては、好ましくは０．０００１〜５０重量％、より好ましくは０．００１〜３０重量％、さらに好ましくは０．０１〜１５重量％である。また、本実施形態の有機酸の産生促進剤において、エピガロカテキンガレートの含量としては、好ましくは０．０００１〜５０重量％、より好ましくは０．００１〜３０重量％、さらに好ましくは０．０１〜１５重量％である。また、本実施形態の有機酸の産生促進剤において、カカオポリフェノールの含量としては、好ましくは０．０００１〜５０重量％、より好ましくは０．００１〜３０重量％、さらに好ましくは０．０１〜１５重量％である。
【００３０】
また、本実施形態の有機酸の産生促進剤において、ポリフェノールとしては、ケルセチン、タキシフォリン、フロレチン、エピガロカテキンガレート、及びプロシアニジンのいずれか１種又は２種以上を組み合わせて含むことも好ましい。このとき、ポリフェノールの２種以上を組み合わせることにより、有機酸の産生促進について相乗効果を期待できる。
【００３１】
本実施形態の有機酸の産生促進剤は、１食当たりの単位包装形態からなるものとすることが可能であり、該単位包装あたりに有効量のポリフェノールを含めた形態とすることも可能である。
本実施形態の有機酸の産生促進剤において、包装形態としては、公知の包装（包材）を用いることが可能であり、特に制限されないが、例えば、紙、プラスチック、ガラス、ナイロン、ステンレス、アルミニウム、鉄、銅、銀、竹などを用いることが可能である。以下の実施形態でも同様である。
ただし、本実施形態の有機酸の産生促進剤において、嫌気性菌であるビフィズス菌又は乳酸菌が含有されているため、包装形態としては、空気や酸素に触れないものとすることが好ましい。例えば、有機酸の産生促進剤の製造工程や包装工程において、空気や酸素に触れる可能性を除去する工程を設けることが好ましく、また、有機酸の産生促進剤を包装した後の保存において、空気や酸素が内部に透過しない包装（包材）を選択することが好ましい。
【００３２】
本実施形態の有機酸の産生促進剤において、それを摂取する（投与する）方法としては、特に限定されず、経口、経管、経腸、血管注射、塗薬、座薬などの公知の摂取（投与）形態の全部を適用することが可能であり、経口、経管、経腸を適用することが好ましく、経口を適用することが特に好ましい。また、本実施形態の有機酸の産生促進剤において、ポリフェノール以外の成分としては、その他の摂取可能な成分、各種の添加物、医薬品の原材料などを含有させてもよい。以下の実施形態についても同様である。
【００３３】
［第二実施形態］
本発明の第二実施形態に係る有機酸の産生促進剤は、ビフィズス菌による有機酸の産生を促進するためのものであり、ポリフェノールのみならず、ビフィズス菌をも有効成分とする点で、第一実施形態と異なっている。その他の点については、第一実施形態と同様のものとすることが可能である。
有機酸の産生促進剤を第二実施形態のような構成にすれば、ポリフェノールと共に、ポリフェノールによって有機酸の産生が促進されたビフィズス菌を同時に摂取することが可能であるため、より確実にビフィズス菌に有機酸を産生させることが可能となる。
【００３４】
本実施形態の有機酸の産生促進剤において、ヒトに対する１日当たりのビフィズス菌の有効量（摂取量，投与量）としては、好ましくは２×１０７〜５×１０１０個、より好ましくは１×１０８〜５×１０１０個、さらに好ましくは５×１０８〜２×１０１０個である。
【００３５】
また、本実施形態の有機酸の産生促進剤において、ビフィズス菌の培養物の１ｇ当たりにビフィズス菌の菌数を１０７個以上で含有させる場合、ヒトに対する１日当たりのビフィズス菌の培養物の有効量（摂取量，投与量）としては、好ましくは５〜１０００ｇ、より好ましくは５０〜５００ｇ、さらに好ましくは８０〜２００ｇである。
【００３６】
このとき、本実施形態の有機酸の産生促進剤において、ビフィズス菌の培養物の１ｇ当たりにビフィズス菌の菌数を１０７個以上、１０８個以上、１０９個以上などで含有させれば良く、１０７個、１０８個、１０９個などで含有させても良い。本実施形態の有機酸の産生促進剤において、ビフィズス菌の培養物の１ｇ当たりのビフィズス菌の菌数を増加させれば、ビフィズス菌の菌数を有効量で含有させつつ、ビフィズス菌の培養物の有効量を低減させることが可能であり、ビフィズス菌の培養物をより少量で摂取することで、有機酸の産生促進効果、並びに炎症性腸疾患の予防効果及び／又は改善効果を十分に得ることが可能となる。これは、第三実施形態における乳酸菌についても同様である。
【００３７】
本実施形態の有機酸の産生促進剤において、ビフィズス菌の培養物は、公知の培地成分で、ビフィズス菌を培養（増殖）させて得ることが可能である。そして、この得られたビフィズス菌の培養液を遠心分離することなどにより、培養液の単位重量当たりのビフィズス菌の菌数を増やすことが可能である。本実施形態の有機酸の産生促進剤において、ビフィズス菌は、例えば、培養（増殖）させたままの状態でもよく、凍結保護剤などと混合して凍結させた状態でもよく、凍結乾燥させた状態でもよい。これは、第三実施形態における乳酸菌についても同様である。
【００３８】
また、本実施形態の有機酸の産生促進剤において、それを摂取するときの温度としては、好ましくは−３０〜５０℃、より好ましくは―２０〜４５℃、さらに好ましくは０〜４５℃、さらに好ましくは０〜３０℃、特に好ましくは０〜２０℃、最も好ましくは０〜１０℃である。これは、第三実施形態における乳酸菌についても同様である。
【００３９】
［第三実施形態］
本発明の第三実施形態に係る有機酸の産生促進剤は、乳酸菌による有機酸の産生を促進するためのものであり、ビフィズス菌に代えて、乳酸菌を有効成分とする点で、第二実施形態と異なっている。その他の点については、第二実施形態と同様のものとすることが可能である。
有機酸の産生促進剤を第三実施形態のような構成にすれば、ポリフェノールと共に、ポリフェノールによって有機酸の産生が促進された乳酸菌を同時に摂取することが可能であるため、より確実に乳酸菌に有機酸を産生させることが可能となる。
【００４０】
本実施形態の有機酸の産生促進剤において、ヒトに対する１日当たりの乳酸菌の有効量（摂取量，投与量）としては、好ましくは２×１０７〜５×１０１０個、より好ましくは１×１０８〜５×１０１０個、さらに好ましくは５×１０８〜２×１０１０個である。
【００４１】
また、本実施形態の有機酸の産生促進剤において、乳酸菌の培養物の１ｇ当たりに乳酸菌の菌数を１０７個以上で含有させる場合、ヒトに対する１日当たりの乳酸菌の培養物の有効量（摂取量，投与量）としては、好ましくは５〜１０００ｇ、より好ましくは５０〜５００ｇ、さらに好ましくは８０〜２００ｇである。
【００４２】
［第四実施形態］
本発明の第四実施形態に係る炎症性腸疾患の予防及び／又は改善剤は、第一実施形態〜第三実施形態のいずれかの有機酸の産生促進剤を含有するものとすることが好ましい。
このような炎症性腸疾患の予防及び／又は改善剤を摂取することにより、腸内において、ビフィズス菌や乳酸菌による有機酸の産生効率を向上することが可能である。このため、実際に産生された有機酸により、腸内において、有害菌の増殖が抑制され、腸内細菌叢の改善効果を通じて、炎症性腸疾患に対する優れた予防効果及び／又は改善効果を得ることが可能となる。
【００４３】
［第五実施形態］
次に、本発明の第五実施形態に係る乳酸の製造方法について説明する。本実施形態の乳酸の製造方法は、ポリフェノールを有効成分として含有する、ビフィズス菌及び／又は乳酸菌による有機酸の産生を促進する組成物を用いて、ビフィズス菌及び／又は乳酸菌により、乳酸を製造する方法である。また、本実施形態の乳酸の製造方法は、ポリフェノールと、ビフィズス菌及び／又は乳酸菌とを有効成分として含有する、ビフィズス菌及び／又は乳酸菌による有機酸の産生を促進する組成物を用いて、ビフィズス菌又は乳酸菌により、乳酸を製造する方法とすることも好ましい。
本実施形態の乳酸の製造方法において、ビフィズス菌や乳酸菌の菌数当たりに製造される乳酸の濃度としては、（絶対値で）好ましくは０．０１ｐＭ／ｃｆｕ以上、より好ましくは０．１ｐＭ／ｃｆｕ以上、さらに好ましくは１ｐＭ／ｃｆｕ以上、特に好ましくは０．０１ｎＭ／ｃｆｕ以上である。また、ポリフェノールを無添加で、ビフィズス菌又は乳酸菌により、乳酸を製造する方法に比較した場合、本実施形態の乳酸の製造方法において、ビフィズス菌や乳酸菌の菌数当たりに製造される乳酸の濃度としては、（相対値で）好ましくは１％以上、より好ましくは２％以上、さらに好ましくは５％以上、特に好ましくは１０％以上で増加する（促進される）。
【００４４】
また、本実施形態の乳酸の製造方法において、ビフィズス菌や乳酸菌の１０８個当たりに製造される乳酸の濃度としては、（絶対値で）好ましくは１ｎＭ／１０８ｃｆｕ以上、より好ましくは０．０１ｍＭ／１０８ｃｆｕ以上、さらに好ましくは０．１ｍＭ／１０８ｃｆｕ以上、特に好ましくは１ｍＭ／１０８ｃｆｕ以上である。また、ポリフェノールを無添加で、ビフィズス菌又は乳酸菌により、乳酸を製造する方法に比較した場合、本実施形態の乳酸の製造方法において、ビフィズス菌や乳酸菌の菌数当たりに製造される乳酸の濃度としては、（相対値で）好ましくは１％以上、より好ましくは２％以上、さらに好ましくは５％以上、特に好ましくは１０％以上で増加する（促進される）。
なお、本実施形態として、ビフィズス菌及び／又は乳酸菌により、乳酸を製造するためのポリフェノールの使用、ビフィズス菌及び／又は乳酸菌により、乳酸の製造を促進するためのポリフェノールの使用などと表現することもできる。
【００４５】
［第六実施形態］
次に、本発明の第五実施形態に係る酢酸の製造方法について説明する。本実施形態の酢酸の製造方法は、ポリフェノールを有効成分として含有する、ビフィズス菌及び／又は乳酸菌による有機酸の産生を促進する組成物を用いて、ビフィズス菌及び／又は乳酸菌により、酢酸を製造する方法である。また、本実施形態の酢酸の製造方法は、ポリフェノールと、ビフィズス菌及び／又は乳酸菌とを有効成分として含有する、ビフィズス菌及び／又は乳酸菌による有機酸の産生を促進する組成物を用いて、ビフィズス菌又は乳酸菌により、酢酸を製造する方法とすることも好ましい。
本実施形態の酢酸の製造方法において、ビフィズス菌や乳酸菌の菌数当たりに製造される酢酸の濃度としては、（絶対値で）好ましくは１ｆＭ／ｃｆｕ以上、より好ましくは０．０１ｐＭ／ｃｆｕ以上、さらに好ましくは０．１ｐＭ／ｃｆｕ以上、特に好ましくは１ｐＭ／ｃｆｕ以上である。また、ポリフェノールを無添加で、ビフィズス菌又は乳酸菌により、酢酸を製造する方法に比較した場合、本実施形態の酢酸の製造方法において、ビフィズス菌や乳酸菌の菌数当たりに製造される酢酸の濃度としては、（相対値で）好ましくは１％以上、より好ましくは２％以上、さらに好ましくは５％以上、特に好ましくは１０％以上で増加する（促進される）。
【００４６】
また、本実施形態の酢酸の製造方法において、ビフィズス菌や乳酸菌の１０８個当たりに製造される酢酸の濃度としては、（絶対値で）好ましくは０．１ｎＭ／１０８ｃｆｕ以上、より好ましくは１ｎＭ／１０８ｃｆｕ以上、さらに好ましくは０．０１ｎＭ／１０８ｃｆｕ以上、特に好ましくは０．１ｎＭ／１０８ｃｆｕ以上である。また、ポリフェノールを無添加で、ビフィズス菌又は乳酸菌により、酢酸を製造する方法に比較した場合、本実施形態の酢酸の製造方法において、ビフィズス菌や乳酸菌の菌数当たりに製造される酢酸の濃度としては、（相対値で）好ましくは１％以上、より好ましくは２％以上、さらに好ましくは５％以上、特に好ましくは１０％以上で増加する（促進される）。
なお、本実施形態として、ビフィズス菌及び／又は乳酸菌により、酢酸を製造するためのポリフェノールの使用、ビフィズス菌及び／又は乳酸菌により、酢酸の製造を促進するためのポリフェノールの使用などと表現することもできる。
【実施例】
【００４７】
以下、本発明の実施形態に係る有機酸の産生促進剤の効果を確認するために実施した試験について詳細に説明する。ただし、本発明は、以下の構成に限定されるものではない。【００４８】
＜試験１＞
（試験方法）
ポリフェノールとして、ケルセチン、タキシフォリン、フロレチン、及びエピガロカテキンガレートの４種類を準備した。
具体的には、ケルセチン（quercetin、ケイマンケミカル  カンパニー  インコーポレーテッド）をＤＭＳＯ（Dimethyl  sulfoxide）に溶解させて２０ｍＭに調製した。また、タキシフォリン（(+)-Taxifolin  1036  Extrasynthese、フナコシ株式会社）をＤＭＳＯに溶解させて４０ｍＭに調製した。また、フロレチン（Phloretin、シグマアルドリッチ  ジャパン）をＤＭＳＯに溶解させて４０ｍＭに調製した。また、エピガロカテキンガレート（Epigallocatechin  gallate、ケイマンケミカル  カンパニー  インコーポレーテッド）をＤＭＳＯに溶解させて２０ｍＭに調製した。そして、これら調製したケルセチン、タキシフォリン、フロレチン、及びエピガロカテキンガレートの各ＤＭＳＯ溶液をＤＭＥＭ培地（DMEM、シグマアルドリッチ  ジャパン）に０．０１％で添加した。なお、対照として、ポリフェノールを加えていないＤＭＳＯ（Dimethyl  sulfoxide）をＤＭＥＭ培地に０．０１％で添加したものを準備した。【００４９】
上記で調製した各ＤＭＥＭ培地に、ビフィズス菌として、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Bifidobacterium  adolescentis）ＪＣＭ１２７５Ｔを１０８ｃｆｕ／ｍｌで接種し、３７℃、３時間で嫌気培養した。そして、培養上清中の乳酸および酢酸を長鎖・短鎖脂肪酸分析用のラベル化試薬（株式会社ワイエムシィ）により、ラベル化した後に、高速液体クロマトグフィー（ＨＰＬＣ、High  performance  liquid  chromatography）を用いて、培養後の各培地における乳酸及び酢酸の濃度を測定した。ＨＰＬＣの条件としては、Ascentis  RP-amideカラム（１００×３０ｍｍ、３μｍ、シグマアルドリッチ  ジャパン）を用い、移動相には、Ａ相（０．０１Ｍ  塩酸、ｐＨ  ４．５）：Ｂ相（アセトニトリル：メタノール＝２：１）を１３：７で、０．４ｍｌ／分とした。また、カラム温度を５０℃、インジェクションを４μｌ、検出波長を４００ｎｍとした。その結果を図１に示す。【００５０】
また、培養前後の各培地におけるビフィズス菌の菌数を、培養前後の各培地の濁度（６５０ｎｍの吸光度）と、あらかじめ作成した検量線によって算出した。
具体的な検量線の作成方法としては、ビフィズス菌の菌数の溶液における濁度（６５０ｎｍの吸光度）を測定した後、ビフィズス菌をＢＣＰ加プレートカウント寒天培地により、３７℃、７２時間で嫌気培養し、コロニー数を計測した。そして、ビフィズス菌の菌数（ｃｆｕ／ｍｌ）と濁度の検量線を作成した。【００５１】
（試験結果）
ポリフェノールを添加していない培地（ＤＭＳＯ）における有機酸の濃度としては、乳酸が３．４６ｍＭ、酢酸が４．８６ｍＭであった。また、ケルセチンを添加した培地（ＱＵＥ）における有機酸の濃度としては、乳酸が３．８８ｍＭ、酢酸が５．４１ｍＭであった。また、タキシフォリンを添加した培地（ＴＡＸ）における有機酸の濃度としては、乳酸が５．８８ｍＭ、酢酸が７．４４ｍＭであった。また、フロレチンを添加した培地（ＰＨＬ）における有機酸の濃度としては、乳酸が４．９１ｍＭ、酢酸が６．２６ｍＭであった。また、エピガロカテキンガレートを添加した培地（ＥＧＣＧ）における有機酸の濃度としては、乳酸が５．２５ｍＭ、酢酸が７．８１ｍＭであった。【００５２】
すなわち、ケルセチンの添加により、乳酸は１２％で増加し、酢酸は１１％で増加した。また、タキシフォリンの添加により、乳酸は７０％で増加し、酢酸は５３％で増加した。また、フロレチンの添加により、乳酸は４２％で増加し、酢酸は２９％で増加した。また、エピガロカテキンガレートの添加により、乳酸は４２％で増加し、酢酸は２９％で増加した。【００５３】
また、培養前後の各培地におけるビフィズス菌の菌数の算出の結果、いずれの培地のビフィズス菌の菌数も約１０８ｃｆｕ／ｍｌであった。このことから、培養前後の培地におけるビフィズス菌の菌数が変化しないことが確認された。
したがって、試験１の結果から、ケルセチン、タキシフォリン、フロレチン、及びエピガロカテキンガレートは、ビフィズス菌の菌数を変化させることなく、ビフィズス菌による乳酸及び酢酸の産生効率を向上し得ることが明らかとなった。【００５４】
＜試験２＞
（試験方法）
プロシアニジンとして、カカオポリフェノールを準備した。
具体的には、後述のように製造したカカオポリフェノール（Cacao  bean  polyphenol  extract）をＤＭＳＯに溶解させて１００ｍｇ／ｍｌに調製した。なお、対照として、ポリフェノールを加えていないＤＭＳＯ（Dimethyl  sulfoxide）をＤＭＥＭ培地に０．０１％で添加したものを準備した。【００５５】
以下のようにして、カカオポリフェノールを製造した。
まず、カカオ豆の１５０ｋｇを８０℃、１時間で加熱した。次いで、エクスペラーを用いて、この加熱したカカオ豆を脱脂し、カカオパウダーの８０ｋｇを得た。この脱脂したカカオパウダーにエタノール（５０％）の８００ｋｇを加えてから加熱した。そして、これを５０℃に達温させた後に、１時間で攪拌抽出してから、この抽出液を４℃、１晩で放置した。スクリューデカンタ、フィルタープレスを用いて、この抽出液を濾過し、この濾液を２７ｋｇに減圧濃縮してから、エタノール（９５％）の１３ｋｇを加えた。そして、この濃縮液を４０℃、１時間で攪拌してから、１晩で冷蔵保存した。シャープレス遠心機を用いて、この濃縮液を遠心分離（２５℃、１２０００ｒｐｍ）した。そして、この遠心分離の上清液に酸性白土（ミズカエース＃２０）の３５ｋｇを加えてから１時間で攪拌した。ヌッチェを用いて、これを濾過し、この濾過液を減圧濃縮してから凍結乾燥して、粉末の６．３ｋｇを得た。そして、この粉末の０．５ｋｇに、樹脂の２５Ｌ、水の５０Ｌを投入し、３０分間以上で攪拌した。この樹脂を回収してから、エタノール（８０％）の７５Ｌを投入し、２０〜３０分間で攪拌した。ヌッチェを用いて、これを濾過し、この濾過液を減圧濃縮してから凍結乾燥して、カカオポリフェノールを得た。【００５６】
上記で調製した各ＤＭＥＭ培地に、ビフィズス菌として、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Bifidobacterium  adolescentis）ＪＣＭ１２７５Ｔを１０８ｃｆｕ／ｍｌで接種し、３７℃、３時間で嫌気培養した。そして、試験１と同様にして、ＨＰＬＣを用いて、培養後の培地における乳酸及び酢酸の濃度を測定した。その結果を図２に示す。
また、培養前後の各培地におけるビフィズス菌の菌数を、培養前後の各培地の濁度（６５０ｎｍの吸光度）と、あらかじめ作成した検量線によって、試験１と同様に算出した。【００５７】
（試験結果）
ポリフェノールを添加していない培地（ＤＭＳＯ）における有機酸の濃度としては、乳酸が５．７０ｍＭ、酢酸が１１．８０ｍＭであった。また、カカオポリフェノールを添加した培地（ＣＢＰ）における有機酸の濃度としては、乳酸が６．３４ｍＭ、酢酸が１３．１８ｍＭであった。【００５８】
すなわち、カカオポリフェノールの添加により、乳酸は１１％で増加し、酢酸は１２％で増加した。【００５９】
また、培養前後の各培地におけるビフィズス菌の菌数の算出の結果、いずれの培地のビフィズス菌の菌数も約１０８ｃｆｕ／ｍｌであった。このことから、培養前後の培地におけるビフィズス菌の菌数が変化しないことが確認された。
したがって、試験２の結果から、カカオポリフェノールは、ビフィズス菌の菌数を変化させることなく、ビフィズス菌による乳酸及び酢酸の産生効率を向上し得ることが明らかとなった。【００６０】
＜試験３＞
（試験方法）
ポリフェノールとして、ケルセチン、タキシフォリン、フロレチン、及びエピガロカテキンガレートの４種類を準備した。
具体的には、ケルセチン（quercetin、ケイマンケミカル  カンパニー  インコーポレーテッド）をＤＭＳＯ（Dimethyl  sulfoxide）に溶解させて２００ｍＭに調製した。また、タキシフォリン((+)-Taxifolin  1036  Extrasynthese、フナコシ株式会社)をＤＭＳＯに溶解させて４００ｍＭに調製した。また、フロレチン(Phloretin、シグマアルドリッチ  ジャパン)をＤＭＳＯに溶解させて４００ｍＭに調製した。また、エピガロカテキンガレート（Epigallocatechin  gallate、ケイマンケミカル  カンパニー  インコーポレーテッド）をＤＭＳＯに溶解させて２００ｍＭに調製した。そして、これら調製したケルセチン、タキシフォリン、フロレチン、及びエピガロカテキンガレートの各ＤＭＳＯ溶液をＤＭＥＭ培地（DMEM、シグマアルドリッチ  ジャパン）に０．０１％で添加した。なお、対照として、ポリフェノールを加えていないＤＭＳＯをＤＭＥＭ培地に０．０１％で添加したものを準備した。【００６１】
上記で調製した各ＤＭＥＭ培地に、乳酸菌として、ラクトバチルス・デルブリッキー・ブルガリカス（Lactobacillus  delbrueckii  subsp.  bulgaricus）ＯＬＬ１１８１（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２６９）を１０８ｃｆｕ／ｍｌで接種し、３７℃、３時間で嫌気培養した。そして、試験１と同様にして、ＨＰＬＣを用いて、培養後の培地における酢酸の濃度を測定した。その結果を図３に示す。
また、培養前後の各培地における乳酸菌の菌数を、培養前後の各培地の濁度（６５０ｎｍの吸光度）と、あらかじめ作成した検量線によって、試験１と同様に算出した。【００６２】
（試験結果）
ポリフェノールを添加していない培地（ＤＭＳＯ）における有機酸の濃度としては、酢酸が０．６３ｍＭであった。また、ケルセチンを添加した培地（ＱＵＥ）における有機酸の濃度としては、酢酸が０．６１ｍＭであった。また、タキシフォリンを添加した培地（ＴＡＸ）における有機酸の濃度としては、酢酸が０．９７ｍＭであった。また、フロレチンを添加した培地（ＰＨＬ）における有機酸の濃度としては、酢酸が０．７２ｍＭであった。また、エピガロカテキンガレートを添加した培地（ＥＧＣＧ）における有機酸の濃度としては、酢酸が０．９０ｍＭであった。【００６３】
すなわち、ケルセチンの添加により、酢酸は３％で減少した。また、タキシフォリンの添加により、酢酸は５４％で増加した。また、フロレチンの添加により、酢酸は１４％で増加した。また、エピガロカテキンガレートの添加により、酢酸は４３％で増加した。【００６４】
また、培養前後の各培地における乳酸菌の菌数の算出の結果、いずれの培地の乳酸菌の菌数も約１０８ｃｆｕ／ｍｌであった。このことから、培養前後の培地における乳酸菌の菌数が変化しないことが確認された。
したがって、試験３の結果から、ケルセチン、タキシフォリン、フロレチン、及びエピガロカテキンガレートは、乳酸菌の菌数を変化させることなく、乳酸菌による酢酸の産生効率を向上し得ることが明らかとなった。【００６５】
以上で説明した通り、本実施形態の有機酸の産生促進剤によれば、ビフィズス菌や乳酸菌の菌数（数量）に拘わらず、これらの微生物が産生する有機酸の量を増加することが可能である。そして、このような有機酸の産生促進剤を含有する本実施形態の炎症性腸疾患の予防及び／又は改善剤によれば、腸内において、有害菌の増殖が抑制され、腸内菌叢の改善効果を通じて、炎症性腸疾患に対する優れた予防効果及び／又は改善効果を得ることが可能となる。【００６６】
本発明は、上記の実施形態や実施例に限定されるものではなく、本発明の範囲内において、種々に変更して実施が可能である。例えば、上記の実施形態及び実施例では、ポリフェノールとして、ケルセチン、タキシフォリン、フロレチン、エピガロカテキンガレート、及びプロシアニジンを用いているが、これらと同様の効果を奏する、その他のポリフェノールを用いてもよい。また、もちろん、ビフィズス菌や乳酸菌として、実施形態に示した菌株以外の微生物を用いてもよい。さらに、第二実施形態と第三実施形態を組み合わせて、ポリフェノールとビフィズス菌及び乳酸菌とを有効成分として含有させてもよい。
【産業上の利用可能性】
【００６７】
本発明は、下痢や便秘、炎症性腸疾患などの予防及び／又は改善を行うために、好適に利用することが可能である。
【図１】
2016103699.tif 000002
【図２】
2016103699.tif 000003
【図３】
2016103699.tif 000004
【国際調査報告】
2016103699.tif 000005
2016103699.tif 000006
2016103699.tif 000007
2016103699.tif 000008
2016103699.tif 000009
2016103699.tif 000010