(57)【要約】  本発明は、比較的少量の含有（添加）であっても、水中油型乳化物に混在する脂肪球が水中で安定的に分散され、水中油型乳化物の乳化安定性が高まる乳化安定剤、及びこの乳化安定剤を用いた乳化安定化方法を提供する。本発明の乳化安定剤は、タンパク質であるＭＦＧ−Ｅ８（ｍｉｌｋ  ｆａｔ  ｇｌｏｂｕｌｅ−ＥＧＦ  ｆａｃｔｏｒ  ８）を有効成分として含有することを特徴とする。また、本発明の乳化安定化方法は、水中油型乳化物にＭＦＧ−Ｅ８を添加する工程を含むことを特徴とする。好適には、水中油型乳化物が乳及び／又は乳製品を含有する乳性食品であり、ＭＦＧ−Ｅ８が乳由来である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
タンパク質であるＭＦＧ−Ｅ８（ｍｉｌｋ  ｆａｔ  ｇｌｏｂｕｌｅ−ＥＧＦ  ｆａｃｔｏｒ  ８）を有効成分として含有する水中油型乳化物用の乳化安定剤。
【請求項２】
ＭＦＧ−Ｅ８が乳由来である請求項１に記載の水中油型乳化物用の乳化安定剤。
【請求項３】
ＭＦＧ−Ｅ８が脱脂乳由来である請求項１に記載の水中油型乳化物用の乳化安定剤。
【請求項４】
ＭＦＧ−Ｅ８が脱脂乳の乳清由来である請求項１に記載の水中油型乳化物用の乳化安定剤。
【請求項５】
水中油型乳化物にタンパク質であるＭＦＧ−Ｅ８を添加する工程を含む水中油型乳化物の乳化安定化方法。
【請求項６】
水中油型乳化物１００質量部に対し、０．００１〜１質量部のＭＦＧ−Ｅ８を添加する請求項５に記載の水中油型乳化物の乳化安定化方法。
【請求項７】
水中油型乳化物が乳及び／又は乳製品を含有する乳性食品であり、ＭＦＧ−Ｅ８が乳由来である請求項５又は請求項６に記載の水中油型乳化物の乳化安定化方法。
【請求項８】
ＭＦＧ−Ｅ８が脱脂乳由来である請求項７に記載の水中油型乳化物の乳化安定化方法。
【請求項９】
ＭＦＧ−Ｅ８が脱脂乳の乳清由来である請求項７に記載の水中油型乳化物の乳化安定化方法。
【請求項１０】
ＭＦＧ−Ｅ８が牛乳由来であり、水中油型乳化物が牛乳及び／又は牛乳由来の乳製品からなる乳性食品である、請求項７〜９のいずれか１項に記載の水中油型乳化物の乳化安定化方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＭＦＧ−Ｅ８タンパク質を有効成分として含有する乳化安定剤及びそれを用いた乳化安定化方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
牛乳などに代表される、水に油が乳化された脂肪球の状態で混在する水中油型乳化物では、水中に混在された脂肪球径を適切な大きさに調整することで、これらの脂肪球が水中で安定的に分散され、水中油型乳化物の乳化安定性が高まる。【０００３】
一方、これらの脂肪球は、水中油型乳化物の保持時間が長くなるにつれ、水中で他の脂肪球との脂肪球同士での会合をすることにより、その脂肪球径が大きくなり、脂肪分の浮上（クリーム浮上）が発生する。そのため、脂肪球径を適切な大きさに調整することは、水中油型乳化物の品質を管理する上で、非常に重要な工程である。【０００４】
すなわち、水中油型乳化物に混在された脂肪球は、一般的に、水中油型乳化物の保持時間が長くなるに従い、脂肪球同士が会合し、脂肪球の集合体へと変化する。そのため、水中油型乳化物に混在された脂肪球径は、最初は小さくても、保持時間が長くなるにつれ、次第に大きくなる傾向にある。それゆえに、長期間にわたり、水中油型乳化物の乳化を安定化させることは難しい。【０００５】
水中油型乳化物に混在された脂肪球径を適切な大きさに調整し、水中油型乳化物の乳化を安定化させる方法は、以下のようなものがある。例えば、水中油型乳化物に混在された脂肪球を均質機などで機械的にせん断することにより、その脂肪球径を小さくする（均質化する）方法、及び水中油型乳化物に乳化剤を添加し、水中油型乳化物の乳化を安定化させる方法、などが公知である。【０００６】
水中油型乳化物に添加する乳化剤は、例えば、水と油になじみやすいグリセリン脂肪酸エステルなどの化学合成品としての乳化剤、及び大豆由来の乳化剤、又は卵由来の乳化剤などの食物由来としての乳化剤が公知である。【０００７】
一方、化学的合成品としての乳化剤は、人工的なイメージを想起することから、近年の消費者の天然素材を評価する傾向に反する。また、食物由来としての乳化剤は、例えば、大豆由来の乳化剤を牛乳成分由来の乳飲料に添加するように、水中油型乳化物の由来が異なる場合には、食物アレルギーを懸念している消費者にとって好ましくない。【０００８】
そこで、水中油型乳化物を食品及び医薬品として経口摂取（投与）する場合には、水中油型乳化物と同じ由来の乳化剤を使用することが好ましい。例えば、水中油型乳化物が牛乳の場合には、牛乳由来の乳化剤として、カゼイン及び／又はカゼインナトリウムを使用することが公知である。また、牛乳の脂肪球の膜の画分を乳化剤として利用できることも公知である（特許文献１）。【０００９】
ところで、水中油型乳化物の一つである哺乳類の母乳中には、ＭＦＧ−Ｅ８（ｍｉｌｋ  ｆａｔ  ｇｌｏｂｕｌｅ−ＥＧＦ  ｆａｃｔｏｒ  ８）という分泌タンパク質を含有することが公知である。ＭＦＧ−Ｅ８は、母乳中に混在する脂肪球の膜中のリン脂質（フォスファチジルセリン）に結合する膜結合タンパク質であるが、乳脂肪球膜の構成成分として、本来必要とされる膜結合タンパク質ではないと言われている（非特許文献１）。一方、ＭＦＧ−Ｅ８の有する機能性は、殆ど知られていないため、その新たな機能性を見出すことを目的に、ＭＦＧ−Ｅ８遺伝子欠損マウスが作製されている（非特許文献２）。【００１０】
そして、このＭＦＧ−Ｅ８質遺伝子欠損マウスを利用した研究を通じて、ＭＦＧ−Ｅ８には、生体内でのアポトーシス細胞の除去、及び、乳腺細胞内での乳脂肪球と上皮細胞間との相互作用の調節よる授乳期・離乳後の母乳中の脂肪球の調節などの機能を有することが知られている（非特許文献３）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】日本国特開平９−１７２９６２号公報
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ｎａｋａｔａｎｉ  Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，７６（１１），２０５５−２０６０，２０１２
【非特許文献２】Ｉｍｐａｉｒｅｄ  ｉｎｖｏｌｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍａｍｍａｒｙ  ｇｌａｎｄｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｂｓｅｎｃｅ  ｏｆ  ｍｉｌｋ  ｆａｔ  ｇｌｏｂｕｌｅ  ＥＧＦ  ｆａｃｔｏｒ  ８．Ｈａｎａｙａｍａ  Ｒ，Ｎａｇａｔａ  Ｓ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．２００５  Ｎｏｖ  １５；１０２（４６）：１６８８６−９１
【非特許文献３】Ｎａｋａｔａｎｉ  Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２０１３；１５３（１）：３１−４１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明の課題は、比較的少量の含有（添加）であっても、水中油型乳化物に混在する脂肪球が水中で安定的に分散され、水中油型乳化物の乳化安定性が高まる乳化安定剤、及びこの乳化安定剤を用いた乳化安定化方法を提供することである。また、本発明の課題は、乳及び／又は乳製品を含有する乳性食品において、比較的少量の含有（添加）であっても、乳性食品に混在する脂肪球が水中で安定的に分散され、乳性食品の乳化安定性が高まる乳化安定剤、及びこの乳化安定剤を用いた乳化安定化方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明者らは、上記課題を解決することを目的に、鋭意検討したところ、タンパク質であるＭＦＧ−Ｅ８を有効成分として含有することで、水中油型乳化物の乳化安定性が高まることを見出した。具体的には、ＭＦＧ−Ｅ８遺伝子欠損マウスの母乳の脂肪球径は、ＭＦＧ−Ｅ８遺伝子が欠損されていない通常のマウスの母乳の脂肪球径と比較して、特に、母乳の保持時間が長くなるにつれ、母乳中で他の脂肪球との脂肪球同士での会合をすることにより、その脂肪球径が大きくなることを確認した。【００１５】
また、ＭＦＧ−Ｅ８遺伝子欠損マウスの母乳にＭＦＧ−Ｅ８を添加したところ、母乳の保持時間が長くなっても、母乳中で他の脂肪球との脂肪球同士での会合を抑制でき、その脂肪球径が大きくならずに、長期間にわたり乳化安定性が高まることを確認した。さらに、搾乳後に均質化処理をしていない牛乳にＭＦＧ−Ｅ８を添加したところ、母乳の保持時間が長くなっても、母乳中で他の脂肪球との脂肪球同士での会合を抑制でき、その脂肪球径が大きくならずに、長期間にわたり乳化安定性が高まることを確認した。【００１６】
本発明の乳化安定剤は、例えば、水中油型乳化物１００質量部に対して、ＭＦＧ−Ｅ８が０．００１〜１質量部という、比較的少量の含有（添加）であっても、水中油型乳化物に混在する脂肪球が水中で安定的に分散され、水中油型乳化物の乳化安定性が高まることを見出した。【００１７】
また、本発明の乳化安定剤を、水中油型乳化物のうち、例えば、乳及び／又は乳製品を含有する乳性食品に添加することで、乳性食品に混在する脂肪球が水中で安定的に分散され、乳性食品の乳化安定性が高まることを見出した。【００１８】
さらに、本発明の乳化安定剤が牛乳由来であり、水中油型乳化物が牛乳及び／又は牛乳由来の乳製品からなる乳性食品である場合には、乳化安定剤と水中油型乳化物が全て牛乳由来となり、「乳飲料」規格ではなく、「加工乳」規格又は「成分調整牛乳」規格などの付加価値の高い商品にすることができる。【００１９】
すなわち、本発明は以下の通りである。
（１）タンパク質であるＭＦＧ−Ｅ８（ｍｉｌｋ  ｆａｔ  ｇｌｏｂｕｌｅ−ＥＧＦ  ｆａｃｔｏｒ  ８）を有効成分として含有する水中油型乳化物用の乳化安定剤。
（２）ＭＦＧ−Ｅ８が乳由来である（１）に記載の水中油型乳化物用の乳化安定剤。
（３）ＭＦＧ−Ｅ８が脱脂乳由来である（１）に記載の水中油型乳化物用の乳化安定剤。
（４）ＭＦＧ−Ｅ８が脱脂乳の乳清由来である（１）に記載の水中油型乳化物用の乳化安定剤。
（５）水中油型乳化物にタンパク質であるＭＦＧ−Ｅ８を添加する工程を含む水中油型乳化物の乳化安定化方法。
（６）水中油型乳化物１００質量部に対し、０．００１〜１質量部のＭＦＧ−Ｅ８を添加する（５）に記載の水中油型乳化物の乳化安定化方法。
（７）水中油型乳化物が乳及び／又は乳製品を含有する乳性食品であり、ＭＦＧ−Ｅ８が乳由来である（５）又は（６）に記載の水中油型乳化物の乳化安定化方法。
（８）ＭＦＧ−Ｅ８が脱脂乳由来である（７）に記載の水中油型乳化物の乳化安定方法。
（９）ＭＦＧ−Ｅ８が脱脂乳の乳清由来である（７）に記載の水中油型乳化物の乳化安定方法。
（１０）ＭＦＧ−Ｅ８が牛乳由来であり、水中油型乳化物が牛乳及び／又は牛乳由来の乳製品からなる乳性食品である（７）〜（９）のいずれか１に記載の水中油型乳化物の乳化安定化方法。
【発明の効果】
【００２０】
本発明によれば、タンパク質であるＭＦＧ−Ｅ８の存在により、比較的少量の含有（添加）であっても、水中油型乳化物に混在する脂肪球が水中で安定的に分散され、水中油型乳化物の乳化安定性が高まることを見出した。本発明は、タンパク質であるＭＦＧ−Ｅ８（ｍｉｌｋ  ｆａｔ  ｇｌｏｂｕｌｅ−ＥＧＦ  ｆａｃｔｏｒ  ８）を有効成分として含有する水中油型乳化物用の乳化安定剤、及びこの乳化安定剤を添加する工程を含む水中油型乳化物の乳化安定化方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】図１Ａは、各乳試料中の脂肪球（ＭＦＧ）の顕微鏡写真である。図１Ｂは、各乳試料の顕微鏡視野中の粒子径ごとの脂肪球（ＭＦＧ）の数を示すグラフである。
【図２】図２Ａは、各乳試料中の脂肪球（ＭＦＧ）を顕微鏡で観察した図である。図２Ｂは、各乳試料の顕微鏡視野中の直径１５μｍ以上の脂肪球（ＭＦＧ）の数を示すグラフである。
【図３】図３Ａは、各乳試料中の脂肪球（ＭＦＧ）を顕微鏡で観察した図である。図３Ｂは、各乳試料の顕微鏡視野中の直径１５μｍ以上の脂肪球（ＭＦＧ）の数を示すグラフである。図３Ｃは、各乳試料中の脂肪球（ＭＦＧ）の抗ＭＦＧ−Ｅ８抗体による免疫染色を示す図である。
【図４】図４は、搾乳後に均質化処理をしていない牛乳の脂肪球（ウシ脂肪球）を位相差顕微鏡下で観察した図である。
【図５】図５は、ウシ乳由来のＭＦＧ−Ｅ８による、保存中の搾乳後に均質化処理をしていない牛乳の脂肪球（ウシ脂肪球）同士の会合の抑制効果を示す図である。
【図６】図６は、マウス乳由来のＭＦＧ−Ｅ８による、保存中の搾乳後に均質化処理をしていない牛乳の脂肪球（ウシ脂肪球）同士の会合の抑制効果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
以下、本発明について詳細に説明する。
＜乳化安定剤＞
上述のように、本発明の水中油型乳化物用の乳化安定剤は、タンパク質であるＭＦＧ−Ｅ８（ｍｉｌｋ  ｆａｔ  ｇｌｏｂｕｌｅ−ＥＧＦ  ｆａｃｔｏｒ  ８）を有効成分として含有することを特徴とする。
【００２３】
本発明のＭＦＧ−Ｅ８は、母乳中に混在する脂肪球の膜中のリン脂質（フォスファチジルセリン）に結合する膜結合タンパク質であるが、乳脂肪球膜の構成成分として、本来必要とされる膜結合タンパク質ではないと言われていたものである。ＭＦＧ−Ｅ８は、例えば、ヒト由来、マウス由来、ラット由来、ブタ由来、及びウシ由来などでその存在が公知である。
【００２４】
ＭＦＧ−Ｅ８は、乳又は脱脂乳（例えば、脱脂粉乳を還元したもの）を、所定の条件で遠心分離し、カゼインを除去した上清画分（いわゆる乳清画分）に含有することが公知である（非特許文献１）。そして、この乳清画分を、公知のタンパク質の精製技術、例えば、各種クロマトグラフィー、塩析、透析、及び膜分離などにより精製することで、精製されたＭＦＧ−Ｅ８、又は部分的（例えば、フォスファチジルセリンなどの任意の段階まで）に精製されたＭＦＧ−Ｅ８を得ることができる。
【００２５】
すなわち、本発明のＭＦＧ−Ｅ８は、例えば、精製されたＭＦＧ−Ｅ８、部分的に精製されたＭＦＧ−Ｅ８、及び、乳又は脱脂乳（例えば、脱脂粉乳を還元したもの）を遠心分離し、カゼインを除去した上清画分（いわゆる乳清画分）を使用することができる。また、本発明のＭＦＧ−Ｅ８は、その形状に制限はなく、例えば、液状、ペースト状、粉末状、及び凍結状などである。また、本発明のＭＦＧ−Ｅ８は、その由来に制限はなく、例えば、乳由来（ヒト乳由来、マウス乳由来、ラット乳由来、ブタ乳由来、及びウシ乳由来など）、脱脂乳由来（ヒト乳由来、マウス乳由来、ラット乳由来、ブタ乳由来、及びウシ乳由来など）である。
【００２６】
本発明のＭＦＧ−Ｅ８の一態様である、乳又は脱脂乳（例えば、脱脂粉乳を還元したもの）を、所定の条件で遠心分離し、カゼインを除去した上清画分（いわゆる乳清画分）は、乳タンパク質原料として重要であるカゼインの製造工程において、いわゆる産業廃棄物とされる画分である。本発明のＭＦＧ−Ｅ８として、これらの乳清画分を使用することは、資源の有効利用、環境保護又はコスト削減などの観点から、好ましい。特に、乳清画分としては、本発明のＭＦＧ−Ｅ８を多く含有していることが、より好ましい。
【００２７】
本発明のＭＦＧ−Ｅ８として使用する乳清画分は、乳又は脱脂乳（例えば、脱脂粉乳を還元したもの）を、遠心分離する条件は、ＭＦＧ−Ｅ８を得られる条件であれば、遠心力（回転数）、遠心分離に要する時間、遠心分離をする温度などに制限はない。
【００２８】
遠心力は、例えば、５０００〜１０００００×ｇ、６０００〜８００００×ｇ、７０００〜６００００×ｇ、８０００〜４００００×ｇ、９０００〜３００００×ｇ、１００００〜２００００×ｇ、１２０００〜１８０００×ｇ、及び１４０００〜１６０００×ｇである。遠心力が５０００×ｇ以上であれば、ＭＦＧ−Ｅ８の純度を高めることができ、好ましい。また、遠心力が１０００００×ｇ以下であれば、過剰な遠心力とはならず、効率よく遠心分離でき、好ましい。
【００２９】
遠心分離に要する時間は、例えば、２〜６０分間、４〜５０分間、６〜４０分間、８〜３０分間、１０〜２０分間、１２〜１８分間、及び１４〜１６分間などが挙げられる。遠心分離に要する時間が２分間以上であれば、ＭＦＧ−Ｅ８の純度を高めることができ、好ましい。また、遠心分離に要する時間が６０分以下であれば、過剰な遠心分離に要する時間とはならず、効率よく遠心分離でき、好ましい。
【００３０】
遠心分離をする温度は、例えば、０〜２０℃、０〜１５℃、０〜１２℃、０〜１０℃、０〜８℃、０〜７℃、０〜６℃、０〜５℃、１〜５℃、２〜５℃、及び３〜５℃である。遠心分離をする温度が０℃以上であれば、乳又は脱脂乳（例えば、脱脂粉乳を還元したもの）が凍結しない状態で遠心分離でき、好ましい。また、遠心分離をする温度が２０℃以下であれば、特に予め加熱殺菌していない乳又は脱脂乳（例えば、脱脂粉乳を還元したもの）を衛生的に遠心分離でき、好ましい。
【００３１】
本発明のＭＦＧ−Ｅ８として使用する乳清画分は、これらの乳清画分中のＭＦＧ−Ｅ８の存在を、抗原抗体反応を利用し、定性的・定量的に確認することができる。抗原抗体反応は、例えば、抗ＭＦＧ−Ｅ８モノクローナル抗体と蛍光標識二次抗体による反応を利用して、乳清画分中のＭＦＧ−Ｅ８と反応させて、その蛍光強度により、乳清画分中のＭＦＧ−Ｅ８の存在や濃度を確認することができる。また、本発明のＭＦＧ−Ｅ８として使用する乳清画分は、実際の水中油型乳化物での乳化の安定性に応じて、水中油型乳化物への添加量を適宜設定することができる。
【００３２】
本発明の乳化安定剤は、水中油型乳化物の乳化を安定化できれば、水中油型乳化物について特に制限はない。特に、哺乳類の乳由来の本発明の乳化安定剤は、化学合成品の乳化剤とは異なり、人工的なイメージが少なく、その食習慣から摂取による副作用の心配がないため、経口摂取できる水中油型乳化物への添加が好ましい。
【００３３】
ここでいう、経口摂取できる水中油型乳化物とは、例えば、水中油型乳化物である食品、水中油型乳化物である医薬品である。これらの水中油型乳化物の形状には、特に制限はなく、例えば、液状、ペースト状（糊状）、半固形状、及び固形状である。水中油型乳化物中に混在する脂肪球同士の会合は、流動性の高い系で起こりやすい。従って、本発明の乳化安定剤は、液状又は糊状などの流動性のある形状の水中油型乳化物に対し、乳化を安定化させる効果が期待できる。
【００３４】
本発明における水中油型乳化物である食品には、例えば、乳（牛乳、山羊乳、水牛乳、羊乳、及び、めん羊乳などの獣乳、豆乳、及びココナツミルクなどの植物乳、コーヒーホワイトナーなどの人工乳）、乳製品、乳及び／又は乳製品を含有する乳性食品、及びマヨネーズなどが挙げられる。中でも、乳及び／又は乳製品を含有する乳性食品が好ましい。
【００３５】
ここでいう、乳製品には、乳を加工したもの全般をいい、例えば濃縮乳、全脂粉乳、脱脂濃縮乳、脱脂粉乳、部分脱脂濃縮乳、部分脱脂粉乳、練乳、加糖練乳、クリーム、バター、発酵乳、チーズ、ホエイ、ホエイ粉、乳タンパク質濃縮物、及びホエイタンパク質濃縮物などがある。
【００３６】
また、乳及び／又は乳製品を含有する乳性食品とは、例えば、牛乳、加工乳、成分調整乳、低脂肪乳、乳飲料、コーヒー入り乳飲料、フルーツ入り乳飲料、ミネラル強化乳飲料、ビタミン強化乳飲料、機能性素材強化乳飲料、ヨーグルト、乳酸菌飲料、乳清飲料、酸性乳飲料、チーズ、練乳、加糖練乳、生クリーム、コンパウンドクリーム、植物性脂肪クリーム、及びコーヒーホワイトナーなどがある。
【００３７】
本発明における水中油型乳化物である医薬品は、公知の医薬品であれば特に制限されない。
【００３８】
なお、本発明の乳化安定剤を水中油型乳化物である食品に使用する場合は、アレルギー源の混入を防止する目的から、同じ食品由来のＭＦＧ−Ｅ８、又は同じ動物由来のＭＦＧ−Ｅ８を使用することが好ましい。
【００３９】
水中油型乳化物である食品が、例えば、牛乳及び／又は牛乳由来の乳製品からなる乳性食品の場合には、本発明の乳化安定剤は、牛乳由来（ウシ由来）のＭＦＧ−Ｅ８であることが好ましい。これにより、乳化安定剤と水中油型乳化物が全て牛乳由来となり、「乳飲料」規格ではなく、「加工乳」規格又は「成分調整牛乳」規格などの付加価値の高い商品にすることができる。
【００４０】
＜乳化安定化方法＞
上述のように、本発明の乳化安定化方法は、水中油型乳化物にタンパク質であるＭＦＧ−Ｅ８を添加する工程を含むことを特徴とする。ここで、水中油型乳化物へ添加する前の、本発明のＭＦＧ−Ｅ８は、例えば、精製されたＭＦＧ−Ｅ８、部分的に精製されたＭＦＧ−Ｅ８、及び、乳又は脱脂乳（例えば、脱脂粉乳を還元したもの）を遠心分離し、カゼインを除去した上清画分（いわゆる乳清画分）を使用することができる。
【００４１】
また、本発明のＭＦＧ−Ｅ８は、その形状に制限はなく、例えば、液状、ペースト状、粉末状、及び凍結状などである。また、本発明のＭＦＧ−Ｅ８は、その由来に制限はなく、例えば、乳由来（ヒト乳由来、マウス乳由来、ラット乳由来、ブタ乳由来、及びウシ乳由来など）、及び脱脂乳由来（ヒト乳由来、マウス乳由来、ラット乳由来、ブタ乳由来、及びウシ乳由来など）である。
【００４２】
本発明の乳化安定化方法において、水中油型乳化物へ添加する前の、本発明のＭＦＧ−Ｅ８の一態様である、乳又は脱脂乳（例えば、脱脂粉乳を還元したもの）を、所定の条件で遠心分離し、カゼインを除去した上清画分（いわゆる乳清画分）は、乳タンパク質原料として重要であるカゼインの製造工程において、いわゆる産業廃棄物とされる画分である。本発明のＭＦＧ−Ｅ８として、これらの乳清画分を使用することは、資源の有効利用、環境保護又はコスト削減などの観点から、好ましい。特に、乳清画分としては、本発明のＭＦＧ−Ｅ８を多く含有していることが、より好ましい。
【００４３】
本発明の乳化安定化方法において、水中油型乳化物へ添加する前の、本発明のＭＦＧ−Ｅ８として使用する乳清画分は、乳又は脱脂乳（例えば、脱脂粉乳を還元したもの）を、遠心分離して得られる。遠心分離の条件は、ＭＦＧ−Ｅ８を得られる条件であれば、遠心力（回転数）、遠心分離に要する時間、遠心分離をする温度などに制限はない。
【００４４】
遠心力は、例えば、５０００〜１０００００×ｇ、６０００〜８００００×ｇ、７０００〜６００００×ｇ、８０００〜４００００×ｇ、９０００〜３００００×ｇ、１００００〜２００００×ｇ、１２０００〜１８０００×ｇ、及び１４０００〜１６０００×ｇである。遠心力が５０００×ｇ以上であれば、ＭＦＧ−Ｅ８の純度を高めることができ、好ましい。また、遠心力が１０００００×ｇ以下であれば、過剰な遠心力とはならず、効率よく遠心分離でき、好ましい。
【００４５】
遠心分離に要する時間は、例えば、２〜６０分間、４〜５０分間、６〜４０分間、８〜３０分間、１０〜２０分間、１２〜１８分間、及び１４〜１６分間である。遠心分離に要する時間が２分間以上であれば、ＭＦＧ−Ｅ８の純度を高めることができ、好ましい。また、遠心分離に要する時間が６０分以下であれば、過剰な遠心分離に要する時間とはならず、効率よく遠心分離でき、好ましい。
【００４６】
遠心分離をする温度は、例えば、０〜２０℃、０〜１５℃、０〜１２℃、０〜１０℃、０〜８℃、０〜７℃、０〜６℃、０〜５℃、１〜５℃、２〜５℃、及び３〜５℃などが挙げられる。遠心分離をする温度が０℃以上であれば、乳又は脱脂乳（例えば、脱脂粉乳を還元したもの）が凍結しない状態で遠心分離でき、好ましい。また、遠心分離をする温度が２０℃以下であれば、特に予め加熱殺菌していない乳又は脱脂乳（例えば、脱脂粉乳を還元したもの）を衛生的に遠心分離でき、好ましい。
【００４７】
本発明の乳化安定化方法において、水中油型乳化物へ添加する前の、本発明のＭＦＧ−Ｅ８として使用する乳清画分は、これらの乳清画分中のＭＦＧ−Ｅ８の存在を、抗原抗体反応を利用し、定性的・定量的に確認することができる。抗原抗体反応は、例えば、抗ＭＦＧ−Ｅ８モノクローナル抗体と蛍光標識二次抗体による反応を利用して、乳清画分中のＭＦＧ−Ｅ８と反応させて、その蛍光強度により、乳清画分中のＭＦＧ−Ｅ８の存在や濃度を確認することができる。また、本発明のＭＦＧ−Ｅ８として使用する乳清画分は、実際の水中油型乳化物での乳化の安定性に応じて、水中油型乳化物への添加量を適宜設定することができる。
【００４８】
本発明の乳化安定化方法において、本発明のＭＦＧ−Ｅ８を有効成分として含有する乳化安定剤を、水中油型乳化物に添加する時期は、水中油型乳化物の製造工程において、予め他の原料とともに調合する方法、製造工程の各段階において別途添加する方法、製造工程を経た後に別途添加する方法など、特に制限はない。
【００４９】
本発明の乳化安定化方法において、本発明のＭＦＧ−Ｅ８を有効成分として含有する乳化安定剤を、水中油型乳化物に添加するにあたり、公知の水中油型乳化物の乳化の安定化方法を併用できる。ここでいう、公知の水中油型乳化物の乳化の安定化方法とは、例えば、水中油型乳化物に混在された脂肪球を均質機などで機械的にせん断することにより、その脂肪球径を小さくする（均質化する）方法、及び水中油型乳化物に乳化剤を添加し、水中油型乳化物の乳化を安定化させる方法などである。
【００５０】
すなわち、例えば、本発明の乳化安定化方法において、本発明のＭＦＧ−Ｅ８を有効成分として含有する乳化安定剤を、水中油型乳化物に添加した後に、水中油型乳化物に混在された脂肪球を均質機などで機械的にせん断することにより、その脂肪球径を小さくする（均質化する）こともできる。これにより、本発明のＭＦＧ−Ｅ８を有効成分として含有する乳化安定剤の水中油型乳化物の添加が、水中油型乳化物を均質化する前の予備乳化に代わる方法として利用することができる。
【００５１】
また、例えば、本発明の乳化安定化方法において、水中油型乳化物に混在された脂肪球を均質機などで機械的にせん断することにより、その脂肪球径を小さくした（均質化した）後に、本発明のＭＦＧ−Ｅ８を有効成分として含有する乳化安定剤を、水中油型乳化物に添加することもできる。これにより、本発明のＭＦＧ−Ｅ８を有効成分として含有する乳化安定剤の水中油型乳化物の添加が、水中油型乳化物の乳化の安定性を高め、本発明のＭＦＧ−Ｅ８を有効成分として含有する乳化安定剤の水中油型乳化物を添加しない場合と比較して、水中油型乳化物をより長期間保存できる。
【００５２】
本発明の乳化安定化方法において、水中油型乳化物の乳化を安定化できれば、水中油型乳化物について特に制限はない。特に、哺乳類の乳由来の本発明の乳化安定剤は、化学合成品の乳化剤とは異なり、人工的なイメージが少なく、その食習慣から摂取による副作用の心配がないため、経口摂取できる水中油型乳化物への添加が好ましい。
【００５３】
ここでいう、経口摂取できる水中油型乳化物とは、例えば、水中油型乳化物である食品、水中油型乳化物である医薬品である。これらの水中油型乳化物の形状には、特に制限はなく、例えば、液状、ペースト状（糊状）、半固形状、及び固形状である。水中油型乳化物中に混在する脂肪球同士の会合は、流動性の高い系で起こりやすい。従って、本発明の乳化安定剤は、液状又は糊状などの流動性のある形状の水中油型乳化物に対し、乳化が安定化する効果が期待できる。
【００５４】
本発明の乳化安定化方法において、水中油型乳化物である食品には、例えば、乳（牛乳、山羊乳、水牛乳、羊乳、及び、めん羊乳などの獣乳、豆乳、ココナツミルクなどの植物乳、コーヒーホワイトナーなどの人工乳）、乳製品、乳及び／又は乳製品を含有する乳性食品、及びマヨネーズなどがあり、中でも、乳及び／又は乳製品を含有する乳性食品が好ましい。
【００５５】
ここでいう、乳製品には、乳を加工したもの全般をいい、例えば濃縮乳、全脂粉乳、脱脂濃縮乳、脱脂粉乳、部分脱脂濃縮乳、部分脱脂粉乳、練乳、加糖練乳、クリーム、バター、発酵乳、チーズ、ホエイ、ホエイ粉、乳タンパク質濃縮物、及びホエイタンパク質濃縮物などがある。また、乳及び／又は乳製品を含有する乳性食品とは、例えば、牛乳、加工乳、成分調整乳、低脂肪乳、乳飲料、コーヒー入り乳飲料、フルーツ入り乳飲料、ミネラル強化乳飲料、ビタミン強化乳飲料、機能性素材強化乳飲料、ヨーグルト、乳酸菌飲料、乳清飲料、酸性乳飲料、チーズ、練乳、加糖練乳、生クリーム、コンパウンドクリーム、植物性脂肪クリーム、及びコーヒーホワイトナーなどがある。
【００５６】
本発明の乳化安定化方法において、水中油型乳化物である医薬品は、公知の医薬品であれば特に制限されない。
【００５７】
本発明の乳化安定化方法において、本発明のＭＦＧ−Ｅ８を有効成分として含有する乳化安定剤を水中油型乳化物である食品に使用する場合は、アレルギー源の混入を防止する目的から、同じ食品由来のＭＦＧ−Ｅ８、又は同じ動物由来のＭＦＧ−Ｅ８を使用することが好ましい。
【００５８】
水中油型乳化物である食品が、例えば、牛乳及び／又は牛乳由来の乳製品からなる乳性食品の場合には、本発明のＭＦＧ−Ｅ８を有効成分として含有する乳化安定剤は、牛乳由来（ウシ由来）のＭＦＧ−Ｅ８であることが好ましい。これにより、乳化安定剤と水中油型乳化物が全て牛乳由来となり、「乳飲料」規格ではなく、「加工乳」規格又は「成分調整牛乳」規格などの付加価値の高い商品にすることができる。
【００５９】
本発明の乳化安定化方法において、本発明のＭＦＧ−Ｅ８を有効成分として含有する乳化安定剤を、水中油型乳化物に添加するにあたり、その添加量は、水中油型乳化物１００質量部に対し、精製物換算で、例えば、０．００１〜１質量部、０．００５〜１質量部、０．０１〜０．１質量部、０．０１〜０．０５質量部、０．０１〜０．０３質量部、及び０．０２〜０．０３質量部である。
【００６０】
本発明の乳化安定化方法において、本発明のＭＦＧ−Ｅ８を有効成分として含有する乳化安定剤を、水中油型乳化物に添加するにあたり、その添加量が、水中油型乳化物１００質量部に対し、精製物換算で、０．００１質量部以上とすることにより、本発明の乳化安定化の効果が得られ、好ましい。また、本発明の乳化安定化方法において、本発明のＭＦＧ−Ｅ８を有効成分として含有する乳化安定剤を、水中油型乳化物に添加するにあたり、その添加量が、水中油型乳化物１００質量部に対し、精製物換算で、１質量部以下とすることにより、本発明の水中油系乳化物の性状（風味及び／又は物性）への影響を防ぐことができ、好ましい。
【実施例】
【００６１】
以下、実施例による試験結果を示し、本発明をさらに詳細に説明する。なお、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。【００６２】
〔試験１：乳試料の調製及び生化学分析〕
実験動物として、野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＷＴ）（日本ＳＬＣ社より購入）、及び、ＭＦＧ−Ｅ８欠損Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＫＯ）（京都大学大学院医学研究科  長田重一教授より供与）を使用した。これらのマウスに対し、研究用の餌（日本ＳＬＣ社製）を与え、母マウスが出産した際に、マウスの同腹仔数が６〜８となるように調整した。【００６３】
これらのマウスより、強制離乳の３時間後（Ｗ３ｈ）及び４８時間後（Ｗ４８ｈ）に、母乳を搾乳し、これを乳試料とした。これらの乳試料を、キャップ付きの試験管に分注し、５７μｇ／ｍｌのペニシリンＧ及び１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンの存在下となるよう、ペニシリンＧ及びストレプトマイシンを添加した後に、３７℃で２４時間又は４８時間、恒温となるよう保持した。【００６４】
これらの乳試料の組成は、Ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ  Ｅ−ｔｅｓｔ  ｋｉｔ（和光純薬工業社）による脂肪含量、及びＢＣＡ  ａｓｓａｙ  ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｉｅｎｔｉｆｉｃ社）によるタンパク質含量を測定することで確認した。そして、これらの乳試料を、１５０００×ｇで１５分間、４℃で遠心分離をし、その上清画分を乳清画分とした。【００６５】
〔試験２：脂肪球の顕微鏡解析〕
乳試料における脂肪球の形態観察は、乳試料をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で１０倍希釈したものを、３００×ｇで１０分間、１５℃で遠心分離をし、その上層の脂肪球（ＭＦＧ）画分を洗浄し、２％のパラホルムアルデヒドを用いて固定した後に、ＰＢＳに溶解した１％のＢＳＡでブロッキングしたものを観察試料とした。そして、これらの観察試料を位相差顕微鏡（ＩＸ７１，オリンパス社）で観察した。【００６６】
脂肪球におけるＭＦＧ−Ｅ８の存在は、脂肪球（ＭＦＧ）画分と、抗マウスＭＦＧ−Ｅ８抗体又は抗ウシＭＦＧ−Ｅ８モノクローナル抗体、並びにＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８標識二次抗体（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社）とで抗原抗体反応させ、脂肪球を免疫蛍光染色したものを、位相差蛍光顕微鏡（ＩＸ７１，オリンパス社）で観察した。【００６７】
〔試験３：脂肪球径の分布〕
位相差蛍光顕微鏡（ＩＸ７１，オリンパス社）で観察した顕微鏡視野（２０４．８×２７２μｍ２）における脂肪球を観察し、脂肪球を脂肪球径ごとに以下の４グループ（小：１．０〜３．２μｍ、中：３．３〜６．５μｍ、大：６．６〜９．９μｍ、特大：１０μｍ以上）に分類し、各グループにおける脂肪球の個数を数えた。【００６８】
〔試験４：ＭＦＧ−Ｅ８、及びＭＦＧ−Ｅ８を含有する乳清画分の添加による脂肪球の確認〕
ＭＦＧ−Ｅ８欠損Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＫＯ）の母乳（強制離乳の３時間後に母乳を搾乳した乳試料）を、キャップ付きの試験管に分注し、遊離のＭＦＧ−Ｅ８を含有する野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＷＴ）の母乳の乳清画分（５０質量％）、又は牛乳から精製したＭＦＧ−Ｅ８（２５０μｇ／ｍｌ）を添加し、３７℃で２４時間又は４８時間、恒温となるよう保持した。その後、上述の試験２及び試験３に基づき、脂肪球の形態、及び脂肪球形の分布を確認した。【００６９】
〔結果１：ＭＦＧ−Ｅ８欠損マウスの母乳と野生型マウスの母乳との間の脂肪球径の分布の相違〕
強制離乳の３時間後（Ｗ３ｈ）及び４８時間後（Ｗ４８ｈ）に母乳を搾乳した乳試料における脂肪球を、位相差顕微鏡で観察した。その結果を図１Ａに示す。【００７０】
図１Ａに示すように、ＭＦＧ−Ｅ８欠損Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＫＯ）では、強制離乳の３時間後（Ｗ３ｈ）に母乳を搾取した乳試料では、大（脂肪球径６．６〜９．９μｍ）又は特大（脂肪球径１０μｍ以上）と分類された脂肪球の個数の割合が少なく、強制離乳の４８時間後（Ｗ４８ｈ）に母乳を搾取した乳試料では、大又は特大と分類された脂肪球の個数の割合が増加した。一方、野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＷＴ）では、強制離乳の３時間後（Ｗ３ｈ）に母乳を搾取した乳試料、強制離乳の４８時間後（Ｗ４８ｈ）に母乳を搾取した乳試料ともに、大又は特大と分類された脂肪球の個数の割合が少なかった。【００７１】
脂肪球径の分布の結果を図１Ｂに示す。図１Ｂに示すように、ＭＦＧ−Ｅ８欠損Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＫＯ）の母乳から搾取した乳試料では、大（脂肪球径６．６〜９．９μｍ）又は特大（脂肪球径１０μｍ以上）と分類された脂肪球の個数の割合は、強制離乳の３時間後（Ｗ３ｈ）に母乳を搾取した乳試料、強制離乳の４８時間後（Ｗ４８ｈ）に母乳を搾取した乳試料ともに、野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＷＴ）の母乳から同様に搾取した乳試料と比較して有意に高かった（Ｗ３ｈ：ｐ＜０．０５；Ｗ４８ｈ：ｐ＜０．０１）。【００７２】
〔結果２：ＭＦＧ−Ｅ８欠損マウスの母乳における脂肪球径の消長〕
ＭＦＧ−Ｅ８欠損Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＫＯ）の母乳から搾取した乳試料で、強制離乳の４８時間後（Ｗ４８ｈ）に母乳を搾取した乳試料の脂肪球の形態の再現を目的に、ＭＦＧ−Ｅ８欠損Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＫＯ）の母乳から搾取した乳試料をキャップ付きの試験管に分注し、５７μｇ／ｍｌのペニシリンＧ及び１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンの存在下となるよう、ペニシリンＧ及びストレプトマイシンを添加した後に、３７℃で２４時間又は４８時間、恒温となるよう保持した。対照として、野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＷＴ）の母乳から搾取した乳試料も同様の条件で保持した。これらの保持した乳試料における脂肪球を、位相差顕微鏡で観察した。その結果を図２Ａに示す。図２Ａに示すように、２４時間（２４ｈ）又は４８時間（４８ｈ）保持に伴い、ＭＦＧ−Ｅ８欠損Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＫＯ）の乳試料中では、特大と分類された脂肪球の個数の割合が増加した。一方、２４時間（２４ｈ）又は４８時間（４８ｈ）保持に伴い、野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＷＴ）の乳試料中では、特大と分類された脂肪球の個数の割合が増加しなかった。また、ＭＦＧ−Ｅ８欠損Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＫＯ）の母乳から搾取した乳試料中では、脂肪球同士の会合が位相差顕微鏡の形態観察で確認できた。なお、図２Ａの０ｈは、それぞれのマウスの母乳から搾取した（搾乳した）直後の状態を示す。【００７３】
ＭＦＧ−Ｅ８欠損Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＫＯ）の母乳から搾取した乳試料中に存在する、１５μｍ以上の脂肪球径の異常特大脂肪球とし、任意の１０視野中において、その個数を確認し、５頭のマウスの乳試料の平均値±標準偏差（ＳＤ）で示した。対照として、野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＷＴ）の母乳から搾取した乳試料についても、同様の条件で、１５μｍ以上の脂肪球径の異常特大脂肪球の個数を確認し、５頭のマウスの乳試料の平均値±標準偏差（ＳＤ）で示した。これらの結果を図２Ｂに示す。【００７４】
図２Ｂに示すように、１５μｍ以上の脂肪球径の異常特大脂肪球の数は、ＭＦＧ−Ｅ８欠損Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＫＯ）の母乳から搾取した乳試料では、３７℃で４８時間保持することでその個数は顕著に増加した。一方、野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＷＴ）の母乳から搾取した乳試料では、３７℃で４８時間保持しても、１５μｍ以上の脂肪球径の異常特大脂肪球の数は変化しなかった。【００７５】
〔結果３：ＭＦＧ−Ｅ８の添加による、ＭＦＧ−Ｅ８欠損マウスの母乳の脂肪球径の消長への影響〕
ＭＦＧ−Ｅ８欠損Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＫＯ）の母乳（強制離乳の３時間後に母乳を搾乳した乳試料）を、キャップ付きの試験管に分注し、遊離のＭＦＧ−Ｅ８を含有する野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＷＴ）の母乳の乳清画分（５０質量％）、又は牛乳から精製したＭＦＧ−Ｅ８（２５０μｇ／ｍｌ）を添加し、３７℃で２４時間又は４８時間、恒温となるよう保持した。対照として、別のＭＦＧ−Ｅ８欠損Ｃ５７ＢＬ／６マウスの母乳の乳清画分（５０質量％）を添加し、３７℃で２４時間又は４８時間、恒温となるよう保持した。なお、全ての乳試料には、５７μｇ／ｍｌのペニシリンＧ及び１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンの存在下となるよう、ペニシリンＧ及びストレプトマイシンを添加した。これらの乳試料における脂肪球を、位相差顕微鏡で観察した。その結果を図３Ａに示す。【００７６】
図３Ａに示すように、遊離のＭＦＧ−Ｅ８を含有する野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＷＴ）の母乳の乳清画分（５０質量％）、又は牛乳から精製したＭＦＧ−Ｅ８（２５０μｇ／ｍｌ）を添加した乳試料では、３７℃で４８時間の保持中に、特大と分類された脂肪球の個数の割合が増加しなかった。一方、別のＭＦＧ−Ｅ８欠損Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＫＯ）の母乳の乳清画分（５０質量％）を添加した乳試料では、特大と分類された脂肪球の個数の割合が増加した。【００７７】
ＭＦＧ−Ｅ８欠損Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＫＯ）の母乳から搾取した乳試料中に存在する、１５μｍ以上の脂肪球径の異常特大脂肪球とし、任意の１０視野中において、その個数を確認し、５頭のマウスの乳試料の平均値±標準偏差（ＳＤ）で示した。野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＷＴ）の母乳の乳清画分を添加したＭＦＧ−Ｅ８欠損Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＫＯ）の母乳（白三角）；牛乳から精製したＭＦＧ−Ｅ８を添加したＭＦＧ−Ｅ８欠損Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＫＯ）の母乳（白丸）；ＭＦＧ−Ｅ８欠損Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＫＯ）の母乳の乳清画分を添加したＭＦＧ−Ｅ８欠損Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＫＯ）マウスの母乳（黒三角）；リン酸緩衝生理食塩水を添加したＭＦＧ−Ｅ８欠損Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＫＯ）の母乳（黒丸）について、平均値±ＳＤで示した結果を図３Ｂに示す。【００７８】
図３Ｂに示すように、遊離のＭＦＧ−Ｅ８を含有する野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＷＴ）の母乳の乳清画分（５０質量％）、及び牛乳から精製したＭＦＧ−Ｅ８（２５０μｇ／ｍｌ）を添加した乳試料では、３７℃で４８時間の保持によっても、１５μｍ以上の脂肪球径の異常特大脂肪球の数は増加しなかった。一方、別のＭＦＧ−Ｅ８欠損Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＫＯ）の母乳の乳清画分（５０質量％）、及びリン酸緩衝生理食塩水を添加した乳試料では、３７℃で４８時間の保持により、１５μｍ以上の脂肪球径の異常特大脂肪球の数は増加した。【００７９】
また、ＭＦＧ−Ｅ８欠損Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＫＯ）の母乳から搾取した乳試料に添加したＭＦＧ−Ｅ８が、ＭＦＧ−Ｅ８欠損Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＫＯ）の母乳に結合する様子を、試験２の抗原抗体反応による免疫染色で確認した。具体的には、３７℃で４８時間保持した上記の乳試料中の脂肪球を、抗ＭＦＧ−Ｅ８抗体を用いて免疫染色した。代表的な脂肪球の画像（位相差画像及び蛍光画像）、及びＭＦＧ−Ｅ８を添加しないで３７℃で４８時間保持した乳試料中（対照）の脂肪球の画像（位相差画像及び蛍光画像）を図３Ｃに示す。【００８０】
図３Ｃに示すように、野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＷＴ）の母乳の乳清画分由来のＭＦＧ−Ｅ８を添加した場合だけでなく、牛乳から精製したＭＦＧ−Ｅ８を添加した場合においても、ＭＦＧ−Ｅ８は、ＭＦＧ−Ｅ８欠損Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＫＯ）の母乳から搾取した乳試料の脂肪球に結合していることが確認された。【００８１】
〔試験５：ＭＦＧ−Ｅ８、及びＭＦＧ−Ｅ８を含有する乳清画分の添加による、搾乳直後の牛乳の脂肪球の確認〕
搾乳直後の牛乳で、ＭＦＧ−Ｅ８が脂肪球同士の会合を抑制しているかを解明するために、搾乳直後の牛乳を、キャップ付きの試験管に分注し、遊離のＭＦＧ−Ｅ８を含有する野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＷＴ）の母乳の乳清画分（５０質量％）、又は牛乳から精製したＭＦＧ−Ｅ８（２５０μｇ／ｍｌ（１０ｍＭトリス塩酸緩衝液、１５０ｍＭ塩化ナトリウム））を添加し、３７℃で１日間、２日間、３日間、４日間、又は７日間恒温で保持した。対照として、別のＭＦＧ−Ｅ８欠損Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＫＯ）の母乳の乳清画分（５０質量％）を添加し、３７℃で１日間、２日間、３日間、４日間、又は７日間恒温で保持した。また、それぞれにアジ化ナトリウムを終濃度０．１％となるように添加した。【００８２】
搾乳直後の牛乳の脂肪球画分の調製方法は、牛乳１ｍｌを遠心分離し（３００×ｇ、１０分間、２０℃）、乳清とカゼイン（３００×ｇ  ｐｐｔ）を注射針により除去した後、５００μｌのＴＢＳ（１０ｍＭトリス塩酸緩衝液、１５０ｍＭ塩化ナトリウム）を添加し、再度遠心分離し（３００×ｇ、１０分間、２０℃）、脂肪球を洗浄した。ＴＢＳによる洗浄を３回繰り返し、これを脂肪球画分とした。【００８３】
〔結果４：搾乳直後の牛乳における脂肪球径の消長〕
搾乳直後の牛乳中の脂肪球を位相差顕微鏡で観察した結果を図４に示す。図４に示すように、搾乳直後の牛乳では、３７℃での保持に伴い、特大と分類された脂肪球の個数の割合が増加した。【００８４】
〔結果５：ＭＦＧ−Ｅ８、及びＭＦＧ−Ｅ８を含有する乳清画分の添加による、搾乳直後の牛乳の脂肪球の消長への影響〕
ＭＦＧ−Ｅ８、及びＭＦＧ−Ｅ８を含有する乳清画分の添加による、搾乳直後の牛乳中の脂肪球を位相差顕微鏡で観察した結果を図５、及び図６に示す。【００８５】
図５に示すように、牛乳から精製したＭＦＧ−Ｅ８（２５０μｇ／ｍｌ）を添加した搾乳直後の牛乳では、３７℃で７日間の保持中に、特大と分類された脂肪球の個数の割合が増加しなかった。一方、牛乳から精製したＭＦＧ−Ｅ８（２５０μｇ／ｍｌ）を添加しない搾乳直後の牛乳では、３７℃で７日間の保持中に、特大と分類された脂肪球の個数の割合が増加した。【００８６】
また、図６に示すように、遊離のＭＦＧ−Ｅ８を含有する野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＷＴ）の母乳の乳清画分（５０質量％）を添加した搾乳直後の牛乳では、３７℃で７日間の保持中に、特大と分類された脂肪球の個数の割合が増加しなかった。一方、遊離のＭＦＧ−Ｅ８を含有しないＭＦＧ−Ｅ８欠損Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＫＯ）の母乳の乳清画分（５０質量％）を添加した搾乳直後の牛乳では、３７℃で７日間の保持中に、特大と分類された脂肪球の個数の割合が増加した。
【産業上の利用可能性】
【００８７】
本発明の水中油型乳化物の乳化安定剤は、比較的少量の含有（添加）であっても、水中油型乳化物に混在する脂肪球が水中で安定的に分散され、水中油型乳化物の乳化安定化に寄与することができる。特に、本発明の乳由来の乳化安定剤は、乳及び／又は乳製品を含有する乳性食品において、従来と比較して乳化安定剤の使用を少量に抑えることができる。【００８８】
本発明を特定の態様を用いて詳細に説明したが、本発明の意図と範囲を離れることなく様々な変更及び変形が可能であることは、当業者にとって明らかである。なお本出願は、２０１４年１２月２５日付で出願された日本特許出願（特願２０１４−２６２７８６）に基づいており、その全体が引用により援用される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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