(57)【要約】  有効成分の濃度が高く、かつ着色の少ないプラセンタ抽出物であって、見た目および風味が重要な要素となる化粧品や食品への使用に適したプラセンタ抽出物を提供する。波長３９０ｎｍにおける吸光度が０．１０以下であり、窒素含有量が０．１０質量％以上であるプラセンタ抽出物とすることにより、見た目および風味が重要な要素となる化粧品や食品への使用に適したプラセンタ抽出物に関する。
2015186806.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
波長３９０ｎｍにおける吸光度が０．１０以下であり、
窒素含有量が０．１０質量％以上であるプラセンタ抽出物。
【請求項２】
前記吸光度が０．０１〜０．１０である請求項１に記載のプラセンタ抽出物。
【請求項３】
前記窒素含有量が０．１０〜１．０質量％である請求項１または２に記載のプラセンタ抽出物。
【請求項４】
前記プラセンタ抽出物の全固形分中における全ペプチドの含有量が７０〜９９．５質量％である請求項１〜３のいずれか１項に記載のプラセンタ抽出物。
【請求項５】
前記プラセンタ抽出物の全固形分中における分子量が３０００以下の低分子化ペプチドの含有量が４０〜９９．５質量％である請求項１〜４のいずれか１項に記載のプラセンタ抽出物。
【請求項６】
前記プラセンタ抽出物の全固形分中における遊離アミノ酸の含有量が０．０１〜３０質量％である請求項１〜５のいずれか１項に記載のプラセンタ抽出物。
【請求項７】
前記プラセンタ抽出物の全固形分中における分子量３０００以下の成分の含有量が１００％である請求項１〜６のいずれか１項に記載のプラセンタ抽出物。
【請求項８】
前記プラセンタ抽出物がプラセンタ原料の亜臨界処理を経て抽出されるプラセンタ抽出物である請求項１〜７のいずれか１項に記載のプラセンタ抽出物。
【請求項９】
前記プラセンタ抽出物が活性炭処理を経て抽出されるプラセンタ抽出物である請求項１〜８のいずれか１項に記載のプラセンタ抽出物。
【請求項１０】
亜臨界処理の温度が１６０〜２００℃であり、
圧力が飽和蒸気圧以上である請求項８に記載のプラセンタ抽出物。
【請求項１１】
亜臨界処理の時間が５〜３０分である請求項８または１０に記載のプラセンタ抽出物。
【請求項１２】
波長３９０ｎｍにおける吸光度が０．１０以下であり、
窒素含有量が０．１０質量％以上であるプラセンタ抽出物を得るプラセンタ抽出物の製造方法であって、
プラセンタを亜臨界処理して亜臨界処理物を得る抽出工程、
前記亜臨界処理物を抽出液と原料残渣に分離する固液分離工程を含むことを特徴とするプラセンタ抽出物の製造方法。
【請求項１３】
前記亜臨界処理による抽出工程の後、脱色工程を含む請求項１２に記載のプラセンタ抽出物の製造方法。
【請求項１４】
前記亜臨界処理における亜臨界処理の温度が１６０〜２００℃であり、圧力が飽和蒸気圧以上である請求項１２または１３に記載のプラセンタ抽出物の製造方法。
【請求項１５】
前記亜臨界処理における亜臨界処理の時間が５〜３０分である請求項１２〜１４のいずれか１項に記載のプラセンタ抽出物の製造方法。
【請求項１６】
前記脱色工程における処理温度が０〜８０℃である請求項１３に記載のプラセンタ抽出物の製造方法。
【請求項１７】
前記脱色工程における処理時間が３〜１２０分である請求項１３または１６に記載のプラセンタ抽出物の製造方法。
【請求項１８】
前記脱色工程における処理回数が２〜１０回である請求項１３、１６または１７に記載のプラセンタ抽出物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はプラセンタを原料とするプラセンタ抽出物およびプラセンタ抽出物の製造方法に関する。特に、特定の吸光度および窒素含有量を示すプラセンタ抽出物およびプラセンタ抽出物の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
プラセンタとは哺乳類の胎盤のことであり、近年、抗酸化性やコラーゲン産生促進能、コラゲナーゼ阻害活性、血圧上昇抑制作用に代表される優れた機能性から、健康食品、化粧品素材、医薬品などとして使用されている。これらの使用において、プラセンタの優れた機能性を発揮するためには、プラセンタ中の蛋白質を、吸収性や機能性に優れたペプチドまで低分子化、可溶化する必要がある。【０００３】
従来、プラセンタを低分子化および可溶化したプラセンタ抽出物を得る方法として酵素処理による方法が知られている。例えば、特許文献１には、人胎盤組織から水溶性プロテインなどの高分子蛋白質を抽出する際に除去される残渣物を蛋白質分解酵素で加水分解させた上清に酵母抽出物を加えることを含むメラニン生成抑制剤の製造方法が開示されている。また、特許文献２には、ブタおよび／またはウマの胎盤を酵素処理により加水分解して得られる水溶性成分、およびフェノール誘導体を含有する化粧料組成物が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開昭５３−１４２５１５号公報
【特許文献２】特開２００２−２１２０４６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、従来の酵素処理による抽出方法では、酵素の添加は当然のことであるがその他の補助剤も添加することが必要となる。具体的には、酵素に加え、ｐＨ調整剤や酵素安定化剤などの酵素反応の補助剤がプラセンタ原料に添加される。これらの添加剤の含有により有効成分の濃度が希釈されるという問題や、非プラセンタ由来の成分が混入するという問題がある。【０００６】
さらに、プラセンタ抽出物を化粧品や食品など、特に液体製品に配合するには、低分子化ペプチドなどの有効成分濃度が高いものが要求され、同時に色や臭いが少ないことも要求される。そのため、酵素処理したプラセンタ抽出物にイオン交換樹脂や活性炭などによる脱色工程を施すことが一般的である。しかしながら、酵素処理したプラセンタ抽出物に脱色工程を行うと、その色や臭いと併せて、有効成分も著しく減少してしまうという問題がある。【０００７】
有効成分の濃度を高くするための手段として、酵素処理による抽出工程および脱色工程を経て得られた抽出物を濃縮する方法が考えられるが、有効成分濃度と併せて色や臭いも濃くなるため、見た目および風味が重要な要素となる化粧品や食品への使用には適さない。また、有効成分の減少を阻止するための手段として、脱色工程を簡易な方法とすることが考えられるが、この場合は、脱色が不完全となり、黄色〜茶色に着色されたプラセンタ抽出物となるため、見た目および風味が重要な要素となる化粧品や食品への使用には適さない。【０００８】
本発明はこれらの問題に鑑みてなされたものであり、有効成分の濃度が高く、かつ着色の少ないプラセンタ抽出物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、波長３９０ｎｍにおける吸光度が０．１０以下であり、窒素含有量が０．１０質量％以上であるプラセンタ抽出物に関する。【００１０】
吸光度が０．０１〜０．１０であるプラセンタ抽出物であることが好ましい。【００１１】
窒素含有量が０．１０〜１．０質量％であるプラセンタ抽出物であることが好ましい。【００１２】
プラセンタ抽出物の全固形分中における全ペプチドの含有量が７０〜９９．５質量％であるプラセンタ抽出物であることが好ましい。【００１３】
プラセンタ抽出物の全固形分中における分子量が３０００以下の低分子化ペプチドの含有量が４０〜９９．５質量％であるプラセンタ抽出物であることが好ましい。【００１４】
プラセンタ抽出物の全固形分中における遊離アミノ酸の含有量が０．０１〜３０質量％であるプラセンタ抽出物であることが好ましい。【００１５】
プラセンタ抽出物の全固形分中における分子量３０００以下の成分の含有量が１００％であるプラセンタ抽出物であることが好ましい。【００１６】
プラセンタ原料の亜臨界処理を経て抽出されるプラセンタ抽出物であることが好ましい。【００１７】
さらに、活性炭処理を経て抽出されるプラセンタ抽出物であることが好ましい。【００１８】
亜臨界処理の温度が１６０〜２００℃であり、圧力が飽和蒸気圧以上であることが好ましい。【００１９】
亜臨界処理の時間が５〜３０分であることが好ましい。【００２０】
また、本発明は波長３９０ｎｍにおける吸光度が０．１０以下であり、
窒素含有量が０．１０質量％以上であるプラセンタ抽出物を得るプラセンタ抽出物の製造方法であって、
プラセンタを亜臨界処理して亜臨界処理物を得る抽出工程、
前記亜臨界処理物を抽出液と原料残渣に分離する固液分離工程を含むことを特徴とするプラセンタ抽出物の製造方法に関する。【００２１】
亜臨界処理による抽出工程の後、脱色工程を含むプラセンタ抽出物の製造方法であることが好ましい。【００２２】
亜臨界処理における亜臨界処理の温度が１６０〜２００℃であり、圧力が飽和蒸気圧以上であるプラセンタ抽出物の製造方法が好ましい。【００２３】
亜臨界処理における亜臨界処理の時間が５〜３０分であるプラセンタ抽出物の製造方法が好ましい。【００２４】
脱色工程における処理温度が０〜８０℃であるプラセンタ抽出物の製造方法が好ましい。【００２５】
脱色工程における処理時間が３〜１２０分であるプラセンタ抽出物の製造方法が好ましい。【００２６】
脱色工程における処理回数が２〜１０回であるプラセンタ抽出物の製造方法が好ましい。
【発明の効果】
【００２７】
本発明のプラセンタ抽出物においては、波長３９０ｎｍにおける吸光度が０．１０以下であり、窒素含有量が０．１０質量％以上であるプラセンタ抽出物によれば、有効成分の濃度が高く、かつ着色の少ないプラセンタ抽出物であって、見た目および風味が重要な要素となる化粧品や食品への使用に適したプラセンタ抽出物を提供することができる。また、本発明のプラセンタ抽出物の製造方法では、波長３９０ｎｍにおける吸光度が０．１０以下であり、窒素含有量が０．１０質量％以上であり、有効成分の濃度が高く、かつ着色の少ないプラセンタ抽出物であって、見た目および風味が重要な要素となる化粧品や食品への使用に適したプラセンタ抽出物を得る製造方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】プラセンタ抽出物の分子量分布測定における溶離時間−分子量（常用対数）での検量線の一例を示すグラフである。
【図２】プラセンタ抽出物を高速液体クロマトグラフィーで測定した結果の一例を示すグラフである。
【図３】実施例および比較例の抽出物の吸光度（３９０ｎｍ）および窒素含有量を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
本発明のプラセンタ抽出物は、プラセンタを原料とする抽出物であり、波長３９０ｎｍにおける吸光度が０．１０以下であり、窒素含有量が０．１質量％以上であることを特徴とする。波長３９０ｎｍにおける吸光度および窒素含有量がこの範囲にあるプラセンタ抽出物とすることにより、有効成分の濃度が高く、かつ着色の少ないプラセンタ抽出物であって、見た目および風味が重要な要素となる化粧品や食品への使用に適したプラセンタ抽出物である。
【００３０】
本発明のプラセンタ抽出物における波長３９０ｎｍにおける吸光度は抽出物の黄色〜茶色への着色の指標である。この吸光度は、市販の可視紫外分光光度計（ＧＥヘルスケア・ジャパン株式会社製のＧｅｎｅＱｕａｎｔ  １３００等）により測定することができる。
【００３１】
前記吸光度の測定は、シングルビーム方式で行うものであり、レファレンス溶液（水）を入れたセルを用意し、レファレンス溶液のセルを可視紫外分光光度計にセットし、波長３９０ｎｍにて測定を行い、測定結果が０．００となることを確認する。その後、試料溶液をレファレンス溶液で用いたセルと同一のセルに入れたセルを用意し、可視紫外分光光度計にセットし、波長３９０ｎｍにて測定を行い、測定結果が試料溶液の吸光度となる。
【００３２】
本発明のプラセンタ抽出物では、波長３９０ｎｍにおける吸光度は、０．１０以下であり、０．０８以下が好ましく、０．０５以下がより好ましい。当該吸光度が０．１０を超える場合は、プラセンタ抽出物が黄色を帯びたり、臭いを発生したりする傾向がある。また、当該吸光度の数値が０に近いほど着色がなく透明に近いプラセンタ抽出物であることを示すが、亜臨界処理を経たプラセンタ抽出物を、脱色工程を行ったとしても、０．０１より小さくならないことが確認されていることから、本発明のプラセンタ抽出物の波長３９０ｎｍにおける吸光度の下限は、０．０１である。本発明のプラセンタ抽出物の波長３９０ｎｍにおける吸光度は、０．０２８〜０．０８４であることがさらに好ましく、実用的な有効成分の濃度であり、かつ着色の少ないプラセンタ抽出物となり、化粧品などへの適用がしやすい。なお、吸光度を上記の数値範囲内にするには、プラセンタを亜臨界処理をした後、脱色処理を行うことで調整することができる。
【００３３】
本発明のプラセンタ抽出物の窒素含有量は抽出物中に含まれる遊離アミノ酸およびペプチドの窒素量であり、プラセンタ抽出物中の有効成分含有量の指標である。この窒素含有量は、ケルダール法（被検液に硫酸を加え、液中の有機体窒素を硫酸アンモニウムに変換し、液体をアルカリ性にして加熱し、発生するアンモニアを滴定によって定量する方法）によって測定することができる。具体的にはＪＩＳ  Ｋ０１０２  ４４に記載の方法に準拠して行うことができる。
【００３４】
ケルダール法による窒素含有量の測定は、以下の手順に行う。
１．試料溶液の適量（３−１０ｍＬ）をビーカー５００ｍＬにとり、硫酸（１＋３５）を加えて弱酸性とし、加熱して３０ｍＬになるまで濃縮させて被検液を用意する。
２．被検液を放冷後、少量の水を加えてケルダールフラスコ２００ｍＬに洗い移す。
３．硫酸１０ｍＬ、硫酸カリウム５ｇ及び硫酸銅（ＩＩ）五水和物２ｇを加え、加熱し、硫酸の白煙を発生させ、引き続き、約３０分間加熱し有機物を分解させる。
４．放冷後、少量の水を加えて、加熱して溶かし、水で蒸留フラスコに洗い移して約３００ｍＬとする。
５．蒸留フラスコを連結し、受器にはメスシリンダー（有栓形）２００ｍＬを用い、硫酸（２５ｍｍｏｌ／Ｌ）５０ｍＬを入れる。蒸留フラスコ上部から注入ロートから水酸化ナトリウム溶液（５００ｇ／Ｌ）４０ｍＬ加えた後、蒸留フラスコを加熱し、留出速度５〜７ｍＬ／ｍｉｎで蒸留を行い、約１４０ｍＬを留出した時点で蒸留を止め、冷却器及び逆流止めを外し、冷却器の内容物及び逆流止めの内外を少量の水で洗い、洗液は受器のメスシリンダー２００ｍＬに入れ、水を２００ｍＬの標線まで加えて、中和測定用サンプルを用意する。
６．空試験として水３０ｍＬをとり、３〜５の操作を行い、中和測定用空試験サンプルを用意する。
７．中和測定用サンプルで得た液を全量使い、５０ｍｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム溶液で溶液の色が灰紫（ｐＨ４．８）になるまで滴定する。同じく中和測定用空試験サンプルを同様に水酸化ナトリウム溶液で滴定を行う。
８．硫酸（２５ｍｍｏｌ／Ｌ）を正しく三角フラスコ５００ｍＬにとり、メチルレッド−プロモクレゾールグリーン混合溶液５〜７滴を加え、５０ｍｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム溶液で溶液の色が灰紫（ｐＨ４．８）になるまで滴定し、硫酸（２５ｍｍｏｌ／Ｌ）に相当する５０ｍｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム溶液の滴定量（ｍＬ）を求める。
【００３５】
以下の式によりアンモニウムイオン濃度を求める。
式Ｘ  Ａ＝（ｂ−ａ）×ｆ×１０００／Ｆ×０．９０２
Ａ：アンモニウムイオン（ＮＨ4+ｍｇ／Ｌ）
ｂ：硫酸（２５ｍｍｏｌ／Ｌ）５０ｍＬに相当する５０ｍｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム溶液（ｍＬ）
ａ：滴定に要した５０ｍｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム溶液（ｍＬ）
ｆ：５０ｍｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム溶液のファクター
Ｆ：試料（ｍＬ）
なお、０．９０２は、５０ｍｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム溶液１ｍＬのアンモニウムイオン相当量である。
【００３６】
以下の式Ｙにより窒素含有量の濃度を算出する。
式Ｙ  Ｎ＝（ｂ１−ａ１）×ｆ×（１０００×０．７００）／Ｖ×０．７７６６
Ｎ：窒素含有量（ｍｇ／Ｌ）
ｂ１：空試験の滴定に要した５０ｍｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム溶液（ｍＬ）
ａ１：滴定に要した５０ｍｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム溶液（ｍＬ）
ｆ：５０ｍｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム溶液のファクター
Ｖ：試料溶液の量（ｍＬ）
Ａ：式Ｘで求めたアンモニウムイオン濃度（ＮＨ4+ｍｇ／Ｌ）
なお、０．７００は、５０ｍｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム溶液１ｍＬの窒素相当量（ｍｇ）、０．７７６６は、アンモニウムイオンを窒素相当量に換算するときの係数である。また、本発明のプラセンタ抽出物における窒素含有量は質量％で示す。
【００３７】
本発明のプラセンタ抽出物の窒素含有量は、０．１０質量％以上であり、０．１５質量％以上が好ましく、０．２０質量％以上がより好ましい。窒素含有量が０．１０質量％未満の場合は、有効成分の濃度が十分ではなく、プラセンタ抽出物の優れた機能が不十分となる傾向がある。また、窒素含有量の上限は特に限定されないが、１．０質量％以下とすることができる。また、本発明のプラセンタ抽出物の窒素含有量は、０．１５〜０．２１質量％であることがさらに好ましく、実用的な有効成分の濃度であり、かつ着色の少ないプラセンタ抽出物となり、化粧品などへの適用がしやすい。なお、窒素含有量を上記の数値範囲内にするには、プラセンタを亜臨界処理した後、脱色処理を行うことで調整することができる。
【００３８】
本発明のプラセンタ抽出物における抽出成分は、遊離アミノ酸、分子量３０００以下の低分子ペプチド、分子量３０００超のペプチド、その他成分の４つに大別される。
【００３９】
なお、本明細書中の遊離アミノ酸、ペプチドおよびその他の成分の含有量は、プラセンタ抽出物の全固形分に対する各成分の質量％で示す。プラセンタ抽出物が水分などの液体成分を含む場合、プラセンタ抽出物を乾燥もしくは凍結乾燥させて液体成分を除去した状態のものを、プラセンタ抽出物の全固形分とする。
【００４０】
遊離アミノ酸とは、アルギニン、リジン、ヒスチジン、フェニルアラニン、チロシン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、バリン、アラニン、グリシン、プロリン、グルタミン酸（グルタミン含む）、セリン、スレオニン、アスパラギン酸（アスパラギン含む）、シスチン、トリプトファンの１８種類からなるアミノ酸が単独で存在するアミノ酸を指す。
【００４１】
遊離アミノ酸は機能性ペプチドの体内への吸収を阻害し、機能性ペプチドの吸収性や機能性を低下させる恐れがある、また、遊離アミノ酸の含有率が高い場合は相対的にペプチドの含有率が低くなり、プラセンタ抽出物の機能性が低下する恐れがある。よって、プラセンタ抽出物の全固形分中の遊離アミノ酸の含有量は、少なければ少ないほど好ましいが、亜臨界処理を経たプラセンタ抽出物を、脱色工程を行ったとしても、０．０１より小さくならないことが確認されていることから、遊離アミノ酸の含有量の下限値は０．０１質量％である。プラセンタ抽出物の機能性を十分に発揮できるという理由から、プラセンタ抽出物の全固形分中の遊離アミノ酸の含有量は、３０質量％以下が好ましく、１０質量％以下がより好ましく、５質量％以下がもっとも好ましい。
【００４２】
分子量３０００以下の低分子ペプチドとは、前記１８種類のアミノ酸のうち少なくとも１種が２分子以上結合したペプチドであって、分子量３０００以下のすべてのペプチドを指す。これらの分子量３０００以下の低分子ペプチドは、人体への吸収性がよく、吸収された成分が抗酸化性やコラーゲン産生促進能、コラゲナーゼ阻害活性、血圧上昇抑制作用に代表されるプラセンタ抽出物の優れた機能性を発揮しやすい成分である。
【００４３】
分子量３０００超のペプチドとは、前記１８種類のアミノ酸のうち少なくとも１種が２分子以上結合したペプチドの内、分子量３０００超のすべてのペプチドを指す。
【００４４】
その他成分とは、ミネラルに代表される無機成分や脂質、炭水化物などでペプチド、アミノ酸以外のすべての成分を指す。これらのその他の成分は、分離、抽出で全てを取り除くことが困難であり、プラセンタ抽出物の全固形分中に０．５質量％以上含まれる。
【００４５】
人体への吸収性がよく、吸収された成分が抗酸化性やコラーゲン産生促進能等の優れた機能性を発揮しやすい成分であることから、プラセンタ抽出物の全固形分中の分子量３０００以下の成分（遊離アミノ酸、分子量３０００以下の低分子ペプチドおよび分子量３０００以下のその他成分の合計）の含有量は１００％が好ましく、分子量３０００超の成分は含有していないことが好ましい。プラセンタの亜臨界処理を行い、加水分解をさせることでプラセンタ抽出物の全固形分中の分子量３０００以下の成分の含有量は１００％に近くなる。また、亜臨界処理と脱色工程とを経たプラセンタ抽出物は、プラセンタ抽出物の全固形分中の分子量３０００以下の成分の含有量が、さらに１００％に近くなる。
【００４６】
本発明のプラセンタ抽出物における全固形分中の全ペプチド（分子量３０００以下の低分子ペプチドおよび分子量３０００超のペプチドの合計）の含有量は、人体に吸収された成分が抗酸化性やコラーゲン産生促進能等の機能性を発揮しやすいことから、７０質量％以上が好ましい。亜臨界処理を経たプラセンタ抽出物においては、プラセンタ抽出物の全固形分中における全ペプチドの含有量を７０質量％以上にすることができる。さらに、プラセンタ抽出物の全固形分中の全ペプチドの含有量は、７５質量％以上がより好ましい。ペプチドの含有量が７０質量％未満の場合は、プラセンタ抽出物の機能性が低下する恐れがある。また、ペプチドの含有量上限は多ければ多いほど好ましいが、全固形分から前記その他の成分を除いた９９．５質量％が上限であると推測される。
【００４７】
ペプチドのなかでも、特に分子量が３０００以下の低分子化ペプチドをプラセンタ抽出物の全固形分中に、４０〜９９．５質量％含有することが、プラセンタ抽出物の機能性をより強く発揮できるという理由から好ましい。言い換えると、プラセンタ抽出物の全固形分中に、分子量が３０００以下の低分子化ペプチドを４０〜９９．５質量％含有することが好ましく、亜臨界処理を経たプラセンタ抽出物におけるプラセンタ抽出物の全固形分中に、分子量が３０００以下の低分子化ペプチドを４０〜９９．５質量％含有することができるのである。
【００４８】
本発明のプラセンタ抽出物における分子量分布測定は、高速液体クロマトグラフィーの分離モードを利用し、サイズ排除クロマトグラフィーにより測定し、高速液体クロマトグラフィーに注入されたサンプル溶液は，機器内で分離され、分子量の大きい成分から順に溶出されるということを利用して分子量を測定する方法により行う。そのためには、分子量が特定され、かつ、分子量が異なる標準試薬を複数用意し、それぞれの標準試薬を高速液体クロマトグラフィーにより測定し、ピークの溶離時間（Ｘ）と分子量の常用対数値（Ｙ）との関係により検量線を作成することで、溶離時間と分子量の関係を求めることができる。そして、この検量線より溶離時間を分子量に変換することができる。
【００４９】
前記検量線について事例を踏まえて説明をする。検量線を作成するためには７点の標準試薬を用いる。標準試薬の分子量ごとの高速液体クロマトグラフィーでのピークの溶離時間は、標準試薬１：分子量１２，５００（試薬名：Cytochrome C）については、溶離時間６．８５分であり、標準試薬２：分子量６，５１２（試薬名：Aprotinin）については、溶離時間８．５８分であり、標準試薬３：分子量１，４２３（試薬名：Bacitracin）については溶離時間９．６０分であり、標準試薬４：分子量１０４６（試薬名：AngiotensinII）については、溶離時間９．７９分であり、標準試薬５：分子量４５１（試薬名：Gly-Gly-Tyr-Arg）については溶離時間１０．７分であり、標準試薬６：分子量１８９（試薬名：Gly-Gly-Gly）については溶離時間１１．７分であり、標準試薬７：分子量７５（試薬名：グリシン）については溶離時間１２．２分であった。この測定結果および各標準試薬の分子量に基づき、Ｘ軸上に溶離時間、Ｙ軸上に分子量の常用対数値をプロットし、その結果より検量線を作成した。作成した検量線を図１に示す。図１の検量線により、高速液体クロマトグラフィーでのピークの溶離時間に対して、該当する分子量を確認することができる。そして、確認された分子量および各ピークのピーク面積に基づき、分子量分布を算出することができる。なお、今回の検量線では、溶離時間９．１分のところで分子量が３０００であることが確認された。よって、プラセンタ抽出物を拘束クロマトグラフィーで測定した結果、検出されたピークの溶離時間が９．１分以内であれば、分子量３０００超であり、ピーク頂上の溶離時間が９．１分を越えていれば、分子量３０００以下となる。
【００５０】
ここで、ブタ胎盤に蒸留水２００ｇを入れて、処理温度：１９５℃、処理圧力：１．６ＭＰａ、処理時間３０分間で亜臨界処理を行ったプラセンタ抽出物を高速液体クロマトグラフィーで測定した結果を図２に示す。図２では、検出されたピークが溶離時間９．１分を越えていることから、抽出物の分子量は３０００以下であることを確認することができる。
【００５１】
本発明のプラセンタ抽出物の製造方法は、原料のプラセンタを亜臨界処理して亜臨界処理物を得る抽出工程、抽出液と原料残渣とを分離する固液分離工程を含んでいる。さらに、活性炭処理による脱色工程を含んでもよい。当該製造方法によれば、有効成分の濃度が高く、かつ着色の少ないプラセンタ抽出物を製造することができる。
【００５２】
本発明のプラセンタ抽出物の製造方法においては、原料となるプラセンタは、哺乳類の胎盤であれば特に限定されず、入手容易性の観点からは、ブタ、ウシ、ウマ、ヒツジ、イノシシ等のプラセンタが好ましい。原料となるプラセンタは、血液やその他の部位が混在していることがあるため、抽出工程の前に洗浄などの精製工程を行うことが好ましい。
【００５３】
本発明のプラセンタ抽出物の製造方法における抽出工程は、プラセンタ原料を亜臨界処理することで、亜臨界処理物を得る工程である。亜臨界処理とは、所定温度および圧力の条件下で亜臨界状態にした抽出剤としての亜臨界流体と抽出対象の原料（本発明ではプラセンタ）とを接触させることにより、抽出原料から所定の成分を抽出するものである。例えば、水は、圧力２２．１２ＭＰａ、温度３７４．１５℃まで上げると液体でも気体でもない状態を示す。この点を水の臨界点といい、臨界点より低い温度および圧力の熱水を亜臨界水という。この亜臨界水は、誘電率低下とイオン積の向上により、優れた成分抽出作用と加水分解作用を有する。
【００５４】
本発明のプラセンタ抽出物の製造方法において、亜臨界処理に用いる抽出剤として水を用いる場合、高温の水処理であれば液体状態でも気体状態でも利用することができる。即ち、亜臨界処理の処理槽へは、水蒸気を供給してもよく、水を供給してもよく、あるいはその両者を供給してもよい。水または水蒸気の温度は望ましくは１００℃以上であり、望まれる反応場としては気体よりも液体状態の方が反応は進みやすいので、密閉に近い容器で強制的に液体の状態にしたいわゆる亜臨界の状態の水の使用が好ましい。より具体的には、金属やセラミックスなどの耐圧容器にプラセンタと抽出剤である水を入れて、密閉状態に近い状態にし、水の亜臨界状態（温度：１００℃以上、圧力：飽和蒸気圧以上）で、両者の接触を一定時間以上行うことで得られる抽出物を亜臨界処理物とすることができる。
【００５５】
本発明のプラセンタ抽出物の製造方法における亜臨界処理に用いる抽出剤は、水以外に、例えばエチレン、エタン、プロパン、二酸化炭素、メタノール、エタノールおよびそれらの混合物が挙げられる。これらの中で、安全性の観点から水を用いるのが最も好ましい。抽出剤が水の場合の処理条件について次に説明する。
【００５６】
本発明のプラセンタ抽出物の製造方法におけるプラセンタの亜臨界処理温度は、１６０〜２００℃の間が好ましい。この温度範囲にすることにより、機能性成分である分子量３０００以下である低分子ペプチドを生成しやすい。分子量分布は、高速液体クロマトグラフィーによる分子量分布測定にて測定可能である。亜臨界処理の温度が１６０℃未満の場合は、分子量３０００以下の低分子ペプチドを生成させることが難しくなる傾向がある。また、亜臨界処理の温度が２００℃を超える場合は、生成された低分子ペプチドがさらに亜臨界反応を起こしてしまい、遊離アミノ酸の生成量が増え、分子量３０００以下である低分子ペプチドの生成量を減少させる傾向が見られる。
【００５７】
さらに、本発明のプラセンタ抽出物の製造方法における亜臨界処理の温度は、１８０〜１９５℃にすることがより好ましい。この範囲にすることで、分子量３０００以下である低分子ペプチドをより短時間で生成しやすくなる。
【００５８】
本発明のプラセンタ抽出物の製造方法におけるプラセンタの亜臨界処理圧力は、亜臨界の処理温度の飽和蒸気圧以上（その一例としては、１６０℃のときには０．６１ＭＰａ以上、２００℃以上のときには１．５５ＭＰａ以上）で行うことが好ましい。この圧力にすることにより、分子量３０００以下の低分子ペプチドを生成しやすくなる傾向がある。亜臨界処理の圧力の上限は特に定められないが、高圧装置の仕様上、２０〜３０ＭＰａあたりに抑えることが好ましい。
【００５９】
本発明のプラセンタ抽出物の製造方法におけるプラセンタの亜臨界処理時間は、５〜３０分の間で行うことが好ましい。この処理時間の範囲にすることにより、低分子ペプチドを生成しやすくなる傾向がある。亜臨界処理時間が５分未満の場合は、低分子ペプチドを生成させることが困難となる傾向がある。亜臨界の処理時間が３０分を超える場合は、生成された低分子ペプチドがさらに過分解してしまい、遊離アミノ酸の生成量が増え、低分子ペプチドの生成量を減少させる傾向がある。
【００６０】
さらに、本発明のプラセンタ抽出物の製造方法におけるプラセンタの亜臨界処理時間を１０〜３０分にすることがより好ましい。この範囲であれば、低分子ペプチドをより効率的に生成しやすくなる傾向がある。
【００６１】
本発明のプラセンタ抽出物の製造方法における亜臨界処理の抽出剤を水とした場合におけるプラセンタの亜臨界処理による加水分解条件としては、処理温度は１６０〜２００℃、処理圧力は処理温度の飽和蒸気圧以上、処理時間は５〜３０分で行うことが好ましい。この条件で行うことで、低分子ペプチドを高効率で生成させることができる。さらに、処理温度は１８０〜１９５℃、処理圧力は処理温度の飽和蒸気圧以上、処理時間は１０〜３０分で行うことが、分子量３０００以下の低分子ペプチドを最大限の効率で得ることができるという理由から好ましい。
【００６２】
本発明のプラセンタ抽出物の製造方法における固液分離工程は、亜臨界処理物を抽出液と原料残渣（固体物）とに分離する工程である。具体的な固液分離工程としては、ろ紙を用いたろ過、遠心分離、デカンテーション、スクリュープレス、ローラープレス、ロータリードラムスクリーン、ベルトスクリーン、振動スクリーン、多重板振動フィルター、真空脱水、加圧脱水、ベルトプレス、遠心濃縮脱水、多重円板脱水などが挙げられる。なかでも、操作が簡便であり、分離効率に優れるという理由から、ろ過が好ましい。
【００６３】
本発明のプラセンタ抽出物の製造方法における固液分離工程により得られた抽出液は、そのまま次の脱色工程に移行し、脱色を行うこともできるが、本抽出液を乾燥させる乾燥工程を経て保存性のよい固形状にしてもよい。この乾燥工程としては、一般的な乾燥方法を用いることができ、自然放置はもちろんのこと、加熱系である箱型乾燥や噴霧乾燥などの伝熱乾燥、マイクロ波乾燥などの内部発熱乾燥、非加熱系である凍結乾燥、真空乾燥、吸引乾燥、加圧乾燥、超音波乾燥等が可能である。一般的で簡便なオーブン、恒温槽を用いて乾燥することももちろん許容される。得られた固形物は水に可溶であるので脱色をしたいときには再度水に溶かし、脱色工程に移行することができる。
【００６４】
本発明のプラセンタ抽出物の製造方法における脱色工程は、前記固液分離工程で得られた抽出液（前記乾燥工程により得られた固形物を水に溶かした抽出液を含む、以下同様）の褐変を取り除き、色を薄くする工程である。
【００６５】
一般的に胎盤の主要組織である蛋白質を酵素処理や高温処理で低分子化すると、蛋白質のアミノ基と、同じく原料中に含まれる糖分とが反応（いわゆる、メイラード反応）して、メラノイジンという物質を生成し、蛋白質が褐変して黒味を生じる。プラセンタに限らず、この反応は蛋白を含む成分については一般的であり、例えば、魚や肉の焦げ、コーヒーや味噌の着色などがある。
【００６６】
本発明のプラセンタ抽出物の製造方法においては抽出液の褐変を取り除く脱色工程としては、活性炭、イオン交換樹脂等の吸着剤を用いる方法などが挙げられる。なかでも、簡便に効率よく脱色できるという理由から、生成したメラノイジンを活性炭の細穴に吸着させて脱色する活性炭処理が好ましい。
【００６７】
本発明のプラセンタ抽出物の製造方法における活性炭処理による脱色工程は、固液分離工程で得られた抽出液に所定量の活性炭を添加し、所定時間撹拌したものを、脱色後の抽出液と活性炭とに固液分離する工程である。
【００６８】
本発明のプラセンタ抽出物の製造方法における活性炭処理の処理温度は、０〜８０℃が好ましく、１０〜６０℃がより好ましい。処理温度が０℃未満の場合は抽出液が凍結してしまう恐れがあり、凍結しない場合でも吸着量が低下してしまう傾向がある。また、処理温度が８０℃を超える場合は、液体の蒸発により固形分濃度が変化し、効率のよい脱色の再現が得られなくなる傾向がある。
【００６９】
本発明のプラセンタ抽出物の製造方法における活性炭処理の処理時間は、３分以上が好ましく、５分以上がより好ましい。処理時間が３分未満の場合は、吸着が思うように進行せず、脱色が不十分となる傾向がある。また、脱色工程の処理時間は１２０分以内が好ましく、６０分以内がより好ましい。脱色工程の処理時間が１２０分を超える場合は、吸着反応が平衡に達してしまい、脱色の効果に変化がなく効率が悪くなる傾向がある。脱色工程の処理時間が３分未満の場合は、抽出液の褐変が取り除けない。
【００７０】
本発明のプラセンタ抽出物の製造方法においては、活性炭処理による脱色工程における固液分離方法は特に限定されず、固液分離工程として挙げた各種方法が採用できるが、操作が簡便であり、分離効率に優れるという理由から、ろ過やデカンテーションが好ましい。
【００７１】
本発明のプラセンタ抽出物の製造方法においては、活性炭処理に用いる活性炭としては特に限定されず、市販されている活性炭を、生成するメラノイジンの性質や入手のしやすさなどにより適宜選択して用いることができる。メラノイジン吸着用の活性炭としては、市販のメラノイジンやカラメル吸着用活性炭を用いることができ、製造法としては一般的な薬品（亜鉛）や水蒸気賦活処理などをして細孔径を制御しているものを用いることができる。例えば、日本エンバイロケミカルズ株式会社製の白鷹シリーズおよびカルボラフィンシリーズなどが挙げられる。
【００７２】
本発明のプラセンタ抽出物の製造方法における使用する活性炭の添加量は、生成したメラノイジンの量に応じ（すなわち、色の濃さに応じ）適宜調節することができるが、脱色しようとする液体１００質量部に対し、０．１〜３０質量部が好ましい。０．１質量部未満の場合は、脱色性能が不十分となり、色度を下げる効果が不十分となる傾向がある。また、３０質量部を超える場合は、脱色性能は向上するが、脱色と同時に液体成分の浸み込みによる収量ロスが起こってしまい、最終的に十分な量が確保できなくなる傾向がある。なお、より効率よく脱色操作を行うことができるという理由からは、活性炭の添加量を１〜１０質量部とすることがより好ましい。
【００７３】
また、本発明のプラセンタ抽出物の製造方法において、活性炭の量を調整する代わりに活性炭使用量を少なめにして複数回、繰り返し活性炭処理を行うこともできる。さらに、活性炭処理を複数回行うことにより、脱色挙動・過程がより詳細に判明し、必要最小限の量の活性炭を使用することができるからである。繰り返し回数はメラノイジンの量に応じ（すなわち、色の濃さに応じ）適宜選択することができるが工程の煩雑さを考えると２〜１０回程度が好ましく、２〜５回程度がより好ましい。複数回行うことで抽出液の褐色をより取り除くことができる。
【００７４】
本発明のプラセンタ抽出物の製造方法においては、抽出剤を水とし、亜臨界処理温度は１９０〜１９５℃、亜臨界処理圧力は亜臨界処理温度の飽和蒸気圧以上、亜臨界処理時間は２０〜３０分の条件でプラセンタを亜臨界処理して、プラセンタの亜臨界処理物を得た後、２〜５回の活性炭処理により脱色することが望ましい。前記条件下の製造方法で得られたプラセンタ抽出物は、波長３９０ｎｍにおける吸光度を０．０２８〜０．０８４の範囲にすることができ、プラセンタ抽出物の窒素含有量を０．１５〜０．２１質量％の範囲にすることができる。
【００７５】
従来の抽出方法である酵素処理による方法では、酵素の添加は当然のことであるがその他の補助剤を用いることが必要となる。具体的には、酵素に加え、ｐＨ調整剤や酵素安定化剤などの酵素反応の補助剤がプラセンタ原料に添加され、これらの添加剤の含有により有効成分の濃度が希釈されてしまい、抽出物あたりの有効成分濃度が低くなってしまう。
【００７６】
一方、亜臨界処理により得られるプラセンタ抽出物では、プラセンタ抽出の手段として亜臨界水抽出を用いており、基本的には水のみの使用で蛋白質およびペプチドの低分子化を達成しており、水以外の添加物は一切使用しないことが可能である。従ってこの抽出法を用いて得られたプラセンタ抽出液は基本的に低分子化されたペプチド濃度が高くなり、従来技術に比べて有効成分濃度の高い抽出液を得ることができる。従って、従来技術と亜臨界処理により得られるプラセンタ抽出物を、同じ活性炭処理にて脱色操作を行えば、必然的に活性炭処理によって取り除かれるメラノイジン以外の主要成分、すなわちペプチドの吸着量は変わらないので結果的に得られる脱色後の溶液中のペプチド量は本発明のほうが多くなる。すなわち脱色しても有効成分の濃度を高いまま保つことができる。
【００７７】
また、プラセンタを構成する蛋白質は種々のアミノ酸、いわゆる生体を構成する約２０種のアミノ酸が主に結合して構成されており、当然のごとく様々な種類のペプチド結合が存在するのに対し、従来技術の酵素処理では酵素の基質特異性により、特定のペプチド結合の切断による低分子化のみが行われる。すなわち、酵素処理による方法では特定のペプチド結合しか切断することができないので、低分子化の度合いに限りがあり、ある一定以下の分子量に達することができない。
【００７８】
本発明のプラセンタ抽出物の製造方法においては、亜臨界水処理による抽出では高温高圧下における水の加水分解力にてペプチド結合を切断するため、ペプチド結合の種類に関係なく、ランダムにペプチド結合を切断することで蛋白質を低分子化することができる。従って温度と時間の条件によって従来からの酵素処理よりも低分子ペプチドの多い分子量分布にすることが可能である。
【００７９】
さらには、酵素処理による方法で得られた低分子ペプチドのサイズが、メラノイジン吸着用活性炭の細孔径に吸着するサイズに合致し、メラノイジンの吸着と共に低分子ペプチドも吸着されてしまい、脱色と共に有効成分であるペプチド量が減少してしまっていることが推測される。一方、亜臨界水処理による抽出により生成した低分子ペプチドのサイズは前述のように従来法よりもさらに低分子のペプチドとして存在するため、同様の活性炭処理を行えばメラノイジンの吸着は起こるものの、低分子ペプチドの吸着は起こりにくくなり、結果的に有効成分である低分子ペプチドが多いにもかかわらず、脱色された抽出物を得ることが可能となる。
【００８０】
なお、このようにして得られた本発明のプラセンタ抽出物は、その使用目的に応じ適時希釈や濃縮を行ってもよい。希釈は単なる加水、エタノールなどの有機溶剤の添加、その他有効成分を含む液体や食品添加物、香料、腐敗防止のためのフェノキシエタノールやブタンジオール、グリセリン、固形の防腐剤もしくはそれらを溶解させた有機溶剤や天然の防腐剤などを添加して行うことができる。希釈物は透明度は高まるものの窒素量は減少するが、従来の抽出物に比較してより窒素量を高く保ったまま希釈することができる。濃縮は熱濃縮、減圧濃縮など一般的な濃縮方法で行うことができ、前述の乾燥方法により乾燥させた後、適量の水などの溶媒を加え溶解させることもできる。濃縮物は窒素量は高まるものの透明度は減少するが、従来の抽出物に比べてより透明度を高く保ったまま濃縮を行うことができる。
【実施例】
【００８１】
本発明を実施例に基づいて説明するが、本発明は実施例のみに限定されるものではない。【００８２】
実施例１
＜抽出工程＞
容積２Ｌの耐圧容器に、ブタ胎盤（東京芝浦臓器株式会社）２００ｇ、蒸留水２００ｇを入れて、処理温度：１９５℃、処理圧力：１．６ＭＰａ、処理時間３０分間で亜臨界処理を行った。ブタ胎盤は水による洗浄を行い、血液および他の部位を取り除いたものを使用した。
＜固液分離工程＞
亜臨界処理を終了後、耐圧容器内の処理物を回収し、セルロース製ろ紙（孔径：１μｍ、Ａｄｖａｎｔｅｃ製の５Ｃ）で吸引ろ過し、ろ液を回収した。回収したろ液は茶褐色であった。
＜脱色工程（活性炭処理）１回目＞
得られたろ液５０ｇをビーカーに量り取り、３０℃の恒温水槽中でスターラーを用いて攪拌した。別途、ろ液１００質量部に対し３質量部の活性炭（市販のメラノイジン吸着用活性炭を使用）を、ろ液を撹拌中のビーカーに添加した。さらに３０分間攪拌後、恒温槽からビーカーを取り出し、固液分離工程と同様のろ紙で吸引ろ過を行い、ろ液を回収した。回収したろ液は少し濃い黄色であった。
＜脱色工程（活性炭処理）２回目＞
脱色工程１回目で得られたろ液に対し、同様の脱色工程を行い、再度ろ液を回収した。得られた抽出液の色は見た目には無色であった。【００８３】
実施例２
実施例１で得られた抽出液に対し、同様の脱色工程を行い、再度ろ液を回収した。得られた抽出液の色は見た目には無色であった。【００８４】
比較例１〜４
市販のプラセンタ化粧水１〜４（いずれも、ブタプラセンタ由来、抽出工程：酵素処理、脱色工程：活性炭処理）を比較例１〜４とした。それぞれの見た目の色は比較例１および２が黄色、比較例３および４は無色であった。【００８５】
比較例５
＜抽出工程＞
ブタ胎盤（東京芝浦臓器株式会社）２００ｇに、蒸留水５０ｇ、蛋白質加水分解酵素Ａｌｃａｌａｓｅ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ社製）４ｍＬ、２５質量％水酸化ナトリウム２ｍＬを添加し、６０℃で３時間反応させた。その後、９０℃で１時間処理し、酵素を失活させた。実施例１および２と固形分濃度を略あわせるため、失活処理後に蒸留水を添加して全量を４００ｇとした。
＜固液分離工程＞
酵素失活後の反応液をセルロース製ろ紙（孔径：１μｍ、Ａｄｖａｎｔｅｃ製の５Ｃ）によりろ過し、ろ液を回収した。回収したろ液は茶褐色であった
＜脱色工程（活性炭処理）１回目＞
得られたろ液５０ｇをビーカーに量り取り、３０℃の恒温水槽中でスターラーを用いて攪拌した。別途、ろ液１００質量部に対し３質量部の活性炭（市販のメラノイジン吸着用活性炭）を、ろ液を撹拌中のビーカーに添加した。さらに３０分間攪拌後、恒温槽からビーカーを取り出し、固液分離工程と同様のろ紙で吸引ろ過を行い、ろ液を回収した。回収したろ液は少し濃い黄色であった。
＜脱色工程（活性炭処理）２回目＞
脱色工程１回目で得られたろ液に対し、同様の脱色工程を行い、再度ろ液を回収した。得られた抽出液の色は薄い黄色であった。
＜脱色工程（活性炭処理）３回目＞
脱色工程１回目で得られたろ液に対し、同様の脱色工程を行い、再度ろ液を回収した。得られた抽出液の色は見た目無色であった。【００８６】
吸光度測定
実施例１、２および比較例１〜５の抽出液または化粧水の３９０ｎｍにおける吸光度を可視紫外分光光度計（ＧＥヘルスケア・ジャパン株式会社製のＧｅｎｅＱｕａｎｔ  １３００）を用いて測定した。結果を表１および図１に示す。【００８７】
窒素含有量測定
実施例１、２および比較例１〜５の抽出液または化粧水中の窒素含有量をケルダール法（被検液に硫酸を加え、液中の有機体窒素を硫酸アンモニウムに変換し、液体をアルカリ性にして加熱し、発生するアンモニアを滴定によって定量する方法）によって求めた。具体的にはＪＩＳ  Ｋ０１０２  ４４に記載の方法に準拠して行った。結果を表１および図１に示す。【００８８】
分子量分布測定
実施例１〜２および比較例１〜５の抽出液または化粧水を、０．４５μｍメンブランフィルターによりろ過し、高速液体クロマトグラフィー（アジレントテクノロジー社製ＨＰ１１００シリーズ）による測定を行った。【００８９】
分析条件については、カラム（東ソー社製  品番：ＴＳＫ  ｇｕａｒｄ  ｃｏｌｕｍｎ  ＳＷＸＬ（６．０ｍｍ  Ｉ.Ｄ.×４０ｍｍ）およびＴＳＫｇｅｌ  Ｇ２０００ＳＷＸＬ（７．８ｍｍ  Ｉ.Ｄ.×３００ｍｍ）を用い、溶離液を０．１ｗ／ｖ％  ＴＦＡ  ｉｎ  ＭｅＣＮ／Ｈ2Ｏ＝４５／５５、カラム温度３５℃、流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ、検出ＵＶ２２０ｎｍ、導入量２０μＬ、分析時間３０ｍｉｎにて分子量分布測定用の標準試薬としてＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｃ（和光純薬工業）分子量１２,５００、Ａｐｒｏｔｉｎｉｎ（ＣＡＬＢＯＣＨＥＭ）分子量６５１２、Ｂａｃｉｔｒａｃｉｎ（Ｄｒ.  Ｅｈｒｅｎｓｔｏｒｆｅｒ）分子量１,４２３、Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  II（ペプチド研究所）分子量１,０２６、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ（ペプチド研究所）分子量４５１、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（ペプチド研究所）分子量１８９により同様な測定で検量線を作成し、溶離時間に対する分子量位置を決め、分子量分布、および分子量分画範囲におけるピーク面積を求め、分子量比率を求めた。結果を表１に示す。【００９０】
なお、今回得られた分子量は、すべての試料においてその上限が用いたカラムの限外排除分子量（約１０万）以下であり、溶出が開始する時間から算出される最大の分子量は約２万であった。よって上記実施例および比較例において原料中に含まれていたタンパク質は、すべて分子量約１０万以下、さらには約２万以下のペプチドの形態に変換されて試料中に含まれていることが分かった。【００９１】
【表１】
2015186806.tif 000003
【００９２】
表１の結果より、本発明のプラセンタ抽出物は、有効成分の濃度が高く、かつ着色の少ないプラセンタ抽出物であることがわかる。さらに、前述の亜臨界処理を含む製造方法により製造されたプラセンタ抽出物は、有効成分の濃度が高く、かつ着色の少ないプラセンタ抽出物であることがわかる。また、比較例５では、生臭いと感じる臭いを確認された。しかしながら、実施例１、２では、生臭いと感じる臭いは確認されなかった。【００９３】
なお、比較例１〜４についての分子量分布（面積）の値が非常に大きいが、これは、市販のプラセンタ化粧水である比較例１〜４はアミノ酸およびペプチド以外のその他の成分（保存料、紫外線吸収剤などの添加を含む）を大量に含有していることによるものと推測される。
【図１】
2015186806.tif 000004
【図２】
2015186806.tif 000005
【図３】
2015186806.tif 000006
【国際調査報告】
2015186806.tif 000007
2015186806.tif 000008
2015186806.tif 000009
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