(57)【要約】  被験者における統合失調症、うつ病、又は双極性障害の有無を簡便かつ高精度に判定することができる精神疾患判定マーカーを開発し、提供することである。  脳脊髄液中に含まれる配列番号１〜２４９で示すアミノ酸配列からなる群からなるタンパク質、その変異体、又はその断片からなる精神疾患判定マーカーを提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
脳脊髄液中に含まれる配列番号１〜２４９で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなる精神疾患判定マーカー。
【請求項２】
配列番号１、３、５、６、７、８〜１３、１５〜３３、３５〜５４、５６〜６０、１４１〜１４４、１４７〜１６２、及び２４９で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなり、精神疾患が統合失調症である、請求項１に記載の精神疾患判定マーカー。
【請求項３】
統合失調症を亜型に細分類する、配列番号７〜１３、１５〜２５、１４１〜１４４、１４７、１４８、及び２４９で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなる、請求項２に記載の精神疾患判定マーカー。
【請求項４】
統合失調症の重症度を同定する、配列番号９、１３、２６〜２９、３１〜３３、３５〜５４、５６〜６０、及び１５９〜１６２で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなる、請求項２に記載の精神疾患判定マーカー。
【請求項５】
配列番号４７、６１〜６９、１１４、及び１６３〜１７３で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなり、精神疾患が双極性障害である、請求項１に記載の精神疾患判定マーカー。
【請求項６】
双極性障害を亜型に細分類する、配列番号６３、６４、１１４、及び１６３〜１６９で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなる、請求項５に記載の精神疾患判定マーカー。
【請求項７】
双極性障害の重症度を同定する、配列番号４７、６５〜６９、及び１７３で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなる、請求項５に記載の精神疾患判定マーカー。
【請求項８】
配列番号１３、１４、１７、４４、５６、６６、７０〜９３、１２３、１７４〜１７８、及び１８０〜２３２で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなり、精神疾患がうつ病である、請求項１に記載の精神疾患判定マーカー。
【請求項９】
うつ病を亜型に細分類する、配列番号６６、７６〜８７、１７４〜１７８、及び１８０〜１９２で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなる、請求項８に記載の精神疾患判定マーカー。
【請求項１０】
うつ病の重症度を同定する、配列番号４４、６６、及び８８〜９３で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなる、請求項８に記載の精神疾患判定マーカー。
【請求項１１】
配列番号９４〜９８で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなり、精神疾患が統合失調症／双極性障害である、請求項１に記載の精神疾患判定マーカー。
【請求項１２】
配列番号２、４、５５、９９〜１０３、１４５、１４６、１７９、及び２３３〜２４０で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなり、精神疾患が統合失調症／うつ病である、請求項１に記載の精神疾患判定マーカー。
【請求項１３】
配列番号１０４〜１２２、及び２４１で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなり、精神疾患がうつ病／双極性障害である、請求項１に記載の精神疾患判定マーカー。
【請求項１４】
配列番号１２４〜１２６で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなり、精神疾患が統合失調症及びうつ病のいずれであるかを判定する、請求項１に記載の精神疾患判定マーカー。
【請求項１５】
配列番号１２７〜１３１、及び２４２〜２４６で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなり、精神疾患が統合失調症及び双極性障害のいずれであるかを判定する、請求項１に記載の精神疾患判定マーカー。
【請求項１６】
配列番号１３１〜１３６、２４７、及び２４８で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなり、精神疾患がうつ病及び双極性障害のいずれであるかを判定する、請求項１に記載の精神疾患判定マーカー。
【請求項１７】
配列番号１３、３４、及び１３７〜１４０で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなり、精神疾患が統合失調症、うつ病又は双極性障害である、請求項１に記載の精神疾患判定マーカー。
【請求項１８】
精神疾患判定方法であって、
被験者及び健常者から採取された試料の単位量あたりに含まれる請求項２、３、５、６、８、９、１１〜１３、及び１７に記載のいずれか一以上の精神疾患判定マーカーの量を測定してその測定値を得る測定工程、
前記測定工程で得られた被験者及び健常者の測定値を比較して、その結果に基づいて被験者における精神疾患を判定する比較判定工程を含む前記方法。
【請求項１９】
前記測定工程において請求項２又は３に記載の精神疾患判定マーカーから統合失調症を判定する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
請求項３に記載の精神疾患判定マーカーの測定値と所定のカットオフ値に基づいて統合失調症の亜型をさらに判定する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記測定工程において請求項５又は６に記載の精神疾患判定マーカーから双極性障害を判定する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
請求項６に記載の精神疾患判定マーカーの測定値と所定のカットオフ値に基づいて双極性障害の亜型をさらに判定する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記測定工程において請求項８又は９に記載の精神疾患判定マーカーからうつ病を判定する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２４】
請求項９に記載の精神疾患判定マーカーの測定値と所定のカットオフ値に基づいてうつ病の亜型をさらに判定する、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記測定工程において請求項１１に記載の精神疾患判定マーカーの測定値と所定のカットオフ値に基づいて統合失調症又は双極性障害を判定する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２６】
前記測定工程において請求項１２に記載の精神疾患判定マーカーの測定値と所定のカットオフ値に基づいて統合失調症又はうつ病を判定する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２７】
前記測定工程において請求項１３に記載の精神疾患判定マーカーの測定値と所定のカットオフ値に基づいてうつ病又は双極性障害を判定する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２８】
前記測定工程において請求項１７に記載の精神疾患判定マーカーから統合失調症、うつ病又は双極性障害を判定する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２９】
前記測定工程において請求項４に記載の精神疾患判定マーカーの量を測定し、
該測定工程で得られた測定値に基づいて統合失調症の重症度を判定する重症度判定工程をさらに含む、請求項１９又は２０に記載の方法。
【請求項３０】
前記測定工程において請求項７に記載の精神疾患判定マーカーの量を測定し、
該測定工程で得られた測定値に基づいて双極性障害の重症度を判定する重症度判定工程をさらに含む、請求項２１又は２２に記載の方法。
【請求項３１】
前記測定工程において請求項１０に記載の精神疾患判定マーカーの量を測定し、
該測定工程で得られた測定値に基づいてうつ病の重症度を判定する重症度判定工程をさらに含む、請求項２３又は２４に記載の方法。
【請求項３２】
前記測定工程において請求項１５に記載の精神疾患判定マーカーの量を測定し、
前記比較判定工程において測定工程で得られた測定値に基づいて統合失調症及び双極性障害のいずれであるかを判定する、請求項２５に記載の方法。
【請求項３３】
前記測定工程において請求項１４に記載の精神疾患判定マーカーの量を測定し、
前記比較判定工程において測定工程で得られた測定値に基づいて統合失調症及びうつ病のいずれであるかを判定する、請求項２６に記載の方法。
【請求項３４】
前記測定工程において請求項１６に記載の精神疾患判定マーカーの量を測定し、
前記比較判定工程において測定工程で得られた測定値に基づいてうつ病及び双極性障害のいずれであるかを判定する、請求項２７に記載の方法。
【請求項３５】
前記測定工程において二以上の異なる精神疾患判定マーカーを測定する、請求項１８〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記試料が脳脊髄液である、請求項１８〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、被験者由来の試料を用いて精神疾患である統合失調症、双極性障害又はうつ病の有無を判定するためのバイオマーカー及びそれを用いた精神疾患判定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
現代社会において、統合失調症、うつ病、及び双極性障害等の精神疾患（Mental Disorder)は、大きな社会問題となっている。例えば、日本の平成23年（2011年）厚生労働省患者調査によると、日本国内の前記精神疾患の入院患者数は、全疾患を合計した国内総入院患者数の約23%にものぼる。通院患者数や潜在的患者数を加えると、精神疾患患者数は、国内で膨大な数に達すると予想される。これらの精神疾患は生産年齢層に多く見られることから、医療費の負担増のみならず、経済的損失や自殺による社会的損失等、社会に与える影響は計り知れない。【０００３】
一般に、精神疾患は、疾患間で近似する症状が多く、また各疾患において症状が多岐にわたることから各疾患の定義が明確でない。そのため専門家であっても正確な診断は、しばしば困難を極める。【０００４】
現在、精神疾患の診断は本人や家族等への問診で聴取した症状、兆候及び経過等の情報に基づいて行われている。通常、米国精神医学会により規定されたDiagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders(DSM)が精神疾患の診断基準に使用されている。ところが、この診断基準は、客観的な検査を用いるわけではないため、診断する医師によって一致しないことも多い。米国の大規模調査によると、一般診療でDSM診断に基づいて、うつ病と診断された5639人のうち、構造化診断面接でうつ病性障害と再診断された患者は38.4%に過ぎないことが報告されている（非特許文献１）。構造化診断面接とは、マニュアル化された面接法で、質問内容や再質問等の形式を予め設定することで、面接者による診断の違いを小さくすることができる。構造化診断面接を用いれば、比較的高い一致度は得られる（非特許文献２）が、構造化診断面接には診断者の高い熟練度と1〜2時間に及ぶ面接時間が必要な上、後述するように、一致度の高い診断を行うことによる診療上の有益性がそれらに見合わないため、研究以外で行われることはほとんどない。【０００５】
また、DSM診断は障害に対して判定されるため、生物学的な病態を必ずしも反映しているとは言えない。実際、脳以外に原因があることが明確な病態であっても、DSM診断では誤って精神疾患と診断されるケースがしばしばみられる。例えば、うつ病と診断された患者の少なくとも1割以上は、甲状腺機能低下症や抗炎症薬の副作用と言われている（非特許文献３）。また、統合失調症と診断された患者の中に、抗NMDA受容体抗体脳炎が含まれることが報告されている（非特許文献４）。【０００６】
ところで、現行の抗うつ薬は、一部の重症症例を除いて十分な効果が認められていない（非特許文献５）。また、統合失調症治療薬の効果も幻聴・妄想等の一部の症状に対する効果に留まっている。このように、精神疾患に対する治療薬の効果が限定される原因の一つとして、精神疾患の分類が十分に確立していない点が挙げられる。例えば、うつ病と診断された精神疾患にも細分類が可能な複数の病態が存在し、現在処方されている抗うつ薬、うつ病における一部の病態にしか治療効果がない、というものである。したがって、精神疾患の本質的な治療法の開発には、生物学的な根拠に基づく新たな分類とそれに応じた適切な診断技術の開発が求められている。【０００７】
上記背景から、生物学的根拠に基づく新たな診断方法として、近年バイオマーカーが注目されている。バイオマーカーとは、特定の疾患の発症に応答して細胞が産生する核酸やタンパク質等の物質であって、体液や組織中における存在量又はその変動が対応する疾患の有無、重症度、又は予後を反映することから、疾患判定及び治療指針決定等の鑑別子となり得る。【０００８】
精神疾患分野においても、これまで統合失調症、うつ病、又は双極性障害のバイオマーカー探索は行われており、サイトカインや神経栄養因子等、様々な候補分子が提案されてきた。ところが、その多くは十分な検出効果が得られておらず、精神疾患の実用的なバイオマーカーは、未だに開発されていないのが現状である（非特許文献６及び７）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Mojtabai R, 2013, Psychotherapy and psychosomatics, 82(3):161-9, Epub 2013/04/04.
【非特許文献２】Harvey PD, et al., 2012, Schizophrenia research, 140(1-3):9-14, Epub 2012/04/17.
【非特許文献３】Kornstein SG and Schneider RK, 2001, Journal of clinical psychiatry, 62 Suppl 16:18-25. Epub 2001/08/02.
【非特許文献４】Dalmau J, et al., 2008, Lancet neurology, 7(12):1091-8, Epub 2008/10/15.
【非特許文献５】Fournier JC, et al., 2010, Journal of the American Medical Association, 303(1):47-53. Epub 2010/01/07.
【非特許文献６】Singh I, and Rose N, 2009, Nature, 460(7252):202-7. Epub 2009/07/10.
【非特許文献７】Enaw JO, and Smith, AK, 2013, Journal of Neurology and Psychology, 1(2):7.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、被験者における統合失調症、うつ病、又は双極性障害等の精神疾患を簡便かつ高精度に判定することができる実用性の高い精神疾患判定マーカーを開発し、提供することを課題とする。また、本発明は、被験者における統合失調症、うつ病、又は双極性障害等の亜型、及び／又は重症度をさらに判定できる精神疾患判定マーカーを開発し、提供することを課題とする。【００１１】
本発明は、前記精神疾患判定マーカーを用いて被験者における各精神疾患の罹患の有無を高精度に検出する方法を開発し、提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
従来の精神疾患の診断には、前述した診断基準そのものの問題や、探索に用いた試料の問題がある。診断基準の問題として、マーカー探索に際して、候補分子を患者群及び健常者群の平均値の有意差のみに基づいて選択している点が挙げられる。精神疾患は症候群であり、症候群には複数の病態が存在する可能性が高い。一部の病態については有用なバイオマーカーとなり得ても、全症例におけるその病態の割合が小さい場合には、有意差検定では埋没し、除外されてしまう可能性がある。また、試料の問題として、マーカー探索用の試料に血液や死後脳を用いていた点が挙げられる。血液は、脳をはじめ、腸、肝臓、筋肉等の様々な臓器と直接に接する。一方で、脳と他臓器の間には血液脳関門が存在し、血液中の物質の交換が制限されている。したがって、血液、特に末梢血を用いたマーカー探索では、脳に特徴的な物質の変化の検出が他臓器の影響によって困難となる可能性が高い。つまり、血液は、ノイズが大きく、脳の状態を反映しにくいという問題がある。また死後脳は、精神疾患の原因と考えられる対象臓器そのものを用いる点や脳の立体構造が保たれている点では優れているものの、死後直ちに摘出可能な動物実験と異なり、ヒトの脳は死因や死後経過による変化等の影響を受けるため、神経伝達物質やシグナル分子等の重要候補分子の変化が検出困難となる可能性が高い。さらに、これまで神経病理学や脳画像研究では、各精神疾患に特異的な病巣は見出されておらず、パーキンソン病等と異なり、脳の立体構造が保たれることの優位性は乏しい。【００１３】
上記問題点を鑑み、本発明者らはマーカー探索に用いる試料として脳脊髄液(cerebrospinal fluid：以下しばしば「CSF」と表記する)を選択した。CSFは、脳と脊髄の周囲にのみ存在する無色透明の液体で、他の臓器とは硬膜、血液とは血液脳関門や血液脳脊髄液関門で隔てられている。CSFは、その大部分が脳の実質より滲出することや、脳細胞とCSFとの間には障壁が事実上存在しないことが近年の研究から明らかとなっている（Wang C, et al., 2012, Cerebrospinal Fluid: Physiology, biomarker and methodology. In: V. S, Dolezal, T., editor. Cerebrospinal Fluid: Functions, Composition and Disorders. New York: Nova Science Publishers; pp.1-37.）。また、診断基準の問題を解決するためにマーカーを選択する統計手法として、従来、頻用されていた健常群と疾患群との平均値の有意差に基づく方法のみならず、カットオフ値を定めて各疾患における異常値を示す症例を選択する方法、及び症例疾患群における重症度を診断する方法を新たに追加した。その結果、249種のタンパク質を精神疾患判定マーカーとして選択することができた。本発明は、上記結果に基づくものであって、以下を提供する。【００１４】
（１）脳脊髄液中に含まれる配列番号１〜２４９で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなる精神疾患判定マーカー。
（２）配列番号１、３、５、６、７、８〜１３、１５〜３３、３５〜５４、５６〜６０、１４１〜１４４、１４７〜１６２、及び２４９で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなり、精神疾患が統合失調症である、（１）に記載の精神疾患判定マーカー。
（３）統合失調症を亜型に細分類する、配列番号７〜１３、１５〜２５、１４１〜１４４、１４７、１４８、及び２４９で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなる、（２）に記載の精神疾患判定マーカー。
（４）統合失調症の重症度を同定する、配列番号９、１３、２６〜２９、３１〜３３、３５〜５４、５６〜６０、及び１５９〜１６２で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなる、（２）に記載の精神疾患判定マーカー。
（５）配列番号４７、６１〜６９、１１４、及び１６３〜１７３で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなり、精神疾患が双極性障害である、（１）に記載の精神疾患判定マーカー。
（６）双極性障害を亜型に細分類する、配列番号６３、６４、１１４、及び１６３〜１６９で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなる、（５）に記載の精神疾患判定マーカー。
（７）双極性障害の重症度を同定する、配列番号４７、６５〜６９、及び１７３で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなる、（５）に記載の精神疾患判定マーカー。
（８）配列番号１３、１４、１７、４４、５６、６６、７０〜９３、１２３、１７４〜１７８、及び１８０〜２３２で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなり、精神疾患がうつ病である、（１）に記載の精神疾患判定マーカー。
（９）うつ病を亜型に細分類する、配列番号６６、７６〜８７、及び１７４〜１７８、及び１８０〜１９２で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなる、（８）に記載の精神疾患判定マーカー。
（１０）うつ病の重症度を同定する、配列番号４４、６６、及び８８〜９３で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなる、（８）に記載の精神疾患判定マーカー。
（１１）配列番号９４〜９８で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなり、精神疾患が統合失調症／双極性障害である、（１）に記載の精神疾患判定マーカー。
（１２）配列番号２、４、５５、９９〜１０３、１４５、１４６、１７９、及び２３３〜２４０で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなり、精神疾患が統合失調症／うつ病である、（１）に記載の精神疾患判定マーカー。
（１３）配列番号１０４〜１２２、及び２４１で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなり、精神疾患がうつ病／双極性障害である、（１）に記載の精神疾患判定マーカー。
（１４）配列番号１２４〜１２６で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなり、精神疾患が統合失調症及びうつ病のいずれであるかを判定する、（１）に記載の精神疾患判定マーカー。
（１５）配列番号１２７〜１３１、及び２４２〜２４６で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなり、精神疾患が統合失調症及び双極性障害のいずれであるかを判定する、（１）に記載の精神疾患判定マーカー。
（１６）配列番１３１〜１３６、２４７、及び２４８で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなり、精神疾患がうつ病及び双極性障害のいずれであるかを判定する、（１）に記載の精神疾患判定マーカー。
（１７）配列番号１３、３４、及び１３７〜１４０で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片からなり、精神疾患が統合失調症、うつ病又は双極性障害である、（１）に記載の精神疾患判定マーカー。
（１８）精神疾患判定方法であって、被験者及び健常者から採取された試料の単位量あたりに含まれる（２）、（３）、（５）、（６）、（８）、（９）、（１１）〜（１３）及び（１７）に記載のいずれか一以上の精神疾患判定マーカーの量を測定してその測定値を得る測定工程、前記測定工程で得られた被験者及び健常者の測定値を比較して、その結果に基づいて被験者における精神疾患を判定する比較判定工程を含む前記方法。
（１９）前記測定工程において（２）又は（３）に記載の精神疾患判定マーカーから統合失調症を判定する、（１８）に記載の方法。
（２０）前記（３）に記載の精神疾患判定マーカーの測定値と所定のカットオフ値に基づいて統合失調症の亜型をさらに判定する、（１９）に記載の方法。
（２１）前記測定工程において（５）又は（６）に記載の精神疾患判定マーカーから双極性障害を判定する、（１８）に記載の方法。
（２２）前記（６）に記載の精神疾患判定マーカーの測定値と所定のカットオフ値に基づいて双極性障害の亜型をさらに判定する、（２１）に記載の方法。
（２３）前記測定工程において（８）又は（９）に記載の精神疾患判定マーカーからうつ病を判定する、（１８）に記載の方法。
（２４）前記（８）に記載の精神疾患判定マーカーの測定値と所定のカットオフ値に基づいてうつ病の亜型をさらに判定する、（２３）に記載の方法。
（２５）前記測定工程において（１１）に記載の精神疾患判定マーカーの測定値と所定のカットオフ値に基づいて統合失調症／双極性障害を判定する、（１８）に記載の方法。
（２６）前記測定工程において（１２）に記載の精神疾患判定マーカーの測定値と所定のカットオフ値に基づいて統合失調症／うつ病を判定する、（１８）に記載の方法。
（２７）前記測定工程において（１３）に記載の精神疾患判定マーカーの測定値と所定のカットオフ値に基づいてうつ病／双極性障害を判定する、（１８）に記載の方法。
（２８）前記測定工程において（１７）に記載の精神疾患判定マーカーから統合失調症、うつ病又は双極性障害を判定する、（１８）に記載の方法。
（２９）前記測定工程において（４）に記載の精神疾患判定マーカーの量を測定し、該測定工程で得られた測定値に基づいて統合失調症の重症度を判定する重症度判定工程をさらに含む、（１９）又は（２０）に記載の方法。
（３０）前記測定工程において（７）に記載の精神疾患判定マーカーの量を測定し、該測定工程で得られた測定値に基づいて双極性障害の重症度を判定する重症度判定工程をさらに含む、（２１）又は（２２）に記載の方法。
（３１）前記測定工程において（１０）に記載の精神疾患判定マーカーの量を測定し、該測定工程で得られた測定値に基づいてうつ病の重症度を判定する重症度判定工程をさらに含む、（２３）又は（２４）に記載の方法。
（３２）前記測定工程において（１５）に記載の精神疾患判定マーカーの量を測定し、前記比較判定工程において測定工程で得られた測定値に基づいて統合失調症及び双極性障害のいずれであるかを判定する、（２５）に記載の方法。
（３３）前記測定工程において（１４）に記載の精神疾患判定マーカーの量を測定し、前記比較判定工程において測定工程で得られた測定値に基づいて統合失調症及びうつ病のいずれであるかを判定する、（２６）に記載の方法。
（３４）前記測定工程において（１６）に記載の精神疾患判定マーカーの量を測定し、前記比較判定工程において測定工程で得られた測定値に基づいてうつ病及び双極性障害のいずれであるかを判定する、（２７）に記載の方法。
（３５）前記測定工程において二以上の異なる精神疾患判定マーカーを測定する、（１８）〜（３４）のいずれかに記載の方法。
（３６）前記試料が脳脊髄液である、（１８）〜（３５）のいずれかに記載の方法。【００１５】
本明細書は本願の優先権の基礎である日本国特許出願2014-102090号の明細書及び／又は図面に記載される内容を包含する。
【発明の効果】
【００１６】
本発明の精神疾患判定マーカーによれば、被験者における統合失調症、うつ病、又は双極性障害等の精神疾患を簡便かつ高精度に判定可能なバイオマーカーを提供することができる。この精神疾患判定マーカーは、被験者における統合失調症、うつ病、又は双極性障害等の罹患鑑別、亜型の同定、及び／又は重症度の同定を行うことができる。【００１７】
本発明の精神疾患判定方法によれば、前記精神疾患判定マーカーを用いて被験者における各精神疾患の罹患可能性、亜型の同定、及び／又は重症度の同定を高精度に判定する方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】本発明の精神疾患判定マーカーの分類群を示す概念図である。
【図２】健常者と各精神疾患患者におけるうつ病用精神疾患判定マーカーSCFsRの測定値分布図を示す。各プロット群における横直線は、そのプロット群における平均値を示す（他の図において、同様とする）。図中、Nはその精神疾患患者の総数を、またDFはN中の薬剤フリー（Drug Free）患者数を示す（他の図において、同様とする）。
【図３】統合失調症を亜型に細分類する精神疾患判定マーカーUNC5H3の健常者と各精神疾患患者における測定値分布図を示す。破線（95％）は、健常者群における95パーセンタイルに相当するカットオフ値である。
【図４】統合失調症重症度判定用の精神疾患判定マーカーであるST4S6の測定値と統合失調症の評価尺度PANSSによる評価値との関係を示す。
【図５】健常者と各精神疾患患者におけるうつ病／双極性障害用精神疾患判定マーカーLYN Bの測定値分布図を示す。
【図６】図５に示したLYN Bの測定値分布図に、健常者群における95パーセンタイルをカットオフ値として記入した図である。
【図７】統合失調症とうつ病のいずれに罹患しているかを判定する精神疾患判定マーカーPTHの測定値分布を示す図である。
【図８】健常者か精神疾患患者かを判定することができる精神疾患判定マーカーVEGF sR3の測定値分布を示す図である。カットオフ値は、健常者群における95パーセンタイルとした。
【図９】うつ病用精神疾患判定マーカーであるFibrinogenの測定値分布を示す図である。（ａ）に示すようにFibrinogenは、うつ病患者（MDD）の一部で顕著な亢進がみられた。また、（ｂ）に示すようにSOMAscanによるFibrinogen測定値は、ELISAによる測定値とよく相関していた。さらに、異なる検体コホートで、Fibrinogenを用いてELISAにより解析したところ、（ｃ）に示すようにうつ病の一群で顕著な亢進が認められ、Fibrinogenがうつ病用の精神疾患判定マーカーとして機能し得る再現性が得られた。
【図１０】統合失調症用精神疾患判定マーカーであるPIGFによる統合失調症検体の測定値と統合失調症認知機能簡易評価尺度(BACS)の符号課題の評価値との関係を示す図である。（ａ）に示すようにPIGF濃度とBACS符号課題の評価値との間には相関があり、PIGF濃度が高いほど、符号課題の評価値が低く、症状が重かった。また、（ｂ）に示すようにPIGFは統合失調症群（Sz）及びうつ病の一部で顕著な亢進がみられた。したがって、PIGFを精神疾患判定マーカーに用いることで、統合失調症に罹患している可能性とその重症度を判定することができる。
【図１１】うつ病用精神疾患判定マーカーであるα1-Antitrypsinの測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのα1-Antitrypsinの測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。図中、Contは健常者を、Szは統合失調症を、MDDはうつ病を、そしてBDは双極性障害を示す。以下の図で同様とする。
【図１２】統合失調症／うつ病用精神疾患判定マーカーであるAdiponectinの測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのAdiponectinの測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図１３】うつ病用精神疾患判定マーカーであるAntithrombin IIIの測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのAntithrombin IIIの測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図１４】統合失調症／うつ病用精神疾患判定マーカーであるApo Bの測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのApo Bの測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図１５】うつ病用精神疾患判定マーカーであるATS13の測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのATS13の測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図１６】双極性障害／うつ病用精神疾患判定マーカーであるb-ECGFの測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのb-ECGFの測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図１７】うつ病用精神疾患判定マーカーであるC1-Esterase Inhibitorの測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのC1-Esterase Inhibitorの測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図１８】統合失調症／うつ病用精神疾患判定マーカーであるC3aの測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのC3aの測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図１９】統合失調症／うつ病用精神疾患判定マーカーであるC5の測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのC5の測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。いずれの図でも、うつ病（MDD）の一部で顕著な亢進がみられた。（Ｄ）は、ELISAによるC5の測定値とSOMAscanによる測定値の相関を示す図である。
【図２０】うつ病用精神疾患判定マーカーであるCD5Lの測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのCD5Lの測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図２１】統合失調症／うつ病用精神疾患判定マーカーであるContactin-4の測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのContactin-4の測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図２２】統合失調症／うつ病用精神疾患判定マーカーであるCRPの測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのCRPの測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。いずれの図でも、うつ病（MDD）の一部で顕著な亢進がみられた。（Ｄ）は、ELISAによるCRPの測定値とSOMAscanによる測定値の相関を示す図である。
【図２３】統合失調症／うつ病用精神疾患判定マーカーであるCystatin Cの測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのCystatin Cの測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図２４】うつ病用精神疾患判定マーカーであるEphrin-A5の測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのEphrin-A5の測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図２５】統合失調症／うつ病用精神疾患判定マーカーであるESAMの測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのESAMの測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図２６】うつ病用精神疾患判定マーカーであるFGF-12の測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのFGF-12の測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図２７】うつ病用精神疾患判定マーカーであるFSTL3の測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのFSTL3の測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図２８】統合失調症用精神疾患判定マーカーであるGDF-9の測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのGDF-9の測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図２９】統合失調症／うつ病用精神疾患判定マーカーであるGP1BAの測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのGP1BAの測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図３０】統合失調症用精神疾患判定マーカーであるIL-13 Ra1の測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのIL-13 Ra1の測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図３１】統合失調症／うつ病／双極性障害用精神疾患判定マーカーであるJAM-Bの測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのJAM-Bの測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図３２】統合失調症／うつ病用精神疾患判定マーカーであるMATN2の測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのMATN2の測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図３３】双極性障害用精神疾患判定マーカーであるMEK1の測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのMEK1の測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図３４】双極性障害用精神疾患判定マーカーであるMidkineの測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのMidkineの測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図３５】双極性障害用精神疾患判定マーカーであるMIFの測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのMIFの測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図３６】うつ病用精神疾患判定マーカーであるMISの測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのMISの測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図３７】統合失調症用精神疾患判定マーカーであるMMP-2の測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのMMP-2の測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図３８】双極性障害用精神疾患判定マーカーであるMSPの測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのMSPの測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図３９】うつ病用精神疾患判定マーカーであるNectin-like protein 1の測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのNectin-like protein 1の測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図４０】統合失調症／うつ病用精神疾患判定マーカーであるNotch 1の測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのNotch 1の測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図４１】うつ病用精神疾患判定マーカーであるProperdinの測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのProperdinの測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図４２】双極性障害用精神疾患判定マーカーであるTFPIの測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのTFPIの測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図４３】うつ病用精神疾患判定マーカーであるTIG2の測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのTIG2の測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図４４】うつ病用精神疾患判定マーカーであるTransketolaseの測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのTransketolaseの測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図４５】統合失調症／うつ病用精神疾患判定マーカーであるTSG-6の測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのTSG-6の測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図４６】うつ病用精神疾患判定マーカーであるTWEAKの測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのTWEAKの測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図４７】統合失調症精神疾患判定マーカーであるUNC5H3の測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのUNC5H3の測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【図４８】統合失調症／うつ病／双極性障害用精神疾患判定マーカーであるVasoactive Intestinal Peptideの測定値分布を示す図である。（ａ）は表１２に示す第１検体コホートの、また（ｂ）は表１３に示す第２検体コホートのVasoactive Intestinal Peptideの測定値分布を示す。（ｃ）は（ａ）及び（ｂ）のデータをZ変換により結合した図である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
１．精神疾患判定マーカー
１−１．概要
本発明の第１の態様は精神疾患判定マーカーである。本発明の精神疾患判定マーカーは、タンパク質又はその断片から構成され、被験者由来の試料に含まれる量を測定することで、該被験者における精神疾患を判定するバイオマーカーとして利用することができる。
【００２０】
１−２．構成
本明細書において使用する用語について、以下で定義する。
精神疾患とは、広義には外因性、心因性、又は内因性の脳の機能的又は器質的障害の総称をいう。しかしながら、本明細書において「精神疾患」とは、特に断りのない限り、従来の精神病理学の診断カテゴリーにおいて統合失調症、うつ病、又は双極性障害に分類される3つの症候群に属する図１に示す狭義の精神疾患を意味する。
【００２１】
本明細書において「精神疾患（を）判定（する）」とは、被験者における精神疾患の罹患鑑別、精神疾患の亜型の同定、及び／又は罹患している精神疾患の重症度の同定をいう。
【００２２】
本明細書において「精神疾患判定マーカー」とは、表１の各配列番号に示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片から構成される、精神疾患判定のためのバイオマーカーである。
【００２３】
【表１】
2015174544.tif 000002
2015174544.tif 000003
2015174544.tif 000004
2015174544.tif 000005
2015174544.tif 000006
2015174544.tif 000007
2015174544.tif 000008
【００２４】
表１の各配列番号に示すアミノ酸配列からなるタンパク質は、いずれもヒト脳脊髄液（CSF）由来のタンパク質であって、本発明において被験者における統合失調症、うつ病又は双極性障害のいずれか一以上の精神疾患を判定するバイオマーカーとなり得る。なお、表１に記載の「UniProt No.」は、「http://www.uniprot.org/」に開示された各タンパク質のアクセッションナンバーである。
【００２５】
本明細書において「その変異体」とは、表１の各配列番号に示すアミノ酸配列からなる各タンパク質の変異体をいう。具体的には、表１に示す各タンパク質のアミノ酸配列において、1〜複数個のアミノ酸の付加、欠失、又は置換を含むポリペプチド、又は表１に示す各タンパク質のアミノ酸配列と80％以上、85％以上、好ましくは90％以上、95％以上、96％以上、97％以上、98％以上、又は99％以上のアミノ酸同一性を有するポリペプチドをいう。ここで、「複数個」とは、2〜10、2〜9、2〜8、2〜7、2〜6、2〜5、2〜4、又は2若しくは3個の整数をいう。また、「アミノ酸同一性」とは、二つのアミノ酸配列を整列（アラインメント）し、必要に応じてギャップを導入して、両者のアミノ酸一致度が最も高くなるようにしたときの表１に示す各タンパク質の全アミノ酸残基数に対する変異体の全アミノ酸残基数の同一アミノ酸残基の割合（％）をいう。アミノ酸同一性は、BLASTやFASTAによるタンパク質の検索システムを用いて決定することができる（Karlin，S．et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 5873-5877；Altschul，S．F．et al., 1990, J. Mol. Biol., 215: 403-410；Pearson，W．R．et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85: 2444-2448）。表１に示す各タンパク質の変異体の具体例には、スプライス変異等が挙げられる。
【００２６】
本明細書において「断片」とは、表１の各配列番号に示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質又はその変異体の一部からなるペプチド断片であって、当該タンパク質を構成するアミノ酸配列のうち、7個以上全数未満、10個以上全数未満、15個以上全数未満、好ましくは20個以上全数未満、25個以上全数未満、35個以上全数未満、40個以上全数未満、又は50個以上全数未満の連続するアミノ酸残基を有する。好ましくは1又は複数のエピトープをそのアミノ酸配列内に保有するポリペプチド断片である。
【００２７】
本明細書では、以下、表１の「配列番号Xに示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、その変異体、又はその断片から構成されるバイオマーカー」を「配列番号Xに示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等」と表記する。ここで、Xは1〜140の任意の整数である。
【００２８】
本明細書において「被験者」とは、後述する第２態様の方法に供され、精神疾患を判定すべき対象となるヒト個体をいう。
【００２９】
本発明の精神疾患判定マーカーは、被験者における統合失調症、うつ病又は双極性障害のいずれか一以上の精神疾患を判定することができる。以下の表２〜５、７、９及び１１に示す精神疾患判定マーカーは、その検出属性に基づいて図１に示す１〜７群に大別することができる。
【００３０】
以下、各群に属する精神疾患判定マーカーについて、具体的に説明をする。
（１）統合失調症を判定する群
１群に属する精神疾患判定マーカーを表２に示す。
【００３１】
【表２】
2015174544.tif 000009
2015174544.tif 000010
2015174544.tif 000011
【００３２】
この群に属する精神疾患判定マーカーは、統合失調症を判定するマーカーである。具体的には、図１において1群で示す区画に属するマーカーであって、配列番号１、３、５、６、７、８〜１３、１５〜３３、３５〜５４、５６〜６０、１４１〜１４４、１４７〜１６２、及び２４９で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等をいう。本群の精神疾患判定マーカーを用いれば、被験者における統合失調症の罹患鑑別、統合失調症の亜型の同定、及び／又は統合失調症の重症度の同定ができる。
【００３３】
本群に属する精神疾患判定マーカーにおいて配列番号１、３、５、６、７、８〜１３、１５〜２５、３０、４６、１４１〜１４４、１４７〜１５８、及び２４９で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等は、被験者における統合失調症の罹患を鑑別することができる。
【００３４】
本明細書において、「罹患（を）鑑別（する）」とは、被験者における特定の精神疾患の罹患可能性の高さを判断することをいう。したがって、配列番号１、３、５、６、７、８〜１３、１５〜２５、３０、４６、１４１〜１４４、１４７〜１５８、及び２４９で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等は、統合失調症罹患鑑別マーカーであり、このマーカーを1以上用いることで、被験体が統合失調症に罹患している可能性が高いことを鑑別できる。
【００３５】
本群に属する精神疾患判定マーカーにおいて配列番号１、３、５、６、１１、１２、３０、４６、１４１、１４２、１４９〜１５８、及び２４９で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等は、統合失調症患者と健常者間の脳脊髄液試料に含まれる当該タンパク質等の存在量の有意差に基づいて単離されたバイオマーカーである。
【００３６】
本明細書において「健常状態」とは、本明細書における狭義のいずれの精神疾患にも罹患していない状態、好ましくは広義のいずれの精神疾患にも罹患していない健全な精神状態であることをいう。
【００３７】
本明細書において「有意」とは、統計学的に有意であることをいう。具体的には、被験者と健常者の測定値の差異を統計学的に処理したときに、両者間に有意差があることをいう。例えば、危険率（有意水準）が5％、1％、0.3％、0.2％又は0.1％より小さい場合が挙げられる。統計学的処理の検定方法は、有意性の有無を判断可能な公知の検定方法を適宜使用すればよく、特に限定しない。例えば、スチューデントt検定法、多重比較検定法を用いることができる。
【００３８】
表２では、年齢・性を共変数とした共分散分析で危険率0.2％より小（p<0.002）を示すタンパク質を、健常との差を有する精神疾患判定マーカーとして「○」印を付けて示している。
【００３９】
本群に属する精神疾患判定マーカーにおいて配列番号８〜１３、１５〜２５、１４１〜１４４、１４７、１４８、及び２４９で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等は、統合失調症の罹患鑑別に加えて、統合失調症を亜型に細分類することができる判定マーカーである。
【００４０】
本明細書において「亜型」とは、本発明の精神疾患判定マーカーを用いた生物学的根拠に基づいて分類される、各精神疾患の下位の分類群である。例えば、１群に属する統合失調症の亜型、２群に属する双極性障害の亜型、３群に属する及びうつ病の亜型が挙げられる。この他にも、４群に属する統合失調症／双極性障害の亜型、５群に属する統合失調症／うつ病の亜型、６群に属する双極性障害／うつ病の亜型が挙げられる。このような亜型は、例えば、「（精神疾患）の（判定マーカー分子名）亜型」として分類される。具体的には、配列番号７で示されるUNC5H3マーカーを用いた精神疾患の判定において、統合失調症と判定された被験者は、「統合失調症のUNC5H3亜型」と同定することができる。なお、４群に属する統合失調症／双極性障害、５群に属する統合失調症／うつ病、及び６群に属する双極性障害／うつ病についての詳細は、後述する。
【００４１】
本明細書において各精神疾患の亜型を同定可能な精神疾患判定マーカー（具体的には、統合失調症亜型用の配列番号７〜１３、１５〜２５、１４１〜１４４、１４７、１４８、及び２４９で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等、後述する双極性障害亜型用の配列番号６３、６４、１１４、及び１６３〜１６９で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等、うつ病亜型用の配列番号６６、７６〜８７、及び１７４〜１７８、及び１８０〜１９２で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質、統合失調症／双極性障害亜型用の配列番号９５〜９８で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等、統合失調症／うつ病亜型用の配列番号２、４、７、１００〜１０３、１４５、１４６、１７９、及び２３３〜２３９で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等、及びうつ病／双極性障害亜型用の配列番号１０８〜１２２で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等）は、健常者群の脳脊髄液由来の試料に含まれる当該精神疾患判定マーカーの測定値に基づいて設定されるカットオフ値により単離されたバイオマーカーである。
【００４２】
本明細書において「カットオフ値」とは、定量結果を陽性、陰性に分類するための境界値をいう。ここでいう陽性とは、精神疾患に罹患している可能性が高いことを、また陰性とは罹患していない可能性が高いことを、それぞれ示す。カットオフ値の設定法は特に限定しない。例えば、健常者群から得られた測定値をパーセンタイルで分類し、その分類に用いたパーセンタイル値をカットオフ値とすることができる。具体的には、健常者群から得られた測定値の95パーセンタイルで被験者の測定値の陽性又は陰性を分類した場合、95パーセンタイルがカットオフ値となる。他にも、Akobeng AKActa, 2007, Paediatr, 96:644-647に記載の算出方法に基づいて設定することができる。
【００４３】
本明細書でパーセンタイル値をカットオフ値として用いる場合、5パーセンタイル又は95パーセンタイルのいずれかを用い、5パーセンタイル未満、又は95パーセンタイルより大の場合を陽性、5パーセンタイル以上、又は95パーセンタイル以下の場合を陰性とする。例えば、被験者におけるUNC5H3マーカーの測定値が健常者群の測定値の95パーセンタイルより大きい値を示した場合、その被検者は、統合失調症に罹患している可能性が高く、かつ統合失調症のUNC5H3亜型として細分類することができる。
【００４４】
従来、一般的な精神疾患は、本人や家族等への問診結果や経過状況、構造化診断面接等により診断されていたが、同じ精神疾患内の個体間でも抗精神疾患薬（例えば、抗うつ薬等）による薬理効果に大きな差異が生じるという問題があった。この原因の一つとして、従来法では診断された精神疾患のカテゴリーが大き過ぎ、同一精神疾患内に複数の病態（本明細書でいうところの亜型）が存在していたために一部の病態にのみ薬理効果が認められた可能性が考えられる。各精神疾患を亜型に細分類可能な本発明の精神疾患判定マーカーを用いれば、従来の仮説的な精神疾患の診断基準に従うだけではなく、各精神疾患の分子病態を反映する、生物学的根拠に基づいた客観性のより高い分類が可能となる。
【００４５】
また本発明の精神疾患判定マーカーを用いれば、同一精神疾患内に存在し得る各亜型に応じた至適な治療が可能となる。亜型に細分類できる上記精神疾患判定マーカーは、精神疾患特異性が高く、統合失調症、双極性障害、又はうつ病を高精度に判定することができる他、従来法では分類し得ない新たな精神疾患群である統合失調症／双極性障害、統合失調症／うつ病、及びうつ病／双極性障害も高精度に判定することができる。
【００４６】
表２では、健常者の95パーセンタイル及び5パーセンタイルをカットオフ値とし、その値を外れ、95パーセンタイルより大、又は5パーセンタイル未満の異常値を示すタンパク質を亜型に細分類可能な精神疾患判定マーカーとして示している。例えば、配列番号７〜１３、１５〜２０、１４１〜１４４、１４７、１４８、及び２４９で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等は、健常者の95パーセンタイルをカットオフ値とし、その値よりも大きい場合には、統合失調症の罹患鑑別に加えて、統合失調症を亜型に細分類することができる。一方、配列番号２１〜２５で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等は、健常者の5パーセンタイルをカットオフ値とし、その値未満の場合には、統合失調症の罹患鑑別に加えて、統合失調症を亜型に細分類することができる。
【００４７】
また、本群に属する精神疾患判定マーカーにおいて配列番号９、１３、２６〜３４、３５〜５４、５６〜６０、及び１５９〜１６２で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等の測定値は、統合失調症の評価尺度と相関性を示す。そのため、統合失調症の重症度を同定することができる。
【００４８】
本明細書において「重症度」とは、各精神疾患の評価尺度に基づく症状の程度をいう。統合失調症の評価尺度には、PANSS（陽性・陰性症状評価尺度；Positive and Negative Syndrome Scale)、又はBACS(統合失調症認知機能簡易評価尺度；(Brief Assessment for Cognition in Schizophrenia)を利用すればよい。配列番号９、１３、２６〜２９、３１〜３３、３５〜５４、５６〜６０、及び１５９〜１６２で示すアミノ酸配列からなる群から選択される各精神疾患判定マーカーと相関性を示す評価尺度は、以下に示す通りである。配列番号２６〜３３で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等は、PANSSを評価尺度としてピアソン相関分析においてp＜0.01で相関する、統合失調症の重症度を同定することができる精神疾患判定マーカーである。一方、配列番号９、１３、３４〜５４、５６〜６０、及び１５９〜１６２で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等は、BACSを評価尺度としてピアソン相関関数においてp＜0.01で相関する、統合失調症の重症度を同定することができる精神疾患判定マーカーである。
【００４９】
統合失調症の重症度を同定可能な前記精神疾患判定マーカーにおいて、配列番号９及び１３で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等は、統合失調症の重症度のみならず、統合失調症の罹患の鑑別及び亜型の同定も可能な精神疾患判定マーカーである。
【００５０】
（２）双極性障害を判定する群
２群に属する精神疾患判定マーカーを表３に示す。
【００５１】
【表３】
2015174544.tif 000012
【００５２】
この群に属する精神疾患判定マーカーは、双極性障害であることを判定できるマーカーである。具体的には、図１において２群で示す区画に属するマーカーであって、配列番号４７、６１〜６９、１１４、及び１６３〜１７３で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等をいう。本群の精神疾患判定マーカーを用いれば、被験者における双極性障害の罹患鑑別、双極性障害の亜型の同定、及び／又は双極性障害の重症度の同定ができる。
【００５３】
本群に属する精神疾患判定マーカーにおいて配列番号６１〜６４、１１４、及び１６３〜１７２で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等は、被験者における双極性障害の罹患を鑑別することができる。このうち、配列番号６１、６２、及び１７０〜１７２で示すアミノ酸配列からなるタンパク質等は、双極性障害患者と健常者間の脳脊髄液由来の試料に含まれる当該タンパク質等の存在量の有意差に基づいて単離されたバイオマーカーである。
【００５４】
表３では、年齢・性を共変数とした共分散分析でp<0.002を示すタンパク質を、有意差を有する精神疾患判定マーカーとして「○」印を付けて示している。
【００５５】
また、配列番号６３、６４、１１４、及び１６３〜１６９で示すアミノ酸配列からなるタンパク質等は、双極性障害を亜型に細分類することができるバイオマーカーである。表３では、健常者の95パーセンタイル及び5パーセンタイルをカットオフ値とし、95パーセンタイルより大、又は5パーセンタイル未満の異常値を示すタンパク質を亜型に細分類可能な精神疾患判定マーカーとして示している。例えば、配列番号６３、６４、１６４、１６６、及び１６８で示すアミノ酸配列からなるタンパク質等は、健常者の5パーセンタイルをカットオフ値とし、その値未満の場合には、双極性障害の罹患鑑別に加えて、双極性障害を亜型に細分類することができる。また、配列番号１１４、１６３、１６５、１６７、及び１６９で示すアミノ酸配列からなるタンパク質等は、健常者の95パーセンタイルをカットオフ値とし、その値より大きい場合には、双極性障害の罹患鑑別に加えて、双極性障害を亜型に細分類することができる。
【００５６】
一方、本群に属する精神疾患判定マーカーにおいて配列番号４７、及び６５〜６９で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等の測定値は、双極性障害におけるうつ症状の評価尺度であるHAM-D（ハミルトンうつ病評価尺度；Hamilton Depression Scale）と相関性を示すことから、その重症度の一側面を同定することができる。具体的には、配列番号４７、６５〜６９、及び１７３で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等は、HAM-Dを評価尺度としてピアソン相関関数においてp＜0.01で相関する、双極性障害の重症度を同定することができる精神疾患判定マーカーである。なお、配列番号４７で示す精神疾患判定マーカーActivin beta Aは、評価尺度をBACSとした場合には、前述のように統合失調症の重症度を同定できる。
【００５７】
（３）うつ病を判定する群
３群に属する精神疾患判定マーカーを表４に示す。
【００５８】
【表４】
2015174544.tif 000013
2015174544.tif 000014
2015174544.tif 000015
【００５９】
この群に属する精神疾患判定マーカーは、うつ病を判定できるマーカーである。具体的には、図１において３群で示す区画に属するマーカーであって、配列番号１３、１４、１７、４４、５６、６６、７０〜９３、１２３、１７４〜１７８、及び１８０〜２３２で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等をいう。本群の精神疾患判定マーカーを用いれば、被験者におけるうつ病の罹患鑑別、うつ病の亜型の同定、及び／又はうつ病の重症度の同定ができる。
【００６０】
表４では、年齢・性を共変数とした共分散分析でp<0.001、p<0.003又はp<0.005を示すタンパク質を、有意差を有する精神疾患判定マーカーとして示している。
【００６１】
本群に属する精神疾患判定マーカーにおいて配列番号１３、１４、１７、５６、６６、７０〜８７、１２３、及び１７４〜１７８、及び１８０〜２３２で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等は、被験者におけるうつ病の罹患を鑑別することができる。このうち、配列番号１３、１４、１７、５６、７０〜７５、８２、８３、１２３、１７４〜１７８、１８０、及び１９３〜２３２で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等は、うつ病患者と健常者間の脳脊髄液由来の試料に含まれる当該タンパク質等の存在量の有意差に基づいて単離されたバイオマーカーである。ここで、配列番号２で示す精神疾患判定マーカーは、統合失調症の有意差に基づく罹患鑑別用の精神疾患判定マーカーでもあり、配列番号１３及び１７で示す精神疾患判定マーカーは、統合失調症の亜型同定用の精神疾患判定マーカーでもあり、配列番号５６で示す精神疾患判定マーカーは、統合失調症の重症度同定用の精神疾患判定マーカーでもある。
【００６２】
また、配列番号６６、７６〜８７、１７４〜１７８、及び１８０〜１９２で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等は、うつ病を亜型に細分類することができるバイオマーカーである。表４では、健常者の95パーセンタイル及び5パーセンタイルをカットオフ値とし、95パーセンタイルより大、又は5パーセンタイル未満の異常値を示すタンパク質を亜型に細分類可能な精神疾患判定マーカーとして示している。例えば、配列番号６６、７６〜８１、１７６〜１７８、１８１〜１８５、及び１８９〜１９２で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等は、健常者の95パーセンタイルをカットオフ値とし、その値より大の場合には、うつ病の罹患鑑別に加えて、うつ病を亜型に細分類することができる。一方、配列番号８２〜８７、１７４、１７５、１８０、及び１８６〜１８８で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等は、健常者の5パーセンタイルをカットオフ値とし、その値未満の場合には、うつ病の罹患鑑別に加えて、うつ病を亜型に細分類することができる。ここで、配列番号６６で示す精神疾患判定マーカーFibrinogenは、評価尺度HAM-Dを用いた場合には、双極性障害の重症度を同定可能な精神疾患判定マーカーとなるが、健常者群の脳脊髄液由来の試料に含まれるFibrinogenの測定値に基づいて決定されるカットオフ値に基づいて同定した場合には、うつ病の罹患鑑別及び重症度の同定用マーカーとなり得る。
【００６３】
本群に属する精神疾患判定マーカーにおいて配列番号４４、６６、及び８８〜９３で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等の測定値は、うつ病の評価尺度HAM-Dと相関性を示すことから、うつ病の重症度を判定することができる。具遺体的には、前記タンパク質等は、HAM-Dを評価尺度としてピアソン相関関数においてp＜0.01で相関する、うつ病の重症度を同定することができる精神疾患判定マーカーである。
【００６４】
（４）統合失調症／双極性障害を判定する群
４群に属する精神疾患判定マーカーを表５に示す。
【００６５】
【表５】
2015174544.tif 000016
【００６６】
この群に属する精神疾患判定マーカーは、統合失調症／双極性障害を判定できるマーカーである。「統合失調症／双極性障害」とは、従来の分類法でいずれかの精神疾患に分類されていた精神疾患で、バイオマーカーを用いた生物学的根拠に基づく本発明の判定方法により、統合失調症と双極性障害の両精神疾患の特徴を有し、いずれか一方には明確に分類し得ない新たな精神疾患群をいう。具体的には、図１において４群で示す区画に属するマーカーであって、配列番号９４〜９８で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等をいう。本群の精神疾患判定マーカーを用いれば、被験者が統合失調症／双極性障害に罹患している可能性が高いことを鑑別できる。
【００６７】
本群に属する精神疾患判定マーカーにおいて配列番号９５〜９８で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等は、統合失調症／双極性障害に罹患して可能性が高いことを鑑別できると共に、統合失調症／双極性障害を亜型に細分類することができる判定マーカーである。本群に属する精神疾患判定マーカーも前述の１〜３群における精神疾患の亜型同定と同様にカットオフ値を設定し、その値に基づいて分類すればよい。例えば、配列番号９５で示されるBMP-1マーカーを用いた精神疾患の判定において、被験者におけるBMP-1マーカーの測定値が健常者群の測定値の95パーセンタイルより大きい値を示した場合、その被検者は、統合失調症／双極性障害に罹患している可能性が高く、かつ「統合失調症／双極性障害のBMP-1亜型」と同定することができる。
【００６８】
表５では、健常者の95パーセンタイル及び5パーセンタイルをカットオフ値とし、95パーセンタイルより大、又は5パーセンタイル未満の異常値を示すタンパク質を亜型に細分類可能な精神疾患判定マーカーとして示している。例えば、配列番号９５で示すアミノ酸配列からなるBMP-1タンパク質は、健常者の95パーセンタイルをカットオフ値とし、その値より大の場合には、統合失調症又は双極性障害であると判定することができる。一方、配列番号９６〜９８で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等は、健常者の5パーセンタイルをカットオフ値とし、その値未満の場合には、統合失調症／双極性障害であると判定することができる。
【００６９】
被験者が統合失調症又は双極性障害のいずれに罹患しているかを判定することのできる補足用の精神疾患判定マーカーとして、配列番号１２７〜１３１、及び２４２〜２４６で示されるアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等を用いてもよい。そのような補足用マーカーを表６に示す。
【００７０】
【表６】
2015174544.tif 000017
【００７１】
表６に示すマーカーは、健常者と各々の疾患との差は小さいため、単独では統合失調症患者、又は双極性障害患者の罹患鑑別には使用できない。しかし、患者が統合失調症又は双極性障害のどちらの精神疾患に罹患している場合、両者を鑑別することができる。例えば、統合失調症か双極性障害か判別したい場合、配列番号１２７、１２８、又は１３０で示すアミノ酸配列からなるタンパク質等は濃度がカットオフ値より低い場合に統合失調症、高い場合に双極性障害であると診断でき、配列番号１２９、１３１、及び２４２〜２４６で示すアミノ酸配列からなるタンパク質等は濃度がカットオフ値より高い場合に統合失調症、低い場合に双極性障害と診断できる。それ故、本群に属する精神疾患判定マーカーで統合失調症又は双極性障害に罹患した患者に対する補助的判定用のマーカーとして有用である。なお、表６のカットオフ値は、Akobeng AKActa, 2007, Paediatr, 96:644-647に記載の算出方法に基づいて、ROC曲線を作成し,(1-感度)2+(1-特異度)2が最小になる値を求めた（表８、表１０についても同様）。
【００７２】
（５）統合失調症／うつ病を判定する群
５群に属する精神疾患判定マーカーを表７に示す。
【００７３】
【表７】
2015174544.tif 000018
【００７４】
この群に属する精神疾患判定マーカーは、統合失調症／うつ病を判定できるマーカーである。「統合失調症／うつ病」とは、従来の分類法でいずれかの精神疾患に分類されていた精神疾患で、バイオマーカーを用いた生物学的根拠に基づく本発明の判定方法により、統合失調症とうつ病の両精神疾患の特徴を有し、いずれか一方には明確に分類し得ない新たな精神疾患群をいう。具体的には、図１において５群で示す区画に属するマーカーであって、配列番号２、４、５５、９９〜１０３、１４５、１４６、１７９、及び２３３〜２４０で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等をいう。本群の精神疾患判定マーカーを用いれば、被験者が統合失調症／うつ病に罹患している可能性が高いことを鑑別できる。
【００７５】
本群に属する精神疾患判定マーカーにおいて配列番号２、４、１０１〜１０３、１４５、１４６、１７９、及び２３３〜２３９で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等は、統合失調症／うつ病に罹患している可能性が高いことを鑑別できると共に、統合失調症／うつ病を亜型に細分類することができる判定マーカーである。本群に属する精神疾患判定マーカーも前述の１〜３群における精神疾患の亜型同定と同様にカットオフ値を設定し、その値に基づいて分類すればよい。例えば、配列番号１０１で示されるNADPH-P450 Oxidoreductaseマーカーを用いた精神疾患の判定において、被験者におけるNADPH-P450 Oxidoreductaseマーカーの測定値が健常者群の測定値の95パーセンタイルより大きい値を示した場合、その被検者は、統合失調症／うつ病に罹患している可能性が高く、かつ「統合失調症／うつ病のNADPH-P450 Oxidoreductase亜型」と同定することができる。
【００７６】
表７では、健常者の95パーセンタイル及び5パーセンタイルをカットオフ値とし、その値を外れ、95パーセンタイルより大、又は5パーセンタイル未満の異常値を示すタンパク質を亜型に細分類可能な精神疾患判定マーカーとして示している。例えば、配列番号１０１、１４５、１４６、１７９、及び２３３〜２３７で示すアミノ酸配列からなるNADPH-P450 Oxidoreductaseは、健常者の95パーセンタイルをカットオフ値とし、その値より大の場合には、統合失調症／うつ病であると判定することができる。一方、配列番号１０２、１０３、１３８、及び１３９で示すアミノ酸配列からなるタンパク質等は、健常者の5パーセンタイルをカットオフ値とし、その値未満の場合には、統合失調症／うつ病であると判定することができる。
【００７７】
被験者が統合失調症又はうつ病のいずれに罹患しているかを鑑別することのできる補足用の精神疾患判定マーカーとして、配列番号１２４〜１２６で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等を用いてもよい。そのような補足用マーカーを表８に示す。
【００７８】
【表８】
2015174544.tif 000019
【００７９】
表８に示すマーカーは、健常者と各々の疾患との差が小さいため、単独では統合失調症患者、又はうつ病の罹患鑑別には使用できない。しかし、患者が統合失調症又はうつ病のいずれかに罹患している場合、両者を鑑別することができる。例えば、統合失調症かうつ病かを判別したい場合、配列番号１２４で示すアミノ酸配列からなるTriosephosphate isomeraseタンパク質等の濃度4320RFUをカットオフ値として、その値よりもより高い場合に統合失調症、低い場合にうつ病であると診断できる。それ故、本群に属する精神疾患判定マーカーで統合失調症又はうつ病に罹患した患者に対する補助的判定用のマーカーとして有用である。
【００８０】
（６）うつ病／双極性障害を判定する群
６群に属する精神疾患判定マーカーを表９に示す。
【００８１】
【表９】
2015174544.tif 000020
【００８２】
この群に属する精神疾患判定マーカーは、うつ病／双極性障害を判定できるマーカーである。「うつ病／双極性障害」とは、従来の分類法でいずれかの精神疾患に分類されていた精神疾患で、バイオマーカーを用いた生物学的根拠に基づく本発明の判定方法により、うつ病と双極性障害の両精神疾患の特徴を有し、いずれか一方には明確に分類し得ない新たな精神疾患群をいう。具体的には、図１において６群で示す区画に属するマーカーであって、配列番号１０４〜１２２及び２４１で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等をいう。本群の精神疾患判定マーカーを用いれば、被験者がうつ病／双極性障害に罹患している可能性が高いことを鑑別できる。
【００８３】
本群に属する精神疾患判定マーカーにおいて配列番号１０８〜１２２で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等は、うつ病／双極性障害に罹患している可能性が高いことを鑑別できると共に、うつ病／双極性障害を亜型に細分類することができる判定マーカーである。本群に属する精神疾患判定マーカーも前述の１〜３群における精神疾患の亜型同定と同様にカットオフ値を設定し、その値に基づいて分類すればよい。例えば、例えば、配列番号１０８で示されるLYN Bマーカーを用いた精神疾患の判定において、被験者におけるLYN Bマーカーの測定値が健常者群の測定値の95パーセンタイルより大きい値を示した場合、その被検者は、うつ病／双極性障害に罹患している可能性が高く、かつ「うつ病／双極性障害のLynB亜型」と同定することができる。
【００８４】
被験者がうつ病又は双極性障害のいずれに罹患しているかを鑑別することのできる補足用の精神疾患判定マーカーとして、配列番号１３１〜１３６、２４７、及び２４８で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等を用いてもよい。
【００８５】
【表１０】
2015174544.tif 000021
【００８６】
表１０に示すマーカーは、健常者と各々の疾患との差は小さいため、単独ではうつ病患者、又は双極性障害患者の罹患鑑別には使用できない。しかし、患者がうつ病又は双極性障害のどちらの精神疾患に罹患している場合、両者を鑑別することができる。例えば、うつ病か双極性障害か判別したい場合、配列番号１３１、１３２、１３３、１３６、２４７、又は２４８で示すアミノ酸配列からなるタンパク質等は濃度がカットオフ値より高い場合にうつ病、低い場合に双極性障害であると診断でき、配列番号１３４、又は１３５で示すアミノ酸配列からなるタンパク質等は濃度がカットオフ値より低い場合にうつ病、高い場合に双極性障害と診断できる。それ故、本群に属する精神疾患判定マーカーでうつ病又は双極性障害に罹患した患者に対する補助的判定用のマーカーとして有用である。
【００８７】
（７）統合失調症、うつ病又は双極性障害を判定する群
７群に属する精神疾患判定マーカーを表１１に示す。
【００８８】
【表１１】
2015174544.tif 000022
【００８９】
この群に属する精神疾患判定マーカーは、精神疾患を判定できるマーカーである。具体的には、図１において７群で示す区画に属するマーカーであって、配列番号１３、３４、及び１３７〜１４０で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等をいう。本群の精神疾患判定マーカーを用いれば、被験者が統合失調症、うつ病、双極性障害、統合失調症／双極性障害、統合失調症／うつ病、又はうつ病／双極性障害のいずれかの精神疾患に罹患している可能性が高いことを判定できる。
【００９０】
２．精神疾患判定方法
２−１．概要
本発明の第２の態様は精神疾患判定方法である。本発明は、第１態様に記載の精神疾患判定マーカーを用いて医師を介することなく、生物学的に被験者における精神疾患の有無を判定することができる。
【００９１】
２−２．判定方法
２−２−１．工程
本判定方法は、必須の工程として測定工程及び比較判定工程を含む。また、選択工程として重症度判定工程を含む。以下、各工程について具体的に説明をする。
【００９２】
（１）測定工程
「測定工程」とは、被験者及び健常者から採取された試料の単位量あたりに含まれる第１態様に記載の精神疾患判定マーカーを定量するため、その量を測定してその測定値を得る工程である。
【００９３】
本明細書において「健常者」とは、精神疾患を有さないヒト個体、好ましくはいずれの疾患や異常も有さない健康なヒト個体をいう。本態様で用いる健常者は、性別、年齢、身長、体重等の身体的条件や、人数は特に制限はしないが、好ましくは被験体と同性で、また年齢、身長、及び体重等の身体的条件が同一又は近似である。また、本明細書では複数の健常者からなる集団を「健常者群」とする。
【００９４】
本明細書において「試料」とは、精神疾患判定マーカーであるタンパク質又はその断片を含み得る生物学的試料をいう。例えば、体液、細胞（細胞抽出液を含む）、又はそれから回収されたタンパク質等が該当する。「体液」とは、被験者から直接採取される液体状の生体試料をいう。例えば、脳脊髄液、血液（血清、血漿及び間質液を含む）、又はリンパ液が該当する。本態様の方法において、好ましい試料は、脳脊髄液又はそれから回収されたタンパク質等である。
【００９５】
「採取された試料」とは、前記被験者及び健常者のそれぞれから採取された試料をいう。採取方法は、既知の方法であればよく、特に限定はしない。例えば、試料が脳脊髄液の場合、腰椎穿刺により採取すればよい。腰椎穿刺は、事前に市販の局所麻酔薬を用いることで、痛みを採血以下にすることが可能であり、また無外傷性針を用いることで、副作用を軽減できることから侵襲性が比較的低く、脳脊髄液を採取する場合には好適な方法である。また、試料が体液の場合、採取は、当該分野の公知の方法に基づいて行なえばよい。例えば、血液やリンパ液であれば、公知の採血方法に従えばよい。具体的には、末梢血であれば末梢部の静脈等に注射をして採取すればよい。試料は、採取後、速やかに本発明の判定方法で使用することもできるが、採取後、直ちに氷冷し、遠心により得られた上清を超低温槽で保存したものを解凍し使用してもよい。また、必要に応じて希釈若しくは濃縮、又はヘパリンのような血液凝固阻止剤を添加することもできる。
【００９６】
「単位量」は、容量又は重量の所定の単位であって、例えば、マイクロリットル、ミリリットル、マイクログラム、ミリグラム、グラム等が挙げられる。
【００９７】
本明細書において「測定値」とは、本工程で測定される精神疾患判定マーカーの量を示す値である。測定値は、容量又は重量のような絶対値であってもよく、また濃度、イオン強度、吸光度又は蛍光強度のような相対値であってもよい。
【００９８】
本工程では、被験者由来の試料（「被験者試料」という）と健常者試料由来の試料（「健常者試料」という）のそれぞれに含まれる精神疾患判定マーカーの量を測定する。
【００９９】
本方法で測定すべき精神疾患判定マーカーは、判定すべき精神疾患によって選択すればよい。例えば、被験者が健常状態ではなく、いずれかの精神疾患に罹患しているか否かを判定する場合には、第１態様に記載の７群に属する配列番号１３、３４、及び１３７〜１４０で示される精神疾患判定マーカーのいずれか一以上を選択すればよい。また、被験者が統合失調症／双極性障害に罹患しているか否かを判定する場合には、第１態様に記載の４群に属する配列番号９４〜９８で示される精神疾患判定マーカーのいずれか一以上を選択すればよい。被験者が統合失調症／うつ病に罹患しているか否かを判定する場合には、第１態様に記載の５群に属する配列番号２、４、７、９９〜１０３、１４５、１４６、１７９、及び２３３〜２４０で示される精神疾患判定マーカーのいずれか一以上を選択すればよい。被験者がうつ病／双極性障害に罹患しているか否かを判定する場合には、第１態様に記載の６群に属する配列番号１０４〜１２２、及び２４１で示される精神疾患判定マーカーのいずれか一以上を選択すればよい。また、被験者が統合失調症に罹患しているか否かを判定する場合には、第１態様に記載の１群に属する配列番号１、３、５、６、８〜１３、１５〜２５、３０、４６、１４１〜１４４、１４７〜１５８、及び２４９で示される精神疾患判定マーカーのいずれか一以上を選択すればよい。被験者が双極性障害に罹患しているか否かを判定する場合には、第１態様に記載の２群に属する配列番号６１〜６４、１１４、及び１６３〜１７２で示される精神疾患判定マーカーのいずれか一以上を選択すればよい。そして、被験者がうつ病に罹患しているか否かを判定する場合には、第１態様に記載の３群に属する配列番号１３、１４、１７、５６、６６、７０〜８７、１２３、及び１７４〜１７８、１８０〜２３２で示される精神疾患判定マーカーのいずれか一以上を選択すればよい。
【０１００】
精神疾患判定マーカーの測定方法は、公知のペプチドの定量方法であればよく、特に限定はしない。例えば、免疫学的検出法、アプタマー解析法、又は質量分析法が挙げられる。
【０１０１】
免疫学的検出法は、標的分子と特異的に結合する抗体又はその断片を用いて、本発方法の標的分子である精神疾患判定マーカーを定量する方法である。免疫学的検出法で使用する抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、合成抗体、及び抗体フラグメントのいずれを使用してもよい。
【０１０２】
抗体がポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体の場合、免疫グロブリン分子は、任意のクラス（例えば、IgG、IgE、IgM、IgA、IgD及びIgY）、又は任意のサブクラス（例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2）でよい。抗体は、哺乳動物及び鳥を含めたいずれの動物由来とすることができる。例えば、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、ヤギ、ロバ、ヒツジ、ラクダ、ウマ、ニワトリ又はヒト等が挙げられる。
【０１０３】
組換え抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、又は多重特異性抗体を含む。キメラ抗体は、異なる動物由来の抗体のアミノ酸配列を組み合わせて作製される抗体で、ある抗体の可変領域（V領域）を他の抗体のV領域で置換した抗体である。例えば、第１態様に記載のいずれかの精神疾患判定マーカーと特異的に結合するマウスモノクローナル抗体のV領域をヒト抗体のV領域と置き換え、可変領域（V領域）がマウス由来、C領域がヒト由来となった抗体が該当する。ヒト化抗体は、ヒト以外の哺乳動物、例えば、第１態様に記載のいずれかの精神疾患判定マーカーと特異的に結合するマウス抗体の可変領域（V領域）における相補性決定領域（CDR；CDR1、CDR2及びCDR3）をヒトモノクローナル抗体のCDRとを置換したグラフト抗体である。多重特異性抗体は、多価抗体、すなわち抗原結合部位を一分子内に複数有する抗体において、それぞれの抗原結合部位が異なるエピトープと結合する抗体をいう。例えば、IgGのように2つの抗原結合部位を有する抗体であれば、それぞれの抗原結合部位が第１態様に記載の同一の又は異なる精神疾患判定マーカーと特異的に結合する二重特異性抗体（Bispecific抗体）が挙げられる。
【０１０４】
合成抗体は、化学的方法又は組換えDNA法を用いることによって合成した抗体をいう。例えば、適当な長さと配列を有するリンカーペプチド等を介して、特定の抗体の一以上のVL及び一以上のVHを人工的に連結させた一量体ポリペプチド分子、又はその多量体ポリペプチドが該当する。このようなポリペプチドの具体例としては、一本鎖Fv（scFv ：single chain Fragment oｆ variable region）（Pierce Catalog and Handbook, 1994-1995, Pierce Chemical Co., Rockford, IL参照）、ダイアボディ（diabody）、トリアボディ（triabody）又はテトラボディ(tetrabody)等が挙げられる。免疫グロブリン分子において、VL及びVHは、通常別々のポリペプチド鎖（軽鎖と重鎖）上に位置する。一本鎖Fvは、これら2つのポリペプチド鎖上のV領域を十分な長さの柔軟性リンカーによって連結し、1本のポリペプチド鎖に包含した構造を有する合成抗体断片である。一本鎖Fv内において両V領域は、互いに自己集合して1つの機能的な抗原結合部位を形成することができる。一本鎖Fvは、それをコードする組換えDNAを、公知技術を用いてファージゲノムに組み込み、発現させることで得ることができる。ダイアボディは、一本鎖Fvの二量体構造を基礎とした構造を有する分子である(Holliger et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448)。例えば、上記リンカーの長さが約12アミノ酸残基よりも短い場合、一本鎖Fv内の2つの可変部位は自己集合できないが、ダイアボディを形成させることにより、すなわち、2つの一本鎖Fvを相互作用させることにより、一方のFv鎖のVLが他方のFv鎖のVHと集合可能となり、2つの機能的な抗原結合部位を形成することができる（Marvin et al., 2005, Acta Pharmacol. Sin. 26:649-658）。さらに、一本鎖FvのC末端にシステイン残基を付加させることにより、2本のFv鎖同士のジスルフィド結合が可能となり、安定的なダイアボディを形成させることもできる(Olafsen et al., 2004, Prot. Engr. Des. Sel. 17:21-27)。このようにダイアボディは二価の抗体断片であるが、それぞれの抗原結合部位は、同一エピトープと結合する必要はなく、それぞれが異なるエピトープを認識し、特異的に結合する二重特異性を有していてもよい。トリアボディ、及びテトラボディは、ダイアボディと同様に一本鎖Fv構造を基本としたその三量体、及び四量体構造を有する。それぞれ、三価、及び四価の抗体断片であり、多重特異性抗体であってもよい。
【０１０５】
抗体フラグメントとは、例えば、Fab、F(ab’2）、Fv等が該当する。
【０１０６】
免疫学的検出法には、例えば、酵素免疫測定法（ELISA法、EIA法を含む）、蛍光免疫測定法、放射免疫測定法（RIA）、発光免疫測定法、表面プラズモン共鳴法（SPR法）、水晶振動子マイクロバランス（QCM）法、免疫比濁法、ラテックス凝集免疫測定法、ラテックス比濁法、赤血球凝集反応、粒子凝集反応法、金コロイド法、キャピラリー電気泳動法、ウェスタンブロット法又は免疫組織化学法（免疫染色法）が挙げられる。
【０１０７】
アプタマー解析法は、標的分子と強固、かつ特異的に結合するアプタマーを用いて、本発方法の標的分子である精神疾患判定マーカーを定量する方法である。アプタマーは、立体構造によって標的物質と強固、かつ特異的に結合し、標的物質の機能を特異的に抑制する能力を持つリガンド分子である。アプタマーは、その分子の種類により、核酸アプタマーとペプチドアプタマーに大別することができるが、いずれのアプタマーであってもよい。
【０１０８】
核酸アプタマーは、核酸で構成されるアプタマーをいう。核酸アプタマーを構成する核酸は、DNA、RNA又はそれらの組合せのいずれであってもよい。必要に応じて、PNA、LNA／BNA、メチルホスホネート型DNA、ホスホロチオエート型DNA、2'-O-メチル型RNA等の化学修飾核酸を含むこともできる。
【０１０９】
核酸アプタマーは、第１態様に記載のいずれかの精神疾患判定マーカーを標的分子として、当該分野で公知の方法により作製することができる。例えば、RNAアプタマーであれば、SELEX(systematic evolution of ligands by exponential enrichment)法を用いて試験管内選別により作製することができる。SELEX法とは、ランダム配列領域とその両端にプライマー結合領域を有する多数のRNA分子によって構成されるRNAプールから標的分子である精神疾患判定マーカーに結合したRNA分子を選択し、回収後にRT-PCR反応によって増幅した後、得られたcDNA分子を鋳型として転写を行い、それを次のラウンドのRNAプールにするという一連のサイクルを数〜数十ラウンド繰り返して、精神疾患判定マーカーに対して、より結合力の強いRNAを選択する方法である。ランダム配列領域とプライマー結合領域の塩基配列長は特に限定はしない。一般的にランダム配列領域は、20〜80塩基、プライマー結合領域は、それぞれ15〜40塩基の範囲である。以上の方法によって最終的に得られたRNA分子を精神疾患判定マーカー結合性RNAアプタマーとして利用する。なお、SELEX法は、公知の方法であり、具体的な方法は、例えば、Panら（Proc. Natl. Acad. Sci. 1995, U.S.A.92: 11509-11513）に準じて行えばよい。
【０１１０】
ペプチドアプタマーとは、アミノ酸で構成されるアプタマーで、抗体と同様に、特定の標的分子の表面構造を認識して、特異的に結合する1〜6kDのペプチド分子である。ファージディスプレイ法や細胞表層ディスプレイ法を用いて製造することができる。ペプチドアプタマーの製造法は、当該分野で公知の方法に基づいて作製すればよい。例えば、Whaley, S.R., et al., 2000, Nature, 405, 665-668を参照することができる。
【０１１１】
上記抗体又はアプタマーは、必要に応じて標識されていてもよい。標識は、当該分野で公知の標識物質を利用すればよい。抗体及びペプチドアプタマーの場合、例えば、蛍光色素（フルオレセイン、FITC、ローダミン、テキサスレッド、Cy3、Cy5）、蛍光タンパク質（例えば、PE、APC、GFP）、酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、グルコースオキシダーゼ）、放射性同位元素（例えば、3H、14C、35S）又はビオチン若しくは（ストレプト）アビジンにより標識することができる。また、核酸アプタマーの場合、例えば、放射性同位元素（例えば、32P、3H、14C）、DIG、ビオチン、蛍光色素（例えば、FITC、Texas、cy3、cy5、cy7、FAM、HEX、VIC、JOE、Rox、TET、Bodipy493、NBD、TAMRA）、又は発光物質（例えば、アクリジニウムエスター）が挙げられる。￥標識物質で標識された抗体やアプタマーは、標的タンパク質と結合したアプタマーを検出する際に有用なツールとなり得る。
【０１１２】
質量分析法には、高速液体クロマトグラフ質量分析法（LC-MS）、高速液体クロマトグラフタンデム質量分析法（LC-MS/MS）、ガスクロマトグラフ質量分析法（GC-MS）、ガスクロマトグラフタンデム質量分析法（GC-MS/MS）、キャピラリー電気泳動質量分析法（CE-MS）及びICP質量分析法（ICP-MS）が挙げられる。
【０１１３】
上記分析法は、いずれも当該分野に公知の技術であって、それらの方法に準じて行えばよい。例えば、Green, M.R. and Sambrook, J., 2012, Molecular Cloning: A Laboratory Manual Fourth Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York；Christopher J., et al., 2005, Chemical Review,105:1103-1169；Iijima Y. et al., 2008,.The Plant Journal, 54,949-962；Hirai M. et al.,2004, Proc Natl Acad Sci USA, 101(27) 10205-10210；Sato S, et al., 2004,,The Plant Journal, 40(1)151-163； Shimizu M. et al., 2005, Proteomics, 5,3919-3931に記載の方法に準じて行うことができる。また、各メーカーから各種核酸又はペプチド定量キットが市販されており、それらを利用することもできる。
【０１１４】
なお、前記測定工程における健常者の測定値は、予め健常者又は健常者群から得られた試料中の各精神疾患判定マーカー量を測定しておき、それをデータベース化したものを使用してもよい。
【０１１５】
本工程では、被験者及び健常者の測定値を補正するために、単位量あたりの試料において量的差異のないことが期待される公知のタンパク質を内在性コントロールとして、さらに測定してもよい。このような内在性コントロール用タンパク質には、例えば、アルブミンが挙げられる。
【０１１６】
（２）比較判定工程
「比較判定工程」とは、前記測定工程で得られた測定値に基づいて被験者における精神疾患の罹患可能性を判定する工程である。
【０１１７】
測定値の比較は、前記測定工程で得られた被験者の測定値と健常者若しくは健常者群の測定値間で、又は被験者の測定値と健常者群の測定値に基づいて得られたカットオフ値で、行う。この時、前記内在性コントロール用タンパク質の測定値を用いて、被験者及び健常者の測定値を補正することもできる。
【０１１８】
判定は、被験者の測定値が健常者又は健常者群の測定値よりも有意に高い又は低い場合、又はカットオフ値により陽性に分類された場合、その被験者は、測定工程において選択した精神疾患判定マーカーが判定可能な精神疾患を有している可能性が高いと判定する。例えば、測定工程で第１態様に記載の１群に属する配列番号１〜６で示されるいずれか一を精神疾患判定マーカーとして選択した場合、被験者の測定値が健常者の測定値よりも有意に高いときには、その被験者は統合失調症に罹患している可能性が高いと判定することができる。また、測定工程で第１態様に記載の１群に属する配列番号７〜２５で示されるいずれか一を精神疾患判定マーカーとして選択した場合、その測定値が健常者群の測定値に基づいてあらかじめ定められたカットオフ値により陽性に分類されれば、その被験者は統合失調症に罹患している可能性が高いと判定することができる。一方、測定値が有意に高くない場合、又はカットオフ値により陰性に分類された場合、その被験者は統合失調症に罹患していない可能性が高いと判定する。
【０１１９】
判定は、測定工程で選択し、使用した精神疾患判定マーカーによって行う。例えば、第１態様に記載の７群に属する精神疾患判定マーカーを使用した場合、被験者の測定値が健常者群の測定値に基づいてあらかじめ定められたカットオフ値により陽性に分類された場合、その被験者は、健常状態ではなく、いずれかの精神疾患に罹患している可能性が高いと判定する。
【０１２０】
第１態様に記載の４群に属する配列番号９４で示されるPSA-ACTタンパク質を精神疾患判定マーカーとして使用した場合、被験者の測定値が健常者の測定値よりも有意に高ければ、その被験者は、統合失調症／双極性障害に罹患している可能性が高いと判定する。また、４群に属する配列番号９５〜９８で示される精神疾患判定マーカーを使用した場合、健常者群の測定値に基づいてあらかじめ定められたカットオフ値により陽性に分類された場合、その被験者は、統合失調症／双極性障害に罹患している可能性が高いと判定する。
【０１２１】
第１態様に記載の５群に属する配列番号９９及び２４０で示される精神疾患判定マーカーを使用した場合、被験者の測定値が健常者の測定値よりも有意に高ければ、その被験者は、統合失調症／うつ病に罹患している可能性が高いと判定する。また、５群に属する配列番号２、４、７、１００〜１０３、１４５、１４６、１７９及び２３３〜２３９で示される精神疾患判定マーカーを使用した場合、健常者群の測定値に基づいてあらかじめ定められたカットオフ値により陽性に分類された場合、その被験者は、統合失調症／うつ病に罹患している可能性が高いと判定する。
【０１２２】
第１態様に記載の６群に属する配列番号１０４〜１０７、及び２４１で示される精神疾患判定マーカーを使用した場合、被験者の測定値が健常者の測定値よりも有意に高ければ、その被験者は、うつ病／双極性障害に罹患している可能性が高いと判定する。また、６群に属する配列番号１０８〜１２２で示される精神疾患判定マーカーを使用した場合、健常者群の測定値に基づいてあらかじめ定められたカットオフ値により陽性に分類された場合、その被験者は、うつ病／双極性障害に罹患している可能性が高いと判定する。
【０１２３】
第１態様に記載の１群に属する配列番号１、３、５、６、３０及び１４９〜１５８で示される精神疾患判定マーカーを使用した場合、前述のように被験者の測定値が健常者の測定値よりも有意に高ければ、その被験者は、統合失調症に罹患している可能性が高いと判定する。また、１群に属する配列番号７〜２５、１４１〜１４８、及び２４９で示される精神疾患判定マーカーを使用した場合、健常者群の測定値に基づいてあらかじめ定められたカットオフ値により陽性に分類された場合、その被験者は、統合失調症に罹患している可能性が高いと判定する。
【０１２４】
第１態様に記載の２群に属する配列番号６１、６２、及び１７０〜１７２で示される精神疾患判定マーカーを使用した場合、被験者の測定値が健常者の測定値よりも有意に高ければ、その被験者は、双極性障害に罹患している可能性が高いと判定する。また、２群に属する配列番号６３、６４、１１４、及び１６３〜１６９で示される精神疾患判定マーカーを使用した場合、健常者群の測定値に基づいてあらかじめ定められたカットオフ値により陽性に分類された場合、その被験者は、双極性障害に罹患している可能性が高いと判定する。
【０１２５】
そして、第１態様に記載の３群に属する配列番号１３、１４、１７、５６、７０〜７５、１２３、及び１９３〜２３２で示される精神疾患判定マーカーを使用した場合、被験者の測定値が健常者の測定値よりも有意に高ければ、その被験者は、うつ病に罹患している可能性が高いと判定する。また、３群に属する配列番号６６、７６〜８７、１７４〜１７８、及び１８０〜１９２で示される精神疾患判定マーカーを使用した場合、健常者群の測定値に基づいてあらかじめ定められたカットオフ値により陽性に分類された場合、その被験者は、うつ病に罹患している可能性が高いと判定する。
【０１２６】
（３）重症度判定工程
「重症度判定工程」は、精神疾患の重症度を同定する場合に、選択される工程である。
【０１２７】
本工程では、比較判定工程において、精神疾患を鑑別し、特定していることを前提とする。つまり、重症度判定工程とは、被験者において統合失調症、双極性障害、又はうつ病の罹患を前提として、その精神疾患の重症度をさらに同定する補足的工程である。本工程は、原則として比較判定工程後に行うが、比較判定工程と同時に行うこともできる。
【０１２８】
精神疾患の重症度を同定可能な精神疾患判定マーカー（重症度同定マーカー）は、当該マーカーの試料中の測定値が各精神疾患の所定の評価尺度と相関性を示す。したがって、各重症度同定マーカーの測定値と評価尺度との関係を示す検量線を予め作成しておけばよい。被験者における重症度同定マーカーの測定値と検量線から、その被検者における精神疾患の重症度を容易に同定することができる。例えば、精神疾患判定マーカーの測定値と評価尺度の値が正の比例関係にある場合、測定値が高ければ精神疾患の重症度が高いと判定することができる。
【０１２９】
本工程において統合失調症の重症度を同定する場合には、精神疾患判定マーカーとして配列番号９、１３、２６〜２９、３１〜６０、及び１５９〜１６２で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等を用いる。配列番号２６〜３３で示すアミノ酸配列からなる精神疾患判定マーカーであれば、当該マーカーの測定値はPANSSと相関性を示す。また、配列番号９、１３、３４〜６０、及び１５９〜１６２で示すアミノ酸配列からなる群から選択される精神疾患判定マーカーであれば、当該マーカーの測定値はBACSと相関性を示す。また、双極性障害の重症度を同定する場合であれば、配列番号４７、６５〜６９、及び１７３で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等を用いる。これらの精神疾患判定マーカーの測定値は、HAM-Dと相関性を示す。さらに、うつ病の重症度を同定する場合であれば、配列番号４４、６６、及び８８〜９３で示すアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質等を用いる。これらの精神疾患判定マーカーの測定値は、HAM-Dと相関性を示す。
【０１３０】
２−２−２．組み合わせ
本態様の判定方法では、前記測定工程において、第１態様に記載の精神疾患判定マーカーのいずれか1つを使用すればよいが、2つ以上を組み合わせて測定することもできる。複数の精神疾患判定マーカーを組み合わせて測定することによって、精神疾患の判定精度を一層高めることができる。
【０１３１】
例えば、第１態様に記載の１群、２群、４群及び７群に属する精神疾患判定マーカーを組み合わせる場合が挙げられる。７群の精神疾患判定マーカーの結果から、健常状態ではなく、統合失調症、双極性障害又はうつ病のいずれかの精神疾患に罹患している可能性が高いと判定し、また４群の精神疾患判定マーカーの結果から、その被験者は、うつ病ではなく、統合失調症又は双極性障害に罹患している可能性が高いと判定することができる。続いて、１群及び２群の精神疾患判定マーカーの結果から、その被験者は、それぞれ統合失調症、又は双極性障害に罹患している可能性が高いと判定することができる。
【０１３２】
また、第１態様に記載の１群、３群、５群及び７群に属する精神疾患判定マーカーを組み合わせる場合が挙げられる。７群の精神疾患判定マーカーの結果から、健常状態ではなく、統合失調症、双極性障害又はうつ病のいずれかの精神疾患に罹患している可能性が高いと判定し、また５群の精神疾患判定マーカーの結果から、その被験者は、統合失調症又はうつ病に罹患している可能性が高いと判定することができる。続いて、１群及び３群の精神疾患判定マーカーの結果から、その被験者は、それぞれ統合失調症、又はうつ病に罹患している可能性が高いと判定することができる。
【０１３３】
さらに、第１態様に記載の２群、３群、６群及び７群に属する精神疾患判定マーカーを組み合わせる場合が挙げられる。７群の精神疾患判定マーカーの結果から、健常状態ではなく、統合失調症、双極性障害又はうつ病のいずれかの精神疾患に罹患している可能性が高いと判定し、また６群の精神疾患判定マーカーの結果から、その被験者は、うつ病又は双極性障害に罹患している可能性が高いと判定することができる。続いて、２群及び３群の精神疾患判定マーカーの結果から、その被験者は、それぞれ双極性障害、又はうつ病に罹患している可能性が高いと判定することができる。
【０１３４】
精神疾患判定マーカーの組み合わせは、同一群内からであってもよい。例えば、１群から配列番号２７のIntegrin α1及び配列番号２８のIntegrin β1を選択する場合が挙げられる。これらは生体内で互いにヘテロ二量体を形成することから、組み合わせによってそれぞれの量を測定することで測定精度を高くすることができる。
【実施例１】
【０１３５】
＜精神疾患判定マーカーの単離（１）＞
１．検体の収集と試料の採取
本発明の精神疾患判定マーカーを選択するための検体の提供者は、国立精神・神経医療研究センター（東京、日本）のホームページ、フリーペーパー上の広告、又はセンター病院内に掲示した募集ポスター等で募集した。その結果、300検体以上の提供者が得られた。表１２にその一部である統合失調症患者30例、うつ病患者30例、及び双極性障害患者16例、並びに対照としての健常者30例についての検体コホート情報を示す。【０１３６】
【表１２】
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【０１３７】
表中、Nは各精神疾患及び健常者の総数を、DFは、薬剤を服用していない患者（薬剤フリー）の数を示す。これら106人の脳脊髄液を本実施例における検体とした。患者は、二人以上の精神科医による面接と病歴からDSM-IV（Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders 4th Ed.）に準拠した診断がなされた。健常者は、精神疾患簡易構造化面接法(MINI)にて精神疾患を除外した。被験者には、研究目的や検体の流れ、副作用の頻度などについて説明し、書面にて同意を得た。研究は国立精神・神経医療研究センター倫理委員会の承認が得られている。なお、被験者はいずれも血縁関係のない日本人である。【０１３８】
被験者からの脳脊髄液の採取方法は、従来法に準じて行った。まず、眼底検査を含む神経学的検査の後、第3〜4腰椎間乃至第4〜5腰椎間に局所麻酔を行い、無外傷性針（22G、ユニシス社、UNIEVER穿刺針）にて腰椎穿刺を行い、約10mLの脳脊髄液を採取した。採取開始後、最初の約2mLを一般検体検査用（細胞数、総タンパク質、糖等）に使用し、次の約8mLを精神疾患判定マーカー単離用として低タンパク質吸着チューブ（住友ベークライト、プロテオセーブ15mL）に採取した。採取後、脳脊髄液を直ちに氷冷し、4000gで、15分間、4℃で遠心した。その後、上清を0.5mLずつ低タンパク質吸着チューブに分注し、使用するまで-80度の超低温槽で保存した。【０１３９】
２．脳脊髄液中のタンパク質の解析
脳脊髄液中のタンパク質の解析は、SomaLogic社（USA）の提供するアプタマー解析サービス、SOMAscan premiumにより行った（Lollo et al., 2014, Proteomics doi: 10.1002/pmic.201300187. 又はhttp://www.somalogic.com/）。本解析では、1129種の改変型の核酸アプタマーSOMAmerを用いて、マイクロアレイにより脳脊髄液中のタンパク質と結合したSOMAmerを測定し、各々のタンパク質の定量を行った。同解析はダイナミックレンジの中央値が4.2 log、%CV（変動係数）の中央値が5.1%（上掲論文）と報告されている。本発明者らが行ったELISAによる比較解析でもR2 = 0.60と高い相関が得られた（図示せず）。なお、統計解析は、SPSS(IBM, Ver 20)を用いて行った。【０１４０】
３．結果
1129種の各タンパク質の測定結果と診断及び症状評価との関連を解析した。その結果、健常者群の5〜95パーセンタイルを正常値としたとき、各疾患群で20%以上の症例で異常値を示したタンパク質が延べ250以上、各患者群と健常者群との間に有意差のあるタンパク質が延べ300以上、それぞれの重症度と相関するタンパク質が延べ150以上得られた。その中で、特に強い有意差が認められ、バイオマーカーとしての有用性が極めて高い140種を選択した。それらのタンパク質を表１に示す。各タンパク質をその属性について分類したものが、本明細書において表２〜５、７、９及び１１に示した１〜７群である。【０１４１】
図２は、３群に属する配列番号７０で示す精神疾患判定マーカーの一つSCFsRの測定値分布を示す図である。うつ病患者群は、健常者群と比べて脳脊髄液中のSCFsRが有意に減少していた(性・年齢を考慮したANCOVAでp=0.013)。この有意差は、薬剤フリー（DF)でも顕著に認められた(p<0.001)。一方、統合失調症患者群や双極性障害患者群では、そのような有意差は認められなかった。したがって、３群に属するタンパク質は、うつ病を判定する精神疾患判定マーカーとなり得る。これと同様の結果は、１群に属する統合失調症用の精神疾患判定マーカー及び２群に属する双極性障害用の精神疾患判定マーカーについても見られた。【０１４２】
図３は、１群に属する配列番号７で示す統合失調症用の精神疾患判定マーカーの中で、統合失調症を亜型に細分類することのできるUNC5H3の測定値分布を示す図である。この図では、健常者群における95パーセンタイルをカットオフ値とし、95パーセンタイル以上を陽性とした。95パーセンタイル以上の異常値を示した30例中6例の統合失調症患者は、統合失調症のUNC5H3亜型として細分類することができる。なお、6例中4例は、薬剤フリー検体であり、治療薬による影響の可能性は低いことが示された。同様の結果は、２群に属する双極性障害用の精神疾患判定マーカーや第３群に属するうつ病用の精神疾患判定マーカーについても見られた。【０１４３】
図４は、１群に属する配列番号２９で示す統合失調症用の精神疾患判定マーカーあるST4S6による統合失調症の測定値と評価尺度PANSSによる評価値との関係を示す図である。この図で示すようにST4S6濃度と症状評価尺度であるPANSSとの間には相関があり、ST4S6濃度が高いほど、症状が重かった。したがって、ST4S6を精神疾患判定マーカーに用いることで、統合失調症の有無とその重症度を判定することができる。これと同様の特徴を示す精神疾患判定マーカーが、２群に属する双極性障害用の精神疾患判定マーカーや３群に属するうつ病用の精神疾患判定マーカーの一部についても確認された。【０１４４】
図５は、６群に属する配列番号１０８で示す精神疾患判定マーカーの一つLYN Bの測定値分布を示す図である。うつ病患者群と双極性障害患者群は、健常者群と比べてLYN Bが有意に増加していた(性・年齢を考慮したANCOVAでp<0.01)。一方、統合失調症患者群では、そのような有意差は認められなかった。したがって、６群に属するタンパク質は、うつ病／双極性障害を判定する精神疾患判定マーカーとなり得る。これと同様の結果は、４群に属する統合失調症／双極性障害用の精神疾患判定マーカー及び５群に属する統合失調症／うつ病用の精神疾患判定マーカーについても見られた。【０１４５】
図６は、図５に示したLYN Bの測定値分布図にカットオフ値を記入した図である。カットオフ値は、健常者群における95パーセンタイルとした。うつ病患者30例中7例及び双極性障害16例中6例でLYN Bがカットオフ値以上の陽性であった。LYN Bのような６群に属する精神疾患判定マーカーの一部は、カットオフ値を設定することにより、うつ病／双極性障害の亜型を判定する精神疾患判定マーカーとなり得、またそのような精神疾患判定マーカーを使用することで、うつ病／双極性障害を細分類することも可能なことが示された。同様の結果は、４群に属する統合失調症／双極性障害用の精神疾患判定マーカーや５群に属する統合失調症／うつ病用の精神疾患判定マーカーについても見られた。【０１４６】
図７は、統合失調症とうつ病のいずれに罹患しているかを判定する精神疾患判定マーカーPTHの測定値分布を示す図である。この図で示すように、脳脊髄液中のPTHは、うつ病患者群と比べて統合失調症患者群で有意に減少していた(性・年齢を考慮したANCOVAでp<0.002)。統合失調症群を薬剤フリー例に限定しても、うつ病群と比べて有意に減少していた(p<0.05)。一方、脳脊髄液中のPTHは、統合失調症患者群もうつ病患者群も健常者群に対しては有意差が認められなかった。したがって、このマーカーは、例えば、統合失調症又はうつ病と判定された被験者に対して、統合失調症とうつ病のいずれであるかを適切に判定する得る補助的精神疾患判定マーカーとなり得る。【０１４７】
図８は、７群に属する精神疾患判定マーカーあるVEGF sR3の測定値分布を示す図である。カットオフ値は、健常者群における95パーセンタイルとした。統合失調症の30例中10例、うつ病の30例中8例、及び双極性障害16例中3例でVEGF sR3が陽性（カットオフ値以上）であった。このマーカーを用いれば被験者が健常状態か精神疾患かを判定することができる。
【実施例２】
【０１４８】
＜精神疾患判定マーカーの単離（２）＞
１．検体の収集と試料の採取
国立精神・神経医療研究センターで募集した前述の300以上の検体から、表１２に示した検体コホートとは異なる表１３に示す検体コホートを用いて、実施例１と同じ手順で試料の採取を行った。【０１４９】
【表１３】
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【０１５０】
２．脳脊髄液中のタンパク質の解析
脳脊髄液中のタンパク質の解析も実施例１と同様に行った。【０１５１】
３．結果
1129種の各タンパク質の測定結果と診断及び症状評価との関連を解析した結果、バイオマーカーとしての有用性が極めて高い138種を選択した。このうち、実施例１で得たバイオマーカーと重複するタンパク質が29種存在したことから、新たなバイオマーカーとして109種（配列番号１４１〜２４９）が得られた。これらの新たに得られたタンパク質についても表１に示す。各タンパク質を実施例１と同様にその属性について分類したものが、本明細書において表２〜５、７、９及び１１に示した１〜７群である。
【実施例３】
【０１５２】
＜精神疾患判定マーカーによる判定制度の検証＞
実施例１及び実施例２で得られた各精神疾患判定マーカーが、異なる検体コホートについて精神疾患判定を行った場合にも再現性がみられることを検証した。【０１５３】
本発明の249種の精神疾患判定マーカーのうち、任意に40種を選択し、前述の表１２に示す第１検体コホート、及び表１３に示す第２検体コホートのそれぞれについて、実施例１と同様の方法で独立に解析し、測定分布を検証した。さらに第１検体コホートの測定結果と第２検体コホートの測定結果をZ変換により結合し、その分布を検証した。【０１５４】
図９〜４８に結果を示す。【０１５５】
図９は、第１検体コホートから選択されたうつ病の精神疾患判定マーカーであるFibrinogenについて検証している。（ａ）は第２検体コホートにおける各精神疾患患者の髄液中におけるFibrinogen値の測定分布である。第２検体コホートでも、うつ病患者（MDD）でFibrinogen値が顕著に亢進しており、Fibrinogenのうつ病の精神疾患判定マーカーとしての再現性が確認された。また、（ｂ）からSOMAscanによるFibrinogen測定値はELISAによる測定値と、よく相関していることが立証された。（ｃ）は、第１検体コホートの測定結果と第２検体コホートの測定結果をZ変換により結合した結果である。この図でもFibrinogenは、うつ病患者（MDD)で顕著な亢進が認められた。したがって、脳脊髄液中のFibrinogenの測定により、うつ病の亜型を判定できる。【０１５６】
図１０は、統合失調症用の精神疾患判定マーカーであるPIGFによる統合失調症検体の測定値と統合失調症認知機能簡易評価尺度(BACS)の符号課題の評価値との関係を示す図である。（ａ）で示すように、PIGF濃度とBACS符号課題の評価値との間には相関があり、PIGF濃度が高いほど、符号課題の評価値が低い、すなわち症状が重かった。また、PIGFは統合失調症群で高い傾向が見られた。したがって、PIGFを精神疾患判定マーカーに用いることで、統合失調症に罹患している可能性とその重症度を判定することができる。【０１５７】
図１１〜４８は、各精神疾患判定マーカーの測定分布図で、（ａ）は第１検体コホートにおける測定結果、（ｂ）は第２検体コホートにおける測定結果、（ｃ）は（ａ）と（ｂ）の測定結果をZ変換により結合した結果を示している。各図の精神疾患判定マーカー名については、上記「図面の簡単な説明」において記述した。  いずれの図においても（ａ）〜（ｃ）において、マーカーの対象疾患となる患者群では顕著な差が認められ、精神疾患判定マーカーとしての検出精度の再現性を確認することができた。この結果から、本発明の精神疾患判定マーカーは、任意の検体に対して精神疾患の判定を補助する有効な精神疾患マーカーであることが示された。【０１５８】
本明細書で引用した全ての刊行物、特許及び特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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