(57)【要約】細胞懸濁液中の異物を除去するために用いるろ過器具であって、フィルター容器を透明又は半透明の素材を用い、かつ、フィルターに補足された固形物を容易に取り出せる構造とする。具体的には、フィルター容器を鋏で切断してフィルターに捕捉された固形物を取り出せる構造とする。この構成により、細胞懸濁液中に異物が混入するのを防止するとともに、仮に異物が混入したときには異物を取り出して分析して、異物混入の原因解明が容易になる。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞懸濁液をろ過するためのろ過器具であって、
前記ろ過器具は、細胞懸濁液を内包した容器と連結可能な連結部を備えた流入口と、細胞懸濁液排手段と連結可能な連結部を備えた排出口と、フィルターと、前記フィルターを内部に備えたフィルター容器からなり、
前記フィルター容器は、細胞懸濁液が、流入口から流入しフィルターを通過して排出口から排出されるまで外部と接触しないような形状であり、かつ、
前記フィルター容器の素材は、フィルターに捕捉された固形分が目視で確認できるような透明又は半透明の素材であって、
前記フィルター容器は、フィルターに補足された固形物を容易に取り出せる構造であることを特徴とするろ過器具。
【請求項２】
前記フィルター容器が、鋏で容易に切断可能な素材で構成されていることにより、フィルターに補足された固形物を容易に取り出せる構造であることを特徴とする請求項１に記載のろ過器具。
【請求項３】
前記フィルター容器のフィルター前室部の内径が、流入口及び排出口の内径よりも大きいことを特徴とする請求項１又は２に記載のろ過器具。
【請求項４】
前記フィルター容器は、フィルターを切断又は損傷することなしに、フィルター前室部を鋏で切断することが可能な形状であることを特徴とする請求項１ないし３に記載のろ過器具。
【請求項５】
培養細胞を含む細胞懸濁液を、遠心分離により細胞を含むペレットと上清に分離し、上清を除去し、ペレットに生理食塩水を加えて再懸濁して細胞懸濁液を調製した後、
前記の再懸濁した細胞懸濁液を注射筒に吸引し、前記注射筒に請求項１ないし４に記載のろ過器具の流入口を接続し、当該ろ過器具の排出口に注射針を接続し、
生理食塩水を容れた点滴用容器に前記注射針を刺して、前記細胞懸濁液を注射筒から前記ろ過器具を通して点滴用容器に注入することを特徴とする細胞懸濁液を含む点滴用溶液の調製方法。
【請求項６】
体外で培養された細胞と人体に投与可能な液体によって構成された細胞懸濁液を内包する容器に、請求項１ないし４に記載のろ過器具の流入口を接続し、当該ろ過器具の排出口に細胞懸濁液排出口を接続し、
人体に投与可能な液体を容れた投与用容器に前記細胞懸濁液排出口を接続して、前記細胞懸濁液を、細胞懸濁液を内包する容器から前記ろ過器具を通して投与用容器に注入することを特徴とする細胞懸濁液を含む投与用溶液の調製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞懸濁液中の異物を除去するために用いるろ過器具及びそれを用いた細胞懸濁液を含む点滴用溶液の調製方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
免疫療法その他の治療方法において、培養細胞を含む細胞懸濁液から細胞を分離及び洗浄し、分離された目的細胞を生理食塩水等に再懸濁することによって調製された細胞懸濁液が点滴用溶液として利用されている。細胞を培養する際に必要な液成分と点滴等に用いるときの液成分が異なるため、細胞培養後、一旦細胞を分離し、洗浄した後に、生理食塩水等で再懸濁することにより細胞懸濁液を含む点滴用溶液が調製されることになる。【０００３】
細胞懸濁液から細胞を分離及び洗浄する方法としては、遠心分離によって目的細胞と上清とを分離する方法や細胞懸濁液をフィルター部材に通過させて目的細胞をフィルター部材上に捕捉し、次いでフィルター部材に細胞懸濁液を通過させたのとは逆方向から液体を通過させてフィルター上に捕捉されている目的細胞を回収する方法などが知られている。【０００４】
また、細胞懸濁液を治療に用いる場合、細胞懸濁液に異物が混入することを防止することが必要になる。例えば、遠心分離によって培養細胞を含む細胞懸濁液から細胞を分離及び洗浄するときには、細菌や異物等の混入が防止できる形状の遠心分離用のディスポーザブル容器が提案されている（特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０１１−１２５８１３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
上記のように、培養細胞を含む細胞懸濁液から細胞を分離及び洗浄する工程では異物混入を防止する種々の方法が提案されているが、細胞懸濁液を含む点滴用溶液を調製する場合、目的細胞を分離及び洗浄する工程の後に目的細胞を含む細胞懸濁液を点滴用容器内の生理食塩水に注入する工程があり、分離及び洗浄の工程以外でも異物が混入する危険性がある。【０００７】
また、何らかの原因により異物が混入したときには、その異物を分析し、異物混入の原因を解明し、異物混入原因を解消した上でその後の細胞培養等を行う必要がある。従来技術では、異物混入を防止するという事前予防策は検討されていたが、何らかの原因によって異物が混入したときに、その異物を分析して原因解明を行うという事後対策の重要性は意識されていなかった。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、培養細胞を含む細胞懸濁液から細胞を分離及び洗浄し、目的細胞を再懸濁する細胞懸濁液を含む点滴用溶液を調製する際に、特定のろ過装置を用いることによって、異物混入を防止し、また仮に何らかの原因により異物が混入した場合にはその異物の分析を容易に行うことを目的とする。【０００９】
すなわち、本件の第１の発明は、細胞懸濁液をろ過するためのろ過器具であって、
前記ろ過器具は、細胞懸濁液を内包する容器と連結可能な連結部を備えた流入口と、細胞懸濁液排出手段と連結可能な連結部を備えた排出口と、フィルターと、前記フィルターを内部に備えたフィルター容器からなり、
前記フィルター容器は、細胞懸濁液が、流入口から流入しフィルターを通過して排出口から排出されるまで外部と接触しないような形状であり、
前記フィルター容器の素材は、フィルターに捕捉された固形分が目視で確認できるような透明又は半透明の素材であって、前記フィルター容器は、フィルターに補足された固形物を容易に取り出せる構造であることを特徴とするろ過器具、である。【００１０】
前記ろ過器具では、細胞懸濁液を内包する容器として、注射筒、培養バッグ等があげられる。【００１１】
前記ろ過器具では、細胞懸濁液排出手段として、注射針、ピペットチップ等があげられる。【００１２】
前記フィルター容器は、フィルターに補足された固形物を容易に取り出せる構造であり、具体的には、フィルター容器が、鋏で容易に切断可能な素材で構成されていて、鋏で切断することによりフィルターに捕捉された固形物を容易に取り出せる構造が挙げられる。【００１３】
前記ろ過器具では、フィルター容器のフィルター前室部の内径が、流入口及び排出口の内径よりも大きいことが好ましい。【００１４】
また、前記フィルター容器は、フィルターを切断又は損傷することなしに、フィルター前室部を鋏で切断することが可能な形状であることが好ましい。【００１５】
前記フィルター容器の材質としては、透明又は半透明な素材で、鋏で容易に切断可能であって、かつ細胞と接触しても細胞を損傷しない素材であれば特に限定されない。具体的にはポリ塩化ビニル、ポリエステル、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリスチレン、ポリアミド等の樹脂が例示できる。【００１６】
フィルターは、孔径が１０〜１００μｍであることが好ましい。フィルターの素材は、細胞を損傷しない素材であれば特に限定されず、例えばポリエステル、ポリ塩化ビニル、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリスチレン、ポリアミド、ポリイミド、アラミド、パルプ等が挙げられる。【００１７】
本件の第２の発明は、培養細胞を含む細胞懸濁液を、遠心分離により細胞を含むペレットと上清に分離し、上清を除去し、ペレットに生理食塩水を加えて再懸濁して細胞懸濁液を調製した後、
前記の再懸濁した細胞懸濁液を注射筒に吸引し、前記注射筒に前記第１の発明のろ過器具の流入口を接続し、当該ろ過器具の排出口に注射針を接続し、
生理食塩水を容れた点滴用容器に前記注射針を刺して、前記細胞懸濁液を注射筒から前記ろ過器具を通して点滴用容器に注入することを特徴とする細胞懸濁液を含む点滴用溶液の調製方法、である。【００１８】
本件の第３の発明は、体外で培養された細胞と人体に投与可能な液体によって構成された細胞懸濁液を内包する容器に、前記第１の発明のろ過器具の流入口を接続し、当該ろ過器具の排出口に細胞懸濁液排出口を接続し、
人体に投与可能な液体を容れた投与用容器に前記細胞懸濁液排出口を接続して、前記細胞懸濁液を、細胞懸濁液を内包する容器から前記ろ過器具を通して投与用容器に注入することを特徴とする細胞懸濁液を含む投与用溶液の調製方法、である。【００１９】
人体に投与可能な液体は、生理食塩水であることが好ましい。【００２０】
投与用溶液は、点滴として投与されるもの、皮内・皮下等へ注射されるものであることが好ましい。
【発明の効果】
【００２１】
本発明のろ過器具では、再懸濁した細胞懸濁液を注射筒に吸引した後、点滴用容器に注入するまで、細胞懸濁液が外部と接触しないため、新たな異物混入が防止できる。また、仮に再懸濁した細胞懸濁液中に異物が混入していた場合、ろ過器具のフィルターで異物が除去されることになるが、本発明のろ過器具はフィルター容器が透明又は半透明であるため、その異物の存在が目視によって容易に識別できる。さらに本発明のろ過器具は、フィルター容器を鋏で切断する等の方法によって、フィルターで除去された異物を容易に取り出すことができ、異物の分析を容易に行うことができる。これにより異物混入原因を解析することが容易になる。【００２２】
また、本発明のろ過器具は、フィルター容器のフィルター前室部の内径が、流入口及び排出口の内径よりも大きくすることにより、細胞懸濁液排出時に細胞に過度の圧力がかかることによる細胞の損傷を抑制することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】図１は本発明のろ過器具の実施態様を示す説明図である。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
以下、本発明を実施例により説明するが、本発明は、その要旨を超えない限り実施例に限定されるものではない。
【実施例１】
【００２５】
本実施例のろ過器具の説明図を図１に示す。ある程度の強度を有するポリ塩化ビニルを整形し、流入口１、排出口６を作製した。流入口１と排出口６には、細胞懸濁液排出時に注射筒や注射針がはずれないようにルアーポートを設けた。前室部２、３、５はポリ塩化ビニルを用いて作製した。本実施例で用いたポリ塩化ビニルは、鋏で切断可能な程度に柔軟で、前室部内を目視で確認できる程度に透明な樹脂である。フィルター４には、ポリエステルを材料とする、平均孔径４２μｍのフィルターを使用した。排出口６の前室部側に、フィルター４を設置し、前室部５の部分で圧着して、フィルター４と排出口６を固定した。他方で、前室部２の部分を圧着して、流入口１と前室部を固定した。前室部３の両端は、細胞懸濁液排出時に液体が残留しにくいよう、端が曲線となるようにした。また、細胞懸濁液排出時に圧力がかかりすぎないよう、前室部３の径を流入口１や排出口６の径よりも大きく設定した。【００２６】
次に、本発明のろ過器具を用いた細胞懸濁液を含む点滴用溶液の調製方法について説明する。
目的細胞を細胞培養用培地に懸濁して、通常の方法で細胞を培養した後、細胞培養液を遠心分離によりペレット（細胞）と上清に分離した。上清を吸引除去したのち、遠心管に生理食塩水を加え、細胞懸濁液を調製した。調製した細胞懸濁液を注射筒に吸引した。【００２７】
本発明のろ過器具の流入口１と、細胞懸濁液を内包する注射筒の吸引口とを接続し、排出口６とプラスチック針とを接続した。次いで、生理食塩水を容れた点滴用容器に前記プラスチック針を刺し込み、注射筒から細胞懸濁液を点滴用容器へ注入した。この操作により、細胞懸濁液は、フィルター４によってろ過された後、外気に接触することなく、点滴剤に充填された。【００２８】
細胞懸濁液を点滴用容器に充填した後、フィルター容器内の前室部３に残留物がないか目視で確認した。【００２９】
さらに、フィルター４を切断しないように注意しながら、前室部３をステンレス製鋏で切断した。切断後、前室部３に異物が存在しないか確認した。仮に異物が存在する場合には、異物を取り出して分析を行うことができる。
【産業上の利用可能性】
【００３０】
本発明によれば、細胞懸濁液を含む点滴用溶液を調製する際に、異物の混入を防止することができ、仮に異物が混入したときには、その異物の存在が容易に識別でき、また、その異物の分析が容易に行うことができる。これにより、異物混入の事前防止と、仮に異物が混入したときの事後的対策の両方を同時に行うことができ、簡便かつ安全に細胞懸濁液を含む点滴用溶液を調製することができる。
【符号の説明】
【００３１】
１  流入口
２  前室部の圧着部分
３  前室部
４  フィルター
５  前室部の圧着部分
６  排出口
【図１】
2015037120.tif 000003
【手続補正書】
【提出日】平成28年8月17日(2016.8.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１】
細胞懸濁液をろ過するためのろ過器具であって、
前記ろ過器具は、細胞懸濁液を内包した容器と連結可能な連結部を備えた流入口と、細胞懸濁液排手段と連結可能な連結部を備えた排出口と、フィルターと、前記フィルターを内部に備えたフィルター容器からなり、
前記フィルター容器は、細胞懸濁液が、流入口から流入しフィルターを通過して排出口から排出されるまで外部と接触しないような形状であり、かつ、
前記フィルター容器の素材は、フィルターに捕捉された固形物が目視で確認できるような透明又は半透明の素材であって、
前記フィルター容器は、フィルターに補足された固形物を容易に取り出せる構造であることを特徴とするろ過器具。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
すなわち、本件の第１の発明は、細胞懸濁液をろ過するためのろ過器具であって、
前記ろ過器具は、細胞懸濁液を内包する容器と連結可能な連結部を備えた流入口と、細胞懸濁液排出手段と連結可能な連結部を備えた排出口と、フィルターと、前記フィルターを内部に備えたフィルター容器からなり、
前記フィルター容器は、細胞懸濁液が、流入口から流入しフィルターを通過して排出口から排出されるまで外部と接触しないような形状であり、
前記フィルター容器の素材は、フィルターに捕捉された固形物が目視で確認できるような透明又は半透明の素材であって、前記フィルター容器は、フィルターに補足された固形物を容易に取り出せる構造であることを特徴とするろ過器具、である。
【国際調査報告】
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2015037120.tif 000005
2015037120.tif 000006
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