(57)【要約】  本発明は、炎症を抑制できかつ安全性の高い、新規な成分を含む抗炎症剤を提供することを目的とする。本発明により、スイゼンジノリから抽出されるサクランに由来するスイゼンジノリ由来多糖体低分子化物を用いた抗炎症剤が提供される。スイゼンジノリ由来多糖体低分子化物は、サクランに由来する重量平均分子量が約３００万以下の硫酸化糖を含む糖誘導体である。本発明により、スイゼンジノリ由来多糖体低分子化物を含む医薬組成物、特には、皮膚外用抗炎症剤が提供される。
2015076244.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
重量平均分子量が、２千以上かつ３００万以下であるスイゼンジノリ由来多糖体低分子化物またはそれらの薬理学的に許容される塩誘導体を含む抗炎症剤。
【請求項２】
前記スイゼンジノリ由来多糖体低分子化物の重量平均分子量が、１万以上かつ１００万以下である請求項１に記載の抗炎症剤。
【請求項３】
前記スイゼンジノリ由来多糖体低分子化物が、糖構造体として硫酸化ムラミン酸を含み、かつ、少なくとも下記式：
【化１】
2015076244.tif 000010
（ここで、Ｒ、Ｒ’は糖を示し、式中の任意の−ＯＨは、−ＯＳＯ3または−ＯＣＨ3に置換されてもよい。）
に示す配列を持つ３糖構造と、下記１）〜６）で表される２糖構造：
１）ヘキソースと、キシロースまたはアラビノースであるペントースとの２糖構造、
２）ヘキソースと、フコースまたはラムノースであるデオキシヘキソースとの２糖構造、
３）ペントースとペントースとの２糖構造、
４）ペントースとデオキシヘキソースとの２糖構造、
５）ヘキソサミンとヘキソサミンとの２糖構造、および
６）グルクロン酸またはガラクツロン酸であるウロン酸と、デオキシヘキソースとの２糖構造、
のいずれかを含む糖誘導体である、請求項１または２に記載の抗炎症剤。
【請求項４】
前記スイゼンジノリ由来多糖体低分子化物が、糖構造体として硫酸化ムラミン酸を含み、かつ、少なくとも下記式：
【化２】
2015076244.tif 000011
（ここで、Ｒ、Ｒ’は糖を示し、式中の任意の−ＯＨは、−ＯＳＯ3または−ＯＣＨ3に置換されてもよい。）
に示す配列を持つ３糖構造と、下記１）〜６）で表される２糖構造：
１）ヘキソースと、キシロースまたはアラビノースであるペントースとの２糖構造、
２）ヘキソースと、フコースまたはラムノースであるデオキシヘキソースとの２糖構造、
３）ペントースとペントースとの２糖構造、
４）ペントースとデオキシヘキソースとの２糖構造、
５）ヘキソサミンとヘキソサミンとの２糖構造、および
６）グルクロン酸またはガラクツロン酸であるウロン酸と、デオキシヘキソースとの２糖構造、
の全てを含む糖誘導体の混合物である、請求項１または２に記載の抗炎症剤。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一つに記載の抗炎症剤を含有する皮膚外用炎症治療剤または予防剤。
【請求項６】
請求項１〜４のいずれか一つに記載の抗炎症剤を含有する局所投与炎症治療剤または予防剤。
【請求項７】
重量平均分子量が、２千以上かつ３００万以下であるスイゼンジノリ由来多糖体低分子化物またはそれらの薬理学的に許容される塩誘導体を有効成分として含むアトピー性皮膚炎の治療剤または予防剤。
【請求項８】
前記スイゼンジノリ由来多糖体低分子化物の重量平均分子量が、１万以上かつ１００万以下である請求項７に記載のアトピー性皮膚炎の治療剤または予防剤。
【請求項９】
前記スイゼンジノリ由来多糖体低分子化物が、糖構造体として硫酸化ムラミン酸を含み、かつ、少なくとも下記式：
【化３】
2015076244.tif 000012
（ここで、Ｒ、Ｒ’は糖を示し、式中の任意の−ＯＨは、−ＯＳＯ3または−ＯＣＨ3に置換されてもよい。）
に示す配列を持つ３糖構造と、下記１）〜６）で表される２糖構造：
１）ヘキソースと、キシロースまたはアラビノースであるペントースとの２糖構造、
２）ヘキソースと、フコースまたはラムノースであるデオキシヘキソースとの２糖構造、
３）ペントースとペントースとの２糖構造、
４）ペントースとデオキシヘキソースとの２糖構造、
５）ヘキソサミンとヘキソサミンとの２糖構造、および
６）グルクロン酸またはガラクツロン酸であるウロン酸と、デオキシヘキソースとの２糖構造、
のいずれかを含む糖誘導体である、請求項７または８に記載のアトピー性皮膚炎の治療剤または予防剤。
【請求項１０】
前記スイゼンジノリ由来多糖体低分子化物が、糖構造体として硫酸化ムラミン酸を含み、かつ、少なくとも下記式：
【化４】
2015076244.tif 000013
（ここで、Ｒ、Ｒ’は糖を示し、式中の任意の−ＯＨは、−ＯＳＯ3または−ＯＣＨ3に置換されてもよい。）
に示す配列を持つ３糖構造と、下記１）〜６）で表される２糖構造：
１）ヘキソースと、キシロースまたはアラビノースであるペントースとの２糖構造、
２）ヘキソースと、フコースまたはラムノースであるデオキシヘキソースとの２糖構造、
３）ペントースとペントースとの２糖構造、
４）ペントースとデオキシヘキソースとの２糖構造、
５）ヘキソサミンとヘキソサミンとの２糖構造、および
６）グルクロン酸またはガラクツロン酸であるウロン酸と、デオキシヘキソースとの２糖構造、
の全てを含む糖誘導体の混合物である、請求項７または８に記載のアトピー性皮膚炎の治療剤または予防剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、スイゼンジノリ由来多糖体低分子化物を含む抗炎症剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症とは生体が障害を受けた際に起こす反応であり、細胞や組織の障害に対して免疫系が引き起こす局所的な防御反応である。炎症の兆候として、発赤、腫脹、熱感、疼痛、および機能障害の５大徴候をあげることができる。炎症を抑える抗炎症剤は、主にステロイド系抗炎症薬と非ステロイド系抗炎症薬の2種類に分類される。
ステロイド系抗炎症剤としては、ヒドロコルチゾン、プレドニゾロン、トリアムシノロン等の副腎皮質ホルモンが挙げられ、プロスタグランジン類の合成阻害作用をもつ。しかし、プロスタグランジン類合成阻害のために消化性潰瘍等の副作用、過剰な免疫抑制作用による副作用、副腎皮質機能不全などの副作用を生じる恐れがあるという問題がある。
一方、非ステロイド系抗炎症剤としては、例えば、サリチル酸、インドメタシン、イブプロフェン等が挙げられ、プロスタグランジン類の合成を阻害することにより高い抗炎症活性を示す。しかしながら、その強いプロスタグランジン類合成阻害のために、特に胃腸障害や腎機能障害等の副作用が懸念されるという問題がある。【０００３】
一方、前記したような従来の抗炎症剤の副作用の問題を解消する目的から、天然物から抗炎症作用を有する物質を探索し、新たな抗炎症剤として利用しようとする試みも広く行われている。具体的には、例えば、木材等から得られる酸性キシロオリゴ糖を有効成分とする抗炎症剤（特許文献１：特許公開２００３−２２１３３９号公報）；ヒャクジツセイ、コウカツツジ、モウボクジュ、サラソウジュ、コウザンレキ等から得られる抗炎症性物質を有効成分とする抗炎症剤（特許文献２：特許公開２００１−２２６２７３号公報）；黄杞等から得られるアスチルビン類を有効成分とする抗炎症剤（特許文献３：特許公開平６−２５６１９４号公報）などが提案されている。さらには、天然物であるヒドロキシチロソールと、グルコサミン、ガラクトサミン、グルコサミノグリカンのいずれかを組み合わせた抗炎症剤が提案されている（特許文献４：特開２００８−１２０７１６号公報）。【０００４】
また、ヒアルロン酸、デルマタン硫酸、コンドロイチン硫酸などのグルコサミノグリカンは、抗炎症作用を有しており、医薬品として上市されているものもある。しかし、その効果は十分とはいえず、また、ヒアルロン酸においては、癌化促進に働く可能性を示唆する報告がなされており、安全性に懸念がある。【０００５】
サクランは、日本固有の食用藍藻であるスイゼンジノリから抽出される、重量平均分子量約2000万の新規超高分子多糖体である。サクラン（スイゼンジノリ多糖体）は多くの硫酸基とカルボン酸基、アミノ基を有する両性電解質である。また、サクランは溶液中で濃度に応じて分子構造が変化し、低濃度領域ではナノメートルサイズの粒子状で存在するが、濃度の上昇に伴い、サクラン分子鎖が互いに相互作用し、液晶構造を形成する。【０００６】
一方、サクランの化学構造は、抗炎症作用を含む様々な生理活性を有するグルコサミノグリカンと類似していることから、抗炎症作用および抗アレルギー作用を示す可能性が考えられている。スイゼンジノリからのエタノール抽出物を有効成分とする抗炎症剤が提案されている（特許文献５：特開２００８−２０１６９４号公報）。また、Nagatsuらは、アトピー性皮膚炎モデルマウスにおいて、サクラン水溶液が抗かゆみ・抗アレルギー作用を有することを報告した（非特許文献１：Nagatu et al., Ann. Allergy Asthma Immunol., 108, 117-122, 2012）。さらに、三価金属低減スイゼンジノリ由来多糖類を含む抗アレルギー性皮膚炎剤が提案されている（特許文献６：ＷＯ２０１１／０１３９６号公報）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特許公開２００３−２２１３３９号公報
【特許文献２】特許公開２００１−２２６２７３号公報
【特許文献３】特許公開平６−２５６１９４号公報
【特許文献４】特開２００８−１２０７１６号公報
【特許文献５】特開２００８−２０１６９４号公報
【特許文献６】ＷＯ２０１１／０１３９６号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Nagatu et al., Ann. Allergy Asthma Immunol., 108, 117-122, 2012
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
しかし、サクランの重量平均分子量は約2000万と大きく、高濃度では高粘性となるため、皮膚への浸透性が低下することが予想される。実際、本発明者らは、サクランの抗炎症作用が高濃度にて減弱することが確認しており、サクランそのものを抗炎症剤として用いることは問題があった。
本発明は、炎症を抑制でき、かつ安全性の高い抗炎症剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意研究をした結果、カラゲニン誘発性ラット足蹠浮腫モデルおよび 12-O-テトラデカノイルホルボールエステル-13-アセタート (TPA) 誘発性マウス耳介皮膚炎症モデルにおいてサクランが抗炎症作用を示すことを明らかにし、さらに、特定の重量平均分子量を有するサクランから由来するスイゼンジノリ由来多糖体低分子化物（以下、単に多糖体低分子化物ともいうことがある。）が、優れた抗炎症作用を有することを見出し、本発明を完成した。
本発明は、以下のものを含む。
（１）重量平均分子量が、約２千以上（好ましくは約５千以上、より好ましくは約１万以上）かつ約３００万以下（好ましくは約２００万以下、より好ましくは約１００万以下）であるスイゼンジノリ由来多糖体低分子化物またはそれらの薬理学的に許容される塩誘導体を含む抗炎症剤。
（２）前記スイゼンジノリ由来多糖体低分子化物の重量平均分子量が、約１万以上かつ約１００万以下（好ましくは、約３万以上かつ約１００万以下）である上記（１）に記載の抗炎症剤。
（３）前記スイゼンジノリ由来多糖体低分子化物が、糖構造体として硫酸化ムラミン酸を含み、かつ、少なくとも下記式：【００１１】
【化１】
2015076244.tif 000003
（ここで、Ｒ、Ｒ’は糖を示し、式中の任意の−ＯＨは、−ＯＳＯ3または−ＯＣＨ3に置換されてもよい。）
に示す配列を持つ３糖構造と、下記１）〜６）で表される２糖構造：
１）ヘキソースと、キシロースまたはアラビノースであるペントースとの２糖構造、
２）ヘキソースと、フコースまたはラムノースであるデオキシヘキソースとの２糖構造、
３）ペントースとペントースとの２糖構造、
４）ペントースとデオキシヘキソースとの２糖構造、
５）ヘキソサミンとヘキソサミンとの２糖構造、および
６）グルクロン酸またはガラクツロン酸であるウロン酸と、デオキシヘキソースとの２糖構造、
のいずれかを含む糖誘導体である、前記（１）または（２）に記載の抗炎症剤。
（４）前記スイゼンジノリ由来多糖体低分子化物が、糖構造体として硫酸化ムラミン酸を含み、かつ、少なくとも下記式：【００１２】
【化２】
2015076244.tif 000004
（ここで、Ｒ、Ｒ’は糖を示し、式中の任意の−ＯＨは、−ＯＳＯ3または−ＯＣＨ3に置換されてもよい。）
に示す配列を持つ３糖構造と、下記１）〜６）で表される２糖構造：
１）ヘキソースと、キシロースまたはアラビノースであるペントースとの２糖構造、
２）ヘキソースと、フコースまたはラムノースであるデオキシヘキソースとの２糖構造、
３）ペントースとペントースとの２糖構造、
４）ペントースとデオキシヘキソースとの２糖構造、
５）ヘキソサミンとヘキソサミンとの２糖構造、および
６）グルクロン酸またはガラクツロン酸であるウロン酸と、デオキシヘキソースとの２糖構造、
の全てを含む糖誘導体の混合物である、前記（１）または（２）に記載の抗炎症剤。
（５）前記（１）〜（４）のいずれか一つに記載の抗炎症剤を含有する皮膚外用炎症治療剤または予防剤。
（６）前記（１）〜（４）のいずれか一つに記載の抗炎症剤を含有する局所投与炎症治療剤または予防剤。【００１３】
（７）重量平均分子量が、約２千以上（好ましくは約５千以上、より好ましくは約１万以上）かつ約３００万以下（好ましくは約２００万以下、より好ましくは約１００万以下）であるスイゼンジノリ由来多糖体低分子化物またはそれらの薬理学的に許容される塩誘導体を有効成分として含むアトピー性皮膚炎の治療剤または予防剤。
（８）前記スイゼンジノリ由来多糖体低分子化物の重量平均分子量が、約１万以上かつ約１００万以下（好ましくは、約３万以上かつ約１００万以下）である上記（７）に記載のアトピー性皮膚炎の治療剤または予防剤。
（９）前記スイゼンジノリ由来多糖体低分子化物が、糖構造体として硫酸化ムラミン酸を含み、かつ、少なくとも下記式：【００１４】
【化３】
2015076244.tif 000005
（ここで、Ｒ、Ｒ’は糖を示し、式中の任意の−ＯＨは、−ＯＳＯ3または−ＯＣＨ3に置換されてもよい。）
に示す配列を持つ３糖構造と、下記１）〜６）で表される２糖構造：
１）ヘキソースと、キシロースまたはアラビノースであるペントースとの２糖構造、
２）ヘキソースと、フコースまたはラムノースであるデオキシヘキソースとの２糖構造、
３）ペントースとペントースとの２糖構造、
４）ペントースとデオキシヘキソースとの２糖構造、
５）ヘキソサミンとヘキソサミンとの２糖構造、および
６）グルクロン酸またはガラクツロン酸であるウロン酸と、デオキシヘキソースとの２糖構造、
のいずれかを含む糖誘導体である、前記（７）または（８）に記載のアトピー性皮膚炎の治療剤または予防剤。
（１０）前記スイゼンジノリ由来多糖体低分子化物が、糖構造体として硫酸化ムラミン酸を含み、かつ、少なくとも下記式：【００１５】
【化４】
2015076244.tif 000006
（ここで、Ｒ、Ｒ’は糖を示し、式中の任意の−ＯＨは、−ＯＳＯ3または−ＯＣＨ3に置換されてもよい。）
に示す配列を持つ３糖構造と、下記１）〜６）で表される２糖構造：
１）ヘキソースと、キシロースまたはアラビノースであるペントースとの２糖構造、
２）ヘキソースと、フコースまたはラムノースであるデオキシヘキソースとの２糖構造、
３）ペントースとペントースとの２糖構造、
４）ペントースとデオキシヘキソースとの２糖構造、
５）ヘキソサミンとヘキソサミンとの２糖構造、および
６）グルクロン酸またはガラクツロン酸であるウロン酸と、デオキシヘキソースとの２糖構造、
の全てを含む糖誘導体の混合物である、前記（７）または（８）に記載のアトピー性皮膚炎の治療剤または予防剤。
【発明の効果】
【００１６】
本発明によれば、炎症を抑制でき、かつ安全性の高い抗炎症剤が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】カラゲニン誘発性ラット足蹠浮腫モデルを用いた、スイゼンジノリ由来多糖体低分子化物の反復投与による抗炎症作用を確認した結果である。
【図２】カラゲニン誘発性ラット足蹠浮腫モデルを用いた、スイゼンジノリ由来多糖体低分子化物の前処理による抗炎症作用を確認した結果である。
【図３】カラゲニン誘発性ラット足蹠浮腫モデルを用いた、スイゼンジノリ由来多糖体低分子化物（サクラン（重量平均分子量150万））の前処理による抗炎症作用の濃度依存性を確認した結果である。
【図４】カラゲニン誘発性ラット足蹠浮腫モデルを用いた、スイゼンジノリ由来多糖体低分子化物（サクラン（重量平均分子量94万））の前処理による抗炎症作用の濃度依存性を確認した結果である。
【図５】カラゲニン誘発性ラット足蹠浮腫モデルを用いた、スイゼンジノリ由来多糖体低分子化物（サクラン（重量平均分子量4.5万）の前処理による抗炎症作用の濃度依存性を確認した結果である。
【図６】カラゲニン誘発性ラット足蹠浮腫モデルを用いた、天然型サクランの反復投与による抗炎症作用の濃度依存性を確認した結果である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明で用いられる特定の平均分子量を有するスイゼンジノリ由来多糖体低分子化物とは、スイゼンジノリ（Aphanothece sacrum）由来の重量平均分子量が約２０００万の硫酸化多糖類であるサクランから得ることができる。
【００１９】
スイゼンジノリ（Aphanothece sacrum）は、多数のマユ型（大きさ：３．５〜４．０μ×６〜７μ）の単細胞が寒天質の中に埋没する状態で群体を形成する淡水性藍藻類であり、九州地方の熊本県、福岡県にのみ生育が確認されている。サクランは、ヘキソース構造を持つ糖構造体およびペントース構造を持つ糖構造体がα−グリコシド結合またはβ−グリコシド結合により直鎖状または分岐鎖状に連結した糖鎖ユニットの繰り返し構造を持ち、前記糖鎖ユニットが糖構造体として硫酸化ムラミン酸を含み、かつ、前記糖鎖ユニットにおいては、水酸基１００個当たり２．７個以上の水酸基が硫酸化され、あるいは全元素中で硫黄元素が１．５重量％以上を占める糖誘導体を含むことに特徴を有する。
【００２０】
サクランは、重量平均分子量が約２０００万であり、糖構造体として硫酸化ムラミン酸を含み、且つ、少なくとも下記式：
【００２１】
【化５】
2015076244.tif 000007
（式はヘキソースと、ヘキソースと、Ｎ−アセチルムラミン酸との３糖構造であることを示し、Ｒ、Ｒ’は糖を示し、式中の任意の−ＯＨが−ＯＳＯ3またはＯＣＨ3となっているものを含む。）で示される配列を持つ３糖構造と、下記１）〜６）に列挙する配列：
１）ヘキソースと、キシロースまたはアラビノースであるペントースとの２糖構造、
２）ヘキソースと、フコースまたはラムノースであるデオキシヘキソースとの２糖構造、
３）ペントースとペントースとの２糖構造、
４）ペントースとデオキシヘキソースとの２糖構造、
５）ヘキソサミンとヘキソサミンとの２糖構造、
６）グルクロン酸またはガラクツロン酸であるウロン酸と、デオキシヘキソースとの２糖構造、
を持つ２糖構造の全てを含む糖誘導体である。
【００２２】
スイゼンジノリからサクランを抽出する方法の一例は、例えば、国際公開ＷＯ２００８／０６２５７４号に記載されている。例えば、８０℃の０．１Ｎ−ＮａＯＨ水溶液にスイゼンジノリを入れて数時間攪拌することによってスイゼンジノリからサクランを抽出できる。また、他の一例としては、スイゼンジノリの水分散液をオートクレーブ中において１３５℃で３０分間加熱することによってスイゼンジノリからサクランを抽出できる。抽出されたサクランは、遠心分離、ろ過、アルコール洗浄などによって精製してもよい。また、スイゼンジノリからサクランを抽出する前に、スイゼンジノリを凍結したのち融解させ、その後に色素を除去する工程を行ってもよい。
【００２３】
このように、サクランは、酸性多糖類であり、アルカリ溶液を用いることでスイゼンジノリから抽出できる。スイゼンジノリから抽出されるサクランは、例えば、大東化成(株)から入手することができる。
また、前記サクランを低分子量化する方法としては、例えば、酸性条件化で加熱処理することによる酸加水分解等が挙げられるが、これに限定されるものではない。
また、サクランの低分子量化物は、任意の方法にて、例えばこれに限定されないがゲル濾過クロマトグラフィーを用いて、特定の分子量のものを分画して用いることもできる。
【００２４】
本発明の抗炎症剤またはアトピー性皮膚炎治療・予防剤（以下、これらをまとめて「医薬組成物」という場合がある）に含まれる多糖体低分子化物は、上記サクランから得ることができる多糖体である。本発明で用いる多糖体低分子化物とは、均一な多糖体から構成されてもよくまた種々の多糖体の混合物から構成されてもよいが、通常は、天然のサクランから調製されるので種々の多糖体の混合物からなる。本発明で用いる多糖体低分子化物は、天然のサクランを分解して得ることができるが、調製する方法はそれに限定されない。
【００２５】
本発明の多糖体低分子化物は、上記サクランから得ることができる多糖体であって、重量平均分子量が、約３００万以下、好ましくは約２００万以下、さらに好ましくは約１００万以下であり、また、重量平均分子量の下限は、約２千以上、好ましくは約５千以上、より好ましくは約１万以上の硫酸化糖を含む多糖体、またはそれと同等の構造を持つ多糖体、さらには、多糖体から常法により得られる各種誘導化物（例えば、多糖体の塩誘導体）である。ここでいう重量平均分子量は、常法により測定することができ、例えば、ゲル濾過クロマトグラフィーを用いて測定することができる。
【００２６】
本発明で用いる多糖体低分子化物の重量平均分子量が、例えば、約２千以上かつ約３００万以下とは、用いる多糖体低分子化物を任意の重量分子量を測定する方法（例えば、ゲル濾過クロマトグラフィー）で測定した場合に、その分布から求められる（重量）平均分子量が、約２千〜約３００万の間にはいるサクラン由来の多糖体の混合物であればよく、それら全ての多糖体（またはその混合物）を含む意味で用いられる。本発明で用いる低分子サクランとは、ゲル濾過クロマトグラフィーで分子量を測定した際に、好ましくは一つのピークを示す多糖体の混合物であるが、複数のピークを示す多糖体の混合物であってもよい。また、本発明で用いる多糖体低分子化物とは、用いる多糖体低分子化物またはその混合物が、本発明で規定する重量平均分子量の範囲に入る限り制限がないが、好ましくは、一つのピークを示す混合物であり、より好ましくは、よりシャープな一つのピークを示す混合物である。
【００２７】
本明細書において、例えば、「サクラン（分子量１５０万）」、「サクラン（分子量９４万）、「サクラン（分子量４．５万）」、「サクラン（分子量９００）」とは、サクランを分解または処理することにより得ることができる多糖体低分子化物またはその混合物であって、それぞれ、重量平均分子量が、約１５０万、約９４万、約４．５万、または約９００である多糖体の混合物を意味する。
【００２８】
本発明の多糖体低分子化物は、重量平均分子量の他、平均糖数でも表すことができる（かかる場合は、単糖の重量平均分子量を約１８０と推定することができる）。つまり、本発明の多糖体低分子化物は、上記サクランから得ることができる多糖体であって、平均糖数の上限が、約104以下、好ましくは約103以下であり、また平均糖数の下限は、約10以上、好ましくは約20以上、より好ましくは約50以上、さらに好ましくは約102以上の硫酸化糖を含む多糖体、またはそれと同等の構造を持つ多糖体、さらには、多糖体から常法により得られる各種誘導化物（例えば、多糖体の塩誘導体）である。ここでいう平均糖数とは、糖誘導体の大きさを、それを構成する糖の数に換算して表したものである。例えば、平均糖数が104の糖誘導体から構成されるサクラン誘導物とは、約103〜約105の間の糖数を有する糖誘導体の集合体（104オーダーの糖数（つまり、糖数万〜十万）の誘導体を中心にして分布する）からなるサクラン誘導物を意味し、平均糖数が103の糖誘導体から構成されるサクラン誘導物とは、約102〜約104の間の糖数を有する糖誘導体の集合体（103オーダーの糖数（つまり、糖数千〜万）の誘導体を中心にして分布する）からなるサクラン誘導物を意味し、平均糖数が102の糖誘導体から構成されるサクラン誘導物とは、約101〜約103の間の糖数を有する糖誘導体の集合体（102オーダーの糖数（つまり、糖数百〜千）の誘導体を中心にして分布する）からなるサクラン誘導物を意味する。
上記した重量平均分子量で示した「サクラン（分子量１５０万）」、「サクラン（分子量９４万）、「サクラン（分子量４．５万）」、「サクラン（分子量９００）」は、平均糖数で示すと、それぞれ、「サクラン（104）」、「サクラン(103)」、「サクラン(102)」、「サクラン(4)」と表すことができる。
【００２９】
上記の同等の糖構造を有する多糖体とは、一例としては、糖構造体として硫酸化ムラミン酸を含み、かつ、少なくとも下記式：
【００３０】
【化６】
2015076244.tif 000008
（ここで、Ｒ、Ｒ’は糖を示し、式中の任意の−ＯＨは、−ＯＳＯ3または−ＯＣＨ3に置換されてもよい。）
に示す配列を持つ３糖構造と、下記１）〜６）で表される２糖構造：
１）ヘキソースと、キシロースまたはアラビノースであるペントースとの２糖構造、
２）ヘキソースと、フコースまたはラムノースであるデオキシヘキソースとの２糖構造、
３）ペントースとペントースとの２糖構造、
４）ペントースとデオキシヘキソースとの２糖構造、
５）ヘキソサミンとヘキソサミンとの２糖構造、および
６）グルクロン酸またはガラクツロン酸であるウロン酸と、デオキシヘキソースとの２糖構造、
の全てを含む糖誘導体である。
【００３１】
上記の同等の糖構造を有する多糖体の別の例としては、糖構造体として硫酸化ムラミン酸を含み、かつ、少なくとも下記式：
【００３２】
【化７】
2015076244.tif 000009
（ここで、Ｒ、Ｒ’は糖を示し、式中の任意の−ＯＨは、−ＯＳＯ3または−ＯＣＨ3に置換されてもよい。）
に示す配列を持つ３糖構造と、下記１）〜６）で表される２糖構造：
１）ヘキソースと、キシロースまたはアラビノースであるペントースとの２糖構造、
２）ヘキソースと、フコースまたはラムノースであるデオキシヘキソースとの２糖構造、
３）ペントースとペントースとの２糖構造、
４）ペントースとデオキシヘキソースとの２糖構造、
５）ヘキソサミンとヘキソサミンとの２糖構造、および
６）グルクロン酸またはガラクツロン酸であるウロン酸と、デオキシヘキソースとの２糖構造、
のいずれかを含む糖誘導体である。
【００３３】
所望の重量平均分子量を有するスイゼンジノリ由来多糖体低分子化物は、サクランから公知の方法を組み合わせて得ることができる。例えば、酸性条件下で加熱処理して酸加水分解することにより得ることができる。あるいは、公知の糖鎖の切断方法、例えば酵素を用いて糖鎖をランダムに切断し、所望の重量平均分子量を有する糖誘導体の混合物を分子量に基づいて単離できる。サクランの糖鎖を切断可能な酵素としては、例えば、β−ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼＡ、ヘキソサミニダーゼＢ、α−ガラクトシダーゼＡ、β−グルコシダーゼ、α−Ｌ−イズロニダーゼ、Ｎ−アセチル−α−グルコサミニダーゼ、β−グルクロニダーゼ、ヒアルロニダーゼ、Ｎ−アセチル−β−グルコサミニダーゼ、α−フコシダーゼ、α−マンノシダーゼ、β−マンノシダーゼ、α−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼ、α−ノイラミニダーゼ、α−１，４−グルコシダーゼを挙げることができるが、これらに限定されるものではない。
【００３４】
所望の重量平均分子量を有するサクラン誘導物を調製するに際し、切断された糖鎖末端は、任意に修飾することも可能である。修飾に用いることができる官能基としては、カルボキシ基、アミノ基、硫酸基、などをあげることができるが、これらに限定されるものではない。これらの切断糖鎖が修飾または置換された誘導物も本発明の多糖体低分子化物に含まれる。
また、所望の重量平均分子量を有するスイゼンジノリ由来多糖体低分子化物を調製するに際し、サクランを構成する糖の水酸基または水素基、あるいは糖に結合しているカルボキシ基、アミノ基その他の基を置換または修飾することも可能であり、これらの修飾または置換された誘導物も本発明の多糖体低分子化物に含まれる。
【００３５】
本発明の多糖体低分子化物は、薬理学的に許容できる塩の形で用いることもできる。薬理学的に許容できる塩としては、特に制限がなく、目的に応じて適宜選択をすることができ、例えば、塩酸塩、硫酸塩などの無機塩、クエン酸などの有機酸塩などをあげることができる。
【００３６】
本発明の医薬組成物中の多糖体低分子化物の含有量は、用途・目的に応じて適宜選択することができ、例えば、医薬組成物の全量に対して固形分換算で、０．０００１〜２０重量％、好ましくは０．００１〜１０重量％、さらに好ましくは、０．０１〜５重量％である。
本発明の医薬組成物は、いずれの形態でも用いることができ、これらに限定されないが、例えば、経口剤、注射剤、皮膚外用剤、局所投与剤、点眼剤等をあげることができる。本発明の多糖体低分子化物は、抗炎症作用に加えて保湿作用を有しているので、皮膚外用剤、関節炎などの対する局所投与剤または注射剤、点眼剤としての態様において好ましく用いられる。
【００３７】
皮膚外用剤として用いる場合は、その剤形は任意であり、例えば、液剤、軟膏、貼付剤、エアゾール形態、ハップ剤、テープ剤、粉末等様々な形態で用いることができる。
経口剤として用いる場合は、その剤形は任意であり、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤等様々な形態で用いることができる。
【００３８】
本発明の医薬組成物は、本発明の多糖体低分子化物に加え、目的に応じて適宜選択した成分を含むことができる。例えば、製剤化のための補助成分としては、基剤、安定剤、防腐剤、保存剤、乳化剤、懸濁化剤、溶解剤、溶解補助剤、滑沢剤、矯味剤、着色剤、芳香剤、無痛化剤、賦形剤、結合剤、粘稠剤、緩衝剤などがあげることができる。これらの補助成分を用いて、本発明の薬剤を調製する場合には、当該補助成分を適宜選択して使用すればよい。また、補助成分の使用量は、製剤学的に許容されうる範囲内において、剤形などに応じ、適宜選択すればよい。
より具体的には、例えば、これに制限はされないが、皮膚外用剤として用いる場合は、例えば、賦形剤、結合剤、矯味矯臭剤、乳化剤、界面活性剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、防腐剤、抗酸化剤、安定化剤または吸収促進剤を適宜組み合わせて製剤化することができる。
例えば、注射剤として用いる場合は、例えば、乳化剤、界面活性剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、防腐剤、抗酸化剤、安定化剤または吸収促進剤を適宜組み合わせて製剤化することができる。
【００３９】
本発明の多糖体低分子化物を含む医薬組成物は、炎症を伴う疾患に広く用いることができ、例えば、感染症、関節リウマチ、膠原病、痛風、アレルギー疾患、アトピー性皮膚炎、炎症性腸疾患、間質性肺炎等を患う対象（例えば、患者や動物）に投与することにより、前記患者の炎症を効果的に抑制することができる。
【００４０】
本発明の多糖体低分子化物は、天然物由来のアニオン性多糖体であるので、安全性に優れている。加えて、本発明の多糖体低分子化物は熱に対して比較的安定であり、オートクレーブ滅菌処理を行うことが可能であり、扱いやすく、医薬用途等に適しているという利点を有する。
【実施例】
【００４１】
以下、実施例により、本発明を具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
スイゼンジノリ由来多糖体低分子化物の抗炎症作用を、炎症モデルを用いて確認を行った。
実施例１：サクラン水溶液の調製および炎症モデル
（１）サクラン水溶液の調製
スイゼンジノリ由来多糖体低分子化物としては、サクラン由来の、重量平均分子量が約８００〜１０００の多糖体低分子化物（サクラン（分子量９００））、重量平均分子量が約４．５万の多糖体低分子化物（サクラン（分子量４．５万））、重量平均分子量が約９４万の多糖体低分子化物（サクラン（分子量９４万））、重量平均分子量が約１５０万の多糖体低分子化物（サクラン（分子量１５０万））（いずれも日立化成（株）製）を用いた。各多糖体低分子化物の分子量は、検出器として示差屈折計（株式会社島津製作所製、ＲＩＤ−１０Ａ）を備えたＨＰＬＣシステムにＧＰＣカラム（株式会社日立ハイテクノロジーズ製、ＧＬ−Ｗ５６０）を接続し、溶離液として０．２Ｍ ＮａＣｌ水溶液を用い、流量を１．０ｍＬ／分にて測定を行い、標準物質としてプルランを用いた検量線から重量平均分子量を算出した。各多糖体低分子化物をそれぞれ生理食塩水に溶解して、種々の濃度のサクラン水溶液を調製した
対象としてサクラン（天然型のサクラン）（グリーンサイエンス・マテリアル社製）を用いた。
（２）炎症モデル
炎症モデルとして、カラゲニン誘発性ラット足蹠浮腫モデルを用いた。カラゲニン誘発性ラット足蹠浮腫モデルは、常法に従い、ラットの足蹠皮内に起炎物質であるカラゲニン（λ-カラゲニン（SIGMA社、Lot No.0001408463）の１％水溶液）を１００μL注射して浮腫を起こさせて作成した。【００４２】
実施例２：スイゼンジノリ由来多糖体低分子化物の反復投与による抗炎症作用
ラットの足蹠へのカラゲニン投与直後より、各種スイゼンジノリ由来多糖体低分子化物を含有する水溶液１００μLを１時間毎に１回塗布した。塗布は、６回繰り返した。用いた多糖体低分子化物水溶液の濃度は、サクラン（分子量１５０万）、サクラン（分子量９４万）、およびサクラン（分子量４．５万）が、０．０００５％（w/v）、サクラン（分子量９００）が０．０２％（w/v）とした。対象として、サクラン（０．０５％（w/v））と、生理食塩水を用いた。カラゲニン投与時およびその後は１時間毎に、足容積の増加をプレチスモメーター（plethysmometer）を用いて測定し、測定後はラットの足蹠を毎回ラップで保護した。結果を図１に示す。
その結果、スイゼンジノリ由来多糖体低分子化物（分子量１５０万、９４万、および４．５万）において、抗炎症作用が確認できた。またスイゼンジノリ由来多糖体低分子化物は、サクランに比べ、１／１００の量にて同等またはそれ以上の抗炎症効果を有し、０．０００5%（w/v）の低濃度でも強力な抗炎症作用を示した。【００４３】
実施例３：スイゼンジノリ由来多糖体低分子化物の前処置による抗炎症作用
カラゲニン誘発性足蹠浮腫ラットモデルにおいて、カラゲニンにより炎症を誘発する前のラットの足蹠にスイゼンジノリ由来多糖体低分子化物を塗布し、抗炎症効果を確認した。多糖体低分子化物の塗布は、カラゲニン投与の１時間前に行った。用いた多糖体低分子化物水溶液の濃度は、サクラン（分子量１５０万）、サクラン（分子量９４万）、サクラン（分子量４．５万）ともに０．０００５％（w/v）とした。対象として、サクラン（０．０５％（ｗ／ｖ））と、生理食塩水を用いた。カラゲニン投与開始時およびその後の１時間毎に、足容積の増加をプレチスモメーターにより測定し、測定後はラットの足蹠を毎回ラップで保護した。結果を図２に示す。
その結果、スイゼンジノリ由来多糖体低分子化物（分子量１５０万、９４万および４．５万）において、カラゲニン投与１時間前に１回投与した際にも抗炎症効果が確認できた。またスイゼンジノリ由来多糖体低分子化物は、サクランに比べ、１／１００の量にて同等またはそれ以上の抗炎症効果を示した。【００４４】
実施例４：スイゼンジノリ由来多糖体低分子化物の抗炎症作用の濃度依存性
実施例３と同様にして、カラゲニン誘発性足蹠浮腫ラットモデルにおいて、カラゲニンにより炎症を誘発する前のラットの足蹠にスイゼンジノリ由来多糖体低分子化物を塗布し、抗炎症効果の濃度依存性を確認した。用いた多糖体低分子化物水溶液の各濃度は、０．０００５％（w/v）、０．００５％（w/v）、０．０１％（w/v）とし、対象として、サクラン（０．０５％（w/v））と、生理食塩水を用いた。サクラン（分子量１５０万）の結果を図３に、サクラン（分子量９４万）の結果を図４に、サクラン（分子量４．５万）の結果を図５に示す。いずれの低分子サクランにおいても、濃度依存的な抗炎症作用を示した。【００４５】
比較例１：サクラン（天然型サクラン）による抗炎症作用の濃度依存性
実施例２と同様にして、ラットの足蹠へのカラゲニン投与直後より、各種濃度のサクラン（天然型サクラン）を含有する水溶液１００μLを１時間毎に１回塗布した。塗布は、６回繰り返した。用いたサクラン水溶液の濃度は、０．０１％（w/v）、０．０５％（w/v）、０．１％（w/v）、および０．２％（w/v）とした。対象として、生理食塩水を用いた。カラゲニン投与時およびその後は１時間毎に、足容積の増加を、プレシスモメーターを用いて測定し、測定後はラットの足蹠を毎回ラップで保護した。結果を図６に示す。
天然型サクランでは、その抗炎症効果は、濃度を増大させると減弱することが判った。【００４６】
以上の結果からわかるように、スイゼンジノリ由来多糖体低分子化物は、天然型サクラン（低分子化していないサクラン）に比べ、強力かつ濃度依存的な抗炎症作用を示すことが示唆され、優れた抗炎症薬としての利用が可能であることが判った。また、スイゼンジノリ由来多糖体低分子化物の場合は、天然型サクランとは異なり、広範な投与濃度の設定が可能である。【００４７】
上記の記載は、本発明の目的および対象を単に説明するものであり、添付の特許請求の範囲を限定するものではない。添付の特許請求の範囲から離れることなしに、記載された実施態様に対しての、種々の変更および置換は、本明細書に記載された教示より当業者にとって明らかである。
【産業上の利用可能性】
【００４８】
本発明のスイゼンジノリ由来多糖体低分子化物は、抗炎症剤の有効成分として有用である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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