(57)【要約】  本発明は、式（Ｉ）：【化１】2016117666.tif 000009（式中、Ａｒ１及びＡｒ２は同一又は異なり、置換又は無置換の芳香族基であり、Ｘは−ＣＨ２Ｏ−又は−ＣＨ＝ＣＨ−である。）で示される化合物、その塩又はそれらの溶媒和物を含有するＨＩＶ−１感染細胞殺傷剤；並びにＨＩＶ−１感染の治療又は予防において同時に、別々に、又は順次に投与するための組み合わせ製剤であって、２つの別個の製剤：（ａ）式（Ｉ）で示される化合物、その塩又はそれらの溶媒和物を含有する製剤、及び（ｂ）抗ＨＩＶ−１薬を含有する製剤を含む組み合わせ製剤に関する。
2016117666.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）：
【化１】
2016117666.tif 000008
（式中、Ａｒ１及びＡｒ２は同一又は異なり、置換又は無置換の芳香族基であり、Ｘは−ＣＨ２Ｏ−又は−ＣＨ＝ＣＨ−である。）
で示される化合物、その塩又はそれらの溶媒和物を含有するＨＩＶ−１感染細胞殺傷剤。
【請求項２】
前記式（Ｉ）において、Ａｒ１及びＡｒ２は同一又は異なり、フェニル基又はピリジル基を表し、当該フェニル基又はピリジル基はアミノ基、Ｃ１−６−アルキル基及びハロゲン原子から選ばれる１以上の置換基で置換されていてもよい請求項１記載のＨＩＶ−１感染細胞殺傷剤。
【請求項３】
前記式（Ｉ）において、Ａｒ１はピリジル基であり、Ａｒ２はアミノ基及びハロゲン原子から選ばれる１以上の置換基で置換されていてもよいフェニル基である請求項１記載のＨＩＶ−１感染細胞殺傷剤。
【請求項４】
ＨＩＶ−１感染者であって、がんに罹患していない者を投与対象とする請求項１〜３のいずれか１項に記載のＨＩＶ−１感染細胞殺傷剤。
【請求項５】
請求項１に記載の式（Ｉ）で示される化合物、その塩又はそれらの溶媒和物と、抗ＨＩＶ−１薬とを含有するＨＩＶ−１感染の治療又は予防用組成物。
【請求項６】
抗ＨＩＶ−１薬がＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤から選ばれる少なくとも１種である請求項５記載のＨＩＶ−１感染の治療又は予防用組成物。
【請求項７】
ＨＩＶ−１感染の治療又は予防において同時に、別々に、又は順次に投与するための組み合わせ製剤であって、２つの別個の製剤：
（ａ）請求項１に記載の式（Ｉ）で示される化合物、その塩又はそれらの溶媒和物を含有する製剤、及び
（ｂ）抗ＨＩＶ−１薬を含有する製剤
を含む組み合わせ製剤。
【請求項８】
抗ＨＩＶ−１薬がＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤から選ばれる少なくとも１種である請求項７記載の組み合わせ製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＨＩＶ−１感染を治療又は予防するために用いられる薬剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
２０１３年における全世界のＨＩＶ−１感染者数は約３，５００万人、ＨＩＶ−１新規感染者は約２１０万人であり、ＨＩＶ−１感染症は、依然として、世界的に公衆衛生上の大きな問題となっている。【０００３】
しかし、現在の抗ＨＩＶ−１薬は、ＨＩＶ−１増殖を抑制することはできるが、ＨＩＶ−１感染細胞を感染者体内より排除することはできない。よって、ＨＩＶ−１感染者は生涯にわたり抗ＨＩＶ−１薬を服用しなければならず、長期服用による抗ＨＩＶ−１薬の慢性毒性や薬剤耐性ＨＩＶ−１の出現が問題になっている。そのため、現在、ＨＩＶ−１感染症に対する根治療法開発の必要性が高まっている。また、治療期間を約４０年間と暫定した場合、ＨＩＶ−１感染者一人あたり医療費は約１億円かかるとされる高額な医療費は社会的に大きな問題となっており、ＨＩＶ−１根治療法の開発は世界中から望まれている。【０００４】
ＨＩＶ−１感染症の完治が困難となっている主な原因はＨＩＶ−１潜伏感染細胞の存在である。潜伏感染細胞は、主に寿命期間の長い休止期メモリーＣＤ４＋Ｔ細胞のＨＩＶ−１感染細胞であり、それらの細胞においてＨＩＶ−１はゲノムＤＮＡの中にプロウイルスＤＮＡとして存在し、増殖刺激など細胞活性化刺激のない状態ではＨＩＶ−１粒子やＨＩＶ−１蛋白はほとんど産生されないが、活性化刺激を受けるとＨＩＶ−１産生を開始する。現在の抗ＨＩＶ−１薬のほとんどはＨＩＶ−１由来の酵素をターゲットとしているので、ＨＩＶ−１産生を抑えることはできるが、ＨＩＶ−１潜伏感染細胞数を減少させることはできない。そのため、ＨＩＶ−１根治療法の確立には、ＨＩＶ−１潜伏感染細胞をターゲットとした治療法の開発が必要である。【０００５】
ヒストンデアセチラーゼの働きを抑えて、ヒストンの高アセチル化を引き起こすことにより遺伝子発現に影響するヒストンデアセチラーゼ（histone deacetylase, ＨＤＡＣ）阻害剤は、がん遺伝子あるいはがん抑制因子の発現を変化させることにより、抗腫瘍効果を発揮する。すでに、いくつかのＨＤＡＣ阻害剤は、固形及び血液学的腫瘍に対する治療法として、単独あるいは併用療法として、臨床開発の初期段階にある。【０００６】
一方、Ｃ型肝炎ウイルス感染症と肝細胞がん、ピロリ菌感染と胃がんなど、慢性感染症と発がんには関連性があることが知られている。これには、炎症性シグナル伝達系の活性化や各種遺伝子の発現誘導など、慢性炎症としてがんと共通する分子メカニズムを持つことが関与していると考えられている。【０００７】
最近、エンチノスタット（entinostat）、ボリノスタット（vorinostat）等のいくつかのＨＤＡＣ阻害剤はＨＩＶ−１潜伏感染細胞（リザーバー細胞）を活性化して、ＨＩＶ−１産生を誘導することが報告された（非特許文献１）。【０００８】
特許文献１及び２、並びに非特許文献２には、ＨＤＡＣ阻害剤であるエンチノスタット、チダミド（chidamide）等のベンズアミド誘導体が悪性腫瘍、自己免疫疾患、皮膚病、寄生虫感染症の治療・改善剤として有用であることが記載されている。【０００９】
これまで、エンチノスタットによるＨＩＶ−１感染ヒト単核球に対する特異的細胞死誘導効果に関する報告はない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特開平１０−１５２４６２号公報
【特許文献２】特表２００７−５２７３６２号公報
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ricky W. Johnstone, Nature Reviews Drug Discovery 1, 287-299 (1 April 2002)
【非特許文献２】Qing-Wei Zhang and Jian-Qi Li, Bull. Korean Chem. Soc. 2012, Vol. 33, No. 2 535 (http://dx.doi.org/10.5012/bkcs.2012.33.2.535)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、ＨＩＶ−１潜伏感染細胞に対し特異的に細胞死を誘導できる薬剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、ＨＤＡＣ阻害剤は、慢性感染細胞であるＨＩＶ−１潜伏感染細胞に対し特異的に細胞死を誘導できる可能性があるのではないかと着想した。【００１４】
そこで、in vitroにおいて、ヒト末梢血単核球ＨＩＶ−１慢性感染細胞モデルを作製し、ＨＤＡＣ阻害剤であるエンチノスタットを作用させた結果、ＨＩＶ−１感染ヒト末梢血単核球に対して特異的、選択的に細胞死を誘導した。【００１５】
しかし、エンチノスタットは感染細胞においてＨＩＶ−１産生を活性化させ、二次感染を引き起こす可能性がある。そのため、エンチノスタット単独使用では、新たなＨＩＶ−１感染細胞を産生してしまう。そこで、ＨＤＡＣ阻害剤とは作用点が異なり、ＨＩＶ−１複製の後期課程に作用してＨＩＶ−１の複製を抑制するプロテアーゼ阻害剤との併用試験を行ったところ、ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤であるネルフィナビル（nelfinavir, ＮＦＶ）及びサキナビル（saquinavir, ＳＱＶ）は、いずれも、エンチノスタット存在下において、濃度依存性にＨＩＶ−１産生を抑制したが、エンチノスタットによるＨＩＶ−１感染細胞特異的な細胞死誘導効果には影響を与えなかった。これらの結果から、エンチノスタットと、ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤等の抗ＨＩＶ−１薬との併用により、エンチノスタットによるＨＩＶ−１産生活性化による二次感染を抑制しながらＨＩＶ−１感染細胞数を減少させることにより、ＨＩＶ−１感染症を根治できる可能性があると考えられた。【００１６】
すなわち、本発明の要旨は次のとおりである。
（１）下記式（Ｉ）：
【化１】
2016117666.tif 000003
（式中、Ａｒ１及びＡｒ２は同一又は異なり、置換又は無置換の芳香族基であり、Ｘは−ＣＨ２Ｏ−又は−ＣＨ＝ＣＨ−である。）
で示される化合物、その塩又はそれらの溶媒和物を含有するＨＩＶ−１感染細胞殺傷剤。
（２）前記式（Ｉ）において、Ａｒ１及びＡｒ２は同一又は異なり、フェニル基又はピリジル基を表し、当該フェニル基又はピリジル基はアミノ基、Ｃ１−６−アルキル基及びハロゲン原子から選ばれる１以上の置換基で置換されていてもよい前記（１）に記載のＨＩＶ−１感染細胞殺傷剤。
（３）前記式（Ｉ）において、Ａｒ１はピリジル基であり、Ａｒ２はアミノ基及びハロゲン原子から選ばれる１以上の置換基で置換されていてもよいフェニル基である前記（１）に記載のＨＩＶ−１感染細胞殺傷剤。
（４）ＨＩＶ−１感染者であって、がんに罹患していない者を投与対象とする前記（１）〜（３）のいずれかに記載のＨＩＶ−１感染細胞殺傷剤。
（５）前記（１）に記載の式（Ｉ）で示される化合物、その塩又はそれらの溶媒和物と、抗ＨＩＶ−１薬とを含有するＨＩＶ−１感染の治療又は予防用組成物。
（６）抗ＨＩＶ−１薬がＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤から選ばれる少なくとも１種である前記（５）に記載のＨＩＶ−１感染の治療又は予防用組成物。
（７）ＨＩＶ−１感染の治療又は予防において同時に、別々に、又は順次に投与するための組み合わせ製剤であって、２つの別個の製剤：
（ａ）前記（１）に記載の式（Ｉ）で示される化合物、その塩又はそれらの溶媒和物を含有する製剤、及び
（ｂ）抗ＨＩＶ−１薬を含有する製剤
を含む組み合わせ製剤。
（８）抗ＨＩＶ−１薬がＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤から選ばれる少なくとも１種である前記（７）に記載の組み合わせ製剤。
【発明の効果】
【００１７】
本発明のＨＩＶ−１感染細胞殺傷剤によれば、ＨＩＶ−１潜伏感染細胞に対し特異的に細胞死を誘導できる。また、本発明のＨＩＶ−１感染細胞殺傷剤と、ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤等の抗ＨＩＶ−１薬との併用により、前記式（Ｉ）で示される化合物によるＨＩＶ−１産生活性化による二次感染を抑制しながらＨＩＶ−１感染細胞数を減少させることにより、ＨＩＶ−１感染症を根治できる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】実施例２で採用した実験手順を示す。
【図２】各濃度のネルフィナビル（ＮＦＶ）で処理されたＨＩＶ−１感染（「ＨＩＶ」）及び非感染（「Mock」）ヒト末梢血単核球（peripheral blood mononuclear cell, ＰＢＭＣ）におけるエンチノスタット（entinostat）又はボリノスタット（vorinostat）の作用を示すグラフである。
【図３】各濃度のサキナビル（ＳＱＶ）で処理されたＨＩＶ−１感染（「ＨＩＶ」）及び非感染（「Mock」）ヒト末梢血単核球（peripheral blood mononuclear cell, ＰＢＭＣ）におけるエンチノスタット（entinostat）又はボリノスタット（vorinostat）の作用を示すグラフである。
【図４】各濃度のネルフィナビル（ＮＦＶ）で処理されたＨＩＶ−１感染（「ＨＩＶ」）及び非感染（「Mock」）ヒト末梢血単核球（peripheral blood mononuclear cell, ＰＢＭＣ）における各濃度のエンチノスタット（entinostat）の作用を示すグラフである。
【図５】実施例３で採用した実験手順を示す。
【図６】プロテアーゼ阻害剤による前処理なしで行ったＨＩＶ−１感染（「ＨＩＶ」）及び非感染（「Mock」）ヒト末梢血単核球におけるネルフィナビル（ＮＦＶ）とエンチノスタットの併用投与の結果を示すグラフである。
【図７】プロテアーゼ阻害剤による前処理なしで行ったＨＩＶ−１感染（「ＨＩＶ」）及び非感染（「Mock」）ヒト末梢血単核球におけるダルナビル（ＤＲＶ）とエンチノスタットの併用投与の結果を示すグラフである。
【図８】実施例４で採用した実験手順を示す。
【図９】ＨＩＶ−１感染（「ＨＩＶ」）及び非感染（「Mock」）ヒト末梢血単核球におけるエンチノスタット又はチダミドによる処理の結果を示すグラフである。
【図１０】実施例５で採用した実験手順を示す。
【図１１】実施例５の実験（１）の結果を示す。
【図１２】実施例５の実験（２）の結果を示す。
【図１３】実施例６で採用した実験手順を示す。
【図１４】実施例６の結果を示す。
【図１５】実施例６（ドルテグラビル（ＤＴＧ）を使用）で採用した実験手順を示す。
【図１６】実施例６において、ドルテグラビル（ＤＴＧ）を使用した場合の結果を示す。
【図１７】ＨＩＶ−１感染（「ＨＩＶ」）及び非感染（「Mock」）ＣＤ４陽性Ｔリンパ球（ＣＤ４Ｔ）におけるエンチノスタットによる処理の結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００２０】
前記式（Ｉ）においてＡｒ１又はＡｒ２で表される芳香族基としては、例えばフェニル基、トリル基、ナフチル基等の芳香族炭化水素基；フリル基、チエニル基、ピロリル基、オキサゾリル基、イソオキサゾリル基、チアゾリル基、イソチアゾリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、ピリジル基、ピリミジニル基、ピリダジニル基、ピラジニル基、キノリル基、イソキノリル基等の芳香族複素環基が挙げられる。
【００２１】
前記式（Ｉ）においてＡｒ１又はＡｒ２で表される芳香族基における置換基としては、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ヘキシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基等のＣ１−６−アルキル基；メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ブトキシ基、イソブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基、ペンチルオキシ基、イソペンチルオキシ基、ヘキシルオキシ基、シクロプロピルオキシ基、シクロブチルオキシ基、シクロペンチルオキシ基、シクロヘキシルオキシ基等のＣ１−６−アルコキシ基；メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、プロポキシカルボニル基、イソプロポキシカルボニル基、ブトキシカルボニル基、イソブトキシカルボニル基、ｓｅｃ−ブトキシカルボニル基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基、ペンチルオキシカルボニル基、イソペンチルオキシカルボニル基、シクロプロピルオキシカルボニル基、シクロブチルオキシカルボニル基、シクロペンチルオキシカルボニル基等のＣ１−６−アルコキシ−カルボニル基；水酸基；フェニル基、トリル基、ナフチル基等の芳香族炭化水素基；フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等のハロゲン原子；ベンジル基、フェネチル基等のアラルキル基；ホルミル基、アセチル基、プロピオニル基（プロパノイル基）、ブチリル基（ブタノイル基）、バレリル基（ペンタノイル基）、ヘキサノイル基等のＣ１−６−脂肪族アシル基；ベンゾイル基、トルオイル基等の芳香族アシル基（アロイル基）；アラルキルオキシ基、カルボキシル基、アミノ基、Ｃ１−６−アルキルアミノ基、ジＣ１−６−アルキルアミノ基が挙げられる。
【００２２】
Ａｒ１又はＡｒ２で表される芳香族基としては、置換又は無置換のフェニル基及びピリジル基（２−ピリジル基、３−ピリジル基、４−ピリジル基）が好ましい。
【００２３】
置換されたフェニル基としては、例えば４−アミノフェニル基、３−アミノフェニル基、２−アミノフェニル基、２−アミノ−４−フルオロフェニル基、２−アミノ−４−クロロフェニル基、２−アミノ−５−フルオロフェニル基、２−アミノ−５−クロロフェニル基、４−メチルフェニル基（ｐ−トリル基）、３−メチルフェニル基（ｍ−トリル基）、２−メチルフェニル基（ｏ−トリル基）、４−エチルフェニル基、３−エチルフェニル基、２−エチルフェニル基、４−ｎ−プロピルフェニル基、４−イソプロピルフェニル基、２−イソプロピルフェニル基、４−ｎ−ブチルフェニル基、４−イソブチルフェニル基、４−ｓｅｃ−ブチルフェニル基、２−ｓｅｃ−ブチルフェニル基、４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル基、３−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル基、２−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル基、４−ｎ−ペンチルフェニル基、４−イソペンチルフェニル基、２−ネオペンチルフェニル基、４−ｔｅｒｔ−ペンチルフェニル基、４−ｎ−ヘキシルフェニル基、４−（２−エチルブチル）フェニル基、４−ｎ−ヘプチルフェニル基、４−ｎ−オクチルフェニル基、４−（２−エチルヘキシル）フェニル基、４−ｔｅｒｔ−オクチルフェニル基、４−ｎ−デシルフェニル基、４−ｎ−ドデシルフェニル基、４−ｎ−テトラデシルフェニル基、４−シクロペンチルフェニル基、４−シクロヘキシルフェニル基、４−（４−メチルシクロヘキシル）フェニル基、４−（４−ｔｅｒｔ−ブチルシクロヘキシル）フェニル基、３−シクロヘキシルフェニル基、２−シクロヘキシルフェニル基、２，４−ジメチルフェニル基、２，５−ジメチルフェニル基、３，４−ジメチルフェニル基、３，５−ジメチルフェニル基、２，６−ジメチルフェニル基、２，４−ジエチルフェニル基、２，３，５−トリメチルフェニル基、２，３，６−トリメチルフェニル基、３，４，５−トリメチルフェニル基、２，６−ジエチルフェニル基、２，５−ジイソプロピルフェニル基、２，６−ジイソブチルフェニル基、２，４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル基、２，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル基、４，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−メチルフェニル基、５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−メチルフェニル基、４−ｔｅｒｔ−ブチル−２，６−ジメチルフェニル基、４−メトキシフェニル基、３−メトキシフェニル基、２−メトキシフェニル基、４−エトキシフェニル基、３−エトキシフェニル基、２−エトキシフェニル基、４−ｎ−プロポキシフェニル基、３−ｎ−プロポキシフェニル基、４−イソプロポキシフェニル基、２−イソプロポキシフェニル基、４−ｎ−ブトキシフェニル基、４−イソブトキシフェニル基、２−ｓｅｃ−ブトキシフェニル基、４−ｎ−ペンチルオキシフェニル基、４−イソペンチルオキシフェニル基、２−イソペンチルオキシフェニル基、４−ネオペンチルオキシフェニル基、２−ネオペンチルオキシフェニル基、４−ｎ−ヘキシルオキシフェニル基、２−（２−エチルブチル）オキシフェニル基、４−ｎ−オクチルオキシフェニル基、４−ｎ−デシルオキシフェニル基、４−ｎ−ドデシルオキシフェニル基、４−ｎ−テトラデシルオキシフェニル基、４−シクロヘキシルオキシフェニル基、２−シクロヘキシルオキシフェニル基、２−メチル−４−メトキシフェニル基、２−メチル−５−メトキシフェニル基、３−メチル−４−メトキシフェニル基、３−メチル−５−メトキシフェニル基、３−エチル−５−メトキシフェニル基、２−メトキシ−４−メチルフェニル基、３−メトキシ−４−メチルフェニル基、２，４−ジメトキシフェニル基、２，５−ジメトキシフェニル基、２，６−ジメトキシフェニル基、３，４−ジメトキシフェニル基、３，５−ジメトキシフェニル基、３，５−ジエトキシフェニル基、３，５−ジ−ｎ−ブトキシフェニル基、２−メトキシ−４−エトキシフェニル基、２−メトキシ−６−エトキシフェニル基、３，４，５−トリメトキシフェニル基、４−ヒドロキシフェニル基、３−ヒドロキシフェニル基、２−ヒドロキシフェニル基、４−メトキシカルボニルフェニル基、３−メトキシカルボニルフェニル基、２−メトキシカルボニルフェニル基、４−ビフェニリル基、３−ビフェニリル基、２−ビフェニリル基、４−（４−メチルフェニル）フェニル基、４−（３−メチルフェニル）フェニル基、４−（４−メトキシフェニル）フェニル基、４−（４−ｎ−ブトキシフェニル）フェニル基、２−（２−メトキシフェニル）フェニル基、４−（４−クロロフェニル）フェニル基、３−メチル−４−フェニルフェニル基、３−メトキシ−４−フェニルフェニル基、ターフェニル基、３，５−ジフェニルフェニル基、４−フルオロフェニル基、３−フルオロフェニル基、２−フルオロフェニル基、４−クロロフェニル基、３−クロロフェニル基、２−クロロフェニル基、４−ブロモフェニル基、２−ブロモフェニル基、２，３−ジフルオロフェニル基、２，４−ジフルオロフェニル基、２，５−ジフルオロフェニル基、２，６−ジフルオロフェニル基、３，４−ジフルオロフェニル基、３，５−ジフルオロフェニル基、２，３−ジクロロフェニル基、２，４−ジクロロフェニル基、２，５−ジクロロフェニル基、３，４−ジクロロフェニル基、３，５−ジクロロフェニル基、２，５−ジブロモフェニル基、２，４，６−トリクロロフェニル基、２−フルオロ−４−メチルフェニル基、２−フルオロ−５−メチルフェニル基、３−フルオロ−２−メチルフェニル基、３−フルオロ−４−メチルフェニル基、２−メチル−４−フルオロフェニル基、２−メチル−５−フルオロフェニル基、３−メチル−４−フルオロフェニル基、２−クロロ−４−メチルフェニル基、２−クロロ−５−メチルフェニル基、２−クロロ−６−メチルフェニル基、２−メチル−３−クロロフェニル基、２−メチル−４−クロロフェニル基、３−クロロ−４−メチルフェニル基、３−メチル−４−クロロフェニル基、２−クロロ−４，６−ジメチルフェニル基、２−メトキシ−４−フルオロフェニル基、２−フルオロ−４−メトキシフェニル基、２−フルオロ−４−エトキシフェニル基、２−フルオロ−６−メトキシフェニル基、３−フルオロ−４−エトキシフェニル基、３−クロロ−４−メトキシフェニル基、２−メトキシ−５−クロロフェニル基、３−メトキシ−６−クロロフェニル基、５−クロロ−２，４−ジメトキシフェニル基等を挙げることができるが、これらに限定されるものではない。
【００２４】
置換されたピリジル基としては、例えば３−クロロ−２−ピリジル基、４−クロロ−２−ピリジル基、５−クロロ−２−ピリジル基、６−クロロ−２−ピリジル基、３−メチル−２−ピリジル基、４−メチル−２−ピリジル基、５−メチル−２−ピリジル基、６−メチル−２−ピリジル基、２−アミノ−３−ピリジル基、２−アミノ−６−クロロ−３−ピリジル基、２−アミノ−６−フルオロ−３−ピリジル基、２−アミノ−５−クロロ−３−ピリジル基、２−アミノ−５−フルオロ−３−ピリジル基等を挙げることができるが、これらに限定されるものではない。
【００２５】
Ａｒ１で表される芳香族基としては、置換又は無置換の含窒素芳香族複素環基（例えば、ピロリル基、オキサゾリル基、イソオキサゾリル基、チアゾリル基、イソチアゾリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、ピリジル基、ピリミジニル基、ピリダジニル基、ピラジニル基、キノリル基、イソキノリル基）が好ましく、置換又は無置換のピリジル基、特に置換又は無置換の３−ピリジル基が更に好ましい。
【００２６】
Ａｒ２で表される芳香族基としては、少なくともアミノ基で置換されているフェニル基又はピリジル基が好ましく、少なくとも２位がアミノ基で置換されているフェニル基（例えば２−アミノ−４−フルオロフェニル基、２−アミノ−４−クロロフェニル基）、２−アミノ−３−ピリジル基、２−アミノ−６−クロロ−３−ピリジル基、２−アミノ−６−フルオロ−３−ピリジル基が更に好ましい。
【００２７】
前記式（Ｉ）で示される化合物がアミノ基、ピリジル基等の塩基性置換基、又はフェノール性水酸基、カルボキシル基等の酸性置換基を有する場合には、塩、好ましくは薬学的に許容される塩、例えば、塩酸、硫酸、リン酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、ピロ硫酸、メタリン酸等の無機酸、又はクエン酸、安息香酸、酢酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、スルホン酸（例えば、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸）等の有機酸との塩；又はナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩として用いることもできる。
【００２８】
前記式（Ｉ）で示される化合物の溶媒和物としては、例えば水和物が挙げられる。
【００２９】
前記式（Ｉ）で示される化合物のうち、前記式（Ｉ）においてＸが−ＣＨ２Ｏ−である化合物（Ｉａ）は、公知の方法、例えば、特開平１０−１５２４６２号公報（特許文献１）に記載の方法に従って、以下に示すようにして製造することができる。
【化２】
2016117666.tif 000004
（式中、Ａｒ１及びＡｒ２は前記と同義である。）
【００３０】
すなわち、前記式（II）で示される化合物と前記式（III）で示される化合物を、Ｎ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾール、ホスゲン等のカルボニル試薬を用いて縮合反応に付すことにより、前記式（Ｉ）で示される化合物を得ることができる。
【００３１】
前記式（Ｉ）で示される化合物の溶媒和物としては、例えば水和物が挙げられる。
【００３２】
前記式（Ｉ）で示される化合物のうち、前記式（Ｉ）においてＸが−ＣＨ＝ＣＨ−である化合物（Ｉｂ）は、公知の方法、例えば、特表２００７−５２７３６２号公報（特許文献２）に記載の方法に従って、以下に示すようにして製造することができる。
【化３】
2016117666.tif 000005
（式中、Ａｒ１及びＡｒ２は前記と同義である。）
【００３３】
すなわち、前記式（IV）で示される化合物と前記式（V）で示される化合物を、ジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾール、ジフェニルホスホリックアジド、ジエチルホスホリルシアニド等のペプチド縮合試薬を用いて縮合反応に付すことにより、前記式（Ｉｂ）で示される化合物を得ることができる。
【００３４】
前記式（Ｉａ）及び（Ｉｂ）においてＡｒ１又はＡｒ２で表される芳香族基がアミノ基で置換されている場合には、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基などの通常のペプチド形成反応に用いられる保護基で保護し、反応後、脱保護する。Ａｒ１又はＡｒ２で表される芳香族基が水酸基で置換されている場合には、ベンジル基などの通常のペプチド形成反応に用いられる保護基で保護し、反応後、脱保護する。
【００３５】
前記式（Ｉ）で示される化合物のうち、例えば、次式（１）：
【化４】
2016117666.tif 000006
で示されるエンチノスタット、次式（２）：
【化５】
2016117666.tif 000007
で示されるチダミド等のように市販されているものがあり、これらについては市販品を用いることができる。
【００３６】
前記のようにして得られる生成物を精製するには、通常用いられる手法、例えばシリカゲル等を担体として用いたカラムクロマトグラフィーやメタノール、エタノール、クロロホルム、ジメチルスルホキシド、ｎ−ヘキサン−酢酸エチル、水等を用いた再結晶法によればよい。カラムクロマトグラフィーの溶出溶媒としては、メタノール、エタノール、クロロホルム、アセトン、ヘキサン、ジクロロメタン、酢酸エチル、及びこれらの混合溶媒等が挙げられる。
【００３７】
前記式（Ｉ）で示される化合物は、ＨＩＶ−１感染細胞殺傷剤として、慣用の製剤担体と組み合わせて製剤化することができる。投与形態としては、特に限定はなく、必要に応じ適宜選択して使用され、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、徐放性製剤、液剤、懸濁剤、エマルジョン剤、シロップ剤、エリキシル剤等の経口剤、注射剤、坐剤等の非経口剤が挙げられる。
【００３８】
経口剤は、例えばデンプン、乳糖、白糖、マンニット、カルボキシメチルセルロース、無機塩類等を用いて常法に従って製造される。また、これらに加えて、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤、着色剤、香料等を適宜添加することができる。
【００３９】
結合剤としては、例えばデンプン、デキストリン、アラビアゴム、ゼラチン、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、結晶セルロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリドン、マクロゴール等が挙げられる。
【００４０】
崩壊剤としては、例えばデンプン、ヒドロキシプロピルスターチ、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロース、低置換ヒドロキシプロピルセルロース等が挙げられる。
【００４１】
界面活性剤としては、例えばラウリル硫酸ナトリウム、大豆レシチン、ショ糖脂肪酸エステル、ポリソルベート８０等が挙げられる。
【００４２】
滑沢剤としては、例えばタルク、ロウ類、水素添加植物油、ショ糖脂肪酸エステル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸アルミニウム、ポリエチレングリコール等が挙げられる。
【００４３】
流動性促進剤としては、例えば軽質無水ケイ酸、乾燥水酸化アルミニウムゲル、合成ケイ酸アルミニウム、ケイ酸マグネシウム等が挙げられる。
【００４４】
注射剤は、常法に従って製造され、希釈剤として一般に注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、オリーブ油、ゴマ油、ラッカセイ油、ダイズ油、トウモロコシ油、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等を用いることができる。更に必要に応じて、殺菌剤、防腐剤、安定剤、等張化剤、無痛化剤等を加えてもよい。また、注射剤は、安定性の観点から、バイアル等に充填後冷凍し、通常の凍結乾燥技術により水分を除去し、使用直前に凍結乾燥物から液剤を再調製することもできる。前記式（Ｉ）の化合物の注射剤中における割合は、５〜５０重量％の間で変動させ得るが、これに限定されるものではない。
【００４５】
その他の非経口剤としては、直腸内投与のための坐剤等が挙げられ、常法に従って製造される。
【００４６】
製剤化したＨＩＶ−１感染細胞殺傷剤は、剤形、投与経路等により異なるが、例えば、１日１〜４回を１週間から３ヶ月の期間、投与することが可能である。
【００４７】
経口剤として所期の効果を発揮するためには、患者の年令、体重、疾患の程度により異なるが、通常成人の場合、前記式（Ｉ）の化合物の重量として、例えば０．１〜１０００ｍｇ、好ましくは１〜５００ｍｇを、１日１回又は数回に分けて服用することが適当である。
【００４８】
非経口剤として所期の効果を発揮するためには、患者の年令、体重、疾患の程度により異なるが、通常成人の場合、前記式（Ｉ）の化合物の重量として、例えば０．１〜１０００ｍｇ、好ましくは１〜５００ｍｇを、静注、点滴静注、皮下注射、筋肉注射により投与することが適当である。
【００４９】
また、前記式（Ｉ）の化合物は、ＨＩＶ−１感染に対して有効な他の薬剤と組み合わせて使用してもよい。これらは、治療の過程において別々に投与されるか、例えば錠剤、静脈用溶液、又はカプセルのような単一の剤形において、前記式（Ｉ）の化合物と組み合わせられる。
【００５０】
前記式（Ｉ）の化合物は感染細胞においてＨＩＶ−１産生を活性化させ、二次感染を引き起こす可能性がある。そのため、前記式（Ｉ）の化合物単独使用では、新たなＨＩＶ−１感染細胞を産生してしまう。
【００５１】
そこで、ＨＤＡＣ阻害剤とは作用点が異なり、ＨＩＶ−１複製の後期課程に作用してＨＩＶ−１の複製を抑制するＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤との併用により、前記式（Ｉ）の化合物によるＨＩＶ−１産生活性化による二次感染を抑制しながらＨＩＶ−１感染細胞数を減少させることにより、ＨＩＶ−１感染症を根治できる。
【００５２】
前記ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤としては、例えばネルフィナビル、サキナビル、アタザナビル、ロピナビル、リトナビル、インジナビル、ダルナビル、アンプレナビル、ホスアンプレナビル及びチプラナビル等の市販のＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤、並びにこれらの化合物のいずれかの誘導体及び類似体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５３】
ＨＤＡＣ阻害剤とＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤との好ましい組み合わせとしては、例えば、ダルナビルとエンチノスタットとの組み合わせが挙げられる。
【００５４】
一実施形態において、ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤は、２００ｍｇ〜２５００ｍｇの１日総用量で被験体に投与される。好ましい実施形態では、ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤が、５００ｍｇ〜２２５０ｍｇの１日総用量で被験体に投与される。最も好ましい実施形態では、ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤が、１日総用量７５０ｍｇ〜２２５０ｍｇ、又は７５０ｍｇで、又はおよそ７５０ｍｇ、又は１２５０ｍｇで、又はおよそ１２５０ｍｇ、又は１５００ｍｇで、又はおよそ１５００ｍｇ、又は２２５０ｍｇで、又はおよそ２２５０ｍｇで被験体に投与される。
【００５５】
前記式（Ｉ）の化合物は、ＨＩＶ−１が感染した末梢リンパ球を慢性感染期に選択的に殺傷する効果を有する。
【００５６】
したがって、本発明の医薬組成物は、ＨＩＶ−１感染の慢性感染期に投与することが好ましい。慢性感染期は、ＨＩＶ−１に対する複数の抗体及び限定的なＴｈ１／ＣＴＬ応答によって特徴付けられる。
【００５７】
本明細書は、本願の優先権の基礎である特願２０１５−１１５０６及び特願２０１５−１１９１１１の明細書に記載される内容を包含する。
【実施例】
【００５８】
以下、実施例に基づき本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。【００５９】
以下の実施例において、前記式（Ｉ）で示される化合物としては、市販されており、入手しやすいことから、エンチノスタットを用いた。【００６０】
（実施例１）ＨＩＶ−１感染細胞特異的な細胞死誘導効果（ヒト末梢血単核球）
ＨＩＶ−１  IIIＢ株を、in vitroで健常人由来の末梢血単核球に感染させて、ヒト末梢血単核球ＨＩＶ−１慢性感染細胞モデルを作製し、ＨＤＡＣ阻害剤であるエンチノスタットを作用させた。【００６１】
ＨＩＶ−１感染後期において、エンチノスタットは０．２５〜０．５μＭで、ＨＩＶ−１感染ヒト末梢血単核球に対して特異的、選択的に細胞死を誘導した。０．５μＭの濃度でＨＩＶ−１感染細胞の生細胞率が偽感染（非感染）細胞の生細胞率の約５０％に減少した。【００６２】
（実施例２）ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤とＨＤＡＣ阻害剤の併用効果
エンチノスタットは感染細胞においてＨＩＶ−１産生を活性化させ、二次感染を引き起こす可能性があるため、ＨＤＡＣ阻害剤とは作用点が異なり、ＨＩＶ−１複製の後期課程に作用してＨＩＶ−１の複製を抑制するＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤との併用試験を図１に示す実験手順に従って行った。【００６３】
ＨＩＶ−１  IIIＢ株を、in vitroで健常人由来の末梢血単核球に感染させて、ヒト末梢血単核球ＨＩＶ−１慢性感染細胞モデルを作製し、ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤（ＮＦＶ、ＳＱＶ）とＨＤＡＣ阻害剤（エンチノスタット、ボリノスタット）の併用効果を検討した。【００６４】
ＨＩＶ−１感染、又は偽感染（＝非感染）後、７日間培養し、各種濃度のＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤で３日間処理した。その後３日間、同濃度のＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤と各種ＨＤＡＣ阻害剤の併用処理を行った。各サンプルの生細胞率は色素法で、また、ＨＩＶ−１産生量はＥＬＩＳＡ法（ＨＩＶ−１  ｐ２４  Ａｎｔｉｇｅｎ  ＥＬＩＳＡ）で測定した。【００６５】
結果を図２〜４に示す。【００６６】
ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤であるＮＦＶ及びＳＱＶは、いずれも、エンチノスタット０．５μＭ存在下において、濃度依存性にＨＩＶ−１産生を抑制したが、エンチノスタットによるＨＩＶ−１感染細胞特異的な細胞死誘導効果には影響を与えなかった。【００６７】
これらの結果から、エンチノスタットとＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤との併用により、エンチノスタットによるＨＩＶ−１産生活性化による二次感染を抑制しながらＨＩＶ−１感染細胞数を減少させることにより、ＨＩＶ−１感染症を根治できる可能性があると考えられた。【００６８】
（実施例３）ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤とＨＤＡＣ阻害剤の併用効果
実施例２では、ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤で前処理した後、ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤とＨＤＡＣ阻害剤とを併用することにより、ＨＩＶ−１産生を抑制しながら感染細胞に細胞死を誘導できることを確認した。【００６９】
本実施例では、ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤とＨＤＡＣ阻害剤との同時投与のみにより同様の効果が得られるかどうかについて、ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤としてネルフィナビル（ＮＦＶ）及びダルナビル（ＤＲＶ）を用いて、エンチノスタットとの併用試験を図５に示す実験手順に従って行った。【００７０】
ＨＩＶ−１  IIIＢ株を、in vitroで健常人由来の末梢血単核球に感染させて、ヒト末梢血単核球ＨＩＶ−１慢性感染細胞モデルを作製し、ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤（ＮＦＶ、ＤＲＶ）とＨＤＡＣ阻害剤（エンチノスタット）の併用効果を検討した。【００７１】
ＨＩＶ−１感染、又は偽感染（＝非感染）後、１１日間培養し、１２日目から３日間、各濃度のＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤とＨＤＡＣ阻害剤の併用投与を行った。各サンプルの生細胞率は色素法で、また、ＨＩＶ−１産生量はＥＬＩＳＡ法（ＨＩＶ−１  ｐ２４  Ａｎｔｉｇｅｎ  ＥＬＩＳＡ）で測定した。【００７２】
結果を図６及び７に示す。【００７３】
エンチノスタットは、in vitroにおけるヒト末梢血単核球を用いたＨＩＶ−１慢性感染細胞モデルにおいて、ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤であるネルフィナビルあるいはダルナビルとの同時投与により、ＨＩＶ−１産生を抑制しながら感染細胞に細胞死を誘導できることが明らかとなった。【００７４】
特にダルナビルは１μＭまで非感染細胞に対する毒性がなく、更にエンチノスタットによるＨＩＶ−１感染細胞特異的細胞死誘導効果にも全く影響することなく、１００ｎＭ以上でエンチノスタットによるＨＩＶ−１産生増加を強力に抑制した。これらの結果から、特にダルナビルとエンチノスタットとの併用投与は、効率よくかつ安全に、エンチノスタットによる二次感染を予防しながらＨＩＶ−１感染細胞数を減らすことでＨＩＶ−１感染症を根治できる可能性があると考えられた。【００７５】
（実施例４）エンチノスタット誘導体チダミドのＨＩＶ−１感染細胞特異的な細胞死誘導効果
図８に示す実験手順に従ってエンチノスタット誘導体チダミドのＨＩＶ−１感染細胞特異的な細胞死誘導効果を検討した。【００７６】
ＨＩＶ−１  IIIＢ株を、in vitroで健常人由来の末梢血単核球に感染させて、ヒト末梢血単核球ＨＩＶ−１慢性感染細胞モデルを作製し、各種ＨＤＡＣ阻害剤（エンチノスタット、チダミド）を作用させた。【００７７】
ＨＩＶ−１感染、又は偽感染（＝非感染）後、１１日間培養し、各種濃度の各種ＨＤＡＣ阻害剤で処理した。各サンプルの生細胞率は色素法で、また、ＨＩＶ−１産生量はＥＬＩＳＡ法（ＨＩＶ−１  ｐ２４  Ａｎｔｉｇｅｎ  ＥＬＩＳＡ）で測定した。【００７８】
結果を図９に示す。【００７９】
チダミドはエンチノスタットと同様にＨＩＶ−１感染細胞特異的な細胞死誘導効果を示した。チダミドはエンチノスタットより非感染細胞に対する毒性は低いが、感染細胞に対する細胞死誘導効果も弱かった。【００８０】
前記式（Ｉ）におけるＡｒ１又はＡｒ２がエンチノスタット、チダミドと異なる他の誘導体、例えば、Ａｒ２が２位にアミノ基を有しないフェニル基である誘導体ではＨＩＶ−１感染細胞特異的な細胞死誘導効果が低下した。【００８１】
（実施例５）ＨＩＶ−１感染細胞特異的な細胞死誘導効果（ＣＤ４Ｔ）
ヒト末梢血単核球においてＨＩＶ−１が主に感染する細胞はＣＤ４陽性Ｔリンパ球（ＣＤ４Ｔ）である。【００８２】
本実施例では、ヒト末梢血単核球から精製したＣＤ４Ｔを用いて、ＨＩＶ−１感染ＣＤ４Ｔに対する各種ＨＤＡＣ阻害剤の作用について解析を行った。【００８３】
ＨＩＶ−１  IIIＢ株を、in vitroで健常人由来のＣＤ４Ｔに感染させて、ＣＤ４Ｔ  ＨＩＶ−１慢性感染細胞モデルを作製し、各種ＨＤＡＣ阻害剤（エンチノスタット、チダミド、ボリノスタット（ＳＡＨＡ））を作用させた。【００８４】
ＨＩＶ−１感染、又は偽感染（＝非感染）後、実験（１）では３日目から４日間、実験（２）では７日目から４日間、各濃度の各種ＨＤＡＣ阻害剤で処理した。各サンプルの生細胞率は色素法で、また、ＨＩＶ−１産生量はＥＬＩＳＡ法（ＨＩＶ−１  ｐ２４  Ａｎｔｉｇｅｎ  ＥＬＩＳＡ）で測定した。実験手順を図１０に示す。【００８５】
実験（１）の結果を図１１に、実験（２）の結果を図１２に示す。【００８６】
末梢血単核球の結果と同様にＣＤ４Ｔにおいても、エンチノスタット及びチダミドは、ＨＩＶ−１感染細胞特異的な細胞死誘導効果を示した。その効果はＨＩＶ−１感染３〜７日目の感染後早期から認められた。【００８７】
チダミドはエンチノスタットと比較して、非感染細胞に対する毒性は低いが、感染細胞に対する細胞死誘導効果も弱かった。【００８８】
一方、ボリノスタット（ＳＡＨＡ）はＣＤ４Ｔにおいても、ＨＩＶ−１感染細胞特異的な細胞死誘導効果を示さなかった。【００８９】
以上の結果から、エンチノスタット及びチダミドは、ＣＤ４Ｔでは感染後早期からＨＩＶ−１感染細胞特異的な細胞死誘導効果を示すことが明らかとなった。このことは、末梢血単核球と比較してＣＤ４ＴではＨＩＶ−１感染がより効率的に行われることと関連する可能性があると考えられた。【００９０】
（実施例６）ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤、ＨＩＶ−１逆転写酵素阻害剤又はＨＩＶ−１インテグラーゼ阻害剤とＨＤＡＣ阻害剤の併用
ＨＤＡＣ阻害剤であるエンチノスタット及びチダミド（エンチノスタット誘導体）は、in vitroにおけるヒト末梢血単核球を用いたＨＩＶ−１慢性感染細胞モデルにおいて、感染細胞特異的に細胞死誘導することが明らかとなった。【００９１】
また、ダルナビルなどのＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤との併用により、エンチノスタットにより活性化されたＨＩＶ−１産生を抑制しながら感染細胞に細胞死を誘導できることを確認した。【００９２】
本実施例では、ＨＩＶ−１逆転写酵素阻害剤との併用により同様の効果が得られるかどうかについて、現在臨床において最も使用されているものの一つであるテノフォビル（ＴＦＶ）を用いて図１３に示す実験手順に従ってエンチノスタットとの併用試験を行い検討した。【００９３】
結果を図１４に示す。【００９４】
in vitroにおけるヒトＣＤ４陽性Ｔリンパ球（ＣＤ４Ｔ）を用いたＨＩＶ−１慢性感染細胞モデルにおいて、ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤であるダルナビル（ＤＲＶ）は１００ｎＭの濃度において、エンチノスタットとの同時投与により、エンチノスタットによるＨＩＶ−１産生活性化を強力に抑制しながら感染細胞に特異的に細胞死を誘導できることが明らかとなった。【００９５】
しかし、テノフォビル（ＴＦＶ）はエンチノスタットによるＨＩＶ−１感染細胞特異的細胞死誘導効果には影響しないものの、１μＭの濃度においても、エンチノスタット存在、非存在に関わらず、ＨＩＶ−１産生を抑制することはなかった。このことから、（１）感染後７日目においてＨＩＶ−１感染ＣＤ４Ｔはすでに慢性感染細胞の状態であり、また（２）エンチノスタットはゲノム遺伝子にインテグレートしているＨＩＶ−１遺伝子の転写活性化させるため、ＨＩＶ−１逆転写酵素阻害剤であるテノフォビルはＨＩＶ−１産生を抑制できなかったと示唆される。【００９６】
次に、ＨＩＶ−１インテグラーゼ阻害剤との併用により同様の効果が得られるかどうかについて、現在臨床において最も使用されているものの一つであるドルテグラビル（ＤＴＧ）を用いて図１５に示す実験手順に従ってエンチノスタットとの併用試験を行い検討した。【００９７】
結果を図１６に示す。【００９８】
in vitroにおけるヒトＣＤ４陽性Ｔリンパ球（ＣＤ４Ｔ）を用いたＨＩＶ−１慢性感染細胞モデルにおいて、ＨＩＶ−１インテグラーゼ阻害剤であるドルテグラビル（ＤＴＧ）はエンチノスタット非存在下ではほとんど抗ＨＩＶ−１効果を示さなかった。またエンチノスタット存在下では、エンチノスタットによるＨＩＶ−１感染細胞特異的細胞死誘導効果には影響しないものの、１μＭの濃度においてもＨＩＶ−１産生を抑制することはなかった。このことから、（１）感染後７日目においてＨＩＶ−１感染ＣＤ４Ｔはすでにほとんど慢性感染細胞の状態であり、また（２）エンチノスタットはゲノム遺伝子にインテグレートしているＨＩＶ−１遺伝子の転写活性化させるため、ＨＩＶ−１インテグラーゼ阻害剤であるドルテグラビル（ＤＴＧ）はＨＩＶ−１産生を抑制できなかったと示唆される。【００９９】
これらの結果から、エンチノスタットによる二次感染を予防しながらＨＩＶ−１感染細胞数を減らすためにはＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤など慢性感染細胞からのＨＩＶ−１産生を抑制可能な抗ＨＩＶ−１薬との併用が必要であると考えられた。【０１００】
更に、ＨＩＶ−１逆転写酵素阻害剤及びＨＩＶ−１インテグラーゼ阻害剤は慢性感染細胞においてエンチノスタットによって活性化されたＨＩＶ−１産生は抑制できないが、臨床においては、ＨＤＡＣ阻害剤であるエンチノスタット及びチダミド（エンチノスタット誘導体）に、ダルナビルなどのＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤を併用するとともに、ＨＩＶ−１逆転写酵素阻害剤やＨＩＶ−１インテグラーゼ阻害剤を併用することにより、より強力に二次感染を予防できると考えられる（これらの薬剤は別の非感染細胞で働く）。【０１０１】
（実施例７）細胞死誘導メカニズムの解析
ヒト末梢血単核球においてＨＩＶ−１が主に感染する細胞はＣＤ４陽性Ｔリンパ球（ＣＤ４Ｔ）である。【０１０２】
本実施例では、ヒト末梢血単核球から精製したＣＤ４Ｔを用いて、細胞死誘導メカニズムについて解析を行った。【０１０３】
ＨＩＶ−１  IIIＢ株を、in vitroで健常人由来のＣＤ４Ｔに感染させて、ＣＤ４Ｔ  ＨＩＶ−１慢性感染細胞モデルを作製し、ＨＤＡＣ阻害剤（エンチノスタット）を作用させた。【０１０４】
ＨＩＶ−１感染、又は偽感染（＝非感染）後、７日目から２４又は４８時間、０．５μＭのＨＤＡＣ阻害剤（エンチノスタット）で処理した。抽出した蛋白をウェスタンブロット法で解析した。結果を図１７に示す。【０１０５】
Cleaved caspase-3及びCleaved PARPの発現をそれぞれ内部コントロールであるβ-tublinの発現で補正してグラフにした。【０１０６】
０．５μＭのエンチノスタットで２４時間処理したことにより、偽感染ＣＤ４Ｔ（Mock）及びＨＩＶ−１感染ＣＤ４Ｔ（ＨＩＶ）において、アポトーシスを誘導する蛋白分解酵素であるcaspase-3の活性化型（cleaved caspase-3）の増加が認められたが、その増加はＨＩＶ−１感染ＣＤ４Ｔ（ＨＩＶ）においてより顕著であった。０．５μＭのエンチノスタット４８時間処理では、偽感染ＣＤ４Ｔ及びＨＩＶ−１感染ＣＤ４Ｔにおいて、エンチノスタット処理による活性化型caspase-3の発現の増加は認められなかったが、これは細胞死による活性化型caspase-3の分解が進んだためと考えられる。【０１０７】
また、活性化したcaspase群により切断されたＰＡＲＰ（cleaved PARP）はアポトーシスの後期ステージにおいても発現が持続する。０．５μＭのエンチノスタットで偽感染ＣＤ４Ｔ及びＨＩＶ−１感染ＣＤ４Ｔを２４時間処理すると、切断されたＰＡＲＰの増加が認められた。更に、エンチノスタットで４８時間処理されたＨＩＶ−１感染ＣＤ４Ｔでは、ＰＡＲＰ発現が著しく増加していた。【０１０８】
これらの結果から、エンチノスタットはアポトーシスを介してＨＩＶ−１感染ＣＤ４Ｔに特異的に細胞死を誘導していると考えられた。【０１０９】
本明細書中で引用した全ての刊行物、特許及び特許出願をそのまま参考として本明細書中にとり入れるものとする。
【図１】
2016117666.tif 000010
【図２】
2016117666.tif 000011
【図３】
2016117666.tif 000012
【図４】
2016117666.tif 000013
【図５】
2016117666.tif 000014
【図６】
2016117666.tif 000015
【図７】
2016117666.tif 000016
【図８】
2016117666.tif 000017
【図９】
2016117666.tif 000018
【図１０】
2016117666.tif 000019
【図１１】
2016117666.tif 000020
【図１２】
2016117666.tif 000021
【図１３】
2016117666.tif 000022
【図１４】
2016117666.tif 000023
【図１５】
2016117666.tif 000024
【図１６】
2016117666.tif 000025
【図１７】
2016117666.tif 000026
【手続補正書】
【提出日】平成28年6月16日(2016.6.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）：
【化１】
2016117666.tif 000027
（式中、Ａｒ１及びＡｒ２は同一又は異なり、置換又は無置換の芳香族基であり、Ｘは−ＣＨ２Ｏ−又は−ＣＨ＝ＣＨ−である。）
で示される化合物、その塩又はそれらの溶媒和物を含有するＨＩＶ−１感染細胞殺傷剤。
【請求項２】
前記式（Ｉ）において、Ａｒ１及びＡｒ２は同一又は異なり、フェニル基又はピリジル基を表し、当該フェニル基又はピリジル基はアミノ基、Ｃ１−６−アルキル基及びハロゲン原子から選ばれる１以上の置換基で置換されていてもよい請求項１記載のＨＩＶ−１感染細胞殺傷剤。
【請求項３】
前記式（Ｉ）において、Ａｒ１はピリジル基であり、Ａｒ２はアミノ基及びハロゲン原子から選ばれる１以上の置換基で置換されていてもよいフェニル基である請求項１記載のＨＩＶ−１感染細胞殺傷剤。
【請求項４】
ＨＩＶ−１感染者であって、がんに罹患していない者を投与対象とする請求項１〜３のいずれか１項に記載のＨＩＶ−１感染細胞殺傷剤。
【請求項５】
請求項１に記載の式（Ｉ）で示される化合物、その塩又はそれらの溶媒和物と、ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤とを含有するＨＩＶ−１感染の治療又は予防用組成物。
【請求項６】
（削除）
【請求項７】
ＨＩＶ−１感染の治療又は予防において同時に、別々に、又は順次に投与するための組み合わせ製剤であって、２つの別個の製剤：
（ａ）請求項１に記載の式（Ｉ）で示される化合物、その塩又はそれらの溶媒和物を含有する製剤、及び
（ｂ）ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤を含有する製剤
を含む組み合わせ製剤。
【請求項８】
（削除）
【請求項９】
前記式（Ｉ）においてＸが−ＣＨ２Ｏ−である請求項１〜４のいずれか１項に記載のＨＩＶ−１感染細胞殺傷剤。
【請求項１０】
ＨＩＶ−１感染の慢性感染期に投与されるように用いられる請求項１〜４及び９のいずれか１項に記載のＨＩＶ−１感染細胞殺傷剤。
【請求項１１】
ＨＩＶ−１が感染した末梢リンパ球を慢性感染期に選択的に殺傷するために用いられる請求項１０記載のＨＩＶ−１感染細胞殺傷剤。
【請求項１２】
前記式（Ｉ）においてＸが−ＣＨ２Ｏ−である請求項５記載のＨＩＶ−１感染の治療又は予防用組成物。
【請求項１３】
ＨＩＶ−１感染の慢性感染期に投与されるように用いられる請求項５又は１２記載のＨＩＶ−１感染の治療又は予防用組成物。
【請求項１４】
ＨＩＶ−１が感染した末梢リンパ球を慢性感染期に選択的に殺傷するために用いられる請求項１３記載のＨＩＶ−１感染の治療又は予防用組成物。
【請求項１５】
ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤がネルフィナビル、サキナビル及びダルナビルから選ばれる少なくとも１種である請求項５及び１２〜１４のいずれか１項に記載のＨＩＶ−１感染の治療又は予防用組成物。
【請求項１６】
前記式（Ｉ）においてＸが−ＣＨ２Ｏ−である請求項７記載の組み合わせ製剤。
【請求項１７】
ＨＩＶ−１感染の慢性感染期に投与されるように用いられる請求項７又は１６記載の組み合わせ製剤。
【請求項１８】
ＨＩＶ−１が感染した末梢リンパ球を慢性感染期に選択的に殺傷するために用いられる請求項１７記載の組み合わせ製剤。
【請求項１９】
ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤がネルフィナビル、サキナビル及びダルナビルから選ばれる少なくとも１種である請求項７及び１６〜１８のいずれか１項に記載の組み合わせ製剤。
【請求項２０】
請求項１に記載の式（Ｉ）で示される化合物がエンチノスタットであり、ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤がダルナビルである請求項５、１３及び１４のいずれか１項に記載のＨＩＶ−１感染の治療又は予防用組成物。
【請求項２１】
請求項１に記載の式（Ｉ）で示される化合物がエンチノスタットであり、ＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤がダルナビルである請求項７、１７及び１８のいずれか１項に記載の組み合わせ製剤。
【国際調査報告】
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