(57)【要約】本発明は、十二指腸液試料中の膵疾患マーカーの濃度に基づいて、膵疾患の罹患可能性を評価する方法を提供することを目的とする。本発明の膵疾患の罹患可能性評価方法は、（ａ）被検者から採取された十二指腸液試料中の膵疾患マーカーの濃度を測定する工程と、（ｂ）前記工程（ａ）において測定された前記膵疾患マーカーの濃度と、前記被験者の年齢とに基づき、前記被験者の膵疾患の罹患可能性を評価する工程と、を有する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）被検者から採取された十二指腸液試料中の膵疾患マーカーの濃度を測定する工程と、
（ｂ）前記工程（ａ）において測定された前記膵疾患マーカーの濃度と、前記被験者の年齢とに基づき、前記被験者の膵疾患の罹患可能性を評価する工程と、
を有する、膵疾患の罹患可能性評価方法。
【請求項２】
前記工程（ｂ）において、
前記膵疾患マーカーの濃度と前記被験者の年齢とに基づきスコア値を算出し、得られたスコア値と、被験者の年齢によらず一律に設定されたカットオフ値とを比較して、前記被験者の膵疾患の罹患可能性を評価する、又は、
前記膵疾患マーカーの濃度と、被験者の年齢層ごとに設定されたカットオフ値とを比較して、前記被験者の膵疾患の罹患可能性を評価する、
請求項１に記載の膵疾患の罹患可能性評価方法。
【請求項３】
前記膵疾患マーカーは、膵疾患罹患者から採取された十二指腸液試料中の濃度が、膵疾患非罹患者から採取された十二指腸液試料中の濃度よりも高くなるマーカーである、請求項１又は２に記載の膵疾患の罹患可能性評価方法。
【請求項４】
前記膵疾患マーカーは、膵疾患罹患者から採取された十二指腸液試料中の濃度が、膵疾患非罹患者から採取された十二指腸液試料中の濃度よりも高くなるマーカーであり、
前記工程（ｂ）において、前記膵疾患マーカーの濃度と前記被験者の年齢とに基づきスコア値を算出し、
当該スコア値が、被験者の年齢によらず一律に設定されたカットオフ値以上の場合に、前記被験者が膵疾患を発症している可能性が高いと評価し、前記カットオフ値未満の場合に、前記被験者が膵疾患を発症している可能性が低いと評価する、請求項１に記載の膵疾患の罹患可能性評価方法。
【請求項５】
前記工程（ａ）において測定された前記膵疾患マーカーの濃度と、前記スコア値Ｐとが、下記式（１）の関係を満たす、請求項４に記載の膵疾患の罹患可能性評価方法。
（１）  ｌｏｇ〔Ｐ／（１−Ｐ）〕＝ａ×ｌｏｇ１０［膵疾患マーカー濃度］＋ｂ×［被検者の年齢］＋ｃ
［式（１）中、ａ、ｂ、及びｃは、膵疾患罹患者群及び膵疾患非罹患者群から採取された十二指腸液試料中の前記膵疾患マーカーの濃度と年齢を説明変数とする多重ロジスティック回帰分析により決定される実数である。］
【請求項６】
前記膵疾患マーカーは、膵疾患罹患者から採取された十二指腸液試料中の濃度が、膵疾患非罹患者から採取された十二指腸液試料中の濃度よりも高くなるマーカーであり、
前記工程（ｂ）において、前記膵疾患マーカーの濃度が、予め年齢層ごとに設定されたカットオフ値以上の場合に、前記被験者が膵疾患を発症している可能性が高いと評価し、前記年齢層ごとに設定されたカットオフ値未満の場合に、前記被験者が膵疾患を発症している可能性が低いと評価する、請求項１に記載の膵疾患の罹患可能性評価方法。
【請求項７】
前記年齢層ごとに設定されたカットオフ値は、年齢層が高いほど低く設定されている、請求項６に記載の膵疾患の罹患可能性評価方法。
【請求項８】
前記膵疾患マーカーがＳ１００タンパク質である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の膵疾患の罹患可能性評価方法。
【請求項９】
前記膵疾患が膵癌である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の膵疾患の罹患可能性評価方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、十二指腸液試料中の膵疾患マーカーの濃度に基づいて、被験者が膵疾患に罹患している可能性を評価する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
被検者の体液中の生体分子の濃度を指標として、がん等の各種疾患の罹患の有無の判定する方法が広く行われている。例えば、特許文献１には、被験者の血液中のＣＳＲＰ１タンパク質の量又はＣＳＲＰ１タンパク質の存在の有無を指標にして、被験者の癌を検出する方法が開示されている。また、特許文献２には、血液等の体液中のＹＫＬ−４０濃度を、年齢によって調整されたカットオフ値と比較し、消化管癌の罹患の有無や重症度の判定、治療法の選択等を行う方法が記載されている。【０００３】
十二指腸液は、膵臓から排出される膵液、胆管から排出される胆汁、及び十二指腸で分泌される粘液の混合体液である。十二指腸液の採取は、内視鏡を十二指腸まで挿入し、その場で吸引するだけで可能であり、膵管からの膵液採取に比べて低侵襲かつより簡便な手技で実施できる。このため、十二指腸液中の膵疾患マーカーを検出することにより、膵疾患を検査することができる（例えば、特許文献３参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２０１４−１１５１８８号公報
【特許文献２】特表２０１２−５０２２８５号公報
【特許文献３】特開２０１５−１１０１１号公報
【特許文献４】特開２００６−３０８５７６号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Pancreas,1994, vol.9, No.6号,p741−747
【非特許文献２】Pancreas, 2002, vol.24, No.54, p344−347
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
十二指腸液に含まれる生体分子の量は、被験者ごとに異なりばらつきが多い。このため、十二指腸液試料中の膵疾患マーカーの濃度に基づいて、膵疾患の罹患可能性を評価する際に、目的の膵疾患の罹患者群と非罹患者群に分けるカットオフ値を、被験者の背景等を考慮せず一律に設定した場合には、判定の精度が充分ではなかった。
すなわち、本発明は、十二指腸液試料中の膵疾患マーカーの濃度に基づいて、膵疾患の罹患可能性を、より精度よく評価する方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、十二指腸液試料中の膵疾患マーカーの濃度は、被験者の年齢が高くなるほど低下する傾向にあることを見出し、本発明を完成させた。【０００８】
すなわち、本発明に係る膵疾患の罹患可能性評価方法は、下記［１］〜［９］である。
［１］  （ａ）被検者から採取された十二指腸液試料中の膵疾患マーカーの濃度を測定する工程と、
（ｂ）前記工程（ａ）において測定された前記膵疾患マーカーの濃度と、前記被験者の年齢とに基づき、前記被験者の膵疾患の罹患可能性を評価する工程と、
を有する、膵疾患の罹患可能性評価方法。
［２］  前記工程（ｂ）において、
前記膵疾患マーカーの濃度と前記被験者の年齢とに基づきスコア値を算出し、得られたスコア値と、被験者の年齢によらず一律に設定されたカットオフ値とを比較して、前記被験者の膵疾患の罹患可能性を評価する、又は、
前記膵疾患マーカーの濃度と、被験者の年齢層ごとに設定されたカットオフ値とを比較して、前記被験者の膵疾患の罹患可能性を評価する、
前記［１］の膵疾患の罹患可能性評価方法。
［３］  前記膵疾患マーカーは、膵疾患罹患者から採取された十二指腸液試料中の濃度が、膵疾患非罹患者から採取された十二指腸液試料中の濃度よりも高くなるマーカーである、前記［１］又は［２］の膵疾患の罹患可能性評価方法。
［４］  前記膵疾患マーカーは、膵疾患罹患者から採取された十二指腸液試料中の濃度が、膵疾患非罹患者から採取された十二指腸液試料中の濃度よりも高くなるマーカーであり、
前記工程（ｂ）において、前記膵疾患マーカーの濃度と前記被験者の年齢とに基づきスコア値を算出し、
当該スコア値が、被験者の年齢によらず一律に設定されたカットオフ値以上の場合に、前記被験者が膵疾患を発症している可能性が高いと評価し、前記カットオフ値未満の場合に、前記被験者が膵疾患を発症している可能性が低いと評価する、前記［１］の膵疾患の罹患可能性評価方法。
［５］  前記工程（ａ）において測定された前記膵疾患マーカーの濃度と、前記スコア値Ｐとが、下記式（１）の関係を満たす、前記［４］の膵疾患の罹患可能性評価方法。
（１）  ｌｏｇ〔Ｐ／（１−Ｐ）〕＝ａ×ｌｏｇ１０［膵疾患マーカー濃度］＋ｂ×［被検者の年齢］＋ｃ
［式（１）中、ａ、ｂ、及びｃは、膵疾患罹患者群及び膵疾患非罹患者群から採取された十二指腸液試料中の前記膵疾患マーカーの濃度と年齢を説明変数とする多重ロジスティック回帰分析により決定される実数である。］
［６］  前記膵疾患マーカーは、膵疾患罹患者から採取された十二指腸液試料中の濃度が、膵疾患非罹患者から採取された十二指腸液試料中の濃度よりも高くなるマーカーであり、
前記工程（ｂ）において、前記膵疾患マーカーの濃度が、予め年齢層ごとに設定されたカットオフ値以上の場合に、前記被験者が膵疾患を発症している可能性が高いと評価し、前記年齢層ごとに設定されたカットオフ値未満の場合に、前記被験者が膵疾患を発症している可能性が低いと評価する、前記［１］の膵疾患の罹患可能性評価方法。
［７］  前記年齢層ごとに設定されたカットオフ値は、年齢層が高いほど低く設定されている、前記［６］の膵疾患の罹患可能性評価方法。
［８］  前記膵疾患マーカーがＳ１００タンパク質である、前記［１］〜［７］のいずれかの膵疾患の罹患可能性評価方法。
［９］  前記膵疾患が膵癌である、前記［１］〜［８］のいずれかの膵疾患の罹患可能性評価方法。
【発明の効果】
【０００９】
十二指腸液試料は個体差が大きい生体試料であるにもかかわらず、本発明に係る膵疾患の罹患可能性評価方法により、十二指腸液試料中の膵疾患マーカーの濃度に基づく膵疾患の罹患可能性の評価を、高精度に、特に６５歳以上の高齢者を被検者とした場合に高い特異度で、実施することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、実施例１において、各患者のＳ１００Ｐ濃度の常用対数値から作成したＲＯＣ曲線である。
【図２】図２は、実施例１において、１ａ＋１ｂ群（左図）と０／Ｉ＋ＩＩＡ群（右図）について、患者の年齢ごとにＳ１００Ｐ濃度の測定値をプロットした結果を示した図である。
【図３】図３は、実施例１において、各患者のＳ１００Ｐ濃度の常用対数値と年齢を組み合わせたスコア値から作成したＲＯＣ曲線である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明及び本願明細書において、膵疾患マーカーは、膵液中に含まれているタンパク質、核酸、脂質、細胞等の各種生体分子であって、膵疾患の非罹患者と比較して、膵疾患に罹患している患者において、膵液中の濃度が有意に高くなる生体分子である。なお、膵疾患の非罹患者は、膵臓が正常であればよく、健常者に限らず、膵疾患以外の疾患の罹患者をも含む。また、膵疾患としては、例えば、膵癌、ＩＰＭＮ（膵管内乳頭粘液性腫瘍）、ＭＣＮ（粘液性嚢胞腫瘍）、ＳＣＮ（漿液性嚢胞腫瘍）、ＮＥＴ（膵内分泌腫瘍）、慢性膵炎（ＣＰ）、急性膵炎等が挙げられる。
【００１２】
本発明及び本願明細書において、カットオフ値は、膵疾患マーカーの濃度又は当該濃度から導出される値について、目的の膵疾患の罹患者群と非罹患者群に分ける値を意味する。膵疾患の罹患者群と非罹患者群とを分けるカットオフ値は、膵疾患マーカーの種類、膵疾患マーカーの濃度の測定方法等を考慮して、実験的に設定することができる。カットオフ値の設定方法の一例としては、例えば、まず、膵疾患に罹患していないことが分かっている充分な数の被験者から採取された十二指腸液と、当該疾患に罹患していることが分かっている充分な数の被験者から採取された十二指腸液とに対して、それぞれ膵疾患マーカーの濃度を測定する。次いで、得られた測定値又は当該測定値から導出されるスコア値についてＲＯＣ曲線(Receiver Operator Characteristic Curve)を作成する。このＲＯＣ曲線に基づいて、目的の感度と特異度になるようにカットオフ値を設定することができる。
膵疾患の罹患可能性を評価するためには、カットオフ値を、特異度が８０％以上となるように設定することが好ましく、特異度が８５％以上となるように設定することがより好ましく、特異度が９０％以上となるように設定することがさらに好ましい。
【００１３】
本発明に係る膵疾患の罹患可能性評価方法（以下、「本発明に係る評価方法」ということがある。）は、十二指腸液試料中の膵疾患マーカーの濃度を指標として膵疾患の罹患可能性を評価する方法である。当該方法は、具体的には、下記工程（ａ）及び（ｂ）を有する。
（ａ）被検者から採取された十二指腸液試料中の膵疾患マーカーの濃度を測定する工程。
（ｂ）前記工程（ａ）において測定された前記膵疾患マーカーの濃度と、前記被験者の年齢とに基づき、前記被験者の膵疾患の罹患可能性を評価する工程。
【００１４】
後記実施例に示すように、十二指腸液試料中の膵疾患マーカーの濃度は、膵疾患非罹患者において、被験者の年齢が高くなるほど低下する傾向にある。この理由は明らかではないが、膵臓の機能低下により、膵管からの膵液の排出量自体が低下する結果、十二指腸液に含まれる膵液量自体が低減してしまうためと推察される。
【００１５】
この十二指腸液試料中の膵疾患マーカーの濃度と年齢の関係により、全年齢層について一律にカットオフ値を設定した場合には、被験者の年齢層ごとに精度がばらつき、評価精度が低くなる。すなわち、全年齢層に対して一律にカットオフ値を設定した場合、比較的年齢の低い層では感度が高いものの特異度が低くなり、偽陽性が多くなる。逆に、比較的年齢の高い層では、特異度は高いものの感度が低く、偽陰性が多くなる傾向がある。
【００１６】
そこで、十二指腸液試料中の膵疾患マーカーの濃度から膵疾患の罹患可能性を評価する際の評価精度を高めてより信頼性の高い評価結果を得るために、本発明に係る評価方法においては、十二指腸液試料中の膵疾患マーカーの濃度と被検者の年齢の両方に基づいて、被験者の膵疾患の罹患可能性を評価する。膵疾患マーカー濃度の加齢による自然低下分を考慮し、十二指腸液試料中の膵疾患マーカーの濃度を被検者の年齢で補正することにより、評価精度を高められる。
【００１７】
例えば、十二指腸液試料中の膵疾患マーカーの濃度と、試料を採取した被験者の年齢に基づいて試料についてのスコア値を算出し、得られたスコア値を、被験者の年齢によらず一律に設定されたカットオフ値と比較することによって、被験者の膵疾患の罹患可能性を評価する。膵疾患マーカーの濃度を被験者の年齢を加味したスコア値化することにより、全年齢層を対象とした一律のカットオフ値と比較した場合でも、年齢層ごとの精度のばらつきが抑えられ、いずれの年齢層においても同程度の感度と特異度を達成できる。全年齢層を対象とするカットオフ値は、統計学的に充分な数の膵疾患罹患者のスコア値と、同じく統計学的に充分な数の非罹患者のスコア値とについて作成されたＲＯＣ曲線に基づいて、感度及び特異度が所望の範囲になるように設定することができる。
【００１８】
膵疾患マーカーの濃度に年齢を加味したスコア値Ｐは、例えば、膵疾患マーカー濃度の常用対数値に、膵疾患マーカー濃度の加齢による低下分を補うように設定される。具体的には、例えば、スコア値Ｐは、下記式（１）の関係を満たすように設定することができる。
【００１９】
（１）  ｌｏｇ〔Ｐ／（１−Ｐ）〕＝ａ×ｌｏｇ１０［膵疾患マーカー濃度］＋ｂ×［被検者の年齢］＋ｃ
【００２０】
式（１）中、ａ、ｂ、及びｃは、膵疾患罹患者群及び膵疾患非罹患者群から採取された十二指腸液試料中の前記膵疾患マーカーの濃度と年齢を説明変数とする多重ロジスティック回帰分析により決定される実数である。多重ロジスティック回帰分析は常法により行うことができる。式（１）を設定する際に行う多重ロジスティック回帰分析の標本には、統計学的に充分な数の膵疾患罹患者と、同じく統計学的に充分な数の非罹患者からそれぞれ採取された十二指腸液試料中の膵疾患マーカー濃度を用いることが好ましい。
【００２１】
例えば、式（１）中、ａを１．５〜２．２、好ましくは１．７〜１．９とし、ｂを０．１〜０．２、好ましくは０．１２〜０．１７とし、ｃを−２０〜−１５とすることにより、全ての年齢層において、特異度を８０％以上、好ましくは９０％以上に調整することができる。
【００２２】
例えば、膵疾患マーカーが、膵疾患罹患者から採取された十二指腸液試料中の濃度が、膵疾患非罹患者から採取された十二指腸液試料中の濃度よりも高くなるマーカーである場合には、被験者の十二指腸液試料中の膵疾患マーカー濃度と年齢から式（１）に基づいてスコア値Ｐを算出し、得られたスコア値Ｐが、被験者の年齢によらず一律に設定されたカットオフ値以上の場合に、当該被験者が膵疾患を発症している可能性が高いと評価し、当該カットオフ値未満の場合に、当該被験者が膵疾患を発症している可能性が低いと評価する。
【００２３】
工程（ｂ）においては、目的の膵疾患の罹患者群と非罹患者群に分けるカットオフ値を、被験者の年齢層別に設定したものを用いることもできる。年齢層ごとのカットオフ値は、年齢層が高いほど低くなるように設定されている。カットオフ値を分けて設定する年齢層は、一定の年齢幅ごとに均等に分けて設定してもよく、年齢幅を不均等に設定してもよい。例えば、０歳からの全年齢を、５歳ごとや１０歳ごとの年齢層に分けて設定したり、５０歳未満の層と７０歳以上の層はそれぞれまとめ、５０〜６９歳を一定の年齢幅ごとに均等に分けて設定することもできる。
【００２４】
例えば、膵疾患マーカーが、膵疾患罹患者から採取された十二指腸液試料中の濃度が、膵疾患非罹患者から採取された十二指腸液試料中の濃度よりも高くなるマーカーである場合には、膵疾患マーカーの濃度が、予め年齢層ごとに設定されたカットオフ値以上の場合に、当該被験者が膵疾患を発症している可能性が高いと評価し、年齢層ごとに設定されたカットオフ値未満の場合に、当該被験者が膵疾患を発症している可能性が低いと評価する。
【００２５】
本発明に係る評価方法において指標とする膵疾患マーカーは、膵疾患の非罹患者と比較して、膵疾患に罹患している患者において、膵液中の濃度が有意に高くなる生体分子であればよく、特に限定されるものではない。本発明においては、膵疾患マーカーは、糖タンパク質や酵素等の、十二指腸液中に含まれている消化酵素の影響を受け難い生体分子であることが好ましい。本発明に係る評価方法において指標とする膵疾患マーカーとしては、Ｓ１００タンパク質（Ｓ１００Ｐ）、ＮＧＡＬ、ＭＩＣ−１、ＣＥＡ、ＣＡ１９−９（例えば、非特許文献１参照。）、ＭＵＣ−１（ＫＬ−６）（例えば、特許文献４等参照）、ＭＭＰ２（Ｍａｔｒｉｘ  Ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−２）（例えば、非特許文献２参照）、ＭＭＰ７（Ｍａｔｒｉｘ  Ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−７）等が挙げられる。中でも、Ｓ１００Ｐ、ＮＧＡＬ、ＭＩＣ−１、ＣＥＡ等のように、評価する目的の膵疾患に罹患している被検者において、非罹患者よりも膵液中の濃度が有意に高くなる物質が好ましく、Ｓ１００Ｐが特に好ましい。例えば、Ｓ１００Ｐは、膵癌細胞からの分泌が増大するため、Ｓ１００Ｐを膵疾患マーカーとすることにより、早期発見が難しい上に予後が非常に悪いとされる膵癌の罹患可能性を高い信頼度で評価することができ、ひいては膵癌の早期発見に寄与し得る。
【００２６】
工程（ａ）において、本発明に係る評価方法に供される十二指腸液試料は、被験者から採取された十二指腸液自体であってもよく、採取された十二指腸液に各種添加剤やバッファー等を添加したものであってもよい。添加剤としては、界面活性剤、タンパク質分解酵素阻害剤、核酸分解酵素阻害剤、ｐＨ調整剤等の、十二指腸液試料中の成分の分解や変性を抑制するための試薬等が挙げられる。バッファーとしては、リン酸生理食塩水（ＰＢＳ）、ＨＥＰＥＳバッファー等のようなタンパク質や核酸の検出のための反応液調製に用いられるバッファーを用いることができる。添加剤等は、生体から採取された十二指腸液を含む容器に添加してもよく、予め容器に入れておき、当該容器に十二指腸液を直接採取することもできる。
【００２７】
十二指腸液は、被験者から常法により採取することができる。例えば、十二指腸液を内視鏡カテーテルに接続したシリンジや真空ポンプなどの吸引手段にて採取することができる。具体的には、内視鏡を口腔から十二指腸まで挿入し、鉗子チャネルを挿通して挿入したカテーテルを用いて、十二指腸の第二・第三ポーションに存在する十二指腸液を吸引し採取する。例えば、いわゆる胃カメラとしての胃・十二指腸の内視鏡検査（上部内視鏡検査）のついでに、十二指腸の腸管内に貯留している十二指腸液を採取してもよい。
【００２８】
工程（ａ）に供される十二指腸液試料は、被験者から採取された直後のものであってもよく、室温、冷蔵、又は冷凍で保存した後のものであってもよく、凍結乾燥処理により得られた凍結粉末であってもよい。その他、十二指腸液試料は、遠心分離処理等により、細胞等の固形分を分離除去した後に工程（ａ）に供されてもよい。
【００２９】
工程（ａ）において、十二指腸液試料中の膵疾患マーカーの濃度を測定する方法は、試料中の膵疾患マーカーを定量的又は半定量的に検出し得る測定方法であれば特に限定されるものではない。例えば、ＥＬＩＳＡ、イムノクロマト、二次元電気泳動、ウエスタンブロット、質量分析法などを用いた種々のタンパク質解析や、ＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ、プローブを用いたハイブリダイゼーションなどを用いた種々の核酸解析等によって、各種膵疾患マーカーを定量的又は半定量的に検出することができる。また、生化学自動分析装置等の各種分析装置を用いることにより、多数の十二指腸液試料について、迅速かつ容易に膵疾患マーカーの定量的又は半定量的な検出を行うことができる。これらの方法は常法により行うことができる。
【実施例】
【００３０】
次に実施例等を示して本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。【００３１】
［実施例１］
２つの医療施設の患者のうち、Ｓ１００Ｐ濃度が検出限界値以上（０超）である、５０歳以上であり、かつ膵臓に疾患がない若しくは膵癌のステージが、０、Ｉ、若しくはＩＩＡである男女合計７１名を対象とし、十二指腸液試料中のＳ１００Ｐ濃度と膵癌の罹患の有無について統計学的解析を行った。なお、５０歳未満の患者では、膵癌罹患の確率が非常に低いため、本実験からは除外した。Ｓ１００Ｐ濃度が検出限界値以上（０超）である患者は２９６名であり、そのうち５０歳以上が２５４名、５０歳未満が４２名であった。
これらの患者は、膵臓に疾患がなく、かつ膵癌の家族歴もない患者群（１ａ群）、膵臓に疾患がないが、膵癌の家族歴がある患者群（１ｂ群）、膵癌の早期（ステージ０とステージＩ）の患者群（０／Ｉ群）、膵癌のステージＩＩＡの患者群（ＩＩＡ群）に分けた。【００３２】
各患者から採取された十二指腸液試料中のＳ１００Ｐ濃度（ｐｇ／ｍＬ）を、ＣｉｒｃｕＬｅｘ  Ｓ１００Ｐ  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ（Ｃｙｃｌｅｘ社製、カタログ番号：ＣＹ−８０６０）を用いて測定した。Ｓ１００Ｐ濃度の測定値を、膵臓に疾患がない患者群（１ａ群と１ｂ群の合計；１ａ＋１ｂ群）と膵癌患者群（０／Ｉ群とＩＩＡ群の合計；０／Ｉ＋ＩＩＡ群）を識別するカットオフ値を求めるために、各患者のＳ１００Ｐ濃度からＲＯＣ曲線を作成したところ、ＲＯＣ曲線下の面積（ＡＵＣ）は０．７０３７（９５％信頼区間：０．５７８７〜０．８０３８）にとどまった（図１）。【００３３】
１ａ＋１ｂ群と０／Ｉ＋ＩＩＡ群について、患者の年齢ごとにＳ１００Ｐ濃度の測定値をプロットした結果を図２に示す。この結果、膵臓が正常な１ａ＋１ｂ群では、年齢が高くなるほど、Ｓ１００Ｐ濃度が低下する傾向が観察された。【００３４】
そこで、Ｓ１００Ｐ濃度（ｐｇ／ｍＬ）の常用対数値（ｌｏｇ１０［膵疾患マーカー濃度（ｐｇ／ｍＬ）］）、年齢、性別、施設、糖尿病の有無、食道の疾患の有無、喫煙歴のうち、それぞれ一つをロジスティック・モデルの説明変数とし、膵癌のステージ（１ａ＋１ｂ群か０／Ｉ＋ＩＩＡ群）との関連を調べた。各説明変数におけるオッズ比と９５％信頼区間、ｐ値を表１に示す。表中、「ｌｏｇ１０（Ｓ１００Ｐ）」はＳ１００Ｐ濃度の常用対数値を示す。この結果、膵癌のステージは、Ｓ１００Ｐの対数変換値、年齢、及び糖尿病の有無と統計学的に有意な関連を示したが、性別、施設、食道の疾患の有無、喫煙歴とは統計学的に有意な関連がなかった。【００３５】
【表１】
2017073226.tif 000003
【００３６】
＜スコア値＞
特に、Ｓ１００Ｐ濃度の常用対数値と年齢の関連が強かったこと、糖尿病は年齢と関連していることから、膵癌のステージと糖尿病の関連は年齢を介した関連の可能性が考えられた。そこで、特に年齢に注目して、Ｓ１００Ｐ濃度の常用対数値と年齢を説明変数とした多重ロジスティック回帰を行ったところ、下記式（２）で表されるスコア値Ｐ１が得られた。【００３７】
（２）  ｌｏｇ〔Ｐ１／（１−Ｐ１）〕＝１．８２２７２×［Ｓ１００Ｐ濃度（ｐｇ／ｍＬ）の常用対数値］＋０．１３７５３×［被検者の年齢（歳）］−１８．２２７３【００３８】
得られたスコア値Ｐ１を用いてＲＯＣ曲線を作成したところ、ＡＵＣが０．８２４３（９５％信頼区間：０．７１９７〜０．９０８２）にまで増加した（図３）。また、特異度９０％で膵癌の罹患の有無を評価するためには、スコア値０．６３４９７４とすればよく、この際の感度は５１．８５％であった。【００３９】
次いで、ロジスティック・モデルにＳ１００Ｐ濃度の常用対数値及び年齢に上記の３変数（施設、糖尿病、食道疾患）のそれぞれ１つ以上を、全ての組み合わせで投入した。各組み合わせにより得られたスコア値からＲＯＣ曲線を作成し、ＡＵＣを求めた。前記３変数を加えたロジスティック回帰モデルから得られたＡＵＣとＳ１００Ｐ濃度の常用対数値及び年齢の２変数によるＡＵＣからの差の検定結果を表２に示す。この結果、いずれもＳ１００Ｐ濃度の常用対数値及び年齢の２変数によるロジスティック・モデルから得られたＲＯＣ曲線のＡＵＣより統計学的に有意に増加した場合はなかったため、Ｓ１００Ｐ濃度の常用対数値と年齢の組み合わせにより、膵癌の罹患の有無を精度良く評価できることがわかった。【００４０】
【表２】
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【００４１】
＜年齢層ごとのカットオフ値の設定＞
前述の７１名の患者を５０〜５９歳層、６０〜６９歳層、７０歳以上層に分け、それぞれの年齢層ごとに、Ｓ１００Ｐ濃度からＲＯＣ曲線を作成し、特異度が９０％前後となるようにカットオフ値を決定し、感度を求めた。また、全年齢層（５０歳以上層）についてもＳ１００Ｐ濃度からＲＯＣ曲線を作成し、特異度が９０％前後となるようにカットオフ値を決定し、感度を求めた。さらに、５０〜５９歳層、６０〜６９歳層、７０歳以上層について、カットオフ値を全年齢層で求めたカットオフ値（一律カットオフ値）とした場合の感度と特異度を算出した。結果を表３に示す。表中、「５０−５９」は５０〜５９歳層、「６０−６９」は６０〜６９歳層、「７０−」は７０歳以上層、「５０−」は５０歳以上層を示す。【００４２】
【表３】
2017073226.tif 000005
【００４３】
一律にカットオフ値を決めた場合のカットオフ値（１３７１１６ｐｇ／ｍＬ）を用いた場合の感度及び特異度と、年齢層ごとに特異度が９０％前後になるようにカットオフ値を決めた場合の感度及び特異度を比較すると、５０〜５９歳層では特に差はなかったが、６０歳以上の年齢層では、年齢層ごとにそれぞれカットオフ値を定めたほうが、より高い検査性能がえられた。６０〜６９歳層では、年齢層ごとに定めたほうが高い特異度が得られた。７０歳以上層では、一律カットオフ値では特異度が高くなるものの、感度が激減してしまったが、年齢層ごとに定めたカットオフ値では、感度も特異度も良好であった。【００４４】
６０〜６９歳層を、６０〜６４歳層と６５〜６９歳層に分け、それぞれの年齢層ごとに、Ｓ１００Ｐ濃度からＲＯＣ曲線を作成し、特異度が９０％前後となるようにカットオフ値を決定し、感度を求めた。結果を表４に示す。表中、「６０−６４」は６０〜６４歳層、「６５−６９」は６５〜６９歳層、「７０−」は７０歳以上層を示す。この結果、６０〜６４歳層は５０〜５９歳層と同様に、一律カットオフ値を用いた場合と年齢層ごとにカットオフ値を設定した場合で特に差はなかったが、６５〜６９歳層では、一律カットオフ値よりも年齢層ごとに定めたほうが高い特異度が得られた。【００４５】
【表４】
2017073226.tif 000006
【図１】
2017073226.tif 000007
【図２】
2017073226.tif 000008
【図３】
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【手続補正書】
【提出日】平成29年6月8日(2017.6.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）被検者から採取された十二指腸液試料中の膵疾患マーカーの濃度を測定する工程と、
（ｂ）前記被験者の年齢に応じて、前記工程（ａ）において測定された前記膵疾患マーカーの濃度に対して加齢による低下分を補正したスコア値と、カットオフ値とを比較して、前記被験者の膵疾患の罹患可能性を評価する工程、又は
前記被験者の年齢に応じて、前記膵疾患マーカーの加齢による低下分を補正したカットオフ値と、前記工程（ａ）において測定された前記膵疾患マーカーの濃度とを比較して、前記被験者の膵疾患の罹患可能性を評価する工程と、
を有する、膵疾患の罹患可能性評価方法。
【請求項２】
前記膵疾患マーカーは、膵疾患罹患者から採取された十二指腸液試料中の濃度が、膵疾患非罹患者から採取された十二指腸液試料中の濃度よりも高くなるマーカーである、請求項１に記載の膵疾患の罹患可能性評価方法。
【請求項３】
前記膵疾患マーカーは、膵疾患罹患者から採取された十二指腸液試料中の濃度が、膵疾患非罹患者から採取された十二指腸液試料中の濃度よりも高くなるマーカーであり、
前記工程（ｂ）において、前記被験者の年齢に応じて、前記工程（ａ）において測定された前記膵疾患マーカーの濃度に対して加齢による低下分を補正したスコア値が、被験者の年齢によらず一律に設定されたカットオフ値以上の場合に、前記被験者が膵疾患を発症している可能性が高いと評価し、前記カットオフ値未満の場合に、前記被験者が膵疾患を発症している可能性が低いと評価する、請求項１に記載の膵疾患の罹患可能性評価方法。
【請求項４】
前記工程（ａ）において測定された前記膵疾患マーカーの濃度と、前記スコア値Ｐとが、下記式（１）の関係を満たす、請求項３に記載の膵疾患の罹患可能性評価方法。
（１）  ｌｏｇ〔Ｐ／（１−Ｐ）〕＝ａ×ｌｏｇ１０［膵疾患マーカー濃度］＋ｂ×［被検者の年齢］＋ｃ
［式（１）中、ａ、ｂ、及びｃは、膵疾患罹患者群及び膵疾患非罹患者群から採取された十二指腸液試料中の前記膵疾患マーカーの濃度と年齢を説明変数とする多重ロジスティック回帰分析により決定される実数である。］
【請求項５】
前記膵疾患マーカーは、膵疾患罹患者から採取された十二指腸液試料中の濃度が、膵疾患非罹患者から採取された十二指腸液試料中の濃度よりも高くなるマーカーであり、
前記工程（ｂ）において、前記膵疾患マーカーの濃度が、前記被験者の年齢に応じて、前記膵疾患マーカーの加齢による低下分を補正したカットオフ値以上の場合に、前記被験者が膵疾患を発症している可能性が高いと評価し、前記カットオフ値未満の場合に、前記被験者が膵疾患を発症している可能性が低いと評価する、請求項１に記載の膵疾患の罹患可能性評価方法。
【請求項６】
前記膵疾患マーカーの加齢による低下分を補正したカットオフ値は、年齢層が高いほど低く補正される、請求項５に記載の膵疾患の罹患可能性評価方法。
【請求項７】
前記膵疾患マーカーがＳ１００タンパク質である、請求項１に記載の膵疾患の罹患可能性評価方法。
【請求項８】
前記膵疾患が膵癌である、請求項１に記載の膵疾患の罹患可能性評価方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
すなわち、本発明に係る膵疾患の罹患可能性評価方法は、下記［１］〜［８］である。
［１］  （ａ）被検者から採取された十二指腸液試料中の膵疾患マーカーの濃度を測定する工程と、
（ｂ）前記被験者の年齢に応じて、前記工程（ａ）において測定された前記膵疾患マーカーの濃度に対して加齢による低下分を補正したスコア値と、カットオフ値とを比較して、前記被験者の膵疾患の罹患可能性を評価する工程、又は
前記被験者の年齢に応じて、前記膵疾患マーカーの加齢による低下分を補正したカットオフ値と、前記工程（ａ）において測定された前記膵疾患マーカーの濃度とを比較して、前記被験者の膵疾患の罹患可能性を評価する工程と、
を有する、膵疾患の罹患可能性評価方法。
［２］  前記膵疾患マーカーは、膵疾患罹患者から採取された十二指腸液試料中の濃度が、膵疾患非罹患者から採取された十二指腸液試料中の濃度よりも高くなるマーカーである、前記［１］の膵疾患の罹患可能性評価方法。
［３］  前記膵疾患マーカーは、膵疾患罹患者から採取された十二指腸液試料中の濃度が、膵疾患非罹患者から採取された十二指腸液試料中の濃度よりも高くなるマーカーであり、
前記工程（ｂ）において、前記被験者の年齢に応じて、前記工程（ａ）において測定された前記膵疾患マーカーの濃度に対して加齢による低下分を補正したスコア値が、被験者の年齢によらず一律に設定されたカットオフ値以上の場合に、前記被験者が膵疾患を発症している可能性が高いと評価し、前記カットオフ値未満の場合に、前記被験者が膵疾患を発症している可能性が低いと評価する、前記［１］の膵疾患の罹患可能性評価方法。
［４］  前記工程（ａ）において測定された前記膵疾患マーカーの濃度と、前記スコア値Ｐとが、下記式（１）の関係を満たす、前記［３］の膵疾患の罹患可能性評価方法。
（１）  ｌｏｇ〔Ｐ／（１−Ｐ）〕＝ａ×ｌｏｇ１０［膵疾患マーカー濃度］＋ｂ×［被検者の年齢］＋ｃ
［式（１）中、ａ、ｂ、及びｃは、膵疾患罹患者群及び膵疾患非罹患者群から採取された十二指腸液試料中の前記膵疾患マーカーの濃度と年齢を説明変数とする多重ロジスティック回帰分析により決定される実数である。］
［５］  前記膵疾患マーカーは、膵疾患罹患者から採取された十二指腸液試料中の濃度が、膵疾患非罹患者から採取された十二指腸液試料中の濃度よりも高くなるマーカーであり、
前記工程（ｂ）において、前記膵疾患マーカーの濃度が、前記被験者の年齢に応じて、前記膵疾患マーカーの加齢による低下分を補正したカットオフ値以上の場合に、前記被験者が膵疾患を発症している可能性が高いと評価し、前記カットオフ値未満の場合に、前記被験者が膵疾患を発症している可能性が低いと評価する、前記［１］の膵疾患の罹患可能性評価方法。
［６］  前記膵疾患マーカーの加齢による低下分を補正したカットオフ値は、年齢層が高いほど低く補正される、前記［５］の膵疾患の罹患可能性評価方法。
［７］  前記膵疾患マーカーがＳ１００タンパク質である、前記［１］の膵疾患の罹患可能性評価方法。
［８］  前記膵疾患が膵癌である、前記［１］の膵疾患の罹患可能性評価方法。
【手続補正書】
【提出日】平成29年9月5日(2017.9.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）被検者から採取された十二指腸液試料中の膵疾患マーカーの濃度を測定する工程と、
（ｂ）前記被験者の年齢に応じて、前記工程（ａ）において測定された前記膵疾患マーカーの濃度に対して加齢による低下分を補正したスコア値と、カットオフ値とを比較して、前記被験者の膵癌の罹患可能性を評価するための工程、又は
前記被験者の年齢に応じて、前記膵疾患マーカーの加齢による低下分を補正したカットオフ値と、前記工程（ａ）において測定された前記膵疾患マーカーの濃度とを比較して、前記被験者の膵癌の罹患可能性を評価するための工程と、
を有し、
前記膵疾患マーカーがＳ１００タンパク質である、膵癌の罹患可能性を評価するための方法。
【請求項２】
前記工程（ｂ）において、前記被験者の年齢に応じて、前記工程（ａ）において測定された前記膵疾患マーカーの濃度に対して加齢による低下分を補正したスコア値が、被験者の年齢によらず一律に設定されたカットオフ値以上の場合に、前記被験者が膵癌を発症している可能性が高いことを示し、前記カットオフ値未満の場合に、前記被験者が膵癌を発症している可能性が低いことを示す、請求項１に記載の膵癌の罹患可能性を評価するための方法。
【請求項３】
前記工程（ａ）において測定された前記膵疾患マーカーの濃度と、前記スコア値Ｐとが、下記式（１）の関係を満たす、請求項２に記載の膵癌の罹患可能性を評価するための方法。
（１）  ｌｏｇ〔Ｐ／（１−Ｐ）〕＝ａ×ｌｏｇ１０［膵疾患マーカー濃度］＋ｂ×［被検者の年齢］＋ｃ
［式（１）中、ａ、ｂ、及びｃは、膵癌罹患者群及び膵癌非罹患者群から採取された十二指腸液試料中の前記膵疾患マーカーの濃度と年齢を説明変数とする多重ロジスティック回帰分析により決定される実数である。］
【請求項４】
前記工程（ｂ）において、前記膵疾患マーカーの濃度が、前記被験者の年齢に応じて、前記膵疾患マーカーの加齢による低下分を補正したカットオフ値以上の場合に、前記被験者が膵癌を発症している可能性が高いことを示し、前記カットオフ値未満の場合に、前記被験者が膵癌を発症している可能性が低いことを示す、請求項１に記載の膵癌の罹患可能性を評価するための方法。
【請求項５】
前記膵疾患マーカーの加齢による低下分を補正したカットオフ値は、年齢層が高いほど低く補正される、請求項４に記載の膵癌の罹患可能性を評価するための方法。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
すなわち、本発明に係る膵癌の罹患可能性を評価するための方法は、下記［１］〜［５］である。
［１］  （ａ）被検者から採取された十二指腸液試料中の膵疾患マーカーの濃度を測定する工程と、
（ｂ）前記被験者の年齢に応じて、前記工程（ａ）において測定された前記膵疾患マーカーの濃度に対して加齢による低下分を補正したスコア値と、カットオフ値とを比較して、前記被験者の膵癌の罹患可能性を評価するための工程、又は
前記被験者の年齢に応じて、前記膵疾患マーカーの加齢による低下分を補正したカットオフ値と、前記工程（ａ）において測定された前記膵疾患マーカーの濃度とを比較して、前記被験者の膵癌の罹患可能性を評価するための工程と、
前記膵疾患マーカーがＳ１００タンパク質である、膵癌の罹患可能性を評価するための方法。
［２］  前記工程（ｂ）において、前記被験者の年齢に応じて、前記工程（ａ）において測定された前記膵疾患マーカーの濃度に対して加齢による低下分を補正したスコア値が、被験者の年齢によらず一律に設定されたカットオフ値以上の場合に、前記被験者が膵癌を発症している可能性が高いことを示し、前記カットオフ値未満の場合に、前記被験者が膵癌を発症している可能性が低いことを示す、前記［１］の膵癌の罹患可能性を評価するための方法。
［３］  前記工程（ａ）において測定された前記膵疾患マーカーの濃度と、前記スコア値Ｐとが、下記式（１）の関係を満たす、前記［２］の膵癌の罹患可能性を評価するための方法。
（１）  ｌｏｇ〔Ｐ／（１−Ｐ）〕＝ａ×ｌｏｇ１０［膵疾患マーカー濃度］＋ｂ×［被検者の年齢］＋ｃ
［式（１）中、ａ、ｂ、及びｃは、膵癌罹患者群及び膵癌非罹患者群から採取された十二指腸液試料中の前記膵疾患マーカーの濃度と年齢を説明変数とする多重ロジスティック回帰分析により決定される実数である。］
［４］  前記工程（ｂ）において、前記膵疾患マーカーの濃度が、前記被験者の年齢に応じて、前記膵疾患マーカーの加齢による低下分を補正したカットオフ値以上の場合に、前記被験者が膵癌を発症している可能性が高いことを示し、前記カットオフ値未満の場合に、前記被験者が膵癌を発症している可能性が低いことを示す、前記［１］の膵癌の罹患可能性を評価するための方法。
［５］  前記膵疾患マーカーの加齢による低下分を補正したカットオフ値は、年齢層が高いほど低く補正される、前記［４］の膵癌の罹患可能性を評価するための方法。
【国際調査報告】
2017073226.tif 000010
2017073226.tif 000011
2017073226.tif 000012
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