(57)【要約】タンパク質が吸着しにくく、耐熱性、耐アルカリ性及び成形加工性にも優れた新規な低タンパク質吸着性材料を提供する。含フッ素オレフィン単位及びビニルアルコール単位を有する含フッ素共重合体からなることを特徴とする低タンパク質吸着性材料である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
含フッ素オレフィン単位及びビニルアルコール単位を有する含フッ素共重合体からなることを特徴とする低タンパク質吸着性材料。
【請求項２】
前記含フッ素共重合体における含フッ素オレフィン単位の含有率が６０〜１０モル％である請求項１記載の低タンパク質吸着性材料。
【請求項３】
前記含フッ素共重合体における含フッ素オレフィン単位とビニルアルコール単位との交互率が１〜７５％である請求項１又は２記載の低タンパク質吸着性材料。
【請求項４】
前記含フッ素オレフィンは、テトラフルオロエチレン、クロロトリフルオロエチレン及びヘキサフルオロプロピレンからなる群より選択される少なくとも１種である請求項１、２又は３記載の低タンパク質吸着性材料。
【請求項５】
前記含フッ素共重合体は、含フッ素オレフィン単位、ビニルアルコール単位及びビニルエステルモノマー単位を有する請求項１、２、３又は４記載の低タンパク質吸着性材料。
【請求項６】
コーティング膜である請求項１、２、３、４又は５記載の低タンパク質吸着性材料。
【請求項７】
請求項１、２、３、４又は５記載の低タンパク質吸着性材料を含むことを特徴とするコーティング用組成物。
【請求項８】
請求項１、２、３、４又は５記載の低タンパク質吸着性材料から形成されることを特徴とするコーティング層。
【請求項９】
請求項１、２、３、４、５若しくは６記載の低タンパク質吸着性材料、請求項７記載のコーティング組成物、又は、請求項８記載のコーティング層からなり、バッグ、シート、フィルム、バイアル瓶、シャーレ、又は、フラスコであることを特徴とする低タンパク質吸着性物品。
【請求項１０】
請求項１、２、３、４、５若しくは６記載の低タンパク質吸着性材料、請求項７記載のコーティング組成物、又は、請求項８記載のコーティング層からなり、バイオ医薬用バッグ、バイオ医薬用シート、バイオ医薬用フィルム、バイオ医薬用バイアル瓶、バイオ医薬用シャーレ、又は、バイオ医薬用フラスコであることを特徴とする低タンパク質吸着性物品。
【請求項１１】
含フッ素オレフィン単位及びビニルアルコール単位を有する含フッ素共重合体からなることを特徴とする低細胞付着性材料。
【請求項１２】
前記含フッ素共重合体における含フッ素オレフィン単位の含有率が６０〜１０モル％である請求項１１記載の低細胞付着性材料。
【請求項１３】
前記含フッ素共重合体における含フッ素オレフィン単位とビニルアルコール単位との交互率が１〜７５％である請求項１１又は１２記載の低細胞付着性材料。
【請求項１４】
前記含フッ素オレフィンは、テトラフルオロエチレン、クロロトリフルオロエチレン及びヘキサフルオロプロピレンからなる群より選択される少なくとも１種である請求項１１、１２又は１３記載の低細胞付着性材料。
【請求項１５】
前記含フッ素共重合体は、含フッ素オレフィン単位、ビニルアルコール単位及びビニルエステルモノマー単位を有する請求項１１、１２、１３又は１４記載の低細胞付着性材料。
【請求項１６】
コーティング膜である請求項１１、１２、１３、１４又は１５記載の低細胞付着性材料。
【請求項１７】
請求項１１、１２、１３、１４又は１５記載の低細胞付着性材料を含むことを特徴とするコーティング用組成物。
【請求項１８】
請求項１１、１２、１３、１４又は１５記載の低細胞付着性材料から形成されることを特徴とするコーティング層。
【請求項１９】
請求項１１、１２、１３、１４、１５若しくは１６記載の低細胞付着性材料、請求項１７記載のコーティング用組成物、又は、請求項１８記載のコーティング層からなり、バッグ、シート、フィルム、バイアル瓶、シャーレ、又は、フラスコであることを特徴とする低細胞付着性物品。
【請求項２０】
請求項１１、１２、１３、１４、１５若しくは１６記載の低細胞付着性材料、請求項１７記載のコーティング用組成物、又は、請求項１８記載のコーティング層からなり、細胞培養用バッグ、細胞培養用シート、細胞培養用フィルム、細胞培養用バイアル瓶、細胞培養用シャーレ、又は、細胞培養用フラスコであることを特徴とする低細胞付着性物品。
【請求項２１】
請求項１１、１２、１３、１４、１５若しくは１６記載の低細胞付着性材料、請求項１７記載のコーティング用組成物、又は、請求項１８記載のコーティング層からなり、胚様体形成用培養容器であることを特徴とする低細胞付着性物品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、低タンパク質吸着性材料、低タンパク質吸着性物品、低細胞付着性材料および低細胞付着性物品に関する。
【背景技術】
【０００２】
血液を保管するための器具、細胞を培養するための器具等を構成する材料として、高分子材料が使用されている。用途によって、高分子材料への血液の吸着を抑制したいとの要求があったり、高分子材料に細胞を吸着させたいとの要求があったりする。これらの要求に応えるために、血液や細胞の高分子材料に対する吸着性を制御する試みがなされてきた。【０００３】
特許文献１には、表面の少なくとも一部が疎水性弗素樹脂と親水性弗素樹脂とから構成されていることを特徴とする生体親和性基材が記載されている。【０００４】
特許文献２には、医療用物品であって、埋め込み型医療用具の少なくとも一部に配置されるコーティングを含み、前記コーティングが（ａ）フッ素化ポリマー、及び（ｂ）生体有益性のポリマーを含む医療用物品が記載されている。【０００５】
特許文献３には、水処理用や医療用に用いられる膜として、テトラフルオロエチレン（ＴＦＥ）と酢酸ビニル（ＶＡｃ）との共重合体又は該共重合体に含まれるアセテート基の少なくとも一部をケン化した共重合体からなり、該共重合体中に含まれるテトラフルオロエチレン含有率が１〜７０モル％であることを特徴とする含フッ素共重合体膜が記載されている。【０００６】
特許文献４には、水系液体の分離膜に用いられる親水化材料として、テトラフルオロエチレンとｔ−ブチルビニルエーテル又は酢酸ビニルとの共重合体を脱保護して得られる共重合体が記載されている。【０００７】
特許文献５には、支持層表面に低タンパク質吸着層を有する成形物であって、該低タンパク質吸着層が両親媒性の重合体からなり、支持層に共有結合で結合して層を形成していることを特徴とする低タンパク質吸着性成形物が記載されている。【０００８】
特許文献６には、２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン重合体及び／又は２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン含有成分の共重合体を含むタンパク質吸着防止剤が記載されている。【０００９】
特許文献７には、水溶性（メタ）アクリル酸エステル重合体中に、水膨潤性粘土鉱物が微分散している高分子複合体を用いた細胞培養基材が記載されている。【００１０】
特許文献８には、ウエル内表面がポリメタクリレートにて構成されており、足場非依存性細胞の増殖が容易である細胞培養ウエルプレートが記載されている。【００１１】
特許文献９には、水溶性樹脂を用いた細胞低接着化処理または細胞非接着化処理にて形成されることを特徴とする胚様体形成用培養容器が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】特開平４−３３６０７２号公報
【特許文献２】特表２００７−５１５２０８号公報
【特許文献３】特開平５−２６１２５６号公報
【特許文献４】国際公開第２０１２／１６５５０３号
【特許文献５】特開２００４−２７７６５２号公報
【特許文献６】特開平７−８３９２３号公報
【特許文献７】特開２０１３−１７６４０２号公報
【特許文献８】特開平８−３２２５９３号公報
【特許文献９】特開２０１２−２１０１６６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明は、タンパク質が吸着しにくく、耐熱性、耐アルカリ性及び成形加工性にも優れた新規な低タンパク質吸着性材料および細胞が付着しにくく、耐熱性、耐アルカリ性及び成形加工性にも優れた新規な低細胞付着性材料を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明は、含フッ素オレフィン単位及びビニルアルコール単位を有する含フッ素共重合体からなることを特徴とする低タンパク質吸着性材料である。【００１５】
本発明の低タンパク質吸着性材料において含フッ素共重合体における含フッ素オレフィン単位の含有率が６０〜１０モル％であることが好ましい。【００１６】
本発明の低タンパク質吸着性材料において含フッ素共重合体における含フッ素オレフィン単位とビニルアルコール単位との交互率が１〜７５％であることが好ましい。【００１７】
本発明の低タンパク質吸着性材料において含フッ素オレフィンは、テトラフルオロエチレン、クロロトリフルオロエチレン及びヘキサフルオロプロピレンからなる群より選択される少なくとも１種であることが好ましい。【００１８】
本発明の低タンパク質吸着性材料において含フッ素共重合体は、含フッ素オレフィン単位、ビニルアルコール単位及びビニルエステルモノマー単位を有することが好ましい。【００１９】
上記低タンパク質吸着性材料は、コーティング膜であることが好ましい。【００２０】
本発明は、上述の低タンパク質吸着性材料を含むことを特徴とするコーティング用組成物でもある。【００２１】
本発明は、上述の低タンパク質吸着性材料から形成されることを特徴とするコーティング層でもある。【００２２】
本発明は、上述の低タンパク質吸着性材料、上述のコーティング組成物、又は、上述のコーティング層からなり、バッグ、シート、フィルム、バイアル瓶、シャーレ、又は、フラスコであることを特徴とする低タンパク質吸着性物品でもある。【００２３】
本発明は、上述の低タンパク質吸着性材料、上述のコーティング組成物、又は、上述のコーティング層からなり、バイオ医薬用バッグ、バイオ医薬用シート、バイオ医薬用フィルム、バイオ医薬用バイアル瓶、バイオ医薬用シャーレ、又は、バイオ医薬用フラスコであることを特徴とする低タンパク質吸着性物品でもある。【００２４】
本発明は、含フッ素オレフィン単位及びビニルアルコール単位を有する含フッ素共重合体からなることを特徴とする低細胞付着性材料でもある。【００２５】
本発明の低細胞付着性材料において含フッ素共重合体における含フッ素オレフィン単位の含有率が６０〜１０モル％であることが好ましい。【００２６】
本発明の低細胞付着性材料において含フッ素共重合体における含フッ素オレフィン単位とビニルアルコール単位との交互率が１〜７５％であることが好ましい。【００２７】
本発明の低細胞付着性材料において含フッ素オレフィンは、テトラフルオロエチレン、クロロトリフルオロエチレン及びヘキサフルオロプロピレンからなる群より選択される少なくとも１種であることが好ましい。【００２８】
本発明の低細胞付着性材料において含フッ素共重合体は、含フッ素オレフィン単位、ビニルアルコール単位及びビニルエステルモノマー単位を有することが好ましい。【００２９】
上記低細胞付着性材料は、コーティング膜であることが好ましい。【００３０】
本発明は、上述の低細胞付着性材料を含むことを特徴とするコーティング用組成物でもある。【００３１】
本発明は、上述の低細胞付着性材料から形成されることを特徴とするコーティング層でもある。【００３２】
本発明は、上述の低細胞付着性材料、上述のコーティング用組成物、又は、上述のコーティング層からなり、バッグ、シート、フィルム、バイアル瓶、シャーレ、又は、フラスコであることを特徴とする低細胞付着性物品でもある。【００３３】
本発明は、上述の低細胞付着性材料、上述のコーティング用組成物、又は、上述のコーティング層からなり、細胞培養用バッグ、細胞培養用シート、細胞培養用フィルム、細胞培養用バイアル瓶、細胞培養用シャーレ、又は、細胞培養用フラスコであることを特徴とする低細胞付着性物品でもある。【００３４】
本発明は、上述の低細胞付着性材料、上述のコーティング用組成物、又は、上述のコーティング層からなり、胚様体形成用培養容器であることを特徴とする低細胞付着性物品でもある。
【発明の効果】
【００３５】
本発明の低タンパク質吸着性材料は、タンパク質が吸着しにくく、耐熱性、耐アルカリ性及び成形加工性にも優れている。本発明の低タンパク質吸着性材料からは、タンパク質が吸着しにくく、耐熱性、耐アルカリ性及び成形加工性にも優れた物品を得ることができる。また、本発明の低細胞付着性材料は、細胞が付着しにくく、耐熱性、耐アルカリ性及び成形加工性にも優れている。本発明の低細胞付着性材料からは、細胞が付着しにくく、耐熱性、耐アルカリ性及び成形加工性にも優れた物品を得ることができる。【００３６】
本発明の低タンパク質吸着性物品は、表面にタンパク質が吸着しにくく、耐熱性、耐アルカリ性及び成形加工性にも優れている。また、本発明の低細胞付着性物品は、表面に細胞が付着しにくく、耐熱性、耐アルカリ性及び成形加工性にも優れている。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
以下、本発明を具体的に説明する。
【００３８】
本発明の低タンパク質吸着性材料および低細胞付着性材料は、含フッ素オレフィン単位及びビニルアルコール単位（−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−）を有する含フッ素共重合体からなる。上記含フッ素共重合体の低タンパク質吸着性および低細胞付着性は本発明者等によって新たに見出された特性である。
【００３９】
本発明の低タンパク質吸着性材料および低細胞付着性材料は、耐熱性にも優れるので、高温で実施する滅菌処理にも耐え得る。例えば、１２１℃で実施するオートクレーブ滅菌にも耐え得る。本発明の低タンパク質吸着性材料および低細胞付着性材料は、分解温度が１２１℃超であることが好ましい。
【００４０】
本発明の低タンパク質吸着性材料および低細胞付着性材料は、耐アルカリ性にも優れるので、次亜塩素酸を含むアルカリ性の水溶液を使用する消毒にも耐え得る。例えば、本発明の低タンパク質吸着性材料および低細胞付着性材料は、０．５質量％の次亜塩素酸ナトリウム及び０．４質量％の水酸化ナトリウムを含む水溶液中に、２４時間浸漬した場合でも、重量変化率が１０質量％以下である。
【００４１】
本発明の低タンパク質吸着性材料および低細胞付着性材料は、成形加工性にも優れる。例えば、本発明の低タンパク質吸着性材料および低細胞付着性材料が有機溶剤を含む塗料組成物である場合、有機溶剤としてアルコール等の弱溶剤を使用することができるので、強溶剤により侵食される基材や下塗りにも適用できる。
【００４２】
上記含フッ素共重合体は、上記含フッ素オレフィン単位を、上記含フッ素共重合体を構成する全単量体単位の６０〜１０モル％含有することが好ましい。より好ましくは４０〜１０モル％であり、更に好ましくは３５〜２０モル％であり、より更に好ましくは３５〜２５モル％である。上記含フッ素オレフィン単位の含有率が上記範囲内にあると、低タンパク質吸着性材料にタンパク質が更に吸着しにくく、また、上記低細胞付着性材料に細胞が更に付着しにくい。上記含フッ素オレフィン単位の含有率が１０モル％未満にあると、含フッ素共重合体の水溶性が高くなり、含フッ素共重合体が水中に溶出しやすくなり機能が発現しにくくなる。上記含フッ素オレフィン単位の含有量が多い方が、上記低タンパク質吸着性材料及び上記低細胞付着性材料の耐熱性、耐アルカリ性及び成形加工性が優れる傾向がある。
【００４３】
上記含フッ素共重合体は、含フッ素オレフィン単位が６０〜１０モル％であり、ビニルアルコール単位が４０〜９０モル％であることが好ましい。各モノマー単位の含有率としては、含フッ素オレフィン単位が４０〜１０モル％であり、ビニルアルコール単位が６０〜９０モル％であることがより好ましく、含フッ素オレフィン単位が３５〜２０モル％であり、ビニルアルコール単位が６５〜８０モル％であることが更に好ましく、含フッ素オレフィン単位が３５〜２５モル％であり、ビニルアルコール単位が６５〜７５モル％であることがより更に好ましい。各モノマー単位の含有率がこのような範囲であることによって、低タンパク質吸着性材料にタンパク質が更に吸着しにくく、また、上記低細胞付着性材料に細胞が更に付着しにくい。上記含フッ素オレフィン単位の含有率が１０モル％未満にあると、含フッ素共重合体の水溶性が高くなり、含フッ素共重合体が水中に溶出しやすくなり機能が発現しにくくなる。上記含フッ素オレフィン単位の含有量が多い方が、上記低タンパク質吸着性材料及び上記低細胞付着性材料の耐熱性、耐アルカリ性及び成形加工性が優れる傾向がある。
【００４４】
上記含フッ素オレフィン単位とは、含フッ素オレフィンに基づく重合単位を表している。該含フッ素オレフィンは、フッ素原子を有する単量体である。
【００４５】
上記含フッ素オレフィンとしては、テトラフルオロエチレン〔ＴＦＥ〕、フッ化ビニリデン〔ＶｄＦ〕、クロロトリフルオロエチレン〔ＣＴＦＥ〕、フッ化ビニル、へキサフルオロプロピレン〔ＨＦＰ〕、へキサフルオロイソブテン、ＣＨ２＝ＣＺ１（ＣＦ２）ｎ１Ｚ２（式中、Ｚ１はＨ、Ｆ又はＣｌ、Ｚ２はＨ、Ｆ又はＣｌ、ｎ１は１〜１０の整数である。）で示される単量体、ＣＦ２＝ＣＦ−ＯＲｆ１（式中、Ｒｆ１は、炭素数１〜８のパーフルオロアルキル基を表す。）で表されるパーフルオロ（アルキルビニルエーテル）〔ＰＡＶＥ〕、及び、ＣＦ２＝ＣＦ−ＯＣＨ２−Ｒｆ２（式中、Ｒｆ２は、炭素数１〜５のパーフルオロアルキル基）で表されるアルキルパーフルオロビニルエーテル誘導体からなる群より選択される少なくとも１種の含フッ素オレフィンであることが好ましい。
【００４６】
上記ＣＨ２＝ＣＺ１（ＣＦ２）ｎ１Ｚ２で示される単量体としては、ＣＨ２＝ＣＦＣＦ３、ＣＨ２＝ＣＨＣＦ３、ＣＨ２＝ＣＦＣＨＦ２、ＣＨ２＝ＣＣｌＣＦ３等が挙げられる。
【００４７】
上記ＰＡＶＥとしては、パーフルオロ（メチルビニルエーテル）〔ＰＭＶＥ〕、パーフルオロ（エチルビニルエーテル）〔ＰＥＶＥ〕、パーフルオロ（プロピルビニルエーテル）〔ＰＰＶＥ〕、パーフルオロ（ブチルビニルエーテル）等が挙げられる。
【００４８】
上記含フッ素オレフィンとしては、ＴＦＥ、ＣＴＦＥ及びＨＦＰからなる群より選択される少なくとも１種がより好ましく、ＴＦＥが更に好ましい。
【００４９】
上記含フッ素共重合体は、含フッ素オレフィン単位とビニルアルコール単位との交互率が１〜７５％であることが好ましい。交互率が上記範囲内にあると、低タンパク質吸着性材料にタンパク質が更に吸着しにくく、また、上記低細胞付着性材料に細胞が更に付着しにくい。より好ましくは１０〜６０％であり、更に好ましくは１０〜３５％であり、特に好ましくは１０〜２０％である。
【００５０】
含フッ素オレフィン単位とビニルアルコール単位との交互率は、重アセトン等の含フッ素共重合体が溶解する溶媒を用いて、含フッ素共重合体の１Ｈ−ＮＭＲ測定を行い、以下の式より３連鎖の交互率として算出できる。
交互率（％）＝Ｃ／（Ａ＋Ｂ＋Ｃ）×１００
Ａ：−Ｖ−Ｖ−Ｖ−のように２つのＶと結合したＶの個数
Ｂ：−Ｖ−Ｖ−Ｔ−のようにＶとＴとに結合したＶの個数
Ｃ：−Ｔ−Ｖ−Ｔ−のように２つのＴに結合したＶの個数
（Ｔ：含フッ素オレフィン単位、Ｖ：ビニルアルコール単位）
Ａ、Ｂ、ＣのＶ単位の数は、１Ｈ−ＮＭＲ測定のビニルアルコール単位（−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−）の３級炭素に結合する主鎖のＨの強度比より算出する。１Ｈ−ＮＭＲ測定による主鎖のＨの強度比の見積もりは、ケン化前の含フッ素共重合体で実施する。
【００５１】
上記含フッ素共重合体は、タンパク質が更に吸着しにくく、また、細胞が更に付着しにくいことから、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＸＹ−（式中、Ｘ及びＹは、同一又は異なり、それぞれＨ、Ｆ又はフルオロアルキル基を表す。ただし、Ｘ及びＹのうち少なくとも一つはＦ又はフルオロアルキル基である。）で表されるフッ素アルコール構造を有することが好ましい。また、上記含フッ素共重合体は、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＦ２−で表されるフッ素アルコール構造を有することがより好ましい。
【００５２】
上記含フッ素共重合体は、更に、−ＣＨ２−ＣＨ（Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ）−（式中、Ｒは、水素原子又は炭素数１〜１７の炭化水素基を表す。）で表されるビニルエステルモノマー単位を有するものであってもよい。このように、本発明における含フッ素共重合体が、含フッ素オレフィン単位、ビニルアルコール単位及びビニルエステルモノマー単位を有することもまた、本発明の好適な実施形態の１つである。そして更には、実質的に含フッ素オレフィン単位、ビニルアルコール単位及びビニルエステルモノマー単位のみからなる含フッ素オレフィン／ビニルアルコール／ビニルエステルモノマー共重合体であることもまた、本発明の好適な実施形態の１つである。
【００５３】
上記ビニルエステルモノマー単位は、−ＣＨ２−ＣＨ（Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ）−（式中、Ｒは、水素原子又は炭素数１〜１７の炭化水素基を表す。）で表されるモノマー単位であるが、上記式中のＲとしては、炭素数１〜１１のアルキル基が好ましく、炭素数１〜５のアルキル基がより好ましい。特に好ましくは、炭素数１〜３のアルキル基である。
【００５４】
上記ビニルエステルモノマー単位としては、中でも、以下のビニルエステルに由来するモノマー単位などが例示される。
ギ酸ビニル、酢酸ビニル、プロピオン酸ビニル、酪酸ビニル、イソ酪酸ビニル、バレリン酸ビニル、イソバレリン酸ビニル、カプロン酸ビニル、へプチル酸ビニル、カプリル酸ビニル、ピバリン酸ビニル、ペラルゴン酸ビニル、カプリン酸ビニル、ラウリン酸ビニル、ミリスチン酸ビニル、ペンタデシル酸ビニル、パルチミン酸ビニル、マルガリン酸ビニル、ステアリン酸ビニル、オクチル酸ビニル、ベオバ−９（昭和シェル石油（株）製）、ベオバ−１０（昭和シェル石油（株）製）、安息香酸ビニル、バーサチック酸ビニル。
これらの中でも、酢酸ビニル、プロピオン酸ビニル、バーサチック酸ビニルに由来するモノマー単位が好ましい。より好ましくは、酢酸ビニルモノマー単位、プロピオン酸ビニルモノマー単位であり、更に好ましくは、酢酸ビニルモノマー単位である。
【００５５】
上記含フッ素共重合体が、含フッ素オレフィン単位、ビニルアルコール単位及びビニルエステルモノマー単位を有する場合の、各モノマー単位の含有率としては、含フッ素オレフィン単位が６０〜１０モル％であり、ビニルアルコール単位が４０〜９０モル％であり、ビニルエステルモノマー単位が０モル％より多く３０モル％未満であることが好ましい。各モノマー単位の含有率が上記範囲内にあると、低タンパク質吸着性材料にタンパク質が更に吸着しにくく、また、上記低細胞付着性材料に細胞が更に付着しにくい。各モノマー単位の含有率としては、含フッ素オレフィン単位が６０〜１０モル％であり、ビニルアルコール単位が４０〜９０モル％であり、ビニルエステルモノマー単位が０より多く１０モル％未満であることがより好ましく、含フッ素オレフィン単位が４０〜１０モル％であり、ビニルアルコール単位が６０〜９０モル％であり、ビニルエステルモノマー単位が０より多く１．０モル％未満であることが更に好ましく、含フッ素オレフィン単位が３５〜２０モル％であり、ビニルアルコール単位が６５〜８０モル％であり、ビニルエステルモノマー単位が０より多く１．０モル％未満であることがより更に好ましく、含フッ素オレフィン単位が３５〜２５モル％であり、ビニルアルコール単位が６５〜７５モル％であり、ビニルエステルモノマー単位が０より多く１．０モル％未満であることがより更にもっと好ましい。上記含フッ素オレフィン単位の含有量が多い方が、上記低タンパク質吸着性材料及び上記低細胞付着性材料の耐熱性、耐アルカリ性及び成形加工性が優れる傾向がある。
【００５６】
上記含フッ素共重合体が、含フッ素オレフィン単位、ビニルアルコール単位及びビニルエステルモノマー単位を有する場合、含フッ素オレフィン単位とビニルアルコール単位及びビニルエステルモノマー単位との交互率は、１〜７５％であることが好ましい。交互率が上記範囲内にあると、低タンパク質吸着性材料にタンパク質が更に吸着しにくく、また、上記低細胞付着性材料に細胞が更に付着しにくい。より好ましくは１０〜６０％であり、更に好ましくは１０〜３５％であり、特に好ましくは１０〜２０％である。
【００５７】
含フッ素オレフィン単位とビニルアルコール単位及びビニルエステルモノマー単位との交互率は、重アセトン等の含フッ素共重合体が溶解する溶媒を用いて、含フッ素共重合体の１Ｈ−ＮＭＲ測定を行い、以下の式より３連鎖の交互率として算出できる。
交互率（％）＝Ｃ／（Ａ＋Ｂ＋Ｃ）×１００
Ａ：−Ｖ−Ｖ−Ｖ−のように２つのＶと結合したＶの個数
Ｂ：−Ｖ−Ｖ−Ｔ−のようにＶとＴとに結合したＶの個数
Ｃ：−Ｔ−Ｖ−Ｔ−のように２つのＴに結合したＶの個数
（Ｔ：含フッ素オレフィン単位、Ｖ：ビニルアルコール単位又はビニルエステルモノマー単位）
Ａ、Ｂ、ＣのＶ単位の数は、１Ｈ−ＮＭＲ測定のビニルアルコール単位（−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−）及びビニルエステルモノマー単位（−ＣＨ２−ＣＨ（Ｏ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ）−）の３級炭素に結合する主鎖のＨの強度比より算出する。１Ｈ−ＮＭＲ測定による主鎖のＨの強度比の見積もりは、ケン化前の含フッ素共重合体で実施する。
【００５８】
上記含フッ素共重合体は、本発明の効果を損なわない範囲で、含フッ素オレフィン単位、ビニルアルコール単位及びビニルエステルモノマー単位以外の他の単量体単位を有していてもよい。
【００５９】
上記他の単量体としては、フッ素原子を含まない単量体（但し、ビニルアルコール及びビニルエステル単量体を除く）として、例えば、エチレン、プロピレン、１−ブテン、２−ブテン、塩化ビニル、塩化ビニリデン、ビニルエーテル単量体、及び、不飽和カルボン酸からなる群より選択される少なくとも１種のフッ素非含有エチレン性単量体が好ましい。
【００６０】
上記他の単量体単位の合計含有率は、含フッ素共重合体の全単量体単位の０〜５０モル％であることが好ましく、０〜４０モル％であることがより好ましく、０〜３０モル％であることが更に好ましい。
【００６１】
本明細書において、含フッ素共重合体を構成する各単量体単位の含有量は、ＮＭＲ、ＦＴ−ＩＲ、元素分析を単量体の種類によって適宜組み合わせることで算出できる。
【００６２】
上記含フッ素共重合体の重量平均分子量は、特に制限されないが、１０，０００以上であることが好ましい。より好ましくは、１２，０００〜２，０００，０００であり、更に好ましくは、１２，０００〜１，０００，０００である。
上記重量平均分子量は、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）により求めることができる。
【００６３】
上記含フッ素共重合体は、後述するように、含フッ素オレフィン単位及びビニルエステルモノマー単位を有する共重合体をケン化することにより製造することができる。すなわち、本発明における含フッ素共重合体が、含フッ素オレフィン単位及びビニルエステルモノマー単位を有する共重合体をケン化して得られた共重合体であることもまた、本発明の好適な実施形態の１つである。
【００６４】
以下に、本発明における含フッ素共重合体の製造方法について説明する。
通常、本発明における含フッ素共重合体は、テトラフルオロエチレン等の含フッ素オレフィンと酢酸ビニル等のビニルエステルモノマーとを共重合して、その後、得られた共重合体をケン化することにより製造することができる。上記含フッ素共重合体の重合方法としては、含フッ素オレフィンとビニルエステルモノマーの組成比を、ほぼ一定に保つ条件下で重合を行うことが好ましい。すなわち、上記含フッ素共重合体は、含フッ素オレフィンとビニルエステルモノマーの組成比を、ほぼ一定に保つ条件下で重合して、含フッ素オレフィン単位とビニルエステルモノマー単位とを有する共重合体を得る工程、及び、得られた共重合体をケン化して、含フッ素オレフィン単位及びビニルアルコール単位を有する共重合体を得る工程、からなる製造方法により得られたものであることが好ましい。
【００６５】
上記ビニルエステルモノマーとしては、ギ酸ビニル、酢酸ビニル、プロピオン酸ビニル、酪酸ビニル、イソ酪酸ビニル、バレリン酸ビニル、イソバレリン酸ビニル、カプロン酸ビニル、へプチル酸ビニル、カプリル酸ビニル、ピバリン酸ビニル、ペラルゴン酸ビニル、カプリン酸ビニル、ラウリン酸ビニル、ミリスチン酸ビニル、ペンタデシル酸ビニル、パルチミン酸ビニル、マルガリン酸ビニル、ステアリン酸ビニル、オクチル酸ビニル、ベオバ−９（昭和シェル石油（株）製）、ベオバ−１０（昭和シェル石油（株）製）、安息香酸ビニル、バーサチック酸ビニル等が挙げられるが、中でも入手が容易で安価である点から、酢酸ビニル、プロピオン酸ビニル、バーサチック酸ビニルが好ましく用いられる。
上記ビニルエステルモノマーとしてはこれらの１種を用いてもよいし、２種以上を混合して用いてもよい。
【００６６】
含フッ素オレフィンとビニルエステルモノマーとを共重合させる方法としては、溶液重合、塊状重合、乳化重合、懸濁重合等の重合方法を挙げることができ、工業的に実施が容易であることから乳化重合、溶液重合又は懸濁重合により製造することが好ましいが、この限りではない。
【００６７】
乳化重合、溶液重合又は懸濁重合においては、重合開始剤、溶媒、連鎖移動剤、界面活性剤、分散剤等を使用することができ、それぞれ通常用いられるものを使用することができる。
【００６８】
溶液重合において使用する溶媒は、含フッ素オレフィンとビニルエステルモノマー、及び、合成される含フッ素共重合体を溶解することができるものが好ましく、例えば、酢酸ｎ−ブチル、酢酸ｔ−ブチル、酢酸エチル、酢酸メチル、酢酸プロピル等のエステル類；アセトン、メチルエチルケトン、シクロヘキサノン等のケトン類；ヘキサン、シクロヘキサン、オクタン等の脂肪族炭化水素類；ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類；メタノール、エタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、２−プロパノール等のアルコール類；テトラヒドロフラン、ジオキサン等の環状エーテル類；ＨＣＦＣ−２２５等の含フッ素溶媒；ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、又はこれらの混合物等が挙げられる。
乳化重合において使用する溶媒としては、例えば、水、水とアルコールとの混合溶媒等が挙げられる。
【００６９】
上記重合開始剤としては、例えば、ジイソプロピルパーオキシジカーボネート（ＩＰＰ）、ジ−ｎ−プロピルパーオキシジカーボネート（ＮＰＰ）等のパーオキシカーボネート類やｔ−ブチルパーオキシピバレート（例えば日油株式会社製のパーブチルＰＶ）等のパーオキシエステル類に代表される油溶性ラジカル重合開始剤や、例えば、過硫酸、過ホウ酸、過塩素酸、過リン酸、過炭酸のアンモニウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩等の水溶性ラジカル重合開始剤等を使用できる。特に乳化重合においては、過硫酸アンモニウム、過硫酸カリウムが好ましい。
【００７０】
上記界面活性剤としては、通常用いられる界面活性剤が使用でき、例えば、非イオン性界面活性剤、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤等が使用できる。また、含フッ素系界面活性剤を用いてもよい。
【００７１】
懸濁重合において用いられる上記分散剤としては、通常の懸濁重合に用いられる部分鹸化ポリ酢酸ビニル、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどの水溶性セルロースエーテル、アクリル酸系重合体、ゼラチンなどの水溶性ポリマーを例示できる。懸濁重合は、水／単量体の比率が通常質量比で１．５／１〜３／１である条件下で行なわれ、分散剤は単量体１００質量部に対し０．０１〜０．１質量部が用いられる。また、必要に応じて、ポリリン酸塩のようなｐＨ緩衝剤を用いることもできる。
【００７２】
上記連鎖移動剤としては、例えば、エタン、イソペンタン、ｎ−ヘキサン、シクロヘキサン等の炭化水素類；トルエン、キシレン等の芳香族類；アセトン等のケトン類；酢酸エチル、酢酸ブチル等の酢酸エステル類；メタノール、エタノール等のアルコール類；メチルメルカプタン等のメルカプタン類；四塩化炭素、クロロホルム、塩化メチレン、塩化メチル等のハロゲン化炭化水素等が挙げられる。
上記連鎖移動剤の添加量は用いる化合物の連鎖移動定数の大きさにより変わりうるが、通常重合溶媒に対して０．００１〜１０質量％の範囲で使用される。
【００７３】
重合温度としては、含フッ素オレフィンとビニルエステルモノマーの反応中の組成比がほぼ一定になる範囲であればよく、０〜１００℃であってよい。
【００７４】
重合圧力としては、含フッ素オレフィンとビニルエステルモノマーの反応中の組成比がほぼ一定になる範囲であればよく、０〜１０ＭＰａＧであってよい。
【００７５】
酢酸ビニルに由来するアセテート基のケン化は従来からよく知られており、アルコリシスや、酸やアルカリを用いた加水分解等の従来公知の方法によって行うことができる。このケン化によって、アセテート基（−ＯＣＯＣＨ３）は、水酸基（−ＯＨ）に変換される。他のビニルエステルモノマーにおいても同様に、従来公知の方法によってケン化され、水酸基を得ることができる。
【００７６】
含フッ素オレフィン単位とビニルエステルモノマー単位とを有する共重合体をケン化して本発明における含フッ素共重合体を得る場合のケン化度は、本発明における含フッ素共重合体の各モノマー単位の含有率が上述した範囲となるような範囲であればよく、具体的には９０％以上が好ましく、９５％以上がより好ましく、９９％以上が更に好ましい。
【００７７】
上記ケン化度は、含フッ素共重合体のＩＲ測定又は１Ｈ−ＮＭＲ測定により、以下の式から算出される。
ケン化度（％）＝Ｄ／（Ｄ＋Ｅ）×１００
Ｄ：含フッ素共重合体中のビニルアルコール単位数
Ｅ：含フッ素共重合体中のビニルエステルモノマー単位数
【００７８】
上記低タンパク質吸着性材料及び上記低細胞付着性材料は、本発明の効果を損なわない範囲で、上記含フッ素共重合体以外の他の成分を更に含んでもよい。
【００７９】
上記他の成分としては、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール等の親水性高分子等が挙げられる。
【００８０】
上記他の成分の配合量は、上記含フッ素共重合体１００質量％に対して、１〜３０質量％であることが好ましく、１〜１０質量％であることがより好ましい。
【００８１】
上記低タンパク質吸着性材料及び上記低細胞付着性材料は、表面が有機溶剤を含む水溶液により処理されていることが好ましい。この表面処理により、上記低タンパク質吸着性材料及び上記低細胞付着性材料の表面に更に水酸基構造が増加するため、タンパク質の吸着及び細胞の付着がより強く抑制される。
【００８２】
上記表面処理で使用することが可能な有機溶剤としては、水に可溶で上記含フッ素共重合体を溶解する有機溶剤であれば特に限定されないが、メタノール、エタノール、２−プロパノール、アセトン、テトラヒドロフラン、メチルエチルケトン、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミド等が挙げられる。中でもメタノール、エタノール、２−プロパノール、テトラヒドロフランが好ましい。
【００８３】
上記有機溶剤を含む水溶液による処理の方法としては、当該水溶液で上記低タンパク質吸着性材料及び上記低細胞付着性材料の表面を濡らす方法が挙げられる。
【００８４】
上記低タンパク質吸着性材料及び上記低細胞付着性材料は、用途に応じて種々の形状に成形されて提供される。成形方法は特に限定されず、スピンコート法、ドロップキャスト法、ディップニップ法、スプレーコート法、刷毛塗り法、浸漬法、インクジェットプリント法、静電塗装法、圧縮成形法、押出成形法、カレンダー成形法、トランスファー成形法、射出成形法、ロト成形法、ロトライニング成形法、熱誘起相分離法、非溶媒誘起相分離法等が採用できる。
【００８５】
多様な形状の物品に適用できることから、上記低タンパク質吸着性材料及び上記低細胞付着性材料は、コーティング膜であることが好ましい。上記コーティング膜とは、上記含フッ素共重合体又は上記含フッ素共重合体を含む塗料組成物を塗布することにより得られる膜をいう。コーティング膜の製膜方法としては、スピンコート法、ドロップキャスト法、ディップニップ法、スプレーコート法、刷毛塗り法、浸漬法、静電塗装法、インクジェットプリント法等が挙げられる。中でも、簡便性の点で、スピンコート法、ドロップキャスト法、浸漬法が好ましい。
【００８６】
上記コーティング膜は、上記含フッ素共重合体及び有機溶剤を含む塗料組成物を塗布することにより得られることが好ましい。有機溶剤としては、メタノール、エタノール、２−プロパノール、２−ブタノール、１−ブタノール、１−ヘキサノール、アセトン、テトラヒドロフラン、メチルエチルケトン、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミド等が使用できる。なかでも、透明で均一なコーティング膜が容易に得られる点で、２−ブタノール、１−ブタノール、１−ヘキサノール、テトラヒドロフランが好ましい。また、含フッ素共重合体の溶解性の観点からは、メタノール、エタノール、２−プロパノール、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミドが好ましい。
【００８７】
上記コーティング膜は、有機溶剤としてアルコール等の弱溶剤を使用した塗料組成物からも得ることができるので、容易に製造することができる。
【００８８】
上記低タンパク質吸着性材料及び上記低細胞付着性材料がコーティング膜である場合、その膜厚は０．１〜５０μｍであることが好ましく、０．５〜３０μｍであることがより好ましく、１．０〜２０μｍであることが更に好ましい。
【００８９】
上記低タンパク質吸着性材料は、０．０５ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン溶液と２３．４℃で０．５時間接触させた場合の、ウシ血清アルブミンの吸着量を２００ｎｇ／ｃｍ２以下とすることができる。
上記低タンパク質吸着性材料は、０．０５ｍｇ／ｍｌのウシ血漿フィブリノーゲン溶液と２３．４℃で０．５時間接触させた場合の、ウシ血漿フィブリノーゲンの吸着量を５００ｎｇ／ｃｍ２以下とすることができる。
上記低タンパク質吸着性材料は、０．０５ｍｇ／ｍｌのウシ血清由来免疫グロブリンＧ溶液と２３．４℃で０．５時間接触させた場合の、ウシ血清由来免疫グロブリンＧの吸着量を５００ｎｇ／ｃｍ２以下とすることができる。
上記タンパク質吸着性材料は、１０〜０．０５ｍｇ／ｍｌのタンパク質溶液と接触させた場合でも、タンパク質がほとんど吸着しないという、驚くべき効果を奏する。すなわち、上記タンパク質吸着性材料は、１０〜０．０５ｍｇ／ｍｌのタンパク質溶液と接触させるタンパク質吸着性材料であってよい。
上記のタンパク質の吸着量は、後述する「タンパク質吸着試験」に記載の方法により測定する。
１０〜０．０５ｍｇ／ｍｌのタンパク質溶液と接触する物品の少なくとも表面に、低タンパク質吸着性材料を適用することにより、上記タンパク質の吸着を防止する方法も、上記低白質吸着性材料の使用方法として好ましい。
【００９０】
上記低タンパク質吸着性材料は、タンパク質の吸着性が低いことから、タンパク質の吸着を避けることが要求される種々の物品に適用できる。上記物品の形状は特に限定されず、バッグ、シート、フィルム、バイアル瓶、シャーレ、又は、フラスコであってよい。
上記低タンパク質吸着性材料を上記物品に適用する工程を含むことを特徴とする、上記物品にタンパク質の吸着を防止する方法は、上記低タンパク質吸着性材料の使用方法として好ましい。上記タンパク質としては、血漿タンパク質、後述するバイオ医薬を挙げることができる。上記血漿タンパク質としては、アルブミン、グロブリン、フィブリノーゲン等が挙げられる。上記低タンパク質吸着性材料を適用する方法は、特に限定されず、物品の少なくとも表面の一部を上記低タンパク質吸着性材料で覆うことができる方法であれば特に限定されない。例えば、上記含フッ素共重合体又は上記含フッ素共重合体を含む塗料組成物を塗布することによりコーティング膜を成膜する方法が挙げられる。上記コーティング膜の成膜方法は上述したとおりである。
【００９１】
本発明は、上記低タンパク質吸着性材料又は上記低細胞付着性材料を含むことを特徴とするコーティング用組成物でもある。
【００９２】
上記コーティング用組成物は、有機溶剤を含むものであってもよい。有機溶剤としては、メタノール、エタノール、２−プロパノール、２−ブタノール、１−ブタノール、１−ヘキサノール、アセトン、テトラヒドロフラン、メチルエチルケトン、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミド等が使用できる。なかでも、透明で均一なコーティング膜が容易に得られる点で、２−ブタノール、１−ブタノール、１−ヘキサノール、テトラヒドロフランが好ましい。また、含フッ素共重合体の溶解性の観点からは、メタノール、エタノール、２−プロパノール、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミドが好ましい。
【００９３】
上記コーティング組成物は、有機溶剤としてアルコール等の弱溶剤を使用することができる。従って、強溶剤により侵食される基材や下塗りにも適用できる。
【００９４】
上記コーティング用組成物は、所望の基材に塗布して、コーティング膜又はコーティング層を形成することができる。塗布方法としては、スピンコート法、ドロップキャスト法、ディップニップ法、スプレーコート法、刷毛塗り法、浸漬法、静電塗装法、インクジェットプリント法等が挙げられる。中でも、簡便性の点で、スピンコート法、ドロップキャスト法、浸漬法が好ましい。
【００９５】
上記コーティング用組成物から形成されたコーティング膜又はコーティング層は、膜厚が０．１〜５０μｍであることが好ましく、０．５〜３０μｍであることがより好ましく、１．０〜２０μｍであることが更に好ましい。
【００９６】
上記コーティング用組成物は、バッグ、シート、フィルム、バイアル瓶、シャーレ、又は、フラスコに適用することができる。
【００９７】
本発明は、上記低タンパク質吸着性材料又は上記低細胞付着性材料から形成されることを特徴とするコーティング層でもある。
【００９８】
上記コーティング層は、上記含フッ素共重合体又は上記含フッ素共重合体を含む塗料組成物を塗布することにより得られる。塗布方法としては、スピンコート法、ドロップキャスト法、ディップニップ法、スプレーコート法、刷毛塗り法、浸漬法、静電塗装法、インクジェットプリント法等が挙げられる。中でも、簡便性の点で、スピンコート法、ドロップキャスト法、浸漬法が好ましい。
【００９９】
上記コーティング層は、上記含フッ素共重合体及び有機溶剤を含む塗料組成物を塗布することにより得られることが好ましい。有機溶剤としては、メタノール、エタノール、２−プロパノール、２−ブタノール、１−ブタノール、１−ヘキサノール、アセトン、テトラヒドロフラン、メチルエチルケトン、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミド等が使用できる。なかでも、透明で均一なコーティング膜が容易に得られる点で、２−ブタノール、１−ブタノール、１−ヘキサノール、テトラヒドロフランが好ましい。また、含フッ素共重合体の溶解性の観点からは、メタノール、エタノール、２−プロパノール、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミドが好ましい。
【０１００】
上記コーティング層は、有機溶剤としてアルコール等の弱溶剤を使用した塗料組成物からも得ることができるので、容易に製造することができる。
【０１０１】
上記コーティング層は、膜厚が０．１〜５０μｍであることが好ましく、０．５〜３０μｍであることがより好ましく、１．０〜２０μｍであることが更に好ましい。
【０１０２】
上記コーティング層は、バッグ、シート、フィルム、バイアル瓶、シャーレ、又は、フラスコの表面を形成するものであることが好ましい。上記コーティング層を表面に備えるバッグ、シート、フィルム、バイアル瓶、シャーレ、又は、フラスコは、タンパク質又は細胞が付着しにくい。
【０１０３】
本発明は、上述の低タンパク質吸着性材料、上述のコーティング組成物、又は、上述のコーティング層からなり、バッグ、シート、フィルム、バイアル瓶、シャーレ、又は、フラスコであることを特徴とする低タンパク質吸着性物品でもある。
【０１０４】
本発明は、上述の低タンパク質吸着性材料、上述のコーティング組成物、又は、上述のコーティング層からなり、バイオ医薬用バッグ、バイオ医薬用シート、バイオ医薬用フィルム、バイオ医薬用バイアル瓶、バイオ医薬用シャーレ、又は、バイオ医薬用フラスコであることを特徴とする低タンパク質吸着性物品でもある。
【０１０５】
バイオ医薬を保管するための器具やバイオ医薬を使用するための器具にバイオ医薬が吸着しやすいと、バイオ医薬を正確に定量できなかったり、正確な分析が困難になったりする。また、バイオ医薬は高価であるため、経済的損失も大きい。バイオ医薬用バッグ、バイオ医薬用シート、バイオ医薬用フィルム、バイオ医薬用バイアル瓶、バイオ医薬用シャーレ、又は、バイオ医薬用フラスコが、上述の低タンパク質吸着性材料、上述のコーティング組成物、又は、上述のコーティング層からなるものであると、バイオ医薬が吸着しにくく、バイオ医薬を高い回収率で回収することができる。
【０１０６】
バイオ医薬としては、タンパク質医薬品、遺伝子組み換えウイルス、細胞性治療薬、核酸医薬品等を挙げることができる。
上記タンパク質医薬品としては、（１）酵素類のタンパク質：アルテラーゼ、モンテブラーゼ、イミグルセラーゼ、ベラグルセラーゼ  アルファ、アガルシダーゼ  アルファ、アガルシダーゼ  ベータ、ラロニダーゼ、アルグルコシダーゼ  アルファ、イデュルスルファーゼ、ガルスルファーゼ、ラスブリカーゼ、ドルナーゼ  アルファ、（２）血液凝固線溶系因子類のタンパク質：オクトコグ  アルファ、ルリオクトコグ  アルファ、エプタコグ  アルファ（活性型）、ノナコグアルファ、ツロクトコグ  アルファ、エフトレノナコグ  アルファ、トロンボモデュリン  アルファ、（３）血清タンパク質類：人血清アルブミン、（４）ホルモン類のタンパク質：ヒトインスリン、インスリン  リスプロ、インスリン  アスパルト、インスリン  グラルギン、インスリン  デテミル、インスリン  グルリジン、インスリン  デグルデク、インスリン  デグルデク及びインスリン  アスパルト、ソマトロピン、ペグビソマント、メカセルミン、カルペリチド、グルカゴン、ホリトロピン  アルファ、フォリトロピン  ベータ、リラグルチド、テリパラチド、メトレレプチン、（５）ワクチン類のタンパク質：組換え沈降Ｂ型肝炎ワクチン（酵母由来）、乾燥細胞培養不活化Ａ型肝炎ワクチン、組換え沈降２価ヒトパピローマウイルス様粒子ワクチン（イラクサギンウワバ細胞由来）、組換え沈降４価ヒトパピローマウイルス様粒ワクチン（酵母由来）、（６）インターフェロン類のタンパク質：インターフェロン  アルファ（ＮＡＭＡＬＷＡ）、インターフェロン  アルファ−２ｂ、インターフェロン  アルファ（ＢＡＬＬ−１）、インターフェロン  アルファコン−１、インターフェロン  ベータ、インターフェロン  ベータ−１ａ、インターフェロン  ベータ−１ｂ、インターフェロン  ガンマ−１ａ、ペグインターフェロン  アルファ−２ａ、ペグインターフェロン  アルファ−２ｂ、（７）エリスロポエチン類のタンパク質：エポエチン  アルファ、エポエチン  ベータ、ダルベポエチン  アルファ、エポエチン  ベータ  ペゴル、エポエチン  カッパ、（８）サイトカイン類のタンパク質：フィルグラスチム、ペグフィルグラスチム、レノグラスチム、ナルトグラスチム、セルモロイキン、テセロイキン、トラフェルミン、（９）抗体類のタンパク質：ムロモナブ−ＣＤ３、トラスツズマブ、リツキシマブ、パリビズマブ、インフリキシマブ、バシリキシマブ、トシリズマブ、ゲムツズマブ  オゾガマイシン、ベバシズマブ、イブリツモマブ  チウキセタン、アダリムマブ、セツキシマブ、ラニビズマブ、オマリズマブ、エクリズマブ、パニツムマブ、ウステキヌマブ、ゴリムマブ、カナキヌマブ、デノスマブ、モガムリズマブ、セルトリズマブ  ペゴル、オファツムマブ、ペルツズマブ、トラスツズマブ  エムタンシン、ブレンツキシマブ  ベドチン、ナタリズマブ、ニボルマブ、アレムツズマブ、（１０）融合タンパク質類：エタネルセプト、アバタセプト、ロミプロスチム、アフリベルセプト等を挙げることができる。
【０１０７】
また、核酸医薬品としては、アンチセンス、ｓｉＲＮＡ、デコイ核酸、核酸アプタマー、リボザイム、ｍｉＲＮＡアンチセンス、ｍｉＲＮＡｍｉｍｉｃ、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチドなどを挙げることができる。
【０１０８】
上記低細胞付着性材料は、細胞の付着性が低いことから、細胞の付着を避けることが要求される種々の物品に適用できる。上記物品の形状は特に限定されず、バッグ、シート、フィルム、バイアル瓶、シャーレ、又は、フラスコであってよい。
上記低細胞付着性材料を上記物品に適用する工程を含むことを特徴とする、上記物品に細胞の付着を防止する方法は、上記低細胞付着性材料の使用方法として好ましい。上記低細胞付着性材料を適用する方法は、特に限定されず、物品の少なくとも表面の一部を上記低細胞付着性材料で覆うことができる方法であれば特に限定されない。例えば、上記含フッ素共重合体又は上記含フッ素共重合体を含む塗料組成物を塗布することによりコーティング膜を成膜する方法が挙げられる。上記コーティング膜の成膜方法は上述したとおりである。
【０１０９】
本発明は、上述の低細胞付着性材料、上述のコーティング用組成物、又は、上述のコーティング層からなり、バッグ、シート、フィルム、バイアル瓶、シャーレ、又は、フラスコであることを特徴とする低細胞付着性物品でもある。
【０１１０】
本発明は、上述の低細胞付着性材料、上述のコーティング用組成物、又は、上述のコーティング層からなり、細胞培養用バッグ、細胞培養用シート、細胞培養用フィルム、細胞培養用バイアル瓶、細胞培養用シャーレ、又は、細胞培養用フラスコであることを特徴とする低細胞付着性物品でもある。
【０１１１】
本発明は、また、上述の低細胞付着性材料、上述のコーティング用組成物、又は、上述のコーティング層からなり、胚様体形成用培養容器であることを特徴とする低細胞付着性物品でもある。上記胚様体形成用培養容器は、２個以上のウェルを有することが好ましい。各ウェルの形状は特に限定されないが、垂直方向における断面が略Ｕ字形状の底部、及び、略円形の開口部を有することが好ましい。更に、上記底部内面の曲率半径（Ｒ’）が、１．０ｍｍ以上、３．５ｍｍ以下であることが好ましく、３．０ｍｍ以下とすることがより好ましい。上記開口部の直径は４．０〜１１．０ｍｍとすることが好ましい。各ウェルの容量は８０〜５００μＬとすることができる。上記胚様体形成用培養容器は、少なくともウェルの内面が上記低細胞付着性材料、上述のコーティング用組成物、又は、上述のコーティング層からなるものであることが好ましい。
【０１１２】
細胞を培養するために使用する器具に細胞が付着しやすいと、培養した細胞の回収率が低下したり、細胞が増殖している形状のまま回収できなかったり、細胞の性質が変化してしまったりする。細胞培養用バッグ、細胞培養用シート、細胞培養用フィルム、細胞培養用バイアル瓶、細胞培養用シャーレ又は細胞培養用フラスコが、上述の低細胞付着性材料、上述のコーティング用組成物、又は、上述のコーティング層からなるものであると、細胞が付着しにくく、培養により得られた細胞を高い回収率で、かつ細胞の形状や性質を好ましい状態で回収することができる。
【０１１３】
上記細胞としては、造血幹細胞、神経幹細胞、間葉系肝細胞、中胚葉系幹細胞、肝幹細胞、膵幹細胞、胚性幹細胞等の幹細胞や、幹細胞を目的の細胞に分化させた細胞、あるいは免疫系細胞、血球系細胞、神経細胞、血管内皮細胞、繊維芽細胞、上皮細胞、角化細胞、角膜細胞、骨芽細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、表皮細胞、肝細胞、膵β細胞、心筋細胞、骨髄細胞、羊膜細胞、臍帯血細胞などの生体由来の細胞、あるいはＮＩＨ３Ｔ３（エヌアイエイチスリーティースリー）細胞、３Ｔ３−Ｌ１（スリーティースリーエルワン）細胞、３Ｔ３−Ｅ１（スリーティースリーイーワン）細胞、Ｈｅｌａ（ヒーラ）細胞、ＰＣ−１２（ピーシーツェルブ）細胞、Ｐ１９（ピーナインティーン）細胞、ＣＨＯ（チャイニーズハムスター卵母）細胞、ＣＯＳ（シーオーエス）細胞、ＨＥＫ（エッチイーケー）細胞、Ｈｅｐ−Ｇ２（ヘップジーツー）細胞、Ｌ９２９（エルナインツーナイン）細胞、Ｃ２Ｃ１２（シーツーシーツェルブ）細胞、Ｄａｕｄｉ（ダウディ）細胞、Ｊｕｒｋａｔ（ジャーカット）細胞、ＫＧ−１ａ（ケージーワンエー）細胞、ＣＴＬＬ−２（シーティーエルエルツー）細胞、ＮＳ−１（エヌエスワン）細胞、ＭＯＬＴ−４（エムオーエルティーフォー）細胞、ＨＵＴ７８（エッチユーティーセブンティエイト）細胞、ＭＴ−４（エムティーフォー）細胞などの株化細胞、あるいは抗体産生細胞である各種ハイブリドーマ細胞株、あるいはこれら細胞を遺伝子工学的に改変した細胞などが挙げられる。
【０１１４】
特に高分子材料に付着しやすい細胞である接着性細胞を培養する場合であっても、本発明の低細胞付着性物品であれば、培養した細胞の付着を抑制することができる。
【０１１５】
上記細胞としては、胚性幹細胞（ＥＳ細胞）や人工多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）などの胚様体（ｅｍｂｒｙｏｉｄ  ｂｏｄｙ：ＥＢ）も挙げられる。
【０１１６】
胚様体形成は、ＥＳ細胞をはじめとする多能性幹細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏで分化誘導する際に有効であるため、広く採用されている手法である。胚様体形成はＥＳ細胞やｉＰＳ細胞を培養容器に接着させない浮遊状態で培養することが重要であり、通常の培養容器を使用した接着培養では胚様体は形成されにくい。上記胚様体形成用培養器が、上述の低細胞付着性材料、上述のコーティング用組成物、又は、上述のコーティング層からなるものであると、均一で、効率よく、質の高い胚様体を形成することができる。
【実施例】
【０１１７】
つぎに本発明を実施例をあげて説明するが、本発明はかかる実施例のみに限定されるものではない。【０１１８】
実施例の各数値は以下の方法により測定した。【０１１９】
〔フッ素含有率による含フッ素オレフィン単位の含有率の測定〕
酸素フラスコ燃焼法により試料１０ｍｇを燃焼し、分解ガスを脱イオン水２０ｍｌに吸収させ、吸収液中のフッ素イオン濃度をフッ素選択電極法で測定することにより求めた（質量％）。ポリマー中の含フッ素オレフィン単位の含有率（モル％）は、ケン化前のポリマーのフッ素含有率から計算した。【０１２０】
〔ＮＭＲ（核磁気共鳴法）による交互率の測定〕
１Ｈ−ＮＭＲ測定条件：４００ＭＨｚ（テトラメチルシラン＝０ｐｐｍ）【０１２１】
〔分子量及び分子量分布〕
ゲルパーミエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）により、溶媒としてテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）を流速１ｍｌ／分で流して測定したデータより、平均分子量を算出した。
検出器にはＲＩ、検量線サンプルはポリスチレン標準サンプルを使用し、流速１ｍｌ／分、サンプル打込量２００μＬで測定を行った。【０１２２】
〔ＩＲ分析によるケン化度の測定〕
フーリエ変換赤外分光光度計で室温にて測定した。【０１２３】
〔融点（Ｔｍ）〕
ＤＳＣ（示差走査熱量計）を用いて、１０℃／分の条件で昇温（セカンドラン）したときの融解熱曲線における極大値に対応する温度をＴｍ（℃）とした。【０１２４】
〔分解温度〕
分解温度は、ＴＧＡ（熱量測定装置）の測定における熱分解曲線において大きく重量減少を示す変曲点の温度とした。具体的には、ＴＧＡ曲線において、大きな重量減少の前後で補助線を引いて交点を求める方法（交点法）により分解温度を求めた。【０１２５】
〔水晶発振子マイクロバランス法（ＱＣＭ−Ｄ）〕
ＱＣＭ−Ｄ（メイワフォーシス社製ＱＣＭ−Ｄ３００）を用いて、Ｐ−１〜４のコーティング膜上に吸着したタンパク質量を求めた。ＱＣＭチップは、ｑｓｅｎｓｅ社製のもの（ＱＳＸ  ３０１、Ａｕ）を使用した。このＱＣＭチップにまずＰＥＴをコートした後、Ｐ−１〜４をコートしたものを測定に用いた。ＱＣＭチップへのＰＥＴコーティング方法については、比較例１に詳細を示している。【０１２６】
Ｐ−１〜４のコーティング膜に吸着したタンパク質量の求め方は、実験から得られた吸着時間３０分後の周波数を解析ソフトＱＴｏｏｌｓに導入されているＳａｕｅｒｂｒｅｙの式からＡｒｅａｌ  ｍａｓｓ［ｎｇ／ｃｍ２］の解析を行い算出した。実験の詳細については、実施例１に記す。【０１２７】
実施例で使用したポリマーを表１に示す。
【表１】
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【０１２８】
耐アルカリ性の評価
ポリマーＰ−２が１３質量％、メタノールが８７質量％からなるポリマー溶液２．３ｇを調製し、直径約５８ｍｍのシャーレ上に展開した後乾燥させてポリマーフィルムを得た。該ポリマーフィルムを１００ｍｇ、０．５質量％の次亜塩素酸ナトリウム及び０．４質量％の水酸化ナトリウムを含む水溶液に浸漬し、２４時間室温にて保持した。重量変化率を測定した結果、約１％しか減少しておらず、十分な耐アルカリ性が確認できた。また、目視による、外観の変化もなかった。【０１２９】
実施例１
ポリマーＰ−１の０．１質量％メタノール溶液を室温でＰＥＴコーティング済みＱＣＭチップ（円盤状：直径１．４ｃｍ）の片側反応面へスピンコートした。具体的には、上記溶液３０μＬをＱＣＭチップ上に滴下し、６０秒間、２０００ｒｐｍ回転させた。その後、室温にて３時間、ロータリー真空ポンプにて減圧乾燥し、コーティング膜（ＱＣＭチップ）を得た。【０１３０】
得られたコーティング膜をＱＣＭ−Ｄに組み込み、以下の方法でコーティング膜上のタンパク質吸着試験（ウシ血清アルブミンとフィブリノーゲン  ウシ血漿由来）を評価した。実験の結果を表２に示す。【０１３１】
〔タンパク質吸着試験〕
上記の方法でＰＥＴコーティング済みＱＣＭチップに重ねてＰ−１をコーティングしたＱＣＭチップをＱＣＭ−Ｄに装着させ、２３．４℃環境下のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で安定化を行った。
周波数のベースラインが平行であることを確認した上、タンパク質を含むリン酸緩衝生理食塩水溶液（タンパク質の濃度０．０５ｍｇ／ｍＬ）を０．５ｍＬ注入し、吸着時間３０分間の周波数の変化量を測定した。タンパク質としては、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）またはウシ血漿フィブリノーゲン（ＢＰＦ）を使用した。【０１３２】
コーティング膜に吸着したタンパク質量は、実験から得られた吸着時間３０分後の周波数を解析ソフトＱＴｏｏｌｓに導入されているＳａｕｅｒｂｒｅｙの式からＡｒｅａｌ  ｍａｓｓ［ｎｇ／ｃｍ２］の解析を行い算出した。【０１３３】
実施例２〜４
実施例１と同様の方法でポリマーＰ−２からＰ−４のコーティング膜を得た。得られたコーティング膜について実施例１と同様の方法でタンパク質吸着試験を実施した。【０１３４】
比較例１（ＰＥＴ）
ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）の１．０質量％溶液（トリフルオロ酢酸、ジクロロメタンと１，１，２，２テトラクロロエタンの混合溶剤（混合比１／４／４５）に溶解させたもの）を室温でＱＣＭチップ（円盤状：直径１．４ｃｍ）の片側反応面へスピンコートした。具体的には、上記溶液３０μＬをＱＣＭチップ上に滴下し、６０秒間、２０００ｒｐｍ回転させた。その後、５０℃にて３時間、ロータリー真空ポンプにて減圧乾燥し、コーティング膜を得た。
得られたコーティング膜について実施例１と同様にタンパク質の吸着試験を実施した。【０１３５】
【表２】
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【０１３６】
実施例５
ポリマーＰ−１の０．１質量％メタノール溶液を室温でＰＥＴフィルム（１．０ｃｍ×１．０ｃｍ）上へスピンコートした。具体的には、上記溶液３０μＬをＰＥＴフィルム上に滴下し、６０秒間、２０００ｒｐｍ回転させた。その後、室温にて３時間、ロータリー真空ポンプにて減圧乾燥し、コーティング膜を得た。
得られたコーティング膜について、以下の方法で細胞の接着試験を評価した。結果を表３に示す。【０１３７】
〔細胞接着試験〕
ＰＥＴフィルム（１．０ｃｍ×１．０ｃｍ）上にＰ−１をスピンコートしたコーティング膜を２４穴の細胞培養プレートの底に少量のシリコン接着剤で固定した。超純水で３回洗浄した後に３７℃環境下のＰＢＳ中で１２時間浸漬させた。【０１３８】
マウス繊維芽細胞（ＮＩＨ３Ｔ３）を５％ＣＯ２、３７℃環境下で１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を含有するダルベッコ改変イーグル培地（ＦＣＳ含有ＤＭＥＭ）中で培養した。培養したＮＩＨ３Ｔ３細胞を滅菌ＰＢＳで一回洗浄し、１ｍＬの０．０２％  エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）溶液と１ｍＬの０．２５％トリプシン溶液を加え細胞培養プレートから剥がした。その細胞懸濁液を遠心してＮＩＨ３Ｔ３細胞を回収した後、ＦＣＳ含有ＤＭＥＭで再懸濁し６１．２×１０４個／ｍＬの溶液を得た。【０１３９】
細胞懸濁液は、コーティング膜を固定した細胞培養プレートの各ウェルに対して１×１０４個／ｃｍ２に培地で調製し、コーティング膜上に播種した。５％ＣＯ２、３７℃環境下で１時間培養した後、コーティング膜をＰＢＳで３回洗浄し、４％パラホルムアルデヒド  ＰＢＳ溶液を用いてコーティング膜上の接着細胞を固定化した。超純水で３回洗浄した後、ロータリー真空ポンプにて減圧乾燥した。１質量％濃度のクリスタルバイオレット  ＰＢＳ染色液で接着細胞を染色し、光学顕微鏡を用いて３視野任意に観察を行い接着細胞の数を数えた。【０１４０】
実施例６〜８
実施例５と同様の方法でポリマーＰ−２からＰ−４のコーティング膜を得た。得られたコーティング膜について実施例５と同様の方法で細胞接着試験を実施した。【０１４１】
比較例２（ＰＥＴ）
ＰＥＴフィルム（１．０ｃｍ×１．０ｃｍ）を用いて実施例５と同様に細胞の接着試験を実施した。【０１４２】
【表３】
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【０１４３】
実施例９〜１２及び比較例３
タンパク質としてウシ血清由来免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を使用したこと以外は実施例１〜４及び比較例１と同様にして、タンパク質吸着試験を実施した。結果を表４に示す。【０１４４】
【表４】
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【国際調査報告】
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