(57)【要約】  本発明は、複数の分析用カラムおよび分析装置を用いず、疎水性化合物および親水性化合物を１本のカラムにて簡便に分析する液体クロマトグラフィー分析方法を提供することを課題とする。本発明は、水酸基を有するポリマー充填剤が充填された分析カラムを用いること、移動相として水溶性有機溶媒および水の混合溶媒を用いること、および、前記移動相の水溶性有機溶媒と水との組成比率を変えることにより逆相クロマトグラフィーモードと親水性相互作用クロマトグラフィーモードとを切替え、親水性化合物および疎水性化合物を分析することを特徴とする液体クロマトグラフィー分析方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
水酸基を有するポリマー充填剤が充填された分析カラムを用いること、
移動相として水溶性有機溶媒および水の混合溶媒を用いること、および、
前記移動相の水溶性有機溶媒と水との組成比率を変えることにより逆相クロマトグラフィーモードと親水性相互作用クロマトグラフィーモードとを切替え、親水性化合物および疎水性化合物を分析すること
を特徴とする液体クロマトグラフィー分析方法。
【請求項２】
前記ポリマー充填剤が、水酸基および水酸基に変換可能なエステル基からなる群より選ばれる少なくとも一種の置換基を有するモノマー（Ａ）を含む原料モノマーを重合させて得られるポリマーである、請求項１に記載の液体クロマトグラフィー分析方法。
【請求項３】
前記モノマー（Ａ）が、ヒドロキシ（メタ）アクリレートまたはカルボン酸ビニルエステルである、請求項２に記載の液体クロマトグラフィー分析方法。
【請求項４】
前記ポリマー充填剤が、ポリヒドロキシ（メタ）アクリレート系樹脂またはポリビニルアルコール系樹脂からなる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の液体クロマトグラフィー分析方法。
【請求項５】
前記ポリマー充填剤１ｇあたりの水酸基の含有量が０．１〜１０ｍｍｏｌである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の液体クロマトグラフィー分析方法。
【請求項６】
前記移動相の水溶性有機溶媒と水との組成比率を体積比で５：９５〜９５：５の範囲内で変える、請求項１〜５のいずれか１項に記載の液体クロマトグラフィー分析方法。
【請求項７】
前記水溶性有機溶媒が、アセトニトリル、メチルアルコール、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、アセトン、メチルエチルケトンおよびテトラヒドロフランからなる群から選ばれる少なくとも１種である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の液体クロマトグラフィー分析方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、親水性化合物および疎水性化合物を分析するための液体クロマトグラフィー分析方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
医薬品、食品および化粧品などの有効成分もしくは不純物の同定または定量を行う方法として液体クロマトグラフィー法が用いられている。例えば分子量が２０００以下の有機化合物を分析する場合、該有機化合物の多くは、アセトニトリルおよびアルコール類等の水溶性有機溶媒に可溶である。そのため、従来、オクタデシルシリカゲル（ＯＤＳ）などの疎水性充填剤が充填された分析用カラムを用いて、前記有機化合物を逆相クロマトグラフィー法にて分析する方法が広く用いられている。【０００３】
しかし、前記有機化合物には、上記の水溶性有機溶媒に可溶な化合物の他に、水酸基、アミノ基およびカルボキシル基等の極性官能基を有する親水性化合物も多く存在している。これらの親水性化合物は、逆相クロマトグラフィー法では、ほとんどカラム内にて保持および分離されずに溶出してしまう。【０００４】
一方、親水性化合物の分析方法として、親水性相互作用クロマトグラフィー法が使用されている。この方法では、未修飾のシリカゲル、または、水酸基、アミノ基、アミド基、スルホ基、カルボキシル基、スルホベタイン基もしくはホスホリルコリン基などの置換基を導入した親水性充填剤を充填した分析用カラム（例えば、特許文献１）を用いる。これにより、逆相クロマトグラフィー法と同様の移動相を用いて溶出順を逆転させることができるため、親水性化合物を良好に保持して分離することができる。【０００５】
しかし、この方法では、芳香族化合物およびアルキル基を有する化合物などの疎水性の高い化合物がカラム内にて保持および分離されずに溶出してしまう。このため、親水性化合物および疎水性化合物を分析するためには、複数のカラムおよび装置を用いる必要があり、それぞれの分析条件の検討などが必要であった。【０００６】
疎水性化合物および親水性化合物を連続分析するための方法として、逆相クロマトグラフィー用カラムと親水性相互作用クロマトグラフィー用カラムとを同時に用いる方法が提案されている（例えば、非特許文献１）。この方法では、まず、疎水性化合物および親水性化合物の混合物から疎水性化合物のみを逆相クロマトグラフィー用カラムを用いて分離して溶出させ、親水性化合物を親水性相互作用クロマトグラフィー用カラムにトラップさせる。次に、親水性相互作用クロマトグラフィー用カラム中の親水性化合物を分離して溶出させることができる。【０００７】
しかし、この方法は、２本のカラムが必要になること、配管系が複雑となること、高価な専用装置が必要となることなどから必ずしも簡便に分析できる方法とは言えない。そのため、より簡便に疎水性化合物および親水性化合物を分析できる方法が望まれている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２０１０−７１７０７号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｓ．Ｌｏｕｗ，Ａ．Ｓ．Ｐｅｒｅｉｒａ，Ｆ．Ｌｙｎｅｎ，Ｍ．Ｈａｎｎａ−Ｂｒｏｗｎ，Ｐ．Ｓａｎｄｒａ，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ａ.，２００８，１２０８，ｐｐ９０．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、複数の分析用カラムおよび分析装置を用いず、疎水性化合物および親水性化合物を１本のカラムにて簡便に分析する液体クロマトグラフィー分析方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、水酸基を有するポリマー充填剤が充填された分析カラムを用いて、水溶性有機溶媒および水からなる移動相の水溶性有機溶媒と水との組成比率を変えることにより、逆相クロマトグラフィーモードと親水性相互作用クロマトグラフィーモードとを切替え、１本のカラムにて親水性化合物および疎水性化合物を簡便に分析する方法を見出し、本発明を完成するに至った。【００１２】
すなわち本発明は次の事項に関する。【００１３】
［１］水酸基を有するポリマー充填剤が充填された分析カラムを用いること、
移動相として水溶性有機溶媒および水の混合溶媒を用いること、および、
前記移動相の水溶性有機溶媒と水との組成比率を変えることにより逆相クロマトグラフィーモードと親水性相互作用クロマトグラフィーモードとを切替え、親水性化合物および疎水性化合物を分析すること
を特徴とする液体クロマトグラフィー分析方法。【００１４】
［２］前記ポリマー充填剤が、水酸基および水酸基に変換可能なエステル基からなる群より選ばれる少なくとも１種の置換基を有するモノマー（Ａ）を含む原料モノマーを重合させて得られるポリマーである、［１］に記載の液体クロマトグラフィー分析方法。【００１５】
［３]前記モノマー（Ａ）が、ヒドロキシ（メタ）アクリレートまたはカルボン酸ビニルエステルである、［２］に記載の液体クロマトグラフィー分析方法。【００１６】
［４］前記ポリマー充填剤が、ポリヒドロキシ（メタ）アクリレート系樹脂またはポリビニルアルコール系樹脂からなる、［１］〜［３］のいずれかに記載の液体クロマトグラフィー分析方法。【００１７】
［５］前記ポリマー充填剤１ｇあたりの水酸基の含有量が０．１〜１０ｍｍｏｌである、［１］〜［４］のいずれかに記載の液体クロマトグラフィー分析方法。【００１８】
［６］前記移動相の水溶性有機溶媒と水との組成比率を体積比で５：９５〜９５：５の範囲内で変える、［１］〜［５］のいずれかに記載の液体クロマトグラフィー分析方法。【００１９】
［７］前記水溶性有機溶媒が、アセトニトリル、メチルアルコール、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、アセトン、メチルエチルケトンおよびテトラヒドロフランからなる群から選ばれる少なくとも１種である、［１］〜［６］のいずれかに記載の液体クロマトグラフィー分析方法。
【発明の効果】
【００２０】
本発明の液体クロマトグラフィー分析方法は、水溶性有機溶媒および水からなる移動相の水溶性有機溶媒と水との組成比率を変えることで、複数の分析用カラムおよび分析装置を使用することなく、各種親水性化合物および疎水性化合物を連続的にもしくは不連続的に分離して溶出させることができるため、医薬品、化粧品、食品、環境、農業、医療および工業材料等の幅広い分野に有用であり、特に、医薬品、食品および化粧品などの有効成分もしくは不純物の同定または定量を行う方法として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】実施例１の移動相がアセトニトリル：水＝４０：６０（体積比）でのクロマトグラムである。
【図２】実施例１の移動相がアセトニトリル：水＝９０：１０（体積比）でのクロマトグラムである。
【図３】比較例１の移動相がアセトニトリル：水＝４０：６０（体積比）でのクロマトグラムである。
【図４】比較例１の移動相がアセトニトリル：水＝９０：１０（体積比）でのクロマトグラムである。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
以下、本発明をさらに詳細に説明する。
【００２３】
本発明の液体クロマトグラフィー分析方法は、水酸基を有するポリマー充填剤が充填された分析用カラムを用いること、移動相として水溶性有機溶媒および水の混合溶媒を用いること、および、前記移動相の水溶性有機溶媒と水との組成比率を変えることにより逆相クロマトグラフィーモードと親水性相互作用クロマトグラフィーモードとを切替え、親水性化合物および疎水性化合物を分析することを特徴とする。以下、本明細書では、「水酸基を有するポリマー充填剤」のことを単に「ポリマー充填剤」ともいう。
【００２４】
本発明の液体クロマトグラフィー分析方法は、移動相の水溶性有機溶媒と水との組成比率を変えることで、複数の分析用カラムおよび分析装置を用いることなく、親水性化合物および疎水性化合物を分離して溶出させ、分析することが可能な方法である。
【００２５】
前記親水性化合物および疎水性化合物は、化合物の骨格および官能基などの構造に制約はないが、分子量が２０００以下の有機化合物であることが好ましく、水、または、アセトニトリルおよびアルコール類などの水溶性有機溶媒に可溶であることが好ましく、紫外吸光度検出器および示差屈折率検出器等の液体クロマトグラフィー用検出器にて検出可能な化合物であることが好ましい。
【００２６】
本発明の液体クロマトグラフィー分析方法は、例えば、１回目の試料注入にて逆相クロマトグラフィーモードにおいて疎水性化合物を分離して溶出させた後、親水性相互作用クロマトグラフィーモードに切替えて、１回目の試料注入を行ったカラムと同じ分析カラムを用いて２回目の試料注入にて親水性化合物を分離して溶出させる方法である。ここで、逆相クロマトグラフィーモードとは、通常、移動相として水溶性有機溶媒および水の混合溶媒を用いた際に、前記混合溶媒の水の比率を高くして、親水性の高い成分から順に溶出させるモードをいう。対して、親水性相互作用クロマトグラフィーモードとは、通常、前記混合溶媒の水溶性有機溶媒の比率を高くして、極性の低い成分から順に溶出させるモードをいう。なお、本発明では、逆相クロマトグラフィーモードを発現させた後に親水性相互作用クロマトグラフィーモードへ切替えてもよく、反対に、親水性相互作用クロマトグラフィーモードを発現させた後に逆相クロマトグラフィーモードへ切替えてもよい。逆相クロマトグラフィーモードと親水性相互作用クロマトグラフィーモードとの切替えは移動相の水溶性有機溶媒と水との組成比率を変えることで容易に行うことができる。また、分析中に単一移動相を用いるイソクラティック法および水溶性有機溶媒比率に勾配を設けるグラジエント法のいずれにおいても分析が可能である。逆相クロマトグラフィーモードと親水性相互作用クロマトグラフィーモードの切替えは、イソクラティック法では、例えば、逆相クロマトグラフィーモードで用いる移動相を送液している送液ポンプを停止し、送液する移動相を親水性相互作用クロマトグラフィーモードで用いる移動相に交換して、再度送液ポンプを作動させることで完了し、グラジエント法では、例えば、分析時間を設定しその時間内で逆相クロマトグラフィーモードで用いる移動相の組成比率から親水性相互作用クロマトグラフィーモードで用いる移動相の組成比率へと一定の勾配によって変えることで完了する。１回の分析中に移動相の切替えを完了させることができる点ではグラジエント法が好ましく、移動相の調整の簡易性という観点ではイソクラティック法が好ましい。
【００２７】
上記のように分析モードの切り替えによって、逆相クロマトグラフィーモードおよび親水性相互作用クロマトグラフィーモードの両方の分析を連続的に行うことができる。ここで分析を連続的に行うとは、同一の分析カラムを使用して同一の試料を異なる分析モードで連続して分析することを意味し、１回の分析の間に分析モードが切り替わる場合と１回毎に分析モードを切り替える場合の両方が含まれる。
【００２８】
本発明で使用する水酸基を有するポリマー充填剤は、水酸基および水酸基に変換可能なエステル基からなる群より選ばれる少なくとも１種の置換基を有するモノマー（Ａ）を含む原料モノマーを重合させて得られるポリマーであることが好ましい。
【００２９】
本願においてエステル基とは、エステル結合を含む官能基であり、Ｒ−ＣＯＯ−もしくは−ＣＯＯＲ'で表すことができる。但し、ＲとＲ'は、炭化水素基である。
【００３０】
また、水酸基に変換可能なエステル基とは、エステル交換反応やケン化によって当該エステル基が水酸基に変換され得ることを意味する。
【００３１】
前記モノマー（Ａ）としては、例えば、ヒドロキシ（メタ）アクリレートおよびカルボン酸ビニルエステルが挙げられる。
【００３２】
ここで（メタ）アクリレートとは、メタクリレート及びアクリレートから選ばれる少なくとも１つを意味する。
【００３３】
前記ヒドロキシ（メタ）アクリレートとしては、例えば、１個以上のエチレン性炭素−炭素二重結合と１個以上の水酸基とから構成されるヒドロキシ（メタ）アクリレートが挙げられ、具体的には、グリセリンジメタクリレート、グリセリンモノメタクリレート、２−ヒドロキシプロピルメタクリレート、２−ヒドロキシブチルメタクリレートおよび２−ヒドロキシ-３-アクリロイルオキシプロピルメタクリレートが挙げられる。これらは単独で用いてもよく、２種以上を組合せて用いてもよい。これらの中でも、得られるポリマー充填剤の粒径を小さくでき、液体クロマトグラフィー用充填剤としての強度、高性能化を図れるなどの点で、グリセリンジメタクリレートの単独重合体が特に好ましい。
【００３４】
前記カルボン酸ビニルエステルとしては、例えば酢酸ビニル、プロピオン酸ビニル、酪酸ビニル、吉草酸ビニルおよびピバリン酸ビニルが挙げられる。これらは単独で用いてもよく、２種以上を組合せて用いてもよい。これらの中でも、酢酸ビニルおよびプロピオン酸ビニルが、比較的親水性が高く重合およびケン化が容易であるので好ましい。そして、これらのモノマーを重合して得られる重合体は、ケン化等によってエステル基を水酸基に変換させることができる。
【００３５】
前記ポリマー充填剤としては、ヒドロキシ（メタ）アクリレート系樹脂またはポリビニルアルコール系樹脂を用いることが望ましい。
【００３６】
前記ヒドロキシ（メタ）アクリレート系樹脂としては、例えば、前記ヒドロキシ（メタ）アクリレートを含む原料モノマーの重合体が挙げられる。
【００３７】
前記ポリビニルアルコール系樹脂としては、例えば、前記カルボン酸ビニルエステルと架橋性単量体から構成される架橋共重合体のエステル基をケン化またはエステル交換反応によってアルコール性水酸基に変換した樹脂が挙げられる。前記架橋性単量体としては、例えば、トリアリルイソシアヌレートが挙げられる。
【００３８】
前記ポリマー充填剤には、任意の割合で水酸基以外のアミノ基、スルホ基およびカルボキシル基等のイオン性官能基を導入することもできる。
【００３９】
前記ポリマー充填剤は、水酸基の含有量が前記ポリマー充填剤１ｇあたり０．１〜１０ｍｍｏｌであることが好ましく、０．５〜８ｍｍｏｌであることがより好ましく、１〜５ｍｍｏｌであることが特に好ましい。前記水酸基は、モノマー（Ａ）に含有されている水酸基でもよく、モノマー（Ａ）またはポリマーに含有されているエステル基を変換した水酸基でもよく、ポリマー中の水酸基などを介して新たに導入した複数の水酸基でもよい。水酸基の含有量が前記ポリマー充填剤１ｇあたり１０ｍｍｏｌを超えると、前記ポリマー充填剤の親水性が強すぎてしまい、逆相クロマトグラフィーモードによる化合物の分離および保持が不十分となることがある。一方、水酸基の含有量が前記ポリマー充填剤１ｇあたり１ｍｍｏｌ未満であると、前記ポリマー充填剤の親水性が弱くなり、親水性相互作用クロマトグラフィーモードが作用しなくなることがある。
【００４０】
前記ポリマー充填剤の形状は、充分な分離性能および高感度を有し、１〜３０ＭＰａの圧力に耐え得る強度を得るために、体積平均粒径が１〜３０μｍの球状が好ましく、３〜１０μｍの球形がさらに好ましい。本願における上記の体積平均粒径は、コールターカウンター法を用いて次のように測定される。すなわち、測定装置としてＭｕｌｔｉｓｉｚｅｒ  ４（ベックマン・コールター社製）を用い、ポリマー充填剤０．２ｇにアイソトン（希釈液）２５ｍＬを加え、超音波を３分間当てて分散させた後、約１０００個の測定個数にて体積平均粒径を測定する。体積平均粒径を好ましい範囲とするには、風力分級、ふるい分けによる分級、沈殿を利用した分級等で制御できる。
【００４１】
本発明で用いる移動相として、水および水溶性有機溶媒の混合溶媒が用いられる。水溶性有機溶媒としては、アセトニトリル、メチルアルコール、エチルアルコール、イソプロピルアルコール等のアルコール類、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類、および、テトラヒドロフラン等のエーテル類などが挙げられる。これらは単独で用いてもよく、２種以上を組合せて用いてもよい。
【００４２】
前記ポリマー充填剤を使用して、移動相の水溶性有機溶媒と水との組成比率を調節することで、逆相クロマトグラフィーモードと親水性相互作用クロマトグラフィーモードを切替えることができる。移動相は分析対象に応じて適宜選択することができるが、通常、水溶性有機溶媒の組成比率（体積比）として５０〜７０％に境界があり、その境界よりも低くすると逆相クロマトグラフィーモードが、高くすると親水性相互作用クロマトグラフィーモードが発現する。前記移動相の水溶性有機溶媒と水との組成比率（体積比）は、通常、１：９９〜９９：１、好ましくは５：９５〜９５：５の範囲内で変えることができる。
【００４３】
疎水性化合物の分離および溶出には逆相クロマトグラフィーモードが用いられ、逆相クロマトグラフィーモードでの水溶性有機溶媒と水との組成比率（体積比）は、通常、１：９９〜７０：３０であり、１：９９〜５０：５０とすることが好ましく、５：９５〜５０：５０とすることがさらに好ましく、１０：９０〜５０：５０とすることが特に好ましい。また、親水性化合物の分離および溶出には親水性相互作用クロマトグラフィーモードが用いられ、親水性相互作用クロマトグラフィーモードでの水溶性有機溶媒と水との組成比率（体積比）は、通常、５０：５０〜９９：１であり、６０：４０〜９９：１とすることが好ましく、７０：３０〜９５：５とすることがさらに好ましく、７５：２５〜９５：５とすることが特に好ましい。
【００４４】
また、移動相には、親水性レベルおよび試料の保持時間を調整する目的で、任意の割合でギ酸アンモニウム、酢酸アンモニウムなどを添加することもできる。
【００４５】
本発明で用いるカラムは、前記ポリマー充填剤が充填されたものであり、ハウジングの材質およびサイズに特に制限はないが、材質は、一般的に、液体クロマトグラフィー用ハウジングとして用いられているステンレスまたはポリエーテルエーテルケトン（ＰＥＥＫ）樹脂製が好ましく、サイズはより高分離および高感度に分析を行うために内径１．０〜４．６ｍｍ、長さ１００〜２５０ｍｍとすることが好ましい。
【実施例】
【００４６】
以下、本発明を実施例によりさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例により何ら制限されるものではない。【００４７】
［実施例１］
ポリマー充填剤として、グリセリンジメタクリレートを単独重合して得られたヒドロキシ（メタ）アクリレート樹脂（粒子径５μｍ）を用いた。ピリジン３３ｍｌ中、前記樹脂２．５ｇと無水酢酸１７ｍｌとを９０℃の加熱下で１６時間撹拌して反応させ、その反応量から前記樹脂中の水酸基量を測定した。その結果、樹脂中の水酸基量は樹脂１ｇあたり２．０ｍｍｏｌであった。【００４８】
液体クロマトグラフとしてＮｅｘｅｒａ（島津製作所（株）製）を用い、カラムとして前記樹脂を内径４．６ｍｍ、長さ１５０ｍｍのステンレスハウジングに充填したカラムを用い、検出器には紫外検出器（ＵＶ、波長：２５４ｎｍ）を用いた。分析条件は、カラム温度を４０℃、移動相の流速を１．０ｍｌ／ｍｉｎとした。【００４９】
まず初めに、移動相としてアセトニトリル：水＝４０：６０（体積比）を用いて、シチジン、ウリジン、ウラシル、トルエンおよびナフタレンの混合試料について逆相クロマトグラフィーモードで分析を行った。得られたクロマトグラムを図１に示す。シチジン、ウリジンおよびウラシル、トルエン、ナフタレンの順番で試料が溶出し、疎水性の高い、トルエンおよびナフタレンが良好に保持されて分離された。尚、シチジン、ウリジンおよびウラシルは保持時間において明確な有意差はなく、共にほとんど保持されなかった。【００５０】
次に、移動相をアセトニトリル：水＝９０：１０（体積比）に切替えて、上記と同様にシチジン、ウリジン、ウラシル、トルエンおよびナフタレンの混合試料の分析を親水性相互作用クロマトグラフィーモードで行った。【００５１】
得られたクロマトグラムを図２に示す。移動相としてアセトニトリル：水＝４０：６０（体積比）を用いたときと溶出順序は逆転し、ナフタレンおよびトルエン、ウラシル、ウリジン、シチジンの順に溶出した。親水性の高い、シチジン、ウリジンおよびウラシルが良好に保持されて分離された。尚、ナフタレンおよびトルエンは保持時間において明確な有意差はなく、共にほとんど保持されなかった。【００５２】
［比較例１］
ポリマー充填剤として、ヒドロキシ（メタ）アクリレート樹脂の代わりに水酸基を有さないエチレングリコールジメタクリレートを単独重合して得られる（メタ）アクリレート樹脂（粒子径５μｍ）を用いた。【００５３】
実施例１に記載の液体クロマトグラフ、検出器および分析条件を用い、カラムとして前記樹脂を内径４．６ｍｍ、長さ１５０ｍｍのステンレスハウジングに充填したカラムを用い、移動相としてアセトニトリル：水＝４０：６０（体積比）を用いて、シチジン、ウリジン、ウラシル、トルエンおよびナフタレンの混合試料について分析した。次に、移動相をアセトニトリル：水＝９０：１０（体積比）に切替えて、上記と同様にシチジン、ウリジン、ウラシル、トルエンおよびナフタレンの混合試料について分析を行った。それぞれの移動相で得られたクロマトグラムを図３および図４に示す。移動相を切替えても溶出順序は変わらず、いずれの移動相を用いても、シチジン、ウリジンおよびウラシル、トルエン、ナフタレンの順番で溶出した。また、いずれの移動相を用いても、親水性の高い化合物であるシチジン、ウリジンおよびウラシルの保持および分離が不十分であった。
【符号の説明】
【００５４】
１  シチジンのピーク
２  ウリジンのピーク
３  ウラシルのピーク
４  トルエンのピーク
５  ナフタレンのピーク
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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2016129322.tif 000007
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