(57)【要約】分析装置に試料及び内部標準物質を導入するに際し、管状のニードルの先端を内部標準液容器に挿入し、該先端から該内部標準液容器に収容された内部標準物質を含む液体である内部標準液を予め定められた量吸引する内部標準液吸引工程（Ｓ１２）と、該先端を試料液容器に挿入し、該先端から該試料液容器に収容された試料液を予め定められた量吸引する試料液吸引工程（Ｓ１３）とを実行した後、該先端を分析装置へ至る流路に連通する注入ポートへ挿入し、該先端から前記試料液及び前記内部標準液を吐出する吐出工程（Ｓ１４）を実行する。このとき、複数回の試料導入においてそれぞれ同一の内部標準液容器から前記内部標準液を吸引することにより、１回の試料導入で消費される内部標準液を分析に供される最小限の量に抑えることが可能となる。
2016001979.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
a) 管状のニードルと、
b) 分析流路に連通する注入ポートと、
c) 前記ニードルと、試料液容器、内部標準液容器、及び前記注入ポートとの相対位置を変化させる移動手段と、
d) 前記ニードルを通して液体を吸引及び吐出する吸引・吐出手段と、
e) 前記移動手段及び前記吸引・吐出手段を制御する制御手段と、
を備え、
更に、前記制御手段が、
f) 前記ニードルの先端を前記内部標準液容器に挿入させ、該先端から該内部標準液容器に収容された内部標準物質を含む液体である内部標準液を予め定められた量吸引させる内部標準液吸引制御手段と、
g) 前記ニードルの先端を前記試料液容器に挿入させ、該先端から該試料液容器に収容された試料液を予め定められた量吸引させる試料液吸引制御手段と、
h) 前記ニードルの先端を前記注入ポートへ挿入させ、前記内部標準液及び前記試料液を該先端から吐出する吐出制御手段と、
を有し、
前記内部標準液吸引制御手段と前記試料液吸引制御手段とをこの順又は逆順で動作させた後、前記吐出制御手段を動作させることにより前記分析流路への試料導入を行うものであって、複数回の試料導入においてそれぞれ同一の内部標準液容器から前記内部標準液を吸引させるものであることを特徴とする自動試料導入装置。
【請求項２】
コンピュータを請求項１に記載の制御手段として機能させることを特徴とするプログラム。
【請求項３】
a) 管状のニードルの先端を内部標準液容器に挿入し、該先端から該内部標準液容器に収容された内部標準物質を含む液体である内部標準液を予め定められた量吸引する内部標準液吸引工程と、
b) 該先端を試料液容器に挿入し、該先端から該試料液容器に収容された試料液を予め定められた量吸引する試料液吸引工程と、
をこの順又はこの逆順で実行した後、
c) 該先端を分析流路に連通する注入ポートへ挿入し、該先端から前記試料液及び前記内部標準液を吐出する吐出工程、
を実行することにより前記分析流路への試料導入を行うものであって、
複数回の試料導入においてそれぞれ同一の内部標準液容器から前記内部標準液を吸引することを特徴とする試料導入方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、自動試料導入装置、試料導入方法、及びプログラムに関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、フェニルケトン尿症等の先天性代謝疾患の早期発見を目的として、新生児から採取した血液サンプルを質量分析装置で分析して疾患の指標物質を定量する新生児マススクリーニングと呼ばれる検査が広く行われている（例えば特許文献１を参照）。新生児マススクリーニングでは、まず医療機関等において、被検者である新生児の血液を濾紙に少量染み込ませて乾燥させる。そして、検査機関において検査担当者が前記濾紙の血液含浸箇所をパンチング（切り出し）してサンプルプレート（例えば96穴マイクロプレート）上の１つのウェル（サンプル収容用の凹部）に収容する。なお、新生児マススクリーニングでは、通常、多数のサンプルを連続的に質量分析するため、前記サンプルプレートの各ウェルにはそれぞれ異なる被験者から採取した血液を含む濾紙が収容される。続いて、前記濾紙が収容された各ウェルに内部標準物質を含む溶液（内部標準液）を一定量ずつ添加して、濾紙中の血液成分を該溶液中に抽出する。その後、各ウェル中の溶液（以下「試料・内部標準混合液」とよぶ）を別のサンプルプレートの各ウェルに移し、該サンプルプレートを自動試料導入装置（オートサンプラ）にセットする。これにより、該自動試料導入装置により各ウェル中の試料・内部標準混合液が順次採取されて質量分析装置に導入される。【０００３】
従来の自動試料導入装置による試料導入の手順について図１３及び図１４を用いて説明する。まず、自動試料導入装置の内部に設けられたニードル３１６の先端がサンプルプレート３１１のウェル３１２に挿入される。このとき、２つの流路切替バルブ３２２、３２３に設けられたポートａ〜ｌは図１３で示すように連通した状態となっている。すなわち、ニードル３１６及びその基端に接続されたサンプルループ３１８は、流路切替バルブ３２２を介して計量ポンプ３１９に接続されている。続いて、計量ポンプ３１９の働きによりウェル３１２内の試料・内部標準混合液がニードル３１６の先端から所定量吸引される。【０００４】
次に、ニードル３１６の先端を注入ポート３２０に挿入すると共に流路切替バルブ３２２による流路の切り替えを行う。これにより、流路切替バルブ３２２に設けられたポートａ〜ｆは図１４で示すように連通した状態となる。すなわち、ニードル３１６及びサンプルループ３１８が、キャリア液体リザーバ３２４から質量分析装置（ＭＳ）へと至るキャリア液体流路の流れに介挿される。その結果、ニードル３１６及び／又はサンプルループ３１８中に保持されていた試料・内部標準混合液がキャリア液体によって押し流され、質量分析装置に導入される。【０００５】
質量分析装置では、導入された試料・内部標準混合液中の各成分がイオン化され、質量毎に分離されて検出される。これにより、横軸を質量電荷比（m/z）、縦軸を信号強度とするマススペクトルが生成され、該マススペクトル上における疾患指標物質の信号強度と内部標準物質の信号強度との比に基づいて、前記疾患指標物質が定量される。そして、この定量値が予め定められた閾値を超えた場合に陽性と判定される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特表2011-511276号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
ところで、上記の内部標準物質には、定量対象の物質に類似した特性を有し、マススペクトル上で定量対象物質のピークに近く且つ該ピークと分離可能な位置にピークを持つ物質を用いる必要がある。そこで、上記の新生児マススクリーニングにおける内部標準物質としては、疾患指標物質である所定のアミノ酸又は所定のアシルカルニチンの一部を安定同位体で置換したものが使用される。しかしながら、これらは一般に製造コストが高く高価である。新生児マススクリーニングでは一度の質量分析で多くの疾患を検査できるよう、上述の内部標準液として複数の疾患指標物質に対応した複数種類（例えば20種類）の内部標準物質を混合したものが使用されており、前記内部標準液のコストが検査コストを押し上げる一因となっている。そのため、１回の検査で使用する内部標準液の量を低減することが求められている。【０００８】
なお、ここでは新生児マススクリーニングを例に挙げたが、これに限らず質量分析装置やその他の分析装置を用いた種々の目的の定量分析において、分析コストの低減のために内部標準物質の使用量を抑えることが望まれている。【０００９】
本発明は上記の点に鑑みてなされたものであり、その目的とするところは内部標準物質を用いた定量分析（内部標準法による定量分析）において、内部標準物質の使用量を低減することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記課題を解決するために成された本発明に係る自動試料導入装置は、
a) 管状のニードルと、
b) 分析流路に連通する注入ポートと、
c) 前記ニードルと、試料液容器、内部標準液容器、及び前記注入ポートとの相対位置を変化させる移動手段と、
d) 前記ニードルを通して液体を吸引及び吐出する吸引・吐出手段と、
e) 前記移動手段及び前記吸引・吐出手段を制御する制御手段と、
を備え、
更に、前記制御手段が、
f) 前記ニードルの先端を前記内部標準液容器に挿入させ、該先端から該内部標準液容器に収容された内部標準物質を含む液体である内部標準液を予め定められた量吸引させる内部標準液吸引制御手段と、
g) 前記ニードルの先端を前記試料液容器に挿入させ、該先端から該試料液容器に収容された試料液を予め定められた量吸引させる試料液吸引制御手段と、
h) 前記ニードルの先端を前記注入ポートへ挿入させ、前記内部標準液及び前記試料液を該先端から吐出する吐出制御手段と、
を有し、
前記内部標準液吸引制御手段と前記試料液吸引制御手段とをこの順又は逆順で動作させた後、前記吐出制御手段を動作させることにより前記分析流路への試料導入を行うものであって、複数回の試料導入においてそれぞれ同一の内部標準液容器から前記内部標準液を吸引させるものであることを特徴としている。【００１１】
前記制御部は、前記試料液と前記内部標準液のどちらを先にニードルに吸引させるものとしてもよい。また、前記移動手段はニードルのみを移動させることで前記相対位置を変化させるものとしてもよく、ニードルに加えて又は代えて試料液容器、内部標準液容器、及び注入ポートの少なくとも１つを移動させることにより前記相対位置を変化させるものとしてもよい。【００１２】
従来、自動試料導入装置を利用した定量分析では、検査担当者が試料と内部標準物質を予め混合した状態で試料液容器（ウェル）に収容しておき、該自動試料導入装置が該試料液容器内の液体を所定量吸引して注入ポートから分析流路に導入していた。例えば、上述の新生児マススクリーニングの場合、検査担当者が乾燥濾紙血液サンプルを100 μLの内部標準液で抽出した後、得られた抽出液（血液成分と内部標準物質の混合液）を前記試料液容器に収容し、自動試料導入装置が該抽出液をニードルで1 μL採取して分析流路に導入していた。従って、試料液容器に収容された内部標準液の大部分（この例では100 μL中の99 μL）は分析に供されず無駄に消費されていたことになる。【００１３】
これに対し、上記本発明に係る自動試料導入装置を利用した定量分析では、それぞれ別の容器（すなわち前記試料液容器と前記内部標準液容器）に収容された試料液と内部標準液とをニードルで所定量ずつ吸引した後に該ニードルを注入ポートに挿入し、前記試料液と内部標準液を一度に分析流路に導入する。例えば、上述の新生児マススクリーニングの場合、乾燥濾紙血液サンプルは内部標準物質を含まない所定の溶媒（例えばメタノール）100 μLで抽出し、得られた抽出液（試料液）を試料液容器に収容しておく。一方で、内部標準液は前記試料液容器とは別に設けられた内部標準液容器に収容しておく。そして、自動試料導入装置が、内部標準液容器内の内部標準液と試料液容器内の試料液をそれぞれ1 μLずつ採取し、これらを一度に分析流路に注入する。このときニードルで吸引されずに内部標準液容器に残った内部標準液は次の分析、すなわち別の試料液容器に収容された試料液の導入時に使用される。そのため、従来のように内部標準液の大部分が無駄になることはない。その結果、１回の分析（すなわち１つの試料液容器に収容された試料液の分析）で消費される内部標準液を分析に供される最小限の量（この例の場合1 μL）に抑えることが可能となる。【００１４】
また、上記課題を解決するために成された本発明に係る試料導入方法は、
a) 管状のニードルの先端を内部標準液容器に挿入し、該先端から該内部標準液容器に収容された内部標準物質を含む液体である内部標準液を予め定められた量吸引する内部標準液吸引工程と、
b) 該先端を試料液容器に挿入し、該先端から該試料液容器に収容された試料液を予め定められた量吸引する試料液吸引工程と、
をこの順又はこの逆順で実行した後、
c) 該先端を分析流路に連通する注入ポートへ挿入し、該先端から前記試料液及び前記内部標準液を吐出する吐出工程、
を実行することにより前記分析流路への試料導入を行うものであって、
複数回の試料導入においてそれぞれ同一の内部標準液容器から前記内部標準液を吸引することを特徴としている。
【発明の効果】
【００１５】
上記の通り、本発明に係る自動試料導入装置及び試料導入方法によれば、内部標準法による定量分析における内部標準物質の消費量を抑えることが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】本発明の一実施形態による自動試料導入装置の概略構成を示す模式図。
【図２】前記自動試料導入装置における制御部のブロック構成図。
【図３】前記自動試料導入装置の動作を示すフローチャート。
【図４】前記自動試料導入装置において試料液を吸引している状態を示す模式図。
【図５】前記自動試料導入装置において試料液及び内部標準液を注入ポートに注入している状態を示す模式図。
【図６】前記自動試料導入装置におけるニードル洗浄工程の前半を示す模式図。
【図７】前記自動試料導入装置におけるニードル洗浄工程の後半を示す模式図。
【図８】本発明の別の実施形態による自動試料導入装置の概略構成を示す模式図。
【図９】前記自動試料導入装置において試料液を吸引している状態を示す模式図。
【図１０】前記自動試料導入装置において試料液及び内部標準液を注入ポートに注入している状態を示す模式図。
【図１１】前記自動試料導入装置において試料液及び内部標準液を質量分析装置へ送出している状態を示す模式図。
【図１２】本発明に係る試料導入方法と従来の試料導入方法による定量結果を示す図。
【図１３】従来の自動試料導入装置における試料導入手順の前半を説明するための模式図。
【図１４】従来の自動試料導入装置における試料導入手順の後半を説明するための模式図。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下、本発明を実施するための最良の形態について図面を参照しつつ説明する。図１は本発明の一実施形態による自動試料導入装置の概略構成図である。なお、上述の図１３と共通する構成要素については下二桁が共通する符号を付し、適宜説明を省略する。本実施形態の自動試料導入装置は質量分析装置（ＭＳ）に対して試料の導入を行うものであり、試料の導入動作を行う動作部１１０と、動作部１１０を制御する制御部１３０とで構成される。
【００１８】
動作部１１０は、サンプルプレート１１１がセットされるプレート載置部１１３と、内部標準液容器１１４がセットされる内部標準液容器載置部１１５と、先端がテーパー状に形成された筒状のニードル１１６と、モータ等を含み前記ニードル１１６を水平方向及び鉛直方向に移動させるニードル駆動機構１１７と、ニードル１１６の基端に接続されたサンプルループ１１８と、計量ポンプ１１９と、注入ポート１２０と、ニードル１１６やサンプルループ１１８を洗浄するための洗浄ポート１２１と、第一流路切替バルブ１２２と、第二流路切替バルブ１２３とを含んでいる。
【００１９】
第一流路切替バルブ１２２及び第二流路切替バルブ１２３はいずれも６ポート２ポジションバルブであり、それぞれステッピングモータ等の駆動源によってバルブ内の回動部材（ロータ）を回動させることにより、隣り合うポート間の連通状態を切り替えることができる。第一流路切替バルブ１２２のポートａにはキャリア液体リザーバ１２４に接続された送液ポンプ１２５が、ポートｂにはサンプルループ１１８が、ポートｃには計量ポンプ１１９が、ポートｄには第二流路切替バルブ１２３のポートｇが、ポートｅには注入ポート１２０が、ポートｆには質量分析装置へ至る流路（以下「分析流路１２６」とよぶ）がそれぞれ接続されている。また、第二流路切替バルブ１２３のポートｇには第一流路切替バルブ１２２のポートｄが、ポートｈにはドレインが、ポートｉには計量ポンプ１１９が、ポートｊには洗浄ポート１２１が、ポートｌには洗浄液を貯留した洗浄液リザーバ１２７がそれぞれ接続されており、ポートｋは閉鎖されている。なお、本実施形態では計量ポンプ１１９及び送液ポンプ１２５が本発明における吸引・吐出手段に相当する。
【００２０】
制御部１３０はパーソナルコンピュータ等のコンピュータであり、図２に示すように中央演算処理装置であるＣＰＵ（Central Processing Unit）１３１と、メモリ１３２と、ＬＣＤ（Liquid Crystal Display）等から成るモニタ（表示部）１３３と、キーボードやマウス等から成る入力部１３４と、ＨＤＤ（Hard Disk Drive）やＳＳＤ（Solid State Drive）等の大容量記憶装置から成る記憶部１３５とが互いに接続されている。記憶部１３５には、ＯＳ（Operating System）１３６、及び注入動作制御プログラム１３７が記憶されている。制御部１３０は、更に、外部装置（ここでは動作部１１０）との直接的な接続や、外部装置とのＬＡＮ（Local Area Network）などのネットワークを介した接続を司るためのインターフェース（Ｉ／Ｆ）１３８を備えており、該Ｉ／Ｆ１３８よりネットワークケーブル又は無線ＬＡＮを介して動作部１１０に接続されている。
【００２１】
図２においては、注入動作制御プログラム１３７に係るように、内部標準液吸引制御部１３９、試料液吸引制御部１４０、及び吐出制御部１４１が示されている。これはいずれも基本的にはＣＰＵ１３１が注入動作制御プログラム１３７をメモリ１３２に読み出して実行することによりソフトウエア的に実現される機能手段である。なお、前記注入動作制御プログラム１３７は必ずしも単体のプログラムである必要はなく、例えば質量分析装置を制御するためのプログラムの一部に組み込まれた機能であってもよく、その形態は特に問わない。
【００２２】
本実施形態に係る自動試料導入装置を上述の新生児マススクリーニングに使用する場合には、まず、次のような手順で試料の前処理を行う。すなわち、検査担当者が医療機関等から送られてきた乾燥濾紙血シートから各被検者の血液が含まれる箇所を切り出し、それぞれをサンプルプレート上の各ウェルに収容する。そして、前記濾紙が収容された各ウェルに血液成分抽出用の液体を所定量（例えば100 μL）ずつ添加する。ここで、該液体としては、従来のような内部標準物質を含む液体ではなく、内部標準物質を含まない液体（例えばメタノール）を使用する。そして、前記サンプルプレートを所定温度で所定時間（例えば、45℃で45分間）振盪することにより、濾紙中の血液成分を前記液体中に抽出する。その後、各ウェル中の液体を別のサンプルプレート１１１の各ウェル１１２に移し、該サンプルプレート１１１を自動試料導入装置のプレート載置部１１３にセットする。以下、このサンプルプレート１１１の各ウェル１１２（本発明における試料液容器に相当）に収容された液体を「試料液」とよぶ。検査担当者は、更に内部標準物質を含む液（内部標準液）を収容した内部標準液容器１１４を自動試料導入装置の内部標準液容器載置部１１５にセットする。
【００２３】
その後、検査担当者が上述の入力部１３４から試料導入の開始を指示すると、注入動作制御プログラム１３７による制御の下に、前記動作部１１０において前記試料液及び内部標準液が採取され、質量分析装置に導入される。このときの試料液及び内部標準液の導入手順について図３のフローチャート、並びに図１、図４、及び図５を参照しつつ説明する。
【００２４】
まず、注入動作制御プログラム１３７が、サンプルプレート１１１上のウェル１１２の番号を表す変数ｎを１にセットする（ステップＳ１１）。
【００２５】
次に、内部標準液吸引制御部１３９が、内部標準液容器１１４に収容された内部標準液をニードル１１６に吸引させる（ステップＳ１２）。具体的には、まず第一流路切替バルブ１２２及び第二流路切替バルブ１２３を制御してポートａ〜ｆ及びｇ〜ｌを図１に示す連通状態にする。これにより、第一流路切替バルブ１２２及び第二流路切替バルブ１２３を介してサンプルループ１１８と計量ポンプ１１９とが接続され、更に、第一流路切替バルブ１２２を介してキャリア液体リザーバ１２４に付設された送液ポンプ１２５と分析流路１２６とが接続された状態となる。そして、ニードル駆動機構１１７を制御してニードル１１６の先端を内部標準液容器１１４に挿入させ（図１）、計量ポンプ１１９により予め定められた量（例えば1 μL）の内部標準液を吸引させる。
【００２６】
続いて、試料液吸引制御部１４０が、ニードル駆動機構１１７を制御してニードル１１６の先端をサンプルプレート１１１上のｎ番目（すなわち１番目）のウェル１１２に挿入させ（図４）、更に、計量ポンプ１１９を制御して該ウェル１１２中の試料液を予め定められた量（例えば1 μL）ニードル１１６に吸引させる（ステップＳ１３）。以上により、ニードル１１６内には所定量の試料液と内部標準液とが採取された状態となる。
【００２７】
次に、吐出制御部１４１が、ニードル駆動機構１１７を制御してニードル１１６を注入ポート１２０に挿入させると共に、第一流路切替バルブ１２２を図５に示す状態にする。これにより、キャリア液体リザーバ１２４から送液ポンプ１２５、ポートａ、ポートｂ、ニードル１１６、注入ポート１２０、ポートｅ、ポートｆ、を経て分析流路１２６へと至る流路が形成される。その結果、送液ポンプ１２５によって送給されたキャリア液体がサンプルループ１１８及びニードル１１６内を通過するようになるため、サンプルループ１１８及び／又はニードル１１６内に存在していた試料液及び内部標準液がこのキャリア液体によって押し流され、注入ポート１２０及び分析流路１２６を介して質量分析装置に導入される（ステップＳ１４）。
【００２８】
その後、注入動作制御プログラム１３７は、洗浄ポート１２１を用いてニードルの洗浄を実行する（ステップＳ１５）。具体的には、第二流路切替バルブ１２３を図６のように切り替えて洗浄液リザーバ１２７と計量ポンプ１１９を連通させ、計量ポンプ１１９の吸引動作によって洗浄液リザーバ１２７内の洗浄液を計量ポンプ１１９のシリンジ内に吸引する。続いて第一流路切替バルブ１２２を図７のように切り替えることでニードル１１６及びサンプルループ１１８をキャリア液体の流れから切り離す。そして、ニードル駆動機構１１７を制御してニードル１１６を洗浄ポート１２１に挿入させると共に、計量ポンプ１１９の吐出動作によって前記シリンジ内の洗浄液を送出する。これにより、洗浄液がサンプルループ１１８に送り込まれ、ニードル１１６を通過して洗浄ポート１２１に排出される。このような洗浄液の吸引及び吐出を繰り返し行い、所定の液量を送出した時点で洗浄動作を終了する。
【００２９】
洗浄動作が完了すると、注入動作制御プログラム１３７は、サンプルプレート１１１上の全ての試料を導入したか否かを判定し（ステップＳ１６）、全試料の導入が完了していない場合には、上記の変数ｎをインクリメント（ステップＳ１７）する。そして、質量分析装置において次の分析が可能となるまで所定の時間待機し（ステップＳ１８）、ステップＳ１２へと戻る。その後、ステップＳ１２〜Ｓ１８を繰り返し実行し、全試料の導入が完了した時点（ステップＳ１６でＹｅｓになった時点）で一連の試料注入動作を完了する。
【００３０】
以上の通り、本実施形態に係る液体試料導入装置によれば、それぞれ別の容器に収容された内部標準液と試料液とがニードルによって順次採取され、これらが同時に質量分析装置へと導入される。また、複数回の試料導入において、試料液はその都度異なるウェル１１２（試料液容器）から吸引されるのに対し、内部標準液は毎回同じ内部標準液容器１１４から採取される。すなわち、１回の試料導入が完了した時点で内部標準液容器１１４内に残った内部標準液は、次回以降の試料の導入時に使用される。そのため、従来のように分析に必要な量以上に内部標準物質を消費することがない。従って、本実施形態の構成によれば内部標準法による定量分析における内部標準物質の消費量を抑え、分析コストを低減することが可能となる。なお、こうした試料導入方法は、上述の新生児マススクリーニングのような乾燥濾紙血液サンプルを試料とした分析に好適に使用できるほか、通常の液体を試料とした分析にも同様に適用することができる。
【００３１】
以上の実施形態では、サンプルプレート１１１とは別に用意した容器に内部標準液を収容して内部標準液容器載置部１１５にセットするものとしたが、これに限らず、内部標準液をサンプルプレート１１１上の試料液が収容されていないウェル１１２に収容するようにしてもよい。この場合、該ウェル１１２が本発明における内部標準液容器に相当する。また、本発明に係る試料導入装置には、内部標準液容器を２個以上セットしてもよい。この場合、例えば所定の回数の試料導入が完了するまでは１つの内部標準液容器から内部標準液を吸引し、それ以降は別の内部標準液容器から内部標準液を採取する。
【００３２】
また、上記実施形態では、ニードルの先端を注入ポートに挿入した後に流路切替バルブを切り替え、ニードルとその基端に接続された流路をキャリア液体の流路中に介挿することにより、ニードル先端から試料液及び内部標準液を吐出させて分析流路に導入する構成としたが、本発明に係る試料導入装置はこれに限定されるものではない。例えば、ニードルの先端を注入ポートに挿入した後に、計量ポンプの吐出動作により該ニードルの先端から試料液及び内部標準液を吐出させて該試料液及び内部標準液を分析流路に導入するようにしてもよい。以下、こうした構成の液体試料導入装置について図８〜図１１を参照しつつ説明する。なお、図１と共通する構成要素については下二桁が共通する符号を付し、適宜説明を省略する。
【００３３】
流路切替バルブ２２２は６ポート２ポジションバルブであり、ポートａにはキャリア液体リザーバ２２４に接続された送液ポンプ２２５が、ポートｂにはサンプルループ２１８の上流側が、ポートｃにはドレインが、ポートｄには注入ポート２２０が、ポートｅにはサンプルループ２１８の下流側が、ポートｆには質量分析装置に至る分析流路２２６がそれぞれ接続されている。計量ポンプ２１９は前記流路切替バルブ２２２とは独立に設けられており、該計量ポンプ２１９にはニードル２１６を備えた配管が接続されている。また、前記流路切替バルブ２２２を含む流路や計量ポンプ２１９を含む流路とは別に、洗浄液容器・送液ポンプ・ニードル洗浄ポート及びこれらを接続する配管から成るニードル洗浄用流路２２８が設けられている。制御部２３０の構成は図２と同様である。なお、本実施形態では計量ポンプ２１９が本発明における吸引・吐出手段に相当する。
【００３４】
この自動試料導入装置においても、図３のフローチャートと同様の手順で試料液及び内部標準液の導入が行われる。但し、ステップＳ１２では、流路切替バルブ２２２を図８に示す連通状態にすると共に、ニードル２１６を内部標準液容器２１４に挿入し、計量ポンプ２１９の吸引動作により所定量の内部標準液をニードル２１６内に採取する。ステップＳ１３では、図９に示すようにニードル２１６をサンプルプレート２１１上の所定のウェル２１２（ｎ番目のウェル）に挿入し、計量ポンプ２１９の吸引動作により所定量の試料液をニードル２１６内に採取する。続くステップＳ１４では、図１０に示すようにニードル２１６を注入ポート２２０に挿入し、計量ポンプ２１９の吐出動作により、ステップＳ１２及びＳ１３で採取した内部標準液及び試料液をサンプルループ２１８に導入し、その後、流路切替バルブを図１１に示す連通状態に切り替える。これにより、サンプルループ２１８がキャリア液体の流れに介挿され、該サンプルループ２１８内に保持されていた内部標準液及び試料液が分析流路２２６を経て質量分析装置に導入される。
【実施例】
【００３５】
本発明に係る試料導入方法と従来の試料導入方法とで質量分析装置への試料導入を行い、該質量分析装置による定量分析の結果を比較した。【００３６】
従来法による試料導入では、直径3 mmにパンチングした乾燥濾紙血液検体をサンプルプレートのウェルに収容し、そこに新生児マススクリーニングキット（NeoBase Non-delivatized MSMS kit、パーキンエルマー製）に付属の内部標準液100 μLを添加して45℃で45分振盪することにより血液成分を抽出した。そして、得られた抽出液（試料と内部標準の混合液）を別のサンプルプレートのウェルに移して自動試料導入装置にセットした。自動試料導入装置では、該ウェルから1 μLの前記抽出液を採取して質量分析装置に導入した。【００３７】
一方、本発明の方法による試料導入では、上記と同様の乾燥濾紙血液検体をサンプルプレートのウェルに収容し、メタノール100 μLを添加して45℃で45分振盪することにより血液成分を抽出した。そして、得られた抽出液（試料液）を別のサンプルプレートのウェルに移して自動試料導入装置にセットした。また、バイアル瓶に上記と同じ内部標準液を適量収容して自動試料導入装置にセットした。自動試料導入装置では、前記ウェル中の抽出液と前記バイアル瓶中の内部標準液をそれぞれ１μL採取して同時に質量分析装置へ導入した。【００３８】
上記いずれの場合においても、質量分析装置では前記キットで定められた条件に基づいて質量分析を行い、得られたマススペクトルに基づいて20種類の指標物質（アミノ酸Ala, Cit, Leu, Met, Phe, Tyr, Valと、アシルカルニチンC0, C2, C3, C4, C5, C5DC, C6, C8, C10, C12, C14, C16, C18）及びそれらに対応した内部標準物質のピーク面積を導出した。そして、これにより得られた各指標物質と内部標準物質のピーク面積の比と、予め前記指標物質と内部標準物質の濃度比が異なる複数種類のサンプルを測定して作成した検量線とを用いて、前記抽出液中における各指標物質の濃度を算出した。【００３９】
上記のような定量分析を、従来法と本発明の方法とでそれぞれ６回ずつ行ったところ、各指標物質の濃度の平均とＣＶ値（変動係数）は図１２に示す通りであった。以上の結果、同図から明らかなように、本発明の方法によれば、いずれの指標物質についても従来法と同程度に検出できることが確認された。
【符号の説明】
【００４０】
１１０、２１０…動作部
１１１、２１１、３１１…サンプルプレート
１１２、２１２、３１２…ウェル
１１３、２１３…プレート載置部
１１４、２１４…内部標準液容器
１１５、２１５…内部標準液容器載置部
１１６、２１６、３１６…ニードル
１１７、２１７…ニードル駆動機構
１１８、２１８、３１８…サンプルループ
１１９、２１９、３１９…計量ポンプ
１２０、２２０、３２０…注入ポート
１２１…洗浄ポート
１２２…第一流路切替バルブ
１２３…第二流路切替バルブ
２２２、３２２、３２３…流路切替バルブ
１２４、２２４、３２４…キャリア液体リザーバ
１２５、２２５…送液ポンプ
１２６、２２６…分析流路
１２７…洗浄液リザーバ
１３０、２３０…制御部
１３５…記憶部
１３７…注入動作制御プログラム
１３８…内部標準液吸引制御部
１３９…試料液吸引制御部
１４０…吐出制御部
【図１】
2016001979.tif 000003
【図２】
2016001979.tif 000004
【図３】
2016001979.tif 000005
【図４】
2016001979.tif 000006
【図５】
2016001979.tif 000007
【図６】
2016001979.tif 000008
【図７】
2016001979.tif 000009
【図８】
2016001979.tif 000010
【図９】
2016001979.tif 000011
【図１０】
2016001979.tif 000012
【図１１】
2016001979.tif 000013
【図１２】
2016001979.tif 000014
【図１３】
2016001979.tif 000015
【図１４】
2016001979.tif 000016
【手続補正書】
【提出日】平成28年7月1日(2016.7.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４０】
１１０、２１０…動作部
１１１、２１１、３１１…サンプルプレート
１１２、２１２、３１２…ウェル
１１３、２１３…プレート載置部
１１４、２１４…内部標準液容器
１１５、２１５…内部標準液容器載置部
１１６、２１６、３１６…ニードル
１１７、２１７…ニードル駆動機構
１１８、２１８、３１８…サンプルループ
１１９、２１９、３１９…計量ポンプ
１２０、２２０、３２０…注入ポート
１２１…洗浄ポート
１２２…第一流路切替バルブ
１２３…第二流路切替バルブ
２２２、３２２、３２３…流路切替バルブ
１２４、２２４、３２４…キャリア液体リザーバ
１２５、２２５…送液ポンプ
１２６、２２６…分析流路
１２７…洗浄液リザーバ
１３０、２３０…制御部
１３５…記憶部
１３７…注入動作制御プログラム
１３９…内部標準液吸引制御部
１４０…試料液吸引制御部
１４１…吐出制御部
【手続補正２】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図８】
2016001979.tif 000017
【手続補正３】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図９】
2016001979.tif 000018
【手続補正４】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１０】
2016001979.tif 000019
【手続補正５】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１１】
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【国際調査報告】
2016001979.tif 000021
2016001979.tif 000022