(57)【要約】肌の黄くすみ、キメ、及び肌質を改善するための経口美容剤を提供することを課題とする。グリコシルヘスペレチンを有効成分とする、肌の黄くすみ、キメ、及び肌質を改善するための経口美容剤を提供することにより前記課題を解決する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
グリコシルヘスペレチンを有効成分とする、肌の黄くすみ、キメ、及び肌質を改善するための経口美容剤。
【請求項２】
グリコシルヘスペレチンが、ヘスペリジン、α−グリコシルヘスペリジン、及び７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチンから選ばれる１種又は２種以上であることを特徴とする、請求項１に記載の経口美容剤。
【請求項３】
α−グリコシルヘスペリジンが、α−グルコシルヘスペリジンであることを特徴とする、請求項１又は２に記載の経口美容剤。
【請求項４】
グリコシルヘスペレチンが、フルフラールを実質的に含まず、乾燥固形物当たり、グリコシルヘスペレチンを９０質量％以上１００質量％未満含有することを特徴とする、請求項１乃至３のいずれかに記載の経口美容剤。
【請求項５】
グリコシルヘスペレチンが、ＧＣ／ＭＳ分析法で測定されたフルフラール含量が、乾燥固形物当たり、２００ｐｐｂ未満であることを特徴とする、請求項１乃至４のいずれかに記載の経口美容剤。
【請求項６】
グリコシルヘスペレチンが、４−メトキシスチレンを実質的に含まないことを特徴とする、請求項１乃至５のいずれかに記載の経口美容剤。
【請求項７】
グリコシルヘスペレチンが、ＧＣ／ＭＳ分析法で測定された４−メトキシスチレン含量が、乾燥固形物当たり、３０ｐｐｂ未満であることを特徴とする、請求項６に記載の経口美容剤。
【請求項８】
乾燥固形物当たりのα−グリコシルヘスペリジンの含量が、５０質量％以上１００質量％未満であることを特徴とする、請求項１乃至７のいずれかに記載の経口美容剤。
【請求項９】
グリコシルヘスペレチンが、１ｗ／ｗ％水溶液とし、これを密閉容器中で１００℃で３０分間加熱した後、２７℃に調整し、幅１ｃｍのセルに入れ、分光光度計により波長４２０ｎｍ及び波長７２０ｎｍにおける吸光度を測定したときの両波長における吸光度の差が０．２４未満であることを特徴とする、請求項１乃至８のいずれかに記載の経口美容剤。
【請求項１０】
グリコシルヘスペレチンが、１ｗ／ｗ％水溶液とし、密閉容器中で１００℃で３０分間加熱した後、２０℃としたときの電気伝導度が１０μＳ／ｃｍ未満であることを特徴とする、請求項１乃至９のいずれかに記載の経口美容剤。
【請求項１１】
グリコシルヘスペレチンが、高周波誘導結合プラズマ発光分光分析法で測定したときの組成物の乾燥固形物当たりのカルシウム、カリウム、マグネシウム、及びナトリウムの含量がそれぞれ、１ｐｐｍ以下、０．１ｐｐｍ以下、０．２ｐｐｍ以下、及び０．４ｐｐｍ以下であることを特徴とする、請求項１乃至１０のいずれかに記載の経口美容剤。
【請求項１２】
錠剤、顆粒剤、粉剤、懸濁剤、ペースト状剤、ゼリー状剤、又は液剤の形態にあることを特徴とする請求項１乃至１１のいずれかに記載の経口美容剤。
【請求項１３】
グリコシルヘスペレチンを、ヘスペリジン換算で、一日１回当たり、１０乃至３，０００ｍｇ経口摂取することを可能とする単位投与形態にあることを特徴とする請求項１乃至１２のいずれかに記載の経口美容剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、経口美容剤に関し、より詳細には、肌の黄くすみ、キメ、及び肌質を改善するための経口美容剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、斯界においては、スキンケアなどに代表される身体の外側から皮膚を美しくする皮膚外用剤とは対照的に、身体の内側から皮膚を美しくする目的で、毎日の食生活の中で不足しがちな栄養素や機能性成分を手軽にしかも効果的に補うために経口摂取される食品（以下、単に「美容食品」と言う。）が脚光を浴びている。【０００３】
美容食品は、経口摂取されるものである点で通常一般の飲食品と類似点はあるものの、所望の目的を達成するために特定の栄養素や機能性成分が強化されている点で通常一般の飲食品とは異なる。また、美容食品は、薬のように即効性を期待したり、特定疾患を治療することを目的とするものではなく、通常一般の飲食品を摂取するだけではその充分量を摂取することが難しい、美容に役立つ特定の栄養素や機能性成分を補うためのものである点で、医薬品とも異なる。美容食品の例としては、例えば、特許文献１、２に記載されている、コンドロイチン硫酸、コエンザイムＱ１０、ヒアルロン酸、グルコサミンなどの美容に役立つ栄養素や機能性成分を含む経口組成物を挙げることができる。また、特許文献３には、飲食品又は経口剤として用いる、α−グリコシルヘスペリジンを含有するメラニン低下剤や皮膚明度低下抑制剤などが開示されているが、それらは、皮膚におけるメラニン量を低減し、皮膚明度の低下を抑制する（所謂メラニンに着目して皮膚明度の低下を抑制する）ためのものであって、皮膚明度とは全く異なる指標である肌の黄くすみ（例えば、非特許文献１、２参照）、キメ、及び肌質を改善するための手段や、α−グリコシルヘスペリジンを経口摂取する場合の不都合を改善するための手段等については何ら開示されていない。なお、特許文献４には、α−グリコシルヘスペリジンを用いて皮膚色を改善する手段が開示されているが、これは、α−グリコシルヘスペリジンを配合してなる皮膚外用剤によるもので、斯かる皮膚外用剤は、経口摂取される美容食品とは投与形態ないしは使用形態の点で明らかに異なる。【０００４】
斯かる状況下、斯界においては、肌の黄くすみ、キメ、及び肌質を改善するための美容食品が希求されているが、斯かる目途で、日常的に継続的に安全かつ容易に不快感なく経口摂取でき、しかも、工業的に安価に提供できるものは未だ提供されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００２−２２３７２６号公報
【特許文献２】特開２００８−９９５６２号公報
【特許文献３】特開２００９−７３３６号公報
【特許文献４】特開２００２−２５５８２７号公報
【非特許文献】
【０００６】
非特許文献１：屋敷圭子、『フレグランス・ジャーナル（ＦＲＡＧＲＡＮＣＥ  ＪＯＵＲＮＡＬ）』、第４０巻、第４号、８０乃至８２頁、２０１２年
非特許文献２：舛田勇二、『色材』、第７６巻、第２号、７８乃至８３頁、２００３年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、上記従来技術に鑑み、肌の黄くすみ、キメ、及び肌質を効果的に改善することのできる経口美容剤を提供することを課題とする。なお、本発明に係る経口美容剤とは、経口摂取される美容食品のみならず、美容改善を目的とする、健康食品、栄養機能食品、保健機能食品、特定保健用食品などの形態にあるものを包含する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記課題を解決すべく、本発明者等は、鋭意研究努力を重ねた結果、グリコシルヘスペレチンをヒトに日常的に継続的に経口摂取させると、肌の黄くすみ、キメ、及び肌質を効果的に改善できることを新規に見出し、その用途を確立して、本発明を完成した。【０００９】
すなわち、本発明は、グリコシルヘスペレチンを有効成分とする、肌の黄くすみ、キメ、及び肌質を改善するための経口美容剤を提供することにより、上記の課題を解決するものである。【００１０】
本願明細書で言うグリコシルヘスペレチンとは、ヘスペレチンに糖類が結合した化合物全般、つまり、ヘスペレチン骨格を有する化合物全般を意味し、その具体例としては、ヘスペリジン、ヘスペリジンのルチノースを構成するラムノース基が離脱した構造を有する７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチン、及びヘスペリジンに糖類（例えば、Ｄ−グルコース、Ｄ−フルクトース、又はＤ−ガラクトースなどの糖類）が等モル以上α−結合したα−グリコシルヘスペリジンなどが挙げられる。【００１１】
より詳細には、ヘスペリジンは、ビタミンＰとも呼ばれ、ラムノースとグルコースとからなるルチノースがヘスペレチンに結合した構造を有する、下記化学式１に示す構造式で表わされる化合物で、柑橘類の果皮等に多く含まれている成分である。【００１２】
化学式１：
【化１】
2016027837.tif 000002
【００１３】
また、７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチンは、下記化学式２に示す構造式で表わされる化合物であり、ヘスペリジンと比べ、水溶性が高い特徴を有している。７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチンは、例えば、特許文献１に示されるとおり、α−グルコシルヘスペリジンとヘスペリジンとを含有する溶液にα−Ｌ−ラムノシダーゼ（ＥＣ  ３．２．１．４０）を作用させて製造することができる。【００１４】
化学式２：
【化２】
2016027837.tif 000003
【００１５】
更に、α−グリコシルヘスペリジンは、ヘスペリジンに糖類（例えば、Ｄ−グルコース、Ｄ−フルクトース、又はＤ−ガラクトースなどの糖類）が等モル以上α−結合した化合物である。α−グリコシルヘスペリジンの代表例としては、ヘスペリジンのルチノース構造におけるグルコースにグルコースが１分子α−結合した、下記化学式３に示す構造式で表わされるα−グルコシルヘスペリジン（別名：酵素処理ヘスペリジン、糖転移ヘスペリジン、水溶性ヘスペリジン、又は糖転移ビタミンＰ）が挙げられる。α−グルコシルヘスペリジン含有製品としては、例えば、商品名『林原ヘスペリジン（登録商標）Ｓ』（株式会社林原販売）が市販されている。【００１６】
化学式３：
【化３】
2016027837.tif 000004
【００１７】
このように、グリコシルヘスペレチン自体は、従来より、各種飲食品、化粧品、医薬品、医薬部外品などの素材として広く用いられている、安全で汎用性の高い化合物である。グリコシルヘスペレチンの内、α−グリコシルヘスペリジンは、ヘスペリジンや７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチンと比べ水溶性が高く、取り扱い性に優れ、生体内においては、ヘスペリジンや７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチンと同様、生体内酵素の作用を受けてヘスペレチンにまで加水分解され、ヘスペレチン本来の生理活性を発揮する。
【発明の効果】
【００１８】
本発明の経口美容剤は、グリコシルヘスペレチンを有効成分とする経口美容剤であって、ヒトが日常的に継続的に安全かつ容易に、しかも、不快感なく経口摂取でき、しかも、工業的に安価に提供することができる。斯かる本発明の経口美容剤によれば、肌の黄くすみ、キメ、及び肌質を効果的に改善することができる。殊に、本発明の経口美容剤は、所謂働き盛りの勤労女性であって、肌の黄くすみやキメの粗さや肌質の低下が気になってくる４０代以降の年齢層の女性に適用する場合には、他の対象者と比べ、所望の作用効果がより顕著に発揮される優れた特徴を有する。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】被験者の左顔、耳朶下と唇端とを結んだ中心部を分光測色計により色差測定して得られたａ＊（赤み）値の経時変化を示す図である。
【図２】被験者の左顔、耳朶下と唇端とを結んだ中心部を分光測色計により色差測定して得られたｂ＊（黄み）値の経時変化を示す図である。
【図３】被験者の肌のキメについて、医師が補助光とマイクロスコープを用いて目視評価して得られたスコア値の経時変化を示す図である。
【図４】被験者の顔全体の乾燥の状態について、医師が補助光とマイクロスコープを用いて目視評価するとともに、各被験者に問診をして得られたスコア値の経時変化を示す図である。
【図５】被験者の顔全体の紅斑の状態について、医師が補助光とマイクロスコープを用いて目視評価するとともに、各被験者に問診をして得られたスコア値の経時変化を示す図である。
【図６】被験者の顔全体の刺激感について、医師が補助光とマイクロスコープを用いて目視評価するとともに、各被験者に問診をして得られたスコア値の経時変化を示す図である。
【図７】被験者の顔全体の掻痒感について、医師が補助光とマイクロスコープを用いて目視評価するとともに、各被験者に問診をして得られたスコア値の経時変化を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
以下、本発明の実施形態について説明するが、それらは本発明を実施するうえでの好ましい態様のあくまで例示であり、本発明は、それら実施態様に何ら限定されるものではない。
【００２１】
本発明の経口美容剤が有効成分として含むグリコシルヘスペレチンとは、ヒトが日常的に継続的に安全かつ容易に、かつ、不快感なく経口摂取でき、しかも、工業的に安価に提供できるものを意味し、本発明の所期の作用効果が奏せられるものである限り、その由来、製法、純度等は、特段の制限なく用いることができる。
【００２２】
より具体的には、本願明細書で言うグリコシルヘスペレチンとは、既述したとおり、ヘスペレチンに糖類が結合した化合物全般を意味し、より詳細には、生体内酵素の作用によりヘスペレチンを生成する、ヘスペリジン、７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチン、及びα−グリコシルヘスペリジンを意味する。それらグリコシルヘスペレチンの中でも、ヒトが安全かつ容易に、しかも、雑味、着色、臭気などが有意ないしは顕著に低減され、不快感なく経口摂取でき、工業的に安価に提供し得るものであれば、市販品或いは従来公知の製造方法により得られるものであろうと、本発明においてはより好適に用いることができる。なお、本発明はグリコシルヘスペレチン自体の製造方法に係る発明ではないことから、その製造方法の詳細は本願明細書においては割愛するけれども、その概要を述べれば下記のとおりである。
【００２３】
本発明で用いるグリコシルヘスペレチンの内、ヘスペリジンは、ヘスペリジン含有植物である柑橘類の果実、果皮、種子、未熟果などを原料とし、水やアルコールなどの溶媒を適宜用いて抽出することにより、工業的にその所望量を製造することができる。また、本発明で用いるグリコシルヘスペレチンの内、α−グリコシルヘスペリジンは、例えば、特開平１１−３４６７９２号公報などに開示されるとおり、ヘスペリジンとα−グルコシル糖化合物とを含有する溶液に、糖転移酵素を作用させて、α−グリコシルヘスペリジンを生成せしめ、これを採取することにより、工業的にその所望量を安価に製造することができる。更に、本発明で用いるグリコシルヘスペレチンの内、７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチンは、例えば、特許文献１などに開示されるとおり、糖転移酵素を作用させて得られるα−グリコシルヘスペリジンとヘスペリジンとを含有する酵素反応液にα−Ｌ−ラムノシダーゼを作用させて、７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチンを生成させ、これを採取することにより、工業的にその所望量を安価に製造することができる。
【００２４】
更に、本発明で用いるグリコシルヘスペレチンとしては、市販品及び従来公知の製造方法により得られるグリコシルヘスペレチンの中でも、不純物のより少ない高純度品が好適に用いられる。すなわち、従来公知のグリコシルヘスペレチンは、結晶化工程を経て得られる試薬級のグリコシルヘスペレチンは別にして、グリコシルヘスペレチンとともに、その製造原料に由来する共雑物、未反応原料、更には、その製造過程で副次的に生成する、生理学的許容性のイオン性化合物を量の多寡は別にして含む、謂わば、グリコシルヘスペレチン含有組成物であって、斯かる形態にあるグリコシルヘスペレチンは、雑味、着色、臭気などの原因物質となり、グリコシルヘスペレチンを経口摂取する上で支障となる複数の成分を含んでいることを本発明者等は新たに知見したからである。なお、本願明細書においては、以下、特に断りがない限り、グリコシルヘスペレチンを主体とし、その製造原料に由来する共雑物、未反応原料、或いは、その製造過程で副次的に生成する生理学的許容性のイオン性化合物とを含むグリコシルヘスペレチン含有組成物を単にグリコシルヘスペレチンと言う。なお、当然ながら、本発明で用いるグリコシルヘスペレチンには、結晶化工程を経て得られる高純度グリコシルヘスペレチンも含まれる。
【００２５】
また、本発明者等は、従来公知のグリコシルヘスペレチンの欠点であった、雑味、着色などを解消する目的で、従来のグリコシルヘスペリジンに含まれる共雑物含量を低減するために、従来法の一部を改良することにより、雑味と着色はもとより、臭気（以下、「雑味、着色、及び臭気」を纏めて「雑味等」と言う場合がある。）が低減されたグリコシルヘスペレチンとその製造方法を確立し、特願２０１４−４１０６６号明細書及び国際特許出願番号第ＰＣＴ／ＪＰ２０１５／０５６２３０号パンフレットに開示した。雑味等が低減されたグリコシルヘスペレチンは、ヒトが日常的に継続的に安全かつ容易に、しかも、不快感なく経口摂取できるとともに、工業的に安価に提供される優れた利点を有している。したがって、雑味等が低減されたグリコシルヘスペレチンは、本発明を実施する上で最も好適なグリコシルヘスペレチンとして有利に用いることができる。
【００２６】
以下、雑味等が低減されたグリコシルヘスペレチンの製造方法とその物性について説明する。
【００２７】
雑味等が低減されたグリコシルヘスペレチンは、（ア）ヘスペリジン及び澱粉部分分解物を含有する水溶液を調製する工程、（イ）得られた水溶液に糖転移酵素を作用させα−グルコシルヘスペリジンを含むグリコシルヘスペレチン含有組成物を生成させる工程、及び（ウ）生成したグリコシルヘスペレチン含有組成物を採取する工程を含む製造方法であって、前記（ア）乃至（ウ）の１又は２以上の工程を還元剤の存在下で実施するか、前記（ア）乃至（ウ）の１又は２以上の工程の前の始発原料及び／又は後の結果物に還元剤を添加することにより、製造することができる。以下、前記還元剤を用いる製造方法で得られるグリコシルヘスペレチン（以下、前記還元剤処理工程を経て調製されたグリコシルヘスペレチンを「還元剤処理品」と言う場合がある。）の製造原料、酵素反応（糖転移反応など）、還元剤処理、及び精製方法について逐次説明する。
【００２８】
（製造原料）
還元剤処理品の製造原料であるヘスペリジンとしては、従来のグリコシルヘスペレチンの製造において用いられるヘスペリジンのいずれも用いることができ、高純度のヘスペリジンはもとより、比較的低純度のヘスペリジン含有植物由来の抽出物、搾汁液、又はその部分精製物などの１種又は２種以上を適宜組み合わせて用いることもできる。
【００２９】
前記ヘスペリジン含有植物とは、具体的には、例えば、ミカン類、オレンジ類、香酸柑橘類、雑柑橘類、タンゴール類、タンゼロ類、ブンタン類、キンカン類などのミカン科ミカン属に属する柑橘類を例示でき、ヘスペリジン含有部位としては、それら柑橘類の果実、果皮、種子、未熟果などを例示できる。
【００３０】
製造原料の澱粉部分分解物としては、後述する糖転移酵素を作用させたとき、ヘスペリジンに糖転移し、グリコシルヘスペレチンとしてのα−グリコシルヘスペリジンを生成することのできるものであればよく、例えば、アミロース、デキストリン、シクロデキストリン、マルトオリゴ糖などの澱粉部分分解物、更には、液化澱粉、糊化澱粉などから選ばれる１種又は２種以上の澱粉部分分解物が適宜選ばれる。
【００３１】
また、後述する酵素反応において用いる澱粉部分分解物の使用量は、原料のヘスペリジンの質量に対し、通常、約０．１乃至約１５０倍、好適には、約１乃至約１００倍、より好適には、約２乃至約５０倍の範囲から選ばれる量が用いられる。酵素反応においては、澱粉部分分解物由来の糖をヘスペリジンへ糖転移させ、α−グリコシルヘスペリジンを効率的に生成させ、しかも、酵素反応系に未反応ヘスペリジンができるだけ残存しないように、ヘスペリジンに対し過剰量の澱粉部分分解物を用いるのが望ましい。その理由は、後述する精製工程において、澱粉部分分解物及びこれに由来する糖類等は、α−グリコシルヘスペリジンと比較的容易に分離できるのに対し、ヘスペリジンはα−グリコシルヘスペリジンと挙動をともにし、α−グリコシルヘスペリジンと分離し難いことから、水溶性が極めて低い、未反応のヘスペリジンの残存量が多いと、全体として、得られるグリコシルヘスペレチンの水溶性が低くなる不都合を生じるからである。
【００３２】
（酵素反応）
本願明細書で言う酵素反応とは、前記製造原料としてのヘスペリジンと澱粉部分分解物に糖転移酵素を作用させてα−グリコシルヘスペリジンを生成させる酵素反応を意味する。
【００３３】
前記酵素反応で用いる糖転移酵素としては、α−グルコシダーゼ（ＥＣ  ３．２．１．２０）、シクロマルトデキストリン・グルカノトランスフェラーゼ（ＥＣ  ２．４．１．１９、以下、「ＣＧＴａｓｅ」と言う。）、α−アミラーゼ（ＥＣ  ３．２．１．１）などを例示できる。前記α−グルコシダーゼとしては、ブタの肝臓、ソバの種子などの動植物組織由来の酵素、又は、ムコール（Ｍｕｃｏｒ）属、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）などのアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属などに属するカビ培養物由来のもの、又はサッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属などに属する酵母などの微生物を栄養培地で培養して得られる培養物由来のものが、ＣＧＴａｓｅとしては、例えば、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ジオバチルス（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）属、パエニバチルス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）属、サーモコッカス（Ｔｈｅｒｍｏｃｏｃｃｕｓ）属、サーモアナエロバクター（Ｔｈｅｒｍｏａｎａｅｒｏｂａｃｔｅｒ）属、ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、パイロコッカス（Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ）属、ブレビバチルス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ）属、及びサッカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属由来のものを例示できる。前記α−アミラーゼとしては、ジオバチルス属などに属する細菌、又は、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）などのアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属などに属するカビ培養物由来の１種又は２種以上のものを適宜組み合わせて用いることができる。これら糖転移酵素は、本発明の目的を達成し得る限り、天然又は遺伝子組換え型のいずれのものも採用でき、市販品がある場合には、それらも適宜用いることができる。また、前記糖転移酵素のいずれも、必ずしも精製して用いる必要はなく、通常、粗酵素であっても本発明の目的を達成し得る限り、いずれも用いることができる。
【００３４】
また、前記天然又は遺伝子組換え型の糖転移酵素を用いるに際し、それら糖転移酵素に好適な澱粉部分分解物を採用することにより、α−グリコシルヘスペリジンの生成率を高めることができる。
【００３５】
前記α−グルコシダーゼを用いる場合には、マルトース、マルトトリオース、マルトテトラオースなどのマルトオリゴ糖、又はデキストロース・イクイバレント（ＤＥ）約１０乃至約７０の澱粉部分分解物が、ＣＧＴａｓｅを用いる場合には、α−、β−、又はγ−シクロデキストリン又はＤＥ１以下の澱粉糊化物からＤＥ約６０の澱粉部分分解物が、更には、α−アミラーゼを用いる場合には、ＤＥ１以下の澱粉糊化物からＤＥ約３０のデキストリンなどの澱粉部分分解物が好適に用いられる。
【００３６】
酵素反応時のヘスペリジン含有溶液としては、ヘスペリジンをできるだけ高濃度に含有するものが望ましく、例えば、ヘスペリジンを懸濁状で含有する懸濁液か、水などの溶媒に室温以上の高温で溶解、若しくは、アルカリ剤を用いてｐＨ７．０を越えるアルカリ側ｐＨで溶解させた、ヘスペリジンを高濃度に含有する溶液が好適に用いられる。前記アルカリ剤としては、約０．１乃至約１．０規定の水酸化ナトリウム水溶液、水酸化カリウム水溶液、炭酸ナトリウム水溶液、水酸化カルシウム水溶液、アンモニア水などの１種又は２種以上の強アルカリ性水溶液を適宜用いることができる。
【００３７】
ヘスペリジンをアルカリ剤を用いて溶液状で用いる場合のヘスペリジン濃度は、通常、約０．００５ｗ／ｖ％以上、好ましくは、約０．０５乃至約１０ｗ／ｖ％、より好ましくは、約０．５乃至約１０ｗ／ｖ％、より更に好ましくは、約１乃至約１０ｗ／ｖ％である。
【００３８】
一方、ヘスペリジンをアルカリ剤を用いないで懸濁状で用いる場合には、ヘスペリジンを水などの溶媒に懸濁して懸濁状ヘスペリジンとし、その際のヘスペリジン濃度は、通常、約０．１乃至約２ｗ／ｖ％、より好適には、約０．２乃至約２ｗ／ｖ％、より好適には、約０．３乃至約２ｗ／ｖ％とする。
【００３９】
ヘスペリジンと澱粉部分分解物に糖転移酵素を作用させるときの温度と時間は、酵素反応で用いるヘスペリジンと澱粉部分分解物の濃度、及び糖転移酵素の種類、至適温度、至適ｐＨ、或いは作用量などに依存して変わるものの、通常、約５０乃至約１００℃、好適には、約６０乃至約９０℃、より好適には、約７０乃至約９０℃、及び、約５乃至約１００時間、好適には、約１０乃至約８０時間、より好適には、約２０乃至約７０時間の範囲とする。
【００４０】
また、糖転移酵素をヘスペリジンを高濃度に含有するアルカリ性溶液に作用させるときのｐＨと温度は、糖転移酵素の種類、至適ｐＨ、至適温度、或いは作用量、及びヘスペリジンの濃度などに依存して変わるものの、糖転移酵素が作用し得るできるだけ高ｐＨ、高温、具体的には、ｐＨ約７．５乃至約１０、好適には、ｐＨ約８乃至約１０、及び約４０乃至約８０℃、より好適には、約５０乃至約８０℃の範囲とする。なお、アルカリ性溶液中のヘスペリジンは、分解を起し易いので、これを防ぐため、できるだけ遮光下、嫌気下にヘスペリジンを保つのが望ましい。
【００４１】
更に、糖転移酵素を懸濁状ヘスペリジンに作用させるときのｐＨは、糖転移酵素の種類、至適温度、至適ｐＨ、或いは作用量、及び懸濁状ヘスペリジンの濃度などに依存して変わるものの、通常、ｐＨ約４乃至約７、好適には、ｐＨ約４．５乃至約６．５の範囲とする。
【００４２】
また、更に必要ならば、酵素反応前のヘスペリジンの溶解度を高め、ヘスペリジンへの糖転移反応を容易にするために、ヘスペリジン高含有溶液、殊に、ヘスペリジン高含有水溶液中に水と相溶性の高い有機溶媒、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、ｉｓｏ−プロパノール、ｎ−ブタノール、アセトール、アセトンなどの低級アルコール、低級ケトンなどの１種又は２種以上を適量共存させることも随意である。
【００４３】
酵素量と反応時間とは密接な関係にあり、通常、経済性の観点から、約５乃至約１５０時間、好適には、約１０乃至約１００時間、より好適には、約２０乃至約８０時間で酵素反応を終了する酵素量を、用いる糖転移酵素の種類に応じて適宜設定すればよい。また、固定化された糖転移酵素を用いてバッチ式で繰り返し反応させるか、連続式で反応させることも随意である。
【００４４】
前記糖転移酵素反応後に得られるα−グリコシルヘスペリジンとヘスペリジンとを含有する酵素反応液は、必要により、そのままで、又は、多孔性合成吸着樹脂により精製した後、グルコアミラーゼ（ＥＣ  ３．２．１．３）、又はβ−アミラーゼ（ＥＣ  ３．２．１．２）などのアミラーゼによって部分加水分解し、α−グリコシルヘスペリジンのα−Ｄ−グルコシル基の数を低減させることができる。例えば、グルコアミラーゼを作用させる場合には、α−マルトシルヘスペリジン以上の高分子を加水分解し、グルコースを生成させるとともにα−グルコシルヘスペリジンを生成させ、蓄積させることができる。また、β−アミラーゼを作用させる場合には、α−マルトトリオシルヘスペリジン以上の高分子を加水分解し、マルトースを生成させるとともに、α−グルコシルヘスペリジンとα−マルトシルヘスペリジンとを含む混合物を生成させ、蓄積させることができる。
【００４５】
一方、糖転移酵素反応後に得られるα−グリコシルヘスペリジンとヘスペリジンとを含有する酵素反応液に、グルコアミラーゼとα−Ｌ−ラムノシダーゼとを同時に、又はそのいずれか一方を先にして順次作用させることにより、α−グリコシルヘスペリジンのルチノース構造におけるグルコースに等モル以上α−結合したグルコースを離脱させ、α−グリコシルヘスペリジンをα−グルコシルヘスペリジンに変換させてα−グルコシルヘスペリジン含量を高めるとともに、水溶性の低いヘスペリジンを水溶性の高い７−Ｏ−β−モノグルコシルヘスペレチンに変えることにより、全体として、水溶性の高いグリコシルヘスペレチンとすることができる。
【００４６】
糖転移酵素と同様、グルコアミラーゼとα−Ｌ−ラムノシダーゼについても、それら酵素量と酵素反応時間とは密接な関係にあり、通常、経済性の観点から、約５乃至約１５０時間、好適には、約１０乃至約１００時間、より好適には、約２０乃至約８０時間で酵素反応を終了させる酵素量を、酵素の種類に応じて適宜設定すればよい。また、固定化されたα−Ｌ−ラムノシダーゼを用いてバッチ式で繰り返し反応させるか、連続式で途切れなく反応させることも適宜実施できる。
【００４７】
（還元剤処理）
本願明細書で言う還元剤処理とは、所定の還元剤を用いて、グリコシルヘスペレチンの雑味と着色（以下、「雑味・着色」と略記する場合がある。）、更には臭気を有意ないしは顕著に低減させるための処理を意味し、後述する還元剤を、（ア）ヘスペリジン及び澱粉部分分解物を含有する水溶液を調製する工程、（イ）得られた水溶液に糖転移酵素を作用させα−グルコシルヘスペリジンを含むグリコシルヘスペレチン含有組成物を生成させる工程、及び（ウ）生成したグリコシルヘスペレチン含有組成物を採取する工程の１又は２以上の工程で用いるか、前記（ア）乃至（ウ）の１又は２以上の工程の前の始発原料及び／又は前記工程後の結果物に、その所定量を添加することを意味する。
【００４８】
雑味等が低減されたグリコシルヘスペレチンの製造方法で用いられる還元剤としては、本発明の所期の目的を達成し得る限り、特段の制限はなく、斯界において汎用の無機系及び有機系の還元剤のいずれも用いることができる。しかしながら、還元剤処理品を含め、本発明で用いるグリコシルヘスペレチン又は高純度グリコシルヘスペレチンは、主として、ヒトに適用することを前提とするものであることから、安全性が高く、安定性、取り扱い性に優れた還元剤を用いるのが望ましい。
【００４９】
本発明で好適に用いられる還元剤の具体的としては、例えば、ヒドロキシルアミン類、二酸化塩素、水素、水素化合物（硫化水素、水素化ホウ素ナトリウム、水素化アルミニウムリチウム、水素化アルミニウムカリウムなど）、硫黄化合物（二酸化硫黄、二酸化チオ尿素、チオ硫酸塩、亜硫酸塩、硫酸鉄、過硫酸ナトリウム、過硫酸カリウム、過硫酸アンモニウム、亜硫酸カルシウムなど）、亜硝酸塩、塩化スズ、塩化鉄、ヨウ化カリウム、過酸化水素、希釈過酸化ベンゾイル、ヒドロペルオキシド、亜塩素酸ナトリウム等の亜塩素酸塩などの無機系還元剤；及びフェノール類、アミン類、キノン類、ポリアミン類、蟻酸とその塩類、蓚酸とその塩類、クエン酸とその塩類、二酸化チオ尿素、ヒドラジン系化合物、還元性糖質、過酸化ベンゾイル、過硫酸ベンゾイル、水素化ジイソブチルアルミニウム、カテキン、ケルセチン、トコフェロール、没食子酸とそのエステル、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジチオトレイトール、還元型グルタチオン、及びポリフェノール類などの有機系還元剤を例示できる。前記無機系及び有機系の還元剤は、それらの１種又は２種以上を適宜組み合わせて用いることができる。
【００５０】
前記無機系及び有機系の還元剤の内、前者の還元剤は、還元剤処理を経ずに調製されたグリコシルヘスペレチンが有していた雑味をより有意に低減でき、着色や異臭も、より顕著に低減された高品質のグリコシルヘスペレチンを提供できるので、本発明においてはより好適に用いることができる。なお、その理由は定かでないものの、以下のように推察される。すなわち、本発明の目的で用いる場合、有機系還元剤は無機系還元剤と比べ、雑味・着色の低減作用が低いか、或いは、有機系還元剤は有機物であることから、自体、雑味や着色の原因となる恐れがある上、有機系還元剤の分解物又は修飾物等が、還元剤処理品の精製工程で完全に除去されずに残存する場合、それらが最終製品のグリコシルヘスペレチンの品質に負の影響を与えるからではないかと考えられる。
【００５１】
無機系還元剤の内、ＳＯ２−イオン、ＨＳＯ３−イオン、ＳＯ３２−イオン、Ｓ２Ｏ４２−イオン、又はＳ２Ｏ７２−イオンと金属イオンとからなる、所謂、亜硫酸塩（亜硫酸塩類とも言う。）は、安全性、安定性、及び取り扱い性の点でも優れていることから、本発明においてより好適に用いることのできる還元剤である。殊に、無機系還元剤である亜硫酸ナトリウム、亜硫酸カリウム、亜硫酸水素ナトリウム、次亜硫酸ナトリウム、次亜硫酸カリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、ピロ亜硫酸カリウム、メタ亜硫酸ナトリウム、メタ亜硫酸カリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、及びメタ重亜硫酸カリウムなどの亜硫酸塩は、本発明において最も好適に用いることができる。
【００５２】
また、前記還元剤は、雑味等が低減されたグリコシルヘスペレチンの製造工程における１工程、又はその工程の前の始発原料及び／又は後の結果物に対して適用されるが、２以上の工程、又はそれら工程の前の始発原料及び／又は後の結果物に、その適量を適宜小分けして用いる場合には、より少ない量の還元剤で効率よく本発明の所期の目的を達成することができる。
【００５３】
前記還元剤の添加量としては、合計で、前記（ア）乃至（ウ）のそれぞれの工程で、前記（イ）酵素反応後（糖転移酵素以外に他の酵素を用いる場合には、それら全ての酵素反応終了後を意味する）に得られる酵素反応液質量に対し、通常、０．００１％以上、好適には、０．０１乃至３％、より好適には、０．０１乃至１％、更に好適には、０．０１乃至０．５％に相当する範囲から選ばれる量が用いられる。なお、還元剤を前記（ウ）の工程より前に添加する場合には、通常、残存する還元剤は、精製工程で実質的に除去されることから、最終製品として得られる雑味等が低減されたグリコシルヘスペレチン中には実質的に検出されない。前記全工程で添加される還元剤の量は、酵素反応後に得られる酵素反応液質量に対して、通常、合計で、０．００１％以上、好適には、０．０１％以上、より好適には、０．０１乃至１％の範囲となるように、１回ないしは複数回にわけて添加される。添加する際の温度は、通常、前記（ア）乃至（ウ）の工程で採用されている温度であるが、別途、その温度を上回る温度とすることも可能である。具体的には、室温以上の温度、好適には、５０℃以上、より好適には、７０℃以上、より好適には、８０℃以上、更に好適には、９０乃至１２０℃を例示できる。
【００５４】
（精製方法）
斯くして得られる酵素反応溶液は、これをそのまま、本発明で好適に用いられる雑味等が低減されたグリコシルヘスペレチンとすることができる。しかし、通常、酵素反応溶液は、斯界において公知の分別方法、濾過方法、多孔性合成樹脂等を用いる精製方法、濃縮方法、噴霧方法、乾燥方法などの１種又は２種以上の手段を適宜組み合わせて、液状、固状、粉末状などの還元剤処理品とする。
【００５５】
前記多孔性合成樹脂としては、多孔性で広い吸着表面積を有し、かつ非イオン性のスチレン−ジビニルベンゼン重合体、フェノール−ホルマリン樹脂、アクリレート樹脂、メタアクリレート樹脂などの合成樹脂を意味し、例えば、市販されているＲｏｈｍ  ＆  Ｈａａｓ社製の商品名：アンバーライトＸＡＤ−１、アンバーライトＸＡＤ−２、アンバーライトＸＡＤ−４、アンバーライトＸＡＤ−７、アンバーライトＸＡＤ−８、アンバーライトＸＡＤ−１１、及びアンバーライトＸＡＤ−１２などの樹脂；三菱化学株式会社製の商品名：ダイヤイオンＨＰ−１０、ダイヤイオンＨＰ−２０、ダイヤイオンＨＰ−３０、ダイヤイオンＨＰ−４０、ダイヤイオンＨＰ−５０、ダイヤイオンＨＰ−２ＭＧ、セパビーズＳＰ７０、セパビーズＳＰ２０７、セパビーズＳＰ７００、セパビーズＳＰ８００などの樹脂；及びＩＭＡＣＴＩ社製の商品名：イマクティＳｙｎ−４２、イマクティＳｙｎ−４４、及びイマクティＳｙｎ−４６などの樹脂を例示できる。
【００５６】
多孔性合成吸着剤を用いる精製方法による場合、酵素反応液を多孔性合成吸着剤を充填したカラムに通液すると、グリコシルヘスペレチンは多孔性合成吸着剤に吸着するのに対し、残存する澱粉部分分解物や水溶性糖類などは吸着されることなく、そのままカラムから流出する。この際、グリコシルヘスペレチンである、ヘスペリジン、７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチン、及びα−グリコシルヘスペリジンは、通常、挙動をともにし、多孔性合成吸着剤によってそれらを個別に分離することはできない。しかし、操作は煩雑となり、収率は低下するものの、多孔性合成吸着剤を充填したカラムに選択的に吸着したグリコシルヘスペレチンを希アルカリ、水などの溶媒で洗浄した後、比較的少量の有機溶媒又は有機溶媒と水との混合液、例えば、メタノール水溶液、エタノール水溶液などを通液すれば、α−グリコシルヘスペリジンがカラムから最初に溶出し、次いで、通液量を増すか有機溶媒濃度を高めることにより未反応ヘスペリジンが溶出してくる。斯くして得られたグリコシルヘスペレチン含有溶出液を蒸留処理して、有機溶媒を留去した後、所望の濃度まで濃縮すれば、ヘスペリジン含量が低減された、雑味等が低減されたグリコシルヘスペレチンが得られる。なお、前記有機溶媒によるグリコシルヘスペレチンの溶出操作は、同時に、多孔性合成吸着剤の再生操作にもなるので、用いる多孔性合成吸着剤の繰り返し使用を可能にする利点がある。
【００５７】
また、酵素反応終了後、酵素反応液を多孔性合成吸着剤に接触させるまでの間に、例えば、反応液を加温して生じる不溶物を濾過して除去したり、ケイ酸アルミン酸マグネシウム、アルミン酸マグネシウムなどで処理して反応液中の蛋白性物質などを吸着除去したり、強酸性イオン交換樹脂（Ｈ型）、中塩基性又は弱塩基性イオン交換樹脂（ＯＨ型）などで処理して脱塩するなどの精製方法を組み合せて、グリコシルヘスペレチンの純度を高めた、液状の還元剤処理品を製造することができる。
【００５８】
更に、前記液状の雑味等が低減されたグリコシルヘスペレチンを公知の乾燥方法により乾燥し粉末化して、本発明で好適に用いられる粉末状のグリコシルヘスペレチンとすることも随意である。
【００５９】
斯くして、前記還元剤処理工程を経ずに調製されたグリコシルヘスペレチン（以下、「還元剤非処理品」と言う場合がある。）の欠点であった特有の雑味が有意に低減され、しかも、着色や臭気も効果的に低減された還元剤処理品を製造することができる。また、本発明者等が確認したところによれば、還元剤非処理品に特有の雑味・着色、或いは、臭気は、前記精製方法を適用しただけでは実質的に変化しない。すなわち、還元剤非処理品の製造工程において汎用されている、例えば、前記多孔性合成吸着剤を用いる精製方法は、澱粉部分分解物や水溶性糖類だけでなく、水溶性の塩類などの夾雑物も同時に除去できる利点を有しているけれども、斯かる精製方法をいかに駆使しようとも、還元剤非処理品に特有の雑味・着色、或いは、臭気を有意ないしは顕著に低減することは困難である。想定される理由として、グリコシルヘスペレチン中に含まれる雑味等の原因物質は、多孔性合成吸着剤への吸脱着の挙動がグリコシルヘスペレチンと同様であり、グリコシルヘスペレチンと分離することができないからではないかと考えられる。
【００６０】
また、本発明で好適に用いられるグリコシルヘスペレチン、殊に、還元剤処理品は、雑味が有意に低減されており、電気伝導度も低く、電気伝導度に関与するイオン性化合物含量が低減されている。なお、イオン性化合物としては、例えば、原材料としてのヘスペリジンに本来的に含まれているナリルチン、ジオスミン、ネオポンシリン、或いは、酵素反応生成物であるグルコシルナリルチン、グルコシルネオポンシリンなどの化合物やその分解物、或いは、その分解物と密接な関連性を有する化合物、更には、グリコシルヘスペレチンの製造原料に由来するか、又はその製造工程で副次的に生成すると考えられる、本発明において指標とするフルフラールをはじめ、フルフリルアルコール、及びヒドロキシメチルフルフラールなどのフルフラール類やその塩類などの他、溶液状態で、カルシウム、カリウム、マグネシウム、及びナトリウムなどの金属の陽イオンを遊離する化合物などが挙げられる。なお、前記ナリルチン、ジオスミン、ネオポンシリン、グルコシルナリルチン、グルコシルネオポンシリンなどの成分は、通常、本発明で好適に用いられる還元剤処理品に微量ながら含まれている。
【００６１】
以上述べた、還元剤処理品の製造方法において、還元剤を用いると雑味と着色、殊に、雑味が有意に低減されたグリコシルヘスペレチンが得られるメカニズムは定かでないが、推定すれば以下のとおりである。
【００６２】
（１）還元剤処理品を製造するに際し、その製造原料に由来して、雑味の原因物質が存在し、それらに還元剤が作用し、その原因物質がマスク、分解ないしは修飾され、雑味が有意に低減されたグリコシルヘスペレチンが得られる。
（２）還元剤処理品の製造工程において、還元剤が、雑味の原因物質が生成するのを低減ないしは抑制するか、生成した雑味の原因物質をマスク、分解ないしは修飾し、雑味が有意に低減されたグリコシルヘスペレチンが得られる。
（３）前記（１）及び（２）に示す雑味の原因物質が還元剤により修飾を受け、多孔性合成吸着剤などによる精製工程でグリコシルヘスペレチンと分離し易くなり、その結果、雑味が有意に低減された還元剤処理品が得られる。
【００６３】
更に、本発明で好適に用いられるグリコシルヘスペレチンとしては、グリコシルヘスペレチン含有物と還元剤とを接触させ、グリコシルヘスペレチン含有物の雑味を有意に低減させたものも例示できる。斯かるグリコシルヘスペレチン含有物も本願明細書で言う還元剤処理品に包含される。また、グリコシルヘスペレチン含有物と還元剤とを接触させると、グリコシルヘスペレチン含有物の雑味が有意に低減できるとともに、着色や臭気をも効果的に顕著に低減することができる。グリコシルヘスペレチン含有物と還元剤との接触は、固状で接触させるよりも、水などの適宜溶媒を用いて、溶液状態又は懸濁状態で行うのがよい。また、前記還元剤を接触させるグリコシルヘスペレチン含有物としては、ヘスペリジン、α−グリコシルヘスペリジン、及び７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチンから選ばれる１種又は２種以上を含有するグリコシルヘスペレチンを例示できる。前記グリコシルヘスペレチン含有物としては、乾燥固形物当たり、グリコシルヘスペレチンを、通常、７０質量％以上１００質量％未満（以下、特に断りがない限り、「質量％」を「％」と略記する。）、より好適には、８０％以上１００％未満、更に好適には、９０％以上１００％未満含有するグリコシルヘスペレチンを例示できる。
【００６４】
また、前記グリコシルヘスペレチン含有物と還元剤とを接触させるに際し、用いる還元剤は、還元剤処理品を製造する場合と同様のものを用いることができる。また、還元剤の使用量は、グリコシルヘスペレチンの乾燥固形物当たり、通常、０．００００１％以上、好適には、０．０００１乃至０．５％、より好適には、０．００１乃至０．４％、より更に好適には、０．００１乃至０．３％の範囲で添加し、それらを均一に混合し、グリコシルヘスペレチンと還元剤とを接触させることにより、前記還元剤処理を経ずに調製された還元剤非処理品であっても、それ特有の雑味等を有意ないしは顕著に低減することができる。
【００６５】
更に、前記液状の還元剤処理品を公知の濃縮方法により濃縮し、シラップ状やペースト状の還元剤処理品とすることも、更に公知の乾燥方法により乾燥し、固状、顆粒状、又は粉末状の還元剤処理品とすることも随意である。
【００６６】
以上述べたとおり、前記還元剤処理をした酵素反応液を前記精製方法に供することにより、還元剤非処理品の欠点であった特有の雑味等が有意ないしは顕著に低減された還元剤処理品を得ることができる。
【００６７】
なお、前記製造方法により得られる還元剤処理品であって、フルフラールを実質的に含まないとともに、フェノールエーテルの一種である４−ビニルアニソール（別名：４−メトキシスチレン）（以下、「４−ＶＡ」と略記する。）を実質的に含まないものは、本発明で用いるグリコシルヘスペレチンの中でも雑味がより有意に低減されていることはもとより、着色や臭気もより顕著に低減されていることから、本発明においては最も好適に用いられる。なお、本願明細書で言うフルフラールを実質的に含まないとは、従来品と比べ、フルフラール含量が有意に低レベルであるグリコシルヘスペレチンを意味する。具体的には、後述する実験２の「（１）フルフラールの含量」に示すガスクロマトグラフ質量（ＧＣ／ＭＳ）分析装置を用いての分析手法（以下、『ＧＣ／ＭＳ分析法』と略記する。）により測定したとき、通常、２００ｐｐｂ（なお、１ｐｐｂは、１０億分の１のこと）未満、好適には、１００ｐｐｂ未満、より好適には、５０ｐｐｂ未満、更に好適には、３０ｐｐｂ未満、より更に好適には、２０ｐｐｂ未満、更に好適には、１５ｐｐｂ未満、特に好適には、１０ｐｐｂ未満であることを意味する。なお、本発明のグリコシルヘスペレチンの内、フルフラール含量がＧＣ／ＭＳ分析法の検出限界を下回るまでに低減されたものは、従来品と比べ雑味が有意に低減されていると共に、着色も顕著に低減された極めて高品質のグリコシルヘスペレチンである。しかしながら、本発明で用いるグリコシルヘスペレチンは、ヒトが経口使用する組成物に配合されるものであることから、必ずしも最高純度のものであることは必ずしも必要ではないことから、フルフラール含量が検出限界以下のレベルにまで低減されているものである必要性や、フルフラール不含有のものである必要性は必ずしもない。したがって、本発明で用いるグリコシルヘスペレチンは、フルフラールを実質的に含んでいなければ良く、本発明の所期の目的を達成し得る限り、従来品と比べ有意に少ない量、若しくは検出限界以下程度のフルフラールを含有していてもよい。なお、本発明で用いるグリコシルヘスペレチンとしては、上記したフルフラールを実質的に含んでいないものがより好適に用いられるけれども、還元剤非処理品の内、フルフラール含量が約３２０ｐｐｂ未満、好適には、約３１０ｐｐｂ未満であるものは、肌の黄くすみ改善乃至軽減作用を発揮することができることから、それらグリコシルヘスペレチンも本発明においては用いることができる。
【００６８】
また、前記４−ＶＡは、グリコシルヘスペレチンの製造原料に起因して生成すると推定される成分であり、得られるグリコシルヘスペレチン中における含量は、通常、乾燥固形物当たり、３０ｐｐｂ未満であり、４−ＶＡ含量は、フルフラール含量が２００ｐｐｂ未満であるものにおいては、通常、フルフラール含量とパラレルの関係にある。なお、４−ＶＡを実質的に含まないとは、フルフラールの場合と同様、還元剤処理品以外の還元剤非処理品などの他のグリコシルヘスペレチン含有組成物と比べ、４−ＶＡ含量が有意に低いレベルにあることを意味する。より具体的には、還元剤処理品における４−ＶＡ含量は、後述する実験２の「（２）４−ＶＡの含量」に示すＧＣ／ＭＳ分析装置を用いての分析手法により測定したとき、通常、乾燥固形物当たり、３０ｐｐｂ未満、好適には、１５ｐｐｂ未満、より好適には、１０ｐｐｂ未満、更に好適には、５ｐｐｂ未満、より更に好適には、３ｐｐｂ未満、より更に好適には、２ｐｐｂ未満である。
【００６９】
次に、還元剤処理品は、還元剤非処理品と比べ、着色（以下、「着色度」と言う場合がある。）も顕著に低減されている優れた特徴を有している。グリコシルヘスペレチンの着色度は、後述する実験２の「（３）色調と着色度」に示す方法により測定され、その概要を示せば下記のとおりである。すなわち、グリコシルヘスペレチンを所定濃度含有する水溶液を密閉容器中で加熱処理した後、処理液の色調を肉眼観察するとともに、分光光度計により、波長４２０ｎｍにおける吸光度（ＯＤ４２０ｎｍ）及び波長７２０ｎｍにおける吸光度（ＯＤ７２０ｎｍ）を測定し、両波長における吸光度の差（ＯＤ４２０ｎｍ−ＯＤ７２０ｎｍ）を求め、その測定値を着色度とする。本発明で用いるグリコシルヘスペレチンの好適な態様としては、前記吸光度の差が０．２４未満、好適には０．２０以下、より好適には０．１７以下、更により好適には０を超え０．１５以下であるものを例示できる。なお、本測定法において、グリコシルヘスペレチンの水溶液を加熱するのは、還元剤非処理品が加熱により着色度が著しく増大する欠点があったことに鑑み、グリコシルヘスペレチンの加熱による着色を実状に即して評価する目的で設定されたものである。
【００７０】
還元剤処理品は、グリコシルヘスペレチンと生理学的許容性のイオン性化合物を含むグリコシルヘスペレチン含有組成物であって、これを１ｗ／ｖ％水溶液とし、密閉容器中で１００℃で３０分間加熱した後、２０℃としたときの電気伝導度が１０μＳ／ｃｍ未満、好適には、８μＳ／ｃｍ未満、より好適には、６μＳ／ｃｍ未満、より更に好適には、０μＳ／ｃｍを超え４．５μＳ／ｃｍ未満であるグリコシルヘスペレチン含有組成物である。
【００７１】
本願明細書で言う生理学的許容性のイオン性化合物とは、本質的に量の多寡は別にして、還元剤非処理品及び還元剤処理品中に含まれている、ヒトが経口摂取しても安全な生理学的許容性のイオン性化合物であって、それらは、製造原料に本来的に含まれているか、又はその製造過程で副次的に生成する、ヒトが経口摂取しても安全な生理学的許容性のイオン性化合物を意味する。具体的には、グリコシルヘスペレチン含有組成物の雑味等の原因物質と推定される、例えば、ヘスペリジン原料に本来的に含まれるナリルチン、ジオスミン、ネオポンシリン、或いは、酵素反応生成物であるグルコシルナリルチン、グルコシルネオポンシリンなどの分解物や、その分解物と密接な関連性を有する化合物を意味し、溶液状態で、陽イオン金属元素であるカルシウム、カリウム、マグネシウム、及びナトリウムなどの金属イオンを遊離する化合物などが挙げられる。
【００７２】
また、前記製造方法により得られる還元剤処理品は、ヘスペリジン、α−グリコシルヘスペリジン、及び７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチンから選ばれる１種又は２種以上のグリコシルヘスペレチンを主体とする組成物であって、好適には、当該組成物の乾燥固形物当たりのグリコシルヘスペレチン含量が合計で、通常、９０％以上１００％未満、好適には、９３％以上１００％未満、より好適には、９５％以上１００％未満、更に好適には、９７％以上１００％未満、より更に好適には、９８％以上１００％未満である。
【００７３】
本願明細書で言うα−グリコシルヘスペリジン含量とは、α−グリコシルヘスペリジン含有組成物を試料とし、これを精製水により０．１％（ｗ／ｖ）になるよう希釈又は溶解し、０．４５μｍメンブランフィルターにより濾過した後、下記の条件による高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析に供し、試薬ヘスぺリジン（和光純薬工業株式会社販売）を標準物質として用い、ＵＶ２８０ｎｍにおけるクロマトグラムに出現したピークの面積と、ヘスペリジン、α−グリコシルヘスペリジン（α−グルコシルヘスペリジンなど）などの各成分の分子量に基づき計算し、無水物質量換算した組成における各成分の含量を意味する。当該ＨＰＬＣ分析によるグリコシルヘスペレチンの定量の概要は、下記（１）乃至（４）に示すとおりである。
【００７４】
＜ＨＰＬＣ分析条件＞
ＨＰＬＣ装置：『ＬＣ−２０ＡＤ』（株式会社島津製作所製）
デガッサー：『ＤＧＵ−２０Ａ３』（株式会社島津製作所製）
カラム：『ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８  ＵＧ  １２０』
（株式会社資生堂製）
サンプル注入量：１０μ１
溶離液：水／アセトニトリル／酢酸（８０／２０／０．０１（容積比））
流  速：０．７ｍ１／分
温  度：４０℃
検  出：ＵＶ検出器『ＳＰＤ−２０Ａ』  （株式会社島津製作所製）
測定波長：２８０ｎｍ
データ処理装置：『クロマトパックＣ−Ｒ７Ａ』  （株式会社島津製作所製）
【００７５】
＜グリコシルヘスペレチンの定量＞
（１）ヘスペリジン含量：ＨＰＬＣにて分析し、そのピーク面積と、所定濃度の標準物質の試薬ヘスペリジン（和光純薬工業株式会社販売）のピーク面積との比に基づいて算出する。
（２）α−グルコシルヘスペリジン含量：ＨＰＬＣにて分析し、そのピーク面積と、所定濃度の標準物質の試薬ヘスペリジン（和光純薬工業株式会社販売）のピーク面積との比と、α−グリコシルヘスペリジンとヘスペリジンの分子量比に基づいて算出する。
（３）７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチン含量：ＨＰＬＣにて分析し、そのピーク面積と、所定濃度の標準物質の試薬ヘスペリジン（和光純薬工業株式会社販売）のピーク面積との比と、７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチンとヘスペリジンの分子量比に基づいて算出する。
（４）その他のグリコシルヘスペレチン含量：ＨＰＬＣにて分析し、そのピーク面積と、所定濃度の標準物質の試薬ヘスペリジン（和光純薬工業株式会社販売）のピーク面積との比と、その他のグリコシルヘスペレチンとヘスペリジンとの分子量比に基づいて算出する。
【００７６】
また、前記製造方法により得られる還元剤処理品の内、α−グリコシルヘスペリジンがα−グルコシルヘスペリジンであるグリコシルヘスペレチンは、本発明における所期の作用効果、すなわち、肌の黄くすみ及びキメ改善作用、及び肌の乾燥、紅斑、刺激感、及び掻痒感などの肌質を改善する効果がより顕著に奏せられることから好ましい。更に、前記グリコシルヘスペレチンにおけるα−グルコシルヘスペリジンの好適な含量は、通常、当該組成物の乾燥固形物当たり、６０乃至９０％、好適には、７０乃至９０％、より好適には７５乃至９０％であり、それらは、上記の作用効果がより顕著に奏せられることから好ましい。
【００７７】
更に、前記製造方法により得られる還元剤処理品の内、１ｗ／ｖ％水溶液とし、密閉容器中で１００℃で３０分間加熱した後、室温に調整し、幅１ｃｍのセルに入れ、分光光度計により波長４２０ｎｍ（ＯＤ４２０ｎｍ）及び波長７２０ｎｍ（ＯＤ７２０ｎｍ）における吸光度を測定したときの両波長における吸光度の差（ＯＤ４２０ｎｍ−ＯＤ７２０ｎｍ）が０．２４未満、好適には０．２０以下、より好適には０．１７以下、更により好適には０以上０．１５以下であるものは、本発明における所期の作用効果、すなわち、肌の黄くすみ及びキメ改善作用、及び肌の乾燥、紅斑、刺激感、及び掻痒感などの肌質を改善する効果がより顕著に奏せられることから好ましい。また、所定の還元剤処理工程を経ない製造方法により得られるグリコシルヘスペレチンと比べ、雑味・着色、及び臭気が有意ないしは顕著に低減されている点でも優れている。
【００７８】
更に、前記製造方法により得られる還元剤処理品の内、高周波誘導結合プラズマ発光分光分析法で測定したときの還元剤処理品の乾燥固形物当たりのカルシウム、カリウム、マグネシウム、及びナトリウム含量が下記数値範囲にあるグリコシルヘスペレチン含有組成物、すなわち、カルシウム、カリウム、マグネシウム、及びナトリウム含量がそれぞれ、１ｐｐｍ以下、０．１ｐｐｍ以下、０．２ｐｐｍ以下、及び０．４ｐｐｍ以下；より好適には、カルシウム、カリウム、マグネシウム、及びナトリウム含量がそれぞれ、０．６ｐｐｍ以下、０．０６ｐｐｍ以下、０．１ｐｐｍ以下、及び０．３ｐｐｍ以下；より更に好適には、カルシウム、カリウム、マグネシウム、及びナトリウム含量がそれぞれ、０ｐｐｍ以上０．５ｐｐｍ以下、０ｐｐｍ以上０．０５ｐｐｍ以下、０ｐｐｍ以上０．０８ｐｐｍ以下、及び０ｐｐｍ以上０．２ｐｐｍ以下であるものは、本発明における所期の作用効果、すなわち、肌の黄くすみ及びキメ改善作用、及び肌の乾燥、紅斑、刺激感、及び掻痒感などの肌質を改善する効果がより顕著に奏せられることから好ましい。また、従来の製造方法により得られるグリコシルヘスペレチン含有組成物と比べ、雑味・着色、及び臭気が有意ないしは顕著に低減されている点でも優れている。
【００７９】
還元剤処理品は、雑味が有意に、しかも、着色や臭気も顕著に低減されており、しかも、熱安定性にも優れていることから、例えば、これを８０乃至１００℃の高温で、３０分間以上加熱しても、また、還元剤処理品を含有させる工程又はこれを含有させた経口美容剤を室温ないしは室温を若干上回る温度で数十分間乃至数カ月間に亘って保存しても、還元剤処理品に起因する雑味・着色、更には、臭気が、製造直後と比べ変化することなく保持されているか、それらの増大が効果的に抑制されている。更に、還元剤処理品は、耐酸性、耐熱性も良好である利点をも有している。
【００８０】
以上述べたとおり、本発明で用いるグリコシルヘスペレチンは、還元剤処理品であろうと還元剤非処理品であろうと、ヘスペレチン骨格を有する化合物である（１）α−グリコシルヘスペリジン（α−グルコシルヘスペリジンなど）及び（２）ヘスペリジン及び７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチンの一方又は双方を主成分として含む組成物、つまり、グリコシルヘスペレチン混合物を意味し、他に、その製造原料に由来するか、その製造工程で副次的に生成すると考えられる（３）ナリルチン、ジオスミン、ネオポンシリン、グルコシルナリルチンなどのフラボノイド、及び（４）塩類などの微量成分を含むものである。斯かるグリコシルヘスペレチンの内、本発明において好適に用いられるグリコシルヘスペレチンとしては、前記（１）及び（２）の成分の合計割合（％）（＝グリコシルヘスペレチン含量）が、通常、乾燥固形物当たり、９０％以上１００％未満、好適には、９３％以上１００％未満、より好適には、９５％以上１００％未満、更には、９７％以上１００％未満、９８％以上１００％未満であるものを例示できる。なお、前記グリコシルヘスペレチンは、本発明の所期の作用効果が妨げられない範囲でヘスペレチンを含んでいてもよい。また、本発明で用いるグリコシルヘスペレチンには、本発明の所期の作用効果が妨げられない範囲で、既知の物理的ないしは化学的手法等により水などの溶媒への分散性が高められたヘスペレチンを適宜配合することも可能である。
【００８１】
本発明で用いるグリコシルヘスペレチンの純度、つまり、乾燥固形物当たりのグリコシルヘスペレチン含量の上限は、通常、工業的に比較的大量、安価かつ容易に提供できる９９％、より安価に提供するには９８％、更により安価に提供するには９７％以下にまで低含量のものであってもよい。しかし、当該グリコシルヘスペレチンの乾燥固形物当たりのグリコシルヘスペレチン含量が低い場合には、高含量のものと比べ、必然的に多量用いられることとなり、その結果、操作が煩雑となり、取り扱い性が悪くなることから、グリコシルヘスペレチン含量の下限は、通常、９０％以上、好適には、９３％以上、より好適には、９５％以上、より好適には、９７質量％以上とするのが望ましい。
【００８２】
本発明で用いるグリコシルヘスペレチンのより好適な実施態様としては、グリコシルヘスペレチンがα−グルコシルヘスペリジンなどのα−グリコシルヘスペリジンである場合、乾燥固形物当たりのα−グリコシルヘスペリジン含量が５０％以上１００％未満であるものを例示できる。
【００８３】
また、本発明で用いるグリコシルヘスペレチンにおけるα−グルコシルヘスペリジン含量の上限としては、本発明に係る経口美溶剤をより安価に提供する場合には、通常、工業的に比較的大量、安価かつ容易に提供できる９０％以下、より安価には８５％以下、更により安価には８０％以下の低含量のものであってもよい。また、α−グルコシルヘスペリジン含量の下限は、上記グリコシルヘスペレチン含量と同様の理由により、通常、６０％以上、６５％以上、又は７０％以上とするのが望ましい。
【００８４】
本発明の経口美容剤は、還元剤非処理品及び／又は還元剤処理品などの各種グリコシルヘスペレチンを有効成分とするものである。詳細は後述するものの、グリコシルヘスペレチンをヒトが日常的に継続的に経口摂取すると、身体の内側から作用して、肌の黄くすみ、キメ、及び肌質の改善作用が発揮されるとともに、肌の乾燥、紅斑、刺激感、掻痒感などの肌質も効果的に改善できることから、グリコシルヘスペレチンは、昨今、注目を集めている、肌の黄くすみ、キメ、及び肌質を改善するための所謂美容食品として、また、健康食品、栄養機能食品、保健機能食品、特定保健用食品として、更には、他の美容食品、健康食品、栄養機能食品、保健機能食品、特定保健用食品、或いは飲食品に適宜配合して有利に用いることができる。また、グリコシルヘスペレチンを前記目途で用いる場合には、レスベラトロール、ケルセチン、クロロゲン酸、アントシアニン、クルクミン、ケンフェロール、フラボノイド類などのポリフェノール；アーティチョーク葉エキス、明日葉エキス、イチゴ種子エキス、イチョウ葉エキス、温州みかんエキス、カシスエキス、キウイ種子エキス、クランベリーエキス、アセロラエキス、アムラエキス、アロニアエキスなどの植物エキス；アスタキサンチン、β−カロテンなどのカロテノイド；及び糖化反応抑制作用を有する植物抽出物又は化合物などの１種又は２種以上の成分と併用すると、グリコシルヘスペレチンが奏する前記肌の黄くすみ、キメ、及び肌質の改善作用がより効果的に発揮されるとともに、前記肌の乾燥、紅斑、刺激感、掻痒感などの肌質がより一層効果的に改善される。
【００８５】
前記糖化反応抑制作用を有する植物抽出物又は化合物としては、アイブライト、アオミズ、アキグミ、アグリモニー、アグニ果実、アケビ、アサイ果実、アシュワガンダ、アスナロ、アセンヤクノキ、アベマキ、アマチャヅル、アニス、アメリカンマンサク、アリスチン、イカリソウ、イタドリ、イチョウ、イチヤクソウ、イチゴ、イトハユリ、イトフノリ、イヌビワ、イペ樹皮、イロハモミジ、イワトユリ、ウイキョウ、ウイッチヘーゼル、ウインターグリーン、ウコン、ウメ、ウラジロガシ、エピメジウム・ブレビコルヌム、エイジツ、エキナセア、エゾウコギ、エニシダ、エルカンプーレ、エルダー、エルバ・マテ、オウギヤシ、オウバク、オウレン、オオアザミ、オート麦、オオバタネツケバナ、オカヒジキ、オトメユリ、オニタ、オニユリ、オレガノ、オレンジ、カボチャ種子、カツアバ樹皮、カノコユリ、ガラナ、カルカデ、カンアオイ、カントウ、キキョウ、ギシギシ、クサギ、クスノハガシワ、クルマユリ、クルミ、コケモモ、コナギ、サガラメ、ザクロ、サツマイモ、サルサパリラ、サンザシ、サンショウソウ、シソ、シカクマメ、シモツケソウ、シャクヤク、ショウヨウダイオウ、シラヤマギク、シロザ、シロヨメナ、セイヨウオオバコ、セキセツソウ、ソバ、タカサゴユリ、タネツケバナ、ダビラ・ルゴサ、タモトユリ、チャデブグレ、チョウジ、チンネベリーセンナ、ツボクサ、デイジー、ディル、デビルスクロウ、ツワブキ、テッポウユリ、デビルスクロー根、テンチャ、トウニン、ドクダミ、トゲナシ、トチュウ茶葉、トマト、トルメンチラ、ナガバギシギシ、ニワトコ、ノウゼンハレン、ノコンギク、ハッカ、ハカタユリ、ハギ、ハスイモ、パッションフラワー、パッションフルーツ、パフィア根、パラミツ、ヒカンザクラ、ヒマワリ、ヒメウワバミソウ、ヒメユリ、ビラコ、ビンロウジュ、フキ、フジマメ、ブラックコホシュ、ベニバナボロギク、マタタビ、マチルス、マツ、マテバシイ、マテ茶、マドンナ・リリー、マリアアザミのソウ果、ミツバウツギ、ムベ、モズク、ヤナギ、ヤブカンゾウ、ヤマトゲバンレイシ、ヤマユリ、ヨウサイ、ヨメナ、ライチ種子、リーガル・リリー、リュウキュウチク、リュウキュウバライチゴ、リンゴ未熟果、リンデン花、ルイボス、レタス、レモン、レモングラス、レモンタイム、レモンバーベナ、レモンバーム、ローズヒップ、ローズピンクバッツ、ローズマリー、ローズレッド、ローレル、ロゼア、ロッグウッド、ワレモコウ、レンゲ草、柿葉、甘草葉、黒大豆種皮、黒米種子、月桃葉、細葉百合、西洋ヤナギ、杜仲葉の葉などの植物の抽出物；ハナフノリ、フクロフノリ、マフノリなどの海藻の抽出物；生コーヒー豆、甘藷焼酎粕、アガリクス菌糸体などの抽出物；及びエクオール、イソフラボン、１，４−アントラキノン、１−アミノ−２−ヒドロキシメチルアントラキノン、４−アミノフェノール、１，３，５−トリヒドロキシベンゼン、コウジ酸、３，４−ジヒドロキシフェニル酢酸、カフェイン酸、イフェンプロジル、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボン酸、６−ヒドロキシインドール、７−ヒドロキシ−４，６−ジメチルフタリド、α−リポ酸、４−ヒドロキシカルコン、真珠タンパク質加水分解物、ア���ノグアニジン、エリスロシンナトリウム、エルゴチオネイン、レスベラトロール、３,３´,５,５´−テトラヒドロキシスチルベンなどのヒドロキシスチルベン類、オキシインドール、カルノシン、サリチル酸、サルソリノール臭化水素酸塩、シナピン酸、トコフェリルニコチネート、ニコチン酸アミド、ノルジヒドログアイアレチン酸、プロアントシアニン、マンニトール、加水分解カゼイン、加水分解性タンニン、カテコール、クロロゲン酸、イソクロロゲン酸、ネオクロロゲン酸、クリプトクロロゲン酸、フェルリルカフェオイルキナ酸などのクロロゲン酸類、ロイコシアニジン、プルニン、プロシアニドール・オリゴマー、グルコシルルチンなどが挙げられる。前記成分の内、本発明でより好適に用いられる、糖化反応抑制作用を有する植物抽出物又は化合物としては、アシュワガンダ、アスナロ、アセンヤクノキ、イチョウ、ウインターグリーン、オウバク、オレンジ、カボチャ種子、カツアバ樹皮、クスノハガシワ、グルコシルルチン、コケモモ、シソ、ソバ葉、ダビラ・ルゴサ、ドクダミ、ヒメウワバミソウ、ベニバナボロギク、マタタビ、リュウキュウチク、リュウキュウバライチゴ、リンゴ未熟果、柿葉、甘草葉、月桃葉、杜仲葉の抽出物；及びエクオール、イソフラボン、イフェンプロジル、真珠タンパク質加水分解物、カテコール、カフェイン酸、及びプルニンなどを例示できる。
【００８６】
本発明の経口美容剤は、トローチ、肝油ドロップ、複合ビタミン剤、口中清涼剤、口中香錠、経口・経管栄養剤、内服薬などの各種固状、顆粒状、粉末状、懸濁状、ペースト状、ゼリー状、液状の形態にある各種組成物に配合して利用することも随意である。
【００８７】
本発明の経口美容剤におけるグリコシルヘスペレチンの配合量は、当該経口美容剤の摂取頻度や肌の状態などによって、適宜調節することができる。しかし、通常、本発明の経口美容剤には、ヘスペリジン、α−グリコシルヘスペリジン、及び７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチンから選ばれる１種又は２種以上から選ばれるグリコシルヘスペレチンを全てヘスペリジンと見做して質量換算（以下、本願明細書においては、単に「ヘスペリジン換算」と言う。）したとき、それらを１０％を超え１００％未満、好適には、１５％を超え１００％未満、より好適には、２０％を超え１００％未満、より更に好適には、３０％を超え１００％未満配合する。また、本発明の経口美容剤の摂取頻度、摂取量、摂取期間は、ヘスペリジン、α−グリコシルヘスペリジン、及び７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチンから選ばれる１種又は２種以上のグリコシルヘスペレチンを、ヘスペリジン換算で、通常、一日１乃至５回、好適には、一日２乃至３回とし、１回当たり、１０乃至３，０００ｍｇ、好適には、２０乃至２，０００ｍｇ、より好適には、３０乃至１，０００ｍｇ、更により好適には、５０乃至５００ｍｇの範囲とし、数週間以上、好適には、６週間以上、より好適には１２週間以上に亘って摂取させるのが望ましい。なお、前記摂取量の下限を下回ると所期の作用効果が著しく低下するか発揮されなくなる場合があること、また、前記摂取量の上限を上回ると、投与量に見合った作用効果が発揮されなくなり、経済性の観点からも好ましくない。
【００８８】
グリコシルヘスペレチンを既述のトローチ、肝油ドロップ、複合ビタミン剤、口中清涼剤、口中香錠、経口・経管栄養剤、内服薬などの各種固状、顆粒状、粉末状、懸濁状、ペースト状、ゼリー状、液状の形態にある各種組成物に配合する方法としては、それら組成物が完成するまでの工程で、例えば、混和、混捏、混合、添加、溶解、浸漬、浸透、散布、塗布、噴霧、注入などの公知の１種又は２種以上の方法を適宜用いることができる。
【００８９】
斯くして得られる、本発明の経口美容剤は、室温ないしは室温を若干上回る温度で、数十分間乃至数カ月間保持又は保存する場合でも、それ自体はもとより、これを配合した各種組成物において、当該経口美容剤に起因する雑味・着色はもとより、臭気が全くないか、或いは、知覚できない程度に顕著に低減されている。また、本発明の経口美容剤は、安全性の高い天然型の酸化防止剤、安定剤、品質改良剤、ビタミンＰ強化剤などとしても機能し、飲食品、美容食品、健康食品、栄養機能食品、保健機能食品、特定保健用食品、飼料、餌料などの各種組成物に配合して用いることも随意である。
【００９０】
以下、本発明に係る経口美容剤について、実験により更に詳細に説明する。
＜実験１：経口摂取試験＞
（１）概要
グリコシルヘスペレチンが肌に及ぼす影響について調べる目的で、所定の還元剤を用いないで調製された、後述する実施例１で得た粉末状グリコシルヘスペレチン含有組成物を用いて、肌質の状態に悪影響を及ぼすことが知られている慢性的な疲労症状を有し、肌荒れなどの肌質の状態が気になっている、３５歳以上５５歳未満の勤労女性４２名を被験者とする経口摂取試験を行った。すなわち、被験者に所定の被験試料を所定の期間、経口摂取させ、被験者の肌（顔）の黄くすみについて機器測定するとともに、皮膚表面のキメについては、医師による目視判定を行い、また、肌質については医師による目視判定と問診とを行い、被験試料が肌に及ぼす影響について評価した。
【００９１】
（２）被験試料の調製
経口摂取試験で用いる被験試料として、公知のハードゼラチンカプセルの製造方法（特公平２−５１５２８号公報参照）に準じて、下記表１に示すハードゼラチンカプセル（サイズ＃１、カプスゲル・ジャパン社製）にデキストリンを除く他の原料を封入し、グリコシルヘスペレチンを含有するカプセル錠剤タイプの被験試料（以下、「被験試料Ａ」と言う。）を調製するとともに、対照として、前記ハードゼラチンカプセルにグリコシルヘスペレチン以外の他の原料を封入し、グリコシルヘスペレチン不含有のカプセル錠剤タイプの被験試料（以下、「被験試料Ｂ」と言う。）を調製した。
【００９２】
【表１】
2016027837.tif 000005
【００９３】
（３）試験手順
被験者４２名を無作為に２１名ずつ、Ａ群とＢ群とに分け、Ａ群には被験試料として被験試料Ａを、Ｂ群には被験試料Ｂを１日当たり一回２錠、１２週間に亘って各自経口摂取させた。被験試料を摂取する時間は特に指定しなかったが、各自なるべく同じ時間帯に摂取するよう指示した。１２週間に亘る経口摂取試験終了後、直ちに、色差計を用いて各被験者の頬の色差測定をし、肌の黄くすみについて評価するとともに（下記「ア」参照）、医師による目視判定により、各被験者の顔の皮膚表面のキメ（下記「イ」参照）について評価し、更に、医師による目視判定と問診により、肌質について評価した（下記「ウ」参照）。なお、前記各評価は、被験試料の経口摂取開始前（０Ｗ）、及び経口摂取開始後６週間目（６Ｗ）にも実施した。なお、Ｂ群の被験者１名は、試験途中で試験継続を辞退したことから、Ｂ群のデータ解析は、２０名の被験者データを元に行った。
【００９４】
＜ア．色差測定による肌の黄くすみ評価＞
・測定項目：Ｌ＊ａ＊ｂ＊表示系に基づく肌の色差測定を行った。
・使用機器：色差計として、『コニカミノルタ分光測色計  ＣＭ−２６００ｄ』、コニカミノルタ社製を用いて、皮膚色を解析した。
・測定箇所：左顔、耳朶下と唇端とを結んだ中心部を測定した（但し、測定箇所に黒子や炎症がある場合には、それらを避けて測定した）。
・色差測定における解析対象：Ｌ＊ａ＊ｂ＊表示系における座標軸であるａ＊（赤み）及びｂ＊（黄み）の値。
ａ＊値は肌の赤みの程度を表わし、「ｂ＊値」は肌の黄みの程度を表わす。なお、肌の黄くすみの上位概念である肌のくすみは、顔全体又は目の周りや頬などの部位に生じ、肌の赤みが減少して黄みが増し、肌のつやや透明感が減少したり、皮膚表面の凹凸などによる影によって明度が低下して暗く見える状態を指す技術用語であるのに対し、黄くすみは、肌の深部にある真皮の蛋白質が過酸化物質などによって変性（カルボニル化）し、黄色に変色（黄食化）することが主たる原因ではないかと言われている。これらの技術的背景に基づき、本試験では、Ｌ＊ａ＊ｂ＊表示系における座標軸であるａ＊値及びｂ＊値を測定し、これらを肌の黄色くすみを評価する指標とした。
・採用値：測定値（ｎ＝３）を平均した。
【００９５】
＜イ．医師による肌のキメ評価：皮丘、皮溝の評価を含む肌の総合評価＞
・評価部位：評価は、左顔、耳朶下と唇端とを結んだ中心部を中心とする部位について行った。
・評価方法：下記判定基準に基づき、医師が補助光とマイクロスコープを用い、評価部位を目視判定してスコア値を求めた。
＜判定基準＞
・良好：スコア値は、２
・やや良好：スコア値は、１
・普通：スコア値は、０
・やや不良：スコア値は、−１
・不良：スコア値は、−２
【００９６】
＜ウ．医師による肌質評価：乾燥、紅斑、刺激感、及び掻痒感の評価＞
・評価部位：顔全体の皮膚
・評価方法：下記判定基準に基づき、医師が補助光とマイクロスコープを用い、評価部位を目視判定するとともに、各被験者に問診してスコア値を求めた。
＜判定基準＞
・なし：症状が認められない（スコア値は、０）
・軽微：わずかに症状が見られる（スコア値は、１）
・軽度：少し症状が見られる（スコア値は、２）
・中程度：明らかな症状が見られる（スコア値は、３）
・重度：著しい症状が見られる（スコア値は、４）
【００９７】
（４）結果と考察
（４−１）色差測定の結果と考察
被験試料Ａ、Ｂをそれぞれ経口摂取させたＡ群及びＢ群の各被験者につき、前記（３）の「ア」に示す色差測定における解析対象を指標に色差測定し、得られた測定値を元に平均値±標準誤差を求め、それら数値に基づいて作成した図をそれぞれ図１及び図２として示す。
【００９８】
図１に示すとおり、被験試料Ｂを経口摂取させたＢ群においては、ａ＊値は、経口摂取開始後６週間目（６Ｗ）の時点で有意に低下し、図２に示すとおり、経口摂取開始後６〜１２週間（６〜１２Ｗ）に亘って、Ｂ群のｂ＊値は殆ど変化しなかった。これに対し、被験試料Ａを経口摂取させたＡ群においては、図１に示すとおり、経口摂取開始後６〜１２週間（６〜１２Ｗ）に亘り、ａ＊（赤み）値が経時的に増加し、かつ、図２に示すとおり、経口摂取開始後６〜１２週間（６〜１２Ｗ）に亘り、Ａ群のｂ＊（黄み）値は経時的に有意に減少した。なお、非特許文献１に記載されるとおり、肌の黄くすみは、ｂ＊値（黄み）が低下すると改善されることが知られていることからも、被験試料Ａは、肌の黄くすみ改善乃至軽減作用を有していると判断された。
【００９９】
また、非特許文献１によれば、Ｌ＊値とｂ＊値に関し、Ｌ＊値は肌の明るさの指標となり、ｂ＊値は黄みの指標となり、それらは相互に連動しない独立した数値である。更に、Ｌ＊値とｂ＊値に関し、非特許文献２によれば、Ｌ＊値とｂ＊値を平面でプロットしたときの角度を指標として皮膚の色素沈着（メラニン）の程度をうまく分けられたとの報告がある一方、ｂ＊値はメラニン以外の因子の影響を受けることや、ａ＊値を含め、Ｌ＊値及びｂ＊値は、色を記載するための数値であり、メラニン特異的な数値ではないと報告されていることなどに基づいて総合的に判断すると、Ｌ＊値とｂ＊値とは相連動する関係にあるとは言えず、Ｌ＊値に基づいてｂ＊値を予測したり、逆にｂ＊値に基づいてＬ＊値を予測したりできる関係にあるとは言えない。したがって、本試験で明らかとなった、グリコシルヘスペレチン含有組成物を経口摂取すると肌の黄くすみが改善乃至軽減されるという知見は、従来技術からは予測できない新規な知見であると言える。
【０１００】
以上のことから、グリコシルヘスペレチンをヒトに経口摂取させると、グリコシルヘスペレチンは生体内酵素の作用を受けてヘスペレチンを生成し、このヘスペレチンが肌の黄くすみ改善乃至軽減作用を発揮すると考えられることから、ヘスペリジン、７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチン、及びα−グリコシルヘスペリジンなどのグリコシルヘスペレチンないしはこれを含有する組成物をヒトに経口摂取させると、肌の黄くすみ改善乃至軽減作用が発揮されると判断される。
【０１０１】
（４−２）肌のキメ評価の結果と考察
被験者の肌のキメについて、医師が補助光とマイクロスコープを用いて目視評価し、得られたスコア値の経時変化を図３に示す。図３から明らかなとおり、被験試料Ｂを経口摂取させたＢ群においては、経口摂取開始後６週間目（６Ｗ）の時点では殆ど変化がなく、経口摂取開始後１２週間目（１２Ｗ）の時点でスコア値はやや増加した程度であったのに対し、被験試料Ａを経口摂取したＡ群では、スコア値は経時的に増加し、経口摂取開始後１２週間目（１２Ｗ）の時点では、スコア値の有意な増加を認めた。更に、医師の所見によれば、肌のキメの指標としての皮丘、皮溝の評価を含む肌の総合評価において、被験試料Ｂを経口摂取したＢ群においては効果が認められなかったのに対し、被験試料Ａを経口摂取したＡ群では、経口摂取開始前（０Ｗ）と比べ、経口摂取開始後１２週間目（１２Ｗ）の時点においては、皮丘の大きさや高さがより均一になっているとともに、皮溝が細かく浅くなっている傾向が認められ、肌のキメ改善作用が認められた。
【０１０２】
以上の結果から、グリコシルヘスペレチンをヒトに経口摂取させると、生体内酵素の作用を受けてヘスペレチンを生成し、このヘスペレチンが肌のキメ改善作用を発揮すると考えられることから、ヘスペリジン、７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチン、及びα−グリコシルヘスペリジンなどのグリコシルヘスペレチンないしはこれを含有する組成物をヒトに経口摂取させると、肌のキメ改善作用が発揮されると判断される。
【０１０３】
（４−３）肌質[乾燥、紅斑、刺激感、及び掻痒感]の評価結果と考察
被験者の顔全体の肌質の状態について、医師が補助光とマイクロスコープを用いて目視評価するとともに、各被験者に問診をして得られたスコア値の経時変化を図４乃至図７に示す。これらの図から明らかなとおり、被験試料Ｂを経口摂取させたＢ群の被験者と比べ、被験試料Ａを経口摂取させたＡ群の被験者においては、肌の乾燥、紅斑、刺激感、及び掻痒感のいずれについても、経口摂取開始前（０Ｗ）と比べ、経口摂取開始後６週間目（６Ｗ）及び１２週間目（１２Ｗ）の時点で有意な改善が認められたことから、被験試料Ａは、肌の乾燥、紅斑、刺激感、及び掻痒感のいずれをも効果的に改善する作用を有することが判明した。
【０１０４】
本試験結果から、グリコシルヘスペレチンは、肌の黄くすみ及びキメを効果的に改善するとともに、肌の乾燥、紅斑、刺激感、及び掻痒感などの肌質の全てを効果的に改善する作用を有すると判断される。本試験で用いたグリコシルヘスペレチン及び還元剤処理品のいずれも、グリコシルヘスペレチンを主体とする組成物であることを勘案すると、本試験で用いた被験試料Ａに配合したグリコシルヘスペレチンに代えて還元剤処理品を用いた場合には、本試験結果と同様の作用効果が発揮されると共に、還元剤処理品は還元剤非処理品と比べ、雑味、着色、臭気などが有意ないしは顕著に低減又は改善されていることから、不快感なく経口摂取できる利点を有する。すなわち、還元剤処理品は、本試験で用いた被験試料Ａ、つまり、所定の還元剤を用いないで調製されたグリコシルヘスペレチン（還元剤非処理品）と比べ、雑味が有意に低減されているとともに、着色や不快な臭気も顕著に低減されていることから、例えば、後述する実施例２乃至８に示す還元剤処理品を有効成分として含む経口美容剤は、ヒトに日常的に継続的に安全かつ容易に、しかも、不快感なく経口摂取させることができるので、所望の作用効果が効果的に発揮されることから、還元剤処理品は、本発明を実施する上で最も好適なグリコシルヘスペレチンである。
【０１０５】
＜実験２：グリコシルヘスペレチンの物性＞
グリコシルヘスペレチンとして、後述する実施例２、４、５及び６の方法において、還元剤を用いない以外はそれら実施例に記載された方法と同様にして調製した４種類の粉末状グリコシルヘスペレチン（被験試料１乃至４）と、実施例２の方法において、還元剤としてピロ亜硫酸ナトリウムを０．１、０．０９、０．０７又は０．０４質量％用いた以外は、実施例２の方法と同様にして調製した４種類の粉末状グリコシルヘスペレチン（被験試料５乃至８）を用いた。なお、被験試料１は、所定の還元剤を用いないで調製されたもので、α−グルコシルヘスペリジン、ヘスペリジン、及びその他の成分含量は実施例１で得た粉末状グリコシルヘスペレチンのそれとほぼ同等であり、実施例１で得た粉末状グリコシルヘスペレチンと同等品である。
【０１０６】
（１）フルフラールの含量
被験試料１乃至８のそれぞれにつき、下記手順及び装置を用いてフルフラール含量を求めた。
【０１０７】
＜Ａ．試料の調製＞
（ア）５０ｍＬ容共栓付三角フラスコに被験試料としてのグリコシルヘスペレチンを０．５ｇ採取する。
（イ）次いで、脱イオン水を５．０ｍＬ加えグリコシルヘスペレチンを溶解し、サロゲート物質（分析に際し、被験試料の回収率を調べるための指標）として、濃度０．００２５％のシクロヘキサノールを２０μＬを加える。
（ウ）更に、塩化ナトリウムを１．５ｇ加え溶解し、ジエチルエーテルを３ｍＬ加え、７００ｒｐｍで１０分間攪拌する。
（エ）全量を分液漏斗に移し取り、１０分間静置した後、ジエチルエーテル相を回収し、硫酸ナトリウムにて脱水後、窒素気流下、約２００μＬとなるまで濃縮する。
（オ）濃縮液１μＬを採取し、ＧＣ／ＭＳ分析装置に供する。
（カ）対照として、グリコシルヘスペレチンに代えて試薬級フルフラールを用いた以外は被験試料と同様、（ア）乃至（オ）の処理を行う。
【０１０８】
＜ＧＣ／ＭＳ分析条件＞
ＧＣ／ＭＳ分析装置：『Ｃｌａｒｕｓ  ６８０  ＧＣ』及び『Ｃｌａｒｕｓ  ＳＱ８Ｔ』（いずれもパーキンエルマー社製）
カラム：ＶＦ−ＷＡＸｍｓ［３０ｍ（カラム長）×０．２５ｍｍ（内径）、膜厚０．２５μｍ］（ＡＧＩＬＥＮＴ  Ｊ＆Ｗ社製）
検出器：質量分析器
キャリアー：ヘリウムガス
線速度３５ｃｍ／秒
昇温条件：４０℃で３分間保持し、４０℃〜８０℃まで５℃／分の割合で昇温し、８０℃〜２００℃まで１０℃／分の割合で昇温し、２００℃で７分間保持し、２００℃〜２２０℃まで１０℃／分の割合で昇温し、更に、２２０℃で８分間保持する。
サロゲート物質：シクロヘキサノール
内部標準物質：ヘンエイコサン
抽出溶媒：ジエチルエーテル
【０１０９】
＜Ｂ．試料中のフルフラールの定量＞
ＧＣ／ＭＳ分析法で得られた、対照の試薬特級フルフラール（和光純薬工業株式会社製）についての測定データを元に検量曲線を作成し、これに基づいて、被験試料のフルフラール含量を求めた。
【０１１０】
（２）４−ＶＡの含量
被験試料１乃至８のそれぞれにつき、下記試薬、手順、及び装置を用いて４−ＶＡ含量を測定した。なお、その測定は、平成１８年７月２８日付、食安基発第０７２８００８号厚生労働省医薬食品局食品安全部基準審査課長通知『清涼飲料水中のベンゼンについて』に準じて行った。
【０１１１】
＜Ａ．試薬、各種溶液の調製＞
（ア）塩化ナトリウム（水質試験用、和光純薬工業株式会社販売）
（イ）シクロヘキサノール標準原液の調製
シクロヘキサノール（試薬一級、片山化学工業株式会社販売）をメタノール（局方一般試験法用）に溶解して０．０１質量％シクロヘキサノール溶液（以下、「シクロヘキサノール標準原液」と言う。）を調製した。
（ウ）内部標準液前記シクロヘキサノール標準原液とメタノールを用いて、０．０００４質量％シクロヘキサノール溶液（以下、「内部標準液１」と言う。）及び０．００００４質量％シクロヘキサノール溶液（以下、「内部標準液２」と言う。）を調製した。
（エ）標準原液の調製
４−ＶＡ（和光純薬工業株式会社販売）をメタノールに溶解し、０．０００５質量％４−ＶＡ溶液（以下、「標準液Ａ」と言う。）及び０．００００５質量％４−ＶＡ溶液（以下、「標準液Ｂ」と言う。）をそれぞれ調製した。
（オ）検量線作成用標準原液の調製
前記標準液Ａ、Ｂ、前記内部標準液１、及びメタノールを用いて、４−ＶＡ濃度が０．０５、０．１、０．２、０．５又は１．０μｇ／ｍＬである５種類の検量線作成用混合標準原液を調製した。
（カ）検量線作成用標準液の調製
２０ｍＬ容ヘッドスペースバイアル５本にそれぞれ超純水を１０ｍＬ加え、更に前記５種類の検量線作成用混合標準原液のいずれかを１０μＬ加え、更に塩化ナトリウム３．０ｇを添加し、直ちに密栓し、撹拌溶解し、５種類の検量線作成用標準液を調製した。
【０１１２】
＜Ｂ．被験試料の調製＞
２０ｍＬ容ヘッドスペースバイアル８本に被験試料１乃至８のいずれかを乾燥固形物換算で０．２０ｇ精秤し、これに超純水を加え全量を１０．０ｇとし、撹拌溶解した。得られた水溶液に前記内部標準液２を１０μＬ加え、更に塩化ナトリウムを３．０ｇ添加し、直ちに密栓し、撹拌溶解し、被験試料１乃至８のいずれかを含む８種類の被験試料を調製した。
【０１１３】
＜Ｃ．４−ＶＡの定量方法＞
（ア）測定条件
＜ＧＣ／ＭＳ分析条件＞
・ＧＣ／ＭＳ分析装置：『Ｃｌａｒｕｓ ＳＱ８Ｔ ＧＣ／ＭＳ』（パーキンエルマー社製）
・ヘッドスペースサンプラー：『ＴｕｒｂｏＭａｔｒｉｘ  Ｔｒａｐ  ４０』パーキンエルマー社製）
・カラム：ＶＦ-ＷＡＸｍｓ[カラム長３０ｍ×内径０．２５ｍｍ、膜厚０．２５μｍ）（ＡＧＩＬＥＮＴ  Ｊ＆Ｗ社製）
・検出器：質量分析器
・キャリアー：ヘリウムガス
・線速度：３５ｃｍ／秒
・カラム注入口温度：２００℃
・昇温条件：４０℃で３分間保持し、４０℃〜８０℃まで５℃／分の割合で昇温し、８０℃〜２００℃まで１０℃／分の割合で昇温し、２００℃で７分間保持し、２００℃〜２２０℃まで１０℃／分の割合で昇温し、更に、２２０℃で８分間保持する。
・バイアルオーブン温度：６０℃
・ニードル温度：１４０℃
・トランスファーライン温度：２０５℃
・バイアル加熱時間：３０分間
＜検出法＞
・イオン化[Ｅｌｅｃｔｒｏｎ
Ｉｍｐａｃｔ（ＥＩ）]法
・ＳＩＭ選択イオン（Ｓｅｌｅｃｔｅｄ  Ｉｏｎ  Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ）
ｍ／ｚ  １３４，  １１９  （４−ＶＡ）
ｍ／ｚ  ８２，  ５７  [シクロヘキサノール（試薬一級、片山化学工業株式会社販売）]
【０１１４】
（イ）４−ＶＡの定量
前記５種類の検量線作成用標準液と前記８種類の被験試料における４−ＶＡと内部標準（シクロヘキサノール）のピーク高さ比と、別途作成しておいた４−ＶＡの検量線とに基づき、前記被験試料における４−ＶＡ濃度を求め、それに基づいて被験試料１乃至８における４−ＶＡ含量を算出した。
【０１１５】
（３）色調と着色度
被験試料１乃至８の水溶液それぞれにつき、色調を肉眼観察するとともに、下記手順により、着色度を求めた。すなわち、被験試料１乃至８のそれぞれにつき、１ｗ／ｗ％水溶液とし、その４０ｍＬを密閉容器（５０ｍＬ容）中で１００℃で３０分間加熱した後、２７℃とし、幅１ｃｍのセルに入れ、分光光度計（商品名『ＵＶ−２６００』、株式会社島津製作所製）により、波長４２０ｎｍ（ＯＤ４２０ｎｍ）及び波長７２０ｎｍ（ＯＤ７２０ｎｍ）における吸光度を測定し、両波長における吸光度の差（ＯＤ４２０ｎｍ−ＯＤ７２０ｎｍ）を求め、その値を着色度とした。なお、吸光度差の数値が小さいほど、着色度が低いことを意味する。
【０１１６】
（４）電気伝導度
次いで、これら被験試料１乃至８のそれぞれにつき、１ｗ／ｖ％水溶液となるように純水に溶解し、密閉容器中で１００℃で３０分間加熱した後、得られた被験試料１乃至８の水溶液をそれぞれ２０℃に冷却し、２０℃での電気伝導度を電気伝導度計（商品名『ＣＭ−５０ＡＴ』、東亜ディーケーケー株式会社製）により測定した。
【０１１７】
（５）イオン性化合物の含量
イオン性化合物を定量することは容易ではないので、簡便法として、下記手法により、陽イオン金属元素の含量を求めた。すなわち、被験試料１乃至８のそれぞれにつき、約０．５ｇを５０ｍＬ容器（商品名『ファルコンチューブ』、日本ベクトンディッキンソン株式会社製）に精秤し、超純水２０ｍＬに加熱溶解し、これに精密分析用の６０ｗ／ｗ％硝酸水溶液を０．５４ｍＬ添加し、７０℃で１４時間加熱し、室温まで冷却した後、超純水にて全量を５０ｍＬとし、下記分析装置と測定条件下で金属元素含量を求めた。なお、対照は超純水のみを用いた。
【０１１８】
＜装置及び測定条件＞
・誘導結合プラズマ発光分光分析装置：『ＣＩＲＯＳ−１２０』（Ｓｐｅｃｔｒｏ社製）
・プラズマ電力：１，４００Ｗ
・プラズマガス（Ａｒ）：１３．０  Ｌ／分
・補助ガス（Ａｒ）：１．０  Ｌ／分
・ネブライザーガス（Ａｒ）：１．０  Ｌ／分
・ポンプ動作：１．０  ｍＬ／分
・金属元素含量（ｐｐｍ）の算出方法：{（被験試料の測定値）−（対照の測定値）}×希釈倍率
【０１１９】
前記（１）乃至（５）の結果を表１に示す。なお、被験試料１乃至８のグリコシルヘスペレチンの組成は、実施例２、４、５又は６に示すものと実質的に同等であることから、表２にはそれらの組成の記載を割愛した。
【０１２０】
【表２】
2016027837.tif 000006
【０１２１】
表２から明らかなとおり、被験試料１乃至４のフルフラール含量はいずれも３００ｐｐｂ超であったのに対し、被験試料５乃至８はいずれも、約１０ｐｐｂであった。また、被験試料１乃至４の４−ＶＡ含量はいずれも４０ｐｐｂ超であったのに対し、被験試料５乃至８はいずれも約２ｐｐｂ以下であった。
【０１２２】
また、表２に示すとおり、被験試料１乃至４（還元剤非処理品）の水溶液の色調（肉眼観察による）は淡黄色であったが、被験試料５乃至８（還元剤処理品）の水溶液は、被験試料１乃至４と比べ明らかに淡い色調であった。また、分光光度計による着色度は、被験試料１乃至４の水溶液の着色度はいずれも、０．２４以上であったのに対し、被験試料５乃至８の水溶液はいずれも０．２０以下と低値であった。更に、被験試料５乃至８の着色度は、用いた還元剤の量が多いものほど低値を示した。
【０１２３】
更に、表２から明らかなとおり、被験試料１乃至４の水溶液の電気伝導度は、約１１乃至約１２μＳ／ｃｍと１０μＳ／ｃｍ超であったのに対し、被験試料５乃至８の水溶液は、約３乃至約７μＳ／ｃｍと１０μＳ／ｃｍ未満であった。
【０１２４】
なお、表２から明らかなとおり、被験試料５乃至８の金属元素（カルシウム、カリウム、マグネシウム、及びナトリウム）含量はそのいずれも、被験試料１乃至４と比べ明らかに低く、この結果は、電気伝導度の測定結果とも良く整合していた。
【０１２５】
以上の結果から、還元剤処理品は、還元剤非処理品と比べ、フルフラール含量が有意に低減され、４−ＶＡ含量、着色度、電気伝導度、及び金属元素含量も顕著に低減されていることが判明した。
【０１２６】
＜実験３：グリコシルヘスペレチンの雑味及び着色と、フルフラール及び４−ＶＡの含量との関係＞
グリコシルヘスペレチンの雑味及び着色と、フルフラール及び４−ＶＡの含量との関係を調べる目的で下記の試験を行った。
【０１２７】
（１）被験試料の調製
後述する実施例５の方法及び実施例１の方法に準じて、還元剤処理品であるグリコシルヘスペレチン（以下、「試料Ａ」と言う。）と、還元剤非処理品であるグリコシルヘスペレチン（以下、「試料Ｂ」と言う。）とをそれぞれ調製した。次いで、便宜上、試料Ａ、Ｂを適宜割合で配合し、フルフラール含量が段階的に異なる、表３に示す３種類のグリコシルヘスペレチン試料（以下、「被験試料９乃至１１」と言う。）を調製した。
【０１２８】
（２）フルフラール及び４−ＶＡの含量
実験２の「（１）フルフラールの含量」及び「（２）４−ＶＡの含量」に示す測定方法にしたがって、被験試料９乃至１１のフルフラール含量と４−ＶＡ含量とをそれぞれ測定した。
【０１２９】
（３）着色判定試験
２８乃至５７歳の健常な男女９人（女性２人、男性７人）をパネルとし、被験試料９乃至１１及び試料Ｂ（以下、「対照」と言う。）を用いて着色についての評価試験を行った。すなわち、被験試料９乃至１１及び対照をそれぞれ蒸留水に１ｗ／ｗ％水溶液となるように室温で溶解し、それらを各パネリストに肉眼観察させ、各パネリストが各被験試料につき、対照と比べ、「着色が低減されている」と評価した場合には「判定Ａ１」、「着色が低減されていない」と評価した場合には「判定Ｂ１」と判定させ、その結果を表３に示した。
【０１３０】
（４）官能試験
前記男女９人をパネルとし、被験試料９乃至１１及び対照の雑味について官能試験を行った。すなわち、被験試料９乃至１１及び対照をそれぞれ蒸留水に１ｗ／ｗ％水溶液となるように室温で溶解し、それらを各パネリストに試飲させ、各パネリストが、各被験試料につき対照と比べ、「雑味が改善されている」と評価した場合には「判定Ａ２」と判定させ、「雑味が改善されていない」と評価した場合には「判定Ｂ２」と判定させ、その結果を表３に示した。
【０１３１】
【表３】
2016027837.tif 000007
【０１３２】
表３の結果から明らかなとおり、グリコシルヘスペレチンの雑味は、フルフラール含量が２００ｐｐｂ近傍を境に有意かつ顕著に改善され、４−ＶＡ含量については３０ｐｐｂ近傍を境に有意かつ顕著に改善されていた。また、グリコシルヘスペレチンの着色についても同様であった。
【０１３３】
これらの結果から、フルフラール含量と４−ＶＡ含量は、雑味が有意に低減され、しかも、着色が顕著に低減されたグリコシルヘスペレチンを峻別するための指標とすることができる。すなわち、フルフラール含量が２００ｐｐｂ以下、４−ＶＡ含量が３０ｐｐｂ以下であるものを峻別すれば、還元剤非処理品と比べ、雑味が有意に低減され、更には、着色も顕著に低減されたグリコシルヘスペレチンを得ることができる。
【０１３４】
因みに、既述の実験２の表２、及び後述する実施例１乃至８に示す粉末状グリコシルヘスペレチンの雑味と、フルフラール含量及び４−ＶＡ含量との関係について取り纏めたものを下記表３に示す。表４中、還元剤処理品である被験試料５乃至８、及び実施例２乃至８の粉末状グリコシルヘスペレチン（以下、纏めて「還元剤処理試料」と言う。）のフルフラール含量は、１９１ｐｐｂ以下、４−ＶＡ含量は２８．７ｐｐｂ以下であり、還元剤非処理品に特有の雑味が有意に低減されていた。これに対し、還元剤非処理品である被験試料１乃至５の粉末状グリコシルヘスペレチン（以下、纏めて「還元剤非処理試料」と言う。）のフルフラール含量は、３０８ｐｐｂ以上、４−ＶＡ含量は４０．０ｐｐｂ以上であり、還元剤非処理品に特有の雑味を有していた。
【０１３５】
下記表４に示す結果は、実験２の結果とよく整合し、これら一連の結果に基づき、フルフラール含量及び／又は４−ＶＡ含量を指標とし、フルフラール含量が２００ｐｐｂ未満及び／又は４−ＶＡ含量が３０ｐｐｂ未満であるものを峻別すれば、還元剤非処理品と比べ、雑味が有意に低減されたグリコシルヘスペレチンを得ることができると判断される。
【０１３６】
【表４】
2016027837.tif 000008
【０１３７】
表４の結果から、還元剤処理品であるグリコシルヘスペレチンは、還元剤非処理品であるグリコシルヘスペレチンと比べ、雑味が有意に低減され、更には、着色や臭気も顕著に低減されているので、ヒトが日常的に継続的に安全かつ容易に、しかも、不快感なく経口摂取できることが判明した。
【０１３８】
＜実験４：官能試験＞
（１）被験試料の調製
実験２で用いた、還元剤処理品である被験試料５乃至８の内、フルフラール含量、着色度、電気伝導度、及び金属元素含量のそれぞれが中間に位置する値を示した被験試料６と、還元剤非処理品である被験試料１乃至４の内、フルフラール含量、着色度、電気伝導度、及び金属元素含量が最も低値を示した被験試料１を用いて、２８乃至５９歳の健常な男女８名（女性２名、男性６名）をパネルとする下記（２）に示す官能試験を行った。すなわち、還元剤非処理品（被験試料１）と還元剤処理品（被験試料６）をそれぞれ１ｗ／ｖ％水溶液となるように室温でＲＯ水（逆浸透膜を通した水）に溶解し、非加熱被験試料１、６とし、これらを下記試験に供するまで密閉容器中にて保管した。また、非加熱被験試料１、６をそれぞれ、容器に入れ密閉し、沸騰水浴中で３０分間加熱し、室温まで冷却したものを加熱被験試料１、６とした。
【０１３９】
（２）官能試験
各パネリストに、室温に調整した、前記（１）で得た非加熱被験試料１、６（各１０ｍＬ）及び加熱被験試料１、６（各１０ｍＬ）について、試飲前に、（ａ）着色と（ｂ）臭気とを各自に評価させた。その後、各パネリストには、各被験試料を試飲する前に白湯で口を漱がせた後、（ｃ）苦味（渋み、えぐみ、収斂味を含む）、（ｄ）後味、及び（ｅ）試飲時の臭気について各自に評価させた。評価基準は下記表５に示すとおりである。なお、非加熱被験試料６に対しては、非加熱被験試料１を対照とし、加熱被験試料６に対しては、加熱被験試料１を対照とし、前記（ａ）乃至（ｅ）の各評価項目につき、各パネリストに評価させた。結果はそれぞれ、表６及び表７に示す。
【０１４０】
（評価基準）
【０１４１】
【表５】
2016027837.tif 000009
【０１４２】
（３）官能試験の結果
【０１４３】
【表６】
2016027837.tif 000010
【０１４４】
【表７】
2016027837.tif 000011
【０１４５】
なお、表６、７に示す評価結果には、還元剤非処理品としてのα−グルコシルヘスペリジン含有組成物（加熱／非加熱被験試料１）自体についての（ａ）着色、（ｂ）臭気、（ｃ）苦味、（ｄ）後味、及び（ｅ）臭気の評価結果を示していないが、評価基準に示すとおり、表５、６に示す評価結果は、還元剤非処理品であるグリコシルヘスペレチンを基準として、還元剤処理品であるグリコシルヘスペレチンを評価したものであることから、還元剤処理品自体の評価結果は、各評価項目につき、評価基準に示すスコア（５段階評価）で言えば、中間の「３」である。
【０１４６】
一方、表６の評価結果から明らかなとおり、非加熱被験試料６、すなわち、加熱処理をしていない還元剤処理品は、（ａ）着色、（ｂ）臭気、（ｃ）苦味、（ｄ）後味、及び（ｅ）臭気の各評価項目につき、５段階評価で最高の「１」と評価したパネル数はそれぞれ、８人中、４人、３人、０人、３人、及び４人（合計１４人）であった。一方、表６の評価結果に示す加熱被験試料６、すなわち、加熱処理した還元剤処理品は、（ａ）着色、（ｂ）臭気、（ｃ）苦味、（ｄ）後味、及び（ｅ）臭気の各評価項目につき、５段階評価で最高の「１」と評価したパネル数はそれぞれ、８人中、４人、５人、７人、４人、及び４人（合計２４人）であった。この結果は、還元剤処理品は、還元剤非処理品に固有の苦味、着色のみならず、臭気が効果的に低減された高品質のグリコシルヘスペレチンであることを示している。
【０１４７】
同様に、表６の評価結果から明らかなとおり、非加熱被験試料６（加熱処理をしていないグリコシルヘスペレチン含有組成物）は、（ａ）着色、（ｂ）臭気、（ｃ）苦味、（ｄ）後味、及び（ｅ）臭気の評価項目につき、５段階評価で最低の「５」及びその最低レベルより１段階高い「４」と評価したパネル数はいずれも０人（合計０人）であった。一方、表７の評価結果から明らかなとおり、加熱被験試料６（加熱処理したグリコシルヘスペレチン含有組成物）は、（ａ）着色、（ｂ）臭気、（ｃ）苦味、（ｄ）後味、及び（ｅ）臭気の評価項目につき、５段階評価で最低の「５」及びその最低レベルより１段階高い「４」と評価したパネル数はいずれも０人（合計０人）であった。この結果は、還元剤処理品は、還元剤非処理品と比べ、雑味・着色のみならず、臭気が効果的に低減された高品質のグリコシルヘスペレチン含有組成物であることを示している。  
【０１４８】
これらの結果から、還元剤処理品は、還元剤非処理品と比べ、加熱／非加熱を問わず、還元剤非処理品に特有の（ａ）着色、（ｂ）臭気、（ｃ）苦味、（ｄ）後味、及び（ｅ）臭気の全ての評価項目において著しく優れているとともに、その優劣の差は、加熱した場合、より顕著な差として現れることが判明した。  
【０１４９】
なお、前記実験３の「（１）被験試料の調製」に示す被験試料５、７及び８についても本実験４の「（２）官能試験」に供したところ、前記被験試料６とほぼ同等の結果が得られた。  
【０１５０】
このように、還元剤処理品は、還元剤非処理品に特有の苦味と後味、つまり、雑味が有意に低減されているとともに、還元剤非処理品と比べ、着色と臭気も顕著に低減されていることが判明した。  
【０１５１】
このように、還元剤処理品は、還元剤非処理品と比べ、還元剤非処理品グリコシルヘスペレチンに特有の苦味と後味、つまり、雑味が有意に低減されているとともに、着色と臭気も顕著に低減されていることが判明した。
【０１５２】
以下、本発明を実施例に基づいてより詳細に説明するが、本発明はそれらにより何等限定されるものではない。
【実施例１】
【０１５３】
＜経口美容剤＞
原料として、特開平１１−３４６７９２号公報の実施例Ａ−２に記載された方法と同様にして、ヘスペリジン１質量部に対しデキストリン（ＤＥ２０）を７質量部用い、バチルス・ステアロサーモフィルス由来のシクロマルトデキストリン・グルカノトランスフェラーゼ（株式会社林原製）をデキストリングラム当り２０単位加え、ｐＨ６．０、７５℃に維持し、２４時間反応させ、シラップ状グリコシルヘスペレチン含有組成物を得、これにグルコアミラーゼ（商品名『グルコチーム』、ナガセケムテックス株式会社製）をグリコシルヘスペレチン含有組成物の乾燥固形物グラム当り１００単位加え、５０℃、５時間反応させた。次いで、得られたシラップ状グリコシルヘスペレチン含有組成物を減圧濃縮し、粉末化して、粉末状グリコシルヘスペレチン含有組成物を乾燥固形物当り、原料のヘスペリジン質量に対し約６０％の収率で得た。本品は、α−グルコシルヘスペリジン７７．０質量％、ヘスペリジン１５．５質量％、その他の成分を７．５質量％含有していた。【０１５４】
本品のフルフラール含量は３１０ｐｐｂ、４−ＶＡ含量は４０．０ｐｐｂ、着色度は０．２４、及び電気伝導度は約１１μＳ／ｃｍであった。また、本品は、乾燥固形物当たり、カルシウム、カリウム、マグネシウム、及びナトリウムをそれぞれ、約３ｐｐｍ、約０．２ｐｐｍ、約０．４ｐｐｍ、及び約１ｐｐｍ含有していた。【０１５５】
本品又はこれを含有させた美容食品、健康食品、栄養機能食品、保健機能食品、或いは特定保健用食品などに加工してヒトに経口摂取させることにより、肌の黄くすみ及びキメ改善作用、及び肌の乾燥、紅斑、刺激感、及び掻痒感などの肌質を効果的に改善することができるとともに、ヒトが安全かつ容易に経口摂取できる経口美容剤として有利に用いることができる。
【実施例２】
【０１５６】
＜経口美容剤＞
１規定水酸化ナトリウム水溶液４質量部を８０℃に加温し、この温度を維持しつつ、ヘスペリジン１質量部及びデキストリン（ＤＥ２０）７質量部を加え、３０分間撹拌しつつ溶解させ、ｐＨを９．０とし、これにジオバチルス・ステアロサーモフィラス  Ｔｃ−９１株（独立行政法人産業技術総合研究所、特許生物寄託センター  受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２７３、寄託日：１９７３年７月３０日）由来のＣＧＴａｓｅをデキストリングラム当り３０単位加え、ｐＨ６．９、５０℃に維持しつつ１８時間反応させ、ヘスペリジンの約７０％をα−グリコシルヘスペリジンに変換させた。次いで、得られた酵素反応液に対し、還元剤としてのピロ亜硫酸ナトリウムを０．０５質量％添加し、１００℃で３０分間加熱するともに、残存する酵素を加熱失活させた後、グルコアミラーゼ（商品名『グルコチーム』、ナガセケムテックス株式会社製）を酵素反応液の固形分グラム当り１００単位加え、ｐＨ５．０、５５℃に維持しつつ５時間反応させ、α−グルコシルヘスペリジンを生成させた。得られた酵素反応液を加熱して残存する酵素を失活させ、濾過し、濾液を多孔性合成吸着剤、商品名『ダイヤイオンＨＰ−１０』（三菱化学株式会社販売）を充填したカラムに空間速度（ＳＶ）２で通液した。その結果、溶液中のα−グルコシルヘスペリジンと未反応ヘスペリジンとが多孔性合成吸着剤に吸着し、Ｄ−グルコース、塩類などは吸着することなく流出した。次いで、カラムに精製水を通液し、カラムを洗浄した後、エタノール水溶液濃度を段階的に高めながら更に通液し、α−グルコシルヘスペリジン含有画分を採取し、減圧濃縮し、粉末化して、淡黄色の粉末状グリコシルヘスペレチン含有組成物を乾燥固形物当り原料のヘスペリジン質量に対して約７０％の収率で得た。なお、本例で得られた粉末状グリコシルヘスペレチン含有組成物は、α−グルコシルヘスペリジンを８０．０質量％、ヘスペリジンを１２．３質量％、その他の成分を７．７質量％含有していた。【０１５７】
本品のフルフラール含量は１２ｐｐｂ、４−ＶＡ含量は２ｐｐｂ、着色度は０．１９、及び電気伝導度は約６μＳ／ｃｍであった。また、本品は乾燥固形物当たり、カルシウム、カリウム、マグネシウム、及びナトリウムをそれぞれ、約０．４ｐｐｍ、約０．０５ｐｐｍ、約０．１ｐｐｍ、及び約０．１ｐｐｍ含有していた。【０１５８】
また、本品は、所定の還元剤を用いないで製造された、実施例１で得た粉末状グリコシルヘスペレチン含有組成物と比べ、雑味と着色とが有意に低減され、臭気も顕著に低減されている上、９０乃至１００℃の比較的高温の条件下で３０分間加熱しても、雑味・着色はもとより、臭気も効果的に低減されていた。【０１５９】
本品又はこれを含有させた美容食品、健康食品、栄養機能食品、保健機能食品、或いは特定保健用食品などに加工して、前記温度範囲かそれを下回る温度で、数十分間乃至数カ月間保持又は保存した場合でも、本品に由来する雑味・着色はもとより臭気が効果的に低減されている優れた作用効果が発揮される。【０１６０】
本例の経口美容剤は、保存安定性に優れた、ヒトが日常的に継続的に安全かつ容易に不快感なく経口摂取できる経口美容剤であって、肌の黄くすみ及びキメ改善作用、及び肌の乾燥、紅斑、刺激感、及び掻痒感などの肌質を効果的に改善することができる優れた利点を有している。
【実施例３】
【０１６１】
＜経口美容剤＞
１規定水酸化ナトリウム水溶液４質量部を８０℃に加温し、この温度を維持しつつ、これにヘスペリジン１質量部、デキストリン（ＤＥ１０）４質量部、及び亜硫酸ナトリウム０．０６質量部を順次添加し、３０分間撹拌しつつ溶解させ、０．０１規定塩酸溶液にて中和した後、直ちにジオバチルス・ステアロサーモフィラス  Ｔｃ−９１株（独立行政法人産業技術総合研究所、特許生物寄託センター  受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２７３）由来のＣＧＴａｓｅをデキストリングラム当り２０単位加え、ｐＨ６．０、７５℃に維持し、攪拌しつつ、２４時間反応させた。得られた酵素反応液をサンプリングして、高速液体クロマトグラフィーで分析したところ、ヘスペリジンの約６９％が、α−グリコシルヘスペリジンに変換していた。次いで、得られた酵素反応液に還元剤としてピロ亜硫酸ナトリウムを０．０３質量％となるように添加し、９０℃で１２０分間加熱した後、グルコアミラーゼ（商品名『グルコチーム』、ナガセケムテックス株式会社製）を当該中間生成物グラム当り５０単位加え、ｐＨ５．０、５５℃に維持しつつ１０時間反応させ、α−グルコシルヘスペリジンを生成させた。得られた酵素反応液を加熱して残存する酵素を失活させ、濾過し、濾液を多孔性合成吸着剤、商品名『ダイヤイオンＨＰ−１０』（三菱化学株式会社販売）を充填したカラムにＳＶ２で通液した。その結果、溶液中のα−グルコシルヘスペリジンと未反応ヘスペリジンとが多孔性合成吸着剤に吸着し、糖類や塩類などは吸着することなく流出した。次いで、カラムに精製水を通液し、カラムを洗浄した後、エタノール水溶液濃度を段階的に高めながら更に通液し、α−グルコシルヘスペリジン含有画分を採取し、減圧濃縮し、粉末化して、淡黄色の粉末状グリコシルヘスペレチン含有組成物を乾燥固形物当り原料のヘスペリジン質量に対して約６８％の収率で得た。なお、本例で得られた粉末状グリコシルヘスペレチン含有組成物は、α−グルコシルヘスペリジン７９．０質量％、ヘスペリジン１４．０質量％、その他の成分を７．０質量％含有していた。【０１６２】
本品のフルフラール含量は、１１ｐｐｂであり、４−ＶＡ含量は１．５ｐｐｂ、着色度は０．１４、及び電気伝導度は約４μＳ／ｃｍであった。また、本品は、乾燥固形物当たり、カルシウム、カリウム、マグネシウム、及びナトリウムをそれぞれ、約０．４ｐｐｍ、約０．０６ｐｐｍ、約０．１ｐｐｍ、及び約０．１ｐｐｍ含有していた。【０１６３】
本品は、所定の還元剤を用いないで製造された、実施例１で得た粉末状グリコシルヘスペレチン含有組成物と比べ、雑味と着色とが有意に低減され、臭気も顕著に低減されている上、９０乃至１００℃の比較的高温の条件下で３０分間加熱しても、雑味・着色はもとより、臭気も効果的に低減されていた。【０１６４】
本品又はこれを含有させた美容食品、健康食品、栄養機能食品、保健機能食品、或いは特定保健用食品などに加工して、前記温度範囲かそれを下回る温度で、数十分間乃至数カ月間保持又は保存した場合でも、本品に由来する雑味・着色はもとより臭気が効果的に低減されている優れた作用効果が発揮される。【０１６５】
本例の経口美容剤は、保存安定性に優れた、ヒトが日常的に継続的に安全かつ容易に不快感なく経口摂取できる経口美容剤であって、肌の黄くすみ及びキメ改善作用、及び肌の乾燥、紅斑、刺激感、及び掻痒感などの肌質を効果的に改善することができる優れた利点を有している。
【実施例４】
【０１６６】
＜経口美容剤＞
１規定水酸化ナトリウム水溶液４質量部を８０℃に加温し、この温度を維持しつつ、これに還元剤として亜硫酸ナトリウム０．１質量部、ヘスペリジン１質量部、及びデキストリン（ＤＥ１０）４質量部を順次添加し、３０分間撹拌しつつ溶解し、これに０．０１規定塩酸溶液を加えて中和した後、直ちにジオバチルス・ステアロサーモフィラス  Ｔｃ−９１株（独立行政法人産業技術総合研究所、特許生物寄託センター  受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２７３）由来のＣＧＴａｓｅをデキストリングラム当り２０単位加え、ｐＨ６．０、７５℃に維持し、攪拌しつつ、２４時間反応させたところ、ヘスペリジンの約７２％がα−グリコシルヘスペリジンに変換していた。得られた酵素反応液を加熱して残存する酵素を失活させ、濾過し、濾液を多孔性合成吸着剤、商品名『ダイヤイオンＨＰ−２０』（三菱化学株式会社販売）を充填したカラムにＳＶ２で通液した。その結果、溶液中のα−グリコシルヘスペリジンと未反応ヘスペリジンとが多孔性合成吸着剤に吸着し、Ｄ−グルコース、塩類などは吸着することなく流出した。次いで、カラムに精製水を通液し、カラムを洗浄した後、エタノール水溶液濃度を段階的に高めながら更に通液し、α−グリコシルヘスペリジン含有画分を採取し、減圧濃縮し、粉末化して、淡黄色の粉末状α−グリコシルヘスペリジン含有組成物を乾燥固形物当り、原料のヘスペリジン質量に対して約７１％の収率で得た。なお、本例で得られた粉末状グリコシルヘスペレチン含有組成物は、α−グリコシルヘスペリジン７６．０質量％、ヘスペリジン１８．５質量％、その他の成分を５．５質量％含有していた。【０１６７】
本品のフルフラール含量は１０ｐｐｂ、４−ＶＡ含量は３．０ｐｐｂ、着色度は０．１７、及び電気伝導度は約４μＳ／ｃｍであった。また、本品は、乾燥固形物当たり、カルシウム、カリウム、マグネシウム、及びナトリウムをそれぞれ、約０．３ｐｐｍ、約０．０４ｐｐｍ、約０．１ｐｐｍ、及び約０．０５ｐｐｍ含有していた。【０１６８】
また、本品は、所定の還元剤を用いないで製造された、実施例１で得た粉末状グリコシルヘスペレチン含有組成物と比べ、雑味と着色とが有意に低減され、臭気も顕著に低減されている上、９０乃至１００℃の比較的高温の条件下で３０分間加熱しても、雑味と着色はもとより、臭気も効果的に低減されている優れた特性を有している。【０１６９】
本品又はこれを含有させた美容食品、健康食品、栄養機能食品、保健機能食品、或いは特定保健用食品などに加工して、前記温度範囲かそれを下回る温度で、数十分間乃至数カ月間保持又は保存した場合でも、本品に由来する雑味・着色はもとより臭気が効果的に低減された優れた作用効果が発揮される。【０１７０】
本例の経口美容剤は、保存安定性に優れた、ヒトが日常的に継続的に安全かつ容易に不快感なく経口摂取できる経口美容剤であって、肌の黄くすみ及びキメ改善作用、及び肌の乾燥、紅斑、刺激感、及び掻痒感などの肌質を効果的に改善することができる優れた利点を有している。
【実施例５】
【０１７１】
＜経口美容剤＞
ヘスペリジン１質量部、デキストリン（ＤＥ８）１０質量部、及び還元剤としてピロ亜硫酸ナトリウム０．０５質量部を水５００質量部に添加し、ｐＨ９．５、９０℃で７０分間加熱し、次いで、ジオバチルス・ステアロサーモフィラス  Ｔｃ−９１株（独立行政法人産業技術総合研究所、特許生物寄託センター  受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２７３）由来のＣＧＴａｓｅをデキストリングラム当り３０単位加え、ｐＨ８．２、６５℃に維持し、攪拌しつつ、４０時間保持しつつ、この酵素反応が終了する直前に、ピロ亜硫酸ナトリウム０．０５質量部を添加し、８５℃で加熱し、酵素を失活させた後、これにグルコアミラーゼ（商品名『グルコチーム』、ナガセケムテックス株式会社製）を酵素反応液固形物グラム当り１００単位加え、ｐＨ５．０、５５℃に維持しつつ５時間反応させ、α−グルコシルヘスペリジンを生成させた。得られた酵素反応液を加熱して残存する酵素を失活させた。次いで、得られた酵素反応液に、α−Ｌ−ラムノシダーゼとしてヘスペリジナーゼ（商名『可溶性ヘスペリジナーゼ＜タナベ＞２号』、田辺製薬製）を０．５質量部を添加し、ｐＨ４に調整し、５５℃で２４時間反応させ、得られた酵素反応液にピロ亜硫酸ナトリウム０．０１質量部を添加し、加熱して酵素を失活させた後、濾過し、濾液を多孔性合成吸着剤、商品名『ダイヤイオンＨＰ−１０』（三菱化学株式会社販売）を充填したカラムにＳＶ２で通液した。その結果、溶液中のα−グルコシルヘスペリジン、７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチン、及び未反応ヘスペリジンとが多孔性合成吸着剤に吸着し、Ｄ−グルコース、塩類などは吸着することなく流出した。次いで、カラムに精製水を通液し、カラムを洗浄した後、エタノール水溶液濃度を段階的に高めながら更に通液し、α−グルコシルヘスペリジン画分を採取し、減圧濃縮し、粉末化して、淡黄色の粉末状グリコシルヘスペレチン含有組成物を乾燥固形物当り原料のヘスペリジン質量に対して約７０％の収率で得た。なお、本例で得られた粉末状グリコシルヘスペレチン含有組成物は、α−グルコシルヘスペリジン８１．９質量％、ヘスペリジン０．５質量％、７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチン８．９質量％、及びその他の成分を８．７質量％含有していた。【０１７２】
本品のフルフラール含量は９ｐｐｂ、４−ＶＡ含量は２．０ｐｐｂ、着色度は０．１６、及び電気伝導度は約４μＳ／ｃｍであった。また、本品は、乾燥固形物当たり、カルシウム、カリウム、マグネシウム、及びナトリウムをそれぞれ、約０．３ｐｐｍ、約０．０３ｐｐｍ、約０．０５ｐｐｍ、及び約０．０５ｐｐｍ含有していた。【０１７３】
本品は、所定の還元剤を用いないで製造された、実施例１で得た粉末状グリコシルヘスペレチン含有組成物と比べ、雑味と着色とが有意に低減され、臭気も顕著に低減されている上、９０乃至１００℃の比較的高温の条件下で３０分間加熱しても、雑味と着色はもとより、臭気も効果的に低減されている優れた特性を有している。【０１７４】
本品又はこれを含有させた美容食品、健康食品、栄養機能食品、保健機能食品、或いは特定保健用食品などに加工して、前記温度範囲かそれを下回る温度で、数十分間乃至数カ月間保持又は保存した場合でも、本品に由来する雑味・着色はもとより臭気が効果的に低減された優れた作用効果が発揮される。【０１７５】
本例の経口美容剤は、保存安定性に優れた、ヒトが日常的に継続的に安全かつ容易に不快感なく経口摂取できる経口美容剤であって、肌の黄くすみ及びキメ改善作用、及び肌の乾燥、紅斑、刺激感、及び掻痒感などの肌質を効果的に改善することができる優れた利点を有している。
【実施例６】
【０１７６】
＜経口美容剤＞
ヘスペリジン５０質量部と次亜硫酸ナトリウム１質量部とを０．２５規定水酸化ナトリウム水溶液０．９質量部に８０℃で加熱溶解し、ＤＥ８のデキストリン１５０質量部を添加し溶解し、ｐＨ９．０に調整した後、ジオバチルス・ステアロサーモフィラス  Ｔｃ−９１株（独立行政法人産業技術総合研究所、特許生物寄託センター  受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１１２７３）由来のＣＧＴａｓｅをデキストリン１質量部当たり１５単位加え、６０℃まで加温しながらｐＨ８．３に調整し、６時間反応させた。その後、ｐＨ７．０に調整し、６８℃に加温して４０時間反応させた。酵素反応終了後、酵素を加熱失活させた後、濾過して酵素反応液を得た。酵素反応液を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により分析したところ、反応前の溶液中のヘスペリジンの７２％がα−グルコシルヘスペリジンに変換しており、残り２８％は未反応のままであった。酵素反応液に、α−Ｌ−ラムノシダーゼとしてヘスペリジナーゼ（商品名『可溶性ヘスペリジナーゼ＜タナベ＞２号』、田辺製薬製）を２質量部を添加し、ｐＨ４に調整し、５５℃で２４時間反応させた後、グルコアミラーゼ（商品名『グルコチーム』、ナガセケムテックス株式会社製）を１質量部加え、更に５５℃で２４時間反応させた。酵素反応終了後、得られた酵素反応液を加熱して酵素を加熱失活させ、中間極性多孔性吸着樹脂（商品名『アンバーライトＸＡＤ−７』、Ｒｏｈｍ  ＆  Ｈａａｓ社製）を充填したカラムにかけ、カラムを水洗し、８０ｖ／ｖ％エタノール水溶液にて樹脂吸着成分を溶出した。溶出液中のエタノールを除去した後、凍結乾燥し、α−グルコシルヘスペリジンを８２．０重量％、７−Ｏ−β−グルコシルヘスペレチン８．０重量％、ヘスペリジンを１．０質量％、及びその他の成分を９．０重量％含む粉末状グリコシルヘスペレチン含有組成物を得た。【０１７７】
本品のフルフラール含量は１０ｐｐｂ、４−ＶＡ含量は１．５ｐｐｂ、着色度は０．１５、及び電気伝導度は１０μＳ／ｃｍ未満であった。また、本品は、乾燥固形物当たり、カルシウム、カリウム、マグネシウム、及びナトリウムをそれぞれ、約０．４ｐｐｍ、約０．０４ｐｐｍ、約０．１ｐｐｍ、及び約０．２ｐｐｍ含有していた。【０１７８】
本品は、所定の還元剤を用いないで製造された、実施例１で得た粉末状グリコシルヘスペレチン含有組成物と比べ、雑味と着色とが有意に低減され、臭気も顕著に低減されている上、９０乃至１００℃の比較的高温の条件下で３０分間加熱しても、雑味と着色はもとより、臭気も効果的に低減されている優れた特性を有している。【０１７９】
本品又はこれを含有させた美容食品、健康食品、栄養機能食品、保健機能食品、或いは特定保健用食品などに加工して、前記温度範囲かそれを下回る温度で、数十分間乃至数カ月間保持又は保存した場合でも、本品に由来する雑味・着色はもとより臭気が効果的に低減された優れた作用効果が発揮される。【０１８０】
本例の経口美容剤は、保存安定性に優れた、ヒトが日常的に継続的に安全かつ容易に不快感なく経口摂取できる経口美容剤であって、肌の黄くすみ及びキメ改善作用、及び肌の乾燥、紅斑、刺激感、及び掻痒感などの肌質を効果的に改善することができる優れた利点を有している。
【実施例７】
【０１８１】
＜経口美容剤＞
酵素反応液に対し、還元剤としてのメタ亜硫酸カリウムを０．００１％添加した以外は実施例１と同様にして、淡黄色の粉末状グリコシルヘスペレチンを乾燥固形物当り原料のヘスペリジン質量に対して約６９％の収率で得た。なお、本例で得られた粉末状グリコシルヘスペレチン含有組成物は、α−グルコシルヘスペリジン７９．５％、ヘスペリジン１３．８％、その他の成分を６．７％含有していた。【０１８２】
本品のフルフラール含量は１８０ｐｐｂ、４−ＶＡ含量は２０．０ｐｐｂ、着色度は０．２３、及び電気伝導度は１０μＳ／ｃｍ未満であった。また、本品は、乾燥固形物当たり、カルシウム、カリウム、マグネシウム、及びナトリウムをそれぞれ、約０．５ｐｐｍ、約０．０８ｐｐｍ、約０．１ｐｐｍ、及び約０．３ｐｐｍ含有していた。【０１８３】
本品は、実施例２乃至５で得られた粉末状グリコシルヘスペレチン含有組成物と比べると劣るものの、還元剤非処理品と比べ、雑味が有意に低減されているとともに、着色や臭気も顕著に低減されている上、９０乃至１００℃の比較的高温の条件下で３０分間加熱した後も、還元剤非処理品と比べ、雑味が有意に低減されていることはもとより、着色や臭気も効果的に顕著に低減されている優れた特性を有している。【０１８４】
本品又はこれを含有させた美容食品、健康食品、栄養機能食品、保健機能食品、或いは特定保健用食品など（これらを纏めて、「経口美容剤」と言う。）に加工して、前記温度範囲かそれを下回る温度で、数十分間乃至数カ月間保持又は保存した場合でも、本品に由来する雑味・着色はもとより臭気が効果的に低減されている優れた作用効果が発揮される。【０１８５】
前記経口美容剤は、保存安定性に優れた、ヒトが日常的に継続的に安全かつ容易に不快感なく経口摂取できる経口美容剤であって、肌の黄くすみ及びキメ改善作用、及び肌の乾燥、紅斑、刺激感、及び掻痒感などの肌質を効果的に改善することができる。
【実施例８】
【０１８６】
＜経口美容剤＞
メタ亜硫酸カリウムを亜硫酸水素ナトリウムに代えた以外は実施例７と同様にして、淡黄色の粉末状グリコシルヘスペレチン含有組成物を、乾燥固形物当り、原料のヘスペリジン質量に対して約６５％の収率で得た。なお、本例で得られた粉末状グリコシルヘスペレチン含有組成物は、α−グルコシルヘスペリジン７７．２％、ヘスペリジン１６．５％、その他の成分を６．３％含有していた。【０１８７】
本品のフルフラール含量は１９１ｐｐｂ、４−ＶＡ含量は２８．７ｐｐｂ、着色度は０．２３、及び電気伝導度は１０μＳ／ｃｍ未満であった。また、本品は、乾燥固形物当たり、カルシウム、カリウム、マグネシウム、及びナトリウムをそれぞれ、約０．５ｐｐｍ、約０．０７ｐｐｍ、約０．０９ｐｐｍ、及び約０．４ｐｐｍ含有していた。【０１８８】
本品は、実施例２乃至６で得られた粉末状グリコシルヘスペレチン含有組成物の物性と比べると劣るものの、本品は、還元剤非処理品と比べ、雑味が有意に低減されているとともに、着色や臭気も顕著に低減されている上、９０乃至１００℃の比較的高温の条件下で３０分間加熱した後も、還元剤非処理品と比べ、雑味が有意に低減されていることはもとより、着色や臭気も効果的に顕著に低減されている優れた特性を有している。【０１８９】
本品又はこれを含有させた美容食品、健康食品、栄養機能食品、保健機能食品、或いは特定保健用食品など（以下、纏めて「経口美容剤」と言う。）に加工して、前記温度範囲かそれを下回る温度で、数十分間乃至数カ月間保持又は保存した場合でも、本品に由来する雑味・着色はもとより臭気が効果的に低減されている優れた作用効果が発揮される。【０１９０】
前記経口美容剤は、保存安定性に優れた、ヒトが日常的に継続的に安全かつ容易に不快感なく経口摂取できる経口美容剤であって、肌の黄くすみ及びキメ改善作用、及び肌の乾燥、紅斑、刺激感、及び掻痒感などの肌質を効果的に改善することができる。
【実施例９】
【０１９１】
＜経口美容剤＞
酢酸カルシウム１水塩１０質量部、Ｌ−乳酸マグネシウム３水塩５０質量部、マルトース５７質量部、実施例１で得た粉末状グリコシルヘスペレチン含有組成物１５０質量部及びエイコサペンタエン酸２０％含有γ−シクロデキストリン包接化合物１２質量部を均一に混合し、顆粒成形機にかけて顆粒とした後、常法に従って、ゼラチンカプセルに封入して、１カプセル当たり内容物を３００ｍｇ含有するカプセル剤タイプの経口美容剤を得た。【０１９２】
本品は、通常、一日当たり、１乃至１０カプセルをヒトが日常的に継続的に経口摂取することにより、肌の黄くすみ及びキメ改善作用が発揮されるとともに、肌の乾燥、紅斑、刺激感、及び掻痒感などの肌質を効果的に改善することができる。
【実施例１０】
【０１９３】
＜経口美容剤＞
実施例２乃至８で得たグリコシルヘスペレチン含有組成物のいずれかを１０質量部、スクラロース０．００３質量部、アスコルビン酸２−グルコシド（商品名『アスコフレッシュ』（登録商標）、株式会社林原販売）０．０１質量部、及びデキストリン２０質量部を撹拌混合し、スティック状の遮光・防湿性包装容器に０．５ｇずつ収容し、７種類の本発明の粉末状の経口美容剤を得た。【０１９４】
本品は、雑味、着色、臭気が実質的になく、ヒトが日常的に継続的に容易に不快感なく経口摂取することができる。本品は、通常、一日当たり、１乃至３包を水、お茶、紅茶、コーヒーなどの各種飲料や他の飲食品に添加し、ヒトに日常的に継続的に経口摂取させると、肌の黄くすみ及びキメ改善作用が発揮されるとともに、肌の乾燥、紅斑、刺激感、及び掻痒感などの肌質を効果的に改善することができる。
【実施例１１】
【０１９５】
＜経口美容剤＞
実施例１０で得た７種類の粉末状の経口美容剤のいずれかを１質量部、アントシアニン０．００１質量部、精製水３０質量部、及び適量のｐＨ調製剤を添加し撹拌し、ｐＨ７．０に調整し、精密濾過し、無菌容器に無菌的に充填して、５種類の本発明の液状の経口美容剤を得た。【０１９６】
本品は、雑味、着色、異臭が実質的になく、ヒトが日常的に継続的に容易に不快感なく経口摂取することができる。本品は、一日当たり、約３０乃至１００ｍＬをヒトに日常的に経口摂取させることにより、肌の黄くすみ及びキメ改善作用が発揮されるとともに、肌の乾燥、紅斑、刺激感、及び掻痒感などの肌質を効果的に改善することができる。
【実施例１２】
【０１９７】
＜経口美容剤＞
実施例１で得た粉末状グリコシルヘスペレチン含有組成物１質量部を精製水５０質量部に均一に溶解し、精密濾過し、無菌容器に充填し、複数種類の液状の経口美容剤を得た。【０１９８】
本品は、雑味、着色、異臭が実質的になく、これをそのまま、又は、緑茶、紅茶、コーヒー、ココア、清涼飲料などの飲料に、通常、約１乃至５ｍＬ添加して飲用することにより、肌の黄くすみ及びキメ改善作用が発揮されるとともに、肌の乾燥、紅斑、刺激感、及び掻痒感などの肌質を効果的に改善することができる。
【実施例１３】
【０１９９】
＜経口美容剤＞
所定の還元剤を用いないで製造された、実施例１で得た粉末状グリコシルヘスペレチン含有組成物１質量部に対し、亜硫酸ナトリウム、次亜硫酸ナトリウム、ピロ亜硫酸カリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、及び二酸化イオウから選ばれる１種又は２種以上の還元剤を合計で０．０００５質量部添加し、精製水５０質量部に均一に溶解し、精密濾過し、無菌容器に充填し、複数種類の液状の経口美容剤を得た。【０２００】
本品は、室温乃至比較的高温の環境下で数十分間乃至数カ月間保存後も、本品に起因する雑味・着色、臭気の増大ないしは変化が実質的に認められず、保存安定性及び熱安定性に優れている。本品は、雑味、着色、異臭が実質的になく、これをそのまま、又は、緑茶、紅茶、コーヒー、ココア、清涼飲料などの飲料に、通常、約１乃至５ｍＬ添加して飲用することにより、肌の黄くすみ及びキメ改善作用が発揮されるとともに、肌の乾燥、紅斑、刺激感、及び掻痒感などの肌質を効果的に改善することができる。
【産業上の利用可能性】
【０２０１】
本発明の経口美容剤によれば、肌の黄くすみ及びキメを効果的に改善することができるとともに、肌の乾燥、紅斑、刺激感、及び掻痒感なども効果的に改善することができる。本発明の経口美容剤に用いるグリコシルヘスペレチンとして、殊に、所定の還元剤を用いて調製されたグリコシルヘスペレチンを用いる場合には、所定の還元剤を用いないで調製されたグリコシルヘスペレチンと比べ、雑味が有意に低減され、しかも、着色や不快な臭気も顕著に低減されていることから、ヒトが日常的に継続的に安全かつ容易に、しかも、不快感なく経口摂取することができることから、所望の肌の黄くすみ及びキメ改善作用が効果的に発揮されるとともに、肌の乾燥、紅斑、刺激感、及び掻痒感などの肌質の改善作用が効果的に発揮される。本発明が斯界に及ぼす影響は斯くも甚大であり、本発明の産業上の利用可能性は極めて大きい。
【符号の説明】
【０２０２】
図１乃至図７において、符号「●」はα−グルコシルヘスペリジン含有組成物投与群を、符号「△」は対照群を表わす。また、図１乃至図７中、符号「#」、「##」、及び「###」はそれぞれ、α−グルコシルヘスペリジン含有組成物投与群と対照群の数値、及び対応するα−グルコシルヘスペリジン含有組成物投与群と対照群の数値間に、統計的仮説検定におけるｐ（危険率）が、ｐ＜０．１、ｐ＜０．０５、及びｐ＜０．０１で有意差があることを示す。
【図１】
2016027837.tif 000012
【図２】
2016027837.tif 000013
【図３】
2016027837.tif 000014
【図４】
2016027837.tif 000015
【図５】
2016027837.tif 000016
【図６】
2016027837.tif 000017
【図７】
2016027837.tif 000018
【国際調査報告】
2016027837.tif 000019
2016027837.tif 000020
2016027837.tif 000021
2016027837.tif 000022