(57)【要約】  少量でも十分な効果を発揮する脳梗塞の予防及び／又は治療の為の医薬を提供する。脳梗塞の予防及び／又は治療の為の医薬であって、CD133陽性細胞を有効成分として含有し、総頚動脈又は椎骨動脈に投与される。CD133陽性細胞は、ヒト臍帯血由来細胞又はヒト骨髄由来細胞である。本発明にかかる医薬は、ラクナ梗塞、アテローム血栓症脳梗塞、又は心原性脳塞栓症のいずれの場合でも好適に使用される。また、超急性期、急性期、亜急性期、及び、慢性期の何れにおいても使用可能である。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
脳梗塞の予防及び／又は治療の為の医薬であって、CD133陽性細胞を有効成分として含有し、総頚動脈又は椎骨動脈に投与されることを特徴とする医薬。
【請求項２】
前記CD133陽性細胞は、ヒト臍帯血由来細胞又はヒト骨髄由来細胞であることを特徴とする請求項１に記載の医薬。
【請求項３】
前記CD133陽性細胞は、1×１０5個／ｋｇ〜１×１０6個／ｋｇであることを特徴とする請求項１又は２に記載の医薬。
【請求項４】
更に神経栄養因子を含有することを特徴とする請求項１乃至３の何れか１項に記載の医薬。
【請求項５】
急性期あるいは亜急性期脳梗塞において投与されることを特徴とする請求項１乃至４の何れか１項に記載の医薬。
【請求項６】
血栓溶解薬、脳保護薬、抗脳浮腫薬、抗トロンビン薬、抗血小板薬又は抗凝血薬の何れかと併用されることを特徴とする請求項５に記載の医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、脳梗塞の予防及び／又は治療の為の医薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
脳梗塞は、脳を栄養する動脈の閉塞又は狭窄のため脳虚血を来たし、脳組織が酸素又は栄養の不足のため壊死になる疾患であり、日本においては患者数約150万人であり毎年約50万人発症とされている。日本人の死亡原因の中でも多くを占めている高頻度な疾患である上、後遺症を残して介護が必要となることが多く福祉の面でも大きな課題を伴う疾患である。【０００３】
脳梗塞により障害された神経組織の再生には、脳微小血管網の再生が必要不可欠であり、近年、この組織再生には細胞治療が有効であることが判明している。【０００４】
非特許文献１には、骨髄間葉系幹細胞を患者の静脈内に投与する脳梗塞治療が記載されている。また、非特許文献２には、自己の骨髄由来単核球細胞を患者の静脈内に投与する脳梗塞治療が記載されている。この非特許文献２では、重症の心原性脳塞栓症症例で、且つ脳梗塞発症１週間後においても神経機能回復が十分でない患者群を対象としており、治療プロトコールの概略は、脳梗塞発症7〜10日目に、局所麻酔身麻酔下で骨髄細胞の採取を行い、比重遠心法を用いて単核球分画の分離を行い、そして静脈内に５分間で全量投与する手技での治療が記載されている。【０００５】
また、非特許文献３では、ヒトCD34陽性幹細胞を経頸動脈的にラット脳内へ移植した例はあるが、生存率が低いことが記載されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】中枢神経再生臨床試験の黎明  脳梗塞に対する再生医療  本望修  臨床評価  第36巻  別冊  2009年
【非特許文献２】脳梗塞後の修復メカニズムと細胞治療  田口明彦  脳循環代謝24：67〜70  2013年
【非特許文献３】科学研究費助成事業（科学研究費補助金）研究成果報告書  課題番号22791119  CD34陽性細胞移植によるラット脳内血管・神経再生、抗うつ効果の検討  研究期間2010〜2011
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかし、上述の技術においては、脳梗塞患者に対して骨髄由来細胞を経静脈的に投与しているが、それらの細胞の大多数は、肺、脾臓あるいは肝臓で捕捉されるので、脳梗塞巣に到達して十分な効果を発揮するのが難しい。【０００８】
これに対して、投与細胞数を多くすることも考えられるが、骨髄由来間葉系幹細胞を大量に投与した場合には肺塞栓症を起こす可能性が高く、また骨髄由来単核球細胞投与に関しては大量の骨髄細胞を採取することによる血圧低下及びそれによって引き起こされる脳梗塞病変の拡大の危険性があるため、脳梗塞患者における採取可能量は血圧低下の危険性がない用量に限定されている。【０００９】
本発明はかかる問題点に鑑みてなされたものであって、少量でも十分な効果を発揮する脳梗塞の予防及び／又は治療の為の医薬を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明にかかる医薬は、CD133陽性細胞を有効成分として含有し、総頚動脈又は椎骨動脈に投与されることを特徴とする、脳梗塞の予防及び／又は治療の為の医薬である。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、少量でも十分な脳梗塞の治療効果が得られる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】Atrophy indexの測定方法を示す図である。Atrophy index(％)＝X/Y×100(％)で算出される。
【図２】ヒト臍帯血由来CD133陽性細胞の頚動脈投与による脳障害軽減に関する治療効果を示す図である。
【図３】ヒト臍帯血由来CD133陽性細胞の頚動脈投与による大脳皮質機能回復促進に関する治療効果を示す図である。
【図４】ヒト骨髄由来CD133陽性細胞の頚動脈投与による脳障害軽減に関する治療効果を示す図である。
【図５】ヒト骨髄由来CD133陽性細胞の頚動脈投与による大脳皮質機能回復促進に関する治療効果を示す図である。
【図６】ヒト骨髄由来単核球細胞の頚動脈投与には、脳障害軽減に関する治療効果がないことを示す図である。
【図７】マウス骨髄由来単核球細胞の頚動脈投与には、脳障害軽減に関する治療効果がないことを示す図である。
【図８】ヒト臍帯血由来CD133陽性細胞の静脈投与による脳障害軽減作用に関する治療効果を示す図である。
【図９】ヒト臍帯血由来CD133陽性細胞の、頚動脈投与と静脈投与の脳障害軽減作用に関する比較検討を示す図である。
【図１０】ヒト臍帯血由来CD133陽性細胞の静脈投与による大脳皮質機能回復促進に関する治療効果を示す図である。
【図１１】ヒト臍帯血由来CD133陽性細胞の頚動脈投与と静脈投与の大脳皮質機能回復促進作用に関する比較検討を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下、添付の図面を参照して本発明の実施形態について具体的に説明するが、当該実施形態は本発明の原理の理解を容易にするためのものであり、本発明の範囲は、下記の実施形態に限られるものではなく、当業者が以下の実施形態の構成を適宜置換した他の実施形態も、本発明の範囲に含まれる。
【００１４】
本実施形態にかかる脳梗塞の予防及び／又は治療の為の医薬は、CD133陽性細胞を有効成分として含有し、総頸動脈、内頚動脈、前大脳動脈、中大脳動脈、後大脳動脈又は椎骨動脈に投与される。
【００１５】
細胞を経静脈的に投与しても、肝臓等で捕捉されることにより、脳梗塞巣への到達の程度が十分ではない。そこで治療効果を上げるため、頚動脈や中大脳動脈等脳を直接栄養している大脳動脈内に細胞を投与することも考えられる。しかしながら、これは後述の実施例にて発明者らが見いだしたことであるが、骨髄由来単核球細胞には、脳の病変を悪化させる可能性のあるマクロファージ等の炎症性細胞が含まれており、頚動脈からの投与では、却って効果が減弱あるいは消失する可能性があり、単純に細胞を動脈内投与したのでは十分な治療効果が得られない。また、非特許文献３のように、CD34陽性細胞の経頸動脈投与は、何らかの理由により著しく生存率が低いことが報告されている。
【００１６】
本発明者は、CD133陽性細胞分画のみを単離し、そのCD133陽性細胞を、脳に直接栄養する血管に投与することにより、驚くべき少量の細胞数で且つ脳病変の悪化を伴うことなく、脳の機能回復をもたらすことを新知見として見いだし、かかる事実に基づいて本発明を完成させた。
【００１７】
本発明にかかる医薬は、脳梗塞の予防及び／又は治療の為のものであるが、本明細書において「予防」には疾患の発症を抑えること及び遅延させることが含まれ、疾患になる前の予防だけでなく、治療後の疾患の再発に対する予防も含まれる。一方、「治療」には、症状を治癒すること、症状を改善すること及び症状の進行を抑えることが含まれる。
【００１８】
本発明にかかる医薬は、対象となる脳梗塞が、ラクナ梗塞、アテローム血栓症脳梗塞、又は心原性脳塞栓症のいずれの場合でも好適に使用される。
【００１９】
また、本発明にかかる医薬は、超急性期、急性期、亜急性期、及び、慢性期の何れにおいても使用可能であるが、特に急性期および亜急性期において好適に使用可能である。ここで、超急性期は発症してから8時間以内の期間であり、血栓溶解療法や血栓除去などにより神経細胞死を阻止できる可能性が高い時期である。急性期は発症してから8時間〜７日以内の期間であり、亜急性期は発症してから１週〜４週以内の期間である。慢性期は発症してから１か月以上の期間であり、症状がほぼ固定されてリハビリとともに再発予防が中心となる期間であり、細胞壊死や組織の瘢痕化が見られる病態である。
【００２０】
本発明においては、CD133陽性細胞は総頸動脈、内頚動脈、前大脳動脈、中大脳動脈、後大脳動脈又は椎骨動脈に投与される。脳は４本の大きな動脈によって給血されているが、総頸動脈(およびそれより分岐する動脈である内頚動脈、前大脳動脈、中大脳動脈)は前方循環用の動脈であり、椎骨動脈(およびそれより分岐する動脈である後大脳動脈)は後方循環用の動脈である。
【００２１】
CD133陽性細胞は、高い分裂能、多分化能を有し、神経・血管発生に関わるサイトカインの産生能力を有する。CD133陽性細胞は、特に限定されるものではなく、臍帯血由来細胞、ヒト骨髄由来細胞、ヒト末梢血由来細胞、胎児肝臓由来等が採用されるが、好ましくはヒト臍帯血由来細胞又はヒト骨髄由来細胞である。
【００２２】
投与されるCD133陽性細胞の濃度は、特に限定されるものではないが、例えば５×１０4個／ｋｇ〜１×１０7個／ｋｇとすることができ、好適には1×１０5個／ｋｇ〜１×１０6個／ｋｇであり、特に好適には５×１０5個／ｋｇである。
【００２３】
本発明においては、更に神経栄養因子を含有することも可能である。神経栄養因子は、特に限定されるものではないが、例えば、BDNF、VEGF、NGF、GDNF、LIF、MYC、Neurotrophine3、TP53又はBAX等を使用することができるが、好ましくはBDNFである。BDNFは、脳は虚血に対する抵抗性を強め、神経幹細胞が活性化させることで神経新生を促進し、シナプス形成を促すとされている。
【００２４】
また、本発明は、脳梗塞の予防及び／又は治療の為のキットであって、該キットは、CD133陽性細胞を有効成分として含有する組成物を含む容器を備える。該キットは、CD133陽性細胞を有効成分として含有する組成物を、総頚動脈又は椎骨動脈に投与することに関する説明書を含む。
【００２５】
また、本発明は、脳梗塞の予防及び／又は治療の為の製品であって、該製品は、(i)CD133陽性細胞を有効成分として含有する組成物と、(ii)容器と、(iii)前記組成物が、脳梗塞の予防及び／又は治療のために使用することができる旨を示し、前記組成物を総頚動脈又は椎骨動脈に投与することに関する、指示書、説明書、添付文書、又は製品ラベルと、を含む。
【実施例】
【００２６】
（実施例１：ヒト臍帯血由来CD133陽性細胞の頚動脈投与による治療効果）
発明者らが開発した再現性の非常に高い、脳梗塞モデルマウス(特許第4481706号)を用いた。脳梗塞作成48時間後に、左総頸動脈より生理食塩水、ヒト臍帯血由来CD133陽性細胞を投与した。脳梗塞後の脳障害軽減に関する評価法として、マクロ標本による脳萎縮スコア(Taguchi et al. Eur J Neurosci. 2007;26(1):126-33.)を使用した。本モデルは、大脳皮質に限局した脳梗塞が生じるため、脳神経機能回復促進評価法として、オープンフィールドテストによる明暗条件に対する反応性(Taguchi et al. J Clin Invest. 2004;114(3):330-8)を使用した。細胞投与数は5ｘ103(個/匹)、1ｘ104(個/匹)であった。実験には各群4匹の脳梗塞マウスを使用した。【００２７】
脳梗塞モデルは下記の手法で作成した。8週齢の重症複合免疫不全マウス(SCIDマウス;CB-17/lcr-scid/scidJcl)をハロセン麻酔により全身麻酔し、左頬骨部よりアプローチして左中大脳動脈に直達できるよう頭蓋底に1.5mm程度の穿孔を行った。嗅索を通過した直後(嗅索交差部の遠位側)の左中大脳動脈を、バイポーラ電気メスを用いて凝固させ、凝固後切断することにより、左中大脳動脈を永久に閉塞し、左中大脳動脈領域の皮質に限局する脳梗塞モデルを作成した。【００２８】
投与に用いるCD133陽性細胞は下記の手法で精製を行った。臍帯血をRPMI1640培地(Thermo Fisher Scientific社製)で3倍に希釈した後、比重遠心液(比重1.077、[フィコール  GEヘルスケア製)に重層し、スイングロータ式遠心機を用いて400Gで40分間遠心した。比重遠心液層の直上に観察される単核球細胞分画をパイペットで採取し、5倍量のRPMI1640培地を加えた後、300Gで10分間遠心を行い、細胞ペレットを得た。細胞ペレットを再懸濁し、磁気ビーズで標識された抗CD133抗体(Miltenyi社製)を加え、4度で30分間インキュベートを行った。その後、磁気カラムを用いて、抗CD133抗体がバインドしている細胞のみを単離した。単離した細胞の品質をフローサイトメトリーにより検証し、CD133陽性細胞の純度が90％以上であることを確認した。【００２９】
頚動脈からの投与は下記の方法で行った。脳梗塞モデルマウスをハロセン麻酔により全身麻酔し、頸部を正中切開した。左総頸動脈を剥離し、近位部を動脈止血クリップで血流を遮断した後、31G注射針で穿刺し、細胞(あるいは生理食塩水)の投与を行った。細胞投与後は穿刺部を医療用アロンアルファ―で止血し、止血確認後クリップを外して血流を再開し、皮膚創部の縫合を行った。【００３０】
マクロ標本による脳萎縮スコアの詳細は下記の通りである。本研究で使用した脳梗塞モデルマウスは左中大脳動脈が潅流する大脳皮質に限局したものであるが、脳梗塞後は炎症細胞の浸潤等により、対側(脳梗塞を作成しない側)に比し、脳梗塞側では明らかな脳の委縮が生じる。我々はその委縮の程度の定量的な評価にAtrophy indexが有用であることを示してきた(Taguchi et al. Eur J Neurosci. 2007;26(1):126-33.)。Atrophy indexの測定方法を図1に示す。図１に示されるように、Atrophy indexはX/Y×100(％)にて示される。【００３１】
大脳皮質機能評価法として、オープンフィールドテストを実施した。その測定原理及び測定法は下記の通りである。マウスは夜行性であるため、正常のマウスにおいては、明条件では行動量が低下し、環境を暗くすることにより行動量が増加することが知られている。明条件下における行動抑制においては大脳皮質機能が重要であり、また細胞治療により大脳皮質機能回復が回復し、明条件下における行動抑制機能が回復することが示されてきた(Taguchi et al. J Clin Invest. 2004;114(3):330-8)。本研究では、マウスをオープンフィールド測定装置((株)行医研製、自由移動空間30cmｘ30cm)にて明条件下で30分間立ち上がり反応(rearing)の回数を自動カウントし、その後暗条件下で30分間立ち上がり反応の回数をカウントした。明状態から暗状態に変化した時の運動量の増加を、機能回復の指標として用いた。【００３２】
脳障害軽減に関する治療効果を図２に示す。Atrophy indexは脳萎縮を示す指標である。1ｘ104(個/匹)のヒト臍帯血由来CD133陽性細胞の投与により、統計学的にも有意に脳障害軽減効果があることが示された。【００３３】
脳神経機能回復促進に関する治療効果を図３に示す。図３では、コントロールの場合、5ｘ103(個/匹)のヒト臍帯血由来CD133陽性細胞が投与された場合、及び、1ｘ104個のヒト臍帯血由来CD133陽性細胞が投与された場合のそれぞれにつきrearing(立ち上がり)が示されている。Rearingは明状態から暗状態に変化させた場合の運動量の変化を示す。生理食塩水投与コントロール群では暗状態への変化によっても有意な運動量の増加を認めなかったが、1ｘ104(個/匹)のヒト臍帯血由来CD133陽性細胞の投与により、統計学的に有意な暗反応に対する行動量の増加が観察されるようになった。即ち1ｘ104(個/匹)のヒト臍帯血由来CD133陽性細胞の投与で脳神経機能回復促進効果があることが示された。【００３４】
（実施例２：ヒト骨髄由来CD133陽性細胞の頚動脈投与による治療効果）
発明者らが開発した再現性の非常に高い、脳梗塞モデルマウスを用いて、嗅索を通過した直後における左中大脳動脈を永久閉塞し、脳梗塞作成48時間後に、左総頸動脈より生理食塩水、ヒト骨髄由来CD133陽性細胞を投与した。細胞投与数は5ｘ103(個/匹)、1ｘ104(個/匹)であった。実験には各群3匹の脳梗塞マウスを使用した。脳梗塞後の脳障害軽減に関する評価法として、マクロ標本による脳萎縮スコアを使用し、脳神経機能回復促進評価法として、オープンフィールドテストによる明暗条件に対する反応性を使用した。【００３５】
投与に用いる骨髄由来CD133陽性細胞は臍帯血由来CD133陽性細胞と同様に下記の手法で精製を行った。ヒト骨髄液をRPMI1640培地で3倍に希釈した後、比重遠心液に重層し、スイングロータ式遠心機を用いて400Gで40分間遠心した。比重遠心液層の直上に観察される単核球細胞分画をパイペットで採取し、5倍量のRPMI1640培地を加えた後、300Gで10分間遠心を行い、細胞ペレットを得た。細胞ペレットを再懸濁し、磁気ビーズで標識された抗CD133抗体を加え、4度で30分間インキュベートを行った。その後、磁気カラムを用いて、抗CD133抗体がバインドしている細胞のみを単離した。単離した細胞の品質をフローサイトメトリーにより検証し、CD133陽性細胞の純度が90％以上であることを確認した。【００３６】
脳障害軽減に関する治療効果を図４に示す。1ｘ104(個/匹)のヒト骨髄由来CD133陽性細胞の投与により、統計学的にも有意に脳障害軽減効果があることが示された。【００３７】
脳神経機能回復促進に関する治療効果を図５に示す。1ｘ104(個/匹)のヒト骨髄由来CD133陽性細胞の投与により、暗反応に対する統計学的に有意な行動量の増加が観察されるようになり、脳障害軽減効果があることが示された。【００３８】
（実施例３：ヒト骨髄由来単核球細胞の頚動脈投与では治療効果はない）
発明者らが開発した再現性の非常に高い、脳梗塞モデルマウスを用いて、嗅索を通過した直後における左中大脳動脈を永久閉塞し、脳梗塞作成48時間後に、左総頸動脈より生理食塩水、ヒト骨髄由来骨髄由来単核球細胞を投与した。細胞投与数は5ｘ103(個/匹)、1ｘ104(個/匹)、1ｘ105(個/匹)であった。実験には各群3匹の脳梗塞マウスを使用した。脳梗塞後の脳障害軽減に関する評価法として、マクロ標本による脳萎縮スコアを使用した。【００３９】
投与に用いる骨髄単核球細胞は下記の手法で精製を行った。ヒト骨髄液をRPMI1640培地で3倍に希釈した後、比重遠心液に重層し、スイングロータ式遠心機を用いて400Gで40分間遠心した。比重遠心液層の直上に観察される単核球細胞分画をパイペットで採取し、5倍量のRPMI1640培地を加えた後、300Gで10分間遠心を行い、骨髄単核球細胞を得た。【００４０】
脳障害軽減に関する治療効果を図６に示す。発明者らの実験前の予想に大きく反し、5ｘ103(個/匹)、1ｘ104(個/匹)あるいは1ｘ105(個/匹)のヒト骨髄由来骨髄由来単核球細胞の頚動脈からの投与では、脳障害軽減効果がないことが示された。【００４１】
（実施例４：マウス骨髄単核球細胞の頚動脈内投与では治療効果はない）
実施例3では発明者らの予想に反して、ヒト骨髄由来単核球細胞の頚動脈投与では治療効果が見られなかった。そこで、その実験結果を再検討するため、マウス骨髄単核球細胞の頚動脈内投与を行った。【００４２】
発明者らが開発した再現性の非常に高い、脳梗塞モデルマウスを用いて、嗅索を通過した直後における左中大脳動脈を永久閉塞し、脳梗塞作成48時間後に、左総頸動脈より生理食塩水、マウス骨髄由来骨髄由来単核球細胞を投与した。細胞投与数は5ｘ103(個/匹)、1ｘ104(個/匹)、1ｘ105(個/匹)であった。実験には各群6匹の脳梗塞マウスを使用した。脳梗塞後の脳障害軽減に関する評価法として、マクロ標本による脳萎縮スコアを使用した。【００４３】
投与に用いる骨髄単核球細胞は下記の手法で精製を行った。マウス大腿骨より得られた骨髄液をRPMI1640培地で懸濁した後、比重遠心液に重層し、スイングロータ式遠心機を用いて400Gで40分間遠心した。比重遠心液層の直上に観察される単核球細胞分画をパイペットで採取し、5倍量のRPMI1640培地を加えた後、300Gで10分間遠心を行い、骨髄単核球細胞を得た。【００４４】
脳障害軽減に関する治療効果を図７に示す。ヒト骨髄単核球細胞の頚動脈内投与と同様に、5ｘ103(個/匹)、1ｘ104(個/匹)あるいは1ｘ105(個/匹)のマウス骨髄由来骨髄由来単核球細胞の頚動脈内投与では、脳障害軽減効果がないことが示された。【００４５】
（実施例５：ヒト臍帯血由来CD133陽性細胞の頚動脈投与と尾静脈投与の比較）
発明者らが開発した再現性の非常に高い、脳梗塞モデルマウスを用いて、嗅索を通過した直後における左中大脳動脈を永久閉塞し、脳梗塞作成48時間後に、ヒト臍帯血由来CD133陽性細胞を左尾静脈より投与した。5ｘ103(個/匹)、1ｘ104(個/匹)、1ｘ105(個/匹)であった。実験には各群3匹の脳梗塞マウスを使用した。脳梗塞後の脳障害軽減に関する評価法として、マクロ標本による脳萎縮スコアを使用し、脳神経機能回復促進評価法として、オープンフィールドテストによる明暗条件に対する反応性を使用した。【００４６】
ヒト臍帯血由来CD133陽性細胞の尾静脈投与による脳障害軽減に関する治療効果を図８に示す。実施例１において全く同一条件で実施したヒト臍帯血由来CD133陽性細胞の頚動脈投与による治療効果との比較検討において、1ｘ104(個/匹)の左頚動脈内投与と1ｘ105(個/匹)の左尾静脈内投与が同程度の治療効果を有していることが判明した(図９)。【００４７】
ヒト臍帯血由来CD133陽性細胞の尾静脈投与による脳神経機能回復促進に関する治療効果を図10に示す。実施例1において全く同一条件で実施したヒト臍帯血由来CD133陽性細胞の頚動脈投与による治療効果との比較検討において、1ｘ104(個/匹)の左頚動脈内投与と1ｘ105(個/匹)の左尾静脈内投与が同程度の脳神経機能回復促進効果を有していることが判明した(図11)。
【産業上の利用可能性】
【００４８】
脳梗塞治療に利用できる。
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１】
2015174087.tif 000013
【手続補正書】
【提出日】平成27年9月11日(2015.9.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
脳梗塞の予防及び／又は治療の為の医薬であって、
純度９０％以上、且つ、濃度５×１０４個／ｋｇ〜１×１０６個／ｋｇのＣＤ１３３陽性細胞が、総頚動脈又は椎骨動脈に投与されることを特徴とする医薬。
【請求項２】
前記ＣＤ１３３陽性細胞は、ヒト臍帯血由来細胞又はヒト骨髄由来細胞であることを特徴とする請求項１に記載の医薬。
【請求項３】
（削除）
【請求項４】
更に神経栄養因子を含有することを特徴とする請求項１又は２項に記載の医薬。
【請求項５】
急性期あるいは亜急性期脳梗塞において投与されることを特徴とする請求項１、２又は４の何れか１項に記載の医薬。
【請求項６】
血栓溶解薬、脳保護薬、抗脳浮腫薬、抗トロンビン薬、抗血小板薬又は抗凝血薬の何れかと併用されることを特徴とする請求項５に記載の医薬。
【国際調査報告】
2015174087.tif 000014
2015174087.tif 000015
2015174087.tif 000016
2015174087.tif 000017