(57)【要約】  クルクミン及び／又はその類縁体の経口吸収性が改善され、かつ簡便で安価に製造できる経口摂取用組成物の提供。  クルクミン及び／又はその類縁体と水溶性セルロース誘導体との複合体。【特許請求の範囲】
【請求項１】
クルクミン及び／又はその類縁体と水溶性セルロース誘導体との複合体。
【請求項２】
クルクミン及び／又はその類縁体が、クルクミン又はウコン色素である請求項１記載の複合体。
【請求項３】
水溶性セルロース誘導体が、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース及びカルボキシメチルセルロース塩から選ばれる成分である請求項１又は２記載の複合体。
【請求項４】
（Ａ）クルクミン及び／又はその類縁体と（Ｂ）水溶性セルロース誘導体の含有比率（Ａ／Ｂ）が、０．０２〜１０である請求項１〜３のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項５】
クルクミン及び／又はその類縁体と水溶性セルロース誘導体とを含有する水−有機溶剤混合溶液から、溶媒を除去することにより得られるものである請求項１〜４のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項６】
クルクミン及び／又はその類縁体が、非晶質である請求項１〜５のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の複合体を含有する経口摂取用組成物。
【請求項８】
クルクミン及び／又はその類縁体と水溶性セルロース誘導体とを水−有機溶剤混合溶媒に溶解させる工程と、該溶液から水及び有機溶剤を除去する工程と、を有することを特徴とする、クルクミン及び／又はその類縁体と水溶性セルロース誘導体との複合体の製造方法。
【請求項９】
クルクミン及び／又はその類縁体を有機溶剤に溶解する工程と、水溶性セルロース誘導体を水に溶解する工程と、クルクミン及び／又はその類縁体を含有する有機溶剤溶液と水溶性セルロース誘導体を含有する水溶液とを混合する工程と、当該混合溶液から水及び有機溶剤を除去する工程と、を有することを特徴とする、クルクミン及び／又はその類縁体と水溶性セルロース誘導体との複合体の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、クルクミン及び／又はその類縁体を含有する経口摂取用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
クルクミンは、ウコンの根茎から得られるウコン色素の主成分であるクルクミノイドの一つである。クルクミノイドは、利胆剤として古くから知られている他、腫瘍形成阻害作用、抗酸化作用、抗炎症作用、コレステロール低下作用、抗アレルギー作用、脳疾患予防作用、心疾患予防治療作用等を有することが知られている（特許文献１、２、非特許文献１〜９）。クルクミンはこのような生理活性を有することから、医薬品、化粧品、栄養補助食品等への応用が検討されている。【０００３】
ところが、クルクミンは水に対する溶解性が低く、経口摂取した際の吸収率が低いという問題がある。これを解決すべく微粒子化したクルクミノイドとガティガムを組み合わせることにより、経口吸収性が向上することが報告されている（特許文献３）。
また、クルクミンの光安定性及び着色力を改良する目的で、クルクミンと水溶性で分枝鎖のある、又は環状のポリサッカライド、タンパク等との複合体を形成させることも報告されている（特許文献４）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００５−４１８１７号公報
【特許文献２】特願２０１０−２６０８１６号公報
【特許文献３】特開２００９−２６３６３８号公報
【特許文献４】特開平３−９７７６１号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Samaha HS, Kelloff GJ, Steele V, Rao CV, Reddy BS., Cancer Res., 57, 1301-5 (1997)
【非特許文献２】Huang MT, Lou YR, Ma W, Newmark HL, Reuhl KR, Conney AH., Cancer Res., 54, 5841-7 (1994)
【非特許文献３】Sreejayan, Rao MN., J Pharm Pharmacol., 46, 1013-6 (1994)
【非特許文献４】Srimal RC, Dhawan BN., J Pharm Pharmacol., 25, 447-52 (1973)
【非特許文献５】Rao DS, Sekhara NC, Satyanarayana MN, Srinivasan M., J Nutr., 100, 1307-16 (1970)
【非特許文献６】Babu PS, Srinivasan K,., Mol Cell Biochem., 166, 169-75 (1997)
【非特許文献７】Yano S, Terai M, Shimizu KL, Futagami Y, Horie S., Natural Medicines, 54, 325-9 (2000)
【非特許文献８】Maher P, Akaishi T, Schubert D, Abe K., NeurobiolAging., Jul 16. [Equb ahead of print] (2008)
【非特許文献９】Morimoto T, Sunagawa Y, KawamuraT, Takaya T, Wada H, NagasawaA, Komeda M, Fujita M, ShimatsuA, Kita T, Hasegawa K. J Clin Invest., 118, 868-878 (2008)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
これまで、経口摂取による体内へのクルクミンの吸収性を向上させたクルクミン組成物がいくつか開発されたが、経口摂取による体内への吸収性は未だ十分とは言えず、また、それらを製造するためには、特殊な技術や複雑な操作を必要とすることなどから、より経口吸収性の高いクルクミン及びその類縁体含有組成物を簡便で安価に製造する方法の開発が望まれている。
一方、特許文献４に記載のクルクミン複合体については、食品の着色剤として利用されるものであって、クルクミン及び／又はその類縁体の体内への吸収性が向上することについては示されていない。
従って、本発明の課題は、クルクミン及び／又はその類縁体の経口吸収性が改善され、かつ簡便で安価に製造できる経口摂取用組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
そこで、本発明者は、クルクミン及び／又はその類縁体と種々の成分との混合物及びそれらの処理物の経口吸収性を検討してきたところ、クルクミン及び／又はその類縁体と水溶性セルロース誘導体とから容易な操作で形成された複合体が、それらの混合物に比べて顕著に経口吸収性が向上しており、これを含有する組成物がクルクミン及び／又はその類縁体の種々の生理作用を確実に発揮させるための経口摂取用組成物として有用であることを見出し、本発明を完成するに至った。【０００８】
すなわち、本発明は、次の〔１〕〜〔９〕を提供するものである。【０００９】
〔１〕クルクミン及び／又はその類縁体と水溶性セルロース誘導体との複合体。
〔２〕クルクミン及び／又はその類縁体が、クルクミン又はウコン色素である〔１〕記載の複合体。
〔３〕水溶性セルロース誘導体が、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース及びカルボキシメチルセルロース塩から選ばれる成分である〔１〕又は〔２〕記載の複合体。
〔４〕（Ａ）クルクミン及び／又はその類縁体と（Ｂ）水溶性セルロース誘導体の含有比率（Ａ／Ｂ）が、０．０２〜１０である〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載の複合体。
〔５〕クルクミン及び／又はその類縁体と水溶性セルロース誘導体とを含有する水−有機溶剤混合溶液から、溶媒を除去することにより得られるものである〔１〕〜〔４〕のいずれかに記載の複合体。
〔６〕クルクミン及び／又はその類縁体が、非晶質である〔１〕〜〔５〕のいずれかに記載の複合体。
〔７〕〔１〕〜〔６〕のいずれかに記載の複合体を含有する経口摂取用組成物。
〔８〕クルクミン及び／又はその類縁体と水溶性セルロース誘導体とを水−有機溶剤混合溶媒に溶解させる工程と、該溶液から水及び有機溶剤を除去する工程と、を有することを特徴とする、クルクミン及び／又はその類縁体と水溶性セルロース誘導体との複合体の製造方法。
〔９〕クルクミン及び／又はその類縁体を有機溶剤に溶解する工程と、水溶性セルロース誘導体を水に溶解する工程と、クルクミン及び／又はその類縁体を含有する有機溶剤溶液と水溶性セルロース誘導体を含有する水溶液とを混合する工程と、当該混合溶液から水及び有機溶剤を除去する工程と、を有することを特徴とする、クルクミン及び／又はその類縁体と水溶性セルロース誘導体との複合体の製造方法。
【発明の効果】
【００１０】
本発明のクルクミン及び／又はその類縁体と水溶性セルロース誘導体との複合体は、両者を含有する水−有機溶剤混合溶液から容易に形成され、かつこれを含有する組成物を経口摂取した際のクルクミン及び／又はその類縁体の経口吸収性は、それらの混合物を経口摂取した場合に比べて顕著に優れている。従って、本発明の複合体を含有する経口摂取用組成物は、クルクミン及び／又はその類縁体の生理作用を発揮できる医薬、化粧品、栄養補助食品、機能性食品等として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】クルクミン投与量１０mg／kgの場合のＣｍａｘ（ng／mL）及びＡＵＣ（ng／mL・０〜２ｈ）を示す。
【図２】クルクミン投与量１０mg／kgの場合のＣｍａｘ（ng／mL）及びＡＵＣ（ng／mL・０〜２ｈ）を示す。
【図３】クルクミン投与量１０mg／kgの場合のＣｍａｘ（ng／mL）及びＡＵＣ（ng／mL・０〜２ｈ）を示す。
【図４】クルクミン投与量１０mg／kgの場合のＣｍａｘ（ng／mL）及びＡＵＣ（ng／mL・０〜２ｈ）を示す。
【図５】クルクミン投与量５０mg／kgの場合のＣｍａｘ（ng／mL）及びＡＵＣ（ng／mL・０〜２ｈ）を示す。
【図６】クルクミン−ヒドロキシプロピルメチルセルロース（９：１）複合体粉末のＸ線回折の結果を示す。
【図７】クルクミン−ヒドロキシプロピルメチルセルロース（３：１）複合体粉末のＸ線回折の結果を示す。
【図８】クルクミン−ヒドロキシプロピルメチルセルロース（１：１）複合体粉末のＸ線回折の結果を示す。
【図９】クルクミン−ヒドロキシプロピルメチルセルロース（１：３）複合体粉末のＸ線回折の結果を示す。
【図１０】クルクミン−ヒドロキシプロピルメチルセルロース（１：９）複合体粉末のＸ線回折の結果を示す。
【図１１】クルクミン−ヒドロキシプロピルセルロース（１：３）複合体粉末のＸ線回折の結果を示す。
【図１２】クルクミン−ヒドロキシプロピルセルロース（１：９）複合体粉末のＸ線回折の結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明の複合体は、（Ａ）クルクミン及び／又はその類縁体と（Ｂ）水溶性セルロース誘導体との複合体である。
【００１３】
（Ａ）クルクミンは、ウコン色素に含まれるクルクミノイドの主成分であり、下記構造式（１）で表される化合物である。
【００１４】
【化１】
2015174475.tif 000002
【００１５】
本発明においてクルクミンは、化学合成されたクルクミンを用いてもよいし、ウコン色素として流通しているものを用いてもよい。ウコン色素としては、ショウガ科ウコン（Curcuma longa LINNE）の根茎の乾燥物を粉末にしたウコン末、該ウコン末を適当な溶媒（例えば、エタノール、油脂、プロピレングリコール、ヘキサン、アセトンなど）を用いて抽出して得られる粗製クルクミン或いはオレオレジン（ターメリックオレオレジン）、および精製したクルクミンを挙げることができる。
なお、クルクミンには、互変異性体であるケト型及びエノール型のいずれも含まれる。
【００１６】
クルクミン類縁体としては、デメトキシクルクミン、ビスデメトキシクルクミン、テトラヒドロクルクミン、ジヒドロキシテトラヒドロクルクミン等が挙げられる。なお、ウコン色素には、クルクミン、デメトキシクルクミン及びビスデメトキシクルクミンが含まれている。
【００１７】
（Ｂ）水溶性セルロース誘導体としては、セルロースを構成するグルコースのヒドロキシ基の一部がエーテル化されたエーテル化セルロースが挙げられ、具体的には、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、及びカルボキシメチルセルロース塩が挙げられる。ここで、カルボキシメチルセルロース塩としては、カルボキシメチルセルロースナトリウム等のカルボキシメチルセルロースアルカリ金属塩、カルボキシメチルセルロースカルシウム等のカルボキシメチルセルロースアルカリ土類金属塩が挙げられる。
これらの水溶性セルロース誘導体のうち、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースがより好ましく、ヒドロキシプロピルメチルセルロースがさらに好ましい。
【００１８】
本発明の複合体中の（Ａ）クルクミン及び／又はその類縁体と（Ｂ）水溶性セルロース誘導体の含有比率（Ａ／Ｂ）は、優れた経口吸収性を得る点、及び製剤の小型化の点から０．０２〜１０が好ましく、０．０３〜１０がより好ましく、０．０５〜１０がさらに好ましく、０．１〜１０がさらに好ましく、０．１〜５がさらに好ましく、０．１〜３がさらに好ましい。
【００１９】
本発明の複合体とは、クルクミン及び／又はその類縁体と水溶性セルロース誘導体との相互作用（例えば、水素結合、疎水結合やファンデルワールス力などの分子間力など）によって形成されたものをいう。なお、本発明の複合体の構造は明らかではないが、後記実施例に示すように、成分（Ａ）及び成分（Ｂ）の混合物に比べて経口吸収性が格段に向上していることから、成分（Ａ）と成分（Ｂ）とが何らかの複合体を形成していることは明らかである。クルクミン及びその類縁体は水にほとんど溶解せず、有機溶剤に溶解する。一方、水溶性セルロース誘導体は、水に良く溶解する。本発明の複合体は、クルクミン及び／又はその類縁体と水溶性セルロース誘導体とを含有する水−有機溶剤混合溶液から、溶媒を除去することにより得られるものが好ましい。クルクミン及び／又はその類縁体と水溶性セルロース誘導体の両者が水−有機溶剤混合溶媒中に一度溶解することにより、例えば両者の会合体のような複合体が形成されるものと推定される。
【００２０】
本発明の複合体は、例えば、（Ａ）クルクミン及び／又はその類縁体と（Ｂ）水溶性セルロース誘導体とを水−有機溶剤混合溶媒に溶解させる工程と、該溶液から水及び有機溶剤を除去する工程と、を含む方法により製造される。
より具体的には、（Ａ）クルクミン及び／又はその類縁体を有機溶剤に溶解する工程と、（Ｂ）水溶性セルロース誘導体を水に溶解する工程と、クルクミン及び／又はその類縁体を含有する有機溶剤溶液と水溶性セルロース誘導体を含有する水溶液とを混合する工程と、当該混合溶液から水及び有機溶剤を除去する工程と、を含む方法により製造される。
【００２１】
（Ａ）クルクミン及び／又はその類縁体を溶解するための有機溶剤としては、親水性有機溶剤、例えばエタノール、イソプロパノール等のＣ2−Ｃ6アルコール、プロピレングリコール等のＣ2−Ｃ6グリコールが挙げられる。このうち、Ｃ2−Ｃ6アルコールが好ましく、エタノールがさらに好ましい。当該有機溶剤の使用量は、クルクミン及び／又はその類縁体を溶解できる量であればよい。また、水溶性セルロース誘導体を溶解するための水の使用量も、水溶性セルロース誘導体を溶解できる量であればよい。
【００２２】
（Ａ）クルクミン及び／又はその類縁体を含有する有機溶剤溶液と（Ｂ）水溶性セルロース誘導体を含有する水溶液の混合は、前記のようにＡ／Ｂが０．０２〜１０になるようにするのが好ましい。
【００２３】
得られた混合溶液から水及び有機溶剤を除去する手段としては、蒸発乾燥、減圧乾燥、噴霧乾燥、凍結乾燥、温風乾燥、冷風乾燥、風乾等が挙げられるが、減圧乾燥及び噴霧乾燥が好ましい。
【００２４】
本発明の複合体は、クルクミン及び／又はその類縁体の経口吸収性が良好であり、その経口吸収性は、クルクミン及び／又はその類縁体と水溶性セルロース誘導体の混合物の経口吸収性に比べて顕著に優れている。従って、当該複合体を含有する経口摂取用組成物は、クルクミン及び／又はその類縁体の生理活性を経口投与で発揮させるための医薬品、化粧品、栄養補助食品、機能性食品、特定保健用食品として有用である。
【００２５】
また、本発明に係る経口摂取用組成物中の前記複合体の含有量は、１回投与量の低減、味、経口吸収性の点から、１０質量％以上が好ましく、１５質量％以上、さらに３０質量％以上が好ましい。また、前記複合体の含有量は、８０質量％以下が好ましく、７０質量％以下がより好ましく、６０質量％以下がさらに好ましい。具体的には、１０〜８０質量％が好ましく、１５〜８０質量％がより好ましく、３０〜７０質量％がさらに好ましく、３０〜６０質量％がさらに好ましい。
【００２６】
本発明における医薬品、化粧品、栄養補助食品、機能性食品、特定保健用食品は、具体的には、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；飴、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子等の菓子類；加工乳、発酵乳等の乳製品；ソース、たれ等の調味料；スープ、シチュー、サラダ、惣菜、ふりかけ、漬物；その他種々の形態の健康・栄養補助食品；錠剤、カプセル剤、ドリンク剤、トローチ等の医薬品、医薬部外品などが挙げられ、これらを製造するに当り通常用いられる添加物を使用することができる。
【００２７】
上記の添加物としては、例えば、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、ルブソサイド、コーンシロップ、乳糖、マンニット、デキストリン、クエン酸、クエン酸ソーダ、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌ−α−トコフェロール、エリソルビン酸ナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＣ、ビタミンＢ類、ビタミンＥ、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、ステビア、酵素処理ステビア、色素、香料、保存剤などが挙げられる。
【００２８】
また、本発明の経口摂取用組成物の形態としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、シロップ剤などが挙げられる。これらの製剤とするには、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、コーティング剤等を用いることができる。
【００２９】
本発明の経口摂取用組成物の１日投与量は、通常成人あたりクルクミン量として一般に安全が確認されている０．０３ｇから１２ｇが好ましい。
【実施例】
【００３０】
次に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明する。【００３１】
実施例１〜１３
（各種複合体の調製）【００３２】
実施例１〜５、９〜１３
（調製方法Ａ：スプレードライヤーを用いて乾燥）
７０又は８０％（ｖ／ｖ）エタノール溶液４００mLに三栄源エフ・エフ・アイ社から供与されたクルクミン含有量が９１．２％（ｗ／ｗ）のウコン抽出物粉末（Lot.NCTH0012012）１．１０〜８．７７ｇ（クルクミン量として１．０〜８．０ｇ）とヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ：メトローズＳＥ−０６又はＳＥ−０３、信越化学工業社製）又はヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ：ＳＳＬ、日本曹達社製）０．２〜６４．８ｇとを添加し、約８０℃に加温しながら撹拌することでクルクミン−ヒドロキシプロピルメチルセルロース複合体又はクルクミン−ヒドロキシプロピルセルロース複合体含有溶液を調製した。
また、前記クルクミン−ヒドロキシプロピルメチルセルロース複合体含有溶液に添加剤としてデキストリンを加えて溶解させることでデキストリンを含むクルクミン−ヒドロキシプロピルメチルセルロース複合体を調製した。
次いで、これら溶液をＮ２ガス密閉循環型噴霧方式二流体ノズル式スプレードライヤー（Pulvis Mini-SprayＧＳ−３１、ヤマト科学社製）を用いて、inlet temperature １４０℃、outlet temperature ８０〜９０℃、spray pressure ０．１０〜０．１３ＭＰａ、feed rate １０mL／min、orifice pressure ７５mmHgの条件で噴霧乾燥することでクルクミン−ヒドロキシプロピルメチルセルロース複合体又はクルクミン−ヒドロキシプロピルセルロース複合体を調製した。【００３３】
実施例６〜８
（調製方法Ｂ：エバポレーターを用いて乾燥）
７０（ｖ／ｖ）エタノール溶液２００又は４００mLに三栄源エフ・エフ・アイ社から供与されたクルクミン含有量が９１．２％（ｗ／ｗ）のウコン抽出物粉末（Lot.NCTH0012012）１．１０又は２．１９ｇ（クルクミン量として１．０又は〜２．０ｇ）とヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ：メトローズＳＥ−０６、信越化学工業社製）０．２、４、６又は１０ｇとを添加し、約８０℃に加温しながら撹拌することでクルクミン−ヒドロキシプロピルメチルセルロース複合体含有溶液を調製した。
次いで、該溶液をエバポレーター（rotary evaporator N-1000、EYELA社製）内に入れ、これを減圧しながら８０℃に保持して溶媒を留去することで乾固させ、乾燥物を回収した。また、該乾燥物を乳鉢に入れて乳棒で粉砕することでクルクミン−ヒドロキシプロピルメチルセルロース複合体を調製した。【００３４】
実施例１〜１３で得られた複合体の組成を表１に示す。【００３５】
【表１】
2015174475.tif 000003
【００３６】
試験例１
（各種複合体の経口吸収性）
（１）供試動物
供試動物は、６週齢のＳＤラット（雄性、体重１７０ｇ〜２６０ｇ、日本チャールス・リバー社）を用いた。【００３７】
（２）投与方法
投与方法は、投与前１２時間以上絶食させた供試動物（ｎ＝３又は５）に、上記で調製した各種複合体（実施例１〜１３）をそれぞれクルクミン濃度１mg／mLとなるように所定量を注射用水に添加して２０mLにメスアップし、超音波発生装置を用いて混合した後、クルクミン投与用量が１０mg／kg（投与試験例１〜１３）又は５０mg／kg（投与試験例１４）となるように経口ゾンデを用いて強制的に経口投与した。
なお、クルクミン原末（比較試験例１）、クルクミン原末とヒドロキシプロピルメチルセルロース粉末又はヒドロキシプロピルセルロース粉末とを単に物理的に混合（クルクミン：ＨＰＭＣ＝１：３又はクルクミン：ＨＰＣ＝１：３）した物理混合物（比較試験例２、３）又は微粒子化したクルクミノイドとガディガムとを組み合わせたウコン色素組成物であるＣＲ-０３１Ｐ粉末（セラバリューズ社製）（比較試験例４、５）を投与した場合を対照とした。【００３８】
（３）血漿中クルクミン濃度の測定
血漿中クルクミン及び／又はその類縁体濃度の測定は、投与開始３０分、１時間及び２時間に供試動物の頸静脈から無麻酔下で約０．５mL採血を行うことで得たヘパリン血漿を用いて、以下の方法によって測定した。【００３９】
ａ．前処理
採血した血漿２０μＬに０．１Ｍ酢酸緩衝液（pH５．０）１００μＬとβ−グルクロニダーゼ溶液（約６８，０００units／mL）１０μＬを加え、３７℃で１時間保持した。その後、内部標準液であるメプロニル２０ng／mLが含まれる５０％（ｖ／ｖ）メタノール１０μＬとクロロホルム０．５mLとを添加し、ボルテックスミキサーを用いて１分間撹拌後、超音波発生装置を用いて１５分間混合することで調製した抽出処理液を遠心分離（１３，０００×ｇ、５分間、室温）によってクロロホルム層と水層とに分離した。なお、この抽出処理を２回繰り返した。次いで、該クロロホルム層を採取し、これを減圧遠心濃縮機を用いて溶媒を留去することで乾固させ、ここに５０％（ｖ／ｖ）メタノール１００μＬを添加した後、遠心分離（１３，０００×ｇ、５分間、室温）して上清液を回収した。【００４０】
ｂ．測定方法
上記で調製した上清液２μＬをＬＣ−ＭＳ／ＭＳ（島津社製）を用いて分析を行うことで血漿中クルクミン濃度を測定した。なお、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析条件は、ＬＣカラムがAtlantis Ｔ３（２．１×１５０mm，３μｍ，Waters社製）、カラム温度が４０℃、流速が０．２mL／min、移動相がＡ：０．１％ギ酸水溶液、Ｂ：０．１％ギ酸／アセトニトリルとし、以下の条件でグラジェント溶出を行った。また、ＭＳ分析条件は、イオン化モードがElectron Spray thermo ionization（ＥＳＩ）、Positive、測定モードがMultiple Reaction Monitoring（ＭＲＭ）とし、クルクミン３６９．１→１７７．２（ｍ／ｚ）、メプロニル２７０→１１９（ｍ／ｚ）で評価した。
一方、試料中に含まれるクルクミン量を定量するために使用する検量線の作成は、クルクミンが１．０、２．０、３．９、７．８、１５．６、３１．３、６２．５、１２５又は２５０ng／mLを含む５０％（ｖ／ｖ）メタノール溶液（クルクミン標準液）９０μＬにメプロニル２０ng／mLを含む５０％エタノール溶液１０μＬを添加することで調製した各種標準溶液（クルクミン濃度９〜２２５ng／mL）を用いて上記同様の条件で測定することで行った。【００４１】
【表２】
2015174475.tif 000004
【００４２】
（４）結果
血漿中のクルクミン濃度（ng／mL）、最高血中濃度（Ｃmax（ng／mL））及び血中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ（ng／mL・０−２hr））を表３〜４及び図１〜５に示す。
表３〜４及び図１〜５から明らかなように、本発明の複合体は、クルクミン単独投与、及びクルクミンとＨＰＭＣとの混合物の投与に比べて顕著に経口吸収性が向上している。また、クルクミンとガティガム混合微粉砕物（ＣＲ−０３１Ｐ）と比べても経口吸収性が向上していた。【００４３】
【表３】
2015174475.tif 000005
【００４４】
【表４】
2015174475.tif 000006
【００４５】
試験例２（複合体中の非晶質クルクミンの安定性）
各種複合体中の非晶質クルクミンの安定性を調べることを目的に、上記で調製した各複合体（実施例１〜５及び１０〜１１）をそれぞれアルミパウチに入れて４０℃で保持し、これら複合体中のクルクミンの結晶性を粉体Ｘ線回折装置（ＲＩＮＴ−ＵｌｔｉｍａＩＩＩ、Ｒｉｇａｋｕ社製）を用いて経時的（試験開始時（０Ｍ）、試験開始１ヶ月後（１Ｍ）、試験開始２ヶ月後（２Ｍ）及び試験開始４ヶ月後（４Ｍ））に調べた（図６〜１２）。
なお、対照として、ウコン抽出物粉末（対照Ａ：原末）、ウコン抽出物粉末をエタノールに溶解させた後、上記調製方法Ａに記載した方法と同様の条件でスプレードライしたウコン抽出物粉末ＳＤ品（対照Ｂ：原末ＳＤ品）及びウコン抽出物粉末とヒドロキシプロピルメチルセルロース又はヒドロキシプロピルセルロースとをウコン抽出物中のクルクミンと該水溶性セルロース誘導体との重量比で９：１〜１：９となるように単に混合して調製した物理混合品（対照Ｃ１〜５及び１０〜１１）とした。【００４６】
これらの結果を図６〜１２に示す。【００４７】
ａ．クルクミン−ヒドロキシプロピルメチルセルロース複合体
クルクミンとヒドロキシプロピルメチルセルロースの比率が９：１の複合体（実施例１）及び３：１の複合体（実施例２）の場合、試験開始時（０Ｍ）にはクルクミン由来の結晶性を示すピークが認められず、複合体中のクルクミンは非晶質であった。４０℃で１ヶ月以上保持した場合（１Ｍ、２Ｍ及び４Ｍ）には結晶性を示すピークが認められた（図６及び７）が、そのピークは若干であった。【００４８】
一方、クルクミンとヒドロキシプロピルメチルセルロースの比率が１：１の複合体（実施例３）、１：３の複合体（実施例４）及び１：９の複合体（実施例５）の場合、試験した期間内ではクルクミン由来の結晶性を示すピークは認められず、複合体中のクルクミンは非晶質であった（図８〜１０）。【００４９】
以上の結果から、クルクミン−ヒドロキシプロピルメチルセルロース複合体におけるクルクミンとヒドロキシプロピルメチルセルロースの比率（クルクミン／ヒドロキシプロピルメチルセルロース）を９／１〜１／９、特に３未満とすることによって該複合体中のクルクミンが長期間非晶質の状態に維持されることが分かった。【００５０】
ｂ．クルクミン−ヒドロキシプロピルセルロース複合体
クルクミンとヒドロキシプロピルメチルセルロースの比率が１：３の複合体（実施例１０）の場合、試験開始時（０Ｍ）にはクルクミン由来の結晶性を示すピークが認められず、複合体中のクルクミンは非晶質であった。４０℃で１ヶ月以上保持した場合（１Ｍ及び２Ｍ）には結晶性を示すピークが認められた（図１１）が、そのピークは若干であった。【００５１】
クルクミンとヒドロキシプロピルメチルセルロースの比率が１：９の複合体（実施例１１）の場合、試験した期間内ではクルクミン由来の結晶性を示すピークは認められず、複合体中のクルクミンは非晶質であった（図１２）。【００５２】
以上の結果から、クルクミン−ヒドロキシプロピルセルロース複合体におけるクルクミンとヒドロキシプロピルセルロースの比率（クルクミン／ヒドロキシプロピルメチルセルロース）を９／１〜１／９、特に１／３未満とすることによって該複合体中のクルクミンが長期間非晶質の状態に維持されることが分かった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【国際調査報告】
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