(57)【要約】  メチルヘスペリジンを有効成分として含む、糖化反応抑制剤。前記メチルヘスペリジンが、下記一般式（１）で表されるカルコン体メチルヘスペリジン、及び下記一般式（２）で表されるフラバノン体メチルヘスペリジンからなる群から選ばれる１種以上であることが好ましい。［化１］2014181716.tif 000017
2014181716.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
メチルヘスペリジンを有効成分として含む、糖化反応抑制剤。
【請求項２】
前記メチルヘスペリジンが、下記一般式（１）で表されるカルコン体メチルヘスペリジン、及び下記一般式（２）で表されるフラバノン体メチルヘスペリジンからなる群から選ばれる１種以上である、請求項１に記載の糖化反応抑制剤。
【化１】
2014181716.tif 000013
（式中、Ｒ１〜Ｒ１９は、それぞれ独立にメチル基または水素原子である。）
【請求項３】
前記メチルヘスペリジンが、下記一般式（３）で表されるカルコン体メチルヘスペリジン、及び下記一般式（４）で表されるフラバノン体メチルヘスペリジンからなる群から選ばれる１種以上である、請求項１に記載の糖化反応抑制剤。
【化２】
2014181716.tif 000014
（式中、Ｒ２０〜Ｒ２５は、それぞれ独立にメチル基または水素原子である。）
【請求項４】
前記一般式（３）で表されるカルコン体メチルヘスペリジンが下記表１に示されるＲ２０〜Ｒ２３の組み合わせを有するカルコン体−１〜３からなる群から選ばれる１種以上である請求項３に記載の糖化反応抑制剤。
【表１】
2014181716.tif 000015
【請求項５】
前記一般式（４）で表されるフラバノン体メチルヘスペリジンが下記表２に示されるＲ２４〜Ｒ２５の組み合わせを有するフラバノン体−１〜４からなる群から選ばれる１種以上である請求項３に記載の糖化反応抑制剤。
【表２】
2014181716.tif 000016
【請求項６】
メチルヘスペリジンを、製剤総質量に対して、０．０１質量％〜５．０質量％の割合で含む、請求項１に記載の糖化反応抑制剤。
【請求項７】
皮膚化粧料用途である、請求項１に記載の糖化反応抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、糖化反応抑制剤に関する。
本願は、２０１３年５月１０日に、日本に出願された特願２０１３−１００７４２号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。
【背景技術】
【０００２】
生体においては、糖尿病の合併症である神経障害、網膜症、腎症、骨疾患、動脈硬化に糖化反応が関与していることが報告されている。高血糖は組織のタンパク質、血漿タンパク質、細胞外基質タンパク質であるコラーゲンなどの糖化によるＡＧＥ（ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄ  ｐｒｏｄｕｃｔ：終末糖化産物）の生成を促進し、これらの障害の原因となっていると考えられている。
さらに、加齢とともに進行する皮膚のシワ、クスミ、弾力性低下等の老化現象にも糖化反応が関与し、これらはコラーゲンやエラスチンなどの真皮構成タンパク質の架橋、変性が原因となっていると考えられている（非特許文献１参照）。
したがって、上述のような各種障害の主要な原因となっている糖化反応を阻害、抑制する化合物の開発は、糖尿病合併症の治療および皮膚科学の分野において重要な研究課題である。【０００３】
糖化反応阻害剤としては、糖尿病患者向け医薬品のアミノグアニジンが知られているが、日本では臨床応用されていない。
皮膚に外用する糖化反応抑制剤としては、植物抽出物やフラボノイド類をはじめとするポリフェノール骨格を有するいくつかの糖化反応阻害剤が報告されている（特許文献１〜３、非特許文献２参照。）。
例えば、特許文献１には柑橘類や甘草から抽出されたナリンギン、ナリンゲニン、リクイリチン、リクイチゲニンが、特許文献２にはハイビスカスなどからの植物抽出物が、特許文献３には植物抽出物と、アントラキノンおよびその誘導体とが開示されている。
しかしながらこれらは必ずしも効果が十分ではなく、新たな阻害剤の開発が望まれていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平７−３２４０２５号公報
【特許文献２】特開平１１−１０６３３６号公報
【特許文献３】特表２０１０−５３３１４２号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｂｒｏｗｎｌｅｅ  Ｍ．,ｅｔ．ａｌ.,ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８６）ｖｏｌ．２３２，ｐｐ．１６２９−１６３２．
【非特許文献２】Ｕｒｉｏｓ  Ｐ．,ｅｔ．ａｌ., Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｕｔｒ.（２００７）ｖｏｌ．４６，ｐｐ．１３９−１４６．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、上述のような状況を踏まえ、糖化反応抑制効果に優れた糖化反応抑制剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、糖化反応抑制剤に関する研究を重ねた結果、特定の構造を有するフラバノン類、すなわちメチルヘスペリジンに優れた糖化抑制効果があることを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち本発明は以下に示す事項を含むものである。【０００８】
［１］メチルヘスペリジンを有効成分として含む、糖化反応抑制剤。
［２］前記メチルヘスペリジンが、下記一般式（１）で表されるカルコン体メチルヘスペリジン、及び下記一般式（２）で表されるフラバノン体メチルヘスペリジンからなる群から選ばれる１種以上である、［１］に記載の糖化反応抑制剤。【０００９】
【化１】
2014181716.tif 000003
【００１０】
（式中、Ｒ１〜Ｒ１９は、それぞれ独立にメチル基または水素原子である。）
［３］前記メチルヘスペリジンが、下記一般式（３）で表されるカルコン体メチルヘスペリジン、及び下記一般式（４）で表されるフラバノン体メチルヘスペリジンからなる群から選ばれる１種以上である、［１］又は［２］に記載の糖化反応抑制剤。【００１１】
【化２】
2014181716.tif 000004
【００１２】
（式中、Ｒ２０〜Ｒ２５は、それぞれ独立にメチルまたは水素原子である。）
［４］前記一般式（３）で表されるカルコン体メチルヘスペリジンが下記表１に示されるＲ２０〜Ｒ２３の組み合わせを有するカルコン体−１〜３からなる群から選ばれる１種以上である［３］に記載の糖化反応抑制剤。【００１３】
【表１】
2014181716.tif 000005
【００１４】
［５］前記一般式（４）で表されるフラバノン体メチルヘスペリジンが下記表２に示されるＲ２４〜Ｒ２５の組み合わせを有するフラバノン体−１〜４からなる群から選ばれる１種以上である［３］に記載の糖化反応抑制剤。【００１５】
【表２】
2014181716.tif 000006
【００１６】
［６］メチルヘスペリジンを、製剤総質量に対して、０．０１質量％〜５．０質量％の割合で含む、［１］〜［５］のいずれか一つに記載の糖化反応抑制剤。
［７］皮膚化粧料用途である、［１］〜［６］のいずれか一つに記載の糖化反応抑制剤。
【発明の効果】
【００１７】
本発明の糖化反応抑制剤は、加齢とともに進行する皮膚の老化現象の予防、改善が期待できるため、医薬品、医薬部外品、化粧料等に幅広く適用することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
以下、本発明の好ましい例を説明するが、本発明はこれら例に限定されることはない。本発明の趣旨を逸脱しない範囲で、構成の付加、省略、置換、およびその他の変更が可能である。
本発明の糖化反応抑制剤は、メチルヘスペリジンを有効成分として含むものであれば特に限定されない。本発明に用いられるメチルヘスペリジンとしては、ヘスペリジンをメチル化し、水に可溶化したものが好ましい。
メチルヘスペリジンには、主に、下記一般式（１）で示されるカルコン型化合物（カルコン体メチルヘスペリジン）と、下記一般式（２）で示されるフラバノン型化合物（フラバノン体メチルヘスペリジン）が含まれることが知られている。
【００１９】
【化３】
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【００２０】
（式中、Ｒ１〜Ｒ１９はそれぞれ独立に、メチル基または水素原子である。）
本発明の糖化反応抑制剤は、前記メチルヘスペリジンが、前記一般式（１）で表されるカルコン体メチルヘスペリジン、及び前記一般式（２）で表されるフラバノン体メチルヘスペリジンからなる群から選ばれる１種以上であることが好ましい。
前記一般式（１）で表されるカルコン体メチルヘスペリジンにおいて、Ｒ１〜Ｒ１０のうち、２〜１０箇所がメチル基であることが好ましく、２〜７箇所がメチル基であることがより好ましく、３〜５箇所がメチル基であることが最も好ましい。
前記一般式（２）で表されるフラバノン体メチルヘスペリジンにおいて、Ｒ１１〜Ｒ１９のうち、２〜９箇所がメチル基であることが好ましく、２〜５箇所がメチル基であることがより好ましく、２〜４箇所がメチル基であることが最も好ましい。
【００２１】
前記一般式（１）および（２）に包含される化合物の中でも、メチルヘスペリジンとしては、特に下記一般式（３）または（４）で表される構造のものが好適に用いられる。
【００２２】
【化４】
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【００２３】
（式中、Ｒ２０〜Ｒ２５は、それぞれ独立にメチルまたは水素原子である。）
前記一般式（３）で表されるカルコン体メチルヘスペリジンは、下記表３に示されるＲ２０〜Ｒ２３の組み合わせを有するカルコン体−１〜３からなる群から選ばれる１種以上であることが好ましい。
【００２４】
【表３】
2014181716.tif 000009
【００２５】
また、前記一般式（４）で表されるフラバノン体メチルヘスペリジンが下記表４に示されるＲ２４〜Ｒ２５の組み合わせを有するフラバノン体−１〜４からなる群から選ばれる１種以上であることが好ましい。
【００２６】
【表４】
2014181716.tif 000010
【００２７】
本発明の糖化反応抑制剤において用いられるメチルヘスペリジンは、前記一般式（１）で表されるカルコン体メチルヘスペリジン、または前記一般式（３）で表されるカルコン体メチルヘスペリジンと、前記一般式（２）で表されるフラバノン体メチルヘスペリジンまたは前記一般式（４）で表されるフラバノン体メチルヘスペリジンの、両方を含むものでも良いし片方のみを含むものでも良い。
また、本発明の糖化反応抑制剤は、カルコン体―１〜３およびフラバノン体−１〜３の混合物であってもよい。
【００２８】
メチルヘスペリジンは、公知の方法、例えば、柑橘類の果皮などから製造されたヘスペリジンを水酸化ナトリウム水溶液に溶かし、そのアルカリ溶液に対応量のジメチル硫酸を作用させ、反応液を硫酸で中和し、n-ブチルアルコールで抽出し、溶媒を留去したのち、イソプロピルアルコールで再結晶することにより製造できるが（崎浴，日本化學雑誌，（１９５８）Ｖｏｌ．７９,ｐｐ．７３３−７３６）、その製造法はこれに限るものではない。
【００２９】
また、市販品（例えば、医薬品添加物、食品添加物、および化粧品原料として流通しているもの、または、「メチルヘスペリジン」（東京化成工業社）、「ヘスペリジンメチルカルコン」（Ｓｉｇｍａ社）等）を購入して使用することもできる。
【００３０】
本発明の糖化反応抑制剤は、製剤総質量に対して、０．０１質量％〜５．０質量％の割合でメチルヘスペリジンを含有することが好ましく、０．１質量％〜５．０質量％の割合で含有することがより好ましく、０．５質量％〜２．０質量％の割合で含有することが更に好ましい。含有割合が０．０１％以上の場合、糖化抑制効果に特に優れている。含有割合が２質量％以下の場合、より過剰な量を用いても効果の上昇は見られないため、経済的に効率がよい。
本発明の糖化反応抑制剤は、メチルヘスペリジンを、水やアルコール等の溶剤に分散したものであってもよい。
【００３１】
本発明の糖化反応抑制剤は、内用・外用製剤類全般において利用できる。用途としては、医薬品用途、医薬部外品用途類、食品用途、皮膚化粧料用途等が挙げられ、皮膚化粧料用途が好ましい。
【実施例】
【００３２】
以下、実施例に基づいて本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。【００３３】
[製造例]
柑橘類より抽出したヘスペリジンを、ジメチル硫酸でメチル化し、脱塩による精製後乾燥させて結晶化することによって水に可溶なメチルヘスペリジン含有組成物を得た。該組成物は、カルコン体―１〜３およびフラバノン体−１〜３の混合物を、組成物全量中、９７．５質量％以上含有することが確認された。【００３４】
［実施例１］
上記製造例で得られたメチルヘスペリジンを用いて糖化反応抑制試験を行った。試験にはコラーゲン抗糖化アッセイキット ｖｅｒ．  ２（グリセルアルデヒド、Ｃｏｄｅ  Ｎｏ．ＡＫ７１、株式会社プライマリーセル）を用いた。以下、具体的な試験方法を記す。【００３５】
氷冷したコラーゲン酸性溶液と中和液を混和し、コラーゲン溶液を得て、このコラーゲン溶液を１ウェルあたり５０μＬずつ９６ウェルブラックプレートに分注した。
これを湿潤条件下、３７℃インキュベーターで一晩静置し、コラーゲンゲルを得た。メチルヘスペリジンを０．０５質量％の割合で水に溶解し、フィルター濾過したものを試料として、コラーゲンゲル上に４０μＬ重層した。
全てのウェルに５００ｍＭグリセルアルデヒド溶液を１０μＬ添加し、プレートミキサーで撹拌した。
グリセルアルデヒド溶液添加後、５分以内に下方測定の傾向プレートリーダーで励起波長３７０ｎｍ、蛍光波長４４０ｎｍでの蛍光強度を測定し、この測定値を反応０時間の蛍光強度Ａとした。
湿潤条件下、３７℃インキュベーターで２４時間静置した後、プレートリーダー（ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ２００、ＴＥＣＡＮ）で励起波長３７０ｎｍ、蛍光強度４４０ｎｍでの蛍光強度を測定した。この測定値を蛍光強度Ｂとした。
得られた測定結果から下記（１）式によりメイラード反応阻害率を算出した。結果を表５に示す。【００３６】
【数１】
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【００３７】
[式（１）中、糖化度αは、「被験試料添加時の糖化度」を表し、糖化度βは、「被験試料無添加時（コントロール）の糖化度」を表し、糖化度は、「各試料の蛍光強度Ｂ−蛍光強度Ａ」を表す]【００３８】
［実施例２〜４、比較例１〜１２］
実施例１における、水に溶解させたメチルヘスペリジンを、表５に示す化合物、濃度および溶媒を変化させたほかは、実施例１と同様にメイラード反応阻害率を測定した。結果を表５に示す。
また、表５に示す化合物の詳細を以下に示す。
塩酸アミノグアニジン：和光純薬工業（ＰＮ：３２８−２６４３２）。
モノグルコシルヘスペリジン：和光純薬工業（ＰＮ：６３８−０７３６１）。
ナリンギン：東京化成工業（ＰＮ：Ｎ００７３）。
ヘスペリジン：東京化成工業（ＰＮ：Ｈ００４９）。
リクイリチン：和光純薬工業（ＰＮ：１２９−０５３４１）。【００３９】
【表５】
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【００４０】
表５の測定結果に示すとおり、実施例１〜４は、メチルスペリジンの濃度依存的に糖化反応抑制活性を有していることが確認された。
実施例２のメチルスペリジンの濃度は、比較例２の塩酸アミノグアニジンの濃度の半分であるにもかかわらず、実施例２は、比較例２より高い糖化反応抑制活性を示すことが確認された。更に、実施例２のメチルスペリジンの濃度は、比較例３のモノグルコシルヘスペリジンの濃度、比較例５のナリンギンの濃度、比較例８のヘスペリジンの濃度、比較例１１のリクイリチンの濃度と同じであるにもかかわらず、実施例２は、これら比較例より高い糖化反応抑制活性を示すことが確認された。
実施例３のメチルスペリジンの濃度は、比較例４のモノグルコシルヘスペリジンの濃度、比較例６のナリンギンの濃度、比較例９のヘスペリジンの濃度、比較例１２のリクイリチンの濃度と同じであるにもかかわらず、実施例３は、これら比較例より高い糖化反応抑制活性を示すことが確認された。【００４１】
以上の結果から、本発明によれば糖化反応抑制効果に優れた糖化反応抑制剤を提供できることが明らかである。
【産業上の利用可能性】
【００４２】
本発明は、糖化反応抑制効果に優れた糖化反応抑制剤を提供することができる。
【国際調査報告】
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