(57)【要約】  塩化物イオンが低減された殺菌剤配合用カタラーゼ含有水溶液を提供することである。殺菌剤に配合するためのカタラーゼを含有する水溶液であって、水溶液中のカタラーゼに対する塩化物イオンの重量割合が１以下であることを特徴とする殺菌剤配合用カタラーゼ含有水溶液。【特許請求の範囲】
【請求項１】
殺菌剤に配合するためのカタラーゼを含有する水溶液であって、水溶液中のカタラーゼに対する塩化物イオンの重量割合が１以下であることを特徴とする殺菌剤配合用カタラーゼ含有水溶液。
【請求項２】
前記塩化物イオンが塩化ナトリウム由来である請求項１記載の殺菌剤配合用カタラーゼ含有水溶液。
【請求項３】
保存料を含有して成る請求項１又は２に記載の殺菌剤配合用カタラーゼ含有水溶液。
【請求項４】
請求項３記載の殺菌剤配合用カタラーゼ含有水溶液を、加熱殺菌処理及び／又は濾過処理して成る殺菌剤配合用カタラーゼ含有水溶液。
【請求項５】
請求項１又は２記載の殺菌剤配合用カタラーゼ含有水溶液を、加熱殺菌処理及び／又は濾過処理して成る殺菌剤配合用カタラーゼ含有水溶液。
【請求項６】
請求項５記載の殺菌剤配合用カタラーゼ含有水溶液に、保存料を配合して成る殺菌剤配合用カタラーゼ含有水溶液。
【請求項７】
前記保存料が、デヒドロ酢酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸エステル、安息香酸ナトリウム、ポリリジンの少なくとも１種である請求項３，４，６の何れかに記載の殺菌剤配合用カタラーゼ含有水溶液。
【請求項８】
更にエタノールを含有して成る請求項７記載の殺菌剤配合用カタラーゼ含有水溶液。
【請求項９】
請求項１〜８の何れかに記載の殺菌剤配合用カタラーゼ含有水溶液を、過酢酸、酢酸、過酸化水素を含有する過酢酸系殺菌剤に配合して成る殺菌組成液。
【請求項１０】
塩化物イオン濃度が１０μｇ／ｍｌ以下である請求項９記載の殺菌組成液。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、食品容器等の殺菌に用いられる殺菌剤に配合されるカタラーゼ含有水溶液に関するものであり、より詳細には、塩化物イオン濃度が低減されたカタラーゼ含有水溶液及びこれを用いて成る塩化物イオン濃度が低減された殺菌組成液に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来より、食品容器等の殺菌乃至滅菌に過酢酸系殺菌剤が用いられており、特に飲料等の無菌充填（アセプティック充填）においては、容器、内容物及び充填環境の全てを無菌とすることが重要であり、ボトルやキャップ等の容器の殺菌乃至滅菌に過酢酸系殺菌剤が使用されている（特許文献１等）。
このような過酢酸系殺菌剤は、過酢酸、酢酸、及び過酸化水素を主成分とし、これらは平衡状態で存在するが、過酸化水素の濃度が高いと、過酸化水素が容器に残留しやすくなり、殺菌後の無菌水による洗浄を充分行う必要が生じてくる。また、従来の方法よりも過酢酸の濃度を低く抑えたいという要望もある。【０００３】
このような問題を解決するために、過酸化水素、ペルカルボン酸、及びカルボン酸から成る殺菌組成物中に、過酸化水素を分解可能なカタラーゼが２０〜２５０ｐｐｍの量で存在する殺菌組成物を用いた滅菌方法が提案されている（特許文献２）。
上記カタラーゼを配合して成る、過酸化水素、ペルカルボン酸、及びカルボン酸から成る殺菌組成物を使用してなる滅菌方法においては、カタラーゼにより過酸化水素が分解され、殺菌組成物中の過酸化水素濃度が低下することから、効率よく殺菌できると共に、過酸化水素濃度を管理することによって長期にわたって安定した殺菌能力を維持できるという利点がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平８−５８７４４号公報
【特許文献２】特表２０１１−５１７９４６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、前述のカタラーゼを配合してなる過酢酸系殺菌組成液を長期にわたり用いた場合、カタラーゼを配合しない過酢酸系殺菌組成液を用いた場合に比べ、殺菌装置におけるステンレス鋼から成る配管やタンク等に腐食が発生するおそれがあることが判明した。発明者等は、この腐食の原因がカタラーゼ含有水溶液中の塩化物イオンであることをつきとめたが、カタラーゼ含有水溶液中の塩化物イオンを低減すると、特に、長期間保管ができなくなるという新たな問題が生じた。この塩化物イオンについて調べた結果、カタラーゼ産生微生物の培養に用いられる培地に含まれる塩化ナトリウム等の無機塩や、カタラーゼ含有水溶液を安定的に長期間保管可能とするための保存料や緩衝剤として添加される塩化ナトリウム等から由来するものであることがわかった。【０００６】
従って本発明の目的は、殺菌剤に配合されても殺菌装置等の腐食のおそれがなく、長期保管が可能な塩化物イオン濃度が低減された殺菌剤配合用カタラーゼ含有水溶液を提供することである。
本発明の他の目的は、塩化物イオン濃度が低減され、殺菌装置等の腐食のおそれがない殺菌組成液を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明によれば、殺菌剤に配合するためのカタラーゼを含有する水溶液であって、水溶液中のカタラーゼに対する塩化物イオンの重量割合が１以下であることを特徴とする殺菌剤配合用カタラーゼ含有水溶液が提供される。
本発明の殺菌剤配合用カタラーゼ含有水溶液においては、
１．塩化物イオンが塩化ナトリウム由来であること、
２．保存料、特にデヒドロ酢酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸エステル、安息香酸ナトリウム、ポリリジンの少なくとも１種が含有されていること、更にこれらに加えてエタノールが含有されていること、
３．加熱殺菌処理及び／又は濾過処理されていること、
４．保存料、特に上記４種の保存料の少なくとも１種が添加された後、加熱殺菌処理及び／又は濾過処理されていること、
５．加熱殺菌処理及び／又は濾過処理された後、保存料、特に上記４種の保存料の少なくとも１種、更にこれらに加えてエタノールが添加されていること、
が好適である。
本発明によればまた、上記殺菌剤配合用カタラーゼ含有水溶液を、過酢酸、酢酸、過酸化水素を含有する過酢酸系殺菌剤に配合して成る殺菌組成液が提供される。
本発明の殺菌組成液においては、塩化物イオン濃度が１０μｇ／ｍｌ以下であることが好適である。
【発明の効果】
【０００８】
本発明のカタラーゼ含有水溶液においては、水溶液中のカタラーゼに対する塩化物イオンの重量割合が１以下に低減されているため、殺菌剤にそのまま添加しても、殺菌装置におけるステンレス鋼製の配管やタンク等の腐食の発生を有効に抑制できる。
また保存料となる塩化ナトリウムを低減することに伴い、カタラーゼ含有水溶液の保存性の低下が懸念されるが、特定の食品保存料の添加、或いは加熱殺菌処理及び／又は濾過処理に賦することによって、塩化物イオン濃度が低減された状態でカタラーゼ含有水溶液の保存性を向上することができる。
本発明のカタラーゼ含有水溶液を添加して成る殺菌組成液は、カタラーゼにより過酸化水素を効率よく分解することができ、長期にわたって安定した殺菌能力を維持できる。しかも、殺菌組成液中の塩化物イオン濃度が１０μｇ／ｍｌ以下と著しく低いことから、殺菌装置の配管等の腐食のおそれがない。
また本発明のカタラーゼ含有水溶液に、特定の保存料を添加し、更にエタノールを配合することにより、長期間保存しても安定的なカタラーゼ活性を保持し得るカタラーゼ含有水溶液を提供することが可能になる。【０００９】
本発明のカタラーゼ含有水溶液が、ステンレス鋼に対して腐食のおそれがないことは後述する実施例の結果からも明らかである。
すなわち、カタラーゼに対する塩化物イオンの重量割合が１以下であるカタラーゼ含有水溶液中に浸漬されたステンレス試料は腐食が生じていないのに対して（実施例１〜８）、カタラーゼ量に対する塩化物イオンの重量割合が１．５であるカタラーゼ含有水溶液では、腐食が発生している(比較例１)。
また、脱塩処理されたカタラーゼ含有水溶液に、特定の食品保存料を配合、加熱殺菌処理及び／又は濾過処理、或いはこれらの両方を行った場合には（実施例９〜２４）、保存性向上のための処理を行わないカタラーゼ含有水溶液（比較例２）に比して、保存性が改善されていることが明らかである。
更に、本発明のカタラーゼ含有水溶液を配合した過酢酸系殺菌組成液は、優れた殺菌性を有すると共に、腐食発生が有効に抑制されているのに対して（実施例２５〜３６）、カタラーゼ量に対する塩化物イオンの重量割合が１．２（比較例３）、の過酢酸系殺菌組成液は腐食が発生している。
更にまた、カタラーゼ含有水溶液に特定の食品保存料と共にエタノールを配合した場合には（実施例３７〜４６，５０〜５２）、特定の食品保存料のみを配合しエタノールを配合しない場合（実施例９〜１６，４７〜４９）に比して、カタラーゼ活性が向上していることが明らかである。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
（カタラーゼ含有水溶液）
一般にカタラーゼは、Bacillus属、Thermus属、Micrococcus属等の細菌、Hansennula属等の酵母、Aspergillus属等の糸状菌等の微生物の培養を用いて製造され、培養終了後培養液から採取されたカタラーゼは、粗カタラーゼ液として可溶化された状態で得られる。必要により精製されたカタラーゼ液は安定的に長期間保管するために、エチルアルコール、塩化ナトリウム等の保存料やクエン酸ナトリウム等の緩衝剤が添加されたカタラーゼ含有水溶液として調製されている。
本発明においては、このような状態で提供されるカタラーゼ含有水溶液を広く使用することができるが、後述する過酢酸系殺菌組成液における酸性域で耐性を有するカタラーゼを含有する水溶液であることが重要であり、特に菌類由来のカタラーゼ、その中でも、Aspergillus  niger由来のカタラーゼが含有された水溶液を好適に使用することができる。
【００１１】
また本発明で用いるカタラーゼ含有水溶液は、ｐＨが４〜１１、特にｐＨ５〜７の範囲に調製されていることが好ましい。これによりカタラーゼの活性及び安定性が維持されると共に、後述する過酢酸系殺菌組成液のｐＨが２〜５の範囲に調整されても、カタラーゼ含有水溶液を添加することによって過酸化水素を１０分未満で３５％以上分解可能な性能を発現することが可能になる。
このようなカタラーゼ含有水溶液として、これに限定されないが、レオネットＦ−３５、レオネットＦプラス（ナガセケムテック株式会社製）等の商業的に入手可能なカタラーゼ含有水溶液を用いることができる。
【００１２】
本発明においては、このような状態で提供されるカタラーゼ含有水溶液の塩化物イオンを、カタラーゼに対する重量割合で１以下、特に０．５以下と、塩化物イオンの濃度を可及的にゼロに近いレベルになるように低減させることが重要な特徴である。
本発明において、カタラーゼ含有水溶液からの脱塩方法は、従来公知の脱塩方法によって行うことができ、例えば、これに限定されないが、透析法、限外濾過法（Ultrafiltration  Membrane，ＵＦ膜処理）、ゲル濾過法等を利用することができる。操作性や生産性等の点から限外濾過法によって脱塩を行うことが特に望ましい。
【００１３】
本発明においては、カタラーゼ含有水溶液の保存性を確保する場合には、脱塩処理後、特定の保存料を添加すること、加熱殺菌処理及び／又は濾過処理を行うこと、或いはこれらの両方を行い、保存性を低下させる原因となる一般細菌或いは黴等の増殖を抑制或いは除去することが望ましい。
本発明で好適に用いることができる保存料は、塩分を含有しないことは勿論、食品添加物として認可され、更にカタラーゼの活性を低下させることなく、一般細菌及び黴の増殖を抑制し得るものであることが重要である。
このような保存料としては、これに限定されないが、ソルビン酸系保存料、安息香酸系保存料、パラオキシ安息香酸系保存料、プロピオン酸系保存料、デヒドロ酢酸系保存料、酒精系保存料、ビタミンＢ１系保存料等を挙げることができ、中でもデヒドロ酢酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸エステル、安息香酸ナトリウム、ポリリジンを好適に用いることができ、本発明においては、これらの少なくとも１種を、カタラーゼ含有水溶液に対して０．００５〜０．５重量％となるように添加することが望ましい。
【００１４】
また本発明においては、上記保存料と共に、エタノールを配合することが特に好ましい。すなわち、前述したとおり、エタノールを追加することで、保存中のカタラーゼ活性の保持性能を向上することが可能になり、カタラーゼ含有水溶液を長期間保存しても、カタラーゼ活性が低下することを有効に防止でき、カタラーゼ活性の安定性に優れたカタラーゼ含有水溶液を提供できる。
尚、エタノールは、カタラーゼ含有水溶液に対して１〜１０重量％、特に３〜６重量％の範囲にあることが好適である。上記範囲よりもエタノールの量が少ない場合には、上記範囲ある場合に比してカタラーゼ活性の安定性の効果を充分得ることができず、その一方上記範囲よりもエタノールの量が多くてもカタラーゼ活性の安定性の効果に変わりはなく、コスト面を考慮しても、上述範囲内とすることが好適である。
【００１５】
また保存性を向上するために行う加熱殺菌処理は、脱塩処理後のカタラーゼ含有水溶液を５０〜７０℃の温度で１０〜６００秒間に加熱殺菌処理を行うことが好適である。上記範囲よりも加熱温度が低い場合には、十分に滅菌することができず、その一方上記温度より加熱温度が高い場合には、カタラーゼの活性を保持できない。
また濾過処理は、カタラーゼ含有水溶液の保存性を低下させる原因となる細菌等を分離し、カタラーゼを分離しないものであることが重要であり、フィルター孔径が０．１〜１．０μｍの範囲にある濾過装置を使用することが好適である。
これら加熱殺菌処理や濾過処理は、少なくとも一方を行えばよいが、両方行うことにより一般細菌或いは黴等の除去率を更に高めることが可能となる。
【００１６】
保存料添加と、加熱殺菌処理及び／又は濾過処理は、少なくとも一方を行えばよいが、両方行うことが保存性をより向上できるので好ましい。保存料添加と加熱殺菌処理及び／又は濾過処理の両方行う場合、何れを先に行ってもよいが、好適には加熱殺菌処理及び／又は濾過処理を先に行い、保存性を低下させる原因となる細菌等を除去した後、保存料を添加することが望ましい。
【００１７】
（過酢酸系殺菌組成液）
本発明のカタラーゼ含有水溶液は、過酢酸、酢酸、及び過酸化水素を主成分とし、これらが平衡状態で存在して成る過酢酸系殺菌剤に配合することにより、食品容器等の殺菌に用いられる殺菌組成液とすることができる。
カタラーゼ含有水溶液を配合する前の過酢酸系殺菌剤は、種々の濃度のものを原料として採用することができるが、好適には、過酢酸１０〜２５重量％、酢酸２０〜４０重量％、過酸化水素１５〜２５重量％、残余の成分が水及び必要により配合される安定剤から成る過酢酸系殺菌剤を好適に用いることができる。このような過酢酸系殺菌剤としてはオキシペール１００（日本パーオキサイド株式会社製：過酢酸１０．２重量％、酢酸２０．６重量％、過酸化水素１７．２重量％）等が挙げられ、水で希釈して濃度調整した後に使用する。
【００１８】
過酢酸系殺菌剤においては、ｐＨが５以上になると過酢酸が分解して濃度が低下して殺菌力が劣るようになってしまうことから、カタラーゼの活性を維持しつつ、過酢酸の殺菌効果を最も効果的に発揮するために、過酢酸系殺菌組成液のｐＨは２〜５の範囲に維持することが好ましい。過酢酸系殺菌組成液のｐＨを上記範囲にするために用いるｐＨ調整剤としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の従来公知のアルカリ性組成物を挙げることができる。
【００１９】
本発明の過酢酸系殺菌組成液は、過酢酸、酢酸、及び過酸化水素が平衡状態で存在してなる原料の過酢酸系殺菌剤に、ｐＨ調整剤、水、及びカタラーゼ含有水溶液を加えることによって調製する。
調製方法は、水で希釈後に過酢酸の濃度が５００〜２５０００ｐｐｍになることを前提に、所望の過酢酸濃度を有する過酢酸系殺菌剤にｐＨ調整剤を加えて混合し、ｐＨを２〜５の範囲に調整した後、カタラーゼが０．１〜１０μｇ／ｍｌ、特に０．１〜３．０μｇ／ｍｌの濃度になるようにカタラーゼ含有水溶液を配合することによって調製することが好ましい。ｐＨ調整剤及びカタラーゼ含有水溶液の配合順序は、必ずしも上記順序に限定されないが、上記順序にすることによって、カタラーゼの活性を最大限保持することが可能になる。
【００２０】
本発明の過酢酸系殺菌組成液は、脱塩処理に賦され、カタラーゼに対する塩化物イオンの重量割合が１以下に低減されているカタラーゼ含有水溶液を用いているため、塩化物イオン濃度が１０μｇ／ｍｌ以下に低減されている。そのため、殺菌装置におけるステンレス鋼製の配管等の腐食を生じることがない。
本発明の過酢酸系殺菌組成液は、従来公知の過酢酸系殺菌剤を用いた殺菌方法に用いられていた方法と同様に使用することができる。
【実施例】
【００２１】
（カタラーゼ含有水溶液の調製）
カタラーゼとして、レオネットＦプラス(ナガセケムテック株式会社製、カタラーゼ濃度：４ｍｇ／ｍｌ、塩化物イオン濃度：３４ｍｇ/ｍｌ)を使用し、ＵＦ膜（旭化成株式会社製：マイクローザＵＦモジュール、ＡＣＶ−３０１０）にて脱塩処理を行い、塩化物イオン濃度を０ｍｇ／ｍｌにした。次いで、イオン交換水で希釈した後、塩化ナトリウムを配合して、表１〜３及び５に示すカタラーゼ濃度、塩化物イオン濃度のカタラーゼ含有水溶液となるよう調製した。
表２、表３、表５に示す保存料は、前記カタラーゼ含有水溶液の調製において、イオン交換水で希釈した後、各表に示す濃度となるよう配合する。また、表３に示すカタラーゼ含有水溶液の処理は、６５℃−１分加熱後直ぐに５０℃に冷却を行う加熱殺菌処理、または、メルクミリポア社製ミリパック６０フィルターユニット（フィルター孔径：０．４５μｍ）による濾過処理を行った。【００２２】
（カタラーゼ含有殺菌組成液の調製）
殺菌組成液の調製方法は、殺菌組成液の原液として、過酢酸系殺菌剤  オキシペール１００（日本パーオキサイド株式会社製：過酢酸１０．２重量％、酢酸２０．６重量％、過酸化水素１７．２重量％）を用い、過酢酸濃度がおよそ１０００ｐｐｍ、２０００ｐｐｍ、３０００ｐｐｍ、１５０００ｐｐｍとなるようイオン交換水で希釈した。次いで、前述の方法によりカタラーゼ濃度４ｍｇ／ｍｌ、塩化物イオン濃度０ｍｇ／ｍｌの濃度に調整したカタラーゼ含有水溶液と塩化ナトリウムを用い、過酢酸系殺菌組成液全体量に対してのカタラーゼ濃度、塩化物イオン濃度が表４に示す濃度となるようカタラーゼ含有水溶液を配合した。
尚、表４に記載した過酢酸濃度の数値は、上述した殺菌組成液のイオン交換水希釈の後、カタラーゼ含有水溶液を配合し、カタラーゼの反応が終了した時点での測定値である。【００２３】
（カタラーゼ含有水溶液成分、殺菌組成液成分の測定方法）
１．カタラーゼ濃度
Invitrogen社製Nano  Orange（登録商標）Protein  Quantitation  Kitを用い、Experimental  Protocolに従い、表１及び表４は調整後の濃度のまま、表２，表３及び表５調整後のカタラーゼ含有水溶液を１０００倍に希釈して測定を行い、表１〜５に示した。
２．塩化物イオン濃度
ＤＩＯＮＥＸ社製イオンクロマトグラフ：ＤＸ−３２０を用い、表１及び表４は調整後の濃度のまま、表２，表３及び表５は調整後のカタラーゼ含有水溶液を１００倍に希釈し、次の条件で測定した。【００２４】
カラム  ：  ＡＳ１１−ＨＣ（４×２５０ｍｍ）
ガードカラム  ：  ＡＧ１１−ＨＣ（４×５０ｍｍ）
温度  ：  ３５℃
溶離液  ：  ＫＯＨ水溶液（グラジエント）
０−８分（１ｍｍｏｌ／Ｌ）、
８−１０分（１−７ｍｍｏｌ／Ｌ）、
１０−１９分（７−１４ｍｍｏｌ／Ｌ）、
１９−２３分（１４−２３ｍｍｏｌ／Ｌ）、
２３−２８分（２３−４５ｍｍｏｌ／Ｌ）、
２８−３５分（４５ｍｍｏｌ／Ｌ）
流速  ：  １．１ｍＬ／分
注入量  ：  ２５μＬ
検出器  ：  電気伝導度（サプレッサー使用）
サプレッサー  ：  エクスターナルモード、１７０ｍＡ【００２５】
３．過酢酸濃度
カタラーゼ含有水溶液を配合終了後、過マンガン酸カリウム−ヨウ素法によって測定した。すなわち、試料を硫酸酸性下で過マンガン酸カリウム滴定を行い、過酸化水素濃度を測定した後、ヨウ化カリウム及びデンプン指示薬を加えて、チオ硫酸ナトリウム滴定を行い、過酢酸濃度を測定した。
上述したカタラーゼ含有水溶液の反応終了時間については、過酢酸系殺菌組成液のカタラーゼ含有水溶液を配合後５分以降から５分おきに測定し、経時測定における過酸化水素濃度の減少が見られなくなった時を反応終了として、過酢酸濃度とした。
４．過酸化水素濃度
過酸化水素濃度は、過酢酸系殺菌剤にカタラーゼ含有水溶液を配合する前の濃度について記した。測定方法は、上述した３．過酢酸濃度の通りである。【００２６】
（評価方法）
１．腐食の有無（腐食性評価）
殺菌装置配管として用いるＳＵＳステンレスパイプ（直径４ｃｍ、長さ１０ｃｍ）を調整後のカタラーゼ含有水溶液、もしくは調整後のカタラーゼ含有殺菌組成液に浸漬し、４０℃で６ヶ月保存した後、評価を行った。尚、過酢酸濃度は経時で変化するため、過酢酸濃度が２８００ｐｐｍ以下になった時点で上述の初期の過酢酸系殺菌組成液に取り替えて浸漬し直すことで、過酢酸量が２８００〜３０００ｐｐｍに維持した。
評価は、当該ステンレスパイプの内外面を目視で観察し、錆や孔食などの腐食がないものを○、錆や孔食などの腐食はないが変色があるものを△、腐食があるものを×とした。【００２７】
２．保存料配合、カタラーゼ含有水溶液の処理による保存性評価
以下に記載するＡ〜Ｄのカタラーゼ含有水溶液について、ＡとＢの菌数増加の差及びＣとＤの菌数増加の差が１０倍未満であるものを○、１０倍以上のものを×として評価した。菌数の測定は、Ａ〜Ｄのカタラーゼ含有水溶液１ｍｌをそれぞれ標準寒天培地２０ｍｌに混釈して３５℃で４８時間培養した後、菌数を測定した。結果を表２及び表３に示す。
Ａ：脱塩処理を行った直後のカタラーゼ含有水溶液
（カタラーゼ濃度４．０ｍｇ／ｍｌ、塩化物イオン濃度０．４ｍｇ／
ｍｌ、塩化物イオン濃度／カタラーゼ濃度＝０．１）
Ｂ：Ａの脱塩処理後、３０℃で１週間保存したカタラーゼ含有水溶液
Ｃ：Ａの脱塩処理後、表２及び表３に示す保存料配合、加熱殺菌処理、濾
過処理を行った直後のカタラーゼ含有水溶液
Ｄ：Ｃの配合、各処理を行った後、３０℃で１週間保存したカタラーゼ含
有水溶液【００２８】
３．殺菌効果
容器として５００ｍｌポリエチレンテレフタレートボトル（以下、ボトルと記す）を使用し、供試菌としてBacillus  cereus  ＡＴＣＣ  ９１３９を用いて菌液を作成し、ボトル内面に１０６ｃｆｕ／ボトルとなるよう噴霧器から均一に吹き付けた後、ボトルを乾燥させて評価用ボトルを作製した。次いで、カタラーゼ反応終了直後の過酢酸系殺菌組成液を６５℃に温度調節し、評価用ボトル内に噴霧し、８秒接触させた後、滅菌水を用いてボトル内面を洗浄し、洗浄に用いた滅菌水を標準寒天培地を用いてメンブレンフィルター法により生存菌数を計測した。初菌数及び生残菌数より、下記式より殺菌効果（Ｄ）を求めた。Ｄ値が６Ｄ以上の場合は殺菌効果が高く○、６Ｄ未満の場合は殺菌効果が低く×とした。尚、試験回数はｎ＝３で実施し、平均生残菌数を生残菌数として殺菌効果を評価した。
Ｄ＝ＬＯＧ（Ｎ０／Ｎ）
式中、Ｎ０は初菌数であり、Ｎは生残菌数である。【００２９】
４．エタノール配合による安定性評価
脱塩処理後に表２、表５に示す保存料を配合したカタラーゼ含有水溶液のカタラーゼ活性を、作成直後と２５℃で３か月保存した後、とで比較した。
２５℃−３か月保存後のカタラーゼ活性が、作成直後のカタラーゼ活性の９０％以上を保持した場合を◎、８０％以上を保持した場合を○、８０％以上保持できなかった場合を×とした。
尚、カタラーゼ活性の測定方法は以下のとおりである。
（カタラーゼ活性測定方法）
３０％過酸化水素水を５０ｍＭリン酸塩緩衝液（ｐＨ７）にて約８００倍に希釈した過酸化水素基質を試験管に５ｍｌ入れ、３０℃の恒温水槽で２０分間保温しておき、測定に適した濃度まで希釈（希釈倍数ｎ）したカタラーゼ含有水溶液を１ｍｌ加えてよく振りまぜ、直ちに３０℃の恒温水槽に入れて反応を開始させる。反応開始から正確に５分後に１Ｎ硫酸溶液２ｍｌを加えて高温水槽から取り出し、よく振りまぜて反応を止める。次いで１０％ヨウ化カリウム溶液を１ｍｌ、１％モリブデン酸アンモニウム溶液を１滴及び指示薬として０．５％デンプン試薬を５滴加え、この溶液を攪拌しながら、１／２００Ｎチオ硫酸ナトリウム溶液（定量用）で滴定し、サンプルの滴定値ＴＳを求めた。
また、ブランクの滴定値Ｔ０は、前述した１Ｎ硫酸溶液とカタラーゼ含有水溶液の順番を逆にし、前述と同様の操作により滴定して求めた。
カタラーゼ活性（Ｕ／ｍｌ）は、以下の計算方法により求めた。
カタラーゼ活性（Ｕ／ｍｌ）＝（Ｔ0−ＴＳ）×２．５＊×ｎ×ｆ／５（分）
＊１／２００Ｎチオ硫酸ナトリウム１ｍｌ＝２．５μＭ
過酸化水素
ｎ：希釈倍数
ｆ＝１／２００ Ｎチオ硫酸ナトリウムのファクター
Ｔ0 ＝ブランクの滴定値（ｍｌ）
ＴS ＝サンプルの滴定値（ｍｌ）【００３０】
５．総合評価
上記保存性評価が○で安定性評価が◎ならば、総合評価は◎であり、保存性評価が○で安定性評価が○ならば、総合評価は○であり、保存性評価又は安定性評価の何れか一方でも×ならば、総合評価×とした。【００３１】
(実施例１〜８及び比較例１)
カタラーゼ含有水溶液中のカタラーゼに対する塩化物イオンの重量割合の違いによる殺菌装置配管等への腐食性について調べた。脱塩処理を行ったカタラーゼ含有水溶液を用い、表１に示すように、カタラーゼ濃度１〜１０μｇ／ｍｌに対して塩化物イオン濃度が０〜１５μｇ／ｍｌになるよう塩化ナトリウムを配合し、評価を行った。結果を表１に示す。【００３２】
【表１】
2014178324.tif 000002
【００３３】
（実施例９〜１６）
脱塩処理を行ったカタラーゼ含有水溶液に保存料を配合した場合の保存性及び安定性について調べた。脱塩処理を行ったカタラーゼ含有水溶液をカタラーゼ濃度４ｍｇ／ｍｌ、塩化物イオン濃度０．４ｍｇ／ｍｌに調製した後、表２に示すように、デヒドロ酢酸ナトリウム０．１重量％，０．４重量％、パラオキシ安息香酸エステル０．０５重量％，０．３重量％、安息香酸ナトリウム０．０５重量％，０．３重量％、ポリリジン０．００５重量％，０．５重量％をそれぞれ配合し、評価を行った。結果を表２に示す。【００３４】
【表２】
2014178324.tif 000003
【００３５】
（実施例１７〜２４及び比較例２）
脱塩処理を行ったカタラーゼ含有水溶液に加熱殺菌処理及び／又は濾過処理を行った場合の保存性について調べた。脱塩処理を行ったカタラーゼ含有水溶液をカタラーゼ濃度４ｍｇ／ｍｌ、塩化物イオン濃度０．４ｍｇ／ｍｌに調製した後、表３に示すように、保存料であるデヒドロ酢酸ナトリウムを０重量％，０．４重量％を配合する前と後に、加熱殺菌処理及び／又は濾過処理を行い、評価を行った。結果を表３に示す。【００３６】
【表３】
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【００３７】
（実施例２５〜３６及び比較例３）
カタラーゼ含有水溶液を配合した殺菌組成液について、カタラーゼ含有水溶液中のカタラーゼに対する塩化物イオンの重量割合の違いによる殺菌装置配管等への腐食性及び殺菌効果について調べた。表４に示すように、過酢酸濃度を１０００〜１５０００ｐｐｍ程度、カタラーゼ含有水溶液の配合前の過酸化水素濃度を１７００〜２４０００ｐｐｍ程度になるよう調製した殺菌組成液に、殺菌組成液中のカタラーゼ濃度が１〜１０μｇ／ｍｌ、塩化物イオン濃度が０〜１２μｇ／ｍｌになるように、脱塩処理を行ったカタラーゼ含有水溶液と塩化ナトリウムを配合し、評価を行った。結果を表４に示す。【００３８】
【表４】
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【００３９】
（実施例３７〜５２）
脱塩処理を行ったカタラーゼ含有水溶液に保存料を配合した場合の保存性及び安定性について調べた。脱塩処理を行ったカタラーゼ含有水溶液をカタラーゼ濃度４ｍｇ／ｍｌ、塩化物イオン濃度０．４ｍｇ／ｍｌに調製した後、表５に示すように、デヒドロ酢酸ナトリウム０．１重量％，０．４重量％、パラオキシ安息香酸エステル０．０５重量％，０．３重量％、安息香酸ナトリウム０．０５重量％，０．３重量％、ポリリジン０．００５重量％，０．５重量％をそれぞれ配合すると共に、エタノール３重量％、５重量％、１０重量％を配合したカタラーゼ含有水溶液（実施例３７〜４６）、或いは、表５に示すように、デヒドロ酢酸ナトリウム０．１重量％、パラオキシ安息香酸エステル０．０５重量％、安息香酸ナトリウム０．０５重量％、ポリリジン０．００５重量％を組み合わせで配合すると共に、エタノール５重量％の配合又は無配合のカタラーゼ含有水溶液（４７〜５２）について評価を行った。結果を表５に示す。【００４０】
【表５】
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【産業上の利用可能性】
【００４１】
本発明のカタラーゼ含有水溶液は、水溶液中のカタラーゼに対する塩化物イオンの重量割合が１以下に低減されているため、ステンレス製の配管やタンク等の殺菌装置に用いられる殺菌剤に有効に利用できる。
また特定の食品保存料の添加、或いは加熱殺菌処理及び／又は濾過処理に賦することによって、塩化物イオンが低減された状態でカタラーゼ含有水溶液の保存性及び安定性が向上されているため、大量生産が可能であり、経済性に優れる。
更に本発明のカタラーゼ含有水溶液を添加して成る殺菌組成液は、カタラーゼにより過酸化水素を効率よく分解し、殺菌能力を維持できると共に、腐食の発生のおそれもないことから、経済性及び衛生性に優れ、大量生産される食品容器等の殺菌に好適に利用できる。
【国際調査報告】
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