(57)【要約】  ヒトを含む被験動物に対して負担が少なく、しかも、神経変性疾患の罹患の有無のみならず、将来的に神経変性疾患に罹患するリスクが高いか否かについても判定することのできる神経変性疾患の検査方法を提供する。  被験動物から採取した尿中のホモシステイン酸濃度と、前記被験動物から採取した血液中のホモシステイン酸濃度と、同血液中のホモシステイン及び／又はメチオニン濃度とを測定することとした。さらに、尿中のクレアチニン濃度と、血液中のクレアチニン濃度とを測定することなどにも特徴を有する。
2015060317.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験動物から採取した尿中のホモシステイン酸濃度と、前記被験動物から採取した血液中のホモシステイン酸濃度と、同血液中のホモシステイン及び／又はメチオニン濃度とを測定することを特徴とする神経変性疾患の検査方法。
【請求項２】
前記被験動物から採取した第１の血液中のホモシステイン濃度を、前記第１の血液の採取以前に前記被験動物より採取した第２の血液中のホモシステイン濃度と比較して、前記第１の血液中のホモシステイン濃度が、前記第２の血液中のホモシステイン濃度より大きくなったことにより、前記被験動物が神経変性疾患に罹患していない場合には、前記第１の血液を採取した時の前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクが、前記第２の血液を採取した時の前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクよりも高い第１の状態であると判定することを特徴とする請求項１に記載の神経変性疾患の検査方法。
【請求項３】
前記被験動物から採取した第１の血液中のメチオニン濃度を、前記第１の血液の採取以前に前記被験動物より採取した第２の血液中のメチオニン濃度と比較して、前記第１の血液中のメチオニン濃度が、前記第２の血液中のメチオニン濃度より大きくなったことにより、前記被験動物が神経変性疾患に罹患していない場合には、前記第１の血液を採取した時の前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクが、前記第２の血液を採取した時の前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクよりも高い第１の状態であると判定することを特徴とする請求項１又は請求項２に記載の神経変性疾患の検査方法。
【請求項４】
前記被験動物から採取した血液中のホモシステイン濃度を、前記被験動物と同じ動物で同性略同齢の異なる健常個体における血液中のホモシステイン濃度範囲と比較して、前記被験動物から採取した血液中のホモシステイン濃度が、前記健常個体におけるホモシステイン濃度範囲の上限を逸脱したことにより、前記被験動物が神経変性疾患に罹患していない場合には、前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクが、前記健常個体の神経変性疾患の罹患リスクよりも高い第１の状態であると判定することを特徴とする請求項１に記載の神経変性疾患の検査方法。
【請求項５】
前記被験動物から採取した血液中のメチオニン濃度を、前記被験動物と同じ動物で同性略同齢の異なる健常個体における血液中のメチオニン濃度範囲と比較して、前記被験動物から採取した血液中のメチオニン濃度が、前記健常個体におけるメチオニン濃度範囲の上限を逸脱したことにより、前記被験動物が神経変性疾患に罹患していない場合には、前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクが、前記健常個体の神経変性疾患の罹患リスクよりも高い第１の状態であると判定することを特徴とする請求項１又は請求項４に記載の神経変性疾患の検査方法。
【請求項６】
さらに、前記尿中のクレアチニン濃度と、前記血液中のクレアチニン濃度とを測定することを特徴とする請求項１〜５いずれか１項に記載の神経変性疾患の検査方法。
【請求項７】
前記被験動物から採取した第１の尿中のクレアチニン濃度と前記被験動物から採取した第１の血液中のクレアチニン濃度との比を、前記第１の尿の採取以前に前記被験動物より採取した第２の尿中のクレアチニン濃度と前記第１の血液の採取以前に前記被験動物より採取した第２の血液中のクレアチニン濃度との比と比較して、前記第１の尿中のクレアチニン濃度と前記第１の血液中のクレアチニン濃度との比における第１の血液中のクレアチニン濃度の割合が、前記第２の尿中のクレアチニン濃度と前記第２の血液中のクレアチニン濃度との比における前記第２の血液中のクレアチニン濃度の割合よりも大きくなったことにより、前記被験動物が神経変性疾患に罹患していない場合には、前記第１の尿及び血液を採取した時の前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクが、前記第２の尿及び血液を採取した時の前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクよりも高く、且つ、前記第１の状態よりも神経変性疾患の罹患リスクが高い第２の状態であると判定することを特徴とする請求項６に記載の神経変性疾患の検査方法。
【請求項８】
前記被験動物から採取した尿中のクレアチニン濃度と前記被験動物から採取した血液中のクレアチニン濃度との比における血液中のクレアチニン濃度の割合が、前記被験動物と同じ動物で同性略同齢の異なる健常個体における尿中のクレアチニン濃度と前記健常個体における血液中のクレアチニン濃度との比における血液中のクレアチニン濃度の割合の範囲の上限を逸脱したことにより、前記被験動物が神経変性疾患に罹患していない場合には、前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクが、前記健常個体の神経変性疾患の罹患リスクよりも高く、且つ、前記第１の状態よりも神経変性疾患の罹患リスクが高い第２の状態であると判定することを特徴とする請求項６に記載の神経変性疾患の検査方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、神経変性疾患の罹患の有無のみならず、将来的に神経変性疾患に罹患するリスクが高いか否かについても判定することのできる神経変性疾患の検査方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、アルツハイマー病（アルツハイマー型認知症）やレビー小体型認知症、脳血管性認知症などの変性性認知症は、神経変性疾患の代表的な症例として知られている。【０００３】
例えば、これら神経変性疾患のうち、アルツハイマー病は、過去の出来事の記憶が失われてしまったり、新しい出来事を記憶するのが困難となる等の病状を示すのが特徴的である。【０００４】
このような病状は、何等手立てを打たないままであると、経時的に徐々に進行することとなり、日常生活において極めて重大な支障を来すこととなってしまう場合がある。【０００５】
したがって、早期にこれら神経変性疾患の兆候を確認し、病状の進行に対して有効な手立てを打つことが重要である。【０００６】
そこで、患者を被験者として複数の質問を行うことにより、神経変性疾患の兆候や進行度合いを確認するテスト等が行われている（例えば、特許文献１参照。）。【０００７】
このようなテストによれば、早期にできるだけ簡単にアルツハイマー病の診断を行うことができるとしている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】２０１０−１８７９５９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
しかしながら、上記従来のテストでは、神経変性疾患の進行度合いを必ずしも迅速に把握するのが困難な場合があった。【００１０】
そこで、比較的迅速に神経変性疾患の進行度合いを把握可能な方法が望まれている。【００１１】
また、既に神経変性疾患に罹患しているか否かの判定のみならず、将来的に神経変性疾患に罹患する可能性が高いか否か、すなわち、神経変性疾患予備軍であるか否かについて知ることができれば、発症を遅らせたり回避すべく、日々の生活の中で何らかの対処を行うことも可能となる。【００１２】
それゆえ、神経変性疾患に罹患しているか否かの判定と共に、神経変性疾患の予備軍であるか否かについて知ることのできる神経変性疾患の検査方法が望まれている。【００１３】
また、神経変性疾患の研究においては、神経変性疾患の病態を示すマウスやラット等の非ヒト動物が用いられているが、これら研究用の非ヒト動物においても、容易且つ正確に神経変性疾患の兆候を確認することができれば、研究において極めて有用である。【００１４】
本発明は、斯かる事情に鑑みてなされたものであって、ヒトを含む被験動物に対して負担が少なく、しかも、神経変性疾患の罹患の有無のみならず、将来的に神経変性疾患に罹患するリスクが高いか否かについても判定することのできる神経変性疾患の検査方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
上記従来の課題を解決するために、請求項１に係る本発明では、神経変性疾患の検査方法において、被験動物から採取した尿中のホモシステイン酸濃度と、前記被験動物から採取した血液中のホモシステイン酸濃度と、同血液中のホモシステイン及び／又はメチオニン濃度とを測定することとした。【００１６】
また、請求項２に係る本発明では、請求項１に記載の神経変性疾患の検査方法において、前記被験動物から採取した第１の血液中のホモシステイン濃度を、前記第１の血液の採取以前に前記被験動物より採取した第２の血液中のホモシステイン濃度と比較して、前記第１の血液中のホモシステイン濃度が、前記第２の血液中のホモシステイン濃度より大きくなったことにより、前記被験動物が神経変性疾患に罹患していない場合には、前記第１の血液を採取した時の前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクが、前記第２の血液を採取した時の前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクよりも高い第１の状態であると判定することに特徴を有する。【００１７】
また、請求項３に係る本発明では、請求項１又は請求項２に記載の神経変性疾患の検査方法において、前記被験動物から採取した第１の血液中のメチオニン濃度を、前記第１の血液の採取以前に前記被験動物より採取した第２の血液中のメチオニン濃度と比較して、前記第１の血液中のメチオニン濃度が、前記第２の血液中のメチオニン濃度より大きくなったことにより、前記被験動物が神経変性疾患に罹患していない場合には、前記第１の血液を採取した時の前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクが、前記第２の血液を採取した時の前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクよりも高い第１の状態であると判定することに特徴を有する。【００１８】
また、請求項４に係る本発明では、請求項１に記載の神経変性疾患の検査方法において、前記被験動物から採取した血液中のホモシステイン濃度を、前記被験動物と同じ動物で同性略同齢の異なる健常個体における血液中のホモシステイン濃度範囲と比較して、前記被験動物から採取した血液中のホモシステイン濃度が、前記健常個体におけるホモシステイン濃度範囲の上限を逸脱したことにより、前記被験動物が神経変性疾患に罹患していない場合には、前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクが、前記健常個体の神経変性疾患の罹患リスクよりも高い第１の状態であると判定することに特徴を有する。【００１９】
また、請求項５に係る本発明では、請求項１又は請求項４に記載の神経変性疾患の検査方法において、前記被験動物から採取した血液中のメチオニン濃度を、前記被験動物と同じ動物で同性略同齢の異なる健常個体における血液中のメチオニン濃度範囲と比較して、前記被験動物から採取した血液中のメチオニン濃度が、前記健常個体におけるメチオニン濃度範囲の上限を逸脱したことにより、前記被験動物が神経変性疾患に罹患していない場合には、前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクが、前記健常個体の神経変性疾患の罹患リスクよりも高い第１の状態であると判定することに特徴を有する。【００２０】
また、請求項６に係る本発明では、請求項１〜５いずれか１項に記載の神経変性疾患の検査方法において、さらに、前記尿中のクレアチニン濃度と、前記血液中のクレアチニン濃度とを測定することに特徴を有する。【００２１】
また、請求項７に係る本発明では、請求項６に記載の神経変性疾患の検査方法において、前記被験動物から採取した第１の尿中のクレアチニン濃度と前記被験動物から採取した第１の血液中のクレアチニン濃度との比を、前記第１の尿の採取以前に前記被験動物より採取した第２の尿中のクレアチニン濃度と前記第１の血液の採取以前に前記被験動物より採取した第２の血液中のクレアチニン濃度との比と比較して、前記第１の尿中のクレアチニン濃度と前記第１の血液中のクレアチニン濃度との比における第１の血液中のクレアチニン濃度の割合が、前記第２の尿中のクレアチニン濃度と前記第２の血液中のクレアチニン濃度との比における前記第２の血液中のクレアチニン濃度の割合よりも大きくなったことにより、前記被験動物が神経変性疾患に罹患していない場合には、前記第１の尿及び血液を採取した時の前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクが、前記第２の尿及び血液を採取した時の前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクよりも高く、且つ、前記第１の状態よりも神経変性疾患の罹患リスクが高い第２の状態であると判定することに特徴を有する。【００２２】
また、請求項８に係る本発明では、請求項６に記載の神経変性疾患の検査方法において、前記被験動物から採取した尿中のクレアチニン濃度と前記被験動物から採取した血液中のクレアチニン濃度との比における血液中のクレアチニン濃度の割合が、前記被験動物と同じ動物で同性略同齢の異なる健常個体における尿中のクレアチニン濃度と前記健常個体における血液中のクレアチニン濃度との比における血液中のクレアチニン濃度の割合の範囲の上限を逸脱したことにより、前記被験動物が神経変性疾患に罹患していない場合には、前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクが、前記健常個体の神経変性疾患の罹患リスクよりも高く、且つ、前記第１の状態よりも神経変性疾患の罹患リスクが高い第２の状態であると判定することに特徴を有する。
【発明の効果】
【００２３】
請求項１に係る本発明によれば、被験動物から採取した尿中のホモシステイン酸濃度と、前記被験動物から採取した血液中のホモシステイン酸濃度と、同血液中のホモシステイン及び／又はメチオニン濃度とを測定することとしたため、ヒトを含む被験動物に対して負担が少なく、神経変性疾患の兆候を比較的正確且つ容易に確認することができ、しかも、神経変性疾患の罹患の有無のみならず、将来的に神経変性疾患に罹患するリスクが高いか否かについても判定することのできる神経変性疾患の検査方法を提供することができる。【００２４】
また、請求項２に係る本発明によれば、前記被験動物から採取した第１の血液中のホモシステイン濃度を、前記第１の血液の採取以前に前記被験動物より採取した第２の血液中のホモシステイン濃度と比較して、前記第１の血液中のホモシステイン濃度が、前記第２の血液中のホモシステイン濃度より大きくなったことにより、前記被験動物が神経変性疾患に罹患していない場合には、前記第１の血液を採取した時の前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクが、前記第２の血液を採取した時の前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクよりも高い第１の状態であると判定することとしたため、神経変性疾患が発症していない被験動物が神経変性疾患予備軍であるか否かについて、自らの過去の状態と比較してより的確に判定を行うことができる。【００２５】
また、請求項３に係る本発明によれば、前記被験動物から採取した第１の血液中のメチオニン濃度を、前記第１の血液の採取以前に前記被験動物より採取した第２の血液中のメチオニン濃度と比較して、前記第１の血液中のメチオニン濃度が、前記第２の血液中のメチオニン濃度より大きくなったことにより、前記被験動物が神経変性疾患に罹患していない場合には、前記第１の血液を採取した時の前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクが、前記第２の血液を採取した時の前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクよりも高い第１の状態であると判定することとしたため、神経変性疾患が発症していない被験動物が神経変性疾患予備軍であるか否かについて、自らの過去の状態と比較してより的確に判定を行うことができる。【００２６】
また、請求項４に係る本発明によれば、前記被験動物から採取した血液中のホモシステイン濃度を、前記被験動物と同じ動物で同性略同齢の異なる健常個体における血液中のホモシステイン濃度範囲と比較して、前記被験動物から採取した血液中のホモシステイン濃度が、前記健常個体におけるホモシステイン濃度範囲の上限を逸脱したことにより、前記被験動物が神経変性疾患に罹患していない場合には、前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクが、前記健常個体の神経変性疾患の罹患リスクよりも高い第１の状態であると判定することとしたため、神経変性疾患が発症していない被験動物が神経変性疾患予備軍であるか否かについて、健常個体と比較してより的確に判定を行うことができる。【００２７】
また、請求項５に係る本発明によれば、前記被験動物から採取した血液中のメチオニン濃度を、前記被験動物と同じ動物で同性略同齢の異なる健常個体における血液中のメチオニン濃度範囲と比較して、前記被験動物から採取した血液中のメチオニン濃度が、前記健常個体におけるメチオニン濃度範囲の上限を逸脱したことにより、前記被験動物が神経変性疾患に罹患していない場合には、前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクが、前記健常個体の神経変性疾患の罹患リスクよりも高い第１の状態であると判定することとしたため、神経変性疾患が発症していない被験動物が神経変性疾患予備軍であるか否かについて、健常個体と比較してより的確に判定を行うことができる。【００２８】
また、請求項６に係る本発明によれば、さらに、前記尿中のクレアチニン濃度と、前記血液中のクレアチニン濃度とを測定することとしたため、神経変性疾患予備軍の中でも、より神経変性疾患の罹患リスクの高い状態であることを判定することができる。【００２９】
また、請求項７に係る本発明によれば、前記被験動物から採取した第１の尿中のクレアチニン濃度と前記被験動物から採取した第１の血液中のクレアチニン濃度との比を、前記第１の尿の採取以前に前記被験動物より採取した第２の尿中のクレアチニン濃度と前記第１の血液の採取以前に前記被験動物より採取した第２の血液中のクレアチニン濃度との比と比較して、前記第１の尿中のクレアチニン濃度と前記第１の血液中のクレアチニン濃度との比における第１の血液中のクレアチニン濃度の割合が、前記第２の尿中のクレアチニン濃度と前記第２の血液中のクレアチニン濃度との比における前記第２の血液中のクレアチニン濃度の割合よりも大きくなったことにより、前記被験動物が神経変性疾患に罹患していない場合には、前記第１の尿及び血液を採取した時の前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクが、前記第２の尿及び血液を採取した時の前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクよりも高く、且つ、前記第１の状態よりも神経変性疾患の罹患リスクが高い第２の状態であると判定することとしたため、神経変性疾患が発症していない被験動物が神経変性疾患予備軍の中でもより神経変性疾患の罹患リスクの高い状態であるか否かについて、自らの過去の状態と比較してより的確に判定を行うことができる。【００３０】
また、請求項８に係る本発明によれば、前記被験動物から採取した尿中のクレアチニン濃度と前記被験動物から採取した血液中のクレアチニン濃度との比における血液中のクレアチニン濃度の割合が、前記被験動物と同じ動物で同性略同齢の異なる健常個体における尿中のクレアチニン濃度と前記健常個体における血液中のクレアチニン濃度との比における血液中のクレアチニン濃度の割合の範囲の上限を逸脱したことにより、前記被験動物が神経変性疾患に罹患していない場合には、前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクが、前記健常個体の神経変性疾患の罹患リスクよりも高く、且つ、前記第１の状態よりも神経変性疾患の罹患リスクが高い第２の状態であると判定することとしたため、神経変性疾患が発症していない被験動物が神経変性疾患予備軍の中でもより神経変性疾患の罹患リスクの高い状態であるか否かについて、健常個体と比較してより的確に判定を行うことができる。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】被験者の認知機能検査のスコアと尿中のホモシステイン酸濃度との関係を示したグラフである。
【図２】被験者の認知機能検査のスコアと血中のホモシステイン酸濃度との関係を示したグラフである。
【図３】被験者の尿中ホモシステイン酸濃度と血中ホモシステイン酸濃度との関係を示したグラフである。
【図４】抗原の合成過程を示した説明図である。
【図５】本実施形態に係るイムノクロマトキットの構成を示した説明図である。
【図６】ホモシステイン酸標品サンプルを測定したクロマトグラムである。
【図７】（ａ）は高濃度領域における検量線、（ｂ）は低濃度領域における検量線である。
【図８】尿サンプルを測定した際のクロマトグラムである。
【図９】血液サンプルを測定した際のクロマトグラムである。
【図１０】尿中ホモシステイン酸含量とMMSEスコアとの相関を示した説明図である。
【図１１】試験群女性又は男性被験者における相関を示した説明図である。
【図１２】血中ホモシステイン酸含量とMMSEスコアとの相関を示した説明図である。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
本発明は、被験動物の神経変性疾患の検査方法を提供するものであり、特に、神経変性疾患の罹患の有無のみならず、将来的に神経変性疾患に罹患するリスクが高いか否かについても判定することのできる神経変性疾患の検査方法を提供するものである。
【００３３】
本実施形態において説明する、神経変性疾患の検査方法、換言すれば、被験動物の神経変性疾患の進行度合いや神経変性疾患予備軍であるか否かを判定する方法（以下、単に検査方法ともいう。）は、本願発明者らの鋭意研究により得られた新たな知見に基づくものである。
【００３４】
そこで、発明の理解を容易とするために、まずはこれら新たな知見について図面を参照しながら説明する。
【００３５】
従来、神経変性疾患の発病原因は、一般に老人斑として知られているアミロイドβ４２が神経細胞の外に蓄積し、その後神経細胞内に繊維状の塊である神経原繊維であるタウと呼ばれるタンパクが蓄積し、その結果神経細胞の機能が障害されて神経細胞の死を迎えることにより起こると理解されている。
【００３６】
しかしながら、上述のアミロイドタンパクは、近年の研究によって健常者の脳内にも十分量蓄積していることが観察されている。
【００３７】
また、神経変性疾患の前駆症状であるMCI(Mild Cognitive Impairment)の患者や、神経変性疾患の患者においても、健常者と同様にアミロイドタンパクが蓄積していることが観察されている。
【００３８】
これらの事実から、なぜ健常者は、神経変性疾患の患者と同様にアミロイドタンパクが蓄積しているにもかかわらず、認知機能の正常性を保つことができるのかが問題となっている。
【００３９】
本願発明者は、この点について研究を重ねたところ、図１〜図３に示す結果が得られた。図１は被験者の認知機能検査（MMSE:Mini-Mental State Examination)のスコアと尿中のホモシステイン酸濃度との関係を示したグラフであり、図２は被験者の認知機能検査のスコアと血中のホモシステイン酸濃度との関係を示したグラフであり、図３は被験者の尿中ホモシステイン酸濃度と血中ホモシステイン酸濃度との関係を示したグラフである。
【００４０】
本発明者が尿中のホモシステイン酸濃度に着目したところ、図１に示すように、認知機能検査のスコアと尿中のホモシステイン酸濃度とは正の相関を示すことが分かった。
【００４１】
また、血中のホモシステイン酸濃度に着目したところ、図２に示すように、認知機能検査のスコアと血中のホモシステイン酸濃度とは逆の相関を示すことが分かった。
【００４２】
また、尿中及び血中のホモシステイン酸濃度を検討すると、図３に示すように、逆の相関を示すことが分かった。
【００４３】
これらの結果から、本発明者は、ホモシステイン酸が神経の変性において重要な役割を担っていることを見出した。
【００４４】
すなわち、神経変性疾患に罹患している患者は、症状の進行に伴って尿中へのホモシステイン酸の排出が抑制され、血中のホモシステイン酸濃度が上昇する。
【００４５】
血中のホモシステイン酸濃度が上昇すると、血液脳関門（blood-brain barrier)を突破し、ホモシステイン酸が脳内に侵入する。
【００４６】
脳内においてアミロイドタンパクが神経変性作用を生起するためには、グルタメート系のNMDA受容体の活性化が必要であり、脳内に侵入したホモシステイン酸は、NMDA受容体のアゴニスト、換言すればNMDA受容体を刺激する伝達物質として機能するということが分かった。
【００４７】
また、本願発明者は、医学研究者として日頃から数多くの神経変性疾患患者と接してきている。このような中で、患者の自宅などにおいて、例えば家族らによって簡便に神経変性疾患の進行度合いを確認し一次スクリーニングを行うことができれば、早期に疾患を発見し、早期の治療に役立つと考えた。
【００４８】
また、このようにして一次スクリーニングを終えた患者が来院した際には、より定量的に尿中又は血中のホモシステイン酸含量を測定することで、医師や医療従事者によって、患者の神経変性疾患の進行度合いを容易且つ速やかに把握することが可能となると考えた。
【００４９】
また、前述したように、これら神経変性疾患の研究現場では、多くの試験動物を用いて研究が行われているが、従来より提案されている神経変性疾患のバイオマーカは、脳や脊髄にアクセスが必要であるなど極めて侵襲的な方法によって得られるものが多く、試験結果へのバイアスとなる可能性について懸念があった。
【００５０】
本発明は、本願発明者が上述のような状況やデータを踏まえ、本実施形態に係る神経変性疾患の検査方法における神経変性疾患の罹患の有無の判定について完成するに至ったものである。
【００５１】
ところで、本明細書の課題でも述べたが、神経変性疾患の検査においては、既に神経変性疾患に罹患しているか否かの判定のみならず、将来的に神経変性疾患に罹患する可能性が高いか否か、すなわち、神経変性疾患予備軍であるか否かについても判定できるのが望ましい。
【００５２】
例えば被験動物がヒトである場合、変性神経疾患予備軍であることを知ることができれば、発症を遅らせたり回避すべく、日々の生活の中で何らかの対処を行うことも可能となる。
【００５３】
それゆえ、神経変性疾患に罹患しているか否かの判定と共に、神経変性疾患の予備軍であるか否かについて知ることのできる神経変性疾患の検査方法が望まれていた。
【００５４】
そこで本発明者は、このような状況に鑑み、神経変性疾患発症予備軍の検査について発症機序に着眼しつつ更に研究を進めた。
【００５５】
その結果、前述のホモシステイン酸は、ホモシステインやメチオニンが腎臓の尿細管に存在するシスタチオニン−β−シンターゼ（ＣＢＳ）に触媒されて生成することを突き止めた。
【００５６】
また、腎臓の機能が低下すると、本来であれば再吸収されないホモシステイン酸が再吸収されてしまい、血中におけるホモシステイン酸濃度が高まって神経変性疾患を助長することが分かった。
【００５７】
すなわち、血中のホモシステインやメチオニンの濃度が高い被験動物は、神経変性疾患を発症する可能性が高い状態（第１の状態）であるといえる。
【００５８】
また、この第１の状態に加えて、腎機能の低下が予見される場合や、実際に腎機能が低下している場合には、前述の第１の状態に比して更に神経変性疾患の発症リスクが高い状態（第２の状態）であるといえる。
【００５９】
これらのように、神経変性疾患の具体的な症状が発症していなくとも、血中のホモシステインやメチオニン濃度を測定し、必要に応じて更に腎機能状態を探ることにより、将来的に神経変性疾患に罹患するリスクが高いか否かについても判定することのできる神経変性疾患の検査方法を完成させた。
【００６０】
すなわち、本発明に係る神経変性疾患の検査方法では、被験動物から採取した尿中のホモシステイン酸濃度と、前記被験動物から採取した血液中のホモシステイン酸濃度と、同血液中のホモシステイン及び／又はメチオニン濃度とを測定することとした。
【００６１】
付言すれば、本発明は、被験動物から採取した尿中のホモシステイン酸濃度と、前記被験動物から採取した血液中のホモシステイン酸濃度と、同血液中のホモシステイン及び／又はメチオニン濃度との測定を含む、前記被験動物における神経変性疾患の状態を判定する方法についての概念も包含するものである。
【００６２】
更に付言するならば、本実施形態に係る神経変性疾患の検査方法は、被験動物から採取した尿中のホモシステイン酸濃度と、前記被験動物から採取した血液中のホモシステイン酸濃度とを測定する、神経変性疾患に罹患しているか否かの判定と、血液中のホモシステイン及び／又はメチオニン濃度とを測定する神経変性疾患予備軍であるか否かの判定とを行うものであると言える。
【００６３】
ここで神経変性疾患とは、神経細胞が障害を受けて神経死を招く疾患を総称するものである。このような疾患について具体的に示すならば、例えばヒトの場合、アルツハイマー病やレビー小体型認知症などの変性性認知症と解釈することができる。また、非ヒト動物の場合は、これらアルツハイマー病やレビー小体型認知症などの変性性認知症と同様の機序により発症する疾病であると解釈することができる。
【００６４】
また、本明細書において被験動物とは、ヒトと、非ヒト動物との両者を含む概念である。
【００６５】
前記被験動物より採取した尿を用いた神経変性疾患に罹患しているか否かの判定にあたっては、例えばキットを用いて行うことができる。また、前記被験動物より採取した血液を用いた神経変性疾患に罹患しているか否かの判定にあたっても、キットを用いて行うことができる。
【００６６】
すなわち、本明細書において示す被験動物が神経変性疾患に罹患しているか否かを判定するためのキットは、被験動物から得られた尿を用いるものと、被験動物から得られた血液を用いるものとがあるが、いずれも、尿中又は血中に含まれるホモシステイン酸の含量により判定を行う点に特徴を有している。
【００６７】
具体的には、被験動物より採取した尿を用いて神経変性疾患に罹患しているか否かを判定するためのキットでは、前記尿と接触させる尿接触手段と、前記尿接触手段に接触させた尿の中に含まれるホモシステイン酸を抗原とする抗ホモシステイン酸抗体と、前記抗ホモシステイン酸抗体の前記尿中のホモシステイン酸への結合量に応じて変化する標識手段と、を備え、前記尿中に含まれるホモシステイン酸に結合した前記抗ホモシステイン酸抗体が少ない程、前記標識手段の変化によって前記被験動物の神経変性疾患が進行していることを表示可能としたものであっても良い。
【００６８】
尿は、被験動物から採取するに際し、被験動物に対して非侵襲的であることから、神経変性疾患の進行度合いの評価を行うときの被験動物への負担を飛躍的に軽減することができる。
【００６９】
特に、被験動物がヒトである場合には、高齢者に対する負担を可及的防止することができる。また、被験動物が試験・研究等に用いられる非ヒト動物である場合には、非ヒト動物に対する侵襲の影響を排除しつつ、神経変性疾患の研究を行うことができる。なお、試験に供する尿は、比重補正等を施して他のサンプルと比較可能な状態としておくことが望ましい。
【００７０】
また、被験動物より採取した血液を用いて神経変性疾患に罹患しているか否かを判定するためのキットでは、前記血液又は前記血液より得られる血漿を接触させる接触手段と、前記接触手段に接触させた血液又は血漿中に含まれるホモシステイン酸を抗原とする抗ホモシステイン酸抗体と、前記抗ホモシステイン酸抗体の前記血液又は血漿中のホモシステイン酸への結合量に応じて変化する標識手段と、を備え、前記血液又は血漿中に含まれるホモシステイン酸に結合した前記抗ホモシステイン酸抗体が多い程、前記標識手段の変化によって前記被験動物の神経変性疾患が進行していることを表示可能としたものであっても良い。
【００７１】
ここで、接触手段に接触させるサンプルは、血液（全血）又は血漿のいずれであっても良い。特に血漿を用いれば、すでに血球等が除かれているため、より円滑に評価を行うことができる。また、血漿も、トリクロロ酢酸(TCA)等を用いて除タンパク処理を行えば、より評価に適したサンプルとすることができる。
【００７２】
これら尿や血液を用いて神経変性疾患に罹患しているか否かを判定するためのキットは、上述の構成を備えていれば特に限定されるものではなく、あらゆる形態にて提供されうるものである。例えば、後述する神経変性疾患予備軍であるか否かの判定を行うべく、ホモシステイン酸の検出に加えて、ホモシステインやメチオニン、クレアチニンの濃度を検出できるようにしても良いし、神経変性疾患予備軍であるか否かの判定のみを行うべく、ホモシステインやメチオニン、クレアチニンの濃度を検出できるようにしても良い。
【００７３】
このようなキットとして一例を示すとすれば、イムノクロマト法を採用したキットや、ELISA(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay)を採用したキットなどを挙げることができる。
【００７４】
例えば、イムノクロマト法を採用したキットとして尿や血液を用いて神経変性疾患に罹患しているか否かを判定するためのキットを実現した場合には、尿と接触させる尿接触手段や血液又は前記血液より得られる血漿を接触させる接触手段は、サンプルパッドの部分と解釈することができる。
【００７５】
また、イムノクロマト法を採用したキットの場合、尿や血液又は血漿中に含まれるホモシステイン酸を抗原とする抗ホモシステイン酸抗体は、コンジュゲートパッドの部分や、テストラインの部分に含まれることとなる。なお、神経変性疾患予備軍であるか否かの判定を行うキット、或いは両者同時に判定を行うキットにおけるホモシステインやメチオニン、クレアチニンについても同様である。
【００７６】
また、イムノクロマト法を採用したキットの場合、抗ホモシステイン酸抗体の尿中や血液又は血漿中のホモシステイン酸への結合量に応じて変化する標識手段としては、例えば、コンジュゲートパッドに含まれる抗ホモシステイン酸抗体に結合させた金コロイド等の標識物質やメンブレン、メンブレン上にライン状に配置した抗ホモシステイン酸抗体等からなる一連の表示（発色）システムと解することができる。なお、神経変性疾患予備軍であるか否かの判定を行うキット、或いは両者同時に判定を行うキットにおけるホモシステインやメチオニン、クレアチニンについても同様である。
【００７７】
このように、神経変性疾患に罹患しているか否かを判定するためのキットや、神経変性疾患予備軍であるか否かの判定を行うキット、或いは両者同時に判定を行うキットにおいてイムノクロマト法を採用した場合には、保存安定性や判定の容易性が良好であり、特別な装置を必要とすることなく被験動物の神経変性疾患の進行度合いを、被験動物より採取した尿や血液又は血漿を用いて判定することができる。
【００７８】
一方、ELISA法を採用したキットとして尿や血液を用いて神経変性疾患に罹患しているか否かを判定や、神経変性疾患予備軍であるか否かの判定を行うためのキットを実現した場合には、尿と接触させる尿接触手段や血液又は前記血液より得られる血漿を接触させる接触手段は、マイクロプレート等に形成されたウェル等と解釈することができる。
【００７９】
また、ELISA法を採用したキットの場合、尿や血液又は血漿中に含まれるホモシステイン酸を抗原とする抗ホモシステイン酸抗体は、ウェル底部や、一次抗体として備えられることとなる。なお、神経変性疾患予備軍であるか否かの判定を行うキット、或いは両者同時に判定を行うキットにおけるホモシステインやメチオニン、クレアチニンについても同様である。
【００８０】
また、ELISA法を採用したキットの場合、抗ホモシステイン酸抗体の尿中や血液又は血漿中のホモシステイン酸への結合量に応じて変化する標識手段としては、例えば、一次抗体又は二次抗体に結合させた酵素等の標識物質等と解することができる。なお、神経変性疾患予備軍であるか否かの判定を行うキット、或いは両者同時に判定を行うキットにおけるホモシステインやメチオニン、クレアチニンについても同様である。
【００８１】
このように、神経変性疾患に罹患しているか否かを判定するためのキットや、神経変性疾患予備軍であるか否かの判定を行うキット、或いは両者同時に判定を行うキットにおいてELISA法を採用した場合には、定量性を良好とすることができ、被験動物の神経変性疾患の進行度合いを、被験動物より採取した尿や血液又は血漿を用いて判定することができる。
【００８２】
上述してきたように、尿や血液を用いて神経変性疾患に罹患しているか否かを判定するためのキットや、神経変性疾患予備軍であるか否かの判定を行うキット、或いは両者同時に判定を行うキットによれば、ヒトを含む被験動物に対して負担が少なく、神経変性疾患の兆候や進行度合いを比較的正確且つ容易に確認可能なキットとすることができる。すなわち、本明細書中には、被験動物から採取した尿中又は血液中におけるホモシステイン酸を検出するための抗ホモシステイン酸抗体を含む、神経変性疾患の診断薬についての概念も含まれている。また、ホモシステインやメチオニン、クレアチニンについても検出可能として神経変性疾患予備軍であるか否かの判定に供することのできる神経変性疾患予備軍の診断薬についての概念も含まれている。
【００８３】
また、本明細書は、被験動物の神経変性疾患の進行度合いや神経変性疾患予備軍であるか否かを同被験動物より採取した尿や血液を用いて判定する方法についての概念も含んでいる。
【００８４】
すなわち、本実施形態に係る神経変性疾患の検査方法では、被験動物から採取した尿中及び／又は血液中のホモシステイン酸含量と、血液中のホモシステイン及び／又はメチオニン濃度とを調べることとしている。
【００８５】
本実施形態に係る神経変性疾患の検査方法を実施するにあたって行われる尿中及び／又は血液中のホモシステイン酸含量の測定は特に限定されるものではない。例えば、前述のキットを使用しても良く、また、各種クロマトを行うことにより定量しても良い。これは、神経変性疾患予備軍であるか否かの判定におけるホモシステインやメチオニン、クレアチニンについても同様である。
【００８６】
本実施形態に係る検査方法では、尿を用いて神経変性疾患に罹患しているか否かを判定するにあたっては、被験動物から採取した第１の尿中のホモシステイン酸含量を、前記第１の尿の採取以前に前記被験動物より採取した第２の尿中のホモシステイン酸含量と比較して、前記第１の尿中のホモシステイン酸含量が、健常個体における尿中のホモシステイン酸含量の適正範囲を逸脱しつつ、前記第２の尿中のホモシステイン酸含量より小さくなったことにより、その減少量が大きいほど前記被験動物の神経変性疾患が進行しているものと判定する。
【００８７】
このことは、先に示した図１及び図３の結果に基づくものであり、尿へのホモシステイン酸の排出量が抑制される程、脳細胞への障害が進み、神経変性疾患が進行することに由来している。
【００８８】
このように、尿を用いて神経変性疾患の進行度合いを判定することができれば、被験動物に対して極めて非侵襲的に、被験動物の神経変性疾患の進行度合いを評価・判定することが可能となる。
【００８９】
また、別の視点によれば、本明細書は、被験動物が神経変性疾患に罹患しているか否かを判定するに際して、前記被験動物より採取した第１の尿中におけるホモシステイン酸の含有量と前記第１の尿の採取以前に前記被験動物より採取した第２の尿中のホモシステイン酸含有量とを比較して前記被験動物に対して非侵襲的に神経変性疾患の進行度合いを判定するための、少なくとも前記第１の尿中におけるホモシステイン酸の含有量と、前記第２の尿中におけるホモシステイン酸の含有量との比が分かるデータを使用することについての概念も包含するものとも言える。
【００９０】
すなわち、上述のような尿中のホモシステイン酸のデータを神経変性疾患の進行度合いの判定に利用することにより、被験動物に対して極めて非侵襲的に、被験動物の神経変性疾患の進行度合いを評価・判定することが可能となるのである。
【００９１】
なお付言すれば、被験動物より採取した第１の尿中におけるホモシステイン酸の含有量と、第１の尿の採取以前に被験動物より採取した第２の尿中のホモシステイン酸含有量とを比較する場合にあっては、各サンプル中のホモシステイン酸含有比率が分かれば良く、必ずしも定量を必要としない。
【００９２】
例えば、各サンプルを高速液体クロマトグラフに供し、検量線と対比することなく（定量することなく）、ピーク面積同士を比較して、神経変性疾患の進行度合いを把握するようにしても良い。
【００９３】
すなわち、本明細書におけるホモシステイン酸含量とは、定量的な量をいうのは勿論のこと、比較対照サンプルに対して何倍などの比率についても含む概念である。
【００９４】
また、血液を用いて神経変性疾患に罹患しているか否かを判定する方法においては、被験動物から採取した第１の血液中のホモシステイン酸含量を、前記第１の血液の採取以前に前記被験動物より採取した第２の血液中のホモシステイン酸含量と比較して、前記第１の血液中のホモシステイン酸含量が、健常個体における血液中のホモシステイン酸含量の適正範囲を逸脱しつつ、前記第２の血液中のホモシステイン酸含量より大きくなったことにより、その増加量が大きいほど前記被験動物の神経変性疾患が進行しているものと判定することができる。
【００９５】
このことは、先に示した図２及び図３の結果に基づくものであり、血中にホモシステイン酸が多くなる程、脳細胞への障害が進み、神経変性疾患が進行することに由来している。
【００９６】
このように、血液を用いて神経変性疾患の進行度合いを判定することができれば、被験動物に対し、従来のバイオマーカーによる検査に比して非侵襲的に、被験動物の神経変性疾患の進行度合いを評価・判定することが可能となる。
【００９７】
また、別の視点によれば、本明細書は、被験動物の神経変性疾患の進行度合いを判定するに際して、前記被験動物より採取した第１の血液中におけるホモシステイン酸の含量と前記第１の血液の採取以前に前記被験動物より採取した第２の血液中のホモシステイン酸含量とを比較して神経変性疾患の進行度合いを判定するための、少なくとも前記第１の血液中におけるホモシステイン酸の含量と、前記第２の血液中のホモシステイン酸含量との比が分かるデータを使用することについての概念も含むものとも言える。
【００９８】
すなわち、上述のような血中のホモシステイン酸含量のデータを神経変性疾患の進行度合いを判定に利用することによっても、被験動物に対し、従来のバイオマーカーによる検査に比して非侵襲的に、被験動物の神経変性疾患の進行度合いを評価・判定することが可能となるのである。
【００９９】
また、上述した血液中に含まれるホモシステイン酸含量と、尿中に含まれるホモシステイン酸含量との両者を加味して、神経変性疾患の診断、検査等を検討するようにしても良い。
【０１００】
例えば、以下の工程（ａ）〜（ｄ）を含む、被験動物の神経変性疾患の検査法とすることで、より正確な神経変性疾患に罹患しているか否かの判定を行うことが可能となる。
（ａ）被験動物から尿及び血液を採取する工程；
（ｂ）前記尿中及び血液中のホモシステイン酸を検出する工程；
（ｃ）前記尿中のホモシステイン酸含量と、前記血液中のホモシステイン酸含量とを比較する工程；
（ｄ）比較結果に基づき、神経変性疾患に罹患しているか否かを判定する工程。
【０１０１】
このように、本明細書にて言及する神経変性疾患に罹患しているか否かの判定によれば、被験動物に対して負担が少なく、神経変性疾患の兆候を比較的正確且つ容易に神経変性疾患に罹患しているか否かを検査できる。
【０１０２】
付言すれば、本明細書は、被験動物より採取した血中又は尿中に含まれるホモシステイン酸を、神経変性疾患に罹患しているか否かの判定のためのバイオマーカーとして使用することについても提案するものであるとも言える。
【０１０３】
すなわち、ホモシステイン酸からなる、神経変性疾患に罹患しているか否かの判定のためのバイオマーカーや、被験者より採取された尿中又は血液中のホモシステイン酸量を指標とした神経変性疾患に罹患しているか否かの判定を行う検査法も含む。
【０１０４】
ここまで、神経変性疾患に罹患しているか否かの判定を中心に言及してきたが、次に、神経変性疾患予備軍であるか否かの判定を中心に説明する。
【０１０５】
本実施形態に係る神経変性疾患の検査方法では、神経変性疾患予備軍であるか否かの判定を行うべく、被験動物から採取した血液中のホモシステイン及び／又はメチオニン濃度を測定することとしている。したがって、ヒトを含む被験動物に対して負担が少なく、神経変性疾患の兆候を比較的正確且つ容易に確認することができ、しかも、神経変性疾患の罹患の有無のみならず、将来的に神経変性疾患に罹患するリスクが高いか否かについても判定することのできる神経変性疾患の検査方法を提供することができる。
【０１０６】
神経変性疾患予備軍であるか否かの判定に際しては、例えば、被験動物から採取した第１の血液中のホモシステイン濃度を、前記第１の血液の採取以前に前記被験動物より採取した第２の血液中のホモシステイン濃度と比較して、前記第１の血液中のホモシステイン濃度が、健常個体における血液中のホモシステイン濃度の適正範囲を逸脱しつつ前記第２の血液中のホモシステイン濃度より大きくなったことにより、前記被験動物が神経変性疾患に罹患していない場合には、前記第１の血液を採取した時の前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクが、前記第２の血液を採取した時の前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクよりも高い第１の状態であると判定するようにしても良い。なお、以下の説明において、このような過程で判断された第１の状態を「過去との比較における血中ホモシステイン濃度に由来する第１の状態」と称する。
【０１０７】
また、前記被験動物から採取した第１の血液中のメチオニン濃度を、前記第１の血液の採取以前に前記被験動物より採取した第２の血液中のメチオニン濃度と比較して、前記第１の血液中のメチオニン濃度が、健常個体における血液中のメチオニン濃度の適正範囲を逸脱しつつ前記第２の血液中のメチオニン濃度より大きくなったことにより、前記被験動物が神経変性疾患に罹患していない場合には、前記第１の血液を採取した時の前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクが、前記第２の血液を採取した時の前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクよりも高い第１の状態であると判定することもできる。なお、以下の説明において、このような過程で判断された第１の状態を「過去との比較における血中メチオニン濃度に由来する第１の状態」と称する。
【０１０８】
すなわち、まだ神経変性疾患の症状が発現していない被験動物を対象として神経変性疾患予備軍であるか否かの判定を行うに際し、この被験動物の過去の血中ホモシステイン濃度と現在の血中ホモシステイン濃度との比較や、過去の血中メチオニン濃度と現在の血中メチオニン濃度との比較を行って、現在の濃度が過去の濃度よりも高くなっている場合、過去に比して神経変性疾患の罹患リスクが高まっていると判定する。なお、現在の濃度が過去の濃度よりも高いか否かについては、その濃度の変動が有意であるか否かや、健常個体における通常の濃度範囲を逸脱するか否か等を加味して判断することができる。
【０１０９】
このような方法とすることにより、神経変性疾患が発症していない被験動物が神経変性疾患予備軍であるか否かについて、自らの過去の状態と比較してより的確に判定を行うことができる。
【０１１０】
また、上述のように、比較対照を自らの過去の状態とするのではなく、例えば、その動物種における一般的な血中ホモシステイン濃度範囲や、血中メチオニン濃度範囲を比較対照とすることもできる。
【０１１１】
すなわち、前記被験動物から採取した血液中のホモシステイン濃度を、前記被験動物と同じ動物で同性略同齢の異なる健常個体における血液中のホモシステイン濃度範囲と比較して、前記被験動物から採取した血液中のホモシステイン濃度が、前記健常個体におけるホモシステイン濃度範囲の上限を逸脱したことにより、前記被験動物が神経変性疾患に罹患していない場合には、前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクが、前記健常個体の神経変性疾患の罹患リスクよりも高い第１の状態であると判定することができる。なお、以下の説明において、このような過程で判断された第１の状態を「他との比較における血中ホモシステイン濃度に由来する第１の状態」と称する。
【０１１２】
また、前記被験動物から採取した血液中のメチオニン濃度を、前記被験動物と同じ動物で同性略同齢の異なる健常個体における血液中のメチオニン濃度範囲と比較して、前記被験動物から採取した血液中のメチオニン濃度が、前記健常個体におけるメチオニン濃度範囲の上限を逸脱したことにより、前記被験動物が神経変性疾患に罹患していない場合には、前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクが、前記健常個体の神経変性疾患の罹患リスクよりも高い第１の状態であると判定することもできる。なお、以下の説明において、このような過程で判断された第１の状態を「他との比較における血中メチオニン濃度に由来する第１の状態」と称する。
【０１１３】
ここで、「被験動物と同じ動物」とは、ヒトならばヒト、マウスならばマウス程度の意味合いである。勿論、ヒトにおいては人種別、より系統的に近い血縁者などと比較することも可能であるが、その場合、系統学的人類学という問題にも留意すべきである。
【０１１４】
また、「同性略同齢」とは、被験動物と同じ性（雌雄）であり、被験動物の生後の経過時間（日数、年数）とほぼ同じ経過時間であることを意味している。なお、略同齢の範囲については、その動物の寿命や生体変化、判定の意義等を考慮して適宜決定されるものであり、例えばヒトであれば１０年区切り（３０〜３９歳、４０〜４９才など）や、５年区切り（３０代前半、３０代後半など）、例えばマウスであれば同様に所定範囲の月齢などで決定することができる。
【０１１５】
また、「異なる健常個体」とは、前述の「被験動物と同じ動物」「同性略同齢」であって、被験動物ではない正常な生育状態にある他の個体を意味している。なお、「異なる健常個体」は、一個体であってもよく、複数個体、すなわち、「異なる健常個体群」であっても良い。
【０１１６】
また、ホモシステインやメチオニンの濃度範囲とは、前述の健常個体（又は健常個体群）が取りうる平均的な濃度範囲のことであり、ホモシステイン濃度範囲は６μM以下である。ただし、これらの濃度範囲も時代背景や食糧事情、医療技術、健康の捉え方の違いなどにより変動するものである。
【０１１７】
このように、その動物種における一般的な血中ホモシステイン濃度範囲や、血中メチオニン濃度範囲を比較対照として被験動物が神経変性疾患予備軍であるか否か判定を行うことができる。なお、上述した過去との比較における血中ホモシステイン濃度に由来する第１の状態や、過去との比較における血中メチオニン濃度に由来する第１の状態、他との比較における血中ホモシステイン濃度に由来する第１の状態、他との比較における血中メチオニン濃度に由来する第１の状態は、それぞれ由来の異なる第１の状態であるため、いずれか１つの理由によって第１の状態と判断された場合、健常個体に比べて神経変性疾患の罹患リスクが高いものの、必ずしも深刻な状態と判断される必要はない。これら由来の異なる第１の状態が複数合致した際に、その数に応じて神経変性疾患予備軍の深刻度合いを判断するようにしても良い。また、被験個体における血中ホモシステインや血中メチオニン濃度が他の異なる健常個体における濃度よりも高いか否かについては、その濃度の変動が有意であるか否かや、健常個体における通常の濃度範囲を逸脱するか否か等を加味して判断することができる。
【０１１８】
また、本実施形態に係る神経変性疾患の検査方法では、さらに、前記尿中のクレアチニン濃度と、前記血液中のクレアチニン濃度とを測定することとしても良い。血液中のクレアチニン濃度とを測定することにより、神経変性疾患予備軍の中でも、より神経変性疾患の罹患リスクの高い状態であることを判定することができる。
【０１１９】
例えば、前記被験動物から採取した第１の尿中のクレアチニン濃度と前記被験動物から採取した第１の血液中のクレアチニン濃度との比を、前記第１の尿の採取以前に前記被験動物より採取した第２の尿中のクレアチニン濃度と前記第１の血液の採取以前に前記被験動物より採取した第２の血液中のクレアチニン濃度との比と比較して、前記第１の尿中のクレアチニン濃度と前記第１の血液中のクレアチニン濃度との比における第１の血液中のクレアチニン濃度の割合が、前記第２の尿中のクレアチニン濃度と前記第２の血液中のクレアチニン濃度との比における前記第２の血液中のクレアチニン濃度の割合よりも大きくなったことにより、前記被験動物が神経変性疾患に罹患していない場合又は前記第１の状態である場合には、前記第１の尿及び血液を採取した時の前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクが、前記第２の尿及び血液を採取した時の前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクよりも高く、且つ、前記第１の状態よりも神経変性疾患の罹患リスクが高い第２の状態であると判定することができる。
【０１２０】
すなわち、まだ神経変性疾患の症状が発現していない被験動物を対象として神経変性疾患予備軍であるか否かの判定を行うに際し、この被験動物の過去の血中クレアチニン濃度の割合と、現在の尿中クレアチニン濃度の割合との比較を行って、現在の割合が過去の割合よりも高くなっている場合、過去に比して神経変性疾患の罹患リスクが高まっていると判定する。特に、被験動物が第１の状態の条件を満たしている場合には、極めて神経変性疾患の罹患リスクが高い状態であると判定することができる。神経変性疾患が発症していない被験動物が神経変性疾患予備軍の中でもより神経変性疾患の罹患リスクの高い状態であるか否かについて、自らの過去の状態と比較してより的確に判定を行うことができる。
【０１２１】
また、例えば、前記被験動物から採取した尿中のクレアチニン濃度と前記被験動物から採取した血液中のクレアチニン濃度との比における血液中のクレアチニン濃度の割合が、前記被験動物と同じ動物で同性略同齢の異なる健常個体における尿中のクレアチニン濃度と前記健常個体における血液中のクレアチニン濃度との比における血液中のクレアチニン濃度の割合の範囲の上限を逸脱したことにより、前記被験動物が神経変性疾患に罹患していない場合又は前記第１の状態である場合には、前記被験動物の神経変性疾患の罹患リスクが、前記健常個体の神経変性疾患の罹患リスクよりも高く、且つ、前記第１の状態よりも神経変性疾患の罹患リスクが高い第２の状態であると判定することもできる。
【０１２２】
この方法によっても、神経変性疾患が発症していない被験動物が神経変性疾患予備軍の中でもより神経変性疾患の罹患リスクの高い状態であるか否かについて、健常個体と比較してより的確に判定を行うことができる。
【０１２３】
なお、上述してきた説明のうち、第２の血液中のホモシステイン濃度や、第２の血液中のメチオニン濃度、第２の尿中のクレアチニン濃度、第２の血液中のクレアチニン濃度（以下、これらを総称して第２のデータという。）は、過去１回の検査より得られたデータであっても良いが、過去複数回行われた検査より得られたデータであるのがより好ましい。例えば、第２のデータを過去複数回行われた検査より得られたデータ群の平均値等とすることもできる。また、第１の血液中のホモシステイン濃度や、第１の血液中のメチオニン濃度、第１の尿中のクレアチニン濃度、第１の血液中のクレアチニン濃度（以下、これらを総称して第１のデータという。）が、第２のデータと比較した際に、統計学的に有意に変動したことにより第１の状態や第２の状態であることを判断することもできる。
【０１２４】
以下、本実施形態に係る神経変性疾患の検査方法について詳細に説明する。なお、説明の便宜上、まず、神経変性疾患に罹患しているか否かの判定に関連する項目について説明し、その後、神経変性疾患予備軍であるか否かの判定に関連する項目について説明する。
【０１２５】
〔１．抗ホモシステイン酸抗体の調製〕
まず、キットに使用する抗ホモシステイン酸抗体の調製を行った。
【０１２６】
（抗原の調製）
抗体を作らせる動物に接種するための抗原を図４に示す方法により調製した。まず、L-ホモシステイン酸(L-Homocysteic acid) 0.27mmolに過剰量のグルタルアルデヒド（Glutaraldehyde）2.7mmolを反応させ、図４（ａ）に示すように、ホモシステイン酸のアミノ基をグルタルアルデヒドで修飾した（HCA-GA）。
【０１２７】
次いで、得られたHCA-GAの過剰量をKLH（スカシ貝ヘモシアニン：keyhole limpet hemocyanin）上に複数存在するアミノ基と反応させて、図４（ｂ）に示すように、中間体を合成した。
【０１２８】
そして、この中間体を還元した後、ゲル濾過により低分子を除き、図４（ｃ）に示すように、抗原としてのKLHとホモシステイン酸の複合体(HCA-G-KLH)を得た。
【０１２９】
（抗体の調製）
つぎに、上記操作によって得られたHCA-G-KLHを抗原とし、ウサギを用いて免疫動物を作成し、２週間後に血液中にHCA-G-KLHに対する抗体を出現させた。
【０１３０】
このウサギより得た血清を精製することにより、ウサギ由来の第１抗ホモシステイン酸抗体を得た。また、同様の操作を行って、第１抗ホモシステイン酸抗体と競合しない第２抗ホモシステイン酸抗体を得た。
【０１３１】
〔２．キットの作成〕
次に、被験動物より採取した尿や血液又は前記血液より得られる血漿を用いて神経変性疾患に罹患しているか否かの判定を行うためのキットの作成を行った。本実施形態では、イムノクロマト法を採用したキットと、ELISA法を採用したキットの２種のキットの作成を行った。具体的には、それぞれ以下に示す通りである。
【０１３２】
（イムノクロマト法を利用したキットの作成）
図５に示すようなストリップ状のイムノクロマトキットＡの作成を行った。図５（ａ）は平面視におけるイムノクロマトキットＡを示した説明図であり、図５（ｂ）は側面視におけるイムノクロマトキットＡを示した説明図である。なお、イムノクロマトキットＡの構成は、従来より公知の一般的なイムノクロマトキットと略同様であるため、特徴的なホモシステイン酸抗体を用いている点以外については説明を省略する場合がある。
【０１３３】
図５（ａ）及び図５（ｂ）に示すように、イムノクロマトキットＡは、尿や血液又は血漿を検体として受け、同検体を均一に分配するためのサンプルパッド１０と、金コロイドにて標識した第１抗ホモシステイン酸抗体を含むコンジュゲートパッド１１と、テストライン１２ａ及びコントロールライン１２ｂが表示されるメンブレン１２と、検体の吸収材として機能する吸収パッド１３とで構成した。
【０１３４】
サンプルパッド１０は、尿を接触させる尿接触手段や、血液又は血漿を接触させる接触手段として機能する部位である。このサンプルパッド１０には、必要に応じてサンプル組成を変えるための試薬等を含浸させておいても良い。また、血液を接触させる接触手段として機能させる場合には、血球等をトラップさせるフィルターとしての役割を担うよう構成しても良い。
【０１３５】
テストライン１２ａの位置には、メンブレン１２上に第２ホモシステイン酸抗体が固定されており、尿や血液又は血漿の水分ともに展開される第１抗ホモシステイン酸抗体と結合したホモシステイン酸とサンドイッチ状に結合するよう構成した。
【０１３６】
また、コントロールライン１２ｂの位置には、メンブレン１２上に抗ウサギ抗体が固定されており、テストラインにてトラップされなかった第１抗ホモシステイン酸抗体が結合するように構成した。
【０１３７】
（ELISA法を利用したキットの作成）
ELISA法を利用した神経変性疾患に罹患しているか否かの判定キットは、透明な底壁を有するELISA法用９６ウェルのサンプルプレートと、第２抗ホモシステイン酸抗体を含有する第１抗体試薬と、第２抗ホモシステイン酸に結合可能な抗ウサギ抗体を含有する第２抗体試薬と、抗ウサギ抗体に結合した酵素により発色する発色物質を含有させた発色試薬とを備えている。
【０１３８】
サンプルプレートの各ウェルの底壁内面には、第１抗ホモシステイン酸抗体が固定されており、ウェル内に収容した尿や血液又は血漿中に含まれるホモシステイン酸を捕捉可能に構成している。なお、各ウェルは、尿を接触させる尿接触手段や、血液又は血漿を接触させる接触手段として機能する部位である。
【０１３９】
〔３．ヒトにおけるキットの機能試験〕
上述したイムノクロマトキットＡ及びELISA法を利用したキットについて、それぞれ尿、血液、血漿を接触手段に接触させて、ホモシステイン酸が検出可能か否かについて検討を行った。
【０１４０】
サンプルは、健常者、軽度のアルツハイマー病と診断された神経変性疾患患者（以下、軽度患者という。）、中程度のアルツハイマー病と診断された神経変性疾患患者（以下、中程度患者という。）、重度のアルツハイマー病と診断された神経変性疾患患者（以下、重度患者という。）から得た尿、血液（全血）、血漿を用いた。なお、各患者の軽度、中程度、重度の度合いは、MMSEスコアによって分類されたものである。
【０１４１】
まず、予め各サンプルに含まれるホモシステイン酸含量について、高速液体クロマトグラフィーにて定量を行った。
【０１４２】
その結果、尿中のホモシステイン酸濃度は、健常者において最も高く、症状が重篤となるに従い減少していた。
【０１４３】
また、血液（全血）、血漿中のホモシステイン酸濃度は、健常者において最も低く、症状が重篤となるに従って増加していた。
【０１４４】
これらのことから、尿中に含まれるホモシステイン酸が少ない程、被験動物の神経変性疾患が進行していること、及び、血液又は血漿中に含まれるホモシステイン酸が多い程、被験動物の神経変性疾患が進行していることが示された。
【０１４５】
次に、イムノクロマトキットＡに各サンプルを供して試験を行った。その結果、前述の高速液体クロマトグラフィーでの定量結果と同様の変化がテストラインにおいて観察された。
【０１４６】
次に、ELISA法を利用したキットに各サンプルを供して試験を行った。発色試薬の発色変化を吸光度計にて計測した結果、前述の高速液体クロマトグラフィーでの定量結果と同様の変化が観察された。
【０１４７】
これらの結果から、被験動物より採取した尿を用いて神経変性疾患に罹患しているか否かを判定するためのキットは、尿中に含まれるホモシステイン酸に結合した前記抗ホモシステイン酸抗体が少ない程、前記標識手段の変化によって前記被験動物の神経変性疾患が進行していることを表示可能であることが示された。
【０１４８】
また、被験動物より採取した血液を用いて神経変性疾患に罹患しているか否かの判定を行うためのキットは、血液又は血漿中に含まれるホモシステイン酸に結合した前記抗ホモシステイン酸抗体が多い程、前記標識手段の変化によって前記被験動物の神経変性疾患が進行していることを表示可能であることが示された。
【０１４９】
〔４．ラットにおけるキットの機能試験〕
上述の〔３．ヒトにおけるキットの機能試験〕と同様にラットを用いて非ヒト動物における試験を行った。
【０１５０】
サンプルは、健常ラット、軽度の神経変性疾患ラット（以下、軽度ラットという。）、中程度の神経変性疾患ラット（以下、中程度ラットという。）、重度神経変性疾患ラット（以下、重度ラットという。）から得た尿、血液（全血）、血漿を用いた。なお、各患者の軽度、中程度、重度の度合いは、水迷路実験による記憶障害判定によって分類されたものである。
【０１５１】
その結果、ヒトにおける試験と同様の結果が得られた。これらの結果から、被験非ヒト動物の神経変性疾患の進行度合いを同被験非ヒト動物より採取した尿を用いて判定するにあたり、被験非ヒト動物の尿中におけるホモシステイン酸の含有量と、前記被験非ヒト動物の神経変性疾患罹患前における尿中のホモシステイン酸含有量とを比較して、前記被験非ヒト動物の尿中におけるホモシステイン酸の含有量が前記神経変性疾患罹患前における尿中のホモシステイン酸含有量より小さくなったことにより、その減少量が大きいほど前記被験非ヒト動物の神経変性疾患が進行しているものと判定可能であることが示された。
【０１５２】
また、被験非ヒト動物の神経変性疾患の進行度合いを同被験非ヒト動物より採取した血液を用いて判定するにあたり、被験非ヒト動物の血中におけるホモシステイン酸の含有量と、前記被験非ヒト動物の神経変性疾患罹患前における血中のホモシステイン酸含有量とを比較して、前記被験非ヒト動物の血中におけるホモシステイン酸の含有量が前記神経変性疾患罹患前における血中のホモシステイン酸含有量より大きくなったことにより、その増加量が大きいほど前記被験非ヒト動物の神経変性疾患が進行しているものと判定可能であることが示された。
【０１５３】
〔ヒト試験〕
次に、ヒトより採取した尿及び血液により行われた試験について説明する。試験プロトコルは、順天堂大学倫理委員会によって承認され、また、被験者からは書面による同意を得た。被験者の詳細を表１に示す。
【表１】
2015060317.tif 000003
【０１５４】
これら被験者より尿及び血液の採取を行った。採取した尿サンプルは、防腐剤を添加することなく−20℃で冷凍保存した。
【０１５５】
（尿中ホモシステイン酸含量の測定）
各尿サンプルは、まず比重の測定を行い、比重を1.020に調節した。その後、ECD検知器およびカラム(Shim-pack XR-ODS、島津製作所製）を備えた高速液体クロマトグラフィー(HPLC)に供することで、各サンプル尿中のホモシステイン酸含量の測定を行った。
【０１５６】
なお、HPLCに供する各サンプルは、水で10倍希釈したものを使用した。また尿中のホモシステイン酸含量の測定は、ブラインド条件下で行った。図６はホモシステイン酸標品サンプルを測定したクロマトグラムであり、図７（ａ）は高濃度領域における検量線、図７（ｂ）は低濃度領域における検量線である。また、図８に尿サンプルを測定した際の典型的なクロマトグラムを示す。
【０１５７】
（血液中のホモシステイン酸含量の測定）
各血液サンプルもまた、前処理を行った上で、前述の尿サンプルと同様にHPLC法により、ホモシステイン酸含量の測定を行った。図９に血液サンプルを測定した際の典型的なクロマトグラムを示す。
【０１５８】
（データの解析）
統計的有意性は、スチューデントのt検定によって評価した。また、Spearman analysisにて相関性の分析を行った。
【０１５９】
（結果）
上記分析の結果、尿中のホモシステイン酸含量は、アルツハイマー病の患者のMMSEスコアーと関連することが確認された。すなわち、図１０（ａ）に示すように、MMSEスコアが低いほど、尿中におけるホモシステイン酸含量は減少する傾向が見られた。
【０１６０】
一方、対照群（コントロール群）では、及び図１０（ｂ）に示すように、尿中のホモシステイン酸含量と、MMSEスコアとの関係においては、関連を見出すことができなかった。
【０１６１】
特に、アルツハイマー病患者における尿中ホモシステイン酸含量とMMSEスコアとの相関性は、図１１（ａ）及び図１１（ｂ）に示すように、男性よりも女性においてより強まる傾向が見られた。
【０１６２】
また、前述の分析結果により、表２に示すように、試験群と対照群との間で尿中のホモシステイン酸含量について比較した場合、違いは統計的に有意(p<0.01)であるとの結果が得られた。
【表２】
2015060317.tif 000004
【０１６３】
また、尿中のホモシステイン酸含量と、血液サンプル中のホモシステイン酸含量とについて検討したところ、図３に示したように尿中のホモシステイン酸含量と、血液中のホモシステイン酸含量との間に逆の相関関係が示された(r=-0.6、p=0.007、n=19)。
【０１６４】
また、血液中のホモシステイン酸含量と、アルツハイマー病の患者のMMSEスコアーとの間には、図１２に示すように逆の相関関係(r=-0.79、p=0.0000518、n=19)があることが示された。
【０１６５】
上述してきたように、本発明に係る神経変性疾患の検査方法によれば、被験動物から採取した尿中及び／又は血液中のホモシステイン酸含量を調べることとしたため、ヒトを含む被験動物に対して負担が少なく、神経変性疾患に罹患しているか否かの判定を比較的正確且つ容易に確認することができる。
【０１６６】
〔神経変性疾患の検査１〕
次に、神経変性疾患の罹患の有無の判定及び神経変性疾患予備軍であるか否かの判定を行う神経変性疾患の検査を行った例について説明する。
【０１６７】
ＭＭＳＥスコアが３０点〜２５点の被験者８名、２４点〜１０点の被験者４名（以下、これら４名を総称してＣ群ともいう。）で構成される計１２名の被験者群に対し、神経変性疾患の罹患の有無の判定及び神経変性疾患予備軍であるか否かの判定を行う神経変性疾患の検査を行った。なお、ＭＭＳＥスコアが３０点〜２５点の被験者８名のうち、４名は健康に不安のない者（以下、これら４名を総称してＡ群ともいう。）であり、残り４名は物忘れなどが気になって医療機関を受診した者（以下、これら４名を総称してＢ群ともいう。）である。また、被験者は７０〜７９歳である。
【０１６８】
この被験者群に対し、１回目の採尿及び採血（第２の血液及び尿の採取）と、１回目から半年後に行われた２回目の採尿及び採血（第１の血液及び尿の採取）を行って、神経変性疾患の罹患の有無及び神経変性疾患予備軍であるか否かの判定を行った。１回目の採尿及び採血でのホモシステイン酸濃度と、２回目の採尿及び採血でのホモシステイン酸濃度を表３に示す。
【表３】
2015060317.tif 000005
【０１６９】
表３からもわかるように、Ａ群及びＢ群の被験者は、尿中ホモシステイン酸及び血中ホモシステイン酸濃度に顕著な変化は見られず、また、その値も健常者におけるホモシステイン酸濃度の範囲内（血中ホモシステイン酸濃度：0.16〜2.50μM、尿中ホモシステイン酸濃度：8.0〜25.0mM）であることから、神経変性疾患に罹患しているか否かの判定において、いずれも「罹患していない」と判定された。一方、Ｃ群の被験者は、ホモシステイン酸の濃度が１回目よりも２回目の方が高いか、又は、１回目と２回目のいずれかが健常者におけるホモシステイン酸濃度の範囲の上限を逸脱しており、いずれも「罹患している」と判定された。
【０１７０】
次に、表４に「罹患していない」と判定されたＡ群及びＢ群の被験者における血中ホモシステイン、メチオニン、クレアチニン、尿中クレアチニンの値を示す。なお、健常者における各成分濃度の範囲は、血中ホモシステイン濃度は6μM以下、血中メチオニン濃度は330〜440mM、血中クレアチニン濃度は0.4〜1.1mg/dl、尿中クレアチニン濃度は14〜26mg/kg/day、血中クレアチニンの割合は1.5〜7.9%である。
【表４】
2015060317.tif 000006
【０１７１】
表４からも分かるように、Ａ群の被験者はいずれもホモシステイン及びメチオニンの濃度に顕著な変化が見られず、また、血中クレアチニンの値と尿中クレアチニンの値の比率における血中クレアチニンの割合（血中クレアチニン／尿中クレアチニン×100）にも顕著な変化が見られないことから、近い将来において神経変性疾患に罹患するリスクは低い、すなわち、神経変性疾患予備軍ではないと判定された。
【０１７２】
また、Ｂ群の被験者のうち７番の被験者についても、ホモシステイン及びメチオニンの濃度に顕著な変化が見られず、また、血中クレアチニンの値と尿中クレアチニンの値の比率における血中クレアチニンの割合にも顕著な変化が見られないことから、近い将来において神経変性疾患に罹患するリスクは低い、すなわち、神経変性疾患予備軍ではないと判定された。
【０１７３】
一方、７番を除くＢ群の被験者（５番，６番，８番）は、ホモシステイン及び／又はメチオニンの濃度が、１回目に比して健常者における各成分濃度の範囲を逸脱しつつ上昇していることから、神経変性疾患予備軍であるものと判定された。しかしながら、５番と８番の被験者は、血中クレアチニンの値と尿中クレアチニンの値の比率における血中クレアチニンの割合にも顕著な変化が見られないことから、第１の状態であると判定された。
【０１７４】
６番の被験者は、血中クレアチニンの値と尿中クレアチニンの値の比率における血中クレアチニンの割合において、１回目に比して２回目の値が上昇していることから腎機能の低下が示唆されており、５番や８番の被験者に比して更に神経変性疾患の発症リスクが高い第２の状態にあると判定された。
【０１７５】
表５に、２回目の採血及び採尿から１年後（１回目の採血及び採尿から１年半後）にテストした各被験者のＭＭＳＥスコアを示す。
【表５】
2015060317.tif 000007
【０１７６】
表５からも分かるように、Ａ群の被験者は、２回目のテストにおいてもスコアに顕著な差異は認められなかった。また、Ｃ群の被験者も同様に、２回目のテストにおいてもスコアに顕著な差異は認められなかった。
【０１７７】
Ｂ群の被験者にあっては、予備軍ではないと判定された７番の被験者は、スコアに顕著な差異は認められなかったものの、５番、６番、８番の被験者にスコアが低下する変化が認められた。
【０１７８】
特に、６番の被験者においては、スコアの大幅な低下が認められ、５番や８番の被験者に比して、神経変性疾患の発症リスクが高かったことが裏付けられた。
【０１７９】
〔神経変性疾患の検査２〕（一般との比較）
上述の〔神経変性疾患の検査１〕は、自らの過去の状態と比較して神経変性疾患に罹患しているか否かの判定や、神経変性疾患予備軍であるか否かの判定を行ったが、ここでは、健常個体と比較して神経変性疾患に罹患しているか否かの判定や、神経変性疾患予備軍であるか否かの判定を行った例について述べる。
【０１８０】
本神経変性疾患の検査２における被験者群も、前述の神経変性疾患の検査１の被験者群と同様、Ａ群４名、Ｂ群４名、Ｃ群４名の計１２名（７０〜７９歳）に設定したが、各群男女２名ずつとした。表６に各被験者の尿中ホモシステイン酸濃度及び血中ホモシステイン酸濃度を示す。なお、健常者における各成分濃度の範囲は、男女ともに血中ホモシステイン酸濃度は0.16〜20μM、尿中ホモシステイン酸濃度は8〜25mMである。
【表６】
2015060317.tif 000008
【０１８１】
表６からも分かるように、Ａ群及びＢ群の被験者は、尿中ホモシステイン酸及び血中ホモシステイン酸濃度に一般的な濃度範囲からの逸脱は見られないことから、神経変性疾患に罹患しているか否かの判定において、いずれも「罹患していない」と判定された。一方、Ｃ群の被験者は、血中ホモシステイン酸の濃度が健常者におけるホモシステイン酸濃度の範囲の上限を逸脱しており、また、尿中ホモシステイン酸の濃度も健常者における尿中ホモシステイン酸濃度の範囲の下限を逸脱していたことから、いずれも「罹患している」と判定された。
【０１８２】
次に、表７に「罹患していない」と判定されたＡ群及びＢ群の被験者における血中ホモシステイン、メチオニン、クレアチニン、尿中クレアチニンの値を示す。なお、健常者における各成分濃度の範囲は、男女ともに血中ホモシステイン濃度は6μM以下、血中メチオニン濃度は330〜440mM、血中クレアチニン濃度は0.4〜1.1mg/dl、尿中クレアチニン濃度は14〜26mg/kg/day、血中クレアチニンの割合は1.5〜7.9%である。
【表７】
2015060317.tif 000009
【０１８３】
表７からも分かるように、Ａ群の被験者はいずれもホモシステイン及びメチオニンの濃度に逸脱は見られず、また、血中クレアチニンの値と尿中クレアチニンの値の比率における血中クレアチニンの割合にも逸脱は見られないことから、近い将来において神経変性疾患に罹患するリスクは低い、すなわち、神経変性疾患予備軍ではないと判定された。
【０１８４】
また、Ｂ群の被験者のうち６番の被験者についても、ホモシステイン及びメチオニンの濃度に逸脱は見られず、また、血中クレアチニンの値と尿中クレアチニンの値の比率における血中クレアチニンの割合にも逸脱は見られないことから、近い将来において神経変性疾患に罹患するリスクは低い、すなわち、神経変性疾患予備軍ではないと判定された。
【０１８５】
一方、６番を除くＢ群の被験者（５番，７番，８番）は、ホモシステイン及び／又はメチオニンの濃度が一般的な濃度範囲から逸脱していることから、神経変性疾患予備軍であるものと判定された。しかしながら、５番と７番の被験者は、血中クレアチニンの値と尿中クレアチニンの値の比率における血中クレアチニンの割合に逸脱が見られないことから、第１の状態であると判定された。
【０１８６】
８番の被験者は、血中クレアチニンの値と尿中クレアチニンの値の比率における血中クレアチニンの割合において、一般的な割合の範囲から逸脱していることから腎機能の低下が示唆されており、５番や７番の被験者に比して更に神経変性疾患の発症リスクが高い第２の状態にあると判定された。
【０１８７】
表８に、採血及び採尿から１年後にテストした各被験者のＭＭＳＥスコアを示す。
【表８】
2015060317.tif 000010
【０１８８】
表８からも分かるように、Ａ群の被験者は、２回目のテストにおいてもスコアに顕著な差異は認められなかった。また、Ｃ群の被験者も同様に、２回目のテストにおいてもスコアに顕著な差異は認められなかった。
【０１８９】
Ｂ群の被験者にあっては、予備軍ではないと判定された６番の被験者は、スコアに顕著な差異は認められなかったものの、５番、７番、８番の被験者にスコアが低下する変化が認められた。
【０１９０】
特に、８番の被験者においては、スコアの大幅な低下が認められ、５番や７番の被験者に比して、神経変性疾患の発症リスクが高かったことが裏付けられた。
【０１９１】
上述してきたように、本発明に係る神経変性疾患の検査方法によれば、被験動物から採取した尿中のホモシステイン酸濃度と、前記被験動物から採取した血液中のホモシステイン酸濃度と、同血液中のホモシステイン及び／又はメチオニン濃度とを測定することとしたため、ヒトを含む被験動物に対して負担が少なく、神経変性疾患の兆候を比較的正確且つ容易に確認することができ、しかも、神経変性疾患の罹患の有無のみならず、将来的に神経変性疾患に罹患するリスクが高いか否かについても判定することのできる神経変性疾患の検査方法を提供することができる。
【０１９２】
最後に、上述した各実施の形態の説明は本発明の一例であり、本発明は上述の実施の形態に限定されることはない。このため、上述した各実施の形態以外であっても、本発明に係る技術的思想を逸脱しない範囲であれば、設計等に応じて種々の変更が可能であることは勿論である。
【０１９３】
本実施形態では、第１抗ホモシステイン酸抗体及び第２抗ホモシステイン酸抗体の調製を行う際にウサギを用いることとしたが、これに限定されるものではない。抗体の調製に一般的に使用される動物であれば、いずれであっても良い。
【０１９４】
また、例えば乳牛を免疫動物として乳中に第１抗ホモシステイン酸抗体及び第２抗ホモシステイン酸抗体を出現させるようにすれば、これらの抗体を容易に大量調製することも可能である。なお、イムノクロマトキットＡのコントロールラインに固定される抗体や、ELISA法を利用したキットにおける２次抗体は、ホモシステイン酸抗体と結合可能とすべく、免疫動物の種類に応じて変更するのは言うまでもない。
【符号の説明】
【０１９５】
１０  サンプルパッド
１１  コンジュゲートパッド
１２  メンブレン
１２ａ  テストライン
１２ｂ  コントロールライン
１３  吸収パッド
Ａ  イムノクロマトキット
【図１】
2015060317.tif 000011
【図２】
2015060317.tif 000012
【図３】
2015060317.tif 000013
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2015060317.tif 000017
【図８】
2015060317.tif 000018
【図９】
2015060317.tif 000019
【図１０】
2015060317.tif 000020
【図１１】
2015060317.tif 000021
【図１２】
2015060317.tif 000022
【国際調査報告】
2015060317.tif 000023
2015060317.tif 000024
2015060317.tif 000025
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