(57)【要約】  ターゲット菌体に結合可能な結合分子を使用して、より簡便且つ迅速に、デバイスにより菌体を検出する新たな方法を提供する。  試料を菌濃縮用試薬中でインキュベートし、前記試料を蛍光標識化結合分子と反応させた後、蛍光偏光度を検出することで、前記ターゲットを検出する方法であり、これを、菌検出用具を用いて行う。前記菌検出用具は、試料採取用具を本体に装着した用具であり、前記試料採取用具は、採取部、前記本体との連結部を含み、前記本体は、試薬収容室、採取部収容室、前記試料採取用具との連結部を含み、前記試薬収容室と前記採取部収容室とは、独立している。前記試料採取用具と前記本体とは、前記準備工程後、前記インキュベート工程前に、前記採取部が前記採取部収容室に収容された状態で、前記試料採取用具の連結部と前記本体の連結部とにおいて連結され、前記準備工程後、前記試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記インキュベート工程および前記反応工程が行われる。
2016072115.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料を準備する準備工程、
前記試料を、菌濃縮用試薬中でインキュベートするインキュベート工程、
前記菌濃縮用試薬中の前記試料を、ターゲットの菌に結合する蛍光標識化結合分子と反応させる反応工程、および、
前記蛍光標識化結合分子の蛍光偏光度を検出することで、前記ターゲットを検出する検出工程を含み；
前記試料の準備工程は、試料採取用具を用いて行われ、
前記インキュベート工程、前記反応工程および前記検出工程は、前記試料採取用具を本体に装着した菌検出用具を用いて行われ；
前記試料採取用具は、試料を採取する採取部と、前記本体との連結部とを含み；
前記本体は、
前記菌濃縮用試薬および前記蛍光標識化結合分子を収容する試薬収容室と、
前記試料採取用具の前記採取部を収容する採取部収容室と、
前記試料採取用具との連結部とを含み、
前記試薬収容室と前記採取部収容室とは、独立しており；
前記試料採取用具と前記本体とは、前記準備工程後であり且つ前記インキュベート工程前に、前記試料採取用具の採取部が前記本体の採取部収容室に収容された状態で、前記試料採取用具の連結部と前記本体の連結部とにおいて連結され；
前記準備工程後、前記試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記インキュベート工程および前記反応工程を行うことを特徴とする菌体の検出方法。
【請求項２】
前記試薬収容室は、前記菌濃縮用試薬と前記蛍光標識化結合分子との混合試薬が収容された収容室であり；
前記準備工程後、前記試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記試薬採取用具の採取部が有する前記試料と前記混合試薬とを接触させ、前記インキュベート工程と前記反応工程とを同時に行う、請求項１記載の検出方法。
【請求項３】
使用時において、
前記本体は、前記試薬収容室が、前記採取部収容室の上方向または下方向に配置されている、請求項１または２記載の検出方法。
【請求項４】
前記試薬収容室は、独立して、第１試薬収容室と第２試薬収容室とを含み、
前記第１試薬収容室は、前記菌濃縮用試薬が収容された収容室であり、
前記第２試薬収容室は、前記蛍光標識化結合分子が収容された収容室であり、
前記第１試薬収容室および前記第２試薬収容室は、それぞれ、前記採取部収容室と独立しており；
前記準備工程後、前記第１試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記試薬採取用具の採取部が有する前記試料と前記菌濃縮用試薬とを接触させ、前記インキュベート工程を行い；
前記インキュベート工程後、前記第２試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記インキュベートした試料と前記蛍光標識化結合分子とを接触させ、前記反応工程を行う、請求項１記載の検出方法。
【請求項５】
使用時において、
前記本体は、前記第１試薬収容室および前記第２試薬収容室の双方が、前記採取部収容室の上方向または下方向に配置されている、請求項４記載の検出方法。
【請求項６】
使用時において、
前記本体は、前記第１試薬収容室および前記第２試薬収容室のうち、一方が、前記採取部収容室の上方向に配置され、他方が、前記採取部収容室の下方向に配置されている、請求項４記載の検出方法。
【請求項７】
さらに、前記検出工程の後、前記インキュベートした試料を、殺菌剤で処理する殺菌工程を含み；
前記本体は、さらに、前記殺菌剤を収容する殺菌剤収容室を含み、
前記試薬収容室および前記採取部収容室は、それぞれ、前記殺菌剤収容室と独立しており；
前記検出工程後、前記殺菌剤収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記殺菌工程を行う、請求項１から６のいずれか一項に記載の検出方法。
【請求項８】
使用時において、
前記本体は、前記殺菌剤収容室が、前記採取部収容室の上方向または下方向に配置されている、請求項７記載の検出方法。
【請求項９】
前記採取部収容室は、
前記インキュベート工程および前記反応工程を行う反応室であり、
さらに、検出領域を含み、
前記検出領域は、前記採取部収容室の内部における蛍光偏光度を、外部から検出可能な部材で形成され；
前記試薬収容室は、前記菌濃縮用試薬と前記蛍光標識化結合分子との混合試薬が収容された収容室であり；
前記準備工程後、前記試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記試薬収容室から前記採取部収容室に前記混合試薬を導入し、前記インキュベート工程と前記反応工程とを同時に行う、請求項１から３のいずれか一項に記載の検出方法。
【請求項１０】
前記採取部収容室は、
前記インキュベート工程および前記反応工程を行う反応室であり、
さらに、検出領域を含み、
前記検出領域は、前記採取部収容室の内部における蛍光偏光度を、外部から検出可能な部材で形成され；
前記試薬収容室は、独立して、第１試薬収容室と第２試薬収容室とを含み、
前記第１試薬収容室は、前記菌濃縮用試薬が収容された収容室であり、
前記第２試薬収容室は、前記蛍光標識化結合分子が収容された収容室であり、
前記第１試薬収容室および前記第２試薬収容室は、それぞれ、前記採取部収容室と独立しており；
前記準備工程後、前記第１試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記第１試薬収容室から前記採取部収容室に前記菌濃縮用試薬を導入し、前記インキュベート工程を行い；
前記インキュベート工程後、前記第２試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記第２試薬収容室から前記採取部収容室に、前記蛍光標識化結合分子を導入し、前記反応工程を行う、請求項１および４から６のいずれか一項に記載の検出方法。
【請求項１１】
さらに、前記検出工程の後、前記インキュベートした試料を、殺菌剤で処理する殺菌工程を含み；
前記本体は、さらに、前記殺菌剤を収容する殺菌剤収容室を含み、
前記試薬収容室および前記採取部収容室は、それぞれ、前記殺菌剤収容室と独立しており；
前記検出工程後、前記殺菌剤収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記殺菌剤収容室から前記採取部収容室に、前記殺菌剤を導入し、前記殺菌工程を行う、請求項１から１０のいずれか一項に記載の検出方法。
【請求項１２】
前記本体において、
連通させる一対の収容室は、連通用の中空管の挿入により連結され、
前記中空管は、一端に閉口部を有し；
前記中空管の閉口部により、一方の収容室の内部と他方の収容室の内部とが非連通となり、
前記中空管を軸方向の途中で切断して、前記閉口部を前記中空管から切り離すことによって、前記中空管の両端を開口させ、前記一方の収容室の内部と前記他方の収容室の内部とを連通させる、請求項９から１１のいずれか一項に記載の検出方法。
【請求項１３】
前記本体は、さらに、貫通孔形成手段を有し；
前記本体において、
連通させる一対の収容室は、
一方の収容室が、他方の収容室と連通可能な開口部を有し、
他方の収容室が、前記貫通孔形成手段により、開口部を形成可能であり；
前記貫通孔形成手段で、前記他方の収容室に貫通孔を形成することによって、前記一方の収容室の開口部と前記他方の収容室に形成した貫通孔とにより、前記一方の収容室の内部と前記他方の収容室の内部とを連通させる、請求項９から１１のいずれか一項に記載の検出方法。
【請求項１４】
前記本体において、
前記試薬収容部は、破壊可能なカプセルであり；
前記カプセルの破壊によって、前記試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させる、請求項９から１１のいずれか一項に記載の検出方法。
【請求項１５】
前記試薬収容室は、
前記インキュベート工程および前記反応工程を行う反応室であり、
前記菌濃縮用試薬と前記蛍光標識化結合分子との混合試薬が収容され、
さらに、検出領域を含み、
前記検出領域は、前記採取部収容室の内部における蛍光偏光度を、外部から検出可能な部材で形成され；
前記準備工程後、前記採取部収容室に収容された前記採取部を前記試薬収容室に収容することによって、前記試薬収容室の混合試薬に前記採取部を接触させ、前記インキュベート工程と前記反応工程とを同時に行う、請求項１から３のいずれか一項に記載の検出方法。
【請求項１６】
前記試薬収容室は、独立した第１試薬収容室と第２試薬収容室とを含み、
前記第１試薬収容室は、前記菌濃縮用試薬が収容された収容室であり、
前記第２試薬収容室は、前記蛍光標識化結合分子が収容された収容室であり、
前記第１試薬収容室および前記第２試薬収容室は、それぞれ、前記採取部収容室と独立しており；
前記第１試薬収容室は、前記インキュベート工程を行う反応室であり；
前記第２試薬収容室は、前記反応工程を行う反応室であり、
さらに、検出領域を含み、
前記検出領域は、前記第２試薬収容室の内部における蛍光偏光度を、外部から検出可能な部材で形成され；
前記準備工程後、前記採取部収容室に収容された前記採取部を前記第１試薬収容室に収容することによって、前記第１試薬収容室の前記菌濃縮用試薬に前記採取部を接触させ、前記インキュベート工程を行い；
前記インキュベート工程後、前記第１試薬収容室に収容された前記採取部を前記第２試薬収容室に収容することによって、前記第１試薬収容室の前記インキュベート後の菌濃縮試薬を前記第２試薬収容室に導入し、前記反応工程を行う、請求項１および４から６のいずれか一項に記載の検出方法。
【請求項１７】
さらに、前記検出工程の後、前記インキュベートした試料を、殺菌剤で処理する殺菌工程を含み；
前記本体は、さらに、前記殺菌剤を収容する殺菌剤収容室を含み、
前記試薬収容室および前記採取部収容室は、それぞれ、前記殺菌剤収容室と独立しており；
前記検出工程後、前記殺菌剤収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記殺菌剤収容室から前記採取部収容室に前記殺菌剤を導入し、前記殺菌工程を行う、請求項１５または１６記載の検出方法。
【請求項１８】
前記菌濃縮用試薬が、検出対象の菌体用の培地である、請求項１から１７のいずれか一項に記載の検出方法。
【請求項１９】
前記蛍光標識化結合分子において、ターゲットの菌に結合する結合分子が、アプタマー、低分子化合物、糖鎖、ペプチド、タンパク質、核酸、ウィルスおよびファージからなる群から選択された少なくとも一つである、請求項１から１８のいずれか一項に記載の検出方法。
【請求項２０】
前記タンパク質が、抗体である、請求項１９記載の検出方法。
【請求項２１】
試料採取用具と本体とを有し；
前記試料採取用具は、試料を採取する採取部と、前記本体との連結部とを含み；
前記本体は、
前記菌濃縮用試薬および前記蛍光標識化試薬を収容する試薬収容室と、
前記試料採取用具の前記採取部を収容する採取部収容室と、
前記試料採取用具との連結部とを含み、
前記試薬収容室と前記採取部収容室とは、独立しており；
前記試料採取用具と前記本体とは、前記試料採取用具の採取部が前記本体の採取部収容室に収容された状態で、前記試料採取用具の連結部と前記本体の連結部とにおいて連結され；
請求項１から２０のいずれか一項に記載の菌体の検出方法に使用されることを特徴とする菌検出用具。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、菌検出方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、大腸菌、サルモネラ菌等の微生物感染による食中毒の増加が問題となっている。この問題の大きな原因は、洗浄不良であることから、食品加工場等では、検査として菌体の検出を行うことが必須となっている。【０００３】
菌体の検出方法としては、例えば、棒の先端に綿球を有するスワブ式のデバイスを用いる方法がある（例えば、特許文献１、特許文献２）。この方法では、前記デバイスの先端で試料を採取し、前記先端を培地に浸して前記試料の培養を行い、さらに、試薬としてターゲット菌体の酵素に対する基質を添加して、その酵素反応を検出することで、間接的に、菌体が検出できる。【０００４】
しかしながら、前記酵素と前記基質との反応を検出する場合、培養工程において、様々な菌体が増殖すると、前記様々な菌体由来の酵素と基質とが反応し、前記ターゲット菌体を特異的に検出できない可能性がある。このため、前記培養工程において、前記ターゲット菌体を選択的に培養する必要があり、手間がかかる。【０００５】
他方、このような問題は、例えば、前記ターゲット菌体に特異的に結合する結合分子（例えば、抗体、アプタマー、結合性ペプチド、糖鎖、結合タンパク質等）を使用するＥＬＩＳＡ法およびＳＰＲ法を採用することによって、解消できる。しかしながら、これらの方法は、前記ターゲット菌体と前記結合分子とを結合させた後、未結合の前記結合分子を除去するための洗浄工程が必須である。このため、洗浄工程を前提としていない前述のようなスワブ式のデバイスでは、このような方法を実施できないという問題がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特許第３４３１８１２号
【特許文献２】特開２０１３−５１６１７９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
そこで、本発明の目的は、ターゲット菌体に結合可能な結合分子を使用して、より簡便且つ迅速に、デバイスにより菌体を検出する新たな方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の菌検出方法は、
試料を準備する準備工程、
前記試料を、菌濃縮用試薬中でインキュベートするインキュベート工程、
前記菌濃縮用試薬中の前記試料を、ターゲットの菌に結合する蛍光標識化結合分子と反応させる反応工程、および、
前記蛍光標識化結合分子の蛍光偏光度を検出することで、前記ターゲットを検出する検出工程を含み；
前記試料の準備工程は、試料採取用具を用いて行われ、
前記インキュベート工程、前記反応工程および前記検出工程は、前記試料採取用具を本体に装着した菌検出用具を用いて行われ；
前記試料採取用具は、試料を採取する採取部と、前記本体との連結部とを含み；
前記本体は、
前記菌濃縮用試薬および前記蛍光標識化結合分子を収容する試薬収容室と、
前記試料採取用具の前記採取部を収容する採取部収容室と、
前記試料採取用具との連結部とを含み、
前記試薬収容室と前記採取部収容室とは、独立しており；
前記試料採取用具と前記本体とは、前記準備工程後であり且つ前記インキュベート工程前に、前記試料採取用具の採取部が前記本体の採取部収容室に収容された状態で、前記試料採取用具の連結部と前記本体の連結部とにおいて連結され；
前記準備工程後、前記試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記インキュベート工程および前記反応工程を行うことを特徴とする。【０００９】
本発明の菌検出用具は、
試料採取用具と本体とを有し；
前記試料採取用具は、試料を採取する採取部と、前記本体との連結部とを含み；
前記本体は、
前記菌濃縮用試薬および前記蛍光標識化結合分子を収容する試薬収容室と、
前記試料採取用具の前記採取部を収容する採取部収容室と、
前記試料採取用具との連結部とを含み、
前記試薬収容室と前記採取部収容室とは、独立しており；
前記試料採取用具と前記本体とは、前記試料採取用具の採取部が前記本体の採取部収容室に収容された状態で、前記試料採取用具の連結部と前記本体の連結部とにおいて連結され；
前記本発明の検出方法に使用されることを特徴とする。
【発明の効果】
【００１０】
本発明では、ターゲットの菌に結合する結合分子として、蛍光標識化された結合分子を使用し、前記蛍光標識化結合分子と前記ターゲットとの結合により変化する前記蛍光標識化結合分子の蛍光偏光度を検出することで、前記ターゲットを検出する。この方法は、前述のような洗浄工程が不要であることから、本発明の検出方法によれば、前記試料採取用具と前記本体とを含む菌検出用具を使用して、簡便且つ迅速に、前記ターゲットの検出を行うことができる。したがって、本発明の菌の検出方法は、例えば、食品製造、食品管理、食品の流通等の分野において、極めて有用な方法といえる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、本発明の菌検出用具の一例であり、（Ａ）は、断面図であり、（Ｂ）は、使用時の状態を示す断面図である。
【図２】図２は、本発明の菌検出用具のその他の例であり、（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）は、前記菌検出用具のバリエーションを示す断面図である。
【図３】図３は、本発明の菌検出用具のその他の例であり、（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）および（Ｅ）は、前記菌検出用具のバリエーションを示す断面図である。
【図４】図４は、本発明の菌検出用具のその他の例を示す断面図である。
【図５】図５は、本発明の菌検出用具のその他の例であり、（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）は、前記菌検出用具のバリエーションを示す断面図である。
【図６】図６は、本発明の菌検出用具のその他の例を示す断面図である。
【図７】図７は、本発明の菌検出用具のその他の例であり、（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）は、前記菌検出用具のバリエーションを示す断面図である。
【図８】図８は、本発明の菌検出用具のその他の例を示す断面図である。
【図９】図９は、本発明の菌検出用具のその他の例であり、（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）は、前記菌検出用具のバリエーションを示す断面図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明の検出方法は、例えば、
前記試薬収容室が、前記菌濃縮用試薬と前記蛍光標識化結合分子との混合試薬が収容された収容室であり；
前記準備工程後、前記試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記試薬採取用具の採取部が有する前記試料と前記混合試薬とを接触させ、前記インキュベート工程と前記反応工程とを同時に行う。
【００１３】
本発明の検出方法は、例えば、使用時において、前記本体は、前記試薬収容室が、前記採取部収容室の上方向または下方向に配置されている。
【００１４】
本発明の検出方法は、例えば、前記試薬収容室は、独立して、第１試薬収容室と第２試薬収容室とを含み、
前記第１試薬収容室は、前記菌濃縮用試薬が収容された収容室であり、
前記第２試薬収容室は、前記蛍光標識化結合分子が収容された収容室であり、
前記第１試薬収容室および前記第２試薬収容室は、それぞれ、前記採取部収容室と独立しており；
前記準備工程後、前記第１試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記試薬採取用具の採取部が有する前記試料と前記菌濃縮用試薬とを接触させ、前記インキュベート工程を行い；
前記インキュベート工程後、前記第２試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記インキュベートした試料と前記蛍光標識化結合分子とを接触させ、前記反応工程を行う。
【００１５】
本発明の検出方法は、例えば、使用時において、前記本体は、前記第１試薬収容室および前記第２試薬収容室の双方が、前記採取部収容室の上方向または下方向に配置されている。
【００１６】
本発明の検出方法は、例えば、使用時において、前記本体は、前記第１試薬収容室および前記第２試薬収容室のうち、一方が、前記採取部収容室の上方向に配置され、他方が、前記採取部収容室の下方向に配置されている。
【００１７】
本発明の検出方法は、例えば、さらに、前記検出工程の後、前記インキュベートした試料を、殺菌剤で処理する殺菌工程を含み；
前記本体は、さらに、前記殺菌剤を収容する殺菌剤収容室を含み、
前記試薬収容室および前記採取部収容室は、それぞれ、前記殺菌剤収容室と独立しており；
前記検出工程後、前記殺菌剤収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記殺菌工程を行う。
【００１８】
本発明の検出方法は、例えば、使用時において、前記本体は、前記殺菌剤収容室が、前記採取部収容室の上方向または下方向に配置されている。
【００１９】
本発明の検出方法は、例えば、
前記採取部収容室は、
前記インキュベート工程および前記反応工程を行う反応室であり、
さらに、検出領域を含み、
前記検出領域は、前記採取部収容室の内部における蛍光偏光度を、外部から検出可能な部材で形成され；
前記試薬収容室は、前記菌濃縮用試薬と前記蛍光標識化結合分子との混合試薬が収容された収容室であり；
前記準備工程後、前記試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記試薬収容室から前記採取部収容室に前記混合試薬を導入し、前記インキュベート工程と前記反応工程とを同時に行う。
【００２０】
本発明の検出方法は、例えば、
前記採取部収容室は、
前記インキュベート工程および前記反応工程を行う反応室であり、
さらに、検出領域を含み、
前記検出領域は、前記採取部収容室の内部における蛍光偏光度を、外部から検出可能な部材で形成され；
前記試薬収容室は、独立して、第１試薬収容室と第２試薬収容室とを含み、
前記第１試薬収容室は、前記菌濃縮用試薬が収容された収容室であり、
前記第２試薬収容室は、前記蛍光標識化結合分子が収容された収容室であり、
前記第１試薬収容室および前記第２試薬収容室は、それぞれ、前記採取部収容室と独立しており；
前記準備工程後、前記第１試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記第１試薬収容室から前記採取部収容室に前記菌濃縮用試薬を導入し、前記インキュベート工程を行い；
前記インキュベート工程後、前記第２試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記第２試薬収容室から前記採取部収容室に、前記蛍光標識化結合分子を導入し、前記反応工程を行う。
【００２１】
本発明の検出方法は、例えば、さらに、前記検出工程の後、前記インキュベートした試料を、殺菌剤で処理する殺菌工程を含み；
前記本体は、さらに、前記殺菌剤を収容する殺菌剤収容室を含み、
前記試薬収容室および前記採取部収容室は、それぞれ、前記殺菌剤収容室と独立しており；
前記検出工程後、前記殺菌剤収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記殺菌剤収容室から前記採取部収容室に、前記殺菌剤を導入し、前記殺菌工程を行合う。
【００２２】
本発明の検出方法は、例えば、前記本体において、
連通させる一対の収容室は、連通用の中空管の挿入により連結され、
前記中空管は、一端に閉口部を有し；
前記中空管の閉口部により、一方の収容室の内部と他方の収容室の内部とが非連通となり、
前記中空管を軸方向の途中で切断して、前記閉口部を前記中空管から切り離すことによって、前記中空管の両端を開口させ、前記一方の収容室の内部と前記他方の収容室の内部とを連通させる。
【００２３】
本発明の検出方法は、例えば、
前記本体は、さらに、貫通孔形成手段を有し；
前記本体において、
連通させる一対の収容室は、
一方の収容室が、他方の収容室と連通可能な開口部を有し、
他方の収容室が、前記貫通孔形成手段により、開口部を形成可能であり；
前記貫通孔形成手段で、前記他方の収容室に貫通孔を形成することによって、前記一方の収容室の開口部と前記他方の収容室に形成した貫通孔とにより、前記一方の収容室の内部と前記他方の収容室の内部とを連通させる。
【００２４】
本発明の検出方法は、例えば、前記本体において、
前記試薬収容部は、破壊可能なカプセルであり；
前記カプセルの破壊によって、前記試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させる。
【００２５】
本発明の検出方法は、例えば、
前記試薬収容室は、
前記インキュベート工程および前記反応工程を行う反応室であり、
前記菌濃縮用試薬と前記蛍光標識化結合分子との混合試薬が収容され、
さらに、検出領域を含み、
前記検出領域は、前記採取部収容室の内部における蛍光偏光度を、外部から検出可能な部材で形成され；
前記準備工程後、前記採取部収容室に収容された前記採取部を前記試薬収容室に収容することによって、前記試薬収容室の混合試薬に前記採取部を接触させ、前記インキュベート工程と前記反応工程とを同時に行う。
【００２６】
本発明の検出方法は、例えば、
前記試薬収容室は、独立した第１試薬収容室と第２試薬収容室とを含み、
前記第１試薬収容室は、前記菌濃縮用試薬が収容された収容室であり、
前記第２試薬収容室は、前記蛍光標識化結合分子が収容された収容室であり、
前記第１試薬収容室および前記第２試薬収容室は、それぞれ、前記採取部収容室と独立しており；
前記第１試薬収容室は、前記インキュベート工程を行う反応室であり；
前記第２試薬収容室は、前記反応工程を行う反応室であり、
さらに、検出領域を含み、
前記検出領域は、前記第２試薬収容室の内部における蛍光偏光度を、外部から検出可能な部材で形成され；
前記準備工程後、前記採取部収容室に収容された前記採取部を前記第１試薬収容室に収容することによって、前記第１試薬収容室の前記菌濃縮用試薬に前記採取部を接触させ、前記インキュベート工程を行い；
前記インキュベート工程後、前記第１試薬収容室に収容された前記採取部を前記第２試薬収容室に収容することによって、前記第１試薬収容室の前記インキュベート後の菌濃縮試薬を前記第２試薬収容室に導入し、前記反応工程を行う。
【００２７】
本発明の検出方法は、例えば、さらに、前記検出工程の後、前記インキュベートした試料を、殺菌剤で処理する殺菌工程を含み；
前記本体は、さらに、前記殺菌剤を収容する殺菌剤収容室を含み、
前記試薬収容室および前記採取部収容室は、それぞれ、前記殺菌剤収容室と独立しており；
前記検出工程後、前記殺菌剤収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記殺菌剤収容室から前記採取部収容室に前記殺菌剤を導入し、前記殺菌工程を行う。
【００２８】
本発明の検出方法は、例えば、前記菌濃縮用試薬が、検出対象の菌体用の培地である。
【００２９】
本発明の検出方法は、例えば、前記蛍光標識化結合分子において、ターゲットの菌に結合する結合分子が、アプタマー、低分子化合物、糖鎖、ペプチド、タンパク質、核酸、ウィルスおよびファージからなる群から選択された少なくとも一つである。
【００３０】
本発明の検出方法は、例えば、前記タンパク質が、抗体である。
【００３１】
［１．菌検出方法］
本発明の検出方法について、以下に、具体的に説明する。
【００３２】
本発明の検出方法は、前述のように、試料を準備する準備工程、
前記試料を、菌濃縮用試薬中でインキュベートするインキュベート工程、
前記菌濃縮用試薬中の前記試料を、ターゲットの菌に結合する蛍光標識化結合分子と反応させる反応工程、および、
前記蛍光標識化結合分子の蛍光偏光度を検出することで、前記ターゲットを検出する検出工程を含み；
前記試料の準備工程は、試料採取用具を用いて行われ、
前記インキュベート工程、前記反応工程および前記検出工程は、前記試料採取用具を本体に装着した菌検出用具を用いて行われ；
前記試料採取用具は、試料を採取する採取部と、前記本体との連結部とを含み；
前記本体は、
前記菌濃縮用試薬および前記蛍光標識化結合分子を収容する試薬収容室と、
前記試料採取用具の前記採取部を収容する採取部収容室と、
前記試料採取用具との連結部とを含み、
前記試薬収容室と前記採取部収容室とは、独立しており；
前記試料採取用具と前記本体とは、前記準備工程後であり且つ前記インキュベート工程前に、前記試料採取用具の採取部が前記本体の採取部収容室に収容された状態で、前記試料採取用具の連結部と前記本体の連結部とにおいて連結され；
前記準備工程後、前記試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記インキュベート工程および前記反応工程を行うことを特徴とする。
【００３３】
本発明において、蛍光偏光度の検出による、前記ターゲットの検出は、例えば、蛍光偏光法に基づく。前記蛍光偏光法は、一般に、偏光励起光を標識物質に照射した際、前記標識物質から発せられる蛍光が、前記標識物質で標識された分子の分子量に応じて異なった偏光度を示すという特性に基づく測定方法である。本発明においては、前記蛍光標識物質で前記結合分子を標識化した前記蛍光標識化結合分子を使用しているため、前記蛍光偏光法により、前記ターゲットと前記蛍光標識化結合分子との結合を検出できる。具体的には、前記蛍光標識化結合分子は、前記ターゲットと未結合の状態と、前記ターゲットと結合した状態とを比較した場合、前者は、相対的に分子量が小さいため、相対的に蛍光偏光度が低く、一方、後者は、相対的に分子量が大きいため、相対的に蛍光偏光度が高い。このため、例えば、前記試料と接触させていない前記蛍光標識化結合分子の蛍光偏光度と、前記試料と接触させた前記蛍光標識化結合分子の蛍光偏光度とを比較することで、前記ターゲットと前記蛍光標識化結合分子との結合を検出できる。また、前記ターゲットと未結合の前記蛍光標識化結合分子および前記ターゲットと結合した前記蛍光標識化結合分子の少なくとも一方の蛍光偏光度を評価基準として、前記試料と接触させた前記蛍光標識化結合分子の蛍光偏光度を評価することでも、前記ターゲットと前記蛍光標識化結合分子との結合を検出できる。
【００３４】
本発明において、前記準備工程は、試料を準備する工程である。本発明において、前記試料の種類は、特に制限されない。前記試料は、例えば、生体由来、飲食品由来、環境由来等の試料があげられる。前記生体は、特に制限されず、例えば、ヒト、ウシ、ブタ、ヒツジ、マウス、ラット、ウサギ、ウマ等の非ヒト哺乳類、鳥類、魚類等の動物の生体があげられる。前記生体由来の試料は、例えば、排泄物、体液、皮膚、肉、粘膜、体毛等があげられる。前記飲食品由来の試料は、例えば、飲料、食品、食品原料等があげられる。前記環境由来の試料は、例えば、生物、水、土壌、大気等があげられる。前記水試料は、例えば、地下水、河川水、海水、生活排水等があげられる。また、前記環境由来の試料は、例えば、食品加工場、調理場等における付着物があげられる。
【００３５】
本発明において、検出対象の菌は、特に制限されず、例えば、リステリア属、サルモネラ属、病原性大腸菌、黄色ブドウ球菌、カンピロバクター属、ビブリオ属、ウェルシュ属、コレラ菌、インフルエンザ菌等があげられる。
【００３６】
また、本発明において、検出対象は、例えば、菌そのものには制限されず、菌由来の物質であってもよい。本発明において、前記菌を特定可能な前記菌由来の物質を検出対象とすることで、前記菌由来の物質の検出により、例えば、間接的に、前記物質により特定される菌を検出することができる。前記菌由来の物質は、例えば、前記菌由来の分泌物、前記菌の内在性の物質等があげられる。この場合、本発明は、例えば、前記菌由来の物質に結合する結合分子を使用することが好ましい。
【００３７】
本発明において、前記インキュベート工程は、前記試料を、菌濃縮用試薬中でインキュベートする工程である。本発明において、菌の濃縮とは、例えば、培地中で菌を培養し、前記菌を増殖させることによる濃縮があげられる。前記菌濃縮用試薬とは、例えば、ターゲットの菌を増殖するための培地があげられる。前記培地の種類は、特に制限されず、例えば、ターゲットの菌に応じて適宜設定できる。なお、本発明の場合、前記ターゲットに結合する前記蛍光標識化結合分子を使用して、前記ターゲットを検出できることから、前記培地は、例えば、前記ターゲットを特異的に増殖する培地の他、種々の菌に汎用できる培地であってもよい。
【００３８】
前記インキュベート工程の条件は、特に制限されず、例えば、前記試料の種類、前記ターゲットの種類に応じて適宜決定できる。本発明の場合、前述のような理由から、例えば、前記ターゲットを特異的に増殖する条件には制限されない。
【００３９】
本発明において、前記反応工程は、前記菌濃縮用試薬中の前記試料を、ターゲットの菌に結合する蛍光標識化結合分子と反応させる工程である。本発明において、前記インキュベート工程と前記反応工程とは、例えば、同時に行ってもよいし、前記インキュベート工程の後に、前記反応工程を行ってもよい。前者の場合、例えば、前記菌濃縮用試薬と前記蛍光標識化結合分子とを混合した混合試薬を使用して、前記両工程を行ってもよいし、前記菌濃縮用試薬および前記蛍光標識化結合分子を、順不同で前記試料と接触させてから、前記両工程を行ってもよい。後者の場合、例えば、前記菌濃縮用試薬と前記試料とを接触させて前記インキュベート工程を行った後、さらに、前記試料と前記蛍光標識化結合分子とを接触させて前記反応工程を行うことができる。以下、前記混合試薬を使用する形態を、「１試薬系」ともいい、前記菌濃縮用試薬および前記蛍光標識化結合分子を独立して使用する形態を、「２試薬系」ともいう。
【００４０】
前記蛍光標識化結合分子は、前記ターゲットに結合する結合分子が、蛍光物質で標識化されている。前記結合分子は、前記ターゲットに結合できればよく、特に制限されず、例えば、前記ターゲットの種類に応じて適宜決定できる。
【００４１】
前記結合分子の具体例は、例えば、アプタマー、低分子化合物、糖鎖、ペプチド、タンパク質、核酸、ウィルスおよびファージ等があげられる。前記タンパク質は、例えば、抗体が例示できる。前記アプタマーは、例えば、前記ターゲットに結合する核酸分子であり、例えば、ＲＮＡ、ＤＮＡ、ＲＮＡとＤＮＡとのキメラ等があげられ、また、さらに人工核酸を含んでもよい。
【００４２】
前記蛍光物質は、特に制限されない。前記蛍光物質は、例えば、ピレン、ＴＡＭＲＡ、フルオレセイン、Ｃｙ３色素、Ｃｙ５色素、ＦＡＭ色素、ローダミン色素、テキサスレッド色素等の色素、ＪＯＥ、ＭＡＸ、ＨＥＸ、ＴＹＥ等の蛍光団があげられ、前記色素の具体例としては、例えば、Ａｌｅｘａ４８８、Ａｌｅｘａ６４７等のＡｌｅｘａ色素等があげられる。前記蛍光物質は、例えば、前記結合分子に直接的に連結してもよいし、リンカーを介して間接的に連結してもよい。
【００４３】
前記結合分子が前記アプタマーの場合、前記蛍光物質は、例えば、前記アプタマーのいずれの箇所に結合してもよく、５’末端および３’末端の少なくとも一方が例示できる。また、前記蛍光物質が、例えば、前記リンカーを介して前記アプタマーに結合している場合、前記リンカーは、特に制限されず、例えば、アプタマーと同様に、前述のような核酸分子があげられる。
【００４４】
前記反応工程の条件は、特に制限されず、例えば、前記試料の種類、前記ターゲットの種類、前記結合分子の種類等に応じて、適宜決定できる。前記反応工程において、反応温度は、例えば、４〜３７℃、１８〜２５℃であり、反応時間は、例えば、１０〜１２０分、３０〜６０分である。
【００４５】
前記反応工程において、前記蛍光標識化結合分子の他に、例えば、さらにその他の成分を共存させてもよい。前記その他の成分としては、例えば、水、緩衝液等の水性溶媒、界面活性剤、塩、金属イオン、添加物等があげられる。
【００４６】
本発明において、前記検出工程は、前記蛍光標識化結合分子の蛍光偏光度を検出することで、前記ターゲットを検出する工程である。前述のように、前記蛍光標識化結合分子に前記ターゲットが結合した場合、前記ターゲットが未結合の場合と比較して、蛍光偏光度が大きくなる。このため、蛍光偏光度の検出により、前記ターゲットを検出できるため、例えば、前記ターゲットの定性分析および定量分析が可能となる。
【００４７】
前記検出工程において、前記蛍光偏光度の検出方法は、特に制限されず、例えば、前記蛍光物質の種類に応じて適宜設定できる。具体例として、前記標識物質がＡｌｅｘａ６４７の場合、前記偏光励起光の波長は、例えば、６２０〜６８０ｎｍであり、偏光度の検出波長は、例えば、６６０〜８００ｎｍである。前記偏光励起光の照射時間は、特に制限されず、例えば、１ナノ秒〜５ナノ秒があげられる。
【００４８】
本発明の検出方法は、さらに、前記検出工程の後、前記インキュベートした試料を、殺菌剤で処理する殺菌工程を含んでもよい。前記殺菌工程により、例えば、前記試料のインキュベートにより増殖した菌を死滅させ、廃棄物による環境への影響を回避し、安全性をより向上することができる。
【００４９】
前記殺菌工程において、前記殺菌剤は、特に制限されず、菌の殺菌効果を示す成分が使用できる。殺菌剤としては、例えば、次亜塩素酸ナトリウム、二酸化塩素等が使用できる。
【００５０】
本発明の検出方法は、前述のように、前記試料採取用具と前記本体とを含む前記菌検出用具を使用して行われる。具体的には、本発明の検出方法において、前記試料の準備工程は、前記試料採取用具を用いて行われ、前記インキュベート工程、前記反応工程および前記検出工程は、前記試料採取用具を本体に装着した菌検出用具を用いて行われる。前記菌検体用具において、前記試料採取用具は、前記本体に脱着可能である。
【００５１】
本発明において、上方向および下方向とは、例えば、前記菌検出用具を使用する際における上下方向であり、具体的には、前記試料採取用具における採取部の方向を下方向、前記試料採取具における前記採取部と反対方向（例えば、連結部の方向）を上方向として、説明する。
【００５２】
前記試料採取用具は、前述のように、試料を採取する採取部と、前記本体との連結部とを含む。前記試料採取用具は、例えば、棒状用具であり、棒状の支持部材の一方の先端に前記採取部を備え、前記支持部材の上方向の領域（例えば、上方向の端部または上方向の端部領域）が前記連結部であることが好ましい。前記試料採取用具は、例えば、スワブ、ブラシ、スパチュラ、スプーン等があげられる。
【００５３】
前記試料採取用具において、前記採取部は、特に制限されず、例えば、繊維球があげられ、前記繊維は、例えば、綿、樹脂繊維等があげられる。また、前記試料採取用具において、前記連結部は、特に制限されず、前記本体の連結部と連結可能であればよい。前記試料採取用具における前記連結部については、前記本体の連結部とともに後述する。
【００５４】
前記試料採取用具を用いた前記試料の準備工程は、例えば、前記試料採取用具を持ち、前記採取部で検出対象となる箇所を擦り、前記採取部に試料を採取することにより行える。前記検出対象となる箇所は、特に制限されず、例えば、前述のような試料が存在する箇所である。
【００５５】
前記本体は、前述のように、前記菌濃縮用試薬および前記蛍光標識化結合分子を収容する試薬収容室と、前記試料採取用具の前記採取部を収容する採取部収容室と、前記試料採取用具との連結部とを含み、前記試薬収容室と前記採取部収容室とは、独立している。本発明の検出方法は、前記試料採取用具と前記本体とが、前記準備工程後であり且つ前記インキュベート工程前に、前記試料採取用具の採取部が前記本体の採取部収容室に収容された状態で、前記試料採取用具の連結部と前記本体の連結部とにおいて連結され、前記準備工程後、前記試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記インキュベート工程および前記反応工程を行う。
【００５６】
前記本体において、前記試薬収容室は、例えば、１つの収容室から構成されてもよいし、独立した２つ以上の収容室を含んでもよい。本発明において、「前記試薬収容室が、独立した２つ以上の収容室を含む」とは、例えば、一つの収容室の内部に、分離された２つ以上の室が形成されている形態でもよいし、前記試薬収容室として、２つ以上の収容室を有する形態、２つ以上の独立した収容室が、それぞれ、分離して、別個に形成されている形態であってもよい。
【００５７】
本発明において、前述のように、前記菌濃縮用試薬と前記蛍光標識化結合分子との混合試薬を使用する場合、前記試薬収容室は、例えば、前記混合試薬が収容された一つの収容室である。また、本発明において、前記菌濃縮用試薬と前記蛍光標識化結合分子とを、それぞれ別個に使用する場合、後者が好ましく、例えば、前記試薬収容室は、独立して、第１試薬収容室と第２試薬収容室とを含み、前記第１試薬収容室が、前記菌濃縮用試薬が収容された収容室であり、前記第２試薬収容室が、前記蛍光標識化結合分子が収容された収容室である。後者の場合、例えば、前記第１試薬収容室および前記第２試薬収容室は、それぞれ、前記採取部収容室と独立している。
【００５８】
前記本体において、前記試薬収容室の配置箇所は、特に制限されず、例えば、使用時において、前記採取部収容室の上方向に、前記試薬収容室が配置されてもよいし、前記採取部収容室の下方向に、前記試薬収容室が配置されてもよい。前記試薬収容室が、前述のように、独立した２つ以上の収容室を含む場合、例えば、各収容室の全てが、前記採取部収容室の上方向に配置されてもよいし、前記採取部収容室の下方向に配置されてもよく、また、いずれかの収容室が、前記採取部収容室の上方向に配置され、残りの収容室が、前記採取部収容室の下方向に配置されてもよい。前記本体が、前記第１試薬収容室および前記第２試薬収容室を含む場合、例えば、前者が前記採取部収容室の上方向に配置され、後者が前記採取部収容室の下方向に配置されてもよいし、前者が前記採取部収容室の下方向に配置され、後者が前記採取部収容室の上方向に配置されてもよい。
【００５９】
このように、前記本体が、前記採取部収容室の上方向に１つ以上の収容室を有する場合、以下、これらの収容室をまとめて「上本体」、前記採取部収容室を「下本体」ともいう。また、前記本体が、前記採取部収容室の下方向に１つ以上の収容室を有する場合、以下、これらの収容室をまとめて「下本体」、前記採取部収容室を「上本体」ともいう。そして、前記本体が、前記採取部収容室の上方向と下方向に、それぞれ１つ以上の収容室を有する場合、以下、上方向の収容室をまとめて「上本体」、前記採取部収容室を「中本体」、下方向の収容室をまとめて「下本体」ともいう。
【００６０】
本発明において、前記混合試薬を使用する場合、例えば、前記準備工程後、前記試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記試薬採取用具の採取部が有する前記試料と前記混合試薬とを接触させ、前記インキュベート工程と前記反応工程とを同時に行うことができる。また、本発明において、前記菌濃縮用試薬および前記蛍光標識化結合分子を独立して使用する場合、例えば、前記準備工程後、前記第１試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記試薬採取用具の採取部が有する前記試料と前記菌濃縮用試薬とを接触させ、前記インキュベート工程を行い、前記インキュベート工程後、前記第２試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記インキュベートした試料と前記蛍光標識化結合分子とを接触させ、前記反応工程を行うことができる。
【００６１】
本発明において、前述のように、さらに前記殺菌剤を使用する場合、前記本体は、例えば、さらに、前記殺菌剤を収容する殺菌剤収容室を含み、この際、前記試薬収容室および前記採取部収容室は、それぞれ、前記殺菌剤収容室と独立している。本発明において、前述のように、前記混合試薬を使用する場合、前記本体は、例えば、独立して、前記混合試薬を収容する前記試薬収容室と前記殺菌剤収容室とを、独立して含み、前記菌濃縮用試薬と前記蛍光標識化結合分子とをそれぞれ別個に使用する場合、前記本体は、例えば、独立して、前記第１試薬収容室と前記第２試薬収容室と前記殺菌剤収容室とを含む。
【００６２】
前記本体において、前記殺菌剤収容室の配置箇所は、特に制限されず、例えば、使用時において、前記採取部収容室の上方向に、前記殺菌剤収容室が配置されてもよいし、前記採取部収容室の下方向に、前記殺菌剤収容室が配置されてもよい。前記殺菌剤収容室は、例えば、前記採取部収容室に対して、前記試薬収容室と同じ方向に配置されてもよいし、前記試薬収容室と反対の方向に配置されてもよい。
【００６３】
本発明において、前記殺菌剤を使用する場合、例えば、前記検出工程後、前記殺菌剤収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記殺菌工程を行うことができる。
【００６４】
本発明において、各収容室が独立しているとは、例えば、各収容室が離れて配置されている形態、その他に、各収容室が隣接しているが、互いの内部は連通しない状態であり、収容室と収容室とを隔離する隔離壁を有している形態等があげられる。
【００６５】
本発明の検出方法は、例えば、前記採取部収容室が反応室でもよいし、前記試薬収容室が反応室でもよい。
【００６６】
まず、前記採取部収容室が反応室となる形態について説明する。
【００６７】
前記混合試薬を使用する一試薬系の場合、前記採取部収容室は、例えば、インキュベート工程および前記反応工程を行う反応室となる。そして、前記採取部収容室は、例えば、さらに、検出領域を含み、前記検出領域は、前記採取部収容室の内部における蛍光偏光度を、外部から検出可能な部材で形成されていることが好ましい。この形態では、例えば、前記準備工程後、前記試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記試薬収容室から前記採取部収容室に前記混合試薬を導入し、前記インキュベート工程と前記反応工程とを同時に行うことができる。
【００６８】
前記菌濃縮用試薬と前記蛍光標識化結合分子とを別個に使用する二試薬系の場合、前記採取部収容室は、例えば、前記インキュベート工程および前記反応工程を行う反応室となる。そして、前記採取部収容室は、例えば、さらに、検出領域を含み、前記検出領域は、前記採取部収容室の内部における蛍光偏光度を、外部から検出可能な部材で形成されていることが好ましい。この形態では、例えば、前記準備工程後、前記第１試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記第１試薬収容室から前記採取部収容室に前記菌濃縮用試薬を導入し、前記インキュベート工程を行い、前記インキュベート工程後、前記第２試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記第２試薬収容室から前記採取部収容室に、前記蛍光標識化結合分子を導入し、前記反応工程を行うことができる。
【００６９】
前記検出領域を形成する部材は、前記蛍光偏光度を外部から検出可能であればよく、特に制限されない。前記部材は、例えば、透明部材であり、具体例として、例えば、ガラス、プラスチック等があげられ、前記プラスチックは、例えば、ポリスチレン、ポリカーボネート等があげられる。以下、同様である。
【００７０】
前記一試薬系または前記二試薬系の形態において、本発明の検出方法が、さらに、殺菌工程を含む場合は、例えば、前記検出工程後、前記殺菌剤収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記殺菌剤収容室から前記採取部収容室に、前記殺菌剤を導入し、前記殺菌工程を行うことができる。
【００７１】
前記採取部収容室が反応室の場合、収容室間の連通の方法は、特に制限されないが、例えば、以下に示す形態Ａ、形態Ｂおよび形態Ｃの方法があげられる。
【００７２】
前記形態Ａは、中空管を利用した方法である。この場合、前記本体において、連通させる一対の収容室は、連通用の中空管の挿入により連結されており、前記中空管は、一端に閉口部を有している。このため、前記中空管の閉口部により、一方の収容室の内部と他方の収容室の内部とが非連通となっているが、前記中空管を軸方向の途中で切断して、前記閉口部を前記中空管から切り離すことによって、前記中空管の両端を開口させ、前記一方の収容室の内部と前記他方の収容室の内部とを連通させることができる。前記一対の収容室とは、例えば、前記試薬収容室と前記採取部収容室、前記第１試薬収容室と前記採取部収容室、前記第２試薬収容室と前記採取部収容室、前記殺菌剤収容室と前記採取部収容室、等があげられる（以下、同様）。
【００７３】
前記形態Ｂは、貫通孔形成手段を利用した方法である。この場合、前記本体は、さらに、貫通孔形成手段を有しており、前記本体において、連通させる一対の収容室は、一方の収容室が、他方の収容室と連通可能な開口部を有し、他方の収容室が、前記貫通孔形成手段により、開口部を形成可能である。そして、前記貫通孔形成手段で、前記他方の収容室に貫通孔を形成することによって、前記一方の収容室の開口部と前記他方の収容室に形成した貫通孔とにより、前記一方の収容室の内部と前記他方の収容室の内部とを連通させることができる。前記貫通孔形成手段は、特に制限されず、例えば、カッター、スクリュー等があげられ、孔をあける穿孔手段ということもできる。
【００７４】
前記形態Ｃは、カプセルを利用した方法である。この場合、前記本体において、前記試薬収容部は、破壊可能なカプセルである。そして、例えば、前記カプセルを破壊することによって、前記試薬収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることができる。
【００７５】
つぎに、前記試薬収容室が反応室となる形態について説明する。この形態は、具体的には、前記試料採取用具の採取部を収容した室が、反応室となる形態である。つまり、この形態は、前記採取部の移動によって、各収容室間の連通を行い、且つ、反応室を移動させる形態Ｄである。
【００７６】
前記混合試薬を使用する一試薬系の場合、前記試薬収容室は、例えば、インキュベート工程および前記反応工程を行う反応室となる。そして、前記試薬収容室は、例えば、さらに、検出領域を含み、前記検出領域は、前記採取部収容室の内部における蛍光偏光度を、外部から検出可能な部材で形成されていることが好ましい。この形態では、例えば、前記準備工程後、前記採取部収容室に収容された前記採取部を前記試薬収容室に収容することによって、前記試薬収容室の混合試薬に前記採取部を接触させ、前記インキュベート工程と前記反応工程とを同時に行うことができる。前記採取部を、前記採取部収容室から前記試薬収容室に収容させるとは、例えば、前記採取部収容室と前記試薬収容室とを隔離している隔離壁を、前記採取部の先端により破断し、前記採取部収容室から前記試薬収容室に前記採取部を移動させる方法があげられる。
【００７７】
前記菌濃縮用試薬と前記蛍光標識化結合分子とを別個に使用する二試薬系の場合、例えば、前記第１試薬収容室が前記インキュベート工程を行う反応室となり、前記第２試薬収容室が前記反応工程を行う反応室となる。そして、前記第２試薬収容室は、例えば、さらに、検出領域を含み、前記検出領域は、前記第２試薬収容室の内部における蛍光偏光度を、外部から検出可能な部材で形成されていることが好ましい。この形態では、例えば、前記準備工程後、前記採取部収容室に収容された前記採取部を前記第１試薬収容室に収容することによって、前記第１試薬収容室の前記菌濃縮用試薬に前記採取部を接触させ、前記インキュベート工程を行い、前記インキュベート工程後、前記第１試薬収容室に収容された前記採取部を前記第２試薬収容室に収容することによって、前記第１試薬収容室の前記インキュベート後の菌濃縮試薬を前記第２試薬収容室に導入し、前記反応工程を行うことができる。
【００７８】
前記一試薬系または前記二試薬系の形態において、本発明の検出方法が、さらに、殺菌工程を含む場合は、例えば、前記検出工程後、前記殺菌剤収容室の内部と前記採取部収容室の内部とを連通させることによって、前記殺菌剤収容室から前記採取部収容室に、前記殺菌剤を導入し、前記殺菌工程を行うことができる。
【００７９】
以下に、本発明の検出方法の具体例について、図を参照して詳細に説明する。なお、本発明は、これらの例示には制限されない。各図において、同一箇所には、同一符号を付している。各図は、概略図であり、便宜上、各部の構造および形状は、適宜簡略化して示す場合があり、各部の大きさおよび形状等は、実際とは異なり、模式的に表す場合がある。各図における上下方向は、前記菌検出用具の使用時における上下方向であり、前記菌検出用具の試料採取用具について、採取部が下方向、本体との連結部が上方向となるように表している。また、各実施形態は、特に示さない限り、それぞれの記載を援用できる。
【００８０】
（実施形態Ａ１）
本実施形態は、前記採取部収容室が、前記インキュベート工程および前記反応工程の反応室であり、前記採取部収容室が前記検出領域を有している菌検出用具を使用し、収容室間の連通を前記形態Ａにより行う形態である。
【００８１】
図１に、菌検出用具の概略図を示す。図１（Ａ）は、菌検出用具の概略を示す断面図であり、図１（Ｂ）は、使用時における前記菌検出用具の概略を示す断面図である。
【００８２】
図１（Ａ）の菌検出用具は、採取部収容室１０と、前記混合試薬を収容する試薬収容室１１と、試料採取用具１５とを備える。本実施形態において、本体は、上本体である試薬収容室１１と、下本体である採取部収容室１０とから構成される。試料採取用具１５は、連通用の中空管１５１と、採取部１５２とを有し、中空管１５１の下方向先端に採取部１５２が連結され、中空管１５１の上方向の端部には閉口部を有し、中空管１５１は、軸方向の途中で切断可能である。中空管１５１は、例えば、切断しやすいことから、所望の切断箇所において、孔が狭まった狭窄部を有してもよい。そして、試料採取用具１５は、上本体である試薬収容室１１と連結しており、具体的には、試料採取用具１５の中空管１５１の上方向の領域が、試薬収容室１１の内部に位置するように配置されている。試料採取用具１５が連結された試薬収容室１１と、採取部収容室１０とは、着脱可能であり、試薬収容室１１は、試料採取用具１５の採取部１５２を採取部収容室１０の内部に収容した状態で、採取部収容室１０に装着できる。採取部収容室１０は、前記インキュベート工程および前記反応工程の反応室であり、例えば、その底部領域が、前記検出領域となる。
【００８３】
図１（Ａ）の菌検出用具は、例えば、以下のように使用できる。
【００８４】
まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（下本体）から、試料採取用具１５を備えた試薬収容室１１（上本体）を取り外し、試料採取用具１５の露出した先端（前記採取部）により、試料を採取する。そして、試料採取用具１５の前記採取部を、採取部収容室１０（下本体）の内部に収容した状態で、採取部収容室１０（下本体）に試薬収容室１１（上本体）を装着する。
【００８５】
つぎに、図１（Ｂ）に示すように、試料採取用具１５の中空管１５１を軸方向の途中で切断して、前記閉口部を有する領域１５１’を、中空管１５１から切り離す。これによって、中空管１５１の両端が開口するため、中空管１５１の上方開口部から、試薬収容室１１内部の前記混合試薬が、中空管１５１の内部に導入され、試料採取用具１５の採取部１５２を通じて、採取部収容室（反応室）１０に導入される。この際、試薬採取用具１５の採取部１５２には、採取した試料が付着しているため、採取部１５２に到達した前記混合試薬と前記試料とが混ざり、前記混合試薬と前記試料との混合物が、採取部収容室１０の底部に滴下される。
【００８６】
そして、採取部収容室１０に導入された前記混合試薬と前記試料との混合物について、前記インキュベート工程と前記反応工程とを施すことによって、前記試料中のターゲット菌体の培養、および、前記ターゲット菌体と前記蛍光標識化結合分子との結合反応を行う。その後、採取部収容室１０の検出領域について、蛍光偏光度の測定を行う。
【００８７】
図１は、試料採取用具１５の支持部材を中空管とし、試薬収容室１１と採取部収容室１０の内部を連通させているが、これには制限されない。この他に、例えば、試薬収容室１１と採取部収容室１０とを、上方向の端部に閉口部を有する中空管１５１の挿入により連結し、試料採取用具１５は、試薬収容室１１の底部に連結するのみでもよい。
【００８８】
（実施形態Ａ２）
本実施形態は、試薬収容室の個数または殺菌剤収容室をさらに含む以外は、前記実施形態Ａ１と同様の形態である。本実施形態は、特に示さない限り、前記実施形態Ａ１および後述する実施形態Ａ３を援用できる。
【００８９】
図２に、菌検出用具のその他の概略図を示す。図２（Ａ）は、採取部収容室１０（下本体）の上方向に、前記菌濃縮用試薬を収容する第１試薬収容室１３と、前記蛍光標識化結合分子を収容する第２試薬収容室１２とを、上本体として有する形態であり、図２（Ｂ）は、採取部収容室１０（下本体）の上方向に、前記混合試薬を収容する試薬収容室１１と、前記殺菌剤を収容する殺菌剤収容室１４とを、上本体として有する形態であり、図２（Ｃ）は、採取部収容室１０（下本体）の上方向に、前記菌濃縮用試薬を収容する第１試薬収容室１３と、前記蛍光標識化結合分子を収容する第２試薬収容室１２と、前記殺菌剤を収容する殺菌剤収容室１４とを、上本体として有する形態である。
【００９０】
図２（Ａ）における第１試薬収容室１３と第２試薬収容室１２、図２（Ｂ）における試薬収容室１１と殺菌剤収容室１４、図２（Ｃ）における第１試薬収容室１３と第２試薬収容室１２と殺菌剤収容室１４は、それぞれ、各収容室は、隔離壁等で隔離されているが、隣接する収容室同士が前記隔離壁で連結し、全体として一体化されていることが好ましい。この場合、採取部収容室１０（下本体）から、第１試薬収容室１３、第２試薬収容室１２、試薬収容室１１または殺菌剤収容室１４を取り外せば、それに付随して、他の収容室も取り外すことができる。
【００９１】
図２（Ａ）および（Ｃ）における第１試薬収容室１３と採取部収容室１０とは、試料採取用具１５の中空管１５１の挿入により連結されている。第１試薬収容室１３と採取部収容室１０と試料採取用具１５との関係は、前記実施形態Ａ１の図１（Ａ）における試薬収容室１１と採取部収容室１０と試料採取用具１５との関係を援用できる。また、図２（Ｂ）における試薬収容室１１と採取部収容室１０と試料採取用具１５との関係は、前記実施形態Ａ１の図１（Ａ）と同じである。
【００９２】
図２（Ａ）および（Ｃ）における第２試薬収容室１２と採取部収容室１０、および、図２（Ｂ）における殺菌剤収容室１４と採取部収容室１０は、それぞれ、上方向の端部に閉口部を有する中空管１６の挿入により連結している。中空管１６は、前記実施形態Ａ１の図１における試料採取用具１５の中空管１５１と同様であり、上方向の端部に閉口部を有しており、軸方向の途中で切断可能である。
【００９３】
図２（Ａ）の菌検出用具は、例えば、以下のように使用できる。まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（下本体）から、試料採取用具１５を備えた前記上本体を取り外し、試料を採取した後、再度、試料採取用具１５の採取部が採取部収容室１０（下本体）の内部に収容されるように、前記上本体を前記下本体に装着する。つぎに、試料採取用具１５の中空管を切断して、第１試薬収容室１３から前記菌濃縮用試薬を採取部収容室１０に導入し、前記インキュベート工程を行い、さらに、第２試薬収容室１２の中空管１６を切断して、第２試薬収容室１２から前記蛍光標識化結合分子を採取部収容室１０に導入して前記反応工程を行う。そして、採取部収容室１０の検出領域において、蛍光偏光度の検出を行う。
【００９４】
つぎに、図２（Ｂ）の菌検出用具は、例えば、以下のように使用できる。まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（下本体）から、試料採取用具１５を備えた前記上本体を取り外し、試料を採取した後、再度、試料採取用具１５の採取部が採取部収容室１０（下本体）の内部に収容されるように、前記上本体を前記下本体に装着する。つぎに、試料採取用具１５の中空管を切断して、試薬収容室１１から前記混合試薬を採取部収容室１０に導入し、前記インキュベート工程および前記反応工程を行い、採取部収容室１０の検出領域において、蛍光偏光度の検出を行う。さらに、殺菌剤収容室１４の中空管１６を切断して、殺菌剤収容室１４から前記殺菌剤を採取部収容室１０に導入して、前記殺菌工程を行う。
【００９５】
つぎに、図２（Ｃ）の菌検出用具は、例えば、以下のように使用できる。まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（下本体）から、試料採取用具１５を備えた前記上本体を取り外し、試料を採取した後、再度、試料採取用具１５の採取部が採取部収容室１０（下本体）の内部に収容されるように、前記上本体を前記下本体に装着する。つぎに、試料採取用具１５の中空管を切断して、第１試薬収容室１３から前記菌濃縮用試薬を採取部収容室１０に導入し、前記インキュベート工程を行い、さらに、第２試薬収容室１２の中空管１６を切断して、第２試薬収容室１２から前記蛍光標識化結合分子を採取部収容室１０に導入し、前記反応工程を行い、採取部収容室１０の検出領域において、蛍光偏光度の検出を行う。そして、殺菌剤収容室１４の中空管１６を切断して、殺菌剤収容室１４から前記殺菌剤を採取部収容室１０に導入して、前記殺菌工程を行う。
【００９６】
（実施形態Ａ３）
本実施形態は、試薬収容室の配置が異なる以外は、前記実施形態Ａ１およびＡ２と同様の形態である。
【００９７】
図３に、菌検出用具のその他の概略図を示す。図３（Ａ）は、前記実施形態Ａ１およびＡ２と同様の形態であり、採取部収容室１０が下本体となり、試料採取用具１５を備える収容室２１が上本体となる形態である。図３（Ａ）において、収容室２１は、例えば、前記実施形態Ａ１およびＡ２におけるいずれの上本体の構成であってもよい。つまり、収容室２１は、例えば、前記実施形態Ａ１の試薬収容室１１でもよいし、前記実施形態Ａ２における図２（Ａ）の上本体（第１試薬収容室１３および第２試薬収容室１２）、図２（Ｂ）の上本体（試薬収容室１１および殺菌剤収容室１４）、図２（Ｃ）の上本体（第１試薬収容室１３、第２試薬収容室１２および殺菌剤収容室１４）でもよい。図３（Ａ）の菌検出用具は、前記実施例Ａ１およびＡ２と同様にして使用することができる。
【００９８】
図３（Ｂ）は、採取部収容室１０が上本体となり、試薬等の収容室が下本体となる形態である。図３（Ｂ）の菌検出用具は、試料採取用具１５、試料採取用具１５を固定化した把持部２２、採取部収容室１０および収容室２１を備え、試料採取用具１５が上本体、収容室２１が下本体である。試料採取用具１５が固定化された把持部２２は、試料採取用具１５の採取部が、採取部収容室１０（上本体）の内部に収容した状態で、採取部収容室１０（上本体）に装着できる。本実施形態において、収容室２１は、その配置が、採取部収容室１０の下方向である以外は、前記実施形態１Ａおよび２Ａと同様である。
【００９９】
図３（Ｂ）の菌検出用具は、まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（上本体）から、試料採取用具１５を備えた把持部２２を取り外し、試料を採取した後、再度、試料採取用具１５の採取部が採取部収容室１０（上本体）の内部に収容されるように、把持部２２を前記上本体に装着する。そして、装着後の前記菌検出用具を、収容室２１が上方向となるように、上下を逆にする。その後は、前記実施形態１Ａおよび２Ａと同様にして、収容室２１の内部の試薬または殺菌剤を、採取部収容室１０に導入すればよい。
【０１００】
図３（Ｃ）は、２つ以上の収容室が、採取部収容室１０の上下方向に配置されている形態である。図３（Ｃ）の菌検出用具は、試料採取用具１５、採取部収容室１０、上方向の収容室２３ａおよび下方向の収容室２３ｂを備え、上方向の収容室２３ａが上本体であり、採取部収容室１０が中本体であり、下方向の収容室２３ｂが下本体となる。本実施形態において、収容室２３ａ（上本体）および収容室２３ｂ（下本体）との組合せは、特に制限されず、前記混合試薬用の試薬収容室、前記第１試薬収容室、前記第２試薬収容室、前記殺菌剤収容室を、適宜組合せることができる。具体例として、前記上本体が前記第１試薬収容室であり、前記下本体が前記第２試薬収容室である組合せ；前記上本体が前記混合試薬用の試薬収容室であり、前記下本体が前記殺菌剤収容室である組合せがあげられる。図３（Ｃ）の菌検出用具は、試料を採取して、試料採取用具１５を備える上本体２３ａを、下本体２３ｂと連結した採取部収容室１０（中本体）に装着し、適宜、上下方向を逆にする以外は、前記実施形態１Ａおよび２Ａと同様にして、使用できる。
【０１０１】
図３（Ｄ）は、３つ以上の収容室が、採取部収容室１０の上下方向に配置されている形態である。図３（Ｄ）の菌検出用具は、試料採取用具１５、採取部収容室１０、上方向の収容室２４ａおよび２４ｂ、ならびに下方向の収容室２４ｃを備え、上方向の収容室２４ａおよび２４ｂが上本体であり、採取部収容室１０が中本体であり、下方向の収容室２４ｃが下本体となる。本実施形態において、収容室２４ａおよび２４ｂ（上本体）ならびに収容室２４ｃ（下本体）との組合せは、特に制限されず、前記混合試薬用の試薬収容室、前記第１試薬収容室、前記第２試薬収容室、および前記殺菌剤収容室を、適宜組合せることができる。具体例として、前記上本体が前記第１試薬収容室２４ｂおよび前記第２試薬収容室２４ａであり、前記下本体が前記殺菌剤収容室２４ｃである組合せがあげられる。図３（Ｄ）の菌検出用具は、試料を採取して、試料採取用具１５を備える上本体（２４ａおよび２４ｂ）を、下本体２４ｃと連結した採取部収容室１０（中本体）に装着し、適宜、上下方向を逆にする以外は、前記実施形態１Ａおよび２Ａと同様にして、使用できる。
【０１０２】
図３（Ｅ）は、３つ以上の収容室が、採取部収容室１０の上下方向に配置されている形態である。図３（Ｅ）の菌検出用具は、試料採取用具１５、採取部収容室１０、上方向の収容室２５ａ、ならびに下方向の収容室２５ｂおよび２５ｃを備え、上方向の収容室２５ａが上本体であり、採取部収容室１０が中本体であり、下方向の収容室２５ｂおよび２５ｃが下本体となる。本実施形態において、収容室２５ａ（上本体）ならびに収容室２５ｂおよび２５ｃ（下本体）との組合せは、特に制限されず、前記混合試薬用の試薬収容室、前記第１試薬収容室、前記第２試薬収容室、および前記殺菌剤収容室を、適宜組合せることができる。具体例として、前記上本体が前記第１試薬収容室２５ａであり、前記下本体が前記第２試薬収容室２５ｂおよび前記殺菌剤収容室２５ｃである組合せがあげられる。図３（Ｅ）の菌検出用具は、試料を採取して、試料採取用具１５を備える上本体（２５ａ）を、下本体（２４ｂおよび２４ｃ）と連結した採取部収容室１０（中本体）に装着し、適宜、上下方向を逆にする以外は、前記実施形態１Ａおよび２Ａと同様にして、使用できる。
【０１０３】
（実施形態Ｂ１）
本実施形態は、前記採取部収容室が、前記インキュベート工程および前記反応工程の反応室であり、前記採取部収容室が前記検出領域を有している菌検出用具を使用し、収容室間の連通を、貫通孔形成手段を使用する前記形態Ｂにより行う形態である。
【０１０４】
図４に、菌検出用具の概略図を示す。図４は、菌検出用具の概略を示す断面図である。図４の菌検出用具は、採取部収容室１０と、前記混合試薬を収容する試薬収容室１１と、試料採取用具１５と、貫通孔形成手段としてカッター４２が固定化された穿孔室４１とを備える。本実施形態において、試薬収容室１１が上本体であり、採取部収容室１０が下本体である。試薬収容室１１（上本体）は、穿孔室４１の上方に配置されており、穿孔室４１の方向に移動させて、穿孔室４１のカッター４２に接触させることで、その底部に貫通孔を設けることができる。穿孔室４１は、採取部収容室１０（下本体）と連通する貫通孔を有しており、その底部の外面において、前記貫通孔とは重複しない位置に、試料採取用具１５が固定化されている。試薬収容室１１と試料採取用具１５とが連結された穿孔室４１は、採取部収容室１０に対して、着脱可能であり、穿孔室４１は、試料採取用具１５の採取部を採取部収容室１０の内部に収容した状態で、採取部収容室１０に装着できる。採取部収容室１０は、前記インキュベート工程および前記反応工程の反応室であり、例えば、その底部領域が、前記検出領域となる。
【０１０５】
試薬収容室１１の底部は、カッター４２により貫通孔を設けることから、例えば、破断可能な部材であることが好ましい。前記部材としては、例えば、アルミシート等のシートがあげられる。
【０１０６】
図４の菌検出用具は、例えば、以下のように使用できる。まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（下本体）から、試薬収容室１１（上本体）と試料採取用具１５とを備えた穿孔室４１を取り外し、試料を採取した後、再度、試料採取用具１５の採取部が採取部収容室（下本体）の内部に収容されるように、穿孔室４１を前記下本体に装着する。つぎに、試料収容室１１を穿孔室４１の内部に押し込み、穿孔室４１のカッター４２で、試料収容室１１の底部に貫通孔を形成する。前記貫通孔の形成により、試料収容室１１中の前記混合試薬が穿孔室４１に導入され、穿孔室４１の貫通孔を通じて、前記混合試薬が採取部収容室（反応室）１０に導入される。これによって、採取部収容室１０に導入された前記混合試薬と、試料採取用具１５の採取部の試料とが接触する。そして、前記混合試薬と前記試料との混合物について、前記インキュベート工程および前記反応工程を行った後、採取部収容室１０の検出領域において、蛍光偏光度の検出を行う。
【０１０７】
（実施形態Ｂ２）
本実施形態は、試薬収容室の個数または殺菌剤収容室をさらに含む以外は、前記実施形態Ｂ１と同様の形態である。本実施形態は、特に示さない限り、前記実施形態Ｂ１を援用できる。
【０１０８】
図５に、菌検出用具のその他の概略図を示す。図５（Ａ）は、採取部収容室１０（下本体）の上方向に、前記菌濃縮用試薬を収容する第１試薬収容室１３と、前記蛍光標識化結合分子を収容する第２試薬収容室１２とを、上本体として有し、さらに、各収容室に対応する穿孔室４１を有する形態であり、図５（Ｂ）は、採取部収容室１０（下本体）の上方向に、前記混合試薬を収容する試薬収容室１１と、前記殺菌剤を収容する殺菌剤収容室１４とを、上本体として有し、さらに、各収容室に対応する穿孔室４１を有する形態であり、図５（Ｃ）は、採取部収容室１０（下本体）の上方向に、前記菌濃縮用試薬を収容する第１試薬収容室１３と、前記蛍光標識化結合分子を収容する第２試薬収容室１２と、前記殺菌剤を収容する殺菌剤収容室１４とを、上本体として有し、さらに、各収容室に対応する穿孔室４１を有する形態である。各穿孔室４１は、それぞれ、前記実施形態Ｂ１と同様であり、貫通孔形成手段として、カッター４２が固定化されており、また、採取部収容室１０に対する貫通孔を有している。
【０１０９】
図５の（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）の菌検出用具において、前記上本体の各収容室は、前記実施形態Ａ２における図２の（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）の組合せを援用できる。
【０１１０】
図５（Ａ）の菌検出用具は、例えば、以下のように使用できる。まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（下本体）から、試料採取用具１５と収容室１２および１３とを備えた穿孔室４１を取り外し、試料を採取した後、再度、試料採取用具１５の採取部が採取部収容室１０（下本体）の内部に収容されるように、穿孔室４１を前記下本体に装着する。つぎに、第１試薬収容室１３を穿孔室４１の内部に押し込み、穿孔室４１のカッター４２で、第１試薬収容室１３の底部に貫通孔を形成し、第１試薬収容室１３から穿孔室４１に導入された前記菌濃縮用試薬を、穿孔室４１の貫通孔を通じて、採取部収容室（反応室）１０に導入する。これによって、採取部収容室１０に導入された前記菌濃縮用試薬と、試料採取用具１５の採取部の試料とが接触する。そして、前記菌濃縮用試薬と前記試料との混合物について、前記インキュベート工程を行った後、同様にして、第２試薬収容室１２から採取部収容室１０に、前記蛍光標識化結合分子を導入し、前記反応工程を行う。そして、採取部収容室１０の検出領域において、蛍光偏光度の検出を行う。
【０１１１】
図５（Ｂ）の菌検出用具は、例えば、以下のように使用できる。まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（下本体）から、試料採取用具１５と収容室１１および１４とを備えた穿孔室４１を取り外し、試料を採取した後、再度、試料採取用具１５の採取部が採取部収容室１０（下本体）の内部に収容されるように、穿孔室４１を前記下本体に装着する。つぎに、前述と同様にして、試薬収容室１１から採取部収容室１０に、前記混合試薬を導入し、前記インキュベート工程および前記反応工程を行い、採取部収容室１０の検出領域において、蛍光偏光度の検出を行う。そして、同様にして、殺菌剤収容室１４から採取部収容室１０に、前記殺菌剤を導入し、殺菌工程を行う。
【０１１２】
図５（Ｃ）の菌検出用具は、例えば、以下のように使用できる。まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（下本体）から、試料採取用具１５と収容室１２、１３、１４とを備えた穿孔室４１を取り外し、試料を採取した後、再度、試料採取用具１５の採取部が採取部収容室１０（下本体）の内部に収容されるように、穿孔室４１を前記下本体に装着する。つぎに、前述と同様にして、第１試薬収容室１３から採取部収容室１０に、前記菌濃縮用試薬を導入し、前記インキュベート工程を行い、続いて、第２試薬収容室１２から採取部収容室１０に、前記蛍光標識化結合分子を導入し、前記反応工程を行い、採取部収容室１０の検出領域において、蛍光偏光度の検出を行う。そして、同様にして、殺菌剤収容室１４から採取部収容室１０に、前記殺菌剤を導入し、殺菌工程を行う。
【０１１３】
（実施形態Ｃ１）
本実施形態は、前記採取部収容室が、前記インキュベート工程および前記反応工程の反応室であり、前記採取部収容室が前記検出領域を有している菌検出用具を使用し、収容室間の連通を、カプセルを使用する前記形態Ｃにより行う形態である。
【０１１４】
図６に、菌検出用具の概略図を示す。図６は、菌検出用具の概略を示す断面図である。図６の菌検出用具は、試料採取用具１５と、採取部収容室１０と、前記混合試薬を収容するカプセル状の試薬収容室１１と、前記試薬収容室１１を保持する保持室６１とを備える。本実施形態において、試薬収容室１１と、これを保持する保持室６１とが上本体であり、採取部収容室１０が下本体である。保持室６１は、採取部収容室１０（下本体）と連通する貫通孔を有しており、その底部の外面において、前記貫通孔とは重複しない位置に、試料採取用具１５が固定化されている。試料採取用具１５が連結された保持室６１は、採取部収容室１０に対して、着脱可能であり、保持室６１は、試料採取用具１５の採取部を採取部収容室１０の内部に収容した状態で、採取部収容室１０に装着できる。採取部収容室１０は、前記インキュベート工程および前記反応工程の反応室であり、例えば、その底部領域が、前記検出領域となる。
【０１１５】
図６の菌検出用具は、例えば、以下のように使用できる。まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（下本体）から、カプセル状の試薬収容室１１と試料採取用具１５とを備えた保持室６１（上本体）を取り外し、試料を採取した後、再度、試料採取用具１５の採取部が採取部収容室（下本体）の内部に収容されるように、保持室６１を前記下本体に装着する。つぎに、保持室６１の内部に保持されたカプセル状の試薬収容室１１を破壊する。前記破壊により、試料収容室１１中の前記混合試薬が保持室６１に導入され、保持室６１の貫通孔を通じて、前記混合試薬が採取部収容室（反応室）１０に導入される。これによって、採取部収容室１０に導入された前記混合試薬と、試料採取用具１５の採取部の試料とが接触する。そして、前記混合試薬と前記試料との混合物について、前記インキュベート工程および前記反応工程を行った後、採取部収容室１０の検出領域において、蛍光偏光度の検出を行う。
【０１１６】
（実施形態Ｃ２）
本実施形態は、試薬収容室の個数または殺菌剤収容室をさらに含む以外は、前記実施形態Ｃ１と同様の形態である。本実施形態は、特に示さない限り、前記実施形態Ｃ１を援用できる。
【０１１７】
図７に、菌検出用具のその他の概略図を示す。図７（Ａ）は、採取部収容室１０（下本体）の上方向に、前記菌濃縮用試薬を収容するカプセル状の第１試薬収容室１３とその保持室６１、前記蛍光標識化結合分子を収容するカプセル状の第２試薬収容室１２とその保持室６１を、上本体として有する形態であり、図６（Ｂ）は、採取部収容室１０（下本体）の上方向に、前記混合試薬を収容するカプセル状の試薬収容室１１とその保持室６１、前記殺菌剤を収容するカプセル状の殺菌剤収容室１４とその保持室６１を、上本体として有する形態であり、図６（Ｃ）は、採取部収容室１０（下本体）の上方向に、前記菌濃縮用試薬を収容するカプセル状の第１試薬収容室１３とその保持室、前記蛍光標識化結合分子を収容するカプセル状の第２試薬収容室１２とその保持室、および前記殺菌剤を収容するカプセル状の殺菌剤収容室１４とその保持室を、上本体として有する形態である。各保持室６１は、それぞれ、前記実施形態Ｃ１と同様であり、採取部収容室１０に対する貫通孔を有している。
【０１１８】
図７の（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）の菌検出用具において、前記上本体の各収容室は、前記実施形態Ａ２における図２の（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）の組合せを援用できる。
【０１１９】
図７（Ａ）の菌検出用具は、例えば、以下のように使用できる。まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（下本体）から、試料採取用具１５とカプセル状の収容室１２、１３とを備えた保持室６１を取り外し、試料を採取した後、再度、試料採取用具１５の採取部が採取部収容室１０（下本体）の内部に収容されるように、保持室６１を前記下本体に装着する。つぎに、保持室６１内のカプセル状の第１試薬収容室１３を破壊し、第１試薬収容室１３から保持室６１に導入された前記菌濃縮用試薬を、保持室６１の貫通孔を通じて、採取部収容室（反応室）１０に導入する。これによって、採取部収容室１０に導入された前記菌濃縮用試薬と、試料採取用具１５の採取部の試料とが接触する。そして、前記菌濃縮用試薬と前記試料との混合物について、前記インキュベート工程を行った後、同様にして、カプセル状の第２試薬収容室１２から採取部収容室１０に、前記蛍光標識化結合分子を導入し、前記反応工程を行う。そして、採取部収容室１０の検出領域において、蛍光偏光度の検出を行う。
【０１２０】
図７（Ｂ）の菌検出用具は、例えば、以下のように使用できる。まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（下本体）から、試料採取用具１５とカプセル状の収容室１１、１４とを備えた保持室６１を取り外し、試料を採取した後、再度、試料採取用具１５の採取部が採取部収容室１０（下本体）の内部に収容されるように、保持室６１を前記下本体に装着する。つぎに、前述と同様にして、試薬収容室１１から採取部収容室１０に、前記混合試薬を導入し、前記インキュベート工程および前記反応工程を行い、採取部収容室１０の検出領域において、蛍光偏光度の検出を行う。そして、同様にして、カプセル状の殺菌剤収容室１４から採取部収容室１０に、前記殺菌剤を導入し、殺菌工程を行う。
【０１２１】
図７（Ｃ）の菌検出用具は、例えば、以下のように使用できる。まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（下本体）から、試料採取用具１５とカプセル状の収容室１２、１３、１４とを備えた保持室６１を取り外し、試料を採取した後、再度、試料採取用具１５の採取部が採取部収容室１０（下本体）の内部に収容されるように、保持室６１を前記下本体に装着する。つぎに、前述と同様にして、カプセル状の第１試薬収容室１３から採取部収容室１０に、前記菌濃縮用試薬を導入し、前記インキュベート工程を行い、続いて、カプセル状の第２試薬収容室１２から採取部収容室１０に、前記蛍光標識化結合分子を導入し、前記反応工程を行い、採取部収容室１０の検出領域において、蛍光偏光度の検出を行う。そして、同様にして、カプセル状の殺菌剤収容室１４から採取部収容室１０に、前記殺菌剤を導入し、殺菌工程を行う。
【０１２２】
（実施形態Ｄ１）
本実施形態は、各収容室が、前記インキュベート工程および前記反応工程の反応室であり、収容室間の連通を、前記形態Ｄ、すなわち、前記試料採取用具の採取部の移動によって行う形態である。
【０１２３】
図８に、菌検出用具の概略図を示す。図８は、菌検出用具の概略を示す断面図である。図８の菌検出用具は、試料採取用具１５と、試料採取用具１５が固定化された把持部２１と、採取部収容室１０と、前記混合試薬を収容する試薬収容室１１とを備える。本実施形態において、試薬収容室１１は、採取部収容室１０の下方向に連結されており、その上面は、試料採取用具１５の採取部を接触させることによって、貫通孔を形成可能である。試料採取用具１５が固定化された把持部２１は、採取部収容室１０に対して、着脱可能である。本実施形態において、試薬収容室１１は、前記インキュベート工程および前記反応工程の反応室であり、例えば、その底部領域が、前記検出領域となる。
【０１２４】
図８の菌検出用具は、例えば、以下のように使用できる。まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（上本体）から、試料採取用具１５を固定化した把持部２１を取り外し、試料を採取した後、再度、試料採取用具１５の採取部が採取部収容室（上本体）の内部に収容されるように、把持部２１を前記下本体に装着する。つぎに、試料収容室１１内の試料採取用具１５の先端部を、下方向に押し込み、前記先端部で、試料収容室１１の上面を突き破り、試料収容室１１中の前記混合試薬に、試料採取用具１５の採取部を接触させる。これによって、前記混合試薬と前記試料とが混合し、前記インキュベート工程および前記反応工程を行った後、試料収容室１１の検出領域において、蛍光偏光度の検出を行う。
【０１２５】
（実施形態Ｄ２）
本実施形態は、試薬収容室の個数または殺菌剤収容室をさらに含む以外は、前記実施形態Ｄ１と同様の形態である。本実施形態は、特に示さない限り、前記実施形態Ｄ１を援用できる。
【０１２６】
図９に、菌検出用具のその他の概略図を示す。図９（Ａ）は、採取部収容室１０の下方向に、前記菌濃縮用試薬を収容する第１試薬収容室１３と、前記蛍光標識化結合分子を収容する第２試薬収容室１２とを、この順序で有する形態であり、図９（Ｂ）は、採取部収容室１０の下方向に、前記混合試薬を収容する試薬収容室１１と、前記殺菌剤を収容する殺菌剤収容室１４とを、この順序で有する形態であり、図９（Ｃ）は、採取部収容室１０の下方向に、前記菌濃縮用試薬を収容する第１試薬収容室１３と、前記蛍光標識化結合分子を収容する第２試薬収容室１２と、前記殺菌剤を収容する殺菌剤収容室１４とを、この順序で有する形態である。試料採取用具１５は、それぞれ、前記実施形態Ｄ１と同様であり、把持部２１に固定化されており、把持部２１は、採取部収容室１０に着脱可能である。
【０１２７】
図９（Ａ）の菌検出用具は、例えば、以下のように使用できる。まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（上本体）から、試料採取用具１５を備えた把持部２１を取り外し、試料を採取した後、再度、試料採取用具１５の採取部が採取部収容室１０（上本体）の内部に収容されるように、把持部２１を前記上本体に装着する。つぎに、採取部収容室１０内の試料採取用具１５の先端部を、下方向に押し込み、前記先端部で、第１試薬収容室１３の上面を突き破り、第１試薬収容室１３中の前記菌濃縮用試薬に、試料採取用具１５の採取部を接触させる。これによって、前記菌濃縮用試薬と前記試料とを混合し、前記混合液に対して前記インキュベート工程を行う。つぎに、第１試薬収容室１３中の試料採取用具１５の先端部を、さらに下方向に押し込み、前記先端部で、第２試薬収容室１２の上面を突き破り、前記上面に貫通孔を形成し、第１試薬収容室１３中の前記混合液を、第２試薬収容室１２に導入する。これによって、前記インキュベート工程後の前記混合液と前記蛍光標識化結合分子とを混合し、この混合液に対して前記反応工程を行う。そして、第２試薬収容室１２の検出領域において、蛍光偏光度の検出を行う。
【０１２８】
図９（Ｂ）の菌検出用具は、例えば、以下のように使用できる。まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（上本体）から、試料採取用具１５を備えた把持部２１を取り外し、試料を採取した後、再度、試料採取用具１５の採取部が採取部収容室１０（上本体）の内部に収容されるように、把持部２１を前記上本体に装着する。つぎに、採取部収容室１０内の試料採取用具１５の先端部を、下方向に押し込み、前記先端部で、試薬収容室１１の上面を突き破り、試薬収容室１１中の前記混合試薬に、試料採取用具１５の採取部を接触させる。これによって、前記混合試薬と前記試料とを混合し、前記混合液に対して前記インキュベート工程および前記反応工程を行い、試薬収容室１１の検出領域において、蛍光偏光度の検出を行う。つぎに、試薬収容室１１中の試料採取用具１５の先端部を、さらに下方向に押し込み、前記先端部で、殺菌剤収容室１４の上面を突き破り、前記上面に貫通孔を形成し、試薬収容室１１中の前記混合液を、殺菌剤収容室１４に導入する。これによって、検出後の前記混合液と前記殺菌剤とを混合し、前記殺菌工程を行う。
【０１２９】
図９（Ｃ）の菌検出用具は、例えば、以下のように使用できる。まず、前記菌検出用具の採取部収容室１０（上本体）から、試料採取用具１５を備えた把持部２１を取り外し、試料を採取した後、再度、試料採取用具１５の採取部が採取部収容室１０（上本体）の内部に収容されるように、把持部２１を前記上本体に装着する。つぎに、採取部収容室１０内の試料採取用具１５の先端部を、下方向に押し込み、前記先端部で、第１試薬収容室１３の上面を突き破り、第１試薬収容室１３中の前記菌濃縮用試薬に、試料採取用具１５の採取部を接触させる。これによって、前記菌濃縮用試薬と前記試料とを混合し、前記混合液に対して前記インキュベート工程を行う。つぎに、第１試薬収容室１３中の試料採取用具１５の先端部を、さらに下方向に押し込み、前記先端部で、第２試薬収容室１２の上面を突き破り、前記上面に貫通孔を形成し、第１試薬収容室１３中の前記混合液を、第２試薬収容室１２に導入する。これによって、前記インキュベート工程後の前記混合液と前記蛍光標識化結合分子とを混合し、この混合液に対して前記反応工程を行う。そして、第２試薬収容室１２の検出領域において、蛍光偏光度の検出を行う。さらに、第２試薬収容室１２中の試料採取用具１５の先端部を、下方向に押し込み、前記先端部で、殺菌剤収容室１４の上面を突き破り、前記上面に貫通孔を形成し、第２試薬収容室１１中の前記混合液を、殺菌剤収容室１４に導入する。これによって、検出後の前記混合液と前記殺菌剤とを混合し、前記殺菌工程を行う。
【０１３０】
本発明の菌検出方法において使用する菌検出用具は、例えば、大きさおよび形状は、特に制限されない。前記菌検出用具において、例えば、前記各収容室等の形状は、例えば、筒状であり、具体例として、例えば、円筒、角筒等があげられる。前記円筒は、例えば、真円、楕円等があげられ、前記角筒は、例えば、正方形、長方形等の４角、その他の多角等があげられる。
【０１３１】
前記菌検出用具において、各部位の連結および装着は、特に制限されず、例えば、螺合、嵌合、挿嵌等があげられる。前記挿嵌は、例えば、圧入が好ましい。各部位の連結等は、例えば、雄型と雌型の組合せを利用することでき、例えば、対応する凹部と凸部との組合せ、雄ネジと雌ネジとの組合せ等が例示できる。
【０１３２】
［２．菌検出用具］
本発明の菌検出用具は、前述のように、
試料採取用具と本体とを有し；
前記試料採取用具は、試料を採取する採取部と、前記本体との連結部とを含み；
前記本体は、
前記菌濃縮用試薬および前記蛍光標識化結合分子を収容する試薬収容室と、
前記試料採取用具の前記採取部を収容する採取部収容室と、
前記試料採取用具との連結部とを含み、
前記試薬収容室と前記採取部収容室とは、独立しており；
前記試料採取用具と前記本体とは、前記試料採取用具の採取部が前記本体の採取部収容室に収容された状態で、前記試料採取用具の連結部と前記本体の連結部とにおいて連結され；
前記本発明の検出方法に使用されることを特徴とする。
【０１３３】
本発明の菌検出用具は、前記本発明の菌検出方法に使用することが特徴であり、前記本発明の菌検出方法における菌検出用具の記載を全て援用できる。
【０１３４】
以上、実施形態および実施例を参照して本願発明を説明したが、本願発明は、上記実施形態および実施例に限定されるものではない。本願発明の構成や詳細には、本願発明のスコープ内で当業者が理解しうる様々な変更をできる。
【０１３５】
この出願は、２０１４年１１月６日に出願された日本出願特願２０１４−２２５６８２を基礎とする優先権を主張し、その開示の全てをここに取り込む。
【産業上の利用可能性】
【０１３６】
本発明によれば、簡便且つ容易に、試料中の菌の培養および目的の菌の検出を行うことができる。特に、本発明は、試薬として前記蛍光標識アプタマーを使用して、蛍光偏光度の変化により、目的の菌を検出できることから、容易な検出が可能となる。したがって、本発明は、例えば、食品製造、食品管理、食品の流通等の分野において、極めて有用である。
【符号の説明】
【０１３７】
１０  採取部収容室
１１  試薬収容室
１２  第２試薬収容室
１３  第１試薬収容室
１４  殺菌剤収容室
１５  試料採取用具
１６  中空管
２１  把持部
４１  穿孔室
４２  カッター
６１  保持室
【図１】
2016072115.tif 000003
【図２】
2016072115.tif 000004
【図３】
2016072115.tif 000005
【図４】
2016072115.tif 000006
【図５】
2016072115.tif 000007
【図６】
2016072115.tif 000008
【図７】
2016072115.tif 000009
【図８】
2016072115.tif 000010
【図９】
2016072115.tif 000011
【国際調査報告】
2016072115.tif 000012
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2016072115.tif 000014
2016072115.tif 000015
2016072115.tif 000016
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