(57)【要約】ＢＴＫに対して選択性が高く医薬品原薬として有用な塩を提供する。式（１）で表される（Ｒ）−１−（１−アクリロイルピペリジン−３−イル）−４−アミノ−Ｎ−（ベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−カルボキサミド（化合物Ａ）のフマル酸塩が、化合物Ａ又はその他の塩と比較して、チャネルハイドレートの性質がなく、安定で吸収性に優れることを見出した。2016121954.tif 000019
2016121954.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ｒ）−１−（１−アクリロイルピペリジン−３−イル）−４−アミノ−Ｎ−（ベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−カルボキサミドのフマル酸塩。
【請求項２】
（Ｒ）−１−（１−アクリロイルピペリジン−３−イル）−４−アミノ−Ｎ−（ベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−カルボキサミド・１／２フマル酸塩である請求項１に記載の塩。
【請求項３】
粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、回折角（２θ±０．１°）が、４．５゜、５．８゜、１１．２゜、１２．１゜、１２．４゜、１３．４゜、１６．６゜、１７．３゜、１８．２゜、２０．２゜、２６．４゜、及び２７．１゜から選択される少なくとも２つ以上のピークを有する結晶である請求項２に記載の塩。
【請求項４】
粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、回折角（２θ±０．１°）が、４．５゜、５．８゜、１１．２゜、１２．１゜、１２．４゜、１３．４゜、１６．６゜、１７．３゜、１８．２゜、２０．２゜、２６．４゜、及び２７．１゜から選択される少なくとも５つ以上のピークを有する結晶である請求項２又は３に記載の塩。
【請求項５】
粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、回折角（２θ±０．１°）が、４．５゜、５．８゜、１１．２゜、１２．１゜、１２．４゜、１３．４゜、１６．６゜、１７．３゜、１８．２゜、２０．２゜、２６．４゜、及び２７．１゜にピークを有する結晶である請求項２乃至４のいずれか１項に記載の塩。
【請求項６】
図２に示される粉末Ｘ線回折スペクトルを有する結晶である請求項２乃至５のいずれか１項に記載の塩。
【請求項７】
示差走査熱量（ＤＳＣ）曲線におけるピーク温度が１９７℃〜１９９℃付近の吸熱ピークを有する結晶である請求項２乃至６のいずれか１項に記載の塩。
【請求項８】
（Ｒ）−１−（１−アクリロイルピペリジン−３−イル）−４−アミノ−Ｎ−（ベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−カルボキサミド・１フマル酸塩である請求項１に記載の塩。
【請求項９】
粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、回折角（２θ±０．１°）が、７．２゜、１２．４゜、１４．４゜、１５．０゜、１５．６゜、１９．０゜、２２．３゜、２２．６゜、２３．４゜、２５．５゜、２５．９゜及び２７．６゜から選択される少なくとも２つ以上のピークを有する結晶である請求項８に記載の塩。
【請求項１０】
粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、回折角（２θ±０．１°）が、７．２゜、１２．４゜、１４．４゜、１５．０゜、１５．６゜、１９．０゜、２２．３゜、２２．６゜、２３．４゜、２５．５゜、２５．９゜及び２７．６゜から選択される少なくとも５つ以上のピークを有する結晶である請求項８又は９に記載の塩。
【請求項１１】
粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、回折角（２θ±０．１°）が、７．２゜、１２．４゜、１４．４゜、１５．０゜、１５．６゜、１９．０゜、２２．３゜、２２．６゜、２３．４゜、２５．５゜、２５．９゜及び２７．６゜にピークを有する結晶である請求項８乃至１０のいずれか１項に記載の塩。
【請求項１２】
図４に示される粉末Ｘ線回折スペクトル有する結晶である請求項８乃至１１のいずれか１項に記載の塩。
【請求項１３】
示差走査熱量（ＤＳＣ）曲線におけるピーク温度が２１９℃〜２２４℃付近の吸熱ピークを有する結晶である請求項８乃至１２のいずれか１項に記載の塩。
【請求項１４】
粉末Ｘ線回折スペクトルにおいてハローパターンを示す非晶質体である請求項８に記載の塩。
【請求項１５】
図１に示される粉末Ｘ線スペクトルを有する非晶質体である請求項８又は１４に記載の塩。
【請求項１６】
請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩を有効成分とするＢＴＫ阻害剤。
【請求項１７】
請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩を含有する医薬組成物。
【請求項１８】
請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩を有効成分とする抗腫瘍剤又はアレルギー疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患の予防剤及び／又は治療剤。
【請求項１９】
請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩を有効成分とする血液腫瘍に対する抗腫瘍剤、又は、アレルギー性鼻炎、花粉症、アトピー性皮膚炎、関節リウマチ、全身性エリテマトーデスの予防剤及び／又は治療剤。
【請求項２０】
ＢＴＫ阻害剤を製造するための、請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩の使用。
【請求項２１】
医薬組成物を製造するための、請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩の使用。
【請求項２２】
抗腫瘍剤又はアレルギー疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患の予防剤及び／又は治療剤を製造するための、請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩の使用。
【請求項２３】
血液腫瘍に対する抗腫瘍剤、又は、アレルギー性鼻炎、花粉症、アトピー性皮膚炎、関節リウマチ、全身性エリテマトーデスの予防剤及び／又は治療剤を製造するための、請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩の使用。
【請求項２４】
ＢＴＫ阻害に使用するための、請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩。
【請求項２５】
医薬として使用するための、請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩。
【請求項２６】
腫瘍、アレルギー疾患、自己免疫疾患又は炎症性疾患の予防又は治療に使用するための、請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩。
【請求項２７】
血液腫瘍、アレルギー性鼻炎、花粉症、アトピー性皮膚炎、関節リウマチ又は全身性エリテマトーデスの予防又は治療に使用するための、請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩。
【請求項２８】
ＢＴＫ阻害方法であって、それを必要とする対象に、請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩の有効量を投与することを含む、方法。
【請求項２９】
腫瘍、アレルギー疾患、自己免疫疾患又は炎症性疾患の予防及び／又は治療方法であって、それを必要とする対象に、請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩の有効量を投与することを含む、方法。
【請求項３０】
血液腫瘍、アレルギー性鼻炎、花粉症、アトピー性皮膚炎、関節リウマチ又は全身性エリテマトーデスの治療方法であって、それを必要とする対象に、請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩の有効量を投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｂｒｕｔｏｎ’ｓ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ（ＢＴＫ）阻害活性を有する化合物の新規な塩及びその結晶に関する。
【背景技術】
【０００２】
プロテインキナーゼは生体内に種々存在し、広範囲な機能調節に関わっていることが知られている。Ｂｒｕｔｏｎ’ｓ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ（ＢＴＫ）はＴｅｃ  ｋｉｎａｓｅ  ｆａｍｉｌｙに属するプロテインキナーゼであり、Ｂ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＢＣＲ）シグナルの下流でＢ細胞の増殖、生存、分化及び活性化等の制御に関わる重要な役割を担っている非受容体型チロシンキナーゼである（非特許文献１）。ＢＴＫの活性を制御できる阻害剤は、ＢＴＫシグナル経路の異常亢進と関連した疾患（例えば癌など）の治療薬として有用であると考えられる。【０００３】
ＢＴＫ阻害活性を有する化合物としては、ＰＣＩ−３２７６５（非特許文献２）や、特許文献１及び２に記載の化合物が知られている。
特許文献１及び２に開示された化合物は、ＢＴＫに加えてＥＧＦＲ（Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ）、ＪＡＫ３（Ｊａｎｕｓ  ｋｉｎａｓｅ  ３）等に対しても高い阻害活性を示すことが知られている。しかし、このようなマルチキナーゼ阻害剤は、種々のシグナル経路を阻害することで細胞増殖等を抑制するため、さまざまな副作用が懸念される。例えば、ＥＧＦＲはリガンドである上皮成長因子（Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ；ＥＧＦ）等と結合し、種々の細胞の増殖や生存（アポトーシス阻害等）等に関与していることが知られているが（非特許文献３）、ＥＧＦＲを標的とした阻害剤では皮膚障害や消化管障害等の副作用が共通して発生することが知られており、これらの副作用は野生型ＥＧＦＲシグナル経路の阻害と関連しうると広く考えられている（非特許文献４）。
そこで、ＢＴＫ阻害活性を有しつつＥＧＦＲ阻害活性が弱い化合物としてＰＣＩ−４５２９２が知られている（非特許文献５）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第２０１１／０９０７６０号
【特許文献２】国際公開第２００９／１５８５７１号
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  ２０００  Ｊｕｎ；１２（３）：２８２−８．
【非特許文献２】Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．２０１０  Ｊｕｌ  ２０；１０７（２９）：１３０７５−８０．
【非特許文献３】Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ，ｖｏｌ．６，ｐｐ８０３−８１１（２００６）
【非特許文献４】Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．，ｖｏｌ．６，ｐｐ９８−１０９（２０１２）
【非特許文献５】Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ａｔｌａｎｔａ，ＧＡ，６−１１  Ｎｏｖｅｍｂｅｒ，２０１０）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、ＢＴＫに対して高い阻害活性を有しＥＧＦＲのような他のキナーゼに対する阻害活性が低い、選択性の高いＢＴＫ阻害剤であり、さらに医薬品原薬として有用な塩を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本出願人は、前記課題を解決すべく鋭意検討した結果、下記式（１）で表される（Ｒ）−１−（１−アクリロイルピペリジン−３−イル）−４−アミノ−Ｎ−（ベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−カルボキサミド（化合物Ａ）が、ＢＴＫに対して高い阻害活性を持ちつつＥＧＦＲのような他のキナーゼに対する阻害活性が低く、癌、自己免疫疾患、アレルギー疾患などを治療するための医薬として有用であることを見出した。【０００８】
【化１】
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【０００９】
そして、本出願人は、化合物Ａの製剤開発を目的に、化合物Ａの物理化学的性質を研究していたところ、（１）化合物Ａのフリー体を高湿度下に暴露した場合には、空気中の水分を吸収し、また、低湿度下に暴露した場合には水分を放出するチャネルハイドレート（ｃｈａｎｎｅｌ  ｈｙｄｒａｔｅ）としての性質を有することから医薬品原薬として使用しづらいこと、（２）化合物Ａの酸付加塩としては酒石酸、リン酸、フマル酸のみからだけ酸付加塩が生成すること、（３）更に驚くべき事には、これらの酸付加塩のうちフマル酸塩のみがチャネルハイドレートの性質を有しないことを見いだし、本発明を完成するに至った。【００１０】
より詳細には、医薬品の工業的生産においては原薬の安定性等が求められるが、それらは個々の化合物の属性に依存する。したがって、複雑な化合物において、医薬品原薬として適切な性質を備える塩を予測することは困難であり、化合物ごとに医薬品として有用な種々の塩を見出すことが求められる。かかる観点から、本出願人は、化合物Ａの各種の塩を合成しその特性や安定性を検討してきたところ、我々の検討で塩を形成できたのは、フマル酸塩、酒石酸塩、リン酸塩、マグネシウム塩であった。しかし、これらの塩やフリー体のうち、酒石酸塩及びフリー体はチャネルハイドレートの性質を有し、固体安定性に乏しく、また、リン酸塩は水分吸脱着試験においてもとの結晶形を維持することができない上、固体安定性に乏しく、マグネシウム塩は類縁物質が多く含まれているため結晶の純度が低いものであった。唯一、フマル酸塩のみが、チャネルハイドレートの性質を回避でき、かつ取得操作性、再現性に優れ、安定で吸収性に優れることを見出し、本発明を完成した。【００１１】
すなわち、本発明は、以下の１）〜１８）に係るものである。
１）（Ｒ）−１−（１−アクリロイルピペリジン−３−イル）−４−アミノ−Ｎ−（ベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−カルボキサミド（化合物Ａ）のフマル酸塩。
２）（Ｒ）−１−（１−アクリロイルピペリジン−３−イル）−４−アミノ−Ｎ−（ベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−カルボキサミド（化合物Ａ）・１／２フマル酸塩。
３）（Ｒ）−１−（１−アクリロイルピペリジン−３−イル）−４−アミノ−Ｎ−（ベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−カルボキサミド（化合物Ａ）・１フマル酸塩。
４）前記化合物Ａのフマル酸塩を有効成分とするＢＴＫ阻害剤。
５）前記化合物Ａのフマル酸塩を含有する医薬組成物。
６）前記化合物Ａのフマル酸塩を有効成分とする抗腫瘍剤又はアレルギー疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患の予防剤及び／又は治療剤。
７）前記化合物Ａのフマル酸塩を有効成分とする血液腫瘍に対する抗腫瘍剤、又は、アレルギー性鼻炎、花粉症、アトピー性皮膚炎、関節リウマチ、全身性エリテマトーデスの予防剤及び／又は治療剤。
８）ＢＴＫ阻害剤を製造するための、前記化合物Ａのフマル酸塩の使用。
９）医薬組成物を製造するための、前記化合物Ａのフマル酸塩の使用。
１０）抗腫瘍剤又はアレルギー疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患の予防剤及び／又は治療剤を製造するための、前記化合物Ａのフマル酸塩の使用。
１１）血液腫瘍に対する抗腫瘍剤、又は、アレルギー性鼻炎、花粉症、アトピー性皮膚炎、関節リウマチ、全身性エリテマトーデスの予防剤及び／又は治療剤を製造するための、前記化合物Ａのフマル酸塩の使用。
１２）ＢＴＫ阻害に使用するための、前記化合物Ａのフマル酸塩。
１３）医薬として使用するための、前記化合物Ａのフマル酸塩。
１４）腫瘍、アレルギー疾患、自己免疫疾患又は炎症性疾患の予防又は治療に使用するための、前記化合物Ａのフマル酸塩。
１５）血液腫瘍、アレルギー性鼻炎、花粉症、アトピー性皮膚炎、関節リウマチ又は全身性エリテマトーデスの予防又は治療に使用するための、前記化合物Ａのフマル酸塩。
１６）ＢＴＫ阻害方法であって、それを必要とする対象に、前記化合物Ａのフマル酸塩の有効量を投与することを含む、方法。
１７）腫瘍、アレルギー疾患、自己免疫疾患又は炎症性疾患の予防及び／又は治療方法であって、それを必要とする対象に、前記化合物Ａのフマル酸塩の有効量を投与することを含む、方法。
１８）血液腫瘍、アレルギー性鼻炎、花粉症、アトピー性皮膚炎、関節リウマチ又は全身性エリテマトーデスの治療方法であって、それを必要とする対象に、前記化合物Ａのフマル酸塩の有効量を投与することを含む、方法。
【発明の効果】
【００１２】
本発明にかかる化合物Ａのフマル酸塩は、医薬品原薬として優れた固体安定性を有し、化合物Ａ、又は、化合物Ａのフマル酸塩以外の塩と比較して、チャネルハイドレートの性質を回避でき、取得操作性・再現性に優れる。更に本発明にかかる化合物Ａのフマル酸塩は、優れた経口吸収性を示し、医薬品又は医薬品原薬としてきわめて有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】実施例１で合成した化合物Ａの１フマル酸塩（非晶質体）の粉末Ｘ線回折スペクトルを示す（縦軸は強度（ｃｐｓ）、横軸は回折角（２θ±０．１°）を表す）。
【図２】実施例２で合成した、化合物Ａの１／２フマル酸塩（結晶）の粉末Ｘ線回折スペクトルを示す（縦軸は強度（ｃｐｓ）、横軸は回折角（２θ±０．１°）を表す）。
【図３】実施例２で合成した、化合物Ａの１／２フマル酸塩（結晶）の示差走査熱量（ＤＳＣ）曲線を示す。
【図４】実施例３で合成した、化合物Ａの１フマル酸塩（結晶）の粉末Ｘ線回折スペクトル縦軸は強度（ｃｐｓ）、横軸は回折角（２θ±０．１°）を表す）。
【図５】実施例３で合成した、化合物Ａの１フマル酸塩（結晶）の示差走査熱量（ＤＳＣ）曲線を示す。
【図６】化合物Ａの水分吸脱着等温曲線を示す。
【図７】化合物Ａの１フマル酸塩（結晶）の水分吸脱着等温曲線を示す。
【図８】化合物Ａの１／２フマル酸塩（結晶）の水分吸脱着等温曲線を示す。
【図９】化合物Ａの１／２酒石酸塩の水分吸脱着等温曲線を示す。
【図１０】化合物Ａの１リン酸塩の水分吸脱着等温曲線を示す。
【図１１】化合物Ａの１フマル酸塩（結晶）のマウスコラーゲン誘発関節炎モデルに対する効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００１５】
本明細書中で単に「化合物Ａ」と記載した場合は、フリー体としての（Ｒ）−１−（１−アクリロイルピペリジン−３−イル）−４−アミノ−Ｎ−（ベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−カルボキサミドを意味する。
【００１６】
本明細書中で単に「化合物Ａのフマル酸塩」と記載した場合は、化合物Ａとフマル酸との塩体であればいずれでもよく、１フマル酸塩、１／２フマル酸塩を包含する。更には、化合物Ａのフマル酸塩の結晶、及び、化合物Ａのフマル酸塩の非晶質体の、いずれをも含む意味で用いられる。化合物Ａのフマル酸塩として、好ましくは、化合物Ａの１フマル酸塩（「化合物Ａ・１フマル酸塩」と略す場合あり）、化合物Ａの１／２フマル酸塩（「化合物Ａ・１／２フマル酸塩」と略す場合あり）であり、より好ましくは、化合物Ａの１フマル酸塩（結晶）、化合物Ａの１／２フマル酸塩（結晶）、化合物Ａの１フマル酸塩（非晶質体）であり、特に好ましくは、化合物Ａの１フマル酸塩（結晶）、化合物Ａの１／２フマル酸塩（結晶）である。
【００１７】
本明細書中、「結晶」、「非晶質体」なる語は、通常の意味で用いられる。
【００１８】
空間的に規則的な原子配列及び物理化学的性質が異なる複数の結晶（結晶多形）が生成することがあるが、本発明にかかる塩は、これら結晶多形のいずれであってもよく、２以上の結晶多形の混合物、更には結晶と非晶質体の混合物であってもよい。
【００１９】
また、化合物Ａのフマル酸塩のラベル体、すなわち、化合物Ａやフマル酸の、１つ以上の原子を放射性同位元素若しくは非放射性同位元素で置換した化合物も、本発明に包含される。
【００２０】
尚、粉末Ｘ線回折スペクトルは、データの性質上、結晶の同一性を認定する際は、回折角や全体的なパターンが重要である。粉末Ｘ線回折スペクトルの相対強度は結晶成長の方向、粒子の大きさ、測定条件によって多少変動し得るものであるから、厳密に解されるべきではない。
各種パターンから得られる数値は、その結晶成長の方向、粒子の大きさ、測定条件等によって多少の誤差が生じる場合がある。したがって、本明細書中、粉末Ｘ線回折スペクトルにおける回折角（２θ±０．１°）の語は、その値の±０．１°の範囲にあればよいことを意味する。
【００２１】
また、示差走査熱量（ＤＳＣ）曲線における吸熱ピークのピーク温度に用いられる「付近」の語は、おおよそその温度の値であることを意味し、好ましくはその値の±５℃の範囲内にあればよいことを意味する。さらに好ましくは、その値の±２℃の範囲にあればよいことを意味する。
【００２２】
化合物Ａの１フマル酸塩（結晶）は、図４に示される粉末Ｘ線回折スペクトル及び／又は図５に示される示差走査熱量（ＤＳＣ）曲線を有することが好ましい。
【００２３】
ここで、化合物Ａの１フマル酸塩（結晶）の粉末Ｘ線回折スペクトルにおける特徴的なピークは、回折角（２θ±０．１°）として７．２°、１２．４°、１５．６°、２５．９°及び２７．６°を挙げることができ、より好ましくは７．２゜、１２．４゜、１４．４゜、１５．０゜、１５．６゜、１９．０゜、２２．３゜、２２．６゜、２３．４゜、２５．５゜、２５．９゜及び２７．６゜を挙げることができる。
本発明にかかる化合物Ａの１フマル酸塩（結晶）は、上記より好ましいピークから選択される少なくとも２つ以上のピークを有する結晶であり、好ましくは、上記ピークから選択される少なくとも３つ以上のピークを有する結晶であり、より好ましくは、上記ピークから選択される少なくとも５つ以上のピークを有する結晶であり、さらに好ましくは、上記ピークから選択される少なくとも８つ以上のピークを有する結晶であり、特に好ましくは、上記ピークのいずれもを有する結晶である。
【００２４】
また、化合物Ａの１フマル酸塩（結晶）の示差走査熱量（ＤＳＣ）曲線における吸熱ピークは２１９℃〜２２４℃付近、好ましくは２２３℃付近を挙げることができる。
【００２５】
本発明にかかる化合物Ａの１フマル酸塩（結晶）の別の好ましい態様としては、粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、回折角（２θ±０．１°）が、７．２°、１２．４°、１５．６°、２５．９°及び２７．６°から選択される少なくとも２つ以上、好ましくは少なくとも３つ以上、さらに好ましくは５つのピークを有し、かつ示差走査熱量（ＤＳＣ）曲線におけるピーク温度が２１９〜２２４℃付近、好ましくは２２３℃付近の吸熱ピークを有する結晶である。また、別の好ましい態様としては、粉末Ｘ線回折スペクトルにおいての回折角（２θ±１°）が、７．２゜、１２．４゜、１４．４゜、１５．０゜、１５．６゜、１９．０゜、２２．３゜、２２．６゜、２３．４゜、２５．５゜、２５．９゜及び２７．６゜から選択される少なくとも２つ以上、好ましくは少なくとも３つ以上、さらに好ましくは少なくとも５つ以上、さらに好ましくは少なくとも８つ以上、さらに好ましくは上記ピークのいずれもを有し、かつ、示差走査熱量（ＤＳＣ）曲線におけるピーク温度が２１９℃〜２２４℃付近、好ましくは２２３℃付近の吸熱ピークを有する結晶である。
【００２６】
化合物Ａの１／２フマル酸塩（結晶）は、図２に示される粉末Ｘ線回折スペクトル及び／又は図３に示される示差走査熱量（ＤＳＣ）曲線を有することが好ましい。
【００２７】
ここで、化合物Ａの１／２フマル酸塩（結晶）の粉末Ｘ線回折スペクトルにおける特徴的なピークは、回折角（２θ±０．１°）として４．５°、５．８°、１６．６°、２０．２°及び２６．４°を挙げることができ、より好ましくは４．５゜、５．８゜、１１．２゜、１２．１゜、１２．４゜、１３．４゜、１６．６゜、１７．３゜、１８．２゜、２０．２゜、２６．４゜及び２７．１゜を挙げることができる。
本発明にかかる化合物Ａの１／２フマル酸塩（結晶）は、上記より好ましいピークから選択される少なくとも２つ以上のピークを有する結晶であり、好ましくは、上記ピークから選択される少なくとも３つ以上のピークを有する結晶であり、より好ましくは、上記ピークから選択される少なくとも５つ以上のピークを有する結晶であり、さらに好ましくは、上記ピークから選択される少なくとも８つ以上のピークを有する結晶であり、特に好ましくは、上記ピークのいずれもを有する結晶である。
【００２８】
また、化合物Ａの１／２フマル酸塩（結晶）の示差走査熱量（ＤＳＣ）曲線における吸熱ピークは１９７℃〜１９９℃付近、好ましくは１９８℃付近を挙げることができる。
【００２９】
本発明にかかる化合物Ａの１／２フマル酸塩（結晶）の別の好ましい態様としては、粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、回折角（２θ±０．１°）が、４．５°、５．８°、１６．６°、２０．２°及び２６．４°から選択される少なくとも２つ以上、好ましくは少なくとも３つ以上、さらに好ましくは５つのピークを有し、かつ示差走査熱量（ＤＳＣ）曲線におけるピーク温度が１９７〜１９９℃付近、好ましくは１９８℃付近の吸熱ピークを有する結晶である。また別の態様としては、粉末Ｘ線回折スペクトルにおける回折角（２θ±１°）が、４．５゜、５．８゜、１１．２゜、１２．１゜、１２．４゜、１３．４゜、１６．６゜、１７．３゜、１８．２゜、２０．２゜、２６．４゜及び２７．１゜から選択される少なくとも２つ以上、好ましくは少なくとも３つ以上、さらに好ましくは少なくとも５つ以上、さらに好ましくは少なくとも８つ以上、さらに好ましくは上記ピークのいずれもを有し、かつ、示差走査熱量（ＤＳＣ）曲線におけるピーク温度が１９７℃〜１９９℃付近、好ましくは１９８℃付近の吸熱ピークを有する結晶である。
【００３０】
本発明にかかる化合物Ａのフマル酸塩は、非晶質体として得ることも可能である。本発明にかかる化合物Ａのフマル酸塩の非晶質体は、具体的には粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて回折像が幅広く明確でないハローパターンを示し、より好ましくは図１に示される粉末Ｘ線回折スペクトルを有する。
【００３１】
化合物Ａは、例えば後述の参考例１〜２に従って合成することができる。化合物Ａの合成法は、後述の参考例１〜２に限定されるものではない。
より詳細には、（Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−３−ピペリジノールにトリエチルアミン等の第３級アミンの存在下、メタンスルホニルクロリドを反応させて（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（メチルスルホニルオキシ）ピペリジン−１−カルボキシレートを得る。次いで、この化合物に炭酸カリウム等の塩基の存在下に３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミンを反応させて（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（４−アミノ−３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレートを得る。次にこの化合物を、一酸化炭素雰囲気下で、ベンズ［ｄ］オキサゾール−２−アミン存在下、パラジウム触媒及び塩基と反応させて、（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（４−アミノ−３−（（ベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）カルバモイル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレートを得る。次いで、この化合物からＢｏｃ保護基を脱離させ、塩化アクリロイルを反応させることにより化合物Ａを得る。
【００３２】
本発明にかかる化合物Ａの１フマル酸塩（非晶質体）は、例えば以下の方法により製造することができる。
化合物Ａに１００〜３００倍量、好ましくは１５０倍量のテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）と、０．０１〜１倍量、好ましくは０．１倍量の水を添加した後、化合物Ａと同モル用量のフマル酸を加えて溶解させる。
ＴＨＦで複数回、好ましくは２回〜５回共沸させながら溶媒を留去することにより、化合物Ａの１フマル酸塩の非晶質体を白色粉末として得ることができる。
【００３３】
本発明にかかる化合物Ａの１フマル酸塩（結晶）は、例えば、化合物Ａの１フマル酸塩（非晶質体）を５〜５０倍量、好ましくは２０倍量のアセトニトリルに懸濁させ、１２〜７２時間、好ましくは２４時間懸濁加熱を行うことにより、白色粉末として得ることができる。
【００３４】
本発明にかかる化合物Ａの１／２フマル酸塩（結晶）は、例えば、化合物Ａの１フマル酸塩（非晶質体）を１０〜１００倍量、好ましくは６０倍量のメチルエチルケトンに懸濁させ、１２〜７２時間、好ましくは２４時間懸濁加熱を行うことにより白色粉末として得ることができる。
【００３５】
本発明にかかる化合物Ａのフマル酸塩によれば、化合物Ａのチャネルハイドレートの性質を回避できる。
一般的に、チャネルハイドレートの性質が回避された化合物を用いた医薬品又は医薬品原薬は、その保管状態での湿度における保存上及び品質管理上の問題が軽減され、また錠剤やカプセル剤等の固形製剤を製造する際に、有効成分の重量変化に基づく製剤上の問題を軽減できることが知られている。
したがって、本発明にかかる化合物Ａのフマル酸塩は、安定した保存、容易な品質管理が期待でき、製剤上においても取扱い容易な優れた化合物であると言える。
【００３６】
本発明にかかる化合物Ａのフマル酸塩は、化合物Ａの他の塩と比較して取得操作性・再現性に優れる。具体的には、例えば、化合物Ａと塩酸、硫酸、コハク酸、リンゴ酸、クエン酸、又は酢酸との塩は、本明細書記載の検討方法によっては形成されなかった。また、例えば、化合物Ａのナトリウム塩形成においては、分解が顕著に進行し、化合物Ａの１／２マグネシウム塩を合成したところ、類縁物質の数が多くなった上、塩取得時の操作が煩雑であり、水及び有機溶媒に対する溶解性が低く、再溶解困難であった。
本発明にかかる化合物Ａのフマル酸塩は、医薬品原薬として取扱い易く、安定した品質の医薬品の工業的生産に資するものである。
【００３７】
本発明にかかる化合物Ａのフマル酸塩は、固体安定性に優れる。医薬品の開発候補化合物が固体安定性を備えることは、工業上の操作においても、また、品質を保つ上でも、重要である。したがって、本発明にかかる化合物Ａのフマル酸塩は、医薬品又は医薬品原薬として必要とされる優れた性質を有する。
【００３８】
本発明にかかる化合物Ａのフマル酸塩は、経口吸収性に優れ、品質の高く優れた医薬品の提供に資するものである。
【００３９】
化合物Ａの塩の中で、化合物Ａが有するチャネルハイドレートの性質を回避し、医薬品原薬として十分な溶解性を保ちつつ、取得操作性・再現性、固体安定性、経口吸収性のいずれもにおいて優れているのは、本発明にかかる化合物Ａのフマル酸塩である。
【００４０】
本発明にかかる化合物Ａのフマル酸塩は、優れたＢＴＫ阻害活性を有し、例えば癌や腫瘍、種々の免疫疾患（例えばアレルギー疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患）の予防及び／又は治療剤として有用である。また、ＢＴＫに対する優れた選択性を有しており、他のキナーゼ（例えばＥＧＦＲ）も阻害してしまうことによる副作用が少ないという利点を有する。
【００４１】
本発明にかかる化合物Ａのフマル酸塩は、優れたＢＴＫ阻害活性を有する。本明細書において「ＢＴＫ」とは、ヒトまたは非ヒト哺乳動物のＢＴＫを含み、好ましくはヒトＢＴＫである。また、「ＢＴＫ」の語にはアイソフォームが含まれる。
また、本発明にかかる化合物Ａのフマル酸塩は、その優れたＢＴＫ阻害活性により、ＢＴＫが関与する疾患の予防や治療のための医薬として有用である。「ＢＴＫが関与する疾患」とは、ＢＴＫの機能を欠失、抑制及び／又は阻害することによって、発症率の低下、症状の寛解、緩和、及び／又は完治する疾患が挙げられる。このような疾患として、例えば、癌や腫瘍、アレルギー疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患、移植片対宿主病等が挙げられるがこれに限定はされず、好ましくは、癌、腫瘍、アレルギー疾患、自己免疫疾患である。
【００４２】
対象となる癌や腫瘍は特に制限はされないが、例えば、上皮性癌（例えば、呼吸器系癌、消化器系癌、生殖器系癌、分泌系癌等が挙げられる。）、肉腫、造血細胞系腫瘍、中枢神経系腫瘍、末梢神経腫瘍等が挙げられ、好ましくは、造血細胞系腫瘍（例えば、白血病、多発性骨髄腫、悪性リンパ腫等）である。また、腫瘍の発生臓器の種類も特に制限はされないが、例えば、頭頚部癌、食道癌、胃癌、結腸癌、直腸癌、肝臓癌、胆嚢・胆管癌、胆道癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、子宮頚癌、子宮体癌、腎癌、膀胱癌、前立腺癌、精巣腫瘍、骨・軟部肉腫、血液腫瘍、多発性骨髄腫、皮膚癌、脳腫瘍、中皮腫等が挙げられる。造血細胞系腫瘍としては、好ましくは、急性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄性白血病、リンパ芽球性リンパ腫、骨髄増殖性腫瘍、慢性リンパ性白血病、小リンパ球性リンパ腫、骨髄異形性症候群、濾胞性リンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、辺縁帯リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫等である。特に好ましくは、Ｂリンパ芽球性白血病／リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、節性濾胞辺縁帯リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、慢性リンパ性白血病、小リンパ球性リンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、骨髄異形成症候群、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病等の血液腫瘍である。
【００４３】
対象となるアレルギー疾患としては特に制限はされないが、例えば、気管支喘息、アレルギー性鼻炎、花粉症、アトピー性皮膚炎、食物アレルギー、アナフィラキシー、薬物アレルギー、じんましん、結膜炎等が挙げられる。好ましくは、気管支喘息、アレルギー性鼻炎、花粉症、アトピー性皮膚炎であり、特に好ましくはアレルギー性鼻炎、花粉症、アトピー性皮膚炎である。
【００４４】
対象となる自己免疫疾患としては特に制限はされないが、例えば、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、強皮症、多発性筋炎、シェーグレン症候群、ベーチェット病が挙げられる。好ましくは、関節リウマチ、全身性エリテマトーデスであり、特に好ましくは関節リウマチである。
【００４５】
対象となる炎症性疾患としては特に制限はされないが、例えば、虫垂炎、眼瞼炎、細気管支炎、気管支炎、滑液包炎、子宮頚炎、胆管炎、胆嚢炎、潰瘍性大腸炎、クローン病、過敏性腸疾患、膀胱炎、涙腺炎、接触性皮膚炎、皮膚筋炎、脳炎、心内膜炎、子宮内膜炎、精巣上体炎、筋膜炎、結合組織炎、胃腸炎、肝炎、汗腺膿瘍、喉頭炎、乳腺炎、髄膜炎、脊髄炎、心筋炎、腎炎、卵巣炎、精巣炎、膵炎、耳下腺炎、心膜炎、腹膜炎、咽頭炎、胸膜炎、静脈炎、肺炎、直腸炎、前立腺炎、腎盂腎炎、耳管炎、副鼻腔炎、口内炎、変形性関節症、滑膜炎、腱炎、へんとう炎、ブドウ膜炎、膣炎、血管炎、外陰炎が挙げられる。好ましくは、潰瘍性大腸炎、クローン病、過敏性腸疾患、接触性皮膚炎、膀胱炎、変形性関節症である。特に好ましくは、接触性皮膚炎、膀胱炎、変形性関節症が挙げられる。
【００４６】
本発明にかかる化合物Ａのフマル酸塩を医薬組成物とするにあたっては、必要に応じて薬学的担体を配合し、予防又は治療目的に応じて各種の投与形態を採用可能であり、該形態としては、例えば、経口剤、注射剤、坐剤、軟膏剤、貼付剤等のいずれでもよい。これらの投与形態は、各々当業者に公知慣用の製剤方法により製造できる。特に、化合物Ａのフマル酸塩の結晶を製造原薬とする、経口投与用の錠剤、被覆錠剤、丸剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤と、安定な固形製剤として有利である。
【００４７】
薬学的担体としては、製剤素材として慣用の各種有機或いは無機担体物質が用いられ、固形製剤における賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、コーティング剤等、液状製剤における溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、ｐＨ調節剤・緩衝剤、無痛化剤等として配合される。また、必要に応じて防腐剤、抗酸化剤、着色剤、矯味・矯臭剤、安定化剤等の製剤添加物を用いることもできる。
賦形剤としては、乳糖、白糖、Ｄ−マンニトール、デンプン、結晶セルロース、ケイ酸カルシウム等が挙げられる。
結合剤としては、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、アメ粉、ヒプロメロース等が挙げられる。
崩壊剤としては、デンプングリコール酸ナトリウム、カルメロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、部分アルファー化デンプン等が挙げられる。
滑沢剤としては、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ショ糖脂肪酸エステル、ステアリン酸、フマル酸ステアリルナトリウム等が挙げられる。
コーティング剤としては、エチルセルロース、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＲＳ、ヒプロメロース、白糖等が挙げられる。
溶剤としては、水、プロピレングリコール、生理食塩液が挙げられる。
溶解補助剤としては、ポリエチレングリコール、エタノール、α−シクロデキストリン、マクロゴール４００、ポリソルベート８０等が挙げられる。
懸濁化剤としては、カラギーナン、結晶セルロース・カルメロースナトリウム、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油が挙げられる。
等張化剤としては、塩化ナトリウム、グリセリン、塩化カリウム等が挙げられる。
ｐＨ調節剤・緩衝剤としては、クエン酸ナトリウム、塩酸、乳酸、リン酸、リン酸二水素ナトリウム等が挙げられる。
無痛化剤としては、プロカイン塩酸塩、リドカイン等が挙げられる。
防腐剤としては、パラオキシ安息香酸エチル、クレゾール、ベンザルコニウム塩化物等が挙げられる。
抗酸化剤としては、亜硫酸ナトリウム、アスコルビン酸、天然ビタミンＥ等が挙げられる。
着色剤としては、酸化チタン、三二酸化鉄、食用青色１号、銅クロロフィル等が挙げられる。
矯味・矯臭剤としてはアスパルテーム、サッカリン、スクラロース、ｌ−メントール、ミントフレーバー等が挙げられる。
安定化剤としては、ピロ亜硫酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム、エリソルビン酸、酸化マグネシウム、ジブチルヒドロキシトルエン等が挙げられる。
【００４８】
経口用固形製剤を調製する場合は、化合物Ａのフマル酸塩に賦形剤、必要に応じて賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味・矯臭剤等を加えた後、常法により錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等を製造することができる。
注射剤を調製する場合は、化合物Ａのフマル酸塩にｐＨ調節剤・緩衝剤、安定化剤、等張化剤、局所麻酔剤等を添加し、常法により皮下、筋肉内及び静脈内用注射剤を製造することができる。
【００４９】
上記の各投与単位形態中に配合されるべき化合物Ａのフマル酸塩の量は、これを適用すべき患者の症状により、或いはその剤形等により一定ではないが、一般に投与単位形態あたり、経口剤では０．０５〜１０００ｍｇ、注射剤では０．０１〜５００ｍｇ、坐剤では１〜１０００ｍｇとするのが望ましい。
【００５０】
また、上記投与形態を有する薬剤の１日あたりの投与量は、患者の症状、体重、年齢、性別等によって異なり一概には決定できないが、化合物Ａのフマル酸塩として通常成人（体重５０ｋｇ）１日あたり０．０５〜５０００ｍｇ、好ましくは０．１〜１０００ｍｇとすればよく、これを１日１回又は２〜３回程度に分けて投与するのが好ましい。
【実施例】
【００５１】
以下、実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。本発明は実施例により十分に説明されているが、当業者により種々の変更や修飾が可能であろうことは理解される。したがって、そのような変更や修飾が本発明の範囲を逸脱するものでない限り、それらは本発明に包含される。【００５２】
実施例で用いた各種試薬は、特に記載の無い限り市販品を使用した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーには、モリテックス社製プリフパック（登録商標）ＳＩ、バイオタージ社製ＫＰ−Ｓｉｌ（登録商標）Ｓｉｌｉｃａプレパックドカラム、又はバイオタージ社製ＨＰ−Ｓｉｌ（登録商標）Ｓｉｌｉｃａプレパックドカラムを用いた。塩基性シリカゲルカラムクロマトグラフィーにはモリテックス社製プリフパック（登録商標）ＮＨ又はバイオタージ社製ＫＰ−ＮＨ（登録商標）プレパックドカラムを用いた。分取用薄層クロマトグラフィーにはメルク社製ＫｉｅｓｅｌｇｅｌＴＭ６０Ｆ２５４，Ａｒｔ．５７４４又は和光社ＮＨ２シリカゲル６０Ｆ２５４プレートを用いた。ＮＭＲスペクトルは、ＡＬ４００（４００ＭＨｚ；日本電子（ＪＥＯＬ））、Ｍｅｒｃｕｒｙ４００（４００ＭＨｚ；アジレント・テクノロジー）型スペクトロメータ、又は４００ＭＮＭＲプローブ（Ｐｒｏｔａｓｉｓ）を装備したＩｎｏｖａ４００（４００ＭＨｚ；アジレント・テクノロジー）型スペクトロメータを使用し、重溶媒中にテトラメチルシランを含む場合は内部基準としてテトラメチルシランを用い、それ以外の場合には内部基準としてＮＭＲ溶媒を用いて測定し、全δ値をｐｐｍで示した。【００５３】
またＬＣＭＳスペクトルはＷａｔｅｒｓ社製ＡＣＱＵＩＴＹ  ＳＱＤ（四重極型）を用いて下記条件にて測定した。
カラム：ＹＭＣ社製ＹＭＣ−Ｔｒｉａｒｔ  Ｃ１８，２．０Ｘ５０ｍｍ，１．９μｍ
ＭＳ検出：ＥＳＩ  ｐｏｓｉｔｉｖｅ
ＵＶ検出：２５４及び２１０ｎｍ
カラム流速：０．５ｍＬ／ｍｉｎ
移動相：水／アセトニトリル（０．１％ギ酸）
インジェクション量：１μＬ
グラディエント（表１）【００５４】
【表１】
2016121954.tif 000004
【００５５】
また、逆相分取ＨＰＬＣ精製はＷＡＴＥＲＳ社製分取システムを用いて下記条件にて実施した。
カラム：ＹＭＣ社製ＹＭＣ−Ａｃｔｕｓ  Ｔｒｉａｒｔ  Ｃ１８，２０×５０ｍｍ，５μｍとＹＭＣ社製ＹＭＣ−Ａｃｔｕｓ  Ｔｒｉａｒｔ  Ｃ１８，２０×１０ｍｍ，５μｍを連結したものを使用した。
ＵＶ検出：２５４ｎｍ
ＭＳ検出：ＥＳＩ  ｐｏｓｉｔｉｖｅ
カラム流速：２５ｍＬ／ｍｉｎ
移動相：水／アセトニトリル（０．１％ぎ酸）
インジェクション量：０．１−０．５ｍＬ【００５６】
略号の意味を以下に示す。
ｓ：シングレット
ｄ：ダブレット
ｔ：トリプレット
ｑ：カルテット
ｄｄ：ダブル  ダブレット
ｄｔ：ダブル  トリプレット
ｔｄ：トリプル  ダブレット
ｔｔ：トリプル  トリプレット
ｄｄｄ：ダブル  ダブル  ダブレット
ｄｄｔ：ダブル  ダブル  トリプレット
ｄｔｄ：ダブル  トリプル  ダブレット
ｔｄｄ：トリプル  ダブル  ダブレット
ｍ：マルチプレット
ｂｒ：ブロード
ｂｒｓ：ブロードシングレット
ＣＤＩ：カルボニルジイミダゾール
ＤＭＳＯ−ｄ6：重ジメチルスルホキシド
ＣＤＣｌ3：重クロロホルム
ＣＤ3ＯＤ：重メタノール
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＡ：Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド
ＮＭＰ：１−メチル−２−ピロリジノン
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＷＳＣ：１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩
ＨＯＢｔ：１−ヒドロキシベンゾトリアゾール１水和物
ＨＡＴＵ：（ジメチルアミノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル（３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イルオキシ）メタンイミニウム  ヘキサフルオロホスフェート
ＤＩＡＤ：ジイソプロピルアゾジカルボキシレート
ＴＢＡＦ：テトラブチルアンモニウムフルオライド
ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ-ブトキシカルボニル
Ｂｏｃ2Ｏ：二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル
ＤＭＡＰ：ジメチルアミノピリジン【００５７】
粉末Ｘ線回折測定
粉末Ｘ線回折は、試験物質適量を必要に応じてメノウ製乳鉢で軽く粉砕した後、次の試験条件に従って測定した。
装置：リガク  ＭｉｎｉＦｌｅｘＩＩ
ターゲット：Ｃｕ
Ｘ線出力設定：１５ｍＡ，３０ｋＶ
走査範囲：２．０〜４０．０°
ステップサイズ：０．０１０°
スキャンスピード：５．００°／ｍｉｎ．
発散スリット：１．２５°
散乱スリット：開放
受光スリット：開放
データ処理を含む装置の取り扱いは、各装置で指示された方法及び手順にしたがった。
なお、各種スペクトルから得られる数値は、その結晶成長の方向、粒子の大きさ、測定条件等によって多少変動する場合がある。したがって、それらの数値は厳密に解されるべきではない。【００５８】
熱分析測定  （示差走査熱量測定（ＤＳＣ測定））
ＤＳＣ測定は、次の試験条件に従って測定した。
装置：ＴＡインスツルメント  Ｑ１０００
試料：およそ１ｍｇ
試料容器：アルミニウム製
昇温速度：２５０℃まで５℃／ｍｉｎ．で昇温
雰囲気ガス：窒素
窒素ガス流量：５０ｍＬ／ｍｉｎ．
データ処理を含む装置の取り扱いは、各装置で指示された方法及び手順にしたがった。【００５９】
参考例１  （Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（４−アミノ−３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレートの合成【００６０】
【化２】
2016121954.tif 000005
【００６１】
（工程１）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（メチルスルホニルオキシ）ピペリジン−１−カルボキシレートの合成
（Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−３−ピぺリジノール２０ｇをトルエン１００ｍＬに溶解し、０℃にてトリエチルアミン２１ｍＬ、メタンスルホニルクロライド９．２ｍＬを加えた。氷冷下にて１時間撹拌したのち、酢酸エチルと水を加え、有機層を分離した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和塩化アンモニウム水溶液、水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥、溶媒を減圧留去し、表題化合物を無色固体として２６．８ｇ得た。【００６２】
（工程２）（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（４−アミノ−３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレートの合成
国際公開第２００７／１２６８４１号パンフレットに記載されている方法にて合成した３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン１４．６ｇ、工程１で得られた（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（メチルスルホニルオキシ）ピペリジン−１−カルボキシレート２５ｇ、炭酸カリウム６９ｇをＤＭＡ１５０ｍＬの懸濁溶液を１００℃に加熱し、１０時間撹拌した。室温に冷却後、水３００ｍＬを加え生じた固体を濾取し、水で洗浄後、乾燥し表題化合物を黄色固体として２６．９ｇを得た。【００６３】
参考例２  （Ｒ）−１−（１−アクリロイルピペリジン−３−イル）−４−アミノ−Ｎ−（ベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−カルボキサミド（化合物Ａ）の合成【００６４】
【化３】
2016121954.tif 000006
【００６５】
（工程１）（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（４−アミノ−３−（（ベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）カルバモイル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレートの合成
参考例１で得た（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（４−アミノ−３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート  ３００ｍｇをＮＭＰ３ｍＬに溶解させた。ベンズ［ｄ］オキサゾール−２−アミン１１８ｍｇ、キサントホス２０ｍｇ、Ｎ−メチルモルホリン０．１５ｍＬを加え、脱気操作を行った。その後酢酸パラジウム７．６ｍｇを加え、一酸化炭素雰囲気下１１０℃に加熱して２時間撹拌した。冷却後、メタノール４．５ｍＬと５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液０．４５ｍＬを加え、室温で３０分撹拌した。その後２ＮＨＣｌでｐＨを５．３に調整し、生じた固体を濾取した。粗体をシリカゲルカラムで精製し（クロロホルムーメタノール）表題化合物を２５７ｍｇ白色固体として得た。【００６６】
（工程２）化合物Ａの合成
工程１で得た（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（４−アミノ−３−（（ベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）カルバモイル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート５．０ｇをアセトニトリル５０ｍＬに懸濁させ、ヨウ化ナトリウム７．８５ｇを加えた。室温で撹拌下、トリメチルシリルクロライド６．６５ｍＬを滴下し１時間撹拌した。水８７．５ｍＬと５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液１２．５ｍＬを加えた後、氷冷した。塩化アクロイル０．８９５ｍＬをアセトニトリル４．１ｍＬに溶解した溶液を滴下し氷冷下１時間撹拌した。水５０ｍＬを加え生じた固体を濾取して水洗し、減圧下乾燥して表題化合物４．１３ｇを白色固体として得た（化合物Ａ）。
1Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ6）：δｐｐｍ  １．５３−１．６８（ｍ，１Ｈ），１．８６−１．９８（ｍ，１Ｈ），２．０８−２．２１（ｍ，１Ｈ），２．２５−２．３９（ｍ，１Ｈ），２．８２−２．９５（ｍ，０．５Ｈ），３．１０−３．２２（ｍ，０．５Ｈ），３．２３−３．３７（ｍ，０．５Ｈ），３．６８−３．７８（ｍ，０．５Ｈ），４．０４−４．１４（ｍ，０．５Ｈ），４．２２−４．３８（ｍ，１Ｈ），４．５２−４．６５（ｍ，０．５Ｈ），４．６７−４．８１（ｍ，１Ｈ），５．５８−５．７４（ｍ，１Ｈ），６．０３−６．１９（ｍ，１Ｈ），６．６８−６．９２（ｍ，１Ｈ），７．２８−７．４０（ｍ，２Ｈ），７．５９−７．７１（ｍ，２Ｈ），８．２２（ｂｒｓ，２Ｈ），８．２８（ｓ，１Ｈ），１２．１５（ｂｒｓ，１Ｈ）【００６７】
参考例３  （Ｒ）−１−（１−アクリロイルピペリジン−３−イル）−４−アミノ−Ｎ−（ベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−カルボキサミド（化合物Ａ）と酸又は塩基付加塩の検討【００６８】
（１）化合物Ａの酸付加塩の検討
無機酸のうち、塩酸、硫酸及びリン酸との塩形成検討を行った。具体的には、化合物Ａを適当な溶媒に溶解させ、これに適当量の各種酸（０．５〜１．５当量）を添加し一終夜攪拌することで塩形成の有無を判断した。その結果、化合物Ａに塩酸及び硫酸を付した場合には、分解が顕著に進行したためさらなる検討を中断した。化合物Ａにリン酸を付した場合は化合物Ａの１リン酸塩が得られた（参考例４）。
また、有機酸のうち、フマル酸、コハク酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、及び酢酸との塩形成検討を行った。具体的には、化合物Ａを適当な溶媒に溶解させこれに化合物Ａと同モル用量の各種酸を添加した後、溶媒を留去させることで各種有機酸の非晶質体を調製した。続いてこの非晶質体を適当な有機溶媒（例えばメチルエチルケトン，エタノール，酢酸エチル及び酢酸ブチル）に加熱懸濁させることで、塩形成の有無を判断した。その結果、リンゴ酸、クエン酸及び酢酸とは塩は形成されなかった。コハク酸の非晶質体からは結晶性のものが得られたが、理論量相当のコハク酸塩を得ることができなかった。フマル酸からは化合物Ａの１フマル酸塩（非晶質体）が、酒石酸からは化合物Ａの１／２酒石酸塩が得られた（実施例１、及び参考例５）。【００６９】
（２）化合物Ａの塩基付加塩の検討
無機塩基のうち、ナトリウムとマグネシウムとの塩形成検討を行った。具体的には、化合物Ａを適当な溶媒に溶解させ、これに適当量の各種塩基（０．５〜１．５当量）を添加し一終夜攪拌することで塩形成の有無を判断した。その結果、ナトリウムとの塩形成においては、分解が顕著に進行したためさらなる検討を中断した。また、マグネシウムからは化合物Ａの１／２マグネシウム塩が得られた（参考例６）。しかし、化合物Ａの１／２マグネシウム塩は類縁物質の数が多くなり、また、塩取得時の操作が煩雑であり、有機溶媒に対する溶解性が低く、再溶解困難であったため、実製造に不適当であると判断した。【００７０】
参考例４  （Ｒ）−１−（１−アクリロイルピペリジン−３−イル）−４−アミノ−Ｎ−（ベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−カルボキサミド・１リン酸塩（化合物Ａの１リン酸塩）の合成【００７１】
上記で得た化合物Ａ（１５０ｍｇ）に対してＴＨＦ（１８ｍＬ）を加え７０℃に加温した後、リン酸（２７．３μＬ）を添加した。その後、同温度で７２時間攪拌し、析出した固体をろ取後減圧乾燥させることにより白色固体として得た。収量；１５８ｍｇ、収率；８５．９％
1Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ6）：δｐｐｍ  １．５１−１．６９（ｍ，１Ｈ），１．８７−１．９７（ｍ，１Ｈ），２．０９−２．２１（ｍ，１Ｈ），２．２５−２．４１（ｍ，１Ｈ），２．８４−２．９５（ｍ，０．５Ｈ），３．０９−３．２２（ｍ，０．５Ｈ），３．２２−３．３８（ｍ，０．５Ｈ），３．６７−３．８３（ｍ，０．５Ｈ），４．０４−４．１７（ｍ，０．５Ｈ），４．２３−４．４０（ｍ，１Ｈ），４．５４−４．６５（ｍ，０．５Ｈ），４．６６−４．８３（ｍ，１Ｈ），５．５８−５．７６（ｍ，１Ｈ），６．０５−６．２２（ｍ，１Ｈ），６．７０−６．９６（ｍ，１Ｈ），７．３２−７．４８（ｍ，２Ｈ），７．６１−７．７５（ｍ，２Ｈ），８．１５−８．２６（ｂｒｓ，２Ｈ），８．３０（ｓ，１Ｈ）【００７２】
参考例５  （Ｒ）−１−（１−アクリロイルピペリジン−３−イル）−４−アミノ−Ｎ−（ベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−カルボキサミド・１／２−Ｌ−（＋）−酒石酸塩（化合物Ａの１／２酒石酸塩）の合成【００７３】
上記で得た化合物Ａ（６００ｍｇ）をＴＨＦ（９０ｍＬ）と水（６０μＬ）に溶解させた後、Ｌ−（＋）−酒石酸塩（２０９ｍｇ）を投入し完全溶解させた。ＴＨＦで２回共沸させながら溶媒を留去することで白色固体を得た。この白色固体（１３０ｍｇ）にメチルエチルケトン（１．５ｍＬ）を加え、７０℃にて２１時間懸濁加熱を行った。ろ取後減圧乾燥させることにより白色固体として得た。収量；９６ｍｇ，収率；８５．９％
1Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ6）：δｐｐｍ  １．５５−１．６８（ｍ，１Ｈ），１．８９−１．９７（ｍ，１Ｈ），２．１０−２．２１（ｍ，１Ｈ），２．２５−２．４０（ｍ，１Ｈ），２．８５−２．９５（ｍ，０．５Ｈ），３．１５−３．６５（ｍ，１Ｈ），３．６８−３．８０（ｍ，０．５Ｈ），４．０５−４．１５（ｍ，０．５Ｈ），４．２４−４．３６（ｍ，１Ｈ），４．３０（ｓ，２Ｈ），４．５３−４．６２（ｍ，０．５Ｈ），４．６７−４．７９（ｂｒｓ，１Ｈ），５．６７（ｄｄ，Ｊ＝９．９９Ｈｚ，１Ｈ），６．０８−６．１８（ｍ，１Ｈ），６．７１−６．９２（ｍ，１Ｈ），７．３０−７．４１（ｍ，２Ｈ），７．６１−７．７３（ｍ，２Ｈ），８．２２（ｂｒｓ，２Ｈ），８．２９（ｓ．，１Ｈ）【００７４】
参考例６  （Ｒ）−１−（１−アクリロイルピペリジン−３−イル）−４−アミノ−Ｎ−（ベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−カルボキサミド・１／２マグネシウム塩（化合物Ａの１／２マグネシウム塩）の合成【００７５】
上記で得られた化合物Ａ（１５９．８ｍｇ）にＴＨＦ（３ｍＬ）及びメタノール（１ｍＬ）を加え懸濁させた後、２Ｍ  水酸化ナトリウム水溶液（１８５μＬ）を加え完全溶解させた。その後、塩化マグネシウム（１７．６ｍｇ）を投入し、攪拌することで白色固体が析出した。水（２ｍＬ）を加えた後、ろ取した。水（１ｍＬ）を２回使用して洗浄し、減圧乾燥させることにより白色固体を得た。この白色固体（５０ｍｇ）にメチルエチルケトン（１ｍＬ）を加え、７０℃にて２４時間懸濁加熱を行った。ろ取後、減圧乾燥させる事により白色固体として得た。収量；４４．７ｍｇ，収率；５７．３％
1Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ6）：δｐｐｍ  １．５２−１．６７（ｍ，１Ｈ），１．８８−２．０１（ｍ，１Ｈ），２．１９−２．４１（ｍ，２Ｈ），２．７５−２．８９（ｍ，０．５Ｈ），３．０７−３．２１（ｍ，１Ｈ），３．５７−３．７１（ｍ，０．５Ｈ），４．１５−４．２３（ｍ，０．５Ｈ），４．３６−４．５５（ｍ，１Ｈ），４．６９−４．８８（ｍ，２Ｈ），５．６０−５．８０（ｍ，１Ｈ），６．０８−６．２２（ｍ，１Ｈ），６．７９−６．９６（ｍ，１Ｈ），７．０８−７．２３（ｍ，２Ｈ），７．４７−７．５６（ｍ，２Ｈ），８．１３−８．２２（ｂｒｓ，２Ｈ），８．４９（ｓ，１Ｈ），１０．４２−１０．５０（ｂｒｓ，１Ｈ）【００７６】
実施例１  （Ｒ）−１−（１−アクリロイルピペリジン−３−イル）−４−アミノ−Ｎ−（ベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−カルボキサミド・１フマル酸塩（化合物Ａの１フマル酸塩（非晶質体））の合成【００７７】
参考例２で得られた化合物Ａ（１．４ｇ）をＴＨＦ（２１０ｍＬ）と水（１４０μＬ）に室温にて溶解させた後、フマル酸（３７６ｍｇ）を投入し完全溶解させた。ＴＨＦで２回共沸させながら溶媒を留去することにより化合物Ａの１フマル酸塩（非晶質体）を白色粉末として得た。収量；１．５７ｇ，収率；９０．１％
1Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ6）：δｐｐｍ  １．５３−１．６８（ｍ，１Ｈ），１．８６−１．９８（ｍ，１Ｈ），２．０８−２．２１（ｍ，１Ｈ），２．２５−２．３９（ｍ，１Ｈ），２．８２−２．９５（ｍ，０．５Ｈ），３．１０−３．２２（ｍ，０．５Ｈ），３．２３−３．３７（ｍ，０．５Ｈ），３．６８−３．７８（ｍ，０．５Ｈ），４．０４−４．１４（ｍ，０．５Ｈ），４．２２−４．３８（ｍ，１Ｈ），４．５２−４．６５（ｍ，０．５Ｈ），４．６７−４．８１（ｍ，１Ｈ），５．５８−５．７４（ｍ，１Ｈ），６．０３−６．１９（ｍ，１Ｈ），６．６２（ｓ，２Ｈ），６．６８−６．９２（ｍ，１Ｈ），７．２８−７．４０（ｍ，２Ｈ），７．５９−７．７１（ｍ，２Ｈ），８．２２（ｂｒｓ，２Ｈ），８．２８（ｓ，１Ｈ），１２．１５（ｂｒｓ，１Ｈ）【００７８】
粉末Ｘ線回折スペクトル：図１に示した。【００７９】
実施例２  （Ｒ）−１−（１−アクリロイルピペリジン−３−イル）−４−アミノ−Ｎ−（ベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−カルボキサミド・１／２フマル酸塩（化合物Ａの１／２フマル酸塩（結晶））の合成【００８０】
実施例１で得られた化合物Ａの１フマル酸塩（非晶質体）（４５０ｍｇ）をメチルエチルケトン（２７ｍＬ）に懸濁させ、８０℃で２４時間懸濁加熱を行った。ろ取後減圧乾燥させることにより化合物Ａの１／２フマル酸塩（結晶）を白色粉末として得た。収量；２７９ｍｇ，収率；６２．０％【００８１】
1Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ6）：δｐｐｍ  １．５３−１．６８（ｍ，１Ｈ），１．８６−１．９８（ｍ，１Ｈ），２．０８−２．２１（ｍ，１Ｈ），２．２５−２．３９（ｍ，１Ｈ），２．８２−２．９５（ｍ，０．５Ｈ），３．１０−３．２２（ｍ，０．５Ｈ），３．２３−３．３７（ｍ，０．５Ｈ），３．６８−３．７８（ｍ，０．５Ｈ），４．０４−４．１４（ｍ，０．５Ｈ），４．２２−４．３８（ｍ，１Ｈ），４．５２−４．６５（ｍ，０．５Ｈ），４．６７−４．８１（ｍ，１Ｈ），５．５８−５．７４（ｍ，１Ｈ），６．０３−６．１９（ｍ，１Ｈ），６．６２（ｓ，１Ｈ），６．６８−６．９２（ｍ，１Ｈ），７．２８−７．４０（ｍ，２Ｈ），７．５９−７．７１（ｍ，２Ｈ），８．２２（ｂｒｓ，２Ｈ），８．２８（ｓ，１Ｈ），１２．１５（ｂｒｓ，１Ｈ）【００８２】
粉末Ｘ線回折スペクトル：図２に示した。
特徴的な回折角（２θ±０．１°）：
４．５゜、５．８゜、１１．２゜、１２．１゜、１２．４゜、１３．４゜、１６．６゜、１７．３゜、１８．２゜、２０．２゜、２６．４゜、２７．１゜【００８３】
示差走査熱量（ＤＳＣ）曲線：図３に示した。
示差走査熱量（ＤＳＣ）曲線における吸熱ピーク：１９７℃〜１９９℃付近【００８４】
実施例３  （Ｒ）−１−（１−アクリロイルピペリジン−３−イル）−４−アミノ−Ｎ−（ベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−カルボキサミド・１フマル酸塩（化合物Ａの１フマル酸塩（結晶））の合成【００８５】
実施例１で得られた化合物Ａの１フマル酸塩（非晶質体）（５００ｍｇ）をアセトニトリル（１０ｍＬ）に懸濁させ、８０℃で２４時間懸濁加熱を行った。ろ取後減圧乾燥することにより化合物Ａの１フマル酸塩（結晶）白色粉末として得た。収量；４４８ｍｇ，収率；８９．６％【００８６】
1Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ6）：δｐｐｍ  １．５３−１．６８（ｍ，１Ｈ），１．８６−１．９８（ｍ，１Ｈ），２．０８−２．２１（ｍ，１Ｈ），２．２５−２．３９（ｍ，１Ｈ），２．８２−２．９５（ｍ，０．５Ｈ），３．１０−３．２２（ｍ，０．５Ｈ），３．２３−３．３７（ｍ，０．５Ｈ），３．６８−３．７８（ｍ，０．５Ｈ），４．０４−４．１４（ｍ，０．５Ｈ），４．２２−４．３８（ｍ，１Ｈ），４．５２−４．６５（ｍ，０．５Ｈ），４．６７−４．８１（ｍ，１Ｈ），５．５８−５．７４（ｍ，１Ｈ），６．０３−６．１９（ｍ，１Ｈ），６．６２（ｓ，２Ｈ），６．６８−６．９２（ｍ，１Ｈ），７．２８−７．４０（ｍ，２Ｈ），７．５９−７．７１（ｍ，２Ｈ），８．２２（ｂｒｓ，２Ｈ），８．２８（ｓ，１Ｈ），１２．１５（ｂｒｓ，１Ｈ）【００８７】
粉末Ｘ線回折スペクトル：図４に示した。
特徴的な回折角（２θ±０．１°）：
７．２゜、１２．４゜、１４．４゜、１５．０゜、１５．６゜、１９．０゜、２２．３゜、２２．６゜、２３．４゜、２５．５゜、２５．９゜及び２７．６゜
示差走査熱量（ＤＳＣ）曲線：図５に示した。
示差走査熱量（ＤＳＣ）曲線における吸熱ピーク：２１９℃〜２２４℃付近【００８８】
比較例１  （Ｒ）−１−（３−（４−アミノ−３−（４−フェノキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）ピペリジン−１−イル）プロパ−２−エン−１−オン（比較例化合物１）の合成
国際公開第２００８／１２１７４２号パンフレットの方法に準じて合成し、表題化合物を白色固体として得た。
1Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ6）：δｐｐｍ  １．２１−１．２８（ｍ，１Ｈ），１．４２−１．７１（ｍ，１Ｈ），１．９１（ｂｒｓ，１Ｈ），２．０４−２．３６（ｍ，２Ｈ），２．９１−３．１０（ｍ，１Ｈ），３．１３−３．２７（ｍ，１Ｈ），３．５９−３．７６（ｍ，１Ｈ），４．０４−４．２６（ｍ，２Ｈ），４．４７−４．８０（ｍ，２Ｈ），５．５１−５．７８（ｍ，１Ｈ），５．９６−６．２１（ｍ，１Ｈ），６．６４−６．９５（ｍ，１Ｈ），７．１４（ｄｄ，Ｊ＝１１．４６，８．５４Ｈｚ，６Ｈ），７．４０−７．４７（ｍ，２Ｈ），７．６３−７．７０（ｍ，２Ｈ），８．２６（ｓ，１Ｈ）【００８９】
本発明にかかる化合物Ａのフマル酸塩の効果は、以下の試験例によって確認された。なお、本試験例の化合物Ａやその塩は、特に記載のない限り結晶を用いた。【００９０】
試験例１  水分吸脱着試験
実施例及び参考例で得られた化合物Ａ、化合物Ａの１フマル酸塩、化合物Ａの１／２フマル酸塩、化合物Ａの１／２酒石酸塩、化合物Ａの１リン酸塩の水分吸脱着試験を行い、チャネルハイドレートの性質の有無を調べた。【００９１】
水分吸脱着試験は、次の条件に従って測定した。
試料およそ５〜１０ｍｇを専用の石英製ホルダーに充填し、以下の条件下に試料の各湿度における重量を連続的に測定し記録した。なお、データ処理を含む装置の取扱いは、各装置で指示された方法及び手順にしたがった。【００９２】
装置：ＶＴＩ  ＳＡ＋（ティー・エイ・インスツルメント社製）
乾燥温度：６０℃
昇温速度：１℃／ｍｉｎ
乾燥の平衡：３００分を超えない範囲で、５分間で０．０１ｗｔ％減少しないことを確認
測定温度：２５℃
加湿の平衡：１２０分を超えない範囲で、５分間で０．０１ｗｔ％増加しないことを確認
相対湿度プログラム：５〜９５％ＲＨまで５％ＲＨずつ上げ、９５％ＲＨ〜５％ＲＨまで５％ＲＨずつ下げる【００９３】
これらの試験で得られたチャートを図６〜図１０に示す。また、測定条件範囲における重量変化を表２−１〜表２−５に示す。【００９４】
【表２−１】
2016121954.tif 000007
【００９５】
【表２−２】
2016121954.tif 000008
【００９６】
【表２−３】
2016121954.tif 000009
【００９７】
【表２−４】
2016121954.tif 000010
【００９８】
【表２−５】
2016121954.tif 000011
【００９９】
表２−１から２−５に示すように、化合物Ａは、測定条件範囲内である５〜９５％の相対湿度において加湿させるとその重量変化は最大約４．４％であった。また、９５％の相対湿度から湿度を下げると、ほぼ初期状態に戻ることが確認された。つまり、化合物Ａは湿度に応じて水分を吸脱着するチャネルハイドレートの性質を有していることがわかった。
同様に、化合物Ａの１／２酒石酸塩では、５〜９５％の相対湿度において加湿させるとその重量変化は最大約３．３％であった。また、９５％の相対湿度から湿度を下げると、ほぼ初期状態に戻ることが確認された。つまり、化合物Ａの１／２酒石酸塩も、湿度に応じて水分を吸脱着するチャネルハイドレートの性質を有していることがわかった。
また、化合物Ａの１リン酸塩においては、水分吸脱着試験後の結晶形は元の結晶形を維持していないことが分かった。
一方、本発明にかかる化合物Ａの１フマル酸塩、及び化合物Ａの１／２フマル酸塩は、９５％の相対湿度下においていずれも約１％未満の質量変化に増加に留まり、湿度を下げるとほぼ初期状態に戻ることがわかった。したがって、本発明にかかる化合物Ａのフマル酸塩はチャネルハイドレートの性質を回避でき、医薬品又は医薬品原薬として、より優れた性質を有することが確認された。【０１００】
試験例２  固体安定性試験（加速試験）
実施例及び参考例で得られた化合物Ａの１フマル酸塩、化合物Ａの１／２フマル酸塩、化合物Ａの１／２酒石酸塩、化合物Ａの１リン酸塩を、４０℃／７５％ＲＨ（密閉条件及び開放条件）で２週間又は４週間保存したときの固体安定性を、次の条件で測定した。【０１０１】
保存条件：４０℃／７５％ＲＨ（密閉及び開放）（開放とはガラス瓶の蓋を取り除き、キムワイプで覆ったことを示す。）
測定ポイント：２週間及び４週間
保存量：約３０ｍｇ
保存容器：褐色ガラス瓶
試料溶液の調製法：試料の濃度が、０．４ｍｇ／ｍＬとなるように５０％アセトニトリルに溶解させた。【０１０２】
試料溶液中の類縁物質量をＨＰＬＣ分析にて測定した。なお、データ処理を含む装置の取扱いは、各装置で指示された方法及び手順にしたがった。（装置：島津製作所  ＳＩＬ−ＨＴｃ／ＬＣ−２０ＡＢ）
カラム：ＧＬサイエンス社製ＩｎｅｒｔＳｕｓｔｅｉｎ  Ｃ１８，４．６×１５０ｍｍ，３μｍ
ＭＳ検出：ＥＳＩ  ｐｏｓｉｔｉｖｅ
ＵＶ検出：２２０ｎｍ
カラム温度：４０℃
カラム流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
移動相：Ａ；１０ｍｍｏｌ／Ｌりん酸緩衝液（ｐＨ６．０）：アセトニトリル混液（１７：３），Ｂ；アセトニトリル
インジェクション量：５μＬ
グラディエント：表３【０１０３】
【表３】
2016121954.tif 000012
【０１０４】
表４に、測定した総類縁物質量を評価した結果を示す。表中の○は０．１％未満、△は０．１％以上０．５％未満、×は０．５％以上の、総類縁物質量の割合を示す。なお、※印については２週間で測定し、他については４週間で測定した。【０１０５】
【表４】
2016121954.tif 000013
【０１０６】
この結果、化合物Ａの１フマル酸塩、及び、化合物Ａの１／２フマル酸塩は類縁物質の生成が少なく、化合物Ａの１／２酒石酸塩や化合物Ａの１リン酸塩に比べて優れた固体安定性を示すことが明らかになった。したがって、本発明にかかる化合物Ａのフマル酸塩は優れた固体安定性を示すことが確認された。【０１０７】
試験例３  固体安定性試験（苛酷試験）
実施例及び参考例で得られた化合物Ａの１フマル酸塩、化合物Ａの１／２酒石酸塩、化合物Ａの１リン酸塩を、６０℃で２週間又は４週間保存したときの固体安定性を、次の条件で測定した。
保存条件：６０℃（密閉）
測定ポイント：２週間及び４週間
保存量：約３０ｍｇ
保存容器：褐色ガラス瓶
試料溶液の調製法：試料の濃度が、０．４ｍｇ／ｍＬとなるように５０％アセトニトリルに溶解させた。【０１０８】
試験例２と同様にして、試料溶液中の類縁物質量をＨＰＬＣ分析にて測定し評価した結果を表５に示す。表中の○は０．１％未満、△は０．１％以上０．５％未満の総類縁物質量の割合を示す。なお、※印については２週間で測定し、他については４週間で測定した。【０１０９】
【表５】
2016121954.tif 000014
【０１１０】
この結果、化合物Ａの１フマル酸塩は類縁物質の生成が少なく、化合物Ａの１／２酒石酸塩や化合物Ａの１リン酸塩に比べて優れた固体安定性を示すことが明らかになった。したがって、本発明にかかる化合物Ａのフマル酸塩は優れた固体安定性を示すことが確認された。【０１１１】
試験例４  血中濃度測定試験
実施例で得られた化合物Ａ、化合物Ａの１／２フマル酸塩、及び化合物Ａの１フマル酸塩について、０．５％ＨＰＭＣを用いて、それぞれ化合物Ａの分子量に換算して５０ｍｇ／１０ｍＬ／ｋｇの懸濁液を作製した。これらの投与液を摂食条件下にて飼育していたマウス（Ｂａｌｂ／ｃＡ）に体重１ｋｇあたり１０ｍＬの用量で経口投与用ゾンデを用いて経口投与した。投与後、マウス用ケージに戻し状態を確認した。ケージ内では給水及び給餌は自由に取れる状態とした。投与０．２５、０．５、１、２、４、６時間後にマウスをイソフルランにて麻酔し、キャピラリ採血管を用いて６０μＬ眼窩静脈叢より採血した。
採血した血液は、氷冷し、遠心操作により血漿を分離した。採血終了後のマウスは、動物飼育ケージに戻し麻酔覚醒後の状態を確認した。最終採血終了後は、イソフルラン麻酔の深度確認を行った後に、頸椎脱臼により安楽死させた。
ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを用いて、ＭＲＭ法で測定した各血漿中の化合物Ａの濃度から、Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ社製ソフトウェア、Ｐｈｏｅｎｉｘ  ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（ｖ６．３．０）を用いて、対数線形台形法でＡＵＣ0-6hr、Ｃmax、Ｔmaxを算出した。【０１１２】
結果を表６に示す。本試験より、Ｃmax（最高血中濃度）では、化合物Ａの１／２フマル酸塩は、化合物Ａと同等、化合物Ａの１フマル酸塩は、化合物Ａの約２倍の値を示し、ＡＵＣ0-6hr（投与後０〜６時間の血中濃度−時間曲線下面積）では、化合物Ａの１／２フマル酸塩は、化合物Ａの約２倍、化合物Ａの１フマル酸塩は、化合物Ａの約１．３倍の値を示すことがわかった。したがって、本発明にかかる化合物Ａのフマル酸塩は優れた経口吸収性を示すことが確認された。【０１１３】
【表６】
2016121954.tif 000015
【０１１４】
試験例５  ＢＴＫ阻害活性（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）の測定
ＢＴＫキナーゼ活性に対する化合物のインビトロでの阻害活性測定法の条件設定において、パーキンエルマー社のＬａｂＣｈｉｐ（登録商標）シリーズ試薬消耗品価格表にＦＬ−Ｐｅｐｔｉｄｅ  ２がＢＴＫキナーゼ活性測定において基質ペプチドとして対応していることが記載されていたので、ＦＬ−Ｐｅｐｔｉｄｅ  ２を基質に用いた。試験に用いた精製リコンビナントヒトＢＴＫ蛋白質はカルナバイオサイエンス社から購入した。
化合物の阻害活性測定においては、まず、化合物Ａの１フマル酸塩をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で段階希釈した。次に、キナーゼ反応用緩衝液（２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ  ７．５）、２ｍＭ  ｄｉｔｈｉｏｔｈｅｉｔｏｌ、０．０１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００）中にＢＴＫ蛋白質、基質ペプチド（終濃度は１μＭ）、塩化マグネシウム（終濃度は１０ｍＭ）、ＡＴＰ（終濃度は４５μＭ）と被検化合物のＤＭＳＯ溶液（ＤＭＳＯの終濃度は５％）を加えて２５℃で４０分間インキュベーションしキナーゼ反応を行った。そこへ終濃度３０ｍＭになるようＥＤＴＡを加えることで反応を停止させた。最後に、ＬａｂＣｈｉｐ  ＥＺ  Ｒｅａｄｅｒ  ＩＩ（パーキンエルマー社）でリン酸化されなかった基質ペプチド（Ｓ）とリン酸化されたペプチド（Ｐ）をマイクロ流路キャピラリー電気泳動によって分離・検出した。ＳとＰそれぞれのピークの高さからリン酸化反応量を求め、リン酸化反応を５０％抑制することのできる化合物濃度をＩＣ５０値（ｎＭ）と定義し以下の表７に示した。【０１１５】
【表７】
2016121954.tif 000016
【０１１６】
この試験結果から、本発明にかかる化合物Ａのフマル酸塩はｉｎ  ｖｉｔｒｏでＢＴＫ阻害活性を有することが明らかになった。【０１１７】
試験例６  ＥＧＦＲキナーゼ阻害活性と比較したＢＴＫ阻害選択性（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）
１）ＢＴＫ阻害活性測定
試験例５と同様にして、ＢＴＫ阻害活性測定を測定した。
２）ＥＧＦＲ阻害活性測定
ＥＧＦＲキナーゼ活性に対する化合物のインビトロでの阻害活性測定法の条件設定において、パーキンエルマー社のＬａｂＣｈｉｐ（登録商標）シリーズ試薬消耗品価格表にＦＬ−Ｐｅｐｔｉｄｅ  ２２がＥＧＦＲキナーゼ活性測定において基質ペプチドとして対応していることが記載されていたので、そのアミノ酸配列を参考にしてビオチン化ペプチド（ｂｉｏｔｉｎ−ＥＥＰＬＹＷＳＦＰＡＫＫＫ）を作製した。試験に用いた精製リコンビナントヒトＥＧＦＲ蛋白質はカルナバイオサイエンス社から購入した。
化合物の阻害活性測定においては、まず、化合物Ａの１フマル酸塩をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で段階希釈した。次に、キナーゼ反応用緩衝液（２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ  ７．５）、２ｍＭ  ｄｉｔｈｉｏｔｈｅｉｔｏｌ、０．０１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００）中にＥＧＦＲ蛋白質、基質ペプチド（終濃度は２５０ｎＭ）、塩化マグネシウム（終濃度は１０ｍＭ）、塩化マンガン（終濃度は１０ｍＭ）、ＡＴＰ（終濃度は１．５μＭ）と被検化合物のＤＭＳＯ溶液（ＤＭＳＯの終濃度は２．５％）を加えて２５℃で１２０分間インキュベーションしキナーゼ反応を行った。そこへ終濃度２４ｍＭになるようＥＤＴＡを加えることで反応を停止させた後、Ｅｕラベル化抗リン酸化チロシン抗体ＰＴ６６（パーキンエルマー社）とＳｕｒｅＬｉｇｈｔ  ＡＰＣ−ＳＡ（パーキンエルマー社）を含む検出液を添加し室温で２時間以上静置した。最後に、ＰＨＥＲＡｓｔａｒ  ＦＳ（ＢＭＧ  ＬＡＢＴＥＣＨ社）で波長３３７ｎｍの励起光照射時における蛍光量を６２０ｎｍと６６５ｎｍの二波長で測定した。二波長の蛍光量比からリン酸化反応量を求め、リン酸化反応を５０％抑制することのできる化合物濃度をＩＣ５０値（ｎＭ）と定義した。
３）ＢＴＫ阻害選択性
上記１）及び２）で得られた結果をもとに、「ＥＧＦＲ阻害活性  ＩＣ５０値（ｎＭ）／ＢＴＫ阻害活性  ＩＣ５０値（ｎＭ）」を算出することにより、被検化合物のＢＴＫ阻害選択性を確認した。【０１１８】
【表８】
2016121954.tif 000017
【０１１９】
この試験結果から、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、本発明にかかる化合物Ａの１フマル酸塩のＥＧＦＲキナーゼに対するＢＴＫ阻害選択性は、比較例化合物１と比較して約１３倍であり、優れたＢＴＫ阻害選択性を有することが明らかとなった。この結果から、本発明にかかる化合物Ａのフマル酸塩は、既知のＢＴＫ阻害剤よりも副作用が軽減されうることが示された。【０１２０】
試験例７  ＢＴＫおよびＥＧＦＲ発現細胞株に対する増殖抑制活性測定試験（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）及びその選択性の比較
ＢＴＫを発現しているびまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫株であるＴＭＤ８細胞は、１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ１６４０培地（ライフテクノロジーズ社製）中に懸濁させた。ＥＧＦＲ過剰発現・高活性化ヒト類上皮癌細胞株であるＡ４３１細胞は、１０％ウシ胎児血清を含むＤＭＥＭ、ｈｉｇｈ  ｇｌｕｃｏｓｅ培地（ライフテクノロジーズ社製）中に懸濁させた。細胞懸濁液を、３８４ウェル平底マイクロプレートの各ウェルに播種し、５％炭酸ガス含有の培養器中３７℃で１日培養した。化合物Ａの１フマル酸塩、および比較例化合物１をＤＭＳＯに溶解し、ＤＭＳＯを用いて被検化合物を終濃度の５００倍の濃度になるように希釈した。被検化合物のＤＭＳＯ溶液を各細胞の懸濁に用いた培地で希釈し、これを細胞の培養プレートの各ウェルにＤＭＳＯの最終濃度が０．２％になるように加え、５％炭酸ガス含有の培養器中３７℃でさらに３日培養した。化合物添加前および化合物存在下での３日間培養後の細胞数計測はセルタイターグロ（プロメガ社製）を用いて、プロメガ社の推奨するプロトコールに基づき行った。以下の式より増殖阻害率を算出し、５０％阻害する被検化合物の濃度（ＧＩ５０（ｎＭ））を求めた。【０１２１】
増殖阻害率（％）＝（Ｃ−Ｔ）／（Ｃ−Ｃ０）×１００
Ｔ：被検化合物を添加したウェルの発光強度
Ｃ：被検化合物を添加しなかったウェルの発光強度
Ｃ０：被検化合物添加前に測定したウェルの発光強度【０１２２】
ＥＧＦＲ増殖シグナルに依存したＡ４３１細胞に対する細胞増殖抑制活性とＢＴＫシグナルに増殖が依存したＴＭＤ８細胞に対する細胞増殖抑制活性を比較すれば、細胞レベルでのそれぞれのキナーゼの影響を評価することができる。すなわち「Ａ４３１細胞増殖阻害率／ＴＭＤ８細胞増殖阻害率」を算出しその値が大きいほど、細胞においてＥＧＦＲに対するＢＴＫの選択性が高いと考えられる。表９に「Ａ４３１細胞増殖阻害率／ＴＭＤ８細胞増殖阻害率」の値を示した。【０１２３】
【表９】
2016121954.tif 000018
【０１２４】
この試験結果から、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞増殖阻害率における、本発明にかかる化合物Ａの１フマル酸塩のＥＧＦＲキナーゼに対するＢＴＫ阻害選択性は、比較例化合物１と比較して約６５倍であった。したがって、本発明にかかる化合物Ａのフマル酸塩は、キナーゼだけでなく、細胞においても優れたＢＴＫ阻害選択性を有することが明らかとなった。この結果から、本発明にかかる化合物Ａのフマル酸塩は、既知のＢＴＫ阻害剤よりも副作用が軽減されうることが示された。【０１２５】
試験例８  マウスコラーゲン誘発関節炎モデル（治療効果）
本試験は非特許文献（Ｂｒａｎｄ  ＤＤ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ  Ｐｒｏｔｏｃ．  ２００７；２，１２６９−１２７５、Ｘｕ  Ｄ．  ｅｔ  ａｌ．，ＪＰＥＴ，  ２０１２  Ａｐｒ；３４１（１）：９０−１０３）に記載された方法に準じて行った。７週齢雄性／ＤＢＡ／１マウス（日本チャールス・リバー）に４ｍｇ／ｍＬウシタイプ２コラーゲン溶液（コラーゲン技術研修会）とフロイント完全アジュバント（ＤＩＦＣＯ）の等量混合溶液（エマルジョン）１００μＬ／ｂｏｄｙを背部皮内注射した（初回免疫）。その２１日後、４ｍｇ／ｍＬウシタイプ２コラーゲン溶液（コラーゲン技術研修会）とフロイント完全アジュバント（ＤＩＦＣＯ）の等量混合溶液（エマルジョン）１００μＬ／ｂｏｄｙを尾根部に皮内注射し、追加免疫を行った。追加免疫から８日後を投与開始日（ｄａｙ０）とし、１７日間、１日１回の経口投与を実施した。ｄａｙ０、ｄａｙ３、ｄａｙ７、ｄａｙ１０、ｄａｙ１４、ｄａｙ１７に肉眼にて関節炎の兆候をスコア化（０：変化無し、１：指１本の腫脹、２：指２本以上の腫脹、３：甲の腫脹、４：全指の腫脹かつ手足首におよぶ腫脹）し、四肢の合計を個体の点数（最高１６点）とした。結果を図１１に示す。【０１２６】
図１１より、試験系の陽性対象化合物として設定したプレドニゾロン（３ｍｇ／ｋｇ）投与群は上昇した関節炎スコアを維持する程度であったが、本発明にかかる化合物Ａの１フマル酸塩（０．３８１ｍｇ／ｋｇ）を投与した群は効果的に関節炎スコアを低下させた。この結果から、本発明にかかる化合物Ａのフマル酸塩は既に発症した関節リウマチに対する優れた治療効果を有することが確認された。
【図３】
2016121954.tif 000020
【図５】
2016121954.tif 000021
【図７】
2016121954.tif 000022
【図８】
2016121954.tif 000023
【図９】
2016121954.tif 000024
【図１０】
2016121954.tif 000025
【図１１】
2016121954.tif 000026
【図１】
2016121954.tif 000027
【図２】
2016121954.tif 000028
【図４】
2016121954.tif 000029
【図６】
2016121954.tif 000030
【手続補正書】
【提出日】平成28年9月5日(2016.9.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ｒ）−１−（１−アクリロイルピペリジン−３−イル）−４−アミノ−Ｎ−（ベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−カルボキサミドのフマル酸塩。
【請求項２】
（Ｒ）−１−（１−アクリロイルピペリジン−３−イル）−４−アミノ−Ｎ−（ベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−カルボキサミド・１／２フマル酸塩である請求項１に記載の塩。
【請求項３】
粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、回折角（２θ±０．１°）が、４．５゜、５．８゜、１１．２゜、１２．１゜、１２．４゜、１３．４゜、１６．６゜、１７．３゜、１８．２゜、２０．２゜、２６．４゜、及び２７．１゜から選択される少なくとも２つ以上のピークを有する結晶である請求項２に記載の塩。
【請求項４】
粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、回折角（２θ±０．１°）が、４．５゜、５．８゜、１１．２゜、１２．１゜、１２．４゜、１３．４゜、１６．６゜、１７．３゜、１８．２゜、２０．２゜、２６．４゜、及び２７．１゜から選択される少なくとも５つ以上のピークを有する結晶である請求項２又は３に記載の塩。
【請求項５】
粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、回折角（２θ±０．１°）が、４．５゜、５．８゜、１１．２゜、１２．１゜、１２．４゜、１３．４゜、１６．６゜、１７．３゜、１８．２゜、２０．２゜、２６．４゜、及び２７．１゜にピークを有する結晶である請求項２乃至４のいずれか１項に記載の塩。
【請求項６】
図２に示される粉末Ｘ線回折スペクトルを有する結晶である請求項２乃至５のいずれか１項に記載の塩。
【請求項７】
示差走査熱量（ＤＳＣ）曲線におけるピーク温度が１９７℃〜１９９℃付近の吸熱ピークを有する結晶である請求項２乃至６のいずれか１項に記載の塩。
【請求項８】
（Ｒ）−１−（１−アクリロイルピペリジン−３−イル）−４−アミノ−Ｎ−（ベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−カルボキサミド・１フマル酸塩である請求項１に記載の塩。
【請求項９】
粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、回折角（２θ±０．１°）が、７．２゜、１２．４゜、１４．４゜、１５．０゜、１５．６゜、１９．０゜、２２．３゜、２２．６゜、２３．４゜、２５．５゜、２５．９゜及び２７．６゜から選択される少なくとも２つ以上のピークを有する結晶である請求項８に記載の塩。
【請求項１０】
粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、回折角（２θ±０．１°）が、７．２゜、１２．４゜、１４．４゜、１５．０゜、１５．６゜、１９．０゜、２２．３゜、２２．６゜、２３．４゜、２５．５゜、２５．９゜及び２７．６゜から選択される少なくとも５つ以上のピークを有する結晶である請求項８又は９に記載の塩。
【請求項１１】
粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、回折角（２θ±０．１°）が、７．２゜、１２．４゜、１４．４゜、１５．０゜、１５．６゜、１９．０゜、２２．３゜、２２．６゜、２３．４゜、２５．５゜、２５．９゜及び２７．６゜にピークを有する結晶である請求項８乃至１０のいずれか１項に記載の塩。
【請求項１２】
図４に示される粉末Ｘ線回折スペクトル有する結晶である請求項８乃至１１のいずれか１項に記載の塩。
【請求項１３】
示差走査熱量（ＤＳＣ）曲線におけるピーク温度が２１９℃〜２２４℃付近の吸熱ピークを有する結晶である請求項８乃至１２のいずれか１項に記載の塩。
【請求項１４】
粉末Ｘ線回折スペクトルにおいてハローパターンを示す非晶質体である請求項８に記載の塩。
【請求項１５】
図１に示される粉末Ｘ線スペクトルを有する非晶質体である請求項８又は１４に記載の塩。
【請求項１６】
請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩を有効成分とするＢＴＫ阻害剤。
【請求項１７】
請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩を含有する医薬組成物。
【請求項１８】
請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩を有効成分とする抗腫瘍剤又はアレルギー疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患の予防剤及び／又は治療剤。
【請求項１９】
請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩を有効成分とする血液腫瘍に対する抗腫瘍剤、又は、アレルギー性鼻炎、花粉症、アトピー性皮膚炎、関節リウマチ、全身性エリテマトーデスの予防剤及び／又は治療剤。
【請求項２０】
ＢＴＫ阻害剤を製造するための、請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩の使用。
【請求項２１】
医薬組成物を製造するための、請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩の使用。
【請求項２２】
抗腫瘍剤又はアレルギー疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患の予防剤及び／又は治療剤を製造するための、請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩の使用。
【請求項２３】
血液腫瘍に対する抗腫瘍剤、又は、アレルギー性鼻炎、花粉症、アトピー性皮膚炎、関節リウマチ、全身性エリテマトーデスの予防剤及び／又は治療剤を製造するための、請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩の使用。
【請求項２４】
ＢＴＫ阻害に使用するための、請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩。
【請求項２５】
医薬として使用するための、請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩。
【請求項２６】
腫瘍、アレルギー疾患、自己免疫疾患又は炎症性疾患の予防又は治療に使用するための、請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩。
【請求項２７】
血液腫瘍、アレルギー性鼻炎、花粉症、アトピー性皮膚炎、関節リウマチ又は全身性エリテマトーデスの予防又は治療に使用するための、請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩。
【手続補正書】
【提出日】平成29年1月12日(2017.1.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ｒ）−１−（１−アクリロイルピペリジン−３−イル）−４−アミノ−Ｎ−（ベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−カルボキサミドのフマル酸塩。
【請求項２】
（Ｒ）−１−（１−アクリロイルピペリジン−３−イル）−４−アミノ−Ｎ−（ベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−カルボキサミド・１／２フマル酸塩である請求項１に記載の塩。
【請求項３】
粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、回折角（２θ±０．１°）が、４．５゜、５．８゜、１１．２゜、１２．１゜、１２．４゜、１３．４゜、１６．６゜、１７．３゜、１８．２゜、２０．２゜、２６．４゜、及び２７．１゜から選択される少なくとも２つ以上のピークを有する結晶である請求項２に記載の塩。
【請求項４】
粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、回折角（２θ±０．１°）が、４．５゜、５．８゜、１１．２゜、１２．１゜、１２．４゜、１３．４゜、１６．６゜、１７．３゜、１８．２゜、２０．２゜、２６．４゜、及び２７．１゜から選択される少なくとも５つ以上のピークを有する結晶である請求項２又は３に記載の塩。
【請求項５】
粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、回折角（２θ±０．１°）が、４．５゜、５．８゜、１１．２゜、１２．１゜、１２．４゜、１３．４゜、１６．６゜、１７．３゜、１８．２゜、２０．２゜、２６．４゜、及び２７．１゜にピークを有する結晶である請求項２乃至４のいずれか１項に記載の塩。
【請求項６】
下記図２に示される粉末Ｘ線回折スペクトルを有する結晶である請求項２乃至５のいずれか１項に記載の塩。
図２
2016121954.tif 000031
【請求項７】
示差走査熱量（ＤＳＣ）曲線におけるピーク温度が１９７℃〜１９９℃付近の吸熱ピークを有する結晶である請求項２乃至６のいずれか１項に記載の塩。
【請求項８】
（Ｒ）−１−（１−アクリロイルピペリジン−３−イル）−４−アミノ−Ｎ−（ベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−カルボキサミド・１フマル酸塩である請求項１に記載の塩。
【請求項９】
粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、回折角（２θ±０．１°）が、７．２゜、１２．４゜、１４．４゜、１５．０゜、１５．６゜、１９．０゜、２２．３゜、２２．６゜、２３．４゜、２５．５゜、２５．９゜及び２７．６゜から選択される少なくとも２つ以上のピークを有する結晶である請求項８に記載の塩。
【請求項１０】
粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、回折角（２θ±０．１°）が、７．２゜、１２．４゜、１４．４゜、１５．０゜、１５．６゜、１９．０゜、２２．３゜、２２．６゜、２３．４゜、２５．５゜、２５．９゜及び２７．６゜から選択される少なくとも５つ以上のピークを有する結晶である請求項８又は９に記載の塩。
【請求項１１】
粉末Ｘ線回折スペクトルにおいて、回折角（２θ±０．１°）が、７．２゜、１２．４゜、１４．４゜、１５．０゜、１５．６゜、１９．０゜、２２．３゜、２２．６゜、２３．４゜、２５．５゜、２５．９゜及び２７．６゜にピークを有する結晶である請求項８乃至１０のいずれか１項に記載の塩。
【請求項１２】
下記図４に示される粉末Ｘ線回折スペクトル有する結晶である請求項８乃至１１のいずれか１項に記載の塩。
図４
2016121954.tif 000032
【請求項１３】
示差走査熱量（ＤＳＣ）曲線におけるピーク温度が２１９℃〜２２４℃付近の吸熱ピークを有する結晶である請求項８乃至１２のいずれか１項に記載の塩。
【請求項１４】
粉末Ｘ線回折スペクトルにおいてハローパターンを示す非晶質体である請求項８に記載の塩。
【請求項１５】
下記図１に示される粉末Ｘ線スペクトルを有する非晶質体である請求項８又は１４に記載の塩。
図１
2016121954.tif 000033
【請求項１６】
請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩を有効成分とするＢＴＫ阻害剤。
【請求項１７】
請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩を含有する医薬組成物。
【請求項１８】
請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩を有効成分とする抗腫瘍剤又はアレルギー疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患の予防剤及び／又は治療剤。
【請求項１９】
請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩を有効成分とする血液腫瘍に対する抗腫瘍剤、又は、アレルギー性鼻炎、花粉症、アトピー性皮膚炎、関節リウマチ、全身性エリテマトーデスの予防剤及び／又は治療剤。
【請求項２０】
ＢＴＫ阻害剤を製造するための、請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩の使用。
【請求項２１】
医薬組成物を製造するための、請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩の使用。
【請求項２２】
抗腫瘍剤又はアレルギー疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患の予防剤及び／又は治療剤を製造するための、請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩の使用。
【請求項２３】
血液腫瘍に対する抗腫瘍剤、又は、アレルギー性鼻炎、花粉症、アトピー性皮膚炎、関節リウマチ、全身性エリテマトーデスの予防剤及び／又は治療剤を製造するための、請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩の使用。
【請求項２４】
ＢＴＫ阻害に使用するための、請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩。
【請求項２５】
医薬として使用するための、請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩。
【請求項２６】
腫瘍、アレルギー疾患、自己免疫疾患又は炎症性疾患の予防又は治療に使用するための、請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩。
【請求項２７】
血液腫瘍、アレルギー性鼻炎、花粉症、アトピー性皮膚炎、関節リウマチ又は全身性エリテマトーデスの予防又は治療に使用するための、請求項１乃至１５のいずれか１項に記載の塩。
【国際調査報告】
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