(57)【要約】【課題】出血している創傷面に対して液体やスプレーミストの形態で適用する簡単な用法にて適用可能であり、また血漿、血清及び血液のいずれに対しても優れた固化作用を示し、迅速且つ容易に止血効果が得られる新規な止血材料（水分散液）を提供すること。【解決手段】平均繊維径（Ｄ）が０．００１乃至１００μｍであり、平均繊維径（Ｄ）に対する平均繊維長（Ｌ）の比（Ｌ／Ｄ）が５乃至５００である不溶性多糖類を含有する水分散液であって、血漿、血清又は血液との接触により固化することを特徴とする、水分散液。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
平均繊維径（Ｄ）が０．００１乃至１００μｍであり、平均繊維径（Ｄ）に対する平均繊維長（Ｌ）の比（Ｌ／Ｄ）が５乃至５００である不溶性多糖類を含有する水分散液であって、
血漿、血清又は血液との接触により固化することを特徴とする、水分散液。
【請求項２】
前記不溶性多糖類が、セルロース繊維及びキチン繊維、リグニン、ヘミセルロース、イヌリン、プロトペクチン、グルカン、グルコマンナン、シクロデキストリン、食物繊維からなる群から選択される、請求項１に記載の水分散液。
【請求項３】
前記不溶性多糖類が、０．００１質量％乃至１０質量％の濃度で含まれてなる、請求項１又は請求項２に記載の水分散液。
【請求項４】
更に高分子を含む、請求項１乃至請求項３のうち何れか一項に記載の水分散液。
【請求項５】
前記高分子が、コラーゲン、アルギン酸、ポリビニルアルコール、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース及びヒアルロン酸からなる群から選択される、請求項４に記載の水分散液。
【請求項６】
更に機能成分を含む、請求項１乃至請求項５のうち何れか一項に記載の水分散液。
【請求項７】
前記機能成分が、アスコルビン酸、アミノカプロン酸、トラネキサム酸及びトロンビンからなる群から選択される、請求項６に記載の水分散液。
【請求項８】
前記水分散液がスプレー噴霧可能であり、該噴霧により血漿、血清又は血液を固化する、請求項１乃至請求項７のうち何れか一項に記載の水分散液。
【請求項９】
止血用途における請求項１乃至請求項８のうち何れか一項に記載の水分散液の使用。
【請求項１０】
創傷治癒用途における請求項１乃至請求項８のうち何れか一項に記載の水分散液の使用。
【請求項１１】
癒着防止用途における請求項１乃至請求項８のうち何れか一項に記載の水分散液の使用。
【請求項１２】
請求項１乃至請求項８のうち何れか一項に記載の水分散液から得られるフィルム又はシート。
【請求項１３】
請求項１乃至請求項８のうち何れか一項に記載の水分散液を含む外用組成物。
【請求項１４】
請求項１乃至請求項８のうち何れか一項に記載の水分散液を含む止血用組成物。
【請求項１５】
請求項１乃至請求項８のうち何れか一項に記載の水分散液を含む創傷治療用組成物。
【請求項１６】
請求項１乃至請求項８のうち何れか一項に記載の水分散液を含む癒着防止用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、不溶性多糖類を含有する水分散液に関し、詳細には、繊維径が小さくアスペクト比が比較的小さいファイバー状不溶性多糖類を含有し、血漿、血清又は血液との接触により固化し止血材として有用である、水分散液に関する。
【背景技術】
【０００２】
血液等との接触により凝固するいわゆる止血効果を持つ材料として、これまでトロンビン粉末、コラーゲン、酸化セルロース粉末、コラーゲン繊維および粉末、コラーゲンスポンジ、アルギン酸カルシウムなどが知られている。こうした止血材料は、止血用パウダー、止血スポンジ（コラーゲン海綿など）、止血ガーゼ等の種々の形態で止血剤として使用され、通常止血後に除去される。【０００３】
また不溶性多糖類の一種であるセルロースは、アルキル化や酸化等の化学修飾により、水溶性高分子として食品、化粧料および医薬品といった幅広い分野で用いられている。例えば代表的な水溶性セルロース誘導体であるカルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ）を不織布の形状に加工し、これを水、血液または体液を吸収して出血を遅らせて防止する止血性材料とする提案がなされている（特許文献１、特許文献２など）。
また、不溶性多糖のキトサン（β−１，４−Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン）がキトサン中のアミノ基が血液凝固系に作用して止血効果を示すことを利用し、キトサンを不織布などの形状としたものの止血剤としての臨床応用がなされている。またキトサンのアセチル体であるキチン（β−１，４−Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン）類は、生体内では炎症を起こすことが指摘されていたが、スポンジ型の非晶質キチンは、血小板血栓を形成して短時間止血作用を示すことが報告されている（非特許文献１）。
さらに、天然のタンパク質であるラミニン鎖、コラーゲン鎖およびニドジェンからモチーフした高分子量のペプチド（自己組織化ペプチド）のハイドロゲル（特許文献３）が局所止血剤として注目されている。
また流血や体液の滲出を伴う外傷等に有効な皮膚外用剤として、デンプンやゼラチン等の親水性コロイド状の水溶性高分子と液状炭化水素化合物とを含む外用剤組成物が提案されている（特許文献４）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第９８／４６８１８号パンフレット
【特許文献２】特表２００３−５１０４７５号公報
【特許文献３】特許第５０５７７８１号明細書
【特許文献４】特開２００１−９７８４８号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】杏林医会誌  ４４巻１号３−１１、２０１３年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしこれまで提案されている種々の止血剤の止血効果は決して満足できるほど十分とはいえず、他の局所止血剤との併用が必要であったり、止血部位から外れやすく該部位の感染リスクが高まったりするなどの懸念がある。また血漿、血清、血液のうちのいずれかでは止血効果を発現するものの、対象によっては止血効果が不十分であるもの、さらにこうした体液を吸収すると止血剤自体の強度が弱まり製品形状を保てないものも存在する。加えて、ヒト由来のフィブリンやウシ由来のコラーゲンなど動物由来の原材料が止血材料として使用される場合、生体異物反応や動物由来品から生じるＣ型肝炎ウイルス等の感染症や、アレルギー反応をひき起こす虞が懸念されている。
前述の自己組織化ペプチドについても、ｐＨが３と酸性であるため付着時の細胞や組織の傷害が懸念されること、またペプチド合成面での原材料費などが高価格であることから汎用性の面で課題となっていること、さらに異物免疫反応などの副作用についての情報が得られていないなど、多くの課題が残されている。
このように出血の抑止を的確に行え、感染リスクがなく安価で安全な新しい止血材が求められている。
また不溶性であるセルロース自体を水分散化することにより、近年、シートやフィルムの強度調節や化粧品への応用が検討されているが、水分散液を医療用途に適応する試みはなされていない。【０００７】
本発明の目的は、出血している創傷面に対して液体やスプレーミストの形態で適用する簡単な用法にて適用可能であり、また血漿、血清及び血液のいずれに対しても優れた固化作用を示し、迅速且つ容易に止血効果が得られる新規な止血材料（水分散液）を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は上述の課題を鋭意検討した結果、セルロース等の不溶性天然多糖を水に分散させた水分散液が、血液と接触した場合に速やかに固化する、いわゆる止血効果を有する点を見出し、本発明を完成させた。【０００９】
すなわち本発明は、第１観点として、平均繊維径（Ｄ）が０．００１乃至１００μｍであり、平均繊維径（Ｄ）に対する平均繊維長（Ｌ）の比（Ｌ／Ｄ）が５乃至５００である不溶性多糖類を含有する水分散液であって、血漿、血清又は血液との接触により固化することを特徴とする、水分散液に関する。
第２観点として、前記不溶性多糖類が、セルロース繊維及びキチン繊維からなる群から選択される、第１観点に記載の水分散液に関する。
第３観点として、前記不溶性多糖類が、０．００１質量％乃至１０質量％の濃度で含まれてなる、第１観点又は第２観点に記載の水分散液に関する。
第４観点として、更に高分子を含む、第１観点乃至第３観点のうち何れか一項に記載の水分散液に関する。
第５観点として、前記高分子が、コラーゲン、アルギン酸、ポリビニルアルコール、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース及びヒアルロン酸からなる群から選択される、第４観点に記載の水分散液に関する。
第６観点として、更に機能成分を含む、第１観点乃至第５観点のうち何れか一項に記載の水分散液に関する。
第７観点として、前記機能成分が、アスコルビン酸、アミノカプロン酸、トラネキサム酸およびトロンビンからなる群から選択される、第６観点に記載の水分散液に関する。
第８観点として、前記水分散液がスプレー噴霧可能であり、該噴霧により血漿、血清又は血液を固化する、第１観点乃至第７観点のうち何れか一項に記載の水分散液に関する。
第９観点として、止血用途における第１観点乃至第８観点のうち何れか一項に記載の水分散液の使用に関する。
第１０観点として、創傷治癒用途における第１観点乃至第８観点のうち何れか一項に記載の水分散液の使用に関する。
第１１観点として、癒着防止用途における第１観点乃至第８観点のうち何れか一項に記載の水分散液の使用に関する。
第１２観点として、第１観点乃至第８観点のうち何れか一項に記載の水分散液から得られるフィルム又はシートに関する。
第１３観点として、第１観点乃至第８観点のうち何れか一項に記載の水分散液を含む外用組成物に関する。
第１４観点として、第１観点乃至第８観点のうち何れか一項に記載の水分散液を含む止血用組成物に関する。
第１５観点として、第１観点乃至第８観点のうち何れか一項に記載の水分散液を含む創傷治療用組成物に関する。
第１６観点として、第１観点乃至第８観点のうち何れか一項に記載の水分散液を含む癒着防止用組成物に関する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明は、血漿、血清及び血液に接すると迅速に固化し、止血材料として有用な水分散液を提供できる。
また本発明の水分散液の原料に使用する不溶性多糖類は安価であり、製品コストを低く抑えることができ、また該水分散液には動物由来の原材料を一切使用していないため、Ｃ型感染ウイルス等の感染症などをひき起こす懸念がない。
さらに該水分散液は不溶性多糖を化学修飾することなく、例えば湿式粉砕法によって微細化することにより水分散化を可能としていることから、化学修飾に伴う種々の薬剤の残存による安全性の低下も防止できる。
しかも本発明の水分散液は、オートクレーブなどの滅菌処理が可能であり、しかも腐食せず、さらにパウダー、糸状、不織布、織布などに加工することなく、液体（分散液）形態やスプレーミストの携帯で簡単な用法にて止血効果を得ることができる。【００１１】
またそもそも血液は血管内において、凝固と線溶のバランスを保った状態にあり、そのバランスが血管壁の異常、血小板の異常、凝固系の異常、線溶系の亢進などの種々の原因によって崩れて出血し易くなると“出血傾向”となる。
本発明の不溶性糖多糖類を含有する水分散液は、血漿や血清、血液と接触することにより、物理的にこれらを固化させることによって止血作用を示すため、凝固系の異常、線溶系の亢進など、出血原因に関わらず止血作用を示すことができる。そのため外傷時だけでなく手術時における出血に対しても、止血効果を示すことができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、実施例４における１％パルプ由来セルロース水分散液添加後のウサギ血液の光学顕微鏡写真を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
＜不溶性多糖類＞
本発明の水分散液に使用される不溶性多糖類としては、セルロース、キチン、シクロデキストリン、食物繊維等が挙げられる。またリグニン、ヘミセルロース、イヌリン、プロトペクチン、グルカン、グルコマンナンや化学的に修飾した酸化セルロース等を用いてもよい。中でも不溶性多糖類として、好ましくは不溶性のセルロース繊維及びキチン繊維から選択される。
【００１４】
［セルロース原料］
本発明の水分散液に使用されるセルロース繊維の原料は、例えば、木材、竹、麻、ジュート、ケナフ、コットン、農作物・食物残渣など植物由来のセルロース、又はバクテリアセルロース、シオグサ（クラドフォラ）、灰色植物（グラウコキスチス）、バロニア、ホヤセルロースなど、微生物産生若しくは動物産生のセルロースを使用することができる。
植物由来のセルロースはミクロフィブリルと呼ばれる非常に細い繊維がさらに束になりフィブリル、ラメラ、繊維細胞と段階的に高次構造を形成しているのに対し、バクテリアセルロースは菌細胞から分泌されたセルロースのミクロフィブリルが、そのままの太さで微細な網目構造を形成している。
上記植物由来、微生物産生、動物産生といった天然由来のセルロースの結晶質は、セルロースＩ型結晶からなり、その結晶化度はセルロース源によって大きく異なる。植物由来セルロースは、ヘミセルロース、リグニンなどを不純物として含有して高次構造を形成している。このため、これを原料して得られる精製パルプの結晶化度は５０％程度であるのに対して、シオグサやバクテリアセルロース、グラウコキスチス、ホヤなどでは結晶化度が８０％以上と高い結晶性を有する。
【００１５】
本発明において、コットンやバクテリアセルロースなど高純度のセルロース原料は原料のまま用いる事ができるが、これ以外の植物由来のセルロースなどは、単離・精製したものを用いる事が好ましい。
本発明の水分散液に使用されるセルロース繊維の原料として、好ましくは、コットン、バクテリアセルロース、クラフトパルプや微結晶セルロースである。
【００１６】
［キチン原料］
キチン原料としては、エビ、カニ、イカ、昆虫、貝、キノコなどに含まれる食品添加物、医薬品添加物、医薬部外品、化粧品原料、医療機器原料など市販のものを好適に使用できる。
【００１７】
［セルロース及びキチン粉砕方法］
本発明においては、上記これらセルロース原料を粉砕したセルロース繊維或いはキチン原料を粉砕したキチン繊維を用いる。セルロース原料及びキチン原料の粉砕方法は限定されないが、本発明の目的に合う後述する繊維径・繊維長にまで微細化するには、高圧ホモジナイザー、グラインダー（石臼）、あるいはビーズミルなどの媒体撹拌ミルといった、強いせん断力が得られる方法が好ましい。
【００１８】
これらの中でも高圧ホモジナイザーを用いて微細化することが好ましく、例えば特開２００５−２７０８９１号公報に開示されるような湿式粉砕法を用いて微細化（粉砕化）することが望ましい。具体的には、セルロース原料又はキチン原料を分散させた分散液を、一対のノズルから高圧でそれぞれ噴射して衝突させることにより、セルロース原料を粉砕するものであって、例えばスターバーストシステム（（株）スギノマシン製の高圧粉砕装置）を用いることにより実施できる。
【００１９】
前述の高圧ホモジナイザーを用いてセルロース原料又はキチン原料を微細化（粉砕化）する際、微細化や均質化の程度は、高圧ホモジナイザーの超高圧チャンバーへ圧送する圧力と、超高圧チャンバーに通過させる回数（処理回数）、及び、水分散液中のセルロース濃度又はキチン濃度に依存することとなる。
圧送圧力（処理圧力）は、通常、５０〜２５０ＭＰａであり、好ましくは１５０〜２４５ＭＰａである。圧送圧力が５０ＭＰａ未満の場合には、セルロース又はキチンの微細化が不充分となり、微細化により期待される効果が得られない。
また、微細化処理時の水分散液中のセルロース濃度並びにキチン濃度は０．１質量％〜３０質量％、好ましくは１質量％〜１０質量％である。水分散液中のセルロース濃度又はキチン濃度が０．１質量％未満だと生産性が著しく低く、３０質量％より高い濃度だと粉砕効率が低く、所望のセルロース繊維やキチン繊維が得られない。
微細化（粉砕化）の処理回数は、特に限定されず、前記水分散液中のセルロース濃度／キチン濃度にもよるが、セルロース濃度／キチン濃度が０．１〜１質量％の場合には処理回数は１０〜１００回程度で充分に微細化されるが、１〜１０質量％では１０〜１０００回程度必要となる。また、３０質量％を超える高濃度な場合は、数千回以上の処理回数が必要となることや、取扱いに支障をきたす程度まで高粘度化が進むため、工業的観点から非現実的である。
【００２０】
本発明に用いるセルロース繊維又はキチン繊維の平均繊維径（Ｄ）は、０．００１乃至１００μｍであり、好ましくは０．００１乃至０．０５μｍ、さらに好ましくは０．０１乃至０．０５μｍのものである。平均繊維径が０．００１μｍ未満であると、セルロース繊維又はキチン繊維が微細すぎることにより添加効果が得られず、すなわち、それを含有する水分散液が、血漿、血清又は血液と接触した際に固化の状態が不十分（例：離液する）となる。また平均繊維径が１００μｍより大きいと、セルロース繊維又はキチン繊維の微細化が不充分なものとなり、水分散液中で沈降や凝集が形成されやすくなり、スプレー性が悪化する虞がある。
【００２１】
本発明に用いるセルロース繊維又はキチン繊維のアスペクト比（Ｌ／Ｄ）は、平均繊維長（Ｌ）／平均繊維径（Ｄ）より得られ、５〜５００であり、好ましくは１０〜５００、更に好ましくは２０〜１１０である。アスペクト比が５未満の場合には、繊維として液中での分散性に欠け、乾燥時の被膜性が充分に得られない。５００を超える場合には、繊維長が極めて大きくなることを意味することから、透明性の低下につながり、さらには皮膚へ塗布した際の透明感や使用感の低下、ヨレの発生などを誘発する。
【００２２】
なお本発明において、セルロース又はキチンの平均繊維径（Ｄ）は以下のようにして求めた。まず応研商事（株）製コロジオン支持膜を日本電子（株）製イオンクリーナ（ＪＩＣ−４１０）で３分間親水化処理を施し、製造例において作製したセルロース分散液又はキチン分散液（超純水にて希釈）を数滴滴下し、室温乾燥した。これを（株）日立製作所製透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ、Ｈ−８０００）（１０，０００倍）にて加速電圧２００ｋＶで観察し、得られた画像を用いて、標本数：２００〜２５０本のセルロース繊維又はキチン繊維について一本一本の繊維径を計測し、その数平均値を平均繊維径（Ｄ）とした。
また、平均繊維長（Ｌ）は、製造例において作製したセルロース分散液又はキチン分散液をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）により４００体積倍に希釈し、セルロース又はキチンを分散させ、予め濃硫酸を用いて表面を親水化処理したシリコンウェハー上へキャストし、１１０℃にて１時間乾燥させて試料とした。得られた試料の日本電子（株）製走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ、ＪＳＭ−７４００Ｆ）（１０，０００倍）で観察した画像を用いて、標本数：１５０〜２５０本のセルロース繊維又はキチン繊維について一本一本の繊維長を計測し、その数平均値を平均繊維長（Ｌ）とした。なお、比較例として使用したキトサン繊維についても同様の方法を用いて平均繊維径及び平均繊維長を求めた。
【００２３】
前記不溶性多糖類は、水分散液の全質量に対して、０．００１質量％乃至１０質量％、好ましくは０．０１乃至１０質量％の量にて配合することが好ましい。
またこれら不溶性多糖類は一種を単独で使用してもよいし、二種以上を併用して用いてもよい。
【００２４】
＜高分子＞
本発明の水分散液には、その効果を損なわない限りにおいてさらに高分子を添加することができ、特に水溶性高分子が挙げられる。
例えば天然の水溶性高分子としては、植物系高分子（例えば、アラビアガム、トラガカントガム、ガラクタン、ローカストビーンガム、グアーガム、タマリンドガム、キャロブガム、カラヤガム、カラギーナン、ペクチン、カンテン、クインスシード、アルゲコロイド（カッソウエキス）、デンプン（コメ、トウモロコシ、バレイショ、コムギ）、グリチルリチン酸）；微生物系高分子（例えば、キサンタンガム、デキストラン、サクシノグルカン、ブルラン等）；動物系高分子（例えば、コラーゲン、カゼイン、アルブミン、ゼラチン等）；ヒアルロン酸等が挙げられる。
また半合成の水溶性高分子としては、例えば、デンプン系高分子（例えば、カルボキシメチルデンプン、メチルヒドロキシプロピルデンプン等）；セルロース系高分子（メチルセルロース、エチルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、セルロース硫酸ナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、結晶セルロース、セルロース末等）；アルギン酸系高分子（例えば、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸プロピレングリコールエステル等）等が挙げられる。
さらに合成の水溶性高分子としては、例えば、ビニル系高分子（例えば、ポリビニルアルコール、ポリビニルメチルエーテル、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー等）；ポリオキシエチレン系高分子（例えば、ポリエチレングリコール２０，０００、４０，０００、６０，０００等）；アクリル系高分子（例えば、ポリアクリル酸ナトリウム、ポリエチルアクリレート、ポリアクリルアミド等）；ポリエチレンイミン；カチオンポリマー等が挙げられる。
【００２５】
これら中でも、コラーゲン、アルギン酸、ポリビニルアルコール、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、メチルセルロース及びヒアルロン酸からなる群から選択される高分子が好ましい。
たとえば創傷被覆剤の材料として用いられているポリビニルアルコール、あるいは、癒着防止剤の材料として用いられるＣＭＣやヒアルロン酸と混合することにより、創傷被覆材や癒着防止剤として用いることができる。
【００２６】
前記高分子が本発明の水分散液に配合される場合、その添加量は、本発明の水分散液の全質量に基いて０．０１質量％乃至１０質量％であることが好ましく、０．１質量％乃至５質量％であることがより好ましい。
【００２７】
＜機能成分＞
本発明の水分散液には、その効果を損なわない限りにおいてさらに下記に示すような機能成分を添加することができる。
機能成分としては、例えばアクリノール、アスコルビン酸、イソプロパノール、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、希ヨードチンキ、グルコン酸クロルヘキシジン、エタノール、フェノキシエタノール、ポビドンヨード、マーキュロクロム、イソプロピルメチルフェノール、アミノ安息香酸エチル、メチルパラベン、グリセリン、プロピレングリコール、ブチレングリコール、オクタンジオール、カルバゾクロムスルホン酸、ジクロフェナク、グリチルレチン酸、インドメタシン、吉草酸酢酸プレドニゾロン、ケトプロフェン、ブフェキサマク、ヒドロコルチゾン、チモール、ピロキシカム、フェルビナク、ノナン酸ワニリルアミド、サリチル酸グリコール、サリチル酸、アラントイン、グリチルリチン酸二カリウム、酢酸トコフェロール、リドカイン、イオウ、塩化セチルピリジニウム、マレイン酸クロルフェニラミン、塩酸ジブカイン、塩酸ナファゾリン、ヨウ素、ジフェンヒドラミン、塩酸ジフェンヒドラミン、ミョウバン、メントール、カンフル、塩酸ピリドキシン、尿素、ビタミンＡ油、ニコチン酸ベンジル、クロタミトン、トウガラシチンキ、ハッカ油、ウンデシレン酸、ウンデシレン酸亜鉛、エキサラミド、クロトリマゾール、硝酸ミコナゾール、硝酸エコナゾール、チオコナゾール、ジエチルジチオカルバミン酸亜鉛、チアントール、トルシクラート、トルナフタート、ハロプロジン、安息香酸ベルベリン、ヒノキチオール、塩酸クロルヘキシジン、ジフェニルイミダゾール、Ｄ−カンフル、フタル酸ジエチル、クロルヒドロキシアルミニウム、キトサン、テレビン油、オリーブ油、マンニトール、グルコース、キチン、無水珪素、含水珪素、果糖、乳糖、蔗糖、白糖、ステアリン酸ナトリウム、アスパルテーム、ソルビトール、キシリトール、ステビオサイド、セラック、酸化チタン、塩化ナトリウム、タルク、マクロゴール、タンニン酸、銅クロロフィリンナトリウム、ヨウ化カリウム、メチルシロキサン、イソプロピルアルコール、ビタミンＫ、トロンビン及びＥＧＦやＦＧＦなどの成長因子、並びに、各種抗生物質、免疫抑制剤が挙げられる。
上記機能成分が本発明の水分散液に配合される場合、その添加量は、本発明の水分散液の全質量に基いて０．０１質量％乃至５０質量％であることが好ましい。
【００２８】
なお本発明の不溶性糖多糖の水分散液は、上述の高分子及び機能成分以外にも、例えば、第ＶＩＩＩ因子製剤、第ＩＸ因子複合体製剤、フィブリノゲン製剤などの「血液凝固因子製剤」、トロンボプラスチン類似物質、リピドトロンボプラスチン、ヘモコアグラーゼなどの「臓器性止血薬・蛇毒製剤」、イプシロンアミノカプロン酸、トラネキサム酸、メシル酸ガベキサート、アプロチニンなどの「抗線溶薬（抗プラスミン薬）」、血管収縮作用を利用して局所止血（例：鼻出血）に応用する「アドレナリン」といった止血剤などの他の止血作用を示す水溶性成分を混合することができる。
【００２９】
本発明の水分散液は、スプレー噴霧が可能であり、該噴霧により血漿、血清又は血液を固化することができる。そのため、本発明の水分散液は止血用途や創傷治療用途に好適に用いられる。また上記水分散液は、フィルムやシートとして使用することもできる。
さらに本発明の水分散液は外用剤、止血用組成物、創傷治療用組成物並びに癒着防止用組成物として適用できる。
【実施例】
【００３０】
［製造例１：１．２％微結晶セルロース由来ナノセルロース（ＭＮＣ）水分散液の調製］
市販の微結晶セルロース（フナコシ（株）製  カラムクロマトグラフィー用  フナセル粉末ＩＩ）１５質量部に純水１，０００質量部を加え分散させた後、（株）スギノマシン製高圧粉砕装置（スターバーストシステム）を用いて、２００ＭＰａにて３００回粉砕処理を行い、微結晶セルロース由来のセルロース繊維水分散液を得た。得られた分散液をシャーレに測りとり、１１０℃にて５時間乾燥を行い、水分を除去して残渣の量を測定し、濃度を測定した。その結果、水中のセルロース濃度（固形分濃度）は、１．２質量％、ｐＨは７であった。この水分散液を１２１℃、２０分間オートクレーブ処理を行った。【００３１】
［製造例２：１％パルプ由来ナノセルロース（ＰＮＣ）水分散液の調製］
市販のクラフトパルプ（国際紙パルプ商事（株）製  ＬＢＫＰ  Ｄ−８、固形分４６質量％）２２質量部に純水９７８質量部を加えて分散させた後、（株）スギノマシン製高圧粉砕装置（スターバーストシステム）を用いて、２４５ＭＰａにて２００回粉砕処理を行い、パルプ由来のセルロース繊維の水分散液を得た。得られた分散液をシャーレに測りとり、１１０℃にて５時間乾燥を行い、水分を除去して残渣の量を測定し、濃度を測定した。その結果、水中のセルロース濃度（固形分濃度）は、１質量％、ｐＨは７であった。この水分散液を１２１℃、２０分間オートクレーブ処理を行った。【００３２】
［製造例３：１％ナノキチン水分散液の調製］
市販のキチン粉末（甲陽ケミカル（株）製）１０質量部に純水９９０質量部を加えて分散させた後、（株）スギノマシン製高圧粉砕装置（スターバーストシステム）を用いて、２４５ＭＰａにて２００回粉砕処理を行い、ナノキチン繊維の水分散液を得た。得られた分散液をシャーレに測りとり、１１０℃にて５時間乾燥を行い、水分を除去して残渣の量を測定し、濃度を測定した。その結果、水中のキチン濃度（固形分濃度）は、１質量％であった。この水分散液を１２１℃、２０分間オートクレーブ処理を行った。【００３３】
［比較製造例１：１％ナノキトサン水分散液の調製］
市販のキトサン粉末（シグマアルドリッチ社製）１０質量部に純水９９０質量部を加えて分散させた後、（株）スギノマシン製高圧粉砕装置（スターバーストシステム）を用いて、２４５ＭＰａにて２００回粉砕処理を行い、ナノキトサン繊維の水分散液を得た。得られた分散液をシャーレに測りとり、１１０℃にて５時間乾燥を行い、水分を除去して残渣の量を測定し、濃度を測定した。その結果、水中のキトサン濃度（固形分濃度）は、１質量％であった。この水分散液を１２１℃、２０分間オートクレーブ処理を行った。【００３４】
［比較製造例２：１％ＣＭＣ−Ｎａ水溶液の調製］
カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ−Ｎａ、アズワン（株）製）０．２５ｇを蓋付き１００ｍＬガラス瓶に入れ、これに２４．７５ｇの精製水を加えて、９０℃で、９０分間ドライバスインキュベーターで加熱後、２３℃で、２４時間室温に静置し、１質量％ＣＭＣ−Ｎａ水溶液を得た。【００３５】
［比較製造例３：１％タマリンドガム水溶液の調製］
タマリンドガム（三晶（株）星製）０．２５ｇを、スクリュー管（マルエムＮｏ．７）に入れ、これに水２４．７５ｇを加えて室温混合して、１質量％タマリンドガム水溶液を得た。【００３６】
［比較製造例４：１％キサンタンガム水溶液の調製］
キサンタンガム（三晶（株）製）製）０．２５ｇを、スクリュー管（マルエムＮｏ．７）に入れ、これに水２４．７５ｇを加えて室温混合して、１質量％タマリンドガム水溶液を得た。【００３７】
［比較製造例５：１％アラビアゴム水溶液及び５％アラビアゴム水溶液の調製］
アラビアゴム（藤井薬品（株）製）０．１ｇを蓋付きスクリュー管（マルエムＮｏ．７）に入れ、これに精製水９．９ｇを加えて、ドライバスインキュベーターで９０℃、６０分間加熱後、２３℃で２４時間室温に静置して、１質量％アラビアゴム水溶液を得た。
同様にアラビアゴム（藤井薬品（株）製）０．５ｇを蓋付きスクリュー管（マルエムＮｏ．７）に入れ、これに精製水９．５ｇを加えて、ドライバスインキュベーターで９０℃、６０分間加熱後、２３℃で２４時間室温に静置して、５質量％アラビアゴム水溶液を得た。【００３８】
［比較製造例６：１％アルギン酸Ｎａ水溶液の調製］
アルギン酸Ｎａ（（有）林ケミカル）０．１ｇを蓋付きスクリュー管（マルエムＮｏ．７）に入れ、これに精製水９．９ｇを加えて、ドライバスインキュベーターで９０℃、６０分間加熱後、２３℃で２４時間室温に静置して、１質量％アルギン酸Ｎａ水溶液を得た。【００３９】
［比較製造例７：１％脱アシルジェランガム水溶液の調製］
脱アシルジェランガム（三晶（株）製）０．２５ｇを、スクリュー管（マルエムＮｏ．７）に入れ、ここに水１７．５ｇを加えて、ドライバスインキュベーターで９０℃、６０分間加熱後、２３℃で２４時間室温に静置して、１質量％脱アシルジェランガム水溶液を得た。【００４０】
［比較製造例８：１％ＰＶＡ水溶液の調製］
ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）（ＪＦ−１７、日本酢ビ・ポバール（株）製）０．１ｇを蓋付きスクリュー管（マルエムＮｏ．７）に入れ、これに９．９ｇの精製水を加えて、ドライバスインキュベーターで９０℃、６０分間加熱後、２３℃で２４時間室温に静置し、１質量％ＰＶＡ水溶液を得た。【００４１】
［平均繊維径Ｄ及び平均繊維長Ｌの測定］
前述の段落［００２２］に記載の手順に従い、ＴＥＭ画像及びＳＥＭ画像より前記製造例１乃至製造例３及び比較製造例１で得られたセルロース繊維、ナノキチン繊維及びナノキトサン繊維の平均繊維径Ｄ及び平均繊維長Ｌを求め、これらの値よりアスペクト比Ｌ／Ｄを求めた。得られた結果を表１に示す。【００４２】
【表１】
2015099083.tif 000002
【００４３】
［実施例１：１．２％ＭＮＣ水分散液及び１％ＰＮＣ水分散液によるヒト血清の固化作用］
ヒト血清（（株）ケー・エー・シー製、Ａ型）０．５ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに１．２％微結晶性セルロース水分散液０．５ｍＬを加えたところ、混合直後より血清の固化作用が認められ、この際にわずかな離液が認められた。ここにさらに、０．５ｍＬの１．２％微結晶性セルロース水分散液を追加し混合したところ、血清は、離液なく完全に固化した。
また、ヒト血清（（株）ケー・エー・シー製、Ａ型）０．５ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに１％パルプ由来セルロース水分散液０．５ｍＬを加えたところ、混合直後より血清の固化作用が認められ、この際に一部の離液に基づくゾル状化が認められた。ここにさらに、０．５ｍＬの１％パルプ由来セルロース水分散液を追加し混合したところ、血清は、離液なく完全に固化した。
尚、ヒト血清は、（株）ケー・エー・シー製の凍結血清（Ａ型）を、４℃で、２０時間融解させた後試験に供した。【００４４】
［実施例２：１％ＰＮＣ水分散液によるヒト血漿の固化作用］
ヒト血漿（コージンバイオ（株）製、ヘパリンＮａ処理）１ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに１％パルプ由来セルロース水分散液１ｍＬを加えたところ、混合直後より血漿の増粘固化作用が認められた。
さらに、ヒト血漿（コージンバイオ社製、ヘパリンＮａ処理）１ｍＬを別のプラスチックチューブに入れ、これに１％パルプ由来セルロース水分散液２ｍＬを加えると、混合直後より血漿の固化作用を示した。
尚、ヒト血漿は、コージンバイオ（株）製の凍結血漿を、室温で５時間融解させた後試験に供した。【００４５】
［実施例３：１．２％ＭＮＣ水分散液及び１％ＰＮＣ水分散液によるヒト血液の固化作用］
ヒト血液（（株）ケー・エー・シー製）０．５ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに１．２％微結晶性セルロース水分散液０．５ｍＬを加えたところ、混合直後より血液の固化作用が認められた。ここにさらに０．５ｍＬの１．２％微結晶性セルロース水分散液を追加しても、血液は固化状態を維持した。
また、ヒト血液（（株）ケー・エー・シー製）０．５ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに１％パルプ由来セルロース水分散液０．５ｍＬを加えたところ、混合直後より血液の固化作用が認められ、この際に一部に離液が認められた。さらにここに０．５ｍＬの１％パルプ由来セルロース水分散液を追加し混合したところ、血液は離液なく完全に固化した。
尚、ヒト血液は、（株）ケー・エー・シー製（ヘパリンナトリウム処理）の凍結血液を、４℃で、２０時間融解させた後、試験に供した。【００４６】
［実施例４：１．２％ＭＮＣ水分散液及び１％ＰＮＣ水分散液によるウサギ血液の固化作用］
ウサギ血液１ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに１．２％微結晶性セルロース水分散液０．５ｍＬまたは１ｍＬを加えたところ、いずれの添加量においても混合直後より血液の固化作用が認められた。
また、ウサギ血液１ｍＬに、１％パルプ由来セルロース水分散液０．５ｍＬを加えたところ、混合直後より血液の固化作用が認められた。この試料を光学顕微鏡にて観察したところ、セルロースファイバーのネットワーク中に血液の血球が取り込まれていることが確認された。その際の光学顕微鏡写真を図１に示す。
尚、ウサギ血液は、ウサギ（（日本エスエルシー（株）製））腹部大動脈より、３．８％クエン酸ナトリウム溶液を用いてプラスティック製注射シリンジにて採取し（血液：クエン酸ナトリウム溶液＝９：１）、これをプラスティック製チューブに入れた後、試験に供した。【００４７】
［実施例５：１％ＰＮＣ水分散液のスプレーミスト法によるウシ血清の固化作用］
プラスティックシャーレに、ウシ血清（ライフテクノロジー社製）０．５ｍＬを入れた。１％パルプ由来セルロースをスプレーボトル（マルエム３Ｌ）に入れ、ウシ血清に対して１ｍＬ量をスプレーした（ミスト状態にて添加）ところ、ウシ血清とセルロースミストの接触直後からシャーレ内で、ウシ血清の流動性が失われ、血清の固化が認められた。【００４８】
［実施例６：１％キチン水分散液によるヒト血清および血液の固化作用］
ヒト血清（（株）ケー・エー・シー製、Ａ型）０．５ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに１％キチン水分散液０．５ｍＬを加えたところ、混合直後より血清の固化作用が認められ、この際にわずかな離液が認められた。さらに、０．５ｍＬの１％キチン水分散液を追加し混合したところ、血清は離液なく完全に固化した。
また、ヒト血液（（株）ケー・エー・シー製）０．５ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに１％キチン水分散液０．５ｍＬを加えたところ、混合直後より血液の固化作用がみられ、また離液が認められた。さらに、０．５ｍＬの１％キチン水分散液を追加し混合したところ、血液は固化した。【００４９】
［比較例１：１％ＰｕｒａＭａｔｒｉｘによるヒト血清および血液の固化作用］
ヒト血清（（株）ケー・エー・シー製、Ａ型）０．５ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに１％ｗ／ｖ高分子ペプチドを有効成分として含有するＰｕｒａＭａｔｒｉｘ（登録商標）ハイドロゲル（ＢＤ社製）０．５ｍＬを加えたところ、混合直後より血清の固化作用が認められ、この際に離液が認められた。ここにさらに０．５ｍＬのＰｕｒａＭａｔｒｉｘを追加し混合したところ、血清は、離液なく完全に固化した。
また、ヒト血液（（株）ケー・エー・シー製）０．５ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに上記ＰｕｒａＭａｔｒｉｘ０．５ｍＬを加えたとところ、混合直後より血液の固化作用がみられ、その際に離液が認められた。ここにさらに０．５ｍＬのＰｕｒａＭａｔｒｉｘを追加し混合したところ、血液は離液なく完全に固化した。【００５０】
［比較例２：１％キトサン水分散によるヒト血清およびヒト血液の固化作用］
ヒト血清（（株）ケー・エー・シー製、Ａ型）０．５ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに１％キトサン水分散液０．５ｍＬを加えて混合したところ、血清は固化せずに液体の状態であった。ここにさらに１％キトサン水分散液０．５ｍＬを追加し混合しても、血清の固化は認められなかった。
また、ヒト血液（（株）ケー・エー・シー製）０．５ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに１％キトサン水分散液０．５ｍＬを加えて混合したところ、血液の固化作用は認められなかった。ここにさらに０．５ｍＬの１％キトサン水分散液を追加し混合しても、血液の固化作用は認められなかった。【００５１】
［比較例３：１％ＣＭＣ−Ｎａ水溶液によるヒト血清の固化作用］
ヒト血清（（株）ケー・エー・シー製、Ａ型）０．５ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに１％ＣＭＣ−Ｎａ水溶液０．５ｍＬを加えて混合しても、血清は固化せずに液体の状態であった。ここにさらに０．５ｍＬの１％ＣＭＣ−Ｎａ水溶液を追加し混合しても、血清の固化は認められなかった。【００５２】
［比較例４：１％タマリンドガム水溶液によるヒト血清の固化作用］
ヒト血清（（株）ケー・エー・シー製、Ａ型）０．５ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに１％タマリンドガム水溶液０．５ｍＬを加えて混合しても、血清は固化せずに液体の状態であった。ここにさらに０．５ｍＬの１％タマリンドガム水溶液を追加し混合しても、血清の固化は認められなかった。【００５３】
［比較例５：１％キサンタンガム水溶液によるヒト血清の固化作用］
ヒト血清（（株）ケー・エー・シー製、Ａ型）０．５ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに１％キサンタンガム水溶液０．５ｍＬを加えて混合しても、血清は固化せずに液体の状態であった。ここにさらに０．５ｍＬの１％キサンタンガム水溶液を追加し混合しても、血清の固化は認められなかった。【００５４】
［比較例６：１％又は５％アラビアゴム水溶液によるヒト血清、血液および血漿の固化作用］
ヒト血清（（株）ケー・エー・シー製、Ａ型）０．５ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに１％アラビアゴム水溶液０．５ｍＬを加えて混合しても、血清は固化せずに液体の状態であった。ここにさらに０．５ｍＬの１％アラビアゴム水溶液を追加し混合しても、血清の固化は認められなかった。
同様に、ヒト血清（（株）ケー・エー・シー製、Ａ型）０．５ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに５％アラビアゴム水溶液０．５ｍＬを加えて混合しても、血清は固化せずに液体の状態であった。ここにさらに０．５ｍＬの５％アラビアゴム水溶液を追加し混合しても、血清の固化は認められなかった。
また、ヒト血液（（株）ケー・エー・シー製）０．５ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに１％アラビアゴム水溶液０．５ｍＬを加えて混合しても、血液は固化せずに液体の状態であった。ここにさらに０．５ｍＬの１％アラビアゴム水溶液を追加しても、血液の固化は認められなかった。
同様に、ヒト血液（（株）ケー・エー・シー製）０．５ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに５％アラビアゴム水溶液０．５ｍＬを加えて混合しても、血液は固化せずに液体の状態であった。ここにさらに０．５ｍＬの５％アラビアゴム水溶液を追加し混合しても、血液の固化は認められなかった。
さらに、ヒト血漿（コージンバイオ（株）製）０．５ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに１％アラビアゴム水溶液０．５ｍＬを加えて混合しても、血漿は固化せずに液体の状態であった。ここにさらに０．５ｍＬの１％アラビアゴム水溶液を追加し混合しても、血漿の固化は認められなかった。
同様に、ヒト血漿（コージンバイオ（株）製）１ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに５％アラビアゴム水溶液を１ｍＬ加えて混合しても、血漿は固化せずに液体の状態であった。ここにさらに２ｍＬの５％アラビアゴム水溶液を追加しても、血漿の固化は認められなかった。【００５５】
［比較例７：１％アルギン酸Ｎａ水溶液によるヒト血清、血液および血漿の固化作用］
ヒト血清（（株）ケー・エー・シー製、Ａ型）０．５ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに１％アルギン酸Ｎａ水溶液０．５ｍＬを加えて混合しても、血清は固化せずに液体の状態であった。ここにさらに、０．５ｍＬの１％アルギン酸Ｎａ水溶液を追加し混合しても、血清の固化は認められなかった。
同様に、ヒト血液（（株）ケー・エー・シー製）０．５ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに１％アルギン酸Ｎａ水溶液０．５ｍＬを加えて混合しても、血液は固化せずに液体の状態であった。ここにさらに０．５ｍＬの１％アルギン酸Ｎａ水溶液を追加し混合しても、血液の固化は認められなかった。
さらに、ヒト血漿（コージンバイオ（株）製）０．５ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに１％アルギン酸Ｎａ水溶液を１ｍＬ加えて混合しても、血漿は固化せずに液体の状態であった。ここにさらに２ｍＬの１％アルギン酸Ｎａ水溶液を追加しても、血漿の固化は認められなかった。【００５６】
［比較例８：１％脱アシルジェランガム水溶液によるヒト血清の固化作用］
ヒト血清（（株）ケー・エー・シー製、Ａ型）０．５ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに１％脱アシルジェランガム水溶液０．５ｍＬを加えて混合しても、血清は固化せずに液体の状態であった。ここにさらに０．５ｍＬの１％脱アシルジェランガム水溶液を追加し混合しても、血清の固化は認められなかった。【００５７】
なおセルロースファイバーを含む水分散液は、繊維径０．００１乃至０．０５μｍ、アスペクト比５乃至５００において、液ダレなくスプレーができることを本発明者らは確認している（特願２０１２−２６５５３０号）。そしてパルプ由来セルロースの水分散液は種々の電解質に対して増粘作用を示すが、微結晶セルロースの水分散液では塩に対する増粘作用を示さない点を確認している（特願２０１３−８９７０２号）。
一方本発明では、前述の実施例において、微結晶セルロースの水分散液が血清および血液を固化させること（実施例１及び実施例３）、パルプ由来セルロースの水分散液が血清、血漿及び血液を固化させること（実施例１〜実施例３）を確認した。従って、これらのナノセルロースは、血液、血清あるいは血漿中に含まれる種々の成分と相互作用してナノファイバーが凝集体、集合体を形成していることが推察される。このことから、セルロースファイバーを含む分散液が、血清又は血漿そのものを固化させ、その結果、血液を固化させ、ひいては止血作用を示すもの考えられる。
なお血液に関してさらに検討すると、１．２％微結晶セルロース水分散液ではわずか０．５ｍＬにてヒト血液（０．５ｍＬ）の固化作用が認められたものの、１％パルプ由来セルロース水分散液、１％キチン水分散液並びにＰｕｒａＭａｔｒｉｘでは、０．５ｍＬの添加量では離液による一部ゾル化が見られた。【００５８】
得られた結果を表２及び表３に示す。
【表２】
2015099083.tif 000003
【表３】
2015099083.tif 000004
【００５９】
［実施例７：蛍光顕微鏡による疎水性観察］
１％パルプ由来セルロース水分散液、１％脱アシルジェランガム水溶液、１％ナノキチン水分散液、および１％ナノキトサン水分散液のそれぞれ１ｍＬに、アニリノナフタレンスルホン酸（ＡＮＳ）０．００７ｇを加えて溶解した。これらの水分散液または水溶液をプレパラート上に滴下し、室温にて乾燥させ、蛍光顕微鏡観察を行った。
また、１％パルプ由来セルロース水分散液、１％ナノキチン水分散液のそれぞれ０．５ｍＬに、１０％ＮａＣｌ溶液０．００５ｍＬを加えた後、ＡＮＳ０．００７ｇを加えて溶解し、同様に蛍光顕微鏡観察を行った。
観察結果を以下に示す。
なおアニリノナフタレンスルホン酸は、純水中に比べ疎水性環境下におかれるとその蛍光強度が著しく増大し、すなわち親水性環境下では蛍光強度が減少（或いは蛍光発現しない）することが知られている。【００６０】
前出の実施例において血清、血漿及び血液に対して固化作用を有することが確認された１％パルプ由来セルロース分散液にアニリノナフタレンスルホン酸（ＡＮＳ）を添加しても蛍光は観察されず、すなわち親水性環境にあるという結果となった。一方、１％パルプ由来セルロース分散液にＮａＣｌ溶液を加え、ここにＡＮＳを添加した場合には蛍光が確認され、すなわち疎水性環境（疎水性の構造体）に変化したことが確認された。
上記の結果は、セルロースは通常水に不溶な多糖類であるが、微細化してナノファイバー状とすることによってファイバー表面が親水性となっており、その後、塩などがファイバー表面に吸着されると疎水性となるというメカニズムを反映したものと考えられる。
このように、セルロース分散液の構成成分である微細化したセルロースファイバーは、その表面の親水性／疎水性変化により、具体的にはセルロースナノファイバー表面に、血清などに含まれるナトリウム塩等が作用することにより疎水性が発現し、その後、血漿、血清、血液中の成分との複合形成反応が起こり、すなわち微細化セルロースと血清、血漿に含まれる成分によって凝集体、集合体を形成することにより、血漿、血清や血液の固化作用を発現したものと考えられる。【００６１】
一方、１％脱アシルジェランガム水溶液では、アニリノナフタレンスルホン酸添加後に蛍光強度の増大が認められた。
脱アシルジェランガムは、通常、カルシウムイオンと反応することにより自己組織化し、ゲルを形成する性質を有する。但し化学構造の性質上、血清或いは血液中のイオン性物質と反応するなどの影響を受け、この結果カルシウムイオンとの反応が阻害される。そのため脱アシルジェランガムは、血清或いは血液中に含まれる成分と複合体を形成せず、すなわち脱アシルジェランガムと血清等を含む凝集体／集合体を形成せず、脱アシルジェランガムは血清や血液を固化する作用が認められないものであると考えられた。【００６２】
また１％ナノキチン水分散液及び１％ナノキトサン水分散液では、いずれもアニリノナフタレンスルホン酸添加により蛍光が確認されたが、イオンの影響を強く受けることが知られているキトサンは凝集体／集合体を形成せず、すなわち血清及び血液を固化させず、一方イオンの影響を受けないキチンのみが血清、血液中に含まれる成分と反応して複合体となり、その結果、凝集体／集合体を形成して、血清および血液の固化作用することが推察された。【００６３】
［実施例８：ナノセルロースと高分子の複合化］
１％パルプ由来セルロース分散液９ｇに１０％ＰＶＡ水溶液１ｇを加えて、セルロース０．９質量％とＰＶＡ１質量％が含まれる透明分散液を作製した。このセルロース０．９質量％とＰＶＡ１質量％が含まれる透明分散液をスプレーボトル（マルエム３Ｌ）に入れ、これを用いてスプレーを行ったところ、透明分散液はミスト化し、スプレー可能であった。またセルロース０．９質量％・ＰＶＡ１質量％透明分散液５ｇをスプレー後、室温で４８時間乾燥後にスプレー箇所はフィルム状となった。【００６４】
［実施例９：ナノセルロースの含水シート化］
１％パルプ由来セルロース分散液９ｇに１０％ＰＶＡ水溶液１ｇを加えて、セルロース０．９質量％とＰＶＡ１質量％が含まれる透明分散液を作製した。このセルロース０．９質量％とＰＶＡ１質量％が含まれる透明分散液１０ｇを、プラスティック製ケース（５ｃｍ×８ｃｍ）に入れ、室温で自然乾燥させ、０．１７１ｇの透明なフィルムを得た。このフィルムをプラスティック製シャーレ（６ｃｍ径）に入れて、水１０ｍｌを加えたところ、直ちに吸水され含水シートが作製された。【００６５】
［実施例１０：血液凝固および線溶系への検討］
全自動血液凝固測定装置ＣＳ−２００ｉ（シスメックス（株）製）において、データファイフィブリノゲン（シスメックス社製）を用いた血液凝固検討では、ヒト標準血漿サイトロール１０マイクロリットルにトロンビン試薬５０マイクロリットルを加えた後、１．２％微結晶性セルロース水分散液１０マイクロリットルを加えても、フィブリン形成は認められなかった。
また、全自動血液凝固測定装置ＣＳ−２００ｉ（シスメックス（株）製）において、フィブリン／フィブリノゲン分解産物測定試薬ラッテクステストＢＬ−２−Ｐ−ＦＤＰ（シスメックス（株）製）を用いた線溶系検討では、ヒト標準血清ＦＤＰコントロールネオＨ１．２％微結晶性セルロース水分散液１０μＬの検討では、フィブリン・フィブリノーゲン分解産物の形成は認められなかった。【００６６】
［製造例４：１．７％パルプ由来ナノセルロース（ＰＮＣ）水分散液の調製］
クラフトパルプ（北越紀州製紙株式会社製ＬＢＫＰ  Ｄ−８、固形分３５質量％）２２質量部に純水１２８質量部を加えて分散させた後、増幸産業株式会社製石臼式粉砕装置（マスコロイダー）を用いて、１５００ｒｐｍにて９回粉砕処理を行い、パルプスラリー（固形分濃度３．５質量％）を作製した。これに株式会社スギノマシン製高圧粉砕装置（スターバーストシステム）を用いて、２４５ＭＰａにて３００回粉砕処理を行い、パルプ由来のセルロース繊維の水分散液を得た。得られた分散液をシャーレに測りとり、１１０℃にて５時間乾燥を行い、水分を除去して残渣の量を測定し、濃度を測定した。その結果、水中のセルロース濃度（固形分濃度）は、１．７質量％であった。この水分散液を１２１℃、２０分間オートクレーブ処理を行った。【００６７】
［実施例１１：ナノセルロースと機能成分（塩化ベンザルコニウム）の複合化］
塩化ベンザルコニウム（５０％）０．５ｇに水９．５ｇを加えて２．５％塩化ベンザルコニウム水溶液を調製した。
２．５％塩化ベンザルコニウム水溶液０．２５ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに１．７％パルプ由来ナノセルロース水分散液２ｍＬを加えて混合するとゲル化（固化）が認められた。
同様に、２．５％塩化ベンザルコニウム水溶液０．５ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに１．７％パルプ由来ナノセルロース水分散液２ｍＬを加えて混合するとゲル化が認められ、また２．５％塩化ベンザルコニウム水溶液１ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに１．７％パルプ由来ナノセルロース水分散液２ｍＬを加えて混合するとゲル化（固化）が認められた。
得られた結果を表４に示す。【００６８】
【表４】
2015099083.tif 000005
【００６９】
［実施例１２：ナノセルロースと機能成分（アミノカプロン酸）の複合化］
アミノカプロン酸（６−ａｍｉｎｏｈｅｘａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）０．２ｇに水９．８ｇを加えて２％アミノカプロン酸水溶液を調製した。
２％アミノカプロン酸水溶液０．２５ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに１．７％パルプ由来ナノセルロース水分散液２ｍＬを加えて混合するとゲル化（固化）が認められた。
同様に、２％アミノカプロン酸水溶液０．５ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに１．７％パルプ由来ナノセルロース水分散液２ｍＬを加えて混合するとゲル化（固化）が認められた。
得られた結果を表５に示す。【００７０】
【表５】
2015099083.tif 000006
【００７１】
［製造例５：１％微結晶性セルロース由来ナノセルロース（ＭＮＣ）水分散液の調製］
市販の結晶セルロース（旭化成ケミカルズ株式会社製  ＰＨ−１０１）４質量部に純水３９６質量部を加え分散させた後、製造例１と同様の操作により製造した。水中のセルロース濃度（固形分濃度）は、１．０質量％であった。【００７２】
［製造例６：２％キチン水分散液の調製］
市販のバイオマスナノファイバー（ＢｉＮＦｉ−Ｓ（ビンフィス）２質量％、株式会社スギノマシン）を１２１℃、２０分間オートクレーブ処理を行うことにより滅菌した。【００７３】
［参考例１：ラットのヘパリン処理血液への水混合における血液の状態］
雄性ＳＤラット１０週齢（日本クレア（株）製）にペントバルビタールナトリウム（共立製薬（株）製）４０ｍｇ／ｋｇを腹腔内投与して麻酔し、腹部大動脈より針先にヘパリン（１０００Ｕ／ｍＬ、セージェント社）を付着させた１８Ｇの針付のプラスティック製シリンジを用いて、血液１０ｍＬを採取した。
このラットヘパリン処理血液１ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに水１ｍＬを加えると、液体の状態であった。さらに水を１ｍＬ加えても液体の状態であった。【００７４】
［実施例１３：１％微結晶性セルロース由来ナノセルロース（ＭＮＣ）水分散液によるヘパリン処理血液の固化作用］
雄性ＳＤラット１０週齢（日本クレア（株）製）にペントバルビタールナトリウム（共立製薬（株）製）４０ｍｇ／ｋｇを腹腔内投与して麻酔し、腹部大動脈より針先にヘパリン（１０００Ｕ／ｍＬ、セージェント社）を付着させた１８Ｇの針付のプラスティック製シリンジを用いて、血液１０ｍＬを採取した。
このラットヘパリン処理血液１ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに１％微結晶性セルロース由来ナノセルロース水分散液１ｍＬを加えると、液体の状態であったが、さらに１％微結晶性セルロース由来ナノセルロース水分散液を１ｍＬ加えると、直後より血液の固化作用が認められ、この際には離液が認められた。
また、この血液ｌｍＬをプラスチックチューブに入れ、１％微結晶性セルロース由来ナノセルロース水分散液１．５ｍＬを加えると、血液は離液のある状態であるが固化する傾向が認められた。【００７５】
［実施例１４：２％キチン水分散液によるヘパリン処理血液の固化作用］
雄性ＳＤラット１０週齢（日本クレア（株）製）にペントバルビタールナトリウム（共立製薬（株）製）４０ｍｇ／ｋｇを腹腔内投与して麻酔し、腹部大動脈より針先にヘパリン（１０００Ｕ／ｍＬ、セージェント社）を付着させた１８Ｇの針付のプラスティック製シリンジを用いて、血液１０ｍＬを採取した。
このラットヘパリン処理血液ｌｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに２％キチン水分散液１ｍＬを加えると、混合直後より血液の固化作用が認められ、この際にわずかな離液が認められた。さらに、１ｍＬの２％キチン水分散液を追加し混合すると、血液は離液なく固化した。
また、この血液１ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに２％キチン水分散液１．５ｍＬを加えたところ、血液は離液なく固化した。【００７６】
［実施例１５：１．７％パルプ由来ナノセルロース水分散液によるヘパリン処理血液の固化作用］
雄性ＳＤラット１０週齢（日本クレア（株）製）にペントバルビタールナトリウム（共立製薬（株）製）４０ｍｇ／ｋｇを腹腔内投与して麻酔し、腹部大動脈より針先にヘパリン（１０００Ｕ／ｍＬ、セージェント社）を付着させた１８Ｇの針付のプラスティック製シリンジを用いて、血液１０ｍＬを採取した。
このラットヘパリン処理血液１ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに１．７％パルプ由来ナノセルロース水分散液１ｍＬを加えると、混合直後より血液の固化作用が認められたが、この際にわずかな離液が認められた。さらに、１ｍＬの１．７％パルプ由来ナノセルロース水分散液を追加し混合すると、血液は離液なく固化した。
また、この血液１ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに１．７％パルプ由来ナノセルロース水分散液１．５ｍＬを加えると、血液は離液なく固化した。【００７７】
［参考例２：水とラット血液の混合における血液の状態］
雄性ＳＤラット１０週齢（日本クレア（株）製）にペントバルビタールナトリウム（共立製薬（株）製）４０ｍｇ／ｋｇを腹腔内投与して麻酔し、腹部大動脈より１８Ｇの針付のプラスティック製シリンジを用いて、血液１０ｍＬを採取した。
このラット血液１．５ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに水１ｍＬを加えると、液体の状態であった。また、ボルテックスによる分散化処理（１５秒）においても液状であった。【００７８】
［実施例１６：２％キチン水分散液によるラット血液の固化作用］
雄性ＳＤラット１０週齢（日本クレア（株）製）にペントバルビタールナトリウム（共立製薬（株）製）４０ｍｇ／ｋｇを腹腔内投与して麻酔し、腹部大動脈より１８Ｇの針付のプラスティック製シリンジを用いて、血液４ｍＬを採取した。
このラット血液１ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに２％キチン水分散液１．５ｍＬを加えると、混合直後より血液の固化作用が認められたが、この際にわずかな離液が認められた。【００７９】
［実施例１７：１．７％パルプ由来ナノセルロース水分散液によるラット血液の固化作用］
雄性ＳＤラット１０週齢（日本クレア（株）製）にペントバルビタールナトリウム（共立製薬（株）製）４０ｍｇ／ｋｇを腹腔内投与して麻酔し、腹部大動脈より１８Ｇの針付のプラスティック製シリンジを用いて、血液４ｍＬを採取した。
このラット血液１ｍＬをプラスチックチューブに入れ、これに１．７％パルプ由来ナノセルロース水分散液１．５ｍＬを加えると、混合直後より血液の固化作用が認められ、血液は離液なく固化した。さらに、この固化体をボルテックスによる分散化処理（１５秒）を行っても離液は認められなかった。【００８０】
［実施例１８：ラット下肢足の静脈を用いた血液固化試験］
雄性ＳＤラット１０週齢（日本クレア（株）製）にペントバルビタールナトリウム（共立製薬（株）製）４０ｍｇ／ｋｇを腹腔内投与して麻酔を行った。ラットの下肢足静脈を鋭敏なメスで、血管を１／３の切り取ることにより出血させ、この直後に、１．７％パルプ由来ナノセルロース（ＰＮＣ）水分散液、あるいは、２％キチン水分散液、または、水の各々０．５ｍＬをそれぞれ別々に充填したプラスティック製シリンジを用いて、傷部を完全に被覆して、一分後、ガーゼで材料を拭き取り後、切り傷からの血液の流れの状態および床敷したガーゼへの浸潤の有無を達観的に観察した。
パルプ由来ナノセルロース（ＰＮＣ）の被覆処理では、血液の流れが止まったが、キチンの被覆処理では、血液の流れは止まらなかった。尚、水を適応した場合、血液は、流れ出て、止まらなかった。【００８１】
［実施例１９：ラット肝切除モデルにおける止血および癒着に対する防止効果試験］
（１）試験方法
雄性ラット（２４５．６ｇ〜２６０．９ｇ）にペントバルビタールナトリウム（商品名：ソムノペンチル、ペントバルビタールナトリウム６４．８ｍｇ／ｍＬ含有、共立製薬（株）製）を腹腔内投与した。具体的には、生理食塩液（製造番号Ｋ３Ｉ８５、大塚生食注、株式会社大塚製薬工場）を用いてソムノペンチルを１０倍希釈し、投与量がペントバルビタールナトリウムとして４０ｍｇ／ｋｇになるように投与液量を換算して投与した。
深麻酔下でラット腹部皮膚を電気バリカンで剃毛し、消毒用アルコールで術野を消毒した後に正中線皮膚を縦切開して肝臓を露出させた。肝臓の外側左葉を滅菌済みの板に乗せ、辺縁部を３０ｍｍ切除した。被験物質塗布群では切除面を完全に被覆するように１．７７％パルプ由来ナノセルロース投与群１〜５ｇを肝臓切除面に塗布し、縫合閉腹した。無処置群では肝臓切除後直ちに縫合閉腹した。
十分に保温しながら、覚醒するまでラットの状態を観察した。覚醒後はラットを飼育ケージに収容した。
術後７日目に、イソフルラン（イソフル［登録商標］、ＤＳファーマアニマルヘルス（株）製）麻酔下で屠殺し、腹腔内組織の癒着、出血性変化を「０：癒着なし、１：自重で剥離可能、２：鈍的剥離可能、３：鋭的剥離」の４段階でスコア化した。【００８２】
（２）試験結果
手術日において、肝臓切除により、無処置群では、全例において出血が認められた。これに対して、肝臓切除面に塗布したパルプ由来ナノセルロース投与群では、出血は止まり、止血された。
術後７日において、癒着の程度を表に示す、４段階スコアについては、肝臓切除部において、無処置群では５例中３例でスコア３であったが、これに対して、パルプ由来ナノセルロース投与群では、全例でスコア０と、肝臓切除による癒着に対して防止効果が認められた。
得られた結果を表６に示す。【００８３】
【表６】
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【図１】
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【国際調査報告】
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