(57)【要約】  ｍＳｉｎ３Ｂに結合できる物質は、線維筋痛症の動物実験モデルであるＩＣＳ（Ｉｎｔｅｒｍｉｔｔｅｎｔ  Ｃｏｌｄ  Ｓｔｒｅｓｓ）モデルマウスに対して鎮痛作用を示し、線維筋痛症の予防または治療薬として有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｍＳｉｎ３Ｂに結合できる物質を含む、線維筋痛症の予防または治療薬。
【請求項２】
ｍＳｉｎ３Ｂに結合できる物質が、ｍＳｉｎ３Ｂを阻害する物質である、請求項１に記載の予防または治療薬。
【請求項３】
ｍＳｉｎ３Ｂに結合できる物質が、ヒト髄芽腫細胞株の増殖阻害活性を持つ、請求項１に記載の予防または治療薬。
【請求項４】
線維筋痛症の予防または治療に用いられる、ｍＳｉｎ３Ｂに結合できる物質。
【請求項５】
ｍＳｉｎ３Ｂに結合できる物質が、ｍＳｉｎ３Ｂを阻害する物質である、請求項４に記載の物質。
【請求項６】
ｍＳｉｎ３Ｂに結合できる物質が、ヒト髄芽腫細胞株の増殖阻害活性を持つ、請求項４に記載の物質。
【請求項７】
哺乳動物にｍＳｉｎ３Ｂに結合できる物質の有効量を投与することを含む、線維筋痛症の予防または治療方法。
【請求項８】
ｍＳｉｎ３Ｂに結合できる物質が、ｍＳｉｎ３Ｂを阻害する物質である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ｍＳｉｎ３Ｂに結合できる物質が、ヒト髄芽腫細胞株の増殖阻害活性を持つ、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
線維筋痛症の予防または治療薬の製造のためのｍＳｉｎ３Ｂに結合できる物質の使用。
【請求項１１】
ｍＳｉｎ３Ｂに結合できる物質が、ｍＳｉｎ３Ｂを阻害する物質である、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
ｍＳｉｎ３Ｂに結合できる物質が、ヒト髄芽腫細胞株の増殖阻害活性を持つ、請求項１０に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、線維筋痛症の予防または治療薬に関し、より詳細には、ｍＳｉｎ３Ｂに結合する化合物を含む線維筋痛症の予防または治療薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
全身性疼痛症候群の一例である線維筋痛症は、圧痛点に特に高い反応性があり、原因不明の全身疼痛と、不眠・うつ病などの精神的、神経的症状などを主訴とする病気である。国民の２％に及ぶ患者数がおり、とくに中高年の女性に圧倒的に多く発症していることが報告されている。手術や事故による身体的外傷、ストレス、うつ、不安による精神的要因が、線維筋痛症を発症する背景に大きく関与していると考えられ、結果として下位脳幹部神経核から脊髄後角への下行性疼痛抑制系の減弱による部分が大きいとされているが、初発原因部位の特定はなされない（非特許文献１及び２参照）。【０００３】
線維筋痛症に対しては、一般の疼痛治療に適用されている非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤｓ）などの消炎鎮痛剤のほとんどが、あまり効果を認められない。そのため、現在の治療においては、抗うつ薬を中心に、抗けいれん薬、漢方薬などを経口投与する薬物療法や、心理療法、リラクゼーション、運動療法などの心理療法が行われている。経口投与される前記抗うつ薬としては、アミトリプチリン、アモキサピン、フルボキサミン、ミルナシプランなどが用いられている。しかしながら、前記従来の治療方法は、線維筋痛症の症状をある程度改善することができるものの、治療効果としては充分でなかったり、完治させることができなかったりするという問題があった。【０００４】
また、最近では、ワクシニアウイルス接種炎症組織抽出物（例えば、ノイロトロピン）が、線維筋痛症に有効であることが開示されている（特許文献１参照）。前記特許文献１に記載の発明によれば、線維筋痛症を効果的に治療することができるが、より優れた治療効果を有し、より副作用の少ない線維筋痛症の治療薬が求められている。【０００５】
一方、神経の障害に起因する慢性疼痛（神経障害性疼痛）は、陽性症状（疼痛過敏とアロディニア（触覚刺激により誘発される強い痛み））と陰性症状（知覚鈍麻）が混在する、複雑な疼痛症状を呈する。また、この異常痛は抗炎症薬やモルヒネに抵抗性を示すことから、難治性疼痛と捉えられている。【０００６】
最近、神経障害後の一次知覚神経において、神経選択的転写抑制因子ＮＲＳＦ／ＲＥＳＴの発現が増加し、エピジェネティクス修飾（ヒストンアセチル化の低下）を介して疼痛関連遺伝子群（Ｎａｖ１．８，ＭＯＰ，ＴＲＰＭ８，ＴＲＰＡ１，Ｋｖ４．３）の発現をサイレンシングし、神経障害性疼痛の特徴であるＣ線維性知覚鈍麻と、モルヒネ抵抗性とを誘発することが報告された（非特許文献３〜６）。【０００７】
一方で本発明者らは、ＮＲＳＦに特異的に結合するｍＳｉｎ３Ｂの、ＰＡＨドメインに結合する化合物を同定し、この化合物が神経障害性疼痛で観察されるモルヒネ鎮痛の消失と知覚鈍麻といった変調を回復させることを明らかにした（特許文献２）。また、前述の特許文献１に記載されているように、ｍＳｉｎ３Ｂ結合化合物による効果は疼痛抑制ではなく、逆説的疼痛鈍麻といった疼痛に関する陰性症状に対する治療効果であり、疼痛過敏やアロディニアといった陽性症状に対しては全く有効性を示さなかった（未発表）。【０００８】
ところで、公知の神経障害性疼痛は全身性疼痛ではなく、障害側に特異的なものである。すなわち神経障害性疼痛は疼痛伝達経路上の障害（傷害）部位を特定できるものである。一方、線維筋痛症では疾患原因責任部位が特定されない。また、モルヒネ全身投与は神経障害性疼痛で正常マウスより１０倍弱い鎮痛効果となるが、線維筋痛症ではまったく効かない（１００倍以上）。
脳室内にモルヒネ投与した場合、神経障害性疼痛モデルでは正常マウスと同様であったが、線維筋痛症モデルではまったく無効である（非特許文献７及び８参照）。
また、ガバペンチンは線維筋痛症モデルでは１回の脳室内投与で３日以上有意な疼痛過敏抑制作用を示したが、神経障害性疼痛モデルではまったく無効である（非特許文献９参照）。
したがって、線維筋痛症と神経障害性疼痛とは、同じ疼痛を伴う疾患であるが、発症機作や薬物の効果に違いが観られることから、まったく異なる疾患であると考えられている。【０００９】
本発明者らは、繰り返しストレス性の慢性疼痛モデルが線維筋痛症をはじめとした全身性疼痛症候群の良きモデルであることを明らかにし（特許文献３参照）、そのうえでこのモデルを用いて臨床で用いられている治療薬（抗うつ薬）を検定することで、全身性疼痛と精神的要因が薬理学的に密接な相関性があることを見出し、特定の抗うつ薬が脊髄クモ膜下腔内投与することで線維筋痛症の治療薬として用いられることを明らかにしている（特許文献４参照）。同文献中、このような治療薬としては、ミルナシプラン、パロキセチン、アミトリプチリンやミアンセリンが挙げられている。
しかし、こうした抗うつ薬による脊髄クモ膜下腔内投与は侵襲性が高く、患者への連続投与は負担が重く、線維筋痛症に対する治療効果の満足度もまだ十分ではなく、線維筋痛症に対する新たな薬剤が求められていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】ＷＯ２００４／０３９３８３
【特許文献２】ＷＯ２０１１／０９９５０２
【特許文献３】特開２００９−１９５２００号公報
【特許文献４】特開２００９−００７２７８号公報
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｍａｙｏ  Ｃｌｉｎ  Ｐｒｏｃ．，２０１１；８６（９）：９０７−９１１．
【非特許文献２】Ａｃｔａ  Ｒｅｕｍａｔｏｌ  Ｐｏｒｔ．，２０１０；３５（１）：１０−１５．
【非特許文献３】Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，１６６，１−４，２０１０．
【非特許文献４】Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，３０，４８０６−４８１４，２０１０．
【非特許文献５】Ｍｏｌ．Ｐａｉｎ，４：１１，２００８．
【非特許文献６】Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．，１０９：５７−７７，２００６．
【非特許文献７】Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．，２０１０，２６；４７２（３）：１８４−１８７．
【非特許文献８】Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，２００４；３０９（１）：３８０−３８７．
【非特許文献９】Ｍｏｌ．Ｐａｉｎ．４：５２，２００８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、優れた予防・治療効果を有する線維筋痛症の予防・治療薬を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、線維筋痛症の治療薬を検索する過程において、線維筋痛症の動物実験モデルとしてＩＣＳ（Ｉｎｔｅｒｍｉｔｔｅｎｔ  Ｃｏｌｄ  Ｓｔｒｅｓｓ）モデルマウスを作成した。そして、本発明者らは、神経選択的転写抑制因子ＮＲＳＦに特異的に結合するコリプレッサーであるｍＳｉｎ３Ｂに特異的に結合する化合物が、上記ＩＣＳモデルマウスにおいて熱性刺激を与えた場合に、それに起因する鎮痛の消失が観察されることを見出した。本発明はこれらの知見に基づき完成されたものである。【００１４】
すなわち、本発明の要旨は以下の通りである。
［１］ｍＳｉｎ３Ｂに結合できる物質を含む、線維筋痛症の予防または治療薬。
［２］ｍＳｉｎ３Ｂに結合できる物質が、ｍＳｉｎ３Ｂを阻害する物質である、前記［１］に記載の予防または治療薬。
［３］ｍＳｉｎ３Ｂに結合できる物質が、ヒト髄芽腫細胞株の増殖阻害活性を持つ、前記［１］に記載の予防または治療薬。
［４］線維筋痛症の予防または治療に用いられる、ｍＳｉｎ３Ｂに結合できる物質。
［５］ｍＳｉｎ３Ｂに結合できる物質が、ｍＳｉｎ３Ｂを阻害する物質である、前記［４］に記載の物質。
［６］ｍＳｉｎ３Ｂに結合できる物質が、ヒト髄芽腫細胞株の増殖阻害活性を持つ、前記［４］に記載の物質。
［７］哺乳動物にｍＳｉｎ３Ｂに結合できる物質の有効量を投与することを含む、線維筋痛症の予防または治療方法。
［８］ｍＳｉｎ３Ｂに結合できる物質が、ｍＳｉｎ３Ｂを阻害する物質である、前記［７］に記載の方法。
［９］ｍＳｉｎ３Ｂに結合できる物質が、ヒト髄芽腫細胞株の増殖阻害活性を持つ、前記［７］に記載の方法。
［１０］線維筋痛症の予防または治療薬の製造のための、ｍＳｉｎ３Ｂに結合できる物質の使用。
［１１］ｍＳｉｎ３Ｂに結合できる物質が、ｍＳｉｎ３Ｂを阻害する物質である、前記［１０］に記載の使用。
［１２］ｍＳｉｎ３Ｂに結合できる物質が、ヒト髄芽腫細胞株の増殖阻害活性を持つ、前記［１０］に記載の使用。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、優れた予防・治療効果を有する線維筋痛症の予防・治療薬を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１は、３，５−ジメチルピペリジル３−メチル−４−ニトロフェニルケトンのＳＴＤ（飽和移動差）（化合物／ｍＳｉｎ３Ｂ：４００μＭ／１０μＭ）を示す（実施例１）。
【図２】図２は、１−［４−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−２−（３，５−ジメチルピペリジル）エタン−１−オンのＳＴＤ（飽和移動差）（化合物／ｍＳｉｎ３Ｂ：４００μＭ／１０μＭ）を示す（実施例１）。
【図３】図３は、ＩＣＳモデルマウスの疼痛関連行動評価試験の試験スケジュール（上段）及び結果（下段）を示す（実施例３）。「−○−Ｃｏｎｔｒｏｌ−Ｖｅｈ」は対照群（非ストレス負荷マウス）のｖｅｈｉｃｌｅ投与群、「−□−ＩＣＳ−１５５」は、ＩＣＳモデルマウスの化合物１５５投与群、「−■−ＩＣＳ−Ａ２８」は、ＩＣＳモデルマウスの化合物Ａ２８投与群、「−●−ＩＣＳ−Ｖｅｈ」は、ＩＣＳモデルマウスのｖｅｈｉｃｌｅ投与群を示し、いずれもｎ＝３の平均値を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明は、ｍＳｉｎ３Ｂに結合できる物質を含む、線維筋痛症の予防または治療薬を提供するものである。以下、詳細に説明する。
【００１８】
（線維筋痛症）
線維筋痛症は、全身に激しい痛みが生じる病気であり、その診断方法としては、米国リウマチ学会が１９９０年に提唱した分類基準が現在世界的に使用されている。この基準では、臍部を基点として上半身と下半身、右半身と左半身、さらに脊椎部及び胸骨部の５ヶ所のいずれの部位にも痛みを認め、それらが少なくとも３ヶ月以上持続する場合、あるいは、規定された全身１８ヶ所の圧痛点に４ｋｇの緩やかな荷重を加え、１１ヶ所以上で痛覚を感じた場合を線維筋痛症とする。
「線維筋痛症の治療」とは、線維筋痛症の病態を完全に治癒させることの他、完全に治癒しなくても症状の進展・悪化を抑制し、病態の進行をとどめること、または病態の一部または全部を改善して治癒の方向へ導くことを意味する。
「線維筋痛症の予防」とは線維筋痛症の病態の発症を防ぐこと、抑制することまたは遅延させることを意味する。
「線維筋痛症を治療するための有効量」は、線維筋痛症を治療するために動物に投与された場合に、当該線維筋痛症について、そのような治療を達成するのに十分な量を意味する。
「線維筋痛症を予防するための有効量」は、線維筋痛症を予防するために動物に投与された場合に、当該線維筋痛症について、そのような予防を達成するのに十分な量を意味する。
【００１９】
（ｍＳｉｎ３Ｂに結合できる物質）
「ｍＳｉｎ３Ｂ」は、神経選択的転写抑制因子ＮＲＳＦ／ＲＥＳＴに特異的に結合するコリプレッサーであり、ＮＲＳＦ／ＲＥＳＴのＮ末端側転写抑制ドメインは、コリプレッサーｍＳｉｎ３Ｂを介してヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）をリクルートし、またＣ末端側のドメインではＣｏＲＥＳＴを介してＨＤＡＣをリクルートし、ヒストンの脱アセチル化を介してクロマチン構造を不活性化することで、転写を抑制する（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９６，１３６９１−１３６９６（１９９９））。ｍＳｉｎ３Ｂは、結合相手が異なる４つのＰＡＨドメイン（ＰＡＨ１〜４）と、ＨＤＡＣ総合作用ドメイン（ＨＩＤ）を有する。このうち、ＰＡＨ１がＮＲＳＦ／ＲＥＳＴのＮ末端側転写抑制ドメインと複合体を形成する（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３１４，９０３−９１５（２００５））。ｍＳｉｎ３Ｂ（特にｍＳｉｎ３ＢとＮＲＳＦ／ＲＥＳＴの総合作用）と線維筋痛症との分子生物学的関連性は、本願出願時点で知られていない。
【００２０】
本発明におけるｍＳｉｎ３Ｂに結合できる物質（以下、当該物質を「ｍＳｉｎ３Ｂ結合化合物」と記載する場合がある）は、ｍＳｉｎ３Ｂに特異的に結合することができる限りどのようなものであってもよく、その結合箇所（ドメイン）は特に限定されないが、ｍＳｉｎ３ＢのＰＡＨ１ドメインに結合できる物質が好ましい。
ｍＳｉｎ３Ｂ結合化合物とｍＳｉｎ３Ｂとの結合は、自体公知のバインディングアッセイ（ラジオバインディングアッセイ等）、ＮＭＲ法（ケミカルシフトマッピング法、ＮＭＲ滴定法、ＳＴＤ（Ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ）−ＮＭＲ（飽和移動差ＮＭＲ）法）等によって測定することができるが、好ましくは、後掲のＳＴＤ−ＮＭＲ法により確認することができる。
【００２１】
本発明のｍＳｉｎ３Ｂ結合化合物は、ｍＳｉｎ３Ｂに結合するものであれば限定はないが、ｍＳｉｎ３Ｂを阻害するものが好ましい。
「ｍＳｉｎ３Ｂを阻害」とは、ｍＳｉｎ３Ｂの機能を抑制してｍＳｉｎ３Ｂが関与する遺伝子の発現を変化させることができるものであれば特に限定はないが、例えば、ｍＳｉｎ３ＢとＮＲＳＦ／ＲＥＳＴとの相互作用を阻害することにより転写抑制作用を阻害するもの、ｍＳｉｎ３ＢとＨＤＡＣとの相互作用を阻害することにより転写抑制作用を阻害するもの、ｍＳｉｎ３ＢとＭｅＣＰ２との相互作用を阻害するもの（メチル化されたＤＮＡは転写抑制因子ＭｅＣＰ２と結合し、さらにｍＳｉｎ３と結合することでＨＤＡＣ機能活性化につながる）等が挙げられる。このうち、ｍＳｉｎ３Ｂ結合化合物がＰＡＨ１ドメインに結合して、ｍＳｉｎ３ＢとＮＲＳＦ／ＲＥＳＴの複合体形成を阻害することにより転写抑制作用を阻害する態様が好ましい。
ＮＲＳＦ（ｎｅｕｒｏｎ−ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｖｅ  ｓｉｌｅｎｃｅｒ  ｆａｃｔｏｒ）は約１０００種類といわれている神経特異的な遺伝子の発現を抑制するので、ＮＲＳＦが神経細胞で少しでも存在すると様々な神経遺伝子の発現が抑制され、正常な神経機能が損なわれる結果、線維筋痛症などの神経疾病の根本原因となると考えられる。ＮＲＳＦが神経細胞に存在していてもｍＳｉｎ３Ｂとの結合が阻害されると、ｍＳｉｎ３Ｂ・ＨＤＡＣ複合体をリクルートできなくなるので、結果的に神経遺伝子の発現が抑制されないで神経機能の異常が起きず、線維筋痛症などの神経疾病の治療効果が期待できる。
【００２２】
また、本発明のｍＳｉｎ３Ｂ結合化合物は、ヒト髄芽腫細胞株の増殖阻害活性を持つものが好ましい。
髄芽腫は最も悪性の小児の脳腫瘍であり、髄芽腫細胞中では、ＮＲＳＦ／ＲＥＳＴの発現レベルが非常に高い。ＮＲＳＦ／ＲＥＳＴに拮抗し、ＮＲＳＦ／ＲＥＳＴのターゲット遺伝子を活性化する組み換えタンパク質ＲＥＳＴ−ＶＰ１６は、神経の遺伝子の発現を促進し、さらにカスパーゼカスケードを活性化することにより、アポトーシスを誘導する。ＮＲＳＦ／ＲＥＳＴは髄芽腫の治療薬のターゲット分子になる可能性を秘めている（Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．，７，８２６−８３１（２０００））。
本発明のｍＳｉｎ３Ｂ結合化合物のヒト髄芽腫細胞株に対する増殖阻害活性は、例えば、ＷＯ２０１１／０９９５０２に記載の方法等により測定することができる。また、ｍＳｉｎ３Ｂ結合化合物がヒト髄芽腫細胞株に対して増殖阻害作用を示すことが同文献に開示されている。
【００２３】
本発明のｍＳｉｎ３Ｂ結合化合物は、上記に定義されるものである限り特に限定されるものではないが、例えば、ｍＳｉｎ３Ｂに親和性を有する抗体（ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体）、ＷＯ２０１１／０９９５０２に記載の化合物、その医薬的に許容される塩、その医薬的に許容されるエステルなどが挙げられる（以下、当該化合物を「本発明のｍＳｉｎ３Ｂ結合化合物」と記載する場合がある）。
【００２４】
（線維筋痛症のモデルマウス）
本発明のｍＳｉｎ３Ｂ結合化合物が線維筋痛症の予防または治療に有用であることを証明するために、線維筋痛症の動物実験モデルとして、ＩＣＳ（Ｉｎｔｅｒｍｉｔｔｅｎｔ  Ｃｏｌｄ  Ｓｔｒｅｓｓ）モデルマウスを使用した。このモデルマウスでは、ストレス後から長期的に（数週間の間）全身性の痛覚過敏が生じることが明らかになっており、熱性疼痛過敏、機械的アロディニア、酢酸Ｗｒｉｔｈｉｎｇ試験に見られる化学物質に対する疼痛過敏、電気刺激による疼痛過敏など、様々な刺激に対し、全身性異常痛を示す。しかも雌性優位性がみられ、モルヒネ鎮痛が観察されないが、ガバペンなどの抗てんかん薬、抗うつ薬に顕著な疼痛抑制効果が認められるなど、疼痛病態や薬理学的感受性などにおいてヒト線維筋痛症患者の臨床症状と酷似している。ＩＣＳモデルマウス作製の具体的な手順の詳細は、後掲の実施例に記載する。
【００２５】
本発明者らは、既に対照モデルとしてｃｏｎｓｔａｎｔ  ｃｏｌｄ  ｓｔｒｅｓｓ（ＣＣＳ）モデル（繰り返し温度変化なしで常時４度に静置）を論文発表しており、このモデルでは異常痛が数日間続くにすぎないことを示している（Ｍｏｌ  Ｐａｉｎ．２００８ Ｎｏｖ  ６；４：５２）。また後述する本願発明で用いられたＩＣＳモデルマウスと異なり、１時間間隔の低温ストレスを与えた自律神経変調モデルとしてのＳＡＲＴモデルマウスでは、１週間以内の異常痛が持続されるに過ぎないことが分かっている（未発表）。一方で本発明で用いられたＩＣＳモデルマウスでは、数週間にも及ぶ長期性の全身疼痛過敏が生じ、またアロディニアを誘発するといった、線維筋痛症に酷似した症状が認められる。さらに本発明者らは、ＩＣＳモデルマウスでは、性腺摘出処置により雌性優位な慢性疼痛が得られることも見いだしている（Ｍｏｌ  Ｐａｉｎ．２００８  Ｎｏｖ  ６；４：５２）。
これらのことから、本発明で用いたＩＣＳモデルマウスは線維筋痛症の動物実験モデルとして非常に有用であることが分かる。
【００２６】
ＩＣＳモデルマウスを用いたｍＳｉｎ３Ｂ結合化合物の線維筋痛症に対する予防または治療効果は、公知の疼痛関連行動評価法に基づき評価することができる。
疼痛関連行動評価法としては、Ｈａｒｇｒｅａｖｅｓ試験（Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｐａｗ  Ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ試験：熱性刺激疼痛試験法）、Ｐａｗ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ試験、電気刺激誘導疼痛試験（ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐａｗ  ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ（ＥＰＷ）ｔｅｓｔ）、化学刺激性酢酸ｗｒｉｔｉｎｇ法等が挙げられる。
【００２７】
Ｈａｒｇｒｅａｖｅｓ試験は、熱刺激に対する疼痛閾値を評価するものであり、公知の方法（例えば、Ｉｎｏｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１０：７１２−７１８，２００４）、またはそれに準じて行うことができる。具体的には、後掲の実施例に記載の方法により行うことができる。
【００２８】
（ｍＳｉｎ３Ｂ結合化合物を含んでなる医薬製剤）
本発明のｍＳｉｎ３Ｂ結合化合物は、常法により製剤化した医薬製剤（例えば、注射剤、カプセル剤、錠剤、散剤、顆粒剤など）として、ヒト又は動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ネコ、イヌ、ウシ、ヒツジ、サル等の哺乳動物）に投与することができる。例えば、有効成分の量に換算して、１日あたり約０．１〜１０００ｍｇ／ｋｇ（体重）、好ましくは１日あたり約１〜５００ｍｇ／ｋｇ（体重）の投与量で、１回または数回に分けて投与するとよいが、その投与量、投与方法や投与回数は、症状、年齢などにより適宜変更しうる。例えば注射剤に製剤化する場合には、蒸留水、生理食塩水などの担体を用いるとよく、カプセル剤、錠剤、散剤、顆粒剤に製剤化する場合には、デンプン、乳糖、白糖、炭酸カルシウムなどの賦形剤、デンプンのり液、アラビアゴム、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースなどの結合剤、ステアリン酸マグネシウム、タルクなどの滑沢剤など、デンプン、寒天、結晶セルロース、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、アルギン酸ナトリウムなどの崩壊剤などを用いるとよい。製剤中の有効成分の含有率は、１〜９９重量％の間で変動させることができる。例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤などの形態をとる場合には、有効成分を５〜８０重量％含有させるのが好ましく、注射剤の場合には、有効成分を１〜１０重量％含有させるのが好ましい。
投与方法としては特に限定されないが、経口投与、腹腔内投与などが挙げられる。
【実施例】
【００２９】
以下、本発明について、実施例を挙げてさらに具体的に説明する。本発明はこれらにより何ら限定されるものではない。【００３０】
〔実施例１〕ＳＴＤ−ＮＭＲによるｍＳｉｎ３Ｂへの結合能測定
以下のＳＴＤ−ＮＭＲ測定条件で実験を行った。
１．試料
（１）タンパク質：１５Ｎ−ｍＳｉｎ３Ｂ（ＷＯ２００６／０３０７２２の実施例１に記載の方法により、１５Ｎ−ｍＳｉｎ３Ｂ（ｍＳｉｎ３ＢのＰＡＨ１ドメイン（ａ．ａ．２８−１０７）の１５Ｎ標識体）を調製した。）を用いた。
（２）リガンド：ｍＳｉｎ３Ｂ結合化合物として、３，５−ジメチルピペリジル３−メチル−４−ニトロフェニルケトン（ＳＰＥＣＳから購入）、１−［４−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−２−（３，５−ジメチルピペリジル）エタン−１−オン（Ｅｎａｍｉｎｅから購入）を用いた。【００３１】
２．試料調製
（１）測定に必要な試料体積は５００μＬで調製した。
（２）タンパク質の濃度は１０μＭ、リガンドの濃度は４００μＭとした。
（３）溶媒は１００ｍＭリン酸緩衝液−ｐＨ７．２（５％ｄ−ＤＭＳＯ）で行い、タンパク質とリガンドを混合した。【００３２】
３．ＮＭＲ測定条件
１Ｈ−ＳＴＤ、積算４、測定時間２分
４．ＮＭＲ装置
Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＶＡＮＣＥ  ６００ＭＨｚ（ｃｒｙｏ−ｐｒｏｂｅ），Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＶＡＮＣＥ  ７００ＭＨｚ（ｃｒｙｏ−ｐｒｏｂｅ）
結果を図１及び２に示す。測定に用いた上記リガンドは、ＳＴＤスペクトルが観察されｍＳｉｎ３ＢのＰＡＨ１ドメインに結合することができると判断された。【００３３】
〔実施例２〕線維筋痛症モデルマウスの作成
ＩＣＳモデルマウスは、飼育環境温度として昼間は３０分毎に室温（２４℃）と低温（４℃）を繰り返し、夜間は低温とすることで作成した。具体的な飼育条件および環境温度は、以下の通りである。
（１）０日目に、１６：３０に低温条件下である冷蔵庫内へ、使用するマウスを移動して、そのまま翌日の１０：００まで飼育した。
（２）翌日（１日目）の１０：００に室温に移し、以後１６：３０まで３０分ごとに低温条件下と室温条件で交互に飼育した。１６：３０以後は、翌朝１０：００まで低温条件下で飼育した。
（３）２日目も１日目と同様に飼育し、３日目の１０：００に室温に移し終了とした。
（４）対照群（非ストレス負荷マウス）は３日間終始室温で飼育した。【００３４】
このマウスでは、数週間にも及ぶ長期性の全身疼痛過敏が生じ、またアロディニアを誘発するといった、線維筋痛症に酷似した症状が認められた。前述のとおりこの症状は、神経の部分結紮等によって製造される神経障害性疼痛とは全く異なるものである。
マウスの飼育環境としては、一般実験用の固形飼料（ＭＦ，オリエンタル，東京）を砕いたもの、水分として滅菌性精製水を寒天（朝日株式会社）で固めたものを自由に摂取させることとし、恒湿（５５±５％）で明／暗１２時間（明８時〜２０時）条件下にて飼育した。【００３５】
〔実施例３〕ｍＳｉｎ３Ｂ結合化合物の治療効果
実施例２で得られたＩＣＳモデルマウスにｍＳｉｎ３Ｂに結合する化合物を投与して、ｍＳｉｎ３Ｂ結合化合物が線維筋痛症の治療効果を有するか否かを、疼痛に関する行動学的解析試験を行うことで調べた。【００３６】
（１）ｍＳｉｎ３Ｂ結合化合物の調製
それぞれのｍＳｉｎ３Ｂ結合化合物はＤＭＳＯに溶解し、投与直前に生理食塩水にて当該ｍＳｉｎ３Ｂ結合化合物のＤＭＳＯ溶液を希釈し（ＤＭＳＯの最終濃度：１０％）、５ｍｇ／ｋｇにて腹腔内投与（ｉ．ｐ．）した。この際の対照群には、生理食塩水にて希釈したＤＭＳＯ（１０％）をｖｅｈｉｃｌｅとして投与した。
本実施例で使用したｍＳｉｎ３Ｂ結合化合物は、以下の通りである：
３，５−ジメチルピペリジル３−メチル−４−ニトロフェニルケトン（化合物１５５）（ＳＰＥＣＳから購入）、及び
１−［４−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−２−（３，５−ジメチルピペリジル）エタン−１−オン（化合物Ａ２８）（Ｅｎａｍｉｎｅから購入）。【００３７】
（２）疼痛に関する行動学的解析
疼痛に関する行動学的解析には、熱刺激に対する疼痛閾値を評価する“Ｈａｒｇｒｅａｖｅｓ試験（ｔｈｅｒｍａｌ  ｐａｗ  ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ  ｔｅｓｔ：熱性刺激疼痛試験法）”（Ｉｎｏｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１０：７１２−７１８，２００４）を利用した。Ｈａｒｇｒｅａｖｅｓ試験の実験手法は以下の通りである。
（Ｈａｒｇｒｅａｖｅｓ試験法）
ＩＣＳモデルマウスを、ガラス板の上に置いたプラスチックのケージの中に置き、３０分以上同じ環境下において適応化させた。熱刺激をガラス板の下から後肢足蹠の中心に投射し、マウスが後肢の逃避反応を示すまでの潜時（Ｐａｗ  Ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ  Ｌａｔｅｎｃｙ：ＰＷＬ）を測定し評価した。実験には正常な動物で１０−１２秒の潜時になる程度の刺激を行い、組織損傷を防ぐためにＣｕｔ  ｏｆｆ  ｔｉｍｅを２０秒に設定した。
ＩＣＳストレスを与え始める日を０日目、ＩＣＳストレスを与え終わった日をＰｏｓｔ  Ｓｔｒｅｓｓ１日目（Ｐ１）とし、Ｐ５からＰ１１まで毎日１回午前中に、ｍＳｉｎ３Ｂ結合化合物として３，５−ジメチルピペリジル３−メチル−４−ニトロフェニルケトン、及び１−［４−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−２−（３，５−ジメチルピペリジル）エタン−１−オンをＤＭＳＯの最終濃度が１０％となるように生理食塩水に溶かした薬液を腹腔内に５ｍｇ／ｋｇにて投与した。ただし、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ８及びＰ１０の疼痛閾値測定は薬物投与前に行なった。
疼痛閾値はＰ５、Ｐ６、Ｐ８、Ｐ１０、Ｐ１２、Ｐ１４及びＰ１６に測定した。潜時および強さは３回以上測定し、平均値を採用した。また、次の閾値を測定するまでに１０分間の間隔をあけた。実験群はＩＣＳストレス負荷群と非ストレス群、薬物投与群、薬物非投与対象群（１０％ＤＭＳＯ）とした（ｎ＝３）。試験スケジュールと結果を図３に示す。【００３８】
図３の上段は、試験スケジュールを示し、下段はＨａｒｇｒｅａｖｅｓ試験の結果を示す。図３の下段のグラフ中、縦軸のＰＷＬ（Ｐａｗ  Ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ  Ｌａｔｅｎｃｙ）はマウスが後肢の逃避反応を示すまでの潜時（ｓｅｃ）を示し、横軸は、ＩＣＳストレスを与え終わった日をＰｏｓｔ  Ｓｔｒｅｓｓ１日目（Ｐ１）とした経過日数を示す。また、「−○−Ｃｏｎｔｒｏｌ−Ｖｅｈ」は対照群（非ストレス負荷マウス）のｖｅｈｉｃｌｅ投与群、「−□−ＩＣＳ−１５５」は、ＩＣＳモデルマウスの化合物１５５投与群、「−■−ＩＣＳ−Ａ２８」は、ＩＣＳモデルマウスの化合物Ａ２８投与群、「−●−ＩＣＳ−Ｖｅｈ」は、ＩＣＳモデルマウスのｖｅｈｉｃｌｅ投与群を示し、いずれもｎ＝３の平均値を示す。
図３の下段のグラフに示すように、ＩＣＳモデルマウスに化合物Ａ２８及び１１５を投与すると、疼痛閾値の回復が見られた。したがって、ｍＳｉｎ３Ｂ結合化合物は、線維筋痛症モデルであるＩＣＳモデルマウスにおいて治療効果を示すことが明らかとなった。
【産業上の利用可能性】
【００３９】
ｍＳｉｎ３Ｂに結合できる物質は、線維筋痛症の予防及び／又は治療剤として有用である。
本出願は、日本で出願された特願２０１２−２６７５９９を基礎としており、その内容は本明細書にすべて包含されるものである。
本発明がその好ましい態様を参照して提示又は記載される一方、本明細書中において、添付の請求の範囲に包含される発明の範囲を逸脱することなく、形態や詳細の様々な変更をなし得ることは当業者に理解されるであろう。本明細書中に示され又は参照されたすべての特許、特許公報及びその他の刊行物は、参照によりその全体が取り込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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