(57)【要約】  複数のチャンバー６が形成された細胞展開用デバイス１０における各チャンバーに収容された複数の細胞の中から、希少細胞２４を蛍光標識に基いて検出する希少細胞検出装置において、該デバイスに励起光２５を照射する光源２６と、該励起光２５により希少細胞２４を標識した蛍光体から発光する蛍光５４を光学的に検出する希少細胞検出部２７と、細胞展開用デバイス１０に照射された励起光２５に基く検出光を光学的に検出するチャンバー検出部２８と、前記検出部２７及び２８からそれぞれ希少細胞２４及びチャンバー６の位置情報を得て希少細胞２４が細胞展開用デバイス１０のどのチャンバー６内に収容されているかを特定する希少細胞位置特定取得部５６ａを備える。このように希少細胞の位置情報を得ておくことで、デバイスが他の装置に移送された場合であっても、希少細胞の観察や形状確認などを容易に行うことが可能となる。
2014097991.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数のチャンバーが形成された細胞展開用デバイスにおける各チャンバーに収容された複数の細胞の中から、目的とする希少細胞を蛍光標識に基いて検出する希少細胞検出装置であって、  複数の細胞が収容された前記細胞展開用デバイスに励起光を照射する光源と、  前記光源から前記細胞展開用デバイスに照射された励起光により発光する、希少細胞を標識した蛍光体からの蛍光を光学的に検出する希少細胞検出部と、  前記光源から前記細胞展開用デバイスに照射された励起光に基く検出光を光学的に検出するチャンバー検出部と、  前記希少細胞検出部で得られた希少細胞の蛍光シグナルに基いて希少細胞の位置情報を得るとともに、前記チャンバー検出部で得られたチャンバーの検出光シグナルに基いてチャンバーの位置情報を得、これら希少細胞の位置情報とチャンバーの位置情報とに基いて希少細胞が前記細胞展開用デバイスのどのチャンバー内に収容されているかを特定する希少細胞位置特定取得部と、を備えた、希少細胞検出装置。
【請求項２】
前記チャンバー検出部では、下記１）〜３）のいずれかの検出光により、チャンバーの位置が検出される、請求項１に記載の希少細胞検出装置；１）前記光源から前記細胞展開用デバイスに照射され、その細胞展開用デバイスを透過した前記励起光の透過光、２）前記光源から前記細胞展開用デバイスに照射され、その細胞展開用デバイスで反射した前記励起光の反射光、３）前記光源から前記細胞展開用デバイスに照射され、その照射された前記励起光に基いて前記細胞展開用デバイスの素材が発光する、素材の自家蛍光。
【請求項３】
前記励起光は、前記細胞と同じ大きさ以上の照射サイズを有し、前記細胞展開用デバイスに対して相対的に走査されるものであって、前記照射サイズの走査方向における長さは前記走査方向に隣接するチャンバー間の中心間の距離以下、かつ、前記照射サイズの前記走査方向に垂直な方向における長さは前記垂直な方向に隣接するチャンバー間の中心間の距離以下である、請求項１または請求項２に記載の希少細胞検出装置。
【請求項４】
前記励起光の照射サイズは、チャンバーの上部開口の面積以下である、請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の希少細胞検出装置。
【請求項５】
前記チャンバーの上部開口の内径は、２０μｍ〜５００μｍである、請求項１ないし請求項４のいずれかに記載の希少細胞検出装置。
【請求項６】
複数のチャンバーが形成された細胞展開用デバイスにおける各チャンバーに収容された複数の細胞の中から、目的とする希少細胞を蛍光標識に基いて検出する希少細胞検出方法であって、  前記細胞展開用デバイスの各チャンバーに、希少細胞を含む細胞懸濁液を展開する懸濁液展開工程と、  前記細胞懸濁液が展開された前記細胞展開用デバイスに対して励起光を相対的に走査することにより、希少細胞の存在を光学的に検出する希少細胞検出工程と、  前記細胞懸濁液が展開された前記細胞展開用デバイスに対して励起光を相対的に走査することにより、チャンバーを光学的に検出するチャンバー検出工程と、  前記希少細胞検出工程で得られた希少細胞の蛍光シグナルに基いて希少細胞の位置情報を得るとともに、前記チャンバー検出工程で得られたチャンバーの検出光シグナルに基いてチャンバーの位置情報を得、これら希少細胞の位置情報とチャンバーの位置情報とに基いて希少細胞が前記細胞展開用デバイスのどのチャンバー内に収容されているかを特定する希少細胞位置特定取得工程とを備えた、希少細胞検出方法。
【請求項７】
前記希少細胞検出工程と、前記チャンバー検出工程とが同時の走査により実施される、請求項６に記載の希少細胞検出方法。
【請求項８】
前記励起光は、前記細胞と同じ大きさ以上の照射サイズであって、前記照射サイズの走査方向における長さは前記走査方向に隣接するチャンバー間の中心間の距離以下、かつ、前記照射サイズの前記走査方向に垂直な方向における長さは前記垂直な方向に隣接するチャンバー間の中心間の距離以下である、請求項６または請求項７に記載の希少細胞検出方法。
【請求項９】
前記励起光の照射サイズは、チャンバーの上部開口の面積以下である、請求項６ないし請求項８のいずれかに記載の希少細胞検出方法。
【請求項１０】
請求項１〜請求項５のいずれかに記載の希少細胞検出装置と、前記細胞展開用デバイスが装着されて希少細胞を観察する観察装置とを備え、  前記希少細胞検出装置で検出された希少細胞を前記観察装置で観察するにあたり、前記希少細胞検出装置で検出された希少細胞がどのチャンバー内に収容されているのかの情報に基いて希少細胞が収容されたチャンバーを特定し、特定したチャンバー内の希少細胞を観察可能とした、希少細胞観察システム。
【請求項１１】
デバイス本体に複数のチャンバーが形成されているとともに、前記デバイス本体の一部にレチクルマークが形成されている、細胞展開用デバイス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、希少細胞検出装置、希少細胞検出方法、希少細胞観察システム、および細胞展開用デバイスに関するものである。
【背景技術】
【０００２】  血中循環癌細胞、循環幹細胞、循環内皮細胞は病態に応じて全血中に非常に稀に存在する細胞（以下、希少細胞あるいは目的細胞ともいう）である。これら希少細胞の検出は臨床的な有用性が明らかであるにもかかわらず、その検出が非常に難しい。近年様々な細胞分離手法を応用して希少細胞の検出が試みられ製品化がなされているが、いずれにしても検出対象とする目的細胞の希少性が故、目的細胞以外の不要細胞の混入を低減しつつ、目的細胞（希少細胞）のロスを低減して、検出結果の有効性を向上させることが未だ重要な課題である。【０００３】  また、スキャナー等を用いた細胞検出装置により目的細胞の検出がなされた標本は、その後顕微鏡など他の観察装置や検査装置等に移動され、目的細胞の形状観察などの詳細を調査することが一般に行われている。【０００４】  このような場合、例えば、目的細胞のロスを低減するように目的細胞以外の細胞も多量に含んだ細胞懸濁液を、平坦な表面のデバイス（スライド）に展開して目的細胞を検出し、その後、顕微鏡などの他の観察装置にデバイスを移動させて、その目的細胞を詳細に調査することが知られている（特許文献１）。  ここで、特許文献１では、スライド上にレチクルマークを形成することにより、他の装置への物理的な移動があったとしてもスライドの位置を補正できるようにしている。【０００５】  ところが、特許文献１では、全体が平坦に形成されたスライド上に平面的に展開された複数の細胞を光学的に走査するため、細胞検出の途中であっても細胞の位置ずれが生じたり、観察する前に乾燥、凝集などが生じたりして、細胞の位置が変わる可能性があり、その場合には、再度位置検出が必要になる。【０００６】  特に、特許文献１のようにスライド上に設けたレチクルマークのみで目的細胞の位置情報を取得する場合には、細胞のわずかな移動が他の装置での目的細胞の位置特定に致命的な欠陥となる場合がある。【０００７】  結果として、特許文献１では、希少細胞を観察する際に、目的とする希少細胞が存在するのかしないのか、適切な位置での観察ができているのかいないのかなどの正確な確認が得られず、検出もれなどの検出低下の要因になる可能性があった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２００５−１８１３１２号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】  本発明は、このような実情に鑑み、細胞展開用デバイス上に展開された複数の細胞の中から目的とする希少細胞を検出するとともに、検出した希少細胞が細胞展開用デバイス上の所定のどの位置に存在するのかの位置情報を得ておくことにより、位置情報取得後の希少細胞がデバイス上で多少移動した場合やデバイスが他の装置に移送された場合であっても、希少細胞の観察や形状確認などを容易に行うことができる希少細胞検出装置、希少細胞検出方法および希少細胞観察システムを提供することを目的としている。【００１０】  また、本発明は、希少細胞検出装置、希少細胞検出方法および希少細胞観察システムに好適に用いられる細胞展開用デバイスを提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【００１１】  上述した目的のうち少なくとも一つを実現するために、本発明の一側面を反映した希少細胞検出装置は、  複数のチャンバーが形成された細胞展開用デバイスにおける各チャンバーに収容された複数の細胞の中から、目的とする希少細胞を蛍光標識に基いて検出する希少細胞検出装置であって、  複数の細胞が収容された前記細胞展開用デバイスに励起光を照射する光源と、  前記光源から前記細胞展開用デバイスに照射された励起光により発光する、希少細胞を標識した蛍光体からの蛍光を光学的に検出する希少細胞検出部と、  前記光源から前記細胞展開用デバイスに照射された励起光に基く検出光を光学的に検出するチャンバー検出部と、  前記希少細胞検出部で得られた希少細胞の蛍光シグナルに基いて希少細胞の位置情報を得るとともに、前記チャンバー検出部で得られたチャンバーの検出光シグナルに基いてチャンバーの位置情報を得、これら希少細胞の位置情報とチャンバーの位置情報とに基いて希少細胞が前記細胞展開用デバイスのどのチャンバー内に収容されているかを特定する希少細胞位置特定取得部と、を備えている。【００１２】  また、上述した目的のうち少なくとも一つを実現するために、本発明の一側面を反映した希少細胞検出方法は、  複数のチャンバーが形成された細胞展開用デバイスにおける各チャンバーに収容された複数の細胞の中から、目的とする希少細胞を蛍光標識に基いて検出する希少細胞検出方法であって、  前記細胞展開用デバイスの各チャンバーに、希少細胞を含む細胞懸濁液を展開する懸濁液展開工程と、  前記細胞懸濁液が展開された前記細胞展開用デバイスに対して励起光を相対的に走査することにより、希少細胞の存在を光学的に検出する希少細胞検出工程と、  前記細胞懸濁液が展開された前記細胞展開用デバイスに対して励起光を相対的に走査することにより、チャンバーを光学的に検出するチャンバー検出工程と、  前記希少細胞検出工程で得られた希少細胞の蛍光シグナルに基いて希少細胞の位置情報を得るとともに、前記チャンバー検出工程で得られたチャンバーの検出光シグナルとに基いてチャンバーの位置情報を得、これら希少細胞の位置情報とチャンバーの位置情報とに基いて希少細胞が前記細胞展開用デバイスのどのチャンバー内に収容されているかを特定する希少細胞位置特定取得工程とを備えている。【００１３】  さらに、上述した目的のうち少なくとも一つを実現するために、本発明の一側面を反映した希少細胞観察システムは、  上記いずれかに記載の希少細胞検出装置と、前記細胞展開用デバイスが装着されて希少細胞を観察する観察装置とを備え、  前記希少細胞検出装置で検出された希少細胞を前記観察装置で観察するにあたり、前記希少細胞検出装置で検出された希少細胞がどのチャンバー内に収容されているのかの情報に基いて希少細胞が収容されているチャンバーを特定し、特定したチャンバー内の希少細胞を観察可能としている。【００１４】  また、上述した目的のうち少なくとも一つを実現するために、本発明の一側面を反映した細胞展開用デバイスは、デバイス本体に複数のチャンバーが形成されているとともに、前記デバイス本体の一部にレチクルマークが形成されている。
【発明の効果】
【００１５】  本発明に係る希少細胞検出装置及び希少細胞検出方法によれば、細胞を収容するための複数のチャンバーを備えた細胞展開用デバイスに展開された細胞懸濁液の中から、特定の希少細胞を速やかに検出し、希少細胞が細胞展開用デバイスのどのチャンバー内に収容されているかを特定することができる。【００１６】  また、本発明に係る希少細胞観察システムによれば、希少細胞検出装置で一旦検出した細胞展開用デバイス上の特定位置にある希少細胞を、観察装置に移送して再度確認したり形状確認などを行ったりする場合に、その観察や形状確認などを速やかに効率的に行うことができる。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図１は、本発明の一実施例に係る細胞展開用デバイスの概略断面図である。
【図２】図２は、図１に示した細胞展開用デバイスから、流路形成枠体を取り外したチャンバーチップを示す模式的平面図である。
【図３Ａ】図３Ａは細胞展開用デバイスのチャンバーに細胞懸濁液が収容された状態を示す模式的拡大平面図である。
【図３Ｂ】図３Ｂは、励起光の照射サイズと隣接チャンバー間の離間距離との関係を示す模式図である。
【図３Ｃ】図３Ｃは、励起光の照射サイズとチャンバーの上部開口の面積との関係を示す模式図である。
【図４】図４は、本発明の一実施例に係る希少細胞検出装置の要部の構成を示す概略図で、チャンバーの検出光として透過光を採用した場合の概略図である。
【図５】図５は、図４に示した希少細胞検出装置により光学的に希少細胞の検出を行った場合の、希少細胞を検出するための蛍光シグナルと、チャンバー位置を検出するための検出光シグナルとを、１つに表したグラフである。
【図６Ａ】図６Ａは、本発明の他の実施例に係る希少細胞検出装置の要部の構成を示す概略図で、チャンバーの検出光として反射光を採用した場合の概略図である。
【図６Ｂ】図６Ｂは、チャンバーの検出光として反射光を採用したさらに他の実施例に係る希少細胞検出装置の要部の構成を示す概略図である。
【図７】図７は、本発明のさらに他の実施例に係る希少細胞検出装置の要部の構成を示す概略図で、２波長照射を採用するとともにチャンバーの検出光として、チャンバーの自家蛍光を採用した場合の概略図である。
【図８】図８は、図６Ｂに示した希少細胞検出装置による実験結果を示したグラフである。
【図９】図９は、希少細胞検出装置で希少細胞が検出された細胞展開用デバイスを他の観察装置で観察するときの、観察装置による位置調整と細胞展開用デバイスとの関係を示す概略図である。
【図１０】図１０は、本発明に係る希少細胞検出方法の概略を示すブロック図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】  以下、図面を参照しながら、本発明に係る希少細胞検出装置、希少細胞検出方法、希少細胞観察システムおよび細胞展開用デバイスの好ましい実施の形態について説明する。  先ず、本発明の概要について説明する。
【００１９】  本発明は、例えば細胞懸濁液中に含まれる希少細胞を光学的に検出するにあたり、細胞懸濁液を表面が平面に形成されたデバイス上に展開するのではなく、予め複数のチャンバー（凹部）が形成されたデバイス上に細胞懸濁液を展開し、それらの各チャンバー内に細胞を分散して貯留している。このように細胞をチャンバー内に分散して貯留することにより、希少細胞の検出中、あるいはデバイスの移送時、さらには細胞検出装置とは異なる他の装置により希少細胞の観察や確認などを行ったりする場合に、その希少細胞がデバイス上を不用意に移動してしまうことがないように規制している。
【００２０】  また、チャンバー内に収容された希少細胞を光学的に検出する際に、希少細胞の検出とともにチャンバーを検出して希少細胞の位置情報とチャンバーの位置情報を得、これらの位置情報に基いてその希少細胞がデバイス上のどのチャンバー内に収容されたものであるかを特定できるようにしている。
【００２１】  すなわち、希少細胞の検出結果とチャンバーの検出結果に基いて、希少細胞装置の例えばコンピューターにおける希少細胞位置特定部により、その希少細胞が細胞展開用デバイスのどのチャンバー内に収容されたものであるかを特定し、それらの情報を記録媒体に保存する。
【００２２】  そして、希少細胞検出装置により一旦希少細胞が検出されたデバイスを他の装置に移送して再び観察したり確認したりする場合であっても、記録媒体に保存された情報に基いて、該当する希少細胞の存在するチャンバーの位置を呼び出して、速やかに観察できるようにしたものである。
【００２３】  このように、本発明に係る希少細胞検出方法は、例えば図１０に示した工程により構成される。  すなわち、複数のチャンバーを有する細胞展開用デバイスに希少細胞を含む細胞懸濁液を展開する懸濁液展開工程１００と、希少細胞の存在を光学的に検出する希少細胞検出工程２００Ａと、細胞懸濁液が収容されたチャンバーそのものを光学的に検出するチャンバー検出工程２００Ｂと、希少細胞がどのチャンバー内に収容されているかを特定する希少細胞位置特定取得工程３００とを有するものである。なお、希少細胞検出工程２００Ａとチャンバー検出工程２００Ｂとは、別々の走査により行うこともできるが同時の走査により行うことが好ましい。  このような希少細胞検出方法であれば、希少細胞がどのチャンバー内に収容されているかを特定することできる。
【００２４】  また、本発明に係る希少細胞検出方法は、希少細胞検出工程２００Ａと、チャンバー検出工程２００Ｂとが同時の走査により実施されることが好ましい。  このような希少細胞検出方法であれば、希少細胞の検出と希少細胞の検出を同時に行うことから作業性が良好である。
【００２５】  さらに本発明に係る希少細胞検出方法では、前記励起光の照射サイズは、前記細胞と同じ大きさ以上であって、照射サイズの走査方向における長さは前記チャンバーの走査方向における隣接するチャンバー間の中心間の距離以下、かつ、照射サイズの走査方向と垂直な方向における長さは前記チャンバーの走査方向と垂直な方向における隣接するチャンバー間の中心間の距離以下であることが好ましい。  また、前記励起光の照射サイズは、前記チャンバーの上部開口の面積以下であることが好ましい。  このように励起光の照射サイズが設定されていれば、目的細胞の検出とチャンバーの検出に有効であり、精度良い情報を得ることができる。
【００２６】  さらに、本実発明に係る希少細胞観察システムは、希少細胞検出装置と、特定の希少細胞を観察する観察装置とを備え、希少細胞検出装置で検出された希少細胞を観察装置で観察するにあたり、希少細胞検出装置で検出された前記希少細胞がどのチャンバー内に収容されているのかの情報に基いてチャンバーを特定し、特定したチャンバー内の前記希少細胞を観察することシステムである。  このような希少細胞観察システムによれば、希少細胞の再度の検出作業を行う必要がなく、一旦、希少細胞の検出が行われたスライドを他の装置に移送してその希少細胞の観察を行った場合に、速やかにその作業を行うことができる。これにより、直ちに希少細胞の観察や確認作業などを効率的に行うことができる。
【００２７】  また、本発明に係る細胞展開用デバイスは、デバイス本体に複数のチャンバーが形成されているとともに、デバイス本体の一部にレチクルマークが形成されている。このような構成の細胞展開用デバイスによれば、希少細胞の検出および観察に有効に用いることができる。
【００２８】  以下、本発明に好適な具体的な実施例ついて詳細に説明する。  図１は、本発明の一実施例に係る細胞展開用デバイスの断面を示したものである。  この細胞展開用デバイス１０は、後述する希少細胞検出装置に着脱自在に装着され、この細胞展開用デバイス１０を介して希少細胞の検出が行われる。また、細胞展開用デバイス１０は、希少細胞の検出作業が行われた後には、必要に応じて顕微鏡などの他の装置に移送されて、希少細胞の観察や確認などが行われる。
【００２９】  この細胞展開用デバイス１０は、図１および図２に示したように、複数のチャンバー６が形成されたチャンバーチップ１と、チャンバー６の上方に流路５が形成されるようにチャンバーチップ１と一体に設けられた流路形成枠体２と、流路形成枠体２に設けられた入口部３と、入口部３から流路５に流入された細胞懸濁液を流路５から流出させる出口部４などを有する。
【００３０】  チャンバーチップ１は、マイクロチャンバーアレイ（ＭＣＡ）とも称され、その上面には、図２に示したように、複数のチャンバー６が所定間隔離間して配置されている。図２では、チャンバー６が縦横に所定間隔離間して直線上に形成されている例を示している。なお、チャンバー６の配列は図２に示したものに限らず、様々な配置とすることができ、例えば、走査方向と並行に列状に配置されたチャンバーを列ごとに走査方向の位置をずらして、チャンバー６を千鳥状に配列することもできる。
【００３１】  チャンバー６とは、一個以上の細胞を「格納」し、「保持」することができる凹状の微細孔（マイクロウェル）をいい、有底である（すなわち貫通した孔ではない）ことが好ましい。
【００３２】  「格納」とは、細胞展開用のチャンバーチップ１上の流路５に細胞懸濁液を導入した際に、導入された細胞がチャンバー６に収容されることをいい、「保持」とは、チャンバー６に格納された細胞が、細胞展開用のチャンバーチップ１の流路５に対する染色液や洗浄液の送液等によってチャンバー６の外方に出ないことをいう。
【００３３】  また、図３Ａに示したように、チャンバー６の上部開口の内径Ｂは、２０μｍ〜５００μｍであることが好ましい。チャンバー６の上部開口の内径Ｂが２０μｍ〜５００μｍの範囲内であると、チャンバー６内に好適に希少細胞を格納、保持することができる。
【００３４】  このチャンバー６は、異なる大きさが混在していても良いが、少なくとも細胞を単層あるいは２層まで積層できることが好ましい。  チャンバー６の深さは、チャンバー６の内径Ｂによって変動させることが好ましく、格納したい細胞数などに応じて、適宜決定することができる。具体的には、細胞を１０〜１５個程度格納できるようにチャンバーの深さを適宜決定することが好ましく、典型的には、チャンバー６の深さは、２０μｍ〜５００μｍである。
【００３５】  チャンバー６の形状は、図１では、底部が平坦な逆円錐台形であるが、これに限定されず、例えば、円筒形、逆半球形、逆角錐形（逆四角形錐や逆六角形錐等の逆多角形錐）、直方体などでもよい。チャンバー６の底部は、典型的には平坦であるが、曲面であってもよい。
【００３６】  チャンバーチップ１の材料としては、従来公知のマイクロプレート等と同じ材料を使用でき、例えば、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）、ポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）、環状オレフィンコポリマー（ＣＯＣ）などのポリマーが挙げられる。チャンバーチップ１は、成形されたポリマーに、金属、ガラス、石英ガラスなどからなる基板を張り合わせたような複数の材料を組み合わせたものであってもよい。
【００３７】  ただし、この細胞展開用デバイス１０に光源から励起光を照射して、細胞展開用デバイス１０内を通過した、その励起光の透過光を検出光とする場合は、チャンバーチップ１の材料は透光性である必要がある。
【００３８】  一方、流路形成枠体２も、上記チャンバーチップ１の材料と同様の材料を使用することができる。ただし、チャンバーチップ１の少なくとも上面を覆う部分は、透光性を有する必要がある。
【００３９】  細胞展開用デバイス１０の一部、例えば、下方に配置されるチャンバーチップ１の角部などには、図２に示したように、位置検出のために基準点として用いられるレチクルマークＲが設けられている。このレチクルマークＲは、いかなるもので形成されていても良い。また、レチクルマークＲは上記のようにチャンバーチップ１の上面に限定されず、流路形成枠体２の上面に設けても良い。また、レチクルマークＲは、１つに限定されず、２つ以上設けても良い。
【００４０】  チャンバーチップ１と流路形成枠体２とは、観察やメンテナンスのし易さから、取り付け・取り外しが可能にされていることが好ましい。  また、流路５の高さ７は、５０μｍ〜５００μｍであることが好ましい。
【００４１】  なお、本実施例の細胞展開用デバイス１０では、チャンバーチップ１の周囲を流路形成枠体２で覆うことにより、チャンバーチップ１と流路形成枠体２との間に流路５を設けているが、この流路形成枠体２と流路５は必須ではない。すなわち、チャンバーチップ１のみで細胞展開用デバイスを構成することもできる。
【００４２】  細胞懸濁液は、希少細胞を含んでいる可能性がある例えばヒトなどの血液、リンパ液、組織液、体腔液などであり、希釈液などで適宜希釈されていてもよい。また、細胞懸濁液は、生体由来のものに限定されず、試験・研究等のために人工的に細胞を懸濁させて調製した細胞の分散液であってもよい。
【００４３】  希少細胞としては、例えば癌細胞などが挙げられる。特に、細胞懸濁液が血液または血液由来検体である場合、希少細胞は、ＣＴＣ（循環腫瘍細胞または循環癌細胞）、ＣＥＣ（循環血管内皮細胞）およびＣＥＰ（循環血管内皮前駆細胞）のいずれか一種以上の細胞であってもよい。
【００４４】  このような細胞懸濁液に含まれる種々の細胞の直径は、１０μｍ〜１００μｍであることが好ましいが、チャンバー６の直径と同じであるか、或いは、チャンバー６の直径より小さいことが好ましい。  なお、本実施例では、細胞懸濁液中の目的とする希少細胞（図３Ａにおける符号２４）、例えば、特定の癌細胞は流路５を介してチャンバー６内に格納され、保持された後、特定の癌細胞のみを染色することが可能な蛍光体を含む染色液により標識される。これにより、染色された希少細胞２４が、光学的手段により検出できるようにされている。
【００４５】  なお、図３Ａは、目的とする希少細胞２４が、他の複数の細胞と混ざって各チャンバー６内に収容された状態を示しており、その希少細胞２４は、細胞展開用デバイス１０におけるレチクルマークＲの位置（基準点）からＸ方向に向かって２番目、Ｙ方向に向かって１番目、に位置するチャンバー６’内に存在することを表している。
【００４６】  一方、励起光は、細胞展開用デバイス１０に対して相対的に走査されるものである。例えば、図３Ａに示したような細胞展開用デバイス１０に対して、光源からの励起光２５を走査する場合は、先ずレチクルマークＲが形成された図中左上側の端部から励起光２５による走査を始めて、矢印Ｚで示したように、走査方向を逆転しながら順次下の段を走査していくことにより、細胞展開用デバイス１０上の全てのチャンバー６、６…６を効率的に走査することができる。このようにして必要な情報を検出することができる。
【００４７】  ここで、励起光２５のスポット形状（照射形状）は、適宜選択することができ、例えば、円形、楕円形、長方形、多角形のいずれかを採用することができる。  励起光２５の照射サイズ（ここで、励起光の照射サイズとは、励起光の広がりを示す互いに直角な二方向の寸法、あるいは細胞展開デバイスに励起光が照射された際の照射面積をいう）は、チャンバー６内に収容された少なくとも１つの細胞の細胞サイズを包含できるように、細胞と同じ大きさ以上の照射サイズを有することが好ましい。これにより検出のための十分な光量を得ることができる。
【００４８】  また、励起光２５の照射サイズ（励起光２５の広がりを示す互いに直角な二方向の寸法）において、図３Ｂに示したように、励起光２５の走査方向（図３Ｂにおける矢印Ｘ方向）における長さＧは、希少細胞２４と同じ大きさ以上であって、さらには走査方向（矢印Ｘ方向）に隣接するチャンバー６、６間の中心間の距離Ｐ以下であることが好ましい（Ｇ≦Ｐ）。
【００４９】  さらに、励起光２５の照射サイズ（励起光２５の広がりを示す互いに直角な二方向の寸法）において、走査方向（矢印Ｘ方向）に垂直な方向（矢印Ｙ方向）における長さＩは、走査方向（矢印Ｘ方向）に垂直な方向（矢印Ｙ方向）に隣接するチャンバー６、６間の中心間の距離Ｊ以下である（Ｉ≦Ｊ）。
【００５０】  多数のチャンバー６に対して、このような大きさに励起光２５の長さＧ、Ｉが設定されていれば、励起光２５が複数のチャンバーに跨ることがなく、それぞれのチャンバーを個々に容易に検出することができる。
【００５１】  励起光２５の照射サイズ（広がりを示す互いに直角な二方向の寸法）としては、例えば、１０μｍ×１００μｍ程度である。  また、励起光２５の照射サイズ（面積）は、チャンバー６の上部開口の面積以下であることが好ましい。励起光２５の具体的な面積としては、７８μｍ2〜２．０×１０5μｍ2程度である。円形、楕円、長方形などからなる励起光２５が、このような面積であれば、励起光２５が複数のチャンバーに跨って同時に照射されることを容易に低減可能となる。また、このような面積に励起光の照射サイズが設定されていれば、目的細胞の検出とチャンバーの検出に有効であり、精度良い情報を得ることができる。  さらに、チャンバー６の上部開口の内径は、２０μｍ〜５００μｍであることが好ましい。  チャンバー６の上部開口の内径がこのような範囲に設定されていれば、チャンバー内に好適に細胞を収容、保持することができる。
【００５２】  さらに、図３Ｃに示したように、励起光２５が円形または楕円形である場合、そのスポット径Ｋは、希少細胞と同じ径またはそれ以上であることが好ましく、チャンバーの上部開口と同じ径またはそれよりも若干大きい径以下であることが好ましい。
【００５３】  スポット径Ｋが、このような範囲に設定されていれば、１つのチャンバー内の正確な情報を得る上で好ましい。また、励起光２５がＹ方向に隣接し合う２つのチャンバー６、６間に跨ることを防止できる。
【００５４】  図４は、本発明の一実施例に係る希少細胞検出装置３２の要部の構成を示したもので、この実施例では、励起光２５を走査する光源２６を１つ備えた１波長照射が採用されている。
【００５５】  なお、図４に示した希少細胞検出装置３２では、光源２６としてレーザー光源が採用されている。  このような希少細胞検出装置３２において、希少細胞２４の検出には、希少細胞２４を標識した蛍光体からの蛍光５４を希少細胞検出部２７で受光することによって行われる。
【００５６】  図４に示した希少細胞検出装置３２では、希少細胞２４の検出と同時に、図２に示した各位置のチャンバー６の検出も行われるが、このチャンバー６の検出には、光源２６に基く種々の検出光を採用することができる。
【００５７】  すなわち、チャンバー６を検出する検出光は、特に限定されるものではなく、１）光源２６から細胞展開用デバイス１０に照射され、その細胞展開用デバイス１０を透過した励起光２５の透過光３０（図４）、２）光源２６から細胞展開用デバイス１０に照射され、その細胞展開用デバイス１０で反射した励起光２５の反射光６１（図６Ａ、図６Ｂ）、３）光源７４から細胞展開用デバイス１０に照射され、その照射された励起光７７に基いて細胞展開用デバイス１０の素材が発光する、素材の自家蛍光６３（図７）、のいずれかを用いて検出することができる。  これらいずれかの検出光を用いることによりチャンバー６の位置を容易に検出することができる。
【００５８】  例えば、図４の希少細胞検出装置３２では、細胞展開用デバイス１０に励起光２５を照射する光源２６を有している。また、希少細胞検出装置３２では、その励起光２５の照射により細胞展開用デバイス１０内で希少細胞２４を標識した蛍光体を発光させ、その特定波長を有する蛍光５４をダイクロックミラー２９を通過させて、その蛍光５４の蛍光シグナルを希少細胞検出部２７で検出するように設定されている。
【００５９】  また、この希少細胞検出装置３２では、光源２６から細胞展開用デバイス１０に照射された励起光２５であって、その細胞展開用デバイス１０を透過した透過光３０を、チャンバー６を検出するための検出光としている。そして、その透過光３０の検出光シグナルをチャンバー検出部２８で検出するように設定されている。
【００６０】  なお、図４に示した上記希少細胞検出部２７は、特に限定されるものではないが、本実施例では、ＰＭＴ（光電子倍増管）が採用されている。また、チャンバー検出部２８も、特に限定されるものではないが、本実施例ではフォトダイオードが採用されている。
【００６１】  なお、図４において、符号３４、３６、３８は集光レンズ、符号４６はピンホール部材、符号４８、５２はエミッションフィルタである。  上記のような光学要素を備えた希少細胞検出装置３２を用いて、図３Ａに示した細胞展開用デバイス１０に対し、レチクルマークＲ側の端部から矢印Ｚで示したように順番に走査していくことにより、希少細胞２４の存在するチャンバー６’では、励起光２５により希少細胞２４を標識した蛍光体が発光し、その特定波長を有する蛍光５４をダイクロックミラー２９を通過させて希少細胞検出部２７によって検出することで、蛍光シグナルを光学的に検出することができる。
【００６２】  そして、上記したように、蛍光５４により検出した希少細胞２４の蛍光シグナルを得ることにより、その蛍光シグナルに基いて希少細胞２４の位置情報を得る。また、透過光３０により検出したチャンバー６の検出光シグナルを得ることにより、そのチャンバーの位置情報を得る。
【００６３】  なお、この細胞展開用デバイス１０を透過した透過光３０の波長は励起光２５と同一波長である。  そして、希少細胞２４の位置情報とチャンバー６の位置情報とに基いて、希少細胞２４がどのチャンバー内に収容されているかを、コンピューター５６の希少細胞位置特定取得部５６ａにより特定することができる。そして、これらの情報はコンピューター５６内の記録媒体５６ｂに保存される。
【００６４】  図５は、図４における希少細胞検出装置３２の希少細胞検出部２７で得られた蛍光５４の蛍光シグナルと、チャンバー検出部２８で得られた検出光シグナルとを、１つのグラフに表したものである。グラフにおける横軸は走査の開始位置（基準点）からの走査距離（位置）を表している。
【００６５】  図５において、実線は希少細胞２４からの蛍光５４による蛍光シグナルを示し、点線は細胞展開用デバイス１０からの透過光３０による検出光シグナルを示している。  図５のグラフから明らかなように、実線で示した蛍光シグナルのピークとなる位置が希少細胞２４の検出を示しており、点線で示した検出光シグナルの低い所が、チャンバー６の検出を示している。
【００６６】  例えば、図５の例では、基準点から約３００μｍ、６００μｍ、９００μｍ、１２００μｍ、１５００μｍの各位置にあるチャンバー６に希少細胞２４が収容されていることを示しており、希少細胞２４の位置は、横軸の位置寸法を読み取ることによって識別することができる。
【００６７】  そして、このように希少細胞２４が細胞展開用デバイス１０のどのチャンバー内に収容されているかを、コンピューター５６の希少細胞位置特定取得部５６ａで特定し、それらの情報を記録媒体５６ｂに保存する。
【００６８】  このように情報を保存しておくことにより、例えば、希少細胞２４の検出が完了した細胞展開用デバイス１０を、この希少細胞検出装置３２から他の装置に移送して、観察や確認を行う場合であっても、記録された情報に基いて直ちにその希少細胞２４の観察を行うことが可能となる。
【００６９】  なお、本実施例のようにチャンバー６を形成した細胞展開用デバイス１０を用いた場合であっても、希少細胞２４が移送の途中で若干の位置ずれなどを起こすことも考えられるが、その場合であっても移動の範囲は、１つのチャンバー６内であるので、大きな移動が生じない。よって、確認作業が容易である。
【００７０】  さらに、細胞展開用デバイス１０が他の装置内に装着された場合に、基準位置に対して偏った姿勢で装着されてしまうことも考えられるが、このような場合であっても、本実施例の細胞展開用デバイス１０にはレチクルマークＲが形成されていることから、このレチクルマークＲを検出することにより正しい位置に配置された場合の正しい情報を得ることができる。
【００７１】  図６Ａは、本発明の他の実施例に係る希少細胞検出装置５８を示したもので、この実施例では、チャンバー６を検出するための検出光として、光源２６から細胞展開用デバイス１０に照射され、その細胞展開用デバイス１０で反射した励起光２５の反射光６１を用いている。ここで、励起光２５の波長と反射光６１の波長とは、同一波長である。
【００７２】  この図６Ａに示した他の実施例による希少細胞検出装置５８では、光源２６から細胞展開用デバイス１０に向かって照射され、その細胞展開用デバイス１０を介して反射する反射光６１を受光するように、チャンバー検出部２８を配置している。また、細胞展開用デバイス１０と希少細胞検出部２７との間に、集光レンズ３４、エミッションフィルタ４８、ピンホール部材４６、集光レンズ３６を配置している。
【００７３】  このような希少細胞検出装置５８によれば、光源２６からの励起光２５を、集光レンズ３８を介して細胞展開用デバイス１０に入射させ、その入射された励起光２５により、希少細胞２４を蛍光標識した蛍光体を発光させ、その特定波長を有する蛍光５４を、集光レンズ３４、エミッションフィルタ４８、ピンホール部材４６、集光レンズ３６を介して希少細胞検出部２７に導くことにより、蛍光細胞２４の蛍光シグナルを希少細胞検出部２７で検出することができる。
【００７４】  また、希少細胞検出装置５８では、希少細胞２４の蛍光シグナルの検出と同時に、同一の光源２６から照射された励起光２５の細胞展開用デバイス１０による反射光６１をチャンバー検出部２８に導いて、チャンバー検出部２８によって検出することで、チャンバー６の検出光シグナルを検出することができる。
【００７５】  このように、反射光６１を検出することによって、チャンバー６の位置情報を得ることができる。  さらに、この希少細胞検出装置５８では、図４に示した希少細胞検出装置３２の場合と同様に、希少細胞２４の位置情報とチャンバー６の位置情報とに基いて、希少細胞２４がどのチャンバー６内に収容されているかを、コンピューター５６の希少細胞位置特定部５６ａにより特定し、記録媒体５６ｂに保存している。したがって、一旦希少細胞２４の検出が行われた細胞展開用デバイス１０を、他の装置に移送したとしても、その情報を記録媒体５６ｂから呼び出すことができる。
【００７６】  なお、反射光６１を用いてチャンバー６の位置情報を得る場合の光学系は、図６Ａに開示された態様に何ら限定されるものではない。また図６Ａでは、希少細胞検出部２７とチャンバー検出部２８とを別々の構成としているが、図６Ｂに示したように一つにすることができる。
【００７７】  図６Ｂは、図６Ａに示した希少細胞検出部２７とチャンバー検出部２８とを一つの検出部２７０とした、さらに他の実施例に係る希少細胞検出装置５９を示したものである。  この希少細胞検出装置５９では、希少細胞検出部２７に代わる一つの検出部２７０により、希少細胞２４を標識した蛍光体の蛍光５４を検出するとともにチャンバー６からの反射光６１を検出することができる。
【００７８】  すなわち、図６Ｂに示した希少細胞検出装置５９では、一つの検出部２７０を設けるとともに、光源２６と細胞展開用デバイス１０との間にダイクロックミラー６２を設け、さらにダイクロックミラー６２と検出部２７０との間にフィルタ切り替え部４８０を設けている。このフィルタ切り替え部４８０により、２つの異なるエミッションフィルタを選択的に切り替えて使用することが可能にされている。
【００７９】  この希少細胞検出装置５９では、希少細胞２４の蛍光シグナルと、チャンバー６の検出光シグナルとは、２回の走査を行うことにより得ることができる。例えば、希少細胞２４を標識した蛍光５４を取り出すためのフィルタをフィルタ切り替え部４８０に設置し、１回目の走査を行うことにより、希少細胞２４の蛍光シグナルを検出部２７０で検出することができる。また、細胞展開用デバイス１０からの反射光６１による検出光シグナルを取り出すためのフィルタをフィルタ切り替え部４８０に設置し、２回目の走査を行なえば、細胞展開用デバイス１０からの反射光６１による検出光シグナルを、検出部２７０で検出することができる。
【００８０】  このように、一つの検出部２７０であっても、希少細胞２４の検出とチャンバー６の検出とを行うことができる。  図７は、本発明のさらに他の実施例に係る希少細胞検出装置７０を示したもので、この実施例では、チャンバー６を検出するための検出光として、第２の光源７４からの励起光７７に基いて細胞展開用デバイス１０の素材が発光する、素材の自家蛍光６３を採用している。
【００８１】  この希少細胞検出装置７０では、希少細胞２４を検出するために使用される第１の光源２６と、チャンバー６の素材の有する自家蛍光６３を検出するために使用される第２の光源７４とが具備されている。
【００８２】  またこの希少細胞検出装置７０では、第１の光源２６からは励起光２５が照射され、第２の光源７４からは、励起光２５の波長とは異なる波長の励起光７７が照射される。  そして、細胞展開用デバイス１０の素材が発光した自家蛍光６３の波長は、希少細胞２４を蛍光標識した蛍光体が発光する蛍光５４の蛍光波長とは異なる波長となるようにする。
【００８３】  本実施例の希少細胞検出装置７０では、希少細胞２４を検出するための第１の光源２６から照射された励起光２５は、ダイクロックミラー８６を通過し、さらにダイクロックミラー８１で反射して細胞展開用デバイス１０に入射され、これにより、希少細胞２４を蛍光標識した蛍光体を発光させる。そして、その蛍光体の発光する特定波長を有する蛍光５４が、ダイクロックミラー８１、ダイクロックミラー８２、エミッションフィルタ４８、ピンホール部材４６、集光レンズ３６などを介して希少細胞検出部２７に取り入れられる。そして、この希少細胞検出部２７に取り入れられた蛍光５４の蛍光シグナルに基いて、希少細胞２４の検出が行われる。
【００８４】  一方、希少細胞検出装置７０において、チャンバー６を検出するために第２の光源７４から照射された励起光７７は、集光レンズ８３を通過し、ダイクロックミラー８６、およびダイクロックミラー８１で反射して細胞展開用デバイス１０に入射される。そして、細胞展開用デバイス１０の素材が発光する自家蛍光６３は、ダイクロックミラー８１を通過しダイクロックミラー８２で反射して、集光レンズ７９を介してチャンバー検出部２８に入射する。これにより、チャンバー６の検出光シグナルをチャンバー検出部２８により検出することができる。なお、細胞展開用デバイス１０の自家蛍光を利用したチャンバーの位置検出では、例えば、チャンバーとそれ以外の部分との素材の厚みの違いによって異なる蛍光量を検出することによってチャンバーを検出することができる。
【００８５】  そして、希少細胞２４の位置情報とチャンバー６の位置情報とに基いて、希少細胞２４がどのチャンバー内に収容されているかを、コンピューター５６の希少細胞位置特定部５６ａにより特定し、それらの情報がコンピューター内の記録媒体５６ｂに保存する。
【００８６】  この希少細胞検出装置７０のように、細胞展開用デバイス１０の自家蛍光６３を検出することによっても、チャンバー６の位置情報を得て、希少細胞２４の位置情報とチャンバー６の位置情報とに基いて、希少細胞２４がどのチャンバー内に収容されているかを特定することができる。
【００８７】  なお、チャンバー６を検出するための検出光として、図６Ａあるいは図６Ｂのように反射光６１を用いる場合と、図７のように自家蛍光６３を用いる場合のいずれの場合であっても、図５のようなグラフを作成すれば、図４の透過光３０を用いた場合と略同様の傾向を得ることができる。
【００８８】  図８は、チャンバー６の検出光として反射光６１が採用された図６Ｂの希少細胞検出装置５９による実験結果を示したグラフである。  図８において、実線は反射光６１による検出光シグナルを示し、点線は蛍光５４による蛍光シグナルを示している。
【００８９】  反射光６１による検出光シグナルにおいては、反射光量が少なくなるピーク所を探すことでチャンバー６の位置を検出することができる。また、蛍光５４による蛍光シグナルにおいては、蛍光５４の光量が高くなる位置を探すことで希少細胞の位置を検出することができる。
【００９０】  なお、図８のグラフにおいて、実線で示した検出光シグナル（反射光６１）の波長は４８８ｎｍを採用しており、点線で示した蛍光シグナル（蛍光５４）の波長は６４７ｎｍである。
【００９１】  以上の各実施例で説明したように、チャンバー６の検出光として、１）透過光３０、２）反射光６１、３）自家蛍光６３、のいずれを用いた希少細胞検出装置３２、５８、５９、７０であっても、希少細胞２４がどのチャンバー内に位置するかを検出することができる。
【００９２】  また、上記各実施例による希少細胞検出装置により、一旦、希少細胞２４が検出された細胞展開用デバイス１０を他の装置に移送して再び観察したり確認したりする場合であっても、コンピューター５６の記録媒体５６ｂに情報が保存されていることから、この保存された情報に基いて、該当する希少細胞２４の存在するチャンバー６の位置を呼び出して、その呼び出された情報を、他の観察装置の位置調整装置に取り入れ、それに基いて観察装置を適宜な位置に移動すれば、速やかに該当する希少細胞２４を観察することができる。
【００９３】  すなわち、このような場合には、先ず、図９に示したように、観察装置７６に位置調整装置９０を具備させる。そして、位置調整装置９０に記録媒体５６ｂから取り入れた情報により、観察装置７６のレンズなどからなる観察部をＸＹＺ方向に移動可能とする。
【００９４】  そして、記録媒体５６ｂに記録された情報に基いて観察装置７６の観察部を移動させ、所望とする希少細胞２４を観察する。  このように、細胞展開用デバイス１０が希少細胞検出装置とは異なる他の観察装置に移送されたとしても、一旦、希少細胞検出装置で検出された希少細胞２４を、速やかに観察することができる。
【００９５】  以上、本発明の各実施例について説明したが、本発明は、上記各実施例に何ら限定されるものではない。  特に、希少細胞検出装置および観察装置に係わる光学要素は様々な態様をとることができる。
【００９６】  また、目的とする希少細胞の検出には１色の蛍光でも良いが、目的とする希少細胞以外の非特異細胞の検出のため、それぞれの細胞を異なる色で発光するように２色以上の蛍光を使用することも可能である。  また、希少細胞２４を標識した蛍光体の蛍光波長は、自家蛍光の影響を避けるために、励起光２５の波長よりも、長波長側を採用することが好ましい。
【００９７】  また、以上の実施例においては、希少細胞検出装置におけるコンピューター内の記録媒体に情報を記録し、観察装置などの他の装置を接続して記録媒体から情報を読み出す態様を説明したが、当該コンピューターは、希少細胞検出装置と別体であっても良く、また細胞展開用デバイス自体に情報記録部を設けて希少細胞検出装置により得られた情報をその情報記録部に記憶させ、観察装置などの他の装置では、細胞展開用デバイスが装着された際に、その情報記録部より必要な情報を読み出すように構成しても良いことは勿論である。
【００９８】  ［具体的な測定例］  がん患者から採血された末梢血を用いた細胞懸濁液を用意し、末梢血中の種々の細胞の検出、特には血液循環がん細胞（ＣＴＣ）の検出を行った。
【００９９】＜細胞懸濁液＞  細胞懸濁液は、末梢血そのものでも良いし、末梢血を適切な緩衝液、例えばリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）等で希釈したものでも良いが、ここでは末梢血をリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で希釈した細胞懸濁液を用いた。
【０１００】  また細胞懸濁液は、予め血液循環がん細胞（ＣＴＣ）および白血球を蛍光標識した。  上記予め蛍光標識された細胞懸濁液の調整方法は以下の通りである。  まず細胞懸濁液１ｍｌに、パラホルムアルデヒド（和光純薬社製）を４％になるように加えて、緩やかに混和し、室温暗所にて１５分間反応させた。ここに、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を充分量加えて混和し、遠心分離にて洗浄を行い、次に細胞膜透過処理用として０．１％Ｔｗｅｅｎを含むリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を１ｍｌ、および血液循環がん細胞（ＣＴＣ）標識用にAlexa  Fluor６４７で標識した抗ＣＫ抗体（Ｍｉｃｒｏｍｅｔ社製）溶液１０μｌおよび白血球標識用にAlexa  Fluor４８８（インビトロジェン社製）で標識した抗ＣＤ４５抗体（Santa Cruz Biotechnology, Inc.）溶液１０μｌを添加し、緩やかに混和しながら、室温暗所にて３０分反応させ、最後の５分間、細胞核染色用にＤＡＰＩ（同仁化学社製）溶液１０μｌを添加して反応させた。  この後、遠心分離により細胞に結合していない抗体試薬を除去し、新たにリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を添加して再懸濁させ、これを本実施例で用いる細胞懸濁液とした。
【０１０１】＜チャンバー外表面処理および細胞トラップ＞（流路内流速制御方式）  細胞展開用デバイス１０（チャンバー深さ50μm, チャンバー径100μφ）に流路５（幅5mm）と流路形成部材（流路高さ500μm）２を具備させ、ブロッキング液（３％BSA含有PBS）を高流速（16mLmin）で送液した。その後、PBSにてブロッキング剤を流路５内から除去し、細胞懸濁液を同流速にて流路５内へ導入後、間欠的な送液（10μL送液後10秒停止）を繰り返すことで、チャンバー６内に細胞を回収した。
【０１０２】＜細胞検出方法１（図６）＞（光源２６からの同一照射で、蛍光５４と反射光６１とをそれぞれ検出）  細胞を収容した細胞展開用デバイス１０に、血液循環がん細胞（ＣＴＣ）標識用に標識したAlexa647を励起するHe-Neレーザー(波長633ｎｍ)を照射し、Alexa647の蛍光シグナルを希少細胞検出部２７（PMT）にて測定し、同光源２６にて照射されたチャンバーの反射光６１をチャンバー検出部２８（PD）にて測定をしたところ、位置情報は自動ステージのパルス信号から取得し、血液循環がん細胞（ＣＴＣ）のシグナルと併せてチャンバーの検出光シグナル（反射光）が検出された。
【０１０３】＜細胞検出方法２（図７）＞  細胞を収容した細胞展開用デバイス１０に、血液循環がん細胞（ＣＴＣ）標識用に標識したAlexa647を励起するHe-Neレーザー(波長633ｎｍ)を光源２６から照射し、Alexa647の蛍光シグナルを希少細胞検出部２７としてのPMT（光電子倍増管）にて測定した。さらに、照射光を405 nmで細胞展開用デバイスの自家蛍光をチャンバー検出部２８としてのPD（フォトダイオード）にて測定をしたところ、血液循環がん細胞（ＣＴＣ）のシグナルと併せてチャンバー６の検出光シグナル（自家蛍光）が検出された。
【符号の説明】
【０１０４】１      チャンバーチップ２      流路形成枠体３      入口部４      出口部５      流路６、６’      チャンバー７      高さ１０    細胞展開用デバイス２４    希少細胞２５    励起光２６    光源（第１の光源）２７    希少細胞検出部２８    チャンバー検出部３０    透過光３２    希少細胞検出装置５４    蛍光５６    コンピューター５６ａ  希少細胞位置特定取得部５６ｂ  記録媒体５８    希少細胞検出装置５９    希少細胞検出装置６１    反射光６３    自家蛍光７０    希少細胞検出装置７４    光源（第２の光源）７６    観察部７７    励起光８０    希少細胞検出装置１００  懸濁液展開工程２００Ａ  希少細胞検出工程２００Ｂ  チャンバー検出工程３００  希少細胞位置特定取得工程２７０  検出部４８０  フィルタ切り替え部Ｒ      レチクルマーク
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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