(57)【要約】  本発明の課題は、食経験により安全と認識される成分において、抗炎症作用を有する組成物を提供することにある。  分離大豆蛋白質が抗炎症作用を示す場合があることから、その作用本体として分離大豆蛋白質からアルコール抽出されるリン脂質を見出した。さらに詳細な検討により、リン脂質において、ＰＩを必須成分として、さらに他のリン脂質を含有し、「ＰＣ，ＰＥ，ＰＳの合計量／ＰＩの量」が０．０５〜２．６であるものが、ＩＬ−１βの産生抑制効果があることを見出した。このような組成物は豊富な食経験から安全と認識されており、課題の解決に至った。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＰＩ及び、ＰＣ、ＰＥまたはＰＳから選ばれる1以上を含み、「ＰＣ，ＰＥ，ＰＳの合計量／ＰＩの量」が０．０５〜２．６である、炎症抑制作用を有する組成物。
【請求項２】
炎症抑制作用が、ＩＬ−１β産生抑制作用によるものである、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
請求項1記載の炎症抑制作用を有する組成物を含有する、炎症抑制用加工食品。
【請求項４】
炎症抑制作用が、ＩＬ−１β産生抑制作用によるものである、請求項３記載の炎症抑制用加工食品。
【請求項５】
請求項1記載の組成物の、炎症抑制剤としての使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＩＬ−１β産生抑制作用を有する食品添加用組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
炎症は生体が何らかの有害な刺激を受けた時に免疫応答が働き、それによって生体に出現する反応である。
生体に対する刺激により、細胞から、種々の細胞間情報伝達分子となる微量生理活性タンパク質であるサイトカインが放出され、炎症と認識される場合がある。【０００３】
特許文献１には、「抗炎症及び／又は抗ヒスタミン活性成分、極性脂質リポソーム及び薬学的に許容可能な水性担体を含有し、活性成分がセチリジンではない、炎症性疾患治療のための均質な医薬組成物。」について記載がある。
特許文献２には、抗炎症作用に関し、リポソームを本体とする組成物について記載がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２０１３−２０９４２３号公報
【特許文献２】特表２００５−５１５２４２号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の課題は、食経験により安全と認識される成分において、抗炎症作用を有する組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は上記課題に対し鋭意検討をおこなった。そうしたところ、過去より十分な食経験のある分離大豆蛋白質において、そこから含水アルコールにて抽出される成分が、マクロファージ細胞（ＴＨＰ−１）からの炎症性サイトカイン（ＩＬ−１β）の産生を抑制する傾向があることを見出した。
更に詳細な検討を行ったところ、前記含水アルコールにて抽出される成分のうち、ＰＩを必須成分とし、さらにＰＣ、ＰＥまたはＰＳから選ばれる1以上を含むものが、同ＩＬ−１βの産生を顕著に抑制することを見出し、本発明を完成させた。【０００７】
すなわち本発明は、
（１）ＰＩ及び、ＰＣ、ＰＥまたはＰＳから選ばれる1以上を含み、「ＰＣ，ＰＥ，ＰＳの合計量／ＰＩの量」が０．０５〜２．６である、炎症抑制作用を有する食品添加用組成物、
（２）炎症抑制作用が、ＩＬ−１β産生抑制作用によるものである、（１）記載の食品添加用組成物、
（３）ＰＩ及び、ＰＣ、ＰＥまたはＰＳから選ばれる1以上を含み、「ＰＣ，ＰＥ，ＰＳの合計量／ＰＩの量」が０．０５〜２．６である、抗炎症剤、
（４）炎症抑制作用が、ＩＬ−１β産生抑制作用による、（３）記載の抗炎症剤、
に関するものである。
また、換言すれば、
（５）ＰＩ及び、ＰＣ、ＰＥまたはＰＳから選ばれる1以上を含み、「ＰＣ，ＰＥ，ＰＳの合計量／ＰＩの量」が０．０５〜２．６である、炎症抑制作用を有する組成物、
（６）炎症抑制作用が、ＩＬ−１β産生抑制作用によるものである、（５）記載の組成物、
（７）（５）記載の炎症抑制作用を有する組成物を含有する、炎症抑制用加工食品、
（８）炎症抑制作用が、ＩＬ−１β産生抑制作用によるものである、（７）記載の炎症抑制用加工食品、
（９）（５）記載の組成物の、炎症抑制剤としての使用、
に関するものである。【０００８】
なお、特許文献１では抗炎症等の活性成分は極性脂質とは別に添加されており、極性脂質自体に生理作用が存在することは開示されていない。
特許文献２においては、「複数の反応性化学基を有する本体」として、リン酸イノシトール等の記載があるが、特定の組み合わせで顕著な効果が生じる旨の示唆はない。
【発明の効果】
【０００９】
本発明により、過去より十分な食経験のある大豆由来成分を用い、炎症抑制作用を有する食品添加用組成物を提供することができる。また、本発明により、抗炎症剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】ＳＰＩＥＥによる、ＩＬ−１β産生抑制を示す図である。
【図２】リン脂質混合物による、ＩＬ−１β産生抑制を示す図である。
【図３】各リン脂質単独による、ＩＬ−１β産生抑制を示す図である。
【図４】リン脂質の組み合わせによる、ＩＬ−１β産生抑制を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明において使用する略号は以下の通りである。
ＰＣ：Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ、
ＰＩ：Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ、
ＰＥ：Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｅｔｈａｎｏｌ、
ＰＳ：Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ、
ＩＬ−１β：Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１β。
【００１２】
ＩＬ−１はサイトカインと呼ばれる生理活性物質の一種であり、炎症性サイトカインと呼ばれるグループに含まれるものである。ＩＬ−１には、ＩＬ−１αとＩＬ−１βの２種類が発見されている。
生体においては、ＩＬ−１がマクロファージやＴ細胞、Ｂ細胞等から産生されることで、炎症が認識される。すなわち、ＩＬ−１の産生を基準に炎症の有無を判断することができる。つまり、ＩＬ−１の産生を抑える物質を見出すことができれば、それは炎症を抑制することができる物質と言える。
【００１３】
大豆は古くから広く食されいてる食材であり、経験上安全性が確認されていると言える。
また、大豆に由来する素材においては、各種の生理作用も知られていた。そのため、その作用本体を明確にすることができれば、当該部分のみを濃縮等することで、より生理作用を高めた素材が得られる可能性があり、又それは、十分な食経験に基づき、一定の安全性が認識できるものという事ができるものである。
【００１４】
本発明者は、分離大豆蛋白（以下、ＳＰＩと称する）から含水エタノールにて抽出される画分（以下、ＳＰＩＥＥと称する）に、ＩＬ−１β産生抑制効果があることを見出した。しかし、ＳＰＩＥＥにおいて、具体的に何が作用本体であるかは不明であった。
本発明者はＳＰＩＥＥに含まれるリン脂質に着目し、それぞれ単独でＩＬ−１β産生抑制効果があるか評価した。しかし、リン脂質（ＰＣ，ＰＩ，ＰＥ，ＰＳ）それぞれの評価では、ＩＬ−１β産生抑制効果はほとんどなかった。
【００１５】
本発明者はさらに検討を行った。そうしたところ、驚くべきことに、ＰＩと、他のリン脂質（ＰＣ，ＰＥまたはＰＳのいずれか）が組み合わされた場合に、ＩＬ−１β産生抑制効果が生じることを見出した。
２種の組み合わせとしては、ＰＩと、ＰＣ又はＰＥのいずれかの組み合わせが望ましく、ＰＩとＰＥの組み合わせがさらに望ましい。
３種の組み合わせとしては、ＰＩとＰＳのほか、ＰＣ又はＰＥを組み合わせることが望ましい。
【００１６】
ＰＩとそれ以外のリン脂質の量比として、本発明では「ＰＣ，ＰＥ，ＰＳの合計量／ＰＩの量」が０．０５〜２．６であることが必要である。この値は、より望ましくは０．３〜２であり、さらに望ましくは０．４〜１．７である。望ましいとされる量比とすることで、ＩＬ−１βの産生が抑制され、ひいては、高い抗炎症効果を示すこととなる。
【００１７】
以上より、効果の高いリン脂質の組み合わせにより、ＩＬ−１β産生抑制効果の高い食品添加用組成物や、抗炎症剤を提供することができるし、また、大豆レシチン等において、そのリン脂質の組成を調整することで、ＩＬ−１β産生抑制効果を高めた食品添加用組成物を提供することができる。
【００１８】
本発明でいう、炎症抑制作用を有する食品添加用組成物とは、食品として使用可能な素材に由来し、炎症抑制作用を有する組成物である。
本発明でいう、IL-1β産生抑制作用を有する食品添加用組成物とは、食品として使用可能な素材に由来し、IL-1β産生抑制作用を有する組成物である。
本発明で言う、抗炎症剤とは、抗炎症作用を有する剤である。
以下、実施例により本発明の具体的態様を明確にする。
【実施例】
【００１９】
○検討１  分離大豆蛋白質からの含水アルコール抽出物による効果検証
Ａ．分離大豆蛋白質の調製
１．脱脂大豆（不二製油株式会社製）１ｋｇへ１２ｋｇの４０℃温水を加え、１Ｎ  ＮａＯＨにてｐH７．０へ調整した。
２．ホモミキサー（特殊機化工業社製）を用い、５０００ｒｐｍで１時間攪拌して蛋白質を抽出した。
３．遠心分離（１５００Ｇ、１０分）でオカラ成分を除去して脱脂豆乳を得た。
４．１Ｎ  ＨＣｌにてｐＨ４．５へ調整し、蛋白カードを沈殿させて遠心分離機にて回収し大豆蛋白質カードを得た。
５．大豆蛋白質カード固形分に対し１０倍量加水し、１Ｎ  ＮａＯＨにてｐＨ７．０へ調整した。
６．スプレードライヤーにて紛体化し「分離大豆蛋白質」（以下、ＳＰＩと称することがある）とした。【００２０】
Ｂ．含水エタノール抽出物の調製とリン脂質の分析
１．「分離大豆蛋白質の調製」で得られた分離大豆蛋白質１ｋｇに、含水エタノール（エタノール：水＝７０：３０（容積比））を５L添加し、ホモミキサーにて６０００ｒｐｍで３０分間攪拌した。
２．ろ紙（Ｎｏ．１）にて溶液を回収した。
３．２で得られた不溶性の残差について１、２の工程をさらに二回繰り返した後、１の含水エタノールを無水エタノールに置き換えて再び１、２の工程に供した。
４．回収したエタノール溶液からエバポレータ―によってエタノールを除き、凍結乾燥機にて紛体化し「含水エタノール抽出物（以下ＳＰＩＥＥと称することがある）」とした。
得られた「含水エタノール抽出物」５０μｇにおける各リン脂質含量は、ＰＣ：５．５μｇ、ＰＩ：３．５μｇ、ＰＥ：２μｇ、ＰＳ：０．３μｇであった。
（リン脂質の分析は薄層クロマトグラフ法で行った）【００２１】
Ｃ．ＩＬ−１β産生抑制効果の検証
イ）細胞の分化誘導：ＴＨＰ-１をＲＰＭＩ１６４０培地(１０％ＦＢＳ)に ３．５×１０５ｃｅｌｌｓ/ｍＬで調製し終濃度１００ｎＭになるようにＰＭＡを加えた。  １２ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに１ｍＬ/ｗｅｌｌで播種した後、５％ＣＯ２, ３７℃で４８ｈｒインキュベートし分化を誘導した。
ロ）サンプル調製：ＳＰＩＥＥ１ｍｇを、７０％ＥｔＯＨ  １ｍｌに溶解し、１/２００量をＲＰＭＩ１６４０培地(１０％ ＦＢＳ, １００ｎｇ/ｍＬ ＬＰＳ、１００ｎＭ ＰＭＡ）に添加した。
ハ）サンプルの添加：評価サンプルを含む培地に交換し５％ＣＯ２, ３７℃で６ｈｒインキュベートした。
ニ）ＲＮＡ抽出:ＩＳＯＧＥＮのプロトコールに従って細胞からｔｏｔａｌ ＲＮＡを抽出し、Ｒｅａｌ-Ｔｉｍｅ ＰＣＲに供した。ＩＬ-１β産生量はＧＡＰＤＨを用いて標準化した。
ホ）ＩＬ-１β産生量がＰｏｓｉｔｉｖｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌに対して４０％以下となったものを、ＩＬ−１β産生抑制効果ありと判断した。
なお、Ｎｅｇａｔｉｖｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌは「ＬＰＳ刺激なし」である。【００２２】
結果
測定されたＩＬ−１β産生量を図１に示した。
考察
図１に示した通り、ＳＰＩＥＥにはＩＬ−１β産生量を抑制する効果が見出された。【００２３】
検討２  リン脂質のＩＬ−１β産生抑制効果の検証
Ａ．ＳＰＩＥＥに含まれるリン脂質比率での効果検証
検討１において分析された、ＳＰＩＥＥにおけるリン脂質含有比率にて、試薬のリン脂質（Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ社製）を混合し、検討１  ＣにおいてＳＰＩＥＥの代わりにリン脂質合計１１．３μｇを用い、他は同じ方法で、ＩＬ−１β産生抑制効果の検証を行った。【００２４】
結果
図２に示した通り、試薬のリン脂質をＳＰＩＥＥに含まれる比率で混合したものが、ＳＰＩＥＥと同様のＩＬ−１β産生抑制効果を示した。このことから、ＳＰＩＥＥにおけるＩＬ−１β産生抑制効果の作用本体は、リン脂質であることが示唆された。【００２５】
Ｂ．各リン脂質によるＩＬ−１β産生抑制効果の検証。
ＳＰＩＥＥに含まれるリン脂質それぞれをＰＣ：５．５μｇ、ＰＩ：３．５μｇ、ＰＥ：２μｇ、ＰＳ：０．３μｇ用い、検討１  Ｃと同様の方法でＩＬ−１β産生抑制効果の検証を行った。【００２６】
結果
図３に示した通り、各リン脂質単独では、ＩＬ−１β産生抑制効果はほとんど見られないことが明らかとなった。【００２７】
Ｃ．各リン脂質の混合によるＩＬ−１β産生抑制効果の検証
表１記載の組み合わせでリン脂質を混合し、検討１  Ｃと同様の方法でＩＬ−１β産生抑制効果の検証を行った。【００２８】
表１  リン脂質の組み合わせ
2016185816.tif 000002
・各リン脂質の数値はμgを示す。各実施例、比較例でのリン脂質混合物を検討１  ＣにおけるＳＰＩＥＥの代わりに用い、ＩＬ−１β産生抑制効果の検証を行った。【００２９】
結果
図４に示した通り、ＰＩを必須として、それ以外のリン脂質を組み合わせた場合にのみ、ＩＬ−１β産生抑制効果が見出されることが明らかとなった。
特に、「ＰＣ，ＰＥ，ＰＳの合計量／ＰＩの量」が０．０５〜２．６である場合に、顕著なＩＬ−１β産生抑制効果が見出されることが明らかとなった。
考察
以上より、ＰＩを必須として、それ以外のリン脂質を適宜組み合わせた組成物は、抗炎症作用を有する食品添加用組成物として使用できることが明らかとなった。
このような組成物は、大豆レシチンのような天然の素材を、目的の組成となるように分離したり、また、特定のリン脂質を追加して調製することもできるし、また、各リン脂質を個別に混合し調製することも可能である。
なお、一般的な大豆レシチンにおけるリン脂質の組成は、フォスファチジルコリン：31.3％、フォスファチジルエタノールアミン：28.5％、フォスファチジルイノシトール：15.6％、フォスファチジルセリン：５．４％、その他：１９．３％（川崎医療福祉学会誌Vol.15  No.1 2005 209-216 P210表１より）であり、ここから計算される「ＰＣ，ＰＥ，ＰＳの合計量／ＰＩの量」は４．１８であった。
【図１】
2016185816.tif 000003
【図２】
2016185816.tif 000004
【図３】
2016185816.tif 000005
【図４】
2016185816.tif 000006
【手続補正書】
【提出日】平成28年7月13日(2016.7.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
本発明において使用する略号は以下の通りである。
ＰＣ：Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ、
ＰＩ：Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ、
ＰＥ：Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ、
ＰＳ：Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ、
ＩＬ−１β：Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１β。
【手続補正書】
【提出日】平成28年10月17日(2016.10.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＰＩ及び、ＰＣ、ＰＥまたはＰＳから選ばれる1以上を含み、「ＰＣ，ＰＥ，ＰＳの合計量／ＰＩの量」が０．４〜１．７である、炎症抑制作用を有する組成物。
【請求項２】
炎症抑制作用が、ＩＬ−１β産生抑制作用によるものである、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
請求項1記載の炎症抑制作用を有する組成物を含有する、炎症抑制用加工食品。
【請求項４】
炎症抑制作用が、ＩＬ−１β産生抑制作用によるものである、請求項３記載の炎症抑制用加工食品。
【請求項５】
請求項1記載の組成物の、炎症抑制剤としての使用。
【手続補正書】
【提出日】平成28年12月20日(2016.12.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＰＩ及び、ＰＣ、ＰＥまたはＰＳから選ばれる1以上を含み、「ＰＣ，ＰＥ，ＰＳの合計量／ＰＩの量」０．４〜１．７である、炎症抑制作用を有する組成物。
【請求項２】
炎症抑制作用が、ＩＬ−１β産生抑制作用によるものである、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
請求項1記載の炎症抑制作用を有する組成物を含有する、炎症抑制用加工食品。
【請求項４】
炎症抑制作用が、ＩＬ−１β産生抑制作用によるものである、請求項３記載の炎症抑制用加工食品。
【請求項５】
請求項1記載の組成物の、炎症抑制剤としての使用。但し人間を治療する態様を除く。
【国際調査報告】
2016185816.tif 000007
2016185816.tif 000008
2016185816.tif 000009
2016185816.tif 000010