(57)【要約】  本発明はリグニン分解活性を有するタンパク質を製造する方法又はリグニンの分解方法を提供することを解決課題とする。  本発明では、ヤブレツボカビ類に分類される微生物の少なくとも1種を培養することにより、リグニン分解活性を有するタンパク質を製造する方法、リグニンの分解方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヤブレツボカビ類に分類される微生物の少なくとも1種を培養し、該微生物にリグニン分解活性を有するタンパク質を生産させる培養工程を含む、リグニン分解活性を有するタンパク質の製造方法。
【請求項２】
前記微生物が、アウランチオキトリウム(Aurantiochytrium)属、ウルケニア(Ulkenia)属、トラウストキトリウム(Thraustochytrium)属、オブロンギキトリウム(Oblongichytrium)属、シゾキトリウム(Schizochytrium)属、アプラノキトリウム(Aplanochytrium)属、ボツリオキトリウム(Botryochytrium)属、シソイドキトリウム(Sicyoidochytrium)属、パリエチキトリウム(Parietichytrium)属、及びジャポノキトリウム(Japonochytrium)属に属する微生物から選択される少なくとも1種である、請求項1の方法。
【請求項３】
前記微生物が、ウルケニア・アモエボイデア(Ulkenia amoeboidea)、トラウストキトリウム・キネイ(Thraustochytrium kinnei)、アウランチオキトリウム・リマシナム(Aurantiochytrium limacinum)、トラウストキトリウム・ストリアタム(Thraustochytrium striatum)、シゾキトリウム・リマシナム(Schizochytrium limacinum)、アウランチオキトリウム・マングロベイ(Aurantiochytrium mangrovei)、シゾキトリウム・アグレガタム(Schizochytrium aggregatum)、トラウストキトリウム・アウレウム(Thraustochytrium aureum)、トラウストキトリウム・ロゼウム(Thraustochytrium roseum)、アプラノキトリウム・ケルグエレンセ(Aplanochytrium kerguelense)、ボツリオキトリウム・ラジアタム(Botryochytrium radiatum)、及びパリエチキトリウム・サルカリアナム(Parietichytrium sarkarianum)に属する微生物から選択される少なくとも1種である、請求項1の方法。
【請求項４】
前記微生物が、アウランチオキトリウム sp. ATCC20888(Aurantiochytrium sp. ATCC20888)株、アウランチオキトリウム sp. ATCC26185(Aurantiochytrium sp. ATCC26185)株、ウルケニア・アモエボイデア SEK214(Ulkenia amoeboidea SEK214)株、トラウストキトリウム・キネイ SEK618(Thraustochytrium kinnei SEK618)株、ウルケニア sp. ATCC28207(Ulkenia sp. ATCC28207)株、アウランチオキトリウム・リマシナム mh0186(Aurantiochytrium limacinum mh0186)株(FERM BP-11311)、トラウストキトリウム・キネイ SEK617(Thraustochytrium kinnei SEK617)株、トラウストキトリウム・ストリアタム ATCC24473(Thraustochytrium striatum ATCC24473)株、アウランチオキトリウム・マングロベイ SEK218(Aurantiochytrium mangrovei SEK218)株、アウランチオキトリウム・リマシナム SR21 ATCC MYA-1381(Aurantiochytrium limacinum SR21 ATCC MYA-1381)株、オブロンギキトリウム sp. SEK347(Oblongichytrium sp. SEK347)株、ウルケニア sp. SEK615(Ulkenia sp. SEK615)株、シゾキトリウム・アグレガタム ATCC28209(Schizochytrium aggregatum ATCC28209)株、トラウストキトリウム・アウレウム ATCC34304(Thraustochytrium aureum ATCC34304)株、トラウストキトリウム・ロゼウム ATCC28210(Thraustochytrium roseum ATCC28210)株、オブロンギキトリウム sp SEK600(Oblongichytrium sp. SEK600)株、ボツリオキトリウム sp. SEK598(Botryochytrium sp. SEK598)株、シゾキトリウム sp. SEK210(Schizochytrium sp. SEK210)株、シゾキトリウム sp. SEK345(Schizochytrium sp. SEK345)株、トラウストキトリウム・アウレウム SEK621(Thraustochytrium aureum SEK621)株、トラウストキトリウム・アフ・カウディボラム SEK616(Thraustochytrium aff. caudivorum SEK 616)株、ボツリオキトリウム・ラジアタム SEK353(Botryochytrium radiatum SEK353)株、パリエチキトリウム・サルカリアナム SEK351(Parietichytrium sarkarianum SEK351)株、パリエチキトリウム・サルカリアナム SEK364(Parietichytrium sarkarianum SEK364)株、及びパリエチキトリウム sp. SEK358(Parietichytrium sp. SEK358)株、並びにこれらの株の、リグニン分解活性を有するタンパク質を生産する能力を有する変異株から選択される少なくとも1種である、請求項1の方法。
【請求項５】
前記培養工程が、界面活性剤を含有する培地を用いて前記微生物を培養する工程である、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
界面活性剤がTween 80（商標）である、請求項5の方法。
【請求項７】
前記培養工程が、ポリペプトン濃度1.0g/L以下、グルコース濃度1.0g/L以下、及び／又は酵母エキス濃度1.0g/L以下である培地を用いて前記微生物を培養する工程である、請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記培養工程が、ポリペプトン濃度1.0g/L以上、グルコース濃度1.0g/L以上、及び／又は酵母エキス濃度1.0g/L以上である培地を用いて前記微生物を培養する工程である、請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
ヤブレツボカビ類に分類される微生物の少なくとも1種、又は該微生物により生産されるリグニン分解活性を有するタンパク質をリグニンに作用させてリグニンを分解する工程を含む、リグニンの分解方法。
【請求項１０】
ヤブレツボカビ類に分類される微生物の少なくとも1種、又は該微生物に生産されるリグニン分解活性を有するタンパク質の、リグニンの分解における使用。
【請求項１１】
前記微生物が、アウランチオキトリウム(Aurantiochytrium)属、ウルケニア(Ulkenia)属、トラウストキトリウム(Thraustochytrium)属、オブロンギキトリウム(Oblongichytrium)属、シゾキトリウム(Schizochytrium)属、アプラノキトリウム(Aplanochytrium)属、ボツリオキトリウム(Botryochytrium)属、シソイドキトリウム(Sicyoidochytrium)属、パリエチキトリウム(Parietichytrium)属、及びジャポノキトリウム(Japonochytrium)属に属する微生物から選択される少なくとも1種である、請求項9の方法又は請求項10の使用。
【請求項１２】
前記微生物が、ウルケニア・アモエボイデア(Ulkenia amoeboidea)、トラウストキトリウム・キネイ(Thraustochytrium kinnei)、アウランチオキトリウム・リマシナム(Aurantiochytrium limacinum)、トラウストキトリウム・ストリアタム(Thraustochytrium striatum)、シゾキトリウム・リマシナム(Schizochytrium limacinum)、アウランチオキトリウム・マングロベイ(Aurantiochytrium mangrovei)、シゾキトリウム・アグレガタム(Schizochytrium aggregatum)、トラウストキトリウム・アウレウム(Thraustochytrium aureum)、トラウストキトリウム・ロゼウム(Thraustochytrium roseum)、アプラノキトリウム・ケルグエレンセ(Aplanochytrium kerguelense)、ボツリオキトリウム・ラジアタム(Botryochytrium radiatum)、及びパリエチキトリウム・サルカリアナム(Parietichytrium sarkarianum)に属する微生物から選択される少なくとも1種である、請求項9の方法又は請求項10の使用。
【請求項１３】
前記微生物が、アウランチオキトリウム sp. ATCC20888(Aurantiochytrium sp. ATCC20888)株、アウランチオキトリウム sp. ATCC26185(Aurantiochytrium sp. ATCC26185)株、ウルケニア・アモエボイデア SEK214(Ulkenia amoeboidea SEK214)株、トラウストキトリウム・キネイ SEK618(Thraustochytrium kinnei SEK618)株、ウルケニア sp. ATCC28207(Ulkenia sp. ATCC28207)株、アウランチオキトリウム・リマシナム mh0186(Aurantiochytrium limacinum mh0186)株(FERM BP-11311)、トラウストキトリウム・キネイ SEK617(Thraustochytrium kinnei SEK617)株、トラウストキトリウム・ストリアタム ATCC24473(Thraustochytrium striatum ATCC24473)株、アウランチオキトリウム・マングロベイ SEK218(Aurantiochytrium mangrovei SEK218)株、アウランチオキトリウム・リマシナム SR21 ATCC MYA-1381(Aurantiochytrium limacinum SR21 ATCC MYA-1381)株、オブロンギキトリウム sp. SEK347(Oblongichytrium sp. SEK347)株、ウルケニア sp. SEK615(Ulkenia sp. SEK615)株、シゾキトリウム・アグレガタム ATCC28209(Schizochytrium aggregatum ATCC28209)株、トラウストキトリウム・アウレウム ATCC34304(Thraustochytrium aureum ATCC34304)株、トラウストキトリウム・ロゼウム ATCC28210(Thraustochytrium roseum ATCC28210)株、オブロンギキトリウム sp SEK600(Oblongichytrium sp. SEK600)株、ボツリオキトリウム sp. SEK598(Botryochytrium sp. SEK598)株、シゾキトリウム sp. SEK210(Schizochytrium sp. SEK210)株、シゾキトリウム sp. SEK345(Schizochytrium sp. SEK345)株、トラウストキトリウム・アウレウム SEK621(Thraustochytrium aureum SEK621)株、トラウストキトリウム・アフ・カウディボラム SEK616(Thraustochytrium aff. caudivorum SEK 616)株、ボツリオキトリウム・ラジアタム SEK353(Botryochytrium radiatum SEK353)株、パリエチキトリウム・サルカリアナム SEK351(Parietichytrium sarkarianum SEK351)株、パリエチキトリウム・サルカリアナム SEK364(Parietichytrium sarkarianum SEK364)株、及びパリエチキトリウム sp. SEK358(Parietichytrium sp. SEK358)株、並びにこれらの株の、リグニン分解活性を有するタンパク質を生産する能力を有する変異株から選択される少なくとも1種である、請求項9の方法又は請求項10の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、微生物に由来する、リグニン分解活性を有するタンパク質を製造する方法及び微生物を用いるリグニン分解法等に関する。
【背景技術】
【０００２】
リグニンは木質バイオマスの構成成分であり、最も分解されにくい物質のひとつである。リグニンを分解する生物としては白色腐朽菌等が知られており、これらの生物により産生されるリグニン分解酵素としてラッカーゼ、リグニンペルオキシダーゼ、マンガンペルオキシダーゼ等が知られている（非特許文献１〜４）。リグニンの分解機構の全容は明らかにされていないが、自然界では白色腐朽菌によるリグニンの部分的酸化分解と細菌群による更なる低分子化が行われていることが示唆されている。リグニン分解酵素群は、木質廃棄物の再資源化、製紙工業由来のパルプ漂白の効率化、染料の分解、及びダイオキシン等の環境汚染物質の浄化等、広く産業応用が期待されている。【０００３】
一方、海洋性真核微生物であるヤブレツボカビ類は、細胞内に著量の油脂を蓄積することが知られている。ヤブレツボカビ類が蓄積する油脂には、ドコサヘキサエン酸等の高度不飽和脂肪酸が高濃度で含まれる（特許文献１）。従来、ヤブレツボカビ類のリグニン分解活性能については検討されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開2005-287380号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, 1991, Vol. 266, pp. 14464-14469
【非特許文献２】木材保存, 1995, Vol. 21-4, pp.163-170
【非特許文献３】Microbiology, 2000, Vol. 146, pp. 759-765
【非特許文献４】Appl. Biochem. Biotechnol., 2011, Vol. 165, pp. 700-718
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
これまでリグニン分解菌として知られているのはほとんどが白色腐朽菌等の真菌類であり、リグニン分解酵素の実用化には至っていないのが現状である。【０００７】
本発明は、リグニン分解能を有する新規な生物を同定し、該生物を用いてリグニン分解酵素を製造すること及びリグニンの分解方法を提供すること等を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題を解決するために、ヤブレツボカビ類（thraustochytrids）をスクリーニングするとともに、その分解酵素の誘導条件について検討した。その結果、ヤブレツボカビ類に分類される微生物、すなわち、アルトルニア(Althornia)属、アプラノキトリウム(Aplanochytrium)属、アウランチオキトリウム(Aurantiochytrium)属、ボツリオキトリウム(Botryochytrium)属、ジャポノキトリウム(Japonochytrium)属、オブロンギキトリウム(Oblongichytrium)属、パリエチキトリウム(Parietichytrium)属、シゾキトリウム(Schizochytrium)属、シソイドキトリウム(Sicyoidochytrium)属、トラウストキトリウム(Thraustochytrium)属、又はウルケニア(Ulkenia)属に属する微生物から選択される少なくとも1種を培養することにより、リグニン分解活性を有するタンパク質を製造できることを見出した。【０００９】
本明細書は本願の優先権の基礎となる日本国特許出願番号2015-003488号の開示内容を包含する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の方法によれば、リグニン分解活性を有するタンパク質を効率的に製造すること、及びリグニンを効率的に分解することが可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図1は、本発明のプレートアッセイの一例を示す。左はRBBR含有培地（表3の培地6）、右はリグニン含有培地（表3の培地8）を用いた場合の結果を示す。
【図２】図2は、Aurantiochytrium limacinum mh0186株の変異株のうち、特に優れたRBBR分解活性を有する7株のRBBR分解活性を示す。縦軸は、RBBRの極大吸収波長である595nmの吸光度を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
一態様において、本発明は、ヤブレツボカビ類に分類される微生物の少なくとも1種を培養し、該微生物にリグニン分解活性を有するタンパク質を生産させる培養工程を含む、リグニン分解活性を有するタンパク質の製造方法に関する。
（リグニン分解活性）
本明細書において「リグニン分解活性」とは、リグニン又はその類似物質を分解する活性をいう。リグニン類似物質として、例えばRemazol Brilliant Blue R (RBBR)、エバンスブルー、アズールB、OrangeIIが挙げられる。
【００１３】
微生物のリグニン分解活性の有無及び強度は、例えば、プレートアッセイによって測定することができる。すなわち、微生物を、リグニン又はリグニン類似物質を含有する培地に播種し、微生物を数日間培養し、生育したコロニー周辺の透明帯（分解帯）又は褐色化（バーベンダム反応）の有無及び大きさを測定する。透明帯又は褐色化の範囲が広いほど、リグニン分解活性が高いことが示唆される。また、微生物を液体培養し、微生物を除いた培養液について、リグニン又はその類似物質の吸光度（例えばRBBRの吸光度である595nm）を測定することにより、リグニン分解活性の有無及び強度を測定することもできる。
【００１４】
微生物が生産したリグニン分解活性を有するタンパク質のリグニン分解活性の有無及び強度は、公知の方法により測定することができる。例えば、上記の微生物と同じプレートアッセイにより測定してもよい。あるいは、タンパク質をリグニン含有溶液に加えてインキュベートし、480nm付近の吸光度からリグニンの脱色を測定してもよいし、275ｎｍ付近の吸光度からリグニンの芳香環の分解を測定してもよい。
（本発明に使用する微生物）
本発明のリグニン分解活性を有するタンパク質の製造方法は、ヤブレツボカビ類（thraustochytrids）に分類される微生物の少なくとも1種を培養し、該微生物にリグニン分解活性を有するタンパク質を生産させる培養工程を含むことを特徴とする。
【００１５】
「ヤブレツボカビ類に分類される微生物」とは、背景技術において説明した通り高度不飽和脂肪酸を産生する海洋性真核微生物である。ヤブレツボカビ類に分類される微生物として、アルトルニア(Althornia)属、アプラノキトリウム(Aplanochytrium)属、アウランチオキトリウム(Aurantiochytrium)属、ボツリオキトリウム(Botryochytrium)属、ジャポノキトリウム(Japonochytrium)属、オブロンギキトリウム(Oblongichytrium)属、パリエチキトリウム(Parietichytrium)属、シゾキトリウム(Schizochytrium)属、シソイドキトリウム(Sicyoidochytrium)属、トラウストキトリウム(Thraustochytrium)属、又はウルケニア(Ulkenia)属に属する微生物が挙げられる。本発明ではヤブレツボカビ類に分類される微生物であり且つリグニン分解活性を有するタンパク質を生産する能力を有する微生物を用いればよい。
【００１６】
ヤブレツボカビ類としては特に、Aplanochytrium属、Aurantiochytrium属、Botryochytrium属、Oblongichytrium属、Parietichytrium属、Schizochytrium属、Sicyoidochytrium属、Thraustochytrium属、又はUlkenia属に属する少なくとも1種の、リグニン分解活性を有するタンパク質を生産する能力を有する微生物が好ましい。
【００１７】
Aplanochytrium属に属しリグニン分解活性を有するタンパク質を生産する能力を有する微生物としては、アプラノキトリウム・ケルグエレンセ(Aplanochytrium kerguelense)に属する少なくとも1種が挙げられる。Aplanochytrium属に属する微生物の具体的な株としては、アプラノキトリウム・ケルグエレンセ SEK535(Aplanochytrium kerguelense SEK535)株が好ましく用いられる。
【００１８】
Aurantiochytrium属に属しリグニン分解活性を有するタンパク質を生産する能力を有する微生物としては、アウランチオキトリウム・リマシナム(Aurantiochytrium limacinum)又はアウランチオキトリウム・マングロベイ(Aurantiochytrium mangrovei)に属する少なくとも1種が挙げられる。Aurantiochytrium属に属する微生物の具体的な株としては、Aurantiochytrium limacinum SR21 ATCC MYA-1381、Aurantiochytrium limacinum mh0186(受託番号FERM BP-11311)、Aurantiochytrium mangrovei SEK243、Aurantiochytrium mangrovei SEK218（受託番号NBRC 103269）、Aurantiochytrium sp. ATCC26185、又はAurantiochytrium sp. ATCC20888が好ましく用いられる。
【００１９】
Botryochytrium属に属しリグニン分解活性を有するタンパク質を生産する能力を有する微生物としては、ボツリオキトリウム・ラジアタム(Botryochytrium radiatum) に属する少なくとも1種が挙げられる。Botryochytrium属に属する微生物の具体的な株としてはBotryochytrium radiatum SEK353（受託番号NBRC 104107）又はBotryochytrium sp. SEK598（受託番号NBRC 110811）が好ましく用いられる。
【００２０】
Oblongichytrium属に属しリグニン分解活性を有するタンパク質を生産する能力を有する微生物の具体的な株としてはOblongichytrium sp. SEK347（受託番号NBRC 102618）又はOblongichytrium sp. SEK600（受託番号NBRC 110833）が好ましく用いられる。
【００２１】
Parietichytrium属に属しリグニン分解活性を有するタンパク質を生産する能力を有する微生物としては、パリエチキトリウム・サルカリアナム(Parietichytrium sarkarianum) に属する少なくとも1種が挙げられる。Parietichytrium属に属する微生物の具体的な株としては、Parietichytrium sarkarianum SEK351（受託番号NBRC 104108）、Parietichytrium sarkarianum SEK364（受託番号FERM BP-11298）、又はParietichytrium sp. SEK358(受託番号FERM BP-11405)が好ましく用いられる。
【００２２】
Schizochytrium属に属しリグニン分解活性を有するタンパク質を生産する能力を有する微生物としては、シゾキトリウム・アグレガタム(Schizochytrium aggregatum)又はシゾキトリウム・リマシナム(Schizochytrium limacinum)に属する少なくとも1種が挙げられる。Schizochytrium属に属する微生物の具体的な株としては、Schizochytrium aggregatum ATCC28209、Schizochytrium sp. SEK210（受託番号NBRC 102615）、又はSchizochytrium sp. SEK345（受託番号NBRC 102616）が好ましく用いられる。
【００２３】
Thraustochytrium属に属しリグニン分解活性を有するタンパク質を生産する能力を有する微生物としては、トラウストキトリウム・アウレウム(Thraustochytrium aureum)、トラウストキトリウム・キネイ(Thraustochytrium kinnei)、トラウストキトリウム・ロゼウム(Thraustochytrium roseum)、又はトラウストキトリウム・ストリアタム(Thraustochytrium striatum)に属する少なくとも1種が挙げられる。Thraustochytrium属に属する微生物の具体的な株としては、Thraustochytrium aureum ATCC34304、Thraustochytrium aureum SEK621（受託番号NBRC 110820）、Thraustochytrium kinnei SEK617（受託番号NBRC 110825）、Thraustochytrium kinnei SEK618（受託番号NBRC 110826）、Thraustochytrium roseum ATCC28210、Thraustochytrium striatum ATCC24473、Thraustochytrium striatum NE03、又はThraustochytrium aff. caudivorum SEK 616（Schizochytrium sp. SEK616と同一である）（受託番号NBRC 110822）が好ましく用いられる。
【００２４】
Ulkenia属に属しリグニン分解活性を有するタンパク質を生産する能力を有する微生物としては、ウルケミア・アモエボイデア(Ulkenia amoeboidea)に属する少なくとも1種が挙げられる。Ulkenia属に属する微生物の具体的な株としては、Ulkenia amoeboidea SEK214（受託番号NBRC 104106）、Ulkenia sp. ATCC28207、又はUlkenia sp. SEK615（受託番号NBRC 110830）が好ましく用いられる。
【００２５】
本発明に用いる微生物の範囲には、現在前記の属又は種に分類されることが明らかになっている微生物だけでなく、現在は他の属又は種に分類されている、或いは分類が明らかでないが、分子進化的には前記の属又は種のいずれかに分類されるべき微生物も含まれる。
【００２６】
上記の具体的な株のうち、Aurantiochytrium limacinum mh0186株(FERM BP-11311)は、特開2005-287380号公報において開示され、ブダペスト条約下の国際寄託機関である独立行政法人 産業技術総合研究所 特許生物寄託センター（〒305-8566日本国茨城県つくば市東1丁目1番地1中央第6）（現：独立行政法人 製品評価技術基盤機構（NITE）特許生物寄託センター（IPOD）、〒292-0818日本国千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8、120号室）に受託番号FERM P-19755として2004年3月29日に国内寄託されているSchizochytrium sp. M-8株を、国際寄託に移管したものである。この菌株は、当該寄託機関から入手可能であり、出願人である宮崎大学からも分譲可能である。FERM P-19755の寄託当時にSchizochytrium属とされていた属が、Schizochytrium属、Aurantiochytrium属及びOblongichytrium属へと再編成された（Rinka Yokoyama, Daiske Honda (2007) MycoscienceTaxonomic rearrangement of the genus Schizochytrium sensu lato based on morphology, chemotaxonomic characteristics, and 18S rRNA gene phylogeny (Thraustochytriaceae, Labyrinthulomycetes): emendation for Schizochytrium and erection of Aurantiochytrium and Oblongichytrium gen. nov. Mycoscience, 48, 199-21）。Aurantiochytrium limacinum mh0186株は、特開2005-287380号公報に開示のSchizochytrium sp. M-8株の取得方法(ヤブレツボカビ科M-8株は以下のようにして取得した。まず、石垣島のマングローブ林で採取した海水・落葉を300ml三角フラスコに入れ、松花粉（ここでは宮崎市周辺海岸にて採取したものを用いた）を約0.05g添加した。室温にて1週間放置し、水面の松花粉を含むように海水を採取し、シャーレ中に調製したポテトデキストロース寒天培地上に0.1mlを塗布した。28℃で5日間培養し、クリーム色でつやのないコロニーをピックアップして新しい寒天培地上に塗布した。3日後、増殖した微生物を顕微鏡下で観察し、ラビリンチュラ類であることを細胞のサイズ、形態から判断してスラント培地に保存した。）にて入手可能である。
【００２７】
Aurantiochytrium limacinum SR21 ATCC MYA-1381、Aurantiochytrium sp. ATCC26185、Aurantiochytrium sp. ATCC20888、Schizochytrium aggregatum ATCC28209、Thraustochytrium aureum ATCC34304、Thraustochytrium roseum ATCC28210、Thraustochytrium striatum ATCC24473、及びUlkenia sp. ATCC28207、は、American Type Culture Collection（ATCC)から一般に入手可能である。
【００２８】
なお、Aurantiochytrium limacinum SR21 ATCC MYA-1381はSchizochytrium limacinum Honda et Yokochi (ATCC MYA-1381) と、Aurantiochytrium sp. ATCC26185 はThraustochytrium sp. (ATCC 26185)と、Aurantiochytrium sp. ATCC20888はSchizochytrium sp. (ATCC 20888)と、Schizochytrium aggregatum ATCC28209はSchizochytrium aggregatum Goldstein et Belsky (ATCC 28209)と、Thraustochytrium aureum ATCC34304はThraustochytrium aureum Goldstein (ATCC 34304)と、Thraustochytrium roseum ATCC28210はThraustochytrium roseum Goldstein (ATCC 28210_TT)と、Thraustochytrium striatum ATCC24473はThraustochytrium striatum Schneider (ATCC 24473)と、Ulkenia sp. ATCC28207はJaponochytrium sp. (ATCC 28207)と、それぞれ同一であり、属又は種の分類を本発明者らが再構築したものである。
【００２９】
Aurantiochytrium mangrovei SEK218（受託番号NBRC 103269）、Botryochytrium radiatum SEK353（受託番号NBRC 104107）、Botryochytrium sp. SEK598（受託番号NBRC 110811）、Oblongichytrium sp. SEK347（受託番号NBRC 102618）、Oblongichytrium sp. SEK600（受託番号NBRC 110833）、Parietichytrium sarkarianum SEK351（受託番号NBRC 104108）、Schizochytrium sp. SEK210（受託番号NBRC 102615）、Schizochytrium sp. SEK345（受託番号NBRC 102616）、Thraustochytrium aff. caudivorum SEK616（受託番号NBRC 110822）、Thraustochytrium aureum SEK621（受託番号NBRC 110820）、Thraustochytrium kinnei SEK617（受託番号NBRC 110825）、Thraustochytrium kinnei SEK618（受託番号NBRC 110826）、Ulkenia amoeboidea SEK214（受託番号NBRC 104106）、及びUlkenia sp. SEK615（受託番号NBRC 110830）は、独立行政法人製品評価技術基盤機構（〒292-0818千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8）に寄託されている。これらの菌株は当該保存機関から一般に入手可能であり、出願人である宮崎大学からも分譲可能である。
【００３０】
Parietichytrium sp. SEK358(受託番号FERM BP-11405)、及びParietichytrium sarkarianum SEK364（受託番号FERM BP-11298）は、それぞれ2011年8月11日及び2010年9月24日を受託日として、ブダペスト条約下の国際寄託機関である独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター（〒305-8566日本国茨城県つくば市東1丁目1番地1中央第6）（現：独立行政法人 製品評価技術基盤機構（NITE）特許生物寄託センター（IPOD）、〒292-0818日本国千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8、120号室）に寄託されている。これらの菌株は、当該寄託機関から入手可能であり、出願人である宮崎大学からも分譲可能である。
【００３１】
Thraustochytrium striatum NE03は本発明者らが鹿児島県の沿岸域にて分離したものである(参考文献：「新奇なアスタキサンチン生産性ラビリンチュラThraustochytrium sp.NE03」著者：長野直樹、田岡洋介、倉村智世、林 雅弘（宮崎大農） 資料名：マリンバイオテクノロジー学会大会講演要旨集 巻：12th ページ：109、 発行年：2009年05月30日)。
【００３２】
本発明に用いる微生物の範囲には、上記具体的な菌株、好ましくはAurantiochytrium limacinum mh0186(受託番号FERM BP-11311)のリグニン分解活性を有するタンパク質を生産する能力を有する変異株が含まれる。上記具体的な菌株の変異株は、リグニン分解活性を有するタンパク質を生産する能力が野生型株と同程度以上であることが好ましく、リグニン分解活性を有するタンパク質を生産する能力が野生型の株よりも高いことが特に好ましい。
【００３３】
変異株は、当業者であれば公知の突然変異誘発方法に基づいて容易に作製することができる。そのような方法として、例えば、放射線処理及び変異原処理が挙げられる。放射線処理の例としてUV照射、ガンマ線照射、X線照射、及び重イオンビーム照射が挙げられ、変異原の例として、エチルメタンスルホネート、N−メチル−N'−ニトロ−N−ニトロソグアニジン、ブロモウラシル等のヌクレオチド塩基類似体、及びアクリジン類が挙げられる。これらの処理を行った後、ランダムにコロニーを単離することにより変異株を得ても良いし、望ましい形質、例えばリグニン分解活性を有するタンパク質を生産する能力に基づいてスクリーニングして変異株を得てもよい。
（微生物の培養）
本発明の方法は、前記微生物を培養し、微生物にリグニン分解活性を有するタンパク質を生産させる培養工程を含むことを特徴とする。
【００３４】
培養工程では、ヤブレツボ類を培養するのに適した固定培地、液体培地等を培地として用いる。培地としては特に限定されないが、通常用いられる培地としては例えばGY培地（日本水産学会誌、68巻、5号、674-678（2002））、B1寒天平板培地（Appl. Microbiol. Biotechnol., 72, 1161-1169 (2006)）等が知られており、これらを適宜使用することができる。
【００３５】
培養工程における培養条件は特に限定されないが、典型的には、前記微生物を適当な培地を用いて1日〜2週間程度、好ましくは2〜12日間、より好ましくは3〜10日間、25〜35℃にて培養する。液体培地の場合には、必要に応じて振とう条件下で培養を行う。培養中の明暗条件は特に限定されないが、通常は暗条件で行う。
【００３６】
本発明者らは、前記微生物を、界面活性剤を含有する培地を用いて培養することで、前記微生物によるリグニン分解活性を有するタンパク質の生産量が顕著に高まることを見出した。界面活性剤は、例えば0.1g/L培地〜10g/L培地、特に0.5g/L培地〜5g/L培地の濃度で使用することができる。本発明に用いられる好ましい界面活性剤としては、非イオン界面活性剤、例えばTween 20（商標）（ポリソルベート20、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート）、Tween 40（商標）（ポリソルベート40、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミテート）、Tween 60（商標）（ポリソルベート60、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート）、Tween 80（商標）（ポリソルベート80、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）、Brij 35（商標）（ポリオキシエチレン（23）ラウリルエーテル）、及びTriton X-100（商標）（ポリ（オキシエチレン）オクチルフェニルエーテル）、特にTween 80が挙げられる。
【００３７】
本発明者らはまた、前記微生物を、貧栄養培地を用いて培養することで、前記微生物によるリグニン分解活性を有するタンパク質の生産量が顕著に高まることを見出した。本明細書において、「貧栄養培地」とはグルコース等の炭素源、ポリペプトン等の窒素源、及び酵母エキス等の生育促進物質等の含有量が低い培地を意味する。炭素源としては、グルコースに加えて、ジャガイモ、麦芽、ニンジンなどの天然物の抽出物、並びにマルトース、スクロース、ラクトース、アミロースなどの糖類、エタノール及びグリセロール等のアルコール類が挙げられる。窒素源としては、ポリペプトンの他に、硫酸アンモニウム等の無機アンモニウム塩、クエン酸アンモニウム等の有機酸アンモニウム塩、硝酸ナトリウム等の硝酸塩が挙げられる。生育促進物質としては、酵母エキスの他に、肉エキス及び麦芽エキス等が挙げられる。例えば、本明細書における「貧栄養培地」は、ポリペプトン等の窒素源濃度、グルコース等の炭素源濃度、及び酵母エキス等の生育促進物質濃度の少なくともいずれか1つ、好ましくは窒素源、炭素源、及び生育促進物の全ての濃度が低い培地である。窒素源、炭素源、及び生育促進物質の好ましい濃度は、例えば1.0g/L培地以下、好ましくは0.5g/L培地以下、特に好ましくは0.1g/L培地以下である。一方で、窒素源、炭素源、及び生育促進物質は、微生物の増殖を促進するのに必要な程度培地中に含まれていることが好ましい。窒素源、炭素源、及び生育促進物質の好ましい濃度は、例えば0.001g/L培地以上、好ましくは0.005g/L培地以上、特に好ましくは0.01g/L培地以上である。したがって、窒素源濃度は、例えば0.001ｇ/L〜1.0g/L培地、好ましくは0.005g/L〜0.5g/L培地、特に好ましくは0.01g/L〜0.1g/L培地であり、炭素源濃度は、例えば0.001ｇ/L〜1.0g/L培地、好ましくは0.005g/L〜0.5g/L培地、特に好ましくは0.01g/L〜0.1g/L培地であり、生育促進物質濃度は、例えば0.001ｇ/L〜1.0g/L培地、好ましくは0.005g/L〜0.5g/L培地、特に好ましくは0.01g/L〜0.1g/L培地である。
【００３８】
別の実施形態において、前記微生物は、富栄養培地を用いて培養してもよい。本明細書において、「富栄養培地」とはグルコース等の炭素源、ポリペプトン等の窒素源、及び酵母エキス等の生育促進物質等の含有量が高い培地を意味する。例えば、本明細書における「富栄養培地」は、窒素源濃度、炭素源濃度、及び生育促進物質濃度の少なくともいずれか1つ、好ましくは窒素源、炭素源、及び生育促進物質の全ての濃度が高い培地である。富栄養培地における窒素源、炭素源、及び生育促進物質の好ましい濃度は、例えば1.0g/L培地以上、好ましくは1.5g/L培地以上、特に好ましくは2.0g/L培地以上である。富栄養培地における窒素源、炭素源、及び生育促進物質の上限は特に限定しないが、例えば50.0g/L培地以下、20.0g/L培地以下、好ましくは10.0g/L培地以下、9.0g/L培地以下、8.0g/L培地以下、7.0g/L培地以下、6.0g/L培地以下、特に好ましくは5.0g/L培地以下である。したがって、窒素源濃度は、例えば1.0g/L〜20.0g/L培地、好ましくは1.5g/L〜10.0g/L培地、特に好ましくは2.0g/L〜5.0g/L培地であり、炭素源濃度は、例えば1.0g/L〜20.0g/L培地、好ましくは1.5g/L〜10.0g/L培地、特に好ましくは2.0g/L〜5.0g/L培地であり、生育促進物質濃度は、例えば1.0g/L〜20.0g/L培地、好ましくは1.5g/L〜10.0g/L培地、特に好ましくは2.0g/L〜5.0g/L培地である。
【００３９】
培地は、さらにリグニン又はリグニン類似物質を含むことが好ましい。リグニン又はRBBR等のリグニン類似物質は、例えば0.1g/L培地〜10g/L培地、特に0.3g/L培地〜1g/L培地の濃度で使用することができる。
【００４０】
培地は、必要に応じて、ビタミン混合溶液及び微量元素を含んでよい。ビタミン混合溶液及び微量元素は、例えば0.1ml/L培地〜10ml/L培地、特に0.5ml/L培地〜5ml/L培地の濃度で使用することができる。
（タンパク質の回収）
本発明のリグニン分解活性を有するタンパク質の製造方法は、任意にリグニン分解活性を有するタンパク質を回収又は単離する工程を含んでもよい。本発明の方法はタンパク質を回収又は単離する工程を含まなくてもよく、この場合、前記微生物の培養物、培養上清画分、菌体含有画分、菌体破砕物、菌体抽出液(粗酵素抽出液)等に含まれた状態のリグニン分解活性を有するタンパク質をそのまま利用することができる。培養された微生物が生産するリグニン分解活性を有するタンパク質が前記微生物の体内に蓄積する場合、微生物の培養物、菌体含有画分、菌体破砕物、菌体抽出液等を本発明の方法に用いることができ、前記微生物の体外に分泌される場合には、培養上清画分を本発明の方法に用いることができる。
【００４１】
前記微生物の培養物、培養上清画分、菌体含有画分、菌体破砕物、菌体抽出液(粗酵素抽出液)等から、より高濃度のリグニン分解活性を有するタンパク質を回収又は単離する手段としては、ゲル濾過、イオン交換クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー等の各種クロマトグラフィー、硫安分画、硫酸ナトリウム分画、塩化ナトリウム分画等の塩析、透析、あるいは等電点電気泳動等の一般的な手段を1つ又は複数組み合わせて使用できる。このとき、リグニン分解活性の存在を指標として、リグニン分解活性を有するタンパク質を高濃度化することができる。
【００４２】
本発明により得られるリグニン分解活性を有するタンパク質は、リグニン分解処理を必要とする産業、例えば木質廃棄物の再資源化、製紙工業由来のパルプ漂白の効率化、染料の分解、及びダイオキシン等環境汚染物質の浄化等に利用することができる。
（リグニンの分解方法、及び本発明の微生物のリグニンの分解における使用）
一態様において、本発明は、ヤブレツボカビ類に分類される微生物の少なくとも1種、又は該微生物により生産されるリグニン分解活性を有するタンパク質をリグニンに作用させてリグニンを分解する工程を含む、リグニンの分解方法に関する。本発明のリグニンの分解方法は、ヤブレツボカビ類に分類される微生物の少なくとも1種をリグニン含有材料とともに培養し、該微生物にリグニン分解活性を有するタンパク質を生産させ、該材料中のリグニンに該タンパク質を直接作用させることにより行ってもよい。また、本発明のリグニンの分解方法は、上記製造方法によって得られたリグニン分解活性を有するタンパク質を、リグニン含有材料と混合して作用させることにより行ってよい。
【００４３】
リグニン含有材料は、リグニンを含むものであれば特に限定せず、固体又は液体のいずれであってもよい。リグニン含有材料上又は中で微生物を培養して作用させる場合には、リグニン含有材料は、上記「微生物の培養」で記載した成分、例えば界面活性剤、炭素源、窒素源、及び生育促進物質等を含むことが好ましい。回収又は単離されたタンパク質にリグニン含有材料を作用させる場合には、リグニン分解に好適な条件を保つため、リグニン含有材料は、緩衝液等を含むことが好ましい。
【００４４】
本発明の方法の分解工程の条件は、リグニン分解活性を有するタンパク質がリグニンに作用する限り、特に限定しない。例えば、数10分〜2週間程度、好ましくは数時間〜数日、又は1日〜3日程度、適切な温度・pH条件下でインキュベートすることができる。温度条件として、例えば10℃〜40℃、15℃〜35℃、好ましくは20℃〜30℃が挙げられ、pH条件として、例えばpH5〜9、6〜8、好ましくは6.5〜7.5が挙げられる。リグニン含有材料が液体の場合には、必要に応じて振とう条件下でインキュベーションを行う。インキュベーション中の明暗条件は特に限定されないが、通常は暗条件で行う。
【００４５】
別の態様において、本発明は、ヤブレツボカビ類に分類される微生物の少なくとも1種、又は該微生物に生産されるリグニン分解活性を有するタンパク質の、リグニンの分解における使用又はリグニンの分解方法における使用に関する。
【００４６】
本発明のリグニンの分解方法、及びリグニンの分解若しくはリグニンの分解方法における使用において用いられる微生物の種類は、上記の通りであるからここでは記載を省略する。
（タンパク質の製造に用いるための、又はリグニンの分解に用いるための組成物）
一態様において、本発明は、本明細書に記載されるヤブレツボカビ類に分類される微生物の少なくとも1種を含む、リグニン分解活性を有するタンパク質の製造に用いるための、又はリグニンの分解に用いるための組成物に関する。本発明の組成物は、好ましくは、ヤブレツボカビ類に分類される微生物の少なくとも1種に加えて、界面活性剤、並びに／又はグルコース等の炭素源、ポリペプトン等の窒素源、及び酵母エキス等の生育促進物質等を含む。本発明の組成物に含まれ得る界面活性剤の種類及び量、並びにグルコース、ポリペプトン、及び酵母エキスの量は上記「微生物の培養」において記載した通りであるからここでは記載を省略する（但し、上記の濃度は、本組成物を他の液体に添加した後の終濃度とする。本発明の組成物が希釈されて用いられる場合には、その希釈倍率に応じて、本発明の組成物における上記成分の濃度は、例えば上記濃度の数倍〜数百倍、好ましくは数倍〜数十倍の濃度であってよい）。本発明の組成物は、必要に応じて、さらにリグニン又はリグニン類似物質、ビタミン混合溶液及び微量元素を含んでよい。これらの成分の量についても上記の通りであるからここでは記載を省略する（但し、上記の濃度は、本組成物を他の液体に添加した後の終濃度とする。本発明の組成物が希釈されて用いられる場合には、その希釈倍率に応じて、本発明の組成物における上記成分の濃度は、例えば、上記濃度の数倍〜数百倍、好ましくは数倍〜数十倍の濃度であってよい）。
【００４７】
本発明の組成物は、直接リグニンを含む固体上又は液体中に添加して用いてもよいし、必要に応じて水又は緩衝液等の媒体に懸濁及び／又は希釈してリグニンを含む固体上又は液体中に添加して用いてもよい。
【００４８】
以下に本発明の実施例を記載するが、本発明はこれらに何ら限定されるものではない。
【実施例】
【００４９】
＜実施例１：様々な培地におけるヤブレツボカビ類のリグニン又はRBBR分解活性＞
１）培地の調製とプレートアッセイの方法
リグニン類似物質であるRemazol Brilliant Blue R (RBBR)（ナカライテスク）もしくはリグニン（ナカライテスク）、Tween 80（ナカライテスク）、ポリペプトン、酵母エキス（ナカライテスク）、グルコース（ナカライテスク）、寒天末（ナカライテスク）、ビタミン混合溶液（組成を以下の表1に示す）、微量元素（組成を以下の表2に示す）を、1Lの50%人工海水（ASW）（pH6.8）に溶解して、以下の表3に従って、培地1〜8を調製した。【００５０】
【表１】
2016111368.tif 000002
【００５１】
【表２】
2016111368.tif 000003
【００５２】
【表３】
2016111368.tif 000004
【００５３】
B1寒天培地（酵母エキス0.2g、ポリペプトン0.2g、グルコース0.5g、ビタミン混合溶液0.1ml、寒天1.5g、50% ASW 100ｍL [pH 6.8]）上で生育（28℃、4−7日間）させたヤブレツボカビ類28株の各コロニーを白金線で採取し、上記の通り調製した培地1〜8に播種した。その後、培地を28℃で7日間インキュベートし、生育したコロニー周辺の透明帯（分解帯）及び褐色化（バーベンダム反応）を観察した。分解帯及び褐色化が認められなかったものは−、不明瞭だが分解帯又は黒色化が認められたものは＋とし、明瞭な分解帯又は褐色化が認められたものについては、その大きさ（mm、平均値±標準偏差（n =3））を計測した。
２）結果
上記プレートアッセイの一例を、図1に示す。また、全供試株における結果を以下の表4に示す。【００５４】
【表４】
2016111368.tif 000005
【００５５】
培地1及び2では28株の全てがRBBR分解活性を示さなかった。培地3では28株中24株でコロニー周辺に透明帯が確認され、RBBR分解活性が確認された。培地4では微弱ながらも、19株においてRBBR分解活性が確認できた。培地5では28株全てにおいてRBBR分解活性が確認された。培地6では19株においてRBBR分解活性が確認された。【００５６】
培地7では28株の全てがリグニン分解活性を示さなかった。培地8においては27株においてコロニー周辺に褐色化が確認され、リグニン分解活性が確認された。
＜実施例２：Aurantiochytrium limacinum mh0186株の変異株のRBBR分解活性＞
１）方法
UV照射処理
アウランチオキトリウム・リマシナム mh0186(Aurantiochytrium limacinum mh0186)株を、GY培地20 mlを含む100 mlバッフル付き三角フラスコで72時間、28℃で前培養した。前培養した菌株を、GY培地へ植継ぎ、同条件で72時間培養を行った。培養液を全て回収し、滅菌50%ASWにて培養細胞を2回遠心洗浄（5,000 g×5 min）した。洗浄した培養細胞を滅菌50%ASWにて20 mlにメスアップした後、100 mlバッフル付き三角フラスコにおいて28℃で一晩培養した。1.5 mlマイクロチューブに培養液を1.0 ml回収し、500 g、5分間の低速遠心処理後10分間静置した。上清回収後、滅菌50%ASWに懸濁した細菌102〜106cellsをB1寒天培地に塗布した。照射距離5、10 cm及び照射時間0、5、10、15、30秒の組み合わせで、AS ONE Handy UV lamp SLUV-6（アズワン株式会社、大阪、日本）を用いてプレートにUV照射（254 nm）した。UV照射後、プレートを72時間、28℃、暗条件下で培養後、プレート上に生育したコロニーをカウントし、UV未照射処理（コントロール区）と比較して死滅率を算出した。生じたコロニーはB1寒天培地上で3回画線し、UV照射株として純化した。
96穴マイクロプレートを用いたRBBR分解スクリーニング試験
96穴マイクロプレートの各ウェルに100μlのRBBR含有液体培地（上記表3に示す培地3の組成から寒天、ビタミン液、微量元素を除いたもの）を無菌的に添加した。上記のUV照射株をB1寒天培地にて28℃で72時間培養し、プレート上に生じたコロニーを１エーゼ白金耳でかきとり、各ウェルに懸濁させた。マイクロプレートをマイクロプレーシェイカーにて500rpmで攪拌しながら28℃で48時間培養した。培養後、各ウェルの培養液を回収し、遠心分離した。マイクロプレートリーダーを用い、上清液のRBBRの極大吸収波長である595nmの吸光度を測定することで、RBBRの分解レベルを評価した。
２）結果
UVを5cm、10秒間で処理した区において、99.8％の死滅率を示した。本試験区で生育したコロニーを純化し、得られた78株をUV照射株とした。【００５７】
UV照射株を培養後の上清液のRBBR極大吸収波長である595nmの吸光度を測定した結果を以下の表5に、特に顕著な吸光度の減少が認められた7株の結果を図2に示す。【００５８】
【表５】
2016111368.tif 000006
【００５９】
変異株の多くで吸光度の減少が認められ、特に照射株7株（#25株、#29株、#39株、#47株、#64株、#71株、#74株）において顕著な吸光度の減少が見られた。以上の通り、RBBRの分解活性を有する変異株を得ることができた。【００６０】
本明細書で引用した全ての刊行物、特許及び特許出願はそのまま引用により本明細書に組み入れられるものとする。
【図１】
2016111368.tif 000007
【図２】
2016111368.tif 000008
【手続補正書】
【提出日】平成28年6月21日(2016.6.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヤブレツボカビ類に分類される微生物の少なくとも１種を培養し、該微生物にリグニン分解活性を有するタンパク質を生産させる培養工程を含む、リグニン分解活性を有するタンパク質の製造方法であって、
前記微生物が、アウランチオキトリウム  ｓｐ．ＡＴＣＣ２０８８８（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．ＡＴＣＣ２０８８８）株、アウランチオキトリウム  ｓｐ．ＡＴＣＣ２６１８５（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．ＡＴＣＣ２６１８５）株、ウルケニア・アモエボイデア  ＳＥＫ２１４（Ｕｌｋｅｎｉａ  ａｍｏｅｂｏｉｄｅａ  ＳＥＫ２１４）株、トラウストキトリウム・キネイ  ＳＥＫ６１８（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｋｉｎｎｅｉ  ＳＥＫ６１８）株、ウルケニア  ｓｐ．ＡＴＣＣ２８２０７（Ｕｌｋｅｎｉａ  ｓｐ．ＡＴＣＣ２８２０７）株、アウランチオキトリウム・リマシナム  ｍｈ０１８６（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｌｉｍａｃｉｎｕｍ  ｍｈ０１８６）株（ＦＥＲＭＢＰ−１１３１１）、トラウストキトリウム・キネイ  ＳＥＫ６１７（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｋｉｎｎｅｉ  ＳＥＫ６１７）株、トラウストキトリウム・ストリアタム  ＡＴＣＣ２４４７３（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｔｒｉａｔｕｍ  ＡＴＣＣ２４４７３）株、アウランチオキトリウム・マングロベイ  ＳＥＫ２１８（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ  ＳＥＫ２１８）株、オブロンギキトリウム  ｓｐ．ＳＥＫ３４７（Ｏｂｌｏｎｇｉｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．ＳＥＫ３４７）株、ウルケニア  ｓｐ．ＳＥＫ６１５（Ｕｌｋｅｎｉａ  ｓｐ．ＳＥＫ６１５）株、シゾキトリウム・アグレガタム  ＡＴＣＣ２８２０９（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ａｇｇｒｅｇａｔｕｍ  ＡＴＣＣ２８２０９）株、トラウストキトリウム・アウレウム  ＡＴＣＣ３４３０４（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ａｕｒｅｕｍ  ＡＴＣＣ３４３０４）株、トラウストキトリウム・ロゼウム  ＡＴＣＣ２８２１０（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｒｏｓｅｕｍ  ＡＴＣＣ２８２１０）株、オブロンギキトリウム  ｓｐ  ＳＥＫ６００（Ｏｂｌｏｎｇｉｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．ＳＥＫ６００）株、ボツリオキトリウム  ｓｐ．ＳＥＫ５９８（Ｂｏｔｒｙｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．ＳＥＫ５９８）株、シゾキトリウム  ｓｐ．ＳＥＫ２１０（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．ＳＥＫ２１０）株、シゾキトリウム  ｓｐ．ＳＥＫ３４５（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．ＳＥＫ３４５）株、トラウストキトリウム・アウレウム  ＳＥＫ６２１（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ａｕｒｅｕｍ  ＳＥＫ６２１）株、トラウストキトリウム・アフ・カウディボラム  ＳＥＫ６１６（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ａｆｆ．ｃａｕｄｉｖｏｒｕｍ  ＳＥＫ  ６１６）株、ボツリオキトリウム・ラジアタム  ＳＥＫ３５３（Ｂｏｔｒｙｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｒａｄｉａｔｕｍ  ＳＥＫ３５３）株、パリエチキトリウム・サルカリアナム  ＳＥＫ３５１（Ｐａｒｉｅｔｉｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓａｒｋａｒｉａｎｕｍ  ＳＥＫ３５１）株、パリエチキトリウム・サルカリアナム  ＳＥＫ３６４（Ｐａｒｉｅｔｉｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓａｒｋａｒｉａｎｕｍ  ＳＥＫ３６４）株、及びパリエチキトリウム  ｓｐ．ＳＥＫ３５８（Ｐａｒｉｅｔｉｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．ＳＥＫ３５８）株、並びにこれらの株の、リグニン分解活性を有するタンパク質を生産する能力を有する変異株から選���される少なくとも１種である、方法。
【請求項２】
（削除）
【請求項３】
（削除）
【請求項４】
（削除）
【請求項５】
前記培養工程が、界面活性剤を含有する培地を用いて前記微生物を培養する工程である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
界面活性剤がＴｗｅｅｎ  ８０（商標）である、請求項５の方法。
【請求項７】
前記培養工程が、ポリペプトン濃度１．０ｇ／Ｌ以下、グルコース濃度１．０ｇ／Ｌ以下、及び／又は酵母エキス濃度１．０ｇ／Ｌ以下である培地を用いて前記微生物を培養する工程である、請求項１、５、及び６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記培養工程が、ポリペプトン濃度１．０ｇ／Ｌ以上、グルコース濃度１．０ｇ／Ｌ以上、及び／又は酵母エキス濃度１．０ｇ／Ｌ以上である培地を用いて前記微生物を培養する工程である、請求項１、５、及び６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
ヤブレツボカビ類に分類される微生物の少なくとも１種、又は該微生物により生産されるリグニン分解活性を有するタンパク質をリグニンに作用させてリグニンを分解する工程を含む、リグニンの分解方法であって、
前記微生物が、アウランチオキトリウム  ｓｐ．ＡＴＣＣ２０８８８（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．ＡＴＣＣ２０８８８）株、アウランチオキトリウム  ｓｐ．ＡＴＣＣ２６１８５（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．ＡＴＣＣ２６１８５）株、ウルケニア・アモエボイデア  ＳＥＫ２１４（Ｕｌｋｅｎｉａ  ａｍｏｅｂｏｉｄｅａ  ＳＥＫ２１４）株、トラウストキトリウム・キネイ  ＳＥＫ６１８（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｋｉｎｎｅｉ  ＳＥＫ６１８）株、ウルケニア  ｓｐ．ＡＴＣＣ２８２０７（Ｕｌｋｅｎｉａ  ｓｐ．ＡＴＣＣ２８２０７）株、アウランチオキトリウム・リマシナム  ｍｈ０１８６（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｌｉｍａｃｉｎｕｍ  ｍｈ０１８６）株（ＦＥＲＭＢＰ−１１３１１）、トラウストキトリウム・キネイ  ＳＥＫ６１７（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｋｉｎｎｅｉ  ＳＥＫ６１７）株、トラウストキトリウム・ストリアタム  ＡＴＣＣ２４４７３（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｔｒｉａｔｕｍ  ＡＴＣＣ２４４７３）株、アウランチオキトリウム・マングロベイ  ＳＥＫ２１８（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ  ＳＥＫ２１８）株、オブロンギキトリウム  ｓｐ．ＳＥＫ３４７（Ｏｂｌｏｎｇｉｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．ＳＥＫ３４７）株、ウルケニア  ｓｐ．ＳＥＫ６１５（Ｕｌｋｅｎｉａ  ｓｐ．ＳＥＫ６１５）株、シゾキトリウム・アグレガタム  ＡＴＣＣ２８２０９（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ａｇｇｒｅｇａｔｕｍ  ＡＴＣＣ２８２０９）株、トラウストキトリウム・アウレウムＡＴＣＣ３４３０４（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ａｕｒｅｕｍ  ＡＴＣＣ３４３０４）株、トラウストキトリウム・ロゼウム  ＡＴＣＣ２８２１０（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｒｏｓｅｕｍ  ＡＴＣＣ２８２１０）株、オブロンギキトリウム  ｓｐ  ＳＥＫ６００（Ｏｂｌｏｎｇｉｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．ＳＥＫ６００）株、ボツリオキトリウム  ｓｐ．ＳＥＫ５９８（Ｂｏｔｒｙｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．ＳＥＫ５９８）株、シゾキトリウム  ｓｐ．ＳＥＫ２１０（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．ＳＥＫ２１０）株、シゾキトリウム  ｓｐ．ＳＥＫ３４５（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．ＳＥＫ３４５）株、トラウストキトリウム・アウレウム  ＳＥＫ６２１（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ａｕｒｅｕｍ  ＳＥＫ６２１）株、トラウストキトリウム・アフ・カウディボラム  ＳＥＫ６１６（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ａｆｆ．ｃａｕｄｉｖｏｒｕｍ  ＳＥＫ  ６１６）株、ボツリオキトリウム・ラジアタム  ＳＥＫ３５３（Ｂｏｔｒｙｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｒａｄｉａｔｕｍ  ＳＥＫ３５３）株、パリエチキトリウム・サルカリアナム  ＳＥＫ３５１（Ｐａｒｉｅｔｉｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓａｒｋａｒｉａｎｕｍ  ＳＥＫ３５１）株、パリエチキトリウム・サルカリアナム  ＳＥＫ３６４（Ｐａｒｉｅｔｉｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓａｒｋａｒｉａｎｕｍ  ＳＥＫ３６４）株、及びパリエチキトリウム  ｓｐ．ＳＥＫ３５８（Ｐａｒｉｅｔｉｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．ＳＥＫ３５８）株、並びにこれらの株の、リグニン分解活性を有するタンパク質を生産する能力を有する変異株から選択される少なくとも１種である、方法。
【請求項１０】
ヤブレツボカビ類に分類される微生物の少なくとも１種、又は該微生物に生産されるリグニン分解活性を有するタンパク質の、リグニンの分解における使用であって、
前記微生物が、アウランチオキトリウム  ｓｐ．ＡＴＣＣ２０８８８（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．ＡＴＣＣ２０８８８）株、アウランチオキトリウム  ｓｐ．ＡＴＣＣ２６１８５（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．ＡＴＣＣ２６１８５）株、ウルケニア・アモエボイデア  ＳＥＫ２１４（Ｕｌｋｅｎｉａ  ａｍｏｅｂｏｉｄｅａ  ＳＥＫ２１４）株、トラウストキトリウム・キネイ  ＳＥＫ６１８（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｋｉｎｎｅｉ  ＳＥＫ６１８）株、ウルケニア  ｓｐ．ＡＴＣＣ２８２０７（Ｕｌｋｅｎｉａ  ｓｐ．ＡＴＣＣ２８２０７）株、アウランチオキトリウム・リマシナム  ｍｈ０１８６（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｌｉｍａｃｉｎｕｍ  ｍｈ０１８６）株（ＦＥＲＭＢＰ−１１３１１）、トラウストキトリウム・キネイ  ＳＥＫ６１７（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｋｉｎｎｅｉ  ＳＥＫ６１７）株、トラウストキトリウム・ストリアタム  ＡＴＣＣ２４４７３（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｔｒｉａｔｕｍ  ＡＴＣＣ２４４７３）株、アウランチオキトリウム・マングロベイ  ＳＥＫ２１８（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｍａｎｇｒｏｖｅｉ  ＳＥＫ２１８）株、オブロンギキトリウム  ｓｐ．ＳＥＫ３４７（Ｏｂｌｏｎｇｉｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．ＳＥＫ３４７）株、ウルケニア  ｓｐ．ＳＥＫ６１５（Ｕｌｋｅｎｉａ  ｓｐ．ＳＥＫ６１５）株、シゾキトリウム・アグレガタム  ＡＴＣＣ２８２０９（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ａｇｇｒｅｇａｔｕｍ  ＡＴＣＣ２８２０９）株、トラウストキトリウム・アウレウム  ＡＴＣＣ３４３０４（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ａｕｒｅｕｍ  ＡＴＣＣ３４３０４）株、トラウストキトリウム・ロゼウム  ＡＴＣＣ２８２１０（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｒｏｓｅｕｍ  ＡＴＣＣ２８２１０）株、オブロンギキトリウム  ｓｐ  ＳＥＫ６００（Ｏｂｌｏｎｇｉｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．ＳＥＫ６００）株、ボツリオキトリウム  ｓｐ．ＳＥＫ５９８（Ｂｏｔｒｙｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．ＳＥＫ５９８）株、シゾキトリウム  ｓｐ．ＳＥＫ２１０（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．ＳＥＫ２１０）株、シゾキトリウム  ｓｐ．ＳＥＫ３４５（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．ＳＥＫ３４５）株、トラウストキトリウム・アウレウム  ＳＥＫ６２１（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ａｕｒｅｕｍ  ＳＥＫ６２１）株、トラウストキトリウム・アフ・カウディボラム  ＳＥＫ６１６（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ａｆｆ．ｃａｕｄｉｖｏｒｕｍ  ＳＥＫ  ６１６）株、ボツリオキトリウム・ラジアタム  ＳＥＫ３５３（Ｂｏｔｒｙｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｒａｄｉａｔｕｍ  ＳＥＫ３５３）株、パリエチキトリウム・サルカリアナム  ＳＥＫ３５１（Ｐａｒｉｅｔｉｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓａｒｋａｒｉａｎｕｍ  ＳＥＫ３５１）株、パリエチキトリウム・サルカリアナム  ＳＥＫ３６４（Ｐａｒｉｅｔｉｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓａｒｋａｒｉａｎｕｍ  ＳＥＫ３６４）株、及びパリエチキトリウム  ｓｐ．ＳＥＫ３５８（Ｐａｒｉｅｔｉｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．ＳＥＫ３５８）株、並びにこれらの株の、リグニン分解活性を有するタンパク質を生産する能力を有する変異株から選���される少なくとも１種である、使用。
【手続補正書】
【提出日】平成29年7月10日(2017.7.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヤブレツボカビ類に分類される微生物の少なくとも1種を培養し、該微生物にリグニン分解活性を有するタンパク質を生産させる培養工程を含む、リグニン分解活性を有するタンパク質の製造方法であって、
前記微生物が、アウランチオキトリウム sp. ATCC20888(Aurantiochytrium sp. ATCC20888)株、アウランチオキトリウム sp. ATCC26185(Aurantiochytrium sp. ATCC26185)株、ウルケニア・アモエボイデア SEK214(Ulkenia amoeboidea SEK214)株、トラウストキトリウム・キネイ SEK618(Thraustochytrium kinnei SEK618)株、ウルケニア sp. ATCC28207(Ulkenia sp. ATCC28207)株、アウランチオキトリウム・リマシナム mh0186(Aurantiochytrium limacinum mh0186)株(FERM BP-11311)、トラウストキトリウム・キネイ SEK617(Thraustochytrium kinnei SEK617)株、トラウストキトリウム・ストリアタム ATCC24473(Thraustochytrium striatum ATCC24473)株、アウランチオキトリウム・マングロベイSEK218(Aurantiochytrium mangrovei SEK218)株、オブロンギキトリウムsp. SEK347(Oblongichytrium sp. SEK347)株、ウルケニア sp. SEK615(Ulkenia sp. SEK615)株、シゾキトリウム・アグレガタムATCC28209(Schizochytrium aggregatum ATCC28209)株、トラウストキトリウム・アウレウム ATCC34304(Thraustochytrium aureum ATCC34304)株、トラウストキトリウム・ロゼウム ATCC28210(Thraustochytrium roseum ATCC28210)株、オブロンギキトリウム sp SEK600(Oblongichytrium sp. SEK600)株、ボツリオキトリウム sp. SEK598(Botryochytrium sp. SEK598)株、シゾキトリウム sp. SEK210(Schizochytrium sp. SEK210)株、シゾキトリウム sp. SEK345(Schizochytrium sp. SEK345)株、トラウストキトリウム・アウレウム SEK621(Thraustochytrium aureum SEK621)株、トラウストキトリウム・アフ・カウディボラム SEK616(Thraustochytrium aff. caudivorum SEK 616)株、ボツリオキトリウム・ラジアタム SEK353(Botryochytrium radiatum SEK353)株、パリエチキトリウム・サルカリアナム SEK351(Parietichytrium sarkarianum SEK351)株、パリエチキトリウム・サルカリアナム SEK364(Parietichytrium sarkarianum SEK364)株、及びパリエチキトリウム sp. SEK358(Parietichytrium sp. SEK358)株、並びにこれらの株の、リグニン分解活性を有するタンパク質を生産する能力を有する変異株から選択される少なくとも1種である、方法。
【請求項２】
前記培養工程が、界面活性剤を含有する培地を用いて前記微生物を培養する工程である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
界面活性剤がTween 80（商標）である、請求項２の方法。
【請求項４】
前記培養工程が、ポリペプトン濃度1.0g/L以下、グルコース濃度1.0g/L以下、及び／又は酵母エキス濃度1.0g/L以下である培地を用いて前記微生物を培養する工程である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記培養工程が、ポリペプトン濃度1.0g/L以上、グルコース濃度1.0g/L以上、及び／又は酵母エキス濃度1.0g/L以上である培地を用いて前記微生物を培養する工程である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
ヤブレツボカビ類に分類される微生物の少なくとも1種、又は該微生物により生産されるリグニン分解活性を有するタンパク質をリグニンに作用させてリグニンを分解する工程を含む、リグニンの分解方法であって、
前記微生物が、アウランチオキトリウム sp. ATCC20888(Aurantiochytrium sp. ATCC20888)株、アウランチオキトリウム sp. ATCC26185(Aurantiochytrium sp. ATCC26185)株、ウルケニア・アモエボイデア SEK214(Ulkenia amoeboidea SEK214)株、トラウストキトリウム・キネイ SEK618(Thraustochytrium kinnei SEK618)株、ウルケニア sp. ATCC28207(Ulkenia sp. ATCC28207)株、アウランチオキトリウム・リマシナム mh0186(Aurantiochytrium limacinum mh0186)株(FERM BP-11311)、トラウストキトリウム・キネイ SEK617(Thraustochytrium kinnei SEK617)株、トラウストキトリウム・ストリアタム ATCC24473(Thraustochytrium striatum ATCC24473)株、アウランチオキトリウム・マングロベイSEK218(Aurantiochytrium mangrovei SEK218)株、オブロンギキトリウムsp. SEK347(Oblongichytrium sp. SEK347)株、ウルケニア sp. SEK615(Ulkenia sp. SEK615)株、シゾキトリウム・アグレガタムATCC28209(Schizochytrium aggregatum ATCC28209)株、トラウストキトリウム・アウレウム ATCC34304(Thraustochytrium aureum ATCC34304)株、トラウストキトリウム・ロゼウム ATCC28210(Thraustochytrium roseum ATCC28210)株、オブロンギキトリウム sp SEK600(Oblongichytrium sp. SEK600)株、ボツリオキトリウム sp. SEK598(Botryochytrium sp. SEK598)株、シゾキトリウム sp. SEK210(Schizochytrium sp. SEK210)株、シゾキトリウム sp. SEK345(Schizochytrium sp. SEK345)株、トラウストキトリウム・アウレウム SEK621(Thraustochytrium aureum SEK621)株、トラウストキトリウム・アフ・カウディボラム SEK616(Thraustochytrium aff. caudivorum SEK 616)株、ボツリオキトリウム・ラジアタム SEK353(Botryochytrium radiatum SEK353)株、パリエチキトリウム・サルカリアナム SEK351(Parietichytrium sarkarianum SEK351)株、パリエチキトリウム・サルカリアナム SEK364(Parietichytrium sarkarianum SEK364)株、及びパリエチキトリウム sp. SEK358(Parietichytrium sp. SEK358)株、並びにこれらの株の、リグニン分解活性を有するタンパク質を生産する能力を有する変異株から選択される少なくとも1種である、方法。
【請求項７】
ヤブレツボカビ類に分類される微生物の少なくとも1種、又は該微生物に生産されるリグニン分解活性を有するタンパク質の、リグニンの分解における使用であって、
前記微生物が、アウランチオキトリウム sp. ATCC20888(Aurantiochytrium sp. ATCC20888)株、アウランチオキトリウム sp. ATCC26185(Aurantiochytrium sp. ATCC26185)株、ウルケニア・アモエボイデア SEK214(Ulkenia amoeboidea SEK214)株、トラウストキトリウム・キネイ SEK618(Thraustochytrium kinnei SEK618)株、ウルケニア sp. ATCC28207(Ulkenia sp. ATCC28207)株、アウランチオキトリウム・リマシナム mh0186(Aurantiochytrium limacinum mh0186)株(FERM BP-11311)、トラウストキトリウム・キネイ SEK617(Thraustochytrium kinnei SEK617)株、トラウストキトリウム・ストリアタム ATCC24473(Thraustochytrium striatum ATCC24473)株、アウランチオキトリウム・マングロベイSEK218(Aurantiochytrium mangrovei SEK218)株、オブロンギキトリウムsp. SEK347(Oblongichytrium sp. SEK347)株、ウルケニア sp. SEK615(Ulkenia sp. SEK615)株、シゾキトリウム・アグレガタムATCC28209(Schizochytrium aggregatum ATCC28209)株、トラウストキトリウム・アウレウム ATCC34304(Thraustochytrium aureum ATCC34304)株、トラウストキトリウム・ロゼウム ATCC28210(Thraustochytrium roseum ATCC28210)株、オブロンギキトリウム sp SEK600(Oblongichytrium sp. SEK600)株、ボツリオキトリウム sp. SEK598(Botryochytrium sp. SEK598)株、シゾキトリウム sp. SEK210(Schizochytrium sp. SEK210)株、シゾキトリウム sp. SEK345(Schizochytrium sp. SEK345)株、トラウストキトリウム・アウレウム SEK621(Thraustochytrium aureum SEK621)株、トラウストキトリウム・アフ・カウディボラム SEK616(Thraustochytrium aff. caudivorum SEK 616)株、ボツリオキトリウム・ラジアタム SEK353(Botryochytrium radiatum SEK353)株、パリエチキトリウム・サルカリアナム SEK351(Parietichytrium sarkarianum SEK351)株、パリエチキトリウム・サルカリアナム SEK364(Parietichytrium sarkarianum SEK364)株、及びパリエチキトリウム sp. SEK358(Parietichytrium sp. SEK358)株、並びにこれらの株の、リグニン分解活性を有するタンパク質を生産する能力を有する変異株から選択される少なくとも1種である、使用。
【国際調査報告】
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2016111368.tif 000011
2016111368.tif 000012