(57)【要約】式（Ｉ）で表される化合物もしくはその塩またはそれらの水和物を含む呼吸器疾患の予防治療剤は、喘息およびＣＯＰＤ等の呼吸器疾患の予防または治療に使用できる可能性がある。    【化１】2014133020.tif 000021［式中、Ｒは水酸基、Ｃ１−６アルコキシ基で置換されてもよいＣ１−６アルコキシ基またはＣ１−６アルキル基で置換されてもよいアミノ基を示す。］
2014133020.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）で表される化合物もしくはその塩またはそれらの水和物を含む呼吸器疾患の予防治療剤。
【化１】
2014133020.tif 000019
［式中、Ｒは水酸基、Ｃ１−６アルコキシ基で置換されてもよいＣ１−６アルコキシ基またはＣ１−６アルキル基で置換されてもよいアミノ基を示す。］
【請求項２】
式（Ｉ）で示される化合物がメチル  Ｎ−［３−（６，７−ジメトキシ−２−メチルアミノキナゾリン−４−イル）フェニル］テレフタラミックアシッドである請求項１に記載の予防治療剤。
【化２】
2014133020.tif 000020
【請求項３】
呼吸器疾患が喘息、急性肺障害、急性呼吸促迫症候群、特発性肺線維症または慢性閉塞性呼吸器疾患である請求項１または２に記載の予防治療剤。
【請求項４】
呼吸器疾患が慢性閉塞性呼吸器疾患である請求項１または２に記載の予防治療剤。
【請求項５】
吸入剤である請求項１〜４のいずれか１項に記載の予防治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ホスホジエステラーゼ４阻害剤を含む呼吸器疾患の予防治療剤に関する。さらに詳しくは、ホスホジエステラーゼ４阻害剤であるキナゾリン誘導体を含む気管支炎、肺気腫、慢性閉塞性呼吸器疾患、喘息、急性肺傷害、急性呼吸促迫症候群等の呼吸器疾患の予防治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）は、サイクリックＡＭＰやサイクリックＧＭＰを選択的に分解する酵素として知られている。ＰＤＥのアイソザイムの４型であるＰＤＥ４は、平滑筋、炎症性細胞および脳に多く含まれている。そのためＰＤＥ４阻害剤は、喘息および慢性閉塞性肺疾患（Chronic Obstructive Pulmonary Disease、ＣＯＰＤ）を含む呼吸器疾患、潰瘍性大腸炎および認知症等の疾患の予防治療薬として開発されている。
例えば、ＰＤＥ４阻害剤である、シロミラスト、ロフルミラストおよびオグレミラストは、気管支喘息および慢性気管支炎等の呼吸器疾患の治療作用があることが報告されている（特許文献１〜３）。また、ナフチリジノン誘導体がＰＤＥ４阻害作用を示し、慢性気管支炎およびＣＯＰＤ等の呼吸器疾患の治療に有用であることが報告されている（特許文献４）。
従来、慢性気管支炎または肺気腫と呼ばれていた疾患は、現在では同一の病態を指すと考えられており、併せて慢性閉塞性肺疾患という疾患名が付けられている。【０００３】
一方、キナゾリン誘導体がＰＤＥ４阻害作用を示すことが報告され（特許文献５）、また、キナゾリン誘導体が止痒作用を示すことが報告されている（特許文献６）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】米国特許第６３６９１０８号明細書
【特許文献２】米国特許第６４３６９７０号明細書
【特許文献３】米国特許第７２２３７８９号明細書
【特許文献４】米国特許出願公開第２００３−０９６８２９号明細書
【特許文献５】米国特許第６３５２９８９号明細書
【特許文献６】米国特許第７９３９５４０号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、喘息およびＣＯＰＤ等の呼吸器疾患の予防または治療に使用できる可能性がある予防治療剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記課題を解決するために、鋭意検討を重ねた結果、以下の構成とすることにより課題を解決できることを見出し、本発明を完成させた。
すなわち、本発明は、以下の［１］〜［２０］を提供する。
［１］  式（Ｉ）で表される化合物もしくはその塩またはそれらの水和物を含む呼吸器疾患の予防治療剤。
【化１】
2014133020.tif 000003
［式中、Ｒは水酸基、Ｃ１−６アルコキシ基で置換されてもよいＣ１−６アルコキシ基またはＣ１−６アルキル基で置換されてもよいアミノ基を示す。］
［２］  式（Ｉ）で示される化合物がメチル  Ｎ−［３−（６，７−ジメトキシ−２−メチルアミノキナゾリン−４−イル）フェニル］テレフタラミックアシッドである上記［１］に記載の予防治療剤。
【化２】
2014133020.tif 000004
［３］  呼吸器疾患が喘息、急性肺障害、急性呼吸促迫症候群、特発性肺線維症または慢性閉塞性呼吸器疾患である上記［１］または［２］に記載の予防治療剤。
［４］  呼吸器疾患が慢性閉塞性呼吸器疾患である上記［１］または［２］に記載の予防治療剤。
［５］  吸入剤である上記［１］〜［４］のいずれか１項に記載の予防治療剤。
［６］  式（Ｉ）で表される化合物もしくはその塩またはそれらの水和物の有効量を患者に投与する、呼吸器疾患の予防治療方法。
【化３】
2014133020.tif 000005
［式中、Ｒは水酸基、Ｃ１−６アルコキシ基で置換されてもよいＣ１−６アルコキシ基またはＣ１−６アルキル基で置換されてもよいアミノ基を示す。］
［７］  式（Ｉ）で示される化合物がメチル  Ｎ−［３−（６，７−ジメトキシ−２−メチルアミノキナゾリン−４−イル）フェニル］テレフタラミックアシッドである上記［７］に記載の方法。
【化４】
2014133020.tif 000006
［８］  呼吸器疾患が喘息、急性肺障害、急性呼吸促迫症候群、特発性肺線維症または慢性閉塞性呼吸器疾患である上記［６］または［７］に記載の方法。
［９］  呼吸器疾患が慢性閉塞性呼吸器疾患である上記［６］または［７］に記載の方法。
［１０］  式（Ｉ）で表される化合物もしくはその塩またはそれらの水和物が吸入剤として投与される、上記［６］〜［９］のいずれか１項に記載の方法。
［１１］  呼吸器疾患の予防治療に使用される、式（Ｉ）で表される化合物もしくはその塩またはそれらの水和物。
【化５】
2014133020.tif 000007
［式中、Ｒは水酸基、Ｃ１−６アルコキシ基で置換されてもよいＣ１−６アルコキシ基またはＣ１−６アルキル基で置換されてもよいアミノ基を示す。］
［１２］  式（Ｉ）で示される化合物がメチル  Ｎ−［３−（６，７−ジメトキシ−２−メチルアミノキナゾリン−４−イル）フェニル］テレフタラミックアシッドである上記［１］に記載の化合物もしくはその塩またはそれらの水和物。
【化６】
2014133020.tif 000008
［１３］  呼吸器疾患が喘息、急性肺障害、急性呼吸促迫症候群、特発性肺線維症または慢性閉塞性呼吸器疾患である上記［１１］または［１２］に記載の化合物もしくはその塩またはそれらの水和物。
［１４］  呼吸器疾患が慢性閉塞性呼吸器疾患である上記［１１］または［１２］に記載の化合物もしくはその塩またはそれらの水和物。
［１５］  吸入剤として使用される、上記［１１］〜［１４］のいずれか１項に記載の化合物もしくはその塩またはそれらの水和物。
［１６］  呼吸器疾患の予防治療剤の製造のための、式（Ｉ）で表される化合物もしくはその塩またはそれらの水和物の使用。
【化７】
2014133020.tif 000009
［式中、Ｒは水酸基、Ｃ１−６アルコキシ基で置換されてもよいＣ１−６アルコキシ基またはＣ１−６アルキル基で置換されてもよいアミノ基を示す。］
［１７］  式（Ｉ）で示される化合物がメチル  Ｎ−［３−（６，７−ジメトキシ−２−メチルアミノキナゾリン−４−イル）フェニル］テレフタラミックアシッドである上記［１６］に記載の使用。
【化８】
2014133020.tif 000010
［１８］  呼吸器疾患が喘息、急性肺障害、急性呼吸促迫症候群、特発性肺線維症または慢性閉塞性呼吸器疾患である上記［１６］または［１７］に記載の使用。
［１９］  呼吸器疾患が慢性閉塞性呼吸器疾患である上記［１６］または［１７］に記載の使用。
［２０］  呼吸器疾患の予防治療剤が吸入剤である上記［１６］〜［１９］のいずれか１項に記載の使用。
【発明の効果】
【０００７】
式（Ｉ）で表される化合物は、急性気管支炎、慢性気管支炎、肺気腫、慢性閉塞性呼吸器疾患、喘息、急性肺傷害、急性呼吸促迫症候群および特発性肺線維症等の予防治療剤として利用できる可能性がある。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
本明細書において予防治療剤とは、疾患を発症したヒトまたは動物を治療するための医薬、または、疾患の発症を予防するための医薬を意味する。かかる予防治療剤は、主薬としてＰＤＥ４阻害剤である式（Ｉ）で表される化合物もしくはその塩またはそれらの水和物を含む。
【０００９】
本明細書において、Ｃ１−６アルキル基とは、炭素数１〜６個の直鎖状または分枝鎖状のアルキル基を意味する。例えば、メチル基、エチル基、１−プロピル基（ｎ−プロピル基）、２−プロピル基（ｉ−プロピル基）、２−メチル−１−プロピル基（ｉ−ブチル基）、２−メチル−２−プロピル基（ｔ−ブチル基）、１−ブチル基（ｎ−ブチル基）、２−ブチル基（ｓ−ブチル基）、１−ペンチル基、２−ペンチル基、３−ペンチル基、２−メチル−１−ブチル基、３−メチル−１−ブチル基、２−メチル−２−ブチル基、３−メチル−２−ブチル基、２，２−ジメチル−１−プロピル基、１−へキシル基、２−へキシル基、３−へキシル基、２−メチル−１−ペンチル基、３−メチル−１−ペンチル基、４−メチル−１−ペンチル基、２−メチル−２−ペンチル基、３−メチル−２−ペンチル基、４−メチル−２−ペンチル基、２−メチル−３−ペンチル基、３−メチル−３−ペンチル基、２，３−ジメチル−１−ブチル基、３，３−ジメチル−１−ブチル基、２，２−ジメチル−１−ブチル基、２−エチル−１−ブチル基、３，３−ジメチル−２−ブチル基、２，３−ジメチル−２−ブチル基等を挙げることができる。
好ましくは、Ｃ１−３アルキル基、すなわち、メチル基、エチル基、１−プロピル基、２−プロピル基、２−メチル−１−プロピル基、２−メチル−２−プロピル基、１−ブチル基または２−ブチル基である。より好ましくは、メチル基またはエチル基である。
【００１０】
本明細書において、Ｃ１−６アルコキシ基とは、前記定義のＣ１−６アルキル基が結合したオキシ基であることを意味する。例えば、メトキシ基、エトキシ基、１−プロポキシ基、２−プロポキシ基、２−メチル−１−プロポキシ基、２−メチル−２−プロポキシ基、１−ブトキシ基、２−ブトキシ基、１−ペントキシ基、２−ペンチルオキシ基、３−ペンチルオキシ基、２−メチル−１−ブトキシ基、３−メチル−１−ブトキシ基、２−メチル−２−ブトキシ基、３−メチル−２−ブトキシ基、２，２−ジメチル−１−プロポキシ基、１−へキシルオキシ基、２−へキシルオキシ基、３−へキシルオキシ基、２−メチル−１−ペントキシ基、３−メチル−１−ペンチルオキシ基、４−メチル−１−ペントキシ基、２−メチル−２−ペントキシ基、３−メチル−２−ペントキシ基、４−メチル−２−ペントキシ基、２−メチル−３−ペンチルオキシ基、３−メチル−３−ペンチルオキシ基、２，３−ジメチル−１−ブトキシ基、３，３−ジメチル−１−ブトキシ基、２，２−ジメチル−１−ブトキシ基、２−エチル−１−ブトキシ基、３，３−ジメチル−２−ブトキシ基、２，３−ジメチル−２−ブトキシ基等を挙げることができる。
好ましくは、Ｃ１−３アルコキシ基、すなわち、メトキシ基、エトキシ基、１−プロポキシ基、２−プロポキシ基である。より好ましくはメトキシ基である。
【００１１】
本明細書において、Ｃ１−６アルコキシ基で置換されてもよいＣ１−６アルコキシ基とは、非置換の前記Ｃ１−６アルコキシ基または前記Ｃ１−６アルコキシ基で置換された前記Ｃ１−６アルコキシ基を意味する。例えば、メトキシメトキシ基、エトキシメトキシ基、メトキシエトキシ基、エトキシエトキシ基等が挙げることができる。
【００１２】
本明細書において、Ｃ１−６アルキル基で置換されてもよいアミノ基とは、アミノ基もしくは前記Ｃ１−６アルキル基で置換されたモノＣ１−６アルキルアミノ基またはジＣ１−６アルキルアミノ基を意味する。例えば、メチルアミノ基、エチルアミノ基、ｔ−ブチルアミノ基、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、メチルエチルアミノ基等を挙げることができる。
好ましくは、アミノ基、モノＣ１−３アルキルアミノ基またはジＣ１−３アルキルアミノ基である。より好ましくはアミノ基またはモノメチルアミノ基である。
【００１３】
式（Ｉ）で表される化合物もしくはその塩またはそれらの水和物の具体例として、下記化合物もしくはその塩またはそれらの水和物を挙げることができる：
メチル  Ｎ−［３−（６，７−ジメトキシ−２−メチルアミノキナゾリン−４−イル）フェニル］テレフタラミックアシッド、
エチル  Ｎ−［３−（６，７−ジメトキシ−２−メチルアミノキナゾリン−４−イル）フェニル］テレフタラミックアシッド、
Ｎ−［３−（６，７−ジメトキシ−２−メチルアミノキナゾリン−４−イル）フェニル］−Ｎ’−メチルテレフタラミド
イソプロピル  Ｎ−［３−（６，７−ジメトキシ−２−メチルアミノキナゾリン−４−イル）フェニル］テレフタラミックアシッド
イソプロピル  Ｎ−［３−（６，７−ジメトキシ−２−メチルアミノキナゾリン−４−イル）フェニル］イソフタリックアシッド
Ｎ−［３−（６，７−ジメトキシ−２−メチルアミノキナゾリン−４−イル）フェニル］テレフタラミックアシッド  ２−メトキシエチルエステルおよび
Ｎ−［３−（６，７−ジメトキシ−２−メチルアミノキナゾリン−４−イル）フェニル］イソフタラミックアシッド  ２−メトキシエチルエステル。
好ましくは、メチル  Ｎ−［３−（６，７−ジメトキシ−２−メチルアミノキナゾリン−４−イル）フェニル］テレフタラミックアシッドまたはその塩もしくはそれらの水和物である。
【００１４】
式（Ｉ）で表される化合物もしくはその塩またはそれらの水和物は、例えば、米国特許第７９３９５４０号明細書および米国特許出願公開第２０１１−０１５２５２１号明細書に記載の方法により製造することができる。
【００１５】
本明細書において塩とは、式（Ｉ）で表される化合物と塩を形成し、かつ薬理学的に許容されるものであれば特に限定されない。例えば、無機酸塩、有機酸塩、無機塩基塩、有機塩基塩、酸性または塩基性アミノ酸塩等を挙げることができる。
無機酸塩としては、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩等を挙げることができる。
有機酸塩としては、例えば、酢酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、ステアリン酸塩、安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩等を挙げることができる。
無機塩基塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、アンモニウム塩等を挙げることができる。
有機塩基塩としては、例えば、ジエチルアミン塩、ジエタノールアミン塩、メグルミン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩等を挙げることができる。
酸性アミノ酸塩としては、例えば、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩等を挙げることができる。
塩基性アミノ酸塩としては、例えば、アルギニン塩、リジン塩、オルニチン塩等を挙げることができる。
【００１６】
本発明の予防治療剤は、吸入用散剤、エアゾール剤、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、注射剤、液剤等の剤形とすることができる。好ましくは吸入用散剤である。
【００１７】
本発明の予防治療剤を吸入用散剤とする場合には、原薬をそのまま使用してもよく、また、一般的に使用される賦形剤を含んでいてもよい。
【００１８】
本発明の予防治療剤の投与量は、吸入する場合には、１回当たり１回当たり０．００１〜１０ｍｇ、好ましくは０．０１〜１ｍｇである。
【００１９】
上記賦形剤としては、例えばトウモロコシデンプン、バレイショデンプン、α化デンプン、デキストリン、乳糖、白糖、ブドウ糖、マンニトール、エリスリトール、マルチトール、ソルビトール、トレハロース、結晶セルロース、軽質無水ケイ酸、ケイ酸アルミニウム、ケイ酸カルシウム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム等を挙げることができる。
【００２０】
また、本発明の予防治療剤を錠剤や顆粒剤とする場合には、上記賦形剤の他、結合剤、滑沢剤、崩壊剤等を配合してもよい。
【００２１】
上記結合剤としては、例えばポリビニルアルコール、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、ポリビニルピロリドン、マクロゴール、アラビアガム等を挙げることができる。
【００２２】
上記滑沢剤としては、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、フマル酸ステアリルナトリウム、タルク等を挙げることができる。
【００２３】
上記崩壊剤としては、例えば結晶セルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、クロスポビドン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム等を挙げることができる。
【実施例】
【００２４】
本発明を実施例によって、さらに詳細に説明する。しかし、本発明はこれらの実施例に限定されない。
以下、メチル  Ｎ−［３−（６，７−ジメトキシ−２−メチルアミノキナゾリン−４−イル）フェニル］テレフタラミックアシッドを、化合物Ａと表記する。化合物Ａは、米国特許出願公開第２０１１−０１５２５２１号の実施例１０に記載の方法と同様の方法で合成した。【００２５】
実施例１  肺傷害モデルにおける化合物Ａの投与による効果
１０−１４週齡のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（雌、１群あたり５例、日本チャールス・リバー）に、リポポリサッカライド（ＬＰＳ）投与して、肺傷害モデルを作製した。このマウスに化合物Ａを前投与した場合の作用を検討した。
化合物Ａを乳糖で希釈し、１０倍散粉末とした。また、ＬＰＳをリン酸緩衝生理食塩液（ＰＢＳ）に、０．５μｇ／ｍｌの濃度になるように溶解した。
各マウスに乳糖（１ｍｇ／匹）または化合物Ａの乳糖倍散（１ｍｇ／匹）を、経気管投与用のデバイスを使用して、気管内に投与した。その２時間後に、ＰＢＳ（５０μｌ）またはＬＰＳ（５０μｌ）を気管内に投与した。その２４時間後に、各マウスに動物用イソフルランを２％、流量１Ｌ／ｍｉｎで吸入させ麻酔した。その後、腹部を切開し、後大静脈より全採血し、各マウスを安楽死させた。マウスの気管を切開し、ＰＢＳを使用して、気管支肺胞洗浄を行い（１ｍｌ×３回）、洗浄液を回収した。以下、回収した洗浄液をＢＡＬＦ（Ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒ  ｌａｖａｇｅ  ｆｌｕｉｄ）と表記する。各群への投与物質、スケジュール、測定項目は表１の通りである。【００２６】
【表１】
2014133020.tif 000011
【００２７】
上記ＢＡＬＦ中に含まれる白血球数、好中球数、マクロファージ数およびリンパ球数を測定した。ＢＡＬＦを遠心分離機（冷却遠心機５４１５Ｒ、エッペンドルフ社）を使用して、３０００ｒｐｍ、１０分間、４℃の条件下で遠心分離し、上清を除去した。沈殿物に１ｍｌのハンクス液を加えて懸濁し、細胞計数盤（ワンセルカウンター、株式会社ワンセル）で、白血球数を測定した。また、懸濁液をスライドガラスに塗沫し、遠心分離機（サイトスピン４、サーモサイエンティフィック社）を使用して、７５０ｒｐｍで５分間遠心した。その後、スライドガラスを染色液（ディフ・クイック、シスメックス社）で染色し、細胞分画を顕微鏡を使用して計測した。
次に、ＢＡＬＦ中の総蛋白質量を、ＢＣＡ法（Ｂｉｃｉｎｃｈｏｎｉｎｉｃ  ａｃｉｄｐｒｏｔｅｉｎ  ａｓｓａｙ）で測定した。その測定結果を表２に示した。【００２８】
【表２】
2014133020.tif 000012
【００２９】
表２に示した結果から明らかなように、陽性対照群では、白血球数、好中球数および総蛋白質量が増加した。しかし、化合物Ａ投与群では、それらの増加が抑制された。なお、リンパ球および好酸球は、全ての群でほとんど観察されなかった。【００３０】
実施例２  催吐モデルにおける化合物Ａの投与による効果
７−８週齢のＩＣＲマウス（雌、１群あたり８−１０例、日本エスエルシー）に、キシラジン（１８−２４ｍｇ／ｋｇ）およびケタミン（１３１−１６０ｍｇ／ｋｇ）の混合液を筋肉内に投与した。その１５分後に、１０ｍｌ／ｋｇの溶媒（１０％ＤＭＳＯおよび１０％Ｔｗｅｅｎ８０を含む生理食塩液）に溶解または懸濁したＰＤＥ４阻害剤を各マウスの皮下に投与した。その後、各マウスを仰向けに静置し、覚醒して、うつぶせになるまでの時間を測定した。この時間を麻酔持続時間と定義した。
各ＰＤＥ４阻害剤の薬物名と、その投与量を表３に示した。なお、陽性対照薬として、ロリプラムを使用した（参考文献１）。また、陰性対照群には、他の群と同量の溶媒を投与した。【００３１】
【表３】
2014133020.tif 000013
【００３２】
その結果、シロミラスト、アチゾラムおよびロフルミラスト投与群では、陰性対照群と比較して、有意な麻酔持続時間の短縮が認められた（表５〜７）。一方、化合物Ａ投与群では、他のＰＤＥ４阻害剤よりも高い用量を投与したのにもかかわらず、陰性対照群とほぼ同様の麻酔持続時間を示した（表４）。【００３３】
種々の動物に対してＰＤＥ４阻害剤を投与すると、嘔吐が誘発されることが知られている。また、その作用の強さは、キシラジン／ケタミンの混合麻酔の持続時間の短縮と相関関係を示すと考えられている（参考文献２〜４）。【００３４】
上記の結果から、従来知られているＰＤＥ４阻害剤の投与によって、嘔吐が誘発されるのに対して、化合物Ａではその作用は誘発されない可能性が示唆された。【００３５】
【表４】
2014133020.tif 000014
【００３６】
【表５】
2014133020.tif 000015
【００３７】
【表６】
2014133020.tif 000016
【００３８】
【表７】
2014133020.tif 000017
【００３９】
参考文献１：Heaslip RJ, Evans DY.: "Emetic, central nervous system and pulmonary activities of rolipram in the dog.", Eur. J. Pharmacol., 286, 3 (24), 281-290, 1995
参考文献２：Robichaud A, Savoie C, Stamatiou PB, Tattersall FD, and Chan CC: "PDE4 inhibitors induce emesis in ferrets via a noradrenergic pathway.", Neuropharmacology, 40 (2), 262-269, 2001.
参考文献３：Robichaud A, Stamatiou PB, Jin SL, Lachance N, MacDonald D, Laliberte F, Liu S, Huang Z, Conti M, and Chan CC: "Deletion of phosphodiesterase 4D in mice shortens α2-adrenoceptor-mediated anesthesia, a behavioral correlate of emesis.", J. Clin. Invest., 110 (7), 1045-1052, 2002.
参考文献４：Robichaud, A., et al.: "Assessing the emetic potential of PDE4 inhibitors in rats.", Br. J. Pharmacol., 135, 113-118, 2002.【００４０】
参考例
常法に従い、各種ＰＤＥ４阻害剤のｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＰＤＥ４阻害活性を測定した。結果を表８に示す。【００４１】
【表８】
2014133020.tif 000018
【国際調査報告】
2014133020.tif 000022
2014133020.tif 000023
2014133020.tif 000024
2014133020.tif 000025