(57)【要約】GLP-1Rのイメージングプローブとして使用できるペプチドを提供する。一態様において、下記式（３）で表されるポリペプチドに関する。Xaa1-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser（３）（配列番号３）式（３）において、Xaa1は、α−アミノ基に-Y-X'基が結合したアスパラギン酸であり、X'は、キレート部と前記キレート部でキレートされた放射性金属核種とを含み、前記キレート部は、diethylenetriaminepentaacetic dianhydride(DTPA)、又は1,4,7-triazacyclononnane-N,N'N''-triacetic acid(NOTA)であり、Yは、-CH2-(C6H4)-、-NH-C(=S)-、及び-NH-(CH2)5-C(=O)-、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される基を含むリンカーである。
2014084372.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）で表されるポリペプチド。
Xaa1-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser（１）（配列番号１）
［式（１）において、
Xaa1は、α−アミノ基に-Y-X基が結合したアスパラギン酸であり、
Xは、diethylenetriaminepentaacetic dianhydride(DTPA)、又は1,4,7-triazacyclononnane-N,N'N''-triacetic acid(NOTA)であり、
Yは、-CH2-(C6H4)-、-NH-C(=S)-、及び-NH-(CH2)5-C(=O)-、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される基を含むリンカーである。］
【請求項２】
下記式（２）で表されるポリペプチド。
【化１】
2014084372.tif 000023
【請求項３】
下記式（３）で表されるポリペプチド。
Xaa1-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser（３）（配列番号３）
［式（３）において、
Xaa1は、α−アミノ基に-Y-X'基が結合したアスパラギン酸であり、
X'は、キレート部と前記キレート部でキレートされた放射性金属核種とを含み、前記キレート部は、diethylenetriaminepentaacetic dianhydride(DTPA)、又は1,4,7-triazacyclononnane-N,N'N''-triacetic acid(NOTA)であり、
Yは、-CH2-(C6H4)-、-NH-C(=S)-、及び-NH-(CH2)5-C(=O)-、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される基を含むリンカーである。］
【請求項４】
前記放射性金属核種が、111Inである、請求項３記載のポリペプチド。
【請求項５】
下記式（４）で表されるポリペプチド。
【化２】
2014084372.tif 000024
【請求項６】
下記式（５）で表されるポリペプチド。
Asp-Leu-Ser-Xaa4-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser（５）（配列番号５）
［式（５）において、
Xaa4は、側鎖のアミノ基に-Y-X基が結合したリジン残基であり、
前記Xは、diethylenetriaminepentaacetic dianhydride(DTPA)、又は1,4,7-triazacyclononnane-N,N'N''-triacetic acid(NOTA)であり、
前記Yは、-CH2-(C6H4)-、-NH-C(=S)-、及び-NH-(CH2)5-C(=O)-、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される基を含むリンカーである。］
【請求項７】
下記式（６）で表されるポリペプチド。
【化３】
2014084372.tif 000025
【請求項８】
下記式（７）で表されるポリペプチド。
Asp-Leu-Ser-Xaa4-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser（７）（配列番号７）
［式（７）において、
Xaa4は、側鎖のアミノ基に-Y-X'基が結合したリジン残基であり、
前記X'は、キレート部と前記キレート部でキレートされた放射性金属核種とを含み、前記キレート部は、diethylenetriaminepentaacetic dianhydride(DTPA)、又は1,4,7-triazacyclononnane-N,N'N''-triacetic acid(NOTA)であり、
前記Yは、-CH2-(C6H4)-、-NH-C(=S)-、及び-NH-(CH2)5-C(=O)-、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される基を含むリンカーである。］
【請求項９】
前記放射性金属核種が、111Inである、請求項８記載のポリペプチド。
【請求項１０】
下記式（８）で表されるポリペプチド。
【化４】
2014084372.tif 000026
【請求項１１】
請求項３から５及び８から１０のいずれかに記載のポリペプチドを含む、イメージング用組成物。
【請求項１２】
請求項１、２、６又は７に記載のポリペプチドと、
放射性金属核種とを含む、キット。
【請求項１３】
GLP-1受容体をイメージングするための方法であって、
請求項３から５及び８から１０のいずれかに記載のポリペプチドを投与された被検体から前記ポリペプチドの放射性シグナルを検出することを含む、イメージング方法。
【請求項１４】
前記検出されたシグナルを再構成処理して画像に変換し表示することを含む、請求項１３記載のイメージング方法。
【請求項１５】
請求項１３又は１４に記載のイメージング方法に用いる請求項３から５及び８から１０のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１６】
GLP-1受容体をイメージングするための請求項３から５及び８から１０のいずれかに記載のポリペプチドの使用。
【請求項１７】
請求項１３又は１４に記載のイメージング方法に用いるイメージング用組成物の製造のための請求項１、２、６又は７に記載のポリペプチドの使用。
【請求項１８】
キレート部が結合されたポリペプチドを標識する方法であって、
グッドの緩衝液、又は非イオン性界面活性剤を含む緩衝液に前記ポリペプチドを溶解すること、及び
溶解した前記ポリペプチドを、[111In]インジウム塩と反応させることを含む、標識方法。
【請求項１９】
下記式（１９）で表されるポリペプチド、
下記式（１９）のポリペプチドから１、２又は３個のアミノ酸が欠失、付加又は置換したポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチド、又は、
下記式(１９)のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の相同性を有するポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチド。
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Xaa12-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser（１９）（配列番号１９）
［式（１９）において、
Xaa12は、側鎖のアミノ基に-Y-X基が結合したリジン残基であり、
前記Xは、diethylenetriaminepentaacetic dianhydride(DTPA)、又は1,4,7-triazacyclononnane-N,N'N''-triacetic acid(NOTA)であり、
前記Yは、-CH2-(C6H4)-、-NH-C(=S)-、及び-NH-(CH2)5-C(=O)-、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される基を含むリンカーである。］
【請求項２０】
下記式（２０）で表されるポリペプチド、
下記式（２０）のポリペプチドから１、２又は３個のアミノ酸が欠失、付加又は置換したポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチド、又は、
下記式（２０）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の相同性を有するポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチド。
【化５】
2014084372.tif 000027
【請求項２１】
下記式（２１）で表されるポリペプチド、
下記式（２１）のポリペプチドから１、２又は３個のアミノ酸が欠失、付加又は置換したポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチド、又は、
下記式(２１)のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の相同性を有するポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチド。
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Xaa12-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser（２１）（配列番号２１）
［式（２１）において、
Xaa12は、側鎖のアミノ基に-Y-X'基が結合したリジン残基であり、
前記X'は、キレート部と前記キレート部でキレートされた放射性金属核種とを含み、前記キレート部は、diethylenetriaminepentaacetic dianhydride(DTPA)、又は1,4,7-triazacyclononnane-N,N'N''-triacetic acid(NOTA)であり、
前記Yは、-CH2-(C6H4)-、-NH-C(=S)-、及び-NH-(CH2)5-C(=O)-、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される基を含むリンカーである。］
【請求項２２】
下記式（２２）で表されるポリペプチド、
下記式（２２）のポリペプチドから１、２又は３個のアミノ酸が欠失、付加又は置換したポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチド、又は、
下記式（２２）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の相同性を有するポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチド。
【化６】
2014084372.tif 000028
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、標識前駆体となるポリペプチド、放射性標識されたポリペプチド、イメージング用組成物、キット、それらの使用、及びイメージング方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
GLP-1（グルカゴン様ペプチド−１）は、グルコース代謝ならびに消化管分泌及び代謝において制御的機能を有する重要な消化管ホルモンである。GLP-1の受容体がGLP-1Rであり、７回膜貫通型のＧ−タンパク質共役受容体である。【０００３】
GLP-1Rを標的分子とするイメージング用分子プローブとして、GLP-1、Exendin-3、Exendin-4、Exendin(9-39)等のペプチド又はその改変体に標識化分子が結合したペプチドが検討されている（例えば、特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特許4642920号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
GLP-1Rはインスリノーマに過剰発現していること及び膵島細胞に発現していること等を利用してGLP-1Rを標的分子としたGLP-1R及び／又はインスリノーマのイメージングが試みられている。GLP-1Rに対する親和性の高いさらなるプローブが求められ、Exendin骨格を利用した放射性プローブの研究が多数行われている。そこで、本開示は、GLP-1Rのイメージングプローブとして使用できるペプチドであって、GLP-1Rに対する親和性の高いペプチドを提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本開示は、一態様において、下記式（１）で表されるポリペプチドに関する。
Xaa1-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser（１）（配列番号１）
［式（１）において、
Xaa1は、α−アミノ基に-Y-X基が結合したアスパラギン酸であり、
Xは、diethylenetriaminepentaacetic dianhydride(DTPA)、又は1,4,7-triazacyclononnane-N,N'N''-triacetic acid(NOTA)であり、
Yは、-CH2-(C6H4)-、-NH-C(=S)-、及び-NH-(CH2)5-C(=O)-、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される基を含むリンカーである。］【０００７】
本開示は、一態様において、下記式（２）で表されるポリペプチドに関する。
【化１】
2014084372.tif 000003
【０００８】
本開示は、一態様において、下記式（３）で表されるポリペプチドに関する。
Xaa1-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser（３）（配列番号３）
［式（３）において、
Xaa1は、α−アミノ基に-Y-X'基が結合したアスパラギン酸であり、
X'は、キレート部と前記キレート部でキレートされた放射性金属核種とを含み、前記キレート部は、diethylenetriaminepentaacetic dianhydride(DTPA)、又は1,4,7-triazacyclononnane-N,N'N''-triacetic acid(NOTA)であり、
Yは、-CH2-(C6H4)-、-NH-C(=S)-、及び-NH-(CH2)5-C(=O)-、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される基を含むリンカーである。］【０００９】
本開示は、一態様において、下記式（４）で表されるポリペプチドに関する。
【化２】
2014084372.tif 000004
【００１０】
本開示は、一態様において、下記式（５）で表されるポリペプチドに関する。
Asp-Leu-Ser-Xaa4-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser（５）（配列番号５）
［式（５）において、
Xaa4は、側鎖のアミノ基に-Y-X基が結合したリジン残基であり、
前記Xは、diethylenetriaminepentaacetic dianhydride(DTPA)、又は1,4,7-triazacyclononnane-N,N'N''-triacetic acid(NOTA)であり、
前記Yは、-CH2-(C6H4)-、-NH-C(=S)-、及び-NH-(CH2)5-C(=O)-、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される基を含むリンカーである。］【００１１】
本開示は、一態様において、下記式（６）で表されるポリペプチドに関する。
【化３】
2014084372.tif 000005
【００１２】
本開示は、一態様において、下記式（７）で表されるポリペプチドに関する。
Asp-Leu-Ser-Xaa4-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser（７）（配列番号７）
［式（７）において、
Xaa4は、側鎖のアミノ基に-Y-X'基が結合したリジン残基であり、
前記X'は、キレート部と前記キレート部でキレートされた放射性金属核種とを含み、前記キレート部は、diethylenetriaminepentaacetic dianhydride(DTPA)、又は1,4,7-triazacyclononnane-N,N'N''-triacetic acid(NOTA)であり、
前記Yは、-CH2-(C6H4)-、-NH-C(=S)-、及び-NH-(CH2)5-C(=O)-、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される基を含むリンカーである。］【００１３】
本開示は、一態様において、下記式（８）で表されるポリペプチドに関する。
【化４】
2014084372.tif 000006
【００１４】
本開示は、一態様において、下記式（１９）で表されるポリペプチド、
下記式（１９）のポリペプチドから１、２又は３個のアミノ酸が欠失、付加又は置換したポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチド、又は、
下記式(１９)のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の相同性を有するポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチドに関する。
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Xaa12-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser（１９）（配列番号１９）
［式（１９）において、
Xaa12は、側鎖のアミノ基に-Y-X基が結合したリジン残基であり、
前記Xは、diethylenetriaminepentaacetic dianhydride(DTPA)、又は1,4,7-triazacyclononnane-N,N'N''-triacetic acid(NOTA)であり、
前記Yは、-CH2-(C6H4)-、-NH-C(=S)-、及び-NH-(CH2)5-C(=O)-、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される基を含むリンカーである。］【００１５】
本開示は、一態様において、下記式（２０）で表されるポリペプチド、
下記式（２０）のポリペプチドから１、２又は３個のアミノ酸が欠失、付加又は置換したポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチド、又は、
下記式（２０）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の相同性を有するポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチドに関する。
【化５】
2014084372.tif 000007
【００１６】
本開示は、一態様において、下記式（２１）で表されるポリペプチド、
下記式（２１）のポリペプチドから１、２又は３個のアミノ酸が欠失、付加又は置換したポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチド、又は、
下記式(２１)のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の相同性を有するポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチドに関する。
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Xaa12-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser（２１）（配列番号２１）
［式（２１）において、
Xaa12は、側鎖のアミノ基に-Y-X'基が結合したリジン残基であり、
前記X'は、キレート部と前記キレート部でキレートされた放射性金属核種とを含み、前記キレート部は、diethylenetriaminepentaacetic dianhydride(DTPA)、又は1,4,7-triazacyclononnane-N,N'N''-triacetic acid(NOTA)であり、
前記Yは、-CH2-(C6H4)-、-NH-C(=S)-、及び-NH-(CH2)5-C(=O)-、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される基を含むリンカーである。］【００１７】
本開示は、一態様において、下記式（２２）で表されるポリペプチド、
下記式（２２）のポリペプチドから１、２又は３個のアミノ酸が欠失、付加又は置換したポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチド、又は、
下記式（２２）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の相同性を有するポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチドに関する。
【化６】
2014084372.tif 000008
【００１８】
本開示は、その他の態様において、本開示に係るポリペプチドを含むイメージング用組成物に関する。本開示は、その他の態様において、本開示にかかるポリペプチドを投与された被検体から前記ポリペプチドの放射性シグナルを検出することを含むイメージング方法に関する。本開示は、その他の態様において、本開示にかかるポリペプチドの使用に関する。
【発明の効果】
【００１９】
本開示によれば、GLP-1Rのイメージングプローブとして使用できるペプチドであって、GLP-1Rに対する親和性の高いペプチドを提供できる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】図１は、式(４)で表されるポリペプチドのBlocking Studyの結果の一例を示すグラフである。
【図２】図２は、式(４)で表されるポリペプチドのSPECT画像である。
【図３】図３は、Binding Assayの結果の一例を示すグラフである。
【図４】図４は、式(２)で表わされるポリペプチドのマウスの血漿中における安定性評価の結果の一例を示すグラフである。
【図５】図５は、式(２２)で表されるポリペプチドのBlocking Studyの結果の一例を示すグラフである。
【図６】図６は、式(２３)で表わされるポリペプチドのマウスの血漿中における安定性評価の結果の一例を示すグラフである。
【図７】図７は、ラットインスリノーマ株INS-1を用いた細胞取り込みアッセイの結果の一例を示すグラフである。
【図８】図８は、式(２２)で表されるポリペプチドのSPECT/CT画像である。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
［標識前駆体となるポリペプチド］
本開示は、一又は複数の実施形態において、標識前駆体となりうるポリペプチドであって、下記式（１）で表されるポリペプチドに関する。
Xaa1-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser（１）（配列番号１）
【００２２】
式（１）において、Xaa1は、α−アミノ基に-Y-X基が結合したアスパラギン酸である。Xは、キレート部であって、DTPA又はNOTAである。Yは、式（１）で表されるポリペプチドＮ末端に位置するアスパラギン酸のＮ末端のα−アミノ基に結合するリンカーであって、-CH2-(C6H4)-、-NH-C(=S)-、及び-NH-(CH2)5-C(=O)-、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される基を含むリンカーである。Yは、一又は複数の実施形態において、-CH2-(C6H4)-、及び-NH-C(=S)-を含むことが好ましく、より好ましくは-CH2-(C6H4)-、-NH-C(=S)-、及び-NH-(CH2)5-C(=O)-を含み、さらに好ましくは-CH2-(C6H4)-NH-C(=S)-NH-(CH2)5-C(=O)-である。すなわち、式（１）において、Xaa1は、DTPA又はNOTAと上記リンカーとを有するアスパラギン酸であって、リンカーの一端がアスパラギン酸のＮ末端のα−アミノ基に結合し、他端がDTPA又はNOTAと結合している。
【００２３】
本開示は、一又は複数の実施形態において、標識前駆体となりうるポリペプチドであって、下記式（５）で表されるポリペプチドに関する。
Asp-Leu-Ser-Xaa4-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser（５）（配列番号５）
【００２４】
式（５）において、Xaa4は、側鎖のアミノ基に-Y-X基が結合したリジン残基である。Xはキレート部であって、DTPA又はNOTAであり、Yはリジンの側鎖のアミノ基に結合するリンカーであって、-CH2-(C6H4)-、-NH-C(=S)-、及び-NH-(CH2)5-C(=O)-、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される基を含むリンカーである。すなわち、式（５）において、Xaa4は、DTPA又はNOTAと上記リンカーとを有するリジン残基であって、リンカーの一端がリジン残基の側鎖のアミノ基に結合し、他端がDTPA又はNOTAと結合している。
【００２５】
本開示は、一又は複数の実施形態において、標識前駆体となりうるポリペプチドであって、下記式（１９）で表されるポリペプチドに関する。
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Xaa12-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser（１９）（配列番号１９）
【００２６】
式（１９）において、Xaa12は、側鎖のアミノ基に-Y-X基が結合したリジン残基である。Xはキレート部であってDTPA又はNOTAである。Yはリジンの側鎖のアミノ基に結合するリンカーであって、-CH2-(C6H4)-、-NH-C(=S)-、及び-NH-(CH2)5-C(=O)-、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される基を含むリンカーである。すなわち、式（１９）において、Xaa12は、DTPA又はNOTAと上記リンカーとを有するリジン残基であって、リンカーの一端がリジン残基の側鎖のアミノ基に結合し、他端がDTPA又はNOTAと結合している。
【００２７】
本開示は、一又は複数の実施形態において、標識前駆体となりうるポリペプチドであって、上記式（１９）のポリペプチドから１、２又は３個のアミノ酸が欠失、付加又は置換したポリペプチドに関する。上記式（１９）のポリペプチドから１、２又は３個のアミノ酸が欠失、付加又は置換したポリペプチドは、一又は複数の実施形態において、Xaa12を含み、かつ、GLP-1Rに結合可能であり、好ましくは上記式（１９）のポリペプチドと同様の作用効果を有する。
【００２８】
本開示は、一又は複数の実施形態において、標識前駆体となりうるポリペプチドであって、上記式(１９)のポリペプチドのアミノ酸配列と85%以上の相同性を有するポリペプチドに関する。ここで、前記相同性とは、当業者が通常用いるアルゴリズム、例えば、BLAST又はFASTAなどで算出されるものでよく、あるいは、比較する２つのポリペプチドの同一アミノ酸残基の数を一方のポリペプチド全長で除して得られる数に基づいてもよい（以下、同じ）。相同性は、一又は複数の実施形態において、85%以上、86%以上、87%以上、88%以上、89%以上、90%以上、91%以上、92%以上、93%以上、94%以上、又は95%を含みうる。該85%以上の相同性を有するポリペプチドは、一又は複数の実施形態において、Xaa12を含み、かつ、GLP-1Rに結合可能であり、好ましくは上記式(１９)のポリペプチドと同様の作用効果を有する。
【００２９】
本開示は、一又は複数の実施形態において、下記式(２０)で表されるポリペプチド、下記式(２０)のポリペプチドから１、２又は３個のアミノ酸が欠失、付加又は置換したポリペプチド、又は下記式（２０）のポリペプチドのアミノ酸配列と85％以上の相同性を有するポリペプチドに関する。相同性は上述の通りである。
【化７】
2014084372.tif 000009
【００３０】
式(２０)のポリペプチドから１、２又は３個のアミノ酸が欠失、付加又は置換したポリペプチド、及び下記式（２０）のポリペプチドのアミノ酸配列と85%以上の相同性を有するポリペプチドは、一又は複数の実施形態において、Xaa12を含み、かつ、GLP-1Rに結合可能であり、好ましくは上記式(２０)のポリペプチドと同様の作用効果を有する。
【００３１】
本開示にかかる標識前駆体となるポリペプチドは、一又は複数の実施形態において、Ｃ末端のカルボキシル基がアミド化されている。本実施形態のポリペプチドは、血液クリアランスに優れうる。
【００３２】
本開示にかかる標識前駆体となるポリペプチドは、GLP-1Rに結合可能である。本開示にかかる標識前駆体となるポリペプチドは、一又は複数の実施形態において、GLP-1Rに対して非標識のexendin(9-39)よりも高い親和性を示す。よって、本開示にかかる標識前駆体となるポリペプチドは、一又は複数の実施形態において、GLP-1R陽性の細胞のイメージング及び定量、GLP-1Rの発現が関与する疾患の診断及び治療等に利用することができる放射性標識試薬の標識前駆体として使用することができる。
【００３３】
本開示にかかる標識前駆体となるポリペプチドの製造方法は、特に限定されない。本開示にかかる標識前駆体となるポリペプチドは、例えば、実施例に開示する方法を参照して製造できる。
【００３４】
［放射性標識されたポリペプチド］
本開示は、その他の態様において、放射性金属核種によって放射性標識されたポリペプチドであって、下記式（３）で表されるポリペプチドに関する。
Xaa1-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser（３）（配列番号３）
【００３５】
式（３）において、Xaa1は、α−アミノ基に-Y-X'基が結合したアスパラギン酸である。X'は、キレート部と前記キレート部でキレートされた放射性金属核種とを含む。キレート部は、DTPA、又はNOTAである。放射性金属核種としては、一又は複数の実施形態において、62Cu、64Cu、67Ga、68Ga、82Rb、99mTc、111In、及び186Re等が挙げられる。Yは、式（３）で表されるポリペプチドＮ末端に位置するアスパラギン酸のＮ末端のα−アミノ基に結合するリンカーであって、-CH2-(C6H4)-、-NH-C(=S)-、及び-NH-(CH2)5-C(=O)-、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される基を含むリンカーである。Yは、一又は複数の実施形態において、-CH2-(C6H4)-、及び-NH-C(=S)-を含むことが好ましく、より好ましくは-CH2-(C6H4)-、-NH-C(=S)-、及び-NH-(CH2)5-C(=O)-を含み、さらに好ましくは-CH2-(C6H4)-NH-C(=S)-NH-(CH2)5-C(=O)-である。すなわち、式（３）において、Xaa1は、放射性金属核種をキレートしたDTPA又はNOTAとリンカーとを有するアスパラギン酸であって、リンカーの一端がアスパラギン酸のＮ末端のα−アミノ基に結合し、他端が放射性核種をキレートしたDTPA又はNOTAと結合している。
【００３６】
本開示は、その他の態様において、放射性金属核種によって放射性標識されたポリペプチドであって、下記式（７）で表されるポリペプチドに関する。
Asp-Leu-Ser-Xaa4-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser（７）（配列番号７）
【００３７】
式（７）において、Xaa4は、側鎖のアミノ基に-Y-X'基が結合したリジン残基である。X'は、DTPA又はNOTAであるキレート部と前記キレート部でキレートされた放射性金属核種とを含み、Yはリジンの側鎖のアミノ基に結合するリンカーである。すなわち、式（７）において、Xaa4は、放射性金属核種をキレートしたDTPA又はNOTAとリンカーとを有するリジン残基であって、リンカーの一端がリジン残基の側鎖のアミノ基に結合し、他端が放射性核種をキレートしたDTPA又はNOTAと結合している。放射性金属核種及びリンカーは上記式（３）と同様である。
【００３８】
本開示は、一又は複数の実施形態において、放射性金属核種によって放射性標識されたポリペプチドであって、下記式（２１）で表されるポリペプチドに関する。
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Xaa12-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser（２１）（配列番号２１）
【００３９】
式（２１）において、Xaa12は、側鎖のアミノ基に-Y-X'基が結合したリジン残基である。X'は、キレート部と前記キレート部でキレートされた放射性金属核種とを含む。Yは、リジンの側鎖のアミノ基に結合するリンカーである。すなわち、式（２１）において、Xaa12は、放射性金属核種をキレートしたDTPA又はNOTAとリンカーとを有するリジン残基であって、リンカーの一端がリジン残基の側鎖のアミノ基に結合し、他端が放射性核種をキレートしたDTPA又はNOTAと結合している。放射性金属核種及びリンカーは上記式（３）と同様である。
【００４０】
本開示は、一又は複数の実施形態において、放射性金属核種によって放射性標識されたポリペプチドであって、上記式（２１）のポリペプチドから１、２又は３個のアミノ酸が欠失、付加又は置換したポリペプチドに関する。上記式（２１）のポリペプチドから１、２又は３個のアミノ酸が欠失、付加又は置換したポリペプチドは、一又は複数の実施形態において、Xaa12を含み、かつ、GLP-1Rに結合可能であり、好ましくは上記式（２１）のポリペプチドと同様の作用効果を有する。
【００４１】
本開示は、一又は複数の実施形態において、上記式（２１）のポリペプチドのアミノ酸配列と85%以上の相同性を有するポリペプチドに関する。相同性は、一又は複数の実施形態において、85%以上、86%以上、87%以上、88%以上、89%以上、90%以上、91%以上、92%以上、93%以上、94%以上、又は95%を含みうる。該85%以上の相同性を有するポリペプチドは、一又は複数の実施形態において、Xaa12を含み、かつ、GLP-1Rに結合可能であり、好ましくは上記式（２１）のポリペプチドと同様の作用効果を有する。
【００４２】
本開示は、一又は複数の実施形態において、下記式（２２）で表されるポリペプチド、下記式（２２）のポリペプチドから１、２又は３個のアミノ酸が欠失、付加又は置換したポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチド、又は下記式（２２）のポリペプチドのアミノ酸配列と85%以上の相同性を有するポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチドに関する。相同性は上述の通りである。
【化８】
2014084372.tif 000010
【００４３】
式(２２)のポリペプチドから１、２又は３個のアミノ酸が欠失、付加又は置換したポリペプチド、及び下記式（２２）のポリペプチドのアミノ酸配列と85%以上の相同性を有するポリペプチドは、一又は複数の実施形態において、Xaa12を含み、かつ、GLP-1Rに結合可能であり、好ましくは上記式(２２)のポリペプチドと同様の作用効果を有する。
【００４４】
本開示にかかる放射性標識されたポリペプチドは、一又は複数の実施形態において、Ｃ末端のカルボキシル基がアミド化されている。本実施形態のポリペプチドは、血液クリアランスに優れうる。
【００４５】
本開示にかかる放射性標識されたポリペプチドの製造方法は、特に限定されない。本開示にかかる放射性標識されたポリペプチドは、例えば、実施例に開示する方法を参照して製造できる。
【００４６】
本開示にかかる放射性標識されたポリペプチドは、GLP-1Rに結合可能である。本開示にかかる標識前駆体となるポリペプチドは、一又は複数の実施形態において、GLP-1Rに対して非標識のexendin(9-39)よりも高い親和性を示す。よって、本開示にかかる放射性標識されたポリペプチドは、一又は複数の実施形態において、GLP-1R陽性の細胞のイメージング及び定量、GLP-1Rの発現が関与する疾患の診断及び治療等に利用できる。GLP-1R陽性の細胞のイメージングとしては、一又は複数の実施形態において、膵島のイメージングが挙げられる。GLP-1Rの発現が関与する疾患は、特に限定されないが、一又は複数の実施形態において、神経内分泌腫瘍（NET）である。神経内分泌腫瘍は、特に限定されないが、一又は複数の実施形態において、インスリノーマ、小細胞気管支癌及び膵癌から選択される。よって、本開示にかかる放射性標識されたポリペプチドは、一又は複数の実施形態において、インスリノーマのイメージング及び定量、インスリノーマの診断及び治療等に利用できる。
【００４７】
本開示にかかる放射性標識されたポリペプチドは、一又は複数の実施形態において、有効成分として本開示にかかる放射性標識されたポリペプチドを含む、上述する各種イメージングに用いる組成物、イメージング用試薬、造影剤、画像診断剤等として用いることができる。これらの組成物、画像診断剤等の取り得る形態としては、特に制限されないが、一又は複数の実施形態において、溶液又は粉末であり、放射性核種の半減期及び放射能減衰等を考慮すると、一又は複数の実施形態において、溶液であり、一又は複数の実施形態において、注射液である。
【００４８】
［イメージング用組成物］
本開示は、さらにその他の態様として、本開示にかかる放射性標識されたポリペプチド又はその前駆体となるポリペプチドを含むイメージング用組成物に関する。イメージング用組成物の形態は、特に限定されないが、一又は複数の実施形態において、溶液又は粉末である。本開示にかかる放射性標識されたポリペプチドを含む場合、放射性核種の半減期及び放射能減衰等を考慮すると、イメージング用組成物の形態は、一又は複数の実施形態において、溶液であり、一又は複数の実施形態において、注射液である。前駆体ペプチドを含む場合、取扱いが向上する観点からは、イメージング用組成物の形態は、一又は複数の実施形態において、粉末であり、一又は複数の実施形態において、凍結乾燥された粉末（凍結乾燥製剤）である。
【００４９】
イメージング用組成物は、担体等の医薬品添加物を含んでいてもよい。本開示において医薬品添加物は、日本薬局方、アメリカ薬局方及び／又はヨーロッパ薬局方等で医薬品添加物として許認可を受けている化合物をいう。担体としては、例えば、水性溶媒及び非水性溶媒が使用できる。水性溶媒としては、例えば、リン酸カリウム緩衝液、生理食塩水、リンゲル液、及び蒸留水等が挙げられる。非水性溶媒としては、例えば、ポリエチレングリコール、植物性油脂、エタノール、グリセリン、ジメチルスルホキサイド、及びプロピレングリコール等が挙げられる。
【００５０】
［キット］
本開示は、さらにその他の態様として、本開示にかかる標識前駆体となるポリペプチドと、放射性金属核種とを含むキットに関する。また、本開示にかかる放射性標識されたポリペプチドを含むキットに関する。本開示のキットは、一又は複数の実施形態において、本開示にかかる放射性標識されたポリペプチドを製造するためのキット、GLP-1Rのイメージングを行うためのキット、インスリノーマのイメージングを行うためのキット、GLP-1R陽性の細胞の定量を行うためのキット、及びインスリノーマの予防又は治療又は診断のためのキットから選択される。キットは、一又は複数の実施形態において、これらの各態様において、それぞれの形態に応じた取扱い説明書を含む。取扱い説明書は、キットに同梱されてもよいし、ウェブ上で提供されてもよい。キットは、一又は複数の実施形態において、本開示にかかる放射性標識されたポリペプチド又はその前駆体を入れるための容器をさらに含む。容器としては、例えば、シリンジやバイアル瓶等が挙げられる。本開示のキットは、一又は複数の実施形態において、バッファー及び浸透圧調整剤等の分子プローブを調製するための成分、並びに、注射器等のポリペプチドの投与に使用する器具から選択される１つ以上をさらに含む。
【００５１】
本開示は、さらにその他の態様として、GLP-1Rをイメージングするための方法であって、本開示にかかる放射性標識されたポリペプチドを投与された被検体から前記ポリペプチドの放射性シグナルを検出することを含むイメージング方法に関する。被検体は、特に限定されないが、一又は複数の実施形態において、ヒト、ヒト以外の哺乳類、培養細胞、及びGLP-1Rが存在しうる対象から選択される。
【００５２】
本開示にかかるイメージング方法は、第１の態様として、本開示にかかる放射性標識されたポリペプチドを予め投与された被検体から該ポリペプチドの放射性シグナルを検出することを含む。シグナルの検出は、例えば、ポリペプチド体を投与後、シグナルの検出に十分な時間が経過後に行うことが好ましい。
【００５３】
本開示にかかるイメージング方法は、一又は複数の実施形態において、検出されたシグナルを再構成処理して画像に変換し表示すること、及び／又は検出されたシグナルを数値化して集積量を提示することを含む。本開示において「表示すること」は、一又は複数の実施形態において、モニタに表示すること、及び／又は印字することを含む。本開示において「提示すること」は、一又は複数の実施形態において、算出した集積量を保存すること、及び／又は外部に出力することを含む。
【００５４】
シグナルの検出は、使用するポリペプチドの放射性核種の種類に応じて適宜決定でき、例えば、PET及びSPECT等を用いて行うことができる。SPECTは、例えば、本開示にかかる放射性標識されたポリペプチドを投与された被検体から放出されるγ線をガンマカメラにより測定することを含む。ガンマカメラによる測定は、例えば、ポリペプチドの放射性核種から放出される放射線（γ線）を一定時間単位で測定することを含み、好ましくは放射線が放出される方向及び放射線数量を一定時間単位で測定することを含む。本開示にかかるイメージング方法は、放射線の測定により得られた測定されたポリペプチドの分布を断面画像として表すこと、及び得られた断面画像を再構成することをさらに含んでいてもよい。
【００５５】
PETは、例えば、ポリペプチドを投与された被検体から、ポジトロンと電子との対消滅により生成するガンマ線をPET用検出器で同時計数することを含み、さらに、計測した結果に基づきポジトロンを放出する放射性核種の位置の三次元分布を描写することを含んでいてもよい。
【００５６】
SPECT又はPETによる測定にあわせて、X線CT及び／又はMRIの測定を行ってもよい。これにより、例えば、SPECT又はPETにより得られた画像（機能画像）と、CT又はMRIにより得られた画像（形態画像）とを融合させた融合画像を得ることができる。
【００５７】
本開示にかかるイメージング方法は、第２の形態として、本開示にかかる放射性標識されたポリペプチドを被検体に投与すること、及び投与された被検体からポリペプチドの放射性シグナルを検出することを含む。シグナルの検出、及び再構成処理等は、第１の態様と同様に行うことができる。
【００５８】
被検体へのポリペプチドの投与は、局所的であってもよく、全身的であってもよい。投与経路は、被検体の状態等に応じて適宜決定できるが、例えば、静脈、動脈、皮内、腹腔内への注射又は輸液等が挙げられる。ポリペプチドの投与量（用量）は、特に制限されず、イメージングのために所望のコントラストを得るために十分な量を投与すればよく、一又は複数の実施形態において、１μｇ以下とすることができる。本開示にかかる放射性標識されたポリペプチドは、一又は複数の実施形態において、担体等の医薬品添加物とともに投与される。医薬品添加物としては、上述のとおりである。投与から測定までの時間は、例えば、ポリペプチドのGLP-1Rへの結合時間、ポリペプチドの種類及びポリペプチドの分解時間等に応じて適宜決定できる。
【００５９】
第２の態様のイメージング方法は、一又は複数の実施形態において、本開示にかかる放射性標識されたポリペプチドを用いたイメージングの結果に基づき、GLP-1Rの発現の状態を判定することを含む。GLP-1Rの発現の状態を判定することは、一又は複数の実施形態において、GLP-1Rのイメージング画像を解析することによりGLP-1Rの発現の有無を判断すること、及び／又はGLP-1R陽性細胞の増減を判断することを含む。
【００６０】
本開示は、さらにその他の態様として、本開示にかかる放射性標識されたポリペプチドを投与された被検体から前記ポリペプチドの放射性シグナルを検出すること、及び、検出したポリペプチドのシグナルからインスリノーマ細胞量を算出することを含むインスリノーマ細胞量の測定方法に関する。インスリノーマ細胞量の算出は、例えば、検出したシグナルの量、シグナルを再構成して得られたイメージング画像を解析すること等により行うことができる。また、イメージングの結果からイメージングの対象物の定量を行うことは、当業者であれば、例えば、検量線や適当なプログラムを用いて容易に行うことができる。インスリノーマ細胞量の測定方法は、算出したインスリノーマ細胞量を表示すること及び／又は提示することをさらに含んでいてもよい。
【００６１】
［糖尿病の予防、治療、診断方法］
本開示は、さらにその他の態様として、糖尿病の予防又は治療又は診断方法に関する。上記のとおり、糖尿病の発症過程では、膵島量（とりわけ、膵β細胞量）が耐糖能異常に先行して減少するが、機能異常が検出・自覚される段階に至ってからでは、糖尿病はすでに治療が難しい段階となっている。しかし、本開示の放射性標識されたポリペプチドを用いたイメージング方法及び／又は膵島量の測定方法によれば、膵島量及び／又は膵β細胞量の減少を早期に発見することができ、ひいては、新たな糖尿病の予防・治療・診断法が構築できる。糖尿病の予防・治療・診断の対象（被検体）としては、ヒト及び／又はヒト以外の哺乳類が挙げられる。
【００６２】
本開示の糖尿病の診断方法は、本開示の放射性標識されたポリペプチドを用いて膵β細胞のイメージングを行うこと、及び、得られた膵島の画像及び／又は膵島量に基づき膵島の状態を判定することを含み、さらに、判定結果に基づき糖尿病の診断を行うことを含んでいてもよい。膵島の状態の判定は、例えば、得られた膵島の画像と基準となる膵島の画像とを比較すること、得られた膵島量と基準となる膵島量とを比較すること等により、膵島量の増減又は変化を判定することを含む。また、膵島の状態の判定は、情報処理装置を用いて行ってもよく、膵島量が減少していると判定したときには、その情報を提示し、膵島量が増加又は維持されていると判定したときには、その情報を提示することが好ましい。判定結果に基づく糖尿病の診断は、例えば、糖尿病発症のリスクを判定すること、糖尿病と判断すること、糖尿病の進行度合いを判断すること等を含む。
【００６３】
本開示の糖尿病の治療方法は、本開示の放射性標識されたポリペプチドを用いた膵島のイメージング及びイメージング結果に基づく糖尿病の診断に加えて、診断に基づき糖尿病の治療することを含む。膵島のイメージング及び糖尿病の診断は、本開示の糖尿病の診断方法と同様に行うことができる。治療方法は、対象に対して行われる投薬や食事療法を含む治療効果を膵島量の変化に着目して評価することを含むことができる。また、本開示の糖尿病の治療方法は、本開示の方法により膵島のイメージング及び／又は膵島量の測定を行うこと、及び、得られた膵島の画像及び／又は膵島量に基づき膵島の機能回復を評価することを含むことができる。
【００６４】
本開示の糖尿病の予防方法は、本開示の放射性標識されたポリペプチドを用いた膵島のイメージング、及びイメージング結果に基づき膵島の状態を判定して糖尿病発症のリスクを判定することを含む。本開示の糖尿病の予防方法は、例えば、定期的に膵島量の測定を行い、膵島量の減少傾向の有無をチェックすることが含むことができる。
【００６５】
本開示は、好ましいその他の態様として、糖尿病の超早期診断方法に関する。本開示の糖尿病の超早期診断方法は、例えば、人間ドック、健康診断において本開示の方法により膵島のイメージング及び／又は膵島量の測定を行うこと、及び、得られた膵島の画像及び／又は膵島量に基づき膵島の状態を判定することを含むことができる。
【００６６】
［インスリノーマの予防、治療、診断方法］
本開示は、さらにその他の態様として、インスリノーマの予防又は治療又は診断方法に関する。本開示にかかる放射性標識されたポリペプチドを用いたイメージング方法及び／又はインスリノーマ細胞量の測定方法によれば、インスリノーマを早期に発見することができ、ひいては、インスリノーマの予防・治療・診断法が構築できる可能性がある。インスリノーマの予防・治療・診断の対象（被検体）としては、ヒト及び／又はヒト以外の哺乳類が挙げられる。
【００６７】
インスリノーマの診断方法は、一又は複数の実施形態において、本開示にかかる放射性標識されたポリペプチドを用いてGLP-1Rのイメージングを行うこと、及び、得られたGLP-1R陽性細胞の画像及び／又はGLP-1R陽性細胞量に基づきインスリノーマの存在を判定することを含む。インスリノーマの存在の判定は、一又は複数の実施形態において、得られたGLP-1R陽性細胞の画像と基準となる画像とを比較すること、及び、得られたGLP-1R陽性細胞量と基準となるGLP-1R陽性細胞量とを比較することから選択されることにより行われる。また、インスリノーマの存在の判定は、一又は複数の実施形態において、情報処理装置を用いて行ってもよく、GLP-1R陽性細胞量が増加していると判定したときには、その情報を提示し、GLP-1R陽性細胞が減少又は維持されていると判定したときには、その情報を提示することが好ましい。判定結果に基づくインスリノーマの診断は、一又は複数の実施形態において、インスリノーマ発症のリスクを判定すること、インスリノーマと判断すること、及び、インスリノーマの進行度合いを判断することから選択されることを含む。
【００６８】
本開示のインスリノーマの治療方法は、本開示にかかる放射性標識されたポリペプチドを用いたGLP-1Rのイメージング及びイメージング結果に基づくインスリノーマの診断に加えて、診断に基づきインスリノーマを治療することを含む。治療方法は、一又は複数の実施形態において、対象に対して行われる投薬の治療効果をGLP-1R陽性細胞量の変化に着目して評価することを含む。
【００６９】
本開示のインスリノーマの予防方法は、本開示にかかる放射性標識されたポリペプチドを用いたGLP-1Rのイメージング、及びイメージング結果に基づきGLP-1Rの発現の状態を判定してインスリノーマ発症のリスクを判定することを含む。本開示のインスリノーマの予防方法は、例えば、定期的にGLP-1R陽性細胞量の測定を行い、GLP-1R陽性細胞量の減少傾向の有無をチェックすることが含むことができる。
【００７０】
本開示は、好ましいその他の態様として、インスリノーマの超早期診断方法に関する。本開示のインスリノーマの超早期診断方法は、例えば、人間ドック、健康診断において本開示の方法によりGLP-1Rのイメージング及び／又はGLP-1R陽性細胞量の測定を行うこと、及び、得られたGLP-1R陽性細胞の画像及び／又はGLP-1R陽性細胞量に基づきGLP-1Rの発現の状態を判定することを含むことができる。
【００７１】
［標識方法］
本開示は、さらにその他の態様として、キレート部が結合されたポリペプチドを標識する方法に関する。本開示の標識方法は、グッドの緩衝液、又は非イオン性界面活性剤を含む緩衝液に前記ポリペプチドを溶解すること、及び溶解した前記ポリペプチドを、[111In]インジウム塩と反応させることを含む。本開示の標識方法によれば、標識を行うポリペプチドの濃度が低い場合であっても、高い放射化化学的収率でポリペプチドを標識することができる。[111In]インジウム塩と反応時のキレート部が結合されたポリペプチドの濃度は、一又は複数の実施形態において、０．１〜１００μＭであり、好ましくは０．１〜５０μＭ、０．１〜１０μＭ、又は１〜１０μＭである。
【００７２】
キレート部が結合されたポリペプチドとしては、一又は複数の実施形態において、上述の標識前駆体となるポリペプチドが挙げられ、特に限定されない一又は複数の実施形態において、式（１）、（２）、（５）又は（６）で表されるポリペプチドが挙げられる。キレート部が結合されたポリペプチドとしては、一又は複数の実施形態において、式（１９）又は（２０）で表わされるポリペプチドが挙げられる。
【００７３】
緩衝液としては、一又は複数の実施形態において、グッドの緩衝液、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、酒石酸緩衝液、リン酸緩衝液、及びトリス緩衝液等が挙げられる。グッドの緩衝液としては、一又は複数の実施形態において、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、２−モルホリノエタンスルホン酸（ＭＥＳ）、ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）、Ｎ−（２−アセトアミド）イミノ二酢酸（ＡＤＡ）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、Ｎ−（２−アセトアミド）−２−アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、３−モルホリノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、３−モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ−〔トリス（ヒドロキシメチル）メチル〕−２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）、２−〔４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル〕エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、Ｎ−〔トリス（ヒドロキシメチル）メチル〕グリシン（Ｔｒｉｃｉｎｅ）、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン（Ｂｉｃｉｎｅ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、Ｎ−シクロヘキシル−２−アミノエタンスルホン酸（ＣＨＥＳ）、Ｎ−シクロヘキシル−３−アミノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ）、及びＮ−シクロヘキシル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＣＡＰＳ）等が挙げられる。
【００７４】
非イオン性界面活性剤としては、一又は複数の実施形態において、ポリオキシエチレン−ｐ−ｔ−オクチルフェニルエーテル（Ｔｒｉｔｏｎ系界面活性剤等）、及びポリエチレンソルビタンアルキルエステル（Ｔｗｅｅｎ系界面活性剤等）、ポリオキシエチレンアルキルエーテル（Ｂｒｉｊ系界面活性剤等）等が挙げられ、特に限定されない一又は複数の実施形態において、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（Ｔｗｅｅｎ８０(商品名)）が挙げられる。
【００７５】
本開示は、以下の一又は複数の実施形態に関しうる；
〔１〕  下記式（１）で表されるポリペプチド。
Xaa1-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser（１）（配列番号１）
［式（１）において、
Xaa1は、α−アミノ基に-Y-X基が結合したアスパラギン酸であり、
Xは、diethylenetriaminepentaacetic dianhydride(DTPA)、又は1,4,7-triazacyclononnane-N,N'N''-triacetic acid(NOTA)であり、
Yは、-CH2-(C6H4)-、-NH-C(=S)-、及び-NH-(CH2)5-C(=O)-、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される基を含むリンカーである。］
〔２〕  下記式（２）で表されるポリペプチド。
【化９】
2014084372.tif 000011
〔３〕  下記式（３）で表されるポリペプチド。
Xaa1-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser（３）（配列番号３）
［式（３）において、
Xaa1は、α−アミノ基に-Y-X'基が結合したアスパラギン酸であり、
X'は、キレート部と前記キレート部でキレートされた放射性金属核種とを含み、前記キレート部は、diethylenetriaminepentaacetic dianhydride(DTPA)、又は1,4,7-triazacyclononnane-N,N'N''-triacetic acid(NOTA)であり、
Yは、-CH2-(C6H4)-、-NH-C(=S)-、及び-NH-(CH2)5-C(=O)-、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される基を含むリンカーである。］
〔４〕  前記放射性金属核種が、111Inである、〔３〕記載のポリペプチド。
〔５〕  下記式（４）で表されるポリペプチド。
【化１０】
2014084372.tif 000012
〔６〕  下記式（５）で表されるポリペプチド。
Asp-Leu-Ser-Xaa4-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser（５）（配列番号５）
［式（５）において、
Xaa4は、側鎖のアミノ基に-Y-X基が結合したリジン残基であり、
前記Xは、diethylenetriaminepentaacetic dianhydride(DTPA)、又は1,4,7-triazacyclononnane-N,N'N''-triacetic acid(NOTA)であり、
前記Yは、-CH2-(C6H4)-、-NH-C(=S)-、及び-NH-(CH2)5-C(=O)-、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される基を含むリンカーである。］
〔７〕  下記式（６）で表されるポリペプチド。
【化１１】
2014084372.tif 000013
〔８〕  下記式（７）で表されるポリペプチド。
Asp-Leu-Ser-Xaa4-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser（７）（配列番号７）
［式（７）において、
Xaa4は、側鎖のアミノ基に-Y-X'基が結合したリジン残基であり、
前記X'は、キレート部と前記キレート部でキレートされた放射性金属核種とを含み、前記キレート部は、diethylenetriaminepentaacetic dianhydride(DTPA)、又は1,4,7-triazacyclononnane-N,N'N''-triacetic acid(NOTA)であり、
前記Yは、-CH2-(C6H4)-、-NH-C(=S)-、及び-NH-(CH2)5-C(=O)-、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される基を含むリンカーである。］
〔９〕  前記放射性金属核種が、111Inである、〔８〕記載のポリペプチド。
〔１０〕  下記式（８）で表されるポリペプチド。
【化１２】
2014084372.tif 000014
〔１１〕  〔３〕から〔５〕及び〔８〕から〔１０〕のいずれかに記載のポリペプチドを含む、イメージング用組成物。
〔１２〕  〔１〕、〔２〕、〔６〕又は〔７〕に記載のポリペプチドと、
放射性金属核種とを含む、キット。
〔１３〕  GLP-1受容体をイメージングするための方法であって、
〔３〕から〔５〕及び〔８〕から〔１０〕のいずれかに記載のポリペプチドを投与された被検体から前記ポリペプチドの放射性シグナルを検出することを含む、イメージング方法。
〔１４〕  前記検出されたシグナルを再構成処理して画像に変換し表示することを含む、〔１３〕記載のイメージング方法。
〔１５〕  〔１３〕又は〔１４〕に記載のイメージング方法に用いる〔３〕から〔５〕及び〔８〕から〔１０〕のいずれかに記載のポリペプチド。
〔１６〕  GLP-1受容体をイメージングするための〔３〕から〔５〕及び〔８〕から〔１０〕のいずれかに記載のポリペプチドの使用。
〔１７〕  〔１３〕又は〔１４〕に記載のイメージング方法に用いるイメージング用組成物の製造のための〔１〕、〔２〕、〔６〕又は〔７〕に記載のポリペプチドの使用。
〔１８〕  キレート部が結合されたポリペプチドを標識する方法であって、
グッドの緩衝液、又は非イオン性界面活性剤を含む緩衝液に前記ポリペプチドを溶解すること、及び
溶解した前記ポリペプチドを、[111In]インジウム塩と反応させることを含む、標識方法。
〔１９〕  下記式（１９）で表されるポリペプチド、
下記式（１９）のポリペプチドから１、２又は３個のアミノ酸が欠失、付加又は置換したポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチド、又は、
下記式(１９)のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の相同性を有するポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチド。
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Xaa12-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser（１９）（配列番号１９）
［式（１９）において、
Xaa12は、側鎖のアミノ基に-Y-X基が結合したリジン残基であり、
前記Xは、diethylenetriaminepentaacetic dianhydride(DTPA)、又は1,4,7-triazacyclononnane-N,N'N''-triacetic acid(NOTA)であり、
前記Yは、-CH2-(C6H4)-、-NH-C(=S)-、及び-NH-(CH2)5-C(=O)-、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される基を含むリンカーである。］
〔２０〕  下記式（２０）で表されるポリペプチド、
下記式（２０）のポリペプチドから１、２又は３個のアミノ酸が欠失、付加又は置換したポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチド、又は、
下記式（２０）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の相同性を有するポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチド。
【化１３】
2014084372.tif 000015
〔２１〕  下記式（２１）で表されるポリペプチド、
下記式（２１）のポリペプチドから１、２又は３個のアミノ酸が欠失、付加又は置換したポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチド、又は、
下記式(２１)のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の相同性を有するポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチド。
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Xaa12-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser（２１）（配列番号２１）
［式（２１）において、
Xaa12は、側鎖のアミノ基に-Y-X'基が結合したリジン残基であり、
前記X'は、キレート部と前記キレート部でキレートされた放射性金属核種とを含み、前記キレート部は、diethylenetriaminepentaacetic dianhydride(DTPA)、又は1,4,7-triazacyclononnane-N,N'N''-triacetic acid(NOTA)であり、
前記Yは、-CH2-(C6H4)-、-NH-C(=S)-、及び-NH-(CH2)5-C(=O)-、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される基を含むリンカーである。］
〔２２〕  下記式（２２）で表されるポリペプチド、
下記式（２２）のポリペプチドから１、２又は３個のアミノ酸が欠失、付加又は置換したポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチド、又は、
下記式（２２）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の相同性を有するポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチド。
【化１４】
2014084372.tif 000016
〔２３〕  〔２１〕又は〔２２〕に記載のポリペプチドを含む、イメージング用組成物。
〔２４〕  〔１９〕又は〔２０〕に記載のポリペプチドと、
放射性金属核種とを含む、キット。
〔２５〕  GLP-1受容体をイメージングするための方法であって、
〔２１〕又は〔２２〕に記載のポリペプチドを投与された被検体から前記ポリペプチドの放射性シグナルを検出することを含む、イメージング方法。
〔２６〕  前記検出されたシグナルを再構成処理して画像に変換し表示することを含む、〔２５〕記載のイメージング方法。
〔２７〕  〔２５〕又は〔２６〕に記載のイメージング方法に用いる〔２１〕又は〔２２〕に記載のポリペプチド。
〔２８〕  GLP-1受容体をイメージングするための〔２１〕又は〔２２〕に記載のポリペプチドの使用。
〔２９〕  〔２５〕又は〔２６〕に記載のイメージング方法に用いるイメージング用組成物の製造のための〔１９〕又は〔２０〕に記載のポリペプチドの使用。
〔３０〕  〔３〕から〔５〕、〔８〕から〔１０〕、〔２１〕及び〔２２〕のいずれかに記載のポリペプチドの製造方法であって、
〔１〕、〔２〕、〔６〕、〔７〕、〔１９〕又は〔２０〕に記載のポリペプチドを、非イオン性界面活性剤を含む緩衝液又はグッドの緩衝液に溶解すること、及び
溶解した前記ポリペプチドを、[111In]インジウム塩と反応させることを含む、製造方法。
〔３１〕  前記ポリペプチドを、非イオン性界面活性剤を含むグッドの緩衝液に溶解することを含む、〔３０〕記載の製造方法。
【００７６】
以下に、実施例を用いて本開示をさらに説明する。但し、本開示は以下の実施例に限定して解釈されない。
【実施例】
【００７７】
なお、本開示において、以下の略語を使用する。
Bn：ベンジル
Ahx：6-aminohexanoic acid
OtBu：tert-ブチルオキシ
Fmoc：9-フルオレニルメチルオキシカルボニル基
HBTU：1-[ビスジメチルアミノメチレン]-1H-ベンゾトリアゾリウム-3-オキシドーヘキサフルオロホスフェイト
NaOAc：酢酸ナトリウム
Trt：トリチル
TIS：triisopropyl silane
DT：dodecane thiol
なお、アミノ酸は、特に言及しない限り、Ｌ体を使用した。【００７８】
［製造例１］
下記手順で、式(２)で表されるポリペプチドを調製した。
(Bn DTPA)-Ahx-DLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2  (２)（配列番号２）【００７９】
（１）保護ペプチド樹脂の合成
(Bn DTPA)-Ahx-DLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2 Rink Amide MBHA   (９)（配列番号９）
上記式(９)で表される保護ペプチド樹脂の合成は、Applied Biosystems社製のペプチド自動合成機（431A）を用いて添付のソフトウエアに従って１個ずつアミノ酸をカルボキシル末端側から結合させていく方法（固相合成法）により行った。
Rink Amide MBHA Resin(0.25mmol scale)を出発樹脂担体として使用し、Fmoc-アミノ酸誘導体を上記ペプチド合成機の反応容器にセットし、合成機に添付されているソフトウエアに従って、活性化剤である1-［ビスジメチルアミノメチレン］-1H-ベンゾトリアゾリウム-3-オキシド-ヘキサフルオロホスフェイト（HBTU）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（HOBt）をジメチルホルムアミド（DMF）に溶解して反応器に加えて反応させた。得られた樹脂をピペリジン含有N-メチルピロリドン中で緩やかに攪拌してFmoc基を除いて次のアミノ酸誘導体の縮合に進めた。使用したFmocアミノ酸誘導体のうち、側鎖に官能基のあるアミノ酸はそれぞれAsp(OBu)、Ser(OBu)、Lys(Boc)、Gln(Trt)、Glu(OBu)、Trp(Boc)、Arg(Pbf)及びAsn(Trt)を用いた。
配列に従って逐次アミノ酸を伸展して、式(１０)で表される保護ペプチド樹脂Ｂを得た。
Fmoc-DLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS- Rink Amide MBHA   (１０)(配列番号１０)
保護ペプチド樹脂ＣにFmoc-Ahx-OHをHBTU-HOBt法で導入して、式(１１)で表される保護ペプチド樹脂Ｃを得た。
Fmoc-Ahx-DLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS- Rink Amide MBHA   (１１)(配列番号１１)
保護ペプチド樹脂ＣからFmoc基を除去した後、p-SCN-Bn-DTPA (Macrocyclics社製)及びDIEAとの反応により、式(９)で表される保護ペプチド樹脂を得た。なお、式(９)、(１０)及び(１１)において、側鎖の保護基の表記を省略した。【００８０】
（２）脱保護と樹脂からの切り出し
得られた保護ペプチド樹脂をトリフルオロ酢酸を用いる定法のTFA-TIS-H2O-DT-(95/2.5/2.5/2.5,v/v)  脱保護条件で室温、2時間処理し脱保護と樹脂からのペプチドの切り離しを同時に行った。反応液から担体樹脂をろ別の後、TFAを留去。残渣にエーテルを加えて得られる粗生成物の沈殿をろ取した。【００８１】
（３）目的ペプチドの単離精製
得られた粗生成ペプチドを島津製LC-8AのHPLC分取装置（カラム：ODS 30×250mm）を用いて0.1%トリフルオロ酢酸を含む水―アセトニトリルの系で分取精製し、目的のペプチドの分画を得、アセトニトリルを留去した後、凍結乾燥粉末とし、目的物をトリフルオロ酢酸塩として得た。【００８２】
［製造例２］
下記手順で、式(１２)で表されるポリペプチドを調製した。
(Bn In DTPA)-Ahx-DLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2  (１２)（配列番号１２）
式（２）で表されるポリペプチド(2.7mg)を0.1%Tween80を含む0.01M MES Buffer(pH5.5)100μLに溶解させ、1M InCl3溶液を20μL加えた。室温にて5分間静置しESI-MASSにて式（１２）で表されるポリペプチドの生成を確認し、島津製LC-20AのHPLC分析装置（カラム：ODS 10×250mm)を用いて0.1%トリフルオロ酢酸を含む水―アセトニトリルの系で分取精製し、目的のペプチドの分画を得、アセトニトリルを留去した後、凍結乾燥粉末とし、式（１２）で表されるポリペプチドをトリフルオロ酢酸塩として得た。【００８３】
［製造例３］
下記手順で、式(６)で表されるポリペプチドを調製した。
DLSK(-Ahx-Bn DTPA)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2  (６)（配列番号６）【００８４】
（１）保護ペプチド樹脂の合成
Boc-DLSK(-Ahx-Bn DTPA)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2 Rink Amide MBHA(１３)（配列番号１３）
上記式(１３)で表される保護ペプチド樹脂の合成は、Applied Biosystems社製のペプチド自動合成機（431A）を用いて添付のソフトウエアに従って１個ずつアミノ酸をカルボキシル末端側から結合させていく方法（固相合成法）により行った。
Rink Amide MBHA Resin(0.25mmol scale)を出発樹脂担体として使用し、Fmoc-アミノ酸誘導体を上記ペプチド合成機の反応容器にセットし、合成機に添付されているソフトウエアに従って、活性化剤である1-［ビスジメチルアミノメチレン］-1H-ベンゾトリアゾリウム-3-オキシド-ヘキサフルオロホスフェイト（HBTU）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（HOBt）をジメチルホルムアミド（DMF）に溶解して反応器に加えて反応させた。得られた樹脂をピペリジン含有N-メチルピロリドン中で緩やかに攪拌してFmoc基を除いて次のアミノ酸誘導体の縮合に進めた。使用したFmocアミノ酸誘導体のうち、側鎖に官能基のあるアミノ酸はそれぞれAsp(OBu)、Ser(OBu)、Lys(Boc)、Lys(Mmt)、Gln(Trt)、Glu(OBu)、Trp(Boc)、Arg(Pbf)及びAsn(Trt)を用いた。
配列に従って逐次アミノ酸を伸展して、式(１４)で表される保護ペプチド樹脂Ｂを得た。
Boc-DLSK(Mmt)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS- Rink Amide MBHA (１４)(配列番号１４)
1.5% TFA/ 5% TIS/ 93.5% DCMで処理してK12（4番目のリジン残基）の側鎖から保護基（Mmt基）を除去した後、Fmoc-Ahx-OHをHBTU-HOBt法で導入して、式(１５)で表される保護ペプチド樹脂Ｃを得た。
Boc-DLSK(-Ahx-Fmoc)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-Rink Amide MBHA (１５)(配列番号１５)
さらにK(-Ahx-Fmoc)12のFmoc基を除去した後、p-SCN-Bn-DTPA (Macrocyclics社製)及びDIEAとの反応により、式(１３)で表される保護ペプチド樹脂を得た。なお、式(１３)、(１４)及び(１５)において、側鎖の保護基の表記を省略した。【００８５】
（２）脱保護と樹脂からの切り出し
得られた保護ペプチド樹脂をトリフルオロ酢酸を用いる定法のTFA-TIS-H2O-DT-(95/2.5/2.5/2.5,v/v)脱保護条件で室温、2時間処理し脱保護と樹脂からのペプチドの切り離しを同時に行った。反応液から担体樹脂をろ別の後、TFAを留去。残渣にエーテルを加えて得られる粗生成物の沈殿をろ取した。【００８６】
（３）目的ペプチドの単離精製
得られた粗生成ペプチドを島津製LC-8AのHPLC分取装置（カラム：ODS 30×250mm）を用いて0.1%トリフルオロ酢酸を含む水―アセトニトリルの系で分取精製し、目的のペプチドの分画を得、アセトニトリルを留去した後、凍結乾燥粉末とし、目的物をトリフルオロ酢酸塩として得た。【００８７】
［製造例４］
下記手順で、式(１６)で表されるポリペプチドを調製した。
DLSK(-Ahx-Bn In DTPA)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2  (１６)（配列番号１６）
式（６）で表されるポリペプチド(2.3mg)を0.1%Tween80を含む0.01M MES Buffer(pH5.5)100uLに溶解させ、1M InCl3溶液を20μL加えた。室温にて5分間静置しESI-MASSにて式（１６）で表されるポリペプチドの生成を確認し、島津製LC-20AのHPLC分析装置（カラム：ODS 10×250mm)を用いて0.1%トリフルオロ酢酸を含む水―アセトニトリルの系で分取精製し、目的のペプチドの分画を得、アセトニトリルを留去した後、凍結乾燥粉末とし、式（１６）で表されるポリペプチドをトリフルオロ酢酸塩として得た。【００８８】
下記手順で、式(８)で表されるポリペプチドを調製する条件を検討した。
DLSK(-Ahx-Bn [111In]In DTPA)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2  (８)（配列番号８）
式（６）で表されるポリペプチドを各種溶媒に溶解させた溶液（1-100μM）20μLに日本メジフィジックス社製[111In]InCl3（0.02M HCl）20μL加えた。室温にて30分間静置し、島津製LC-20AのHPLC分析装置（カラム：ODS 10×250mm)を用いて0.1%トリフルオロ酢酸を含む水―アセトニトリルの系で式（８）で表されるポリペプチドを確認した。その結果の一例を表１に示す。【００８９】
【表１】
2014084372.tif 000017
【００９０】
表１に示すように、式（６）で表されるポリペプチド溶液(100μM)を用いた場合、定量的に式(８)で表されるポリペプチドが得られた（Entry 1,2）。式（６）で表されるポリペプチド溶液(10μM)を用いた場合、溶媒として0.4M NaOAc(pH5.0)を用いた場合よりも0.01-1.0M MES(pH5.5)を用いた場合の方が良好な放射化学的収率であった。また、可溶化剤として0.1% Tween80を添加した場合の方が添加していない条件よりも良好な放射化学的収率であった（Entry 3-12）。式（６）で表されるポリペプチド溶液(1μM)を用いた場合、溶媒として0.4M NaOAc(pH5.0)を用いた場合は、式(８)で表されるポリペプチドは得られず（Entry 13）、0.01-1.0M MES(pH5.5)を用いた場合でも1-2％の放射化学的収率であった（Entry 14-16）。可溶化剤として0.1% Tween80を添加した0.01M MES(pH5.5)を場合、86.4%の良好な放射化学的収率であった（Entry 21）。【００９１】
また、式(１７)で表されるポリペプチドを用いて上記表１に示す条件と同じ条件でポリペプチドの標識を行ったところ、同様に式(１８)で表されるポリペプチドが調製できた。
HGEGTFTSDLSK(-Ahx-Bn DTPA)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2  (１７)（配列番号１７）
HGEGTFTSDLSK(-Ahx-Bn [111In]In DTPA)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2  (１８)（配列番号１８）【００９２】
［Binding Assayの手順］
Binding Buffer（50mM HEPES, 5mM MgCl2, 0.2% BSA, pH7.4）155μL、評価するポリペプチド水溶液(0,10-11,10-10,10-9,10-8,10-7,10-6,10-5 M)20μL、PerkinElmer社製[125I]Tyr-GLP-1(7-36)(5nM)20μL、Millipore社製Membrane Preparation Recombinant Human GLP-1(200units/1mL)5μLを混合し、室温にて2時間震蕩した。震蕩した液はガラス繊維濾紙を用いたB/F分離を行い、濾紙をWash Buffer（25mM HEPES, 0.5M NaCl, 0.1% BSA, pH7.4）にて洗浄した。濾紙上に残った放射能をPerkinElmer社製Wallac1480WIZARD(R)3のγカウンターを用いて測定した。得られた測定結果はGraphPad Software社製GraphPad Prism version 5.03を用いて解析した。その結果の一例を図３のグラフに示す。【００９３】
式(２)で表されるポリペプチドのIC50は6.86nMであり、非標識のexendin(9-39)のGLP-1Rに対する親和性(30.2nM)よりも一桁以上親和性の向上が確認された。さらに、インジウムを導入した式(１２)で表されるポリペプチド（In-DTPA9-Ex(9-39)）のIC50は2.5nMであり、インジウムを導入することによってさらに親和性が向上された。式(６)で表されるポリペプチドのIC50は26.25nMであり、非標識のexendin(9-39)のGLP-1Rに対する親和性(30.2nM)と同等の親和性が確認された。さらに、インジウムを導入した式(１６)で表されるポリペプチド（In-DTPA12-Ex(9-39)）のIC50は31.27nMであり、インジウムを導入することによっても同等の親和性が確認された。【００９４】
［In Vitro Evaluation of Stability in Murine Plasma］
ddYマウス(6週齢、雌性)から採取した血漿200μLと111In-DTPA9-Ex(9-39)(1.85 MBq)20μLとを混和し、37℃にて30, 60, 120, 240分間インキュベートした。その後、メタノール100μLを加え、血漿中タンパク成分を凝集させ、5分遠心(4℃, 10000×g)し、上清を得た。上清はMillex-GV(13 mm)を用いてろ過し、HPLCにて分析した。その結果の一例を図４のグラフに示す。図４に示すように、111In-DTPA9-Ex(9-39)は、２４０分間インキュベートした後であっても、91%が未変化体として存在していた。つまり、111In-DTPA9-Ex(9-39)は非常に安定であることが確認できた。【００９５】
［製造例５］
下記手順で、式(４)で表されるポリペプチドを調製した。
(Bn [111In]In DTPA)-Ahx-DLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2  (４)（配列番号４）
式（２）で表されるポリペプチドを0.1%Tween80を含む0.01M MES Buffer(pH5.5)に溶解させた溶液（10μM）20μLに日本メジフィジックス社製[111In]InCl3（0.02M HCl）20μL加えた。室温にて30分間静置し、島津製LC-20AのHPLC分析装置（カラム：ODS 10×250mm)を用いて0.1%トリフルオロ酢酸を含む水―アセトニトリルの系で式（４）で表されるポリペプチドを確認し、使用した。【００９６】
［製造例６］
下記手順で、式(８)で表されるポリペプチドを調製した。
DLSK(-Ahx-Bn [111In]In DTPA)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2  (８)（配列番号８）
式（６）で表されるポリペプチドを0.1%Tween80を含む0.01M MES Buffer(pH5.5)に溶解させた溶液（10μM）20μLに日本メジフィジックス社製[111In]InCl3（0.02M HCl）20μL加えた。室温にて30分間静置し、島津製LC-20AのHPLC分析装置（カラム：ODS 10×250mm)を用いて0.1%トリフルオロ酢酸を含む水―アセトニトリルの系で式（８）で表されるポリペプチドを確認し、使用した。【００９７】
［Distribution］
調製した式(４)で表されるポリペプチド（0.8-1.2μCi）を無麻酔下の6週齢ddYマウス（雄性、体重25g）静脈注射（尾静脈）により投与した。投与5分後、15分後、30分後、60分後、120分後に各臓器を摘出した（n=5）。各臓器の重量と放射能とを測定し、単位重量あたりの放射能から集積量（%dose/g）を算出した。その結果の一例を下記表２に示す。【００９８】
【表２】
2014084372.tif 000018
【００９９】
表２に示すとおり、式(４)で表されるポリペプチドの膵臓への集積は投与5分後で12.69%dose/g、投与15分後で9.55%dose/g、投与30分後で5.74%dose/g、投与60分後で4.04%dose/g、投与120分後で2.64%dose/gであった。また、式(４)で表されるポリペプチドは、投与後5〜120分の間では、膵臓の隣接臓器である肝臓、胃、脾臓、小腸よりも膵臓に多く集積し、観察する上で十分なコントラストのSPECT画像が得られるものと示唆された。【０１００】
［Distribution］
調製した式(６)で表されるポリペプチド（0.8-1.2μCi）を無麻酔下の6週齢ddYマウス（雄性、体重25g）静脈注射（尾静脈）により投与した。投与5分後、15分後、30分後、60分後、120分後に各臓器を摘出した（n=5）。各臓器の重量と放射能とを測定し、単位重量あたりの放射能から集積量（%dose/g）を算出した。その結果の一例を下記表３に示す。【０１０１】
【表３】
2014084372.tif 000019
【０１０２】
表３に示すとおり、式(６)で表されるポリペプチドの膵臓への集積は投与5分後で8.78%dose/g、投与15分後で4.47%dose/g、投与30分後で3.27%dose/g、投与60分後で1.41%dose/g、投与120分後で0.70%dose/gであった。式(４)で表されるポリペプチドと比較して膵臓への集積の低下が見られたが、GLP-1Rへの親和性の違いによる影響が示唆された。また、式(６)で表されるポリペプチドは、投与後5〜30分の間では、膵臓の隣接臓器である肝臓、胃、脾臓、小腸よりも膵臓に多く集積し、観察する上で十分なコントラストのSPECT画像が得られるものと示唆された。【０１０３】
［Distribution］
調製した式(４)で表されるポリペプチド（0.8-1.2μCi）を無麻酔下のラットInsulinoma細胞株INS-1移植BALB/c nu/nuマウス（雌性、体重20g）静脈注射（尾静脈）により投与した。投与15分後、30分後、60分後、120分後、240分後、360分後に各臓器を摘出した（n=5）。各臓器の重量と放射能とを測定し、単位重量あたりの放射能から集積量（%dose/g）を算出した。その結果の一例を下記表４に示す。【０１０４】
【表４】
2014084372.tif 000020
【０１０５】
表４に示すとおり、式(４)で表されるポリペプチドのINS-1腫瘍への集積は、投与15分後で14.60%dose/g、投与30分後で7.83%dose/g、投与60分後で4.40%dose/g、投与120分後で2.32%dose/g、投与240分後で1.87%dose/g、投与360分後で1.94%dose/gであった。また、式(４)で表されるポリペプチドは、投与後15〜360分の間では、膵臓の隣接臓器である膵臓、肝臓、胃、脾臓、小腸よりも膵臓に多く集積し、特にINS-1腫瘍/膵臓比は投与15分後で2.06、投与30分後で2.52、投与60分後で2.70、投与120分後で2.46、投与240分後で2.86、投与360分後で2.25であった。これらの結果より、ＩＮＳ−１腫瘍を観察する上で十分なコントラストのSPECT画像が得られるものと示唆された。【０１０６】
［Blocking Study］
Ex(9-39)amide(20μg)を投与した無麻酔下のラットInsulinoma細胞株INS-1移植BALB/c nu/nuマウス（雌性、体重20g）静脈注射（尾静脈）により投与した。30分後調製した式(４)で表されるポリペプチド（0.8-1.2μCi）を投与し、60分後に各臓器を摘出した（n=5）。各臓器の重量と放射能とを測定し、単位重量あたりの放射能から集積量（%dose/g）を算出した。その結果の一例を図１に示す。【０１０７】
図１に示すように、Ex(9-39)amide(20μg)を投与したInsulinoma細胞株INS-1移植BALB/c nu/nuマウスの式(４)で表されるポリペプチドの集積量（%dose/g）に対して、Ex(9-39)amide(20μg)を投与していないInsulinoma細胞株INS-1移植BALB/c nu/nuマウスの式(４)で表されるポリペプチドの集積量（%dose/g）を比較すると、INS-1腫瘍では集積量が75.7%減少し、膵臓では集積量が67.7%減少したことから、式(４)で表されるポリペプチドがGLP-1R特異的に集積していることが確認された。【０１０８】
［SPECT Study］
調製した式(４)で表されるポリペプチド（538μCi）を無麻酔下のラットInsulinoma細胞株INS-1移植BALB/c nu/nuマウス（雌性、体重20g）静脈注射（尾静脈）により投与した。投与後30分から1時間30分まで小動物用SPECT/CT(FX-3300)にて撮像した。その結果の一例を図２に示す。【０１０９】
図２は、尾側の横断面像であり、図２において膀胱を矢印で示し、腫瘍部分を三角で示す。図２に示すとおり、式(４)で表されるポリペプチドを用いたINS-1腫瘍を明瞭に描出することが出来、三次元イメージングが可能となった。したがって、本発明のイメージング用分子プローブであれば、GLP-1Rを標的とした非侵襲的イメージングプローブになることが示唆された。【０１１０】
［製造例７］
製造例３と同様の手順で、式(２０)で表されるポリペプチドを調製した。なお、使用したFmocアミノ酸誘導体のうち、側鎖に官能基のあるアミノ酸はそれぞれHis(Trt)、Asp(OBu)、Ser(OBu)、Lys(Boc)、Lys(Mmt)、Gln(Trt)、Glu(OBu)、Trp(Boc)、Arg(Pbf)及びAsn(Trt)を用いた。【０１１１】
［製造例８］
式(６)で表わされるポリペプチドに代えて式(２０)で表されるポリペプチドを使用した以外は、製造例５４と同様の手順で、式(２３)で表されるポリペプチド（以下、「In-DTPA12-Ex4」ともいう）を調製した。
HGEGTFTSDLSK DLSK(-Ahx-Bn In DTPA)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2  (２３)（配列番号２３）【０１１２】
［製造例９］
式(６)で表わされるポリペプチドに代えて式(２０)で表されるポリペプチドを使用した以外は、製造例５と同様の手順で、式(２２)で表されるポリペプチド（以下、「111In-DTPA12-Ex4」ともいう）を調製した（放射化学的収率：６４．３％、放射化学的純度：＞９９％）。
HGEGTFTSDLSK(-Ahx-Bn [111In]In DTPA)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2  (２２)（配列番号２２）【０１１３】
［Inhibition Assay Using GLP-1 Membrane Preparation］
Binding Buffer（50mM HEPES, 5mM MgCl2, 0.2% BSA, pH7.4）155μL、In-DTPA12-Ex4の水溶液(0,10-11,10-10,10-9,10-8,10-7,10-6,10-5 M)20μL、PerkinElmer社製[125I]Tyr-GLP-1(7-36)(5nM)20μL、Millipore社製Membrane Preparation Recombinant Human GLP-1(200units/1mL)5μLを混合し、25℃にて2時間震蕩した。震蕩した液はガラス繊維濾紙を用いたB/F分離を行い、濾紙をWash Buffer（25mM HEPES, 0.5M NaCl, 0.1% BSA, pH7.4）にて洗浄した。濾紙上に残った放射能をPerkinElmer社製Wallac1480WIZARD(R)3のγカウンターを用いて測定した。得られた測定結果はGraphPad Software社製GraphPad Prism version 5.03を用いて解析して、50%阻害濃度(IC50)を測定した。その結果の一例を図５のグラフに示す。In-DTPA12-Ex4のIC50は0.43nM（95% confidence interval:0.24-0.78）であり、非標識のexendin4（IC50：0.19nM（95% confidence interval:0.11-0.32））と同程度のGLP-1R結合親和性を有することが確認された。【０１１４】
［In Vitro Evaluation of Stability in Murine Plasma］
ddYマウス(6週齢、雌性)から採取した血漿200μLと111In-DTPA12-Ex4(1.85 MBq)20μLとを混和し、37℃にて30, 60, 120, 240分間インキュベートした。その後、メタノール100μLを加え、血漿中タンパク成分を凝集させ、5分遠心(4℃, 10000×g)し、上清を得た。上清はMillex-GV(13 mm)を用いてろ過し、HPLCにて分析した。その結果の一例を図６のグラフに示す。図６に示すように、111In-DTPA12-Ex4は、２４０分間インキュベートした後であっても、98.8%が未変化体として存在していた。つまり、111In-DTPA12-Ex4は非常に安定であることが確認できた。【０１１５】
［Cellular Uptake Assay Using INS-1 Tumor Cells］
ラットインスリノーマ細胞株INS-1を24-well plateに播種し終夜培養(37℃, 5%CO2)した後、111In-DTPA12-Ex4(37 kBq/20 μL)を添加し、37℃にて30, 60, 120, 240分間インキュベートした。非特異的結合の評価は、式(２３)で表わされるポリペプチドとともに過剰量のExendin-(9-39)を添加することにより行った。インキュベート後、冷PBS(-)により洗浄を行った後、0.1 N NaOH水溶液により細胞を溶解した。細胞膜画分に結合した放射能は、Acid Buffer(50 mM Glycine, 0.1 M NaCl, pH2.8)を加えて4℃で10分間静置した後に洗浄、細胞溶解の操作を行うことで除去した。細胞溶解液の放射能はBCAタンパク定量により補正した。その結果の一例を図７に示す。図７において、Total Uptakeは細胞に取り込まれた式(２３)で表わされるポリペプチドの取り込み量（放射能）を示し、Internalizationは細胞膜画分に結合した放射能の除去後の取り込み量（放射能）を示し、Blockingは非特異的結合の評価の結果を示す。図７に示すように、式(２３)で表わされるポリペプチドの細胞への取り込み量は経時的に増加し、その取り込みは過剰のexendin-(9-39)の添加により阻害された。また、GLP-1Rに結合した式(２３)で表わされるポリペプチドは、ほぼ全て内在化していることが示唆された。【０１１６】
［In Vivo Biodistribution］
ddYマウス(6週齢、雄性)に、111In-DTPA12-Ex4(18.5 kBq/100 μL)をマウス尾静脈より投与した。投与後、5, 15, 30, 60, 120分に屠殺し、各臓器(膵臓、血液、心臓、肺、胃、小腸、大腸、肝臓、脾臓、腎臓)を摘出した(n=5)。各臓器の重量と放射能とを測定し、各臓器への集積量(%injection dose/g)を算出した。その結果の一例を下記表５及び６に示す。【０１１７】
【表５】
2014084372.tif 000021
【０１１８】
【表６】
2014084372.tif 000022
【０１１９】
表５に示すとおり、111In-DTPA12-Ex4は、GLP1-R発現組織である膵臓及び肺に高い集積を示した。表６に示すように、111In-DTPA12-Ex4は、膵/血比が投与後早期で２を越える値を示し、良好な血液クリアランスを示すとともに、膵/肝比も非常に高かった。このように膵臓への集積量が高い一方で、膵/肝比が高く、血液クリアランスに優れるポリペプチドによれば、膵β細胞のイメージング、好ましくは膵β細胞のGLP-1Rのイメージングを行った際に、明瞭な画像が得られることが示唆された。【０１２０】
［SPECT/CT Study in ddY Mice］
ddYマウス(6週齢、雄性)に、111In-DTPA12-Ex4(9.62 MBq/150 μL)をマウス尾静脈より投与した。投与後20分からイソフルラン(2.5%)吸引麻酔し投与後38分からSPECT/CT装置(GMI, FX-3300)を用いて48分間撮像した。その後、CT撮像(60 kV, 310 μA)を行った。その結果を図８に示す。
＜SPECT撮像条件＞
Method: Tomo
Collimators: 4-head N5F75A10(1.0-mm diameter, 7.5-mm focal length)
Radius of rotation: 35 mm
Reconstruction: 3D-OSEM(Iterations: 5, Subsets: 8)【０１２１】
図８において左から順に、横断像（transverse view）、冠状断像（coronal view）、及び矢状断像（sagittal view）を示す。図８において白線で囲んだ位置が膵臓の位置を示す。図８に示すように、111In-DTPA12-Ex4を用いたSPECT/CT撮像によって、正常マウス(ddyマウス)において膵臓を描写することができた。このように、ヒトよりも膵臓のサイズが小さく、かつ臓器が密集しているマウスにおいて膵臓の描写に成功したことから、マウスよりも膵臓のサイズが大きく、かつ臓器が密集していないヒトであれば、例えば、膵臓の位置及びサイズをより明確に判別でき、さらには、膵β細胞のGLP-1Rに結合するペプチド誘導体の量を測定できることが示唆された。【０１２２】
これらの結果より、111In-DTPA12-Ex4は、GLP-1R結合型膵β細胞イメージングプローブとして有用であることが示された。
【産業上の利用可能性】
【０１２３】
本開示にかかるポリペプチドは、例えば、医学研究分野、医療分野、治療及び診断ではない分野、分子イメージング分野、インスリノーマに関する分野などで有用である。
【配列表フリーテキスト】
【０１２４】
配列番号１：本開示にかかるポリペプチドの一実施形態
配列番号２：本開示にかかるポリペプチドの一実施形態
配列番号３：本開示にかかるポリペプチドの一実施形態
配列番号４：本開示にかかるポリペプチドの一実施形態
配列番号５：本開示にかかるポリペプチドの一実施形態
配列番号６：本開示にかかるポリペプチドの一実施形態
配列番号７：本開示にかかるポリペプチドの一実施形態
配列番号８：本開示にかかるポリペプチドの一実施形態
配列番号９：一実施形態に使用された保護ペプチド樹脂
配列番号１０：一実施形態に使用された保護ペプチド樹脂
配列番号１１：一実施形態に使用された保護ペプチド樹脂
配列番号１２：実施例に使用されたポリペプチド（コールド体）の一実施形態
配列番号１３：一実施形態に使用された保護ペプチド樹脂
配列番号１４：一実施形態に使用された保護ペプチド樹脂
配列番号１５：一実施形態に使用された保護ペプチド樹脂
配列番号１６：実施例に使用されたポリペプチド（コールド体）の一実施形態
配列番号１７：実施例で調製したポリペプチド
配列番号１８：実施例で調製したポリペプチド
配列番号１９：本開示にかかるポリペプチドの一実施形態
配列番号２０：本開示にかかるポリペプチドの一実施形態
配列番号２１：本開示にかかるポリペプチドの一実施形態
配列番号２２：本開示にかかるポリペプチドの一実施形態
配列番号２３：実施例に使用されたポリペプチド（コールド体）の一実施形態
【図１】
2014084372.tif 000029
【図３】
2014084372.tif 000030
【図４】
2014084372.tif 000031
【図５】
2014084372.tif 000032
【図６】
2014084372.tif 000033
【図７】
2014084372.tif 000034
【図２】
2014084372.tif 000035
【図８】
2014084372.tif 000036
【配列表】
2014084372000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成26年9月29日(2014.9.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）で表されるポリペプチド。
2014084372.tif 000037
［式（１）において
Ｘａａ１は、α−アミノ基に−Ｙ−Ｘ基が結合したアスパラギン酸であり、
Ｘは、ｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｒｉａｍｉｎｅｐｅｎｔａａｃｅｔｉｃ  ｄｉａｎｈｙｄｒｉｄｅ（ＤＴＰＡ）、又は１，４，７−ｔｒｉａｚａｃｙｃｌｏｎｏｎｎａｎｅ−Ｎ，Ｎ’Ｎ’’−ｔｒｉａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ（ＮＯＴＡ）であり、
Ｙは、−ＣＨ２−（Ｃ６Ｈ４）−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−、及び−ＮＨ−（ＣＨ２）５−Ｃ（＝Ｏ）−、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される基を含むリンカーである。］
【請求項２】
下記式（２）で表されるポリペプチド。
【化１】
2014084372.tif 000038
【請求項３】
下記式（３）で表されるポリペプチド。
2014084372.tif 000039
［式（３）において
Ｘａａ１は、α−アミノ基に−Ｙ−Ｘ’基が結合したアスパラギン酸であり、
Ｘ’は、キレート部と前記キレート部でキレートされた放射性金属核種とを含み、前記キレート部は、ｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｒｉａｍｉｎｅｐｅｎｔａａｃｅｔｉｃ  ｄｉａｎｈｙｄｒｉｄｅ（ＤＴＰＡ）、又は１，４，７−ｔｒｉａｚａｃｙｃｌｏｎｏｎｎａｎｅ−Ｎ，Ｎ’Ｎ’’−ｔｒｉａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ（ＮＯＴＡ）であり、
Ｙは、−ＣＨ２−（Ｃ６Ｈ４）−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−、及び−ＮＨ−（ＣＨ２）５−Ｃ（＝Ｏ）−、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される基を含むリンカーである。］
【請求項４】
前記放射性金属核種が、１１１Ｉｎである、請求項３記載のポリペプチド。
【請求項５】
下記式（４）で表されるポリペプチド。
【化２】
2014084372.tif 000040
【請求項６】
下記式（５）で表されるポリペプチド。
2014084372.tif 000041
［式（５）において、
Ｘａａ４は、側鎖のアミノ基に−Ｙ−Ｘ基が結合したリジン残基であり、
前記Ｘは、ｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｒｉａｍｉｎｅｐｅｎｔａａｃｅｔｉｃ  ｄｉａｎｈｙｄｒｉｄｅ（ＤＴＰＡ）、又は１，４，７−ｔｒｉａｚａｃｙｃｌｏｎｏｎｎａｎｅ−Ｎ，Ｎ’Ｎ’’−ｔｒｉａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ（ＮＯＴＡ）であり、
前記Ｙは、−ＣＨ２−（Ｃ６Ｈ４）−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−、及び−ＮＨ−（ＣＨ２）５−Ｃ（＝Ｏ）−、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される基を含むリンカーである。］
【請求項７】
下記式（６）で表されるポリペプチド。
【化３】
2014084372.tif 000042
【請求項８】
下記式（７）で表されるポリペプチド。
2014084372.tif 000043
2014084372.tif 000044
［式（７）において、
Ｘａａ４は、側鎖のアミノ基に−Ｙ−Ｘ’基が結合したリジン残基であり、
前記Ｘ’は、キレート部と前記キレート部でキレートされた放射性金属核種とを含み、前記キレート部は、ｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｒｉａｍｉｎｅｐｅｎｔａａｃｅｔｉｃ  ｄｉａｎｈｙｄｒｉｄｅ（ＤＴＰＡ）、又は１，４，７−ｔｒｉａｚａｃｙｃｌｏｎｏｎｎａｎｅ−Ｎ，Ｎ’Ｎ’’−ｔｒｉａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ（ＮＯＴＡ）であり、
前記Ｙは、−ＣＨ２−（Ｃ６Ｈ４）−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−、及び−ＮＨ−（ＣＨ２）５−Ｃ（＝Ｏ）−、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される基を含むリンカーである。］
【請求項９】
前記放射性金属核種が、１１１Ｉｎである、請求項８記載のポリペプチド。
【請求項１０】
下記式（８）で表されるポリペプチド。
【化４】
2014084372.tif 000045
【請求項１１】
請求項３から５及び８から１０のいずれかに記載のポリペプチドを含む、イメージング用組成物。
【請求項１２】
請求項１、２、６又は７に記載のポリペプチドと、
放射性金属核種とを含む、キット。
【請求項１３】
ＧＬＰ−１受容体をイメージングするための方法であって、
請求項３から５及び８から１０のいずれかに記載のポリペプチドを投与された被検体から前記ポリペプチドの放射性シグナルを検出することを含む、イメージング方法。
【請求項１４】
前記検出されたシグナルを再構成処理して画像に変換し表示することを含む、請求項１３記載のイメージング方法。
【請求項１５】
請求項１３又は１４に記載のイメージング方法に用いる請求項３から５及び８から１０のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１６】
ＧＬＰ−１受容体をイメージングするための請求項３から５及び８から１０のいずれかに記載のポリペプチドの使用。
【請求項１７】
請求項１３又は１４に記載のイメージング方法に用いるイメージング用組成物の製造のための請求項１、２、６又は７に記載のポリペプチドの使用。
【請求項１８】
キレート部が結合されたポリペプチドを標識する方法であって、
グッドの緩衝液、又は非イオン性界面活性剤を含む緩衝液に前記ポリペプチドを溶解すること、及び
溶解した前記ポリペプチドを、［１１１Ｉｎ］インジウム塩と反応させることを含む、標識方法。
【請求項１９】
下記式（１９）で表されるポリペプチド、
下記式（１９）のポリペプチドから１、２又は３個のアミノ酸が欠失、付加又は置換したポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチド、又は、
下記式（１９）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の相同性を有するポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチド。
2014084372.tif 000046
［式（１９）において、
Ｘａａ１２は、側鎖のアミノ基に−Ｙ−Ｘ基が結合したリジン残基であり、
前記Ｘは、ｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｒｉａｍｉｎｅｐｅｎｔａａｃｅｔｉｃ  ｄｉａｎｈｙｄｒｉｄｅ（ＤＴＰＡ）、又は１，４，７−ｔｒｉａｚａｃｙｃｌｏｎｏｎｎａｎｅ−Ｎ，Ｎ’Ｎ’’−ｔｒｉａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ（ＮＯＴＡ）であり、
前記Ｙは、−ＣＨ２−（Ｃ６Ｈ４）−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−、及び−ＮＨ−（ＣＨ２）５−Ｃ（＝Ｏ）−、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される基を含むリンカーである。］
【請求項２０】
下記式（２０）で表されるポリペプチド、
下記式（２０）のポリペプチドから１、２又は３個のアミノ酸が欠失、付加又は置換したポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチド、又は、
下記式（２０）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の相同性を有するポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチド。
【化５】
2014084372.tif 000047
【請求項２１】
下記式（２１）で表されるポリペプチド、
下記式（２１）のポリペプチドから１、２又は３個のアミノ酸が欠失、付加又は置換したポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチド、又は、
下記式（２１）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の相同性を有するポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチド。
2014084372.tif 000048
［式（２１）において、
Ｘａａ１２は、側鎖のアミノ基に−Ｙ−Ｘ’基が結合したリジン残基であり、
前記Ｘ’は、キレート部と前記キレート部でキレートされた放射性金属核種とを含み、前記キレート部は、ｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｒｉａｍｉｎｅｐｅｎｔａａｃｅｔｉｃ  ｄｉａｎｈｙｄｒｉｄｅ（ＤＴＰＡ）、又は１，４，７−ｔｒｉａｚａｃｙｃｌｏｎｏｎｎａｎｅ−Ｎ，Ｎ’Ｎ’’−ｔｒｉａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ（ＮＯＴＡ）であり、
前記Ｙは、−ＣＨ２−（Ｃ６Ｈ４）−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−、及び−ＮＨ−（ＣＨ２）５−Ｃ（＝Ｏ）−、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択される基を含むリンカーである。］
【請求項２２】
下記式（２２）で表されるポリペプチド、
下記式（２２）のポリペプチドから１、２又は３個のアミノ酸が欠失、付加又は置換したポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチド、又は、
下記式（２２）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の相同性を有するポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチド。
【化６】
2014084372.tif 000049
【請求項２３】
下記式（１９）で表されるポリペプチド、
下記式（１９）のポリペプチドから１、２又は３個のアミノ酸が欠失、付加又は置換したポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチド、又は、
下記式（１９）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の相同性を有するポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチド。
2014084372.tif 000050
2014084372.tif 000051
［式（１９）において、
Ｘａａ１２は、側鎖のアミノ基に−Ｙ−Ｘ基が結合したリジン残基であり、
前記Ｘは、ｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｒｉａｍｉｎｅｐｅｎｔａａｃｅｔｉｃ  ｄｉａｎｈｙｄｒｉｄｅ（ＤＴＰＡ）、又は１，４，７−ｔｒｉａｚａｃｙｃｌｏｎｏｎｎａｎｅ−Ｎ，Ｎ’Ｎ’’−ｔｒｉａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ（ＮＯＴＡ）であり、
前記Ｙは、−ＣＨ２−（Ｃ６Ｈ４）−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−、及び−ＮＨ−（ＣＨ２）５−Ｃ（＝Ｏ）−を含むリンカーである。］
【請求項２４】
下記式（２１）で表されるポリペプチド、
下記式（２１）のポリペプチドから１、２又は３個のアミノ酸が欠失、付加又は置換したポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチド、又は、
下記式（２１）のポリペプチドのアミノ酸配列と８５％以上の相同性を有するポリペプチドであって、ＧＬＰ−１Ｒに結合可能なポリペプチド。
2014084372.tif 000052
［式（２１）において、
Ｘａａ１２は、側鎖のアミノ基に−Ｙ−Ｘ’基が結合したリジン残基であり、
前記Ｘ’は、キレート部と前記キレート部でキレートされた放射性金属核種とを含み、前記キレート部は、ｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｒｉａｍｉｎｅｐｅｎｔａａｃｅｔｉｃ  ｄｉａｎｈｙｄｒｉｄｅ（ＤＴＰＡ）、又は１，４，７−ｔｒｉａｚａｃｙｃｌｏｎｏｎｎａｎｅ−Ｎ，Ｎ’Ｎ’’−ｔｒｉａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ（ＮＯＴＡ）であり、
前記Ｙは、−ＣＨ２−（Ｃ６Ｈ４）−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−、及び−ＮＨ−（ＣＨ２）５−Ｃ（＝Ｏ）−を含むリンカーである。］
【国際調査報告】
2014084372.tif 000053
2014084372.tif 000054
2014084372.tif 000055
2014084372.tif 000056