(57)【要約】  本発明の膵臓疾患判定方法は、ＩＰＭＮ患者における膵臓疾患の有無を判定する膵臓疾患判定方法であって、前記ＩＰＭＮ患者の十二指腸液中のＳ１００Ｐの濃度を測定する第一工程と、前記Ｓ１００Ｐの前記濃度が所定のカットオフ値以上であるか否かに基づいて、前記ＩＰＭＮ患者におけるＩＰＭＮの悪性化と膵癌の存在との少なくとも一方を判定する第二工程と、を備える。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩＰＭＮ患者における膵臓疾患の有無を判定する膵臓疾患判定方法であって、
前記ＩＰＭＮ患者の十二指腸液中のＳ１００Ｐの濃度を測定する第一工程と、
前記Ｓ１００Ｐの前記濃度が所定のカットオフ値以上であるか否かに基づいて、前記ＩＰＭＮ患者におけるＩＰＭＮの悪性化と膵癌の存在との少なくとも一方を判定する第二工程と、
を備える膵臓疾患判定方法。
【請求項２】
前記第一工程において、前記十二指腸液が、前記Ｓ１００Ｐを分解するプロテアーゼに対する阻害剤を用いて処理される
請求項１に記載の膵臓疾患判定方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、膵臓疾患判定方法に関する。
本願は、２０１４年７月２３日に、日本に出願された特願第２０１４−１４９９４２号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。
【背景技術】
【０００２】
膵管内乳頭粘液性腫瘍（ＩＰＭＮ）は、膵管内に発生し、のう胞を形成する腫瘍である。ＩＰＭＮには様々な段階があるが、一部の段階ではＩＰＭＮが悪性化し、ＩＰＭＮが膵臓の主要な機能を担う部分である膵実質内に浸潤する。ＩＰＭＮの悪性化を早期に発見することができれば、病状が進行する前に適切な処置を施すことができるため、ＩＰＭＮが確認された患者は、通常定期的に検査（フォローアップ検査）を受ける。【０００３】
しかしながら、ＩＰＭＮの悪性化を簡便に検出できる方法は、今のところ存在しない。ＩＰＭＮ自体はＣＴ及びＭＲＩ等の画像診断で容易に検出することができるものの、ＩＰＭＮの膵実質内への浸潤を画像診断により早期に発見するには、高度な読影技術が必要とされる。そのため、ＩＰＭＮの膵実質内への浸潤を早期に発見できる施設としては、高度な読影技術を備えた技術者を有する施設に限られる。
ＩＰＭＮの膵実質内への浸潤を調べる方法としては、上述の方法の他に、膵管にカニュレーションを行い、膵液を採取して細胞を診断する方法があるが、膵管へのカニュレーションは高い技術力を要する作業であること、この診断方法により急性膵炎を引き起こすリスクがあること等の問題がある。【０００４】
一方、特許文献１には、膵液と膵液を含む体液とのうち少なくとも一方に含まれるＳ１００Ｐ（Ｓ１００タンパク質ファミリーの一つ）の値が、良性膵のう胞患者よりもＩＰＭＮ患者において高いことが示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２０１２／１３７８３２号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
特許文献１に記載の方法は、ＩＰＭＮ患者の発見には有用であるものの、ＩＰＭＮの病状の推移とＳ１００Ｐの値との間の関係は不明であったため、ＩＰＭＮ患者のフォローアップ検査において、Ｓ１００Ｐの測定がＩＰＭＮの病状の推移を診断するために有用であるか否かは全く明らかでなかった。【０００７】
上記事情の中、発明者らは、ＩＰＭＮ患者におけるＳ１００Ｐの値について新たな知見を獲得し、本発明の完成に至った。
本発明は、上記の事情に鑑みてなされたものであり、高度な技術を必要とせずに、ＩＰＭＮ患者における悪性の膵臓疾患を簡便に検出できる方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の第１の態様に係る膵臓疾患判定方法は、ＩＰＭＮ患者における膵臓疾患の有無を判定する膵臓疾患判定方法であって、前記ＩＰＭＮ患者の十二指腸液中のＳ１００Ｐの前記濃度を測定する第一工程と、前記Ｓ１００Ｐの濃度が所定のカットオフ値以上であるか否かに基づいて、前記ＩＰＭＮ患者におけるＩＰＭＮ悪性の化と膵癌の存在との少なくとも一方を判定する第二工程とを備える。【０００９】
本発明の第２の態様によれば、前記第一工程において、前記十二指腸液が、前記Ｓ１００Ｐを分解するプロテアーゼに対する阻害剤を用いて処理されてもよい。
【発明の効果】
【００１０】
上記各態様によれば、ＩＰＭＮ患者における膵臓疾患有無を簡便に判定可能な膵臓疾患判定方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】本発明の第一実施形態の膵臓疾患判定方法の流れを示すフローチャートである。
【図２】ＩＰＭＮ悪性患者およびＩＰＭＮ良性患者におけるＳ１００Ｐの値を示すグラフである。
【図３】ＩＰＭＮフォローアップ患者におけるＳ１００Ｐの値を示すグラフである。
【図４】早期及び中等度の膵癌患者におけるＳ１００Ｐの値を示すグラフである。
【図５】ＩＰＭＮ悪性患者およびＩＰＭＮ良性患者におけるＳ１００Ｐの値（阻害剤処理あり）を示すグラフである。
【図６】ＩＰＭＮフォローアップ患者におけるＳ１００Ｐの値（阻害剤処理あり）を示すグラフである。
【図７】早期及び中等度の膵癌患者におけるＳ１００Ｐの値（阻害剤処理あり）を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
まず、本発明の膵臓疾患判定方法の概要について説明し、その後第一実施形態について説明する。
図１は、本発明の膵臓疾患判定方法の流れを示すフローチャートである。膵臓疾患判定方法は、ＩＰＭＮ患者の十二指腸液中におけるＳ１００Ｐの濃度を測定するステップＳ１と、Ｓ１００Ｐの濃度に基づいて被験者等の膵臓疾患の判定を行うステップＳ２と、を備えている。
【００１３】
ステップＳ１の第一工程では、ＩＰＭＮ患者の十二指腸液が採取される。十二指腸液は、膵臓から排出される膵液、胆嚢あるいは肝臓から排出される胆汁、および十二指腸から分泌される粘液（腸液）等の混合体液である。十二指腸液の採取方法は特に制限されないが、例えば被験者等の体内に挿入した内視鏡を用いて吸引等を行うことにより、容易に採取することができる。十二指腸液の検体量は、例えば０．１〜０．５ミリリットル（ｍｌ）程度あればよい。
第一工程では、十二指腸液から膵液を単離することはせずに、混合体液としての十二指腸液におけるＳ１００Ｐの濃度を測定する。
【００１４】
ステップＳ２の第二工程では、測定されたＳ１００Ｐの値が所定のカットオフ値以上であるか否かに基づいて、ＩＰＭＮ患者における膵臓疾患、特に、ＩＰＭＮの悪性化および膵癌等の悪性膵臓疾患の有無を判定する。
ＩＰＭＮ患者の集団において、Ｓ１００Ｐの値がどの程度の偏差を有するか、およびＳ１００Ｐの値と悪性膵臓疾患との関連性についてはこれまで全く不明であった。しかしながら、本発明者らは、ＩＰＭＮ患者においてＩＰＭＮが悪性化すると、Ｓ１００Ｐの値が有意に上昇することを発見した。
【００１５】
図２に、ＩＰＭＮ悪性患者７名から採取した十二指腸液におけるＳ１００Ｐの値と、ＩＰＭＮ良性患者８名から採取した十二指腸液におけるＳ１００Ｐの値を示す。１５名の患者の全てに対して手術が行われており、手術の際にＩＰＭＮの良性又は悪性の診断が確定している。
１５名の患者においては、カットオフ値を１００００ｐｇ／ｍｌとすることで、ＩＰＭＮ悪性に関する感度７１．４％（５／７）、ＩＰＭＮ悪性に関する特異度８７．５％（７／８）、ＩＰＭＮ悪性に関する的中率８３．３％（５／６）、ＩＰＭＮ良性に関する的中率７７．８％（７／９）、及び正診率８０．０％（１２／１５）と、良性又は悪性であるかを高精度に判定することが可能である。
【００１６】
図３に、ＩＰＭＮのフォローアップ検査を受診中である、ＩＰＭＮフォローアップ患者２１名から採取した十二指腸液におけるＳ１００Ｐの値を示す。これら２１名の患者に対して精密な画像診断を行ったところ、これら２１名の患者において、ＩＰＭＮは悪性化していないと判定されている。すなわち、２１名全員が、ＩＰＭＮ良性患者である。
２１名のＩＰＭＮフォローアップ患者においては、カットオフ値を１００００ｐｇ／ｍｌとすることで、ＩＰＭＮ悪性に関する特異度および正診率７６．２％（１６／２１）という結果であった。以上より、ＩＰＭＮ患者においてＳ１００Ｐを測定することにより、精密な画像診断を行わずに、高精度に良性及び悪性を判定し、悪性化した患者を抽出することができると考えられた。
【００１７】
ＩＰＭＮ患者に対するＳ１００Ｐの測定によりスクリーニング可能な膵臓疾患は、ＩＰＭＮの悪性化に限られない。図４に、早期（ステージ０またはＩ）及び中等度（ステージＩＩＡおよびＩＩＢ）の膵癌患者３７名から採取した十二指腸液におけるＳ１００Ｐの値を示す。病期分類としてはＵＩＣＣ分類（第６版）を用いている。
３７名の膵癌患者においては、カットオフ値を１００００ｐｇ／ｍｌとすることにより、３５．１％（１３／３７）の感度及び正診率を得られた。上述の結果から、Ｓ１００Ｐの測定は、ＩＰＭＮ患者における膵癌の検出に対しても有効であると考えられた。
【００１８】
以上説明したように、本実施形態の膵臓疾患判定方法では、十二指腸液におけるＳ１００Ｐの濃度に基づいて膵臓疾患の判定を行う工程（第二工程）を備えるため、比較的簡易に入手できる十二指腸液試料を用いて、ＩＰＭＮ患者において高精度に膵臓疾患の判定を行うことができる。
【００１９】
次に本発明の第二実施形態について説明する。本実施形態では、第一工程において、Ｓ１００Ｐを分解するプロテアーゼを阻害する阻害剤で十二指腸液を処理してからＳ１００Ｐを測定する。つまり、本実施形態では、上述の阻害剤を用いることにより、Ｓ１００Ｐを分解するプロテアーゼの機能が阻害されるため、十二指腸液中のＳ１００Ｐの分解を抑制することが可能である。
使用する阻害剤については、Ｓ１００Ｐを分解するプロテアーゼに対して阻害作用を有する限り特に制限はなく、公知の阻害剤を適宜選択して使用することができる。
【００２０】
図５に、ＩＰＭＮ悪性患者７名から採取した十二指腸液におけるＳ１００Ｐの値と、ＩＰＭＮ良性患者１１名から採取した十二指腸液におけるＳ１００Ｐの値を示す。１８名の患者の全てに対して手術が行われており、手術の際にＩＰＭＮの良性又は悪性の診断が確定している。なお、１８名の患者は、第一実施形態の１５名とは別個の集団である。
１８名の患者においては、カットオフ値を７３０００ｐｇ／ｍｌとすることで、ＩＰＭＮ悪性に関する感度８７．５％（７／８）、ＩＰＭＮ悪性に関する特異度８１．８％（９／１１）、ＩＰＭＮ悪性に関する的中率８７．５％（７／８）、ＩＰＭＮ良性に関する的中率９０．０％（９／１０）、及び正診率８３．３％（１５／１８）と、第一実施形態よりも高精度に良性悪性を判定することが可能である。
カットオフ値を１０４０００ｐｇ／ｍｌとした場合も、ＩＰＭＮ悪性に関する感度６２．５％（５／８）、ＩＰＭＮ悪性に関する特異度９０．９％（１０／１１）、ＩＰＭＮ悪性に関する的中率８０．０％（４／５）、ＩＰＭＮ良性に関する的中率７６．９％（１０／１３）、及び正診率７７．８％（１４／１８）と、良性又は悪性であるかを高精度に判定することが概ね可能である。
【００２１】
図６に、ＩＰＭＮフォローアップ患者１７名から採取した十二指腸液におけるＳ１００Ｐの値を示す。これら１７名の患者に対して精密な画像診断を行ったところ、これら１７名の患者において、ＩＰＭＮは悪性化していないと判定されている。すなわち、１７名全員が、ＩＰＭＮ良性患者である。なお、１７名の患者は、第一実施形態の２１名とは別個の集団である。
１７名のフォローアップ患者においては、カットオフ値を７３０００ｐｇ／ｍｌとすることで、ＩＰＭＮ悪性に関する特異度および正診率が、７０．６％（１２／１７）であり、第一実施形態と同等の精度で検査が行えると考えられた。
カットオフ値を１０４０００ｐｇ／ｍｌとした場合は、ＩＰＭＮ悪性に関する特異度および正診率が、８２．４％（１４／１７）であり、第一実施形態よりも高い精度で膵臓疾患を検出できると考えられた。
【００２２】
図７に、早期及び中等度の膵癌患者３２名から採取した十二指腸液におけるＳ１００Ｐの値を示す。病期分類は第一実施形態と同様である。なお、３２名の患者は、第一実施形態の３７名とは別個の集団である。
３２名の膵癌患者においては、カットオフ値を７３０００ｐｇ／ｍｌとすることで、感度および正診率が、５０．０％（１６／３２）であり、第一実施形態よりも良好な結果であった。
カットオフ値を１０４０００ｐｇ／ｍｌとした場合も、感度および正診率が、４６．９％（１５／３２）であり、良好な結果が得られた。
【００２３】
以上のように、本実施形態の膵臓疾患判定方法においても、第一実施形態と同様に、比較的簡易に入手できる十二指腸液試料を用いて、ＩＰＭＮ患者において高精度に膵臓疾患の判定を行うことができる。
本実施形態では、第一工程においてプロテアーゼ阻害剤を用いて十二指腸液を処理するため、Ｓ１００Ｐの分解が抑制される。その結果、十二指腸液の採取からＳ１００Ｐの測定までに時間を要する場合であっても、Ｓ１００Ｐがプロテアーゼによって分解されないため、測定精度を維持することができ、なおかつ精度そのものの向上も期待できる。
【００２４】
以上、本発明の各実施形態について説明したが、本発明の技術範囲は上記実施形態に限定されるものではなく、本発明の趣旨を逸脱しない範囲において種々の変更を加えることが可能である。
【００２５】
例えば、本発明の膵臓疾患判定方法におけるＳ１００Ｐのカットオフ値は、上述の各実施形態に記載のものには限定されない。したがって、蓄積されたデータ等に基づき、適宜設定されて構わない。
【産業上の利用可能性】
【００２６】
上記各実施形態によれば、ＩＰＭＮ患者における膵臓疾患の有無を簡便に判定可能な膵臓疾患判定方法を提供することができる。
【符号の説明】
【００２７】
Ｓ１  第一工程
Ｓ２  第二工程
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
2016013248.tif 000007
【図６】
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【図７】
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【手続補正書】
【提出日】平成28年2月1日(2016.2.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩＰＭＮ患者における膵臓疾患の有無を判定する膵臓疾患判定方法であって、
前記ＩＰＭＮ患者の十二指腸液中のＳ１００Ｐの濃度を測定する第一工程と、
前記Ｓ１００Ｐの前記濃度が所定のカットオフ値以上であるか否かに基づいて、前記ＩＰＭＮ患者を良性のＩＰＭＮ患者と悪性のＩＰＭＮ患者とに判別、または、前記ＩＰＭＮ患者を前記良性のＩＰＭＮ患者と膵癌が発現したＩＰＭＮ患者とに判別する第二工程と、
を備える膵臓疾患判定方法。
【請求項２】
前記第二工程では、前記Ｓ１００Ｐの前記濃度が所定のカットオフ値以上であれば、前記ＩＰＭＮ患者が前記悪性のＩＰＭＮ患者または前記膵癌が発現したＩＰＭＮ患者であると判別し、前記Ｓ１００Ｐの前記濃度が前記所定のカットオフ値未満であれば、前記良性のＩＰＭＮ患者であると判別する
請求項１に記載の膵臓疾患判定方法。
【請求項３】
前記所定のカットオフ値は、１００００ｐｇ／ｍｌ以上の値である
請求項１に記載の膵臓疾患判定方法。
【請求項４】
前記第一工程において、前記十二指腸液が、前記Ｓ１００Ｐを分解するプロテアーゼに対する阻害剤を用いて処理される
請求項１に記載の膵臓疾患判定方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
本発明の第１の態様に係る膵臓疾患判定方法は、ＩＰＭＮ患者における膵臓疾患の有無を判定する膵臓疾患判定方法であって、前記ＩＰＭＮ患者の十二指腸液中のＳ１００Ｐの前記濃度を測定する第一工程と、前記Ｓ１００Ｐの濃度が所定のカットオフ値以上であるか否かに基づいて、前記ＩＰＭＮ患者を良性のＩＰＭＮ患者と悪性のＩＰＭＮ患者とに判別、または、前記ＩＰＭＮ患者を前記良性のＩＰＭＮ患者と膵癌が発現したＩＰＭＮ患者とに判別する第二工程とを備える。
本発明の第２の態様によれば、前記第二工程では、前記Ｓ１００Ｐの前記濃度が所定のカットオフ値以上であれば、前記ＩＰＭＮ患者が前記悪性のＩＰＭＮ患者または前記膵癌が発現したＩＰＭＮ患者であると判別し、前記Ｓ１００Ｐの前記濃度が前記所定のカットオフ値未満であれば、前記良性のＩＰＭＮ患者であると判別してもよい。
本発明の第３の態様によれば、前記所定のカットオフ値は、１００００ｐｇ／ｍｌ以上の値であってもよい。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
本発明の第４の態様によれば、前記第一工程において、前記十二指腸液が、前記Ｓ１００Ｐを分解するプロテアーゼに対する阻害剤を用いて処理されてもよい。
【手続補正書】
【提出日】平成28年5月20日(2016.5.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩＰＭＮ患者における膵臓疾患の有無を判定する膵臓疾患判定方法であって、
前記ＩＰＭＮ患者の十二指腸液中のＳ１００Ｐの濃度を測定する第一工程と、
前記Ｓ１００Ｐの前記濃度が所定のカットオフ値以上であるときに、前記ＩＰＭＮ患者を悪性のＩＰＭＮ患者または膵癌が発現したＩＰＭＮ患者であると判別し、前記濃度が所定のカットオフ値未満であるときに、前記ＩＰＭＮ患者を良性のＩＭＰＮ患者であると判別する第二工程と、
を備える膵臓疾患判定方法。
【請求項２】
前記所定のカットオフ値は、１００００ｐｇ／ｍｌ以上の値である
請求項１に記載の膵臓疾患判定方法。
【請求項３】
前記第一工程において、前記十二指腸液が、前記Ｓ１００Ｐを分解するプロテアーゼに対する阻害剤を用いて処理される
請求項１に記載の膵臓疾患判定方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
本発明の第１の態様に係る膵臓疾患判定方法は、ＩＰＭＮ患者における膵臓疾患の有無を判定する膵臓疾患判定方法であって、前記ＩＰＭＮ患者の十二指腸液中のＳ１００Ｐの前記濃度を測定する第一工程と、前記Ｓ１００Ｐの濃度が所定のカットオフ値以上であるときに、前記ＩＰＭＮ患者を悪性のＩＰＭＮ患者または膵癌が発現したＩＰＭＮ患者であると判別し、前記濃度が所定のカットオフ値未満であるときに、前記ＩＰＭＮ患者を良性のＩＭＰＮ患者であると判定する第二工程とを備える。
本発明の第２の態様によれば、前記所定のカットオフ値は、１００００ｐｇ／ｍｌ以上の値であってもよい。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
本発明の第３の態様によれば、前記第一工程において、前記十二指腸液が、前記Ｓ１００Ｐを分解するプロテアーゼに対する阻害剤を用いて処理されてもよい。
【手続補正書】
【提出日】平成28年9月14日(2016.9.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩＰＭＮ患者における膵臓疾患の有無を判定する膵臓疾患判定のための方法であって、
Ｓ１００Ｐの濃度が所定のカットオフ値以上であるときに、前記ＩＰＭＮ患者を悪性のＩＰＭＮ患者または膵癌が発現したＩＰＭＮ患者であると判別し、前記濃度が所定のカットオフ値未満であるときに、前記ＩＰＭＮ患者を良性のＩＭＰＮ患者であると判別するために、前記ＩＰＭＮ患者の十二指腸液中のＳ１００Ｐの濃度を測定する工程を備える方法。
【請求項２】
前記所定のカットオフ値は、１００００ｐｇ／ｍｌ以上の値である
請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記工程において、前記十二指腸液が、前記Ｓ１００Ｐを分解するプロテアーゼに対する阻害剤を用いて処理される
請求項１に記載の方法。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
本発明は、膵臓疾患判定のための方法に関する。
本願は、２０１４年７月２３日に、日本に出願された特願第２０１４−１４９９４２号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
本発明の方法は、ＩＰＭＮ患者における膵臓疾患の有無を判定する膵臓疾患判定のための方法であって、Ｓ１００Ｐの濃度が所定のカットオフ値以上であるときに、前記ＩＰＭＮ患者を悪性のＩＰＭＮ患者または膵癌が発現したＩＰＭＮ患者であると判別し、前記濃度が所定のカットオフ値未満であるときに、前記ＩＰＭＮ患者を良性のＩＭＰＮ患者であると判別するために、前記ＩＰＭＮ患者の十二指腸液中のＳ１００Ｐの濃度を測定する工程を備える。
前記所定のカットオフ値は、１００００ｐｇ／ｍｌ以上の値であってもよい。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
前記工程において、前記十二指腸液が、前記Ｓ１００Ｐを分解するプロテアーゼに対する阻害剤を用いて処理されてもよい。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
本発明によれば、ＩＰＭＮ患者における膵臓疾患有無を簡便に判定可能な膵臓疾患判定のための方法を提供することができる。
【国際調査報告】
2016013248.tif 000010
2016013248.tif 000011
2016013248.tif 000012