(57)【要約】  ＡｄｉｐｏＲ１及びＡｄｉｐｏＲ２の両方を活性化させる、ＡｄｉｐｏＲのアクチベーターの提供。  下記一般式（１）〔式中、Ａは置換又は非置換のアリール基等、Ｙ１は（ＣＨＲ２）ａ−等、ＸはＣＨ又はＮ、Ｒ１はＣ１〜７アルキル基、ｍは０〜４の整数、Ｙ２は、＊−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−、＊−ＣＯＮＨ−（ＣＨ２）ｂ−ＣＯ−等、Ｚは環状基、Ｂは、Ｚで示される環状基に置換し得る基、ｎは０〜３の整数。〕で表される化合物。2015046595.tif 000100
2015046595.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）：
【化１】
2015046595.tif 000097
〔式中、
Ａは、置換又は非置換のアリール基、置換又は非置換のヘテロアリール基、置換又は非置換のアリールオキシ基、又はＣ４〜８第３級アルキル基又は−ＮＨ２を示し、
Ｙ１は、−（ＣＨＲ２）ａ−（ここで、Ｒ２は水素原子又はＣ１〜７アルキル基を示し、ａは０〜２の整数を示す。）又は−ＣＯ−を示し、
Ｘは、ＣＨ又はＮを示し、
Ｒ１は、Ｃ１〜７アルキル基を示し、複数のＲ１は同一又は異なっていてもよい
ｍは０〜４の整数を示し、
Ｙ２は、 
ｉ）ＸがＣＨである場合、
＊−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−、−Ｏ−、＊−ＣＯＮＨ−、又は
【化２】
2015046595.tif 000098
（ここで、Ｒ３はＣ１〜７アルキル基を示し、ｒは０〜４の整数を示し、ｐ及びｑは独立して０〜２の整数（ｒが２以上の場合Ｒ３は同一又は異なっていてもよい）を示し、＊はこの位置でＺと結合することを示す。）を示し、
ｉｉ）ＸがＮである場合、
＊−ＣＯＮＨ−（ＣＨ２）ｂ−ＣＯ−、＊−ＮＨＣＯ−Ａｒ１−ＣＨ２−、＊−ＮＨＣＯ−（ＣＨ２）ｂ−又は−ＣＯ−（ここで、Ａｒ１は置換基又は非置換のアリーレン基を示し、ｂは１〜３の整数を示し、＊はこの位置でＺと結合すること示す。）を示し、
Ｚは、アリール基、ヘテロアリール基及びＣ３〜７シクロアルキル基から選ばれる環状基を示し、
Ｂは、Ｚで示される環状基に置換し得る基であり、−ＣＯ−Ｒ４若しくは−Ｏ−Ｒ４（ここで、Ｒ４はＣ１〜７アルキル基、又は置換又は非置換のフェニル基、置換又は非置換のピリジル基を示す）、−ＣＯＮＲ５Ｒ６（ここで、Ｒ５は水素原子、Ｃ３〜７シクロアルキル基、Ｃ１〜４アルコキシＣ１〜４アルキル基、ノルボルネニルＣ１〜４アルキル基、又はＡｒ２−Ｃ１〜４アルキル基（Ａｒ２は置換又は非置換のアリール又はヘテロアリール基を示す）を示し、Ｒ６は水素原子、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ２〜４アルケニル基又はＣ２〜４アルキニル基を示す）、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜７シクロアルキル基、ハロＣ１〜７アルキル基、フェニル基、ハロゲン原子、−ＮＯ２、又は以下で示される基：
【化３】
2015046595.tif 000099
を示し、
ｎは０〜３の整数（ｎが２以上の場合Ｂは同一又は異なっていてもよい。）を示す。〕
で表される化合物。
【請求項２】
ＸがＣＨでＹ２が−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−であるか、又はＸがＮでＹ２が−ＣＯＮＨ−（ＣＨ２）ｂ−ＣＯ−である、請求項１記載の化合物又はその塩。
【請求項３】
請求項１又は２記載の化合物又はその塩、及び医薬上許容され得る担体を含有する医薬。
【請求項４】
アディポネクチンの産生低下又はアディポネクチン受容体の活性低下に伴って発症する症状又は疾患を予防、改善又は治療するための請求項３記載の医薬。
【請求項５】
アディポネクチンの産生低下又はアディポネクチン受容体の活性低下に伴って発症する症状又は疾患が、ＩＩ型糖尿病、高血圧症、脂質異常症、ミトコンドリア機能障害、生活習慣病、生活習慣病に起因する悪性腫瘍、又は肥満である請求項４記載の医薬。
【請求項６】
請求項１又は２記載の化合物又はその塩を有効成分とするアディポネクチン受容体活性化剤。
【請求項７】
アディポネクチン受容体が、ＡｄｉｐｏＲ１及びＡｄｉｐｏＲ２である請求６記載のアディポネクチン受容体活性化剤。
【請求項８】
請求項３記載の医薬を患者に投与することを含む、アディポネクチンの産生低下又はアディポネクチン受容体の活性低下に伴って発症する症状又は疾患の予防、改善又は治療方法。
【請求項９】
アディポネクチンの産生低下又はアディポネクチン受容体の活性低下に伴って発症する症状又は疾患が、ＩＩ型糖尿病、高血圧症、脂質異常症、ミトコンドリア機能障害、生活習慣病、生活習慣病に起因する悪性腫瘍、又は肥満である請求項８記載の予防、改善又は治療方法。
【請求項１０】
アディポネクチンの産生低下又はアディポネクチン受容体の活性低下に伴って発症する症状又は疾患の予防、改善又は治療のために使用される、請求項１又は２記載の化合物又はその塩。
【請求項１１】
アディポネクチンの産生低下又はアディポネクチン受容体の活性低下に伴って発症する症状又は疾患が、ＩＩ型糖尿病、高血圧症、脂質異常症、ミトコンドリア機能障害、生活習慣病、生活習慣病に起因する悪性腫瘍、又は肥満である請求項１０記載の化合物又はその塩。
【請求項１２】
アディポネクチン受容体活性化のため使用される、請求項１又は２記載の化合物又はその塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はアディポネクチン受容体活性化作用を有する化合物又はその塩に関する。
【背景技術】
【０００２】
過体重の人の数は世界中で増えており、罹病や死亡に繋がる肥満に係わる問題は段階的に拡大している。インスリン抵抗性は、肥満の一般的な特徴であり、患者を２型糖尿病及び心血管疾患を含めた様々な病態にさせる。【０００３】
アディポネクチンは、抗糖尿病性及び抗アテローム産生性アディポカインである。血漿中のアディポネクチンレベルは、肥満、インスリン抵抗性、及び２型糖尿病で減少する（非特許文献１）。また、アディポネクチンの投与は、マウスにおいてグルコース低下効果を有し、且つインスリン抵抗性を改善することが知られている（非特許文献２−４）。アディポネクチンのこのインスリン感受性効果は、少なくとも部分的に、ＡＭＰ活性化プロテインキナーゼ（ＡＭＰＫ）の活性化（非特許文献５−７）と、ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体（ＰＰＡＲ）αを介した脂肪酸酸化の増加（非特許文献８−９）により起こると考えられている。【０００４】
アディポネクチンの作用は、アディポネクチン受容体（以下、「ＡｄｉｐｏＲ」とも称する）を介していることが明らかにされており、さらに、ＡｄｉｐｏＲにはＡｄｉｐｏＲ１とＡｄｉｐｏＲ２の２つのサブタイプが存在すること、ＡｄｉｐｏＲ１は主としてＡＭＰＫを活性化し、ＡｄｉｐｏＲ２は主としてＰＰＡＲαを活性化することが報告されている（非特許文献１０）。【０００５】
また、骨格筋では、ＡｄｉｐｏＲ１が優勢的に発現し（非特許文献１１）、ＡＭＰＫ及びＰＰＡＲγコアクチベーター（ＰＧＣ）−１α並びにＣａ２＋シグナル伝達経路を活性化させ、これらは運動によっても活性化される。運動は、２型糖尿病などの肥満関連疾患に有益な効果を発揮することが報告されており、健康長寿に寄与することができる。一方、肝臓では、ＡｄｉｐｏＲｌ及びＡｄｉｐｏＲ２が発現し、これらは両方とも、グルコース及び脂質代謝、炎症、酸化ストレスの調節において役割を演ずる（非特許文献１０）。【０００６】
したがって、ＡｄｉｐｏＲを活性化する化合物は、アディポネクチン様の作用を示すことで、ＡｄｉｐｏＲ活性化作用が有効な疾患、例えば、インスリン感受性低下、糖尿病、肥満、メタボリックシンドローム、脂質異常症、ミトコンドリア機能障害、動脈硬化、等に対する予防、治療又は改善に有効である。
細胞中のＡＭＰＫ経路を活性化する化合物として、これまでに幾つか報告がなされているが（特許文献１〜５）、より効果の高い薬剤の開発が望まれている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特表２０１０−５１４７８８号公報
【特許文献２】特表２０１１−５０３２１０号公報
【特許文献３】特表２０１１−５０６４８０号公報
【特許文献４】特表２０１１−５２７６６５号公報
【特許文献５】特表２０１２−５１６３４９号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Hotta, K., et al. , Plasmaconcentrations of a novel, adipose-specific protein,adiponectin, in type 2diabetic patients. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 20, 1595-1599 (2000).
【非特許文献２】Yamauchi, T., et al., Thefat-derived hormone adiponectin reverses insulinresistance associated with bothlipoatrophy and obesity. Nature Med. 7, 941-946(2001).
【非特許文献３】Berg, A.H., Combs, T.P., Du, X.,Brownlee, M., & Scherer, P.E., The adipocytesecretedprotein Acrp30 enhanceshepatic insulin action. Nature Med. 7, 947-953(2001).
【非特許文献４】Fruebis, J., et al., Proteolyticcleavage product of 30-kDa adipocyte complementrelated protein increases fattyacid oxidation in muscle and causes weight loss in mice. Proc. Natl Acad. Sci.USA 98, 2005-2010 (2001).
【非特許文献５】Yamauchi, T., et al., Adiponectinstimulates glucose utilization and fatty-acid oxidation by activatingAMP-activated protein kinase. Nature Med. 8, 1288-1295(2002).
【非特許文献６】Tomas, E., et al., Enhancedmuscle fat oxidation and glucose transport by ACRP30 globular domain:acetyl-CoA carboxylase inhibition and AMP-activated protein kinase activation.Proc. Natl Acad. Sci. USA 99, 16309-16313 (2002).
【非特許文献７】Kahn, B.B., Alquier, T., Carling,D., & Hardie, D.G., AMP-activated protein kinase: ancient energy gaugeprovides clues to modern understanding of metabolism. Cell Metab. 1, 15-25(2005).
【非特許文献８】Kersten, S., Desvergne, B., &Wahli, W., Roles of PPARs in health and disease. Nature 405, 421-424 (2000).
【非特許文献９】Yamauchi, T., et al., Globularadiponectin protected ob/ob mice from diabetes and apoE deficient mice fromatherosclerosis. J. Biol. Chem. 278, 2461-2468 (2003).
【非特許文献１０】Yamauchi, T., et al., Targeteddisruption of AdipoR1 and AdipoR2 causes abrogation of adiponectin binding andmetabolic actions. Nature Med. 13, 332-339 (2007).
【非特許文献１１】Iwabu, M., et al., Adiponectinand AdipoR1 regulate PGC-1alpha and mitochondria by Ca(2+) and AMPK/SIRT1.Nature 464, 1313-1319 (2010).
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、ＡｄｉｐｏＲ１及びＡｄｉｐｏＲ２の両方を活性化させる、ＡｄｉｐｏＲのアクチベーターを提供することに関する。また本発明は、減少したアディポネクチンの産生、減少した血液中のアディポネクチンレベル、又は減少したＡｄｉｐｏＲの活性低下に起因して生じる症状、疾患又は障害を予防又は治療するための薬剤を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記課題について鋭意検討した結果、下記の一般式（Ｉ）で示される化合物が優れたＡｄｉｐｏＲ活性化作用を示すことを見出した。【００１１】
すなわち本発明は以下の１）〜６）に係るものである。
１）下記一般式（１）：【００１２】
【化１】
2015046595.tif 000003
【００１３】
〔式中、
Ａは、置換又は非置換のアリール基、置換又は非置換のヘテロアリール基、置換又は非置換のアリールオキシ基、又はＣ４〜８第３級アルキル基又は−ＮＨ２を示し、
Ｙ１は、−（ＣＨＲ２）ａ−（ここで、Ｒ２は水素原子又はＣ１〜７アルキル基を示し、ａは０〜２の整数を示す。）又は−ＣＯ−を示し、
Ｘは、ＣＨ又はＮを示し、
Ｒ１は、Ｃ１〜７アルキル基を示し、複数のＲ１は同一又は異なっていてもよい
ｍは０〜４の整数を示し、
Ｙ２は、 
ｉ）ＸがＣＨである場合、
＊−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−、−Ｏ−、＊−ＣＯＮＨ−、又は
【化２】
2015046595.tif 000004
（ここで、Ｒ３はＣ１〜７アルキル基を示し、ｒは０〜４の整数を示し、ｐ及びｑは独立して０〜２の整数（ｒが２以上の場合Ｒ３は同一又は異なっていてもよい）を示し、＊はこの位置でＺと結合することを示す。）を示し、
ｉｉ）ＸがＮである場合、
＊−ＣＯＮＨ−（ＣＨ２）ｂ−ＣＯ−、＊−ＮＨＣＯ−Ａｒ１−ＣＨ２−、＊−ＮＨＣＯ−（ＣＨ２）ｂ−又は−ＣＯ−（ここで、Ａｒ１は置換基又は非置換のアリーレン基を示し、ｂは１〜３の整数を示し、＊はこの位置でＺと結合すること示す。）を示し、
Ｚは、アリール基、ヘテロアリール基及びＣ３〜７シクロアルキル基から選ばれる環状基を示し、
Ｂは、Ｚで示される環状基に置換し得る基であり、−ＣＯ−Ｒ４若しくは−Ｏ−Ｒ４（ここで、Ｒ４はＣ１〜７アルキル基、又は置換又は非置換のフェニル基、置換又は非置換のピリジル基を示す）、−ＣＯＮＲ５Ｒ６（ここで、Ｒ５は水素原子、Ｃ３〜７シクロアルキル基、Ｃ１〜４アルコキシＣ１〜４アルキル基、ノルボルネニルＣ１〜４アルキル基、又はＡｒ２−Ｃ１〜４アルキル基（Ａｒ２は置換又は非置換のアリール又はヘテロアリール基を示す）を示し、Ｒ６は水素原子、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ２〜４アルケニル基又はＣ２〜４アルキニル基を示す）、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ３〜７シクロアルキル基、ハロＣ１〜７アルキル基、フェニル基、ハロゲン原子、−ＮＯ２、又は以下で示される基：
【化３】
2015046595.tif 000005
を示し、
ｎは０〜３の整数（ｎが２以上の場合Ｂは同一又は異なっていてもよい。）を示す。〕
で表される化合物。【００１４】
２）上記１）の化合物又はその塩、及び医薬上許容され得る担体を含有する医薬。
３）上記１）の化合物又はその塩を有効成分とするアディポネクチン受容体活性化剤。
４）上記２）の医薬を患者に投与することを含む、アディポネクチンの産生低下又はアディポネクチン受容体の活性低下に伴って発症する症状又は疾患の予防、改善又は治療方法。
５）アディポネクチンの産生低下又はアディポネクチン受容体の活性低下に伴って発症する症状又は疾患の予防、改善又は治療のために使用される、上記１）の化合物又はその塩。
６）アディポネクチン受容体活性化のため使用される、上記１）の化合物又はその塩。
【発明の効果】
【００１５】
本発明の化合物又はその塩は、ＡｄｉｐｏＲの活性化作用を有する。従って、本発明の化合物又はその塩は、ＡｄｉｐｏＲ（ＡｄｉｐｏＲ１又はＡｄｉｐｏＲ２）活性低下に伴って発症する症状、疾患、障害又は状態、例えば高血糖症；耐糖能障害；インスリン感受性低下（例えばインスリン抵抗性）；ＩＩ型糖尿病；高血圧症；動脈硬化、アテローム性動脈効果、高脂血症、脂肪肝などの脂質異常症；ミトコンドリア機能障害；肥満；メタボリックシンドロームおよび生活習慣病；生活習慣病に起因する悪性腫瘍等の予防、治療又は改善剤として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】AdipoR1およびAdipoR2に対する親和性、及び骨格筋及び肝臓でＡＭＰＫのリン酸化の誘導作用を示す図。j, k； AdipoR1およびAdipoR2に対するAdipoRonの結合を測定する表面プラズモン共鳴。l, m； AMPKのリン酸化および量（骨格筋(l)、肝臓(m)）。全ての値は、平均±s.e.m.として表す。l, m、各々n=3; *P<0.05および**P<0.01。NS,非有意。
【００１７】
【図２】グルコース不耐性、インスリン抵抗性及び異脂肪血症に対する作用を示す図。a〜g；血漿中化合物濃度(a)、体重(b)、食物摂取(c)、血漿中グルコース(d, e, g)、血漿中インスリン(d, e)、及びインスリン抵抗性(f)であって、AdipoRon(50mg/kg体重)を経口投与又は投与なしの野生型(WT)及びAdipor1-/-Adipor2-/-ダブルノックアウトマウスでの経口グルコース耐性試験(OGTT)(1.0gグルコース/kg体重)(d, e)又はインスリン耐性試験(ITT)(0.5Uインスリン/kg体重)中g)の値。h, i,；AdipoRon(50mg/kg体重)を経口投与又は投与なしの野生型及びAdipor1-/-Adipor2-/-ダブルノックアウトマウスで高インスリン血症正常血糖クランプ試験のグルコース注入率(GIR)、内因性グルコース産生(EGP)、及びグルコース処理率(Rd)。j, k；AdipoRon(50mg/kg体重)を用いて又は用いずに治療した野生型及びAdipor1-/-Adipor2-/-ダブルノックアウトマウスでの血漿中トリグリセリド(j)及び遊離脂肪酸(FFA)(k)。全ての値は、平均±s.e.m.として表される。a, n=12〜32; b〜g, j, k, 各々n=10;h, i, 各々n=5; *P<0.05及び**P<0.01(対照との比較又は示された通り)。NS, 非有意。
【００１８】
【図３】筋肉中のミトコンドリア新生、肝臓中の組織トリグリセリド含量、肝臓およびWAT中の酸化ストレス、炎症に対する作用を示す図。a〜h；Ppargc1a、Esrra、Tfam、mt-Co2、Tnni1、Acadm、及びSod2mRNAのレベル(a)、骨格筋中のミトコンドリアDNAコピー数により評価されたときのミトコンドリア含量(b)、運動持久力(c)、Ppargc1a、Pck1、G6pc、Ppara、Acox1、Ucp2、Cat、Tnf、及びCcl2 mRNAのレベル(d)、組織トリグリセリド含量(e)、肝臓中のTBARS(f)、Tnf、Il6、Ccl2、Emr1、Itgax、及びMrc1のmRNAレベル(g)、及びWAT中のTBARS(h)。AdipoRon(50mg/kg体重)を経口投与又は投与なしの野生型及びAdipor1-/-Adipor2-/-ダブルノックアウト(DKO)マウスの結果。全ての値は、平均±s.e.m.として表される。a, b, d〜h, 各々n=10;c, 各々n=5; *P<0.05及び**P<0.01(対照との比較又は示された通り)。NS, 非有意。
【００１９】
【図４】db/dbマウスでのインスリン抵抗性、糖尿病、および異脂肪血症に対する作用を示す図。a；アディポネクチン(30μg/10g体重)を腹腔内注射後(左）又はAdipoRon(50mg/kg体重)を経口投与後(中間)の血漿中グルコースレベル。左図及び中間図の曲線下の面積(AUC)を、右図に示す。b〜i；体重(b)、食物摂取(c)、肝臓重量(d)、WAT重量(e)、血漿中グルコース(f, 左, g)、血漿中インスリン(f,中間)、及びインスリン抵抗性指数(f, 右)であって、経口グルコース耐性試験(OGTT)(1.0gグルコース/kg体重)(f)又はインスリン耐性試験(ITT)(0.75Uインスリン/kg体重中(g)のものであり、血漿中トリグリセリド(h)及び遊離脂肪酸(FFA)(i)である。これらは、AdipoRon(50mg/kg体重)を経口投与又は投与なしの通常の固形飼料条件下にあるdb/dbマウスにおけるものである。全ての値は、平均±s.e.m.として表される。a, n=6〜7; b〜i, 各々n=10(2〜3回の独立実験による), *P<0.05及び**P<0.01(対照との比較又は示された通り)。NS, 非有意。
【００２０】
【図５】筋肉中のミトコンドリア新生、筋肉および肝臓中の組織トリグリセリド含量、酸化ストレス、db/dbマウスの肝臓およびWAT中の炎症に対する作用を示す図。a〜h； Ppargc1a、Esrra、Tfam、mt-Co2、Tnni1、Acadm、及びSod2mRNAのレベル(a)、ならびにミトコンドリアDNAコピー数により評価されたミトコンドリア含量(b)、組織トリグリセリド含量(c)、ならびに骨格筋中のTBARS(d)、Ppargc1a、Pck1、G6pc、Ppara、Acox1、Ucp2、Cat、Tnf、及びCcl2 mRNAのレベル(e)、組織トリグリセリド含量(f)、ならびに肝臓中のTBARS(g)、ならびにWAT中のTnf、Il6、Ccl2、Emr1、Itgax、及びMrc1 mRNAのレベル(h)。これらは、AdipoRon(50mg/kg体重)を経口投与又は投与なしの通常の固形飼料によるdb/dbマウスにおけるものである。全ての値は、平均±s.e.m.として表される。n=10, *P<0.05及び**P<0.01(対照との比較又は示された通り)。NS, 非有意。
【００２１】
【図６】インスリン感受性、グルコース耐性、肥満糖尿病マウスの寿命に対する作用を示す図。a〜c； 通常の固形飼料(a)(それぞれn=50、32、29、及び35)もしくは高脂肪食(b)(それぞれn=47、33、35、及び31)による、野生型、Adipor1-/-、Adipor2-/-、及びAdipor1-/-Adipor2-/-ノックアウトマウス、又は通常の固形飼料もしくは高脂肪食(それぞれn=20)(c)による、AdipoRon(30mg/kg体重)を経口投与又は投与なしのdb/dbマウスに関する、Kaplan-Meier生存曲線。P値は、ログランク計算から導かれた。
【００２２】
【図７】グルコース不耐性及びインスリン抵抗性に対する作用を示す図（化合物７４（No.112254））。血漿中グルコース(d, e, g)、血漿中インスリン(d, e)、及びインスリン抵抗性(f)。
【００２３】
【図８】化合物１のＬＣＭＳの分析チャート。
【図９】化合物２のＬＣＭＳの分析チャート。
【図１０】化合物３のＬＣＭＳの分析チャート。
【図１１】化合物４のＬＣＭＳの分析チャート。
【図１２】化合物５のＬＣＭＳの分析チャート。
【図１３】化合物６のＬＣＭＳの分析チャート。
【図１４】化合物７のＬＣＭＳの分析チャート。
【図１５】化合物８のＬＣＭＳの分析チャート。
【図１６】化合物９のＬＣＭＳの分析チャート。
【図１７】化合物１０のＬＣＭＳの分析チャート。
【図１８】化合物１１のＬＣＭＳの分析チャート。
【図１９】化合物１２のＬＣＭＳの分析チャート。
【図２０】化合物１３のＬＣＭＳの分析チャート。
【図２１】化合物１４のＬＣＭＳの分析チャート。
【図２２】化合物１４のＭＮＲの分析チャート。
【図２３】化合物１５のＬＣＭＳの分析チャート。
【図２４】化合物１６のＬＣＭＳの分析チャート。
【図２５】化合物１７のＬＣＭＳの分析チャート。
【図２６】化合物１８のＬＣＭＳの分析チャート。
【図２７】化合物１８のＭＮＲの分析チャート。
【図２８】化合物１９のＬＣＭＳの分析チャート。
【図２９】化合物２０のＬＣＭＳの分析チャート。
【図３０】化合物２１のＬＣＭＳの分析チャート。
【図３１】化合物２２のＬＣＭＳの分析チャート。
【図３２】化合物２３のＬＣＭＳの分析チャート。
【図３３】化合物２４のＬＣＭＳの分析チャート。
【図３４】化合物２５のＬＣＭＳの分析チャート。
【図３５】化合物２６のＬＣＭＳの分析チャート。
【図３６】化合物２６のＭＮＲの分析チャート。
【図３７】化合物２７のＬＣＭＳの分析チャート。
【図３８】化合物２８のＬＣＭＳの分析チャート。
【図３９】化合物２９のＬＣＭＳの分析チャート。
【図４０】化合物３０のＬＣＭＳの分析チャート。
【図４１】化合物３１のＬＣＭＳの分析チャート。
【図４２】化合物３２のＬＣＭＳの分析チャート。
【図４３】化合物３３のＬＣＭＳの分析チャート。
【図４４】化合物３４のＬＣＭＳの分析チャート。
【図４５】化合物３５のＬＣＭＳの分析チャート。
【図４６】化合物３６のＬＣＭＳの分析チャート。
【図４７】化合物３７のＬＣＭＳの分析チャート。
【図４８】化合物３８のＬＣＭＳの分析チャート。
【図４９】化合物３９のＬＣＭＳの分析チャート。
【図５０】化合物４０のＬＣＭＳの分析チャート。
【図５１】化合物４１のＬＣＭＳの分析チャート。
【図５２】化合物４１のＭＮＲの分析チャート。
【図５３】化合物４２のＬＣＭＳの分析チャート。
【図５４】化合物４３のＬＣＭＳの分析チャート。
【図５５】化合物４４のＬＣＭＳの分析チャート。
【図５６】化合物４５のＬＣＭＳの分析チャート。
【図５７】化合物４６のＬＣＭＳの分析チャート。
【図５８】化合物４７のＬＣＭＳの分析チャート。
【図５９】化合物４８のＬＣＭＳの分析チャート。
【図６０】化合物４９のＬＣＭＳの分析チャート。
【図６１】化合物５０のＬＣＭＳの分析チャート。
【図６２】化合物５１のＬＣＭＳの分析チャート。
【図６３】化合物５２のＬＣＭＳの分析チャート。
【図６４】化合物５３のＬＣＭＳの分析チャート。
【図６５】化合物５４のＬＣＭＳの分析チャート。
【図６６】化合物５５のＬＣＭＳの分析チャート。
【図６７】化合物５６のＬＣＭＳの分析チャート。
【図６８】化合物５７のＬＣＭＳの分析チャート。
【図６９】化合物５８のＬＣＭＳの分析チャート。
【図７０】化合物５９のＬＣＭＳの分析チャート。
【図７１】化合物６０のＬＣＭＳの分析チャート。
【図７２】化合物６１のＬＣＭＳの分析チャート。
【図７３】化合物６２のＬＣＭＳの分析チャート。
【図７４】化合物６３のＬＣＭＳの分析チャート。
【図７５】化合物６４のＬＣＭＳの分析チャート。
【図７６】化合物６５のＬＣＭＳの分析チャート。
【図７７】化合物６６のＬＣＭＳの分析チャート。
【図７８】化合物６７のＬＣＭＳの分析チャート。
【図７９】化合物６８のＬＣＭＳの分析チャート。
【図８０】化合物６９のＬＣＭＳの分析チャート。
【図８１】化合物７０のＬＣＭＳの分析チャート。
【図８２】化合物７１のＬＣＭＳの分析チャート。
【図８３】化合物７２のＬＣＭＳの分析チャート。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
本発明の一般式（１）中、「Ｃ１−７アルキル基」としては、例えばメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基等のＣ１−７アルキル基が挙げられる。このうち好ましくは、Ｃ１−４アルキル基であり、より好ましくは例えばメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｓ−ブチル基、ｔ−ブチル基、イソブチル基等が挙げられる。
【００２５】
「アリール基」としては、例えばフェニル基、ナフチル基、インデニル基、アントリル基等のＣ６−１４アリール基が挙げられ、好ましくは、Ｃ６−１０アリール基であり、より好ましくはフェニル基が挙げられる。
【００２６】
「ヘテロアリール基」としては、例えばフリル基、チエニル基、オキサゾリル基、ピリジル基、ピリミジニル基、ピラゾリル基、ベンゾフラニル基、ベンゾオキサジアゾリル基等の５〜１４員のヘテロアリール基が挙げられ、好ましくは、５又は６員のヘテロアリール基が挙げられ、より好ましくは、フリル基、ピリジル基、ベンゾフラニル基が挙げられる。
【００２７】
「アリールオキシ基」におけるアリールとしては、上記アリール基と同様のものが挙げられ、好ましくはフェノキシ基である。
【００２８】
「アリーレン基」としては、上記アリール基の芳香環に結合した１個の水素原子を除いた基が挙げられ、フェニレン基、ナフチレン基がより好ましい。
【００２９】
上記アリール基、ヘテロアリール基、アリールオキシ基及びアリーレン基に置換し得る基としては、例えばＣ１−４アルキル基（例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ｎ−ブチル基、ｓ−ブチル基、ｔ−ブチル基、イソブチル基等）、ハロＣ１−４アルキル基（例えば、クロロメチル基、ジクロロメチル基、フルオロメチル基、ジフルオロメチル基、トリフルオロメチル基、ペンタクロロエチル基等）、ハロゲン原子（例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等）、Ｃｌ−４アルコキシ基（例えば、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、ｓ−ブトキシ基、ｔ−ブトキシ基、イソブトキシ基等）、水酸基等が挙げられる。
【００３０】
「Ｃ３−７シクロアルキル基」としては、例えば、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基等が挙げられる。
【００３１】
「Ｃ２〜４アルケニル基」としては、例えばビニル基、プロペニル基等が挙げられる。
【００３２】
「Ｃ２〜４アルキニル基」としては、エチニル基、プロピニル基、ブチニル基等が挙げられ、２−プロピニル基、２−ブチニル基が好ましい。
【００３３】
「Ｃ４〜８第３級アルキル基」としては、ｔ−ブチル基、ｔ−ペンチル基、ｔ−ヘキシル基等が挙げられ、ｔ−ブチル基が好ましい。
【００３４】
Ａで示されるアリール基としては、フェニル基が好ましい。また、ヘテロアリール基としては、フリル基、チエニル基、ピリジル基、ベンゾフラニル基、ベンゾオキサジアゾリル基等が好ましい。アリールオキシ基としては、フェノキシ基が好ましい。
アリール基、ヘテロアリール基又はアリールオキシ基に置換し得る基としては、Ｃ１−４アルキル基（例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ｎ−ブチル基、ｓ−ブチル基、ｔ−ブチル基、イソブチル基等）、ハロＣ１−４アルキル基（例えば、トリフルオロメチル基、クロロメチル基、ジクロロメチル基、フルオロメチル基、ジフルオロメチル基等）、ハロゲン原子（例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等）、Ｃｌ−４アルコキシ基（例えば、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基等）、水酸基等が挙げられる。置換アリール基、置換ヘテロアリール基又は置換アリールオキシ基としては、当該置換基で１〜３置換されたアリール基、ヘテロアリール基又はアリールオキシ基が挙げられる。
Ａは、より好適には、フェニル基又は上記置換基で１〜３置換されたフェニル基である。
【００３５】
Ｙ１で示される、−（ＣＨＲ２）ａ−としては、Ｒ２が水素原子又はＣ１〜３アルキル基（好ましくはメチル基又はエチル基）であり、ａは１であるのが好ましく、より好適には−ＣＨ２−又は−ＣＨ（ＣＨ３）−である。
【００３６】
Ｒ１で示されるＣ１〜７アルキル基としては、Ｃ１−４アルキル基（例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｓ−ブチル基、ｔ−ブチル基、イソブチル基等）が好ましく、メチル基、エチル基がより好ましい。
また、ｍは、０又は１であるのが好ましい。
【００３７】
ＸがＣＨである場合、Ｙ２は＊−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−、−Ｏ−、＊−ＣＯＮＨ−、又は下記式（Ａ）：
【化４】
2015046595.tif 000006
であるが、このうち、＊−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−であるのがより好ましい。
【００３８】
また、（Ａ）で示される基において、ｐ及びｑは共に０、又は何れか一方が０で他方が１であるのが好ましく、Ｒ３で示されるＣ１〜７アルキル基としては、Ｃ１−４アルキル基（例えば、メチル基、エチル基、プロピル基等）が好ましく、ｒは０又は１であるのが好ましい。また、ｒが２以上の場合Ｒ３は同一又は異なっていてもよい。
【００３９】
（Ａ）としては、例えば以下の基が挙げられる。
【化５】
2015046595.tif 000007
【００４０】
ＸがＮである場合、Ｙ２は、＊−ＣＯＮＨ−（ＣＨ２）ｂ−ＣＯ−、＊−ＮＨＣＯ−Ａｒ１−ＣＨ２−、＊−ＮＨＣＯ−（ＣＨ２）ｂ−又は−ＣＯ−であるが、このうち、＊−ＣＯＮＨ−（ＣＨ２）ｂ−ＣＯ−又は＊−ＮＨＣＯ−Ａｒ１−ＣＨ２−であるのが好ましく、＊−ＣＯＮＨ−（ＣＨ２）ｂ−ＣＯ−であるのがより好ましく、ｂは２であるのが好ましい。
【００４１】
Ｚで示される環状基は、アリール基、ヘテロアリール基又はＣ３〜７シクロアルキル基であるが、このうちアリール基であるのが好ましく、さらにフェニル基又はナフチル基であるのが好ましく、フェニル基がより好ましい。Ｃ３〜７シクロアルキル基としては、シクロプロピル基、シクロブチル基等が好ましい。
【００４２】
（Ｂ）ｎ−は、Ｚで示される環状基に置換し得る基であり、ｎが２以上の場合Ｂは同一又は異なっていてもよい。ｎは０、１又は２であるのが好ましい。
Ｂで示される、−ＣＯ−Ｒ４若しくは−Ｏ−Ｒ４において、Ｒ４としては、好適にはＣ１〜４アルキル基（好適にはメチル基、エチル基、プロピル基等）、フェニル基、ハロゲン原子で１〜２置換されたフェニル基、ピリジル基等が挙げられる。
このうち、−Ｏ−Ｒ４であるのがより好ましく、具体的にはＣ１〜４アルコキシ基（好適には、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基等）；フェノキシ基；ハロゲン原子（好ましくは塩素原子、フッ素原子等）、ニトロ基等で１又は２置換されたフェノキシ基；ピリジルオキシ基（２−ピリジルオキシ基、３−ピリジルオキシ基、４−ピリジルオキシ基）を例示することができる。
【００４３】
Ｂで示される−ＣＯＮＲ５Ｒ６において、Ｒ５は水素原子、Ｃ３〜７シクロアルキル基が好ましく、Ｒ６としては水素原子、Ｃ１〜７アルキル基、Ｃ２〜４アルケニル基が好ましく、Ｒ５及びＲ６が共に水素原子であるのが好ましい。
また、Ｒ５において、Ａｒ２−Ｃ１〜４アルキル基のＡｒ２としては、フェニル基、フリル基、ピラゾリル基、ピリジル基等が好ましく、Ｃ１〜４アルキルとしてはＣ１〜２アルキルが好ましい。
【００４４】
Ｒ５において、Ｃ１〜４アルコキシＣ１〜４アルキル基としては、メトキシエチル基、エトキシエチル基、エトキシプロピル基が好ましい。
Ｂで示されるＣ１〜７アルキル基としては、好ましくはメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｓ−ブチル基、ｔ−ブチル基、イソブチル基等が挙げられる。
Ｂで示されるハロＣ１〜７アルキル基としては、クロロメチル基、ジクロロメチル基、フルオロメチル基、ジフルオロメチル基、トリフルオロメチル基等が挙げられ、好ましくはトリフルオロメチル基である。
Ｂで示されるハロゲン原子としては、好適にはフッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子が挙げられる。
Ｂで示されるＣ３〜７シクロアルキル基としては、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基等が好ましい。
【００４５】
Ｂとしては、Ｃ１〜７アルキル基、ハロゲン原子、−ＮＯ２、フェニル基、ハロＣ１〜７アルキル基、−ＣＯ−Ｒ４、−Ｏ−Ｒ４、−ＣＯＮＲ５Ｒ６であるのが好ましい。
【００４６】
本発明の式（１）で表される化合物のうち、好適には、以下の（１ａ）及び（１ｂ）で表されるが挙げられる。
【００４７】
【化６】
2015046595.tif 000008
【００４８】
〔式中、Ｙ１、Ｂ、Ｒ１、ｍ及びｎは前記と同じものを示し、Ｒ７は、Ｃ１−４アルキル基（例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ｎ−ブチル基、ｓ−ブチル基、ｔ−ブチル基、イソブチル基等）、ハロＣ１−４アルキル基（例えば、トリフルオロメチル基、クロロメチル基、ジクロロメチル基、フルオロメチル基、ジフルオロメチル基等）、ハロゲン原子（例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等）、Ｃｌ−４アルコキシ基（例えば、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基等）、水酸基を示し、ｓは０〜３の整数（ｓが２以上の場合Ｒ７は同一又は異なっていてもよい）を示す。〕
【００４９】
本発明の式（１）で表される好適な化合物の具体例を、下記表１〜９に示す。
【００５０】
【表１】
2015046595.tif 000009
【００５１】
【表２】
2015046595.tif 000010
【００５２】
【表３】
2015046595.tif 000011
【００５３】
【表４】
2015046595.tif 000012
【００５４】
【表５】
2015046595.tif 000013
【００５５】
【表６】
2015046595.tif 000014
【００５６】
【表７】
2015046595.tif 000015
【００５７】
【表８】
2015046595.tif 000016
【００５８】
【表９】
2015046595.tif 000017
【００５９】
本発明の式（１）で表される化合物は、シス体、トランス体等の幾何異性体やｄ体−、ｌ体−等の光学異性体等の全ての立体異性体を包含し、当該異性体を任意の割合で含む混合物であってもよい。
【００６０】
一般式（１）で表される化合物は、酸、塩基と酸付加塩、塩基付加塩を形成することができるが、酸付加塩としては、例えば塩酸、硫酸等の鉱酸との塩；ギ酸、酢酸、クエン酸、トリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸、フマ−ル酸、マレイン酸等の有機カルボン酸との塩；メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、メシチレンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸等のスルホン酸との塩を、また塩基付加塩としては、例えば、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属との塩；カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属との塩；アンモニウム塩、トリメチルアミン、トリエチルアミン、トリブチルアミン、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、Ｎ−メチル−Ｄ（−）−グルカミン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−メチルモルホリン、ジエチルアミン、シクロヘキシルアミン、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ−ベンジル−β−フェネチルアミン、１−エフェナミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン等の含窒素有機塩基との塩を挙げることができる。
【００６１】
また、式（１）で表される化合物又はその塩は、未溶媒和型のみならず、水和物又は溶媒和物としても存在することができる。従って、本発明においては、その全ての結晶型及び水和若しくは溶媒和物を含むものである。
【００６２】
本発明の式（１）で表される化合物及びその塩は、例えば、以下に示す方法により製造することができる。
【００６３】
【化７】
2015046595.tif 000018
【００６４】
〔式中、Ｙ１、Ａ、Ｂ、Ｚ、ｍ及びｎは前記と同じものを示し、Ｙ２ａは、＊−Ｏ−ＣＨ２−、単結合、又は
【化８】
2015046595.tif 000019
を示し、Ｙ２ｂは、＊−ＣＯＮＨ−（ＣＨ２）ｂ−又は単結合（ここで、Ｒ３、ｒ、ｐ、ｑ、ｂ及び＊は前記と同じものを示す。）を示す。
【００６５】
すなわち、化合物（２Ａ）又は（２Ｂ）のカルボン酸と、化合物（３Ａ）又は（３Ｂ）のアミンの縮合反応により化合物（１Ａ）又は（１Ｂ）を得ることができる。
本反応はカルボン酸（化合物（２Ａ）又は（２Ｂ））とアミン（化合物（３Ａ）又は（３Ｂ））とを当量或いは一方を過剰量用いて、縮合剤の存在下、常法に従って行えばよい。
縮合剤としては、例えばＮ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ），1-エチル-3-（3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ又はＷＳＣ）、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ），カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）４−メチルモルホリニウムクロリド（ＤＭＴＭＭ）、２−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）等を好適に用いることができる。これら縮合剤は、カルボン酸に対して当量、或いは過剰量用いて行われる。
【００６６】
溶媒としては、反応に関与しない溶媒、例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジオキサン、水、メタノール、エタノール、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジクロロメタン、ジクロロエタン、ジエチルエーテル、クロロホルム、ジメトキシエタン（ＤＭＥ）、酢酸エチル、トルエン、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）やこれらの混合溶媒などが用いることができるが、原料や縮合剤の種類などにより適宜選択するのが好ましい。
【００６７】
尚、脱水縮合を促進させ、かつ副反応を抑制するための添加剤として１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）やＮ−ヒドロキシコハク酸イミド（ＨＯＳｕ）などを添加することができる。
【００６８】
前記反応は通常、冷却〜室温にて行うが、縮合反応の条件によっては加熱下で反応させることもできる。
【００６９】
また、化合物（１Ａ）又は（１Ｂ）は、カルボン酸を活性誘導体に導いた後にアミンと縮合させる方法によっても製造できる。この場合、カルボン酸（化合物（２Ａ）又は（２Ｂ））とアミン（化合物（３Ａ）又は（３Ｂ））とを当量或いは一方を過剰量用いて反応を行う。カルボン酸の活性誘導体としては、ｐ−ニトロフェノール等のフェノール系化合物、又は１−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）もしくは７−アザ−１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）等のＮ−ヒドロシキアミン系の化合物と反応させて得られる活性エステル、炭酸モノアルキルエステル、有機酸と反応させて得られる混合酸無水物、塩化ジフェニルホスホリル及びＮ−メチルモルホリンを反応させて得られるリン酸系混合酸無水物、エステルをヒドラジン及び亜硝酸アルキルと逐次反応させて得られる酸アジド、酸塩化物もしくは酸フッ化物等の酸ハロゲン化物、並びに対象型酸無水物等が挙げられる。
カルボン酸の活性誘導体を合成する際の活性化試薬はカルボン酸（化合物（２Ａ）又は（２Ｂ））に対して当量又は、過剰量用いて実施される。この場合の反応条件以外でも、アミド結合を形成する反応であれば、いずれの反応も用いることができる。
【００７０】
尚、上記反応において、原料として用いられるカルボン酸（化合物（２Ａ）又は（２Ｂ））及びアミン（化合物（３Ａ）又は（３Ｂ））は文献公知の化合物であり、公知の合成法により製造することができ、また市販品を用いることもできる。
【００７１】
斯くして製造される本発明の式（１）で表される化合物は、遊離のまま或いはその塩として、当該分野における慣用の化学操作、例えば、抽出、沈殿、分画クロマトグラフィー、分別結晶化、再結晶等により単離、精製することができる。また、当該化合物の塩は、遊離の本発明化合物を通常の造塩反応に付すことにより製造できる。また、本発明化合物が不斉炭素を有する場合には光学異性体が存在する。これら光学異性体は、光学活性な酸もしくは塩基とのジアステレオマー塩に導いた後、分別結晶化する手法、カラクロマトグラフィー等の常法により光学分割する手法、或いは光学活性な原料化合物を用いて合成する手法等により製造することができる。
【００７２】
本発明の式（１）で表される化合物又はその塩は、後記試験例に示すとおり、ＡｄｉｐｏＲ１を発現するＣ２Ｃ１２細胞においてＡＭＰＫのリン酸化を増大すると共に、それが特異的ｓｉＲＮＡによるＡｄｉｐｏＲ１の抑制により大きく低減される（試験例１）。すなわち、本発明の化合物又はその塩は、ＡｄｉｐｏＲを介してＡＭＰＫリン酸化を増加させる。
また、本発明の化合物は、ＡｄｉｐｏＲ１及びＡｄｉｐｏＲ２の両方に結合し、高脂肪（ＨＦ）食を与えたマウスにおけるＡＭＰＫ及びＰＰＡＲα経路の活性化、インスリン抵抗性及びグルコース不耐性の改善等、筋肉及び肝臓でアディポネクチン様の作用を有する。また、本発明の化合物は、遺伝性肥満の齧歯類モデルであるｄｂ／ｄｂマウスにおいて、糖尿病を改善し、ＨＦ食によるｄｂ／ｄｂマウスの短い寿命を延ばす（試験例２、３）。
従って、本発明の化合物又はその塩は、アディポネクチンの産生低下や、血中アディポネクチン濃度の低下、ＡｄｉｐｏＲ（ＡｄｉｐｏＲ１又はＡｄｉｐｏＲ２）活性低下に伴って発症する症状、疾患、障害又は状態の予防、治療又は改善剤として有用であり、当該症状、疾患、障害又は状態の予防、治療又は改善のために使用できる。具体的には、高血糖症；耐糖能障害；インスリン感受性低下（例えばインスリン抵抗性）；ＩＩ型糖尿病；高血圧症；動脈硬化、アテローム性動脈効果、高脂血症、脂肪肝などの脂質異常症、ミトコンドリア機能障害；肥満；メタボリックシンドロームおよび生活習慣病；生活習慣病に起因する悪性腫瘍等の予防又は治療のため医薬として有用である。
【００７３】
本発明の式（１）で表される化合物又はその塩を医薬（医薬組成物）として使用する場合、注射、経直腸、経皮等の非経口投与、固形、半固形若しくは液体形態での経口投与等のための製薬（医薬）上許容し得る担体と共に組成物として処方することができる。
注射剤のための本発明による組成物の形態としては、製薬上許容し得る無菌水、非水溶液、懸濁液又は乳濁液が挙げられる。適当な非水担体、希釈剤、溶媒又はビヒクルの例としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油等の植物油、オレイン酸エチル等の注射可能な有機エステルが挙げられる。このような組成物は、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤等の補助剤をも合有することができる。これらの組成物は、例えば細菌保持フィルターによる濾過により、又は使用直前に滅菌水あるいは若干の他の滅菌注射可能な媒質に溶解し得る無菌固形組成物の形態で滅菌剤を混入することにより滅菌することができる。
【００７４】
経口投与のための固形製剤としては、カプセル剤、錠剤、丸剤、トローチ剤、散剤、顆粒剤等が挙げられる。この固形製剤の調製に際しては、一般に本発明化合物を少なくとも1種の不活性希釈剤、例えばスクロース、乳糖、でんぷん等と混和する。この製剤は、また通常の製剤化において不活性希釈剤以外の追加の物質例えば滑沢剤(例えばステアリン酸マグネシウム等)を包合させることができる。カプセル剤、錠剤及び丸剤の場合には、緩衝剤をも包合し得る。錠剤及び丸剤には更に腸溶性被膜を施すこともできる。
【００７５】
経口投与のための液体製剤としては、当業者間で普通に使用される不活性希釈剤、例えば水を合む製薬上許容し得る乳剤、溶液、懸濁剤、シロップ剤、エリキシール剤等が挙げられる。かかる不活性希釈剤に加えて、組成物には湿潤剤、乳化剤、懸濁剤、甘味剤、調味剤、香味剤等の補助剤をも配合することができる。経直腸投与のための製剤の場合、本発明化合物に加えてカカオ脂、坐剤ワックス等の賦形剤を合有するのが好ましい。
【００７６】
本発明の式（１）で表される化合物又はその塩の投与量は、投与される化合物の性状、投与経路、所望の処置期間及びその他の要因によって左右されるが、一般に静脈内投与の場合、一日当り約０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ、筋肉内投与の場合、一日当り約０．０５〜５００ｍｇ／ｋｇ、及び経口投与の場合、約０．１〜１０００ｍｇ／ｋｇが好ましい。また、所望によりこの一日量を２〜４回に分割して投与することもできる。
【００７７】
投与対象としては、アディポネクチンの産生低下や、血中アディポネクチン濃度の低下、ＡｄｉｐｏＲ活性低下に伴う各種症状、疾患又は障害を発症しているヒト又はその恐れのあるヒトが挙げられる。例えば、高血糖症；耐糖能障害；インスリン感受性低下（例えばインスリン抵抗性）；ＩＩ型糖尿病；高血圧症；動脈硬化、アテローム性動脈効果、高脂血症、脂肪肝などの脂質異常症；ミトコンドリア機能障害；肥満；メタボリックシンドロームおよび生活習慣病；生活習慣病に起因する悪性腫瘍等を罹患している患者が挙げられる。
以下に、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する。なお、特に記載がない限り％は、質量％を意味する。
【実施例】
【００７８】
製造例１  化合物１の合成
【化９】
2015046595.tif 000020
【００７９】
バイアルにカルボン酸（３３０ｍｇ、１．１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３１６ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２９０ｍｇ、１．２１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、４２５ｍｇ（７２％）であった。【００８０】
製造例２  化合物２の合成
【化１０】
2015046595.tif 000021
【００８１】
バイアルにカルボン酸（３３９ｍｇ、１．１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３２４ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２９８ｍｇ、１．２１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、５９０ｍｇ（９８％）であった。【００８２】
製造例３  化合物３の合成
【化１１】
2015046595.tif 000022
【００８３】
バイアルにカルボン酸（１７４ｍｇ、１．１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（１０９ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（１４３ｍｇ、１．２１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、９４ｍｇ（３７％）であった。【００８４】
製造例４  化合物４の合成
【化１２】
2015046595.tif 000023
【００８５】
バイアルにカルボン酸（２９０ｍｇ、１．１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３５０ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２９８ｍｇ、１．２１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、１２５ｍｇ（２１％）であった。【００８６】
製造例５  化合物５の合成
【化１３】
2015046595.tif 000024
【００８７】
バイアルにカルボン酸（２９９ｍｇ、１．１当量）および乾燥ＤＭＦ（１ｍＬ）を投入した。その撹拌反応混合物にＮ，Ｎ−カルボジイミダゾール（２６９ｍｇ、１．１当量）を添加した。１時間の撹拌後、バイアルを開け、反応混合物を２時間、６０℃の乾燥オーブンの中に放置した。その後、アミン（３５９ｍｇ、１当量）を添加し、バイアルをしっかりと閉じ、反応混合物を撹拌した。その反応バイアルを水浴に入れ、１００℃で１時間放置した。反応混合物を室温に冷却し、そのバイアルが満たされるまで水を添加した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、バイアルを一晩放置し、その後、水層を除去し、２−プロパノール（１ｍＬ）を添加して結晶化させた。沈殿物を濾過し、炭酸ナトリウム溶液で２回洗浄し、その後、水／２−プロパノール（１：１）溶液で洗浄した。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。その収量は、収量４５０ｍｇ（７４％）であった。【００８８】
製造例６  化合物６の合成
【化１４】
2015046595.tif 000025
【００８９】
バイアルにカルボン酸（３３６ｍｇ、１．１当量）および乾燥ＤＭＦ（１ｍＬ）を投入した。その撹拌反応混合物にＮ，Ｎ−カルボジイミダゾール（２６２ｍｇ、１．１当量）を添加した。１時間の撹拌後、バイアルを開け、反応混合物を２時間、６０℃の乾燥オーブンの中に放置した。その後、アミン（３０５ｍｇ、１当量）を添加し、バイアルをしっかりと閉じ、反応混合物を撹拌した。その反応バイアルを水浴に入れ、１００℃で１時間放置した。反応混合物を室温に冷却し、そのバイアルが満たされるまで水を添加した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、バイアルを一晩放置し、その後、水層を除去し、２−プロパノール（１ｍＬ）を添加して結晶化させた。沈殿物を濾過し、炭酸ナトリウム溶液で２回洗浄し、その後、水／２−プロパノール（１：１）溶液で洗浄した。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。その収量は、収量２５３ｍｇ（４３％）であった。【００９０】
製造例７  化合物７の合成
【化１５】
2015046595.tif 000026
【００９１】
バイアルに対応する酸（３３１ｍｇ、１．０当量）、ＤＩＰＥＡ（４６８ｍｇ、２．５当量）、および乾燥アセトニトリル（１ｍＬ）を投入した。その撹拌反応混合物にアミン（２９６ｍｇ、１．０当量）および２−クロロ−Ｎ−メチルピリジニウム・ヨージド（４４４ｍｇ、１．２当量）を添加した。その反応バイアルを水浴に入れ、１００℃で３時間放置した。その後、それを室温に冷却し、過剰な水を添加した。その後、そのバイアルを超音波処理したが、なお抽出により油性生成物を分離した。乾燥した有機層を濃縮し、粗残留物を、シリカゲルを用いるＣｏｍｂｉＦｌａｓｈでのカラムクロマトグラフィーによって精製した。収量は、２０ｍｇ（３％）であった。【００９２】
製造例８  化合物８の合成
【化１６】
2015046595.tif 000027
【００９３】
バイアルにカルボン酸（３４７ｍｇ、１．１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３１３ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２６９ｍｇ、１．２１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、３９９ｍｇ（６６％）であった【００９４】
製造例９  化合物９の合成
【化１７】
2015046595.tif 000028
【００９５】
バイアルにカルボン酸（３５６ｍｇ、１．１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３００ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２７６ｍｇ、１．２１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、２５０ｍｇ（４２％）であった。【００９６】
製造例１０  化合物１０の合成
【化１８】
2015046595.tif 000029
【００９７】
バイアルにカルボン酸（３７１ｍｇ、１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（２５４ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２２８ｍｇ、１．１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、５０６ｍｇ（８４％）であった。【００９８】
製造例１１  化合物１１の合成
【化１９】
2015046595.tif 000030
【００９９】
バイアルにカルボン酸（４１０ｍｇ、１．１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（２４４ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２４１ｍｇ、１．２１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、４９ｍｇ（８％）であった。【０１００】
製造例１２  化合物１２の合成
【化２０】
2015046595.tif 000031
【０１０１】
バイアルにカルボン酸（３２６ｍｇ、１当量）および乾燥ＤＭＦ（１ｍＬ）を投入した。その撹拌反応混合物にＮ，Ｎ−カルボジイミダゾール（２３７ｍｇ、１．２当量）を添加した。１時間の撹拌後、バイアルを開け、反応混合物を２時間、６０℃の乾燥オーブンの中に放置した。その後、アミン（２８６ｍｇ、１当量）を添加し、バイアルをしっかりと閉じ、反応混合物を撹拌した。その反応バイアルを水浴に入れ、１００℃で１時間放置した。反応混合物を室温に冷却し、そのバイアルが満たされるまで水を添加した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、バイアルを一晩放置し、その後、水層を除去し、２−プロパノール（１ｍＬ）を添加して結晶化させた。沈殿物を濾過し、炭酸ナトリウム溶液で２回洗浄し、その後、水／２−プロパノール（１：１）溶液で洗浄した。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、６３ｍｇ（１１％）であった。【０１０２】
製造例１３  化合物１３の合成
【化２１】
2015046595.tif 000032
【０１０３】
バイアルにカルボン酸（３２６ｍｇ、１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（２９７ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２４８ｍｇ、１．１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、４１９ｍｇ（７０％）であった。【０１０４】
製造例１４  化合物１４の合成
【化２２】
2015046595.tif 000033
【０１０５】
バイアルにカルボン酸（３３３ｍｇ、１．１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３１９ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２９３ｍｇ、１．２１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、５１７ｍｇ（８７％）であった。【０１０６】
製造例１５  化合物１５の合成
【化２３】
2015046595.tif 000034
【０１０７】
バイアルにカルボン酸（２８９ｍｇ、１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３３４ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２２０ｍｇ、１．１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、５２５ｍｇ（８８％）であった。【０１０８】
製造例１６  化合物１６の合成
【化２４】
2015046595.tif 000035
【０１０９】
バイアルにカルボン酸（３４７ｍｇ、１．１当量）および乾燥ＤＭＦ（１ｍＬ）を投入した。その撹拌反応混合物にＮ，Ｎ−カルボジイミダゾール（２７０ｍｇ、１．１当量）を添加した。１時間の撹拌後、バイアルを開け、反応混合物を２時間、６０℃の乾燥オーブンの中に放置した。その後、アミン（３１０ｍｇ、１当量）を添加し、バイアルをしっかりと閉じ、反応混合物を撹拌した。その反応バイアルを水浴に入れ、１００℃で１時間放置した。反応混合物を室温に冷却し、そのバイアルが満たされるまで水を添加した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、バイアルを一晩放置し、その後、水層を除去し、２−プロパノール（１ｍＬ）を添加して結晶化させた。沈殿物を濾過し、炭酸ナトリウム溶液で２回洗浄し、その後、水／２−プロパノール（１：１）溶液で洗浄した。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。その収量は、収量４９６ｍｇ（８３％）であった。【０１１０】
製造例１７  化合物１７の合成
【化２５】
2015046595.tif 000036
【０１１１】
バイアルにカルボン酸（３３５ｍｇ、１．２当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３４８ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２７５ｍｇ、１．３２当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、４９６ｍｇ（８２％）であった。【０１１２】
製造例１８  化合物１８の合成
【化２６】
2015046595.tif 000037
【０１１３】
バイアルにカルボン酸（３７３ｍｇ、１．２当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３０５ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（３０６ｍｇ、１．３２当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、５２２ｍｇ（８９％）であった。【０１１４】
製造例１９  化合物１９の合成
【化２７】
2015046595.tif 000038
【０１１５】
バイアルにカルボン酸（２９０ｍｇ、１．１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３５０ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２５４ｍｇ、１．２１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、４５９ｍｇ（７８％）であった。【０１１６】
製造例２０  化合物２０の合成
【化２８】
2015046595.tif 000039
【０１１７】
バイアルにカルボン酸（３１４ｍｇ、１．１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３３１ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２７５ｍｇ、１．２１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、２９９ｍｇ（５１％）であった。【０１１８】
製造例２１  化合物２１の合成
【化２９】
2015046595.tif 000040
【０１１９】
バイアルにカルボン酸（２８３ｍｇ、１．１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３５５ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２４８ｍｇ、１．２１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、５４２ｍｇ（９２％）であった。【０１２０】
製造例２２  化合物２２の合成
【化３０】
2015046595.tif 000041
【０１２１】
バイアルにカルボン酸（３０８ｍｇ、１．１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３５３ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２６７ｍｇ、１．２１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、３５４ｍｇ（５８％）であった。【０１２２】
製造例２３  化合物２３の合成
【化３１】
2015046595.tif 000042
【０１２３】
バイアルにカルボン酸（３０２ｍｇ、１．１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３９７ｍｇ、１当量）を投入し、さらにトリエチルアミン（１６９ｍｇ、１．２当量）を添加した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２６２ｍｇ、１．２１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、１７０ｍｇ（２９％）であった。【０１２４】
製造例２４  化合物２４の合成
【化３２】
2015046595.tif 000043
【０１２５】
バイアルにカルボン酸（３１１ｍｇ、１．１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３４２ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２６９ｍｇ、１．２１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、４９３ｍｇ（８２％）であった。【０１２６】
製造例２５  化合物２５の合成
【化３３】
2015046595.tif 000044
【０１２７】
バイアルにカルボン酸（３２５ｍｇ、１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３０７ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２３６ｍｇ、１．１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、５２６ｍｇ（８７％）であった。【０１２８】
製造例２６  化合物２６の合成
【化３４】
2015046595.tif 000045
【０１２９】
バイアルにカルボン酸（３３９ｍｇ、１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（２９４ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２４６ｍｇ、１．１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、３８６ｍｇ（６４％）であった。【０１３０】
製造例２７  化合物２７の合成
【化３５】
2015046595.tif 000046
【０１３１】
バイアルにカルボン酸（３０７ｍｇ、１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３２４ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２２３ｍｇ、１．１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、２５２ｍｇ（４１％）であった。【０１３２】
製造例２８  化合物２８の合成
【化３６】
2015046595.tif 000047
【０１３３】
バイアルにカルボン酸（３５４ｍｇ、１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（２６８ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２２４ｍｇ、１．１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、５４１ｍｇ（９０％）であった。【０１３４】
製造例２９  化合物２９の合成
【化３７】
2015046595.tif 000048
【０１３５】
バイアルにカルボン酸（３４５ｍｇ、１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（２７９ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２１８ｍｇ、１．１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、５０４ｍｇ（８４％）であった。【０１３６】
製造例３０  化合物３０の合成
【化３８】
2015046595.tif 000049
【０１３７】
バイアルにカルボン酸（２４８ｍｇ、１．０当量）、１ｍＬの溶媒（２００ｍＬの乾燥ＤＭＦ中の３．４ｇのイミダゾール）を、そしてアミン（３８７ｍｇ、１．０当量を投入した。その撹拌反応混合物にキノリン（４４３ｍｇ、１．２当量）を添加した。溶液を室温で７２時間保持した。反応混合物を２％塩酸で注意深く希釈し、その後、２４時間放置した。その後、その反応混合物を超音波処理した。バイアルを一晩放置し、その後、水層を除去し、２−プロパノール（１ｍＬ）を添加して結晶化を生じさせた。あるいは、炭酸ナトリウムをその水溶液に少しずつ添加して、アミド結晶化を助長した。ゴム状沈殿物を濾過し、炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、その後、メタノールで洗浄した。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、４：１としてクロロホルムと２−プロパノール）によって精製した。収量は、４２８ｍｇ（７０％）であった。【０１３８】
製造例３１  化合物３１の合成
【化３９】
2015046595.tif 000050
【０１３９】
バイアルにカルボン酸（３２９ｍｇ、１．１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３３９ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（３１２ｍｇ、１．２１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、５９０ｍｇ（９７％）であった。【０１４０】
製造例３２  化合物３２の合成
【化４０】
2015046595.tif 000051
【０１４１】
バイアルにカルボン酸（２７７ｍｇ、１．１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３８４ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２７８ｍｇ、１．２１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、２０９ｍｇ（３４％）であった。【０１４２】
製造例３３  化合物３３の合成
【化４１】
2015046595.tif 000052
【０１４３】
バイアルにカルボン酸（２８７ｍｇ、１．１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３６２ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２６３ｍｇ、１．２１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、２２ｍｇ（４％）であった。【０１４４】
製造例３４  化合物３４の合成
【化４２】
2015046595.tif 000053
【０１４５】
バイアルにカルボン酸（３４８ｍｇ、１．１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３１９ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２７０ｍｇ、１．２１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、４５６ｍｇ（７５％）であった。【０１４６】
製造例３５  化合物３５の合成
【化４３】
2015046595.tif 000054
【０１４７】
バイアルにカルボン酸（３２６ｍｇ、１．１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３２１ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２５３ｍｇ、１．２１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、４７１ｍｇ（７９％）であった。【０１４８】
製造例３６  化合物３６の合成
【化４４】
2015046595.tif 000055
【０１４９】
バイアルにカルボン酸（３４８ｍｇ、１当量）および乾燥ＤＭＦ（１ｍＬ）を投入した。その撹拌反応混合物にＮ，Ｎ−カルボジイミダゾール（２３１ｍｇ、１当量）を添加した。１時間の撹拌後、バイアルを開け、反応混合物を２時間、６０℃の乾燥オーブンの中に放置した。その後、アミン（２７１ｍｇ、１当量）を添加し、バイアルをしっかりと閉じ、反応混合物を撹拌した。その反応バイアルを水浴に入れ、１００℃で１時間放置した。反応混合物を室温に冷却し、そのバイアルが満たされるまで水を添加した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、バイアルを一晩放置し、その後、水層を除去し、２−プロパノール（１ｍＬ）を添加して結晶化させた。沈殿物を濾過し、炭酸ナトリウム溶液で２回洗浄し、その後、水／２−プロパノール（１：１）溶液で洗浄した。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。その収量は、収量６６ｍｇ（１１％）であった。【０１５０】
製造例３７  化合物３７の合成
【化４５】
2015046595.tif 000056
【０１５１】
バイアルにカルボン酸（２８５ｍｇ、１．１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３６９ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２６７ｍｇ、１．２１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、１２６ｍｇ（２１％）であった。【０１５２】
製造例３８  化合物３８の合成
【化４６】
2015046595.tif 000057
【０１５３】
バイアルにカルボン酸（２９９ｍｇ、１．１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３５９ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２６０ｍｇ、１．２１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、１４８ｍｇ（２４％）であった。【０１５４】
製造例３９  化合物３９の合成
【化４７】
2015046595.tif 000058
【０１５５】
バイアルにカルボン酸（３３８ｍｇ、１．１当量）および乾燥ＤＭＦ（１ｍＬ）を投入した。その撹拌反応混合物にＮ，Ｎ−カルボジイミダゾール（２７９ｍｇ、１．１当量）を添加した。１時間の撹拌後、バイアルを開け、反応混合物を２時間、６０℃の乾燥オーブンの中に放置した。その後、アミン（３２０ｍｇ、１当量）を添加し、バイアルをしっかりと閉じ、反応混合物を撹拌した。その反応バイアルを水浴に入れ、１００℃で１時間放置した。反応混合物を室温に冷却し、そのバイアルが満たされるまで水を添加した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、バイアルを一晩放置し、その後、水層を除去し、２−プロパノール（１ｍＬ）を添加して結晶化させた。沈殿物を濾過し、炭酸ナトリウム溶液で２回洗浄し、その後、水／２−プロパノール（１：１）溶液で洗浄した。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。その収量は、収量１７ｍｇ（３％）であった。【０１５６】
製造例４０  化合物４０の合成
【化４８】
2015046595.tif 000059
【０１５７】
バイアルにカルボン酸（２８８ｍｇ、１．１当量）および乾燥ＤＭＦ（１ｍＬ）を投入した。その撹拌反応混合物にＮ，Ｎ−カルボジイミダゾール（２３８ｍｇ、１．１当量）を添加した。１時間の撹拌後、バイアルを開け、反応混合物を２時間、６０℃の乾燥オーブンの中に放置した。その後、アミン（３４５ｍｇ、１当量）を添加し、バイアルをしっかりと閉じ、反応混合物を撹拌した。その反応バイアルを水浴に入れ、１００℃で１時間放置した。反応混合物を室温に冷却し、そのバイアルが満たされるまで水を添加した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、バイアルを一晩放置し、その後、水層を除去し、２−プロパノール（１ｍＬ）を添加して結晶化させた。沈殿物を濾過し、炭酸ナトリウム溶液で２回洗浄し、その後、水／２−プロパノール（１：１）溶液で洗浄した。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。その収量は、収量１３１ｍｇ（２２％）であった。【０１５８】
製造例４１  化合物４１の合成
【化４９】
2015046595.tif 000060
【０１５９】
バイアルにカルボン酸（３２０ｍｇ、１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３１１ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２６０ｍｇ、１．１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、５０５ｍｇ（８４％）であった。【０１６０】
製造例４２  化合物４２の合成
【化５０】
2015046595.tif 000061
【０１６１】
バイアルにカルボン酸（３１１ｍｇ、１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３２３ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２５３ｍｇ、１．１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、２９１ｍｇ（４８％）であった。【０１６２】
製造例４３  化合物４３の合成
【化５１】
2015046595.tif 000062
【０１６３】
バイアルにカルボン酸（３１９ｍｇ、１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３１０ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２５９ｍｇ、１．１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、５４１ｍｇ（９０％）であった。【０１６４】
製造例４４  化合物４４の合成
【化５２】
2015046595.tif 000063
【０１６５】
バイアルにカルボン酸（２９３ｍｇ、１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３４６ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２３８ｍｇ、１．１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、１７４ｍｇ（２８％）であった。【０１６６】
製造例４５  化合物４５の合成
【化５３】
2015046595.tif 000064
【０１６７】
バイアルにカルボン酸（３８３ｍｇ、１．１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（２７０ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２６７ｍｇ、１．２１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、５８０ｍｇ（９８％）であった。【０１６８】
製造例４６  化合物４６の合成
【化５４】
2015046595.tif 000065
【０１６９】
バイアルにカルボン酸（３６９ｍｇ、１．１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（２７９ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２５７ｍｇ、１．２１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、５７０ｍｇ（９７％）であった。【０１７０】
製造例４７  化合物４７の合成
【化５５】
2015046595.tif 000066
【０１７１】
バイアルにカルボン酸（３７５ｍｇ、１．１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（２８４ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２６１ｍｇ、１．２１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、５９６ｍｇ（９９％）であった。【０１７２】
製造例４８  化合物４８の合成
【化５６】
2015046595.tif 000067
【０１７３】
バイアルにカルボン酸（３３０ｍｇ、１当量）および乾燥ＤＭＦ（１ｍＬ）を投入した。その撹拌反応混合物にＮ，Ｎ−カルボジイミダゾール（２１８ｍｇ、１当量）を添加した。１時間の撹拌後、バイアルを開け、反応混合物を２時間、６０℃の乾燥オーブンの中に放置した。その後、アミン（２８０ｍｇ、１当量）を添加し、バイアルをしっかりと閉じ、反応混合物を撹拌した。その反応バイアルを水浴に入れ、１００℃で１時間放置した。反応混合物を室温に冷却し、そのバイアルが満たされるまで水を添加した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、バイアルを一晩放置し、その後、水層を除去し、２−プロパノール（１ｍＬ）を添加して結晶化させた。沈殿物を濾過し、炭酸ナトリウム溶液で２回洗浄し、その後、水／２−プロパノール（１：１）溶液で洗浄した。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。その収量は、収量４５３ｍｇ（７７％）であった。【０１７４】
製造例４９  化合物４９の合成
【化５７】
2015046595.tif 000068
【０１７５】
バイアルにカルボン酸（３１５ｍｇ、１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３１４ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２６０ｍｇ、１．１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、３９６ｍｇ（６６％）であった。【０１７６】
製造例５０  化合物５０の合成
【化５８】
2015046595.tif 000069
【０１７７】
バイアルにカルボン酸（２９３ｍｇ、１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３３４ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２４１ｍｇ、１．１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、５１２ｍｇ（８５％）であった。【０１７８】
製造例５１  化合物５１の合成
【化５９】
2015046595.tif 000070
【０１７９】
バイアルにカルボン酸（２９８ｍｇ、１．１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３７３ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２６３ｍｇ、１．２１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、４４４ｍｇ（７２％）であった。【０１８０】
製造例５２  化合物５２の合成
【化６０】
2015046595.tif 000071
【０１８１】
バイアルにカルボン酸（３４８ｍｇ、１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３７０ｍｇ、１当量）を投入し、さらにトリエチルアミン（３３９ｍｇ、２．４当量）を添加した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２３８ｍｇ、１．１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、２９１ｍｇ（４９％）であった。【０１８２】
製造例５３  化合物５３の合成
【化６１】
2015046595.tif 000072
【０１８３】
バイアルにカルボン酸（３２４ｍｇ、１当量）および乾燥ＤＭＦ（１ｍＬ）を投入した。その撹拌反応混合物にＮ，Ｎ−カルボジイミダゾール（２４２ｍｇ、１．２当量）を添加した。１時間の撹拌後、バイアルを開け、反応混合物を２時間、６０℃の乾燥オーブンの中に放置した。その後、アミン（２９５ｍｇ、１当量）を添加し、バイアルをしっかりと閉じ、反応混合物を撹拌した。その反応バイアルを水浴に入れ、１００℃で１時間放置した。反応混合物を室温に冷却し、そのバイアルが満たされるまで水を添加した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、バイアルを一晩放置し、その後、水層を除去し、２−プロパノール（１ｍＬ）を添加して結晶化させた。沈殿物を濾過し、炭酸ナトリウム溶液で２回洗浄し、その後、水／２−プロパノール（１：１）溶液で洗浄した。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、２３９ｍｇ（４０％）であった。【０１８４】
製造例５４  化合物５４の合成
【化６２】
2015046595.tif 000073
【０１８５】
バイアルにカルボン酸（３４１ｍｇ、１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３９７ｍｇ、１当量）を投入し、さらにトリエチルアミン（３６４ｍｇ、２．４当量）を添加した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２５６ｍｇ、１．１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、４６９ｍｇ（７８％）であった。【０１８６】
製造例５５  化合物５５の合成
【化６３】
2015046595.tif 000074
【０１８７】
バイアルにカルボン酸（３１９ｍｇ、１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３２０ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２３９ｍｇ、１．１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、３８５ｍｇ（６３％）であった。【０１８８】
製造例５６  化合物５６の合成
【化６４】
2015046595.tif 000075
【０１８９】
バイアルにカルボン酸（３６６ｍｇ、１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３５７ｍｇ、１当量）を投入し、さらにトリエチルアミン（３２７ｍｇ、２．４当量）を添加した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２３０ｍｇ、１．１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、４９３ｍｇ（８２％）であった。【０１９０】
製造例５７  化合物５７の合成
【化６５】
2015046595.tif 000076
【０１９１】
バイアルにカルボン酸（３２４ｍｇ、１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（２９４ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２４３ｍｇ、１．１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、４９３ｍｇ（８３％）であった。【０１９２】
製造例５８  化合物５８の合成
【化６６】
2015046595.tif 000077
【０１９３】
バイアルにカルボン酸（３５２ｍｇ、１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（２６７ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２２１ｍｇ、１．１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、５５５ｍｇ（９３％）であった。【０１９４】
製造例５９  化合物５９の合成
【化６７】
2015046595.tif 000078
【０１９５】
バイアルにカルボン酸（３４１ｍｇ、１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（２９６ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２１４ｍｇ、１．１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、５０８ｍｇ（８３％）であった。【０１９６】
製造例６０  化合物６０の合成
【化６８】
2015046595.tif 000079
【０１９７】
バイアルにカルボン酸（２８７ｍｇ、１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３３６ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２１５ｍｇ、１．１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、５３１ｍｇ（８８％）であった。【０１９８】
製造例６１  化合物６１の合成
【化６９】
2015046595.tif 000080
【０１９９】
バイアルにカルボン酸（３２２ｍｇ、１当量）および乾燥ＤＭＦ（１ｍＬ）を投入した。その撹拌反応混合物にＮ，Ｎ−カルボジイミダゾール（２１３ｍｇ、１当量）を添加した。１時間の撹拌後、バイアルを開け、反応混合物を２時間、６０℃の乾燥オーブンの中に放置した。その後、アミン（２８９ｍｇ、１当量）を添加し、バイアルをしっかりと閉じ、反応混合物を撹拌した。その反応バイアルを水浴に入れ、１００℃で１時間放置した。反応混合物を室温に冷却し、そのバイアルが満たされるまで水を添加した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、バイアルを一晩放置し、その後、水層を除去し、２−プロパノール（１ｍＬ）を添加して結晶化させた。沈殿物を濾過し、炭酸ナトリウム溶液で２回洗浄し、その後、水／２−プロパノール（１：１）溶液で洗浄した。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。その収量は、収量４６９ｍｇ（８０％）であった。【０２００】
製造例６２  化合物６２の合成
【化７０】
2015046595.tif 000081
【０２０１】
バイアルにカルボン酸（２９９ｍｇ、１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３０８ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２２３ｍｇ、１．１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、４３７ｍｇ（７５％）であった。【０２０２】
製造例６３  化合物６３の合成
【化７１】
2015046595.tif 000082
【０２０３】
バイアルにカルボン酸（３４３ｍｇ、１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（２７４ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２４６ｍｇ、１．１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、５７１ｍｇ（９７％）であった。【０２０４】
製造例６４  化合物６４の合成
【化７２】
2015046595.tif 000083
【０２０５】
バイアルにカルボン酸（３２８ｍｇ、１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３０１ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２３５ｍｇ、１．１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、４９２ｍｇ（８１％）であった。【０２０６】
製造例６５  化合物６５の合成
【化７３】
2015046595.tif 000084
【０２０７】
バイアルにカルボン酸（３４０ｍｇ、１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（２９４ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２４４ｍｇ、１．１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、４６７ｍｇ（７７％）であった。【０２０８】
製造例６６  化合物６６の合成
【化７４】
2015046595.tif 000085
【０２０９】
バイアルにカルボン酸（３１２ｍｇ、１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３５７ｍｇ、１当量）を投入し、さらにトリエチルアミン（１５９ｍｇ、１．２当量）を添加した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２２４ｍｇ、１．１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、３７９ｍｇ（６３％）であった。【０２１０】
製造例６７  化合物６７の合成
【化７５】
2015046595.tif 000086
【０２１１】
バイアルにカルボン酸（３１０ｍｇ、１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３１８ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２２２ｍｇ、１．１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、４３９ｍｇ（７３％）であった。【０２１２】
製造例６８  化合物６８の合成
【化７６】
2015046595.tif 000087
【０２１３】
バイアルにカルボン酸（３２３ｍｇ、１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３０４ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２３２ｍｇ、１．１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、３７１ｍｇ（６２％）であった。【０２１４】
製造例６９  化合物６９の合成
【化７７】
2015046595.tif 000088
【０２１５】
バイアルにカルボン酸（２９９ｍｇ、１）、１ｍＬの溶媒（２００ｍＬの乾燥ＤＭＦ中の３．４ｇのイミダゾール）、およびアミン（３２７ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物に２−エトキシキノリン−１（２Ｈ）−カルボン酸エチル（３７２ｍｇ、１．２当量）を添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を２％塩酸で注意深く希釈し、その後、それを２４時間放置した。その後、その反応混合物を超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、バイアルを一晩放置し、その後、水層を除去し、２−プロパノール（１ｍＬ）を添加して結晶化させた。沈殿物を濾過し、炭酸ナトリウム溶液およびメタノールで洗浄した。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルムと２−プロパノール＝４：１）によって精製した。その収量は、収量２３３ｍｇ（３７％）であった。【０２１６】
製造例７０  化合物７０の合成
【化７８】
2015046595.tif 000089
【０２１７】
バイアルにカルボン酸（３８６ｍｇ、１．１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（３８３ｍｇ、１当量）を投入し、さらにトリエチルアミン（３５０ｍｇ、２．４当量）を添加した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２７１ｍｇ、１．２１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、５８７ｍｇ（９７％）であった。【０２１８】
製造例７１  化合物７１の合成
【化７９】
2015046595.tif 000090
【０２１９】
バイアルにカルボン酸（３７１ｍｇ、１．１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（２８６ｍｇ、１当量）を投入した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（２６０ｍｇ、１．２１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、４１２ｍｇ（６９％）であった。【０２２０】
製造例７２  化合物７２の合成
【化８０】
2015046595.tif 000091
【０２２１】
バイアルにカルボン酸（１３３ｍｇ、１．１当量）、溶媒（１ＬのＤＭＦ中の２００ｇのＮ−オキシベンゾトリアゾールの１ｍＬの溶液）、およびアミン（２１５ｍｇ、１当量）を投入し、さらにトリエチルアミン（１９３ｍｇ、２．４当量）を添加した。その撹拌反応混合物にＥＤＣを添加した（１４９ｍｇ、１．２１当量）。反応混合物が非常に粘稠になる場合は、ＤＭＦをもう少し添加した。反応混合物が均質溶液であった場合は、それを室温で７２時間保持した。それ以外の場合は、反応混合物を室温で５日間、超音波処理した。反応混合物を１％リン酸ナトリウム水溶液で、そのバイアルが満たされるまで、希釈した。その後、そのバイアルを超音波処理した。結晶性沈殿が形成された場合は、バイアルを濾過にまわした。油性生成物が形成された場合は、その生成物をメタノールに溶解し、４％塩酸の添加により沈殿させた。あるいは、２−プロパノール（１ｍＬ）をその粗生成物と混合し、その混合物を超音波処理した。その後、その溶液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した（必要に応じてこの手順を２〜３回繰り返した）。その粗生成物をクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：２−プロパノール＝４：１）によって精製した。収量は、２９ｍｇ（１１％）であった。【０２２２】
製造例１〜製造例７２で得られた化合物のＬＣＭＳ又はＮＭＲのチャートを図８〜８３に示す。【０２２３】
製造例７３  化合物７３＜ＡｄｉｐｏＲｏｎ：２−（４−ベンゾイルフェノキシ）−Ｎ−（１−ベンジルピペリジン−４−イル）アセトアミド＞の製造
【化８１】
2015046595.tif 000092
【０２２４】
ヒドロキシベンゾフェノン２、クロロ酢酸メチル及びＫ２ＣＯ３をアセトン中で混合し、還流撹拌し、エステル体３を得た（工程ａ）。反応終了後、ＮａＯＨ水溶液を加え、次いでＨＣｌにより酸性化してカルボン酸４を得た（工程ｂ）。カルボン酸４に４−アミノ−１−ベンジルピペリジンを加え、縮合剤としてカルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）を用い、製造例１２と同様に反応させ、化合物７３を得た。【０２２５】
１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ８．０４ｐ．ｐ．ｍ．（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．７４（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ）、７．６８（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）、７．６５（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．５５（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．２７〜７．３２（ｍ，４Ｈ）、７．２３（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．０９（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ）、４．５８（ｓ，２Ｈ）、３．６３（ｍ，１Ｈ）、３．４４（ｓ，２Ｈ）、２．７４（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，２Ｈ）、１．９９（ｔ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，２Ｈ）、１．７０（ｄ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，２Ｈ）、１．５０ｐ．ｐ．ｍ．（ｄｑ，Ｊ１＝３．０Ｈｚ，Ｊ２＝１１．９Ｈｚ，２Ｈ）；
１３Ｃ−ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１９４．４、１６６．２、１６１．５、１３８．６、１３７．７、１３２．２、１３２．０、１２９．８、１２９．３、１２８．７、１２８．５、１２８．１、１２６．８、１１４．６、６６．９、６２．１、５１．９、４６．１、３１．４。【０２２６】
製造例７４  化合物７４（４−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−（３−｛４−［（４−メトキシフェニル）メチル］ピペラジン−１−イル｝−３−オキソプロピル）ベンズアミド＜Ｎｏ．１１２２５４＞の製造
【化８２】
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【０２２７】
酸１ａを１０ｍｌ容フラスコに充填し（０．２８５ｇ、１．０当量）、カルボジイミダゾール３ａ（０．２１３ｇ、１．１５当量）を添加し、１ｍｌのＤＭＦＡを添加する。反応混合物を７０℃に１時間、溶解するまで加熱する。次いで、アミン２ａ（０．２３６ｇ、１．０当量）を反応混合物に添加し、１００℃で更に２時間保管する。反応混合物を冷却し、８ｍｌの水を添加する。沈殿物をへらで粉砕し、濾過し、５０％水／イソプロパノールで洗浄する。（更に精製することなく）乾燥させ、０．３３ｇの化合物７４を得た。【０２２８】
試験例１  ヒトＡｄｉｐｏＲ１発現細胞株でのＡＭＰＫのリン酸化能の測定
本発明化合物が有するＡＭＰＫのリン酸化能を、分化したＣ２Ｃ１２細胞又はＨＥＫ２９３Ｔ細胞を用いて測定した。
１．ＡＭＰＫのリン酸化能の測定（Ａｓｓａｙ １）
（１）細胞培養
ｉ）ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を用いた評価
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞（ＡＴＣＣ；ＣＲＬ−３２１６，Ｍｅｄｉｕｍ；ＤＭＥＭ，  Ｆｅｔａｌ  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ（ＦＢＳ））を１２又は２４  ｗｅｌｌｓ  ｐｌａｔｅにて、１００％  ｃｏｎｆｌｕｅｎｔになるまで培養した（３７Ｃ，５％  ＣＯ２）。
Ｓｔａｒｖａｔｉｏｎ後、表１０〜１１に記載の試験化合物（濃度；２５μＭ、５０μＭ）を添加し、１０分後、Ｍｅｄｉｕｍをｄｉｓｃａｒｄし、液体窒素にて凍結した。【０２２９】
ｉｉ）Ｃ２Ｃ１２細胞を用いた評価
Ｃ２Ｃ１２細胞（ＡＴＣＣ；ＣＲＬ−１７７２，Ｍｅｄｉｕｍ；ＤＭＥＭ，１０％ＦＢＳ）を１２又は２４  ｗｅｌｌｓ  ｐｌａｔｅにて、１００％  ｃｏｎｆｌｕｅｎｔになるまで培養した（３７Ｃ，５％  ＣＯ２）。
培地をＤＭＥＭ，２．５％Ｈｏｒｓｅ  Ｓｅｒｕｍ（ＨＳ）に変更し、分化をスタートした。２日おきに培地（ＤＭＥＭ，２．５％ＨＳ）を交換した。
Ｓｔａｒｖａｔｉｏｎ後、表１２に記載の試験化合物（濃度；１０μＭ）を添加し、１０分後、培地をｄｉｓｃａｒｄし、液体窒素にて凍結した。【０２３０】
（２）ウエスタンブロッティング
ｉ）サンプルの調製
凍結した１２又は２４  ｗｅｌｌの細胞プレートに、各１００又は１５０μＬのＣｅｌｌ  ｌｙｓｉｓ  ｂｕｆｆｅｒ  ｐＨ７．４（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、２ｍＭ  オルトバナジン酸ナトリウム、１０ｍＭ  ピロリン酸ナトリウム、１０ｍＭ  ＮａＦ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、２ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．１％（ｖ／ｖ）  ＮＰ−４０、０．２ｍＭ  ＰＭＳＦ）を加え、セルスクレーパーで細胞をかき取り、懸濁し、マイクロ遠心チューブに移した。次いで、ソニケーターにより超音波破砕した（１秒×３回）。１５，０００  ｒｐｍ、４℃で１５分間遠心し、上清を新しいチューブに回収した。
１００μＬの上清に対して２５μＬの５×サンプルバッファー（２８０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．９）、４０％Ｇｌｙｃｅｒｏｌ、１０％β−メルカプトエタノール、１３％ＳＤＳ、ブロモフェノールブルー少量）を加え、混和した。残りの上清を用いて、タンパク質定量を行い、各サンプルの濃度に応じて１×サンプルバッファーを加え、タンパク質濃度を揃えた。【０２３１】
ｉｉ）ポリアクリルアミドゲル電気泳動
泳動槽に１×ＳＤＳ  ｂｕｆｆｅｒ（２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、２５０ｍＭ  Ｇｌｙｃｉｎｅ、０．１％ＳＤＳ）を満たし、ポリアクリルアミドゲルのウェルにサンプルをアプライした。サンプル中のブロモフェノールブルーがゲルの下端に到達するまで電気泳動を行った。【０２３２】
ｉｉｉ）ブロッティング
ＰＶＤＦメンブレン（ＧＥ；Ｈｙｂｏｎｄ−Ｐ）を数分間メタノールに浸した後、１×Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｂｕｆｆｅｒに浸しておく。
１×Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｂｕｆｆｅｒ；１０％  １０×Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｂｕｆｆｅｒ、２０％Ｍｅ−ＯＨ、７０％蒸留水
１０×Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｂｕｆｆｅｒ；  ４７９ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、３８６ｍＭ  Ｇｌｙｃｉｎｅ、０．３７％ＳＤＳ
１×Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｂｕｆｆｅｒに濾紙を十分に浸し、その上にＰＶＤＦメンブレン、泳動後のゲルの順に重ね、さらに上に１×Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｂｕｆｆｅｒを十分に浸した濾紙を重ね、空気を抜いて、セミドライ式トランスファー装置にセットし転写した（７Ｖ、３５分間）。【０２３３】
ｉｖ）ブロッキング
ブロットしたメンブレンから不要な部分をカットし、速やかにブロッキングバッファー（５％スキムミルク  ｉｎ  Ｒｉｎｓｅ  ｂｕｆｆｅｒ）に浸し、室温で３時間、４０ｒｐｍで振とうした。
Ｒｉｎｓｅ  ｂｕｆｆｅｒ；  １０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  （ｐＨ７．５）、０．１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１０％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ【０２３４】
ｖ）抗体反応
ブロッキング終了後、Ｒｉｎｓｅ  ｂｕｆｆｅｒにメンブレンを移し、振とうしながら室温で１０分間洗浄した。メンブレンを１次抗体溶液（ＡＭＰＫａｌｐｈａ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ；  ＃２５３２）１／１，０００  ｉｎ  Ｒｉｎｓｅ  ｂｕｆｆｅｒ、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＡＭＰＫａｌｐｈａ（Ｔｈｒ１７２）（４０Ｈ９）  ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ；＃２５３５）１／１，０００  ｉｎ  Ｒｉｎｓｅ  ｂｕｆｆｅｒ）に浸し、４℃でｏｖｅｒ  ｎｉｇｈｔ、４０ｒｐｍで振とうした。
Ｒｉｎｓｅ  ｂｕｆｆｅｒにメンブレンを移し、振とうしながら、室温で４５分間洗浄した（３〜５分ごとにＲｉｎｓｅ  ｂｕｆｆｅｒを交換）。
メンブレンを２次抗体溶液（ｇｏａｔ  ａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ  ＩｇＧ−ＨＲＰ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ；ｓｃ−２０３０）１／２，０００  ｉｎ  Ｒｉｎｓｅ  ｂｕｆｆｅｒ）に浸し、室温で１時間、４０ｒｐｍで振とうした。【０２３５】
ｖｉ）シグナルの検出
メンブレンを１次抗体反応後と同様に４５分間洗浄した後、化学発光反応液（ＥＣＬ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｂｌｏｔｔｉｎｇ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ，ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に１分間程度浸した。余分な反応液を除いて、透明フィルムにメンブレンを並べて挟み、暗室中でＸ線フィルムに感光させ（数秒〜６０秒程度）、フィルムを現像した。
ｖｉｉ）定量
Ｘ線フィルムをスキャンして、画像を取り込み、画像解析ソフト「Ｉｍａｇｅ  Ｊ」にて、バンドを測定し、ｐＡＭＰＫ及びＡＭＰＫ量を求めた。【０２３６】
（３）結果
本発明の化合物は、ＡＭＰＫのリン酸化を促進し、ＡＭＰＫを活性化した（表１０〜１２）。【０２３７】
２．ＡＭＰＫのリン酸化能の測定（Ａｓｓａｙ ２）
（１）細胞培養
ｉ）ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を用いた評価
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞（Ｍｅｄｉｕｍ；ＤＭＥＭ，１０％ＦＢＳ）を２４  ｗｅｌｌｓ  ｐｌａｔｅにて、６０％ｃｏｎｆｌｕｅｎｔになるまで培養した（３７Ｃ，５％  ＣＯ２）。
Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ＲＮＡｉＭＡＸ  １μＬと５０μＬ  ＯＰＴＩ−ＭＥＭ、また、５μＭ  ｓｉＲＮＡ（センスｓｉＲＮＡ配列：ＧＡＧＡＣＵＧＧＣＡＡＣＡＵＣＵＧＧＡＣＡｔｔ（配列番号１））と５０μＬ  ＯＰＴＩ−ＭＥＭを混合し、室温で５分間置いた。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ＲＮＡｉＭＡＸ  １μＬ／５０μＬ  ＯＰＴＩ−ＭＥＭと５μＭ  ｓｉＲＮＡ／５０μｌ  ＯＰＴＩ−ＭＥＭを混合し、室温で１０分間置き、これらを細胞に添加した。
５分後、培地（ＤＭＥＭ，１０％  ＦＢＳ）を交換し、翌日、Ｓｔａｒｖａｔｉｏｎ後、表１０〜１１に記載の試験化合物を添加した。１０分後、培地をｄｉｓｃａｒｄし、液体窒素にて凍結した。【０２３８】
ｉｉ）Ｃ２Ｃ１２細胞を用いた評価
Ｃ２Ｃ１２  ｃｅｌｌｓ（ＡＴＣＣ；ＣＲＬ−１７７２，Ｍｅｄｉｕｍ；ＤＭＥＭ，１０％  Ｆｅｔａｌ  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ（ＦＢＳ））を１２又は２４  ｗｅｌｌｓ  ｐｌａｔｅにて、１００％ｃｏｎｆｌｕｅｎｔになるまで培養した（３７Ｃ，５％ ＣＯ２）。ＭｅｄｉｕｍをＤＭＥＭ，２．５％Ｈｏｒｓｅ  Ｓｅｒｕｍ（ＨＳ）に変更し、分化をスタートした。分化スタート２日後に、培地（ＤＭＥＭ，２．５％ＨＳ）を交換した。さらに２日後に、培地（ＤＭＥＭ，２．５％ＨＳ）を交換した。
培地交換した翌日、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ＲＮＡｉＭＡＸ  １μＬと５０μＬＯＰＴＩ−ＭＥＭ、また、５μＭ  ｓｉＲＮＡ（センスｓｉＲＮＡ配列：ＧＡＧＡＣＵＧＧＣＡＡＣＡＵＣＵＧＧＡＣＡｔｔ（配列番号１））と５０μＬＯＰＴＩ−ＭＥＭを混合し、室温で５分間置いた。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ＲＮＡｉＭＡＸ  １μＬ／５０μＬ  ＯＰＴＩ−ＭＥＭと５μＭ  ｓｉＲＮＡ／５０μＬ  ＯＰＴＩ−ＭＥＭを混合し、室温で１０分間置き、これらを細胞に添加した。
５分後、培地（ＤＭＥＭ，２．５％  ＨＳ）を交換し、翌日、Ｓｔａｒｖａｔｉｏｎ後、表１２に記載の試験化合物を添加した。１０分後、培地をｄｉｓｃａｒｄし、液体窒素にて凍結した。【０２３９】
（２）ウエスタンブロッティング
上記Ａｓｓａｙ １と同様にして、ｐＡＭＰＫ及びＡＭＰＫ量を求めた。【０２４０】
（３）結果
本発明の化合物によるＡＭＰＫリン酸化の促進は、ＡｄｉｐｏＲ１に特異的に作用するｓｉＲＮＡの添加により、大きく低減された（表１０〜１２）。したがって、本発明化合物は、ＡｄｉｐｏＲ１を介してＡＭＰＫリン酸化を増加させたことを示す。【０２４１】
【表１０】
2015046595.tif 000094
【０２４２】
【表１１】
2015046595.tif 000095
【０２４３】
【表１２】
2015046595.tif 000096
【０２４４】
試験例２  ＡｄｉｐｏＲ１及びＡｄｉｐｏＲ２に対する親和性
以下に示すように、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用し、本発明の化合物７３（以下「ＡｄｉｐｏＲｏｎ」と称する）、ＡｄｉｐｏＲ１及びＡｄｉｐｏＲ２の両方に対する親和性を測定した。
ｉ）方法
表面プラズモン共鳴測定を、ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｘ１００システム（GE Healthcare）及びセンサーチップＳＡ（GE Healthcare）によって行った。ヒトＡｄｉｐｏＲ１及びＡｄｉｐｏＲ２を、バキュロウイルス系によって発現させ、均一になるまで精製した。次いで、ＡｄｉｐｏＲ１及びＡｄｉｐｏＲ２のサンプルを、文献記載ａのようにビオチニルホスファチジルエタノールアミンを含有する卵ホスファチジルコリンリポソーム（Avanti）で再構成した。マウス完全長アディポネクチンを、文献記載ｂ，ｃ，ｄ，ｅのように生成した。ＡｄｉｐｏＲ１及びＡｄｉｐｏＲ２を、標準固定プロトコル（GE Healthcare）を用いて２５００〜３０００反応単位（ＲＵ）のレベルでセンサーチップＳＡに固定した。対照としてロドプシン受容体を使用し、ＡｄｉｐｏＲｏｎが実際にはロドプシン受容体と全く反応しないことを確認した。
実験は、ＡｄｉｐｏＲｏｎ（０．４９μＭ〜３１．２５μＭ）及びアディポネクチン（１．５ｎｇ〜３．７５μｇ）を用い、泳動バッファー（２０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ７．４）、２００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０％グリセロール、０．０５％（ｖ／ｖ）界面活性剤Ｐ２０）を用いて２５℃で行った。Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｘ１００評価ソフトウェアを用いて、化合物又はタンパク質の平衡解離定数（ＫＤ）を決定した。
＜文献＞
ａ）Hino, T., et al. , G-protein-coupledreceptor inactivation by an allosteric inverse-agonist antibody. Nature 482,237-240 (2012).
ｂ）Yamauchi, T., et al., Globularadiponectin protected ob/ob mice from diabetes and apoE deficient mice fromatherosclerosis. J. Biol. Chem. 278, 2461-2468 (2003).
ｃ）Iwabu, M., et al., Adiponectin and AdipoR1regulate PGC-1alpha and mitochondria by Ca(2+) and AMPK/SIRT1. Nature 464,1313-1319 (2010).
ｄ）Yamauchi, T., et al., The fat-derivedhormone adiponectin reverses insulin resistance associated with bothlipoatrophy and obesity. Nature Med. 7, 941-946 (2001).
ｅ）Yamauchi, T., et al., Adiponectinstimulates glucose utilization and fatty-acid oxidation by activatingAMP-activated protein kinase. Nature Med. 8, 1288-1295 (2002).
ｉｉ）結果
図１ｊ、ｋに示すとおり、ＫＤ  １．８及び３．１μＭ、Ｒｍａｘ  １４．６及び８．６ＲＵであり、ＡｄｉｐｏＲｏｎは、ＡｄｉｐｏＲ１及びＡｄｉｐｏＲ２の両方に親和性を有していた。【０２４５】
試験例３  本発明化合物が有する各種薬理作用
化合物７３（ＡｄｉｐｏＲｏｎ）及び化合物７４（Ｎｏ．１１２２５４）について行った各種薬理試験の結果を、以下にまとめて示す。
１．材料及び方法
（１）マウス
オリジナルＡｄｉｐｏｒ１＋／−／Ａｄｉｐｏｒ２＋／−マウス（Ｃ５７ＢＬ／６及び１２９／Ｓｖの混合バックグラウンド）ａは、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスと７回を超えて戻し交雑した。本研究の全ての実験を雄性同腹子に対して行った。
マウスは実験時に６週齢〜１０週齢であった。マウスをケージに収容し、１２時間の明暗サイクルで管理した。図４及び図５に示す実験については、以下の組成を有する標準固形飼料（ＣＥ−２、日本クレア株式会社）である食餌を使用した：２５．６％（ｗｔ／ｗｔ）のタンパク質、３．８％の食物繊維、６．９％の灰分、５０．５％の炭水化物、４％の脂肪及び９．２％の水。他の全ての実験については、２５．５％（ｗｔ／ｗｔ）のタンパク質、２．９％の食物繊維、４．０％の灰分、２９．４％の炭水化物、３２％の脂肪及び６．２％の水からなる高脂肪食３２（日本クレア株式会社）を使用した。
雄性Ｌｅｐｒ−／−（６週齢〜１０週齢）はJ、ackson Laboratoryから購入した。同じ遺伝子型のマウスに異なる処理を施し、処理群に無作為に割り当てた。
ａ）Yamauchi, T., et al., Targeteddisruption of AdipoR1 and AdipoR2 causes abrogation of adiponectin binding andmetabolic actions. Nature Med. 13, 332-339 (2007).【０２４６】
（２）Ｃ２Ｃ１２細胞
マウスＣ２Ｃ１２筋芽細胞（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ−１７７２）を、１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎仔血清を含有する９０％ダルベッコ改変高グルコースイーグル培地で成長させた。細胞が８０％コンフルエントに達した時点で、培地を低血清分化培地（９８％ダルベッコ改変高グルコースイーグル培地、２．５％（ｖ／ｖ）ウマ血清、毎日交換する）に置き換えることによって筋芽細胞を筋管に分化するように誘導した。【０２４７】
（３）ＡｄｉｐｏＲｏｎの血漿濃度の測定
体重１ｋｇ当たり５０ｍｇのＡｄｉｐｏＲｏｎを経口投与したＣ５７ＢＬ／６マウスにおけるＡｄｉｐｏＲｏｎの血漿濃度を、ＨＰＬＣ及びＴＳＱ  Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｕｌｔｒａ（ThermoFisher）によって測定した。定量分析のために、２０μｌの血漿をアセトニトリルと混合した。混合物を３０秒間激しく混合した後、４℃、１００００ｒｐｍで３分間遠心分離した。上清のアリコートを定量ＬＣ／ＭＳシステムに注入した。定量分析を、Ａｃｃｅｌａ  ＨＰＬＣシステム（ThermoFisher）を用いて行った。液体クロマトグラフ分離を、ｓｙｎｃｒｏｎｉｓ  Ｃ１８（１５０×２．１ｍｍ、３μｍ）を用いて行った。カラム温度は４０℃に保持した。流量は０．２ｍｌ／分とした。溶出溶媒Ａは水中の０．１％ギ酸からなるものであり、溶媒Ｂはメタノール中の０．１％ギ酸からなるものであった。クロマトグラフ条件は以下のとおりとした：０分〜５分  ４５％のＡ／５５％のＢ；５分〜６．５分  ５％のＡ／９５％のＢ、６．５分〜１０分  ４５％のＡ／５５％のＢ。典型的な注入量は３μｌであった。定量分析を、ＴＳＱ  Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｕｌｔｒａ三段四重極質量分析計を用いて行った。陽イオンモードのエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ＋）をイオン化に用い、選択反応モニタリング（ＳＲＭ）モードを検出に選んだ。ＡｄｉｐｏＲｏｎの最適前駆イオン対は、ｍ／ｚ４２９．２５１→９１．０５７であった。最適ＭＳパラメーターは以下のとおりであった：イオンスプレー：４０００Ｖ、気化器温度：５３０℃、シースガス圧：５０ｐｓｉ、補助ガス圧：５ｐｓｉ、キャピラリー温度：２７０℃。衝突圧：１．５ｍＴｏｒｒ。ピーク面積を、ＬＣ  ｑｕａｎ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ４．５．６（Thermo Fisher）を用いて自動的に積分した。【０２４８】
（４）初代肝細胞
肝細胞を、８週齢の雄性マウスから若干の変更を加えたコラゲナーゼ灌流法ａ，ｂによって単離した。細胞を３．７５×１０５細胞／ｍｌでコラーゲンＩコーティングプレートの１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎仔血清、１０ｎＭデキサメタゾン、１０ｎＭインスリンを添加したウィリアム培地Ｅ中にプレーティングした。
ａ）Yamauchi, T., et al.,Targeted disruption of AdipoR1 and AdipoR2 causes abrogation of adiponectinbinding and metabolic actions. Nature Med. 13, 332-339 (2007).
ｂ）Tsuchida, A., et al.,Insulin/Foxo1 pathway regulates expression levels of adiponectin receptors andadiponectin sensitivity. J. Biol. Chem. 279, 30817-30822 (2004).【０２４９】
（５）単離筋
インスリンシグナル伝達及びＡＭＰＫのリン酸化の分析のために、単離腓腹筋を、２ｍＭピルビン酸塩を含有するクレブスリンガー重炭酸塩（ＫＲＢ）バッファー（１１７ｍＭ  ＮａＣｌ、２．５ｍＭ  ＣａＣｌ２、１．２ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４、１．２ｍＭ  ＭｇＳＯ４、２４．６ｍＭ  ＮａＨＣＯ３）中、３７℃で５０分間プレインキュベートし、１００ｎＭインスリンの存在下又は非存在下で１０分間刺激したａ。
ａ）Bruning, J.C., et al., A muscle-specific insulin receptor knockoutexhibits features of the metabolic syndrome of NIDDM without altering glucose tolerance.Mol. Cell 2, 559-569 (1998).【０２５０】
（６）呼吸鎖複合体Ｉ活性
呼吸鎖複合体Ｉアッセイを、若干の変更を加えて以前の記載ａ〜ｃのように行った。複合体Ｉアッセイのために、ミトコンドリア（０．５ｍｇ／ｍｌ）を、１ｍＭ  ＥＧＴＡ、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．２）溶液中、５００μＭ  ＮＡＤＨ及び５ｍＭ  ＫＣＮの存在下でインキュベートした。複合体Ｉ活性を、電子受容体として１００μＭデシルユビキノンを添加した後のＮＡＤＨの酸化率（分光光度計で３４０ｎｍでの吸光度を測定する）によって評価した。
ａ）Brunmair, B., et al.,Thiazolidinediones, like metformin, inhibit respiratory complex I: a commonmechanism contributing to their antidiabetic actions? Diabetes 53, 1052-1059(2004).
ｂ）El-Mir, M.Y., et al.,Dimethylbiguanide inhibits cell respiration via an indirect effect targeted onthe respiratory chain complex I. J. Biol. Chem. 275, 223-228 (2000).
ｃ）Hinke, S.A., et al.,Methyl succinate antagonises biguanide-induced AMPK-activation and death ofpancreatic beta-cells through restoration of mitochondrial electron transfer.Br. J. Pharmacol. 150, 1031-1043 (2007).【０２５１】
（７）ミトコンドリア含量の分析
ミトコンドリア含量アッセイは、若干の変更を加えて文献記載ａ，ｂのように行った。ミトコンドリア含量の定量化のために、ｍｔＤＮＡを文献記載ｃのように使用した。
ａ）Iwabu, M., et al.,Adiponectin and AdipoR1 regulate PGC-1alpha and mitochondria by Ca(2+) andAMPK/SIRT1. Nature 464, 1313-1319 (2010).
ｂ）Civitarese, A.E. et al.,Role of adiponectin in human skeletal muscle bioenergetics. Cell Metab. 4,75-87 (2006).
ｃ）Heilbronn, L.K., et al.,Glucose tolerance and skeletal muscle gene expression in response to alternateday fasting. Obes. Res. 13, 574-581 (2005).【０２５２】
（８）ｉｎ  ｖｉｖｏでのＡＭＰＫリン酸化
ｉｎ  ｖｉｖｏでのＡＭＰＫリン酸化の評価は、体重１ｋｇ当たり５０ｍｇのＡｄｉｐｏＲｏｎをマウスに下大静脈カテーテルを通して静脈注射することにより行ったａ。
ａ）Yamauchi, T., et al.,Adiponectin stimulates glucose utilization and fatty-acid oxidation byactivating AMP-activated protein kinase. Nature Med. 8, 1288-1295 (2002).【０２５３】
（９）リアルタイムＰＣＲ、免疫沈降及び免疫ブロット
リアルタイムＰＣＲは、文献記載の方法ａ，ｂ，ｃに従って行った。全ＲＮＡを、Ｔｒｉｚｏｌ（Invitrogen）によりメーカーの使用説明書に従って細胞又は組織から調製した。若干の変更を加えたリアルタイムＰＣＲ法を用いてｍＲＮＡを定量化した１９。
免疫ブロットは、文献記載の方法により、肝臓、筋肉又は白色脂肪組織を液体窒素中でｉｎ  ｓｉｔｕに凍結クランプすることにより行ったｂ，ｄ，ｅ。
免疫沈降及び免疫ブロットは、文献記載の方法により行ったａ，ｆ。すなわち、筋又は肝臓又は細胞溶解物を、ホスホチロシンに対する抗体（４Ｇ１０）に結合したプロテインＧセファロース（Merck Millipore）６０μｌと共にインキュベートした。次いで、ビーズを洗浄し、サンプルバッファー中で５分間煮沸し、免疫沈降物を免疫ブロットに供した。ＡＭＰＫα（Cell signalingの＃２５３５、＃２５３２）、１Ｒβ（Upstateの０５−３２１、Santa Cruzのｓｃ−７１１）、ＡＫＴ（Cell signalingの＃９２７１、＃９２７２）、ＧＳＫ３（Cell signalingの＃５５５８、＃９３１５）及びチューブリン（NeoMarkersのＲＢ−９２８１−ＰＯ）のリン酸化及び／又はタンパク質レベルを、文献記載ａ，ｇ，ｈのように決定した。２回〜５回の独立実験の内の１つの代表的なデータを示した。
ａ）Yamauchi, T., et al.,Targeted disruption of AdipoR1 and AdipoR2 causes abrogation of adiponectinbinding and metabolic actions. Nature Med. 13, 332-339 (2007).
ｂ）Kubota, N., et al.,Pioglitazone ameliorates insulin resistance and diabetes by bothadiponectin-dependent and -independent pathways. J. Biol. Chem. 281, 8748-8755(2006).
ｃ）Yamauchi, T., et al.,Cloning of adiponectin receptors that mediate antidiabetic metabolic effects.Nature 423, 762-769 (2003).
ｄ）Kamei, N., et al.,Overexpression of MCP-1 in adipose tissues causes macrophage recruitment andinsulin resistance. J. Biol. Chem. 281, 26602-26614 (2006).
ｅ）Yamauchi, T., et al., Thefat-derived hormone adiponectin reverses insulinresistance associatedwith both lipoatrophy and obesity. Nature Med. 7, 941-946 (2001).
ｆ）Kubota, N., et al.,Dynamic functional relay between insulin receptor substrate 1 and 2 in hepaticinsulin signaling during fasting and feeding. Cell Metab. 8, 49-64 (2008).
ｇ）Iwabu, M., et al.,Adiponectin and AdipoR1 regulate PGC-1alpha and mitochondria by Ca(2+) andAMPK/SIRT1. Nature 464, 1313-1319 (2010).
ｈ）Cross, D.A., et al.,Inhibition of glycogen synthase kinase-3 by insulin mediated by protein kinaseB. Nature 378, 785-789 (1995).【０２５４】
（１０）脂質代謝、脂質過酸化及び他の材料
骨格筋ホモジネートを抽出し、組織のトリグリセリド含量を幾らか変更を加えて文献記載ａ〜ｃのように行った。酸化ストレスが増大したか否かを調査するために、文献記載４のように血漿チオバルビツール酸反応性物質（ＴＢＡＲＳ）によって表される酸化損傷のマーカーである脂質過酸化を測定した。簡潔に述べると、組織サンプルを５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）及び１．１５％ＫＣｌを含有するバッファー溶液中でホモジナイズした後、遠心分離した。上清をアッセイに使用した。組織ホモジネート及び血漿における脂質過酸化のレベルを、ＬＰＯ試験（和光純薬工業株式会社）を用いてＴＢＡＲＳ量の点から測定した。
［１−１４Ｃ］パルミチン酸からの［１４Ｃ]ＣＯ２生成の測定を、肝臓及び骨格筋を用いて文献記載ｄ，ｅのように行った。
血漿グルコースレベルを、グルコースＢ試験（和光純薬工業株式会社）を用いて決定した。血漿インスリンを、インスリンイムノアッセイ（株式会社シバヤギ）によって測定した。血漿ＮＥＦＡ（和光純薬工業株式会社）を酵素法によってアッセイした。
全ての測定を盲検で行った。
ａ）Wu, H., et al., MEF2responds to multiple calcium-regulated signals in the control of skeletalmuscle fiber type. EMBO J. 19, 1963-1973 (2000).
ｂ）Westfall, M.V. &Sayeed, M.M., Effect of Ca2(+)-channel agonists and antagonists on skeletalmuscle sugar transport. Am. J. Physiol. 258, R462-468 (1990).
ｃ）Merrill, G.F., Kurth,E.J., Hardie, D.G., & Winder, W.W., AICA riboside increases AMP-activatedprotein kinase, fatty acid oxidation, and glucose uptake in rat muscle. Am. J.Physiol. 273, E1107-1112 (1997).
ｄ）Yamauchi, T., et al.,Targeted disruption of AdipoR1 and AdipoR2 causes abrogation of adiponectinbinding and metabolic actions. Nature Med. 13, 332-339 (2007).
ｅ）Iwabu, M., et al., Adiponectinand AdipoR1 regulate PGC-1alpha and mitochondria by Ca(2+) and AMPK/SIRT1.Nature 464, 1313-1319 (2010).【０２５５】
（１１）インスリン耐性指数
経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）及びインスリン負荷試験（ＩＴＴ）を、若干の変更を加えて文献記載ａ，ｂのように行った。
グルコース及びインスリンの曲線面積を、グルコース値（１ｍｇ／ｍｌ＝１ｃｍ）及びインスリン値（１ｎｇ／ｍｌ＝１ｃｍ）のそれぞれの累加平均高さに時間（６０分＝１ｃｍ）を乗算することによって算出したｃ，ａ。インスリン耐性指数を、グルコース負荷試験におけるグルコース及びインスリンの面積×１０−２の積から算出した。結果を対照同腹子の値に対するパーセンテージとして表す。
ａ）Yamauchi, T., et al., Thefat-derived hormone adiponectin reverses insulin resistance associated withboth lipoatrophy and obesity. Nature Med. 7, 941-946 (2001).
ｂ）Yamauchi, T., et al.,Adiponectin stimulates glucose utilization and fatty-acid oxidation byactivating AMP-activated protein kinase. Nature Med. 8, 1288-1295 (2002).
ｃ）Yamauchi, T., et al.,Targeted disruption of AdipoR1 and AdipoR2 causes abrogation of adiponectinbinding and metabolic actions. Nature Med. 13, 332-339 (2007).【０２５６】
（１２）高インスリン正常血糖クランプ試験
クランプ試験を、若干の変更を加えて文献記載ａ，ｂのように行った。試験の２日〜３日前に、ペントバルビタールナトリウムによる全身麻酔下で右頸静脈に注入カテーテルを挿入した。試験は、６時間の絶食後に意識のあるストレスのない条件下でマウスに対して行った。インスリン（Ｈｕｍｕｌｉｎ  Ｒ、Lilly）のプライミング後（primed）、持続注入し（１０．０ミリ単位／ｋｇ／分）、５分間隔でモニタリングした。血中グルコース濃度を、１２０分間のグルコース（［６，６−２Ｈ２］グルコース（Sigma）で２０％まで富化した１０ｍｌ当たり５ｇのグルコース）の投与によって１２０ｍｇ／ｄｌに維持した。血液を９０分、１０５分及び１２０分の時点で尾端出血によりサンプリングし、グルコース消失率（Ｒｄ）を決定した。Ｒｄを非定常状態方程式に従って算出し、Ｒｄと外因性グルコース注入速度との差として内因性グルコース産生（ＥＧＰ）を算出したａ，ｂ，ｃ。
ａ）Kubota, N., et al.,Pioglitazone ameliorates insulin resistance and diabetes by bothadiponectin-dependent and -independent pathways. J. Biol. Chem. 281, 8748-8755(2006).
ｂ）Kamei, N., et al.,Overexpression of MCP-1 in adipose tissues causes macrophage recruitment andinsulin resistance. J. Biol. Chem. 281, 26602-26614 (2006)
ｃ）Iwabu, M., et al.,Adiponectin and AdipoR1 regulate PGC-1alpha and mitochondria by Ca(2+) andAMPK/SIRT1. Nature 464, 1313-1319 (2010).【０２５７】
（１３）マウスにおける運動能力の測定
トレッドミル運動負荷試験計画は１５ｍ／分で２０分間とした。運動持久力を、マウスが電気ショックを回避することができない回数で２０分を除算することによって評価した。【０２５８】
（１４）統計分析
結果は、平均±s.e.m.と表される。2つの群の間の差を、独立両側t検定を使用して評価した。3つ以上の群に関するデータを、分散分析(ANOVA)により評価した。【０２５９】
２．結果
（１）マウスの骨格筋及び肝臓におけるＡＭＰＫのリン酸化の誘導
ＡｄｉｐｏＲｏｎをマウスに静脈内投与（５０ｍｇ／ｋｇ体重）した場合、野生型（ＷＴ）マウスの骨格筋及び肝臓でＡＭＰＫのリン酸化を有意に誘導した。これに対し、Ａｄｉｐｏｒｌ／ｒ２ダブルノックアウトマウスではＡＭＰＫのリン酸化は誘導されなかった（図１ｌ、ｍ）。これはＡｄｉｐｏＲｏｎが、ＡｄｉｐｏＲ１／Ｒ２を介して骨格筋及び肝臓でＡＭＰＫを活性化できたことを示している。【０２６０】
（２）グルコース不耐性及びインスリン抵抗性の改善
ｉ）５０ｍｇ／ｋｇのＡｄｉｐｏＲｏｎをＣ５７Ｂ６  ＷＴマウスに経口投与後、ＡｄｉｐｏＲｏｎの血漿中濃度を測定した。最大血中濃度（Ｃｍａｘ）は１１．８μＭであった（図２ａ）。
ｉｉ）高脂肪（ＨＦ）食誘導肥満マウスを用い、ＡｄｉｐｏＲｏｎを１０日間経口投与（５０ｍｇ／ｋｇ体重）して、インスリン抵抗性を測定した。尚、ＨＦ食の摂取は、マウスの体重（図２ｂ）及び食物摂取（図２ｃ）に著しい影響を及ぼさなかった。
その結果、ＡｄｉｐｏＲｏｎを投与したマウス（ＷＴマウス）では、空腹時血漿グルコース及びインスリンレベル並びに経口グルコース耐性試験（ＯＧＴＴ）中のグルコース及びインスリン応答を著しく低減した（図２ｄ）。血漿中インスリンレベルの低減にも関わらずグルコースレベルが減少したことは、インスリン感受性が改善したことを示す（図２ｄ、ｆ）。
また、Ａｄｉｐｏｒ１／ｒ２ダブルノックアウトマウスを用いた同様の試験では、ＨＦ食誘導高血糖症及び高インスリン血症を改善できなかった（図２ｅ、ｆ）。
尚、化合物７４（No.112254）についても、ＡｄｉｐｏＲｏｎと同様に、グルコース不耐性を改善することができ、かつインスリ抵抗性を改善することができることが確認された(図７c〜f)
ｉｉｉ）更に、１０日間の化合物投与の後に、ＨＦ食を与えたマウスにおいて高インスリン型正常血糖クランプを行った。ＡｄｉｐｏＲｏｎを投与したＷＴマウスにおいて、グルコース注入率（ＧＩＲ）は著しく増大し（図２ｈ、左）、内因性グルコース産生（ＥＧＰ）は著しく抑制され（図２ｈ、中）、グルコース処理率（Ｒｄ）は著しく増大した（図２ｈ、右）。これらのパラメーターはいずれも、Ａｄｉｐｏｒ１／ｒ２ダブルノックアウトマウスにおいてＡｄｉｐｏＲｏｎにより改善されなかった（図２ｉ）。【０２６１】
（３）脂質代謝に対する作用
ＡｄｉｐｏＲｏｎの１０日間経口投与（５０ｍｇ／ｋｇ体重）は、ＨＦ食を与えたＷＴマウスにおけるトリグリセリド（ＴＧ）及び遊離脂肪酸（ＦＦＡ）の血漿中濃度を低減させ（図２ｊ、ｋ）、これはＡｄｉｐｏｒ１／ｒ２ダブルノックアウトマウスでは観察されなかった（図２ｊ、ｋ）。【０２６２】
（４）骨格筋のＡｄｉｐｏＲ１−ＡＭＰＫ−ＰＧＣ−１α経路の活性化
ｉ）ＡｄｉｐｏＲｏｎを経口投与（５０ｍｇ／ｋｇ体重）したＷＴマウスの骨格筋では、Ｐｐａｒｇｃ１ａ及びエストロゲン関連受容体α（Ｅｓｒｒａ）などのミトコンドリア新生に関与する遺伝子、ミトコンドリア転写因子Ａ（Ｔｆａｍ）などのミトコンドリアＤＮＡ複製／翻訳に関与する遺伝子、シトクロームｃオキシダーゼサブユニットＩＩ（ｍｔ−Ｃｏ２）などの酸化的リン酸化（ＯＸＰＨＯＳ）に関与する遺伝子の発現を増加させた（図３ａ）。また、ＡｄｉｐｏＲｏｎは、ＷＴマウスの骨格筋中のミトコンドリアＤＮＡ含量も増加させた（図３ｂ）。これらの作用は、Ａｄｉｐｏｒ１／ｒ２ダブルノックアウトマウスでは全体的に消失していた（図３ａ、ｂ）。
また、ＡｄｉｐｏＲｏｎは、Ｉ型線維マーカーであるＴｒｏｐｏｎｉｎ  Ｉ（ｓｌｏｗ）（Ｔｎｎｉ１）のレベルを増加させた。これに対し、Ａｄｉｐｏｒ１／ｒ２ダブルノックアウトマウス（図３ａ）では増加させなかった。
また、ＨＦ食を与えたマウスに、トレッドミルランニングによる強制的な身体運動を行わせ、次いで筋持久力を評価したところ、ＡｄｉｐｏＲｏｎの投与により、ＷＴマウスにおいては運動持久力を著しく増大させたが、ＨＦ食を与えたＡｄｉｐｏｒ１／ｒ２ダブルノックアウトマウス（図３ｃ）では増大させなかった。
ｉｉ）また、ＡｄｉｐｏＲｏｎは、中鎖アシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ（Ａｃａｄｍ）などの脂肪酸酸化に関与する遺伝子を著しく増加させた（図３ａ）。これはＷＴマウスの骨格筋中のＴＧ含量の低下したことに関連したものであって、ＨＦ食を与えたＡｄｉｐｏｒ１／ｒ２ダブルノックアウトマウスに関連したものではない。
ｉｉｉ）また、ＡｄｉｐｏＲｏｎは、ＷＴマウスの骨格筋ではマンガンスーパーオキシドジスムターゼ（Ｓｏｄ２）（図３ａ）などの酸化ストレス解毒遺伝子の発現レベルを著しく増大させ、チオバルビツール酸反応性物質（ＴＢＡＲＳ）などの酸化ストレスマーカーを低下させた（図３ｈ）。当該作用は、ＨＦ食を与えたＡｄｉｐｏｒ１／ｒ２ダブルノックアウトマウスでは認められなかった。【０２６３】
（５）肝臓におけるＡｄｉｐｏＲ１−ＡＭＰＫ経路及びＡｄｉｐｏＲ２−ＰＰＡＲα経路の活性化
ｉ）肝臓のＡｄｉｐｏＲ１−ＡＭＰＫ経路の活性化は、Ｐｐａｒｇｃ１ａ、ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ１（Ｐｃｋ１）、及びグルコース−６−ホスファターゼ（Ｇ６ｐｃ）などの肝グルコース新生に関与する遺伝子の発現を低減させることが報告されている。
ＡｄｉｐｏＲｏｎは、ＷＴマウスの肝臓において、Ｐｐａｒｇｃ１ａ及びＧ６ｐｃの発現を著しく低下させた（図３ｄ）。しかし、当該作用は、ＨＦ食を与えたＡｄｉｐｏｒ１／ｒ２ダブルノックアウトマウス（図３ｄ）では認められなかった。
ｉｉ）ＡｄｉｐｏＲ２の活性化は、ＰＰＡＲαレベルを増大させかつＰＰＡＲα経路を活性化させることができ、その結果、脂肪酸の酸化が増大しかつ酸化ストレスが低減する。
ＡｄｉｐｏＲｏｎは、ＷＴマウスの肝臓において、ＰＰＡＲα（Ｐｐａｒα）をコードする遺伝子、及びその標的遺伝子であってアシル−ＣｏＡオキシダーゼ（Ａｃｏｘ１）などの脂肪酸燃焼に関与する遺伝子、脱共役タンパク質２（Ｕｃｐ２）などのエネルギー散逸に関与する遺伝子、及びカタラーゼ（Ｃａｔ）などの酸化ストレス解毒酵素をコードする遺伝子を含めた遺伝子の発現レベルを増大させた（図３ｄ）。しかし、ＨＦ食を与えたＡｄｉｐｏｒ１／ｒ２ダブルノックアウトマウス（図３ｄ）では増大させなかった。また、実際、ＡｄｉｐｏＲｏｎは、ＴＢＡＲＳ（図３ｆ）の測定により、ＴＧ含量（図３ｅ）及び酸化ストレスをＷＴマウスの肝臓で著しく低減させた。これに対し、ＨＦ食を与えたＡｄｉｐｏｒ１／ｒ２ダブルノックアウトマウスでは当該作用は認められなかった（図３ｅ、ｆ）。【０２６４】
（６）炎症性サイトカインの発現低下
ＡｄｉｐｏＲｏｎは、ＴＮＦα（Ｔｎｆ）及びＭＣＰ−１（Ｃｃｌ２）などの炎症性サイトカインをコードする遺伝子の発現レベルをＷＴマウス（図３ｄ）の肝臓では低減させた。これに対し、ＨＦ食を与えたＡｄｉｐｏｒ１／ｒ２ダブルノックアウトマウス（図３ｄ）では当該作用は認められなかった。【０２６５】
（７）白色脂肪組織（ＷＡＴ）における炎症抑制
ＡｄｉｐｏＲｏｎは、Ｔｎｆ、ＩＬ−６（Ｉｌ６）、及びＣｃｌ２などの炎症誘発性サイトカインをコードする遺伝子の発現レベルをＷＴマウスのＷＡＴで低減させた。これに対し、ＨＦ食を与えたＡｄｉｐｏｒ１／ｒ２ダブルノックアウトマウスでは当該作用は認められなかった（図３ｇ）。
ＡｄｉｐｏＲｏｎは、ＨＦ食を与えたＷＴマウス（図３ｇ）のＷＡＴにおいて、ＴＢＡＲＳ（図３ｈ）、Ｆ４／８０（Ｅｍｒ１）などのマクロファージマーカーのレベル、特に、ＣＤ１１ｃ（Ｉｔｇａｘ）などの古典的に活性化させたＭ１マクロファージに関するマーカーのレベルを低減させたが、ＣＤ２０６（Ｍｒｃ１）などの代替的に活性化されたＭ２マクロファージに関するマーカーのレベルに対しては影響を与えなかった。また、これらの変化は、Ａｄｉｐｏｒ１／ｒ２ダブルノックアウトマウス（図３ｇ、ｈ）では認められなかった。【０２６６】
（８）抗糖尿病作用
遺伝的に肥満の齧歯類モデルであるＬｅｐｒ−／−（「ｄｂ／ｄｂ」とも呼ばれる。）マウスに対して、ＡｄｉｐｏＲｏｎを２週間経口投与（５０ｍｇ／ｋｇ体重）した場合、アディポネクチンをｄｂ／ｄｂマウスへの腹腔内（ＩＰ）投与した場合と同様に、血漿中アディポネクチン濃度が低下し、血漿中グルコースレベルを低下させた（図４ａ、左、右）。また、体重、食物摂取、肝重量、及びＷＡＴ重量に影響を及ぼすことなく（図４ｂ〜ｅ）、グルコース不耐性、インスリン抵抗性、及び異脂肪血症を著しく改善した（図４ｆ〜ｉ）。【０２６７】
（９）db/dbマウスのインスリン標的組織におけるTG含量、酸化ストレス、及び炎症に対する作用
ＡｄｉｐｏＲｏｎを経口投与したｄｂ／ｄｂマウスにおいては、骨格筋では、ミトコンドリア発生機能及びＤＮＡ含量（図５ａ、ｂ）に関与する遺伝子のレベルと、Ａｃａｄｍ及びＳｏｄ２（図５ａ）のレベルが著しく増加した。これらはそれぞれ低下したＴＧ含量及びＴＢＡＲＳ（図５ｃ、ｂ）に関連したものであった。
肝臓において、ＡｄｉｐｏＲｏｎは、Ｐｐａｒｇｃ１ａ、Ｐｃｋ１、及びＧ６ｐｃの発現を著しく低下させ（図５ｅ）、Ｐｐａｒα及びその標的遺伝子の発現を増加させたが（図５ｅ）、これらは、著しく低減したＴＧ含量（図５ｆ）及び酸化ストレス（図５ｇ）と、炎症誘発性サイトカインをコードする遺伝子の発現レベルの低下とに関連するものであった。
ＷＡＴでは、ＡｄｉｐｏＲｏｎは、炎症誘発性サイトカインをコードする遺伝子、マクロファージマーカーの発現レベル、特に古典的に活性化されたＭ１マクロファージに関するマーカーのレベルを低下させたが、代替的に活性化されたＭ２マクロファージに関するマーカーのレベルはそうではなかった（図５ｈ）。【０２６８】
（１０）HF食によるdb/dbマウスの延命
通常の固形飼料（ａ）（それぞれｎ＝５０、３２、２９、及び３５）、又は高脂肪食（ｂ）（それぞれｎ＝４７、３３、３５、及び３１）を摂取した、野生型、Ａｄｉｐｏｒ１−／−、Ａｄｉｐｏｒ２−／−、及びＡｄｉｐｏｒ１−／−Ａｄｉｐｏｒ２−／−ノックアウトマウスの生存率を毎日記録し、生存曲線を、Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ法を使用してプロットした。その結果、Ａｄｉｐｏｒ１／ｒ２ダブルノックアウトマウスが、通常の固形飼料及び高脂肪食の両方の下でＷＴマウスと比較して短い寿命を示した（図６ａ及びｂ）。
ＨＦ食は寿命を短くすることが報告されていることから、ＡｄｉｐｏＲｏｎの経口投与により、ＨＦ食により短くなった寿命を延ばすことができるか否かを、検討した。
すなわち、db/dbマウスをランダムに3つの群：通常の固形飼料群(通常の固形飼料、ｎ＝２０）、高脂肪食群（高脂肪食、ｎ＝２０）、及び高脂肪食にＡｄｉｐｏＲｏｎを加えた群（高脂肪食＋ＡｄｉｐｏＲｏｎ、ｎ＝２０）に分け、これらを日用量３０ｍｇ  ｋｇ−１体重のＡｄｉｐｏＲｏｎで処置し、生存率を毎日記録した。
その結果、ＨＦ食によるｄｂ／ｄｂマウスの寿命は、通常の固形飼料による場合に比べて明らかに短くなり、ＡｄｉｐｏＲｏｎは、ＨＦ食によるｄｂ／ｄｂマウスの短い寿命を著しく回復させた（図６ｃ）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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【図５１】
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【図５２】
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【図５３】
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【図５４】
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【図５５】
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【図５６】
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【図５７】
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【図５８】
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【図５９】
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【図６０】
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【図６１】
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【図６２】
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【図６３】
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【図６４】
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【図６５】
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【図６６】
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【図６７】
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【図６８】
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【図６９】
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【図７０】
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【図７１】
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【図７２】
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【図７３】
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【図７４】
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【図７５】
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【図７６】
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【図７７】
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【図７８】
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【図７９】
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【図８０】
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【図８１】
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【図８２】
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【図８３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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