(57)【要約】  本発明は、肺血管拡張作用とｓＥＨ阻害作用の双方の作用メカニズムに基づき肺高血圧症を治療する肺高血圧症の治療剤又は予防剤を提供すること、並びに、肺血管拡張薬と併用して用いられる肺高血圧症の治療剤又は予防剤を提供すること、を目的としている。本発明は、下式に代表されるニペコチン酸誘導体又はその薬理学的に許容される塩と、肺血管拡張薬と、を有効成分として含有する、肺高血圧症の治療剤又は予防剤を提供する。2015046404.tif 000026
2015046404.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の一般式（Ｉ）で示されるニペコチン酸誘導体又はその薬理学的に許容される塩と、肺血管拡張薬と、を有効成分として含有する、肺高血圧症の治療剤又は予防剤。
【化１】
2015046404.tif 000024
［式中、Ｒ１は、水酸基、シアノ基、炭素数１〜６のアルキル基若しくはアルキルオキシ基、炭素数３〜６のシクロアルキル基若しくはシクロアルキルオキシ基、炭素数２〜７のアルキルオキシアルキル基、炭素数４〜７のシクロアルキルアルキル基（該アルキル基、アルキルオキシ基、シクロアルキル基、シクロアルキルオキシ基、アルキルオキシアルキル基及びシクロアルキルアルキル基は、１〜３個の水素原子が、それぞれ独立して、ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、−ＳＲ６、−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ６又は−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ６で置換されていてもよい）、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７、−Ｎ（Ｒ６）Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）Ｒ７又は環構成原子数５のヘテロアリール基を表し、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基又は炭素数２〜７のアルキルオキシアルキル基（該アルキル基及びアルキルオキシアルキル基は、１〜３個の水素原子が、それぞれ独立して、ハロゲン原子、水酸基又はシアノ基で置換されていてもよい）を表すか、又は、一緒になって−（ＣＨ２）ｌ−若しくは−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−を表すが、同時に水素原子を表すことはなく、Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、炭素数１〜６のアルキル基若しくはアルキルオキシ基、炭素数３〜６のシクロアルキル基若しくはシクロアルキルオキシ基（該アルキル基、アルキルオキシ基、シクロアルキル基及びシクロアルキルオキシ基は、１〜３個の水素原子が、それぞれ独立して、ハロゲン原子で置換されていてもよい）又は−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２を表すが、同時にアルキルオキシ基を表すことはなく、Ｒ６は、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を表し、Ｒ７は、炭素数１〜６のアルキル基、炭素数３〜６のシクロアルキル基、炭素数２〜７のアルキルオキシアルキル基又は炭素数４〜７のシクロアルキルアルキル基（該アルキル基、シクロアルキル基、アルキルオキシアルキル基及びシクロアルキルアルキル基は、１〜３個の水素原子が、それぞれ独立して、ハロゲン原子、水酸基又はシアノ基で置換されていてもよい）を表し、ｌは、２〜５の整数を表し、ｍ及びｎは、それぞれ独立して、１又は２を表す。］
【請求項２】
Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、水素原子若しくは炭素数１〜６のアルキル基を表すか、又は、一緒になって−（ＣＨ２）ｌ−を表すが、同時に水素原子を表すことはなく、
Ｒ４は、ベンゼン環上の２位の置換基を表し、
Ｒ５は、ベンゼン環上の４位の置換基を表す、請求項１記載の治療剤又は予防剤。
【請求項３】
Ｒ１は、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７又は−Ｎ（Ｒ６）Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ７を表し、
Ｒ４は、ハロゲン原子又は炭素数１〜６のアルキル基若しくはアルキルオキシ基を表し、
Ｒ５は、ハロゲン原子、シアノ基又は炭素数１〜６のアルキル基若しくはアルキルオキシ基を表し、
Ｒ６は、水素原子を表す、請求項１又は２記載の治療剤又は予防剤。
【請求項４】
肺血管拡張薬と併用して用いられる、以下の一般式（Ｉ）で示されるニペコチン酸誘導体又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する、肺高血圧症の治療剤又は予防剤。
【化２】
2015046404.tif 000025
［式中、Ｒ１は、水酸基、シアノ基、炭素数１〜６のアルキル基若しくはアルキルオキシ基、炭素数３〜６のシクロアルキル基若しくはシクロアルキルオキシ基、炭素数２〜７のアルキルオキシアルキル基、炭素数４〜７のシクロアルキルアルキル基（該アルキル基、アルキルオキシ基、シクロアルキル基、シクロアルキルオキシ基、アルキルオキシアルキル基及びシクロアルキルアルキル基は、１〜３個の水素原子が、それぞれ独立して、ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、−ＳＲ６、−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ６又は−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ６で置換されていてもよい）、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７、−Ｎ（Ｒ６）Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）Ｒ７又は環構成原子数５のヘテロアリール基を表し、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基又は炭素数２〜７のアルキルオキシアルキル基（該アルキル基及びアルキルオキシアルキル基は、１〜３個の水素原子が、それぞれ独立して、ハロゲン原子、水酸基又はシアノ基で置換されていてもよい）を表すか、又は、一緒になって−（ＣＨ２）ｌ−若しくは−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−を表すが、同時に水素原子を表すことはなく、Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、炭素数１〜６のアルキル基若しくはアルキルオキシ基、炭素数３〜６のシクロアルキル基若しくはシクロアルキルオキシ基（該アルキル基、アルキルオキシ基、シクロアルキル基及びシクロアルキルオキシ基は、１〜３個の水素原子が、それぞれ独立して、ハロゲン原子で置換されていてもよい）又は−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２を表すが、同時にアルキルオキシ基を表すことはなく、Ｒ６は、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を表し、Ｒ７は、炭素数１〜６のアルキル基、炭素数３〜６のシクロアルキル基、炭素数２〜７のアルキルオキシアルキル基又は炭素数４〜７のシクロアルキルアルキル基（該アルキル基、シクロアルキル基、アルキルオキシアルキル基及びシクロアルキルアルキル基は、１〜３個の水素原子が、それぞれ独立して、ハロゲン原子、水酸基又はシアノ基で置換されていてもよい）を表し、ｌは、２〜５の整数を表し、ｍ及びｎは、それぞれ独立して、１又は２を表す。］
【請求項５】
Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、水素原子若しくは炭素数１〜６のアルキル基を表すか、又は、一緒になって−（ＣＨ２）ｌ−を表すが、同時に水素原子を表すことはなく、
Ｒ４は、ベンゼン環上の２位の置換基を表し、
Ｒ５は、ベンゼン環上の４位の置換基を表す、請求項４記載の治療剤又は予防剤。
【請求項６】
Ｒ１は、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７又は−Ｎ（Ｒ６）Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ７を表し、
Ｒ４は、ハロゲン原子又は炭素数１〜６のアルキル基若しくはアルキルオキシ基を表し、
Ｒ５は、ハロゲン原子、シアノ基又は炭素数１〜６のアルキル基若しくはアルキルオキシ基を表し、
Ｒ６は、水素原子を表す、請求項４又は５記載の治療剤又は予防剤。
【請求項７】
前記肺血管拡張薬は、プロスタサイクリン誘導体、ホスホジエステラーゼ阻害剤及び／又はエンドセリンレセプター拮抗剤である、請求項１〜６のいずれか一項記載の治療剤又は予防剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、肺高血圧症の治療剤又は予防剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
肺高血圧症とは、肺動脈圧の上昇を認める病態の総称であり、運動耐容能を著しく低下させ、そのほとんどが進行性で予後も不良であることが知られている。健常人では、肺動脈圧が全身の血圧より低く維持されているが、肺高血圧症患者では、平均の肺動脈圧が安静時でも２５ｍｍＨｇ以上（運動時では、３０ｍｍＨｇ以上）あり、この状態が長時間持続することで右心室肥大や右心不全が誘発され、最悪の場合には死に至るとされている。【０００３】
肺高血圧症の発症原因の一つとしては、肺血管攣縮が関与すると考えられており、肺高血圧症の治療には、プロスタサイクリン誘導体、ホスホジエステラーゼ阻害剤及びエンドセリンレセプター拮抗剤等の肺血管拡張作用を示す薬剤（肺血管拡張薬）が使用され（特許文献１〜４及び非特許文献１）、単剤の投与で十分な降圧作用が得られない場合には、２剤又は３剤の肺血管拡張薬を併用して投与する治療が施されている（特許文献４及び５並びに非特許文献２及び３）。【０００４】
近年、内皮細胞由来の過分極因子の一つであるエポキシエイコサトリエン酸（Ｅｐｏｘｙｅｉｃｏｓａｔｒｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄｓ；以下、ＥＥＴｓ）が、血圧上昇抑制作用及び血管内皮保護作用を有し、肺疾患において臓器保護作用を示すことが報告された（非特許文献４及び５）。また、ＥＥＴｓは可溶性エポキシド加水分解酵素（ｓｏｌｕｂｌｅ  ｅｐｏｘｉｄｅ  ｈｙｄｒｏｌａｓｅ；以下、ｓＥＨ）の作用によってジヒドロキシエイコサトリエン酸（ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｅｉｃｏｓａｔｒｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄｓ；以下、ＤＨＥＴｓ）に代謝されて失活するが、可溶性エポキシド加水分解酵素阻害剤（以下、ｓＥＨ阻害剤）は、ＥＥＴｓの分解を抑制してＥＥＴｓの量を増加させるため、ｓＥＨ阻害剤は肺高血圧症の治療薬として有用であることが示唆された（特許文献６並びに非特許文献６及び７）。【０００５】
ｓＥＨ阻害活性を有する化合物が見出され、肺高血圧症の治療薬としての利用が示唆されたが（特許文献６及び非特許文献６）、ｓＥＨ阻害活性を有していても自然発症型高血圧ラット（Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ  Ｒａｔ）に対して治療効果を示さない例も報告されている（非特許文献８〜１０）。【０００６】
一方、ニペコチン酸ジアミド構造を有する化合物としては、ニペコチン酸にヘテロアリールアミンが縮合したヘテロアリールアミド誘導体（特許文献７）、アミジン誘導体（特許文献８）及びヒドロキサム酸誘導体（特許文献９）が報告されているが、ｓＥＨ阻害活性については開示も示唆もされていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第９６／２６７２１号
【特許文献２】国際公開第９５／１９９７８号
【特許文献３】公開番号ＥＰ１０９７７１１
【特許文献４】国際公開第２００５／３０１８７号
【特許文献５】国際公開第２００４／１７９９３号
【特許文献６】国際公開第２００７／１０６５２５号
【特許文献７】国際公開第２０１０／０９６３７１号
【特許文献８】国際公開第２０００／０１７１５８号
【特許文献９】国際公開第２００２／０２８８２９号
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】佐藤徹、最新医学、２０１０年、第６５巻、第８号、ｐ．１６９８−１７０２
【非特許文献２】中西宣文ら、肺高血圧症治療ガイドライン（２０１２年改訂版）
【非特許文献３】Ｂｅｎｚａら、Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈｅａｒｔ  ａｎｄ  Ｌｕｎｇ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、２００７年、第２６巻、ｐ．４３７−４４６
【非特許文献４】Ｌｅｅら、Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  Ｓｏｃｉｅｔｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｅｘｐｅｒｉｍａｎｔａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、２０１０年、第２４巻、Ｐ．３７７０−３７８１
【非特許文献５】Ｄｈａｎａｓｅｋａｒａｎら、ＡＪＰ−Ｈｅａｒｔ  ａｎｄ  Ｃｉｒｃｕｌａｔｏｒｙ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、２００６年、第２９１巻、Ｈ５１７−Ｈ５３１
【非特許文献６】Ｓｐｅｃｔｏｒら、Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００４年、第４３巻、ｐ．５５−９０
【非特許文献７】Ｌａｒｓｅｎら、Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、２００６年、第２８巻、第１号、ｐ．３２−３８
【非特許文献８】Ｓｈｅｎら、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、２００９年、第１９巻、ｐ．３３９８−３４０４
【非特許文献９】Ｓｈｅｎら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００９年、第５２巻、ｐ．５００９−５０１２
【非特許文献１０】Ｓｈｅｎら、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、２００９年、第１９巻、ｐ．５３１４−５３２０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
しかしながら、肺高血圧症の治療に使用されている肺血管拡張薬であっても、肺動脈圧上昇及びこれに引き続いて起こる右心室肥大、肺肥大、肺動脈肥厚及び心筋肥大を効果的に抑制するには限界があるのが現状であり、肺高血圧の治療には、肺血管拡張作用とは異なるメカニズムで肺血圧症を治療し得る強い薬効を併せ持つ薬剤又は併用薬の創出が急務であると言える。【００１０】
また、ｓＥＨ阻害活性を示す既存の化合物であっても、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて降圧作用などの薬理作用を発揮するとは限らなかったため、肺高血圧症に対して治療効果を発揮するｓＥＨ阻害剤を見出すことは困難であった。しかし、これまでニペコチン酸ジアミド構造を有するｓＥＨ阻害剤は創出されてこなかったため、ｓＥＨ阻害活性に基づいて肺動脈圧上昇を抑制するニペコチン酸誘導体を見出すことができれば、肺高血圧症を治療するための新たな薬剤又は併用薬として利用できる可能性があると考えられた。【００１１】
そこで本発明は、肺血管拡張作用とｓＥＨ阻害作用の双方の作用メカニズムに基づき肺高血圧症を治療する肺高血圧症の治療剤又は予防剤、並びに、肺血管拡張薬と併用して用いられる肺高血圧症の治療剤又は予防剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは上記の課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、新規なニペコチン酸誘導体又はその薬理学的に許容される塩が、強いｓＥＨ阻害活性を示すこと、並びに、その作用に基づき肺高血圧症に対し優れた治療効果及び予防効果を発揮することを見出し、さらに、上記の新規なニペコチン酸誘導体又はその薬理学的に許容される塩と、肺血管拡張薬と、を組み合わせることにより、肺高血圧症に対し優れた治療効果及び予防効果を発揮することをも見出して本発明を完成するに至った。【００１３】
すなわち、本発明は、下記の一般式（Ｉ）で示されるニペコチン酸誘導体又はその薬理学的に許容される塩と、肺血管拡張薬と、を有効成分として含有する肺高血圧症の治療剤又は予防剤を提供する。
【化１】
2015046404.tif 000003
［式中、Ｒ１は、水酸基、シアノ基、炭素数１〜６のアルキル基若しくはアルキルオキシ基、炭素数３〜６のシクロアルキル基若しくはシクロアルキルオキシ基、炭素数２〜７のアルキルオキシアルキル基、炭素数４〜７のシクロアルキルアルキル基（該アルキル基、アルキルオキシ基、シクロアルキル基、シクロアルキルオキシ基、アルキルオキシアルキル基及びシクロアルキルアルキル基は、１〜３個の水素原子が、それぞれ独立して、ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、−ＳＲ６、−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ６又は−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ６で置換されていてもよい）、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７、−Ｎ（Ｒ６）Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）Ｒ７又は環構成原子数５のヘテロアリール基を表し、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基又は炭素数２〜７のアルキルオキシアルキル基（該アルキル基及びアルキルオキシアルキル基は、１〜３個の水素原子が、それぞれ独立して、ハロゲン原子、水酸基又はシアノ基で置換されていてもよい）を表すか、又は、一緒になって−（ＣＨ２）ｌ−若しくは−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−を表すが、同時に水素原子を表すことはなく、Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、炭素数１〜６のアルキル基若しくはアルキルオキシ基、炭素数３〜６のシクロアルキル基若しくはシクロアルキルオキシ基（該アルキル基、アルキルオキシ基、シクロアルキル基及びシクロアルキルオキシ基は、１〜３個の水素原子が、それぞれ独立して、ハロゲン原子で置換されていてもよい）又は−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２を表すが、同時にアルキルオキシ基を表すことはなく、Ｒ６は、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を表し、Ｒ７は、炭素数１〜６のアルキル基、炭素数３〜６のシクロアルキル基、炭素数２〜７のアルキルオキシアルキル基又は炭素数４〜７のシクロアルキルアルキル基（該アルキル基、シクロアルキル基、アルキルオキシアルキル基及びシクロアルキルアルキル基は、１〜３個の水素原子が、それぞれ独立して、ハロゲン原子、水酸基又はシアノ基で置換されていてもよい）を表し、ｌは、２〜５の整数を表し、ｍ及びｎは、それぞれ独立して、１又は２を表す。］【００１４】
上記のニペコチン酸誘導体は、Ｒ２及びＲ３が、それぞれ独立して、水素原子若しくは炭素数１〜６のアルキル基を表すか、又は、一緒になって−（ＣＨ２）ｌ−を表すが、同時に水素原子を表すことはなく、Ｒ４が、ベンゼン環上の２位の置換基を表し、Ｒ５が、ベンゼン環上の４位の置換基を表すことが好ましい。【００１５】
この場合には、ニペコチン酸誘導体又はその薬理学的に許容される塩がより強いｓＥＨ阻害活性を示すことが期待できることから、肺高血圧症の治療剤又は予防剤は、肺高血圧症に対してより優れた治療効果及び予防効果を発揮できる。【００１６】
上記のニペコチン酸誘導体は、Ｒ１が、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７又は−Ｎ（Ｒ６）Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ７を表し、Ｒ４が、ハロゲン原子又は炭素数１〜６のアルキル基若しくはアルキルオキシ基を表し、Ｒ５が、ハロゲン原子、シアノ基又は炭素数１〜６のアルキル基若しくはアルキルオキシ基を表し、Ｒ６が、水素原子を表すことがより好ましく、Ｒ１が、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３を表し、Ｒ２及びＲ３が、一緒になって−（ＣＨ２）３−を表し、Ｒ４が、−ＯＣＦ３を表し、Ｒ５が、シアノ基を表すことが特に好ましい。【００１７】
この場合には、ニペコチン酸誘導体又はその薬理学的に許容される塩がより強いｓＥＨ阻害活性を示すことが期待でき、加えて、その薬物動態も優れていることから、肺高血圧症の治療剤又は予防剤は、肺高血圧症に対してさらに優れた治療効果及び予防効果を発揮できる。【００１８】
上記の肺血管拡張薬は、プロスタサイクリン誘導体、ホスホジエステラーゼ阻害剤及び／又はエンドセリンレセプター拮抗剤であることが好ましく、ホスホジエステラーゼ阻害剤及び／又はエンドセリンレセプター拮抗剤がより好ましい。【００１９】
また、上記のホスホジエステラーゼ阻害剤は、シルデナフィル若しくはその薬理学的に許容される塩、又は、タダラフィルが好ましく、タダラフィルがより好ましく、上記のエンドセリンレセプター拮抗剤は、アンブリセンタン若しくはその薬理学的に許容される塩、又は、ボセンタン若しくはその水和物が好ましく、アンブリセンタン又はその薬理学的に許容される塩がより好ましい。【００２０】
また本発明は、肺血管拡張薬と併用して用いられる、上記のニペコチン酸誘導体又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する、肺高血圧症の治療剤又は予防剤を提供する。
【発明の効果】
【００２１】
本発明の肺高血圧症の治療剤又は予防剤は、肺血管拡張作用とｓＥＨ阻害作用に基づき、肺高血圧症を治療又は予防できる。また本発明の肺高血圧症の治療剤又は予防剤は、肺血管拡張薬の薬理作用を増強することにより、肺高血圧症を治療又は予防できる。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】ラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルにおける右心室収縮期圧に対する実施例化合物１の作用を示す図である。
【図２】ラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルにおける右心室重量比に対する実施例化合物１の作用を示す図である。
【図３】ラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルにおける肺重量比に対する実施例化合物１の作用を示す図である。
【図４】ラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルにおける右心室重量比に対する実施例化合物１の作用を示す図である。
【図５】ラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルにおける右心室収縮期圧に対する実施例化合物２の作用を示す図である。
【図６】ラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルにおける右心室重量比に対する実施例化合物２の作用を示す図である。
【図７】ラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルにおける肺重量比に対する実施例化合物２の作用を示す図である。
【図８】ラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルにおける右心室重量比に対する実施例化合物３１の作用を示す図である。
【図９】ラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルにおける右心室重量比に対する実施例化合物１とタダラフィルとの併用投与の作用を示す図である。
【図１０】タダラフィルを投与している病態進行期のラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルにおける右心室重量比に対する、実施例化合物１を追加で併用投与することによる作用を示した図である。
【図１１】アンブリセンタンを投与している病態進行期のラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルにおける右心室重量比に対する、実施例化合物１を追加で併用投与することによる作用を示した図である。
【図１２】タダラフィルを投与している病態進行期のラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルにおける右心室重量比に対する、実施例化合物３１を追加で併用投与することによる作用を示した図である。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本発明の肺高血圧症の治療剤又は予防剤は、下記の一般式（Ｉ）で示されるニペコチン酸誘導体又はその薬理学的に許容される塩と、肺血管拡張薬と、を有効成分として含有することを特徴としている。
【化２】
2015046404.tif 000004
［式中、Ｒ１は、水酸基、シアノ基、炭素数１〜６のアルキル基若しくはアルキルオキシ基、炭素数３〜６のシクロアルキル基若しくはシクロアルキルオキシ基、炭素数２〜７のアルキルオキシアルキル基、炭素数４〜７のシクロアルキルアルキル基（該アルキル基、アルキルオキシ基、シクロアルキル基、シクロアルキルオキシ基、アルキルオキシアルキル基及びシクロアルキルアルキル基は、１〜３個の水素原子が、それぞれ独立して、ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、−ＳＲ６、−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ６又は−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ６で置換されていてもよい）、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７、−Ｎ（Ｒ６）Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）Ｒ７又は環構成原子数５のヘテロアリール基を表し、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基又は炭素数２〜７のアルキルオキシアルキル基（該アルキル基及びアルキルオキシアルキル基は、１〜３個の水素原子が、それぞれ独立して、ハロゲン原子、水酸基又はシアノ基で置換されていてもよい）を表すか、又は、一緒になって−（ＣＨ２）ｌ−若しくは−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−を表すが、同時に水素原子を表すことはなく、Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、炭素数１〜６のアルキル基若しくはアルキルオキシ基、炭素数３〜６のシクロアルキル基若しくはシクロアルキルオキシ基（該アルキル基、アルキルオキシ基、シクロアルキル基及びシクロアルキルオキシ基は、１〜３個の水素原子が、それぞれ独立して、ハロゲン原子で置換されていてもよい）又は−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２を表すが、同時にアルキルオキシ基を表すことはなく、Ｒ６は、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を表し、Ｒ７は、炭素数１〜６のアルキル基、炭素数３〜６のシクロアルキル基、炭素数２〜７のアルキルオキシアルキル基又は炭素数４〜７のシクロアルキルアルキル基（該アルキル基、シクロアルキル基、アルキルオキシアルキル基及びシクロアルキルアルキル基は、１〜３個の水素原子が、それぞれ独立して、ハロゲン原子、水酸基又はシアノ基で置換されていてもよい）を表し、ｌは、２〜５の整数を表し、ｍ及びｎは、それぞれ独立して、１又は２を表す。］
【００２４】
「炭素数１〜６のアルキル基」とは、炭素原子を１〜６個有する直鎖状又は炭素原子を３〜６個有する分岐鎖状の飽和炭化水素基を意味し、例えば、メチル基、エチル基、１−プロピル基、２−プロピル基、１−ブチル基、２−ブチル基、２−メチル−２−プロピル基（ｔｅｒｔ−ブチル基）、２−メチル−１−プロピル基、２，２−ジメチル−１−プロピル基、１−ペンチル基、２−ペンチル基又は３−ペンチル基が挙げられる。
【００２５】
「炭素数１〜６のアルキルオキシ基」とは、上記の炭素数１〜６のアルキル基が酸素原子に結合した基を意味し、例えば、メトキシ基、エトキシ基、１−プロピルオキシ基、２−プロピルオキシ基、１−ブチルオキシ基又は２−ブチルオキシ基が挙げられる。
【００２６】
「炭素数３〜６のシクロアルキル基」とは、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基又はシクロヘキシル基を意味する。
【００２７】
「炭素数３〜６のシクロアルキルオキシ基」とは、シクロプロピルオキシ基、シクロブチルオキシ基、シクロペンチルオキシ基又はシクロヘキシルオキシ基を意味する。
【００２８】
「炭素数２〜７のアルキルオキシアルキル基」とは、炭素原子を２〜７個有し、アルキル基の１個の水素原子がアルキルオキシ基で置換された基を意味し、例えば、メトキシメチル基、メトキシエチル基、メトキシプロピル基、エトキシメチル基、プロポキシメチル基又はイソプロポキシメチル基が挙げられる。
【００２９】
「炭素数４〜７のシクロアルキルアルキル基」とは、炭素原子を４〜７個有し、アルキル基の１個の水素原子がシクロアルキル基で置換された基を意味し、例えば、シクロプロピルメチル基、シクロプロピルエチル基、シクロプロピルプロピル基、シクロブチルメチル基、シクロペンチルメチル基又はシクロヘキシルメチル基が挙げられる。
【００３０】
「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子を意味する。
【００３１】
「環構成原子数５のヘテロアリール基」とは、窒素原子、酸素原子及び硫黄原子からなる群から選択される同一又は異なる原子を環構成原子として１〜４個含む、環構成原子数が５の複素芳香族基を意味し、例えば、ピロリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、トリアゾリル基、オキサゾリル基、イソキサゾリル基、フラニル基又はチアゾリル基が挙げられる。
【００３２】
上記のニペコチン酸誘導体は、一般式（Ｉ）において、Ｒ１は、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７又は−Ｎ（Ｒ６）Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ７であることが好ましく、アセチルアミジル、プロピオンアミジル基又はメタンスルホニルアミジル基であることがより好ましい。
【００３３】
Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、水素原子若しくは炭素数１〜６のアルキル基であるか、又は、一緒になって−（ＣＨ２）ｌ−であることが好ましく、それぞれ独立して、水素原子若しくは炭素数１〜３のアルキル基（該アルキル基は、１個の水素原子が、水酸基で置換されていてもよい）であるか、又は、一緒になって−（ＣＨ２）２−若しくは−（ＣＨ２）３−であることがより好ましく、それぞれ独立して、水素原子、メチル基若しくは２−ヒドロキシ−２−プロピル基であるか、又は、一緒になって−（ＣＨ２）２−若しくは−（ＣＨ２）３−であることがさらに好ましいが、同時に水素原子となることはない。
【００３４】
Ｒ４は、ベンゼン環上の２位の置換基であることが好ましい。また、Ｒ４は、ハロゲン原子又は炭素数１〜６のアルキル基若しくはアルキルオキシ基であることが好ましく、ハロゲン原子又はアルキルオキシ基であることがより好ましく、アルキルオキシ基であることがさらに好ましい。
【００３５】
Ｒ５は、ベンゼン環上の４位の置換基であることが好ましい。また、Ｒ５は、ハロゲン原子、シアノ基又は炭素数１〜６のアルキル基若しくは炭素数１〜６のアルキルオキシ基であることが好ましく、ハロゲン原子又はシアノ基であることがより好ましい。
【００３６】
Ｒ６は、水素原子であることが好ましく、Ｒ７は、メチル基又はエチル基であることが好ましい。
【００３７】
また、ｌは、２又は３であることが好ましく、ｍは、２であることが好ましく、ｎは、２であることが好ましい。
【００３８】
上記の一般式（Ｉ）で示されるニペコチン酸誘導体（以下、ニペコチン酸誘導体（Ｉ））は、少なくとも１個の不斉炭素原子を有しており、光学異性体やジアステレオマーが存在するものであるが、ニペコチン酸誘導体（Ｉ）は単一異性体のみならず、ラセミ体及びジアステレオマー混合物も包含するものである。また、回転異性体が存在する場合、全ての回転異性体を包含する。
【００３９】
ニペコチン酸誘導体（Ｉ）の薬理学的に許容される塩としては、例えば、酸付加塩として塩酸塩、トリフルオロ酢酸塩、硫酸塩、硝酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩又はメタンスルホン酸塩が挙げられるが、塩酸塩、硫酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩又はメタンスルホン酸塩が好ましい。
【００４０】
また、本発明の肺高血圧症の治療剤又は予防剤は、肺血管拡張薬と併用して用いられるニペコチン酸誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有することを特徴としている。
【００４１】
ニペコチン酸誘導体（Ｉ）の製造に使用する出発物質と試薬は、市販品をそのまま利用してもよいし、又は、公知の方法により合成しても構わない。
【００４２】
ニペコチン酸誘導体（Ｉ−ａ）は、例えば、以下のスキーム１に示すように、塩基及び縮合剤存在下、アミン誘導体（ＩＩ）とカルボン酸誘導体（ＩＩＩ）との縮合反応により製造できる。
（スキーム１）
【化３】
2015046404.tif 000005
[式中、Ｒ１’は、水酸基、シアノ基、炭素数１〜６のアルキル基若しくはアルキルオキシ基、炭素数３〜６のシクロアルキル基若しくはシクロアルキルオキシ基、炭素数２〜７のアルキルオキシアルキル基、炭素数４〜７のシクロアルキルアルキル基（該アルキル基、アルキルオキシ基、シクロアルキル基、シクロアルキルオキシ基、アルキルオキシアルキル基及びシクロアルキルアルキル基は、１〜３個の水素原子が、それぞれ独立して、ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、−ＳＲ６、−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ６又は−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ６で置換されていてもよい）を表す。Ｒ２〜Ｒ６は、上記定義に同じ。]
【００４３】
縮合反応に用いる縮合剤としては、例えば、シクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ−エチル−Ｎ‘−３−ジメチルアミノプロピルカルボジイミド塩酸塩、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリスジメチルアミノホスホニウム塩（ＢＯＰ試薬）、１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−ベンゾトリアゾリウム−３−オキシドヘキサフルオロホスファート（ＨＢＴＵ）又はＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）テトラメチルウロニウム  ヘキサフルオロホスファート（以下、ＨＡＴＵ）が挙げられるが、ＨＡＴＵが好ましい。該縮合剤の当量は、１〜１０当量が好ましく、１〜３当量がより好ましい。
【００４４】
縮合反応に用いる溶媒としては、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（以下、ＤＭＦ）、テトラヒドロフラン（以下、ＴＨＦ）、ジクロロメタン、クロロホルム、ジエチルエーテル又はジメチルエーテルが挙げられるが、ＤＭＦ又はＴＨＦが好ましく、ＤＭＦがより好ましい。
【００４５】
縮合反応に用いる塩基としては、例えば、ジイソプロピルエチルアミン（以下、ＤＩＰＥＡ）、トリエチルアミン（以下、ＴＥＡ）、ピリジン若しくはＮ−メチルモルホリン等の有機塩基又は炭酸カリウム、炭酸ナトリウム若しくは炭酸水素ナトリウム等の有機酸塩が挙げられるが、ＤＩＰＥＡ又はＴＥＡが好ましい。該塩基の当量は、アミン誘導体（ＩＩ）に対して１〜１００当量が好ましく、１〜１０当量がより好ましい。
【００４６】
縮合反応に用いるカルボン酸誘導体（ＩＩＩ）の当量は、アミン誘導体（ＩＩ）に対して０．１〜１００当量が好ましく、０．１〜１０当量がより好ましく、０．８〜２当量がさらに好ましい。
【００４７】
縮合反応の反応温度は、−５０〜１００℃が好ましく、０〜５０℃がより好ましく、０〜３０℃がさらに好ましい。また、縮合反応の反応時間は、１分間〜４８時間が好ましく、１分間〜２４時間がより好ましく、１０分間〜２４時間がさらに好ましい。
【００４８】
縮合反応におけるアミン誘導体（ＩＩ）の反応開始時の濃度は、０．０１〜１００Ｍが好ましく、０．０１〜１０Ｍがより好ましく、０．１〜１０Ｍがさらに好ましい。
【００４９】
また、Ｒ１が、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７であるニペコチン酸誘導体（Ｉ−ｂ）は、例えば、以下のスキーム２に示すように、塩基存在下、アミン誘導体（ＩＶ）と酸クロリド誘導体（Ｖ）との縮合反応、又は、塩基及び縮合剤存在下、アミン誘導体（ＩＶ）とカルボン酸誘導体（ＶＩ）との縮合反応により製造できる。
（スキーム２）
【化４】
2015046404.tif 000006
[式中、Ｒ２〜Ｒ５及びＲ７は、上記定義に同じ。]
【００５０】
酸クロリド誘導体（Ｖ）との縮合反応に用いる溶媒としては、例えば、ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、アセトニトリル、ＤＭＦ、ＴＨＦ、ジオキサン、ジエチルエーテル又は１，２−ジメトキシエタンが挙げられるが、ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、アセトニトリル又はＴＨＦが好ましく、ジクロロメタン又は１，２−ジクロロエタンがより好ましい。
【００５１】
酸クロリド誘導体（Ｖ）との縮合反応に用いる酸クロリド（Ｖ）の当量は、アミン誘導体（ＩＶ）に対して０．１〜１０当量が好ましく、１〜３当量がより好ましく、１〜１．５当量がさらに好ましい。
【００５２】
酸クロリド誘導体（Ｖ）との縮合反応に用いる塩基としては、例えば、ＤＩＰＥＡ、ＴＥＡ、ピリジン又はＮ−メチルモルホリン等の有機塩基が挙げられるが、ＤＩＰＥＡ又はＴＥＡが好ましい。該塩基の当量は、アミン誘導体（ＩＶ）に対して１〜１００当量が好ましく、１〜１０当量がより好ましい。
【００５３】
酸クロリド誘導体（Ｖ）との縮合反応の反応温度は、−５０〜１００℃が好ましく、−２０〜６０℃がより好ましく、０〜４０℃がさらに好ましい。また、酸クロリド（Ｖ）との縮合反応の反応時間は、３０分間〜２４時間が好ましく、３０分間〜１２時間がより好ましく、３０分間〜８時間がさらに好ましい。
【００５４】
酸クロリド誘導体（Ｖ）との縮合反応におけるアミン誘導体（ＩＶ）の反応開始時の濃度は、０．０１〜１００Ｍが好ましく、０．０１〜１０Ｍがより好ましく、０．１〜１０Ｍがさらに好ましい。
【００５５】
一方、アミン誘導体（ＩＶ）とカルボン酸誘導体（ＶＩ）との縮合反応は、スキーム１と同様の条件により行うことができる。
【００５６】
Ｒ１が、−Ｎ（Ｈ）Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ７であるニペコチン酸誘導体（Ｉ−ｃ）は、例えば、以下のスキーム３に示すように、塩基存在下、アミン誘導体（ＩＶ）とスルホン酸クロリド誘導体（ＶＩＩ）とのスルホンアミド化反応により製造できる。
（スキーム３）
【化５】
2015046404.tif 000007
[式中、Ｒ２〜Ｒ５及びＲ７は、上記定義に同じ。]
【００５７】
スルホンアミド化反応に用いる溶媒としては、例えば、ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、アセトニトリル、ＤＭＦ、ＴＨＦ、ジオキサン、ジエチルエーテル又は１，２−ジメトキシエタンが挙げられるが、ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、アセトニトリル又はＴＨＦが好ましく、ジクロロメタン又は１，２−ジクロロエタンがより好ましい。
【００５８】
スルホンアミド化反応に用いるスルホン酸クロリド誘導体（ＶＩＩ）の当量は、アミン誘導体（ＩＶ）に対して０．１〜１０当量が好ましく、１〜３当量がより好ましく、１〜１．５当量がさらに好ましい。
【００５９】
スルホンアミド化反応に用いる塩基としては、例えば、ＤＩＰＥＡ、ＴＥＡ、ピリジン又はＮ−メチルモルホリン等の有機塩基が挙げられるが、ＤＩＰＥＡ又はＴＥＡが好ましい。該塩基の当量は、アミン誘導体（ＩＶ）に対して１〜１００当量が好ましく、１〜１０当量がより好ましい。
【００６０】
スルホンアミド化反応の反応温度は、−５０〜５０℃が好ましく、−３０〜３０℃がより好ましく、−２０〜２０℃がさらに好ましい。また、スルホンアミド化反応の反応時間は、３０分間〜２４時間が好ましく、３０分間〜１２時間がより好ましく、３０分間〜８時間がさらに好ましい。
【００６１】
スルホンアミド化反応におけるアミン誘導体（ＩＶ）の反応開始時の濃度は、０．０１〜１００Ｍが好ましく、０．０１〜１０Ｍがより好ましく、０．１〜１０Ｍがさらに好ましい。
【００６２】
上記のスキーム２及び３における出発物質であるアミン誘導体（ＩＶ）は、例えば、以下のスキーム４に示すように、塩基存在下、アミン誘導体（ＩＩ）とカルボン酸誘導体（ＶＩＩＩ）との縮合反応後、保護基を除去する脱保護反応により製造できる。
（スキーム４）
【化６】
2015046404.tif 000008
[式中、Ｒ２〜Ｒ５は、上記定義に同じであり、Ｒ８は、保護基を表す。]
【００６３】
アミン誘導体（ＩＩ）とカルボン酸誘導体（ＶＩＩＩ）との縮合反応は、スキーム１と同様の条件により行うことができる。
【００６４】
縮合反応に続く脱保護反応は、例えば、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ第３版（Ｇｒｅｅｎら著、１９９９年、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．）に記されている公知の方法により行うことができる。例えば、保護基が、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基である場合には、トリフルオロ酢酸などの強酸で処理することで保護基を除去することができる。
【００６５】
上記のスキーム４におけるカルボン酸誘導体（ＶＩＩＩ）は、市販品をそのまま利用してもよいし、又は、公知の方法により製造しても構わない。
【００６６】
上記のスキーム１及び４における出発物質であるアミン誘導体（ＩＩ）は、例えば、以下のスキーム５に示すように、塩基及び縮合剤存在下、ベンジルアミン誘導体（ＩＸ）とニペコチン酸誘導体（Ｘ）との縮合反応後、保護基を除去する脱保護反応により製造できる。
（スキーム５）
【化７】
2015046404.tif 000009
[式中、Ｒ４、Ｒ５及びＲ８は、上記定義に同じ。]
【００６７】
ベンジルアミン誘導体（ＩＸ）とニペコチン酸誘導体（Ｘ）との縮合反応は、スキーム１と同様の条件により行うことができる。
【００６８】
脱保護反応は、スキーム４記載の方法と同様の条件にて行うことができる。
【００６９】
スキーム５の縮合反応は、ニペコチン酸誘導体（Ｘ）を酸クロリドへ変換し、塩基存在下にて行うこともできる。
【００７０】
ニペコチン酸誘導体（Ｘ）を酸クロリドへ変換する試薬としては、オキサリルクロリド又は塩化チオニルが挙げられるが、オキサリルクロリドが好ましい。該試薬の当量は、ニペコチン酸誘導体（Ｘ）に対して１〜１０当量が好ましく、１〜１．５当量がより好ましい。
【００７１】
ニペコチン酸誘導体（Ｘ）を酸クロリドへ変換する際に用いる溶媒としては、ジクロロメタン、クロロホルム、ＴＨＦ、１，２−ジクロロエタン、アセトニトリル、１，４−ジオキサン又はＤＭＦが挙げられるが、ジクロロメタン、ＴＨＦ若しくはＤＭＦ、又は、これらの混合溶媒が好ましく、ジクロロメタンとＤＭＦとの混合溶媒又はＴＨＦとＤＭＦとの混合溶媒がより好ましい。混合溶媒の比率としては、例えば、ジクロロメタンとＤＭＦとの混合溶媒の場合、ジクロロメタン：ＤＭＦ＝１〜１０００：１が好ましく、１〜１００：１がより好ましい。
【００７２】
ニペコチン酸誘導体（Ｘ）を酸クロリドへ変換する際の反応温度は、−５０〜１００℃が好ましく、−３０〜３０℃が好ましく、−２０〜０℃がさらに好ましい。また、ニペコチン酸誘導体（Ｘ）を酸クロリドへ変換する際の反応時間は、３０分間〜２４時間が好ましく、３０分間〜１２時間がより好ましく、３０分間〜２時間がさらに好ましい。
【００７３】
ニペコチン酸誘導体（Ｘ）を酸クロリドへ変換する際の反応開始時のニペコチン酸誘導体（Ｘ）の濃度は、０．０１〜１００Ｍが好ましく、０．０１〜１０Ｍがより好ましく、０．１〜３Ｍがさらに好ましい。
【００７４】
以上のようにして得られる上記のニペコチン酸誘導体（Ｉ）、その薬理学的に許容される塩、又は、上記のニペコチン酸誘導体（Ｉ）の製造に用いる中間体、原料化合物若しくは試薬は、必要に応じて、抽出、蒸留、クロマトグラフィー又は再結晶等の方法で単離精製してもよい。
【００７５】
上記のニペコチン酸誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩と併用して用いられる肺血管拡張薬としては、プロスタサイクリン誘導体、ホスホジエステラーゼ阻害剤、エンドセリンレセプター拮抗剤等が挙げられ、これらを複数種類包含してもよい。なお、肺血管拡張薬とは、肺動脈を拡張させることにより肺動脈圧を低下させることを主な作用機序とする薬剤のことである。
【００７６】
プロスタサイクリン誘導体としては、例えば、エポプロステノールナトリウム（（Ｚ）−（３ａＲ，４Ｒ，５Ｒ，６ａＳ）−３，３ａ，４，５，６，６ａ−ヘキサヒドロ−５−ヒドロキシ−４−［（Ｅ）−（３Ｓ）−３−ヒドロキシ−１−オクテニル］−２Ｈ−シクロペンタ［ｂ］フラン−Δ２，σ吉草酸ナトリウム）、ベラプロストナトリウム（（１ＲＳ，２ＲＳ，３ａＳＲ，８ｂＳＲ）−２，３，３ａ，８ｂ−テトラヒドロ−２−ヒドロキシ−１−［（１Ｅ，３ＳＲ，４ＲＳ）−３−ヒドロキシ−４−メチルオクト−１−エン−６−イン−１−イル］−１Ｈ−シクロペンタ［ｂ］ベンゾフラン−５−ブタン酸ナトリウム）、イロプロスト（（Ｅ）−（３ａＳ，４Ｒ，５Ｒ，６ａＲ）−ヘキサヒドロ−５−ヒドロキシ−４−［（Ｅ）−（３Ｓ，４ＲＳ）−３−ヒドロキシ−４−メチル−１−オクテン−６−イニル］−Δ（２（１Ｈ），Δ−ペンタレン吉草酸）、トレプロスチニルナトリウム（（１Ｒ，２Ｒ，３ａＳ，９ａＳ）−［［２，３，３ａ，４，９，９ａ−ヘキサヒドロ−２−ヒドロキシ−１−［（３Ｓ）−３−ヒドロキシオクチル］−１Ｈベンズ［ｆ］インデン−５−イル］オキシ］酢酸ナトリウム）が挙げられるが、エポプロステノールナトリウムが好ましい。
【００７７】
ホスホジエステラーゼ阻害剤としては、例えば、シルデナフィル（１−［［３−（６，７−ジヒドロ−１−メチル−７−オキソ−３−プロピル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）−４−エトキシフェニル］スルホニル］−４−メチルピペラジン）若しくはその薬理学的に許容される塩、又は、タダラフィル（（６Ｒ，１２ａＲ）−６−（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−２−メチル−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロピラジノ［１’、２’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン）が挙げられるが、シルデナフィル若しくはその薬理学的に許容される塩、又は、タダラフィル、が好ましく、タダラフィルがより好ましい。
【００７８】
エンドセリンレセプター拮抗剤としては、例えば、アンブリセンタン（（２Ｓ）−２［（４，６−ジメチルピリミジン−２−イル）オキシ］−３−メトキシ−３，３−ジフェニルプロパン酸）若しくはその薬理学的に許容される塩、又は、ボセンタン（４−（１，１−ジメチルエチル）−Ｎ−［６−（２−ヒドロキシエトキシ）−５−（２−メトキシフェノキシ）−２−（ピリミジン−２−イル）ピリミジン−４−イル］ベンゼンスルホンアミド）若しくはその水和物が挙げられるが、アンブリセンタン若しくはその薬理学的に許容される塩、又は、ボセンタン若しくはその水和物が好ましく、アンブリセンタン又はその薬理学的に許容される塩がより好ましい。
【００７９】
シルデナフィル又はアンブリセンタンの薬理学的に許容される塩とは、例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、臭化水素酸塩若しくはヨウ化水素酸塩等の無機酸塩、若しくは、シュウ酸塩、マロン酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレイン酸塩、グルコン酸塩、安息香酸塩、アスコルビン酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩若しくはケイ皮酸塩等の有機酸塩、又は、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩若しくはアンモニウム塩等の無機塩基塩、若しくは、メチルアミン塩、ジエチルアミン塩、トリメチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ピリジニウム塩、トリエタノールアミン塩、エチレンジアミン塩若しくはグアニジン塩等の有機塩基塩が挙げられる。シルデナフィルの薬理学的に許容される塩は、クエン酸塩であることが好ましい。
【００８０】
プロスタサイクリン誘導体は、市販品として入手可能である他、例えば、公知文献（特公平１−５３６７２）に記載の方法に従って合成することもできる。
【００８１】
ホスホジエステラーゼ阻害剤は、市販品として入手可能である他、例えば、公知文献（国際公開第９５／１９９７８号）に記載の方法に従って合成することもできる。
【００８２】
エンドセリンレセプター拮抗剤は、市販品として入手可能である他、例えば、公知文献（国際公開第９６／１１９１４号）に記載の方法に従って合成することもできる。
【００８３】
上記の肺高血圧症の治療剤又は予防剤の有効成分である、ニペコチン酸誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩は、強いｓＥＨ阻害活性を示し、また、その作用に基づき肺高血圧症に対し優れた治療効果及び予防効果を発揮する。
【００８４】
「ｓＥＨ」は、可溶性エポキシド加水分解酵素（ｓｏｌｕｂｌｅ  ｅｐｏｘｉｄｅ  ｈｙｄｒｏｌａｓｅ）の略であり、エポキシドの加水分解を触媒し、それに対応するジオールに変換する代謝酵素である。ｓＥＨの最も知られた基質は、内皮細胞由来の過分極因子の一つであるＥＥＴｓであり、ｓＥＨは、ＥＥＴｓをＤＨＥＴｓに代謝して失活させる作用を有している。「ＥＥＴｓ」は、エポキシエイコサトリエン酸（Ｅｐｏｘｙｅｉｃｏｓａｔｒｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄｓ）の略であり、「ＤＨＥＴｓ」は、ジヒドロキシエイコサトリエン酸（Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｅｉｃｏｓａｔｒｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄｓ）の略である。ＥＥＴｓとして、例えば、１４，１５―エポキシエイコサトリエン酸（１４，１５―Ｅｐｏｘｙｅｉｃｏｓａｔｒｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ；以下、１４，１５―ＥＥＴ）が挙げられる。ＤＨＥＴｓとして、例えば、１４，１５―ジヒドロキシエイコサトリエン酸（１４，１５―Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｅｉｃｏｓａｔｒｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ；以下、１４，１５―ＤＨＥＴ）が挙げられる。
【００８５】
「ｓＥＨ阻害活性」とは、ｓＥＨの作用を阻害する活性を意味する。したがって、ｓＥＨ阻害活性とは、ｓＥＨの基質の一つであるＥＥＴｓの加水分解を触媒するというｓＥＨの酵素反応を阻害する活性を包含する。
【００８６】
「ｓＥＨ阻害剤」とは、ｓＥＨ阻害活性を示す化合物又は該化合物を有効成分として含有する組成物を意味する。
【００８７】
ｓＥＨ阻害活性は、例えば、ヒトｓＥＨと、その基質であるＥＥＴｓとをｓＥＨ阻害剤の存在下で反応させ、産生されるＤＨＥＴｓの量を、ｓＥＨ阻害剤非存在下におけるＤＨＥＴｓ産生量と比較することで測定できる。また、市販の測定キット（Ｓｏｌｕｂｌｅ  Ｅｐｏｘｉｄｅ  Ｈｙｄｒｏｌａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ；Ｃａｙｍａｎ社）を用いるか、公知文献（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００５年、第３４３巻、ｐ．６６−７５等）に記載の方法によっても、ｓＥＨ阻害剤のｓＥＨ阻害活性を測定できる。
【００８８】
また、ｓＥＨ阻害剤存在下及び非存在下で、ｓＥＨの基質としてラセミ性４−ニトロフェニル−トランス−２，３−エポキシ−３−フェニルプロピルカルボナートを用いて、４−ニトロフェノラート陰イオンの出現を測定するか、又は、ｓＥＨの基質としてシアノ（６−メトキシナフタレン−２−イル）メチル  ２−（３−フェニルオキシラン−２−イル）アセタートを用いて、６−メトキシ−２−ナフトアルデヒドの出現を測定することによっても、ｓＥＨ阻害剤のｓＥＨ阻害活性を測定できる。
【００８９】
ｓＥＨ阻害剤が、ＥＥＴｓからＤＨＥＴｓへの代謝を抑制すること又はＥＥＴｓの量を増加させることは、ＥＥＴｓ濃度、ＤＨＥＴｓ濃度又はＥＥＴｓ／ＤＨＥＴｓ比を測定することで確認できる。ＥＥＴｓ濃度、ＤＨＥＴｓ濃度及びＥＥＴｓ／ＤＨＥＴｓ比は、例えば、市販の測定キット（１４，１５―ＥＥＴ／ＤＨＥＴ  ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ；Ｄｅｔｒｏｉｔ  Ｒ＆Ｄ社）を用いて測定できる。
【００９０】
「肺高血圧症」とは、血液を心臓から肺に送る肺動脈圧の上昇を認める病態のうち、安静臥位での平均肺動脈圧が２５ｍｍＨｇ以上の状態、又は、肺疾患、睡眠時無呼吸症候群及び肺胞低換気症候群では、平均肺動脈圧が安静時で２０ｍｍＨｇ以上（運動時では、３０ｍｍＨｇ以上）の状態を意味する（ダイジェスト版  肺高血圧症治療ガイドライン（２００６年改訂版）、Ｐ２−Ｐ３．）。肺高血圧症では、右心室収縮期圧上昇、右心室肥大、肺肥大、肺動脈肥厚、肺における細胞増殖又は心筋肥大が認められる。
【００９１】
上記の肺高血圧症の治療剤又は予防剤の、肺高血圧症に対する治療効果は、人為的に肺高血圧症を誘発させた動物モデルを用いて評価することができる。そのような動物モデルとしては、例えば、ラットを用いたモノクロタリン投与肺高血圧症モデル（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、２００９年、第１１１巻、ｐ．２３５−２４３）が挙げられる。なお、病態の進行は、右心室重量比（右心室重量／（中隔重量＋左心室重量））を測定することで確認できる。また、肺高血圧症に伴う右心室肥大及び肺肥大の病態は、それぞれ、右心室重量比（右心室重量／（中隔重量＋左心室重量））を測定することで確認できる。
【００９２】
肺高血圧症の肺の病変部位におけるｓＥＨの発現は、肺組織を抗ｓＥＨ抗体を用いて免疫組織染色することで確認できる。肺高血圧症の肺動脈肥厚は、肺組織をエラスチカ・ワンギーソン染色し、染色像の観察又は肺動脈中膜厚比（（肺動脈中膜厚×２／肺動脈直径）×１００）を測定することで確認できる。肺高血圧症の肺における細胞増殖は、肺組織を抗増殖性細胞核抗原（Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｃｅｌｌ  ｎｕｃｌｅａｒ  ａｎｔｉｇｅｎ；以下、ＰＣＮＡ）抗体を用いて免疫染色することで確認できる。肺高血圧症の心筋肥大は、右心室をＨＥ染色することで確認できる。肺高血圧症における全身血圧は実施例に記載した方法で確認できる。これらを確認することにより、肺動脈性肺高血圧症、肺静脈閉塞性疾患、肺毛細血管腫症、左心疾患による肺高血圧症、肺疾患及び低酸素による肺高血圧症、慢性血栓塞栓症肺高血圧症並びに原因不明の複合式要因による肺高血圧症に対する治療効果を評価することができる。
【００９３】
上記の肺高血圧症の治療剤又は予防剤は、ヒトに対して投与した場合に優れた肺高血圧症の治療効果又は予防効果を示す。また、ヒト以外の哺乳類に対して投与した場合にも、優れた肺高血圧症の治療効果又は予防効果を示す。ここでヒト以外の哺乳類としては、例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ネコ、イヌ、ウシ、ヒツジ又はサルが挙げられる。
【００９４】
上記の肺高血圧症の治療剤又は予防剤の投与形態としては、ニペコチン酸誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩と、肺血管拡張薬（例えば、プロスタサイクリン誘導体、ホスホジエステラーゼ阻害剤及び／又はエンドセリンレセプター拮抗剤）とを、両者の混合物すなわち配合剤をそのまま又は医薬として許容される担体をさらに配合して、経口的又は非経口的に投与することができる。あるいは、両者を配合剤としてではなく、それぞれ単独で、すなわち単剤として準備しておき、これらをそのまま又は医薬として許容される担体をさらにそれぞれに配合して、同時に投与することもできる。さらには、それぞれの単剤を適当な間隔をおいて相前後して投与することも可能である。これらの場合、それぞれの単剤の剤形及び投与経路は同一である必要はなく、それぞれ異なっていても構わない。なお、上記の「適当な間隔」は、臨床上又は動物実験により確認することができる。
【００９５】
単剤又は配合剤として経口投与する場合の剤形としては、例えば、錠剤（糖衣錠、フィルムコーティング錠を含む）、丸剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤（ソフトカプセル剤、マイクロカプセル剤を含む）、シロップ剤、乳剤又は懸濁剤が挙げられ、また、非経口投与する場合の剤形としては、例えば、注射剤、注入剤、点滴剤又は坐剤が挙げられる。さらには、適当な基剤（例えば、酪酸の重合体、グリコール酸の重合体、酪酸−グリコール酸の共重合体、酪酸の重合体とグリコール酸の重合体との混合物又はポリグリセロール脂肪酸エステル等）と組合せて、徐放性製剤とすることも有効である。
【００９６】
上記剤形の単剤又は配合剤の調製は、製剤分野で一般的に用いられている公知の製造方法に従って行うことができる。この場合、必要に応じて、製剤分野において一般的に用いられる賦形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、甘味剤、界面活性剤、懸濁化剤又は乳化剤等を含有させて製造することができる。
【００９７】
単剤又は配合剤の錠剤としての調製は、賦形剤、結合剤、崩壊剤又は滑沢剤等を含有させて行うことができ、丸剤及び顆粒剤としての調製は、賦形剤、結合剤又は崩壊剤等を含有させて行うことができる。また、散剤及びカプセル剤としての調製は賦形剤等を、シロップ剤としての調製は甘味剤等を、乳剤及び懸濁剤としての調製は界面活性剤、懸濁化剤又は乳化剤等を、それぞれ含有させて行うことができる。
【００９８】
上記の賦形剤としては、例えば、乳糖、ブドウ糖、デンプン、ショ糖、微結晶セルロース、カンゾウ末、マンニトール、炭酸水素ナトリウム、リン酸カルシウム又は硫酸カルシウムが挙げられる。
【００９９】
上記の結合剤としては、例えば、デンプンのり液、アラビアゴム液、ゼラチン液、トラガント液、カルボキシメチルセルロース液、アルギン酸ナトリウム液又はグリセリンが挙げられる。
【０１００】
上記の崩壊剤としては、例えば、デンプン又は炭酸カルシウムが挙げられる。
【０１０１】
上記の滑沢剤としては、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム又は精製タルクが挙げられる。
【０１０２】
上記の甘味剤としては、例えば、ブドウ糖、果糖、転化糖、ソルビトール、キシリトール、グリセリン又は単シロップが挙げられる。
【０１０３】
上記の界面活性剤としては、例えば、ラウリル硫酸ナトリウム、ポリソルベート８０、ソルビタンモノ脂肪酸エステル又はステアリン酸ポリオキシル４０が挙げられる。
【０１０４】
上記の懸濁化剤としては、例えば、アラビアゴム、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース又はベントナイトが挙げられる。
【０１０５】
上記の乳化剤としては、例えば、アラビアゴム、トラガント、ゼラチン又はポリソルベート８０が挙げられる。
【０１０６】
さらに上記剤形の単剤又は配合剤の調製では、製剤分野において一般的に用いられる着色剤、保存剤、芳香剤、矯味剤、安定剤又は粘稠剤等を添加することができる。
【０１０７】
ニペコチン酸誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩と、肺血管拡張薬（例えば、プロスタサイクリン誘導体、ホスホジエステラーゼ阻害剤及び／又はエンドセリンレセプター拮抗剤）との投与量比又は配合比は、投与対象、投与ルート、対象疾患、症状又は配合の組み合わせ等により適宜選択することができる。
【０１０８】
プロスタサイクリン誘導体を含有する製剤の１日あたりの投与量は、患者の状態や体重、プロスタサイクリン誘導体の種類、投与経路等によって異なるが、例えば、ベラプロストナトリウムを経口投与する場合には成人（体重約６０ｋｇ）であれば０．１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは１μｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの範囲で１日１〜４回に分けて投与することが好ましい。
【０１０９】
ホスホジエステラーゼ阻害剤を含有する製剤の１日あたりの投与量は、患者の状態や体重、ホスホジエステラーゼ阻害剤の種類、投与経路等によって異なるが、例えば、タダラフィルを経口投与する場合には成人（体重約６０ｋｇ）であれば５〜８０ｍｇの範囲で１〜３回に分けて投与することが好ましく、シルデナフィル又はその薬理学的に許容される塩を経口投与する場合には成人（体重約６０ｋｇ）であれば５〜９０ｍｇの範囲で１〜３回に分けて投与することが好ましい。
【０１１０】
エンドセリンレセプター拮抗剤を含有する製剤の１日あたりの投与量は、例えば、アンブリセンタンを経口投与する場合には成人（体重約６０ｋｇ）であれば１〜２０ｍｇの範囲で１〜３回に分けて投与することが好ましく、ボセンタン又はその水和物を経口投与する場合には成人（体重約６０ｋｇ）であれば１０〜４００ｍｇの範囲で１〜３回に分けて投与することが好ましい。
【０１１１】
ニペコチン酸誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩を含有する製剤の１日あたりの投与量は、例えば、経口投与する場合には成人（体重約６０ｋｇ）であれば１〜１０００ｍｇの範囲で１〜３回に分けて投与することが好ましく、非経口投与する場合には、注射剤であれば体重１ｋｇあたり０．０１〜１００ｍｇの範囲で静脈注射により投与することが望ましい。
【実施例】
【０１１２】
以下、本発明を実施例に基づき具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製は、特に記述のない場合、「ＨＩ−ＦＬＡＳＨ」カラム（山善社）及びＰｕｒｉｆ−α２（昭光サイエンティフィックス社）を用いて行った。【０１１３】
（実施例１）
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−プロピオンアミドシクロブタンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
〔ステップ１〕
４−ブロモ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンズアルデヒドの合成：
−７８℃下、４−ブロモ−１−ヨード−２−（トリフルオロメトキシ）ベンゼン（２５ｇ、６８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（０．４０Ｌ）溶液に、ｎ−ブチルリチウムヘキサン溶液（１．６規定、８６ｍＬ、０．１４ｍｏｌ）を１．５時間かけて滴下した。−７８℃下で１時間撹拌した後、反応溶液に、ＤＭＦ（１１ｍＬ、０．１４ｍｍｏｌ）を１０分間かけて滴下した。−７８℃下で２時間撹拌した後、反応溶液に、クエン酸水溶液（０．２５Ｍ、０．２５Ｌ、６３ｍｍｏｌ）を加え、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、４−ブロモ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンズアルデヒド（以下、参考例化合物１）を１６ｇ（８７％）得た。【０１１４】
〔ステップ２〕
（４−ブロモ−２−（トリフルオロメトキシ）フェニル）メタノールの合成：
−１０℃下、参考例化合物１（１６ｇ、５９ｍｍｏｌ）のメタノール（０．２３Ｌ）溶液に、水素化ホウ素ナトリウム（２．４ｇ、６３ｍｍｏｌ）を加えた。−１０℃下で１０分間撹拌した後、反応溶液に、アセトン（１０ｍＬ）、１規定塩酸（１０ｍＬ）を加えた。反応溶液を減圧濃縮し、得られた粗生成物に、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝５０：１→１：１）で精製し、（４−ブロモ−２−（トリフルオロメトキシ）フェニル）メタノール（以下、参考例化合物２）を１５ｇ（９１％）得た。【０１１５】
〔ステップ３〕
４−ブロモ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル  メタンスルホナートの合成：
氷冷下、参考例化合物２（２．０ｇ、７．４ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（１．２ｍＬ、８．９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）溶液に、メタンスルホニルクロリド（０．９３ｇ、８．１ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で３時間撹拌した後、反応溶液に、水を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、４−ブロモ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル  メタンスルホナート（以下、参考例化合物３）を２．６ｇ（定量的）得た。【０１１６】
〔ステップ４〕
２−（４−ブロモ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）イソインドリン−１，３−ジオンの合成：
氷冷下、参考例化合物３（２．６ｇ、７．４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）溶液に、フタルイミドカリウム（２．１ｇ、１１ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１４時間撹拌した後、反応溶液に、水を加えた。析出した固体をろ取し、水で洗浄し、乾燥し、２−（４−ブロモ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）イソインドリン−１，３−ジオン（以下、参考例化合物４）を２．７ｇ（９１％）得た。【０１１７】
〔ステップ５〕
（４−ブロモ−２−（トリフルオロメトキシ）フェニル）メタンアミンの合成：
室温下、参考例化合物４（２．６ｇ、６．５ｍｍｏｌ）のメタノール（４０ｍＬ）溶液に、ヒドラジン一水和物（０．９８ｇ、１９ｍｍｏｌ）を加えた。６０℃下で２時間撹拌した後、室温下で析出した固体をろ別した。ろ液を減圧濃縮し、得られた粗生成物を酢酸エチルに溶解させ、水、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、（４−ブロモ−２−（トリフルオロメトキシ）フェニル）メタンアミン（以下、参考例化合物５）を１．５ｇ（８５％）得た。【０１１８】
〔ステップ６〕
（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（４−ブロモ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシラートの合成：
室温下、参考例化合物５（０．５０ｇ、１．９ｍｍｏｌ）、（Ｒ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−３−カルボン酸（０．４３ｇ、１．９ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．５３ｇ、４．１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３．０ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（０．７７ｇ、２．０ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１５時間撹拌した後、反応溶液に、酢酸エチルを加え、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝９：１→１：１）で精製し、（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（４−ブロモ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシラート（以下、参考例化合物６）を０．８９ｇ（定量的）得た。【０１１９】
〔ステップ７〕
（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシラートの合成：
室温下、参考例化合物６（０．０５０ｇ、０．１０ｍｍｏｌ）、シアン化亜鉛（０．０１２ｇ、０．１０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．０ｍＬ）溶液に、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（０）（０．０３０ｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）を加えた。１５０℃下で３０分間撹拌した後、室温下で反応溶液に、水を加え、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を水、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝２０：１→１：２）で精製し、（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシラート（以下、参考例化合物７）を０．０１７ｇ（３９％）得た。【０１２０】
〔ステップ８〕
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物７（６．９ｇ、１６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（０．１６Ｌ）溶液に、トリフルオロ酢酸（以下、ＴＦＡ）（３５ｍＬ、０．４５ｍｏｌ）を加えた。室温下で１時間撹拌した後、反応溶液を減圧濃縮した。得られた粗生成物をジクロロメタンに溶解させ、飽和炭酸ナトリウム水溶液で中和し、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、参考例化合物８）を５．２ｇ（９８％）得た。【０１２１】
〔ステップ９〕
（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  （１−（３−（（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボニル）シクロブチル）カルバマートの合成：
氷冷下、参考例化合物８（０．２０ｇ、０．６７ｍｍｏｌ）、１−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）シクロブタンカルボン酸（０．１５ｇ、０．６７ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．２４ｍＬ、１．３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（０．７０ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（０．２８ｇ、０．７３ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で８６時間撹拌した後、反応溶液に、１規定塩酸を加え、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（富士シリシア化学社製アミンシリカゲルＤＭ１０２０、溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝７：３→４：６）で精製し、（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  （１−（３−（（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボニル）シクロブチル）カルバマート（以下、参考例化合物９）を０．２５ｇ（７８％）得た。【０１２２】
〔ステップ１０〕
（Ｒ）−１−（１−アミノシクロブタンカルボニル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物９（０．２５ｇ、０．４７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１．４ｍＬ）溶液に、ＴＦＡ（０．７０ｍＬ、９．１ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で３時間撹拌した後、反応溶液を減圧濃縮した。得られた粗生成物をジクロロメタンに溶解させ、飽和炭酸ナトリウム水溶液で中和し、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、（Ｒ）−１−（１−アミノシクロブタンカルボニル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、参考例化合物１０）を０．１８ｇ（９０％）得た。【０１２３】
〔ステップ１１〕
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−プロピオンアミドシクロブタンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物１０（７．６ｇ、１８ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（５．５ｍＬ、４０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５４ｍＬ）溶液に、プロピオニルクロリド（１．８ｇ、２０ｍｍｏｌ）を加えた。氷冷下で１時間撹拌した後、反応溶液に、水、１規定塩酸を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；クロロホルム：メタノール＝９９：１→９５：５）で精製し、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−プロピオンアミドシクロブタンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物１）を６．２ｇ（７１％）得た。【０１２４】
（実施例２）
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（２−メチル−２−（メチルスルホンアミド）プロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
〔ステップ１〕
（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  （１−（３−（（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−イル）−２−メチル−１−オキソプロパン−２−イル）カルバマートの合成：
氷冷下、参考例化合物８（３．５ｇ、１１ｍｍｏｌ）、２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−メチルプロパン酸（２．６ｇ、１３ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（４．１ｍＬ、２４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４０ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（４．９ｇ、１３ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１時間撹拌した後、反応溶液に、水、１規定塩酸を加え、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（富士シリシア化学社製アミンシリカゲルＤＭ１０２０、溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝９：１→４：６）で精製し、（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  （１−（３−（（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−イル）−２−メチル−１−オキソプロパン−２−イル）カルバマート（以下、参考例化合物１１）を５．２ｇ（９５％）得た。【０１２５】
〔ステップ２〕
（Ｒ）−１−（２−アミノ−２−メチルプロパノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物１１（５．２ｇ、１０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（０．１０Ｌ）溶液に、ＴＦＡ（２５ｍＬ、０．３２ｍｏｌ）を加えた。室温下で１．５時間撹拌した後、反応溶液を減圧濃縮した。得られた粗生成物をジクロロメタンに溶解させ、飽和炭酸ナトリウム水溶液で中和し、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、（Ｒ）−１−（２−アミノ−２−メチルプロパノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、参考例化合物１２）を３．４ｇ（８２％）得た。【０１２６】
〔ステップ３〕
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（２−メチル−２−（メチルスルホンアミド）プロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物１２（２．３ｇ、５．６ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（１．６ｍＬ、１１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１５ｍＬ）溶液に、メタンスルホニルクロリド（０．９７ｇ、８．５ｍｍｏｌ）を加えた。氷冷下で５分間撹拌した後、反応溶液に、水、１規定塩酸を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；クロロホルム：メタノール＝９９：１→９５：５）で精製し、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（２−メチル−２−（メチルスルホンアミド）プロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物２）を２．４ｇ（８７％）得た。【０１２７】
（実施例３）
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（メチルスルホンアミド）シクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
〔ステップ１〕
（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  （１−（３−（（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボニル）シクロプロピル）カルバマートの合成：
氷冷下、参考例化合物８（０．６７ｇ、２．０ｍｍｏｌ）、１−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）シクロプロパンカルボン酸（０．４９ｇ、２．４ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（１．１ｍＬ、６．１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５．０ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（１．１ｇ、２．５ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１時間撹拌した後、反応溶液に、水、１規定塩酸を加え、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（富士シリシア化学社製アミンシリカゲルＤＭ１０２０、溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝９：１→４：６）で精製し、（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  （１−（３−（（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボニル）シクロプロピル）カルバマート（以下、参考例化合物１３）を０．９２ｇ（８８％）得た。【０１２８】
〔ステップ２〕
（Ｒ）−１−（１−アミノシクロプロパンカルボニル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物１３（０．９２ｇ、１．８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）溶液に、ＴＦＡ（４．７ｍＬ、６１ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１．５時間撹拌した後、反応溶液を減圧濃縮した。得られた粗生成物をジクロロメタンに溶解させ、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で中和し、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、（Ｒ）−１−（１−アミノシクロプロパンカルボニル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、参考例化合物１４）を０．６３ｇ（８７％）得た。【０１２９】
〔ステップ３〕
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（メチルスルホンアミド）シクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物１４（０．６３ｇ、１．５ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（１．１ｍＬ、７．７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５．０ｍＬ）溶液に、メタンスルホニルクロリド（０．２７ｇ、２．３ｍｍｏｌ）を加えた。氷冷下で１．５時間撹拌した後、反応溶液に、水、１規定塩酸を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；クロロホルム：メタノール＝９９：１→９５：５）で精製し、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（メチルスルホンアミド）シクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物３）を０．５６ｇ（７４％）得た。【０１３０】
（実施例４）
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（トリフルオロメチル）シクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
１−（トリフルオロメチル）シクロプロパンカルボン酸（０．０５４ｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ９〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（トリフルオロメチル）シクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物４）を０．０４４ｇ（５８％）得た。【０１３１】
（実施例５）
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（メチルスルホンアミド）シクロブタンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物１０（０．０２０ｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）を用いて実施例２〔ステップ３〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（メチルスルホンアミド）シクロブタンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物５）を０．０１７ｇ（７１％）得た。【０１３２】
（実施例６）
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−イソブチルアミドシクロブタンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
イソブチリルクロリド（０．００５５ｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ１１〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−イソブチルアミドシクロブタンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物６）を０．０２２ｇ（９５％）得た。【０１３３】
（実施例７）
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−ピバルアミドシクロブタンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
ピバロイルクロリド（０．００６３ｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ１１〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−ピバルアミドシクロブタンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物７）を０．０１７ｇ（７２％）得た。【０１３４】
（実施例８）
（Ｒ）−１−（１−アセトアミドシクロペンタンカルボニル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
〔ステップ１〕
（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  （１−（３−（（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボニル）シクロペンチル）カルバマートの合成：
１−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）シクロペンタンカルボン酸（０．０７８ｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ９〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  （１−（３−（（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボニル）シクロペンチル）カルバマート（以下、参考例化合物１５）を０．１３ｇ（７７％）得た。【０１３５】
〔ステップ２〕
（Ｒ）−１−（１−アミノシクロペンタンカルボニル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物１５（０．１３ｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ１０〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−１−（１−アミノシクロペンタンカルボニル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、参考例化合物１６）を０．０５１ｇ（４９％）得た。【０１３６】
〔ステップ３〕
（Ｒ）−１−（１−アセトアミドシクロペンタンカルボニル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物１６（０．０２０ｇ、０．０４６ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（０．０１９ｍＬ、０．１４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（０．２０ｍＬ）溶液に、無水酢酸（０．００７０ｇ、０．０６８ｍｍｏｌ）を加えた。氷冷下で１時間撹拌した後、反応溶液に、水、１規定塩酸を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；クロロホルム：メタノール＝９９：１→９５：５）で精製し、（Ｒ）−１−（１−アセトアミドシクロペンタンカルボニル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物８）を０．０１４ｇ（６２％）得た。【０１３７】
（実施例９）
（Ｒ）−１−（１−アセトアミドシクロブタンカルボニル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物１０（０．０２０ｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）を用いて実施例８〔ステップ３〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−１−（１−アセトアミドシクロブタンカルボニル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物９）を０．０１３ｇ（６０％）得た。【０１３８】
（実施例１０）
（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロ−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ベンジル）−１−（２−メチル−２−（メチルスルホンアミド）プロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
〔ステップ１〕
４−クロロ−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ベンゾニトリルの合成：
氷冷下、２，２，２−トリフルオロエタノール（１．５ｇ、１５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液に、水素化ナトリウム（５５重量％、０．６７ｇ、１５ｍｍｏｌ）を加えた。氷冷下で１０分間撹拌した後、室温下で３０分間撹拌した。氷冷下、反応溶液に、４−クロロ−２−フルオロベンゾニトリル（２．０ｇ、１３ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１時間撹拌した後、氷冷下、反応溶液に、０．１規定塩酸を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝１０：０→３：１）で精製し、４−クロロ−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ベンゾニトリル（以下、参考例化合物１７）を２．６ｇ（８６％）得た。【０１３９】
〔ステップ２〕
（４−クロロ−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）フェニル）メタンアミンの合成：
氷冷下、参考例化合物１７（２．５ｇ、１１ｍｍｏｌ）のジエチルエーテル（３０ｍＬ）溶液に、水素化アルミニウムリチウム（１．０ｇ、２７ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で４時間撹拌した後、氷冷下、反応溶液に、ＴＨＦ（２０ｍＬ）、水（１．０ｍＬ）、１規定水酸化ナトリウム水溶液（１．０ｍＬ）、水（３．０ｍＬ）を加えた。反応溶液をろ過後、ろ液を減圧濃縮し、（４−クロロ−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）フェニル）メタンアミン（以下、参考例化合物１８）を２．４ｇ（９４％）得た。【０１４０】
〔ステップ３〕
（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（４−クロロ−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシラートの合成：
参考例化合物１８（２．４ｇ、１０ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ６〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（４−クロロ−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシラート（以下、参考例化合物１９）を４．５ｇ（定量的）得た。【０１４１】
〔ステップ４〕
（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロ−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物１９（２．０ｇ、４．４ｍｍｏｌ）に、濃塩酸（１０ｍＬ、０．１２ｍｏｌ）を加えた。室温下で３時間撹拌した後、反応溶液を減圧濃縮した。得られた粗生成物をジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解させ、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）を加えた。室温下で３０分間撹拌した後、反応溶液に、水を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロ−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、参考例化合物２０）を１．４ｇ（８７％）得た。【０１４２】
〔ステップ５〕
（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  （１−３−（（４−クロロ−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−イル）−２−メチル−１−オキソプロパン−２−イル）カルバマートの合成：
参考例化合物２０（０．６０ｇ、１．７ｍｍｏｌ）を用いて実施例２〔ステップ１〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  （１−３−（（４−クロロ−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−イル）−２−メチル−１−オキソプロパン−２−イル）カルバマート（以下、参考例化合物２１）を０．７７ｇ（８４％）得た。【０１４３】
〔ステップ６〕
（Ｒ）−１−（２−アミノ−２−メチルプロパノイル）−Ｎ−（４−クロロ−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物２１（０．８３ｇ、１．５ｍｍｏｌ）に、ＴＦＡ（１０ｍＬ）を加えた。室温下で３時間撹拌した後、反応溶液を減圧濃縮した。得られた粗生成物をジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解させ、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）を加えた。室温下で３０分間撹拌した後、反応溶液に、水を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、（Ｒ）−１−（２−アミノ−２−メチルプロパノイル）−Ｎ−（４−クロロ−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、参考例化合物２２）を０．６５ｇ（９６％）得た。【０１４４】
〔ステップ７〕
（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロ−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ベンジル）−１−（２−メチル−２−（メチルスルホンアミド）プロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物２２（０．０８０ｇ、０．１８ｍｍｏｌ）、ピリジン（０．０３０ｍＬ、０．３７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２．０ｍＬ）溶液に、メタンスルホニルクロリド（０．０２３ｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１０時間撹拌した後、反応溶液に、水を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を０．１規定塩酸、水、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；クロロホルム：メタノール＝１００：１→１０：１）で精製し、（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロ−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ベンジル）−１−（２−メチル−２−（メチルスルホンアミド）プロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物１０）を０．０３０ｇ（３２％）得た。【０１４５】
（実施例１１）
（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アセトアミド−３−メチルブタノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
〔ステップ１〕
（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アミノ−３−メチルブタノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物８（０．２１ｇ、０．６５ｍｍｏｌ）、（Ｒ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−メチルブタン酸（０．２４ｇ、０．７２ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．１４ｍＬ、０．７８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３．５ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（０．３０ｇ、０．７８ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１時間撹拌した後、反応溶液に、水、１規定塩酸を加え、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝９：１→１：９）で精製し、粗生成物を０．３０ｇ得た。氷冷下、得られた粗生成物（０．３０ｇ）のＤＭＦ（２．０ｍＬ）溶液に、モルホリン（０．２０ｍＬ、２．３ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で２．５時間撹拌した後、反応溶液に、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；クロロホルム：メタノール＝９９：１→９０：１０）で精製し、（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アミノ−３−メチルブタノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、参考例化合物２３）を０．１８ｇ（２段階収率６５％）得た。【０１４６】
〔ステップ２〕
（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アセトアミド−３−メチルブタノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物２３（０．０２０ｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）を用いて実施例８〔ステップ３〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アセトアミド−３−メチルブタノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物１１）を０．０１８ｇ（８３％）得た。【０１４７】
（実施例１２）
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（（Ｒ）−３−メチル−２−（メチルスルホンアミド）ブタノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物２３（０．０２０ｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）を用いて実施例２〔ステップ３〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（（Ｒ）−３−メチル−２−（メチルスルホンアミド）ブタノイル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物１２）を０．０２０ｇ（８３％）得た。【０１４８】
（実施例１３）
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（エチルスルホンアミド）シクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物１４（０．０５０ｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．０４３ｍＬ、０．２４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３．０ｍＬ）溶液に、エタンスルホニルクロリド（０．０１７ｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で３時間撹拌した後、ピリジン（０．３０ｍＬ、３．７ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で３時間撹拌した後、反応溶液に、水を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を０．１規定塩酸、水、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；クロロホルム：メタノール＝１００：１→１０：１）で精製し、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（エチルスルホンアミド）シクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物１３）を０．００８０ｇ（１３％）得た。【０１４９】
（実施例１４）
（Ｒ）−Ｎ−（４−カルバモイル−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（２−メチル−２−（メチルスルホンアミド）プロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、実施例化合物２（０．０２０ｇ、０．０４１ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（０．００２８ｇ、０．０２０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（０．３８ｍＬ）溶液に、過酸化水素水（３０重量％、０．０２１ｍＬ）を加えた。室温下で１８時間撹拌した後、反応溶液に、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層をチオ硫酸ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；クロロホルム：メタノール＝９９：１→８５：１５）で精製し、（Ｒ）−Ｎ−（４−カルバモイル−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（２−メチル−２−（メチルスルホンアミド）プロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物１４）を０．０１３ｇ（６３％）得た。【０１５０】
（実施例１５）
（Ｒ）−Ｎ−（４−カルバモイル−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（２−メチル−２−（メチルスルホンアミド）シクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
実施例化合物３（０．０２５ｇ、０．０５１ｍｍｏｌ）を用いて実施例１４と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−カルバモイル−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（２−メチル−２−（メチルスルホンアミド）シクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物１５）を０．０２０ｇ（７７％）得た。【０１５１】
（実施例１６）
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（２−ヒドロキシ−２−メチルプロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
２−ヒドロキシ−２−メチルプロパン酸（０．１５ｇ、０．４６ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ９〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（２−ヒドロキシ−２−メチルプロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物１６）を０．１２ｇ（６２％）得た。【０１５２】
（実施例１７）
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−ピバロイルピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物８（０．１５ｇ、０．４６ｍｍｏｌ）、ピバロイルクロリド（０．０６６ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ１１〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−ピバロイルピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物１７）を０．１９ｇ（定量的）得た。【０１５３】
（実施例１８）
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（Ｎ−メチルメチルスルホンアミド）シクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
〔ステップ１〕
１−（メチルスルホンアミド）シクロプロパンカルボン酸エチルの合成：
氷冷下、１−アミノシクロプロパンカルボン酸エチル塩酸塩（２．０ｇ、１２ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（６．３ｍＬ、３６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３５ｍＬ）溶液に、メタンスルホニルクロリド（１．４ｇ、１２ｍｍｏｌ）を加えた。氷冷下で３時間撹拌した後、反応溶液に、１規定塩酸を加え、酸性にした後、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１→１：２）で精製し、１−（メチルスルホンアミド）シクロプロパンカルボン酸エチル（以下、参考例化合物２４）を２．３ｇ（６０％）得た。【０１５４】
〔ステップ２〕
１−（Ｎ−メチルメチルスルホンアミド）シクロプロパンカルボン酸エチルの合成：
氷冷下、参考例化合物２４（２．０ｇ、９．７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液に、水素化ナトリウム（５５重量％、０．５１ｇ、１２ｍｍｏｌ）を加えた。氷冷下で１０分間撹拌した後、室温下で３０分間撹拌した。氷冷下、反応溶液に、ヨウ化メチル（０．７８ｍＬ、１３ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１４時間撹拌した後、氷冷下、反応溶液に、０．１規定塩酸を加え、ヘキサン：酢酸エチル混合溶媒（ヘキサン：酢酸エチル＝１：２）で抽出した。有機層を水、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１→１：１）で精製し、１−（Ｎ−メチルメチルスルホンアミド）シクロプロパンカルボン酸エチル（以下、参考例化合物２５）を１．８ｇ（８４％）得た。【０１５５】
〔ステップ３〕
１−（Ｎ−メチルメチルスルホンアミド）シクロプロパンカルボン酸の合成：
室温下で、参考例化合物２５（１．８ｇ、７．９ｍｍｏｌ）のメタノール（２０ｍＬ）溶液に、１規定水酸化ナトリウム水溶液（１２ｍＬ、１２ｍｍｏｌ）を加えた。５０℃下で３時間撹拌した後、室温下、反応溶液に、１規定塩酸を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、１−（Ｎ−メチルメチルスルホンアミド）シクロプロパンカルボン酸（以下、参考例化合物２６）を０．８８ｇ（５８％）得た。【０１５６】
〔ステップ４〕
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（Ｎ−メチルメチルスルホンアミド）シクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物２６（０．１３ｇ、０．６７ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ９〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（Ｎ−メチルメチルスルホンアミド）シクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物１８）を０．１７ｇ（６０％）得た。【０１５７】
（実施例１９）
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（３−ヒドロキシ−２，２−ジメチルプロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
室温下、３−ヒドロキシ−２，２−ジメチルプロパン酸メチル（１．０ｇ、７．６ｍｍｏｌ）のメタノール（７．５ｍＬ）溶液に、１規定水酸化ナトリウム水溶液（９．１ｍＬ）を加えた。室温下で４時間撹拌した後、反応溶液を減圧濃縮した。得られた粗生成物に、１規定塩酸を加え、減圧濃縮した。氷冷下、得られた粗生成物（０．１０ｇ）、ＤＩＰＥＡ（０．３０ｍＬ、１．７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．６ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（０．３５ｇ、０．９３ｍｍｏｌ）を加えた。氷冷下で１５分間撹拌した後、反応溶液に、参考例化合物８（０．２８ｇ、０．８５ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で一晩撹拌した後、反応溶液に、水を加え、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を水、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝８：２→酢酸エチルのみ）で精製し、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（３−ヒドロキシ−２，２−ジメチルプロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物１９）を０．２４ｇ（２段階収率６５％）得た。【０１５８】
（実施例２０）
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−ヒドロキシシクロヘキサンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、シクロヘキサノン（３．０ｇ、３１ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（２．２ｇ、３４ｍｍｏｌ）の水（５．６ｍＬ）溶液に、硫酸水溶液（４０重量％、５．６ｍＬ）を加えた。室温下で１時間撹拌した後、反応溶液に、水を加え、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物に、濃塩酸（６０ｍＬ）を加えた。８０℃下で１６時間撹拌した後、反応溶液を減圧濃縮し、粗生成物を４．０ｇ得た。氷冷下、得られた粗生成物（０．１６ｇ）、参考例化合物８（０．１５ｇ、０．４６ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．２４ｍＬ、１．４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．０ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（０．４５ｇ、０．６０ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で２時間撹拌した後、反応溶液に、水、１規定塩酸を加え、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（富士シリシア化学社製アミンシリカゲルＤＭ１０２０、溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝７：３→４：６）で精製し、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−ヒドロキシシクロヘキサンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物２０）を０．０６１ｇ（２段階収率２９％）得た。【０１５９】
（実施例２１）
（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アセトアミドブタノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
〔ステップ１〕
（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタン酸の合成：
氷冷下、（Ｒ）−２−アミノブタン酸（２．０ｇ、１９ｍｍｏｌ）、炭酸水素ナトリウム（１．６ｇ、１９ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン：水（１，４−ジオキサン：水＝３：１０、２６ｍＬ）混合溶液に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボナート（４．７ｇ、２１ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１２０時間撹拌した後、反応溶液を減圧濃縮した。得られた粗生成物をクロロホルムに溶解させ、１規定塩酸を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタン酸（以下、参考例化合物２７）を２．０ｇ（定量的）得た。【０１６０】
〔ステップ２〕
ｔｅｒｔ−ブチル  （（Ｒ）−１−（（Ｒ）−３−（（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−イル）−１−オキソブタン−２−イル）カルバマートの合成：
参考例化合物２７（０．２０ｇ、１．０ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ９〕と同様の反応を行うことにより、ｔｅｒｔ−ブチル  （（Ｒ）−１−（（Ｒ）−３−（（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−イル）−１−オキソブタン−２−イル）カルバマート（以下、参考例化合物２８）を０．４７ｇ（定量的）得た。【０１６１】
〔ステップ３〕
（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アミノブタノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物２８（０．４７ｇ、０．９１ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ１０〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アミノブタノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、参考例化合物２９）を０．３８ｇ（定量的）得た。【０１６２】
〔ステップ４〕
（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アセトアミドブタノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物２９（０．０９１ｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を用いて実施例８〔ステップ３〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アセトアミドブタノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物２１）を０．０８５ｇ（８５％）得た。【０１６３】
（実施例２２）
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（（Ｒ）−２−（メチルスルホンアミド）ブタノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物２９（０．０９６ｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を用いて実施例２〔ステップ３〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（（Ｒ）−２−（メチルスルホンアミド）ブタノイル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物２２）を０．０９０ｇ（７９％）得た。【０１６４】
（実施例２３）
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−シアノシクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
１−シアノシクロプロパンカルボン酸（０．０３４ｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ９〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−シアノシクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物２３）を０．０８１ｇ（６３％）得た。【０１６５】
（実施例２４）
（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アセトアミドプロパノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
〔ステップ１〕
（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アミノプロパノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
室温下、参考例化合物８（０．３５ｇ、１．１ｍｍｏｌ）、（Ｒ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパン酸（０．３７ｇ、１．２ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．５６ｍＬ、３．２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．０ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（０．５３ｇ、１．４ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で３０分間撹拌した後、反応溶液に、水、１規定塩酸を加え、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（富士シリシア化学社製アミンシリカゲルＤＭ１０２０、溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝９：１→１：９）で精製し、粗生成物を０．５３ｇ得た。室温下、得られた粗生成物（０．５３ｇ）のＤＭＦ（４．０ｍＬ）溶液に、モルホリン（０．３６ｍＬ、４．１ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で６時間撹拌した後、反応溶液に、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（富士シリシア化学社製アミンシリカゲルＤＭ１０２０、溶離液；クロロホルム：メタノール＝９９：１→９５：５）で精製し、（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アミノプロパノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、参考例化合物３０）を０．２９ｇ（２段階収率６７％）得た。【０１６６】
〔ステップ２〕
（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アセトアミドプロパノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物３０（０．１０ｇ、０．２５ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（０．１１ｍＬ、０．１４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１．０ｍＬ）溶液に、無水酢酸（０．０３２ｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を加えた。氷冷下で５分間撹拌した後、反応溶液に、水、１規定塩酸を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；クロロホルム：メタノール＝９９：１→９０：１０）で精製し、（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アセトアミドプロパノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物２４）を０．１１ｇ（定量的）得た。【０１６７】
（実施例２５）
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（（Ｒ）−２−（メチルスルホンアミド）プロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物３０（０．１０ｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を用いて実施例２〔ステップ３〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（（Ｒ）−２−（メチルスルホンアミド）プロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物２５）を０．０９９ｇ（８３％）得た。【０１６８】
（実施例２６）
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−イソブチルアミドシクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物１４（０．０２０ｇ、０．０４９ｍｍｏｌ）、イソブチリルクロリド（０．００６２ｇ、０．０５８ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ１１〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−イソブチルアミドシクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物２６）を０．０１７ｇ（７１％）得た。【０１６９】
（実施例２７）
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−ピバルアミドシクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物１４（０．０２０ｇ、０．０４９ｍｍｏｌ）、ピバロイルクロリド（０．００６４ｇ、０．０５８ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ１１〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−ピバルアミドシクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物２７）を０．０１８ｇ（７３％）得た。【０１７０】
（実施例２８）
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（４−（メチルスルホンアミド）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
〔ステップ１〕
８−オキサ−１，３−ジアザスピロ［４．５］デカン−２，４−ジオンの合成：
室温下、ジヒドロ−２Ｈ−ピラン４（３Ｈ）−オン（２．０ｇ、２０ｍｍｏｌ）、炭酸アンモニウム（９．６ｇ、０．１０ｍｏｌ）、ＴＥＡ（２．８ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）の水：メタノール（水：メタノール＝１：１、６０ｍＬ）混合溶液に、シアン化カリウム（３．９ｇ、６０ｍｍｏｌ）を加えた。加熱環流下で４８時間撹拌した後、反応溶液を減圧濃縮し、溶媒を半分程度留去し、析出した固体をろ取し、水で洗浄後、乾燥し、８−オキサ−１，３−ジアザスピロ［４．５］デカン−２，４−ジオン（以下、参考例化合物３１）を１．４ｇ（４１％）得た。また、ろ液に、酸性になるまで濃塩酸を加え、析出した固体をろ取し、水で洗浄後、乾燥し、参考例化合物３１を０．８０ｇ（２４％）得た。【０１７１】
〔ステップ２〕
４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸の合成：
室温下、参考例化合物３１（２．２ｇ、１３ｍｍｏｌ）の水（３０ｍＬ）溶液に水酸化カルシウム（３．０ｇ、４１ｍｍｏｌ）を加えた。加熱環流下で４８時間撹拌した後、反応溶液をセライトろ過し、ろ物を熱湯で洗浄した。ろ液を減圧濃縮し、得られた粗生成物を水：１，４−ジオキサン：メタノール（水：１，４−ジオキサン：メタノール＝１０：１０：３、２３ｍＬ）混合溶液に溶解させた。室温下、反応溶液に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボナート（３．４ｇ、１６ｍｍｏｌ）、水酸化ナトリウム（０．５０ｇ、１３ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１５時間撹拌した後、反応溶液を減圧濃縮した。得られた粗生成物に、希塩酸（１５ｍＬ）を加え、クロロホルム：メタノール（クロロホルム：メタノール＝１０：１）混合溶液で抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸（以下、参考例化合物３２）を２．６ｇ（８２％）得た。【０１７２】
〔ステップ３〕
（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  （４−（３−（（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）カルバマートの合成：
参考例化合物３２（０．０８２ｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ９〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  （４−（３−（（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）カルバマート（以下、参考例化合物３３）を０．１０ｇ（６２％）得た。【０１７３】
〔ステップ４〕
（Ｒ）−１−（４−アミノテトラヒドロ−２Ｈ−ピランカルボニル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物３３（０．１０ｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ１０〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−１−（４−アミノテトラヒドロ−２Ｈ−ピランカルボニル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、参考例化合物３４）を０．０５０ｇ（５８％）得た。【０１７４】
〔ステップ５〕
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（４−（メチルスルホンアミド）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物３４（０．０４０ｇ、０．０８８ｍｍｏｌ）を用いて実施例２〔ステップ３〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（４−（メチルスルホンアミド）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物２８）を０．０２４ｇ（５．１％）得た。【０１７５】
（実施例２９）
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（シクロプロパンカルボキサミド）シクロブタンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
シクロプロパンカルボニルクロリド（０．００５９ｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ１１〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（シクロプロパンカルボキサミド）シクロブタンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物２９）を０．０１２ｇ（５２％）得た。【０１７６】
（実施例３０）
（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アセトアミド−３−ヒドロキシ−３−メチルブタノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
〔ステップ１〕
（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−ヒドロキシプロパン酸メチルの合成：
氷冷下、（Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシプロパン酸メチル（３．０ｇ、１９ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（８．１ｍＬ、５８ｍｍｏｌ）のメタノール（５０ｍＬ）溶液に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボナート（４．６ｇ、２１ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１４時間撹拌した後、反応溶液に、希塩酸を加えた。室温下で１時間環撹拌した後、反応溶液に、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝２０：１→２：１）で精製し、（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−ヒドロキシプロパン酸メチル（以下、参考例化合物３５）を４．１ｇ（９７％）得た。【０１７７】
〔ステップ２〕
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  （１，３−ジヒドロキシ−３−メチルブタン−２−イル）カルバメートの合成：
−７８℃下、参考例化合物３５（４．０ｇ、１８ｍｍｏｌ）のジエチルエーテル（０．１２Ｌ）溶液に、メチルマグネシウムブロミドジエチルエーテル溶液（３規定、３０ｍＬ、９１ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１時間撹拌した後、反応溶液に、氷冷下、飽和塩化アンモニウム水溶液、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を０．１規定希塩酸、水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１→３：１）で精製し、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  （１，３−ジヒドロキシ−３−メチルブタン−２−イル）カルバメート（以下、参考例化合物３６）を２．８ｇ（８４％）得た。【０１７８】
〔ステップ３〕
（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−ヒドロキシ−３−メチルブタン酸の合成：
３５℃下、参考例化合物３６（２．８ｇ、１３ｍｍｏｌ）、２，２，６，６，−テトラメチルピペリジン  １−オキシル（０．４０ｇ、２．６ｍｍｏｌ）、標準中性リン酸緩衝液（４５ｍＬ）のアセトニトリル（５０ｍＬ）溶液に、次亜塩素酸ナトリウム（０．８ｇ、０．６４ｍｍｏｌ）の水（５．０ｍＬ）溶液、亜塩素酸（２．４ｇ、２７ｍｍｏｌ）の水（１０ｍＬ）溶液を、同時に別々にゆっくり加えた。３５℃下で３時間撹拌した後、反応溶液に、酢酸（１．０ｍＬ）を加えた。３５℃下で３時間撹拌した後、反応溶液に、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液に溶解させ、酢酸エチルで洗浄した。水層に、３規定塩酸を加え、酸性にし、酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−ヒドロキシ−３−メチルブタン酸（以下、参考例化合物３７）を２．５ｇ（８４％）得た。【０１７９】
〔ステップ４〕
ｔｅｒｔ−ブチル  （（Ｒ）−１−（（Ｒ）−３−（（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシ−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバマートの合成：
室温下、参考例化合物８（０．３０ｇ、０．９２ｍｍｏｌ）、参考例化合物３７（０．２４ｇ、１．０ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．３５ｍＬ、２．０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．０ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（０．４２ｇ、１．１ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１時間撹拌した後、反応溶液に、１規定塩酸を加え、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（富士シリシア化学社製アミンシリカゲルＤＭ１０２０、溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝７：３→４：６）で精製し、ｔｅｒｔ−ブチル  （（Ｒ）−１−（（Ｒ）−３−（（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシ−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバマート（以下、参考例化合物３８）を０．４４ｇ（８９％）得た。【０１８０】
〔ステップ５〕
（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシ−３−メチルブタノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物３８（０．４４ｇ、０．８２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（８．０ｍＬ）溶液に、ＴＦＡ（１．８ｍＬ、２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で２時間撹拌した後、反応溶液を減圧濃縮した。得られた粗生成物をジクロロメタンに溶解させ、飽和炭酸ナトリウム水溶液で中和し、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシ−３−メチルブタノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、参考例化合物３９）を０．２０ｇ（５８％）得た。【０１８１】
〔ステップ６〕
（（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アセトアミド−３−ヒドロキシ−３−メチルブタノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物３９（０．０４０ｇ、０．０９０ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．０３５ｍＬ、０．２０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（０．３０ｍＬ）溶液に、無水酢酸（０．０１０ｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を加えた。氷冷下で１０分間撹拌した後、反応溶液に、水、１規定塩酸を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；クロロホルム：メタノール＝９９：１→９５：５）で精製し、（（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アセトアミド−３−ヒドロキシ−３−メチルブタノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物３０）を０．０２９ｇ（６６％）得た。【０１８２】
（実施例３１）
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−メチル−２−プロピオンアミドブタノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物３９（０．００８３ｇ、０．０１９ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ１１〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−メチル−２−プロピオンアミドブタノイル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物３１）を０．００６５ｇ（７０％）得た。【０１８３】
（実施例３２）
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−メチル−２−（メチルスルホンアミド）ブタノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物３９（０．０４０ｇ、０．０９０ｍｍｏｌ）を用いて実施例２〔ステップ３〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−メチル−２−（メチルスルホンアミド）ブタノイル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物３２）を０．０３８ｇ（８１％）得た。【０１８４】
（実施例３３）
（Ｒ）−１−（１−ブチルアミドシクロブタンカルボニル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
ブチリルクロリド（０．００６０ｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ１１〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−１−（１−ブチルアミドシクロブタンカルボニル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物３３）を０．０１８ｇ（７９％）得た。【０１８５】
（実施例３４）
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（２−シクロプロピルアセトアミド）シクロブタンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物１０（０．０２１ｇ、０．０４９ｍｍｏｌ）、２−シクロプロピル酢酸（０．００５９ｇ、０．０５８ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ９〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（２−シクロプロピルアセトアミド）シクロブタンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物３４）を０．００６５ｇ（２６％）得た。【０１８６】
（実施例３５）
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（２−シクロプロピルアセトアミド）シクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物１４（０．０２０ｇ、０．０４９ｍｍｏｌ）、２−シクロプロピル酢酸（０．００５９ｇ、０．０５８ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ９〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（２−シクロプロピルアセトアミド）シクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物３５）を０．００８３ｇ（３５％）得た。【０１８７】
（実施例３６）
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（２−メチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
〔ステップ１〕
２−メチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロパン酸エチルの合成：
室温下、２−ブロモ−２−メチルプロパン酸エチル（１．０ｇ、５．１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２５ｍＬ）溶液に、炭酸セシウム（５．０ｇ、１５ｍｍｏｌ）、１，２，４−トリアゾール−１−イドナトリウム（０．５８ｇ、６．２ｍｍｏｌ）を加えた。５０℃下で２４時間撹拌した後、反応溶液を減圧濃縮した。得られた粗生成物に、水を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝７：３→４：６）で精製し、２−メチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロパン酸エチル（以下、参考例化合物４０）を０．８４ｇ（８９％）得た。【０１８８】
〔ステップ２〕
２−メチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロパン酸ナトリウムの合成：
氷冷下、参考例化合物４０（０．６５ｇ、３．６ｍｍｏｌ）のエタノール（１８ｍＬ）溶液に、１規定水酸化ナトリウム水溶液（３．９ｍＬ、３．９ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１時間撹拌した後、反応溶液を減圧濃縮し、２−メチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロパン酸ナトリウム（以下、参考例化合物４１）を０．６７ｇ（定量的）得た。【０１８９】
〔ステップ３〕
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（２−メチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物４１（０．０９０ｇ、０．５１ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ６〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（２−メチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロパノイル）ピペリジン−３（以下、実施例化合物３６）を０．１２ｇ（５４％）得た。【０１９０】
（実施例３７）
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（２−メチル−２−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
〔ステップ１〕
２−メチル−２−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロパン酸エチルの合成：
１Ｈ−ピラゾール（０．４２ｇ、６．２ｍｍｏｌ）を用いて実施例３６〔ステップ１〕と同様の反応を行うことにより、２−メチル−２−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロパン酸エチル（以下、参考例化合物４２）を０．８１ｇ（８７％）得た。【０１９１】
〔ステップ２〕
２−メチル−２−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロパン酸ナトリウムの合成：
参考例化合物４２（０．８１ｇ、４．５ｍｍｏｌ）を用いて実施例３６〔ステップ２〕と同様の反応を行うことにより、２−メチル−２−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロパン酸ナトリウム（以下、参考例化合物４３）を０．８０ｇ得た。【０１９２】
〔ステップ３〕
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（２−メチル−２−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物４３（０．０９０ｇ、０．５１ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ９〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（２−メチル−２−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物３７）を０．１６ｇ（６８％）得た。【０１９３】
（実施例３８）
（Ｒ）−Ｎ−（２，４−ジクロロベンジル）−１−（１−ヒドロキシシクロヘキサンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
〔ステップ１〕
（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（２，４−ジクロロベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシラートの合成：
２，４−ジクロロベンジルアミン（１．５ｇ、８．５ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ６〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（２，４−ジクロロベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシラート（以下、参考例化合物４４）を２．６ｇ（定量的）得た。【０１９４】
〔ステップ２〕
（Ｒ）−Ｎ−（２，４−ジクロロベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物４４（２．６ｇ、６．７ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ８〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（２，４−ジクロロベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、参考例化合物４５）を１．８ｇ（９５％）得た。【０１９５】
〔ステップ３〕
（Ｒ）−Ｎ−（２，４−ジクロロベンジル）−１−（１−ヒドロキシシクロヘキサンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物４５（０．１０ｇ、０．３５ｍｍｏｌ）を用いて実施例２０と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（２，４−ジクロロベンジル）−１−（１−ヒドロキシシクロヘキサンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物３８）を０．０３０ｇ（２４％）得た。【０１９６】
（実施例３９）
（（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アセトアミド−３−ヒドロキシ−３−メチルブタノイル）−Ｎ−（２，４−ジクロロベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
〔ステップ１〕
ｔｅｒｔ−ブチル  （（Ｒ）−１−（（Ｒ）−３−（２，４−ジクロロベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシ−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバマートの合成：
氷冷下、参考例化合物３７（０．０８９ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）、参考例化合物４５（０．１０ｇ、０．３５ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．２０ｍＬ、１．１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（０．７０ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（０．１６ｇ、０．４２ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１時間撹拌した後、反応溶液に、１規定塩酸を加え、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝７：３→４：６）で精製し、ｔｅｒｔ−ブチル  （（Ｒ）−１−（（Ｒ）−３−（２，４−ジクロロベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシ−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバマート（以下、参考例化合物４６）を０．１５ｇ（８２％）得た。【０１９７】
〔ステップ２〕
氷冷下、参考例化合物４６（０．７０ｇ、１．７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２．０ｍＬ）溶液に、ＴＦＡ（１．０ｍＬ、１３ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で２．５時間撹拌した後、反応溶液に、ＴＦＡ（１．０ｍＬ、１３ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１時間撹拌した後、反応溶液を減圧濃縮した。得られた粗生成物をジクロロメタンに溶解させ、飽和炭酸ナトリウム水溶液で中和し、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシ−３−メチルブタノイル）−Ｎ−（２，４−ジクロロベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、参考例化合物４７）を０．４７ｇ（８４％）得た。【０１９８】
〔ステップ３〕
（（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アセトアミド−３−ヒドロキシ−３−メチルブタノイル）−Ｎ−（２，４−ジクロロベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物４７（０．０２０ｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（０．０１４ｍＬ、０．０９９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（０．１５ｍＬ）溶液に、無水酢酸（０．００５６ｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）を加えた。氷冷下で１０分間撹拌した後、反応溶液に、水、１規定塩酸を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；クロロホルム：メタノール＝９９：１→９５：５）で精製し、（（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アセトアミド−３−ヒドロキシ−３−メチルブタノイル）−Ｎ−（２，４−ジクロロベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物３９）を０．０２１ｇ（９６％）得た。【０１９９】
（実施例４０）
（Ｒ）−Ｎ−（２，４−ジクロロベンジル）−１−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−メチル−２−プロピオンアミドブタノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物４７（０．０２０ｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ１１〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（２，４−ジクロロベンジル）−１−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−メチル−２−プロピオンアミドブタノイル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物４０）を０．０１８ｇ（７７％）得た。【０２００】
（実施例４１）
（Ｒ）−Ｎ−（２，４−ジクロロベンジル）−１−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−メチル−２−（メチルスルホンアミド）ブタノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物４７（０．０２０ｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）を用いて実施例２〔ステップ３〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（２，４−ジクロロベンジル）−１−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−メチル−２−（メチルスルホンアミド）ブタノイル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物４１）を０．０２０ｇ（８５％）得た。【０２０１】
（実施例４２）
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（（Ｒ）−２−ヒドロキシプロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成： 
（Ｒ）−２−ヒドロキシプロパン酸ナトリウム（０．０１９ｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ９〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（（Ｒ）−２−ヒドロキシプロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物４２）を０．０４５ｇ（７４％）得た。【０２０２】
（実施例４３）
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（（Ｒ）−２−ヒドロキシブタノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成： 
（Ｒ）−２−ヒドロキシブタン酸（０．０１７ｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ９〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（（Ｒ）−２−ヒドロキシブタノイル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物４３）を０．０５６ｇ（８９％）得た。【０２０３】
（実施例４４）
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（（Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−メチルブタノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成： 
（Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−メチルブタン酸（０．０１８ｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ９〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（（Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−メチルブタノイル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物４４）を０．０４２ｇ（６４％）得た。【０２０４】
（比較例１）  （Ｒ）−１−（１−ヒドロキシシクロヘキサンカルボニル）−Ｎ−（５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
〔ステップ１〕
（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシラートの合成：
氷冷下、（Ｒ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−３−カルボン酸（２０ｇ、８７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１．０Ｌ）溶液に、ＤＭＦ（０．６８ｍＬ、８．７ｍｍｏｌ）、オキサリルクロリド（８．０ｍＬ、９２ｍｍｏｌ）を内温が５℃を超えないように加えた。氷冷下で３０分間撹拌した後、−２５℃下、反応溶液に、２−アミノ−５−（トリフルオロメチル）ピリジン（１５ｇ、９２ｍｍｏｌ）、ピリジン（１５ｍＬ、０．１８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（０．１０Ｌ）溶液を内温が−２０℃を超えないように加えた。氷冷下で３時間撹拌した後、反応溶液に、飽和塩化ナトリウム水溶液を内温が５℃を超えないように加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物に、ヘキサンを加えた。析出した固体をろ取し、ろ液を減圧濃縮した。同様の精製操作を２回繰り返した。得られた固体を合わせ、（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシラート（以下、参考例化合物４８）を２６ｇ（８０％）得た。【０２０５】
〔ステップ２〕
（Ｒ）−Ｎ−（５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物４８（１．５ｇ、４．０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）溶液に、ＴＦＡ（２．２ｍＬ、２８ｍｍｏｌ）を加えて、室温下撹拌した。２時間後、反応溶液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水を加えて、ジクロロメタンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、（Ｒ）−Ｎ−（５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、参考例化合物４９）を０．９５ｇ（８７％）得た。【０２０６】
〔ステップ３〕
（Ｒ）−１−（１−ヒドロキシシクロヘキサンカルボニル）−Ｎ−（５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物４９（０．１３ｇ、０．４６ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸（０．０７９ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．２４ｍＬ、１．４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．０ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（０．２３ｇ、０．６０ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１時間撹拌した後、反応溶液に、水、１規定塩酸を加え、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（富士シリシア化学社製アミンシリカゲルＤＭ１０２０、溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝９：１→３：７）で精製し、（Ｒ）−１−（１−ヒドロキシシクロヘキサンカルボニル）−Ｎ−（５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、比較例化合物１）を０．０５８ｇ（３２％）得た。【０２０７】
（比較例２）  （Ｒ）−１−（２−アセトアミドアセチル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
室温下、参考例化合物８（０．１０ｇ、０．３１ｍｍｏｌ）、Ｎ−アセチルグリシン（０．０３６ｇ、０．３１ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．１６ｍＬ、０．９２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）溶液にＨＡＴＵ（０．１４ｇ、０．３７ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１４時間撹拌した後、氷冷下、反応溶液に、１規定希塩酸を加え、ヘキサン：酢酸エチル（ヘキサン：酢酸エチル＝１：２）混合溶媒で抽出した。有機層を水、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をジエチルエーテル（１．０ｍＬ）に溶解させ、ヘキサン（４．０ｍＬ）を加えた。析出したゲル状物質をろ取し、（Ｒ）−１−（２−アセトアミドアセチル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、比較例化合物２）を０．０４０ｇ（３１％）得た。【０２０８】
表１−１〜表１−６には、実施例化合物１〜４４の物性データを示し、表２には、比較例化合物１〜２の物性データを示し、表３−１〜表３−５には、参考例化合物１〜４９の物性データを示した。なお、表中のＮ．Ｄ．は「データなし」を表す。【０２０９】
１Ｈ−ＮＭＲデータにおいて、プロトン積分値が整数でないものは、回転異性体の存在などによるものである。【０２１０】
１Ｈ−ＮＭＲデータ中の溶媒名は、測定に使用した溶媒を示している。また、４００  ＭＨｚＮＭＲスペクトルは、ＪＮＭ−ＡＬ４００型核磁気共鳴装置（日本電子社）を用いて測定した。ケミカルシフトは、テトラメチルシランを基準としてδ（単位：ｐｐｍ）で表し、シグナルはそれぞれｓ（一重線）、ｄ（二重線）、ｔ（三重線）、ｑ（四重線）、ｍ（多重線）、ｂｒｓ（幅広）、ｄｄ（二重二重線）、ｄｔ（二重三重線）、ｄｄｄ（二重二重二重線）、ｄｑ（二重四重線）、ｔｄ（三重二重線）又はｔｔ（三重三重線）で表した。溶媒は全て市販のものを用いた。ＥＳＩ−ＭＳスペクトルは、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  １２００  Ｓｅｒｉｅｓ、Ｇ６１３０Ａ（ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社）を用いて測定した。【０２１１】
【表１−１】
2015046404.tif 000010
【０２１２】
【表１−２】
2015046404.tif 000011
【０２１３】
【表１−３】
2015046404.tif 000012
【０２１４】
【表１−４】
2015046404.tif 000013
【０２１５】
【表１−５】
2015046404.tif 000014
【０２１６】
【表１−６】
2015046404.tif 000015
【０２１７】
【表２】
2015046404.tif 000016
【０２１８】
【表３−１】
2015046404.tif 000017
【０２１９】
【表３−２】
2015046404.tif 000018
【０２２０】
【表３−３】
2015046404.tif 000019
【０２２１】
【表３−４】
2015046404.tif 000020
【０２２２】
【表３−５】
2015046404.tif 000021
【０２２３】
（実施例４５）  ニペコチン酸誘導体（Ｉ）のＩｎ  ｖｉｔｒｏにおけるｓＥＨ阻害活性：
公知文献（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００５年、第３４３巻、ｐ．６６−７５）記載の方法に基づき、ヒトｓＥＨを用いて、ニペコチン酸誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩のｓＥＨ阻害活性を評価した。【０２２４】
リコンビナント・ヒトｓＥＨ（最終濃度０．０２６μg／ｍＬ；Ｃａｙｍａｎ社）を、被験化合物とともに、０．１ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡを含む２５ｍＭ  Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．０）中にて室温で３０分間インキュベートした。その後、蛍光基質としてシアノ（６−メトキシナフタレン−２−イル）メチル  ２−（３−フェニルオキシラン−２−イル）アセタート（最終濃度６．２５μｍｏｌ／Ｌ；Ｃａｙｍａｎ社）を加え、さらに室温で２０分間インキュベートし、ＺｎＳＯ４（最終濃度０．２ｍｏｌ／Ｌ）を加え反応を停止させ、蛍光強度（Ｆｕｓｉｏｎα（パッカード社）；Ｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ：３３０ｎｍ、Ｅｍｉｓｓｉｏｎ：４８５ｎｍ）を測定した。【０２２５】
ｓＥＨ非添加かつ被験化合物非添加の蛍光強度を０％ｓＥＨ酵素反応率とし、ｓＥＨ添加かつ被験化合物非添加の蛍光強度を１００％ｓＥＨ酵素反応率として、得られた蛍光強度から、各被験化合物の各ｓＥＨ酵素反応率を算出し、ＩＣ５０を求めた。その結果を表４に示す。【０２２６】
【表４】
2015046404.tif 000022
【０２２７】
その結果、実施例化合物１〜４４は、比較例化合物１及び２と比較して、ヒトｓＥＨの酵素反応に対して非常に強い阻害活性を示した。【０２２８】
したがって、ニペコチン酸誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩が、ヒトｓＥＨの酵素反応に対して非常に強い阻害活性を示すことが明らかとなった。【０２２９】
（実施例４６）  ラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルにおけるニペコチン酸誘導体（Ｉ）の効果：
ラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデル（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、２００９年、第１１１巻、ｐ．２３５−２４３）に、実施例化合物１、２又は３１を投与し、ニペコチン酸誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩の肺高血圧症に対する治療効果を評価した。【０２３０】
１）実施例化合物１のラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルの心肺機能、右心室肥大、肺肥大、肺動脈肥厚、肺における細胞増殖及び心筋肥大に対する効果：
ラット（Ｗｉｓｔａｒ系、雄性、５週齢；日本エスエルシー株式会社）の背部皮下に、モノクロタリン（シグマ社）水溶液（６０ｍｇ／ｋｇ）を投与して、肺高血圧症を誘発させた群を、「肺高血圧症誘発群」とした。一方で、注射用水を同様に投与した群を、「正常群」とした。【０２３１】
肺高血圧症誘発群のラットに、モノクロタリン投与日から２４日間、実施例化合物１（３、１０及び３０ｍｇ／ｋｇ）又は陽性対照化合物タダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）を１日１回経口投与した。実施例化合物１及びタダラフィルは、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液に懸濁して用いた。実施例化合物１を、３、１０及び３０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与した群をそれぞれ、「実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）投与群」、「実施例化合物１（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群」及び「実施例化合物１（３０ｍｇ／ｋｇ）投与群」とした。また、タダラフィルを１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与した群を、「タダラフィル投与群」とした。一方で、比較対照として、肺高血圧症誘発群のラットに、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液を同様に投与した群を、「肺高血圧症対照群」とした。なお、正常群にも０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液を同様に投与した。【０２３２】
被験化合物最終投与の翌日に、右心室収縮期圧、全身収縮期血圧及び心拍数を測定した。右心室収縮期圧及び全身収縮期血圧は、血圧測定用アンプ（日本光電工業株式会社）を用いて測定し、心拍数は、瞬時心拍計ユニット（日本光電工業株式会社）を用いて測定した。また、同日に、体重、肺湿重量、並びに、右心室、左心室及び中隔の湿重量を測定し、右心室重量比（右心室重量／（中隔重量＋左心室重量））及び肺重量比（肺重量／体重）を求めた。【０２３３】
また、肺は湿重量測定後にホルマリン液に浸漬し保存した。ホルマリン液で固定した肺をパラフィンに包埋後、切片を作製し、抗ｓＥＨ抗体を用いて免疫染色組織標本を作製し、ｓＥＨ発現を検討した。また、エラスチカ・ワンギーソン染色による病理組織標本を作製し、肺動脈肥厚を検討した。また、抗ＰＣＮＡ抗体を用いて免疫染色組織標本を作製し、細胞増殖を検討した。また、右心室は湿重量測定後にホルマリン液に浸漬し保存した。ホルマリン液で固定した右心室をパラフィンに包埋後、切片を作製し、ＨＥ染色による病理組織標本を作製し、心筋肥大を検討した。【０２３４】
さらに、摘出した肺を緩衝液中で破砕後、１４，１５―ＥＥＴ及び１４，１５―ＤＨＥＴを抽出した。抽出した１４，１５―ＥＥＴを加水分解し、１４，１５―ＤＨＥＴへと変換し、ＥＬＩＳＡ法を用いて１４，１５―ＤＨＥＴ濃度を測定した。加水分解反応の前後で増加した１４，１５―ＤＨＥＴ濃度を１４，１５―ＥＥＴ濃度とし、１４，１５―ＥＥＴ／１４，１５―ＤＨＥＴ比を求めた。【０２３５】
肺高血圧症におけるｓＥＨ発現を検討した結果、肺高血圧症誘発群の肺では、正常群の肺に比べて、病変部位でｓＥＨの発現が認められた。したがって、ｓＥＨの発現は、肺高血圧症の肺の病変部位で亢進することが示された。【０２３６】
被験化合物最終投与の翌日の右心室収縮期圧、右心室重量比及び肺重量比について、結果を図１〜３に示す。図の横軸は各群を示し、縦軸は各測定値（平均値±標準誤差、ｎ＝１０）を示す。図中の＊印は、肺高血圧症対照群との比較で統計学的に有意であることを示す（Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ検定、ｐ＜０．０５）。【０２３７】
肺高血圧症対照群の右心室収縮期圧は、正常群の右心室収縮期圧と比較して、統計学的に有意に高値を示し（Ａｓｐｉｎ−Ｗｅｌｃｈのｔ検定、ｐ＜０．０５）、肺高血圧症の病態を呈していることが示された。また、実施例化合物１（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群及び実施例化合物１（３０ｍｇ／ｋｇ）投与群の右心室収縮期圧は、肺高血圧症対照群の右心室収縮期圧と比較して、統計学的に有意に低値を示した（Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ検定、ｐ＜０．０５）（図１）。したがって、実施例化合物１が、肺動脈圧上昇を認める肺高血圧症の病態に対して治療効果を有することが示された。【０２３８】
肺高血圧症対照群の右心室重量比は、正常群の右心室重量比と比較して、統計学的に有意に高値を示し（Ａｓｐｉｎ−Ｗｅｌｃｈのｔ検定、ｐ＜０．０５）、右心室肥大の病態を呈していることが示された。また、実施例化合物１（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群及び実施例化合物１（３０ｍｇ／ｋｇ）投与群の右心室重量比は、肺高血圧症対照群の右心室重量比と比較して、統計学的に有意に低値を示した（Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ検定、ｐ＜０．０５）（図２）。したがって、実施例化合物１が、右心室肥大を認める肺高血圧症の病態に対しても治療効果を有することが示された。【０２３９】
肺高血圧症対照群の肺重量比は、正常群の肺重量比と比較して、統計学的に有意に高値を示し（Ａｓｐｉｎ−Ｗｅｌｃｈのｔ検定、ｐ＜０．０５）、肺肥大の病態を呈していることが示された。また、実施例化合物１（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群の肺重量比は、肺高血圧症対照群の肺重量比と比較して、統計学的に有意に低値を示した（Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ検定、ｐ＜０．０５）（図３）。したがって、実施例化合物１が、肺肥大を認める肺高血圧症の病態に対しても治療効果を有することが示された。【０２４０】
一方、実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）投与群、実施例化合物１（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群及び実施例化合物１（３０ｍｇ／ｋｇ）投与群の、心拍数及び全身収縮期血圧については、肺高血圧症対照群の心拍数及び全身収縮期血圧と比較して、いずれも有意な差は認められなかった（Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ検定、ｐ＜０．０５）。したがって、実施例化合物１が、肺高血圧症において心拍数及び全身血圧に作用しないことが示された。【０２４１】
肺高血圧症における肺動脈肥厚を検討した結果、肺高血圧症対照群の肺では、正常群の肺に比べて、肺動脈肥厚が認められた。一方、実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）投与群の肺では、肺高血圧症対照群の肺に比べて、肺動脈肥厚は認められなかった。したがって、実施例化合物１が、肺動脈肥厚を認める肺高血圧症の病態に対しても治療効果を有することが示された。【０２４２】
肺高血圧症における細胞増殖を検討した結果、肺高血圧症対照群の肺では、正常群の肺に比べて、細胞増殖が認められた。一方、実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）投与群の肺では、肺高血圧症対照群の肺に比べて、細胞増殖は認められなかった。したがって、実施例化合物１が、肺における細胞増殖を認める肺高血圧症の病態に対しても治療効果を有することが示された。【０２４３】
肺高血圧症における心筋肥大を検討した結果、肺高血圧症対照群の右心室では、正常群の右心室に比べて、心筋肥大が認められた。一方、実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）投与群の右心室では、肺高血圧症対照群の右心室に比べて、心筋肥大は認められなかった。したがって、実施例化合物１が、心筋肥大を認める肺高血圧症の病態に対しても治療効果を有することが示された。【０２４４】
肺高血圧症における１４，１５−ＥＥＴ／１４，１５−ＤＨＥＴ比を検討した結果、肺高血圧症対照群の肺における１４，１５−ＥＥＴ／１４，１５−ＤＨＥＴ比は、正常群の肺における１４，１５−ＥＥＴ／１４，１５−ＤＨＥＴ比と比較して、低値を示した。したがって、肺高血圧症の肺では、１４，１５−ＥＥＴ／１４，１５−ＤＨＥＴ比が低下することが示された。一方、実施例化合物１（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群の肺における１４，１５−ＥＥＴ／１４，１５−ＤＨＥＴ比は、肺高血圧症対照群の肺における１４，１５−ＥＥＴ／１４，１５−ＤＨＥＴ比と比較して、高値を示した。したがって、実施例化合物１が、肺高血圧症の肺における１４，１５−ＥＥＴ／１４，１５−ＤＨＥＴ比を増加させることが示された。【０２４５】
２）実施例化合物１のラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルの病態進行期からの投与による右心室肥大に対する効果：
ラット（Ｗｉｓｔａｒ系、雄性、５週齢；日本エスエルシー株式会社）の背部皮下に、モノクロタリン（シグマ社）水溶液（６０ｍｇ／ｋｇ）を投与して、肺高血圧症を誘発させた群を、「肺高血圧症誘発群」とした。一方で、注射用水を同様に投与した群を、「正常群」とした。【０２４６】
肺高血圧症誘発群のラットに、実施例化合物１（３及び１０ｍｇ／ｋｇ）又は陽性対照化合物タダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）を１日１回経口投与した。実施例化合物１（３及び１０ｍｇ／ｋｇ）は、モノクロタリン投与日の１０日後から１８日間又は１９日間投与した。タダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）は、モノクロタリン投与日から２８日間又は２９日間投与した。実施例化合物１及びタダラフィルは、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液に懸濁して用いた。実施例化合物１を３及び１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与した群をそれぞれ、「実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）投与群」及び「実施例化合物１（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群」とした。また、タダラフィルを１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与した群を、「タダラフィル投与群」とした。一方で、比較対照として、肺高血圧症誘発群のラットに、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液を同様に投与した群を、「肺高血圧症対照群」とした。なお、正常群にも０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液を同様に投与した。【０２４７】
被験化合物最終投与日に、ラットを麻酔下で腹大静脈より採血し、続けて安楽死させた後、心臓を摘出し、右心室、左心室及び中隔の湿重量を測定し、右心室重量比（右心室重量／（中隔重量＋左心室重量））を求めた。また、採取した血液中の１４，１５−ＤＨＥＴ濃度をＥＬＩＳＡ法を用いて測定した。また、採取した血液に一定量の１４，１５−ＥＥＴを添加し３７℃で３０分間反応させ、産生された１４，１５−ＤＨＥＴ量をＥＬＩＳＡ法を用いて測定することで、血液中のｓＥＨ活性を求めた。【０２４８】
肺高血圧症対照群の血液中の１４，１５−ＤＨＥＴ濃度及びｓＥＨ活性は、正常群の血液中の１４，１５−ＤＨＥＴ濃度及びｓＥＨ活性に比べて高値を示した。したがって、肺高血圧症では、１４，１５−ＤＨＥＴ濃度が上昇すること及びｓＥＨ活性が亢進することが示された。【０２４９】
被験化合物最終投与日の右心室重量比について、結果を図４に示す。図の横軸は各群を示し、縦軸は右心室重量比（平均値±標準誤差、ｎ＝１０）を示す。図中の＊印は、肺高血圧症対照群との比較で統計学的に有意であることを示す（ｔ検定、ｐ＜０．０５）。【０２５０】
肺高血圧症対照群の右心室重量比は、正常群の右心室重量比と比較して、統計学的に有意に高値を示した（ｔ検定、ｐ＜０．０５）。したがって、肺高血圧症対照群は、右心室肥大の病態を呈していることが示された。一方、実施例化合物１（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群の右心室重量比は、肺高血圧症対照群の右心室重量比と比較して、統計学的に有意に低値を示した（ｔ検定、ｐ＜０．０５）（図４）。したがって、実施例化合物１は、肺高血圧症の病態進行期から投与しても、右心室肥大を認める肺高血圧症の病態に対して治療効果を有することが示された。【０２５１】
３）実施例化合物１のラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルの全身血圧に対する作用：
モノクロタリン投与肺高血圧症モデルラットに、実施例化合物１を単回投与し、ニペコチン酸誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩の投与直後からの全身血圧に対する作用を評価した。【０２５２】
ラット（ＳＤ系、雄性、１１週齢；日本チャールス・リバー株式会社）の背部皮下に、モノクロタリン（シグマ社）水溶液（６０ｍｇ／ｋｇ）を投与して、肺高血圧症を誘発させた。【０２５３】
モノクロタリン投与７日後に、肺高血圧症を誘発させたラットを麻酔し、股部及び背頸部を除毛し、イソジン液を用いて術野を消毒した。股部及び背頸部皮膚を切開後、ピンセットを用いて鈍性に股部の筋層を切開し、大腿動脈を剥離露出した後、小切開しポリエチレンチューブを挿入留置した。モノクロタリン投与９日後に、大腿動脈に挿入したチューブに血圧トランスデューサーを接続し、血圧はＢｌｏｏｄ Ｐｒｅｓｓｕｒｅ Ａｍｐｌｉｆｉｅｒにて増幅させ、心拍数は脈波形をトリガーとしＨｅａｒｔ Ｒａｔｅ Ｃｏｕｎｔｅｒを介し、いずれもＰｏｗｅｒ Ｌａｂシステムにて波形を得た。全身血圧及び心拍数が安定したことを確認した。全身血圧が安定したことを確認した後、実施例化合物１を１０ｍｇ／ｋｇの投与量で単回経口投与した。なお、実施例化合物１は、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液に懸濁して用いた。実施例化合物１を投与した群を、「実施例化合物１投与群」とした。一方で、比較対照として、肺高血圧症を誘発させたラットに、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液を同様に投与した群を、「肺高血圧症対照群」とした。実施例化合物１又は０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液の投与直後から投与１、２、３、４、５及び６時間後までの全身平均血圧を測定した。【０２５４】
その結果、実施例化合物１投与群の全身平均血圧は、肺高血圧症対照群の全身平均血圧と比較して、有意な差は認められなかった。したがって、実施例化合物１が、肺高血圧症において投与直後から全身血圧に作用しないことが示された。【０２５５】
４）実施例化合物２のラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルの心肺機能及び右心室肥大に対する効果：
被験化合物が異なる点を除いて、実施例４６の１）と同じ方法で、ラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルに対する実施例化合物２の効果を評価した。【０２５６】
実施例４６の１）と同じ方法で作製した、「肺高血圧症誘発群」のラットに、モノクロタリン投与日から２４日間、実施例化合物２（１０ｍｇ／ｋｇ）又は陽性対照化合物タダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）を１日１回経口投与した。実施例化合物２及びタダラフィルは、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液に懸濁して用いた。実施例化合物２を、１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与した群を、「実施例化合物２投与群」とし、タダラフィルを１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与した群を、「タダラフィル投与群」とした。一方で、比較対照として、肺高血圧症誘発群のラットに、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液を、同様に投与した群を、「肺高血圧症対照群」とした。なお、モノクロタリン投与していない「正常群」にも０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液を同様に投与した。【０２５７】
実施例４６の１）と同様に、被験化合物最終投与の翌日に、右心室収縮期圧、全身収縮期血圧及び心拍数を測定した。また、同日に、体重、肺湿重量、並びに、右心室、左心室及び中隔の湿重量を測定し、右心室重量比（右心室重量／（中隔重量＋左心室重量））及び肺重量比（肺重量／体重）を求めた。【０２５８】
その結果を図５〜７に示す。図の横軸は各群を示し、縦軸は各測定値（平均値±標準誤差、ｎ＝１０）を示す。図中の＊印は、肺高血圧症対照群との比較で統計学的に有意であることを示す（Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ検定、ｐ＜０．０５）。【０２５９】
肺高血圧症対照群の右心室収縮期圧は、正常群の右心室収縮期圧と比較して、統計学的に有意に高値を示し（Ａｓｐｉｎ−Ｗｅｌｃｈのｔ検定、ｐ＜０．０５）、肺高血圧症の病態を呈していることが示された。また、実施例化合物２投与群の右心室収縮期圧は、肺高血圧症対照群の右心室収縮期圧と比較して、統計学的に有意に低値を示した（Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ検定、ｐ＜０．０５）（図５）。したがって、実施例化合物２が、肺動脈圧上昇を認める肺高血圧症の病態に対して治療効果を有することが示された。【０２６０】
肺高血圧症対照群の右心室重量比は、正常群の右心室重量比と比較して、統計学的に有意に高値を示し（Ａｓｐｉｎ−Ｗｅｌｃｈのｔ検定、ｐ＜０．０５）、右心室肥大の病態を呈していることが示された。また、実施例化合物２投与群の右心室重量比は、肺高血圧症対照群の右心室重量比と比較して、統計学的に有意に低値を示した（Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ検定、ｐ＜０．０５）（図６）。したがって、実施例化合物２が、右心室肥大を認める肺高血圧症の病態に対しても治療効果を有することが示された。【０２６１】
肺高血圧症対照群の肺重量比は、正常群の肺重量比と比較して、統計学的に有意に高値を示し（Ａｓｐｉｎ−Ｗｅｌｃｈのｔ検定、ｐ＜０．０５）、肺肥大の病態を呈していることが示された。また、実施例化合物２投与群の肺重量比は、肺高血圧症対照群の肺重量比と比較して、低値を示した（図７）。したがって、実施例化合物２が、肺肥大を認める肺高血圧症の病態に対しても治療効果を有することが示された。【０２６２】
一方、実施例化合物２投与群の、心拍数及び全身収縮期血圧については、肺高血圧症対照群の心拍数及び全身収縮期血圧と比較して、いずれも有意な差は認められなかった（Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ検定、ｐ＜０．０５）。したがって、実施例化合物２が、肺高血圧症において心拍数及び全身血圧に作用しないことが示された。【０２６３】
５）実施例化合物３１のラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルの右心室肥大に対する効果：
ラット（Ｗｉｓｔａｒ系、雄性、６週齢；日本エスエルシー株式会社）の背部皮下に、モノクロタリン（シグマ社）水溶液（６０ｍｇ／ｋｇ）を投与して、肺高血圧症を誘発させた群を「肺高血圧症誘発群」とした。一方で、注射用水を同様に投与した群を「正常群」とした。【０２６４】
肺高血圧症誘発群のラットに、モノクロタリン投与日から２９日間又は３０日間、実施例化合物３１（３ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇ）を１日１回経口投与した。実施例化合物３１は、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液に懸濁して用いた。実施例化合物３１を、３ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与した群をそれぞれ「実施例化合物３１（３ｍｇ／ｋｇ）投与群」及び「実施例化合物３１（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群」とした。一方で、比較対照として、肺高血圧症誘発群のラットに、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液を同様に投与した群を、「肺高血圧症対照群」とした。なお、正常群にも０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液を同様に投与した。【０２６５】
被験化合物最終投与日に、右心室、左心室及び中隔の湿重量を測定し、右心室重量比（右心室重量／（中隔重量＋左心室重量））を求めた。【０２６６】
被験化合物最終投与日の右心室重量比について調べた結果を図８に示す。図の横軸は各群を示し、縦軸は右心室重量比（平均値±標準誤差、ｎ＝７〜１８）を示す。図中の＃印は、正常群との比較で統計学的に有意であることを示す（ｔ検定、ｐ＜０．０５）。【０２６７】
肺高血圧症対照群の右心室重量比は、正常群の右心室重量比と比較して、統計学的に有意に高値を示し（ｔ検定、ｐ＜０．０５）、右心室肥大の病態を呈していることが示された。また、実施例化合物３１（３ｍｇ／ｋｇ）投与群及び実施例化合物３１（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群の右心室重量比は、肺高血圧症対照群の右心室重量比と比較して、低値を示した（図８）。したがって、実施例化合物３１が、右心室肥大を認める肺高血圧症の病態に対して治療効果を有することが示された。【０２６８】
実施例４６の１）、２）、３）、４）及び５）の結果から、ニペコチン酸誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩が、肺高血圧症に対して治療効果を示すことが明らかとなった。【０２６９】
（実施例４７）  ラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルにおける、ニペコチン酸誘導体（Ｉ）と、肺血管拡張薬であるホスホジエステラーゼ阻害剤又はエンドセリンレセプター拮抗剤との併用効果：
ラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデル（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、２００９年、第１１１巻、ｐ．２３５−２４３）に、ニペコチン酸誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩と、肺血管拡張薬であるホスホジエステラーゼ阻害剤又はエンドセリンレセプター拮抗剤とを、併用投与することによる肺高血圧症に対する治療効果を評価した。【０２７０】
ニペコチン酸誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩としては、実施例化合物１及び実施例化合物３１を選択した。また、ホスホジエステラーゼ阻害剤としては、タダラフィルを選択した。エンドセリンレセプター拮抗剤としては、アンブリセンタンを選択した。【０２７１】
１）ラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルの右心室肥大に対する、実施例化合物１とタダラフィルとの併用投与（同時投与）の効果：
ラット（Ｗｉｓｔａｒ系、雄性、５週齢；日本エスエルシー株式会社）の背部皮下に、モノクロタリン（シグマ社）水溶液（６０ｍｇ／ｋｇ）を投与して、肺高血圧症を誘発させた群を、「肺高血圧症誘発群」とした。一方で、注射用水を同様に投与した群を、「正常群」とした。【０２７２】
肺高血圧症誘発群のラットに、実施例化合物１（１０ｍｇ／ｋｇ）若しくはタダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）を単独で、又は、実施例化合物１（１０ｍｇ／ｋｇ）とタダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）とを併用して、モノクロタリン投与日から２４日間、１日１回経口投与した。実施例化合物１又はタダラフィルの単独投与用の投与液は、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液にそれぞれ懸濁して調製した。また、併用投与用の投与液は、実施例化合物１とタダラフィルとを０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液に混合懸濁して調製した。【０２７３】
実施例化合物１を１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与した群を「実施例化合物１（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群」とした。タダラフィルを１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与した群を、「タダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群」とした。１０ｍｇ／ｋｇの実施例化合物１と、１０ｍｇ／ｋｇのタダラフィルとを併用で投与した群を「実施例化合物１（１０ｍｇ／ｋｇ）＋タダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群」とした。一方で、比較対照として、肺高血圧症誘発群のラットに、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液を同様に投与した群を、「肺高血圧症対照群」とした。なお、正常群にも０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液を同様に投与した。【０２７４】
被験化合物最終投与日に、ラットをイソフルラン麻酔下で放血致死により安楽死させた後、心臓を摘出し、右心室、左心室及び中隔の湿重量を測定し、右心室重量比（右心室重量／（中隔重量＋左心室重量））を求めた。【０２７５】
被験化合物最終投与日の右心室重量比について、結果を図９に示す。図の横軸は各群を示し、縦軸は右心室重量比（平均値±標準誤差、ｎ＝５〜６）を示す。図中の＃印は、正常群との比較で統計学的に有意であることを示し（ｔ検定、ｐ＜０．０５）、＊印は、肺高血圧症対照群との比較で統計学的に有意であることを示す（ｔ検定、ｐ＜０．０５）。【０２７６】
肺高血圧症対照群の右心室重量比は、正常群の右心室重量比と比較して、統計学的に有意に高値を示し（ｔ検定、Ｐ＜０．０５）、右心室肥大の病態を呈していることが示された。また、実施例化合物１（１０ｍｇ／ｋｇ）＋タダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群の右心室重量比は、実施例化合物１（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群及びタダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群と比較して低値を示し、さらに、肺高血圧症対照群の右心室重量比と比較して、統計学的に有意に低値を示した（ｔ検定、ｐ＜０．０５）（図９）。したがって、実施例化合物１とタダラフィルとを組み合わせて投与することによって、肺高血圧症の病態に対して優れた治療効果が得られることが示された。【０２７７】
２）タダラフィルを投与しているラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルにおける、実施例化合物１の病態進行期からの併用投与（追加投与）による効果：
ラット（Ｗｉｓｔａｒ系、雄性、６週齢；日本エスエルシー株式会社）の背部皮下に、モノクロタリン（シグマ社）水溶液（６０ｍｇ／ｋｇ）を投与して、肺高血圧症を誘発させた群を、「肺高血圧症誘発群」とした。一方で、注射用水を同様に投与した群を、「正常群」とした。【０２７８】
肺高血圧症誘発群のラットに、実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）若しくはタダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）を単独で、又は、実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）とタダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）とを併用（タダラフィルを先行投与開始し、実施例化合物１を追加で投与）して投与した。実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）単独投与は、モノクロタリン投与日の１０日後から１８日間又は１９日間、１日１回経口投与した。タダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）単独投与は、モノクロタリン投与日から２８日間又は２９日間、１日１回経口投与した。実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）とタダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）との併用投与は、実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）をモノクロタリン投与日の１０日後から１８日間又は１９日間、１日１回経口投与し、タダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）をモノクロタリン投与日から２８日間又は２９日間、１日１回経口投与した。実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）又はタダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）を単独投与した群をそれぞれ、「実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）投与群」及び「タダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群」とした。また、実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）とタダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）との併用投与群を、「実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）＋タダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群」とした。なお、実施例化合物１及びタダラフィルは、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液に懸濁して用いた。一方で、比較対照として、肺高血圧症誘発群のラットに、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液を同様に投与した群を、「肺高血圧症対照群」とした。なお、実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）投与群に実施例化合物１の投与開始までの期間、及び、正常群にも０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液を同様に投与した。【０２７９】
被験化合物最終投与日に、ラットをイソフルラン麻酔下で放血致死により安楽死させた後、心臓を摘出し、右心室、左心室及び中隔の湿重量を測定し、右心室重量比（右心室重量／（中隔重量＋左心室重量））を求めた。【０２８０】
また、被験化合物最終投与日に肺も摘出し、肺を湿重量測定後にホルマリン液に浸漬し保存した。ホルマリン液で固定した肺をパラフィンに包埋後、エラスチカ・ワンギーソン染色による病理組織標本を作製し、肺動脈中膜厚を測定し、肺動脈中膜厚比（（肺動脈中膜厚×２／肺動脈直径）×１００）を求めた。【０２８１】
被験化合物最終投与日の右心室重量比について、結果を図１０に示す。図の横軸は各群を示し、縦軸は右心室重量比（平均値±標準誤差、ｎ＝６〜１２）を示す。図中の＃印は、正常群との比較で統計学的に有意であることを示し（ｔ検定、ｐ＜０．０５）、＊印は、肺高血圧症対照群との比較で統計学的に有意であることを示す（ｔ検定、ｐ＜０．０５）。【０２８２】
肺高血圧症対照群の右心室重量比は、正常群の右心室重量比と比較して、統計学的に有意に高値を示し（ｔ検定、Ｐ＜０．０５）、右心室肥大の病態を呈していることが示された。また、実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）＋タダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群の右心室重量比は、実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）投与群の右心室重量比及びタダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群の右心室重量比と比較して低値を示し、さらに、肺高血圧症対照群の右心室重量比と比較して、統計学的に有意に低値を示した（ｔ検定、ｐ＜０．０５）（図１０）。【０２８３】
被験化合物最終投与日の肺動脈中膜厚比について、結果を表５に示す。表の値は肺動脈中膜厚比（％）（平均値±標準偏差、ｎ＝６〜１２）を示す。図中の＃＃印は、正常群との比較で統計学的に有意であることを示し（ｔ検定、ｐ＜０．０１）、＊＊印は、肺高血圧症対照群との比較で統計学的に有意であることを示す（ｓｔｅｅｌ検定、ｐ＜０．０１）。【０２８４】
【表５】
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【０２８５】
肺高血圧症対照群の肺動脈中膜厚比は、正常群の肺動脈中膜厚比に比べて、統計学的に有意に高値を示し（ｔ検定、ｐ＜０．０１）、肺動脈肥厚の病態を呈していることが認められた。また、実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）＋タダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群の肺動脈中膜厚比は、実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）投与群の肺動脈中膜厚比及びタダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群の肺動脈中膜厚比と比較して低値を示し、さらに、肺高血圧症対照群の肺動脈中膜厚比と比較して、統計学的に有意に低値を示した（ｓｔｅｅｌ検定、ｐ＜０．０１）（表５）。【０２８６】
したがって、タダラフィルを先行して投与し、実施例化合物１を肺高血圧症の病態進行期からタダラフィルと併用投与することにより、肺高血圧症の病態に対して優れた治療効果が得られることが示された。【０２８７】
３）アンブリセンタンを投与しているラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルにおける、実施例化合物１の病態進行期からの併用投与（追加投与）による効果：
ラット（Ｗｉｓｔａｒ系、雄性、６週齢；日本エスエルシー株式会社）の背部皮下に、モノクロタリン（シグマ社）水溶液（６０ｍｇ／ｋｇ）を投与して、肺高血圧症を誘発させた群を、「肺高血圧症誘発群」とした。一方で、注射用水を同様に投与した群を、「正常群」とした。【０２８８】
肺高血圧症誘発群のラットに、実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）若しくはアンブリセンタン（３５ｍｇ／ｋｇ）を単独で、又は、実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）とアンブリセンタン（３５ｍｇ／ｋｇ）とを併用（アンブリセンタンを先行投与開始し、実施例化合物１を追加で投与）して投与した。実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）単独投与は、モノクロタリン投与日の１０日後から１８日間又は１９日間、１日１回経口投与した。アンブリセンタン（３５ｍｇ／ｋｇ）単独投与は、モノクロタリン投与日から２８日間又は２９日間、１日１回経口投与した。実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）とアンブリセンタン（３５ｍｇ／ｋｇ）との併用投与は、実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）をモノクロタリン投与日の１０日後から１８日間又は１９日間、１日１回経口投与し、アンブリセンタンをモノクロタリン投与日から２８日間又は２９日間、１日１回経口投与した。実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）又はアンブリセンタン（３５ｍｇ／ｋｇ）を単独投与した群をそれぞれ、「実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）投与群」及び「アンブリセンタン（３５ｍｇ／ｋｇ）投与群」とした。また、実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）とアンブリセンタン（３５ｍｇ／ｋｇ）との併用投与群を「実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）＋アンブリセンタン（３５ｍｇ／ｋｇ）投与群」とした。なお、実施例化合物１及びアンブリセンタンは、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液に懸濁して用いた。一方で、比較対照として、肺高血圧症誘発群のラットに、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液を同様に投与した群を、「肺高血圧症対照群」とした。なお、実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）投与群に実施例化合物１の投与開始までの期間、及び、正常群にも０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液を同様に投与した。【０２８９】
被験化合物最終投与日に、ラットをイソフルラン麻酔下で放血致死により安楽死させた後、心臓を摘出し、右心室、左心室及び中隔の湿重量を測定し、右心室重量比（右心室重量／（中隔重量＋左心室重量））を求めた。【０２９０】
被験化合物最終投与日の右心室重量比について、結果を図１１に示す。図の横軸は各群を示し、縦軸は右心室重量比（平均値±標準誤差、ｎ＝６〜１２）を示す。図中の＃印は、正常群との比較で統計学的に有意であることを示し（ｔ検定、ｐ＜０．０５）、＊印及び＊＊印は、肺高血圧症対照群との比較で統計学的に有意であることを示す（ｔ検定、＊印：ｐ＜０．０５、＊＊印：ｐ＜０．０１）。【０２９１】
肺高血圧症対照群の右心室重量比は、正常群の右心室重量比と比較して、統計学的に有意に高値を示し（ｔ検定、Ｐ＜０．０５）、右心室肥大の病態を呈していることが示された。また、実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）＋アンブリセンタン（３５ｍｇ／ｋｇ）投与群の右心室重量比は、実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）投与群の右心室重量比及びアンブリセンタン（３５ｍｇ／ｋｇ）投与群の右心室重量比と比較して低値を示し、さらに、肺高血圧症対照群の右心室重量比と比較して、統計学的に有意に低値を示した（ｔ検定、ｐ＜０．０１）（図１１）。したがって、アンブリセンタンを先行して投与し、実施例化合物１を病態進行期からアンブリセンタンと併用投与することにより、肺高血圧症の病態に対して優れた治療効果が得られることが示された。【０２９２】
４）タダラフィルを投与しているラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルにおける、実施例化合物３１の病態進行期からの併用投与（追加投与）による効果：
ラット（Ｗｉｓｔａｒ系、雄性、６週齢；日本エスエルシー株式会社）の背部皮下に、モノクロタリン（シグマ社）水溶液（６０ｍｇ／ｋｇ）を投与して、肺高血圧症を誘発させた群を、「肺高血圧症誘発群」とした。一方で、注射用水を同様に投与した群を、「正常群」とした。【０２９３】
肺高血圧症誘発群のラットに、タダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）を単独で、又は、実施例化合物３１（１０ｍｇ／ｋｇ）とタダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）とを併用（タダラフィルを先行投与開始し、実施例化合物３１を追加で投与）して投与した。タダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）単独投与は、モノクロタリン投与日から２８日間又は２９日間、１日１回経口投与した。実施例化合物３１（１０ｍｇ／ｋｇ）とタダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）との併用投与は、実施例化合物３１（１０ｍｇ／ｋｇ）をモノクロタリン投与日の１０日後から１８日間又は１９日間、１日１回経口投与し、タダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）をモノクロタリン投与日から２８日間又は２９日間、１日１回経口投与した。タダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）を単独投与した群を「タダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群」とした。また、実施例化合物３１（１０ｍｇ／ｋｇ）とタダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）との併用投与群を、「実施例化合物３１（１０ｍｇ／ｋｇ）＋タダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群」とした。なお、実施例化合物３１及びタダラフィルは、それぞれ０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液に懸濁して用いた。一方で、比較対照として、肺高血圧症誘発群のラットに、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液を同様に投与した群を、「肺高血圧症対照群」とした。なお、正常群にも０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液を同様に投与した。【０２９４】
被験化合物最終投与の翌日に、ラットをイソフルラン麻酔下で放血致死により安楽死させた後、心臓を摘出し、右心室、左心室及び中隔の湿重量を測定し、右心室重量比（右心室重量／（中隔重量＋左心室重量））を求めた。【０２９５】
被験化合物最終投与日の右心室重量比について、結果を図１２に示す。図の横軸は各群を示し、縦軸は右心室重量比（平均値±標準誤差、ｎ＝９〜１８）を示す。図中の＃印は、正常群との比較で統計学的に有意であることを示し（ｔ検定、ｐ＜０．０５）、＊印は、肺高血圧症対照群との比較で統計学的に有意であることを示す（ｔ検定、ｐ＜０．０５）。【０２９６】
肺高血圧症対照群の右心室重量比は、正常群の右心室重量比と比較して、統計学的に有意に高値を示し（ｔ検定、Ｐ＜０．０５）、右心室肥大の病態を呈していることが示された。また、実施例化合物３１（１０ｍｇ／ｋｇ）＋タダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群の右心室重量比は、タダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群の右心室重量比と比較して低値を示し、さらに、肺高血圧症対照群の右心室重量比と比較して、統計学的に有意に低値を示した（ｔ検定、ｐ＜０．０５）（図１２）。【０２９７】
したがって、タダラフィルを先行して投与し、実施例化合物３１を肺高血圧症の病態進行期からタダラフィルと併用投与することにより、肺高血圧症の病態に対して優れた治療効果が得られることが示された。【０２９８】
実施例４７の１）、２）、３）及び４）の結果から、ニペコチン酸誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩と、肺血管拡張薬であるホスホジエステラーゼ阻害剤又はエンドセリンレセプター拮抗剤とを、併用投与することにより、肺高血圧症に対して優れた治療効果を示すことが明らかとなった。
【産業上の利用可能性】
【０２９９】
本発明は、ニペコチン酸誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩と、肺血管拡張薬とを有効成分として含有するものであり、肺高血圧症の治療剤又は予防剤として利用できる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
2015046404.tif 000034
【図９】
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【図１０】
2015046404.tif 000036
【図１１】
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【図１２】
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【国際調査報告】
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