(57)【要約】【課題】担体が生分解性であって、かつ水溶性である、担体リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩を提供することを目的とする。【解決手段】担体として糖鎖を採用し、特定の構造を有する担体−リンカーの構造に着目することで、上記課題を解決する、担体リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩を見出した。【特許請求の範囲】
【請求項１】
糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩であって、
前記化合物は、下記式（Ａ）で表わされ、
Ｒ１−Ｘ      （Ａ）
ここで、
Ｒ１は、糖鎖付加リンカー部分を意味し、
Ｒ１は、下記式（Ｉ）で表わされ、
【化１】
2014080730.tif 000109
［式（Ｉ）中、
Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜１６のアルキル基、または、炭素数５〜１６のアリール基であり（ただし、Ｒ２およびＲ３の両方が、同時に、水素原子とはならない）、または、Ｒ２およびＲ３はそれらが結合している窒素原子と一緒になって、３〜７員の複素環を形成し、
前記アルキル基、前記アリール基、または前記複素環における少なくとも１つの水素原子は、糖鎖、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドによって置換されており、
Ｒ４は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜１６のアルキル基または炭素数５〜１６のアリール基であり、
Ｙは、
【化２】
2014080730.tif 000110
であり、
ここで、
Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、Ｒ５Ａが結合する炭素原子、Ｒ５Ｂが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数５〜１６のアリール、炭素数５〜１６のシクロアルケニル、炭素数７〜１３のビシクリル、炭素数９〜１４のトリシクリル、炭素数６〜１４のキノン、または５〜１０員の複素環を形成するか、あるいは、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン、シアノ基、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基、ニトロ基、メシル基、トシル基、炭素数１〜３のアシル基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基、置換または非置換のフェニル基、ベンジル基であり、
Ｒ５Ｃ、Ｒ５Ｄは、Ｒ５Ｃが結合する炭素原子、Ｒ５Ｄが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数４〜１６のシクロアルキル、炭素数５〜１６のシクロアルケニル、炭素数７〜１３のビシクリル、炭素数９〜１４のトリシクリル、または５〜１０員の複素環を形成し、
波線は、Ｘへの結合部分を示す。］
Ｘは、生理活性物質部分を意味し、
前記生理活性物質は、少なくとも１つのアミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、またはカルボキシ基を有しており、
ＸのＲ１との結合は、当該少なくとも１つのアミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、またはカルボキシ基における結合である、
化合物またはその塩。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物またはその塩であって、
前記Ｒ１は、下記式（Ｉ）で表わされる、
【化３】
2014080730.tif 000111
［式（Ｉ）中、
Ｒ２およびＲ３は、それらが結合している窒素原子と一緒になって３〜７員の複素環を形成しており、
ここで、前記複素環は、アジリジン、アゼチジン、ピロリン、ピロール、イミダゾール、イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、イソオキサゾリン、チアゾリン、イソチアゾリン、チアジアゾリン、ピロリジン、イミダゾリジン、ピラゾリジン、オキサゾリジン、イソオキサゾリジン、チアゾリジン、イソチアゾリジン、チアジアゾリジン、ピペラジン、ピペリジン、モルホリン、チオモルホリン、チアジン、テトラゾール、トリアゾール、トリアゾリジン、テトラゾリジン、アゼパン、ジアゼパン、アゼピンおよびホモピペラジンからなる群から選択され、
前記複素環における少なくとも１つの水素原子は、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドによって置換されており、当該置換は、当該「糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチド」におけるアミノ酸またはポリペプチドの部分における結合であり、
Ｒ４は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜１６のアルキル基または炭素数５〜１６のアリール基であり、
Ｙは、
【化４】
2014080730.tif 000112
であり、
ここで、
Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、Ｒ５Ａが結合する炭素原子、Ｒ５Ｂが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数５〜１６のアリール、炭素数５〜１６のシクロアルケニル、炭素数７〜１３のビシクリル、炭素数９〜１４のトリシクリル、炭素数６〜１４のキノン、または５〜１０員の複素環を形成するか、あるいは、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン、シアノ基、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基、ニトロ基、メシル基、トシル基、炭素数１〜３のアシル基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基、置換または非置換のフェニル基、ベンジル基であり、
Ｒ５Ｃ、Ｒ５Ｄは、Ｒ５Ｃが結合する炭素原子、Ｒ５Ｄが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数４〜１６のシクロアルキル、炭素数５〜１６のシクロアルケニル、炭素数７〜１３のビシクリル、炭素数９〜１４のトリシクリル、または５〜１０員の複素環を形成し、
波線は、前記Ｘへの結合部分を示す。］
化合物またはその塩。
【請求項３】
請求項１に記載の化合物またはその塩であって、
前記Ｒ１は、下記式（ＩＩ）で表わされる、
【化５】
2014080730.tif 000113
［式（ＩＩ）中、
Ｒ４は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜１６のアルキル基または炭素数５〜１６のアリール基であり、
Ｙは、
【化６】
2014080730.tif 000114
であり、
ここで、
Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、Ｒ５Ａが結合する炭素原子、Ｒ５Ｂが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数５〜１６のアリールを形成するか、あるいは、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、いずれも水素原子であり、
Ｒ５Ｃ、Ｒ５Ｄは、Ｒ５Ｃが結合する炭素原子、Ｒ５Ｄが結合する炭素原子と一緒になって、シクロヘキシルまたはノルボルニルを形成し、
Ｒ６は、糖鎖、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドであり、
波線は、前記Ｘへの結合部分を示す。］
化合物またはその塩。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物またはその塩であって、
前記生理活性物質は、ペプチド部分を有しており、
前記Ｘの前記Ｒ１との結合は、
（１）前記生理活性物質の前記ペプチド部分のＮ末端のアミノ基におけるアミド結合、
（２）前記生理活性物質の前記ペプチド部分のセリン残基、スレオニン残基またはチロシン残基の側鎖に存在するヒドロキシ基におけるエステル結合（但し、前記生理活性物質の前記ペプチド部分が、セリン残基、スレオニン残基またはチロシン残基を有する場合に限る）、
（３）前記生理活性物質の前記ペプチド部分のアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基の側鎖に存在するカルボキシ基における酸無水物結合（但し、前記生理活性物質の前記ペプチド部分が、アスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基を有する場合に限る）、
（４）前記生理活性物質の前記ペプチド部分のリシン残基、アスパラギン残基、アルギニン残基、ヒスチジン残基またはトリプトファン残基の側鎖に存在するアミノ基におけるアミド結合（但し、前記生理活性物質の前記ペプチド部分が、リシン残基、アスパラギン残基、アルギニン残基、ヒスチジン残基またはトリプトファン残基を有する場合に限る）、
（５）前記生理活性物質の前記ペプチド部分のシステイン残基の側鎖に存在するチオール基におけるチオエステル結合（但し、前記生理活性物質の前記ペプチド部分が、システイン残基を有する場合に限る）、
または、
（６）前記生理活性物質の前記ペプチド部分のＣ末端のカルボキシ基における酸無水物結合、
である、化合物またはその塩。
【請求項５】
請求項１に記載の化合物またはその塩であって、
前記Ｒ１は、下記式（ＩＩＩ）で表わされ、
【化７】
2014080730.tif 000115
［式（ＩＩＩ）中、
Ｒ４は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜１６のアルキル基または炭素数５〜１６のアリール基であり、
Ｙは、
【化８】
2014080730.tif 000116
であり、
ここで、
Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、Ｒ５Ａが結合する炭素原子、Ｒ５Ｂが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数５〜１６のアリールを形成するか、あるいは、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、いずれも水素原子であり、
Ｒ５Ｃ、Ｒ５Ｄは、Ｒ５Ｃが結合する炭素原子、Ｒ５Ｄが結合する炭素原子と一緒になって、シクロヘキシルまたはノルボルニルを形成し、
Ｒ７は、−Ｓ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−糖鎖または−ＣＯＮＨ−糖鎖であり、
Ｒ８は、水素原子、炭素数１〜１６のアシル基、Ｆｍｏｃ基、Ｂｏｃ基、Ｚ基、Ｔｒｏｃ基、Ａｌｌｏｃ基、カルバメート系保護基、糖鎖、アミノ酸、ポリペプチド、糖鎖付加アミノ酸、または糖鎖付加ポリペプチドであり、
波線は、Ｘへの結合部分を示す。］
前記生理活性物質は、少なくとも１つのアミノ基を有しており、
前記Ｘの前記Ｒ１との結合は、当該少なくとも１つのアミノ基における結合である、
化合物またはその塩。
【請求項６】
請求項１に記載の化合物またはその塩であって、
前記Ｒ１は、下記式（ＩＶ）で表わされ、
【化９】
2014080730.tif 000117
［式（ＩＶ）中、
Ｒ４は、それぞれ独立し
て、水素原子、炭素数１〜１６のアルキル基または炭素数５〜１６のアリール基であり、
Ｒ７は、−Ｓ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−糖鎖または−ＣＯＮＨ−糖鎖であり、
Ｒ８は、水素原子、炭素数１〜１６のアシル基、Ｆｍｏｃ基、Ｂｏｃ基、Ｚ基、Ｔｒｏｃ基、Ａｌｌｏｃ基、カルバメート系保護基、糖鎖、アミノ酸、ポリペプチド、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドであり、
Ｒ９は、それぞれ独立に、水素原子、ハロゲン、シアノ基、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基、ニトロ基、メシル基、トシル基、炭素数１〜３のアシル基、ヒドロキシ基、カルボキシ基またはアミノ基であり、
波線は、Ｘへの結合部分を示す。］
前記生理活性物質は、少なくとも１つのアミノ基を有しており、
前記Ｘの前記Ｒ１との結合は、当該少なくとも１つのアミノ基における結合である、
化合物またはその塩。
【請求項７】
請求項６に記載の化合物またはその塩であって、
４つの前記Ｒ４は、いずれも水素原子である、
化合物またはその塩。
【請求項８】
請求項６または７に記載の化合物またはその塩であって、
少なくとも１つの前記Ｒ９は、ハロゲンである、
化合物またはその塩。
【請求項９】
請求項６または７に記載の化合物またはその塩であって、
４つの前記Ｒ９は、いずれも塩素である、
化合物またはその塩。
【請求項１０】
請求項１に記載の化合物またはその塩であって、
前記「糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチド」において、糖鎖は、アミノ酸またはポリペプチドにおける、ＡｓｎまたはＣｙｓに結合している、
化合物またはその塩。
【請求項１１】
請求項１に記載の化合物またはその塩であって、
前記「糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチド」において、糖鎖は、アミノ酸またはポリペプチドと、リンカーを介することなく結合している、
化合物またはその塩。
【請求項１２】
請求項１に記載の化合物またはその塩であって、
前記「糖鎖、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチド」における糖鎖は、４個以上の糖残基からなる、
化合物またはその塩。
【請求項１３】
請求項１に記載の化合物またはその塩であって、
前記「糖鎖、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチド」における糖鎖は、２本鎖複合型糖鎖、３本鎖複合型糖鎖、または４本鎖複合型糖鎖である、
化合物またはその塩。
【請求項１４】
請求項１３に記載の化合物またはその塩であって、
前記糖鎖が、ジシアロ糖鎖、モノシアロ糖鎖、アシアロ糖鎖、ジグルクナック糖鎖およびジマンノース糖鎖からなる群から選択される２本鎖複合型糖鎖である、
化合物またはその塩。
【請求項１５】
請求項１に記載の化合物またはその塩であって、
前記「糖鎖、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチド」における糖鎖が、下記式：
【化１０】
2014080730.tif 000118
［式中、Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なって、
【化１１】
2014080730.tif 000119
を示す。Ａｃは、アセチル基を示す。］
で表される糖鎖である、
化合物またはその塩。
【請求項１６】
請求項１に記載の化合物またはその塩であって、
前記生理活性物質は、低分子生理活性物質または生体高分子である、
化合物またはその塩。
【請求項１７】
請求項１６に記載の化合物またはその塩であって、
前記生体高分子は、タンパク質、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、およびペプチド核酸からなる群より選択される、
化合物またはその塩。
【請求項１８】
請求項１に記載の化合物またはその塩であって、
無修飾の生理活性物質と比較して、向上した水溶性を有する、
化合物またはその塩。
【請求項１９】
請求項１８に記載の化合物またはその塩であって、
前記向上した水溶性が、モル濃度において、前記「無修飾の生理活性物質」と比較して、１０〜１，０００，０００倍である、
化合物またはその塩。
【請求項２０】
請求項１に記載の化合物またはその塩であって、
前記糖鎖付加リンカー部分がｐＨおよび／または温度に依存して自己触媒的に切断される、
化合物またはその塩。
【請求項２１】
請求項１〜２０のいずれか１項に記載の化合物またはその塩を含む組成物であって、
前記化合物又はその塩における糖鎖は、実質的に均一である、
組成物。
【請求項２２】
医薬組成物であって、
（Ｉ）請求項１〜２０のいずれか１項に記載の化合物またはその塩、および
（ＩＩ）薬理学的に許容される担体
を含む、
医薬組成物。
【請求項２３】
請求項２２に記載の医薬組成物であって、
前記生理活性物質は、対象に投与後に速やかに活性を発揮する、
医薬組成物。
【請求項２４】
請求項２２または２３に記載の医薬組成物であって、
ワクチン接種に用いられる、
医薬組成物。
【請求項２５】
糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩の製造方法であって、
ここで、前記生理活性物質は、少なくとも１つのアミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、またはカルボキシ基を有するペプチド部分を含んでおり、
以下のステップ、
（ａ）固相合成法により、樹脂上に前記ペプチド部分を合成するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）で合成された前記ペプチド部分における前記「アミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、またはカルボキシ基」に、下記式（Ｉ’）で表わされるリンカー部分を結合させるステップと、
【化１２】
2014080730.tif 000120
［式（Ｉ’）中、
Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜１６のアルキル基、または、炭素数５〜１６のアリール基であり（ただし、Ｒ２およびＲ３の両方が、同時に、水素原子とはならない）、または、Ｒ２およびＲ３はそれらが結合している窒素原子と一緒になって、３〜７員の複素環を形成し、
Ｒ４は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜１６のアルキル基または炭素数５〜１６のアリール基であり、
Ｙは、
【化１３】
2014080730.tif 000121
であり、
ここで、
Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、Ｒ５Ａが結合する炭素原子、Ｒ５Ｂが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数５〜１６のアリール、炭素数５〜１６のシクロアルケニル、炭素数７〜１３のビシクリル、炭素数９〜１４のトリシクリル、炭素数６〜１４のキノン、または５〜１０員の複素環を形成するか、あるいは、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン、シアノ基、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基、ニトロ基、メシル基、トシル基、炭素数１〜３のアシル基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基、置換または非置換のフェニル基、ベンジル基であり、
Ｒ５Ｃ、Ｒ５Ｄは、Ｒ５Ｃが結合する炭素原子、Ｒ５Ｄが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数４〜１６のシクロアルキル、炭素数５〜１６のシクロアルケニル、炭素数７〜１３のビシクリル、炭素数９〜１４のトリシクリル、または５〜１０員の複素環を形成し、
波線は、前記ペプチド部分の前記「アミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、またはカルボキシ基」との結合部分を示す。］
（ｃ）ステップ（ｂ）により、前記ペプチド部分の前記「アミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、またはカルボキシ基」に結合された前記リンカー部分のＲ２またはＲ３における前記アルキル基、前記アリール基、または前記複素環における少なくとも１つの水素原子を、糖鎖、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドによって置換するステップ
を含む、
製造方法。
【請求項２６】
糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩の製造方法であって、
ここで、前記生理活性物質は、少なくとも１つのアミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、またはカルボキシ基を有するペプチド部分を含んでおり、
前記ペプチド部分における前記「アミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、またはカルボキシ基」に、下記式（Ｉ’’）で表わされる糖鎖付加リンカーを脱水縮合により結合させる製造方法。
【化１４】
2014080730.tif 000122
［式（Ｉ’’）中、
Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜１６のアルキル基、または、炭素数５〜１６のアリール基であり（ただし、Ｒ２およびＲ３の両方が、同時に、水素原子とはならない）、または、Ｒ２およびＲ３はそれらが結合している窒素原子と一緒になって、３〜７員の複素環を形成し、
前記アルキル基、前記アリール基、または前記複素環における少なくとも１つの水素原子は、糖鎖、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドによって置換されており、
Ｒ４は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜１６のアルキル基または炭素数５〜１６のアリール基であり、
Ｙは、
【化１５】
2014080730.tif 000123
であり、
ここで、
Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、Ｒ５Ａが結合する炭素原子、Ｒ５Ｂが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数５〜１６のアリール、炭素数５〜１６のシクロアルケニル、炭素数７〜１３のビシクリル、炭素数９〜１４のトリシクリル、炭素数６〜１４のキノン、または５〜１０員の複素環を形成するか、あるいは、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン、シアノ基、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基、ニトロ基、メシル基、トシル基、炭素数１〜３のアシル基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基、置換または非置換のフェニル基、ベンジル基であり、
Ｒ５Ｃ、Ｒ５Ｄは、Ｒ５Ｃが結合する炭素原子、Ｒ５Ｄが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数４〜１６のシクロアルキル、炭素数５〜１６のシクロアルケニル、炭素数７〜１３のビシクリル、炭素数９〜１４のトリシクリル、または５〜１０員の複素環を形成する。］
【請求項２７】
請求項２５または２６に記載の製造方法により得られうる、化合物またはその塩。
【請求項２８】
少なくとも１つのアミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、またはカルボキシ基を有する生理活性物質との結合用の、糖鎖付加リンカーであって、
前記糖鎖付加リンカーは、下記式（Ｂ）で表され、
Ｒ１−Ｌ      （Ｂ）
ここで、
Ｒ１は、糖鎖付加リンカー部分を意味し、
Ｒ１は、下記式（Ｉ）で表わされ、
【化１６】
2014080730.tif 000124
［式（Ｉ）中、
Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜１６のアルキル基、または、炭素数５〜１６のアリール基であり（ただし、Ｒ２およびＲ３の両方が、同時に、水素原子とはならない）、または、Ｒ２およびＲ３はそれらが結合している窒素原子と一緒になって、３〜７員の複素環を形成し、
前記アルキル基、前記アリール基、または前記複素環における少なくとも１つの水素原子は、糖鎖、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドによって置換されており、
Ｒ４は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜１６のアルキル基または炭素数５〜１６のアリール基であり、
Ｙは、
【化１７】
2014080730.tif 000125
であり、
ここで、
Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、Ｒ５Ａが結合する炭素原子、Ｒ５Ｂが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数５〜１６のアリール、炭素数５〜１６のシクロアルケニル、炭素数７〜１３のビシクリル、炭素数９〜１４のトリシクリル、炭素数６〜１４のキノン、または５〜１０員の複素環を形成するか、あるいは、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン、シアノ基、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基、ニトロ基、メシル基、トシル基、炭素数１〜３のアシル基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基、置換または非置換のフェニル基、ベンジル基であり、
Ｒ５Ｃ、Ｒ５Ｄは、Ｒ５Ｃが結合する炭素原子、Ｒ５Ｄが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数４〜１６のシクロアルキル、炭素数５〜１６のシクロアルケニル、炭素数７〜１３のビシクリル、炭素数９〜１４のトリシクリル、または５〜１０員の複素環を形成し、
波線は、Ｌへの結合部分を示す。］
Ｌは、脱離基を意味する、
糖鎖付加リンカー。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、糖鎖付加リンカー、糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩、及びそれらの製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
生理活性物質を薬物として生体に投与しようとしても、その水溶性が低いために、（十分な）フィルター滅菌を行うことができないものが存在する。また、水溶液または当該水溶液から調製したエマルションに、生理活性物質を溶解させて、生体に投与することが困難なものが存在している。【０００３】
生理活性物質等の薬物の水溶性を向上させるために、様々な方法が試みられている。例えば、薬物に水溶性の高い担体を共有結合させた、担体−薬物コンジュゲート（いわゆる、薬物誘導体）が知られている。担体としては、親水性アミノ酸配列、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等が知られている。【０００４】
しかしながら、このような薬物誘導体の立体構造は、元の薬物の立体構造と異なるため、元の薬物と比較して、異なる薬物動態学的、免疫原性的、毒物学的または薬理学的特性等を示す。例えば、薬物誘導体をワクチンとして用いた場合、無修飾の薬物と比較して、その抗原性は一般に低下することが知られている。【０００５】
また、担体としてＰＥＧを付加した（ＰＥＧ化）薬物は、生分解抵抗性を有する。したがって、ＰＥＧ化薬物を生体内に投与し続けると、それが生体内に蓄積して、生体に薬害を与える可能性がある（特許文献１）。さらに、ＰＥＧは分子量分布（多分散系の性質（ｐｏｌｙｄｉｓｐｅｒｓｅ  ｎａｔｕｒｅ））を有する。したがって、薬物をＰＥＧ化すると、付加されるＰＥＧの結合位置または分子量が異なるため、多くの、活性が異なる単量体アイソフォーム（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｍｏｎｏｍｅｒｉｃ  ｉｓｏｆｏｒｍｓ：構造の異なるタンパク質）が生成する。生成したこれらのアイソフォームは、薬物の受容体分子への結合に関して、互いに競合する可能性がある（非特許文献１）。【０００６】
薬物と担体とを、リンカー部分を介して結合させた、担体−リンカー−薬物コンジュゲートも開発されている。これは、標的場所（血中等）で、担体−リンカー部分と薬物との間の結合が切断されて、薬物自身が放出されるように設計されている。かかる結合の切断には、光や酵素的切断がトリガーとして使用されてきた。しかしながら、生体内における標的部位への光照射は困難であり、光による生体へのダメージも懸念される。また、酵素的切断の場合、酵素量は、個体間や投与部位で大きく異なることが知られている。したがって、薬物治療の効果のばらつきが生じることが問題となる。【０００７】
そのため、担体−リンカー−薬物コンジュゲートにおいて、担体リンカー部分の、薬物からの切断のために、リンカー内の分子内触媒作用による自動加水分解（ａｕｔｏｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ）の利用が試みられている。かかるタイプのコンジュゲートとして、リンカー部分が、薬物に由来するアミノ基を介して薬物にアミド結合したものが報告されている（特許文献２）。このコンジュゲートの切断メカニズムは、リンカー内の環状イミド形成による環化−活性化によるアミド結合の切断に基づく。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特表２００７−５３０５６９号公報
【特許文献２】国際公開第２００９／０９５４７９号パンフレット
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｂａｒｒｙ  Ｂｙｒｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔｏｄａｙ，  （２００７），  Ｖｏｌ．１２，  ３１９−３２６頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
しかしながら、特許文献２は、担体の生分解性について着目していない。さらに、担体−リンカー−薬物コンジュゲートの水溶性についても言及していない。【００１１】
本発明は、担体が生分解性であり、水溶性である、担体リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、鋭意検討の結果、担体として糖鎖を採用し、特定の構造を有する担体−リンカーの構造に着目することで、上記課題を解決する、担体リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩を見出した。【００１３】
すなわち、本発明の目的は、
糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩であって、
前記化合物は、下記式（Ａ）で表わされ、
Ｒ１−Ｘ      （Ａ）
ここで、
Ｒ１は、糖鎖付加リンカー部分を意味し、
Ｒ１は、下記式（Ｉ）で表わされ、
【化１】
2014080730.tif 000002
［式（Ｉ）中、
Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜１６のアルキル基、または、炭素数５〜１６のアリール基であり（ただし、Ｒ２およびＲ３の両方が、同時に、水素原子とはならない）、または、Ｒ２およびＲ３はそれらが結合している窒素原子と一緒になって、３〜７員の複素環を形成し、
前記アルキル基、前記アリール基、または前記複素環における少なくとも１つの水素原子は、糖鎖、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドによって置換されており、
Ｒ４は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜１６のアルキル基または炭素数５〜１６のアリール基であり、
Ｙは、
【化２】
2014080730.tif 000003
であり、
ここで、
Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、Ｒ５Ａが結合する炭素原子、Ｒ５Ｂが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数５〜１６のアリール、炭素数５〜１６のシクロアルケニル、炭素数７〜１３のビシクリル、炭素数９〜１４のトリシクリル、炭素数６〜１４のキノン、または５〜１０員の複素環を形成するか、あるいは、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン、シアノ基、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基、ニトロ基、メシル基、トシル基、炭素数１〜３のアシル基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基、置換または非置換のフェニル基、ベンジル基であり、
Ｒ５Ｃ、Ｒ５Ｄは、Ｒ５Ｃが結合する炭素原子、Ｒ５Ｄが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数４〜１６のシクロアルキル、炭素数５〜１６のシクロアルケニル、炭素数７〜１３のビシクリル、炭素数９〜１４のトリシクリル、または５〜１０員の複素環を形成し、
波線は、Ｘへの結合部分を示す。］
Ｘは、生理活性物質部分を意味し、
前記生理活性物質は、少なくとも１つのアミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、またはカルボキシ基を有しており、
ＸのＲ１との結合は、当該少なくとも１つのアミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、またはカルボキシ基における結合である、
化合物またはその塩を提供することによって、達成される。【００１４】
また、本発明の化合物またはその塩は、一態様において、
前記Ｒ１は、下記式（Ｉ）で表わされる、
【化３】
2014080730.tif 000004
［式（Ｉ）中、
Ｒ２およびＲ３は、それらが結合している窒素原子と一緒になって３〜７員の複素環を形成しており、
ここで、前記複素環は、アジリジン、アゼチジン、ピロリン、ピロール、イミダゾール、イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、イソオキサゾリン、チアゾリン、イソチアゾリン、チアジアゾリン、ピロリジン、イミダゾリジン、ピラゾリジン、オキサゾリジン、イソオキサゾリジン、チアゾリジン、イソチアゾリジン、チアジアゾリジン、ピペラジン、ピペリジン、モルホリン、チオモルホリン、チアジン、テトラゾール、トリアゾール、トリアゾリジン、テトラゾリジン、アゼパン、ジアゼパン、アゼピンおよびホモピペラジンからなる群から選択され、
前記複素環における少なくとも１つの水素原子は、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドによって置換されており、当該置換は、当該「糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチド」におけるアミノ酸またはポリペプチドの部分における結合であり、
Ｒ４は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜１６のアルキル基または炭素数５〜１６のアリール基であり、
Ｙは、
【化４】
2014080730.tif 000005
であり、
ここで、
Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、Ｒ５Ａが結合する炭素原子、Ｒ５Ｂが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数５〜１６のアリール、炭素数５〜１６のシクロアルケニル、炭素数７〜１３のビシクリル、炭素数９〜１４のトリシクリル、炭素数６〜１４のキノン、または５〜１０員の複素環を形成するか、あるいは、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン、シアノ基、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基、ニトロ基、メシル基、トシル基、炭素数１〜３のアシル基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基、置換または非置換のフェニル基、ベンジル基であり、
Ｒ５Ｃ、Ｒ５Ｄは、Ｒ５Ｃが結合する炭素原子、Ｒ５Ｄが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数４〜１６のシクロアルキル、炭素数５〜１６のシクロアルケニル、炭素数７〜１３のビシクリル、炭素数９〜１４のトリシクリル、または５〜１０員の複素環を形成し、
波線は、前記Ｘへの結合部分を示す。］
ことが好ましい。【００１５】
また、本発明の化合物またはその塩は、一態様において、
前記Ｒ１は、下記式（ＩＩ）で表わされる、
【化５】
2014080730.tif 000006
［式（ＩＩ）中、
Ｒ４は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜１６のアルキル基または炭素数５〜１６のアリール基であり、
Ｙは、
【化６】
2014080730.tif 000007
であり、
ここで、
Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、Ｒ５Ａが結合する炭素原子、Ｒ５Ｂが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数５〜１６のアリールを形成するか、あるいは、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、いずれも水素原子であり、
Ｒ５Ｃ、Ｒ５Ｄは、Ｒ５Ｃが結合する炭素原子、Ｒ５Ｄが結合する炭素原子と一緒になって、シクロヘキシルまたはノルボルニルを形成し、
Ｒ６は、糖鎖、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドであり、
波線は、前記Ｘへの結合部分を示す。］
ことが好ましい。【００１６】
また、本発明の化合物またはその塩は、一態様において、
前記生理活性物質は、ペプチド部分を有しており、
前記Ｘの前記Ｒ１との結合は、
（１）前記生理活性物質の前記ペプチド部分のＮ末端のアミノ基におけるアミド結合、
（２）前記生理活性物質の前記ペプチド部分のセリン残基、スレオニン残基またはチロシン残基の側鎖に存在するヒドロキシ基におけるエステル結合（但し、前記生理活性物質の前記ペプチド部分が、セリン残基、スレオニン残基またはチロシン残基を有する場合に限る）、
（３）前記生理活性物質の前記ペプチド部分のアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基の側鎖に存在するカルボキシ基における酸無水物結合（但し、前記生理活性物質の前記ペプチド部分が、アスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基を有する場合に限る）、
（４）前記生理活性物質の前記ペプチド部分のリシン残基、アスパラギン残基、アルギニン残基、ヒスチジン残基またはトリプトファン残基の側鎖に存在するアミノ基におけるアミド結合（但し、前記生理活性物質の前記ペプチド部分が、リシン残基、アスパラギン残基、アルギニン残基、ヒスチジン残基またはトリプトファン残基を有する場合に限る）、
（５）前記生理活性物質の前記ペプチド部分のシステイン残基の側鎖に存在するチオール基におけるチオエステル結合（但し、前記生理活性物質の前記ペプチド部分が、システイン残基を有する場合に限る）、または、
（６）前記生理活性物質の前記ペプチド部分のＣ末端のカルボキシ基における酸無水物結合、
である、
ことが好ましい。【００１７】
また、本発明の化合物またはその塩は、一態様において、
前記Ｒ１は、下記式（ＩＩＩ）で表わされ、
【化７】
2014080730.tif 000008
［式（ＩＩＩ）中、
Ｒ４は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜１６のアルキル基または炭素数５〜１６のアリール基であり、
Ｙは、
【化８】
2014080730.tif 000009
であり、
ここで、
Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、Ｒ５Ａが結合する炭素原子、Ｒ５Ｂが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数５〜１６のアリールを形成するか、あるいは、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、いずれも水素原子であり、
Ｒ５Ｃ、Ｒ５Ｄは、Ｒ５Ｃが結合する炭素原子、Ｒ５Ｄが結合する炭素原子と一緒になって、シクロヘキシルまたはノルボルニルを形成し、
Ｒ７は、−Ｓ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−糖鎖または−ＣＯＮＨ−糖鎖であり、
Ｒ８は、水素原子、炭素数１〜１６のアシル基、Ｆｍｏｃ基、Ｂｏｃ基、Ｚ基、Ｔｒｏｃ基、またはＡｌｌｏｃ基等のカルバメート系保護基、糖鎖、アミノ酸、ポリペプチド、糖鎖付加アミノ酸、または糖鎖付加ポリペプチドであり、
波線は、Ｘへの結合部分を示す。］
前記生理活性物質は、少なくとも１つのアミノ基を有しており、
前記Ｘの前記Ｒ１との結合は、当該少なくとも１つのアミノ基における結合である、
ことが好ましい。【００１８】
また、本発明は、一態様において、
前記Ｒ１は、下記式（ＩＶ）で表わされ、
【化９】
2014080730.tif 000010
［式（ＩＶ）中、
Ｒ４は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜１６のアルキル基または炭素数５〜１６のアリール基であり、
Ｒ７は、−Ｓ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−糖鎖または−ＣＯＮＨ−糖鎖であり、
Ｒ８は、水素原子、炭素数１〜１６のアシル基、Ｆｍｏｃ基、Ｂｏｃ基、Ｚ基、Ｔｒｏｃ基、またはＡｌｌｏｃ基等のカルバメート系保護基、糖鎖、アミノ酸、ポリペプチド、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドであり、
Ｒ９は、それぞれ独立に、水素原子、ハロゲン、シアノ基、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基、ニトロ基、メシル基、トシル基、炭素数１〜３のアシル基、ヒドロキシ基、カルボキシ基またはアミノ基であり、
波線は、Ｘへの結合部分を示す。］
前記生理活性物質は、少なくとも１つのアミノ基を有しており、
前記Ｘの前記Ｒ１との結合は、当該少なくとも１つのアミノ基における結合である、
ことが好ましい。【００１９】
また、本発明の化合物またはその塩は、一態様において、
前記式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）または（ＩＶ）における４つの前記Ｒ４は、いずれも水素原子である
ことが好ましい。【００２０】
また、本発明の化合物またはその塩は、一態様において、
前記式（ＩＶ）における少なくとも１つの前記Ｒ９は、ハロゲンである、
ことが好ましい。【００２１】
また、本発明の化合物またはその塩は、一態様において、
前記式（ＩＶ）における４つの前記Ｒ９は、いずれも塩素である、
ことが好ましい。【００２２】
また、本発明の化合物またはその塩は、一態様において、
前記「糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチド」において、糖鎖は、アミノ酸またはポリペプチドにおける、ＡｓｎまたはＣｙｓに結合している、
ことが好ましい。【００２３】
また、本発明の化合物またはその塩は、一態様において、
前記「糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチド」において、糖鎖は、アミノ酸またはポリペプチドと、リンカーを介することなく結合している、
ことが好ましい。【００２４】
また、本発明の化合物またはその塩は、一態様において、
前記「糖鎖、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチド」における糖鎖は、４個以上の糖残基からなる、
ことが好ましい。【００２５】
また、本発明の化合物またはその塩は、一態様において、
前記「糖鎖、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチド」における糖鎖は、２本鎖複合型糖鎖、３本鎖複合型糖鎖、または４本鎖複合型糖鎖である、
ことが好ましい。【００２６】
また、本発明の化合物またはその塩は、一態様において、
前記糖鎖が、ジシアロ糖鎖、モノシアロ糖鎖、アシアロ糖鎖、ジグルクナック糖鎖およびジマンノース糖鎖からなる群から選択される２本鎖複合型糖鎖である、
ことが好ましい。【００２７】
また、本発明の化合物またはその塩は、一態様において、
前記「糖鎖、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチド」における糖鎖が、下記式：
【化１０】
2014080730.tif 000011
［式中、Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なって、
【化１１】
2014080730.tif 000012
を示す。Ａｃは、アセチル基を示す。］
で表される糖鎖である、
ことが好ましい。【００２８】
また、本発明の化合物またはその塩は、一態様において、
前記生理活性物質は、低分子生理活性物質または生体高分子である、
ことが好ましい。【００２９】
また、本発明の化合物またはその塩は、一態様において、
前記生体高分子は、タンパク質、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、およびペプチド核酸からなる群より選択される、
ことが好ましい。【００３０】
また、本発明の化合物またはその塩は、一態様において、
無修飾の生理活性物質と比較して、向上した水溶性を有する、
ことが好ましい。【００３１】
また、本発明の化合物またはその塩は、一態様において、
前記向上した水溶性が、モル濃度において、前記「無修飾の生理活性物質」と比較して、１０〜１，０００，０００倍である、
ことが好ましい。【００３２】
また、本発明の化合物またはその塩は、一態様において、
前記糖鎖付加リンカー部分がｐＨおよび／または温度に依存して自己触媒的に切断される、
ことが好ましい。【００３３】
以上述べた本発明の一又は複数の特徴を、任意に組み合わせたものも、本発明の化合物またはその塩であることはいうまでもない。【００３４】
本発明は、別の態様において、
前記化合物又はその塩における糖鎖は、実質的に均一である、
組成物を提供する。【００３５】
また、本発明の組成物は医薬組成物であることが好ましい。【００３６】
本発明は、別の態様において、
（Ｉ）前記化合物またはその塩、および
（ＩＩ）薬理学的に許容される担体
を含む、
医薬組成物を提供する。【００３７】
また、本発明の医薬組成物は、一態様において、
前記生理活性物質は、対象に投与後に速やかに活性を発揮する、
ことが好ましい。【００３８】
また、本発明の医薬組成物は、一態様において、
ワクチン接種に用いられる、
ことが好ましい。【００３９】
以上述べた本発明の一又は複数の特徴を、任意に組み合わせたものも、本発明の（医薬）組成物であることはいうまでもない。【００４０】
本発明は、別の態様において、
糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩の製造方法であって、
ここで、前記生理活性物質は、少なくとも１つのアミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、またはカルボキシ基を有するペプチド部分を含んでおり、
以下のステップ、
（ａ）固相合成法により、樹脂上に前記ペプチド部分を合成するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）で合成された前記ペプチド部分における前記「アミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、またはカルボキシ基」に、下記式（Ｉ’）で表わされるリンカー部分を結合させるステップと、
【化１２】
2014080730.tif 000013
［式（Ｉ’）中、
Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜１６のアルキル基、または、炭素数５〜１６のアリール基であり（ただし、Ｒ２およびＲ３の両方が、同時に、水素原子とはならない）、または、Ｒ２およびＲ３はそれらが結合している窒素原子と一緒になって、３〜７員の複素環を形成し、
Ｒ４は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜１６のアルキル基または炭素数５〜１６のアリール基であり、
Ｙは、
【化１３】
2014080730.tif 000014
であり、
ここで、
Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、Ｒ５Ａが結合する炭素原子、Ｒ５Ｂが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数５〜１６のアリール、炭素数５〜１６のシクロアルケニル、炭素数７〜１３のビシクリル、炭素数９〜１４のトリシクリル、炭素数６〜１４のキノン、または５〜１０員の複素環を形成するか、あるいは、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン、シアノ基、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基、ニトロ基、メシル基、トシル基、炭素数１〜３のアシル基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基、置換または非置換のフェニル基、ベンジル基であり、
Ｒ５Ｃ、Ｒ５Ｄは、Ｒ５Ｃが結合する炭素原子、Ｒ５Ｄが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数４〜１６のシクロアルキル、炭素数５〜１６のシクロアルケニル、炭素数７〜１３のビシクリル、炭素数９〜１４のトリシクリル、または５〜１０員の複素環を形成し、
波線は、前記ペプチド部分の前記「アミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、またはカルボキシ基」との結合部分を示す。］
（ｃ）ステップ（ｂ）により、前記ペプチド部分の前記「アミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、またはカルボキシ基」に結合された前記リンカー部分のＲ２またはＲ３における前記アルキル基、前記アリール基、または前記複素環における少なくとも１つの水素原子を、糖鎖、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドによって置換するステップ
を含む、
製造方法を提供する。【００４１】
また、本発明は、さらに別の態様において、
糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩の製造方法であって、
ここで、前記生理活性物質は、少なくとも１つのアミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、またはカルボキシ基を有するペプチド部分を含んでおり、
前記ペプチド部分における前記「アミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、またはカルボキシ基」に、下記式（Ｉ’’）で表わされる糖鎖付加リンカーを脱水縮合により結合させる製造方法を提供する。
【化１４】
2014080730.tif 000015
［式（Ｉ’’）中、
Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜１６のアルキル基、または、炭素数５〜１６のアリール基であり（ただし、Ｒ２およびＲ３の両方が、同時に、水素原子とはならない）、または、Ｒ２およびＲ３はそれらが結合している窒素原子と一緒になって、３〜７員の複素環を形成し、
前記アルキル基、前記アリール基、または前記複素環における少なくとも１つの水素原子は、糖鎖、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドによって置換されており、
Ｒ４は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜１６のアルキル基または炭素数５〜１６のアリール基であり、
Ｙは、
【化１５】
2014080730.tif 000016
であり、
ここで、
Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、Ｒ５Ａが結合する炭素原子、Ｒ５Ｂが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数５〜１６のアリール、炭素数５〜１６のシクロアルケニル、炭素数７〜１３のビシクリル、炭素数９〜１４のトリシクリル、炭素数６〜１４のキノン、または５〜１０員の複素環を形成するか、あるいは、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン、シアノ基、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基、ニトロ基、メシル基、トシル基、炭素数１〜３のアシル基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基、置換または非置換のフェニル基、ベンジル基であり、
Ｒ５Ｃ、Ｒ５Ｄは、Ｒ５Ｃが結合する炭素原子、Ｒ５Ｄが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数４〜１６のシクロアルキル、炭素数５〜１６のシクロアルケニル、炭素数７〜１３のビシクリル、炭素数９〜１４のトリシクリル、または５〜１０員の複素環を形成する。］【００４２】
以上述べた本発明の一又は複数の特徴を、任意に組み合わせたものも、本発明の化合物またはその塩の製造方法であることはいうまでもない。【００４３】
また、本発明は、別の態様において、
前記いずれかの製造方法により得られうる、化合物またはその塩を提供する。【００４４】
また、本発明は、別の態様において、
前記いずれかの製造方法により得られた、化合物またはその塩を提供する。【００４５】
以上述べた本発明の一又は複数の特徴を、任意に組み合わせたものも、本発明の化合物またはその塩であることはいうまでもない。【００４６】
本発明は、さらに別の態様において、
少なくとも１つのアミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、またはカルボキシ基を有する生理活性物質との結合に用いてもよい、糖鎖付加リンカーであって、
前記糖鎖付加リンカーは、下記式（Ｂ）で表され、
Ｒ１−Ｌ      （Ｂ）
ここで、
Ｒ１は、糖鎖付加リンカー部分を意味し、
Ｒ１は、下記式（Ｉ）で表わされ、
【化１６】
2014080730.tif 000017
［式（Ｉ）中、
Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜１６のアルキル基、または、炭素数５〜１６のアリール基であり（ただし、Ｒ２およびＲ３の両方が、同時に、水素原子とはならない）、または、Ｒ２およびＲ３はそれらが結合している窒素原子と一緒になって、３〜７員の複素環を形成し、
前記アルキル基、前記アリール基、または前記複素環における少なくとも１つの水素原子は、糖鎖、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドによって置換されており、
Ｒ４は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜１６のアルキル基または炭素数５〜１６のアリール基であり、
Ｙは、
【化１７】
2014080730.tif 000018
であり、
ここで、
Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、Ｒ５Ａが結合する炭素原子、Ｒ５Ｂが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数５〜１６のアリール、炭素数５〜１６のシクロアルケニル、炭素数７〜１３のビシクリル、炭素数９〜１４のトリシクリル、炭素数６〜１４のキノン、または５〜１０員の複素環を形成するか、あるいは、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン、シアノ基、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基、ニトロ基、メシル基、トシル基、炭素数１〜３のアシル基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基、置換または非置換のフェニル基、ベンジル基であり、
Ｒ５Ｃ、Ｒ５Ｄは、Ｒ５Ｃが結合する炭素原子、Ｒ５Ｄが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数４〜１６のシクロアルキル、炭素数５〜１６のシクロアルケニル、炭素数７〜１３のビシクリル、炭素数９〜１４のトリシクリル、または５〜１０員の複素環を形成し、
波線は、Ｌへの結合部分を示す。］
Ｌは、脱離基を意味する、
糖鎖付加リンカーを提供する。【００４７】
以上述べた本発明の一又は複数の特徴を、任意に組み合わせたものも、本発明の糖鎖付加リンカーであることはいうまでもない。
【発明の効果】
【００４８】
本発明に係る、糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩は、ヒドロキシ基が多く、かつ極性が高い糖鎖を有するため、無修飾の生理活性物質と比較して、向上した水溶性を有する。また、担体が生分解性の性質を有する糖鎖なので、生体に投与した場合に薬害が少ない。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】ＰＢＳに溶解した糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１）と無修飾のケメリン９（化合物３）の、３７℃、ｐＨ７．４における経時的な存在量の変化を示す図である。縦軸は波長２２０ｎｍでの吸光度を表し、横軸は保持時間（分）を表す。矢印で示される１のピークは、糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１）を表す。矢印で示される３のピークは、無修飾のケメリン９を表す。
【図２】ＰＢＳ（３７℃、ｐＨ７．４）に溶解した糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１）の、インキュベーション時間に対する相対濃度を示す図である。縦軸は相対濃度を表し、横軸は時間（ｈ）を表す。縦軸に記載の表現「Ｒｅｌａｔｉｖｅ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  １」は、溶解した糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１）の相対濃度を意味する。
【図３】ＰＢＳ（３７℃、ｐＨ７．４）に溶解した糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１）の、インキュベーション時間に対する相対濃度の自然対数を示す図である。縦軸は相対濃度の自然対数（Ｌｎ（Ｃ／Ｃ０））を表し、横軸は時間（ｈ）を表す。
【図４】０．１Ｍ  酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）または当該酢酸緩衝液に基づいて作成したエマルション溶液に溶解した糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１）の、２５℃での、インキュベーション時間に対する相対濃度を比較した図である。縦軸は相対濃度を表し、横軸は時間（ｈ）を表す。黒い丸印の点線（「１  ｉｎ  ｅｍｕｓｉｏｎ」）と白い丸印の線（「１  ｉｎ  ａｃｅｔａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒ」）は、それぞれ、エマルション溶液または０．１Ｍ  酢酸緩衝液中の糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１）の、インキュベーション時間に対する相対濃度を表す。縦軸に記載の表現「Ｒｅｌａｔｉｖｅ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  １」は、溶解した糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１）の相対濃度を意味する。
【発明を実施するための形態】
【００５０】
以下、本発明の好適な実施態様について説明する。
【００５１】
本明細書において、表現：「糖鎖付加リンカー部分を有する生理活性物質誘導体」は、本発明の「糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩」と同じ意味で用いられる。また、本明細書において、用語「コンジュゲート」は、薬物（生理活性物質等）に、異なる物質（例えば、担体または担体リンカー（糖鎖付加リンカー等））を結合させたものを意味する。
【００５２】
本発明の糖鎖付加リンカーは、担体として糖鎖をリンカーに付加したものである。本発明の糖鎖付加リンカーは、２本以上の同一または異なる糖鎖を有してもよい。
【００５３】
本明細書において、生理活性物質部分（Ｘ）と糖鎖付加リンカー部分（Ｒ１）とが結合することにより、式（Ａ）「Ｒ１−Ｘ」で表される糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩を形成することができる。
【００５４】
本発明において、生理活性物質は、その構造の一部が変化することにより（修飾されることにより）、糖鎖付加リンカー部分と結合できる。しかしながら、ひとたび糖鎖付加リンカー部分が切断されると、生理活性物質が遊離する。当該遊離した生理活性物質の構造は、糖鎖付加リンカー部分に結合する前（修飾される前）の化合物構造と同じであることが好ましい。本明細書では、糖鎖付加リンカーに結合していない生理活性物質を「無修飾の生理活性物質」と称する。無修飾の生理活性物質は、生理活性物質そのものが本来有する薬物動態学的、免疫原性的、毒物学的または薬理学的特性を有することが好ましいが、その特性が改変、修飾等されていてもよい。本発明の「糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩」は、所定の条件下で、糖鎖付加リンカー部分が切断されることにより、無修飾の生理活性物質を放出することが好ましい。
【００５５】
本発明の糖鎖付加リンカーは、結合するパートナーとなる生理活性物質が有する薬物動態学的、免疫原性的、毒物学的または薬理学的特性等に悪影響を与えないことが好ましい。
【００５６】
本明細書において、「生理活性物質」は、限定はされないが、生体の生理活動に直接的または間接的に、何らかの作用・影響をもたらす物質を意味する。生理活性物質は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏでの使用を意図してよい。当該生理活性物質は、それ自身が生体内で機能を発揮しないものであってもよい。当該生理活性物質は、ある態様において、薬物と同義に用いられてよい。当該生理活性物質には、ワクチンまたは医薬品として有用なもののみならず、生体の生理活動に直接的に作用・影響をもたらさない物質、例えば診断薬が含まれてよい。また、当該生理活性物質には、天然由来のもののみならず、その一部を欠失、修飾または置換させたもの（誘導体ともいう）も含まれてよい。さらに、人工的に合成した物質（例えば、組み換えＤＮＡテクノロジー等の生物学的アプローチ、またはペプチド固相合成法等の化学的合成アプローチにより製造した物質）、または天然由来の物質の一部と人工的に合成した物質の一部を融合したものも含まれてよい。したがって、本発明における生理活性物質には、例えば、ＧＦＰ（緑色蛍光タンパク質）等のレポータータンパク質またはフルオレセイン等の蛍光色素が融合した物質も含まれる。
【００５７】
本発明における生理活性物質は、少なくとも１つのアミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、またはカルボキシ基を有する。本発明における生理活性物質は、少なくとも１つのアミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、またはカルボキシ基を有する、低分子生理活性物質または生体高分子であることが好ましい。
【００５８】
本明細書において、「生体高分子」は、生理活性物質のうち、高分子の有機化合物であることを意味してよい。一方、「低分子生理活性物質」は、生理活性物質のうち、低分子の有機化合物であることを意味してよい。生体高分子は、例えば、タンパク質、核酸または多糖類等の高分子化合物またはその一部であってもよいが、人工的に合成したものでもよい。また、低分子生理活性物質は、例えば、生体内で、生体高分子と相互作用できるものであってよく、人工的に合成したものでもよい。しかしながら、本明細書では、生体高分子と低分子生理活性物質は、場合により、同じものを指してもよい。
【００５９】
本発明における生体高分子は、一態様において、少なくとも１つのアミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、またはカルボキシ基を有する、タンパク質、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、またはペプチド核酸であるか、あるいは、その構造の一部に、タンパク質、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、またはペプチド核酸を含むのが好ましい。本明細書において、タンパク質またはポリペプチドに由来する部分を「ペプチド部分」ともいう。
【００６０】
本明細書において、「タンパク質」は、複数のアミノ酸がアミド結合により結合しているものであれば特に限定されず、既知タンパク質、新規タンパク質、またはそれらの改変体を含む。本明細書において、「改変体」とは、タンパク質を天然又は人工的に部分的に改変した化合物である。そのような改変として、例えば、タンパク質の１つ又は複数のアミノ酸残基の、アルキル化、アシル化（例えばアセチル化）、アミド化（例えば、タンパク質のＣ末端のアミド化）、カルボキシル化、エステル形成、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、リン酸化、ヒドロキシ化、脱水縮合または標識成分の結合等が挙げられる。あるいは、当該改変体は、既知タンパク質または新規タンパク質の構造の一部を欠失、置換または融合させたもの等が挙げられる。生理活性物質としての生体高分子がタンパク質である場合、タンパク質は、限定はされないが、例えば、固相合成、液相合成、細胞による合成、天然に存在するものを分離抽出する方法等、当業者に公知の方法を用いて合成してよい。
【００６１】
本明細書において、「ポリペプチド」及び「ペプチド」は、原則として、タンパク質と同義で用いられる。ただし、ポリペプチド及びペプチドは、タンパク質の構造の一部である場合や、高次構造をとらない比較的短いアミノ酸鎖を指すために用いられてもよい（すなわち、タンパク質の断片）。本発明におけるポリペプチドまたはペプチドには、例えば、アミノ酸が２個結合したジペプチド、アミノ酸が３個結合したトリペプチド、アミノ酸が４個結合したテトラペプチド、アミノ酸が通常１０個以下の数で結合したオリゴペプチドも含まれてよい。
【００６２】
本明細書において、「アミノ酸」とは、その最も広い意味で用いられ、天然のアミノ酸、例えばセリン（Ｓｅｒ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、バリン（Ｖａｌ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、アラニン（Ａｌａ）、チロシン（Ｔｙｒ）、グリシン（Ｇｌｙ）、リシン（Ｌｙｓ）、アルギニン（Ａｒｇ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、システイン（Ｃｙｓ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、プロリン（Ｐｒｏ）のみならず、アミノ酸変異体及び誘導体といった、非天然アミノ酸も含まれる。当業者であれば、この広い定義を考慮して、本明細書におけるアミノ酸として、例えばＬ−アミノ酸；Ｄ−アミノ酸；アミノ酸変異体、アミノ酸誘導体等の化学修飾されたアミノ酸；ノルロイシン、β−アラニン、オルニチン等、生体内でタンパク質の構成材料とならないアミノ酸；及び当業者に公知のアミノ酸の特性を有する、化学的に合成された化合物等が挙げられることを当然に理解する。非天然アミノ酸の例としては、α−メチルアミノ酸（α−メチルアラニン等）、Ｄ−アミノ酸（Ｄ−アスパラギン酸、Ｄ−グルタミン酸等）、ヒスチジン様アミノ酸（２−アミノ−ヒスチジン、β−ヒドロキシ−ヒスチジン、ホモヒスチジン、α−フルオロメチル−ヒスチジン、α−メチル−ヒスチジン等）、側鎖に余分なメチレンを有するアミノ酸（「ホモ」アミノ酸）及び側鎖中のカルボン酸官能基アミノ酸がスルホン酸基で置換されるアミノ酸（システイン酸等）があげられる。
【００６３】
本明細書における「ポリヌクレオチド」には、限定はされないが、２〜２０００ヌクレオチド配列を有する、１本鎖または２本鎖のＤＮＡまたはＲＮＡ；１本鎖または２本鎖のｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡまたは核酸（ＤＮＡもしくはＲＮＡ）アプタマー；または、それらが化学的に修飾された化合物が含まれる。そのような修飾には、限定はされないが、当該ポリヌクレオチドの全体または一部に対して、電荷、分極性（ｐｏｌａｒｉｚａｂｉｌｉｔｙ）、水素結合、静電相互作用、または流動性（ｆｌｕｘｉｏｎａｌｉｔｙ）をさらに与える、他の化学基による修飾が挙げられる。ポリヌクレオチドは、２０塩基対またはそれ未満のサイズを有するオリゴヌクレオチドであってもよい。
【００６４】
本明細書において、「ペプチド核酸」は、限定はされないが、核酸（ＤＮＡまたはＲＮＡ）の糖リン酸骨格を、Ｎ−（２−アミノエチル）グリシン骨格に変換した修飾核酸を意味する。当該ペプチド核酸は、当業者に公知の方法でさらに修飾されてよい。
【００６５】
本発明における生体高分子には、以下に限定はされないが、一態様において、例えば、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、オキシトシン、アデノシンデアミナーゼ、アガルシダーゼ、α１アンチトリプシン、α１プロテアーゼインヒビター、アルテプラーゼ、アミリン、シムリン、アニストレプラーゼ、アンクロッドセリンプロテアーゼ、アンチトロンビンＩＩＩ、アンチトリプシン、アプロチニン、アスパラギナーゼ、アトシバン、ビファリン（Ｂｉｐｈａｌｉｎ）、ビバリルジン、骨形成タンパク質、膵臓トリプシンインヒビター、カドヘリン断片、カルシトニン（例えばサケ由来）、コラゲナーゼ、補体Ｃ１エステラーゼインヒビター、コノトキシン、サイトカイン受容体断片、ＤＮアーゼ、ダイノルフィンＡ、エンドルフィン、エンフビルチド、エンケファリン、エリスロポエチン、エキセンディン（エキセンディン−３またはエキセンディン−４等）、第ＶＩＩ因子（第ＶＩＩａ因子）、第ＶＩＩＩ因子（第ＶＩＩＩａ因子）、第ＩＸ因子、フィブリノリジン、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、成長ホルモン放出ペプチド２（ＧＨＲＰ−２）、卵胞刺激ホルモン、グラミシジン、グレリン、デスアシル型グレリン、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、ガラクトシダーゼ、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド（エクセナチド、ＧＬＰ−１、ＧＬＰ−２など）、グルコセレブロシダーゼ、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）、ホスホリパーゼ活性化タンパク質（ＰＬＡＰ）、絨毛性性腺刺激ホルモン、ヘモグロビン、ヒルジン、ヒトセリンプロテアーゼインヒビター、ヒアルロニダーゼ、イズロニダーゼ、免疫グロブリン（ＩｇＧ  Ｆｃ領域等）、インターロイキン（１α、１β、２、３、４、５、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１７、１８または２１等）、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１ｒａ）、インスリン、インスリン様成長因子、インスリン様成長因子結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ）、インターフェロン（α（α２ａ、α２ｂ、α２ｃ等）、β（β１ａ、β１ｂ）、γ（γ１ａ、γ１ｂ）、λ、ω、ε、κ等）、細胞内接着分子、ケラチノサイト増殖因子（ＫＧＦ）、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド（ＰＳＧＬ）、トランスフォーミン増殖因子、ラクターゼ、レプチン、ロイプロリド、黄体形成ホルモン、ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ、ＢＮＰまたはＣＮＰ、またはそれらの断片）、ニューロペプチドＹ、パンクレリパーゼ、膵臓ポリペプチド、パパイン、副甲状腺ホルモン（パラトルモン等）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、ペプシン、ペプチドＹＹ、血小板活性化因子アセチルヒドロラーゼ（ＰＡＦ−ＡＨ）、プロラクチン、プロテインＡ、プロテインＣ、チモシンα１、オクトレオチド、セクレチン、セルモレリン、可溶性腫瘍壊死因子受容体、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）、ソマトロピン（成長ホルモン）、ソマトプリム、ソマトスタチン、ストレプトキナーゼ、スクラーゼ、テルリプレシン、破傷風毒素Ｃフラグメント、チラクターゼ、トロンビン、チモシン、甲状腺刺激ホルモン、チロトロピン、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、ＴＮＦ受容体、組織プラスミノゲンアクチベーター（ｔＰＡ）、甲状��ホルモン（カルシトニン等）、ウロジラチン、尿酸オキシダーゼ、ウロキナーゼ、ハプテン、抗原等を用いたワクチン（癌ワクチン、ＨＩＶ抗原、Ａ型肝炎ワクチン、Ｂ型肝炎ワクチン（ＨＢｓ抗原等）、インフルエンザワクチン、ライム病ワクチン等）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、ケメリン（Ｃｈｅｍｅｒｉｎ））、ＨＥＲ２タンパク質（ヒト上皮増殖因子受容体）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、血管作動性腸管ペプチド、バソプレッシン、ジコノチド、レクチン、コリンエステラーゼ、アミラーゼ、またはペプシン、またはそれらの改変体が含まれる。
【００６６】
本発明における低分子生理活性物質には、一態様において、例えば、少なくとも１つのアミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、またはカルボキシ基を有する、中枢神経系活性剤、抗感染剤、抗アレルギー剤、免疫調節剤、抗肥満剤、抗凝血剤、抗糖尿病剤、抗がん剤、抗新生物剤、抗菌剤、抗真菌剤、鎮痛剤、避妊薬、抗炎症剤、ステロイド剤、血管拡張剤、血管収縮剤または心血管作動薬が挙げられる。
【００６７】
本発明における低分子生理活性物質には、限定はされないが、一態様として、例えば、アカルボース、アラプロクラート、アレンドロナート、アマンタジン、アミカシン、アミネプチン、アミノグルテチミド、アミスルプリド、アムロジピン、アモトサレン、アモキサピン、アモキシシリン、アンフェタミン、アンホテリシンＢ、アンピシリン、アンプレナビル、アムリノン、アニレリジン、アプラクロニジン、アプラマイシン、アルチカイン、アテノロール、アトモキセチン、アビザホン、バクロフェン、ベナゼプリル、ベンセラジド、ベンゾカイン、ベタキソロール、ブレオマイシン、ブロムフェナク、ブロファロミン、カルベジロール、カシン、カチノン、カルブタミド、セファレキシン、クリナフロキサシン、シプロフロキサシン、デフェロキサミン、デラビルジン、デシプラミン、ダウノルビシン、デクスメチルフェニデート、デクスメチルフェニデート、ジアフェニルスルホン、ジゾシルピン、ドーパミン、ドブタミン、ドルゾラミド、ドキソルビシン、デュロキセチン、エフロールニチン、エナラプリル、エピネフリン、エピルビシン、エルゴリン、エルタペネム、エスモロール、エノキサシン、エタンブトール、フェンフルラミン、フェノルドパム、フェノテロール、フィンゴリモド、フレカイニド、フルボキサミン、ホスアンプレナビル、フロバトリプタン、フロセミド、フルオエキセチン、ガバペンチン、ガチフロキサシン、ゲミフロカシン、ゲンタマイシン、グレパフロキサシン、ヘキシルカイン、ヒドララジン、ヒドロクロロチアジド、イコフンギペン、イダルビシン、イミキモド、イソプロテレノール、イスラジピン、カナマイシンＡ、ケタミン、ラベタロール、ラミブジン、レボブノロール、レボドパ、レボチロキシン、リシノプリル、ロメフロキサシン、ロラカルベフ、マプロチリン、メフロキン、メルファラン、メマンチン、メロペネム、メサラジン、メスカリン、メチルドパ、メチレンジオキシメタンフェタミン、メトプロロール、ミルナシプラン、ミトキサントロン、モキシフロキサシン、ノルエピネフリン、ノルフロキサシン、ノルトリプチリン、ネオマイシンＢ、ニスタチン、オセルタミビル、パミドロン酸、パロキセチン、パズフロキサシン、ペメトレキセド、ペリンドプリル、フェンメトラジン、フェネルジン、プレガバリン、プロカイン、プソイドエフェドリン、プロトリプチリン、レボキセチン、リトドリン、サバルビシン、サルブタモール、セロトニン、セルトラリン、シタグリプチン、ソタロール、スペクチノマイシン、スルファジアジン、スルファメラジン、セルトラリン、スプレクチノマイシン、スルファレン、スルファメトキサゾール、タクリン、タムスロシン、テルブタリン、チモロール、チロフィバン、トブラマイシン、トカイニド、トスフロキサシン、トランドラプリル、トラネキサム酸、トラニルシプロミン、トリメトレキサート、トロバフロキサシン、バラシクロビル、バルガンシクロビル、バンコマイシン、バイオマイシン、ビロキサジン、ザルシタビン、ペニシリン、セファロスポリン、ストレプトマイシン、デストマイシン、カスガマイシン、タイロシン、エリスロマイシン、オレアンドマイシン、スピラマイシン、リンコマイシン、コリスチン、バシトラシン、サリノマイシン、モネンシン、ラサロシド、テトラサイクリン、クロラムフェニコール、バージニアマイシン、スルファジメトキシン、オキソリン酸、ピロミド酸、ジフラゾン、ゼアラレノン、デオキシニバレノール、パツリン、フモニシン、オクラトキシン、テトロドトキシン、オカダ酸、サキシトシンまたはゴニオトキシン等が含まれる。
【００６８】
本発明における生理活性物質部分は、生理活性物質が有する少なくとも１つのアミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、またはカルボキシ基において、糖鎖付加リンカー部分またはリンカー部分（糖鎖が付加されていないリンカー部分）と結合する。前記アミノ基は、１級アミノ基または２級アミノ基であるのが好ましい。
【００６９】
本明細書において、「糖鎖付加アミノ酸」は、糖鎖が結合したアミノ酸であり、糖鎖とアミノ酸とは、リンカーを介さずに結合していてもよく、あるいは、リンカーを介して結合していてもよい。糖鎖とアミノ酸との結合部位に特に制限はないが、糖鎖の還元末端にアミノ酸が結合していることが好ましい。糖鎖が結合するアミノ酸の種類に特に限定はなく、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、Ｄ−アミノ酸のいずれを用いることもできる。糖鎖付加アミノ酸が生体内に糖ペプチド（糖タンパク質）として存在するものと同一又は類似の構造を有するという観点からは、糖鎖付加アミノ酸は、Ｎ−結合型糖鎖のような糖鎖付加Ａｓｎ、Ｏ−結合型糖鎖のような糖鎖付加Ｓｅｒ及び糖鎖付加Ｔｈｒが好ましい。
【００７０】
糖鎖とアミノ酸とがリンカーを介して結合している場合、リンカーとの結合容易性という観点からは、糖鎖付加アミノ酸のアミノ酸は、アスパラギン酸またはグルタミン酸等の分子内に２つ以上のカルボキシ基を持つアミノ酸；リシン、アルギニン、アスパラギン、ヒスチジン、トリプトファン等の分子内に２つ以上のアミノ基を持つアミノ酸；セリン、スレオニン、チロシン等の分子内にヒドロキシ基を持つアミノ酸；システイン等の分子内にチオール基を持つアミノ酸；アスパラギン、グルタミン等の分子内にアミド基を持つアミノ酸が好ましい。特に、反応性の観点からは、糖鎖付加アミノ酸のアミノ酸は、アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニン、セリン、スレオニン、システイン、アスパラギン、グルタミンが好ましく、システインまたはアスパラギンがさらに好ましい。
【００７１】
糖鎖とアミノ酸とがリンカーを介して結合している場合、リンカーとしては、当該分野において用いられているものを広く使用することができる。例えば、
−ＮＨ−（ＣＨ２）ａ−（ＣＯ）−ＣＨ２−
（式中、ａは整数であり、目的とするリンカー機能を阻害しない限り限定されるものではないが、好ましくは０〜４の整数を示す。）；
Ｃ１〜１０ポリメチレン；
−ＣＨ２−Ｒ−；
（式中、Ｒは、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、置換または非置換のアリール、置換または非置換の炭素環基、置換または非置換の複素環基を含む群より選択される基から水素原子が１つ脱離して生ずる基である。）
−（ＣＯ）−（ＣＨ２）ａ−（ＣＯ）−
（式中、ａは整数であり、目的とするリンカー機能を阻害しない限り限定されるものではないが、好ましくは０〜４の整数を示す。）
等を挙げることができる。
【００７２】
本発明における糖鎖付加アミノ酸において、糖鎖とアミノ酸とがリンカーを介さずに結合している一態様として、例えば、アスパラギンの側鎖のアミノ基上の水素原子が、糖鎖の還元末端部分で置換されてもよい。この場合、糖鎖の還元末端に存在する脱離基は、限定されないが、例えば、塩素、臭素またはフッ素等であってよい。
【００７３】
本発明における糖鎖付加アミノ酸において、糖鎖とアミノ酸とがリンカーを介して結合している一態様として、例えば、システインの側鎖のチオール基上の水素原子が、リンカーを介して糖鎖の還元末端に結合していてもよい（例えば、リンカーが−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−の場合、糖鎖の還元末端は当該リンカー中の窒素原子に結合している）。この場合、糖鎖の還元末端に結合したリンカーの脱離基は、限定されないが、例えば、塩素、臭素またはフッ素等であってよい。
【００７４】
本明細書において、「糖鎖付加ポリペプチド」は、タンパク質（またはポリペプチドまたはペプチド）に少なくとも１つの糖鎖が付加された化合物であれば特に限定されない。糖鎖付加ポリペプチドは、本明細書において、「糖タンパク質」または「糖ペプチド」と互換的に用いられる。糖鎖付加ポリペプチドは、前述の糖鎖付加アミノ酸を含むポリペプチドであってよい。糖鎖付加ポリペプチドにおける、糖鎖とアミノ酸との結合態様、及びポリペプチドを構成するアミノ酸の種類等は、本発明における糖鎖付加アミノ酸と同様に規定されてよい。糖鎖に結合する、ポリペプチドにおけるアミノ酸（残基）は、ポリペプチドのＮ末端、Ｃ末端に限定されず、適切な場合には、ポリペプチドを構成するアミノ酸（残基）のどれであってもよい。本発明における糖鎖付加ポリペプチドにおけるアミノ酸残基は好ましくは２〜１００アミノ酸残基、さらに好ましくは２〜１０アミノ酸残基であってよい。また、本発明における糖鎖付加ポリペプチドにおいて、糖鎖とポリペプチドが結合する部分のアミノ酸以外のアミノ酸は、比較的自由に選択してよい。一態様として、糖鎖とポリペプチドが結合する部分のアミノ酸が、例えばアスパラギン、システイン、グルタミンまたはリシンである一方で、糖鎖とポリペプチドが結合する部分のアミノ酸以外のアミノ酸(例えば、（糖鎖付加）リンカー部分と結合するアミノ酸)は特に制限されないことを当業者は理解する。
【００７５】
本発明の化合物またはその塩を生体内に投与する観点からは、本発明における糖鎖付加アミノ酸、または糖鎖付加ポリペプチドを構成するアミノ酸は、生体内に存在するアミノ酸からなることが好ましい。
【００７６】
本明細書中において、「糖鎖」とは、単位糖（単糖及び／又はその誘導体）が２つ以上連なってできた化合物の他、１つの単位糖（単糖及び／又はその誘導体）からなる化合物を含む。このような糖鎖として、限定はされないが、例えば、生体中に含有される単糖類及び多糖類（グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、キシロース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、シアル酸またはそれらの複合体または誘導体）の他、分解された多糖、糖タンパク質、プロテオグリカン、グリコサミノグリカン、または糖脂質等の複合生体分子から分解又は誘導された糖鎖等が挙げられる。単位糖が２つ以上連なる場合、各々の単位糖同士の間は、グリコシド結合による脱水縮合によって結合してよい。糖鎖は直鎖型であっても、分岐鎖型であってもよい。
【００７７】
また、本明細書中において、「糖鎖」には糖鎖の誘導体も含まれる。糖鎖の誘導体としては、例えば、糖鎖を構成する糖が、カルボキシ基を有する糖（例えば、Ｃ１位が酸化されてカルボン酸となったアルドン酸（例えば、Ｄ−グルコースが酸化されたＤ−グルコン酸）、末端のＣ原子がカルボン酸となったウロン酸（Ｄ−グルコースが酸化されたＤ−グルクロン酸））、アミノ基又はアミノ基の誘導体（例えば、アセチル化されたアミノ基）を有する糖（例えば、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン、Ｎ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミン等）、アミノ基及びカルボキシ基を両方とも有する糖（例えば、Ｎ−アセチルノイラミン酸（シアル酸）、Ｎ−アセチルムラミン酸等）、デオキシ化された糖（例えば、２−デオキシ−Ｄ−リボース）、硫酸基を含む硫酸化糖、リン酸基を含むリン酸化糖等である糖鎖が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７８】
本発明における糖鎖は、一態様において、生体内で複合糖質（糖タンパク質（又は糖ポリペプチド）、プロテオグリカン、または糖脂質等）として存在する糖鎖であってよい。あるいは、別の態様において、生体内では複合糖質として存在しない糖質であってもよい。
【００７９】
生体内で複合糖質として存在する糖鎖は、本発明の化合物またはその塩を生体に投与するという観点から好ましい。かかる糖鎖としては、限定はされないが、生体内で糖タンパク質としてタンパク質に結合している糖鎖であるＮ−結合型糖鎖、Ｏ−結合型糖鎖等が挙げられる。Ｏ−結合型糖鎖が結合している糖タンパク質においては、ペプチドのＳｅｒ又はＴｈｒにＮ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、キシロース、またはフコース等がＯ−グリコシド結合で結合し、これにさらに糖鎖が付加する。Ｎ結合型糖鎖としては、例えば、高マンノース（ハイマンノース）型、複合（コンプレックス）型、混成（ハイブリッド）型を挙げることができ、複合型が好ましい。
【００８０】
本発明で使用する好ましい複合型糖鎖としては、例えば、下記式：
【化１８】
2014080730.tif 000019
［式中、Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なって、
【化１９】
2014080730.tif 000020
を示す。Ａｃは、アセチル基を示す。］
で表される糖鎖が挙げられる。
【００８１】
一態様において、本発明における「糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチド」における糖鎖は、４個以上、例えば５個以上、７個以上、特に９個以上、１１個以上の糖からなる糖鎖であることが好ましい。付加する糖鎖を構成する糖の数が多いほど、本発明の化合物またはその塩の水溶性が向上する一方で、その半減期には影響を与えないことを、本発明者は驚くべきことに発見した。
【００８２】
好ましい一態様において、本発明における糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドにおける糖鎖は、２本鎖複合型（つまり糖鎖が２分岐になっている、２分岐型複合型）糖鎖である。限定はされないが、複合型糖鎖とは、２種類以上の単糖を含み、以下に示す基本構造と、Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃで示されるラクトサミン構造を有することを特徴とする。
【化２０】
2014080730.tif 000021
【００８３】
限定はされないが、２本鎖複合型糖鎖とは、基本構造の末端の２つのマンノースに、それぞれ０〜３糖からなる１本鎖の糖鎖が結合しているものをいう。２本鎖複合型糖鎖としては、例えば、以下に示すジシアロ糖鎖：
【化２１】
2014080730.tif 000022
以下に示すモノシアロ糖鎖：
【化２２】
2014080730.tif 000023
【化２３】
2014080730.tif 000024
以下に示すアシアロ糖鎖：
【化２４】
2014080730.tif 000025
以下に示すジグルクナック糖鎖：
【化２５】
2014080730.tif 000026
以下に示すジマンノース糖鎖：
【化２６】
2014080730.tif 000027
等が好ましい。
【００８４】
また、別の態様において、本発明における複合型糖鎖には、上記の２本鎖複合型糖鎖の他、３本鎖の複合型糖鎖（３分岐型複合型糖鎖）、４本鎖の複合型糖鎖（４分岐型複合型糖鎖）も含まれてよい。限定はされないが、例えば、３本鎖、４本鎖の複合型糖鎖としては、以下に示すトリシアロ糖鎖：
【化２７】
2014080730.tif 000028
【化２８】
2014080730.tif 000029
以下に示すテトラシアロ糖鎖：
【化２９】
2014080730.tif 000030
を挙げることができる。さらに、３本鎖複合型糖鎖および４本鎖複合型糖鎖としては、これらのトリシアロ糖鎖またはテトラシアロ糖鎖の非還元末端から、１つ又は複数の糖を失った糖鎖も挙げることができる。
【００８５】
別の態様において、本発明における糖鎖は、高マンノース型糖鎖であってもよい。本発明で用いられる高マンノース型糖鎖は、上述した複合型糖鎖の基本構造に、さらにマンノースが２個以上結合している糖鎖である。哺乳類の高マンノース型糖鎖のように、５〜９個のマンノースを含む糖鎖が好ましいが、酵母の高マンノース型糖鎖のように、より多くのマンノースを含む糖鎖であってもよい。本発明に好ましく用いられる高マンノース型糖鎖としては、例えば、
【００８６】
以下に示す高マンノース−５（Ｍ−５）：
【化３０】
2014080730.tif 000031
以下に示す高マンノース−９（Ｍ−９）：
【化３１】
2014080730.tif 000032
等を挙げることができる。
【００８７】
別の態様において、本発明における糖鎖は、直鎖構造を有する糖鎖であってもよい。かかる糖鎖としては、例えば、オリゴヒアルロン酸が挙げられる。本発明におけるオリゴヒアルロン酸は、限定はされないが、Ｎ−アセチルグルコサミンとグルクロン酸が交互に４〜３２糖、好ましくは４〜１６糖、より好ましくは４〜８糖、直鎖上に結合した糖鎖であってよい。本発明に用いられるオリゴヒアルロン酸のうち、特に好ましいものとして、Ｎ−アセチルグルコサミンとグルクロン酸とからなる単位を１単位とした場合、２単位（４糖）以上８単位（１６糖）以下の糖鎖が挙げられ、さらに好ましくは、２単位（４糖）〜４単位（８糖）、最も好ましくは２単位（４糖）である。
【００８８】
本発明に好ましく用いられるヒアルロン酸としては、例えば、
以下に示す、４糖のオリゴヒアルロン酸：
【化３２】
2014080730.tif 000033
以下に示す、８糖のオリゴヒアルロン酸：
【化３３】
2014080730.tif 000034
等が挙げられる。
【００８９】
さらに、別の態様において、本発明における複合型糖鎖には、種々の糖（例えば、フコース）が付いたものも挙げることができる。例えば、糖鎖（２本鎖複合型糖鎖、３本鎖複合型糖鎖、４本鎖複合型糖鎖等）の非還元末端のＮ−アセチルグルコサミンに、少なくとも１個以上のフコースが付加されてよい。
【００９０】
限定はされないが、例えば、フコースが付いた複合型糖鎖（フコース含有複合型糖鎖）としては、以下に示すフコース含有複合型糖鎖：
【化３４】
2014080730.tif 000035
【化３５】
2014080730.tif 000036
【化３６】
2014080730.tif 000037
【化３７】
2014080730.tif 000038
【化３８】
2014080730.tif 000039
を挙げることができる。さらに、これらのフコース含有複合型糖鎖の非還元末端から、１つ又は複数の糖を失った糖鎖も挙げることができる。
【００９１】
また、別の態様において、本発明の複合型糖鎖には、典型的には、下記式で表わされるポリラクトサミン構造またはシアリルポリラクトサミン構造を有する糖鎖も挙げることができる。
【化３９】
2014080730.tif 000040
（式中、ｎは２〜３の整数である。）
【化４０】
2014080730.tif 000041
（式中、ｎは２〜３の整数である。）
さらに、例えば、これらのポリラクトサミン構造またはシアリルポリラクトサミン構造を有する糖鎖の非還元末端から１つ又は複数の糖を失った糖鎖も挙げることができる。
【００９２】
本発明において、２本鎖複合型糖鎖、３本鎖複合型糖鎖、４本鎖複合型糖鎖、高マンノース型糖鎖、オリゴヒアルロン酸、フコース含有複合型糖鎖、ポリラクトサミン構造を有する糖鎖、シアリルポリラクトサミン構造を有する糖鎖には、本明細書において化学式で具体的に示されるもののほか、化学式で示した例と結合様式の異なるものも含まれ、かかる糖鎖も本発明における糖鎖として好ましく用いられる。かかる糖鎖としては、例えば、ジシアロ糖鎖又はモノシアロ糖鎖においてシアル酸とガラクトースが（α２→３）結合で結合しているもの等が挙げられる。
【００９３】
上記に挙げられる糖鎖は、それを構成する各糖残基のヒドロキシ基および／またはカルボキシ基が、保護基により保護されていてもよい。保護基としては、例えば、糖残基のヒドロキシ基および／またはカルボキシ基を化学反応により保護する目的で導入される当業者に公知の保護基である。より具体的には、以下に限定されないが、例えば、アルキル基（メチル基、エチル基等）、ベンジル基、アシル基（アセチル基、ベンゾイル基、ピバロイル基等）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル基、フェナシル基、アリル基等を挙げることができる。
【００９４】
本発明において、医薬品等の製造の分野に適用することを考慮した場合に、抗原性等の問題を回避し得るという観点からは、好ましい糖鎖としては、例えば、ヒト体内において、タンパク質と結合した糖タンパク質として存在する糖鎖（例えば、「ＦＥＢＳ  ＬＥＴＴＥＲＳ  Ｖｏｌ．５０，Ｎｏ．３，Ｆｅｂ．１９７５」に記載の糖鎖）と、同一の構造を有する糖鎖（構成糖の種類及びそれらの結合様式が同一の糖鎖）又はこれの非還元末端から１つ又は複数の糖を失った糖鎖である、下記表１〜４に記載の糖鎖を挙げることができる。
【表１】
2014080730.tif 000042
【表２】
2014080730.tif 000043
【表３】
2014080730.tif 000044
【表４】
2014080730.tif 000045
【００９５】
好ましい一態様において、本発明における糖鎖、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドにおける糖鎖の構造は、実質的に均一である。糖鎖、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドにおける糖鎖の構造が実質的に均一であるとは、本発明の化合物またはその塩、及び本発明の糖鎖付加リンカーにおける糖鎖間で比較した場合に、構成する各糖の種類、結合順序、及び糖間の結合様式が実質的に同一であることをいい、あるいは、本発明の化合物またはその塩、及び本発明の糖鎖付加リンカーにおける糖鎖付加アミノ酸及び／または糖鎖付加ポリペプチドの間で比較した場合に、前記アミノ酸及び／または前記ポリペプチド中の糖鎖付加部位、糖鎖を構成する各糖の種類、結合順序、及び糖間の結合様式が実質的に同一であることをいう。ここで、実質的に同一とは、少なくとも９０％以上、好ましくは９５％以上、より好ましくは９９％以上の糖鎖の構造が均一であることを言う。さらに好ましい一態様において、糖鎖のみならず、本発明における糖鎖付加アミノ酸及び／または糖鎖付加ポリペプチドの構造は、実質的に均一である。糖鎖付加アミノ酸及び／または糖鎖付加ポリペプチドの構造が実質的に均一であるとは、本発明の化合物またはその塩、または、本発明の糖鎖付加リンカーにおける、糖鎖、糖鎖付加アミノ酸及び／または糖鎖付加ポリペプチドの種類、構造等が実質的に同一であることをいう。ここで、実質的に同一とは、少なくとも９０％以上、好ましくは９５％以上、より好ましくは９９％以上の糖鎖付加アミノ酸及び／または糖鎖付加ポリペプチドの構造が均一であることを言う。本発明における糖鎖付加リンカーに糖鎖が２本以上存在する場合（つまり、同一化合物中に複数本の糖鎖が存在する場合）、及び本発明の組成物または医薬組成物に含まれる、糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩が複数ある場合（つまり、複数の化合物またはその塩が存在する場合）においても、すべての糖鎖、糖鎖付加アミノ酸及び／または糖鎖付加ポリペプチドにおけるすべての糖鎖の構造が実質的に均一であることが好ましい。これらの場合に、さらに、すべての糖鎖付加アミノ酸及び／または糖鎖付加ポリペプチドの構造が実質的に均一であることがさらに好ましい。糖鎖が均一である糖鎖付加アミノ酸及び糖鎖付加ポリペプチドは、品質が一定であり、特に医薬品の製造や、アッセイ等の分野において好ましい。均一な糖鎖の割合は、例えば、ＨＰＬＣ、キャピラリー電気泳動、ＮＭＲ、質量分析等を用いた方法によって測定することが可能である。さらに、本発明における糖鎖付加リンカーまたはリンカー（糖鎖が結合していない構造を有する）に結合する生理活性物質は、同一の結合様式で結合するのが好ましい。
【００９６】
本発明に用いられる、アミノ酸配列及び／または糖鎖が実質的に均一な、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドは、固相合成、液相合成、細胞による合成、天然に存在するものを分離抽出する方法等、当業者に公知のペプチド製造方法に、糖鎖付加工程を組み込むことで製造することができる。そのような糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドの製造方法に関しては、例えば、国際公開第２０１０／０２１１２６号パンフレット、国際公開第２００４／００５３３０号パンフレット、国際公開２００９／１５３９６０号パンフレット、特開２００１−３０２６９５号、国際公開第２００５／０９５３３１号パンフレット、特開２００９−２４２３７２号、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ  １５２６  （２００１）  ２４２−２４８頁等を参照してよい。
【００９７】
糖鎖の製造方法に関しては、例えば、国際公開第０３／００８４３１号パンフレット、国際公開第２００４／０５８９８４号パンフレット、国際公開第２００４／００８４３１号パンフレット、国際公開第２００４／０５８８２４号パンフレット、国際公開第２００４／０７００４６号パンフレット、国際公開第２００７／０１１０５５号パンフレット等を参照してよい。
【００９８】
限定はされないが、一態様において、本発明に用いられる糖鎖付加ポリペプチドには、アミノ酸の結合していない糖鎖を、アミノ酸、またはポリペプチド上のアミノ酸に直接又はリンカーを介して結合した糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチド；糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドにおいて、付加した糖鎖に糖又は糖鎖をさらに付加することで、すでに付加された糖鎖を伸長させた糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチド；糖鎖付加アミノ酸の、例えば、アミノ基及び／又はカルボキシ基に、１又は複数（例えば、２個〜３０個、好ましくは２個〜１０個）のアミノ酸を結合させ、さらにこれをアミノ酸又はポリペプチドと連結させた糖鎖付加ポリペプチド；アミノ酸の結合した糖鎖を、ポリペプチド上のアミノ酸にリンカーを介して結合させた糖鎖付加ポリペプチド、なども含まれてよい。
【００９９】
また、本発明における糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドに、糖転移酵素によって種々の糖（例えば、フコース等）を転移することにより、所望の糖鎖構造を有する糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドを効率的に得てもよい。例えば、糖転移酵素（例えば、フコース転移酵素）によってフコースを転移することにより、フコースを含む所望の糖鎖構造を有する糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドを得ることができる。また、使用する糖転移酵素に依存して、結合様式の異なった所望の糖鎖構造を有する糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドを得ることができる。
【０１００】
フコースとしては、一般に市販されているフコースまたは化学合成したものを使用することができる。
【０１０１】
フコース転移酵素としては、一般に市販されているもの、天然由来のもの、遺伝子組換えにより生産されたものを用いることができ、転移させるフコースの種類により適宜選択することができる。具体的には、糖鎖アスパラギンの非還元末端側のＮ−アセチルグルコサミンにフコースを転移させる酵素であるＦｕｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ Ｖ（Ｈｕｍａｎ，Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ、血漿由来、血清由来、乳汁由来、肝臓由来）等を挙げることができる。また、フコース加水分解酵素を用い、ｐＨ調整等によって平衡をずらすことにより、フコースを転移させてもよい。
【０１０２】
本発明における、糖鎖付加リンカー、糖鎖付加リンカー部分、リンカー、またはリンカー部分における各置換基について、以下に、さらに、説明する：
【０１０３】
[Ｒ２および／またはＲ３について]
Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜１６のアルキル基、または、炭素数５〜１６のアリール基であり（ただし、Ｒ２およびＲ３の両方が、同時に、水素原子とはならない）、または、Ｒ２およびＲ３はそれらが結合している窒素原子と一緒になって、３〜７員の複素環を形成する。限定はされないが、好ましい一実施態様において、Ｒ２およびＲ３は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、３〜７員の複素環を形成する。
【０１０４】
Ｒ２およびＲ３が、それらが結合している窒素原子と一緒になって３〜７員の複素環を形成する場合、３〜７員の複素環は、最大数までの二重結合を含有してもよく、Ｒ２およびＲ３がそれぞれ隣接する窒素原子に加えて、硫黄原子、酸素原子及び窒素原子を含む群から選択されるさらなるヘテロ原子を有してもよい。一態様において、ヘテロ原子は、硫黄原子、酸素原子及び窒素原子からなる群から選択されるのが好ましい。限定はされないが、前記３〜７員の複素環は、アジリジン、アゼチジン、ピロリン（２−ピロリン、３−ピロリンなど）、ピロール、イミダゾール、イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、イソオキサゾリン（３−イソオキサゾリン、４−イソオキサゾリンなど）、チアゾリン（４−チアゾリンなど）、イソチアゾリン、チアジアゾリン、ピロリジン、イミダゾリジン、ピラゾリジン、オキサゾリジン、イソオキサゾリジン、チアゾリジン、イソチアゾリジン、チアジアゾリジン、ピペラジン、ピペリジン、モルホリン、チオモルホリン、チアジン、テトラゾール、トリアゾール、トリアゾリジン、テトラゾリジン、アゼパン、ジアゼパン、アゼピンおよびホモピペラジンを含む群から選択されることが好ましい。
【０１０５】
一態様において、前記３〜７員の複素環は、その置換可能な位置に置換基を１つ以上有してよい。置換基としては、限定はされないが、炭素数１〜１６のアルキル、炭素数２〜１６のアルケニル、炭素数２〜１６のアルキニル、炭素数５〜１６のアリール、炭素数３〜８のシクロアルキル、炭素数３〜８のシクロアルケニル、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、カルバモイル、カルボキシ、炭素数１〜４のアルコキシカルボニル（例えばメトキシカルボニル、エトキシカルボニル等）、ハロゲン、−（ＯＡ１）ｎ−ＯＡ２［Ａ１は炭素数１〜４のアルキレン、Ａ２は炭素数１〜４のアルキル、ｎは０〜３の整数］で示される基（例えばメトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、エトキシエトキシ、メトキシエトキシエトキシ等）、フェノキシ、ハロゲノフェノキシ（例えばｏ−、ｍ−またはｐ−クロロフェノキシ、ｏ−、ｍ−またはｐ−ブロモフェノキシ等）、炭素数１〜４のアルキルチオ（例えばメチルチオ、エチルチオ、ｎ−プロピルチオ、イソプロピルチオ、ｎ−ブチルチオ、ｔｅｒｔ−ブチルチオ等）、フェニルチオ、炭素数１〜４のアルキルスルフィニル（例えばメチルスルフィニル、エチルスルフィニル等）、炭素数１〜４のアルキルスルホニル（例えばメチルスルホニル、エチルスルホニル等）、炭素数１〜１０のハロアルキル（例えばジフルオロメチル、トリフルオロメチル、トリフルオロエチル、トリクロロエチル等）、ホルミル、炭素数１〜５のアルカノイル（例えばアセチル等）、ベンゾイル等が挙げられる。さらに、限定はされないが、非置換又は置換のアミノ、すなわち炭素数１〜６のアルカノイルアミノ（例えばアセチルアミノ、プロピオニルアミノ等）、炭素数１〜１６のアルキルアミノ（例えばメチルアミノ、エチルアミノ、ｎ−プロピルアミノ、イソプロピルアミノ、ｎ−ブチルアミノ、イソブチルアミノ、ｓｅｃ−ブチルアミノ、ｔｅｒｔ−ブチルアミノ、ペンチルアミノ、ヘキシルアミノ、ヘプチルアミノ、オクチルアミノ、ノニルアミノ、デシルアミノ、ウンデシルアミノ、ドデシルアミノ、トリデシルアミノ、テトラデシルアミノ、ペンタデシルアミノ、ヘキサデシルアミノ等であって、ここで、これらのアルキル基はヒドロキシ基で置換されていてもよい）、炭素数１〜４のジアルキルアミノ（例えばジメチルアミノ、ジエチルアミノ、Ｎ−メチル−Ｎ−エチルアミノ、Ｎ−メチル−Ｎ−プロピルアミノ等）等が挙げられる。
【０１０６】
Ｒ２および／またはＲ３が、炭素数１〜１６のアルキル基の場合、炭素数１〜１６のアルキル基は、置換または非置換の、直鎖状または分岐鎖状の脂肪族炭化水素基であってよい。炭素数１〜１６のアルキル基の例としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基、ｎ−ヘプチル基、ｎ−オクチル基、ｎ−ノニル基、ｎ−デシル基、ｎ−ウンデシル基、ｎ−ドデシル基、ｎ−トリデシル基、ｎ−テトラデシル基、ｎ−ペンタデシル基、ｎ−ヘキサデシル基を挙げることができる。分岐鎖状の脂肪族炭化水素基である「炭素数１〜１６のアルキル基」の例としては、イソブチル基、イソデシル基、２−エチルヘキシル基、２−オクチル−ドデシル基、ネオペンチル基、またはｔｅｒｔ−ブチル基を挙げることができる。直鎖状又は分岐鎖状の脂肪族炭化水素基における１つまたは複数の置換基の例としては、それぞれ独立に、炭素数１〜１０のアルコキシ基（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ等）、アミノ基 、ヒドロキシ基、チオール基、カルボキシ基、またはハロゲン原子（例えば、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）を挙げることができる。
【０１０７】
一態様において、Ｒ２および／またはＲ３が炭素数１〜１６のアルキル基の場合、置換または非置換の、炭素数１〜１０のアルキル基であるのが好ましい。さらに好ましい一態様において、置換または非置換の、炭素数１〜７のアルキル基であってよい。
【０１０８】
Ｒ２および／またはＲ３が炭素数５〜１６のアリール基の場合、炭素数５〜１６のアリール基は、置換または非置換のアリール基であってよい。アリール基の１つまたは複数の水素原子が置換されている場合の置換基の例としては、それぞれ独立に、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ等）、アミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、カルボキシ基、ハロゲン原子（例えば、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）、炭素数１〜４のハロゲン化アルキル基（例えば塩化メチル基）を挙げることができる。置換または非置換のアリール基の例としては、限定されないが、フェニル基、ビフェニル基、ナフチル基、アントラニル基、フェナントリル基、アントリル基、ｏ−トリル基、ｍ−トリル基、ｐ−トリル基、キシリル基、エチルフェニル基またはベンジル基を挙げることができる。
【０１０９】
一態様において、Ｒ２および／またはＲ３が炭素数５〜１６のアリール基の場合、置換または非置換の、炭素数５〜１０のアリール基であるのが好ましい。さらに好ましい一態様において、置換または非置換の、炭素数５〜８のアリール基、例えば、フェニル基、ｏ−トリル基、ｍ−トリル基、ｐ−トリル基またはベンジル基であってよい。
【０１１０】
[Ｒ４について]
Ｒ４は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜１６のアルキル基または炭素数５〜１６のアリール基である。
【０１１１】
Ｒ４の１つまたは複数が、炭素数１〜１６のアルキル基の場合、Ｒ２および／またはＲ３に関連して上述した炭素数１〜１６のアルキル基と同様であってよい。
【０１１２】
一態様において、Ｒ４の１つまたは複数が炭素数１〜１６のアルキル基の場合、置換または非置換の、炭素数１〜１０のアルキル基であるのが好ましい。さらに好ましい一態様において、置換または非置換の、炭素数１〜５のアルキル基、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基であってよい。
【０１１３】
Ｒ４の１つまたは複数が、炭素数５〜１６のアリール基の場合、Ｒ２および／またはＲ３に関連して上述した炭素数５〜１６のアリール基と同様であってよい。
【０１１４】
一態様において、Ｒ４の１つまたは複数が、炭素数５〜１６のアリール基の場合、置換または非置換の、炭素数５〜１０のアリール基であるのが好ましい。さらに好ましい一態様において、置換または非置換の、炭素数５〜８のアリール基、例えば、フェニル基、ｏ−トリル基、ｍ−トリル基、ｐ−トリル基またはベンジル基であってよい。
【０１１５】
Ｒ４はそのいずれもが同一であってもよく、または、その３つのＲ４が同一であってもよい。あるいは、その結合する炭素原子が異なって隣接する２つの前記Ｒ４の両方、同一の炭素原子に結合する２つの前記Ｒ４の両方、または結合する炭素原子が異なって対向する２つの前記Ｒ４の両方が、同一であってもよい。
【０１１６】
好ましくは、４つの前記Ｒ４の少なくとも１つが水素原子であり、より好ましくは、４つの前記Ｒ４の任意の少なくとも２つが水素原子であり、さらに好ましくは、４つの前記Ｒ４の任意の少なくとも３つが水素原子であり、最も好ましくは、４つの前記Ｒ４のいずれもが水素原子である。
【０１１７】
[Ｙについて]
Ｙは、
【化４１】
2014080730.tif 000046
であり、
ここで、
Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、Ｒ５Ａが結合する炭素原子、Ｒ５Ｂが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数５〜１６のアリール、炭素数５〜１６のシクロアルケニル、炭素数７〜１３のビシクリル、炭素数９〜１４のトリシクリル、炭素数６〜１４のキノン、または５〜１０員の複素環を形成するか、あるいは、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン、シアノ基、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基、ニトロ基、メシル基、トシル基、炭素数１〜３のアシル基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基、置換または非置換のフェニル基、ベンジル基であり、
Ｒ５Ｃ、Ｒ５Ｄは、Ｒ５Ｃが結合する炭素原子、Ｒ５Ｄが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数４〜１６のシクロアルキル、炭素数５〜１６のシクロアルケニル、炭素数７〜１３のビシクリル、炭素数９〜１４のトリシクリル、または５〜１０員の複素環を形成してよい。
【０１１８】
好ましい一態様において、本発明における糖鎖付加リンカー、糖鎖付加リンカー部分、またはリンカー部分において、Ｙは、
【化４２】
2014080730.tif 000047
であり、
ここで、
Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、Ｒ５Ａが結合する炭素原子、Ｒ５Ｂが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数５〜１６のアリールを形成するか、あるいは、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、いずれも水素原子であり、
Ｒ５Ｃ、Ｒ５Ｄは、Ｒ５Ｃが結合する炭素原子、Ｒ５Ｄが結合する炭素原子と一緒になって、シクロヘキシルまたはノルボルニルを形成してよい。
【０１１９】
［Ｒ５Ａおよび／またはＲ５Ｂについて］
Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、Ｒ５Ａが結合する炭素原子、Ｒ５Ｂが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数５〜１６のアリール、炭素数５〜１６のシクロアルケニル、炭素数７〜１３のビシクリル、炭素数９〜１４のトリシクリル、炭素数６〜１４のキノン、または５〜１０員の複素環を形成するか、あるいは、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン、シアノ基、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基、ニトロ基、メシル基、トシル基、炭素数１〜３のアシル基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基、置換または非置換のフェニル基、ベンジル基である。
【０１２０】
Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、Ｒ５Ａが結合する炭素原子、Ｒ５Ｂが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数５〜１６のアリールを形成する場合、炭素数５〜１６のアリールは、Ｒ２および／またはＲ３に関連して上述した炭素数５〜１６のアリール基と同様であってよい。
【０１２１】
一態様において、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂが、Ｒ５Ａが結合する炭素原子、Ｒ５Ｂが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数５〜１６のアリールを形成する場合、置換または非置換の、炭素数５〜１０のアリールであるのが好ましい。さらに好ましい一態様において、置換または非置換の、炭素数５〜８のアリール、例えば、フェニル、ｏ−トリル、ｍ−トリル、ｐ−トリルまたはベンジルであってよい。
【０１２２】
Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂが、Ｒ５Ａが結合する炭素原子、Ｒ５Ｂが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数５〜１６のシクロアルケニルを形成する場合、炭素数５〜１６のシクロアルケニルは、置換または非置換のシクロアルケニルであってよい。非置換のシクロアルケニルの例としては、限定されないが、Ｒ５Ｃ、Ｒ５Ｄに関連して後述する炭素数４〜１６のシクロアルキルに、１個以上の二重結合等の不飽和結合を有するものが挙げられる。例えば、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘプテニル、シクロオクテニル、シクロノネニル、シクロデセニル、シクロウンデセニル、シクロドデセニル、シクロトリデセニル、シクロテトラデセニル、シクロペンタデセニル、またはシクロヘキサデセニルを挙げることができる。シクロアルケニルの１つまたは複数の水素原子が置換されている場合の置換基の例としては、それぞれ独立に、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基（例えば、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基等）、アミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、カルボキシ基、ハロゲン原子（例えば、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）、または炭素数１〜４のハロゲン化アルキル基（例えば塩化メチル基）を挙げることができる。
【０１２３】
一態様において、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂが、Ｒ５Ａが結合する炭素原子、Ｒ５Ｂが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数５〜１６のシクロアルケニルを形成する場合、置換または非置換の、炭素数５〜１０のシクロアルケニルであるのが好ましい。さらに好ましい一態様において、置換または非置換の、炭素数５〜８のシクロアルケニル、例えば、シクロヘキセニルであってよい。
【０１２４】
Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂが、Ｒ５Ａが結合する炭素原子、Ｒ５Ｂが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数７〜１３のビシクリルを形成する場合、炭素数７〜１３のビシクリルは、置換または非置換のビシクリルであってよい。非置換のビシクリルの例としては、限定されないが、１個以上の二重結合等の不飽和結合を有してもよく、場合により、ヘテロ原子を１つまたは複数有していてもよい。また、好ましくは、ビシクリルの各環は、３〜６員環を含有してよい。ビシクリルの１つまたは複数の水素原子が置換されている場合の置換基の例としては、それぞれ独立に、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ等）、アミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、カルボニル基、カルボキシ基、ハロゲン原子（例えば、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）、または炭素数１〜４のハロゲン化アルキル基（例えば塩化メチル基）を挙げることができる。炭素数７〜１３のビシクリルの例としては、限定されないが、アズレニル、ナフチルを挙げることができる。
【０１２５】
一態様において、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂが、Ｒ５Ａが結合する炭素原子、Ｒ５Ｂが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数７〜１３のビシクリルを形成する場合、置換または非置換の、炭素数７〜１０のビシクリル、例えば、ナフチルであってよい。
【０１２６】
Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂが、Ｒ５Ａが結合する炭素原子、Ｒ５Ｂが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数９〜１４のトリシクリルを形成する場合、炭素数９〜１４のトリシクリルは、置換または非置換のトリシクリルであってよい。非置換のトリシクリルの例としては、限定されないが、１個以上の二重結合等の不飽和結合を有してもよく、場合により、ヘテロ原子を１つまたは複数有していてもよい。また、好ましくは、トリシクリルの各環は、３〜６員を含有してよい。トリシクリルの１つまたは複数の水素原子が置換されている場合の置換基の例としては、それぞれ独立に、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ等）、アミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、カルボニル基、カルボキシ基、ハロゲン原子（例えば、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）、または炭素数１〜４のハロゲン化アルキル基（例えば塩化メチル基）を挙げることができる。炭素数９〜１４のトリシクリルの例としては、限定されないが、アントラセニル、フェナントリル、アセナフテニル、アセナフチレニル、フルオレニル、それらの誘導体、例えばそれらの水素添加物を挙げることができる。
【０１２７】
一態様において、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂが、Ｒ５Ａが結合する炭素原子、Ｒ５Ｂが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数９〜１４のトリシクリルを形成する場合、置換または非置換の、炭素数１２〜１４のトリシクリルであるのが好ましい。さらに好ましい一態様において、置換または非置換の、炭素数１４のトリシクリル、例えば、フェナントリルであってよい。
【０１２８】
Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂが、Ｒ５Ａが結合する炭素原子、Ｒ５Ｂが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数６〜１４のキノンを形成する場合、炭素数６〜１４のキノンは、置換または非置換のキノンであってよい。非置換のキノンの例としては、限定されないが、ベンゾキノン、アントラキノン、ナフトキノンを挙げることができる。キノンには、例えば、ｏ−ベンゾキノン、ｐ−ベンゾキノン等のように、異性体の関係にあるものも含まれる。キノンの１つまたは複数の水素原子が置換されている場合の置換基の例としては、それぞれ独立に、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ等）、アミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、カルボニル基、カルボキシ基、ハロゲン原子（例えば、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）、または炭素数１〜４のハロゲン化アルキル基（例えば塩化メチル基）を挙げることができる。
【０１２９】
一態様において、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂが、Ｒ５Ａが結合する炭素原子、Ｒ５Ｂが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数６〜１４のキノンを形成する場合、置換または非置換の、炭素数６〜１０のキノンであるのが好ましい。さらに好ましい一態様において、置換または非置換の、炭素数６のキノン、例えば、ベンゾキノンであってよい。
【０１３０】
Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂが、Ｒ５Ａが結合する炭素原子、Ｒ５Ｂが結合する炭素原子と一緒になって、５〜１０員の複素環を形成する場合、５〜１０員の複素環は、置換または非置換の複素環であってよい。非置換の複素環の例としては、限定されないが、最大数までの二重結合を含有してもよく、かつ、窒素原子、硫黄原子、酸素原子及び窒素原子を含む群から選択されるヘテロ原子を１つまたは複数有してよい。また、場合により、ヘテロ原子を１つまたは複数有する、二環式または三環系であってもよい（かかる場合、ヘテロ原子を１つまたは複数有する、二環式または三環系の複素環は、例えば、上述の、炭素数７〜１３のビシクリルまたは炭素数９〜１４のトリシクリルであってもよい）。複素環の例としては、限定されないが、ピラゾール環、ピロール環、フラン環、チオフェン環、イミダゾール環、チアゾール環、イソチアゾール環、オキサゾール環、イソオキサゾール環、ピリジン環、ピラジン環、ピリミジン環またはピリダジン環を挙げることができる。複素環の１つまたは複数の水素原子が置換されている場合の置換基の例としては、それぞれ独立に、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ等）、アミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、カルボニル基、カルボキシ基、ハロゲン原子（例えば、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）、または炭素数１〜４のハロゲン化アルキル基（例えば塩化メチル基）を挙げることができる。
【０１３１】
一態様において、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂが、Ｒ５Ａが結合する炭素原子、Ｒ５Ｂが結合する炭素原子と一緒になって、５〜１０員の複素環を形成する場合、置換または非置換の、５〜８員の複素環であるのが好ましい。さらに好ましい一態様において、置換または非置換の、５〜７員の複素環、例えば、ピリジン環であってよい。
【０１３２】
Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂが、Ｒ５Ａが結合する炭素原子、Ｒ５Ｂが結合する炭素原子と一緒になって環を形成しない場合、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン、シアノ基、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基、ニトロ基、メシル基、トシル基、炭素数１〜３のアシル基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基、置換または非置換のフェニル基、ベンジル基であってもよい。置換のフェニル基の例としては、限定はされないが、ｏ−トリル基、ｍ−トリル基またはｐ−トリル基であってよい。また、炭素数１〜３のアシル基としては、ホルミル基、アセチル基が好ましい。好ましい一態様において、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂが、Ｒ５Ａが結合する炭素原子、Ｒ５Ｂが結合する炭素原子と一緒になって環を形成しない場合、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、それぞれ独立して、水素原子、メチル基、エチル基、プロピル基、フェニル基である。より好ましい一態様において、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂは、いずれも水素原子、メチル基またはフェニル基である。
【０１３３】
［Ｒ５Ｃおよび／またはＲ５Ｄについて］
Ｒ５Ｃ、Ｒ５Ｄが、Ｒ５Ｃが結合する炭素原子、Ｒ５Ｄが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数４〜１６のシクロアルキルを形成する場合、炭素数４〜１６のシクロアルキルは、置換または非置換のシクロアルキルであってよい。非置換のシクロアルキルの例としては、限定されないが、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、シクロデシル、シクロウンデシル、シクロドデシル、シクロトリデシル、シクロテトラデシル、シクロペンタデシル、またはシクロヘキサデシルを挙げることができる。シクロアルキルの１つまたは複数の水素原子が置換されている場合の置換基の例としては、それぞれ独立に、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ等）、アミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、カルボキシ基、ハロゲン原子（例えば、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）、または炭素数１〜４のハロゲン化アルキル基（例えば塩化メチル基）を挙げることができる。
【０１３４】
一態様において、Ｒ５Ｃ、Ｒ５Ｄが、Ｒ５Ｃが結合する炭素原子、Ｒ５Ｄが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数４〜１６のシクロアルキルを形成する場合、置換または非置換の、炭素数４〜１０のシクロアルキルであるのが好ましい。さらに好ましい一態様において、置換または非置換の、炭素数４〜８のシクロアルキル、例えば、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルであってよい。
【０１３５】
Ｒ５Ｃ、Ｒ５Ｄが、Ｒ５Ｃが結合する炭素原子、Ｒ５Ｄが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数５〜１６のシクロアルケニルを形成する場合、炭素数５〜１６のシクロアルケニルは、Ｒ５Ａおよび／またはＲ５Ｂに関連して上述した炭素数５〜１６のシクロアルケニルと同様であってよい。
【０１３６】
一態様において、Ｒ５Ｃ、Ｒ５Ｄが、Ｒ５Ｃが結合する炭素原子、Ｒ５Ｄが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数５〜１６のシクロアルケニルを形成する場合、置換または非置換の、炭素数５〜１０のシクロアルケニルであるのが好ましい。さらに好ましい一態様において、置換または非置換の、炭素数５〜８のシクロアルケニル、例えば、シクロヘキセニルであってよい。
【０１３７】
Ｒ５Ｃ、Ｒ５Ｄが、Ｒ５Ｃが結合する炭素原子、Ｒ５Ｄが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数７〜１３のビシクリルを形成する場合、炭素数７〜１３のビシクリルは、Ｒ５Ａおよび／またはＲ５Ｂに関連して上述した炭素数７〜１３のビシクリルと同様であってよい。
【０１３８】
一態様において、Ｒ５Ｃ、Ｒ５Ｄが、Ｒ５Ｃが結合する炭素原子、Ｒ５Ｄが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数７〜１３のビシクリルを形成する場合、置換または非置換の、炭素数７〜１０のビシクリルであるのが好ましい。さらに好ましい一態様において、置換または非置換の、炭素数７〜９のビシクリル、例えば、ノルボルニル、ヘキサクロロノルボルニルであってよい。
【０１３９】
Ｒ５Ｃ、Ｒ５Ｄが、Ｒ５Ｃが結合する炭素原子、Ｒ５Ｄが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数９〜１４のトリシクリルを形成する場合、炭素数９〜１４のトリシクリルは、Ｒ５Ａおよび／またはＲ５Ｂに関連して上述した炭素数９〜１４のトリシクリルと同様であってよい。
【０１４０】
一態様において、Ｒ５Ｃ、Ｒ５Ｄが、Ｒ５Ｃが結合する炭素原子、Ｒ５Ｄが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数９〜１４のトリシクリルを形成する場合、置換または非置換の、炭素数１２〜１４のトリシクリルであるのが好ましい。さらに好ましい一態様において、置換または非置換の、炭素数１４のトリシクリル、例えば、テトラデカヒドロフェナントリルであってよい。
【０１４１】
Ｒ５Ｃ、Ｒ５Ｄが、Ｒ５Ｃが結合する炭素原子、Ｒ５Ｄが結合する炭素原子と一緒になって、５〜１０員の複素環を形成する場合、５〜１０員の複素環は、Ｒ５Ａおよび／またはＲ５Ｂに関連して上述した５〜１０員の複素環と同様であってよい。
【０１４２】
一態様において、Ｒ５Ｃ、Ｒ５Ｄが、Ｒ５Ｃが結合する炭素原子、Ｒ５Ｄが結合する炭素原子と一緒になって、５〜１０員の複素環を形成する場合、置換または非置換の、５〜８員の複素環であるのが好ましい。さらに好ましい一態様において、置換または非置換の、５〜７員の複素環、例えば、エポキシシクロヘキシルであってよい。
【０１４３】
［Ｒ８、Ｒ８Ａ、Ｒ８’について］
Ｒ８は、水素原子、炭素数１〜１６のアシル基、Ｆｍｏｃ基、Ｂｏｃ基、Ｚ基、Ｔｒｏｃ基、またはＡｌｌｏｃ基等のカルバメート系保護基、あるいは、アミノ酸、ポリペプチド、糖鎖、糖鎖付加アミノ酸、または糖鎖付加ポリペプチドである。特定の一態様において、Ｒ８は、水素原子、炭素数１〜１６のアシル基、Ｆｍｏｃ基、Ｂｏｃ基、Ｚ基、Ｔｒｏｃ基、またはＡｌｌｏｃ基であってよい。Ｒ８Ａは、炭素数１〜１６のアシル基、Ｆｍｏｃ基、Ｂｏｃ基、Ｚ基、Ｔｒｏｃ基、またはＡｌｌｏｃ基等の保護基である。Ｒ８’は、炭素数１〜１６のアシル基、Ｆｍｏｃ基、Ｂｏｃ基、Ｚ基、Ｔｒｏｃ基、またはＡｌｌｏｃ基等の保護基である。
【０１４４】
Ｒ８、Ｒ８ＡまたはＲ８’が炭素数１〜１６のアシル基の場合、炭素数１〜１６のアシル基は、置換または非置換のアシル基であってよい。置換または非置換のアシル基の例としては、限定はされないが、ホルミル基、アセチル基、メチルカルボニル基、エチルカルボニル基、ｎ−プロピルカルボニル基、ｉｓｏ−プロピルカルボニル基、ｎ−ブチルカルボニル基、ｉｓｏ−ブチルカルボニル基、ｓｅｃ−ブチルカルボニル基、ｔｅｒｔ−ブチルカルボニル基、ｎ−ペンチルカルボニル基、ｉｓｏ−ペンチルカルボニル基、ネオペンチルカルボニル基、２−メチルブチルカルボニル基、ベンゾイル基、１−ナフトイル基、２−ナフトイル基、メチルベンゾイル基、エチルベンゾイル基、トリルカルボニル基、プロピルベンゾイル基、４−ｔｅｒｔ−ブチルベンゾイル基、ニトロベンジルカルボニル基、３−ブトキシ−２−ナフトイル基、シンナモイル基を挙げることができる。
【０１４５】
好ましい一態様において、Ｒ８、Ｒ８ＡまたはＲ８’が炭素数１〜１６のアシル基の場合、それぞれ、ホルミル基、アセチル基であってよい。
【０１４６】
好ましい一態様において、Ｒ８が存在する場合、酸性条件下（例えばｐＨ１〜ｐＨ６）で本発明の化合物またはその塩を安定化させるために、Ｒ８は炭素数１〜１６のアシル基、Ｆｍｏｃ基、Ｂｏｃ基、Ｚ基、Ｔｒｏｃ基、またはＡｌｌｏｃ基等の保護基である。
【０１４７】
［Ｒ９について］
Ｒ９は、それぞれ独立に、水素原子、ハロゲン、シアノ基、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基、ニトロ基、メシル基、トシル基、炭素数１〜３のアシル基、ヒドロキシ基、カルボキシ基またはアミノ基である。
【０１４８】
Ｒ９の１つまたは複数がハロゲンの場合、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素であることが好ましい。
【０１４９】
Ｒ９の１つまたは複数が炭素数１〜３のアシル基の場合、置換または非置換のアシル基であってよい。非置換のアシル基の例としては、限定はされないが、ホルミル基、アセチル基、プロピオニル基を挙げることができる。好ましい一態様において、Ｒ９の１つまたは複数が炭素数１〜３のアシル基の場合、ホルミル基、アセチル基であってよい。
【０１５０】
Ｒ９の１つまたは複数が、炭素数１〜４のアルキル基の場合、置換または非置換のアルキル基であってよい。非置換のアルキル基の例としては、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基を挙げることができる。好ましい一態様において、Ｒ９の１つまたは複数が炭素数１〜４のアルキル基の場合、メチル基またはエチル基であってよい。
【０１５１】
Ｒ９の１つまたは複数が、炭素数１〜４のアルコキシ基の場合、置換または非置換のアルコキシ基であってよい。非置換のアルコキシ基の例としては、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、ｎ−ブトキシ基を挙げることができる。好ましい一態様において、Ｒ９の１つまたは複数が炭素数１〜４のアルコキシ基の場合、メトキシ基またはエトキシ基であってよい。
【０１５２】
本発明の糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩から糖鎖付加リンカー部分を速やかに切断させて、生理活性物質を速やかに遊離させたい場合には、前記Ｒ９は電子求引性基であることが好ましいことを、本発明者は驚くべきことに発見した。したがって、好ましい一実施態様において、本発明の化合物またはその塩から糖鎖付加リンカー部分を速やかに切断させて、生理活性物質を速やかに遊離させたい場合には、４つの前記Ｒ９の少なくとも１つは、独立に、ハロゲン、シアノ基、ニトロ基、メシル基（メタンスルホニル基）、トシル基（ｐ−トルエンスルホニル基）または炭素数１〜３のアシル基で置換されていてよい。
同様に、好ましい別の実施態様において、本発明における糖鎖付加リンカー、糖鎖付加リンカー部分、またはリンカー部分において、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂが、Ｒ５Ａが結合する炭素原子、Ｒ５Ｂが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数５〜１６のアリール、炭素数５〜１６のシクロアルケニル、炭素数７〜１３のビシクリル、炭素数９〜１４のトリシクリル、炭素数６〜１４のキノン、または５〜１０員の複素環を形成する場合、あるいは、Ｒ５Ｃ、Ｒ５Ｄが、Ｒ５Ｃが結合する炭素原子、Ｒ５Ｄが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数４〜１６のシクロアルキル、炭素数５〜１６のシクロアルケニル、炭素数７〜１３のビシクリル、炭素数９〜１４のトリシクリル、または５〜１０員の複素環を形成する場合、これらの環上に存在する少なくとも１つの水素原子が、独立に、ハロゲン、シアノ基、ニトロ基、メシル基（メタンスルホニル基）、トシル基（ｐ−トルエンスルホニル基）または炭素数１〜３のアシル基で置換されていてよい。
【０１５３】
よりいっそう糖鎖付加リンカー部分の切断を加速させたい場合、前記電子求引性基が多い方が好ましい。また、電子求引性基はハロゲンであるのが好ましく、塩素であるのがさらに好ましい。
【０１５４】
したがって、好ましい一実施態様において、本発明の化合物またはその塩、または、本発明の糖鎖付加リンカーには、標的環境（例えば血中）に到達後、速やかに薬理活性等を発揮させたい生理活性物質を用いることが可能である。
【０１５５】
本発明における糖鎖付加リンカー部分において、水素原子が糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドによって置換される場合、前記糖鎖付加アミノ酸におけるアミノ酸の部分で置換されるか、または、前記糖鎖付加ポリペプチドにおける当該ポリペプチドを構成するアミノ酸の部分で置換されることが好ましい。これらの置換は、当業者に公知の結合態様であれば限定されない。
【０１５６】
好ましい一態様において、本発明における糖鎖、糖鎖付加アミノ酸および／または糖鎖付加ポリペプチドは、糖鎖付加リンカー部分に存在する、窒素原子、炭素原子及び／または硫黄原子などに結合している少なくとも１つの水素原子が置換されることによって、結合している。
【０１５７】
例示として、本発明における糖鎖付加リンカー部分が前記式（Ｉ）で表される場合：
Ｒ２またはＲ３が水素原子である場合（Ｒ２およびＲ３の両方が、同時に、水素原子とはならない）、かかる水素原子の部分で、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドは置換されていてよく；または
Ｒ２および／またはＲ３が炭素数１〜１６のアルキル基、または炭素数５〜１６のアリール基であるか、あるいはＲ２およびＲ３はそれらが結合している窒素原子と一緒になって、３〜７員の複素環を形成している場合、前記アルキル基、前記アリール基、または、前記複素環に結合している少なくとも１つの水素原子の部分で、糖鎖、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドは置換されていてよい。
例えば、前記Ｒ２がメチル基の場合、当該メチル基（−ＣＨ３）における少なくとも１つの水素原子が、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドによって置換されていてよい。あるいは、例えば、前記Ｒ２および前記Ｒ３はそれらが結合している窒素原子と一緒になってピペラジンを形成する場合、当該ピペラジンの環構造上の窒素原子に結合した水素原子が、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドによって置換されていてよい。
好ましくは、前記アルキル基、前記アリール基、または、前記複素環に存在する窒素原子に結合している少なくとも１つの水素原子が糖鎖、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドで置換されている。さらに好ましくは、前記アルキル基、前記アリール基、または、前記複素環に存在する窒素原子に結合している少なくとも１つの水素原子が糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドで置換されており、いっそう好ましくは、当該置換は、当該「糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチド」におけるアミノ酸またはポリペプチドの部分における結合である。
【０１５８】
例示として、本発明における糖鎖付加リンカー部分が前記式（ＩＩ）で表される場合：
Ｒ６の糖鎖、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドが前記式（ＩＩ）中のピペラジンの環構造上の窒素原子に結合している。一態様において、Ｒ６は、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドであるのが好ましく、かかる場合、限定はされないが、Ｒ６の窒素原子との結合は、当該「糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチド」におけるアミノ酸またはポリペプチドの部分における結合であることが好ましい。
【０１５９】
例示として、本発明における糖鎖付加リンカー部分が前記式（ＩＩＩ）または前記式（ＩＶ）で表される場合：
Ｒ７が−Ｓ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−糖鎖または−ＣＯＮＨ−糖鎖を採用することにより、前記式（ＩＩＩ）または前記式（ＩＶ）で表される本発明における糖鎖付加リンカー部分は、糖鎖構造を含む。また、前記糖鎖付加リンカー部分がさらに糖鎖を含む場合、Ｒ８は糖鎖、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドであって、前記式（ＩＩＩ）または前記式（ＩＶ）中のＲ８が結合している窒素原子に結合していてよい。
限定はされないが、例えば、水素原子、あるいは、炭素数１〜１６のアシル基、Ｆｍｏｃ基、Ｂｏｃ基、Ｚ基、Ｔｒｏｃ基、またはＡｌｌｏｃ基等の保護基であるＲ８を、Ｒ８が結合している窒素原子由来のアミノ基の求核性を利用して、糖鎖、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドでさらに置換してもよい。限定はされないが、置換されたＲ８が糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドである場合、当該置換は、当該「糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチド」におけるアミノ酸またはポリペプチドの部分における結合であるのが好ましい。もちろん、まず、水素原子、あるいは、炭素数１〜１６のアシル基、Ｆｍｏｃ基、Ｂｏｃ基、Ｚ基、Ｔｒｏｃ基、またはＡｌｌｏｃ基等の保護基であるＲ８をアミノ酸またはポリペプチドで置換した後に、置換したアミノ酸またはポリペプチドに、当業者に周知の方法で、さらに糖鎖を付加してもよい。
【０１６０】
一態様において、本発明における糖鎖付加アミノ酸は、そのアミノ酸の主鎖に存在するカルボキシ基における−ＯＨ部分と、糖鎖付加リンカー部分に由来する前述の水素原子との脱水縮合反応により、糖鎖付加リンカー部分へ結合してよい。あるいは、別の態様において、糖鎖付加アミノ酸は、そのアミノ酸がセリン、スレオニンまたはチロシンである場合、そのアミノ酸の側鎖に存在するヒドロキシ基と前記水素原子との脱水縮合反応により結合してよい。あるいは、さらに別の態様において、糖鎖付加アミノ酸は、そのアミノ酸がアスパラギン酸またはグルタミン酸である場合、そのアミノ酸の側鎖に存在するカルボキシ基における−ＯＨ部分と前記水素原子との脱水縮合反応により結合してよい。
【０１６１】
一態様において、本発明における糖鎖付加ポリペプチドは、そのポリペプチドを構成するＣ末端のアミノ酸のカルボキシ基における−ＯＨ部分と、糖鎖付加リンカー部分に由来する前述の水素原子との脱水縮合反応により結合してよい。あるいは、別の態様において、糖鎖付加ポリペプチドは、そのポリペプチドを構成するアミノ酸残基がセリン残基、スレオニン残基またはチロシン残基を含む場合、そのアミノ酸残基の側鎖に存在するヒドロキシ基と前記水素原子との脱水縮合反応により結合してよい。あるいは、さらに別の態様において、糖鎖付加ポリペプチドは、そのポリペプチドを構成するアミノ酸残基がアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基を含む場合、そのアミノ酸残基の側鎖に存在するカルボキシ基における−ＯＨ部分と前記水素原子との脱水縮合反応により結合してよい。
【０１６２】
本発明において、Ｒ７は、−Ｓ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−部分または−ＣＯＮＨ−部分を介して、糖鎖の、いずれかの部分（例えば還元末端）に結合していてよい。糖鎖は、−Ｓ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−または−ＣＯＮＨ−の窒素原子に結合する。Ｒ７が−Ｓ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−糖鎖である場合、−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−はリンカーを示し、かつ、好ましくは、硫黄原子はシステインに由来してよい。Ｒ７が−ＣＯＮＨ−糖鎖である場合、好ましくは、−ＣＯＮＨ−はアスパラギンに由来してよい。
【０１６３】
本発明の糖鎖付加リンカーは、生理活性物質が有する少なくとも１つのアミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、またはカルボキシ基において結合可能である。その結合の態様は、当業者に公知の態様であれば限定はされないが、生理活性物質がアミノ基を有する場合にはアミド結合により結合し、生理活性物質がヒドロキシ基を有する場合にはエステル結合により結合し、生理活性物質がチオール基を有する場合にはチオエステル結合により結合し、生理活性物質がカルボキシ基を有する場合には酸無水物結合により結合するのが好ましい。本発明における生理活性物質が低分子生理活性物質または生体高分子である場合においても、その結合の態様は同様である。
【０１６４】
生理活性物質がポリヌクレオチドであるか、またはポリヌクレオチドをその一部に含む場合、限定はされないが、それが有するアミノ基またはヒドロキシ基を介して、本発明の糖鎖付加リンカーとアミド結合またはエステル結合により結合してもよい。
【０１６５】
生理活性物質がペプチド核酸であるか、またはペプチド核酸をその一部に含む場合、限定はされないが、それが有するアミノ基またはカルボキシ基を介して、本発明の糖鎖付加リンカーとアミド結合により結合してもよい。
【０１６６】
生理活性物質がタンパク質もしくはポリペプチドであるか、またはペプチド部分をその一部に含む場合、限定はされないが、それが有するアミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、またはカルボキシ基を介して、本発明の糖鎖付加リンカーとアミド結合、エステル結合、チオエステル結合または酸無水物結合により結合してもよい。
【０１６７】
好ましい一実施態様において、本発明における生理活性物質は、タンパク質またはポリペプチドであり、それは、
（Ｉ）Ｎ末端にアミノ酸に由来するアミノ基を有するか、
（ＩＩ）側鎖にヒドロキシ基を有するセリン残基、スレオニン残基またはチロシン残基を含むか、
（ＩＩＩ）側鎖にカルボキシ基を有するアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基を含むか、
（ＩＶ）側鎖にアミノ基を有するリシン残基、アスパラギン残基、アルギニン残基、ヒスチジン残基またはトリプトファン残基を含むか、
（Ｖ）側鎖にチオール基を有するシステイン残基を含むか、または、
（ＶＩ）Ｃ末端にアミノ酸に由来するカルボキシ基を有する
ことが好ましい。アスパラギン酸はＤ−アスパラギン酸であってもよい。また、グルタミン酸はＤ−グルタミン酸であってもよい。他の人工アミノ酸も同様に採用されてよい。
かかる実施態様において、生理活性物質部分と糖鎖付加リンカー部分との結合は、
（１）前記生理活性物質のＮ末端のアミノ基におけるアミド結合、
（２）前記生理活性物質のセリン残基、スレオニン残基またはチロシン残基の側鎖に存在するヒドロキシ基におけるエステル結合（但し、前記生理活性物質が、セリン残基、スレオニン残基またはチロシン残基を有する場合に限る）、
（３）前記生理活性物質のアスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基の側鎖に存在するカルボキシ基（具体的には、−ＣＯＯＨ基中の−ＯＨ部分）における酸無水物結合（但し、前記生理活性物質が、アスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基を有する場合に限る）、
（４）前記生理活性物質のリシン残基、アスパラギン残基、アルギニン残基、ヒスチジン残基またはトリプトファン残基の側鎖に存在するアミノ基におけるアミド結合（但し、前記生理活性物質が、リシン残基、アスパラギン残基、アルギニン残基、ヒスチジン残基またはトリプトファン残基を有する場合に限る）、
（５）前記生理活性物質のシステイン残基の側鎖に存在するチオール基におけるチオエステル結合（但し、前記生理活性物質が、システイン残基を有する場合に限る）、または、
（６）前記生理活性物質のＣ末端のカルボキシ基における酸無水物結合、
であることが好ましい。
前記（１）、（４）の場合、生理活性物質部分と糖鎖付加リンカー部分は、結合により−ＮＨ−部分を介してリンクし、
前記（２）、（３）、（６）の場合、生理活性物質部分と糖鎖付加リンカー部分は、結合により−Ｏ−部分を介してリンクし、
前記（５）の場合、生理活性物質部分と糖鎖付加リンカー部分は、結合により−Ｓ−部分を介してリンクする。
【０１６８】
本発明における生理活性物質がペプチド部分を有する場合、生理活性物質部分と糖鎖付加リンカー部分との結合の態様は、生理活性物質がタンパク質またはポリペプチドの場合における前述した結合の態様と同様であってもよい。
【０１６９】
本発明の化合物またはその塩は、リンカー部分に付加される糖鎖の数が多いほど、その水溶性が向上する一方で、その半減期は変化しないことが見出されたことから、糖鎖の存在は、本発明の化合物またはその塩からリンカー部分が切断されるのを干渉しないものと考えられる。したがって、本発明において、糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とがアミド結合を介してリンクしている場合、そのアミド結合が切断されることにより糖鎖付加リンカーが切断されるメカニズムは、理論に拘束されることを意図しないが、国際公開第２００９／０９５４７９号パンフレットにおいて報告されているものに基づくものと考えられた。また、当該文献には、本発明における糖鎖付加リンカー部分またはリンカー部分における、置換基Ｙに相当する構造について、多様な構造（例えば、
【化４３】
2014080730.tif 000048
で表される構造等）を含む、（担体）リンカー部分が具体的に開示されており、当該（担体）リンカー部分が切断されて、無修飾の薬物が放出・生成されたことも具体的に開示されている。さらに、当該文献には、「担体−リンカー−薬物コンジュゲート」における担体−リンカー部分の切断による薬物の放出速度が、ｉｎ  ｖｉｖｏ／ｉｎ  ｖｉｔｒｏで正の相関関係を有していたことも報告されている。したがって、当業者は、本発明の化合物またはその塩における糖鎖付加リンカー部分の切断により生じる生理活性物質の放出速度が、ｉｎ  ｖｉｖｏ／ｉｎ  ｖｉｔｒｏで正の相関関係を有していることを理解する。
【０１７０】
したがって、非常に好ましい一態様において、本発明における糖鎖付加リンカー部分の切断は、ｉｎ  ｖｉｖｏ／ｉｎ  ｖｉｔｒｏで正の相関関係を有することを特徴とする。非常に好ましい一実施態様において、本発明の化合物またはその塩、および本発明の糖鎖付加リンカーは、糖鎖を有するために、ｉｎ  ｖｉｖｏ環境（体液、例えば、血液、リンパ液等）にも容易に溶解することができる。
【０１７１】
また、本発明において、糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とがエステル結合を介してリンクしている場合、当該結合の切断のメカニズムは、理論に拘束されることを意図しないが、Ｃｈｅｍ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｂｕｌｌ．  （２００８），  Ｖｏｌ．５６，  １５１５−１５２０頁）において報告されているものに基づくものと考えられた。
【０１７２】
本明細書において、「糖鎖付加リンカー」は、糖鎖付加リンカー部分（Ｒ１）と脱離基Ｌが結合した、式（Ｂ）「Ｒ１−Ｌ」で表されてもよく、それ自体で安定して存在することができる。本発明の糖鎖付加リンカーは、少なくとも１つのアミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、またはカルボキシ基を有する生理活性物質との結合を意図したものであってよい。
【０１７３】
本発明の糖鎖付加リンカーは、一実施態様において、下記式（Ｂ）で表され、
Ｒ１−Ｌ      （Ｂ）
ここで、
Ｒ１は、糖鎖付加リンカー部分を意味し、その定義は上述のとおりであり、
Ｌは、脱離基を意味する。
ここで、好ましくは、前記アルキル基、前記アリール基、または、前記複素環に存在する窒素原子に結合している少なくとも１つの水素原子が糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドで置換されており、いっそう好ましくは、当該置換は、当該「糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチド」におけるアミノ酸またはポリペプチドの部分における結合である。
【０１７４】
前記Ｌは、糖鎖付加リンカー部分（Ｒ１）と結合可能な基を表す。脱離基であるＬの態様および脱離反応は、当業者に公知のものであれば特に限定されない。例えば、国際公開第２００９／０９５４７９号パンフレットに開示されるような脱離基を用いてもよい。前記Ｌは、限定されないが、一態様において、塩素、臭素、フッ素、ニトロフェノキシ、イミダゾリル、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾリル、Ｎ−ヒドロキシアゾベンゾトリアゾリル、ペンタフルオロフェノキシ、２−チオオキソ−チアゾリジニルまたはＮ−ヒドロキシスルホスクシンイミジルであってよい。
【０１７５】
本発明の糖鎖付加リンカーは、低温（例えば−８０℃〜４℃、好ましくは−８０℃〜−３０℃）条件下において安定して保存することができる。さらに、糖鎖付加リンカーから脱離基Ｌを脱離反応によって除去して、上述の態様で、生理活性物質と結合させることができる。
【０１７６】
本発明の糖鎖付加リンカーは、「糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩」のうち、自己切断された糖鎖付加リンカー部分を当業者に周知の方法を用いて回収した後に、再利用してもよい。
【０１７７】
合成した、または回収した本発明の糖鎖付加リンカーが式（Ｉ’’）で表される糖鎖付加リンカーである場合、前記糖鎖付加リンカーにおける遊離のカルボン酸と、生理活性物質が有する少なくとも１つのアミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、またはカルボキシ基とを脱水縮合させることで、本発明の糖鎖付加リンカーと生理活性物質とを結合させて、本発明の化合物またはその塩を製造してもよい。
【０１７８】
あるいは、本発明におけるリンカー部分のみを合成し、次にリンカー部分へ糖鎖、糖鎖付加アミノ酸および／または糖鎖付加ポリペプチドを結合させて糖鎖付加リンカー部分を製造することもできる。製造した糖鎖付加リンカーに、別途、生体からの抽出、発現、または化学合成等で得られたタンパク質またはポリペプチドなどの生理活性物質を結合させてもよい。例えば、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．  （２００７），  Ｖｏｌ．１８，  １８６９‐１８７８頁には、ｐ−ニトロフェニル基で活性化させたＰＥＧ修飾リンカーにアミド結合でタンパク質を結合させたＰＥＧ修飾リンカー−タンパク質のコンジュゲートから、還元条件下（チオール存在下）でＰＥＧ修飾部分とリンカー部分が切断されて、無修飾のタンパク質が生成したことが報告されている。また、特表２００７−５２８３５４号公報には、Ｎ-ヒドロキシスクシンイミド基で活性化させたＰＥＧ修飾リンカーを、ペプチド／タンパク質に修飾して、ＰＥＧ修飾リンカーにペプチド／タンパク質がアミド結合で結合したＰＥＧ−Ｓ−ＭＡＬ−ＦＭＳ−ＮＨ−ペプチド／タンパク質結合物を２つの異なる経路で合成したところ、生理的条件下でＰＥＧ修飾リンカー部分が切断されて、無修飾のペプチド／タンパク質が得られたことが報告されている。これらの技術文献は、担体リンカー部分が薬物とアミド結合したものが、リンカーの分解によって、薬物自身が放出されることを説明したものである。当業者は、本明細書及びこれらの文献の教示等に基づいて、本発明の糖鎖付加リンカーを合成し、利用可能であることを理解できる。
【０１７９】
本発明の化合物またはその塩から、糖鎖付加リンカー部分が切断されると、切断された糖鎖付加リンカーにおいて、少なくとも１つのアミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、またはカルボキシ基を有する生理活性物質部分と結合していた部分は、−ＯＨ基を有する。言い換えるならば、本発明の糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩から切断直後の糖鎖付加リンカーは、本明細書において式（Ｉ’’）で表される糖鎖付加リンカーであってよい。
【０１８０】
本発明において、糖鎖付加リンカーにおける「リンカー」（糖鎖が結合していない構造を有する）は、糖鎖が結合していない状態で製造することができる。その製造方法、製造条件等は、限定はされないが、例えば、ジカルボン酸無水物（例えば、フタル酸無水物）に由来する、ジカルボン酸における遊離のカルボキシ基を、ジアミン（例えば、Ｎ−（２−アミノエチル）ピペラジン）における遊離のアミノ基（−ＮＨ２）と縮合させることにより合成してもよい。ジカルボン酸無水物、ジアミンは、限定はされないが、後述する、糖鎖付加リンカーを形成するユニットにおいて使用可能な、ジカルボン酸無水物、ジアミンと同じであってもよい。ジカルボン酸無水物とジアミンを用いて、前記リンカー（糖鎖が結合していない構造を有する）を製造する場合には、後述する、糖鎖付加リンカーを形成するユニットを用いた糖鎖付加リンカーの製造方法・手順に準じて合成してもよい。目的とする最終的な糖鎖付加リンカーの構造に照らして、当業者は適宜、反応条件、反応化合物等を選択して、多様なリンカーを合成することができる。
【０１８１】
本発明において、生理活性物質にリンカー部分を結合させる方法、反応条件等は、限定はされないが、例えば、国際公開第２００９／０９５４７９号パンフレットに記載される製造方法、製造条件等を適宜参酌して行ってよいことが当業者には理解されよう。
【０１８２】
一態様において、本発明の糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩は、液相合成法または固相合成法を利用して合成してもよい。例えば、固相合成法を利用した場合、本発明の糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩は、
（Ａ）適当な樹脂に、生理活性物質を固定するステップと、
（Ｂ）当該生理活性物質が有する少なくとも１つのアミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、またはカルボキシ基において、リンカーをアミド結合、エステル結合、チオエステル結合または酸無水物結合により結合させるステップと、
（Ｃ）次いで、糖鎖、糖鎖付加アミノ酸及び／または糖鎖付加ポリペプチドをリンカーに結合させるステップと
を含む工程によって合成してもよい。
【０１８３】
一実施態様において、前記ステップ（Ｂ）の代わりに、
（Ｂ’）当該生理活性物質が有する少なくとも１つの遊離のアミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、またはカルボキシ基の部分で、第１のリンカー部分（ジカルボン酸無水物（例えばフタル酸無水物））をアミド結合、エステル結合、チオエステル結合または酸無水物結合により縮合させ、さらに、当該第１のリンカー部分における遊離のカルボキシ基に、第２のリンカー部分（ジアミン（例えばＮ−（２−アミノエチル）ピペラジン））における遊離のアミノ基を縮合させることにより、所望のリンカー部分を有する生理活性物質を得てもよい。当業者は、反応条件、反応させるリンカーの一部を構成する化合物等を適宜選択して、生理活性物質に連続して縮合させることにより、所望のリンカー部分を有する生理活性物質を合成することができる。
【０１８４】
別の態様において、生理活性物質がタンパク質またはポリペプチドであるか、またはペプチド部分をその一部に含む場合には、前記ステップ（Ｂ）または前記ステップ（Ｂ’）に先だって、前記ステップ（Ａ）において、固相合成法により、適当な樹脂にタンパク質またはポリペプチドを合成してよい。固相合成法によるタンパク質またはポリペプチドの合成方法は、当業者に周知の方法であれば限定されない。
【０１８５】
固相合成法によるタンパク質またはポリペプチドの合成方法を組み合わせた、本発明の化合物またはその塩の製造方法は、例えば以下のように行ってもよい。
【０１８６】
まず、（１）ヒドロキシ基を有する樹脂（レジン）のヒドロキシ基と、脂溶性保護基でアミノ基が保護されたアミノ酸のカルボキシ基とをエステル化反応させる。この場合アミノ酸のアミノ基を脂溶性保護基で保護しているので、アミノ酸同士の自己縮合は防止され、レジンのヒドロキシ基とアミノ酸のカルボキシ基との間でエステル化反応が起こる。
【０１８７】
次に、
（２）工程（１）で得られたエステルの脂溶性保護基を脱離して遊離アミノ基を形成させ、
（３）上記遊離アミノ基と、脂溶性保護基でアミノ基が保護された別のアミノ酸のカルボキシ基とをアミド化反応させ、
（４）工程（３）の後、脂溶性保護基を脱離して遊離アミノ基を形成させ、
（５）工程（３）及び（４）の工程を必要に応じて繰り返すことにより、所望の数のアミノ酸が連結したポリペプチドを得ることができる。
【０１８８】
工程（５）で得られるポリペプチドは、一端が樹脂に結合し、もう一端に遊離アミノ基を有する。そこで、
（６）目的の構造を有するリンカーを、樹脂に結合した前記ポリペプチドの遊離アミノ基の部分でアミド結合、エステル結合、チオエステル結合または酸無水物結合させ、
（７）前記リンカー部分の所定の置換基における少なくとも１つの水素原子を糖鎖、糖鎖付加アミノ酸および／または糖鎖付加ポリペプチドによって置換させ、
（８）工程（１）で形成されたエステル結合を酸で切断する。
【０１８９】
これら（１）〜（８）のステップを含む製造方法により、所望の、糖鎖、糖鎖付加アミノ酸及び／または糖鎖付加ポリペプチド部分を備えたリンカー部分−ポリペプチドの化合物を製造することができる。
【０１９０】
あるいは、前記ステップ（６）の後に、
（７’）前記リンカー部分の所定の置換基における少なくとも１つの水素原子をアミノ酸および／またはポリペプチドによって置換させ、
（８’）工程（１）で形成されたエステル結合を酸で切断して、所望の、アミノ酸及び／またはポリペプチド部分を備えたリンカー部分−ポリペプチドの化合物を得て、
（９’）前記化合物のアミノ酸及び／またはポリペプチド部分に糖鎖を付加させる。
【０１９１】
これら（１）〜（６）及び（７’）〜（９’）のステップを含む製造方法により、所望の、糖鎖、糖鎖付加アミノ酸及び／または糖鎖付加ポリペプチド部分を備えたリンカー部分−ポリペプチドの化合物を製造することができる。
【０１９２】
これらの場合において、固相樹脂（レジン）としては、通常、固相合成で使用する樹脂であればよく、例えば、Ａｍｉｎｏ−ＰＥＧＡレジン（メルク社製）、Ｗａｎｇレジン（メルク社製）、ＨＭＰＡ−ＰＥＧＡレジン（メルク社製）または２−クロロトリチルクロリドレジン（メルク社製）等を用いることができる。
【０１９３】
また、Ａｍｉｎｏ−ＰＥＧＡレジン（樹脂）とアミノ酸との間にリンカーを存在させてもよく、このようなリンカーとして、例えば、４−ヒドロキシメチルフェノキシ酢酸（ＨＭＰＡ）、４−（４−ヒドロキシメチル−３−メトキシフェノキシ）−ブチル酢酸（ＨＭＰＢ）等を挙げることができる。
【０１９４】
脂溶性保護基としては、例えば、９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）基、ベンジルオキシカルボニル基（Ｚ）基、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル（Ｔｒｏｃ）基、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）基等のカルボニル含有基、アセチル（Ａｃ）基等のアシル基、アリル基、ベンジル基等の保護基を挙げることができるが、特にこれらに限定されるものではない。
【０１９５】
脂溶性保護基を導入するには、例えばＦｍｏｃ基を導入する場合には９−フルオレニルメチル−Ｎ−スクシニミジルカーボネートと炭酸水素ナトリウムを加えて反応を行うことにより導入できる。反応は０〜５０℃、好ましくは室温で、約１〜５時間程度行ってよい。
【０１９６】
脂溶性保護基で保護したアミノ酸としては、上述のアミノ酸を上記の方法で保護したものを用いることができる。また、市販のものも使用することができる。例えば、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（ｔＢｕｔｈｉｏ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨを挙げることができる。
【０１９７】
エステル化触媒として、例えば１−メシチレンスルホニル−３−ニトロ−１，２，４−トリアゾール（ＭＳＮＴ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１，３−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）等の公知の脱水縮合剤を用いることができる。アミノ酸と脱水縮合剤との使用割合は、前者１重量部に対して、後者が、通常１〜１０重量部、好ましくは２〜５重量部であってよい。
【０１９８】
エステル化反応は、例えば、固相カラムにレジンを入れ、このレジンを溶剤で洗浄し、その後アミノ酸の溶液を加えることにより行うのが好ましい。洗浄用溶剤としては、例えばジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、２−プロパノール、ジクロロメタン等を挙げることができる。アミノ酸を溶解する溶媒としては、例えばジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ＤＭＦ、ジクロロメタン等を挙げることができる。エステル化反応は０〜５０℃、好ましくは室温で、１０分〜３０時間程度、好ましくは１５分〜２４時間程度行ってよい。エステル化反応の後、固相上の未反応の官能基を、無水酢酸等を用いてアセチル化してキャッピングすることも好ましい。
【０１９９】
脂溶性保護基の脱離は、例えば塩基で処理することにより行うことができる。塩基としては、例えばピペリジン、モルホリン等を挙げることができる。その際、溶媒の存在下で行うのが好ましい。溶媒としては、例えばＤＭＳＯ、ＤＭＦ、メタノール等を挙げることができる。
【０２００】
遊離アミノ基と、脂溶性保護基でアミノ基窒素が保護された任意のアミノ酸／ポリペプチドにおけるカルボキシ基とのアミド化反応は、活性化剤及び溶媒の存在下行うのが好ましい。
【０２０１】
活性化剤としては、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド・塩酸塩（ＷＳＣ／ＨＣｌ）、ジフェニルホスホリルアジド（ＤＰＰＡ）、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、ジエチルシアノホスホネート（ＤＥＰＣ）、１，３−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリスピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）、３−ジエトキシホスホリルオキシ−１，２，３−ベンゾトリアジン−４（３Ｈ）−オン（ＤＥＰＢＴ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）、ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）、３−ヒドロキシ−４−オキソ−３，４−ジヒドロ−５−アザベンゾ−１，２，３−トリアジン（ＨＯＤｈｂｔ）、ヒドロキシフタルイミド（ＨＯＰｈｔ）、ペンタフルオロフェノール（Ｐｆｐ−ＯＨ）、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム  ヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム  ヘキサフルオロホスホネート（ＨＡＴＵ）、Ｏ−（６−クロロ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム  ヘキサフルオロホスフェート（ＨＣＴＵ）、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム  テトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）等を挙げることができる。
【０２０２】
活性化剤の使用量は、脂溶性の保護基でアミノ基窒素が保護された任意のアミノ酸／ポリペプチドに対して、１〜２０当量、好ましくは１〜１０当量、さらに好ましくは、１〜５当量とするのが好ましい。
【０２０３】
上記活性化剤のみでも反応は進行するが、補助剤としてアミンを併用することが好ましい。アミンとしては、例えば、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、Ｎ−エチルモルホリン（ＮＥＭ）、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、Ｎ−メチルイミダゾール（ＮＭＩ）、２，４，６−トリメチルピリジン等を用いることができる。補助剤の使用量は、脂溶性の保護基でアミノ基窒素が保護された任意のアミノ酸／ポリペプチドに対して、１〜２０当量、好ましくは１〜１０当量、さらに好ましくは、１〜５当量とするのが好ましい。
【０２０４】
溶媒としては、例えばＤＭＳＯ、ＤＭＦ、ジクロロメタン等を挙げることができる。反応は０〜５０℃、好ましくは室温で、約１０分〜３０時間程度、好ましくは１５分〜２４時間程度行うのが良い。この間、固相上の未反応のアミノ基を、無水酢酸等を用いてアセチル化しキャッピングするのが好ましい。脂溶性保護基の脱離は、上記と同様に行うことができる。
【０２０５】
レジン（樹脂）からペプチド鎖を切断するには、酸で処理するのが好ましい。酸としては、例えばトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、フッ化水素（ＨＦ）等を挙げることができる。その際、アミノ酸に使用していた脂溶性保護基および樹脂上のリンカーから、反応性の高いカチオン種が生成する場合があるため、これを捕獲するために、求核性試薬を添加することが好ましい。求核性試薬としては、トリイソプロピルシラン（ＴＩＳ）、フェノール、チオアニソール、エタンジチオール（ＥＤＴ）等を挙げることができる。
【０２０６】
化学合成、生物合成または購入等により入手した生理活性物質（例えば、ポリペプチド）とリンカーとの縮合反応の条件は、特に限定はされないが、当業者に周知の方法に基づいて適宜選択して行ってよい。例えば、それは、糖鎖付加リンカーを形成するユニット（例えば、ジカルボン酸、ジアミン、および、糖鎖、糖鎖付加アミノ酸および／もしくは糖鎖付加ポリペプチド）を順次、生理活性物質に作用させてもよい。この場合、まずジカルボン酸を導入し、次いで前記ジカルボン酸の一方のカルボン酸にアミド結合を介してジアミンを導入し、最後に前記ジアミンの他方のアミノ基にアミド結合を介して糖鎖、糖鎖付加アミノ酸および／または糖鎖付加ポリペプチドを導入してよい。ジアミンにおける前記他方のアミノ基が、例えば、置換または非置換の３〜７員の複素環の形成に用いられている場合、糖鎖付加アミノ酸および／または糖鎖付加ポリペプチドとのアミド結合に供されるアミノ基は、３〜７員の複素環構造に由来するアミノ基であってよい。上記ジカルボン酸の導入は、例えば、ピリジンなどの塩基の存在下で、ジカルボン酸の酸無水物を、例えば、上記ジアミンにおける遊離のアミノ基と反応させることで行うことができる。前記ジアミンの導入は、例えば、上記活性化剤と、上記補助剤であるアミンの存在下、前記ジアミンを、ジカルボン酸における遊離のカルボキシ基と縮合させることで行うことができる。上記の反応の溶媒としては、例えば、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ、ジクロロメタン等を挙げることができる。このとき、限定はされないが、反応は０〜５０℃で、好ましくは室温で、１０分〜３０時間程度、好ましくは１５分〜２４時間程度行ってよい。
【０２０７】
限定はされないが、前記ジカルボン酸の酸無水物には、例えば、以下の化合物が例示される。例えば、アリール環を有するジカルボン酸の酸無水物としては、
【化４４】
2014080730.tif 000049
が挙げられる。例えば、シクロアルキル環を有するジカルボン酸の酸無水物としては、
【化４５】
2014080730.tif 000050
が挙げられる。例えば、シクロアルケニル環を有するジカルボン酸の酸無水物としては、
【化４６】
2014080730.tif 000051
が挙げられる。例えば、複素環を有するジカルボン酸の酸無水物としては、
【化４７】
2014080730.tif 000052
が挙げられる。例えば、ビシクリルを有するジカルボン酸の酸無水物としては、
【化４８】
2014080730.tif 000053
が挙げられる。例えば、トリシクリルを有するジカルボン酸の酸無水物としては、
【化４９】
2014080730.tif 000054
が挙げられる。例えば、キノン構造を有するジカルボン酸の酸無水物としては、
【化５０】
2014080730.tif 000055
が挙げられる。他の例としては、例えば、以下のジカルボン酸の酸無水物：
【化５１】
2014080730.tif 000056
を挙げてもよい。
【０２０８】
本発明における糖鎖付加リンカー、糖鎖付加リンカー部分、またはリンカー部分における置換基Ｙに関して、
Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂが、Ｒ５Ａが結合する炭素原子、Ｒ５Ｂが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数５〜１６のアリール、炭素数５〜１６のシクロアルケニル、炭素数７〜１３のビシクリル、炭素数９〜１４のトリシクリル、炭素数６〜１４のキノン、または５〜１０員の複素環を形成する場合、あるいは、
Ｒ５Ｃ、Ｒ５Ｄが、Ｒ５Ｃが結合する炭素原子、Ｒ５Ｄが結合する炭素原子と一緒になって、炭素数４〜１６のシクロアルキル、炭素数５〜１６のシクロアルケニル、炭素数７〜１３のビシクリル、炭素数９〜１４のトリシクリル、または５〜１０員の複素環を形成する場合、
Ｙの構造は、例えば、上述の、具体的に示した多様なジカルボン酸の酸無水物における、Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）を除いた構造部分に相当する。例えば、ジカルボン酸無水物としてフタル酸無水物を用いて、本発明の化合物またはその塩、あるいは本発明の糖鎖付加リンカー、あるいはリンカー（糖鎖が結合していない構造を有する）を製造する場合、フタル酸無水物のうち、下記式において点線で囲ったフェニル環部分（すなわち、フタル酸無水物のうち、Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）を除いた構造部分）が、置換基Ｙの構造に相当する。
【化５２】
2014080730.tif 000057
当業者であれば、多様なジカルボン酸の酸無水物において、Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）を除いた構造部分が、糖鎖付加リンカーまたはリンカーを構成する部分の一部として導入できることを当然に理解する。
【０２０９】
前記ジアミンは、限定はされないが、置換または非置換のエチレンジアミンであってよい。エチレンジアミンにおけるアミノ基以外に存在する水素原子が１つまたは複数置換されている場合、炭素数１〜１６のアルキル基または炭素数５〜１６のアリール基で置換されていてよい。前記置換または非置換のエチレンジアミンにおいて、さらに、そのアミノ基の一方が、置換または非置換の３〜７員の複素環の形成に用いられてもよい。この場合、このようなジアミンとしては、市販のものを用いてもよく、あるいは当業者に周知の方法で合成してもよい。限定はされないが、例えば、それぞれ以下の化学構造式で挙げられるジアミン誘導体が挙げられる：
Ｎ−（２−アミノエチル）イミダゾリジン：
【化５３】
2014080730.tif 000058
Ｎ−（２−アミノエチル）ピペラジン：
【化５４】
2014080730.tif 000059
４−（２−アミノエチル）−１，４−ジアゼパン：
【化５５】
2014080730.tif 000060
Ｎ−（２−アミノプロピル）ピペラジン：
【化５６】
2014080730.tif 000061
４−（２−アミノエチル）ピペラジン−２−オン：
【化５７】
2014080730.tif 000062
１−（２−アミノエチル）−ピペリジン−３−オール：
【化５８】
2014080730.tif 000063
１−（２，５−ジメチルピペラジン−１−イル）プロパン−２−アミン：
【化５９】
2014080730.tif 000064
また、前記置換または非置換の３〜７員の複素環は、置換基Ｒ２および／またはＲ３に関連して上述した置換または非置換の３〜７員の複素環と同様であってよい。
【０２１０】
一実施態様において、本発明において式（Ｉ）で表される糖鎖付加リンカー部分におけるＲ２および／またはＲ３が、炭素数１〜１６のアルキル基である場合、当該アルキル基上に、例えば、アミノ基、カルボキシ基、ヒドロキシ基、チオール基などの官能基を導入し、当該官能基部分で、例えば、糖鎖、アミノ酸、ポリペプチド、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドを導入してもよい。例えば、当業者に周知の方法にしたがって、化学合成によって前記アルキル基上の任意の位置に前記官能基を導入することが可能である。限定はされないが、前記アミノ基はアミド結合により、前記カルボキシ基はアミド結合またはエステル結合により、前記ヒドロキシ基はエステル結合またはエーテル結合により、前記チオール基はチオエーテル結合またはチオエステル結合により、例えば、糖鎖付加アミノ酸および／または糖鎖付加ポリペプチドが結合可能である。
例えば、本発明における式（Ｉ）で表される糖鎖付加リンカー部分におけるＲ２および／またはＲ３に相当する部分で炭素数１〜１６のアルキル基を有し、アミノ基を導入された、前述のエチレンジアミン誘導体として、以下の誘導体（ジアミン誘導体）が例示される：
３−（２−アミノエチルアミノ）プロピルアミン：
【化６０】
2014080730.tif 000065
トリス（２−アミノエチル）アミン：
【化６１】
2014080730.tif 000066
あるいは、例えば、本発明における式（Ｉ）で表される糖鎖付加リンカー部分におけるＲ２および／またはＲ３に相当する部分で炭素数１〜１６のアルキル基を有し、カルボキシ基を導入された、前述のエチレンジアミン誘導体として、以下の誘導体が例示される：
[（２−アミノエチル）アミノ]酢酸：
【化６２】
2014080730.tif 000067
あるいは、例えば、本発明における式（Ｉ）で表される糖鎖付加リンカー部分におけるＲ２および／またはＲ３に相当する部分で炭素数１〜１６のアルキル基を有し、ヒドロキシ基を導入された、前述のエチレンジアミン誘導体として、以下の誘導体が例示される：
３−（２−アミノエチルアミノ）プロパノール：
【化６３】
2014080730.tif 000068
Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）エチレンジアミン：
【化６４】
2014080730.tif 000069
あるいは、例えば、本発明における式（Ｉ）で表される糖鎖付加リンカー部分におけるＲ２および／またはＲ３に相当する部分で炭素数１〜１６のアルキル基を有し、チオール基を導入された、前述のエチレンジアミン誘導体として、以下の誘導体が例示される：
２−（２−アミノエチルアミノ）エタンチオール：
【化６５】
2014080730.tif 000070
当業者は、本発明におけるその他の糖鎖付加リンカーやリンカーにおけるＲ２および／またはＲ３に相当する部分で炭素数１〜１６のアルキル基が存在する場合における、例えば、糖鎖、アミノ酸、ポリペプチド、糖鎖付加アミノ酸および／または糖鎖付加ポリペプチドの導入についても、同様に理解する。
【０２１１】
同様に、別の実施態様において、本発明において式（Ｉ）で表される糖鎖付加リンカー部分におけるＲ２および／またはＲ３が、炭素数５〜１６のアリール基である場合、当該アリール基上に、例えば、アミノ基、カルボキシ基、ヒドロキシ基、チオール基などの官能基を導入し、当該官能基部分で、例えば、糖鎖、アミノ酸、ポリペプチド、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドを導入してもよい。例えば、当業者に周知の方法にしたがって、化学合成によって前記アリール基上の任意の位置に前記官能基を導入することが可能である。限定はされないが、前記アミノ基はアミド結合により、前記カルボキシ基はアミド結合またはエステル結合により、前記ヒドロキシ基はエステル結合またはエーテル結合により、前記チオール基はチオエーテル結合またはチオエステル結合により、例えば、糖鎖付加アミノ酸および／または糖鎖付加ポリペプチドが結合可能である。
例えば、本発明における式（Ｉ）で表される糖鎖付加リンカー部分におけるＲ２および／またはＲ３に相当する部分で炭素数５〜１６のアリール基を有し、アミノ基を導入された、前述のエチレンジアミン誘導体として、以下の誘導体が例示される：
Ｎ−（２−アミノエチル）−１，４−ベンゼンジアミン：
【化６６】
2014080730.tif 000071
Ｎ−（２−アミノエチル）−１，２−ベンゼンジアミン：
【化６７】
2014080730.tif 000072
Ｎ−（２−アミノエチル）−１，３‐ベンゼンジアミン：
【化６８】
2014080730.tif 000073
あるいは、例えば、本発明における式（Ｉ）で表される糖鎖付加リンカー部分におけるＲ２および／またはＲ３に相当する部分で炭素数５〜１６のアリール基を有し、カルボキシ基を導入された、前述のエチレンジアミン誘導体として、以下の誘導体が例示される：
４−［（２−アミノエチル）アミノ］−安息香酸：
【化６９】
2014080730.tif 000074
あるいは、例えば、本発明における式（Ｉ）で表される糖鎖付加リンカー部分におけるＲ２および／またはＲ３に相当する部分で炭素数５〜１６のアリール基を有し、ヒドロキシ基を導入された、前述のエチレンジアミン誘導体として、以下の誘導体が例示される：
４−［（２−アミノエチル）アミノ］−フェノール：
【化７０】
2014080730.tif 000075
当業者は、本発明におけるその他の糖鎖付加リンカーやリンカーにおけるＲ２および／またはＲ３に相当する部分で炭素数５〜１６のアリール基が存在する場合における、例えば、糖鎖、アミノ酸、ポリペプチド、糖鎖付加アミノ酸および／または糖鎖付加ポリペプチドの導入についても、同様に理解する。
【０２１２】
本発明における式（Ｉ）で表される糖鎖付加リンカー部分におけるＲ２および／またはＲ３が、炭素数１〜１６のアルキル基または炭素数５〜１６のアリール基であるか、あるいはＲ２およびＲ３はそれらが結合している窒素原子と一緒になって、３〜７員の複素環を形成しているとき、前記アルキル基、前記アリール基または前記複素環上に、チオール基を導入した場合、限定はされないが、ハロアセチル化（例えばブロモアセチル化）複合型糖鎖誘導体（またはハロアセトアミド化複合型糖鎖誘導体）等を直接結合することができる。
【０２１３】
同様に、本発明における式（Ｉ）で表される糖鎖付加リンカー部分におけるＲ２および／またはＲ３が炭素数１〜１６のアルキル基または炭素数５〜１６のアリール基であるか、あるいはＲ２およびＲ３はそれらが結合している窒素原子と一緒になって３〜７員の複素環を形成しているときであって、かつ、それに結合する糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドにおける当該糖鎖が例えばハロアセチル化複合型糖鎖誘導体等の糖鎖である場合、アミノ酸部分またはポリペプチド部分を介することなく、当該糖鎖部分が前記糖鎖付加リンカー部分に直接結合できることを当業者は当然に理解する。
【０２１４】
ハロアセチル化複合型糖鎖誘導体（またはハロアセトアミド化複合型糖鎖誘導体）は、例えば、複合型アスパラギン結合型糖鎖の１位の炭素に結合しているヒドロキシ基を、−ＮＨ−（ＣＨ２）ａ−（ＣＯ）−ＣＨ２Ｘ（Ｘはハロゲン原子、ａは整数であり、目的とするリンカー機能を阻害しない限り限定されるものではないが、好ましくは０〜４の整数を示す。）で置換した化合物である。
【０２１５】
一態様において、生理活性物質に結合したリンカー部分の所定の置換基における少なくとも１つの水素原子を糖鎖、糖鎖付加アミノ酸（アミノ酸は例えばアスパラギンであってよい）及び／または糖鎖付加ポリペプチド（当該ポリペプチドにおけるアスパラギン残基であってよい）によって置換する反応条件は、限定されないが、当業者に周知の方法に基づいて適宜選択して行ってよい。例えば、それは、上記活性化剤と、上記補助剤であるアミンの存在下、糖鎖、糖鎖付加アミノ酸及び／または糖鎖付加ポリペプチドを反応させてもよい。
【０２１６】
別の態様において、生理活性物質に結合したリンカー部分の所定の置換基における少なくとも１つの水素原子を、アミノ酸（例えばシステイン）及び／またはポリペプチド部分（当該ポリペプチドにおけるシステイン残基であってよい）によって置換する反応条件は、限定されないが、当業者に周知の方法に基づいて適宜選択して行ってよい。例えば、それは、固相合成法、液相合成法等により、糖鎖を付加したい位置にＣｙｓを導入することによって実施してよい。かかる場合において、置換させたアミノ酸及び／またはポリペプチドにさらに糖鎖を付加する反応条件は、限定されないが、当業者に周知の方法に基づいて適宜選択して行ってよい。例えば、ハロアセチル化複合型糖鎖誘導体を、上記で得た無保護のＣｙｓを含む化合物と反応させることにより、糖鎖を無保護のＣｙｓのチオール基と反応させ、当該化合物に結合させる。上記反応は、リン酸緩衝液、トリス−塩酸緩衝液、クエン酸緩衝液、またはこれらの混合溶液中において、通常０〜８０℃、好ましくは、１０〜６０℃、更に好ましくは１５〜３５℃で行うのが好ましい。反応時間は、限定はされないが、通常１０分〜２４時間、好ましくは、通常３０分〜５時間程度であってよい。反応終了後は、適宜、公知の方法（例えば、ＨＰＬＣ）で精製してよい。なお、ハロアセチル化は、例えば、クロロアセチル化、ブロモアセチル化、ヨードアセチル化等であってよい。ハロアセチル化複合型糖鎖誘導体とは、例えば、２本鎖複合型糖鎖、３本鎖複合型糖鎖または４本鎖複合型糖鎖等の複合型糖鎖がハロアセチル化されたものを意味してよい。糖鎖のハロアセチル化の方法および態様は、例えば、国際公開第２００５／１００５３号パンフレット（ＵＳ２００７０６０５４３（Ａ１））等を参照してもよく、当業者に公知である。
【０２１７】
一実施態様において、本発明の糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩の製造方法において用いるリンカー部分は、前述の式（Ｉ’）で表わされる（式中、各置換基及び波線は上記に規定したとおりである。）。
ここで、好ましくは、前記アルキル基、前記アリール基、または、前記複素環に存在する窒素原子に結合している少なくとも１つの水素原子が糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドで置換されており、いっそう好ましくは、当該置換は、当該「糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチド」におけるアミノ酸またはポリペプチドの部分における結合である。
【０２１８】
好ましい一実施態様において、限定はされないが、本発明の糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩の製造方法において用いるリンカー部分は、前述の式（Ｉ’）で表わされるリンカー部分の代わりに、下記式（ＩＩ’）で表されるリンカー部分であってもよい、
【化７１】
2014080730.tif 000076
［式（ＩＩ’）中、
Ｒ４、Ｙおよび波線は、それぞれ、上記において規定したとおりであり、
Ｒ６’は、水素原子である。］。
かかる場合、糖鎖付加リンカー部分を得るために、さらに、前記リンカー部分のＲ６’の水素原子を、糖鎖、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドによって置換する（ここで、一態様において、前記リンカー部分のＲ６’の水素原子を、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドで置換するのが好ましく、当該置換は、限定はされないが、当該「糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチド」におけるアミノ酸またはポリペプチドの部分における結合であるのが好ましい。）。
【０２１９】
好ましい一実施態様において、限定はされないが、前記式（ＩＩ’）で表わされるリンカー部分のＲ６’にある水素原子が、糖鎖付加アスパラギン（当該アスパラギンの主鎖のアミノ基が保護基により保護されている）によって置換されて、式（ＩＩＩａ）で表される糖鎖付加リンカー部分の構造を有してもよい。
【化７２】
2014080730.tif 000077
［式（ＩＩＩａ）中、
Ｒ４、Ｙおよび波線は、それぞれ、上記において規定したとおりであり、
Ｒ７Ａは、−ＣＯＮＨ−糖鎖であり、
Ｒ８Ａは、炭素数１〜１６のアシル基、Ｆｍｏｃ基、Ｂｏｃ基、Ｚ基、Ｔｒｏｃ基、またはＡｌｌｏｃ基等の保護基である。）
さらに、前記Ｒ８Ａの保護基を、水素原子、アミノ酸、ポリペプチド、糖鎖、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドで置換してもよい。一態様において、Ｒ８Ａが糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドであるとき、Ｒ８Ａの窒素原子との結合は、当該「糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチド」におけるアミノ酸またはポリペプチドの部分における結合であるのが好ましい。
【０２２０】
あるいは、好ましい別の実施態様において、限定はされないが、前記式（ＩＩ’）で表わされるリンカー部分のＲ６’の水素原子が、その主鎖のアミノ基が保護基により保護されているシステインによって置換されて、式（ＩＩＩ’）で表されるリンカー部分の構造を有してもよい。
【化７３】
2014080730.tif 000078
［式（ＩＩＩ’）中、
Ｒ４、Ｙおよび波線は、それぞれ、上記において規定したとおりであり、
Ｒ７’は、−ＳＨであり、
Ｒ８’は、炭素数１〜１６のアシル基、Ｆｍｏｃ基、Ｂｏｃ基、Ｚ基、Ｔｒｏｃ基、またはＡｌｌｏｃ基等の保護基である。）
【０２２１】
ここで、前記Ｒ８’の保護基を、水素原子、アミノ酸、ポリペプチド、糖鎖、糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドでさらに置換してもよい。一態様において、Ｒ８’が糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチドであるとき、Ｒ８’の窒素原子との結合は、当該「糖鎖付加アミノ酸または糖鎖付加ポリペプチド」におけるアミノ酸またはポリペプチドの部分における結合であるのが好ましい。
また、前記Ｒ７’の−ＳＨにおける水素原子を、−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−糖鎖で置換することにより、糖鎖付加リンカー部分を形成してよい。
【０２２２】
一実施態様において、本発明は、上述のいずれかの製造方法により得られうる（ｏｂｔａｉｎａｂｌｅ）、化合物またはその塩を提供することが好ましい。得られうる化合物またはその塩とは、上述のいずれかの製造方法によって製造されるものには限定されず、他の製造方法によって製造されるものも対象となる。
【０２２３】
別の実施態様において、本発明は、上述のいずれかの製造方法により得られた（ｏｂｔａｉｎｅｄ）、化合物またはその塩を提供することが好ましい。
【０２２４】
好ましい一態様において、本発明の糖鎖付加リンカーを利用することで、生理活性物質が難溶性であるか否かに関わらず、本発明の糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩として、生理活性物質を水溶液、または、水溶液から調製したエマルション中に容易に溶解することができる。当該溶解後、当該糖鎖付加リンカー部分が切断されることにより、無修飾の生理活性物質が放出可能である。
【０２２５】
好ましい一態様において、本発明における糖鎖付加リンカー部分は、本発明の糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩から、酵素または光に非依存的に切断が可能である。すなわち、当該糖鎖付加リンカー部分は、その分子内触媒作用によって、当該「糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩」から自動加水分解により切断可能である。しかしながら、当該切断は、例えば、生体内に存在する酵素による切断（例えば、アミド結合の場合は、酵素としてアミダーゼが挙げられる。エステル結合の場合は、酵素としてエステラーゼが挙げられる。）等の生物学的切断または光等の化学的切断を排除することを意図していない。
【０２２６】
本明細書において、「自己切断」または「自己触媒的な切断」とは、本発明の糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩において、リンカー部分内における分子内触媒作用による活性化により、糖鎖付加リンカー部分−生理活性物質部分の結合が自動加水分解（酵素または光などの外来要因が不要な加水分解）により切断されることを意味する。
【０２２７】
好ましい一実施態様において、本発明の化合物またはその塩は、水溶液またはエマルション中に溶解後、ｐＨおよび／または温度に依存して、糖鎖付加リンカー部分の切断が速くなる特徴を有している（ｐＨおよび／または温度依存的切断）。本発明の化合物またはその塩、及び本発明の糖鎖付加リンカーは、例えば、低温（例えば−８０℃〜４℃）および／または低ｐＨ（例えばｐＨ１〜ｐＨ４）で保存してもよい。また、糖鎖付加リンカー部分に生理活性物質を結合させて「糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩」を調製する工程は、例えば、低温（例えば０℃〜２５℃）および／または低ｐＨ（例えばｐＨ１〜ｐＨ７）で行ってよい。糖鎖付加アミノ酸のＮ末端のアミノ基を炭素数１〜１６のアシル基、Ｆｍｏｃ基、Ｂｏｃ基、Ｚ基、Ｔｒｏｃ基、またはＡｌｌｏｃ基等で保護することにより、本発明の糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩および本発明の糖鎖付加リンカーを安定化させてもよい。
【０２２８】
好ましくは、本発明の化合物またはその塩は、生理的条件に近い温度およびｐＨ（例えば、哺乳動物の生体内の生理的環境またはそれに近い環境、例えば３５℃〜４３℃、ｐＨ６．８〜７．８等）で使用してよい。
【０２２９】
好ましい一実施態様において、本発明の化合物またはその塩を用いることにより、生理活性物質を、水溶液、または水溶液から調製するエマルションに効率的に溶解させることができる。したがって、好ましい一態様において、本発明の化合物またはその塩を用いることにより、水溶性の低い（難溶性の）生理活性物質でさえも、フィルター滅菌を行うことができる。さらに、好ましい別の態様において、本発明の化合物またはその塩を用いることにより、水溶性の低い生理活性物質でさえも、生体に投与することが可能である。
【０２３０】
好ましい別の実施態様において、本発明の化合物またはその塩を用いることにより、水溶性の高い生理活性物質でさえも、いっそう高効率で水溶液、または水溶液から調製するエマルションに溶解できる。したがって、本発明は、有利には、高価な生理活性物質を含む製剤調製または製剤投与過程における、物質の不溶性等から生じ得る「損失」を低下させ得る。
【０２３１】
また、好ましい他の一実施態様において、溶媒中の半減期があらかじめわかっている本発明の糖鎖付加リンカーを適宜選択することで、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ環境またはｉｎ  ｖｉｖｏ環境中に放出される無修飾の生理活性物質の放出時間、タイミングを制御することが可能となる。例えば、生体内に投与後に、所望の部位で、迅速に効果を発揮させたい生理活性物質の送達にも有利である。
【０２３２】
特に好ましい一実施態様において、本発明の糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩は、無修飾の生理活性物質と比較して、向上した水溶性を提供できる。前記向上した水溶性は、限定はされないが、モル濃度で、２倍〜１，０００，０００倍であることが好ましく、１０倍〜１，０００，０００倍であることがより好ましく、１００倍〜１，０００，０００倍であることがさらに好ましい。当業者は、生理活性物質の用途と目的に応じて、必要な溶解性を有する本発明の糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩、または本発明の糖鎖付加リンカーを適宜選択することができる。
【０２３３】
本発明の糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩、または無修飾の生理活性物質の溶解度を決定するために必要なモル吸光係数（比吸光度）は、当業者に公知の方法、例えば、アミノ酸組成分析又は窒素定量法等の方法により測定した既知のタンパク質濃度の溶液を試料として、紫外可視分光光度法（例えば、２８０ｎｍ等の紫外可視領域での波長）により決定してよい。
【０２３４】
本発明の組成物は、１種以上の本発明の化合物またはその塩に加えて、任意の１種以上の他の成分（活性成分または不活性成分）を含む。本発明の組成物の使用は、特に限定されないが、例えば、アッセイ系（例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ系等）に用いてよい。また、本発明の医薬組成物は、医薬用途に適した組成物であり、通常使用される充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、崩壊剤、表面活性剤、滑沢剤等の希釈剤または賦形剤を用いて、通常の医薬組成物の形態に製剤化したものである。このような医薬組成物としては、例えば、限定はされないが、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、坐剤、注射剤等が挙げられる。医薬組成物が対象とする医薬用途は、生理活性物質部分として組成物中に含有される生理活性物質が関与する疾患、疾病を対象とするものであってよい。例えば、生理活性物質がＧＬＰ‐１またはその誘導体である場合、対象とする医薬用途は、糖尿病等であってよい。他の医薬用途についても、各生理活性物質が関与する疾患、疾病の種類を併せて考慮することで、当業者は同様に理解できる。
【０２３５】
本明細書において、薬理学的に許容される担体とは、特に制限されない。薬理学的に許容される担体を配合することにより、本発明の化合物またはその塩の吸収性や血中濃度に影響を及ぼし、体内動態の変化をもたらしてよい。
【０２３６】
特に好ましくは、生理活性物質として抗原を用いた場合、本発明の化合物またはその塩及びそれを含む本発明の医薬組成物は、ワクチンとしても利用可能である。好ましい一態様において、例えば難溶性の抗原であっても、本発明の化合物またはその塩として水溶液またはエマルション中に溶解させることが可能であり、また、生体内で、糖鎖付加リンカー部分の切断後に、無修飾の抗原を放出させることが可能である。好ましくは、本発明の化合物またはその塩及び糖鎖付加リンカーは、ペプチドワクチン等の様々なワクチンの開発に利用できる。
【０２３７】
本明細書において、ワクチン（免疫原性組成物とも称される）は、動物に接種した際に、免疫応答を生じ得る物質を意味する。ワクチンは抗原を含んでいるか、または抗原を発現可能であり、これにより抗原に対する免疫応答を誘導することができる。本発明の医薬組成物は、ワクチンとして用いた場合、ウイルス感染、細菌感染（敗血症等）、伝染病の予防または治療のみならず、免疫応答に関連し得る任意の疾患、例えば癌、自己免疫疾患（例えば、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症、関節リウマチ等）の治療等にも用いることが可能である。
【０２３８】
抗原とは、１つまたはそれ以上のエピトープを含む分子であり、宿主の免疫系を刺激して抗原特異的な免疫応答を誘導し得るものであればどのようなものでもよい。免疫応答は、体液性免疫応答および／または細胞性免疫応答であってよい。３個〜数個（例えば５個、６個）程度のアミノ酸でも１つのエピトープとなり得るが、通常、タンパク質中の１つのエピトープは、７〜１５アミノ酸、例えば８、９、１０、１２、または１４アミノ酸を含んでいる。抗原は、一態様において、ペプチドまたはエピトープであるのが好ましい。抗原を癌の治療に用いる場合、かかるペプチドは、がんペプチドとも称される。
【０２３９】
また、本発明の医薬組成物（ワクチンとして用いる場合を含む）を生体に投与してもよい。その投与方法としては特に制限はなく、各種製剤形態、患者の年齢、性別、疾患の状態、その他の条件に応じた方法で投与される。錠剤、丸剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤及びカプセル剤の場合の投与方法としては、例えば、経口投与が挙げられる。また、注射剤の場合には、単独で、又はブドウ糖、アミノ酸等の通常の補液と混合して、静脈内、筋肉内、皮内、皮下又は腹腔内に投与することができる。坐剤の場合には、直腸内に投与される。特に、本発明の医薬組成物は、ワクチンとして用いた場合、皮下注射、筋肉内注射、経口、スタンプ式、皮内注射等であってよい。
【０２４０】
本発明の医薬組成物（ワクチンとして用いる場合を含む）の投与量は、用法、患者の年齢、性別、疾患の程度、その他の条件に応じて適宜選択すればよい。投与回数は、用法、患者の年齢、性別、疾患の程度、その他の条件に応じて適宜選択すればよく、例えば、３回／１日、２回／１日、１回／１日、さらにはその血中安定性に応じて、より頻度の少ない投与回数（例えば、１回／週、１回／月等）も選択しうる。本発明の医薬組成物は、糖鎖リンカー部分の切断が徐々に生じることにより、生理活性物質に徐放性を提供してもよい。あるいは、本発明の医薬組成物は、糖鎖リンカー部分の切断が迅速に生じることにより、生理活性物に速効性を提供してもよい。
【０２４１】
また、ある一態様において、本発明は、糖鎖付加リンカー、または、糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩における、生理活性物質が対象とする疾患、疾病の治療または予防用医薬の製造のための使用にも関する。あるいは、別の態様において、本発明は、糖鎖付加リンカー、または、糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩における、生理活性物質が対象とする疾患、疾病の治療または予防等のための使用にも関する。
【０２４２】
本発明の糖鎖付加リンカーは、生分解性の性質を有する糖鎖をリンカーに付加したことにより、ＰＥＧを付加する場合に比べて、生体への悪影響が軽減される。その結果、生体への長期間の投与が期待される。
【０２４３】
本明細書における水溶液は、溶媒である水に物質（例えば酢酸）が溶解した液体であればいずれのものでもよく、当業者に公知または新規のあらゆる水溶液を対象とする。
【０２４４】
本明細書におけるエマルションは、限定されるわけではないが、水溶液から調製したものであればいずれのものでもよい。エマルションとしては、限定されるわけではないが、水中油滴（Ｏ／Ｗ型）エマルションまたは油中水滴（Ｗ／Ｏ型）エマルションであってよい。水溶液中に分散乳化させる方法は当業者に公知の方法を用いてよい。
【０２４５】
本発明の化合物またはその塩、または本発明の医薬組成物を投与（適用）する対象とは、限定はされないが、動物（ヒト、非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウサギ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ等）または非哺乳動物（例えば、魚類、爬虫類、両生類または鳥類））、植物、昆虫、細菌、またはそれら由来の細胞（培養細胞を含む）、組織または器官等を含む。あるいは、当該対象は、人工的な環境（例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏ反応系等）であってもよい。好ましくは、本発明における対象はヒトである。
【０２４６】
本明細書において用いられる用語は、特定の実施態様を説明するために用いられるのであり、発明を限定する意図ではない。
【０２４７】
また、本明細書において用いられる「含む」との用語は、文脈上明らかに異なる理解をすべき場合を除き、記載された事項（部材、ステップ、要素または数字等）が存在することを意図するものであり、それ以外の事項（部材、ステップ、要素または数字等）が存在することを排除しない。
【０２４８】
一態様において、限定はされないが、本発明の糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩は、生理活性物質部分と糖鎖付加リンカー部分から実質的になってもよく（言い換えれば、本発明の基本的、本質的な構成には影響を与えない態様で、他の成分を有してもよく）、または、生理活性物質部分と糖鎖付加リンカー部分のみからなってもよい。
【０２４９】
異なる定義が無い限り、ここに用いられるすべての用語（技術用語及び科学用語を含む。）は、本発明が属する技術の当業者によって広く理解されるのと同じ意味を有する。ここに用いられる用語は、異なる定義が明示されていない限り、本明細書及び関連技術分野における意味と整合的な意味を有するものとして解釈されるべきであり、理想化され、又は、過度に形式的な意味において解釈されるべきではない。
【０２５０】
本発明の実施態様は模式図を参照しつつ説明される場合があるが、模式図である場合、説明を明確にするために、誇張されて表現されている場合がある。
【０２５１】
第１の、第２の等の用語が種々の要素を表現するために用いられるが、これらの要素はそれらの用語によって限定されるべきではないことが理解される。これらの用語は一つの要素を他の要素と区別するためのみに用いられているのであり、例えば、第１の要素を第２の要素と記し、同様に、第２の要素は第１の要素と記すことは、本発明の範囲を逸脱することなく可能である。
【０２５２】
本明細書において、例えば、「炭素数１〜１６のアルキル基」と表現されている場合、当業者は、当該表現が、炭素数が１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６のアルキル基を個別具体的に指すことを理解する。
【０２５３】
本明細書において、成分含有量や数値範囲を示すのに用いられるあらゆる数値は、特に明示がない限り、用語「約」の意味を包含するものとして解釈される。例えば、「１０倍」とは、特に明示がない限り、「約１０倍」を意味するものと理解される。
【０２５４】
本明細書中に引用される文献は、それらのすべての開示が、本明細書中に援用されているとみなされるべきであって、当業者は、本明細書の文脈に従って、本発明の精神及び範囲を逸脱することなく、それらの先行技術文献における関連する開示内容を、本明細書の一部として援用して理解する。
【０２５５】
以下において、本発明を、実施例を参照してより詳細に説明する。しかしながら、本発明はいろいろな態様により具現化することができ、ここに記載される実施例に限定されるものとして解釈されてはならない。
【実施例】
【０２５６】
本実施例において用いられる略語の一部を以下に説明する：
Ａｃ：アセチル（基）
ＡｃＯＨ：酢酸
Ａｌｌｏｃ基：アリルオキシカルボニル基
Ａｓｎ：アスパラギン
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル基
Ｃｙｓ：システイン
ＤＩＣ：ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＤＴＴ：ジチオトレイトール
ＥＳＩ−ＭＳ：エレクトロスプレーイオン化（ＥｌｅｃｔｒｏＳｐｒａｙ  Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ）質量分析
Ｆｍｏｃ（基）：９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（基）
ＧｌｃＮＡｃ：Ｎ−アセチルグルコサミン
ＨＣＴＵ：Ｏ−（６−Ｃｈｌｏｒｏ−１Ｈ−ｂｅｎｚｏｔｒｉａｚｏｌ−１−ｙｌ）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｕｒｏｎｉｕｍ  ｈｅｘａｆｌｕｏｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ
ＨＭＰＢ：４−ヒドロキシメチル−３−メトキシフェノキシ酪酸
ＨＯＢｔ：１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
Ｈ２Ｏ：水
Ｌｅｕ：ロイシンまたはロイシン残基
ｌｎ２：ｌｏｇｅ２
ＭＳＮＴ：１−（メシチレン−２−スルホニル）−３−ニトロ−１，２，４−トリアゾール（１−（Ｍｅｓｉｔｙｌｅｎｅ−２−ｓｕｌｆｏｎｙｌ）−３−ｎｉｔｒｏ−１，２，４−ｔｒｉａｚｏｌｅ）
ＰＢＳ：リン酸緩衝生理食塩水
Ｐｂｆ：２，２，４，６，７−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホニル
ｔＢｕ：ｔｅｒｔ−ブチル基
ＴＢＴＵ：Ｏ−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム（Ｏ−（１Ｈ−Ｂｅｎｚｏｔｒｉａｚｏｌ−１−ｙｌ）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｕｒｏｎｉｕｍ）
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
Ｔｒｔ：トリチル基【０２５７】
<実施例１>
（糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１）の合成および糖鎖付加リンカー部分の切断評価）
生理活性物質の溶解性をさらに高めることができるリンカーを開発する目的で、水溶性の高い糖鎖をリンカーに付加した、糖鎖付加リンカーとペプチドとからなる新規化合物の合成を試みた。糖鎖としては、アシアロ糖鎖を用い、ペプチドとしてはケメリン９（Ｃｈｅｍｅｒｉｎ９）を用いた。アシアロ糖鎖付加リンカーとペプチドとからなる化合物（糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１（配列番号６））を、後述のように合成した。【０２５８】
生理活性物質の例として、鎖長の短い、ケメリン９（Ｃｈｅｍｅｒｉｎ ９）を選択した。ケメリン９（９残基、配列：ＹＦＰＧＱＦＡＦＳ）は、米国公開特許２００３／０９６２９９の配列表における配列番号３１（１８アミノ酸残基）のうちの、４〜１２番のアミノ酸残基に相当する。ケメリン９は、Ｇタンパク質共役型レセプターであるＣｈｅｍＲ２３アゴニスト活性を有することから、免疫疾患、炎症性疾患、糖尿病の治療及び／又は予防剤としての可能性を有する。しかしながら、生体内では、タンパク質分解酵素による分解を受けるので、非常に不安定であることが知られている（特開２０１０−２２９０９３号公報）。その製造方法、反応条件および温度等は公知であって、当業者には明らかであるが、前記文献に記載の方法にしたがって、ケメリン９を合成してもよい。【０２５９】
（糖鎖付加（Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物７）の合成）
糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１）を合成するために、まず、糖鎖付加（Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物７）（配列番号５）を、以下のように合成した。
【化７４】
2014080730.tif 000079
（式中、Ｒは上記の化学式を表す。）【０２６０】
固相合成用カラムにＡｍｉｎｏ−ＰＥＧＡレジン（メルク社製）（２００μｍｏｌ）を取り、ＤＭＦで洗浄した。ＨＭＰＢ（１２１．２ｍｇ、０．５０４ｍｍｏｌ）、ＴＢＴＵ（１６１．７ｍｇ、０．５０４ｍｍｏｌ）、およびＮ−エチルモルホリン（５７．３μＬ、０．４９５ｍｍｏｌ）入りのＤＭＦ（５．０ｍＬ）溶液を加え、室温で３時間振とうした。ＤＭＦおよびジクロロメタンで洗浄した後、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ（３８３．１ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）、ＭＳＮＴ（２９６．４ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）、およびＮ−メチルイミダゾール（５５．８μＬ、０．７００ｍｍｏｌ）入りのジクロロメタン（１０ｍＬ）溶液を加え、室温で３時間振とうした。ジクロロメタンおよびＤＭＦで洗浄後、ＤＭＦ（４ｍＬ）、ピリジン（１．２ｍＬ）、および無水酢酸（１８９μＬ、２．００ｍｍｏｌ）を順次加え、室温で振とうした。１時間後、樹脂をＤＭＦおよびジクロロメタンで洗浄した。【０２６１】
上記で得られた樹脂のうち、その一部（１００μｍｏｌ）におけるＦｍｏｃ基を、ＤＭＦ中の２０％のピペリジンで１５分処理することにより除去した。ＤＭＦで洗浄後、Ｐｒｅｌｕｄｅ（商標）ペプチド合成機を用いて、Ｆｍｏｃ法によるペプチド固相合成法にて、ｔＢｕ及びＴｒｔで保護されたケメリン９を樹脂上に合成した。縮合反応は、縮合剤としてＨＣＴＵを使用してＤＭＦ中で行った。【０２６２】
上記で得られた樹脂のうち、その一部（７０μｍｏｌ）におけるＦｍｏｃ基を、ＤＭＦ中の２０％のピペリジンで処理することにより除去し、ｔＢｕ及びＴｒｔで保護されたケメリン９が結合した樹脂（化合物１２）（配列番号２）を得た。ＤＭＦおよびジクロロメタンで洗浄後、フタル酸無水物（無水フタル酸）（１０４ｍｇ、０．７０２ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（２．１ｍＬ）、ピリジン（１２６μＬ）を順次加え、室温で３時間振とうした。ジクロロメタンおよびＤＭＦで洗浄後、ＨＯＢｔ（４７．３ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．７５ｍＬ）溶液およびＤＩＣ（５１．２μＬ、０．３３ｍｍｏｌ）を加え、室温で振とうした。１５分後、Ｎ−（２−アミノエチル）ピペラジン（４６．１μＬ、０．３５ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間振とうした。ＤＭＦで洗浄後、この縮合操作を１回繰り返した後、ＤＭＦで洗浄することで、ｔＢｕ及びＴｒｔで保護されたケメリン９とリンカー部分が結合した樹脂（化合物１３）（配列番号３）を得た。【０２６３】
得られた樹脂（化合物１３）のうち、その一部（２０μｍｏｌ）に、下記化学式：
【化７５】
2014080730.tif 000080
で表されるＦｍｏｃ−Ａｓｎ（アシアロ）−ＯＨ  （化合物１４）（７５ｍｇ、３８μｍｏｌ）、ＤＭＳＯ−ＤＭＦ（１／１、ｖ／ｖ、８３３μＬ）溶液、ＴＢＴＵ（１６．１ｍｇ、５０μｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（１３．１μＬ、７５．２μｍｏｌ）を順次添加し、室温で４．５時間振とうさせた。ＤＭＦおよびジクロロメタンで洗浄することで、ｔＢｕ及びＴｒｔで保護されたケメリン９を有する化合物が結合した樹脂（化合物１５）（配列番号４）を得た。樹脂（化合物１５）にＴＦＡ：水：トリイソプロピルシラン：エタンジチオール（体積部で、それぞれ、９０：２．５：５：２．５）を加え、室温で３時間振とうした。ろ液に冷却したジエチルエーテルを加え、化合物を沈殿として得た。前記化合物をＨＰＬＣ［カラム：ＳＨＩＳＥＩＤＯ  ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８  ＵＧ−１２０（５μｍ）、φ２０ｘ２５０ｍｍ、流速：７．０ｍＬ／分、溶離液Ａ：０．１％ＴＦＡ水  溶離液Ｂ：０．０９％ＴＦＡ／１０％水／９０％アセトニトリル、グラジエントＡ：Ｂ＝６５：３５→４０：６０（３０分）  直線濃度勾配溶出］を用いて精製し、糖鎖付加（Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物７）  （８．６ｍｇ）を得た。
ＥＳＩ−ＭＳ：（ｍ／ｚ）ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ１４９Ｈ２０１Ｎ１９Ｏ６４  ［Ｍ＋３Ｈ］３＋  １０９４．４、［Ｍ＋４Ｈ］４＋  ８２１．１、ｆｏｕｎｄ  １０９４．４、８２１．１。【０２６４】
<実施例２>
（糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１）の合成）【０２６５】
【化７６】
2014080730.tif 000081
（式中、Ｒは上記の化学式を表す。）【０２６６】
糖鎖付加（Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物７）（４．０  ｍｇ、１．２  μｍｏｌ）を２０％  ピペリジン／ＤＭＦ溶液（６０μＬ）で５分処理することで、Ｆｍｏｃ基を脱保護した。酢酸（５７．５μＬ）および０．１％ＴＦＡ水溶液（１３００μＬ）を加えた後、ＨＰＬＣ［カラム：ＳＨＩＳＥＩＤＯ  ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８  ＵＧ−１２０（５μｍ）、φ４．６ｘ２５０ｍｍ、流速：０．７ｍＬ／分、溶離液Ａ：０．１％ＴＦＡ水  溶離液Ｂ：０．０９％ＴＦＡ／１０％水／９０％アセトニトリル、グラジエントＡ：Ｂ＝８０：２０→５０：５０（３０分）直線濃度勾配溶出］を用いて精製し、糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１）（３．５ｍｇ、１．１μｍｏｌ、９２％）を得た。
ＥＳＩ−ＭＳ：（ｍ／ｚ）ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ１３４Ｈ１９１Ｎ１９Ｏ６２  ［Ｍ＋３Ｈ］３＋  １０２０．４、［Ｍ＋４Ｈ］４＋  ７６５．６、ｆｏｕｎｄ  １０２０．４、７６５．６。【０２６７】
<実施例３>
（糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１）の糖鎖付加リンカー部分の、水溶液中での切断評価）
（ａ．糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１）の自己切断による無修飾ケメリン９の遊離生成）
続いて、上記のように得られた糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１）における、糖鎖が付加したリンカー部分の、水溶液における自己触媒的な切断挙動を追跡した。以下に、その反応を示す。
【化７７】
2014080730.tif 000082
（式中、Ｒは上記の化学式を表す。）【０２６８】
切断挙動の追跡を次のとおりに行った。
凍結乾燥した糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１）をＰＢＳ溶液（３７℃、ｐＨ７．４、３５０μＬ）に溶解させた後、３７℃で静置させてインキュベーションした。その後、一定の時間間隔で、糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１）が溶解したＰＢＳ溶液（２８μＬ）をサンプリングし、サンプリングした溶液に０．５％ＴＦＡ水溶液（２８μＬ）を加えた後、この溶液を凍結させた。得られた溶液をＨＰＬＣ分析の直前に溶解させ、５０μＬをインジェクションして、ＨＰＬＣ［カラム：ＳＨＩＳＥＩＤＯ  ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８  ＵＧ−１２０（５μｍ）、φ４．６ｘ２５０ｍｍ、流速：０．７ｍＬ／分、溶離液Ａ：０．１％ＴＦＡ水  溶離液Ｂ：０．０９％ＴＦＡ／１０％水／９０％アセトニトリル、グラジエントＡ：Ｂ＝７７：２３→５０：５０（２０分）  直線濃度勾配溶出］分析を行った。化合物の検出はダイオードアレイ検出器を用い、検出波長は２２０ｎｍに設定した。ＨＰＬＣクロマトグラムおよびＥＳＩ−ＭＳの解析から、時間経過とともに糖鎖付加リンカー部分の切断が進行し、無修飾のケメリン９（化合物３）（配列番号１）が遊離することを確認した（図１の矢印３で示されるピーク）。試験開始６時間後には、糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１）はほとんど存在せず、無修飾のケメリン９（化合物３）が多く存在した。
６時間後、反応液のＨＰＬＣ［カラム：ＳＨＩＳＥＩＤＯ  ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８  ＵＧ−１２０（５μｍ）、φ４．６ｘ２５０ｍｍ、流速：０．７ｍＬ／分、溶離液Ａ：０．１％ＴＦＡ水  溶離液Ｂ：０．０９％ＴＦＡ／１０％水／９０％アセトニトリル、グラジエントＡ：Ｂ＝９５：５→９５：５（８分）  次いでＡ：Ｂ＝９５：５→５：９５（２０分）  直線濃度勾配溶出］分析を行った。その結果、保持時間９．６分で糖鎖付加リンカー部分（化合物２）のピークが確認された。
化合物２のＥＳＩ−ＭＳ：（ｍ／ｚ）ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ８０Ｈ１２７Ｎ９Ｏ５０［Ｍ＋２Ｈ］２＋  １００７．９、［Ｍ＋３Ｈ］３＋  ６７２．３、ｆｏｕｎｄ  １００７．９、６７２．２。【０２６９】
図１の矢印１で示されるピーク面積（糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１）に相当する）をインキュベーション時間に対してプロットすることにより、糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１）の時間に対する相対濃度（Ｃ／Ｃ０）を算出し（図２）、さらに、当該相対濃度の自然対数をインキュベーション時間に対してプロットして、直線状のプロットを得た（図３）（ここで、Ｃ０は化合物１の初濃度を表し、Ｃは任意の時間における化合物１の濃度を表す。）。図３より、糖鎖付加リンカーの切断速度は一次反応であることが示された。【０２７０】
したがって、図３より得られた直線プロットの傾きｋを下記式：
ｔ１／２＝ｌｎ２／ｋ（ｋは直線プロットの傾き）
に代入することにより、出発物質（糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１））の消失半減期ｔ１／２を算出した。消失半減期は、１．２時間であった。【０２７１】
（ｃ．糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１）の温度およびｐＨ依存性）
次に、様々な温度（４℃、２５℃、３７℃）およびｐＨ（ｐＨ４．０、ｐＨ７．４）条件下で、糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１）における糖鎖付加リンカー部分の自己触媒的切断を観察した。【０２７２】
【表５】
2014080730.tif 000083
同じ温度での半減期を比較すると、ｐＨが高いほど、糖鎖付加リンカー部分の切断が速いことを見出した（Ｅｎｔｒｙ（エントリー）  １と４との比較（３７℃）、Ｅｎｔｒｙ  ２と５との比較（２５℃）、Ｅｎｔｒｙ  ３と６との比較（４℃））。
さらに、同じｐＨでの半減期を比較すると、温度が高いほど、糖鎖付加リンカー部分の切断が速いことを見出した（Ｅｎｔｒｙ  １、２、３の比較（ｐＨ４．０）、Ｅｎｔｒｙ  ４、５、６の比較（ｐＨ７．４））。
これらの結果から、（ｉ）温度、（ｉｉ）ｐＨが高いほど、糖鎖付加リンカー部分の切断が促進されることを本発明者は発見した。【０２７３】
そこで、化合物の構造と、糖鎖付加リンカー部分の自己触媒的切断との相関関係をさらに調べるために、複数の化合物を以下のように合成した。【０２７４】
<実施例４>
（糖鎖付加（Ｃｙｓ（ＧｌｃＮＡｃ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物４）の合成）【０２７５】
【化７８】
2014080730.tif 000084
（式中、Ｒは上記の化学式を表す。）【０２７６】
ｔＢｕ及びＴｒｔで保護されたケメリン９とリンカー部分が結合した樹脂（化合物１３）（５０μｍｏｌ）に、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（１４６．８ｍｇ、０．２５１ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３３．８ｍｇ、０．２５０ｍｍｏｌ）、およびＤＩＣ（３６．６μＬ、０．２３８ｍｍｏｌ）入りのＤＭＦ（１．２５ｍＬ）溶液を加え、室温で１時間振とうして、縮合操作を行った。ＤＭＦで洗浄後、この縮合操作を１回繰り返した。ＤＭＦおよびジクロロメタンで洗浄後、ＴＦＡ：水：トリイソプロピルシラン：エタンジチオール（体積部で、それぞれ、９０：２．５：５：２．５）を適当量加え、室温で３時間振とうした。その後、樹脂のろ別を行った。ろ液に、冷却したジエチルエーテルを加え、化合物を沈殿として得た。得られた前記化合物をＨＰＬＣ［カラム：ＳＨＩＳＥＩＤＯ  ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８  ＵＧ−１２０（５μｍ）、φ２０ｘ２５０ｍｍ、流速：７．０ｍＬ／分、溶離液Ａ：０．１％ＴＦＡ水  溶離液Ｂ：０．０９％ＴＦＡ／１０％水／９０％アセトニトリル、グラジエントＡ：Ｂ＝５０：５０→４２．７：５７．３（２２分）  直線濃度勾配溶出］を用いて精製し、化合物１６（配列番号７）（６．６  ｍｇ）を得た。
ＥＳＩ−ＭＳ：（ｍ／ｚ）ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ８６Ｈ９８Ｎ１４Ｏ１８Ｓ  ［Ｍ＋２Ｈ］２＋  ８２４．４、ｆｏｕｎｄ  ８２４．４。【０２７７】
化合物１６（６．６ｍｇ、４．０μｍｏｌ）を２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液（１．０ｍＬ）に溶解することで、Ｆｍｏｃ基を脱保護した。酢酸（１．０ｍＬ）および０．１％ＴＦＡ水（２．０ｍＬ）を加えた後、ＨＰＬＣ［カラム：ＳＨＩＳＥＩＤＯ  ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８  ＵＧ−１２０（５μｍ）、φ４．６ｘ２５０ｍｍ、流速：０．７ｍＬ／分、溶離液Ａ：０．１％ＴＦＡ水  溶離液Ｂ：０．０９％ＴＦＡ／１０％水／９０％アセトニトリル、グラジエントＡ：Ｂ＝７０：３０→５０：５０（３０分）  直線濃度勾配溶出］を用いて精製し、化合物１７（配列番号８）（３．４  ｍｇ、２．４  μｍｏｌ、６０％）を得た。
ＥＳＩ−ＭＳ：（ｍ／ｚ）ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ７１Ｈ８８Ｎ１４Ｏ１６Ｓ  ［Ｍ＋２Ｈ］２＋  ７１３．３、ｆｏｕｎｄ  ７１３．３。【０２７８】
得られた化合物１７（２．２ｍｇ、１．５μｍｏｌ）、および下記化学式：
【化７９】
2014080730.tif 000085
で表される、ＧｌｃＮＡｃと２−ブロモアセトアミドとの脱水縮合物  （化合物１８）（２．７ｍｇ、７．９μｍｏｌ）を４．９ｍＭ  ＤＴＴを含む５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４、３１６μＬ）に溶解し、室温で５０分反応させた。反応溶液をＨＰＬＣ［カラム：ＳＨＩＳＥＩＤＯ  ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８  ＵＧ−１２０（５μｍ）、φ２０ｘ２５０ｍｍ、流速：７．０ｍＬ／分、溶離液Ａ：０．１％ＴＦＡ水  溶離液Ｂ：０．０９％ＴＦＡ／１０％水／９０％アセトニトリル、グラジエントＡ：Ｂ＝７５：２５→４５：５５（２０分）  直線濃度勾配溶出］を用いて精製し、糖鎖付加（Ｃｙｓ（ＧｌｃＮＡｃ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物４）（配列番号９）（１．８ｍｇ、１．１  μｍｏｌ、収率７３％）を得た。
ＥＳＩ−ＭＳ：（ｍ／ｚ）ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ８１Ｈ１０４Ｎ１６Ｏ２２Ｓ  ［Ｍ＋２Ｈ］２＋  ８４３．４、ｆｏｕｎｄ  ８４３．４。【０２７９】
<実施例５>
（糖鎖付加（Ｃｙｓ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物５）の合成）
実施例４における糖鎖付加（Ｃｙｓ（ＧｌｃＮＡｃ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物４）の合成で用いたＧｌｃＮＡｃと２−ブロモアセトアミドとの脱水縮合物（化合物１８）の代わりに、下記化学式：
【化８０】
2014080730.tif 000086
で表されるアシアロ糖鎖と２−ブロモアセトアミドとの脱水縮合物（化合物１９）を用いたこと以外は、糖鎖付加（Ｃｙｓ（ＧｌｃＮＡｃ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物４）の合成と同様に反応を行って、糖鎖付加（Ｃｙｓ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物５）（配列番号１０）を得た。
ＥＳＩ−ＭＳ：（ｍ／ｚ）ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ１３５Ｈ１９３Ｎ１９Ｏ６２Ｓ  ［Ｍ＋２Ｈ］２＋  １５５３．１、［Ｍ＋３Ｈ］３＋  １０３５．７、ｆｏｕｎｄ  １５５３．２、１０３５．８。【０２８０】
合成した糖鎖付加（Ｃｙｓ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物５）の化学式を以下に示す。
【化８１】
2014080730.tif 000087
式中、Ｒは以下の化学式を表す。
【化８２】
2014080730.tif 000088
【０２８１】
<実施例６>
（糖鎖付加（Ｃｙｓ（ジシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物６）の合成）
実施例４における糖鎖付加（Ｃｙｓ（ＧｌｃＮＡｃ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物４）の合成で用いたＧｌｃＮＡｃと２−ブロモアセトアミドとの脱水縮合物（化合物１８）の代わりに、下記化学式：
【化８３】
2014080730.tif 000089
で表されるジシアロ糖鎖と２−ブロモアセトアミドとの脱水縮合物（化合物２０）を用いたこと以外は、糖鎖付加（Ｃｙｓ（ＧｌｃＮＡｃ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物４）の合成と同様に反応を行って、糖鎖付加（Ｃｙｓ（ジシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物６）（配列番号１１）を得た。
ＥＳＩ−ＭＳ：（ｍ／ｚ）ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ１５７Ｈ２２７Ｎ２１Ｏ７８Ｓ  ［Ｍ＋３Ｈ］３＋  １２２９．８、［Ｍ＋４Ｈ］４＋  ９２２．６、ｆｏｕｎｄ  １２２９．８、９２２．６。【０２８２】
合成した糖鎖付加（Ｃｙｓ（ジシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物６）の化学式を以下に示す。
【化８４】
2014080730.tif 000090
式中、Ｒは以下の化学式を表す。
【化８５】
2014080730.tif 000091
【０２８３】
<実施例７>
（糖鎖付加（Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（ジシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物８）の合成）
実施例４の糖鎖付加（Ｃｙｓ（ＧｌｃＮＡｃ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物４）の合成過程で得られた化合物１６（０．４ｍｇ、０．２４μｍｏｌ）、および実施例６の糖鎖付加（Ｃｙｓ（ジシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物６）の合成においても用いたジシアロ糖鎖と２−ブロモアセトアミドとの脱水縮合物（化合物２０）（０．９ｍｇ、０．３８μｍｏｌ）を７Ｍ  グアニジン塩酸塩を含む０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４、５６μＬ）に溶解し、室温で２．５時間反応させた。反応溶液をＨＰＬＣ［カラム：ＳＨＩＳＥＩＤＯ  ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８  ＵＧ−１２０（５μｍ）、φ４．６ｘ２５０ｍｍ、流速：０．７ｍＬ／分、溶離液Ａ：０．１％ＴＦＡ水  溶離液Ｂ：０．０９％ＴＦＡ／１０％水／９０％アセトニトリル、グラジエントＡ：Ｂ＝６０：４０→４０：６０（２０分）  直線濃度勾配溶出］を用いて精製し、糖鎖付加（Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（ジシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物８）（配列番号１２）（０．９  ｍｇ、０．２３  μｍｏｌ、収率９６％）を得た。
ＥＳＩ−ＭＳ：（ｍ／ｚ）ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ１７２Ｈ２３７Ｎ２１Ｏ８０Ｓ  ［Ｍ＋３Ｈ］３＋  １３０３．８、［Ｍ＋４Ｈ］４＋  ９７８．１、ｆｏｕｎｄ  １３０８．８、９７８．１。【０２８４】
合成した糖鎖付加（Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（ジシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物８）の化学式を以下に示す。
【化８６】
2014080730.tif 000092
式中、Ｒは以下の化学式を表す。
【化８７】
2014080730.tif 000093
【０２８５】
<実施例８>
（糖鎖付加（Ａｃ−Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物９）の合成）【０２８６】
【化８８】
2014080730.tif 000094
（式中、Ｒは上記の化学式を表す。）【０２８７】
ｔＢｕ及びＴｒｔで保護されたケメリン９とリンカー部分が結合した樹脂（化合物１５）  （１５μｍｏｌ）のＦｍｏｃ基を、ＤＭＦ中の２０％のピペリジンで処理することにより除去した。ＤＭＦで洗浄後、酢酸（４．３μＬ）、ＨＯＢｔ（１０．１ｍｇ、７５μｍｏｌ）、およびＤＩＣ（１１．０μＬ、７１μｍｏｌ）入りのＤＭＦ溶液（３７５μＬ）を加え、室温で１時間振とうして、縮合操作を行った。ＤＭＦで洗浄後、この縮合操作を１回繰り返した。ＤＭＦおよびジクロロメタンで洗浄後、ＴＦＡ：水：トリイソプロピルシラン：エタンジチオール（体積部で、それぞれ９０：２．５：５：２．５）を適当量加え、室温で３時間振とうした。その後、樹脂のろ別を行った。ろ液に冷却したジエチルエーテルを加え、化合物を沈殿として得た。得られた化合物をＨＰＬＣ［カラム：ＳＨＩＳＥＩＤＯ  ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８  ＵＧ−１２０（５μｍ）、φ２０ｘ２５０ｍｍ、流速：７．０ｍＬ／分、溶離液Ａ：０．１％ＴＦＡ水  溶離液Ｂ：０．０９％ＴＦＡ／１０％水／９０％アセトニトリル、グラジエントＡ：Ｂ＝７５：２５→６７：３３（８分）  直線濃度勾配溶出］を用いて精製し、糖鎖付加（Ａｃ−Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物９）（配列番号１３）（５．０ｍｇ）を得た。
ＥＳＩ−ＭＳ：（ｍ／ｚ）ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ１３６Ｈ１９３Ｎ１９Ｏ６３  ［Ｍ＋２Ｈ］２＋  １５５１．１、［Ｍ＋３Ｈ］３＋  １０３４．４、ｆｏｕｎｄ  １５５１．１、１０３４．４。【０２８８】
<実施例９>
（糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）−テトラクロロフタロイル型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１０）の合成）
実施例１に記載のように糖鎖付加（Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物７）を合成した後に、実施例２に記載のように糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１）を合成する過程において、フタル酸無水物の代わりにテトラクロロフタル酸無水物を用いることにより、糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）−テトラクロロフタロイル型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１０）（配列番号１４）を得た。
ＥＳＩ−ＭＳ：（ｍ／ｚ）ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ１３４Ｈ１８７Ｃｌ４Ｎ１９Ｏ６２  ［Ｍ＋２Ｈ］２＋  １５９８．０、［Ｍ＋３Ｈ］３＋  １０６５．７、ｆｏｕｎｄ  １５９８．０、１０６５．７。
合成した糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）−テトラクロロフタロイル型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１０）の化学式を以下に示す。
【化８９】
2014080730.tif 000095
式中、Ｒは以下の化学式を表す。
【化９０】
2014080730.tif 000096
【０２８９】
<実施例１０>
（合成した様々な糖鎖付加リンカー−ケメリン９コンジュゲートの切断評価）
上記実施例において合成した糖鎖付加リンカー−ケメリン９コンジュゲートの模式的構造を以下に示す。
【化９１】
2014080730.tif 000097
（ここで、
Ａｓｎ（ａｓｉａｌｏ）型（１）は、糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１）を表し、
Ｃｙｓ（ＧｌｃＮＡｃ）型（４）は、糖鎖付加（Ｃｙｓ（ＧｌｃＮＡｃ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物４）を表し、
Ｃｙｓ（ａｓｉａｌｏ）型（５）は、糖鎖付加（Ｃｙｓ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物５）を表し、
Ｃｙｓ（ｄｉｓｉａｌｏ）型（６）は、糖鎖付加（Ｃｙｓ（ジシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物６）を表し、
Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（ａｓｉａｌｏ）型（７）は、糖鎖付加（Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物７）を表し、
Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（ｄｉｓｉａｌｏ）型（８）は、糖鎖付加（Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（ジシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物８）を表し、
Ａｃ−Ａｓｎ（ａｓｉａｌｏ）型（９）は、糖鎖付加（Ａｃ−Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物９）を表し、
Ａｓｎ（ａｓｉａｌｏ）−テトラクロロフタロイル型（１０）は、糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）−テトラクロロフタロイル型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１０）を表し、
【化９２】
2014080730.tif 000098
は、アスパラギンを示し、かつ、当該アスパラギン自身の側鎖のアミノ基部分でアシアロ糖鎖と結合しており、かつ当該アスパラギン自身の主鎖のカルボキシ基部分でリンカー部分に結合しており、
【化９３】
2014080730.tif 000099
は、システインを示し、かつ、当該システイン自身の側鎖のチオール基部分に、基：−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−を介して、アシアロ糖鎖、ジシアロ糖鎖またはＧｌｃＮＡｃと結合しており、かつ当該システイン自身の主鎖のカルボキシ基部分でリンカー部分に結合している。）【０２９０】
合成した糖鎖付加リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１）、（化合物４）〜（化合物１０）における、糖鎖付加リンカー部分の自己触媒的切断を観察した。実施例３に記載の方法と同様の方法を用いて、各実験を行った。その結果、合成した糖鎖付加リンカー−ケメリン９コンジュゲートの全てが、溶液中で無修飾のケメリン９を遊離生成することを確認した。また、各糖鎖付加リンカー−ケメリン９コンジュゲートの消失半減期を決定した。半減期を下表に示す。【０２９１】
【表６】
2014080730.tif 000100
【０２９２】
Ａｓｎ（アシアロ）型（１）およびＣｙｓ（アシアロ）型（５）の半減期は、ｐＨ４．０およびｐＨ７．４の両方において大変類似した時間となった。この結果から、本発明者は、糖鎖に付加するアミノ酸残基の変化が、糖鎖付加リンカーの切断速度に大きな影響を与えないことを発見した。【０２９３】
Ｃｙｓ（ＧｌｃＮＡｃ）型（４）、Ｃｙｓ（アシアロ）型（５）、およびＣｙｓ（ジシアロ）型（６）の半減期は、互いに類似した時間となった。この結果から、本発明者は、糖鎖付加リンカーにおける糖鎖の大きさが、糖鎖付加リンカーの切断効率に大きな影響を及ぼさないことを発見した。したがって、より大きなサイズを有する糖鎖付加リンカーを利用しても、生体内で無修飾の生理活性物質を遊離生成させることを、当業者であれば理解できる。【０２９４】
糖鎖に付加されたアスパラギンのＮ末端がＦｍｏｃ基で保護されているＦｍｏｃ−Ａｓｎ（アシアロ）型（７）は、当該アスパラギンのＮ末端が保護されていないＡｓｎ（アシアロ）型（１）と比較して、ｐＨ４．０およびｐＨ７．４の両方において、切断時間が遅くなった。同様に、糖鎖に付加されたシステインのＮ末端がＦｍｏｃ基で保護されているＦｍｏｃ−Ｃｙｓ（ジシアロ）型（８）は、当該システインのＮ末端が保護されていないＣｙｓ（ジシアロ）型（６）と比較して、ｐＨ４．０およびｐＨ７．４の両方において切断時間が遅くなった。糖鎖に付加されたアスパラギンのＮ末端がアセチル基で保護されているＡｃ−Ａｓｎ（アシアロ）型（９）の半減期は、当該アスパラギンのＮ末端が保護されていないＡｓｎ（アシアロ）型（１）と比較して、ｐＨ７．４において半減期に大きな違いはなかった。一方、ｐＨ４．０での半減期は３倍近く延長した。Ａｃ−Ａｓｎ（アシアロ）型（９）の、ｐＨ４．０における半減期は、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（アシアロ）型（７）の半減期と非常に類似した。これらの結果から、本発明者は、糖鎖に付加するアミノ酸のＮ末端のアミノ基を保護することにより、酸性条件下（例えばｐＨ４．０）での糖鎖付加リンカー−生理活性物質コンジュゲートの安定性を向上できることを発見した。【０２９５】
Ａｓｎ（アシアロ）−テトラクロロフタロイル型（１０）の半減期は、ＰＢＳ（３７℃、ｐＨ７．４）中で１５．３分（約０．２５時間）であった。Ａｓｎ（アシアロ）−テトラクロロフタロイル型（１０）の半減期を、フタロイル基が塩素原子で置換されていないＡｓｎ（アシアロ）型（１）の半減期と比較すると、約５分の１しかなかった。つまり、糖鎖付加リンカー部分において、フタロイル基をテトラクロロフタロイル基に置換することで、糖鎖付加リンカー部分の自己触媒的切断が約５倍速くなることを、本発明者は発見した。理論に拘束されることを意図しないが、これは、当該フタロイル基において、芳香環上の水素原子を、電子求引性の塩素原子に置換することで、ペプチドに結合したカルボニル炭素の電子密度が低下して、窒素による求核攻撃を受けやすくなったためと考えられる。このような化合物の構造上の特性を生かすことにより、生体内に投与後に、速やかに活性を発揮させたい生理活性物質にも適用可能であることを当業者であれば理解する。【０２９６】
また、Ａｓｎ（アシアロ）−テトラクロロフタロイル型（１０）の水溶液中の半減期は、ＰＢＳ（３７℃、ｐＨ７．４）において１５．３分（約０．２５時間）であった一方で、酢酸緩衝液（２５℃、ｐＨ４．０）において４．５時間であった。これらの半減期の違いから、本発明の糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物を、ｐＨ４．０、室温（例えば２５℃）で調製後、生体内（例えばｐＨ７．４、例えば３７℃）に投与することで、無修飾の生理活性物質を速やかに、かつ制御可能に遊離生成させることが可能であることが理解される。【０２９７】
<実施例１１>
（糖鎖付加リンカー−ケメリン９コンジュゲートの糖鎖付加リンカー部分の、エマルション中での切断評価）
抗原液をエマルションと混合させてワクチンとして生体に投与した場合、抗原が、ワクチン注射部位に残存する効果と、徐放効果とを期待することができる。そこで、本発明における糖鎖付加リンカー部分が水溶液のみならずエマルションにおいても、糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩から自己切断するかを検討することにより、本発明の糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩が、ペプチドワクチン等の様々なワクチンの開発に応用できるかを検討した。水溶液から調製するエマルション中での、本発明の糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩の安定性を、以下のように、酢酸緩衝液の場合と比較した。【０２９８】
凍結乾燥した糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１）を、０．１Ｍ  酢酸緩衝液（ｐＨ４．０、２５℃、１７５μＬ）に溶解させた後に、ミネラルオイル系アジュバントであるＭＯＮＴＡＮＩＤＥ  ＩＳＡ  ２０６  ＶＧ（ＳＥＰＰＩＣ社製）を当該酢酸緩衝液に１７５μＬ添加した。次いで、混合物をボルテックスにより激しく撹拌することでエマルションを形成させた。３７℃で静置させてインキュベーションした後、一定の時間間隔で、糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１）のエマルション溶液を２８μＬインジェクションして、ＨＰＬＣ分析を行い、時間に対する、糖鎖付加リンカー部分の切断反応を追跡した。【０２９９】
対照群として、凍結乾燥した糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１）を０．１Ｍ  酢酸緩衝液（２５℃、ｐＨ４．０、３５０μＬ）に溶解させた後、３７℃で静置させてインキュベーションした。その後、一定の時間間隔で、糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１）の酢酸緩衝液を２８μＬインジェクションして、ＨＰＬＣ分析を行った。【０３００】
ＨＰＬＣクロマトグラムおよびＥＳＩ−ＭＳ分析から、エマルション中でも、時間経過とともに糖鎖付加リンカー部分の切断が進行し、無修飾のケメリン９が遊離することを確認した。【０３０１】
エマルション溶液と酢酸緩衝液のそれぞれについて、ＨＰＬＣクロマトグラムにおける、糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１）に相当するピーク面積をインキュベーション時間に対してプロットすることにより、糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ケメリン９コンジュゲート（化合物１）の、インキュベーション時間に対する相対濃度を算出して比較した（図４）。すると、エマルション中でも、緩衝液中と同様の速度で糖鎖付加リンカー部分の切断が進行することを確認した。【０３０２】
したがって、当業者であれば、本発明における糖鎖付加リンカー部分を有する生理活性物質誘導体を用いることにより、水溶液から調製するエマルション中においても、無修飾の生理活性物質を、水溶液中と同様の速度で放出できることを理解する。すなわち、本発明における糖鎖付加リンカー部分は、生理活性物質のワクチンとしての利用に応用できることが明らかになった。【０３０３】
<実施例１２>
（糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ＨＥＲ２８−１６コンジュゲート（化合物１１）の合成、糖鎖付加リンカー部分の切断評価、および溶解度評価）
上述のように、本発明における糖鎖付加リンカー部分を有する生理活性物質誘導体は、エマルションの形態でも使用できることから、様々なワクチンの開発に利用できる。そこで、本発明者は、例示として、腫瘍抗原ペプチドとしても使用可能なＨＥＲ２８−１６と糖鎖付加リンカーとのコンジュゲートを作成した。ここで、ＨＥＲ２８−１６（配列：ＲＷＧＬＬＬＡＬＬ）は、ＨＥＲ（ヒト上皮増殖因子受容体：Ｈｕｍａｎ  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ）ファミリーの１つであるＨＥＲ２／ｎｅｕタンパク質のアミノ酸配列のうち、８〜１６アミノ酸残基に相当するペプチドである。ＨＥＲ２８−１６は、コードＨＥ１とも呼ばれ、ＨＬＡ（ヒト白血球抗原分子：Ｈｕｍａｎ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ａｎｔｉｇｅｎ）の一つであるＨＬＡ−Ａ２４に結合能を有し、ＨＬＡを介した抗原提示により細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）を誘導することが可能であることから、腫瘍ワクチン候補ペプチドとして同定されている（国際公開第２００５／００７６９４号パンフレット等を参照）。【０３０４】
（糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ＨＥＲ２８−１６コンジュゲート（化合物１１）の合成）
本発明者は、以下の模式的構造を有する、アシアロ糖鎖付加リンカーとペプチドとからなる化合物（糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ＨＥＲ２８−１６コンジュゲート（化合物１１））を合成した。
【化９４】
2014080730.tif 000101
（式中、
【化９５】
2014080730.tif 000102
は、上記において規定したとおりである。）【０３０５】
固相合成用カラムにＡｍｉｎｏ−ＰＥＧＡレジン（２００μｍｏｌ）を取り、ＤＭＦで洗浄した。ＨＭＰＢ（１２０．２ｍｇ、０．５００ｍｍｏｌ）、ＴＢＴＵ（１６０．６ｍｇ、０．５００ｍｍｏｌ）、およびＮ−エチルモルホリン（５７．３μＬ、０．４９５ｍｍｏｌ）入りのＤＭＦ（５．０ｍＬ）溶液を加え、室温で３時間振とうした。ＤＭＦおよびジクロロメタンで洗浄した後、得られた樹脂のうち、その一部（１００μｍｏｌ）に、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（１７６．７ｍｇ、０．５００ｍｍｏｌ）、ＭＳＮＴ（１４８．２ｍｇ、０．５００ｍｍｏｌ）、およびＮ−メチルイミダゾール（２７．９μＬ、０．３５ｍｍｏｌ）入りのジクロロメタン（５ｍＬ）溶液を加え、室温で３時間振とうした。ジクロロメタンおよびＤＭＦで洗浄後、ＤＭＦ（４ｍＬ）、ピリジン（１．２ｍＬ）、および無水酢酸（１８９μＬ、２．００ｍｍｏｌ）を順次加え、室温で振とうした。１時間後、樹脂をＤＭＦおよびジクロロメタンで洗浄した。【０３０６】
当該Ｆｍｏｃ基を、ＤＭＦ中の２０％のピペリジンで１５分処理することにより除去した。ＤＭＦで洗浄後、Ｐｒｅｌｕｄｅ（商標）ペプチド合成機を用いて、Ｆｍｏｃ法によるペプチド固相合成法にて下記式（２１）で表わされる、樹脂に結合した状態にある保護されたＨＥＲ２８−１６ペプチド（配列番号１６）を合成した。縮合反応は、縮合剤としてＨＣＴＵを使用してＤＭＦ中で行った。
【化９６】
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【０３０７】
得られた樹脂（化合物２１）のうち、その一部（５０μｍｏｌ）におけるＦｍｏｃ基を、ＤＭＦ中の２０％のピペリジンで２０分処理することにより除去し、保護されたペプチドが結合した樹脂を得た。ＤＭＦおよびジクロロメタンで洗浄後、フタル酸無水物（無水フタル酸）（７５．７ｍｇ、０．５１１ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（１．５ｍＬ）、ピリジン（９０μＬ）を順次加え、室温で３時間振とうした。ジクロロメタンおよびＤＭＦで洗浄後、ＨＯＢｔ（３３．８ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．２５ｍＬ）溶液およびＤＩＣ（３６．６μＬ、０．２３８ｍｍｏｌ）を加え、室温で振とうした。１５分後、Ｎ−（２−アミノエチル）ピペラジン（３３０μＬ、２．５１ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間振とうした。ＤＭＦで洗浄後、下記化学式：
【化９７】
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で表されるＦｍｏｃ−Ａｓｎ（アシアロ）−ＯＨ  （化合物１４）（１８６ｍｇ、９４．１μｍｏｌ）、ＤＭＳＯ−ＤＭＦ（１／１、ｖ／ｖ、２．１ｍＬ）溶液、ＴＢＴＵ（４０．５ｍｇ、０．１２６ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（３３μＬ、０．１９ｍｍｏｌ）を順次添加し、室温で１２時間振とうさせた。ＤＭＦ、ジクロロメタン、およびＤＭＦで順次洗浄後、ＤＭＦ中の２０％のピペリジンで１５分処理することにより、Ｆｍｏｃ基を除去した。ＤＭＦおよびジクロロメタンで洗浄後、樹脂にＴＦＡ：水：トリイソプロピルシラン：エタンジチオール（体積部で、それぞれ、９０：２．５：５：２．５）を加え、室温で３時間振とうした。ろ液に冷却したジエチルエーテルを加え、化合物を沈殿として得た。前記化合物をＨＰＬＣ［カラム：ＳＨＩＳＥＩＤＯ  ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８  ＵＧ−１２０（５μｍ）、φ２０ｘ２５０ｍｍ、流速：７．０ｍＬ／分、溶離液Ａ：０．１％ＴＦＡ水  溶離液Ｂ：０．０９％ＴＦＡ／１０％水／９０％アセトニトリル、グラジエントＡ：Ｂ＝６０：４０→５５．５：４４．５（１１分）  直線濃度勾配溶出］を用いて精製し、糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ＨＥＲ２８−１６コンジュゲート（化合物１１）（配列番号１７）（１１．１ｍｇ）を得た。
ＥＳＩ−ＭＳ：（ｍ／ｚ）ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ１３２Ｈ２１２Ｎ２２Ｏ５９  ［Ｍ＋２Ｈ］２＋  １５２５．７、［Ｍ＋３Ｈ］３＋  １０１７．５、［Ｍ＋４Ｈ］４＋  ７６３．４、ｆｏｕｎｄ  １５２５．７、１０１７．５、７６３．４。【０３０８】
合成した糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ＨＥＲ２８−１６コンジュゲート（化合物１１）の化学式を以下に示す。
【化９８】
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式中、Ｒは以下の化学式を表す。
【化９９】
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【０３０９】
（糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ＨＥＲ２８−１６コンジュゲート（化合物１１）の糖鎖付加リンカー部分の、水溶液中での切断評価）
続いて、得られた糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ＨＥＲ２８−１６コンジュゲート（化合物１１）における、糖鎖が付加したリンカー部分の、水溶液における自己触媒的な切断挙動を追跡した。【０３１０】
切断挙動の追跡を、実施例３に記載の方法と同様に行った。すなわち、凍結乾燥した糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ＨＥＲ２８−１６コンジュゲート（化合物１１）をＰＢＳ（ｐＨ７．４）または０．１Ｍ  酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）に溶解させた後、２５℃または３７℃で静置してインキュベーションした。その後、一定の時間間隔で、糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ＨＥＲ２８−１６コンジュゲート（化合物１１）が溶解したＰＢＳ溶液または０．１Ｍ  酢酸緩衝液を、それぞれ、一定量インジェクションして、ＨＰＬＣ分析を行った。ＨＰＬＣクロマトグラムおよびＥＳＩ−ＭＳの解析から、時間経過とともに、糖鎖付加リンカー部分の切断が水溶液中で進行し、無修飾のＨＥＲ２８−１６(配列番号１５)が生成することを確認した。様々な条件下での、糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ＨＥＲ２８−１６コンジュゲート（化合物１１）の消失半減期を下表に示す。【０３１１】
【表７】
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同じ温度での半減期を比較すると、ｐＨが高いほうが、糖鎖付加リンカー部分の切断が速いことを見出した（Ｅｎｔｒｙ  １と３との比較（３７℃）、Ｅｎｔｒｙ  ２と４との比較（２５℃））。さらに、同じｐＨでの半減期を比較すると、温度が高いほど、糖鎖付加リンカー部分の切断が速いことを見出した（Ｅｎｔｒｙ  １と２との比較（ｐＨ４．０）、Ｅｎｔｒｙ  ３と４との比較（ｐＨ７．４））。【０３１２】
これらの結果から、糖鎖付加リンカー−ケメリン９コンジュゲートの場合に観察された結果と同様に、（ｉ）温度、（ｉｉ）ｐＨが高いほど、糖鎖付加リンカー部分の切断が促進されることを本発明者は発見した。
したがって、当業者であれば、表５〜７の結果をも併せて鑑みることにより、本発明における糖鎖付加リンカー部分を有する生理活性物質は、温度および／またはｐＨに依存して、糖鎖付加リンカー部分が切断されることによって、無修飾の生理活性物質を生成させることが可能であることを理解する。【０３１３】
（糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ＨＥＲ２８−１６コンジュゲート（化合物１１）の溶解度評価）
本発明における糖鎖付加リンカー部分を有する生理活性物質誘導体を用いた場合の、水溶性向上の効果を評価した。一例として、生理活性物質としてＨＥＲ２８−１６を用いた。【０３１４】
糖鎖付加リンカー−ＨＥＲ２８−１６コンジュゲート（化合物１１）とＨＥＲ２８−１６ペプチドとを、それぞれ、３．５ｍｇと３．５ｍｇ程度ずつ、異なるマイクロチューブ中に取った。それぞれのマイクロチューブに、０．１％ＴＦＡ水溶液を３０μＬずつ添加した。これらのマイクロチューブを２５℃で１５分間振とうした後に、２５℃、１６１００ｘｇで１０分間遠心した。次いで、これらのマイクロチューブ中、上清液の２８０ｎｍの吸光度をそれぞれ測定して、得られた値から糖鎖付加リンカー−ＨＥＲ２８−１６コンジュゲート（化合物１１）とＨＥＲ２８−１６ペプチドの濃度をそれぞれ算出し、溶解度を決定した。
ここで、糖鎖付加リンカー−ＨＥＲ２８−１６コンジュゲート（化合物１１）の２８０ｎｍにおけるモル吸光係数は、以下の方法で求めた。すなわち、化合物１１の溶液を５本のチューブに等量ずつ分注し、凍結乾燥後、そのうちのチューブ３本を用いてアミノ酸組成分析を行うことでサンプル含量を求めた。また、前記５本のうちの１本のチューブに１ｍＬの０．１％ＴＦＡ水溶液を添加し、このときの糖鎖付加リンカー−ＨＥＲ２８−１６コンジュゲート（化合物１１）の２８０ｎｍの吸光度を測定した。この２８０ｎｍの吸光度を、アミノ酸組成分析で求めた濃度で割ることにより求めた。その結果、糖鎖付加リンカー−ＨＥＲ２８−１６コンジュゲート（化合物１１）の２８０ｎｍにおけるモル吸光係数εＭは５９２２となった。
ＨＥＲ２８−１６ペプチド（配列番号１５）の２８０ｎｍにおけるモル吸光係数εＭは、以下の式を用いて算出した（Ｃ．Ｎ．Ｐａｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔ．Ｓｃｉ．，１９９５，  ４，２４１１−２４２３頁）。
εＭ ＝ Ｔｒｐ×５５００＋Ｔｙｒ×１４９０＋Ｃｙｓｔｉｎｅ×１２５［Ａ２８０／ｍｏｌ／ｃｍ］
ここで、Ｔｒｐはトリプトファン残基の数、Ｔｙｒはチロシン残基の数、Ｃｙｓｔｉｎｅはジスルフィド結合の数を表す。ＨＥＲ２８−１６ペプチド（アミノ酸配列：ＲＷＧＬＬＬＡＬＬ）はトリプトファン残基を１残基含むことから、２８０ｎｍにおけるモル吸光係数εＭは５５００となった。【０３１５】
その結果、糖鎖付加リンカーが結合していないＨＥＲ２８−１６ペプチドの、０．１％ＴＦＡ水溶液への溶解度は、０．２１ｍｇ／ｍＬ（２．０×１０２μＭ））であった。この時、マイクロチューブ中、ＨＥＲ２８−１６ペプチドの沈殿を目視で確認することができた。一方、糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ＨＥＲ２８−１６コンジュゲート（化合物１１）の、０．１％ＴＦＡ水溶液への溶解度は、１００ｍｇ／ｍＬ以上であることを確認した。驚くべきことに、１１６ｍｇ／ｍＬの濃度（３．８×１０４μＭ）でさえも、糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカー−ＨＥＲ２８−１６コンジュゲート（化合物１１）の沈殿は確認できなかった。これらの結果より、ＨＥＲ２８−１６ペプチドの水溶性は、本発明の糖鎖付加（Ａｓｎ（アシアロ）型）リンカーを結合させることで、モル濃度で比較して、１９０倍以上向上することが驚くべきことに判明した。【０３１６】
【表８】
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【０３１７】
したがって、本発明の糖鎖付加リンカー部分と生理活性物質部分とを含む化合物またはその塩を用いることにより、無修飾の生理活性物質と比較して、水溶液またはエマルションへの溶解度を有意に改善できることを本発明者は見出した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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