(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ステビア、レバウジオシドＡ、ステビオールグリコシド、アセスルファム−Ｋ、アスパルテーム、チョコレート、コウジンからなる群から選択される食品産物と、Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓから得られた菌糸体組織の液体培養物から分離された上清との組合せからなる組成物であって、前記組合せが、減少した苦味、減少した好ましくない後味、及び／又は減少した渋味を有する、前記組成物。
【請求項２】
前記上清が、乾燥された上清である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓから得られた菌糸体組織の液体培養物の上清が、濾過又は遠心によって得られる、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓの菌糸体組織を液体培地中で培養し；
上清流体を前記培養した菌糸体組織の菌糸体細胞から分離し；
前記分離された上清流体を収集し；そして
前記収集した上清流体を、食品産物の味を向上するために十分な量でステビア、レバウジオシドＡ、ステビオールグリコシド、アセスルファム−Ｋ、アスパルテーム、チョコレート、コウジンからなる群から選択される食品産物に加えること；
を含んでなり、ここにおいて、前記味の向上が、食品産物中の、苦味を減少すること、好ましくない後味を減少すること、及び／又は渋味を減少することを含んでなる、食品産物の味を向上するための方法。
【請求項５】
前記収集された上清流体が低温殺菌、滅菌及び／又は乾燥される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓの液体培養物が濾過又は遠心される、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記培養工程が、１日〜６０日間行われる、請求項４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
[0001]本発明は、本発明の方法により、グルメ指向かつ治療的に高次の担子菌類及び子嚢菌類の菌糸体の液体組織培養物から製造される産物及びその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
[0002]米国特許第２６９３６６５号（ＵＳ２６９３６６５）は、かんきつ類のジュース、ナシジュース、アスパラガスジュース、“有機物質”、炭水化物、窒素供給源、及びこれらの物質のいずれもの組合せ中で、所望により尿素及び／又は各種のアンモニウム塩で補充してＡｇａｒｉｃｕｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓを培養して、食材として使用するための菌糸体を産生することを考察している。
【０００３】
[0003]米国特許第２７６１２４６号（ＵＳ２７６１２４６）は、ヒトの食品のための液内Ｍｏｒｃｈｅｌｌａ  ｅｓｃｕｌｅｎｔａ及びＨｅｌｖｅｌｌａｃｅａｅ  ｓｐｐ．菌糸体の産生のための方法を開示している。この文献は、アンモニウム塩の補充物質を伴う培地としての各種の糖蜜溶液の使用を考察している。この特許は、添加された炭酸カルシウム又は硫酸カルシウムが、菌糸球核形成部位として作用して、バイオマスの収率を３０倍に増加することを開示している。
【０００４】
[0004]米国特許第２９２８２１０号は、有機及び無機塩で補充された亜硫酸パルプ廃液培地からキノコ菌糸体を産生する方法を開示している。
[0005]米国特許第３０８６３２０号は、Ｍｏｒｃｈｅｌｌａ  ｅｓｃｕｌｅｎｔａ、Ｈｅｌｖｅｌｌａ  ｇｉｇａｓ、Ｃｏｐｒｉｎｕｓ  ｃｏｍａｔｕｓ、及びＡｇａｒｉｃｕｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓの液内菌糸体の風味を、“エネルギーの供給源としての炭水化物、窒素の供給源及び適したミネラルを水中に含有しなければならず”、並びにミルクを含んでなる処方を含む培地中で、株を増殖することによって改善するための方法を開示し、これは、適当に使用された場合、菌糸体の収率及び風味を改善することが主張されている。
【０００５】
[0006]米国特許第４０７１９７３号は、担子菌類のための培養条件を考察している。真菌は播種され、そして、５０−７０ｇ／Ｌのスクロースと混合されて“粉砕サトウキビ、サトウキビバガス、マツの木の組織及びコムギフスマ”の０．２−１５ｇ／Ｌの微粉で補充された、窒素、リン酸塩（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）及びカリウムのための無機栄養物塩中で増殖される。酸素は、培地に対して３０−９０％（容量／容量）に制御され、容器は０．１２−０．５ＭＰａ（１７．４−７２．５ｐｓｉ）に、０．１−１．０Ｌ／分で供給される酸素で加圧される。使用される塩は、硝酸アンモニウム、リン酸ナトリウム、硫酸マグネシウム七水和物、硫酸鉄（ＩＩ）七水和物及びリン酸水素二カリウムを含む。独創的空気圧サイクルが考察され、そして圧力制御器で制御されている。別の工業化スキームは、背圧制御器を使用し、空気を供給する空気受けタンク上の圧力制御器を伴うものである。
【０００６】
[0007]世界中の団体は、新規な苦味遮断物質を熱心に探求している。少数の苦味遮断物質に対する特許のみが出願され、そしてその多くは、合成化合物であるか又は基本の分子のモチーフの変更に依存しており、例えば、欧州特許出願公開第２５７００３５号（ＥＰ２５７００３５Ａ１）、米国特許第４１５４８６２号（ＵＳ４１５４８６２）、米国特許第５６３１２９２号（ＵＳ５６３１２９２）、米国特許第６２６５０１２号（ＵＳ６２６５０１２）、米国特許第７９３９６７１号（ＵＳ７９３９６７１）、米国特許出願公開第２００８／０２２６７８８号（ＵＳ２００８０２２６７８８Ａ１）、米国特許出願公開第２０１０／０２２７０３９号（ＵＳ２０１００２２７０３９Ａ１）、米国特許出願公開２００２／０１７７５７６号（ＵＳ２００２０１７７５７６）、米国特許出願公開第２０１１／００８６１３８号（ＵＳ２０１１００８６１３８）及び国際公開第２００８／１１９１９７号（ＷＯ２００８１１９１９７Ａ１）を参照されたい。
【０００７】
[0008]ステビア（Ｓｔｅｖｉａ  ｒｅｂａｕｄｉａｎａ）は、人間社会で数千年にわたって民間薬及び甘味剤として使用されてきた。今日、韓国、台湾、タイ、マレーシア、ブラジル、コロンビア、ペルー、パラグアイ、ウルグアイ、及びイスラエルを含む多くの国で、この植物を育てている。ＦＤＡは、レバウジオシドＡ及びステビオシドを、一般に安全と認められる添加物（ＧＲＡＳ）として分類し、多くのステビア抽出物の食品添加物が米国市場に入ることをもたらしている。用語“ステビア”は、一般的に、新鮮か又は乾燥されたかのいずれかのＳｔｅｖｉａ  ｒｅｂａｕｄｉａｎａの葉及び／又は植物体の部分、或いは粗製か又は特定のグリコシドに更に精製されたかのいずれかの抽出物／煎じ汁／シロップを指すために使用され、これ以降で使用される場合、本文書中で使用される用語“ステビア”は、この植物のこれらの形態のいずれをも指すことができる。Ｓ．ｒｅｂａｕｄｉａｎａの甘味並びに金属的な、そして苦い後味の原因である化合物は、ステビオールグリコシドとして知られている。合計１０種が確認され、そしてこの化合物のクラスは、アグリコンのジテルペンステビオールの各種のグリコシル化、ラムノシル化（ｒｈａｍｎｏｓｙｌａｔｅｄ）、及びキシル化（ｘｙｌａｔｅｄ）された形態によって特徴づけられる。
【０００８】
[0009]ステビオールグリコシドを産生するために、ステビアの植物体を乾燥し、そして抽出過程にかける。各種のグリコシドを、各種の溶媒、例えばメタノール又はエタノールによる結晶化によって、カラムクロマトグラフィーによって、又は濾過によって異なった純度で得ることができる。
【０００９】
[0010]緑茶の味特性を変更するために、各種の方法が使用されてきた。発酵茶は、数百年にわたって消費されてきたが、これは、常に環境の微生物叢により行われてきた。茶は、典型的には３ヶ月以上、そして時には５０年もの長い間発酵される。
【００１０】
[0011]所望されることは、例えば、味の欠点を減少しながら、良好な味の産物を達成するステビア又は茶のような食品産物を製造する方法である。従って、ステビア又は茶に対して、減少したレベルの所望しない味成分及び／又は増加したレベルの風味及び／又は健康促進成分を有する産物、並びにこのような産物を得るための方法に対する必要性が当技術において残る。本発明は、上記で考察した問題の一つ又はそれより多くを克服することに関する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】米国特許第２６９３６６５号
【特許文献２】米国特許第２７６１２４６号
【特許文献１】米国特許第２９２８２１０号；
【特許文献１】米国特許第３０８６３２０号；
【特許文献１】米国特許第４０７１９７３号；
【特許文献１】欧州特許出願公開第２５７００３５号；
【特許文献１】米国特許第４１５４８６２号；
【特許文献１】米国特許第５６３１２９２号；
【特許文献１】米国特許第６２６５０１２号；
【特許文献１】米国特許第７９３９６７１号；
【特許文献１】米国特許出願公開第２００８／０２２６７８８号；
【特許文献１】米国特許出願公開第２０１０／０２２７０３９号；
【特許文献１】米国特許出願公開第２００２／０１７７５７６号；
【特許文献１】米国特許出願公開第２０１１／００８６１３８号；
【特許文献１】国際特許出願公開第２００８／１１９１９７号。
【発明の概要】
【００１２】
[0012]一つの態様において、本発明は、食品産物の味を向上するための方法を含み、これは、液内菌糸体液体組織培養物を培地中で培養し、液内菌糸体液体培養物の上清流体を収集し；そして収集された上清流体を、食品産物の味を向上するために十分な量で食品産物に加える工程を含むことができる。
【００１３】
[0013]液内菌糸体組織を培養するために使用される真菌は、次の種：Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍ、Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ａｐｐｌａｎａｔｕｍ、Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ、Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ、Ｈｅｒｉｃｉｕｍ  ｅｒｉｎａｃｅｕｓ、Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ  ｅｄｏｄｅｓ、Ａｇａｒｉｃｕｓ  ｂｌａｚｅｉ、Ｇｒｉｆｏｌａ  ｆｒｏｎｄｏｓａ、Ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａ  ａｕｒｉｃｕｌａ、Ｆｌａｍｍｕｌｉｎａ  ｖｅｌｕｔｉｐｅｓ、Ｔｒａｍｅｔｅｓ  ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ、Ｍｏｒｃｈｅｌｌａ  ｓｐｐ．、Ｉｎｏｎｏｔｕｓ  ｏｂｌｉｑｕｕｓ、Ｌａｒｉｃｉｆｏｍｅｓ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ、Ｆｏｍｅｓ  ｆｏｍｅｎｔａｒｉｕｓ、Ｆｏｍｅｓ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ、Ｆｏｍｅｓ  ｆｏｍｉｔｏｐｉｓｉｓ、Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ  ｍａｔｓｕｔａｋｅ、Ｂｏｌｅｔｕｓ  ｅｄｕｌｉｓ、Ｃｌｉｔｏｃｙｂｅ  ｎｕｄａ、Ｃｌｉｔｏｃｙｂｅ  ｓａｅｖａ、Ｐｌｅａｒｏｔｕｓ  ｓｐｐ．、Ｔｒｅｍｅｌｌａ  ｆｕｃｉｆｏｒｍｉｓ、Ｐｉｐｔｏｐｏｒｕｓ  ｂｅｔｕｌｉｎｉｓ、Ｐｏｌｙｐｏｒｕｓ  ｕｍｂｅｌｌａｔｕｓ、Ｐｈｏｌｉｏｔａ  ｎａｍｅｋｏ、Ｖｏｌｖａｒｉｅｌｌａ  ｖｏｌｖａｃｅａ、Ｈｙｐｓｉｚｙｇｕｓ  ｍａｒｍｏｒｅｕｓ、Ｓｔｒｏｐｈａｒｉａ  ｒｕｇｏｓｏａｎｎｕｌａｔａ、及びＬａｅｔｉｐｏｒｕｓ  ｓｕｌｆｕｒｅｕｓの少なくとも一つを含むことができる。一つの態様において、真菌は、Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓである。
【００１４】
[0014]幾つかの態様において、食品産物の味は、収集された上清流体と混合された場合に向上される。味の向上は、例えば、食品産物の苦味を減少する、好ましくない後味を減少する、及び渋味を減少することのようないずれもの形態をとることができる。
【００１５】
[0015]食品産物は、食品成分、栄養補助食品、食品添加物、栄養補給食品、及び医薬を含むことができる。食品産物の例は、ステビアの植物体の部分、ステビオールグリコシド、アスパルテーム、アセスルファム−Ｋ、スクラロース、炭水化物、羅漢果、カカオ、カカオリカー、茶、チョウセンニンジン、糖アルコール、コーヒー、クランベリー、グレープフルーツ、ザクロ、ココナツ、ワイン、ビール、リカー及びスピリッツを含む。
【００１６】
[0016]一つの態様において、収集された上清流体は、所望により、低温殺菌又は滅菌することができる。収集された上清流体は、更に所望により、所望による低温殺菌又は滅菌工程の前或いは後のいずれかに乾燥することができる。
【００１７】
幾つかの態様において、培養工程は、約１〜約６０日で行うことができる。
[0017]各種の改変及び付加を、本発明の範囲から逸脱することなく、考察された態様に対して行うことができる。例えば、先に記載した態様は、特定の特徴に対して言及しているが、本発明の範囲は、更に、異なった特徴の組合せを有する態様、及び先に記載した特徴の全てを含まない態様を含む。
すなわち、本出願は以下の発明の開示を包含する。
［１］液内菌糸体液体組織培養物を培地中で培養し；
前記液内菌糸体液体組織培養物の上清流体を収集し；そして
前記収集した上清流体を、食品産物の味を向上するために十分な量で食品産物に加えること；
を含んでなる、食品産物の味を向上するための方法。
［２］前記液内菌糸体液体組織培養物を培養するために使用される真菌が、次の群：Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍ、Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ａｐｐｌａｎａｔｕｍ、Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ、Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ、Ｈｅｒｉｃｉｕｍ  ｅｒｉｎａｃｅｕｓ、Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ  ｅｄｏｄｅｓ、Ａｇａｒｉｃｕｓ  ｂｌａｚｅｉ、Ｇｒｉｆｏｌａ  ｆｒｏｎｄｏｓａ、Ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａ  ａｕｒｉｃｕｌａ、Ｆｌａｍｍｕｌｉｎａ  ｖｅｌｕｔｉｐｅｓ、Ｔｒａｍｅｔｅｓ  ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ、Ｍｏｒｃｈｅｌｌａ  ｓｐｐ．、Ｉｎｏｎｏｔｕｓ  ｏｂｌｉｑｕｕｓ、Ｌａｒｉｃｉｆｏｍｅｓ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ、  Ｆｏｍｅｓ  ｆｏｍｅｎｔａｒｉｕｓ、Ｆｏｍｅｓ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ、Ｆｏｍｅｓ  ｆｏｍｉｔｏｐｉｓｉｓ、Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ  ｍａｔｓｕｔａｋｅ、Ｂｏｌｅｔｕｓ  ｅｄｕｌｉｓ、Ｃｌｉｔｏｃｙｂｅ  ｎｕｄａ、Ｃｌｉｔｏｃｙｂｅ  ｓａｅｖａ、Ｐｌｅａｒｏｔｕｓ  ｓｐｐ．、Ｔｒｅｍｅｌｌａ  ｆｕｃｉｆｏｒｍｉｓ、Ｐｉｐｔｏｐｏｒｕｓ  ｂｅｔｕｌｉｎｉｓ、Ｐｏｌｙｐｏｒｕｓ  ｕｍｂｅｌｌａｔｕｓ、Ｐｈｏｌｉｏｔａ  ｎａｍｅｋｏ、Ｖｏｌｖａｒｉｅｌｌａ  ｖｏｌｖａｃｅａ、Ｈｙｐｓｉｚｙｇｕｓ  ｍａｒｍｏｒｅｕｓ、Ｓｔｒｏｐｈａｒｉａ  ｒｕｇｏｓｏａｎｎｕｌａｔａ、及びＬａｅｔｉｐｏｒｕｓ  ｓｕｌｆｕｒｅｕｓから選択される、［１］に記載の方法。
［３］前記真菌が、Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓである、［１］に記載の方法。
［４］前記味の向上が：食品産物の、苦味を減少すること、好ましくない後味を減少すること、及び渋味を減少することからなる群から選択される、［１］に記載の方法。
［５］前記培地が、ヒトの食品グレードの培地である［３］に記載の方法。
［６］前記食品産物が：食品成分、栄養補助食品、食品添加物、栄養補給食品、及び医薬からなる群から選択される、［１］に記載の方法。
［７］前記収集された上清流体が低温殺菌される、［１］に記載の方法。
［８］前記収集された上清流体が乾燥される、［１］に記載の方法。
［９］前記収集された上清流体が滅菌される、［１］に記載の方法。
［１０］前記菌糸体液体組織培養物が濾過される、［１］に記載の方法。
［１１］前記菌糸体液体組織培養物が遠心される、［１］に記載の方法。
［１２］前記培地が動物グレードであり、そして食品産物が動物の飼料である、［１］に記載の方法。
［１３］前記培養物が、浮遊培養物であり、そして上清流体を収集する前にブレンドされる、［１］に記載の方法。
［１４］前記食品産物が乾燥される、［１］に記載の方法。
［１５］前記培養工程が、１日〜６０日間行われる、［１］に記載の方法。
［１６］前記食品産物がステビアの植物体の部分、ステビア煎じ汁、又は精製されたステビア抽出物である、［１］に記載の方法。
［１７］前記食品産物が、ステビアの植物体の部分、ステビオールグリコシド、アスパルテーム、アセスルファム−Ｋ、スクラロース、炭水化物、羅漢果、カカオ、カカオ濃縮液、茶、チョウセンニンジン、エンドウマメタンパク質、糖アルコール、コーヒー、クランベリー、グレープフルーツ、ザクロ、ココナツ、ワイン、ビール、リカー及びスピリッツからなる群から選択される、［１］に記載の方法。
［１８］Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓを含んでなる液内菌糸体液体組織培養物を、培地中で約４〜約７日間培養し；
前記液内菌糸体液体組織培養物の上清流体を濾過によって収集し；
収集した前記上清流体を乾燥し；そして
収集し、乾燥した上清流体を食品産物の苦味を減少するために十分な量で食品産物に添加すること；
を含んでなる、食品産物の苦味を減少するための方法。
［１９］前記食品産物が、ステビアの植物体の部分又はステビオールグリコシドである、［１８］に記載の方法。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
[0018]ある種の態様の各種の側面及び特徴が上記に要約されてきたが、以下の詳細な記載は、当業者がこのような態様を実行することを可能にするために、幾つかの態様を更に詳細に例示する。記載される実施例は、例示の目的のために提供され、そして本発明の範囲を制約することは意図していない。
【００１９】
[0019]説明の目的のための以下の記載において、記載される態様の完璧な理解を提供するために、多くの具体的な詳細が記載される。然しながら、本発明の他の態様を、これらの具体的な詳細の幾つかによらずに実行することができることは当業者にとって明白であるものである。幾つかの態様が本明細書中に記載され、そして特許請求され、そして各種の特徴が異なった態様に属するが、一つの態様に関して記載された特徴を、他の態様に同様に組込むことができることは認識されるべきである。然しながら、同様に、いずれもの記載される又は特許請求される態様の一つの特徴或いは複数の特徴は、本発明の他の態様がこのような特徴を省略することができるので、本発明の全ての態様に対して本質的であると考えられるべきではない。
【００２０】
[0020]他に示さない限り、使用される量、寸法、等を表示するために本明細書中で使用される全ての数字は、用語“約”によって全ての場合修飾されていると理解されるべきである。本出願公開において、単数の使用は、他に具体的に記述しない限り複数を含み、そして、用語“及び”と“又は”の使用は、他に示さない限り“及び／又は”を意味する。更に、用語“含んで”、並びに他の形態、例えば“含む”及び“含まれる”の使用は、非排他的と考えるべきである。更に、“要素”又は“成分”のような用語は、他に具体的に記述しない限り、一つの単位を含んでなる要素及び成分並びに一つより多い単位を含んでなる要素及び成分の両方を包含する。
【００２１】
[0021]一つの態様において、本発明は、真菌が培養された培地（本明細書中に記載されるようないずれもの培地）、例えばＣｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ、Ｈｅｒｉｃｕｍ  ｅｒｉｎａｃｅｕｓ、又はＧａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍが培養された培地を、適した処理、例えば消費前の低温殺菌又は滅菌後に、直接食材として使用することができるという発見に基づいている。培養培地は、乾燥し、希釈し、濃縮することができるか、又は濃縮物、乾燥粉末、等の形態で未稀釈で使用することができる。
【００２２】
[0022]定常的菌糸体マット状培養物として、真菌代謝物溶液と残りの培地の界面は、着実に沈降する。界面置換は、培養物の健康状態を決定するための都合のよい観察であり、そして何時、培養物が定常期又は増殖期に入ったかを示す。形成される代謝産物プールは、しばしば好ましい着色を有し、そして理論によって束縛されるものではないが、有益な真菌物質、例えばこの物質を食品成分／補助食品／添加物として好ましいものにするものであろう酵素、炭水化物、脂質、小分子、等を含有すると思われる。本発明者等は、一つの態様において、液内菌糸体培養物を、濾過し（例えば、チーズクロス、コーヒフィルター、０．２ミクロンフィルターによる）、そして低温殺菌して、上清流体を分離することのみを必要とすることを見出している。浮遊培養物は、ブレンドされた場合、本発明により使用することができる。
【００２３】
[0023]一つの態様において、本発明者等は、真菌の液体組織培養物流体の一部である上清流体（減少された量の菌糸体を含有し、本明細書中で“菌糸体を含まない部分”と呼ぶ）が、食品産物に直接加えられた場合、例えば苦味、渋味、及び／又は好ましくない後味のような食品産物の好ましくない味を改善する能力を有することを見出している。食品産物の味を向上することは、その食品産物によって改善された甘味を含む。風味の改善は、更に、制約されるものではないが、初期の甘味又は茶の感覚後に気になる、通常後味としての苦い風味、金属的風味、甘草の風味を含むステビア及び茶に伴う特徴的後味の減少を含む。これらの味を減少することは、更に味の欠点の軽減とも呼ぶことができる。例えば、ステビオールグリコシドは、残留する苦味及び後味を保有し、これはその定性的特徴に影響する。
【００２４】
[0024]本発明の産物によって処理された食品産物の改善された風味は、各種の方法、例えば改善された甘味、減少した苦味及び／又は軽減された味の欠点を実証する化学分析で測定することができる。産物の改善された味（類）に関する定性的データを提供するために、食味検査パネルによる味の試験も、処理された産物において改善された甘味及び／又は減少した味の欠点が示されているかを決定するパネルにより更に行うことができる。
【００２５】
[0025]一つの態様において、本発明は、Ｓｔｅｖｉａ  ｒｅｂａｕｄｉａｎｎａの葉を、例えばＣｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓで菌糸体化（ｍｙｃｅｌｉａｔｉｎｇ）して、菌糸体化されていない対照と比較してより良好な味のＳ．ｒｅｂａｕｄｉａｎｎａの水性抽出物を提供することを含む。然しながら、本発明者等は、更に、Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓの全液体培養物を、Ｓ．ｒｅｂａｕｄｉａｎｎａの水性抽出物の試料に単純に加えることが、Ｓ．ｒｅｂａｕｄｉａｎｎａの好ましくない後味（例えば不愉快な後味）を排除することを見出した。例えば、６０％のレバウジオシドＡの混合物を、Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ及びＧ．ｌｕｃｉｄｕｍの全液体組織培養物と共にインキュベートした。本発明者等は、ステビオールグリコシド混合物の通常伴われる後味が、Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓの全液体培養物と共に混合された場合に、６時間のインキュベーション後、完全に除去されることを見出した。このような効果は、Ｇ．ｌｕｃｉｄｕｍ、Ｈｅｒｉｃｉｕｍ  ｅｒｉｎａｃｅｕｓ、Ｇｒｉｆｏｌａ  ｆｒｏｎｄｏｓａ、Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ  ｅｄｏｄｅｓ、Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ  ｍａｔｓｕｔａｋｅ、Ｍｏｒｃｈｅｌｌａ  ｅｓｃｕｌｅｎｔａ、Ｔｒａｍｅｔｅｓ  ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ又はＧａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍでは観察されなかった。然しながら、味の特性を改善する特質は、他の真菌の属において、そして恐らく、例えばＯｐｈｉｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ、Ｅｌａｐｈｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ、又はＣｏｒｄｙｃｅｐｓ、例えばＣ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ及びＣ．ｍｉｌｉｔａｒｉｓのようなＣｏｒｄｙｃｅｐｓ属の真菌の他の種において見いだされる可能性があるものであることが本発明者等によって理解される。
【００２６】
[0026]具体的には、本発明者等は、６時間のインキュベーションのために、濾過されたＣ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ液体組織培養物を使用して、ステビオールグリコシド混合物と混合：」した。時間経過研究を行った後、本発明者等は、風味向上効果が、濾液のステビオールグリコシド混合物への添加の直後に起こり、過程が恐らく非酵素的であることを示すことを、驚くべきことに発見した。濾過されたＣ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ液体組織培養物が、味改善及び／又は苦味遮断物質の特性を有することが推察される。次いで、濾過されたＣ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ液体組織培養物（濾液）は、本明細書中で表９に開示されるように他の物質と混合され、そしてこれらの物質に対して一般的な味改善及び／又は苦味遮断物質の特性を有することが見いだされた。本発明者等は、例えば、溶解性を増加するために濾液を更に精製することができ、そして乾燥、例えば噴霧乾燥することができ、そして苦味及び／又は後味を減少させることを含む食品産物の味のプロファイルを改善するために食品産物と混合することができることを見出した。従って、本発明は、多くの異なった種類の食品産物において有効であるように思われる苦味遮断物質を開示する。
【００２７】
[0027]一つの態様において、本発明は、食品産物の味を向上するための方法を含み、これは、液内菌糸体液体組織培養物を培地中で培養し、培養物の菌糸体を含まない部分を収集し、そして菌糸体を含まない部分を食品産物に添加して、食品産物の味を向上する工程を含む。
【００２８】
[0028]本発明による食品産物は、経口投与によって（口によって）摂取されるいずれもの物質を含むいずれもの食品産物を含むことができ、そして食品産物、食品成分、栄養補助食品、食品添加物、医薬、食材、化粧品成分、栄養補給食品成分、栄養補助食品成分、及び加工助剤を含む。好ましくない味の特徴、例えば苦味、好ましくない後味、渋味、等を有する、又は有することができるいずれもの食品産物は、本発明の苦味遮断物質の組成物で処理することができる。幾つかの態様において、食品産物は、茶の植物体の部分、茶煎じ汁、又は茶の精製された抽出物を含む。幾つかの態様において、食品産物は、ステビアの植物体の部分、ステビオールグリコシド、アスパルテーム、アセスルファム−Ｋ、スクラロース、炭水化物、羅漢果、カカオ、カカオリカー、茶、チョウセンニンジン、エンドウマメタンパク質、糖アルコール、コーヒー、クランベリー、グレープフルーツ、ザクロ、ココナツ、ワイン、ビール、リカー及びスピリッツを含む。
【００２９】
[0029]食品産物は、全ての穀草類、穀類、全ての種の小麦、ライムギ、玄米、白米、赤米、ゴールドライス、野生米、コメ、大麦、ライコムギ、米、ソルガム、カラスムギ、アワ、キノア、ソバ、フォニオ、アマランス、テフ及びデュラム小麦；リンゴ及びナシ、アンズ、サクランボ、アーモンド、モモ、イチゴ、レーズン、マニオク、カカオ、バナナ、アカネ科の種（コーヒー）、レモン、オレンジ及びグレープフルーツ；トマト、ジャガイモ、コショウ、ナス、オールスパイス、マンゴ粉、アンゲリカ、アニス（Ｐｉｍｐｉｎｅｌｌａ  ａｎｉｓｕｍ）、アニスシードマートル（Ｓｙｚｙｇｉｕｍ  ａｎｉｓａｔｕｍ）、アナトー（Ｂｉｘａ  ｏｒｅｌｌａｎａ）、アップルミント（Ｍｅｎｔｈａ  ｓｕａｖｅｏｌｅｎｓ）、オウシュウヨモギ、ヨモギ、アサフェティダ（Ｆｅｒｕｌａ  ａｓｓａｆｏｅｔｉｄａ）、ベルベリス、バナナ、バジル（Ｏｃｉｍｕｍ  ｂａｓｉｌｉｃｕｍ）、ローリエ、ビストート（Ｐｅｒｓｉｃａｒｉａ  ｂｉｓｔｏｒｔａ）、ブラックカルダモン、ブラッククミン、カシス、ブラックライム、ヒバマタ（Ｆｕｃｕｓ  ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ）、ブルーコホシュ、ブルーマレー（Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓ  ｐｏｌｙｂｒａｃｔｅａ）、ボグラブラドールティー（Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ  ｇｒｏｅｎｌａｎｄｉｃｕｍ）、ボルド（Ｐｅｕｍｕｓ  ｂｏｌｄｕｓ）、ボリビアンコリアンダー（Ｐｏｒｏｐｈｙｌｌｕｍ  ｒｕｄｅｒａｌｅ）、ルリジサ（Ｂｏｒａｇｏ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ショウブ、キンセンカ、カランバ（Ｊａｔｅｏｒｈｉｚａ  ｃａｌｕｍｂａ）、カモミール、大麻、ケイパー（Ｃａｐｐａｒｉｓ  ｓｐｉｎｏｓａ）、キャラウェイ、カルダモン、イナゴマメ鞘、カシア、モクマオウ、イヌハッカ、キャッツクロー、タンポポモドキ、カイエンペッパー、Ｃｅｌａｓｔｒｕｓ  ｐａｎｉｃｕｌａｔｕｓ、コンフリー、セロリソルト、セロリシード、ベニバナセンブリ、チャービル（Ａｎｔｈｒｉｓｃｕｓ  ｃｅｒｅｆｏｌｉｕｍ）、ハコベ、チコリ、チリペッパー、チリパウダー、キナ、チャイブ（Ａｌｌｉｕｍ  ｓｃｈｏｅｎｏｐｒａｓｕｍ）、セリ（Ｍｙｒｒｈｉｓ  ｏｄｏｒａｔａ）、シラントロ（コリアンダーを参照されたい）（Ｃｏｒｉａｎｄｒｕｍ  ｓａｔｉｖｕｍ）、シナモン（及びカシア）、シナモンマートル（Ｂａｃｋｈｏｕｓｉａ  ｍｙｒｔｉｆｏｌｉａ）、サルビア、ヤエムグラ、クローバー、クローブ、コーヒー、フキタンポポ、コンフリー、ヘンルーダ、コンズランゴ、オウレン、コリアンダー、コストマリー（Ｔａｎａｃｅｔｕｍ  ｂａｌｓａｍｉｔａ）、シバムギ、ノラニンジン（Ａｎｔｈｒｉｓｃｕｓ  ｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓ）、キバナクリンザクラ、セイヨウカンボク（Ｖｉｂｕｒｎｕｍ  ｏｐｕｌｕｓ）、クレソン、スープミント（Ｐｌｅｃｔｒａｎｔｈｕｓ  ａｍｂｏｉｎｉｃｕｓ）、ハハコグサ、クミン、カレーリーフ（Ｍｕｒｒａｙａ  ｋｏｅｎｉｇｉｉ）、ダミアナ（Ｔｕｒｎｅｒａ  ａｐｈｒｏｄｉｓｉａｃａ）、タンポポ（Ｔａｒａｘａｃｕｍ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ）、デマルセント、デビルズクロー（Ｈａｒｐａｇｏｐｈｙｔｕｍ  ｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓ）、ディルシード、ディル（Ａｎｅｔｈｕｍ  ｇｒａｖｅｏｌｅｎｓ）、ドリゴペッパー（Ｔａｓｍａｎｎｉａ  ｓｔｉｐｉｔａｔａ）、エキナセア、Ｅｃｈｉｎｏｐａｎａｘ  Ｅｌａｔｕｍ、エーデルワイス、アメリカニワトコ、ニワトコ花、オオグルマ、エゾウツギ、アリタソウ（Ｃｈｅｎｏｐｏｄｉｕｍ  ａｍｂｒｏｓｉｏｉｄｅｓ）、マオウ、Ｅｒｙｎｇｉｕｍ  ｆｏｅｔｉｄｕｍ、ユーカリ、ウイキョウ（Ｆｏｅｎｉｃｕｌｕｍ  ｖｕｌｇａｒｅ）、コロハ、ナツシロギク、ゴマノハグサ、五香粉（中華料理）、Ｆｏ‐ｔｉ‐ｔｉｅｎｇ、カラクサケマン、ガランゲル、ガラムマサラ、ガーテンクレス、ニラ、ニンニク、ショウガ（Ｚｉｎｇｉｂｅｒ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ）、イチョウ、チョウセンニンジン、ニンジン、シベリア（Ｅｌｅｕｔｈｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ）、ゴーツルー（Ｇａｌｅｇａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ゴーダマサラ、アキノキリンソウ、ゴールデンシール、ゴーツコーラ、ギニアショウガ（Ａｆｒａｍｏｍｕｍ  ｍｅｌｅｇｕｅｔａ）、セリム子実（Ｘｙｌｏｐｉａ  ａｅｔｈｉｏｐｉｃａ）、ブドウ種子エキス、緑茶、カキドウシ、ミカニア、ジプシーワート、サンザシ（Ｃｒａｔａｅｇｕｓ  ｓａｎｇｕｉｎｅａ）、サンザシ樹、アサ、エルブドプロバンス、ハイビスカス、セイヨウヒイラギ、サントリソウ、ホップ、ニガハッカ、ホースラディッシュ、ツクシ（Ｅｑｕｉｓｅｔｕｍ  ｔｅｌｍａｔｅｉａ）、ヒソップ（Ｈｙｓｓｏｐｕｓ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ヤラッパ、ジャスミン、ジャスミンパール、アマチャズル（Ｇｙｎｏｓｔｅｍｍａ  ｐｅｎｔａｐｈｙｌｌｕｍ）、ヒヨドリバナ（Ｇｒａｖｅｌｒｏｏｔ）、ジョンザコンカラー、ビャクシン、カフェライムリーフ（Ｃｉｔｒｕｓ  ｈｙｓｔｒｉｘ，Ｃ．ｐａｐｅｄｉａ）、カーラマサラ、タデ、コカム、ラブラドルティー、セイヨウカワラマツバ、ハゴロモグサ、ランドクレス、ラベンダー（Ｌａｖａｎｄｕｌａ  ｓｐｐ．）、イソツツジ、レモンバーム（Ｍｅｌｉｓｓａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、レモンバジル、レモングラス（Ｃｙｍｂｏｐｏｇｏｎ  ｃｉｔｒａｔｕｓ，Ｃ．ｆｌｅｘｕｏｓｕｓ，及び他の種）、レモンアイロンバーク（Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓ  ｓｔａｉｇｅｒｉａｎａ）、レモンミント、レモンマートル（Ｂａｃｋｈｏｕｓｉａ  ｃｉｔｒｉｏｄｏｒａ）、レモンタイム、レモンバーベナ（Ｌｉｐｐｉａ  ｃｉｔｒｉｏｄｏｒａ）、甘草−適応促進薬、ライムフラワー、シソクサ、アマニン、リコリッシュ、ヒハツ、ロベージ（Ｌｅｖｉｓｔｉｃｕｍ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ）、羅漢果、メース、マウラブチェリー、マラバスラム、マンシュウタラの木（Ａｒａｌｉａ  ｍａｎｃｈｕｒｉｃａ）、マンドレーク、マヨラナ（Ｏｒｉｇａｎｕｍ  ｍａｊｏｒａｎａ）、ニガハッカ、カラフトイソツツジ、ウスベニタチアオイ、マスチック樹、セイヨウナツユキソウ、Ｍｅｉ  Ｙｅｎ、ギニアショウガ（Ａｆｒａｍｏｍｕｍ  ｍｅｌｅｇｕｅｔａ）、ミント、マリアアザミ（Ｓｉｌｙｂｕｍ）、ベルガモット（Ｍｏｎａｒｄａ  ｄｉｄｙｍａ）、メハジキ、マウンテンスカルキャップ、ビロードモウズイカ（Ｖｅｒｂａｓｃｕｍ  ｔｈａｐｓｕｓ）、カラシナ、カラシナ種子、Ｎａｓｈｉａ  ｉｎａｇｕｅｎｓｉｓ、インドセンダン、イヌハッカ、イラクサ、ブラッククミン��カロンジ、ブラックキャラウェイ、ノニ、ナツメグ、メース、マリファナ、マツヨイグサ（Ｏｅｎｏｔｈｅｒａ  ｂｉｅｎｎｉｓ）、オリダ（Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓ  ｏｌｉｄａ）、オレガノ（Ｏｒｉｇａｎｕｍ  ｖｕｌｇａｒｅ，Ｏ．ｈｅｒａｃｌｅｏｔｉｃｕｍ）、オリス根、ヤブニンジン、オリーブ葉（茶及びハーブ補助食品として使用）、Ｐａｎａｘ  ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓ、タコヤシ葉、パプリカ、パセリ（Ｐｅｔｒｏｓｅｌｉｎｕｍ  ｃｒｉｓｐｕｍ）、トケイソウ、パチョリ、メグサハッカ、コショウ（黒、白、及び緑）、ペパーミント、ペパーミントガム（Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓ  ｄｉｖｅｓ）、シソ、オオバコ、ザクロ、ポンチホラン、ポピーシード、サクラソウ（Ｐｒｉｍｕｌａ）、砂糖漬け花、乾燥茶葉混合物、サイリウム、スベリヒユ、ニガキ、カトルエピス、ラムソン、ラズベリー、ラズベリー（葉）、霊芝、ハリモクシュ、イワベンケイ、ライベリー（Ｓｙｚｙｇｉｕｍ  ｌｕｅｈｍａｎｎｉｉ）、キバナスズシロ、ローマンカモミール、ルイボス、ローズヒップ、ローズマリー（Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ナナカマド、ルー、ベニバナ、サフラン、セージ（Ｓａｌｖｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）、ニッケイ、セイヨウオトギリソウ、オランダワレモコウ（Ｓａｎｇｕｉｓｏｒｂａ  ｍｉｎｏｒ又はＰｏｔｅｒｉｕｍ  ｓａｎｇｕｉｓｏｒｂａ）、サルビア、カホクサンショウ（Ｓａｎｓｈｏ）、サッサフラス、セイボリー（Ｓａｔｕｒｅｊａ  ｈｏｒｔｅｎｓｉｓ，Ｓ．ｍｏｎｔａｎａ）、ゴミシ（Ｓｃｈｉｓａｎｄｒａ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）、Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ  ｃｏｓｔａｒｉｃａｎａ、センナ（ハーブ）、エビスグサ、ゴマ種子、ヒメスイバ、ナズナ、唾液分泌促進薬（Ｓｉａｌａｇｏｇｕｅ）、シベリアニンジン（Ｅｌｅｕｔｈｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ）、羅漢果（ｌｕｏｈａｎｇｕｏ）、タツナミソウ、スローベリー、スマッジスティック、ノゲシ、ギシギシ（Ｒｕｍｅｘ  ｓｐｐ．）、サザンウッド、スペアミント、トラノオ、ウミネギ、トウシキミ、ステビア、イチゴ葉、スマ（Ｐｆａｆｆｉａ  ｐａｎｉｃｕｌａｔａ）、ヌルデ、サマーセイボリー、Ｓｕｔｈｅｒｌａｎｄｉａ  ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ、スウィートグラス、スイートシスリー（Ｍｙｒｒｈｉｓ  ｏｄｏｒａｔａ）、クルマバソウ、トウサンショウ（Ｘａｎｔｈｏｘｙｌｕｍ  ｐｉｐｅｒｉｔｕｍ）、タカマハック、タマリンド、タンドリーマサラ、タンジー、タラゴン（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ  ｄｒａｃｕｎｃｕｌｕｓ）、茶、テウクリウムポリウム、タイバジル、アザミ、タイム、キマメ、タチキジムシロ、Ｔｒｉｂｕｌｕｓ  ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ、カミメボウキ（Ｏｃｉｍｕｍ  ｔｅｎｕｉｆｌｏｒｕｍ）、ウコン（Ｃｕｒｃｕｍａ  ｌｏｎｇａ）、クマコケモモとしても知られるウバウルシ、バニラ（Ｖａｎｉｌｌａ  ｐｌａｎｉｆｏｌｉａ）、ヴァサカ、クマツヅラ、ベチバー、ニオイタデ（Ｐｅｒｓｉｃａｒｉａ  ｏｄｏｒａｔａ）、ワサビ（Ｗａｓａｂｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ）、クレソン、ワトルシード、カンアオイ、ワイルドレタス、ヨウシュイブキジャコウソウ、キダチハッカ、マンサク、クコ、ダイコンソウ、カッコウチョロギ、クルマバソウ、��モギ、ノコギリソウ、イエルバブエナ、イエルバマテ、ヨヒンベ、ザータル、ガジュツ根、或いは水性又は半水性溶液（類）中のこれらの誘導体を含む。
【００３０】
[0030]液内菌糸体液体組織培養物を培養する工程は、当技術において既知のいずれもの方法によって達成することができる。一つの態様において、液内菌糸体液体組織培養物を培養するための方法は、例えば、２０１４年３月１５日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ１４／２９９８９、２０１４年３月１５日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ１４／２９９９８、２０１４年３月１５日に出願されたＵ．Ｓ．６１／９５３，８２１、２０１４年３月１５日に出願されたＵ．Ｓ．６１／９５３，８２３、２０１４年８月２６日に出願されたＵ．Ｓ．６２／０４２，０７１中に見出すことができ、これらの全ては、参照により本明細書中にその全てが援用される。
【００３１】
[0031]一つの態様において、液内菌糸体液体組織の培養は、バイオリアクター圧力容器中で行われ、これは、理想的には皿型ドーム、円筒形の胴体、及び球形のキャップ基部で構築され、胴体はジャケット加熱され、磁気駆動ミキサー、及び当技術において既知のＤＯプローブ、ｐＨメーター、電導度計、熱電対、等を含んでなる機器のための手段を提供するための、丸められたジャケット空間を通るポートを備えている。これらのメーター及びプローブは、データロギングされなければならない。一つの態様において、円筒形の基部は、もう一つのティー型部材への弁にティー型部材で分岐された回収管路に接続された弁を有し、これは、床の排水口にティー型部材で分岐され、そしてＣＩＰスキッドと接続（ｉｎ−ｌｉｎｅ）され、回収管路は低温殺菌スキッドに、そして最終的に乾燥デバイス、例えば噴霧乾燥器、流動床乾燥機、コニカル乾燥機、又は他の乾燥処理に接続される。一つの態様において、加工された菌糸体液体組織培養物は、乾燥器から直ちに包装することができる。試料は、対照として保持されなければならず、そして適当な試料は、第三者の品質管理の分析証明書発行者に送られる。空気は、１２０／２４０Ｖの空気圧縮機に接続された空気受けタンクによって提供することができる。空気圧縮機は、上流及び下流の弁を持つ圧力調節器を通して空気を放出し、上流の弁のすぐ上流は、ティー型部材であり、もう一つのティー型部材に導く弁にティー型部材で分岐され、ＣＩＰスキッドへの弁にティー型部材で分岐され、弁を備えた水蒸気供給に接続され、圧力調節器の後の弁は、弁及びステンレス鋼のカートリッジに収容された０．２μｍのステンレス鋼のフィルター（これは超音波シンクで掃除することができる）に接続され、これは、圧力容器のドーム上の必須の弁への所望による逆止弁に導き、所望による逆止弁の上流の最終弁系は、３６０°のスプレーボールに設置された弁への二つの類似の逆止弁に導くＹ型部材にティー型部材で分岐される。二つのスプレーボールは、容器を通して伸長される空気パーコレーターによって提示される影響（ｓｈａｄｏｗ）を考慮して置かれる。装置の近辺の圧力計は、圧力をモニターするために戦略的に置かれ、そして流量計は、空気の供給速度をモニターするために使用される。更なるガス受けタンク、例えば酸素タンクを、いずれものガスの分圧を補正するために圧力調節器とフィルター間にインラインで置くことができる。本発明者等は、背中合わせのフィルターカートリッジを、これが必須ではないが推奨する。ガスは、低いクラッキング圧を持つ逆止弁、例えばゲート弁、又は２〜３ｐｓｉのクラッキング圧を持つスプリング式逆止弁を通して、容器を５〜２５ｐｓｉに保持する背圧調節器に排気される。背圧調節器は、更に水蒸気トラップ及び床の排水口に導くことができる。一つの態様において、装置は、０．５〜５．０ＡＣＨを提供する。当業者にとって既知の他の設計スキームも更に使用することができる。
【００３２】
[0032]好ましくは、リアクターは、滅菌播種のための手段が装備されている。一つの態様において、リアクターに播種するために、弁を備えたオートクレーブ処理可能な（例えばポリプロピレン）容器からなる真菌のグリセロール原液を冷凍庫から取出し、そのシールを除去し、そしてチャンバーへの弁と接続した交差部に接続される。交差部の交差管路は、両端に弁を備え、上流の弁は、ステンレス鋼の０．２μｍのフィルターを保持するステンレス鋼のカートリッジの容器に接続される。この管路は、主空気供給管路に接続された弁を備えたティー型部材（更に上流側にも弁を備える）に接続される。交差部の下流は、床の排水口への水蒸気トラップ（ｓｔｒａｐ）への弁である。水蒸気は、グリセロール原液とチャンバーへの弁の間の空気を滅菌するために流される。滅菌され、そして冷却された時点で、グリセロール原液とチャンバーへの弁の間の真空が破られる。交差部のいずれかの側の弁が閉じられ、そしてグリセロール原液及び圧力容器の弁が開かれて、培地に播種される。当業者にとって既知の他の設計スキームも更に使用することができる。
【００３３】
[0033]リアクターは、水で充填されるように設定されなければならない。水の供給系は、理想的には、炉とリアクター間に滅菌可能な管路を持つＷＦＩ装置である。固体の培地成分が、タンクの予備滅菌のために、理想的には真空コンベアー装置により加えられなければならない。高温の滅菌法は、培地に対して有害でないように十分に早い。水が加えられた時点で、タンクは穏やかに撹拌され、そして播種されなければならない。もう一つの態様において、固体の培地成分が濾過又は蒸留された水に加えられ、そして液体培地は高温で滅菌され、そして滅菌管路を通して圧力容器にポンプで送られる。もう一つの態様において、タンクは濾過又は蒸留された水で満たされ、固体培地成分が加えられ、そして培地は、ジャケット、チャンバーのいずれか、又は両方を水蒸気加熱することによって滅菌され、この間培地は所望により撹拌される。
【００３４】
[0034]少なくとも一つのスケールアップしたリアクターが、約１×１０５の桁の体積を持つタンクに取り組む前に使用されなければならない。３〜４基くらいが推奨される。本発明者等は、１×１００Ｌの桁から１×１０２Ｌないし１×１０４Ｌないし１×１０５−６Ｌに進めることを推奨する。より濃い培地を、スケールアップしたリアクター及びグリセロール原液培養前モチーフに対して使用することができる。
【００３５】
[0035]一つの態様において、本明細書中に開示されるグリセロール原液は、０．１Ｌ〜４Ｌのエルレンマイヤー振盪フラスコへのペトリ皿の単純な増殖モチーフによって、５０％グリセロール原液へ調製される。ペトリ皿は、バイオリアクターのモチーフに対して先に記載した培地の変更に加えて、２５〜３５ｇ／Ｌの寒天を含んでなることができる。滅菌操作で行われる場合、３〜９０日の範囲で増殖している選択されたペトリ皿を、４Ｌのエルレンマイヤーフラスコ（又は２５０〜１，０００ｍＬのＷｈｅａｔｏｎジャー）の中へ、振盪台上のインキュベーションのために増殖させることができる。容器が小さければ、振盪台は早くなければならない。本発明者等は、容器サイズにもよるが約１インチの旋回半径で４０〜１６０ＲＰＭの範囲を推奨する。１〜１０日間振盪した後、振盪フラスコのアリコート（例えば１０〜５００ｍＬ）を、滅菌した弁を備えたオートクレーブ処理可能な容器に注ぎ、次いでこれを、滅菌した室温のグリセロールで４０〜６０％（容量／容量）に調節することができる。グリセロール原液は、耐水シールで密封することができ、そして滅菌プラスチックバッグに入れ、密封し、そして貯蔵及び最終的にいずれもの製造場所への冷凍出荷のために、−２０℃で冷凍庫に入れることができる。冷凍庫は、理想的には定温冷凍庫である。グリセロールで調節されていない液体組織培養物原液も更に使用することができ、そして４℃又は−２０°Ｆで貯蔵される。４℃で貯蔵されたグリセロール原液も更に使用することができる。
【００３６】
[0036]本発明は、発明の背景において考察されたいずれものヒューマングレード成分を除く、いずれものヒューマングレード培地が、当技術において知られ、そして他で、例えばその全てが参照により本明細書中にその全てが援用される、２０１４年３月１５に出願されたＰＣＴ／ＵＳ１４／２９９８９、２０１４年３月１５に出願されたＰＣＴ／ＵＳ１４／２９９９８、２０１４年３月１５に出願されたＵ．Ｓ．６１／９５３，８２１、２０１４年３月１５に出願されたＵ．Ｓ．６１／９５３，８２３、２０１４年８月２６に出願されたＵ．Ｓ．６２／０４２，０７１で開示されているように、食用液体菌糸体培養物の産生のための培地の処方として使用することができるという概念を利用する。好ましくは、窒素塩は、使用される場合、酢酸アンモニウムであり、それが最も“自然な”塩であるからである。他の補助培地成分は、玄米シロップ、廃糖蜜、１×１０−２〜１×１０２ｍＬ／Ｌの桁の濃度の（又は単純に培地として）の果実ピューレ（マンゴ、リンゴ等）、短種玄米粉、栄養酵母フレーク、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース塩、乳清、カゼイン、並びに植物及び種子タンパク質を含む。成分は、アレルギー反応の可能性を最小にし、そして高い収率を提供するように選択される。酢酸アンモニウムは、バッチで供給される成分として所望により組込まれる。
【００３７】
[0037]本発明は、更に動物グレードの培地及び動物グレードの食品産物と共に使用することができる。
[0038]一つの態様において、最小培地液体組織培養物は、短い対数時間及び二次代謝の利益を得るように、大体積の最大培地で補充される。
【００３８】
[0039]一つの態様において、本発明の一つの態様における真菌成分のために有用である真菌株は、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ  Ｓｔａｔｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｔｈｅ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ  Ｓｔａｔｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｍｕｓｈｒｏｏｍ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，ａｖａｉｌａｂｌｅ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｐｌａｎｔ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１１７  Ｂｕｃｋｈｏｕｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｔｈｅ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ  Ｓｔａｔｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐａｒｋ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，ＵＳＡ  １６８０２）から商業的に入手可能なＣ．ｓｉｎｅｎｓｉｓＷＣ８５９株である。本発明において有用な真菌成分は、本明細書中に記載される方法によって調製することができる。当技術において既知の他の方法を使用することができる。
【００３９】
[0040]別の方法として、真菌の液体組織培養物は、例えばＣ．ｍｉｌｉｔａｒｉｓのようなＣｏｒｄｙｃｅｐｓ、Ｏｐｈｉｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ、Ｅｌａｐｈｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ、Ｍｅｔａｃｏｒｄｙｃｅｐｓ属からの真菌の他の種を含むことができる。多くの他の種が属中に存在するが、然しながら、これらの種は、一般的に商業的に培養されない。然しながら、例えば、Ｃ．ｓｃａｒａｂａｅｉｃｏｌａ、Ｃ．ｔａｋａｏｍｏｎｔａｎａ、Ｏｐｈｉｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｄｉｐｔｅｒｉｇｅｎａ、Ｏｐｈｉｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ａｍａｚｏｎｉｃａ、Ｃ．ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａ、Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｓｐｈｅｃｏｃｅｐｈａｌａ、Ｍｅｔａｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍａｒｔｉａｌｉｓ、Ｏｐｈｉｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｅｌｏｎｌｏｎｔｈａｅ、Ｏｐｈｉｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｎｕｔａｎｓ、Ｏｐｈｉｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｃｕｒｃｕｌｉｏｎｉｕｍ、Ｏｐｈｉｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ａｕｓｔｒａｌｉｓ、Ｏｐｈｉｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｔｉｐｕｔｉｎｉ、Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｃａｌｏｃｅｒｏｉｄｅｓ、及びＣｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｖａｒｉａｂｉｌｉｓが、Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓと同じ又は類似の苦味遮断能力を有するものであることが期待される。
【００４０】
[0041]別の方法として、本発明のために適した真菌は：Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍ、Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ａｐｐｌａｎａｔｕｍ、Ｃ．ｍｉｌｉｔａｒｉｓ、Ｈｅｒｉｃｉｕｍ  ｅｒｉｎａｃｅｕｓ、Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ  ｅｄｏｄｅｓ、Ａｇａｒｉｃｕｓ  ｂｌａｚｅｉ、Ｇｒｉｆｏｌａ  ｆｒｏｎｄｏｓａ、Ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａ  ａｕｒｉｃｕｌａ、Ｆｌａｍｍｕｌｉｎａ  ｖｅｌｕｔｉｐｅｓ、Ｔｒａｍｅｔｅｓ  ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ、Ｍｏｒｃｈｅｌｌａ  ｓｐｐ．、Ｉｎｏｎｏｔｕｓ  ｏｂｌｉｑｕｕｓ、Ｌａｒｉｃｉｆｏｍｅｓ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ、Ｆｏｍｅｓ  ｆｏｍｅｎｔａｒｉｕｓ、Ｆｏｍｅｓ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ、Ｆｏｍｅｓ  ｆｏｍｉｔｏｐｉｓｉｓ、Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ  ｍａｔｓｕｔａｋｅ、Ｂｏｌｅｔｕｓ  ｅｄｕｌｉｓ、Ｃｌｉｔｏｃｙｂｅ  ｎｕｄａ、Ｃｌｉｔｏｃｙｂｅ  ｓａｅｖａ、Ｐｌｅａｒｏｔｕｓ  ｓｐｐ．、Ｔｒｅｍｅｌｌａ  ｆｕｃｉｆｏｒｍｉｓ、Ｐｉｐｔｏｐｏｒｕｓ  ｂｅｔｕｌｉｎｉｓ、Ｐｏｌｙｐｏｒｕｓ  ｕｍｂｅｌｌａｔｕｓ、Ｐｈｏｌｉｏｔａ  ｎａｍｅｋｏ、Ｖｏｌｖａｒｉｅｌｌａ  ｖｏｌｖａｃｅａ、Ｈｙｐｓｉｚｙｇｕｓ  ｍａｒｍｏｒｅｕｓ、Ｓｔｒｏｐｈａｒｉａ  ｒｕｇｏｓｏａｎｎｕｌａｔａ、Ｌａｅｔｉｐｏｒｕｓ  ｓｕｌｆｕｒｅｕｓ、及びこれらの組合せを含んでなる。
【００４１】
[0042]一つの態様において、本発明は、培養後の液内菌糸体液体組織培養物の菌糸体を含まない部分を調製するための方法を含む。菌糸体を含まない部分は、液内菌糸体液体組織培養物の菌糸体生体分子の上清固体、細胞物質及び残留培地を含む。
【００４２】
[0043]本明細書中で先に開示したように、培養物を調製するために、調製された培地は、好ましくは当技術において既知のいずれもの方法、例えば逆浸透、脱イオン又は蒸留で精製（ｆｉｌｔｅｒｅｄ）された水中の滅菌されたヒューマングレード培地の容器に播種される。もう一つの態様において、水は濾過されない。もう一つの態様において、培地は動物グレードである。開示したように、フラスコ及び培地は、当技術において既知のいずれもの方法、例えば、１．５Ｌの培地で充填された４．０Ｌのエルレンマイヤーフラスコの、適当な時間、例えば２〜２．５時間の、２３ＰＳＩの２５０°Ｆの飽和水蒸気へのｉｎ  ｓｉｔｕの曝露によって滅菌することができる。滅菌フラスコは、冷却された時点で、当技術において既知のいずれもの手段、例えばペトリ皿、浮遊又は液内液体培養物、菌糸体化農産物質、グリセロール原液、等によって播種することができる。フラスコは、当技術において既知であるような３〜６０日の適当な、例えばクリーンルーム中の室温の１３０ＲＰＭの振盪台上における培養後に使用可能な状態となる。フラスコ中に残った残留培養物の対照ペトリ皿を、汚染物質がない（ｖｏｉｄ）ことを確実にするために製造することができる。フラスコは、更に、類似の様式で使用することができる同じ品質の培地で製造された大きいバイオリアクター（例えば、５〜５００Ｌ）に拡大するためにも使用することができる。
【００４３】
[0044]幾つかの態様において、真菌の液体組織培養物は、８ｇ／Ｌの有機ジャガイモデンプン粉及び０．８ｇ／Ｌ有機ニンジン粉からなる液体培地中で増殖されたＣ．ｓｉｎｅｎｓｉｓである。この最小培地は、先に記載したような苦味遮断物質（味向上食品産物）を産生するために有効な培地処方であることが、本発明者等によって見いだされている。本発明の産物の苦味遮断効果／味向上は、異なった培地、例えば２０ｇ／Ｌの有機マンゴピューレの添加により喪失することができ、これは、ステビオールグルコシド水溶液の風味の欠点を導入する。得られる上清の粉末は、本明細書中で考察されるような産物の適用における苦味遮断物質として使用することができる。
【００４４】
[0045]当業者によって決定することができる培養のための適した時間後、菌糸体を含まない部分（本明細書中で定義されるような）を、培養物から収集することができる。液内液体菌糸体液体組織培養物のこの菌糸体を含まない部分は、食品産物の味を改善及び／又は向上するために、所望により使用することができる。培養は、例えば、約１〜約６０日、約２〜約５０日、約３〜約４０日、約４〜約３０日、約５〜約２０日、約６〜約２０日、約７〜約１５日、約８〜約１２日、そして約９〜約１０日行うことができる。培養のための時間の長さは、例えば、培養の日数に対する経済的考慮及び特定の培養時間に対して観察される味の向上の程度に対する考慮によって決定することができる。
【００４５】
[0046]本発明において使用するための培養物は、菌糸体を含んでなるいずれもの液体組織培養物、例えば液内又は浮遊培養物であることができる。液内培養物は、一般的に撹拌され、一方、浮遊培養物は最小で撹拌され、これは、菌糸体がマット様の形態で増殖することを可能にする。本発明で使用する培養物の部分は、菌糸体、培養上清又は濾液、或いはいずれもの部分又はその画分を含む、培養物のいずれもの、そして全ての部分又はその一部を含む。一つの態様において、培養物は、使用の前にブレンド（機械的に又は他の方法で）し、そして全体のブレンドされた物質又はその幾つかの画分を使用することができる。幾つかの態様において、使用される培養物の部分は、通常“細胞培養物上清”又は“細胞培養物濾液”として理解される培養物の部分、即ち、菌糸体細胞から分離された培養物の流体部分であり、そして菌糸体細胞に富むが、しかし、なおある程度の流体部分を含有するものである菌糸体細胞部分とは反対に、比較的小さい又は少ない量の菌糸体を含有する。従って、この流体組織培養物の上清も、目に見えなくとも、又は顕微鏡下で容易に見えても、更に菌糸体を通常含有するものであることは理解されるべきである。培養物のこの部分は、本明細書中で便宜上“菌糸体を含まない”部分と呼ばれるが、然しながら、記述したように、この部分が、目に見えなくとも、ある程度の最小量の菌糸体を通常含有するものであることは理解されるべきである。
【００４６】
[0047]培養物の菌糸体を含まない部分を調製するために、菌糸体は、細胞培養物上清流体を分離するために当技術において既知のいずれもの方法によって除去することができる。例えば、培養物は、濾液を得るために、例えば０．２μｍフィルター等のような当技術において既知のいずれもの手段によって濾過することができる。別の方法として、培養物の菌糸体を含まない部分は、遠心によって収集することができる。培養された液内菌糸体液体組織培養物の収集された菌糸体を含まない部分は、本明細書中で収集された上清、上清、上清流体、Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ上清、濾液、産物、及び類似の用語、例えば味向上産物又は苦味遮断物質／遮断性産物、或いは苦味遮断物質と呼ぶことができる。
【００４７】
[0048]所望により、液体組織培養物は、生きた生物体の生存率を減少又は除去するために、当技術において既知の方法、例えば低温殺菌又は滅菌によって処理することができる。収集された液体組織培養物は、分離の前又は後のいずれかに、当技術において既知の方法によって低温殺菌或いは滅菌して、培養物の菌糸体を含まない部分を得ることができる。一つの態様において、この物質は、２３ｐｓｉの２５０°Ｆの飽和水蒸気へのおよそ３０〜５０分の曝露のような条件下で滅菌される。別の方法として、この物質は、１６０°Ｆ〜１７０°Ｆの熱水浴中で２０分間、２回保持し、実行間にこれを室温に冷却し戻すことによって低温殺菌することができる。
【００４８】
[0049]この低温殺菌又は滅菌された液体組織培養物は、新規な飲料として、又はその粉末を新規な食材、食品成分、栄養補助食品、食事成分、又は食品添加物として使用することができ、これは、各種の産物の適用において０．１〜４０，０００ｐｐｍ使用することができる。
【００４９】
[0050]濾液（収集された上清）は、濃縮物、希釈物、又は乾燥粉末を産生するために、当業者によって決定されるように調節されたその体積又は液体成分を有することができる。一つの態様において、濾液は、所望により、開放空気乾燥の使用、小バッチデシケーター、真空（ｖａｃｕｕｆｏｒｍ）乾燥機、流動床又は噴霧乾燥器、或いは凍結乾燥器を含む当技術において既知のいずれもの方法によって乾燥して、液体を粉末に乾燥することができる。一つの態様において、濾液は、滅菌／低温殺菌後に乾燥される。
【００５０】
[0051]得られた粉末又は味向上産物は、食品産物の味を向上するために使用することができ、そしていずれもの食品／飲料に、本明細書中に記載するように０．１〜４０，０００ｐｐｍの、そして適用の性質によるがなおより高い濃度で混合することができる。使用する味向上産物の量の決定は、食品試料中の好ましくない味成分を減少又は排除し、及び／又は味の欠点を導入せずに食品試料の味を向上させることを目標とした試行によって、当業者によって決定されることができる。
【００５１】
[0052]各種の食品産物と共に使用する乾燥粉末としてのＣ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ上清（苦味遮断物質）の濃度の一般的な範囲は、以下の表９に示される。特定の産物と使用するためのＣ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ上清の最適な比を味の特性に基づいて決定することは、当技術の技術の範囲内である。例えば、高すぎる濃度のＣ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ上清において、風味向上効果は止まるものであり、又は産物は最終物質へ風味の欠点を導入するものである。低すぎる濃度の上清において、不十分な程度の風味改善があるものである。農産物質、例えば典型的には２００〜４５０ｐｐｍで使用されるステビオールグリコシド混合物の濃度は、理想的な苦味遮断物質の濃度を最終的に決定する。例えば、一連の希釈／濃縮を、上清の使用の上限及び下限閾値濃度の決定における道具として使用することができる。苦味遮断物質を、物質に、いくらであれ試験することを欲する初期の所望の濃度で処方する。これが所望の風味の変化を提供した場合、風味の変化が不十分となるまで、濃度を半減する。効果があったもの及びなかったものの間の最終濃度を採用し、そして苦味遮断物質をその平均で適用する。それが効果があった場合、これの効果がなくなるまで濃度を半減し、そして効果のないものの上の濃度が、下限閾値濃度である。これの効果がなかった場合、効果があるまで濃度を倍増する。テイスターが、風味改善効果が最終的に喪失するか、又は苦味遮断物質が風味の欠点を導入し始めるかを決定する上限閾値濃度に達するまで、下限閾値濃度を無制限に倍増する。
【００５２】
[0053]粉末は、更に再水和し、濾過し、そして再乾燥して、産物の溶解性を増加することもできる。噴霧乾燥の産物は高い溶解性を有し、そして所望により使用前に再水和されず、そして単純に粉末として食品産物と混合することができる（特に非栄養性甘味料の適用において）。別の方法として、味向上食品産物は、液体の形態の食品産物と混合することができ、そして所望により食品産物／味向上産物を、一緒に乾燥することができる。上清粉末は、更に流動床において乾燥させることもでき、又は流動化産物上に噴霧乾燥させることもでき、そして産物を含んでなるステビオールグリコシド混合物の産生におけるように凝集させることさえできる。
【００５３】
[0054]本発明は、本明細書中に開示される方法によって製造される苦味遮断物質産物を含む。
[0055]本発明は、−２０℃で維持することができる５０％（容量／容量）グリセロールに調節された液体組織原液の形態で、製造場所に播種源を提示する手段によって、ヒトの食品として世界中で液内菌糸体を培養する有効な手段を提案する。少なくとも試験された両方の株（Ｇ．ｌｕｃｉｄｕｍ及びＣ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ）に対するこの培養物は、より長く−２０℃の貯蔵庫に保存されるほど、再生時に活発に増加する現象を示し、そして増殖の前に温める必要はない。
【００５４】
[0056]本発明は、更に、液内菌糸体液体組織培養物を培地中で培養し、上清の菌糸体を含まない部分を収集し、そして培養物の菌糸体を含まない部分を食品産物として使用することを含んでなる食品産物を産生する方法を提供する。使用するために適当な真菌、適当な培地、上清の菌糸体を含まない部分を収集する適当な方法は、本明細書中に開示される。培養物流体（又は条件付けされた培地）の菌糸体を含まない部分は、それ自体食品産物として使用することができる。菌糸体を含まない部分は、本明細書中に開示されるように、所望により濃縮し、希釈し又は乾燥することができ、そして使用前に本明細書中に開示されるようにいずれもの食品産物と混合することができる。本発明は、更に、本明細書中に開示される方法によって製造される食品産物を含む。
【００５５】
[0057]以下の実施例は、例示の目的のみのために提供され、そして本発明の範囲を制約することは意図していない。
【実施例】
【００５６】
実施例１
[0058]ＲＯで濾過された水性抽出物を、１ポンドの有機の／新鮮なジャガイモ及びニンジン、並びに１Ｌの有機果実ジュースから製造して、１Ｌの培養物を６つの４Ｌエルレンマイヤーフラスコ中に作製した。これらの培養物を、０〜１００％の範囲のステビア／茶水性抽出物から製造した。フラスコをオートクレーブにかけ、そして冷却した。冷却した時点で、Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ  ＷＣ８５９の対数期のペトリ皿培養物を、フラスコに増殖させ、そしてその後撹拌した（１／２インチ旋回半径で６０ＲＰＭ）。十分に発育した液体組織培養物（対数期で増殖）が、約３〜４日で観察された。２０ｇのステビア葉を食品グレードの容器に入れ、そして約１００ｍＬの先に記載したような対数期の液体培養物を、この容器に加えた。容器に蓋をし、約７５°Ｆで約６時間インキュベートした。インキュベーション後、ステビア葉を軽く低温殺菌し、そして乾燥させた。５ｇの処理されたステビア葉をコップ１杯の水に浸し、濾過し、そしてランダム化二重盲検で、未処理のステビア葉と共に５人のテスターによって味見した。テスターは、処理されたステビアが、未処理の対照ステビアと比較して増加した甘味を有し、そして軽減された苦味／甘草の後味を有することを見出した。
【００５７】
実施例２
[0059]ＲＯで濾過された水性抽出物を、１ポンドの有機の／新鮮なジャガイモ及びニンジン、並びに１Ｌの有機果実ジュースから製造して、４Ｌエルレンマイヤーフラスコ中の６つの１Ｌの培養物を作製した。これらの培養物を０〜１００％の茶の水性抽出物から製造した。フラスコをオートクレーブにかけ、そして冷却した。冷却した時点で、Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ  ＷＣ８５９株の対数期のペトリ皿培養物を、フラスコに増殖させ、そしてその後撹拌した（１／２インチ旋回半径で６０ＲＰＭ）。十分にコロニー化した対数期の液体組織培養物が約３〜４日で観察された。およそ２０ｇの緑茶葉を、食品グレードの容器に入れ、そして約１００ｍＬの先に記載したような対数期培養物を、この容器に加えた。容器に蓋をし、約７５°Ｆで約６時間インキュベートした。インキュベーションが終了した後、味試験により、緑茶葉を軽く濯ぎ、穏やかに低温殺菌し、そして乾燥させた。５ｇの処理された緑茶葉を乾燥させ、そしてコップ１杯の水で煎じ、濾過し、そしてランダム化二重盲検で、未処理の対照の緑茶葉と共に５人のテスターによって味見した。テスターは、処理された緑茶葉が、対照の緑茶葉と比較して減少した苦味を有することを見出した。
【００５８】
実施例３
[0060]清潔な１．５Ｌの柄付きガラス瓶を、１７ｇ／Ｌの寒天、８ｇ／Ｌの有機ジャガイモデンプン、０．８ｇ／Ｌの有機ニンジン粉、及び２０ｍＬ／Ｌの有機マンゴピューレからなる１Ｌの培地で満たした。柄付きガラス瓶の蓋をゆるくねじって留め、そしてスズホイルで覆った。本発明者等は、注ぎを容易にするその柄のために、これらの柄付きガラス瓶の使用を推奨する。ビンをオートクレーブに入れ、そして２．３３時間の液体サイクルで滅菌した。サイクルが完了した時点で、ビンを層流の滅菌フードに急いで入れて、これに触ることができるまで冷却し、これは約１．３時間を要した。この時点で、ビンの内容物を１２０個のペトリ皿に注意深く注いだ。プレートをフード中で一晩冷却した。
【００５９】
[0061]冷却した後、培養物原液からの真菌を直近に注いだプレートに播種するために使用した。これらの真菌を同一の培地上で増殖した。真菌を、前日から寒天を含むメイソンボールジャー中でオートクレーブ処理された１２インチの竹串で移した。これらの真菌の種の一つは、Ｈｅｒｉｃｉｕｍ  ｅｒｉｎａｃｅｕｓである。１５個のＨ．ｅｒｉｎａｃｅｕｓプレートを製造し、そして一つを、播種後８日目に４Ｌのエルレンマイヤーフラスコへの増殖のために選択した。増殖の７日目に、４Ｌのエルレンマイヤーフラスコを調製した。フラスコは、８ｇ／Ｌのトウモロコシ粉、４ｇ／Ｌの有機カラスムギ粉、２ｇ／Ｌの有機マンゴピューレ及び２ｇ／Ｌの有機ジャガイモデンプン粉からなる１．５Ｌの培地を含有していた。フラスコを１インチの旋回半径で６日間６０ＲＰＭで振盪した。この培養の２日目、１００Ｌのバイオリアクターを５８ＬのＲＯ水で満たし、そして８００ｇの有機ジャガイモデンプン粉、８０ｇの有機ニンジン粉、５０ｇのブレンドした有機ソフト白小麦粒及び１Ｌの有機マンゴピューレを含有する、ＲＯ水で２Ｌに調節された濃縮物をリアクターに注いで、６０Ｌの体積にした。リアクターはジャケット加熱されていないために、１２１〜１２２℃を注入し、当業者によって設置された圧力容器の頭部に接続されたマニホールドを通ってチャンバーに排気した。バイオリアクターは４．５時間の液体サイクルで滅菌され、そして水蒸気の凝縮により８５Ｌまで満たされた。リアクターは、熱拡散により４日間で室温に冷却され、この時点で播種された。
【００６０】
[0062]容器は、空気入口管路に対する接続を有し、これは、二つのインラインの０．２μｍのオートクレーブ処理可能なカプセル式フィルターを通して、逆止弁及びボール弁を通ってチャンバーに空気を供給する、１／４馬力の、１１５Ｖ、５０／６０Ｈｚの空気圧縮機から構成されていた。全体のカプセル式フィルター弁の機構は、バイオリアクター及び培地を滅菌する前に滅菌され、そしてバイオリアクターに滅菌操作で取り付けられた。８６時間後冷却した時点で、容器を加圧するために、空気が入れられたが、しかし空気を排気マニホールドを通して流す代わりに、空気の排気マニホールドは閉じられ、そして容器の頭部の圧力計は直ちに除去され、正に加圧されたノズルを作った。液内Ｈ．ｅｒｉｎａｃｅｕｓ培養物の蓋が除去され、エルレンマイヤーフラスコの上部５インチが当業者によってプロパントーチで燃焼され、そして、フラスコが冷却した時点で（８秒の待ち時間）、フラスコを正に加圧されたノズルを通してバイオリアクターに注いだ。圧力計をリアクターに戻し、そして空気排気マニホールドを直ちに開放した。リアクターの圧力は、入口及び出口逆止弁のクラッキング圧力である、２〜３ｐｓｉで平衡した。Ｈ．ｅｒｉｎａｃｅｕｓ播種物のペトリ皿をＱＣのために製造した。
【００６１】
[0063]空気はそのままで供給し、そしてバイオリアクターを１３日間培養した。培養物は、２日目に対数期に入ったように見受けられ、そして９日目までに０．５ｃｍの球とともに活気に満ちて増殖し、ここで、細胞の分裂は停止したように見受けられた。１３日目に、バイオリアクターの内容物を、へりを持つ１０インチの壁を持つ６ｍ２のプラスチックの桶に注ぎ、桶は食品グレードのプラスチックシートで覆われていた。桶は、約４フィートの高さに保たれ、そして二つのファンが桶の上の空気を吹き飛ばすために位置していた。４日後、培養物は乾燥し、そしてビーフジャーキー様の物質が回収され、そしてブレンドされて、７２４ｇの粉末が得られた。粉末は、非常に軽いニンジンの味を、そして主として非常にニュートラルな穀草類風の味を有していた。
【００６２】
実施例４
[0064]１．５Ｌの、ＲＯ水中の８ｇ／Ｌの有機ジャガイモデンプン及び０．８ｇ／Ｌの有機ニンジン粉で満たされた４Ｌのフラスコを滅菌し、そして２週間経ったＰ１  Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ培養物で播種した。７日間室温の６０ＲＰＭ（１インチ旋回半径）で培養した後、培養物を三枚重ねたコーヒーフィルターを通して濾過し、１６５°Ｆで４０分間低温殺菌し、そして１４０°Ｆの小バッチデシケーターに一晩置いた。翌日、乾燥した物質を、４．５ｇ／Ｌの収率で全体で６．７５ｇを収集してブレンドした。５ｇの回収した物質を、１ＬのＲＯ水に注ぎ、そして１５分間間欠的に振盪した。この培養原液から、５３．３４ｍＬの溶液を、１．６ＬのＲＯ水中に溶解した１ｋｇの９７％レバウジオシドＡを含有するもう一つの溶液に加えた。この溶液を徹底的に混合し、そして小バッチデシケーターで一晩乾燥し、そして得られた物質をブレンドして清潔なジップロックバッグ中に包装し、２，６６７ｐｐｍの収集された濾液の固体の濃度を有していた。１５０ｍｇのこの混合物を５００ｍＬのＲＯ水に加えて、０．８ｐｐｍのＣ．ｓｉｎｅｎｓｉｓの上清固体に対して３００ｐｐｍの９７％レバウジオシドＡの溶液を作製した。対照に対して味の試験をした場合、Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ上清固体を含有するステビオールグリコシド混合物の後味が、対照の３００ｐｐｍの９７％レバウジオシドＡ溶液と比較して検出不可能であることが全ての３人の発明者にとって明白であった。
【００６３】
実施例５
[0065]１．５Ｌの、ＲＯ水中の８ｇ／Ｌの有機ジャガイモデンプン及び０．８ｇ／Ｌの有機ニンジン粉で満たされた４Ｌのフラスコを滅菌し、そして２週間経ったＰ１  Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ培養物で播種した。１５日間室温の６０ＲＰＭ（１インチ旋回半径）で培養した後、培養物を三枚重ねたコーヒーフィルターを通して濾過し、１６５°Ｆで４０分間低温殺菌し、そして１４０°Ｆの小バッチデシケーターに一晩置いた。翌日、乾燥した物質を、４．１ｇ／Ｌの収率で全体で６．１５ｇ収集し、そしてブレンドした。５ｇの回収した物質を、１ＬのＲＯ水に注ぎ、そして１５分間間欠的に振盪した。この培養原液から、５３．３４ｍＬの溶液を、１．６ＬのＲＯ水中に溶解した１ｋｇの９７％レバウジオシドＡを含有するもう一つの溶液に加えた。この溶液を徹底的に混合し、そして小バッチデシケーターで一晩乾燥し、そして得られた物質をブレンドして清潔なジップロックバッグ中に包装し、２，６６７ｐｐｍの収集された濾液の固体の濃度を有していた。１５０ｍｇのこの混合物を５００ｍＬのＲＯ水に加えて、０．８ｐｐｍのＣ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ上清固体に対して３００ｐｐｍの９７％レバウジオシドＡの溶液を作製した。対照に対して味の試験をした場合、Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ上清固体を含有するステビオールグリコシド混合物の後味が、対照の３００ｐｐｍの９７％レバウジオシドＡ溶液と比較して検出不可能であることが全ての３人の発明者にとって明白であった。
【００６４】
実施例６
[0066]１．５Ｌの、ＲＯ水中の８ｇ／Ｌの有機ジャガイモデンプン及び０．８ｇ／Ｌの有機ニンジン粉で満たされた４Ｌのフラスコを滅菌し、そして２週間経ったＰ１  Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ培養物で播種した。３５日間室温の６０ＲＰＭ（１インチ旋回半径）で培養した後、培養物を三枚重ねたコーヒーフィルターを通して濾過し、１６５°Ｆで５０分間低温殺菌し、そして１４０°Ｆの小バッチデシケーターに一晩置いた。翌日、乾燥した物質を、５．５ｇ／Ｌの収率で全体で８．２５ｇを収集してブレンドした。５ｇの回収した物質を、１ＬのＲＯ水に注ぎ、そして１５分間間欠的に振盪し、そして中火に調節したホットプレート上で１５分間加熱した。この培養原液から、５３．３４ｍＬの溶液を、１．６ＬのＲＯ水中に溶解した１ｋｇの９７％レバウジオシドＡを含有するもう一つの溶液に加えた。この溶液を徹底的に混合し、そして小バッチデシケーターで一晩乾燥し、そして得られた物質をブレンドして清潔なジップロックバッグ中に包装し、２，６６７ｐｐｍの収集された濾液の固体の濃度を有していた。１５０ｍｇのこの混合物を５００ｍＬのＲＯ水に加えて、０．８ｐｐｍのＣ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ上清固体に対して３００ｐｐｍの９７％レバウジオシドＡの溶液を作製した。対照に対して味の試験をした場合、Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ上清固体を含有するステビオールグリコシド混合物の後味が、対照の３００ｐｐｍの９７％レバウジオシドＡ溶液と比較して検出不可能であることが全ての３人の発明者にとって明白であった。
【００６５】
実施例７
[0067]１．５Ｌの、ＲＯ水中の８ｇ／Ｌの有機ジャガイモデンプン及び０．８ｇ／Ｌの有機ニンジン粉で満たされた４Ｌのフラスコを滅菌し、そして２週間経ったＰ１  Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ培養物で播種した。７日間室温の６０ＲＰＭ（１インチ旋回半径）で培養した後、培養物をチーズクロスを通して濾過し、１６０°Ｆで５０分間低温殺菌し、そして１３０°Ｆの小バッチデシケーターに一晩置いた。翌日、乾燥した物質を、４．４ｇ／Ｌの収率で全体で６．６ｇを収集してブレンドした。５ｇの回収した物質を、１ＬのＲＯ水に注ぎ、そして１５分間間欠的に振盪した。この培養原液から、５３．３４ｍＬの溶液を、１．６ＬのＲＯ水中に溶解した１ｋｇの９７％レバウジオシドＡを含有するもう一つの溶液に加えた。この溶液を徹底的に混合し、そして小バッチデシケーターで一晩乾燥し、そして得られた物質をブレンドして清潔なジップロックバッグ中に包装し、２，６６７ｐｐｍの収集された濾液の固体の濃度を有していた。１５０ｍｇのこの混合物を５００ｍＬのＲＯ水中に加えて、０．８ｐｐｍのＣ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ上清固体に対して３００ｐｐｍの９７％レバウジオシドＡの溶液を作製した。対照に対して味の試験をした場合、Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ上清固体を含有するステビオールグリコシド混合物の後味が、対照の３００ｐｐｍの９７％レバウジオシドＡ溶液と比較して検出不可能であることが全ての３人の発明者にとって明白であった。
【００６６】
実施例８
[0068]１．５Ｌの、ＲＯ水中の８ｇ／Ｌの有機ジャガイモデンプン及び０．８ｇ／Ｌの有機ニンジン粉で満たされた４Ｌのフラスコを滅菌し、そして２週間経ったＰ１  Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ培養物で播種した。１０日間室温の６０ＲＰＭ（１インチ旋回半径）で培養した後、培養物を三枚重ねたコーヒーフィルターを通して濾過し、１７０°Ｆで４０分間低温殺菌し、そして１４０°Ｆの小バッチデシケーターに一晩置いた。翌日、乾燥した物質を、４．６ｇ／Ｌの収率で全体で６．９ｇを収集してブレンドした。５ｇの回収した物質を、１ＬのＲＯ水に注ぎ、そして１５分間間欠的に振盪した。この培養原液から、４０．００ｍＬの溶液を、１ｋｇの９７％レバウジオシドＡを含有する蒸留水のもう一つの１．６Ｌの溶液に加えた。この溶液を徹底的に混合し、そして小バッチデシケーターで一晩乾燥し、そして得られた物質をブレンドして清潔なジップロックバッグ中に包装し、２，０００ｐｐｍの収集された濾液の固体の濃度を有していた。１５０ｍｇのこの混合物を５００ｍＬのＲＯ水に加えて、０．６ｐｐｍのＣ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ上清固体に対して３００ｐｐｍの９７％レバウジオシドＡの溶液を作製した。対照に対して味の試験をした場合、Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ上清固体を含有するステビオールグリコシド混合物の後味が、対照の３００ｐｐｍの９７％レバウジオシドＡ溶液と比較して検出不可能であることが全ての３人の発明者にとって明白であった。このステビオールグリコシドの混合物は、０．８ｐｐｍの上清固体を含有する混合物と非常に類似する味がした。
【００６７】
実施例９
[0069]１．５Ｌの、ＲＯ水中の８ｇ／Ｌの有機ジャガイモデンプン及び０．８ｇ／Ｌの有機ニンジン粉で満たされた４Ｌのフラスコを滅菌し、そして１０日経ったＰ１  Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ培養物で播種した。４日間室温の６０ＲＰＭ（１インチ旋回半径）で培養した後、培養物をチーズクロスを通して濾過し、そして１４０°Ｆの小バッチデシケーターに一晩置いた。翌日、乾燥した物質を、４．５ｇ／Ｌの収率で全体で６．７５ｇを収集してブレンドした。５ｇの回収した物質を、１ＬのＲＯ水に注ぎ、そして１５分間間欠的に振盪した。この培養原液から、５３．３４ｍＬの溶液を、１．６ＬのＲＯ水中に溶解した１ｋｇの９７％レバウジオシドＡを含有する蒸留水のもう一つの溶液に加えた。この溶液を徹底的に混合し、そして小バッチデシケーターで一晩乾燥し、そして得られた物質をブレンドして清潔なジップロックバッグ中に包装し、２，６６７ｐｐｍの収集された濾液の固体の濃度を有していた。１５０ｍｇのこの混合物を５００ｍＬのＲＯ水中に加えて、０．８ｐｐｍのＣ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ上清固体に対して３００ｐｐｍの９７％レバウジオシドＡの溶液を作製した。対照に対して味の試験をした場合、Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ上清固体を含有するステビオールグリコシド混合物の後味が、対照の３００ｐｐｍの９７％レバウジオシドＡ溶液と比較して検出不可能であることが全ての３人の発明者にとって明白であった。
【００６８】
実施例１０
[0070]１．５Ｌの、ＲＯ水中の８ｇ／Ｌの有機ジャガイモデンプン及び０．８ｇ／Ｌの有機ニンジン粉で満たされた４Ｌのフラスコを滅菌し、そして２週間経ったＰ１  Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ培養物で播種した。７日間室温の６０ＲＰＭ（１インチ旋回半径）で培養した後、培養物を三枚重ねたコーヒーフィルターを通して濾過し、そして１４０°Ｆの小バッチデシケーターに一晩置いた。翌日、乾燥した物質を、４．５ｇ／Ｌの収率で全体で６．７５ｇを収集してブレンドした。５ｇの回収した物質を、１ＬのＲＯ水に注ぎ、そして１５分間間欠的に振盪した。この培養原液から、５３．３４ｍＬの溶液を、１．６ＬのＲＯ水中に溶解された１ｋｇの９７％レバウジオシドＡを含有するもう一つの溶液に加えた。この溶液を徹底的に混合し、そして小バッチデシケーターで一晩乾燥し、そして得られた物質をブレンドして清潔なジップロックバッグ中に包装し、２，６６７ｐｐｍの収集された濾液の固体の濃度を有していた。１５０ｍｇのこの混合物を５００ｍＬのＲＯ水に加えて、０．８ｐｐｍのＣ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ上清固体に対して３００ｐｐｍの６０％レバウジオシドＡの溶液を作製した。対照に対して味の試験をした場合、Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ上清固体を含有するステビオールグリコシド混合物の後味が、対照の３００ｐｐｍの６０％レバウジオシドＡ溶液と比較して検出不可能であることが全ての３人の発明者にとって明白であった。
【００６９】
実施例１１
[0071]１．５Ｌの、ＲＯ水中の８ｇ／Ｌの有機ジャガイモデンプン及び０．８ｇ／Ｌの有機ニンジン粉で満たされた４Ｌのフラスコを滅菌し、そして２０日経ったＰ１  Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ培養物で播種した。７日間室温の６０ＲＰＭ（１インチ旋回半径）で培養した後、培養物を０．２μｍの真空フィルターを通して濾過し、そして１５０°Ｆの小バッチデシケーターに一晩置いた。翌日、乾燥した物質を、４．３ｇ／Ｌの収率で全体で６．４５ｇを収集してブレンドした。５ｇの回収した物質を、１ＬのＲＯ水に注ぎ、そして１５分間間欠的に振盪した。この培養原液から、５３．３４ｍＬの溶液を、１．６ＬのＲＯ水中に溶解した１ｋｇの６０％レバウジオシドＡを含有するもう一つの溶液に加えた。この溶液を徹底的に混合し、そして小バッチデシケーターで一晩乾燥し、そして得られた物質をブレンドして清潔なジップロックバッグ中に包装し、２，６６７ｐｐｍの収集された濾液の固体の濃度を有していた。１５０ｍｇのこの混合物を５００ｍＬのＲＯ水中に加えて、０．８ｐｐｍのＣ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ上清固体に対して３００ｐｐｍの６０％レバウジオシドＡの溶液を作製した。対照に対して味の試験をした場合、Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ上清固体を含有するステビオールグリコシド混合物の後味が、対照の３００ｐｐｍの６０％レバウジオシドＡ溶液と比較して検出不可能であることが全ての３人の発明者にとって明白であった。
【００７０】
実施例１２
[0072]実施例４の方法を使用する６０％レバウジオシドＡの試料に対する苦味遮断活性に関する培地の影響を決定するための、以下に示すのように培地を変化させた場合の、１６種の異なった培地処方。以下の表１は、試験された培地及び感覚の反応の要約を示す。
【００７１】
【表１】
0006616826.tif 000002
【００７２】
[0073]表１は、全ての処方が機能するとは限らないが、多くの処方は苦味遮断物質の産生のために適用可能であることを示す。本発明者等は、本明細書中に記載されるようなジャガイモ／ニンジン又はトウモロコシ／カラスムギの処方を推奨する。
【００７３】
実施例１３
[0074]開示される苦味遮断物質の分子組成が、８ｇ／Ｌの有機ジャガイモデンプン粉及び０．８ｇ／Ｌの有機ニンジン粉のＲＯ水培地中で増殖された２００ＬのＣ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ液内培養物の二つの４０Ｌのバッチから製造された試料から決定された。培養物は、合計２３０ｇの粉末の苦味遮断物質（約２．９ｇ／Ｌの収率）のために、４１及び４８日目に回収され、これは一緒に混合された。１５０ｇの試料を、第三者の組成分析のために使用した。技術的に二重に採取されたデータは、このバッチの苦味遮断物質が８６．９％の炭水化物であることを示す。この物質は、更に濃度の下降する順序で、水、灰分、脂肪及びタンパク質で構成される。食品供給に対して異質の分子は、この研究では検出されなかった。これらのデータは、表２に要約され、一方、更に詳細な情報は、後続の表に示される。キロカロリー（食品のラベルでは通常‘カロリー’と呼ばれる）も同様に列挙されている。苦味遮断物質は、典型的には、培養の８〜１２日目に加工されるが、しかしこの方法は、産物の最も濃縮された形態、即ち最も転換された培地の理解を明らかにするために採用された。
【００７４】
【表２】
0006616826.tif 000003
【００７５】
[0075]苦味遮断物質の脂質含量は、その疎水性の性質の幾つかの画分の原因となる可能性がある。苦味遮断物質は、水溶液中で１４０〜１６０°Ｆに加熱された場合により早く可溶化する。室温において、バッチは、５００ｍＬ中に０．３ｇを可溶化するために間欠的な撹拌を伴って１５分を要した。表３に示す脂質含量は、１０種の異なった分子から構成され、そして興味あることに、両方の必須脂肪酸を十分に含有する。これらの分子及び後続の表中の全ての分子の分子構造は、添付物中に示される。平均の合計は、これらのデータが全脂質プロファイルの９９．３％を占めることを示す。
【００７６】
【表３】
0006616826.tif 000004
【００７７】
[0076]表４に示す脂肪含量は、試料の飽和、ポリ−及び一不飽和脂肪の内訳、並びにオメガ酸の内訳を提供する。
【００７８】
【表４】
0006616826.tif 000005
【００７９】
[0077]以下に示す表５は、苦味遮断物質の塩、幾つかの元素、小分子及びビタミンの内訳を詳述する。
【００８０】
【表５】
0006616826.tif 000006
【００８１】
[0078]表６に示す苦味遮断物質の希薄なアミノ酸含量は、アスパラギン酸、グルタミン酸、システイン及びリシンから構成される。
【００８２】
【表６】
0006616826.tif 000007
【００８３】
[0079]表７は、苦味遮断物質の炭水化物含量及び内訳を示す。β−グルカン及びキチンは、全真菌バイオマスの良好な指標（表５に示したエルゴステロール及びＤ−マンニトールのような）である。これらのデータは、炭水化物プロファイルのおよそ９９．８％を占める。
【００８４】
【表７】
0006616826.tif 000008
【００８５】
[0080]以下に示す表８は、苦味遮断物質のＮＢＳＴ含量を概略記載する。データは、サルベージ経路が増殖のために必要なＮＢＳＴ物質を産生するために活性化されることを示す。苦味遮断物質のＮＢＳＴ含量が、如何に必要最低限のものだけを備えたＣ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ粉末のＮＢＳＴ含量の組であるかに気付かれたい。非保持ＮＢＳＴは細胞内になければならない。
【００８６】
【表８】
0006616826.tif 000009
【００８７】
ＧＣ／ＭＳ研究は、三つの揮発性生体分子が苦味遮断物質中に存在することを明らかにした。これらは、ヘキサデカン酸メチルエステル、９−オクタデカン酸メチルエステル及びステアリン酸メチルである。これらの濃度は、標準物質を試験した時点で、決定されるものである。
【００８８】
実施例１４
[0081]Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ上清粉末（苦味遮断物質）を、実施例４に概略記載した方法によって製造し、そしてｐｐｍ基準で食品産物と共に使用した。
【００８９】
【表９】
0006616826.tif 000010
【００９０】
[0082]各種の態様の記載が例示及び説明の目的のために提示されてきたが、しかしこれは、本発明を徹底的であるか又は開示された形態に限定することを意図していない。本発明の範囲は、以下の特許請求の範囲によってのみ制限される。多くの改変及び変更は、当業者にとって明白であるものである。記載され、そして図に示された態様は、本発明の原理、実際の適用を説明し、そして他の当業者の、予期される特定の使用に適した各種の改変を伴う各種の態様に対する本発明の理解を可能にするために選択され、そして説明された。本明細書中に引用された全ての参考文献は、その全てが参照により援用される。