(57)【要約】【課題】  酸化タンパク質分解酵素の新たな活性増強化剤を提供する。  本発明の酸化タンパク質分解酵素活性増強化剤は、ヒシ、ステビア、ローズマリー、タイム、キク、セイボリー、ヨモギ、クリ、スペアミント、マジョラム、ペパーミント、レモンバーム、オールスパイス、シソ、バジルおよびキャラウェイからなる群から選択される少なくとも１種類の植物の抽出物を含むことを特徴とする。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒシ、ステビア、ローズマリー、タイム、キク、セイボリー、ヨモギ、クリ、スペアミント、マジョラム、ペパーミント、レモンバーム、オールスパイス、シソ、バジルおよびキャラウェイからなる群から選択された少なくとも１種類の植物の抽出物を含むことを特徴とする、酸化タンパク質分解酵素活性増強化剤。
【請求項２】
２種類以上の前記植物の抽出物を含む、請求項１記載の酸化タンパク質分解酵素活性増強化剤。
【請求項３】
請求項１または２記載の酸化タンパク質分解酵素活性増強化剤を試料に添加することにより、前記試料中の酸化タンパク質分解酵素の活性を増強する工程を含むことを特徴とする、酸化タンパク質分解酵素活性増強化方法。
【請求項４】
請求項１または２記載の酸化タンパク質分解酵素活性増強化剤を試料に添加することにより、前記試料中の酸化タンパク質分解酵素による酸化タンパク質または糖化タンパク質の分解を促進する工程を含むことを特徴とする、タンパク質分解促進方法。
【請求項５】
請求項１または２記載の酸化タンパク質分解酵素活性増強化剤を含むことを特徴とする、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、酸化タンパク質分解酵素活性増強化剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
生体内における酸化反応および糖化反応は、細胞および組織に悪影響を及ぼすことが知られている。特に、酸化反応または糖化反応を受けたタンパク質、すなわち酸化タンパク質または糖化タンパク質は、その生成および蓄積が、糖尿病合併症、アルツハイマー病、白内障、動脈硬化等の疾病、ならびに皮膚等の組織の老化および機能低下の原因となっている（非特許文献１）。このことから、前記酸化タンパク質および前記糖化タンパク質は、傷害タンパク質と呼ばれている。特に、タンパク質への糖の非酵素的付加反応により生成される最終生成物ＡＧＥｓ（advanced  glycation  end  products：終末糖化合物）の蓄積が問題視されている。【０００３】
通常、これらの傷害タンパク質は、プロテアソーム、および酸化タンパク質分解酵素（Oxidized  Protein  Hydrolase、以下「ＯＰＨ」という。）等のタンパク質分解酵素により分解除去される。しかし、これらの酵素活性は、加齢と共に低下する（非特許文献２）ため、前記酵素の活性を増強させることによる、前記疾病、前記組織の老化および組織の機能低下の治療ならびに予防の可能性に期待が寄せられている。【０００４】
前記プロテアソームは、タンパク質を分解する巨大な酵素複合体であり、２６Ｓプロテアソーム、２０Ｓプロテアソーム等がある。前記プロテアソームを活性化する物質は、大豆サポニン、ケール抽出物、シリビン、シラン化合物およびアヤメ抽出物等が知られている（特許文献１〜５）。また、前記ＯＰＨは、セリンプロテアーゼの一種であり、これを活性化する物質は、ローマカミツレ、ドクダミ、セイヨウサンザシおよびブドウ等が知られている（特許文献６）。しかしながら、近年、さらに強力な新規の活性増強化剤が求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００２−１７９５９２号公報
【特許文献２】特許第４２５５４３２号公報
【特許文献３】特開２００８−３０８５０５号公報
【特許文献４】特開２００４−９１３９８号公報
【特許文献５】特開２００７−９９６５０号公報
【特許文献６】国際公開第２０１１／００４７３３号
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】後藤ら、実験医学、１８（増刊）、２３２４−２３３１頁、１９９８年
【非特許文献２】Ｂｒｅｕｓｉｎｇ  Ｎ．ら、Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、Ｖｏｌ．３８９、ｐ．２０３−２０９（２００８）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
そこで、本発明は、新たなＯＰＨの活性増強化剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明のＯＰＨ活性増強化剤は、ヒシ、ステビア、ローズマリー、タイム、キク、セイボリー、ヨモギ、クリ、スペアミント、マジョラム、ペパーミント、レモンバーム、オールスパイス、シソ、バジルおよびキャラウェイからなる群から選択された少なくとも１種類の植物の抽出物を含むことを特徴とする。【０００９】
本発明のＯＰＨ活性増強化方法は、本発明のＯＰＨ活性増強化剤を、ＯＰＨを含む試料に添加する工程を含むことを特徴とする。【００１０】
本発明のタンパク質分解促進方法は、本発明のＯＰＨ活性増強化剤を、タンパク質とＯＰＨとを含む試料に添加する工程を含み、前記タンパク質が、酸化タンパク質および糖化タンパク質の少なくとも一方を含むことを特徴とする。【００１１】
本発明の治療方法は、本発明のＯＰＨ活性増強化剤を生体に投与し、酸化タンパク質または糖化タンパク質の生成が原因となる疾病、組織の老化および組織の機能低下を、治療することを特徴とする。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、ＯＰＨの活性の増強化が可能である。このため、本発明は、傷害タンパク質、すなわち、酸化タンパク質およびＡＧＥ化タンパク質等の糖化タンパク質の分解を促進できる。したがって、本発明は、例えば、生体内に生成した前記傷害タンパク質が原因となる疾病、組織の老化および機能低下の治療ならびに予防が可能である。さらに、本発明は、古来利用されてきた植物の抽出物を利用するため、安全性に優れ、また、前記植物の抽出物は大量に入手可能なため、生産性にも優れる。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明において、酵素活性の増強化は、例えば、酵素の活性化および失活抑制のいずれの意味であってもよい。本発明において、前記ＯＰＨは、アシルアミノ酸遊離酵素（ＡＡＲＥ）またはアシルペプチドヒドロラーゼ（ＡＣＰＨ）ともいう。
【００１４】
本発明のＯＰＨ活性増強化剤は、前述のように、ヒシ、ステビア、ローズマリー、タイム、キク、セイボリー、ヨモギ、クリ、スペアミント、マジョラム、ペパーミント、レモンバーム、オールスパイス、シソ、バジルおよびキャラウェイからなる群から選択される少なくとも１種類の植物の抽出物を含むことを特徴とする。前記ＯＰＨ活性増強化剤は、前述の植物のうち、例えば、１種類の植物の抽出物を含んでもよいし、２種類以上の植物の抽出物を含んでもよく、全ての植物の抽出物を含んでもよい。
【００１５】
本発明のＯＰＨ活性増強化剤によれば、ＯＰＨ活性を増強できるため、酸化タンパク質またはＡＧＥ化タンパク質等の糖化タンパク質を効率良く分解することができる。本発明のＯＰＨ活性増強化剤によれば、例えば、ＯＰＨ活性の増強化により、ＡＧＥ化アルブミンまたはＡＧＥ化コラーゲンを効率良く分解することができる。アルブミンは、一般に、広く全身に存在するタンパク質であることが知られている。このため、本発明のＯＰＨ活性増強化剤は、前記ＡＧＥ化アルブミンを効率良く分解できることから、例えば、全身に効果的であり、具体例として新陳代謝の向上に有用といえる。また、コラーゲンは、一般的に、皮膚、腱、骨、軟骨等に存在するタンパク質であることが知られている。このため、本発明のＯＰＨ活性増強化剤は、前記ＡＧＥ化コラーゲンを効率良く分解できることから、例えば、肌の改善に有用といえる。
【００１６】
ＯＰＨ活性を増強することで、前記ＡＧＥ化アルブミンを効率良く分解する場合、本発明のＯＰＨ活性増強化剤は、例えば、ヒシ、ステビア、ローズマリー、タイム、キク、セイボリーおよびヨモギからなるＡ群から選択された少なくとも１種類の植物の抽出物を含むことが好ましく、より好ましくは、ヒシ、ステビア、ローズマリーおよびタイムからなる群から選択された少なくとも１種類の植物の抽出物を含む。ＯＰＨ活性を増強することで、前記ＡＧＥ化コラーゲンを効率良く分解する場合、本発明のＯＰＨ活性増強化剤は、例えば、クリ（渋皮）、タイム、セイボリー、ローズマリー、スペアミント、キク、ヒシおよびステビアからなるＢ群から選択された少なくとも１種類の植物の抽出物を含むことが好ましく、より好ましくは、クリ（渋皮）、タイム、セイボリー、ローズマリー、スペアミントおよびキクからなる群から選択された少なくとも１種類の植物の抽出物を含む。
【００１７】
ＯＰＨ活性を増強することで、前記ＡＧＥ化アルブミンおよび前記ＡＧＥ化コラーゲンを効率良く分解する場合、本発明のＯＰＨ活性増強化剤は、例えば、前記Ａ群から選択された少なくとも１種類の植物の抽出物と、前記Ｂ群から選択された少なくとも１種類の植物の抽出物とを含むことが好ましい。
【００１８】
前記ＯＰＨ活性増強化剤は、中でも、ヒシ、ステビア、ローズマリー、タイムおよびキクからなる群から選択された少なくとも１種類の植物の抽出物を含むのが好ましい。
【００１９】
前記ヒシ（学術名Ｔｒａｐａ ｊａｐｏｎｉｃａ）は、ヒシ科ヒシ属の植物である。前記ヒシの抽出物は、例えば、花、花穂、穂、果皮、果実、茎、枝、葉、根茎、根皮、根および種子等のいずれの抽出物であってもよく、１つの部位の抽出物でもよく、２つ以上の部位の抽出物でもよい。前記抽出物は、例えば、植物体全体の抽出物であってもよい。前記ヒシの抽出物において、前記抽出部位は、特に制限されず、例えば、種皮の抽出物があげられる。
【００２０】
前記ステビア（学術名Ｓｔｅｖｉａ ｒｅｂａｕｄｉａｎａ）は、キク科ステビア属の植物である。前記ステビアの抽出物は、例えば、花、花穂、穂、果皮、果実、茎、枝、葉、根茎、根皮、根および種子等のいずれの抽出物であってもよく、１つの部位の抽出物でもよく、２つ以上の部位の抽出物でもよい。前記抽出物は、例えば、植物体全体の抽出物であってもよい。前記ステビアの抽出物において、前記抽出部位は、特に制限されず、例えば、葉の抽出物があげられる。
【００２１】
前記ローズマリー（学術名Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）は、シソ科ロスマリナス属の植物である。前記ローズマリーの抽出物は、例えば、花、花穂、穂、果皮、果実、茎、枝、葉、根茎、根皮、根および種子等のいずれの抽出物であってもよく、１つの部位の抽出物でもよく、２つ以上の部位の抽出物でもよい。前記抽出物は、例えば、植物体全体の抽出物であってもよい。前記ローズマリーの抽出物において、前記抽出部位は、特に制限されず、例えば、葉の抽出物があげられる。
【００２２】
前記タイム（学術名Ｔｈｙｍｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ）は、シソ科イブキジャコウソウ属の植物である。前記タイムの抽出物は、例えば、花、花穂、穂、果皮、果実、茎、枝、葉、根茎、根皮、根および種子等のいずれの抽出物であってもよく、１つの部位の抽出物でもよく、２つ以上の部位の抽出物でもよい。前記抽出物は、例えば、植物体全体の抽出物であってもよい。前記タイムの抽出物において、前記抽出部位は、特に制限されず、例えば、葉の抽出物があげられる。
【００２３】
前記キク（学術名Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ ｍｏｒｉｆｏｌｉｕｍ）は、キク科キク属の植物である。前記キクの抽出物は、例えば、花、花穂、穂、果皮、果実、茎、枝、葉、根茎、根皮、根および種子等のいずれの抽出物であってもよく、１つの部位の抽出物でもよく、２つ以上の部位の抽出物でもよい。前記抽出物は、例えば、植物体全体の抽出物であってもよい。前記キクの抽出物において、前記抽出部位は、特に制限されず、例えば、花弁の抽出物があげられ、具体例として、食用菊の花弁である。
【００２４】
前記セイボリー（学術名Ｓａｔｕｒｅｉａ ｈｏｒｔｅｎｓｉｓ）は、シソ科キダチハッカ属の植物である。前記セイボリーの抽出物は、例えば、花、花穂、穂、果皮、果実、茎、枝、葉、根茎、根皮、根および種子等のいずれの抽出物であってもよく、１つの部位の抽出物でもよく、２つ以上の部位の抽出物でもよい。前記抽出物は、例えば、植物体全体の抽出物であってもよい。前記セイボリーの抽出物において、前記抽出部位は、特に制限されず、例えば、葉および花穂の抽出物があげられる。
【００２５】
前記ヨモギ（学術名Ａｒｔｅｍｉｓａ ｉｎｄｉｃａ）は、キク科ヨモギ属の植物である。前記ヨモギの抽出物は、例えば、花、花穂、穂、果皮、果実、茎、枝、葉、根茎、根皮、根および種子等のいずれの抽出物であってもよく、１つの部位の抽出物でもよく、２つ以上の部位の抽出物でもよい。前記抽出物は、例えば、植物体全体の抽出物であってもよい。前記ヨモギの抽出物において、前記抽出部位は、特に制限されず、例えば、葉の抽出物があげられる。
【００２６】
前記クリ（学術名Ｃａｓｔａｎｅａ ｃｒｅｎａｔａ）は、ブナ科クリ属の植物である。前記クリの抽出物は、例えば、花、花穂、穂、果皮、果実、茎、枝、葉、根茎、根皮、根および種子等のいずれの抽出物であってもよく、１つの部位の抽出物でもよく、２つ以上の部位の抽出物でもよい。前記抽出物は、例えば、植物体全体の抽出物であってもよい。前記クリの抽出物において、前記抽出部位は、特に制限されず、例えば、外皮の抽出物または渋皮の抽出物があげられる。
【００２７】
前記スペアミント（学術名Ｍｅｎｔｈａ ｓｐｉｃａｔａ）は、シソ科ハッカ属の植物である。前記スペアミントの抽出物は、例えば、花、花穂、穂、果皮、果実、茎、枝、葉、根茎、根皮、根および種子等のいずれの抽出物であってもよく、１つの部位の抽出物でもよく、２つ以上の部位の抽出物でもよい。前記抽出物は、例えば、植物体全体の抽出物であってもよい。前記スペアミントの抽出物において、前記抽出部位は、特に制限されず、例えば、葉の抽出物があげられる。
【００２８】
前記マジョラム（学術名Ｏｒｉｇａｎｕｍ ｍａｊｏｒａｎａ）は、シソ科ハナハッカ属の植物である。前記マジョラムの抽出物は、例えば、花、花穂、穂、果皮、果実、茎、枝、葉、根茎、根皮、根および種子等のいずれの抽出物であってもよく、１つの部位の抽出物でもよく、２つ以上の部位の抽出物でもよい。前記抽出物は、例えば、植物体全体の抽出物であってもよい。前記マジョラムの抽出物において、前記抽出部位は、特に制限されず、例えば、葉の抽出物があげられる。
【００２９】
前記ペパーミント（学術名Ｍｅｎｔｈａ ｐｉｐｅｒｉｔａ）は、シソ科ハッカ属の植物である。前記ペパーミントの抽出物は、例えば、花、花穂、穂、果皮、果実、茎、枝、葉、根茎、根皮、根および種子等のいずれの抽出物であってもよく、１つの部位の抽出物でもよく、２つ以上の部位の抽出物でもよい。前記抽出物は、例えば、植物体全体の抽出物であってもよい。前記ペパーミントの抽出物において、前記抽出部位は、特に制限されず、例えば、葉の抽出物があげられる。
【００３０】
前記レモンバーム（学術名Ｍｅｌｉｓｓａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）は、シソ科コウスイハッカ属の植物である。前記レモンバームの抽出物は、例えば、花、花穂、穂、果皮、果実、茎、枝、葉、根茎、根皮、根および種子等のいずれの抽出物であってもよく、１つの部位の抽出物でもよく、２つ以上の部位の抽出物でもよい。前記抽出物は、例えば、植物体全体の抽出物であってもよい。前記レモンバームの抽出物において、前記抽出部位は、特に制限されず、例えば、葉の抽出物があげられる。
【００３１】
前記オールスパイス（学術名Ｐｉｍｅｎｔａ ｄｉｏｉｃａ）は、フトモモ科オールスパイス属の植物である。前記オールスパイスの抽出物は、例えば、花、花穂、穂、果皮、果実、茎、枝、葉、根茎、根皮、根および種子等のいずれの抽出物であってもよく、１つの部位の抽出物でもよく、２つ以上の部位の抽出物でもよい。前記抽出物は、例えば、植物体全体の抽出物であってもよい。前記オールスパイスの抽出物において、前記抽出部位は、特に制限されず、例えば、果実および葉の抽出物があげられる。
【００３２】
前記シソ（学術名Ｐｅｒｉｌｌａ ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ）は、シソ科シソ属の植物である。前記シソの抽出物は、例えば、花、花穂、穂、果皮、果実、茎、枝、葉、根茎、根皮、根および種子等のいずれの抽出物であってもよく、１つの部位の抽出物でもよく、２つ以上の部位の抽出物でもよい。前記抽出物は、例えば、植物体全体の抽出物であってもよい。前記シソの抽出物において、前記抽出部位は、特に制限されず、例えば、穂の抽出物があげられ、具体例として、ホジソ（シソの穂の若いもの）の抽出物があげられる。
【００３３】
前記バジル（学術名Ｏｃｉｍｕｍ ｂａｓｉｌｉｃｕｍ）は、シソ科メボウキ属の植物である。バジルは、例えば、イタリア料理等に多く使われる品種として、「バジリコ」、「バジル」あるいは「スイートバジル(Sweet  basil)」の名で知られている。前記バジルの抽出物は、例えば、花、花穂、穂、果皮、果実、茎、枝、葉、根茎、根皮、根および種子等のいずれの抽出物であってもよく、１つの部位の抽出物でもよく、２つ以上の部位の抽出物でもよい。前記抽出物は、例えば、植物体全体の抽出物であってもよい。前記バジルの抽出物において、前記抽出部位は、特に制限されず、例えば、葉の抽出物があげられる。
【００３４】
前記キャラウェイ（学術名Ｃａｒｕｍ ｃａｒｖｉ）は、セリ科ヒメウイキョウ属の植物である。前記キャラウェイの抽出物は、例えば、花、花穂、穂、果皮、果実、茎、枝、葉、根茎、根皮、根および種子等のいずれの抽出物であってもよく、１つの部位の抽出物でもよく、２つ以上の部位の抽出物でもよい。前記抽出物は、例えば、植物体全体の抽出物であってもよい。前記キャラウェイの抽出物において、前記抽出部位は、特に制限されず、例えば、葉の抽出物があげられる。
【００３５】
本発明において、前記抽出物は、例えば、前述のような抽出部位または植物体全体から得ることができる。前記抽出物の抽出方法は、特に制限されず、例えば、溶媒抽出法、圧搾法等の公知の方法があげられる。
【００３６】
前記溶媒抽出法に用いる抽出溶媒は、特に制限されず、例えば、水性溶媒、有機溶媒等があげられる。前記水性溶媒は、特に制限されず、例えば、水等があげられる。前記有機溶媒は、特に制限されず、例えば、低級アルコールおよび多価アルコール等のアルコール、ケトン、エステル、エーテル、ニトリル、芳香族化合物および塩化アルキル等があげられる。前記低級アルコールは、特に制限されず、例えば、メタノール、エタノールおよび無水エタノール等があげられる。前記多価アルコールは、特に制限されず、例えば、プロピレングリコールおよび１，３−ブチレングリコール等があげられる。前記ケトンは、特に制限されず、例えば、アセトンおよびギ酸等があげられる。前記エステルは、特に制限されず、例えば、酢酸エチル等があげられる。前記エーテルは、特に制限されず、例えば、ジエチルエーテルおよびジオキサン等があげられる。前記ニトリルは、特に制限されず、例えば、アセトニトリル等があげられる。前記芳香族化合物は、特に制限されず、例えば、ベンゼン、トルエンおよびキシレン等があげられる。前記塩化アルキルは、特に制限されず、例えば、クロロホルム等があげられる。
【００３７】
前記抽出溶媒は、例えば、１種類の溶媒であってもよいし、２種類以上の溶媒を組み合わせてもよい。また、前記抽出溶媒は、例えば、前記水性溶媒と前記有機溶媒との混合溶媒であってもよい。前記混合溶媒は、特に制限されず、例えば、エタノール水溶液等の低級アルコール水溶液等があげられる。前記混合溶媒における前記有機溶媒の割合は、特に制限されず、例えば、１〜９９体積％である。
【００３８】
前記溶媒抽出法は、例えば、前述の抽出部位または植物体全体を原料とし、これを前記抽出溶媒に浸漬して実施できる。前記原料は、例えば、前記浸漬前に、洗浄、乾燥および粉砕等の処理を行ってもよい。前記原料が２種類以上の場合、各原料をそれぞれ抽出処理してもよいし、２種類以上の原料の混合物を抽出処理してもよい。前者の場合、例えば、得られた各抽出物を混合し、混合抽出物としてもよい。前記混合抽出物における各抽出物の混合割合は、特に制限されず、例えば、等量（重量）であってもよい。後者の場合、例えば、前記混合物中の各原料の割合は、特に制限されず、例えば、等量（重量）であってもよい。
【００３９】
抽出に用いる前記原料と前記抽出溶媒との割合は、特に制限されず、前記原料１００ｇ（乾燥重量）に対して、例えば、前記抽出溶媒１〜１０００Ｌ、１〜１００Ｌである。前記浸漬時間は、例えば、前記原料および前記抽出溶媒の種類および量等に応じて適宜設定でき、特に制限されない。具体的には、前記原料１００ｇを前記抽出溶媒１０Ｌに浸漬する場合、前記浸漬時間は、例えば、０．５時間以上、０．５〜２４時間である。
【００４０】
また、前記抽出時の前記抽出溶媒の温度は、室温であってもよいし、室温以上または室温以下であってもよく、特に制限されない。前記抽出溶媒が水性溶媒の場合、前記抽出処理は、例えば、熱水抽出が好ましい。前記熱水抽出の場合、前記水性溶媒の温度は、特に制限されず、下限は、例えば、３０℃以上、５０℃以上であり、範囲は、例えば、５０〜１００℃である。また、前記熱水抽出の処理時間は、例えば、前記原料の種類および量、ならびに前記水性溶媒の量等に応じて適宜設定でき、特に制限されない。具体的には、前記原料１００ｇ（乾燥重量）を前記水性溶媒１０Ｌで抽出する場合、前記処理時間は、下限が、例えば、０．５時間以上であり、範囲は、例えば、０．５〜２４時間である。
【００４１】
前記抽出物は、前記抽出処理後、例えば、精製処理等を施してもよい。前記精製処理は、特に制限されないが、例えば、蒸留処理、ろ過処理、クロマトグラフィー処理および乾燥処理等の公知の方法があげられる。
【００４２】
前記抽出方法としては、例えば、水抽出法、アルコール抽出法、ミセル化抽出法、超臨界抽出法等が具体例としてあげられる。水抽出法によれば、例えば、より安価で、より安全な抽出物を得ることができる。前記アルコール抽出法によれば、例えば、水では抽出できない成分も回収でき、また、殺菌も可能である。前記ミセル化抽出法によれば、例えば、水に溶ける成分とアルコールに溶ける成分の両方を抽出することができる。前記超臨界抽出法によれば、より優れた抽出効率で抽出物を得ることができる。
【００４３】
前記ろ過処理は、例えば、限外ろ過処理があげられる。前記限外ろ過処理において、分子量分画の条件は、特に制限されず、回収する画分の分子量は、例えば、１０ｋＤａ以下である。
【００４４】
前記抽出物の形態は、特に制限されないが、例えば、液状、ペースト状および粉末状等があげられ、後述するＯＰＨ活性増強化剤の形態に応じて、適宜選択できる。
【００４５】
前記ＯＰＨ活性増強化剤は、前述の抽出物のみを含んでもよいし、前述の抽出物とその他の成分を含む組成物であってもよい。前記成分は、例えば、賦形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、吸収促進剤、乳化剤、安定化剤および防腐剤等の各種添加剤を含んでもよい。前記ＯＰＨ活性増強化剤中の前記各種添加剤の配合量は、特に制限されず、適宜設定できる。
【００４６】
前記ＯＰＨ活性増強化剤の形態は、特に制限されないが、例えば、固形状、ゲル状および液状等があげられる。前記形態の具体例としては、例えば、散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤、被覆錠剤、カプセル剤、トローチ剤、点眼剤、液剤、貼付剤、ローション剤および軟膏剤等があげられる。
【００４７】
本発明のＯＰＨ活性増強化剤は、例えば、生体に投与することにより、生体内におけるＯＰＨの活性を増強化可能である。このため、前記ＯＰＨ活性増強化剤は、後述するように、例えば、生体内の酸化タンパク質またはＡＧＥ化タンパク質等の糖化タンパク質が原因となる疾病や、組織の老化および機能低下等の治療方法または予防方法に利用できる。前記ＯＰＨ活性増強化剤は、例えば、一般食品および栄養補助食品等の食品、化粧料、医薬部外品および医薬品等のその他の成分と配合し、組成物として投与してもよい。前記組成物中の前記ＯＰＨ活性増強化剤の配合量は、例えば、前記その他の成分および投与対象等に応じて適宜設定可能であり、特に制限されない。本発明のＯＰＨ活性増強化剤は、例えば、生体内の前記酸化タンパク質または前記糖化タンパク質が原因となる疾病や、組織の老化および機能低下等の治療医薬または予防医薬ともいえる。また、本発明の医薬組成物は、前記本発明のＯＰＨ活性増強化剤を含むことを特徴とする。
【００４８】
つぎに、本発明のＯＰＨ活性増強化方法は、前述のように、本発明のＯＰＨ活性増強化剤を、ＯＰＨを含む試料に添加することにより、前記試料中の酸化タンパク質分解酵素の活性を増強する工程を含む。本発明の方法は、例えば、前記本発明のＯＰＨ活性増強化剤の記載を援用できる。本発明のＯＰＨ活性増強化方法において、前記試料は、例えば、生体から採取した生体試料でもよいし、非生体試料でもよい。
【００４９】
本発明のタンパク質分解促進方法は、前述のように、本発明のＯＰＨ活性増強化剤を、タンパク質とＯＰＨとを含む試料に添加することにより、前記試料中の酸化タンパク質分解酵素による酸化タンパク質または糖化タンパク質の分解を促進する工程を含む。本発明の方法は、例えば、前記本発明のＯＰＨ活性増強化剤の記載を援用できる。本発明のタンパク質分解促進方法において、前記試料は、例えば、生体から採取した生体試料でもよいし、非生体試料でもよい。
【００５０】
前記酸化タンパク質および前記糖化タンパク質は、例えば、加齢または老化病態を示す疾患に伴い修飾を受けたタンパク質、紫外線曝露等により酸化障害を受けたタンパク質、糖により修飾を受けたタンパク質等があげられる。前記タンパク質の修飾は、例えば、酸化、糖化、カルボニル化、アシル化等があげられる。前記カルボニル化には、例えば、ヒドロキシノネナール化、マロンジアルデヒド化、グリコールアルデヒド化、ピラリン化等が含まれる。具体的には、特に制限されず、例えば、前記酸化タンパク質は、酸化オキシレドキシン等があげられ、前記糖化タンパク質は、ＨｂＡ１ｃ、グリコアルブミン、ＡＧＥｓ（終末糖化産物）化タンパク質等があげられる。
【００５１】
本発明の治療方法は、本発明のＯＰＨ活性増強化剤を生体に投与し、酸化タンパク質または糖化タンパク質の生成が原因となる疾病、組織の老化および／または組織の機能低下を、治療することを特徴とする。本発明の治療方法は、予防方法でもよい。前記疾病は、例えば、糖尿病合併症、アルツハイマー病、白内障、動脈硬化、骨粗鬆症、リウマチおよび変形性骨関節疾患等があげられる。前記組織は、例えば、皮膚、神経、腎臓、血管、網膜、水晶体、骨、関節、脳組織、肝臓および赤血球等があげられる。
【００５２】
投与対象となる生体は、特に制限されず、例えば、ヒトまたは非ヒト動物があげられ、後者は、例えば、サル、ウシ、ブタ、イヌおよびネコ等の非ヒト哺乳類、ニワトリ等の鳥類ならびに魚介類等があげられる。前記投与方法は、特に制限されず、例えば、経口投与および非経口投与があげられる。前記非経口投与は、例えば、経皮投与および静脈注射等の注射等があげられる。
【００５３】
前記ＯＰＨ活性増強化剤の形態は、特に制限されず、例えば、前述の形態等があげられる。また、前記ＯＰＨ活性増強化剤は、前述のように、その他の成分と配合した組成物として投与してもよい。前記組成物中の前記ＯＰＨ活性増強化剤の配合量は、前述のように、適宜設定可能であり、特に制限されない。前記ＯＰＨ活性増強化剤の投与量は、例えば、動物種、年齢等に応じて適宜設定でき、特に制限されない。健常成人が経口摂取する場合、前記ＯＰＨ活性増強化剤の摂取量は、前記抽出物(固形物)換算で、下限が、例えば、１０ｍｇ、５０ｍｇであり、上限が、２０００ｍｇ、１０００ｍｇであり、その範囲が、例えば、１０〜２０００ｍｇ、５０〜１０００ｍｇである。前記本発明のＯＰＨ活性増強化剤は、例えば、前記疾病、組織の老化および／または機能低下の治療薬ともいえ、予防薬の意味も含む。
【００５４】
本発明の抽出物は、酸化タンパク質または糖化タンパク質の生成が原因となる疾病、組織の老化および／または機能低下の治療に使用するための、ヒシ、ステビア、ローズマリー、タイム、キク、セイボリー、ヨモギ、クリ、スペアミント、マジョラム、ペパーミント、レモンバーム、オールスパイス、シソ、バジルおよびキャラウェイからなる群から選択された少なくとも１種類の抽出物である。前記治療は、予防でもよい。
【００５５】
本発明の抽出物は、前記ＯＰＨ活性増強化剤または前記治療医薬もしくは予防医薬の製造に使用するための、ヒシ、ステビア、ローズマリー、タイム、キク、セイボリー、ヨモギ、クリ、スペアミント、マジョラム、ペパーミント、レモンバーム、オールスパイス、シソ、バジルおよびキャラウェイからなる群から選択された少なくとも１種類の抽出物である。
【００５６】
本発明の組成物は、酸化タンパク質または糖化タンパク質の生成が原因となる疾病、組織の老化および機能低下の治療に使用するための、ヒシ、ステビア、ローズマリー、タイム、キク、セイボリー、ヨモギ、クリ、スペアミント、マジョラム、ペパーミント、レモンバーム、オールスパイス、シソ、バジルおよびキャラウェイからなる群から選択される少なくとも１種類の抽出物を含む組成物である。前記治療は、予防でもよい。本発明の抽出物および組成物において、前記各抽出物、および、前記抽出物を含む組成物は、前述のとおりであり、組み合わせ、使用方法等も同様である。
【００５７】
本発明の抽出物は、前記ＯＰＨ活性増強化剤または前記治療医薬もしくは予防医薬の製造に使用するための、ヒシ、ステビア、ローズマリー、タイム、キク、セイボリー、ヨモギ、クリ、スペアミント、マジョラム、ペパーミント、レモンバーム、オールスパイス、シソ、バジルおよびキャラウェイからなる群から選択される少なくとも１種類の抽出物を含む組成物である。
【実施例】
【００５８】
つぎに、本発明の実施例について説明する。ただし、本発明は、以下の実施例により制限されない。【００５９】
［実施例１］
本例では、ＡＧＥ化ヒト血清アルブミンを指標として、各植物抽出物によるＯＰＨ活性への影響を評価した。【００６０】
（１）植物の抽出サンプルの調製
食品成分表２０１２（女子栄養大学出版）に従って、植物をカットし、以下に示す植物の植物サンプルを得た。前記植物サンプルを、乾燥機（大紀式食品乾燥機プチミニ、大紀産業）を用いて、６５℃で２０時間乾燥させた。得られた乾燥サンプルを、粉砕機（ラボミルサーＬＭ−ＰＬＵＳ、大阪ケミカル）で粉砕して粉末化した。そして、前記粉末サンプル２ｇを８０℃の蒸留水４０ｍＬに懸濁し、１時間抽出処理を行った後、遠心分離して上清を得た。これらの上清を、抽出サンプルとした。【００６１】
ヒシ：種皮
ステビア：葉
ローズマリー：葉
タイム：葉
キク（食用菊）：花弁
セイボリー：葉および花穂
ヨモギ：葉
クリ：外皮または渋皮
スペアミント：葉
マジョラム：葉
ペパーミント：葉
レモンバーム：葉
オールスパイス：果実および葉
シソ：穂紫蘇
バジル：葉
キャラウェイ：葉【００６２】
（２）ＯＰＨによるＡＧＥｓ分解活性の測定
４０ｍｇ／ｍＬ  ヒト血清アルブミン（code：A-16532、シグマ）、１００ｍｍｏｌ／Ｌ  リン酸緩衝液（ｐＨ７．４）、２ｍｏｌ／Ｌ  グルコースおよび蒸留水を、体積比２：５：１：２となるように混合し、この混合液を６０℃で４０時間インキュベートして、ＡＧＥ化ヒト血清アルブミン（ＡＧＥ−ＨＳＡ）を調製した。これをＯＰＨの分解活性測定用の基質として使用した。【００６３】
ＯＰＨは、０．５Ｕ／ｍＬ  Acylamino-acid-releasing  enzyme（ＡＡＲＥ、ｃｏｄｅ７３０１、タカラバイオ）を使用した（以下、同様）。そして、下記組成の反応液を調製し、３７℃で９０分、インキュベートした。インキュベート後、７％  過塩素酸（ＰＣＡ）水溶液１００μＬを添加し、２０分間氷冷した後、４℃で遠心分離を行い、沈殿物を回収した。前記沈殿物を、２００ｍｍｏｌ／Ｌ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）３５０μＬで溶解し、得られた溶液を、９６ウェル黒色マイクロプレートの各ウェルに２５０μＬずつ添加した。そして、前記各ウェルについて、ＡＧＥｓ由来の蛍光（励起波長３７０ｎｍ、検出波長４４０ｎｍ）を、マイクロプレートリーダーで測定した。同時に、コントロールとして、前記抽出サンプルを添加しない反応液を調製し、同様にして、測定を行った。そして、測定値を、５μｇ／ｍＬ  硫酸キニーネ溶液の蛍光値を１，０００とした相対値に換算し、下記式からＯＰＨのＡＧＥｓ分解活性増強率（％）を算出した。下記式から算出されるＡＧＥｓ分解活性増強率は、コントロール（抽出サンプル未添加；以下、Ｃと表記）におけるＯＰＨの分解活性に対する実施例（抽出サンプル添加；以下、Ｓと表記）における分解活性の増強率を示す。
ＯＰＨのＡＧＥｓ分解活性増強率（％）＝[１−（Ｓ／Ｃ）]×１００【００６４】
【表１】
2014126199.tif 000002
【００６５】
これらの結果を下記表２に示す。下記表２に示すように、前記抽出サンプルを添加した実施例は、コントロールよりも優れたＯＰＨの活性増強化を示し、特に好ましくは、ヒシ抽出物は、著しい活性増強化を示した。このように、各植物抽出物によれば、ＯＰＨの活性を増強できることから、これによって、ＡＧＥ化タンパク質の分解除去を促進可能であるといえる。【００６６】
【表２】
2014126199.tif 000003
【００６７】
［実施例２］
本例では、ＡＧＥ化ヒト血清アルブミンを指標として、限外濾過した各植物抽出物によるＯＰＨ活性への影響を評価した。【００６８】
（１）植物の抽出サンプルの調製
以下に示す植物の乾燥サンプルを準備し、前記実施例１と同様にして抽出処理を行った後、遠心分離により上清を回収した。そして、前記上清を、分画分子量１０ｋＤａの限外濾過フィルター（商品名アミコンウルトラ（Amicon  Ultra）−0.5  遠心式フィルターユニット  ウルトラセル（Ultracel）−10メンブレン装着、メルク社（メルクミリポア事業本部）製）を用いて限外濾過し、分子量１０ｋＤａ未満の低分子量画分を回収し、抽出サンプルとした。【００６９】
ヒシ：種皮
ステビア：葉
ローズマリー：葉
タイム：葉
キク（食用菊）：花弁
セイボリー：葉および花穂
スペアミント：葉【００７０】
（２）ＯＰＨによるＡＧＥｓ分解活性の測定
前記実施例１のＡＧＥ化ヒト血清アルブミン（ＡＧＥ−ＨＳＡ）を、ＯＰＨの分解活性測定用の基質として使用した。そして、下記組成の４種類の反応液（Ａ〜Ｄ）を調製した（ｎ＝３）。反応液において、各成分は、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、抽出サンプル、ＯＰＨ、ＡＧＥ−ＨＳＡの順で添加した。【００７１】
【表３】
2014126199.tif 000004
【００７２】
前記反応液を混合した後、３７℃で１８時間、インキュベートした。インキュベート後、７％  過塩素酸（ＰＣＡ）水溶液１００μＬを添加し、２０分間氷冷した後、４℃で遠心分離を行い、沈殿物を回収した。前記沈殿物を、２００ｍｍｏｌ／Ｌ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）３５０μＬで溶解し、得られた溶液を、９６ウェル黒色マイクロプレートの各ウェルに２００μＬずつ添加した。そして、前記各ウェルについて、ＡＧＥｓ由来の蛍光（励起波長３７０ｎｍ、検出波長４４０ｎｍ）を、マイクロプレートリーダーで測定した。そして、測定値を、５μｇ／ｍＬ  硫酸キニーネ溶液の蛍光値を１，０００とした相対値に換算し、下記式からＯＰＨのＡＧＥｓ分解活性増強率（％）を算出した。
ＯＰＨのＡＧＥｓ分解活性増強率（％）＝[１−（A-C-D）/（B-C）]×１００
A：反応液Aの相対値
B：反応液Bの相対値
C：反応液Cの相対値
D：反応液Dの相対値【００７３】
これらの結果を下記表４に示す。下記表４に示すように、限外濾過により低分子量画分として回収した前記サンプルを添加した実施例は、コントロールよりも優れたＯＰＨの活性増強化を示し、特に、タイムは、著しい活性増強化を示した。このように、各植物抽出物によれば、ＯＰＨの活性を増強できることから、これによって、ＡＧＥ化タンパク質の分解除去を促進可能であるといえる。【００７４】
【表４】
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【００７５】
［実施例３］
本例では、ＡＧＥ化コラーゲンを指標として、各植物抽出物によるＯＰＨ活性への影響を評価した。【００７６】
（１）植物の抽出サンプルの調製
以下に示す植物の乾燥サンプルを準備し、前記実施例１と同様にして抽出処理を行い、抽出サンプルを調製した。【００７７】
ヒシ：種皮
ステビア：葉
ローズマリー：葉
タイム：葉
キク（食用菊）：花弁
セイボリー：葉および花穂
ヨモギ：葉
クリ：外皮または渋皮
スペアミント：葉
マジョラム：葉
ペパーミント：葉
レモンバーム：葉【００７８】
（２）ＯＰＨによるＡＧＥｓ分解活性の測定
コラーゲン（コラーゲンタイプＩ  ウシ真皮由来（ペプシン可溶化）、ニッピ社製）を用いてＡＧＥ化コラーゲンを調製し、これを、ＯＰＨの分解活性測定用の基質として使用した。前記ヒト血清アルブミンに代えてコラーゲンを使用したこと、ＡＧＥ化コラーゲンの調製方法ではインキュベート時間の４０時間を１０日間としたこと以外は、前記実施例１と同様にして、ＡＧＥｓ分解活性の測定を行った。【００７９】
これらの結果を下記表５に示す。下記表５に示すように、前記抽出サンプルを添加した実施例は、コントロールよりも優れたＯＰＨの活性増強化を示し、特に好ましくは、ローズマリーの抽出物およびクリ（渋皮）の抽出物は、著しい活性増強化を示した。このように、各植物抽出物によれば、ＯＰＨの活性を増強できることから、これによって、ＡＧＥ化タンパク質の分解除去を促進可能であるといえる。【００８０】
【表５】
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【００８１】
以上、実施形態を参照して本願発明を説明したが、本願発明は上記実施形態に限定されるものではない。本願発明の構成や詳細には、本願発明のスコープ内で当業者が理解し得る様々な変更をすることができる。【００８２】
この出願は、２０１３年２月１８日に出願された日本出願特願２０１３−０２９３３９を基礎とする優先権を主張し、その開示の全てをここに取り込む。
【産業上の利用可能性】
【００８３】
本発明によれば、ＯＰＨ活性の増強化が可能である。このため、本発明は、酸化タンパク質および糖化タンパク質等の傷害タンパク質の分解促進に利用でき、生体内に生成した傷害タンパク質が原因となる疾病、組織の老化および組織の機能低下の治療や予防にも利用できる。また、本発明は、古来利用されてきた植物の抽出物を利用するため、安全性に優れ、前記植物の抽出物が大量入手可能なため、生産性にも優れる。本発明は、工業製品、食品、医薬等の幅広い分野に適用可能である。
【国際調査報告】
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