(57)【要約】  多糖を含む細胞における有用物質の産生促進用組成物、多糖を含む細胞培養用培地、多糖を含む細胞培養用培地を用いて細胞を培養する工程を含む有用物質の製造方法が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
連結されたヘキソース残基を含む多糖であって、１位の炭素と３位の炭素、１位の炭素と４位の炭素、または１位の炭素と６位の炭素で連結されている多糖を含む、細胞における有用物質産生促進用組成物。
【請求項２】
連結されたヘキソース残基を含む多糖であって、１位の炭素と３位の炭素、１位の炭素と４位の炭素、または１位の炭素と６位の炭素で連結されている多糖を含む、細胞培養用培地。
【請求項３】
ヘキソースが、アルデヒド基を有する糖である、請求項１または２に記載の組成物または培地。
【請求項４】
ヘキソースが、デオキシ糖、カルボン酸を含む糖またはアミノ糖である、請求項１または２に記載の組成物または培地。
【請求項５】
ヘキソースが、アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イドーズ、ガラクトース、タロース、フコース、ラムノース、フクロースおよびそれらの誘導体からなる群から選択される少なくとも１つの糖である、請求項１から４のいずれかに記載の組成物または培地。
【請求項６】
ヘキソース残基が、β１,３結合、α１,３結合、β１,４結合、α１,４結合、β１,６結合及びα１,６結合からなる群から選択される少なくとも１つの結合により連結されている、請求項１から５のいずれかに記載の組成物または培地。
【請求項７】
式（１）：
【化１】
2014157483.tif 000032
・・・（１）
（式中、
Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ＯＳＯ３ＨまたはＯＺ１であり；
Ｚ１は、下記式（２）
【化２】
2014157483.tif 000033
・・・（２）
または、下記式（３）、
【化３】
2014157483.tif 000034
・・・（３）
であり；
Ｒ２は、ＨまたはＯＨであり；
Ｒ３は、Ｈ、ＣＨ３またはＣＨ２ＯＨであり；
Ｒ４は、ＨまたはＣＨ３であり；
Ｒ５は、Ｈであり；
Ｒ６は、ＯＨまたはＯＳＯ３Ｈであり；
Ｘ１およびＹ１は一方がＯＨで、もう一方がＨであり；
Ｘ２およびＹ２は一方がＯＨで、もう一方がＨである）
で表わされる１種または２種以上の糖が、β１,３結合、α１,３結合、β１,４結合、α１,４結合、β１,６結合及びα１,６結合からなる群から少なくとも１つ選択される結合により連結されている多糖またはその誘導体を含む、請求項１から６のいずれかに記載の組成物または培地。
【請求項８】
式（４）：
【化４】
2014157483.tif 000035
・・・（４）
Ｒ７は、ＨまたはＯＨであり；
Ｒ８は、ＨまたはＯＨであり；
Ｒ９は、Ｈ、ＣＯＯＨ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＯＯＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３またはＣＯＯＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＯＨであり；
Ｒ１０は、Ｈ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３またはＣＯＯＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＯＨであり；
Ｒ１１は、ＯＨまたはＯＺ２であり；
Ｚ２は、下記式（５）
【化５】
2014157483.tif 000036
・・・（５）
であり；
Ｒ１２は、Ｈであり；
Ｘ３およびＹ３は一方がＯＨで、もう一方がＨである）
で表わされる１種または２種以上の糖が、β１,３結合、α１,３結合、β１,４結合、α１,４結合、β１,６結合及びα１,６結合からなる群から少なくとも１つ選択される結合により連結されている多糖またはその誘導体を含む、請求項１から６のいずれかに記載の組成物または培地。
【請求項９】
多糖が、式（６）：
【化６】
2014157483.tif 000037
・・・（６）
（式中、
Ｒａは、ＣＨ２ＯＨであり；
Ｒａ’は、ＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２ＯＺ３であり、
Ｚ３は、下記式（７）
【化７】
2014157483.tif 000038
・・・（７）
であり；
ｍ１およびｎ１は、重量平均分子量が１０，０００〜１０，０００，０００であるような値を表す整数である）
で表される、重合体またはそれらの誘導体；
式（８）：
【化８】
2014157483.tif 000039
・・・（８）
（式中、
Ｒｂは、Ｈ、ＯＨまたはＯＳＯ３Ｈであり；
Ｒｂ’は、ＯＺ４であり；
Ｚ４は、下記式（９）
【化９】
2014157483.tif 000040
・・・（９）
または、下記式（１０）、
【化１０】
2014157483.tif 000041
・・・（１０）
であり；
ＲｃおよびＲｃ’は、それぞれ独立して、ＨまたはＯＨであり；
ＲｄおよびＲｄ’は、それぞれ独立して、ＨまたはＣＨ３であり；
ＲｅおよびＲｅ’は、それぞれ独立して、ＨまたはＣＨ３であり；
ＲｆまたはＲｆ’は、それぞれ独立して、ＯＨまたはＯＳＯ３Ｈであり；
ｍ２およびｎ２は、重量平均分子量が１，０００〜１０，０００，０００であるような値を表す整数である）
で表される、重合体またはそれらの誘導体；
式（１１）：
【化１１】
2014157483.tif 000042
・・・（１１）
（式中、
ＲｇおよびＲｇ’は、それぞれ独立して、ＨまたはＯＨであり；
ＲｈおよびＲｈ’は、それぞれ独立して、ＨまたはＯＨであり；
Ｒｉは、ＣＯＯＨ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＯＯＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３またはＣＯＯＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＯＨであり；
Ｒｉ’は、ＨまたはＣＨ２ＯＨであり；
Ｒｊは、Ｈであり；
Ｒｊ’は、Ｈ，ＣＯＯＨ、ＣＯＯＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３またはＣＯＯＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＯＨであり；
Ｒｋは、ＯＨまたはＯＺ５であり；
Ｚ５は、下記式（１２）
【化１２】
2014157483.tif 000043
・・・（１２）
であり；
Ｒｋ’は、ＯＨであり；
ＲｌおよびＲｌ’は、それぞれ独立して、Ｈであり；
ｍ３およびｎ３は、重量平均分子量が１０，０００〜５０，０００，０００であるような値を表す整数である）
で表される、重合体またはそれらの誘導体；
式（１３）：
【化１３】
2014157483.tif 000044
・・・（１３）
（式中、ｏ１、ｐ１およびｑ１は、重量平均分子量が１，０００〜１０，０００，０００であるような値を表す整数である）
で表される、重合体またはそれらの誘導体；
式（１４）：
【化１４】
2014157483.tif 000045
・・・（１４）
（式中、
ｏ２、ｐ２およびｑ２は重量平均分子量が１，０００〜１０，０００，０００であるような値を表す整数である）
で表される、重合体またはそれらの誘導体；
式（１５）：
【化１５】
2014157483.tif 000046
・・・（１５）
（式中、
Ｒｍは、ＯＨまたはＯＳＯ３Ｈであり；
Ｒｎは、ＨまたはＯＨであるが、ＲｎがＯＨのとき、当該水酸基の水素は任意にＺ６で置換されていてもよく、Ｚ６は下記式（１６）：
【化１６】
2014157483.tif 000047
・・・（１６）
であり；
Ｒｏは、ＨまたはＯＨであり；
ｍ４およびｎ４は、重量平均分子量が１，０００〜３００，０００であるような値を表す整数である）で表される重合体またはそれらの誘導体である、請求項１から８のいずれかに記載の組成物または培地。
【請求項１０】
多糖が、さらに、β１,６結合、α１，２結合、β１，３結合、α１,３結合およびα１,６結合からなる群から選択される少なくとも１つの結合により結合したヘキソースを含む、請求項１から９のいずれかに記載の組成物または培地。
【請求項１１】
多糖が、さらにそのヒドロキシル基の一部または全部が硫酸基で修飾される、請求項１から１０のいずれかに記載の組成物または培地。
【請求項１２】
有用物質がＩｇＧ抗体である、請求項１から１１のいずれかに記載の組成物または培地。
【請求項１３】
細胞が、形質転換細胞である、請求項１から１２のいずれかに記載の組成物または培地。
【請求項１４】
請求項１から１３のいずれかに記載の培地を用いて細胞を培養することを含む、有用物質の製造方法。
【請求項１５】
有用物質がＩｇＧ抗体である、および／または細胞が、形質転換細胞である、請求項１４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１３年３月２９日に出願された日本国特許第２０１３−７３０１９号および２０１３年７月９日に出願された日本国特許第２０１３−１４３３５７号の優先権の利益を主張し、それらの開示内容の全体を参照として本明細書に組み込む。【０００２】
本発明は、細胞培養用培地添加物、当該添加物を含んだ細胞培養用培地および当該添加物および当該培地の有用物質製造のための使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
遺伝子組換え技術を利用して、タンパク質、ペプチドが人為的に生産されている。とりわけ医薬分野においては、医薬に有用なタンパク質（例えば、ヒト化抗体、ヒト抗体等）が培養細胞を利用して製造されている。
細胞の培養に用いられる培地としては、古くより牛血清を添加した血清培地が主体であったが、医薬品生産においては病原体混入などのリスクもあり血清を含まない無血清培地が求められている。しかし、血清には細胞増殖にかかわる種々の増殖因子が含まれており、単純に血清を欠如したのみでは、細胞増殖やタンパク質生産性が著しく抑制される。そのため、多くの場合は、血清代替物質としてインスリンやトランスフェリン、亜セレン酸ナトリウムなどが使用されている。しかし、無血清培地、特に化学組成が明確な物質のみで構成される培地（Ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ  ｄｅｆｉｎｅｄ培地）では、従来の血清培地に比べると細胞増殖やタンパク質生産性において劣る。その改善のため、酵母や大豆加水分解物なども使用されることがあり、このようなタンパク加水分解物は細胞増殖に極めて有効に働くことが知られている（特許文献１）。しかし、タンパク加水分解物は組成未知の成分も多く存在する複合素材であるため、医薬製造に使用する原料として安全性の面からは好ましいものではない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特表２００２−５２００１４号公報
【発明の概要】
【０００５】
本発明は、細胞培養用培地添加物、当該添加物を含んだ細胞培養用培地、および当該添加物および当該培地の有用物質製造のための使用を提供する。
【０００６】
本発明者らは、多糖が細胞においてタンパク質等の有用物質の生産量を増大させることを見出し、これに基づき本発明を完成させた。
本発明は、一つの側面として、多糖を含む細胞における有用物質の産生促進用組成物を提供する。
本発明は、一つの側面として、多糖を含む細胞培養用培地を提供する。
本発明は、一つの側面として、多糖を含む細胞培養用培地を用いて細胞を培養する工程を含む、有用物質の製造方法を提供する。
【発明の詳細な説明】
【０００７】
本発明は、多糖を含む細胞における有用物質の産生促進用組成物；多糖を含む細胞培養用培地；多糖を含む細胞培養用培地を用いて細胞を培養する行程を含む有用物質の製造方法等を提供する。
【０００８】
本発明で用いることのできる多糖は、直鎖のみからなる多糖であっても、主鎖および側鎖を有する多糖であってもよい。また、本発明で用いることのできる多糖は、１種の直鎖である多糖、２種以上の直鎖である多糖の混合物、１種の主鎖および側鎖を有する多糖、２種以上の主鎖および側鎖を有する多糖の混合物、またはそれらの混合物であってもよい。直鎖からなる多糖の場合は、その直鎖は連結されたヘキソース残基を含み、主鎖および側鎖を有する多糖の場合は、連結されたヘキソース残基を主鎖に含む。連結されたヘキソース残基は、１位の炭素と３位の炭素、１位の炭素と４位の炭素、または１位の炭素と６位の炭素の間で結合したヘキソース残基であり得る。１位の炭素と３位の炭素の結合にはβ１,３結合およびα１,３結合が含まれ、１位の炭素と４位の炭素の結合にはβ１,４結合およびα１,４結合が含まれ、１位の炭素と６位の炭素の結合にはβ１,６結合、およびα１,６結合が含まれる。これらα１,３結合、β１,３結合、α１,４結合、β１,４結合、α１,６結合およびβ１,６結合は、グリコシド結合であり、１位と３位、１位と４位、または１位と６位の炭素の間に酸素原子が介在して結合が形成される。
連結されたヘキソース残基を主鎖に含む場合は、その２位、３位または６位に結合したヘキソース残基を含む１個または２個以上の側鎖をさらに含んでもよい。この場合、側鎖は、２個以上のヘキソースが連結したものであっても、１個のヘキソースであってもよく、側鎖を構成するヘキソースの種類は１種でも２種以上でもよい。主鎖と側鎖の結合は、α１,２結合、α１,３結合、α１,６結合、β１,２結合、β１,３結合およびβ１,６結合からなる群から少なくとも１個選択され得る。
【０００９】
本発明で用いることのできる多糖を構成するヘキソースは、炭素数６の糖であり、例えば、グルコース、マンノース、ガラクトース、フコース、アロース、アルトロース、グロース、イドース、タロース、ラムノース、フクロース、グルコサミン、ガラクトサミン、グルクロン酸、ガラクツロン酸、マンヌロン酸、およびそれらの誘導体（塩、エステル、エーテル、アミド）等が挙げられる。ヘキソースは、アルデヒド基を有する糖であってもよく、またはアルドヘキソースであってもよい。また、ヘキソースは、デオキシ糖、カルボン酸を含む糖またはアミノ糖であってもよい。デオキシ糖には、例えば、Ｄ−デオキシリボース、Ｌ−フコース、Ｌ−ラムノース、Ｄ−アロメチロース、Ｄ−キノボース、Ｄ−アンチアロース、Ｄ−タロメチロース、Ｌ−タロメチロース、Ｄ−ジギタロース、Ｄ−ジギトキソース、Ｄ−シマロース、チベロース、アベコース、パラトース、コリトース、アスカリロースが含まれる。カルボン酸を含む糖には、例えば、グルクロン酸、ガラクツロン酸、マンヌロン酸、グルコン酸、ガラクトン酸、マンノン酸が含まれる。アミノ糖には、例えば、グルコサミン、マンノサミン、ガラクトサミンが含まれる。
好ましくは、天然に存在するＤ−グルコース、Ｄ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、Ｄ−グルコサミン、Ｄ−ガラクトサミン、Ｄ−グルロン酸、Ｄ−グルクロン酸、Ｄ−ガラクツロン酸、Ｄ−マンヌロン酸、Ｌ−フコースが、本発明で使用可能なヘキソースの例として挙げられる。より好ましくは、Ｄ−グルコース、Ｌ−フコース、Ｄ−グルクロン酸、Ｄ−マンノース、Ｄ−マンヌロン酸、Ｄ−グルロン酸などが挙げられる。
【００１０】
誘導体の例としては、塩、エステル、エーテル、アミドが挙げられる。
塩の例としては、酸付加塩および塩基付加塩が含まれる。酸付加塩の例としては、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸および硝酸などの無機酸由来のもの、ならびにｐ-トルエンスルホン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、コハク酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、トリフルオロ酢酸などの有機酸由来のものなどが挙げられる。塩基付加塩の例としては、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、カルシウム由来のもの、および例えば、水酸化テトラメチルアンモニウムなどの水酸化四級アンモニウム由来のものが挙げられる。
【００１１】
エステルの例としては、脂肪族エステル（例えば、メチルエステル、エチルエステル、プロピルエステル、イソプロピルエステル、ブチルエステル、イソブチルエステル、t-ブチルエステル、ペンチルエステル、１-シクロプロピルエチルエステル、およびプロピレングリコールエステル）、有機酸エステル（例えば、酢酸エステル、スルホン酸エステル、リン酸エステル、リンゴ酸エステル）、無機酸エステル（例えば、硫酸エステル）などが挙げられる。
【００１２】
エーテルの例としては、メチルエーテル、エチルエーテル等の低級アルキルエーテル（Ｃ１−６アルキルエーテル）が挙げられる。
【００１３】
アミドの例としては、メチルアミド、エチルアミド等の低級アルキルアミド（Ｃ１−６アルキルアミド）が挙げられる。
【００１４】
また、本発明で用いることのできる多糖の重量平均分子量は、通常、多糖の重量平均分子量の測定方法に用いられる方法において測定することができる。例えば、ＨＰＬＣによるゲルパーミエションクロマトグラフィーによって、多糖の重量平均分子量を測定することができる。なお、測定に使用するカラムは、測定する多糖に応じて適宜選択すればよく、通常市販されている分子量測定用のカラムを用いればよく、測定は通常の方法を用いることができ、特に限定されるものではない。
【００１５】
一つの実施態様として、本発明で用いることのできる多糖は、式（１）：
【化１】
2014157483.tif 000002
・・・（１）
（式中、
Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ＯＳＯ３ＨまたはＯＺ１であり；
Ｚ１は、下記式（２）
【化２】
2014157483.tif 000003
・・・（２）
または、下記式（３）、
【化３】
2014157483.tif 000004
・・・（３）
であり；
Ｒ２は、ＨまたはＯＨであり；
Ｒ３は、Ｈ、ＣＨ３またはＣＨ２ＯＨであり；
Ｒ４は、ＨまたはＣＨ３であり；
Ｒ５は、Ｈであり；
Ｒ６は、ＯＨまたはＯＳＯ３Ｈであり；
Ｘ１およびＹ１は一方がＯＨで、もう一方がＨであり；
Ｘ２およびＹ２は一方がＯＨで、もう一方がＨである）
で表わされる１種または２種以上の糖が、β１,３結合、α１,３結合、β１,４結合、α１,４結合、β１,６結合及びα１,６結合からなる群から少なくとも１つ選択される結合により連結されている化合物、またはその誘導体を含む多糖（以下、式（１）の糖より構成される多糖とも称す）であってもよい。式（１）の糖より構成される多糖は、直鎖状であっても、側鎖を有するものであってもよい。
また、一つの実施態様として、式（４）：
【化４】
2014157483.tif 000005
・・・（４）
Ｒ７は、ＨまたはＯＨであり；
Ｒ８は、ＨまたはＯＨであり；
Ｒ９は、Ｈ、ＣＯＯＨ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＯＯＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３またはＣＯＯＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＯＨであり；
Ｒ１０は、Ｈ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３またはＣＯＯＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＯＨであり；
Ｒ１１は、ＯＨまたはＯＺ２であり；
Ｚ２は、下記式（５）
【化５】
2014157483.tif 000006
・・・（５）
であり；
Ｒ１２は、Ｈであり；
Ｘ３およびＹ３は一方がＯＨで、もう一方がＨである）
で表わされる１種または２種以上の糖が、β１,３結合、α１,３結合、β１,４結合、α１,４結合、β１,６結合及びα１,６結合からなる群から少なくとも１つ選択される結合により連結されている化合物またはその誘導体を含む多糖（以下、式（４）の糖より構成される多糖とも称す）であってもよい。式（４）の糖より構成される多糖は、直鎖状であっても、側鎖を有するものであってもよい。
【００１６】
また、一つの実施態様として、本発明で用いることのできる多糖は、
式（６）：
【化６】
2014157483.tif 000007
・・・（６）
（式中、
Ｒａは、ＣＨ２ＯＨであり；
Ｒａ’は、ＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２ＯＺ３であり、
Ｚ３は、下記式（７）
【化７】
2014157483.tif 000008
・・・（７）
であり；
ｍ１およびｎ１は、重量平均分子量が１０，０００〜１０，０００，０００であるような値を表す整数である）
で表される、重合体またはそれらの誘導体（以下、式（６）で表わされる重合体とも称す）；
式（８）：
【化８】
2014157483.tif 000009
・・・（８）
（式中、
Ｒｂは、Ｈ、ＯＨまたはＯＳＯ３Ｈであり；
Ｒｂ’は、ＯＺ４であり；
Ｚ４は、下記式（９）
【化９】
2014157483.tif 000010
・・・（９）
または、下記式（１０）、
【化１０】
2014157483.tif 000011
・・・（１０）
であり；
ＲｃおよびＲｃ’は、それぞれ独立して、ＨまたはＯＨであり；
ＲｄおよびＲｄ’は、それぞれ独立して、ＨまたはＣＨ３であり；
ＲｅおよびＲｅ’は、それぞれ独立して、ＨまたはＣＨ３であり；
ＲｆまたはＲｆ’は、それぞれ独立して、ＯＨまたはＯＳＯ３Ｈであり；
ｍ２およびｎ２は、重量平均分子量が１，０００〜１０，０００，０００であるような値を表す整数である）
で表される、重合体またはそれらの誘導体（以下、式（８）で表わされる重合体とも称す）；
式（１１）：
【化１１】
2014157483.tif 000012
・・・（１１）
（式中、
ＲｇおよびＲｇ’は、それぞれ独立して、ＨまたはＯＨであり；
ＲｈおよびＲｈ’は、それぞれ独立して、ＨまたはＯＨであり；
Ｒｉは、ＣＯＯＨ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＯＯＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３またはＣＯＯＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＯＨであり；
Ｒｉ’は、ＨまたはＣＨ２ＯＨであり；
Ｒｊは、Ｈであり；
Ｒｊ’は、Ｈ，ＣＯＯＨ、ＣＯＯＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３またはＣＯＯＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＯＨであり；
Ｒｋは、ＯＨまたはＯＺ５であり；
Ｚ５は、下記式（１２）
【化１２】
2014157483.tif 000013
・・・（１２）
であり；
Ｒｋ’は、ＯＨであり；
ＲｌおよびＲｌ’は、それぞれ独立して、Ｈであり；
ｍ３およびｎ３は、重量平均分子量が１０，０００〜５０，０００，０００であるような値を表す整数である）
で表される、重合体またはそれらの誘導体（以下、式（１１）で表わされる重合体とも称す）；
式（１３）：
【化１３】
2014157483.tif 000014
・・・（１３）
（式中、ｏ１、ｐ１およびｑ１は、重量平均分子量が１，０００〜１０，０００，０００であるような値を表す整数である）
で表される、重合体またはそれらの誘導体（以下、式（１３）で表わされる重合体とも称す）；
式（１４）：
【化１４】
2014157483.tif 000015
・・・（１４）
（式中、
ｏ２、ｐ２およびｑ２は、重量平均分子量が１，０００〜１０，０００，０００であるような値を表す整数である）
で表される、重合体またはそれらの誘導体（以下、式（１４）で表わされる重合体とも称す）；
または
式（１５）：
【化１５】
2014157483.tif 000016
・・・（１５）
（式中、
Ｒｍは、ＯＨまたはＯＳＯ３Ｈであり；
Ｒｎは、ＨまたはＯＨであるが、ＲｎがＯＨのとき、当該水酸基の水素は任意にＺ６で置換されていてもよく、Ｚ６は下記式（１６）：
【化１６】
2014157483.tif 000017
・・・（１６）
であり；
Ｒｏは、ＨまたはＯＨであり；
ｍ４およびｎ４は、重量平均分子量が１，０００〜３００，０００であるような値を表す整数である）
で表される、重合体またはそれらの誘導体（以下、式（１５）で表わされる重合体とも称す）
であり得る。
【００１７】
式（６）で表わされる重合体において、ｍ１：ｎ１の比率は特に制限されず、ｍ１：ｎ１＝１００：０〜０：１００の範囲内で任意である。また、ｍ１およびｎ１は、式（６）で表わされる重合体の重量平均分子量が、例えば、１万〜２００万、２万〜１３０万であるような値を表す整数であってもよい。式（６）で表わされる重合体は、ホモポリマーであってもコポリマーであってもよく、例えば、ブロックコポリマーまたはランダムコポリマーであってもよい。
【００１８】
式（８）で表わされる重合体において、ｍ２：ｎ２の比率は特に制限されず、ｍ２：ｎ２＝１００：０〜０：１００の範囲内で任意である。また、ｍ２およびｎ２は、式（８）で表わされる重合体の重量平均分子量が、例えば、１０００〜８０万、２万〜４０万であるような値を表す整数であってもよい。式（８）で表わされる重合体は、ホモポリマーであってもコポリマーであってもよく、例えば、ブロックコポリマーまたはランダムコポリマーであってもよい。
【００１９】
式（１１）で表わされる重合体において、ｍ３：ｎ３の比率は特に制限されず、ｍ３：ｎ３＝１００：０〜０：１００の範囲内で任意である。また、ｍ３およびｎ３は、式（１１）で表わされる重合体の重量平均分子量が、例えば、１万〜１３０万、１３００万〜５０００万であるような値を表す整数であってもよい。式（１１）で表わされる重合体は、ホモポリマーであってもコポリマーであってもよく、例えば、ブロックコポリマーまたはランダムコポリマーであってもよい。
【００２０】
式（１３）で表わされる重合体において、ｏ１：ｐ１：ｑ１＝１００：０：０／０：１００：０／０：０：１００である。例えば、ｏ１＝０であって、且つｐ１：ｑ１＝１：２であってもよく、ｑ１＝０であって、且つｏ１：ｐ１＝１００：０〜０：１００であってもよい。また、ｏ１、ｐ１およびｑ１は、式（１３）で表わされる重合体の重量平均分子量が、例えば、６０００〜１４０万、５万〜１３０万であるような値を表す整数であってもよい。式（１３）で表わされる重合体は、ホモポリマーであってもコポリマーであってもよく、例えば、ブロックコポリマーまたはランダムコポリマーであってもよい。
【００２１】
式（１４）で表わされる重合体において、ｏ２：ｐ２：ｑ２＝１００：０：０／０：１００：０／０：０：１００である。例えば、ｏ２＝０であって、且つｐ２：ｑ２＝１：２であってもよく、ｑ２＝０であって、且つｏ２：ｐ２＝１００：０〜０：１００であってもよい。また、ｏ２、ｐ２およびｑ２は、式（１３）で表わされる重合体の重量平均分子量が、例えば、６０００〜１４０万、５万〜１３０万であるような値を表す整数であってもよい。式（１４）で表わされる重合体は、ホモポリマーであってもコポリマーであってもよく、例えば、ブロックコポリマーまたはランダムコポリマーであってもよい。
【００２２】
式（１５）で表わされる重合体において、ｍ４：ｎ４の比率は特に制限されず、、ｍ４：ｎ４＝１００：０〜０：１００の範囲内で任意である。また、ｍ４およびｎ４は、式（１５）で表わされる重合体の重量平均分子量が、例えば、１，０００〜３００，０００、１,０００〜２００，０００、２０，０００〜１００，０００であるような値を表す整数であってもよい。式（１５）で表わされる重合体は、ホモポリマーであってもコポリマーであってもよく、例えば、ブロックコポリマーまたはランダムコポリマーであってもよい。
【００２３】
上記式（１）または式（４）の糖より構成される多糖、式（６）、式（８）、式（１１）、式（１３）、式（１４）または式（１５）で表される多糖は、それを主鎖として、さらに、β１,６結合、α１,２結合、β１,３結合、α１,３結合およびα１,６結合からなる群から選択される少なくとも１つの結合により結合したヘキソースを含む側鎖を含んでもよい。側鎖の糖残基数は特に限定されず、１、２、３、４、５またはそれ以上であり得る。
【００２４】
また、上記式（１）または式（４）の糖より構成される多糖、式（６）、式（８）、式（１１）、式（１３）、式（１４）または式（１５）で表される多糖は、そのヒドロキシル基やカルボキシル基がエステル化されていてもよい。例えば、多糖にあるヒドロキシル基は、その全部または一部が硫酸基で修飾されていてもよい。
【００２５】
本発明で用いることのできる多糖としては、アミロース、アミロペクチン、グリコーゲン、セルロース、デンプン、キチン、キトサン、アガロース、カラギナン、ヒアルロン酸、コンドロイチン４-硫酸、コンドロイチン６-硫酸、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、ヘパラン硫酸、ヘパリン、キシログルカン、グルコマンサン、ガラクトマンナン、ラミナラン、キシラン、ペクチン、レンチナン、マルトデキストリン、カードラン、グアーガム、β-１,３-グルカン、フコイダン、アルギン酸、アルギン酸エステル、プルラン、キサンタンガム、デキストラン、ラミナランなどを例示できる。より具体的なものとして、以下のものが挙げられる。
【００２６】
（ａ）β-１,３-グルカン
本発明で使用可能なβ-１,３-グルカンは、β１,３結合を有するグルカンであればよく、β１,３結合で連結されたグルコース残基から構成される、またはそれを主鎖とし側鎖を有するグルカン、またはそれらの混合物である。β-１,３-グルカンは、天然物から調製でき、例えば、オーレオバシジウム属（Ａｕｒｅｂａｓｉｄｉｕｍ  ｓp．）微生物、パン酵母（例えば、Ｓ.  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ)、担子菌(例えば、Ｌｅｎｔｉｎｕｓ  ｅｄｏｄｅｓ,  Ｓｃｈｉｚｏｐｈｙｌｌｕｍ  Ｃｏｍｍｕｎｅ,  Ｃｏｒｉｏｌｕｓ  ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ)、ユーグレナ藻、イネ科穀類等から調製できる。本発明に使用できるβ-１,３-グルカンは、その由来に限定されない。
【００２７】
本発明で使用可能なβ-１,３-グルカンの例には、オーレオバシジウム・プルランス由来のβ-１,３-１,６-グルカン（例えば、ダイソー株式会社製：アクアβ（登録商標）として入手可能）、パン酵母由来のβ-１,３-１,６-グルカン（例えば、ＢＩＯＴＨＥＲＡ社：Ｗｅｌｌｍｕｎｅ（登録商標）として入手可能）、およびパラミロン（ユーグレナ藻由来直鎖β１,３-グルカン）が挙げられるが、これらに限定されない。β-１,３-グルカンは、例えば、下記式（１７）で表わされる。
【化１７】
2014157483.tif 000018
・・・（１７）
ここで、aおよびbは任意の整数である。例えば、aおよびbは、重量平均分子量が１０，０００〜１０，０００，０００（例えば、２〜３０万または５０〜２５０万）であり、好ましくは１〜２００万であり、より好ましくは２万〜１３０万であり得る。また、β-１,３結合／β-１,６結合の分岐度（β１，３主鎖に対するβ１，６側鎖の結合比）は、オーレオバシジウム由来のグルカンは、約３０〜１００％であるような整数であり、キノコ（スエヒロタケ）由来のグルカンは、約３３％であるような整数であり、ユーグレナ藻由来のグルカンは、約０％であるような整数であり得る。
本発明で使用可能なβ-１,３-グルカンは、一部のグルコース残基のヒドロキシル基に硫酸基が導入されていてもよい。例えば、式（１７）のβ-１,３-グルカンについて、その一部のヒドロキシル基がＯＳＯ３Ｈとなっていてもよい。また、本発明で使用可能なβ-１,３-グルカンは、その塩（例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム塩等）であってもよい。
【００２８】
（ｂ）フコイダン
本発明で使用可能なフコイダンは、Ｌ−フコースが１０から数十万個連結された化合物であり、連結されたＬ−フコース残基から構成される、またはそれを主鎖とし側鎖を有するフコイダン、またはそれらの混合物である。由来は限定されない。例えば、褐藻類（モズク、メカブ、コンブ等）に由来するフコイダンを使用することができる。このようなフコイダンの例としては、トンガ王国産天然モズクより得られるフコイダン（例えば、協同乳業社：メイトーフコイダンとして入手可能）、ガゴメ昆布由来のフコイダン（例えば、タカラバイオ株式会社：ガゴメ昆布フコイダンとして入手可能）が挙げられる。フコイダンは、化学構造式中に硫酸基を含む。例えば、５糖残基当たり２〜１２個、４〜１２個、５〜１０または８〜１０個の硫酸基を含み得る。重量％として、１０〜４０％、１５〜３０％または２０〜３０％の硫酸基を含み得る。
フコイダンは、例えば、下記式（１８）で表わされる。
【化１８】
2014157483.tif 000019
・・・（１８）
ここで、cは任意の整数であり、重量平均分子量５，０００以上（例えば、重量平均分子量１，０００〜３００，０００であり、好ましくは１,０００〜２００，０００であり、より好ましくは２０，０００〜１００，０００であり得る。）となるような数であり得る。
ガゴメ昆布由来のフコイダンは、下記式（１９）に示されるＵ−フコイダン、下記式（２０）に示されるＧ−フコイダン、下記式（２１）に示されるＦ−フコイダンの混合物である。
【化１９】
2014157483.tif 000020
・・・（１９）
【化２０】
2014157483.tif 000021
・・・（２０）
【化２１】
2014157483.tif 000022
・・・（２１）
ここで、d、e、fは任意の整数であり、混合物の重量平均分子量は約２００，０００（例えば、重量平均分子量１，０００〜１０，０００，０００であり、好ましくは２万〜８０万であり、より好ましくは５万〜４０万であり得る。）となるような数であり得る。
また、本発明で使用可能なフコイダンは、その塩（例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム塩等）であってもよい。
【００２９】
（ｃ）アルギン酸およびアルギン酸誘導体
本発明で使用可能なアルギン酸は、β-Ｄ-マンヌロン酸とそのＣ-５エピマーであるα-Ｌ-グルロン酸の２種のブロックがα１,４結合した直線状のポリマーである。本発明で使用可能なアルギン酸は、褐藻から調製することができるが、由来に限定されない。また、アルギン酸としてアルギン酸の塩（例えば、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸カリウム、アルギン酸アンモニウム、アルギン酸カルシウム等）を本発明に使用することも可能であり、アルギン酸エステル（例えば、アルギン酸プロピレングリコールエステル）を本発明に使用することも可能である。アルギン酸ナトリウムおよびアルギン酸プロピレングリコールエステルは、例えば、和光純薬工業株式会社または株式会社ＫＩＭＩＣＡから入手可能である。
アルギン酸は、下記式（２２）で表わされる。
【化２２】
2014157483.tif 000023
・・・（２２）
ここで、g、hは任意の整数であり、例えば、重量平均分子量は約２４０，０００又は３８０，０００、（例えば、重量平均分子量１０，０００〜６００，０００であり、好ましくは１万〜５０万であり、より好ましくは２万〜４５万であり得る。）となるような数であり得る。
アルギン酸エステルの重量平均分子量は１０，０００〜６０万であり、好ましく１万〜４０万であり、より好ましくは２万〜２０万であり得る。
【００３０】
（ｄ）プルラン
本発明で使用可能なプルランは、グルコース３分子がα１,４結合したマルトトリオースがα１,６結合で繋がった構造を有する（下記、式（２３）参照。なお、式中iは任意の整数である）。プルランは、オーレオバシジウム・プルランスによってスクロースや澱粉加水分解物などから生成される。
【化２３】
2014157483.tif 000024
・・・（２３）
本発明で使用可能なプルランは、例えば、昭和電工株式会社製：Ｓｈｏｄｅｘ  ｓｔａｎｄａｒｄ Ｐ-１３００（重量平均分子量：約１，３３０，０００；カタログ値）である。また、本発明で使用可能なプルランの重量平均分子は、好ましくは１０万〜１４０万であり、より好ましくは５０万〜１３０万であり得る。
また、本発明で使用可能なプルランは、その塩（例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム塩等）であってもよい。
【００３１】
（ｅ）キサンタンガム
本発明で使用可能なキサンタンガムは、グルコース２分子、マンノース２分子、グルクロン酸の繰り返し単位を含む化合物、およびその誘導体である。例えば、ユニテックフーズ株式会社のＳＡＴＩＡＸＡＮＥ（登録商標）ＣＸ９０を使用でき、下記式（２４）に示されるように、グルコース残基がβ１,４結合した主鎖に、マンノース２分子およびグルクロン酸１分子の誘導体からなる側鎖が結合した化合物を使用することができる。
【化２４】
2014157483.tif 000025
・・・（２４）
ここで、式中Ｍ＋は、例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウムであり得る。本発明で使用可能なキサンタンガムは、その塩（例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム塩等）であってもよい。重量平均分子量は、例えば、約２,０００,０００または１３，０００，０００〜５０，０００，０００であり得る。
【００３２】
（ｆ）デキストラン
本発明で使用可能なデキストランは、グルコース分子の繰り返し単位を含む化合物、およびその誘導体である。例えば、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓが生産するデキストランを使用でき、下記式（２５）に示されるように、グルコース残基がα１,６結合した主鎖に、グルコース１分子の誘導体からなる側鎖が結合した化合物を使用することができる。
【化２５】
2014157483.tif 000026
・・・（２５）
ここで、j、kは任意の整数であり、例えば、重量平均分子量１，０００〜１０，０００，０００となるような数であり、好ましくは６,０００〜８０万であり、より好ましくは５万〜４０万であり得る。
【００３３】
（ｇ）ラミナラン
本発明で使用可能なラミナランは、グルコース分子の繰り返し単位を含む化合物、およびその誘導体である。由来は限定されない。例えば、褐藻類（モズク、メカブ、コンブ等）に由来するラミナランを使用することができ、下記式（２６）に示されるように、グルコース残基がβ１,６結合とβ１，３結合ランダムに結合した主鎖からなる化合物を使用することができる。
【化２６】
2014157483.tif 000027
・・・（２６）
（式中、
ｍ５およびｎ５は、重量平均分子量が例えば、１，０００〜３００，０００であり、好ましくは１,０００〜２００，０００であり、より好ましくは２０，０００〜１００，０００であるような値を表す整数である）
【００３４】
上記で説明した「本発明で用いることのできる多糖」は、更に公知の方法で低分子化処理を施したものを用いることも可能である。例えば低分子化の方法としては、公知である多糖の加水分解反応のいずれもが利用可能である。例えば、水溶性多糖は、酸存在下に加圧加熱により加水分解することが知られており、これを利用して多糖を低分子化処理することができる。また、酵素による加水分解反応を利用した低分子化することも可能である。さらには、超音波処理などの物理的な処理を行うことによっても低分子化することが可能である。
【００３５】
上記で説明した「本発明で用いることのできる多糖」は、細胞での有用物質の産生促進に使用することができる。好ましくは、in vitroで細胞を用いた有用物質生産をする際の産生促進のため、「本発明で用いることができる多糖」の使用が提供される。産生促進は、そのメカニズムに関係なく、一定時間内に有用物質の産生量が増大すればよく、例えば、細胞増殖を促進することにより有用物質の産生を増大させてもよく、個々の細胞における有用物質の発現量を増大させることにより有用物質の産生を増大させてもよく、その両方でもよい。よって、上記で説明した「本発明で用いることのできる多糖」は、細胞増殖促進剤として、細胞における有用物質の発現促進剤として、またはその両方として使用することができる。
【００３６】
上記で説明した「本発明で用いることのできる多糖」は、細胞培養用培地に添加することにより有用物質の産生促進に使用することができる。また、好ましい実施態様において、上記で説明した「本発明で用いることのできる多糖」は、細胞培養用培地に添加することにより、無血清下または血清の濃度を低減させた条件下（例えば、５、３または１％ＦＢＳ含有条件下）で有用物質の産生を促進する。よって、上記で説明した「本発明で用いることのできる多糖」は、単独で培地添加因子として使用でき、他の有用物質の産生促進に寄与する物質（例えば、タンパク質（例えば、トランスフェリン）および／または低分子化合物（例えば、グルコース、リン酸塩、亜セレン酸））とともに細胞培養用培地添加剤として使用できる。
【００３７】
本発明が提供する組成物（例えば、有用物質の産生促進用組成物、細胞培養用培地添加剤）は、「本発明で用いることのできる多糖」を、例えば、０．０００１〜５０重量％、０．０００１〜１０重量％、好ましくは、０．０００５〜１重量％、より好ましくは、０．００１〜０．１重量％で含んでもよい。組成物は室温で液体でも固体でもよい。例えば、ＰＢＳなどの緩衝液に「本発明で用いることのできる多糖」を上記含量で溶解させて、本発明が提供する組成物を調製することができる。
【００３８】
上記で説明した「本発明で用いることのできる多糖」を添加する培地は、例えば、ＥＭＥＭ、αＭＥＭ、ＤＭＥＭ、Ham's  medium、ＲＰＭＩ１６４０、Fisher's  mediumまたはそれらの混合物であってもよい。これらの基礎培地に上記で説明した「本発明で用いることのできる多糖」を添加することにより、有用物質の製造に有用な無血清培地を調製でき、または血清の濃度を低減させた培地（例えば、５、３または１％ＦＢＳ含有培地）を調製することができる。また、増殖因子や血清代替物質を添加することにより血清非含有で使用することを前提とした無血清培地、無タンパク培地またはケミカリー・ディファインド培地に添加して用いることもできる。これらの培地の例としてはＳＡＦＣ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社製のＸ-ＣＥＬＬ  ３０２,  ＥＸ-ＣＥＬＬ  ３２５-ＰＦ、ＥＸ-ＣＥＬＬ  ＣＤ  ＣＨＯなど、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製のＳＦＭ  ＩＩ、ＣＨＯ-ＩＩＩ-ＰＦＭ、ＣＤ  ＣＨＯなど、また、Ｉｒｖｉｎｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製のＩＳ-ＣＨＯ  ＣＤ、ＢａｌａｎＣＤ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ａ  Ｍｅｄｉｕｍなどが挙げられるがこれらに限定されるものではない。また、このような無血清培地、無タンパク培地、またはケミカリーディファインド培地を任意の比率で２種以上を混合した混合培地に対しても同様に用いることができる。培地中の「本発明で用いることのできる多糖」の含有量は、特に限定されないが、例えば、1〜10,000μg/ml、好ましくは1〜5,000μg/ml、より好ましくは1〜2,000μg/mlであり得る。例えば、当業者は、上記「本発明で用いることのできる多糖」を添加する培地の水以外の成分の濃度を変えることなく、「本発明で用いることのできる多糖」を培地に添加して、「本発明で用いることのできる多糖」を1〜10,000μg/ml、好ましくは1〜5,000μg/ml、より好ましくは1〜2,000μg/ml含有する培地を調製することができる。「本発明で用いることのできる多糖」を含む培地は、「本発明で用いることのできる多糖」に加えて、例えば、無機塩類（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩）、炭水化物（例えば、グルコース等の糖）、アミノ酸（例えば、必須アミノ酸）、ビタミン（例えば、リボフラビン、チアミン）、脂肪酸・脂質（例えば、コレステロール等のステロイド）、タンパク質・ペプチド（例えば、アルブミン、トランスフェリン）、微量元素（例えば、亜鉛、銅、セレニウム）およびそれらの組み合わせから選択される物質を含んでもよい。一つの実施態様において、本発明で用いることのできる多糖」を含む液体培地は、「本発明で用いることのできる多糖」に加えて、０．１から４．５ｇ／Ｌのグルコース、０．１から０．５ｇ／ＬのＣａＣｌ２、１から１０ｇ／ＬのＮａＣｌ、０．００１から０．３ｇ／ＬのＬ−アルギニン・ＨＣｌ、０．００１から０．３ｇ／ＬのＬ−システイン・２ＨＣｌ、０．００１から０．３ｇ／ＬのＬ−ヒスチジン・ＨＣｌ・Ｈ２Ｏ、０．００１から０．３ｇ／ＬのＬ−イソロイシン、０．００１から０．３ｇ／ＬのＬ−ロイシン、０．００１から０．３ｇ／ＬのＬ−リジン・ＨＣｌ、０．００１から０．３ｇ／ＬのＬ−メチオニン、０．００１から０．３ｇ／ＬのＬ−フェニルアラニン、０．００１から０．３ｇ／ＬのＬ−トレオニン、０．００１から０．３ｇ／ＬのＬ−トリプトファン、０．００１から０．３ｇ／ＬのＬ−チロシン・２Ｎａ・２Ｈ２Ｏ、および０．００１から０．３ｇ／ＬのＬ−バリンを含む。また、一つの実施態様として、水に溶解したときに上記の組成になるような粉末状態の培地であってもよい。このような上記で説明した「本発明で用いることのできる多糖」を含有する培地は、有用物質の製造に使用することができる。
具体的には、有用物質を産生する細胞を、上記で説明した「本発明で用いることのできる多糖」を含む培地で培養すること、および細胞から産生された有用物質を単離することを含む方法により有用物質を製造できる。当該培地は、無血清培地または血清の濃度を低減させた培地（例えば、５、３または１％ＦＢＳ含有培地）とすることができる。例えば、有用物質として抗体を製造する場合には、抗体産生細胞を、上記で説明した「本発明で用いることのできる多糖」を含む培地で培養し、抗体を精製することを含む方法により抗体を製造できる。抗体の精製工程は、例えば、プロテインＡアフィニティーカラムクロマトグラフィー、低ｐＨ処理によるウイルス不活化、その他のクロマトグラフィー工程（陽イオン交換クロマトグラフィー、陰イオン交換クロマトグラフィー等）、ウイルス除去フィルターによる濾過、濃縮工程、最終濾過が含まれる。
【００３９】
本明細書において、有用物質とは、医薬、農薬、食品、その他化学工業に有用な物質であれば特に制限はない。好ましくは、抗体、酵素（ウロキナーゼ等）、ホルモン（インスリン等）、サイトカイン（インターフェロン、インターロイキン、エリスロポエチン、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ等）等の生理活性タンパク質、ペプチドなどが例として挙げられる。抗体は、例えば、マウスモノクローナル抗体、ヒト化モノクローナル抗体またはヒトモノクローナル抗体である。また、免疫グロブリンのクラスは特に限定されないが、例えば、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２）である。有用物質は、外来遺伝子の発現産物である組み換えタンパク質であり得る。
【００４０】
本明細書において、細胞については組換えタンパク等の有用物質生産に使用可能な細胞であれば特に限定されず、ＣＨＯ細胞、ＢＨＫ細胞、ＨｅｐＧ２細胞、rodent  myeloma細胞（例えば、ＳＰ２/Ｏ細胞、ＮＳＯ細胞等のマウス骨髄腫細胞）、ハイブリドーマ、昆虫細胞およびそれらの細胞に外来遺伝子を導入した形質転換細胞が例として挙げられる。有用物質として抗体を産生させる場合は、ＣＨＯ細胞、ＳＰ２/Ｏ細胞またはＮＳＯ細胞等を細胞融合することによって得られるハイブリドーマなどを抗体産生細胞として採用することができる。
【００４１】
以下、実施例により本発明をさらに説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例】
【００４２】
ＩｇＧ遺伝子を導入しＩｇＧ抗体を分泌産生するＣＨＯ細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１２４４５）をＡＴＣＣより購入して用いた。このＣＨＯ細胞株を１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭにて培養した後回収し、１％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭに懸濁し、１２wellマルチプレートに４×１０４cells/wellとなるように播種した。下記の評価検体である多糖を滅菌超純水に溶解し、最終濃度４０、２００、１０００μｇ/ｍｌとなるように各ｗｅｌｌに添加した。また、コントロールとして、検体と等量の滅菌超純水を添加した。３日培養後、ＩｇＧの濃度を測定した。結果は、コントロールｗｅｌｌの細胞上清中のＩｇＧ濃度（つまり滅菌超純水のみを添加したｗｅｌｌの細胞上清中のＩｇＧ濃度）を１００として、評価検体である多糖を添加したｗｅｌｌの細胞上清中のＩｇＧの濃度を表１−１〜４に示した。下記全ての評価検体について、ＩｇＧ産生量の増加が認められた。【００４３】
評価検体：
オーレオバシジウム・プルランス由来β-１,３−１,６−グルカン（ダイソー株式会社製）；分子量８０万及び８万。
なお、分子量８万のβ-１,３−１,６−グルカンは分子量８０万のβ-１,３−１,６−グルカンを超音波処理（温度４℃、４時間、超音波ホモジサイザー（ＳＯＮＩＦＩＥＲ  ２５０ＢＲＡＮＳＯＮ社製）を用いて）することにより得た。
パン酵母由来β-１,３-１,６-グルカン（ＢＩＯＴＨＥＲＡ社製）；
パラミロン（和光純薬工業株式会社製）；
モズク由来フコイダン（協同乳業株式会社製）；
昆布由来フコイダン（タカラバイオ株式会社製）；
アルギン酸プロピレングリコールエステル（株式会社ＫＩＭＩＣＡ製）；
アルギン酸ナトリウム（和光純薬工業株式会社製）；
プルラン（昭和電工株式会社製：Ｓｈｏｄｅｘ ｓｔａｎｄａｒｄ Ｐ-１３００）；
キサンタンガム（ユニテックフーズ株式会社製：ＳＡＴＩＡＸＡＮＥ ＣＸ９０）；
デキストラン（和光純薬工業株式会社製）
ラミナラン（東京化成工業株式会社製）【００４４】
評価検体の重量平均分子量の測定方法（有機溶媒系）
以下に記載の方法により、実施例に用いたオーレオバシジウム・プルランス由来β-１,３−１,６−グルカン、パン酵母由来β-１,３-１,６-グルカン、パラミロン、デキストランの各サンプルの重量平均分子量を測定した。測定した重量平均分子量を表１−１〜４に示す。
装置：高速液体クロマトグラフィー（日本ウォーターズ社製）
カラム：shodex GPC KD-806M（カラムサイズ8×300 mm）（昭和電工社製）
カラム温度：５０℃
移動相：１０ｍＭＬｉＢｒ/ＤＭＳＯ溶液
流速：０．７ｍｌ／ｍｉｎ
流入量：１００μｌ
試料濃度：０．１０％(１ｍｇ/ｍｌ)
検出器：２４１４示差屈折計(ＲＩ検出器)（日本ウォーターズ社製）
前処理：０．４５μｍメンブレンフィルター濾過(Ｍｉｎｉｓａｒｔ ＲＣ ４)
分子量マーカー：プルラン（重量平均分子量；１３３万、７８．８万、４０．４万、２１．２万、１１．２万、４.７３万、２.２８万、１.１８万）（昭和電工社製）【００４５】
評価検体の重量平均分子量の測定方法（水系）
以下に記載の方法により、実施例に用いたモズク由来フコイダン、昆布由来フコイダン、アルギン酸プロピレングリコールエステル、アルギン酸ナトリウム、プルラン、キサンタンガム、ラミナランの各サンプルの重量平均分子量を測定した。測定した重量平均分子量を表１−１〜４に示す。なお、カラムは、ＴＯＳＨＯ ｇｕａｒｄ ｃｏｌｕｍを装着し、ＴＳＫ-ＧＥＬ ＧＭＰＷＸＬカラムを直列に２本連結させて、重量平均分子量の測定に用いた。
装置：高速液体クロマトグラフィー（日本ウォーターズ社製）
カラム：ＴＳＫ-ＧＥＬ ＧＭＰＷＸＬ（カラムサイズ ７．５ｍｍ  Ｉ.Ｄ×３０ｃｍ）（東ソー社製）を２本、ＴＯＳＨＯ ｇｕａｒｄ ｃｏｌｕｍ
カラム温度：４０℃
移動相：２００ｍＭＫ2ＨＰＯ4水溶液
流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ
流入量：１００μｌ
試料濃度：０．２０％(２ｍｇ/ｍｌ)
検出器：２４１４示差屈折計(RI検出器)（日本ウォーターズ社製）
前処理：０．４５μｍメンブレンフィルター濾過(Ｍｉｎｉｓａｒｔ ＲＣ ４)
分子量マーカー：プルラン（重量平均分子量；１３３万、７８．８万、２１．２万、４.７３万、２.２８万、１.１８万、０．５９万）（昭和電工社製）【００４６】
ＩｇＧ産生量の測定方法
Ｂｅｔｈｙｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ,  Ｉｎｃ.製のｈｕｍａｎ  ＩｇＧ  ＥＬＩＳＡ測定キット（Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ  ＥＬＩＳＡ  Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ  Ｓｅｔ,   ＥＬＩＳＡ  ＳｔａｒｔｅｒＡｃｃｅｓｓｏｒｙ  Ｋｉｔ）を用い、添付の取扱説明書記載の方法で細胞培養液中のＩｇＧ濃度を測定した。【００４７】
【表１−１】
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【表１−２】
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【表１−３】
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【表１−４】
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【００４８】
本発明が提供する組成物、培地および製造方法は、細胞を用いた有用物質の生産に利用できる。【００４９】
一つの実施態様では、本発明は、多糖を有効成分とする安価で安全性の高い優れた有用物質の産生促進組成物を提供することができる。本発明が提供する多糖を含む細胞培養用培地は、細胞の形態や種類などに限定されず増殖を促進させ、有用物質の生産量を増大させ得る。即ち、一つの実施態様において、本発明が提供する組成物、培地および製造方法は、細胞における有用物質の生産量を増大させることができ、抗体を利用した臨床診断薬製造、抗体医薬生産、再生医療、細胞治療などの分野で応用が可能である。
【国際調査報告】
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