(57)【要約】  本発明は、メチルチオアデノシン含有量の高い酵母培養物及び組成物を提供すること、及び該酵母培養物及び組成物の新たな用途を提供することを課題とする。本発明は、メチルチオアデノシン又はその塩を含有し、メチルチオアデノシン含有量が５．５質量％を超える酵母培養物、及び、酵母とメチルチオアデノシン又はその塩とを含み、メチルチオアデノシン又はその塩の含有量と酵母の含有量の合計に対するメチルチオアデノシンとしての含有量の質量比が、１／１００００以上１／２以下である、内服組成物を提供する。上記酵母培養物はＳ−アデノシルメチオニン又はその塩を含有する酵母培養物を加熱又は静置して製造できる。上記酵母培養物及び内服組成物は、睡眠促進剤の有効成分として有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
メチルチオアデノシン又はその塩を含有し、
酵母培養物の乾燥質量あたりのメチルチオアデノシン含有量が５．５質量％以上の、
酵母培養物。
【請求項２】
Ｓ−アデノシルメチオニン分解物を含有する酵母培養物。
【請求項３】
Ｓ−アデノシルメチオニン分解物がメチルチオアデノシンを含む、請求項２に記載の酵母培養物。
【請求項４】
酵母培養物の乾燥質量あたりのメチルチオアデノシン含有量が５．５質量％以上である請求項３に記載の酵母培養物。
【請求項５】
Ｓ−アデノシルメチオニン又はその塩を含有する酵母培養物を加熱してＳ−アデノシルメチオニン又はその塩を分解させる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の酵母培養物の製造方法。
【請求項６】
酵母とメチルチオアデノシン又はその塩とを含み、
Ａ／（Ａ＋Ｂ）が、１／１００００以上１／２以下である〔式中、Ａは組成物中のメチルチオアデノシン含有量を、Ｂは組成物中の酵母含有量を、それぞれ表す。〕、
内服組成物。
【請求項７】
Ａ／（Ａ＋Ｂ）が、１／７５０以上１／５以下である、請求項６に記載の内服組成物。
【請求項８】
Ａ／（Ａ＋Ｂ）が、１／１００以上１／５以下である、請求項６に記載の内服組成物。
【請求項９】
Ａ／（Ａ＋Ｂ）が、５．５／１００以上１／５以下である、請求項６に記載の内服組成物。
【請求項１０】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の酵母培養物及び／又は請求項６〜８のいずれか一項に記載の内服組成物を有効成分とする、睡眠促進剤。
【請求項１１】
成人１人あたりのメチルチオアデノシン摂取量が０．０１〜１０００ｍｇ／日となる投与量である、請求項１０に記載の睡眠促進剤。
【請求項１２】
請求項１０又は１１に記載の睡眠促進剤を含有する飲食品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、酵母培養物、内服組成物及びその用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
メチルチオアデノシンは生体成分として知られている。非特許文献１には、清酒醸造において、酵母培養液にＳ−アデノシルメチオニンとメチルチオアデノシンが含まれていること、及び、生酒を火入れ貯蔵すると生酒中のＳ−アデノシルメチオニンがメチルチオアデノシンに変換することが記載されている。特許文献１にはＳ−アデノシルメチオニン生産能を有する微生物をメチオニン含有培地で培養すると、メチルチオアデノシンが生じることが記載されており、その最大値は乾燥菌体あたりのメチルチオアデノシン量で０．０２０４％である（特許文献１の比較例参照）。【０００３】
非特許文献２には、メチルチオアデノシンを添加するとＳ４９細胞内のｃＡＭＰ濃度が増加すること、及びｃＡＭＰ濃度増加が成長阻害に関与することが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開昭５８−１４６２９１号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｊ．Ｓｏｃ．Ｂｒｅｗ．Ｊａｐａｎ  ７０（８）５８５−５８７，１９７５
【非特許文献２】Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３３（２２）：３６３９−４３．，１９８４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかし、非特許文献１における生酒中のメチルチオアデノシン含有量及び特許文献１における培養物中のメチルチオアデノシンの含有量は、いずれも少量であった。また、非特許文献２には、ｃＡＭＰ濃度増加に起因する効果として成長阻害以外については記載されていなかった。【０００７】
本発明は、メチルチオアデノシン含有量の高い酵母培養物及び組成物を提供すること、及び該酵母培養物及び組成物の新たな用途を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、下記の〔１〕〜〔１２〕を提供する。
〔１〕メチルチオアデノシン又はその塩を含有し、酵母培養物の乾燥質量あたりのメチルチオアデノシン含有量が５．５質量％以上の、酵母培養物。
〔２〕Ｓ−アデノシルメチオニン分解物を含有する酵母培養物。
〔３〕Ｓ−アデノシルメチオニン分解物がメチルチオアデノシンを含む、上記〔２〕に記載の酵母培養物。
〔４〕酵母培養物の乾燥質量あたりのメチルチオアデノシン含有量が５．５質量％以上である上記〔３〕に記載の酵母培養物。
〔５〕Ｓ−アデノシルメチオニン又はその塩を含有する酵母培養物を加熱してＳ−アデノシルメチオニン又はその塩を分解させる、上記〔１〕〜〔４〕のいずれか一項に記載の酵母培養物の製造方法。
〔６〕酵母とメチルチオアデノシン又はその塩とを含み、Ａ／（Ａ＋Ｂ）が、１／１００００以上１／２以下である〔式中、Ａは組成物中のメチルチオアデノシン含有量を、Ｂは組成物中の酵母含有量を、それぞれ表す。〕、内服組成物。
〔７〕Ａ／（Ａ＋Ｂ）が、１／７５０以上１／５以下である、上記〔６〕に記載の内服組成物。
〔８〕Ａ／（Ａ＋Ｂ）が、１／１００以上１／５以下である、上記〔６〕に記載の内服組成物。
〔９〕Ａ／（Ａ＋Ｂ）が、５．５／１００以上１／５以下である、上記〔６〕に記載の内服組成物。
〔１０〕上記〔１〕〜〔４〕のいずれか一項に記載の酵母培養物及び／又は上記〔６〕〜〔８〕のいずれか一項に記載の内服組成物を有効成分とする、睡眠促進剤。
〔１１〕成人１人あたりのメチルチオアデノシン摂取量が０．０１〜１０００ｍｇ／日となる投与量である、上記〔１０〕に記載の睡眠促進剤。
〔１２〕上記〔１０〕又は〔１１〕に記載の睡眠促進剤を含有する飲食品組成物。【０００９】
また、本発明は、他の側面において、下記の実施形態を提供し得る。
（１）上記〔１〕〜〔５〕のいずれか一項に記載の酵母培養物又は上記〔７〕〜〔１０〕のいずれか一項に記載の内服組成物を投与する、睡眠促進方法。
（２）上記〔１〕〜〔５〕のいずれか一項に記載の酵母培養物又は上記〔７〕〜〔１０〕のいずれか一項に記載の内服組成物を経口投与する、上記（１）の方法。
（３）上記〔１〕〜〔５〕のいずれか一項に記載の酵母培養物又は上記〔７〕〜〔１０〕のいずれか一項に記載の内服組成物の、睡眠促進剤を製造するための使用。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、メチルチオアデノシン含有量の高い酵母培養物及び組成物が提供される。本発明の酵母培養物及び組成物は睡眠を促進することができ、良好な自然睡眠を誘発することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、レム睡眠とノンレム睡眠の一般的なパターンを示す睡眠経過図である。
【図２】図２は、実験例１の結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
〔共通の用語の説明〕
本発明において酵母は、生活環の大部分を単細胞で経過し、出芽、又は隔壁を生じて細胞分裂する菌類であれば、特に限定されない。酵母としては例えば、サッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属酵母、シゾサッカロミセス（Ｓｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属酵母を挙げることができ、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｃｉａｅ；出芽酵母）、シゾサッカロミセス・ポンベ（Ｓｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ；分裂酵母）が好ましい。
【００１３】
本発明において酵母培養物とは、酵母を培地にて培養して得られる混合物を意味する。該混合物は、通常、酵母菌体、菌体成分（菌体の破砕片）、酵母が代謝産生した生成物などを含有する。酵母は生菌体及び死菌体のいずれでもよい。
【００１４】
酵母の培養は、使用する酵母株が属する種に適した培養条件に従って常法通りに行えばよい。培養に用いる培地に特に制限はなく、炭素源、窒素源、無機塩等、通常の微生物の培養に利用される培地に利用される成分が含まれていてもよい。炭素源としては例えば、グルコース、蔗糖、酢酸、エタノール、糖蜜、亜硫酸パルプ廃液等が挙げられる。窒素源としては、例えば、尿素、アンモニア、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、リン酸アンモニウム等の含窒素無機塩、コーンスティプリカー（ＣＳＬ）、カゼイン、酵母エキス、ペプトン等の含窒素有機物が挙げられる。無機塩としては例えば、過リン酸石灰、リン酸アンモニウム等のリン酸塩；塩化カリウム、水酸化カリウム等のカリウム塩；硫酸マグネシウム、塩酸マグネシウム等のマグネシウム塩；亜鉛；銅；マンガン；鉄イオンが挙げられる。培地は更に、ビタミン、核酸関連物質、アミノ酸等の成分を含んでいてもよい。培地には少なくともエタノールとアミノ酸（例えばメチオニン）が含まれていることが好ましい。培地が固形培地の場合には通常、寒天等が添加される。
【００１５】
培地は固形培地でも液体培地でもよい。液体培地の場合の培養様式としては例えば、回分培養、流加培養、連続培養等が挙げられ、これらのいずれを採用してもよい。
【００１６】
培養温度は６℃から３５℃の間であってもよく、通常２０〜３５℃であり、２５〜３２℃であることが好ましい。培養時間は通常１日以上何日でもよく、好ましくは２日以上１０日以内である。
【００１７】
本発明においてメチルチオアデノシンは、５’−デオキシ−５’−メチルチオアデノシンとも称される。５’−デオキシ−５’−メチルチオアデノシンは、アンチ（ａｎｔｉ）型又はシン（ｓｙｎ）型のいずれの形態であってもよい。なお、以下本明細書においては、メチルチオアデノシン又はその塩を、ＭＴＡと略称する場合がある。
【００１８】
メチルチオアデノシンの塩は、薬理学的に許容可能な塩である限り特に限定はなく、剤形等に応じて選択すればよい。好適なメチルチオアデノシンの塩としては、例えば、酸付加塩が挙げられる。酸付加塩としては、無機酸付加塩及び有機酸付加塩のいずれであってもよく、例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、炭酸塩、リン酸塩、ギ酸塩、シュウ酸塩、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、メタンスルホン酸塩、１，４−ブタンジスルホン酸塩、１，５−ペンタンスルホン酸塩及びｐ−トルエンスルホン酸塩が挙げられる。
【００１９】
本発明においてＳ−アデノシルメチオニンは、アデノシンとメチオニンがメチルスルホニル結合を介して連結した構造を有する。メチオニンの光学異性体にはＬ体、Ｄ体、ＤＬ体がある。本発明において、Ｓ−アデノシルメチオニンの構造中のメチオニンは前記光学異性体のいずれであってもよい。
【００２０】
Ｓ−アデノシルメチオニンの塩としては、薬理学的に許容可能な塩である限り特に限定はなく、剤形等に応じて選択することができる。好適なＳ−アデノシルメチオニンの塩としては、例えば、酸付加塩及びハロゲン化物が挙げられ、具体的には、塩酸塩、硫酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩（トシル酸塩）、硫酸・ｐ−トルエンスルホン酸塩、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、１，４−ブタンジスルホン酸、１，５−ペンタンスルホン酸、リン酸塩、塩化物、臭化物などが挙げられる。これらのうち、塩酸塩またはトシル酸塩が好ましい。
【００２１】
酵母はメチルチオアデノシン及びその塩の少なくともいずれかを含んでいればよく、その両方を含んでいてもよい。
【００２２】
〔本発明の第１の酵母培養物〕
本発明の酵母培養物の好ましい態様としては、メチルチオアデノシン又はその塩を含む酵母培養物を挙げることができる。
【００２３】
酵母培養物中のメチルチオアデノシン又はその塩の含有量は、酵母培養物の乾燥質量あたりのメチルチオアデノシン含有量として示すことができる。乾燥質量あたりのメチルチオアデノシン含有量（含有率）とは、酵母培養物に含まれるメチルチオアデノシンの正味の質量の、酵母培養物全量に対する割合の百分率を意味する。酵母培養物がメチルチオアデノシン塩を含有する場合には、「メチルチオアデノシンの正味の質量」には、メチルチオアデノシン塩の塩部分の質量は含まれない。メチルチオアデノシン含有量は５．５質量％以上であることが好ましく、７質量％以上であることがより好ましく、８質量％以上であることが更に好ましい。これにより、本発明の酵母培養物はメチルチオアデノシン又はその塩の生理的効果を効率よく発揮することができる。メチルチオアデノシン含有量の上限は通常５０質量％以下であり、好ましくは４０質量％以下であり、より好ましくは３０％以下であり、更に好ましくは２０質量％以下であり、更により好ましくは１５質量％以下である。
【００２４】
また、酵母培養物の乾燥質量あたりのメチルチオアデノシン含有量の下限を５．５質量％以上とすることにより、高い睡眠誘発効果が得られる。
【００２５】
酵母培養物中の乾燥質量あたりのメチルチオアデノシン含有量は、例えば以下の式（１）により定義され得る。
式（１）
酵母培養物の乾燥質量あたりのメチルチオアデノシン含有量
＝（ａ／ｂ）×１００
【００２６】
式（１）中のａは酵母培養物から採取された一定量におけるメチルチオアデノシン含有量（メチルチオアデノシン塩の、塩の部分の質量は含まない）（ｇ）である。メチルチオアデノシンとしての定量は液体クロマトグラフィにより行うことができる。ｂは、上記のａ測定時に採取した量と同量の酵母培養物の、２４時間凍結乾燥（トラップ冷却温度−７５℃）後の、乾燥重量（ｇ）である。
【００２７】
メチルチオアデノシン又はその塩を含有する酵母培養物は、酵母がメチルチオアデノシン又はその塩を含有していてもよいし、酵母の菌体外にメチルチオアデノシン又はその塩を含有していてもよい。
【００２８】
本発明の第１の酵母培養物は、メチルチオアデノシン又はその塩の生理活性（例えば、細胞内ｃＡＭＰ濃度上昇活性、睡眠促進活性など）を向上させる何らかの成分を含むと推測される。よって、本発明の第１の酵母培養物は、上記の生理活性を発揮するような各種の用途に用いることができる。
【００２９】
〔本発明の第２の酵母培養物〕
本発明の酵母培養物の別の好ましい態様としては、Ｓ−アデノシルメチオニン又はその塩の分解物を含有する酵母培養物を挙げることができる。
【００３０】
Ｓ−アデノシルメチオニン又はその塩の分解物とは、Ｓ−アデノシルメチオニンが分解して生成する成分及びＳ−アデノシルメチオニンの塩が分解して生成する成分を意味する。Ｓ−アデノシルメチオニン又はその塩の分解物としては、例えば、メチルチオアデノシン、Ｓ−アデノシルホモシステイン、Ｓ−アデノシルメチオニアミン、Ｓ−アミノブチロラクトン、アデノシン、メチオニン、アデニン、イノシン、ホモセリン、ホモシステイン、シスタチオニンなどを挙げることができる。Ｓ−アデノシルメチオニンの分解物は単一の成分であってもよいし、２以上の成分の組み合わせであってもよい。Ｓ−アデノシルメチオニンの分解物は、メチルチオアデノシンであるか、又は少なくともメチルチオアデノシンを含むことが好ましく、メチルチオアデノシン又はその塩であることがより好ましい。
【００３１】
Ｓ−アデノシルメチオニン又はその塩の分解物は、Ｓ−アデノシルメチオニンの分解物でもよいし、Ｓ−アデノシルメチオニンの塩の分解物でもよいし、Ｓ−アデノシルメチオニンの分解物およびＳ−アデノシルメチオニンの塩の分解物の組み合わせでもよい。
【００３２】
Ｓ−アデノシルメチオニン又はその塩の分解物における分解の条件は特に限定されない。分解としては例えば、加熱による分解、酵素による分解、酸分解、アルカリ分解、化学反応による分解等が挙げられ、このうち加熱による分解が好ましい。
【００３３】
酵母培養物中のＳ−アデノシルメチオニン又はその塩の分解物の含有量は、該分解物に含まれるメチルチオアデノシンの、酵母培養物の乾燥質量あたりの含有量として示すことができる。乾燥質量あたりのメチルチオアデノシン含有量（含有率）とは、酵母培養物に含まれるメチルチオアデノシンの正味の質量の、酵母培養物全量に対する割合の百分率を意味する。酵母培養物がメチルチオアデノシン塩を含有する場合には、「メチルチオアデノシンの正味の質量」には、メチルチオアデノシン塩の塩部分の質量は含まれない。本発明の酵母培養物における乾燥質量あたりのメチルチオアデノシン含有量は５．５質量％以上であることが好ましく、７質量％以上であることがより好ましく、８質量％以上であることが更に好ましい。これにより、本発明の酵母培養物はメチルチオアデノシン又はその塩の生理的効果を効率よく発揮することができる。メチルチオアデノシン含有量の上限は通常５０質量％以下であり、好ましくは４０質量％以下であり、より好ましくは３０％以下であり、更に好ましくは２０質量％以下であり、更により好ましくは１５質量％以下である。酵母培養物中の乾燥質量あたりのメチルチオアデノシン含有量の測定は、本発明の第１の酵母培養物の項で説明したとおりである。
【００３４】
Ｓ−アデノシルメチオニン又はその塩の分解物を含有する酵母培養物は、酵母がＳ−アデノシルメチオニン又はその塩の分解物を含有していてもよいし、酵母の菌体外にＳ−アデノシルメチオニン又はその塩の分解物を含有していてもよい。
【００３５】
本発明の第２の酵母培養物は、Ｓ−アデノシルメチオニン又はその塩の分解物の生理活性（例えば、その中のメチルチオアデノシンの生理活性である、細胞内ｃＡＭＰ濃度上昇活性、睡眠促進活性など）を向上させる何らかの成分を含むと推測される。よって、本発明の第２の酵母培養物は、上記の生理活性を発揮するような各種の用途に用いることができる。
【００３６】
〔本発明の酵母培養物の製造方法〕
本発明の酵母培養物の製造方法は特に限定されないが、Ｓ−アデノシルメチオニン又はその塩を含有する酵母培養物を加熱することにより簡便に製造することができ、前記の方法が好ましい。本発明の第１の酵母培養物及び第２の酵母培養物のいずれも、前記の方法で製造することが好ましい。
【００３７】
Ｓ−アデノシルメチオニン又はその塩を含有する酵母は、Ｓ−アデノシルメチオニン又はその塩を本来含有する酵母であってもよいし、Ｓ−アデノシルメチオニン又はその塩を本来含有していない酵母にＳ−アデノシルメチオニンを産生させて、得られる酵母であってもよい。Ｓ−アデノシルメチオニン又はその塩を酵母に産生させる方法の例としては、酵母を培養して、酵母内（細胞内）にＳ−アデノシルメチオニン又はその塩を産生させる方法が挙げられる。係る方法の場合、得られる培養液をそのままＳ−アデノシルメチオニン又はその塩を含有する酵母培養物として使用してもよいし、培養後に回収された酵母を、Ｓ−アデノシルメチオニン又はその塩を含有する酵母として使用してもよい。更に、培養後の培地をそのまま、あるいは集菌してから、乾燥して得られる乾燥状態の酵母培養物を使用してもよい。本発明においては、乾燥状態のＳ−アデノシルメチオニン又はその塩を含有する酵母培養物を使用することが好ましい。
【００３８】
また、式（１）で秤量後の酵母培養物に、安定化剤、賦形剤などの成分を添加し、その後に以下の加熱操作を行ってもよい。
【００３９】
Ｓ−アデノシルメチオニン又はその塩を含有する酵母培養物を加熱する際の条件は特に限定されない。温度は通常４０℃以上であり、好ましくは５０℃以上であり、より好ましくは６０℃以上であり、更に好ましくは８０℃以上である。上限は通常２００℃以下であり、好ましくは１８０℃以下であり、より好ましくは１６０℃以下であり、更に好ましくは１２０℃以下である。通常は４０℃以上２００℃以下であり、好ましくは５０℃以上１８０℃以下であり、より好ましくは６０℃以上１６０℃以下であり、更に好ましくは８０℃以上１２０℃以下である。処理時間はメチルチオアデノシン又はその塩の生成度合いによって調節すればよい。
【００４０】
加熱の方法には特に制限がない。液状の酵母培養物の場合の加熱の方法としては例えば、酵母培養物を入れた容器を直火、電熱ヒーターなどの加熱装置にかけて攪拌しながら加熱する方法、酵母培養物を入れた容器を湯浴、油浴等に入れ攪拌しながら加熱する方法、酵母培養物をウォータージャケット付き容器に入れ、ウォータージャケット内に湯又はスチームを通して加熱する方法、酵母培養物を入れた容器を熱交換式プレートヒーターで加熱する方法、酵母培養物を入れた容器を密閉し、容器に湯をかけて加熱する方法、電磁波（電子レンジ）で加熱する方法、噴霧乾燥で加熱する方法、オートクレーブで加熱する方法、流動層乾燥機、棚乾燥機などの乾燥機で加熱する方法などが挙げられる。粉末など固体状の酵母培養物の場合の加熱の方法としては例えば、オートクレーブで加熱する方法、密閉した容器に湯をかけて加熱する方法、流動層乾燥機、回転通気式乾燥機、棚乾燥機などの乾燥機で加熱する方法、焙煎機で加熱する方法などが挙げられる。
【００４１】
加熱又は静置処理に続き、酵母培養物を乾燥処理することにより、メチルチオアデノシン又はその塩の含有量が高い酵母培養物を得ることができる。培養物を乾燥処理する方法は、特に限定されるものではなく、乾燥酵母菌体を調製する場合に通常行われている調製方法のいずれを用いてもよく、例えば、凍結乾燥法、スプレードライ法、ドラムドライ法等がある。更に、得られた乾燥酵母培養物を粉末状に加工することにより、取り扱い性に優れたメチルチオアデノシン又はその塩の含有量が高い酵母培養物を得ることができる。
【００４２】
〔本発明の内服組成物〕
本発明の内服組成物は、酵母とメチルチオアデノシン又はその塩とを含む。
【００４３】
メチルチオアデノシン又はその塩は公知の方法で得ることができ、市販品であってもよい。メチルチオアデノシン又はその塩の市販品としては例えば、シグマ−アルドリッチ社製の市販品、サンタクルズ社製の市販品などが挙げられ、前者が好ましい。また、メチルチオアデノシンの一部又は全部が酵母に含有されていてもよい。
【００４４】
酵母は生菌、死菌、菌体成分のいずれであってもよい。酵母は市販品であってもよい。
【００４５】
酵母は１種単独であってもよいし、品種、形態等の異なる２種以上の組み合わせであってもよい。メチルチオアデノシン及びその塩は、それぞれ１種単独であってもよいし、化学構造、塩の種類、形態等の２種以上の組み合わせであってもよい。内服組成物は、メチルチオアデノシン及びその塩の少なくともいずれかを含んでいればよく、その両方を含んでいてもよい。
【００４６】
本発明の内服組成物において、以下の式（２）で表される質量比が１／１００００以上１／２以下であることが好ましく、１／７５０以上１／５以下であることがより好ましく、１／１００以上１／５以下であることが更に好ましく、５．５／１００以上１／５以下であることが更により好ましい。これにより、優れた睡眠促進効果を得ることができる。Ａ／（Ａ＋Ｂ）が５．５／１００以上５０／１００以下であることにより、メチルチオアデノシンの苦味と酵母の口中残存感をともに低減することができる：
式（２）
Ａ／（Ａ＋Ｂ）
【００４７】
式（２）中、Ａは組成物中のメチルチオアデノシン含有量である。組成物中のメチルチオアデノシン含有量とは、組成物に含まれるメチルチオアデノシンの正味の量を意味する。内服組成物がメチルチオアデノシン塩を含有する場合、メチルチオアデノシン含有量には、メチルチオアデノシン塩の塩部分の質量は含まれない。酵母がメチルチオアデノシン又はその塩を含有する場合、酵母に含まれるメチルチオアデノシン又はその塩のメチルチオアデノシンの正味の量もメチルチオアデノシン含有量に反映される。式（２）中、Ｂは組成物中の酵母含有量である。
【００４８】
本発明の内服組成物の製造にあたっては、酵母とメチルチオアデノシン又はその塩とを混合すればよく、製造条件は特に限定されない。混合する際には、溶媒（メチルセルロース水溶液など）を用いてもよい。
【００４９】
本発明の内服組成物における、酵母とメチルチオアデノシン又はその塩との存在形態は特に限定されない。通常は、酵母がメチルチオアデノシン又はその塩の一部又は全部を含有する態様であってもよい。
【００５０】
本発明の内服組成物は、酵母とメチルチオアデノシン又はその塩との組み合わせにより、メチルチオアデノシン又はその塩の生理活性（例えば、細胞内ｃＡＭＰ濃度上昇活性、睡眠促進活性）を向上させることができるものと推測される。よって、本発明の内服組成物は、上記の生理活性を発揮するような各種の用途に用いることができる。
【００５１】
〔睡眠促進剤〕
上記本発明の酵母培養物及び内服組成物は自然睡眠促進効果を発揮するので、それぞれは、又は両者の組み合わせは、睡眠促進剤（睡眠促進組成物）、特にノンレム睡眠促進剤、より好ましくは深睡眠促進剤（深睡眠促進組成物）の有効成分として有用である。
【００５２】
睡眠促進効果とは、睡眠時間に占めるノンレム睡眠の時間の割合を延長する効果を意味する。ノンレム睡眠はポリソムノグラフ解析（脳波、眼電図、筋電図など）により判定できる。脳波としては、アルファ波（ヒトでは例えば８〜３Ｈｚ）の減少、及びデルタ波（ヒトでは例えば０．５〜４．５Ｈｚ）の増加によりノンレム睡眠を判定することができる。測定した脳波を、ＳｌｅｅｐＳｉｇｎ（登録商標）などの自動解析ソフトを用いても判定することができる。ノンレム睡眠の時間のうち深睡眠の時間の割合が高いことが好ましい。
【００５３】
「ノンレム睡眠を促進する」とは、対比される状態（例えば、本発明の内服組成物の摂取前の状態）と比べて、１）ノンレム睡眠の状態がより長時間観察されること、２）ノンレム睡眠の深さがより深まること、または、３）ノンレム睡眠への移行がより円滑に進むこと、のいずれかの効果が観察されることをいう。
【００５４】
「深睡眠」とは、ヒトの場合、睡眠の深さが一定以上の睡眠のことを言い、ノンレム睡眠をＩ〜ＩＶ層の４段階に分類した際（図１）のＩＩＩ層以上の深さにある睡眠状態のことをいう。ＩＩＩ層及びＩＶ層の睡眠中は、脳波全体（０．５〜２０Ｈｚ）に対するデルタ波（０．５〜４．５Ｈｚ）の占有率が一定以上であることを示すが、占有率が高いほどデルタパワー値が高いことが知られている。したがって、深睡眠とはデルタパワー値が高い睡眠とも定義することもできる。デルタパワー値は、例えば、ポリソムノグラフィー検査装置などを用いて測定することができ、睡眠の深さと時間の積算である「深睡眠の大きさ」はデルタパワー値に時間を乗じた値と定義される。
【００５５】
「深睡眠を促進する」とは、対比される状態（例えば、睡眠促進剤投与前の状態）と比べて、１）深睡眠の状態がより長時間観察されること、２）深睡眠の深さがより深まること、又は、３）深睡眠への移行がより円滑に進むこと、のいずれかの効果が観察されることをいう。すなわち、マウスやモルモットを用いた実験系では、上記のデルタパワー値に時間を乗じた値が大きくなることとし得る。
【００５６】
「自然睡眠」とは、正向反射消失を生じない睡眠のことをいう。「正向反射」とは、頭部を重力の方向に対して正常の位置を回復するようにする反射運動であり、立ち直り反射ともいわれる。
【００５７】
マウス、ラット等のげっ歯類動物における正向反射消失は、例えば、仰臥位又は背位に置かれたマウス又はラットが、３０秒以内に腹位に戻らない状態として確認し得る。睡眠状態にある該動物を仰臥位又は背位に置いたときに、即座に睡眠から覚めたり、又は速やかに腹位に戻ったりするような場合、その睡眠は、正向反射を消失してない睡眠である。ヒトでは、動物で定義されている「正向反射」に相当する言葉はない。しかしながら、ヒトにおいて「正向反射を消失しない」状態は、例えば、肩を叩かれた際にすぐに目が覚める等、容易に覚醒可能な睡眠がこれに該当し、自然睡眠と定義することができる。
【００５８】
自然睡眠に対し、麻酔は正向反射消失を引き起こす。マウス又はラットにおける正向反射消失は、麻酔効果の評価指標として知られている。ペントバルビタールなどの麻酔薬又はその他の薬剤による麻酔効果は、上記の正向反射消失動物数の増加により評価され得る。また、麻酔又は従来の医薬品としての睡眠薬による睡眠時、麻酔又は従来の睡眠薬を使用しない睡眠時の脳波について、フーリエ変換解析による周波数の分布解析を行うと、麻酔又は従来の睡眠薬による催眠と、これらを使用しない睡眠とでは、共にデルタ波（０．５〜４．５Ｈｚ）の脳波が増加するが、麻酔又は従来の睡眠薬による催眠においては、１５〜２０Ｈｚに、麻酔又は従来の睡眠薬を使用しない睡眠時には見られない周波数帯の脳波の増加が観察される。麻酔又は従来の睡眠薬を使用しない睡眠時には見られない周波数帯の脳波が何に由来しているかについては、現在明らかになっていないが、麻酔又は従来の睡眠薬による目覚めの悪さなどとの関連性が推察される。
【００５９】
本発明の睡眠促進剤中の酵母培養物の含有量は、特に制限はなく、効果を発揮し得る有効量などの諸条件に応じて適宜調整し得る。本発明の睡眠促進剤中の内服組成物の含有量は、特に制限はなく、効果を発揮し得る有効量などの諸条件に応じて適宜調整し得る。
【００６０】
本発明の睡眠促進剤は、本発明の酵母培養物及び内服組成物以外の、睡眠を促進し得る成分（睡眠薬を含む）と混合又は併用してもよい。ここで睡眠薬としては、例えば、睡眠改善剤、睡眠誘発剤などと称されるものが含まれ得る。但し、正向反射消失を生じるような種類又は量の麻酔薬との混合形態は除かれる。
【００６１】
本発明の睡眠促進剤は、本発明の酵母培養物及び／又は内服組成物のみから実質的になる製剤、又は、本発明の酵母培養物及び／又は内服組成物と、該酵母培養物及び該内服組成物以外の他の成分を１種又は２種以上を含有する製剤（組成物）とし得る。
【００６２】
本発明の睡眠促進剤に含まれる上記他の成分は、本発明の効果を本質的に損なわない限り、特に限定されない。上記他の成分としては例えば、賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、コーティング剤、着色剤、発色剤、矯味剤、着香剤、酸化防止剤、防腐剤、呈味剤、酸味剤、甘味剤、強化剤、ビタミン剤、膨張剤、増粘剤、界面活性剤などの薬理学的に許容可能な添加剤が挙げられる。これらの中から、睡眠を促進する効果、製剤に必要な諸特性（例えば、製剤安定性）を損なわず、かつ、最終製品（例えば、飲食品、医薬品、医薬部外品、栄養補助製品（サプリメント）など）の剤形に応じた添加剤を１種又は２種以上選択し得る。本発明の睡眠促進剤に含まれる他の成分は、１種でも２種以上の組み合わせであってもよい。
【００６３】
本発明の睡眠促進剤の剤形は、本発明の酵母培養物及び／又は内服組成物を有効成分とし得る形態であれば特に制限はない。経口投与される際の剤形の例としては、液状（液剤）、シロップ状（シロップ剤）、固形状（錠剤）、カプセル状（カプセル剤）、粉末状（顆粒、細粒）、ソフトカプセル状（ソフトカプセル剤）、半液体状、クリーム状、ペースト状が挙げられる。非経口投与する場合の剤形の例としては、液剤（注射剤、点鼻剤）、霧状（噴霧剤、吸入剤）などが挙げられる。これらの製剤は、本発明の酵母培養物を薬理的に許容される媒体と混合して調製し得る。
【００６４】
本発明の睡眠促進剤の投与量は、本発明の効果を損なわない限り特に制限は無く、適応される被投与生体の年齢、状態などの要因により適宜調整し得る。目的の効果を得る好ましい投与量は、成人１日あたりのメチルチオアデノシン又はその塩の投与量（ｍｇ／日）として、その下限は、好ましくは０．０１ｍｇ以上、より好ましくは０．１ｍｇ以上であり、更に好ましくは１ｍｇ以上であり、更により好ましくは１０ｍｇ以上である。その上限は、好ましくは１０００ｍｇ以下であり、より好ましくは５００ｍｇ以下であり、更に好ましくは１００ｍｇ以下である。
【００６５】
本発明の睡眠促進剤の投与形態は特に限定されず、経口投与及び非経口投与のいずれであってもよいが、侵襲性が少ないことから、経口投与が好ましい。経口投与としては例えば、口腔内投与、舌下投与などが挙げられる。非経口投与としては例えば、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、経皮投与、経鼻投与、経肺投与などが挙げられる。
【００６６】
本発明の睡眠促進剤の投与時期は特に限定されないが、通常は就寝前に投与され、就寝３時間前から就寝までの間に投与されることが好ましく、就寝２時間前から就寝の間に投与されることがより好ましく、就寝１時間前から就寝の間に投与されることが更に好ましく、就寝１時間前に投与されることが更により好ましい。
【００６７】
本発明の睡眠促進剤の摂取対象者は特に限定されない。摂取対象者としては、例えば、眠りが浅い、起床時にまだ眠い、寝つきが悪い、熟眠感が足りない（深く眠れない）、夢見が悪い、睡眠後にも疲れが取れない等、主観的睡眠感に不満がある対象者、疲労感を感じており主観的睡眠感を向上させたい対象者などが挙げられる。また、特段の問題のない対象者も、良好な睡眠の維持、睡眠障害の予防、自然睡眠をより促進することなどを目的として日常的に摂取し得る。
【００６８】
本発明の睡眠促進剤は、飲食品用の添加剤、医薬用の添加剤、医薬部外品用の添加剤として用いてもよい。これにより、飲食品、医薬、及び、医薬部外品に、自然睡眠を促進する効果を付与することができる。
【００６９】
〔本発明の飲食品〕
本発明の睡眠促進剤を含む飲食品は、上述のような睡眠促進効果及びこれに付随する効果が期待される飲食品として利用することができる。このような飲食品としては、例えば、健康食品、機能性食品、栄養補助食品（サプリメント）、特定保健用食品、医療用食品、病者用食品、乳児用食品、介護用食品、高齢者用食品等が挙げられる。
【００７０】
本発明の睡眠促進剤は、下記の実施例に示すように、睡眠中のノンレム睡眠時間を本発明の睡眠促進剤が投与されていない場合よりも増加させることができる。したがって、ノンレム睡眠時間の短縮もしくは睡眠の深さの減少による、又はその両方による睡眠の質低下が関連する疾病の予防及び治療への応用も期待される。
【００７１】
本発明の睡眠促進剤は、自然睡眠を促進することができるため、自然睡眠誘発剤としても使用し得る。「自然睡眠を誘発する」とは、正向反射消失の起こらない睡眠を誘発することをいう。本発明の自然睡眠誘発剤は、自然睡眠が促進できるため、良好な睡眠パターンを維持すること、又は乱れてしまった睡眠パターンを良好な睡眠パターンに回復することなどに寄与し得る。本発明の睡眠促進剤を自然睡眠誘発剤として用いる場合、その投与量等実施形態は、上記本発明の睡眠促進剤の実施形態を適用してよい。
【００７２】
〔本発明の飲食品〕
本発明の飲食品の形態に特に制限はなく、例えば、飲料（清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、粉末飲料、果実飲料、乳飲料、ゼリー飲料など）、菓子類（クッキー、ケーキ、ガム、キャンディー、タブレット、グミ、饅頭、羊羹、プリン、ゼリー、アイスクリーム、シャーベットなど）、水産加工品（かまぼこ、ちくわ、はんぺんなど）、畜産加工品（ハンバーグ、ハム、ソーセージ、ウィンナー、チーズ、バター、ヨーグルト、生クリーム、マーガリン、発酵乳など）、スープ（粉末状スープ、液状スープなど）、主食類（ご飯類、麺（乾麺、生麺）、パン、シリアルなど）、調味料（マヨネーズ、ショートニング、ドレッシング、ソース、たれ、しょうゆなど）が挙げられる。更に、本発明の飲食品は、健康食品、機能性食品、健康補助食品（サプリメント）、栄養補助食品、特定保健用食品、医療用食品、病者用食品、乳児用食品、介護用食品、高齢者用食品等の飲食品であってもよい。これらのうち、健康補助食品が好ましく、タブレット状の健康補助食品がより好ましい。
【実施例】
【００７３】
以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明は下記実施例に限定されるものではない。【００７４】
実施例１〜１３及び比較例１〜３
＜サンプルの調製＞
実施例１〜２、８〜１３及び比較例２〜３では、酵母（日清フーズ株式会社製、商品名：日清スーパーカメリヤドライイースト）と、メチルチオアデノシン又はその塩（以下、ＭＴＡと称する。シグマ−アルドリッチ社製、商品名：５’−Ｄｅｏｘｙ−５’−（ｍｅｔｈｙｌｔｈｉｏ）ａｄｅｎｏｓｉｎｅ）とを、混合物全体に占めるＭＴＡの質量比が表１の通りとなるように混合した。得られる組成物をサンプルとした。【００７５】
実施例３〜７では、それぞれＭＴＡを含有する酵母培養物（以下、ＭＴＡ含有酵母培養物と称する。）を用いた。ＭＴＡ含有酵母培養物の調製方法は下記の通りとした。Ｓ−アデノシルメチオニン又はその塩を含有する酵母培養物粉末（メーカー名：磐田化学工業株式会社、商品名：アミー）を乾燥機を用いて、１２０℃、２０分加熱し、ＭＴＡ含有酵母培養物を得た。各実施例におけるＭＴＡの質量比は表１の通りである。【００７６】
【表１】
2014163151.tif 000002
【００７７】
表１の脚注
＊：「質量比」は、サンプルが組成物の場合にはメチルチオアデノシン含有量と酵母の含有量の合計に占めるメチルチオアデノシン含有量の比である。サンプルがＭＴＡ含有酵母培養物の場合には酵母培養物中のＭＴＡの質量比である。【００７８】
なお、サンプルが酵母培養物のメチルチオアデノシン含有量は、前述の式（１）により定義される。例えば実施例１のサンプルは、高速液体クロマトグラフィ法により、Ｓ−アデノシルメチオニンとＭＴＡが分離できる公知の方法で測定した。サンプルが組成物の場合のメチルチオアデノシン含有量は、前述の式（２）により定義される。【００７９】
＜実験例１＞
ＨＥＫ細胞（パーキンエルマー社製、ｃＡＭＰＺｅｎ（ｃＡＭＰアッセイ用培養細胞））に対して実施例１〜１３及び比較例１〜５の各サンプルを３０分間作用させた。その後、ＦＲＥＴ（蛍光共鳴エネルギー転移）による細胞内ｃＡＭＰ濃度を測定するため、Ｅｕ−ｃＡＭＰ  ｔｒａｃｅｒ及びＵＬｉｇｈｔ−ａｎｔｉ−ｃＡＭＰ（いずれもパーキンエルマー社製、ＬＡＮＣＥ  Ｕｌｔｒａ  ｃＡＭＰ  Ｋｉｔ中の試薬）を添加し、１時間インキュベートした。その後、下記の条件でシグナル値を測定した。細胞内ｃＡＭＰ濃度上昇活性は下記の式（３）で算出した。【００８０】
＜測定条件＞
Ｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ  ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ：３２０ｎｍ
Ｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ：６６５ｎｍ
Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ：１００μｓ
Ｌａｇ  ｔｉｍｅ：５０μｓ【００８１】
＜計算式＞
式（３）：
細胞内ｃＡＭＰ濃度上昇活性％＝
｛（サンプル無添加時の蛍光シグナル値−サンプルの蛍光シグナル値）／
（サンプル無添加時の蛍光シグナル値−ＭＴＡ単独投与時の蛍光シグナル値）｝
×１００【００８２】
各実施例の細胞内ｃＡＭＰ濃度上昇活性の結果を図２に示す。図２から以下のことが明らかである。【００８３】
実施例１、２、８〜１３では、比較例１〜５と比較して活性が高かった。このことは、本発明の組成物は細胞内ｃＡＭＰ濃度を高める効果があることを示している。【００８４】
実施例３〜７は、比較例１〜５と比較して活性が高かった。このことは、本発明の酵母培養物は細胞内ｃＡＭＰ濃度を高める効果があることを示している。【００８５】
実施例７と８とは、ＭＴＡの質量比が同等であるにもかかわらず、実施例７は実施例８よりも活性が高かった。このことは、ＭＴＡが酵母内に含有されていると、ＭＴＡに酵母を加えた場合よりも、細胞内ｃＡＭＰ濃度をより顕著に高める効果があることを示している。【００８６】
睡眠中枢の細胞内ｃＡＭＰ濃度が高まると睡眠の促進につながると考えられる。このことから、本発明の組成物及び酵母培養物は、睡眠促進効果を発揮することと推測される。【００８７】
実施例１４及び比較例６〜８
＜評価サンプルと投与量＞
比較例６のサンプル（コントロール溶液）として０．５質量％メチルセルロース水溶液を用いた。投与量は１０ｍＬ／体重ｋｇとした。【００８８】
比較例７のサンプルは、ＭＴＡ（シグマ−アルドリッチ社製、商品名：５’−Ｄｅｏｘｙ−５’−（ｍｅｔｈｙｌｔｈｉｏ）ａｄｅｎｏｓｉｎｅ）を０．５質量％メチルセルロース（シグマ−アルドリッチ社製、商品名Ｍｅｔｈｙｌ  ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）水溶液に懸濁して調製した。投与量はＭＴＡの量として１５ｍｇ／体重ｋｇ（懸濁液として１０ｍＬ／体重ｋｇ）とした。【００８９】
実施例１４のサンプルは、以下のようにして調製した。市販のＳ−アデノシルメチオニン含有酵母培養物粉末（メーカー名：磐田化学工業株式会社、商品名：アミー）を１２０℃で２０分加熱処理した。得られた酵母培養物中のメチルチオアデノシン含有量は２７５ｍｇ、酵母培養物（ＭＴＡを含む）の乾燥重量は５０００ｍｇ、ＭＴＡ以外の酵母培養物の乾燥重量は４７２５ｍｇであった。すなわち、酵母培養物に対するメチルチオアデノシン含有量の質量比（前述の式（１）で表される）は５．５質量％であり、前述の式（２）で表される比率は２７５／（２７５＋４７２５）となり、５．５／１００（約６／１００）であった。結果物を０．５質量％メチルセルロース水溶液に懸濁して、懸濁液をサンプルとした。投与量は酵母培養物として２７５ｍｇ／体重ｋｇ（懸濁液として１０ｍＬ／体重ｋｇ、ＭＴＡ量としては１５ｍｇ／体重ｋｇ）とした。【００９０】
比較例８のサンプルはＳ−アデノシルメチオニン含有酵母を含むサンプルであり、以下のようにして調製した。実施例１４で用いたのと同じ市販のＳ−アデノシルメチオニン含有酵母培養物粉末を、０．５質量％メチルセルロース水溶液に懸濁して、懸濁液をサンプルとした。投与量はＳ−アデノシルメチオニン含有酵母として２７５ｍｇ／体重ｋｇ（懸濁液として１０ｍＬ／ｋｇ体重、ＭＴＡ量としては０ｍｇ／体重ｋｇ）とした。【００９１】
＜実験例２＞
日本ＳＬＣより購入した８週齢雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、脳波及び筋電用の電極を装着した。電極装着後、回復チャンバーにて１０日間回復させた。その後、記録用チャンバーに移し、ケーブルを接続した。脳波解析ソフトであるＳｌｅｅｐＳｉｇｎ（登録商標）Ｖｅｒ  ３．０（キッセイコムテック株式会社）にて脳波判別可否を確認後、３日間馴化させた。その後、脳波を２４時間測定し、睡眠覚醒リズムが維持されているかどうかを確認し、各実施例及び比較例の投与群分けを実施した。各投与群は８匹とした（ｎ＝８）。【００９２】
暗期開始直前に、各投与群にそれぞれサンプルを経口投与し、２４時間脳波を記録した。なお、脳波測定を行った日とは別の日に、酵母培養物として２７５ｍｇ／体重ｋｇを強制経口投与した全てのマウスにおいて、仰臥位にさせるために触れた際、覚醒を示したことから、これらの睡眠は、「正向反射を消失していない」状態であることを確認した。【００９３】
記録後、脳波をＳｌｅｅｐＳｉｇｎ（登録商標）  Ｖｅｒ  ３．０により自動解析を行い、評価実施者がその自動解析の結果を確認して、覚醒、レム睡眠及びノンレム睡眠の各睡眠ステージに分類した。脳波測定時間から４時間後までのノンレム睡眠時間の総積算量（単位：ｓｅｃ）を算出し、同じ個体の非投与時（ｂａｓｅｌｉｎｅ）のノンレム睡眠量に対する百分率を求め、その平均値を表２の「睡眠量」の欄に示した。【００９４】
【表２】
2014163151.tif 000003
【００９５】
表２の結果から明らかな通り、比較例６〜８と比較して、実施例１４においては投与時のノンレム睡眠量の非投与時のノンレム睡眠量に対する比率が非常に高かった。このことは、本発明の酵母培養物は優れた睡眠改善効果を有することを示している。【００９６】
実施例１５〜１９
＜評価サンプルの調製＞
各サンプルは、ＭＴＡを表３に示す量含有する酵母培養物であり、以下のようにして調製した。酵母（日清フーズ株式会社製、商品名：日清スーパーカメリヤドライイースト）と、メチルチオアデノシン又はその塩（以下、ＭＴＡと称する。シグマ−アルドリッチ社製、商品名：５’−Ｄｅｏｘｙ−５’−（ｍｅｔｈｙｌｔｈｉｏ）ａｄｅｎｏｓｉｎｅ）とを、混合物全体に占めるＭＴＡの質量比が表３の通りとなるように混合した。得られる組成物をサンプルとした。【００９７】
＜実験例３＞
被験者１０名がそれぞれサンプル５０ｍｇを経口摂取後、苦味の程度と口中への残存感を下記の基準で評価し、各パネラーの評点の平均値を求めた。苦味の評価ではＭＴＡそのものの苦味を基準とし、これを１点として評価した。口中への残存感の評価では酵母のみでの残存感を基準とし、これを１点として評価した。【００９８】
苦味の評価基準
〔評点基準〕
５点：苦味を感じない
４点：苦味をやや感じる
３点：苦味を感じる
２点：苦味を強く感じる
１点：苦味を耐えがたく感じる【００９９】
〔評価基準〕
◎：平均値３．５点以上
○：平均値２．５点以上３．５点未満
△：平均値１．５点以上２．５点未満
×：平均値１．０点以上〜１．５点未満【０１００】
・口中残存感の評価基準
５点：口中への残存を感じない
４点：口中への残存をやや感じる
３点：口中への残存を感じる
２点：口中への残存を強く感じる
１点：口中への残存を耐えがたく感じる【０１０１】
上記評価基準により算出した口中への残存感の評点の１０名の平均値を求めその数値により口中残存感を判定した。結果を表３に示す。表３中、ＭＴＡの質量比とは、酵母培養物に対するＭＴＡの質量比である。【０１０２】
【表３】
2014163151.tif 000004
【０１０３】
表３の結果から、実施例１６〜１８ではＭＴＡに由来する苦味及び口中の残存感がいずれも低減されていた。このことは、本発明の酵母培養物は、ＭＴＡ含量が０．０６〜０．５質量％であることにより、良好な風味を呈することを示している。【０１０４】
実施例２０
＜評価サンプルの調製＞
ＭＴＡ含有酵母培養物は、以下のようにして調製した。市販のＳ−アデノシルメチオニン含有酵母培養物粉末（メーカー名：三菱ガス化学株式会社、商品名：ＳＡＭｅ含有乾燥酵母）を１２０℃で２０分加熱処理した。得られた酵母培養物中のメチルチオアデノシン含有量は３２０ｍｇ、酵母培養物（ＭＴＡを含む）の乾燥重量は５０００ｍｇ、ＭＴＡ以外の酵母培養物の乾燥重量は４６８０ｍｇであった。すなわち、酵母培養物に対するメチルチオアデノシン含有量の質量比（前述の式（１）で表される）は６．４質量％であり、前述の式（２）で表される比率は３２０／（４６８０＋３２０）となり、６．４／１００であった。【０１０５】
実施例２０のサンプルとして、上記のＭＴＡ含有酵母培養物を配合した錠剤（４錠中のメチルチオアデノシン含有量：２１ｍｇ）を用意した。また、比較例９のサンプルとして、ＭＴＡ含有酵母を含まないプラセボの錠剤を用意した。各組成の詳細は、表４に示すとおりである。【０１０６】
【表４】
2014163151.tif 000005
【０１０７】
＜実験例４＞（ヒトにおける評価）
６名の被験者に上記実施例２０のサンプルの錠剤４錠を就寝１時間前に経口摂取させ、２電極方式の携帯型脳波測定器（スリープウェル（株）社製「脳波計スリープスコープ」）を装着し、被験者の睡眠中における脳波を測定した。また、同様にして、同じ被験者６名に上記比較例９のサンプルの錠剤４錠を就寝１時間前に経口摂取させ、２電極方式の携帯型脳波測定器（スリープウェル（株）社製「脳波計スリープスコープ」）を装着し、被験者の睡眠中における脳波を測定した。各被験者に対して、実施例２０のサンプルおよび比較例９のサンプルそれぞれについて、投与および脳波測定を４回行った。【０１０８】
また、上記投与および脳波測定とは別の機会に、各サンプルを同じ被験者６名に経口摂取させ、被験者が就寝後、被験者の肩を叩いた。その結果、被験者が容易に目を覚ますこと、すなわち各サンプル（実施例２０及び比較例９のサンプル）を各被験者に経口摂取させた後の睡眠は、自然睡眠であることを各被験者について確認した。【０１０９】
（脳波解析）
脳波は、スリープウェル（株）に依頼して解析した。睡眠の深さは睡眠中の脳波のデルタパワー値によって知ることができ、デルタパワー値が大きいほど睡眠の深さは深い。一般に、就寝直後にノンレム睡眠が出現し、その後レム睡眠が出現する。本実験では、就寝直後に出現したノンレム睡眠中のデルタパワー値（すなわち、就寝後一旦ノンレム睡眠に入ったその後にレム睡眠が出現するまでのデルタパワー値）を、睡眠初期のデルタパワー値とした。【０１１０】
デルタパワー値は、個々人により異なる。そこで、実施例２０のサンプルまたは比較例９のサンプルを経口摂取させた後の、睡眠初期におけるデルタパワー値を被験者ごとに４回測定し、４回の測定値の平均値を算出した。被験者ごとに、プラセボ（比較例９のサンプル）摂取後のデルタパワー値に対する、ＭＴＡ含有酵母（実施例２０のサンプル）摂取後におけるデルタパワー値の変化率（％）を下式（２）により算出した。【０１１１】
〔式（２）〕
デルタパワー値の変化率（％）＝
｛（実施例２０のサンプル摂取後のデルタパワー値の平均値）／（比較例９のサンプル摂取後のデルタパワー値の平均値）｝×１００【０１１２】
表５にデルタパワー値の変化率を示す。デルタパワー値の変化率は、被験者６人の平均値である。【０１１３】
【表５】
2014163151.tif 000006
【０１１４】
表５から、以下のことが分かる。サンプルとしてＭＴＡ含有酵母の錠剤を経口摂取させた実施例２０では、プラセボ錠を経口摂取させた比較例９に比べ、睡眠初期のデルタパワー値が大きい。このことは、本発明の酵母培養物及び内服組成物が睡眠初期のノンレム睡眠を十分深めることができること、これにより、睡眠を促進することができ、良好な自然睡眠を誘発することができることを示している。
【図１】
2014163151.tif 000007
【図２】
2014163151.tif 000008
【国際調査報告】
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2014163151.tif 000010
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