(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
タウタンパク質のリン酸化エピトープに結合する単離された抗体であって、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、並びにＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含み、
（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１６のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号２７のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号３３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号３４のアミノ酸配列を含み，及びＨＶＲ−Ｈ３が配列番号３５のアミノ酸配列を含む；
（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１７のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号２７のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号３３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号３４のアミノ酸配列を含み，及びＨＶＲ−Ｈ３が配列番号３５のアミノ酸配列を含む；
（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号８のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号２１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号２９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号３３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号３４のアミノ酸配列を含み，及びＨＶＲ−Ｈ３が配列番号３５のアミノ酸配列を含む；
（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号１４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号２５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号３１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号３３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号３４のアミノ酸配列を含み，及びＨＶＲ−Ｈ３が配列番号３５のアミノ酸配列を含む；又は
（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号９のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号１７のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号３１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号３３のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号３４のアミノ酸配列を含み，及びＨＶＲ−Ｈ３が配列番号３５のアミノ酸配列を含む、抗体。
【請求項２】
リン酸化エピトープが、ヒトタウ（配列番号５９）４０９位のセリン；ヒトタウ（配列番号５９）４０４位のセリン；及びヒトタウ（配列番号５９）４０４位及び４０９位のセリンからなる群から選択されるリン酸化アミノ酸残基を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１又は２に記載の抗体。
【請求項４】
（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１又は２に記載の抗体。
【請求項５】
（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１又は２に記載の抗体。
【請求項６】
（ａ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１又は２に記載の抗体。
【請求項７】
（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１又は２に記載の抗体。
【請求項８】
配列番号３６、配列番号３７、配列番号４４、配列番号５４、及び配列番号５５からなる群から選択される軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列及び配列番号５８の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含むか、又は、配列番号３６、配列番号３７、配列番号４４、配列番号５４、及び配列番号５５からなる群から選択されるアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列及び配列番号５８のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列を含む、請求項１又は２に記載の抗体。
【請求項９】
モノクローナル抗体である、請求項１〜８の何れか一項に記載の抗体。
【請求項１０】
ヒト化、又はキメラ抗体である、請求項１〜９の何れか一項に記載の抗体。
【請求項１１】
ヒト化抗体である、請求項１０に記載の抗体。
【請求項１２】
完全長ＩｇＧ１抗体である、請求項１〜１１の何れか一項に記載の抗体。
【請求項１３】
完全長ＩｇＧ４抗体である、請求項１〜１１の何れか一項に記載の抗体。
【請求項１４】
完全長ＩｇＧ１  Ｎ２９７Ｇ抗体である、請求項１〜１１の何れか一項に記載の抗体。
【請求項１５】
ヒトタウタンパク質上のリン酸化エピトープに結合する抗体断片である、請求項１〜１１の何れか一項に記載の抗体。
【請求項１６】
タウタンパク質がヒトタウタンパク質である、請求項１〜１５の何れか一項に記載の抗体。
【請求項１７】
リン酸化されていないタウタンパク質の同じエピトープに結合しない、請求項１〜１６の何れか一項に記載の抗体。
【請求項１８】
リン酸化されていないタウタンパク質の同じエピトープに、リン酸化されているタウタンパク質の同じエピトープと比較して、低下した親和性で結合する、請求項１〜１６の何れか一項に記載の抗体。
【請求項１９】
タウタンパク質が配列番号５９のアミノ酸配列を含む、請求項１〜１８の何れか一項に記載の抗体。
【請求項２０】
ヒトタウタンパク質上のエピトープが、アミノ酸残基４０４〜４１１を含む、請求項１６〜１９の何れか一項に記載の抗体。
【請求項２１】
リン酸化エピトープに１ｎＭと４５ｎＭの間のＫｄで結合する、請求項１〜２０の何れか一項に記載の抗体。
【請求項２２】
リン酸化エピトープに≦１ｎＭのＫｄで結合する、請求項１〜２１の何れか一項に記載の抗体。
【請求項２３】
≦５×１０−３ｓ−１の解離速度定数を有する、請求項１〜２２の何れか一項に記載の抗体。
【請求項２４】
≧３×ｌ０５Ｍ−１ｓ−１の結合速度定数を有する、請求項１〜２３の何れか一項に記載の抗体。
【請求項２５】
タウタンパク質が、対らせん状細線維（ＰＨＦ）に存在するような、凝集した微小管関連タウタンパク質、及び／又は過リン酸化タウタンパク質である、請求項１〜２４の何れか一項に記載の抗体。
【請求項２６】
請求項１〜２５の何れか一項に記載の抗体をコードする、単離された核酸。
【請求項２７】
請求項２６に記載の核酸を含む宿主細胞。
【請求項２８】
抗体が製造されるように、請求項２７に記載の宿主細胞を培養することを含む、抗体を製造する方法。
【請求項２９】
請求項１〜２５の何れか一項に記載の抗体、及び細胞傷害性薬剤を含む、免疫複合体。
【請求項３０】
請求項１〜２５の何れか一項に記載の抗体、及び薬学的に許容され得る担体を含む、薬学的製剤。
【請求項３１】
医薬としての使用のための、請求項１〜２５の何れか一項に記載の抗体。
【請求項３２】
個体におけるタウタンパク質関連疾患又は障害の処置における使用のための、請求項１〜２５の何れか一項に記載の抗体。
【請求項３３】
個体におけるタウオパシーの処置における使用のための、請求項１〜２５の何れか一項に記載の抗体。
【請求項３４】
個体におけるアルツハイマー病（ＡＤ）の処置における使用のための、請求項１〜２５の何れか一項に記載の抗体。
【請求項３５】
個体における前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）の処置における使用のための、請求項１〜２５の何れか一項に記載の抗体。
【請求項３６】
個体における認識機能の障害又は喪失の処置における使用のための、請求項１〜２５の何れか一項に記載の抗体。
【請求項３７】
個体の脳におけるタウタンパク質の総レベルを低下させることにおける使用のための、請求項１〜２５の何れか一項に記載の抗体。
【請求項３８】
個体の脳におけるリン酸化又は過リン酸化タウタンパク質の総レベルを低下させることにおける使用のための、請求項１〜２５の何れか一項に記載の抗体。
【請求項３９】
個体における、タウタンパク質関連疾患又は障害、タウオパシー、ＡＤ、ＦＴＤ、及び、認識機能の障害又は喪失から選択される、個体における疾患又は障害を処置するための医薬の製造における、請求項１〜２５の何れか一項に記載の抗体の使用。
【請求項４０】
個体の脳におけるタウタンパク質の総レベルを低下させるための、又は、個体の脳におけるリン酸化又は過リン酸化タウタンパク質レベルを低下させるための、医薬の製造における、請求項１〜２５の何れか一項に記載の抗体の使用。
【請求項４１】
タウタンパク質関連疾患又は障害、タウオパシー、ＡＤ、ＦＴＤ、及び、認識機能の障害又は喪失から選択される、疾患又は障害を有する個体を処置するための医薬であって、請求項１〜２５の何れか一項に記載の抗体の有効量を含む、医薬。
【請求項４２】
疾患又は障害がＡＤである、請求項４１に記載の医薬。
【請求項４３】
個体の脳における総タウタンパク質、リン酸化タウタンパク質、又は過リン酸化タウタンパク質のレベルを低下させるための医薬であって、個体の脳における、総タウタンパク質、リン酸化タウタンパク質、又は過リン酸化タウタンパク質のレベルを低下させるために、請求項１〜２５の何れか一項に記載の抗体の有効量を含む、医薬。
【請求項４４】
個体がヒトである、請求項３１〜４３の何れか一項に記載の抗体、使用、又は医薬。
【請求項４５】
神経原線維タングル、ニューロピルスレッド、及び変性神経突起の検出における使用のための、請求項１〜２５の何れか一項に記載の抗体。
【請求項４６】
タウタンパク質関連疾患又は障害、タウオパシー、ＡＤ、又はＦＴＤの検出における使用のための、請求項１〜２５の何れか一項に記載の抗体。
【請求項４７】
ＡＤの検出における使用のための、請求項４６に記載の抗体。
【請求項４８】
個体の脳におけるタウタンパク質の総レベルの調節における使用のための、請求項１〜２５の何れか一項に記載の抗体。
【請求項４９】
個体の脳におけるリン酸化又は過リン酸化タウタンパク質の総レベルの調節における使用のための、請求項１〜２５の何れか一項に記載の抗体。
【請求項５０】
個体の脳におけるタウタンパク質の総レベルを調節するための、又は、個体の脳におけるリン酸化又は過リン酸化タウタンパク質レベルを調節するための、医薬の製造における、請求項１〜２５の何れか一項に記載の抗体の使用。
【請求項５１】
個体の脳における総タウタンパク質、リン酸化タウタンパク質、又は過リン酸化タウタンパク質のレベルを調節するための医薬であって、個体の脳における、総タウタンパク質、リン酸化タウタンパク質、又は過リン酸化タウタンパク質のレベルを調節するために、請求項１〜２５の何れか一項に記載の抗体の有効量を含む、医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、タウタンパク質のリン酸化エピトープに高特異性及び／又は高親和性で結合する、リン酸化抗タウ抗体（anti-Tau antibodies）、及び当該抗体を使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
神経原線維タングル（Neurofibrally tangles）及び神経網糸屑構造（ニューロピルスレッド、neuropil threads）（ＮＴ）は、アルツハイマー病（ＡＤ）の主要な神経病理学的特徴である。ＮＴは、リン酸化を含む翻訳後修飾を経た微小管関連タウタンパク質から成り、過リン酸化タウ配座異性体の凝集によって発達する。ＡＤは、この病理を多くの神経変性タウオパシー（tauopathies）、特に、特定の型の頭側頭認知症（ＦＴＤ）と共通で有する。タウタンパク質は、ＡＤにおける認識力の減退に重要な役割を果たすと考えられ、神経変性タウオパシーに関連している。
【０００３】
タウタンパク質を標的とする治療手法は乏しく、タウのリン酸化を病理学的レベルまで増加させると考えられるキナーゼの阻害剤、及び、過リン酸化タウタンパク質の細胞質での凝集をブロックする化合物を主に含むものである。これらの手法は、特異性と有効性の様々な弱点を有する。リン酸化病理学的タウ配座異性体に結合するマウス抗体は、例えば、WO 2012/045882に既に報告されている。しかし、例えば、アミロイドとしてＡＤに典型的な、過リン酸化タンパク質タウの神経内凝集により引き起こされる、ＡＤのアミロイド病理のような神経変性疾患の原因となることが知られる又は推測される、病理学的タンパク質配座異性体に反作用する、追加の受動的及び／又は能動的な免疫療法が、未だ必要である。
【発明の概要】
【０００４】
本発明は、タウタンパク質のリン酸化エピトープに高い特異性で及び／又は高い親和性で結合する、リン酸化抗タウ抗体（anti-Tau antibodies）、及び当該抗体を使用する方法に関する。
【０００５】
ある実施態様において、本発明は、タウタンパク質のリン酸化されたエピトープに結合する、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１つの配列を含む単離された抗体に関するものであり、（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１は、アミノ酸配列Ｘ１ＳＳＱＸ２ＬＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＧＸ７ＴＹＸ８Ｈ（配列番号８９）を含み、ここで、Ｘ１＝Ｒ又はＴ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ又はＶ；Ｘ３＝Ｖ、Ｉ又はＲ；Ｘ４＝Ｈ又はＲ；Ｘ５＝Ｓ、Ｒ、Ｇ又はＫ；Ｘ６＝Ｈ、Ｎ、Ｒ、Ｋ又はＧ；Ｘ７＝Ｋ又はＲ；及びＸ８＝Ｌ又はＶであり；（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２は、アミノ酸配列ＫＶＸ９Ｘ１０ＲＦＸ１１（配列番号９０）を含み、ここで、Ｘ９＝Ｓ、Ｋ又はＲ；Ｘ１０＝Ｎ、Ｋ又はＨ；及びＸ１１＝Ｓ、Ｆ、Ｇ、Ｋ、Ｒ、Ｙ又はＬであり、；そして、（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３は、アミノ酸配列ＳＱＴＸ１２Ｘ１３ＦＰＸ１４Ｔ（配列番号９１）を含み、ここで、Ｘ１２＝Ａ又はＲ；Ｘ１３＝Ｈ、Ｒ、Ｑ又はＹ；Ｘ１４＝Ｙ又はＲであり；その抗体は、ＨＶＲ−Ｌ１のアミノ酸配列がＲＳＳＱＳＬＶＨＳＨＧＫＴＹＬＨ（配列番号１５）、又はＲＳＳＱＲＬＶＨＳＨＧＫＴＹＬＨ（配列番号９２）；ＨＶＲ−Ｌ２のアミノ酸配列がＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号１６）；ＨＶＲ−Ｌ３のアミノ酸配列がＳＱＴＡＨＦＰＹＴ（配列番号３０）であるＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３を含まない。
【０００６】
特定の実施態様において、本願発明に係る抗体は、ヒトタウ（配列番号５９）の４０９位のセリン；ヒトタウ（配列番号５９）の４０４位のセリン；及びヒトタウ（配列番号５９）の４０４位及び４０９位のセリン、から選択されるリン酸化アミノ酸残基を含むタウタンパク質のリン酸化エピトープに結合する。
【０００７】
いくつかの実施態様において、本願発明に係る抗体は、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３からなる群から選択される少なくとも１つの配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ１はアミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮ（配列番号３３）；ＨＶＲ−Ｈ２はアミノ酸配列ＤＩＮＰＮＲＧＧＴＴＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号３４）；及びＨＶＲ−Ｈ３はアミノ酸配列ＹＹＡＶＧＹ（配列番号３５）を含む。
【０００８】
特定の実施態様において、本願発明に係る抗体は、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１つの配列を含み、ここで、（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、そして、（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０００９】
特定の実施態様において、本願発明に係る抗体は、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３を含み、ここで、（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、そして、（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００１０】
ある実施態様において、本願発明に係る抗体は、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【００１１】
ある実施態様において、本願発明に係る抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【００１２】
ある実施態様において、本願発明に係る抗体は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【００１３】
ある実施態様において、本願発明に係る抗体は、（ａ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【００１４】
ある実施態様において、本願発明に係る抗体は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【００１５】
特定の実施態様において、本願発明に係る抗体は、配列番号３６、配列番号３７、配列番号４４、配列番号５４、及び配列番号５５からなる群から選択される軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列、又は配列番号３６、配列番号３７、配列番号４４、配列番号５４、及び配列番号５５からなる群から選択されるアミノ酸配列に、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＬを含む。
【００１６】
特定の実施態様において、本願発明に係る抗体は、配列番号５８の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列、又は配列番号５８のアミノ酸配列に、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＨを含む。
【００１７】
いくつかの実施態様において、本願発明に係る抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施態様において、本願発明に係る抗体は、ヒト、ヒト化、又はキメラ抗体である。特定の実施態様において、本願発明に係る抗体は、ヒト、又はヒト化抗体である。
【００１８】
特定の実施態様において、本願発明に係る抗体は、完全長ＩｇＧ１抗体である。別の特定の実施態様において、本願発明に係る抗体は、完全長ＩｇＧ４抗体である。別の特定の実施態様において、本願発明に係る抗体は、完全長ＩｇＧ１  Ｎ２９Ｇ抗体である。また別の特定の実施態様において、本願発明に係る抗体は、ヒトタウタンパク質のリン酸化エピトープに結合する抗体断片である。
【００１９】
特定の実施態様において、本願発明に係る抗体は、ヒトタウタンパク質（例えば、配列番号５９のタウタンパク質）である、タウタンパク質に結合する。
【００２０】
いくつかの実施態様において、本願発明に係る抗体は、タウタンパク質のリン酸化エピトープに結合するが、タウタンパク質の、リン酸化されていない同じエピトープには結合しない。いくつかの実施態様において、本願発明に係る抗体は、タウタンパク質のリン酸化エピトープに結合するが、タウタンパク質の、リン酸化されていない同じエピトープには、実質的に低下したアフィニティで結合する。特定の実施態様において、本願発明に係る抗体は、配列番号５９のアミノ酸配列を含むタウタンパク質のリン酸化エピトープに結合する。特定の実施態様において、本願発明に係る抗体は、アミノ酸残基４０４〜４１１を含むヒトタウタンパク質（配列番号５９）のリン酸化エピトープに結合する。
【００２１】
特定の実施態様において、本願発明に係る抗体は、約１ｎＭから４５ｎＭの間のＫｄで、タウタンパク質のリン酸化エピトープに結合する。ある実施態様において、本願発明に係る抗体は、≦１ｎＭのＫｄで、タウタンパク質のリン酸化エピトープに結合する。特定の実施態様において、本願発明に係る抗体は、≦５×１０−３ｓ−１のＫｄで、タウタンパク質のリン酸化エピトープに結合する。特定の実施態様において、本願発明に係る抗体は、≧３×ｌ０５Ｍ−１ｓ−１、又は≧７×ｌ０５Ｍ−１ｓ−１の結合速度定数で、タウタンパク質のリン酸化エピトープに結合する。
【００２２】
いくつかの実施態様において、本願発明に係る抗体は、対らせん状細線維（ＰＨＦ）に存在するような、凝集した微小管関連タウタンパク質、及び／又は、過リン酸化タウタンパク質に結合する。
【００２３】
別の実施態様において、本願発明は、本明細書に記載される任意の抗体をコードする、単離された核酸に関する。
【００２４】
また別の実施態様において、本願発明は、本明細書に記載の任意の抗体をコードする単離された核酸を含む宿主細胞に関する。特定の実施態様において、本願発明は、そのような宿主細胞の培養を含む、抗体を製造する方法に関連し、それにより抗体が製造される。
【００２５】
また別の実施態様において、本願発明は、本明細書に記載の任意の抗体、及び細胞傷害性薬剤を含む、免疫複合体に関する。
【００２６】
更なる実施態様において、本願発明は、本明細書に記載の任意の抗体、及び薬学的に許容され得る担体を含む、薬学的製剤に関する。
【００２７】
いくつかの実施態様において、本願発明は、医薬としての使用のための、本明細書に記載の抗体（本明細書に記載の任意の抗体）に関する。いくつかの実施態様において、本願発明に係る抗体は、個体におけるタウタンパク質関連疾患又は障害の処置における使用のための抗体である。特定の実施態様において、本願発明に係る抗体は、個体におけるタウオパシーの処置における使用のための抗体である。いくつかの実施態様において、本願発明に係る抗体は、個体におけるアルツハイマー病（ＡＤ）の処置における使用のための抗体である。いくつかの実施態様において、本願発明に係る抗体は、個体における前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）の処置における使用のための抗体である。いくつかの実施態様において、本願発明に係る抗体は、個体における認識機能の障害又は喪失の処置における使用のための抗体である。特定の実施態様において、本願発明に係る抗体は、個体の脳におけるタウタンパク質の総レベルを低下させること又は調節することにおける使用のための抗体である。特定の実施態様において、本願発明に係る抗体は、個体の脳におけるリン酸化又は過リン酸化タウタンパク質の総レベルを低下させること又は調節することにおける使用のための抗体である。
【００２８】
特定の実施態様において、本願発明に係る抗体は、個体におけるタウタンパク質関連疾患又は障害、タウオパシー、ＡＤ、ＦＴＤ、及び、認識機能の障害又は喪失から選択される、個体における疾患又は障害を処置するための医薬の製造における使用のための抗体である。いくつかの実施態様において、本願発明に係る抗体は、個体の脳におけるタウタンパク質の総レベルを低下させるため又は調節するための医薬の製造における使用のための抗体である。いくつかの実施態様において、本願発明に係る抗体は、個体の脳におけるリン酸化又は過リン酸化タウタンパク質レベルを低下させるため又は調節するための医薬の製造における使用のための抗体である。
【００２９】
特定の実施態様において、本願発明は、タウタンパク質関連疾患又は障害、タウオパシー、ＡＤ、ＦＴＤ、及び、認識機能の障害又は喪失から選択される、疾患又は障害を有する個体を処置するための方法に関し、当該方法は、本願明細書に記載の抗体（本願明細書に記載の任意の抗体）の有効量を個体に投与することを含む。ある実施態様において、本願に係る方法に従って処置される疾患又は障害は、ＡＤである。
【００３０】
特定の実施態様において、本願発明は、個体の脳における、総タウタンパク質、リン酸化タンパク質、又は過リン酸化タウタンパク質のレベルを低下させる方法に関し、当該方法は、本願明細書に記載の抗体（本願明細書に記載の任意の抗体）の有効量を、個体の脳における、総タウタンパク質、リン酸化タンパク質、又は過リン酸化タウタンパク質のレベルを低下させるために、個体に投与することを含む。いくつかの実施態様において、本願発明は、個体の脳における、総タウタンパク質、リン酸化タンパク質、又は過リン酸化タウタンパク質のレベルを調節する方法に関し、当該方法は、本願明細書に記載の抗体（本願明細書に記載の任意の抗体）の有効量を、個体の脳における、総タウタンパク質、リン酸化タンパク質、又は過リン酸化タウタンパク質のレベルを調節するために、個体に投与することを含む。
【００３１】
特定の実施態様において、本明細書に記載の方法に従って処置される個体は、ヒトである。特定の実施態様において、抗体は、ヒトに投与されるための抗体である。特定の実施態様において、本明細書に記載の使用は、ヒトを処置するための使用である。
【００３２】
別の実施態様において、本発明は、神経原線維タングル、ニューロピルスレッド、及び／又は変性神経突起の検出における使用のための抗体に関する。いくつかの実施態様において、本明細書に記載の抗体（本明細書に記載の任意の抗体）は、タウタンパク質関連疾患又は障害、タウオパシー、ＡＤ、又はＦＴＤの検出における使用のための抗体である。特定の実施態様において、本明細書に記載の抗体（本明細書に記載の任意の抗体）は、ＡＤの検出における使用のための抗体である。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１Ａ】図１（Ａ〜Ｃ）は、５２０２．４抗体、及び５２０２．４のｐタウ親和性成熟変異体、すなわちＴＡＭ１からＴＡＭ２３、のＣＤＲを含む、軽鎖可変領域のアミノ酸配列のアライメント（ａｌｉｇｎｍｅｎｔ）を示す。抗体５２０２．４は、２０１３年３月１５日出願のＰＣＴ／ＵＳ１３／３２３４１に記載の、ｈＡＣＩ−３６−２Ｂ６−Ａｂ１抗体と同じ重鎖及び軽鎖可変領域を有する。残基の番号付けは、カバットシステムに従う。ＣＤＲのアミノ酸配列は、「カバット−ＣＤＲ  Ｌ１」、「カバット−ＣＤＲ  Ｌ２」、及び「カバット−ＣＤＲ  Ｌ３」と示される。抗ｐタウ親和性成熟変異体の、５２０２．４の配列から変化したＣＤＲ残基は、ハイライトされている（黒のボックス内の残基を参照）。
【図１Ｂ】図１（Ａ〜Ｃ）は、５２０２．４抗体、及び５２０２．４のｐタウ親和性成熟変異体、すなわちＴＡＭ１からＴＡＭ２３、のＣＤＲを含む、軽鎖可変領域のアミノ酸配列のアライメント（ａｌｉｇｎｍｅｎｔ）を示す。抗体５２０２．４は、２０１３年３月１５日出願のＰＣＴ／ＵＳ１３／３２３４１に記載の、ｈＡＣＩ−３６−２Ｂ６−Ａｂ１抗体と同じ重鎖及び軽鎖可変領域を有する。残基の番号付けは、カバットシステムに従う。ＣＤＲのアミノ酸配列は、「カバット−ＣＤＲ  Ｌ１」、「カバット−ＣＤＲ  Ｌ２」、及び「カバット−ＣＤＲ  Ｌ３」と示される。抗ｐタウ親和性成熟変異体の、５２０２．４の配列から変化したＣＤＲ残基は、ハイライトされている（黒のボックス内の残基を参照）。
【図１Ｃ】図１（Ａ〜Ｃ）は、５２０２．４抗体、及び５２０２．４のｐタウ親和性成熟変異体、すなわちＴＡＭ１からＴＡＭ２３、のＣＤＲを含む、軽鎖可変領域のアミノ酸配列のアライメント（ａｌｉｇｎｍｅｎｔ）を示す。抗体５２０２．４は、２０１３年３月１５日出願のＰＣＴ／ＵＳ１３／３２３４１に記載の、ｈＡＣＩ−３６−２Ｂ６−Ａｂ１抗体と同じ重鎖及び軽鎖可変領域を有する。残基の番号付けは、カバットシステムに従う。ＣＤＲのアミノ酸配列は、「カバット−ＣＤＲ  Ｌ１」、「カバット−ＣＤＲ  Ｌ２」、及び「カバット−ＣＤＲ  Ｌ３」と示される。抗ｐタウ親和性成熟変異体の、５２０２．４の配列から変化したＣＤＲ残基は、ハイライトされている（黒のボックス内の残基を参照）。
【図２Ａ−Ｂ】ＥＬＩＳＡにより測定された、タウ、リン酸化タウ、及びｐＳ１２９アルファシヌクレインに対するＩｇＧ抗体の結合。図２は、ＩｇＧ１  ５２０２．４、ＴＡＭ１、ＴＡＭ２、ＴＡＭ９、ＴＡＭ１９、ＴＡＭ２０、及びコントロール（５Ｂ６抗ｇＤ）抗体の、非リン酸化完全長タウ、ＰＫＡリン酸化完全長タウ、過リン酸化完全長タウ、一リン酸化（ｐＳ１２９）アルファシヌクレイン、又はコートなし／ＢＳＡコントロールに対する結合を示す。
【図２Ｃ−Ｆ】ＥＬＩＳＡにより測定された、タウ、リン酸化タウ、及びｐＳ１２９アルファシヌクレインに対するＩｇＧ抗体の結合。図２は、ＩｇＧ１  ５２０２．４、ＴＡＭ１、ＴＡＭ２、ＴＡＭ９、ＴＡＭ１９、ＴＡＭ２０、及びコントロール（５Ｂ６抗ｇＤ）抗体の、非リン酸化完全長タウ、ＰＫＡリン酸化完全長タウ、過リン酸化完全長タウ、一リン酸化（ｐＳ１２９）アルファシヌクレイン、又はコートなし／ＢＳＡコントロールに対する結合を示す。
【図３】ＥＬＩＳＡにより測定された、固定化ＩｇＧ抗体の、ｐＳ４０４及び／又はｐＳ４０９を含むタウ由来ビオチン化ペプチドに対する結合。図３は、固定化ＩｇＧ１  ５２０２．４、ＴＡＭ１、ＴＡＭ２、ＴＡＭ９、ＴＡＭ１９、ＴＡＭ２０、及びコントロール（５Ｂ６抗ｇＤ、及び非ＩｇＧ）抗体の、セリン４０４及びセリン４０９の両方でリン酸化されたペプチド（ｐＳ４０４、ｐＳ４０９）、セリン４０４でリン酸化されたぺプチド（ｐＳ４０４）、セリン４０９でリン酸化されたぺプチド（ｐＳ４０９）、非リン酸化ペプチド、又はペプチドなしコントロールを含む、タウ由来ビオチン化ペプチドに対する結合を示す。図３及び５に示される、１０ｎＭのビオチン化ペプチドが使用された。
【図４Ａ−Ｂ】ＥＬＩＳＡにより測定された、ＩｇＧ抗体の、固定化されたｐＳ４０４及び／又はｐＳ４０９を含むタウ由来ビオチン化ペプチドに対する結合。図４は、固定化ＩｇＧ１  ５２０２．４、ＴＡＭ１、ＴＡＭ２、ＴＡＭ９、ＴＡＭ１９、ＴＡＭ２０、及びコントロール（５Ｂ６抗ｇＤ、及び非ＩｇＧ）抗体の、セリン４０４及びセリン４０９の両方でリン酸化されたペプチド（ｐＳ４０４、ｐＳ４０９）、セリン４０４でリン酸化されたぺプチド（ｐＳ４０４）、セリン４０９でリン酸化されたぺプチド（ｐＳ４０９）、非リン酸化ペプチド、ペプチドなしコントロール、又はバックグランドコントロールを含む、タウ由来ビオチン化ペプチドに対する結合を示す。２０ｎＭのビオチン化ペプチド、及びＩｇＧの異なる５つの濃度（すなわち、０．０１ｎＭ、０．１ｎＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、及び１００ｎＭＩｇＧ）が、各結合実験に使用された。
【図４Ｃ−Ｄ】ＥＬＩＳＡにより測定された、ＩｇＧ抗体の、固定化されたｐＳ４０４及び／又はｐＳ４０９を含むタウ由来ビオチン化ペプチドに対する結合。図４は、固定化ＩｇＧ１  ５２０２．４、ＴＡＭ１、ＴＡＭ２、ＴＡＭ９、ＴＡＭ１９、ＴＡＭ２０、及びコントロール（５Ｂ６抗ｇＤ、及び非ＩｇＧ）抗体の、セリン４０４及びセリン４０９の両方でリン酸化されたペプチド（ｐＳ４０４、ｐＳ４０９）、セリン４０４でリン酸化されたぺプチド（ｐＳ４０４）、セリン４０９でリン酸化されたぺプチド（ｐＳ４０９）、非リン酸化ペプチド、ペプチドなしコントロール、又はバックグランドコントロールを含む、タウ由来ビオチン化ペプチドに対する結合を示す。２０ｎＭのビオチン化ペプチド、及びＩｇＧの異なる５つの濃度（すなわち、０．０１ｎＭ、０．１ｎＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、及び１００ｎＭＩｇＧ）が、各結合実験に使用された。
【図４Ｅ】ＥＬＩＳＡにより測定された、ＩｇＧ抗体の、固定化されたｐＳ４０４及び／又はｐＳ４０９を含むタウ由来ビオチン化ペプチドに対する結合。図４は、固定化ＩｇＧ１  ５２０２．４、ＴＡＭ１、ＴＡＭ２、ＴＡＭ９、ＴＡＭ１９、ＴＡＭ２０、及びコントロール（５Ｂ６抗ｇＤ、及び非ＩｇＧ）抗体の、セリン４０４及びセリン４０９の両方でリン酸化されたペプチド（ｐＳ４０４、ｐＳ４０９）、セリン４０４でリン酸化されたぺプチド（ｐＳ４０４）、セリン４０９でリン酸化されたぺプチド（ｐＳ４０９）、非リン酸化ペプチド、ペプチドなしコントロール、又はバックグランドコントロールを含む、タウ由来ビオチン化ペプチドに対する結合を示す。２０ｎＭのビオチン化ペプチド、及びＩｇＧの異なる５つの濃度（すなわち、０．０１ｎＭ、０．１ｎＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、及び１００ｎＭＩｇＧ）が、各結合実験に使用された。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
Ｉ．定義
本明細書に記載の目的のための「アクセプターヒトフレームワーク」とは、下記に定義されるように、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークに由来する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワーク、又は重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワーク、又はヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同一のアミノ酸配列を含んでもよく、又はアミノ酸配列の変化を含み得る。いくつかの実施態様において、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、又は２以下である。いくつかの実施態様において、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列又はヒトコンセンサスフレームワーク配列に、配列が同一である。
【００３５】
「親和性」とは、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合相互作用の総和の強度を指す。本明細書で使用する場合、別途指示がない限り、「結合親和性」は、結合対（例えば、抗体と抗原）メンバー間の１：１の相互作用を反映している固有の結合親和性を指す。そのパートナーＹに対する分子Ｘの親和性は、通常、解離定数（Ｋｄ）で表すことができる。親和性は、本明細書に記載したものを含む、当該技術分野で周知の一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための具体的な実例であって例示的な実施態様は、以下で説明される。
【００３６】
「親和性成熟」抗体とは、その改変を有していない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性に改良をもたらす、その一又は複数の超可変領域（ＨＶＲ）において一又は複数の改変を持つ抗体を指す。
【００３７】
用語「抗タウ抗体」及び「タウに結合する抗体」は、十分な親和性でタウに結合することができ、それによりタウを標的とする診断及び／又は治療薬剤として有用である抗体を指す。ある実施態様において、抗タウ抗体の、無関係な、非タウタンパク質への結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定される場合、抗体のタウへの結合の約１０％未満である。特定の実施態様において、タウに結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ、又はそれ未満、例えば、１０−８Ｍから１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。特定の実施態様において、抗タウ抗体は、異なる種由来のタウ間で保存されているタウのエピトープに結合する。用語「抗タウ抗体（anti-Tau antibody(ies)」は、抗ｐタウ抗体を包含する。
【００３８】
用語「抗タウｐ抗体」及び「ｐタウに結合する抗体」は、十分な親和性でタウのリン酸化エピトープに結合することができ、それによりｐタウを標的とする診断及び／又は治療薬剤として有用である抗体を指す。ある実施態様において、抗ｐタウ抗体の、非ｐタウタンパク質への結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定される場合、抗体のｐタウへの結合の約１０％未満である。特定の実施態様において、ｐタウに結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ、又はそれ未満、例えば、１０−８Ｍから１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。特定の実施態様において、抗ｐタウ抗体は、異なる種由来のタウ間で保存されているタウのリン酸化エピトープに結合する。特定の実施態様において、抗ｐタウ抗体は、タウのリン酸化形態、又はリン酸化されたアミノ酸残基を含むタウのエピトープに選択的に結合する。別の実施態様において、抗ｐタウ抗体は、非リン酸化タウ又はリン酸化されていないタウのエピトープに対し、結合しないか、又は、リン酸化タウ、タウのリン酸化形態、又はリン酸化されたアミノ酸残基を含むタウのエピトープに対するのと比較して実質的に低下した親和性で結合する。いくつかの実施態様において、リン酸化タウ又はタウのエピトープは、ヒトタウアミノ酸配列のアミノ酸４０４位、４０９位、又は４０４位及び４０９位におけるリン酸化セリンを含む。
【００３９】
用語「抗体」は最も広義に用いられ、様々な抗体構造を包含し、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体(例えば二重特異性抗体)、及び、所望の抗原結合活性を示す限り、抗体断片を含むが、これらに限定されない。
【００４０】
「抗体断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原を結合するインタクトな抗体の一部を含むインタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨは、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、直鎖状抗体、単鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）、及び抗体断片から形成された多重特異性抗体を含む。
【００４１】
参照抗体と「同一のエピトープに結合する抗体」とは、競合アッセイにおいて参照抗体の抗原に対する結合を５０％以上ブロックする抗体を指し、逆に、競合アッセイにおいてその抗体の抗原に対する結合を５０％以上ブロックするその参照抗体を指す。典型的な競合アッセイが、本明細書において提供される。
【００４２】
用語「調節抗体（modulating antibody）」は、様々な実施態様で本明細書に記載される抗体又はその機能的断片を指し、当該抗体は、動物、特に、可溶性タウタンパク質及び／又は可溶性リン酸化タウタンパク質のレベルが増加している、哺乳動物又はヒトの、脳、特に大脳皮質及び／又は海馬において、可溶性及び／又は不溶性タウタンパク質、特に可溶性リン酸化タウタンパク質の、機能的属性、生物活性、又は、レベルを、上方制御（例えば、活性化又は刺激）、下方制御（例えば、阻害又は抑制）、又は変化させてもよい。調節抗体又はその機能的断片は、タウタンパク質、又はタウタンパク質をコードするポリペプチドを調節するために、直接的又は間接的に機能してもよい。特定の実施態様において、調節抗体又はその機能的断片は、動物、特に、可溶性タウタンパク質及び／又は可溶性リン酸化タウタンパク質のレベルが増加している、哺乳動物又はヒトの、脳、特に大脳皮質及び／又は海馬において、可溶性及び／又は不溶性タウタンパク質、特に可溶性リン酸化タウタンパク質の、レベルを低下させる。
【００４３】
本明細書で使用されるフレーズ「実質的に低下した（された）」又は「実質的に異なる」は、当業者が、２つの値の間の差異が、前記値（例えば、Ｋｄ値）で示される生物学的特性に関して、統計学的有意であると考える程の、２つの数値（通常、一方が分子に関連し、もう一方が参照／比較分子に関連する）の間の十分に高い相異性を意味する。前記２つの値の間の差異は、参照／比較分子の機能に対し、例えば約１０％よりも高い、約２０％よりも高い、約３０％よりも高い、約４０％よりも高い、及び／又は約５０％よりも高い。
【００４４】
一般的に、「結合親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合性相互作用の総和の強度を指す。本明細書において、別途指示がない限り、「結合親和性」は、結合対（例えば、抗体と抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を反映している固有の結合親和性を指す。そのパートナーＹに対する分子Ｘの親和性は、一般的に解離定数（Ｋｄ）で表すことができる。親和性は、本明細書に記載したものを含む、当技術分野で周知の一般的な方法によって測定することができる。低親和性抗体は通常、抗原にゆっくり結合して素早く解離する傾向があるのに対し、高親和性抗体は通常、抗原により速く結合し、より長く結合を維持する傾向がある。結合親和性の種々の測定方法は当該技術分野において周知であり、それらの何れも本発明の目的ために用いることができる。特定の具体的な実施態様が、以下に記載される。ある実施態様において、本発明に係る「Ｋｄ」又は「Ｋｄ値」は、以下のアッセイに記載されるように、目的の抗体のＦａｂ型とその抗原を用い、放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。一実施例において、非標識抗原の力価測定系の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）−標識抗原にてＦａｂを均衡化し、抗Ｆａｂ抗体コートプレートと結合した抗原を捕獲することによって、抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性を測定し得る(Chen, et al., J. Mol. Biol. 293:865-881(1999))。アッセイ条件を確立するために、マイクロタイタープレート(Dynex)を、５μｇ／ｍｌの捕捉抗Ｆａｂ抗体(Cappel Labs)を含む５０ｍＭ炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）で一晩コートし、その後、室温（およそ２３℃）で、２％（ｗ／ｖ））のウシ血清アルブミンを含むＰＢＳにより２〜５時間ブロックする。非吸着プレート(Nunc #269620)において、１００ｐＭ又は２６ｐＭの［１２５Ｉ］抗原を段階希釈した所望のＦａｂと混合する(例えば、Presta et al., (1997) Cancer Res. 57: 4593-4599に記載の、抗ＶＥＧＦ抗体、Ｆａｂ12の評価に従う)。 目的のＦａｂを一晩インキュベートする；しかし、平衡状態に達したことを確認するまで、より長く（例えば、６５時間）インキュベーションを続けてもよい。その後、混合物を、室温でのインキュベーションのため（例えば１時間）に、捕獲プレートに移す。次いで、溶液を取り除き、プレートを０．１％のＴｗｅｅｎ−２０を含むＰＢＳにて８回洗浄する。プレートが乾燥したら、１５０μｌ／ウエルの閃光物質(MicroScint-20; Packard)を加え、プレートをTopcountガンマカウンター(Packard)で１０分間計測する。最大結合の２０％か又はそれ以下濃度のＦａｂを選択してそれぞれ競合結合測定に用いる。別の実施態様によれば、Ｋｄ又はＫｄ値は、製造業者の指示書に従って、又は、２５℃で、−１０反応単位（ＲＵ）の固定した抗原ＣＭ５チップを用い、ビアコア（BIAcore）（商標）−２０００又はビアコア(商標）−３０００(BIAcore, Inc., Piscataway, NJ)を用いて表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定され得る。簡潔に言うと、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ(CM5、BIAcore, Inc.)を、供給業者の指示書に従ってＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシニミド（��ＨＳ）で活性化する。抗原を１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍｌ（−０．２μＭ）に希釈し、結合したタンパク質の反応単位（ＲＵ）がおよそ１０になるように５μｌ／分の流速で注入する。抗原の注入後、未反応基をブロックするために１Ｍのエタノールアミンを注入した。反応速度論的な測定のために、Ｆａｂの２倍段階希釈（０．７８ｎＭから５００ｎＭ）を、２５℃で、およそ２５μｌ／分の流速で０．０５％ＴＷＥＥＮ−２０を含むＰＢＳ（ＰＢＳＴ）に注入する。会合センサーグラム及び解離センサーグラムを同時にフィットさせることにより、単純１対１ラングミュア結合モデル（ビアコア評価ソフトウェアバージョン３．２）を用いて、会合速度（ｋｏｎ）と解離速度（ｋｏｆｆ）を算出し得る。平衡解離定数（Ｋｄ）は、ｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として算出し得る。例えば、Chen, Y., et al., (1999) J. MoI Biol 293:865-881を参照のこと。上記の表面プラズモン共鳴アッセイによる会合速度が１０６Ｍ−１ｓ−１を上回る場合、会合速度は、分光計、例えば流動停止を備えた分光光度計(Aviv Instruments)又は撹拌キュベットを備えた８０００シリーズＳＬＭ−Ａｍｉｎｃｏ分光光度計(ThermoSpectronic)で測定される漸増濃度の抗原の存在下で、２５℃、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中の２０ｎＭ抗抗原抗体（Ｆａｂ型）の蛍光放出強度（励起＝２９５ｎｍ；吸収＝３４０ｎｍ、１６ｎｍバンドパス）の増加又は低下を測定する蛍光消光技術を用いて測定することができる。
【００４５】
本発明に係る「会合速度」又は「結合の速度」又は「結合速度」又は「ｋｏｎ」は、２５℃で、−１０反応単位（ＲＵ）で、固定した抗原ＣＭ５チップと共に−１０反応単位（ＲＵ）のビアコア（商標）−２０００又はビアコア（商標）−３０００(BIAcore, Inc., Piscataway, NJ)を用いた上記と同様の表面プラズモン共鳴法によって、決定し得る。簡潔に言うと、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ(CM5, BIAcore Inc.)を、供給業者の指示書に従ってＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル)-カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシニミド（ＮＨＳ）で活性化する。抗原を１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍｌ（−０．２μＭ）に希釈し、結合したタンパク質の反応単位（ＲＵ）がおよそ１０になるように５μｌ／分の流速で注入する。抗原の注入後、未反応基をブロックするために１Ｍのエタノールアミンを注入した。反応速度論的な測定のために、Ｆａｂの２倍段階希釈（０．７８ｎＭから５００ｎＭ）を、２５℃で、およそ２５μｌ／分の流速で０．０５％ＴＷＥＥＮ−２０を含むＰＢＳ（ＰＢＳＴ）に注入する。会合センサーグラム及び解離センサーグラムを同時にフィットさせることにより、単純１対１ラングミュア結合モデル(ビアコア評価ソフトウェアバージョン３．２)を用いて、会合速度(ｋｏｎ)と解離速度(ｋｏｆｆ)を算出し得る。平衡解離定数（Ｋｄ）は、ｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として算出された。例えば、Chen, Y., et al., (1999) J. MoI Biol 293:865-881を参照のこと。しかしながら、表面プラズモン共鳴アッセイによる会合速度が１０６Ｍ−１ｓ−１を上回る場合、会合速度は、分光計、例えば流動停止を備えた分光光度計(Aviv Instruments)又は撹拌キュベットを備えた８０００シリーズＳＬＭ−Ａｍｉｎｃｏ分光光度計(ThermoSpectronic)で測定される漸増濃度の抗原の存在下で、２５℃、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中の２０ｎＭ抗抗原抗体（Ｆａｂ型）の蛍光放出強度（励起＝２９５ｎｍ；吸収＝３４０ｎｍ、１６ｎｍバンドパス）の増加又は低下を測定する蛍光消光技術を用いて測定することができる。
【００４６】
用語「キメラ」抗体は、重鎖及び／又は軽鎖の一部分が特定の起源又は種から由来し、残りの重鎖及び／又は軽鎖は異なる起源又は種から由来する抗体を指す。
【００４７】
抗体の「クラス」は、その重鎖が保有する定常ドメイン又は定常領域のタイプを指す。抗体の５つの主要なクラスがあり：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭ、及びこれらのいくつかは、更にサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２に、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩＧＡ１、及びＩｇＡ２に分類されてもよい。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
【００４８】
本明細書において、用語「細胞傷害性薬物」は、細胞の機能を阻害又は阻止し、及び／又は細胞死又は細胞破壊を引き起こす物質を指す。細胞傷害性薬物は、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２及びＬｕの放射性同位体）；化学療法剤又は薬物（例えば、メトトレキセート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンC、クロラムブシル、ダウノルビシン又は他の挿入剤）；増殖阻害剤；例えば核酸分解酵素等の酵素及びその断片；抗生物質；小分子毒素等の毒素、又は細菌、真菌、植物又は動物由来の酵素活性毒素（それらの断片及び／又はその変異体を含む）；及び以下に開示される様々な抗腫瘍剤又は抗がん剤を含むが、これらに限定されない。
【００４９】
「エフェクター機能」とは、抗体のアイソタイプにより変わる、抗体のＦｃ領域に起因する生物活性を指す。抗体のエフェクター機能の例は以下のものを含む：Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞障害（ＡＤＣＣ）；貪食；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御；及びＢ細胞の活性化。
【００５０】
薬剤、例えば、薬学的製剤の「有効量」とは、所望の治療的又予防的結果を達成するために必要な用量及び期間での有効な量を指す。
【００５１】
本明細書において、用語「Ｆｃ領域」は、定常領域の少なくとも一部を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。その用語は、天然配列Ｆｃ領域と変異体Ｆｃ領域を含む。ある実施態様において、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域はＣｙｓ２２６又はＰｒｏ２３０から重鎖のカルボキシル末端まで伸長する。しかし、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は存在していても、又は存在していなくてもよい。本明細書において、別途指示がない限り、Ｆｃ領域又は定常領域内のアミノ酸残基の番号付けは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed.Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991に記載される、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けシステムに従う。
【００５２】
「フレームワーク」又は「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、通常、４つのＦＲのドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。従って、ＨＶＲ及びＦＲ配列は、通常、ＶＨ（又はＶＬ）の以下の配列に現れる：ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４。
【００５３】
用語「完全長抗体」、「インタクトな抗体」及び「全抗体（whole antibody）」は、本明細書中で区別なく用いられ、天然型抗体構造と実質的に類似の構造を有するか、又は本明細書で定義されるＦｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指す。
【００５４】
用語「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養物」は区別なく用いられ、外因性の核酸が導入された細胞を指し、そのような細胞の子孫を含む。宿主細胞は、「形質転換体」及び「形質転換された細胞」を含み、一次形質転換細胞、及び継代の数に関係なくそれに由来する子孫が含まれる。子孫は親細胞と含有する核酸が完全に同一でなくてもよく、変異を含んでもよい。最初に形質転換された細胞でスクリーニング又は選択されたものと同じ機能又は生物活性を有する変異子孫が本明細書において含まれる。
【００５５】
「ヒト抗体」は、ヒト又はヒト細胞により産生されるか、又はヒト抗体のレパートリーや他のヒト抗体をコードする配列を利用した非ヒト起源に由来する、抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特に除外する。
【００５６】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」とは、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。通常、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからのものである。通常、配列のサブグループは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), vols. 1-3に記載のサブグループである。ある実施態様において、ＶＬについて、サブグループは上記Kabat et al.に記載のサブグループカッパＩである。ある実施態様において、ＶＨについて、サブグループは上記Kabat et al.に記載のサブグループＩＩＩである。
【００５７】
「ヒト化」抗体は、非ヒトHVR由来のアミノ酸残基、及びヒトＦＲ由来アミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。特定の実施態様において、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの全てを実質的に含み、ＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全て又は実質的に全てが、非ヒト抗体のＨＶＲに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全てが、ヒト抗体のＦＲに対応する。ヒト化抗体は、任意で、ヒト抗体由来の抗体定常領域の少なくとも一部を含んでもよい。抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化型」は、ヒト化を遂げた抗体を指す。
【００５８】
本明細書において、用語「超可変領域」又は「ＨＶＲ」は、配列が超可変である（「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」）及び／又は構造的に定義されたループ（「超可変ループ」）を形成する、及び／又は抗原接触残基（antigen-contacting residues）（「抗原接触部位」）を含む、抗体可変ドメインの各領域を指す。通常、抗体は、６つのＨＶＲ：ＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）に３つ、及びＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）に３つ、を含む。本明細書において、例示的なＨＶＲは、以下を含む。
（ａ）アミノ酸残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、９１〜９６（Ｌ３）、２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、及び９６〜１０１（Ｈ３）(Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987))に生じる、超可変ループ；
（ｂ）アミノ酸残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）、８９〜９７（Ｌ３）、３１〜３５ｂ（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）、及び９５〜１０２（Ｈ３）（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991))に生じるＣＤＲ；
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ〜３６（Ｌ１）、４６〜５５（Ｌ２）、８９〜９６（Ｌ３）、３０〜３５ｂ（Ｈ１）、４７〜５８（Ｈ２）、及び９３〜１０１（Ｈ３）（MacCallum et al. J. Mol. Biol. 262: 732-745 (1996))に生じる抗原接触部位；及び
（ｄ）ＨＶＲアミノ酸残基４６〜５６（Ｌ２）、４７〜５６（Ｌ２）、４８〜５６（Ｌ２）、４９〜５６（Ｌ２）、２６〜３５（Ｈ１）、２６〜３５ｂ（Ｈ１）、４９〜６５（Ｈ２）、９３〜１０２（Ｈ３）、及び９４〜１０２（Ｈ３）を含む、（ａ）、（ｂ）、及び／又は（ｃ）の組み合わせ。
【００５９】
ある実施態様において、ＨＶＲ残基は、表２Ｂに示す残基（すなわち、配列番号３３、配列番号３４、及び／又は配列番号３５）を含む、又は、本明細書の別の箇所に記載される。
【００６０】
別途指示がない限り、可変ドメイン内のＨＶＲ残基及び他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、上記Kabat et al.に従い、本明細書において番号付けされる。
【００６１】
「免疫複合体」は、１以上の異種分子にコンジュゲートされた抗体であり、異種分子は細胞傷害性薬剤を含むがこれに限定されない。
【００６２】
「個体」又は「対象」は、哺乳動物である。哺乳動物は、家畜動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、ウマ）、霊長類（例えば、ヒト、サルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、げっ歯類（例えば、マウス及びラット）を含むが、これらに限定されない。特定の実施態様において、個体又は対象はヒトである。
【００６３】
「単離された」抗体は、その自然環境の成分から分離されたものである。いくつかの実施態様において、抗体は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）又はクロマトグラフィー（例えば、イオン交換又は逆相ＨＰＬＣ）により決定されるように、９５％より高い又は９９％より高い純度に精製される。抗体純度の評価法の総説としては、例えばFlatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87 (2007)を参照のこと。
【００６４】
「単離された」核酸は、その自然環境の成分から分離された核酸分子を指す。単離された核酸は、核酸分子を通常含む細胞に含まれる核酸分子を含むが、しかし、その核酸分子は、染色体外又はその自然の染色体上の位置とは異なる染色体位置に存在している。
【００６５】
「タウ抗体をコードする単離された核酸」は、抗体の重鎖及び軽鎖（又はその断片）をコードする１以上の核酸分子を指し、単一のベクター又は複数の独立したベクター内の核酸分子、及び宿主細胞内の１以上の場所に存在する核酸分子を含む。
【００６６】
本明細書において、用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、例えば、一般的に少量で存在する、天然に生じる変異を含む又はモノクローナル抗体製剤の製造時に発生する可能性のある、変異体抗体を除き、集団を構成する個々の抗体は同一であり、及び／又は同じエピトープに結合する。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を通常含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。従って、修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、限定されないが、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部又は一部を含むトランスジェニック動物を利用する方法を含む様々な技術によって作製され、モノクローナル抗体を作製するためのそのような方法及び他の例示的な方法は、本明細書に記載される。
【００６７】
「ネイキッド抗体（naked antibody）」とは、異種の部分（例えば、細胞傷害性部分）又は放射性標識にコンジュゲートしていない抗体を指す。ネイキッド抗体は薬学的製剤中に存在してもよい。
【００６８】
「天然型抗体」は、天然に生じる、様々な構造をとる免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然型ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合している二つの同一の軽鎖と二つの同一の重鎖からなる約１５００００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各重鎖は、Ｎ末端からＣ末端に、可変重鎖ドメイン又は重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）を有し、三つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３）が続く。同様に、各軽鎖は、Ｎ末端からＣ末端に、可変軽鎖ドメイン又は軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）を有し、定常軽鎖（ＣＬ）ドメインが続く。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）とラムダ（λ）と呼ばれる、二つのタイプの何れかに割り当てることができる。
【００６９】
用語「添付文書」は、治療製品の商品包装に通例含まれる説明書を指すのに使用され、このような治療製品の使用に関する指示、使用法、用量、投与、併用療法、禁忌及び／又は注意事項についての情報を含む。
【００７０】
参照ポリペプチド配列に関する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」は、配列を整列させ、最大のパーセント配列同一性を得るために、必要ならばギャップを導入した後、如何なる保存的置換も配列同一性の一部と考慮せず、参照ポリペプチドのアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当該技術分野における種々の方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ-２、ＡＬＩＧＮ、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアのような公に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用することにより、達成可能である。当業者であれば、比較される配列の完全長に対して最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列をアラインするための適切なパラメータを決定することができる。しかし、本明細書における目的のためには、％アミノ酸配列同一性の値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ-２を使用することによって生成される。ＡＬＩＧＮ-２配列比較コンピュータプログラムはGenentech, Inc.によって作製され、ソースコードは米国著作権庁、ワシントンＤ．Ｃ．，２０５５９に使用者用書類とともに提出され、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７の下で登録されている。ＡＬＩＧＮ-２もまた、Genentech, Inc.、サウスサンフランシスコ、カリフォルニアから公的に入手可能であり、又はそのソースコードからコンパイルすることができる。ＡＬＩＧＮ-２プログラムは、デジタルＵＮＩＸのＶ４．０Ｄを含む、ＵＮＩＸオペレーティングシステム上での使用のためにコンパイルされるべきである。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ-２プログラムによって設定され変動しない。
【００７１】
アミノ酸配列比較にＡＬＩＧＮ-２が用いられる状況では、与えられたアミノ酸配列Ａの、与えられたアミノ酸配列Ｂとの、又はそれに対する、％アミノ酸配列同一性（与えられたアミノ酸配列Ｂと、又はそれに対して、所定の％アミノ酸配列同一性を持つ又は含む与えられたアミノ酸配列Ａと言うこともできる）は次のように計算される：
分率Ｘ／Ｙの１００倍
ここで、Ｘは配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ-２により、ＡとＢのそのプログラムのアラインメントにおいて同一と一致したスコアのアミノ酸残基の数であり、ＹはＢの全アミノ酸残基数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと異なる場合、ＡのＢに対する％アミノ酸配列同一性は、ＢのＡに対する％アミノ酸配列同一性とは異なることは理解されるであろう。別途指定のない限り、本明細書で使用される全ての％アミノ酸配列同一性値が、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用し、直前の段落で説明したように、得られる。
【００７２】
用語「薬学的製剤」は、その中に含有される活性成分の生物活性が有効になるような形態であって、製剤を投与する被検体にとって許容できない毒性である他の成分を含まない調製物を指す。
【００７３】
「薬学的に許容され得る担体」は、被検体に非毒性である、有効成分以外の薬学的製剤中の成分を指す。薬学的に許容され得る担体は、バッファー、賦形剤、安定剤、又は保存剤を含むが、これらに限定されない。
【００７４】
本明細書において、用語「ｐタウ」は、プロテインキナーゼによる共有結合したリン酸基の付加により、セリン、スレオニン、又はチロシン残基が、リン酸化されたタウを指す。いくつかの実施態様において、ｐタウは、セリン残基又はスレオニン残基においてリン酸化されている。いくつかの実施態様において、ｐタウは、４０９位及び／又は４０４位のセリンにおいてリン酸化されている。いくつかの実施態様において、ｐタウは、４０９位のセリンにおいてリン酸化されている。
【００７５】
別途指示がない限り、本明細書において、用語「タウ」は、霊長類（例えばヒト）及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）等の哺乳動物を含む任意の脊椎動物起源由来の、任意の天然型タウタンパク質を指す。その用語は、細胞内でのプロセシングにより生じるタウの任意の形態だけでなく、「完全長」の、プロセシングを受けていないタウを包含する。その用語はまた、天然に存在するタウの変異体、例えば、スプライス変異体又は対立遺伝子変異体を包含する。例示的なヒトタウのアミノ酸配列は、配列番号５９で示される。
【００７６】
本明細書において、「処置」（及び「処置する（treat）」又は「処置すること（treating）」などその文法上の変形）は、処置されている個体の自然経過を変えようと試みる臨床的介入を指し、予防のために、又は臨床病理の過程においての何れかで実行され得る。処置の望ましい効果は、疾患の発症又は再発を予防すること、症状の緩和、疾患の直接的又は間接的な任意の病理学的帰結の低減、疾患の進行の速度を遅らせること、疾患状態の改善又は緩和、及び寛解又は予後の改善を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施態様において、本発明の抗体は、疾患の発症を遅延させるか又は疾患の進行を遅くするために使用される。
【００７７】
用語「可変領域」又は「可変ドメイン」は、抗体の抗原への結合に関与する抗体の重鎖又は軽鎖のドメインを指す。天然型抗体の重鎖及び軽鎖（それぞれ、ＶＨ及びＶＬ）の可変ドメインは、各ドメインが４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの超可変領域（ＨＶＲ）を持つ、通常類似の構造を有する（例えば、Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007)を参照）。単一のVH又はVLドメインが、抗原結合特異性を付与するのに十分であってもよい。更に、特定の抗原に結合する抗体は、相補的なＶＬ又はＶＨドメインのライブラリーをそれぞれスクリーニングするために、抗原に特異的に結合する抗体由来のＶＨ又はＶＬドメインを用いて単離することができる。例えば、Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)を参照のこと。
【００７８】
本明細書において、用語「ベクター」は、それが結合されている別の核酸を伝播することができる核酸分子を指す。この用語は、自己複製核酸構造としてのベクター、並びにそれが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターを含む。ある種のベクターは、それらが動作可能なように結合されている核酸の発現を指示することができる。このようなベクターは、本明細書では「発現ベクター」と言う。
【００７９】
本明細書において、用語「可溶性タウ」又は「可溶性タウタンパク質」は、十分に（completely）溶解するのタウタンパク質／ペプチドモノマー、又はタウ様ペプチド／タンパク質、又は改変された又は短鎖化されたタウペプチド／タンパク質、又はタウペプチド／タンパク質モノマーの他の誘導体、及びタウタンパク質オリゴマーからなるタンパク質を指す。「可溶性タウ」は、特に神経原線維タングル（ＮＦＴ）を除外する。
【００８０】
本明細書において、用語「不溶性タウ」は、インビトロ、水性溶媒、及びインビボにおいて、哺乳動物又はヒトの体内、特に脳内において不溶性のオリゴマーの又はポリマーの構造を形成する、タウペプチド又はタンパク質、又はタウ様ペプチド／タンパク質、又は改変又は短鎖化されたタウペプチド／タンパク質、又はタウペプチド／タンパク質の他の誘導体の、集合的に凝集したモノマーを指し、特に、哺乳動物又はヒトの体内、特に脳内において不溶性である、タウ、又は改変又は短鎖化されたタウペプチド／タンパク質、又はその誘導体の集合的に凝集したモノマーを指す。「不溶性タウ」は、特に神経原線維タングル（ＮＦＴ）を特に含む。
【００８１】
本明細書において、用語「モノマータウ（monomeric Tau）」又は「タウモノマー（Tau monomer）」は、水性溶媒において凝集複合体を形成せずに十分に溶解するタウタンパク質を指す。
【００８２】
本明細書において、用語「凝集したタウ」、「オリゴマータウ（oligomeric Tau）」、「タウオリゴマー」は、インビトロ、水性溶媒、及びインビボにおいて、哺乳動物又はヒトの体内、特に脳内において不溶性又は可溶性のオリゴマーの又はポリマーの構造を形成する、タウペプチド又はタンパク質、又はタウ様ペプチド／タンパク質、又は改変又は短鎖化されたタウペプチド／タンパク質、又はタウペプチド／タンパク質の他の誘導体の、集合的に凝集したモノマーを指し、特に、哺乳動物又はヒトの体内、特に脳内において不溶性又は可溶性である、タウ、又は改変又は短鎖化されたタウペプチド／タンパク質、又はその誘導体の集合的に凝集したモノマーを指す。
【００８３】
「ｐタウＰＨＦ」、「ＰＨＦ」、及び「対らせん状細線維」は本明細書において同義に使用され、電子顕微鏡で可視できる、１６０ｎｍ周期のらせんを形成する線維の対を指す。幅は、１０及び２２ｎｍの間で異なる。ＰＨＦは、アルツハイマー病（ＡＤ）及びニューロピルスレッドの神経原線維タングルにおける、主要な構造である。ＰＨＦは、老人斑に関連する変性神経突起の全てはないが、その一部にみられることがある。ＰＨＦの主要な要素は、微小管関連タンパク質タウの過リン酸化形態である。ＰＨＦは、部分的に、ジスルフィド結合した、逆平行性過リン酸化タウタンパク質から構成されていてもよい。ＰＨＦタウは、そのＣ末端の２０アミノ酸残基が切断されていてもよい。ＰＨＦ形成のメカニズムは不明確であるが、タウの過リン酸化により微小管から解放され、ＰＨＦがニューロン内で形成され得るタウの可溶性プールを増加させる。
【００８４】
ＩＩ．材料及び方法
ある実施態様において、本発明は、一部、抗タウ抗体の生成に基づいている。特定の実施態様において、ｐタウに結合する抗体が提供される。特定の実施態様において、ｐタウに高特異性及び／又は高親和性で結合する抗体が提供される。特定の実施態様において、例えば、高親和性及び／又は高特異性で、４０９位のセリンでリン酸化されたタウに結合する抗体のような、４０９位のセリンでリン酸化されたタウに結合する抗体が提供される。本発明の抗体は、例えば、アルツハイマー病（ＡＤ）のようなタウオパシーの診断、又は処置のために有効である。
【００８５】
Ａ．例示的な抗タウ抗体
ある実施態様において、本発明は、タウに結合する単離された抗体、又はその断片を提供する。特定の実施態様において、本発明は、タウにおけるリン酸化されたエピトープ（ｐタウ）に結合する、抗ｐタウ抗体を提供する。いくつかの実施態様において、本発明は、４０９位のリン酸化されたセリン（「ｐＳ４０９」）及び／又は４０４位のリン酸化されたセリン（「ｐＳ４０４」）に結合する抗ｐタウ抗体を提供する。ある実施態様において、本発明は、ｐＳ４０９に結合する抗ｐタウ抗体を提供する。特定の実施態様において、本発明は、配列番号５９で示されるヒトタウタンパク質のアミノ酸残基４０４〜４１１（任意で、４０９位のリン酸化セリン、すなわちｐＳ４０９、を有する）を含むエピトープに結合する抗ｐタウ抗体を提供する。別の実施態様において、本発明は、配列番号５９で示されるヒトタウタンパク質のアミノ酸残基４０５〜４１１（任意で、ｐＳ４０９を有する）を含むエピトープに結合する抗ｐタウ抗体を提供する。別の実施態様において、本発明は、配列番号５９で示されるヒトタウタンパク質のアミノ酸残基４０１〜４１８（任意で、ｐＳ４０９を有する）を含むエピトープに結合する抗ｐタウ抗体を提供する。特定の実施態様において、本発明は、タウにおける病理的にリン酸化されたエピトープ（例えば、ＡＤのようなタウオパシーに関連するリン酸化エピトープ）に結合する抗タウ抗体を提供する。特定の実施態様において、本発明は、病理的タウ配座異性体（例えば、ＡＤのようなタウオパシーに関連するタウ配座異性体）に結合する抗タウ抗体を提供する。ある実施態様において、本発明は、過リン酸化タウ（例えば、ＡＤのようなタウオパシーに関連する過リン酸化タウ）に結合する抗タウ抗体を提供する。特定の実施態様において、本発明は、凝集したタウ（例えば、ＡＤのようなタウオパシーに関連する凝集したタウ）に結合する抗タウ抗体を提供する。ある実施態様において、本発明は、凝集したリン酸化タウ（例えば、ＡＤのようなタウオパシーに関連するエピトープにおいてリン酸化された凝集したタウ）に結合する抗タウ抗体を提供する。いくつかの実施態様において、本発明は、可溶性タウ（例えば、可溶性ｐタウ）に結合する、抗タウ抗体を提供する。別の実施態様において、本発明は、不溶性タウ（例えば、不溶性ｐタウ）に結合する、抗タウ抗体を
提供する。特定の実施態様において、本発明は、微小管関連タウ（例えば、ＡＤのようなタウオパシーに関連する、微小管関連タウ）に結合する抗タウ抗体を提供する。ある実施態様において、本発明は、凝集した微小管関連タウ（例えば、ＡＤのようなタウオパシーに関連する、凝集した微小管関連タウ）に結合する抗タウ抗体を提供する。ある実施態様において、本発明は、凝集した過リン酸化微小管関連タウ（例えば、ＡＤのようなタウオパシーに関連する、凝集しかつ過リン酸化された、微小管関連タウ）に結合する抗タウ抗体を提供する。ある実施態様において、本発明は、対らせん状細線維（例えば、ＡＤのようなタウオパシーに関連する対らせん状細線維）に存在するタウに結合する抗タウ抗体を提供する。特定の実施態様において、本発明は、神経原線維対タングル、ニューロピルスレッド、及び／又は変性神経突起に存在するタウ（例えば、ｐタウ又は過リン酸化タウ）に結合する抗タウ抗体を提供する。
【００８６】
いくつかの実施態様において、本発明は、タウ（例えば、ｐタウ）を特異的に認識し、かつ、結合する抗タウ抗体、又はその断片を提供する。特定の実施態様において、本発明は、高特異性でｐタウを認識する抗ｐタウ抗体を提供する。
【００８７】
特定の実施態様において、本発明は、タウにおけるリン酸化エピトープ（例えば、ホスホセリン４０９、ホスホセリン４０４、又はホスホセリン４０９及びホスホセリン４０４）に結合するが、タウにおける対応する非リン酸化エピトープ及び／又は無関係のエピトープには結合しない、抗ｐタウ抗体を提供する。特定の実施態様において、本発明は、タウにおけるリン酸化エピトープ（例えば、ホスホセリン４０９、ホスホセリン４０４、又はホスホセリン４０９及びホスホセリン４０４）に結合するが、リン酸化されていない、タウにおける同じエピトープには、低下した親和性で結合する、抗ｐタウ抗体を提供する。特定の実施態様において、本発明は、タウにおけるリン酸化エピトープ（例えば、ホスホセリン４０９、ホスホセリン４０４、又はホスホセリン４０９及びホスホセリン４０４）に対し、タウにおける対応する非リン酸化エピトープ及び／又は無関係のエピトープに対する親和性よりも、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、又は少なくとも１００倍高い親和性で結合する抗Pタウ抗体を提供する。特定の実施態様において、本発明は、タウにおけるリン酸化エピトープ（例えば、ホスホセリン４０９、ホスホセリン４０４、又はホスホセリン４０９及びホスホセリン４０４）に対し、タウにおける対応する非リン酸化エピトープ及び／又は無関係のエピトープに対する親和性よりも、少なくとも１０倍高い親和性で結合する抗ｐタウ抗体を提供する。
【００８８】
特定の実施態様において、タウ（例えば、ｐタウ）に対し高親和性を有する抗タウ（抗ｐタウ）抗体を提供する。
【００８９】
特定の実施態様において、本発明は、タウにおけるリン酸化エピトープ（例えば、ホスホセリン４０９及び／又はホスホセリン４０４）に、７０ｎＭより低い、６０ｎＭより低い、５０ｎＭより低い、４５ｎＭより低い、４０ｎＭより低い、３５ｎＭより低い、３０ｎＭより低い、２５ｎＭより低い、２０ｎＭより低い、１５ｎＭより低い、１０ｎＭより低い、９ｎＭより低い、８ｎＭより低い、７ｎＭより低い、６ｎＭより低い、５ｎＭより低い、４ｎＭより低い、３ｎＭより低い、２ｎＭより低い、１ｎＭより低い、０．９ｎＭより低い、０．８ｎＭより低い、０．７ｎＭより低い、０．６ｎＭより低い、０．５ｎＭより低い、０．４ｎＭより低い、０．３ｎＭより低い、０．２ｎＭより低い、又は０．１ｎＭより低い（又はこれら値の何れかに等しい）解離定数（Ｋｄ）で結合する、抗ｐタウ抗体を提供する。
【００９０】
いくつかの実施態様において、本発明は、１．５×１０５Ｍ−１ｓ−１より高い、２×１０５Ｍ−１ｓ−１より高い、２．５×１０５Ｍ−１ｓ−１より高い、３×１０５Ｍ−１ｓ−１より高い、３．５×１０５Ｍ−１ｓ−１より高い、４×１０５Ｍ−１ｓ−１より高い、４．５×１０５Ｍ−１ｓ−１より高い、５×１０５Ｍ−１ｓ−１より高い、５×１０５Ｍ−１ｓ−１より高い、５．５×１０５Ｍ−１ｓ−１より高い、６×１０５Ｍ−１ｓ−１より高い、６．５×１０５Ｍ−１ｓ−１より高い、７×１０５Ｍ−１ｓ−１より高い、７．５×１０５Ｍ−１ｓ−１より高い、８×１０５Ｍ−１ｓ−１より高い、８．５×１０５Ｍ−１ｓ−１より高い、９×１０５Ｍ−１ｓ−１より高い、１０×１０５Ｍ−１ｓ−１より高い、１２．５×１０５Ｍ−１ｓ−１より高い、１５×１０５Ｍ−１ｓ−１より高い、２０×１０５Ｍ−１ｓ−１より高い、２５×１０５Ｍ−１ｓ−１より高い、３０×１０５Ｍ−１ｓ−１より高い、３５×１０５Ｍ−１ｓ−１より高い、４０×１０５Ｍ−１ｓ−１より高い、４５×１０５Ｍ−１ｓ−１より高い、５０×１０５Ｍ−１ｓ−１より高い、又は７５×１０５Ｍ−１ｓ−１より高い、又は１００×１０５Ｍ−１ｓ−１（又はこれらの値の何れかに等しい）結合速度定数で、ｐタウに結合する抗ｐタウ抗体を提供する。
【００９１】
いくつかの実施態様において、本発明は、１０×１０−３ｓ−１より低い、９×１０−３ｓ−１より低い、８×１０−３ｓ−１より低い、７×１０−３ｓ−１より低い、６×１０−３ｓ−１より低い、５×１０−３ｓ−１より低い、４×１０−３ｓ−１より低い、３×１０−３ｓ−１より低い、２×１０−３ｓ−１より低い、１×１０−３ｓ−１より低い、又は０．５×１０−３ｓ−１より低い（又はこれらの値の何れかに等しい）解離速度定数で、ｐタウに結合する抗ｐタウ抗体を提供する。また別の実施態様において、本発明は、１×１０−４ｓ−１より高い、２×１０−４ｓ−１より高い、３×１０−４ｓ−１より高い、４×１０−４ｓ−１より高い、５×１０−４ｓ−１より高い、６×１０−４ｓ−１より高い、７×１０−４ｓ−１より高い、８×１０−４ｓ−１より高い、９×１０−４ｓ−１より高い、１０×１０−４ｓ−１より高い、又は１２×１０−４ｓ−１より高い（又はこれらの値の何れかに等しい）解離速度定数で、ｐタウに結合する抗ｐタウ抗体を提供する。
【００９２】
いくつかの実施態様において、本発明は、タウ、病理的タウ配座異性体（例えば、病理的ｐタウ）、過リン酸化タウ、凝集したタウ（例えば、凝集したｐタウ）、可溶性タウ（例えば、可溶性ｐタウ）、不溶性タウ（不溶性ｐタウ）、微小管関連タウ（例えば、微小管関連ｐタウ）、凝集した過リン酸化微小管関連タウ、対らせん状細線維に存在するタウ、又は、神経原線維対タングル、ニューロピルスレッド、及び／又は変性神経突起に存在するタウ、における病理的リン酸化エピトープに対し、高特異性及び／又は高親和性を有する抗タウ抗体を提供する。いくつかの実施態様において、本発明は、タウ、病理的タウ配座異性体（例えば、病理的ｐタウ）、過リン酸化タウ、凝集したタウ（例えば、凝集したｐタウ）、可溶性タウ（例えば、可溶性ｐタウ）、不溶性タウ（不溶性ｐタウ）、微小管関連タウ（例えば、微小管関連ｐタウ）、凝集した過リン酸化微小管関連タウ、対らせん状細線維に存在するタウ、又は、神経原線維対タングル、ニューロピルスレッド、及び／又は変性神経突起に存在するタウ、における病理的リン酸化エピトープに対し、上記任意の値に等しいKd（結合速度定数）又は解離速度定数で結合する抗タウ抗体を提供する。いくつかの実施態様において、抗タウ抗体は、タウのリン酸化エピトープに結合するが、タウにおける対応する非リン酸化エピトープ及び／又は無関係のエピトープに結合しない（又は、５、１０、５０又は１００倍低い親和性で結合する）。
【００９３】
いくつかの実施態様において、本発明は、ヒトタウタンパク質の、アミノ酸残基４０４〜４１１、４０５〜４１１、又は４０１〜４１８を含み、かつｐＳ４０９及び／又はｐＳ４０４を含むエピトープに対し高特異性及び／又は高親和性を有する抗ｐタウ抗体を提供する。いくつかの実施態様において、ヒトタウタンパク質の、アミノ酸残基４０４〜４１１、４０５〜４１１、又は４０１〜４１８を含み、かつｐＳ４０９を含むエピトープに対し、上記任意の値に等しいＫｄ（結合速度定数）又は解離速度定数で結合する抗ｐタウ抗体を提供する。いくつかの実施態様において、抗ｐタウ抗体は、タウにおけるアミノ酸残基４０４〜４１１、４０５〜４１１、又は４０１〜４１８を含み、かつｐＳ４０９を含むエピトープに結合するが、タウにおける対応する非リン酸化エピトープ及び／又は無関係のエピトープに結合しない（又は、５、１０、５０又は１００倍低い親和性で結合する）。
【００９４】
特定の実施態様において、本発明は、例えばヒトタウ（例えば、ヒトｐタウ）のような、哺乳動物タウ（例えば、哺乳動物ｐタウ）に結合する抗タウ抗体を提供する。
【００９５】
特定の実施態様において、本発明は、モノクローナル抗体である、抗タウ（例えば、抗ｐタウ）抗体、又はその断片を提供する。特定の実施態様において、本発明は、キメラ抗体である抗タウ（例えば、抗ｐタウ）抗体、又はその断片を提供する。ある実施態様において、本発明は、ヒト化抗体である抗タウ（例えば、抗ｐタウ）抗体、又はその断片を提供する。ある実施態様において、本発明は、ヒト抗体である抗タウ（例えば、抗ｐタウ）抗体、又はその断片を提供する。
【００９６】
特定の実施態様において、本発明は、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、又は配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、又は配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、又は配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも２、３、４、５、６、又は６のＨＶＲを含む抗タウ抗体を提供する。
【００９７】
ある実施態様において、本発明は、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１、少なくとも２、又は３つのＶＨ  ＨＶＲ全てを含む抗体を提供する。別の実施態様において、抗体は、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施態様において、抗体は、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１又は配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。更なる実施態様において、抗体は、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、及びは配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【００９８】
別の実施態様において、本発明は、（ａ）配列番号１、配列番号２、、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、又は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、又は配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、又は配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１、少なくとも２、又は３つのＶＬ  ＨＶＲ全てを含む抗体を提供する。ある実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、又は配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、又は配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、又は配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【００９９】
別の実施態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｉｉｉ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１、少なくとも２、又は３つのＶＨ  ＨＶＲ全てを含むＶＨドメイン、及び、（ｂ）（ｉ）配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、又は配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｉｉ）配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、又は配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、又は配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１、少なくとも２、又は３つのＶＬ  ＨＶＲ全てを含むＶＬドメイン、を含む。
【０１００】
別の実施態様において、本発明は、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）  配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、又は配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、又は配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、又は配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１０１】
特定の実施態様において、配列番号１５のＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１６のＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３０のＨＶＲ−Ｌ３を含む抗タウ抗体の１以上のアミノ酸が、以下のＨＶＲの位置（カバットにより定義される）において置換される：
ＨＶＲ−Ｌ１  （配列番号１５）：カバット位置２４、２７Ａ、２７Ｃ、２７Ｄ、２７Ｅ、２８、３０及び３３、
ＨＶＲ−Ｌ２  （配列番号１６）：カバット位置５２、５３、及び５６、
ＨＶＲ−Ｌ３  （配列番号３０）：カバット位置９２、９３、及び９６。
【０１０２】
特定の実施態様において、本明細書に記載されるように、置換は保存的置換である。特定の実施態様において、以下の、任意の１以上の置換は、示されるカバット位置において任意の組み合わせで生じてもよい：
ＨＶＲ−Ｌ１  （配列番号１５）：Ｒ２４Ｔ；Ｓ２７ａＲ又はＶ；Ｖ２７ｃＲ又はＩ；Ｈ２７ｄＲ；Ｓ２７ｅＲ、Ｇ又はＫ；Ｈ２８Ｒ、Ｋ、Ｎ、又はＧ；Ｋ３０Ｒ；又はＬ３３Ｖ
ＨＶＲ−Ｌ２  （配列番号１６）：Ｓ５２Ｋ又はＲ；Ｎ５３Ｋ又はＨ；又はＳ５６Ｆ、Ｇ、Ｋ、Ｒ、Ｙ、又はＬ
ＨＶＲ−Ｌ３  （配列番号３０）：Ａ９２Ｒ、Ｈ９３Ｒ、Ｑ又はＹ；又はＹ９６Ｒ。
【０１０３】
上記置換の全ての生じ得る組み合わせは、以下のコンセンサス配列に包含される：
アミノ酸配列Ｘ１ＳＳＱＸ２ＬＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＧＸ７ＴＹＸ８Ｈ（配列番号８９）を含むＨＶＲ−Ｌ１であって、Ｘ１＝Ｒ又はＴ；Ｘ２＝Ｓ、Ｒ又はＶ；Ｘ３＝Ｖ、Ｉ又はＲ；Ｘ４＝Ｈ又はＲ；Ｘ５＝Ｓ、Ｒ、Ｇ又はＫ；Ｘ６＝Ｈ、Ｎ、Ｒ、Ｋ又はＧ；Ｘ７＝Ｋ又はＲ；及びＸ８＝Ｌ又はＶであるＨＶＲ−Ｌ１；
アミノ酸配列ＫＶＸ９Ｘ１０ＲＦＸ１１（配列番号９０）を含むＨＶＲ−Ｌ２であって、Ｘ９＝Ｓ、Ｋ又はＲ；Ｘ１０＝Ｎ、Ｋ又はＨ；及びＸ１１＝Ｓ、Ｆ、Ｇ、Ｋ、Ｒ、Ｙ又はＬであるＨＶＲ−Ｌ２、
アミノ酸配列ＳＱＴＸ１２Ｘ１３ＦＰＸ１４Ｔ（配列番号９１）を含むＨＶＲ−Ｌ３であって、Ｘ１２＝Ａ又はＲ；Ｘ１３＝Ｈ、Ｒ、Ｑ又はＹ；Ｘ１４＝Ｙ又はＲであるＨＶＲ−Ｌ２であるＨＶＲ−Ｌ３。
【０１０４】
特定の実施態様において、上記のコンセンサス配列を有する抗体は、以下の３つのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３全てを含むのではない：ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＨＧＫＴＹＬＨ（配列番号１５）又はＲＳＳＱＲＬＶＨＳＨＧＫＴＹＬＨ（配列番号９２）からなるＨＶＲ−Ｌ１；ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号１６）からなるＨＶＲ−Ｌ２；及びＳＱＴＡＨＦＰＹＴ（配列番号３０）からなるＨＶＲ−Ｌ３。
【０１０５】
特定の実施態様において、本願発明は、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。ある実施態様において、本願発明は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。ある実施態様において、本願発明は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。ある実施態様において、本願発明は、（ａ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。ある実施態様において、本願発明は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１０６】
特定の実施態様において、本発明は、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。別の特定の実施態様において、本発明は、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。別の特定の実施態様において、本発明は、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。また別の特定の実施態様において、本発明は、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。また別の特定の実施態様において、本発明は、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１０７】
上記の任意の実施態様において、抗タウ抗体は、ヒト化抗体であり得る。ある実施態様において、抗タウ抗体は、上記任意の実施態様のように、ＨＶＲを含み、そして、更に、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク等の、供与側のヒトフレームワークを含む。別の実施態様において、抗タウ抗体は、上記任意の実施態様のように、ＨＶＲを含み、そして、更に、配列番号５８の配列を含むＶＨを含む。別の実施態様において、抗タウ抗体は、上記任意の実施態様のように、ＨＶＲを含み、そして、更に、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、又は配列番号５７の配列を含むＶＬを含む。
【０１０８】
別の実施態様において、抗タウ抗体は、配列番号５８のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の実施態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗タウ抗体は、タウに結合する能力を保持する。特定の実施態様において、配列番号５８において、合計１から１０のアミノ酸が、置換、挿入及び／又は欠失している。特定の実施態様において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲ外の（すなわちＦＲ内の）領域で生じる。任意で、抗タウ抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号５８におけるＶＨ配列を含む。特定の実施態様において、ＶＨは、以下から選択される１、２、又は３のＨＶＲを含む：（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３。
【０１０９】
別の実施態様において、抗タウ抗体は、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、又は配列番号５７のアミノ酸配列に対し、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）ＨＶＲを含むように提供される。特定の実施態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗タウ抗体は、タウに結合する能力を保持する。特定の実施態様において、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、又は配列番号５７において、合計１から１０のアミノ酸が、置換、挿入及び／又は欠失している。特定の実施態様において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲ外の（すなわちＦＲ内の）領域で生じる。任意で、抗タウ抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号３６におけるＶＬ配列を含む。ある実施態様において、抗タウ抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号３７におけるＶＬ配列を含む。別の実施態様において、抗タウ抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号４４におけるＶＬ配列を含む。また別の実施態様において、抗タウ抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号５４におけるＶＬ配列を含む。また別の実施態様において、抗タウ抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号５５におけるＶＬ配列を含む。特定の実施態様において、ＶＬは、（ａ）配列番号１、配列番号２、配列番号８、配列番号９、又は配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号１６、配列番号１７、配列番号２１、又は配列番
号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号２７、配列番号２９、又は配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、１、２、又は３のＨＶＲを含む。
【０１１０】
別の実施態様において、抗タウ抗体が提供され、その抗体は、上記実施態様の何れかにおけるＶＨ、及び上記実施態様の何れかおけるＶＬを含む。ある実施態様において、抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号５８及び配列番号３６におけるＶＨ及びＶＬ配列をそれぞれ含む。ある実施態様において、抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号５８及び配列番号３７におけるＶＨ及びＶＬ配列をそれぞれ含む。ある実施態様において、抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号５８及び配列番号４４におけるＶＨ及びＶＬ配列をそれぞれ含む。ある実施態様において、抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号５８及び配列番号５４におけるＶＨ及びＶＬ配列をそれぞれ含む。ある実施態様において、抗体は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号５８及び配列番号５５におけるＶＨ及びＶＬ配列をそれぞれ含む。
【０１１１】
更なる実施態様において、本発明は、本明細書における抗タウ抗体と同一エピトープに結合する抗体を提供する。例えば、抗体は、配列番号５８のＶＨ配列、及び配列番号３６、配列番号３７、配列番号４４、配列番号５４、及び配列番号５５からなる群から選択されるＶＬ配列を含む抗体と同じエピトープに結合するように提供される。特定の実施態様において、抗体は、配列番号５９の、アミノ酸４０１〜４１８からなる、又はアミノ酸４０４〜４１１からなる、又はアミノ酸４０５〜４１１からなるタウの断片内のリン酸化エピトープに結合するように提供される。
【０１１２】
更なる実施態様において、任意の上記実施態様によれば、抗タウ抗体は、キメラ、ヒト化、ヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。ある実施態様において、抗タウ抗体は、抗体フラグメント、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施態様において、抗体は、完全長抗体、例えば、インタクトなＩｇＧ１、ＩｇＧ１  Ｎ２９７Ｇ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４抗体、又は本明細書で定義された、他の抗体クラス、又はアイソタイプである。
【０１１３】
更なる実施態様において、任意の上記実施態様によれば、抗タウ抗体は、下記セクション１〜７に記載のように、任意の特徴を、単一で又は組み合わせで含んでもよい。
【０１１４】
１．抗体親和性
特定の実施態様において、本明細書において提供される抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ又はそれ未満、例えば、１０−８Ｍから１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。
【０１１５】
ある実施態様において、Ｋｄは放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）で測定される。ある実施態様において、ＲＩＡは目的の抗体のＦａｂ型及びその抗原を用いて実施される。例えば、非標識抗原の力価測定系の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）−標識抗原にてＦａｂを均衡化して、抗Ｆａｂ抗体コートプレートと結合した抗原を捕獲することによって抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性を測定する(例えば、Chen, et al., J. Mol. Biol. 293:865-881(1999)を参照)。アッセイ条件を確立するために、MICROTITER(登録商標)マルチウエルプレート(Thermo Scientific)を、５μｇ／ｍｌの捕捉抗Ｆａｂ抗体(Cappel Labs)を含む５０ｍＭ炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）で一晩コートし、その後２％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミンを含むＰＢＳにより室温（およそ２３℃）で２〜５時間ブロックする。非吸着プレート(Nunc #269620)において、１００ｐＭ又は２６ｐＭの［１２５Ｉ］抗原を段階希釈した目的のＦａｂと混合する(例えば、Presta et al., (1997) Cancer Res. 57: 4593-4599の抗ＶＥＧＦ抗体、Ｆａｂ-１２の評価と一致する)。ついで目的のＦａｂを一晩インキュベートする；しかし、インキュベーションは平衡状態に達したことを確認するまでに長時間(例えばおよそ６５時間)かかってもよい。その後、混合物を、室温でのインキュベーションのため(例えば１時間)に、捕獲プレートに移す。そして、溶液を取り除き、プレートを０．１％のポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））を含むＰＢＳにて８回洗浄する。プレートが乾燥したら、１５０μｌ／ウエルの閃光物質(MICROSCINT-20（商標）；Packard)を加え、プレートをTOPCOUNT（商標）ガンマ計測器(Packard)にて１０分間計測する。最大結合の２０％か又はそれ以下濃度のＦａｂを選択してそれぞれ競合結合測定に用いる。
【０１１６】
別の実施態様によれば、Ｋｄはビアコア（登録商標）表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定される。例えば、ビアコア（登録商標）−２０００、ビアコア（登録商標）−３０００（BIAcore, Inc., Piscataway, NJ)は約１０反応単位（ＲＵ）で、固定化抗原ＣＭ５を用いて実施される。ある実施態様において、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ(CM5, BIAcore Inc.)を、供給業者の指示書に従ってＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシニミド（ＮＨＳ）で活性化する。抗原を１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍｌ（０．２μＭ）に希釈し、結合したタンパク質の反応単位（ＲＵ）がおよそ１０になるように５μｌ／分の流速で注入する。抗原の注入後、未反応基をブロックするために１Ｍのエタノールアミンを注入した。動力学的な測定のために、Ｆａｂの２倍の段階希釈（０．７８ｎＭから５００ｎＭ）を、２５°Ｃで、およそ２５μｌ／分の流速で０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（商標））界面活性剤（ＰＢＳＴ）を含むＰＢＳに注入する。会合センサーグラム及び解離センサーグラムを同時にフィットさせることによる単純１対１ラングミュア結合モデル(BIACORE（登録商標）評価ソフトウェアバージョン３．２）を用いて、会合速度（ｋｏｎ）と解離速度（ｋｏｆｆ）を算出する。平衡解離定数（Ｋｄ）をｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として算出する。例えば、Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999)を参照のこと。上記の表面プラズモン共鳴アッセイによる会合速度が１０６Ｍ−１ｓ−１を上回る場合、会合速度は、分光計、例えば流動停止を備えた分光光度計（Aviv Instruments）又は撹拌キュベットを備えた８０００シリーズSLM-Aminco（商標）分光光度計（ThermoSpectronic）で測定される漸増濃度の抗原の存在下で、２５℃、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中の２０ｎＭ抗抗原抗体（Ｆａｂ型）の蛍光放出強度（励起＝２９５ｎｍ；吸収＝３４０ｎｍ、１６ｎｍバンドパス）の増加又は低下を測定する蛍光消光技術を用いて測定することができる。
【０１１７】
２．抗体断片
特定の実施態様において、本明細書で提供される抗体は、抗体断片である。抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、及び下記の他の断片を含むが、これらに限定されない。特定の抗体断片の総説については、 Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003)を参照のこと。ｓｃＦｖ断片の総説については、例えば、Pluckthun, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994)を参照；また、WO 93/16185；及び米国特許第5,571,894号及び第5,587,458号も参照。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、かつインビボ半減期を増加させたＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の議論については、米国特許第５８６９０４６号を参照のこと。
【０１１８】
ダイアボディは２価又は二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、EP 404,097；WO 1993/01161; Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003); 及び Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)を参照のこと。トリアボディ（triabodies）及びテトラボディ（tetrabodies）は、また、Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)に記載されている。
【０１１９】
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全て又は一部、又は軽鎖可変ドメインの全て又は一部を含む抗体断片である。特定の実施態様において、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である(Domantis, Inc., Waltham, MA; 例えば、米国特許第6,248,516 B1号を参照)。
【０１２０】
抗体断片は様々な技術で作製することができ、限定されないが、本明細書に記載するように、インタクトな抗体のタンパク質分解、並びに組換え宿主細胞（例えば、大腸菌やファージ）による生産を含む。
【０１２１】
３．キメラ及びヒト化抗体
特定の実施態様において、本明細書で提供される抗体は、キメラ抗体である。特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第4,816,567号;及びMorrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)に 記載される。一例において、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、又はサル等の非ヒト霊長類由来の可変領域）及びヒト定常領域を含む。更なる例において、キメラ抗体は、クラス又はサブクラスが親抗体のものから変更された「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。
【０１２２】
特定の実施態様において、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、ヒトに対する免疫原性を低下させるために、親の非ヒト抗体の特異性と親和性を保持したまま、ヒト化されている。通常、ヒト化抗体は、例えばＣＤＲ等のＨＶＲ（又はその一部）が非ヒト抗体に由来し、かつ、ＦＲ（又はその一部）がヒト抗体配列に由来する、１以上の可変領域を含む。ヒト化抗体はまた、任意で、ヒト定常領域の少なくとも一部をも含む。いくつかの実施態様において、ヒト化抗体におけるいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体の特異性又は親和性を回復又は改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）における、対応する残基により置換されている。
【０１２３】
ヒト化抗体及びその製造は、例えば、Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)に記載され、更に、例えば、Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988)；Queen et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989)；米国特許第5,821,337号、第7,527,791号、第6,982,321号、及び第7,087,409号；Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005) (「特異性決定領域（SDR）グラフティング（grafting）について記載）；Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991) (「表面再構成（resurfacing）」を記載)；Dall’Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005) (「ＦＲシャッフリング」を記載)；及びOsbourn et al., Methods 36:61-68 (2005)及びKlimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000)に記載されている。
【０１２４】
ヒト化に使用されてもよいヒトフレームワーク領域は、「ベストフィット（best-fit）」法（例えば、Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993)参照)を使用して選択されるフレームワーク領域；軽鎖又は重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体の定常配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992)；及びPresta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)参照)；ヒト成熟 (体細胞変異した）フレームワーク領域又はヒト生殖細胞系フレームワーク領域（例えば、Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)参照）；及びFRライブラリーのスクリーニングに由来するフレームワーク領域(例えば、Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997) 及びRosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)参照）を含むが、これらに限定されない。
【０１２５】
４．ヒト抗体
特定の実施態様において、本明細書で提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当技術分野で公知の様々な技術を用いて作製することができる。ヒト抗体は一般的にvan Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001)及びLonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008)に記載されている。
【０１２６】
ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答して、インタクトなヒト抗体又はヒト可変領域を持つインタクトな抗体を産生するように改変されたトランスジェニック動物に、免疫原を投与することにより調製されてもよい。そのような動物は、一般的に、内因性の免疫グロブリン遺伝子座を置き換える、又は、染色体外に又は動物の染色体にランダムに組み込まれて存在する、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全て又は一部を含む。このようなトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、一般的に不活性化される。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の総説については、 Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005)を参照のこと。 また、例えば、XENOMOUSE（商標）技術を記載する米国特許第6,075,181号及び第6,150,584号； HUMAB（登録商標）技術を記載する米国特許第5,770,429号；K-M MOUSE（登録商標）技術を記載する米国特許第7,041,870号、及びVELOCIMOUSE（登録商標）技術を記載する米国特許出願2007/0061900も参照のこと。このような動物で作製されたインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わされることにより、更に改変されてもよい。
【０１２７】
ヒト抗体は、ハイブリドーマをベースにした方法（hybridoma-based methods）によっても作製することができる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株が記載されている（例えば、Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984);Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987);及びBoerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991)を参照）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して作製されたヒト抗体はまた、Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)に記載されている。更なる方法は、例えば、米国特許第7,189,826号(ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載している)及びNi, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006) （ヒト−ヒトハイブリドーマを記載している)に記載されたものを含む。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）もまた、Vollmers and Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) 及びVollmers and Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-91 (2005)に記載される。
【０１２８】
ヒト抗体はまた、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択されたFvクローン可変ドメイン配列を単離することによって作製されてもよい。このような可変ドメイン配列は、次に所望のヒト定常ドメインと組み合わされてもよい。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技術が、以下に説明される。
【０１２９】
５．ライブラリー由来抗体
本発明の抗体は、所望の１又は複数の活性を有する抗体について、コンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって単離することができる。例えば、様々な方法が、ファージディスプレイライブラリーを作製し、所望の結合特性を有する抗体をスクリーニングするために、当該技術分野で知られている。そのような方法は、例えば、Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O’Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001) に概説され、更に、例えば、McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury, Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004); 及び Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004)に概説されている。
【０１３０】
特定のファージディスプレイ法において、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーがポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により個別にクローニングされ、ファージライブラリーにおいてランダムに再結合され、その後、Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994)に記載されるように、抗原結合ファージがスクリーニングされ得る。ファージは、一般的に、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片又はＦａｂ断片として、抗体断片を提示する。免疫された起源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要性を伴うことなく免疫原に対する高親和性抗体を提供する。一方、Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993)に記載されるように、任意の免疫感作無しで、広範囲の非自己抗原及び自己抗原に対する抗体の単一起源を提供するために、ナイーブなレパートリーが、（例えば、ヒトから）クローン化され得る。最後に、Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992)に記載されるように、ナイーブライブラリーは、再構成されていないＶ−遺伝子断片を幹細胞からクローニングすることによって、及び、超可変ＣＤＲ３領域をコードし、かつ、インビトロで再構成を達成するように、ランダム配列を含むＰＣＲプライマーを使用して、合成的に作製され得る。ヒト抗体のファージライブラリーを記載する特許文献は、例えば、米国特許第5,750,373号、及び米国特許出願公開第2005/0079574号、第2005/0119455号、第2005/0266000号、第2007/0117126号、第2007/0160598号、第2007/0237764号、第2007/0292936号、及び第2009/0002360号を含む。
【０１３１】
ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体又は抗体断片は、本明細書でヒト抗体又はヒト抗体の断片とみなされる。
【０１３２】
６．多重特異性抗体
特定の実施態様において、本明細書で提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも二つの異なる部位に対して結合特異性を有するモノクローナル抗体である。特定の実施態様において、結合特異性の１つはタウ（例えば、ｐタウ）に対してであり、他は、任意の他の抗原に対してである。特定の実施態様において、二重特異性抗体は、タウ（例えば、ｐタウ）の２つの異なるエピトープに結合してもよい。二重特異性抗体はまたタウを発現する細胞に対して細胞傷害性薬剤を局在化させるために用いられてもよい。二重特異性抗体は、完全長抗体又は抗体断片として調製することができる。
【０１３３】
多重特異性抗体を作製する技術は、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖ペアの、組換え体共発現を含むが、これに限定されない（Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983))、WO 93/08829、及び Traunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991))、及び“knob-in-hole” engineering (例えば、米国特許第5,731,168号を参照）を参照）。多重特異性抗体は、抗体Ｆｃヘテロ二量体分子（WO 2009/089004A1）作製のための静電気操作効果の使用によって；２以上の抗体又は断片の架橋結合によって（例えば、米国特許第4,676,980号、及びBrennan et al., Science, 229: 81 (1985)を参照）；二重特異性抗体を作製するためのレクチンジッパーの使用によって（例えば、Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992)を参照）；二重特異性抗体断片を作製するための「ダイアボディ」技術によって（例えば、Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)を参照）；及び単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ダイマーの使用によって（例えば、Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)参照)；及び、例えば、Tutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991)に記載の三重特異性抗体の調製によって、作製されてもよい。
【０１３４】
「オクトパス抗体」を含む、３以上の機能性抗原結合部位を持つ改変抗体もまた本明細書に含まれる(例えば、米国特許出願公開第2006/0025576A1号を参照)。
【０１３５】
本明細書における抗体又は断片はまた、タウ（例えば、ｐタウ）及びその他の異なる抗原（例えば、米国特許出願公開第2008/0069820号を参照）に結合する抗原結合部位を含む、「２重作用（Dual Acting）ＦＡｂ」又は「ＤＡＦ」を含む。
【０１３６】
加えて、本発明の抗体は、様々な、利用するＢＢＢ受容体（すなわち、トランスフェリン受容体、インスリン受容体、低比重リポタンパク質受容体関連タンパク質８、グルコース輸送体１（Ｇｌｕｔ１）等）による、血液脳関門（ＢＢＢ）を介した受容体介在輸送の長所を生かすために、改変されてもよい。例えば、本願発明に係る抗体は、タウ及びＢＢＢ受容体を標的とするために、多重特異的に作製され得る。多重特異性抗体の非限定的な例は、抗体の１つのアームが本願発明の抗体断片であり、抗体のもう一方のアームがＢＢＢを介した輸送を介在するＢＢＢ受容体を標的とする、二重特異性抗体を含む。例えば、ＢＢＢ受容体は、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）、インスリン受容体、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦ受容体）、低比重リポタンパク質受容体関連タンパク質８（ＬＲＰ８）、低比重リポタンパク質受容体関連タンパク質１（ＬＲＰ１）、グルコース輸送体１（Ｇｌｕｔ１）、及びヘパリン結合上皮増殖因子様成長因子（ＨＢ−ＥＧＦ）を含み得る。
【０１３７】
７．抗体変異体
特定の実施態様において、本明細書で提供される抗体のアミノ酸配列変異体が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び/又は他の生物学的特性を改善することが望まれ得る。抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な改変を導入することにより、又はペプチド合成によって調製されてもよい。このような改変は、例えば、抗体のアミノ酸配列内における、残基の欠失、及び／又は挿入及び/又は置換を含む。欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせが、抗原結合等の所望の特性を有する最終コンストラクトを取得するために作成され得る。
【０１３８】
ａ）置換、挿入、及び欠失変異体
特定の実施態様において、１以上のアミノ酸置換を有する抗体変異体が提供される。置換変異の対象となる部位は、ＨＶＲとＦＲを含む。保存的置換は、表１の「好ましい置換」の見出しの下に示されている。より実質的な変更が、表１Ａの「例示的置換」の見出しの下に提供され、アミノ酸側鎖のクラスに関して以下に更に説明される。アミノ酸置換は、目的の抗体に導入してもよく、その産物は、例えば、抗原結合の保持／改善、免疫原性の低下、又はＡＤＣＣ又はＣＤＣの改善等の所望の活性についてスクリーニングされた。
【０１３９】
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アミノ酸は共通の側鎖特性に基づいてグループに分けることができる：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性の親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーを他のクラスに交換することを必要とするであろう。
【０１４０】
ある型の置換型変異体は、親抗体（例えばヒト化、又はヒト抗体）の１以上の超可変領域残基の置換を含んでいる。通常、更なる研究のために選択され得られた変異体は、親抗体と比較して、特定の生物学的特性の改変（例えば、改善）（例えば、親和性の増加、免疫原性の低下）を有し、及び/又は親抗体の特定の生物学的特性を実質的に保持しているであろう。典型的な置換変異体は、親和性成熟抗体であり、例えば、本明細書に記載されるファージディスプレイベースの親和性成熟技術を用いて、簡便に生成され得る。簡潔に言うと、１以上のＨＶＲ残基が変異され、そして、変異体抗体がファージ上に提示され、特定の生物学的活性（例えば、結合活性）についてスクリーニングされる。
【０１４１】
変更（例えば、置換）は、例えば抗体の親和性を向上させるために、ＨＶＲで行われてもよい。そのような変更は、ＨＶＲの「ホットスポット」、すなわち、体細胞変異過程の間、高頻度で変異を受けるコドンによりコードされる残基（例えば、Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)を参照)、及び又は、結合親和性が試験される得られた変異体ＶＨ又はＶＬと共に抗原に接触する残基、において実施されてもよい。二次ライブラリーからの構築、及び、再選択による、親和性変異は、例えば、Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O’Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001)）に記載されている。親和性成熟のいくつかの実施態様において、任意の様々な方法によって、多様性が、成熟のために選択された可変の遺伝子に導入される（例えば、エラープローンＰＣＲ（error-prone PCR）、チェーンシャッフリング（chain shuffling）、又は部位特異的変異誘発（oligonucleotide-directed mutagenesis））。次いで、二次ライブラリーが作製される。続いて、ライブラリーは、所望の親和性を持つ抗体変異体を同定するためにスクリーニングされる。多様性を導入するもう１つの方法は、様々なＨＶＲ残基（例えば、一度に４から６残基）がランダム化されるＨＶＲ指向のアプローチを伴う。抗原結合に関与するHVR残基は、例えばアラニンスキャニング変異誘発、又はモデリングを用いて、特異的に同定されてもよい。ＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３がしばしば標的にされる。
【０１４２】
特定の実施態様において、抗体の抗原に対する結合力を実質的に低下させない範囲で、置換、挿入、又は欠失は、１以上のＨＶＲ内に生じてもよい。例えば、実質的に結合親和性を低下させない保存的改変（例えば本明細書で与えられる保存的置換）がＨＶＲ内で実施されてもよい。そのような変更は、例えば、ＨＶＲ内の抗原接触残基の外側にあってもよい。上記変異体ＶＨ又はＶＬ配列の特定の実施態様において、各ＨＶＲは不変であるか、又は１以下、２以下、又は３以下のアミノ酸置換が含まれているかの何れかである。
【０１４３】
変異誘発のために標的とすることができる抗体の残基又は領域を同定するための有用な方法は、Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085により説明されるように、「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法では、標的残基の残基又はグループ（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ及びｇｌｕ等の荷電残基）が同定され、抗原と抗体との相互作用が影響を受けるかどうかを判断するために、中性又は負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニン又はポリアラニン）に置換される。更なる置換が、最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸の位置に導入されてもよい。一方、又は更に、抗原抗体複合体の結晶構造が、抗体と抗原との接触点を同定する。そのような接触残基及び隣接残基が、置換の候補として標的とされるか又は排除されてもよい。変異体はそれらが所望の特性を含むかどうかを決定するためにスクリーニングされてもよい。
【０１４４】
アミノ酸配列挿入は、一残基から百以上の残基を含有するポリペプチド長にわたるアミノ及び／又はカルボキシル末端融合、並びに単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニン残基を有する抗体が含まれる。抗体分子の他の挿入変異体は、抗体のＮ末端又はＣ末端の、酵素への融合（例えばＡＤＥＰＴのための）、又は抗体の血清半減期を増加させるポリペプチドへの融合を含む。
【０１４５】
ｂ）グリコシル化変異体
特定の実施態様において、本明細書で提供される抗体は抗体がグリコシル化される程度が増加又は低下するように改変される。抗体に対するグリコシル化部位の追加又は除去は、１以上のグリコシル化部位が作成又は除去されたアミノ酸配列を変更することにより、簡便に行われてもよい。
【０１４６】
抗体がＦｃ領域を含む場合には、それに付着する炭水化物が変更されてもよい。哺乳動物細胞によって生成された天然型抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７にＮ−結合により一般的に付着した、分岐した、二分岐オリゴ糖を含んでいる。例えば、Wright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997)を参照のこと。オリゴ糖は、様々な炭水化物、例えば、二分岐糖鎖構造の「幹」のＧｌｃＮＡｃに結合した、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、シアル酸、並びに、二分岐オリゴ糖構造の「柄（stem）」でＧｌｃＮＡｃに付着したフコースを含んでもよい。いくつかの実施態様において、本発明の抗体におけるオリゴ糖の改変は一定の改善された特性を有する抗体変異体を作製するために行われてもよい。
【０１４７】
ある実施態様において、抗体変異体は、Ｆｃ領域に（直接又は間接的に）付着したフコースを欠いた炭水化物構造を有して提供される。例えば、このような抗体のフコース量は、１％から８０％、１％から６５％、５％から６５％、又は２０％から４０％であり得る。フコースの量は、例えば、WO 2008/077546に記載されているように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって測定されるＡｓｎ２９７に付着しているすべての糖構造の合計（例えば、コンプレックス、ハイブリッド及び高マンノース構造）に対して、Ａｓｎ２９７の糖鎖中のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号付け）でおよそ２９７位に位置するアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７は、２９７位の±３残基上流又は下流のアミノ酸に配置されてもよく、すなわち抗体の軽微な配列変異に起因して、２９４位と３００位の間に配置されてもよい。このようなフコシル化変異体はＡＤＣＣ機能を改善させた可能性がある。例えば、米国特許出願公開第2003/0157108号(Presta, L.);米国特許出願公開第2004/0093621号(Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd)を参照のこと。「フコース非修飾」又は「フコース欠損」抗体変異体に関連する出版物の例としては、米国特許出願公開第2003/0157108号、WO 2000/61739、WO 2001/29246、米国特許出願公開第2003/0115614号、米国特許出願公開第2002/0164328号、米国特許出願公開第2004/0093621号、米国特許出願公開第2004/0132140号、米国特許出願公開第2004/0110704号、米国特許出願公開第2004/0110282号、米国特許出願公開第2004/0109865号、WO 2003/085119、WO 2003/084570、WO 2005/035586、WO 2005/035778、WO 2005/053742、WO 2002/031140、Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)が含まれる。フコース非修飾抗体を作成可能な細胞株の例は、タンパク質フコシル化が欠損しているＬｅｃ１３  ＣＨＯ細胞(Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); 米国特許出願公開第2003/0157108 A1号、Presta, L; and WO 2004/056312 A1, Adams et al., 特に Example 11)、 及び、アルファ-1,6-フコシルトランスフェラーゼ遺伝子ＦＵＴ８ノックアウトＣＨＯ細胞等のノックアウト細胞株(例えば、Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006); 及び WO 2003/085107を参照）を含む。
【０１４８】
抗体変異体は、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分された、二分オリゴ糖とともに更に提供される。このような抗体変異体はフコシル化を低下させ、及び／又はＡＤＣＣ機能を改善していてもよい。そのような抗体変異体の例は、例えば、WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.);米国特許第6,602,684号 (Umana et al.);及び米国特許出願公開第2005/0123546号 (Umana et al.)に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖内に少なくとも1つのガラクトース残基を持つ抗体変異体も提供される。このような抗体変異体はＣＤＣ機能が改善されていてもよい。このような抗体変異体は、例えば、WO 1997/30087 (Patel et al.);WO 1998/58964 (Raju, S.);及びWO 1999/22764 (Raju, S.)に記載されている。
【０１４９】
ｃ）Ｆｃ領域変異体
特定の実施態様において、１以上のアミノ酸の修飾は、本明細書において提供される抗体のＦｃ領域に導入されてもよく、それにより、Ｆｃ領域変異体が作製される。Ｆｃ領域変異体は、１以上のアミノ酸の位置におけるアミノ酸の修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４  Ｆｃ領域）を含んでもよい。
【０１５０】
特定の実施態様において、本発明は、インビボにおける抗体の半減期が重要であるが、ある種のエフェクター機能（例えば補体及びＡＤＣＣ等）が不要又は有害である用途に望ましい候補となる、全てではないが、一部の、エフェクター機能を有する抗体変異体を企図する。インビボ及び／又はインビトロの細胞障害性アッセイは、ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣ活性の低下／喪失を確認するために実施され得る。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイは、抗体がＦｃγＲ結合（従って、ＡＤＣＣ活性を欠いていると見込まれる）を欠いているが、ＦｃＲｎ結合能を維持していることを確認するために実施され得る。ＡＤＣＣを仲介するための初代細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲの発現は、Ravetch及びKinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)の４６４頁の表３に要約されている。目的分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第5,500,362号（例えば、Hellstrom, I. et al. Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)を参照)、及びHellstrom, I et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985); 5,821,337 (Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)を参照)に記載されている。
一方、非放射性アッセイ法が使用されてもよい（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ(CellTechnology, Inc. Mountain View, CA;及びCytoTox 96（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ(Promega, Madison, WI)を参照）。このようなアッセイにおいて有用なエフェクター細胞は、末梢血液単核細胞(ＰＢＭＣ)及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。一方、又は更に、目的分子のＡＤＣＣ活性は、Clynesら、PNAS USA 95:652-656 (1998)に開示されるように、インビボで、例えば動物モデルにおいて評価することができる。Ｃ１ｑ結合アッセイは、また、抗体がC1qに結合できないこと、従って、ＣＤＣ活性を欠いていることを確認するために行ってもよい。例えば、WO 2006/029879及びWO 2005/100402に記載のＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照のこと。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイが実施されてもよい（例えば、Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M.S. et al., Blood 101:1045-1052 (2003); 及びCragg, M.S. and M.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004))を参照）。ＦｃＲｎ結合、及びインビボでのクリアランス/半減期の測定もまた、当該分野で周知の方法を用いて行うことができる(例えば、Petkova, S.B. et al., Int’l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)を参照)。
【０１５１】
エフェクター機能が低下した抗体は、Ｆｃ領域の残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、及び３２９の１以上での置換を有する抗体を含む（米国特許第6,737,056号）。そのようなＦｃ変異体は、残基２６５及び２９７のアラニンへの置換を有する、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含む、アミノ酸２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７位の２以上での置換を有するＦｃ変異体を含む（米国特許第7,332,581号）。
【０１５２】
ＦｃＲへに対する改善した又は低下した結合を有する特定の抗体変異体が記載されている。(例えば、米国特許第6,737,056号; WO 2004/056312、及びShields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)を参照)。
【０１５３】
特定の実施態様において、抗体変異体は、例えば、Ｆｃ領域の２９８、３３３、及び／又は３３４位（残基のＥＵ番号付け）での置換等の、ＡＤＣＣを改善する１以上のアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む。
【０１５４】
いくつかの実施態様において、例えば、米国特許第6,194,551号、WO 99/51642、及び Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)記載されるように、改変された（すなわち、改善された又は低下した）Ｃ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）をもたらす、Ｆｃ領域における改変がなされる。
【０１５５】
増加した半減期を持ち、胎仔への母性ＩｇＧの移送を担う、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善された抗体(Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) 及びKim et al., J. Immunol. 24:249 (1994))が、米国特許出願公開第2005/0014934 A1号 (Hinton et al.)に記載されている。それらの抗体は、Ｆｃ領域のＦｃＲｎに対する結合を改善する、１以上の置換を有するＦｃ領域を含む。そのようなＦｃ変異体は、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換（米国特許第7,371,826号）等の、１以上のＦｃ領域残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４又は４３４での置換を有する変異体を含む。
【０１５６】
Ｆｃ領域変異体の他の例に関しては、Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988);米国特許第5,648,260号;米国特許第5,624,821号;及びWO 94/29351も参照のこと。
【０１５７】
ｄ）システイン操作抗体変異体
特定の実施態様において、例えば、抗体の１以上の残基がシステイン残基で置換されている「チオＭＡｂ（thioMAbs）」等の、システイン操作抗体を作製することが望ましいことがある。特定の実施態様において、置換された残基は、抗体のアクセス可能な部位で生じる。それらの残基をシステインで置換することにより、反応性チオール基は、それによって抗体のアクセス可能な部位に配置され、本明細書中で更に記載されるように、免疫複合体を作製するために、例えば薬物部分又はリンカー−薬剤部分等の他の部分に抗体をコンジュゲートするために使用されてもよい。特定の実施態様において、Ｆｃ領域の、軽鎖のＶ２０５（カバット番号付け）；重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）；及び重鎖のＳ４００（ＥＵ番号付け）の１以上の残基がシステインで置換されていてもよい。システイン操作抗体は、例えば、米国特許第7,521,541号に記載のように作製され得る。
【０１５８】
ｅ）抗体誘導体
特定の実施態様において、本明細書で提供される抗体は、当技術分野で知られ、容易に入手可能な追加の非タンパク質部分を含むように更に改変されていてもよい。抗体の誘導体化に適した部分は、水溶性ポリマーを含むが、これに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールの共重合体、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキソラン、エチレン／無水マレイン酸共重合体、ポリアミノ酸（ホモ重合体又はランダム共重合体の何れか）、及びデキストラン又はポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモ重合体、プロピレンオキシド／エチレンオキシド共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール（例えばグリセロール）、ポリビニルアルコール及びこれらの混合物を含むが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドはその水中での安定性のために製造上の利点を有してもよい。ポリマーは任意の分子量のものであってよく、そして分枝鎖又は未分枝鎖であってよい。抗体に結合するポリマーの数は多様であってよく、１より多いポリマーが結合している場合、それらは同じ又は異なる分子であり得る。通常、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／又は種類は、限定されないが、改善される抗体の特定の特性又は機能、抗体誘導体が特定の条件下で治療に使用されるのか等を考慮した上で決定され得る。
【０１５９】
別の実施態様において、放射線への曝露によって選択的に加熱されてもよい、抗体及び非タンパク質部分とのコンジュゲートが提供される。ある実施態様において、非タンパク質部分がカーボンナノチューブである（Kam et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605 (2005)）。放射線は任意の波長であってもよく、そして、限定されないが、細胞には害を与えないが、抗体−非タンパク質部分の近位の細胞が死滅する温度まで非タンパク質部分を加熱する波長を含む。
【０１６０】
Ｂ．組換え方法及び組成物
本発明の方法を用いて同定される抗体は、例えば米国特許第4,816,567号に記載の組換え方法及び組成物を用いて製造することができる。ある実施態様において、本明細書に記載の抗タウ（例えば、抗ｐタウ）抗体をコードする、単離された核酸が提供される。このような核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列、及び／又は抗体のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／又は重鎖）をコードしてもよい。更なる実施態様において、そのような核酸を含む１以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。更なる実施態様において、そのような核酸を含む宿主細胞が提供される。ある実施態様において、宿主細胞は以下を含む（例えば、以下で形質転換される）：（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、又は（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１ベクター、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２ベクター。ある実施態様において、宿主細胞は、真核生物細胞、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、又はリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。ある実施態様において、抗タウ抗体を作製する方法が提供され、当該方法は、前述のように、抗体の発現に適した条件下で抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養すること、及び、任意選択的に、宿主細胞（又は宿主細胞の培地）から抗体を回収すること、を含む。
【０１６１】
抗タウ抗体の組換え生産のために、例えば、前述のように、抗体をコードする核酸は、単離され、そして、宿主細胞内での更なるクローニング及び／又は発現のために１以上のベクターに挿入される。このような核酸は、一般的な手順を用いて（例えば、抗体の重鎖と軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離、及び、シークエンシングされてもよい。
【０１６２】
抗体をコードするベクターのクローニング又は発現に適した宿主細胞は、本明細書に記載の原核生物細胞又は真核細胞を含む。例えば、特に、グリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要ない場合には、抗体は、細菌内で製造され得る。細菌における抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第5,648,237号、第5,789,199号、及び第5,840,523号を参照のこと（大腸菌における抗体断片の発現を記載する、Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254も参照）。発現の後、抗体は可溶性画分において細菌の細胞ペーストから単離され得、更に精製されてもよい。
【０１６３】
原核生物に加えて、糸状菌又は酵母のような真核微生物は、抗体をコードするベクターのための、適切なクローニング宿主又は発現宿主であって、当該真核微生物は、グリコシル化経路が「ヒト化」され、部分的又は完全にヒトのグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす、菌類及び酵母株を含む。Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004)、及びLiら、Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)を参照のこと。
【０１６４】
グリコシル化抗体の発現に適した宿主細胞はまた、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）にも由来する。無脊椎動物細胞の例には、植物細胞及び昆虫細胞が含まれる。多数のバキュロウイルス株が同定されてきており、これらは特にヨトウガ（Spodoptera frugiperda）細胞のトランスフェクションのために、昆虫細胞と併せて使用されてもよい。
【０１６５】
植物細胞培養物を宿主として利用することもできる。例えば、米国特許第5,959,177号、第6,040,498号、第6,420,548号、第7,125,978号及び第6,417,429号（トランスジェニック植物における抗体産生のためのPLANTIBODIES（商標）技術を記載)を参照のこと。
【０１６６】
脊椎動物細胞もまた宿主として使用されてもよい。例えば、懸濁液中で増殖するように適合されている哺乳動物細胞株は有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０で形質転換されたサル腎臓ＣＶ１細胞株（ＣＯＳ−７）；ヒト胚性腎臓細胞株（例えばGraham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)に記載の２９３又は２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えばMather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)に記載のＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２）;例えばMather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)に記載のＴＲＩ細胞；ＭＲＣ５細胞；及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株は、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞 (Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980));及びＹ０、ＮＳ０、及びＳｐ２／０等の骨髄腫細胞株を含む、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を含む。抗体産生に適した特定の哺乳動物宿主細胞株の概説については、例えば、Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003)を参照のこと。
【０１６７】
Ｃ．アッセイ
本明細書において提供される抗タウ（例えば、抗ｐタウ）抗体は、当該技術分野で周知の様々なアッセイにより、同定され、スクリーニングされ、又は、その物理的／化学的特性、及び／又は様々な生物活性により特徴づけられる。
【０１６８】
１．結合アッセイとその他のアッセイ
ある実施態様において、本発明の抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット、ビアコア等の周知の方法によって、その抗原結合活性が試験される。
【０１６９】
別の実施態様において、競合アッセイは、本明細書に記載の１以上の抗体（例えば、ｐタウに結合する、配列番号６１の軽鎖及び配列番号６３の重鎖を有する抗体、配列番号６４の軽鎖及び配列番号８７の重鎖を有する抗体、配列番号６５の軽鎖及び配列番号８７の重鎖を有する抗体、配列番号７２の軽鎖及び配列番号８７の重鎖を有する抗体、配列番号８２の軽鎖及び配列番号８７の重鎖を有する抗体、又は配列番号８３の軽鎖及び配列番号８７の重鎖を有する抗体）と競合する抗体を同定するために使用されてもよい。特定の実施態様において、競合抗体は、そのような抗体が結合するのと同じエピトープ（例えば、直鎖状又は立体構造状のエピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な典型的な方法が、Morris (1996) “Epitope Mapping Protocols,” in Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ)に提供されている。
【０１７０】
例示的な競合アッセイにおいて、ｐタウに結合する標識された第一の抗体（例えば、配列番号６１の軽鎖及び配列番号６３の重鎖を有する抗体、配列番号６４の軽鎖及び配列番号８７の重鎖を有する抗体、配列番号６５の軽鎖及び配列番号８７の重鎖を有する抗体、配列番号７２の軽鎖及び配列番号８７の重鎖を有する抗体、配列番号８２の軽鎖及び配列番号８７の重鎖を有する抗体、又は配列番号８３の軽鎖及び配列番号８７の重鎖を有する抗体）、及びｐタウに対する結合について第一の抗体との競合能が試験される非標識の第二の抗体を含む溶液中で、固定化ｐタウがインキュベートされる。第二の抗体はハイブリドーマ上清中に存在してもよい。コントロールとして、固定化ｐタウは、標識された第一の抗体を含むが非標識の第二の抗体は含まない溶液中で、インキュベートされる。第一の抗体のｐタウへの結合が可能な条件下でのインキュベーションの後、過剰な非結合抗体が除去され、そして、固定化ｐタウに関連する標識の量が測定される。固定化ｐタウに関連する標識の量が、コントロール試料と比較してテスト試料で実質的に低下していた場合、ｐタウへの結合について、第二の抗体が第一の抗体と競合していることを示す。Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY)を参照のこと。
【０１７１】
２．活性のアッセイ
ある実施態様において、アッセイは、生物活性を有するタウ（例えば、抗ｐタウ）抗体を同定するために提供される。生物活性は、例えば、タウ（例えば、タウを含む脳における神経原線維タングル）に対する抗体の結合、及びタウタンパク質（脳、例えば、大脳皮質及び／又は海馬における、例えば、総タウ、総可溶性タウ、可溶性リン酸化タウ、総不溶性タウ、不溶性リン酸化タウ、過リン酸化タウ、又は対らせん状細線維含有過リン酸化タウ）レベルの低下を含んでもよい。インビボ及び／又はインビトロでこのような生物活性を有する抗体が提供される。
【０１７２】
特定の実施態様において、本発明の抗体は、そのような生物活性について試験される。例えば、タウトランスジェニックマウス（例えば、Ｐ３０１Ｌ）のような、タウオパシーの動物モデルは、特にトランスジェニックマウスの脳における神経原線維タングルといった、脳の部位に対する、抗タウ抗体の結合を検出するために使用され得る。更に、タウトランスジェニックマウス（例えば、Ｐ３０１Ｌ）等のタウオパシーの動物モデルは、抗タウ抗体（例えば、抗ｐタウ）で処置され得、そして、当該技術分野で周知の実験技法は、その処置が、マウスの脳において（例えば、大脳皮質及び／又は海馬において）、タウタンパク質（例えば、総タウ、総可溶性タウ、可溶性リン酸化タウ、総不溶性タウ、不溶性リン酸化タウ、過リン酸化タウ、又は対らせん状細線維含有過リン酸化タウ）レベルを低下させたかどうかを評価するために使用され得る。
【０１７３】
Ｄ．免疫複合体
本発明は、化学療法剤又は薬物、成長阻害剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、毒素、菌類、植物、又は動物由来の酵素的に活性な毒素、又はその断片）、又は放射性同位体等の１以上の細胞傷害性薬剤にコンジュゲートされた本明細書における抗タウ（例えば、抗ｐタウ）抗体を含む、免疫複合体も提供する。
【０１７４】
ある実施態様において、免疫複合体は、メイタンシノイド（米国特許第5,208,020号、第5,416,064号、及びEP 0 425 235 B1を参照）；モノメチルアウリスタチン薬物部位ＤＥ及びＤＦ（ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）等のオーリスタチン（米国特許第5,635,483号、及び第5,780,588号、及び第7,498,298号を参照）；ドラスタチン；カリケアマイシン又はその誘導体（米国特許第5,712,374号、第5,714,586号、第5,739,116号、第5,767,285号、第5,770,701号、第5,770,710号、第5,773,001号、及び第5,877,296号；Hinman et al., Cancer Res. 53:3336-3342 (1993);及びLode et al., Cancer Res. 58:2925-2928 (1998)を参照)；ダウノマイシン又はドキソルビシン（Kratz et al., Current Med. Chem. 13:477-523 (2006);Jeffrey et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters 16:358-362 (2006);Torgov et al., Bioconj. Chem. 16:717-721 (2005);Nagy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:829-834 (2000); Dubowchik et al., Bioorg. & Med. Chem. Letters 12:1529-1532 (2002); King et al., J. Med. Chem. 45:4336-4343 (2002);及び米国特許第6,630,579号を参照)；メトトレキサート；ビンデシン；ドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル、テセタキセル、及びオルタタキセル等のタキサン；及びCC1065を含むが、これらに限定されない１以上の薬物に、抗体がコンジュゲートされた、抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）である。
【０１７５】
別の実施態様において、免疫複合体は、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、（緑膿菌からの）外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシン(modeccin)Ａ鎖、アルファ-サルシン、シナアブラギリ(Aleurites fordii)タンパク質、ジアンチン(dianthin)タンパク質、ヨウシュヤマゴボウ(Phytolaca americana)タンパク質（PAPI、PAPII、及びPAP-S）、ツルレイシ(momordica charantia)阻害剤、クルシン(curcin)、クロチン(crotin)、サボンソウ(sapaonaria oficinalis)阻害剤、ゲロニン(gelonin)、ミトゲリン(mitogellin)、レストリクトシン(restrictocin)、フェノマイシン(phenomycin)、エノマイシン(enomycin)及びトリコテセン(tricothecene)を含むが、これらに限定されない、酵素的に活性な毒素又はその断片にコンジュゲートされた、本明細書に記載の抗体を含む。
【０１７６】
別の実施態様において、免疫複合体は、放射性複合体を形成するために放射性原子にコンジュゲートされた、本明細書に記載される抗体を含む。様々な放射性同位体が放射性複合体の作製のために入手可能である。例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体を含まれる。検出のために放射性複合体を使用する場合、それはシンチグラフィー試験のための放射性原子、例えばＴｃ９９ｍ又はＩ１２３、又は核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像化（磁気共鳴画像化ＭＲＩとしても知られている）のためのスピン標識、例えばヨウ素−１２３、再びヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガン又は鉄を含んでもよい。
【０１７７】
抗体と細胞障害性薬剤の複合体は、種々の二官能性タンパク質カップリング剤、例えばＮ-スクシンイミジル-３-(２-ピリジルジチオ)プロピオナート(ＳＰＤＰ)、スクシンイミジル-４-(Ｎ-マレイミドメチル)シクロヘキサン-１-カルボキシラート(ＳＭＣＣ)、イミノチオラン(ＩＴ)、イミドエステル類の二官能性誘導体(例えばジメチルアジピミダートＨＣＬ)、活性エステル類(例えば、スベリン酸ジスクシンイミジル)、アルデヒド類(例えば、グルタルアルデヒド)、ビスアジド化合物(例えば、ビス(ｐ-アジドベンゾイル)ヘキサンジアミン)、ビス-ジアゾニウム誘導体(例えば、ビス-(ｐ-ジアゾニウムベンゾイル)エチレンジアミン)、ジイソシアネート(例えば、トリエン-２,６-ジイソシアネート)、及び二活性フッ素化合物(例えば、１,５-ジフルオロ-２,４-ジニトロベンゼン)を使用して作製することができる。Vitetta et al., Science 238:1098 (1987)に記載されるように、例えば、リシンイムノトキシンを調製することができる。カーボン-１４-標識１-イソチオシアナトベンジル-３-メチルジエチレントリアミン五酢酸(ＭＸ-ＤＴＰＡ)は、放射性ヌクレオチドの抗体へのコンジュゲートのためのキレート剤の例である。WO 94/11026を参照のこと。リンカーは、細胞中での細胞傷害性薬剤の放出を促進する「切断可能なリンカー」であり得る。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、光解離性リンカー、ジメチルリンカー又はジスルフィド含有リンカー（Chari et al., Cancer Res. 52:127-131 (1992); 米国特許第5,208,020号)が使用されてもよい。 
【０１７８】
本明細書において、免疫複合体又はＡＤＣは、限定されないが、市販の(例えばPierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL., U.S.Aからの)、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＰＢ、及びスルホ−ＳＭＰＢ及びＳＶＳＢ（スクシンイミジル（４−ビニルスルホン）ベンゾエート）を含むクロスリンカー試薬を用いて調製されるコンジュゲートを特に企図する。
【０１７９】
Ｅ．方法、並びに診断法及び検出のための組成物
特定の実施態様において、本明細書において提供される任意の抗タウ抗体は、生物学的試料におけるタウの存在を検出するために有効である。本明細書で使用する「検出」という用語は、定量的又は定性的検出を包含する。特定の実施態様において、生物学的試料は、脳脊髄液、脳の細胞又は組織（例えば、大脳皮質又は海馬）、又は血液等の、細胞又は組織を含む。ある実施態様において、生物学的試料は、脳脊髄液である。
【０１８０】
ある実施態様において、診断又は検出の方法における使用のための、抗タウ（例えば、抗ｐタウ）抗体が提供される。更なる実施態様において、生物学的試料におけるタウ（例えば、ｐタウ）の存在を検出する方法が提供される。特定の実施態様において、方法は、抗タウ抗体のタウへの結合が可能な条件下で、本明細書に記載の抗タウ抗体と生物学的試料とを接触させること、及び、抗タウ抗体とタウとの複合体が形成されたかどうかを検出すること、を含む。特定の実施態様において、方法は、抗ｐタウ抗体のｐタウへの結合が可能な条件下で、本明細書に記載の抗ｐタウ抗体と生物学的試料とを接触させること、及び、抗タｐウ抗体とｐタウとの複合体が形成されたかどうかを検出すること、を含む。そのような方法は、インビトロ又はインビボ法であってもよい。更に、生物学的テスト試料において抗タウ抗体とタウとの間に形成された複合体は、生物学的コントロール試料（例えば、健康な１又は複数の対象からの生物学的試料）において形成された複合体と比較され得る。更に、生物学的テスト試料において抗タウ抗体とタウとの間に形成された複合体の量も、生物学的コントロール試料（例えば、健康な対象（複数を含む）又は被検体からの生物学的試料）において形成された複合体の量、又は健康な対象において形成されることが知られる複合体の平均量と比較され得る。
【０１８１】
ある実施態様において、抗タウ抗体は、例えば、タウが患者の選択のためのバイオマーカーである場合、抗タウ抗体による治療が適した対象を選択するために使用される。ある実施態様において、抗ｐタウ抗体は、例えば、ｐタウが患者の選択のためのバイオマーカーである場合、抗ｐタウ抗体による治療が適した対象を選択するために使用される。例えば、いくつかの実施態様において、抗タウ（例えば、抗ｐタウ）抗体は、対象がタウタンパク質疾患又は障害を有しているかどうか、又は、対象がタウタンパク質疾患又は障害の高いリスクを有する（又は、かかりやすい）かどうかを検出するために使用される。
【０１８２】
本発明の抗体を使用して診断されてもよい例示的な疾患又は障害は、タウタンパク質関連疾患又は障害、及び、神経原線維タングル又はニューロピルスレッドの形成により生じる又は関連する、疾患又は障害を含む。いくつかの実施態様において、本願発明の抗体を使用して診断されてもよい疾患又は障害は、論理的思考（reasoning）、状況判断（situational judgement）、記憶力、学習、及び／又は特定のナビゲーションを含む認識機能の障害又は喪失として現れる、タウタンパク質関連疾患又は障害を含む。特に、本発明の抗体を使用して診断されてもよい疾患又は障害は、神経変性タウオパシー等のタウオパシーを含む。本発明の抗体を使用して診断されてもよい、例示的な疾患又は障害は、アルツハイマー病、クロイツフェルト・ヤコブ病、拳闘家認知症、ダウン症、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー症候群、封入体筋炎、プリオンタンパク質脳アミロイドアンギオパチー、外傷性脳損傷、グアム島筋萎縮性側索硬化症／グアム島パーキンソン痴呆複合、神経原線維タングルを伴う非グアム型運動ニューロン疾患（Non-Guamanian motor neuron disease）、嗜銀顆粒性認知症、大脳皮質基底核変性症、石灰沈着を伴うびまん性神経原線維変化病、前頭側頭型認知症、第１７染色体関連パーキンソン病を伴う前頭側頭型認知症（frontotemporal dementia with parkinsonism linked to chromosome 17）、ハレルフォルデン−スパッツ病、多系統萎縮症、ニーマン・ピック病、タイプＣ（type C）、淡蒼球橋黒質変性症（Pallido-ponto-nigral degeneration）、ピック病、進行性皮質下膠質症（progressive subcortical gliosis）、進行性核上性麻痺（progressive supranuclear palsy）、亜急性硬化性全脳炎（Subacute sclerosing panencephalitis）、神経原線維変化型（Tangle only dementia）、脳炎後パーキンソン病（Postencephalitic Parkinsonism）、及び筋強直性ジストロフィーを含むが、これらに限定されない。ある実施態様において、本発明の抗体を使用して診断されてもよい障害は、アルツハイマー病（ＡＤ）である。
【０１８３】
特定の実施態様において、標識された抗タウ抗体が提供される。標識は、（例えば、蛍光標識、発色団標識、高電子密度標識、化学発光標識、放射性標識など）直接検出される標識又は部分、並びに、例えば、酵素反応又は分子間相互作用を介して間接的に検出される酵素又はリガンドのような部分が含まれるが、これらに限定されない。このような標識の例には、ラジオアイソトープ３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、及び１３１Ｉ、フルオロフォア、例えば希土類キレート又はフルオレセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシフェラーゼ、例えばホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ(米国特許第4,737,456号)、ルシェフェリン、2,3-ジヒドロフタルジネジオン、西洋ワサビペルオキシダーゼ(ＨＲＰ)、アルカリフォスファターゼ、β-ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖オキシダーゼ、例えばグルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース-6-リン酸デヒドロゲナーゼ、ヘテロサイクリックオキシダーゼ、例えばウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼ、色素前駆体、例えばＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、又はマイクロペルオキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピンラベル、バクテリオファージラベル、安定な遊離ラジカル等を酸化する過酸化水素を利用する酵素とカップリングさせたもの等が含まれるが、これらに限定されない。
【０１８４】
Ｆ．薬学的製剤
本明細書における抗タウ（例えば、抗ｐタウ）抗体の薬学的製剤は、所望の精度を有する抗体と１以上の任意選択的な薬学的に許容され得る担体とを混合することにより、凍結乾燥又は水溶液の形態に調製される（Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)）。薬学的に許容され得る担体は、使用される用量及び濃度でレシピエントに毒性でなく、リン酸塩、クエン酸塩及び他の有機酸のようなバッファー；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えば、オクタデシルジメチオルベンジルアンモニウムクロライド；ヘキサメトニウムクロライド；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチル又はプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン又はリジン；モノサッカライド、ジサッカライド、及びグルコース、マンノース又はデキストリンを含む他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム、金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；及び／又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤を含むが、これらに限定されない。本明細書における例示的な薬学的に許容され得る担体は、介在性薬物分散剤、例えば、水溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（sHASEGP）、例えば、ｒｈｕＰＨ２０（HYLENEX（登録商標）、Baxter International, Inc.）等のヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質を更に含む。特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用法は、ｒＨｕＰＨ２０を含み、米国特許出願公開第2005/0260186号及び第2006/0104968号に開示されている。ある実施態様において、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼ等の、１以上の追加のグリコサミノグリカナセーゼと組み合わせることができる。
【０１８５】
例示的な凍結乾燥抗体製剤は、米国特許第6,267,958号に記載されている。水性の抗体製剤は、米国特許出願公開第6171586号及びWO 2006/044908に記載されているものを含み、後者の製剤はヒスチジン−酢酸バッファーを含む。
【０１８６】
本明細書において提供される製剤は、また、処置される特定の症状のために必要な、１以上の成分、好ましくは、互いに悪影響を与えない相補的活性を有する成分を含んでもよい。このような活性成分は、意図した目的のために有効な量、組み合わせで、適切に存在する。
【０１８７】
本発明に係る組成物は、例えば、タウオパシー及び／又はアミロイドーシス、アルツハイマー病に関与するアミロイドベータタンパク質等のアミロイド又はアミロイド様プロテインに関連する疾患又は障害のグループの医薬において使用される周知の化合物等の、生物学的に活性な基質又は化合物を含む他の組成物との組み合わせで投与されてもよい。
【０１８８】
通常、他の生物学的に活性な化合物は、神経伝達エンハンサー（neutron-transmission enhancers）、精神治療薬、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤、カルシウムチャネルブロッカー、生体アミン、ベンゾジアゼピン精神安定剤、アセチルコリン合成、促進剤の貯蔵又は放出、アセチルコリンシナプス後受容体アゴニスト、モノアミンオキシダーゼＡ又はＢ阻害剤、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパルタートグルタマート受容体アンタゴニスト、非ステロイド系抗炎症薬、抗酸化剤、セロトニン作動性受容体アンタゴニストを含んでもよい。特に、生物学的に活性な薬剤又は化合物は、抗酸化ストレス化合物、抗アポトーシス化合物、金属キレート剤、ピレンゼピン及び代謝産物等のＤＮＡ修復阻害剤、３−アミノ−１−プロパンスルホン酸（３ＡＰＳ）、１，３−プロパンジスルホナート（１，３ＰＤＳ）、セクレターゼ活性化剤、ベータ及び７−セクレターゼ阻害剤、タウタンパク質、神経伝達物質、ベータシートブレーカー（beta-sheet breakers)、抗炎症性分子、「非定型抗精神病薬」、例えば、クロザピン、ジプラシドン、リスペリドン、アリピプラゾール、又はオランザピン、又はコリンエステラーゼ阻害剤（ＣｈＥＩｓ）、例えば、タクリン、リバスティグミン、ドネペジル、及び／又はガランタミン、及び他の薬物、及び栄養補助剤、例えば、ビタミンＢ１２、システイン、アセチルコリン前駆体、レシチン、コリン、イチョウ（Ginkgo biloba）、アシエチル-L-カルニチン、イデベノン、プロペントフィリン、又はキサンチン誘導体等の、並びに、抗体を含む本発明に係る結合ペプチド、特に、モノクローナル抗体、及びその活性断片、及び、任意選択的に、薬学的に許容され得る担体、及び／又は希釈剤、及び／又は賦形剤、及び疾患の処置のための指示書からなる群から選択される化合物の少なくとも１つを含んでもよい。
【０１８９】
更なる実施態様において、本発明に係る組成物は、ナイアシン、メマンチン、並びに、抗体、特にモノクローナル抗体、及びその活性断片、及び、任意選択的に、薬学的に許容され得る担体、及び／又は希釈剤、及び／又は賦形剤を含む、本発明に係るキメラ抗体又はヒト化抗体を含んでもよい。
【０１９０】
本発明のまた別の実施態様において、組成物は、障害（著しい矛盾、脱線、脱線思考が現れる）を通じた、幻覚、妄想を含む精神病的陽性及び陰性症状、及び、異様な又は混乱した行動、及び無快感症、平坦化された感情、無関心、及び社会的離脱の処置のために、例えば、クロザピン、ジプラシドン、リスペリドン、アリピプラゾール、又はオランザピン等の「非定型抗精神病薬」、並びに、本発明に係るキメラ抗体又はヒト化抗体、又はその活性断片、及び、薬学的に許容され得る担体及び／又は希釈剤及び／又は賦形剤を含むように提供される。
【０１９１】
本発明に係るキメラ抗体又はヒト化抗体に加えて組成物において好適に使用され得る他の化合物は、例えば、治療薬の標的（３６〜３９頁）、アルカンスルホン酸及びアルカノール硫酸（３９〜５１頁）、コリンエステラーゼ阻害剤（５１〜５６頁）、ＮＭＤＡ受容体アンタゴニスト（５６〜５８頁）、エストロゲン（５８〜５９頁）、非ステロイド系抗炎症薬（６０〜６１頁）、抗酸化剤（６１〜６２頁）、ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体（peroxisome proliferators-activated receptors）（ＰＰＡＲ）アンタゴニスト（６３〜６７頁）、コレステロール低下剤（６８〜７５頁）、アミロイド阻害剤（７５〜７７頁）、アミロイド形成阻害剤（７７〜７８頁）、金属キレート剤（７８〜７９頁）、抗精神病薬及び抗鬱薬（８０〜８２頁）、栄養補助剤（８３〜８９頁）、及び脳における生物学的活性基質の能力を増加させる化合物（８９〜９３頁を参照）、及びプロドラッグ（９３及び９４頁）、を含むWO 2004/058258 (特に、１６及び１７頁を参照)に記載されているものであり、本出版物、特に、上記の頁に記載される組成物は、引用により本明細書に組み込まれる。 
【０１９２】
活性成分は、例えば、コアセルベーション技術又は界面重合法によって、例えばそれぞれヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン−マイクロカプセル及びポリ（メチルメタクリレート(methylmethacylate)）マイクロカプセル）、コロイド薬物送達系（例えばリポソーム、アルブミンミクロスフィア、ミクロエマルジョン、ナノ粒子及びナノカプセル）又はマクロ・エマルジョンなどの調製されたマイクロカプセルに封入されてもよい。このような技術は、Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)に開示される。 
【０１９３】
徐放性調製物が調製されてもよい。徐放性製剤の好適な例は、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスを含み、そのマトリックスが成形品、例えばフィルム又はマイクロカプセルの形態である。
【０１９４】
インビボ投与に使用される製剤は、一般的に無菌である。無菌性は、例えば、滅菌濾過膜を通して濾過することにより、達成することができる。
【０１９５】
Ｇ．治療的方法及び組成物
本明細書において提供される任意の抗タウ（例えば、抗ｐタウ）抗体は、治療方法において使用されてもよい。
【０１９６】
ある実施態様において、医薬として使用するための抗タウ抗体が提供される。更なる実施態様において、タウタンパク質関連疾患又は障害の処置における使用のための抗タウ抗体が提供される。いくつかの実施態様において、神経原線維タングル又はニューロピルスレッドの形成により生じる、又はこれらに関連する、疾患又は障害の処置における使用のための、抗タウ抗体が提供される。特定の実施態様において、神経変性タウオパシー等のタウオパシーの処置における使用のための抗タウ抗体が提供される。抗タウ抗体を使用して処置され得る、例示的なタウタンパク質関連疾患又は障害は、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、クロイツフェルト・ヤコブ病、拳闘家認知症、ダウン症、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー症候群、封入体筋炎、プリオンタンパク質脳アミロイドアンギオパチー、外傷性脳損傷、グアム島筋萎縮性側索硬化症／グアム島パーキンソン痴呆複合、神経原線維タングルを伴う非グアム型運動ニューロン疾患（Non-Guamanian motor neuron disease）、嗜銀顆粒性認知症、大脳皮質基底核変性症、石灰沈着を伴うびまん性神経原線維変化病、前頭側頭型認知症、第１７染色体関連パーキンソン病を伴う前頭側頭型認知症（frontotemporal dementia with parkinsonism linked to chromosome 17）、ハレルフォルデン−スパッツ病、多系統萎縮症、ニーマン・ピック病、タイプＣ（type C）、淡蒼球橋黒質変性症（Pallido-ponto-nigral degeneration）、ピック病、進行性皮質下膠質症（progressive subcortical gliosis）、進行性核上性麻痺（progressive supranuclear palsy）、亜急性硬化性全脳炎（Subacute sclerosing panencephalitis）、神経原線維変化型（Tangle only dementia）、脳炎後パーキンソン病（Postencephalitic Parkinsonism）、及び筋強直性ジストロフィーを含むが、これらに限定されない。ある実施態様において、アルツハイマー病（ＡＤ）の処置における使用のための抗タウ抗体が提供される。更に、抗タウ抗体を使用して処置され得る、タウタンパク質関連疾患又は障害は、例えば、論理的思考、状況判断、記憶力、学習、及び／又は特定のナビゲーション等の認識機能の障害又は喪失として現れる疾患又は障害を含む。ある実施態様において、処置の方法に使用される抗タウ抗体が提供される。特定の実施態様において、本発明は、個体に抗タウ（例えば、抗ｐタウ）抗体の有効量を投与することを含む、上記任意のタウ関連疾患又は障害を有する個体を処置する方法における使用のための、抗タウ抗体を提供する。ある実施態様において、方法は、例えば以下に記載される、少なくとも1つの追加の治療剤の有効量を個体に投与することを更に含む。
【０１９７】
更なる実施態様において、本発明は、個体におけるタウタンパク質（例えば、総タウ、総可溶性タウ、可溶性リン酸化タウ、総不溶性タウ、不溶性リン酸化タウ、過リン酸化タウ、又は、対らせん状細線維含有過リン酸化タウ）レベルを低下させることにおける使用のための、抗タウ抗体を提供する。例えば、そのような低下は脳（例えば、大脳皮質及び／又は海馬）において生じる。ある実施態様において、本発明は、リン酸化タウレベルを低下させることにおける使用のための抗タウ抗体を提供する。ある実施態様において、本発明は、不溶性タウ（例えば、不溶性リン酸化タウ）レベルを低下させることおける使用のための抗タウ抗体を提供する。ある実施態様において、本発明は、過リン酸化タウレベルを低下させることにおける使用のための抗タウ抗体を提供する。ある実施態様において、本発明は、脳における（例えば、大脳皮質及び／又は海馬における）、対らせん状細線維（例えば、過リン酸化含有対らせん状細線維）を低下させることにおける使用のための抗タウ抗体を提供する。特定の実施態様において、本発明は、タウタンパク質レベルを低下させるために、抗タウタンパク質の有効量を個体に投与することを含む、個体の脳において（例えば、大脳皮質及び／又は海馬において）、タウタンパク質（例えば、総タウ、総可溶性タウ、可溶性リン酸化タウ、総不溶性タウ、不溶性リン酸化タウ、過リン酸化タウ、又は、対らせん状細線維含有過リン酸化タウ）レベルを低下させる方法における使用のための、抗タウ（例えば、抗ｐタウ）抗体を提供する。上記任意の実施態様に係る「個体」は、哺乳動物であり、好ましくはヒトである。
【０１９８】
いくつかの実施態様において、本発明は、例えば、個体の脳における（例えば、大脳皮質及び／又は海馬における）タウタンパク質（例えば、総タウ、総可溶性タウ、可溶性リン酸化タウ、総不溶性タウ、不溶性リン酸化タウ、過リン酸化タウ、又は、対らせん状細線維含有過リン酸化タウ）レベルの調節における使用のための、抗タウ抗体を提供する。
【０１９９】
更なる実施態様において、本発明は、医薬の製造又は調製における抗タウ抗体の使用を提供する。ある実施態様において、医薬はタウタンパク質関連疾患又は障害の処置のためのものである。タウタンパク質関連疾患又は障害は、神経原線維タングル又はニューロピルスレッドの形成により生じる、又はこれらに関連する、疾患又は障害であり得る。特定の実施態様において、医薬は、神経変性タウオパシー等のタウオパシーの処置のための医薬である。特定の実施態様において、医薬は：アルツハイマー病（ＡＤ）、クロイツフェルト・ヤコブ病、拳闘家認知症、ダウン症、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー症候群、封入体筋炎、プリオンタンパク質脳アミロイドアンギオパチー、外傷性脳損傷、グアム島筋萎縮性側索硬化症／グアム島パーキンソン痴呆複合、神経原線維タングルを伴う非グアム型運動ニューロン疾患（Non-Guamanian motor neuron disease）、嗜銀顆粒性認知症、大脳皮質基底核変性症、石灰沈着を伴うびまん性神経原線維変化病、前頭側頭型認知症、第１７染色体関連パーキンソン病を伴う前頭側頭型認知症（frontotemporal dementia with parkinsonism linked to chromosome 17）、ハレルフォルデン−スパッツ病、多系統萎縮症、ニーマン・ピック病、タイプＣ（type C）、淡蒼球橋黒質変性症（Pallido-ponto-nigral degeneration）、ピック病、進行性皮質下膠質症（progressive subcortical gliosis）、進行性核上性麻痺（progressive supranuclear palsy）、亜急性硬化性全脳炎（Subacute sclerosing panencephalitis）、神経原線維変化型（Tangle only dementia）、脳炎後パーキンソン病（Postencephalitic Parkinsonism）、及び筋強直性ジストロフィーからなる群から選択される疾患又は障害の処置のためのものである。ある実施態様において、医薬はＡＤの処置のためのものである。特定の実施態様において、医薬は、タウタンパク質関連疾患又は障害は、例えば、論理的思考、状況判断、記憶力、学習、又は特定のナビゲーション等の認識機能の障害又は喪失として現れる疾患又は障害の処置のためのものである。更なる実施態様において、医薬は、上記列挙された疾患（例えば、ＡＤ等のタウオパシー）の１つの処置の方法における使用のためのものであって、当該方法は、医薬の有効量を、そのような疾患を有する個体に投与することを含む。ある実施態様において、方法は、例えば以下に記載される、少なくとも1つの追加の治療剤の有効量を個体に投与することを更に含む。
【０２００】
更なる実施態様において、医薬は、タウタンパク質（例えば、総タウ、総可溶性タウ、可溶性リン酸化タウ、総不溶性タウ、不溶性リン酸化タウ、過リン酸化タウ、又は、対らせん状細線維含有過リン酸化タウ）レベルを低下させるためのものである。例えば、そのような、タウタンパク質の低下は、脳（例えば、大脳皮質及び／又は海馬）において、又は個体の脳脊髄液において、観察され得る。ある実施態様において、医薬は、リン酸化タウレベルを低下させるためのものである。ある実施態様において、医薬は、不溶性タウ（例えば、不溶性リン酸化タウ）レベルを低下させるためのものである。ある実施態様において、医薬は、過リン酸化タウレベルを低下させるためのものである。ある実施態様において、医薬は、対らせん状細線維（例えば、過リン酸化含有対らせん状細線維）のレベルを低下させるためのものである。更なる実施態様において、医薬は、タウタンパク質レベルを低下させるために、抗タウタンパク質の有効量を個体に投与することを含む、個体における、タウタンパク質（例えば、総タウ、総可溶性タウ、可溶性リン酸化タウ、総不溶性タウ、不溶性リン酸化タウ、過リン酸化タウ、又は、対らせん状細線維含有過リン酸化タウ）レベルを低下させる方法における使用のためのものである。上記任意の実施態様に係る「個体」は、哺乳動物であり、好ましくはヒトである。
【０２０１】
更なる実施態様において、本発明は、タウタンパク質関連疾患又は障害を処置するための方法を提供する。本明細書において提供される方法に従って処置され得るタウタンパク質関連疾患又は障害は、神経原線維タングル又はニューロピルスレッドの形成により生じる、又はこれらに関連する、疾患又は障害を含む。特定の実施態様において、本発明は、神経変性タウオパシー等のタウオパシーの処置のための方法を提供する。特定の実施態様において、本発明は、アルツハイマー病、クロイツフェルト・ヤコブ病、拳闘家認知症、ダウン症、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー症候群、封入体筋炎、プリオンタンパク質脳アミロイドアンギオパチー、外傷性脳損傷、グアム島筋萎縮性側索硬化症／グアム島パーキンソン痴呆複合、神経原線維タングルを伴う非グアム型運動ニューロン疾患（Non-Guamanian motor neuron disease）、嗜銀顆粒性認知症、大脳皮質基底核変性症、石灰沈着を伴うびまん性神経原線維変化病、前頭側頭型認知症、第１７染色体関連パーキンソン病を伴う前頭側頭型認知症（frontotemporal dementia with parkinsonism linked to chromosome 17）、ハレルフォルデン−スパッツ病、多系統萎縮症、ニーマン・ピック病、タイプＣ（type C）、淡蒼球橋黒質変性症（Pallido-ponto-nigral degeneration）、ピック病、進行性皮質下膠質症（progressive subcortical gliosis）、進行性核上性麻痺（progressive supranuclear palsy）、亜急性硬化性全脳炎（Subacute sclerosing panencephalitis）、神経原線維変化型（Tangle only dementia）、脳炎後パーキンソン病（Postencephalitic Parkinsonism）、及び筋強直性ジストロフィーからなる群から選択される疾患又は障害を処置するための方法を提供する。ある実施態様において、本発明は、アルツハイマー病（AD）を処置するための方法を提供する。特定の実施態様において、本発明は、タウタンパク質関連疾患又は障害は、例えば、論理的思考、状況判断、記憶力、学習、又は特定のナビゲーション等の認識機能の障害又は喪失として現れる疾患又は障害の処置のための方法を提供する。ある実施態様において、方法は、上記任意の疾患又は障害を有する個体に対し、抗タウ（例えば、抗ｐタウ）抗体の有効量を投与することを含む。ある実施態様において、方法は、例えば以下に記載される、少なくとも1つの追加の治療剤の有効量を個体に投与することを更に含む。ある実施態様において、方法は、上記１つの疾患を有する個体に対し、抗タウ（例えば、抗ｐタウ）抗体の有効量を投与することを含む。ある実施態様において、方法は、以下に記載される、少なくとも1つの追加の治療剤の有効量を個体に投与することを更に含む。上記任意の実施態様に係る「個体」は、哺乳動物であり、好ましくはヒトである。
【０２０２】
更なる実施態様において、本発明は、個体におけるタウタンパク質（例えば、総タウ、総可溶性タウ、可溶性リン酸化タウ、総不溶性タウ、不溶性リン酸化タウ、過リン酸化タウ、又は、対らせん状細線維含有過リン酸化タウ）レベルを低下させるための方法を提供する。例えば、そのような、タウタンパク質レベルの低下は、脳（例えば、大脳皮質及び／又は海馬）、又は個体の脳脊髄液において、観察され得る。ある実施態様において、本発明は、リン酸化タウレベルを低下させるための方法を提供する。ある実施態様において、本発明は、不溶性タウ（例えば、不溶性リン酸化タウ）レベルを低下させるための方法を提供する。ある実施態様において、本発明は、過リン酸化タウレベルを低下させるための方法を提供する。ある実施態様において、本発明は、対らせん状細線維（例えば、過リン酸化含有対らせん状細線維）のレベルを低下させるため方法を提供する。ある実施態様において、方法は、タウタンパク質レベルを低下させるために、抗タウ（例えば、抗ｐタウ）抗体の有効量を個体に投与することを含む。特定の実施態様において、「個体」はヒトである。
【０２０３】
いくつかの実施態様において、発明は、タウタンパク質関連疾患又は障害の１以上の症状を緩和するための方法；又は、タウタンパク質関連疾患又は障害（例えば、ＡＤ等の本明細書に記載の任意の疾患又は障害）の１以上の症状を改善するための、抗タウ抗体、又は抗タウ抗体を含む医薬を提供する。いくつかの実施態様において、発明は、タウタンパク質関連疾患又は障害の１以上の症状の数、又は１以上の症状の重症度を低下させるための方法；又は、タウタンパク質関連疾患又は障害（例えば、ＡＤ等の本明細書に記載の任意の疾患又は障害）の症状の数、又は１以上の症状の重症度を低下させるするための、抗タウ抗体、又は抗タウ抗体を含む医薬を提供する。特定の実施態様において、タウタンパク質関連疾患又は障害の症状は、認識における障害である。特定の実施態様において、タウタンパク質関連疾患又は障害の症状は、学習、及び／又記憶における障害である。特定の実施態様において、タウタンパク質関連疾患又は障害の症状は、長期記憶の喪失である。特定の実施態様において、タウタンパク質関連疾患又は障害の症状は、認知症である。いくつかの実施態様において、タウタンパク質関連疾患又は障害の症状は、精神錯乱（confusion）、短気（irritability）、攻撃性（aggression）、気分のむら（mood swings）、又は言語障害である。いくつかの実施態様において、タウタンパク質関連疾患又は障害の症状は、論理的思考、状況判断、記憶力、及び／又は学習等の１以上の認識機能の障害又は喪失である。  本明細書において提供される方法は、個体（例えば、タウ関連疾患又は障害の１以上を呈する）に対する、抗タウ抗体のある量（例えば、治療上有効量）の投与を含む。
【０２０４】
特定の実施態様において、発明は、認識記憶力を保持又は改善するため、又はタウタンパク質関連疾患又は障害に関連する記憶喪失を遅らせるための方法；又は、認識記憶力を保持又は改善するため、又はタウタンパク質関連疾患又は障害（例えば、ＡＤ等の、本明細書に記載の任意の疾患又は障害）に関連する記憶喪失を遅らせるための、抗タウ抗体、又は抗タウ抗体を含む医薬を提供する。本明細書において提供される方法は、個体（例えば、タウ関連疾患又は障害の１以上の症状を呈する個体）に対する、抗タウ抗体のある量（例えば、治療上有効量）の投与を含む。
【０２０５】
いくつかの実施態様において、発明は、タウタンパク質関連疾患又は障害の進行速度を遅らせるための方法；又は、タウタンパク質関連疾患又は障害（例えば、ＡＤ等の本明細書に記載の任意の疾患又は障害）の進行速度を遅らせるための、抗タウ抗体、又は抗タウ抗体を含む医薬を提供する。本明細書において提供される方法は、個体（例えば、タウ関連疾患又は障害の１以上の症状を呈する個体）に対する、抗タウ抗体のある量（例えば、治療上有効量）の投与を含む。
【０２０６】
いくつかの実施態様において、発明は、タウタンパク質関連疾患又は障害の進行を予防するための方法；又は、タウタンパク質関連疾患又は障害（例えば、ＡＤ等の本明細書に記載の任意の疾患又は障害）の進行を予防するための、抗タウ抗体、又は抗タウ抗体を含む医薬を提供する。本明細書において提供される方法は、個体（例えば、タウ関連疾患又は障害のリスクがある個体）に対する、抗タウ抗体のある量（例えば、治療上有効量）の投与を含む。
【０２０７】
いくつかの実施態様において、発明は、タウタンパク質関連疾患又は障害の進行を遅延させるための方法；又は、タウタンパク質関連疾患又は障害（例えば、ＡＤ等の本明細書に記載の任意の疾患又は障害）の進行を遅延させるための、抗タウ抗体、又は抗タウ抗体を含む医薬を提供する。本明細書において提供される方法は、個体（例えば、タウ関連疾患又は障害の１以上の症状を呈する個体）に対する、抗タウ抗体のある量（例えば、治療上有効量）の投与を含む。
【０２０８】
更なる実施態様において、本発明は、例えば、上記任意の治療方法における使用のための、本明細書において提供される任意の抗タウ（例えば、抗ｐタウ）抗体を含む薬学的製剤を提供する。ある実施態様において、薬学的製剤は、本明細書において提供される任意の抗タウ（例えば抗ｐタウ）抗体、及び薬学的に許容され得る担体を含む。別の実施態様において、薬学的製剤は、本明細書において提供される任意の抗タウ（例えば抗ｐタウ）抗体、及び、例えば以下に記載の少なくとも１つの追加の治療剤を含む。
【０２０９】
本発明の抗体は、治療において、単独で、又は他の薬剤と組み合わせて使用することができる。例えば、本発明の抗体は少なくとも1つの追加の治療剤と共投与されてもよい。
【０２１０】
例えば、本発明に係る組成物は、例えば、タウオパシー及び／又はアミロイドーシス、アルツハイマー病に関与するアミロイドベータタンパク質等のアミロイド又はアミロイド様プロテインに関連する疾患又は障害のグループの医薬において使用される周知の化合物等の、生物学的に活性な基質又は化合物を含む他の組成物との組み合わせで投与されてもよい。
【０２１１】
通常、他の生物学的に活性な化合物は、神経伝達エンハンサー（neutron-transmission enhancers）、精神治療薬、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤、カルシウムチャネルブロッカー、生体アミン、ベンゾジアゼピン精神安定剤、アセチルコリン合成、促進剤の貯蔵又は放出、アセチルコリンシナプス後受容体アゴニスト、モノアミンオキシダーゼＡ又はＢ阻害剤、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパルタートグルタマート受容体アンタゴニスト、非ステロイド系抗炎症薬、抗酸化剤、セロトニン作動性受容体アンタゴニストを含んでもよい。特に、生物学的に活性な薬剤又は化合物は、抗酸化ストレス化合物、抗アポトーシス化合物、金属キレート剤、ピレンゼピン及び代謝産物等のＤＮＡ修復阻害剤、３−アミノ−１−プロパンスルホン酸（３ＡＰＳ）、１，３−プロパンジスルホナート（１，３ＰＤＳ）、セクレターゼ活性化剤、ベータ及び７−セクレターゼ阻害剤、タウタンパク質、神経伝達物質、ベータシートブレーカー（beta-sheet breakers)、抗炎症性分子、「非定型抗精神病薬」、例えば、クロザピン、ジプラシドン、リスペリドン、アリピプラゾール、又はオランザピン、又はコリンエステラーゼ阻害剤（ＣｈＥＩｓ）、例えば、タクリン、リバスティグミン、ドネペジル、及び／又はガランタミン、及び他の薬物、及び栄養補助剤、例えば、ビタミンＢ１２、システイン、アセチルコリン前駆体、レシチン、コリン、イチョウ（Ginkgo biloba）、アシエチル−Ｌ−カルニチン、イデベノン、プロペントフィリン、又はキサンチン誘導体等の、並びに、抗体を含む本発明に係る結合ペプチド、特に、モノクローナル抗体、及びその活性断片、及び、任意選択的に、薬学的に許容され得る担体、及び／又は希釈剤、及び／又は賦形剤、及び疾患の処置のための指示書からなる群から選択される化合物の少なくとも１つを含んでもよい。
【０２１２】
更なる実施態様において、本発明に係る組成物は、ナイアシン、メマンチン、並びに、抗体、特にモノクローナル抗体、及びその活性断片、及び、任意選択的に、薬学的に許容され得る担体、及び／又は希釈剤、及び／又は賦形剤を含む、本発明に係るキメラ抗体又はヒト化抗体を含んでもよい。
【０２１３】
本発明のまた別の実施態様において、組成物は、障害（著しい矛盾、脱線、脱線思考が現れる）を通じた、幻覚、妄想を含む精神病的陽性及び陰性症状、及び、異様な又は混乱した行動、及び無快感症、平坦化された感情、無関心、及び社会的離脱の処置のために、例えば、クロザピン、ジプラシドン、リスペリドン、アリピプラゾール、又はオランザピン等の「非定型抗精神病薬」、並びに、本発明に係るキメラ抗体又はヒト化抗体、又はその活性断片、及び、薬学的に許容され得る担体及び／又は希釈剤及び／又は賦形剤を含むように提供される。
【０２１４】
本発明に係るキメラ抗体又はヒト化抗体に加えて組成物において好適に使用され得る他の化合物は、例えば、治療薬の標的（３６〜３９頁）、アルカンスルホン酸及びアルカノール硫酸（３９〜５１頁）、コリンエステラーゼ阻害剤（５１〜５６頁）、ＮＭＤＡ受容体アンタゴニスト（５６〜５８頁）、エストロゲン（５８〜５９頁）、非ステロイド系抗炎症薬（６０〜６１頁）、抗酸化剤（６１〜６２頁）、ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体（peroxisome proliferators-activated receptors）（ＰＰＡＲ）アンタゴニスト（６３〜６７頁）、コレステロール低下剤（６８〜７５頁）、アミロイド阻害剤（７５〜７７頁）、アミロイド形成阻害剤（７７〜７８頁）、金属キレート剤（７８〜７９頁）、抗精神病薬及び抗鬱薬（８０〜８２頁）、栄養補助剤（８３〜８９頁）、及び脳における生物学的活性基質の能力を増加させる化合物（８９〜９３頁を参照）、及びプロドラッグ（９３及び９４頁）、を含むWO 2004/058258（特に、１６及び１７頁を参照）に記載されているものであり、本出版物、特に、上記の頁に記載される組成物は、引用により本明細書に組み込まれる。
【０２１５】
上記記載の併用療法は、組み合わせ投与（２以上の治療剤が同じ又は別々の製剤に含まれる）、及び、追加の１又は複数の治療剤の投与と同時に及び／又はそれに続いて、本発明の抗体の投与が生じ得る、別々の投与を包含する。ある実施態様において、抗タウ抗体の投与、及び追加の治療剤の投与は、互いに、約１か月以内、約１、２、又は３週以内、又は約１、２、３、４、５、又は６日以内に生じ得る。
【０２１６】
本発明の抗体（及び任意の追加の治療剤）は、非経口、肺内、及び鼻腔内を含む任意の好適な手段により投与され得、そして、局所処置に所望であれば、病巣内投与により投与され得る。非経口注入は、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与を含む。投薬は、その投与が短期間か又は長期であるかどうかに部分的に依存し、任意の適切な経路、例えば、静脈内又は皮下注射などの注射により行われ得る。限定されないが、様々な時間点にわたる、単一又は複数回投与、ボーラス投与、パルス注入を含む様々な投薬スケジュールが本明細書において企図される。
【０２１７】
本発明の抗体は、適切な医療行為にあった方法で製剤化され、投薬され、投与される。この観点において考慮すべき要因には、処置される特定の障害、処置される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤送達部位、投与方法、投与日程、及び医療従事者に知られる他の要因が含まれる。抗体は、必要ではないが任意で、問題となる障害の予防又は処置のために、現在使用中の１以上の薬剤ともに処方される。そのような他の薬剤の有効量は製剤中に存在する抗体の量、障害又は処置の種類及び上記した他の要因に依存する。これらは通常本明細書に記載されるのと同じ用量及び投与経路において、又は、本明細書に記載された用量の約１％から９９％で、又は経験的に／臨床的に妥当であると決定された任意の用量及び任意の経路により使用される。
【０２１８】
疾患の予防又は処置のための、本願発明の抗体の用量（単独で又は１以上の他の追加の治療剤との組み合わせで使用される場合）は、上記で定義されるように、処置される疾患の型、抗体の型、疾患の重症度及び経過、抗体が予防又は処置目的で投与されるかどうか、以前の治療、患者の病歴及び抗体に対する応答、及び主治医の裁量に依存する。抗体は、患者に対して、単回、又は一連の処置にわたって適切に投与される。例えば、１以上の投与による場合、又は継続的注入による場合の何れであっても、疾患の型及び重症度に応じ、約１μｇ／ｋｇから１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ−１０ｍｇ／ｋｇ）の抗体が、患者に対する投与用量の当初の候補となり得る。ある典型的な用量が、上記要因に応じ、約１μｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇ、又はそれ以上の範囲であってもよい。数日間以上に渡る反復投与の場合には、状態に応じて、処置は通常疾患症状の望まれる抑制が生じるまで持続するであろう。抗体のある例示的な用量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇの範囲であろう。従って、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、又は１０ｍｇ／ｋｇ（又は、これらの任意の組み合わせ）の１以上の用量が、患者に投与されてもよい。このような用量は断続的に、例えば毎週又は３週毎（例えば、患者が約２から約２０、又は例えば抗体の約６用量を受けるように）投与されてもよい。１以上のより低い用量投与の前に、初期負荷用量が投与されてもよい。しかしながら、他の用量レジメンも有効かもしれない。この治療法の進行は従来の手法及びアッセイにより容易にモニタリングされる。
【０２１９】
上記任意の製剤又は治療方法は、本発明の免疫複合体を代わりに使用して、又は抗タウ抗体に追加で使用して、実施されてもよい。
【０２２０】
Ｈ．製品
本発明の別の実施態様において、上記障害の処置、予防、及び／又は診断に有用な材料を含む製品が提供される。製品は、容器と容器上ないしは容器に付随するラベル又はパッケージ挿入物を含む。好適な容器は、例としてボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ輸液バッグ等を含む。容器はガラス又はプラスチック等の様々な物質から形成されうる。容器は、健康状態の処置、予防、及び／又は診断に有効である、それ自体か、又はその他の組成物と併用される組成物を収容し、無菌のアクセスポートを有していてもよい（例えば、容器は皮下注射針で穿刺可能なストッパーを有する静脈溶液バッグ又はバイアルであってよい）。組成物中の少なくとも１つの活性薬剤が本発明の抗体である。ラベル又はパッケージ挿入物は、組成物が特定の症状の処置のために使用されることを示している。更に、製品は、（ａ）本発明の抗体を含む組成物を含む、第１容器；及び（ｂ）更なる細胞傷害性薬剤又は治療剤を含む組成物を含む、第２容器を含んでもよい。本発明の本実施態様における製品は、組成物が特定の疾患を処置することに使用され得ることを示すパッケージ挿入物を更に含んでいてもよい。一方、又は、加えて、製品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液、及びデキストローズ溶液のような、薬学的に許容され得るバッファーを含む、第２（又は第３の）の容器を更に含んでいてもよい。製品は、他のバッファー、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的及び使用者の観点から望ましい他の材料を更に含むことができる。
【０２２１】
上記任意の製品は、抗タウ（例えば、抗ｐタウ）抗体の代わりに、又は、抗タウ抗体に追加して、本発明の免疫複合体を含んでもよい。
【実施例】
【０２２２】
以下は本発明の方法及び組成物の例である。上記の一般的な説明を前提として、他の様々な実施態様が実施され得る。
【０２２３】
抗ｐタウに対するヒト化抗体は、以下に記載のように親和性成熟され、分析された。
【０２２４】
５２０２．４親和性成熟
ヒト化５２０２．４は、ファージミドベクターを使用し、繊維状ファージＭ１３上にＦａｂ形態で提示された（表１は５２０２．４のアミノ酸配列を示す；５２０２．４の可変領域は、２０１３年３月１５日出願のPCT/US13/32341に記載されるhACI-36-2B6-Ab1抗体と同一である）。４つのライブラリーが、停止鋳型（変異形成のためのＣＤＲが削除されたベクター、かつ、非成熟配列の発現を低下させるために挿入された停止コドン）に基づいて構築された。オリゴヌクレオチドの縮合によるクンケル（Ｋｕｎｋｅｌ）変異は、４つの各ライブラリーにおけるＣＤＲを変異させるために使用された。重鎖及び軽鎖は、別々に変異形成され；従って、各ライブラリーは、親重鎖及び変異した軽鎖、又はその逆、の何れかを含む。２つのライブラリーにおいて、重鎖又は軽鎖の何れかが、ＮＮＫウォーク（NNK walk）として知られるスキームを用いて変異され、一度に１つのＣＤＲ残基（ＣＤＲ毎）が、コドンＮＮＫの縮合により変異される。ＮＮＫは２０種の天然のアミノ酸全て及び停止コドンをコードしている。３つの全てのＣＤＲは同時に変異された。他の２つのライブラリーにおいて、３つの重鎖又は軽鎖ＣＤＲは、「ソフト」な変異形成により、同時に変異された。この場合、オリゴヌクレオチド合成の間、変異のために選択された領域における各ヌクレオチドは、９０％親ヌクレオチド及び各非親ヌクレオチドの３．３％を含む混合物で置換された。コドン位置２及び３は、残基ＣＤＲ−Ｌ１  Ｌ２７ａ、ＣＤＲ−Ｌ１  Ｌ３３、及びＣＤＲ−Ｈ１  Ｍ３４(カバット番号付け)について、親のままに維持された。変異ＤＮＡは、XL1 Blue E. coli に形質転換され、Ｍ１３ベースのヘルパーファージでレスキューされたライブラリーに導入された。形質転換対の数は、各ライブラリーについて２ｘ１０８−１ｘ１０９の間であると推測された。
【０２２５】
各ライブラリーは、ビオチニル-18-アミノ-4,7.10,13,16−ペンタオキサオクタデカノイル-Gly-Asp-Thr-Ser[PO3H2]-Pro-Trp-His-Leu-Ser[PO3H2]-Asn-Val-Ser-Ser-Thr-Gly-Ser-Ile-Asp-NH2 (配列番号93)のペプチドを使用したビオチン化ペプチドを用いて、３〜４回の選抜に供された。ファージ／ペプチド複合体は、ニュートラビジン（neutravidin）をコートしたマイクロプレートに捕捉され、繰り返し洗浄され、そして、１００ｍＭ塩酸で溶出された。溶出されたファージは、XL1 Blue E. coliにおいて増幅され、ヘルパーファージでレスキューされ、ＰＥＧ／ＮａＣｌを用いた沈殿法で精製された。使用したビオチン化ペプチドの濃度は、２５０ｎＭ(１回目)、１００ｎＭ(２回目)、４０ｎＭ(３回目)、及び４ｎＭ又は１０ｎＭの何れか（４回目)であった。４回目の選抜のいくつかにおいては、捕捉の３０分前に、親ＩｇＧ（１μＭ）がファージ／ペプチド混合物に添加された。
【０２２６】
個々のクローンは、制限的希釈により単離され、プラスミドＤＮＡからシークエンスされた。３回目の選抜に続いて、及び、第２実験においては４回目の選抜に続いて、コンセンサス配列が、変異軽鎖と共に、プールに観察された。最も頻繁に観察される変異は、Ｈ２７ｄＲ、Ｓ２７ｅＲ、Ｓ２７ｅＫ、Ｈ２８Ｒ、Ｈ２８Ｎ、Ｈ２８Ｋ、Ｋ３０Ｒ、Ｓ５２Ｒ、Ｓ５２Ｋ、Ｓ５６Ｆ、Ｓ５６Ｌ、Ｑ９０Ｓ、Ａ９２Ｒ、Ｈ９３Ｒ、Ｈ９３Ｑ、Ｙ９６Ｒ（全ての番号付けは、カバットシステムに従う）を含んでいた。２３アミノ酸配列、すなわち、ＴＡＭ１、ＴＡＭ２、ＴＡＭ３、ＴＡＭ４、ＴＡＭ５、ＴＡＭ６、ＴＡＭ７、ＴＡＭ８、ＴＡＭ９、ＴＡＭ１０、ＴＡＭ１１、ＴＡＭ１２、ＴＡＭ１３、ＴＡＭ１４、ＴＡＭ１５、ＴＡＭ１６、ＴＡＭ１７、ＴＡＭ１８、ＴＡＭ１９、ＴＡＭ２０、ＴＡＭ２１、ＴＡＭ２２、ＴＡＭ２３（集合的に、「ＴＡＭタンパク質」）が得られた。合計２２の固有なアミノ酸配列が、更なる分析のために選抜され、そして、293S細胞の一時的トランスフェクションにより、組換えＦａｂ断片として、及びＩｇＧとして、発現された。
【０２２７】
図１は、５２０２．４と比較したＴＡＭタンパク質のＣＤＲにおけるアミノ酸変化を示す；表２Ａは、ＴＡＭタンパク質及び５２０２．４の軽鎖ＣＤＲのアミノ酸配列を示す；表２Ｂは、ＴＡＭタンパク質及び５２０２．４の重鎖ＣＤＲのアミノ酸配列を示す；表３は、ＴＡＭタンパク質におけるアミノ酸変異が生じるカバット位置及び変異型を示す；表４は、ＴＡＭタンパク質の可変軽鎖アミノ酸配列及び可変重鎖アミノ酸配列を示す；表５は、ＴＡＭタンパク質の完全長軽鎖アミノ酸配列を示す；表７は、ＴＡＭタンパク質の完全長重鎖アミノ酸配列（ＩｇＧ１）を示す。表６は、ＴＡＭ抗体のＩｇＧ４アイソタイプの完全長重鎖アミノ酸配列を示す。表８は、ＴＡＭ抗体のＩｇＧ１  Ｎ２９７Ｇアイソタイプの完全長重鎖アミノ酸配列を示す。
【０２２８】
抗体選抜及び特性評価
ビアコア機器は、表面プラズモン共鳴アッセイを使用したＦａｂ及びＩｇＧの特性評価のために使用された。その実験のために、プロテインキナーゼＡ（ＰＫＡ）でリン酸化されたタウタンパク質は、ビアコアアミンカップリングキット及び固定化バッファー酢酸ナトリウム（ｐＨ５）を使用して、ＣＭ５又はSeries S CM5 センサーチップに直接固定化された。フローセル１は、参照セルとしての使用のため、未処理のままにされ、当該セルからのデータは、分析前に、全てのセンサーグラムから差し引かれた。各結合／解離サイクルに続いて、１０ｍＭグリシン（ｐＨ１．７）の再生バッファーが、０．５〜１分間注入された。抗体結合は、３０μl/分の流速で評価された。ＢＩＡ評価ソフトウェア及び１：１結合モデルを使用し、非線形回帰によって速度定数が決定された。
【０２２９】
２２ＴＡＭクローンのスクリーニングは、ビアコアＴ１００機器において、Series S CM5チップ、０以外の４つの各Ｆａｂの濃度（２．４、１２、６０及び３００ｎＭ）を使用して、実施された。結果は、表９に示される用に、ＫＤにより順序付られた。そのＫＤ順に基づき、ＴＡＭ１、ＴＡＭ２、ＴＡＭ９、ＴＡＭ１９及びＴＡＭ２０が、更なる特性評価のために選抜された。１つの反復濃度を含む、０以外の７つの濃度を使用して、２つの実験が実施された（表１０）。実験１は、ビアコアＴ１００機器、Series S CM5センサーチップ、及び３０秒の再生期間により実施された。実験２は、ビアコア３０００機器、ＣＭ５センサーチップ、及び1分の再生期間により実施された。表１０は、５２０２．４の選抜された親和性成熟変異体（Ｆａｂ形態）のＰＫＡリン酸化タウタンパク質に対する結合反応速度を示す。リガンドの密度：おおよその４０３ＲＵ  ＰＫＡリン酸化タウタンパク質は、実験１において固定化され、かつ、おおよその３５６ＲＵは、実験２において固定化された。
【０２３０】
クローンは、ＣＭ５センサーチップ及びビアコア２０００機器を使用して、ＩｇＧ（ＩｇＧ１）形態で分析された。再生時間は１分であった。１つの反復濃度を含む０以外の６つの濃度が試験され；少なくとも６つのうち５つの注入から得られたデータが最終分析に含まれた。ＩｇＧの二価性のために、準最適１：１フィッティングが本態様において予測されてもよく、かつ、結果は、固定化された抗原の密度に依存してもよい。２つの密度が、隣接したフローセルを使用して同時に評価され、その結果が表１１に示される（表１１は、ＰＫＡリン酸化タウタンパク質に対する、選抜された５２０２．４の親和性変異体（ＩｇＧ形態）の結合反応速度を示す）。リガンドの密度：おおよその１５３ＲＵ  ＰＫＡリン酸化タウタンパク質は、フローセル４に固定化され（リガンド密度１）、かつ、おおよその８２４ＲＵは、フローセル３に固定化された（リガンド密度２）。これらのデータは、抗体のリガンドへの結合に対する親和性コンポーネントが存在すること、及び、抗体の両アームが抗体のリガンドへの結合に寄与している可能性を示す。
【０２３１】
上位５つのクローンの特異性がＥＬＩＳＡによって評価された。０．１又は１μｇ／のｍｌ非リン酸化完全長タウ、ＰＫＡリン酸化完全長タウ、過リン酸化完全長タウ、又は一リン酸化アルファシヌクレインでコートされたマイクロプレートは、ＰＢＳ／０．５％ＢＳＡ／０．１％Ｔｗｅｅｎ２０（ＢＢＴ）により、常温で、数時間ブロッキングされ、そして、ＢＢＴ中で２時間、上記濃度の抗タウＩｇＧに曝露された。本実験に使用された完全長タウ（４４１ａａ）のアミノ酸配列は、表１２に示される（配列番号５９）。ＰＫＡリン酸化タウは、完全長タウを、セリン４０９をリン酸化するプロテインキナーゼＡとインビトロでインキュベーションすることにより得られた。過リン酸化タウは、完全長タウを、ＰＫＡ、ＧＳＫ３β、ＣＤＫ５、及びカゼインキナーゼ１デルタを含むキナーゼのカクテルとインキュベーションすることにより得られた。結合ＩｇＧは、ペルオキシダーゼ結合抗ヒトＦｃで検出され、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）ベースの検出システムを用いて可視化された。同量の１Ｍリン酸を添加した後、SpectraMax M2プレートリーダー（Molecular Devices）を用いて４５０ｎｍでの吸光度が測定された。ＴＡＭ１、ＴＡＭ２、ＴＡＭ９、ＴＡＭ１９、及びＴＡＭ２０  ＩｇＧは、ＰＫＡリン酸化タウでコートされたプレートに結合したが、非リン酸化タウタンパク質又は一リン酸化アルファシヌクレインでコートされたプレートにはほとんど結合しなかった。
【０２３２】
上位５つのクローンのホスホセリン４０４及びホスホセリン４０９に対する特異性も、ELISAで評価された。ある実験において（図３）、Nunc maxisorp マイクロプレートは、コーティングバッファー（炭酸ナトリウム、ｐＨ９．６）中で、常温で７０分間、５μｇ／ｍｌＩｇＧでコートされた。非特異的結合部位は、最低２時間ＢＢＴでブロックされ、プレートは洗浄され、１０ｎＭビオチン化ペプチド（ＢＢＴ中）が添加された。１．５時間後、、６５分間のペルオキシダーゼ結合ストレプトアビジンとのインキュベーション及び上記ＴＭＢによる検出によって、ペプチドが検出された。図３は、２回反復のウエルの、平均及び範囲を示す；ｙ軸は、４５０ｎｍでの吸光度を示す。本実験で合成及び使用されたペプチド（完全長タウのアミノ酸４０１〜４１８位に対応）は、以下のアミノ酸配列を有する（表Ｂ）。
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【０２３３】
別の実験において（図４）、Nunc maxisorpマイクロプレートは、コーティングバッファー中で、４℃で、５μｇ／ｍｌニュートラビジンでコートされ、非特異的結合部位は、最低２時間のＢＢＴとのインキュベーションによりブロックされた。ビオチン化ペプチド（２０ｎＭ）は、１．５時間結合に供され、プレートは洗浄され、上記濃度で１時間ＩｇＧに曝露された。図３に示され、上述される実験と同じペプチドが、本実験で使用された（表Ｂを参照）。結合したＩｇＧは、ペルオキシダーゼ結合抗ヒト抗体及び上記ＴＭＢによる検出によって、検出された。様々なＩｇＧ濃度が使用された（０．０１ｎＭ、０．１ｎＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、及び１００ｎＭ）。図４は、２回反復のウエルの、平均及び範囲を示す；ｙ軸は、４５０ｎｍでの吸光度を示す。「バックグランド」は、ニュートラビジンでコートされていないウエルから得られたシグナルを示し；「ペプチドなし」は、ニュートラビジンでコートされているが、ペプチドに曝露されていない、ウエルから得られたシグナルを示す。
【０２３４】
結論
データは、タウのリン酸化エピトープを特異的に認識し、かつ、タウリン酸化エピトープに特異的に結合する親和性成熟抗体が作製されたことを示す。作製された抗体のいくつかは、ｐタウに対する、高特異性及び／又は高親和性を示す。
【０２３５】
ＴＡＭ１、ＴＡＭ２、及びＴＡＭ９は、ＥＬＩＳＡ及びビアコアで示されるように、タウのホスホセリン４０９を選択的に検出する。概して、全てのデータは、非リン酸化完全長タウと比較したリン酸化完全長タウに照らし、これらの抗体（すなわち、ＴＡＭ１、ＴＡＭ２、及びＴＡＭ９）のホスホセリン４０９に対する選択性を示す。
【０２３６】
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【０２３７】
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【０２３８】
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【０２３９】
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【０２４０】
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【０２４１】
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【０２４２】
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【０２４３】
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【０２４４】
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【０２４５】
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【０２４６】
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【０２４７】
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試験された濃度：２５ｎＭ、６．２５ｎＭ、１．５６ｎＭ、１．５６ｎＭ、０．４ｎＭ、０．１ｎＭ。クオリティーコントロール：２５ｎＭのデータは、会合が陰性のフェーズ及び／又はＲｍａｘの約１０％よりも高い非特異的結合が認められた場合に除外される。１つの曲線（ＴＡＭ２０、１．２５ｎＭ）が、解離フェーズにおける正の曲線のため、除外される。アスタリスク（＊）は、約２１％ＲｍａｘのＣｈｉ２を示す。準最適な１：１フィッティングが、固定化抗原に対する二価ＩｇＧ結合のために生じ得ることを留意のこと。
【０２４８】
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前述の発明は、明確な理解のために、例示及び実施例によってある程度詳細に説明されたが、これらの説明や例は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書に引用されるすべての特許及び科学文献の開示は、その内容全体が出典明示により援用される。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２Ａ−Ｂ】
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【図２Ｃ−Ｆ】
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【図３】
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【図４Ａ−Ｂ】
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【図４Ｃ−Ｄ】
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【図４Ｅ】
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【配列表】
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