(57)【要約】【課題】  被検者や個体への負担が少なく、迅速、安全、非侵襲的、簡便かつ確実にパーキンソン病とパーキンソン症候群との鑑別、パーキンソン病発症リスク予測、あるいはパーキンソン病に対する薬剤の薬効評価を行うために用いることができるバイオマーカー、ならびに被検者や個体への負担が少なく、迅速、安全、非侵襲的、簡便かつ確実にパーキンソン病とパーキンソン症候群とを鑑別する方法、パーキンソン病の発症のリスクを予測する方法およびパーキンソン病に対する薬剤の薬効を評価する方法を提供する。【解決手段】  イサチンからなる、パーキンソン病とパーキンソン症候群との鑑別用、パーキンソン病発症リスク予測用および／またはパーキンソン病に対する薬剤の薬効評価用バイオマーカー。
2014157707.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
イサチンからなる、パーキンソン病とパーキンソン症候群との鑑別用、パーキンソン病発症リスク予測用および／またはパーキンソン病に対する薬剤の薬効評価用バイオマーカー。
【請求項２】
パーキンソン病またはパーキンソン症候群を罹患している被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定する工程を有する、パーキンソン病とパーキンソン症候群とを鑑別する方法。
【請求項３】
パーキンソン病またはパーキンソン症候群を罹患している被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定する工程と、
前記測定したイサチンの濃度から得られる測定／算出値と、健常者、パーキンソン病を罹患している個体およびパーキンソン症候群を罹患している個体の少なくともいずれかより採取された血液試料中におけるイサチンの濃度から得られるリファレンス値とを比較する工程と
を有する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
パーキンソン病を罹患していない被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定する工程を有する、パーキンソン病の発症のリスクを予測する方法。
【請求項５】
パーキンソン病を罹患していない被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定する工程と、
前記測定したイサチンの濃度から得られる測定／算出値と、健常者および／またはパーキンソン病を罹患している個体より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度から得られるリファレンス値とを比較する工程と
を有する、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
パーキンソン病を罹患し、かつ薬物治療を受けている被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定する工程を有する、パーキンソン病に対する薬剤の薬効を評価する方法。
【請求項７】
パーキンソン病を罹患し、かつ薬物治療を受けている被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定する工程と、
前記測定したイサチンの濃度から得られる測定／算出値と、健常者および／またはパーキンソン病を罹患しているが前記薬物治療を受けていない個体より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度から得られるリファレンス値とを比較する工程と
を有する、請求項６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、バイオマーカー、パーキンソン病とパーキンソン症候群とを鑑別する方法、パーキンソン病の発症のリスクを予測する方法およびパーキンソン病に対する薬剤の薬効を評価する方法に関し、特に、イサチンからなる、パーキンソン病とパーキンソン症候群との鑑別用、パーキンソン病発症リスク予測用および／またはパーキンソン病に対する薬剤の薬効評価用バイオマーカー、ならびに血液試料中におけるイサチンの濃度を測定する工程を有する、パーキンソン病とパーキンソン症候群とを鑑別する方法、パーキンソン病の発症のリスクを予測する方法およびパーキンソン病に対する薬剤の薬効を評価する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
パーキンソン病は脳内のドパミンの不足とアセチルコリンの相対的増加とを病態とする進行性疾患、かつ錐体外路系徴候を示す神経変性疾患の一つである。神経内科領域において極めて患者数の多い疾患であり、厚生労働省の難病（特定疾患）に指定されている。いわゆる中年以降の発症が多く、高齢に従いその割合も増えるのが特徴である。パーキンソン病の主な症状は、安静時の振戦、無動、筋固縮、姿勢保持障害などの運動症状であるが、このうち最も重要な症状は無動であり、自発運動の減少や動作緩慢、巧緻運動の障害、すくみ足が含まれる。また、運動症状とともに様々な全身症状、精神症状も合併する。進行性の病気であるものの通常は症状の進行が遅いため、患者本人がいつ発症したのかを気付かないことが多く、経過が長いのも特徴である。また、パーキンソン病の主な病変として、黒質・線条体系のドパミン神経系の変性が挙げられ、その原因ないし発症要因としては、酸化ストレス、神経毒、ミトコンドリア障害説ないし感染説の他、加齢、性、環境因子、ライフスタイルなどが挙げられる。【０００３】
現在、臨床応用されているパーキンソン病の治療としては、薬物療法、外科療法、リハビリテーション、遺伝子治療、細胞移植治療などが挙げられ、薬物療法としては、ドパミン（ｄｏｐａｍｉｎｅ；ＤＡ）の前駆物質であり、補充薬としてのＬ−ＤＯＰＡ（３，４−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−Ｌ−ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ、Ｌ−ドパ、レボドパ）とカルビドパやベンセラジドなどのＤＡ脱炭酸酵素阻害薬の合剤の投与が主流となっている他、カベルゴリン、メシル酸ペルゴリド、メシル酸ブロモクリプチン、プラミペキソール、ロピニロール、塩酸タリペキソール、アポモルヒネなどのＤＡアゴニスト、塩酸セレギリンやラザジリンなどのモノアミン酸化酵素（ｍｏｎｏａｍｉｎｅｏｘｉｄａｓｅ；ＭＡＯ）−Ｂ阻害薬、エンタカポンやトルカポンなどのカテコール−Ｏ−メチル基転移酵素（ｃａｔｅｃｈｏｌ−Ｏ−ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ；ＣＯＭＴ）阻害薬剤、塩酸アマンタジンなどのＤＡ放出促進薬、塩酸トリヘキシフェニジル、ビペリデン、プロフェナミン、メチキセン、プロメタジンなどの抗コリン薬、ドロキシドパなどのノルアドレナリンプロドラッグ、ＤＡ合成促進作用などを有するゾニサミド、イストラデフィリン、プレラデナントなどのアデノシン受容体拮抗薬の投与が挙げられる。【０００４】
昨今、薬効の持続という観点でＭＡＯ−Ｂ阻害薬が有効であることが明らかとなってきている。ＭＡＯにはＭＡＯ−ＡとＭＡＯ−Ｂのアイソザイムが存在し、ＭＡＯ−Ａの基質がノルアドレナリンやセロトニン（５−ｈｙｄｒｏｘｙｔｒｙｐｔａｍｉｎｅ）などであるのに対してＭＡＯ−Ｂの基質がＤＡやチラミンであること、ＭＡＯ−Ｂが線条体などの中枢内に多く存在してＤＡの代謝経路として働いていることから、ＭＡＯ−Ｂ阻害薬はパーキンソン病に用いられ、新たなＭＡＯ−Ｂ阻害薬の研究・開発がなされている。【０００５】
ＭＡＯ−Ｂ活性阻害物質であるイサチンは、生体内に存在する物質であることから、従来のＭＡＯ−Ｂ阻害薬と比較して安全なＭＡＯ−Ｂ阻害薬となり得るため、期待がされている。本願発明者らは、イサチンがパーキンソン病治療薬として有用であるのではないかと考え、日本脳炎ウィルス（ＪＥＶ）を用いてパーキンソン病モデルラット（ＪＥＶラット）を作製し、イサチン(１００ｍｇ／ｋｇ)を１週間投与することで運動機能や脳内カテコールアミン濃度、免疫組織化学的変化についての検討を行い、イサチンがＪＥＶラットの線条体ＤＡ濃度を上昇させ、運動機能を回復させたことを明らかにすることでパーキンソン病の治療薬としての有用性を示している（非特許文献１）。【０００６】
この新たなＭＡＯ−Ｂ阻害薬のように、パーキンソン病の治療薬の研究・開発が日々なされているが、その候補薬の薬効を評価する手法やパーキンソン病の発症リスクを予測する手法についての研究・開発も並行して進められている。例えば、薬効評価に関しては、パーキンソン病の症状を確実かつ早期に示すパーキンソン病モデルマウスを作製してパーキンソン病治療薬を評価する方法が開示されており（特許文献１）、また、パーキンソン病の発症リスクを予測する手法については、ヒト染色体１ｑ３２において所定の一塩基多型を含む８塩基以上の連続する塩基配列からなるポリヌクレオチドをパーキンソン病の発症リスクマーカーとして検出する方法が開示されている（特許文献２）。【０００７】
一方、パーキンソン病の症状を呈する疾患が複数知られており、総じてパーキンソン症候群（パーキンソニズム；パーキンソン病を除く）と称されている。パーキンソン病とパーキンソン症候群とは、原因や治療法、予後が異なっているため、鑑別する必要があるが、パーキンソン症候群もまた、安静時の振戦、無動、筋固縮、姿勢保持障害などの運動症状を主徴とするため、パーキンソン病とパーキンソン症候群との鑑別が困難な場合がある。パーキンソン病とパーキンソン症候群とを鑑別する手法としては、例えば、αアドレナリン受容体作動薬を有効成分とする点眼剤と、ノルアドレナリン再取り込み阻害薬やノルアドレナリン放出薬を有効成分とする点眼剤とを被検者に点眼し、両者の散瞳量を比較することによって、パーキンソン病を特異的に診断する方法（特許文献３）や、個体から採取された脳脊髄液サンプル中の可溶性α−シヌクレインオリゴマー量を測定することによって、パーキンソン病を特異的に診断する方法（特許文献４）が挙げられる。【０００８】
しかしながら、特許文献１に開示されているパーキンソン病治療薬を評価する方法は、不活化したパーキン遺伝子をホモ接合体で持ち、かつ導入されたＩＲＰ２遺伝子を有する、早期に（壮年期から）パーキンソン病の症状を示すマウスを用いての方法であり、当該方法で評価された治療薬がヒトに対してもそのまま当て嵌まるか否かは不明である。また、特許文献２に開示されているパーキンソン病の発症リスクマーカーとして検出する方法は、パーキンソン病の疾患感受性遺伝子であるＰＡＲＫ１６およびＢＳＴ１における各種ＳＮＰをタイピングする方法であるが、マイクロアレイによる検出が可能であることから簡便な方法といえるものの、実際の臨床データは開示されておらず、検出能については不明である。また、特許文献３に開示されているパーキンソン病を特異的に診断する方法は、点眼剤を用いるという点で簡便な方法といえるが、パーキンソン病患者と本態性振戦患者について診断されているのにとどまっており、当該方法によりパーキンソン病とパーキンソン症候群とを鑑別できるか否かについては不明である。さらに、特許文献４に開示されているパーキンソン病を特異的に診断する方法は、脳脊髄液の採取のための腰椎穿刺を伴うことから、侵襲性のある方法であるとともに簡便な方法とは言い難い。【０００９】
なお、非特許文献１では、イサチンがパーキンソン病の治療薬として有用たり得ることが開示されているのにとどまっており、イサチンがパーキンソン病とパーキンソン症候群との鑑別用、パーキンソン病発症リスク予測用ないしパーキンソン病に対する薬剤の薬効評価用バイオマーカーとなり得ることが開示されているのではない。また、本願発明者らによって、健常人およびパーキンソン病患者の血清中に存在するイサチンの濃度を測定できたことが報告されているが（非特許文献２および非特許文献３）、同様に、イサチンがパーキンソン病とパーキンソン症候群との鑑別用、パーキンソン病発症リスク予測用ないしパーキンソン病に対する薬剤の薬効評価用バイオマーカーとなり得ることについて報告されているのではない。さらに本願発明者らによって、イサチンのパーキンソン病病態マーカーとしての可能性について検討され、パーキンソン病患者の診断に有用であることが報告されているが（非特許文献４）、同様に、イサチンがパーキンソン病とパーキンソン症候群との鑑別用、パーキンソン病発症リスク予測用ないしパーキンソン病に対する薬剤の薬効評価用バイオマーカーとなり得ることについて報告されているのではない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特開２０１０−２２０５０３
【特許文献２】特開２０１１−２３９６９７
【特許文献３】特開２００５−１６２６９３
【特許文献４】特表２０１３−５０４７６６
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｏｇａｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃｉ．，２０６（１），ｐｐ．７９−８３，２００３
【非特許文献２】日本薬学会第１２９年会  一般学術発表「ヒト尿および血清中イサチン関連物質濃度の測定」要旨
【非特許文献３】日本薬学会第１３０年会  一般学術発表「パーキンソン病患者の血清中イサチン濃度」要旨
【非特許文献４】日本薬学会第１３１年会  一般学術発表「イサチンのパーキンソン病病態マーカーとしての可能性」要旨
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
安静時の振戦、無動、筋固縮、姿勢保持障害などの運動症状はパーキンソン病とパーキンソン症候群のいずれの疾患にも現れる徴候であり、生存中、パーキンソン病やパーキンソン症候群を正確に臨床診断することは困難となっている。特に、パーキンソン病やパーキンソン症候群についての詳細な知識を有さない一般内科医師では、神経内科医師とは異なり、発症初期において被検者がパーキンソン病であるか否か、あるいはパーキンソン症候群患者であるか否かを判定するのは極めて困難である。また、パーキンソン病を罹患していない被検者におけるパーキンソン病の発症のリスクについての予測やパーキンソン病を罹患している個体における候補薬の薬効についての評価を、被検者や個体への負担が少なく、迅速、安全、非侵襲的かつ簡便に行うということも同様である。従って、被検者や個体への負担が少なく、迅速、安全、非侵襲的かつ簡便に、生体に対して用いることができる、パーキンソン病とパーキンソン症候群との鑑別、パーキンソン病の発症のリスクについての予測、およびパーキンソン病に対する薬剤の薬効についての評価を確実に行うことができる方法などの開発についてはニーズが存在する。【００１３】
本発明は、このような問題点を解決するためになされたものであって、被検者や個体への負担が少なく、迅速、安全、非侵襲的、簡便かつ確実にパーキンソン病とパーキンソン症候群との鑑別、パーキンソン病発症リスク予測、あるいはパーキンソン病に対する薬剤の薬効評価を行うために用いることができるバイオマーカー、ならびに被検者や個体への負担が少なく、迅速、安全、非侵襲的、簡便かつ確実にパーキンソン病とパーキンソン症候群とを鑑別する方法、パーキンソン病の発症のリスクを予測する方法およびパーキンソン病に対する薬剤の薬効を評価する方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明者らは、鋭意研究の結果、ＭＡＯ−Ｂ活性阻害物質として生体内に存在するイサチンが、パーキンソン病とパーキンソン症候群との鑑別、パーキンソン病発症リスク予測、あるいはパーキンソン病に対する薬剤の薬効評価のためのバイオマーカーとなること、および被検者や個体より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定することでパーキンソン病とパーキンソン症候群との鑑別、パーキンソン病発症リスク予測、あるいはパーキンソン病に対する薬剤の薬効評価が可能であることを見出し、下記の各発明を完成した。【００１５】
（１）イサチンからなる、パーキンソン病とパーキンソン症候群との鑑別用、パーキンソン病発症リスク予測用および／またはパーキンソン病に対する薬剤の薬効評価用バイオマーカー。【００１６】
（２）パーキンソン病またはパーキンソン症候群を罹患している被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定する工程を有する、パーキンソン病とパーキンソン症候群とを鑑別する方法。【００１７】
（３）パーキンソン病またはパーキンソン症候群を罹患している被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定する工程と、前記測定したイサチンの濃度から得られる測定／算出値と、健常者、パーキンソン病を罹患している個体およびパーキンソン症候群を罹患している個体の少なくともいずれかより採取された血液試料中におけるイサチンの濃度から得られるリファレンス値とを比較する工程とを有する、（２）に記載の方法。【００１８】
（４）パーキンソン病を罹患していない被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定する工程を有する、パーキンソン病の発症のリスクを予測する方法。【００１９】
（５）パーキンソン病を罹患していない被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定する工程と、前記測定したイサチンの濃度から得られる測定／算出値と、健常者および／またはパーキンソン病を罹患している個体より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度から得られるリファレンス値とを比較する工程とを有する、（４）に記載の方法。【００２０】
（６）パーキンソン病を罹患し、かつ薬物治療を受けている被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定する工程を有する、パーキンソン病に対する薬剤の薬効を評価する方法。【００２１】
（７）パーキンソン病を罹患し、かつ薬物治療を受けている被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定する工程と、前記測定したイサチンの濃度から得られる測定／算出値と、健常者および／またはパーキンソン病を罹患しているが前記薬物治療を受けていない個体より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度から得られるリファレンス値とを比較する工程とを有する、（６）に記載の方法。【００２２】
（８）パーキンソン病とパーキンソン症候群とを鑑別するための、パーキンソン病発症リスクを予測するための、および／またはパーキンソン病に対する薬剤の薬効を評価するための、それぞれのバイオマーカーとしてのイサチン。
【発明の効果】
【００２３】
本発明に係るバイオマーカー、パーキンソン病とパーキンソン症候群とを鑑別する方法、パーキンソン病の発症のリスクを予測する方法およびパーキンソン病に対する薬剤の薬効を評価する方法によれば、ＭＡＯ−Ｂ活性阻害物質として生体内に存在するイサチンについて、バイオマーカーとして検出する、あるいは採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定することにより、被検者や個体への負担が少なく、迅速、安全、非侵襲的、簡便かつ確実にパーキンソン病とパーキンソン症候群とを鑑別、パーキンソン病の発症のリスクを予測、あるいはパーキンソン病に対する薬剤の薬効を評価することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】トリプトファンからイサチンが代謝されるとされている経路を示す図である。
【図２】健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、早期パーキンソン病患者（ＰＤ−Ｅ）および晩期パーキンソン病患者（ＰＤ−Ｄ）から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の、それぞれの平均値と標準偏差の比較を示す図である。図中、「＊＊＊」印はＣｏｎｔｒｏｌに対してＰ＜０．００１で有意差があることを示す。
【図３】健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）およびＨｏｅｈｎ−Ｙａｈｒの重症度分類のＳｔａｇｅ Ｉ〜ＩＶ（重症度１〜４）に該当するパーキンソン病患者（ＰＤ−Ｉ〜ＩＶ）から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の、それぞれの平均値と標準偏差の比較を示す図である。図中、「＊＊＊」印はＣｏｎｔｒｏｌに対してＰ＜０．００１で有意差があることを示す。
【図４】健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、早期パーキンソン病患者と晩期パーキンソン病患者とを合わせたパーキンソン病患者（ＰＤ−ａｌｌ）およびレビー小体型認知症患者（ＤＬＢ）から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の、それぞれの平均値と標準偏差の比較を示す図である。図中、「＊＊＊」印はＣｏｎｔｒｏｌに対してＰ＜０．００１で有意差があることを示し、「＃＃＃」印はＰＤ−ａｌｌに対してＰ＜０．００１で有意差があることを示す。
【図５】健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、パーキンソン病患者（ＰＤ−ａｌｌ）および大脳皮質基底核変性症患者／進行性核上性麻痺患者（ＣＢＤ／ＰＳＰ）から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の、それぞれの平均値と標準偏差の比較を示す図である。図中、「＊＊＊」印はＣｏｎｔｒｏｌに対してＰ＜０．００１で有意差があることを示し、「＃＃＃」印はＰＤ−ａｌｌに対してＰ＜０．００１で有意差があることを示す。
【図６】健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、パーキンソン病患者（ＰＤ−ａｌｌ）および多系統萎縮症患者（ＭＳＡ）から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の、それぞれの平均値と標準偏差の比較を示す図である。図中、「＊＊」印はＣｏｎｔｒｏｌに対してＰ＜０．０１で有意差があることを示し、「＊＊＊」印はＣｏｎｔｒｏｌに対してＰ＜０．００１で有意差があることを示し、「＃＃＃」印はＰＤ−ａｌｌに対してＰ＜０．００１で有意差があることを示す。
【図７】健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、パーキンソン病患者（ＰＤ−ａｌｌ）および本態性振戦患者（Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｔｒｅｍｏｒ）から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の、それぞれの平均値と標準偏差の比較を示す図である。図中、「＊＊＊」印はＣｏｎｔｒｏｌに対してＰ＜０．００１で有意差があることを示し、「＃＃＃」印はＰＤ−ａｌｌに対してＰ＜０．００１で有意差があることを示す。
【図８】健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、パーキンソン病患者（ＰＤ−ａｌｌ）および脳血管障害性パーキンソニズム患者（Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ）から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の、それぞれの平均値と標準偏差の比較を示す図である。図中、「＊＊＊」印はＣｏｎｔｒｏｌに対してＰ＜０．００１で有意差があることを示し、「＃＃＃」印はＰＤ−ａｌｌに対してＰ＜０．００１で有意差があることを示す。
【図９】健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、パーキンソン病患者（ＰＤ−ａｌｌ）およびアルツハイマー病患者（ＡＤ）から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の、それぞれの平均値と標準偏差の比較を示す図である。図中、「＊＊＊」印はＣｏｎｔｒｏｌに対してＰ＜０．００１で有意差があることを示し、「＃＃＃」印はＰＤ−ａｌｌに対してＰ＜０．００１で有意差があることを示す。
【図１０】（Ａ）パーキンソン病患者２３名における、薬物治療を受けていない段階（Ｎｏｎ−ｔｒｅａｔｅｄ）で採取された血液試料中におけるイサチンの濃度とＭＡＯ−Ｂ阻害薬である塩酸セレギリンの投与を受けた段階（ＦＰ−ｔｒｅａｔｅｄ）で採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を示して対比させた図である。（Ｂ）パーキンソン病患者２３名において、薬物治療を受けていない段階（Ｎｏｎ−ｔｒｅａｔｅｄ）で採取された血液試料中におけるイサチンの濃度とＭＡＯ−Ｂ阻害薬である塩酸セレギリンの投与を受けた段階（ＦＰ−ｔｒｅａｔｅｄ）で採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の、それぞれの平均値と標準偏差の比較を示す図である。図中、「Ｐ＜０．００１」との記載はＦＰ−ｔｒｅａｔｅｄがＮｏｎ−ｔｒｅａｔｅｄに対してＰ＜０．００１で有意差があることを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
以下、本発明に係るバイオマーカー、パーキンソン病とパーキンソン症候群とを鑑別する方法、パーキンソン病の発症のリスクを予測する方法およびパーキンソン病に対する薬剤の薬効を評価する方法について詳細に説明する。
【００２６】
本発明に係るバイオマーカーは、イサチンからなる、パーキンソン病とパーキンソン症候群との鑑別用、パーキンソン病発症リスク予測用および／またはパーキンソン病に対する薬剤の薬効評価用バイオマーカーである。なお、本発明において、「鑑別」は「判別」、「判定」、「識別」と交換して用いられ得る。
【００２７】
バイオマーカーとは、疾患の進行や治療の効果などの特定の生物学的特性を測定するために用いることができる生化学的特徴あるいは面をもつ分子指標をいう（米国立衛生研究所）。すなわち本発明に係る「バイオマーカー」は、パーキンソン病とパーキンソン症候群との鑑別、パーキンソン病発症リスクの予測、あるいはパーキンソン病に対する薬剤の薬効評価が可能であるという３つの面をもつ、イサチンからなる分子指標といえる。なお、パーキンソン病とパーキンソン症候群との鑑別、パーキンソン病発症リスクの予測、あるいはパーキンソン病に対する薬剤の薬効評価が可能であるという各側面は、各々、独立であってもよく、関連してもよい。
【００２８】
イサチン（ｉｓａｔｉｎ）とは、２，３−インドリンジオン（２，３−Ｉｎｄｏｌｉｎｅｄｉｏｎｅ）、１Ｈ−インドール−２，３−ジオン（１Ｈ−ｉｎｄｏｌｅ−２，３−ｄｉｏｎｅ）、インドリン−２，３−ジオン（Ｉｎｄｏｌｉｎｅ−２，３−ｄｉｏｎｅ）、イサチン酸ラクタム（Ｉｓａｔｉｃ ａｃｉｄ ｌａｃｔａｍ）、２，３−ジケトインドリン（２，３−Ｄｉｋｅｔｏｉｎｄｏｌｉｎｅ）、イサチン酸無水物（Ｉｓａｔｉｎｉｃ ａｃｉｄ ａｎｈｙｄｒｉｄｅ）あるいは２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−２，３−ジオン（２，３−Ｄｉｈｙｄｒｏ−１Ｈ−ｉｎｄｏｌｅ−２，３−ｄｉｏｎｅ）とも称され、下記の化学式（１）で表される物質である。
【００２９】
【化１】
2014157707.tif 000003
【００３０】
イサチンは、多くの植物で見られるインドール誘導体の一つであるが、トリプトファンから腸内細菌によりインドールに変換され吸収後代謝されると考えられている。Ｄｅａｌｌｅｒらは、Ｐｕｒｐｌｅ ｕｒｉｎｅ ｂａｇ ｓｙｎｄｒｏｍｅ（紫色蓄尿バッグ症候群）に係る報告において、必須アミノ酸の一つであるトリプトファン（Ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ）は腸管内において腸内細菌によりインドール（ｉｎｄｏｌｅ）に分解され、分解されたインドール（ｉｎｄｏｌｅ）は腸管から吸収され、さらにインジカン（ｉｎｄｉｃａｎ）に代謝されて尿中に排泄されるところ、尿中の細菌によりインジカン（ｉｎｄｉｃａｎ）が加水分解を経てインドキシル（ｉｎｄｏｘｙｌ）に変換され、インドキシル（ｉｎｄｏｘｙｌ）が酸化されてイサチンに変換されると報告している（Ｄｅａｌｌｅｒ Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２６，ｐｐ．２１５２−２１５６，１９８８）。 また、インドキシル（ｉｎｄｏｘｙｌ）が酸化されてイサチンに変換される反応には、シトクロムＰ４５０（ＣＹＰ；シップ）が関与しているとの説がある。トリプトファンからイサチンが代謝されるとされている経路を図１に示す。
【００３１】
なお、イサチンについて、定量する方法やその濃度を測定する方法によっては、イサチンの還元体である３−ジヒドロイサチン（３−Ｄｉｈｙｄｒｏｉｓａｔｉｎ；図１中、[２Ｈ]−ｉｓａｔｉｎとして示し、その他慣用名として、ジオキシンドール（Ｄｉｏｘｉｎｄｏｌｅ）、ｏ−アミノマンデロラクタム（ｏ−Ａｍｉｎｏｍａｎｄｅｌｉｃ ｌａｃｔａｍ）、１，３−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−２Ｈ−インドール−２−オン（１，３−Ｄｉｈｙｄｒｏ−３−ｈｙｄｒｏｘｙ−２Ｈ−ｉｎｄｏｌ−２−ｏｎｅ）、３−ヒドロキシインドリン−２−オン（３−Ｈｙｄｒｏｘｙｉｎｄｏｌｉｎｅ−２−ｏｎｅ）、３−ヒドロキシ−１Ｈ−インドール−２（３Ｈ）−オン（３−Ｈｙｄｒｏｘｙ−１Ｈ−ｉｎｄｏｌｅ−２（３Ｈ）−ｏｎｅ）、２，３−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−１Ｈ−インドール−２−オン（２，３−Ｄｉｈｙｄｒｏ−３−ｈｙｄｒｏｘｙ−１Ｈ−ｉｎｄｏｌｅ−２−ｏｎｅ））について、定量、あるいは濃度を測定することが便宜である場合があり、本明細書において、「イサチン」という場合、３−ジヒドロイサチンを包含する場合がある。３−ジヒドロイサチンは、下記の化学式（２）で表される物質である。
【００３２】
【化２】
2014157707.tif 000004
【００３３】
本発明において、イサチンを定量する方法やその濃度を測定する方法は、当業者にとって適宜選択可能な方法であれば特に限定されず、本明細書実施例に好適な方法として開示されている、酢酸エチルにより精製した後にＨＰＬＣ−ＵＶを用いる方法の他、例えば、ＥＬＩＳＡを用いた方法などが挙げられる。
【００３４】
上述の通り、パーキンソン病は、安静時の振戦、無動、筋固縮、姿勢保持障害などの運動症状を主な症状とするが、これら症状のうちのいくつかの症状を示している状態、一般には２つ以上の症状を示している状態を「パーキンソニズム」と呼んでいる。パーキンソン病の重症度分類としてよく用いられているＨｏｅｈｎ−Ｙａｈｒの重症度分類は、このパーキンソニズムに基づいている。Ｈｏｅｈｎ−Ｙａｈｒの重症度分類の内容と、Ｈｏｅｈｎ−Ｙａｈｒの重症度分類と生活機能障害との関係を下記の表１に示す。
【００３５】
［表１］
2014157707.tif 000005
【００３６】
表１に示すように、Ｈｏｅｈｎ−Ｙａｈｒの重症度分類のＳｔａｇｅ ＩおよびＳｔａｇｅ ＩＩ（重症度１および重症度２）は生活機能障害のＩ度に相当し、Ｈｏｅｈｎ−Ｙａｈｒの重症度分類のＳｔａｇｅ ＩＩＩおよびＳｔａｇｅ ＩＶ（重症度３および重症度４）は生活機能障害のＩＩ度に相当し、Ｈｏｅｈｎ−Ｙａｈｒの重症度分類のＳｔａｇｅ Ｖ（重症度５）は生活機能障害のＩＩＩ度に相当する。なお、本明細書中、生活機能障害のＩ度を「早期パーキンソン病（ＰＤ−Ｅ）」といい、生活機能障害のＩＩ度を「晩期パーキンソン病（ＰＤ−Ｄ）」という場合がある。
【００３７】
本発明における「パーキンソン症候群」とは、上述したパーキンソニズムすなわち安静時の振戦、無動、筋固縮、姿勢保持障害などの運動症状を有するものの、パーキンソン病とは異なる疾患をいうが、本発明では、中脳黒質のドパミン神経細胞の変性を主体とする孤発性の神経変性疾患をパーキンソン病としてパーキンソン症候群と区別する。そのようなパーキンソン症候群に包含される疾患としては、例えば、レビー小体型認知症（Ｄｅｍｅｎｔｉａ ｗｉｔｈ Ｌｅｗｙ Ｂｏｄｉｅｓ；ＤＬＢ）、家族性パーキンソン病である常染色体優性遺伝性疾患や常染色体劣性遺伝性疾患、神経変性疾患である進行性核上性麻痺（Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ Ｓｕｐｒａｎｕｃｌｅａｒ Ｐａｌｓｙ；ＰＳＰ）や大脳皮質基底核変性症（Ｃｏｒｔｉｃｏｂａｓａｌ Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ；ＣＢＤ）、多系統萎縮症（Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｙｓｔｅｍ Ａｔｒｏｐｈｙ；ＭＳＡ）、本態性振戦（Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｔｒｅｍｏｒ）、筋萎縮性側索硬化症（Ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ Ｌａｔｅｒａｌ Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ；ＡＬＳ）／パーキンソン認知症複合（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ−Ｄｅｍｅｎｔｉａ Ｃｏｍｐｌｅｘ；ＰＤＣ）、ハンチントン病（Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、前頭側頭型認知症パーキンソニズム (Ｆｒｏｎｔｏｔｅｍｐｏｒａｌ Ｄｅｍｅｎｔｉａ ｗｉｔｈ ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ−１７；ＦＴＤＰ−１７）、アルツハイマー病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ；ＡＤ）、症候性パーキンソニズムである脳血管障害性パーキンソニズム（Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ）、正常圧水頭症、脳炎後パーキンソニズム、薬剤性パーキンソニズム、中毒性パーキンソニズム、脳腫瘍、頭部外傷、傍腫瘍性パーキンソニズム、代謝性疾患などが挙げられる。また、多系統萎縮症としては、線条体黒質変性症（Ｓｔｒｉａｔｏｎｉｇｒａｌ Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ；ＳＮＤ）やオリーブ橋小脳萎縮症（Ｏｌｉｖｏｐｏｎｔｏｃｅｒｅｂｅｌｌａｒ Ａｔｒｏｐｈｙ；ＯＰＣＡ) およびシャイ・ドレーガー症候群（Ｓｈｙ−Ｄｒａｇｅｒ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ；ＳＤＳ）が挙げられる。また、代謝性疾患としては、ウィルソン病、肝硬変、セルロプラスミン欠乏症、ゴーシェ病などが挙げられる。
【００３８】
なお、本明細書実施例においては、パーキンソン症候群のうち、パーキンソン病とパーキンソン症候群との重要な鑑別疾患として、レビー小体型認知症（Ｄｅｍｅｎｔｉａ ｗｉｔｈ Ｌｅｗｙ Ｂｏｄｉｅｓ；ＤＬＢ）、大脳皮質基底核変性症（Ｃｏｒｔｉｃｏｂａｓａｌ Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ；ＣＢＤ）／進行性核上性麻痺（Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ Ｓｕｐｒａｎｕｃｌｅａｒ Ｐａｌｓｙ；ＰＳＰ）、多系統萎縮症（Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｙｓｔｅｍ Ａｔｒｏｐｈｙ；ＭＳＡ）、本態性振戦（Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｔｒｅｍｏｒ）、脳血管障害性パーキンソニズム（Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ）、およびアルツハイマー病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ；ＡＤ）について検討がなされている。
【００３９】
また、本発明に係るパーキンソン病とパーキンソン症候群とを鑑別する方法、パーキンソン病の発症のリスクを予測する方法およびパーキンソン病に対する薬剤の薬効を評価する方法は、パーキンソン病またはパーキンソン症候群を罹患している被検者、パーキンソン病を罹患していない被検者、あるいはパーキンソン病を罹患し、かつ薬物治療を受けている被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定する工程を有している。
【００４０】
本発明における「被検者」、「健常者」および「個体」は、パーキンソン病やパーキンソン症候群を罹患し得る哺乳動物、あるいはその健常なものをいい、哺乳動物としては、例えば、ヒトやヒト以外の霊長類が挙げられ、好ましくはヒトである。一般に本発明はヒトへの使用に向けられている。
【００４１】
本発明における「血液試料」とは、全血の他、全血から分離された血清や血漿を含む概念である。なお、本明細書実施例では、酢酸エチルにより精製した後にＨＰＬＣ−ＵＶを用いて、被検者から採取された全血から血清を分離し、イチサン濃度が測定されている。
【００４２】
また、本発明に係るパーキンソン病とパーキンソン症候群とを鑑別する方法のより具体的な態様は、さらに、パーキンソン病またはパーキンソン症候群を罹患している被検者より採取された血液試料中における測定したイサチンの濃度から得られる測定／算出値と、健常者、パーキンソン病を罹患している個体およびパーキンソン症候群を罹患している個体の少なくともいずれかより採取された血液試料中におけるイサチンの濃度から得られるリファレンス値とを比較する工程を有している。
【００４３】
本発明における「血液試料中におけるイサチンの濃度から得られる測定／算出値」とは、血液試料中において測定した（測定された）イサチンの濃度に基づく値をいい、例えば、測定値そのものの他、母集団の平均値や標準偏差、変動係数（相対標準偏差）、標準誤差などの算出された値を含む概念である。また、本発明における「リファレンス値」とは、母集団の平均値や標準偏差、変動係数（相対標準偏差）、標準誤差などの他、カットオフ値や閾値などを含む概念である。なお、「測定したイサチンの濃度から得られる測定／算出値と、健常者、パーキンソン病患者およびパーキンソン症候群患者の少なくともいずれかより採取された血液試料中におけるイサチンの濃度から得られるリファレンス値とを比較」する方法は特に限定されないが、例えば、リファレンスレベルを７０％以下、６０％以下、５０％以下、４０％以下、３０％以下、２０％以下、あるいは５０〜１５０％、６０〜１４０％、７０〜１３０％、８０〜１２０％などと設定して比較する方法や、統計学的仮説検定を用いる方法が挙げられる。
【００４４】
なお、本明細書実施例１より、パーキンソン症候群を罹患している被検者より（パーキンソン症候群を罹患している被検者から）採取された血液試料中における測定したイサチンの濃度から得られる測定／算出値はパーキンソン病を罹患している個体より（パーキンソン病を罹患している個体から）採取された血液試料中におけるイサチンの濃度から得られるリファレンス値と比較して高値を示すこと、パーキンソン症候群を罹患している被検者より（パーキンソン症候群を罹患している被検者から）採取された血液試料中における測定したイサチンの濃度から得られる測定／算出値は健常者より（健常者から）採取された血液試料中におけるイサチンの濃度から得られるリファレンス値と比較して高値ないし近似する（同じまたは概ね同等の）値を示すこと、パーキンソン病を罹患している被検者より（パーキンソン病を罹患している被検者から）採取された血液試料中における測定したイサチンの濃度から得られる測定／算出値は健常者より（健常者から）採取された血液試料中におけるイサチンの濃度から得られるリファレンス値と比較して低値を示すことが明らかとなっている。
【００４５】
すなわち、本発明に係るパーキンソン病とパーキンソン症候群とを鑑別する方法は、より詳細には、
パーキンソン病またはパーキンソン症候群を罹患しているとの疑いのある被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定し、前記測定したイサチンの濃度から測定／算出値を得る工程と、
健常者、パーキンソン病を罹患している個体およびパーキンソン症候群を罹患している個体の少なくともいずれかより採取された血液試料中におけるイサチンの濃度からリファレンス値を得る工程と、
前記測定／算出値と前記リファレンス値とを比較する工程と
を有している。
【００４６】
また、本発明に係るパーキンソン病とパーキンソン症候群とを鑑別する方法の異なる態様としては、
パーキンソン病またはパーキンソン症候群を罹患しているとの疑いのある被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定し、前記測定したイサチンの濃度から測定／算出値を得る工程と、
健常者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度からリファレンス値を得る工程と、
前記測定／算出値と前記リファレンス値とを比較して前記測定／算出値が低値を示す場合に前記被検者がパーキンソン病を罹患していると認定する工程と
を有している。
【００４７】
また、本発明に係るパーキンソン病とパーキンソン症候群とを鑑別する方法の、より異なる態様としては、
パーキンソン病またはパーキンソン症候群を罹患しているとの疑いのある被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定し、前記測定したイサチンの濃度から測定／算出値を得る工程と、
パーキンソン病を罹患している個体より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度からリファレンス値を得る工程と、
前記測定／算出値と前記リファレンス値とを比較して前記測定／算出値が高値を示す場合に前記被検者がパーキンソン症候群を罹患していると認定する工程と
を有している。
【００４８】
また、本発明に係るパーキンソン病とパーキンソン症候群とを鑑別する方法の、さらに異なる態様としては、
パーキンソン病またはパーキンソン症候群を罹患しているとの疑いのある被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定し、前記測定したイサチンの濃度から測定／算出値を得る工程と、
パーキンソン症候群を罹患している個体より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度からリファレンス値を得る工程と、
前記測定／算出値と前記リファレンス値とを比較して前記測定／算出値が低値を示す場合に前記被検者がパーキンソン病を罹患していると認定する工程と
を有している。
【００４９】
ここで、「パーキンソン病またはパーキンソン症候群を罹患しているとの疑いのある被検者」とは、安静時の振戦、無動、筋固縮、姿勢保持障害などの運動症状の少なくともいずれかが認められる被検者をいうものとする。
【００５０】
また、例えば、「パーキンソン症候群を罹患している被検者より（パーキンソン症候群を罹患している被検者から）採取された血液試料中における測定したイサチンの濃度から得られる測定／算出値と、パーキンソン病を罹患している個体より（パーキンソン病を罹患している個体から）採取された血液試料中におけるイサチンの濃度から得られるリファレンス値とを比較する」ことと「パーキンソン病を罹患している被検者より（パーキンソン病を罹患している被検者から）採取された血液試料中における測定したイサチンの濃度から得られる測定／算出値と、パーキンソン症候群を罹患している個体より（パーキンソン症候群を罹患している個体から）採取された血液試料中におけるイサチンの濃度から得られるリファレンス値とを比較する」こととは同義である。
【００５１】
また、本発明に係るパーキンソン病の発症のリスクを予測する方法のより具体的な態様は、さらに、パーキンソン病を罹患していない被検者より採取された血液試料中における測定したイサチンの濃度から得られる測定／算出値と、健常者および／またはパーキンソン病を罹患している個体より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度から得られるリファレンス値とを比較する工程を有している。なお、前記工程において、上述した本発明に係るパーキンソン病とパーキンソン症候群とを鑑別する方法における工程の構成と同等または相当する構成については再度の説明を省略する。
【００５２】
本発明に係るパーキンソン病の発症のリスクを予測する方法における「パーキンソン病を罹患していない被検者」は、血液試料が採取された時点においてパーキンソン病を罹患していないのであって、その後にパーキンソン病を罹患してもよく、罹患しなくてもよいことはいうまでもない。
【００５３】
なお、本明細書実施例２より、血液試料の採取時にはパーキンソン病を罹患していなかったがその後パーキンソン病を罹患した被検者について、当該被検者より（当該被検者から）採取された血液試料中における測定したイサチンの濃度から得られる測定／算出値は健常者より（健常者から）採取された血液試料中におけるイサチンの濃度から得られるリファレンス値と比較して低値を示すこと、血液試料の採取時にはパーキンソン病を罹患していなかったがその後パーキンソン病を罹患した被検者について、当該被検者より（当該被検者から）採取された血液試料中における測定したイサチンの濃度から得られる測定／算出値はパーキンソン病を罹患している個体より（パーキンソン病を罹患している個体から）採取された血液試料中におけるイサチンの濃度から得られるリファレンス値と比較して近似する（同じまたは概ね同等の）値を示すことが明らかとなっている。
【００５４】
すなわち、本発明に係るパーキンソン病の発症のリスクを予測する方法は、より詳細には、
パーキンソン病を罹患していない被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定し、前記測定したイサチンの濃度から測定／算出値を得る工程と、
健常者および／またはパーキンソン病を罹患している個体より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度からリファレンス値を得る工程と、
前記測定／算出値と前記リファレンス値とを比較する工程と
を有している。
【００５５】
また、本発明に係るパーキンソン病の発症のリスクを予測する方法の異なる態様としては、
パーキンソン病を罹患していない被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定し、前記測定したイサチンの濃度から測定／算出値を得る工程と、
健常者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度からリファレンス値を得る工程と、
前記測定／算出値と前記リファレンス値とを比較して前記測定／算出値が低値を示す場合に前記被検者が将来においてパーキンソン病の発症のリスクを有していると認定する工程と
を有している。
【００５６】
また、本発明に係るパーキンソン病の発症のリスクを予測する方法の、より異なる態様としては、
パーキンソン病を罹患していない被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定し、前記測定したイサチンの濃度から測定／算出値を得る工程と、
パーキンソン病を罹患している個体より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度からリファレンス値を得る工程と、
前記測定／算出値と前記リファレンス値とを比較して前記測定／算出値が近似する（同じまたは概ね同等の）値を示す場合に前記被検者が将来においてパーキンソン病の発症のリスクを有していると認定する工程と
を有している。
【００５７】
なお、本明細書において「近似する（同じまたは概ね同等の）値」とは、ｔ検定に基づく有意水準を設定することにより適宜定めることができ、例えば、有意水準ｐ＞０．１、ｐ＞０．０９、ｐ＞０．０８、ｐ＞０．０７、ｐ＞０．０６、ｐ＞０．０５となる値を「近似する（同じまたは概ね同等の）値」とすることができる。
【００５８】
また、本発明に係るパーキンソン病に対する薬剤の薬効を評価する方法のより具体的な態様は、さらに、パーキンソン病を罹患し、かつ薬物治療を受けている被検者より採取された血液試料中における測定したイサチンの濃度から得られる測定／算出値と、健常者および／またはパーキンソン病を罹患しているが前記薬物治療を受けていない個体より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度から得られるリファレンス値とを比較する工程を有している。なお、前記工程において、上述した本発明に係るパーキンソン病とパーキンソン症候群とを鑑別する方法における工程の構成と同等または相当する構成については再度の説明を省略する。
【００５９】
本発明に係るパーキンソン病に対する薬剤の薬効を評価する方法における「薬剤」としては、例えば、Ｌ−ＤＯＰＡ、ＤＡ脱炭酸酵素阻害薬、ＤＡアゴニスト、ＭＡＯ阻害薬（ＭＡＯ−Ａ阻害薬、ＭＡＯ−Ｂ阻害薬）、カテコール−Ｏ−メチル基転移酵素阻害薬剤、ＤＡ放出促進薬、抗コリン薬、ノルアドレナリンプロドラッグ、ＤＡ合成促進剤、アデノシン受容体拮抗薬など、パーキンソン病の治療に有効とされる薬剤が挙げられ、「薬物治療」としては、前記薬剤の投与による治療が挙げられる。なお、本明細書実施例では、ＭＡＯ−Ｂ阻害薬を薬剤として用い、ＭＡＯ−Ｂ阻害薬の投与による治療を薬剤治療としている。
【００６０】
本発明に係るパーキンソン病に対する薬剤の薬効を評価する方法のより具体的な態様において、「パーキンソン病を罹患し、かつ薬物治療を受けている被検者」と「パーキンソン病を罹患しているが前記薬物治療を受けていない個体」とは同一人物（同一個体）であってもよく、なくてもよい。「パーキンソン病を罹患し、かつ薬物治療を受けている被検者」と「パーキンソン病を罹患しているが前記薬物治療を受けていない個体」とが同一人物（同一個体）の場合は、前記薬物治療を受けていない個体から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定してリファレンス値を得る工程、その後に薬物治療を受けた被検者（当該個体）から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定して測定／算出値を得る工程、これら測定／算出値とリファレンス値とを比較する工程、という各工程を有する。
【００６１】
なお、本明細書実施例３より、パーキンソン病を罹患し、かつ薬物治療を受けている被検者より（パーキンソン病を罹患し、かつ薬物治療を受けている被検者から）採取された血液試料中における測定したイサチンの濃度から得られる測定／算出値はパーキンソン病を罹患しているが前記薬物治療を受けていない個体より（パーキンソン病を罹患しているが前記薬物治療を受けていない個体から）採取された血液試料中におけるイサチンの濃度から得られるリファレンス値と比較して高値を示すこと、パーキンソン病を罹患し、かつ薬物治療を受けている被検者より（パーキンソン病を罹患し、かつ薬物治療を受けている被検者から）採取された血液試料中における測定したイサチンの濃度から得られる測定／算出値は健常者より（健常者から）採取された血液試料中におけるイサチンの濃度から得られるリファレンス値と比較して高値ないし近似する（同じまたは概ね同等の）値を示すことが明らかとなっている。
【００６２】
すなわち、本発明に係るパーキンソン病に対する薬剤の薬効を評価する方法は、より詳細には、
パーキンソン病を罹患し、かつ薬物治療を受けている被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定し、前記測定したイサチンの濃度から測定／算出値を得る工程と、
健常者および／またはパーキンソン病を罹患しているが前記薬物治療を受けていない個体より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度からリファレンス値を得る工程と、
前記測定／算出値と前記リファレンス値とを比較する工程と
を有している。
【００６３】
また、本発明に係るパーキンソン病に対する薬剤の薬効を評価する方法の異なる態様としては、
パーキンソン病を罹患し、かつ薬物治療を受けている被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定し、前記測定したイサチンの濃度から測定／算出値を得る工程と、
健常者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度からリファレンス値を得る工程と、
前記測定／算出値と前記リファレンス値とを比較して前記測定／算出値が高値ないし近似する（同じまたは概ね同等の）値を示す場合に前記被検者の治療に用いられている薬剤の薬効があると認定する工程と
を有している。
【００６４】
また、本発明に係るパーキンソン病に対する薬剤の薬効を評価する方法の異なる態様としては、
パーキンソン病を罹患し、かつ薬物治療を受けている被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定し、前記測定したイサチンの濃度から測定／算出値を得る工程と、
パーキンソン病を罹患しているが前記薬物治療を受けていない個体より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度からリファレンス値を得る工程と、
前記測定／算出値と前記リファレンス値とを比較して前記測定／算出値が高値を示す場合に前記被検者の治療に用いられている薬剤の薬効があると認定する工程と
を有している。
【００６５】
なお、本発明に係るパーキンソン病とパーキンソン症候群とを鑑別する方法、パーキンソン病の発症のリスクを予測する方法およびパーキンソン病に対する薬剤の薬効を評価する方法は、本発明の特徴を損なわない範囲において、例えば、イサチンの濃度を測定するために血液試料から測定のための試料を調製する工程や、検査項目や検査所見などを検討する工程を含んでもよい。
【００６６】
以下、本発明に係るバイオマーカー、パーキンソン病とパーキンソン症候群とを鑑別する方法、パーキンソン病の発症のリスクを予測する方法およびパーキンソン病に対する薬剤の薬効を評価する方法について、実施例に基づいて説明する。なお、本発明の技術的範囲は、これらの実施例によって示される特徴に限定されない。
【実施例】
【００６７】
＜実施例１＞パーキンソン病患者とパーキンソン症候群患者との鑑別可能性の検討
健常者、パーキンソン病患者およびパーキンソン症候群患者から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定して比較することにより、パーキンソン病患者とパーキンソン症候群患者との鑑別が可能であるか否かについて検討した。【００６８】
（１）健常者、パーキンソン病患者およびパーキンソン症候群患者から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の測定
［１−１］健常者から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の測定
健常者の血液試料は、神経内科専門医が本研究の趣旨を説明して提供の同意を得られた、６５歳から１０５歳の健常者５８名（男性２１名、女性３７名）から採取されたものである。前記健常者から採取された血液試料から血清を分離し、分離した血清２．０ｍＬに３．０ｍＬの精製水、５．５Ｍの塩酸水溶液０．４ｍＬおよび内標物質として５−メチルイサチンを加え、沸騰水浴中、１０分間湯浴して加温した。加温後室温下で冷却し、酢酸エチル１０ｍＬを加えて３，０００ｒｐｍ、１０分間遠心後、上清を回収し、窒素雰囲気下にて酢酸エチルを蒸発乾固した。得られた残渣をメタノールと精製水の混液（０．３：１）に溶解し、シリカ系固相抽出カートリッジ（Ｂｏｎｄ Ｅｌｕｔ Ｃｅｒｔｉｆｙ ＩＩ：アジレント・テクノロジー社）を用いて濃縮精製した後、これに含まれるイサチンの濃度をＨＰＬＣ−ＵＶにて測定し、それらの平均値と標準偏差を算出して、これをコントロールとした。ＨＰＬＣ−ＵＶによる測定条件は次のとおりである。【００６９】
ＨＰＬＣ−ＵＶによるイサチン濃度の測定条件
装置：ＥＩＣＯＭ ＥＮＯ−１０（エイコム社）
ＥＩＣＯＭ ＮＯＤ−１０（エイコム社）
カラム：Ｅｉｃｏｍｐａｋ ＳＣ５−ＯＤＳ（３．０×１５０ｍｍ：エイコム社）
移動相：２５％（ｖ／ｖ）
移動相流量：０．５ｍＬ／分
カラム温度：２５℃
測定波長２４０ｎｍ【００７０】
［１−２］パーキンソン病患者から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の測定
パーキンソン病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ；ＰＤ）患者の血液試料は、神経内科を受診したパーキンソン病患者のうち、パーキンソン病治療薬として用いられているＭＡＯ−Ｂ阻害薬を使用しておらず、かつ神経内科専門医が本研究の趣旨を説明して提供の同意を得られた、５２歳から８９歳の早期パーキンソン病患者（Ｈｏｅｈｎ−Ｙａｈｒの重症度分類のＳｔａｇｅ ＩおよびＳｔａｇｅ ＩＩ、ならびに生活機能障害のＩ度に相当するパーキンソン病患者；ＰＤ−Ｅ）５５名（男性２２名、女性３３名）および５７歳から８７歳の晩期パーキンソン病患者（Ｈｏｅｈｎ−Ｙａｈｒの重症度分類のＳｔａｇｅＩＩＩおよびＳｔａｇｅＩＶ、ならびに生活機能障害のＩＩ度に相当するパーキンソン病患者；ＰＤ−Ｄ）３０名（男性１４名、女性１６名）から採取されたものである。前記早期パーキンソン病患者と晩期パーキンソン病患者から採取された血液試料から血清をそれぞれ分離し、本実施例（１）［１−１］と同様の手法によりそれぞれのイサチンの濃度の平均値と標準偏差を算出した。【００７１】
［１−３］Ｈｏｅｈｎ−Ｙａｈｒの重症度分類のＳｔａｇｅ Ｉ〜ＩＶに該当するパーキンソン病患者からそれぞれ採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の測定
本実施例１［１−２］と同様の手法により、神経内科を受診したパーキンソン病患者のうち、パーキンソン病治療薬として用いられているＭＡＯ−Ｂ阻害薬を使用しておらず、かつ神経内科専門医が本研究の趣旨を説明して提供の同意を得られた、５４歳から８６歳のＨｏｅｈｎ−Ｙａｈｒの重症度分類のＳｔａｇｅ Ｉ（重症度１）に該当するパーキンソン病患者（ＰＤ−Ｉ）１１名（男性４名、女性７名）、５２歳から８９歳の同重症度分類のＳｔａｇｅ ＩＩ（重症度２）に該当するパーキンソン病患者（ＰＤ−ＩＩ）４４名（男性１８名、女性２６名）、５２歳から８７歳の同重症度分類のＳｔａｇｅ ＩＩＩ（重症度３）に該当するパーキンソン病患者（ＰＤ−ＩＩＩ）２６名（男性１２名、女性１４名）および６３歳から８７歳の同重症度分類のＳｔａｇｅＩＶ（重症度４）に該当するパーキンソン病患者（ＰＤ−ＩＶ）４名（男性２名、女性２名）から採取された血液試料から血清をそれぞれ分離し、本実施例（１）［１−１］と同様の手法によりそれぞれのイサチンの濃度の平均値と標準偏差を算出した。【００７２】
［１−４］レビー小体型認知症患者、大脳皮質基底核変性症患者／進行性核上性麻痺患者、および多系統萎縮症患者から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の測定
レビー小体型認知症（Ｄｅｍｅｎｔｉａ ｗｉｔｈ Ｌｅｗｙ Ｂｏｄｉｅｓ；ＤＬＢ）患者、大脳皮質基底核変性症（Ｃｏｒｔｉｃｏｂａｓａｌ Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ；ＣＢＤ）患者／進行性核上性麻痺（Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ Ｓｕｐｒａｎｕｃｌｅａｒ Ｐａｌｓｙ；ＰＳＰ）患者、および多系統萎縮症（Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｙｓｔｅｍ Ａｔｒｏｐｈｙ；ＭＳＡ）患者の血液試料は、パーキンソン病患者の血液試料と同様、神経内科を受診したレビー小体型認知症患者、大脳皮質基底核変性症患者／進行性核上性麻痺患者、および多系統萎縮症患者のうち、一部のパーキンソン症候群の治療薬として用いられているＭＡＯ−Ｂ阻害薬を使用しておらず、かつ神経内科専門医が本研究の趣旨を説明して提供の同意を得られた、７０歳から８５歳のレビー小体型認知症患者１８名（男性７名、女性１１名）、６３歳から９３歳の大脳皮質基底核変性症患者／進行性核上性麻痺患者７名（男性２名、女性５名）、および５７歳から８７歳の多系統萎縮症患者５名（男性２名、女性３名）から採取されたものである。前記レビー小体型認知症患者、大脳皮質基底核変性症患者／進行性核上性麻痺患者、および多系統萎縮症患者から採取された血液試料から血清をそれぞれ分離し、本実施例（１）［１−１］と同様の手法によりそれぞれのイサチンの濃度の平均値と標準偏差を算出した。また、本実施例（１）［１−２］のデータまたは［１−３］のデータに基づいて、早期パーキンソン病患者と晩期パーキンソン病患者とを合わせたパーキンソン病患者トータル（Ｈｏｅｈｎ−Ｙａｈｒの重症度分類のＳｔａｇｅＩ〜ＩＶに相当するパーキンソン病患者、または生活機能障害のＩ度およびＩＩ度に相当するパーキンソン病患者；ＰＤ−ａｌｌ）におけるイサチンの濃度の平均値と標準偏差を算出した。【００７３】
ここで、血液試料が採取されたパーキンソン病患者、レビー小体型認知症患者、大脳皮質基底核変性症患者および進行性核上性麻痺患者、ならびに多系統萎縮症患者の、それぞれの症状、検査項目および検査所見を下記の表２に示す。【００７４】
［表２］
2014157707.tif 000006
【００７５】
［１−５］本態性振戦患者から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の測定
本態性振戦（Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｔｒｅｍｏｒ）患者の血液試料は、パーキンソン病患者の血液試料と同様、神経内科を受診した本態性振戦患者のうち、一部のパーキンソン症候群の治療薬として用いられているＭＡＯ−Ｂ阻害薬を使用しておらず、かつ神経内科専門医が本研究の趣旨を説明して提供の同意を得られた４６歳から８４歳の本態性振戦患者１１名（男性３名、女性８名）から採取されたものである。前記本態性振戦患者から採取された血液試料から血清を分離し、本実施例（１）［１−１］と同様の手法によりイサチンの濃度の平均値と標準偏差を算出した。【００７６】
［１−６］脳血管障害性パーキンソニズム患者から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の測定
脳血管障害性パーキンソニズム（Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ）患者の血液試料は、パーキンソン病患者の血液試料と同様、神経内科を受診した脳血管障害性パーキンソニズム患者のうち、一部のパーキンソン症候群の治療薬として用いられているＭＡＯ−Ｂ阻害薬を使用しておらず、かつ神経内科専門医が本研究の趣旨を説明して提供の同意を得られた５８歳から８７歳の脳血管障害性パーキンソニズム患者８名（男性６名、女性２名）から採取されたものである。前記脳血管障害性パーキンソニズム患者から採取された血液試料から血清を分離し、本実施例（１）［１−１］と同様の手法によりイサチンの濃度の平均値と標準偏差を算出した。【００７７】
［１−７］アルツハイマー病患者から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の測定
アルツハイマー病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ；ＡＤ）患者の血液試料は、パーキンソン病患者の血液試料と同様、神経内科を受診したアルツハイマー病患者のうち、一部のパーキンソン症候群の治療薬として用いられているＭＡＯ−Ｂ阻害薬を使用しておらず、かつ神経内科専門医が本研究の趣旨を説明して提供の同意を得られた６３歳から８２歳のアルツハイマー病患者５３名（男性１１名、女性４２名）から採取されたものである。前記アルツハイマー病患者から採取された血液試料から血清を分離し、本実施例（１）［１−１］と同様の手法によりイサチンの濃度の平均値と標準偏差を算出した。【００７８】
（２）試験結果
［２−１］健常者およびパーキンソン病患者から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の比較
健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、早期パーキンソン病患者（ＰＤ−Ｅ）および晩期パーキンソン病患者（ＰＤ−Ｄ）から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の、それぞれの平均値と標準偏差の比較を、下記の表３および図２に示す。図２中、「＊＊＊」印はＣｏｎｔｒｏｌに対してＰ＜０．００１で有意差があることを示している。表３および図２に示すように、健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、早期パーキンソン病患者（ＰＤ−Ｅ）および晩期パーキンソン病患者（ＰＤ−Ｄ）から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の平均値と標準偏差は、それぞれ０．２９８±０．１６（ｎ＝５８）、０．１１６±０．０８（ｎ＝５５）および０．１０９±０．１０（ｎ＝３０）であり、早期パーキンソン病患者（ＰＤ−Ｅ）および晩期パーキンソン病患者（ＰＤ−Ｄ）の血液試料中におけるイサチンの濃度は、健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）の血液試料中におけるイサチンの濃度と比較して有意に低値であることが明らかとなった。【００７９】
［表３］
2014157707.tif 000007
【００８０】
［２−２］健常者およびＨｏｅｈｎ−Ｙａｈｒの重症度分類のＳｔａｇｅ Ｉ〜ＩＶに該当するパーキンソン病患者から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の比較
健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、Ｈｏｅｈｎ−Ｙａｈｒの重症度分類のＳｔａｇｅＩ（重症度１）に該当するパーキンソン病患者（ＰＤ−Ｉ）、ＳｔａｇｅＩＩ（重症度２）に該当するパーキンソン病患者（ＰＤ−ＩＩ）、ＳｔａｇｅＩＩＩ（重症度３）に該当するパーキンソン病患者（ＰＤ−ＩＩＩ）およびＳｔａｇｅＩＶ（重症度４）に該当するパーキンソン病患者（ＰＤ−ＩＶ）から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の、それぞれの平均値と標準偏差の比較を、下記の表４および図３に示す。図３中、「＊＊＊」印はＣｏｎｔｒｏｌに対してＰ＜０．００１で有意差があることを示している。表４および図３に示すように、健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、Ｈｏｅｈｎ−Ｙａｈｒの重症度分類のＳｔａｇｅＩに該当するパーキンソン病患者（ＰＤ−Ｉ）、ＳｔａｇｅＩＩに該当するパーキンソン病患者（ＰＤ−ＩＩ）、ＳｔａｇｅＩＩＩに該当するパーキンソン病患者（ＰＤ−ＩＩＩ）およびＳｔａｇｅＩＶに該当するパーキンソン病患者（ＰＤ−ＩＶ）から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の平均値と標準偏差は、それぞれ０．２９８±０．１６（ｎ＝５８）、０．１１５±０．０９（ｎ＝１１）、０．１１７±０．０８（ｎ＝４４）、０．１１５±０．１０（ｎ＝２６）および０．０７５±０．０２（ｎ＝４）であり、Ｈｏｅｈｎ−Ｙａｈｒの重症度分類のＳｔａｇｅ Ｉ〜ＩＶに該当するパーキンソン病患者（ＰＤ−Ｉ〜ＩＶ）の血液試料中におけるイサチンの濃度は健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）の血液試料中におけるイサチンの濃度と比較して有意に低値であること、およびＨｏｅｈｎ−Ｙａｈｒの重症度分類のＳｔａｇｅ Ｉ〜ＩＶに該当するパーキンソン病患者の、それぞれの血液試料中におけるイサチンの濃度を互いに比較した場合、それぞれのＳｔａｇｅ（重症度）の間には有意差がないということが明らかとなった。【００８１】
［表４］
2014157707.tif 000008
【００８２】
［２−３］健常者、パーキンソン病患者およびレビー小体型認知症患者から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の比較
健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、早期パーキンソン病患者と晩期パーキンソン病患者とを合わせたパーキンソン病患者（ＰＤ−ａｌｌ）、ならびにレビー小体型認知症患者（ＤＬＢ）から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の、それぞれの平均値と標準偏差の比較を、下記の表５および図４に示す。図４中、「＊＊＊」印はＣｏｎｔｒｏｌに対してＰ＜０．００１で有意差があることを示し、「＃＃＃」印はＰＤ−ａｌｌに対してＰ＜０．００１で有意差があることを示している。表５および図４に示すように、健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、パーキンソン病患者（ＰＤ−ａｌｌ）およびレビー小体型認知症患者（ＤＬＢ）から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の平均値と標準偏差は、それぞれ０．２９８±０．１６（ｎ＝５８）、０．１１４±０．０８（ｎ＝８５）および０．４６３±０．２５（ｎ＝１８）であり、パーキンソン病患者（ＰＤ−ａｌｌ）の血液試料中におけるイサチンの濃度は健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）の血液試料中におけるイサチンの濃度と比較して有意に低値であること、およびレビー小体型認知症患者（ＤＬＢ）の血液試料中におけるイサチンの濃度は、健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）の血液試料中におけるイサチンの濃度およびパーキンソン病患者（ＰＤ−ａｌｌ）の血液試料中におけるイサチンの濃度のいずれと比較しても有意に高値であることが明らかとなった。【００８３】
［表５］
2014157707.tif 000009
【００８４】
［２−４］健常者、パーキンソン病患者および大脳皮質基底核変性症患者／進行性核上性麻痺患者から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の比較
健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、パーキンソン病患者（ＰＤ−ａｌｌ）および大脳皮質基底核変性症患者／進行性核上性麻痺患者（ＣＢＤ／ＰＳＰ）から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の、それぞれの平均値と標準偏差の比較を、下記の表６および図５に示す。図５中、「＊＊＊」印はＣｏｎｔｒｏｌに対してＰ＜０．００１で有意差があることを示し、「＃＃＃」印はＰＤ−ａｌｌに対してＰ＜０．００１で有意差があることを示している。表６および図５に示すように、健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、パーキンソン病患者（ＰＤ−ａｌｌ）および大脳皮質基底核変性症患者／進行性核上性麻痺患者（ＣＢＤ／ＰＳＰ）から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の平均値と標準偏差は、それぞれ０．２９８±０．１６（ｎ＝５８）、０．１１４±０．０８（ｎ＝８５）および０．５７７±０．４０（ｎ＝７）であり、パーキンソン病患者（ＰＤ−ａｌｌ）の血液試料中におけるイサチンの濃度は健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）の血液試料中におけるイサチンの濃度と比較して有意に低値であること、および大脳皮質基底核変性症患者／進行性核上性麻痺患者（ＣＢＤ／ＰＳＰ）の血液試料中におけるイサチンの濃度は、健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）の血液試料中におけるイサチンの濃度およびパーキンソン病患者（ＰＤ−ａｌｌ）の血液試料中におけるイサチンの濃度のいずれと比較しても有意に高値であることが明らかとなった。【００８５】
［表６］
2014157707.tif 000010
【００８６】
［２−５］健常者、パーキンソン病患者および多系統萎縮症患者から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の比較
健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、パーキンソン病患者（ＰＤ−ａｌｌ）および多系統萎縮症患者（ＭＳＡ）から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の、それぞれの平均値と標準偏差の比較を、下記の表７および図６に示す。図６中、「＊＊」印はＣｏｎｔｒｏｌに対してＰ＜０．０１で有意差があることを示し、「＊＊＊」印はＣｏｎｔｒｏｌに対してＰ＜０．００１で有意差があることを示し、「＃＃＃」印はＰＤ−ａｌｌに対してＰ＜０．００１で有意差があることを示している。表７および図６に示すように、健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、パーキンソン病患者（ＰＤ−ａｌｌ）および多系統萎縮症患者（ＭＳＡ）から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の平均値と標準偏差は、それぞれ０．２９８±０．１６（ｎ＝５８）、０．１１４±０．０８（ｎ＝８５）および０．７５３±１．０４（ｎ＝５）であり、パーキンソン病患者（ＰＤ−ａｌｌ）の血液試料中におけるイサチンの濃度は健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）の血液試料中におけるイサチンの濃度と比較して有意に低値であること、および多系統萎縮症患者（ＭＳＡ）の血液試料中におけるイサチンの濃度は、健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）の血液試料中におけるイサチンの濃度およびパーキンソン病患者（ＰＤ−ａｌｌ）の血液試料中におけるイサチンの濃度のいずれと比較しても有意に高値であることが明らかとなった。【００８７】
［表７］
2014157707.tif 000011
【００８８】
［２−６］健常者、パーキンソン病患者および本態性振戦患者から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の比較
健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、パーキンソン病患者（ＰＤ−ａｌｌ）および本態性振戦患者（Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｔｒｅｍｏｒ）から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の、それぞれの平均値と標準偏差の比較を、下記の表８および図７に示す。図７中、「＊＊＊」印はＣｏｎｔｒｏｌに対してＰ＜０．００１で有意差があることを示し、「＃＃＃」印はＰＤ−ａｌｌに対してＰ＜０．００１で有意差があることを示している。表８および図７に示すように、健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、パーキンソン病患者（ＰＤ−ａｌｌ）および本態性振戦患者（Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｔｒｅｍｏｒ）から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の平均値と標準偏差は、それぞれ０．２９８±０．１６（ｎ＝５８）、０．１１４±０．０８（ｎ＝８５）および０．２９４±０．２４（ｎ＝１１）であり、パーキンソン病患者（ＰＤ−ａｌｌ）の血液試料中におけるイサチンの濃度は健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）の血液試料中におけるイサチンの濃度と比較して有意に低値であること、および本態性振戦患者（Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｔｒｅｍｏｒ）の血液試料中におけるイサチンの濃度はパーキンソン病患者（ＰＤ−ａｌｌ）の血液試料中におけるイサチンの濃度と比較して有意に高値であり、かつ健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）の血液試料中におけるイサチンの濃度と比較して近似することが明らかとなった。【００８９】
［表８］
2014157707.tif 000012
【００９０】
［２−７］健常者、パーキンソン病患者および脳血管障害性パーキンソニズム患者から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の比較
健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、パーキンソン病患者（ＰＤ−ａｌｌ）および脳血管障害性パーキンソニズム患者（Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ）から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の、それぞれの平均値と標準偏差の比較を、下記の表９および図８に示す。図８中、「＊＊＊」印はＣｏｎｔｒｏｌに対してＰ＜０．００１で有意差があることを示し、「＃＃＃」印はＰＤ−ａｌｌに対してＰ＜０．００１で有意差があることを示している。表９および図８に示すように、健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、パーキンソン病患者（ＰＤ−ａｌｌ）および脳血管障害性パーキンソニズム患者（Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ）から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の平均値と標準偏差は、それぞれ０．２９８±０．１６（ｎ＝５８）、０．１１４±０．０８（ｎ＝８５）および０．５１８±０．３２（ｎ＝８）であり、パーキンソン病患者（ＰＤ−ａｌｌ）の血液試料中におけるイサチンの濃度は健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）の血液試料中におけるイサチンの濃度と比較して有意に低値であること、および脳血管障害性パーキンソニズム患者（Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ）の血液試料中におけるイサチンの濃度はパーキンソン病患者（ＰＤ−ａｌｌ）の血液試料中におけるイサチンの濃度と比較して有意に高値であり、かつ健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）の血液試料中におけるイサチンの濃度と比較して近似することが明らかとなった。【００９１】
［表９］
2014157707.tif 000013
【００９２】
［２−８］健常者、パーキンソン病患者およびアルツハイマー病患者から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の比較
健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、パーキンソン病患者（ＰＤ−ａｌｌ）およびアルツハイマー病患者（ＡＤ）から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の、それぞれの平均値と標準偏差の比較を、下記の表１０および図９に示す。図９中、「＊＊＊」印はＣｏｎｔｒｏｌに対してＰ＜０．００１で有意差があることを示し、「＃＃＃」印はＰＤ−ａｌｌに対してＰ＜０．００１で有意差があることを示している。表１０および図９に示すように、健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、パーキンソン病患者（ＰＤ−ａｌｌ）およびアルツハイマー病患者（ＡＤ）から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の平均値と標準偏差は、それぞれ０．２９８±０．１６（ｎ＝５８）、０．１１４±０．０８（ｎ＝８５）および０．３７０±０．２３（ｎ＝５３）であり、パーキンソン病患者（ＰＤ−ａｌｌ）の血液試料中におけるイサチンの濃度は健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）の血液試料中におけるイサチンの濃度と比較して有意に低値であること、およびアルツハイマー病患者（ＡＤ）の血液試料中におけるイサチンの濃度はパーキンソン病患者（ＰＤ−ａｌｌ）の血液試料中におけるイサチンの濃度と比較して有意に高値であり、かつ健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）の血液試料中におけるイサチンの濃度と比較して近似することが明らかとなった。【００９３】
［表１０］
2014157707.tif 000014
【００９４】
以上、［２−１］〜［２−８］の結果から、健常者、パーキンソン病を罹患している個体、あるいはパーキンソン症候群を罹患している個体より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定して算出された平均値と標準偏差をリファレンス値として、パーキンソン病またはパーキンソン症候群を罹患している被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定して算出された平均値および標準偏差と、健常者、パーキンソン病を罹患している個体、あるいはパーキンソン症候群を罹患している個体より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定して算出された平均値と標準偏差とを比較した結果、パーキンソン病とパーキンソン症候群との鑑別が可能であることが示された。【００９５】
＜実施例２＞パーキンソン病の発症リスクの予測診断
被検者から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定し、後日その被検者がパーキンソン病を罹患するかどうかの診断をすることにより、あらかじめ被検者から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定することでパーキンソン病の発症リスクの予測が可能であるか否かについて検討した。【００９６】
（１）被験者から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の測定
神経内科を受診した患者のうち、神経内科専門医が本研究の趣旨を説明して提供の同意を得られた、２００８年１１月１２日の初診日に正常と診断された７０歳の女性１名から、２００９年５月２９日の初診日に脳梗塞（ラクナ梗塞）患者と診断された７８歳の女性１名から、および２００９年１０月２３日の初診日に脳梗塞（ラクナ梗塞）患者と診断された６８歳の男性１名からそれぞれ採取された血液試料を被験者の血液試料とした。前記被験者の血液試料から血清を分離し、本実施例（１）［１−１］と同様の手法によりイサチンの濃度をＨＰＬＣ−ＵＶにて測定した。その結果を下記の表１１に示す。【００９７】
［表１１］
2014157707.tif 000015
【００９８】
（２）診断結果
表１１中、「ＰＤ−Ｅ」は早期パーキンソン病患者と診断されたことを示し、「Ｙａｈｒ−Ｉ」および「Ｙａｈｒ−ＩＩ」はそれぞれＨｏｅｈｎ−Ｙａｈｒの重症度分類のＳｔａｇｅ Ｉ（重症度１）とＳｔａｇｅ ＩＩ（重症度２）に該当することを示す。表１１に示すように、２００８年１１月１２日に７０歳女性患者から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の値は０．１１３μｇ／ｍＬ、２００９年５月２９日に７８歳女性脳梗塞（ラクナ梗塞）患者から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の値は０．０９８μｇ／ｍＬ、２００９年１０月２３日に６８歳男性脳梗塞（ラクナ梗塞）患者から採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の値は０．０４３μｇ／ｍＬであった。【００９９】
以上の結果から、実施例１（１）［１−１］で算出された健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）における血液試料中におけるイサチンの濃度の平均値と標準偏差、および実施例１（１）［１−４］で算出されたパーキンソン病患者トータル（ＰＤ−ａｌｌ）における血液試料中におけるイサチンの濃度の平均値と標準偏差から、これら被験者３名の血液試料中におけるイサチンの濃度は、健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）の血液試料中におけるイサチンの濃度と比較して有意に低値であり、かつパーキンソン病患者トータル（ＰＤ−ａｌｌ）の血液試料中におけるイサチンの濃度と比較して概ね同等の値であることが明らかである。【０１００】
よって、パーキンソン病を罹患していない被検者、より詳細には血液試料の採取時にはパーキンソン病を罹患していない被検者について、当該被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定して算出された平均値および標準偏差と、健常者あるいはパーキンソン病を罹患している個体より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定して算出された平均値と標準偏差をリファレンス値として比較した結果、パーキンソン病の発症のリスクを予測できることが示された。【０１０１】
＜実施例３＞パーキンソン病に対する薬剤の薬効評価
パーキンソン病患者において薬物治療前後に採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定して比較することにより、パーキンソン病に対する薬剤の薬効評価が可能であるか否かについて検討した。【０１０２】
（１）パーキンソン病患者において薬物治療前後に採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の測定
神経内科を受診したパーキンソン病患者のうち、神経内科専門医が本研究の趣旨を説明して提供の同意を得られた薬物治療を受けていない５２歳から８３歳のパーキンソン病患者２３名（男性４名、女性１９名）から、薬物治療を受けていない段階（Ｎｏｎ−ｔｒｅａｔｅｄ）で採取された血液試料、および前記パーキンソン病患者に対してＭＡＯ−Ｂ阻害薬である塩酸セレギリン（エフピー：エフピー社）の投与を受けた段階（ＦＰ−ｔｒｅａｔｅｄ）で採取された血液試料のそれぞれから血清を分離し、本実施例（１）［１−１］と同様の手法によりそれぞれのイサチンの濃度の平均値と標準偏差を算出した。その結果を図１０に示す。【０１０３】
（２）評価結果
図１０（Ｂ）中、「Ｐ＜０．００１」との記載は、ＦＰ−ｔｒｅａｔｅｄがＮｏｎ−ｔｒｅａｔｅｄに対してＰ＜０．００１で有意差があることを示している。図１０（Ａ）に示すように、パーキンソン病患者２３名のいずれにおいても、ＭＡＯ−Ｂ阻害薬である塩酸セレギリンの投与を受けた段階（ＦＰ−ｔｒｅａｔｅｄ）で採取された血液試料中におけるイサチンの濃度は、薬物治療を受けていない段階（Ｎｏｎ−ｔｒｅａｔｅｄ）で採取された血液試料中におけるイサチンの濃度よりも高値であることが明らかとなり、パーキンソン病患者２３名のいずれにおいても、ＭＡＯ−Ｂ阻害薬である塩酸セレギリンの投与を受けた後において症状の改善が見られた。また、図１０（Ｂ）に示すように、パーキンソン病患者２３名において、薬物治療を受けていない段階（Ｎｏｎ−ｔｒｅａｔｅｄ）およびＭＡＯ−Ｂ阻害薬である塩酸セレギリンの投与を受けた段階（ＦＰ−ｔｒｅａｔｅｄ）で採取された血液試料中におけるイサチンの濃度の平均値と標準偏差は、それぞれ０．０９２±０．０７（ｎ＝２３）および０．４１４±０．３３（ｎ＝２３）であり、パーキンソン病患者においてＭＡＯ−Ｂ阻害薬である塩酸セレギリン（エフピー：エフピー社）の投与を受けた段階（ＦＰ−ｔｒｅａｔｅｄ）の血液試料中におけるイサチンの濃度は、薬物治療を受けていない段階（Ｎｏｎ−ｔｒｅａｔｅｄ）の血液試料中におけるイサチンの濃度と比較して有意に高値であることが明らかとなった。さらに、実施例１（２）［２−１］〜［２−８］における健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）の血液試料中におけるイサチンの濃度（図２〜図９）との比較では、パーキンソン病患者においてＭＡＯ−Ｂ阻害薬である塩酸セレギリン（エフピー：エフピー社）の投与を受けた段階（ＦＰ−ｔｒｅａｔｅｄ）の血液試料中におけるイサチンの濃度は、健常者（Ｃｏｎｔｒｏｌ）の血液試料中におけるイサチンの濃度と比較して高値ないし近似する（同じまたは概ね同等の）値であることが明らかとなった。【０１０４】
なお、イサチンの生成過程においては腸内細菌が重要な役割を持っていると考えられていること、パーキンソン病の腸管壁にα−シヌクレインが存在して病理学的に腸管内の病変を示唆する所見が得られていることなどから、本発明者らは、腸内病変をもつことが明らかであるパーキンソン病では腸内細菌叢の変化がおこり、イサチンの合成がうまくいかない可能性があるのではないかと考えている。そこで、本発明者らは、パーキンソン病の治療に有効な薬剤が腸内細菌叢の正常化をもたらすなどして、イサチンの生成を正常可するのではないかと考えている。【０１０５】
以上の結果から、パーキンソン病を罹患し、かつ薬物治療を受けている被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定して算出された平均値および標準偏差と、健常者あるいはパーキンソン病を罹患しているが前記薬物治療を受けていない個体より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定して算出された平均値と標準偏差をリファレンス値として比較した結果、パーキンソン病に対する薬剤の薬効を評価できることが示された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【手続補正書】
【提出日】平成26年10月14日(2014.10.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
イサチンからなる、パーキンソン病とパーキンソン症候群との鑑別用、パーキンソン病発症リスク予測用および／またはパーキンソン病に対する薬剤の薬効評価用バイオマーカー。
【請求項２】
パーキンソン病またはパーキンソン症候群を罹患している被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定する工程を有する、パーキンソン病とパーキンソン症候群とを鑑別する方法。
【請求項３】
パーキンソン病またはパーキンソン症候群を罹患している被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定する工程と、
前記測定したイサチンの濃度から得られる測定／算出値と、健常者、パーキンソン病を罹患している個体およびパーキンソン症候群を罹患している個体の少なくともいずれかより採取された血液試料中におけるイサチンの濃度から得られるリファレンス値とを比較する工程と
を有する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
パーキンソン病を罹患していない被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定する工程を有する、パーキンソン病の発症のリスクを予測する方法。
【請求項５】
パーキンンン病を罹患していない被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定する工程と、
前記測定したイサチンの濃度から得られる測定／算出値と、健常者および／またはパーキンソン病を罹患している個体より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度から得られるリファレンス値とを比較する工程と
を有する、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
パーキンソン病を罹患し、かつ薬物治療を受けている被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定する工程を有する、パーキンソン病に対する薬剤の薬効を評価する方法。
【請求項７】
パーキンソン病を罹患し、かつ薬物治療を受けている被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定する工程と、
前記測定したイサチンの濃度から得られる測定／算出値と、健常者および／またはパーキンソン病を罹患しているが前記薬物治療を受けていない個体より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度から得られるリファレンス値とを比較する工程と、
前記測定／算出値と前記健常者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度から得られるリファレンス値とを比較して前記測定／算出値が高値ないし近似する値を示す場合に、または前記測定／算出値と前記パーキンソン病を罹患しているが前記薬物治療を受けていない個体より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度から得られるリファレンス値とを比較して前記測定／算出値が高値を示す場合に、前記被検者の治療に用いられている薬剤の薬効があると認定する工程と
を有する、請求項６に記載の方法。
【手続補正書】
【提出日】平成28年9月30日(2016.9.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
イサチンからなる、パーキンソン病とパーキンソン症候群との鑑別用、パーキンソン病発症リスク予測用および／またはパーキンソン病に対する薬剤の薬効評価用バイオマーカー。
【請求項２】
パーキンソン病とパーキンソン症候群とを鑑別するための指標としてイサチンの濃度を使用する方法であって、パーキンソン病またはパーキンソン症候群を罹患している被験者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定することと、イサチンの濃度をリファレンス値と比較することとを含む方法。
【請求項３】
イサチンの濃度をリファレンス値と比較することが、前記測定したイサチンの濃度から得られる測定／算出値と、健常者、パーキンソン病を罹患している個体およびパーキンソン症候群を罹患している個体の少なくともいずれかより採取された血液試料中におけるイサチンの濃度から得られるリファレンス値とを比較することである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
パーキンソン病の発症のリスクを予測するための指標としてイサチンの濃度を使用する方法であって、パーキンソン病を罹患していない被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定することと、イサチンの濃度をリファレンス値と比較することとを含む方法。
【請求項５】
イサチンの濃度をリファレンス値と比較することが、前記測定したイサチンの濃度から得られる測定／算出値と、健常者および／またはパーキンソン病を罹患している個体より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度から得られるリファレンス値とを比較することである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
パーキンソン病に対する薬剤の薬効を評価するための指標としてイサチンの濃度を使用する方法であって、パーキンソン病を罹患し、かつ薬物治療を受けている被検者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度を測定することと、イサチンの濃度をリファレンス値と比較することとを含む方法。
【請求項７】
イサチンの濃度をリファレンス値と比較することが、前記測定したイサチンの濃度から得られる測定／算出値と、健常者および／またはパーキンソン病を罹患しているが前記薬物治療を受けていない個体より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度から得られるリファレンス値とを比較することと、前記測定／算出値と前記健常者より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度から得られるリファレンス値とを比較して前記測定／算出値が高値ないし近似する値を示す場合に、または前記測定／算出値と前記パーキンソン病を罹患しているが前記薬物治療を受けていない個体より採取された血液試料中におけるイサチンの濃度から得られるリファレンス値とを比較して前記測定／算出値が高値を示す場合に、前記被検者の治療に用いられている薬剤の薬効が示されるとすることである、請求項６に記載の方法。
【国際調査報告】
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