(57)【要約】【課題】人工的に生産される真珠の性質は、真珠母貝及び挿入される外套膜によって決定される。従来技術では真珠母貝と外套膜の由来となる貝とは同種であったため、人工的に生産が可能な真珠の種類が限定されていた。【解決手段】本発明は、真珠母貝であって、真珠母貝に対して異種の貝に由来する細胞を体内に保持した真珠母貝、該真珠母貝の生産方法、及び該真珠母貝を用いた真珠の生産方法を提供する。本発明の真珠母貝は、真珠母貝に対して異種の貝の外套膜切片を挿入しても、脱核率や死亡率が低く抑えられる。また、挿入された外套膜切片から真珠が形成されるため、外套膜切片の由来となる貝の性質を有する真珠を生産することができる。【選択図】図４
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
真珠母貝であって、該真珠母貝に対して異種の貝に由来する細胞を体内に保持した真珠母貝
【請求項２】
前記真珠母貝が二枚貝網に属し、前記異種の貝が二枚貝網、腹足網、又は頭足網に属する、請求項１に記載の真珠母貝
【請求項３】
前記異種の貝に由来する細胞が、外套膜、生殖巣、消化管、循環器、及び貝柱から選択される１又は複数から得られる、請求項１又は請求項２に記載の真珠母貝
【請求項４】
前記真珠母貝が、アコヤガイ、シロチョウガイ、クロチョウガイ、ベニコチョウガイ、マベ、イケチョウガイ、カワシンジュガイ、カラスガイ、又はイシガイである、
請求項１〜請求項３いずれか一項に記載の真珠母貝
【請求項５】
前記異種の貝が、アコヤガイ、シロチョウガイ、クロチョウガイ、ベニコチョウガイ、マベ、マゼランツキヒガイ、ヨーロッパヒラガキ、イガイ、ヨーロッパイガイ、シシリアタイラギ、ダイオウショウジョウガイ、マルスダレガイ、ホンビノスガイ、ネッタイザルガイ、シラナミガイ、アイスランドガイ、イシガイ、イケチョウガイ、カワシンジュガイ、カラスガイ、ボタンガイ、オオウネカワボタンガイ、ヒラツバサカワボタンガイ、アワビ、アカネアワビ、サラサバテイ、ヤコウガイ、カサガイ、ギンイロカサガイ、タマキビ、ヨーロッパタマキビ、オオビワガイ、ピンクガイ、タカラガイ、ホシダカラ、ダイオウイトマキボラ、ハルカゼヤシガイ、ブローデリップヤシガイ、トゲコブシボラ、マイマイ、サヤガタドイツマイマイ、オウムガイ、及びオオベソオウムガイからなる群から選択される一又は複数である、請求項１〜請求項４いずれか一項に記載の真珠母貝
【請求項６】
前記異種の貝が、前記真珠母貝に対して、分類学上は同種であるが異品種又は異系統の貝である、請求項１〜請求項５いずれか一項に記載の真珠母貝
【請求項７】
異種の貝に由来する細胞を体内に保持した真珠母貝の生産方法であって、
前記異種の貝の外套膜、生殖巣、消化管、循環器、及び貝柱から選択される１又は複数を粉砕して得られた細胞懸濁液を、前記真珠母貝に１回又は複数回インジェクションし、
さらに、前記細胞懸濁液には、前記異種の貝の生細胞が含まれる、
異種の貝に由来する細胞を体内に保持した真珠母貝の生産方法
【請求項８】
前記インジェクションのうち少なくとも１回が、蝶番長が約２０ｍｍ〜約５０ｍｍの真珠母貝に対して行われる、
請求項７に記載の真珠母貝の生産方法
【請求項９】
前記インジェクションが、真珠母貝の生殖巣、消化管、循環器、及び貝柱から選択される１又は複数になされる、
請求項７又は請求項８に記載の真珠母貝の生産方法
【請求項１０】
前記異種の貝が、前記真珠母貝に対して、分類学上は同種であるが異品種又は異系統の貝である、請求項７〜請求項９いずれか一項に記載の真珠母貝の生産方法
【請求項１１】
少なくとも外套膜を真珠母貝の体内に挿入して行われる真珠の生産方法であって、
前記真珠母貝が、該真珠母貝に対して異種の貝に由来する細胞を体内に保持した真珠母貝であり、前記外套膜が、前記異種の貝と同種の貝から得られた外套膜である、
真珠の生産方法
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、真珠母貝、真珠母貝の生産方法、及び該真珠母貝を用いた真珠の生産方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
真珠とは、貝の体内で生産される鉱物であり、古くから宝石として重宝されてきた。また、人工的に真珠を生産する方法は既に確立されている。従来の一般的な真珠生産方法は、真珠核及び真珠母貝と同種の貝の外套膜の切片を、真珠母貝の生殖巣に挿入し、該真珠母貝を１年〜２年間養殖することで、真珠母貝の体内で真珠が生産されるというものである（非特許文献１参照）。【０００３】
また、効率的な真珠生産方法や、独自の性質を有する真珠を生産する方法が数多く開発されている。例えば、真珠母貝の感染症を防止するため、サイトカインの存在下で挿核を行う方法（特許文献１参照）、β―１，３―グルコシド結合からなる主鎖を持つグルカン類を用いて真珠核を挿入することで真珠核挿入後の真珠母貝の生存率を向上させる方法（特許文献２参照）、略ハート型に形成した真珠核を用いてハート型の真珠を生産する方法（特許文献３参照）、ｓｉＲＮＡを用いてアコヤガイの生殖細胞の発達を抑制する方法（特許文献４参照）が開示されている。【０００４】
発明者らは、真珠母貝に対して異種の貝の外套膜の切片を用いて真珠を生産するために、免疫寛容化処理を施した真珠母貝、及び該真珠母貝を用いた真珠生産方法の開発に成功した（特許文献５参照）
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００７−００００４７号公報
【特許文献２】特開平０７−０３１３２１号公報
【特許文献３】特開２００９−０５５８７３号公報
【特許文献４】特開２００９−２１９４８７号公報
【特許文献５】特開２０１２−１３０３３１号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】文部科学省著、「水産００６  栽培漁業」、実教出版株式会社発行、２００３年２月２５日発行、ｐ．２７７〜２８５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
特許文献５には、異種貝の外套膜を含む免疫寛容化液を真珠母貝に複数回投与することで、減感作により免疫寛容化された真珠母貝を得るという方法が記載されている。しかし、該方法による真珠の生産率は非常に低かったため、より効率的に異種貝の外套膜を用いた真珠生産を可能とする真珠母貝、及び真珠生産方法が必要であった。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、上記の課題を解決するため、異種の貝から得られた外套膜の切片を用いて効率的に真珠を生産することを可能とする真珠母貝とその生産方法、さらに該真珠母貝を用いた真珠生産方法を提供する。【０００９】
本発明の真珠母貝は、真珠母貝に対して異種の貝に由来する細胞を体内に保持した真珠母貝である。【００１０】
また、別の本発明では、真珠母貝が二枚貝網に属し、異種の貝が二枚貝網、腹足網、又は頭足網に属する。【００１１】
さらに、別の本発明では、異種の貝に由来する細胞が、外套膜、生殖巣、消化管、循環器、及び貝柱から選択される１又は複数から得られる。【００１２】
また、真珠母貝は、アコヤガイ、シロチョウガイ、クロチョウガイ、ベニコチョウガイ、マベ、イケチョウガイ、カワシンジュガイ、カラスガイ、又はイシガイであり得る。さらに、異種の貝は、アコヤガイ、シロチョウガイ、クロチョウガイ、ベニコチョウガイ、マベ、マゼランツキヒガイ、ヨーロッパヒラガキ、イガイ、ヨーロッパイガイ、シシリアタイラギ、ダイオウショウジョウガイ、マルスダレガイ、ホンビノスガイ、ネッタイザルガイ、シラナミガイ、アイスランドガイ、イシガイ、イケチョウガイ、カワシンジュガイ、カラスガイ、ボタンガイ、オオウネカワボタンガイ、ヒラツバサカワボタンガイ、アワビ、アカネアワビ、サラサバテイ、ヤコウガイ、カサガイ、ギンイロカサガイ、タマキビ、ヨーロッパタマキビ、オオビワガイ、ピンクガイ、タカラガイ、ホシダカラ、ダイオウイトマキボラ、ハルカゼヤシガイ、ブローデリップヤシガイ、トゲコブシボラ、マイマイ、サヤガタドイツマイマイ、オウムガイ、及びオオベソオウムガイからなる群から選択される一又は複数であり得る。さらに本発明は、異種の貝が、真珠母貝に対して、分類学上は同種であるが異品種又は異系統の貝でもあり得る。【００１３】
また、本発明は真珠母貝の生産方法を提供する。すなわち、異種の貝に由来する細胞を体内に保持した真珠母貝の生産方法であって、異種の貝の外套膜、生殖巣、消化管、循環器、及び貝柱から選択される１又は複数を粉砕して得られた細胞懸濁液を、真珠母貝に１回又は複数回インジェクションし、さらに、細胞懸濁液には、異種の貝の生細胞が含まれる。【００１４】
別の本発明の真珠母貝の生産方法では、インジェクションのうち少なくとも１回が、蝶番長が約２０ｍｍ〜約５０ｍｍの真珠母貝に対して行われる。真珠母貝の蝶番長が約２０ｍｍに満たない場合は注射器を使用したインジェクションが困難である一方、蝶番長が約５０ｍｍ以下の真珠母貝にインジェクションを行うと真珠生産効率が高まるためである。さらに、別の本発明では、インジェクションが、真珠母貝の生殖巣、消化管、循環器、及び貝柱から選択される１又は複数になされる。【００１５】
さらに本発明の真珠母貝の生産方法は、異種の貝が、真珠母貝に対して、分類学上は同種であるが異品種又は異系統の貝でもあり得る。【００１６】
また、本発明は、真珠の生産方法を提供する。すなわち、少なくとも外套膜を真珠母貝の体内に挿入して行われる真珠の生産方法であって、真珠母貝が、真珠母貝に対して異種の貝に由来する細胞を体内に保持した真珠母貝であり、外套膜が、異種の貝と同種の貝から得られた外套膜である真珠の生産方法である。
【発明の効果】
【００１７】
本発明の真珠母貝は、真珠母貝に対して異種の貝の外套膜切片を挿入しても、脱核率や死亡率が低く抑えられる。また、挿入された外套膜切片から真珠が形成されるため、外套膜切片の由来となる貝の性質を有する真珠を生産することができる。特に、特許文献５に記載の方法と比較して、真珠母貝内での真珠核の生着率や、真珠の生産効率や生産された真珠の品質が飛躍的に高まる。【００１８】
また、本発明では、蝶番長が約５０ｍｍ以下の真珠母貝を利用して、本発明の真珠母貝を生産することができる。したがって、異種の貝に由来する細胞を体内に保持した真珠母貝の流通販売が可能となる。また、異種の貝から得られた細胞懸濁液のインジェクション回数が少なくてもよく、本発明の真珠母貝を効率良く生産することができる。【００１９】
また、真珠母貝と外套膜切片を得る貝との組み合わせにより、さまざまな性質を持った真珠を人工的に生産することが可能である。【００２０】
例えば、アコヤガイを真珠母貝として用いて、クロチョウガイから得られたピースを用いて真珠を生産すれば、海水温が低い地域であってもクロチョウガイから得られた真珠と同質の層を有する真珠を得ることができる。【００２１】
また、アコヤガイを真珠母貝として、マベから得られたピースを用いて真珠を生産すれば、マベから得られた真珠と同質の層を有する球体の真珠を得ることができる。マベの構造は生殖巣に真珠核を挿入することが困難なため、マベを真珠母貝とした場合は、半球形の真珠核を貝殻の内側に接着させ、半球体の真珠（ブリスタ真珠）が生産される。しかし、本発明を用いればアコヤガイを真珠母貝としてマベから得られたピースを用いて真珠を生産することが可能となり、球体の真珠を得ることができる。【００２２】
さらに、アコヤガイを真珠母貝として、ピンクガイやダイオウイトマキボラ、ハルカゼヤシガイ等の巻貝の外套膜から得られたピースを用いて真珠を生産すれば、巻貝から得られる真珠と同質の層を有する真珠を生産することができる可能性がある。巻貝は、ピースの挿入が非常に困難な構造をしているため、人工的な真珠生産は行われていない。本発明によれば、これまで真珠養殖が困難であった貝であっても、該貝から得られる天然真珠と同質の層を有する真珠を人工的に生産することが可能である。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】本発明の真珠母貝が異種貝の細胞を保持していることを示す図である。
【図２】本発明の真珠母貝の異種貝に対するNF-kBの発現の変化を示す図である。
【図３】本発明の真珠母貝を用いた真珠生産における真珠核の生着率を示す図である。
【図４】本発明の真珠母貝を用いて生産された真珠における真珠層の実体顕微鏡写真である。
【図５】本発明の真珠母貝を用いて生産された真珠における真珠層の走査型電子顕微鏡写真である。
【図６】本発明の真珠母貝を用いた真珠生産における真珠核の生着率を示す図である。
【図７】本発明の真珠母貝を用いた真珠生産における品質の評価を示す図である。
【図８】本発明の実施例で真珠と比較例で得られた真珠とのクラスタ解析の結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
次に、本発明を実施するための形態について説明するが、本発明はこれらの実施形態に限定されるものではない。
【００２５】
本発明の真珠母貝は、真珠母貝に対して異種の貝に由来する細胞を、生細胞として体内に保持する。すなわち、本発明の真珠母貝は、異種の貝の細胞を、該細胞が生きたまま自らの体の一部として持つこととなるから、該異種の貝は本発明の真珠母貝の体内で異物としては認識されない。したがって、本発明の真珠母貝には、本発明の真珠母貝が保持する細胞の由来と同種の貝から得られた外套膜の挿入が可能である。本発明の真珠母貝に挿入された異種貝の外套膜は、真珠母貝の体内で、外套膜単独で又は外套膜と真珠核とが共に生着し、真珠が形成される。
【００２６】
真珠母貝とは、真珠の生産のために養殖される貝である。真珠母貝の生殖巣に少なくとも外套膜を挿入し、該真珠母貝を養殖することで真珠を生産することができる。また、真珠母貝の生殖巣に外套膜及び真珠核を挿入した場合には、該真珠母貝を養殖することで、真珠核の表面に貝殻の層が形成された真珠を生産することができる。
【００２７】
本発明において用いられる貝とは、軟体動物門に属する生物である。真珠母貝は二枚貝網に属する生物であることが好ましい。二枚貝は、外套膜を生殖巣に挿入することが容易な構造を有しているためである。具体的には、アコヤガイ、シロチョウガイ、クロチョウガイ、ベニコチョウガイ、マベ、イケチョウガイ等、真珠母貝として既に広く用いられている生物種を挙げることができる。
【００２８】
また、異種の貝は、二枚貝網、腹足網、又は頭足網に属する生物を用いることができる。二枚貝網に属する生物とは、一般に二枚貝と呼称され、原鰓類、翼形類、マルスダレガイ類、サンカクガイ類、イシガイ類、オオノガイ類、ウミタケガイモドキ類、隔鰓類等に分類される。さらに具体的には、アコヤガイ、シロチョウガイ、クロチョウガイ、ベニコチョウガイ、マベ、マゼランツキヒガイ、ヨーロッパヒラガキ、イガイ、ヨーロッパイガイ、シシリアタイラギ、ダイオウショウジョウガイ、マルスダレガイ、ホンビノスガイ、ネッタイザルガイ、シラナミガイ、アイスランドガイ、イシガイ、イケチョウガイ、カワシンジュガイ、ボタンガイ、オオウネカワボタンガイ、ヒラツバサカワボタンガイ等の生物種を用いることができる。
【００２９】
また、腹足網に属する生物とは、一般に巻貝と呼称され、カサガイ類、古腹足類、新腹足類、タマキビ類、新紐舌類、イモガイ類等に分類される。さらに具体的には、アワビ、アカネアワビサラサバテイ、ヤコウガイ、カサガイ、ギンイロカサガイ、タマキビ、ヨーロッパタマキビ、オオビワガイ、ピンクガイ、タカラガイ、ホシダカラ、ダイオウイトマキボラ、ハルカゼヤシガイ、ブローデリップヤシガイ、トゲコブシボラ、マイマイ、サヤガタドイツマイマイ等の生物種を用いることができる。
【００３０】
また、頭足網に属する生物では、オウムガイ類に属するオウムガイ、オオベソオオムガイ等の生物種を用いることができる。
【００３１】
本発明によって得られる真珠母貝の体内には、真珠母貝に対して異種の貝から得られる外套膜を挿入することができる。本工程を挿入工程という。特に、外套膜は、真珠母貝の生殖巣に挿入されることが好ましい。
【００３２】
外套膜は、ピースとも呼ばれ、好ましくは貝から摘出した外套膜を適切なサイズに切断した外套膜切片として真珠母貝に挿入される。挿入される外套膜には、外套膜外面上皮細胞が含まれていればよい。真珠の生産に真珠核を用いる場合には、外套膜は真珠核と同時に又は連続して真珠母貝に挿入される。外套膜及び真珠核は、真珠母貝の生殖巣に挿入されることが好ましい。
【００３３】
ここで、真珠核とは、表面に真珠層等の貝殻構造が形成されることで真珠となるものであり、外套膜と同時に又は連続して真珠母貝に挿入される。一般的な真珠核としては、貝（特に二枚貝）の真珠層を略球形又は略半球形に削ったものが用いられるが、合成樹脂やセラミクスを用いることも可能である。真珠核は、直径が約０．５ｍｍから約２０ｍｍまでのものが広く用いられている。
【００３４】
本発明の真珠母貝は、該真珠母貝に対して異種の貝から得られた外套膜を用いて真珠を生産することができる。真珠母貝に挿入された外套膜に含まれる外套膜外面上皮細胞から貝殻成分が分泌され、真珠層構造、稜柱層構造、交差板構造、葉状構造、針状構造等の貝殻の構造が形成される。これらの構造は、挿入される外套膜の由来となる貝の種類によって決定される。したがって、真珠母貝と外套膜を得る貝との組み合わせにより、さまざまな性質を持った真珠を生産することが可能である。
【００３５】
本発明の真珠母貝の生産方法について説明する。まず、異種の貝の軟体部を粉砕した細胞懸濁液を作製する。より具体的には、異種貝の軟体部とは、外套膜、生殖巣、消化管、循環器、及び貝柱から選択される１又は複数である。細胞懸濁液には、異種の貝に由来する生細胞が含まれている。好ましくは、異種の貝の外套膜又は生殖巣湯から得られた生細胞が含まれる細胞懸濁液である。
【００３６】
真珠母貝のサイズに合わせて、約５０μＬ〜約１ｍＬの細胞懸濁液がインジェクションされる。細胞懸濁液に含まれる細胞の濃度は、約１×１０３個〜約１×１０１０個の細胞が真珠母貝にインジェクションされるように調整される。より好ましくは、約１×１０４個〜約１×１０８個の細胞が、さらに好ましくは、約１×１０５個〜約１×１０７個の細胞が真珠母貝にインジェクションされるように調整される。
【００３７】
細胞懸濁液を真珠母貝に１回又は複数回インジェクションすることで、異種の貝に由来する細胞を、生きたまま体内に保持した真珠母貝を生産することができる。
【００３８】
真珠母貝へのインジェクションは、蝶番長が約１００ｍｍ以下の真珠母貝に対して行われることが好ましい。真珠母貝の種類によって最適なインジェクション時期は異なるが、例えばアコヤガイは蝶番長約３ｍｍ〜約７０ｍｍ、シロチョウガイやクロチョウガイは蝶番長約１０ｍｍ〜約１００ｍｍであることがさらに好ましい。免疫系が十分に成熟していない時期の真珠母貝にインジェクションした場合には、異種貝の細胞が真珠母貝体内で保持されやすいためである。特許文献４に記載の方法は、免疫系が成熟した真珠母貝に異種貝の外套膜を含んだ免疫寛容化液を投与することにより減感作するものであり、その点で本発明とは本質的に異なる。
【００３９】
一方、インジェクションを容易に行うためには、真珠母貝がある程度の大きさに成長していることが好ましい。蝶番長が約５ｍｍ以上であればマイクロインジェクタを用いたインジェクションが可能であり、蝶番長が約２０ｍｍ以上であれば注射器を用いたインジェクションが可能である。
【００４０】
したがって、注射器を用いる場合は、アコヤガイであれば蝶番長が約２０ｍｍ〜約６０ｍｍの、シロチョウガイやクロチョウガイであれば超番長が約２０ｍｍ〜約１００ｍｍの真珠母貝に対してインジェクションすることが好ましい。さらに好ましくは、約２０ｍｍ〜約５０ｍｍの真珠母貝に対してインジェクションすることである。注射器を使用すると、マイクロインジェクタを使用する場合に比べて、安価且つ簡便に処理することができる。
【００４１】
また、真珠母貝に対して複数回のインジェクションを行う場合には、少なくとも１回のインジェクションが、上述の範囲に含まれる蝶番長の真珠母貝に対して行われればよい。特に、初回のインジェクションが、上述の範囲に含まれる蝶番長の真珠母貝に対して行われることが好ましい。
【００４２】
インジェクションは真珠母貝の軟体部になされる。特に、生殖巣、消化管、循環器、及び貝柱から選択される１又は複数になされることが好ましく、生殖巣にインジェクションすることがさらに好ましい。真珠母貝の生殖巣は袋状構造をとっているため、十分量の細胞懸濁液を受容することができるためである。
【００４３】
異種の貝の生細胞が含有される細胞懸濁液を１回又は複数回インジェクションされた真珠母貝は、体内で異種貝の生細胞を保持する。真珠母貝が異種貝の生細胞を保持しているか否かは、ＰＣＲ等の遺伝子検査で確認することが可能である。複数回のインジェクションを行う場合には、真珠母貝の負担を軽減するため、約３日以上、好ましくは約７日以上の間隔が設けられる。
【００４４】
さらに、本発明は、真珠の生産方法を提供する。すなわち、少なくとも外套膜を真珠母貝の体内に挿入して行われる真珠の生産方法であって、真珠母貝が、真珠母貝に対して異種の貝に由来する細胞を体内に保持した真珠母貝であり、真珠母貝に挿入される外套膜は、異種の貝と同種の貝から得られた外套膜である。
【００４５】
さらに、本発明における異種の貝とは、分類上の種が異なる貝だけでなく、分類上の種は同一であるが品種又は系統が異なる貝をも含む。真珠母貝は、同一の種に分類されても、産地等によりさまざまな品種又は系統に区別される。真珠母貝に対して異なる品種又は異なる系統の貝の外套膜を真珠母貝に挿入した場合、該外套膜は、真珠母貝の免疫により異物として認識される場合があり、かかる場合は真珠の生産効率が低く、品質の高い真珠が得られないという問題があった。本発明によれば、真珠母貝に対して異なる品種又は異なる系統から得られた外套膜を用いて、効率的且つ高品質な真珠生産を行うことができる。
【００４６】
真珠母貝の品種又は系統は、アコヤガイの場合、日本産、中国産、ベトナム産、ペルシャ産等の産地で区別されることが多い。また、各品種又は各系統の交雑貝も品種又は系統として用いられ、例えば、中国産アコヤガイと日本産アコヤガイの交雑貝等がある。また、生産者毎に独自の系統が確立されている場合もある。本発明によれば、例えば、ペルシャ産のアコヤガイを真珠母貝とし、日本産のアコヤガイから得られた外套膜を用いた真珠生産において、生産効率を高めることができる。
【００４７】
すなわち、本発明は、真珠母貝に対し異品種又は異系統の貝の外套膜を用いて真珠を生産するために、異品種又は異系統の貝に由来する細胞を体内に保持した真珠母貝、異品種又は異系統の貝に由来する細胞を体内に保持した真珠母貝の生産方法、及び異品種又は異系統の貝に由来する細胞を体内に保持した真珠母貝を用いた真珠の生産方法を提供する。
【実施例】
【００４８】
続いて、本発明を実施例に基づいてさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されない。【００４９】
実施例１．異種の貝の細胞を保持した真珠母貝の作製
アコヤガイを真珠母貝として用いて、マベ由来の細胞を保持した真珠母貝を作製した。アコヤガイは蝶番長が約５ｍｍ〜約３０ｍｍのものを使用した。マベから生殖巣及び外套膜を摘出し、濾過海水で洗浄した。それぞれをミキサーで粉砕し、生殖巣から得られた細胞懸濁液、及び外套膜から得られた細胞懸濁液を作製した。細胞懸濁液に含まれる細胞数を計測して、細胞懸濁液中の細胞が１×１０３〜１０６個／ｍＬとなるように調整した。アコヤガイ１個体あたり、０．１ｍＬの細胞懸濁液を生殖巣にインジェクションした。アコヤガイは、インジェクション後、海面で飼育した。【００５０】
インジェクションから２月後、アコヤガイがマベの生細胞を保持しているか否かをPCRにより調べた。アコヤガイとマベとに共通なEF1αのプライマーを用い、サイズの違いで判定した。図１に結果を示す。実施例１のアコヤガイからマベと同じサイズのバンドが検出されたことから、実施例１のアコヤガイはマベの細胞を生きたまま保持していることがわかった。【００５１】
さらに、実施例１のアコヤガイがマベを異物として認識するか否かを調べた。炎症に関わる遺伝子であるNF-kBの発現を指標とした。実施例１のアコヤガイにマベ外套膜を高濃度に含む破砕液を投与し、投与前と投与後1時間とのNF-kB m-RNA量をRealTime PCRで比較した。比較例１には無処理のアコヤガイを用いた。結果を図２に示す。比較例１はマベ外套膜破砕液の投与により、NF-kBの発現量が大幅に増加した。一方、実施例１のアコヤガイでは比較例１ほどの発現量の変化が見られず、炎症反応が抑制されていることが示唆された。したがって、実施例１のアコヤガイは、マベを異物として認識しにくい状態にあることがわかった。【００５２】
実施例２．異種の貝の細胞を保持した真珠母貝を用いた真珠の生産（１）
マベ外套膜由来の生細胞をインジェクションしたアコヤガイに、マベの外套膜と真珠核とを挿入して真珠を生産した。比較例として、無処理のアコヤガイにアコヤガイの外套膜と真珠核とを（比較例２）、無処理のアコヤガイにマベの外套膜と真珠核とを（比較例３）、それぞれ挿入した。挿核から２月後に真珠核が生着したか否かを、Ｘ線を用いて確認した。結果を図３に示す。マベの細胞を保持した真珠母貝では、無処理のアコヤガイを用いた比較例２に比べて生着率が高かった。特に、マベの外套膜から得られた細胞を保持した真珠母貝における生着率が最も高かった。【００５３】
さらに、挿核が成功した真珠母貝から真珠核を取り出して真珠が形成されていることを実体顕微鏡及び電子顕微鏡を用いて確認した。図４は実体顕微鏡、図５は走査型電子顕微鏡を用いて撮影した。図４及び図５に示すように、実施例２のアコヤガイを真珠母貝として、マベの外套膜を用いた真珠形成に成功した。比較例である無処理のアコヤガイでは、比較例３でアコヤガイの外套膜を用いた真珠形成が確認された一方で、比較例２のマベの外套膜を用いた真珠形成は見られなかった。【００５４】
実施例３．異種の貝の細胞を保持した真珠母貝を用いた真珠の生産（２）
アコヤガイを真珠母貝として用いて、マベ由来の細胞を保持した真珠母貝を作製した。マベから外套膜を摘出し、濾過海水で洗浄してミキサーで粉砕して細胞懸濁液を作製した。インジェクションは合計３回行った。アコヤガイは、成長段階毎に３つの群に分けた。すなわち、初回のインジェクション時の平均蝶番長６２．４ｍｍの群、平均蝶番長５４．３ｍｍの群、平均蝶番長４９．９ｍｍの群である。初回は約１×１０５個のマベ細胞が、２回目はその１週間後に約１×１０６ 個のマベ細胞が、３回目は、その約４ヶ月後且つ挿核の１週間前に約１×１０６個のマベ細胞が、それぞれアコヤガイ１個体当たりに入るよう、０．１ｍＬの細胞懸濁液をアコヤガイの生殖巣にインジェクションした。アコヤガイは、インジェクション後、海面で飼育した。【００５５】
上述のように作製された真珠母貝のアコヤガイに、マベの外套膜と真珠核とを挿入して真珠を生産した。挿核から１月後に真珠核が生着したか否かを、Ｘ線を用いて確認した。結果を図６に示す。全体的に生着率は低かったものの、平均蝶番長５０ｍｍ以下の真珠母貝に初回のインジェクションを行った群の生着率が他の群と比較して高かった。したがって、蝶番長５０ｍｍ以下の真珠母貝に少なくとも１回のインジェクションがなされることが好ましいことがわかった。【００５６】
実施例４．異系統の貝の細胞を保持した真珠母貝を用いた真珠の生産
アコヤガイに属するが異なる系統の貝を用いて、本発明の真珠母貝の生産、及び該真珠母貝を用いた真珠の生産を行った。真珠母貝には、アコヤガイの系統である「下灘１号（下灘漁業協同組合）」を用いた。アコヤガイであるが「下灘１号」とは異なる系統である「華（株式会社養殖屋）」由来の生細胞を「下灘１号」の生殖腺にインジェクションし、「華」由来の細胞を保持した「下灘１号」の真珠母貝を作製した。【００５７】
具体的には、まず、「華」から外套膜を摘出し、濾過海水で洗浄しミキサーで粉砕して細胞懸濁液を作製した。「下灘１号」の生殖腺へのインジェクションは合計２回行った。初回は、挿核の４週間前に１×１０５個の「華」の細胞が、２回目は、挿核の２週間前に１×１０６個の「華」の細胞が、それぞれ「下灘１号」の１個体当たりに入るよう、０．１ｍＬの細胞懸濁液を下灘１号の生殖巣にインジェクションした。初回のインジェクション時の「下灘１号」の蝶番長は約５８ｍｍ〜約６０ｍｍであった。「下灘１号」は、インジェクションを行った後は、海面で飼育した。【００５８】
上述のように作製された真珠母貝の「下灘１号」に、「華」の外套膜と真珠核とを挿入して真珠を生産した。また、無処理の真珠母貝の「下灘１号」を比較例４に用い、「華」の外套膜と真珠核とを挿入して真珠を生産した。生産された真珠から無作為に１０個〜１１個を抽出し、品質の評価を行った。図７は、無作為に抽出された真珠の写真であり、その中で品質が高いと判断されたものを矢印で示し、その割合を記載した。実施例４は、品質が高い真珠が５０％を占めたのに対し、比較例４は２７％であった。したがって、本発明の真珠母貝は、品質の高い真珠を多く生産可能であることが示された。【００５９】
さらに、実施例４及び比較例４で得られた真珠の表面の赤外分光スペクトルをFT-IR システムAlpha（ブルカー・オプティクス株式会社）を用いて計測し、クラスタ解析を行った。図７に写真で示した実施例４及び比較例４で得られた真珠を、それぞれ左から順に「実施例４：１」から「実施例４：１０」と、「比較例４：１」から「比較例４：１１」と区別した。計測された波長のうち、２４０４ｃｍ-1〜９３０ｃｍ-1の波長領域の一次微分で得られたベクトルを正規化し、ウォード法に基づいて分類した。結果を図８に示す。実施例４の真珠と比較例４の真珠は、完全に異なったクラスタに分類された。したがって、本発明によって高品質な真珠が生産可能であり、これらは表面の赤外分光スペクトルにより従来の真珠と明確に識別可能であることが示された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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