(57)【要約】  本発明は、グリセリン脂肪酸エステルを含む試料から脂肪酸アルキルエステルを調製する方法であって、以下の工程、該グリセリン脂肪酸エステルを、疎水性溶媒と、該疎水性溶媒及び水の各々に対して混和する両親媒性有機溶媒とを含む溶液に溶解する工程、並びに、該グリセリン脂肪酸エステルを、炭素数１〜４のアルコール溶媒及び炭素数１〜４のアルコキシドイオンと反応させて、脂肪酸アルキルエステルを生成する工程、を含むことを特徴とする方法又はそのためのキットに関する。また、本発明は、試料中のグリセリン脂肪酸エステルの脂肪酸組成を分析する方法にも関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
グリセリン脂肪酸エステルを含む試料から脂肪酸アルキルエステルを調製する方法であって、以下の工程、
該グリセリン脂肪酸エステルを、疎水性溶媒と、該疎水性溶媒及び水の各々に対して混和する両親媒性有機溶媒とを含む溶液に溶解する工程、並びに、
該グリセリン脂肪酸エステルを、炭素数１〜４のアルコール溶媒及び炭素数１〜４のアルコキシドイオンと反応させて、脂肪酸アルキルエステルを生成する工程、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項２】
前記疎水性溶媒が、脂肪族炭化水素溶媒、脂環式炭化水素溶媒、ハロゲン化炭化水素溶媒、芳香族炭化水素溶媒及びエーテル溶媒から成る群から選択される疎水性溶媒の１種又は２種以上の混合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記両親媒性有機溶媒が、１，４−ジオキサン、アセトン、エチレングリコールジメチルエーテル、メチルエチルケトン及びテトラヒドロフランから成る群から選択される１種又は２種以上の混合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
酸性水溶液を加えて反応を停止する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記酸性水溶液が、疎水性溶媒に溶解しない色素を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
疎水性溶媒層を採取する工程をさらに含む、請求項４又は５に記載の方法。
【請求項７】
試料中のグリセリン脂肪酸エステルの脂肪酸組成を分析する方法であって、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法によって該試料から脂肪酸アルキルエステルを調製し、それを分析する工程を含むことを特徴とする方法。
【請求項８】
グリセリン脂肪酸エステルを含む試料から脂肪酸アルキルエステルを調製するためのキットであって、
疎水性溶媒と、該疎水性溶媒及び水の各々に対して混和する両親媒性有機溶媒とを含む溶解液、並びに、
炭素数１〜４のアルコール溶媒と、炭素数１〜４のアルコキシドイオンとを含む反応液、
を含むことを特徴とするキット。
【請求項９】
前記両親媒性有機溶媒が、１，４−ジオキサン、アセトン、エチレングリコールジメチルエーテル、メチルエチルケトン及びテトラヒドロフランから成る群から選択される１種又は２種以上の混合物である、請求項８に記載のキット。
【請求項１０】
酸性水溶液を含む停止液をさらに含む、請求項８に記載のキット。
【請求項１１】
前記酸性水溶液が、疎水性溶媒に溶解しない色素を含む、請求項１０に記載のキット。
【請求項１２】
疎水性溶媒層を採取するための器具をさらに含む、請求項１０又は１１に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、グリセリン脂肪酸エステルを含む試料から脂肪酸アルキルエステルを調製する方法及びそのためのキット並びに試料中のグリセリン脂肪酸エステルの脂肪酸組成を分析する方法に関するものであり、特に、加熱器具を必要とせず安全に、かつ短時間で反応を完了することができるため、試料中のグリセリン脂肪酸エステルの脂肪酸組成分析のために脂肪酸アルキルエステルを迅速に調製する方法及びそのためのキットに関するものである。また、本発明は、反応産物である脂肪酸アルキルエステルを含む疎水性溶媒層と水層とが色分けされるため、該疎水性溶媒層の採取を容易に行う方法及びそのためのキットに関するものでもある。
【背景技術】
【０００２】
植物性油若しくは動物性油などの油脂中、又は、細胞、菌体若しくは血液などの生体試料中のグリセリン脂肪酸エステルを構成する脂肪酸の組成は、該脂肪酸に由来する脂肪酸アルキルエステルとして、ガスクロマトグラフィー分析により決定される。前記脂肪酸アルキルエステルは、種々の方法によって前記グリセリン脂肪酸エステルから調製される。【０００３】
ある方法では、生体試料に三フッ化ホウ素／メタノール及びトルエンを加えて密栓し、８０℃で約２０分間振り混ぜ、さらに約６０分間加熱し、静置して反応液を２層に分離したら、脂肪酸メチルエステルを含む上澄み液を回収する。
また、特許文献１には、生体試料にプロピオン酸メチルを加えて室温で５分間撹拌し、ここへナトリウムメトキシド／メタノール溶液を加えて１分間撹拌後、３７℃で１時間反応させ、さらに三フッ化ホウ素／メタノールを加えて１分間撹拌後、３７℃で２０分間反応させ、得られた反応混合物にヘキサンを加えて１分撹拌後、３分間遠心分離して脂肪酸メチルエステルを含むヘキサン層を採取する方法が記載されている。
そして、非特許文献１には、グリセリン脂肪酸エステルに、ヘキサン及びメタノール性水酸化カリウムを加えて室温で１〜２分間混合し、脂肪酸メチルエステルを含むヘキサン層を採取する方法が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００７−１７６９１８号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Lipids (1996), Vol. 31, No. 5, p. 535-9
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
上述の方法では、処理時間又は撹拌時間が長い、加熱器具を必要とし処理温度がメタノールの沸点を超えると危険である、という問題点があった。また、分離した二層のうち脂肪酸メチルエステルを含む層を採取する際に、該二層の境界面が不明瞭であるため、正確に採取しにくいという問題点があった。
本発明の課題は、処理時間又は撹拌時間が短く、加熱器具を必要とせず安全な、脂肪酸アルキルエステルの調製方法及びそのためのキットを提供することである。また、本発明の課題は、容易に採取しやすい分離層を形成する、脂肪酸アルキルエステルの調製方法及びそのためのキットを提供することでもある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、グリセリン脂肪酸エステルを含む試料を、疎水性溶媒と、該疎水性溶媒及び水の各々に対して混和する両親媒性有機溶媒とを含む溶液に溶解すると、炭素数１〜４のアルコール溶媒の存在下において、グリセリン脂肪酸エステルと炭素数１〜４のアルコキシドイオンとの反応効率が高まることを見出し、本発明を完成した。
また、本発明者らは、疎水性溶媒に溶解しない色素を含む酸性水溶液を用いてエステル交換反応を停止した場合には、反応産物である脂肪酸アルキルエステルを含む疎水性溶媒層と水層とが色分けされることを見出し、本発明を完成した。【０００８】
すなわち、本発明は、以下に示す脂肪酸アルキルエステルを調製する方法及びキットを提供するものである。
＜１＞グリセリン脂肪酸エステルを含む試料から脂肪酸アルキルエステルを調製する方法であって、以下の工程、
該グリセリン脂肪酸エステルを、疎水性溶媒と、該疎水性溶媒及び水の各々に対して混和する両親媒性有機溶媒とを含む溶液に溶解する工程、並びに、
該グリセリン脂肪酸エステルを、炭素数１〜４のアルコール溶媒及び炭素数１〜４のアルコキシドイオンと反応させて、脂肪酸アルキルエステルを生成する工程、
を含むことを特徴とする方法。
＜２＞前記疎水性溶媒が、脂肪族炭化水素溶媒、脂環式炭化水素溶媒、ハロゲン化炭化水素溶媒、芳香族炭化水素溶媒及びエーテル溶媒から成る群から選択される疎水性溶媒の１種又は２種以上の混合物である、上記＜１＞に記載の方法。
＜３＞前記両親媒性有機溶媒が、１，４−ジオキサン、アセトン、エチレングリコールジメチルエーテル、メチルエチルケトン及びテトラヒドロフランから成る群から選択される１種又は２種以上の混合物である、上記＜１＞に記載の方法。
＜４＞酸性水溶液を加えて反応を停止する工程をさらに含む、上記＜１＞に記載の方法。
＜５＞前記酸性水溶液が、疎水性溶媒に溶解しない色素を含む、上記＜４＞に記載の方法。
＜６＞疎水性溶媒層を採取する工程をさらに含む、上記＜４＞又は＜５＞に記載の方法。
＜７＞試料中のグリセリン脂肪酸エステルの脂肪酸組成を分析する方法であって、上記＜１＞〜＜６＞のいずれか１項に記載の方法によって該試料から脂肪酸アルキルエステルを調製し、それを分析する工程を含むことを特徴とする方法。
＜８＞グリセリン脂肪酸エステルを含む試料から脂肪酸アルキルエステルを調製するためのキットであって、
疎水性溶媒と、該疎水性溶媒及び水の各々に対して混和する両親媒性有機溶媒とを含む溶解液、並びに、
炭素数１〜４のアルコール溶媒と、炭素数１〜４のアルコキシドイオンとを含む反応液、
を含むことを特徴とするキット。
＜９＞前記両親媒性有機溶媒が、１，４−ジオキサン、アセトン、エチレングリコールジメチルエーテル、メチルエチルケトン及びテトラヒドロフランから成る群から選択される１種又は２種以上の混合物である、上記＜８＞に記載のキット。
＜１０＞酸性水溶液を含む停止液をさらに含む、上記＜８＞に記載のキット。
＜１１＞前記酸性水溶液が、疎水性溶媒に溶解しない色素を含む、上記＜１０＞に記載のキット。
＜１２＞疎水性溶媒層を採取するための器具をさらに含む、上記＜１０＞又は＜１１＞に記載のキット。
【発明の効果】
【０００９】
本発明に従えば、加熱器具を必要とせず安全に、かつ短時間で反応を完了することができるため、試料中のグリセリン脂肪酸エステルの脂肪酸組成分析のために脂肪酸アルキルエステルを迅速に調製することができる。
また、本発明に従えば、試料中のグリセリン脂肪酸エステルの脂肪酸組成分析のための脂肪酸アルキルエステルの調製において、容易に採取しやすい分離層を形成することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】薄層クロマトグラフィーによる脂肪酸アルキルエステルの調製の確認の結果を示す。
【図２】ガスクロマトグラフィーによる脂肪酸分析の結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本明細書に記載の「グリセリン脂肪酸エステルを含む試料」とは、トリグリセリド、ジグリセリド、モノグリセリド、グリセロリン脂質若しくはグリセロ糖脂質などのグリセリンと脂肪酸とのエステル結合を含む化合物又はそのような化合物を含む組成物のことをいう。前記試料は、脂肪酸組成分析の対象となり得る。前記試料としては、種々のものを採用することができ、例えば、ヤシ油、大豆油、菜種油などの植物性油、牛脂、魚油、バターなどの動物性油、細菌、酵母、細胞、血液などの生体試料であってもよい。
【００１２】
本明細書に記載の「溶解液」とは、前記グリセリン脂肪酸エステルを含む試料から、該グリセリン脂肪酸エステルを抽出し、溶解する溶媒のことをいう。前記溶解液は、疎水性溶媒と、該疎水性溶媒及び水の各々に対して混和する両親媒性有機溶媒とを含む。ある態様では、前記試料に添加する前に、前記疎水性溶媒と前記両親媒性有機溶媒とを混合して前記溶解液を調製してもよい。別の態様では、前記試料に前記疎水性溶媒を添加し、続いて前記両親媒性有機溶媒を添加して、又は、前記試料に前記両親媒性有機溶媒を添加し、続いて前記疎水性溶媒を添加して、前記グリセリン脂肪酸エスエルの抽出及び溶解の場で前記溶解液を調製してもよい。
【００１３】
前記溶解液のために、前記疎水性溶媒と前記両親媒性有機溶媒とは、体積比で、２０：１〜１：５、好ましくは１０：１〜１：２、より好ましくは４：１〜１：１で使用してもよい。
前記試料に対する前記溶解液の添加量は、該試料中のグリセリン脂肪酸エステル１ｍｇあたり、１０〜１００００μＬ、好ましくは５０〜５０００μＬ、より好ましくは１００〜３０００μＬであってもよい。
前記溶解液によるグリセリン脂肪酸エステルの抽出及び溶解は、４℃〜４０℃、好ましくは１０℃〜３０℃、より好ましくは１５℃から３０℃で、２分未満、好ましくは１分未満、より好ましくは１〜３０秒間、撹拌することにより行ってもよい。
【００１４】
前記「疎水性溶媒」とは、水に混和せず二層に分離する溶媒のことをいう。該疎水性溶媒は、前記試料中のグリセリン脂肪酸エステルを抽出する。該疎水性溶媒としては、種々のものを採用することができ、例えば、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、イソオクタン、ノナン、デカンなどの脂肪族炭化水素溶媒、シクロヘキサン、シクロペンタンなどの脂環式炭化水素溶媒、四塩化炭素、クロロホルム、ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタンなどのハロゲン化炭化水素溶媒、ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素溶媒、ジエチルエーテル、イソプロピルエーテルなどのエーテル溶媒から成る群から選択される１種又は２種以上の混合物であってもよい。
【００１５】
前記「疎水性溶媒及び水の各々に対して混和する両親媒性有機溶媒」とは、溶解液に使用する疎水性溶媒と混ぜ合わせても二層に分離せず、かつ水と混ぜ合わせても二層に分離しない溶媒のことをいう。
従来技術では、後述するエステル交換反応において、抽出したグリセリン脂肪酸エステルを含む疎水性溶媒とアルコキシドイオンを含む炭素数１〜４のアルコール溶媒とが混和しないことが、該反応の効率を悪くしていると考えられる。また、水分を含み得るグリセリン脂肪酸エステルを含む試料中には、前記疎水性溶媒が十分に浸透せず、該グリセリン脂肪酸エステルの抽出効率が低下していると考えられる。
しかしながら、前記両親媒性有機溶媒は、前記疎水性溶媒に対して混和し、かつ前記炭素数１〜４のアルコール溶媒に対しても混和するので、該エステル交換反応の場を提供する仲介役として機能し、該反応の効率を高めることができる。また、前記両親媒性有機溶媒を溶解液として前記疎水性溶媒と併用することで、前記水分を含み得る試料中への該溶解液の浸透性が向上し、前記グリセリン脂肪酸エステルの抽出効率を高め、前記反応の効率を高めることができる。
前記両親媒性有機溶媒としては、疎水性溶媒及び水の各々に対して混和するもの、特に、グリセリン脂肪酸エステルの抽出に用いられる疎水性溶媒及びエステル交換反応に用いられる炭素数１〜４のアルコール溶媒の各々に対して混和する種々の溶媒を採用することができ、例えば、１，４−ジオキサン、アセトン、テトラヒドロフラン、エチレングリコールジメチルエーテル、メチルエチルケトンから成る群から選択される１種又は２種以上の混合物であってもよい。
【００１６】
本明細書に記載の「反応液」は、炭素数１〜４のアルコール溶媒及び炭素数１〜４のアルコキシドイオンを含み、これらは前記グリセリン脂肪酸エステルのエステル交換反応に使用され、アルキル基の供与体となり得る。
一般に、エステル交換反応とは、エステルのアルコキシル基やアシル基を他のアルコキシル基やアシル基と交換する反応をいう。前記反応液を使用した場合には、前記グリセリン脂肪酸エステルのカルボニル基に炭素数１〜４のアルコキシドイオンが付加して、エステル交換反応が起こる。
【００１７】
前記反応液中で、前記アルコキシドイオンの濃度は、０．０５Ｍ〜５Ｍ、好ましくは０．１Ｍ〜４Ｍ、より好ましくは０．５Ｍ〜３Ｍであってもよい。
前記試料に対する前記反応液の添加量は、該試料中のグリセリン脂肪酸エステル１ｍｇあたり、０．５〜１００μＬ、好ましくは１〜２０μＬ、より好ましくは２〜１０μＬであってもよい。
前記エステル交換反応は、４℃〜４０℃、好ましくは１０℃〜３５℃、より好ましくは１５℃から３０℃で、２分未満、好ましくは１分未満、より好ましくは５〜３０秒間、撹拌することにより行ってもよい。
【００１８】
前記「炭素数１〜４のアルコール溶媒」としては、種々のものを採用することができ、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール及びブタノールから選択される１種以上の溶媒であってもよい。
前記「炭素数１〜４のアルコキシドイオン」は、金属アルコキシドに由来してもよく、又は、前記炭素数１〜４のアルコール溶媒の脱プロトン化により生じてもよい。前記金属アルコキシドとしては、アルコキシドイオンを含む種々のものを採用することができ、例えば、アルカリ金属アルコキシド、アルカリ土類金属アルコキシド、好ましくは、ナトリウムアルコキシド、カリウムアルコキシド、より好ましくは、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウムメトキシド、カリウムエトキシドであってもよい。前記炭素数１〜４のアルコール溶媒の脱プロトン化は、強塩基又はアルカリ金属によって行ってもよい。前記強塩基としては、アルコキシドよりも塩基性が強い種々のものを採用することができ、例えば、金属水酸化物、金属アミド、アルキル金属、金属水素化物、好ましくは、アルカリ金属水酸化物、アルカリ金属アミド、アルキル・アルカリ金属、アルカリ金属水素化物、より好ましくは、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、リチウムジイソプロピルアミド、ナトリウムアミド、ブチルリチウム、水素化カリウムであってもよい。脱プロトン化のための前記アルカリ金属としては、例えば、リチウム、ナトリウム、カリウム又はセシウムを採用してもよい。
【００１９】
本明細書に記載の「停止液」は、酸性水溶液を含み、前記エステル交換反応の溶液のｐＨを低下させて該反応を停止する。前記停止液中の酸の濃度は、０．０５Ｍ〜５Ｍ、好ましくは０．１Ｍ〜４Ｍ、より好ましくは０．２Ｍ〜２Ｍであってもよい。前記停止液の添加後の溶液のｐＨは、２〜７、好ましくは３〜７、より好ましくは４．５〜７であってもよい。
前記エステル交換反応の停止は、４℃〜４０℃、好ましくは１０℃〜３５℃、より好ましくは１５℃〜３０℃で、２分未満、好ましくは１分未満、より好ましくは１〜３０秒間、撹拌することにより行ってもよい。
【００２０】
前記「酸性水溶液」としては、前記エステル交換反応の溶液のｐＨを低下させて該反応を停止する種々のものを採用することができ、例えば、クエン酸水溶液、酢酸水溶液であってもよい。前記酸性水溶液を前記エステル交換反応中の溶液に添加すると、該溶液は、脂肪酸アルキルエステルを含む疎水性溶媒層と、それを含まない水層の二層に分離する。
【００２１】
ある態様では、前記酸性水溶液が、前記疎水性溶媒に溶解しない色素を含んでもよい。本明細書に記載の「疎水性溶媒に溶解しない色素」とは、前記溶解液に含まれている疎水性溶媒に溶解せず、前記酸性水溶液中又は前記水層に溶解する色素のことをいう。前記色素は、前記水層を着色し、該水層と前記疎水性溶媒の層との境界を明確にすることができる。前記色素としては、前記疎水性溶媒を着色せず前記酸性水溶液又は前記水層を着色する種々のものを採用することができ、例えば、メチレンブルー、メチルオレンジ、アシッドレッド、サンセットイエローであってもよい。
【００２２】
上層である前記疎水性溶媒層を採取することで、脂肪酸アルキルエステルを取得することができる。前記疎水性溶媒層を採取するための器具としては、種々のものを採用することができ、例えば、シリンジ、ピペットであってもよい。
【００２３】
前記脂肪酸アルキルエステルは、前記試料中のグリセリン脂肪酸エステルの脂肪酸組成の分析のために使用される。前記脂肪酸アルキルエステルを分析して、その脂肪酸部分の化学構造、すなわち前記グリセリン脂肪酸エステルの脂肪酸部分の構造を決定することができる。前記分析は、種々の手段によって行うことができ、例えば、薄層クロマトグラフィー、ガスクロマトグラフィー、液体クロマトグラフィーによって行ってもよい。
以下、実施例により本発明を具体的に説明するが、本発明の範囲はこれら実施例に限定されるものではない。
【実施例】
【００２４】
（実験例１）
この実験例では、疎水性溶媒及び水の各々に対して混和する種々の両親媒性有機溶媒のエステル交換反応の効率に対する影響を、種々の親水性有機溶媒と比較して検討した。【００２５】
試験管中の２０ｍｇのトリグリセリドを含むヤシ油に、以下の表１に示す溶解液を２ｍＬ添加して、５秒間よく撹拌した。次に、前記試験管に、反応液（２Ｍナトリウムメトキシド／メタノール溶液）を１００μＬ加え、１０秒間よく撹拌し、エステル交換反応を行った。続けて、停止液（メチレンブルー含有０．５Ｍ酢酸水溶液）を２ｍＬ加え、５秒間よく撹拌し、前記エステル交換反応を停止した。二層に分離した上層（ヘキサン層）をバイアル瓶に採取した。すべての操作は常温で行い、約１分間で完了した。採取したサンプルを、展開溶媒としてヘキサン：ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル：酢酸（８５：１５：０．５）を使用した薄層クロマトグラフィーにより展開し、ヨウ素で検出した。【００２６】
【表１】
2015155858.tif 000003
【００２７】
前記停止液を加えた後の分離層においては、下層の水層がメチレンブルーによって着色されていたのに対して、上層のヘキサン層は無色透明だった。これによって、上層と下層の間の境界が明確になり、上層の採取を容易に行うことができた。【００２８】
薄層クロマトグラフィーでは、エステル交換反応による脂肪酸メチルエステルの生成を確認することができる。試料が展開されると、原点（１）に近いほうから順に、ジグリセリド（２）、遊離脂肪酸（３）、トリグリセリド（４）及び脂肪酸メチルエステル（５）が検出され得る（図１）。図１に示すように、溶解液中で、疎水性溶媒に加えて該疎水性溶媒及び水の各々に混和する両親媒性溶媒（１，４−ジオキサン、アセトン及びＴＨＦ）を混合した実施例１〜３では、脂肪酸メチルエステルのスポットが検出され、他のスポットは検出されなかった。他方、溶解液中で、疎水性溶媒に加えて親水性有機溶媒（アセトニトリル及びメタノール）を混合した比較例１及び２では、トリグリセリドのスポットが濃く検出され、ジグリセリドのスポットも検出されたが、脂肪酸メチルエステルのスポットは薄かった。したがって、エステル交換反応に１０秒間しか費やしておらず、試料の溶解から反応産物の採取までに約１分間しか費やしていなかったにもかかわらず、実施例１〜３では、前記エステル交換反応がほぼ完全に進行し、その反応効率は比較例１又は２と比較して高いことがわかった。【００２９】
溶解液に使用されたヘキサンは、メトキシドイオンを含むアセトニトリル又はメタノールとは混和しない。他方、実施例１〜３の両親媒性溶媒は、それぞれ化学構造が異なるものであるが、疎水性溶媒及び水の各々に対して混和するという共通の性質を有しており、前記ヘキサン及び前記アセトニトリル又はメタノールの各々に対して混和する。この性質に基づいて、前記両親媒性溶媒は、前記エステル交換反応の場を提供する仲介役として機能し、該反応の効率を高めたと考えられる。また、前記両親媒性有機溶媒は、試料中への前記溶解液の浸透性を向上させることによって、前記グリセリン脂肪酸エステルの抽出効率を高めて、前記エステル交換反応の効率を高めたとも考えられる。
以上より、グリセリン脂肪酸エステルを含む試料を、疎水性溶媒と、該疎水性溶媒及び水の各々に対して混和する両親媒性有機溶媒とを含む溶液に溶解すると、炭素数１〜４のアルコール溶媒の存在下において、グリセリン脂肪酸エステルと炭素数１〜４のアルコキシドイオンとの反応効率が高まることがわかった。【００３０】
（実験例２）
この実験例では、種々のグリセリン脂肪酸エステルを含む試料から調製した脂肪酸アルキルエステルによって、該グリセリン脂肪酸エステルの脂肪酸組成を分析した。【００３１】
ヤシ油、牛脂、魚油及び大豆油を、実験例１の方法に従って処理し、脂肪酸メチルエステルを調製した。これらの試料のグリセリン脂肪酸エステルの抽出及び溶解のためには、実施例１の溶解液を使用した。得られた脂肪酸メチルエステルを、次の条件でガスクロマトグラフィーにより分析した。
機器： 島津 GC2014
カラム： ULBON HR-SS-10, 50 m x 0.25 mm I.D.
カラムオーブン： 160℃ 〜 220℃, Program rate 1.5 ℃/min
検出： FID
キャリアガス： He, 1.0 mL/min
注入： 0.5 μL【００３２】
ガスクロマトグラフィーでは、測定の結果得られるピークに基づいて、脂肪酸メチルエステルの脂肪酸の種類を決定することができる。図２に示すように、本発明に従って調製された脂肪酸メチルエステルに由来する各試料のピークのパターンが明確に検出され、脂肪酸の種類を決定することができた。
以上より、本発明に従って調製された脂肪酸アルキルエステルは、種々の試料中のグリセリン脂肪酸エステルの脂肪酸組成を分析するのに有用であることがわかった。
【図１】
2015155858.tif 000004
【図２】
2015155858.tif 000005
【国際調査報告】
2015155858.tif 000006
2015155858.tif 000007
2015155858.tif 000008
2015155858.tif 000009