(57)【要約】  本発明は、５−ＨＴ２Ｃ受容体作動活性を有する、腹圧性尿失禁の治療剤又は予防剤として有用な化合物を提供することを目的としている。本発明は、下記の化学式に代表される６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体又はその薬学的に許容される酸付加塩を提供する。2016152759.tif 000040
2016152759.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の一般式（Ｉ）で示される６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体又はその薬学的に許容される酸付加塩。
【化１】
2016152759.tif 000039
［式中、Ｒ１は、炭素数１〜６のアルキル基、炭素数１若しくは２のアルキルチオ基、又は、ハロゲン原子、を表し、Ｒ２は、水素原子、炭素数１〜３のアルキルオキシ基、又は、環構成原子数５若しくは６のヘテロアリール基、を表し、Ｒ３は、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を表し、Ｒ１が炭素数１〜６のアルキル基又はハロゲン原子である場合、Ｒ２は、炭素数１〜３のアルキルオキシ基又は環構成原子数５若しくは６のヘテロアリール基である。］
【請求項２】
Ｒ１は、炭素数１〜６のアルキル基、炭素数１若しくは２のアルキルチオ基、又は、塩素原子であり、Ｒ２は、水素原子、炭素数１〜３のアルキルオキシ基、又は、３−チエニル基であり、Ｒ３は、水素原子である、請求項１記載の６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体又はその薬学的に許容される酸付加塩。
【請求項３】
Ｒ１は、ｎ−プロピル基であり、Ｒ２は、メトキシ基又は３−チエニル基であり、Ｒ３は、水素原子である、請求項１記載の６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体又はその薬学的に許容される酸付加塩。
【請求項４】
Ｒ１は、メチルチオ基であり、Ｒ２は、水素原子又はメトキシ基であり、Ｒ３は、水素原子である、請求項１記載の６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体又はその薬学的に許容される酸付加塩。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項記載の６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体又はその薬学的に許容される酸付加塩を有効成分として含有する、医薬。
【請求項６】
請求項１〜４のいずれか一項記載の６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体又はその薬学的に許容される酸付加塩を有効成分として含有する、５−ＨＴ２Ｃ受容体作動薬。
【請求項７】
請求項１〜４のいずれか一項記載の６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体又はその薬学的に許容される酸付加塩を有効成分として含有する、腹圧性尿失禁の治療剤又は予防剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体及びその医薬用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
腹圧性尿失禁とは、くしゃみや咳等で力んだ時、笑った時、走った時又は重いものを持ち上げた時等、日常生活で起こる一過性の腹圧上昇時に尿が漏れてしまう症状を特徴とする疾患である。その原因として、出産、閉経又は加齢等に伴い、尿道閉鎖組織である骨盤底筋群又は外尿道括約筋の、外傷、虚血状態又は除神経等が考えられており、潜在患者数は非常に多いことが報告されている（非特許文献１）。【０００３】
腹圧性尿失禁の治療法としては、運動療法、外科的手術又は薬物療法がある。運動療法である骨盤底筋訓練は、継続的に毎日行うことにより、数週間から数ヶ月後に効果が得られるが（非特許文献２）、訓練を習慣化することができず継続できないことが少なくない（非特許文献３）。外科的手術は、一定の効果があることが示されているが、重症度や患者の意志に依存されるため、実際に手術を受ける患者は少ないのが現状である（非特許文献４）。【０００４】
薬物療法に関しては、腹圧性尿失禁を適応症とする治療剤として、デュロキセチン及びクレンブテロールのみが臨床で用いられている。デュロキセチンは、神経終末のセロトニン及びノルアドレナリンの再取込みを抑制することにより尿道を収縮させ治療効果をもたらす。クレンブテロールは、外尿道括約筋のアドレナリンβ２受容体を刺激し、尿道を収縮させ治療効果をもたらす。しかしながら、これらの薬物による治療割合や治療継続率は低く（非特許文献５）、腹圧性尿失禁に対する新たな治療剤又は予防剤の開発が切望されている。【０００５】
近年、一過性の腹圧上昇時に尿道収縮を促す尿禁制反射機構が存在することが提唱されており（非特許文献６）、セロトニン受容体のひとつである５−ＨＴ２Ｃ受容体を活性化する化合物、すなわち、５−ＨＴ２Ｃ受容体作動薬が尿禁制反射機構を促進的に作用し、腹圧性尿失禁の治療剤又は予防剤として期待できることが報告されている（特許文献１〜３及び非特許文献７）。【０００６】
一方、６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体としては、例えば、特許文献４に記載の化合物が報告されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２０１２−１０７０３２号公報
【特許文献２】国際公開第２０１１／１１１８１７号
【特許文献３】国際公開第２００８／１１７１６９号
【特許文献４】国際公開第２０１０／０８０２５３号
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｉｒｗｉｎら、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｕｒｏｌｏｇｙ  Ｉｎｔ．、２０１１年、第１０８巻、第７号、ｐ．１１３２−１１３９
【非特許文献２】Ｓａｍｐｓｅｌｌｅら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃ，  Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃ，  ａｎｄ  Ｎｅｏｎａｔａｌ  Ｎｕｒｓｉｎｇ、１９９７年、第２６巻、第４号、ｐ．３７５−３８５
【非特許文献３】Ｂｉｓｈｏｐら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃ，  Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃ，  ａｎｄ  Ｎｅｏｎａｔａｌ  Ｎｕｒｓｉｎｇ、１９９２年、第２１巻、第５号、ｐ．４０１−４０６
【非特許文献４】Ｗａｅｔｊｅｎら、ＯＢＳＴＥＴＲＩＣＳ  ＆  ＧＹＮＥＣＯＬＯＧＹ、２００３年、１０１巻、第４号、ｐ．６７１−６７６
【非特許文献５】Ｖｅｌｌａら、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｕｒｏｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ａｎｄ  Ｐｅｌｖｉｃ  Ｆｌｏｏｒ  Ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ、２００８年、第１９巻、第７号、ｐ．９６１−９６４
【非特許文献６】吉村ら、日本薬理学雑誌、２００３年、第１２１巻、第５号、ｐ．２９０−２９８
【非特許文献７】Ｍｉｙａｚａｔｏら、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ.  Ｒｅｎａｌ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、２００９年、第２９７巻、第４号、ｐ．Ｆ１０２４−１０３１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
しかしながら、特許文献１〜４及び非特許文献７には、６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体が５−ＨＴ２Ｃ受容体作動活性を有することについては記載がなく、その可能性についても示唆すらされていない。【００１０】
そこで本発明は、５−ＨＴ２Ｃ受容体作動活性を有し、腹圧性尿失禁の治療剤又は予防剤として有用な化合物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、上記の目的を達成するため鋭意研究を重ねた結果、新規な６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体又はその薬学的に許容される酸付加塩が、強力な５−ＨＴ２Ｃ受容体作動活性を有することを見出し、本発明を完成させるに至った。【００１２】
すなわち、本発明は、以下の一般式（Ｉ）で示される６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体又はその薬学的に許容される酸付加塩を提供する。
【化１】
2016152759.tif 000003
［式中、Ｒ１は、炭素数１〜６のアルキル基、炭素数１若しくは２のアルキルチオ基、又は、ハロゲン原子、を表し、Ｒ２は、水素原子、炭素数１〜３のアルキルオキシ基、又は、環構成原子数５若しくは６のヘテロアリール基、を表し、Ｒ３は、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を表し、Ｒ１が炭素数１〜６のアルキル基又はハロゲン原子である場合、Ｒ２は、炭素数１〜３のアルキルオキシ基又は環構成原子数５若しくは６のヘテロアリール基である。］【００１３】
上記の一般式（Ｉ）で示される６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体又はその薬学的に許容される酸付加塩は、Ｒ１が、炭素数１〜６のアルキル基、炭素数１若しくは２のアルキルチオ基、又は、塩素原子であり、Ｒ２が、水素原子、炭素数１〜３のアルキルオキシ基、又は、３−チエニル基であり、Ｒ３が、水素原子であることが好ましく、Ｒ１が、ｎ−プロピル基であり、Ｒ２が、メトキシ基又は３−チエニル基であり、Ｒ３が、水素原子であることがより好ましく、Ｒ１が、メチルチオ基であり、Ｒ２が、水素原子又はメトキシ基であり、Ｒ３が、水素原子であることがさらに好ましい。【００１４】
また、本発明は、上記の一般式（Ｉ）で示される６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体又はその薬学的に許容される酸付加塩を有効成分として含有する、医薬及び５−ＨＴ２Ｃ受容体作動薬を提供する。【００１５】
上記の医薬は、腹圧性尿失禁の治療剤又は予防剤であることが好ましい。
【発明の効果】
【００１６】
本発明の６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体及びその薬学的に許容される酸付加塩は、強力な５−ＨＴ２Ｃ受容体作動活性を有し、腹圧性尿失禁に対して優れた治療効果又は予防効果を発揮する。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】麻酔下ラット漏出時圧に対する実施例１の化合物の作用を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明の６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体は、以下の一般式（Ｉ）で示されることを特徴としている。
【化２】
2016152759.tif 000004
［式中、Ｒ１は、炭素数１〜６のアルキル基、炭素数１若しくは２のアルキルチオ基、又は、ハロゲン原子、を表し、Ｒ２は、水素原子、炭素数１〜３のアルキルオキシ基、又は、環構成原子数５若しくは６のヘテロアリール基、を表し、Ｒ３は、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を表し、Ｒ１が炭素数１〜６のアルキル基又はハロゲン原子である場合、Ｒ２は、炭素数１〜３のアルキルオキシ基又は環構成原子数５若しくは６のヘテロアリール基である。］
【００１９】
「炭素数１〜６のアルキル基」とは、炭素数１〜６個の直鎖状又は炭素数３〜６個の分岐鎖状の飽和炭化水素基を意味し、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基又はｎ−ヘキシル基が挙げられる。
【００２０】
「炭素数１又は２のアルキルチオ基」とは、メチルチオ基又はエチルチオ基を意味する。
【００２１】
「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子を意味する。
【００２２】
「炭素数１〜３のアルキルオキシ基」とは、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロピルオキシ基又はイソプロピルオキシ基を意味する。
【００２３】
「環構成原子数５又は６のヘテロアリール基」とは、窒素原子、酸素原子及び硫黄原子からなる群から選択される同一又は異なる原子を環構成原子として１〜４個含む、環構成原子数が５又は６の複素芳香族基を意味し、例えば、ピロリル基、フラニル基、チエニル基、ピラゾリル基、イソキサゾリル基、イミダゾリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、ピリジル基、ピリダジル基、ピリミジル基又はピラジル基が挙げられる。
【００２４】
上記の一般式（Ｉ）で示される６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体において、Ｒ１が、炭素数１〜６のアルキル基、炭素数１若しくは２のアルキルチオ基、又は、塩素原子であり、Ｒ２が、水素原子、炭素数１〜３のアルキルオキシ基、又は、３−チエニル基であり、Ｒ３が、水素原子であることが好ましく、Ｒ１が、ｎ−プロピル基であり、Ｒ２が、メトキシ基又は３−チエニル基であり、Ｒ３が、水素原子であることがより好ましく、Ｒ１が、メチルチオ基であり、Ｒ２が、水素原子又はメトキシ基であり、Ｒ３が、水素原子であることがさらに好ましい。
【００２５】
上記の一般式（Ｉ）で示される６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体の「薬学的に許容される酸付加塩」としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩若しくはリン酸塩等の無機酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、グルタル酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、マンデル酸塩、マレイン酸塩、安息香酸塩若しくはフタル酸塩等の有機カルボン酸塩又はメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩若しくはカンファースルホン酸塩等の有機スルホン酸塩が挙げられるが、塩酸塩、臭化水素酸塩、トリフルオロ酢酸塩、酒石酸塩又はメタンスルホン酸塩が好ましく、塩酸塩又はトリフルオロ酢酸塩がより好ましい。
【００２６】
上記の一般式（Ｉ）で示される６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体のうち、好ましい具体例を表１に示す。ただし、これらは本発明を限定するものではない。
【００２７】
【表１−１】
2016152759.tif 000005
【００２８】
【表１−２】
2016152759.tif 000006
【００２９】
上記の一般式（Ｉ）で示される６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体は、その基本骨格や置換基の種類に由来する特徴に基づいた適切な方法で製造することができる。なお、この製造に使用する出発物質、試薬及び製造中間体のうち製造法を示していない化合物は、一般に購入することができる。
【００３０】
（製造法１）
上記の一般式（Ｉ）で示される６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体は、例えば、以下のスキーム１に示すように、酸存在下、一般式（ＩＩ）で示される６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体の脱保護反応により製造することができる。
【化３】
2016152759.tif 000007
［式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、上記定義に同じであり、Ｂｏｃは、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基を表す。］
【００３１】
脱保護反応に用いる酸としては、例えば、塩化水素、硫酸、ｐ−トルエンスルホン酸又はトリフルオロ酢酸が挙げられるが、塩化水素又はトリフルオロ酢酸が好ましく、塩化水素がより好ましい。
【００３２】
脱保護反応に用いる酸の当量は、上記の一般式（ＩＩ）で示される６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体に対して５〜１０００当量が好ましく、１０〜４００当量がより好ましい。
【００３３】
脱保護反応に用いる溶媒としては、例えば、テトラヒドロフラン（以下、ＴＨＦ）、１，４−ジオキサン、アセトニトリル、ジクロロメタン、メタノール又はエタノールが挙げられるが、１，４−ジオキサン、ジクロロメタン又はメタノールが好ましく、１，４−ジオキサンがより好ましい。
【００３４】
脱保護反応における、上記の一般式（ＩＩ）で示される６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体の反応開始時の濃度は、０．１ｍｍｏｌ／Ｌ〜５ｍｏｌ／Ｌが好ましく、１ｍｍｏｌ／Ｌ〜１ｍｏｌ／Ｌがより好ましい。
【００３５】
脱保護反応の反応温度は、０〜６０℃が好ましく、２０〜４０℃がより好ましい。
【００３６】
脱保護反応の反応時間は、反応温度等の条件に応じて適宜選択されるが、１０分間〜７２時間が好ましく、３０分間〜２４時間がより好ましい。
【００３７】
（製造法２）
上記の一般式（ＩＩ）で示される６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体のうち、化合物（ＩＩ−ａ）は、例えば、以下のスキーム２に示すように、３工程で製造することができる。
【化４】
2016152759.tif 000008
［式中、Ｂｏｃは、上記定義に同じであり、Ｘは、臭素原子又は塩素原子を表し、ＰＧは、保護基を表し、Ｒ４は、メチル基又はエチル基を表す。］
【００３８】
（工程１）
６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体（ＩＶ）は、例えば、６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体（Ｖ）に保護基を導入して製造することができる。
保護基の導入は、保護基の種類によって異なるが、例えば、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  第３版（Ｇｒｅｅｎら、１９９９年、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．）に記載の方法又はこれに準ずる方法に従って行うことができる。
【００３９】
（工程２）
６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体（ＩＩＩ）は、例えば、上記の６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体（ＩＶ）のナトリウムチオアルコキシド（Ｌ−Ｉ）を用いたチオエーテル化反応により製造することができる。
【００４０】
チオエーテル化反応に用いる上記のナトリウムチオアルコキシド（Ｌ−Ｉ）の当量は、上記の６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体（ＩＶ）に対して１〜１０当量が好ましく、１．１〜５当量がより好ましい。
【００４１】
チオエーテル化反応に用いる溶媒としては、例えば、ＴＨＦ、１，４−ジオキサン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（以下、ＤＭＦ）又はＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（以下、ＤＭＡ）が挙げられるが、ＤＭＦ又はＤＭＡが好ましく、ＤＭＡがより好ましい。
【００４２】
チオエーテル化反応における、上記の６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体（ＩＶ）の反応開始時の濃度は、０．１ｍｍｏｌ／Ｌ〜１０ｍｏｌ／Ｌが好ましく、０．０１〜１ｍｏｌ／Ｌがより好ましい。
【００４３】
チオエーテル化反応の反応温度は、０〜１１０℃が好ましく、６０〜１００℃がより好ましい。
【００４４】
チオエーテル化反応の反応時間は、反応温度等の条件に応じて適宜選択されるが、１０分間〜７２時間が好ましく、３０分間〜４８時間がより好ましい。
【００４５】
（工程３）
上記の６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体（ＩＩ−ａ）は、例えば、上記の６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体（ＩＩＩ）の脱保護により製造することができる。
【００４６】
保護基の脱保護は、保護基の種類によって異なるが、例えば、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  第３版（Ｇｒｅｅｎら、１９９９年、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．）に記載の方法又はこれに準ずる方法に従って行うことができる。
【００４７】
（製造法３）
上記の６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体（Ｖ）は、例えば、以下のスキーム３に示すように、２工程で製造することができる。
【化５】
2016152759.tif 000009
［式中、Ｘ及びＢｏｃは、上記定義に同じである。］
【００４８】
（工程１）
ヒドラゾノピペリジン誘導体（ＶＩ）は、例えば、ヒドラジニルピリジン誘導体（ＶＩＩ）とｔｅｒｔ−ブチル  ４−オキソピペリジン−１−カルボキシレート（ＶＩＩＩ）とのヒドラゾン形成反応により製造することができる。
【００４９】
ヒドラゾン形成反応に用いる上記のｔｅｒｔ−ブチル  ４−オキソピペリジン−１−カルボキシレート（ＶＩＩＩ）の当量は、上記のヒドラジニルピリジン誘導体（ＶＩＩ）に対して１〜３当量が好ましく、１〜１．５当量がより好ましい。
【００５０】
ヒドラゾン形成反応に用いる溶媒としては、例えば、ＴＨＦ、１，４−ジオキサン、トルエン、メタノール又はエタノールが挙げられるが、メタノール又はエタノールが好ましい。
【００５１】
ヒドラゾン形成反応における、上記のヒドラジニルピリジン誘導体（ＶＩＩ）の反応開始時の濃度は、０．１ｍｍｏｌ／Ｌ〜１０ｍｏｌ／Ｌが好ましく、０．１〜１ｍｏｌ／Ｌがより好ましい。
【００５２】
ヒドラゾン形成反応の反応温度は、０〜６０℃が好ましく、２０〜４０℃がより好ましい。
【００５３】
ヒドラゾン形成反応の反応時間は、反応温度等の条件に応じて適宜選択されるが、１０分間〜７２時間が好ましく、３０分間〜４８時間がより好ましい。
【００５４】
（工程２）
上記の６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体（Ｖ）は、例えば、酸存在下、上記のヒドラゾノピペリジン誘導体（ＶＩ）のインドール形成反応後、塩基存在下、Ｂｏｃ保護反応により製造することができる。
【００５５】
インドール形成反応に用いる酸としては、例えば、塩化水素、硫酸、ｐ−トルエンスルホン酸、リン酸、ポリリン酸又は酢酸が挙げられるが、塩化水素又はポリリン酸が好ましく、ポリリン酸がより好ましい。
【００５６】
インドール形成反応に用いる酸の当量は、上記のヒドラゾノピペリジン誘導体（ＶＩ）に対して２〜１０００当量が好ましく、５〜４００当量がより好ましい。
【００５７】
インドール形成反応に用いる溶媒としては、例えば、ＴＨＦ、１，４−ジオキサン、アセトニトリル又はトルエンが挙げられるが、トルエンが好ましい。
【００５８】
インドール形成反応における、上記のヒドラゾノピペリジン誘導体（ＶＩ）の反応開始時の濃度は、０．１ｍｍｏｌ／Ｌ〜５ｍｏｌ／Ｌが好ましく、０．０１〜１ｍｏｌ／Ｌがより好ましい。
【００５９】
インドール形成反応の反応温度は、２０〜２００℃が好ましく、８０〜１８０℃がより好ましい。
【００６０】
インドール形成反応の反応時間は、反応温度等の条件に応じて適宜選択されるが、１時間〜７２時間が好ましく、３時間〜４８時間がより好ましい。
【００６１】
Ｂｏｃ保護反応に用いる塩基としては、例えば、水素化ナトリウム、ｔｅｒｔ−ブトキシナトリウム、ｔｅｒｔ−ブトキシカリウム、水酸化ナトリウム、トリエチルアミン、炭酸ナトリウム又は炭酸カリウムが挙げられるが、炭酸ナトリウム又は炭酸カリウムが好ましい。
【００６２】
Ｂｏｃ保護反応に用いる塩基の当量は、上記のヒドラゾノピペリジン誘導体（ＶＩ）に対して１〜１０当量が好ましく、１．５〜５当量がより好ましい。
【００６３】
Ｂｏｃ保護反応に用いる二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（以下、（Ｂｏｃ）２Ｏ）の当量は、上記のヒドラゾノピペリジン誘導体（ＶＩ）に対して１〜５当量が好ましく、１．１〜３当量がより好ましい。
【００６４】
Ｂｏｃ保護反応に用いる溶媒としては、例えば、ＴＨＦ、１，４−ジオキサン、ジクロロメタン、ＤＭＦ、メタノール、エタノール、イソプロパノール又は水が挙げられるが、イソプロパノール又は水が好ましく、これらを混合して用いてもよい。
【００６５】
Ｂｏｃ保護反応における、上記のヒドラゾノピペリジン誘導体（ＶＩ）の反応開始時の濃度は、０．１ｍｍｏｌ／Ｌ〜５ｍｏｌ／Ｌが好ましく、０．０１〜１ｍｏｌ／Ｌがより好ましい。
【００６６】
Ｂｏｃ保護反応の反応温度は、０〜６０℃が好ましく、２０〜４０℃がより好ましい。
【００６７】
Ｂｏｃ保護反応の反応時間は、反応温度等の条件に応じて適宜選択されるが、１０分間〜７２時間が好ましく、３０分間〜２４時間がより好ましい。
【００６８】
上記の一般式（Ｉ）で示される６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体の薬学的に許容される酸付加塩は、例えば、上記の一般式（Ｉ）で示される６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体と酸とを混合することによる塩化反応により製造することができる。
【００６９】
塩化反応に用いる酸としては、例えば、塩化水素、硫酸、硝酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸若しくはリン酸等の無機酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、乳酸、クエン酸、シュウ酸、グルタル酸、リンゴ酸、酒石酸、フマル酸、マンデル酸、マレイン酸、安息香酸若しくはフタル酸等の有機カルボン酸又はメタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸若しくはカンファースルホン酸等の有機スルホン酸が挙げられる。
【００７０】
塩化反応は、一般に溶媒中で行われ、反応を阻害しない溶媒が適宜選択される。このような溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール若しくはイソプロパノール等の脂肪族アルコール類、ジエチルエーテル、ＴＨＦ、１，４−ジオキサン若しくはエチレングリコールジメチルエーテル等のエーテル類、ＤＭＦ若しくはＮ−メチルピロリドン等のアミド類、ジメチルスルホキシド等のスルホキシド類、アセトニトリル若しくはプロピオニトリル等の脂肪族ニトリル類、アセトン若しくは２−ブタノン等のケトン類、酢酸エチル、酢酸メチル若しくは酢酸ｎ−ブチル等のエステル類又は水が挙げられるが、１，４−ジオキサンが好ましい。
【００７１】
本発明の医薬及び５−ＨＴ２Ｃ受容体作動薬は、上記の一般式（Ｉ）で示される６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体又はその薬学的に許容される酸付加塩を有効成分として含有することを特徴としている。上記の医薬は、腹圧性尿失禁の治療剤又は予防剤であることが好ましい。
【００７２】
上記の一般式（Ｉ）で示される６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体又はその薬学的に許容される酸付加塩が、５−ＨＴ２Ｃ受容体作動活性を有することは、例えば、Ｊｅｒｍａｎらの文献（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、２００１年、第４１４巻、ｐ．２３−３０）に準じた方法により、ヒト５−ＨＴ２Ｃ受容体を発現した細胞を用いたｉｎ  ｖｉｔｒｏの実験系で確認できる。具体的には、例えば、ヒト５−ＨＴ２Ｃ受容体をヒト胎児腎臓由来のＨＥＫ―２９３細胞に強制発現させ、化合物の作動活性による細胞内カルシウム濃度の上昇を測定することで確認できる。
【００７３】
また、上記の一般式（Ｉ）で示される６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体又はその薬学的に許容される酸付加塩が、腹圧性尿失禁の治療又は予防に有効であることは、蓄尿期の尿道抵抗を示す漏出時圧（Ｌｅａｋ  Ｐｏｉｎｔ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ）を測定することで確認できる。
【００７４】
漏出時圧（Ｌｅａｋ  Ｐｏｉｎｔ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ）とは、排尿筋の収縮がない状態において、尿漏れが生じた際の膀胱内圧のことであり、膀胱内圧の上昇に抵抗できる最大尿道抵抗を示す。動物モデルにおいて、漏出時圧を上昇させる作用を有する薬剤は腹圧性尿失禁の治療又は予防に有効であることを示している。
【００７５】
漏出時圧を測定する方法として例えば、Ｌｅｅらの文献（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｕｒｏｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ  Ｊｏｕｒｎａｌ、２００３年、第１４巻、第１号、ｐ．３１−３７）、又は、Ｍｉｙａｚａｔｏらの文献（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ．Ｒｅｎａｌ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、２００８年、第２９５巻、第１号、ｐ．Ｆ２６４−２７１）に準じた方法が挙げられ、腹圧性尿失禁の治療薬であるデュロキセチンが、漏出時圧を上昇させることが報告されている（Ｍｉｙａｚａｔｏら、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ.  Ｒｅｎａｌ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、２００８年、第２９５巻、第１号、ｐ．Ｆ２６４−２７１）。
【００７６】
上記の一般式（Ｉ）で示される６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体又はその薬学的に許容される酸付加塩は、哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、イヌ、サル、ウシ、ヒツジ又はヒト）、特にヒトに対して投与した場合に、有用な医薬（特に、腹圧性尿失禁の治療剤又は予防剤）として用いることができる。
【００７７】
上記の一般式（Ｉ）で示される６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体又はその薬学的に許容される酸付加塩を医薬として臨床で使用する際には、上記の一般式（Ｉ）で示される６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体又はその薬学的に許容される酸付加塩をそのまま用いてもよいし、賦形剤、安定化剤、保存剤、緩衝剤、溶解補助剤、乳化剤、希釈剤又は等張化剤等の添加剤が適宜混合されていてもよい。また、上記の医薬は、これらの薬剤用担体を適宜用いて、通常の方法によって製造することができる。上記の医薬の投与形態としては、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤若しくはシロップ剤等による経口剤、吸入剤、注射剤、座剤若しくは液剤等による非経口剤又は局所投与をするための軟膏剤、クリーム剤若しくは貼付剤等が挙げられる。また、公知の持続型製剤としても構わない。
【００７８】
上記の医薬は、上記の一般式（Ｉ）で示される６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体又はその薬学的に許容される酸付加塩を、０．００００１〜９０重量％含有することが好ましく、０．０１〜７０重量％含有することがより好ましい。用量は、患者の症状、年齢及び体重、並びに投与方法に応じて適宜選択されるが、成人に対する有効成分量として、注射剤の場合１日０．１μｇ〜１ｇ、経口剤の場合１μｇ〜１０ｇ、貼付剤の場合１μｇ〜１０ｇが好ましく、それぞれ１回又は数回に分けて投与することができる。
【００７９】
上記の医薬の薬学的に許容される担体又は希釈剤としては、例えば、結合剤（シロップ、ゼラチン、アラビアゴム、ソルビトール、ポリビニルクロリド又はトラガント等）、賦形剤（砂糖、乳糖、コーンスターチ、リン酸カルシウム、ソルビトール又はグリシン等）又は滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、タルク又はシリカ等）を挙げることができる。
【００８０】
上記の医薬は、その治療若しくは予防効果の補完又は増強あるいは投与量の低減のために、他の薬剤と適量配合又は併用して使用しても構わない。
【実施例】
【００８１】
以下、実施例を示して本発明を具体的に詳述するが、本発明はこれらに限定されるものではない。【００８２】
以下の記載において、ＮＭＲデータ中に示される溶媒名は、測定に使用した溶媒を示している。また、４００ＭＨｚ  ＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＶＡＮＣＥ  ４００型核磁気共鳴装置（Ｂｒｕｋｅｒ社）を用いて測定した。ケミカルシフトは、テトラメチルシランを基準として、δ（単位：ｐｐｍ）で表し、シグナルはそれぞれｓ（一重線）、ｄ（二重線）、ｔ（三重線）、ｍ（多重線）、ｂｒｓ（幅広）で表した。ＥＳＩ−ＭＳスペクトルは、ＬＣＭＳ−２０１０ＥＶ（島津製作所）を用いて測定した。シリカゲルは、ＴＬＣ  Ｓｉｌｉｃａ  ｇｅｌ  ６０  Ｆ２５４（Ｍｅｒｃｋ  ＫＧａＡ社）を用いた。【００８３】
（実施例１）２−（メチルチオ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン塩酸塩の合成：
〔ステップ１〕ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（６−ブロモピリジン−２−イル）ヒドラゾノ）ピペリジン−１−カルボキシレートの合成：
【化６】
2016152759.tif 000010
２−ブロモ−６−ヒドラジニルピリジン（１０ｇ、５３ｍｍｏｌ）のメタノール（１００ｍＬ）溶液に、ｔｅｒｔ−ブチル  ４−オキソピペリジン−１−カルボキシレート（１１ｇ、５３ｍｍｏｌ）を室温で加え、室温で１６時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、得られた濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液：酢酸エチル／ｎ−ヘキサン）にて精製することで、ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（６−ブロモピリジン−２−イル）ヒドラゾノ）ピペリジン−１−カルボキシレートを灰色がかった白色固体として得た（１２ｇ、収率６２％）。
ESI-MS m/z 369 [M+H]+.【００８４】
〔ステップ２〕ｔｅｒｔ−ブチル  ２−ブロモ−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレートの合成：
【化７】
2016152759.tif 000011
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（６−ブロモピリジン−２−イル）ヒドラゾノ）ピペリジン−１−カルボキシレート（５．０ｇ、１４ｍｍｏｌ）のトルエン（５０ｍＬ）溶液に、ポリリン酸（２５ｇ）を室温で加え、１６０℃で２４時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、トルエンを除去した後（デカンテーション）、残渣にｐＨが９．０以上になるまで、炭酸ナトリウム水溶液を加えた。析出した固体をろ過し、室温で減圧乾燥することで中間体を得た。得られた中間体のイソプロパノール（１０ｍＬ）、水（１０ｍＬ）溶液に炭酸カリウム（５．５ｇ、４０ｍｍｏｌ）、（Ｂｏｃ）２Ｏ（５．２ｇ、２４ｍｍｏｌ）を室温で加え、室温で３時間撹拌した。反応混合物を濃縮後、酢酸エチルで抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮した。得られた濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液：酢酸エチル／ｎ−ヘキサン）にて精製することで、ｔｅｒｔ−ブチル  ２−ブロモ−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレートを灰色がかった白色固体として得た（１．４ｇ、収率２９％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 11.71 (1H, brs), 7.83 (1H, d, J = 8.0 Hz), 7.20 (1H, d, J = 8.0 Hz), 4.84-4.53 (2H, m), 3.73-3.68 (2H, m), 2.79-2.74 (2H, m), 1.43 (9H, s).
ESI-MS m/z 352 [M+H]+.【００８５】
〔ステップ３〕ｔｅｒｔ−ブチル  ２−ブロモ−９−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレートの合成：
【化８】
2016152759.tif 000012
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−ブロモ−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレート（５００ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３．０ｍＬ）溶液に、水素化ナトリウム（１１０ｍｇ、２．８ｍｍｏｌ）を０℃で加え、０℃で１０分間撹拌した後、２−（トリメチルシリル）エトキシメチルクロリド（０．３６ｍＬ、２．１ｍｍｏｌ）を０℃で加え、室温で１時間撹拌した。反応混合物に水（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（２５ｍＬ×２）で抽出した。有機層をあわせ、硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮した。得られた濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液：メタノール／ジクロロメタン）にて精製することで、ｔｅｒｔ−ブチル  ２−ブロモ−９−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレートを白色固体として得た（５４０ｍｇ、収率７９％）。
ESI-MS m/z 482 [M+H]+.【００８６】
〔ステップ４〕ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（メチルチオ）−９−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレートの合成：
【化９】
2016152759.tif 000013
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−ブロモ−９−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレート（３００ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）のＤＭＡ（１．０ｍＬ）溶液に、ナトリウムチオメトキシド（１３０ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）を室温で加え、封管し、８０℃で３０分間撹拌した。反応混合物にジクロロメタン（３０ｍＬ）を室温で加え、水（１０ｍＬ×２）、飽和食塩水（１０ｍＬ）で順次洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮した。得られた濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液：１５％酢酸エチル／ｎ−ヘキサン）にて精製することで、ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（メチルチオ）−９−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレートをガム状固体として得た（３００ｍｇ、収率９０％）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.55 (1H, d, J = 8.2 Hz), 6.96 (1H, d, J = 8.2 Hz), 5.59 (2H, s), 4.57 (2H, brs), 3.84 (2H, brs), 3.52 (2H, t, J= 8.2 Hz), 2.95 (2H, brs), 2.62 (3H, s), 1.50 (9H, s), 0.90 (2H, t, J = 8.2 Hz), -0.07 (9H, s).
ESI-MS m/z 450 [M+H]+.【００８７】
〔ステップ５〕ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（メチルチオ）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレートの合成：
【化１０】
2016152759.tif 000014
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（メチルチオ）−９−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレート（３００ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（８．０ｍＬ）溶液に、テトラブチルアンモニウムフルオリド（以下、ＴＢＡＦ）（２ｍｏｌ／Ｌ  ＴＨＦ溶液、４．０ｍＬ）を室温で加え、６０℃で５時間撹拌した。反応混合物に水を加え、酢酸エチル（２０ｍＬ）で抽出した。有機層を水（１０ｍＬ×２）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮した。得られた濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液：２５％酢酸エチル／ｎ−ヘキサン）にて精製することで、ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（メチルチオ）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレートを灰色がかった白色固体として得た（１７０ｍｇ、収率８１％）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.37 (1H, brs), 7.58 (1H, d, J = 8.2 Hz), 6.96 (1H, d, J = 8.1 Hz), 4.57 (2H, brs), 3.80 (2H, brs), 2.81 (2H, brs), 2.59 (3H, s), 1.50 (9H, s).
ESI-MS m/z 320 [M+H]+.【００８８】
〔ステップ６〕２−（メチルチオ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン塩酸塩の合成：
【化１１】
2016152759.tif 000015
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（メチルチオ）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレート（１７０ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）に、４規定塩化水素１，４−ジオキサン溶液（３．６ｍＬ）を室温で加え、室温で２時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、濃縮残渣にアセトニトリルを室温で加えた。析出した固体をろ取し、室温で減圧乾燥することで、２−（メチルチオ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン塩酸塩（以下、実施例１の化合物）を灰色がかった白色固体として得た（１２５ｍｇ、収率９１％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 11.66 (1H, brs), 9.47 (2H, brs), 7.78 (1H, d, J = 8.2 Hz), 6.96 (1H, d, J = 8.2 Hz), 4.25 (2H, brs), 3.49-3.40 (2H, m), 2.99 (2H, t, J = 6.0 Hz), 2.53 (3H, s).
ESI-MS m/z 220 [M+H]+.【００８９】
（実施例２）９−メチル−２−（メチルチオ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン塩酸塩の合成：
〔ステップ１〕ｔｅｒｔ−ブチル  ９−メチル−２−（メチルチオ）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレートの合成：
【化１２】
2016152759.tif 000016
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（メチルチオ）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレート（５０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．５ｍＬ）溶液に、水素化ナトリウム（１２ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を０℃で加え、０℃で２０分間撹拌した。続いて、ヨウ化メチル（０．０２５ｍＬ、０．３９ｍｍｏｌ）を０℃で加え、室温で１時間撹拌した。反応混合物に氷水を加え、１０分間撹拌した後、酢酸エチル（１０ｍＬ×２）で抽出した。有機層をあわせ、飽和食塩水（５ｍＬ×２）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮した。得られた濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液：１０％酢酸エチル／ｎ−ヘキサン）にて精製することで、ｔｅｒｔ−ブチル  ９−メチル−２−（メチルチオ）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレートを灰色がかった白色固体として得た（２５ｍｇ、収率８９％）。
ESI-MS m/z 334 [M+H]+.【００９０】
〔ステップ２〕９−メチル−２−（メチルチオ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン塩酸塩の合成：
【化１３】
2016152759.tif 000017
ｔｅｒｔ−ブチル  ９−メチル−２−（メチルチオ）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレート（２０ｍｇ、０．０６０ｍｍｏｌ）に、４規定塩化水素１，４−ジオキサン溶液（０．４０ｍＬ）を室温で加え、室温で２時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、濃縮残渣にアセトニトリルを室温で加えた。析出した固体をろ取し、室温で減圧乾燥することで、９−メチル−２−（メチルチオ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン塩酸塩（以下、実施例２の化合物）を灰色固体として得た（１１ｍｇ、収率６８％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 9.45 (2H, brs), 7.81 (1H, d, J = 8.2 Hz), 6.91 (1H, d, J = 8.2 Hz), 4.28 (2H, brs), 3.69 (3H, s), 3.54-3.46 (2H, m), 3.07 (2H, t, J= 5.9 Hz), 2.58 (3H, s).
ESI-MS m/z 234 [M+H]+.【００９１】
（実施例３）４−メトキシ−２−プロピル−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン塩酸塩の合成：
〔ステップ１〕２，６−ジブロモ−４−メトキシピリジンの合成：
【化１４】
2016152759.tif 000018
水素化ナトリウム（２１０ｍｇ、５．３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２．０ｍＬ）溶液に、無水メタノール（０．２０ｍＬ）を０℃で加え、０℃で２時間撹拌した。この反応混合物に、２，６−ジブロモ−４−ニトロピリジン（１．０ｇ、３．５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３．０ｍＬ）溶液を０℃で加え、室温で３時間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（１００ｍＬ×２）で抽出した。有機層をあわせ、硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮した。得られた濃縮物を再結晶（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン）にて精製することで、２，６−ジブロモ−４−メトキシピリジンを白色固体として得た（６３０ｍｇ、収率６６％）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 6.98 (2H, s), 3.85 (3H, s).
ESI-MS m/z 265 [M+H]+.【００９２】
〔ステップ２〕２−ブロモ−６−ヒドラジニル−４−メトキシピリジンの合成：
【化１５】
2016152759.tif 000019
２，６−ジブロモ−４−メトキシピリジン（５３０ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）のイソプロパノール（１０ｍＬ）溶液に、ヒドラジン一水和物（０．５０ｍＬ、１６ｍｍｏｌ）を室温で加え、１１０℃で２４時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、濃縮後、濃縮残渣をクロロホルムに溶解した。この反応混合物にｎ−ヘキサンを加え、析出した固体をろ過し、室温で減圧乾燥することで、２−ブロモ−６−ヒドラジニル−４−メトキシピリジンを灰色がかった白色固体として得た（３７０ｍｇ、収率８４％）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 6.44 (1H, d, J = 2.0 Hz), 6.21 (1H, d, J = 2.0 Hz), 5.93 (1H, brs), 3.79 (3H, s), 3.75 (2H, brs).
ESI-MS m/z 217 [M+H]+.【００９３】
〔ステップ３〕ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（６−ブロモ−４−メトキシピリジン−２−イル）ヒドラゾノ）ピペリジン−１−カルボキシレートの合成：
【化１６】
2016152759.tif 000020
２−ブロモ−６−ヒドラジニル−４−メトキシピリジン（３５０ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）のエタノール（８．０ｍＬ）溶液に、ｔｅｒｔ−ブチル  ４−オキソピペリジン−１−カルボキシレート（３５０ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）を室温で加え、室温で１時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、得られた濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液：酢酸エチル／ｎ−ヘキサン）にて精製することで、ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（６−ブロモ−４−メトキシピリジン−２−イル）ヒドラゾノ）ピペリジン−１−カルボキシレートを黄色オイルとして得た（６２０ｍｇ、収率９８％）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.76 (1H, s), 6.63 (1H, d, J = 2.0 Hz), 3.84 (3H, s), 3.56 (4H, t, J = 6.2 Hz), 2.50 (2H, t, J = 6.2 Hz), 2.37 (2H, t, J = 6.0 Hz), 1.48 (9H, s).
ESI-MS m/z 399 [M+H]+.【００９４】
〔ステップ４〕ｔｅｒｔ−ブチル  ２−ブロモ−４−メトキシ−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレートの合成：
【化１７】
2016152759.tif 000021
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（６−ブロモ−４−メトキシピリジン−２−イル）ヒドラゾノ）ピペリジン−１−カルボキシレート（２２０ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）のトルエン（６．０ｍＬ）溶液に、ポリリン酸（３．０ｇ）を室温で加え、１６０℃で３６時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、トルエンを除去した後（デカンテーション）、残渣にｐＨが９．０以上になるまで、炭酸ナトリウム水溶液を加えた。この反応混合物にイソプロパノール（１０ｍＬ）、（Ｂｏｃ）２Ｏ（１８０ｍｇ、０．８１ｍｍｏｌ）を室温で加え、室温で１時間撹拌した。反応混合物を濃縮後、クロロホルム（５０ｍＬ）で抽出した。有機層を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮した。得られた濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液：酢酸エチル／ｎ−ヘキサン）にて精製することで、ｔｅｒｔ−ブチル  ２−ブロモ−４−メトキシ−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレートを白色固体として得た（６０ｍｇ、収率２９％）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 9.00 (1H, brs), 6.64 (1H, s), 4.69 (2H, brs), 3.92 (3H, s), 3.76 (2H, t, J = 6.4 Hz), 2.81 (2H, t, J= 6.4 Hz), 1.50 (9H, s).
ESI-MS m/z 382 [M+H]+. 【００９５】
〔ステップ５〕ｔｅｒｔ−ブチル  ４−メトキシ−２−プロピル−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレートの合成：
【化１８】
2016152759.tif 000022
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−ブロモ−４−メトキシ−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレート（１００ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）のトルエン（８．０ｍＬ）溶液に、ｎ−プロピルボロン酸（３４ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（６．０ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）、２規定炭酸ナトリウム水溶液（０．３９ｍＬ、０．７８ｍｍｏｌ）、トリシクロヘキシルホスフィン（１１ｍｇ、０．０３９ｍｍｏｌ）を室温で加え、１２０℃で２時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、水（４０ｍＬ）を加え、ジクロロメタン（５０ｍＬ×２）で抽出した。有機層をあわせ、硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮した。得られた濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液：酢酸エチル／ｎ−ヘキサン）にて精製することで、ｔｅｒｔ−ブチル  ４−メトキシ−２−プロピル−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレートを淡褐色固体として得た（４６ｍｇ、収率５１％）。
ESI-MS m/z 346 [M+H]+. 【００９６】
〔ステップ６〕４−メトキシ−２−プロピル−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン塩酸塩の合成：
【化１９】
2016152759.tif 000023
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−メトキシ−２−プロピル−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレート（９．０ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ）のメタノール（４．０ｍＬ）溶液に、４規定塩化水素１，４−ジオキサン溶液（０．１３ｍＬ）を室温で加え、室温で２時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、濃縮残渣を水、アセトニトリルに溶解した後、凍結乾燥することで、４−メトキシ−２−プロピル−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン塩酸塩（以下、実施例３の化合物）を淡褐色固体として得た（７．１ｍｇ、収率９７％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.32-11.98 (1H, m), 9.52-9.41 (2H, m), 6.84 (1H, brs), 4.31-4.26 (2H, brs), 4.01 (3H, s), 3.17-3.10 (2H, brs), 3.05-3.00 (2H, m), 2.89-2.77 (2H, m), 1.81-1.68 (2H, m), 0.92 (3H, t, J = 6.7 Hz).
ESI-MS m/z 246 [M+H]+.【００９７】
（実施例４）４−メトキシ−２−（メチルチオ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン塩酸塩の合成：
〔ステップ１〕ｔｅｒｔ−ブチル  ４−メトキシ−２−（メチルチオ）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレートの合成：
【化２０】
2016152759.tif 000024
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−ブロモ−４−メトキシ−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレート（９９ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）のＤＭＡ（０．４２ｍＬ）溶液に、ナトリウムチオメトキシド（５５ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ）を室温で加え、封管し、８０℃で３０分間撹拌した。反応混合物にジクロロメタン（１５ｍＬ）を室温で加え、水（５ｍＬ×２）、飽和食塩水（５ｍＬ）で順次洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮した。得られた濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液：酢酸エチル／ｎ−ヘキサン）にて精製することで、ｔｅｒｔ−ブチル  ４−メトキシ−２−（メチルチオ）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレートを茶色固体として得た（１０ｍｇ、収率１１％）。
ESI-MS m/z 350 [M+H]+.【００９８】
〔ステップ２〕４−メトキシ−２−（メチルチオ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン塩酸塩の合成：
【化２１】
2016152759.tif 000025
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−メトキシ−２−（メチルチオ）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレート（１５ｍｇ、０．０４４ｍｍｏｌ）に、４規定塩化水素１，４−ジオキサン溶液（０．２８ｍＬ）を室温で加え、室温で２時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、濃縮残渣にアセトニトリルを室温で加えた。析出した固体をろ取し、室温で減圧乾燥することで、４−メトキシ−２−（メチルチオ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン塩酸塩（以下、実施例４の化合物）を茶色固体として得た（１２ｍｇ、収率９７％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 11.58 (1H, brs), 9.04 (2H, brs), 6.54 (1H, s), 4.29 (2H, brs), 3.89 (3H, s), 3.48 (2H, brs), 2.93 (2H, t, J = 5.9 Hz), 2.53 (3H, s).
ESI-MS m/z 250 [M+H]+.【００９９】
（実施例５）２−クロロ−４−（チオフェン−３−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン塩酸塩の合成：
〔ステップ１〕２，４，６−トリクロロ−３−（トリメチルシリル）ピリジンの合成：
【化２２】
2016152759.tif 000026
２，４，６−トリクロロピリジン（１．０ｇ、５．５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液に、ｎ−ブチルリチウム（２．５ｍｏｌ／Ｌ  ｎ−ヘキサン溶液、２．２ｍＬ）を−７８℃で加え、−７８℃で１時間撹拌した。この反応混合物に、トリメチルシリルクロリド（０．７０ｍＬ、５．５ｍｍｏｌ）を加え、−７８℃で１時間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（３０ｍＬ×２）で抽出した。有機層をあわせ、硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮した。得られた濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液：２％酢酸エチル／ｎ−ヘキサン）にて精製することで、２，４，６−トリクロロ−３−（トリメチルシリル）ピリジンを無色オイルとして得た（１．２ｇ、収率８７％）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.27 (1H, s), 0.51 (9H, s).
ESI-MS m/z 255 [M+H]+.【０１００】
〔ステップ２〕２，４−ジクロロ−６−ヒドラジニルピリジンの合成：
【化２３】
2016152759.tif 000027
２，４，６−トリクロロ−３−（トリメチルシリル）ピリジン（５８０ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液に、ヒドラジン一水和物（０．１５ｍＬ、４．６ｍｍｏｌ）を室温で加え、５０℃で１６時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、ＴＢＡＦ（１ｍｏｌ／Ｌ  ＴＨＦ溶液、２．３ｍＬ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応混合物に水（１０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（３０ｍＬ）で抽出した。有機層を水（１０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮した。得られた濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液：２０−２５％酢酸エチル／ｎ−ヘキサン）にて精製することで、２，４−ジクロロ−６−ヒドラジニルピリジンを無色オイルとして得た（１９０ｍｇ、収率４６％）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.23 (1H, s), 6.71 (1H, d, J = 1.2 Hz), 6.65 (1H, d, J = 1.6 Hz), 4.32 (2H, s).
ESI-MS m/z 179 [M+H]+.【０１０１】
〔ステップ３〕ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（４，６−ジクロロピリジン−２−イル）ヒドラゾノ）ピペリジン−１−カルボキシレートの合成：
【化２４】
2016152759.tif 000028
２，４−ジクロロ−６−ヒドラジニルピリジン（１８０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）のエタノール（５．０ｍＬ）溶液に、ｔｅｒｔ−ブチル  ４−オキソピペリジン−１−カルボキシレート（２２０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を室温で加え、室温で１時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、得られた濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液：２０−３０％酢酸エチル／ｎ−ヘキサン）にて精製することで、ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（４，６−ジクロロピリジン−２−イル）ヒドラゾノ）ピペリジン−１−カルボキシレートを白色固体として得た（３４０ｍｇ、収率９４％）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.85 (1H, s), 7.13 (1H, d, J = 1.4 Hz), 6.76 (1H, d, J = 1.2 Hz), 3.62-3.57 (4H, m), 2.50 (2H, t, J = 6.4 Hz), 2.38 (2H, t, J = 6.0 Hz), 1.48 (9H, s).
ESI-MS m/z 360 [M+H]+.【０１０２】
〔ステップ４〕ｔｅｒｔ−ブチル  ２，４−ジクロロ−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレートの合成：
【化２５】
2016152759.tif 000029
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−（４，６−ジクロロピリジン−２−イル）ヒドラゾノ）ピペリジン−１−カルボキシレート（９５ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）のトルエン（３．０ｍＬ）溶液に、ポリリン酸（１．５ｇ）を室温で加え、１６０℃で３６時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、トルエンを除去した後（デカンテーション）、残渣にｐＨが９．０以上になるまで、炭酸ナトリウム水溶液を加えた。この反応混合物にイソプロパノール（５．０ｍＬ）、（Ｂｏｃ）２Ｏ（９１ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）を室温で加え、室温で１時間撹拌した。反応混合物を濃縮後、クロロホルム（２５ｍＬ）で抽出した。有機層を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮した。得られた濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液：１０−２０％酢酸エチル／ｎ−ヘキサン）にて精製することで、ｔｅｒｔ−ブチル  ２，４−ジクロロ−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレートを白色固体として得た（１０ｍｇ、収率１１％）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 10.64 (1H, brs), 7.06 (1H, s), 4.83 (2H, brs), 3.80 (2H, t, J= 5.4 Hz), 2.93 (2H, t, J = 5.6 Hz), 1.48 (9H, s).
ESI-MS m/z 343 [M+H]+.【０１０３】
〔ステップ５〕ｔｅｒｔ−ブチル  ２−クロロ−４−（チオフェン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレートの合成： 
【化２６】
2016152759.tif 000030
ｔｅｒｔ−ブチル  ２，４−ジクロロ−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレート（１００ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）のトルエン（１０ｍＬ）溶液に、チオフェン−３−イル−ボロン酸（５６ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（６．０ｍｇ、０．０２９ｍｍｏｌ）、２規定炭酸ナトリウム水溶液（０．１０ｍＬ）、トリシクロヘキシルホスフィン（１２ｍｇ、０．０４４ｍｍｏｌ）を室温で加え、１００℃で１２時間撹拌した。反応混合物を水に注ぎ、酢酸エチル（２５ｍＬ×３）で抽出した。有機層をあわせ、硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮した。得られた濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液：酢酸エチル／ｎ−ヘキサン）にて精製することで、ｔｅｒｔ−ブチル  ２−クロロ−４−（チオフェン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレートを灰色がかった白色固体として得た（６０ｍｇ、収率５４％）。
ESI-MS m/z 390 [M+H]+. 【０１０４】
〔ステップ６〕２−クロロ−４−（チオフェン−３−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン塩酸塩の合成：
【化２７】
2016152759.tif 000031
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−クロロ−４−（チオフェン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレート（３０ｍｇ、０．０７６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（４．０ｍＬ）溶液に、４規定塩化水素１，４−ジオキサン溶液（２．０ｍＬ）を室温で加え、室温で２時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、濃縮残渣に酢酸エチル／ｎ−ヘキサンを室温で加えた。析出した固体をろ取し、室温で減圧乾燥することで、２−クロロ−４−（チオフェン−３−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン塩酸塩（以下、実施例５の化合物）を黄茶色固体として得た（１５ｍｇ、収率６８％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12.1 (1H, s), 9.22 (2H, brs), 7.85-7.37 (1H, m), 7.79-7.77 (1H, m), 7.38-7.37 (1H, m), 7.10 (1H, s), 3.95 (2H, brs), 3.50-3.47 (2H, m), 3.06 (2H, t, J = 5.2 Hz).
ESI-MS m/z 290 [M+H]+.【０１０５】
（実施例６）２−プロピル−４−（チオフェン−３−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン塩酸塩の合成：
〔ステップ１〕ｔｅｒｔ−ブチル  ２−プロピル−４−（チオフェン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレートの合成： 
【化２８】
2016152759.tif 000032
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−クロロ−４−（チオフェン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレート（５０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）のトルエン（１０ｍＬ）溶液に、ｎ−プロピルボロン酸（１７ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（３．０ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）、２規定炭酸ナトリウム水溶液（０．１０ｍＬ）、トリシクロヘキシルホスフィン（５．５ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ）を室温で加え、マイクロウエーブ照射下、１２０℃で１時間撹拌した。反応混合物を水に注ぎ、酢酸エチル（２５ｍＬ×３）で抽出した。有機層をあわせ、硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮した。得られた濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液：酢酸エチル／ｎ−ヘキサン）にて精製することで、ｔｅｒｔ−ブチル  ２−プロピル−４−（チオフェン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレートを灰色がかった白色固体として得た（１５ｍｇ、収率２９％）。
ESI-MS m/z 398 [M+H]+. 【０１０６】
〔ステップ２〕２−プロピル−４−（チオフェン−３−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン塩酸塩の合成：
【化２９】
2016152759.tif 000033
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−プロピル−４−（チオフェン−３−イル）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレート（１５ｍｇ、０．０３７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２．０ｍＬ）溶液に、４規定塩化水素１，４−ジオキサン溶液（１．０ｍＬ）を室温で加え、室温で２時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、濃縮残渣に酢酸エチル／ｎ−ヘキサンを室温で加えた。析出した固体をろ取し、室温で減圧乾燥することで、２−プロピル−４−（チオフェン−３−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン塩酸塩（以下、実施例６の化合物）を黄色固体として得た（７．０ｍｇ、収率６３％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 11.6 (1H, s), 9.09 (2H, brs), 7.77-7.71 (2H, m), 7.33-7.32 (1H, m), 6.91 (1H, s), 3.94 (2H, brs), 3.49-3.38 (2H, m), 3.05-2.99 (2H, m), 2.76 (2H, t, J= 7.6 Hz), 1.77-1.70 (2H, m), 0.91 (3H, t, J = 7.6 Hz).
ESI-MS m/z 298 [M+H]+.【０１０７】
（参考例１）２−（イソプロピルチオ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン塩酸塩の合成：
〔ステップ１〕ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（イソプロピルチオ）−９−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレートの合成：
【化３０】
2016152759.tif 000034
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−ブロモ−９−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレート（１３０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）のＤＭＡ（３．０ｍＬ）溶液に、ナトリウム  プロパン−２−チオレート（７９ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ）を室温で加え、８５℃で１６時間撹拌した。反応混合物に氷水を加え、酢酸エチル（２５ｍＬ×２）で抽出した。有機層をあわせ、硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮した。得られた濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液：メタノール／ジクロロメタン）にて精製することで、ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（イソプロピルチオ）−９−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレートを灰色固体として得た（９８ｍｇ、収率８３％）。
ESI-MS m/z 478 [M+H]+.【０１０８】
〔ステップ２〕ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（イソプロピルチオ）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレートの合成：
【化３１】
2016152759.tif 000035
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（イソプロピルチオ）−９−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレート（９０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３．０ｍＬ）溶液に、ＴＢＡＦ（２ｍｏｌ／Ｌ  ＴＨＦ溶液、４．０ｍＬ）を室温で加え、６０℃で１６時間撹拌した。反応混合物に水（２．０ｍＬ）を室温で加え、酢酸エチル（５．０ｍＬ×２）で抽出した。有機層をあわせ、硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮した。得られた濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液：メタノール／ジクロロメタン）にて精製することで、ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（イソプロピルチオ）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレートを灰色固体として得た（５３ｍｇ、収率８０％）。
ESI-MS m/z 348 [M+H]+.【０１０９】
〔ステップ３〕２−（イソプロピルチオ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン塩酸塩の合成：
【化３２】
2016152759.tif 000036
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（イソプロピルチオ）−７，８−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン−６（９Ｈ）−カルボキシレート（５３ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）に、４規定塩化水素１，４−ジオキサン溶液（３．０ｍＬ）を室温で加え、室温で２時間撹拌した。析出した固体をろ取し、酢酸エチル／ｎ−ヘキサン＝１／１で洗浄後、室温で減圧乾燥することで、２−（イソプロピルチオ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ：４，５−ｃ’］ジピリジン塩酸塩（以下、参考例１の化合物）を灰色がかった白色固体として得た（４３ｍｇ、収率９７％）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 11.68 (1H, brs), 9.68 (2H, brs), 7.77 (1H, d, J = 8.0 Hz), 6.94 (1H, d, J = 8.0 Hz), 4.26-4.20 (2H, m), 3.96-3.88 (1H, m), 3.47-3.40 (2H, m), 3.03-2.99 (2H, m), 1.33 (6H, d, J = 8.0 Hz).
ESI-MS m/z 248 [M+H]+.【０１１０】
（参考例２）２−（メチルチオ）−５，６，７，８，９，１０−ヘキサヒドロピリド［３’，２’：４，５］ピロロ［２，３−ｄ］アゼピン塩酸塩の合成：
【化３３】
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実施例１と同様の手順により、実施例１のステップ１に記載のｔｅｒｔ−ブチル  ４−オキソピペリジン−１−カルボキシレートの代わりにｔｅｒｔ−ブチル  ４−オキソアゼパン−１−カルボキシレートを用いることで、２−（メチルチオ）−５，６，７，８，９，１０−ヘキサヒドロピリド［３’，２’：４，５］ピロロ［２，３−ｄ］アゼピン塩酸塩（以下、参考例２の化合物）を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 11.50 (1H, brs), 8.91 (2H, brs), 7.74 (1H, d, J = 8.2 Hz), 6.93 (1H, d, J = 8.2 Hz), 3.38-3.28 (4H, m), 3.10 (2H, t, J = 6.0 Hz), 3.01 (2H, t, J = 6.0 Hz), 2.52 (3H, s).
ESI-MS m/z 234 [M+H]+.【０１１１】
（実施例７）ヒト５−ＨＴ２Ｃ受容体作動活性：
ヒト５−ＨＴ２Ｃ受容体を安定発現した細胞（以下、ヒト５−ＨＴ２Ｃ受容体発現細胞）を用いて、上記の一般式（Ｉ）で示される６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体又はその薬学的に許容される酸付加塩のヒト５−ＨＴ２Ｃ受容体作動活性を評価した。【０１１２】
ヒト５−ＨＴ２Ｃ受容体遺伝子が挿入されたプラスミド（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＡＢ５２８０３６．１）のヒト５−ＨＴ２Ｃ受容体遺伝子部位を切り出し、哺乳細胞発現ベクターｐＣＩ−ｎｅｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）にクローン化することにより作製したｐＣＩ−ｎｅｏ−ＨＴＲ２Ｃを、ＨＥＫ―２９３細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）に導入した。発現ベクターｐＣＩ−ｎｅｏ−ＨＴＲ２Ｃを導入した細胞から限界希釈法にて単一クローンを取得し、ヒト５−ＨＴ２Ｃ受容体発現細胞を作製した。【０１１３】
ヒト５−ＨＴ２Ｃ受容体発現細胞は、１０％ウシ胎児血清（透析処理済み）、１％ＭＥＭ用非必須アミノ酸、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン及び５００μｇ／ｍＬ  Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎを含むＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍを培養液として用いて、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター中で培養維持した。【０１１４】
ヒト５−ＨＴ２Ｃ受容体発現細胞を上記培養液（ただし、Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ不含）に懸濁し、９６ｗｅｌｌ  ｂｌａｃｋ  ｐｌａｔｅ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）の各ウェルに８×１０４個になるように播種し、３７℃、５％ＣＯ２で一晩培養し、以下の評価に用いた。【０１１５】
ヒト５−ＨＴ２Ｃ受容体作動活性の評価は、ヒト５−ＨＴ２Ｃ受容体の活性化による細胞内カルシウム濃度の上昇を測定することで行った。【０１１６】
細胞内カルシウム濃度の測定には、ＦＬＩＰＲ（登録商標）  Ｃａｌｃｉｕｍ５  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いた。アッセイバッファーとして、２０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．３）を含むＨａｎｋ’ｓ  ｂａｌａｎｃｅｄ  ｓａｌｔ  ｓｏｌｕｔｉｏｎに２．５ｍｍｏｌ／Ｌ  プロベネシド（ＳＩＧＭＡ）を加えたものを用いた。【０１１７】
ヒト５−ＨＴ２Ｃ受容体発現細胞を播種したプレートの培地を除去し、上記Ｋｉｔに添付の説明書に従いアッセイバッファーで溶解したＦＬＩＰＲ（登録商標）  Ｃａｌｃｉｕｍ５  Ａｓｓａｙ  Ｒｅａｇｅｎｔ（上記Ｋｉｔに含まれる）を１５０μＬ／ウェル加え、遮光下３７℃、５％ＣＯ２で６０分間培養し、さらに室温、遮光下で１５分間静置した。ＦＬＩＰＲ（登録商標）  ＴＥＴＲＡ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて、被験化合物５０μＬ／ウェルを自動添加し、励起波長４７０−４９５ｎｍ、蛍光波長５１５−５７５ｎｍで蛍光強度を５分間測定した。【０１１８】
各被験化合物の評価は、公比３の濃度で、各濃度につきｔｒｉｐｌｉｃａｔｅで実施した。アッセイバッファー添加時の蛍光強度を０％反応値とし、ヒト５−ＨＴ２Ｃ受容体作動薬であるセロトニン（ナカライテスク）を被験化合物の代わりに添加したときの最大蛍光強度を１００％反応値として、各被験化合物の各濃度における反応率（％）を求めた。各被験化合物の各濃度における反応率（％）を用いて線形回帰により各被験化合物のＥＣ５０値（セロトニンの１００％反応値に対して５０％の反応を示す濃度）を求めた。なお、各被験化合物及びセロトニンはＤＭＳＯに溶解した後、アッセイバッファーで希釈したものを用いた。【０１１９】
各被験化合物のＥＣ５０値を表２に示す。表２の結果から明らかな通り、上記の一般式（Ｉ）で示される６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体又はその薬学的に許容される酸付加塩は、参考例１及び２の化合物と比較して、いずれも強力なヒト５−ＨＴ２Ｃ受容体作動活性を有することが示された。【０１２０】
【表２】
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【０１２１】
（実施例８）麻酔下ラット漏出時圧に対する作用：
腹圧性尿失禁に対する効果を評価できる麻酔下ラット漏出時圧測定法を用いて、上記の一般式（Ｉ）で示される６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体又はその薬学的に許容される酸付加塩の作用を評価した。【０１２２】
体重１９０〜３４０ｇのＳＤ系雌性ラット（日本チャールス・リバー）をイソフルラン（マイラン製薬）で麻酔し、排尿反射を消失させる目的で、脊髄をＴ８−Ｔ９レベルで切断した。次に、下腹部を切開し、両側の尿管を結紮後、腎臓側を切断した。さらに、２本のカテーテル（ＰＥ−９０及びＰＥ−５０；Ｂｅｃｔｏｎ＆Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を膀胱内に留置した。麻酔から覚醒する直前にウレタン（ＳＩＧＭＡ）を腹腔内に追加麻酔した後、腹筋及び皮膚の切開部をそれぞれ縫合した。ＰＥ−５０型膀胱内カテーテルは圧トランスデューサーに接続し、ＰＥ−９０型カテーテルには、生理食塩液を満たした６０ｍＬシリンジに接続した。トランスデューサーの信号をアンプ（血圧用増幅ユニットＡＰ−６４１Ｇ；日本光電）及びデータ解析装置（ＰｏｗｅｒＬａｂ；ＡＤ  Ｉｎｓｔｒｕｍａｎｔｓ  Ｉｎｃ．）を介してコンピュータへ送り、ハードディスク上に記録し解析した。生理食塩液を満たした６０ｍＬシリンジを垂直に上昇させることにより膀胱内に生理食塩液を注入し、尿道口から生理食塩液が漏れ出た際の最大膀胱内圧（漏出時圧）を測定した。尿道口から生理食塩液が漏れ出たことを確認した後、生理食塩液の膀胱注入を停止し、膀胱内に滞留した生理食塩液を排出した。【０１２３】
生理食塩液の膀胱注入及び排出を繰り返し、安定した漏出時圧が３回得られた直後に、被験化合物を尾静脈内に投与した。被験化合物投与５分後に生理食塩液を膀胱注入し、漏出時圧を測定した。被験化合物投与直前３回の漏出時圧の平均値に対する投与後の漏出時圧の変化率（％）を評価値とした。【０１２４】
上記の一般式（Ｉ）で示される６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体又はその薬学的に許容される酸付加塩として、実施例１の化合物を用いた。実施例１の化合物は、生理食塩液に溶解して、０．３ｍｇ／ｋｇ（容量０．５ｍＬ／ｋｇ）を投与した。また、対照として、腹圧性尿失禁の治療薬であるデュロキセチンを用いた。デュロキセチン（Ｋｅｍｐｒｏｔｅｃ）は蒸留水に溶解して、１ｍｇ／ｋｇ（容量０．５ｍＬ／ｋｇ）を投与した。なお、実施例１の化合物及びデュロキセチンに対するコントロールとして、各溶媒を同一容量投与した群を設けた。【０１２５】
結果を図１に示す。縦軸は被験化合物投与後の漏出時圧の変化率（％）（平均値±標準誤差；Ｎ＝６〜１２）を示す。図１中の＊印は、それぞれのコントロール群との比較で統計学的に有意（ｐ＜０．０５、ｔ検定）であることを示す。【０１２６】
実施例１の化合物（０．３ｍｇ／ｋｇ）及びデュロキセチン（１ｍｇ／ｋｇ）は、それぞれのコントロール群と比較して統計学的に有意に漏出時圧を上昇させた。【０１２７】
この結果から、上記の一般式（Ｉ）で示される６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体又はその薬学的に許容される酸付加塩は、デュロキセチンと同様に、腹圧性尿失禁の治療又は予防に有効であることが示された。
【産業上の利用可能性】
【０１２８】
上記の一般式（Ｉ）で示される６−アザ−テトラヒドロ−γ−カルボリン誘導体又はその薬学的に許容される酸付加塩は、強力な５−ＨＴ２Ｃ受容体作動活性を有するため、医薬、特に腹圧性尿失禁の治療剤又は予防剤として利用できる。
【図１】
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【国際調査報告】
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