(57)【要約】  本発明はヒスチジン緩衝液とリン酸緩衝液とを組み合わせて配合することにより安定なアダリムマブ水性製剤を提供する。ヒスチジン緩衝液及びリン酸緩衝液を配合することにより、アダリムマブの安定性を向上させることができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
アダリムマブと、緩衝液としてヒスチジン緩衝液及びリン酸緩衝液とを含み、かつ、ｐＨが５．５〜６．１である水性液体製剤である医薬組成物。
【請求項２】
更に緩衝剤、賦形剤及び等張化剤のうちから選択される少なくとも一つの添加剤を含んでなる請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
ヒスチジンの濃度が５ｍＭ〜５０ｍＭである請求項１又は２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
リン酸の濃度が１ｍＭ〜２０ｍＭである請求項１〜３のうちのいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
請求項１〜４のうちのいずれか一項に記載の医薬組成物が凍結されてなる凍結製剤である医薬組成物。
【請求項６】
請求項１〜４のうちのいずれか一項に記載の医薬組成物が予備充填滅菌注射器中に保存されている医薬製剤。
【請求項７】
請求項１〜５のうちのいずれか一項に記載の医薬組成物及び請求項６に記載の医薬製剤のうちの少なくとも１つと、前記医薬組成物の仕様説明書とを含むキット製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はアダリムマブを含む医薬組成物及び該医薬組成物の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ポリペプチドを有効成分とする医薬品（ポリペプチド医薬品）は、ポリペプチドの複雑な構造に起因して、製造過程や保存中に各種の化学的変化や凝集等の物理的変化を起こしやすい。これらの変化は薬理作用を低下させるだけでなく、免疫原性等、安全性にも大きな影響を与えることが一般的に知られている。【０００３】
ポリペプチド医薬品の製剤化においては、有効成分として使用されるポリペプチドを安定に保存することができる製剤処方が必要である（Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃｏｖ．、２００５、４（４）、２９８−３０６（非特許文献１））。一般にポリペプチドの劣化としては、加水分解や脱アミド化、メチオニン酸化等、化学的修飾を伴う劣化（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．、１９９９、１８５、１２９−１８８（非特許文献２））と、凝集、切断化、変性等の物理的会合化に伴う劣化（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．、２００５、２８９、１−３０（非特許文献３））との２つが挙げられる。医薬品としての使用を企図する場合、保存期間中のこのような劣化を最小限にすることが求められる。その方法としては、剤形選択；溶液ｐＨの最適化；緩衝液や塩、安定化剤の種類と濃度の最適化等が挙げられる。【０００４】
関節リウマチ等の膠原病・自己免疫疾患の治療に用いられるポリペプチド（抗体）であるアダリムマブも、多くの他のポリペプチド同様、水性製剤とした際に温度、湿度、光等に起因して物理的、化学的変化を生じ、結果として活性が低下すると想定されている。【０００５】
他方、ポリペプチド医薬品の多くは注射剤又は輸液剤として用いられるため、液体製剤として使用できる水性製剤は利便性に優れている。水性製剤においてポリペプチドの変性、凝集及び他の変化を回避するためには安定化剤等の添加剤を含有する必要がある。【０００６】
ポリペプチドの安定化のために、糖類、アミノ酸類、水溶性高分子及び非イオン性界面活性剤、緩衝剤等が前記添加剤として使用されており、例えば、国際公開第２０１３／１８６２３０号（特許文献１）の実施例では、コハク酸緩衝液ｐＨ６．２５、ヒスチジン緩衝液ｐＨ６．２５、及び酢酸及びアルギニン緩衝液ｐＨ６．５が使用されている。また、国際公開第２０１４／０３９９０３号（特許文献２）の実施例では、コハク酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、酒石酸緩衝液（いずれもｐＨ５．２）が使用されている。【０００７】
アダリムマブは、アボット社より「ヒュミラ（登録商標）」として市販されている医薬組成物の有効成分であり、関節リウマチ・乾癬・クローン病等の自己免疫疾患の治療に用いられるヒト型抗ヒトＴＮＦαモノクローナル抗体である。「ヒュミラ（登録商標）」は１４．１ｍＭリン酸−４．２ｍＭクエン酸緩衝液中に、アダリムマブ約５０ｍｇ／ｍＬ、ＮａＣｌ  ６．１７ｍｇ／ｍＬ、マンニトール１２ｍｇ／ｍＬ及びポリソルベート８０  １ｍｇ／ｍＬを含有し、ｐＨが約５．２の水性液体製剤である。このため、一般にはアダリムマブはｐＨ５．２において安定であると考えられている。【０００８】
注射剤に配合されているクエン酸が疼痛の原因であることが知られている（Ａｍ  Ｊ  Ｋｉｄｎｅ  ｙ  Ｄｉｓ．、１９９３、Ｏｃｔ  ２２（４）、５５３−５５６（非特許文献４）、Ｃｌｉｎ  Ｎｅｐｈｒｏｌ、１９９８、Ｊａｎ  ４９（１）、４１−４４（非特許文献５））。「ヒュミラ（登録商標）」はクエン酸が配合されている上、ｐＨが約５．２と比較的低いため、投与時の疼痛が生じると考えられる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】国際公開第ＷＯ２０１３／１８６２３０号
【特許文献２】国際公開第ＷＯ２０１４／０３９９０３号
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃｏｖ．、２００５、４（４）、２９８−３０６
【非特許文献２】Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．、１９９９、１８５、１２９−１８８
【非特許文献３】Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．、２００５、２８９、１−３０
【非特許文献４】Ａｍ  Ｊ  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｄｉｓ．、１９９３、Ｏｃｔ  ２２（４）、５５３−５５６
【非特許文献５】Ｃｌｉｎ  Ｎｅｐｈｒｏｌ、１９９８、Ｊａｎ  ４９（１）、４１−４４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の目的は、安定で利便性の高いアダリムマブ水性製剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、上記の目的を達成するべく鋭意研究を行った結果、本発明に到達した。すなわち、本発明者らは、種々の緩衝液の中でも特定の緩衝液を組み合わせて用い、かつ、ｐＨを特定の範囲内とすることによって、従来のものに比べて安定性に優れたアダリムマブ水性製剤となることを見出した。【００１３】
より具体的には、本発明は、
（１）アダリムマブと、緩衝液としてヒスチジン緩衝液及びリン酸緩衝液とを含み、かつ、ｐＨが５．５〜６．１の水性液体製剤である医薬組成物。
（２）更に緩衝剤、賦形剤及び等張化剤のうちから選択される少なくとも一つの添加剤を含んでなる（１）に記載の医薬組成物。
（３）ヒスチジンの濃度が５ｍＭ〜５０ｍＭである（１）又は（２）に記載の医薬組成物。
（４）リン酸の濃度が１ｍＭ〜２０ｍＭである（１）〜（３）のうちのいずれか一項に記載の医薬組成物。
（５）（１）〜（４）のうちのいずれか一項に記載の医薬組成物が凍結されてなる凍結製剤である医薬組成物。
（６）（１）〜（４）のうちのいずれか一項に記載の医薬組成物が予備充填滅菌注射器中に保存されている医薬製剤。
（７）（１）〜（５）のうちのいずれか一項に記載の医薬組成物及び（６）に記載の医薬製剤のうちの少なくとも１つと、前記医薬組成物の仕様説明書とを含むキット製剤である。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の構成をとることにより水性製剤におけるアダリムマブの安定性を向上させることができる。これによりアダリムマブを含有する医薬組成物の安定性向上、薬理作用の低下防止が期待され、さらに免疫原性の低減等、安全性の向上も期待される。また、注射時の疼痛を軽減することができ、患者への負担を軽減できることが期待される。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】４０℃で一箇月間保存後の各アダリムマブ水性製剤における単量体量を示すグラフである。
【図２】４０℃で一箇月間保存後の各アダリムマブ水性製剤における酸性化体量を示すグラフである。
【図３】凍結融解前に対する凍結融解後のアダリムマブ水性製剤中の凝集体の変化率を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明は、緩衝液としてヒスチジン緩衝液及びリン酸緩衝液を配合することによって、ポリペプチドであるアダリムマブを含有する水性製剤（以下、場合により「アダリムマブ水性製剤」という）の安定化を図るものである。
【００１７】
本発明において「医薬組成物」とは、治療を要する患者に注射及び／又は投与するのに適するように調製されたペプチドを含む製剤（医薬製剤）を指すと理解される。該医薬組成物は、前記緩衝液の他、緩衝剤や等張化剤、賦形剤等を含んでいても良い。
【００１８】
本発明において「水性製剤」とは、前記医薬製剤のうち、水を溶媒として使用する製剤を指すと理解され、「アダリムマブ水性製剤」とは、少なくとも水及びアダリムマブを含有する製剤を指すと理解され、前記緩衝液の他、緩衝剤、等張化剤、賦形剤等の添加剤を含んでいても良い。また、本発明において「水性液体製剤」とは、前記水性製剤の形態うち、水を溶媒として使用する液体製剤を指すと理解され、「凍結製剤」とは、前記水性液体製剤が凍結されてなる製剤を指すと理解される。
【００１９】
本発明における「水性液体製剤」としては注射剤又は輸液剤として用いられることが好ましく、予備充填滅菌注射器等の注射器中や輸液パック中に保存されていることが好ましい。また、「凍結製剤」としては解凍後に注射剤又は輸液剤として用いられることが好ましい。
【００２０】
本発明における「キット製剤」とは、前記医薬組成物と前記医薬組成物の仕様説明書とを含む製剤を指すと理解され、前記医薬組成物としては、前記水性液体製剤や前記凍結製剤であって良い。
【００２１】
本発明の医薬組成物のｐＨは、５．５〜６．１である。本発明者らは、ヒスチジン緩衝液及びリン酸緩衝液を組み合わせることによって、従来のアダリムマブ水性製剤である「ヒュミラ（登録商標）」よりも優れた安定性が発揮され、これに加えて、ｐＨを５．５〜６．１の範囲内とすることによって、保存中のアダリムマブ活性本体含有量の維持、及び／又は、前記活性本体以外の成分の増加抑制といった、アダリムマブの更なる安定性が発揮されることを見出した。
【００２２】
本発明において「緩衝液」とは、その酸塩基共役成分の作用により溶液のｐＨを許容される範囲に維持する溶液であり、緩衝液の例としてはヒスチジン緩衝液、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、コハク酸緩衝液、クエン酸緩衝液、及び有機酸緩衝液等が挙げられる。本発明においては、前記緩衝液としてヒスチジン緩衝液とリン酸緩衝液とを組み合わせて使用するだけでなく、他の緩衝液、例えば、酢酸緩衝液等を更に組み合わせて使用しても良い。
【００２３】
本発明において「ヒスチジン緩衝液」とは、ヒスチジン、ヒスチジン塩及び前記ヒスチジン塩の水和物からなる群から選択される少なくとも二種（ヒスチジン塩を二種、或いは、ヒスチジン塩の水和物を二種も含む）から調製される緩衝液であって、前記ヒスチジン塩としてはヒスチジン塩酸塩等が挙げられる。また、本発明において「リン酸緩衝液」とは、リン酸、リン酸塩及び前記リン酸塩の水和物からなる群から選択される少なくとも二種（リン酸塩を二種、或いは、リン酸塩の水和物を二種も含む）から調製される緩衝液であって、前記リン酸塩としてはリン酸ナトリウムやリン酸カリウム等が挙げられる。
【００２４】
本発明において「緩衝剤」とは、ｐＨを許容される範囲に維持する緩衝作用を有する化合物であって、好ましい緩衝剤は、前記ヒスチジン緩衝液及びリン酸緩衝液に含有されうるヒスチジン、ヒスチジン塩酸塩、リン酸、リン酸ナトリウム、リン酸カリウムに加えて、クエン酸ナトリウム、クエン酸カリウム、クエン酸、マレイン酸、酢酸ナトリウム、酢酸カリウム、酢酸アンモニウム、酢酸、コハク酸、コハク酸ナトリウム、酒石酸、酒石酸ナトリウム、乳酸、乳酸ナトリウム、リンゴ酸、ホウ酸、アスコルビン酸、グルタミン酸、グルタミン酸ナトリウム、アルギニン、アルギニン塩酸塩、トリス−（ヒドロキシメチル）−アミノメタン（トリス）及びジエタノールアミンからなる群から選択される少なくとも一つの緩衝剤であり、より好ましくはヒスチジン、ヒスチジン塩酸塩、及びリン酸ナトリウムである。
【００２５】
本発明において好ましい等張化剤は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、クエン酸ナトリウム、スクロース、グルコース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、アルギニン、システイン、ヒスチジンからなる群から選択される少なくとも一つの等張化剤であり、より好ましくは塩化ナトリウムである。
【００２６】
本発明において好ましい賦形剤（ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ）は、ソルビトール、マンニトール、スクロース、キシリトール、トレハロース、グルコース、ラクトース、グリセロール、マルトース、イノシトール、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）、デキストラン、ＰＶＡ、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ポリエチレンイミン、ゼラチン、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）、ポリエチレングリコール、エチレングリコール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、プロリン、Ｌ−セリングルタミン酸ナトリウム、グルタミン酸カリウム、アラニン、リシン塩酸塩、サルコシン、γ−アミノ酪酸、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ＳＤＳ、ポリオキシエチレンコポリマー、酢酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、硫酸マグネシウム、硫酸ナトリウム、トリメチルアミンＮ−オキシド、ベタイン、亜鉛イオン、銅イオン、カルシウムイオン、マンガンイオン、マグネシウムイオン、ＣＨＡＰＳ、スクロースモノラウレート及び２−Ｏ−β−マンノグリセレートからなる群から選択される少なくとも一つの賦形剤である。より好ましくは、ソルビトール、マンニトール、スクロース、キシリトールである。
【００２７】
本発明において「アダリムマブ」とは、「ヒュミラ（登録商標）」として市販されている医薬組成物の有効成分のヒト型抗ヒトＴＮＦαモノクローナル抗体であるタンパク質、及び、これと医薬的に同等のタンパク質をいう。また、本発明におけるアダリムマブの「単量体」及び「モノマー」とは約１４８ｋＤａの活性体タンパク質のことをいう。さらに、本発明における「活性本体」とは、アダリムマブの単量体を指し、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により確認できる単量体を指すと理解される。
【００２８】
本発明の医薬組成物は、アダリムマブと、水と、前記緩衝液として（及び必要に応じて前記緩衝剤として）配合されたヒスチジン及びリン酸とを含む。本発明の医薬組成物におけるヒスチジンの濃度は特に限定されないが、その下限値は好ましくは５ｍＭ、より好ましくは１０ｍＭ、更に好ましくは１５ｍＭ、特に好ましくは２０ｍＭであり、その上限値は好ましくは５０ｍＭ、より好ましくは３０ｍＭ、更に好ましくは２５ｍＭ、特に好ましくは２０ｍＭである。また、本発明の医薬組成物におけるヒスチジンの濃度としては、５ｍＭ〜５０ｍＭであることが好ましく、１０ｍＭ〜３０ｍＭであることがより好ましく、１５ｍＭ〜２５ｍＭであることが更に好ましい。同様に、リン酸の濃度も特に限定されないが、その下限値は好ましくは１ｍＭ、より好ましくは３ｍＭ、更に好ましくは５ｍＭであり、その上限値は好ましくは２０ｍＭ、より好ましくは１０ｍＭ、更に好ましくは５ｍＭである。また、本発明の医薬組成物におけるリン酸の濃度としては、１ｍＭ〜２０ｍＭであることが好ましく、３ｍＭ〜１０ｍＭであることがより好ましい。
【００２９】
また、本発明の医薬組成物は、グリシンを実質的に含まないことが好ましい。本発明において、グリシンを実質的に含まないとは、医薬組成物中のグリシンの含有量が６ｍＭ以下であることをいう。本発明においては、グリシンを含まなくとも、水性製剤におけるアダリムマブの安定性に優れる。
【実施例】
【００３０】
本発明を下記の実施例にて詳細に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に限定されるものではない。【００３１】
（アダリムマブ水性製剤の調製１）
種々の緩衝液を配合した試料（アダリムマブ水性製剤）をそれぞれ調製した（表１）。これらの試料はアダリムマブ５０ｍｇ／ｍＬ、ＮａＣｌ  ６．１６ｍｇ／ｍＬ、マンニトール１２ｍｇ／ｍＬ、ポリソルベート８０  １ｍｇ／ｍＬ、及び表１に示す緩衝液を含有し、ｐＨが５．２〜６．０の水溶液として調製した。また、リン酸緩衝液はリン酸二水素ナトリウム・２水和物及びリン酸水素二ナトリウム・１２水和物から調製し、ヒスチジン緩衝液はヒスチジン及びヒスチジン塩酸塩・１水和物から調製し、クエン酸緩衝液はクエン酸・１水和物及びクエン酸三ナトリウム・２水和物から調製し、表１に記載の組み合わせで、各緩衝液由来の酸成分（リン酸、クエン酸、ヒスチジン）のアダリムマブ水性製剤における濃度（終濃度）が表１に示す濃度となるように配合した。【００３２】
【表１】
2015190378.tif 000002
【００３３】
調製した試料を４０℃で保存した後、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）及びイオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＣ）により解析を行った。ＳＥＣはカラム充填剤の細孔により、試料中の高分子量種（凝集体を含む）、単量体（モノマー：活性本体）及び低分子量種（切断体・分解物を含む）を分離する手法である。評価ではこの方法を用いて、各試料中での単量体の含有量（％単量体（％Ｍｏｎｏｍｅｒ））を測定して評価した。【００３４】
ＩＥＣはタンパク質表面に露出されている電荷の特性にしたがって生体分子を分離する手法であり、本発明では陽イオン交換クロマトグラフィーを用いて、アダリムマブの活性本体が脱アミド化された酸性化体（脱アミド体）の各試料中での含有量（％酸性化体（％Ａｃｉｄｉｃ））を測定して評価した。【００３５】
保存後の各試料をＳＥＣにより解析した結果、４０℃で１箇月間保存した後、ヒスチジン緩衝液及びリン酸緩衝液を配合し、かつ、ｐＨが５．５〜６．１の範囲内にある処方Ｆ４〜Ｆ６では処方Ｆ１〜３よりも多くの単量体が残存していた。処方Ｆ１、処方Ｆ２及び処方Ｆ３の％単量体が９８．５５、９８．７２及び９８．６６であるのに対して、処方Ｆ４、処方Ｆ５及び処方Ｆ６では％単量体が９８．９４、９８．９７及び９８．９６と顕著に高く、処方Ｆ４〜Ｆ６は安定性に優れた製剤であった（図１）。【００３６】
保存後の各試料をＩＥＣにより解析した結果、４０℃で１箇月間保存した後、ヒスチジン緩衝液及びリン酸緩衝液を配合し、かつ、ｐＨが５．５〜６．１の範囲内にある処方Ｆ４〜Ｆ６では処方Ｆ１〜３より酸性化体量が少なく、脱アミド体の生成が抑制されていることが確認された。処方Ｆ１、処方Ｆ２及び処方Ｆ３の％酸性化体が３３．５、３４．４及び３２．６であるのに対して、処方Ｆ４、処方Ｆ５及び処方Ｆ６では％酸性化体が３１．４、３１．１及び３１．０と低く、処方Ｆ４〜Ｆ６は安定性に優れた製剤であった（図２）。【００３７】
また、処方Ｆ４〜Ｆ６の凍結融解試験として、−２０℃における凍結及び室温における融解の凍結融解サイクル（Ｆｒｅｅｚｅ−ｔｈａｗ  ｃｙｃｌｅ）を５サイクルまで繰り返し、サイクル毎にＳＥＣにより各試料中での凝集体の含有量を測定し、次式：
凝集体量の変化率＝｛［各凍結融解サイクル後の試料における凝集体量（％）］／［凍結融解サイクルゼロの試料における凝集体量（％）］｝×１００
により、凍結融解前（凍結融解サイクルゼロの試料）に対する凝集体量の変化率（％Ｃｈａｎｇｅ  ｉｎ  Ａｇｇｒｅｇａｔｅ）を求め、凍結融解に対する安定性を評価した。その結果、処方Ｆ４〜Ｆ６はいずれも凍結融解による明らかな凝集体の増加は認められず、極めて安定であった（図３）。【００３８】
（アダリムマブ水性製剤の調製２）
種々の緩衝液を配合した試料（アダリムマブ水性製剤）をそれぞれ調製した（表２）。これらの試料はアダリムマブ５０ｍｇ／ｍＬ、ＮａＣｌ  ６．１６ｍｇ／ｍＬ、マンニトール１２ｍｇ／ｍＬ、ポリソルベート８０  １ｍｇ／ｍＬ、及び表２に示す緩衝液を含有し、ｐＨが５．２〜５．５の水溶液として調製した。また、リン酸緩衝液及びヒスチジン緩衝液は上記アダリムマブ水性製剤の調製１と同様に調製し、酢酸緩衝液は酢酸及び酢酸ナトリウム・３水和物から調製し、表２に記載の組み合わせで、各緩衝液由来の酸成分（リン酸、ヒスチジン、酢酸）のアダリムマブ水性製剤における濃度（終濃度）が表２に示す濃度となるように配合した。【００３９】
【表２】
2015190378.tif 000003
【００４０】
調製した試料を４０℃で１箇月間保存した後、アダリムマブ水性製剤の調製１と同様にＳＥＣによる解析及びＩＥＣによる解析を行った。結果を処方Ｆ１〜Ｆ６の結果と合わせて図１〜２に示す。図１〜２に示す結果から明らかなように、ヒスチジン緩衝液とリン酸緩衝液とを含有し、かつ、ｐＨが５．２である処方８は「ヒュミラ（登録商標）」に相当するｐＨ５．２の処方１と同等以上の単量体が残存していたが、ヒスチジン緩衝液とリン酸緩衝液とを含有し、かつ、ｐＨが５．５〜６．１の範囲内にある処方Ｆ４〜Ｆ６では、同処方８よりも更に多くの単量体が残存しており、かつ、更に十分に酸性化体の生成が抑制されており、特に安定性に優れた製剤であることが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００４１】
本発明はヒスチジン緩衝液とリン酸緩衝液とを組み合わせて使用することによって、アダリムマブの安定性が向上されることを示すものである。さらに、添加剤としてクエン酸を配合せず、製剤のｐＨを５．５〜６．１にすることによって、疼痛を軽減でき患者の負担を減らすことができると考えられる。本成果によって、安定で利便性の高いアダリムマブ水性製剤が提供可能となる。
【図１】
2015190378.tif 000004
【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
2015190378.tif 000007
2015190378.tif 000008
2015190378.tif 000009