(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸である下記式（Ｉ）の化合物またはその塩：
【化１】
0006611799.tif 000048
【請求項２】
（Ｒ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸：
【化２】
0006611799.tif 000049
（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸：
【化３】
0006611799.tif 000050
（Ｒ）−４−（（Ｒ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸： 
【化４】
0006611799.tif 000051
（Ｓ）−４−（（Ｒ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸：
【化５】
0006611799.tif 000052
である、式（ＩＡ１）、（ＩＡ２）、（ＩＡ３）または（ＩＡ４）から選択される式を有する、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項３】
（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸：
【化６】
0006611799.tif 000053
である式を有する、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４】
（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸マレイン酸塩である、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩と、１種以上の薬学上許容可能な担体、希釈剤または賦形剤とを含んでなる、医薬組成物。
【請求項６】
経口投与用に適合させた形態である、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
αｖβ６受容体アンタゴニストが指示される疾患または病態の治療において使用するための、請求項５または６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
線維性疾患の治療において使用するための、請求項５または６に記載の医薬組成物。
【請求項９】
線維性疾患の予防において使用するための、請求項５または６に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
特発性肺線維症の治療において使用するための、請求項５または６に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
特発性肺線維症の予防において使用するための、請求項５または６に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
ヒトにおけるαｖβ６受容体の拮抗作用が有益である障害の治療のための、請求項５または６に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
ヒトにおけるαｖβ６受容体の拮抗作用が有益である障害の予防のための、請求項５または６に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
治療するための薬剤の製造における、請求項１〜４のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩の使用。
【請求項１５】
αｖβ６受容体アンタゴニストが指示される疾患または病態を治療するための薬剤の製造における、請求項１〜４のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩の使用。
【請求項１６】
線維性疾患の治療のための薬剤の製造における、請求項１〜４のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩の使用。
【請求項１７】
特発性肺線維症の治療のための薬剤の製造における、請求項１〜４のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩の使用。
【請求項１８】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩と、少なくとも１種の他の薬学上活性な薬剤とを含んでなる、組合せ物。
【請求項１９】
他の薬学上活性な薬剤がＴＧＦβ合成の阻害剤である、請求項１８に記載の組合せ物。
【請求項２０】
他の薬学上活性な薬剤がピルフェニドンである、請求項１８に記載の組合せ物。
【請求項２１】
他の薬学上活性な薬剤がニンテダニブ（ＢＩＢＦ−１１２０）である、請求項１８に記載の組合せ物。
【請求項２２】
他の薬学上活性な薬剤が抗αｖβ６抗体である、請求項１８に記載の組合せ物。
【請求項２３】
請求項１８〜２２のいずれか一項に記載の組合せ物を含む、治療薬。
【発明の詳細な説明】
【発明の背景】
【０００１】
技術分野
本発明は、αｖβ６インテグリンアンタゴニストであるピロリジン化合物、そのような化合物を含んでなる医薬組成物および療法、特に、αｖβ６インテグリンアンタゴニストが指示される病態の治療におけるそれらの使用、αｖβ６インテグリンのアンタゴニストが指示される病態の治療のための薬剤の製造における化合物の使用、およびヒトにおけるαｖβ６インテグリンの拮抗作用が指示される障害の治療または予防のための方法に関する。
【０００２】
背景技術
インテグリンスーパーファミリータンパク質は、αおよびβサブユニットからなるヘテロ二量体の細胞表面受容体である。少なくとも１８種のαサブユニットと８種のβサブユニットが報告されており、それらは、２４種の異なるα／βヘテロ二量体を形成することが実証されている。各鎖は、鎖１本当たり２０前後のアミノ酸の膜貫通領域を備えた大きな細胞外ドメイン（βサブユニットでは６４０を越えるアミノ酸、αサブユニットでは９４０を越えるアミノ酸）と、一般に、鎖１本当たり３０〜５０アミノ酸の短い細胞質テールを含んでなる。種々のインテグリンが、細胞外マトリックスとの細胞接着、細胞−細胞相互作用、ならびに細胞の遊走、増殖、分化および生存に対する作用を含む多くの細胞生物学に関与していることが示されている(Barczyk et al, Cell and Tissue Research, 2010, 339, 269)。
【０００３】
インテグリン受容体は、短いタンパク質−タンパク質結合界面を介して結合タンパク質と相互作用する。インテグリンファミリーは、そのようなリガンドにおける類似の結合認識モチーフを共有するサブファミリーに分類され得る。主なサブファミリーは、ＲＧＤ−インテグリンであり、これはそれらのタンパク質配列内にＲＧＤ（アルギニン−グリシン−アスパラギン酸）モチーフを含有するリガンドを認識する。このサブファミリーには、８種のインテグリン、すなわち、αｖβ１、αｖβ３、αｖβ５、αｖβ６、αｖβ８、αＩＩｂβ３、α５β１、α８β１が存在し、命名は、αｖβ１、αｖβ３、αｖβ５、αｖβ６、およびαｖβ８が、βサブユニットは異なるが、共通のαｖサブユニットを有し、αｖβ１、α５β１およびα８β１が、αサブユニットは異なるが、共通のβ１サブユニットを有することを示している。β１サブユニットは、１１種の異なるαサブユニットと対を成し、そのうち、上記に列挙した３種のみが、ＲＧＤペプチドモチーフを共通に認識することが示されている(Humphries et al, Journal of Cell Science, 2006, 119, 3901)。
【０００４】
８種のＲＧＤ結合インテグリンは、異なるＲＧＤ含有リガンドに対して、異なる結合親和性および特異性を有する。リガンドには、フィブロネクチン、ビトロネクチン、オステオポンチン、ならびにトランスフォーミング増殖因子β１およびβ３（ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ３）の潜伏関連ペプチド（ＬＡＰ）などのタンパク質が含まれる。ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ３のＬＡＰと結合するインテグリンは、いくつかのシステムで、ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ３生物活性の活性化、およびその後のＴＧＦβ駆動性の生物学を可能にすることが示されている(Worthingt et al, Trends in Biochemical Sciences, 2011, 36, 47)。このようなリガンドの多様性は、ＲＧＤ結合インテグリンの発現パターンと相まって、疾患介入のための多くの機会を作り出す。このような疾患には、線維性疾患（線維症）(Margadant et al, EMBO reports, 2010, 11, 97)、炎症性障害、癌(Desgrosellier et al, Nature Reviews Cancer, 2010, 10, 9)、再狭窄、および血管形成要素を有する他の疾患(Weis et al, Cold Spring. Harb. Perspect. Med. 2011, 1, a 006478)が含まれる。
【０００５】
阻害性の抗体、ペプチドおよび小分子を含め相当な数のαｖインテグリンアンタゴニスト(Goodman et al, Trends in Pharmacological Sciences, 2012, 33, 405)が文献に開示されている。抗体では、これらには、ｐａｎ−αｖアンタゴニストのインテツムマブおよびアビツズマブ(Gras, Drugs of the Future, 2015, 40, 97)、選択的αｖβ３アンタゴニストのエタラシズマブ、および選択的αｖβ６アンタゴニストのＳＴＸ−１００が含まれる。シレンジタイドは、αｖβ３およびαｖβ５の両方を阻害する環状ペプチドアンタゴニストであり、ＳＢ−２６７２６８は、αｖβ３およびαｖβ５の両方を阻害する化合物の例である(Wilkinson-Berka et al, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 2006, 47, 1600)。種々の組合せのαｖインテグリンのアンタゴニストとして作用する化合物を発明することで、新規薬剤を、特定の疾患兆候のために作出、適合させることが可能となる。
【０００６】
肺線維症は、特発性間質性肺炎を含むいくつかの間質性肺疾患の最終段階であり、肺間質内での細胞外マトリックスの過剰な沈積を特徴とする。特発性間質性肺炎のうち、特発性肺線維症（ＩＰＦ）は、診断後３〜５年の典型的生存期間を有する最も一般的かつ最も致命的な病態である。ＩＰＦにおける線維症は、一般に、進行性で、現行の薬理学的介入に不応であり、無情にも機能性肺胞単位の閉塞のために呼吸不全につながる。ＩＰＦは米国および欧州の約５００，０００人を侵している。
【０００７】
ＴＧＦ−β１の活性化における上皮限定インテグリンαｖβ６の重要な役割を裏付けるｉｎ  ｖｉｔｒｏの実験的動物およびＩＰＦ患者の免疫組織化学データが存在する。このインテグリンの発現は、正常な上皮組織では低く、ＩＰＦにおける活性化上皮を含む、損傷および炎症上皮において有意にアップレギュレートされる。従って、このインテグリンを標的とすることで、より広いＴＧＦβ恒常性の役割に干渉する理論的可能性が低くなる。抗体遮断によるαｖβ６インテグリンの部分的阻害は、炎症を悪化させることなく、肺線維症を予防することが示されている(Horan GS et al Partial inhibition of integrin αvβ6 prevents pulmonary fibrosis without exacerbating inflammation. Am J Respir Crit Care Med  2008 177: 56-65)。肺線維症の他、αｖβ６はまた、肝臓および腎臓を含む他の器官の線維性疾患の重要な促進因子と考えられ(Reviewed in Henderson NC et al Integrin-mediated regulation of TGFβ in Fibrosis, Biochimica et Biophysica Acta - Molecular Basis of Disease 2013 1832:891-896)、このことは、αｖβ６アンタゴニストが複数の器官の線維性疾患を治療する上で有効であり得ることを示唆している。
【０００８】
いくつかのＲＧＤ結合インテグリンがＴＧＦβと結合してこれを活性化し得るという所見と一致して、種々のαｖインテグリンが最近、線維性疾患に関連付けられている(Henderson NC et al Targeting of αv integrin identifies a core molecular pathway that regulates fibrosis in several organs Nature Medicine 2013 Vol 19, Number 12: 1617-1627; Sarrazy V et al Integrins αvβ5 and αvβ3 promote latent TGF-β1 activation by human cardiac fibroblast contraction Cardiovasc Res 2014 102:407-417; Minagawa S et al Selective targeting of TGF-β activation to treat fibroinflammatory airway disease Sci Transl Med  2014 Vol 6, Issue 241: 1-14; Reed NI et al .  The αvβ1 integrin plays a critical in vivo  role in tissue fibrosis Sci Transl Med  2015 Vol 7, Issue 288: 1-8)。従って、ＲＧＤ結合インテグリンファミリーの特定のメンバーに対する、またはＲＧＤ結合インテグリンファミリー内の特定の選択的フィンガープリントを有する阻害剤は、複数の器官の線維性疾患を治療する上で有効であり得る。
【０００９】
αｖβ３  αｖβ５、αｖβ６およびαｖβ８に対する一連のインテグリンアンタゴニストのＳＡＲ関係が記載されている(Macdonald, SJF et al. Structure activity relationships of αv integrin antagonists for pulmonary fibrosis by variation in aryl substituents. ACS MedChemLett 2014, 5, 1207-1212. 19 Sept 2014)。
【００１０】
本発明の目的は、好ましくはαｖβ１、αｖβ３、αｖβ５またはαｖβ８などの他のαｖインテグリンに対して活性を有する、αｖβ６阻害剤を提供することである。
【発明の概要】
【００１１】
本発明の第１の側面では、式（Ｉ）の化合物、４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸またはその塩、より詳しくは、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩：
【化１】
0006611799.tif 000002
が提供される。
【００１２】
式（Ｉ）の化合物およびそれらの塩は、αｖβ６アンタゴニスト活性を有し、特定の障害の治療または予防に使用される可能性があると考えられる。
【００１３】
用語αｖβ６アンタゴニスト活性には、本明細書ではαｖβ６阻害剤活性を含む。
【００１４】
本発明の第２の側面では、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩と、１種以上の薬学上許容可能な担体、希釈剤または賦形剤とを含んでなる医薬組成物が提供される。
【００１５】
本発明の第３の側面では、療法において、特に、αｖβ６インテグリン受容体アンタゴニストが指示される疾患または病態の治療において使用するための式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩が提供される。
【００１６】
本発明の第４の側面では、必要とするヒトにおけるαｖβ６インテグリン受容体アンタゴニストが指示される疾患または病態の治療または予防方法が提供され、その方法は、それを必要とするヒトに治療上有効な量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含んでなる。
【００１７】
本発明の第５の側面では、αｖβ６インテグリン受容体アンタゴニストが指示される疾患または病態の治療のための薬剤の製造における式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩の使用が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】
【発明の具体的説明】
【００１９】
本発明の第１の側面では、式（Ｉ）の化合物、４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸またはその塩、より詳しくは、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩が提供される。
【化２】
0006611799.tif 000003
【００２０】
別の態様において、式（Ｉ）の化合物は、４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸の薬学的に許容可能な塩である。
【００２１】
別の態様において、式（Ｉ）の化合物は、４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸である。
【００２２】
１つの態様において、式（Ｉ）の化合物は、（Ｒ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸である式（ＩＡ１）：
【化３】
0006611799.tif 000004
またはその薬学的に許容可能な塩を有する。
【００２３】
１つの態様において、式（Ｉ）の化合物は、（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸である、式（ＩＡ２）：
【化４】
0006611799.tif 000005
またはその薬学的に許容可能な塩を有する。
【００２４】
１つの態様において、式（Ｉ）の化合物は、（Ｒ）−４−（（Ｒ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸である、式（ＩＡ３）：
【化５】
0006611799.tif 000006
またはその薬学的に許容可能な塩を有する。
【００２５】
１つの態様において、式（Ｉ）の化合物は、（Ｓ）−４−（（Ｒ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸である、式（ＩＡ４）：
【化６】
0006611799.tif 000007
またはその薬学的に許容可能な塩を有する。
【００２６】
別の態様において、式（Ｉ）の化合物あるいはＩＡ１、ＩＡ２、ＩＡ３またはＩＡ４のいずれか１つの化合物は、４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸の薬学的に許容可能な塩である。
【００２７】
式（Ｉ）の化合物は、塩基性アミン基およびカルボン酸基の両方を有するため、結果として内部塩、即ち、双性イオンまたは内塩、を生成することができる。従って、一つの態様において、式（Ｉ）の化合物は４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸あるいは双性イオン形態におけるＩＡ１、ＩＡ２、ＩＡ３またはＩＡ４のいずれか１つの化合物である。別の態様において、式（Ｉ）の化合物は、４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸あるいは非双性イオン形態におけるＩＡ１、ＩＡ２、ＩＡ３またはＩＡ４のいずれか１つの化合物である。
【００２８】
本発明は、式（Ｉ）、ＩＡ１、ＩＡ２、ＩＡ３またはＩＡ４の化合物を親化合物として、双性イオン（親化合物はそのカルボン酸基によって内部でプロトン化され、通常は双性イオンとして存在する）およびそれらの塩として、例えばその薬学的に許容可能な塩として包含することを理解されよう。
【００２９】
適切な塩の総説としては、Berge et al., J. Pharm. Sci., 66:1-19, (1977)を参照のこと。適切な薬学的に許容可能な塩は、P H Stahl and C G Wermuth編, Handbook of Pharmaceutical Salts; Properties, Selection and Use, Weinheim/Surich: Wiley- VCH/VHCA, 2002に列挙されている。適切な薬学的に許容可能な塩には、例えば、塩酸、臭化水素酸、オルトリン酸、硝酸、リン酸、もしくは硫酸などの無機酸、または例えば、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酢酸、プロピオン酸、乳酸、クエン酸、フマル酸、リンゴ酸、コハク酸、サリチル酸、マレイン酸、グリセロリン酸、酒石酸、安息香酸、グルタミン酸、アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸などのナフタレンスルホン酸、ヘキサン酸、もしくはアセチルサリチル酸、具体的にはマレイン酸などの有機酸との酸付加塩が含まれ得る。一般に、薬学的に許容可能な塩は、適当であれば所望の酸または塩基を使用することによって容易に調製することができる。得られた塩は、溶液から沈澱させ、濾取することができるか、または溶媒の蒸発により回収することができる。
【００３０】
他の薬学上許容されない塩、例えば、ギ酸塩、シュウ酸塩またはトリフルオロ酢酸塩も、式（Ｉ）の化合物を単離する際に使用することができ、本発明の範囲内に含まれる。
【００３１】
薬学的に許容可能な塩基付加塩を、場合により好適な溶媒中で、式（Ｉ）の化合物を好適な有機塩基（例えば、トリエチルアミン、エタノールアミン、トリエタノールアミン、コリン、アルギニン、リシンもしくはヒスチジン）と反応させることにより形成して塩基付加塩を得ることができ、この塩基付加塩を通常、例えば、結晶化および濾過により単離する。薬学上許容可能な無機塩基塩には、アンモニウム塩、ナトリウムおよびカリウムの塩などのアルカリ金属塩、カルシウムおよびマグネシウムの塩などのアルカリ土類金属、ならびにイソプロピルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミン、トリメチルアミン、ジシクロヘキシルアミンおよびＮ−メチル−Ｄ−グルカミンなどの第一級、第二級および第三級アミンの塩を含む有機塩基との塩が含まれる。
【００３２】
１つの態様において、式（Ｉ）の化合物は、親化合物、例えば４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸の形態である。
【００３３】
本発明は、その範囲内に、総ての可能な化学量論的および非化学量論的形態の式（Ｉ）の化合物の塩を含む。
【００３４】
式（Ｉ）の化合物は、結晶形または非晶質形であり得る。さらに、式（Ｉ）の化合物の結晶形の一部は多形として存在することもあり、これらも本発明の範囲内に含まれる。式（Ｉ）の化合物の多形形態は、限定されるものではないが、Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターン、赤外（ＩＲ）スペクトル、ラマンスペクトル、示差走査熱分析（ＤＳＣ）、熱重量分析（ＴＧＡ）、および固相核磁気共鳴（ＳＳＮＭＲ）を含むいくつかの従来の分析技術を使用して、特性評価および識別を行うことができる。
【００３５】
式（Ｉ）の化合物は、バイオアベイラビリティおよび安定性等の特性を改善するために、液体カプセル化技術を用いて、液体または半固形の充填硬カプセル剤あるいは軟質ゼラチンカプセル形式のいずれかで、送達させることもできる。
【００３６】
多くの有機化合物は、それらが反応される、またはそれらが沈澱もしくは結晶化される溶媒と複合体を形成することができることが認識されるであろう。これらの複合体は、「溶媒和物」として知られる。例えば、水との複合体は、「水和物」として知られる。水、キシレン、Ｎ−メチルピロリジノン、メタノールおよびエタノールなどの、高沸点を有しかつ／または水素結合を形成することができる溶媒を、溶媒和物を形成するために使用することができる。溶媒和物を同定するための方法には、限定されるものではないが、ＮＭＲおよび微量分析が含まれる。結晶形態は場合により、例えば、薬学上許容可能な溶媒和物、例えば、化学量論水和物ならびに変動量の水を含有する化合物であり得る水和物を形成するように溶媒和され得ることが認識されるであろう。溶媒和物には、化学量論溶媒和物および非化学量論的溶媒和物が含まれる。式（Ｉ）の化合物は、溶媒和形態または非溶媒和物形態で存在し得る。
【００３７】
本明細書に記載の化合物は２個の不斉中心を含有するので、光学異性体、例えば、ジアステレオ異性体および鏡像異性体が形成され得る。従って、本発明は、他の異性体を実質的に含まないように単離された（すなわち、純粋な）個々の異性体としてであれ、または混合物としてであれ、式（Ｉ）の化合物の異性体を包含する。他の異性体を実質的に含まないように単離された（すなわち、純粋な）個々の異性体は、１０％未満、特に、約１％未満、例えば約０．１％未満の他の異性体が存在するように単離され得る。
【００３８】
当業者には、ある特定のジアステレオ異性体は他のものよりも活性が劣ることがあり、個々のジアステレオ異性体の活性は選択限界を下回ることもあることが理解されるであろう。
【００３９】
異性体の分離は、当業者に公知の従来技術によって、例えば、分別結晶化、クロマトグラフィーまたはＨＰＬＣまたはこれらの技術の組合せによって達成することができる。
【００４０】
式（Ｉ）の化合物は、いくつかの互変異性型の１つとして存在し得る。本発明は、個々の互変異性体としてであれまたはその混合物としてであれ、式（Ｉ）の化合物の総ての互変異性体を包含することが認識されるであろう。
【００４１】
以上から式（Ｉ）の化合物およびその塩の溶媒和物、異性体および多形が本発明の範囲内に含まれることが認識されるであろう。
【００４２】
化合物の製造
本発明の化合物は、標準的な化学作用を含む様々な方法によって製造することができる。従前に定義された変数はいずれも、そうではないことが示されない限り、従前に定義された意味を有し続ける。一般合成法の実例を以下に示し、次いで、具体的な本発明の化合物を、実施例において調製する。
【００４３】
当業者であれば、２つの幾何学的異性体で存在し得る、いくつかの中間体化合物の（Ｅ）または（Ｚ）の表記が、他方の幾何学的異性体を微量成分として含有し得ることを理解されよう。
【００４４】
構造式（Ｉ）の化合物は、構造式（ＩＩ）：
【化７】
0006611799.tif 000008
［式中、
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、例えば、ｔｅｒｔ−ブチル、エチルまたはメチル基である。あるいは、Ｒ２はキラルアルキル、例えば、（−）−メンチル［（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−２−イソプロピル−５−メチルシクロヘキサノールである。］
の化合物の第一脱保護、即ち、エステル基の切断、続いて場合により塩への転換、を含めた方法によって調製し得る。
【００４５】
本発明の第６の側面では、式（ＩＩ）の化合物が提供される。
【００４６】
Ｒ２がメチル、エチル、メンチル等のキラルアルキルまたはｔｅｒｔ−Ｂｕである、構造式（ＩＩ）の化合物の脱保護は、ジクロロメタン、２−メチル−テトラヒドロフラン、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサンまたはシクロプロピルメチルエーテル等の不活性溶媒または水中で、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸またはトリフルオロ酢酸を用いた酸加水分解によって達成し得る。
【００４７】
あるいは、Ｒ２がメチル、エチル、メンチル等のキラルアルキルである、構造式（ＩＩ）の化合物の脱保護は、好適な溶媒（例えば、水性メタノール等の水性溶媒）中の例えば、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムを用いて、塩基加水分解によって達成し得る。
【００４８】
エステル基を切断した後、結果として得られた生成物を、当業者に十分公知な方法によって要求される塩に転換し得る。
【００４９】
１つの態様において、双性イオンから塩酸塩（hydrochloride slat）への転換は、アセトニトリルまたはアセトン等の不活性有機溶媒中の双性イオンの溶液の、塩酸水溶液での処理、結果として得られた食塩水の濃縮、およびアセトニトリルからの結晶化によって達成される。  
【００５０】
１つの態様において、双性イオンからマレイン酸塩への転換は、双性イオンのアセトニトリル溶液の、マレイン酸水溶液での処理、結果として得られた溶液の４０℃への加熱および結晶化を発生させるために５℃への冷却させることによって達成される。
【００５１】
構造式（ＩＩ）の化合物は、構造式（ＩＩＩ）：
【化８】
0006611799.tif 000009
［ここで、Ｒ２は上記で定義された通りである。］
の化合物を、構造式（ＩＶ）：
【化９】
0006611799.tif 000010
のボロン酸化合物と反応させることによって得ることができる。
【００５２】
あるいはｉｎ  ｓｉｔｕで親ボロン酸を提供する、ピナコールエステル等のボロネートエステルを用いてもよい。構造式（ＩＶ）の化合物は、例えば、(米国) NJ 08852  Princeton Corporate Plaza, 7 Deer Park Drive Ste. 17-3, Monmouth Jct.のEnamine LLC、Manchester Organics またはFluorochemより入手可能である。構造式（ＩＩＩ）および（ＩＶ）の化合物間の反応は、ロジウム触媒（例えば、塩化ロジウム（１，５−シクロオクタジエン）の二量体、［Ｒｈ（ＣＯＤ）Ｃｌ］２）等の好適な触媒およびホスフィンリガンド（例えば、ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル（ＢＩＮＡＰ））等の添加剤の存在下で、好ましくは水酸化カリウム等の塩基の存在下で、５０〜９０℃等の上昇した温度にて、１，４−ジオキサン等の水混和性溶媒中で行ってもよい。反応は、好ましくは厳しい嫌気状態下で実施され、ここで反応混合物が窒素等の不活性ガスでパージされ、低減された圧力下で排出され、この排出および窒素でのパージの手順は３回繰り返される。この反応によって、異性体の混合物が、通常は１：１の比で生成される。生成された異性体の混合物は、クロマトグラフィー、ＨＰＬＣまたは結晶化によって分離することができる。不斉合成は、ロジウム化合物に基づく触媒の存在下でキラルリガンド２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル（「ＢＩＮＡＰ」）の１つの鏡像異性体を含めることによって達成することができる。構造式（ＩＩＩ）の化合物中の二重結合の幾何学は、（Ｅ）または（Ｅ）および（Ｚ）異性体の混合物、好ましくは純粋な（Ｅ）異性体であり得る。
【００５３】
式（ＩＩＩ）の化合物の１つの鏡像異性体と式（ＩＶ）の化合物を反応させることによっておよそ１：１の比で２つのジアステレオ異性体が生成され、これは通常結晶化、クロマトグラフィーまたはＨＰＬＣによって分離することができる。好ましい分離方法は、キラルパックまたはキラルセルカラム等の、キラルサポート上のキラルＨＰＬＣである。生成されたジアステレオ異性体の比は、生物学的により活性なジアステレオ異性体を主要異性体として提供する（Ｒ）−（＋）−２，２′−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１′−ビナフタレン［（Ｒ）−ＢＩＮＡＰ］等の約１０％の添加剤の存在下で、例えばおよそ８０：２０以上等に実質的に増大させることができる。
【００５４】
あるいは当業者によって選択された化合物（ＩＩＩ）の、異なるキラルＲ２基、リガンド、ボロン酸（ＩＶ）、触媒および溶媒との多様な組合せまたは多数の組合せをスクリーニングすることによってより高い比のジアステレオ異性体が提供され得る。
【００５５】
ジアステレオ異性体比は、キラルＨＰＬＣまたは結晶化によって、例えば９９：１超にさらに増大させることができる。
【００５６】
構造式（ＩＩＩ）の化合物は、ジクロロメタン等の溶媒中で、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（「ＤＩＰＥＡ」）等の有機塩基および好適なパラジウム系触媒（例えば、ジクロロメタンとの複合体、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）−ＣＨ２Ｃｌ２［１，１′−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）の存在下で、構造式（Ｖ）：
【化１０】
0006611799.tif 000011
の化合物を構造式（ＶＩ）：
【化１１】
0006611799.tif 000012
［式中、Ｒ２は上記に定義された通りである。］
の化合物と反応させることによって得ることができる。式（Ｖ）の化合物は親化合物として用いることも、第３級アミン塩基の存在下で、二塩酸塩等の塩からｉｎ  ｓｉｔｕで発生させることもできる。
【００５７】
構造式（ＶＩ）の化合物は、本明細書に記載された方法によって調製することもできる。例示目的でＲ２がメチルであり、かつ二重結合が（Ｅ）幾何学を有する、構造式（ＶＩ）の化合物は、上昇した温度（例えば、５０℃）にて、市販の４−ブロモクロトン酸メチルおよびアセトニトリル中の酢酸ナトリウムまたは酢酸カリウムから出発する、下記に示された方法によって調製することができる。
【化１２】
0006611799.tif 000013
【００５８】
構造式（Ｖ）の化合物は、例えば、エタノールまたは酢酸エチル等の不活性溶媒中で炭素上に沈着させたパラジウム触媒を用いることによる等の接触水素化分解によって構造式（ＶＩＩ）：
【化１３】
0006611799.tif 000014
の化合物から調製し得る。
【００５９】
構造式（ＶＩＩ）の化合物は、例えば、炭酸カリウム等の塩基の存在下で、ＤＭＦ等の好適な溶媒中で、１３０℃等の上昇した温度にて、ベンゼンスルホニルヒドラジドから発生するジイミド還元によって、構造式（ＶＩＩＩ）：
【化１４】
0006611799.tif 000015
の化合物から調製し得る。
【００６０】
構造式（ＶＩＩＩ）の化合物は、幾何学的異性体（例えば、（Ｅ）または（Ｚ）の形）として存在し、純粋な異性体または混合物のいずれかとして用いることもできる。構造式（ＶＩＩＩ）の化合物は、例えば、ピリジン中の三酸化硫黄で構造式（Ｘ）：
【化１５】
0006611799.tif 000016
の対応するアルデヒドに酸化させ得る、公知で市販（例えば、中国、Shanghai 200131、Waigaoquiao Free Trade 、288 Fute Zhong Road のWuxi App Tecより）の構造式（ＩＸ）：
【化１６】
0006611799.tif 000017
の化合物から出発して得ることもできる。
【００６１】
次いで、この構造式（Ｘ）の化合物は、構造式（Ｘ）の化合物を単離させることなく、構造式（ＸＩ）：
【化１７】
0006611799.tif 000018
のイリドと反応させてもよく、それによって幾何学的異性体（Ｅ）および（Ｚ）の混合物として存在する式（ＶＩＩＩ）の化合物が生成される。当業者であれば、アルデヒド（Ｘ）から式（ＶＩＩＩ）の化合物を生成する他の方法もあることを理解されよう。幾何学的異性体は、クロマトグラフィーによって分離させても、混合物として次の工程で用いることもできる。構造式（Ｉ）の化合物を調製するためのこの全体的なスキームを、スキーム（Ｉ）として下記のように要約する。
スキーム（Ｉ）
【化１８】
0006611799.tif 000019
【００６２】
構造式（ＸＩ）のイリドは、式（ＸＩＩ）の化合物 (Fluorochemより入手可能): 
【化１９】
0006611799.tif 000020
から開始して作製することもでき、ここで、第一の塩酸との反応、続く重炭酸ナトリウムでの中性化は、次いで構造式（ＸＩＩＩ）：
【化２０】
0006611799.tif 000021
のアルデヒドに転換され、これは例えば、水素化ホウ素ナトリウムを用いて構造式（ＸＩＶ）：
【化２１】
0006611799.tif 000022
の対応するアルコールに還元され得（式（ＸＩＶ）のアルコールの調製については、ＵＳ−Ａ−２００４００９２５３８に記載された経路も参照のこと）、これは次いで例えば、三臭化リンを用いて臭素化されてもよく、構造式（ＸＶ）：
【化２２】
0006611799.tif 000023
の対応するブロモ化合物が生成され、これはアセトニトリル等の溶媒中でトリフェニルホスフィンと反応させることによって臭化トリフェニルホスホニウム（ＸＶＩ）に転換し得る。
【化２３】
0006611799.tif 000024
【００６３】
上記の構造式（ＸＩ）のイリド化合物は、構造式（ＸＶＩ）の化合物を、ＴＨＦ等の不活性溶媒中のｔｅｒｔ−ブトキシドカリウムの溶液等の塩基と反応させることによって得ることができる。構造式（ＸＩ）のイリドは、単離しても、または好ましくは事前に単離せずにｉｎ  ｓｉｔｕで生成して同一の容器中で構造式（Ｘ）のアルデヒドと反応させてもよい。
【００６４】
構造式（ＸＩ）のイリドを調製するためのこの全体的なスキームを、スキーム（ＩＩ）として下記のように要約する。
スキーム（ＩＩ）
【化２４】
0006611799.tif 000025
【００６５】
式（ＩＸ）の化合物のそれぞれの２つの市販の鏡像異性体は、対応する非主要なものより強力である、式（Ｉ）の化合物の１つの主要なジアステレオ異性体を提供する。
【００６６】
上記の経路のいずれにおいても、１以上の官能基を保護することが有利であり得ることが認識されるであろう。保護基およびそれらの除去のための手段の例は、T. W. Greene ‘Protective Groups in Organic Synthesis’ (3rd edition, J. Wiley and Sons, 1999)に見出すことができる。好適なアミン保護基としては、アシル（例えば、アセチル）、カルバメート（例えば、２’，２’，２’−トリクロロエトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニルまたはｔ−ブトキシカルボニル）およびアリールアルキル（例えば、ベンジル）が含まれ、これらは、適当であれば、加水分解（例えば、ジオキサン中の塩酸、もしくはジクロロメタン中のトリフルオロ酢酸などの酸を使用）によって、または還元的に（例えば、ベンジルもしくはベンジルオキシカルボニル基の水素化分解、または酢酸中で亜鉛を使用する２’，２’，２’−トリクロロエトキシカルボニル基の還元的除去）によって除去することができる。他の好適なアミン保護基としては、トリフルオロアセチル（−ＣＯＣＦ３）が含まれ、これは塩基触媒による加水分解によって除去することができる。
【００６７】
上記いずれの経路でも、様々な基および部分が分子に導入される合成段階の正確な順序は可変であることが認識されるであろう。この工程の一段階で導入される基または部分が、その後の変換および反応によって影響を受けないように保証し、それに応じて合成段階の順序を選択することは当業者の技術の範囲内である。
【００６８】
式（ＩＩＩ）、（Ｖ）〜（ＶＩＩＩ）、（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＶ）および（ＸＶＩ）の化合物も新規であると考えられるため、本発明の一層さらなる側面をなす。
【００６９】
式（Ｉ）の化合物の絶対立体配置は、既知の絶対立体配置の中間体からの独立したエナンチオ選択的合成によって得ることができる。あるいは、鏡像異性体的に純粋な式（Ｉ）の化合物は、絶対立体配置が既知の化合物に変換され得る。いずれの場合にも、分光分析データ、旋光度および分析的ＨＰＬＣカラムでの保持時間の比較を絶対立体配置の確認に使用することができる。実現可能であれば、第３の選択肢として、Ｘ線結晶学を介した絶対立体配置の決定がある。
【００７０】
使用方法
式（Ｉ）の化合物およびその塩は、αｖインテグリンアンタゴニスト活性、特に、αｖβ６受容体活性を有すると考えられ、従って、αｖβ６アンタゴニストが指示される疾患または病態の治療において潜在的有用性を有する。
【００７１】
従って、本発明は、療法において使用するための式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩は、αｖβ６インテグリンアンタゴニストが指示される疾患または病態の治療において使用することができる。
【００７２】
従って、本発明は、αｖβ６インテグリンアンタゴニストが指示される疾患または病態の治療において使用するための式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００７３】
また、αｖβ６インテグリンアンタゴニストが指示される疾患または病態の治療のための薬剤の製造における式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩の使用も提供される。
【００７４】
また、必要とする対象においてαｖβ６インテグリンアンタゴニストが指示される疾患または病態を治療する方法であって、治療上有効な量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含んでなる方法が提供される。
【００７５】
好適には、それを必要とする対象は哺乳動物、特に、ヒトである。
【００７６】
本明細書で使用する場合、用語「有効な量」は、例えば、研究者または臨床家が求めている組織、系、動物またはヒトの生物学的または医学的応答を誘発する薬物または薬剤の量を意味する。さらに、用語「治療上有効な量」は、そのような量を受容していない対応する対象と比較して、疾患、障害、もしくは副作用の治療、治癒、予防、もしくは寛解の改善、または疾患もしくは障害の進行速度の低下をもたらす任意の量を意味する。この用語はまた、その範囲内に、正常な生理学的機能を増進するために有効な量に含む。
【００７７】
線維性疾患は、修復過程または反応過程にある器官または組織において過剰な線維性結合組織の形成を伴う。αｖβ６アンタゴニストは、αｖβ６インテグリン機能およびαｖインテグリンを介してのトランスフォーミング増殖因子βの活性化に依存するものを含む、様々なそのような疾患または病態の治療において有用であると考えられる。疾患には、限定されるものではないが、肺線維症（例えば、特発性肺線維症、非特異的間質性肺炎（ＮＳＩＰ）、通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）、Ｈｅｒｍａｎｓｋｙ−Ｐｕｄｌａｋ症候群、進行性塊状線維症（炭坑夫塵肺症の合併症）、結合組織疾患関連肺線維症、喘息およびＣＯＰＤでの気道線維症、ＡＲＤＳ関連線維症、急性肺損傷、放射線誘発線維症、家族性肺線維症、肺高血圧）；腎線維症（糖尿病性腎障害、ＩｇＡ腎障害、狼瘡性腎炎、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、移植腎障害、自己免疫腎障害、薬物誘発性腎障害、高血圧関連腎障害、腎性全身性線維症）；肝線維症（ウイルス誘発性線維症（例えば、Ｃ型またはＢ型肝炎）、自己免疫肝炎、原発性胆汁性肝硬変、アルコール性肝臓疾患、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を含む非アルコール性脂肪肝疾患、先天性肝線維症、原発性硬化性胆管炎、薬物誘発性肝炎、肝硬変）；皮膚線維症（肥厚性瘢痕、強皮症、ケロイド、皮膚筋炎、好酸球性筋膜炎、Ｄｕｐｙｔｒｅｎｓ拘縮、Ｅｈｌｅｒｓ−Ｄａｎｌｏｓ症候群、Ｐｅｙｒｏｎｉｅ病、栄養障害型表皮水疱症、口腔粘膜下線維症）；眼線維症（加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ、緑内障）；角膜瘢痕化、角膜損傷および角膜創傷治癒、線維柱帯切除術後の濾過胞瘢痕化の予防；心臓線維症（鬱血性心不全、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、心内膜心筋線維症、肥大性心筋症（ＨＣＭ））、ならびに他の多種の線維性病態（縦隔線維症、骨髄線維症、腹膜後線維症、クローン病、神経線維腫症、子宮平滑筋腫（線維性）、慢性臓器移植拒絶）が含まれ得る。αｖβ１、αｖβ５またはαｖβ８インテグリンのさらなる阻害に関するさらなる利点も存在し得る。
【００７８】
加えて、αｖβ６インテグリンに関連する前癌病変または癌も治療することができる（これらには、限定されるものではないが、子宮内膜癌、基底細胞癌、肝臓癌、結腸癌、子宮頸癌、口腔癌、膵臓癌、乳癌および卵巣癌、カポジ肉腫、巨細胞腫瘍、ならびに癌関連間質が含まれ得る)。血管新生に対する作用から利点を得ることができる病態も、利益を受け得る(例えば、固形腫瘍)。
【００７９】
用語「αｖβ６アンタゴニストが指示される疾患または病態」は、上記病的状態のいずれかまたは総てを含むことが意図される。
【００８０】
１つの態様では、αｖβ６アンタゴニストが指示される疾患または病態は、特発性肺線維症である。
【００８１】
別の態様では、αｖβ６アンタゴニストが指示される疾患または病態は、角膜瘢痕化、角膜損傷および角膜創傷治癒から選択される。
【００８２】
組成物
療法において使用するために、式（Ｉ）の化合物ならびにその薬学的に許容可能な塩を、そのままの化学物質として投与してもよいが、有効成分を医薬組成物として提供することが一般的である。
【００８３】
従って、本発明は、さらなる側面で、式（Ｉ）の化合物またその薬学的に許容可能な塩と１種以上の薬学上許容可能な担体、希釈剤および／または賦形剤を含んでなる医薬組成物を提供する。式（Ｉ）の化合物および薬学的に許容可能な塩は上記の通りである。担体、希釈剤または賦形剤は、組成物の他の成分と適合し、そのレシピエントに有害でないという意味で許容されなければならない。
【００８４】
本発明の別の側面によれば、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を、１種以上の薬学上許容可能な担体、希釈剤または賦形剤と混合することを含む、医薬組成物の調製方法も提供される。医薬組成物は、本明細書に記載の病態のいずれかの治療において使用することができる。
【００８５】
さらに、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含んでなる、αｖβ６インテグリンアンタゴニストが指示される疾患または病態を治療するための医薬組成物も提供される。
【００８６】
さらに、０．０１〜３０００ｍｇの式（Ｉ）の化合物またはその薬学的塩と、０．１〜２ｇの１種以上の薬学上許容可能な担体、希釈剤または賦形剤とを含んでなる医薬組成物も提供される。
【００８７】
式（Ｉ）の化合物は医薬組成物における使用を意図されているので、それらがそれぞれ、好ましくは実質的に純粋な形態で、例えば、少なくとも純度６０％、より好適には少なくとも純度７５％、好ましくは少なくとも純度８５％、特には少なくとも純度９８％（重量に対する重量の％）で提供されることが容易に理解されるであろう。
【００８８】
医薬組成物は、単位用量当たり所定量の有効成分を含有する単位投与形で提供され得る。好ましい単位投与組成物は、有効成分の１日用量もしくは部分用量、またはその適切な分数を含有するものである。従って、そのような単位用量は、１日２回以上投与することができる。好ましい単位投与組成物は、本明細書の上記で挙げたような１日用量もしくは部分用量（１日２回以上投与するため）、または適切なその分数の有効成分を含有するものである。
【００８９】
医薬組成物は、任意の適切な経路、例えば、経口（頬側または舌下を含む）、直腸、吸入、鼻腔内、局所（頬側、舌下または経皮を含む）、膣、目または非経口（皮下、筋肉内、静脈内または皮内を含む）経路による投与に適合させることができる。そのような組成物は、薬学分野で知られている任意の方法によって、例えば、有効成分を担体または賦形剤と会合させることによって製造することができる。
【００９０】
１つの態様では、医薬組成物は経口投与に適合される。
【００９１】
経口投与に適合させた医薬組成物は、カプセル剤もしくは錠剤などの分離した単位；散剤もしくは顆粒；水性液もしくは非水性液中の溶液もしくは懸濁液；可食フォームまたはホイップ；または水中油型液体エマルションもしくは油中水型液体エマルションとして提供され得る。
【００９２】
例えば、錠剤またはカプセル剤の形態での経口投与では、有効薬物成分を、エタノール、グリセロール、水などの経口用の非毒性で薬学上許容可能な不活性担体と合わせることができる。錠剤またはカプセル剤に組み込むために適した散剤は、化合物を好適な微細な粒径（例えば、微粉化によって）に縮小し、例えば、デンプンまたはマンニトールなどの可食炭水化物などの同様に調製された医薬担体と混合することによって調製され得る。香味剤、保存剤、分散剤および着色剤も存在することができる。
【００９３】
カプセル剤は、上記のように粉末混合物を調製し、成形ゼラチンシースに充填することによって製造することができる。コロイドシリカ、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムまたは固体ポリエチレングリコールなどの、流動促進剤および滑沢剤を、充填操作の前に、粉末混合物に添加することができる。カプセル剤が摂取される際に、薬剤の利用度を改善するために、寒天、炭酸カルシウムまたは炭酸ナトリウムなどの崩壊剤または可溶化剤を添加することもできる。
【００９４】
さらに、所望の場合または必要な場合には、好適な結合剤、流動促進剤、滑沢剤、甘味剤、香味剤、崩壊剤および着色剤も、混合物に組み込むことができる。好適な結合剤には、デンプン、ゼラチン、天然の糖（グルコースまたはベータ−ラクトースなど）、トウモロコシ甘味剤、天然および合成ゴム（アラビアガム、トラガカントガムまたはアルギン酸ナトリウムなど）、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、ワックスなどが含まれる。
【００９５】
これらの投与形で使用される滑沢剤には、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが含まれる。
【００９６】
崩壊剤には、限定されるものではないが、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガムなどが含まれる。錠剤は、例えば、粉末混合物を調製し、造粒またはスラグとし、滑沢剤および崩壊剤を添加し、打錠することによって製剤化する。粉末混合物は、適切に微粉化された化合物を、上記のように希釈剤または基剤、ならびに任意選択でカルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、もしくはポリビニルピロリドンなどの結合剤、パラフィンなどの溶解遅延剤、第四級塩などの吸収促進剤、および／またはベントナイト、カオリンもしくリン酸二カルシウムなどの吸収剤と混合することによって調製される。粉末混合物は、シロップ、デンプンペースト、アラビアゴム漿またはセルロースもしくはポリマー材料の溶液などの結合剤で湿らせ、篩に通すことによって顆粒化することができる。造粒の代わりに、粉末混合物を、打錠機に掛けることができ、結果として不完全に形成されたスラグが破砕されて顆粒となる。顆粒剤は、ステアリン酸、ステアリン酸塩、タルクまたは鉱油を添加することによって、錠剤成形金型に粘着することを防止するために滑沢化することができる。次いで、滑沢化された混合物を打錠する。本発明の化合物は、流動性不活性担体と混合して、造粒またはスラグ化工程を行うことなく直接、打錠することもできる。セラックのシールコート、糖またはポリマー材料のコーティング、およびワックスの艶出コーティングからなる透明または不透明の保護コーティングを施すことができる。異なる単位用量を識別するために、これらのコーティングに染料を添加することができる。
【００９７】
溶液、シロップ、およびエリキシルなどの経口用液体は、所定量が、予め決定された量の化合物を含有するように、単位投与形で調製することができる。シロップは、化合物を適宜矯味した水溶液に溶かすことによって調製することができ、エリキシルは、非毒性アルコールビヒクルの使用によって調製する。懸濁剤は、化合物を非毒性ビヒクルに分散させることによって製剤化することができる。エトキシ化イソステアリルアルコールおよびポリオキシエチレンソルビトールエーテルなどの可溶化剤および乳化剤、保存剤、ペパーミントオイルなどの香味添加剤、または天然甘味剤もしくはサッカリンもしくは他の人口甘味剤なども添加することができる。
【００９８】
適当であれば、経口投与用の用量単位組成物を、マイクロカプセル化することができる。処方物は、例えば、粒子材料をポリマー、ワックスなどでコーティングまたはそれに包埋することによって、放出を延長また持続させるように調製することもできる。
【００９９】
本発明の化合物は、小単ラメラ小胞、大単ラメラ小胞および多重ラメラ小胞などのリポソーム送達系の形態で投与することもできる。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリンなどの様々なリン脂質から形成することができる。
【０１００】
経皮投与に適合させた医薬組成物は、長期間にわたってレシピエントの表皮と密着して接触して留まるように意図された別個のパッチ剤として提供することができる。
【０１０１】
局所投与に適合させた医薬組成物は、軟膏、クリーム、懸濁剤、ローション、散剤、液剤、ペースト、ゲル、スプレー、エアロゾルまたはオイルとして製剤化することができる。
【０１０２】
眼または他の外部組織、例えば、口および皮膚の治療では、組成物は、好ましくは、局所用軟膏またはクリームとして塗布される。軟膏に製剤化する場合、有効成分を、パラフィン系または水混和性軟膏剤基剤のいずれかとともに使用することができる。あるいは、有効成分を、水中油型クリーム基剤又は油中水型基剤を用いてクリーム剤に製剤化することができる。本発明の化合物は、局所用点眼剤として投与することができる。本発明の化合物は、１日より長い投与間隔を要する結膜下、房内または硝子体内経路を介して投与することができる。
【０１０３】
眼への局所投与に適合させた医薬組成物には、有効成分が好適な担体、特に、水性溶媒に溶解または懸濁している点眼剤が含まれる。眼に投与される処方物は、眼科的に適合するｐＨおよびモル浸透圧濃度を有する。酢酸、ホウ酸、クエン酸、乳酸、リン酸および塩酸などの酸；水酸化ナトリウム、リン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、および乳酸ナトリウムなどの塩基；ならびにクエン酸塩／デキストロース、重炭酸ナトリウムおよび塩化アンモニウムなどのバッファーを含め、１種以上の眼科的に許容可能なｐＨ調整剤および／または緩衝剤が本発明の組成物に含まれ得る。このような酸、塩基、およびバッファーは、組成物のｐＨを眼科的に許容可能な範囲に維持するのに必要な量で含まれ得る。１以上の眼科的に許容可能な塩は、組成物のモル浸透圧濃度を眼科的に許容可能な範囲とするのに十分な量で組成物を含み得る。このような塩としては、ナトリウム、カリウムまたはアンモニウム陽イオンおよび塩化物、クエン酸、アスコルビン酸、ホウ酸、リン酸、重炭酸、硫酸、チオ硫酸または重亜硫酸陰イオンを有するものが含まれる。
【０１０４】
眼送達デバイスは、複数の定義された放出速度ならびに持続的用量動態および透過性を持った１種以上の治療薬の放出制御のために設計することができる。放出制御は、生分解性／声帯浸食性ポリマー（例えば、ポリ（エチレンビニル）アセテート（ＥＶＡ）、超加水分解するｄ  ＰＶＡ）、ヒドロキシアルキルセルロース（ＨＰＣ）、メチルセルロース（ＭＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ポリカプロラクトン、ポリ（グリコール）酸、ポリ（乳）酸、ポリ無水物の、薬物の拡散、腐食、溶解および浸透を増強するポリマー分子量、ポリマー結晶度、共重合体比、加工条件、表面仕上げ、幾何学、賦形剤添加およびポリマーコーティングの、種々の選択および特性を組み込んだポリマーマトリックスの設計を通して得ることができる。
【０１０５】
眼用デバイスを用いた薬物送達のための処方物は、１種以上の有効薬剤と指示される投与経路に適当なアジュバントを組み合わせることができる。例えば、有効薬剤を、任意の薬学上許容可能な賦形剤、ラクトース、スクロース、デンプン粉末、アルカン酸のセルロースエステル、ステアリン酸、タルク、ステアリン酸マグネシウム、酸化マグネシウム、リン酸および硫酸のナトリウムおよびカルシウム塩、アラビアガム、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリジン、および／またはポリビニルアルコールと混合し、従来の投与向けに錠剤化またはカプセル化することができる。あるいは、本化合物をポリエチレングリコール、プロピレングリコール、カルボキシメチルセルロースコロイド溶液、エタノール、トウモロコシ油、落花生油、綿実油、ゴマ油、トラガカントガム、および／または種々のバッファーに溶解させてもよい。本化合物はまた、生分解性および非生分解性ポリマーの両方の組成物および時間遅延特性を有する担体または希釈剤と混合してもよい。生分解性組成物の代表例としては、アルブミン、ゼラチン、デンプン、セルロース、デキストラン、多糖類、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ヒドロキシブチレート）、ポリ（アルキルカーボネート）およびポリ（オルトエステル）およびそれらの混合物が挙げられる。非生分解性ポリマーの代表例としては、ＥＶＡコポリマー、シリコーンゴムおよびポリ（メチルアクリレート）、およびそれらの混合物が挙げられる。
【０１０６】
眼送達用の医薬組成物はまた、ｉｎ  ｓｉｔｕゲル化可能水性組成物も含む。このような組成物は、眼または涙液と接触した際にゲル化を促進するのに効果的な濃度でゲル化剤を含んでなる。好適なゲル化剤としては、限定されるものではないが、熱硬化性ポリマーが含まれる。用語「ｉｎ  ｓｉｔｕゲル化可能」とは、本明細書で使用する場合、眼または涙液と接触した際にゲルを形成する低粘度の液体を含むだけでなく、眼に投与した際に実質的に高い粘度またはゲル強度を示す半液体およびチキソトロピックゲルなどのより粘稠な液体も含む。例えば、眼への薬物送達に使用するためのポリマーの例の教示の目的で引用することにより本明細書の開示の一部とされるLudwig (2005) Adv. Drug Deliv. Rev. 3; 57:1595-639を参照。
【０１０７】
口腔中への局所投与に適合させた医薬組成物には、ロゼンジ剤、香錠および洗口液が含まれる。
【０１０８】
直腸投与に適合させた医薬組成物は、坐剤または浣腸として提供することができる。
【０１０９】
鼻腔または吸入投与用の投与形は、好都合には、エアロゾル、溶液、懸濁液、ゲルまたはドライパウダーとして処方され得る。
【０１１０】
膣投与に適合させた医薬組成物は、膣坐剤、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォームまたは噴霧処方物として提供され得る。
【０１１１】
非経口投与に適合させた医薬組成物には、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、および組成物を、意図されるレシピエントの血液と等張にする溶質を含有してよい、水性および非水性無菌液、ならびに懸沈殿防止剤および増粘剤を含み得る水性および非水性無菌懸濁剤が含まれる。組成物を、単位用量または多回用量容器、例えば、密封アンプルおよびバイアル中で提供してもよく、使用直前に、無菌液体担体、例えば注射水を添加するだけのフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保存してもよい。即時注射溶液および懸濁液は、無菌粉末、顆粒および錠剤から調製することができる。
【０１１２】
皮下または筋肉内投与に適合された医薬組成物は、ポリ（乳酸−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）共重合体を含み、徐放をもたらす医薬有効成分を含有する微粒子が生成される。
【０１１３】
本発明の化合物の治療上有効な量は、例えば、対象の齢および体重、治療を必要とする厳密な病態およびその重篤度、処方物の性質、ならびに投与経路を含む複数の因子によって決まり、最終的には担当の医師または獣医の裁量にある。本医薬組成物では、経口または非経口投与の各用量単位は、好ましくは、０．０１〜３０００ｍｇ、より好ましくは０．１〜２０００ｍｇの双性イオン親化合物として計算される本発明の化合物を含有する。
【０１１４】
本発明の薬学上許容可能な化合物は、例えば、双性イオンとして計算される式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩１日当たり０．０１ｍｇ〜３０００ｍｇ、もしくは１日当たり０．５〜１０００ｍｇの経口もしくは非経口用量の１日用量（成人患者）で投与することができる。この量は、１日当たり単回用量で、またはより通常には、全１日用量は同じであるように１日当たり複数回（２回、３回、４回、５回もしくは６回）の部分用量で与えてよい。その塩有効量のは、有効量の式（Ｉ）の化合物自体の割合として決定することができる。
【０１１５】
本発明の化合物は、単独で、または他の治療薬と組み合わせて使用することができる。従って、本発明による併用療法は、少なくとも１種の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩の投与、および少なくとも１種の他の薬学上活性な薬剤の使用を含んでなる。好ましくは、本発明による併用療法は、少なくとも１種の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩、および少なくとも１種の他の薬学上活性な薬剤の投与を含んでなる。本発明の１または複数の化合物および１または複数の他の薬学上活性な薬剤は、一緒に単一の医薬組成物で、または別個に投与することができ、別個に投与される場合には、これを同時にまたは任意の順序で逐次に行うことができる。本発明の１または複数の化合物および他の１または複数の薬学上活性な薬剤の量、ならびに投与の相対なタイミングは、所望の併用治療効果が達成されるように選択される。
【０１１６】
よって、さらなる側面では、本発明の化合物と少なくとも１種の他の薬学上活性な薬剤とを含んでなる組合せが提供される。
【０１１７】
従って、一側面では、本発明による化合物および医薬組成物は、アレルギー性疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患の療法、抗線維性療法および閉塞性気道疾患の療法、糖尿病性眼疾患の療法、ならびに角膜瘢痕化、角膜損傷の療法および角膜創傷治癒を含む、１種以上の他の治療薬と組み合わせて使用し得るか、それを含み得る。
【０１１８】
抗アレルギー療法としては、抗原免疫療法（例えば、ハチ毒、花粉、牛乳、落花生、ＣｐＧモチーフ、コラーゲンの成分および断片、口腔または舌下抗原として投与され得る細胞外マトリックスの他の成分）、抗ヒスタミン薬（例えば、セチリジン、ロラチジン、アクリバスチン、フェキソフェナジン、クロルフェナミン）、およびコルチコステロイド（例えば、プロピオン酸フルチカゾン、フロ酸フルチカゾン、二プロピオン酸ベクロメタゾン、ブデソニド、シクレソニド、フロ酸モメタゾン、トリアムシノロン、フルニソリド、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン）が含まれる。
【０１１９】
抗炎症療法としては、ＮＳＡＩＤ（例えば、アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン）、ロイコトリエンモジュレーター（例えば、モンテルカスト、ザフィルルカスト、プランルカスト）、および他の抗炎症療法（例えば、ｉＮＯＳ阻害剤、トリプターゼ阻害剤、ＩＫＫ２阻害剤、ｐ３８阻害剤（ロスマピモド、ジルマピモド）、エラスターゼ阻害剤、β２アゴニスト、ＤＰ１アンタゴニスト、ＤＰ２アンタゴニスト、ｐＩ３Ｋδ阻害剤、ＩＴＫ阻害剤、ＬＰ（リゾホスファチジン酸）阻害剤またはＦＬＡＰ（５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質）阻害剤（例えば、ナトリウム３−（３−（ｔｅｒｔ−ブチルチオ）−１−（４−（６−エトキシピリジン−３−イル）ベンジル）−５−（（５−メチルピリジン−２−イル）メトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イル）−２，２−ジメチルプロパノエート）；アデノシンａ２ａアゴニスト（例えば、アデノシンおよびリガデノソン）、ケモカインアンタゴニスト（例えば、ＣＣＲ３アンタゴニストまたはＣＣＲ４アンタゴニスト）、メディエーター放出阻害剤が含まれる。
【０１２０】
自己免疫疾患の療法としては、ＤＭＡＲＤＳ（例えば、メトトレキサート、レフルノミド、アザチオプリン）、生物薬剤療法（例えば、抗ＩｇＥ、抗ＴＮＦ、抗インターロイキン（例えば、抗ＩＬ−１、抗ＩＬ−６、抗ＩＬ−１２、抗ＩＬ−１７、抗ＩＬ−１８）、受容体療法（例えば、エタネルセプトおよび類似の薬剤）；抗原非特異的免疫療法（例えば、インターフェロンまたは他のサイトカイン／ケモカイン、サイトカイン／ケモカイン受容体モジュレーター、サイトカインアゴニストまたはアンタゴニスト、ＴＬＲアゴニストおよび類似の薬剤）が含まれる。
【０１２１】
他の抗線維性療法としては、ＴＧＦβ合成の阻害剤（例えば、ピルフェニドン）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）および線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）受容体キナーゼを標的とするチロシンキナーゼ阻害剤（例えば、ニンテダニブ（ＢＩＢＦ−１１２０）およびメシル酸イマチニブ（グリベック））、エンドセリン受容体アンタゴニスト（例えば、アンブリセンタンまたはマシテンタン）、酸化防止剤（例えば、Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）；広域抗生物質（例えば、コトリモキサゾール、テトラサイクリン（塩酸ミノサイクリン））、ホスホジエステラーゼ５（ＰＤＥ５）阻害剤（例えば、シルデナフィル）、抗αｖβｘ抗体および薬物（例えば、抗αｖβ６モノクローナル抗体（ＷＯ２００３１０００３３Ａ２に記載されているもの等）、インテツムマブ、シレンジチド）が併用可能である。
【０１２２】
閉塞性気道疾患の療法としては、短期作用型β２−アゴニスト（例えば、サルブタモール）、長期作用型β２−アゴニスト（例えば、サルメテロール、フォルモテロールおよびビランテロール）、短期作用型ムスカリン性アンタゴニスト（例えば、臭化イプラトロピウム）、長期作用型ムスカリン性アンタゴニスト（例えば、チオトロピウム、ウメクリジニウム）などの気管支拡張薬が含まれる。
【０１２３】
いくつかの態様では、治療はまた、本発明の化合物と他の既存の治療様式、例えば、糖尿病性眼疾患の治療のための既存の薬剤、例えば、抗ＶＥＧＦ療法、例えば、ルセンティス（商標）、アバスチン（商標）、およびアフリバーセプト、ならびにステロイド、例えば、トリアムシノロン、およびフルオシノロンアセトニド含有ステロイドインプラントの組合せも含み得る。
【０１２４】
いくつかの態様では、治療はまた、本発明の化合物と他の既存の治療様式、例えば、角膜瘢痕化、角膜損傷の治療または角膜創傷治癒のための既存の薬剤、例えば、ゲンテル（Ｇｅｎｔｅｌ）（商標）、ウシ血液抽出物、レボフロキサシン（商標）、およびオフロキサシン（商標）の組合せも含み得る。
【０１２５】
本発明の化合物および組成物は、癌を治療するために単独で、または化学療法、放射線療法、標的薬剤、免疫療法および細胞もしくは遺伝子療法を含む癌療法と組み合わせて使用され得る。
【０１２６】
適当であれば、治療成分の活性および／または安定性および／または溶解度などの物理的特徴を最適化するために、他の治療成分を、塩の形態で、例えば、アルカリ金属塩もしくはアミン塩もしくは酸付加塩として、またはプロドラッグ、またはエステル、例えば低級アルキルエステル、または溶媒和物、例えば水和物として使用することができることは、当業者には明らかである。適当であれば、治療成分を、光学的に純粋な形態で使用することができることもまた明らかである。
【０１２７】
上記で言及した組合せは、好都合には、医薬組成物の形態で使用するために提供することができ、従って、上記で定義されたような組合せを薬学上許容可能な希釈剤または担体とともに含んでなる医薬組成物は本発明のさらなる側面を表す。そのような組合せの個々の化合物を順次、または個別もしくは組み合わせた医薬組成物として同時に投与することができる。好ましくは、個々の化合物が、組み合わせた医薬組成物として同時に投与される。公知の治療薬の適切な用量は、当業者には容易に分かる。
【０１２８】
本発明の化合物が、通常、吸入、静脈内、経口、鼻腔内、眼内局所、または他の経路よって投与される１種以上の他の治療上有効な薬剤と組み合わせて投与される場合には、結果としての医薬組成物も同じ経路によって投与され得ることが認識されるであろう。あるいは、本組成物の個々の成分は異なる経路によって投与されてもよい。
【０１２９】
以下、本発明を単に例により示す。
【０１３０】
略語
以下のリストは、本明細書で使用される特定の略語の定義を示す。このリストは排他的ではなく、本明細書の下記で定義されていない略語の意味は当業者には容易に分かることが認識されるであろう。
【０１３１】
Ａｃ（アセチル）
ＢＣＥＣＦ−ＡＭ（２’，７’−ビス−（２−カルボキシエチル）−５−（および−６）−カルボキシフルオレセインアセトキシメチルエステル）
ＢＥＨ（エチレン架橋ハイブリッド技術）
Ｂｕ（ブチル）
ＣＢＺ（カルボキシベンジル）
ＣＨＡＰＳ  （３−［（３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−１−プロパンスルホネート）
キラルＯＤ−Ｈ（５μｍシリカゲル上のセルローストリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）コーティング）
キラルパックＡＤ−Ｈ（５μｍシリカゲル上のアミローストリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）コーティング）
キラルパックＩＤ（５μｍシリカゲル上の固定化されたアミローストリス（３−クロロフェニルカルバメート））
キラルパックＡＳ（５μｍシリカゲル上のアミローストリス（（Ｓ）−α−メチルベンジルカルバメート）コーティング）
ＣＤＩ（カルボニルジイミダゾール）
ＣＳＨ（表面チャージハイブリッド技術）
ＣＶ（カラム体積）
ＤＣＭ（ジクロロメタン）
ＤＩＰＥＡ（ジイソプロピルエチルアミン）
ＤＭＦ（Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）
ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）
ＤＳＣ（示差走査熱量測定）
Ｅｔ（エチル）
ＥｔＯＨ（エタノール）
ＥｔＯＡｃ（酢酸エチル）
ｈ（時間）
ＨＣｌ（塩酸）
ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸）
ＬＣＭＳ（液体クロマトグラフィー質量分析）
ＭＤＡＰ（質量分析自動分取ＨＰＬＣ）
ＭＤＣＫ（メイディン・ダービー・イヌ腎臓）
Ｍｅ（メチル）
ＭｅＣＮ（アセトニトリル）
ＭｅＯＨ（メタノール）
ＭＳ（質量スペクトル）
ｍｉｎ（分）
ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）−ＣＨ２Ｃｌ２  ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）のジクロロメタンとの複合体）
Ｐｈ（フェニル）
ｉＰｒ（イソプロピル）
（Ｒ）−ＢＩＮＡＰ（Ｒ）−（＋）−２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフタレン
［Ｒｈ（ＣＯＤ）Ｃｌ］２（（クロロ（１，５−シクロオクタジエン）ロジウム（Ｉ）二量体）
ＲＴ  （保持時間）
ＳＰＥ（固相抽出）
ＴＢＭＥ（ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル）
ＴＥＡ（トリエチルアミン）
ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）
ＴＧＡ（熱重量分析）
ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）
ＴＬＣ（薄層クロマトグラフィー）
ＵＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）
【０１３２】
ブライン(brine)という場合には総て、塩化ナトリウムの飽和水溶液を指す。
【実施例】
【０１３３】
実験の詳細
分析ＬＣＭＳ
分析的ＬＣＭＳを、次のシステムＡ、ＢまたはＣの１つで行った。
【０１３４】
総てのシステムに対するＵＶ検出は、２２０ｎｍ〜３５０ｎｍの波長の平均シグナルであり、質量スペクトルは、交互スキャンポジティブおよびネガティブモードエレクトロスプレーイオン化を使用する質量分析計で記録した。
【０１３５】
本明細書において言及するＬＣＭＳシステムＡ〜Ｄの実験の詳細は以下の通りである。
【０１３６】
システムＡ
カラム：  ５０ｍｍ×２．１ｍｍ  ＩＤ、１．７μｍ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８カラム
流速：  １ｍＬ／分
温度：  ４０℃
溶媒：  Ａ：アンモニア溶液でｐＨ１０に調整した水中１０ｍＭ重炭酸アンモニウム
Ｂ：アセトニトリル
勾配：  時間（分） Ａ％ Ｂ％
０            ９９            １
１．５          ３          ９７
１．９          ３          ９７
２．０        ９９            １
【０１３７】
システムＢ
カラム：  ５０ｍｍ×２．１ｍｍ  ＩＤ、１．７μｍ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８カラム
流速：  １ｍＬ／分
温度：  ４０℃
溶媒：  Ａ：水中０．１％ｖ／ｖギ酸溶液
Ｂ：アセトニトリル中０．１％ｖ／ｖギ酸溶液
勾配：  時間（分） Ａ％ Ｂ％
０            ９７            ３
１．５          ０        １００
１．９          ０        １００
２．０        ９７            ３
【０１３８】
システムＣ
カラム：  ５０ｍｍ×２．１ｍｍ  ＩＤ、１．７μｍ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＣＳＨ  Ｃ１８カラム
流速：  １ｍＬ／分
温度：  ４０℃
溶媒：  Ａ：アンモニア溶液でｐＨ１０に調整した水中１０ｍＭ重炭酸アンモニウム
Ｂ：アセトニトリル
勾配：  時間（分） Ａ％ Ｂ％
０            ９７            ３
１．５          ５          ９５
１．９          ５          ９５
２．０        ９７            ３
【０１３９】
システムＤ
カラム：  ５０ｍｍ×２．１ｍｍ  ＩＤ、１．７μｍ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８カラム
流速：  １ｍＬ／分
温度：  ４０℃
溶媒：  Ａ：水中０．１％  ｖ／ｖトリフルオロ酢酸溶液
Ｂ：アセトニトリル中０．１％ｖ／ｖトリフルオロ酢酸
勾配：  時間（分） Ａ％ Ｂ％
０            ９７            ３
１．５          ５          ９５
１．９          ５          ９５
２．０        ９５            ５
【０１４０】
中間体１：７−（ブロモメチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン（化合物ＸＶ）
【化２５】
0006611799.tif 000026
０℃にて窒素下で、三臭化リン（０．５６５ｍＬ，５．９９ｍｍｏｌ）を、無水アセトニトリル（５０ｍＬ）中、（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）メタノール（化合物ＸＩＶ））の懸濁液に滴状添加した：（ＵＳ２００４００９２５３８，８０ページ，［０８４４］を参照のこと）（８２０ｍｇ，４．９９ｍｍｏｌ）。添加したところ濃い橙色の沈殿物が生成され、淡い橙色に変化した。反応混合物を０℃にて１時間撹拌し、その時間までには反応が完了した。混合物を真空内濃縮し、残渣を酢酸エチル（２５０ｍＬ）とＮａＨＣＯ３（２５０ｍＬ）の飽和水溶液に区分けした。水性相をさらに酢酸エチル（２５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機溶液を疎水性フリットに移し、次いで真空内濃縮し、標題化合物（１．０５ｇ，９３％）をフワフワしたクリーム状の固体として得た：ＬＣＭＳ（システムＣ）ＲＴ＝０．９５分，ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ  ２２７，２２９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１４１】
中間体２：トリフェニル（（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）−メチル）臭化ホスホニウム（化合物（ＸＶＩ））
【化２６】
0006611799.tif 000027
アセトニトリル（９８ｍＬ）中、７−（ブロモメチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン（化合物（ＸＶ），中間体１）（１．００ｇ，４．４０ｍｍｏｌ）の溶液をトリフェニルホスフィン（１．２７０ｇ，４．８４ｍｍｏｌ）で処理し、溶液を一晩中室温にて窒素下で撹拌した。混合物を真空内濃縮し、濃いクリーム固体が得られ、それを次いでジエチルエーテルで粉末化し、標題化合物（２．１３９ｇ，９９％）を淡いクリーム固体として得た：ＬＣＭＳ（システムＣ）ＲＴ＝１．２３分，ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ  ４０９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１４２】
中間体３：３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）ビニル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｅ，Ｚ）ベンジル（化合物（ＶＩＩＩ））
【化２７】
0006611799.tif 000028
撹拌した、ＤＣＭ（３ｍＬ）およびＤＭＳＯ（０．３ｍＬ）中、３−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボン酸（＋）−ベンジル（化合物（ＩＸ）：Wuxi App Tecより入手可能）（２６０ｍｇ，１．０３ｍｍｏｌ）の溶液を、窒素下で、ＤＩＰＥＡ（０．８９６ｍＬ，５．１３ｍｍｏｌ）で処理した。０−５℃（氷浴）に冷却した後、およそ５分間ピリジン三酸化硫黄（３２７ｍｇ，２．０５ｍｍｏｌ）を少量ずつ添加し、アルコール化合物（ＩＸ）を対応する単離されていないアルデヒド化合物（Ｘ）に酸化させた。冷却浴を取り外し、０．５時間撹拌を継続した。その間、無水ＤＣＭ（１０ｍＬ）中、トリフェニル（（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）−メチル）臭化ホスホニウム（化合物（ＸＶＩ）、調製は中間体２を参照のこと）（５５３ｍｇ，１．１３ｍｍｏｌ）の溶液を、窒素下で、およそ５分、ｔｅｒｔ−ブトキシドカリウム（ＴＨＦ中１Ｍ）（１．２３２ｍＬ，１．２３２ｍｍｏｌ）で滴状処理し、結果として橙色溶液を得た。撹拌を１０分継続し、次いでアルデヒド（式（Ｘ））溶液を１回（one shot）でイリド溶液に添加し、混合物を大気温度にて２２時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭ（２０ｍＬ）で希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（２０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、次いで真空内蒸発させた。濃い褐色残渣を、３０分間、２０ｇシリカＳＰＥカートリッジ上でのクロマトグラフィーによって精製し、０−１００％酢酸エチル−シクロヘキサンの勾配で溶出し、標題化合物を２つの幾何学的異性体として得た。：
異性体１：藁色のガム（１２３．４ｍｇ，３１％），ＬＣＭＳ（システムＡ）ＲＴ＝１．２８分，９５％，ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ  ３８２（Ｍ＋Ｈ）＋および
異性体２：藁色のガム（１２１．５  ｍｇ，  ３１％），ＬＣＭＳ（システムＡ）ＲＴ＝１．２２分，９１％，ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ  ３８２（Ｍ＋Ｈ）＋
全体の収量＝２４４．９ｍｇ，６２．５％
【０１４３】
その後、中間体３の形状として（Ｒ）が示され、２つの幾何学的異性体は：３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）ビニル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｒ，Ｅ）−ベンジルおよび３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）ビニル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｒ，Ｚ）−ベンジルであった。
【０１４４】
中間体４：３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−カルボン酸ベンジル（化合物（ＶＩＩ））
【化２８】
0006611799.tif 000029
ＤＭＦ（２ｍＬ）中、３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）ビニル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｅ，Ｚ）−ベンジル（化合物ＶＩＩＩ，中間体３）（２４４ｍｇ，０．６４０ｍｍｏｌ）（１：１，Ｅ：Ｚ）の溶液を、ベンゼンスルホニルヒドラジド(Alfa Aesarより入手可能）（２７５ｍｇ，１．６０ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（３５４ｍｇ，２．５６ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を１時間１３０℃まで加熱し、次いで冷却させ、ＤＣＭと水に区分けした。有機相を水で洗浄し、疎水性フリットに通して乾燥させた。有機溶液を真空内蒸発させ、残渣の橙色油を２０分にわたって０−５０％［（３：１ＥｔＯＡｃ−ＥｔＯＨ）−ＥｔＯＡｃ］の勾配で溶出するシリカカートリッジ（２０ｇ）上でのクロマトグラフィーによって精製した。適切な画分を合わせ、真空内蒸発させ、標題化合物（１５０ｍｇ，６１％）を淡い黄色ガムとして得た：ＬＣＭＳ（システムＡ）ＲＴ＝１．２４分，９０％，ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ  ３８４（Ｍ＋Ｈ）＋。その後、中間体４の絶対的形状として（Ｓ）が示され、それ故に化合物は、３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｓ）−ベンジルである。中間体３の  （Ｒ）から中間体４の（Ｓ）への変化は、何よりも二重結合の除去に起因する。
【０１４５】
中間体５：７−（２−（３−フルオロピロリジン−３−イル）エチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン（化合物（Ｖ））
【化２９】
0006611799.tif 000030
炭素上１０％のパラジウム（０．５０ｇ）を含有するエタノール（７０ｍＬ）中、撹拌した３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−カルボン酸ベンジル（化合物（ＶＩＩ，中間体４）  （４．６７ｇ，１２．２ｍｍｏｌ）溶液を、水素雰因気下で７時間撹拌した。ＬＣＭＳは、不完全な脱保護を示したため、追加の炭素上１０％のパラジウム（０．２５ｇ）を添加し、混合物を一晩中水素雰因気下で撹拌した。反応混合物は濃い灰色懸濁液として存在したため、原料を溶解しきるため混合物が黒色となるまでＤＣＭを添加した。触媒を濾過によってセライトのパッドを解して除去し、濾液をおよび洗浄物を真空内蒸発させた。残渣をＤＣＭから蒸発させ、標題化合物を橙色油（３．２８ｇ）として得た：ＬＣＭＳ（システムＡ）ＲＴ＝０．７９分，９０％，ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ  ２５０（Ｍ＋Ｈ）＋。その後、中間体５の形状として（Ｓ）が示され、化合物の名称は（Ｓ）−７−（２−（３−フルオロピロリジン−３−イル）エチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジンである。
【０１４６】
中間体６：［７−（２−（３−フルオロピロリジン−３−イル）エチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン，（化合物（Ｖ））メタンスルホン酸塩
【化３０】
0006611799.tif 000031
この化合物（Ｖ）の塩は、上記化合物（Ｖ）の精製法として調製および結晶化され得る。
【０１４７】
２−ブタノール（５ｍＬ）を、７−（２−（３−フルオロピロリジン−３−イル）エチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン（化合物（Ｖ））（１．０ｇ，４．０ｍｍｏｌ）に添加し、混合物を完全な溶解が達成されるまで加熱した。メタンスルホン酸（０．２６０ｍＬ，４．０１ｍｍｏｌ）を温かい溶液に添加し、混合物を撹拌しながら８０℃に加熱した。次いで、溶液を大気温度に冷ました。直ちに沈殿が認められなかったため、溶液を冷蔵庫（およそ４℃）内でさらに冷却した。３日後、顕著な量の固体が観察された。固体を濾過によって単離死、冷たい２−ブタノールで洗浄し、さらに真空内乾燥させ、標題化合物（６００ｍｇ，４３％）を淡い黄色固体として得た：ＬＣＭＳ（システムＡ）ＲＴ＝０．８０分，１００％，ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ  ２５０（Ｍ＋Ｈ）＋；４０％ＥｔＯＨ（０．２％イソプロピルアミン含有）−ヘプタン溶出、流速１ｍＬ／分、検出２３５ｎｍの、キラルパックＡＤカラム（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）での分析的キラルＨＰＬＣ  ＲＴ＝８．４１分，９９．６％およびＲＴ＝１２．０３分，０．４％。その後、中間体６の形状として（Ｓ）が示され、化合物の名称は（Ｓ）−７−（２−（３−フルオロピロリジン−３−イル）エチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジンメタンスルホン酸塩である。
【０１４８】
中間体７：４−アセトキシブト−２−エン酸（Ｅ）−メチル（化合物（ＶＩ））
【化３１】
0006611799.tif 000032
ＭｅＣＮ（３０ｍＬ）中、酢酸ナトリウム（３．５ｇ，４２ｍｍｏｌ）の懸濁液を、４−ブロモクロトン酸メチル (Aldrich) （３．３３ｍＬ，５ｇ，２８ｍｍｏｌ）で処理し、混合物を３日間５０℃まで加熱した。混合物をエーテルで希釈し、次いで濾過した。固体をエーテルで洗浄し、合わせた濾液および洗浄物を低減した圧力下で蒸発させた。蒸発後、残渣をエーテルと水に区分けした。有機相を水性重炭酸ナトリウムで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、低減した圧力下で蒸発させ、淡い橙色油を得た。ＮＭＲは生成物および出発材の混合物を示したため、酢酸ナトリウム（３．４４ｇ，４２ｍｍｏｌ）を残渣油に添加し、続けてＭｅＣＮ（１０ｍＬ）を添加し、混合物を週末中７０℃まで加熱した。混合物を低減した圧力下で濃縮し、残渣をエーテルと水に区分けした。有機溶液を水、ブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過した。濾液を低減した圧力下で蒸発させ標題化合物（３．５５ｇ，８０％）を橙色油として得た：NMR δ (CDCl3) 6.92 (1H, dt, J 16, 5 Hz), 6.01 (1H, dt, J 16, 2 Hz), 4.72 (2H, dd, J 5, 2 Hz), 3.73 (3H, s), 2.10 (3H, s)。
【０１４９】
中間体８：４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）ブト−２−エン酸（Ｅ）−メチル（化合物（ＩＩＩ））
【化３２】
0006611799.tif 000033
ＤＣＭ（２ｍＬ）中、４−アセトキシブト−２−エン酸（Ｅ）−メチル（化合物（ＶＩ）、調製するには中間体７を参照のこと）（１２７ｍｇ，０．８０２ｍｍｏｌ）、７−（２−（３−フルオロピロリジン−３−イル）エチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン（化合物（Ｖ）、調製するには中間体５を参照のこと）（２００ｍｇ，０．８０２ｍｍｏｌ）およびＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）−ＣＨ２Ｃｌ２付加物（６５．７ｍｇ，０．０８０ｍｍｏｌ）の混合物を大気温度にて２時間撹拌した。ＬＣＭＳは、約５０％の転換を示したため、ＤＩＰＥＡ（０．２７９ｍＬ，１．６０ｍｍｏｌ）を添加し、溶液を室温にて２時間撹拌した。ＬＣＭＳは生成物へのほぼ完全な転換を示した。原料を直接カラムにロードし、シクロヘキサン中、２０分にわたって０−１００％ＥｔＯＡｃの勾配で溶出するクロマトグラフィー（２０ｇアミノプロピルカートリッジ）によって精製した。適切な画分を合わせ、標題化合物（１０１．４ｍｇ，３６％）を得た：ＬＣＭＳ（システムＡ）ＲＴ＝１．０８分，９５％，ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ  ３４８（Ｍ＋Ｈ）＋。中間体８は、形状として（Ｓ）を示し、名称はして４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）ブト−３−エン酸（Ｓ，Ｅ）−メチルであった。
【０１５０】
中間体９：３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）ビニル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｅ，Ｚ）（Ｓ）−ベンジル（化合物（ＸＸＩＩＩ））
【化３３】
0006611799.tif 000034
ジクロロメタン（６０ｍＬ）およびＤＭＳＯ（５．８６ｍＬ，８３ｍｍｏｌ）中、撹拌した（３−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボン酸Ｒ）−（−）−ベンジル［（−）−化合物（ＩＸ）］ (Wuxi App Tecより入手可能)（４．１８ｇ，１６．５０ｍｍｏｌ）の溶液を、窒素下でＤＩＰＥＡ（１４．４１ｍＬ，８３ｍｍｏｌ）で処理した。氷浴中で０−５℃に冷却した後、およそ５分間ピリジン三酸化硫黄（５．４０ｇ，３３．９ｍｍｏｌ）を少量ずつ添加した。溶液は淡い黄色に変化し、撹拌をおよそ０．５時間継続し、黄色溶液を得た。溶液を希釈ＨＣｌ（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させた（ＭｇＳＯ４）。次いで、トリフェニル（（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）メチル）臭化ホスホニウム（化合物ＸＶＩ，中間体２）（８．０６ｇ，１６．４７ｍｍｏｌ）および少量のＤＣＭ（およそ５ｍＬ）を添加し、その後シクロヘキサン（３．８１ｍＬ）を添加し、淡い橙色溶液を得た。ｔｅｒｔ−ブトキシドカリウム（１９．８０ｍＬ，１９．８０ｍｍｏｌ）を個の溶液に滴状添加し、結果としてクリーム色の懸濁液が得られた。１時間後、反応混合物をＤＣＭ（２００ｍＬ）で希釈し、飽和水性重炭酸ナトリウム（２００ｍＬ）およびブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、次いで真空内蒸発させた。濃い橙色油は一晩で固化し、ジエチルエーテル（およそ３０ｍＬ）で粉末下し、次いで濾過し、クリーム固体および黄色濾液を得た。濾液を真空内蒸発させ、橙色油が得られ、これを３３０ｇ順相シリカカートリッジに適用し、シクロヘキサン／酢酸エチル勾配（０−１００％酢酸エチル、５０分間）で溶出した。画分１６−４０を真空内蒸発させ、標題化合物を（Ｅ）および（Ｚ）幾何学的異性体の混合物（３．９５３ｇ，６３％）として藁色ガムとして得た：ＬＣＭＳ（システムＣ）ＲＴ＝１．２８分，５０％および１．３４分，４６％ ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ  ３８２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５１】
中間体１０：３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｒ）−ベンジル
【化３４】
0006611799.tif 000035
ＤＭＦ（４０ｍＬ）中、撹拌した３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）ビニル）ピロリジン−１−カルボン酸（ＥおよびＺ）−（Ｓ）−ベンジル（中間体９）（３．８１４ｇ，１０．００ｍｍｏｌ）の溶液を、窒素下で、炭酸カリウム（５．５３ｇ，４０．０ｍｍｏｌ）、続けてベンゼンスルホノヒドラジド（４．３８ｇ，２５．４ｍｍｏｌ）で処理し、黄色液体を得た。混合物を１時間１００℃まで加熱し、次いで大気温度まで冷まし、セライトを通して濾過した。濾液を真空内蒸発させ、クリーム色のスラリーを得た。これを水（１００ｍＬ）と酢酸エチル（１００ｍＬ）に区分けし、有機層をさらに水（４×１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、次いで真空内蒸発させ、黄色油（３．２６１ｇ）を得た。これを週末中高真空ラインに放置した（２．９８２ｇ）。油を最小限のＤＭＳＯ（およそ３ｍＬ）中に溶解し、１２０ｇ逆相カートリッジに適用し、１２ＣＶにわたって１０ｍＭ水性重炭酸アンモニウム中、１０−１００％（０．１％のＮＨ３含有アセトニトリル）の勾配で溶出した。画分６−９を部分的に真空内蒸発させ、アセトニトリルを除去した。残留溶液を水（４０ｍＬ）およびＤＣＭ（６０ｍＬ）で希釈し、分離させた。水性層をさらにＤＣＭ（３×３０ｍＬ）で抽出し、有機抽出物を合わせ、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、次いで真空内蒸発させて標題化合物（２．１４５ｇ，５６％）を淡い黄色油として得た：ＬＣＭＳ（システムＣ）：ＲＴ＝１．２５分，ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ  ３８４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５２】
中間体１１：（Ｒ）−７−（２−（３−フルオロピロリジン−３−イル）エチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン 
【化３５】
0006611799.tif 000036
エタノール（５０ｍＬ）中、３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｒ）−ベンジル（中間体１０）（２．３３４ｇ，６．０９ｍｍｏｌ）の溶液を、炭素上１０％のパラジウム（２５０ｍｇ，０．２３５ｍｍｏｌ）に添加し、混合物を水素雰因気下で３時間撹拌し、その時点で炭素上のパラジウム（１０７．２ｍｇ）をより添加した。反応物を一晩中撹拌した。ＤＣＭ（およそ３０ｍＬ）を添加し、混合物を窒素下でセライトを通して濾過した。濾液を真空内蒸発させ標題化合物（１．５７５ｇ）を黄色油として得た：ＬＣＭＳ（システムＣ）ＲＴ＝０．８３分，ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ  ２５０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５３】
中間体１２：４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）ブト−２−エン酸（Ｒ，Ｅ）−メチル
【化３６】
0006611799.tif 000037
４−アセトキシブト−２−エン酸（Ｅ）−メチル（中間体７，化合物ＶＩ）（０．９５１ｇ，６．０１ｍｍｏｌ）、（Ｒ）−７−（２−（３−フルオロピロリジン−３−イル）エチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン（中間体１１）（１．５２０ｇ，６．１０ｍｍｏｌ）、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）−ＣＨ２Ｃｌ２付加物（０．２４２ｇ，０．３３１ｍｍｏｌ）および酢酸カリウム（２．０８３ｇ，２１．２２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２５ｍＬ）中に溶解させ、反応混合物を窒素下で２０時間撹拌し、橙色液体（２．１８８ｇ）を得た。反応混合物をＤＣＭ（５０ｍＬ）と水（５０ｍＬ）に区分けし、もう一度ＤＣＭ（５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空内除去し、残渣をＤＣＭ中で溶解させ、２０分にわたって０−１００％酢酸エチル−シクロヘキサンの勾配を用いるアミノプロピルカートリッジ（５０ｇ）上で精製した。適切な画分を合わせ、真空内蒸発させ標題化合物（１．５９ｇ，７５％）を黄色油として得た。ＬＣＭＳ（システムＣ）：ＲＴ＝１．０７分，ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ  ３４８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５４】
中間体１３．４−（（Ｒ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸メチル
【化３７】
0006611799.tif 000038
１，４−ジオキサン（１０ｍＬ）中、４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）ブト−２−エン酸（Ｒ，Ｅ）−メチル（中間体１２，化合物（Ｒ）−ＩＩＩ）（０．８ｇ，２．３０３ｍｍｏｌ）、（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ボロン酸（Manchester Organics, EnamineまたはCombi-Blocksより入手可能）（１．３８９ｇ，７．０９ｍｍｏｌ）およびクロロ（１，５−シクロオクタジエン）ロジウム（Ｉ）二量体（５７ｍｇ，０．１１５ｍｍｏｌ）の溶液を脱気した。１，４−ジオキサン（３．３３ｍＬ）中、（Ｒ）−ＢＩＮＡＰ（０．１７３ｇ，０．２７８ｍｍｏｌ）および３．８Ｍ水酸化カリウム（１．５１５ｍＬ，５．７６ｍｍｏｌ）の溶液を脱気した。後者の溶液を前者の溶液に添加し、混合物を窒素下で９０℃にて１．５時間撹拌した。反応混合物を冷却させ、次いでＴＢＭＥ（５０ｍＬ）および２Ｍ塩酸（３０ｍＬ）で区分けした。水性相を飽和重炭酸ナトリウム溶液で塩基性化し、次いで酢酸エチル（３×３０ｍＬ）を用いて抽出した。酢酸エチル抽出物をブラインで洗浄し、乾燥させた（ＭｇＳＯ４）。溶媒を真空内除去し、残渣を最小限のＤＣＭで溶解させ、アミノプロピルカートリッジ（５０ｇ）上にロードし、２０分にわたって０−５０％酢酸エチル−シクロヘキサンの勾配で溶出してクロマトグラフィーを行った。適切な画分を合わせ、真空内蒸発させ標題化合物をジアステレオ異性体の混合物として（０．７ｇ；比８６：１４）淡い黄色油として得た：ＬＣＭＳ（システムＣ）ＲＴ＝１．２９分，ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ  ５００（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５５】
例の製造
例１：（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸および
例２：（Ｒ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸
【化３８】
0006611799.tif 000039
【化３９】
0006611799.tif 000040
４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）ブト−２−エン酸（Ｓ，Ｅ）−メチル  （中間体８）（１０１．４ｍｇ，０．２９２ｍｍｏｌ）、３．８Ｍ  ＫＯＨ（ａｑ）（０．２３０ｍＬ，０．８７６ｍｍｏｌ）およびボロン酸（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）(Enamine LLC, からの化合物（ＩＶ））（１７２ｍｇ，０．８７６ｍｍｏｌ）を、１，４−ジオキサン（２ｍＬ）中に溶解させ、溶液を脱気した。［Ｒｈ（ＣＯＤ）Ｃｌ］２（７．２０ｍｇ，０．０１５ｍｍｏｌ）および（Ｒ）−ＢＩＮＡＰ（２１．８１ｍｇ，０．０３５ｍｍｏｌ）を、１，４−ジオキサン（２ｍＬ）中に懸濁し、脱気した。次いで、反応物の前者溶液を、窒素下で後者の触媒溶液に添加した。反応混合物を加熱し撹拌した（５０℃  ２時間）。次いで、混合物をＳＣＸ  カートリッジ（１０ｇ）（１ＣＶ  ＭｅＯＨ，１ＣＶ  ＭｅＣＮで事前処理したもの）上にロードし、１０ＣＶ  ＤＭＳＯ、４ＣＶ  ＭｅＣＮで洗浄し、ＭｅＯＨ（４ＣＶ）中２Ｍ  ＮＨ３で溶出した。塩基性画分を低減した圧力下で蒸発させた。残渣を高真空下で１２時間乾燥させ、４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸（Ｓ）−メチル（化合物（ＩＩ））（１３１．３ｍｇ，９３％）を得た。
【０１５６】
このメチルエステル、化合物（ＩＩ）をＴＨＦ（２ｍＬ）中に溶解させ、水性１Ｍ  ＬｉＯＨ（１．４５９ｍＬ，１．４５９ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を室温にて１８時間撹拌した。ＬＣＭＳはカルボン酸への完全な加水分解を示し、２ＭＨＣｌ（０．８７６ｍＬ，１．７５１ｍｍｏｌ）を添加し、溶液をＳＣＸカートリッジ（１０ｇ）（１ＣＶ  ＭｅＯＨ，１ＣＶ  ＭｅＣＮで事前処理したもの）上にロードし、４ＣＶ  ＭｅＣＮで洗浄し、ＭｅＯＨ（４ＣＶ）中２Ｍ  ＮＨ３で溶出した。塩基性画分を低減した圧力下で蒸発させ、粗製生成物をガム（１２７ｍｇ，９０％）として得た。６０％ＥｔＯＨ（０．２％イソプロピルアミン含有）−ヘプタン溶出、流速＝１．０ｍＬ／分、検出２１５ｎｍの、キラルセルＯＪ−Ｈカラム（４．６ｍｍ  ｉｄ×２５ｃｍ）での分析的キラルＨＰＬＣ  ＲＴ＝９．０分，８８％およびＲＴ＝１３．８分，１２％。式（Ｉ）の化合物のジアステレオ異性体混合物を、６０％ＥｔＯＨ−ヘプタン溶出、流速＝３０ｍＬ／分、検出２１５ｎｍの、キラルセルＯＪ−Ｈカラム（３ｃｍ×２５ｃｍ）での分取キラルＨＰＬＣによって分離させ、標題化合物の２つの個別ジアステレオ異性体を得た。
【０１５７】
例１（７８ｍｇ，５５％）：６０％ＥｔＯＨ（０．２％イソプロピルアミン含有）−ヘプタン溶出、流速＝１．０ｍＬ／分、検出２１５ｎｍの、キラルセルＯＪ−Ｈ  カラム（４．６ｍｍ  ｉｄ×２５ｃｍ）での分析的キラルＨＰＬＣ  ＲＴ＝９．０分,９８．７％；ＬＣＭＳ（システムＤ）ＲＴ＝０．５２分，１００％，ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ  ４８６（Ｍ＋Ｈ）＋および（システムＣ）ＲＴ＝０．８１分，９２％，ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ  ４８６（Ｍ＋Ｈ）＋ 1H NMR (CDCl3, 600MHz): δ 8.45 (br s, 1H), 7.21 (t, J=7.7 Hz, 1H), 7.16 (d, J=7.2 Hz, 1H), 6.86-6.73 (m, 3H), 6.31 (d, J=7.2 Hz, 1H), 4.12 (t, J=4.4 Hz, 2H), 4.08 (br s, 1H), 3.75 (td, J=4.7, 0.8 Hz, 2H), 3.73-3.68 (m, 1H), 3.47 (br s, 2H), 3.46 (d, J=1.1 Hz, 2H), 3.42 (br t, J=5.1 Hz, 2H), 3.00-2.85 (m, 2H), 2.82-2.75 (m, 1H), 2.70-2.66 (m, 1H), 2.63-2.57 (m, 1H), 2.73-2.55 (m, 3H), 2.49 (q, J=9.1 Hz, 1H), 2.45 (dd, J=11.9, 3.7 Hz, 1H), 2.23-1.97 (m, 4H), 1.95-1.80 (m, 3H), ［α］Ｄ２０＋５１（エタノール中ｃ＝０．７２）。
【０１５８】
例１の不斉中心の絶対的形状が決定され、化合物は（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸（下記参照）であることが見出された。
【化４０】
0006611799.tif 000041
【０１５９】
例２（１０ｍｇ，７％）：６０％ＥｔＯＨ（０．２％イソプロピルアミン含有）−ヘプタン溶出、流速＝１．０ｍＬ／分、検出２１５ｎｍの、キラルセルＯＪ−Ｈカラム（４．６ｍｍ  ｉｄ×２５ｃｍ）での分析的キラルＨＰＬＣ  ＲＴ＝１２．５分，＞９９．５％；ＬＣＭＳ（システムＣ）ＲＴ＝０．８２分，８４％，ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ  ４８６（Ｍ＋Ｈ）＋。［α］Ｄ２０−２８（エタノール中ｃ＝０．５０）。
【０１６０】
例１の不斉中心の絶対的形状が決定され、化合物は構造式（Ｒ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸であることが見出された。
【化４１】
0006611799.tif 000042
【０１６１】
例３．（Ｒ）−４−（（Ｒ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸、および
例４．（Ｓ）−４−（（Ｒ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸
【化４２】
0006611799.tif 000043
メタノール（１ｍＬ）中、４−（（Ｒ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸メチル（中間体１３）（１００ｍｇ，０．２００ｍｍｏｌ）の溶液に水酸化ナトリウム水溶液（２Ｍ，０．５００ｍＬ）を添加し、反応混合物を室温にて２時間撹拌した。反応混合物を、２Ｍ塩酸を用いてｐＨ７に酸性化した。溶液を水（１０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をブラインで洗浄し、乾燥させた（ＭｇＳＯ４）。溶媒を真空内除去し、若干粘性な無色のガラス（６２ｍｇ，６４％）を得た：ＬＣＭＳ（システムＡ）ＲＴ＝０．８分，ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ  ４８６（Ｍ＋Ｈ）＋。６０％ＥｔＯＨ−ヘプタン、流速１ｍＬ／分で溶出し、検出２１５ｎｍでする、キラルセルＯＪカラム（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）上での分析的キラルＨＰＬＣ  ＲＴ＝７．４分，１６％およびＲＴ＝１１．８分，８４％。ジアステレオ異性体を、５０％ＥｔＯＨ含有ヘプタン溶出、流速３０ｍＬ／分の、キラルセルＯＪ−Ｈカラム（２５０ｍｍ×３０ｍｍ）上の分取キラルＨＰＬＣによって分離させ、例３および４として２つのジアステレオ異性体を得た。
例３（６ｍｇ，６％）：ＬＣＭＳ（システムＣ）ＲＴ＝０．８０分，９４％，ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ  ４８６（Ｍ＋Ｈ）＋；６０％ＥｔＯＨ−ヘプタン溶出、流速１ｍＬ／分、検出２１５ｎｍの、キラルセルＯＪカラム（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）での分析的キラルＨＰＬＣ  ＲＴ＝７．２分，＞９９．５％。（Ｒ）−４−（（Ｒ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸。
例４（３３ｍｇ，３４％）：ＬＣＭＳ（システムＣ）ＲＴ＝０．８０分，１００％，ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ４８６（Ｍ＋Ｈ）＋；６０％ＥｔＯＨ−ヘプタン溶出、流速１ｍＬ／分、検出２１５ｎｍの、キラルセルＯＪ  カラム（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）での分析的キラルＨＰＬＣ  ＲＴ＝１１．８分，＞９９．５％。（Ｓ）−４−（（Ｒ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸。
【０１６２】
例５.（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸マレイン酸塩
ＭｅＣＮ（１００μＬ）を（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸（例１）（１１２．７ｍｇ）に添加し、６０℃まで加熱した。溶液に、マレイン酸（固体、〜１当量、２６．８２ｍｇ）を、本特許出願と同日に出願した我々の特許出願に記載され、かつ参照することにより本明細書に組み込まれた、（Ｓ）−４−（Ｓ）−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−モルホリノフェニル）ブタン酸マレイン酸塩のシードと供に添加し、溶液を３時間６０℃に保った。溶液を１時間５℃毎に保ちながら、段階的に６０℃から５℃へ冷却し、最大１６時間５℃にて撹拌した。固体を真空濾過によって単離し、１５分間空気乾燥させた。結晶性マレイン酸塩の収量は最大４１％（５７．３ｍｇ）であった。
【０１６３】
ＭｅＣＮ（３００μＬ）を（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸（例１）（２９８．５４ｍｇ）に室温にて添加した。溶液にマレイン酸（固体、〜１当量，７１．０５ｍｇ）を添加した。懸濁液を６０℃に加熱し、透明溶液を得た。マレイン酸塩（上記で得られたもの）のシードを添加したが、シードは溶解した。溶液を１時間６０℃に保ち、５３℃未満に冷却し、再度シードした。シードは溶解したが、ゆっくりであった。溶液をゆっくり５℃まで冷却し、濃厚な懸濁液がもたらされた。この懸濁液にジ−イソプロピルエーテル（９００μＬ）を添加し、室温にて２日間撹拌した。固体を真空濾過によって単離させ、ジ−イソプロピルエーテルで洗浄し、１時間空気乾燥させ、４０℃にて一晩中真空オーブン内で乾燥させた。結晶性マレイン酸塩の収量は３５２．９ｍｇ，９５％であった。
【０１６４】
例６.（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸シトラコン酸塩
【化４３】
0006611799.tif 000044
無水アセトニトリル（０．１ｍＬ）を（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸（例１）（５０５ｍｇ，１．０４ｍｍｏｌ）に添加し、大気温度にて溶解させた。シトラコン酸（２８．４ｍｇ，０．２１８ｍｍｏｌ） (Sigmaより入手可能)を添加し、懸濁液を６０℃に加熱し、透明な黄色溶液が得られ、次いで最大５０℃未満に冷却し、そこで５分間保持した。溶液を４０℃に冷却し、次いで撹拌することなくマレイン酸塩（例５）がシードされた。混合物を一晩冷蔵庫内に放置し、次いでジイソプロピルエーテル（０．７５ｍＬ）で処理したところ、２つの層が観察され、１時間冷蔵庫（３℃未満〜４℃）内に戻し、続けて冷凍庫（−２２〜２０℃）内に１時間入れ、冷蔵庫内に４日間戻した。沈殿／結晶化が発生し、液体をピペットで除去し、固体を一晩中空気乾燥させ、標題化合物（９９ｍｇ，７７％）を白色結晶性固体として得た。1H NMR (600 MHz, D2O) 7.53-7.50 (m, 1H), 7.39-7.35 (m, 1H), 7.01-6.98 (m, 1H), 6.97-6.94 (m, 2H), 6.57-6.55 (m, 1H), 5.84-5.82 (m, 1H), 4.21-4.18 (m, 2H), 3.81-3.79 (m, 2H), 3.77-3.69 (m, 1H), 3.68-3.61 (m, 2H), 3.66-3.57 (m, 2H), 3.52-3.42 (m, 1H), 3.44-3.41 (m, 2H), 3.41 (s, 3H), 3.44-3.40 (m, 1H), 2.87-2.77 (m, 2H), 2.77-2.74 (m, 2H), 2.66-2.61 (m, 1H), 2.57-2.52 (m, 1H), 2.44-2.35 (m, 1H), 2.29-2.17 (m, 1H), 2.28-2.16 (m, 2H), 2.01-1.97 (m, 3H), 1.91-1.86 (m, 2H); 溶融点：１０３℃（ＤＳＣ）。
【０１６５】
生物学的アッセイ
細胞間接着アッセイ
使用した試薬および方法は記載の通りであり [Ludbrook et al, Biochem. J. 2003, 369, 311およびαvβ8アッセイについてはMacdonald et al. ACS MedChemLett, 2014, 5, 1207-1212]、以下に明瞭化の点を示す。以下の細胞株を使用し、括弧内にリガンドを示す：Ｋ５６２−α５β１（フィブロネクチン）、Ｋ５６２−αｖβ３（ＬＡＰ−ｂ１）、Ｋ５６２−αｖβ５（ビトロネクチン）、Ｋ５６２−αｖβ６（ＬＡＰ−ｂ１）、Ｋ５６２−αｖβ８（ＬＡＰ−ｂ１）。接着を促進するために使用した二価陽イオンは２ｍＭ  ＭｇＣｌ２であった。接着を、蛍光色素ＢＣＥＣＦ−ＡＭ（Life TecHnologies）での細胞標識によって定量化し、その際、３×１０６細胞／ｍＬの細胞懸濁液を、０．３３ｍＬ／ｍＬの３０ｍＭ  ＢＣＥＣＦ−ＡＭとともに３７℃で１０分間インキュベートし、その後、１つのウェル当たり５０μＬを９６−ウェルのアッセイプレートに分注した。アッセイの終了時に、接着した細胞を、Ｈ２Ｏ中０．５％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を１ウェル当たり５０μＬで使用して溶解し、蛍光を放出させた。蛍光強度を、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（商標）プレートリーダー（Perkin Elmer）を使用して検出した。このアッセイにおいて活性なアンタゴニストについて、ＩＣ５０決定のために、データを４パラメーターロジスティック方程式にフィットさせた。
【０１６６】
細胞間接着アッセイにおける例１の親和性（ｐＩＣ５０）は、αｖβ６でｐＩＣ５０＝７．９；αｖβ３でｐＩＣ５０＝７．４；αｖβ５でｐＩＣ５０＝７．４；αｖβ８でｐＩＣ５０＝７．５；αｖβ１でｐＩＣ５０＝６．４であった。
【０１６７】
細胞間接着アッセイにおける例２の親和性（ｐＩＣ５０）は、αｖβ６でｐＩＣ５０＝６．２；αｖβ３でｐＩＣ５０＝５．９；αｖβ５でｐＩＣ５０＝６．６；αｖβ８でｐＩＣ５０＝５．８であった。
【０１６８】
細胞間接着アッセイにおける例３の親和性（ｐＩＣ５０）は、αｖβ６でｐＩＣ５０＝５．４；αｖβ３でｐＩＣ５０＝５．３；αｖβ５でｐＩＣ５０＝５．０；αｖβ８でｐＩＣ５０＝５．３であった。
【０１６９】
細胞間接着アッセイにおける例４の親和性（ｐＩＣ５０）は、αｖβ６でｐＩＣ５０＝７．７；αｖβ３でｐＩＣ５０＝６．３；αｖβ５でｐＩＣ５０＝６．９；αｖβ８でｐＩＣ５０＝７．３であった。
【０１７０】
挙げられた数字は、平均ｐＩＣ５０値である。
【０１７１】
ＭＤＣＫ細胞における浸透性
例１および例４（両方双性イオン）の受動的膜浸透性を、メイディン・ダービー・イヌ腎臓多剤耐性Ｉ（ＭＤＣＫＩＩ−ＭＤＲ１）細胞において、強力なＰ−糖タンパク質阻害剤ＧＦ１２０９１８の存在下でｐＨ７．４にて決定した。各化合物を各試験回で３ｍＭの濃度にて２回インキュベートした。このアッセイにおいて例１の受動的な明白な浸透性（Ｐａｐｐ）は７１ｎｍ／ｓ（±２３ｎｍ／ｓ；ｎ＝３  試験回）、例４では１７ｎｍ／ｓ（ｎ＝２試験回）であった。
【０１７２】
例１および例４の２つのジアステレオ異性体は、αｖβ６細胞接着アッセイ（例１ｐＩＣ５０＝７．９；例４  ｐＩＣ５０＝７．７）においてｉｎ  ｖｉｔｒｏにて類似の親和性を有することが観察されたが（例１ｐＩＣ５０＝７．９；例４ｐＩＣ５０＝７．７）、それらはＭＤＣＫ細胞において異なる浸透性を有していた（例１Ｐ＝７１ｎｍ／ｓおよび例４Ｐ＝１７ｎｍ／ｓ）。これは例１が例４より薬物動態学的研究にてｉｎ  ｖｉｖｏにおいて高い経口的アベイラビリティを有することに反映されたものであると予想されている。
【０１７３】
構造式（Ｉ）の化合物の絶対的形状の同定
３−フルオロピロリジン不斉中心の絶対的形状の同定
標的分子（ＩＡ）の合成は、構造式（ＩＸ）の中間体のそれぞれの鏡像異性体で別々に開始された。（ＩＸ）の鏡像異性体Wuxi App Tecから購入した。３−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボン酸（＋）−ベンジルは、最も高い親和性で（ＩＡ）のジアステレオ異性体を提供した（例１、異性体Ａ）。しかしながら、３−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボン酸（＋）−ベンジル（ＩＸ）の絶対的形状が分からなかったため、スキームＩＩＩに概説された以下の実験を行い、その形状を構築した。
【０１７４】
１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−フルオロピロリジン−３−カルボン酸  （ＸＶＩＩ）［化学情報登録番号１００１７５４−５９−１］ (Wuxi App Tecより入手可能) のラセミ混合物を、酸（ＸＶＩＩ）と第一のカルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、続けて（＋）−（Ｒ）−α−メチルベンジルアミンと反応させることによってＮ−α−メチルベンジルアミドに転換した。これによって、シリカゲルでのクロマトグラフィーによって分離可能なアミドのジアステレオ異性体の混合物（スキーム３、化合物ＸＶＩＩＩおよびＸＩＸ）がもたらされた(P.K. Mykhailiuk et.al. Convenient synthesis of enantiopure (R) - and (S)-3-fluoro-3-aminomethylpyrrolidines, Tetrahedron 2014, 70, 3011-3017)。より極性な異性体の形状は、Ｘ線回折研究によりMykhailiukおよび我々の両者によって独立して構築され、３−フルオロ−３−（（（Ｒ）−１−フェニルエチル）カルバモイル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル［化合物（ＸＶＩＩＩ）］（図１）であり、そして故に、より極性が低い異性体については３−フルオロ−３−（（（Ｒ）−１−フェニルエチル）カルバモイル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル［化合物  （ＸＩＸ）］で有ることが示された。さらに、これはスキームＩＩＩに示された順序で得られた化合物との比較に対する参照資料を提供した。極性異性体［化合物（ＸＶＩＩＩ）］の我々のＸ線データはMykhailiuk et.al.が報告していたＸ線結晶構造と合致していたが、１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは我々が得たスペクトルと異なっていた。２つのジアステレオ異性体［化合物（ＸＶＩＩＩ）および（ＸＩＸ）］のスペクトルは非常に類似していたが、ピロリジンＣ４プロトンについては少しの診断的差異があった。我々はそれを２．２２ｐｐｍで観察した。この点Mykhailiukは２．１５ｐｐｍにて報告している。（ＩＡ）のジアステレオ異性体を提供した、構造式（ＩＸ）［３−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボン酸（−）−ベンジル］の化合物の（−）−鏡像異性体（例２（異性体１））は、エタノール中１０％Ｐｄ／Ｃで水素化され、ＣＢＺ保護基が除去されて、結果として得られたアミン（ＸＸ）を二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルで保護して、３−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボン酸（−）−ｔｅｒｔ−ブチル（ＸＸＩ）が得られた。後者をアセトニトリル−水中で三塩化ルテニウムおよび過ヨウ素酸ナトリウムで酸化させた。次いで、結果として得られたカルボン酸（ＸＸＩＩ）を、以前のようにＣＤＩおよび（＋）−（Ｒ）−α−メチルベンジルアミンを用いてアミドに転換させた。このアミドを参照用アミド試料（ＸＶＩＩＩ）および（ＸＩＸ）と比較したところ、ＮＭＲ分光学、旋光度およびキラルＨＰＬＣに関して、それは３−フルオロ−３−（（（Ｒ）−１−フェニルエチル）カルバモイル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル（ＸＩＸ）と同一であることが見出された。この順序で用いられた（ＩＸ）の（−）−鏡像異性体は、ジアステレオ異性体（ＩＡ３）および（ＩＡ４）（例２）を提供する異性体であるため、（ＩＡ１）および（ＩＡ２）（例１）を提供する（ＩＸ）の（＋）−鏡像異性体は、ピロリジン不斉中心で絶対的形状（Ｓ）を有する。
【化４４】
0006611799.tif 000045
【０１７５】
ベンジル系不斉中心の絶対的形状の同定
例１異性体Ａのベンジル系不斉中心の絶対的形状はスキームＩＶに示された分解実験によって得られた。従って、例１異性体Ａは、室温にて一晩ＤＣＭ中のヨウ化メチルで処理し、ピロリジン窒素を四級化し、次いで炭酸カリウムを添加し、マイクロ波反応器内で１２０℃まで１時間加熱し、（Ｓ）−（＋）−４−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ジヒドロフラン−２（３Ｈ）−オン（化合物ＸＸＩＶ）を得た。分解生成物を、伝統的なHayashi不斉反応(Hayashi, T. Tetrahedron Asymmetry, 1999, 10, 4047-4056)を用いて、ビス（ノルボルナジエン）ロジウム（Ｉ）テトラフルオロホウ酸塩を触媒として、かつ（Ｒ）−ＢＩＮＡＰをキラルリガンドとして用いて、（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ボロン酸をフラン−２（５Ｈ）−オンに添加によって調製された真性の（Ｒ）−（−）−４−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ヒドロフラン−２（３Ｈ）−オン（化合物ＸＸＶ）と比較したところ、分解生成物の鏡像異性体で有ることが示され、従って例１異性体Ａの形状をそのベンジル系中心にて（Ｓ）として構築した。
【０１７６】
【化４５】
0006611799.tif 000046
スキームＩＶ．試薬および条件：ｉ）ＭｅＩ，ＤＣＭ，室温，１８時間；ｉｉ）Ｋ２ＣＯ３，１２０℃，１時間；ｉｉｉ）ビス（ノルボルナジエン）ロジウム（Ｉ）テトラフルオロホウ酸塩および（Ｒ）−ＢＩＮＡＰ，ＫＯＨ，１，４−ジオキサン，１００℃，１時間。
【０１７７】
構造式（Ｉ）の化合物における各不斉中心の絶対的形状を同定するための上記実験に基づき、各実験の絶対的形状は以下の通り要約される：
【０１７８】
例１は構造式（ＩＡ２）（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸の化合物である。
【０１７９】
例２は構造式（ＩＡ１）（Ｒ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸の化合物である。
【０１８０】
例３は構造式（ＩＡ３）（Ｒ）−４−（（Ｒ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸の化合物である。
【０１８１】
例４は構造式（ＩＡ４）（Ｓ）−４−（（Ｒ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸の化合物である。
【０１８２】
実験
３−フルオロ−３−（（（Ｒ）−１−フェニルエチル）カルバモイル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（化合物ＸＶＩＩＩ）および３−フルオロ−３−（（（Ｒ）−１−フェニルエチル）カルバモイル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル（化合物ＸＩＸ）
ＴＨＦ（７０ｍＬ）中、（±）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−フルオロピロリジン−３−カルボン酸（化合物ＸＶＩＩ）［１００１７５４−５９−１］(Wuxi App Tecより入手可能)（３．００ｇ，１２．９ｍｍｏｌ）の溶液を、室温にて固体ＣＤＩ（２．５  ｇ，１５．４ｍｍｏｌ）で処理し、次いで混合物を８０℃まで１．５時間加熱した。（Ｒ）−（＋）−α−メチルベンジルアミン (Flukaより入手可能）（１．６ｇ，１３．２ｍｍｏｌ）をこの温度にて添加し、次いで混合物をさらに１．５時間８０℃にて加熱した。混合物を酢酸エチルで希釈し、希釈ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ３、ブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、室温にてゆっくり蒸発させた。固体が結晶化しだされなかったため、最後に混合物を低減した圧力下で濃縮した。残渣を４０分にわたって０−２５％ＥｔＯＡｃ−シクロヘキサンで溶出するシリカ（２ｘ１００ｇ）カートリッジでのクロマトグラフィーによって精製した。第一に溶出する化合物を白色フォーム（１．５４ｇ，３６％）として得た：ＬＣＭＳ（システムＡ）ＲＴ＝１．１７分，ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ  ３３７（Ｍ＋Ｈ）＋; 1H NMR (500 MHz, CDCl3) 1.43-1.49 (m, 9H), 1.54 (d, J=7.0 Hz, 3H), 2.08-2.19 (m, 1H), 2.37-2.62 (m, 1H), 3.43-3.56 (m, 1H), 3.61-3.93 (m, 3H), 5.14 (quin, J=7.1 Hz, 1H), 6.71-6.76 (m, 1H), 7.27-7.39 (m, 5H)  約１０％のより極性なジアステレオ異性体を含む；［α］Ｄ２０＋６１（ＭｅＯＨ中ｃ＝１．２７）；１０％ＥｔＯＨ−ヘプタン溶出、流速＝１  ｍＬ／分、検出２１５ｎｍの、キラルパックＡＤカラム（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）での分析的キラルＨＰＬＣ  ＲＴ＝７．５８分，９０％およびＲＴ＝９．５３分，１０％。この試料の部分５０ｍｇを２０分にわたって０−２５％ＥｔＯＡｃ−シクロヘキサンで溶出するカートリッジ（２０ｇ）でさらに精製した。適切な画分を低減した圧力化で蒸発させ、３−フルオロ−３−（（（Ｒ）−１−フェニルエチル）カルバモイル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル（化合物ＸＩＸ）の分析的試料（３０ｍｇ）を得た：ＬＣＭＳ（システムＣ）ＲＴ＝１．１６分，ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ  ３３７（Ｍ＋Ｈ）＋および３５４（Ｍ＋ＮＨ４）＋およびＥＳ−ｖｅ  ｍ／ｚ  ３３５（Ｍ−Ｈ）−；［α］Ｄ２０＋６３（ＭｅＯＨ中ｃ＝０．９３３）。
【０１８３】
カラムから溶出している第二化合物（より極性なジアステレオ異性体）（１．２ｇ，２８％）をエーテルから結晶化し、３−フルオロ−３−（（（Ｒ）−１−フェニルエチル）カルバモイル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（化合物ＸＶＩＩＩ）の白色結晶を得た：ｍｐ＝１１３−１１５℃；ＬＣＭＳ（システムＣ）ＲＴ＝１．１６分，ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ  ３３７（Ｍ＋Ｈ）＋； 1H NMR (500 MHz, CDCl3) 1.43-1.48 (m, 9H), 1.54 (d, J=7.0 Hz, 3H), 2.14-2.26 (m, 1H), 2.44-2.70 (m, 1H), 3.46-3.55 (m, 1H), 3.56-3.87 (m, 3H), 5.14 (quin, J=7.1 Hz, 1H), 6.73 (br s, 1H), 7.27-7.40 (m, 5H);［α］Ｄ２０＋７３（ＭｅＯＨ中ｃ＝０．８７６）；１０％ＥｔＯＨ−ヘプタン溶出、流速＝１ｍＬ／分、検出２１５ｎｍの、キラルパックＡＤカラム（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）での分析的キラルＨＰＬＣ  ＲＴ＝９．５０分，１００％。このジアステレオ異性体の絶対的形状はＸ線回折研究から構築された。
【０１８４】
（−）−（Ｒ）−（３−フルオロピロリジン−３−イル）メタノール （化合物ＸＸ）
（−）−Ｎ−ＣＢＺ−３−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ピロリジン、化合物（ＩＸ）の（−）−異性体(Wuxi App Tecより入手可能）（４．０ｇ，１５．８ｍｍｏｌ）の溶液を、エタノール（１５０ｍＬ）中１０％Ｐｄ／Ｃ（４００ｍｇ）で一晩水素化した。触媒を、セライトを通した濾過によって除去し、エタノールで洗浄した。濾液および洗浄物を低減した圧力下で蒸発させ標題化合物（２．０ｇ，１０６％，ＮＭＲにより多少のエタノール含有）を黄色油として取得し、これはワックス状の固体へ固体化した：ＬＣＭＳ（システムＣ）ＲＴ＝０．２２分，ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ  １２０（Ｍ＋Ｈ）＋およびＥＳ−ｖｅ  ｍ／ｚ  １１８（Ｍ−Ｈ）−。生成物を窒素下で４０℃にてブローダウン（blow-down）した装置内でさらに乾燥させた。1H NMR (500 MHz, CDCl3) 3.82 (dd, J=18.7, 12.5 Hz, 1H), 3.73 (dd, J=22.0, 12.2 Hz, 1H), 3.22-3.15 (m, 1H), 3.23-3.14 (m, 1H), 2.99-2.92 (m, 1H), 2.91 (dd, J=29.1, 13.2 Hz, 1H), 2.66 (br s, 2H), 2.10-1.98 (m, 1H), 1.94-1.81 (m, 1H); ［α］Ｄ２０＝−４（ＥｔＯＨ中ｃ＝１．１９）。
【０１８５】
３−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボン酸（−）−（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル（化合物ＸＸＩ）
ＤＣＭ（１５ｍＬ）およびジイソプロピルエチルアミン（４．１３ｍＬ，２３．７ｍｍｏｌ）中、（Ｒ）−（３−フルオロピロリジン−３−イル）メタノール（化合物ＸＸ）（１．８８ｇ，１５．８ｍｍｏｌ）の溶液を、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（３．７９ｇ，１７ｍｍｏｌ）で処理し、混合物を２０℃にて３時間撹拌した。混合物を２Ｍ  ＨＣｌおよびＤＣＭに区分けし、相分離器カートリッジ内で分離させた。有機層を低減した圧力下で濃縮し、残渣を４０分にわたって０−５０％ＥｔＯＡｃ−シクロヘキサンの勾配で溶出するシリカカートリッジ（７０ｇ）でのクロマトグラフィーによって精製した。画分をシリカ（５０％ＥｔＯＡｃ−シクロヘキサン）でのＴＬＣによって検査し、ＫＭｎＯ４溶液で染色した。適切な画分を合わせ、低減した圧力下で蒸発させ標題化合物（２．７３ｇ，７９％）を無色油として得た：ＬＣＭＳ（システムＣ）ＲＴ＝０．７９分，ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ  ２２０（Ｍ＋Ｈ）＋および４３９（２Ｍ＋Ｈ）＋；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1.42 (s, 9H), 1.96-2.14 (m, 2H), 3.32-3.41 (m, 2H), 3.42-3.50 (m, 2H), 3.54-3.61 (m, 1H), 3.62-3.69 (m,  H), 4.90 (t, J=5.8 Hz, 1H);［α］Ｄ２０＝２８（ＣＨＣｌ３中ｃ＝３．５１）。
【０１８６】
３−フルオロ−３−（（（Ｒ）−１−フェニルエチル）カルバモイル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル（化合物ＸＩＸ）
ＭｅＣＮ（１ｍＬ）および水（１ｍＬ）中の３−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボン酸（−）−ｔｅｒｔ−ブチル（化合物ＸＸＩ）（２００ｍｇ，０．９ｍｍｏｌ）溶液を、ＲｕＣｌ３（９．５ｍｇ，０．０５ｍｍｏｌ）および過ヨウ素酸ナトリウム（９７６ｍｇ，４．５ｍｍｏｌ）で処理し、混合物を２０℃にて１６時間撹拌した。混合物を１Ｍ  ＨＣｌ（５ｍＬ）で酸性化し、ＤＣＭ中で区分けした。水性相を、ＤＣＭで２回再抽出し、相を相分離カートリッジで分離させた。有機溶液をブローダウンした装置にて蒸発させ、（Ｒ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−フルオロピロリジン−３−カルボン酸（化合物ＸＸＩＩ）（１２５ｍｇ，５９％）を得た：ＭＳ  ＥＳ−ｖｅ  ｍ／ｚ  ２３２  Ｍ−Ｈ）−。酸（１２５ｍｇ，０．５４ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（１０ｍＬ）中に溶解させ、ＣＤＩ（３６０ｍｇ，２．２ｍｍｏｌ）で処理し、混合物を室温にて１時間撹拌し、次いで５０℃にて０．５時間加熱した。混合物をブローダウンした装置内で濃縮し、残渣をＴＨＦ（６ｍＬ）中に溶解させ、（Ｒ）−（＋）−α−メチルベンジルアミン（２００ｍｇ，１．９ｍｍｏｌ）で処理し、２０℃にて１．５時間撹拌した。混合物を酢酸エチルで希釈し、２ＭＨＣｌ溶液で２回、続けてブラインで洗浄した。有機溶液を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、低減した圧力下で蒸発させ、灰色固体（２９０ｍｇ）を得た。残渣をＭｅＯＨ−ＤＭＳＯ（１：１；３ｍＬ）中に溶解させ、大気温度にて、３０−８５％（アンモニア水溶液−アセトニトリルでｐＨ１０に調節された水中の１０ｍＭ  重炭酸アンモニア）の勾配で溶出し、３０分にわたって運転し、２５４ｎｍにて検出し、ピークをＲＴ＝１７．４分，ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ  ３３７（Ｍ＋Ｈ）＋で回収する、ＸＳＥＬＥＣＴ  ＣＳＨ  Ｃ１８カラム（１５０ｍｍ×３０ｍｍ  ｉ．ｄ．パッキンの直径５μｍ）でのＭＤＡＰによって精製した。画分をブローダウンした装置内で４５℃にて窒素下で濃縮し、残留懸濁液をＥｔＯＡｃで抽出した。有機溶液を２Ｍ  ＨＣｌで２回、次いでブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、低減した圧力下で蒸発させ、黄色ガム（３５  ｍｇ）を得た。ガムを大気温度にて、（アンモニア水溶液−アセトニトリルでｐＨ１０に調節された水中の１０  ｍＭ  重炭酸アンモニア）の勾配で溶出し、２５分にわたって運転し、２５４ｎｍにて検出し、第一画分を回収する（ＲＴ＝１０分）、ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  カラム（１００ｍｍ×１９ｍｍ  ｉ．ｄ．パッキンの直径５μｍ）でのＭＤＡＰによって再精製した。溶媒をブローダウンした装置内で窒素下で４５℃にて除去し、標題化合物（１６ｍｇ，５％）を無色ガムとして得た：ＬＣＭＳ（システムＣ）ＲＴ＝１．１６分，ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ  ３３７（Ｍ＋Ｈ）＋，３５４（Ｍ＋ＮＨ４）＋；１０％ＥｔＯＨ−ヘプタン溶出、流速＝１ｍＬ／分、検出２１５ｎｍのキラルパックＡＤカラム（２５０  ｍｍ×４．６ｍｍ）での分析的キラルＨＰＬＣ  ＲＴ＝７．５８分，９７．７％；［α］Ｄ ２０＋６３（ＭｅＯＨ中ｃ＝１．１５）。１Ｈ  ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）と同様に旋光度およびキラルＨＰＬＣ  ＲＴは、全て３−フルオロ−３−（（（Ｒ）−１−フェニルエチル）カルバモイル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル（化合物ＸＩＸ）のものと一致した。
【０１８７】
（Ｓ）−（＋）−４−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ジヒドロフラン−２（３Ｈ）−オン（化合物ＸＸＩＶ）への分解による例１のベンジル系不斉中心の絶対的形状の決定
ＤＣＭ（２０ｍＬ）中、４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸（例１（２００ｍｇ，０．４１２ｍｍｏｌ）の溶液を、室温にてヨードメタン（０．４００ｍＬ，６．４０ｍｍｏｌ）で処理し、１８時間撹拌した。反応混合物を真空内濃縮し、過剰ヨードメタンを除去し、残留固体をＤＣＭ（１０ｍＬ）中で再溶解させ、次いで炭酸カリウム（２５０ｍｇ，１．８０９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物をマイクロ波反応器内で１２０℃まで１時間加熱した。溶液を濾過し、真空内濃縮し、残留油をシクロヘキサン中０−１００％ＴＢＭＥの勾配で溶出し、２２０ｎｍにて検出するシリカカカラム（１０ｇ）でのクロマトグラフィーによって精製した。関連の画分を真空内濃縮し、（Ｓ）−（＋）−４−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ジヒドロフラン−２（３Ｈ）−オン（化合物ＸＸＩＶ）（８０ｍｇ，８２％）を無色油として得た：ＬＣＭＳ（システムＢ）ＲＴ＝０．８０分，１００％，  ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ  ２３７（Ｍ＋Ｈ）＋；1H NMR (400 MHz, CDCl3) 7.34-7.26 (m, 1H), 6.92-6.72 (m, 3H), 4.67 (dd, J= 9.0, 7.9 Hz, 1H), 4.28 (dd, J= 9.1, 8.1 Hz, 1H), 4.20-4.10 (m, 2H), 3.84-3.72 (m, 3H), 3.48 (s, 3H), 2.93 (dd, J=17.5, 8.7 Hz, 1H), 2.68 (dd, J= 17.5, 9.0 Hz, 1H)；［α］Ｄ２２＝＋４２（ＣＨＣｌ３中ｃ＝１．０６）；４０％ＥｔＯＨ含有ヘプタン溶出、流速＝１ｍＬ／分、検出２１５ｎｍの、キラルパックＡＤカラム（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）でのキラルＨＰＬＣ  ＲＴ＝９．７２分，１００％。
【０１８８】
化合物（ＸＸＩＶ）と比較するための真性（Ｒ）−（−）−４−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ジヒドロフラン−２（３Ｈ）−オン（化合物  ＸＸＶ）の合成
１，４−ジオキサン（１０ｍＬ）中、ビス（ノルボルナジエン）ロジウム（Ｉ）テトラフルオロホウ酸塩（Aldrichより入手可能）（３７．４ｍｇ，０．１００ｍｍｏｌ）、（Ｒ）−ＢＩＮＡＰ（１２５ｍｇ，０．２００ｍｍｏｌ）および（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ボロン酸(Enamineより入手可能) （９８０ｍｇ，５．００ｍｍｏｌ）の溶液に、フラン−２（５Ｈ）−オン（Alfa Aesarより入手可能）（０．１４２ｍＬ，２．０ｍｍｏｌ）および水性ＫＯＨ（３．８Ｍ，１．０５３ｍＬ，４．００ｍｍｏｌ）を添加した。結果として得られた溶液を、マイクロ波反応器内で１００℃まで１時間加熱した。反応混合物を冷まし、水（２０ｍＬ）とＤＣＭ（２０ｍＬ）に区分けした。層を分離し、有機層を疎水性フリットに移し、真空内濃縮した。残留油を、４５分間にわたって０−１００％シクロヘキサン中ＴＢＭＥの勾配で溶出し、２２０ｎｍにて検出する、ＫＰＮＨカラム（５０ｇ）でのクロマトグラフィーによって精製した。関連画分を真空内濃縮し、標題化合物（１０１ｍｇ，２１％）を無色油として得た：ＬＣＭＳ（システムＢ）ＲＴ＝０．８０分，１００％，ＥＳ＋ｖｅ  ｍ／ｚ  ２３７（Ｍ＋Ｈ）＋；［α］Ｄ２３＝−３７（ＣＨＣｌ３中ｃ＝１．１０）；４０％ＥｔＯＨ含有ヘプタン溶出、流速＝１ｍＬ／分、検出２１５ｎｍ、標題化合物が化合物（ＸＸＩＶ）の鏡像異性体であることを示した、キラルパックＡＤカラム（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）でのキラルＨＰＬＣ  ＲＴ＝１１．８２分、９４％  およびＲＴ＝９．６７分，６％。
従って、  
例１は（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸
【化４６】
0006611799.tif 000047
および、
例２は（Ｒ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸である。
【図１】
0006611799.tif 000054