(57)【要約】  本発明は、ニトロイミダゾール系化合物又はその塩を含有する、腎イメージング剤を提供するものである。本発明の腎イメージング剤は、陽電子放出断層撮影に用いることができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）：
【化１】
2016047424.tif 000012
〔式中、Ｒ１は、水素又はヒドロキシメチル基であり、Ａは、下記（Ｉ）〜（ＩＶ）：
【化２】
2016047424.tif 000013
（式中、Ｒ２は水素又はヒドロキシ基であり、Ｒ３は水素又はヒドロキシメチル基であり、Ｒ４はヒドロキシ基又はヒドロキシメチル基であり、ｋは０又は１であり、ｍは０又は１であり、ｎは０、１又は２であり、Ｘは放射性フッ素である）
【化３】
2016047424.tif 000014
（式中、ｎは０、１又は２であり、ｐは１又は２であり、ｑは０、１又は２であり、Ｘは放射性フッ素である）
【化４】
2016047424.tif 000015
（式中、ｎは０、１又は２であり、Ｘは放射性フッ素である）
【化５】
2016047424.tif 000016
のいずれかの基である〕
で表されるニトロイミダゾール系化合物又はその塩を含有する、腎イメージング剤。
【請求項２】
前記ニトロイミダゾール系化合物が、
２−［１８Ｆ］フルオロメチル−２−（（２−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メチル）−１，３−プロパンジオール；
２−［１８Ｆ］フルオロメチル−２−（（４−ヒドロキシメチル−２−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メチル）−１，３−プロパンジオール；
２−［１８Ｆ］フルオロメチル−２−（２−（２−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）エチル）−１，３−プロパンジオール；
１−［１８Ｆ］フルオロ−３−（２−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−２−プロパノール；
１−［１８Ｆ］フルオロ−４−（２−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−２，３−ブタンジオール；
３−［１８Ｆ］フルオロ−２−（（２−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メトキシ）−１−プロパノール；
Ｎ−（２−［１８Ｆ］フルオロエチル）−２−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−１−アセタミド；
２−ニトロ−Ｎ−（２，２，３，３，３−［１８Ｆ］ペンタフルオロプロピル）−１Ｈ−イミダゾール−１−アセタミド；
（３−［１８Ｆ］フルオロ−２−（４−（（２−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−１−プロパノール；又は、
１−（５−デオキシ−５−［１８Ｆ］フルオロ−α−Ｄ−アラビノフラノシル）−２−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール
である、請求項１に記載の腎イメージング剤。
【請求項３】
前記ニトロイミダゾール系化合物は、２５℃において、１−［１８Ｆ］フルオロ−３−（２−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−２−プロパノールのｌｏｇＰよりも低いｌｏｇＰを有する化合物である、請求項１に記載の腎イメージング剤。
【請求項４】
陽電子放出断層撮影に用いられる、請求項１乃至３いずれか一項に記載の腎イメージング剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腎イメージング剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
日本における腎疾患患者は年々増加傾向にあり、国民の健康に重大な影響を及ぼしている。中でも、慢性腎不全（ｃｈｒｏｎｉｃ  ｋｉｄｎｅｙ  ｄｉｓｅａｓｅ：ＣＫＤ）は、悪化すると重大な心血管疾患を引き起こしたり、人工透析が必要になったりする場合がある。このため、近年、ＣＫＤの重症化を予防するための様々な取り組みがなされている（例えば、非特許文献１）。【０００３】
ＣＫＤ診療ガイドライン（非特許文献２）においてＣＫＤは、（ｉ）尿異常、画像診断、血液、病理で腎障害の存在が明らか、特に０．１５ｇ／ｇＣｒ以上の蛋白尿（３０ｍｇ／ｇＣｒ以上のアルブミン尿）の存在が重要；（ｉｉ）ＧＦＲ（糸球体濾過量）が６０ｍＬ／分／１．７３ｍ２未満、という症状について、（ｉ）、（ｉｉ）のいずれか、または両方が３カ月以上持続すること、と定義されており、ＣＫＤの重症度は、ＧＦＲとＡＣＲ（アルブミン／クレアチニン比）で分類されることが示されている。また、非特許文献２には、ＣＫＤの診断と治療方針の決定のため、検尿所見を参考に適応を見極めたうえで、腎生検の施行が推奨されること、ＣＫＤでは、形態的変化を示す疾患（尿路結石、尿路の閉塞性障害、嚢胞性腎疾患など）の診断には腹部超音波検査が、腎動脈狭窄の有無および程度の評価には超音波ドプラ法、ＭＲアンジオグラフィ、ＣＴ血管造影検査が腎機能に応じて選択するよう推奨されると記載されている。【０００４】
ＣＫＤは、慢性的な尿細管間質障害による進行的な腎機能の損失に特徴づけられており、これは尿細管萎縮や間質性線維症を含むものである。このような変化は、腎における酸素化を減少させるものであり、これにより、様々なサイトカインシグナル伝達経路や細胞シグナルを介して、次々に、繊維化反応を開始し、促進する。繊維化と低酸素はＣＫＤの進行を導く主要な要因とみなされるので、これらの要因を正確に評価し、非侵襲的に評価できれば、ＣＫＤの治療に有用と考えられる。非特許文献３では、こうした背景の下、ｆＭＲＩを用いたＢＯＬＤ（ｂｌｏｏｄ  ｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎ  ｌｅｖｅｌ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ）−ＭＲＩにより、ＣＫＤの虚血病変の検出を検討したことが報告されている。【０００５】
薬剤性腎障害は、治療又は診断に使用される薬剤（抗菌薬、鎮痛薬、抗がん薬、造影剤）により引き起こされる腎障害である。薬剤性腎症の多くは可逆性であるが、不可逆的な腎機能障害を回避するためには的確な早期診断が必要とされており、血清クレアチニン、尿素窒素、一般検尿が薬剤性腎障害の必須定期検査として挙げられている。【０００６】
核医学検査法は、腎機能を検査する手法の一つとして知られている。この核医学検査には、腎動態を検査するレノグラフィーと、腎シンチグラフィーがあり、腎動態の検査に使用される放射性薬剤として、［１３１Ｉ］オルトヨウ化ヒプル酸（１３１Ｉ−ＯＩＨ）、９９ｍＴｃ−ＭＡＧ３（メルカプトアセチルトリグリシン）、９９ｍＴｃ−ＤＴＰＡ（ジエチレントリアミン五酢酸）、腎シンチグラフィーに使用される放射性薬剤として、９９ｍＴｃ−ＤＭＳＡ（ジメルカプトコハク酸）が知られている。これら核医学検査によれば、血液検査や尿検査とは異なり、左右の腎臓別々に機能を評価できるという利点がある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】今後の腎疾患対策のあり方について、腎疾患対策検討会（平成２０年３月）
【非特許文献２】エビデンスに基づくＣＫＤ診療ガイドライン２０１３
【非特許文献３】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ、２０１１、２２（８）、ｐｐ．１４２９−３４
【非特許文献４】Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、２００８、７４、ｐｐ．８６７−８７２
【発明の概要】
【０００８】
しかしながら、従来の腎疾患の検査法には、以下のような課題があった。
非特許文献２に記載されるように、ＣＫＤの場合、ステージＧ３区分以降（遅くてもステージＧ４）に専門医を紹介することにより、腎機能低下速度が緩やかになり、透析導入すべき時期が遅延できたという後ろ向き研究の報告がある。この理由の一つとして、専門医による薬剤調整が考えられるが、確固たるエビデンスは得られていない。
【０００９】
また、ＣＫＤの治療方針の決定や長期予後の予測には、腎生検が有用とされる一方、腎機能や虚血状態などは腎生検で把握することができない。
【００１０】
従来の核医学診断法は、腎機能の測定値の信頼性が十分に検定されておらず、臨床検査としての実用性については課題が残る。
【００１１】
非特許文献４に記載されるように、腎臓内の低酸素状態が腎障害を悪化させることは知られているが、腎臓内の低酸素状態を検出できる確立した技術は知られていない。
【００１２】
薬剤性腎障害の場合、不可逆的に腎障害が発生しているものは、尿検査や血液検査で異常が検出されたときには手遅れであり、投薬の中止によっても腎機能障害が回復しないこともある。
【００１３】
本発明は上記事情に鑑みてなされたものであり、その目的とするところは、腎内環境に基づき病変部位を非侵襲的に描出できる新規な腎イメージング剤を提供することにある。
【００１４】
本発明者は、放射性フッ素（18Ｆ）で標識した特定のニトロイミダゾール系化合物を用いることにより、核医学検査法を用いて腎病変を非侵襲的に描出できることを新たに知見した。ニトロイミダゾール系化合物は低酸素領域に特異的に集積する。このため、腎臓内低酸素状態の広がりを検出し、低酸素状態を定量的に評価することにより、腎の繊維化の程度を評価して、腎臓病の早期発見、早期治療、予後予測、治療効果判定が可能になることが期待される。
【００１５】
すなわち、本発明によれば、下記一般式（１）で表されるニトロイミダゾール系化合物又はその塩を含有する、腎イメージング剤が提供される。
【００１６】
【化１】
2016047424.tif 000002
【００１７】
上記一般式（１）中、Ｒ１は水素又はヒドロキシメチル基である。Ａは、下記（Ｉ）〜（ＩＶ）のいずれかの基である。
【００１８】
【化２】
2016047424.tif 000003
（Ｉ）で表される基中、Ｒ２は水素又はヒドロキシ基であり、Ｒ３は水素又はヒドロキシメチル基であり、Ｒ４はヒドロキシ基又はヒドロキシメチル基であり、ｋは０又は１であり、ｍは０又は１であり、ｎは０、１又は２であり、Ｘは放射性フッ素である。
【００１９】
【化３】
2016047424.tif 000004
（ＩＩ）で表される基中、ｎは０、１又は２であり、ｐは１又は２であり、ｑは０、１又は２であり、Ｘは放射性フッ素である。
【００２０】
【化４】
2016047424.tif 000005
（ＩＩＩ）で表される基中、ｎは０、１又は２であり、Ｘは放射性フッ素である。
【００２１】
【化５】
2016047424.tif 000006
（ＩＶ）で表される基中、ｎは０、１又は２であり、Ｘは放射性フッ素である。
【００２２】
本発明によれば、腎内環境に基づき病変部位を非侵襲的に描出できる腎イメージング剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
上述した目的、およびその他の目的、特徴および利点は、以下に述べる好適な実施の形態、およびそれに付随する以下の図面によってさらに明らかになる。【００２４】
【図１】１８Ｆ−ＨＩＣ１０１のＰＥＴイメージング画像（ＭＩＰ画像）である。（ａ）がＣＫＤモデルの画像であり、（ｂ）が健常モデルの画像である。
【図２】１８Ｆ−ＨＩＣ１０１投与後１００分の体内分布の結果を示す図である。
【図３】腎組織内のＨＩＦ−１αの発現量と１８Ｆ−ＨＩＣ１０１の局在の比較を示す図である。
【図４】１８Ｆ−ＦＭＩＳＯのＰＥＴイメージング画像（ＭＩＰ画像）である。（ａ）がＣＫＤモデルの画像であり、（ｂ）が健常モデルの画像である。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
本発明において、「放射性フッ素」とは、フッ素の放射性同位体であり、フッ素−１８（１８Ｆ）をいう。
【００２６】
本発明において、「塩」とは、医薬として許容されるものであればよい。例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸、又は、酢酸、トリフルオロ酢酸、マレイン酸、コハク酸、マンデル酸、フマル酸、マロン酸、ピルビン酸、シュウ酸、グリコール酸、サリチル酸、ピラノシジル酸（グルクロン酸、ガラクツロン酸など）、α−ヒドロキシ酸（クエン酸、酒石酸など）、アミノ酸（アスパラギン酸、グルタミン酸など）、芳香族酸（安息香酸、ケイ皮酸など）、スルホン酸（ｐ−トルエンスルホン酸、エタンスルホン酸など）などの有機酸から誘導される塩にすることができる。
【００２７】
本発明において、「ニトロイミダゾール系化合物」とは、上記一般式（１）のものをいい、例えば、
２−［１８Ｆ］フルオロメチル−２−（（２−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メチル］−１，３−プロパンジオール（１８Ｆ−ＨＩＣ１０１：Ａが（Ｉ）で表される基であり、Ｒ１、Ｒ２が水素であり、Ｒ３、Ｒ４がヒドロキシメチル基であり、ｋが０であり、ｍが０であり、ｎが１である化合物）；
２−［１８Ｆ］フルオロメチル−２−（（４−ヒドロキシメチル−２−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メチル）−１，３−プロパンジオール（Ａが（Ｉ）で表される基であり、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４がヒドロキシメチル基であり、Ｒ２が水素であり、ｋが０であり、ｍが０であり、ｎが１である化合物）；
２−［１８Ｆ］フルオロメチル−２−（２−（２−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）エチル）−１，３−プロパンジオール（Ａが（Ｉ）で表される基であり、Ｒ１、Ｒ２が水素であり、Ｒ３、Ｒ４がヒドロキシメチル基であり、ｋが０であり、ｍが０であり、ｎが２である化合物）；
１−［１８Ｆ］フルオロ−３−（２−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−２−プロパノール（１８Ｆ−ＦＭＩＳＯ：Ａが（Ｉ）で表される基であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３が水素であり、Ｒ４がヒドロキシ基であり、ｋが０であり、ｍが０であり、ｎが１である化合物）；
１−［１８Ｆ］フルオロ−４−（２−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−２，３−ブタンジオール（１８Ｆ−ＦＥＴＮＩＭ：Ａが（Ｉ）で表される基であり、Ｒ１、Ｒ３が水素であり、Ｒ２、Ｒ４がヒドロキシ基であり、ｋが０であり、ｍ、ｎが１である化合物）；
３−［１８Ｆ］フルオロ−２−（（２−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メトキシ）−１−プロパノール（１８Ｆ−ＦＲＰ−１７０：Ａが（Ｉ）で表される基であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３が水素であり、Ｒ４がヒドロキシメチル基であり、ｋが１であり、ｍが０であり、ｎが１である化合物）；
Ｎ−（２−［１８Ｆ］フルオロエチル）−２−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−１−アセタミド（１８Ｆ−ＦＥＴＡ：Ａが（ＩＩ）で表される基であり、Ｒ１が水素であり、ｎが１であり、ｐが２であり、ｑが０である化合物）；
２−ニトロ−Ｎ−（２，２，３，３，３−［１８Ｆ］ペンタフルオロプロピル）−１Ｈ−イミダゾール−１−アセタミド（１８Ｆ−ＥＦ５：Ａが（ＩＩ）で表される基であり、Ｒ１が水素であり、ｎが１であり、ｐが１であり、ｑが２である化合物）；
（３−［１８Ｆ］フルオロ−２−（４−（（２−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−１−プロパノール（１８Ｆ−ＨＸ４：Ａが（ＩＩＩ）で表される基であり、Ｒ１が水素であり、ｎが１である化合物）；又は、
１−（５−デオキシ−５−［１８Ｆ］フルオロ−α−Ｄ−アラビノフラノシル）−２−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール（１８Ｆ−ＦＡＺＡ：Ａが（ＩＶ）で表される基であり、Ｒ１が水素であり、ｎが０である化合物）
が挙げられる。
なお、（Ｉ）〜（ＩＶ）中、＊（アスタリスク）は結合部位を示す。
【００２８】
腎病変への集積を高める観点からは、１８Ｆ−ＦＭＩＳＯよりも脂溶性の低いニトロイミダゾール系化合物が好ましく、具体的には、２５℃におけるオクタノール/水分配係数（ｌｏｇＰ）が、１８Ｆ−ＦＭＩＳＯのｌｏｇＰよりも低いものが好ましい。ｌｏｇＰが、−０．４以下がより好ましく、−２〜−０．６の範囲にあるニトロイミダゾール系化合物がさらに好ましい。ニトロイミダゾール系化合物の構造としては、一般式（１）中、Ｒ１は、水素が好ましい。
【００２９】
一般式（１）中、Ａが（Ｉ）のニトロイミダゾール系化合物においては、腎病変への集積を高める観点から、（Ｉ）中、Ｒ２は水素が好ましい。また、Ｒ４はヒドロキシメチル基が好ましい。また、ｍは０であることが好ましい。また、ｎは１であることが好ましい。より好ましくは、Ｒ３がヒドロキシメチル基であり、ｋが０である。このようなニトロイミダゾール系化合物は、ＷＯ２０１３／０４２６６８；「ＰＥＴ用放射性薬剤の製造および品質管理―合成と臨床使用へのてびき」（ＰＥＴ 化学ワークショップ編）―第４版（平成２３年改定版）；Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ、２００１、４２、ｐｐ．１３９７−１４０４；Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２００７、２１、ｐｐ．１０１−１０７、その他公知の情報に基づき合成することができる。
【００３０】
一般式（１）中、Ａが（ＩＩ）のニトロイミダゾール系化合物においては、腎病変への集積を高める観点から、ｎは１であることが好ましい。また、ｐが２のときｑが０であることが好ましく、ｐが１であるときｑは２であることが好ましい。このようなニトロイミダゾール系化合物は、例えば、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ、２００４、９０、ｐｐ．２２３２−２２４２；Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｓｏｔｏｐｅｓ、２００１、５４、ｐｐ．７３−８０、その他公知の情報に基づき合成することができる。
【００３１】
一般式（１）中、Ａが（ＩＩＩ）のニトロイミダゾール系化合物においては、腎病変への集積を高める観点から、ｎは１であることが好ましい。このようなニトロイミダゾール系化合物は、ＷＯ２００８／１２４６５１、その他公知の情報に基づき合成することができる。
【００３２】
一般式（１）中、Ａが（ＩＶ）のニトロイミダゾール系化合物においては、腎病変への集積を高める観点から、ｎは０であることが好ましい。このようなニトロイミダゾール系化合物は、「ＰＥＴ用放射性薬剤の製造および品質管理―合成と臨床使用へのてびき」（ＰＥＴ 化学ワークショップ編）―第４版（平成２３年改定版）、その他公知の情報に基づき合成することができる。
【００３３】
本発明に係る腎イメージング剤は、上記一般式（１）で表されるニトロイミダゾール系化合物又はその塩を生体内への投与に適した形態で含む処方物であると定義することができる。本発明に係る腎イメージング剤は、非経口的に、即ち注射によって投与される形態であることが好ましく、水溶液であることがより好ましい。かかる組成物は適宜、ｐＨ調節剤、製薬学的に許容される可溶化剤、安定剤又は酸化防止剤などの追加成分を含んでいてもよい。
【００３４】
本発明に係る腎イメージング剤は、生物体内に導入すると、上記一般式（１）で表されるニトロイミダゾール系化合物が低酸素状態の腎臓組織に集積する。そのため、陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）を用いて生物体外から非侵襲的に放射線を検出し、腎病変の広がり・程度を画像化することができる。したがって、本発明の腎イメージング剤によれば、様々な腎臓病に対し、従来の検査法において得られなかった腎機能情報を提供して、腎臓病の早期発見、早期治療、予後予測、治療効果判定が実現可能になる。
【００３５】
例えば、ＣＫＤにおいては、本発明に係る腎イメージング剤を用いて腎皮質における放射能集積を定量化することにより、繊維化の進行度を適切に把握し、薬剤治療の最適化することで、透析の時期を遅らせることが可能になる。また、本発明の腎イメージング剤により、腎機能や虚血状態に関する情報が得られるため、腎生検と相補的に使用することで、より正確なＣＫＤの病態の把握や予後予測が可能になる。
【００３６】
また、抗癌剤等の薬物治療の際、本発明に係る腎イメージング剤を用いて腎機能のモニタリングすることにより、血液や尿の変化よりも早期に腎機能障害を発見することができる。このため、薬物の投与中止・変更をすることにより、不可逆的な薬剤性腎障害を回避することが可能になる。
【実施例】
【００３７】
以下、実施例を記載して本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらの内容に限定されるものではない。【００３８】
本実施例で使用する化合物は、以下のとおり定義され、いずれもＷＯ２０１３／０４２６６８記載の方法で合成された。【００３９】
１８Ｆ−ＨＩＣ１０１：２−［１８Ｆ］フルオロメチル−２−（（２−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メチル）−１，３−プロパンジオール（ＷＯ２０１３／０４２６６８実施例の化合物１）
１８Ｆ−ＦＭＩＳＯ：１−［１８Ｆ］フルオロ−３−（２−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）−２−プロパノール（１８Ｆ−フルオロミソニダゾール）【００４０】
（実施例１）ＣＫＤモデル動物の作製［１］
Ｌｅｗｉｓ  ｒａｔ（雄性、８週齢、入手先：日本エスエルシー株式会社）１３例に対してアドリアマイシン（和光純薬工業(株)製）７．５ｍｇ／ｋｇ）を尾静脈投与し、死亡した２例を除く１１例について、投与後１３日に、ブラッドフォード法に従って尿タンパクを測定した。このうち、尿タンパクの値の高いもの４例をＣＫＤモデル動物として選出し、アドリアマイシン投与後１４日に後述する実施例で使用した。４例の状態を表１に示す。
健常モデルとしては、アドリアマイシンに変えて、等量の生理食塩液を投与して作製した４例を用いた。
なお、マウスやラット試料中に存在するＬ−ＦＡＢＰをサンドイッチ法により定量するＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用いて、各モデルの尿中のＦＡＢＰ−４の量を測定した。また、生体活動による尿中成分の濃縮及び希釈の影響を補正するため、ヤッフェ反応を利用したキット（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社製）を用いて尿中クレアチニンの測定を実施した。【００４１】
【表１】
2016047424.tif 000007
【００４２】
表１には、各４例の平均値±標準偏差を示す。ＣＫＤモデル群において、１８Ｆ−ＦＭＩＳＯ投与群及び１８Ｆ−ＨＩＣ１０１投与群間での尿タンパク及びＬ−ＦＡＢＰの値に有意な差は認められなかった。【００４３】
（実施例２）ＰＥＴイメージング［１］
１８Ｆ−ＨＩＣ１０１（放射化学的純度８４．２％）を実施例１で作製したＣＫＤモデル４匹に、１８．６±０．９ＭＢｑ／匹、健常モデル４匹に、１７．０±２．７ＭＢｑ／匹投与し、投与８０分後より、動物用ＰＥＴ装置（ｅＸｐｌｏｒｅ  Ｖｉｓｔａ、ＧＥ社製）を用い、ｓｔａｔｉｃ撮像を実施した。収集条件は、２５０−７００ｋｅＶのエネルギーウィンドウで１０分間とした。収集データは、３Ｄ−ＯＳＥＭ法により再構成して画像化した。画像より各スライスにおける腎臓のＳＵＶ（ｓｔａｎｄａｒｄｉｚｅｄ  ｕｐｔａｋｅ  ｖａｌｕｅ）最高値の平均（腎盂を除いて関心領域（ＲＯＩ）を設定）、正常組織のＳＵＶ平均値を測定した。これらの値より、評価は正常組織比、正常腎比を用いた。なお、測定結果の統計解析はｓｔｕｄｅｎｔ'ｓ  ｔ−ｔｅｓｔを使用した。結果を図１、表２に示す。【００４４】
【表２】
2016047424.tif 000008
【００４５】
図１は、最大値投影法で画像処理を行ったＭＩＰ画像である。図１（ａ）がＣＫＤモデルであり、図１（ｂ）が健常モデルである。図１中、黒い矢印で示すものが腸管であり、白い矢印で示すものが腎盂である。画像解析により、ＣＫＤモデルにおける腎組織（腎盂を除く）のＳＵＶ最大値は健常モデルと比較して有意に高く（左右いずれもｐ＜０．００１）また、正常組織比においても有意に高いことが認められた（左右いずれもｐ＜０．００１）。図１の例は、腎組織のＳＵＶ最大値が１０である。なお、正常組織のＳＵＶ平均値でもＣＫＤモデルにおいて有意に高いことが認められた（ｐ＝０．０４５）。【００４６】
（実施例３）体内分布実験［１］
実施例２のＰＥＴ撮像終了後、投与１００分後まで麻酔下に置き、放血死させた。次いで、左右腎臓、血液、脳、肺、心臓、肝臓、脾臓、胃、小腸、大腸、副腎、筋肉、骨、腎臓の周りの脂肪、尿、残全身を採取し、重量及び放射能量を測定した。なお、結果の統計解析はｓｔｕｄｅｎｔ'ｓ  ｔ−ｔｅｓｔを使用した。結果を図２、表３に示す。【００４７】
【表３】
2016047424.tif 000009
【００４８】
図２中、各臓器において左のバーが健常モデル群であり、右のバーがＣＫＤモデル群である。健常モデル群と比較してＣＫＤモデル群では左右の腎臓において有意に集積が高かった。また、主要組織である血液、心臓、肺、肝臓、筋肉ではＣＫＤモデル群で有意に集積が高かった。なお、小腸、大腸、尿では有意差は認められなかったが、これは胆汁排泄速度と尿排泄に個体差があったためと考えられる。【００４９】
（実施例４）腎臓内集積の局在評価
実施例３で得られた腎組織を放射能量測定後に二等分し、片方をＯ．Ｃ．Ｔ．コンパウンド（サクラファインテック社製）に包埋し、クリオスタット（形式：ＣＭ３０５０、Ｌｅｉｃａ社製）を用いて、新鮮凍結切片（厚さ１０μｍ）を作製し、これを用いてオートラジオグラフィーを実施した。当該腎組織切片をイメージングプレートで８〜１０時間露光させた後、バイオイメージングアナライザー（形式：ＢＡＳ−２５００、富士フィルム社製）を用いて画像化した。
その後、放射能減衰後の同切片を用いて免疫組織化学（ＬＳＡＢ法）を実施した。腎組織切片の固定と賦活化処理後、１次抗体に抗ラットＨＩＦ−１αマウスモノクローナル抗体（入手先：ＧｅｎｅＴｅｘ社製）１００倍希釈）を、２次抗体に抗マウスＩｇＧ抗体（入手先：ＤＡＫＯ社製）をそれぞれ使用して腎組織切片と反応させ、２次抗体に反応するＨＲＰ標識ストレプトアビジン（ＤＡＫＯ社製）を用い、ＨＲＰ活性をＤＡＢ（３，３'−ジアミノベンジジン）を基質とした呈色反応で検出することで、腎組織切片のＨＩＦ−１αの発現部位を同定した。近接切片として連続で薄切した１枚をネガティブコントロールとして用い、１次抗体だけを反応させない手順で上記同様の実験を行い、１次抗体以外の成分による腎組織切片への非特異的な反応が認められないことを確認した。顕微鏡システム（形式：ＢＺ−９０００、キーエンス社製）を用い、免疫組織化学染色により得られた標本画像の全体画像を取得した。画像は、ＤＡＢ陽性部位をＩｍａｇｅＪにより抜き出し、疑似カラー化する画像処理を行った。【００５０】
結果を図３に示す。ＣＫＤモデル２例（ＳＵＶ最大値（左）４．３０、（右）５．１２）、健常モデル１例（ＳＵＶ最大値１．０６）の腎組織内ＨＩＦ−１αの発現を確認した。その結果、肉眼的にＣＫＤモデルの腎皮質部においてＨＩＦ−１αが高発現していることが認められた。オートラジオグラフィーによる１８Ｆ−ＨＩＣ１０１の局在と比較した結果、図３中、白矢印で示す部位がＨＩＦ−１αの発現部位と一致していた。なお、図３中、ＡＲＧはオートラジオグラフィーの略である。また、未処置のオートラジオグラフィー画像で集積がある箇所は腎盂である。【００５１】
（実施例５）ＰＥＴイメージング［２］
１８Ｆ−ＦＭＩＳＯ（放射化学的純度９６％以上）を実施例１で作製したＣＫＤモデル４匹に、１８．７±１．１ＭＢｑ／匹、健常モデル４匹に、１９．５±０．６９ＭＢｑ／匹投与し、投与８０分後より、動物用ＰＥＴ装置（ｅＸｐｌｏｒｅ  Ｖｉｓｔａ、ＧＥ社製）を用い、ｓｔａｔｉｃ撮像を実施した。また、各群１例ずつＰＥＴ撮像後再度麻酔下に置き、投与１８０分後に撮像を実施した。収集条件は、２５０−７００ｋｅＶのエネルギーウィンドウで１０分間とし、収集データは、３Ｄ−ＯＳＥＭ法により再構成して画像化した。画像より各スライスにおける腎臓のＳＵＶ最高値の平均（腎盂を除いて関心領域（ＲＯＩ）を設定）、正常組織のＳＵＶ平均値を測定した。これらの値より、評価は正常組織比、正常腎比を用いた。なお、測定結果の統計解析はｓｔｕｄｅｎｔ'ｓ  ｔ−ｔｅｓｔを使用した。結果を図４、表４に示す。【００５２】
【表４】
2016047424.tif 000010
【００５３】
投与８０分後のＰＥＴ画像を解析した結果、ＣＫＤモデルにおける腎組織（腎盂を除く）のＳＵＶ最大値は健常モデルと比較して有意に高いが（左右いずれもｐ＜０．０５）、腎正常組織比では左腎臓で有意な差が認められなかった（右：ｐ＜０．０１，左：ｐ＝０．０８）。
投与１８０分後のＰＥＴ画像を投与８０分後のＰＥＴ画像と比較すると、腎皮質部への集積が腎盂より高くなる傾向が認められた。ＣＫＤモデルと健常モデルでバックグランドに差がなく、また、投与８０分後と同様であることが肉眼的に確認された。ＲＯＩ解析の結果、投与８０分後よりもＳＵＶ最大値が増加し、それに伴い腎正常組織比も増加する傾向が認められた。
図４は、投与１８０分後に撮像した最大値投影法で画像処理を行ったＭＩＰ画像である。図４（ａ）がＣＫＤモデルであり、図４（ｂ）が健常モデルである。図４中、白い矢印で示すものが腎盂である。【００５４】
（実施例６）体内分布実験［２］
実施例５において投与８０分後にＰＥＴ撮像終了した各群３例、及び、ＰＥＴ撮像を実施していない各群１例につき、投与１００分後まで麻酔下に置き、放血死させた。次いで、左右腎臓、血液、脳、肺、心臓、肝臓、脾臓、胃、小腸、大腸、副腎、筋肉、骨、腎臓の周りの脂肪、尿、残全身を採取し、重量及び放射能量を測定した。なお、結果の統計解析はｓｔｕｄｅｎｔ'ｓ  ｔ−ｔｅｓｔを使用した。結果を表５に示す。【００５５】
【表５】
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【００５６】
以上の結果から、１８Ｆ−ＨＩＣ１０１及び１８Ｆ−ＦＭＩＳＯは、いずれも、ＣＫＤモデルにおいて、健常モデルに対して優位に腎盂を除く腎組織に取り込まれることが確認された。また、ＣＫＤモデルにおける取り込みを比較した結果、１８Ｆ−ＨＩＣ１０１は、１８Ｆ−ＦＭＩＳＯに比べて高い取り込みが確認された。これらの結果から、イミダゾール系化合物、特に１８Ｆ−ＨＩＣ１０１は、腎イメージング剤として有用であることが示された。【００５７】
この出願は、２０１４年９月２５日に出願された日本出願特願２０１４−１９５８０２号を基礎とする優先権を主張し、その開示の全てをここに取り込む。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【手続補正書】
【提出日】平成29年4月20日(2017.4.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１】
下記一般式（１）：
【化１】
2016047424.tif 000021
〔式中、Ｒ１は、水素又はヒドロキシメチル基であり、Ａは、下記（Ｉ）〜（ＩＶ）：
【化２】
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（式中、Ｒ２は水素又はヒドロキシ基であり、Ｒ３は水素又はヒドロキシメチル基であり、Ｒ４はヒドロキシ基又はヒドロキシメチル基であり、ｋは０又は１であり、ｍは０又は１であり、ｎは０、１又は２であり、Ｘは放射性フッ素である）
【化３】
2016047424.tif 000023
（式中、ｎは０、１又は２であり、ｐは１又は２であり、ｑは０、１又は２であり、Ｘは放射性フッ素である）
【化４】
2016047424.tif 000024
（式中、ｎは０、１又は２であり、Ｘは放射性フッ素である）
【化５】
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（式中、ｎは０、１又は２であり、Ｘは放射性フッ素である。）
のいずれかの基である〕
で表されるニトロイミダゾール系化合物又はその塩を含有する、腎イメージング剤。
【国際調査報告】
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