(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ゴールデンシルク抽出物とヒアルロン酸とを含有する、ハリ、弾力、及び／又はみずみずしさの向上用の皮膚外用剤であって、
前記ゴールデンシルク抽出物はゴールデンシルクを６０℃以上の酸性アルコール溶媒又はアルコールと水との酸性混合溶媒で抽出する工程を含む製造方法で得たものである、皮膚外用剤。
【請求項２】
さらにコラーゲンを含有する、請求項１に記載の皮膚外用剤。
【請求項３】
化粧料である、請求項１又は２に記載の皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、優れた抗老化作用を有する皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
肌のしわ形成予防、肌のたるみの形成予防等、いわゆる皮膚老化抑制に関する研究が進められている。その中でも線維芽細胞は、コラーゲン・エラスチンといった、肌の張りや弾力を保つ働きをする物質を産生する重要な細胞であるため、様々な研究がなされている。
【０００３】
線維芽細胞により産生されることが知られているバーシカンは、大型のコンドロイチン硫酸プロテオグリカンであり、創傷治癒時に一時的に高レベルで発現することが知られている（非特許文献１）。
また、バーシカンは、胎児や新生児の皮膚の創生においても重要な役割を果たすことが知られ、具体的にはバーシカンが足場となって線維芽細胞が産生したコラーゲン等の成分が真皮の三次元構造を形成するのを補助する（非特許文献２）。なお、真皮構造が完成した後はバーシカンは消失し、成人では上記のように創傷治癒時以外はほとんど発現しないことも知られている（非特許文献３）。
また、バーシカンはヒアルロン酸を抱え込むことができることも報告されている（非特許文献４）。
【０００４】
一方でシルク、特に加水分解シルク蛋白質は、様々な皮膚への作用が報告されており、例えば抗酸化作用、皮膚炎症防止作用、チロシナーゼ活性阻害作用、コラーゲン産生促進作用、保湿性向上作用、しわ形成抑制作用などが挙げられる（特許文献１、２）。
【０００５】
また、トリテルペノイドの１つであるルペオールについては、種々の植物抽出物に含まれることが知られており、ルペオールやその誘導体にはメラニン産生抑制等の作用があることが報告されている（特許文献３〜５）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００７−２７７１１９号公報
【特許文献２】特開２００５−１５４４６号公報
【特許文献３】特開２００７−５１１４７２号公報
【特許文献４】特開２００４−３４５９５９号公報
【特許文献５】特開２００２−３３８１号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】ARAKI Eri et al., 日本結合組織学会学術大会抄録集  41巻, 54頁
【非特許文献２】Sorrell JM. et al., Anat. Embryol., 1999, 199 (1) 45-56
【非特許文献３】Carrino DA. et al., Arch Biochem. Biophys., 2000, 373 (1) 91-101
【非特許文献４】Matsumoto K. et al., J. Biol. Chem., 2003, 278 (42) 41205-41212
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、優れた抗老化作用を有する皮膚外用剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、これまでにシルクの中でも濃黄色の繭色を呈するゴールデンシルクから特定の方法で抽出した抽出物が、線維芽細胞におけるバーシカン産生を促進させることを見出している（特願２０１４−２３１３４０）。上記課題を解決すべくさらに鋭意研究したところ、該抽出物に含まれるバーシカン産生促進に有効な成分が、ルペオールであることを突き止めた。さらに、ルペオールとヒアルロン酸やコラーゲンを組み合わせることにより、皮膚の水分保持能や弾力性を向上させることができ、優れた抗老化作用を発揮する皮膚外用剤を提供できることに想到した。
【００１０】
すなわち、本発明の１つの態様は、ルペオールとヒアルロン酸とを含有する皮膚外用剤である。
また、本発明の別の態様は、ゴールデンシルク抽出物とヒアルロン酸とを含有する皮膚外用剤である。この態様において、ゴールデンシルク抽出物は、好ましくは、ゴールデンシルクから６０℃以上の酸性アルコール溶媒又はアルコールと水との酸性混合溶媒で抽出して得たものである。
さらに、本発明の皮膚外用剤は、さらにコラーゲンを含有することが好ましい。
さらに、本発明の皮膚外用剤は、好ましくは化粧料であり、より好ましくは抗老化用化粧料である。
【発明の効果】
【００１１】
本発明により、優れた抗老化作用を発揮する皮膚外用剤が提供される。
本発明の皮膚外用剤は、線維芽細胞によるバーシカン産生を促進し、胎児や新生児において真皮が創生するときのような環境を作ることができる。そして産生したバーシカンがヒアルロン酸を抱え込むために、皮膚の水分保持能を向上させることができる。また、バーシカン産生を促進する結果、太く強靭なコラーゲン線維束の三次元構造を形成させ、皮膚の弾力性をも向上させることができる。その結果、本発明の皮膚外用剤により、ハリや弾力に富み、みずみずしく生まれ変わったような真皮となり得るため、優れた抗老化用化粧料を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】参考試験例２におけるバーシカンｍＲＮＡの発現量を示すグラフ。
【図２】ゴールデンシルク抽出物分画とルペオールの1Ｈ−ＮＭＲチャート。
【図３】ゴールデンシルク抽出物分画とルペオールの13Ｃ−ＮＭＲチャート。
【図４】参考試験例３におけるバーシカンの分布を示す顕微鏡写真。
【図５】参考試験例４におけるコラーゲン線維束を示す顕微鏡写真。
【図６】参考試験例４におけるコラーゲンゲルの弾力値を示すグラフ。
【図７】参考試験例５におけるコラーゲンゲルの水分保持能を示すグラフ。
【図８】参考試験例５におけるコラーゲンゲルの外観を示す写真。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下、本発明について詳細に説明するが、本発明は具体的な実施態様にのみ限定されないことはいうまでもない。
【００１４】
本発明の皮膚外用剤は、ルペオールを含有する。
ルペオールはルパン型トリテルペンである（ＣＡＳ番号：５４５−４７−１、分子量４２６．７２４）。天然には、種々の植物に含まれていることが知られている。
本発明者らは、先にゴールデンシルク抽出物が優れたバーシカン産生促進作用を有することを見出し、その有効成分がルペオールであることを突き止めた。ルペオールは桑の葉にも含まれていると考えられるが、桑の葉を食べた蚕が作る繭にもルペオールが存在し、
繭から抽出することでルペオールを高い純度で得ることができる。特に、ゴールデンシルクと呼ばれる繭から抽出すると、より高い純度のルペオールを得ることができる。
したがって、本発明の他の態様では、皮膚外用剤は、ゴールデンシルク抽出物を含有する。
【００１５】
本発明に係るルペオールはゴールデンシルク抽出物から精製して用いてもよいし、ゴールデンシルク抽出物として用いてもよい。
ゴールデンシルク抽出物は、エキス状、オイル状、粉末状のいずれであってもよく、溶媒を用いてエキスやオイルとして抽出した抽出液を乾燥させ、粉末状の抽出物としてもよい。
【００１６】
ゴールデンシルク（Ｇｏｌｄｅｎ  Ｓｉｌｋ  Ｎｏ．１１）はカイコガ（Ｂｏｎｂｉｘ
ｍｏｒｉ）の繭糸であって、濃黄色を呈する繭糸である。主に、タイ王国  ランプン県
トンフォアチャン地方（Thunghuachang Lamphun Thailand）で生産されている特殊な繭であり、商業的にも入手可能である。
【００１７】
本発明におけるゴールデンシルク抽出物は、任意の製造方法で得ることができるが、ゴールデンシルクを６０℃以上の酸性アルコール溶媒又はアルコールと水との酸性混合溶媒で抽出する工程を含む製造方法で得ることが、ルペオールを多く含みバーシカン産生促進能が高い抽出物を得られるため好ましい。
【００１８】
アルコール溶媒としては、低級アルコールが好ましく、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコールなどが挙げられる。このうち、メタノール、エタノールが好ましく、エタノールが抽出効率の観点からより好ましい。また、アルコールと水との混合溶媒においては、通常アルコールが４０％ｖ／ｖ以上含まれることが好ましく、５０％ｖ／ｖ以上含まれることが抽出効率の観点から特に好ましい。また、上限は特段限定されず、通常９９．９％ｖ／ｖ以下である。
【００１９】
抽出溶媒を酸性とするのはゴールデンシルクを加水分解させるためであり、ｐＨは通常７より小さく、３以下であることが好ましく、２以下であることがより好ましい。ｐＨの下限は特段限定されないが、通常ｐＨ１以上である。
なお、アルカリ性溶媒でもゴールデンシルクを加水分解させることはできるが、アルカリ性溶媒で抽出したゴールデンシルク抽出物は、黄褐色の着色が強く、皮膚外用剤等の組成物に配合する際に好ましくない。一方、酸性溶媒で抽出したゴールデンシルク抽出物は着色が少ない。
抽出溶媒を酸性とするためには、例えば硫酸、塩酸、硝酸などの酸を溶媒中に適量添加することができる。これらのうち、抽出物の着色をより少なくできることから、塩酸が特に好ましい。
【００２０】
抽出は６０℃以上で行い、好ましくは８０℃以上で行う。なお、加温の上限は特段限定されず、圧力を過度に変動させることのない、安全性を確保できる範囲で行えばよい。
また抽出は、抽出温度にもよるが、通常１０分以上行い、３０分以上行うことがより好ましく、１時間以上行うことが更に好ましい。抽出時間の上限は特段限定されないが、通常２０時間以下であり、１０時間以下であることが好ましい。
【００２１】
得られた抽出物は、さらにアルカリにより中和を行うことが好ましい。なお、中和は、ＮａＯＨやＫＯＨなどのアルカリを加えることによりできる。
その他に、適宜澱を析出させて純度を上げたり、濾過ステップを設けて不純物などを除去したりすることもできる。
【００２２】
ゴールデンシルク抽出物からルペオールを得る方法は、定法により行うことができる。
【００２３】
本発明の皮膚外用剤において、ルペオールの含有量は、特に限定されないが、通常、皮膚外用剤全体に対して０．００００１〜０．０５質量％が好ましく、０．０００１〜０．０５質量％がより好ましく、０．００１〜０．０５質量％がさらに好ましい。
また、本発明の皮膚外用剤において、ゴールデンシルク抽出物の含有量は、特に限定されないが、通常、皮膚外用剤全体に対して蒸発残分として０．０００１〜０．５質量％が好ましく、０．００１〜０．５質量％がより好ましく、０．０１〜０．５質量％がさらに好ましい。
【００２４】
前述のように、成人においては通常バーシカンはほとんど発現しない。本発明の皮膚外用剤において、ルペオール又はゴールデンシルク抽出物は、線維芽細胞によるバーシカン産生を促進し、成人におけるバーシカン欠乏を補うことができる。その結果、コラーゲン線維束などの細胞外マトリックスの三次元構造の形成を促進するため、その結果真皮の創生（再生）へ導く役割を果たす。
【００２５】
本発明の皮膚外用剤は、ヒアルロン酸も含有する。
ヒアルロン酸は、一般に保水成分として知られる多糖類である。本発明の皮膚外用剤において、ヒアルロン酸は、ルペオール又はゴールデンシルク抽出物によって産生が促進されたバーシカンに抱えこまれ、ヒアルロン自体の保水能によって、真皮における水分保持能を向上させる役割を担う。
【００２６】
本発明の皮膚外用剤において、ヒアルロン酸の含有量は、特に限定されないが、通常、皮膚外用剤全体に対して０．０００１〜０．５質量％が好ましく、０．００１〜０．５質量％がより好ましく、０．０１〜０．５質量％がさらに好ましい。
また、ヒアルロン酸の平均分子量は、特に限定されないが、通常、５０００００未満のものが好ましく、１００００未満のものがより好ましく、１０００未満のものがさらに好ましい。
【００２７】
本発明の皮膚外用剤において、ルペオールとヒアルロン酸は、１:１の質量比で含有す
ることが好ましく、１:１０の質量比で含有することがより好ましい。
また、本発明の皮膚外用剤において、ルペオールとゴールデンシルク抽出物（蒸発残分）は、１:１の質量比で含有することが好ましく、１:５の質量比で含有することがより好ましい。
【００２８】
本発明の皮膚外用剤は、さらにコラーゲンを含有することが好ましい。
皮膚構造の支持体として機能し、また力学的役割を担っている真皮は、その９０％以上がコラーゲンで構成される。真皮においてコラーゲンは線維束を形成し、真皮のほぼ全層に絡み合って三次元の網目構造を形成し、肌の弾力性に寄与することが知られている。本発明の皮膚外用剤において、コラーゲンはルペオール又はゴールデンシルク抽出物によって産生が促進されたバーシカンの作用により、通常よりも太く強靭な線維束を形成し、真皮の弾力性を向上させる役割を担う。
【００２９】
本発明の皮膚外用剤において、コラーゲンの含有量は、特に限定されないが、通常、皮膚外用剤全体に対して０．０００１〜０．５質量％が好ましく、０．００１〜０．５質量％がより好ましく、０．０１〜０．５質量％がさらに好ましい。
また、コラーゲンの平均分子量は、特に限定されないが、通常、３０００００未満のものが好ましく、５０００未満のものがより好ましく、１０００未満のものがさらに好ましい。
【００３０】
本発明の皮膚外用剤は、化粧料や医薬部外品など任意の用途に適用できるが、化粧料とすることが好ましく、特に抗老化用化粧料とすることが好ましい。
【００３１】
本発明の皮膚外用剤には、上記の他に、通常皮膚外用剤に使用される有効成分等の成分を任意に含有させることができる。また、その剤型も、ローション剤型、乳液やクリーム等の乳化剤型、オイル剤型等、特に限定されず、任意に設計することができる。
【００３２】
本発明の皮膚外用剤に含有させる他の有効成分としては、美白成分、シワ改善成分、抗炎症成分、動植物由来の抽出物等が挙げられ、１種のみを含有させてもよく、２種以上含有されていてもよい。また、その含有量は、通常皮膚外用剤に含有させる量としてよい。
その他に、油性成分、界面活性剤、多価アルコール、増粘剤、紛体類、紫外線吸収剤等を任意成分として挙げられる。
【００３３】
美白成分としては、特に限定されないが、例えば、アスコルビン酸類、過酸化水素、コロイド硫黄、グルタチオン、ハイドロキノン、カテコール等の美白成分、チロシナーゼ関連蛋白阻害剤、エンドセリン作用抑制剤、プロトンポンプ阻害剤、ステムセルファクター結合阻害剤等のメラニン生成抑制剤、デンドライト伸張抑制剤、メラニン移送又は放出抑制剤、インテグリン産生促進剤などが挙げられる。
【００３４】
シワ改善成分としては、特に限定されないが、例えば、ビタミンＡ又はその誘導体、レチノール、レチナール、レチノイン酸、トレチノイン、イソトレチノイン、レチノイン酸トコフェロール、パルミチン酸レチノール、酢酸レチノールやウルソール酸ベンジルエステル、ウルソール酸リン酸エステル、ベツリン酸ベンジルエステル、ベンジル酸リン酸エステルなどが挙げられる。
【００３５】
抗炎症成分としては、特に限定されないが、例えば、クラリノン、グラブリジン、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸、パントテニルアルコール等が挙げられ、好ましくは、グリチルリチン酸及びその塩、グリチルレチン酸アルキル及びその塩、並びに、グリチルレチン酸及びその塩などが挙げられる。
【００３６】
動植物由来の抽出物としては、特に限定されないが、例えば、アケビエキス、アスナロエキス、アスパラガスエキス、アボカドエキス、アマチャエキス、アーモンドエキス、アルニカエキス、アロエエキス、アロニアエキス、アンズエキス、イチョウエキス、インドキノエキス、ウイキョウエキス、ウドエキス、エイジツエキス、エゾウコギエキス、エンメイソウエキス、オウゴンエキス、オウバクエキス、オウレンエキス、オタネニンジンエキス、オトギリソウエキス、オドリコソウエキス、オレンジエキス、カキョクエキス、カッコンエキス、カモミラエキス、カロットエキス、カワラヨモギエキス、カンゾウエキス、キウイエキス、キューカンバーエキス、グアバエキス、クジンエキス、クチナシエキス、クマザサエキス、クララエキス、クルミエキス、グレープフルーツエキス、黒米エキス、クロレラエキス、クワエキス、ケイケットウエキス、ゲットウヨウエキス、ゲンチアナエキス、ゲンノショウコエキス、紅茶エキス、ゴボウエキス、コメエキス、コメ発酵エキス、コメヌカ発酵エキス、コメ胚芽油、コケモモエキス、サルビアエキス、サボンソウエキス、ササエキス、サンザシエキス、サンシャエキス、サンショウエキス、シイタケエキス、ジオウエキス、シコンエキス、シソエキス、シナノキエキス、シモツケソウエキス、シャクヤクエキス、ショウキョウエキス、ショウブ根エキス、シラカバエキス、スギナエキス、ステビアエキス、ステビア発酵物、セイヨウキズタエキス、セイヨウサンザシエキス、セイヨウニワトコエキス、セイヨウノコギリソウエキス、セイヨウハッカエキス、セージエキス、ゼニアオイエキス、センキュウエキス、センブリエキス、ソウハクヒエキス、ダイオウエキス、ダイズエキス、タイソウエキス、タイムエキス、タンポポエキス、茶エキス、チョウジエキス、チンピエキス、甜茶エキス、トウガラシエキス、トウキエキス
、トウキンセンカエキス、トウニンエキス、トウヒエキス、ドクダミエキス、トマトエキス、納豆エキス、ニンジンエキス、ニンニクエキス、ノバラエキス、ハイビスカスエキス、バクモンドウエキス、ハスエキス、パセリエキス、バーチエキス、ハマメリスエキス、ヒキオコシエキス、ヒノキエキス、ビワエキス、フキタンポポエキス、フキノトウエキス、ブクリョウエキス、ブッチャーブルームエキス、ブドウエキス、ブドウ種子エキス、ヘチマエキス、ベニバナエキス、ペパーミントエキス、ボダイジュエキス、ボタンエキス、ホップエキス、マツエキス、マロニエエキス、ミズバショウエキス、ムクロジエキス、メリッサエキス、モズクエキス、モモエキス、ヤグルマギクエキス、ユーカリエキス、ユキノシタエキス、ユズエキス、ユリエキス、ヨクイニンエキス、ヨモギエキス、ラベンダーエキス、緑茶エキス、リンゴエキス、ルイボス茶エキス、レイシエキス、レタスエキス、レモンエキス、レンギョウエキス、レンゲソウエキス、ローズエキス、ローズマリーエキス、ローマカミツレエキス、ローヤルゼリーエキス、ワレモコウエキスなどが挙げられる。
【００３７】
油性成分としては、極性油、揮発性炭化水素油等が挙げられる。
極性油としては、合成エステル油として、ミリスチン酸イソプロピル、オクタン酸セチル、ミリスチン酸オクチルドデシル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、ラウリン酸ヘキシル、ミリスチン酸ミリスチル、オレイン酸デシル、ジメチルオクタン酸ヘキシルデシル、乳酸セチル、乳酸ミリスチル、酢酸ラノリン、ステアリン酸イソセチル、イソステアリン酸イソセチル、１２−ヒドロキシステアリル酸コレステリル、ジ−２−エチルヘキシル酸エチレングリコール、ジペンタエリスリトール脂肪酸エステル、モノイソステアリン酸Ｎ−アルキルグリコール、ジカプリン酸ネオペンチルグリコール、リンゴ酸ジイソステアリル、ジ−２−ヘプチルウンデカン酸グリセリン、トリ−２−エチルヘキシル酸トリメチロールプロパン、トリイソステアリン酸トリメチロールプロパン、テトラ−２−エチルヘキシル酸ペンタンエリスリトール、トリ−２−エチルヘキシル酸グリセリン、トリイソステアリン酸トリメチロールプロパンを挙げることができる。
【００３８】
さらに、セチル２−エチルヘキサノエート、２−エチルヘキシルパルミテート、トリミリスチン酸グリセリン、トリ−２−ヘプチルウンデカン酸グリセライド、ヒマシ油脂肪酸メチルエステル、オレイン酸オイル、セトステアリルアルコール、アセトグリセライド、パルミチン酸２−ヘプチルウンデシル、アジピン酸ジイソブチル、Ｎ−ラウロイル−Ｌ−グルタミン酸−２−オクチルドデシルエステル、アジピン酸ジ−２−ヘプチルウンデシル、エチルラウレート、セバチン酸ジ−２−エチルヘキシル、ミリスチン酸２−ヘキシルデシル、パルミチン酸２−ヘキシルデシル、アジピン酸２−ヘキシルデシル、セバチン酸ジイソプロピル、コハク酸２−エチルヘキシル、酢酸エチル、酢酸ブチル、酢酸アミル、クエン酸トリエチル、オクチル  メトキシシンナメート等も挙げられる。
【００３９】
また、天然油として、アボカド油、ツバキ油、タートル油、マカデミアナッツ油、トウモロコシ油、ミンク油、オリーブ油、ナタネ油、卵黄油、ゴマ油、パーシック油、小麦胚芽油、サザンカ油、ヒマシ油、アマニ油、サフラワー油、綿実油、エノ油、大豆油、落花生油、茶実油、カヤ油、コメヌカ油、シナギリ油、日本キリ油、ホホバ油、胚芽油、トリグリセリン、トリオクタン酸グリセリン、トリイソパルミチン酸グリセリン等が挙げられる。
【００４０】
揮発性炭化水素油としては、イソドデカン、イソヘキサデカン等が挙げられる。
【００４１】
界面活性剤としては、脂肪酸セッケン（ラウリン酸ナトリウム、パルミチン酸ナトリウム等）、ラウリル硫酸カリウム、アルキル硫酸トリエタノールアミンエーテル等のアニオン界面活性剤類、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化ベンザルコニウム、ラウリルアミンオキサイド等のカチオン界面活性剤類、
ベタイン系界面活性剤（アルキルベタイン、アミドベタイン、スルホベタイン等）、イミダゾリン系両性界面活性剤（２−ココイル−２−イミダゾリニウムヒドロキサイド−１−カルボキシエチロキシ２ナトリウム塩等）、アシルメチルタウリン等の両性界面活性剤類、
ソルビタン脂肪酸エステル類（ソルビタンモノステアレート、セスキオレイン酸ソルビタン等） 、グリセリン脂肪酸類（モノステアリン酸グリセリン等）、プロピレングリコ
ール脂肪酸エステル類（モノステアリン酸プロピレングリコール等）、硬化ヒマシ油誘導体、グリセリンアルキルエーテル、ＰＯＥソルビタン脂肪酸エステル類（ＰＯＥソルビタンモノオレエート、モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン等）、ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル類（ＰＯＥ−ソルビットモノラウレート等）、ＰＯＥグリセリン脂肪酸エステル類（ＰＯＥ−グリセリンモノイソステアレート等）、ＰＯＥ脂肪酸エステル類（ポリエチレングリコールモノオレート、ＰＯＥジステアレート等） 、ＰＯＥアルキル
エーテル類（ＰＯＥ２−オクチルドデシルエーテル等）、ＰＯＥアルキルフェニルエーテル類（ＰＯＥノニルフェニルエーテル等）、プルロニック型類、ＰＯＥ・ＰＯＰアルキルエーテル類（ＰＯＥ・ＰＯＰ２−デシルテトラデシルエーテル等）、テトロニック類、ＰＯＥヒマシ油・硬化ヒマシ油誘導体（ＰＯＥヒマシ油、ＰＯＥ硬化ヒマシ油等）、ショ糖脂肪酸エステル、アルキルグルコシド等の非イオン界面活性剤類、等が挙げられる。
【００４２】
多価アルコールとしては、ポリエチレングリコール、グリセリン、１，３−ブチレングリコール、エリスリトール、ソルビトール、キシリトール、マルチトール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ジグリセリン、イソプレングリコール、１，２−ペンタンジオール、２，４−ヘキシレングリコール、１，２−ヘキサンジオール、１，２−オクタンジオール等が挙げられる。
【００４３】
増粘剤としては、グアガム、クインスシード、カラギーナン、ガラクタン、アラビアガム、ペクチン、マンナン、デンプン、キサンタンガム、カードラン、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、グリコーゲン、ヘパラン硫酸、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸ナトリウム、トラガントガム、ケラタン硫酸、コンドロイチン、ムコイチン硫酸、ヒドロキシエチルグアガム、カルボキシメチルグアガム、デキストラン、ケラト硫酸、ローカストビーンガム、サクシノグルカン、カロニン酸，キチン、キトサン、カルボキシメチルキチン、寒天、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アルキル変性カルボキシビニルポリマー、ポリアクリル酸ナトリウム、ポリエチレングリコール、ベントナイト等が挙げられる。
【００４４】
粉体類としては、表面を処理されていても良い、マイカ、タルク、カオリン、合成雲母、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、無水ケイ酸（シリカ）、酸化アルミニウム、硫酸バリウム等の粉体類、表面を処理されていても良い、ベンガラ、黄酸化鉄、黒酸化鉄、酸化コバルト、群青、紺青、酸化チタン、酸化亜鉛の無機顔料類、表面を処理されていても良い、雲母チタン、魚燐箔、オキシ塩化ビスマス等のパール剤類、レーキ化されていても良い赤色２０２号、赤色２２８号、赤色２２６号、黄色４号、青色４０４号、黄色５号、赤色５０５号、赤色２３０号、赤色２２３号、橙色２０１号、赤色２１３号、黄色２０４号、黄色２０３号、青色１号、緑色２０１号、紫色２０１号、赤色２０４号等の有機色素類、ポリエチレン末、ポリメタクリル酸メチル、ナイロン粉末、オルガノポリシロキサンエラストマー等の有機粉体類、が挙げられる。
【００４５】
紫外線吸収剤としては、パラアミノ安息香酸系紫外線吸収剤、アントラニル酸系紫外線吸収剤、サリチル酸系紫外線吸収剤、桂皮酸系紫外線吸収剤、ベンゾフェノン系紫外線吸収剤、糖系紫外線吸収剤、２−（２'−ヒドロキシ−５'−ｔ−オクチルフェニル)ベンゾ
トリアゾール、４−メトキシ−４'−ｔ−ブチルジベンゾイルメタン等の紫外線吸収剤類
、等が挙げられる。
【実施例】
【００４６】
以下、具体的な実験例をあげて、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は以下の態様にのみ限定されない。
【００４７】
＜参考試験例１＞
ゴールデンシルク（Ｇｏｌｄｅｎ  Ｓｉｌｋ  Ｎｏ．１１  タイ王国ランプン県トンフォアチャン地方産）１０ｇを、５０％エタノール溶液４００ｍＬと濃塩酸１ｍＬとの混合溶媒に浸漬させ、８０℃で７時間抽出を行った。抽出後、ろ過したろ液を、１ＮのＮａＯＨで中和した。その後、中和した抽出液を５℃で静置し澱を析出させた。澱をろ別してゴールデンシルク抽出物を得た。
１０％ＦＢＳ／ＤＭＥＭ培地にヒト繊維芽細胞を７．０×１０5個／ウェルずつ播種し
、３７℃、５％ＣＯ2条件下で培養した。培養開始２４時間後に培地を除去し、細胞をＰ
ＢＳ（−）で洗浄し、２％ＦＢＳ／ＤＭＥＭ培地中でゴールデンシルク抽出物を蒸発残分として１×１０-3質量％の濃度となるように添加し、さらに４８時間培養した。培養後にｍＲＮＡを回収して、ＲＴ−ＰＣＲでバーシカンのｍＲＮＡ発現量を測定した。なお、発現量は、内部標準物質を基準に算出した。また、陰性対照として、抽出液の代わりに５０％エタノールを添加した場合（コントロール）、及び陽性対照として抗老化作用を有するＴＧＦ−βを２ｎｇ／ｍＬ添加した場合について、同様にｍＲＮＡ発現量を測定した。
陰性対照（コントロール）を１とした場合の相対発現量を図１に示す。この結果の通り、ゴールデンシルク抽出物によって、線維芽細胞におけるバーシカンの発現が促進されたことがわかる。
【００４８】
＜参考試験例２＞
ゴールデンシルク２０ｇを、メタノール４００ｍＬ、水４００ｍＬ及び濃塩酸２ｍＬの混合溶媒に浸漬させ、８０℃で６時間抽出を行った。抽出後、ろ過したろ液を、１ＮのＮａＯＨで中和した。その後、中和した抽出液を５℃で１日以上静置し澱を析出させた。澱をろ別してゴールデンシルク抽出物を得た。
上記ゴールデンシルク抽出物から溶媒を留去したのち、酢酸エチルを加えて液液分配した。酢酸エチル層を乾固後、クロロホルムを溶媒として用いてシリカゲルカラムで精製した。
参考試験例１と同様の実験を行い線維芽細胞におけるバーシカンの発現を促進した分画について1Ｈ−ＮＭＲ、13Ｃ−ＮＭＲ、及びＭＳ解析を行い、これらがルペオール（和光純薬株式会社  試薬）と一致することと（図２〜３）、文献値（EXCLI Journal 2010; 9: 1-10、Research Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol.1 (1), 23-27, 2012）と一致することから、ゴールデンシルク抽出物のバーシカン産生促進作用の有効成分はルペオールであると同定した。
【００４９】
＜参考試験例３＞
コラーゲンゲルにヒト線維芽細胞を１．５×１０4個／ウェルずつ播種し、ゴールデン
シルク抽出物を蒸発残分として１×１０-3質量％の濃度となるように添加して、通常のコラーゲンゲル培養法に従って１０日間培養した。対照として、ゴールデンシルク抽出物を添加しないヒト線維芽細胞も同様に培養した。培養後の細胞を抗バーシカン抗体（Ｈｕｍａｎ ｖｅｒｓｉｃａｎ Ｉｓｏｆｏｒｍ ＶＯ Ａｎｔｉｂｏｄｙ：Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍ
ｓ）で染色し、共焦点蛍光顕微鏡（ＬＳＭ５１０ Ｌａｓｅｒ Ｍｏｄｕｌｅ：ＺＥＩＳＳ）で観察した。
結果を図４に示す。ゴールデンシルク抽出物によって線維芽細胞におけるバーシカン産生が促進され、コラーゲンゲル内にバーシカンが充満したことがわかる。
【００５０】
＜参考試験例４＞
コラーゲンゲルにヒト線維芽細胞を１×１０6個／ウェルずつ播種し、ゴールデンシル
ク抽出物を蒸発残分として１×１０-3質量％の濃度となるように添加して、通常のコラーゲンゲル培養法に従って５日間培養した。対照として、ゴールデンシルク抽出物を添加しないヒト線維芽細胞も同様に培養した。培養後にコラーゲン線維束を走査型電子顕微鏡（ＶＳＭ‐６３８０ＬＡ：日本電子）で観察した。また、培養後のコラーゲンゲルの弾力値を、バリストメーター（キーストン サイエンティフィック株式会社）を用いて測定した
。
図５に示す結果から、ゴールデンシルク抽出物を添加した場合は、より太く強靭なコラーゲン線維束が多数形成されたことがわかる。また、図６に示すように、ゴールデンシルク抽出物を添加した場合は、コラーゲンゲルの弾力性が約１．５倍に向上したことがわかる。
【００５１】
＜参考試験例５＞
コラーゲンゲルにヒト線維芽細胞を１×１０5個／ウェルずつ播種し、ゴールデンシル
ク抽出物を蒸発残分として１×１０‐3質量％の濃度となるように添加して、通常のコラ
ーゲンゲル培養法に従って６日間培養した。対照として、ゴールデンシルク抽出物を添加しないヒト線維芽細胞も同様に培養した。培養後にコラーゲンゲルを０．２５質量％ヒアルロン酸水溶液に３０分間浸漬し、浸漬後に水分増加量を測定した。その後、該コラーゲンゲルを乾燥処理し（３７℃、２時間）、乾燥処理前後のコラーゲンゲルの外観を観察した。
図７に示す結果から、ゴールデンシルク抽出物を添加した場合は、コラーゲンゲルの水分保持能が約１．２倍に向上したことがわかる。また、図８に示すように、乾燥処理後のコラーゲンゲルは、コントロールでは水分を放出し透明化したのに対し、ゴールデンシルク抽出物を添加した場合は、ゲルが水分を抱え込んだままであることがわかる。
【００５２】
＜実施例１＞
以下に示す処方により、本発明の皮膚外用剤を製造した。すなわち、処方成分を７０℃で加熱、攪拌、可溶化し、攪拌冷却して実施例１の化粧水を得た。
処方：
ルペオール                                      ０．１重量部
ヒアルロン酸                                    ０．１重量部
グリセリン                                      ５ 重量部
１，２−ペンタンジオール                        ４ 重量部
ポリホスファチジルオキシエチルメタクリレート    ０．１重量部
フェノキシエタノール                            ０．１重量部
エタノール                                      ５ 重量部
ＰＯＥ（６０）硬化ひまし油                      ０．１重量部
水                                            ８５．５重量部
【００５３】
また、実施例１の化粧水においてヒアルロン酸を水に置換した比較例１の化粧水、実施例１の化粧水においてルペオールを水に置換した比較例２の化粧水、及び実施例１の化粧水においてルペオールとヒアルロン酸とを水に置換した比較例３の化粧水も、同様に調製した。
【００５４】
実施例１及び比較例１〜３の化粧水に関して、１群１０名のハリ、弾力、みずみずしさに悩むパネラーを用いて、長期連用試験を行った。各群のパネラーに、化粧水を１日１回毎日、顔面に塗布してもらい、試験開始３ヶ月後に、ハリ、弾力、及びみずみずしさの改善についてそれぞれ著効、効果あり、及び効果なしの３段階で評価してもらった。表１に示す結果より、本発明に係る化粧料はハリ、弾力、みずみずしさについて優れた改善効果を発揮することがわかる。
【００５５】
【表１】
0006611308.tif 000002
【００５６】
＜実施例２＞
以下に示す処方により、本発明の皮膚外用剤を製造した。すなわち、イ、ロ及びハの成分をそれぞれ７０℃に加熱し、イにロを加え中和し、これにハを徐々に加え乳化した。これを攪拌冷却し、実施例２の乳液を得た。
処方：
（イ）
１，２−ペンタンジオール                      ５ 重量部
イソプレングリコール                          ４ 重量部
アクリル酸・メタクリル酸アルキルポリマー      ０．６ 重量部
フェノキシエタノール                          ０．１ 重量部
水                                          ３０ 重量部
（ロ）
１０％水酸化カリウム水溶液                    ３ 重量部
水                                          ３９．７重量部
（ハ）
スクワラン                                    ５ 重量部
ホホバ油                                      ５ 重量部
オリーブ油                                    ５ 重量部
ゴールデンシルクエキス抽出物                  ０．２ 重量部
ヒアルロン酸                                  ０．２ 重量部
【００５７】
また、実施例２の乳液においてヒアルロン酸を水に置換した比較例４の化粧水、実施例２の乳液においてルペオールを水に置換した比較例５の化粧水、及び実施例２の乳液ルペオールとヒアルロン酸とを水に置換した比較例６の化粧水も、同様に調製した。
【００５８】
実施例１及び比較例１〜３の化粧水に関して、１群１０名のハリ、弾力、みずみずしさに悩むパネラーを用いて、実使用試験を行った。各群のパネラーに、化粧水を１日１回毎日、顔面に塗布してもらい、試験開始４週間後に、ハリ、弾力、及びみずみずしさの改善についてそれぞれ著効、効果あり、及び効果なしの３段階で評価してもらった。表２に示す結果より、本発明に係る乳液はハリ、弾力、みずみずしさについて優れた改善効果を発揮することがわかる。
【００５９】
【表２】
0006611308.tif 000003
【産業上の利用可能性】
【００６０】
本発明の皮膚外用剤は、ハリや弾力に富み、みずみずしく生まれ変わったような肌を実現し得るため、優れた抗老化用化粧料となり得、産業上非常に有用である。
【図１】
0006611308.tif 000004
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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