(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物（Ｉ）：
【化１】
0006476253.tif 000024
（Ｉ）
のヘミ硫酸塩の７０ｍｇ〜８０ｍｇおよび医薬的に許容される担体または希釈剤を含む、医薬組成物。
【請求項２】
化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩の７０ｍｇを含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩の８０ｍｇを含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩が、セスキ水和物である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩が、下記：
下記：
格子サイズ：    ａ＝１０．９２Å
ｂ＝３３．０４Å
ｃ＝７．９０Å
α＝９０度
β＝９０度
γ＝９０度
空間群：Ｐ２１２１２
化合物（Ｉ）の分子／非対称単位：１
体積＝２８５１Å３
密度（理論値）＝１．４２３ｇ／ｃｍ３
（前記結晶形の測定は、２５℃の温度である）；
と同等な単位格子パラメータ
によって特徴付けられる結晶形態Ｈ１．５−１である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記形態Ｈ１．５−１が、下記： 
ａ）図１：
0006476253.tif 000025
に示されるパターンによる実測された粉末Ｘ線回折パターン；
ｂ）図１：
0006476253.tif 000026
に示されるパターンによるシミュレーションされた粉末Ｘ線回折パターン；
ｃ）５．４±０．１、８．６±０．１、９．７±０．１、１２．４±０．１、１４．９±０．１、１７．６±０．１、１８．１±０．１、２０．５±０．１、２１．４±０．１、および２２．０±０．１から選択される４つまたはそれ以上の２θ値を含む粉末Ｘ線回折パターン（ＣｕＫα  λ＝１．５４１８Å）（結晶形態の測定は、２５℃の温度である）；および／または
ｄ）２６．６±０．１、２７．１±０．１、２８．３±０．１、３０．７±０．１、４３．１±０．１、４５．９±０．１、４７．１±０．１、５２．０±０．１、５４．２±０．１、７２．５±０．１、１１７．０±０．１、１１７．７±０．１、１２４．２±０．１、１２５．２±０．１、１２８．３±０．１、１３０．３±０．１、１３１．４±０．１、１３４．１±０．１、１４０．８±０．１、１４４．７±０．１、１４８．７±０．１、１４９．８±０．１、１５１．２±０．１、１５３．４±０．１、１５５．１±０．１、１５５．６±０．１、および１５６．７±０．１から選択される６つまたはそれ以上のピーク（ＴＭＳで標準化したδ（ｐｐｍ））を含む固体核磁気スペクトル：
のうちの１つまたはそれ以上によって特徴付けられるものである、
請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
ＣＧＲＰ受容体の阻害における使用のための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
片頭痛の治療における使用のための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
片頭痛の治療に有用である経口投与のための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
片頭痛の治療に有用である舌下投与のための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
片頭痛の治療に有用である鼻腔内投与のための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
片頭痛の治療における１日１回の使用のための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
片頭痛の治療における１日２回の使用のための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１２年２月２７日に提出の米国仮出願番号第６１／６０３，５９８号の利益を請求するものである。
【背景技術】
【０００２】
Ｎ−（５Ｓ，６Ｓ，９Ｒ）−５−アミノ−６−（２，３−ジフルオロフェニル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−シクロヘプタ［ｂ］ピリジン−９−イル−４−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレートのヘミ硫酸塩およびその結晶形が開示される。Ｎ−（５Ｓ，６Ｓ，９Ｒ）−５−アミノ−６−（２，３−ジフルオロフェニル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−シクロヘプタ［ｂ］ピリジン−９−イル−４−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレートのヘミ硫酸塩を含む少なくとも１つの医薬組成物およびＣＧＲＰ関連障害（例えば、片頭痛および喘息）の治療におけるＮ−（５Ｓ，６Ｓ，９Ｒ）−５−アミノ−６−（２，３−ジフルオロフェニル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−シクロヘプタ［ｂ］ピリジン−９−イル−４−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレートのヘミ硫酸塩の少なくとも１つの使用方法もまた開示される。
【０００３】
化合物、Ｎ−（５Ｓ，６Ｓ，９Ｒ）−５−アミノ−６−（２，３−ジフルオロフェニル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−シクロヘプタ［ｂ］ピリジン−９−イル−４−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレートは、式Ｉ：
【化１】
0006476253.tif 000002
（Ｉ）
の構造を有し、本明細書では「化合物（Ｉ）」と称される。化合物（Ｉ）、化合物（Ｉ）の製造方法、および化合物（Ｉ）を用いる治療方法は、特許文献１に開示されている。この文献は、本出願人に譲渡されており、その全体が出典明示により本明細書に取り込まれるものである。
【０００４】
経口製剤の有用性は、とりわけ、活性な薬剤が患者間の生物学的な利用可能性を有し、バイオアベイラビリティにおける一貫性の程度に依存する。経口投与薬のバイオアベイラビリティは、例えば、胃腸管中の薬物の溶解性、胃腸管中の薬物の安定性、および胃腸管中の薬物吸収などを含む様々な因子によって影響を受けることがよくある。さらに、これらの因子は、他の薬物の共投与および／または食物の摂取によって影響され、経口投与薬のバイオアベイラビリティの変動を生じうる。また、活性な薬剤の急速なインビボ溶解はまた、片頭痛などの症状の急速な処置の提供が必要とされる。
【０００５】
化合物（Ｉ）の溶解速度は、水媒体のｐＨに依存する。化合物（Ｉ）は、７のｐＨ値より１〜５のｐＨ値においてより高い溶解速度を有する。化合物（Ｉ）の経口投与において、溶解速度および化合物Ｉのバイオアベイラビリティは、胃内容物のｐＨによって影響を受けうる。胃の正常なｐＨは、非特許文献１によると、１．２〜１．８である。しかしながら、患者は、化合物（Ｉ）の溶解速度を低下させることができる制酸薬、プロトンポンプ阻害剤、およびファモチジンなどのＨ２−受容体アンタゴニストを含む、胃のｐＨを上昇させることができる他の薬剤を摂取することもある。
【０００６】
典型的には、医薬組成物の製造の際、例えば、溶解速度、溶解性、バイオアベイラビリティ、および／または保存安定性などの所望される特性のバランスを有する活性成分の形態が探索される。例えば、十分に溶解性を有し、バイオアバイラビリティを有する形態が、医薬組成物の製造、調製、および／または保存の間に、望ましくない溶解性および／またはバイオアベイラビリティプロファイルを有する別の形態に変換することを防ぐために十分な安定性、溶解性、およびバイオアベイラビリティを有する活性成分の形態が探索される。例えば、周囲温度および湿度条件で安定であり、低い吸湿性を有する活性成分の形態が探索される。
【０００７】
さらに、活性成分を大規模生成可能な方法によって生成することができる活性成分の形態もまた探索されうる。このような方法では、活性成分は、単離および／または精製（例えば、濾過による）、および乾燥を容易にできる形態であることが望ましい。
【０００８】
さらに、生産経済性が重要であることから、形態の製造においてコストの高い物質を用いることを回避することが望ましい。
【０００９】
出願人は、驚くべきことに、化合物（Ｉ）のバイオアベイラビリティの変動を減らし、患者間のバイオアベイラビリティを一致させ、および／または患者に化合物（Ｉ）のバイオアベイラビリティを増加させる化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩を見出した。また、出願人は、驚くべきことに、化合物（Ｉ）のバイオアベイラビリティの変動を減らし、患者間のバイオアベイラビリティを一致させ、および／または患者に化合物（Ｉ）のバイオアベイラビリティを増加させる化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩の結晶形態を見出した。化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩およびその結晶形態は、驚くべきことに、医薬組成物中で要求される特性のバランスを有するものである。本発明はまた、他の重要な態様に関するものである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】米国特許公開第２０１１／０２５１２２３Ａ１
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】C.J. Perigard, Clinical Analysis, Chapter 32, in Remington: The Science and Practice of Pharmacy 20th Edition, A.R. Gennaro, editor; 2000, Lippinocott Williams & Wilkins, Baltimore, MD
【発明の概要】
【００１２】
ある態様において、本発明は、化合物（Ｉ）：
【化２】
0006476253.tif 000003
（Ｉ）
のヘミ硫酸塩である。
【００１３】
本発明はまた、化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩の結晶形態を提供する。
【００１４】
本発明はまた、医薬的に許容される担体および／または希釈剤；および化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩を含む医薬組成物を提供する。
【００１５】
本発明はまた、哺乳類患者に化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩を投与することを特徴とする、ＣＧＲＰ受容体の活性に関連する疾患または障害の治療方法を提供する。
【００１６】
本発明はまた、化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩および／またはその結晶形態を調製するための方法および中間体を提供する。
【００１７】
本発明はまた、治療に使用するための化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩を提供する。
【００１８】
本発明はまた、片頭痛、神経因性血管拡張、神経因性炎症、熱傷、循環ショック、閉経に関連する紅潮、喘息などの気道炎症疾患、および慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の治療剤の製造のための化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩を提供する。
【００１９】
本発明のこれらおよび他の特徴は、開示が続くように拡大された形で説明される。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】図１は、実施例化合物１の形態Ｈ１．５−１の実験上（室温）およびシミュレーション上（室温）のＰＸＲＤパターン（ＣｕＫα  λ＝１．５４１８Å）を示す。
【図２】図２は、実施例化合物１の形態Ｈ１．５−１の示差走査熱量測定プロファイルを示す。
【図３】図３は、実施例化合物１の形態Ｈ１．５−１の熱重量分析プロファイルを示す。
【図４】図４は、実施例化合物１の形態Ｈ１．５−１の交差分極マジック角回転（ＣＰＭＡＳ）ＮＭＲスペクトルを示す。
【図５】図５は、２５℃で実施例化合物１についての吸湿等温線を示す。（Ｘ）吸着；（■）脱着。
【図６】図６は、遊離塩基としての化合物（Ｉ）および化合物（Ｉ）のＨＣｌ塩についての飽食時小腸内模擬腸液（ＦｅＳＳＩＦ）中の約５のｐＨ値および絶食時小腸内模擬腸液（ＦａＳＳＩＦ）中の約７のｐＨ値における時間に対する％溶解度を示す。
【図７】図７は、遊離塩基としての化合物（Ｉ）および化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩についての約１のｐＨ値、飽食時小腸内模擬腸液（ＦｅＳＳＩＦ）中での約５のｐＨ値、および絶食時小腸内模擬腸液（ＦａＳＳＩＦ）中の約７のｐＨ値における時間に対する％溶解度を示す。
【図８】図８は、化合物（Ｉ）の投与２時間前にファモチジン（４０ｍｇ）で前処置の有無による経口投与後のヒトにおける遊離塩基である化合物（Ｉ）の血漿薬物動態を示す。化合物（Ｉ）は１５０ｍｇの用量で投与した。（●）化合物（Ｉ）（ｎＭ）；（◆）ファモチジン前処置による化合物（Ｉ）（ｎＭ）。ｘ軸は、時間（分）である。
【図９】図９は、化合物（Ｉ）および実施例化合物１の経口投与後のイヌにおける化合物（Ｉ）の血漿薬物動態を示す。化合物（Ｉ）および実施例化合物１は、１５０ｍｇの用量（またはこれと同等）で経口投与した。（◆）化合物（Ｉ）（ｎＭ）およびペンタガストリンによる前処置（６μｍ／ｋｍ）；（■）化合物（Ｉ）およびファモチジン（４０ｍｇ）；（▲）実施例化合物１（ヘミ硫酸塩）およびファモチジン（４０ｍｇ）。
【図１０】図１０は、実施例化合物１の形態Ｐ２２Ｃの実験上（室温）のＰＸＲＤパターン（ＣｕＫα  λ＝１．５４１８Å）を示す。
【図１１】図１１は、実施例化合物１の形態Ｐ３３の実験上（室温）のＰＸＲＤパターン（ＣｕＫα  λ＝１．５４１８Å）を示す。
【図１２】図１２は、実施例化合物１の形態Ｐ３５の実験上（室温）のＰＸＲＤパターン（ＣｕＫα  λ＝１．５４１８Å）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明の特徴および有利な点は、下記の詳細な説明を読むことによって当業者により容易に理解されうる。明確化のために別の実施態様として上記および下記に記載される本発明の一定の特徴もまた、組み合わされて１つの実施態様を形成しうることが評価されるべきである。反対に、簡潔さのために１つの実施態様で記載される本発明の様々な特徴もまた、その部分的な組み合わせを形成するように組み合わされうる。
【００２２】
特定の形態を特徴付けるために本明細書で用いられる名称、例えば、「Ｈ１．５−１」、「Ｐ２２Ｃ」、「Ｐ３３」および「Ｐ３５」は、本明細書で提示される特徴付け情報によって解釈されるべきであり、同様または同一の物理的および化学的特徴を有する他の物質を除くように限定されるべきではない単なる識別名である。
【００２３】
本明細書で説明される定義は、出典明示により本明細書に取り込まれるいずれの特許、特許出願、および／または特許出願公開で説明される定義に優先する。
【００２４】
成分の量、重量パーセント、温度、その他前に「約」がある語を表現する全ての数字は、記載される数値より高く、および低いわずかな変動が記載される数値と実質的に同一の結果を達成するために用いられうるように近似する値のみとして理解されるべきである。よって、矛盾を示さない限り、前に用語「約」がある数値パラメータは、取得されることが望まれる所望の特性に応じて変動しうる近似値である。少なくとも、均等論の適用を請求項の範囲に限定しようとするのではなく、各数値パラメータは、少なくとも、記載される有効桁数を考慮し、通常の周知技術を適用することによって解釈されるべきである。
【００２５】
全ての測定は、実験誤差にさらされ、本発明の精神の範囲内である。
【００２６】
化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩は、その製造後に、好ましくは、単離され、精製されて、（「実質的に純粋な」）化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩に同等または９９％以上、より好ましくは９９．５％以上、より好ましくは９９．９％以上の重量を含有する組成物が得られ、続いて本明細書に記載されるように用いられ、または製剤化される。このような「実質的に純粋な」化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩はまた、本発明の一部として本明細書に包含される。
【００２７】
本明細書で用いられるように、「多形」は、同一の化学構造を有するが、その結晶を形成する分子および／またはイオンの異なる空間的配置を有する結晶形態を意味する。
【００２８】
本明細書で用いられるように、「アモルファス」は、結晶ではない分子および／またはイオンの固体形態を意味する。アモルファス固体は、はっきりした最大値を有する明確なＸ線回折パターンを示さない。
【００２９】
本明細書で用いられるように、用語「実質的に純粋な結晶形態」は、化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩の重量に基づいて、その形態の少なくとも約９０重量％を含有するとされる化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩の結晶形態を意味する。用語「少なくとも約９０重量％」は、均等論の適用を請求項の範囲に限定することなく、以下に限定されないが、例えば、化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩の重量に基づいて、約９０、９０、約９１、９１、約９２、９２、約９３、９３、約９４、９４、約９５、９５、約９６、９６、約９７、９７、約９８、９８、約９９、９９、および約１００重量％が挙げられる。化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩の他には、化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩の他の形態（アモルファスの化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩を含む）および／または反応不純物および／または、例えば、ヘミ硫酸塩が調製され、および／または結晶形態が調製される際に生じる処理不純物が含まれうる。
【００３０】
反応不純物および／または処理不純物の存在は、当該技術分野で公知の分析技術、例えば、クロマトグラフィー、核磁気共鳴分光法、質量分析、および／または赤外分光法などによって決定されうる。
【００３１】
本明細書で用いられるように、パラメータ「分子／非対称単位」は、非対称単位中の化合物（Ｉ）の分子数を意味する。
【００３２】
本明細書で用いられるように、単位格子パラメータ「分子／単位格子」は、単位格子中の化合物（Ｉ）の分子数を意味する。
【００３３】
本発明は、本化合物中に存在する原子の全ての同位体が含まれるものとされる。同位体には、同一の原子番号を有するが、異なる質量数を有する原子が含まれる。一般的な例示のためであって、限定するものではなく、水素の同位体には、重水素およびトリチウムが含まれる。炭素の同位体には、１３Ｃおよび１４Ｃが含まれる。本発明の同位体標識した化合物は、一般に、他で用いられる標識されていない試薬の代わりに適当に同位体標識した試薬を用いて、当業者に公知の従来技術または本明細書に記載の方法に類似する方法によって調製することができる。このような化合物は、例えば、生物学的活性を測定する際の標準物質および試薬として、様々な潜在的な用途を有しうる。安定な同位体の場合、このような化合物は、生物学的、薬理学的、または薬物動態学的特性を好ましく改変する可能性を有しうる。
【００３４】
本発明の第１の態様は、化合物（Ｉ）
【化３】
0006476253.tif 000004
（Ｉ）
のヘミ硫酸塩を提供する。化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩は、化合物（Ｉ）の各分子に対して０．５のＨ２ＳＯ４分子の比率で有する化合物（Ｉ）の酸塩であり、名称：（５Ｓ，６Ｓ，９Ｒ）−５−アミノ−６−（２，３−ジフルオロフェニル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−シクロヘプタ［ｂ］ピリジン−９−イル４−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート，ヘミ硫酸塩を有する。
【００３５】
ある実施態様において、化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩は、化合物（Ｉ）の各分子に対して１．５の水分子および０．５のＨ２ＳＯ４分子の比率を有するセスキ水和物として提供される。
【００３６】
ある実施態様において、化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩は、結晶形態として提供される。
【００３７】
ある実施態様において、化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩は、結晶形態として提供されるものであって、結晶形態が、形態Ｈ１．５−１である。この結晶形態は、化合物（Ｉ）の各分子に対して１．５の水分子および０．５のＨ２ＳＯ４分子の比率を有する。
【００３８】
ある実施態様において、形態Ｈ１．５−１は、下記：
格子サイズ：
ａ＝１０．９２Å
ｂ＝３３．０４Å
ｃ＝７．９０Å
α＝９０度
β＝９０度
γ＝９０度
空間群：Ｐ２１２１２
化合物（Ｉ）の分子／非対称単位：１
体積＝２８５１Å３
密度（算出）＝１．４２３ｇ／ｃｍ３
（前記結晶形態の測定は、約２５℃の温度である）
に実質的に同等な単位格子パラメータによって特徴付けられる。
【００３９】
ある実施態様において、形態Ｈ１．５−１は、実質的に図１に示されるパターンによる実測された粉末Ｘ線回折パターンによって特徴付けられる。
【００４０】
ある実施態様において、形態Ｈ１．５−１は、実質的に図１に示されるパターンによるシミュレーションされた粉末Ｘ線回折パターンによって特徴付けられる。
【００４１】
ある実施態様において、形態Ｈ１．５−１は、５．４±０．１、８．６±０．１、９．７±０．１、１２．４±０．１、１４．９±０．１、１７．６±０．１、１８．１±０．１、２０．５±０．１、２１．４±０．１、および２２．０±０．１から選択される４つまたはそれ以上、好ましくは、５つまたはそれ以上の２θ値を含む、粉末Ｘ線回折パターン（ＣｕＫα  λ＝１．５４１８Å）によって特徴付けられる（結晶形態の測定は、約２５℃の温度である）。
【００４２】
別の実施態様において、形態Ｈ１．５−１は、実質的に図４に示されるスペクトルによる固体核磁気共鳴スペクトル（ｓｓＮＭＲ）によって特徴付けられる。
【００４３】
ある実施態様において、形態Ｈ１．５−１は、２６．６±０．１、２７．１±０．１、２８．３±０．１、３０．７±０．１、４３．１±０．１、４５．９±０．１、４７．１±０．１、５２．０±０．１、５４．２±０．１、７２．５±０．１、１１７．０±０．１、１１７．７±０．１、１２４．２±０．１、１２５．２±０．１、１２８．３±０．１、１３０．３±０．１、１３１．４±０．１、１３４．１±０．１、１４０．８±０．１、１４４．７±０．１、１４８．７±０．１、１４９．８±０．１、１５１．２±０．１、１５３．４±０．１、１５５．１±０．１、１５５．６±０．１、および１５６．７±０．１から選択される６つまたはそれ以上、好ましくは、７つまたはそれ以上のピーク（ＴＭＳで標準化したδ（ｐｐｍ））を含む、固体核共鳴スペクトルによって特徴付けられる。
【００４４】
なおさらなる実施態様において、形態Ｈ１．５−１は、実質的に表１に記載される分率原子座標によって特徴付けられる。
表１：２５℃で算出される形態Ｈ１．５−１の分率原子座標。
非水素原子および等価原子の原子座標（ｘ１０４）
等方性変位パラメータ（Å２ｘ１０３）
【表１】
0006476253.tif 000005
0006476253.tif 000006
＊ジフルオロフェニル環は、０．８１７（５）および０．１８３（５）を占有する２つの配向性（Ｆ１／Ｆ１Ａ、Ｆ２／Ｆ２Ａ）により結晶中で不規則であることが測定される。
表２
表２：２５℃で算出される形態Ｈ１．５−１の分率原子座標。
水素原子および等価原子の原子座標（ｘ１０４）
等方性変位パラメータ（Å２ｘ１０３）
【表２】
0006476253.tif 000007
0006476253.tif 000008
【００４５】
よりさらなる実施態様において、形態Ｈ１．５−１は、実質的に図２に示されるＤＳＣサーモグラムによって特徴付けられる。
【００４６】
なお別の実施態様において、形態Ｈ１．５−１は、ＴＧＡサーモグラムによって特徴付けられ、形態Ｈ１．５−１は、約２００℃の温度に加熱されることによって約４−５重量％の重量損失を経る。
【００４７】
なおさらなる実施態様において、形態Ｈ１．５−１は、図３に示されるＴＧＡサーモグラムと実質的に同一である。
【００４８】
さらになお別の実施態様において、形態Ｈ１．５−１は、実質的に純粋な結晶形態で提供される。
【００４９】
なおさらなる実施態様において、化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩は、ヘミ硫酸塩に基づいて、少なくとも約９０重量％、好ましくは、少なくとも約９５重量％、より好ましくは、少なくとも約９９重量％の形態Ｈ１．５−１を含有する。
【００５０】
よりさらなる実施態様において、実質的に純粋な形態Ｈ１．５−１は、シミュレーションされたＰＸＲＤパターンでは存在しないピークから生じる実験で測定されたＰＸＲＤパターンの総ピーク面積の約１０％以下、好ましくは、約５％以下、より好ましくは、約２％以下の実質的に純粋な相均一性を有する。最も好ましくは、実質的に純粋な形態Ｈ１．５−１は、シミュレーションされたＰＸＲＤパターンでは存在しないピークから生じる実験で測定されたＰＸＲＤパターンの総ピーク面積の約１％以下の実質的に純粋な相均一性を有する。
【００５１】
別の実施態様において、化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩は、必須として、形態Ｈ１．５−１からなる。この実施態様の結晶形態は、化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩の重量に基づいて、少なくとも約９０重量％、好ましくは、少なくとも約９５重量％、より好ましくは、少なくとも約９９重量％含まれうる。
【００５２】
なお別の実施態様において、医薬組成物には、形態Ｈ１．５−１の化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩；および少なくとも１つの医薬的に許容される担体および／または希釈剤が含まれる。
【００５３】
ある実施態様において、化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩は、結晶形態として提供され、前記結晶形態は、Ｐ２２Ｃである。この結晶形態は、化合物（Ｉ）の各分子について１．５の水分子および０．５のＨ２ＳＯ４分子の比率を有するセスキ水和物である。
【００５４】
ある実施態様において、形態Ｐ２２Ｃは、実質的に図１０に示される粉末Ｘ線回折パターンによる実測された粉末Ｘ線回折パターンによって特徴付けられる。
【００５５】
ある実施態様において、化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩は、化合物（Ｉ）の各分子について１の水分子および０．５のＨ２ＳＯ４分子の比率を有する一水和物として提供される。
【００５６】
ある実施態様において、化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩は、形態Ｐ３３である結晶形態として提供される。この結晶形態は、化合物（Ｉ）の各分子について１の水分子および０．５のＨ２ＳＯ４分子の比率を有する。
【００５７】
ある実施態様において、形態Ｐ３３は、実質的に図１１に示される粉末Ｘ線回折パターンによる実測された粉末Ｘ線回折パターンによって特徴付けられる。
【００５８】
化合物（Ｉ）は、ＣＧＲＰ受容体アンタゴニストとして適当であり、片頭痛、神経因性血管拡張、神経因性炎症、熱傷、循環ショック、閉経に関連する紅潮、喘息などの気道炎症疾患、および慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を含む、ＣＧＲＰ関連障害の治療に有用である。
【００５９】
カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）は、１９８２年に初めて同定された天然に存在する３７−アミノ酸ペプチドである（Amara, S. G. et al, Science 1982, 298, 240-244）。ラットおよびヒトで１つおよび３つのアミノ酸がそれぞれ異なるこのペプチドの２つの形態が発現される（αＣＧＲＰおよびβＣＧＲＰ）。前記ペプチドは、末梢（ＰＮＳ）および中枢神経系（ＣＮＳ）の両方で広く分布され、主に、感覚求心路および中枢神経に局在し、血管拡張を含む多くの生物学的効果を示す。
【００６０】
細胞から放出されると、ＣＧＲＰは、特定の細胞表面Ｇタンパク質共役受容体に結合し、細胞内アデニル酸シクラーゼの活性化によってその生物学的作用を優位に発揮する（Poyner, D. R. et al, Br J Pharmacol 1992, 105, 441-7; Van Valen, F. et al, Neurosci Lett 1990, 119, 195-8.）。ＣＧＲＰ受容体の２つのクラス（ＣＧＲＰ１およびＣＧＲＰ２）は、ペプチド断片ＣＧＲＰ（８-３７）のアンタゴニスト特性およびＣＧＲＰの直鎖類似体の能力に基づいてＣＧＲＰ２受容体を活性化することが推定されている（Juaneda, C. et al. TiPS 2000, 21, 432-438）。しかしながら、ＣＧＲＰ２受容体についての分子上の証拠は存在していない（Brain, S. D. et al, TiPS 2002, 23, 51-53）。ＣＧＲＰ１受容体は、２つの構成部分：（ｉ）７回膜貫通型カルシトシン受容体様受容体（ＣＲＬＲ）；（ｉｉ）１回膜貫通型受容体活性調節タンパク質１（ＲＡＭＰ１）；および（ｉｉｉ）細胞内受容体構成（component）タンパク質（ＲＣＰ）を有する（Evans B. N. et al., J Biol Chem. 2000, 275, 31438-43）。ＲＡＭＰ１は、ＣＲＬＲの細胞膜への輸送およびＣＧＲＰ受容体に結合するリガンドに必要とされる（McLatchie, L. M. et al, Nature 1998, 393, 333-339）。ＲＣＰは、シグナル伝達に必要とされる（Evans B. N. et al., J Biol Chem. 2000, 275, 31438-43）。小分子アンタゴニストがＣＧＲＰ受容体に結合する際、他の種よりヒトの受容体の拮抗作用について見られる典型的により高い親和性での種特異的な相違が知られている（Brain, S. D. et al, TiPS 2002, 23, 51-53）。ＲＡＭＰ１のアミノ酸配列は、種選択性を決定し、特に、アミノ酸残基Ｔｒｐ７４は、ヒト受容体の表現形に関連する（Mallee et al. J Biol Chem 2002, 277, 14294-8）。
【００６１】
ＣＧＲＰに対する受容体レベルでの阻害剤は、過剰なＣＧＲＰ受容体の活性化が生じる病態生理学的状態に有用であることが想定される。これらとしては、神経因性血管拡張、神経因性炎症、片頭痛、群発頭痛および他の頭痛、熱傷、循環ショック、閉経期紅潮、および喘息などが挙げられる。ＣＧＲＰ受容体の活性化は、片頭痛の病理発生に関与している（Edvinsson L. CNS Drugs 2001;15(10):745-53; Williamson, D. J. Microsc. Res. Tech. 2001, 53, 167-178.; Grant, A. D. Brit. J. Pharmacol. 2002, 135, 356-362.）。ＣＧＲＰの血清レベルは、片頭痛の間に上昇し（Goadsby PJ, et al. Ann Neurol 1990;28:183-7）、抗片頭痛薬による治療は、頭痛の軽減を伴いＣＧＲＰレベルを正常値まで戻す（Gallai V. et al. Cephalalgia 1995;15: 384-90）。片頭痛患者は、対照患者と比較して基準ＣＧＲＰレベルの上昇を示す（Ashina M, et al., Pain 2000, 86(1-2):133-8.2000）。静脈内ＣＧＲＰ吸入は、片頭痛患者の頭痛を持続させる（Lassen LH, et al. Cephalalgia 2002 Feb;22(1):54-61）。イヌおよびラットにおける前臨床試験では、ペプチドアンタゴニストＣＧＲＰ（８−３７）による全身のＣＧＲＰ遮断は、安静全身血行動態も局所血流も変化させないことが報告されている（Shen, Y-T. et al, J Pharmacol Exp Ther 2001, 298, 551-8）。よって、ＣＧＲＰ受容体アンタゴニストは、非選択性５−ＨＴ１Ｂ／１Ｄアゴニスト、「トリプタン」（例えば、スマトリプタン）に伴う心血管の活性な血管収縮の起こりやすさを回避する片頭痛の新規な治療を示しうる。
【００６２】
ＣＧＲＰアンタゴニストはヒト臨床試験で有効性を示した。Davis CD, Xu C. Curr Top Med Chem. 2008 8(16):1468-79; Benemei S, Nicoletti P, Capone JG, Geppetti P. Curr Opin Pharmacol. 2009 9(1):9-14.  Epub 2009 Jan 20; Ho TW, Ferrari MD, Dodick DW, Galet V, Kost J, Fan X, Leibensperger H, Froman S, Assaid C, Lines C, Koppen H, Winner PK. Lancet. 2008 372:2115. Epub 2008 Nov 25; Ho TW, Mannix LK, Fan X, Assaid C, Furtek C, Jones CJ, Lines CR, Rapoport AM; Neurology 2008 70:1304. Epub 2007 Oct 3を参照のこと。
【００６３】
医薬組成物および治療方法
化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩は、ＣＧＲＰ受容体を阻害する。このように、化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩は、異常なＣＧＲＰレベルに関連し、またはＣＧＲＰレベルの調節が治療上の利益を有しうる疾患または障害を治療するために有用である。
【００６４】
よって、本発明の別の態様は、化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩を、医薬的に許容される補助剤、担体または希釈剤と共に含む医薬組成物である。
【００６５】
ある実施態様は、化合物（Ｉ）セスキ水和物のヘミ硫酸塩を、医薬的に許容される補助剤、担体または希釈剤と共に含む医薬組成物を提供する。
【００６６】
ある実施態様は、化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩の結晶形態を、医薬的に許容される補助剤、担体、または希釈剤と共に含む医薬組成物を提供する。
【００６７】
ある実施態様は、化合物（Ｉ）セスキ水和物のヘミ硫酸塩の結晶形態を、医薬的に許容される補助剤、担体、または希釈剤の結晶形態を含む医薬組成物を提供する。
【００６８】
ある実施形態は、化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩の形態Ｈ１．５−１を、医薬的に許容される補助剤、担体、または希釈剤と共に含む医薬組成物を提供する。
【００６９】
化合物は、一般に、治療上の有効量の化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩、および医薬的に許容される担体で構成される医薬組成物として付与され、従来の賦形剤を含有していてもよい。治療上の有効量は、当該技術分野における医療従事者によって決定されるような意味のある患者の利益を供するために必要とされる量である。医薬的に許容される担体は、許容可能な安全性プロフィールを有する一般に公知の担体である。組成物には、カプセル剤、錠剤、トローチ剤および散剤、ならびに液体懸濁液、シロップ、リキシル剤および溶液を含む、全ての一般的な固体および液体形態が包含される。固体組成物は、時間調節または持続放出製剤中で形成されうる。組成物は、一般的な製剤化技術、ならびに従来の賦形剤（結合剤および湿潤剤など）およびベヒクル（水およびアルコールなど）を用いて調製される。
【００７０】
固体組成物は、通常、１回投与あたり約１〜約１０００ｍｇの活性成分を提供する用量単位中に製剤化される。固形用量単位の例としては、０．１ｍｇ、１ｍｇ、１０ｍｇ、１００ｍｇ、５００ｍｇ、および１０００ｍｇである。液体組成物は、一般に、１〜１００ｍｇ／ｍＬの単位用量範囲である。液体用量単位の例としては、０．１ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、および１００ｍｇ／ｍＬである。
【００７１】
ある実施態様において、経口投与形態は、化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩として、７０〜７５０ｍｇの化合物（Ｉ）を提供する。この実施態様において、化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩として、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、５００ｍｇ、および７５０ｍｇの化合物（Ｉ）を有する経口投与形態が含まれる。
【００７２】
ある実施態様において、経口投与形態は、化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩の形態Ｈ１．５−１として、７０〜７５０ｍｇの化合物（Ｉ）を提供する。この実施態様において、化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩の形態Ｈ１．５−１として、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、５００ｍｇ、および７５０ｍｇの化合物（Ｉ）を有する経口投与形態が含まれる。
【００７３】
ある実施態様において、化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩は、１日１回投与される。適する用量としては、化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩の形態Ｈ１．５−１として、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、５００ｍｇ、および７５０ｍｇの化合物（Ｉ）が挙げられる。
【００７４】
ある実施態様において、化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩は、１日２回投与される。適する用量としては、化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩の形態Ｈ１．５−１として、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、５００ｍｇ、および７５０ｍｇの化合物（Ｉ）が挙げられる。
【００７５】
本発明には、経口、非経口、鼻腔内、舌下、および経皮様式を含む、全ての従来の投与様式が包含される。典型的には、１日１回の用量は、１日あたり０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重である。一般に、より多くの化合物が経口で必要とされ、非経口では少ない量の化合物が必要とされる。しかしながら、具体的な投薬計画は、妥当な医学的判断に従って医師により決定されるべきである。
【００７６】
ＣＧＲＰに対する受容体レベルでの阻害剤は、過剰なＣＧＲＰ受容体の活性化が生じる病態生理学的状態に有用であることが想定される。これらとしては、神経因性血管拡張、神経因性炎症、片頭痛、群発頭痛および他の頭痛、熱傷、循環ショック、閉経期紅潮、および喘息などが挙げられる。ＣＧＲＰ受容体の活性化は、片頭痛の病理発生に関与している（Edvinsson L. CNS Drugs 2001, 15(10),745-53; Williamson, D. J. Microsc. Res. Tech. 2001, 53, 167-178.; Grant, A. D. Brit. J. Pharmacol. 2002, 135, 356-362.）。ＣＧＲＰの血清レベルは、片頭痛の間に上昇し（Goadsby P. J. et al. Ann. Neurol. 1990, 28, 183-7）、抗片頭痛薬による治療は、頭痛の軽減を伴いＣＧＲＰレベルを正常値まで戻す（Gallai V. et al. Cephalalgia 1995, 15, 384-90）。片頭痛患者は、対照患者と比較して基準ＣＧＲＰレベルの上昇を示す（Ashina M. et al., Pain 2000, 86(1-2), 133-8）。静脈内ＣＧＲＰ吸入は、片頭痛患者の頭痛を持続させる（Lassen L.H. et al. Cephalalgia. 2002, 22(1), 54-61）。イヌおよびラットにおける前臨床試験では、ペプチドアンタゴニストＣＧＲＰ（８−３７）による全身のＣＧＲＰ遮断は、安静全身血行動態も局所血流も変化させないことが報告されている（Shen, Y-T. et al. J. Pharmacol. Exp. Ther. 2001, 298, 551-8）。よって、ＣＧＲＰ受容体アンタゴニストは、非選択性５−ＨＴ１Ｂ／１Ｄアゴニストである「トリプタン」（例えば、スマトリプタン）に伴う心血管の活性な血管収縮の起こりやすさを回避する片頭痛の新規な治療を示しうる。
【００７７】
別の態様において、本発明は、ＣＧＲＰ受容体を化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩と接触させることを特徴とする、ＣＧＲＰ受容体を阻害する方法である。
【００７８】
ある実施態様は、ＣＧＲＰ受容体を化合物（Ｉ）セスキ水和物のヘミ硫酸塩と接触させることを特徴とする、ＣＧＲＰ受容体を阻害する方法を提供する。
【００７９】
ある実施態様は、ＣＧＲＰ受容体を化合物（Ｉ）セスキ水和物の結晶性ヘミ硫酸塩と接触させることを特徴とする、ＣＧＲＰ受容体を阻害する方法を提供する。
【００８０】
ある実施態様は、ＣＧＲＰ受容体を化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩の形態Ｈ１．５−１と接触させることを特徴とする、ＣＧＲＰ受容体を阻害する方法を提供する。
【００８１】
別の態様において、本発明は、治療上の有効量の化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩を患者に投与することを特徴とする、ＣＧＲＰの異常なレベルに関連する疾患の治療方法である。
【００８２】
別の態様において、本発明は、ＣＧＲＰの異常なレベルに関連する疾患の治療剤の製造における、化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩の使用である。
【００８３】
別の態様において、本発明は、片頭痛または頭痛の治療方法である。
【００８４】
本発明の別の態様は、炎症（特に、神経因性炎症）、疼痛、熱傷、循環ショック、糖尿病、レイノー症候群、末梢動脈不全、くも膜下／頭蓋内出血、腫瘍成長、閉経に関連する紅潮および他の疾患の治療方法に関するものであって、その治療は、本明細書に定義されるような化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩を含む医薬組成物の投与によるＣＧＲＰ受容体の拮抗作用によって達成することができる。
【００８５】
本発明の別の態様は、（ａ）腸粘膜における免疫調節、（ｂ）心臓のアナフィラキシー傷害に対する保護効果、（ｃ）骨吸収のインターロイキン−１ｂ（ＩＬ−１ｂ）刺激の活性または阻害、（ｄ）脊髄ニューロンにおけるＮＫ１受容体の発現の調節、および（ｅ）気道炎症疾患および慢性閉塞性肺疾患（喘息を含む）からなる群から選択される方法に関する。(a) Calcitonin Receptor-Like Receptor Is Expressed on Gastrointestinal Immune Cells.  Hagner, Stefanie; Knauer, Jens; Haberberger, Rainer; Goeke, Burkhard; Voigt, Karlheinz; McGregor, Gerard Patrick.  Institute of Physiology, Philipps University, Marburg, Germany.  Digestion (2002), 66(4), 197-203; (b) Protective effects of calcitonin gene-related peptide-mediated evodiamine on guinea-pig cardiac anaphylaxis.  Rang, Wei-Qing; Du, Yan-Hua; Hu, Chang-Ping; Ye, Feng; Tan, Gui-Shan; Deng,  Han-Wu; Li, Yuan-Jian.  School of Pharmaceutical Sciences, Department of Pharmacology, Central South University, Xiang-Ya Road 88, Changsha, Hunan, Naunyn-Schmiedeberg's Archives of Pharmacology (2003), 367(3), 306-311; (c)  The experimental study on the effect calcitonin gene-related peptide on bone resorption mediated by interleukin-1.  Lian, Kai; Du, Jingyuan; Rao, Zhenyu; Luo, Huaican.  Department of Orthopedics, Xiehe Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan, Peop. Rep. China.  Journal of Tongji Medical University (2001), 21(4), 304-307, (d) Calcitonin gene-related Peptide regulates expression of neurokinin1 receptors by rat spinal neurons. Seybold VS, McCarson KE, Mermelstein PG, Groth RD, Abrahams LG.  J.  Neurosci.  2003 23 (5): 1816-1824.  Department of Neuroscience, University of Minnesota, Minneapolis, Minnesota 55455, and Department of Pharmacology, Toxicology, and Therapeutics, University of Kansas Medical Center, Kansas City, Kansas 66160 (e) Attenuation of antigen-induced airway hyperresponsiveness in CGRP-deficient mice.  Aoki-Nagase, Tomoko; Nagase, Takahide; Oh-Hashi, Yoshio; Shindo, Takayuki; Kurihara, Yukiko; Yamaguchi, Yasuhiro; Yamamoto, Hiroshi; Tomita, Tetsuji; Ohga, Eijiro; Nagai, Ryozo; Kurihara, Hiroki; Ouchi, Yasuyoshi.  Department of Geriatric Medicine, Graduate School of Medicine, University of Tokyo, Tokyo, Japan.  American Journal of Physiology (2002), 283(5,Pt. 1), L963-L970; (f) Calcitonin gene-related peptide as inflammatory mediator. Springer, Jochen; Geppetti, Pierangelo; Fischer, Axel; Groneberg, David A.  Charite Campus-Virchow, Department of Pediatric Pneumology and Immunology, Division of Allergy Research, Humboldt-University Berlin, Berlin, Germany.  Pulmonary Pharmacology & Therapeutics (2003), 16(3), 121-130; and (g) Pharmacological targets for the inhibition of neurogenic inflammation.  Helyes, Zsuzsanna; Pinter, Erika; Nemeth, Jozsef; Szolcsanyi, Janos.  Department of Pharmacology and Pharmacotherapy, Faculty of Medicine, University of Pecs, Pecs, Hung. Current Medicinal Chemistry: Anti-Inflammatory & Anti-Allergy Agents (2003), 2(2), 191-218を参照のこと。
【００８６】
別の態様において、本発明は、化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩と、片頭痛の治療のためのＣＯＸ２阻害剤、ＮＳＡＩＤＳ、アスピリン、アセトアミノフェン、トリプタン、エルゴタミンおよびカフェインからなる群から選択される１つまたはそれ以上の薬剤との組み合わせを用いる治療方法に関する。
【００８７】
「片頭痛」、「頭痛」および関連する用語は、医療従事者によって理解されるとおりである。片頭痛には、典型的、普通的、群発、電撃性、片麻痺型、眼筋麻痺型、および眼性を含む全てのクラスの片頭痛が包含される。
【００８８】
「治療上の有効量」は、単独で、またはさらなる治療薬と組み合わせて投与される場合、疾患および／または病気、ならびに／あるいは疾患および／または病気の進行を予防し、抑制し、および／または軽減するために有効である量を意味する。
【００８９】
「患者」は、医療従事者によって決定されるような治療から利益を得られうる人を意味する。
【実施例１】
【００９０】
実施例
本発明は、下記の実施例でさらに定義される。実施例は、例示のみのために記載されていることが理解されるべきである。上記記載および実施例から、当業者は、その精神および範囲から逸脱することなく、本発明の必須の特徴を確認することができ、本発明を様々な用途および条件で用いるために様々な変更および改変をすることができる。よって、本発明は、下記に説明される例示的な実施例によって限定されるものではなく、むしろ添付の特許請求の範囲によって定義されるものである。
【００９１】
略語
ＤＭＳＯ      ジメチルスルホキシド
ＥＤＴＡ      エチレンジアミンテトラ酢酸
ｅｑ          当量
ＥＳＩ        エレクトロスプレーイオン化質量分析
ｇ            グラム
ｈ            時間
Ｌ            リットル
ＬＣＭＳ      液体クロマトグラフィー質量分析
Ｍ            モル
ｍｇ          ミリグラム
ｍｉｎ        分
ｍＬ          ミリリットル（s）
ｍｍｏｌ      ミリモル
ＭＳ          質量分析
Ｎ            通常
ＮａＨＭＤＳ  ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド
ＮＣＳ        Ｎ−クロロコハク酸イミド
ＮＭＲ        核磁気共鳴分光法
ＲＴ          保持時間
ｓｓＮＭＲ    固体核磁気共鳴
ＴＢＡＦ      テトラブチルアンモニウムフルオリド
ＴＦＡ        トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ        テトラヒドロフラン
ＴＩＰＳＯ    トリイソプロピルシリルオキシ
ＴＭＳ        テトラメチルシラン
μＬ          マイクロリットル
℃            摂氏温度
【００９２】
陽子磁気共鳴（１Ｈ  ＮＭＲ）スペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＣ３００またはＡＣ５００に記録した。全てのスペクトルは、表示される溶媒中で決定され、化学シフトは、内部標準物質テトラメチルシラン（ＴＭＳ）からのδユニット低磁場で記載し、プロトン間結合定数は、ヘルツ（Ｈｚ）で記載する。分裂パターンは、下記のように表記する：ｓ，一重項；ｄ，ニ重項；t，三重項；q，四重項；ｍ，多重項；ｂｒ，広域ピーク。低分解能質量スペクトル（ＭＳ）および見掛けの分子量（ＭＨ＋）または（Ｍ−Ｈ）＋は、Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ｐｌａｔｆｏｒｍで調べた。元素分析は、重量パーセントとして記載する。生成物は、カラムＹＭＣ  Ｓ５  ＯＤＳ（３０ｘ１００ｍｍ）を、４０．０ｍＬ／分の流速および８．０分のグラジエントで、４０％  メタノール−６０％  水−０．１％  ＴＦＡの溶媒組成物から開始し、溶媒組成物９５％  メタノール−５％  水−０．１％  ＴＦＡまで用いて、プレパラティブＨＰＬＣによって精製した。生成物は、ＸＴＥＲＡカラム（３．０ｘ５０ｍｍ  Ｓ７）を、２分のグラジエント時間にわたって、溶媒Ａ（１０％  メタノール−９０％  水−０．１％  トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ））から開始し、溶媒Ｂ（１０％  水−９０％  メタノール−０．１％  ＴＦＡ）までで用いて、ＨＰＬＣ装置によって分析した。流速は５ｍＬ／分であり、生成物の保持時間（Ｒｆ）は２２０ｎｍ波長で測定した。
【００９３】
中間体１
（６Ｓ，９Ｒ）−６−（２，３−ジフルオロフェニル）−９−ヒドロキシ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−シクロヘプタ［ｂ］ピリジン−５−オン
【化４】
0006476253.tif 000009
（中間体１）
２５０ｍＬの丸底フラスコにおいて、テトラヒドロフラン（５ｍＬ）中に（９Ｒ）−６−（２，３−ジフルオロフェニル）−９−（トリイソプロピルシリルオキシ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−シクロヘプタ［ｂ］ピリジン−５−オン（０．２１８ｇ，０．４９ｍｍｏｌ）を溶解させて無色の溶液を得た。窒素下で−１５℃（氷−メタノール槽）に冷却し、ＴＢＡＦ（０．４９０ｍＬ，０．４９０ｍｍｏｌ）を加え、得られた明るい黄色の溶液を−１５℃で１時間攪拌した。これを炭酸水素ナトリウム溶液でクエンチし、酢酸エチルで希釈した。層を分離し、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせて、食塩水で洗浄し、乾燥させ、濃縮して、黄褐色の油状物を得た。１００％以下の酢酸エチル／ヘキサンを用いてフラッシュカラムクロマトグラフィー（２５ｇシリカゲルカラム）により、所望生成物を得た（１１２ｍｇ，６２％）。1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 8.53 (dd, J=4.91, 1.64 Hz, 1 H) 7.85 (dd, J=7.68, 1.64 Hz, 1 H) 7.34 (dd, J=7.68, 4.91 Hz, 1 H) 7.00-7.16 (m, 3 H) 5.32 (s, 1 H) 4.94-5.04 (m, 1 H) 4.48 (dd, J=11.83, 3.02 Hz, 1 H) 2.14-2.48 (m, 4 H); 19F NMR (376 MHz, クロロホルム-d) δ ppm -138.24--138.07 (m, 1 F) -140.70--140.50 (m, 1 F).
【００９４】
中間体２
（５Ｓ，６Ｓ，９Ｒ）−６−（２，３−ジフルオロフェニル）−９−（トリイソプロピルシリルオキシ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−シクロヘプタ［ｂ］ピリジン−５−オール。
【化５】
0006476253.tif 000010
（中間体２）
水素化ホウ素リチウム（０．９８２ｇ，４５．１ｍｍｏｌ）を、Ｎ２下にて０℃で（６Ｓ，９Ｒ）−６−（２，３−ジフルオロフェニル）−９−（トリイソプロピルシリルオキシ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−シクロヘプタ［ｂ］ピリジン−５−オン（５．０２２４ｇ，１１．２７ｍｍｏｌ）のシクロペンチルメチルエーテル（３０ｍＬ）溶液に加えた。反応混合液を０℃で２時間攪拌し、続いて室温でさらに４時間攪拌した。該反応物を、メタノールを加えてクエンチした。反応混合液を０．５時間攪拌した。該溶媒を減圧下でほぼ留去し、粗物質を酢酸エチル中に入れ、水で３回洗浄した。０〜１０％のヘキサン中の酢酸エチルによるフラッシュカラムで所望生成物を得た（３．２８ｇ，６５％）。
【００９５】
中間体３
（５Ｒ，６Ｓ，９Ｒ）−５−クロロ−６−（２，３−ジフルオロフェニル）−９−（トリイソプロピルシリルオキシ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−シクロヘプタ［ｂ］ピリジン
【化６】
0006476253.tif 000011
（中間体３）
オーブンで乾燥させた２５０ｍＬの丸底フラスコにおいて、ＮＣＳ（０．７５１ｇ，５．６２ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１５ｍＬ）中で懸濁させた。トリフェニルホスフィン（１．４７５ｇ，５．６２ｍｍｏｌ）を加えた。窒素下で５分間攪拌し、（５Ｓ，６Ｓ，９Ｒ）−６−（２，３−ジフルオロフェニル）−９−（トリイソプロピルシリルオキシ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−シクロヘプタ［ｂ］ピリジン−５−オール（１．００７ｇ，２．２５０ｍｍｏｌ）を灰色の懸濁液に一度に加えた。生じた赤みがかった懸濁液を室温で攪拌した。該固形物が徐々に溶解して黄褐色の溶液を得た。５時間後、ＬＣＭＳにより変換が完了したことを示された。テトラヒドロフランを減圧中で留去し、残った赤色の油状物を６０％以下の酢酸エチル／ヘキサンによるＩＳＣＯ（２４０ｇシリカカラム）によって直接精製した。純粋な酢酸エチルで溶出した非極性成分および生成物を、塩化メチレン中の１０％  メタノール（２．０Ｍ  ＮＨ４ＯＨ）で溶出した。生成フラクションを合わせて、５０％  酢酸エチル／ヘキサンでＦＣＣによって再精製して、無色の油状物として所望生成物を得た（８６９ｍｇ，８３％）。MS(ESI)[M+H+] = 466.22; 1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 8.55 (d, J=3.53 Hz, 1 H) 7.63 (br. s., 1 H) 7.20 (dd, J=7.68, 4.91 Hz, 1 H) 7.01-7.15 (m, 1 H) 6.90-7.01 (m, 1 H) 6.66-6.90 (m, 1 H) 5.55-5.85 (m, 1 H) 5.40-5.56 (m, 1 H) 3.96-4.33 (m, 1 H)  2.33 (br. s., 3 H) 2.09-2.20 (m, 1 H) 1.14-1.23 (m, 3 H) 1.04-1.14 (m, 9 H) 1.01 (d, J=7.30 Hz, 9 H).
【００９６】
中間体４
（５Ｓ，６Ｓ，９Ｒ）−５−アジド−６−（２，３−ジフルオロフェニル）−９−（トリイソプロピルシリルオキシ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−シクロヘプタ［ｂ］ピリジン
【化７】
0006476253.tif 000012
（中間体４）
１００ｍＬの丸底フラスコにおいて、（５Ｒ，６Ｓ，９Ｒ）−５−クロロ−６−（２，３−ジフルオロフェニル）−９−（トリイソプロピルシリルオキシ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−シクロヘプタ［ｂ］ピリジン（５６６ｍｇ，１．２１４ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中に溶解させて、無色の溶液を得た。アジ化ナトリウム（４７４ｍｇ，７．２９ｍｍｏｌ）を加え、該混合物を窒素下にて室温で２．５時間攪拌した。ＬＣＭＳにより一部のみの反応が示された。該混合物を５０℃で終夜加熱した。１５時間後、ＬＣＭＳによりいくらかの除去生成物と共に完全な変換が示された。該混合物を水および酢酸エチルで希釈した。該層を分離した。有機層を食塩水で洗浄し、乾燥させ、濃縮して、無色の油状物を得た。粗生成物をさらに精製し、特徴付けをすることなく、次の反応に用いた。小規模の精製により分析試料を得た：MS(ESI)[M+H+] = 473.27; 1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 8.52-8.63 (m, 1 H) 7.75 (d, J=7.81 Hz, 1 H) 7.23-7.36 (m, 1 H) 6.95-7.17 (m, 2 H) 6.89 (br. s., 1 H) 5.28 (d, J=4.03 Hz, 1 H) 4.90 (d, J=9.07 Hz, 1 H) 3.79 (t, J=9.44 Hz, 1 H) 1.86-2.23 (m, 4 H) 1.16-1.30 (m, 3 H) 0.98-1.15 (m, 18 H); 19F NMR (376 MHz, クロロホルム-d) δ ppm -137.68--137.36 (m, 1 F) -141.78--141.54 (m, 1 F).
【００９７】
中間体５
（５Ｓ，６Ｓ，９Ｒ）−５−アジド−６−（２，３−ジフルオロフェニル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−シクロヘプタ［ｂ］ピリジン−９−オール
【化８】
0006476253.tif 000013
（中間体５）
１００ｍＬの丸底フラスコにおいて、（５Ｓ，６Ｓ，９Ｒ）−５−アジド−６−（２，３−ジフルオロフェニル）−９−（トリイソプロピルシリルオキシ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−シクロヘプタ［ｂ］ピリジン（０．７３２ｇ，１．５４９ｍｍｏｌ）（粗製）をテトラヒドロフラン（８ｍＬ）中に溶解させて、無色の溶液を得た。ＴＢＡＦ（１．８５９ｍＬ，１．８５９ｍｍｏｌ）を加え、得られた淡黄色の溶液を室温で１．５時間攪拌した。ＬＣＭＳにより変換が完了したことが示された。テトラヒドロフランを留去し、残渣を水および酢酸エチルで希釈した。該層を分離した。有機層を食塩水で洗浄し、乾燥させ、濃縮して、淡黄色の油状物を得た。６０％  酢酸エチル／ヘキサンのＦＣＣによる精製により、所望生成物（粗製重量：４８０ｍｇ）を無色の油状物として得た。小規模精製により、分析試料を得た：MS(ESI)[M+H+] = 317.22; 1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 8.51 (dd, J=4.91, 1.38 Hz, 1 H) 7.99 (d, J=7.30 Hz, 1 H) 7.35 (dd, J=7.81, 5.04 Hz, 1 H) 7.06-7.20 (m, 2 H) 6.94-7.05 (m, 1 H) 5.91 (br. s., 1 H) 5.03 (d, J=10.32 Hz, 1 H) 4.92 (dd, J=11.21, 2.39 Hz, 1 H) 2.84-3.02 (m, 1 H) 2.37-2.49 (m, 1 H) 2.25-2.36 (m, 1 H) 2.07-2.17 (m, J=14.38, 4.94, 3.05, 3.05 Hz, 1 H) 1.40-1.64 (m, 1 H); 13C NMR (101 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 158.48 (s, 1 C) 152.19-149.87 (dd, J=13.10 and 221Hz, 1 C) 149.72-147.42 (dd, J=13.87および219 Hz, 1 C) 146.16 (s, 3 C) 133.67 (s, 2 C) 133.23 (s, 1 C) 132.66 (d, J=10.79 Hz, 1 C) 124.43 (dd, J=6.94, 3.85 Hz, 2 C) 123.84 (br. s., 1 C) 122.89 (s, 2 C) 115.98 (d, J=17.73 Hz, 2 C) 70.94 (s, 3 C) 65.67 (s, 1 C) 45.43 (br. s., 1 C) 35.71 (s, 3 C) 33.45 (s, 2 C); 19F NMR (376 MHz, クロロホルム-d) δ ppm -137.55--137.20 (m, 1 F) -142.28--141.89 (m, 1 F).
【００９８】
中間体６
（５Ｓ，６Ｓ，９Ｒ）−５−アジド−６−（２，３−ジフルオロフェニル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−シクロヘプタ［ｂ］ピリジン−９−イル ４−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート
【化９】
0006476253.tif 000014
（中間体６）
１００ｍＬの丸底フラスコにおいて、（５Ｓ，６Ｓ，９Ｒ）−５−アジド−６−（２，３−ジフルオロフェニル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−シクロヘプタ［ｂ］ピリジン−９−オール（０．４９０ｇ，１．５４９ｍｍｏｌ）（乾燥ベンゼンと共沸）および４−ニトロフェニル ４−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（０．７１３ｇ，１．８５９ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド（８ｍＬ）中に溶解させて、窒素下で淡黄色の懸濁液を得た。−１５℃（氷−メタノール槽）に冷却し、ＮａＨＭＤＳ（４．１８ｍＬ，４．１８ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。生じた黄褐色の溶液を、窒素下にて−１０℃〜０℃で２時間、続いて室温で２時間攪拌した。ＬＣＭＳにより完全な変換が示された。該反応を炭酸水素ナトリウム溶液でクエンチした。該混合物を酢酸エチルで希釈した。層を分離し、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせて、水、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して、黄褐色の油状物を得た。８％  メタノール／塩化メチレンでＦＣＣによる精製により、所望生成物（主要なピーク，６３２ｍｇ，３段階で７３％）を淡黄色の泡状物として得た。MS(ESI)[M+H+] = 561.27; 1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 11.50 (br. s., 1 H) 8.58 (d, J=3.78 Hz, 1 H) 8.11 (d, J=5.04 Hz, 1 H) 7.91 (d, J=7.30 Hz, 1 H) 7.33 (br. s., 2 H) 7.07-7.19 (m, 2 H) 6.92-7.06 (m, 2 H) 6.10 (d, J=9.32 Hz, 1 H) 5.23 (d, J=10.07 Hz, 1 H) 4.26-4.84 (m, 3 H) 2.46-3.34 (m, 4 H) 2.20-2.43 (m, 3 H) 2.01-2.13 (m, 1 H) 1.94 (d, J=12.34 Hz, 3 H); 19F NMR (376 MHz, クロロホルム-d) δ ppm -137.30--137.01 (m, 1 F) -142.32--142.03 (m, 1 F).
【００９９】
化合物（Ｉ）
（５Ｓ，６Ｓ，９Ｒ）−５−アミノ−６−（２，３−ジフルオロフェニル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−シクロヘプタ［ｂ］ピリジン−９−イル ４−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート
【化１０】
0006476253.tif 000015
（Ｉ）
１００ｍＬの丸底フラスコにおいて、（５Ｓ，６Ｓ，９Ｒ）−５−アジド−６−（２，３−ジフルオロフェニル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−シクロヘプタ［ｂ］ピリジン−９−イル ４−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（６２０ｍｇ，１．１０６ｍｍｏｌ）（中間体６）を、テトラヒドロフラン（５ｍＬ）中に溶解させて、無色の溶液を得た。トリメチルホスフィン（３．３２ｍＬ，３．３２ｍｍｏｌ，トルエン中で１．０Ｍ）を加えた。該混合物を室温で攪拌した。２時間後、ＬＣＭＳにより出発物質が存在しないことが示された。水（０．０８０ｍＬ，４．４２ｍｍｏｌ）を加え、該混合物をさらに３時間攪拌した。ＬＣＭＳにより、所望生成物への完全な変換が示された。揮発性構成物質を減圧中で留去し、残渣を塩化メチレン中の１０％  メタノールでのＦＣＣで直接精製して、生成物（５１０ｍｇ，８５％）を白色の固形物として得た。MS(ESI)[M+H+] = 535.23; 1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 10.39 (br. s., 1 H) 8.52 (d, J=3.78 Hz, 1 H) 8.09 (d, J=5.04 Hz, 2 H) 7.46 (br. s., 1 H) 7.26-7.38 (m, 1 H) 7.06-7.20 (m, 3 H) 6.94-7.05 (m, 1 H) 6.06-6.23 (m, 1 H) 4.31-4.78 (m, 4 H) 4.05 (spt, J=6.13 Hz, 1 H) 2.57-3.25 (m, 3 H) 2.17-2.38 (m, 3 H) 1.42-2.04 (m, 6 H); 19F NMR (376 MHz, クロロホルム-d) δ ppm -136.90 (br. s., 1 F) -142.48--142.21 (m, 1 F).
【０１００】
化合物（Ｉ）の結晶塩についてのハイスループット塩スクリーニング
ハイスループット結晶化は、化合物（Ｉ）の結晶塩の形成についてスクリーニングするために用いた。前記スクリーニングは、酸タイプ、酸レベル（当量）、および／または結晶化溶媒のタイプを試験した。各プレートは、９６ウェルプレート（１プレートあたり１２列の８行）を含有した。
【０１０１】
溶液は、４００ｍｇの化合物（Ｉ）を３６ｍＬ  ＴＨＦおよび４ｍＬ  Ｈ２Ｏの混合液中に溶解させることによって調製した。該溶液（１２．５ｍＬ）を２４個のバイアルに移した。各バイアルに、以下の酸の０．２５Ｍ  ＥｔＯＨストック溶液を加えた：
【表３】
0006476253.tif 000016
【０１０２】
各バイアルの内容物を１２個の結晶化ウェルに移し、乾燥するまで蒸発させた。蒸発により、各ウェルを、ロボット液体ハンドラー（robotic liquid handler）を用いて１００μｌの溶媒で満たした。下記の結晶化溶媒を試験した：メチルイソブチルケトン（ＭＩＢＫ、酢酸エチル、トルエン、ＴＨＦ、アセトニトリル、アセトン、イソプロパノール、エタノール、メタノール、１，２−ジクロロエチレン、イソプロパノール／水（５０：５０）、および水。次に、該プレートをテフロンセプタムで密封し、温度サイクルにかけた。該プレートを５０℃で１０時間保ち、続いて１４時間かけて室温に冷ました。加熱／冷却サイクル後、ウェルの内容物を複屈折イメージングによって特徴付けした。認識された結晶ヒット物をＰＸＲＤ分析でさらに特徴付けした。
【０１０３】
結晶塩形成は、酢酸、安息香酸、ベンゼンスルホン酸、Ｌ−乳酸、マレイン酸、Ｌ−リンゴ酸、リン酸、およびコハク酸の存在下における化合物（Ｉ）について観察されなかった。結晶塩形成は、少なくとも１つの溶媒中のクエン酸、フマル酸、塩酸、メタンスルホン酸、硫酸、Ｄ−酒石酸、およびＬ−酒石酸の存在下における化合物（Ｉ）について観察された。化合物（Ｉ）の結晶塩の特性をさらに特徴付けした。
【０１０４】
塩スクリーニングおよび結晶塩の特徴付けの結果は、表３に示す。
表３
【表４】
0006476253.tif 000017
0006476253.tif 000018
【０１０５】
実施例１
（５Ｓ，６Ｓ，９Ｒ）−５−アミノ−６−（２，３−ジフルオロフェニル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−シクロヘプタ［ｂ］ピリジン−９−イル ４−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート，ヘミ硫酸塩
エタノール／水溶液からの調製
化合物（Ｉ）（１ｇ）を、７０℃で１７ｍＬのエタノールおよび水（３：１）中に溶解させた（溶液Ａ）。別個に、５２μＬの９６％  Ｈ２ＳＯ４（０．５当量）を、室温で８ｍＬのエタノールおよび水（３：１）中に溶解させた（溶液Ｂ）。次に、３０ｍｇの種晶を溶液Ａに加えた。溶液Ｂを、シリンジポンプで２時間かけて播種した溶液Ａに加えた。生じたスラリーを７０℃で１時間攪拌し、９０分かけて２０℃に冷ました。該スラリーを室温で終夜攪拌させた。該スラリーを濾過した。湿ったケーキを８ｍＬのＥｔＯＨ：水（３：１）の溶液で洗浄し、３０℃で真空オーブン中にて終夜乾燥させて、１．０１ｇ（８８．４モル％）の実施例化合物１を結晶固形物として得た。ＧＡＤＤＳにより、結晶固形物が形態Ｈ−１．５であることが示された。
【０１０６】
テトラヒドロフラン／水溶液からの調製
化合物（Ｉ）（１ｇ）を、５０℃で１０ｍＬのＴＨＦおよび水（４：１）中に溶解させた（溶液Ａ）。別個に、５２μＬの９６％  Ｈ２ＳＯ４（０．５当量）を、室温で１０ｍＬのＴＨＦ中に溶解させた（溶液Ｂ）。次に、０．５ｍＬの溶液Ｂを溶液Ａに加え、続いて２０ｍｇの種晶を加えた。該溶液は、薄いスラリーに変化した。溶液Ｂの残りの量は、シリンジポンプを用いて２時間かけてスラリーにした。該スラリーを５０℃で１時間攪拌し、続いて１時間かけて２０℃に冷ました。該スラリーを室温で終夜攪拌した。該スラリーを濾過した。湿ったケークを８ｍＬのＴＨＦ：水＝３：１で洗浄し、真空オーブン中で３０℃にて終夜乾燥させて、１．０６ｇ（９２．８モル％）の実施例化合物１を結晶固形物として得た。ＧＡＤＤＳにより、結晶固形物が形態Ｈ−１．５であることが示された。
【０１０７】
安定性実験
実施例化合物１の固形安定性は、試料を様々な温度および相対湿度条件に１、２および４週間曝すことによって試験した。効力％（％ｐｏｔ．）および合計不純物％（％ｔｏｔａｌ  ｉｍｐ．）を表４に示す。結果により、化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩の結晶形態Ｈ１．５−１が、４週間の保存後に、合計不純物レベルがほとんど増加せず、および／または効力が減少しないことによって示されるように、試験された保存条件下で安定であることが示される。
表４
ヘミ硫酸塩の形態Ｈ１．５−１の固形安定性
【表５】
0006476253.tif 000019
％ pot.＝効力％
％ total imp.＝合計不純物％
HIL／UV：高強度の光／紫外線
【０１０８】
実施例化合物１についての吸湿等温線を図５に示す。実施例化合物１は、２５％から７５％の間の相対湿度および５％から９５％の間の相対湿度でそれぞれ、０．８重量％および２．８重量％の吸湿重量増加を示す。これらの結果により、化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩が試験された条件下で低い吸湿性を有し、または吸湿性を有していないことが示された。
【０１０９】
形態Ｈ１．５−１
表５は、ＮＩＳＴおよび他の適切な標準物質を用いて２θで較正した回転キャピラリーを備える回折計（ＣｕＫα）で収集した質の高いパターンに基づいて、実施例化合物１について約２５℃で測定した特徴的なＰＸＲＤ回折ピーク位置（２θ±０．１度）を示す。
表５
ＰＸＲＤピーク位置（度２θ±０．１）
【表６】
0006476253.tif 000020
【０１１０】
表６は、ＴＭＳで標準化した実施例化合物１についての特徴的な固体ＮＭＲピーク位置δ（ｐｐｍ）を示す。
表６
ｓｓＮＭＲピーク位置−δ（ｐｐｍ）
【表７】
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【０１１１】
実施例化合物１の他の結晶形態
形態Ｐ２２Ｃ：形態Ｈ１．５−１を６０℃で２時間または７５℃で５分間加熱することによって調製した。形態Ｈ１．５−１および形態Ｐ２２Ｃとの間の水分活性実験により、形態Ｈ１．５−１が＞２３％の相対湿度でより安定であることが示された。
形態Ｐ３３：形態Ｈ１．５−１は、様々な温度のＰＸＲＤ実験において５０℃から７５℃の間で形態Ｐ３３に変換した。形態Ｈ１．５−１を１０５℃で５分間加熱した後にも観察されるか、または、乾燥粉末形態Ｈ１．５−１を乾燥ＥｔＯＨまたはＩＰＡｃ中でスラリーにすることによって調製した。元素分析により、形態Ｐ３３がヘミ硫酸一水和物であることが示された。固体ＮＭＲにより、形態Ｐ３３が単一相（single phase）であることが示された。形態Ｈ１．５−１と形態Ｐ３３との間の水分活性実験により、形態Ｈ１．５−１が＞２３％の相対湿度でより安定であることが示された。
形態Ｐ３５：モレキュラ・シーブス（７％  ＲＨ）を用いて、乾燥ＭｅＯＨ中の形態Ｈ１．５−１のスラリーから調製した。６０℃で乾燥させた場合に形態Ｐ３３に変換した。
【０１１２】
水スラリー中での安定性
実施例化合物１の水スラリーを調製し、室温で保存した。２日後、化学的な分解はあまり生じず；ＰＸＲＤパターンに変化はなく、結晶形態Ｈ１．５−１が水スラリー中で安定であることが示された。
【０１１３】
熱重量分析走査および示差走査熱量測定、ならびにＰＸＲＤであまり変化は見られなかった。
【０１１４】
化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩を化合物（Ｉ）の他の塩と比較し、特に有益であることを見出した。化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩は、化合物（Ｉ）の他の塩と比較して物理的に安定で、かつ化学的に安定である塩を供するという驚くべき効果を有する。さらに、ヘミ硫酸塩は、安定な結晶形態である形態Ｈ１．５−１で供される驚くべき利点を有する。例えば、化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩は、結晶形態として再現性よく調製され、低い吸湿性を示し、相対湿度および／または温度の変化に応じて結晶形態または水和状態が容易に変化することはなかった。対照的に、クエン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、メタンスルホン酸塩、リン酸塩、およびＬ−酒石酸塩は、周囲温度および相対湿度条件で吸湿性を示し、結果として、重量変化、水和状態の変化、および／または相転移を生じた。結晶塩の形成は、ハイスループット塩スクリーニングにおいて、酢酸、安息香酸、ベンゼンスルホン酸、Ｌ−乳酸、マレイン酸、Ｌ−リンゴ酸、およびコハク酸の存在下での化合物（Ｉ）については見られなかった。さらに、ヘミ硫酸塩の調製には、Ｄ−酒石酸などの高価な物質の使用の必要はなかった。
【０１１５】
生物学的方法
インビトロ薬理
組織培養
ＳＫ−Ｎ−ＭＣ細胞は、アール塩を含有するＭＥＭおよび１０％  ウシ胎児血清（インビトロジェン）を添加したＬ−グルタミン（インビトロジェン）からなる培地中で単層として、５％  ＣＯ２中にて３７℃で増殖させた。
【０１１６】
膜調製
粗膜は、ＣＧＲＰ受容体を発現するＳＫ−Ｎ−ＭＣ細胞から調製した。該細胞をリン酸緩衝生理食塩水（１５５ｍＭ  ＮａＣｌ，３．３ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４，１．１ｍＭ  ＫＨＰＯ４，ｐＨ７．４）で２回すすぎ、１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．４）および５ｍＭ  ＥＤＴＡからなる低浸透圧性溶解緩衝液中で４℃にて５〜１０分間インキュベートした。該細胞をプレートからポリプロピレン管（１６ｘ１００ｍｍ）に移し、ポリトロンを用いてホモジェナイズした。ホモジェナイズ物を３２，０００ｘｇで３０分間遠心分離した。該ペレットを、０．１％  哺乳類プロテアーゼ阻害剤クックテイル（Ｓｉｇｍａ）を含有する冷たい低浸透圧性溶解緩衝液中に再懸濁し、タンパク質濃度についてアッセイした。ＳＫ−Ｎ−ＭＣホモジェナイズ物を一定分量とし、−８０℃で保存した。
【０１１７】
放射性リガンド結合アッセイ
化合物（Ｉ）を可溶化し、１００％  ＤＭＳＯを用いて連続希釈を行った。化合物の連続希釈物からの一定分量を、アッセイ緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−Ｃｌ  ｐＨ７．５，５ｍＭ  ＭｇＣｌ２，０．００５％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００）で２５倍にさらに希釈し、（体積５０μｌ）を９６ウェルアッセイプレートに移した。［１２５Ｉ］−ＣＧＲＰ（ＧＥ  ＨｅａｌｔｈｃａｒｅまたはＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）をアッセイ緩衝液で７２ｐＭに希釈し、５０μｌの体積を各ウェルに加えた。ＳＫ−Ｎ−ＭＣ膜を融解し、新たに調製した０．１％  哺乳類プロテアーゼ阻害剤クックテイル（Ｓｉｇｍａ）を含有するアッセイ緩衝液で希釈し、再度ホモジェナイズした。ＳＫ−Ｎ−ＭＣホモジェナイズ物（７μｇ／ウェル）を１００μｌの体積中に加えた。続いて、アッセイプレートを室温で２時間インキュベートした。０．５％  ＰＥＩ中に予め浸したガラス繊維フィルター（Ｗｈａｔｍａｎ  ＧＦ／Ｂ）により濾過し、すぐに過剰量の冷たい洗浄緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−Ｃｌ  ｐＨ７．５，０．１％  ＢＳＡ）を加えることによりアッセイを停止した。非特異的な結合を１μＭ  ベータ−ＣＧＲＰ（Ｂａｃｈｅｍ）で定めた。タンパク質結合放射活性は、ガンマまたはシンチレーションカウンターを用いて調べた。生じたデータは、四パラメータ競合結合式（ＸＬｆｉｔ  ｖ２．０）を用いて解析し、ＩＣ５０は、５０％の放射性リガンド結合を置き換えるために必要とされる化合物（Ｉ）の濃度として定義した。［１２５Ｉ］−ＣＧＲＰの最終アッセイ濃度は、１８ｐＭであった。［１２５Ｉ］−ＣＧＲＰについての平均Ｋｄは、２５．４ｐＭである。化合物（Ｉ）は、少なくとも２つの別々の実験で評価した。この実験において、化合物（Ｉ）のヒトＣＧＲＰ受容体ＩＣ５０値は、０．０４ｎＭであった。
【０１１８】
インビボ薬物動態実験
インビボ実験は、４０ｍｇのファモチジンで予め処置したヒトにおける遊離塩基化合物（Ｉ）の薬物動態を、処置していないヒトと比較して行った。
【０１１９】
ヒトＥＤＴＡ血漿中の化合物（Ｉ）は、Ｔｒｉｐｌｅ  Ｑｕａｄ  ５５００質量分光計におけるｕＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳ検出による液体−液体抽出を用いて解析した。この方法は、安定な同位体で標識された［１３Ｃ２，Ｄ４］−化合物（Ｉ）を内部標準として利用した。５０μＬのＭｅＯＨ：水（２０／８０）中の１００ｎｇ／ｍＬの［１３Ｃ２，Ｄ４］−化合物（Ｉ）および４％  酢酸緩衝溶液を含有する５０μＬ  １Ｍ  ＮＨ４ＯＡｃを、０．１００ｍＬの各実験試料、品質管理（ＱＣ）試料、および校正基準に加え、該試料を６００μＬ  メチル ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）で１５分間攪拌させることによって抽出した。有機層の４５０μＬを除去し、乾燥するまで蒸発させた。残渣を２００μＬの再構成溶液（０．０１％  酢酸を含有する１０ｍＭ  ＮＨ４ＯＡｃ中の３０％  アセトニトリル）中で再構成させた。全ての液体を移す工程は、内部標準液を加える場合を除き、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＪＡＮＵＳ  Ｍｉｎｉ（登録商標）液体ハンドラーを用いて行った。１０μＬの一定分量の抽出した試料をｕＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳシステムに注入した。ｕＨＰＬＣは、ＬＥＡＰ  ＨＴＣ  ＰＡＬオートサンプラーを備えたＬＥＡＰ  ４Ｘ  Ｕｌｔｒａ  ｕＨＰＬＣシステムを用いて行った。移動相Ａは、１０ｍＭ  ＮＨ４ＯＡｃおよびＡＣＮ／水（１０：９０）中で０．０１％  酢酸を含有し、移動相Ｂは、１０ｍＭ  ＮＨ４ＯＡｃおよびＡＣＮ／水（９０：１０）中で０．０１％  酢酸を含有した。クロマトグラフ分離は、Ａｃｑｕｉｔｙ（登録商標）ｕＨＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８カラム（１．７μｍ，２．１ｘ５０ｍｍ）を用いて、化合物（Ｉ）の分析のために２８％  移動相Ｂから構成される０〜１．５分で定組成溶離液、次いで０．１分で２８％  Ｂ〜１００％  Ｂの線形増加から構成されるグラジエント溶離液、続いてカラムを洗い流すためにそれを１００％  Ｂで１．１分間保持することによって行った。続いて、該グラジエントを０．１分以内に２８％  Ｂに戻し、３．７分の流動時間で２８％に０．９分間保持した。流速は０．６ｍＬ／分であり、カラム温度は６０℃の条件を保った。検出は、陽性ＥＳＩでターボイオンスプレーイオン化と共にＡＢ  Ｓｃｉｅｘ  Ｔｒｉｐｌｅ  Ｑｕａｄ  ５５００質量分光計を用い、複数反応モニタリング（multiple reaction monitoring）（ＭＲＭ）モードを用いて行った。前記ＭＲＭ移行は、化合物（Ｉ）については、ｍ／ｚ５３５→２５６であり、［１３Ｃ２，Ｄ４］−化合物（Ｉ）については、ｍ／ｚ５４１→２５６であった。データ収集および定量化は、ＡＢ  Ｓｃｉｅｘ  Ａｎａｌｙｓｔ（登録商標）１．５．１ソフトウェアを用いて行った。検量線は、化合物（Ｉ）について０．５００〜５００ｎｇ／ｍｌであり、１／ｘ２加重線形回帰モデルに適合させた。試料分析中、ヒトＥＤＴＡ血漿で調製された化合物（Ｉ）の低、幾何平均、中および高濃度を示す分析品質管理（ＱＣ）試料の４つのレベルは、各分析流動ごとに各濃度レベルで４回反復して解析した。これらのＱＣ試料からの結果を用いて、ヒトＥＤＴＡ血漿中の化合物（Ｉ）の回折について事前に設定した許容基準に基づいて、実験試料を含有する流動分析物を受け入れるか、受け入れない。
【０１２０】
この実験の結果を表７および図８に示す。化合物（Ｉ）のＡＵＣおよびＣｍａｘにおける著しい減少は、予め処置していないヒトと比較して４０ｍｇのファモチジンで処置したヒトで見られた。
表７
【表８】
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【０１２１】
インビボ実験は、ファモチジンまたはペンタガストリンで処置したイヌにおいて遊離塩基化合物（Ｉ）および化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩の薬物動態を比較して行った。
【０１２２】
１５０ｍｇの遊離塩基またはヘミ硫酸塩としての化合物（Ｉ）を含有するカプセル剤を調製した：
１．化合物（Ｉ）遊離塩基カプセル剤：５０重量％の化合物（Ｉ）、４２重量％の微結晶セルロース、３重量％のクロスカルメロースナトリウム、４重量％のＫｌｕｃｅｌ  ＥＸＦ  ヒドロキシプロピルセルロース、０．５重量％のステアリン酸マグネシウム、０．５重量％のコロイド性二酸化ケイ素
２．化合物（Ｉ）ヘミ硫酸塩カプセル剤：５７％の実施例化合物１（化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩、結晶形態Ｈ１．５−１）、４０％の微結晶セルロース、３％のクロスカルメロースナトリウム。
【０１２３】
４匹の雄イヌ（１０ｋｇ）は、下記の３つの処置プロトコールに従って処置した：
処置１：化合物（Ｉ）遊離塩基カプセル剤の経口投与の数時間前にペンタガストリン（６μｇ／ｋｇ，ＩＰ）で予め処置。
処置２：化合物（Ｉ）遊離塩基カプセル剤の経口投与の３時間前に４０ｍｇのファモチジンで経口的に予め処置。
処置３：化合物（Ｉ）ヘミ硫酸塩カプセル剤の経口投与の３時間前に４０ｍｇのファモチジンで経口的に予め処置。
【０１２４】
血液試料は、化合物（Ｉ）遊離塩基カプセル剤または化合物（Ｉ）ヘミ硫酸塩カプセル剤の投与後０、０．５、１、２、４、８、および２４時間で収集し、ＥＤＴＡチューブで保存した。イヌＥＤＴＡ血漿中の化合物（Ｉ）は、Ｔｒｉｐｌｅ  Ｑｕａｄ  ５５００質量分光計における液体−液体抽出およびｕＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳ検出を用いて分析した。イヌＥＤＴＡ血漿の０．０５０ｍＬの一定分量をアッセイについて使用した。この方法は、安定な同位体で標識した［１３Ｃ２，Ｄ４］−化合物（Ｉ）を内部標準として利用した。ＭｅＯＨ：水（２０／８０）中の５０μＬの２００ｎｇ／ｍＬの［１３Ｃ２，Ｄ４］−化合物（Ｉ）および４％の酢酸緩衝溶液を含有する５０μＬの１Ｍ  ＮＨ４ＯＡｃを０．０５０ｍＬの各実験試料、品質管理（ＱＣ）試料、および校正基準に加え、該試料を、６００μＬのメチル ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）で１５分間振盪させることにより抽出した。４５０μＬの有機層を除去し、乾燥するまで蒸発させた。残渣を３００μＬの再構成溶液（０．０１％  酢酸を含有する１０ｍＭ  ＮＨ４ＯＡｃ中の３０％  アセトニトリル）で再構成した。全ての液体を移す工程は、内部標準液を加える場合を除いて、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＪＡＮＵＳ  Ｍｉｎｉ（登録商標）液体ハンドラーを用いて行った。抽出した試料の５μＬの一定分量をｕＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳシステムに注入した。このｕＨＰＬＣは、ＬＥＡＰ  ＨＴＣ  ＰＡＬオートサンプラーを備えたＬＥＡＰ  ４Ｘ  Ｕｌｔｒａ  ｕＨＰＬＣシステムを用いて行った。移動相Ａは、１０ｍＭ  ＮＨ４ＯＡｃおよびＡＣＮ／水（１０：９０）中の０．０１％  酢酸を含有し、移動相Ｂは、１０ｍＭ  ＮＨ４ＯＡｃおよびＡＣＮ／水（９０：１０）中の０．０１％  酢酸を含有した。カラムクロマトグラフ分離は、Ａｃｑｕｉｔｙ（登録商標）ｕＨＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８カラム（１．７μｍ，２．１ｘ５０ｍｍ）を用いて、化合物（Ｉ）の分析のために２８％  移動相Ｂから構成される０〜１．５分で定組成溶離液、続いて０．１分で２８％  Ｂから１００％  Ｂの線形増加から構成されるグラジエント溶離液、次いでカラムを洗い流すための１．１分間の１００％  Ｂに保持することによって行った。次いで、前記グラジエントを０．１分以内に２８％  Ｂに戻し、３．７分の合計流動時間で０．９分間２８％で保持した。該流速は、０．６ｍＬ／分であり、カラム温度は、６０℃の条件に保った。検出は、陽性ＥＳＩでターボイオンスプレーイオン化と共にＡＢ  Ｓｃｉｅｘ  Ｔｒｉｐｌｅ  Ｑｕａｄ  ５５００質量分光計を用い、複数反応モニタリング（ＭＲＭ）モードを用いて行った。ＭＲＭ移行は、化合物（Ｉ）については、ｍ／ｚ  ５３５→２５６、［１３Ｃ２，Ｄ４］−化合物（Ｉ）については、ｍ／ｚ  ５４１→２５６であった。データ収集および定量化は、ＡＢ  Ｓｃｉｅｘ  Ａｎａｌｙｓｔ（登録商標）１．５．１ソフトウェアを用いて行った。検量線は、化合物（Ｉ）について３．００〜３０００ｎｇ／ｍＬの範囲であり、１／ｘ２加重線形回帰モデルに適合させた。試料分析中、ヒトＥＤＴＡ血漿で調製された化合物（Ｉ）の低、幾何平均、中および高濃度を示す分析品質管理（ＱＣ）試料の４つのレベルは、各分析流動ごとに各濃度レベルで４回反復して解析した。これらのＱＣ試料からの結果を用いて、ヒトＥＤＴＡ血漿中の化合物（Ｉ）の回折について事前に設定した許容基準に基づいて、実験試料を含有する流動分析物を受け入れるか、受け入れない。
【０１２５】
この実験の結果を表８および図９に示す。ペンタガストリンで予め処置したイヌ（低い胃ｐＨ）と比較して、遊離塩基化合物（Ｉ）で処置した後にファモチジンで予め処置したイヌ（高い胃ｐＨ）において、ＡＵＣおよびＣｍａｘにおける著しい減少が見られた。ファモチジンで予め処置したイヌに実施例化合物１（化合物（Ｉ）のヘミ硫酸セスキ水和物塩）を投与すると、ＡＵＣおよびＣｍａｘであまりに低い減少を示した。この特定の実験において、化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩は、ファモチジンで予め処置した後に投与されると、２５９６ｎｇ／ｍＬのＣｍａｘ値、１２４７３ｎｇ・ｈ／ｍＬのＡＵＣ０−２４ｈｒ、および３４．７３％のバイオアベイラビリティを供した。対照的に、同様の実験において、化合物（Ｉ）遊離塩基は、ファモチジンで予め処置した後に投与されると、２４５ｎｇ／ｍＬのＣｍａｘ値、１７６２ｎｇ・ｈ／ｍＬのＡＵＣ０−２４ｈｒ、および４.５４％のバイオアベイラビリティを供した。
表８
ヘミ硫酸塩または遊離塩基としての化合物（Ｉ）の１５０ｍｇのイヌにおける投与のための薬物動態パラメータ
【表９】
0006476253.tif 000023
【０１２６】
化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩は、化合物（Ｉ）遊離塩基と比較して、特に有利であることが見出された。化合物（Ｉ）のヘミ硫酸塩は、患者に対して、化合物（Ｉ）のバイオアベイラビリティにおける変動を抑え、および／または化合物（Ｉ）のバイオアベイラビリティを増加させるという驚くべき有益な点を有する。これらのインビトロおよびインビボデータに基づいて、ヘミ硫酸塩は、遊離型よりも患者間のバイオアベイラビリティにおける一貫性についての著しい利益を供することが期待される。例示されるように、制酸薬、プロトンポンプ阻害剤、またはＨ２−受容体アンタゴニストなどの胃酸のｐＨを上昇させうる薬を投与される患者集団において、ヘミ硫酸塩形態は、著しく高まったバイオアベイラビリティを供する。
【０１２７】
単一結晶データ（ＬＶＬ）
データは、Ｂｒｕｋｅｒ−Ｎｏｎｉｕｓ  ＣＡＤ４連続回折計で収集した。単位格子パラメータは、２５高角反射（high-angle reflections）の実験上の回折計設定の最小二乗解析により取得した。強度は、θ−２θ可変走査技術（variable scan technique）で一定温度にてＣｕＫα線（λ＝１．５４１８Å）を用いて測定し、ローレンツ偏光因子についてのみ補正した。バックグラウンド計数は、走査時間の半分の走査時に収集した。あるいは、単一結晶データは、ＣｕＫα線（λ＝１．５４１８Å）を用いてＢｒｕｋｅｒ−Ｎｏｎｉｕｓ  Ｋａｐｐａ  ＣＣＤ２０００システムで収集した。測定した強度データの索引および処理は、コレクトプログラムスイート（Collect program suite）中のＨＫＬ２０００ソフトウェアパッケージ（Otwinowski, Z & Minor, W. (1997) in Macromolecular Crystallography, eds. Carter, W.C. Jr. & Sweet, R.M. (Academic, NY), Vol. 276, pp307-326）を用いて行った。（Collect Data collection and processing user interface: Collect: Data collection software, R. Hooft, Nonius B.V., 1998）。あるいは、単一結晶データは、ＣｕＫα線（λ＝１．５４１８Å）を用いてＢｒｕｋｅｒ−ＡＸＳ  ＡＰＥＸ２  ＣＣＤシステムで収集した。測定した強度データの索引および処理は、ＡＰＥＸ２ソフトウェアパッケージ／プログラムスイート（APEX2 Data collection and processing user interface: APEX2 User Manual, v1.27; BRUKER AXS, Inc., Madison, WI）を用いて行った。
【０１２８】
示される場合、結晶は、データ収集中にＯｘｆｏｒｄ  ｃｒｙｏｓｙｓｔｅｍ（Oxford Cryosystems Cryostream cooler: J. Cosier and A.M. Glazer, J. Appl. Cryst., 1986, 19, 105）の低温ストリームで冷却した。
【０１２９】
これらの構造を直接的な方法によって溶解し、一部に改変を加えたＳＤＰソフトウェアパッケージ（SDP, Structure Determination Package, Enraf-Nonius, Bohemia NY）、または結晶学的パッケージＭＡＸＵＳ（maXus solution and refinement software suite: S. Mackay, C.J. Gilmore, C. Edwards, M. Tremayne, N. Stewart, K. Shankland. maXus: a computer program for the solution and refinement of crystal structures from diffraction data）もしくはＳＨＥＬＸＴＬ（Sheldrick, GM. 1997, SHELXTL. Structure Determination Programs. Version 5.10 or greater, Bruker AXS, Madison, Wisconsin）のいずれかを用いて実測された反射に基づいて精密化した。
【０１３０】
生じた原子パラメータ（座標および温度因子）は、全マトリックス最小二乗法により精密化した。精密化で最小化した関数は、Σｗ（｜Ｆｏ｜−｜Ｆｃ｜）２であった。Ｒｗ＝［Σｗ（｜Ｆｏ｜−｜Ｆｃ｜）２／Σｗ｜Ｆｏ｜２］１／２［式中、ｗは、実測された強度における誤差に基づく適当な重み関数である］である場合、Ｒは、Σ｜｜Ｆｏ｜−｜Ｆｃ｜｜／Σ｜Ｆｏ｜と定義する。差分地図（Difference maps）を精密化の全ての段階で試験した。水素を等方性温度因子を用いて理論上の位置に導入したが、水素パラメータは変化しなかった。
【０１３１】
単一結晶データ（ＷＦＤ）
ＣｕＫα線（λ＝１．５４０５６Å）を放射する黒鉛のモノクロメータを備えたＢｒｕｋｅｒ  ＳＭＡＲＴ  ２Ｋ  ＣＣＤ回折計を用いて、室温で回折データを収集した。全データセットは、４．９８ｃｍの結晶−検出器間の距離で２θ範囲にわたりωスキャンモードを用いて収集した。経験的吸収補正には、回折計を備えたＳＡＤＡＢＳルーチン（routine）を利用した（Bruker AXS. 1998, SMART and SAINTPLUS.  Area Detector Control and Integration Software, Bruker AXS, Madison, Wisconsin, USA）。最終的な単位格子パラメータは、全データセットを用いて決定した。
【０１３２】
全ての構造を直接的な方法によって溶解し、ＳＨＥＬＸＴＬソフトウェアパッケージを用いて全マトリックス最小二乗技術によって精密化した（Sheldrick, GM. 1997, SHELXTL. Structure Determination Programs. Version 5.10, Bruker AXS, Madison, Wisconsin, USA.）。精密化で最小化された関数は、Σｗ（｜Ｆｏ｜−｜Ｆｃ｜）２であった。Ｒｗ＝［Σｗ（｜Ｆｏ｜−｜Ｆｃ｜）２／Σｗ｜Ｆｏ｜２］１／２（式中、ｗは、実測された強度における誤差に基づく適当な重み関数である）である場合、Ｒは、Σ｜｜Ｆｏ｜−｜Ｆｃ｜｜／Σ｜Ｆｏ｜として定義する。差分フーリエ地図（Difference Fourier maps）を精密化の全ての段階で試験した。全ての非水素原子は、異方性熱変位パラメータで精密化した。水素結合で結合した水素原子を最終的な差分フーリエ地図に配置し、他の水素原子の位置は標準的な結合の長さおよび角度を用いて理論上の構造から算出した。それらは、等方性温度因子が割り当てられ、固定したパラメータを用いて構造因子の算出に含まれる。
【０１３３】
ＰＸＲＤ（Ｐｈｉｌｉｐｓ）
約２００ｍｇをＰｈｉｌｉｐｓ粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）サンプルホルダーに詰めた。該試料をＰｈｉｌｉｐｓ  ＭＰＤユニット（４５ＫＶ，４０ｍＡ，ＣｕＫα）に移した。データは、２〜３２の２シータ範囲（連続スキャンモード、スキャン速度０．０３度／秒、オートダイバージェンス（auto divergence）および散乱防止スリット（anti scatter slit）、受光スリット（receiving slit）：０．２ｍｍ，サンプルスピナー（sample spinner）：ＯＮ）にて室温で収集した。
【０１３４】
ＰＸＲＤ（ＧＡＤＤＳ−ＮＢ）
Ｘ線粉末回折（ＰＸＲＤ）データは、Ｂｒｕｋｅｒ  Ｃ２  ＧＡＤＤＳを用いて取得した。放射線は、ＣｕＫα（４０ＫＶ，４０ｍＡ）であった。試料−検出器の距離は、１５ｃｍであった。粉末試料は、直径１ｍｍまたはそれ以下の密封したガラスキャピラリー中に置いた；該キャピラリーをデータ収集中回転させた。データは、少なくとも１０００秒の試料露出時間で３≦２θ≦３５°について収集した。生じた二次元回折角度（two-dimensional diffraction arcs）を統合して、３〜３５度の２θの範囲において、０．０２度の２θのステップサイズで従来の一次元ＰＸＲＤパターンを作成した。
【０１３５】
ＤＳＣ（オープンパン）
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）実験は、ＴＡ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（登録商標）モデルＱ２０００、Ｑ１０００または２９２０で行った。試料（約２−６ｍｇ）は、アルミニウムパンで重みを加え、１００分の１ミリグラムまで正確に記録し、ＤＳＣに移した。該機器を窒素ガスで５０ｍＬ／分にてパージした、データは、１０℃／分の加熱速度で室温から３００℃の間で収集した。該プロットは、減少した吸熱ピークで作成した。
【０１３６】
ＴＧＡ（オープンパン）
熱重量分析（ＴＧＡ）実験は、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（登録商標）モデルＱ５００または２９５０で行った。試料（約１０−３０ｍｇ）を予め重量を測定した白金パンに置いた。試料の重量は、正確に測定し、該装置で１０００分の１ミリグラムまで記録した。該炉は、窒素ガスを用いて１００ｍＬ／分でパージした。データは、１０℃／分の加熱速度で室温から３００℃までの間で収集した。
【０１３７】
固体核磁気共鳴法（ＳＳＮＭＲ）
全ての固体Ｃ−１３ＮＭＲ測定は、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＶ−４００、４００ＭＨｚ  ＮＭＲ分光計を用いて行った。高分解能スペクトルは、高出力プロトン脱カップリング、およびＴＰＰＭパルスシーケンスおよび約１２ｋＨｚのマジック角回転（magic-angle spinning）（ＭＡＳ）を有する傾斜振幅交差分極（ramp amplitude cross-polarization）（ＲＡＭＰ−ＣＰ）を用いて得た（A.E. Bennett et al, J. Chem. Phys.,1995, 103, 6951）、（G. Metz, X. Wu and S.O. Smith, J. Magn. Reson. A,. 1994, 110, 219-227）。約７０ｍｇの試料を、キャニスターデザインジルコニアローター（canister-design zirconia rotor）に詰め込み、各実験に用いた。化学シフト（δ）は、３８．５６ｐｐｍに設定された高周波共鳴で外部基準のアダマンタンを基準とした（W.L. Earl and D.L. VanderHart, J. Magn. Reson., 1982, 48, 35-54）。
【０１３８】
ＶＴＩ（ドライオン）
吸湿等温線は、約１０ｍｇの試料を用いて、ＶＴＩ  ＳＧＡ−１００  Ｓｙｍｍｅｔｒｉｃ  Ｖａｐｏｒ  Ａｎａｌｙｚｅｒで収集した。該試料を、０．０００５ｗｔ％／分の損失速度が得られるまで６０℃で１０分間乾燥させた。該試料は、２５℃および３または４、５、１５、２５、３５、４５、５０、６５、７５、８５、および９５％  ＲＨで試験した。各ＲＨにおける平衡は、３５分間の０．０００３重量％／分の速度が達成されるか、または最大６００分で達成された。
【０１３９】
本開示が前記例示の実施例に限定されるものではなく、その必要な態様から逸脱することなく他の特定の形で具体化できることは、当業者にとって明らかである。それゆえ、実施例は、例示として考慮されるべきであって、限定されるものとして考慮されるべきではなく、前記実施例ではなく特許請求の範囲を参照し、よって特許請求の範囲の意味と範囲内にある全ての変更は、本発明に受け入れられることが望ましい。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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