(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
中央に形成された空洞；及び前記空洞を取り囲む、微細気孔を含む隔壁；を含む中空多孔性微小球を組成物の総重量に対し１〜５０質量％含み、
前記空洞の平均径は６０〜１５０μｍであり、
前記微細気孔の平均径は５〜５０μｍであり、
前記中空多孔性微小球は疎水性の生分解性高分子を含む、
皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進注射用組成物。
【請求項２】
前記中空多孔性微小球の平均径は７０〜２００μｍである、請求項１に記載の皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進注射用組成物。
【請求項３】
前記中空多孔性微小球の空洞の体積は、前記中空多孔性微小球の全体積に対し２０〜８０体積％である、請求項１に記載の皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進注射用組成物。
【請求項４】
前記中空多孔性微小球の孔隙率は平均２０〜８０％である、請求項１に記載の皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進注射用組成物。
【請求項５】
前記疎水性の生分解性高分子は、ポリ乳酸（Ｐｏｌｙ−Ｌ−Ｌａｃｔｉｃ  Ａｃｉｄ、ＰＬＬＡ）、ポリグリコール酸（ｐｏｌｙｇｌｙｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄ、ＰＧＡ）、ポリ乳酸−グリコール酸共重合体（ｐｏｌｙ（ｌａｃｔｉｃ−ｃｏ−ｇｌｙｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、ＰＬＧＡ）、ポリ−ε−（カプロラクトン）（Ｐｏｌｙｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ、ＰＣＬ）、ポリ無水物（ｐｏｌｙａｎｈｙｄｒｉｄｅｓ）、ポリオルトエステル（ｐｏｌｙｏｒｔｈｏｅｓｔｅｒ）、ポリビニルアルコール（ｐｏｌｙｖｉｎｉｙａｌｃｏｈｏｌ）、ポリエチレングリコール（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）、ポリウレタン（ｐｏｌｙｕｒｅｔｈａｎｅ）、ポリアクリル酸（ｐｏｌｙａｃｒｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）、ポリ−Ｎ−イソプロピルアクリルアミド（Ｐｏｌｙ−Ｎ−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ  ａｃｒｙｌａｍｉｄｅ）、ポリ（エチレンオキサイド）−ポリ（プロピレンオキサイド）−ポリ（エチレンオキサイド）共重合体（ｐｏｌｙ  ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｏｘｉｄｅ）−ｐｏｌｙ  ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｏｘｉｄｅ−ｐｏｌｙ  ｅｔｈyｌｅｎｅ  ｏｘｉｄｅ  ｃｏｐｏｌｙｍｅｒ）、これらの共重合体及びこれらの混合物からなる群より選択された一つ以上である、請求項１に記載の皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進注射用組成物。
【請求項６】
前記組成物は、アルギン酸（ａｌｇｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）、ヒアルロン酸（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、カルボキシメチルセルロース（ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ  ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）、デキストラン（ｄｅｘｔｒａｎ）、コラーゲン（ｃｏｌｌａｇｅｎ）、ゼラチン（ｇｅｌａｔｉｎ）及びエラスチン（ｅｌａｓｔｉｎ）からなる群より選択される一種以上の水溶性高分子をさらに含む、請求項１に記載の皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進注射用組成物。
【請求項７】
前記皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進は、生体内皮膚組織細胞が前記微細気孔を通じて前記中空多孔性微小球内に移動し、中央の空洞で前記移動した皮膚組織細胞が増殖して皮膚組織を再生させ又はボリュームを増進させることである、請求項１に記載の皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進注射用組成物。
【請求項８】
前記組成物は、皮膚シワ又は皮膚陥没部位の改善フィラー用である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進注射用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚シワ及び陥没部位の改善のための皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進注射用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
美容施術を目的として販売されている美容施術用医療機器のうちのフィラー（ｆｉｌｌｅｒ）は、シワや陥没部位の皮膚組織に注入するといった方式で用いられる。
【０００３】
大半のフィラーは皮膚組織に注入され、該物質自体の体積によって皮膚組織の体積を増大させる方式で皮膚しわや陥没部位を改善する。現在最も多用されるフィラーとしては、ヒアルロン酸とコラーゲンなどのゲル状の無形物質があるが、経時的に皮膚組織内に吸収されることでその美容施術の効果が長期に亘り保持されないという問題がある。
【０００４】
また、美容施術用医療機器として幅広い使用範囲を有するためには、注射によって伝達しなければならないが、既存開発のフィラー成分である多孔性材料はその大きさが数十ｍｍ以上であったため注射によっては皮膚組織への移植が不可能であり、専ら皮膚組織を切開する手術によって皮膚組織内に移植しなければならないという短所があった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】大韓民国公開特許公報第２０１１−００７５６１８号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の一目的は、多孔性微小球を注射によって皮膚組織内に注入することができ、且つ前記多孔性微小球内で細胞を増殖させて皮膚組織の体積を増大させることができる皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進注射用組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
前記したような目的を解決するために、本発明の一観点は、中央に形成された空洞；及び前記空洞を取り囲む、微細気孔を含む隔壁を含む中空多孔性微小球を含む皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進注射用組成物を提供する。
【発明の効果】
【０００８】
本発明に係る組成物に含まれる中空多孔性微小球は小さい粒子サイズを有することで、既存の多孔性材料は大きい粒子サイズによって皮膚組織を切開して移植しなければならなかったという短所を解決することができる。
【０００９】
前記中空多孔性微小球は、粒子内の中央に形成された巨大空洞と微細気孔を含む隔壁を含む二重構造を有するので、生体内皮膚組織細胞がチャンネルとして前記微細気孔を用いて前記中空多孔性微小球内に容易に移動することができ、前記空洞内で前記移動した皮膚組織細胞が効果的に増殖することができる。さらには、前記本発明に係る中空多孔性微小球は、皮膚組織の再生によって皮膚シワ又は陥没部位の改善だけでなく、骨組織の再生のような医薬の産業にも適用され得る。
【００１０】
また、本発明によれば、一定期間の経過後に前記中空多孔性微小球が皮膚内で生分解した後で前記新規に増殖した皮膚組織細胞がその体積を保持するので、皮膚組織のボリューム増進効果を増大させるだけでなく、その効果を安全且つ長期に亘り保持することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】本発明の一実施例に係る中空多孔性微小球の製造時のポロゲンの種類及び含有量による粒子表面と切片の電子走査顕微鏡写真を示した図である。
【図２】本発明の一実施例に係る中空多孔性微小球で線維芽細胞を培養したＬｉｖｅ／ｄｅａｄ染色共焦点顕微鏡写真を示した図である。
【図３】本発明の一実施例に係る中空多孔性微小球で線維芽細胞を培養した後にＭＴＴ  ａｓｓａｙによって細胞成長率を示した図である。
【図４】本発明の一実施例に係る中空多孔性微小球をマウスの皮膚に移植した後の多孔性微小球内への細胞移動及び組織再生効果を示した図である。
【図５】本発明の一実施例に係る中空多孔性微小球に対し、引張力測定機を利用して注射性能の測定前と後における多孔性微小球の形状変化を示した図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本明細書において「皮膚」とは、生物の外部を覆っている器官を意味するものであって、表皮、真皮及び皮下脂肪層から構成されており、顔またはからだ全体の外部を覆う組織だけでなく、頭皮と毛髪を含む最広義の概念である。
【００１３】
本明細書において「フィラー（ｆｉｌｌｅｒ）」とは、体内に注入される充填剤、補強剤などを意味するものであって、皮膚の表皮、真皮、または皮下脂肪層や関節などに美容、整形、機能強化のために注入される物質がいずれも含まれる最広義の意味である。
【００１４】
本明細書において「平均径」とは、対象の横断面の両端を結ぶ線分である径を平均した値を意味し、例えば、本発明の空洞の場合、中空多孔性微小球内に形成される空洞が真球状ではないときに前記空洞自体が持つ径の平均値を意味していてよい。または、複数の微小球内に存在する各空洞の径の平均値を意味していてもよい。微細気孔の場合、微細気孔自体が真球状ではないときに前記微細気孔自体が持つ径の平均値または複数の微細気孔の径の平均値を意味していてよい。
【００１５】
以下、本発明を詳しく説明する。
【００１６】
本発明の一実施例は、中央に形成された空洞；及び前記空洞を取り囲む、微細気孔を含む隔壁を含む中空多孔性微小球を含む、皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進注射用組成物を提供する。
【００１７】
本発明の他の一実施例は、皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進のための注射方法であって、当該方法は、中空多孔性微小球を含む組成物を必要対象に有効量で投与する段階を含み、前記中空多孔性微小球が、前記中央に形成された空洞及び前記空洞を取り囲む微細気孔を含む隔壁を含むものを提供することができる。
【００１８】
本発明の他の一実施例は、中空多孔性微小球の皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進注射用組成物の製造のための使用であって、前記中空多孔性微小球が、前記中央に形成された空洞及び前記空洞を取り囲む微細気孔を含む隔壁を含むものを提供することができる。
【００１９】
本発明の他の一実施例は、皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進注射に用いるための中空多孔性微小球であって、当該中空多孔性微小球が、前記中央に形成された空洞及び前記空洞を取り囲む微細気孔を含む隔壁を含むものを提供することができる。
【００２０】
一実施例として、前記中空多孔性微小球の中央に形成された空洞は５〜１５０μｍの平均径を有していてよい。前記空洞の径が５μｍ未満であると細胞の成長が困難となり、また１５０μｍを超えると微小球の強度が弱すぎて生体内注入の際に破壊され得る。具体的に、前記空洞の平均径は、５μｍ以上、１０μｍ以上、１３μｍ以上、１５μｍ以上、１７μｍ以上、２０μｍ以上、２３μｍ以上、２５μｍ以上、２７μｍ以上、３０μｍ以上、３３μｍ以上、３５μｍ以上、３７μｍ以上、４０μｍ以上、４３μｍ以上、４５μｍ以上、４８μｍ以上、５０μｍ以上、６０μｍ以上、７０μｍ以上、８０μｍ以上、９０μｍ以上、１００μｍ以上、１１０μｍ以上、１２０μｍ以上、１３０μｍ以上、１４０μｍ以上または１５０μｍであってよい。また、前記空洞の平均径は、１５０μｍ以下、１４０μｍ以下、１３０μｍ以下、１２０μｍ以下、１１０μｍ以下、１００μｍ以下、９０μｍ以下、８０μｍ以下、７０μｍ以下、６０μｍ以下、５０μｍ以下、４７μｍ以下、４５μｍ以下、４３μｍ以下、４０μｍ以下、３７μｍ以下、３５μｍ以下、３３μｍ以下、３０μｍ以下、２８μｍ以下、２５μｍ以下、２３μｍ以下、２０μｍ以下、１８μｍ以下、１５μｍ以下、１３μｍ以下、１０μｍ以下または５μｍであってよいが、皮膚組織細胞の増殖が可能な大きさであれば必ずしも前記した大きさに制限されるものではない。
【００２１】
一実施例として、本発明に係る組成物に含まれる前記中空多孔性微小球の粒子は、５０〜２００μｍの平均径を有していてよいが、注射によって皮膚組織内注入が可能であり、且つ皮膚組織細胞の増殖が可能であれば必ずしも前記範囲に制限されるものではない。前記中空多孔性微小球は、前記したような範囲の小さい粒子サイズを有することで、皮膚組織内に３００μｍ以下の内径を有する注射針を介して投与することができ、既存の多孔性材料は大きい粒子サイズによって皮膚組織を切開して移植する必要があったという短所を解決することができる。前記中空多孔性微小球の径が５０μｍ未満であると皮膚組織細胞の増殖が困難となり、また２００μｍを超えると皮膚組織内への注射針を用いた多孔性微小球の移植が容易ではない。具体的に、前記中空多孔性微小球粒子の平均径は、５０μｍ以上、６０μｍ以上、７０μｍ以上、８０μｍ以上、９０μｍ以上、１００μｍ以上、１１０μｍ以上、１２０μｍ以上、１３０μｍ以上、１４０μｍ以上、１５０μｍ以上、１６０μｍ以上、１７０μｍ以上、１８０μｍ以上、１９０μｍ以上または２００μｍであってよい。また、前記中空多孔性微小球粒子の平均径は、２００μｍ以下、１９０μｍ以下、１８０μｍ以下、１７０μｍ以下、１６０μｍ以下、１５０μｍ以下、１４０μｍ以下、１３０μｍ以下、１２０μｍ以下、１１０μｍ以下、１００μｍ以下、９０μｍ以下、８０μｍ以下、７０μｍ以下、６０μｍ以下または５０μｍであってよい。
【００２２】
一実施例として、前記中空多孔性微小球の空洞の体積は、前記中空多孔性微小球の全体積に対し２０〜８０体積％であってよい。前記２０体積％未満であると皮膚組織細胞が増殖する空間が十分ではなく、また８０体積％を超えると、隔壁の厚みが薄すぎるようになるため微小球の形態が保持できずに崩れ得る。一実施例として、前記隔壁の厚みは、前記中空多孔性微小球の全径の１／５〜１／２であってよい。
【００２３】
具体的に、前記中空多孔性微小球の隔壁に含まれる微細気孔は、一実施例として、５〜５０μｍの平均径を有していてよい。前記平均径が５μｍ未満であると前記中空多孔性微小球を皮下組織に注入したときに皮膚組織細胞が微小球内部に移動することができず、また前記平均径が５０μｍを超えると隔壁内気孔の占める体積が増加して微小球の形態が保持され難くなる。
【００２４】
例えば、前記中空多孔性微小球の好ましい孔隙率は、平均２０〜８０％であってよい。
本発明の一実施例に係る前記中空多孔性微小球は、一実施例として、疎水性の生分解性高分子を含んでいてよい。具体的に、前記疎水性の生分解性高分子としては、ポリ乳酸（Ｐｏｌｙ−Ｌ−Ｌａｃｔｉｃ  Ａｃｉｄ、ＰＬＬＡ）、ポリグリコール酸（ｐｏｌｙｇｌｙｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄ、ＰＧＡ）、ポリ乳酸−グリコール酸共重合体（ｐｏｌｙ（ｌａｃｔｉｃ−ｃｏ−ｇｌｙｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、ＰＬＧＡ）、ポリ−ε−（カプロラクトン）（Ｐｏｌｙｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ、ＰＣＬ）、ポリ無水物（ｐｏｌｙａｎｈｙｄｒｉｄｅｓ）、ポリオルトエステル（ｐｏｌｙｏｒｔｈｏｅｓｔｅｒ）、ポリビニルアルコール（ｐｏｌｙｖｉｎｉｙａｌｃｏｈｏｌ）、ポリエチレングリコール（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）、ポリウレタン（ｐｏｌｙｕｒｅｔｈａｎｅ）、ポリアクリル酸（ｐｏｌｙａｃｒｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）、ポリ−Ｎ−イソプロピルアクリルアミド（Ｐｏｌｙ−Ｎ−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ  ａｃｒｙｌａｍｉｄｅ）、ポリ（エチレンオキサイド）−ポリ（プロピレンオキサイド）−ポリ（エチレンオキサイド）共重合体（ｐｏｌｙ  ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｏｘｉｄｅ）−ｐｏｌｙ  ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｏｘｉｄｅ−ｐｏｌｙ  ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｏｘｉｄｅ  ｃｏｐｏｌｙｍｅｒ）、これらの共重合体、及びこれらの混合物からなる群より選択された一つ以上を含んでいてよいが、皮膚組織内に注入されたときに安全且つ分解可能なものであれば必ずしもこれらに制限されものではない。
【００２５】
また、本発明の一実施例によれば、前記中空多孔性微小球の空洞及び微細気孔は気孔形成誘導物質、すなわちポロゲン（ｐｏｒｏｇｅｎ）により形成されたものであり、前記ポロゲンは、疎水性の生分解性高分子と相溶性がなく、且つ密度が水よりも低い疎水性流体であればその種類は特に制限されない。具体的に、前記空洞及び微細気孔形成誘導物質は、１ａｔｍ、２５０℃以下で沸点を有する物質であればよく、１ａｔｍ、３０〜１５０℃で液状の物質であればよい。例えば、前記空洞及び微細気孔形成誘導物質は、アルカン（ａｌｋａｎｅ）類、植物性油及びこれらの混合物からなる群より選択された一つ以上であってよい。一実施例として、前記アルカン類は、オクタン（Ｏｃｔａｎｅ）、ウンデカン（Ｕｎｄｅｃａｎｅ）、トリデカン（Ｔｒｉｄｅｃａｎｅ）、ペンタデカン（Ｐｅｎｔａｄｅｃａｎｅ）及びこれらの混合物からなる群より選択された一つ以上であり、前記植物性油は、大豆油、とうもろこし油、綿実油、オリーブ油、ブドウ種子油、クルミ油、ゴマ油、エゴマ油及びこれらの混合物からなる群より選択された一つ以上を含んでいてよい。本発明は、前記具体的な物質以外に他の物質を適用して気孔を形成することもでき、一実施例として、本発明は、前記中空多孔性微小球の製造の際に気孔を形成するポロゲンの濃度及び種類によって中空及び微細気孔の大きさや形態を調節することができ、且つ気孔均一度も増加させることができる。
【００２６】
一実施例によれば、前記したような本発明の組成物に係る前記皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進は、一実施例として、生体内皮膚組織細胞が前記微細気孔を通じて前記中空多孔性微小球内に移動し、中央の空洞で前記移動した皮膚組織細胞が増殖して皮膚組織を再生させ又はボリュームを増進させることを含んでいてよい。すなわち、生体組織内に存在する細胞が前記中空多孔性微小球内に浸透し、成長分裂して新規生体組織を形成することができる。本発明の一実施例によれば、前記気孔形成誘導物質と疎水性の生分解性高分子の混合比を調節することで、微小球の中央に形成される空洞の及び隔壁の微細気孔の大きさや形態を調節自在とすることができ、前記中空多孔性微小球の外部に存在する線維芽細胞、脂肪細胞などが多孔性微小球内に浸透した後、成長し分裂することができる空間を与えることができる。
【００２７】
一実施例として、前記中空多孔性微小球の大きさと中央に形成される空洞と隔壁の微細気孔は、微細流体デバイスまたは膜乳化装置を利用して調節及び製造されていてよい。前記微細流体デバイスの場合、連続相を移送する導管内に微細導管を介して不連続相を注入する速度を調節して微小球の大きさを一定に制御することができる。膜乳化の場合は、微細流体デバイスで用いる微細導管の代わりに孔隙の大きさが一定の膜（ｍｅｍｂｒａｎｅ）を通じて不連続相を連続相が流れる導管に移送させて制御することができる。
【００２８】
本発明の一実施例によれば、前記組成物は、皮膚シワ又は皮膚陥没部位の改善用であってよい。より具体的に、前記組成物は、皮膚シワを含む老化の改善、皮膚色調の改善、又は皮膚弾力の改善用フィラー（ｆｉｌｌｅｒ）又はリフティングなどを目的にして用いられてよいが、皮膚の組織再生のためであれば必ずしもこれらに制限されるものではない。例えば、人工皮膚、人工軟骨、骨充填剤、整形補型物などに用いられていてよい。または、前記本発明に係る組成物は、一実施例として、薬学又は化粧料組成物としても提供されていてよい。
【００２９】
また、本発明に係る皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進注射用組成物は、前記中空多孔性微小球を組成物の総質量に対し１〜５０質量％で含んでいてよい。前記１質量％未満であると中空多孔性微小球の含有量が少なすぎて皮膚組織内への注入時に目的とする効果を期待し難く、また５０質量％を超えると注射によって皮膚組織内への注入を円滑に行い難い。より具体的に、本発明に係る皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進注射用組成物は、一実施例として、前記中空多孔性微小球を組成物の総質量に対し５〜２０質量％で含んでいてよい。
【００３０】
一実施例として、前記組成物は、中空多孔性微小球の他、多孔性微小球を含む組成物の粘性と安定性を向上するために水溶性高分子が含まれていてよい。一実施例として、前記水溶性高分子は、アルギン酸（ａｌｇｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）、ヒアルロン酸（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、カルボキシメチルセルロース（ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ  ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）、デキストラン（ｄｅｘｔｒａｎ）、コラーゲン（ｃｏｌｌａｇｅｎ）及びこれらの分解物であるゼラチン（ｇｅｌａｔｉｎ）、エラスチン（ｅｌａｓｔｉｎ）からなる群より選択される１種以上の化合物をさらに含んでいてよい。
【００３１】
以下、実施例を通じて本発明をより詳しく説明することにする。これらの実施例は単に本発明を例示するためのものに過ぎず、本発明の範囲がこれらの実施例によって制限されるものではないと解釈されることは当業界における通常の知識を有する者にとって自明であろう。
【００３２】
［実施例１］中空多孔性微小球の製造１
本発明の一実施例に係る中空多孔性微小球を下記の方法で製造した。
【００３３】
段階１：微細流体デバイス（ｓｉｍｐｌｅ  ｆｌｕｉｄｉｃ  ｄｅｖｉｃｅ）の製作
ＰＶＣチューブに９０°で折り曲げた３０ゲージ注射針を入れ、注射針とＰＶＣチューブとの間に微細ガラス管を挿入して微細流体デバイスを製作した。製作された微細流体デバイスはエポキシ接着剤を用いて微細な隙間を埋め込んだ。
【００３４】
段階２：アルカン類が含まれたＰＬＬＡ溶液の製造
疎水性の生分解性高分子としてＰＬＬＡ（ＲＥＳＯＭＥＲ  ＬＲ  ７０４Ｓ、Ｅｖｏｎｉｋ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  ＡＧ）０．１ｇ、Ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ (３４３５５−０３５０、Ｊｕｎｓｅｉ）１０ｇ、気孔形成誘導物質としてアルカン類物質、具体的にオクタン（Ｏｃｔａｎｅ、４１２２３６、Ｓｉｇｍａ−ａｌｄｒｉｃｈ）またはウンデカン（Ｕｎｄｅｃａｎｅ、U４０７、Ｓｉｇｍａ−ａｌｄｒｉｃｈ）またはトリデカン（Ｔｒｉｄｅｃａｎｅ、T５７４０１、Ｓｉｇｍａ−ａｌｄｒｉｃｈ）またはペンタデカン（Ｐｅｎｔａｄｅｃａｎｅ、７６５１０、Ｓｉｇｍａ−ａｌｄｒｉｃｈ）をそれぞれ０．１、０．３ｇ及び０．６ｇ混ぜ合わせて（１、３、６質量％）疎水性の生分解性高分子（ＰＬＬＡ）溶液を製造した。
【００３５】
段階３：均一なＰＬＬＡエマルジョンの製造
微細流体デバイスに、２％  ＰＶＡ溶液を流速が分当たり１．５ｍｌの連続相（ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ  ｐｈａｓｅ）で供給し、且つ前記ＰＶＡ溶液に、前記段階２で得たアルカン類が含まれたＰＬＬＡ溶液を３０ゲージ注射器針を用いて流速が分当たり０．１ｍｌの不連続相（ｄｉｓｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ  ｐｈａｓｅ）で供給して、一定の大きさを有するエマルジョンが形成されるようにした。
【００３６】
段階４：均一な中空多孔性微小球の製造
前記段階３で得たエマルジョンを２％  ＰＶＡ収集相（ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｐｈａｓｅ）に分散させて１５０ｒｐｍで攪拌させた後、ジクロロメタンを十分に揮発させた。
【００３７】
段階５：気孔形成誘導物質を除去して多孔性付与
前記段階４で得たＰＬＬＡビード蒸溜水（Ｄ．Ｗ．）で数回洗浄した後、凍結乾燥器を利用してアルカン類を昇華させて均一な大きさの中空多孔性微小球の多孔性ＰＬＬＡビードを製造した。
【００３８】
前記製造された各中空多孔性微小球を図１に示した。気孔形成誘導物質の含有量が増加するにつれて、または炭化水素鎖の長さが長くなるにつれて、微小球の中央に空洞がより効果的に製造されることを確認することができる。
【００３９】
［実施例２］中空多孔性微小球の製造２
本発明の一実施例に係る中空多孔性微小球を下記の方法で製造した。
【００４０】
段階１：微細流体デバイス（ｓｉｍｐｌｅ  ｆｌｕｉｄｉｃ  ｄｅｖｉｃｅ）の製作
ＰＶＣチューブに９０°で折り曲げた３０ゲージ注射針を入れ、注射針とＰＶＣチューブとの間に微細ガラス管を挿入して微細流体デバイスを製作した。製作された微細流体デバイスはエポキシ接着剤を利用して微細な隙間を埋め込んだ。
【００４１】
段階２：植物性油が含まれたＰＬＬＡ溶液の製造
疎水性の生分解性高分子としてＰＬＬＡ（ＲＥＳＯＭＥＲ  ＬＲ  ７０４Ｓ、Ｅｖｏｎｉｋ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  ＡＧ）０．１ｇ、Ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ (３４３５５−０３５０、Ｊｕｎｓｅｉ）１０ｇ、気孔形成誘導物質として綿実油または大豆油をそれぞれ０．５ｇに混ぜ合わせて疎水性の生分解性高分子（ＰＬＬＡ）溶液を製造した。
【００４２】
段階３：均一なＰＬＬＡエマルジョンの製造
微細流体デバイスに、２％  ＰＶＡ溶液を流速が分当たり１．５ｍｌの連続相（ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ  ｐｈａｓｅ）で供給し、且つ前記ＰＶＡ溶液に、前記段階２で得た植物性油が含まれたＰＬＬＡ溶液を、３０ゲージ注射器針を用いて流速が分当たり０．１ｍｌの不連続相（ｄｉｓｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ  ｐｈａｓｅ）で供給して、一定の大きさを有するエマルジョンが形成されるようにした。
【００４３】
段階４：均一なＰＬＬＡビードの製造
前記段階３で得たエマルジョンを２％  ＰＶＡ収集相（ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｐｈａｓｅ）に分散させて１５０ｒｐｍで攪拌させた後、ジクロロメタンを十分に揮発させた。
【００４４】
段階５：内部気孔形成誘導物質を除去して多孔性付与
前記段階４で得たＰＬＬＡビードを蒸溜水（Ｄ．Ｗ．）で数回洗浄した後、凍結乾燥器を利用して植物性油を除去して均一な大きさの中空多孔性微小球の多孔性ＰＬＬＡビードを製造した。
【００４５】
［実施例３］中空多孔性微小球を含有する注射用組成物の製造
本発明の一実施例として、前記中空多孔性微小球及び多孔性微小球を含む組成物の粘性と安定性を向上するためのヒアルロン酸（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、カルボキシメチルセルロース（ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ  ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）等の水溶性高分子を混合して注射用組成物を製造した。
【００４６】
このとき、各組成の含有量は下記の表１と表２に表したとおりであり、各組成の含有量による中空多孔性微小球を含有する注射用組成物の注射圧測定結果を共に表した。
【００４７】
【表１】
0006605722.tif 000002
【００４８】
【表２】
0006605722.tif 000003
【００４９】
［試験例１］皮膚組織細胞の培養
本発明の一実施例に係る中空多孔性微小球の中空形成の有無による細胞移動性及び増殖効能を比べるための実験を下記のように行った。
【００５０】
比較例として、中空を含まない多孔性微小球（ｓｍａｌｌ  ｐｏｒｅｓ：トリデカン３質量％）及び前記実施例１の中空を含む多孔性微小球（Ｌａｒｇｅ  ｐｏｒｅｓ：アルカン類でトリデカンを６質量％含む）をそれぞれ７０％エタノールで滅菌処理した後、ＰＢＳで十分に洗浄し、ＮＩＨ３Ｔ３線維芽細胞を移植して細胞増殖の挙動を観察した。ＮＩＨ３Ｔ３線維芽細胞を１×１０３ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度で培養培地に分散させスピンナーフラスコ（ｓｐｉｎｎｅｒ  ｆｌａｓｋ）を利用して６時間撹拌した後、多孔性粒子を培養容器（ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｐｌａｔｅ）に移して培養した。細胞培養して１、３、７、１０日目に前記培養した各多孔性微小球粒子をＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ染色した後、細胞の付着及び増殖の有無を共焦点顕微鏡とＭＴＴ  ａｓｓａｙによって確認した。図２及び図３に示したように、中空を含む中空多孔性微小球（Ｌａｒｇｅ  ｐｏｒｅｓ）が、中空を含まず微細気孔のみを含む多孔性微小球（Ｓｍａｌｌ  ｐｏｒｅｓ）に比べて、内部気孔へのＮＩＨ３Ｔ３線維芽細胞の浸透及び増殖が１０日目までに順調になされることを確認することができる。これは、多孔性微小球内に含まれた中空が細胞の浸透及び増殖において大きな効果があることを意味する。
【００５１】
［試験例２］動物実験による中空多孔性微小球の細胞移動性及び組織再生効能の評価
本発明の一実施例に係る中空多孔性微小球の中空形成の有無による細胞移動性及び組織再生効能を比べるための実験を下記のように行った。
【００５２】
比較例として、中空を含まない多孔性微小球（ｓｍａｌｌ  ｐｏｒｅｓ：トリデカン３質量％）及び前記実施例１の中空を含む多孔性微小球（Ｌａｒｇｅ  ｐｏｒｅｓ：アルカン類でトリデカンを６質量％含む）をそれぞれ７０％エタノールで滅菌処理した。これをＰＢＳで十分に洗浄し、ヌードマウスの皮下に２３ゲージ針を利用して多孔性ＰＬＬＡ粒子をＰＢＳ相に分散させて注入し、多孔性微小球内の細胞浸透及び細胞増殖の有無を８週に亘り観察した。多孔性微小球を注入してから２、４、６、８週目にそれぞれヌードマウスの皮膚と皮下粒子の部分まで切開して４％ホルムアルデヒドに３時間固定した後、当該組織を３０％サッカロース（ｓａｃｃｈａｒｏｓｅ）溶液に１２時間浸漬させた。次いで、クライオ・ミクロトーム（ｃｒｙｏ  ｍｉｃｒｏｔｏｍｅ）によって２０μm大きさのクライオ切片（ｃｒｙｏ  ｓｅｃｔｉｏｎ）を製作した。クライオ切片にした組織をスライドガラスに張って、５０℃の加熱板（ｈｅａｔｉｎｇ  ｂｌｏｃｋ）にて３時間乾燥して、スライドガラスに組織がよく張り付くようにした。当該組織切片をＨ＆Ｅ染色をして、多孔性ＰＬＬＡ微小球周辺の組織反応を観察した。
【００５３】
その結果、図４に示したように、中空を含まず微細気孔のみを含む多孔性微小球（Ｓｍａｌｌ  ｐｏｒｅｓ）は８週目まで細胞の大半が外部に存在していたのに対し、中空を含む中空多孔性微小球（Ｌａｒｇｅ  ｐｏｒｅｓ）は細胞が粒子内部まで浸透して新規組織生成を誘導する様相を示した。また、８週後でも粒子が完全に分解していないことから、多孔性微小球の生体内での長期保持可能性を確認することができた。
【００５４】
［試験例３］中空多孔性微小球を含む組成物の注射性能の測定
前記表１と表２で製造した組成物の注射注入の可能有無を測定するための性能試験を実施した。引張力測定機を圧縮強度測定モード（ｍｏｄｅ）に設定し、注射性能を測定した。各中空多孔性微小球を含む組成物を内容物として入れた注射器のキャップ（ｃａｐ）を外し、２３Ｇの規格を有する注射針を取り付けた後、注射器を引張力測定機の測定板に対して注射針が下方に向くように垂直に固定した。引張力測定機を稼動して、１ｍｍ／ｓｅｃの速度で注射器に取り付けられたプランジャ（ｐｌｕｎｇｅｒ）を押しながら、注射器内の内容物が完全に無くなるまでの圧縮にかかる力を測定した。
【００５５】
その結果を前記表１と２に表した。表１と２から分かるように、中空多孔性微小球をそれぞれ２％ヒアルロン酸、２％カルボキシメチルセルロースに分散させて注射性能を測定した場合、比較製造例１及び２のように組成物内への微小球の含有量が５０質量％を超えた場合、注入が不可能であった。
【００５６】
［試験例４］中空多孔性微小球を含む組成物の注射注入前後の形状の比較
本発明の実施例に係る中空多孔性微小球を含む組成物の注射注入後の形状の変化の有無を確認するために、前記表１の製造例６に対し注射性能の試験前と後の試料を収集し、中空多孔性微小球の形状の変化をレーザ顕微鏡（３Ｄ  ｍｅａｓｕｒｉｎｇ  ｌａｓｅｒ  ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ、オリンパス）によって観察した。その結果を図５に示した。図５から分かるように、製造例６の場合、高い注射圧にも拘わらず、注射前と比べて多孔性微小球の形状をよく保持していることを確認した。
【００５７】
本発明は、一実施例として次の実施形態を提供することができる。
【００５８】
第１実施形態は、中央に形成された空洞；及び前記空洞を取り囲む、微細気孔を含む隔壁を含む中空多孔性微小球を含む、皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進注射用組成物を提供することができる。
【００５９】
第２実施形態は、第１実施形態において、前記中空多孔性微小球の空洞の平均径は５〜１５０μｍである、皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進注射用組成物を提供することができる。
【００６０】
第３実施形態は、第１実施形態及び第２実施形態のいずれか一つ以上において、前記中空多孔性微小球の平均径は５０〜２００μｍである、皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進注射用組成物を提供することができる。
【００６１】
第４実施形態は、第１実施形態〜第３実施形態のいずれか一つ以上において、前記中空多孔性微小球の空洞の体積は、前記中空多孔性微小球の全体積に対し２０〜８０体積％である、皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進注射用組成物を提供することができる。
【００６２】
第５実施形態は、第１実施形態〜第４実施形態のいずれか一つ以上において、前記中空多孔性微小球の微細気孔の平均径は５〜５０μｍである、皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進注射用組成物を提供することができる。
【００６３】
第６実施形態は、第１実施形態〜第５実施形態のいずれか一つ以上において、前記中空多孔性微小球の孔隙率は平均２０〜８０％である、皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進注射用組成物を提供することができる。
【００６４】
第７実施形態は、第１実施形態〜第６実施形態のいずれか一つ以上において、前記中空多孔性微小球は疎水性の生分解性高分子を含む、皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進注射用組成物を提供することができる。
【００６５】
第８実施形態は、第７実施形態において、前記疎水性の生分解性高分子は、ポリ乳酸（Ｐｏｌｙ−Ｌ−Ｌａｃｔｉｃ  Ａｃｉｄ、ＰＬＬＡ）、ポリグリコール酸（ｐｏｌｙｇｌｙｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄ、ＰＧＡ）、ポリ乳酸−グリコール酸共重合体（ｐｏｌｙ（ｌａｃｔｉｃ−ｃｏ−ｇｌｙｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、ＰＬＧＡ）、ポリ−ε−（カプロラクトン）（Ｐｏｌｙｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ、ＰＣＬ）、ポリ無水物（ｐｏｌｙａｎｈｙｄｒｉｄｅｓ）、ポリオルトエステル（ｐｏｌｙｏｒｔｈｏｅｓｔｅｒ）、ポリビニルアルコール（ｐｏｌｙｖｉｎｉｙａｌｃｏｈｏｌ）、ポリエチレングリコール（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）、ポリウレタン（ｐｏｌｙｕｒｅｔｈａｎｅ）、ポリアクリル酸（ｐｏｌｙａｃｒｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）、ポリ−Ｎ−イソプロピルアクリルアミド（Ｐｏｌｙ−Ｎ−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ  ａｃｒｙｌａｍｉｄｅ）、ポリ（エチレンオキサイド）−ポリ（プロピレンオキサイド）−ポリ（エチレンオキサイド）共重合体（ｐｏｌｙ  ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｏｘｉｄｅ）−ｐｏｌｙ  ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｏｘｉｄｅ−ｐｏｌｙ  ｅｔｈyｌｅｎｅ  ｏｘｉｄｅ  ｃｏｐｏｌｙｍｅｒ）、これらの共重合体及びこれらの混合物からなる群より選択された一つ以上である、皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進注射用組成物を提供することができる。
【００６６】
第９実施形態は、第１実施形態〜第８実施形態のいずれか一つ以上において、前記中空多孔性微小球の空洞及び微細気孔形成誘導物質は、疎水性の生分解性高分子と相溶性がなく、且つ密度が水よりも低い疎水性流体である、皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進注射用組成物を提供することができる。
【００６７】
第１０実施形態は、第９実施形態において、前記空洞及び微細気孔形成誘導物質は、アルカン（ａｌｋａｎｅ）類、植物性油及びこれらの混合物からなる群より選択された一つ以上である、皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進注射用組成物を提供することができる。
【００６８】
第１１実施形態は、第１０実施形態において、前記アルカン類は、オクタン（Ｏｃｔａｎｅ）、ウンデカン（Ｕｎｄｅｃａｎｅ）、トリデカン（Ｔｒｉｄｅｃａｎｅ）、ペンタデカン（Ｐｅｎｔａｄｅｃａｎｅ）及びこれらの混合物からなる群より選択された一つ以上であり、前記植物性油は、大豆油、とうもろこし油、綿実油、オリーブ油、ブドウ種子油、クルミ油、ゴマ油、エゴマ油及びこれらの混合物からなる群より選択された一つ以上である、皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進注射用組成物を提供することができる。
【００６９】
第１２実施形態は、第１実施形態〜第１１実施形態のいずれか一つ以上において、前記組成物は、アルギン酸（ａｌｇｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）、ヒアルロン酸（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、カルボキシメチルセルロース（ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ  ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）、デキストラン（ｄｅｘｔｒａｎ）、コラーゲン（ｃｏｌｌａｇｅｎ）、ゼラチン（ｇｅｌａｔｉｎ）及びエラスチン（ｅｌａｓｔｉｎ）からなる群より選択される一種以上の水溶性高分子をさらに含む、皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進注射用組成物を提供することができる。
【００７０】
第１３実施形態は、第１実施形態〜第１２実施形態のいずれか一つ以上において、前記組成物は、前記中空多孔性微小球を組成物の総質量に対し１〜５０質量％で含む、皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進注射用組成物を提供することができる。
【００７１】
第１４実施形態は、第１実施形態〜第１３実施形態のいずれか一つ以上において、前記皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進は、生体内皮膚組織細胞が前記微細気孔を通じて前記中空多孔性微小球内に移動し、中央の空洞で前記移動した皮膚組織細胞が増殖して皮膚組織を再生させ又はボリュームを増進させることである、皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進注射用組成物を提供することができる。
【００７２】
第１５実施形態は、第１実施形態〜第１４実施形態のいずれか一つ以上において、前記組成物は、皮膚シワ又は皮膚陥没部位の改善フィラー用である、皮膚組織の再生又は皮膚組織のボリューム増進注射用組成物を提供することができる。
【００７３】
前記実施形態は本発明の説明のために開示されたものであり、前記説明は本発明の範囲を制限するものではない。したがって、当該技術分野の通常の技術者であれば本発明の意味及び範囲を逸脱することなく、種々の修正、変形、及び代替が可能である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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