(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲートを含む膜を含む、リポソーム組成物であって、
前記リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分が、
【化１】
0006505235.tif 000050
によって表され、
前記リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中のリン脂質−ポリマー部分が、
【化２】
0006505235.tif 000051
によって表され、式中、
Ｒ２は、アルキレンまたはアルコキシアルキレンのうちの１つである１〜６個の炭素原子を含む連結基であり；
Ｒ３は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、またはＣ１−Ｃ６アルコキシアルキルであり、且つ、水素以外のＲ３は、０個、１個または複数の−ＯＨで置換されており；
ピリミジンＰは、−ＯＨ、−Ｏ−アルキルおよび−ＮＨ２のうちの０個、１個または複数で置換されており；
ｎは、約６０〜約１００の整数であり；
ｍは、１２、１３、１４、１５、１６、１７、または１８のうちの１つである、
リポソーム組成物。
【請求項２】
前記リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分が、
【化３】
0006505235.tif 000052
（ピリミジンＰは、−ＯＨ、−Ｏ−Ｍｅ、または−ＮＨ２のうちの０個、１個または複数で置換されている）
によって表される、請求項１に記載のリポソーム組成物。
【請求項３】
前記リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分が、
【化４】
0006505235.tif 000053
のうちの１つによって表される、請求項１に記載のリポソーム組成物。
【請求項４】
前記膜によってカプセル化されたものまたは前記膜に結合したもののうちの少なくとも１つである非放射性磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）コントラスト増強剤をさらに含む、請求項１に記載のリポソーム組成物。
【請求項５】
前記膜が、第１のリン脂質および第２のリン脂質をさらに含み、前記第２のリン脂質が、親水性ポリマーで誘導体化されている、請求項１に記載のリポソーム組成物。
【請求項６】
前記膜が、
ＤＰＰＣ；
コレステロール；
ジエチレントリアミン五酢酸）−ビス（ステアリルアミド）のガドリニウム塩；
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］
をさらに含み、
前記リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲートが、以下の構造式：
【化５】
0006505235.tif 000054
（ｎは、約７０〜約９０の整数であり；ｍは、１４または１６である）のうちの１つによって表される、
請求項１に記載のリポソーム組成物。
【請求項７】
患者中のアミロイド沈着物の画像化における使用のためのリポソーム組成物であって、
前記リポソーム組成物が、リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート（前記リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分は、
【化６】
0006505235.tif 000055
によって表され、前記リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中のリン脂質−ポリマー部分は、
【化７】
0006505235.tif 000056
によって表され、式中、Ｒ２は、アルキレンまたはアルコキシアルキレンのうちの１つである１〜６個の炭素原子を含む連結基であり；Ｒ３は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、またはＣ１−Ｃ６アルコキシアルキルであり、且つ、水素以外のＲ３は、０個、１個または複数の−ＯＨで置換されており；ピリミジンＰは、−ＯＨ、−Ｏ−アルキルおよび−ＮＨ２のうちの０個、１個または複数で置換されており；ｎは、約６０〜約１００の整数であり；ｍは、１２、１３、１４、１５、１６、１７、または１８のうちの１つである）を含む膜と、前記膜によってカプセル化されたものまたは前記膜に結合したもののうちの少なくとも１つである非放射性磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）コントラスト増強剤と、を含み、
前記使用が、
検出可能な量の前記リポソーム組成物を前記患者中に導入するステップ；
前記リポソーム組成物が１個以上のアミロイド沈着物と結合するのに十分な時間を与えるステップ；および
１個以上のアミロイド沈着物と結合したリポソーム組成物を検出するステップ、
を含む、
リポソーム組成物。
【請求項８】
前記検出するステップが、磁気共鳴イメージングを用いて検出することを含む、請求項７に記載のリポソーム組成物。
【請求項９】
前記非放射性磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）コントラスト増強剤が、前記膜によってカプセル化されており、且つ、前記膜に結合している、請求項７に記載のリポソーム組成物。
【請求項１０】
前記リポソーム組成物が、約１００，０００、１２５，０００、１５０，０００、１６５，０００、１８０，０００、１９０，０００、および２００，０００のうちの少なくとも約１つ以上のｍＭ−１ｓ−１の粒子あたりの緩和により特徴付けられる、請求項９に記載のリポソーム組成物。
【請求項１１】
前記膜が、
ＤＰＰＣ；
コレステロール；
ジエチレントリアミン五酢酸）−ビス（ステアリルアミド）のガドリニウム塩；
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］
をさらに含み、
前記リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲートが、以下の構造式：
【化８】
0006505235.tif 000057
（ｎは、約７０〜約９０の整数であり；ｍは、１４または１６である）のうちの１つによって表される、
請求項７に記載のリポソーム組成物。
【請求項１２】
前記使用が、前記１個以上のアミロイド沈着物と結合したリポソーム組成物の検出に応じて前記患者をアルツハイマー病と診断することをさらに含む、請求項７に記載のリポソーム組成物。
【請求項１３】
前記使用が、
前記１個以上のアミロイド沈着物と結合したリポソーム組成物の検出に応じて、アルツハイマー病を潜在的に有するとして前記患者を特定すること；
タウ神経原線維濃縮体の分析に前記患者を供すること；および
前記１個以上のアミロイド沈着物と結合したリポソーム組成物の検出と共にタウ神経原線維濃縮体の存在を決定したら、前記患者をアルツハイマー病と診断すること、
をさらに含む、請求項７に記載のリポソーム組成物。
【請求項１４】
患者中のアミロイド沈着物を画像化するためのキットであって、
リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート（前記リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分は、
【化９】
0006505235.tif 000058
によって表され、前記リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中のリン脂質−ポリマー部分は、
【化１０】
0006505235.tif 000059
によって表され、式中、Ｒ２は、アルキレンまたはアルコキシアルキレンのうちの１つである１〜６個の炭素原子を含む連結基であり；Ｒ３は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、またはＣ１−Ｃ６アルコキシアルキルであり、且つ、水素以外のＲ３は、０個、１個または複数の−ＯＨで置換されており；ｎは、約６０〜約１００の整数であり；ｍは、１２、１３、１４、１５、１６、１７、または１８のうちの１つである）を含む膜と、前記膜によってカプセル化されたものまたは前記膜に結合したもののうちの少なくとも１つである非放射性磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）コントラスト増強剤と、を含むリポソーム組成物；ならびに
説明書であって、
検出可能な量の前記リポソーム組成物を前記患者中へ導入し；
前記リポソーム組成物が１個以上のアミロイド沈着物と結合するのに十分な時間を与え；
１個以上のアミロイド沈着物と結合したリポソーム組成物を検出する
ようにユーザーに指示する説明書、
を含むキット。
【請求項１５】
前記説明書が、１個以上のアミロイド沈着物と結合したリポソーム組成物の検出に応じて前記患者をアルツハイマー病と診断するように前記ユーザーにさらに指示する、請求項１４に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１４年１０月８日出願の米国仮特許出願第６２／０６１，５１４号、および２０１５年２月２日出願の同第６２／１１１，０５７号の優先権を主張するものであり、その各々は参照により全体が本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病（「ＡＤ」）は、記憶喪失および他の認知障害を特徴とする神経変性疾患である。ＡＤは、認知症の最も一般的な形態であり、６５歳を上回る８人に１人および８５歳を上回る２人に１人に影響を与え、米国における死亡の第６番目の主要原因である。５５０万人を上回るアメリカ人がＡＤを患い、年間で推定２０００億米国ドルの費用がかかる。２０５０年までには、ＡＤは、１．１兆米国ドルの年間費用で（２０１１年のドルで）２０００万人を上回るアメリカ人に影響を与えると推定される。世界中で、２０１１年の推定数字は、６００億ドル（米国ドル）を上回る関連費用で、３７００万を上回る患者数であった。
【０００３】
ＡＤの有効な診断試験が当技術分野で必要とされている。現時点では、ＡＤは、典型的には、死後の組織病理学的分析によってのみ確証的に診断される。生存対象における診断は、主に、認知障害を検出するための精神科の試験に依存している。しかしながら、ＡＤの主要な神経病理学的特徴である細胞外アミロイド−β（「Αβ」）斑沈着物および細胞内神経原線維濃縮体は、臨床症状が識別できるはるか前から現れる。Αβ沈着物はまた、出血性脳卒中の主要な危険因子である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
アミロイド斑に特異的に結合する２つの陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）イメージング剤が、最近、ＦＤＡにより承認され、アミロイド斑の検出に使用することができる。しかしながら、それらの空間分解能は、ＰＥＴモダリティの分解能によって制限され、画像で利用可能な任意の解剖学特異的情報を５〜１０ｍｍのオーダーに制限している。ＰＥＴイメージングはまた、放射性同位体の使用を必要とし、著しい放射線のリスクを有する：典型的な頭部ＣＴが約２ｍＳｖであり得るので、アミロイドスキャンは、数回のＣＴスキャンとほぼ同等の約７ｍＳｖの放射線量を患者に暴露すると推定される。ＰＥＴ用放射性薬剤の利用可能性はまた、それらの短い半減期による課題が残ったままである。タウ濃縮体などの同族因子の同時検出は、診断検査の特異性を改善する可能性があり、現在、タウを検出するためのいくつかのＰＥＴイメージング剤が開発されている。現在のＰＥＴイメージング剤が有する分布の課題と放射線量の問題の両方に対処し、タウイメージング剤と組み合わせて、おそらくＡＤの診断を構成する、非放射性アミロイドイメージング剤が大きな関心である。
【０００５】
非放射性アミロイド標的ＭＲＩ剤の開発におけるいくつかの以前の努力は、主に、プロトンＴ２（酸化鉄ナノ粒子のＴ２緩和を使用する）、または１９Ｆイメージング（内因性Ｆシグナルの不在により達成可能な高いシグナル対ノイズ比を用いる）のいずれかに焦点を当てていた。高いＴ２緩和は全体的なシグナルの抑制をもたらし、本来の低強度領域からの検出および差別化を困難にし、ならびに画像の定量化を不確かにする。さらに、内因性のＭＲ可視フッ素の不在はまた、１９Ｆ画像において何らの解剖学的ランドマークが存在しないことを意味する。
【０００６】
他の以前の研究は、チオフラビンアナログであるメトキシ−ＸＯ４によってアミロイド斑を標的とするリポソームが、血液脳関門（ＢＢＢ）を貫通し、ＡＤのＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデルにおいて大部分のアミロイド斑にうまく結合することを実証した。しかしながら、メトキシ−ＸＯ４を含む既存のアミロイド結合リガンドは疎水性である。リポソーム製剤において、それらは脂質二重層に干渉する。ＭＲＩ  Ｔ１コントラスト用のＧｄキレートを添加した場合には、メトキシ−ＸＯ４標的化リポソームは、Ｇｄキレートの高い内部濃度によって作られた浸透勾配に不安定であり、不安定化された。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本出願は、アミロイド沈着物の検出が挑戦的な努力であり得ることを認識する。
【発明の効果】
【０００８】
一実施形態において、リポソーム組成物が提供される。リポソーム組成物は、膜を含み得る。膜は、リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲートを含み得る。リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分は、構造式Ｉ：−Ｘ−Ａｒ−Ｒ１−Ｈｅｔ（Ｉ）によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり得る。構造式Ｉによって表されるリン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分において、Ｘは、−Ｒ２−Ｏ−または−Ｒ２−Ｎ（Ｒ３）−であり得る。Ｒ１は、Ｃ２−Ｃ６アルキルまたはアルケニルであり得る。Ｒ２は、１〜６個の炭素原子を含む連結基であり得る。Ｒ２は、アルキレンまたはアルコキシアルキレンのうちの１つを含み得る。Ｒ３は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、またはＣ１−Ｃ６アルコキシアルキルであり得る。Ａｒは、単環式基または多環式基であり得る。Ａｒは、少なくとも１つの芳香環またはヘテロ芳香環を含み得る。Ｈｅｔは、単環式基または多環式基であり得る。Ｈｅｔは、少なくとも１つのヘテロ芳香環を含み得る。構造式Ｉによって表されるリン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分は、さらに置換され得る。例えば、Ｒ２は、ヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ６アルキル、およびＣ１−Ｃ６ヒドロキシアルキルのうちのゼロ個、または１個以上で置換され得る。水素以外のＡｒ、Ｈｅｔ、Ｒ１、およびＲ３は、独立して、ハロゲン；−ＯＨ；−ＯＨもしくはハロゲンで任意に置換されたアルキル、−Ｏ−アルキル、アリール、−Ｏ−アリールまたは−（Ｏ−アルキレン）１−６；−ＮＨ２；−ＮＨ−アルキル；−Ｎ−ジアルキル；カルボキシル；スルホニル；カルバモイル；およびグリコシルのうちのゼロ個、または１個以上で置換され得る。
【０００９】
別の実施形態において、対象中のアミロイド沈着物を画像化する方法が提供される。本方法は、検出可能な量のリポソーム組成物を対象中へ導入することを含み得る。本方法は、リポソーム組成物が１個以上のアミロイド沈着物と結合するのに十分な時間を与えることを含み得る。本方法は、１個以上のアミロイド沈着物と結合したリポソーム組成物を検出することを含み得る。本方法のリポソーム組成物は、膜を含み得る。非放射性磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）コントラスト増強剤は、膜によってカプセル化されたものか膜に結合したもののうちの少なくとも１つであり得る。膜は、リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲートを含み得る。リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分は、構造式Ｉ：−Ｘ−Ａｒ−Ｒ１−Ｈｅｔ（Ｉ）によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり得る。構造式Ｉによって表されるリン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分において、Ｘは、−Ｒ２−Ｏ−または−Ｒ２−Ｎ（Ｒ３）−であり得る。Ｒ１は、Ｃ２−Ｃ６アルキルまたはアルケニルであり得る。Ｒ２は、１〜６個の炭素原子を含む連結基であり得る。Ｒ２は、アルキレンまたはアルコキシアルキレンのうちの１つを含み得る。Ｒ３は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、またはＣ１−Ｃ６アルコキシアルキルであり得る。Ａｒは、単環式基または多環式基であり得る。Ａｒは、少なくとも１つの芳香環またはヘテロ芳香環を含み得る。Ｈｅｔは、単環式基または多環式基であり得る。Ｈｅｔは、少なくとも１つのヘテロ芳香環を含み得る。構造式Ｉによって表されるリン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分は、さらに置換され得る。例えば、Ｒ２は、ヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ６アルキル、およびＣ１−Ｃ６ヒドロキシアルキルのうちのゼロ個、または１個以上で置換され得る。水素以外のＡｒ、Ｈｅｔ、Ｒ１、およびＲ３は、独立して、ハロゲン；−ＯＨ；−ＯＨもしくはハロゲンで任意に置換されたアルキル、−Ｏ−アルキル、アリール、−Ｏ−アリールまたは−（Ｏ−アルキレン）１−６；−ＮＨ２；−ＮＨ−アルキル；−Ｎ−ジアルキル；カルボキシル；スルホニル；カルバモイル；およびグリコシルのうちのゼロ個、または１個以上で置換され得る。
【００１０】
一実施形態において、リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲートが提供される。リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分は、構造式Ｉ：−Ｘ−Ａｒ−Ｒ１−Ｈｅｔ（Ｉ）によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり得る。構造式Ｉによって表されるリン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分において、Ｘは、−Ｒ２−Ｏ−または−Ｒ２−Ｎ（Ｒ３）−であり得る。Ｒ１は、Ｃ２−Ｃ６アルキルまたはアルケニルであり得る。Ｒ２は、１〜６個の炭素原子を含む連結基であり得る。Ｒ２は、アルキレンまたはアルコキシアルキレンのうちの１つを含み得る。Ｒ３は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、またはＣ１−Ｃ６アルコキシアルキルであり得る。Ａｒは、単環式基または多環式基であり得る。Ａｒは、少なくとも１つの芳香環またはヘテロ芳香環を含み得る。Ｈｅｔは、単環式基または多環式基であり得る。Ｈｅｔは、少なくとも１つのヘテロ芳香環を含み得る。構造式Ｉによって表されるリン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分は、さらに置換され得る。例えば、Ｒ２は、ヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ６アルキル、およびＣ１−Ｃ６ヒドロキシアルキルのうちのゼロ個、または１個以上で置換され得る。水素以外のＡｒ、Ｈｅｔ、Ｒ１、およびＲ３は、独立して、ハロゲン；−ＯＨ；−ＯＨもしくはハロゲンで任意に置換されたアルキル、−Ｏ−アルキル、アリール、−Ｏ−アリールまたは−（Ｏ−アルキレン）１−６；−ＮＨ２；−ＮＨ−アルキル；−Ｎ−ジアルキル；カルボキシル；スルホニル；カルバモイル；およびグリコシルのうちのゼロ個、または１個以上で置換され得る。
【００１１】
別の実施形態において、構造式ＩＩ：Ｒ５−Ａｒ−Ｒ１−Ｈｅｔ（ＩＩ）によって表される化合物またはその薬学的に許容される塩が提供される。式ＩＩによって表される化合物において、Ｒ１は、Ｃ２−Ｃ６アルキルまたはアルケニルであり得る。Ｒ５は、水素、ヒドロキシル、Ｈ−Ｒ２−、ＨＯ−Ｒ２−、Ｈ−Ｒ２−Ｎ（Ｒ３）−、またはＨＯ−Ｒ２−Ｎ（Ｒ３）−であり得る。Ｒ２は、１〜６個の炭素原子を含む連結基であり得る。Ｒ２は、アルキレンまたはアルコキシアルキレンのうちの１つを含み得る。Ｒ３は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、またはＣ１−Ｃ６アルコキシアルキルであり得る。Ａｒは、単環式基または多環式基であり得る。Ａｒは、少なくとも１つの芳香環またはヘテロ芳香環を含み得る。Ｈｅｔは、単環式基または多環式基であり得る。Ｈｅｔは、少なくとも１つのヘテロ芳香環を含み得る。構造式ＩＩによって表される化合物は、さらに置換され得る。例えば、Ｒ２は、ヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ６アルキル、およびＣ１−Ｃ６ヒドロキシアルキルのうちのゼロ個、または１個以上で置換され得る。水素以外のＡｒ、Ｈｅｔ、Ｒ１、およびＲ３は、独立して、ハロゲン；−ＯＨ；−ＯＨもしくはハロゲンで任意に置換されたアルキル、−Ｏ−アルキル、アリール、−Ｏ−アリールまたは−（Ｏ−アルキレン）１−６；−ＮＨ２；−ＮＨ−アルキル；−Ｎ−ジアルキル；カルボキシル；スルホニル；カルバモイル；およびグリコシルのうちのゼロ個、または１個以上で置換され得る。
【００１２】
別の実施形態において、対象中のアミロイド沈着物を画像化するためのキットが提供される。キットは、説明書およびリポソーム組成物を含み得る。説明書は、検出可能な量のリポソーム組成物を対象中へ導入するようにユーザーに指示し得る。説明書は、リポソーム組成物が１個以上のアミロイド沈着物と結合するのに十分な時間を与えるようにユーザーに指示し得る。説明書は、１個以上のアミロイド沈着物と結合したリポソーム組成物を検出するようにユーザーに指示し得る。キットのリポソーム組成物は、膜を含み得る。非放射性磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）コントラスト増強剤は、膜によってカプセル化されたものか膜に結合したもののうちの少なくとも１つであり得る。膜は、リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲートを含み得る。リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分は、構造式Ｉ：−Ｘ−Ａｒ−Ｒ１−Ｈｅｔ（Ｉ）によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり得る。構造式Ｉによって表されるリン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分において、Ｘは、−Ｒ２−Ｏ−または−Ｒ２−Ｎ（Ｒ３）−であり得る。Ｒ１は、Ｃ２−Ｃ６アルキルまたはアルケニルであり得る。Ｒ２は、１〜６個の炭素原子を含む連結基であり得る。Ｒ２は、アルキレンまたはアルコキシアルキレンのうちの１つを含み得る。Ｒ３は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、またはＣ１−Ｃ６アルコキシアルキルであり得る。Ａｒは、単環式基または多環式基であり得る。Ａｒは、少なくとも１つの芳香環またはヘテロ芳香環を含み得る。Ｈｅｔは、単環式基または多環式基であり得る。Ｈｅｔは、少なくとも１つのヘテロ芳香環を含み得る。構造式Ｉによって表されるリン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分は、さらに置換され得る。例えば、Ｒ２は、ヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ６アルキル、およびＣ１−Ｃ６ヒドロキシアルキルのうちのゼロ個、または１個以上で置換され得る。水素以外のＡｒ、Ｈｅｔ、Ｒ１、およびＲ３は、独立して、ハロゲン；−ＯＨ；−ＯＨもしくはハロゲンで任意に置換されたアルキル、−Ｏ−アルキル、アリール、−Ｏ−アリールまたは−（Ｏ−アルキレン）１−６；−ＮＨ２；−ＮＨ−アルキル；−Ｎ−ジアルキル；カルボキシル；スルホニル；カルバモイル；およびグリコシルのうちのゼロ個、または１個以上で置換され得る。
【００１３】
以下に提供される詳細な説明と共に、請求される本発明の例示的な実施形態を説明する化学式、化学構造、および実験データが添付図面に与えられる。
【００１４】
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１Ａ】様々な化合物のＣＬｏｇＰ値および構造を示す表である。
【図１Ｂ】様々な化合物のＣＬｏｇＰ値および構造を示す表である。
【図１Ｃ】様々な化合物のＣＬｏｇＰ値および構造を示す表である。
【図２】原線維への化合物ｉｉの結合を示し、相対蛍光単位（ＲＦＵ）対μΜの濃度としてプロットした結合プロファイルである。
【図３】原線維への化合物ｉｉｉの結合を示し、相対蛍光単位（ＲＦＵ）対μΜの濃度としてプロットした結合プロファイルである。
【図４】原線維へのＭｅＸＯ４（以前の化合物）の結合を示し、相対蛍光単位（ＲＦＵ）対μΜの濃度としてプロットした結合プロファイルである。
【図５Ａ】化合物ｉｉおよびｉｉｉがアミロイド線維へ結合することを示し、相対蛍光単位（ＲＦＵ）対μΜの濃度としてプロットしたグラフである。
【図５Ｂ】それぞれがクリサミン−Ｇと競合して懸濁液中の原線維に安定して結合する、化合物ｉｉおよびｉｉｉの結合を示し、結合％対μΜのクリサミン−Ｇ濃度としてプロットした競合結合プロファイルである。
【図５Ｃ】化合物ｉｉｉが、ＡＤ剖検例の前頭皮質からのヒト脳組織の切片中のアミロイド斑を特異的に染色することを示す蛍光顕微鏡画像である。
【図５Ｄ】化合物ｉｉｉが、高齢犬の脳組織における脳アミロイド血管障害を標識することを示す蛍光顕微鏡画像である。
【図６】以前の化合物ＭｅＸＯ４およびリポソームＭｅＸＯ４のそれぞれがクリサミン−Ｇと競合して原線維に結合することを示し、結合％対μΜでのクリサミン−Ｇの濃度としてプロットした競合結合プロファイルである。
【図７Ａ】２０μΜの原線維に結合したＤＳＰＥ−ＰＥＧ−化合物ｉｉｉのコンジュゲートの量を示し、リポソーム組成物中のＤＳＰＥ−ＰＥＧ−化合物ｉｉｉの濃度に対してプロットした、化合物標識リポソーム結合プロファイルのグラフである。
【図７Ｂ】Ｋｄ＝５．０μΜでの化合物ｉｉの原線維結合データおよび原線維への化合物ｉｉの結合定数の推定のために計算された適合度を示すグラフである。
【図７Ｃ】Ｋｄ＝５．０μΜでの化合物ｉｉｉの原線維結合データおよび原線維への化合物ｉｉｉの結合定数の推定のために計算された適合度を示すグラフである。
【図７Ｄ】Ｋｄ＝３．３μΜでのリポソーム含有ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−化合物ｉｉｉの原線維結合データおよび原線維へのリポソーム含有ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−化合物ｉｉｉの結合定数の推定のために計算された適合度を示すグラフである。
【図８】ＭｅＸＯ４標的リガンド、化合物ｉｉｉで調製したリポソーム、およびリガンドを含まないＰＥＧ化リポソームの平均直径ならびに多分散指数を示す表である。
【図９Ａ】二重層中にＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＸＯ４を含むリポソームの陰性染色ＴＥＭ画像を示す。
【図９Ｂ】非標的化リポソーム（ＭｅＸＯ４を含まない同一の二重層構造）を含むリポソームの陰性染色ＴＥＭ画像を示す。
【図１０Ａ】遊離Ｇｄキレートと比較した低磁場強度での例示的なリポソームの高いＧｄモル緩和を示す棒グラフである。
【図１０Ｂ】得られた粒子が、粒子単位で非常に高い緩和を有していることを示すグラフである。
【図１１Ａ】１５ヶ月齢のＴｅｔＯ／ＡＰＰｓｗｅ−ｉｎｄマウスについての結果を示す。
【図１１Ｂ】図１１Ａのマウスのプレインジェクションスキャンの結果を示す。
【図１１Ｃ】９ヶ月齢のＴｇ２５７６マウス（ＡＰＰｓｗｅ）についての結果を示す。
【図１１Ｄ】図１１Ｃのマウスのプレインジェクションスキャンの結果を示す。
【図１１Ｅ】非標的（非アミロイド結合）粒子を注射したＴｇ２５７６マウスについての結果を示す。
【図１１Ｆ】アミロイド標的粒子を注射した図１１Ｅのマウスの非トランスジェニック同胞についての結果を示す。
【図１２】４Ｇ８抗体を用いた免疫組織化学によるアミロイド病理スコア、使用したイメージング剤（化合物ｉｉｉ標的化または対照の非標的化）、マウス脳内の個々のナノ粒子の存在の測定を示す表である。
【図１３Ａ】系統ＴｅｔＯ／ＡＰＰ  ５７５６、遺伝子型ＡＰＰ＋のマウス、および化合物ｉｉｉ標的粒子についての、それぞれコントラスト後３〜４日の画像ならびにコントラスト前の画像である。
【図１３Ｂ】系統ＴｅｔＯ／ＡＰＰ  ５７５６、遺伝子型ＡＰＰ＋のマウス、および化合物ｉｉｉ標的粒子についての、それぞれコントラスト後３〜４日の画像ならびにコントラスト前の画像である。
【図１３Ｃ】系統ＴｅｔＯ／ＡＰＰ  ７１１０、遺伝子型ＡＰＰ−のマウス、および化合物ｉｉｉ標的粒子についての、それぞれコントラスト後３〜４日の画像ならびにコントラスト前の画像である。
【図１３Ｄ】系統ＴｅｔＯ／ＡＰＰ  ７１１０、遺伝子型ＡＰＰ−のマウス、および化合物ｉｉｉ標的粒子についての、それぞれコントラスト後３〜４日の画像ならびにコントラスト前の画像である。
【図１３Ｅ】系統ＴｅｔＯ／ＡＰＰ  ５７８５、遺伝子型ＡＰＰ＋のマウス、および化合物ｉｉｉ標的粒子についての、それぞれコントラスト後３〜４日の画像ならびにコントラスト前の画像である。
【図１３Ｆ】系統ＴｅｔＯ／ＡＰＰ  ５７８５、遺伝子型ＡＰＰ＋のマウス、および化合物ｉｉｉ標的粒子についての、それぞれコントラスト後３〜４日の画像ならびにコントラスト前の画像である。
【図１３Ｇ】系統ＴｅｔＯ／ＡＰＰ  ５６３３、遺伝子型ＡＰＰ＋のマウス、および化合物ｉｉｉ標的粒子についての、それぞれコントラスト後３〜４日の画像ならびにコントラスト前の画像である。
【図１３Ｈ】系統ＴｅｔＯ／ＡＰＰ  ５６３３、遺伝子型ＡＰＰ＋のマウス、および化合物ｉｉｉ標的粒子についての、それぞれコントラスト後３〜４日の画像ならびにコントラスト前の画像である。
【図１３Ｉ】系統ＴｅｔＯ／ＡＰＰ  ６９４９、遺伝子型ＡＰＰ＋のマウス、および化合物ｉｉｉ標的粒子についての、それぞれコントラスト後３〜４日の画像ならびにコントラスト前の画像である。
【図１３Ｊ】系統ＴｅｔＯ／ＡＰＰ  ６９４９、遺伝子型ＡＰＰ＋のマウス、および化合物ｉｉｉ標的粒子についての、それぞれコントラスト後３〜４日の画像ならびにコントラスト前の画像である。
【図１３Ｋ】系統ＴｅｔＯ／ＡＰＰ  ＸＸ２１、遺伝子型ＡＰＰ＋のマウス、および化合物ｉｉｉ標的粒子についての、それぞれコントラスト後３〜４日の画像ならびにコントラスト前の画像である。
【図１３Ｌ】系統ＴｅｔＯ／ＡＰＰ  ＸＸ２１、遺伝子型ＡＰＰ＋のマウス、および化合物ｉｉｉ標的粒子についての、それぞれコントラスト後３〜４日の画像ならびにコントラスト前の画像である。
【図１３Ｍ】系統ＴｅｔＯ／ＡＰＰ  ＸＸＸＸ、遺伝子型ＡＰＰ−のマウス、および化合物ｉｉｉ標的粒子についての、それぞれコントラスト後３〜４日の画像ならびにコントラスト前の画像である。
【図１３Ｎ】系統ＴｅｔＯ／ＡＰＰ  ＸＸＸＸ、遺伝子型ＡＰＰ−のマウス、および化合物ｉｉｉ標的粒子についての、それぞれコントラスト後３〜４日の画像ならびにコントラスト前の画像である。
【図１３Ｏ】系統Ｔｇ２５７６（対照１）、遺伝子型ＡＰＰ−のマウス、および化合物ｉｉｉ標的粒子についての、それぞれコントラスト後３〜４日の画像ならびにコントラスト前の画像である。
【図１３Ｐ】系統Ｔｇ２５７６（対照１）、遺伝子型ＡＰＰ−のマウス、および化合物ｉｉｉ標的粒子についての、それぞれコントラスト後３〜４日の画像ならびにコントラスト前の画像である。
【図１３Ｑ】系統Ｔｇ２５７６（対照２）、遺伝子型ＡＰＰ−のマウス、および化合物ｉｉｉ標的粒子についての、それぞれコントラスト後３〜４日の画像ならびにコントラスト前の画像である。
【図１３Ｒ】系統Ｔｇ２５７６（対照２）、遺伝子型ＡＰＰ−のマウス、および化合物ｉｉｉ標的粒子についての、それぞれコントラスト後３〜４日の画像ならびにコントラスト前の画像である。
【図１３Ｓ】系統Ｔｇ２５７６  ＴＧ１、遺伝子型ＡＰＰ＋のマウス、および化合物ｉｉｉ標的粒子についての、それぞれコントラスト後３〜４日の画像ならびにコントラスト前の画像である。
【図１３Ｔ】系統Ｔｇ２５７６  ＴＧ１、遺伝子型ＡＰＰ＋のマウス、および化合物ｉｉｉ標的粒子についての、それぞれコントラスト後３〜４日の画像ならびにコントラスト前の画像である。
【図１３Ｕ】系統Ｔｇ２５７６  ＴＧ２、遺伝子型ＡＰＰ＋のマウス、および化合物ｉｉｉ標的粒子についての、それぞれコントラスト後３〜４日の画像ならびにコントラスト前の画像である。
【図１３Ｖ】系統Ｔｇ２５７６  ＴＧ２、遺伝子型ＡＰＰ＋のマウス、および化合物ｉｉｉ標的粒子についての、それぞれコントラスト後３〜４日の画像ならびにコントラスト前の画像である。
【図１３Ｗ】系統Ｔｇ２５７６  ＴＧ３、遺伝子型ＡＰＰ＋のマウス、および非標的粒子についての、それぞれコントラスト後３〜４日の画像ならびにコントラスト前の画像である。
【図１３Ｘ】系統Ｔｇ２５７６  ＴＧ３、遺伝子型ＡＰＰ＋のマウス、および非標的粒子についての、それぞれコントラスト後３〜４日の画像ならびにコントラスト前の画像である。
【図１３Ｙ】系統Ｔｇ２５７６  ＴＧ４、遺伝子型ＡＰＰ＋のマウス、および非標的粒子についての、それぞれコントラスト後３〜４日の画像ならびにコントラスト前の画像である。
【図１３Ｚ】系統Ｔｇ２５７６  ＴＧ４、遺伝子型ＡＰＰ＋のマウス、および非標的粒子についての、それぞれコントラスト後３〜４日の画像ならびにコントラスト前の画像である。
【図１４Ａ】非トランスジェニック対照（図１４Ｂ参照）と比較した場合ＡＰＰ＋脳においてより高い局在性を示す、トランスジェニックマウスの皮質および海馬において増強したＩＣＧシグナルを有するＴｇ２５７６マウスの脳切片の共焦点イメージングを示す。
【図１４Ｂ】図１４Ａと同じ治療および測定条件下での非トランスジェニック対照の脳切片の共焦点イメージングを示す。
【図１４Ｃ】ＴｅｔＯ／ＡＰＰ＋マウスの全脳が、それらのＡＰＰ−同胞対照（図１４Ｄ参照）よりも高い近赤外蛍光を示したことを示す画像である。
【図１４Ｄ】ＴｅｔＯ／ＡＰＰ＋マウスの全脳が、それらのＡＰＰ−同胞（図１４Ｃ参照）よりも高い近赤外蛍光を示したことを示す画像である。
【図１４Ｅ】アミロイド沈着物の特徴的な点状構造を示す図１４Ａの高倍率バージョンである。
【図１４Ｆ】図１４Ｂの高倍率バージョンである。
【図１４Ｇ１】（緑）３つのアミロイド斑のクラスターに結合した蛍光標識４Ｇ８抗体を示す。
【図１４Ｇ２】（赤）３つのアミロイド斑のクラスターに結合したＩＣＧを示す。
【図１４Ｇ３】（青）３つのアミロイド斑のクラスターに結合した化合物ｉｉｉを示す。
【図１４Ｇ４】図１４Ｇ１、１４Ｇ２、および１４Ｇ３の組み合わせを示す。
【図１４Ｈ１】（緑色）単一斑に結合した蛍光標識４Ｇ８抗体を示す。
【図１４Ｈ２】（赤）単一斑に結合したＩＣＧを示す。
【図１４Ｈ３】（青）単一斑に結合した化合物ｉｉｉを示す。
【図１４Ｈ４】図１４Ｇ１、１４Ｇ２、および１４Ｇ３の組み合わせを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
様々な態様において、リポソーム組成物が提供される。リポソーム組成物は、膜を含み得る。膜は、リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲートを含み得る。リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分は、構造式Ｉ：−Ｘ−Ａｒ−Ｒ１−Ｈｅｔ（Ｉ）によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり得る。構造式Ｉによって表されるリン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分において、Ｘは、−Ｒ２−Ｏ−または−Ｒ２−Ｎ（Ｒ３）−であり得る。Ｒ１は、Ｃ２−Ｃ６アルキルまたはアルケニルであり得る。Ｒ２は、１〜６個の炭素原子を含む連結基であり得る。Ｒ２は、アルキレンまたはアルコキシアルキレンのうちの１つを含み得る。Ｒ３は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、またはＣ１−Ｃ６アルコキシアルキルであり得る。Ａｒは、単環式基または多環式基であり得る。Ａｒは、少なくとも１つの芳香環またはヘテロ芳香環を含み得る。Ｈｅｔは、単環式基または多環式基であり得る。Ｈｅｔは、少なくとも１つのヘテロ芳香環を含み得る。構造式Ｉによって表されるリン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分は、さらに置換され得る。例えば、Ｒ２は、ヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ６アルキル、およびＣ１−Ｃ６ヒドロキシアルキルのうちのゼロ個、または１個以上で置換され得る。水素以外のＡｒ、Ｈｅｔ、Ｒ１、およびＲ３は、独立して、ハロゲン；−ＯＨ；−ＯＨもしくはハロゲンで任意に置換されたアルキル、−Ｏ−アルキル、アリール、−Ｏ−アリールまたは−（Ｏ−アルキレン）１−６；−ＮＨ２；−ＮＨ−アルキル；−Ｎ−ジアルキル；カルボキシル；スルホニル；カルバモイル；およびグリコシルのうちのゼロ個、または１個以上で置換され得る。
【００１７】
いくつかの実施形態において、リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲートが提供される。リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分は、構造式Ｉ：−Ｘ−Ａｒ−Ｒ１−Ｈｅｔ（Ｉ）によって表され得るか、またはその薬学的に許容される塩であり得、式中、変数、例えば、Ｘ、Ａｒ、Ｒ１、およびＨｅｔなどは、本明細書に記載のリポソーム組成物の構造式Ｉまたは化合物の構造式ＩＩでのように同じ部分を表し得る。
【００１８】
いくつかの実施形態において、構造式ＩＩ：Ｒ５−Ａｒ−Ｒ１−Ｈｅｔ（ＩＩ）によって表される化合物またはその薬学的に許容される塩が提供され、式中、変数、例えば、Ａｒ、Ｒ１、Ｈｅｔ、およびＲ５などは、本明細書に記載の構造式Ｉのリポソーム組成物または構造式Ｉのリン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲートでのように同じ部分を表し得る。
【００１９】
構造式ＩＩにおいて、Ｒ５は、水素、ヒドロキシル、Ｈ−Ｒ２−、ＨＯ−Ｒ２−、Ｈ−Ｒ２−Ｎ（Ｒ３）−、またはＨＯ−Ｒ２−Ｎ（Ｒ３）−であり得る。いくつかの実施形態において、Ｒ５は、ヒドロキシル、Ｈ−Ｒ２−、ＨＯ−Ｒ２−、Ｈ−Ｒ２−Ｎ（Ｒ３）−、またはＨＯ−Ｒ２−Ｎ（Ｒ３）−であり得る。Ｒ５は、Ｈ−Ｒ２−、ＨＯ−Ｒ２−、Ｈ−Ｒ２−Ｎ（Ｒ３）−、またはＨＯ−Ｒ２−Ｎ（Ｒ３）−であり得る。Ｒ５は、Ｈ−Ｒ２−またはＨ−Ｒ２−Ｎ（Ｒ３）−であり得る。Ｒ５は、ＨＯ−Ｒ２−またはＨＯ−Ｒ２−Ｎ（Ｒ３）−であり得る。Ｒ５は、Ｈ−Ｒ２−またはＨＯ−Ｒ２−であり得る。
【００２０】
構造式ＩおよびＩＩの様々な実施形態において、Ｒ１は、Ｃ２アルキルまたはアルケニルであり得る。例えば、Ｒ１は、Ｃ２−Ｃ６アルケニルであり得る。Ｒ１は、トランスまたはシス配置、例えば、トランスのＣ２−Ｃ６アルケニルであり得る。Ｒ１は、トランス１，２−エテニルであり得る。
【００２１】
構造式ＩおよびＩＩのいくつかの実施形態において、ＡｒおよびＨｅｔが含むヘテロ芳香環の１、２、３、または４個の環原子のそれぞれは、独立して、Ｎ、Ｏ、またはＳのうちの１つであり得る。例えば、Ｈｅｔによって表されるヘテロ芳香環の２個の環原子のそれぞれは、Ｎ、Ｏ、またはＳのうちの１つであり得る。Ｈｅｔおよび／またはＡｒは、それぞれ、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、ピリダジン、チオフェン、フラン、ピロール、チアゾール、オキサゾール、ジアゾール、チアジアゾール、オキサジアゾール、およびトリアゾールからなる群から選択される少なくとも１つのヘテロ芳香環を含み得る。Ｈｅｔおよび／またはＡｒは、それぞれ、例えば、フェニル、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、ピリダジン、チオフェン、フラン、ピロール、チアゾール、オキサゾール、ジアゾール、チアジアゾール、オキサジアゾール、トリアゾール、ベンゾフラン、インドール、ベンゾチオフェン、チエノピリミジン、ベンゾオキサゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾオキサジアゾール、またはベンゾチアジアゾールのうちの１つを含み得る。例えば、Ｈｅｔは、ピリジン、ピリミジン、チエノピリミジン、またはベンゾチアゾールのうちの１つを含み得る。Ａｒは、フェニルまたはインドールのうちの１つを含み得る。
【００２２】
構造式ＩおよびＩＩのいくつかの実施形態において、ＡｒおよびＨｅｔは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、アルキル、アリール、−ＯＨ、−Ｏ−アルキル、−Ｏ−アリール、−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ−ジアルキル、カルボキシル、スルホニル、カルバモイル、およびグリコシルのうちのゼロ個、または１個以上で置換され得る。
【００２３】
構造式ＩおよびＩＩの様々な実施形態において、リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分は、−Ｏ−Ａｒ−Ｒ１−Ｈｅｔによって表され得る。化合物は、Ｈ−Ｏ−Ａｒ−Ｒ１−Ｈｅｔによって表され得る。Ｈｅｔおよび／またはＡｒは、−Ｏ−アルキルによって置換され得る。Ｈｅｔおよび／またはＡｒは、メトキシによって置換され得る。Ｈｅｔは単環式であり得る。Ｈｅｔが含むヘテロ芳香環の１または２個の環原子は、Ｎであり得る。
【００２４】
構造式Ｉのいくつかの実施形態において、リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分は、
【化１】
0006505235.tif 000002
によって表され得る。同様に、構造式ＩＩの化合物は、
【化２】
0006505235.tif 000003
によって表され得る。Ｒ５は、Ｈ、ヒドロキシル、Ｈ−Ｒ２−、ＨＯ−Ｒ２−、Ｈ−Ｒ２−Ｎ（Ｒ３）−、またはＨＯ−Ｒ２−Ｎ（Ｒ３）−であり得る。
【００２５】
いくつかの実施形態において、リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分は、
【化３】
0006505235.tif 000004
によって表され得る。同様に、構造式ＩＩの化合物は、
【化４】
0006505235.tif 000005
によって表され得る。Ｒ５は、Ｈ、ヒドロキシル、Ｈ−Ｒ２−、ＨＯ−Ｒ２−、Ｈ−Ｒ２−Ｎ（Ｒ３）−、またはＨＯ−Ｒ２−Ｎ（Ｒ３）−であり得る。いくつかの実施形態において、Ｒ５はヒドロキシルであり得る。例えば、化合物は、
【化５】
0006505235.tif 000006
であり得る。
【００２６】
いくつかの実施形態において、リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲートは、
【化６】
0006505235.tif 000007
によって表され得る。変数ｎは、約１０〜約１００、例えば、約６０〜約１００、約７０〜約９０、約７５〜約８５、および約７７などの任意の整数であり得る。変数ｍは、１２、１３、１４、１５、１６、１７、または１８のうちの１つであり得る。例えば、ｎは７７であり得、ｍは１４であり得る。別の例において、ｎは７７であり得、ｍは１６であり得る。
【００２７】
様々な実施態様において、リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分は、−Ｒ２−Ｎ（Ｒ３）−Ａｒ−Ｒ１−Ｈｅｔによって表され得る。Ａｒは、非置換であり得る。Ａｒは、単環式であり得る。Ａｒは、炭素環式芳香環を含み、例えば、Ａｒはフェニル環であり得る。Ａｒはインドールであり得る。例えば、Ａｒは、非置換の１，４−フェニレンまたは非置換の１，５−インドリルであり得る。Ｈｅｔは単環式であり得る。Ｈｅｔが含むヘテロ芳香環の１個または２個の環原子は、Ｎであり得る。Ｒ２は、ゼロ個、または１個以上の−ＯＨで置換され得る。Ｒ３は、−ＯＨおよび１個以上の−ＯＨで任意に置換されたアルキルのうちのゼロ個、または１個以上で置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり得る。例えば、Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ３アルキルまたはヒドロキシアルキルであり得る。
【００２８】
いくつかの実施形態において、リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分は、
【化７】
0006505235.tif 000008
によって表され得る。ピリミジンＰは、−ＯＨ、−Ｏ−アルキル、および−ＮＨ２のうちのゼロ個、または１個以上で置換され得る。例えば、リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分は、
【化８】
0006505235.tif 000009
によって表され得る。ピリミジンＰは、−ＯＨ、−ＯＭｅ、および−ＮＨ２のうちのゼロ個、１個、または２個によって置換され得る。同様に、構造式ＩＩの化合物は、
【化９】
0006505235.tif 000010
によって表され得る。Ｒ５’は、水素またはヒドロキシルであり得る。
【００２９】
いくつかの実施形態において、リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分は、
【化１０】
0006505235.tif 000011
のうちの１つによって表され得る。同様に、構造式ＩＩの化合物は、
【化１１】
0006505235.tif 000012
によって表され得る。Ｒ５’は、水素またはヒドロキシルであり得る。例えば、化合物は、
【化１２】
0006505235.tif 000013
のうちの１つであり得る。
【００３０】
様々な態様において、リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲートは、
【化１３】
0006505235.tif 000014
のうちの１つによって表され得る。変数ｎは、約１０〜約１００、例えば、約６０〜約１００、約７０〜約９０、約７５〜約８５、または約７７の任意の整数であり得る。変数ｍは、１２、１３、１４、１５、１６、１７、または１８のうちの１つであり得る。例えば、ｎは７７であり得、ｍは１４であり得る。別の例において、ｎは７７であり得、ｍは１６であり得る。
【００３１】
いくつかの実施形態において、Ｈｅｔは、二環式ヘテロ芳香族基を含み得る。例えば、Ｈｅｔが含む二環式ヘテロ芳香族基の１、２、３、または４個の環原子のそれぞれは、Ｎ、Ｏ、またはＳのうちの１つであり得る。例えば、リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分は、
【化１４】
0006505235.tif 000015
によって表され得る。さらに、例えば、リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分は、
【化１５】
0006505235.tif 000016
によって表され得る。同様に、構造式ＩＩの化合物は、
【化１６】
0006505235.tif 000017
によって表され得る。Ｒ５’は、水素またはヒドロキシルであり得る。
【００３２】
いくつかの実施形態において、リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分は、
【化１７】
0006505235.tif 000018
によって表され得る。同様に、構造式ＩＩの化合物は、
【化１８】
0006505235.tif 000019
によって表され得る。Ｒ５’は、水素またはヒドロキシルであり得る。例えば、化合物は、
【化１９】
0006505235.tif 000020
によって表され得る。
【００３３】
いくつかの実施形態において、リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲートは、
【化２０】
0006505235.tif 000021
によって表され得る。変数ｎは、約１０〜約１００、例えば、約６０〜約１００、約７０〜約９０、約７５〜約８５、または約７７の任意の整数であり得る。変数ｍは、１２、１３、１４、１５、１６、１７、または１８のうちの１つであり得る。例えば、ｎは７７であり得、ｍは１４であり得る。別の例において、ｎは７７であり得、ｍは１６であり得る。
【００３４】
様々な態様において、リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分は、
【化２１】
0006505235.tif 000022
によって表され得る。同様に、構造式ＩＩの化合物は、
【化２２】
0006505235.tif 000023
によって表され得る。Ｒ５’は、水素またはヒドロキシルであり得る。上記の構造において、Ｒ４はＨであり得る。Ｒ４は、−ＯＨで任意に置換されたアルキルであり得る。−ＯＲ４は、−ＯＨで任意に置換された−（Ｏ−アルキレン）１−６であり得る。
【００３５】
いくつかの実施形態において、リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分は、
【化２３】
0006505235.tif 000024
のうちの１つによって表され得る。
【００３６】
同様に、構造式ＩＩの化合物は、
【化２４】
0006505235.tif 000025
によって表され得る。Ｒ５’は、水素またはヒドロキシルであり得る。例えば、化合物は、
【化２５】
0006505235.tif 000026
のうちの１つによって表され得る。
【００３７】
いくつかの実施形態において、リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲートは、
【化２６】
0006505235.tif 000027
0006505235.tif 000028
のうちの１つによって表され得る。変数ｎは、約１０〜約１００、例えば、約６０〜約１００、約７０〜約９０、約７５〜約８５、または約７７の任意の整数であり得る。変数ｍは、１２、１３、１４、１５、１６、１７、または１８のうちの１つであり得る。例えば、ｎは７７であり得、ｍは１４であり得る。別の例において、ｎは７７であり得、ｍは１６であり得る。
【００３８】
様々な態様において、リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分は、
【化２７】
0006505235.tif 000029
によって表され得る。Ｒ４はＨであり得る。Ｒ４は、−ＯＨで任意に置換されたアルキルであり得る。−ＯＲ４は、−ＯＨで任意に置換された−（Ｏ−アルキレン）１−６であり得る。同様に、構造式ＩＩの化合物は、
【化２８】
0006505235.tif 000030
によって表され得る。Ｒ５’は、水素またはヒドロキシルであり得る。さらに、例えば、リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分は、
【化２９】
0006505235.tif 000031
によって表され得る。構造式ＩＩの化合物は、
【化３０】
0006505235.tif 000032
によって表され得る。
【００３９】
リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲートは、
【化３１】
0006505235.tif 000033
によって表され得る。変数ｎは、約６０〜約１００の整数であり得；かつｍは、１２、１３、１４、１５、１６、１７、または１８のうちの１つであり得る。
【００４０】
様々な態様において、化合物は、化合物ｉ〜ｘｉｉｉのいずれか１つを含み得る。
【００４１】
いくつかの実施形態において、リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中のリン脂質部分は、以下の構造式：
【化３２】
0006505235.tif 000034
によって表され得る。変数ｍは、１２、１３、１４、１５、１６、１７、または１８のうちの１つであり得る。例えば、ｍは、１４または１６であり得る。様々な実施形態において、リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中のリン脂質部分は、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、または１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＰＰＥ）のうちの１つであり得る。適切なリン脂質はまた、本明細書に開示されるものを含み、さらに、Ａｎｎａｐｒａｇａｄａらに発行され、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，７８５，５６８号に開示されているものを含み得る。適切なポリマー誘導体化リン脂質は、本明細書に開示されるものを含み、さらに、米国特許第７，７８５，５６８号に開示されているものを含み得る。
【００４２】
いくつかの実施形態において、リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中のポリマー部分は、親水性ポリマー、例えば、ポリ（アルキレンオキシド）を含み得る。親水性ポリ（アルキレンオキシド）は、約１０と約１００の間の繰り返し単位を含み、例えば、５００〜１０，０００ダルトンの範囲の分子量を有し得る。親水性ポリ（アルキレンオキシド）は、例えば、ポリ（エチレンオキシド）、およびポリ（プロピレンオキシド）などを含み得る。リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中のポリマー部分は、アミド基またはカルバメート基を介してリン脂質部分にコンジュゲートされ得る。リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中のポリマー部分は、アミド、カルバメート、ポリ（アルキレンオキシド）、トリアゾール、およびそれらの組み合わせなどを介して芳香族部分にコンジュゲートされ得る。例えば、リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中のポリマー部分は、以下の構造式：
【化３３】
0006505235.tif 000035
のうちの１つによって表され得る。変数ｎは、約１０〜約１００、例えば、約６０〜約１００、約７０〜約９０、約７５〜約８５、または約７７の任意の整数であり得る。
【００４３】
いくつかの実施形態において、リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中のリン脂質−ポリマー部分は、以下の構造式：
【化３４】
0006505235.tif 000036
のうちの１つによって表され得る。変数ｎは、約１０〜約１００、例えば、約６０〜約１００、約７０〜約９０、約７５〜約８５、または約７７の任意の整数であり得る。変数ｍは、１２、１３、１４、１５、１６、１７、または１８のうちの１つであり得る。例えば、ｎは７７であり得、ｍは１４であり得る。別の例において、ｎは７７であり得、ｍは１６であり得る。
【００４４】
様々な実施形態において、リポソーム組成物は、膜によってカプセル化されたものか膜に結合したもののうちの少なくとも１つであり得る非放射性磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）コントラスト増強剤をさらに含み得る。例えば、非放射性磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）コントラスト増強剤は、例えば、デュアルコントラスト剤リポソームを提供するために、膜によってカプセル化されたものと膜に結合したものの両方であり得る。リポソーム組成物は、約１００，０００、１２５，０００、１５０、０００、１６５，０００、１８０，０００、１９０，０００、および２００，０００のうちの少なくとも約１つ以上のｍＭ−１ｓ−１の粒子あたりの緩和により特徴付けられ得る。リポソーム製剤の検出には、例えば、約１Ｔ〜約３．５Ｔ、または約１．５〜約３Ｔの磁場の範囲で磁気共鳴イメージングを用いる検出を含み得る。非放射性ＭＲＩコントラスト増強剤は、ガドリニウムを含み得る。例えば、非放射性ＭＲＩコントラスト増強剤は、（ジエチレントリアミン五酢酸）−ビス（ステアリルアミド）ガドリニウム塩（Ｇｄ−ＤＴＰＡ−ＢＳＡ）を含み得る。ＧｄＤＴＰＡ、ＧｄＤＯＴＡ、ＧｄＨＰＤＯ３Ａ、ＧｄＤＴＰＡ−ＢＭＡ、およびＧｄＤＴＰＡ−ＢＳＡなどのガドリニウム常磁性キレートが、ＭＲＩコントラスト剤として知られている。Ｋｌａｖｅｎｅｓｓらに発行され、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，６７６，９２８号を参照されたい。
【００４５】
いくつかの実施形態において、膜は、１種以上の安定化賦形剤を含み得る。１種以上の安定化賦形剤は、ステロール、例えば、コレステロール、または脂肪酸を含み得る。
【００４６】
いくつかの実施形態において、膜は、第１のリン脂質を含み得る。膜は、第２のリン脂質を含み得る。第２のリン脂質は、例えば、親水性ポリ（アルキレンオキシド）を含み得る親水性ポリマーで誘導体化され得る。親水性ポリ（アルキレンオキシド）は、約１０と約１００個の間の繰り返し単位を含み得る。親水性ポリ（アルキレンオキシド）は、例えば、ポリ（エチレンオキシド）、およびポリ（プロピレンオキシド）などを含み得る。本明細書で使用される場合、「第１のリン脂質」、「第２のリン脂質」のそれぞれの、およびリン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲートの中のリン脂質部分は、独立して選択される。
【００４７】
様々な実施形態において、リポソーム組成物の膜は、ＤＰＰＣ；コレステロール；ジエチレントリアミン五酢酸）−ビス（ステアリルアミド）のガドリニウム塩；および１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（「ＤＳＰＥ−ｍＰＥＧ−２０００」；ＣＡＳ番号１４７８６７−６５−０）を含み得る。リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲートは、以下の構造式：
【化３５】
0006505235.tif 000037
0006505235.tif 000038
のうちの１つによって表され得る。
【００４８】
変数ｎは、約１０〜約１００、例えば、約６０〜約１００、約７０〜約９０、約７５〜約８５、または約７７の任意の整数であり得る。変数ｍは、１２、１３、１４、１５、１６、１７、または１８のうちの１つであり得る。例えば、ｎは７７であり得、ｍは１４であり得る。別の例において、ｎは７７であり得、ｍは１６であり得る。
【００４９】
様々な態様において、芳香族部分および本明細書に記載の化合物に加えて、１個以上の代替アミロイドリガンドは、例えば、コンゴーレッドおよびその誘導体、チオフラビンＴおよびその誘導体、ならびにクリサミンＧおよびその誘導体を含み得る。そのような代替アミロイドリガンドは、脂質−親水性ポリマー−アミロイドリガンドコンジュゲートを形成するために、親水性ポリマー、例えば、ＰＥＧ（例えば、５００〜１０，０００Ｄａの範囲の分子量を有する）など、ならびに脂質、例えば、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＥ、ＤＳＰＣ、およびＤＰＰＥなどとコンジュゲートされ得る。例えば、脂質−ポリマー−アミロイドリガンドコンジュゲートは、本明細書に記載のリポソーム組成物中に組み込まれ得る。
【００５０】
様々な実施形態において、対象中のアミロイド沈着物を画像化するための方法が提供される。本方法は、検出可能な量のリポソーム組成物を対象中へ導入することを含み得る。本方法は、リポソーム組成物が１個以上のアミロイド沈着物と結合するのに十分な時間を与えることを含み得る。本方法は、１個以上のアミロイド沈着物と結合したリポソーム組成物を検出することを含み得る。本方法のリポソーム組成物は、膜を含み得る。非放射性磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）コントラスト増強剤は、膜によってカプセル化されたものか膜に結合したもののうちの少なくとも１つであり得る。膜は、リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲートを含み得る。リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分は、構造式Ｉ：−Ｘ−Ａｒ−Ｒ１−Ｈｅｔ（Ｉ）によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり得る。構造式Ｉによって表されるリン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分において、Ｘは、−Ｒ２−Ｏ−または−Ｒ２−Ｎ（Ｒ３）−であり得る。Ｒ１は、Ｃ２−Ｃ６アルキルまたはアルケニルであり得る。Ｒ２は、１〜６個の炭素原子を含む連結基であり得る。Ｒ２は、アルキレンまたはアルコキシアルキレンのうちの１つを含み得る。Ｒ３は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、またはＣ１−Ｃ６アルコキシアルキルであり得る。Ａｒは、単環式基または多環式基であり得る。Ａｒは、少なくとも１つの芳香環またはヘテロ芳香環を含み得る。Ｈｅｔは、単環式基または多環式基であり得る。Ｈｅｔは、少なくとも１つのヘテロ芳香環を含み得る。構造式Ｉによって表されるリン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分は、さらに置換され得る。例えば、Ｒ２は、ヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ６アルキル、およびＣ１−Ｃ６ヒドロキシアルキルのうちのゼロ個、または１個以上で置換され得る。水素以外のＡｒ、Ｈｅｔ、Ｒ１、およびＲ３は、独立して、ハロゲン；−ＯＨ；−ＯＨもしくはハロゲンで任意に置換されたアルキル、アリール、−Ｏ−アリールまたは−（Ｏ−アルキレン）１−６；−ＮＨ２；−ＮＨ−アルキル；−Ｎ−ジアルキル；カルボキシル；スルホニル；カルバモイル；およびグリコシルのうちのゼロ個、または１個以上で置換され得る。
【００５１】
様々な実施形態において、本方法で使用されるリポソーム組成物およびリン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲートは、リポソーム組成物およびリン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲートについて本明細書に記載の任意の値を含み得る。
【００５２】
いくつかの実施形態において、検出は、磁気共鳴イメージングを用いる検出を含み得る。別の例では、検出は、蛍光イメージング（ＦＩ）による検出を含み得る。検出は、ＳＰＥＣＴイメージングおよび／またはＰＥＴイメージングによる検出を含み得、ならびに非放射性コントラスト増強剤は、放射性コントラスト増強剤と交換され得る。放射性コントラスト増強剤は、例えば、米国立衛生研究所の分子イメージングとコントラスト剤データベース（「ＭＩＣＡＤ」）でＳＰＥＣＴイメージングおよび／またはＰＥＴイメージングで使用するのに適切とみなされる薬剤を含み得る。当業者に公知の、ＰＥＴイメージングを含むがこれに限定されない、イメージング方法の任意の他の適切な種類が企図される。
【００５３】
様々な実施形態において、本方法は、１個以上のアミロイド沈着物に結合したリポソーム組成物の検出に応じて、アルツハイマー病患者を診断することを含み得る。
【００５４】
いくつかの実施形態において、本方法は、１個以上のアミロイド沈着物に結合したリポソーム組成物の検出に応じて、アルツハイマー病を潜在的に有するとして患者を特定することを含み得る。本方法は、タウ神経原線維濃縮体の分析に、例えば、タウ神経原線維濃縮体のＰＥＴ分析に患者を供することを含み得る。本方法は、１個以上のアミロイド沈着物に結合したリポソーム組成物の検出と組み合わせてタウ神経原線維濃縮体の存在を決定する際に、アルツハイマー病患者を診断することを含み得る。
【００５５】
様々な実施形態において、本方法において使用されるリポソーム組成物およびリン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲートは、リポソーム組成物およびリン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲートについて本明細書に記載の任意の値を含み得る。
【００５６】
様々な実施形態において、対象中のアミロイド沈着物を画像化するためのキットが提供される。キットは、本明細書に記載の任意のリポソーム組成物を含み得る。説明書は、検出可能な量のリポソーム組成物を対象中へ導入するようにユーザーに指示し得る。説明書は、リポソーム組成物が１個以上のアミロイド沈着物と結合するのに十分な時間を与えるようにユーザーに指示し得る。説明書は、１個以上のアミロイド沈着物と結合したリポソーム組成物を検出するようにユーザーに指示し得る。キットのリポソーム組成物は、膜を含み得る。非放射性磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）コントラスト増強剤は、膜によってカプセル化されたものか膜に結合したもののうちの少なくとも１つであり得る。膜は、リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲートを含み得る。リン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分は、構造式Ｉ：−Ｘ−Ａｒ−Ｒ１−Ｈｅｔ（Ｉ）によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり得る。構造式Ｉによって表されるリン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分において、Ｘは、−Ｒ２−Ｏ−または−Ｒ２−Ｎ（Ｒ３）−であり得る。Ｒ１は、Ｃ２−Ｃ６アルキルまたはアルケニルであり得る。Ｒ２は、１〜６個の炭素原子を含む連結基であり得る。Ｒ２は、アルキレンまたはアルコキシアルキレンのうちの１つを含み得る。Ｒ３は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、またはＣ１−Ｃ６アルコキシアルキルであり得る。Ａｒは、単環式基または多環式基であり得る。Ａｒは、少なくとも１つの芳香環またはヘテロ芳香環を含み得る。Ｈｅｔは、単環式基または多環式基であり得る。Ｈｅｔは、少なくとも１つのヘテロ芳香環を含み得る。式Ｉによって表されるリン脂質−ポリマー−芳香族コンジュゲート中の芳香族部分は、さらに置換され得る。例えば、Ｒ２は、ヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ６アルキル、およびＣ１−Ｃ６ヒドロキシアルキルのうちのゼロ個、または１個以上で置換され得る。水素以外のＡｒ、Ｈｅｔ、Ｒ１、およびＲ３は、独立して、ハロゲン；−ＯＨ；−ＯＨもしくはハロゲンで任意に置換されたアルキル、−Ｏ−アルキル、アリール、−Ｏ−アリールまたは−（Ｏ−アルキレン）１−６；−ＮＨ２；−ＮＨ−アルキル；−Ｎ−ジアルキル；カルボキシル；スルホニル；カルバモイル；およびグリコシルのうちのゼロ個、または１個以上で置換され得る。
【００５７】
様々な実施形態において、説明書は、本明細書に記載の方法のステップのいずれかを実行するようにユーザーに指示し得る。例えば、説明書は、１個以上のアミロイド沈着物に結合したリポソーム組成物の検出に応じて、アルツハイマー病患者を診断するようにユーザーに指示し得る。
【００５８】
いくつかの実施形態において、説明書は、１個以上のアミロイド沈着物に結合したリポソーム組成物の検出に応じて、アルツハイマー病を潜在的に有するとして患者を特定するようにユーザーに指示し得る。説明書は、タウ神経原線維濃縮体の分析に、例えば、タウ神経原線維濃縮体のためのＰＥＴ分析に患者を供するようにユーザーに指示し得る。説明書は、１個以上のアミロイド沈着物に結合したリポソーム組成物の検出に関連してタウ神経原線維濃縮体の存在を決定する際に、アルツハイマー病の患者を診断するようにユーザーに指示し得る。
【００５９】
実施例
特定の実施形態を、実施例の形式で以下に記載する。本発明のすべての潜在的な用途を描写することは不可能である。したがって、実施形態は、かなり詳細に記載してあるが、添付の特許請求の範囲をそのような詳細に、もしくは任意の特定の実施形態に制限するか、またはいかなる方法で限定することを意図するものではない。
【００６０】
概要：全ての試薬はＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から入手し、さらに精製することなく使用した。プロトン核磁気共鳴（１Ｈ  ＮＭＲ）スペクトルを、Ｂｒｕｋｅｒ  ６００  ＮＭＲ分光計（Ｂｒｕｋｅｒ，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）にて６００ＭＨｚで記録した。カーボン核磁気共鳴（１３Ｃ  ＮＭＲ）スペクトルを、Ｂｒｕｋｅｒ  ６００  ＮＭＲ分光計にて１５０ＭＨｚで記録した。１Ｈ  ＮＭＲについて内部標準のアセトン（２．０５ｐｐｍ）、クロロホルム（７．２６ｐｐｍ）、またはジメチルスルホキシド（２．５０ｐｐｍ）からの化学シフト；および１３Ｃ  ＮＭＲについて残留アセトン（２０６．２６ｐｐｍ）、クロロホルム（７７．００ｐｐｍ）、またはジメチルスルホキシド（３９．５２ｐｐｍ）のいずれかの内部標準からの化学シフトを、百万分率（ｐｐｍ）で報告する。ＮＭＲピーク多重度を以下のように示す：ｓ（シングレット）、ｄ（ダブレット）、ｔ（トリプレット）、ｑ（カルテット）、ｂｓ（ブロードシングレット）、ｄｄ（ダブレットのダブレット）、ｔｔ（トリプレットのトリプレット）、ｄｄｄ（ダブレットのダブレットのダブレット）、およびｍ（マルチプレット）。カップリング定数（Ｊ）は、ヘルツ（Ｈｚ）で与えられる。高分解能質量スペクトル（ＨＲＭＳ）は、オハイオ州コロンバスのオハイオ州立大学の質量分析およびプロテオミクス施設から入手した；ＨＲＭＳおよびマトリックス支援レーザー脱離／イオン化（ＭＡＬＤＩ）スペクトルはまた、テキサス州ヒューストンのライス大学のバイオサイエンス共同研究の質量分析部から入手した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を、シリカゲル６０  Ｆ２５４プレート（ＥＭＤケミカル社、Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ，ＮＪ）にて行い、成分を紫外線（２５４ｎｍ）および／またはエタノール中のリンモリブデン酸の２０重量％溶液によって可視化した。ＳｉｌｉＦｌａｓｈシリカゲル（２３０〜４００メッシュ）を、全てのカラムクロマトグラフィーのために使用した。
【００６１】
以下の方法は、図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃに示すように、化合物ｉ〜ｘｉｉｉを合成するために使用または適合され得る。
【００６２】
実施例１Ａ：化合物ｉの調製
【化３６】
0006505235.tif 000039
化合物ｉは、４−ヒドロキシ−３−メトキシベンズアルデヒド（４６６ｍｇ、３．０６ミリモル）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２４ｍＬ）中の４−メチルピリミジン（１４０μＬ、１．５３ミリモル）およびカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（６８７ｍｇ、６．１２ミリモル）と反応させることによって調製した。反応混合物をセライトを通して濾過し、化合物ｉを、酢酸エチル／メタノール／ヘキサン混合溶媒を用いてシリカゲルクロマトグラフィーにより単離した。（Ｅ）−２−メトキシ−４−［２−（ピリミジン−４−イル）ビニル］フェノール（化合物ｉ）：１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，６００ＭＨｚ）  δ  ９．５１（ｂｓ，ＯＨ），９．０８（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），８．７０（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），７．８６（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５４（ｄｄ，Ｊ＝５．４，１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｄ，Ｊ＝１．５，Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄｄ，Ｊ＝８．０，１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，１Ｈ），６．８３（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），３．８９（ｓ，３Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，１５０ＭＨｚ）  δ  １６２．１６，１５８．３８，１５７．３９，１４８．４６，１４７．９３，１３７．２５，１２６．９８，１２２．５３，１２２．２１，１１８．４８，１１５．６０，１１０．７１，５５．６２；Ｃ１３Ｈ１２Ｎ２Ｏ２＋ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋についてのＨＲＭＳ計算値２２９．０９７２、測定値２２９．０９８１。
【００６３】
机上の実施例１Ｂ：アルコキシル化誘導体の調製
【化３７】
0006505235.tif 000040
様々なＯ−およびＮ−ヒドロキシエチル化合物ならびに誘導体を以下のように調製できる。例えば、化合物ｉをエチレンカーボネートで処理して対応するアルコキシル化誘導体を生成できる。さらに、例えば、化合物ｉｉ、ｉｖ、およびｖは、対応するアニリン誘導体をエチレンオキシドと反応させることによって調製でき、式中、Ｒ３＝Ｒ４＝アルキル、例えば、メチルである。この反応は、酸、またはルイス酸の添加を含み得る。この反応は、周囲温度を上回る反応温度を含み得る。化合物ｉｉｉおよびｖｉなどのジアルコキシル化化合物の調製は、２当量のエポキシドを含んでよく、式中、例えば、Ｒ３＝Ｈであり、Ｒ４は、第２のヒドロキシエチル基（ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）であり得る。あるいは、Ｏ−もしくはＮ−ヒドロキシエチル化合物または誘導体のいずれかは、２−ブロモエタノールなどのβ−ヒドロキシハライドによるアルキル化によって調製できる（図示せず）。Ｏ−およびＮ−ヒドロキシエチル化合物は、実施例７に記載のように対応するグリセロール誘導体の基質として使用できる。
【化３８】
0006505235.tif 000041
【００６４】
Ｎ−ヒドロキシエチル化合物ｉｉ−ｖｉは、もう１つの方法として、水素およびＰｄ／Ｃなどの触媒の存在下で、２−ヒドロキシエタナール（グリコールアルデヒド）を用いる還元的アミノ化によって調製できる。公認誘導体は、３−ヒドロキシプロパナール（ｎ＝２）、４−ヒドロキシブタナール（ｎ＝３）、５−ヒドロキシペンタナール（ｎ＝４）、または６−ヒドロキシヘキサナール（ｎ＝５）などの適切なヒドロキシアルデヒドを用いて、同様の条件下で容易に調製できる。
【００６５】
実施例２：化合物ｉｉの調製
【化３９】
0006505235.tif 000042
一例において、化合物ｉｉを、Ｎ−メチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−４−アミノベンズアルデヒド（２００ｍｇ、１．１２ミリモル）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）中の４−メチルピリミジン（１１２μＬ，１．２３ミリモル）およびカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（３７６ｍｇ、３．３５ミリモル）と８０℃で４時間反応させることによって調製した。得られた混合物を周囲温度に冷却し、セライトを通して濾過し、濃縮した。酢酸エチル／メタノール／ヘキサンの溶媒勾配を用いるシリカゲルクロマトグラフィーにより、化合物ｉｉ（Ｅ−異性体）（１８４ｍｇ、０．７２ミリモル、６４％）、Ｚ異性体（１８ｍｇ、０．０７ミリモル、６％）、およびＥ／Ｚ異性体混合物（３９ｍｇ、０．１５ミリモル、１４％）を得た。（Ｅ）−２−｛メチル［４−（２−（ピリミジン−４−イル）ビニル）フェニル］アミノ｝エタノール（化合物ｉｉ）：１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、６００ＭＨｚ）  δ  ８．９１（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），８．４５（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），７．７０（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），７．２６（ｄｄ，Ｊ＝６．６，１．２Ｈｚ，１Ｈ），６．７５（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），６．６７（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），３．６９（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），３．４６（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），３．９８（ｓ，３Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，１５０ＭＨｚ）  δ  １６３．８０，１５７．６０，１５５．８０，１５０．５９，１３９．１９，１２９．５４，１２３．２１，１１９．４８，１１７．８３，１１５．１３，１１１．９１，５９．１３，５４．３５，３８．８２；Ｃ１５Ｈ１７Ｎ３Ｏ＋ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋についてのＨＲＭＳ計算値２５６．１４４４、測定値２５６．１３７２。
【００６６】
実施例３：化合物ｉｉｉの調製
【化４０】
0006505235.tif 000043
一例において、化合物ｉｉｉを、４−（ビス（ヒドロキシエチル）アミノ）ベンズアルデヒド（２３４ｍｇ、１．１２ミリモル）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）中の−４−メチルピリミジン（１１２μＬ，１．２３ミリモル）およびカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（３７６ｍｇ、３．３５ミリモル）と８０℃で１２時間反応させることによって調製した。得られた混合物を周囲温度に冷却し、セライトを通して濾過し、濃縮した。化合物ｉｉｉを、酢酸エチル／メタノール／ヘキサン溶媒系を用いるシリカゲルクロマトグラフィーによって混合物の主成分として単離した。（Ｅ）−２，２’−｛［４−（２−（ピリミジン−４−イル）ビニル）フェニル］アザンジイル｝ジエタノール（化合物ｉｉｉ）：１Ｈ  ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，６００ＭＨｚ）  δ  ９．０２（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），８．６１（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），７．５３（ｄｄ，Ｊ＝６．０，１．２Ｈｚ，１Ｈ），６．９８（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），３．７１（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，４Ｈ），３．５７（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，４Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，１５０ＭＨｚ）  δ  １６５．２３，１５９．１７，１５７．７６，１４９．７２，１３９．９９，１３０．８４，１２５．８７，１２１．６４，１１９．４２，１１３．６６，５１．３６，５０．０８；Ｃ１６Ｈ１９Ｎ３Ｏ２＋ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋のＨＲＭＳ計算値２８６．１５５０、測定値２８６．１５４６。
【００６７】
実施例４：アジドの調製：化合物Ａ
【化４１】
0006505235.tif 000044
化合物Ａを、４−トルエンスルホニルクロリド（３０１ｍｇ、１．５８ミリモル）を０℃でピリジン（１０ｍＬ）中の化合物ｉｉｉ（３００ｍｇ、１．０５ミリモル）の溶液に添加することにより調製し、混合物を一晩室温に温めた。ピリジンを減圧下で除去し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）を粗トシレート残留物に加えた。アジ化ナトリウム（４１０ｍｇ、６．３１ミリモル）を溶液に加え、得られた混合物を６０℃で一晩加熱した。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶媒を減圧下で除去し、得られたスラリーを酢酸エチルで希釈し、ブライン（１５ｍＬ）で洗浄した。水層を酢酸エチルで３回逆抽出した。合わせた有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。化合物Ａ（１２２ｍｇ、０．４０ミリモル、３８％）および望ましくないジアジド生成物（１２３ｍｇ、０．３７ミリモル、３５％）を酢酸エチル／メタノール／ヘキサン（９．５：９．５：１）溶媒混合物を用いるシリカゲルクロマトグラフィーにより単離した。実施例４Ａおよび４Ｂに記載の手順を化合物ｉｉ、ｉｖ、ｖ、またはｖｉなどの他のヒドロキシアルキル化合物に適用して、対応するアジドを生成できる。
【００６８】
実施例５：化合物ｉｖの調製
【化４２】
0006505235.tif 000045
一例において、化合物ｉｖを、４−（ビス（ヒドロキシエチル）アミノ）ベンズアルデヒド（２５０ｍｇ、１．２０ミリモル）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）中のベンゾチアゾール（１７８ｍｇ、１．３２ミリモル）およびカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（４０４ｍｇ、３．６ミリモル）とを密閉ボンベ中で５時間反応させることにより調製した。反応混合物をセライトを通して濾過した。化合物ｉｖ（８９ｍｇ、０．２６ミリモル、２２％）を、酢酸エチル／メタノール／ヘキサン混合溶媒を用いるシリカゲルクロマトグラフィーにより単離した。
【００６９】
実施例６：化合物ｖ、ｖｉ、ｖｉｉ、ｖｉｉｉ、およびｉｘの調製
【化４３】
0006505235.tif 000046
化合物ｖ、ｖｉ、ｖｉｉ、およびｖｉｉｉを、標準的なＴａｋａｉ条件（例えば、０℃で３時間、テトラヒドロフラン中のトリヨードメタン（ヨードホルム）、クロムジクロリド）下で、対応する４−アミノベンズアルデヒドを最初に反応させることによって容易に調製でき、対応するヨウ化ビニルを得る。Ｓｕｚｕｋｉ条件（例えば、Ｐｄ（０）触媒、炭酸セシウム、トルエン／エタノール／水（４：４：１）、１２時間、７０℃）下で（６−ヒドロキシピリジン−３−イル）ボロン酸とヨウ化ビニルを反応させ、その後、酢酸エチル／メタノール／ヘキサン混合溶媒を用いるシリカゲルクロマトグラフィーによって、化合物ｖ、ｖｉ、ｖｉｉ、およびｖｉｉｉを生成できる。
【００７０】
机上の実施例７：グリセロール誘導体の合成
【化４４】
0006505235.tif 000047
アジド化合物Ｅ１およびＥ２は、化合物ｉｉ、ｉｉｉ、ｉｖ、ｖ、またはｖｉのうちの１つなどの対応するアルコールをトシレート、メシレート、トリフレート、またはハライドなどの適切な脱離基へと変換することによって調製できる。グリセロールとの反応は、適切な脱離基を置換してグリセロール置換化合物Ｂを生成できる。もう１つの方法として、化合物Ｂは、化合物ｉｉ、ｉｉｉ、ｉｖ、ｖ、またはｖｉの２−オキシランメタノールとの反応によって直接調製できる。例えば、トシル化、メシル化、トリフレート化、またはハロゲン化による、化合物Ｂ中のより反応性のある第一級アルコールの化学選択的官能化は、化合物Ｃおよび／またはエポキシド化合物Ｄを提供できる。アジ化ナトリウムなどのアジド源で化合物ＣまたはＤを処理すると、主なアジ化合物Ｅ１が得られる。化合物Ｅ２は、シリルエーテルなどの化合物Ｂ中の第一級アルコールの化学選択的保護から始まる一連の反応により調製できる。続いて、遊離第二級アルコールをトシレートなどの適切な脱離基へと変換し、その後、アジ化ナトリウムによって置換することにより、脱保護後に化合物Ｅ２を得ることができる。もう１つの方法として、保護基は、実施例８に示すように、コンジュゲーション後に、例えば、［３＋２］環化反応を介するコンジュゲート後に除去できる。
【００７１】
実施例８：３＋２「クリック」ケミストリーを用いるコンジュゲートの調製
【化４５】
0006505235.tif 000048
ＤＳＰＥ−ＰＥＧ３４Ｋ−ＮＨ２（１．０ｇ、０．２４ミリモル）、ピリジン（５ｍＬ、６２．１ミリモル）、およびクロロホルム（５ｍＬ）の溶液に、プロパルギルクロロホルメート（５０μＬ、０．５１ミリモル）を添加した。得られた混合物を周囲温度で一晩撹拌した。クロロホルムを減圧下で除去し、得られた残留物を１：４のＥｔＯＨ：Ｈ２Ｏ溶液（２０ｍＬ）で希釈した。粗カルバメートを含有する溶液を２０００  ＭＷＣＯ透析バッグ中に入れ、１２時間、ＭＥＳ緩衝液（５０ｍＭ、５Ｌ）に対して透析し、水（５Ｌ）に対してそれぞれ１２時間、２回透析した。溶液を凍結乾燥し、生成物（１．０８ｇ、定量）を灰色粉末として得、その分子量をＭＡＬＤＩによって確認した。
【００７２】
続いて、生成物（６００ｍｇ、０．１４ミリモル）を、メタノール（１０ｍＬ）中の化合物Ａ（８４ｍｇ、０．２７ミリモル）に添加し、その後、ＴＨＦ（３ｍＬ）および水（２ｍＬ）を加えた。続いて、アスコルビン酸ナトリウム（２７ｍｇ、０．１４ミリモル）および酢酸銅（ＩＩ）（２．７ｍｇ、０．０１４ミリモル）を添加し、得られた混合物を周囲温度で一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、得られた残留物を１：４のＥｔＯＨ：Ｈ２Ｏ溶液（２０ｍＬ）で希釈した。粗製トリアゾールを含有する溶液を２０００  ＭＷＣＯ透析バッグ中に入れ、それぞれ１２時間、ＭＥＳ緩衝液（５０ｍＭ、５Ｌ）に対しおよび水（５Ｌ）に対し２回透析した。溶液を凍結乾燥し、対応するコンジュゲート（５６５ｍｇ、０．１２ミリモル、８７％）を無色粉末として得た。
【００７３】
実施例９：化合物ｉ〜ｘｉｉｉは従来の化合物と比較して親水性である
図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃは、化合物ｉ〜ｘｉｉｉ、および既知の化合物ＭｅＸＯ４、ＳＢ−１３およびフロルベタピルを含む様々な化合物のＣＬｏｇＰ値および構造を表形式で示す。ＣＬｏｇＰは、Ｌｏｇ［オクタノール中の濃度／水中の濃度］としての、オクタノール中の化合物の水に対する相対濃度についての分配係数の対数である。より低いＣＬｏｇＰ値は、より高い親水性に相当する。ＭｅＸＯ４はアミロイド斑に対する高い親和性を示したが、発明者らはＳＢ−１３および臨床に使用されるフロルベタピル中のスチルベン構造が結合における感度および特異性を提供し得ると判断した。発明者らはさらに、ベンゾチアゾールまたはピリミジル部分が既知の化合物と比較してより低いＣＬｏｇＰおよび増加したＨ結合能を有する類似体を生成し得ると判断した。加えて、ヒドロキシエチル基（複数可）で窒素をキャッピングすると、さらに親水性が増加し、リポソームの脂質二重層中への挿入の代わりに、リポソームの外部の水性媒質中でリガンドが浮遊するのを維持する能力を高めることができた。したがって、ｉ〜ｘｉｉｉなどの化合物は、ゆえに、スチルベンコアの親水性を増加して二重層を不安定にすることなくリポソーム表面上に提示されるリガンドの能力を増強すると一般的に予想される側鎖修飾を用いて考案した。化合物ｉ〜ｘｉｉｉはそれぞれ、以前の化合物ＭｅＸＯ４よりも数桁親水性である。理論に束縛されるものではないが、より高い親水性は、例えば、リポソーム外の親水性環境中の、結合に利用可能な構成での対応する化合物の存在を増加させることによって、およびアミロイドβ線維との結合相互作用を増加させることなどによって、アミロイドβ線維との相互作用ならびに結合を促進できると考えられる。
【００７４】
イオン性の増加がＢＢＢの透過性を減少させ得るという懸念から、イオン性を増加させることなく親水性を促進するように、ヒドロキシおよびメトキシなどの非イオン性基を選択した。化合物ｉ、ｉｉ、およびｉｉｉは、３つの最低のＣＬｏｇＰ値（それぞれ、１．５６、１．８０、および１．０６）を有した。分光蛍光試験により、化合物ｉｉおよびｉｉｉの両方は、４０４ｎｍおよび５５０ｎｍで吸収極大ならびに発光極大を有したが、化合物ｉは、可視発光極大がなく、３４６ｎｍで吸収極大を表したことが示された。化合物ｉｉおよびｉｉｉは、蛍光および比較的低いＣＬｏｇＰ値による検出の容易さのために使用され得る。
【００７５】
実施例１０：Αβ線維の合成
Αβ線維を、全体の教示が参照により本明細書に組み込まれるＫｌｕｎｋら、Ａｎｎ  Ｎｅｕｒｏｌ，２００４；５５：３０６−１９の方法に従って合成した。簡潔に述べると、Αβ（１−４０）ペプチド（ｒＰｅｐｔｉｄｅ，Ｂｏｇａｒｔ，ＧＡ）を４３３μｇ／ｍＬ（１００μΜ）の最終濃度にｐＨ７．４のリン酸緩衝生理食塩水中に溶解した。この溶液を室温で４時間、７００ｒｐｍで磁気撹拌棒を用いて撹拌して原線維の形成を促進した。原液を等分し、将来の使用のために−８０℃で保存した。原線維の均質な懸濁液を維持するために、結合アッセイ用のアリコートを取り出す前に、ストック溶液を十分に撹拌した。原線維の均質な懸濁液を確実にするために、結合アッセイ用のアリコートを取り出す前にストック溶液を十分に撹拌した。
【００７６】
実施例１１：化合物ｉｉ、化合物ｉｉｉ、およびＤＳＰＥ−ＰＥＧ−化合物ｉｉｉのコンジュゲートの結合アッセイ
結合アッセイ：化合物または化合物−標識リポソームのアミロイド線維との結合親和性を、以下の方法によって測定した。競合アッセイ用のリガンド−標識リポソーム、リガンドストック溶液、およびクリサミンＧを１０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．４で５００ｎＭに希釈した。原線維ストック溶液を、２００μＬの反応混合物中の化合物のストック溶液または化合物標識リポソームと混合し、０．０６２５〜２．０μΜの試験化合物を有する原線維の最終濃度（２０μΜ）を得た。結合混合物を室温で１時間インキュベートした。続いて、インキュベートした結合混合物を１６，４００ｒｐｍで２０分間遠心分離して原線維を分離した。原線維沈殿物をＴｒｉｓ−ＨＣｌで２回洗浄した。次いで、蛍光を、それぞれ４０５ｎｍおよび５３５ｎｍの励起波長ならびに発光波長を用いて、ＦｉｌｔｅｒＭａｘ  Ｆ−５マルチモードプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）で測定した。競合結合アッセイは、２０μΜの原線維、１．０μΜの試験化合物および様々な量の非蛍光競合物質のクリサミンＧを使用し、１時間インキュベートした。
【００７７】
図２は、原線維への化合物ｉｉの結合を示し、相対蛍光単位（ＲＦＵ）対μΜの濃度としてプロットした結合プロファイルである。図３は、原線維への化合物ｉｉｉの結合を示し、相対蛍光単位（ＲＦＵ）対μΜの濃度としてプロットした結合プロファイルである。
【００７８】
図４は、原線維へのＭｅＸＯ４（以前の化合物）の結合を示し、相対蛍光単位（ＲＦＵ）対μΜの濃度としてプロットした結合プロファイルである。その手順が本発明の化合物、コンジュゲートおよびリポソーム組成物と共に使用でき、従来の化合物ＭｅＸＯ４および他の関連化合物を用いる合成、コンジュゲート、リポソーム製剤、および結合については、Ａｎｎａｐｒａｇａｄａらの米国特許公開第１３／４４１，８１６号に記載されており、その全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【化４６】
0006505235.tif 000049
【００７９】
図２〜４に示すように、化合物ｉｉおよびｉｉｉは、従来の化合物ＭｅＸＯ４と比較してはるかに高い結合を示した。例えば、１μΜの濃度で、化合物ｉｉは３５ｍ  ＲＦＵで結合し、化合物ｉｉｉは４００ｋ  ＲＦＵで結合するが、以前の化合物ＭｅＸＯ４は１００ｋ未満のＲＦＵで結合した。
【００８０】
図５Ａ〜Ｄは、化合物ｉｉおよびｉｉｉの結合の態様を示す。図５Ａは、化合物ｉｉおよびｉｉｉがアミロイド線維へ結合することを示し、相対蛍光単位（ＲＦＵ）対μΜの濃度としてプロットしたグラフである。図５Ｂは、それぞれがクリサミン−Ｇと競合して懸濁液中の原線維に安定に結合する化合物ｉｉおよびｉｉｉの結合を示し、チオフラビン結合部位への特異性と一致する、結合％対μΜのクリサミン−Ｇ濃度としてプロットした競合結合プロファイルである。これは、化合物ｉｉおよびｉｉｉが、比較的親水性であっても、アミロイド斑に実際に結合できることを示す。
【００８１】
図５Ｃは、化合物ｉｉｉがＡＤ剖検例の前頭皮質からのヒト脳組織の切片中のアミロイド斑を特異的に染色することを示す、蛍光顕微鏡画像である。
【００８２】
図５Ｄは、化合物ｉｉｉが高齢犬の脳組織における脳アミロイド血管障害を標識することを示す、蛍光顕微鏡画像である。画像を、ブロードパス（ｂｒｏａｄｐａｓｓ）フィルタを使用してオリンパスＢＸ−５１落射蛍光顕微鏡で収集した。緑の標識は化合物ｉｉｉを表し、黄色は、非特異的自己蛍光を表す。スケールバーは、長さ５０μｍを表す。
【００８３】
ＰＢＳ中の化合物ｉｉｉ溶液を、８８歳のＡＤ患者（ケンタッキー大学の治験審査委員会が、本研究のためにヒト組織の使用を承認した；インフォームドコンセントを剖検前に得た）および１２．３歳の老犬の剖検から得た前頭皮質組織とインキュベートした。ヒトと犬の両組織は、以前の研究から確認されたアルツハイマー病のアミロイド病理を有していた。５０μｍの厚さのフリーフローティング切片をスライド上にマウントし、一晩乾燥させた。次いで、スライドをＰＢＳ（５分、３回）中で洗浄し、化合物ｉｉｉ溶液（１ｍＭ）中で２時間インキュベートし、次いで、再びＰＢＳ中で５分、３回洗浄し、ＤＡＰＩ（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）を含むＶｅｃｔａｓｈｉｅｌｄマウンティングメディウム中でカバーガラスをかぶせた。切片を、ブロードパスフィルタを備えるオリンパスＢＸ−５１顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｓ，Ｃｅｎｔｅｒ  Ｖａｌｌｅｙ，ＰＡ）で画像化した。
【００８４】
図６は、以前の化合物ＭｅＸＯ４およびリポソームＭｅＸＯ４のそれぞれがクリサミン−Ｇと競合して原線維へ結合することを示し、結合％対μΜでのクリサミン−Ｇの濃度としてプロットした競合結合プロファイルである。図５Ａ、図５Ｂ、および図６に示すように、化合物ｉｉおよびｉｉｉは、従来の化合物ＭｅＸＯ４またはリポソームＭｅＸＯ４と比較してクリサミン−Ｇに対してはるかに高い競合結合を示す。例えば、１μΜのクリサミン−Ｇ濃度で、化合物ｉｉは約４５％結合し、化合物ｉｉｉは約５５％結合した。対照的に、従来の化合物ＭｅＸＯ４は約２０％結合し、リポソームＭｅＸＯ４は約５％結合した。
【００８５】
図７Ａは、２０μΜ原線維に結合したＤＳＰＥ−ＰＥＧ−化合物ｉｉｉのコンジュゲートの量を示し、リポソーム組成物中のＤＳＰＥ−ＰＥＧ−化合物ｉｉｉの濃度に対してプロットした、化合物標識リポソーム結合プロファイルのグラフである。
【００８６】
図７Ｂは、Ｋｄ＝５．０μΜでの化合物ｉｉの原線維結合データおよび原線維への化合物ｉｉの結合定数の推定のために計算された適合度を示すグラフである。図７Ｃは、Ｋｄ＝５．０μΜでの化合物ｉｉｉの原線維結合データおよび原線維への化合物ｉｉｉの結合定数の推定のために計算された適合度を示すグラフである。図７Ｄは、Ｋｄ＝３．３μΜでのリポソーム含有ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−化合物ｉｉｉの原線維結合データおよび原線維へのリポソーム含有ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−化合物ｉｉｉの結合定数の推定のために計算された適合度を示すグラフである。原線維への結合は、洗浄した原線維へ結合するそれぞれの薬剤の蛍光を測定することにより定量した。データを、単層結合方程式；Ｋｄ＝１／Ｋｂに当てはめた。
【００８７】
実施例１２：親水性リガンドは安定したリポソームを促進する
粒径を測定するために、押出プロセスからの定期的な試料および透析濾過後の最終試料をＰＢＳで希釈し、自己相関システムに取り付けられたゴニオメータベースの動的光散乱システム（ＢＩ−９０，Ｂｒｏｏｋｈａｖｅｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｈｏｌｔｓｖｉｌｌｅ，ＮＹ）で測定した。５３２ｎｍの固体レーザーを光源として使用し、９０℃で、光電子増倍管で判別検出されるまで調整された試料の濃度から、毎秒約１００ｋカウント（ｋｃｐｓ）を得た。相関関数を、相関ビンの指数関数的に離間したセットを使用して測定し、相関関数の初期の指数関数的な降下を捕捉する少なくとも１０チャネル、および長期残光を捕捉する１０チャネルを確実にした。ダストの特徴である大きな粒径の混入を示す、ベースラインよりも有意に高い長期相関関数を示した相関関数スライスを排除するダスト識別アルゴリズムを用いて、各試料について２分間の相関関数を平均した。得られた平均相関関数を、ＣＯＮＴＩＮアルゴリズムを用いて分析し、体積平均分布を使用して、平均サイズおよび標準偏差を推定した。全ての分布は実質的に単峰性であった（主ピークにおける体積の９９％以上）。
【００８８】
ＰＢＳおよび再構成ウシ血漿（ＲＢＰ）中の製剤の安定性を測定した。調製物のアリコートをＰＢＳまたはＲＢＰのいずれかで１０倍希釈し、２００μＬの希釈材料を透析バッグ中に入れ、次に２００ｍＬのＰＢＳ中に入れ、２４時間ゆっくりと撹拌した。外部バッファの試料を、２４時間の期間中に定期的に採取し、ＩＣＰ−ＡＥＳによってＧｄ含有量についてアッセイした。ウシ血漿における漏れは、緩衝液とウシ血漿の両方において５％未満であった。
【００８９】
図８は、ＭｅＸＯ４標的リガンド、化合物ｉｉｉのうちの一方と共に調製したリポソーム、またはリガンドを含まないＰＥＧ化リポソームの平均直径および多分散指数を示す表である。全てのリポソームは、二重層中にビス−ステアリルアミド−ＤＴＰＡ−Ｇｄ、リポソームコア内部中のにＧｄ−ＢＯＰＴＡ（ガドベン酸ジメグルミン）、ＤＰＰＣ（５５％）、およびコレステロール（４０％）を含んでいた。リポソームは、例えば、リガンドを含まないＰＥＧ化リポソームによって示されるように、約１００〜１５０ｎｍの平均直径および低い多分散指数を得ることを目的に、４００／２００ｎｍの膜を通す５回押出通過および１００ｎｍの膜を通す５回押出通過を含む、トラックエッチ膜を通す押出により調製した。
【００９０】
しかしながら、ＭｅＸＯ４リポソームは、陰性染色電子顕微鏡によって確認されるように、ＭｅＸＯ４リガンドの二重層との干渉と一致する、より大きな直径および多分散性を示す（図９Ａも参照されたい）。化合物ｉｉｉでのＸＯ４リガンドの置換により、低い多分散性を有し、直径が約１５０ｎｍ未満のリポソームが得られた。２４時間、３７℃での再構成ウシ血漿とのインキュベーション（血漿漏れ試験）で、Ｇｄは粒子と実質的に１００％結合したままであり、修飾リガンドが安定な二重層をもたらしたことが確認された。ＭｅＸＯ４のような疎水性リガンドは、得られた粒子のより大きな直径に反映されるように、二重層に再び入り、その完全性を損なうと考えられる。化合物ｉｉｉのようなより親水性のリガンドは、押出後の二重層の完全性および粒径をより良好に維持する。
【００９１】
リポソームの調製：１，２−ジヘキサデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）およびコレステロールは、Ｌｉｐｏｉｄ社、米国ニュージャージー州ニューアークから購入した。ＤＳＰＥ−ＰＥＧ３４００−化合物ｉｉｉを、上記のように調製した。１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（ＤＳＰＥ−ＭＰＥＧ２０００）は、Ｃｏｒｄｅｎ  Ｐｈａｒｍａ社、Ｌｉｅｓｔａｈｌ、スイスから購入した。ＤＰＰＣ、コレステロール、ＤＳＰＥ−ＭＰＥＧ２０００、ビス−ステアリルアミン−ＤＴＰＡ−Ｇｄ（ＢＳＡ−ＤＴＰＡ−Ｇｄ）、およびＤＳＰＥ−ＰＥＧ３４００−化合物ｉｉｉ（モル比で、ＤＰＰＣ：ＢＳＡ−ＤＴＰＡ−Ｇｄ：コレステロール：ＤＳＰＥ−ＭＰＥＧ２０００：ＤＳＰＥ−ＰＥＧ３４００−化合物ｉｉｉは、３１：２５：４０：２：２である）を、エタノール中に溶解し、総濃度を１５０ｍＭにした。５００ｍＭのガドベン酸ジメグルミン中６５μΜのＩＣＧ溶液を作製した。脂質のエタノール溶液を、３０分間６５℃で、１０倍過剰量のＩＣＧ／ガドベン酸ジメグルミン溶液で水和し、多層リポソームを形成させた。次いで、混合物を、２００ｎｍのポリカーボネートトラックエッチフィルタ（１０回通過）、続いて、１００ｎｍのポリカーボネートフィルター（１０回通過）を用いて、１０ｍＬのライペックス押出機（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  Ｌｉｐｉｄｓ社、Ｂｕｒｎａｂｙ、Ｃａｎａｄａ）で押出した。次いで、懸濁液を、ＭＩＣＲＯＫＲＯＳ（登録商標）（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、Ｒａｎｃｈｏ  Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚ、ＣＡ）クロスフロー透析濾過用カートリッジ（５００ｋＤカットオフ）を用いて透析濾過し、１５体積交換用のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．２）と外部緩衝液を交換した。
【００９２】
体積交換ごとに透析濾過液中のＩＣＧ含有量を近赤外蛍光（励起７８０ｎｍ／発光８２０ｎｍ）により測定し、最初の体積交換後には、実際にＩＣＧは検出されなかった。残余分から失われたＩＣＧの大半は、最初の体積交換中に存在していた。出発ＩＣＧのうち、約９５％はリポソームと結合したままであると推定された。
【００９３】
透析濾過した生成物のリンおよびＧｄ含有量を、誘導結合プラズマ発光分析（ＩＣＰ−ＡＥＳ）を用いて測定した。出発Ｇｄのうち、実質的に１００％がリポソームと結合したままであった。
【００９４】
二重層のＭｅＸＯ４リガンドとの干渉を、陰性染色電子顕微鏡により確認した。図９Ａは、二重層中にリポソームを含有するＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＸＯ４の陰性染色ＴＥＭ画像を示す。図９Ｂは、非標的化リポソーム（ＭｅＸＯ４を含まない同一の二重層構造）を含有するリポソームの陰性染色ＴＥＭ画像を示す。使用した陰性染色は、１％酢酸ウラニルであった。二重層と干渉し二重層を破壊するＭｅＸＯ４リガンドと一致して、左側の画像における退縮した不完全なスフェロイドに留意されたい。これとは対照的に、ＭｅＸＯ４の不在および化合物ｉｉｉの存在は、リポソームに典型的な一貫性のある球状構造をもたらす。
【００９５】
ＭｅＸＯ４リガンドの化合物ｉｉｉでの置換により、直径が１００ｎｍに近い、低い多分散性を有するリポソームが再び得られた。さらに、２４時間、３７℃での再構成ウシ血漿とのインキュベーション後に、Ｇｄは粒子と実質的に１００％結合したままであり、修飾リガンドが安定した二層を生じたことが確認された。
【００９６】
実施例１３：例示的なリポソームは低磁場強度で高いＧｄモル緩和を示す
脂質二重層の表面上に表面Ｇｄキレートで装飾したリポソームを調製した（ビス−ステアリル鎖がリポソームの二重層中に挿入するようにＧｄキレートが脂質アンカーＢＳＡ−ＤＴＰＡ−Ｇｄにコンジュゲートされる）。図１０Ａに示すように、これらのリポソームは、低磁場強度で高いＧｄモル緩和を示した。図１０Ａにおいて、例示的なリポソームを、より低い磁場強度で遊離Ｇｄキレート（ＧａｄｏｂｅｎａｔｅＤｉｍｅｌｇｌｕｍｉｎｅ、ＭＵＬＴＩＨＡＮＣＥ（商標）、Ｂｒａｃｃｏ  Ｉｍａｇｉｎｇ、Ｍｏｎｒｏｅ  Ｔｏｗｎｓｈｉｐ、ＮＪ）と比較しているが、その差は、遊離キレートが表面提示よりも緩和的である９．４Ｔでの点まで、より高い磁場強度で徐々に失われる。
【００９７】
しかしながら、より高い磁場強度で、緩和のこの増強は低減され、試験した最も高い磁場強度（９．４Ｔ）で、表面Ｇｄは遊離キレートよりも緩和が低い。低磁場強度での緩和増強を利用して、発明者らは、ＢＳＡ−ＤＴＰＡ−Ｇｄからなる最大２５％のリポソーム二重層を有する製剤を試験した。リポソームは安定しており、最大８週間、冷蔵条件下で保存した際に測定可能なＧｄ損失を示さなかった。図１０Ｂに示すように、得られた粒子は、粒子単位で非常に高い緩和を有する。粒子に基づいて、約１９０，０００ｍＭ−１ｓ−１の緩和を１Ｔで達成した。
【００９８】
１．５、３、４．７、７および９．４Ｔの測定を個々のＭＲＩ装置で行った。１．４Ｔの測定をＢｒｕｋｅｒミニスペックＭＱ６０緩和計（Ｂｒｕｋｅｒ社、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ  ＭＡ）で行った。１Ｔ測定をアスペクトＭ２永久磁石ＭＲＩ装置（Ａｓｐｅｃｔ  Ｉｍａｇｉｎｇ社、Ｓｈｏｈａｍ  Ｉｓｒａｅｌ）で行った。緩和計にてＴ１測定を３７℃で行ったが、ＭＲＩ装置での測定を標準温度（１８〜２０℃）で行った。
【００９９】
ベイラー医科大学で行った全ての動物実験は、ベイラー施設内動物管理使用委員会によって承認された。ＭＤアンダーソン癌センターでの全ての動物実験は、ＭＤＡ施設内動物管理使用委員会によって承認された。全ての研究は、ＮＣ３ＲＳ−ＡＲＲＩＶＥ基準に準拠していた。Ｔｇ２５７６マウスを、Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社、ニューヨーク州ハドソンから購入した。ＴｅｔＯ／ＡＰＰマウスは、ベイラー医科大学のＪｏａｎｎａ  Ｊａｎｋｏｗｓｋｙ博士から厚意により提供された。全てのＡＰＰ−対照動物は、本研究でＡＰＰ＋動物の年齢をマッチさせた非トランスジェニック同腹子であった。全てのＴＧ２５７６マウスを、ＭＤアンダーソン癌センターの１．０Ｔ  Ｂｒｕｋｅｒ  Ｉｃｏｎシステム（Ｂｒｕｋｅｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）上で画像化した。全てのＴｅｔＯ／ＡＰＰマウスを、１．０ＴアスペクトＭ２システム（Ａｓｐｅｃｔ  Ｉｍａｇｉｎｇ社、Ｓｈｏｈａｍ、Ｉｓｒａｅｌ）上で画像化した。これらの２つのスキャナー装置は、同一のハードウェア上に構築され、両方ともＡｓｐｅｃｔ  Ｉｍａｇｉｎｇ社によって製造されたことに留意されたい。ソフトウェアインタフェースのみが異なる。全てのイメージングパラメータは２台の装置で同一であった。
【０１００】
麻酔を、空気中５％イソフルランを使用して、イソフルラン吸入ボックス中に誘導した。マウスを次いで、吸入による継続的な麻酔送達（空気中１．５〜３％イソフルラン）のために一体型フェースコーンを備えたカスタム製造スレッド上に置き、磁石キャビティに移した。脳のコントラスト前の画像を、２Ｄマルチスライススピンエコーシーケンスを用いて、以下のパラメータ：ＴＥ＝３２ｍｓ、ＴＲ＝７７０ｍｓ、スライス厚＝１．２ｍｍ、ＦＯＶ＝３０×３０ｍｍ、マトリックス＝１５６×１５６、２４スライスＡ〜Ｐ、およびＮＥＸ＝２を用いて取得した。次いで、マウスを目覚めさせ、ケージに戻した。コントラスト前の画像の２４時間後に、試験群におけるＡＰＰ＋マウスおよびＡＰＰ−マウスに、化合物ｉｉｉ標的化リポソーム（１５０ｍＭの総脂質濃度、３７．５ｍＭのＧｄ総濃度、注射量４μＬ／ｇ体重、０．１５ミリモルのＧｄ／ｋｇ）を注射し、対照群のＡＰＰ＋マウスに、同一のパラメータを有する非標的（すなわち、化合物ｉｉｉが存在しない）リポソームを注射した。注射の４日後に、マウスを麻酔し、同一のシーケンスを使用して再び画像化した。本研究で調製したＰＥＧ化リポソームの半減期は約１８〜２４時間であり、バックグラウンドシグナルを減少させるために、４日の間隔を選んで血流からの未結合剤のクリアランスを促進した。
【０１０１】
０．２５〜１．０ｍＭのＧｄ濃度を有する試料を、ＰＢＳでリポソーム製剤を希釈することによって調製した。次いで、Ｔ１緩和測定を、６０ＨｚのブルカーミニスペックＭＱベンチトップ緩和計（Ｂｒｕｋｅｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）で行った。縦緩和時間（Ｔ１）を、反転回復シーケンスを用いて得た。Ｇｄ濃度に対する緩和速度（１／Ｔ１）のプロットから、Ｔ１緩和（ｒ１）として定義した傾きの直線が得られた。より高い磁場強度（１．５Ｔ〜９．４Ｔ）での緩和測定については、Ｔ１加重高速スポイルグラジエントエコー（ＦＳＰＧＲ）シーケンスを用いて、対応するＭＲＩ装置上で同じ試料を画像化した。１／Ｔ１対濃度プロットの傾きを用いて各磁場強度での緩和を推定した。
【０１０２】
実施例１４：ＭＲＩによるマウスにおける例示的リポソーム画像のアミロイド斑
化合物ｉｉｉのリガンドを使用してアミロイド斑を標的とするデュアルＧｄリポソームを、したがって、マウス中のアミロイド斑を画像化するそれらの能力について試験した。デュアルＧｄ／化合物ｉｉｉリポソームをマウス内に静脈内注射し、１Ｔ  ＭＲＩスキャナーでＴ１加重スピンエコーシーケンス（ＴＥ＝３２ｍｓ、ＴＲ＝７７０ｍｓ）を用いて４日後にスキャンした。デュアル−Ｇｄ／化合物ｉｉｉリポソームは、アミロイド保有マウスの２つの異なる系統（１５ヶ月齢のＴｅｔＯ／ＡＰＰｓｗｅ−ｉｎｄおよび９ヶ月齢のＴｇ２５７６）において、アミロイド沈着に特徴的なパターンでシグナル増強をもたらした。同じマウスの注射前スキャンおよび同様に注射したアミロイド陰性マウス、ならびに同じ粒子の非標的バージョン（すなわち、化合物ｉｉｉを含まない）を注射したアミロイド陽性マウスでは、比較してシグナルは得られなかった。未結合リポソームが循環から除去されるように、４日の遅延を計画した。ＰＥＧ化リポソームは約２４時間の循環半減期を有しており、過去の経験から、４日の遅延が血液プールからのリポソームのほぼ完全な除去に十分であることが示唆された。
【０１０３】
組織学：４日後の画像を取得した直後に、マウスを生理食塩水、続いて１０％ホルマリンで灌流して屠殺し、脳を摘出して２４時間１０％ホルマリンに浸漬し、次いで、３０％スクロースに移し、脳が沈むまで（通常は約７２時間）冷蔵した。脳全体のＮＩＲイメージングをこの段階で行った。次いで、この脳をＯＣＴ溶液中に包埋し−８０℃で保存して、その後連続切片にした。切片を３０μｍの厚さに切断し、０．２％Ｔｗｅｅｎを含むトリス緩衝生理食塩水中で洗浄した。アミロイド抗体染色については、切片を１時間、５％正常ロバ血清中でインキュベートし、続いて、３％ＮＤＳ中の抗アミロイドβ抗体（４Ｇ８、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯから）と４℃で一晩インキュベートした。次いで、切片を洗浄し、ＦＩＴＣまたはＣｙ５タグ付きｄｙｌｉｇｈｔ６４９抗マウスＩｇＧ二次抗体とインキュベートし、Ｖｅｃｔａｓｈｉｅｌｄマウンティングメディウム（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ  ＣＡ）を用いてマウントしカバースライドをかぶせ、適切なフィルターセットを用いて画像化した。
【０１０４】
この研究からの例示的な画像を図１１Ａ〜Ｆに示す。ナノ粒子ＭＲ剤の静脈注射の前および４日後の、マウスモデルにおけるアミロイド斑のＴ１加重ＭＲイメージング。２Ｄスピンエコーシーケンス（ＴＥ＝３２ｍｓ、ＴＲ＝７７０ｍｓ、スライス厚＝１．２ｍｍ、ＦＯＶ＝３０×３０ｍｍ、マトリックス＝１５６×１５６、およびＮＥＸ＝２）を用いた。皮質および海馬を通じて脳の冠状２Ｄスライスを示す。図１１Ａは、１５ヶ月齢のＴｅｔＯ／ＡＰＰｓｗｅ−ｉｎｄマウスの結果を示し、ここでＡＰＰ生成は食事中のドキシサイクリンによって生後６週まで抑制された。図１１Ｂは、図１１Ａのマウスの注射前スキャンの結果を示す。図１１Ｃ、Ｄはそれぞれ、９ヶ月齢のＴｇ２５７６マウス（ＡＰＰｓｗｅ）および同じマウスの注射前スキャンの結果を示す。図１１Ｅは、非標的（非アミロイド結合）粒子を注射したＴｇ２５７６マウスの結果を示す。図１１Ｆは、アミロイド標的粒子を注射した図１１Ｅのマウスの非トランスジェニック同胞の結果を示す。総シグナルを、Ｏｓｉｒｉｘソフトウェアを用いて「レインボー」カラーマップにマッピングした（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｏｓｉｒｉｘ−ｖｉｅｗｅｒ．ｃｏｍ／からオンラインで入手できる）。優勢な青色の背景から緑色の前景の範囲は、２倍超のシグナル増加を表す。緑色から黄色の範囲は、さらなる２倍の増加を示す。９ヶ月齢のＴｇ２５７６マウスは、より年をとったＴｅｔＯ／ＡＰＰマウス（広範な皮質および海馬のシグナル、脳室はシグナルなし）と比較して、非常に異なる標識パターンを示し（軟膜、海馬およびある程度のシグナルが脳室中にあった）、Ｔｇ２５７６例におけるＣＳＦからの遅いクリアランスを示唆する。各群において６／６の動物がこれらの画像と一致したが、Ｔｇ２５７６  ＡＰＰ＋動物は例外で、その２／６がこの増強パターンを示した。残りの４／６は増強を示さず、非トランスジェニック同胞動物とは区別できなかった。しかしながら、Αβへの４Ｇ８抗体を用いた免疫組織化学により、増強を示さなかった４匹の動物は、脳に重要なアミロイド病理も有していなかったことが明らかになった。
【０１０５】
したがって、図１２の表形式にまとめたように、アミロイド沈着物の存在と陽性ＭＲＩシグナルとの間に完全な対応があった。図１２は、４Ｇ８抗体を用いた免疫組織化学、使用したイメージング剤（化合物ｉｉｉ標的化または対照非標的化）およびマウス脳での個々のナノ粒子の存在の測定によるアミロイド病理スコアを示す。Αβ斑の半定量的スコアリングは、０（なし）、１（まばら）、２（中等度）、および３（重度／頻繁）の４層のスケールによった。ＩＣＧ、リガンド、およびＭＲＩの陽性シグナルの存在は、「Ｘ」によって示され、不在は「−」によって示される。免疫組織化学の結果とナノ粒子の存在の測定のそれぞれとの間には、ほぼ１００％の相関があった。標的剤で処置したいずれかの系統のＡＰＰ＋マウス（ＴｅｔＯ／ＡＰＰｓｗｅ、またはＴｇ２５７６）は、ＭＲＩ、免疫組織化学およびナノ粒子の存在の蛍光マーカーにおいて陽性シグナルを示したが、非標的剤で処置したいずれかの系統のＡＰＰ＋マウスは全くシグナルを示さず、ＡＰＰ−マウスは、処置にかかわらずシグナルを示さなかった。このデータは、アミロイド斑に近づき結合できる標的剤と一致し、結合がないと排除されるが、標的リガンドが存在しないと結合は生じない。
【０１０６】
図１３Ａ〜１３Ｚは、図１２にまとめたデータの代表的な１３ペアのＭＲＩ画像を表す。各ペアの画像について、右側の画像はコントラスト前のものであり、左側の画像は、コントラスト後３〜４日の時点のものである。類似のまたは同一のカラーマップを提供するために、全ての画像のペアを同一のウィンドウレベルおよび幅で配置した。各画像のペアを、マウス（系統（ＴｅｔＯ／ＡＰＰまたはたＴｇ２５７６）、遺伝子型（ＡＰＰ＋またはＡＰＰ−）、および処置（化合物ｉｉｉ標的粒子、または非標的粒子）によって識別する。
【０１０７】
実施例１５：マウスにおけるＩＲ蛍光による例示的リポソーム画像のアミロイド斑
リポソームはまた、近赤外イメージングのために、二重層に約０．６モル％のインドシアニングリーン（ＩＣＧ）を含有していた。図１４Ａ〜Ｈ４は、死後のマウスの脳の近赤外イメージングの結果を示す。Ｔｇ２５７６マウスの脳切片の共焦点イメージングにより、トランスジェニックマウスの皮質および海馬におけるＩＣＧシグナルの増強が明らかになり、非トランスジェニック対照（図１４Ｂ）と比較した場合ＡＰＰ＋脳において局在性がより高い（図１４Ａ）ことが示された。高倍率では、図１４Ｅが、図１４Ａに対応するアミロイド沈着物の特徴的な点状構造を明らかにした；図１４Ｆは、図１４Ｂの対照に相当する。
【０１０８】
ＴｅｔＯ／ＡＰＰ＋マウスの全脳は、ＡＰＰ−同胞対照（図１４Ｄ）よりも高い近赤外蛍光を示した（図１４Ｃ）。血管漏出位置に相当する所々に存在するホットスポットを有するＡＰＰ−陰性脳における全体的に低いシグナル（図１４Ｄ）と比較して、ＡＰＰ−陽性脳では均一に増加したＩＣＧシグナルが局在した（図１４Ｃ）。
【０１０９】
３つの斑のクラスター（図１３Ｇ１〜Ｇ４）および個々の斑（図１３Ｈ１〜Ｈ４）に対して、アミロイド斑に対する蛍光標識４Ｇ８抗体を用いて、抗体（緑、図１４Ｇ１）、ＩＣＧ（赤）および化合物ｉｉｉ（青）の共局在が示された。ＭＲＩシグナルの場合と同様に、蛍光シグナルはまた、図１２にまとめたようなアミロイド病理の存在の免疫組織化学的測定と一致した。これらの結果は、化合物ｉｉｉ標的デュアル−ＧｄリポソームがＢＢＢを貫通し、アミロイド斑を探し求め、臨床磁場強度でＭＲＩを用いて検出するのに十分なシグナル増強をもたらすことができることを確認するものである。
【０１１０】
考察
合成の取り組みは、図１Ａ〜１Ｂ中の最低のＣＬｏｇＰ値を有する３つの化合物（化合物ｉｉ、化合物ｉおよび化合物ｉｉｉ）に焦点を当てた。合成および精製は効率的であり、全収率は約９０％であった。化合物ｉｉおよび化合物ｉｉｉを、アミロイド線維の結合および特異性について試験し、非常に類似した結果が得られたことから、アミロイド結合能力は、これらの分子の比較的高い親水性によって顕著に影響されないことが示唆された。実際には、ＭｅＸＯ４で行った類似の研究と比較して本分子はＭｅＸＯ４よりも非常に強くアミロイド線維に結合するようであり、クリサミン−Ｇで置換された結合種はＭｅＸＯ４での８０％超と比較して、わずか約６０％である。化合物ｉｉｉを、そのより低いＣＬｏｇＰ値およびわずかにより高いアミロイド結合能力に基づいて、リード候補として選択した。
【０１１１】
図８に示すように、化合物ｉｉｉの親水性は、二重層を損なうことなく、安定なリポソームの形成をもたらした。二重層中に飽和脂質およびコレステロールを有するリポソームは、１００ｎｍの膜を通して押出された場合に、約１００ｎｍの直径を有するリポソームをもたらす。１００ｎｍよりもかなり大きい粒径は、図８および図９においてＭｅＸＯ４リポソームで実証されたように、二重層の不安定化、小胞融合、およびマルチラメラ構造の形成と関連する。比較的疎水性のＭｅＸＯ４リガンドは、柔軟なＰＥＧテザーによってリポソーム表面上に係留された場合に、図８および図９ＡにおいてＭｅＸＯ４リポソームで実証されたように、二重層中に分配し、二重層の安定性を損なう原因となると考えられる。より親水性の化合物ｉｉｉリガンドでＭｅＸＯ４リガンドを置換すると、リガンドが二重層中に分配する傾向は排除または低減され、これにより化合物ｉｉｉ標的化リポソームについて観察された図８のデータによって実証される二重層の完全性が保持される。
【０１１２】
アミロイド病理を結合する化合物ｉｉｉの能力を、８８歳のヒトＡＤ患者の剖検から得たヒト脳組織を用いて試験した。化合物ｉｉｉは、アミロイド斑の染色と一致する病巣パターンでヒト組織を明瞭に染色する（図５Ｃ）。老犬はΒ−アミロイド沈着の天然モデルであり、１２．３歳の老犬のビーグルからの前頭皮質の切片を化合物ｉｉｉ中でインキュベートしても、ＣＡＡ標識が示された（図５Ｄ）。
【０１１３】
アミロイド斑の可視化を可能にするのに十分なＴ１シグナルを有するナノ粒子を構築するために、発明者らは、Ｇｄ緩和の増強を誘導することが以前に実証されたデュアル−Ｇｄプレゼンテーションを採用した。二重層中に挿入されたビス−ステアリルアミドのアンカーへのＧｄキレートのコンジュゲートはＧｄ原子の回転相関を遅らせ、それによって、回転相関時間τＲを増加させることができる。Ｇｄキレートの回転相関時間の増加は、約１Ｔの低磁場強度でＴ１緩和にピークをもたらすが、この増強は７Ｔ超のより高い磁場強度で大幅に低減され、最終的には元に戻され得る。これは、観察された挙動と一致する（図１０Ａ）。リポソーム表面ＧｄのＴ１緩和（ＧＤモルベースで）は、１．４Ｔおよび１．５Ｔでの遊離分子キレートのそれよりも２．５倍高かったが、より高い磁場では、遊離分子キレートはより高い緩和を示した。したがって、緩和およびインビボイメージングを、低い（１Ｔ）磁場強度で試験した。
【０１１４】
標的化リポソーム（本明細書で考慮される化合物ｉｉｉ標的化リポソームなど）が分子標的（アミロイド斑のベータシート構造など）に結合できる場合、それぞれの分子標的はリポソーム全体と結合でき、ＭＲ画像中の対応するシグナルは、リポソーム全体に起因し得る。したがって、リポソームモルベースでの緩和は、分子標的に結合したシグナルに線形に関連し得る。したがって、表面Ｇｄリポソームの緩和を、リポソーム二重層中の増加するＧｄキレート濃度の関数として、リポソームモルベースで測定した。図１０Ｂの結果は、二重層中のＧｄキレートの数に対する、緩和の予想される線形依存性を示す。Ｇｄキレートを担持する二重層分子の２５％で、粒子単位のＴ１緩和は約１９０，０００ｍＭ−１Ｓ−１であると推定された。約１２０ｎｍの直径の粒子については、緩和は粒子当たりおおよそ４８，０００のＧｄキレートに対応し得、その半分はリポソーム二重層の外側リーフレット上に存在し、半分は内部リーフレット上に存在し得る。内部リーフレットＧｄはＴ１緩和に対して実質的に活性でないが、外側リーフレットのキレートは活性であると仮定すると、１．４Ｔ緩和計を用いて測定された桁と同じ桁の、Ｇｄ単位でおおよそ８ｍＭ−１Ｓ−１のモル緩和が示唆される（図１０Ａ）。
【０１１５】
血流中への注射投与の際に、化合物ｉｉｉ標的化リポソームは、血液脳関門を横断しアミロイド斑に強く結合するように思われた（図１１Ａ〜Ｆ）。血液脳関門のこのような透過性は、ＡＤのＡＰＰ／ＰＳＥＮ１マウスモデルにおいてＢＢＢを横断しアミロイド斑を標識するＭｅＸＯ４標的化リポソームの能力の過去の観測と一致した。過去の観測はまた、ＡＤのＴｅｔＯ／ＡＰＰモデルにおいてＢＢＢを横断する非標的化リポソームの能力を実証し、年齢依存的およびアミロイド依存的にＢＢＢを横断する顕著な漏れを実証した。試験した全てのマウスは脈絡叢の漏れを示したが、老いた（１４ヶ月齢を超える）マウスは主要な血管に沿って顕著により高い漏れを示し、一方でＡＰＰ＋マウスは大脳皮質においてより多くの漏れを示した。本研究のＴｅｔＯ／ＡＰＰマウスは全て１４ヶ月齢を超えており脳内でより広範なシグナルを示したが、Ｔｇ２５７６マウスは全て９〜１０ヶ月齢であり、軟膜および皮質血管の周囲に集中してより低いシグナルを示した。さらに、ＴｅｔＯ／ＡＰＰマウスの６／６は脳内に明瞭なシグナルを示し、標的剤の局在と一致したが、Ｔｇ２５７６動物の２／６のみが明瞭な脳のシグナルを示した。しかしながら、免疫組織化学的には、Ｔｇ２５７６動物の同じ２／６はアミロイド病理を示したが、残りの４／６は示さなかった。
【０１１６】
アミロイド斑への粒子の局在は、図１４Ａ〜Ｈ４のデータから確認される。インドシアニン標識を可視化する全脳の近ＩＲ画像（図１４Ｃ〜Ｄ）は、ＡＰＰ−脳と比較して、ＡＰＰ＋脳における局在の増加と一致した。ＡＰＰ＋およびＡＰＰ−マウスの皮質ならびに海馬を通るスライス（図１４Ａ〜Ｂ）は、ＡＰＰ＋脳において顕著な局在を示し、大脳皮質および海馬の部分で最大強度が観察された。顕著な染色が視床でも観察され、同じマウスのＭＲ画像における視床シグナルと一致した（図１４Ｃ）。大脳皮質の高倍率（図１４Ｅ〜Ｆ）下では、ＡＰＰ＋マウスの脳におけるＩＣＧシグナルは、病巣斑の標識と一致して点状であり、かつＣＡＡ標識と一致して血管壁に沿っていることが観察された。
【０１１７】
大脳皮質内の個々の病巣斑（図１４Ｇ１〜Ｈ４）の詳細な組織学的検査により、リガンド標的粒子は斑の密集部分と拡散部分の両方を標識するようであることが明らかにされる。図１４Ｇ１〜Ｈ４において、ＦＩＴＣで可視化した４Ｇ８抗体は緑色で標識され、ＩＣＧは赤色で標識され、化合物ｉｉｉリガンドは青色で標識される。図１４Ｇ１〜Ｇ４は、目に見える３つの病巣斑を有する領域を示す。その領域には、アミロイド沈着の周囲により拡散したパターンも存在する。４Ｇ８抗体は、これらの実体の両方を標識する。病巣斑は中央で比較的均一なアミロイド密度を有し、かつ周辺により高い密度を有するように思われ、抗体およびチオフラビンＳ染色を用いたマウスにおける斑の多数の他の観察と一致した。ＩＣＧおよび化合物ｉｉｉの標識（それぞれ赤色および青色）は、互いにおよび抗体標識と十分に相関し、斑の中央に低密度の結合を示し、周辺に高密度の小結節を示したので、リポソーム粒子が斑にそのまま結合し、高密度病巣斑とより低い密度の拡散した斑の両方を標識することは疑いの余地はない。
【０１１８】
ＴｅｔＯ／ＡＰＰマウスとＴＧ２５７６マウスの間でＭＲＩシグナルパターンにいくつかの違いが認められ、前者は大脳皮質、海馬、および線条体にシグナルを示し、ＣａＭｋＩＩαプロモーターの異質な活性によりこれらの領域に優先的にアミロイド沈着が存在することと一致した。より完全な沈着パターンがＴｇ２５７６マウスで観察され、より均一な斑の沈着と一致した。Ｔｇ２５７６マウスはまた、血管外遊出されるリポソームの推定輸送媒体である、脳脊髄液中の薬剤の継続的な存在が原因であり得る強い脳室シグナルを示した。
【０１１９】
リポソームは、以前に集合的に実証され、かつ３種類の異なるマウスモデルのＡＰＰ／ＰＳＥＮ１、ＴｅｔＯ／ＡＰＰＰ、およびＴｇ２５７６について本明細書で実証されたように、アミロイド沈着およびアルツハイマー病のマウスモデルにおいてＢＢＢを貫通する。以前の研究は単なるＰＥＧ化リポソームが容易にＢＢＢを通って輸送されることを実証したので、このＢＢＢ貫通は任意の能動輸送機構を必要としない。しかしながら、アミロイド沈着の部位におけるリポソームの長時間の保持は、分子標的への結合に依存する。発明者らの以前の研究での結合リガンドとしてのＭｅＸＯ４の使用により、アミロイド斑への結合および顕微鏡による生体外での可視化が実証された。本明細書で化合物ｉｉｉを用いて実証されたように、新規の標的リガンドの使用は二重層の完全性が改善されたリポソームをもたらし、結果として大量のＧｄキレートがカプセル化される。これらのＧｄキレートは、リポソームの表面上に提示され、低い（約１Ｔ）磁場強度で超緩和し、Ｔ１重み付けＭＲＩを用いてインビボでそれらの可視化を可能にするのに十分な約１９０，０００ｍＭ−１ｓ−１の粒子あたりの緩和を提供した。このように、２種類の異なるマウスモデル（Ｔｇ２５７６およびＴｅｔＯ／ＡＰＰ）においてアミロイド斑が可視化された。
【０１２０】
本発明の方法、リガンド、コンジュゲートおよびリポソームは、ヒトにおいてＢＢＢを横断するのを容易に促進すると考えられる。ＡＤおよびＭＣＩ患者で行なわれたＭＲＩ研究から、ＢＢＢが実際に損なわれており損害の程度はアミロイド負荷に依存しないことが知られている。また、ＤＣＥ−ＭＲＩを用いた最近の研究により、高齢のヒトの海馬においてＢＢＢが破壊され浸透性になることが確認された。この薬剤がマウス過剰発現モデル以外のアミロイド病理を結合することの確認は、イヌ脳およびヒトの脳切片におけるインビトロでのアミロイド沈着物への結合を試験することによって本明細書で実証される。したがって、本発明の方法、リガンド、コンジュゲートおよびリポソームは、ヒトにおいて機能し得る。
【０１２１】
本出願は、臨床的に許容される磁場強度での齧歯類モデル内のアミロイド斑のＭＲＩ画像を示し、これはヒトにおける斑の解析およびＡＤの診断へと拡大されると考えられる。記載のＭＲＩイメージングは、ＰＥＴイメージングなどの現在の非侵襲的イメージング技術を上回る、可用性の向上、コストの低下、および高解像度を含むいくつかの実質的な利点を提供できる。アミロイド斑のイメージングのための既知の、承認されたＰＥＴ薬剤の利用可用性は限られており、大規模な学術医療センターに制限され得る。これとは対照的に、本明細書に記載の研究は、世界中に可用性を提供できる。さらに、Ｔ１剤は、それらの陽性シグナルのために非常に魅力的であり、シグナル解釈の信頼の増加につながり得る。本明細書に記載の研究は、ヒトのイメージングのための最先端のＭＲＩスキャナーと一致して、低磁場（１〜３Ｔ）スキャナーでの使用を目的としている。
【０１２２】
アミロイド斑の分析に加えて、本明細書に記載の研究は、ＡＤを診断するために、神経原線維のタウ濃縮体の識別などの第２のマーカーと組み合わせて使用できる。
【０１２３】
用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」または「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」は、本明細書または特許請求の範囲において使用される程度まで、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」が特許請求の範囲において移行語として使用された場合に解釈されるのと同様に包括的であることが意図される。さらに、用語「または」が使用される程度まで（例えば、ＡまたはＢ）、それは、「ＡまたはＢまたは両方」を意味することが意図される。「ＡまたはＢのみだが、両方ではない」が意図される場合には、用語「ＡまたはＢのみだが、両方ではない」が採用されるであろう。したがって、本明細書において用語「または」の使用は、包括的な使用であり、排他的な使用ではない。本明細書および特許請求の範囲において使用されるように、単数形の「１つ（ａ）」、「１つ（ａｎ）」および「その」は、複数を含む。最後に、用語「約」が数と組み合わせて使用される場合には、数の±１０％を含むことが意図される。例えば、「約１０」は、９〜１１を意味し得る。
【０１２４】
一般に、「置換」は、以下に定義されるような有機基（例えば、アルキル基）を指し、その中に含有される水素原子への１個以上の結合は、非水素または非炭素原子への結合によって置き換えられる。置換基はまた、炭素（複数可）または水素（複数可）の原子への１個以上の結合が、二重または三重結合を含む１個以上の結合によってヘテロ原子へ置き換えられる基を含む。このように、特に断りのない限り、置換基は、１個以上の置換基によって置換される。いくつかの実施形態において、置換基は、１、２、３、４、５、または６個の置換基によって置換される。置換基の例としては、ハロゲン（すなわち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＩ）；ヒドロキシル；アルコキシ、アルケノキシ、アリールオキシ、アラルキルオキシ、ヘテロシクリルオキシ、およびヘテロシクリルアルコキシ基；カルボニル（オキソ）；カルボキシル；エステル；ウレタン；オキシム；ヒドロキシルアミン；アルコキシアミン；アラルコキシアミン；チオール；スルフィド；スルホキシド；スルホン；スルホニル；スルホンアミド；アミン；Ｎ−オキシド；ヒドラジン；ヒドラジド；ヒドラゾン；アジド；アミド；尿素；アミジン；グアニジン；エナミン；イミド；イソシアネート；イソチオシアネート；シアネート；チオシアネート；イミン；ニトロ基；およびニトリル（すなわち、ＣＮ）などが挙げられる。
【０１２５】
置換されたシクロアルキル、アリール、ヘテロシクリルおよびヘテロアリール基などの置換された環基はまた、水素原子への結合が炭素原子への結合で置き換えられる環および環系を含む。したがって、置換されたシクロアルキル、アリール、ヘテロシクリルおよびヘテロアリール基はまた、以下に定義されるような、置換されているか、または置換されていないアルキル、アルケニル、およびアルキニル基によって置換され得る。
【０１２６】
アルキル基は、１〜１２個の炭素原子、典型的には１〜１０個の炭素、または、いくつかの実施形態において、１〜８、１〜６、または１〜４個の炭素原子を有する直鎖および分枝鎖のアルキル基を含む。直鎖アルキル基の例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、およびｎ−オクチル基などの基が挙げられる。分岐アルキル基の例としては、イソプロピル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ネオペンチル、イソペンチル、および２，２−ジメチルプロピル基が挙げられるが、これらに限定されない。代表的な置換アルキル基は、上記のものなどの置換基で１回以上置換され、限定されないが、ハロアルキル（例えば、トリフルオロメチル）、ヒドロキシアルキル、チオアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アルコキシアルキル、およびカルボキシアルキルなどを含み得る。
【０１２７】
シクロアルキル基は、環（複数可）に３〜１２個の炭素原子を有するか、またはいくつかの実施形態において、３〜１０、３〜８、または３〜４、５、もしくは６個の炭素原子を有する単環式、二環式または三環式アルキル基を含む。例示的な単環式シクロアルキル基には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、およびシクロオクチル基が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、シクロアルキル基は、３〜８個の環員を有するが、他の実施形態において、環炭素原子数は、３〜５、３〜６、または３〜７に及ぶ。二環式および三環式環系には、限定されないが、ビシクロ［２．１．１］ヘキサン、アダマンチル、およびデカリニルなどの架橋シクロアルキル基および縮合環の両方が含まれる。置換シクロアルキル基は、上記で定義したような非水素および非炭素基で１回以上置換され得る。しかしながら、置換シクロアルキル基はまた、上記で定義されるような直鎖または分枝鎖のアルキル基によって置換された環も含む。代表的な置換シクロアルキル基は、モノ置換であるか、または複数回置換され、例えば、限定されないが、上記に列挙したものなどの置換基によって置換され得る２，２−、２，３−、２，４−、２，５−または２，６−二置換シクロヘキシル基などであり得る。
【０１２８】
アリール基は、ヘテロ原子を含有しない環状芳香族炭化水素である。アリール基は、本明細書では、単環式、二環式および三環式環系を含む。このように、アリール基には、フェニル、アズレニル、ヘプタレニル、ビフェニル、フルオレニル、フェナントレニル、アントラセニル、インデニル、インダニル、ペンタレニル、およびナフチル基が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、アリール基は、基の環部分に６〜１４個の炭素を含有し、他の実施形態において、６〜１２またはさらには６〜１０個の炭素原子を含有する。いくつかの実施形態において、アリール基は、フェニルまたはナフチルである。語句「アリール基」は、縮合芳香族−脂肪族環系など（例えば、インダニル、およびテトラヒドロナフチルなど）の縮合環を含有する基を含むが、これは、環員の１つに結合した、アルキルまたはハロ基などの他の基を有するアリール基を含まない。むしろ、トリルなどの基は置換アリール基と呼ばれる。代表的な置換アリール基は、モノ置換であるか、または複数回置換され得る。例えば、モノ置換アリール基には、上記に列挙したものなどの置換基によって置換され得る２−、３−、４−、５−、もしくは６−置換フェニル基またはナフチル基が含まれるが、これらに限定されない。
【０１２９】
アラルキル基は、アルキル基の水素または炭素結合が上記で定義したようなアリール基への結合で置き換えられた、上記で定義したようなアルキル基である。いくつかの実施形態において、アラルキル基は、７〜１６個の炭素原子、７〜１４個の炭素原子、または７〜１０個の炭素原子を含有する。置換アラルキル基は、基のアルキル部分、アリール部分またはアルキル部分とアリール部分の両方によって置換され得る。代表的なアラルキル基には、４−インダニルエチルなどのベンジルおよびフェネチル基ならびに縮合（シクロアルキルアリール）アルキル基が含まれるが、これらに限定されない。代表的な置換アラルキル基は、上記に列挙したものなどの置換基で１回以上置換され得る。
【０１３０】
複素環基は、１個以上が、限定されないが、Ｎ、Ｏ、およびＳなどのヘテロ原子である３個以上の環員を含有する芳香環（ヘテロアリールとも呼ばれる）ならびに非芳香環化合物を含む。いくつかの実施形態において、ヘテロシクリル基は、１、２、３または４個のヘテロ原子を含有する。いくつかの実施形態において、複素環基は、３〜１６個の環員を有する単環式、二環式および三環式環を含み、他のそのような基は、３〜６、３〜１０、３〜１２、または３〜１４個の環員を有する。複素環基は、例えば、イミダゾリル、イミダゾリニルおよびイミダゾリジニル基などの芳香環系、部分不飽和環系および飽和環系を包含する。語句「複素環基」には、例えば、ベンゾトリアゾリル、２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシニル、およびベンゾ［１，３］ジオキソリルなどの、縮合芳香族基ならびに非芳香族基を含むものを含む縮合環種を含む。この語句はまた、限定されないがキヌクリジルなどのヘテロ原子を含有する架橋多環式環系を含む。しかしながら、この語句は、環員の１つに結合したアルキル、オキソまたはハロ基などの他の基を有する複素環基を含まない。むしろ、これらは、「置換複素環基」と呼ばれる。複素環基には、アジリジニル、アゼチジニル、ピロリジニル、イミダゾリジニル、ピラゾリジニル、チアゾリジニル、テトラヒドロチオフェニル、テトラヒドロフラニル、ジオキソリル、フラニル、チオフェニル、ピロリル、ピロリニル、イミダゾリル、イミダゾリニル、ピラゾリル、ピラゾリニル、トリアゾリル、テトラゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、チアゾリニル、イソチアゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、ピペリジル、ピペラジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、オキサチアン、ジオキシル、ジチアニル、ピラニル、ピリジル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピラジニル、トリアジニル、ジヒドロピリジル、ジヒドロジチイニル、ジヒドロジチオニル、ホモピペラジニル、キヌクリジル、インドリル、インドリニル、イソインドリル、アザインドリル（ピロロピリジル）、インダゾリル、インドリジニル、ベンゾトリアゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンゾオキサジニル、ベンゾジチイニル、ベンゾオキサチイニル（ｂｅｎｚｏｘａｔｈｉｉｎｙｌ）、ベンゾチアジニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾ［１，３］ジオキソリル、ピラゾロピリジル、イミダゾピリジル（アザベンゾイミダゾリル）、トリアゾロピリジル、イソオキサゾピリジル、プリニル、キサンチニル、アデニニル、グアニニル、キノリニル、イソキノリニル、キノリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、フタラジニル、ナフチリジニル、プテリジニル、チアナフチル、ジヒドロベンゾチアジニル、ジヒドロベンゾフラニル、ジヒドロインドリル、ジヒドロベンゾジオキシニル、テトラヒドロインドリル、テトラヒドロインダゾリル、テトラヒドロベンズイミダゾリル、テトラヒドロベンゾトリアゾリル、テトラヒドロピロロピリジル、テトラヒドロピラゾロピリジル、テトラヒドロイミダゾピリジル、テトラヒドロトリアゾロピリジル、およびテトラヒドロキノリニル基が含まれるが、これらに限定されない。代表的な置換複素環基は、モノ置換であるか、または複数回置換され得、２−、３−、４−、５−、もしくは６−置換であるか、または上記に列挙したものなどの様々な置換基によって置換されている、限定されないがピリジルまたはモルホリニル基などであり得る。
【０１３１】
ヘテロアリール基は、５個以上の環員を含有する芳香環化合物であり、そのうちの１個以上が、限定されないが、Ｎ、Ｏ、およびＳなどのヘテロ原子である。ヘテロアリール基には、ピロリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、チオフェニル、ベンゾチオフェニル、フラニル、ベンゾフラニル、インドリル、アザインドリル（ピロロピリジニル）、インダゾリル、ベンゾイミダゾリル、イミダゾピリジニル（アザベンズイミダゾリル）、ピラゾロピリジニル、トリアゾロピリジニル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、イミダゾピリジニル、イソオキサゾロピリジニル、チアナフチル、プリニル、キサンチニル、アデニニル、グアニニル、キノリニル、イソキノリニル、テトラヒドロキノリニル、キノキサリニル、およびキナゾリニル基などの基が含まれるが、これらに限定されない。ヘテロアリール基は、全ての環がインドリル基などの芳香族である縮合環化合物を含み、環の１つのみが２，３−ジヒドロインドリル基などの芳香族である縮合環化合物を含む。語句「ヘテロアリール基」は、縮合環化合物を含むが、この語句は、アルキル基などの環員の１つに結合した他の基を有するヘテロアリール基を含まない。むしろ、そのような置換を有するヘテロアリール基は、「置換ヘテロアリール基」と呼ばれる。代表的な置換ヘテロアリール基は、上記に列挙したものなどの様々な置換基で１回以上置換され得る。
【０１３２】
ヘテロアラルキル基は、アルキル基の水素結合または炭素結合が上記で定義したようなヘテロアリール基への結合と置き換えられる上記で定義したようなアルキル基である。置換ヘテロアラルキル基は、基のアルキル部分、ヘテロアリール部分またはアルキル部分とヘテロアリール部分の両方によって置換され得る。代表的な置換ヘテロアラルキル基は、上記に列挙したものなどの置換基で１回以上置換され得る。
【０１３３】
本技術の化合物中に２個以上の付着点（すなわち、二価、三価、または多価）を有する本明細書に記載の基は、接尾語「エン」を使用することによって命名される。例えば、二価のアルキル基はアルキレン基であり、二価のアリール基はアリーレン基であり、二価のヘテロアリール基はヘテロアリーレン基である、などである。本技術の化合物への１個の付着点を有する置換基は、「エン」命名を使用して呼ばれない。したがって、例えば、クロロエチルは、本明細書においてクロロエチレンと呼ばれない。
【０１３４】
アルコキシ基は、水素原子への結合が、上記で定義したような置換もしくは非置換のアルキル基の炭素原子への結合によって置き換えられたヒドロキシル基（−ＯＨ）である。直鎖アルコキシ基の例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペントキシ、およびヘキソキシなどが挙げられるが、これらに限定されない。分岐アルコキシ基の例としては、イソプロポキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、イソペントキシ、およびイソヘキソキシなどが挙げられるが、これらに限定されない。シクロアルコキシ基の例としては、シクロプロピルオキシ、シクロブチルオキシ、シクロペンチルオキシ、およびシクロヘキシルオキシなどが挙げられるが、これらに限定されない。代表的な置換アルコキシ基は、上記に列挙したものなどの置換基で１回以上置換され得る。
【０１３５】
本明細書で使用する用語「アミン」（または「アミノ」）は、ＮＲａＲｂ基を指し、式中、ＲａおよびＲｂは、独立して、水素、または本明細書で定義されるような置換されているかもしくは置換されていないアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクリルアルキルまたはヘテロシクリル基である。いくつかの実施形態において、アミンは、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、またはアルキルアリールアミノである。他の実施形態において、アミンは、ＮＨ２、メチルアミノ、ジメチルアミノ、エチルアミノ、ジエチルアミノ、プロピルアミノ、イソプロピルアミノ、フェニルアミノ、またはベンジルアミノである。用語「アルキルアミノ」は、ＮＲｃＲｄとして定義され、式中、ＲｃおよびＲｄのうちの少なくとも１つはアルキルであり、他方はアルキルまたは水素である。用語「アリールアミノ」は、ＮＲｅＲｆとして定義され、式中、ＲｅおよびＲｆのうちの少なくとも１つはアリールであり、他方はアリールまたは水素である。
【０１３６】
本明細書で使用する用語「ハロゲン」または「ハロ」は、臭素、塩素、フッ素、またはヨウ素を指す。いくつかの実施形態において、ハロゲンはフッ素である。他の実施形態において、ハロゲンは塩素または臭素である。
【０１３７】
上述したように、本出願は、実施形態の説明により例示されており、それらの実施形態をかなり詳細に説明してきたが、本出願は、添付の特許請求の範囲をそのような詳細に制限するか、またはいかなる方法で限定することを意図するものではない。当業者は、本出願の利益を有する追加の利点および修正が容易に思い付くであろう。したがって、本出願は、そのより広い態様において、示された特定の詳細および例示的な実施例に限定されるものではない。逸脱は、一般的な発明の概念の精神または範囲から逸脱することなく、そのような詳細および実施例からなされ得る。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１１Ｄ】
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【図１１Ｅ】
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【図１１Ｆ】
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【図１２】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１３Ｄ】
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【図１３Ｅ】
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【図１３Ｆ】
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【図１３Ｇ】
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【図１３Ｈ】
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【図１３Ｉ】
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【図１３Ｊ】
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【図１３Ｋ】
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【図１３Ｌ】
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【図１３Ｍ】
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【図１３Ｎ】
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【図１３Ｏ】
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【図１３Ｐ】
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【図１３Ｑ】
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【図１３Ｒ】
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【図１３Ｓ】
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【図１３Ｔ】
0006505235.tif 000106
【図１３Ｕ】
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【図１３Ｖ】
0006505235.tif 000108
【図１３Ｗ】
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【図１３Ｘ】
0006505235.tif 000110
【図１３Ｙ】
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【図１３Ｚ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１４Ｃ】
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【図１４Ｄ】
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【図１４Ｅ】
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【図１４Ｆ】
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【図１４Ｇ１】
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【図１４Ｇ２】
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【図１４Ｇ３】
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【図１４Ｇ４】
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【図１４Ｈ１】
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【図１４Ｈ２】
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【図１４Ｈ３】
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【図１４Ｈ４】
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