(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記Ａ成分及び／又はＢ成分が添加された培地で酵母を培養することを含む、ポリアミンを１５０ｍｇ／１００ｇ菌体（乾物換算）以上の量で含有するポリアミン高含有酵母の製造方法：
Ａ成分  プトレスシン、スペルミジン及びスペルミンからなる群より選択される１種以上のポリアミンを、合計で０．１ｍＭ以上；
Ｂ成分  塩化ナトリウム、グルタミン酸ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、クエン酸と水酸化ナトリウム、クエン酸のナトリウム塩、及びリンゴ酸ナトリウムからなる群より選択される１種以上のナトリウム源を、ナトリウム濃度として２５ｍＭ以上。
【請求項２】
前記培地にＡ成分とＢ成分が両方添加されている、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記酵母がサッカロマイセス属である、請求項１又は２記載の方法。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項記載の方法で製造された酵母からポリアミンを分離することを含む、ポリアミンの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ポリアミンを高濃度で含有する酵母、及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ポリアミンは第１級アミノ基を複数有する直鎖状脂肪族炭化水素の総称であり、生物の細胞内に普遍的に存在する。現在までに、２０種類以上のポリアミンの存在が報告されている。ヒトの体内のポリアミンは、主にプトレスシン、スペルミジン及びスペルミンの３種類であり、２０歳台をピークにその量は減少する。ポリアミンは、細胞の分裂に必要な成分であり、細胞内ポリアミン量が減少すると、細胞のターンオーバーが低下し、老化が促進すると考えられている。
【０００３】
したがって、体外からポリアミンを補充することによって、様々な生理効果を享受できると期待される。ポリアミンを多く含む食品としては、大豆、キノコ類、鶏肉、チーズなどが知られている。しかし、通常の食品中に含まれるポリアミンの量はそれほど多くないことから、日常の食事から充分な量のポリアミンを摂取することは容易ではない。
【０００４】
食品素材からポリアミンを調製する方法が提案されている。特許文献１及び２には、チーズホエー等の乳又は乳素材から限外濾過やイオン交換処理によりポリアミンを分離、回収する方法が記載されている。特許文献３には、白子から鉱酸処理及び遠心分離によってポリアミンを回収する方法が記載されている。しかしながら、上記方法は、原料食品素材中のポリアミンの含量が多くないことから、生産性が低く、また精製のために煩雑な工程を必要とするなどコスト高である。
【０００５】
特許文献４には、酵母に高濃度のポリアミンが含まれていること、及び酵母の菌体や培養液を酸溶液で抽出することによりポリアミン含有画分を分離、精製する方法が記載されている。従来報告されている酵母のポリアミン含量は、特許文献４によれば、乾燥菌体１００ｇ中、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅで約１３ｍｇ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｄｉａｓｔａｔｉｃａｓで約２３ｍｇ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｕｌｉｔｉｓで約１０３ｍｇである。非特許文献１の報告から算出される菌体１００ｇ（湿重量）中のプトレスシン、スペルミジン及びスペルミンの合計含量は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅで約１７ｍｇ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｌａｂｒａｔｅで約３０ｍｇ、Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｒｏｕｘｉｉで約２１ｍｇである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開平６−３０５９５６号公報
【特許文献２】特開２００１−８６６３号公報
【特許文献３】特開平８−２３８０９４号公報
【特許文献４】特開平１０−５２２９１号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】群馬保健学紀要  ２５：１１７−１２３，２００４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、ポリアミン源として有用なポリアミンを高濃度で含有する酵母、及びその製造方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、種々検討した結果、酵母をプトレスシン、スペルミジン、スペルミン等のポリアミン、及び／又は特定の種類のナトリウム源を添加した培地で培養することにより、酵母菌体内のポリアミン含有量が飛躍的に増大することを見出した。これらの知見に基づいて、本発明者らは、酵母のポリアミン生産性を向上させ、従来公知の酵母と比べて菌体内のポリアミン含有量が著しく高い酵母を製造することに成功した。
【００１０】
したがって、本発明は、下記Ａ成分及び／又はＢ成分が添加された培地で酵母を培養することを含む、ポリアミン高含有酵母の製造方法：
Ａ成分  プトレスシン、スペルミジン及びスペルミンからなる群より選択される１種以上のポリアミンを、合計で０．１ｍＭ以上；
Ｂ成分  塩化ナトリウム、グルタミン酸ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、クエン酸と水酸化ナトリウム、クエン酸のナトリウム塩、及びリンゴ酸ナトリウムからなる群より選択される１種以上のナトリウム源を、ナトリウム濃度として２５ｍＭ以上、
を提供する。
【００１１】
また本発明は、下記Ａ成分及び／又はＢ成分が添加された培地で酵母を培養することを含む、酵母のポリアミン生産性の向上方法：
Ａ成分  プトレスシン、スペルミジン及びスペルミンからなる群より選択される１種以上のポリアミンを、合計で０．１ｍＭ以上；
Ｂ成分  塩化ナトリウム、グルタミン酸ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、クエン酸と水酸化ナトリウム、クエン酸のナトリウム塩、及びリンゴ酸ナトリウムからなる群より選択される１種以上のナトリウム源を、ナトリウム濃度として２５ｍＭ以上、
を提供する。
【００１２】
さらに本発明は、ポリアミンを１５０ｍｇ／１００ｇ菌体（乾物換算）以上の量で含有する、ポリアミン高含有酵母を提供する。
【００１３】
さらに本発明は、上記製造方法で製造されたポリアミン高含有酵母を提供する。
【００１４】
さらに本発明は、上記ポリアミン高含有酵母からポリアミンを分離することを含む、ポリアミンの製造方法を提供する。
【００１５】
さらに本発明は、下記Ａ成分及び／又はＢ成分を含有する酵母培養用培地：
Ａ成分  プトレスシン、スペルミジン及びスペルミンからなる群より選択される１種以上のポリアミンを、合計で０．１ｍＭ以上；
Ｂ成分  塩化ナトリウム、グルタミン酸ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、クエン酸と水酸化ナトリウム、クエン酸のナトリウム塩、及びリンゴ酸ナトリウムからなる群より選択される１種以上のナトリウム源を、ナトリウム濃度として２５ｍＭ以上、
を提供する。
【発明の効果】
【００１６】
本発明によれば、ポリアミンを高濃度で含有する酵母を提供することができる。本発明により提供されるポリアミン高含有酵母は、食品等に添加するためのポリアミン源として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】プトレスシン添加培地で培養した酵母菌体中のポリアミン量。
【図２】種々のナトリウム源添加培地で培養した酵母菌体中のポリアミン量。
【図３】種々のナトリウム源添加培地で培養した酵母菌体中のポリアミン量。
【図４】ナトリウム源添加酸性培地で培養した酵母菌体中のポリアミン量。
【図５】プトレスシン及びナトリウム源添加培地で培養した酵母菌体中のポリアミン量。各プトレスシン濃度について、ナトリウム源濃度は、左から０、２５、５０、１００ｍＭ。
【図６】クエン酸三ナトリウム添加培地で培養した酵母菌体中のポリアミン量。
【図７】プトレスシン及びクエン酸三ナトリウム添加培地で培養した酵母菌体中のポリアミン量。
【図８】プトレスシン及びリン酸二水素ナトリウム添加培地で培養した酵母菌体中のポリアミン量。
【図９】スペルミジン添加培地で培養した酵母菌体中のポリアミン量。
【図１０】プトレスシン及びスペルミジン添加培地で培養した酵母菌体中のポリアミン量。
【図１１】プトレスシン及びナトリウム源添加培地で培養した酵母菌体中のポリアミン量。Ａ：Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｒｏｕｘｉｉ、Ｂ：Ｃａｎｄｉｄａ  ｕｔｉｌｉｓ。
【図１２】通常培地で培養した酵母菌体中のポリアミン量。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本明細書において、「ポリアミン」とは、特に説明がない場合、第１級アミノ基を複数有する直鎖状脂肪族炭化水素をいい、その種類は特に限定されない。通常、酵母が主に産生するポリアミンはプトレスシン、スペルミジン及びスペルミンの３種類であるため、好ましくは、本明細書における「ポリアミン」とは、プトレスシン、スペルミジン及びスペルミンの総称である。したがって、本明細書における「酵母が含有するポリアミンの量」又は「酵母菌体中のポリアミンの量」とは、好ましくは、該酵母菌体中におけるプトレスシン、スペルミジン及びスペルミンの合計量を指す。酵母菌体中のポリアミンの量は、ＨＰＬＣ法（例えば、後述の参考例１及び２参照）などによって測定することができる。
【００１９】
本発明は、菌体中にポリアミンを高濃度で含有するポリアミン高含有酵母を提供する。本発明のポリアミン高含有酵母は、後述する培養方法に従って酵母を培養することによって製造することができる。
【００２０】
培養する酵母としては、通常の食用又は発酵に用いられる酵母を使用することができる。当該酵母の例としては、子嚢菌門のサッカロマイセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）、トルロプシス属（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ）、ジゴサッカロマイセス属（Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、シゾサッカロマイセス属（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、ピチア属（Ｐｉｃｈｉａ）、ヤロウィア属（Ｙａｒｒｏｗｉａ）、ハンセヌラ属（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ）、クルイウェロマイセス属（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）、デバリオマイセス属（Ｄｅｂａｒｙｏｍｙｃｅｓ）、ゲオトリクム属（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ）、ウィッケルハミア属（Ｗｉｃｋｅｒｈａｍｉａ）、フェロマイセス属（Ｆｅｌｌｏｍｙｃｅｓ）に属する酵母、及び担子菌門のスポロボロマイセス属（Ｓｐｏｒｏｂｏｌｏｍｙｃｅｓ）に属する酵母、などが挙げられる。これらの中でも、サッカロマイセス属、カンジダ属及びジゴサッカロマイセス属に属する酵母が好ましく、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐａｓｔｏｒｉａｎｕｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｕｔｉｌｉｓ、及びＺｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｒｏｕｘｉｉがより好ましい。
【００２１】
本発明において、上記酵母を培養するための培地としては、下記のＡ成分又は下記Ｂ成分が添加された培地が使用される。
Ａ成分）プトレスシン、スペルミジン及びスペルミンからなる群より選択される１種以上のポリアミン
Ｂ成分）塩化ナトリウム、グルタミン酸ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、クエン酸と水酸化ナトリウム、クエン酸のナトリウム塩、硫酸ナトリウム、コハク酸ナトリウム、酒石酸ナトリウム、フマル酸二ナトリウム、及びリンゴ酸ナトリウムからなる群より選択される１種以上のナトリウム源
【００２２】
Ａ成分は、プトレスシン、スペルミジン及びスペルミンからなる群より選択されるポリアミンのいずれか１種であっても、いずれか２種以上の組み合わせであっても、全部の組み合わせであってもよい。好ましくはプトレスシンが使用される。Ａ成分として使用されるプトレスシン、スペルミジン及びスペルミンは、合成物であっても、菌や食品などから調製した天然物であってもよい。
【００２３】
Ｂ成分は、ナトリウム源である。当該ナトリウム源としては、塩化ナトリウム、グルタミン酸ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、クエン酸と水酸化ナトリウム、クエン酸のナトリウム塩（例えば、クエン酸一ナトリウム、クエン酸二ナトリウム、クエン酸三ナトリウム）、硫酸ナトリウム、コハク酸ナトリウム、酒石酸ナトリウム、フマル酸二ナトリウム、及びリンゴ酸ナトリウムからなる群より選択される１種以上を使用することができる。当該ナトリウム源は、試薬として販売されているものを使用することができる。
【００２４】
本発明においては、上記Ａ成分及びＢ成分は単独で使用されても併用されてもよい。好ましくは、該Ａ成分及びＢ成分の両方を含む培地で酵母が培養される。上記Ａ成分が単独で使用される場合、培地に対するＡ成分の添加量は、該培地中のプトレスシン、スペルミジン及びスペルミンの合計濃度として、０．１ｍＭ以上、好ましくは０．３ｍＭ〜３０ｍＭ、より好ましくは０．５ｍＭ〜２０ｍＭである。より詳細には、該培地中におけるプトレスシンの好ましい濃度は０．５ｍＭ以上、より好ましくは１〜５０ｍＭ、さらに好ましくは１〜３０ｍＭであり、スペルミジンの好ましい濃度は０．１ｍＭ以上、より好ましくは０．１〜３０ｍＭ、さらに好ましくは０．１〜２０ｍＭであり、スペルミンの好ましい濃度は０．１ｍＭ以上、より好ましくは１〜２０ｍＭ、さらに好ましくは１〜１０ｍＭである。上記Ｂ成分が単独で使用される場合、培地に対するＢ成分の添加量は、該培地中のナトリウム濃度として、１００ｍＭ以上、好ましくは１００ｍＭ〜２Ｍ、より好ましくは１００ｍＭ〜１Ｍである。ナトリウム濃度がこれより高い培地を用いると、ポリアミンの収量が低下することがある。
【００２５】
上記Ａ成分及びＢ成分を併用する場合、該Ａ成分及びＢ成分は、それぞれ、上述した単独添加の場合の濃度で使用することができる。好ましくは、上記Ａ成分とＢ成分を併用する場合の該Ａ成分の濃度は０．１ｍＭ以上、より好ましくは０．２５ｍＭ〜３０ｍＭであり、該Ｂ成分の濃度は２５ｍＭ以上、好ましくは２５ｍＭ〜１Ｍ、より好ましくは２５ｍＭ〜５００ｍＭである。例えば、Ａ成分が０．１ｍＭで、Ｂ成分が２５ｍＭ以上、好ましくは２５ｍＭ〜１Ｍ、より好ましくは２５ｍＭ〜５００ｍＭであるか、又はＡ成分が０．２５ｍＭ〜３０ｍＭで、Ｂ成分が２５ｍＭ以上、好ましくは２５ｍＭ〜１Ｍ、より好ましくは２５ｍＭ〜５００ｍＭである。
【００２６】
上記Ａ成分を培地に添加する場合、通常の手順で調製してオートクレーブ処理した培地に対し、酵母を接種する前、又は接種した後に、上記所定の最終濃度になるようにＡ成分を添加すればよい。上記Ｂ成分を培地に添加する場合は、培地を調製する段階で上記所定の最終濃度になるようにＢ成分を添加してもよく、又は通常の手順で調製してオートクレーブ処理した培地に対し、酵母を接種する前、又は接種した後に、上記所定の最終濃度になるようにＢ成分を添加してもよい。
【００２７】
言い換えると、本発明においては、上記Ａ成分及び／又はＢ成分を含む培地に酵母を接種して、培養してもよく、培地に酵母を接種した後、さらに上記Ａ成分及び／又はＢ成分を添加して培養してもよく、あるいは上記Ａ成分及び／又はＢ成分を含む培地に酵母を接種した後、さらに上記Ａ成分及び／又はＢ成分を添加して培養してもよい。
【００２８】
本発明で使用される上記Ａ成分及び／又はＢ成分を含む培地の基礎培地としては、酵母の培養に使用することができる培地を使用すればよく、合成培地、天然培地及びこれらの組合せのいずれであってもよい。好ましい例としては、ＹＭ培地、ＹＰＤ培地、ＳＤ培地（グルコース最小培地）、ＹＭＰＤ培地、糖蜜培地（糖濃度０．３〜１０質量／容量％、発酵試験用）などを挙げることができる。これらの培地の代表的な組成は以下のとおりである：ＹＰＤ培地［１０ｇ／Ｌイーストエキス、２０ｇ／Ｌペプトン、１０ｇ／Ｌグルコース］；ＹＭ培地［３ｇ／Ｌイーストエキス、３ｇ／Ｌモルトエキス、３ｇ／Ｌペプトン、１０ｇ／Ｌグルコース］；ＳＤ培地［６．７ｇ／Ｌ  Ｙｅａｓｔ  Ｎｉｔｒｏｇｅｎ  ｂａｓｅ  ｗｉｔｈｏｕｔ  Ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ、２０ｇ／Ｌグルコース］；ＹＭＰＤ培地［３ｇ／Ｌイーストエキス、３ｇ／Ｌモルトエキス、５ｇ／Ｌペプトン、３０ｇ／Ｌグルコース］；糖蜜培地［糖蜜を還元糖濃度０．３〜１０質量／容量％になるように水で希釈したもの］。あるいは、基礎培地としては、グルコース水溶液を使用することもできる。該グルコース水溶液のグルコース濃度は０．５〜１０質量／容量％が好ましい。好ましくは、上記培地は、調製後に１２１℃、１５分間等の条件でオートクレーブして滅菌される。培地の固形化は、２％の寒天を加えてプレートを作製するなど、常法に従って行えばよい。
【００２９】
あるいは、酵母の増殖を抑えるか、又はわずかな増殖のみに抑えながら菌体内のポリアミン含量を増加させる場合は、上述した培地の代わりに、上記Ａ成分及び／又はＢ成分を含む水や水溶液を使用して酵母の培養を行ってもよい。
【００３０】
以上述べた上記Ａ成分及び／又はＢ成分を含む酵母培養用培地は、本発明の一態様である。より詳細には、当該酵母培養用培地は、ポリアミン高含有酵母製造用の培地である。
【００３１】
本発明において、酵母の培養方法は、上記Ａ成分及び／又はＢ成分を含むポリアミン高含有酵母製造用培地を使用すること以外は、通常の酵母の培養方法に従って行うことができる。酵母の培養方法やその条件は、例えば、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｃｕｌｔ  Ｃｏｌｌ，２５（２）８９−９１，２００９などを参考に決定することができる。
【００３２】
好ましくは、まず酵母を通常の液体培地に接種し、３０℃で１〜２日間振とうしながら前培養を行う。必要に応じて、前培養した培地を遠心分離等にかけ、酵母画分を分離してもよい。次いで、オートクレーブ滅菌した基礎培地に上記Ａ成分及び／又はＢ成分を加えて本培養用培地を調製し、次いでこれに前培養液又はその酵母画分を加え、２９〜３２℃にて１２０〜１５０ｒｐｍ程度で振とう培養（液体培地の場合）又は静置培養する。本培養用培地に加える前培養液又は酵母画分の量は、本培養用培地１００容量％に対して、前培養液で１０〜８０容量％程度、又は酵母画分で１０〜１５００容量％（前培養液換算）程度であればよく、培養スケールや装置、環境等に応じて適宜変更することができる。本培養の培養時間は、培養スケールによっても異なるが、３時間〜２週間程度である。培養液の懸濁度などを指標とする酵母の増殖量と、サンプリングして得られる酵母菌体中のポリアミン量を指標として、所望される培養スケールで効率よくポリアミンを生産できる培養時間を決定することができる。
【００３３】
本発明によれば、上述のとおりＡ成分及び／又はＢ成分を添加した培地で酵母を培養することによって、酵母のポリアミン生産性を向上させることができ、菌体中にポリアミンを高濃度で含有するポリアミン高含有酵母を製造することができる。製造された本発明のポリアミン高含有酵母は、従来公知の酵母に比べて、ポリアミン生産性が高く、菌体中により多量のポリアミンを含有する。好ましくは、本発明のポリアミン高含有酵母は、菌体１００ｇ（乾物換算）中に、ポリアミンを１５０ｍｇ以上、より好ましくは２００ｍｇ以上、さらに好ましくは２５０ｍｇ以上、なお好ましくは３００ｍｇ以上、なお好ましくは４００ｍｇ以上、なお好ましくは５００ｍｇ以上の量で含有する。
【００３４】
本発明のポリアミン高含有酵母は、菌体中にポリアミンを高含量で有しているため、ポリアミン源として有用である。例えば、本発明のポリアミン高含有酵母は、そのまま食品、栄養組成物などに添加することができる。あるいは、本発明のポリアミン高含有酵母の菌体中から公知の方法（例えば、特許文献４記載の方法）に従ってポリアミンを分離し、必要に応じて精製することによって、ポリアミンを高濃度で含むポリアミン含有組成物を製造することができる。該ポリアミン含有組成物は、食品、栄養組成物、医薬品などの有効成分として使用することができる。
【実施例】
【００３５】
以下に実施例及び比較例を示し、本発明の効果を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例等に限定されるものではない。なお、本明細書に記載の方法を参考にして、均等な方法によって得られたポリアミン高含有酵母は、本発明のポリアミン高含有酵母の範囲に含まれる。
【００３６】
以下の実施例において、酵母菌体からのポリアミンの抽出及びポリアミン量の測定は、それぞれ以下の参考例１及び２に記載の手順に従って行った。
【００３７】
（参考例１  酵母菌体からのポリアミンの抽出）
培地を遠心分離して集菌し、超純水で２回洗浄した後、総量が０．５ｍＬとなるように超純水を加えて菌液を調製した。菌液０．２ｍＬを採取し、含まれる菌体の乾燥重量を測定した。また、菌液０．２ｍＬに０．２Ｍ過塩素酸４．８ｍＬを添加して、１００℃で１０分間加熱した後、遠心分離（４℃、２０００ｒｐｍ、３分間）した。上清を０．４５μｍフィルターでろ過し、得られたろ液を０．２Ｍ過塩素酸で希釈した。希釈液１ｍＬに対して、飽和炭酸ナトリウム水溶液０．５ｍＬ、１％ダンシルクロライド−アセトン溶液１ｍＬを添加して混和後、遮光下にて４５℃で１時間反応させた。反応液に１０％プロリン０．５ｍＬを添加してよく混和し、遮光下にて１０分間静置した後、トルエン２ｍＬを加えて２５０ｒｐｍで１０分間振盪してトルエン層を採取した。トルエン層１ｍＬを４０℃で減圧乾固し、アセトニトリル１ｍＬで溶解してＨＰＬＣ測定用サンプルを調製した。
【００３８】
（参考例２  ポリアミン量の測定）
既知の濃度のポリアミン標準品を用いて、下記条件でＨＰＬＣ測定を行い、各ポリアミン標準品の濃度と、ＨＰＬＣリテンションタイムのピーク下面積から検量線を作成した。ポリアミン標準品には、プトレスシン二塩酸塩、スペルミジン三塩酸塩、及びスペルミン四塩酸塩（いずれもＳｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を用い、それぞれについて検量線を作成した。次いで、同条件にて参考例１で調製したＨＰＬＣ測定用サンプルをＨＰＬＣ測定し、プトレスシン、スペルミジン及びスペルミンのピークを検出した。それぞれのピーク下面積から、対応する検量線に基づいて該サンプルのプトレスシン、スペルミジン及びスペルミンの量を定量した。
（ＨＰＬＣ条件）
カラム：ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８  ＵＧ−１２０
３μｍ，４．６×１００ｍｍ（資生堂）
溶離液Ａ：１０ｍＭ  酢酸アンモニウム
溶離液Ｂ：アセトニトリル
グラジエントプログラム：
時間（分）      Ａ（％）    Ｂ（％）
０          ５０        ５０
１５          １０        ９０
２５          １０        ９０
２５．１      ５０        ５０
３５          ５０        ５０
カラム温度：３５℃
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
検出：Ｅｘ．３６５ｎｍ、Ｅｍ．５１０ｎｍ
【００３９】
（実施例１）
パン酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、オリエンタル酵母工業（株））を、ＹＭＰＤ培地（３ｇ／Ｌイーストエキス、３ｇ／Ｌモルトエキス、５ｇ／Ｌペプトン、３０ｇ／Ｌグルコース）５ｍＬが入った試験管に接種し、３０℃、１５０ｒｐｍで２４時間振盪培養した。得られた培養液０．５ｍＬを遠心分離（４℃、３０００ｒｐｍ）して菌体を回収した。これを１０ｍＭプトレスシンを添加したＹＭＰＤ培地５ｍＬに接種して、３０℃、１５０ｒｐｍで３、６、８又は２２時間振盪培養した。培養後、参考例１及び２に記載の手順に従って、培地から酵母菌体を回収してポリアミンを抽出し、菌体中のポリアミン量を測定した。
ポリアミン量の測定結果を図１に示す。プトレスシンを添加した培地で培養することにより、酵母菌体中のポリアミン量が増加した。
【００４０】
（実施例２）
１０ｍＭプトレスシンに代えて、ナトリウム源又は他の塩類を添加したＹＭＰＤ培地を用いたこと以外は、実施例１と同様の手順で酵母を培養し、菌体中のポリアミン量を測定した。ナトリウム（Ｎａ）源又は塩類としては、６８０ｍＭの塩化ナトリウム、グルタミン酸ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、硫酸ナトリウム、リン酸緩衝液、及び炭酸水素ナトリウム（図２）、１００ｍＭのクエン酸三ナトリウム、ならびに２００ｍＭのコハク酸ナトリウム、リンゴ酸ナトリウム、酒石酸ナトリウム、グルコン酸ナトリウム、フマル酸二ナトリウム、アスコルビン酸ナトリウム、アスパラギン酸ナトリウム、及び乳酸ナトリウム（図３）、又は、３５０ｍＭのクエン酸＋水酸化ナトリウム、乳酸＋水酸化ナトリウム、及び塩酸＋水酸化ナトリウム（図４）を用いた。なお、上記の濃度は、いずれもナトリウムとしての濃度である。培養時間は２４時間とした。
ポリアミン量の測定結果を図２〜４に示す。特定の種類のナトリウム源を添加した培地で培養することにより、酵母菌体内のポリアミン量が増加した。
【００４１】
（実施例３）
パン酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、オリエンタル酵母工業（株））をＹＭＰＤ培地（３ｇ／Ｌイーストエキス、３ｇ／Ｌモルトエキス、５ｇ／Ｌペプトン、３０ｇ／Ｌグルコース）５ｍＬが入った試験管に接種して、３０℃、１５０ｒｐｍで２４時間振盪培養した。得られた培養液２．５ｍＬを遠心分離（４℃、３０００ｒｐｍ）して菌体を回収した。これを、リン酸二水素ナトリウム（０、２５、５０又は１００ｍＭ）及びプトレスシン（０、１、２又は４ｍＭ）を添加したＹＭＰＤ培地５ｍＬに接種して、３０℃、１５０ｒｐｍで２４時間振盪培養した。培養後、参考例１及び２に記載の手順に従って、培地から酵母菌体を回収してポリアミンを抽出し、菌体中のポリアミン量を測定した。
ポリアミン量の測定結果を図５に示す。プトレスシンとナトリウム源とを組合わせて添加することにより、各々の単独添加と比べて、酵母菌体中のポリアミン量が顕著に増加した。
【００４２】
（実施例４）
プトレスシンの代わりにクエン酸三ナトリウムを添加したＹＭＰＤ培地を用いたこと以外は、実施例１と同様の手順で酵母を培養し、菌体中のポリアミン量を測定した。培地中のクエン酸三ナトリウムの濃度は２５、５０、１００、及び２００ｍＭとした。培養時間は２４時間とした。ポリアミン量の測定結果を図６に示す。
【００４３】
（実施例５）
プトレスシン単独添加の代わりにクエン酸三ナトリウムとプトレスシンを併用添加したＹＭＰＤ培地を用いたこと以外は、実施例１と同様の手順で酵母を培養し、菌体中のポリアミン量を測定した。培地中のクエン酸三ナトリウムの濃度は０（プトレスシンのみ）、２５、５０、１００、及び２００ｍＭ、プトレスシンの濃度は１ｍＭとした。培養時間は２４時間とした。ポリアミン量の測定結果を図７に示す。ナトリウム源単独添加の場合と比べて、プトレスシンとナトリウム源の併用により、酵母菌体中のポリアミン量は顕著に増加した。
【００４４】
（実施例６）
プトレスシン単独添加の代わりにリン酸二水素ナトリウムとプトレスシンを併用添加したＹＭＰＤ培地を用いたこと以外は、実施例１と同様の手順で酵母を培養し、菌体中のポリアミン量を測定した。培地中のリン酸二水素ナトリウムの濃度は２５又は１００ｍＭ、プトレスシンの濃度は０．１２５、０．２５及び０．５ｍＭとした。培養時間は２４時間とした。ポリアミン量の測定結果を図８に示す。プトレスシンとナトリウム源の併用により、酵母菌体中のポリアミン量は顕著に増加した。
【００４５】
（実施例７）
プトレスシンに代えてスペルミジンを添加したＹＭＰＤ培地を用いたこと以外は、実施例１と同様の手順で酵母を培養し、菌体中のポリアミン量を測定した。培地中のスペルミジンの濃度は０．０６２５、０．１２５、０．５、及び１ｍＭとした。培養時間は２４時間とした。ポリアミン量の測定結果を図９に示す。
【００４６】
（実施例８）
プトレスシン単独添加に代えて、プトレスシンとスペルミジンを併用添加したＹＭＰＤ培地を用いたこと以外は、実施例１と同様の手順で酵母を培養し、菌体中のポリアミン量を測定した。培地中のプトレスシンの濃度は０．２５ｍＭ、スペルミジンの濃度は０．０６２５、０．１２５、０．２５ｍＭとした。培養時間は２４時間とした。ポリアミン量の測定結果を図１０に示す。
【００４７】
（実施例９）
パン酵母に代えて、Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｒｏｕｘｉｉ（ＮＢＲＣ１７３０）及びＣａｎｄｉｄａ  ｕｔｉｌｉｓ（ＮＢＲＣ１０７０７）を接種したことと、１０ｍＭストレプシンを添加したＹＭＰＤ培地に代えて、リン酸二水素ナトリウム１００ｍＭ及びプトレスシン１ｍＭを添加したＹＭＰＤ培地を用いたこと以外は、実施例１と同様の手順で酵母を培養し、菌体中のポリアミン量を測定した。培養時間は２４時間とした。ポリアミンの測定結果を図１１Ａ、Ｂに示す。
【００４８】
（比較例）
Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ（オリエンタル酵母工業（株）；パン酵母）、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｅｉａｅ株（ＮＢＲＣ２０４３、ＮＢＲＣ１０２１７）、Ｓ．ｐａｓｔｒｉａｎｕｓ（ＮＢＲＣ１９６１、ＮＢＲＣ１００１０）、及びＣａｎｔｉｄａ  ｕｔｉｌｉｓ（ＮＢＲＣ１０７０７）を、ＹＭＰＤ培地（３ｇ／Ｌイーストエキス、３ｇ／Ｌモルトエキス、５ｇ／Ｌペプトン、３０ｇ／Ｌグルコース）５ｍＬが入った試験管に接種して、３０℃、１５０ｒｐｍで２４時間振盪培養した。得られた培養液０．５ｍＬを遠心分離（４℃、３０００ｒｐｍ）して菌体を回収した。これをＹＭＰＤ培地５ｍＬに接種して、３０℃、１５０ｒｐｍで２４時間振盪培養した。培養後、参考例１及び２に記載の手順に従って、培地から酵母菌体を回収してポリアミンを抽出し、菌体中のポリアミン量を測定した。
ポリアミン量の測定結果を図１２に示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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