(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
検体を添加する試料添加部と、前記検体に含まれる被検出物質を認識する標識物質を保持する標識物質保持部と、前記被検出物質を検出する検出部が担持されたクロマトグラフ媒体部とを順次含む免疫クロマト分析装置において、
前記クロマトグラフ媒体部における前記検出部が、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）および前記被検出物質と特異的に反応する抗体を少なくとも含む塗布液を、クロマトグラフ媒体部上に塗布して形成されてなり、
前記クロマトグラフ媒体部が、ニトロセルロースまたは酢酸セルロースを含むことを特徴とする免疫クロマト分析装置。
【請求項２】
前記塗布液における前記ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）の濃度が、０．０２〜０．４容量％であることを特徴とする請求項１に記載の免疫クロマト分析装置。
【請求項３】
検体を添加する試料添加部と、前記検体に含まれる被検出物質を認識する標識物質を保持する標識物質保持部と、前記被検出物質を検出する検出部が担持されたクロマトグラフ媒体部とを順次含む免疫クロマト分析装置の製造方法において、
前記クロマトグラフ媒体部における前記検出部が、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）および前記被検出物質と特異的に反応する抗体を少なくとも含む塗布液を、クロマトグラフ媒体部上に塗布して形成され、前記クロマトグラフ媒体部が、ニトロセルロースまたは酢酸セルロースを含むことを特徴とする免疫クロマト分析装置の製造方法。
【請求項４】
前記塗布液における前記ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）の濃度が、０．０２〜０．４容量％であることを特徴とする請求項３に記載の免疫クロマト分析装置の製造方法。
【請求項５】
請求項１または２に記載の免疫クロマト分析装置を用い、下記工程（１）〜（４）を順次実施することを特徴とする、免疫クロマト分析方法。
（１）前記検体を試料添加部に添加する工程
（２）前記標識物質保持部に保持されている標識物質により前記検体に含まれる被検出物質を認識させる工程
（３）前記検体および標識物質を移動相としてクロマトグラフ媒体部に展開させる工程
（４）展開された移動相中の被検出物質を検出部で検出する工程
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫クロマト分析装置およびその製造方法並びに免疫クロマト分析方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、検体の前処理を行う必要の無い、免疫クロマトグラフィーによるイムノアッセイは、抗体の持つ特異的反応性を利用して、試料液中の抗原を検出する簡便な体外診断キットもしくは携帯用診断装置として重要性が高まっている。特に、ウィルスや細菌等の病原体検査キットは、一般の病院やクリニックでも汎用されている身近な免疫クロマト分析装置である。
【０００３】
従来の免疫クロマト分析装置の最も簡単な構造としては、試料添加部、標識物質保持部、検出部が担持されたクロマトグラフ媒体部、および検出部を通過した液体を吸収する吸収部が相互に繋がった構造である。
【０００４】
このような免疫クロマト分析装置に対し、現在ではインフルエンザウイルスのような微量な抗原を検出するために、高感度化が求められている。
例えば、非特異的な抗原抗体反応を防ぐため、ＢＳＡ、カゼイン、ゼラチン、哺乳動物ＩｇＧ等のタンパク質を検体希釈液や展開液に添加する方法や、検体を、ステロイド骨格を持つ界面活性剤溶液で展開し、その後標識物質を増幅する方法（特許文献１）や、被験物質と該被験物質に対する第一の抗体で修飾した標識物質とを含む溶液を多孔性担体上で特定の速度で展開する方法（特許文献２）等が提案されている。
しかし、従来の免疫クロマト分析装置では、要求されるレベルにまで被検出物質の検出感度を高めることはできなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０１２−２１１８４９号公報
【特許文献２】特開２００８−１９７０３８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、本発明の目的は、被検出物質の検出感度を著しく高めることのできる、免疫クロマト分析装置およびその製造方法並びに免疫クロマト分析方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、以下の通りである。
１．検体を添加する試料添加部と、前記検体に含まれる被検出物質を認識する標識物質を保持する標識物質保持部と、前記被検出物質を検出する検出部が担持されたクロマトグラフ媒体部とを順次含む免疫クロマト分析装置において、
前記クロマトグラフ媒体部における前記検出部が、非プロトン性極性溶媒および前記被検出物質と特異的に反応する抗体を少なくとも含む塗布液を、クロマトグラフ媒体部上に塗布して形成されてなることを特徴とする免疫クロマト分析装置。
２．前記非プロトン性極性溶媒が、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）であることを特徴とする前記１に記載の免疫クロマト分析装置。
３．前記塗布液における前記非プロトン性極性溶媒の濃度が、０．０２〜０．４容量％であることを特徴とする前記１または２に記載の免疫クロマト分析装置。
４．前記クロマトグラフ媒体部が、ニトロセルロースまたは酢酸セルロースを含むことを特徴とする前記１〜３のいずれか１に記載の免疫クロマト分析装置。
５．検体を添加する試料添加部と、前記検体に含まれる被検出物質を認識する標識物質を保持する標識物質保持部と、前記被検出物質を検出する検出部が担持されたクロマトグラフ媒体部とを順次含む免疫クロマト分析装置の製造方法において、
前記クロマトグラフ媒体部における前記検出部が、非プロトン性極性溶媒および前記被検出物質と特異的に反応する抗体を少なくとも含む塗布液を、クロマトグラフ媒体部上に塗布して形成されることを特徴とする免疫クロマト分析装置の製造方法。
６．前記非プロトン性極性溶媒が、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）であることを特徴とする前記５に記載の免疫クロマト分析装置の製造方法。
７．前記塗布液における前記前記非プロトン性極性溶媒の濃度が、０．０２〜０．４容量％であることを特徴とする前記５または６に記載の免疫クロマト分析装置の製造方法。
８．前記クロマトグラフ媒体部が、ニトロセルロースまたは酢酸セルロースを含むことを特徴とする前記５〜７のいずれか１に記載の免疫クロマト分析装置の製造方法。
９．前記１〜４のいずれか１に記載の免疫クロマト分析装置を用い、下記工程（１）〜（４）を順次実施することを特徴とする、免疫クロマト分析方法。
（１）前記検体を試料添加部に添加する工程
（２）前記標識物質保持部に保持されている標識物質により前記検体に含まれる被検出物質を認識させる工程
（３）前記検体および標識物質を移動相としてクロマトグラフ媒体部に展開させる工程
（４）展開された移動相中の被検出物質を検出部で検出する工程
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、非プロトン性極性溶媒が抗体の疎水性部分（例えばＦｃ領域）と相互作用し、クロマトグラフ媒体部上での抗体の凝集を抑制することにより、被検出物質の存在に基づいて発せられる信号とノイズの比であるＳＮ比が向上し、被検出物質の検出感度が著しく高まる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】免疫クロマト分析装置の構造を説明するための断面図である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下に、本発明を実施するための形態を説明する。
【００１１】
本発明の免疫クロマト分析装置およびその製造方法は、検体を添加する試料添加部と、前記検体に含まれる被検出物質を認識する標識物質を保持する標識物質保持部と、前記被検出物質を検出する検出部が担持されたクロマトグラフ媒体部と、必要に応じて前記検出部を通過した液体を吸収する吸収部とを順次備え、前記クロマトグラフ媒体部における前記検出部が、非プロトン性極性溶媒および前記被検出物質と特異的に反応する抗体を少なくとも含む塗布液を、クロマトグラフ媒体部上に塗布して形成されることを特徴としている。
以下、図面を参照しながら本発明の免疫クロマト分析装置およびその製造方法の一実施形態について説明する。
【００１２】
本発明の免疫クロマト分析装置は図１に示すように、試料添加部（サンプルパッドともいう）（１）、標識物質保持部（コンジュゲートパッドともいう）（２）、クロマトグラフ媒体部（３）、検出部（４）、吸収部（５）およびバッキングシート（６）から構成されている。
【００１３】
試料添加部（１）は、免疫クロマト分析装置において、検体（サンプル）を滴下する部位である。サンプルは、通常の免疫クロマト分析装置に使用される素材であればどのようなものでもよい。試料添加部（１）は試料を吸収保持するグラスファイバーまたはセルロースの膜が通常使用される。
【００１４】
標識物質保持部（２）は、あらかじめ被検出物質と結合する抗体に結合した、後述する標識物質（マーカー物質）が含有されている。標識物質保持部内を被検出物質が移動する際に抗体と結合し、標識化される。標識物質保持部（２）は、例えば、グラスファイバー不織布またはセルロース膜等からなっている。
【００１５】
クロマトグラフ媒体部（３）は、クロマトグラフの展開部位である。クロマトグラフ媒体部（３）は、毛管現象を示す微細多孔性物質からなる不活性の膜である。クロマトグラフで使用される検出試薬、固定化試薬または被検出物質などと反応性を有しないという観点から、また、本発明の効果が向上するという観点から、例えば、ニトロセルロース製のメンブレン（以下「ニトロセルロースメンブレン」という場合がある）や、酢酸セルロース製のメンブレン（以下「酢酸セルロースメンブレン」という場合がある）が好ましく、ニトロセルロースメンブレンがさらに好ましい。なお、セルロース類メンブレン、ナイロンメンブレン及び多孔質プラスチック布類（ポリエチレン、ポリプロピレン）も使用可能である。
【００１６】
ニトロセルロースメンブレンとしては、ニトロセルロースが主体で含まれていればよく、純品またはニトロセルロース混合品などニトロセルロースを主材とするメンブレンを使用することができる。
【００１７】
ニトロセルロースメンブレンは、さらに毛細管現象を促進させる物質を含有させることもできる。該物質としては、膜面の表面張力を低下させ、親水性をもたらす物質が好ましい。例えば、糖類、アミノ酸の誘導体、脂肪酸エステル、各種合成界面活性剤またはアルコール等の両親媒性の作用を有する物質であって、免疫クロマトグラフ上での被検出物質の移動に影響がなく、マーカー物質（例えば金コロイドなど）の発色に影響を及ぼさない物質が好ましい。
【００１８】
ニトロセルロースメンブレンは、多孔性であって、毛細管現象を示す。この毛細管現象の指標は、吸水速度（吸水時間：ｃａｐｉｌｌａｒｙ  ｆｌｏｗ  ｔｉｍｅ）を測ることで確認できる。吸水速度は、検出感度と検査時間に影響する。
【００１９】
上記のようなニトロセルロースメンブレンや酢酸セルロースメンブレンに代表されるクロマトグラフ媒体部（３）の形態及び大きさは特に制限されるものではなく、実際の操作の点及び反応結果の観察の点において適切であればよい。
【００２０】
さらに操作をより簡便にするためには、クロマトグラフ媒体部（３）の裏面に、プラスチックなどよりなる支持体を設けることが好ましい。この支持体の性状は特に制限されるものではないが、目視判定によって測定結果の観察を行う場合には、支持体は、標識物質によりもたらされる色彩と類似しない色彩を有するものであることが好ましく、通常、無色又は白色であることが好ましい。
【００２１】
検出部（４）は、前記クロマトグラフ媒体部（３）上に形成される。すなわち、被検出物質と特異的に結合する抗体が任意の位置に固定化される。
本発明では、検出部（４）が、非プロトン性極性溶媒および被検出物質と特異的に反応する抗体を少なくとも含む塗布液を、クロマトグラフ媒体部（３）上に塗布して形成されてなることを特徴としている。
【００２２】
非プロトン性極性溶媒としては、例えばジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、アセトニトリル、プロパンニトリル、ブチロニトリル、スルホラン等が挙げられ、中でもクロマトグラフ媒体部上での抗体の凝集を抑制し、ＳＮ比を向上させるという観点から、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）がとくに好ましい。
【００２３】
また、前記塗布液における非プロトン性極性溶媒の濃度は、０．０１〜１．０容量％の範囲であることが好ましい。非プロトン性極性溶媒の濃度が０．０１容量％未満では、添加量が少なすぎて本発明の効果を奏することができない。逆に１．０容量％を超えるとニトロセルロースメンブレンや酢酸セルロースメンブレンのようなクロマトグラフ媒体部を溶解してしまい好ましくない。前記塗布液における非プロトン性極性溶媒の濃度は、０．０２〜０．４容量％がより好ましく、０．０２〜０．３容量％がさらに好ましい。
【００２４】
抗体としては例えば、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体が挙げられる。モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体若しくはそのフラグメントは、公知であり、入手可能であり、公知の方法により調製することができる。
前記塗布液中の抗体の濃度は、例えば０．１ｍｇ/ｍＬ〜２ｍｇ/ｍＬであり、０．３ｍｇ/ｍＬ〜１．５ｍｇ/ｍＬが好ましく、０．４ｍｇ/ｍＬ〜１．２ｍｇ/ｍＬがさらに好ましい。
【００２５】
また前記塗布液において、前記各成分以外に通常使用される成分としては、例えば、各種緩衝液、アルコール類、糖類、アミノ酸類、たんぱく質、水溶性の合成高分子等が挙げられる。
【００２６】
前記塗布液を、クロマトグラフ媒体部（３）上に塗布する方法としては、インクジェット印刷法、スポット法等の公知の方法が挙げられる。また塗布された検出部の形状はとくに限定されないが、円形のスポット、クロマトグラフ媒体部（３）の展開方向に対し垂直にのびるライン、数字、文字または＋、−などの記号等の形状が挙げられる。また塗布量としても公知のものと同等とすることができる。
【００２７】
またクロマトグラフ媒体部（３）上に前記塗布液を塗布した後、非特異的な吸着により分析の精度が低下することを防止するため、必要に応じて、クロマトグラフ媒体部（３）に、公知の方法でブロッキング処理を行うことができる。一般にブロッキング処理はウシ血清アルブミン、スキムミルク、カゼインまたはゼラチン等の蛋白質が好適に用いられる。かかるブロッキング処理後に、必要に応じて、例えば、Ｔｗｅｅｎ２０、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００またはＳＤＳ等の界面活性剤を１つ又は２つ以上組み合わせて洗浄してもよい。
【００２８】
吸収部（５）は、クロマトグラフ媒体部（３）の末端に、検出部（４）を通過した検体や展開液等の液体を吸収させるために必要に応じて設置される。本発明の免疫クロマト分析装置において、吸収部（５）は例えばグラスファイバーからなることができる。吸収部（５）がグラスファイバーからなることによって、試料液の液戻りを大幅に低減することができる。
【００２９】
バッキングシート（６）は、基材である。片面に粘着剤を塗布したり、粘着テープを貼り付けることにより、片面が粘着性を有し、該粘着面上に試料添加部（１）、標識物質保持部（２）、クロマトグラフ媒体部（３）、検出部（４）、および吸収部（５）の一部または全部が密着して設けられている。バッキングシート（６）は、粘着剤によって試料液に対して不透過性、非透湿性となるようなものであれば、基材としては、特に限定されない。
【００３０】
上記のようにして作製した免疫クロマト分析装置は、製品化する前に、通常乾燥処理に施される。乾燥温度は例えば２０〜５０℃、乾燥時間は０．５〜１時間である。非プロトン性極性溶媒、例えばジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）は、上記乾燥条件により、検出部（４）中、例えば１キットあたり０．０１〜０．５μｇ／キット質量％残存する。
【００３１】
本発明の免疫クロマト分析方法は以下の工程（１）〜（４）を含み、上記の免疫クロマト分析装置を用いて検体に含まれる被検出物質を検出する。
（１）前記検体を試料添加部に添加する工程
（２）前記標識物質保持部に保持されている標識物質により前記検体に含まれる被検出物質を認識させる工程
（３）前記検体および標識物質を移動相としてクロマトグラフ媒体部に展開させる工程
（４）展開された移動相中の被検出物質を検出部で検出する工程
各工程について以下に説明する。
【００３２】
（１）検体を試料添加部に添加する工程
工程（１）では、第１に、検体を、測定精度を低下させることなく、免疫クロマトグラフ媒体中をスムーズに移動する程度の濃度に検体希釈液で調整または希釈して検体含有液とするのが好ましい。第２に、該検体含有液を試料添加部（１）上に、所定量（通常、０．１〜２ｍｌ）滴下する。検体含有液が滴下されると、検体含有液は試料添加部（１）中で移動を開始する。
【００３３】
検体希釈液は、また展開液としても使用することができるものであるが、通常、溶媒として水を用い、これに緩衝液、塩、および非イオン界面活性剤、さらに、例えば抗原抗体反応の促進あるいは非特異的反応を抑制するための蛋白質、高分子化合物（ＰＶＰ等）、イオン性界面活性剤又はポリアニオン、あるいは、抗菌剤、キレート剤等々の１種もしくは２種以上を加えてもよい。展開液として用いる場合には、検体と展開液を予め混合したものを、試料添加部上に供給・滴下して展開させることもできるし、先に検体を試料添加部上に供給・滴下した後、展開液を試料添加部上に供給・滴下して展開させてもよい。
【００３４】
被検出物質を含む検体としては、例えば、生体試料、即ち、全血、血清、血漿、尿、唾液、喀痰、鼻腔又は咽頭拭い液、髄液、羊水、乳頭分泌液、涙、汗、皮膚からの浸出液、組織や細胞及び便からの抽出液等の他、牛乳、卵、小麦、豆、牛肉、豚肉、鶏肉などやそれらを含む食品等の抽出液等が挙げられる。
【００３５】
具体的な被検出物質としては、例えば、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＨＥＲ２タンパク、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、ＣＡ１９−９、α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、免疫抑制酸性タンパク（ＩＰＡ）、ＣＡ１５−３、ＣＡ１２５、エストロゲンレセプター、プロゲステロンレセプター、便潜血、トロポニンＩ、トロポニンＴ、ＣＫ−ＭＢ、ＣＲＰ、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、梅毒抗体、インフルエンザウイルス、ヒトヘモグロビン、クラミジア抗原、Ａ群β溶連菌抗原、ＨＢｓ抗体、ＨＢｓ抗原、ロタウイルス、アデノウイルス、アルブミンまたは糖化アルブミン等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００３６】
（２）標識物質保持部に保持されている標識物質により検体に含まれる被検出物質を認識させる工程
工程（２）は、工程（１）において試料添加部に添加された検体含有液を、標識物質保持部（２）へと移動させ、標識物質保持部に保持されている標識物質により検体中の被検出物質を認識させる工程である。
【００３７】
標識物質は抗体を標識化する。免疫クロマトグラフ法における検出試薬の標識には、一般に酵素等も使用されるが、被検出物質の存在を目視で判定するのに適していることから、標識物質としては不溶性担体を用いることが好ましい。抗体を不溶性担体に感作することにより標識化した検出試薬を調製することができる。なお、抗体を不溶性担体に感作する手段は、公知の方法に従えばよい。
【００３８】
標識物質としての不溶性担体には、金、銀もしくは白金のようなコロイド状金属粒子、酸化鉄のようなコロイド状金属酸化物粒子、硫黄などのコロイド状非金属粒子及び合成高分子よりなるラテックス粒子、またはその他を用いることができる。特に金コロイドが、検出が簡便で好ましい。金コロイドの粒子の平均粒径は、例えば１０ｎｍ〜２５０ｎｍ、好ましくは３５ｎｍ〜１２０ｎｍである。平均粒径は、透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ：日本電子（株）製、ＪＥＭ−２０１０）により、撮影した投影写真を用いて無造作に１００個の粒子を粒子の投影面積円相当径を計測し、その平均値から算出することができる。
【００３９】
不溶性担体は、被検出物質の存在を視覚的に判定するのに適した標識物質であり、目視による判定を容易にするためには有色であることが好ましい。コロイド状金属粒子及びコロイド状金属酸化物粒子は、それ自体が粒径に応じた特定の自然色を呈するものであり、その色彩を標識として利用することができる。
【００４０】
（３）検体および標識物質を移動相としてクロマトグラフ媒体部に展開させる工程
工程（３）は、工程（２）において被検出物質が標識物質保持部において標識物質に認識された後、検体および標識物質を、クロマトグラフ媒体部上を移動相として通過させる工程である。
【００４１】
（４）展開された移動相中の被検出物質を検出部で検出する工程
工程（４）は、クロマトグラフ媒体部上を移動相として通過した検体中の被検出物質が、抗原・抗体の特異的結合反応により、検出部に保持、即ち、担持固定されている抗体と標識試薬とによってサンドイッチ状に挟まれるように特異的に反応結合して、検出部が着色する工程である。
【００４２】
被検出物質が存在しない場合には、試料の水分に溶解した標識試薬は、クロマトグラフ媒体部上の検出部を通過しても特異的結合反応が起こらないので、検出部が着色しない。
本発明では、前記塗布液に含まれる非プロトン性極性溶媒が抗体の疎水性部分（例えばＦｃ領域）と相互作用し、ニトロセルロースメンブレンや酢酸セルロースメンブレンのようなクロマトグラフ媒体部上で抗体の凝集が抑制され、被検出物質の存在に基づいて発せられる信号とノイズの比であるＳＮ比が向上し、被検出物質の検出感度が著しく高まる。
【００４３】
最後に、検体含有液の水分は、吸収部（５）へと移動する。
【実施例】
【００４４】
以下、本発明を実施例によりさらに説明するが、本発明は下記例に制限されるものではない。
【００４５】
（１）試料添加部の作製
試料添加部としてグラスファイバーからなる不織布（ミリポア社製：３００ｍｍ×３０ｍｍ）を用いた。
（２）標識物質保持部の作製
金コロイド懸濁液（田中貴金属工業社製：ＬＣ４０ｎｍ）０．５ｍｌに、リン酸緩衝液（ｐＨ７．４）で０．０５ｍｇ／ｍｌの濃度になるように希釈したマウス由来抗インフルエンザＡモノクローナル抗体（第二抗体）を０．１ｍｌ加え、室温で１０分間静置した。
次いで、１質量％の牛血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）を０．１ｍｌ加え、更に室温で１０分間静置した。その後、十分撹拌した後、８０００×ｇで１５分間遠心分離を行い、上清を除去した後、１質量％のＢＳＡを含むリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）を０．１ｍｌ加えた。以上の手順で標識物質溶液を作製した。
上記作製した標識物質溶液３００μＬに３００μＬの１０質量％トレハロース水溶液と１．８ｍＬの蒸留水を加えたものを１５ｍｍ×３００ｍｍのグラスファイバーパッド（ミリポア社製）に均一になるように添加した後、真空乾燥機にて乾燥させ、標識物質保持部を作製した。
【００４６】
（３）クロマトグラフ媒体部および検出部の作製
メンブレンとしてニトロセルロースからなるシート（ミリポア社製、商品名：ＨＦ１２０、３００ｍｍ×２５ｍｍ）を用いた。
次に、５質量％のイソプロピルアルコールを含むリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）で１．０ｍｇ／ｍｌの濃度になるようにマウス由来抗インフルエンザＡモノクローナル抗体（第一抗体）を希釈した溶液１５０μＬを、乾燥されたメンブレン上の検出部位（検出ライン）に１ｍｍの幅でイムノクロマト用ディスペンサー「ＸＹＺ３０５０」（ＢＩＯＤＯＴ社製）を用いて１μＬ／ｍｍの量（１シートあたり２５μＬ）でライン状に塗布した。なお該溶液としては、表１に示すジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）濃度を有する複数の溶液を準備した。
また、金ナノ粒子標識試薬の展開の有無や展開速度を確認するために検出部位の下流に、金ナノ粒子標識物質や被検出物質である動物肉タンパク質などと広く親和性を有するヤギ由来抗血清をリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）で希釈した液をコントロール部位（コントロールライン）に塗布した。その後、５０℃で３０分間乾燥させ、室温で一晩乾燥させ、クロマトグラフ媒体部および検出部を作製した。
【００４７】
（４）免疫クロマト分析装置の作成
次に、バッキングシートから成る基材に、試料添加部、標識物質保持部、検出部が担持されたクロマトグラフ媒体部、展開した試料や標識物質を吸収するための吸収部としてグラスファイバー製の不織布を順次貼り合わせた。そして、裁断機で幅が５ｍｍとなるように裁断し、免疫クロマト分析装置とした。なお、標識物質保持部およびインキュベーション部の試料展開方向の長さをそれぞれ８ｍｍとした。
【００４８】
（５）検体希釈液
１質量％の非イオン界面活性剤（日油株式会社製、商品名：ＭＮ８１１とナカライテスク社製、商品名ＮＰ−４０の１：１混合物）、８０ｍＭの塩化カリウム、２０ｍＭのグアニジン塩酸塩、０．４重量％のポリビニルピロリドン（平均分子量３６万）を含む５０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）を調製し、検体を希釈処理するための試薬とした。
【００４９】
（６）測定
上記作製した免疫クロマト分析装置を用いて、以下の方法で試料中のインフルエンザＡウィルスの存在の有無を測定した。即ち、吸引トラップの片方の管を吸引ポンプに、もう片方の管をインフルエンザに感染していない人の鼻腔の奥部まで挿入し、吸引ポンプを陰圧にして鼻汁を採取した。採取した鼻汁を上記検体希釈液で２０倍に希釈し、これを陰性検体試料とした。また、陰性検体試料に、蛋白濃度が５０ｎｇ／ｍＬとなるように市販の不活化インフルエンザＡウィルスを加えたものを陽性検体試料とした。
【００５０】
陰性検体試料、陽性検体試料とも１５０μＬを免疫クロマト分析装置の試料添加部上に載せて展開させ、表１に示す各経過時間後に、検出部の着色の度合い（発色強度）をデンシトメーターにより測定した（表中の単位はｍＡｂｓ）。結果を表１に示す。なお、試料数は３とした（Ｎｏ．１〜３）。
【００５１】
【表１】
0006595215.tif 000002
【００５２】
表１において、まず陰性検体試料の結果を参照すると、ＤＭＳＯを添加していない試料は、試験開始後１５分経過後および３０分経過後で発色のノイズが観察されたが、ＤＭＳＯを０．０２〜０．４０容量％の範囲で添加した試料は、ノイズの発生が大幅に減少した。
また、陽性検体試料と陰性検体試料の結果から下記式によりＳＮ比を算出すると、ＤＭＳＯを０．０２〜０．４０容量％の範囲で添加した試料は、ＳＮ比が向上しており、被検出物質の検出感度が著しく高まることが示唆された。さらに、陽性検体の１５分経過後の測定バラツキ（ＳＤ：標準偏差）も、ＤＭＳＯを０．０２〜０．４０容量％の範囲で添加した試料において大幅に低下している。これらの効果は、検出部の抗体塗布時に非プロトン性極性溶媒を加えることで、固相に固定化された検出部抗体の配向性が良化するため、非特異的反応および測定バラツキの抑制、特異的反応の増大が得られていると考えられる。
ＳＮ比＝陽性検体試料１５分経過後の発色強度／陰性検体試料３０分経過後の発色強度
【符号の説明】
【００５３】
１  試料添加部（サンプルパッド）
２  標識物質保持部
３  クロマトグラフ媒体部
４  検出部
５  吸収部
６  バッキングシート
【図１】
0006595215.tif 000003