(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物
【化１】
0006505095.tif 000012
またはその薬学的に許容できる塩または溶媒和化合物であって、式中、
Ｒ１は置換Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり、Ｒ１における置換はＣ３〜Ｃ６シクロアルキルおよびフッ素から選択され、
Ｒ２およびＲ３は水素または置換もしくは未置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルより独立に選択されるか、
またはＲ２およびＲ３は、それらが結合する窒素原子とともに、置換もしくは未置換複素環を形成し、
Ｒ４はハロゲンである化合物。
【請求項２】
Ｒ１はＣ３〜Ｃ６シクロアルキルによって置換されたＣ１〜Ｃ４アルキルである、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩または溶媒和化合物。
【請求項３】
Ｒ１は−ＣＨ２−シクロプロピル基である、請求項２に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩または溶媒和化合物。
【請求項４】
Ｒ１は少なくとも１つのフッ素によって置換されたＣ１〜Ｃ４アルキルである、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩または溶媒和化合物。
【請求項５】
Ｒ１は−ＣＨＦ２または−ＣＦ３基より選択される、請求項４に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩または溶媒和化合物。
【請求項６】
Ｒ２はＨである、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩または溶媒和化合物。
【請求項７】
Ｒ３は置換または未置換Ｃ１〜Ｃ４アルキルである、請求項１から６のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩または溶媒和化合物。
【請求項８】
Ｒ３は−ＣＨ２ＣＨ３基である、請求項７に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩または溶媒和化合物。
【請求項９】
Ｒ３は−ＮＲ’Ｒ’’基によって置換されたＣ１〜Ｃ４アルキル基であり、式中、Ｒ’およびＲ’’は、ＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルより独立に選択される、請求項７に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩または溶媒和化合物。
【請求項１０】
Ｒ３は−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）２基である、請求項９に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩または溶媒和化合物。
【請求項１１】
Ｒ２およびＲ３は、置換または未置換飽和５員複素環を形成する、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩または溶媒和化合物。
【請求項１２】
Ｒ２およびＲ３は、任意に置換される飽和６員複素環を形成する、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩または溶媒和化合物。
【請求項１３】
前記飽和複素環は、その少なくとも１つの位置においてＣ１〜Ｃ４アルキルによって置換される、請求項１１または１２に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩または溶媒和化合物。
【請求項１４】
前記６員飽和複素環は、挿入された付加的なＮまたはＯ原子を含有する、請求項１２に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩または溶媒和化合物。
【請求項１５】
前記ＮはＣ１〜Ｃ４アルキルによって置換されている、請求項１４に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩または溶媒和化合物。
【請求項１６】
Ｒ４はフッ素である、請求項１から１５のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩または溶媒和化合物。
【請求項１７】
−  １−（（６−（ジフルオロメトキシ）−４−（４−フルオロフェニル）−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）ピロリジン
−  １−（（４−（４−フルオロフェニル）−６−（トリフルオロメトキシ）−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）ピロリジン
−  １−（（６−（シクロプロピルメトキシ）−４−（４−フルオロフェニル）−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）ピロリジン
−  １−（（６−（ジフルオロメトキシ）−４−（４−フルオロフェニル）−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）−４−メチルピペラジン
−  Ｎ１−（（６−（ジフルオロメトキシ）−４−（４−フルオロフェニル）−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）−Ｎ２，Ｎ２−ジメチルエタン−１，２−ジアミン
−  Ｎ１−（（４−（４−フルオロフェニル）−６−（トリフルオロメトキシ）−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）−Ｎ２，Ｎ２−ジメチルエタン−１，２−ジアミン
−  ４−（（４−（４−フルオロフェニル）−６−（トリフルオロメトキシ）−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）モルホリン
−  Ｎ−（（４−（４−フルオロフェニル）−６−（トリフルオロメトキシ）−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）エタンアミン
−  １−（（６−（シクロプロピルメトキシ）−４−（４−フルオロフェニル）−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）−４−メチルピペラジン
−  Ｎ１−（（６−（シクロプロピルメトキシ）−４−（４−フルオロフェニル）−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）−Ｎ２，Ｎ２−ジメチルエタン−１，２−ジアミン
−  ４−（（６−（シクロプロピルメトキシ）−４−（４−フルオロフェニル）−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）モルホリン
−  Ｎ−（（６−（シクロプロピルメトキシ）−４−（４−フルオロフェニル）−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）エタンアミンより選択される、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩または溶媒和化合物。
【請求項１８】
−  １−（（６−（シクロプロピルメトキシ）−４−（４−フルオロフェニル）−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）−４−メチルピペラジン
−  ４−（（４−（４−フルオロフェニル）−６−（トリフルオロメトキシ）−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）モルホリン
−  ４−（（６−（シクロプロピルメトキシ）−４−（４−フルオロフェニル）−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）モルホリン
−  Ｎ−（（６−（シクロプロピルメトキシ）−４−（４−フルオロフェニル）−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）エタンアミンより選択される、請求項１７に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩または溶媒和化合物。
【請求項１９】
薬物の製造のための、請求項１から１８のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩または溶媒和化合物の使用。
【請求項２０】
Ｔリンパ球におけるＴＣＲ−Ｎｃｋ相互作用の介在する疾患または障害を処置するための薬物の製造のための、請求項１から１８のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩または溶媒和化合物の使用。
【請求項２１】
Ｔリンパ球におけるＴＣＲ−Ｎｃｋ相互作用の介在する前記疾患または障害は、移植片拒絶、免疫性、自己免疫性および炎症性の疾患、神経変性疾患、血液病、ならびに増殖性疾患より選択される、請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
Ｔリンパ球におけるＴＣＲ−Ｎｃｋ相互作用の介在する前記疾患または障害は、移植片拒絶、関節リウマチ、乾癬性関節炎、乾癬、Ｉ型糖尿病、糖尿病による合併症、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、アトピー性皮膚炎、肥満細胞の介在するアレルギー反応、白血病、リンパ腫、ならびに白血病およびリンパ腫に関連する血栓閉塞性およびアレルギー性の合併症より選択される、請求項２１に記載の使用。
【請求項２３】
請求項１から１８のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩または溶媒和化合物と、１つまたはそれ以上の薬学的に許容できる賦形剤とを含む、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、クロメンコアを含有し、かつＴＣＲとＮｃｋとの相互作用を妨げることによってリンパ球増殖を阻害する能力を有する化合物のグループに関し、したがってこうした化合物は、こうした相互作用がたとえば移植片拒絶反応、免疫もしくは自己免疫疾患、炎症性疾患または増殖性疾患などの合併症を引き起こすような疾患または状態を処置するために有用である。
【背景技術】
【０００２】
たとえば喘息、多発性硬化症、アレルギー、関節リウマチ、クローン病または乾癬などの自己免疫疾患および炎症性疾患は多様な疾患群であり、この疾患においては適応免疫系が特にＴリンパ球を介して体内の自身の抗原を攻撃する。Ｔ細胞がすべての免疫機構の中心にあることは、一般的に認められている。Ｔ細胞は外来抗原および自己抗原の両方を認識して、それらに対する免疫応答を活性化できる。Ｔ細胞は、細胞質へのシグナル伝達を行うＴ細胞受容体（Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ＴＣＲ）を介して抗原を認識する。実際に、主要組織適合複合体（ｍａｊｏｒ  ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｃｏｍｐｌｅｘ：ＭＨＣ）のハプロタイプがヒト自己免疫疾患に対する最も重要な遺伝的危険因子であるという事実が、すべての免疫病理学的事象の中心にＴ細胞を配置する。
【０００３】
Ｔ細胞は、Ｔ細胞抗原受容体（ＴＣＲ）を介してＭＨＣに関連する抗原ペプチド（ｐＭＨＣ）を認識し、ｐＭＨＣの化学組成のわずかな相違を異なる定量的および定性的結果に変換できる。自己ペプチドの入ったＭＨＣに対する顕著な親和性を有するＴＣＲを有するＴ細胞の活性化を防ぐためのさまざまな制御機構が存在し、その中には胸腺の成熟の際の潜在的自己反応性Ｔ細胞の抑制も含まれるが、自己免疫疾患にかかって自己反応性Ｔ細胞が活性化および拡大し、恒常性制御に打ち勝っている患者において、これらの機構は幾分不十分である。
【０００４】
ＴＣＲは刺激の際に活性化されて立体構造変化を起こし、その結果として、シグナル伝達および細胞活性化を行う「ＴＣＲシグナロソーム」を形成する異なるタンパク質の補充をもたらす。この複合体は、Ｔ細胞受容体のＣＤ３εサブユニットに存在するＰＲＳモチーフ（プロリンリッチ配列（ｐｒｏｌｉｎｅ−ｒｉｃｈ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ））に結合するサイトゾルタンパク質Ｎｃｋを含む。その結果として、ＴＣＲ立体構造変化が安定化し、活性化シグナルが効率的に伝達される。
【０００５】
免疫疾患に対する現在の治療法は、免疫寛容誘発／免疫調節性のアプローチではなく、免疫抑制的な戦略にみえる。アザチオプリン、メトトレキセート、ミコフェノレート、およびクラドリビンは細胞増殖抑制性である。他の治療法は、Ｔ細胞の欠乏（アレムツズマブ、抗ＣＤ５２）、またはリンパ節におけるＴ細胞の保持（フィンゴリモド）を強制するものである。代替的に、免疫系の間接的な調節も強力な戦略として用いられる（ＢＧ−１２）。したがって、自己免疫疾患においてＴ細胞を活性化するためにＴＣＲシグナルが中心的役割を有するにもかかわらず、Ｔ細胞の活性化を調節するための近年の努力は、同時刺激シグナル、サイトカイン受容体などを調節することに焦点を合わせており、結果として特異性の欠如および多数の関連副作用が伴っている。
【０００６】
特定の免疫調節性の治療法を開発するために、多くの異なる研究グループによってＴ細胞活性化におけるＮｃｋの役割の特徴付けに焦点を合わせて多くの努力がなされてきた。すべての組織においてＮｃｋ１を欠き、Ｔ細胞においてのみ条件的にＮｃｋ２を欠くノックアウトマウスの研究を通じて、Ｎｃｋは成熟Ｔ細胞の機能に重要な役割を有するとされてきた。これらのモデルにおいては、自己抗原に対する低い結合力を有するＴＣＲを発現する末梢Ｔ細胞の数が急激に減少し、弱い抗原による刺激によるＴ細胞の活性化の全身的悪化が観察された。さらに、骨髄キメラを生成して、強いアゴニストではなく弱いアゴニストによる成熟Ｔ細胞の活性化のためにＰＲＳ輸送性（ＴＣＲにおけるＮｃｋ結合部位）が重要であることを示すことによっても、Ｎｃｋの重要性が示された。同様に、ＰＲＳ配列の突然変異は、マウスがインビボで適応免疫応答を活性化する能力を変えた。さらに、ＮｃｋのＳＨ３．１ドメインに対する高親和性を有する阻害ペプチドは、ＴＣＲシグナロソームのアセンブリを変えることから、Ｎｃｋの補充はＴＣＲシグナリングの重要な初期段階であることが示唆され、これは免疫応答の調節に対するターゲットを表すものである。
【０００７】
特許文献１は、スフィンゴシン−１−リン酸受容体（ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ−１−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ：Ｓ１Ｐ１）が介在する望ましくないリンパ球浸潤によって誘発される疾患の予防または処置のための、２Ｈ−クロメンに由来する一連の化合物を記載している。
【０００８】
加えて特許文献２は、Ｔ細胞におけるＴＣＲ−Ｎｃｋ相互作用の阻害能力を有するクロメン誘導体、および自己免疫疾患、炎症性疾患または移植片拒絶の処置のためのそれらの使用を記載している。
【０００９】
したがって、Ｔリンパ球におけるＴＣＲ−Ｎｃｋ相互作用を阻害でき、かつ良好な薬物候補である新規化合物を提供することが望ましいだろう。その化合物は、インビボ薬理学試験における良好な活性および経口投与時の良好な経口吸収を示すべきであり、かつ代謝的に安定であり、好都合な薬物動態プロファイルを有するべきである。さらに、化合物は毒性であってはならず、最小限の副作用を示すべきである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】国際公開第２０１０／０６４７０７号公報
【特許文献２】国際公開第２０１２／０４２０７８号公報
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
以下に記載される化合物は、ＴＣＲ−Ｎｃｋ間の相互作用を阻害する高い能力を有するため、Ｔリンパ球の過剰増殖が起こる疾患または障害を処置するために有用である。さらに、本発明の化合物は、構造的に類似の公知の化合物よりも良好な生物学的利用率を示し、かつＴＣＲ−Ｎｃｋの同じ阻害能力を有し、これは本発明の化合物の薬物としての使用における明確な利点である。
【００１２】
本発明の第1の局面は、式（Ｉ）の化合物
【化１】
0006505095.tif 000002
またはその薬学的に許容できる塩、異性体、もしくは溶媒和化合物に関し、式中、
Ｒ１は水素、置換もしくは未置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換もしくは未置換Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、置換もしくは未置換アリールまたは置換もしくは未置換ヘテロアリール、−ＣＯＲ５、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、−ＣＮＲ５より選択され、
Ｒ２およびＲ３は水素、置換もしくは未置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換もしくは未置換Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、置換もしくは未置換アリール、置換もしくは未置換ヘテロアリール、−ＣＯＲ７、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ７Ｒ８、−ＣＮＲ７、−ＯＲ７、−ＮＲ７Ｒ８、および−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）Ｒ８より独立に選択されるか、
またはＲ２およびＲ３は、それらが結合する窒素原子とともに、置換もしくは未置換複素環を形成し、
Ｒ４はハロゲンであり、
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、およびハロゲンより独立に選択される。
式（Ｉ）の化合物は、１−（（４−（４−フルオロフェニル）−６−メトキシ−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）ピロリジンではないという条件を有する。
【００１３】
本発明における「アルキル」という用語は、直鎖または分岐鎖の、１から６の炭素原子、好ましくは１から４の炭素原子を有し、かつ残りの分子に単結合で結合した炭化水素鎖のラジカル、たとえばメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシルなどを示す。アルキル基は、たとえばハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、カルボキシル、カルボニル、シアノ、アシル、アルコキシカルボニル、アミノ、ニトロ、メルカプト、およびアルキルチオなどの１つまたはそれ以上の置換基によって任意に置換されてもよい。
【００１４】
本発明における「シクロアルキル」という用語は、安定な３員から６員の単環式ラジカルであって、好ましくは３員であり、飽和または部分的に不飽和であり、かつ炭素および水素原子のみからなるもの、たとえばシクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシルなど、ならびにたとえばアルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、カルボキシル、シアノ、カルボニル、アシル、アルコキシカルボニル、アミノ、ニトロ、メルカプト、およびアルキルチオなどの１つまたはそれ以上の基によって任意に置換され得るものを示す。
【００１５】
本発明における「アリール」という用語は、６から１８の炭素原子、好ましくは６から１４の炭素原子、より好ましくは６から８の炭素原子を有し、かつ単一または複数の環でできていてもよく、後者の場合には分離および／または融合した環を有する、芳香族炭素環鎖を示す。アリール基の非限定的な例は、フェニル、ナフチル、インデニルなどである。好ましくは、アリール基はフェニルまたはナフチルである。アリール基は、たとえばアルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、カルボキシル、カルボニル、シアノ、アシル、アルコキシカルボニル、アミノ、ニトロ、メルカプト、およびアルキルチオなどの１つまたはそれ以上の５置換基によって任意に置換されてもよい。
【００１６】
「ヘテロアリール」という用語は、次の群、すなわち窒素、酸素または硫黄より選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含有するアリール基を示す。
【００１７】
本発明における「複素環」という用語は、不飽和、飽和または部分的飽和であり、かつ炭素原子と、次の群、すなわち窒素、酸素または硫黄より選択される少なくとも１つのヘテロ原子とからなる、３員から１５員の安定な単環式または二環式のラジカルを示す。複素環は、好ましくは１つまたはそれ以上のヘテロ原子を伴う４員から８員、より好ましくは１つまたはそれ以上のヘテロ原子を伴う５員から６員を有する。ヘテロアリールの例は、アゼピン、インドール、イミダゾール、イソチアゾール、チアジアゾール、フラン、テトラヒドロフラン、ベンゾイミダゾール、ベンゾチアゾール、ピペリジン、ピロリジン、ピペラジン、プリン、キノリンであってもよく、それらに限定されない。好ましくは、複素環基はピロリジンまたはピペラジンである。複素環基は、その任意の位置において、たとえばアルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、カルボキシル、カルボニル、シアノ、アシル、アルコキシカルボニル、アミノ、ニトロ、メルカプト、およびアルキルチオなどの１つまたはそれ以上の置換基によって任意に置換されてもよい。
【００１８】
「ハロゲン」とは、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を示す。
【００１９】
好ましい実施形態において、Ｒ１は置換または未置換Ｃ１〜Ｃ４アルキルである。より好ましい実施形態において、Ｒ１は−ＣＨ３である。
【００２０】
別のより好ましい実施形態において、Ｒ１はＣ３〜Ｃ６シクロアルキルによって置換されたＣ１−Ｃ４アルキルである。さらにより好ましい実施形態において、Ｒ１は−ＣＨ２−シクロプロピル基である。
【００２１】
別の好ましい実施形態において、Ｒ１は少なくとも１つのフッ素によって置換されたＣ１〜Ｃ４アルキルである。より好ましい実施形態において、Ｒ１は−ＣＨＦ２または−ＣＦ３基より選択される。
【００２２】
別の好ましい実施形態において、Ｒ１は水素である。
【００２３】
別の好ましい実施形態において、Ｒ２はＨである。
【００２４】
別の好ましい実施形態において、Ｒ３は置換または未置換Ｃ１〜Ｃ４アルキルである。より好ましい実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２ＣＨ３基である。
【００２５】
別のより好ましい実施形態において、Ｒ３は−ＮＲ’Ｒ’’基によって置換されたＣ１〜Ｃ４アルキルであり、式中、Ｒ’およびＲ’’は、ＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルより独立に選択される。より好ましい実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）２基である。
【００２６】
別の好ましい実施形態において、Ｒ２およびＲ３は、置換または未置換飽和５員複素環を形成する。
【００２７】
別の好ましい実施形態において、Ｒ２およびＲ３は、任意に置換される飽和６員複素環を形成する。
【００２８】
より好ましい実施形態において、飽和複素環は、その少なくとも１つの位置においてＣ１〜Ｃ４アルキルによって置換される。
【００２９】
別のより好ましい実施形態において、飽和６員複素環は、挿入された付加的なＮまたはＯ原子を含有する。さらにより好ましい実施形態において、ＮはＣ１〜Ｃ４アルキルによって置換されている。
【００３０】
別の好ましい実施形態において、Ｒ３は、未置換であるか、またはＣ１〜Ｃ４アルキルによって置換された付加的な挿入Ｎ原子を含有する飽和６員複素環である。
【００３１】
別の好ましい実施形態において、Ｒ４はフッ素である。
【００３２】
好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、次のリストより選択される。
−  ４−（４−フルオロフェニル）−３−（ピロリジン−１−イルメチル）−２Ｈ−クロメン−６−オール（ＡＸ−０１）
−  １−（（６−（ジフルオロメトキシ）−４−（４−フルオロフェニル）−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）ピロリジン（ＡＸ−０２）
−  １−（（４−（４−フルオロフェニル）−６−（トリフルオロメトキシ）−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）ピロリジン（ＡＸ−０３）
−  １−（（６−（シクロプロピルメトキシ）−４−（４−フルオロフェニル）−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）ピロリジン（ＡＸ−０４）
−  １−（（４−（４−フルオロフェニル）−６−メトキシ−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）−４−メチルピペラジン（ＡＸ−９）
−  Ｎ１−（（４−（４−フルオロフェニル）−６−メトキシ−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）−Ｎ２，Ｎ２−ジメチルエタン−１，２−ジアミン（ＡＸ−１０）
−  ４−（（４−（４−フルオロフェニル）−６−メトキシ−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）モルホリン（ＡＸ−１１）
−  Ｎ−（（４−（４−フルオロフェニル）−６−メトキシ−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）−エタンアミン（ＡＸ−１２）
−  １−（（６−（ジフルオロメトキシ）−４−（４−フルオロフェニル）−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）−４−メチルピペラジン（ＡＸ−１７）
−  Ｎ１−（（６−（ジフルオロメトキシ）−４−（４−フルオロフェニル）−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）−Ｎ２，Ｎ２−ジメチルエタン−１，２−ジアミン（ＡＸ−１８）
−  Ｎ１−（（４−（４−フルオロフェニル）−６−（トリフルオロメトキシ）−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）−Ｎ２，Ｎ２−ジメチルエタン−１，２−ジアミン（ＡＸ−２６）
−  ４−（（４−（４−フルオロフェニル）−６−（トリフルオロメトキシ）−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）モルホリン（ＡＸ−２７）
−  Ｎ−（（４−（４−フルオロフェニル）−６−（トリフルオロメトキシ）−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）エタンアミン（ＡＸ−２８）
−  １−（（６−（シクロプロピルメトキシ）−４−（４−フルオロフェニル）−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）−４−メチルピペラジン（ＡＸ−３３）
−  Ｎ１−（（６−（シクロプロピルメトキシ）−４−（４−フルオロフェニル）−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）−Ｎ２，Ｎ２−ジメチルエタン−１，２−ジアミン（ＡＸ−３４）
−  ４−（（６−（シクロプロピルメトキシ）−４−（４−フルオロフェニル）−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）モルホリン（ＡＸ−３５）
−  Ｎ−（（６−（シクロプロピルメトキシ）−４−（４−フルオロフェニル）−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）エタンアミン（ＡＸ−３６）。
【００３３】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、次のリストより選択される。
−  １−（（４−（４−フルオロフェニル）−６−メトキシ−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）−４−メチルピペラジン（ＡＸ−９）
−  Ｎ１−（（４−（４−フルオロフェニル）−６−メトキシ−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）−Ｎ２，Ｎ２−ジメチルエタン−１，２−ジアミン（ＡＸ−１０）
−  １−（（６−（シクロプロピルメトキシ）−４−（４−フルオロフェニル）−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）−４−メチルピペラジン（ＡＸ−３３）
−  ４−（（４−（４−フルオロフェニル）−６−（トリフルオロメトキシ）−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）モルホリン（ＡＸ−２７）
−  ４−（（６−（シクロプロピルメトキシ）−４−（４−フルオロフェニル）−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）モルホリン（ＡＸ−３５）
−  Ｎ−（（６−（シクロプロピルメトキシ）−４−（４−フルオロフェニル）−２Ｈ−クロメン−３−イル）メチル）エタンアミン（ＡＸ−３６）。
【００３４】
本発明の別の局面は、薬物の製造のための、上述の式（Ｉ）の化合物の使用に関する。
【００３５】
本発明の別の局面は、Ｔリンパ球におけるＴＣＲ−Ｎｃｋ相互作用の介在する疾患または障害を処置するための薬物の製造のための、上述の式（Ｉ）の化合物の使用に関する。
【００３６】
この記載全体にわたり、疾患の「処置」、疾患を「処置する」という用語、またはその他の文法的に関連する表現は、こうした疾患の根治的治療および対症療法または予防的処置を示す。
【００３７】
好ましい実施形態において、Ｔリンパ球におけるＴＣＲ−Ｎｃｋ相互作用の介在する疾患または障害は、移植片拒絶、免疫性、自己免疫性および炎症性の疾患、神経変性疾患、血液病、ならびに増殖性疾患の中から選択される。
【００３８】
より好ましい実施形態において、Ｔリンパ球におけるＴＣＲ−Ｎｃｋ相互作用の介在する疾患または障害は、移植片拒絶、関節リウマチ、乾癬性関節炎、乾癬、Ｉ型糖尿病、糖尿病に関連する合併症、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、アトピー性皮膚炎、肥満細胞の介在するアレルギー反応、白血病、リンパ腫、ならびに白血病およびリンパ腫に関連する血栓閉塞性およびアレルギー性の合併症より選択される。
【００３９】
本発明の別の局面は、Ｔリンパ球におけるＴＣＲ−Ｎｃｋ相互作用の介在する疾患または障害の処置におけるその使用に対して式（Ｉ）の化合物に言及する。
【００４０】
本発明の別の局面は、上述の式（Ｉ）の化合物と、１つまたはそれ以上の薬学的に許容できる賦形剤とを含む医薬組成物に関する。
【００４１】
本発明に記載される化合物、その薬学的に許容できる塩、および／またはそれらを含有する医薬組成物などの溶媒和化合物を、併用療法を提供するために他の付加的な薬物とともに用いることもできる。前記付加的な薬物は、同じ医薬組成物の一部であってもよいし、代替的には同時投与のための別個の組成物の形で提供されるか、あるいは式（Ｉ）の化合物またはその異性体、溶媒和化合物、もしくは薬学的に許容できる塩を含む医薬組成物に提供されなくてもよい。
【００４２】
別様に示されない限り、本発明の化合物は、１つまたはそれ以上の同位体濃縮された原子の存在のみが異なる化合物をも含む。たとえば、水素の重水素またはトリチウムによる置換、あるいは炭素の１３Ｃもしくは１４Ｃ濃縮炭素または１５Ｎ濃縮窒素による置換以外は前記構造を有する化合物は、本発明の範囲内である。
【００４３】
治療用途に対する式（Ｉ）の化合物は、固体形状または薬学的に許容できる希釈剤中の水性懸濁物として調製される。これらの調製物は任意の好適な投与経路によって投与されてもよく、前記調製物は選択された投与経路に対する薬学的に適切な方法で調合される。特定の実施形態において、本発明によって提供される式（Ｉ）の化合物の投与は、経口、局所、直腸、または非経口（皮下、腹腔内、皮内、筋肉内、静脈内などを含む）経路によって行われる。薬物投与の異なる医薬形状、およびそれらを得るために必要な賦形剤の概説は、たとえば「生薬学の約定（Ｔｒｅａｔｙ  ｏｆ  Ｇａｌｅｎｉｃ  Ｐｈａｒｍａｃｙ）」Ｃ．ファウリ・イ・トリリョ（Ｆａｕｌｉ  ｉ  Ｔｒｉｌｌｏ）、１９９３、ルサン（Ｌｕｚａｎ）５、ＳＡ  エディシオネス（Ｅｄｉｃｉｏｎｅｓ）、マドリード（Ｍａｄｒｉｄ）、またはその他のスペイン、欧州もしくは米国薬局方に共通もしくは類似のものなどに見出すことができる。
【００４４】
治療における適用に対して、式（Ｉ）の化合物、それらの異性体、塩または溶媒和化合物は、好ましくは許容できるかまたは実質的に純粋な医薬形状であること、すなわちたとえば希釈剤および担体などの通常の医薬添加剤を除いて、薬学的に許容できるレベルの純度を有し、かつ通常の用量レベルにおいて毒性であると考えられる材料を含まないことが見出される。活性物質に対する純度レベルは、好ましくは５０％より高く、より好ましくは７０％より高く、より好ましくは９０％より大きい。好ましい実施形態において、純度レベルは式（Ｉ）の化合物またはその異性体、塩もしくは溶媒和化合物に対して９５％より高い。
【００４５】
本発明の化合物は、遊離化合物または溶媒和化合物として結晶形状になっていてもよく、両方の形状が本発明の範囲内にあることが意図される。ここで、本明細書において用いられる「溶媒和化合物」という用語は、薬学的に許容できる溶媒和化合物、すなわち薬物の製造に用いられ得る式（Ｉ）の化合物の溶媒和化合物と、薬学的に許容できる塩または溶媒和化合物の調製に有用であり得る、薬学的に許容できない溶媒和化合物との両方を含む。薬学的に許容できる溶媒和化合物の性質は、薬学的に許容できるものであれば重大ではない。特定の実施形態において、溶媒和化合物は水和物である。溶媒和化合物は、この主題の技術者に周知の従来の溶媒和法によって得られてもよい。
【００４６】
式（Ｉ）によって表される本発明の化合物、特に前述のこの一般式に属する特定の化合物は、キラル中心の存在によって、光学異性体またはエナンチオマーを含む、複数の結合の存在に依存する（例、Ｚ、Ｅ）異性体を含み得る。異性体、エナンチオマーまたは個々のジアステレオ異性体、およびそれらの混合物は本発明の範囲内にある。個々のエナンチオマーまたはジアステレオ異性体、たとえばそれらの混合物などは、従来の技術によって分離されてもよい。
【００４７】
本発明の別の局面は、Ｔ細胞におけるＴＣＲ−Ｎｃｋ相互作用の介在する疾患または障害を処置する方法であり、この方法は、投与を必要とする患者に治療上有効な量の式（Ｉ）の化合物を投与するステップを含む。
【００４８】
本明細書において使用される「治療上有効な量」という用語は、疾患の症状を低減する所望の効果を生じさせるために十分な活性化合物の量を示す。用量は、臨床評価によって有害とされて治療上処置不能とされるような望ましくない副作用をもたらす量で使用されるべきではない。一般的に、用量は患者の年齢、状態、性別、および疾患の程度、ならびに投与の経路および頻度によって変動し、場合ごとに定められる。
【００４９】
本発明の別の局面は、以下のステップを含む、上述の式（Ｉ）の化合物を得る方法に関する。
ａ）式（ＩＩ）の化合物を、式（ＩＩＩ）の化合物および式（ＩＶ）の化合物と反応させるステップであって、
【化２】
0006505095.tif 000003
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は請求項１と同じ意味を有する、ステップ、および
ｂ）１つまたはそれ以上のステップにおいて、式（ＩＩ）の化合物を式（Ｉ）の化合物に変換するステップ。
【００５０】
本記載および請求項の全体にわたって、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という言葉およびその変形は、他の技術的特徴、添加剤、構成要素またはステップを除外することを意図するものではない。この主題の専門家には、本発明の記載および実施の部分から、本発明の他の目的、利点および特徴が明らかになるだろう。以下の実施例および図面は例示のために提供されるものであって、本発明を限定することは意図されない。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】本発明のテスト化合物の各々に対して、Ｔリンパ球の増殖を阻害する能力を表す図である。
【図２】プラセボを受けた対象および化合物ＡＸ−１０４を受けた対象の間の、研究中の神経細胞損傷のレベルの推定を表す図である。
【図３】プラセボを受けた対象および化合物ＡＸ−１０４を受けた対象の間の、研究中の体重の推移（ｗｅｉｔｇｈ  ｐｏｇｒｅｓｓｉｏｎ）を表す図である。
【実施例】
【００５２】
本発明の化合物の有効性を示す、本発明者らの行ったテストによって本発明を示す。
【００５３】
実施例１：本発明の化合物の合成
ＡＸ−１０１の合成スキーム
【化３】
0006505095.tif 000004
ＡＸ−１０１（遊離塩基）の合成：ＡＸ−２４．ＨＣｌ（１ｇ、１ｅｑ．）の無水ＤＣＭ（１０ｍｌ）溶液に、ＢＢｒ３（０．７９ｇ、１．２ｅｑ．）を−７８℃にて滴下して加え、ＲＴにて一晩撹拌した。ＴＬＣによって反応をモニタした。完了後に、反応混合物を飽和重炭酸ナトリウムの冷溶液に注ぎ入れ、ＤＣＭ（２ｘ２０ｍｌ）で抽出した。混合有機層を水（２０ｍｌ）、生理食塩水（１０ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。カラムクロマトグラフィー（１００％酢酸エチル）による粗生成物の精製によって、ＨＰＬＣによる９７．８％の純度を有する０．５ｇの所望の生成物（薄茶色の固体）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．８０（ｓ，１Ｈ），７．３１−７．２７（ｍ，２Ｈ），７．２０−７．１７（ｍ，２Ｈ），６．６８−６．６６（ｄ，２Ｈ），６．５１−６．２８，（ｄｄ，１Ｈ），５．９３（ｓ，１Ｈ），４．７３（ｓ，１Ｈ），２．９６（ｓ，２Ｈ），２．２９（ｂ，４Ｈ），１．６１（ｂ，４Ｈ）。Ｃ２０Ｈ２０ＦＮＯ２に対する理論上のＭＳ：３２５．４；実際のＭ＋＋１，３２６．１．
【００５４】
ＡＸ−１０４の合成スキーム
【化４】
0006505095.tif 000005
ＡＸ−１０４の合成：ＡＸ−１０１（０．７ｇ、１ｅｑ．）、Ｋ２ＣＯ３（１ｇ、３ｅｑ．）、臭化シクロプロピルメチル（１．１６ｇ、４ｅｑ．）のＤＭＦ（１０ｍｌ）およびアセトン（２０ｍｌ）溶液の混合物に、臭化テトラメチルアンモニウム（０．１ｇ、触媒）を加えた。得られた反応混合物を８０℃にて一晩加熱した。ＴＬＣによって反応を制御した。完了後に、反応混合物を冷水（４０ｍｌ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（３×２０ｍｌ）で抽出した。混合有機層を水（２×１５ｍｌ）、生理食塩水（１０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。カラムクロマトグラフィー（２０％酢酸エチルのヘキサン溶液）による粗生成物の精製によって、ＨＰＬＣによる９６％の純度を有する０．１ｇの所望の生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ７．３１−７．２７（ｍ，２Ｈ），７．２１−７．１９（ｍ，２Ｈ），６．７８−６．７６（ｄ，２Ｈ），６．７０−６．６７（ｄｄ，１Ｈ），５．９７−５．９６（ｄ，１Ｈ），３．５８−３．５６（ｄ，２Ｈ），２．９７（ｓ，２Ｈ），２．３（ｂ，４Ｈ），１．６１（ｂ，４Ｈ），１．８−１．２（ｍ，４Ｈ），０．４９−０．４４（ｍ，２Ｈ），０．２１−０．１８（ｍ，２Ｈ）。Ｃ２４Ｈ２６ＦＮＯ２に対する理論上のＭＳ：３７９．５；実際のＭ＋＋１，３８０．１。
【００５５】
ＡＸ−１３３からＡＸ−１３６に対する合成スキーム
【化５】
0006505095.tif 000006
化合物Ｂの合成：化合物Ａ（１０ｇ、１ｅｑ．）の無水ＤＣＭ（１５０ｍｌ）溶液に、ＢＢｒ３（１１．４ｇ、１．３ｅｑ．）を０℃にて滴下して加え、ＲＴにて一晩撹拌した。ＴＬＣによって反応を制御した。完了後に、反応混合物を冷水に注ぎ入れ、ＤＣＭ（２ｘ１５０ｍｌ）で抽出した。混合有機層を水（２×７０ｍｌ）、生理食塩水（２０ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。カラムクロマトグラフィー（４０％酢酸エチルのヘキサン溶液）による粗生成物の精製によって、４．７ｇの所望の生成物を得た。Ｃ１６Ｈ１１ＦＯ３に対する理論上のＭＳ：３２４．１２，実際のＭ＋＋１，３２５．２
【００５６】
化合物Ｃの合成：化合物Ｂ（５．５ｇ、１ｅｑ．）、Ｋ２ＣＯ３（１１．２ｇ、４ｅｑ．）、臭化シクロプロピルメチル（５．５ｇ、２ｅｑ．）のＤＭＦ（５０ｍｌ）溶液の混合物に、臭化テトラメチルアンモニウム（０．１ｇ、触媒）を加えた。得られた反応混合物を７５℃にて一晩加熱した。ＴＬＣによって反応を制御した。完了後に、混合物を冷水（１００ｍｌ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（３×７０ｍｌ）で抽出した。混合有機層を水（２×４０ｍｌ）、生理食塩水（２０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。カラムクロマトグラフィー（１０％酢酸エチルのヘキサン溶液）による粗生成物の精製によって、１．７ｇの所望の生成物を得た。Ｃ２０Ｈ１７ＦＯ３に対する理論上のＭＳ：３２４．１２，実際のＭ＋＋１，３２５．２
【００５７】
化合物Ｄの合成：化合物Ｃ（３ｇ、１ｅｑ．）の混合物に、水素化ホウ素ナトリウム（０．１７ｇ、０．５ｅｑ．）をトルエン（２０ｍｌ）、メタノール（２ｍｌ）中でＲＴにて滴下して加え、この温度で２ｈ撹拌した。ＴＬＣによって反応をモニタした。完了後に、混合物を冷水（１００ｍｌ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（２×３０ｍｌ）で抽出した。混合有機層を水（２０ｍｌ）、生理食塩水（１０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。減圧下での有機層の蒸発によって、２．７ｇの所望の生成物を得た。この材料を、精製および分析なしに次のステップに直接用いた。
【００５８】
化合物Ｅの合成：化合物Ｄ（３．５ｇ、１ｅｑ．）の混合物に、水素化ホウ素ナトリウムをトルエン（３０ｍｌ）、塩化チオニル（１．７８ｇ、１．４ｅｑ．）中で０℃にて滴下して加え、ＲＴにて２ｈ撹拌した。ＴＬＣによって反応をモニタした。完了後に、混合物を氷冷水（２５ｍｌ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（２×２５ｍｌ）で抽出した。混合有機層を水（３０ｍｌ）、生理食塩水（１０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。減圧下での有機層の蒸発（真空蒸発）によって、３．４ｇの原料生成物を得た。この材料を、精製および分析なしに次のステップに直接用いた。
【００５９】
ＡＸ−１３３の合成：化合物Ｅ（０．３ｇ、１ｅｑ．）、Ｋ２ＣＯ３（０．３６ｇの３ｅｑ．）、Ｎ−メチルピペラジン（０．１３ｇ、１．５ｅｑ．）のジイソプロピルエーテル（１５ｍｌ）溶液の混合物を、ＲＴにて一晩撹拌した。ＴＬＣによって反応をモニタした。完了後に、混合物を冷水（２０ｍｌ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（２×３０ｍｌ）で抽出した。混合有機層を水（２０ｍｌ）、生理食塩水（１０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。カラムクロマトグラフィー（１０％メタノールのＤＣＭ溶液）による粗生成物の精製によって、ＨＰＬＣによる９２．９％の純度を有する４０ｍｇの所望の生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ７．１１−７．２（ｍ，４Ｈ），６．７８−６．７５（ｄ，１Ｈ），６．６５−６．６３（ｄｄ，１Ｈ），６．１５−６．１４（ｄ，１Ｈ），４．７８（ｓ，２Ｈ），３．５７−３．５５（ｄ，２Ｈ），２．９７（ｓ，２Ｈ），２．５２（ｂ，８Ｈ），１．２３（ｓ，３Ｈ），１．１４−１．８（ｍ，１Ｈ），０．５６−０．５２（ｍ，２Ｈ），０．２４−０．０２０（ｍ，２Ｈ）。Ｃ２５Ｈ２９ＦＮ２Ｏ２に対する理論上のＭＳ：４０８．５１；実際のＭ＋＋１，４０９．２。
【００６０】
ＡＸ−１３４の合成：化合物Ｅ（０．３ｇ、１ｅｑ．）、Ｋ２ＣＯ３（０．５５ｇ、５ｅｑ．）、Ｎ，Ｎ−ジメチルエチレンジアミン（０．２８ｇ、４ｅｑ．）のジイソプロピルエーテル（１５ｍｌ）溶液の混合物を、２ｈ還流した。ＴＬＣによって反応をモニタした。完了後に、混合物を冷水（２０ｍｌ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（２×３０ｍｌ）で抽出した。混合有機層を水（２０ｍｌ）、生理食塩水（１０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。カラムクロマトグラフィー（１２％メタノールのＤＣＭ溶液）による粗生成物の精製によって、ＨＰＬＣによる９３．２％の純度を有する８０ｍｇの所望の生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ  ７．１６−７．８（ｍ，４Ｈ），６．８０−６．７７（ｄ，１Ｈ），６．６８−６．６３（ｄｄ，１Ｈ），６．１８−６．１７（ｄ，１Ｈ），４．８５（ｓ，２Ｈ），３．６０−３．５８（ｄ，２Ｈ），３．１９（ｓ，２Ｈ），２．５５−２．５２（ｔ，２Ｈ），２．３４−２．３１（ｔ，２Ｈ），２．１８（ｂ，５Ｈ），１．１４−１．１２（ｍ，１Ｈ），０．５７−０．５５（ｍ，２Ｈ），０．２５−０．２４（ｍ，２Ｈ）。Ｃ２４Ｈ２９ＦＮ２Ｏ２に対する理論上のＭＳ：３９６．５；実際のＭ＋＋１，３９７．２。
【００６１】
ＡＸ−１３５の合成：化合物Ｅ（０．２ｇ、１ｅｑ．）、Ｋ２ＣＯ３（０．２４ｇの３ｅｑ．）、モルホリン（０．１ｇ、２ｅｑ．）のジイソプロピルエーテル（１５ｍｌ）溶液の混合物を、２ｈ還流した。ＴＬＣによって反応をモニタした。完了後に、混合物を冷水（２０ｍｌ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（２×２０ｍｌ）で抽出した。混合有機層を水（２０ｍｌ）、生理食塩水（１０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。カラムクロマトグラフィー（３０％酢酸エチルのヘキサン溶液）による粗生成物の精製によって、ＨＰＬＣによる９５．８％の純度を有する４５ｍｇの所望の生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ７．３７−７．２６（ｔ，２Ｈ），７．２１−７．１６（ｍ，２Ｈ），６．７８−６．７６（ｄ，１Ｈ），６．７１−６．６８（ｄｄ，１Ｈ），５．９７−５．９６（ｄ，１Ｈ），４．７５（ｓ，２Ｈ），３．５８−３．５６（ｄ，２Ｈ），３．５２−３．５０（ｍ，２Ｈ），２．８７（ｓ，２Ｈ），２．２１（ｂ，４Ｈ），１．８−１．３（ｍ，１Ｈ），０．４９〜０．４４（ｍ，２Ｈ），０．２１〜０．１７（ｍ，２Ｈ）。Ｃ２４Ｈ２６ＦＮＯ３に対する理論上のＭＳ：３９５．４７；実際のＭ＋＋１，３９６．１。
【００６２】
ＡＸ−１３６の合成：化合物Ｅ（０．３ｇ、１ｅｑ．）、Ｋ２ＣＯ３（０．３６ｇの３ｅｑ．）、エチルアミン塩酸塩（０．２２ｇ、３ｅｑ．）のＤＭＦ（１０ｍｌ）溶液の混合物を、ＲＴにて一晩撹拌した。ＴＬＣによって反応をモニタした。完了後に、混合物を冷水（２０ｍｌ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（３×２０ｍｌ）で抽出した。混合有機層を水（２×１５ｍｌ）、生理食塩水（１０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。カラムクロマトグラフィー（５％メタノールのＤＣＭ溶液）による粗生成物の精製によって、ＨＰＬＣによる９２．２％の純度を有する５０ｍｇの所望の生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ  ７．１６−７．９（ｍ，４Ｈ），６．８０−６．７８（ｄ，１Ｈ），６．６８−６  ６３（ｄｄ，１Ｈ），６．１９−６．１７（ｓ，１Ｈ），４．８３（ｓ，２Ｈ），３．６０−３．５８（ｄ，２Ｈ），３．２（ｓ，２Ｈ），２．５４−２．４９（ｑ，２Ｈ），１．１６−１．１２（ｍ，１Ｈ），１．０２−０．９８（ｔ，３Ｈ），０．５９  ｔｏ  ０．５４（ｍ，２Ｈ），０．２７−０．２３（ｍ，２Ｈ）。Ｃ２４Ｈ２６ＦＮＯ３に対する理論上のＭＳ：３５３．４３；実際のＭ−４４．３，３０９．１（エチルアミン基は質量を分割する）。
【００６３】
ＡＸ−１０２、ＡＸ−１１７およびＡＸ−１１８に対する合成スキーム
【化６】
0006505095.tif 000007
化合物Ｂの合成：化合物Ａ（３ｇ、１ｅｑ．）、Ｋ２ＣＯ３（３．０６ｇ、２ｅｑ．）、エチルクロロジフルオロアセテート（２．２ｇ、１．３ｅｑ．）のＤＭＦ（２０ｍｌ）溶液の混合物を、７５℃にて一晩加熱した。ＴＬＣによって反応をモニタした。完了後に、混合物を冷水（５０ｍｌ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（３×５０ｍｌ）で抽出した。混合有機層を水（２×３０ｍｌ）、生理食塩水（２０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。カラムクロマトグラフィー（１０％酢酸エチルのヘキサン溶液）による粗生成物の精製によって、１ｇの所望の生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）  Ｃ１７Ｈ１１Ｆ３ＮＯ３に対する理論上のＭＳ：３２０．２６；実際のＭ＋＋１，３２１．１
【００６４】
化合物Ｃの合成：化合物Ｂ（１ｇ、１ｅｑ．）、水素化ホウ素ナトリウム（０．０５ｇ、０．５ｅｑ．）のトルエン（１０ｍｌ）溶液の混合物に、メタノール（２ｍｌ）をＲＴにて滴下して加え、この温度で２ｈ撹拌した。ＴＬＣによって反応をモニタした。完了後に、混合物を冷水（３０ｍｌ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（２×３０ｍｌ）で抽出した。混合有機層を水（１５ｍｌ）、生理食塩水（１０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。減圧下での有機層の蒸発（真空蒸発）によって、０．９ｇの所望の生成物を得た。この材料を、精製および分析なしに次のステップに直接用いた。
【００６５】
化合物Ｄの合成：化合物Ｃ（０．９ｇ、１ｅｑ．）のトルエン（２０ｍｌ）溶液の混合物に、塩化チオニル（０．４３ｇ、１．３ｅｑ．）を０℃にて滴下して加え、ＲＴにて２ｈ撹拌した。ＴＬＣによって反応をモニタした。完了後に、混合物を冷水（２０ｍｌ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（２×３０ｍｌ）で抽出した。混合有機層を水（２０ｍｌ）、生理食塩水（１０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。減圧下での有機層の蒸発（真空蒸発）によって、０．９ｇの原料生成物を得た。この材料を、精製および分析なしに次のステップに直接用いた。
【００６６】
ＡＸ−１０２の合成：化合物Ｄ（０．２５ｇ、１ｅｑ．）、Ｋ２ＣＯ３（０．５ｇ、５ｅｑ．）、およびピロリジン（０．１５ｇ、３ｅｑ．）のジイソプロピルエーテル（１５ｍｌ）溶液の混合物を、６０℃にて２ｈ加熱した。ＴＬＣによって反応をモニタした。完了後に、混合物を冷水（２０ｍｌ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（２×２５ｍｌ）で抽出した。混合有機層を水（２０ｍｌ）、生理食塩水（１０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。カラムクロマトグラフィー（４０％酢酸エチルのヘキサン溶液）による粗生成物の精製によって、９４．４％ＨＰＬＣ純度３０を有する５０ｍｇの所望の生成物を与えた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ  ７．１２−７．１１（ｄ，４Ｈ），６．８８−６．８１（ｍ，２Ｈ），６．４７−６．１０（ｑ，１Ｈ），４．９（ｓ，２Ｈ），３．０（ｓ，２Ｈ），２．３８（ｂ，２Ｈ），１．７０（ｂ，４Ｈ）。Ｃ２１Ｈ２０Ｆ３ＮＯ２に対する理論上のＭＳ：３７５．４；実際のＭ＋＋１，３７６．１。
【００６７】
ＡＸ−１１７の合成：化合物Ｄ（０．２５ｇ、１ｅｑ．）、Ｋ２ＣＯ３（０．３ｇ、３ｅｑ．）、およびＮ−メチルピペラジン（０．１１ｇ、１．５ｅｑ．）のジイソプロピルエーテル（１５ｍｌ）溶液の混合物を、６０℃にて２ｈ加熱した。ＴＬＣによって反応をモニタした。完了後に、混合物を冷水（２０ｍｌ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（２×３０ｍｌ）で抽出した。混合有機層を水（２０ｍｌ）、生理食塩水（１０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。カラムクロマトグラフィー（８％メタノールのＤＣＭ溶液）による粗生成物の精製によって、ＨＰＬＣによる９６．３％の純度を有する４０ｍｇの所望の生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ７．３２−７．３０（ｂ，２Ｈ），７．２２（ｂ，２Ｈ），７．１３−６．７６（１Ｈ），６．９８−  ９．８９（２Ｈ），６．２（ｓ，１Ｈ），４．８８（ｓ，２Ｈ），２．９１（ｓ，３Ｈ），２．６７）ｂ，４Ｈ），２．４１（ｂ，８Ｈ）。Ｃ２２Ｈ２３Ｆ３Ｎ２Ｏ２に対する理論上のＭＳ：４０４．４３；実際のＭ＋＋１，４０５．１。
【００６８】
ＡＸ−１１８．ＨＣｌの合成：化合物Ｄ（０．２ｇ、１ｅｑ．）、Ｋ２ＣＯ３（０．３２ｇ、４ｅｑ．）、およびＮ，Ｎ−ジメチルエチレンジアミン（０．１５ｇ、３ｅｑ．）のジイソプロピルエーテル（１０ｍＬ）溶液の混合物を、６０℃にて２ｈ加熱した。ＴＬＣによって反応をモニタした。完了後に、混合物を冷水（２０ｍｌ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（２×２５ｍｌ）で抽出した。混合有機層を水（２０ｍｌ）、生理食塩水（１０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。カラムクロマトグラフィー（７％メタノールのＤＣＭ溶液）による粗生成物の精製によって、ＨＰＬＣによる９２％の純度を有する５０ｍｇの所望の生成物を得た。前の生成物をジオキサン（４ｍｌ）に溶解し、０．５ｍｌの４Ｍ  ＨＣｌを加えてＲＴにて撹拌した。２ｈ後に得られた固体をろ過し、１０ｍｌのｎ−ペンタンで洗浄し、真空乾燥して、ＨＰＬＣによる９３％の純度を有する４０ｍｇの純生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  １０．７（ｂ，１Ｈ），９．７６（ｂ，２Ｈ），７．４２−７．３４（ｍ，４Ｈ），７．１７−６．９８（ｍ，３Ｈ），６．２６（ｓ，１Ｈ），５．０４（ｓ，２Ｈ），３．６（ｂ，２Ｈ），３．３（ｂ，２Ｈ），２．７９（ｂ，６Ｈ）。Ｃ２１Ｈ２４ＣｌＦ３Ｎ２Ｏ２に対する理論上のＭＳ：４２８．８８；実際のＭ＋＋１，３９３．１（−ＨＣｌ）。
【００６９】
ＡＸ−１０９からＡＸ−１１２に対する合成スキーム
【化７】
0006505095.tif 000008
化合物Ｂの合成：化合物Ａ（３ｇ、１ｅｑ．）、水素化ホウ素ナトリウム（０．１７ｇ、０．５ｅｑ．）のトルエン（２０ｍｌ）溶液の混合物に、メタノール（２ｍｌ）をＲＴにて滴下して加え、この温度で２ｈ撹拌した。ＴＬＣによって反応をモニタした。完了後に、混合物を冷水（１００ｍｌ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（２×３０ｍｌ）で抽出した。混合有機層を水（２０ｍｌ）、生理食塩水（１０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。減圧下での有機層の蒸発によって、２．７ｇの所望の生成物を得た。この材料を、精製および分析なしに次のステップに直接用いた。
【００７０】
化合物Ｃの合成：化合物Ｂ（３．５ｇ、１ｅｑ．）のトルエン（３０ｍｌ）溶液の混合物に、塩化チオニル（１．７８ｇ、１．４ｅｑ．）を０℃にて滴下して加え、ＲＴ１５にて２ｈ撹拌した。ＴＬＣによって反応をモニタした。完了後に、混合物を氷冷水（２５ｍｌ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（２×２５ｍｌ）で抽出した。混合有機層を水（３０ｍｌ）、生理食塩水（１０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。減圧下での有機層の蒸発（真空蒸発）によって、３．４ｇの粗生成物を得た。この材料を、精製および分析なしに次のステップに直接用いた。
【００７１】
ＡＸ−１０９の合成：化合物Ｃ（０．４ｇ、１ｅｑ．）、Ｋ２ＣＯ３（０．５ｇ、３ｅｑ．）、およびＮ−メチルピペラジン（０．１５ｇ、１．２ｅｑ．）のジイソプロピルエーテル（４ｍｌ）溶液の混合物を、ＲＴにて１５ｈ撹拌した。ＴＬＣによって反応をモニタした。次いで冷水（２０ｍｌ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（２×３０ｍｌ）で抽出した。混合有機層を水（２０ｍｌ）、生理食塩水（１０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。カラムクロマトグラフィー（５％メタノールのＤＣＭ溶液）による粗生成物の精製によって、ＨＰＬＣによる９４．５％の純度を有する１７０ｍｇの所望の生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ  ７．１０−７．０９（ｄ，４Ｈ），６．８２−６．７９（ｄ，１Ｈ），６．６８−６．６５（ｄｄ，１Ｈ），６．１３（ｄ，１Ｈ），４．７９（ｓ，２Ｈ），３．６１（ｓ，３Ｈ），２．９５（ｓ，２Ｈ），２．５１−２．４４（ｂ，８Ｈ），２．０８（ｓ，２Ｈ）。Ｃ２２Ｈ２５ＦＮ２Ｏ２に対する理論上のＭＳ：３６８．４；実際のＭ＋＋１，３６９．２。
【００７２】
ＡＸ−１１０の合成：化合物Ｃ（０．４ｇ、１ｅｑ．）、Ｋ２ＣＯ３（０．５ｇ、３ｅｑ．）、および１０Ｎ，Ｎ−ジメチルエチレンジアミン（０．１３ｇ、１．２ｅｑ．）のジイソプロピルエーテル（４ｍｌ）溶液の混合物を、ＲＴにて１５ｈ撹拌した。ＴＬＣによって反応をモニタした。完了後に、混合物を冷水（２０ｍｌ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（２×３０ｍｌ）で抽出した。混合有機層を水（２０ｍｌ）、生理食塩水（１０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。ＨＣｌ塩の形成後に、飽和重炭酸ナトリウムを用いて中和することによって行われた粗生成物の精製によって、ＨＰＬＣによる９４％の純度を有する１３０ｍｇの所望の生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ  ７．１７−７．０８（ｍ，４Ｈ），６．８２−６．８０（ｄ，１Ｈ），６．６７−６．６５（ｄｄ，１Ｈ），６．１５−６．１４（ｄ，１Ｈ），４．８２（ｓ，２Ｈ），３．６２（ｓ，３Ｈ），３．２１（ｓ，２Ｈ），２．５５−２．５３（ｔ，２Ｈ），２．３５−２．３２（ｔ，２Ｈ），２．１９（ｓ，６Ｈ）。Ｃ２１Ｈ２５ＦＮ２Ｏ２に対する理論上のＭＳ：３５６．４；実際のＭ＋＋１，３５７．１。
【００７３】
ＡＸ−１１１の合成：化合物Ｃ（０．４ｇ、１ｅｑ．）、Ｋ２ＣＯ３（０．５ｇ、３ｅｑ．）、およびモルホリン（０．１３ｇ、１．２ｅｑ．）のジイソプロピルエーテル（４ｍｌ）溶液の混合物を、ＲＴにて１５ｈ撹拌した。ＴＬＣによって反応をモニタした。完了後に、混合物を冷水（２０ｍｌ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（２×３０ｍｌ）で抽出した。混合有機層を水（２０ｍｌ）、生理食塩水（１０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。ジエチルエーテルを用いた結晶化によって行われた粗生成物の精製によって、ＨＰＬＣによる９６．５％の純度を有する１６０ｍｇの所望の生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ  ７．１２−７．１０（ｄ，４Ｈ），６．８２−６．８０（ｄ，１Ｈ），６．６８−６．６５（ｄｄ，１Ｈ），６．１３（ｄ，１Ｈ），４．８２（ｓ，２Ｈ），３．６５−３．６３（ｍ，４Ｈ），３．６２（ｓ，３Ｈ），２．９１（ｓ，２Ｈ），２．３１（ｂ，４Ｈ）。Ｃ２１Ｈ２２ＦＮＯ３に対する理論上のＭＳ：３５５．４；実際のＭ＋＋１，３５６．１。
【００７４】
ＡＸ−１１２の合成：化合物Ｃ（０．４ｇ、１ｅｑ．）、Ｋ２ＣＯ３（０．５ｇ、３ｅｑ．）、およびエチルアミン．ＨＣｌ（０．１２ｇ、１．２ｅｑ．）のジイソプロピルエーテル（４ｍｌ）溶液の混合物を、ＲＴにて１５ｈ撹拌した。ＴＬＣによって反応をモニタした。完了後に、混合物を冷水（２０ｍｌ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（２×３０ｍｌ）で抽出した。混合有機層を水（２０ｍｌ）、生理食塩水（１０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。カラムクロマトグラフィー（６％メタノールのＤＣＭ溶液）による粗生成物の精製によって、ＨＰＬＣによる９５．０％の純度を有する１２０ｍｇの所望の生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ  ７．２６−７．０９（ｍ，４Ｈ），６．８２−６．８０（ｄ，１Ｈ），６．６８−６．６５（ｄｄ，１Ｈ），６．１４（ｄ，１Ｈ），４．８６（ｓ，２Ｈ），３．６２（ｓ，３Ｈ），３．２５（ｓ，２Ｈ），２．５８−２．５３（ｍ，２Ｈ），１．０５−１．０１（ｔ，３Ｈ）。Ｃ１９Ｈ２０ＦＮＯ２に対する理論上のＭＳ：３１３．４；実際のＭ＋＋１，２６９．２（−ＮＨＥｔ）。
【００７５】
ＡＸ−１０３およびＡＸ−１２６からＡＸ−１２８に対する合成スキーム
【化８】
0006505095.tif 000009
化合物Ｂの合成：化合物Ａ（３．５ｇ、１ｅｑ．）のトルエン（３０ｍｌ）溶液の混合物に、塩化チオニル（１．７８ｇ、１．４ｅｑ．）塩化物を０℃にて滴下して加え、ＲＴにて２ｈ撹拌した。ＴＬＣによって反応をモニタした。完了後に、混合物を氷冷水（２５ｍｌ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（２×２５ｍｌ）で抽出した。混合有機層を水（３０ｍｌ）、生理食塩水（１０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。減圧下での有機層の蒸発によって、２．４ｇの粗生成物を得た。この材料を、精製および分析なしに次のステップに直接用いた。
【００７６】
ＡＸ−１０３．ＨＣｌの合成：化合物Ｂ（０．２ｇ、１ｅｑ．）、Ｋ２ＣＯ３（０．２ｇ、３ｅｑ．）、およびピロリジン（０．０５ｇ、１．２ｅｑ．）のジイソプロピルエーテル（４ｍｌ）溶液の混合物を、ＲＴにて１５ｈ撹拌した。ＴＬＣによって反応をモニタした。完了後に、混合物を冷水（２０ｍｌ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（２×３０ｍｌ）で抽出した。混合有機層を水（２０ｍｌ）、生理食塩水（１０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。粗生成物を、ＨＰＬＣによる９８．２％の純度を有する４５ｍｇのスケールで、そのＨＣｌ塩に転換した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ  ７．２６−７．２０（ｍ，２Ｈ），７．１７−７．１４（ｍ，２Ｈ），７．１４−  ７．０６（ｄ，１Ｈ），６．９５−６．９３（ｄ，１Ｈ），６．４１−６．４０（ｄ，１Ｈ），５．２９（ｓ，２Ｈ），３．７２−３．６６（ｍ，４Ｈ）。Ｃ２１Ｈ２３ＣｌＦ４Ｎ２Ｏ２に対する理論上のＭＳ：４２９．８４；実際のＭ＋＋１，３９４．１（−ＨＣｌ）。
【００７７】
ＡＸ−１２６．ＨＣｌの合成：化合物Ｂ（０．４ｇ、１ｅｑ．）、Ｋ２ＣＯ３（０．５ｇ、３ｅｑ．）、およびＮ，Ｎ−ジメチルエチレンジアミン（０．１３ｇ、１．２ｅｑ．）のジイソプロピルエーテル（４ｍｌ）溶液の混合物を、ＲＴにて１５ｈ撹拌した。ＴＬＣによって反応をモニタした。完了後に、混合物を冷水（２０ｍｌ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（２×３０ｍｌ）で抽出した。混合有機層を水（２０ｍｌ）、生理食塩水（１０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。ＨＣｌ塩の形成によって行われた粗生成物の精製によって、ＨＰＬＣによる９３．７％の純度を有する６０ｍｇの所望の生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  １０．８（ｂ，１Ｈ），９．７０（ｂ，１Ｈ），７．９３−７．９２（ｂ，２Ｈ），７．３０−７．２４（ｍ，２Ｈ），７．１９−７．１１（ｍ，２Ｈ），７．０１−  ６．９６（ｍ，２Ｈ），６．８７−６．８５（ｄ，１Ｈ），６．３（ｓ，１Ｈ），５．０（ｓ，２Ｈ），３．５５（ｓ，２Ｈ），３．４０（ｂ，２Ｈ），２．７８（ｂ，６Ｈ）。Ｃ２１Ｈ２３ＣｌＦ４Ｎ２Ｏ２に対する理論上のＭＳ：４４６．８７；実際のＭ＋＋１，４１１．１（−ＨＣｌ）。
【００７８】
ＡＸ−１２７の合成：化合物Ｂ（０．４ｇ、１ｅｑ．）、Ｋ２ＣＯ３（０．５ｇ、３ｅｑ．）、およびモルホリン（０．１３ｇ、１．２ｅｑ．）のジイソプロピルエーテル（４ｍｌ）溶液の混合物を、ＲＴにて１５ｈ撹拌した。ＴＬＣによって反応をモニタした。完了後に、混合物を冷水（２０ｍｌ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（２×３０ｍｌ）で抽出した。混合有機層を水（２０ｍｌ）、生理食塩水（１０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。それを減圧下で蒸発（真空蒸発）させて、ＨＰＬＣによる９６％の純度を有する１１０ｍｇの所望の生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ  ７．１６−７．０８（ｍ，４Ｈ），６．９７−６．９５（ｄ，１Ｈ），６．８５−６．８３（ｄ，１Ｈ），６．４０−６．３９（ｂ，１Ｈ），４．９０（ｓ，２Ｈ），３．６６−  ３．６４（ｔ，４Ｈ），２．９２（ｓ，２Ｈ），２．３１（ｂ，４Ｈ）。Ｃ２１Ｈ１９Ｆ４ＮＯ３に対する理論上のＭＳ：４０９．３；実際のＭ＋＋１，４１０．１。
【００７９】
ＡＸ−１２８．ＨＣｌの合成：化合物Ｂ（０．４ｇ、１ｅｑ．）、Ｋ２ＣＯ３（０．５ｇ、３ｅｑ．）、およびエチルアミン．ＨＣｌ（０．１２ｇ、１．２ｅｑ．）のジイソプロピルエーテル（４ｍｌ）溶液の混合物を、ＲＴにて１ｈ撹拌した。ＴＬＣによって反応をモニタした。完了後に、混合物を冷水（２０ｍｌ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（２×３０ｍｌ）で抽出した。混合有機層を水（２０ｍｌ）、生理食塩水（１０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。ＨＣｌ塩の形成によって行われた粗生成物の精製によって、ＨＰＬＣによる９８．２％の純度を有する６５ｍｇの所望の生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ  ７．２７−７．２４（ｍ，２Ｈ），７．２１−７．１６（ｍ，２Ｈ），７．０４−７．０１（ｍ，１Ｈ），６．８６−６．８４（ｄ，１Ｈ），６．４４−６．４３（ｂ，１Ｈ），５．１３（ｓ，２Ｈ），３．５８−３．５５（ｔ，２Ｈ），２．９１−２．８７（ｍ，２Ｈ）。Ｃ１９Ｈ１８ＣｌＦ４ＮＯ２に対する理論上のＭＳ：４０５．８；実際のＭ＋＋１，３６８．１（ＨＣｌ）。
【００８０】
実施例２：ＴＣＲ刺激によって誘導されるＴ細胞増殖の阻害。
ＴＣＲがＴリンパ球の増殖を誘導する能力に対する化合物ＡＸ−１０１、ＡＸ−１０３ＨＣｌ、ＡＸ−１０４、ＡＸ−１０９、ＡＸ−１１０、ＡＸ−１１１、ＡＸ−１２７、ＡＸ−１３３、ＡＸ−１３５、およびＡＸ−１３６の効果を、健康なヒトドナーの血液から得た初代Ｔリンパ球（ＰＢＭＣ、末梢血単核細胞（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｂｌｏｏｄ  ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ  ｃｅｌｌｓ））において評価した。フィコール−パック・プラス（Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  Ｐｌｕｓ）密度勾配における遠心分離によって、静脈血からボランティアのＰＢＭＣを単離した。精製した細胞（ＮＷＴ；ナイロン・ウッドＴ細胞（Ｎｙｌｏｎ  Ｗｏｏｄ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ））を、９６ウェルプレート（０．５×１０５／ウェル）で２００ｕｌの完全培地にて３つ組で培養し、１ｕＭおよび１０ｕＭという異なる濃度の化合物の存在下または不在下で、ＯＫＴ３（１０ｕｇ／ｍｌ）またはＯＫＴ３（１０ｕｇ／ｍｌ）およびＣＤ２８によって刺激した。培養物を３日間インキュベートし、培養の最後の１２ｈに０．５ｕＣｉ［３Ｈ］ＴｄＲ／ウェルを加えた後に分析した。液体シンチレーション測定によって、ＤＮＡに取り込まれた放射活性を定めた。細胞分裂の際に放射活性は娘細胞に取り込まれるため、これが細胞増殖の程度であると考えられる。テスト化合物の阻害能力を図１に示す。
【００８１】
実施例３：げっ歯動物における経口投与後の化合物ＡＸ−１０４の生物学的利用率の改善
化合物ＡＸ−１０４の薬物動態特性を、（国際公開第２０１２／０４２０７８号に記載される）化合物ＥＣＲＡ−２４に対して観察される薬物動態特性に関して分析した。このために、ラットにおいて化合物の静脈内投与（ボーラス）と、化合物の溶液の経口経管栄養とを別々に行った（平均±ＳＤ；ｎ＝３）。表１および表２に示したデータにみられるとおり、経口投与後の化合物ＡＸ−１０４の合計生物学的利用率は２４％であり、これに対してＥＣＲＡ−２４の合計生物学的利用率は２％であった。
【００８２】
【表１】
0006505095.tif 000010
【００８３】
【表２】
0006505095.tif 000011
【００８４】
実施例４：ＥＡＥ（実験的自己免疫性脳脊髄炎（ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ））のモデルに対するインビボテスト。
フロイント完全アジュバント（Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ａｄｊｕｖａｎｔ）（ＣＦＡ、シグマアルドリッチ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ））に乳化し、５ｍｇ／ｍｌの結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）（ディフコ（Ｄｉｆｃｏ）のＨ３７Ｒａ株）を補充した合計１５０μｇのペプチドＭＯＧ（ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（Ｍｙｅｌｉｎ  Ｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｃｙｔｅ  Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ）；ＭＯＧ３５−５５、エスピケム（Ｅｓｐｉｋｅｍ）、ドイツ）を両大腿領域において皮下注射することによって、処置グループ当たり１０匹のＣ５７ＢＬ／６メスマウス（６〜８週齢、体重２０ｇ）において慢性ＥＡＥのモデルを誘導した。マウスに直ちに１５０ｎｇの百日咳毒素（シグマアルドリッチ）を腹腔内注射し、免疫化の４８ｈ後にもう一度腹腔内注射した。示された化合物（ＡＸ−１０４）を食塩水緩衝液にて調製し、免疫化と同じ日から始めて最初の１０日間にわたって経口投与した。プラセボグループの対象は、食塩水緩衝液のみを含有する同等の経口用量を受けた。動物を計量し、以下のスケールに基づく症状の視覚的分析によって、プロセス外の外部観察者によって疾患の臨床的兆候を分析した。０＝正常；１＝尾が少し不自由であるか、後肢をわずかに引きずる；２＝中程度の後肢脱力または軽度の運動失調；３＝幾分重度の後肢脱力；４＝重度の後肢脱力または軽度の前肢脱力または中程度の運動失調；５＝明らかな中程度の前肢脱力を伴う対麻痺；および６＝重度の前肢脱力または重度の運動失調を伴う対麻痺、瀕死状態または死亡。図２は、化合物ＡＸ−１０４を受けた動物がプラセボグループと比較して低減したスコアを示す様子を示す。
【００８５】
並行して、動物の一般的福祉および疾患の進行を示す測定値として、動物の体重もモニタした。図３は、処置された動物がプラセボグループの動物と比較して顕著に低減した体重減少を示すことを示す。
【００８６】
研究の最後に、動物に麻酔をして、４％パラホルムアルデヒドの０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．６）溶液によって心臓内灌流を行った。マウスの脳および脊髄を解剖して固定した。
【００８７】
全体の結果は、化合物ＡＸ−１０４がこのモデルに関連する症状の影響を顕著に低減できることを示すものである。
【００８８】
実施例５：血液細胞に対するインビトロテスト。
フィコール−パック・プラス（Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  Ｐｌｕｓ）密度勾配における遠心分離によって、静脈血から健康な成人ボランティアドナーのヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を単離した。精製したＴ細胞（ＮＷＴ−０．５×１０５／ウェル）を、９６ウェルプレートで２００ｕｌの完全培地にて３つ組で培養し、所望の濃度のテスト化合物の存在下または不在下で、ＯＫＴ３（１０ｕｇ／ｍｌ）またはＯＫＴ３（１０ｕｇ／ｍｌ）およびＣＤ２８によって刺激する。培養物を３日間生育し、培養の最後の１２ｈに０．５ｕＣｉの［３Ｈ］ＴｄＲ／ウェルのパルスを投与する。液体シンチレーション測定によって、ＤＮＡに取り込まれた放射活性を評価した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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