(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
良性前立腺肥大疾患の治療用および/または予防用であり、α1Aアドレナリン受容体と結合して阻害するための薬物組成物であって、以下の化合物から選ばれるヘキサヒドロジベンゾ[a,g]キノリジン系化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体を含む、前記薬物組成物。
【化１】
0006585033.tif 000015
（ここで、キラリティーが示されていないキラル炭素原子は、R配置またはS配置である。）
【請求項２】
泌尿系平滑筋の収縮を抑制するために使用されることを特徴とする、請求項１に記載の薬物組成物。
【請求項３】
阻害剤として前立腺の治療に、および/またはノルエピネフリンによって誘導される尿道平滑筋および/または前立腺平滑筋の収縮の拮抗に、使用されることを特徴とする、請求項1に記載の薬物組成物。
【請求項４】
薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の薬物組成物。
【請求項５】
体外でα1Aアドレナリン受容体を非治療的に抑制する方法であって、抑制対象に抑制有効量の、以下の化合物から選ばれるヘキサヒドロジベンゾ[a,g]キノリジン系化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体を施用すること、あるいは抑制有効量の、以下の化合物から選ばれるヘキサヒドロジベンゾ[a,g]キノリジン系化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体を含有する培養系において前記の抑制対象を培養すること、のステップを含むことを特徴とし、
前記の抑制対象は、α1Aアドレナリン受容体を発現する細胞または動物摘出組織である、前記方法。
【化２】
0006585033.tif 000016
（ここで、キラリティーが示されていないキラル炭素原子は、R配置またはS配置である。）
【請求項６】
以下の化合物から選ばれるヘキサヒドロジベンゾ[a,g]キノリジン系化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体を、薬学的に許容される担体と混合することによって、薬物組成物を形成することを含む、該薬物組成物を含むα1Aアドレナリン受容体阻害剤を製造する方法。
【化３】
0006585033.tif 000017
（ここで、キラリティーが示されていないキラル炭素原子は、R配置またはS配置である。）
【請求項７】
α1Aアドレナリン受容体と結合する阻害剤を製造するための、以下の化合物から選ばれるヘキサヒドロジベンゾ[a,g]キノリジン系化合物の使用。
【化４】
0006585033.tif 000018
（ここで、キラリティーが示されていないキラル炭素原子は、R配置またはS配置である。）
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヘキサヒドロジベンゾ[a,g]キノリジン系化合物の薬物としての使用に関し、具体的に、良性前立腺肥大疾患を治療および/または予防する薬物の製造におけるその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
良性前立腺肥大（benign prostatic hyperplasia、BPH）は、中高年男性によく見られる生理的病変で、不可避な人口高齢化とともに、良性前立腺肥大の発症率は以前と比べて大幅に向上し、既に我が国の中高年男性に最も多い老年病の一つになってきた。資料によると、前立腺肥大は、40歳以前の発症率が低いが、50歳以上の男性における約半分が良性前立腺肥大を罹患し、80代の90％近くがそうなっている。良性前立腺肥大は、前立腺の尿道周囲細胞の良性腺腫様肥大で、腺体の進行性腫大は前立腺の尿道を狭窄させ、膀胱からの尿液流出の閉塞を引き起こし、最初の臨床初見は下部尿路症状（Lower urinary tract symptoms、LUTS）で、最終的に尿閉、膀胱感染、膀胱結石および腎不全に発展し、ひいては患者の命を脅かすことになる。そのため、前立腺肥大は国内外の中高年男性のよく見られる疾患として、患者の生活品質を極度に低下させる。
【０００３】
良性前立腺肥大の発症機序は複雑で、多くの酵素および受容体に関連する。現在、臨床ではBPHの治療に最も幅広く応用される2種類の薬物はそれぞれ5α-還元酵素阻害剤およびα1-アドレナリン受容体拮抗剤で、それぞれ前立腺肥大症状につながる前立腺の体積および平滑筋の張力という2つの要素を標的に治療するものである。5α-還元酵素阻害剤は、体内におけるテストステロンのジヒドロテストステロンへの転化を抑制することによって、前立腺におけるジヒドロテストステロンの含有量を低下させ、前立腺の体積を縮小させて排尿困難を改善するという治療の目的を果たす。しかし、このような薬物は、前立腺の体積の増加に下部尿路症状が伴うBPH患者だけに適し、しかも通常勃起不全、射精障害、性欲低下やほかの副作用、たとえば男性の女性化乳房、乳腺痛などが伴う。そのため、臨床ではα1-アドレナリン受容体拮抗剤の応用が最も多い。
【０００４】
アドレナリン受容体（adrenergic receptors、ARs）は、α-受容体とβ-受容体に分かれ、α-アドレナリン受容体（α-ARs）はまたα1、α2の2種類の受容体に分かれ、現在、α1A、α1Bおよびα1Dという3つのα1-受容体のサブタイプが確認された。研究によると、前立腺の基質成分および腺管上皮に存在するのは主にα1型受容体で、中でも、α1A-ARsはヒト前立腺および尿路系における全α1-ARsの70％を占める。生殖・泌尿系において、α1A-受容体は主に前立腺、尿道および膀胱三角部、輸精管に、α1B-受容体は血管に、α1D-受容体は膀胱の排尿筋および輸尿管の平滑筋に分布する。
BPHの病理的状況では、α1-ARsの密度が顕著に増加する。また、α1-ARsサブタイプの分布の特徴は年齢にもより、このような年齢と分布の関連性は良性前立腺肥大および下部尿路症状の理解と治療、α1-アドレナリン受容体拮抗剤の開発に重要な意義がある。α1A-アドレナリン受容体は、良性前立腺肥大の治療の理想的な標的と思われ、それに対する遮断は有効に前立腺平滑筋の収縮頻度を減少し、同時に膀胱の排尿を改善することができることが証明された。α1B-アドレナリン受容体に対する遮断は、血管平滑筋の弛緩、動静脈の拡張、末梢抵抗の減少などの症状につながり、一部の患者に副作用、たとえば目眩や低血圧が生じる。α1D-アドレナリン受容体に対する作動は、排尿筋の過活動を引き起こし、それに対する阻害は排尿症状の発生を減少することが動物試験において実証された。理論上α1Aおよびα1D-アドレナリン受容体の共阻害剤は、良性前立腺肥大を抑える非常に有効な薬物である。それは前立腺平滑筋の収縮頻度の減少および排尿筋の機能不全の抑制という2つの機能を有し、またα1B-アドレナリン受容体の阻害による心血管の副作用が避けられるからである。
【０００５】
最初に開発・使用された、有効に良性前立腺肥大の症状を緩和するができるα受容体遮断剤はフェノキシベンザミン（Phenoxybenzamine）である。フェノキシベンザミンは、β-ハロアルカン系非可逆的非選択的α1/α2受容体遮断剤で、前立腺におけるα受容体を遮断し、前立腺の線維組織を弛緩させ、臨床で前立腺による非機械的尿道閉塞によって生じる排尿困難の治療に使用される。フェノキシベンザミンの構造にβ-クロロエチルアミン構造が含まれ、体内でほかの酵素と反応しやすいため、毒性や副作用が多い。そして、非選択的α受容体遮断剤として、フェノキシベンザミンはα1受容体を阻害すると同時に、シナプス前α2受容体を阻害するため、フィードバックとして神経末端からアルテレノールが放出されることによって反射性頻脈、不整脈などの副作用を引き起こす。
【０００６】
これらの副作用を減少するという目的で、α1受容体に対する高選択性の2代目のα1-アドレナリン受容体が開発された（たとえば、プラゾシン、テラゾシン、ドキサゾシン、アルフゾシン）。α1-アドレナリン受容体は交感神経による前立腺および尿道平滑筋の収縮を緩和させることによって、動的に尿道閉塞の症状を軽減することができる。これらの薬物は、有効に下部尿路症状を緩和させると同時に、血管拡張による副作用の発生を減少する。ゾシン系薬物は、いずれもキナゾリノンの構造母核を有し、現在臨床でBPHおよびそれによる下部尿路症状（LUTS）を治療する通常の薬物である。しかし、α1-アドレナリン受容体は幅広く分布し、かつ重要な生理機能を有するため、α1-アドレナリン受容体拮抗剤を使用すると、通常、体位性低血圧、目眩、だるさなどの副作用が現れる。
【０００７】
近年市販されている良性前立腺肥大を治療する薬物はα1A受容体選択的拮抗剤で、それぞれタムスロシン（Tamsulosin）およびシロドシン（Silodosin）である。タムスロシンはα1A受容体選択的拮抗剤と思われるが、ほかのα受容体に対する選択性が比較的に低く、市販が早かったため、現在マーケットの占有率が高い。しかし、まだ副作用、たとえば免疫系および眼部における副作用があり、また射精障害、血圧低下、頭痛などの副作用もある。市販されたばかりの薬物シロドシンは、良い受容体の選択性を有し、その選択性が顕著にタムスロシンよりも優れるため、現在、臨床における副作用もタムスロシンよりも少ない。そのため、良いα1A受容体選択性を有する、良性前立腺肥大を治療する薬物の開発は非常にマーケットの将来性がある。
【発明の概要】
【０００８】
本発明の一つの目的は、ヘキサヒドロジベンゾ[a,g]キノリジン系化合物の薬物としての使用を提供することである。
本発明のもう一つの目的は、良いα1A受容体選択性を有する、良性前立腺肥大の治療に使用される薬物を提供することである。
【０００９】
本発明の第一は、良性前立腺肥大疾患を治療および/または予防する薬物の製造における、以下の一般式（I）で表されるヘキサヒドロジベンゾ[a,g]キノリジン系化合物、その薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体の使用を提供する。
【化１】
0006585033.tif 000002
（ここで、R1、R2、R4、R5、R6およびR7はそれぞれ独立に水素、水酸基、ハロゲン、置換または無置換のC1-C6アルコキシ基、置換または無置換のC1-C6アルキル基、置換または無置換のC2-C6アルケニル基、置換または無置換のC2-C6アルキニル基、置換または無置換のC3-C6シクロアルキル基、置換または無置換のベンジルオキシ基で、前記置換の置換基はハロゲン、水酸基、アミノ基またはスルホニル基である。
【００１０】
R3は水素、ハロゲン、置換または無置換またはハロゲン置換されたC1-C6アルキル基、あるいは無置換またはハロゲン置換されたC1-C6アルコキシ基である。
【００１１】
R1とR2は、一緒に置換または無置換の5-7員複素環を形成してもよく、前記置換の置換基はハロゲン、あるいは無置換またはハロゲンで置換されたC1-C6アルキル基で、前記複素環はN、OおよびSから選ばれる1〜3個のヘテロ原子を含む。
【００１２】
R4、R5、R6およびR7のうちの任意の2つの隣接の置換基は、一緒に置換または無置換の5-7員複素環を形成してもよく、前記置換の置換基はハロゲン、無置換またはハロゲンで置換されたC1-C6アルキル基、あるいは無置換またはハロゲンで置換されたC1-C6アルコキシ基で、前記複素環はN、OまたはSから選ばれる1〜3個のヘテロ原子を含む。
一般式（I）の化合物におけるキラル炭素原子の立体配置は、R型またはS型である。）
【００１３】
もう一つの好適な例において、
R1、R2、R4、R5、R6およびR7はそれぞれ独立に水素、水酸基、ハロゲン、置換または無置換のC1-C4アルコキシ基、置換または無置換のC1-C4アルキル基、置換または無置換のC2-C4アルケニル基、置換または無置換のC2-C4アルキニル基、置換または無置換のC3-C6シクロアルキル基、置換または無置換のベンジルオキシ基で、前記置換の置換基はハロゲン、水酸基、アミノ基またはスルホニル基で、
【００１４】
R3は水素、ハロゲン、無置換またはハロゲン置換されたC1-C4アルキル基、あるいは無置換またはハロゲン置換されたC1-C4アルコキシ基で、
R1とR2は、一緒に置換または無置換の5-7員複素環を形成してもよく、前記置換の置換基はハロゲン、あるいは無置換またはハロゲンで置換されたC1-C4アルキル基で、前記複素環はN、OおよびSから選ばれる1〜3個のヘテロ原子を含み、
R4、R5、R6およびR7のうちの任意の2つの隣接の置換基は、一緒に置換または無置換の5-7員複素環を形成してもよく、前記置換の置換基はハロゲン、無置換またはハロゲンで置換されたC1-C4アルキル基、あるいは無置換またはハロゲンで置換されたC1-C4アルコキシ基で、前記複素環はN、OまたはSから選ばれる1〜3個のヘテロ原子を含み、
一般式（I）の化合物におけるキラル炭素原子の立体配置は、R型またはS型である。
【００１５】
もう一つの好適な例において、
R1、R2、R4、R5、R6およびR7はそれぞれ独立に水素、水酸基、ハロゲン、置換または無置換のC1-C4アルコキシ基、置換または無置換のC1-C4アルキル基、あるいは置換または無置換のベンジルオキシ基で、前記置換の置換基はハロゲン、水酸基またはアミノ基で、
R3は水素、ハロゲン、無置換またはハロゲンで置換されたアルキル基で、
R1とR2は、一緒に置換または無置換の5員または6員複素環を形成してもよく、前記置換の置換基はハロゲン、あるいは無置換またはハロゲンで置換されたC1-C4アルキル基で、前記複素環はN、OまたはSから選ばれる1〜3個のヘテロ原子を含み、
R4、R5、R6およびR7のうちの任意の2つの隣接の置換基は、一緒に置換または無置換の5員または6員複素環を形成してもよく、前記置換の置換基はハロゲン、無置換またはハロゲンで置換されたC1-C4アルキル基、あるいは無置換またはハロゲンで置換されたC1-C4アルコキシ基で、前記複素環はN、OまたはSから選ばれる1〜3個のヘテロ原子を含み、
一般式（I）の化合物におけるキラル炭素原子の立体配置は、R型またはS型である。
【００１６】
もう一つの好適な例において、
R1、R2、R4、R5、R6およびR7はそれぞれ独立に水素、水酸基、ハロゲン、置換または無置換のC1-C4アルコキシ基、置換または無置換のC1-C4アルキル基、あるいは置換または無置換のベンジルオキシ基で、前記置換の置換基はハロゲンまたは水酸基で、
R3は水素、ハロゲン、あるいは無置換またはハロゲンで置換されたアルキル基で、
R1とR2は、一緒に5員または6員複素環を形成してもよく、前記複素環はN、OまたはSから選ばれる1〜2個のヘテロ原子を含み、
R5とR6は、一緒に5員または6員複素環を形成してもよく、前記複素環はN、OまたはSから選ばれる1〜2個のヘテロ原子を含み、
一般式（I）の化合物におけるキラル炭素原子の立体配置は、R型またはS型である。
もう一つの好適な例において、前記一般式（I）で表されるヘキサヒドロジベンゾ[a,g]キノリジン系化合物は、以下の化合物から選ばれる。
【００１７】
【化２】
0006585033.tif 000003
【００１８】
【化３】
0006585033.tif 000004
【００１９】
ここで、キラリティーが示されていないキラル炭素原子は、R配置またはS配置である。
もう一つの好適な例において、前記薬物は、選択的にα1Aアドレナリン受容体と結合することに使用される。
【００２０】
もう一つの好適な例において、前記薬物とα1Bアドレナリン受容体の結合のIC50値と前記薬物とα1Aアドレナリン受容体の結合のIC50値の比IC50(α1B/α1A)は≧2、好ましくは≧5、より好ましくは≧10である。
もう一つの好適な例において、前記薬物とα1Bアドレナリン受容体の結合のIC50値と前記薬物とα1Aアドレナリン受容体の結合のIC50値の比IC50(α1B/α1A)は2〜3000である。
もう一つの好適な例において、前記の薬物とα1Bアドレナリン受容体の結合のIC50値は≧150nM、好ましくは≧500nM、より好ましくは≧1000nMである。
もう一つの好適な例において、前記の薬物は、選択的に泌尿系平滑筋の収縮を抑制することに使用される。
もう一つの好適な例において、前記の泌尿系平滑筋は、尿道平滑筋、前立腺平滑筋からなる群から選ばれる。
【００２１】
本発明の第二は、体外で1Aアドレナリン受容体を非治療的に抑制する方法であって、抑制対象に抑制有効量の式Iで表されるヘキサヒドロジベンゾ[a,g]キノリジン系化合物、その薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体を施用すること、あるいは抑制有効量の式Iで表されるヘキサヒドロジベンゾ[a,g]キノリジン系化合物、その薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体を含有する培養系において前記の抑制対象を培養することを含む、方法を提供する。
もう一つの好適な例において、前記の抑制は、選択的にα1Aアドレナリン受容体を抑制することである。
【００２２】
もう一つの好適な例において、前記の抑制対象は、α1Aアドレナリン受容体を発現する細胞または動物摘出組織である。
もう一つの好適な例において、前記の抑制対象は、α1Aアドレナリン受容体およびα1Bアドレナリン受容体を発現する細胞または動物摘出組織で、好ましくは前記の抑制対象はさらにα1Dアドレナリン受容体を発現する。
もう一つの好適な例において、前記の抑制対象は、尿道平滑筋または前立腺平滑筋である。
【００２３】
本発明の第三は、良性前立腺肥大疾患を治療および/または予防する薬物の製造に使用される方法であって、治療有効量の前記式I化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体を薬学的に許容される担体と混合することによって、薬物組成物を形成することを含む、方法を提供する。
もう一つの好適な例において、前記の薬学的に許容される担体は、経口投与剤の担体または注射剤の担体からなる群から選ばれる。
本発明の第四は、α1Aアドレナリン受容体と選択的に結合する阻害剤の製造に使用される、本発明の第一に記載の式I化合物の使用を提供する。
【００２４】
本発明の第五は、前記化合物は、阻害剤として前立腺の治療、および/またはアルテレノールによって誘導される尿道平滑筋および/または前立腺平滑筋の収縮の拮抗に使用されることを特徴とする本発明の第一に記載の式I化合物の使用を提供する。
本発明の第六は、抑制有効量の式I化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体を含有する、α1Aアドレナリン受容体選択的阻害剤を提供する。
【００２５】
本発明の第七は、良性前立腺肥大疾患を治療および/または予防する方法であって、治療が必要な対象に治療有効量の前記式I化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体を施用することを含む、方法を提供する。
本発明の第八は、良性前立腺肥大疾患を治療または抑制する薬物組成物であって、（a）薬学的に許容される担体と、（b）式I化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体とを含有する、薬物組成物を提供する。
もう一つの好適な例において、前記の薬物組成物の剤形は、経口投与剤形または注射剤形である。
【００２６】
もちろん、本発明の範囲内において、本発明の上述の各技術特徴および下述（例えば実施例）の具体的に記述された各技術特徴は互いに組合せ、新しい、または好ましい技術方案を構成できることが理解される。紙数に限りがあるため、ここで逐一説明しない。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】1は、本発明の実施例4における陽性薬物シロドシンのラット尿道内圧（IUP）、末梢動脈圧（MBP）に対する影響の実験曲線である。
【図２】図2は、本発明の実施例4におけるDC037009のラット尿道内圧（IUP）、末梢動脈圧（MBP）に対する影響の実験曲線である。
【図３】図3は、本発明の実施例5におけるSham群およびBPH群のラットの排尿回数、1回排尿量および総排尿量の分布図である。
【図４】図4は、本発明の実施例5におけるSham群、シロドシン群（BPH-1、3つの投与量）およびDC037009群（BPH-2、3つの投与量）のラットの排尿回数、1回排尿量および総排尿量の分布図である。
【図５】図5は、本発明の実施例6におけるラットの胃内投与および静脈注射によるDC037009の投与後の血漿中濃度-時間曲線である。
【００２８】
具体的な実施形態
本発明者らは、長期間にわたって深く研究したところ、意外にも、ヘキサヒドロジベンゾ[a,g]キノリジン系化合物は、選択的にα1Aアドレナリン受容体と結合するが、α1Bアドレナリン受容体と結合しないため、心血管副作用が減少した良性前立腺肥大を抑える薬物の製造に有用であることを見出した。上記の知見により、発明者らは本発明を完成させるに至った。
【００２９】
用語
用語「C1〜C6アルコキシ基」とは、炭素原子を1〜6個有する直鎖又は分岐鎖のアルコキシ基を示し、例えばメトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ブトキシ基、イソブトキシ基、sec-ブトキシ基、tert-ブトキシ基や類似の基が挙げられる。
用語「C1〜C6アルキル基」とは、炭素原子を1〜6個有する直鎖又は分岐鎖のアルキル基で、例えばメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基や類似の基が挙げられる。
用語「C3〜C6シクロアルキル基」とは、炭素原子を3〜6個有するシクロアルキル基で、例えばシクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘプチル基や類似の基が挙げられる。
【００３０】
用語「C2〜C6アルケニル基」とは、炭素原子を1〜6個有する直鎖又は分岐鎖のアルケニル基で、例えばビニル基、プロペニル基、イソプロペニル基、ブテニル基、イソブテニル基、sec-ブテニル基、tert-ブテニル基や類似の基が挙げられる。
用語「C2〜C6アルキニル基」とは、炭素原子を1〜6個有する直鎖又は分岐鎖のアルキニル基で、例えばエチニル基、プロピニル基、イソプロピニル基、ブチニル基、イソブチニル基、sec-ブチニル基、tert-ブチニル基や類似の基が挙げられる。
用語「スルホニル基」とは、「C1〜C6アルキル-SO2-」または「アリール-SO2-」構造を有する基で、例えばメタンスルホニル基、エタンスルホニル基、プロパンスルホニル基、イソプロパンスルホニル基、ブタンスルホニル基、イソブタンスルホニル基、sec-ブタンスルホニル基、tert-ブタンスルホニル基、ベンゼンスルホニル基、p-トルエンスルホニル基や類似の基が挙げられる。
【００３１】
用語「5-7員複素環」とは、ヘテロ原子を1つまたは2つ以上、好ましくは1〜3個有する環状構造で、前記の環は飽和または不飽和の環でもよい。特に、「R1とR2は一緒に複素環を形成してもよい」とは、R1、R2およびそれらに連結する炭素鎖は一緒に複素環を形成することである。
用語「ハロゲン」とは、F、Cl、BrおよびIである。
ここで用いられるように、用語「RxとRｙ（ｘ、ｙは1、2、4、5、6、7から選ばれる。）は一緒に置換または無置換のm（m=5、6または7）員複素環を形成する」とは、Rｘ、Ryは隣接の1〜3個の炭素原子とともに置換または無置換のm（m=5、6または7）員複素環を形成することである。
【００３２】
ここで用いられるように、用語「キラル炭素原子の立体配置はR型またはS型である」とは、前記の構造式において、キラル炭素原子はR配置でもよく、S配置でもよく、または両者の混合物でもよいことであるが、好ましくは単一のR配置またはS配置である。
【００３３】
薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体
ここで用いられるように、用語「薬学的に許容される塩」とは、本発明の化合物と薬学的に許容される無機酸や有機酸で形成される塩で、中でも、好適な無機酸は、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硝酸、硫酸を含むが、これらに限定されない。また、好適な有機酸は、ギ酸、酢酸、プロパン酸、ブタン二酸、ナフタレンジスルホン酸（1,5）、アシアチン酸、シュウ酸、酒石酸、乳酸、サリチル酸、安息香酸、ペンタン酸、ジエチル酢酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、ピメリン酸、アジピン酸、マレイン酸、リンゴ酸、アミノスルホン酸、フェニルプロピオン酸、グルコン酸、アスコルビン酸、ニコチン酸、イソニコチン酸、メタンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸、クエン酸、およびアミノ酸を含むが、これらに限定されない。
【００３４】
ここで用いられるように、用語「薬学的に許容される溶媒和物」とは、本発明の化合物と薬学的に許容される溶媒で形成される溶媒和物で、中でも、前記薬学的に許容される溶媒は、水、エタノール、メタノール、イソプロパノール、テトラヒドロフラン、塩化メチレンを含むが、これらに限定されない。
ここで用いられるように、用語「薬学的に許容される立体異性体」とは、本発明の化合物に係るキラル炭素原子は、R配置でもよく、S配置でもよく、またはこれらの組み合わせでもよい。
【００３５】
薬物組成物
また、本発明は、顕著な抗腫瘍効果を有する薬物組成物であって、治療有効量の前記式I化合物またはその薬学的に許容される塩と、1つまたは2つ以上の薬学的に許容される担体とを含む薬物組成物を提供する。
化合物そのものまたはその薬学的に許容される塩と薬用賦形剤、希釈剤などの混合物を錠剤、カプセル、顆粒剤、散剤またはシロップ剤の様態で経口投与してもよく、あるいは注射剤の様態で非経口投与してもよい。当該薬物組成物は好ましくは重量比が0.01％〜99％の本発明の式I化合物またはその薬学的に許容される塩を活性成分として含有し、より好ましくは重量比が0.1％〜90％の活性成分を含有する。
【００３６】
上記製剤は、通常の製薬方法によって製造することができる。使用できる薬用助剤の例は、賦形剤（たとえば乳糖、ショ糖、ブドウ糖、マンニトール、ソルビトールのような糖類誘導体、コーンスターチ、バレイショデンプンデキストリンやカルボキシメチルデンプンのようなデンプン誘導体、結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルメロースカルシウム、カルメロースナトリウムのようなセルロース誘導体、アラビアゴム、デキストラン、メタケイ酸アルミニウムマグネシウムのようなケイ酸塩誘導体、リン酸カルシウムのようなリン酸塩誘導体、炭酸カルシウムのよう炭酸塩誘導体、硫酸カルシウムのような硫酸塩誘導体など）、バインダー（たとえばゼラチン、ポリビニルピロリドンやポリエチレングリコール）、崩壊剤（たとえばカルメロースナトリウムのようなセルロース誘導体、ポリビニルピロリドン）、潤滑剤（たとえばタルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、鯨ろう、ホウ酸、安息香酸ナトリウム、ロイシン）、安定化剤（p-ヒドロキシ安息香酸メチル、p-ヒドロキシ安息香酸プロピルなど）、矯味剤（たとえば通常の甘味料、酸味料や香料など）、希釈剤および注射液用溶媒（たとえば水、エタノールやグリセリンなど）を含む。
本発明の化合物、その薬学的に許容される塩またはプロドラッグ、あるいはその薬物組成物の投与量は、患者の年齢、性別、種族、病態などによる。
【００３７】
ヘキサヒドロジベンゾ[a,g]キノリジン系化合物の薬物としての新規な使用
本発明は、良性前立腺肥大を治療および/または予防する薬物の製造における、以下の一般式（I）で表されるヘキサヒドロジベンゾ[a,g]キノリジン系化合物、その薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体の使用を提供する。
【化４】
0006585033.tif 000005
（ここで、R1、R2、R4、R5、R6およびR7はそれぞれ独立に水素、水酸基、ハロゲン、置換または無置換のC1-C6アルコキシ基、置換または無置換のC1-C6アルキル基、置換または無置換のC2-C6アルケニル基、置換または無置換のC2-C6アルキニル基、置換または無置換のC3-C6シクロアルキル基、置換または無置換のベンジルオキシ基で、前記置換の置換基はハロゲン、水酸基、アミノ基またはスルホニル基である。
R3は水素、ハロゲン、置換または無置換のC1-C6アルキル基、あるいは置換または無置換のC1-C6アルコキシ基である。
【００３８】
R1とR2は、一緒に置換または無置換の5-7員複素環を形成してもよく、前記置換の置換基はハロゲン、あるいは無置換のC1-C6アルキル基またはハロゲンで置換されたC1-C6アルキル基で、前記複素環はN、OおよびSから選ばれる1〜3個のヘテロ原子を含む。
R4、R5、R6およびR7のうちの任意の2つの隣接の置換基は、一緒に置換または無置換の5-7員複素環を形成してもよく、前記置換の置換基はハロゲン、無置換のC1-C6アルキル基またはハロゲンで置換されたC1-C6アルキル基、あるいは無置換のC1-C6アルコキシ基またはハロゲンで置換されたC1-C6アルコキシ基で、前記複素環はN、OまたはSから選ばれる1〜3個のヘテロ原子を含む。
一般式（I）の化合物におけるキラル炭素原子の立体配置は、R型またはS型である。）
【００３９】
好ましくは、一般式（I）化合物において、
ここで、R1、R2、R4、R5、R6およびR7はそれぞれ独立に水素、水酸基、ハロゲン、置換または無置換のC1-C4アルコキシ基、置換または無置換のC1-C4アルキル基、置換または無置換のC2-C4アルケニル基、置換または無置換のC2-C4アルキニル基、置換または無置換のC3-C6シクロアルキル基、置換または無置換のベンジルオキシ基で、前記置換の置換基はハロゲン、水酸基、アミノ基またはスルホニル基で、
R3は水素、ハロゲン、置換または無置換のC1-C4アルキル基、あるいは置換または無置換のC1-C4アルコキシ基で、
R1とR2は、一緒に置換または無置換の5-7員複素環を形成してもよく、前記置換の置換基はハロゲン、あるいは無置換のC1-C4アルキル基またはハロゲンで置換されたC1-C4アルキル基で、前記複素環はN、OおよびSから選ばれる1〜3個のヘテロ原子を含み、
R4、R5、R6およびR7のうちの任意の2つの隣接の置換基は、一緒に置換または無置換の5-7員複素環を形成してもよく、前記置換の置換基はハロゲン、無置換のC1-C4アルキル基またはハロゲンで置換されたC1-C4アルキル基、あるいは無置換のC1-C4アルコキシ基またはハロゲンで置換されたC1-C4アルコキシ基で、前記複素環はN、OまたはSから選ばれる1〜3個のヘテロ原子を含み、
一般式（I）の化合物におけるキラル炭素原子の立体配置は、R型またはS型である。
より好ましくは、一般式（I）化合物において、
R1、R2、R4、R5、R6およびR7はそれぞれ独立に水素、水酸基、ハロゲン、置換または無置換のC1-C4アルコキシ基、置換または無置換のC1-C4アルキル基、あるいは置換または無置換のベンジルオキシ基で、前記置換の置換基はハロゲン、水酸基またはアミノ基で、
R3は水素、ハロゲン、あるいは無置換のC1-C4アルキル基またはハロゲンで置換されたアルキル基で、
R1とR2は、一緒に置換または無置換の5員または6員複素環を形成してもよく、前記置換の置換基はハロゲン、あるいは無置換のC1-C4アルキル基またはハロゲンで置換されたC1-C4アルキル基で、前記複素環はN、OまたはSから選ばれる1〜3個のヘテロ原子を含み、
R4、R5、R6およびR7のうちの任意の2つの隣接の置換基は、一緒に置換または無置換の5員または6員複素環を形成してもよく、前記置換の置換基はハロゲン、無置換のC1-C4アルキル基またはハロゲンで置換されたC1-C4アルキル基、あるいは無置換のC1-C4アルコキシ基またはハロゲンで置換されたC1-C4アルコキシ基で、前記複素環はN、OまたはSから選ばれる1〜3個のヘテロ原子を含み、
一般式（I）の化合物におけるキラル炭素原子の立体配置は、R型またはS型である。
さらに好ましくは、一般式I化合物において、
R1、R2、R4、R5、R6およびR7はそれぞれ独立に水素、水酸基、ハロゲン、置換または無置換のC1-C4アルコキシ基、置換または無置換のC1-C4アルキル基、あるいは置換または無置換のベンジルオキシ基で、前記置換の置換基はハロゲンまたは水酸基で、
R3は水素、ハロゲン、あるいは無置換のC1-C4アルキル基またはハロゲンで置換されたアルキル基で、
R1とR2は、一緒に5員または6員複素環を形成してもよく、前記複素環はN、OまたはSから選ばれる1〜2個のヘテロ原子を含み、
R5とR6は、一緒に5員または6員複素環を形成してもよく、前記複素環はN、OまたはSから選ばれる1〜2個のヘテロ原子を含み、
一般式（I）の化合物におけるキラル炭素原子の立体配置は、R型またはS型である。
前記ハロゲンは、フッ素、塩素、臭素まはたヨウ素である。
【００４０】
本発明において、最も好ましくは、前記ヘキサヒドロジベンゾ[a,g]キノリジン系化合物は、その薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体、プロドラッグを含み、以下の化合物から選ばれる。
【００４１】
【化５】
0006585033.tif 000006
【００４２】
【化６】
0006585033.tif 000007
本発明において、最も好適な化合物、S-(-)-2,3-メチレンジオキシ-10,11-ジメチルオキシ-5,8,13,13a-テトラヒドロ-6H-ジベンゾ[a,g]キノリジン（DC037009）で、その薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体も含まれる。
【００４３】
ヘキサヒドロジベンゾ[a,g]キノリジン系化合物を含有する薬物組成物
本発明のもう一つの目的は、治療有効量の一般式（I）で表されるヘキサヒドロジベンゾ[a,g]キノリジン系化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体、プロドラッグと、薬学的に許容される担体とを含む薬物組成物を提供することである。
本発明は、一般式（I）で表されるヘキサヒドロジベンゾ[a,g]キノリジン系化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、互変異性体、プロドラッグおよびこれらの混合物を有効成分として製造される良性前立腺肥大を治療および/または予防する薬物に関する。
前記薬物は、注射、噴射、点鼻、点眼、浸透、吸収、物理または化学的方法によって生体、たとえば筋肉、皮内、皮下、静脈、粘膜組織へ、あるいはほかの物質によって混合または包埋されて生体へ導入することができる。
必要な場合、上記薬物に1つまたは2つ以上の薬学的に許容される担体を入れてもよい。前記担体は、薬学分野における通常の希釈剤、賦形剤、充填剤、バインダー、湿潤剤、崩壊剤、吸収促進剤、界面活性剤、吸着担体、潤滑剤などを含む。
【００４４】
一般式（I）で表されるヘキサヒドロジベンゾ[a,g]キノリジン系化合物またはその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物、立体異性体、互変異性体、プロドラッグを活性成分として、単独でまたは組み合わせて使用し、あるいはほかの薬物、助剤と様々な剤形に調製し、前記剤形は錠剤、散剤、丸剤、注射剤、カプセル剤、膜剤、坐剤、クリーム剤、懸濁用顆粒剤などの多くの様態を含むが、これらに限定されない。上記の各剤形の薬物は、いずれも薬学分野における通常の方法によって製造することができる。
【００４５】
以下、具体的な実施例によって、さらに本発明を説明する。これらの実施例は本発明を説明するために用いられるものだけで、本発明の範囲の制限にはならないと理解されるものである。下述実施例で具体的な条件が示されていない実験方法は、通常、例えばSambrookら、「モレキュラー・クローニング：研究室マニュアル」(ニューヨーク、コールド・スプリング・ハーバー研究所出版社、1989) に記載の条件などの通常の条件に、或いは、メーカーのお薦めの条件に従う。 特に断らない限り、％と部は、重量で計算される。記載された試薬および生物は、特に説明しない限り、いずれも市販品として入手できるものである。
【００４６】
実施例1：薬物の細胞活性および選択性の研究
α1A-AR/Gα16、α1B-AR/Gα16、α1D-AR/Gα16を安定して発現するHEK293細胞をそれぞれ96ウェルプレートに接種し、24時間培養した後、培地を除去し、各ウェルに40 μLずつ2 μM Fluo-4 AMを含有するハンクス平衡塩溶液(HBSS:5.4 mM KCl、0.3 mM Na2HPO4、0.4 mM KH2PO4、4.2 mM NaHCO3、1.3 mM CaCl2、0.5 mM MgCl2、0.6 mM MgSO4、137 mM NaCl、5.6 mM D-グルコースおよび250 μM スルフィンピラゾン(sulfinpyrazone)を含有する。pH 7.4。)を入れてインキュベーターで45分間インキュベートした。染料を吸い取り、50μLの測定される化合物または1％DMSO（陰性コントロール）を含有するHBSSを入れ、室温で10分間インキュベートした後、Flex Station 3マイクロプレート測定装置で読み取った。測定装置は、所定の時点で、自動的に25μLの作動剤のフェニレフリン（Phenylephrine、最終濃度30 nM）を反応系に入れ、同時に485 nmの光で励起させて波長525 nmの領域において細胞におけるカルシウムイオン濃度の変化による染料の蛍光強度の変化を検出することができる。
【００４７】
異なる薬物のインキュベート後の1-AR作動剤フェニレフリンに対する細胞の反応率は以下の式で計算された。
反応率％ = (D-B)/(S-B)×100％
ここで、Dは測定される薬物のインキュベート後のフェニレフリンによるカルシウム流の信号のピーク値で、Bは10 μMの陽性コントロール薬タムスロシンのインキュベート後のフェニレフリンによるカルシウム流の信号のピーク値で、Sは陰性コントロールの1％DMSOのインキュベート後のフェニレフリンによるカルシウム流の信号のピーク値である。
同一の薬物の異なる投与量における反応率に対してソフトGraphPad Prismで非線形回帰分析を行い、投与量反応曲線を得てIC50値を測定した。データは3回の独立実験の結果で、毎回の実験はいずれも3つの重複ウェルがあった。
【００４８】
【表１】
0006585033.tif 000008
【００４９】
細胞実験から、DC037009などを含むこの種類の化合物はα1A受容体における活性が陽性コントロール薬タムスロシンよりもちょっと弱かったが、この種類の化合物はα1A選択性がタムスロシンよりも顕著に優れたことがわかり、この種類の化合物はさらに研究する価値があることが示唆された。
【００５０】
実施例2：薬物の受容体結合活性の研究
受容体結合活性の研究はTag-lite技術を使用した。Tag-liteは、SNAP-TagとHTRF技術を組み合わせ、活細胞表面受容体の分析を行う技術である。SNAPは、小さな融合タンパク質のタグで、特異的に基質とベンジル基を介して非可逆的に共役結合することができ、その基質はそれぞれベンジルグアニンおよびベンジルシトシンである。基質は様々な染料と誘導体を形成し、共役反応によって、染料がSNAPを標識する。pSNAPとα1-ARをコードする遺伝子でプラスミドを構築し、細胞に移入した後、N末端にSNAPが融合したα1-ARを発現させた。基質はHTRF蛍光染料ドナーのテルビウム穴状化合物（Lumi4-Tb）と誘導体を形成し、SNAP-α1-AR融合タンパク質がそれと反応し、Tbがα1-ARに標識された。アクセプター蛍光染料で標識されたリガンドを入れ、受容体リガンド結合実験を行った。
SNAP-α1A-AR、SNAP-α1B-AR、SNAP-α1D-ARを安定して発現するHEK293細胞をそれぞれ3 cmプレートに接種し、24時間培養した後、Tag-lite SNAP Lumi4-Tbを100 nM入れ、インキュベーターで1時間インキュベートした後細胞を消化し、標識緩衝液で4回洗浄した後、384ウェルプレートに各ウェル10μLずつ入れた。さらに5μLの濃度が少しずつ上がっていく赤色フルオレセインで標識された既知のリガンドと5μLの測定される化合物を入れた。室温で1時間インキュベートした後、同時に665 nm（ドナー）および620 nm（アクセプター）の波長領域で細胞における受容体リガンドの変化による染料の蛍光強度の変化を検出した。
【００５１】
異なる薬物のインキュベート後の1-ARのフルオレセインで標識された既知のリガンドに対する細胞の反応率は以下の式で計算された。
反応率％ = (D-B)/(S-B)×100％
ここで、Dは測定される薬物のインキュベート後のフルオレセインで標識された既知のリガンドによる信号のピーク値で、Bは10 μMの陽性コントロール薬タムスロシンによる信号のピーク値で、Sは陰性コントロールのDMSOのインキュベート後の信号のピーク値である。
同一の薬物の異なる投与量における反応率に対してソフトGraphPad Prismで非線形回帰分析を行い、投与量反応曲線を得てKi値を測定した。データは3回の独立実験の結果で、毎回の実験はいずれも3つの重複ウェルがあった。
【００５２】
【表２】
0006585033.tif 000009
【００５３】
細胞実験から、DC037009などを含むこの種類の化合物はα1A受容体との結合活性が陽性薬タムスロシンおよびシロドシンよりもちょっと弱かったが、この種類の化合物はα1B選択性が陽性薬よりも顕著に優れたことがわかり、この種類の化合物はさらに研究する価値があることが示唆された。
【００５４】
実施例3：薬物の動物摘出組織に対する活性の研究
摘出尿道平滑筋実験：
健康の雄Wistarラットを取り、頭を叩いて意識を失わせ、迅速に腹腔および恥骨結合を切開し、手早く前立腺部の尿道を取り出し、すぐに4℃のクレブス‐ヘンゼライト液（K-H液）の入ったシャーレに入れ、気をつけて周囲の組織を分離し、長さ約3〜5 mmの短冊状筋肉とし、下端を20 mLの恒温浴槽に固定し、上端を圧力変換器に連接した。栄養液はK-H液で、かつ95％ O2および5％ CO2の混合ガスを通し、浴温37℃で、負荷0.5 gで、6〜8 minおきに栄養液を交換した。ベースラインが安定したら、アルテレノールを入れ、その浴管における最終濃度を3×10-4 mol/Lとし、収縮曲線が最高点に上ったらすぐ洗浄してベースラインのレベルに戻し、ベースラインが安定したら、それぞれ異なる濃度の試験される薬物を入れ、3〜5 minインキュベートし、1×10-1 Mのアルテレノールを60 μL入れ、その浴管における最終濃度を3×10-4 mol/Lとし、収縮曲線を記録した。
【００５５】
摘出血管平滑筋実験：
健康の雄Wistarラットを取り、頭を叩いて意識を失わせ、迅速に腹腔を切開し、胸部大動脈を取り出し、付着組織を分離し、2〜3 mmの血管リングに切り、尿道平滑筋実験と同様の方法で行った。負荷1 gで、ベースラインが安定したら、アルテレノールを入れ、その浴管における最終濃度を10-7 mol/Lとし、収縮曲線が最高点に上ったらすぐ洗浄してベースラインのレベルに戻し、ベースラインが安定したら、さらにそれぞれ異なる濃度の試験される薬物を入れ、3〜5 minインキュベートし、1×10-4 Mのアルテレノールを20 μL入れ、その浴管における最終濃度を10-7 mol/Lとし、収縮曲線を記録した。
【００５６】
【表３】
0006585033.tif 000010
【００５７】
化合物DC037009はアルテレノールによる尿道平滑筋収縮に対して顕著な拮抗作用を有し、IC50 = 1.66 nMで、かつアルテレノールによる血管平滑筋収縮に対する抑制作用よりも顕著に強く、受容体選択比が873に達し、しかも尿道抑制率は陽性薬に相当する。DC037009の選択性は陽性薬タムスロシンおよびシロドシンよりも優れ、タムスロシンの1617倍で、シロドシンの11倍で、既有薬物にある副作用の減少に非常に重要である。
【００５８】
実施例4：薬理学研究
雄SDラットは、体重250〜450 gで、ウレタン（1.25g/kg）を腹腔注射して麻酔した。腹部の白線に沿って恥骨結合まで切開し、膀胱、前立腺、尿道を露出させた。さらにカテーテルを 膀胱穹窿部から尿道の前立腺のところまで挿入し、かつ縫合糸で膀胱頚部（膀胱と尿道の結合箇所）に固定した。恥骨下の遠端の尿道を閉めた。カテーテルのもう一方の末端を圧力センサーに連接し、尿道内圧力（IUP）を測定した。十二指腸を分離し、胃の幽門部から約2 cmで切開し、挿管して巾着縫合し、試験サンプルとした。一方、頚部の真ん中を切開し、総頚動脈を分離し、挿管して動脈圧力変換器に連接し、動脈血圧を測定し、操作の全過程において神経と血管が傷つかないように注意した。手術終了後、少量(0.1〜0.2 mL)の生理食塩水を注射して尿道内圧力を10 cm水柱に安定させた。その後、投与前、投与後5 min、30 min、1 h、1.5 h、2 h、3 h（作用が安定または弱化するしたら実験を終了する。）で濃度が30 μg/mLの塩酸フェニレフリン(PHE)を1 mL/kgで静脈注射して尿道内圧の上昇を誘導し、投与前後の異なる時点におけるフェニレフリンによるラット尿道内圧および末梢動脈基礎血圧の変化を観察して記録した。
【００５９】
実験結果から、シロドシン、DC037009は投与量に依存してフェニレフリンによるラット尿道内圧（IUP）および末梢動脈圧（MBP）の上昇を抑制できたことがわかる。そのフェニレフリンによるラット尿道内圧の増加を抑制する作用は、DC037009＞シロドシンで、フェニレフリンによる血圧上昇を抑制する作用の順番は、シロドシン＞DC037009で、尿道に対する選択性はそれぞれDC037009＞シロドシンであった。また、DC037009の効果が出始める投与量は陽性薬シロドシンよりも顕著に低かった（図1および図2を参照）。
【００６０】
実施例5：薬力学実験
BPHラットモデルの構築：6週齡のSD雄ラット49匹（体重200g程度）で、そのうちの37匹をBPHモデル群とした。毎日腹部にプロピオン酸テストステロンを皮下注射し、ほかの12匹をSham群としてオリーブオイルを注射し、4週間続けた。4週間後、49匹のラットに30mL/kg水の投与量で胃内投与し、各ラットの排尿状況を観察して記録した（毎回の排尿量および2時間内の排尿回数を記録した。）。
以上の検証結果によって、まず排尿状況が正常ではないラットを除き、その後状況が正常のBPHモデル群のラットを2群に分け、Sham群から12匹をコントロール群に選んだ。群分けの原則は、2群のBPHモデル群がそれぞれSham群と体重、2時間内の排尿回数、1回排尿量および排尿総量で有意差があり、かつBPHモデル群の2群の間に有意差がないようにすることである。実験結果から、2群のBPHモデルのラットはいずれもSham群と体重および2時間内の排尿回数、1回排尿量で有意差があたが、排尿回数および排尿総量で差がなかったことがわかる（図3）。
【００６１】
薬力検証実験：本実験は、合計7群：Sham群、シロドシン群(BPH-1、3つの投与量)およびDC037009群(BPH-2、3つの投与量)に分けた。CMCNaで溶解させた各投与量の化合物を5mL/kgでラットに胃内投与し、20min後各群のラットに30mL/kgの水負荷で胃内投与した。同じ種類の化合物の異なる投与量の研究時間の間隔は24時間超であった。
シロドシンおよびDC037009群はラットの排尿回数、1回排尿量がいずれも投与量に依存する関係を示し、DC037009は陽性薬シロドシンの薬力に相当し、効果が出始める量は1mg/kgであった。薬力学実験で、化合物DC037009は総排尿量が一定の条件で、1回排尿量を顕著に増加し、排尿回数を減少することができることが証明された（図4）。
【００６２】
実施例6：薬物動態学研究
ラット胃内投与：体重200-220 gの健康SD雄ラット3匹に対し、投与前12時間は禁食させ、水を自由に飲ませ、化合物DC037009を10％ DMSO/10％ツイン80/80％生理食塩水で調製し、20 mg/kgの投与量でラットの尾静脉から化合物を注射し、投与体積は10 mL/kgであった。
ラット静脈投与：体重200-220 gの健康SD雄ラット3匹に対し、投与前12時間は禁食させ、水を自由に飲ませ、化合物DC037009を10％ DMSO/10％ツイン80/80％生理食塩水で調製し、10 mg/kgの投与量でラットの尾静脉から化合物を注射し、投与体積は5 mL/kgであった。
胃内投与：投与後0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、5.0、7.0、9.0および24h。
静脈投与：投与後5min、0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、5.0、7.0、9.0および24h。
以上の所定の時点でラットの眼球後静脈叢から静脈血0.3 mLを取り、ヘパリンで処理した試験管に置き、11000 rpmで5 min遠心し、血漿を分離し、-20℃の冷蔵庫で冷凍した。
ラットに20 mg/kgのDC037009を胃内投与したところ、ラット体内の血漿における濃度がピークになった時間Tmaxが0.67±0.29 hで、ピーク濃度Cmaxが453±147ng/mLで、血漿中濃度-時間の曲線下面積AUC0-ｔが2867±798 ng・h/mLで、排泄半減期ｔ1/2が3.26±0.82 hであった。
【００６３】
DC037009を10 mg/kg静脈注射後、AUC0-tが4196±141 ng・h/mlで、t1/2が5.44±0.85 hで、血漿クリアランスCLが2.38±0.08 L/h/kgで、安定分布容積Vssが3.49±0.24 L/kgであった（図5を参照）。
【００６４】
【表４】
0006585033.tif 000011
【００６５】
生物利用能および半減期では、化合物DC037009はラット体内の半減期と生物利用能がそれぞれ3.26 hと34.2％で、そのAUC0-tが2260 ng・h/mLで、初歩の薬物動態学実験の結果でこの種類の化合物の薬物動態学的性質が優れたことが示された。
【００６６】
実施例7：DC037009の体外代謝の種属の比較研究
各インキュベート系の総体積は200 μLで、媒体は100 mMリン酸緩衝液(PBS、pH7.4)、最終濃度が3 μMのDC037009および2 mMのNADPHを含み、37℃水浴でインキュベートした。3min予備インキュベートした後、緩衝液-基質-補因子の混合物にそれぞれ各種属の肝臓ミクロソームタンパク質を入れて反応を開始させ、各種属の肝臓ミクロソームタンパク質の濃度はいずれも1.0 mg/mLで、60 min反応した後等体積の冷やしたアセトニトリルを入れて反応を終了させた。ブランクコントロールの総体積は200 μLで、媒体は100 mMリン酸緩衝液(PBS、pH7.4)、最終濃度が3 μMのDC037009および熱不活性化したミクロソームタンパク質を含んだ。全部のインキュベートサンプルは2標本であった。
2標本のインキュベートサンプルをそれぞれ150 μL取って混合し、300 μLのアセトニトリルを入れ、1 min渦流混合し、5 min遠心し(11000 rpm)、いずれも上清液を取って10 mL試験管に置き、40℃窒素ガス流下で乾燥し、残留物を100 μLメタノール/水(1: 9、v/v)で溶解させ、10 μL取ってUPLC/Q-TOF MS分析を行った。
【００６７】
【表５】
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【００６８】
DC037009のサルおよびマウスの肝臓ミクロソームにおける代謝が不安定で、少量の元の薬物だけが検出され、イヌおよびラットの肝臓ミクロソームにおける代謝がそれに次ぎ、ヒトの肝臓ミクロソームにおける代謝の安定性が比較的に高く、60 minインキュベートした後、約26％の元の薬物が代謝された。ヒトの肝臓ミクロソームで4種類の代謝物が、サルの肝臓ミクロソームで7種類の代謝物が、イヌの肝臓ミクロソームで6種類の代謝物が、ラットの肝臓ミクロソームで8種類の代謝物が、マウスの肝臓ミクロソームで8種類の代謝物が検出され、しかも代謝物の生成はいずれもNADPHに依存した。ヒトの肝臓ミクロソームにおけるDC037009の主な代謝経路はO-脱メチル、ジオキサシクロペンタン開環および脱水素で、代謝物の生成の相対比率から見ると、ヒトおよびイヌの肝臓ミクロソームは良い類似性がある。
【００６９】
体外代謝の種属差異の結果から、化合物DC037009はサルおよびマウスの肝臓ミクロソーム細胞において代謝が不安定であったが、ヒトの肝臓ミクロソーム細胞において代謝物の種類も顕著に減少し、安定性も大幅に向上し、60 minインキュベートした後、26％だけの元の薬物が代謝されたことがわかる。さらに、DC037009は良い薬物代謝性質を有し、薬になる潜在力があることが説明された。
【００７０】
実施例8：安全性評価
【表６】
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【００７１】
DC037009のα1A受容体に対する拮抗活性はそのhERGに対する抑制活性の272倍で、当該化合物は心臓に対する抑制作用が弱く、心臓の副作用が生じる可能性が低いことが示された。
【００７２】
DC037009の正常ラット下腹神経への電気刺激による精嚢線の収縮に対する作用
実験結果から、DC037009は電気刺激によるラットの精嚢線の収縮の幅および収縮曲線下面積のいずれにも顕著な抑制作用がなかった（P＞0.05）ことが示され、実験されたサンプルはラットの精嚢線に作用してその射精機能に影響を与えることはないことが説明された。さらに、当該化合物の副作用が小さいかもしれないことが証明された。
【００７３】
SDラットへのDC037009の経口胃内投与の急性毒性実験
SDラットに一回で500および1000 mg/kgの化合物DC037009を経口胃内投与した群ではラットが全部生存し、解剖では肉眼観察で顕著な薬物に関連する変化が見られず、最大耐用量(MTD)が1000 mg/kgであった。
【００７４】
SDラットへのDC037009の経口投与の14日重複投与毒性試験
SDラットに経口投与し、0、100および200 mg/kg群では14日連続投与したところ、動物が全部生存した。
賦形剤コントロール群と比較すると、100および200 mg/kg投与した動物は、血液と凝血の指標および血清の生物化学指標の検査結果から、血液と凝血の指標の変化および血清の生物化学指標の変化は投与量に依存せず、同時に実験室の正常値の範囲内にあったため、毒理学的意義がなかった。全部の動物の肉眼解剖では投与に関連する病理的変化が見られなかった。
急性毒性および亜急性毒性の実験結果から、化合物DC037009はラット体内における毒性が小さく、安全で信頼性が高いことがわかる。同時に、化合物DC037009の治療の応用範囲が広く、化合物には巨大な応用価値があることが説明された。
【００７５】
実施例9：化合物DC037009の薬学研究
化合物の溶解度の測定：
【表７】
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【００７６】
酸性溶液における溶解度は塩基性溶液における溶解度よりも高く、化合物DC037009を入れた溶液のpHが高くなった。
【００７７】
化合物の安定性の考査およびpKaの測定：
化合物DC037009は80℃で24時間加熱したところ、化合物の純度は0.5％しか変化しなかった。化合物は異なる溶媒におけるpKaはそれぞれpKa(H2O)= 7.28、pKa(CH3OH)= 6.81であった。
上記薬学のデータから、化合物DC037009は薬物になる基本的な性質を有し、応用の潜在性があることがわかる。
各文献がそれぞれ単独に引用されるように、本発明に係るすべての文献は本出願で参考として引用する。また、本発明の上記の内容を読み終わった後、この分野の技術者が本発明を各種の変動や修正をすることができるが、それらの等価の様態のものは本発明の請求の範囲に含まれることが理解されるはずである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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