(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
眼への投与を介して、対象の糖尿病性眼疾患の治療に用いる医薬組成物であって、式Ｉ
【化１】
0006625064.tif 000007
の化合物（式中、各Ｒ１およびＲ２が、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、かつＲ３がＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルである。）またはその薬学的に許容可能な塩の治療有効量を含む、医薬組成物。
【請求項２】
前記化合物がビンダリットである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記糖尿病性眼疾患が、糖尿病性網膜症または糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記糖尿病性眼疾患が、白内障または緑内障である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記対象は、１型または２型の糖尿病を有する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記対象は、正常レベルを超える血中グルコースレベルを有する、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記対象の眼の細胞における核へのＮＦｋｂの転位を低減する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項８】
高血糖細胞における細胞ストレスを正常にする、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記対象のＣｃｌ２、Ｃｒｐ、Ｉｃａｍ１、およびＶｃａｍ１のうちの一つ以上の発現を減少させる、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記医薬組成物は、さらに一つ以上の追加的な治療剤を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記一つ以上の追加的な治療剤は、抗ＶＥＧＦ剤、ＡＣＥ阻害剤、ＰＰＡＲ−ガンマアゴニスト若しくは部分的なアゴニスト、レニン阻害剤、ステロイド、オートファジーを調節する薬剤、セマピモド、ＭＩＦ阻害剤、ＣＣＲ２阻害剤、ＣＫＲ−２８、２−チオイミダゾール、ＣＡＳ４４５４７９−９７−０、ＣＣＸ１４０、クロドロン酸、クロドロネート―リポソーム製剤、および塩化ガドリニウムから選択される、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記化合物は眼への投与のために製剤化されている、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記眼への投与は、硝子体内または眼球内の投与である、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記化合物は、制御された放出または徐放のために製剤化されている、請求項１３に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２０１４年５月１５日に出願の米国特許仮出願番号第６１／９９３，９１５号、２０１４年１０月１５日に出願の第６２／０６４，３４４号、２０１４年１１月６日に出願の第６２／０７６，１６２号、および２０１５年５月６日に出願の第６２／１５７，７７３号の利益を主張するものであり、これら全体は、参照として本明細書中に援用されている。
【０００２】
本発明は、部分的に、眼障害の診断、治療、または予防に有益である方法および組成物であって、これらの障害に有効である免疫調節剤を含む、薬剤の発見を含む、方法および組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
視界を低減または除去する可能性のある眼障害は、とりわけ深刻な医療上の問題である。
【０００４】
たとえば、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）は、眼の機能障害の主な原因であり、特に５０歳超の患者における不可逆的な失明を含む。全患者は、初期のいわゆる「非滲出型」ＡＭＤに端を発する。これは、黄斑として知られている眼の後局部に臨床的に見ることができる沈着物を特徴とする。進行したＡＭＤは、２つの形態−末期「滲出型」または末期「非滲出型」を取り得る。進行した「滲出型」ＡＭＤにおける主な薬学的な選択肢は、抗血管新生剤の定期的な眼内注射である。これらの注射は、網膜中心の下でまたは中に病態となる新規血管が増殖した後に行われている。ここでの血管は漏出し、出血し、または組織の損傷および瘢痕を引き起こす。対照的に、末期または初期の非滲出型ＡＭＤの治療は存在しない。末期非滲出型ＡＭＤは、光受容体およびそのナース細胞である網膜色素上皮（ＲＰＥ）の死または萎縮症を特徴とする。組織の喪失のパッチは、「地図状萎縮」（ＧＡ）として知られている。
【０００５】
よって、現在、眼障害の有効な治療にあてはまる薬剤が不足している。よって、これらの障害の治療に有用な治療が依然として必要とされている。さらに、これら障害の有効な診断およびこれらの障害の治療に応答する患者の集合の同定が、必要とされている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
よって、一態様では、本発明は、眼障害またはその末期の失明する合併症を治療または予防する方法であって、眼障害の治療に有効な薬剤の有効量をその必要がある対象に投与することを含み、前記薬剤が、任意に、免疫調節剤（任意に、ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−２、およびＭＣＰ−３を含む単球走化性タンパク質（ＭＣＰ）−調節剤から選択される）であり、ビンダリットなどの（本明細書中に定義されている）式Ｉの化合物（場合によっては本明細書中でＴＭｉ−０１８と呼ばれる）、ＰＰＡＲγモジュレータ、遊走阻止因子（ＭＩＦ）阻害剤、およびケモカイン受容体２（ＣＣＲ２）阻害剤）を含む、方法を提供する。一部の実施形態では、免疫調節剤はマクロファージを標的とする。一部の実施形態では、免疫調節剤は、Ｍ１／Ｍ２の分極化を調節する。一部の実施形態では、免疫調節剤は、特異的に、対象のＭ１マクロファージおよびＭ２マクロファージのうちの１つまたは複数を調節する。一部の実施形態では、免疫調節剤は、対象のＭ１マクロファージの活性を調節（たとえば低減）し、かつ／または対象のＭ２マクロファージの活性を調節（たとえば増大もしくは維持）する。一部の態様では、本発明は、眼障害を治療または予防する方法であって、眼障害の治療に有効な薬剤の有効量を、その必要がある対象に投与することを含み、上記対象が、ＣＤ６４、ＩＤＯ、ＳＯＣＳ１、ＣＸＣＬ１０  Ｍａｒｃｏ、Ｎｏｓ２、Ｉｌ１２ｂ、Ｐｔｇｓ２（Ｃｏｘ２）、Ｉｌ２３α（Ｉｌ２３ｐ１９）、Ｉｄｏ１、Ａｄｉｐｏｑ、Ｃｃｌ２０、Ｓｏｃｓ３、Ｓｔａｔ１、ＩＬ−６、およびＩＬ１７（サブタイプａ）のうちの１つまたは複数の異常な（たとえば非疾患状態と比較して、たとえば増加または減少する）発現または活性を有する、方法に関する。一部の態様では、本発明は、眼障害を治療または予防する方法であって、眼障害の治療に有効な薬剤の有効量をその必要がある対象に投与することを含み、上記対象が、Ｃｃｌ５、ＣＤ１６３、Ｃｘ３Ｃｒ１、Ｆａｓｌｇ、Ｇｆａｐ、Ｃｓｆ２、Ｉｃａｍ１、Ｉｆｎｇ、Ｉｌ１０、Ｉｌ１２ｂ、Ｉｌ１３、Ｉｌ１７ａ、Ｉｌ１８、Ｉｌ１ｂ、Ｉｌ２２、Ｉｌ４、Ｉｌ６、Ｋｌｆ４、Ｍｒｃ１、Ｍｙｄ８８、Ｎｌｒｐ３、Ｎｏｓ２、Ｐｐａｒγ、Ｔｇｆｂ１、Ｔｌｒ４、Ｔｎｆ、Ｖｃａｍ１、ＭＣＰ−１（Ｃｃｌ２）、ＭＣＰ−２（Ｃｃｌ５）、ＭＣＰ−３（Ｃｃｌ７）、Ｃｃｒ２、Ｓｏｃｓ１、Ｓｏｃｓ３、Ｓｔａｔ１、Ｓｔａｔ３、およびＳｔａｔ６のうちの１つまたは複数の異常な（たとえば非疾患状態と比較して、たとえば増加または減少する）発現または活性を有する、方法に関する。一態様では、本発明は、眼障害を治療または予防する方法であって、ＭＣＰ調節剤の有効量をその必要がある対象に投与することを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、ＭＣＰ調節剤は、ＭＣＰ遺伝子プロモーター／エンハンサー領域の近位領域、遠位領域、または他の制御領域を標的とする。一部の実施形態では、本発明は、眼障害を治療または予防する方法であって、ＭＣＰ−１および／またはＭＣＰ−２および／またはＭＣＰ−３−調節剤の有効量をその必要がある対象に投与することを含む、方法に関する。
【０００７】
様々な態様では、本方法は、対象の集合を選択するのに使用することができる。たとえば、本方法は、薬剤がビンダリットを含む本明細書中に記載の式Ｉの化合物であり、かつ眼障害が非滲出型ＡＭＤまたは網状偽ドルーゼン（ＲＰＤ）（ドルーゼン様沈着、網状黄斑疾患とも呼ばれる）である実施形態を含むものであり、抗Ｄ因子抗体（たとえばランパリズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ））、抗βアミロイド（抗Ａβ）抗体（たとえばＧＳＫ９３３７７６（ＧＳＫ））、コルチコステロイド（たとえばフルオシノロンアセトニド）、ＭＣ−１１０１（ＭａｃｕＣＬＥＡＲ）、ＣＤ３４＋幹細胞療法、抗ＶＥＧＦ抗体（たとえばラニビズマブ）、ブリモニジン（アルファガン）、抗補体Ｃ５抗体（たとえばＬＦＧ３１６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ドキシサイクリン（ＯＲＡＣＥＡ）、エミクススタト塩酸塩、シロリムス（ＲＡＰＡＭＵＮＥ）、およびグラチラマー酢酸塩（ＣＯＰＡＸＯＮＥ））のうちの１つまたは複数で治療されていない、または治療を受けている、かつ／またはこの治療でから利益を受けている、かつ／またはこれら１つまたは複数に非応答である、対象に関連する。薬剤がビンダリットを含む本明細書中に記載の式Ｉの化合物であり、眼障害が非滲出型ＡＭＤまたはＲＰＤである実施形態を含む様々な実施形態では、対象は、以下：事前のまたは活動性の脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）のエビデンスを伴う、または伴うことのない、１つまたは複数の眼における、直径約１２５μｍ超の少なくとも１つのドルーゼン、１つまたは複数の良好に画定された総面積約２〜２０ｍｍ２のＧＡ病変領域、約３５文字超の最高矯正視力スコア、または２０／２００以上に相当するスネレン視力のうちの１つまたは複数を有することにより、分類されていてもよい。様々な実施形態では、対象は、以下：網膜下のドルーゼン様沈着および／または網状偽ドルーゼンおよび／または「びまん性−しずく型疾患（ｄｉｆｆｕｓｅ  ｔｒｉｃｋｌｉｎｇ  ｄｉｓｅａｓｅ）」、および／またはＧＡの境界もしくは結合性領域の周辺領域における過蛍光性眼底自発蛍光（ＦＡＦ）の他の疾患のうちの１つまたは複数を有することにより、分類されてもよい。様々な実施形態では、対象は、正面（ｅｎ−ｆａｃｅ）のイメージングで見られるように（たとえば白色眼底検査、青色光、近赤外線、赤外線、またはマルチカラーのイメージングにより観察可能である）、標的の病変を形成する多中心であり得る小さな丸形の斑点、またはインターレース状（ｉｎｔｅｒ−ｌａｃｉｎｇ）のリボンのうちの１つまたは複数を有することにより、分類されてもよい。患者は、これらの既知の診断、または一部の実施形態では、網膜外層の歪みをもたらし得る網膜下または網膜内の流体を特徴とする障害のうちの１つまたは複数を有し得る。患者は、本明細書中に提供されるいずれかの眼障害に罹患していてもよい。
【０００８】
一態様では、本発明は、眼障害の治療に有効な薬剤を作製する方法であって、
（ａ）
ｉ）眼に（１）上記動物の眼障害の存在を示すために有効な量の蛍光性化合物と、（２）眼組織の萎縮症を誘導するために有効な量の毒素を含む動物に試験化合物の有効量を投与することと、
ｉｉ）上記蛍光性化合物を蛍光させるために有効な波長および輝度を有する光に、上記眼を曝露することと、
ｉｉｉ）上記眼の蛍光パターンを、蛍光性化合物および毒素を含むが、試験化合物を含まない動物の眼の蛍光パターンと比較することと、
（ｉｖ）ステップ（ｉｉｉ）の比較の結果が、上記試験化合物が眼障害の治療に有用であることを示す場合に、上記試験化合物を候補化合物として選択することと
により、薬剤を同定することと、
（ｂ）上記同定した薬剤を、眼に投与するために製剤化することと
を含む、方法を提供する。一部の態様では、眼障害を治療または予防する方法であって、上述の方法を使用する際に作製される眼障害の治療に有効な薬剤のいずれか１つである薬剤の有効量と、薬学的に許容可能な担体または賦形剤とを含む医薬組成物を、その必要がある対象に投与することを含む、方法を提供する。眼障害の治療に有効である例示的な薬剤は、（たとえば「本発明の薬剤」として）本明細書中に列挙されている。
【０００９】
様々な態様では、本発明は、眼障害（限定するものではないがＡＭＤおよびＲＰＤを含む）の診断および／または予後および／または進行の代用となるバイオマーカーとしての、遅延性の近赤外線解析（ＤＮＩＲＡ）の使用に関連する。様々な態様では、さらに本発明は、臨床試験の設計のための受け入れ（ｅｎｔｒａｎｃｅ  ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ）、除外基準、またはエンドポイント解析としてのＤＮＩＲＡの使用に関する
【００１０】
様々な態様では、本発明は、糖尿病性眼疾患（たとえば糖尿病性網膜症およびＤＭＥ）、フォークト・小柳・原田病（ＶＫＨ）；サルコイドブドウ膜炎；眼ヒストプラスマ症および／または推定眼ヒストプラスマ症候群；自己免疫性ブドウ膜炎；全身性疾患、たとえばループス、クローン病、関節リウマチ、および他の既知の免疫起源の疾患に関連したブドウ膜炎；後部ぶどう膜炎（Ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ  ｕｖｉｅｉｔｓ）（まだ診断されて得ないものを含む）；前部ブドウ膜炎（たとえば虹彩炎）；ベーチェット病；結節性多発動脈炎；ならびにウェゲナー肉芽腫症のうちの１つまたは複数を、限定するものではないが、ビンダリットなどの式Ｉの化合物を含む本明細書中に記載の薬剤のいずれかで治療する方法に関する。一部の実施形態では、ビンダリットなどの式Ｉの化合物をその必要がある患者に投与することにより、糖尿病性網膜症を治療する方法を提供する。
【００１１】
様々な態様では、本発明は、非滲出型ＡＭＤまたはＲＰＤを治療する方法であって、ビンダリットなどの式Ｉの化合物、およびランパリズマブ（Ｌａｍｐｉｌｉｚｕｍａｂ）などの補体Ｄ因子阻害剤の有効量を、その必要がある患者に投与することを含む、方法に関する。
【００１２】
本発明の詳細は、以下に付随する説明に記載されている。本明細書中に記載の方法および材料と類似または均等なものは、本発明の実務または試験に使用することができるが、ここでは例示的な方法および材料が記載されている。本発明の他の特徴、対象、および利点は、詳細な説明および特許請求の範囲から明らかである。本明細書および添付の特許請求の範囲では、単数形は、特段他の記載が明確に指示されていない限り、複数形をも含む。特段他の定義がない限り、本明細書中で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般的に理解されている意味と同一の意味を有する。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１Ａ−Ｄ】ＮａＩＯ３の注射後のｉｎ  ｖｉｖｏでのＦＡＦのイメージングが、網状のパターンを呈する損傷の地図状な領域を同定することを示す。ＩＣＧ血管造影は、一過性の脈絡網膜の透過性を同定する。
【図１Ａ】視神経乳頭周辺の初期ＦＡＦの変化の時間経過を示す。過蛍光の線または境界が、ＮＡＩＯ３注射から２〜３日後に形成された。この境界は、視神経乳頭を完全に囲み得る、または囲み得るものではなく、視神経乳頭に近接するものではない。蛍光のレース状または網状のパターンは、３日目および７日目の間に現れ、この線の周辺に形成された。７日目までに、このパターンは明確となった。
【図１Ｂ】視神経乳頭および中央周辺網膜（ｍｉｄ−ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｒｅｔｉｎａ）を含む合成した画像であり、過蛍光の境界が、将来のレース状または網状の過蛍光の領域を画定したことを示す。この例では、ＮａＩＯ３投与後３日目に見られた境界が、網膜下部の島を画定した。７日目までには、境界はもはや見ることができず、代わりに広範囲の網状のパターンが出現した。３日目および７日目での２つの異なる島を示す画像は、異なる動物由来であり、どのくらい一貫してこのパターンが観察されたかを示す。これらのような小さな島は、眼の約７％で観察された。
【図１Ｃ】ＦＡＦのパターンが、フルオレセインで見られた網膜および脈絡膜の脈管構造のパターン（それぞれ、内部および中央の網膜の左および中央の画像）、または脈絡膜のＩＣＧ血管造影（右の画像）と明確に異なることを示す。
【図１Ｄ】パターンの進行の約２日前に起こった経上皮の透過性の一過性の増大を示し、これは、ＩＣＧの血管造影（色素注入から約６分間後、７９０ｎｍ）の間の顕著なフラッシュにより明らかである。このＩＣＧフラッシュは、毒素注射の１日後では検出されておらず、一時的に現れ、３日目または４日目に定例的に試験した次の時点にまでにはほとんど見られない。
【図２Ａ−Ｄ】大きな３６０°のリングにおけるＮａＩＯ３注射後のＦＡＦの変化の成熟度を示す。
【図２Ａ】乳頭周囲および周辺の網膜の境界の両方により画定された、後極の大部分および同定された３６０°のリングの損傷を含む大きな合成したＦＡＦ画像を示す。ＮａＩＯ３から７日後に撮影したＦＡＦの画像は、長円、円形、貝殻状、ロゼット、または動物の足跡のパターンを形成する曲線の過蛍光の別々かつ近接した複数の領域を同定した。これらは、概して、７日目および１４日目の間で現れた。詳細は、上部の拡大図に提供されている。これらの複合的なＦＡＦパターンは、初期の過蛍光の境界内で起こり、経時的に合体する。
【図２Ｂ】１４日目までに、大部分の動物が３６０°のリング全体にわたる網状の過蛍光の密接に近接したパターンを示すことを示す。詳細は、中央のボックスに提供されている。
【図２Ｃ】ＮａＩＯ３曝露から２８日目までに、パターンはより顆粒の外観をとることを示す。パターンがあまり明らかではない小さな領域は、より暗く、灰色の領域として見えている。
【図２Ｄ】比較のために、ＦＡＦの「びまん性−しずく型（ｄｉｆｆｕｓｅ  ｔｒｉｃｋｌｉｎｇ）」の臨床画像を示す。本発明は、特に、周辺の過蛍光に関連する、網状、小葉状、または貝殻状の長円の灰色の低蛍光を含む多くの特徴をまとめている。
【図３Ａ−Ｃ】網膜外部の曲線の網状のパターンが、ＮａＩＯ３注射から数週間以内に発症することを示す。
【図３Ａ】このパターンが自己蛍光細胞の分布と対応することを示す。低電力（１×、左の縦列；５×、右の縦列）の白色光の、ＮａＩＯ３注射前（ベースライン）、および注射から４日後および７日後に撮影した、摘出した網膜全載の画像が示されている。わずかな曲線パターンが、ベースラインと比較して３〜４日後に認められ、７日目に明確となっている。
【図３Ｂ】ＮａＩＯ３から１４日目までに、この網状のパターンが顕著になり、網膜外部の全体の変形と対応することを示す。これは、減張切開の部位で見られる断面図においてノッチまたはひだとして現れる（ボックスで拡大）。
【図３Ｃ】細胞染色を伴わない、４８８ｎｍチャネルにおいて落射蛍光顕微鏡が、網状の溝の中にある自己蛍光細胞の存在を示したことを示す。このことは、幅広い光の発光（左の縦列）ならびに狭い励起および発光（右の縦列）を使用することにより両方で明らかであり、ＦＡＦイメージングの間に使用される波長に対応する。網膜のひだは、７日目までの小さな蛍光のドットの存在と関連していた。さらに、拡大写真は、核のための空隙を伴う、小さな蛍光細胞の分布を明確に示した。全身性フルオレセイン‐デキストラン注射（血管造影のため）後の陽性対照の組織は、組織の処理または染色を行うことなく摘出した網膜または眼杯において４８８ｎｍの蛍光（ＨＲＡＩＩイメージングにおけるＦＡＦで使用した波長と類似）を検出する能力を確認した。ベースラインでの陰性対照は、自己蛍光細胞の不存在を示す。
【図４Ａ−Ｃ】組織学的に決定した組織の知見がどのようにＮａＩＯ３誘導型のＲＰＥ喪失後のｉｎ  ｖｉｖｏでのイメージングを説明することができるかを示す解釈上の例示を示す。
【図４Ａ】初期のＡＭＤ患者からの臨床的な画像を示し、かつ網状偽ドルーゼン、およびいわゆるＮＩＲチャネルにおける「標的」病変（上部）を示す。すぐ下は、強調のために黒色にし、中断する明るいシグナルを強調するために明るい背景を伴う、低蛍光のスポット（概してドルーゼン様沈着物して定義されている）を強調する２つの概略的なオーバーレイである。下部の２つの画像は、ＲＰＤの複数の小さな標的病変を強調しており（円の中）、最下部の概略図は、潜在的な暈状の存在、および組織の同心円のひだにより形成される標的病変を示す。
【図４Ｂ】３次元の全載ＯＮＬの組織と、２次元の正面の臨床上のＦＡＦ画像との間の直接的な関係性を示す概略的なレンダリングを示す。ＮａＩＯ３に曝露してから１４日目までに、網膜外部は、中央のＯＮＬの複数のひだを示す（相対的に低倍率［もともとの４０×］およびデジタルにより拡大）。デジタルの拡大は、組織のひだの同心円のリングを示す。黒色および白色で示されたこの同一の領域は、これが、どのように中心の空隙を伴う円形または長円の領域であるようにＦＡＦで現れるかを示す。反転した黒色および白色のレンダリング（「陰性の」画像）は、このＯＮＬの歪みの配置が、中心が明るい標的を有するように現れることを示す。
【図４Ｃ】ＮａＩＯ３注射から１４日後のラットの網膜のＯＣＴイメージングが、網膜外部を介して明るい「スパイク」を示すことを示す。これらは、臨床的に説明されている。網膜外部を介した類似の組織学的セクションは、ＯＮＬが、細胞の狭いカラムを形成する拡大した網膜下腔において根底にある炎症細胞とともに折りたたまれることを示す。ｉｎ  ｖｉｖｏでの画像との比較のために、これらは、黒色および白色にされている。反転した黒色および白色（ＯＣＴ画像を一致させるための偽陰性画像）では、ＯＮＬは消失し、網膜下の密度は明るく見えることが観察される。
【図５Ａ−Ｈ】小斑点のＮＩＲ蛍光が、７９５／８１０ｎｍのｃＳＬＯイメージングにより検出されるが、従来のＩＣＧ注射なしでは検出することができないものであり、すなわちこの蛍光は、所定の励起／発光フィルターでのみ検出することができるが、色素注射後の移行期とは一致せず、または移行期ではない（すなわちＤＮＩＲＡ法を使用している）。図５Ａ〜Ｆは、以下を使用して得た野生型のＳＤラットの典型的な正常な共焦点走査型レーザー検眼鏡（ｃＳＬＯ）および血管造影の画像を示す：
【図５Ａ】赤色を含まない光
【図５Ｂ】赤外線反射（８３０ｎｍ）
【図５Ｃ】４８８／５００ｎｍの自己蛍光（ＦＡＦ）
【図５Ｄ】７９５／８１０ｎｍのＮＩＲ蛍光
【図５Ｅ−Ｆ】それぞれ、フルオレセインデキストラン、およびＩＣＧ色素を使用した正常な網膜および脈絡膜の脈管構造を示す。これらおよび類似の画像は、すべての実験の正常な対照となる。このようなイメージングは、網膜とＲＰＥ層の中、および網膜とＲＰＥ層との間に焦点深度を適切に合わせるように使用されている。
【図５Ｇ】ｔ＝０での５ｍｇ／ｋｇのＩＣＧ色素の単回注射を投与した代表的な動物におけるＤＮＩＲＡの時間経過を示す。色素注射前には検出可能なシグナルは観察されていない（均一な暗色の画像、上の列）。血管造影の間（第２の列）、網膜の血管は可視化され、背景が検出可能ではなく、ここでｃＳＬＯの増分（感受性）が、移行期の間に飽和を防止するように減少していることが示されている。血管造影から数日後に、（列３〜５）で、ベースラインと比較して小斑点または点状の背景の蛍光が増加している。遅延性のＮＩＲ蛍光は、上にある血管により阻害されており、視神経乳頭では存在していないが、ＦＡＦとは異なり（図５Ｈ）、神経頭周辺に明るい弓またはリングを形成する。このシグナルは強力なままであり、使用する濃度（５ｍｇ／ｋｇ）で注射してから最大２８日後まで眼底全体に分布している。底部の列のわずかに暗いセグメントは、脈絡膜の渦静脈の存在を反映しているようである。
【図５Ｈ】ＤＮＩＲＡの時間経過とは対照的に、４８８／５００ｎｍの自己蛍光シグナルが、フルオレセインの血管造影（下の列）から３日後、８日後、および２８日後に見る場合に、注射前の輝度（上部の列）まで戻ることを示す。最下列のわずかに暗いセグメントは、脈絡膜の渦静脈の存在を反映しているようである。
【図６Ａ−Ｄ】ＤＮＩＲＡを使用して、ＮＩＲ蛍光シグナルの輝度がＩＣＧの用量と相関することを示す。
【図６Ａ】ＩＣＧ色素が投与されなかった場合に、対照のｃＳＬＯの画像が、７９５／８１０ｎｍの蛍光シグナルの非存在を例証することを示す。ＩＣＧを投与されていなかった対照の動物は、評価する２１日間にわたり無視できるシグナルを伴う背景の蛍光の同一のレベルを維持した。
【図６Ｂ】同一の増分を使用して、遅延型のＮＩＲの蛍光は、０．３５ｍｇ／ｋｇの低用量で投与する場合に、ＩＣＧ注射から４８時間後に容易に検出可能であったことを示す。しかしながら、時間とともに、ＤＮＩＲＡは、注射から４８時間後〜２１日後まで徐々に消えてくことを示す。
【図６Ｃ】同一の増分を使用して、５ｍｇ／ｋｇのＩＣＧ血管造影は、低用量で行うよりも明るい（高い輝度の）遅延型ＮＩＲ蛍光を４８時間でもたらしたことを示す（図６Ｂ）。この蛍光は、最大２１日目まで大きく変化しないままであった。
【図６Ｄ】対照的に、８３０ｎｍのＮＩＲの反射率のチャンネルが類似の変化を示さないことを示す。
【図７Ａ−Ｂ】ヨウ素酸ナトリウムが脈絡膜の脈管構造に対する明確な見解をもたらす遅延性ＮＩＲ蛍光のパッチ状の喪失を引き起こすことを示す。
【図７Ａ】ＩＣＧおよびＮａＩＯ３の注射から３日後に行われたＤＮＩＲＡを示す。後極の明確に画定されたパッチまたは領域における小斑点の蛍光の喪失が見られた。これらの領域は、明確に画定された境界を伴い、暗くまたは低蛍光のように見える。
【図７Ｂ】これらの領域の中で、ｃＳＬＯの増分（感受性が）が増加した場合、脈絡膜の血管が容易に明らかとなることを示す。ボックス（拡大されている）は、視神経から放射状にある網膜の脈管構造とは異なっている方向に移動する顕著な脈絡膜の血管の一部を同定する（矢印）。小斑点のＤＮＩＲＡの蛍光は、画像の右上の脈絡膜に対する見解をわかりにくくしている。
【図８Ａ−Ｃ】網状のＦＡＦパターンが、ｉｎ  ｖｉｖｏおよび摘出した網膜において成熟し、視神経に隣接している領域に影響しないことを示す。
【図８Ａ】ＮａＩＯ３注射から３ケ月後までに有意な網膜外部の喪失にもかかわらず、ＯＮＬが、視神経乳頭（ＯＮＨ）のすぐ近くに隣接する領域に保存されたことを示す。高倍率で（底部）、光受容体の核が保存されており、網膜外部がひだにないことを確認した。動物へのＮａＩＯ３注射から７日後からの代表的な眼のＦＡＦイメージングにより、網状のパターンが見られないことを確認した。明確な点線（内部の円）は、ＯＮＨの位置を表し、粗い点線（外部の円）は、正常な非網状ＦＡＦのおおよその度合いを示す。
【図８Ｂ】ＮａＩＯ３投与後の網膜外部の明確な変形を示したＨ＆Ｅ染色を示す。ＮａＩＯ３投与前（ＢＬ）に、ＯＮＬは、ＯＮＨから網膜周辺部まで延びた暗い線状のバンドとして現れる。７日目までに、網膜外部は、ひだにあるが、ＯＮＬは肉眼で正常のままであった。このことは、右のカラムの拡大図で見られる。しかしながら、ＮａＩＯ３から１４日後までに、ＯＮＬは、特定したＲＰＥの基底膜であるブルッフ膜（ＢＭ）に対して直接ある網膜内部を伴う、明らかな喪失領域を示した。このことは、拡大図で見られる（黒色の矢印）。
【図８Ｃ】核染色ＴＯ−ＰＲＯ−３（遠赤色蛍光のみを用いたカルボシアニンのモノマーの核酸染色，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でイメージングしたＯＮＬを介した共焦点顕微鏡を示す。ベースラインではこの層は平坦であり、特徴を区別することはない。ＮａＩＯ３投与後の時間を増加させると、ＯＮＬは、次第に異常が進むこととなった。線状の溝、曲線の形状、同心円のリング、および単離した小さな長円もしくは円を、３日目、６日目、および１４日目に同定した。
【図９Ａ−Ｃ】疾患の初期および末期のＲＰＥの非存在下で、Ｉｂａ１＋細胞が網状ＦＡＦパターンに寄与することを示す。
【図９Ａ】ＦＡＦで見られる網状のパターンと、疾疾患進行の初期および末期のＩＨＣとの間の比較を表す、低倍率（上部列）および高倍率（下の列）のｉｎ  ｖｉｖｏおよびｅｘ  ｖｉｖｏでのイメージングを示す。ｉｎ  ｖｉｖｏで同定されたＦＡＦのパターンは、抗Ｉｂａ抗体を使用した蛍光免疫組織学的検査により、再度撮像されている。７日目のＨＲＡＩＩイメージングの直後に摘出した網膜全裁と比較すると、同一の網状パターンが、ミクログリアおよびマクロファージのマーカーであるＩｂａ−１に対する抗体を使用して観察された（上部）。ＴＯ−ＰＲＯ−３を使用した核染色は、曲線、長円、または小葉のパターンを形成するように、２次元で現れる外部顆粒層（光受容体層）の密接に封入された細胞を示した。２つをまとめることにより、Ｉｂａ−１＋染色が、核染色の間に組み合わさって見いだされていることを確認した。末期の網状のパターンの拡大から、折りたたまれた光受容体の核の間の溝にＩｂａ−１＋細胞が残ったままであることが確認された（下部）。
【図９Ｂ】ＦＡＦシグナルが、ＲＰＥの非存在下であっても検出できることを示す。左：ＲＰＥ６５（緑色）で染色した後部眼杯は、この中心および中央の網膜の単層の喪失を示す（周辺のＲＰＥのリングは残る）。残りの画像は、２つの異なるＲＰＥ標識（ＭｉＴＦ：小眼球転写因子）、および特徴的な二重の核染色を利用し、かつ眼底自発蛍光の複雑なパターンを有するとみられた領域で、中央および中心の眼杯のＲＰＥ層の喪失を確認する。対照的に、正常なまたはほぼ正常なＲＰＥは、後部の眼杯に残っている。
【図９Ｃ】ＲＰＥ細胞を示す二核の非存在により証明される、網膜全載の中心部のＲＰＥ細胞の消失を示す核染色を示す。ＲＰＥは、周辺の網膜組織にまだ可視化されていた。これはＲＰＥ細胞が中心および周辺の網膜組織の両方に存在していたベースラインの対照とは対照的である。
【図１０Ａ−Ｃ】Ｉｂａ−１＋およびＣＤ６８＋食細胞の対応するインターレース状の分布を伴う複雑な３次元の変形を表す、網膜外部を介した連続共焦点顕微鏡を示す。
【図１０Ａ】内部の網状層（ＩＰＬ）から網膜下腔まで延びる４つの層に光学的に区切られた網膜外部の形態学的な変化を示す。ＯＮＬは、内部層および外部層に分割されている。赤色＝Ｉｂａ−１、緑色＝ＣＤ６８、青色＝核。食細胞数の増加は、ベースラインと比較して、ＮａＩＯ３投与から４日後に網膜層で見られた。この時点で、Ｉｂａ−１細胞は、主に網膜内層で見いだされる。これは、両細胞マーカーに関して抗体の陰性対照では存在していなかった。
【図１０Ｂ】ＮａＩＯ３投与から１４日後までに、円形および長円のパターンが、ＯＮＬで明らかであり、ＯＰＬ（血管の存在により同定）と同じようにかなり内部にあることを示した。このパターンは、内部ＯＮＬで曲線であり、密接に折りたたまれた核の層がより密集している外部ＯＮＬでは多く、曲線の空隙の領域が小さい。外部ＯＮＬでは、ひだの間に有意な架橋が存在していた。これらの核の空隙は、Ｉｂａ−１＋およびＣＤ６８＋細胞を含んだ。
【図１０Ｃ】最外層のＯＮＬにおける拡大した画像を示し、または拡大した網膜下腔（通常仮想の空間である）は、光受容体の核の間に交絡したＩｂａ−１＋およびＣＤ６８＋細胞の網状パターンを示す。
【図１１Ａ−Ｂ】食細胞が網状パターンを形成する変形した光受容体層内にあることを確認した、摘出した網膜全裁組織の３次元の再構成を示す。
【図１１Ａ】網膜外部を介した共焦点Ｚシリーズを使用して、ＯＮＬおよびＩｂａ１＋細胞の３次元の再構成を作製したことを示す。光受容体核層の核染色（赤）がひだにあることを示した。Ｉｂａ−１＋染色（緑）と組み合わせると、炎症細胞が、網膜の変形により画定されているひだの間または中にあることが明らかとなった。Ｉｂａ−１陽性細胞単独の再構成は、網状のパターンを示した。
【図１１Ｂ】ＮａＩＯ３投与から２８日後の網膜外部の全画像のスタックのセグメントのＺシリーズの再構成が、ひだの複雑さを示し、これらのピークではより狭く（内部）、これらの基部（中央、外側）ではより広くよりインターレース状であることを示す。断面のイメージングとの比較のため、およびこれらの結果の３Ｄの性質を良好に表すために、斜視図もまた示されている（中央のパネル）。正面の画像（左）のアスタリスクの位置は、斜視図の画像のアスタリスクの位置と対応している。デジタルの拡大図（右）は、曲線状であり、網膜外部に近接しているが、内部のＯＮＬにおける３つの小さな長円の中で崩壊している、光受容体層（赤色）の間の溝を示した。Ｉｂａ１＋細胞（緑色）は、光受容体層の中、すなわち外部に著しく局在していた。網膜外部の対照の再構成は、Ｉｂａ−１陽性細胞もＯＮＬの変形も示さなかった（下部の列）。ビットプレーンソフトウェア（Ｉｍａｒｉｓ）を使用してこれらの画像を作製した。
【図１２Ａ−Ｄ】進行性のＮａＩＯ３誘導型の網膜外部の変形がｉｎ  ｖｉｖｏでのＯＣＴイメージングにより同定され、かつ臨床結果と比較したことを示す（略語：ＮＦＬ＝神経線維層；ＧＣＬ＝ガングリオン細胞層；ＩＰＬ＝内部網状層；ＩＮＬ＝内部顆粒層；ＯＰＬ：外部網状層；ＯＮＬ＝外部顆粒層；ＩＳ＋ＯＳ内部セグメント＆外部セグメント層；ＲＰＥ＝網膜色素上皮；ＢＭ＝ブルッフ膜）。
【図１２Ａ】ｉｎ  ｖｉｖｏでのＯＣＴを示し、かつ網膜下部で発生したが、網膜上部では発生しない初期の変化が、ＮａＩＯ３投与から３日後に最初に観察されたことを示す。ベースラインの画像は、ＯＣＴで視認可能な網膜層を示した。３日目の網膜の正面の画像は、２つの光学的なセクションの位置を表し、ここで上部および下部が示されている。上部は、ベースラインと比較して変化しないままであった。対照的に下部は、ＲＰＥ層の喪失に加えて、光受容体の内部および外部のセグメントの小さな凹凸を示した。
【図１２Ｂ】ＮａＩＯ３投与から１４日後までに、網膜外部が、暗い外部顆粒層の外部（下部）にある明るいシグナルの複数の曲線のひだ、ベースダウンの三角形、場合によってはスパイクの形成を含む顕著な変化を示した。
【図１２Ｃ】げっ歯類の網膜の１４日目の画像に、良好に形成されたベースダウンの三角形が示されていることを示す。
【図１２Ｄ】げっ歯類のモデルで見られるものと類似のベースダウンの三角形を示す網状偽ドルーゼンを有する患者のＯＣＴ画像を示す。
【図１３Ａ−Ｂ】網膜下の変化が、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＹ軸およびＺ軸の複合的な３Ｄ構造に寄与することを示す。
【図１３Ａ】網膜下の変化がＹ軸の複合的な３Ｄ構造に寄与することを確認する隣接した連続したＯＣＴ画像を示す。小さな網膜下のドームまたは錐体の形状は多くあり、中心に示されるように、さかさまの「Ｙ」または「ウィッシュボーン」に類似する形状をも形成する。連続的な画像の容積測定の再構成と比較して、この画像は、正面から見る場合に円形となる構造を通る光学的なセクションと一致する。円形構造を通る連続的なＯＣＴセクションの位置を示す画像は、隣接する光学的な断面図の画像に対応する。これら断面図の２つの主要な網膜下のシグナル（矢印）は、円の上部および下部の先端でともに近接し、さらには中心で離れているように観察される。内部のスパイクの距離が提供されている。円のすぐ左側の構造の評価は、より小さなループ様の構造に対する網膜下の構造の類似する寄与を示す。
【図１３Ｂ】内部、中央、および外部のＯＮＬを介した連続的なＺセクションのセグメントのスタックの容積測定の再構成が、変形した網膜外部下でシグナルの異なる正面の外観を確認することを示す。ＯＣＴは同一の組織平面を介して分割する。（上部の列）３つの平面内で形成された容積測定で再構成された画像は、上部の列に示される平行の緑色の線により境界わけされている。このよう内部、中央、および外部のＯＮＬを介したセグメントの再構成は、３つの別々のパターンを示す。（Ｃ、下部の列）内部ＯＮＬにおける点状のスポットの通常の列。（Ｃ、左下）中央のＯＮＬにおけるより曲線状のパターン。（Ｃ  中央）大部分の拡大した網膜下腔内の最外部のＯＮＬは、これらの間の顕著な架橋で複数の複合的な曲線、ループ、複合構造を示す。これらの画像は、３Ｄで再構成された共焦点顕微鏡の結果と相関する（Ｃ、右下）。
【図１４Ａ−Ｂ】循環する単球および固有のマクロファージを欠失するガドリニウムが、ＮａＩＯ３誘導型網膜外部の損傷のＦＡＦパターンを変化させることを示す。
【図１４Ａ】非治療（下部パネル）と比較して、ＧＡＤで治療した病変が、どのように、３日目に良好に画定された境界をほとんど有さず、かつ〜日目に損傷の典型的な島の中にＦＡＦの良好に画定されたパターンがはるかに少なくすることを示す。
【図１４Ｂ】どのようにマクロファージの欠失がより小さな損傷領域をもたらすかを示す。左：ＦＡＦの画像は、ＮａＩＯ３および同時のマクロファージのＧＡＤでの欠失から７日後に網状のパターンの小さな三日月を示す。右：摘出した網膜全体と比較して、損傷領域は概して観察されていたものよりも明らかに小さい。
【図１５Ａ−Ｃ】理論による限定を望むものではないが、組織学的に決定された組織の知見が、どのようにＮａＩＯ３誘導型のＲＰＥ喪失後のｉｎ  ｖｉｖｏでのイメージングを構成できるかの解釈上の図を示す。
【図１５Ａ】ＮＩＲチャネルで網状偽ドルーゼンおよびいわゆる「標的」病変を示す初期のＡＭＤ患者由来の臨床画像を示す（一番上）。すぐ下は、強調のため黒で低蛍光スポット（これらは概してドルーゼン様沈着物として定義されている）を示し、介在する明るいシグナルを強調する明るい背景を伴う２つの概略的なオーバーレイである。下２つの画像は、複数の小さなＲＰＤの標的病変（円の中）を強調し、最も下の画像は、組織の同心円のひだにより形成された潜在的な暈状および標的病変を概略的に示す。
【図１５Ｂ】３次元の全載ＯＮＬ組織と、２次元の正面の臨床ＦＡＦ画像との間の直接的な関係を示唆する概略的なレンダリングを示す。ＮａＩＯ３投与から１４日後までに、網膜外部は、中央ＯＮＬの複合的なひだを示す（相対的に低倍率（本来の４０×）およびデジタルで拡大）。デジタルの倍率は、組織のひだの同心円のリングを示す。黒色および白色で示されたこの同一の領域は、これが、どのように中心の空隙を含む円形または長円の領域のようにＦＡＦ上で現れ得るかを示した。反転した白色および黒色のレンダリング（すなわち「陰性」画像）は、ＯＮＬの崩壊の配置が、中心の明るい標的を有するように見えることを示した。
【図１５Ｃ】ＮａＩＯ３投与から１４日後のラットの網膜のＯＣＴイメージングが、網膜外部を介して明るい「スパイク」を示すことを示す。これらは臨床的に説明されている。網膜外部を介して同様の組織学的なセクションは、ＯＮＬが、細胞の狭いカラムを形成する拡大した網膜下腔における根底の炎症細胞とともに折りたたまれることを示す。ｉｎ  ｖｉｖｏでの画像との比較のために、これらは、黒色および白色で表されている。反転した黒色および白色（すなわち、ＯＣＴ画像と一致させるための偽陰性画像）では、ＯＮＬが、網膜下の密度が明るく見える間に消失することが観察される。
【図１６Ａ−Ｆ】眼底自然発光（ＦＡＦ）を使用して経時的に評価する場合、硝子体内ビンダリットが、過蛍光ＦＡＦの複合的なパターンの発達を低減することを示す。
【図１６Ａ】生理食塩水を投与し、ＦＡＦを使用して評価した進行性の変化を発達させた陰性対照である。
【図１６Ｂ】高用量（２０μｇ／眼）のビンダリットでＦＡＦが正常のままであることを示す。
【図１６Ｃ】異常性のＦＡＦが、比較器の小分子の存在下で発達することを示す。
【図１６Ｄ】ＤＮＩＲＡイメージング（下の列）と併用したＦＡＦ（上の列）により、ＲＰＥ層の保存を確認することを示す。対照動物（左）は、複合的なＦＡＦパターンおよび暗いＤＮＩＲＡシグナル（ＲＰＥなし）を発達させる。高用量のＴｍｉ−０１８（２０μｇ／眼）では、ＦＡＦは正常であり、ＤＮＩＲＡシグナルが保存される。中程度の用量（１０μｇ／眼）では、異常なＦＡＦおよびＲＰＥの喪失の小さなパッチが存在する。
【図１６Ｅ】硝子体内のビンダリットが、パッチの大きさを用量依存的に減少させることを示す。様々な用量：２０μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、および対照（ビヒクルのみおよび毒素のみ）を使用する。
【図１６Ｆ】硝子体内に投与した１ｍｇ／ｍｌ（２μｇ）のビンダリットの存在下で、高用量のＮａＩＯ３毒素で起こる損傷の小さなパッチのＤＮＩＲＡ（左）およびＦＡＦ（右）の典型的な画像を示す。
【図１７Ａ−Ｂ】ビンダリットが、網膜の機能（電気生理学）を用量依存的に保護し、最小有効用量を示すことを示す。
【図１７Ａ】網膜電図解析が、網膜の機能の用量依存的な保護を示すことを示す。用量は、ビンダリット：４０μｇ、２μｇ、および０．２μｇの量である。これを下回るとビンダリットの効果が失われる最小有効用量（ＭＥＤ）は、０．１ｍｇ／ｍｌ、または２００ｎｇ／眼と確認された。
【図１７Ｂ】網膜電図のトレースを示す。明るいフラッシュｂ波の振幅は、生理食塩水の対照の存在下で、高用量では保存され、低用量では消失する。
【図１８Ａ−Ｃ】ビンダリットが、組織の損傷、ＲＰＥの喪失、および網膜外部の破壊を保護することを示す。
【図１８Ａ】ビンダリットが、用量依存的に組織の損傷を保護することを示し、これは４８８／５１２ｎｍでの自己蛍光落射蛍光顕微鏡を使用して評価される。小さな立法状のＲＰＥ細胞が、非常に高用量（１０ｍｇ／ｋｇ）および高用量（５０ｍｇ／ｋｇ）の両方のビンダリットアームで見られる（左および中央）。細胞のデブリおよび拡大した過蛍光のＲＰＥ細胞は、生理食塩水の対照で見られる（右）。
【図１８Ｂ】硝子体内ビンダリットがＲＰＥ細胞の喪失を保護することを示す。硝子体内の生理食塩水（ビヒクル）の存在下で、ＲＰＥ細胞が消失しており、蛍光組織化学的検査により確認されている（左）。硝子体内ビンダリットの存在下で、ＲＰＥ細胞が保存されている。緑色＝ＲＰＥ６５；赤色＝Ｉｂａｌ；青色＝核
【図１８Ｃ】Ｈ＆Ｅ組織学的検査から、ビンダリットの存在下でのＲＰＥ層および網膜外部の保存を確認されることを示す（左の２つの画像）。これらの層は、生理食塩水（ビヒクル）の存在下で損傷または喪失している。
【図１９Ａ−Ｈ】ビンダリットが、単球走化性タンパク質（ＭＣＰ−１）の発現を低減し、Ｍ１マクロファージの応答を低減し、Ｍ２の観点での均衡が崩れることを示す。
【図１９Ａ】蛍光免疫組織化学的検査を示す。本明細書中に記載のＡＭＤ／ＲＰＤのモデルでは、ＲＰＥに対する毒素誘導型の損傷が、一連の生来の免疫系の分極化の変化をもたらす。免疫組織化学的検査は、ベースラインで、Ｍ２応答のマーカー（たとえばＣＤ１６３およびその他）が支配的であることを確認する。損傷の誘導の後、疾患のセネッセンスをに移行する発達および成熟の後に、ベースラインに戻るＭ１の遺伝子発現の大きな増加が存在する。赤＝iＮＯＳ（Ｍ１）,緑＝ＣＤ１６３(Ｍ２)，青＝核、もともとの倍率：１００×
【図１９Ｂ】定量的なＰＣＲは、Ｍ１の遺伝子発現（ｍＲＮＡ）が減少し、Ｍ２発現がほとんど変化しないことを確認したことを示す。ｍＲＮＡ転写物の変化倍数は、ベースライン（前損傷）のレベルと比較して計算されている。ｘ軸上の数１〜５は、以下：１＝誘導、２＝初期の発達、３＝末期の発達、４＝成熟、および５＝セネッセンスといった、時間経過に伴う変化を表す。Ｍ１に特異的なマーカーは、この図面で評価されている。
【図１９Ｃ】定量ＰＣＲが、Ｍ１の遺伝子発現（ｍＲＮＡ）が減少し、Ｍ２の発現がほとんど変化しないことを確認することを示す。ｍＲＮＡ転写物の変化倍数は、ベースライン（前損傷）レベルと比較して計算されている。ｘ軸上の数１〜５は、以下：１＝誘導、２＝初期の発達、３＝末期の発達、４＝成熟、および５＝セネッセンスといった、時間経過に伴う変化を表す。Ｍ２に特異的なマーカーは、この図面で評価されている。
【図１９Ｄ】硝子体内ビンダリット投与後の、網膜下腔におけるＭＣＰ−１タンパク質発現の用量依存的な低減を定性的に示す落射蛍光ＩＨＣを示す。ＭＣＰ−１（赤色）およびＣＤ１６３（緑色）；青色の核。もともとの倍率は１０×である。上部の左のパネルは生理食塩水（陰性対照）であり；上部の右のパネルは低用量のビンダリット（１ｍｇ／ｋｇ）であり；下側の左のパネルは高用量のビンダリット（１０ｍｇ／ｋｇ）であり；下側の右のパネルは正常である（毒素なし）。
【図１９Ｅ】落射蛍光ＩＨＣが、硝子体内ビンダリット後の網膜下腔におけるＴＮＦ−αおよびＣＤ６８タンパク質の発現の用量依存的な低減を定性的に示すことを示す。ＴＮＦ−αおよびＣＤ６８（緑色）；核は青色である。もともとの倍率は１０×である。上部の左のパネルは生理食塩水（陰性対照）であり；上部の右のパネルは低用量のビンダリット（１ｍｇ／ｋｇ）であり；下側の左のパネルは高用量のビンダリット（１０ｍｇ／ｋｇ）であり；下側の右のパネルは正常（毒素なし）である。
【図１９Ｆ】硝子体内のビンダリットがＭ１に関連するｍＲＮＡの転写を低減することを示す。ベースラインと比較して、ＲＰＥ損傷の誘導および初期の発達は、Ｍ１サイトカインの発現に非常に関連しており、このことは、末期の発達および成熟の間では次第に失われていく。対照的に、Ｍ２のｍＲＮＡは疾患の後期に上昇し、Ｍ１のレベルは減少する。「１」の変化は、ベースラインから変化していないことを表し、生物学的に有意な変化は、場合により、変化倍数が２または３を超える場合に存在するといわれてもよい。同様の観察が、Ｍ１およびＭ２に関連する転写因子に関してなされている。Ｍ１転写物は疾患の間、優性であり、Ｍ２の変化はほとんどない。左のパネル（サイトカインｍＲＮＡ）では、各時点で、Ｍ１試料は左のバーであり、Ｍ２の試料は右のバーである。右のパネル（転写因子のｍＲＮＡ）では、各時点でＭ１試料は右のバーであり、Ｍ２の試料は左のバーである。
【図１９Ｇ】Ｍ１対Ｍ２遺伝子発現の変化の概略図である。毒素誘導型損傷の後、遺伝子発現はＭ１に向けて変化し、ビンダリット（ＴＭｉ−０１８）の存在下で遺伝子発現は、中立に戻る（すなわちＭ２に向かう）。ＲＰＥ６５遺伝子の転写物は、観察された細胞の喪失と一致する疾患の間に有意に減少する。比較すると、ビンダリットはこの喪失を低減する。
【図１９Ｈ】ビンダリット（ＴＭｉ−０１８）が、タンパク質レベルで、毒素誘導型のＲＰＥ損傷の非存在下でのＭ２応答を有意に低減しないことを示す。蛍光免疫組織化学的検査は、高用量の硝子体内のビンダリットにもかかわらず、鍵となる標的のＭＣＰ−１のタンパク質のレベルが、生理食塩水で処置した眼と薬剤で処置した眼との間でほとんど変化しないことを示す。これらのデータは、ビンダリットが、ＭＣＰ−１発現のベースラインまたは「正常な」レベルを特異的に調節し、かつ「炎症に関連する」転写を特異的に低減するように作用し得ることを示す。このような特異的な活性は、ＭＣＰ遺伝子複合体の５’アップストリームのプロモーターおよびエンハンサーの活性を特異的に使用するビンダリットの作用と一致する。
【図２０Ａ−Ｃ】ビンダリットが、（パッチの予防とは反対の）パッチの拡大を低減することを示す。ＧＡ形成を防止することに加え、ビンダリットが、これらＲＰＥおよび網膜外部の喪失のパッチの増殖を低減することにより、既存のＧＡを治療することを示す。このような治療の目的は、患者が中心視野で観察する「失明スポット」の大きさを減少させることである。
【図２０Ａ】既存のパッチの陰性対照（生理食塩水）での治療を示し、このパッチは拡大する。
【図２０Ｂ】既存のパッチのビンダリットでの治療を示し、このパッチは拡大しない。
【図２０Ｃ】パッチの拡大に関するデータをまとめる（この文脈での「成功」はパッチの拡大である）。ヒットは、毒素での試験である。このデータは、実験モデルが、毒素および生理食塩水ではパッチの拡大を引き起こし得るが、このような拡大はビンダリット（「ＴＭｉ」）で防止されることを示す。「ＩＶＴ」は硝子体内である。
【図２１】パネルＡおよびＢにおいて、ｈＴＥＲＴ、不死化（テロメラーゼ欠損）のヒトＲＰＥ細胞株が、ＲＰＥ分化のマーカーを発現することが確認されていることを示す。パネルＣでは、ＴＭｉ−０１８が、ＮＦｋｂの発現、核へのＮＦｋｂの転位を低減し、ｈＴＥＲＴにおけるＭＣＰ−１を低減することが示されている。パネルＤは、Ｔｍｉ−０１８が、ｉｎ  ｖｉｖｏでの毒素の試験に対するＲＰＥの生存を直接増加させることを示す。
【図２２】パネルＡで、補体カスケードの成分のｍＲＮＡ種が、毒素誘導型ＲＰＥ損傷の後に変化し、パネルＢで、ビンダリットが、補体のｍＲＮＡ発現を変化させることを示す。各セットの組織学検査では、以下の遺伝子を評価する（左から右）：Ｃ１ｑｂ、Ｃ１ｑｔｎｆ５、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４ｂ、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８ａ、Ｃ９、Ｃｆｂ、Ｃｆｄ、Ｃｆｈ、およびＣｆｉ。２未満の変化倍数は有意ではないと考えられる。タンパク質のレベルは解析しなかった。
【図２３】「非滲出型」ＡＭＤ患者のＩＣＧ血管造影を示す。左のパネルは、非滲出型ＡＭＤ患者の初期（移行期）ＩＣＧ血管造影を示し、脈絡膜の正常で大きな血管（網膜外部（深い）多くの血管床）を同定することを示す。中央のパネルは、同一の患者の中期のＩＣＧ血管造影であり、根底にある蛍光をわずかに阻害する小さな中心領域を同定することを示す。これらは、カラー写真で見られる異常な色素沈着の領域に対応する（データ不図示）。右のパネルは末期の血管造影を示し、血管から組織へＩＣＧが漏出する際の脈絡膜組織のぼやけて広がったフラッシュを表す。中心視野の上に重なる阻害以外（ほとんど検出されない）には、ほとんど異常は観察されない。
【図２４】図２３とは対照的に、さらなる注射を行わないＩＣＧ色素の全身注射から２日後に採取した同一の非滲出型ＡＭＤ患者のＤＮＩＲＡを示す。左のパネルでは、図２３の患者のベースラインのＤＮＩＲＡの画像は、ＩＣＧ注射前ではあるが、所定のＩＣＧ励起／発光フィルターでわずかなシグナルを示す。右のパネルは、同一の患者からの２日目のＤＮＩＲＡ画像を示し、中心黄斑の顕著な低蛍光の領域を同定する。画像は、所定のｅｘ／ｅｍフィルターを用いて得られるが、色素をさらに注射せずに得る。（数日早いベースラインのため）。さらに、ヒョウ柄様のまたはレース状のパターンが、最近のいずれかのイメージング技術により同定されていない周辺の黄斑で観察される。
【図２５】ＦＡＦおよび近赤外線（ＩＲ）と比較したＤＮＩＲＡ画像を示す。左のパネルでは、非滲出型ＡＭＤの患者の眼底の近赤外線イメージングが、わずかに過蛍光および低蛍光の領域を示す。明るい領域は、仮定の結晶性沈着物（臨床試験により観察される）の存在を反映する。中央のパネルは、同一の患者の眼底自発蛍光のイメージングを示し、かつ上にある血管により阻害され黄斑全体の正常なすりガラス状の外観を示し、視神経が存在しておらず（画像のかなり右側）、中心に向けて徐々に減少することを示す。右のパネルは、同一の患者のＤＮＩＲＡ画像を示し、かつＦＡＦおよびＩＲ画像と顕著に対照をなしている。当然、明確な低蛍光（暗色）の領域は、中心に認められる。より小さなパッチは、視神経乳頭に近接して、中央の病変の境界に認められる。
【図２６】複合的なＤＮＩＲＡ画像が、中央および周辺の黄斑の新規の変化を同定することを示す。同一の患者の複合的な画像は、他のイメージング方法では見られず、従来記載されていない過蛍光および低蛍光が交互のＤＮＩＲＡの網状またはヒョウ柄様のパターンを示す（上部パネル）。
【図２７】経時的な同一の患者の反復するイメージングを示し、ＤＮＩＲＡパターンも変化することを示し、これによりＤＮＩＲＡが疾患の進行の新規のマーカーであることが示される。左のパネルは、０時間での非滲出型ＡＭＤ患者のＤＮＩＲＡ画像を示し、低蛍光（および過蛍光）の領域を示す。右のパネルは、６か月後の同一の患者の反復したＤＮＩＲＡイメージングを示し、低蛍光ＤＮＩＲＡシグナルの領域が拡大したことを示す。
【図２８】非滲出型ＡＭＤ患者のＤＮＩＲＡ画像が、過蛍光の別々の明るい点状のスポットを同定することを示す。過蛍光ＤＮＩＲＡの別々のドットは、ＡＭＤ患者の黄斑全体に散乱して同定されている。一部は視神経乳頭に近位であり、その他は、地図状萎縮領域のすぐ近くにあり、両方が境界およびいわゆる接合領域にある。右のパネルは、左のパネルの一部の拡大図である。
【図２９】ヒトのＲＰＤ患者のＤＮＩＲＡイメージングを示す。上の列の画像は近赤外線のイメージングを示し、ＲＰＤを特徴づける上部の「リボンおよびドット」を伴う中央に超反射の図面を示す。中央の列の画像はＦＡＦを示し、右の眼により多く低ＦＡＦの領域を伴う正常な中心窩の低蛍光を示す（左の画像、中央の画像）。上部のＲＰＤは、リボンおよびドットの構成を伴う交互に起きる過／低ＦＡＦとして認められる。下の列の画像は、ＤＮＩＲＡのイメージングを示し、他のいずれかの方法（ここで示される他の方法を含む）では見られない低ＦＡＦの複数の領域を示す。これらの領域は、黄斑にわたり分布している。ヒョウ柄様またはレース状のパターンは、黄斑周辺で再度みられる。
【図３０】ヒトのＲＰＤ患者における低蛍光および過蛍光シグナルの勾配を示す。別のＲＰＤ患者のＤＮＩＲＡイメージングが示されている。下部の矢印は、中央の黄斑のすぐ上に別々の低蛍光（黒色）ＤＮＩＲＡシグナルの領域を示す。この上に、ＤＮＩＲＡを使用して見られた過蛍光ドットの集積の増加が存在する。
【図３１】ウサギの眼における過蛍光ＦＡＦシグナルと過蛍光ＤＮＩＲＡシグナルとの間の対応性を示す。左の画像は、毒素注射後のウサギの眼底のＦＡＦである。小さな過蛍光のドットは、青色で観察される。ＤＮＩＲＡを使用することにより、これらおよび多くのより明るいドットが現れる（中央の画像）。青色でのｅｘ  ｖｉｖｏでの自己蛍光の蛍光顕微鏡は、ＦＡＦで見られる過蛍光のドットに対応する網膜下腔に核形成細胞を同定する。ＮＩＲ顕微鏡は利用可能ではない。免疫組織化学的検査は、これら細胞のマクロファージとしての同定を確認する（ラットではあらかじめ認められている、右のパネル）。
【図３２】経時的に位置を変化させる過蛍光ＤＮＩＲＡドット、すなわち仮定のマクロファージを示す。上の列の画像は、ラットにおける全身性毒素注射の後のＤＮＩＲＡイメージングを示し、視神経乳頭を囲む点状の過蛍光ドットを示す。経時的に、これらのドットは外側に向かうように移動するように見える。下の列は、マクロファージのマーカーに陽性である免疫組織化学染色により個々に標識したドットの同様の明らかな移動を伴う、ラビットの眼におけるＤＮＩＲＡのイメージングを示す。両方の列では、最も左側の画像はベースラインのＤＮＩＲＡである（すなわち所定のＩＣＧフィルターを用いた前ＩＣＧ注射）。
【図３３】ラット（上）、ウサギ（中央）、およびヒト（下）の画像における視神経乳頭に近接して明るく標識した小さなＤＮＩＲＡ陽性のドットが観察されることを示す。ラット、ウサギ、およびヒトの視神経乳頭の比較は、点状の過蛍光のドットの集積を示す。倍率の変化は、眼の大きさの差を反映しており、同一の臨床的なｃＳＬＯシステムを使用して撮影された。これらのデータは、最初に、理論による限定を望むものではないが、マクロファージが、ヒトを含む複数の種にわたる生存する眼で評価できることを示唆している。さらにこれらは、理論による限定を望むものではないが、ＤＮＩＲＡによりみられる過蛍光ドットを有する患者が、望ましくないマクロファージ活性に対する治療から利益を得ることができることを示唆するものである。
【図３４】ビンダリットが、糖尿病性網膜症に関与すると知られている炎症性介在物質を低減することを示す。ｍＲＮＡの変化倍数を、以下の条件：１．硝子体内生理食塩水（ビヒクル）、２．高用量のビンダリット、２μｇ／μｌ（毒素なし）、３．毒素＋低用量２μｇ／μｌのビンダリット、４．毒素＋高用量２０μｇ／μｌのビンダリット＋ＮａＩＯ３、および５．毒素単独の下で、ベースライン（正常）の条件と比較した。
【図３５】ビンダリットが炎症性インターロイキンＩＬ−１ｂおよびＩＬ−６を有意にダウンレギュレートし、色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）に及ぼす小さな陰性の調製効果を有することを示す。ｍＲＮＡの変化倍数を、以下の条件：１．硝子体内生理食塩水（ビヒクル）、２．高用量のビンダリット、２μｇ／μｌ（毒素なし）、３．毒素＋低用量２μｇ／μｌのビンダリット、４．毒素＋高用量２０μｇ／μｌのビンダリット＋ＮａＩＯ３、および５．毒素単独の下で、ベースライン（正常）の条件と比較した。
【図３６】ビンダリットが、この文脈では、他のインターロイキンＩＬ―１０およびＩＬ−３、または腫瘍壊死因子α（ＴＮＦａ）およびｃｃｌ５（ＭＣＰ−３）に及ぼす有意な効果を有さないことを示す。ｍＲＮＡの変化倍数を、以下の条件：１．硝子体内生理食塩水（ビヒクル）、２．高用量のビンダリット、２μｇ／μｌ（毒素なし）、３．毒素＋低用量２μｇ／μｌのビンダリット、４．毒素＋高用量２０μｇ／μｌのビンダリット＋ＮａＩＯ３、および５．毒素単独の下で、ベースライン（正常）の条件と比較した。
【図３７】ビンダリットが、血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦ−Ａ）のｍＲＮＡに及ぼす有意な効果を有さなかったことを示す。ｍＲＮＡの変化倍数を、以下の条件：１．硝子体内生理食塩水（ビヒクル）、２．高用量のビンダリット、２μｇ／μｌ（毒素なし）、３．毒素＋低用量２μｇ／μｌのビンダリット、４．毒素＋高用量２０μｇ／μｌのビンダリット＋ＮａＩＯ３、および５．毒素単独の下で、ベースライン（正常）の条件と比較した。ＶＥＧＦ−Ａは評価しなかった（データ不図示）。
【図３８】不死化したヒトのＲＰＥ細胞株において、ビンダリットが核へのＮＦｋｂの転位を低減することを示す。
【図３９】ビンダリットが、高グルコースでインキュベートしたｈＴＥＲＴ細胞における細胞ストレスを正常にすることを示す。細胞のみ：培地のみ（１７．５ｍＭのＤ−グルコースを含む）；中度〜高度のＤ−グルコース：３０ｍＭのＤ−グルコース（培地中１７．５ｍＭのＤ−グルコース＋１２．５ＭのＤ−グルコースの補充）；高度のＤ−グルコース：５０ｍＭのＤ−グルコース（培地中１７．５ｍＭのＤ−グルコース＋３２．５ｍＭのＤ―グルコースの補充）；Ｌ−グルコース対照：５０ｍＭのグルコース（Ｄ＋Ｌ）（培地中１７．５ｍＭのＤ−グルコース＋３２．５ｍＭのＬ−グルコースの補充）；中度〜高度のＤ−グルコース  ｗ  ＴＭｉ−０１８：１５０ｍＭのＴｍｉ−０１８を含む３０ｍＭのＤ−グルコース；高度のＤ−グルコース  ｗ  Ｔｍｉ−０１８：１５０ｍＭのＴｍｉ−０１８を含む５０ｍＭのＤ−グルコース；およびＴｍｉ−０１８のみ：１５０ｍＭのＴｍｉ−０１８
【図４０】ＦＡＦで評価されているように本明細書中に参照されているＲＰＥ毒素モデルの変化の段階を示す。具体的には、ＮａＩＯ３注射後のラットの眼のＦＡＦ画像の時間経過および段階の典型的な画像が示されている。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明は、部分的に、ビンダリットが、たとえば網膜色素上皮（ＲＰＥ）を保護することを含む、非滲出型ＡＭＤおよびＲＰＤなどの眼障害に有効な薬剤となる、免疫調節作用、特にＭ１／Ｍ２マクロファージの分極化に関する免疫調節作用を有するという驚くべき知見に関する。
【００１５】
よって、一態様では、本発明は、眼障害を治療または予防する方法であって、眼障害の治療に有効な薬剤の有効量を、その必要がある対象に投与することを含み、このような薬剤が免疫調節剤である、方法を提供する。一部の実施形態では、免疫調節剤は、マクロファージを標的とする。一部の実施形態では、免疫調節剤は、Ｍ１／Ｍ２の分極化を調節する。一部の実施形態では、免疫調節剤は、対象のＭ１マクロファージの活性および／もしくはＭ１遺伝子もしくはタンパク質の発現を調節（たとえば低減）し、かつ／または対象のＭ２マクロファージの活性、および／もしくはＭ２遺伝子もしくはタンパク質の発現を調節（たとえば増大もしくは維持）する。一部の態様では、本発明は、眼障害を治療または予防する方法であって、眼障害の治療に有効な薬剤の有効量を、その必要がある対象に投与することを含み、上記対象が、ＣＤ６４、ＩＤＯ、ＳＯＣＳ１、ＣＸＣＬ１０ Ｍａｒｃｏ、Ｎｏｓ２、Ｉｌ１２ｂ、Ｐｔｇｓ２（Ｃｏｘ２）、Ｉｌ２３α（Ｉｌ２３ｐ１９）、Ｉｄｏ１、Ａｄｉｐｏｑ、Ｃｃｌ２０、ＩＬ１７（サブタイプ  ａ）Ｃｃｌ５、ＣＤ１６３、Ｃｘ３Ｃｒ１、Ｆａｓｌｇ、Ｇｆａｐ、Ｃｓｆ２、Ｉｃａｍ１、Ｉｆｎｇ、Ｉｌ１０、Ｉｌ１２ｂ、Ｉｌ１３、Ｉｌ１７、Ｉｌ１８、Ｉｌ１ｂ、Ｉｌ２２、Ｉｌ４、Ｉｌ６、Ｋｌｆ４、Ｍｒｃ１、Ｍｙｄ８８、Ｎｌｒｐ３、Ｐｐａｒγ、Ｔｇｆｂ１、Ｔｌｒ４、Ｔｎｆ、Ｖｃａｍ１、Ｃｃｌ２、Ｃｃｌ５、Ｃｃｌ７、Ｃｃｒ２、Ｓｏｃｓ１、Ｓｏｃｓ３、Ｓｔａｔ１、Ｓｔａｔ３、およびＳｔａｔ６のうちの１つまたは複数の異常な（増加または減少した）発現または活性を有する、方法に関する。
【００１６】
一部の実施形態では、対象は、ＭＲＣ１、ＴＧＭ２、ＣＤ２３、ＣＣＬ２２ Ｒｅｌｍａ（Ｆｉｚｚ１、Ｒｅｔｎｌａ）、Ｓｏｃｓ２、Ｉｒｆ４、Ｃｈｉａ（Ａｍｃａｓｅ）、Ｃｈｉ３ｌ１（Ｇｐ３９、Ｙｋｌ４０）、Ｃｈｉ３ｌ２（Ｙｋｌ３９）、Ｃｈｉ３ｌ３（Ｙｍ１）、Ｃｘｃｌ１３、Ｃｃｌ１２、Ｃｃｌ２４、およびＫｌｆ４のうちの１つまたは複数の調節した（たとえば減少または増加した）発現または活性を有する。
【００１７】
一部の実施形態では、ＴＭｉ−０１８（および、ひいては本発明の有益なマーカー）により軽減した遺伝子の応答は、Ａｄｉｐｏｑ、ＡｐｏＥ、Ｔｉｍｐ３、Ｇｆａｐ、Ｎｌｒｐ３、Ｃｃｌ１１（Ｅｏｔａｘｉｎ１）、Ｃｘ３Ｃｒ１、Ｓｏｃｓ３、Ｓｔａｔ１、Ｃｃｌ２０、Ｉｌ１７ａ、ＲＰＥ６５、Ｃｆｂ、Ｃ１ｑｂ、Ｓｅｒｐｉｎｇ１、Ｃ３、Ｃ４ｂ、ＩＬ−６、Ｍｙｄ８８およびＣ６のうちの１つまたは複数である。
【００１８】
一態様では、本発明は、眼障害を治療または予防する方法であって、ＭＣＰ調節剤の有効量をその必要がある対象に投与することを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、ＭＣＰ調節剤は、ＭＣＰ遺伝子のプロモーター／エンハンサー領域の遠位および／または近位の制御領域を特異的に標的とする。一部の実施形態では、本発明は、眼障害を治療または予防する方法であって、ＭＣＰ−１および／またはＭＣＰ−２および／またはＭＣＰ−３調節剤の有効量を、その必要がある対象に投与することを含む、方法を提供する。
【００１９】
一部の実施形態では、眼障害の治療に有効な薬剤は、（ｉ）眼に（１）上記動物の眼障害の存在を示すために有効な量の蛍光性化合物、および（ｓ）眼組織の萎縮症を誘導するために有効な量の毒素を含む動物に試験化合物の有効量を投与することと、（ｉｉ）上記蛍光性化合物を蛍光させるために有効な波長および輝度を有する光に、上記眼を曝露することと、（ｉｉｉ）上記眼の蛍光パターンを、蛍光性化合物および毒素を含むが、試験化合物を含まない動物の眼の蛍光パターンと比較することと、（ｉｖ）ステップ（ｉｉｉ）の結果が、上記試験化合物が眼障害の治療に有益であることを示す場合、上記試験化合物を候補化合物として選択することといった方法により、同定される。一部の実施形態では、眼障害の治療に有効な薬剤は、免疫調節剤であり、これは任意にマクロファージを標的とする。一部の実施形態では、眼障害の治療に有効な薬剤は、対象のＭ１マクロファージの活性および／もしくはＭ１遺伝子、もしくはタンパク質の発現を調節（たとえば低減）し、かつ／または対象のＭ２マクロファージの活性および／もしくはＭ２遺伝子もしくはタンパク質の発現を調節（たとえば増大）する。一部の実施形態では、眼障害の治療に有効な薬剤は、ＭＣＰ調節剤であり、任意に、ＭＣＰ遺伝子の遺伝子のプロモーター／エンハンサー領域（任意にＭＣＰの近位のプロモーター領域を含む）を標的とする。一部の実施形態では、眼障害の治療に有効な薬剤は、インダゾールのコアを含む小分子である。一部の実施形態では、眼障害の治療に有効な薬剤は、本明細書中に示される式Ｉの化合物であり、限定するものではないが、この化合物はビンダリットである。
【００２０】
一部の実施形態では、眼障害は、非滲出型ＡＭＤ、ＲＰＤ、白点症候群（たとえば匐行性網脈絡膜症、匐行性網膜症、急性後部多発性小板状色素上皮症（ＡＰＭＰＰＥ）、多発一過性白点症候群（ＭＥＷＤＳ）、急性帯状潜在性網膜外層症（ＡＺＯＯＲ）、点状脈絡膜内層症（ＰＩＣ）、びまん性網膜下線維症（ＤＳＦ））、ＬＯＲＤｓ（すなわちＱ１ｑＴＮＦ５機能不全）、および中心性漿液性網膜症（ＣＳＲ）のうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、眼障害は、レシチンレチノールアシルトランスフェラーゼ（Ｌｅｃｉｔｈｉｎ  Ｒｅｔｉｎｏｌ  Ａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）（ＬＲＡＴ）機能不全であり、これは、任意に、ｌｒａｔ関連レーバー先天黒内障、および網膜のジストロフィー、初期の発症、および重篤に関連する。一部の実施形態では、眼障害は、白点状眼底であり、これは、以下の遺伝子の位置：３ｑ２２．１（白点状網膜炎、ＲＨＯ）；６ｐ２１．１（白点状網膜炎、ＰＲＰＨ２）；１２ｑ１３．２（白点状眼底、ＲＤＨ５）；１５ｑ２６．１（白点状網膜炎、ＲＬＢＰ１）；および１５ｑ２６．１（白点状眼底、ＲＬＢＰ１）のうちの１つまたは複数に関連し得る。
【００２１】
一部の実施形態では、対象は、糖尿病性眼疾患（たとえば糖尿病性網膜症およびＤＭＥ）、フォークト・小柳・原田病（ＶＫＨ）；サルコイドブドウ膜炎；眼ヒストプラスマ症および／または推定眼ヒストプラスマ症候群；突発性ブドウ膜炎、自己免疫性ブドウ膜炎；全身性疾患、たとえばループス、クローン病、関節リウマチ、および他の既知の免疫起源の疾患に関連したブドウ膜炎；後部ぶどう膜炎（Ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｕｖｉｅｉｔｓ）（まだ診断され得ないものを含む）；前部ブドウ膜炎（たとえば虹彩炎）；ベーチェット病；結節性多発動脈炎；ならびにウェゲナー肉芽腫症のうちの１つまたは複数である。
【００２２】
一部の実施形態では、対象は、抗Ｄ因子抗体（たとえばランパリズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ））、抗βアミロイド（抗Ａβ）抗体（たとえばＧＳＫ９３３７７６（ＧＳＫ））、コルチコステロイド（たとえばフルオシノロンアセトニド）、ＭＣ−１１０１（ＭａｃｕＣＬＥＡＲ）、ＣＤ３４＋幹細胞療法、抗ＶＥＧＦ抗体（たとえばラニビズマブ）、ブリモニジン（アルファガン）、抗補体Ｃ５抗体（たとえばＬＦＧ３１６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ドキシサイクリン（ＯＲＡＣＥＡ）、エミクススタト塩酸塩、シロリムス（ＲＡＰＡＭＵＮＥ）、およびグラチラマー酢酸塩（ＣＯＰＡＸＯＮＥ）のうちの１つまたは複数での治療を受けておらず、かつ／またはこれらの１つまたは複数から利益を得ておらず、かつ／またはこれらの１つまたは複数に非応答性である。一部の実施形態では、対象は、直径約１２５μｍ超の少なくとも１つのドルーゼンの存在により確認されたＡＭＤのエビデンスを有する。一部の実施形態では、対象は、以前のまたは同時に発生する活動性の脈絡膜新生血管（ＣＮＶ）のエビデンスを有し得る、または有し得ない。一部の実施形態では、対象は、１つまたは複数の眼に総面積約２〜約２０ｍｍ２の１つまたは複数の良好に画定されたＧＡ病変、および／または０．５〜１０個のディスク状の領域（たとえば０．５〜７、または約０．５または約１、または約２、または約３、または約４、または約５、または約６、または約７、または約８、または約９、または約１０個のディスク領域）を有する。一部の実施形態では、対象は、約３５文字超の最高矯正視力スコアを有し、または約２０／２００以上に相当するスネレン視力を有する。一部の実施形態では、対象は、多数の小さなドルーゼンまたは数個の中程度の大きさのドルーゼンにより証明された初期の非滲出型黄斑変性を有する。一部の実施形態では、対象は、多数の中程度の大きさのドルーゼン、または１つもしくは複数の大きなドルーゼンにより証明された初期の非滲出型の黄斑変性を有する。一部の実施形態では、対象は、数個の大きなドルーゼンおよび／または黄斑の細胞の広範囲の崩壊により証明された初期の非滲出型黄斑変性を有する。一部の実施形態では、対象は、大きなドルーゼンおよび色素の変化により証明された初期の非滲出型黄斑変性を有する。
【００２３】
一部の実施形態では、本方法は、追加的な治療剤を投与することをさらに含む。追加的な治療剤は、様々な実施形態では、抗Ｄ因子抗体（たとえばランパリズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ））、抗βアミロイド（抗Ａβ）抗体（たとえばＧＳＫ９３３７７６（ＧＳＫ））、コルチコステロイド（たとえばフルオシノロンアセトニド）、ＭＣ−１１０１（ＭａｃｕＣＬＥＡＲ）、ＣＤ３４＋幹細胞療法、抗ＶＥＧＦ抗体（たとえばラニビズマブ）、ブリモニジン（アルファガン）、抗補体Ｃ５抗体（たとえばＬＦＧ３１６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ドキシサイクリン（ＯＲＡＣＥＡ）、エミクススタト塩酸塩、シロリムス（ＲＡＰＡＭＵＮＥ）、およびグラチラマー酢酸塩（ＣＯＰＡＸＯＮＥ）であり得る。また追加的な治療剤は、様々な実施形態で、抗血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）剤、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、ペルオキシソーム増殖剤−活性化受容体（ＰＰＡＲ）−ガンマアゴニスト、レニン阻害剤、ステロイド、およびオートファジーを調節する薬剤であり得る。一部の実施形態では、追加的な治療剤は、補体のカスケードの調節物質（たとえば補体Ｃ３、Ｃ５、補体Ｄ因子、または補体Ｂ因子の調節物質）である。
【００２４】
一部の実施形態では、追加的な治療剤は、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤（ＮＲＴＩ）であり、非限定的な例として、ジドブジン、ジダノシン、ザルシタビン、スタブジン、ラミブジン、アバカビル、エムトリシタビン、およびエンテカビルがある。一部の実施形態では、追加的な治療剤は、アシクロビルである。
【００２５】
一態様では、本発明は、眼障害の治療に有効な薬剤を作成する方法であって、（ａ）（ｉ）眼に（１）上記動物の眼障害の存在を示すために有効な量の蛍光性化合物と、（２）眼組織の萎縮症を誘導するために有効な量の毒素とを含む動物に、試験化合物の有効量を投与することと、（ｉｉ）上記蛍光性化合物を蛍光させるために有効な波長および輝度を有する光に上記眼を曝露させることと、（ｉｉｉ）上記眼の蛍光パターンを、上記蛍光性化合物および毒素を含むが、上記試験化合物を含まない動物の眼の蛍光パターンと比較することと、（ｉｖ）ステップ（ｉｉｉ）の比較の結果が眼障害の治療に有用であることを示す場合、上記試験化合物を候補化合物として選択することとにより、上記薬剤を同定することと、（ｂ）上記眼へ投与するための上記同定した薬剤を製剤化することとを含む、方法を提供する。一部の態様では、眼障害を治療または予防する方法であって、上述の方法で使用する際に作製される、眼障害の治療に有効な薬剤のいずれか１つの薬剤の有効量と、薬学的に許容可能な担体または賦形剤とを含む医薬組成物を、その必要がある対象に投与することを含む、方法を提供する。
【００２６】
一部の実施形態では、眼障害の治療に有効な薬剤は免疫調節剤であり、任意にマクロファージを標的とする。一部の実施形態では、眼障害の治療に有効な薬剤は、対象のＭ１マクロファージの活性および／もしくはＭ１遺伝子およびタンパク質の発現を調節（たとえば低減）し、かつ／または対象のＭ２マクロファージの活性および／もしくはＭ２遺伝子およびタンパク質の発現を調節（たとえば増大）する。
【００２７】
一部の実施形態では、眼障害の治療に有効な薬剤は、ＭＣＰ調節剤であり、任意に、ＭＣＰ遺伝子のプロモーター／エンハンサー領域の遠位および／または近位の制御領域を標的とする。
【００２８】
一部の実施形態では、眼障害の治療に有効な薬剤は、インダゾールのコアを有する小分子である。一部の実施形態では、眼障害の治療に有効な薬剤は、式Ｉ
【化１】
0006625064.tif 000002
の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩であって、
式中、各Ｒ１およびＲ２が、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、かつＲ３がＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルである、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩である。一部の実施形態では、眼障害の治療に有効な薬剤は、構造
【化２】
0006625064.tif 000003
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩である。
【００２９】
様々な態様では、本方法は、対象の集合を選択するために使用することができる。たとえば本方法は、薬剤がビンダリットを含む式Ｉの化合物であり、眼障害が、非滲出型ＡＭＤまたはＲＰＤであり、対象が、抗Ｄ因子抗体（たとえばランパリズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ））、抗βアミロイド（抗Ａβ）抗体（たとえばＧＳＫ９３３７７６（ＧＳＫ））、コルチコステロイド（たとえばフルオシノロンアセトニド）、ＭＣ−１１０１（ＭａｃｕＣＬＥＡＲ）、ＣＤ３４＋幹細胞療法、抗ＶＥＧＦ抗体（たとえばラニビズマブ）、ブリモニジン（アルファガン）、抗補体Ｃ５抗体（たとえばＬＦＧ３１６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ドキシサイクリン（ＯＲＡＣＥＡ）、エミクススタト塩酸塩、シロリムス（ＲＡＰＡＭＵＮＥ）、およびグラチラマー酢酸塩（ＣＯＰＡＸＯＮＥ）のうちの１つまたは複数での治療を受けておらず、かつ／またはこれらのうち１つまたは複数に非応答性である実施形態を含む。薬剤がビンダリットであり、眼障害が非滲出型ＡＭＤまたはＲＰＤである実施形態を含む、様々な実施形態では、以下：直径約１２５μｍ超の少なくとも１つのドルーゼン、以前のまたは活動性の脈絡膜新生血管（ＣＮＶ）のエビデンスがないこと、１つまたは複数の眼に総面積約２〜２０ｍｍ２の１つまたは複数の良好に画定されたＧＡ病変、約３５文字超の最高矯正視力スコア、２０／２００以上に相当するスネレン視力、および約７．０未満の黄斑の光凝固試験のディスク状の領域、ならびに約１未満から最大１０超のディスク領域（たとえば約１、または約２、または約３、または約４、または約５、または約６、または約７、または約８、または約８、または約９、または約１０個のディスク状の領域）のうちの１つまたは複数を有することにより、対象が分類されている。様々な実施形態では、対象は、少なくとも１つの大きなドルーゼン、またはＲＰＤ、および１つまたは複数の眼に、総面積約２ｍｍ２〜約２０ｍｍ２のＤＮＩＲＡにより同定された低蛍光（影状または黒色の）領域、または１つまたは複数の眼における低蛍光のＤＮＩＲＡシグナルの１未満のディスク状の領域または最大１０個超のディスク状の領域（たとえば約１、または約２、または約３、または約４、または約５、または約６、または約７、または約８、または約８、または約９、または約１０個のディスク状領域）のうちの１つまたは複数を有するとして、分類されている。
【００３０】
一態様では、本発明は、眼障害を治療または予防する方法であって、本明細書中に記載の式Ｉの化合物の有効量を、その必要がある対象に投与することを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、本化合物はビンダリットである。一部の実施形態では、眼障害は、非滲出型ＡＭＤ、ＲＰＤ、白点症候群（たとえば匐行性網脈絡膜症、匐行性網膜症、急性後部多発性小板状色素上皮症（ＡＰＭＰＰＥ）、多発一過性白点症候群（ＭＥＷＤＳ）、急性帯状潜在性網膜外層症（ＡＺＯＯＲ）、点状脈絡膜内層症（ＰＩＣ）、びまん性網膜下線維症（ＤＳＦ））、ＬＯＲＤｓ、および中心性漿液性網膜症（ＣＳＲ）のうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、眼障害は、糖尿病性眼疾患（たとえば糖尿病性網膜症およびＤＭＥ）、フォークト・小柳・原田病（ＶＫＨ）；サルコイドブドウ膜炎；眼ヒストプラスマ症および／または推定眼ヒストプラスマ症候群；自己免疫性ブドウ膜炎；全身性疾患、たとえばループス、クローン病、関節リウマチ、および他の既知の免疫起源の疾患に関連したブドウ膜炎；後部ぶどう膜炎（Ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｕｖｉｅｉｔｓ）（まだ診断され得ないものを含む）；前部ブドウ膜炎（たとえば虹彩炎）；ベーチェット病；結節性多発動脈炎；ならびにウェゲナー肉芽腫症のうちの１つまたは複数である。一実施形態では、式Ｉの化合物はビンダリットである。一部の実施形態では、本発明は、眼障害を治療または予防する方法であって、ビンダリットまたはその薬学的に許容可能な塩の有効量を、その必要がある対象に投与することを含み、眼障害が、糖尿病性眼疾患（たとえば糖尿病性網膜症およびＤＭＥ）、フォークト・小柳・原田病（ＶＫＨ）；サルコイドブドウ膜炎；眼ヒストプラスマ症および／または推定眼ヒストプラスマ症候群；自己免疫性ブドウ膜炎；全身性疾患、たとえばループス、クローン病、関節リウマチ、および他の既知の免疫起源の疾患に関連したブドウ膜炎；後部ぶどう膜炎（Ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｕｖｉｅｉｔｓ）（まだ診断され得ないものを含む）；前部ブドウ膜炎（たとえば虹彩炎）；ベーチェット病；結節性多発動脈炎；ならびにウェゲナー肉芽腫症から選択される、方法を提供する。
【００３１】
さらなる態様では、本発明は、眼障害を治療または予防する方法であって、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩の有効量を、その必要がある対象に投与することを含み、眼障害が、糖尿病性眼疾患（たとえば糖尿病性網膜症およびＤＭＥ）、フォークト・小柳・原田病（ＶＫＨ）；サルコイドブドウ膜炎；眼ヒストプラスマ症および／または推定眼ヒストプラスマ症候群；自己免疫性ブドウ膜炎；全身性疾患、たとえばループス、クローン病、関節リウマチ、および他の既知の免疫起源の疾患に関連したブドウ膜炎；後部ぶどう膜炎（Ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｕｖｉｅｉｔｓ）（まだ診断され得ないものを含む）；前部ブドウ膜炎（たとえば虹彩炎）；ベーチェット病；結節性多発動脈炎；ならびにウェゲナー肉芽腫症から選択される、方法を提供する。
【００３２】
一部の実施形態では、患者は１型または２型の糖尿病を有する。様々な実施形態では、患者は、正常値（食事前に約７０〜１３０ミリグラム／デシリットル、すなわちｍｇ／ｄｌ、および食事から１〜２時間後に１８０ｍｇ／ｄｌ未満）を超える血中グルコースレベルを有する。
【００３３】
他の実施形態では、本発明は、白内障または緑内障の治療または予防であって、式Ｉの化合物、メトトレキサートまたはその薬学的に許容可能な塩を、その必要がある対象に投与することを含み、式中、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３が、上記に定義される通りである、治療または予防に関する。一実施形態では、式Ｉの化合物はビンダリットである。
【００３４】
一部の実施形態では、本方法は、追加的な治療剤を投与することをさらに含む。様々な実施形態では、追加的な治療剤は、１つまたは複数の血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）である。
【００３５】
一態様では、本発明は、ある薬剤が、糖尿病性眼疾患（非限定的な例として、糖尿病性網膜症およびＤＭＥ）を含む眼障害の治療に有効であるかどうかを同定する方法であって、（ａ）眼に動物の（ｉ）糖尿病性眼疾患（非限定的な例として、糖尿病性網膜症およびＤＭＥ）を含む眼障害の存在を示すために有効な量の蛍光性化合物と、（ｉｉ）眼組織の萎縮症を誘導するために有効な量の毒素とを含む動物に、試験化合物の有効量を投与することと、（ｂ）上記蛍光性化合物を蛍光させるために有効な波長および輝度を有する光に上記眼を曝露させることと、（ｃ）上記眼の蛍光パターンを、上記蛍光性化合物および上記毒素を含むが、試験化合物を含まない動物の眼の蛍光パターンと比較することと、（ｄ）、ステップ（ｃ）の比較の結果が、眼障害の治療に有用である場合、上記試験化合物を候補化合物として選択することとを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、本方法は、眼への送達のための候補化合物を製剤化することにより、眼障害の治療に有効な薬剤を作製するステップをさらに提供する。
【００３６】
一部の実施形態では、眼障害は、糖尿病性眼疾患（非限定的な例として、糖尿病性網膜症およびＤＭＥ）、ＡＭＤ、ＲＰＤ疾患、フォークト・小柳・原田病（ＶＫＨ）；サルコイドブドウ膜炎；眼ヒストプラスマ症および／または推定眼ヒストプラスマ症候群；自己免疫性ブドウ膜炎；全身性疾患、たとえばループス、クローン病、関節リウマチ、および他の既知の免疫起源の疾患に関連したブドウ膜炎；後部ぶどう膜炎（Ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｕｖｉｅｉｔｓ）（まだ診断され得ないものを含む）；前部ブドウ膜炎（たとえば虹彩炎）；ベーチェット病；結節性多発動脈炎；ならびにウェゲナー肉芽腫症のうちの１つまたは複数である。
【００３７】
一部の実施形態では、動物は、非限定的な例として、マウス、ラット、ゼブラフィッシュ、イヌ、ネコ、ブタ、ウマ、または非ヒトの哺乳類などの、本明細書中に記載されるいずれかである。
【００３８】
他の実施形態では、蛍光性化合物は、約６００ｎｍ〜約９００ｎｍの波長の光を吸収し、かつ／または約７５０ｎｍ〜約９５０ｎｍの波長の光を発光する。特定の実施形態では、蛍光性化合物はＩＣＧである。さらなる他の実施形態では、蛍光はＲＰＥ細胞で起こる。
【００３９】
一部の実施形態では、毒素はヨウ素酸ナトリウムである。他の実施形態では、萎縮症は、ＲＰＥ細胞のネクローシスを含む。他の実施形態では、ネクローシスはパッチとして呈する。
【００４０】
さらなる他の実施形態では、比較は、試験化合物を投与してから少なくとも約２４時間後、または少なくとも７日後、または少なくとも３０日後、または少なくとも６０日後、または少なくとも９０日後に行われる。
【００４１】
様々な実施形態では、光への眼の曝露は、ｃＳＬＯ、ＦＡＦ、ＤＮＩＲＡ、ＩＲ、またはＯＣＴを行うことを含む、様々な実施形態では、光への眼の曝露は、白色光、青色光、赤色を含まない光、近赤外線、または赤外線を含む。
【００４２】
様々な実施形態では、眼障害の存在は、ＲＰＥの損傷もしくは喪失または網膜外部の喪失のパッチ内のＦＡＦのパターンにより示されている。様々な実施形態では、眼障害の存在は、ＲＰＥの損傷もしくは喪失、または網膜外部の喪失のパッチの中、またはその隣、その近接部、またはそこから離れて存在しており、または存在しない、ＦＡＦのパターンにより示されている。一部の実施形態では、パターンは、曲線、リボン様、網状、長円、円形、貝殻状、暈状、標的様病変のうちの１つまたは複数である。様々な実施形態では、眼障害の存在は、ＲＰＥの損傷もしくは喪失または網膜外部の喪失のパッチの境界のＦＡＦのパターンにより表される。一部の実施形態では、パターンは、曲線、リボン様、網状、長円、円形、貝殻状、暈状、および標的様病変のうちの１つまたは複数である。様々な実施形態では、眼障害の存在は、ＲＰＥの損傷もしくは喪失（いわゆる接合領域）のパッチから離れて、またはＲＰＥの損傷もしくは喪失または網膜外部の喪失のパッチの非存在下で起こるＦＡＦのパターンにより表される。一部の実施形態では、パターンは、曲線、リボン様、網状、長円、円形、貝殻状、暈状、および標的様病変のうちの１つまたは複数である。
【００４３】
様々な他の実施形態では、眼障害の存在は、断面のパターンまたは横断したパターンにより表される。一部の実施形態では、パターンはＯＣＴで観察される。一部の実施形態では、パターンは、ＲＰＥおよび／または網膜外部の喪失、または網膜下腔で見いだされる隆起、三角形、ピーク、もしくはスパイクである。一部の実施形態では、たとえばＬＯＲＤの場合、例示的な症状／診断のパラメータとして、（たとえば拡張した眼底により観察される）後極の中央周辺における網膜色素上皮（ＲＰＥ）萎縮症および広範囲の萎縮症の貝殻状の領域；杆体錐体ジストロフィー（たとえばＥＲＧにより観察される）；内部／外部のセグメントの接合ラインの非存在下での光受容体の広範囲の喪失、ならびに同時の外部核層の菲薄化（たとえばＳＤ−ＯＣＴにより観察される）、脈絡毛細管の喪失を伴い内部脈絡膜に影響を与えることを含む、びまん性脈絡膜の菲薄化が挙げられる。
【００４４】
さらなる他の実施形態では、本方法は、試験化合物を投与する前に眼を観察するステップをさらに含む。一部の実施形態では、この観察は、１つまたは複数の投与前の眼の特徴を確立する。
【００４５】
さらなる別の実施形態では、本明細書中に記載の方法は、試験化合物を投与する前に、蛍光性化合物を投与する。さらなる別の実施形態では、本明細書中に記載の方法は、（ｉ）追加的な量の蛍光性化合物を動物に投与すること、または（ｉｉ）第２の蛍光性化合物を動物に投与することを含むものではない。他の実施形態では、本明細書中に記載の方法は、試験化合物を投与する前に毒素を投与すること、および／または蛍光性化合物を投与する前に毒素を投与することを含む。
【００４６】
さらなる別の実施形態では、本明細書中に記載の方法は、（ｉ）追加的な量の毒素を動物に投与すること、または（ｉｉ）第２の毒素を動物に投与することを含む。さらなる別の実施形態では、本明細書中に記載の方法は、（ｉ）追加的な量の毒素を動物に投与すること、（ｉｉ）第２の毒素を動物に投与すること、または（ｉｉｉ）毒素の作用機構に影響すると考えられる化合物を投与することを含む。一部の実施形態では、本明細書中に記載の方法は、眼組織の萎縮症のパッチまたは組織喪失のパッチの形成、増殖、または拡大の比率の減少を観察することを含む。
【００４７】
一部の実施形態では、候補化合物は、眼障害を治療、予防、または眼障害の発病の比率を低下させるのに有用である。他の実施形態では、複数の候補化合物が同定されている。一部の実施形態では、本明細書中に記載の方法は、眼障害の治療における複数の候補化合物の有用性を比較することと、この比較に基づき優れた化合物を選択することをさらに含む。
【００４８】
一部の実施形態では、本発明は、非滲出型ＡＭＤの予防または治療であって、対象の眼における過蛍光ＦＡＦの領域の存在、および／または対象の眼における異常に蛍光性であるＦＡＦの１つもしくは複数の領域の存在、および／または対象の眼における青色スペクトラムの眼底イメージング、白色光の眼底のイメージング、赤色を含まない眼底のイメージング、およびＯＣＴのうちの１つまたは複数の変化、および／または、非疾患状態と比較した、脈絡膜と網膜との間の対象の上皮性関門を通した透過性の増加（一過性の増加を含む）、および／または、網膜外部の変形、および／または、非疾患状態と比較した、対象の脈絡膜と網膜の間の上皮関門を隔てた網膜中央の脈管構造の変形、および／または、非疾患状態と比較した、対象のＲＰＥを通した食作用免疫細胞の存在により、同定可能であり得る、予防または治療に関する。
【００４９】
一部の実施形態では、非滲出型ＡＭＤは、初期のＡＭＤ、または末期の萎縮性非滲出型ＡＭＤである。
【００５０】
他の実施形態では、対象はヒトである。さらなる他の実施形態では、投与は、経口投与、血管内投与、または眼内投与、または眼球周囲投与、または眼表面への投与により、効果を発揮する。
【００５１】
別の態様では、本発明は、ＲＰＤ疾患を治療する方法であって、各Ｒ１およびＲ２が、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、かつＲ３がＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルである、式Ｉの化合物（本明細書中に記載）またはその薬学的に許容可能な塩の有効量を、その必要がある対象に投与することを含む、方法を提供する。一実施形態では、式Ｉの化合物はビンダリットである。
【００５２】
さらなる別の態様では、本発明は、ＲＰＤ疾患を治療する方法であって、メトトレキサートまたはその薬学的に許容可能な塩の有効量をその必要がある対象に投与することを含む、方法を提供する。
【００５３】
一部の実施形態では、本明細書中に記載の方法は、対象の偽ドルーゼンの量を減少させる、かつ／または対象の眼の中心窩領域、周中心窩領域、近傍中心窩領域、および中心窩外領域のいずれか１つの偽ドルーゼンの量を減少させることを含む。他の実施形態では、本明細書中に記載の方法は、末期の疾患への進行の速度を減少させることを含み、ここでの末期の疾患は、脈絡膜心血管または地図状萎縮のいずれか１つである。一部の実施形態では、本明細書中に記載の方法は、地図状萎縮の拡大速度を減少させることを含む。
【００５４】
一部の実施形態では、本明細書中に記載の方法は、追加的な治療剤を投与することを含む。様々な実施形態では、追加的な治療剤は、抗血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）剤、補体のカスケードの調節物質、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体（ＰＰＡＲ）−ガンマアゴニスト、レニン阻害剤、コルチコステロイド、およびオートファジーを調節する薬剤のうちの１つまたは複数である。
【００５５】
さらなる他の実施形態では、ＲＰＤ疾患は、対象の眼における網膜のイメージングの明確なパターンの１つまたは複数の領域の存在により同定可能であり、ここでの網膜のイメージングは、白色光、赤色を含まない光、青色光、ＦＡＦ、近赤外線（ＮＩＲ）、赤外線（ＩＲ）の血管造影およびＤＮＩＲＡ、ならびに／または対象の眼の異常に蛍光するＦＡＦの１つもしくは複数の領域の存在、ならびに／または、非疾患状態と比較した、脈絡膜と網膜との間の対象の上皮性関門を通した透過性の増加（一過性の増加を含む）、ならびに／または、非疾患状態と比較した対象のＲＰＥを通した食作用免疫細胞の存在のうちの１つまたは複数である。
【００５６】
他の実施形態では、対象はヒトである。さらなる他の実施形態では、投与は、経口投与、血管内投与、または眼内投与、または眼球周囲への投与、または眼の表面への投与により、効果を発揮する。
【００５７】
他の実施形態では、本発明は、１つまたは複数の眼障害の治療または予防に有用な薬物の製造における、式Ｉの化合物、メトトレキサート、またはその薬学的に許容可能な化合物の、単独または追加的な治療剤と併用しての使用を提供する。
【００５８】
さらなる別の態様では、本発明は、眼障害を有し、かつある薬剤での治療に、応答しない可能性が高い対象を同定する方法であって、対象の眼が、非疾患状態と比較して、眼の脈絡膜と網膜との間の上皮性関門を通した透過性の増加を有する、または以前より有していたかどうかを決定することを含み、上記透過性の増加が、上記対象が薬剤との治療により応答しない可能性が高いことを示し、上記薬剤が、メトトレキサートもしくはその薬学的に許容可能な塩、またはおよび式Ｉの化合物（本明細書中に記載）もしくはその薬学的に許容可能な塩であって、式中、各Ｒ１およびＲ２が、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、かつＲ３がＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルである、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩から選択される、方法を提供する。
【００５９】
一実施形態では、式Ｉの化合物はビンダリットである。一部の実施形態では、眼障害は、糖尿病性眼疾患、非滲出型ＡＭＤ、およびＲＰＤ疾患のうちの１つまたは複数である。
【００６０】
他の実施形態では、糖尿病性眼疾患は、糖尿病性網膜症またはＤＭＥである。
【００６１】
さらなる別の実施形態では、本発明は、薬剤での治療に応答しない可能性が高い眼障害の対象を同定する方法であって、対象の眼が、非疾患状態と比較して、ＲＰＥを通して食作用免疫細胞（任意に網膜、ＲＰＥ、脈絡膜、または血流の中に由来）の存在を有するかどうかを決定することを含み、食作用免疫細胞の存在が、対象が、上記薬剤での治療に応答しない可能性が高いことを示し、上記薬剤が、メトトレキサートもしくはその薬学的に許容可能な塩、または／および式Ｉの化合物（本明細書中に記載）もしくはその薬学的に許容可能な塩であって、各Ｒ１およびＲ２が、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、かつＲ３がＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルである、式Ｉの化合物もしくはその薬学的に許容可能な塩から選択される、方法を提供する。
【００６２】
一実施形態では、式Ｉの化合物はビンダリットである。一部の実施形態では、眼障害は、非滲出型ＡＭＤおよびＲＰＤ疾患のうちの１つまたは複数である。他の実施形態では、食作用免疫細胞の存在は、ＤＮＩＲＡにより測定される。
【００６３】
別の態様では、本発明は、対象の眼障害が、対象の免疫細胞の機能を阻害または修飾する薬剤での治療に応答するかどうかを決定する方法であって、前記対象の眼における免疫細胞の存在を検出、不存在を検出、または細胞の量を測定することを含み、上記対象の眼が、約６００ｎｍ〜約９００ｎｍの波長を有する光に応答して蛍光する、方法を提供する。一部の実施形態では、光は、約４００ｎｍ〜約９００ｎｍの波長を有する。
【００６４】
一部の実施形態では、本明細書中に記載の方法は、蛍光性化合物の有効量を対象に投与することをさらに含み、ここでは、蛍光性化合物の投与から少なくとも１日後に、検出または測定が行われる。一部の実施形態では、蛍光性化合物の有効量を対象に投与してから少なくとも１日後に、検出または測定が行われる。
【００６５】
一部の実施形態では、本明細書中に記載の方法は、対象の眼におけるＦＡＦを検出または測定するステップをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書中に記載の方法は、対象の眼における免疫細胞の存在、不存在、または量と、ＦＡＦのパターンを相関させるステップをさらに含む。
【００６６】
他の実施形態では、眼障害は、糖尿病性眼疾患、ＡＭＤ、中心性漿液性網膜症（ＣＳＲ）またはＲＰＤ疾患である。一部の実施形態では、対象はヒトである。
【００６７】
他の実施形態では、糖尿病性眼疾患は、糖尿病性網膜症またはＤＭＥである。
【００６８】
様々な実施形態では、対象の眼は、約７５０ｎｍ〜約９５０ｎｍの波長を有する光を蛍光する。一部の実施形態では、蛍光性化合物はＩＣＧである。
【００６９】
一部の実施形態では、蛍光性化合物の投与から約１日後、または約７日後、または約３０日後に、検出または測定を行う。
【００７０】
一部の実施形態では、本明細書中に記載の方法は、（ａ）追加的な量の蛍光性化合物、または（ｂ）第２の蛍光性化合物を投与することをさらに含むものではない。
【００７１】
他の実施形態では、検出または測定は、ｃＳＬＯ、ＦＡＦ、ＤＮＩＲＡ、またはＯＣＴを行うことを含む。
【００７２】
一部の実施形態では、免疫細胞は、対象の免疫系の細胞および／またはマクロファージおよび／またはミクログリア細胞である。
【００７３】
定義
以下の定義は、本明細書中に開示される本発明に関連して使用されるものである。特段他の定義がない限り、本明細書中で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者に一般的に理解される意味と同一の意味を有する。
【００７４】
試験化合物および／または候補化合物に関連して使用される場合、「有効量」は、たとえば糖尿病性眼疾患（たとえば糖尿病性網膜症およびＤＭＥ）、フォークト・小柳・原田病（ＶＫＨ）；サルコイドブドウ膜炎；眼ヒストプラスマ症および／または推定眼ヒストプラスマ症候群；自己免疫性ブドウ膜炎；全身性疾患、たとえばループス、クローン病、関節リウマチ、および他の既知の免疫起源の疾患に関連したブドウ膜炎；後部ぶどう膜炎（Ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ  ｕｖｉｅｉｔｓ）（まだ診断され得ないものを含む）；前部ブドウ膜炎（たとえば虹彩炎）；ベーチェット病；結節性多発動脈炎；ならびにウェゲナー肉芽腫症、ＡＭＤおよび／またはＲＰＤなどの、眼障害の測定可能な治療、予防、または発病の比率の低下を提供するために有効な量である。
【００７５】
蛍光性化合物と関連して使用される場合の「有効量」は、光学的な検出を可能にする量である。
【００７６】
眼障害の治療に有効な薬剤、式Ｉの化合物、メトトレキサート、またはそれらの薬学的に許容可能な塩に関連して使用される場合、「有効量」は、たとえば、糖尿病性眼疾患（たとえば糖尿病性網膜症およびＤＭＥ）、フォークト・小柳・原田病（ＶＫＨ）；サルコイドブドウ膜炎；眼ヒストプラスマ症および／または推定眼ヒストプラスマ症候群；自己免疫性ブドウ膜炎；全身性疾患、たとえばループス、クローン病、関節リウマチ、および他の既知の免疫起源の疾患に関連したブドウ膜炎；後部ぶどう膜炎（Ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ  ｕｖｉｅｉｔｓ）（まだ診断され得ないものを含む）；前部ブドウ膜炎（たとえば虹彩炎）；ベーチェット病；結節性多発動脈炎；ならびにウェゲナー肉芽腫症、ＡＭＤおよび／またはＲＰＤなどの眼障害を治療または予防するために有効な量である。
【００７７】
別の治療剤に関連して使用される場合、「有効量」は、たとえば糖尿病性眼疾患（たとえば糖尿病性網膜症およびＤＭＥ）、フォークト・小柳・原田病（ＶＫＨ）；サルコイドブドウ膜炎；眼ヒストプラスマ症および／または推定眼ヒストプラスマ症候群；自己免疫性ブドウ膜炎；全身性疾患、たとえばループス、クローン病、関節リウマチ、および他の既知の免疫起源の疾患に関連したブドウ膜炎；後部ぶどう膜炎（Ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ  ｕｖｉｅｉｔｓ）（まだ診断され得ないものを含む）；前部ブドウ膜炎（たとえば虹彩炎）；ベーチェット病；結節性多発動脈炎；ならびにウェゲナー肉芽腫症、ＡＭＤおよび／またはＲＰＤなどの眼障害を、単独または式Ｉの化合物、メトトレキサート、またはそれらの薬学的に許容可能な塩と併用した、治療または予防（たとえば測定可能な治療、予防、または発病の比率の低下を提供する）に有効な量である。「〜と併用して」は、同一の組成物内での投与および別々の組成物を介した投与を含む；後者の例では、薬剤、式Ｉの化合物、メトトレキサート、またはそれらの薬学的に許容可能な塩が、予防効果または治療効果を発揮する時間の間は、他の治療剤は、病態を治療または予防するのに有効であり、逆もまた同様である。
【００７８】
毒素、たとえばヨウ素酸ナトリウムと関連して使用する場合の「有効量」は、本明細書中に記載される測定可能な眼組織の萎縮症を誘導するために有効な量である。
【００７９】
ある薬剤が、測定可能な眼障害の治療、予防、または発病比率の低下を提供する場合、当該薬剤は、「眼障害の治療に有用である」。
【００８０】
用語「眼障害」は、様々な眼疾患のうちの１つを指し、眼および眼球付属器の疾患を含む。用語「眼障害」として、本明細書中に記載される障害（たとえば、非限定的な例として、たとえば糖尿病性眼疾患（たとえば糖尿病性網膜症およびＤＭＥ）、フォークト・小柳・原田病（ＶＫＨ）；サルコイドブドウ膜炎；眼ヒストプラスマ症および／または推定眼ヒストプラスマ症候群；自己免疫性ブドウ膜炎；全身性疾患、たとえばループス、クローン病、関節リウマチ、および他の既知の免疫起源の疾患に関連したブドウ膜炎；後部ぶどう膜炎（Ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｕｖｉｅｉｔｓ）（まだ診断され得ないものを含む）；前部ブドウ膜炎（たとえば虹彩炎）；ベーチェット病；結節性多発動脈炎；ならびにウェゲナー肉芽腫症、滲出型ＡＭＤ、非滲出型ＡＭＤ、ＲＰＤ、白点症候群（たとえば匐行性網脈絡膜症、匐行性網膜症、急性後部多発性小板状色素上皮症（ＡＰＭＰＰＥ）、多発一過性白点症候群（ＭＥＷＤＳ）、急性帯状潜在性網膜外層症（ＡＺＯＯＲ）、点状脈絡膜内層症（ＰＩＣ）、びまん性網膜下線維症（ＤＳＦ））、ＬＯＲＤｓ、および中心性漿液性網膜症（ＣＳＲ）などの眼障害）が挙げられる。
【００８１】
用語「血管新生」は、異常な組織または異常な位置における新規の血管の形成を指す。
【００８２】
用語「ＶＥＧＦ」は、限定するものではないが、透過性を増大させることを含む、血管新生または血管新生の工程を誘導する血管内皮増殖因子を指す。本明細書中で使用されるように、用語「ＶＥＧＦ」は、たとえば、ＶＥＧＦ１２１、ＶＥＧＦ１６５、およびＶＥＧＦ１８９を含むＶＥＧＦ−Ａ／ＶＰＦ遺伝子の代替的なスプライシングにより生じる様々なサブタイプのＶＥＧＦ（血管透過性因子（ＶＰＦ）およびＶＥＧＦ−Ａとしても知られている）を含む。さらに、本明細書中で使用されるように、用語「ＶＥＧＦ」は、ＰＩＧＦ（胎盤増殖因子）、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、およびＶＥＧＦ−ＥなどのＶＥＧＦ関連血管新生因子を含み、これらは、血管新生または血管新生の工程を誘導するように、同族のＶＥＦＧ受容体（すなわちＶＥＧＦＲ）を介して作用する。用語「ＶＥＧＦ」は、ＶＥＧＦＲ−１（Ｆｌｔ−１）、ＶＥＧＦＲ−２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ−１）、またはＶＥＧＦＲ−３（ＦＬＴ−４）などのＶＥＧＦ受容体に結合する増殖因子のクラスのいずれかのメンバーである。用語「ＶＥＧＦ」は、「ＶＥＧＦポリヌクレオチド」または遺伝子もしくは核酸をコードする「ＶＥＧＦ」を指すように使用することができる。
【００８３】
用語「抗ＶＥＧＦ剤」は、ＶＥＧＦの活性または産生を、部分的または完全に低減または阻害する薬剤を指す。抗ＶＥＧＦ剤は、ＶＥＧＦ１６５などの特定のＶＥＧＦの活性または産生を、直接的または間接的に低減または阻害することができる。さらに、「抗ＶＥＧＦ剤」は、ＶＥＧＦ関連受容体シグナルを低減または阻害させるように、ＶＥＧＦリガンドまたはその同族の受容体のいずれかに作用する薬剤を含む。「抗ＶＥＧＦ剤」の非限定的な例として、ＶＥＧＦの核酸を標的とするアンチセンス分子、リボザイム、またはＲＮＡｉ；抗ＶＥＧＦアプタマー、ＶＥＧＦ自体またはその受容体に対する抗ＶＥＧＦ抗体、またはＶＥＧＦをその同族の受容体に結合させないようにする可溶性のＶＥＧＦ受容体のデコイ；同族のＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）の核酸を標的とするアンチセンス分子、リボザイム、またはＲＮＡｉ；同族のＶＥＧＦＲ受容体に結合する抗ＶＥＧＦアプタマーまたは抗ＶＥＧＦＲ抗体；ならびにＶＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤が挙げられる。
【００８４】
用語「抗ＲＡＳ剤」または「抗レニンアンジオテンシン系剤」は、レニンアンジオテンシン系（ＲＡＳ）の分子の活性または産生を、完全または部分的に低減または阻害する薬剤を指す。「抗ＲＡＳ」または「抗レニンアンジオテンシン系」分子の非限定的な例は、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アンギオテンシン受容体遮断薬、およびレニン阻害剤のうちの１つまたは複数である。
【００８５】
用語「ステロイド」は、以下の例示的な化合物の系統群：コルチコステロイド、ミネラリコステロイド（ｍｉｎｅｒａｌｉｃｏｓｔｅｒｏｉｄ）、および性ステロイド（たとえばアンドロゲン性もしくはエストロゲン性、または抗アンドロゲン性（ａｎｄｏｇｅｎｉｃ）および抗エストロゲン性の分子を含む）に属するまたは関連する化合物を指す。これらのうち、例として、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロン、フルオシノロン、アルドステロン、スピロノラクトン、ダナゾール（またＯＰＴＩＮＡとして知られている）およびその他、がある。
【００８６】
用語「ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体γ剤」または「ＰＰＡＲ−γ剤」、または「ＰＰＡＲＧ剤」、または「ＰＰＡＲガンマ剤」は、ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体に直接的または間接的に作用する薬剤を指す。またこの薬剤は、ＰＰＡＲ−α、「ＰＰＡＲＡ」の活性に影響し得る。
【００８７】
用語「オートファジーを調節する薬剤」は、細胞の生存、細胞死、生存、オートファジー、増殖、再生などの調節物質を指す。
【００８８】
用語「単球走化性タンパク質」または「ＭＣＰ」は、損傷および感染症の部位へ単球を動員する役割を果たす小分子誘導可能遺伝子（ｓｍａｌｌ  ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ｇｅｎｅ：ＳＩＧ）のファミリーまたはメンバーを指す。また、これらの用語は、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン分子を指し、この活性は、たとえばマクロファージの動員および／または増殖および／または活性化を含む。
【００８９】
特段他の記載がない限り、本明細書中で使用される用語「アルキル」は、アルカンからの水素原子の除去に由来する直鎖または分枝鎖の飽和基を指す。典型的な直鎖アルキル基として、限定するものではないが、−メチル、−エチル、−ｎプロピル、−ｎ−ブチル、−ｎ−ペンチル、およびｎ−ヘキシルが挙げられる。典型的な分枝鎖のアルキル基として、限定するものではないが、イソプロピル、−ｓｅｃ−ブチル、−イソブチル、−ｔｅｒｔ−ブチル、−イソペンチル、−ネオペンチル、１−メチルブチル、２−メチルブチル、３−メチルブチル、１，１−ジメチルプロピル、および１，２−ジメチルプロピルが挙げられる。
【００９０】
本明細書中で使用されるように、「ａ」、「ａｎ」、または「ｔｈｅ」は、１つまたは１超を意味する。さらに、言及される数字の記載と関連して使用される場合の用語「約」は、言及された数字の記載±言及した数字の最大１０％を意味する。たとえば、用語「約５０」は、４５〜５５の範囲を含む。
【００９１】
本明細書中に記載されるように、すべての組成のパーセンテージは、特段他の記載がない限り、総組成物の重量パーセントである。本明細書中で使用されるように、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」およびその変形は、列挙される項目の記載が、この技術の物質、複合物、デバイス、および方法に同様に有益であり得る他の項目を除外しないように、非限定的に意図されている。同様に、用語「できる（ｃａｎ）」および「し得る（ｍａｙ）」およびその変形は、実施形態が、特定の要素または特徴を含むことができるもしくは含み得る記載が、これら要素または特徴を含まない本技術の他の実施形態を除外するものではないように、非限定的であるように意図されている。
【００９２】
含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ、ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）は、または有する（ｈａｖｉｎｇ）などの用語の同義語としてのオープンエンドの用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、本発明を説明かつ請求するために本明細書中で使用されているが、本発明またはその実施形態は、「〜からなる」または「〜から本質的になる」などの代替的な用語を使用して代替的に使用され得る。
【００９３】
ＤＮＩＲＡ
様々な実施形態では、本発明は、当該分野で知られている様々な技術を使用した光学的なイメージングを含む。たとえばこのような技術として、限定するものではないが、ｃＳＬＯ、ＦＡＦ、血管造影、ＯＣＴが挙げられ、これらの三次元構築を含む。本発明の様々な実施形態では、光に眼を曝露することは、ｃＳＬＯ、ＦＡＦ、ＤＮＩＲＡ、血管造影、またはＯＣＴを行うことを含む。様々な実施形態では、イメージングは、ＤＮＩＲＡである。様々な実施形態では、上記技術のいずれかの組み合わせを使用することができる。
【００９４】
以前より、本発明者は、臨床試験から予測されるように（データ不図示）、ヨウ素酸ナトリウムの全身送達の後に、低蛍光ＦＡＦのパッチが、ＲＰＥ喪失領域（非臨床状況、すなわち非ヒトの眼）において、ｉｎ  ｖｉｖｏでは観察されていないことを示した。しかしながら、遅延性の近赤外線解析（ＤＮＩＲＡ）と呼ばれる技術である、近赤外線（ＮＩＲ）色素のインドシアニングリーン（ＩＣＧ）、などの蛍光色素でＲＰＥをあらかじめ標識することにより、ＲＰＥは、ｃＳＬＯイメージングを使用して可視化される。いったん標識されると、ＲＰＥ喪失の領域は、臨床的に観察したパッチと類似の定量可能な過蛍光のパッチとして現れることとなる。様々な実施形態では、ＮａＩＯ３、ＦＡＦ、およびＤＮＩＲＡは、単なる例として、ＲＰＥ喪失、マクロファージ、マクロファージの分極化、およびＭ１応答の調節の間の関係性を示すために共に使用されてもよい。
【００９５】
ＤＮＩＲＡでは、非毒性の用量で投与される場合、ＩＣＧなどの近赤外線（ＮＩＲ）の色素を含む蛍光検出に適した化合物は、ＲＰＥを標識することができ、よって標識から数日から数週間以内に、ＩＣＧの励起／発光フィルターを使用して見る場合に可視化させることができる。重要なことに、この標識から数日から数週間の可視化は、色素を再度投与することなく可能であり得る。よって、一部の態様では、ＤＮＩＲＡ技術の中心的な構成は、そのタイミングにある。これは、色素の血管内部での位置および即時的な色素の血管外漏出を判定するための、注射の直後、一過性の段階、または注射から数分から数時間以内で見られるＩＣＧまたは他の血管造影の色素の現在の使用とは、明らかに異なる。
【００９６】
一部の実施形態では、ＤＮＩＲＡは、研究動物で使用される。一実施形態では、ＤＮＩＲＡは、蛍光検出に適した化合物の投与を含んでもよく、非限定的な例として、毒素、またはＲＰＥ喪失のパッチ状の地図状領域を引き起こす他の薬剤（たとえばＮＡＩＯ３）を用いた投与の約１日またはそれ以上前、次いで任意に、追加的な量のＮａＩＯ３またはパッチ状のＲＰＥ喪失の領域の拡大を引き起こす別の薬剤を用いた投与の約１日またはそれ以上、（または約１週間、または約１か月、または約３か月）での、ＩＣＧの投与（および任意の血管造影）がある。たとえば、地図状萎縮の拡大を引き起こす他の課題（たとえば最初、または２回目、または３回目、または４回目の投与時）は、細胞の生存、細胞死、生存、オートファジー、増殖、再生などの調節物質であり得る。
【００９７】
様々な実施形態では、ＤＮＩＲＡ技術は、ヒトの患者に使用する。たとえば、ヒトの患者におけるＤＮＩＲＡは、毒素の使用を含み得ない。ヒトの患者におけるＤＮＩＲＡは、所定の励起／発光フィルターを伴うが、血管造影を伴わずに蛍光色素を使用した、眼における正常な変化または疾患に関連する変化の評価を含んでもよい。
【００９８】
地図状萎縮の拡大は、米国食品医薬局（ＦＤＡ）により承認された臨床試験設計の主な結果であり、よって本発明は、動物モデルにおける地図状萎縮、特に地図状萎縮の拡大の観察を可能にすることにより、前臨床疾患モデルと臨床試験の設計との間の相関を可能にする。本発明の前に、動物の眼において地図状萎縮、または地図状萎縮の拡大を明確に同定することができないことから、前臨床試験と臨床初見との間の直接的な相関が妨げされていた。さらに、一部の実施形態では、本発明は、ヒトの患者において、地図状萎縮の拡大を含む地図状萎縮の臨床評価を可能にする。
【００９９】
一部の実施形態では、蛍光検出に適した化合物は、蛍光の様々な波長を用いたイメージングに適している。一部の実施形態では、これらの波長は、可視光から赤外線、たとえば、３９０ｎｍ〜１ｍｍの範囲にあり、たとえば、青色光、白色光、近赤外線を含む。一部の実施形態では、色素は近赤外色素である。一部の実施形態では、色素はＩＣＧである。
【０１００】
一部の実施形態では、ＤＮＩＲＡは、投与してから約１日後、または約２日後、または約３日後、または約４日後、または約５日後、または約６日後、または約７日後、または約１０日後、または約１４日後、または約２１日後に、行われる（および／または遅延性の近赤外線蛍光（ＤＮＩＲＦ）が観察される）。一部の実施形態では、ＤＮＩＲＡは、投与から少なくとも１日後、または投与から少なくとも２日後、もしくは少なくとも３日後、もしくは少なくとも４日後、もしくは少なくとも５日後、もしくは少なくとも６日後、もしくは少なくとも７日後、もしくは少なくとも１０日後、もしくは少なくとも１４日後、もしくは少なくとも２１日後に行われる。他の実施形態では、ＤＮＩＲＡは、投与から少なくとも約２４時間後、または少なくとも約７日後、または少なくとも約３０日後、または少なくとも約６０日後、または少なくとも約９０日後に行われる。他の実施形態では、ＤＮＩＲＡは、投与から少なくとも約２か月後、または約３か月後、または約４か月後、または約５か月後、または最大約６か月後に行われる。一部の実施形態では、ＤＮＩＲＡは、移行期（すなわち、色素が眼血管を介して眼組織に流れる際の色素の第１の移動）またはその後の数分間の間に行われる。
【０１０１】
一部の実施形態では、可視化は、ｃＳＬＯを使用してもたらされる。一部の実施形態では、可視化は、白色光および適切なフィルターを使用してもたらされる。一部の実施形態では、ＩＣＧ励起／発光フィルターは、７９５ｎｍ（励起）／８１０ｎｍ（発光）フィルターである。
【０１０２】
ＲＰＥは、眼の固有の光受容体、桿状体、および錐状体用の「神経細胞」の機能を作用させる重要な上皮の単層である。たとえばＡＭＤおよびＲＰＤなどの失明疾患は、理論による拘束を望むものではないが必然的に、ＲＰＥの異常と部分的に関連する。
【０１０３】
ＤＮＩＲＡにより、動物の眼において、ｉｎ  ｖｉｖｏでＲＰＥの層を明確に同定することが可能である。さらに、ヒトの眼においてＲＰＥを検出するために使用される主な技術、ＦＡＦは、おそらくはリポフスチンなどのフルオロフォアの相対的な不足により、げっ歯類の眼（非限定的な例）では無効、または有効とするには不十分である。ヒトの眼におけるＦＡＦイメージングは、刺激／発光フィルターの存在下での青色スペクトラムの非コヒーレント光、または青色のコヒーレント光を使用して行い、かつ存在しないＲＰＥ（例えば低蛍光シグナル）または異常なＲＰＥ（たとえば過蛍光シグナル）の領域を同定することができる。ＤＮＩＲＡの非存在下で、動物の眼においてＲＰＥを明確に同定できないことにより、前臨床試験と臨床初見との間の直接的な相関が排除されていた。
【０１０４】
よって、本発明の様々な態様では、眼障害の前臨床試験のための、たとえばＤＮＩＲＡなどの、ＲＰＥ層を可視化させる方法を提供する。
【０１０５】
さらに、本明細書中に記載されるように、ＤＮＩＲＡまたはその変形は、動物の眼で蛍光性免疫細胞の可視化を可能にする。一部の実施形態では、ＤＮＩＲＡは、任意に毒素の投与を含まなくてもよい。一部の実施形態では、ＤＮＩＲＡはヒトの患者で行われ、毒素は使用しない。
【０１０６】
さらに、本明細書中に記載されるように、ＤＮＩＲＡまたはその変形は、ヒトの対象の眼で蛍光性免疫細胞の可視化を可能にする。ヒトの対象を用いる一部の実施形態では、ＤＮＩＲＡは、毒素の投与を含まなくてもよい。
【０１０７】
一部の実施形態では、ＤＮＩＲＡは、眼障害の治療に有効な薬剤の同定に使用される。
【０１０８】
一部の実施形態では、ＤＮＩＲＡは、眼障害（限定するものではないが、ＡＭＤおよびＲＰＤを含む）を有する、または有し得る患者を評価するための方法として、使用される。一部の実施形態では、ＤＮＩＲＡは、眼障害（限定するものではないが、ＡＭＤおよびＲＰＤを含む）の診断、および／または予後、および／または進行のための代わりとなるバイオマーカーである。たとえば、ＤＮＩＲＡを使用して、眼疾患状態（限定するものではないがＡＭＤおよびＲＰＤ）を示す、他のイメージング手法では見られていない過蛍光および低蛍光が交互のＤＮＩＲＡのレース状、網状、またはヒョウ柄状のパターンを含むパターンを同定することができる。また、ＤＮＩＲＡは、過蛍光および低蛍光のＤＮＩＲＡの領域を同定かつ定量化するために使用してもよい。
【０１０９】
様々な実施形態では、ＤＮＩＲＡは、眼の低蛍光の特性を同定するために使用する。たとえば、これらの領域はイメージングされると黒色で現れ、よって、簡単に定量化することが可能である（黒色／白色よりはグレースケールである、ＩＣＧイメージングとは対照的であり、または過蛍光シグナルとは対照的である）。低蛍光ＤＮＩＲＡの検出は、一部の実施形態では、損傷または死滅したＲＰＥを予測するものである。たとえば、低蛍光ＤＮＩＲＡは、ＲＰＥの不存在、異常性／非健常なＲＰＥ（ＩＣＧ色素を取り込むことができない）、ブルッフ膜と接触していないＲＰＥ（およびもはや、脈絡膜の脈管構造からＩＣＧ色素を取り込む位置にないＲＰＥ）、ならびにＲＰＥとＢＭとの間に位置することができ、またはＲＰＥ内部にあり得る脂質の存在のうちの１つまたは複数を示してもよい。
【０１１０】
様々な実施形態では、ＤＮＩＲＡは、眼の過蛍光の特性を同定するために使用する。たとえば、これらの領域は、イメージングする際に光るように現れ、よって容易に定量化することが可能である。過蛍光ＤＮＩＲＡの検出は、一部の実施形態では、Ｍ１および／またはＭ２マクロファージを含むマクロファージを予測するものである。
【０１１１】
様々な実施形態では、ＤＮＩＲＡは、眼疾患状態（限定するものではないがＡＭＤおよびＲＰＤ）の診断のためのバイオマーカーとして使用され、さらには、限定するものではないが本明細書中に記載されるものを含む１つまたは複数の薬剤を用いた評価および／または治療を促進する。
【０１１２】
様々な実施形態では、ＤＮＩＲＡは、眼疾患状態（限定するものではないがＡＭＤおよびＲＰＤ）の予後のためのバイオマーカーとして使用され、限定するものではないが、本明細書中に記載されるものを含む１つまたは複数の薬剤を用いた評価および／または治療をさらに促進する。
【０１１３】
様々な実施形態では、ＤＮＩＲＡは、試験の動員に適した患者の同定を改善するため、および疾患の進行を評価するために使用する。様々な実施形態では、ＤＮＩＲＡは、疾患の進行をモニタリングするために使用する。
【０１１４】
様々な実施形態では、ＤＮＩＲＡは、本明細書中に記載の薬剤のいずれかに対するコンパニオン診断として、使用する。様々な実施形態では、ＤＮＩＲＡは、本明細書中に記載の薬剤のいずれかに応答する患者を評価する（本明細書中に記載の薬剤の有効性を評価すること、および／または本明細書中に記載の薬剤のいずれかに応答する可能性を含む）ために、使用する。様々な態様では、さらに本発明は、臨床試験設計のための、受け入れ（ｅｎｔｒａｎｃｅ  ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ）、除外基準、またはエンドポイント解析としてのＤＮＩＲＡの使用に関する。
【０１１５】
眼障害
眼障害は、様々な眼障害のうちの１つを指し、かつ眼および眼球付属器の疾患を含むものである。一部の実施形態では、眼障害は、たとえば、糖尿病性眼疾患（たとえば糖尿病性網膜症およびＤＭＥ）、フォークト・小柳・原田病（ＶＫＨ）；サルコイドブドウ膜炎；眼ヒストプラスマ症および／または推定眼ヒストプラスマ症候群；自己免疫性ブドウ膜炎；全身性疾患、たとえばループス、クローン病、関節リウマチ、および他の既知の免疫起源の疾患に関連したブドウ膜炎；後部ぶどう膜炎（Ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｕｖｉｅｉｔｓ）（まだ診断され得ないものを含む）；前部ブドウ膜炎（たとえば虹彩炎）；ベーチェット病；結節性多発動脈炎；ならびにウェゲナー肉芽腫症、滲出型ＡＭＤ、非滲出型ＡＭＤ、ＲＰＤ、白点症候群（たとえば匐行性網脈絡膜症、匐行性網膜症、急性後部多発性小板状色素上皮症（ＡＰＭＰＰＥ）、多発一過性白点症候群（ＭＥＷＤＳ）、急性帯状潜在性網膜外層症（ＡＺＯＯＲ）、点状脈絡膜内層症（ＰＩＣ）、びまん性網膜下線維症（ＤＳＦ））、ＬＯＲＤｓ、および中心性漿液性網膜症（ＣＳＲ）である。
【０１１６】
様々な実施形態では、眼障害は、ＤＮＩＲＡまたは当該分野で知られている技術を使用して、評価される、かつ／または同定可能である。例示的な技術として、ｃＳＬＯ、ＦＡＦ、ＯＣＴ（断面像、三次元像、および正面像を用いるものを含む）、ＳＤ−ＯＣＴ（断面像、三次元像、および正面像を含む）、血管造影、または他の蛍光波長を含むイメージング手法が挙げられる。一部の実施形態では、これらの波長は、青色〜赤外線、たとえば３９０ｎｍ〜１ｍｍの範囲であり、たとえば青色光、白色光、赤色を含まない光、近赤外線、赤外線を含む。
【０１１７】
様々な実施形態では、眼障害は、ＲＰＥの損傷もしくは喪失または網膜外部の喪失のパッチの中のＦＡＦのパターンにより、評価される、かつ／または同定可能である。一部の実施形態では、このようなパターンは、曲線状、リボン様、網状、長円、円形、貝殻状、暈状、および標的様病変のうちの１つまたは複数である。
【０１１８】
様々な実施形態では、眼障害は、ＲＰＥの損傷もしくは喪失または網膜外部の喪失のパッチの境界内のＦＡＦのパターンにより評価される、かつ／または同定可能である。一部の実施形態では、このようなパターンは、曲線状、リボン様、網状、長円、円形、貝殻状、暈状、および標的様病変のうちの１つまたは複数である。
【０１１９】
様々な他の実施形態では、眼障害は、断面のパターンまたは横断したパターンにより、評価される、かつ／または同定可能である。一部の実施形態では、このようなパターンはＯＣＴを用いて観察される。一部の実施形態では、パターンは、ＲＰＥおよび／もしくは網膜外部の喪失、または網膜下腔で見いだされる隆起、三角形、ピーク、もしくはスパイクである。
【０１２０】
他の実施形態では、眼障害は、対象の眼における過蛍光ＦＡＦの領域の存在、ならびに／または対象の眼における異常に蛍光するＦＡＦの１つもしくは複数の領域の存在、ならびに／または対象の眼における、青色スペクトルの眼底のイメージング、白色光の眼底のイメージング、赤色を含まない光の眼底のイメージング、およびＯＣＴのうちの１つまたは複数の変化、ならびに／または非疾患状態と比較した、脈絡膜と網膜との間の対象の上皮性関門を通した透過性の増加（たとえば一過性の増加）、ならびに／または網膜外部の変形、ならびに／または、非疾患状態と比較した、対象の脈絡膜と網膜の間の上皮関門を隔てた網膜中央の脈管構造の変形、ならびに／または非疾患状態と比較した、対象のＲＰＥを通した食作用免疫細胞の存在により、評価される、かつ／または同定可能である。例示的な変化として、２つの異なる時点および／または実験条件もしくは臨床条件の、異なる対象および／または動物の同一のイメージングパターンの差異が挙げられる。たとえば、変化は、同一の対象および／もしくは動物の２つの評価の間のイメージングデータの変化、ならびに／または第１の対象および／もしくは動物と第２の対象および／もしくは動物との間のイメージングデータの変化を含む。
【０１２１】
さらなる他の実施形態では、眼障害は、対象の眼における網膜のイメージング（ここでの網膜のイメージングは、白色光、赤色を含まない光、青色光、ＦＡＦ、近赤外線（ＮＩＲ）、赤外線（ＩＲ）、血管造影、およびＤＮＩＲＡのうちの１つまたは複数である）の明確なパターンの１つまたは複数の領域の存在、ならびに／または対象の眼の異常に蛍光するＦＡＦの１つもしくは複数の領域の存在、ならびに／または、非疾患状態と比較した、脈絡膜と網膜との間の対象の上皮性関門を通した透過性の増加（たとえば一過性の増加）、ならびに／または、非疾患状態と比較した、対象のＲＰＥを通した食作用免疫細胞の存在により、評価される、かつ／または同定可能である。
【０１２２】
一部の実施形態では、眼障害は、糖尿病性眼疾患であり、非限定的な例として、糖尿病性網膜症およびＤＭＥがある。一部の実施形態では、糖尿病性眼疾患は、１型糖尿病または２型糖尿病の患者で見いだされる。様々な実施形態では、治療すべき糖尿病性眼疾患の患者は、正常値（食事前に約７０〜１３０ミリグラム／デシリットル、すなわちｍｇ／ｄｌ、および食事から１〜２時間後に１８０ｍｇ／ｄｌ未満）を超える血中グルコースレベルを有する。
【０１２３】
一部の実施形態では、糖尿病性眼疾患は、以下の段階：軽度の非増殖性網膜症（毛細血管瘤が発症し得る）；中度の非増殖性網膜症（網膜に栄養を与える一部の血管が阻害され得る）；および重度の非増殖性網膜症（多くの血管が阻害され得、いくかの網膜領域への血液供給が欠乏する）；ならびに増殖性網膜症（栄養に関する網膜により送られるシグナルが、新規血管の増殖の引き金となる）のうちの１つまたは複数の糖尿病性網膜症である。
【０１２４】
一部の実施形態では、眼障害（たとえば糖尿病性眼疾患（たとえば糖尿病性網膜症およびＤＭＥ）、フォークト・小柳障害（たとえば糖尿病性眼疾患（たとえば糖尿病性網膜症およびＤＭＥ）、フォークト・小柳・原田病（ＶＫＨ）；サルコイドブドウ膜炎；眼ヒストプラスマ症および／または推定眼ヒストプラスマ症候群；自己免疫性ブドウ膜炎；全身性疾患、たとえばループス、クローン病、関節リウマチ、および他の既知の免疫起源の疾患に関連したブドウ膜炎；後部ぶどう膜炎（Ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｕｖｉｅｉｔｓ）（まだ診断され得ないものを含む）；前部ブドウ膜炎（たとえば虹彩炎）；ベーチェット病；結節性多発動脈炎；ならびにウェゲナー肉芽腫症）の治療または予防のための、本発明の方法は、レーザー外科手術（たとえば散乱レーザー治療、焦点レーザー治療、光凝固）を行うこと、および／または硝子体切除術（たとえば血管を、患者の眼の中心から除去する）を行うこと、および／またはステロイドの投与、および／またはラニビズマブ（Ｒａｎｉｂｉｚｕｍｂ）（ＬＵＣＥＮＴＩＳ）、ベバシズマブ（Ｂｅｖｉｚｕｍａｂ）（ＡＶＡＳＴＩＮ）またはアフリベルセプト（ＥＹＬＥＡ）などの抗ＶＥＧＦ抗体剤を投与することをさらに含む。
【０１２５】
一部の実施形態では、糖尿病性眼疾患は、白内障または緑内障（たとえば新生血管緑内障）である。
【０１２６】
様々な実施形態では、眼障害はＡＭＤである。ＡＭＤは、先進国の世界において主な失明の原因である。初期のＡＭＤは、疾患の特徴であるドルーゼンの集積を特徴とし、地図状萎縮（ＧＡ）および脈絡膜新生血管（ＣＮＶＭ）は、それぞれ、末期の非滲出型（いわゆる「非滲出型（ｄｒｙ）」または萎縮性）および滲出型（いわゆる「滲出型」または血管新生）疾患の失明性の合併症である。抗ＶＥＧＦ療法は、滲出型ＡＭＤＦＦの治療を改革したが、すべてのＡＭＤの事例の１２〜１５％のみを表すものである。ビタミンの補給により、治療が存在しない非滲出型ＡＭＤの進行の速度を遅らせることができる。
【０１２７】
様々な実施形態では、眼障害は、初期の非滲出型（ｎｏｎ  ｅｘｕｄａｔｉｖｅ  またはｄｒｙ）のＡＭＤである。初期の非滲出型のＡＭＤは、ドルーゼンの集積および色素変化またはＲＰＥの脱離などの関連する特性を特徴とする。末期または進行した非滲出型ＡＭＤは、ＲＰＥおよび覆っている光受容体のパッチ状の萎縮症を特徴とすることができる。これらのパッチは、いわゆる「ｗｉｎｄｏｗ  ｄｅｆｅｃｔ」と呼ばれるように臨床的に可視化されており、「地図状萎縮」の領域として知られている。
【０１２８】
様々な実施形態では、眼障害は滲出型ＡＭＤである。滲出型ＡＭＤは、出血かつ体液を漏出し得る網膜またはＲＰＥの下の新規血管の増殖を特徴とし、多くの場合、中心視野の急速かつ多くの場合は重篤な喪失をもたらす。この中心視野の喪失は、読む、運転する、顔を認識する能力を損なうことにより、患者の日常に有害な影響を与える。場合によって、黄斑変性は、非滲出型から滲出型へ進行する。
【０１２９】
一実施形態では、本方法は、同時に行われる、同一の患者の滲出型ＡＭＤおよび非滲出型ＡＭＤの治療に関する。
【０１３０】
一実施形態では、眼障害は、脈絡膜新生血管（ＣＮＶＭ）に関連する。
【０１３１】
一部の実施形態では、ＡＭＤは、眼底の内因性の、天然にまたは病理学的に存在するフルオロフォアの空間マッピング（二次元、正面など）のための、ＦＡＦ、ｉｎ  ｖｉｖｏでのイメージング方法を使用して、検出または評価する。一部の実施形態では、理論による拘束を望むものではないが、ＦＡＦイメージングは、ｉｎ  ｖｉｖｏでＲＰＥの可視化を可能にし、脈絡網膜性障害および網膜色素上皮症の発病における代謝上の変化をより良く理解することを支援することができる。ＦＡＦは、当該分野でよく知られている（たとえば、Ｂｅｌｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｒ  Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  ２００３  ８７：  １３８１−１３８６を参照されたい。この内容は本明細書中参照として援用されている）。
【０１３２】
一部の実施形態では、ＡＭＤおよび／またはＲＰＥの損傷または喪失は、白色光、青色光、近赤外線、赤外線を含む光の他の波長によっても可視化することができ、それを通して脈絡膜を見ることができる「ｗｉｎｄｏｗ  ｄｅｆｅｃｔ」として可視化することができる。一部の実施形態では、ＡＭＤおよび／またはＲＰＥの損傷または喪失は、ｃＳＬＯ、ＦＡＦ、ＯＣＴ（断面像、三次元像、および正面像を用いるものを含む）、ＳＤ−ＯＣＴ（断面像、三次元像、および正面像を含む）、または他の手法によっても可視化されてもよく、これらは、他の蛍光波長（たとえば波長は青色〜赤外線、例えば３９０ｎｍ〜１ｍｍの範囲にあり、たとえば青色光、白色光、赤色を含まない光、近赤外線、または赤外線を含む）を含む。
【０１３３】
一部の実施形態では、末期の非滲出型ＡＭＤにおいて、地図状萎縮の領域は、低蛍光の領域または暗いＦＡＦとして明確に可視化されている。ある実施形態では、これらは、ＲＰＥが失われた領域を示す。
【０１３４】
一部の実施形態では、非滲出型ＡＭＤは、対象の眼における過蛍光のＦＡＦの領域の存在により、同定可能である。一部の実施形態では、過蛍光のＦＡＦの領域の存在により同定可能である非滲出型ＡＭＤは、進行中の初期または末期の非滲出型ＡＭＤである。一部の実施形態では、過蛍光ＦＡＦは、リポフスチンもしくはリポフスチン様物質の正常な密度の可視化の増加により引き起こされ得る蛍光の増加、または組織のリポフスチン含有量の増加を指す。リポフスチンは、脂質を含むまたは含むことのない、タンパク質の混合物を含み、これら成分は、適切な波長の青色蛍光下で蛍光する。リポフスチン様蛍光はまた、このスペクトルでも起こり得、かつ、リポフスチンおよびその構成以外の分子により、起こり得る。
【０１３５】
リポフスチン様蛍光は、ＲＰＥ細胞、およびＲＰＥ細胞以外の細胞、たとえば免疫系細胞（食作用免疫細胞）などで起こり得る。
【０１３６】
他の実施形態では、ＡＭＤは、対象の眼におけるＦＡＦの異常なパターンの存在により、同定可能である。一部の実施形態では、異常な蛍光ＦＡＦは、対象の眼で観察される正常な蛍光性ＦＡＦパターンからの偏差を指す。正常なＦＡＦでは、ｃＳＬＯまたは改変した眼底カメラを使用すると、視神経乳頭は、ＲＰＥの不存在（よってリポフスチンがない）により暗く（黒色）、血管もまたは、根底にあるＲＰＥ単層からの蛍光を遮断しているため、暗い。中心の黄斑領域では、ＦＡＦシグナルは、黄体の色素による青色光の吸収によって低減される。これらの正常な青色光ＦＡＦの特徴は、異常な蛍光の存在を評価する際に考慮され得る。
【０１３７】
一部の実施形態では、ＡＭＤおよび他の失明疾患に関連する過蛍光ＦＡＦは、複合的であり得る二次元の空間パターンを示し得る。一部の研究では、過蛍光ＦＡＦのこれらのパターンは、初期から末期（新生血管または萎縮性）疾患の、疾患進行速度と相関する。これらのパターンは、当該分野で理解されている（たとえばＳｃｈｍｉｔｚ−Ｖａｌｃｋｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｕｒｖｅｙ  ｏｆ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ．  ２００９  Ｊａｎ−Ｆｅｂ；  ５４（１）：９６−１１７；  Ｂｉｎｄｅｗａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ．  ２００５  Ｊｕｌ；  ８９（７）：８７４−８；  Ｈｏｌｚ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｍ．  Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ．  ２００７  Ｍａｒ；  １４３（３）：４６３−７２を参照。この内容全体は本明細書中参照として援用されている）。
【０１３８】
一部の実施形態では、非滲出型ＡＭＤは初期のＡＭＤであり、または末期の萎縮性非滲出型ＡＭＤである。
【０１３９】
一部の実施形態では、非滲出型ＡＭＤは末期であり、前より存在する地図状萎縮の境界であり、かつ隣接する領域（いわゆる接合領域）における、過蛍光または異常に蛍光するＦＡＦの領域の存在を特徴とする。
【０１４０】
一部の実施形態では、非滲出型ＡＭＤは、末期であり、前より存在する地図状萎縮の不非存在下での、過蛍光または異常に蛍光するＦＡＦの領域の存在を特徴とする。これらの実施形態では、理論による拘束を望むものではないが、この特徴は、ＲＰＥの喪失をさらに予測し得る。
【０１４１】
一部の実施形態では、初期および末期の両方における非滲出型ＡＭＤは、免疫細胞（たとえば食作用免疫細胞）の存在を特徴とする。免疫細胞の存在は、除核後または死後の眼の試料から、推定することができる。本明細書中に記載されるように、一部の実施形態では、免疫細胞の存在は、ＤＮＩＲＡを使用して評価する。
【０１４２】
一部の実施形態では、「びまん性−しずく型（ｄｉｆｆｕｓｅ  ｔｒｉｃｋｌｉｎｇ）」などのイメージング（ＦＡＦ）パターンに関連する障害は、本明細書中に記載の方法を使用して、評価、治療、または予防することができる。びまん性−しずく型（ｄｉｆｆｕｓｅ  ｔｒｉｃｋｌｉｎｇ）パターンは、当該分野で知られている（たとえばＳｃｈｍｉｔｚ−Ｖａｌｃｋｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｕｒｖｅｙ  ｏｆ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ．  ２００９  Ｊａｎ−Ｆｅｂ；  ５４（１）：９６−１１７；  Ｂｉｎｄｅｗａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ．  ２００５  Ｊｕｌ；  ８９（７）：８７４−８；  Ｈｏｌｚ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｍ．  Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ．  ２００７  Ｍａｒ；  １４３（３）：４６３−７２を参照されたい。この内容全体は、本明細書中参照として援用されている）。
【０１４３】
一部の実施形態では、非滲出型ＡＭＤは、非疾患状態と比較した、脈絡膜と網膜との間の対象の上皮性関門を通した透過性の増加（たとえば一過性の増加）により、同定可能である。これは、血管（内皮）の透過性と異なる。たとえばこれは血管造影を使用してみることが可能である。
【０１４４】
一部の実施形態では、ＤＮＩＲＡは、本明細書中に記載の眼障害のいずれかを同定かつ／または診断するために使用する。一部の実施形態では、ＲＰＥの毒性、ＲＰＥの喪失、および非滲出型ＡＭＤは、たとえばヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３）を用いて、または疾患の存在下で、ＤＮＩＲＡを使用して同定可能である。地図状萎縮に類似する領域は、たとえば、ＮａＩＯ３で処理した眼の、組織解析により（たとえばＲＰＥ６５などのＲＰＥ細胞マーカーの喪失および／または二核細胞の染色の喪失を観察することにより）、かつ／またはｉｎ  ｖｉｖｏでＤＮＩＲＡを使用することにより、検出することができる。一部の実施形態では、ＲＰＥの毒性、ＲＰＥの喪失、および非滲出型ＡＭＤは、過蛍光ＦＡＦシグナルを示すＦＡＦを使用することにより同定可能であり、近接した組織の喪失の中、またはその境界では複合的であり得る。この複合的な過蛍光ＦＡＦシグナルは、ＮａＩＯ３の処置から数日〜数週間、ＦＡＦパターンへと発達し、複合的となり得、かつ限定するものではないが、リボン様、曲線、インターレース状、分枝状、または網状の過蛍光を含むことができる。このようなパターンは、臨床非滲出型ＡＭＤで見いだされるパターンを模倣する。このようなＦＡＦはまた低蛍光であってもよい。
【０１４５】
さらに、血管造影単独で、またはＤＮＩＲＡの一部として使用することにより、変質したＦＡＦの領域の発現の直前に行われた血管造影、または同時に行われた血管造影は、脈絡膜と網膜との間の上皮性関門を通した透過性の増加（一過性の増加を含む）を示し得る（たとえば、イメージング前に注射され得る色素の漏出により観察されるなど：このような色素はＩＣＧを含む）。この障壁は、通常、内部脈絡膜、ブルッフ膜、ＲＰＥ細胞、および可能な場合は、ＲＰＥおよび外境界膜と結合した外部光受容体の構成を含む。理論による限定を望むものではないが、この特化した上皮性関門の一過性の崩壊は、網膜外部、光受容体層のフォールディング、凹凸もしくは変形、ならびに／または脈絡膜から網膜下腔への炎症細胞の移動／遊走を含む、その後の一連の事象の根拠となり得る。しかしながら、一部の実施形態では、この段階は、一過性であり、解決される場合があり、またはその度合いでは無症状であり得る。
【０１４６】
一部の実施形態では、非滲出型ＡＭＤは、非疾患状態と比較した、対象の網膜色素上皮（ＲＰＥ）にわたる免疫細胞（たとえば食作用免疫細胞または天然の免疫細胞）の存在（たとえば流入）により、同定可能である。脈絡膜から網膜下腔または網膜内層から網膜外部または網膜下腔までの炎症細胞の移動／遊走が存在する場合、このような細胞は、当業者に知られている染色方法により、除核した眼または切除した組織で同定されてもよい、ＮａＩＯ３モデルでは、Ｉｂａ１染色は、免疫系の活性化細胞を検出するために使用されてもよい。さらに、これら細胞の存在は、たとえば、単球／マクロファージの欠失が行われているＮＡＩＯ３調製物との比較により、確認されてもよい。このような欠失は、当該分野で知られており、塩化ガドリニウム（ＧＡＤ）またはクロドロネートでの処理により、達成されてもよい。一部の実施形態では、免疫細胞の存在（たとえば流入）は、ＤＮＩＲＡの使用により、ｉｎ  ｖｉｖｏで測定かつ／または決定される。本発明の前に、このようなｉｎ  ｖｉｖｏでの可視化は、臨床状況では可能ではなかった。
【０１４７】
さらに、対象の細胞で同定され得る免疫細胞の例としての、マクロファージは、サブセット：臨床的（Ｍ１）または代替的に（Ｍ２）に活性化したマクロファージ（たとえばＬａｓｋｉｎ，  Ｃｈｅｍ  Ｒｅｓ  Ｔｏｘｉｃｏｌ．  ２００９  Ａｕｇｕｓｔ  １７；  ２２（８）：  １３７６−１３８５，参照、この内容全体は本明細書中参照として援用されている）により、分類することができる。理論による限定を望むものではないが、Ｍ１マクロファージは、ＩＦＮγ、ＬＰＳ、およびＴＮＦαなどの標準的な機構により活性化されるが、Ｍ２マクロファージは、ＩＬ−４、ＩＬ−１３、ＩＬ−１０、およびＴＧＦβなどの代替的な機構により活性化されている。理論による限定を望むものではないが、Ｍ１マクロファージは、細胞傷害性、炎症誘発性の表現型を示すが、Ｍ２マクロファージは、免疫応答および炎症応答の一部の態様を抑制し、創傷治癒および血管新生に関与する。一部の実施形態では、本発明は、Ｍ１およびＭ２マクロファージのうちの１つまたは複数の阻害、調節、または分極化を含む。
【０１４８】
一部の実施形態では、非滲出型のＡＭＤは、対象の眼における青色スペクトルの眼底のイメージング、白色光の眼底のイメージング、赤色を含まない光の眼底のイメージング、およびＯＣＴのうちの１つまたは複数の変化により、同定可能である。一部の実施形態では、非滲出型ＡＭＤは、ｃＳＬＯ、ＦＡＦ、ＯＣＴ（断面像、三次元像、および正面像を含む）、ＳＤ―ＯＣＴ（断面像、三次元像、および正面像）、または他のイメージング機構のうちの１つまたは複数の変化により同定可能であり、これは、他の蛍光波長（たとえば青色〜赤外線までの範囲の波長、例えば３９０ｎｍ〜１ｍｍであり、例えば青色光、白色光、赤色を含まない光、近赤外線、または赤外線を含む）を含む。例示的な変化は、２つの時点および／または実験条件もしくは臨床条件において異なる対象および／または動物の同一のイメージングパターンの差異を含む。たとえば変化は、同一の対象および／もしくは動物の２つの評価間のイメージングデータの差異、ならびに／または第１の対象および／または動物のイメージングデータと第２の対象および／もしくは動物のイメージングデータとの間の差異を含むことができる。
【０１４９】
一部の実施形態では、ＡＭＤは、ＯＣＴにより同定可能である。一部の実施形態では、断面の画像は、網膜下腔における、浅部の隆起、または錐体もしくはスパイク様のシグナルの存在を示す。３次元または正面像のＯＣＴイメージングは、リボン様、または曲線、長円、円形、暈状、または標的様のシグナルを明らかにする。一部の実施形態では、断面のパターンまたは横断パターンは、ＲＰＥおよび／または網膜外部の喪失（萎縮症）、または網膜下腔で見いだされた隆起、三角形、ピーク、もしくはスパイクを含む。様々な実施形態では、これらの特徴はＡＭＤを表す。
【０１５０】
さらに本発明は、限定するものではないが、「網膜ドルーゼン様疾患」、「偽網状ドルーゼン」、および「ドルーゼン様黄斑疾患」、または「網膜下のドルーゼン様沈着物の存在を特徴とする疾患」としても知られている、ＲＰＤ疾患の治療または予防のための方法を提供する。理論による拘束を望むものではないが、ＲＰＤは、ＡＭＤのサブタイプであってもよく、またはＡＭＤに関連していてもよい。ＡＭＤおよびＲＰＤの両方は、脈絡膜血管疾患または地図状萎縮の失明性の合併症をもたらす可能性がある。
【０１５１】
一部の実施形態では、ＲＰＤ疾患は、偽ドルーゼン物質が、治療時に、減少、または根絶し、または遅延する集積および／もしくは拡大を伴う、疾患である。一部の実施形態では、本発明は、対象の眼の中心窩領域および／または周中心窩領域および／または近傍中心窩領域の治療後に偽ドルーゼンが減少または根絶される、ＲＰＤ疾患を治療する方法を提供する。
【０１５２】
一部の実施形態では、さらに本発明は、初期から末期への疾患の進行速度が低下するＲＰＤ疾患の治療または予防の方法を提供する。末期の疾患として、たとえば脈絡膜新生血管または地図状萎縮を挙げることができる。
【０１５３】
一部の実施形態では、さらに本発明は、地図状萎縮の拡大速度が低下するＲＰＤ疾患の治療または予防の方法を提供する。
【０１５４】
一部の実施形態では、ＲＰＤ疾患は、ＦＡＦまたは他の蛍光波長を含む他のイメージング様式により、同定可能である。一部の実施形態では、これらの波長は、青色〜赤外線の範囲であり、たとえば３９０ｎｍ〜１ｍｍであり、たとえば青色光、白色光、近赤外線、または赤外線を含む。
【０１５５】
一部の実施形態では、ＲＰＤ疾患は、過蛍光ＦＡＦおよび／または異常蛍光ＦＡＦ、または他の蛍光波長を含む他のイメージング様式の領域の存在により、同定可能である。一部の実施形態では、これらの波長は、青色〜赤外線の範囲、たとえば３９０ｎｍ〜１ｍｍであり、たとえば青色光、白色光、近赤外線、および赤外線を含む。一部の実施形態では、ＲＰＤ疾患はＤＮＩＲＡを使用することにより、同定可能である。
【０１５６】
一部の実施形態では、ＲＰＤ疾患は、白色光、青色光、ＦＡＦ、および近赤外線、および赤外線のうちの少なくとも１つ、または少なくとも２つ、または少なくとも３つ、または少なくとも４つを使用して、同定することができる。特定の実施形態では、ＲＰＤ疾患は青色光により同定可能である。
【０１５７】
一部の実施形態では、ＲＰＤ疾患は、ＯＣＴにより同定可能である。一部の実施形態では、断面の画像は、網膜下腔における、浅い隆起、または錐体もしくはスパイク様のシグナルの存在を示す。３次元または正面像のＯＣＴのイメージングは、リボン様、または曲線、長円、円形、暈状、または標的様のシグナルを明らかにする。
【０１５８】
一部の実施形態では、ＲＰＤは、非疾患状態と比較した、脈絡膜と網膜との間の対象の上皮性関門を通した透過性の増加（たとえば一過性の増加）により、同定可能である。これは、血管（内皮）の透過性とは異なる。たとえばＲＰＥ毒性のヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３）モデルを含むＤＮＩＲを使用すると、ＲＰＥの損傷または喪失の地図状の領域は、たとえば、組織解析（たとえばＲＰＥ６５などのＲＰＥ細胞マーカーの喪失、ならびに／または二核性の細胞染色の喪失を観察することによる）により、検出できるように、形成することができる、さらに、ＮａＩＯ３で処理したＲＰＥのＦＡＦのイメージングは、過蛍光ＦＡＦシグナルを示し、これは、近接組織喪失領域内、および／またはその境界で複合的であり得る。この過蛍光ＦＡＦシグナルは、ＮａＩＯ３処理から数日〜数週間、限定するものではないが、リボン様、曲線、魚形、貝殻状、インターレース状、分枝状、または網状の過蛍光を含む複合的なＦＡＦとすることができる、パターンへと発達する。このようなパターンは、臨床的なＲＰＤで見いだされたものを模倣する。
【０１５９】
さらに、ＤＮＩＲＡでは、変化したＦＡＦの領域の出現の直前または出現と同時に行われた血管造影は、脈絡膜と網膜との間の上皮性関門を通した透過性の増加（一過性の増加を含む）（イメージングの前に注射され得る色素の漏出により観察されるなど；このような色素はＩＣＧを含む）を示す。この障壁は、通常、内部脈絡膜、ブルッフ膜、ＲＰＥ細胞、および可能であるならばＲＰＥおよび外境界膜と結合した外部光受容体の構成を含む。理論により拘束を望むものではないが、この特化した上皮性関門の一過性の崩壊は、光受容体層のフォールディング、凹凸、または変形を含む、その後の一連の事象に対して寛容であってもよい。しかしながら、一部の実施形態では、この段階は、一過性であり得、解決することができ、この度合までは無症状であり得る。
【０１６０】
一部の実施形態では、ＲＰＤは、非疾患状態と比較した、対象の網膜色素上皮（ＲＰＥ）を通した免疫細胞（たとえば食作用免疫細胞）の存在（たとえば流入）により、同定可能である。一部の実施形態では、免疫細胞の存在（たとえば流入）は、ＤＮＩＲＡで、検出かつ／または測定されている。脈絡膜から網膜下腔または網膜内層から網膜外部または網膜下腔までの、炎症細胞の移動／遊走が存在する場合、このような細胞は、当該分野で知られているように染色により同定されてもよい。たとえばＮＡＩＯ３モデルを使用して、Ｉｂａ１染色は、免疫系の活性化した食作用細胞を検出するために使用してもよい。さらに、これら細胞の存在は、単球／マクロファージの欠失が行われているＮａＩＯ３調製物との比較により、確認されてもよい。このような欠失は、当該分野で知られており、たとえば塩化ガドリニウム（ＧＡＤ）またはクロドロネートでの処理により、達成されてもよい。さらに、対象の細胞で同定されている食作用免疫細胞の例としてのマクロファージは、臨床的（Ｍ１）または代替的（Ｍ２）に活性化したマクロファージにより、分類されてもよい。（たとえばＬａｓｋｉｎ，  Ｃｈｅｍ  Ｒｅｓ  Ｔｏｘｉｃｏｌ．  ２００９  Ａｕｇｕｓｔ  １７；  ２２（８）：  １３７６−１３８５参照、この文献全体は本明細書中参照として援用されている）。理論による拘束を望むものではないが、Ｍ１マクロファージは、ＩＦＮγ、ＬＰＳ、およびＴＮＦα、などの標準的な機構により活性化されており、Ｍ２マクロファージは、ＩＬ−４、ＩＬ−１３、ＩＬ−１０、およびＴＧＦβなどの代替的な機構により、活性化されている。理論による拘束を望むものではないが、Ｍ１マクロファージは、細胞傷害性、炎症誘発性の表現型を表し、Ｍ２マクロファージは、免疫応答および炎症性応答の一部の態様を抑制し、創傷治癒および血管新生に関与している。たとえば、本発明は、一部の実施形態では、Ｍ１およびＭ２マクロファージのうちの１つまたは複数の阻害、調節、または分極化を含む。
【０１６１】
一部の実施形態では、ＲＰＤ疾患は、対象の眼における青色スペクトラムの眼底イメージング、白色光の眼底のイメージング、赤色を含まない眼底のイメージング、およびＯＣＴのうちの１つまたは複数の変化により、同定可能である。一部の実施形態では、ＲＰＤ疾患は、ｃＳＬＯ、ＦＡＦ、ＯＣＴ（断面像、三次元像、および正面像を用いるものを含む）、ＳＤ−ＯＣＴ（断面像、三次元像、および正面像を含む）、または他のイメージング様式のうちの１つまたは複数の変化により、同定可能であり、これは、他の蛍光波長（たとえば青色〜赤外線、たとえば３９０ｎｍ〜１ｍｍであり、たとえば青色光、白色光、赤色を含まない光、近赤外線、または赤外線を含む）を含む。例示的な変化は、２つの異なる時点および／または実験条件もしくは臨床条件での、異なる対象および／または動物の同一のイメージングパターンの差異を含む。たとえば変化は、同一の対象および／もしくは動物の２つの評価の間のイメージングデータの差異、ならびに／または、第１の対象および／もしくは動物と第２の対象および／もしくは動物との間のイメージングデータの差異を含むことができる。
【０１６２】
別の実施形態では、眼障害は、ｃ１ｑＴＮＦ５欠損またはそれに対応する遺伝子変異に関連するＬＯＲＤ（遅発性網膜変性）または網膜変性、または別の黄斑変性であって、限定するものではないが、シュタルガルト病、パターンジストロフィー、ならびに網膜色素変性症（ＲＰ）、および関連する疾患を含む。一実施形態では、黄斑変性は遺伝性である。
【０１６３】
他の実施形態では、失明疾患は、理論による拘束を望むものではないが、付随する黄斑変性を伴うまたは伴わない網膜炎症を特徴とし得る突発性の障害であって、限定するものではないが、白点症候群（たとえば匐行性網脈絡膜症、匐行性網膜症、急性後部多発性小板状色素上皮症（ＡＰＭＰＰＥ）、多発一過性白点症候群（ＭＥＷＤＳ）、急性帯状潜在性網膜外層症（ＡＺＯＯＲ）、点状脈絡膜内層症（ＰＩＣ）、およびびまん性網膜下線維症（ＤＳＦ））を含む。
【０１６４】
他の実施形態では、眼障害は、中心性漿液性網膜症（ＣＳＲ）である。ＣＳＲは、周辺組織からの黄斑層の流体の脱離である。ＣＳＲは、多くの場合、網膜下またはＲＰＥ下腔への流体の漏出および集積を特徴とする。理論よる拘束を望むものではないが、流体の漏出および集積は、ＲＰＥの小規模の破損により、起こり得る。
【０１６５】
一部の実施形態では、眼障害の１つまたは複数は、過蛍光および／または異常蛍光ＦＡＦ、または３５０ｎｍ〜１，０００ｎｍの光の他の波長の領域の存在により、同定可能である。一部の実施形態では、眼障害のうちの１つまたは複数は、ＤＮＩＲＡを使用して同定可能である。
【０１６６】
一部の実施形態では、眼障害のうちの１つまたは複数は、たとえば、ｃＳＬＯ、ＦＡＦ、ＯＣＴ（断面像、三次元像、および正面像を用いるものを含む）、ＳＤ−ＯＣＴ（断面像、三次元像、および正面像を含む）、または他のイメージング様式により、同定可能であり、これは他の蛍光波長（たとえば青色〜赤外線、たとえば３９０ｎｍ〜１ｍｍであり、たとえば青色光、白色光、赤色を含まない光、近赤外線、または赤外線を含む）を含む。
【０１６７】
一部の実施形態では、眼障害は、特定の段階または進行中であり得る。一部の実施形態では、眼障害は、初発性、新興性、静止性、進行性、または活動性であり得る。
【０１６８】
既存の眼障害を治療することに加えて、本発明は、これら障害の発症を予防または発症を遅延させるための予防方法を含む。予防的な使用では、薬剤は、特定の眼障害に罹患しやすい、またはリスクのある対象に投与することができる。このような罹患しやすさは、たとえば、家族性の素因、遺伝的な試験、リスク因子の解析、血液または他のサイトカインまたはバイオマーカーのレベル、および眼の試験により、決定されてもよく、これらは、ＦＡＦ、青色光、白色光、赤色を含まない光、近赤外線、赤外線、ＤＮＩＲＡなどのマルチモード解析を含むことができる。またこのような罹患しやすさは、たとえば断面像、三次元像、および正面像を用いたＯＣＴによる検出により、決定されてもよい。
【０１６９】
一部の実施形態では、眼障害は、以下のセクション：Ｈ３０脈絡網膜性炎症、脈絡膜のＨ３１の他の障害、他の場所で分類された疾患におけるＨ３２脈絡網膜性障害、Ｈ３３網膜の脱離および崩壊、Ｈ３４の網膜血管閉塞、Ｈ３５の他の網膜障害、およびその他と分類された疾患におけるＨ３６の網膜障害において、疾病及び関連保健問題の国際統計分類またはＩＣＤ−１０（本明細書中参照として援用される）に列挙された１つまたは複数の疾患である。
【０１７０】
定義された既知の眼障害の治療に加えて、本発明は、白色光、青色光、ＦＡＦ、赤外線、近赤外線、ＤＮＩＲＡを含む、３００〜１００ｎｍの範囲の波長の光を使用した、または断面像、三次元像、および正面像を用いたＯＣＴによる、ｉｎ  ｖｉｖｏでのイメージングの特定のパターンを含む。ｉｎ  ｖｉｖｏでのイメージングの特定のパターンに対する使用では、ある薬剤を、特定の失明疾患を有する、罹患しやすい、またはリスクのある対象に投与することができる。このような診断または罹患しやすさは、たとえば眼の試験、家族性の素因、遺伝的な試験、リスク因子の解析、および血液または他のサイトカインまたは他のバイオマーカーのレベルにより、決定してもよく、これらは、ＦＡＦ、青色光、白色光、赤色を含まない光、近赤外線、赤外線、ＤＮＩＲＡなどのマルチモード解析を含むことができる。また、このような罹患しやすさは、たとえば断面像、三次元像、および正面像を用いたＯＣＴによる検出により決定してもよい。
【０１７１】
本発明の薬剤
様々な態様では、本明細書中に記載されるいずれかの化合物または薬剤は、本発明の薬剤である。
【０１７２】
様々な態様では、本発明は、候補化合物および／または試験化合物の同定および使用を提供する。候補化合物および／または試験化合物の同定および使用を提供する実施形態では、候補化合物および／または試験化合物は、化学物質、分子、化合物、生物学的な物質（たとえば抗体またはペプチド）、薬剤、プロドラッグ、細胞治療、低分子量合成化合物、または小分子薬剤であってもよい。一部の実施形態では、候補化合物および／または試験化合物は、当該分野で知られている化合物のライブラリーから選択されている。一部の実施形態では、候補化合物は、眼障害の治療、失明疾患の予防、または眼障害の発病比率の低減に有用である。
【０１７３】
様々な態様では、本発明は、糖尿病性失明疾患、非滲出型ＡＭＤおよび／またはＲＰＤを含む、本明細書中に記載される疾患または障害のいずれかを治療または予防する方法を提供する。一部の実施形態では、式Ｉの化合物、メトトレキサート、またはその薬学的に許容可能な塩は、同様に追加的な治療剤とともに投与される。様々な実施形態では、追加的な治療剤は、本明細書中に記載の眼障害を治療するのに有効な薬剤との併用療法に使用してもよい。様々な実施形態では、本明細書中に記載の眼障害の治療に有効な薬剤は、１つまたは複数の追加的な治療剤での治療を受けた患者に、投与される。追加的な治療剤は、たとえば、抗ＶＥＧＦ剤、ＡＣＥ阻害剤、ＰＰＡＲガンマアゴニストまたは部分的なアゴニスト、レニン阻害剤、ステロイド、およびオートファジーを調節する薬剤、ならびにセマピモド（ｓｅｍａｐｉｍｏｄ）、ＭｉＦ阻害剤、ＣＣＲ２阻害剤、ＣＫＲ−２８，２−チオイ ミダ ゾール、ＣＡＳ４４５４７９−９７−０、ＣＣＸ１４０，クロドロン酸、クロドロネート―リポソーム製剤、または塩化ガドリニウムを含む。
【０１７４】
様々な態様では、本発明は、薬剤（たとえば「本発明の薬剤」）での治療に応答しない可能性が高い眼障害の対象を同定すること、および／または対象の眼障害が薬剤での治療に応答するかどうかを決定することを提供する。
【０１７５】
一部の実施形態では、本発明の薬剤は、式Ｉ
【化３】
0006625064.tif 000004
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩であって、式中、各Ｒ１およびＲ２が、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、かつＲ３がＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルである、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩である。
【０１７６】
様々な実施形態では、Ｒ１およびＲ２は、独立して、水素、メチル、またはエチルである。
【０１７７】
一部の実施形態では、Ｒ１およびＲ２が、独立して、メチルまたはエチルである。
【０１７８】
一部の実施形態では、Ｒ１およびＲ２がメチルである。
【０１７９】
一部の実施形態では、Ｒ３が水素、メチルまたはエチルである
【０１８０】
一部の実施形態では、Ｒ３が水素である。
【０１８１】
一部の実施形態では、特に、Ｒ３が水素であり、式Ｉの化合物は、薬学的に許容可能な塩の形態である。
【０１８２】
一部の実施形態では、Ｒ１およびＲ２はメチルであり、Ｒ３は水素である。このような実施形態では、式Ｉの化合物は、２−（（１−ベンジルインダゾル−３−イル）メトキシ）−２−メチルプロピオン酸であり、２−メチル−２−［［１−（フェニルメチル）−１Ｈ−インダゾール−３イル］メトキシ］プロパン酸としても知られている。このような化合物は、一般的にビンダリットとして知られており、以下の構造を有する。
【化４】
0006625064.tif 000005
【０１８３】
ビンダリットの合成は、本明細書中全体が参照として援用されている米国特許第４，９９９，３６７号に詳細に記載されている。
【０１８４】
ビンダリットは、理論による拘束を望むものではないが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏでＭＣＰ−１の産生の阻害剤であり、炎症の動物モデルにおけるその有益な効果は、この抗ＭＣＰ−１活性に関連している可能性がある（たとえばＭｉｒｏｌｏ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｕｒ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｎｅｔｗ  ２００８；１９：１１９−１２２参照）。またビンダリットは、ＭＣＰ−２およびＭＣＰ−３の産生を選択的に阻害することが示されている（Ｍｉｒｏｌｏ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｕｒ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｎｅｔｗ  ２００８；１９：１１９−１２２参照）。
【０１８５】
一部の実施形態では、本発明の薬剤は、メトトレキサートまたはその薬学的に許容可能な塩である。メトトレキサートは、以下の構造を有する。
【化５】
0006625064.tif 000006
【０１８６】
メトトレキサートはまた、ＩＵＰＡＣ名（２Ｓ）−２−［（４−｛［（２，４−ジアミノプテリジン−６−イル）メチル］（メチル）アミノ｝ベンゾイル）アミノ］ペンタン二酸；「ＭＴＸ」；「アメトプテリン」によっても知られている。メトトレキサートナトリウムは、米国での処方により入手可能である。メトトレキサートの合成は、米国特許第４，０８０，３２５号に記載されており、この文献全体は本明細書中参照として援用されている。
【０１８７】
さらなる別の実施形態では、本発明の薬剤は、マクロファージの分極化の調節物質である。例示的なマクロファージ分極化の調節物質は、ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体γ（ＰＰＡＲ−ｇ）調節物質を含み、たとえば、アゴニスト、部分的なアゴニスト、およびアンタゴニスト、または組み合わせたＰＰＡＲγ／αアゴニストを含む。
【０１８８】
一部の実施形態では、ＰＰＡＲγの調節物質は、完全なアゴニストまたは部分的なアゴニストである。一部の実施形態では、ＰＰＡＲγの調節物質は、チアゾリジンジオン（ＴＺＤまたはグリタゾン）の薬剤分類のメンバーである。非限定的な例として、ＰＰＡＲγの調節物質は、ロシグリタゾン（ＡＶＡＮＤＩＡ）、ピオグリタゾン（ＡＣＴＯＳ）、トログリタゾン（ＲＥＺＵＬＩＮ）、ネトグリタゾン、リボグリタゾン、シグリタゾン、ロダニンのうちの１つまたは複数であってもよい。一部の実施形態では、ＰＰＡＲγの調節物質は、イルベサルタンおよびテルミサルタンのうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、ＰＰＡＲγの調節物質は、非ステロイド状の抗炎症性薬剤（たとえばイブプロフェンなどのＮＳＡＩＤ）、およびインドールである。既知の阻害剤として、実験的な薬剤のＧＷ−９６６２が挙げられる。ＰＰＡＲγの調節物質のさらなる例は、ＷＩＰＯの公報第１９９９／０６３９８３号、第２００１／０００５７９号、Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２０１１  Ｏｃｔ  ２５；１１（１１）：７５０−６１に記載されており、第２００２／０６８３８６号の方法を使用して同定した薬剤が記載されており、この参照文献全体は本明細書中参照として援用されている。
【０１８９】
一部の実施形態では、ＰＰＡＲγの調節物質は、「二重の」、または「均衡した」、または「選別された（ｐａｎ）」ＰＰＡＲ調節物質である。一部の実施形態では、ＰＰＡＲγの調節物質は、２つ以上のＰＰＡＲのアイソフォームを結合するグリタザール、たとえばムラグリタザル（Ｐａｒｇｌｕｖａ）およびテサグリタザル（Ｇａｌｉｄａ）およびアレグリタザルである。
【０１９０】
別の実施形態では、本発明の薬剤は、Ｂｉａｎｃｈｉ，  ｅｔ  ａｌ．  （Ｍａｒ  １９９５）．  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  （Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，  Ｍａｓｓ．）  １  （３）：  ２５４−２６６に記載されるようにセマピモド（ＣＮＩ−１４９３）であり、この内容全体は本明細書中参照として援用されている。
【０１９１】
さらなる別の実施形態では、本発明の薬剤は遊走阻止因子（ＭＩＦ）阻害剤である。例示的なＭＩＦ阻害剤は、国際特許公開公報第２００３／１０４２０３号、第２００７／０７０９６１号、第２００９／１１７７０６号、および米国特許第７，７３２，１４６号および第７，６３２，５０５号、および第７，２９４，７５３（７２９４７５３）号に記載されており、これらの内容全体は本明細書中参照として援用されている。一部の実施形態では、ＭＩＦ阻害剤は、（Ｓ，Ｒ）−３−（４−ヒドロキシフェニル）−４，５−ジヒドロ−５−イソキサゾール酢酸メチルエステル（ＩＳＯ−１）、イソキサゾリン、ｐ４２５（Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，  ２８７，  ３０６５３−３０６６３）、エポキシアザジラジオン、またはビタミンＥである。
【０１９２】
さらなる別の実施形態では、本発明の薬剤は、たとえば米国特許および特許公開公報の第７，７９９，８２４号、第８，０６７，４１５号、第２００７／０１９７５９０号、第２００６／００６９１２３号、第２００６／００５８２８９号、および第２００７／００３７７９４号に記載されるケモカイン受容体２（ＣＣＲ２）阻害剤であり、それらの内容全体は本明細書中に参照として援用されている。一部の実施形態では、ＣＣＲ２阻害剤は、マラビロク、セニクリビロク（ｃｅｎｉｃｒｉｖｉｒｏｃ）、ＣＤ１９２、ＣＣＸ８７２、ＣＣＸ１４０、２−（（イソプロピルアミノカルボニル）アミノ）−Ｎ−（２−（（シス−２−（（４−（メチルチオ）ベンゾイル）アミノ）シクロヘキシル）アミノ）−２−オキソエチル）−５−（トリフルオロメチル）−ベンズアミド、ビクリビロック、ＳＣＨ３５１１２５、ＴＡＫ７７９、Ｔｅｉｊｉｎ、ＲＳ−５０４３９３、化合物２、化合物１４、または化合物１９である（Ｐｌｏｓ  ＯＮＥ  ７（３）：  ｅ３２８６４、この内容は本明細書中参照として援用される）。
【０１９３】
様々な特定の実施形態では、本発明の薬剤は、ＣＫＲ−２Ｂ、２−チオイミダゾール、ＣＣＲ２アンタゴニスト（ＣＡＳ  ４４５４７９−９７−０）、およびＣＣＸ１４０のうちの１つまたは複数である。
【０１９４】
さらなる別の実施形態では、本発明の薬剤はクロドロネートである。さらなる別の実施形態では、薬剤は、Ｂａｒｒｅｒａ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ，  ２０００，  ４３，  ｐｐ．  １９５１−１９５９に記載されるクロドロネートリポソーム製剤であり、この内容全体は本明細書中参照として援用されている。
【０１９５】
さらなる別の実施形態では、本発明の薬剤は、ガドリニウムのキレートまたは非キレート型であり、たとえば塩化ガドリニウム（ＧＡＤ）である。
【０１９６】
様々な実施形態では、本発明の薬剤は抗ＶＥＧＦ剤である。本方法に有用な抗ＶＥＧＦ剤の非限定的な例として、ラニビズマブ、ベバシズマブ、アフリベルセプト、ＫＨ９０２ＶＥＧＦ受容体−Ｆｃ、融合タンパク質、２Ｃ３抗体、ＯＲＡ１０２、ペガプタニブ、ベバシラニブ（ｂｅｖａｓｉｒａｎｉｂ）、ＳＩＲＮＡ−０２７、デクルシン、デクルシノール、ピクロポドフィリン、グッグルステロン、ＰＬＧ１０１、エイコサノイドＬＸＡ４、ＰＴＫ７８７、パゾパニブ、アキシチニブ、ＣＤＤＯ−Ｍｅ、ＣＤＤＯ−Ｉｍｍ、シコニン、β−、ヒドロキシイソバレリルシコニン、ガングリオシドＧＭ３、ＤＣ１０１抗体、Ｍａｂ２５抗体、Ｍａｂ７３抗体、４Ａ５抗体、４Ｅ１０抗体、５Ｆ１２抗体、ＶＡ０１抗体、ＢＬ２抗体、ＶＥＧＦ−関連タンパク質、ｓＦＬＴ０１、ｓＦＬＴ０２、Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｂ３、ＴＧ１００８０１、ソラフェニブ、Ｇ６−３１抗体、融合抗体、およびＶＥＧＦのエピトープに結合する抗体が挙げられる。本方法に有用な抗ＶＥＧＦ剤のさらなる非限定的な例として、ヒトの血管内皮増殖因子−Ａ（ＶＥＧＦ−Ａ）、ヒトの血管内皮増殖因子−Ｂ（ＶＥＧＦ−Ｂ）、ヒトの血管内皮増殖因子−Ｃ（ＶＥＧＦ−Ｃ）、ヒトの血管内皮増殖因子−Ｄ（ＶＥＧＦ−Ｄ）およびヒトの血管内皮増殖因子−Ｅ（ＶＥＧＦ−Ｅ）のうちの１つまたは複数に特異的に結合する基質、ならびにＶＥＧＦのエピトープに結合する抗体が挙げられる。
【０１９７】
一実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤は、抗体のラニビズマブまたはその薬学的に許容可能な塩である。ラニビズマブは、商標ＬＵＣＥＮＴＩＳの下で市販されている。別の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤は、抗体のベバシズマブまたはその薬学的に許容可能な塩である。ベバシズマブは、商標ＡＶＡＳＴＩＮの下で市販されている。別の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤は、アフリベルセプトまたはその薬学的に許容可能な塩である。アフリベルセプトは、商標ＥＹＬＥＡの下で市販されている。一実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤は、ペガプタニブまたはその薬学的に許容可能な塩である。ペガプタニブ（Ｐｅｇａｐｔｉｎｉｂ）は、商標ＭＡＣＵＧＥＮの下で市販されている。別の実施形態では、抗ＶＥＧＦ剤は、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、またはＶＥＧＦ−ＥのエピトープなどのＶＥＧＦのエピトープに結合する抗体または抗体フラグメントである。一部の実施形態では、ＶＥＧＦおよびＶＥＧＦＲの結合性が阻害されるように、ＶＥＧＦアンタゴニストがＶＥＧＦのエピトープに結合する。一実施形態では、エピトープは、エピトープがフォールディングされたＶＥＧＦ分子の表面に曝露されているように表されたＶＥＧＦの３次元構造の構成を含む。一実施形態では、エピトープは、ＶＥＧＦ由来の直線状のアミノ酸配列である。
【０１９８】
様々な実施形態では、本発明の薬剤は、レニンアンジオテンシン系（ＲＡＳ）阻害剤である。一部の実施形態では、レニンアンジオテンシン系（ＲＡＳ）阻害剤は、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アンジオテンシン受容体遮断薬、およびレニン阻害剤のうちの１つまたは複数である。
【０１９９】
本発明に有用なアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤の非限定的な例として、限定するものではないが、アラセプリル、アラトリオプリル、アルチオプリルカルシウム、アンコベニン、ベナゼプリル、ベナゼプリル塩酸塩、ベナゼプリラート、ベナゼプリル（ｂｅｎｚａｚｅｐｒｉｌ）、ベンゾイルカプトプリル、カプトプリル、カプトプリルシステイン、カプトプリルグルタチオン、セラナプリル、セラノプリル（ｃｅｒａｎｏｐｒｉｌ）、セロナプリル、シラザプリル、シラザプリラート、コンバスタチン（ｃｏｎｖｅｒｓｔａｔｉｎ）、デラプリル、デラプリル−二酸（ｄｅｌａｐｒｉｌ−ｄｉａｃｉｄ）、エナラプリル、エナラプリラト、エナルキレン、エナラプリル（ｅｎａｐｒｉｌ）、エピカプトプリル、ホロキシミチン、ホスフェノプリル、ホセノプリル、フォスエノプリル・ナトリウム（ｆｏｓｅｎｏｐｒｉｌ  ｓｏｄｉｕｍ）、ホシノプリル、ホシノプリルナトリウム、ホシノプリラト、ホシノプリル酸、グリコプリル（ｇｌｙｃｏｐｒｉｌ）、ヘモルフィン−４、イダプリル（ｉｄａｐｒｉｌ）、イミダプリル、インドラプリル、インドラプリラト、リベンザプリル、リシノプリル、リシウミンＡ（ｌｙｃｉｕｍｉｎ  Ａ）、リシウミンＢ、ミキサンプリル、モエキシプリル、モエキシプリラート、モベルチプリル、ムラセインＡ、ムラセインＢ、ムラセインＣ、ペントプリル、ペリンドプリル、ペリンドプリラット、ピバロプリル（ｐｉｖａｌｏｐｒｉｌ）、ピボプリル（ｐｉｖｏｐｒｉｌ）、キナプリル、キナプリル塩酸塩、キナプリラート、ラミプリル、ラミプリラート、スピラプリル、スピラプリル塩酸塩、スピラプリラット、スピロプリル（ｓｐｉｒｏｐｒｉｌ）、スピラプリル塩酸塩、テモカプリル、テモカプリル塩酸塩、テプロチド、トランドラプリル、トランドラプリラット、ウチバプリル、ザビシプリル、ザビシプリラット、ゾフェノプリル、ゾフェノプリラト、その薬学的に許容可能な塩、およびその混合物が挙げられる。
【０２００】
本発明に有用であるアンジオテンシン受容体遮断薬の非限定的な例として、限定するものではないが、イルベサルタン（米国特許第５，２７０，３１７号、全体が本明細書中参照として援用されている）、カンデサルタン（米国特許第５，１９６，４４４号および第５，７０５，５１７号、全体が本明細書中参照として援用されている）、バルサルタン（米国特許第５，３９９，５７８号、全体が本明細書中参照として援用されている）、およびロサルタン（米国特許第５，１３８，０６９号、全体が本明細書中参照として援用されている））が挙げられる。
【０２０１】
本発明に有用なレニン阻害剤の非限定的な例として、限定するものではないが、アリスキレン、ジテキレン、エナルキレン、レミキレン、テルラキレン、シプロキレン、およびザンキレン、それらの薬学的に許容可能な塩、ならびにそれらの混合物が挙げられる。
【０２０２】
様々な実施形態では、本発明の薬剤はステロイドである。一部の実施形態では、ステロイドは、以下の例示的な化合物のファミリー：コルチコステロイド、ミネラリコステロイド（ｍｉｎｅｒａｌｉｃｏｓｔｅｒｏｉｄ）、および性ステロイド（たとえば潜在的にアンドロゲン性もしくはエストロゲン性分子、または抗アンドロゲン性（ａｎｔｉ−ａｎｄｏｇｅｎｉｃ）分子および抗エストロゲン性分子）に属する、または関連する化合物である。これらに含まれる非限定的な例として、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロン、フルオシノロン、アルドステロン、スピロノラクトン、ダナゾール（またはＯＰＴＩＮＡとしても知られている）、ならびにその他がある。
【０２０３】
様々な実施形態では、本発明の薬剤は、オートファジー、マイクロオートファジー、マイトファジー、または他の形態のオートファジーを調節する薬剤である。一部の実施形態では、候補薬剤および／または化合物は、シロリムス、タクロリミス（ｔａｃｒｏｌｉｍｉｓ）、ラパマイシン、エベロリムス、バフィロマイシン、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、スパウチン（ｓｐａｕｔｉｎ）−１、メトホルミン、ペリフォシン、レスベラトロール、トリコスタチン、バルプロ酸（ｖａｌｐｒｏｉｃ  ａｃｉｄｅ）、Ｚ−ＶＡＤ−ＦＭＫ、または当該分野で知られているその他、のうちの１つまたは複数である。理論による拘束を望むものではないが、オートファジー、マイクロオートファジー、マイトファジー、または他の形態のオートファジーを調節する薬剤は、たとえば限定するものではないが、細胞のオルガネラ、ミトコンドリア、小胞体、脂質、またはその他の細胞内の構成要素の再利用を変更し得る。さらに理論による拘束を望むものではないが、この薬剤は、微小管関連タンパク質１Ａ／１Ｂ軽鎖３（ＬＣ３）を介して作用してもよく、または作用しなくてもよい。
【０２０４】
本発明のさらなる薬剤として、たとえば、抗Ｄ因子抗体（たとえばランパリズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ））、抗βアミロイド（抗Ａβ）抗体（たとえばＧＳＫ９３３７７６（ＧＳＫ））、コルチコステロイド（たとえばフルオシノロンアセトニド）、ＭＣ−１１０１（ＭａｃｕＣＬＥＡＲ）、ＣＤ３４＋ 幹細胞療法、抗ＶＥＧＦ抗体（たとえばラニビズマブ）、ブリモニジン（アルファガン）、抗補体Ｃ５抗体（たとえばＬＦＧ３１６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ドキシサイクリン（ＯＲＡＣＥＡ）、エミクススタト塩酸塩、シロリムス（ＲＡＰＡＭＵＮＥ）、およびグラチラマー酢酸塩（ＣＯＰＡＸＯＮＥ）のうちの１つまたは複数が挙げられる。一部の実施形態では、ビンダリットは、非滲出型ＡＭＤおよび／またはＲＰＤの予防の治療においてこれら薬剤を用いて付属的に、または新たに付属的に使用される。
【０２０５】
非滲出型ＡＭＤおよび／またはＲＰＤの方法の文脈を含む、本発明のさらなる薬剤は、Ａｒｑ．  Ｂｒａｓ．  Ｏｆｔａｌｍｏｌ．  ｖｏｌ．７５  ｎｏ．１  Ｊａｎ．  ／  Ｆｅｂ．  ２０１２で見いだされており、この内容全体は本明細書中参照として援用されている。
【０２０６】
蛍光性化合物
一部の実施形態では、蛍光性化合物は、様々な蛍光波長を用いたイメージングに適している。一部の実施形態では、これらの波長は、可視光から赤外線、たとえば３９０ｎｍ〜１ｍｍの範囲にあり、たとえば青色光、白色光、および近赤外線を含む。一部の実施形態では、色素は近赤外色素である。一部の実施形態では、色素はＩＣＧである。
【０２０７】
一部の実施形態では、蛍光性化合物は、様々な蛍光波長を用いたイメージングに適している。一部の実施形態では、これらの波長は、可視光から赤外線、たとえば約３９０ｎｍ〜約１ｍｍの範囲にあり、たとえば青色光、白色光、および近赤外線を含む。一部の実施形態では、この吸収は、約３９０ｎｍ〜約１ｍｍである。一部の実施形態では、発光は約３９０ｎｍ〜約１ｍｍである。
【０２０８】
一部の実施形態では、蛍光性化合物は、約６００ｎｍ〜約９００ｎｍの波長を吸収し、かつ／または約７５０ｎｍ〜約９５０ｎｍの波長の光を発光する。
【０２０９】
一部の実施形態では、色素は近赤外色素である。一部の実施形態では、色素はＩＣＧである。一部の実施形態では、ＩＣＧ励起／発光フィルターは、７９５ｎｍ（励起）／８１０ｎｍ（発光）である。
【０２１０】
一部の実施形態では、蛍光性化合物、たとえば色素（ＩＣＧを含む）の用量は、蛍光性化合物の有効量である。様々な実施形態では、ＩＣＧの用量は、約０．１〜約１０ｍｇ／ｋｇ（動物）である。一部の実施形態では、この用量は、約０．１、または約０．３、または約０．５、または約１．０、または約２．０、または約３．０、または約４．０、または約５．０、または約６．０、または約７．０、または約８．０、または約９．０、または約１０．０ｍｇ／ｋｇ（動物）である。
【０２１１】
様々な実施形態では、蛍光性化合物またはその代謝物は、ＲＰＥ細胞および／または免疫細胞で起こる蛍光を引き起こす。
【０２１２】
他の実施形態では、本明細書中に記載の方法は、（ｉ）追加的な量の蛍光性化合物を動物に投与すること、または（ｉｉ）第２の蛍光性化合物を動物に投与することを含まない。
【０２１３】
毒素
一部の実施形態では、限定するものではないが、ＲＰＥまたは網膜を含む眼組織に影響を与える毒素が提供される。
【０２１４】
一部の実施形態では、毒素は、アルミニウム、アミノフェノキシアルカン（非限定的な例として、限定するものではないが、ラットに対する１、４、−ビス（４−アミノフェノキシ）−２−フェニルベンゼンを含む）、陽イオン性両染性薬剤／三環系抗うつ薬（非限定的な例として、限定するものではないが、アミオダロン、クロロアミトリプチリン（ｃｈｌｏｒｏａｍｉｔｒｉｐｔｙｌｉｎｅ）、クロルフェンテルミン、クロミプラミン、イミプラミン、イプリンドール、様々なアミノグリコシド、および他の陽イオン性両染性化合物が挙げられる）、デスフェリオキサミン、ジ−（ｐ−トリフルオロメチルフェニル）イソプロピルアミンハイドロクロライド、フルオライド（たとえばフッ化ナトリウム）、ヨウ素酸塩（非限定的な例として、限定するものではないが、ヨウ素酸ナトリウムまたはヨウ素酸カリウムが挙げられる）、ヨード酢酸、鉛、メタノールおよびギ酸、４，４’−メチレンジアニリン、Ｎ−メチルＮ−ニトロソウレア、ナフタレン、ナフトール（ｎａｐｔｈｏｌ）、ニトロアニリン（Ｎ−３−ピリジルメチル−Ｎ’−ｐ−ニトロフェニルウレア／ニトロアニリン／ピリミニル）、有機リン酸塩（非限定的な例として、限定するものではないが、エチルチオメトン、フェンチオン、およびフェニトロチオンが挙げられる）、シュウ酸塩（非限定的な例として、限定するものではないがシュウ酸ジブチルが挙げられる）、フェノチアジン（非限定的な例として、限定するものではないが、ピペリジルクロロフェノチアジン、チオリダジン、およびクロルプロマジンが挙げられる）、キノリン（非限定的な例として、限定するものではないが、クロロキンおよびヒドロキシクロロキンが挙げられる）、ストレプトゾトシン、タウリン欠乏、ウレタン、金属キレート剤により引き起こされる亜鉛欠乏、ならびにそれらの誘導体および変異体のうちの１つまたは複数である。
【０２１５】
一部の実施形態では、毒素はヨウ素酸塩である。一部の実施形態では、毒素はヨウ素酸ナトリウムまたはヨウ素酸カリウムである。
【０２１６】
一部の実施形態では、毒素は眼組織の萎縮症を誘導する。様々な実施形態では、この萎縮症はネクローシスおよび／またはアポトーシスを含む。様々な実施形態では、ネクローシスおよび／またはアポトーシスを含む萎縮症は、ＲＰＥ細胞の萎縮症である。一部の実施形態では、毒素はオートファジーを低減または修正する。一部の実施形態では、毒素は地図状萎縮および／または地図状萎縮の拡大を誘導する。一部の実施形態では、毒素は、上述の効果のうちの１つまたは複数を誘導する。
【０２１７】
一部の実施形態では、毒素は、１回、または２回、または３回投与される。一部の実施形態では、毒素は、１回、または２回、または３回、または４回、または５回投与される。一部の実施形態では、第２、または第３、または第４、または第５の投与は、第１の投与から約１日以内、または１週間以内、または１か月以内である。
【０２１８】
一部の実施形態では、投与された毒素は、本明細書中に記載の薬剤のうちの１つまたは複数であってもよい。様々な実施形態では、第２、または第３、または第４、または第５のパルスは、本明細書中に記載されており、かつ当該分野で知られている、オートファジー、細胞の生存、細胞死、増殖、再生などの調節物質である。
【０２１９】
別の実施形態では、本明細書中に記載の方法は、（ｉ）追加的な量の第１の毒素を動物に投与すること、および／または（ｉｉ）第２の毒素を動物に投与することを含む。一部の実施形態では、本明細書中に記載の方法は、眼組織の萎縮症のパッチ、または組織喪失パッチの形成、増殖、または拡大の比率の低下を観察することをさらに含む。
【０２２０】
様々な実施形態では、毒素の用量は、当業者に知られている。たとえば、適切な用量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ（対象の体重）の範囲、たとえば約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．９ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．１ｍｇ／ｋｇ、約１．２ｍｇ／ｋｇ、約１．３ｍｇ／ｋｇ、約１．４ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約１．６ｍｇ／ｋｇ、約１．７ｍｇ／ｋｇ、約１．８ｍｇ／ｋｇ、約１．９ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１１ｍｇ／ｋｇ、約１２ｍｇ／ｋｇ、約１３ｍｇ／ｋｇ、約１４ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約５５ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約６５ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約７５ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約８５ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇ、約９５ｍｇ／ｋｇ、または約１００ｍｇ／ｋｇ体重であってもよく、すべての値およびその間の範囲を含んでもよい。
【０２２１】
一実施形態では、毒素はＮａＩＯ３であり、この用量は約５０ｍｇ／ｋｇ体重である。一実施形態では、毒素はＮａＩＯ３であり、この用量は約４５ｍｇ／ｋｇ体重である。一実施形態では、毒素はＮａＩＯ３であり、この用量は約３０ｍｇ／ｋｇ体重である。
【０２２２】
薬学的に許容可能な塩および賦形剤
本明細書中に記載されるいずれかの薬剤は、無機塩基または有機塩基と反応できる無機酸また有機酸またはカルボキシル基と反応し、薬学的に許容可能な塩を形成することができる、十分に塩基性の官能基を有することができる。薬学的に許容可能な酸付加塩は、薬学的に許容可能な酸から形成されており、当該分野でよく知られている。このような塩は、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ６６，  ２−１９  （１９７７）  ａｎｄ  Ｔｈｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ；  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，  ａｎｄ  Ｕｓｅ．  Ｐ．  Ｈ．  Ｓｔａｈｌ  ａｎｄ  Ｃ．  Ｇ．  Ｗｅｒｍｕｔｈ  （ｅｄｓ．），  Ｖｅｒｌａｇ，  Ｚｕｒｉｃｈ  （Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）  ２００２に列挙されている薬学的に許容可能な塩を含み、これら文献全体は本明細書中参照として援用されている。
【０２２３】
薬学的に許容可能な塩として、非限定的な例として、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩（ｇｅｎｔｉｓｉｎａｔｅ）、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルカル酸塩（ｇｌｕｃａｒｏｎａｔｅ）、サッカラート、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホナート、カンファースルホン酸塩、パモ酸塩、フェニル酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、アクリル酸塩、クロロ安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ｏ−アセトキシ安息香酸塩、ナフタレン−２−ベンゾアート、イソ酪酸塩、フェニル酪酸塩、α−ヒドロキシ酪酸塩、ブチン−１、４−ジカルボン酸塩、ヘキシン−１、４−ジカルボン酸塩、カプリン酸塩、カプリル酸塩、桂皮酸塩、グリコール酸塩（ｇｌｙｃｏｌｌａｔｅ）、ヘプタン酸塩、馬尿酸塩、リンゴ酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、ニコチン酸塩、フタル酸塩、テレフタル酸塩（ｔｅｒａｐｈｔｈａｌａｔｅ）、プロピオル酸塩、プロピオン酸塩、フェニルプロピオン酸塩、セバシン酸塩、スベリン酸塩、ｐ−ブロモベンゼンスルホン酸塩、クロロベンゼンスルホン酸塩、エチルスルホン酸塩、２−ヒドロキシエチルスルホ酸塩、メチルスルホン酸塩、ナフタレン−１−スルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、ナフタレン−１，５−スルホン酸塩、キシレンスルホナート、および酒石酸塩の塩が挙げられる。
【０２２４】
また、用語「薬学的に許容可能な塩」は、カルボン酸官能基などの酸性官能基、および塩基を有する本発明の化合物の塩を指す。適切な塩基として、限定するものではないが、ナトリウム、カリウム、およびリチウムなどのアルカリ金属の水酸化物；カルシウムおよびマグネシウムなどのアルカリ土類金属の水酸化物；アルミニウムおよび亜鉛などの他の金属の水酸化物；アンモニア；ならびに非置換型またはヒドロキシ置換型のモノ、ジ、またはトリアルキルアミン、ジシクロヘキシルアミンなどの有機アミン、；トリブチルアミン；ピリジン；Ｎ−メチル、Ｎ−エチルアミン；ジエチルアミン；トリエチルアミン；モノ―、ビス―、トリス―（２−ヒドロキシエチル）アミン、２−ヒドロキシ−ｔｅｒｔ−ブチルアミン、またはトリス（ヒドロキシメチル）メチルアミンなどのモノ―、ビス―、トリス（２−ＯＨ低級アルキルアミン）、またはＮ，Ｎ−ジメチルＮ−（２−ヒドロキシエチル）アミンまたはトリ−（２−ヒドロキシエチル）アミンなどのＮ，Ｎ−ジ−低級アルキル−Ｎ−（ヒドロキシル−低級アルキル）−アミン；Ｎ−メチルＤ−グルカミン；ならびにアルギニン、リジンなどのアミノ酸が挙げられる。
【０２２５】
一部の実施形態では、本発明の薬剤は、この形態または薬学的に許容可能な塩の形態にある。一部の実施形態では、薬学的に許容可能な塩はナトリウム塩である。一部の実施形態では、特に、式Ｉの化合物のＲ３は水素であり、式Ｉの化合物は薬学的に許容可能な塩の形態である。一部の実施形態では、式Ｉの化合物は、ビンダリットの薬学的に許容可能な塩である。一部の実施形態では、メトトレキサートは、この形態または薬学的に許容可能な塩である。一部の実施形態では、メトトレキサートの薬学的に許容可能な塩は、メトトレキサートナトリウムである。
【０２２６】
さらに、本明細書中に記載のいずれかの薬剤は、薬学的に許容可能な担体またはビヒクルを含む組成物の成分として対象に投与することができる。このような組成物は、任意に、適切な投与形態を提供するために適切な量の薬学的に許容可能な賦形剤を含むことができる。
【０２２７】
薬学的な賦形剤は、水などの液体、およびピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油などの石油、動物、植物油、または合成由来の油を含む油とすることができる。薬学的な賦形剤は、生理食塩水、アカシアガム、ゼラチン、デンプンペースト、タルク、ケラチン、コロイドシリカ、尿素などとすることができる。さらに、補助剤、安定剤、増粘剤、潤滑剤、および着色剤を使用することができる。一実施形態では、薬学的に許容可能案な賦形剤は、対象に投与される際は無菌性である。本明細書中に記載のいずれかの薬剤が静脈内投与される場合、水は有用な賦形剤である。生理食塩水溶液および水性デキストロースおよびグリセロール溶液もまた、液体の賦形剤、特に注射可能な溶液用の液体賦形剤として使用することができる。また、適切な薬学的な賦形剤として、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、コムギ、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアラート、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。本明細書中に記載の薬剤は、必要に応じて、少量の湿潤剤または乳化剤、またはｐＨ緩衝剤を含むこともできる。
【０２２８】
製剤、投与、および用量
本明細書中に記載のいずれかの薬剤は、液剤、懸濁剤、乳剤、眼内注射、硝子体内注射、局所目薬、結膜下注射、テノン嚢下注射、経強膜製剤、錠剤、丸剤、ペレット、カプセル剤、液体を含むカプセル剤、散剤、徐放製剤、坐剤、乳剤、エアゾール剤、噴霧剤、懸濁剤の形態、または使用に適した他のいずれかの形態をとることができる。一実施形態では、組成物は、硝子体内注射（たとえばＩＬＵＶＩＥＮまたは類似の形態を参照）、または移植（たとえばＲＥＴＩＳＥＲＴまたは類似の形態を参照）に適している。一実施形態では、組成物はカプセル剤（たとえば米国特許第５，６９８，１５５号参照）の形態である。適切な薬学的な他の賦形剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １４４７−１６７６  （Ａｌｆｏｎｓｏ  Ｒ．  Ｇｅｎｎａｒｏ  ｅｄｓ．，  １９ｔｈ  ｅｄ．  １９９５）に記載されており、これは本明細書中参照として援用されている。
【０２２９】
一実施形態では、本明細書中に記載のいずれかの薬剤は、たとえば硝子体内または眼内投与、局所および／または静脈内投与を含む、眼の投与のために製剤化されている。概して、投与用の組成物は、無菌性、等張性の水性バッファーを含む。必要に応じて、組成物は、可溶化剤をも含む。また薬剤は、当該分野で知られている適切なビヒクルまたは送達デバイスを用いて送達できる。本明細書中で要点を述べた併用療法は、単一の送達ビヒクルまたは送達デバイスで同時に送達できる。投与用の組成物は、任意に、注射部位での疼痛を弱めるために、リグノカインなどの局所麻酔剤を含むことができる。
【０２３０】
一実施形態では、本明細書中に記載のいずれかの薬剤は、眼内投与に適合した組成物として、定例的な手段に従い製剤化されている。
【０２３１】
一実施形態では、本明細書中に記載のいずれかの薬剤は、ヒトへの経口投与に適合した組成物として、定例的な手段に従い製剤化されている。経口送達用の組成物は、たとえば錠剤、甘味入り錠剤、水性または油性懸濁剤、顆粒剤、散剤、乳剤、カプセル剤、シロップ、またはエリキシル剤の形態とすることができる。経口投与した組成物は、１つまたは複数の薬剤、たとえばフルクトース、アスパルテーム、またはサッカリンなどの甘味剤；ペパーミント、ウインターグリーンまたはサクランボの油などの芳香剤；着色剤；および保存剤を含むことにより、薬学的に美味な製剤を提供することができる。さらに、錠剤または丸剤の形態の場合、組成物は、胃腸管での分解および吸収を遅らせることにより、長い期間持続する作用を提供するために、コーティングすることができる。浸透圧的に活性に駆動する本明細書中に記載のいずれかの薬剤を囲む選択的に透過性の膜もまた、経口投与する組成物に適している。これら後者の場合では、カプセル剤を囲む環境からの流体は、駆動する化合物により吸収され、これにより、駆動化合物は膨張して、開口部を介して薬剤または薬剤組成物を移動させる。これらの送達プラットフォームは、即時型の放出製剤のスパイク型プロファイルとは反対に本質的にゼロ次のプロファイルを提供することができる。モノステアリン酸グリセロールまたはステアリン酸グリセロールなどの徐放物質もまた有用とすることができる。経口組成物は、マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの標準的な賦形剤を含むことができる。一実施形態では、賦形剤は、薬物学的なグレードである。
【０２３２】
成分は、たとえば、アンプル、プレフィルドシリンジ、または活性成分の量を示す小包などの密閉された容器内の、あらかじめ混合した溶液、凍結乾燥した粉体、または水を含まない濃縮物として、単位剤形中に、別々またはともに混合して供給されてもよい。本明細書中に記載のいずれかの薬剤が、硝子体内または眼内の送達により投与される場合、薬剤は、たとえばプレフィルドシリンジまたは注射器、または適切なシリンジに廃棄するためのアンプルに、分注することができる。本明細書中に記載のいずれかの薬剤が吸入により投与される場合、たとえば、無菌性医薬グレードの水または生理食塩水を含む吸入ビンに分注することができる。本明細書中に記載のいずれかの薬剤が注射により投与される場合、注射用の滅菌水または生理食塩水のアンプルが、成分が投与前に混合できるように提供することができる。
【０２３３】
本明細書中に記載のいずれかの薬剤は、制御された放出または徐放の手段により、または当業者によく知られている送達デバイスにより、投与することができる。例として、限定するものではないが、米国特許第３，８４５，７７０号；第３，９１６，８９９号；第３，５３６，８０９号；第３，５９８，１２３号；第４，００８，７１９号；第５，６７４，５３３号；第５，０５９，５９５号；第５，５９１，７６７号；第５，１２０，５４８号；第５，０７３，５４３号；第５，６３９，４７６号；第５，３５４，５５６号；および第５，７３３，５５６号に記載されるものを含み、これらそれぞれは、参照として本明細書中に全体を援用されている。このような剤形は、変動する特性における所望の放出プロファイルを提供するために、たとえば、ヒドロプロピルメチルセルロース、他のポリマーマトリクス、ゲル、透過性膜、浸透系、多層コーティング、マイクロ粒子、ナノ粒子、リポソーム、マイクロスフィア、またはそれらの組み合わせを使用して、１つまたは複数の活性成分の制御放出または徐放に有用とすることができる。本明細書中に記載されるものを含む、当業者に知られている適切な制御放出の製剤または徐放製剤は、本明細書中に記載の薬剤の活性成分とともに使用するために、容易に選択することができる。よって本発明は、限定するものではないが、制御放出または徐放に適合している錠剤、カプセル剤、ジェルキャップ、およびカプレットなどの経口投与に適した単回単位剤形を提供する。
【０２３４】
活性成分の制御放出または徐放は、限定するものではないが、ｐＨの変化、温度の変化、適切な光波長による刺激、酵素の濃度もしくは利用可能性、水の濃度もしくは利用可能性、または他の生理学的な条件もしくは化合物を含む、様々な条件により刺激することができる。
【０２３５】
組成物は、それぞれ、従来の混合、顆粒化、コーティング、または重合方法により、調製することができ、本組成物は、一実施形態では、本明細書中に記載のいずれかの薬剤を、約０．１〜約９９容量または重量％、別の実施形態では、約１〜約７０容量または重量％含むことができる。
【０２３６】
別の実施形態では、本明細書中に記載のいずれかの薬剤は、別の薬剤と同時に投与する場合に相乗的に作用し、このような薬剤を単剤療法として使用する場合の一般的に使用される用量よりも低い用量で投与されている。
【０２３７】
たとえば、本明細書中に記載のいずれかの薬剤の用量、および投与スケジュールは、限定するものではないが、治療される眼障害、対象の一般的な健康状態、および投与する実務者の裁量を含む様々なパラメータに依存することができる。本明細書中に記載のいずれかの薬剤は、その必要がある対象への追加的な治療剤の投与の前（たとえば５分前、１５分前、３０分前、４５分前、１時間前、２時間前、４時間前、６時間前、１２時間前、２４時間前、４８時間前、７２時間前、９６時間前、１週間前、２週間前、３週間前、４週間前、５週間前、６週間前、８週間前、または１２週間前）、当該投与と同時、または当該投与の後（たとえば５分後、１５分後、３０分後、４５分後、１時間後、２時間後、４時間後、６時間後、１２時間後、２４時間後、４８時間後、７２時間後、９６時間後、１週間後、２週間後、３週間後、４週間後、５週間後、６週間後、８週間後、または１２週間後）に投与することができる。様々な実施形態では、本明細書中に記載のいずれかの薬剤は、１分空けて、１０分空けて、３０分空けて、１時間未満空けて、１時間空けて、１〜２時間空けて、２〜３時間空けて、３〜４時間空けて、４〜５時間空けて、５〜６時間空けて、６〜７時間空けて、７〜８時間空けて、８〜９時間空けて、９〜１０時間空けて、１０〜１１時間空けて、１１〜１２時間空けて、２４時間以下空けて、または４８時間以下空けて、投与する。一実施形態では、式Ｉの化合物、メトトレキサート、またはそれらの薬学的に許容可能な塩を含む本発明の薬剤、および１つまたは複数の追加的な治療剤は、３時間以内に投与する。別の実施形態では、式Ｉの化合物、メトトレキサート、またはそれらの薬学的に許容可能な塩を含む本発明の薬剤、および１つまたは複数の追加的な治療剤は、１分〜２４時間空けて投与する。
【０２３８】
単回用量を生成するために担体物質と混合した本明細書中に記載のいずれかの薬剤の量は、治療される対象、および特定の投与形式に応じて変動し得る。ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏでのアッセイは、最適な投与範囲の同定を支援するために使用することができる。
【０２３９】
一般的に、有用な用量は、当業者に知られている。たとえば用量は、文献Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，  ６６ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  ＰＤＲ  Ｎｅｔｗｏｒｋ；  ２０１２  Ｅｄｉｔｉｏｎ  （Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ２７，  ２０１１）を用いて決定されており、この内容全体は、本明細書中参照として援用されている。
【０２４０】
本明細書中に記載のいずれかの薬剤の用量は、病態の重症度、病態は治療または予防されるべきかどうか、ならびに治療される対象の年齢、体重、および健康状態を含むいくつかの要因に依存する場合がある。さらに、特定の対象についての薬理ゲノミクス（治療の薬物動態学的、薬力学的、または有効なプロファイルに及ぼす遺伝子型の作用）の情報は、使用する用量に影響する場合もある。さらに、正確な個々の用量は、投与される薬剤の特定の組み合わせ、投与時間、投与経路、製剤の性質、排出速度、治療される特定の眼障害、障害の重症度、および障害の解剖学的な位置を含む様々な要因に応じて、いくらか調節することができる。用量の一部の変動は、予測することができる。
【０２４１】
一部の実施形態では、投与は、経口投与、または血管内投与、または眼内投与、または眼球周囲投与、または眼の表面への投与により、効果を発揮する。
【０２４２】
ヒトの眼に投与する場合、たとえば硝子体内に投与する場合、たとえば式Ｉ、メトトレキサート、またはその薬学的に許容可能な塩、および／または追加的な治療剤を含む、本発明の薬剤の用量は、通常、投与あたり０．００３ｍｇ〜５．０ｍｇ／眼、または投与あたり０．０３ｍｇ〜３．０ｍｇ／眼、または投与あたり０．１ｍｇ〜１．０ｍｇ／眼である。一実施形態では、用量は、０．０３ｍｇ、０．３ｍｇ、１．５ｍｇ、または３．０ｍｇ／眼である。別の実施形態では、用量は０．５ｍｇ／眼である。用量は、眼あたり０．０１ｍＬ〜０．２ｍＬの範囲で投与され、または眼あたり０．０３ｍＬ〜０．１５ｍＬの範囲で投与され、または眼あたり０．０５ｍＬ〜０．１０ｍＬの範囲で投与されることができる。一実施形態では、投与は、少なくとも３か月間、１ケ月に１回の４００μｇの化合物である。
【０２４３】
一般的に、哺乳類に経口投与する場合、本明細書中に記載のいずれかの薬剤の用量は、０．００１ｍｇ／ｋｇ／日〜１００ｍｇ／ｋｇ／日、０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜５０ｍｇ／ｋｇ／日、または０．１ｍｇ／ｋｇ／日〜１０ｍｇ／ｋｇ／日であってよい。ヒトに経口投与する場合、本明細書中に記載のいずれかの薬剤の用量は、通常、０．００１ｍｇ〜１０００ｍｇ／日、１ｍｇ〜６００ｍｇ／日、または５ｍｇ〜３０ｍｇ／日である。一実施形態では、経口用量は、６００ｍｇ／日である。一実施形態では、経口用量は、２回の３００ｍｇ用量／日である。別の実施形態では、経口用量は、７．５ｍｇ／週〜１５ｍｇ／週である。
【０２４４】
非経口注射により本明細書中に記載のいずれかの薬剤の投与では、用量は、通常、０．１ｍｇ〜２５０ｍｇ／日、１ｍｇ〜２０ｍｇ／日、または３ｍｇ〜５ｍｇ／日である。注射は、１日に最大４回行われてもよい。一般的に、経口投与または非経口投与される場合、本明細書中に記載のいずれかの薬剤の用量は、通常、０．１ｍｇ〜１５００ｍｇ／日、または０．５ｍｇ〜１０ｍｇ／日、または０．５ｍｇ〜５ｍｇ／日である。最大３０００ｍｇ／日の用量を投与することができる。
【０２４５】
一部の実施形態では、眼に本明細書中に記載のいずれかの薬剤を１つまたは複数投与することが望ましくてもよい。投与は、非限定的な例として、眼内、硝子体内、局所（限定するものではないが点眼薬および軟膏を含む）、結膜下、テノン嚢下、経強膜、脈絡膜上、網膜下、であってもよく、かつイオン導入を介してもよい。
【０２４６】
たとえば、皮内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、静脈内投与、皮下投与、鼻腔内投与、硬膜外投与、経口投与、舌下投与、鼻腔内投与、脳内投与、腟内投与、経皮的投与、直腸投与、吸入による投与、局所投与、特に耳、鼻、眼、または皮膚への投与などの他の投与経路もまた、使用することができる。
【０２４７】
投与経路は、実務者の裁量に任せることができ、健康状態の部位に部分的に依存する。多くの場合、投与は、本明細書中に記載のいずれかの薬剤の血流内への放出をもたらす。
【０２４８】
本明細書中に記載のいずれかの薬剤は経口投与することができる。またこのような薬剤は、たとえば静脈内吸入、またはボーラス注射により、上皮または皮膚粘膜の裏層（たとえば口腔粘膜、直腸および腸の粘膜など）を介した吸収によるといった、他のいずれかの従来の経路により投与することができ、かつ、別の生物学的に活性の薬剤とともに投与することができる。投与は全身性または局所性とすることができる。様々な送達システムは既知であり、たとえばリポソーム、マイクロ粒子、マクロカプセル、カプセルなどへの封入があり、投与に使用することができる。
【０２４９】
さらなる投与方法として、限定するものではないが、眼内投与、硝子体内投与、局所的な眼投与（限定するものではないが、点眼薬、軟膏、およびインサートを含む）、結膜下投与、テノン嚢下投与、脈絡膜上投与、経強膜投与、皮内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、静脈内投与、皮下投与、鼻腔内投与、硬膜外投与、経口投与、舌下投与、鼻腔内投与、脳内投与、膣内投与、経皮投与、直腸投与、吸入による投与または局所投与、特に、耳、鼻、眼、または皮膚への投与が挙げられる。一部の実施形態では、１超の、本明細書中に記載のいずれかの薬剤を眼に投与する。投与は、非限定的な例として、眼内、硝子体内、局所（限定するものではないが、点眼薬および軟膏を含む）、結膜下投与、テノン嚢下投与、経強膜投与、およびイオン導入であってもよい。投与形式は、実務者の裁量にゆだねることができ、健康状態の部位に部分的に依存する。多くの例では、投与により、血流への放出がもたらされる。
【０２５０】
特定の実施形態では、治療の必要のある領域に局所的に投与することが望ましい場合がある。
【０２５１】
別の実施形態では、ベシクル、特にリポソームにおいて送達を行うことができる（Ｌａｎｇｅｒ，  １９９０，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３；  Ｔｒｅａｔ  ｅｔ  ａｌ．，  ｉｎ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ，  Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｆｉｄｌｅｒ  （ｅｄｓ．），  Ｌｉｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ｐｐ．  ３５３−３６５  （１９８９）参照）。さらなる別の実施形態では、送達は制御放出システムにおいて行うことができる。一実施形態では、遅行放出型の眼内デバイスを使用してもよい。一部の実施形態では、このデバイスは、局所的に送達された浸食し得るまたは非浸食性の液体、ゲル、ポリマーなどからなる。
【０２５２】
別の実施形態では、ポリマー物質を使用することができる（Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，  Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ  （ｅｄｓ．），  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．，  Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，  Ｆｌｏｒｉｄａ  （１９７４）；  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，  Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，  Ｓｍｏｌｅｎ  ａｎｄ  Ｂａｌｌ  （ｅｄｓ．），  Ｗｉｌｅｙ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９８４）；  Ｒａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｐｅｐｐａｓ，  １９８３，  Ｊ．  Ｍａｃｒｏｍｏｌ．  Ｓｃｉ．  Ｒｅｖ．  Ｍａｃｒｏｍｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２３：６１；  ｓｅｅ  ａｌｓｏ  Ｌｅｖｙ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８５，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８：１９０；  Ｄｕｒｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９，  Ａｎｎ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  ２５：３５１；  Ｈｏｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９，  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．  ７１：１０５参照）。別の実施形態では、制御放出システムは、治療される標的領域、たとえば網膜の近位に配置することにより、全身性の用量の一部のみが必要とすることができる。（たとえばＧｏｏｄｓｏｎ，  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，  ｓｕｐｒａ，  ｖｏｌ．  ２，  ｐｐ．  １１５−１３８  （１９８４）参照）。Ｌａｎｇｅｒ，  １９９０，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３）による概要で論述された他の制御放出システムを使用してもよい。
【０２５３】
本明細書中に記載のいずれかの薬剤の投与は、独立して、１日に１〜４回、または１ケ月あたり１〜４回、または１年に１〜６回、または２年に１度、３年に１度、４年に１度、または５年に１度とすることができる。投与は、１日、または１ケ月、２ケ月、３ケ月、６ケ月、１年、２年、３年の間とすることができ、さらには対象が生きている間持続してもよい。慢性的な長期間の投与は、多くの場合で表記されている。用量は、単回投与として投与してもよく、または複数回の用量に分割してもよい。数か月または数年、またはそれ以上長い投与期間が必要とされる場合があるが、一般的に、所望の用量は、長期間、通常少なくとも数週間または数か月間にわたる長期間の設定された間隔で投与されるべきである。
【０２５４】
本明細書中のいずれかの薬剤を利用する投与レジメンは、対象の種類、種族、年齢、体重、性別、および健康状態、治療される病態の重症度、投与経路、対象の腎機能または肝機能、個体の薬理ゲノミクス的性質、ならびに使用される本発明の特定の化合物を含む様々な要因にしたがい、選択することができる。本明細書中に記載のいずれかの薬剤は、単回一日用量で投与することができ、または総一日用量は、１日２回、３回、または４回の分割した用量で投与することができる。さらに、本明細書中に記載のいずれかの薬剤は、投与レジメンにわたり断続的ではなく、むしろ連続的に投与することができる。
【０２５５】
治療方法
様々な態様では、本発明は、本明細書中に記載の眼障害を治療または予防する方法を提供する。これらの態様では、「本発明の薬剤」は、単剤療法および併用療法（たとえば追加的な治療剤）の両方に有用な化合物を含む。
【０２５６】
様々な態様では、本発明は、眼障害を治療または予防する方法であって、眼障害の治療に有効な薬剤の有効量をその必要がある対象に投与することを含み、当該薬剤が、ビンダリットなどの式Ｉの化合物を含む、免疫調節剤（非限定的な例として、ＭＣＰ−１および／またはＭＣＰ−２および／またはＭＣＰ−３調節剤）、ＰＰＡＲγモジュレータ、遊走阻止因子（ＭＩＦ）阻害剤、およびケモカイン受容体２（ＣＣＲ２）阻害剤である。一部の実施形態では、免疫調製剤はマクロファージを標的とする。一部の実施形態では、免疫調節剤は、Ｍ１／Ｍ２の分極化を調節する。一部の実施形態では、免疫調節剤は、対象のＭ１マクロファージ活性を調節（たとえば低減）し、かつ／または対象のＭ２マクロファージの活性を調節（たとえば増大または維持）する。一部の態様では、本発明は、眼障害を治療または予防する方法であって、眼障害の治療に有効な薬剤の有効量を、その必要のある対象に投与することを含み、対象が、ＣＤ６４、ＩＤＯ、ＳＯＣＳ１、ＣＸＣＬ１０  Ｍａｒｃｏ、Ｓｏｃｓ３、Ｎｏｓ２、Ｉｌ１２ｂ、Ｐｔｇｓ２（Ｃｏｘ２）、Ｉｌ２３α（Ｉｌ２３ｐ１９）、およびＩｄｏ１のうちの１つまたは複数の発現または活性の増加または減少を有する、方法に関する。
【０２５７】
一部の実施形態では、対象は、ＭＲＣ１、ＴＧＭ２、ＣＤ２３、ＣＣＬ２２ Ｒｅｌｍａ（Ｆｉｚｚ１、Ｒｅｔｎｌａ）、Ｓｏｃｓ２、Ｉｒｆ４、Ｃｈｉａ（Ａｍｃａｓｅ）、Ｃｈｉ３ｌ１（Ｇｐ３９、Ｙｋｌ４０）、Ｃｈｉ３ｌ２（Ｙｋｌ３９）、Ｃｈｉ３ｌ３（Ｙｍ１）、Ｃｘｃｌ１３、Ｃｃｌ１２、Ｃｃｌ２４、およびＫｌｆ４のうちの１つまたは複数の発現または活性の増加または減少を有する。
【０２５８】
一部の実施形態では、対象は、Ｃｃｌ５、ＣＤ１６３、Ｃｘ３Ｃｒ１、Ｆａｓｌｇ、Ｇｆａｐ、Ｃｓｆ２、Ｉｃａｍ１、Ｉｆｎｇ、Ｉｌ１０、Ｉｌ１２ｂ、Ｉｌ１３、Ｉｌ１７ａ、Ｉｌ１８、Ｉｌ１ｂ、Ｉｌ２２、Ｉｌ４、Ｉｌ６、Ｋｌｆ４、Ｍｒｃ１、Ｍｙｄ８８、Ｎｌｒｐ３、Ｎｏｓ２、Ｐｐａｒγ、Ｔｇｆｂ１、Ｔｌｒ４、Ｔｎｆ、Ｖｃａｍ１、Ｃｃｌ２、Ｃｃｌ５、Ｃｃｌ７、Ｃｃｒ２、Ｓｏｃｓ１、Ｓｏｃｓ３、Ｓｔａｔ１、Ｓｔａｔ３、およびＳｔａｔ６のうちの１つまたは複数の発現または活性の増加または減少を有する。一部の実施形態では、対象は、Ｍｙｄ８８、Ｋｌｆ４、Ｎｌｒｐ３、Ｃｃｌ２、Ｃｃｌ５、Ｃｃｌ７、Ｓｏｃｓ１、Ｓｏｃｓ３、Ｓｔａｔ１、Ｓｔａｔ３、およびＳｔａｔ６のうちの１つまたは複数の発現または活性の増加または減少を有する。
【０２５９】
一部の実施形態では、ビンダリットは、直接的または間接的に、以下の、Ｃｃｌ５、ＣＤ１６３、Ｃｘ３Ｃｒ１、Ｆａｓｌｇ、Ｇｆａｐ、Ｃｓｆ２、Ｉｃａｍ１、Ｉｆｎｇ、Ｉｌ１０、Ｉｌ１２ｂ、Ｉｌ１３、Ｉｌ１７ａ、Ｉｌ１８、Ｉｌ１ｂ、Ｉｌ２２、Ｉｌ４、Ｉｌ６、Ｋｌｆ４、Ｍｒｃ１、Ｍｙｄ８８、Ｎｌｒｐ３、Ｎｏｓ２、Ｐｐａｒγ、Ｔｇｆｂ１、Ｔｌｒ４、Ｔｎｆ、Ｖｃａｍ１、Ｃｃｌ２、Ｃｃｌ５、Ｃｃｌ７、Ｃｃｒ２、Ｓｏｃｓ１、Ｓｏｃｓ３、Ｓｔａｔ１、Ｓｔａｔ３、およびＳｔａｔ６のうちのいずれかの特異的な発現を、任意に、マクロファージまたはＲＰＥにおいて直接的にもたらす。一部の実施形態では、ビンダリットはＮＦκＢを調節する。
【０２６０】
一態様では、本発明は、眼障害を治療または予防する方法であって、ＭＣＰ−１調節剤の有効量をその必要がある対象に投与することを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、ＭＣＰ−１調節剤は、ＭＣＰ遺伝子プロモーター／エンハンサー領域の遠位および／または近位の制御領域を標的とする。一部の実施形態では、ＭＣＰ−１調節剤は、ＭＣＰ−１プロモーターの近位制御領域を標的とする。一部の実施形態では、本発明は、眼障害を治療または予防する方法であって、ＭＣＰ−２および／またはＭＣＰ−３調節剤の有効量をその必要のある対象に投与することを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、ＭＣＰ−２および／またはＭＣＰ−３調節剤は、任意に、ＭＣＰ―２および／またはＭＣＰ−３遺伝子のプロモーター／エンハンサー領域の遠位および／または近位制御領域を標的とする。一部の実施形態では、ＭＣＰ−２および／またはＭＣＰ−３調節剤は、任意に、ＭＣＰ−２および／またはＭＣＰ−３プロモーターの近位制御領域を標的とする。一部の実施形態では、ＭＣＰ−１および／またはＭＣＰ−２および／またはＭＣＰ−３調節剤は、ビンダリットなどの式Ｉの化合物である。
【０２６１】
一態様では、本発明は、眼障害を治療または予防する方法であって、ＭＣＰ−１調節剤の有効量をその必要のある対象に投与することを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、ＭＣＰ−１調節剤は、ＭＣＰ−１プロモーターの近位制御領域を標的とする。一部の実施形態では、本発明は、眼障害を治療または予防する方法であって、ＭＣＰ−２および／またはＭＣＰ−３調節剤の有効量をその必要のある対象に投与することを含み、ＭＣＰ−２および／またはＭＣＰ−３調節剤が、ＭＣＰ−２および／またはＭＣＰ−３プロモーターの近位制御領域を任意に標的とする、方法を提供する。
【０２６２】
一部の実施形態では、対象は、抗Ｄ因子抗体（たとえばランパリズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ））、抗βアミロイド（抗Ａβ）抗体（たとえばＧＳＫ９３３７７６（ＧＳＫ））、コルチコステロイド（たとえばフルオシノロンアセトニド）、ＭＣ−１１０１（ＭａｃｕＣＬＥＡＲ）、ＣＤ３４＋ 幹細胞療法、抗ＶＥＧＦ抗体（たとえばラニビズマブ）、ブリモニジン（アルファガン）、抗補体Ｃ５抗体（たとえばＬＦＧ３１６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ドキシサイクリン（ＯＲＡＣＥＡ）、エミクススタト塩酸塩、シロリムス（ＲＡＰＡＭＵＮＥ）、およびグラチラマー酢酸塩（ＣＯＰＡＸＯＮＥ）のうちの１つまたは複数での治療を受けていない、またはこれら１つもしくは複数に非応答性である。一部の実施形態では、対象は、直径約１２５μｍ超の少なくとも１つのドルーゼンの存在により確認されたＡＭＤのエビデンスを有する。一部の実施形態では、対象は、以前のまたは活動性の脈絡膜新生血管（ＣＮＶ）のエビデンスを有さない。一部の実施形態では、対象は、１つまたは複数の眼に総面積約２〜約２ｍｍ２の、１つまたは複数の良好に画定されたＶＡ病変を有する。一部の実施形態では、対象は、約３５文字超の最高矯正視力スコア、または約２０／２００以上に相当するスネレン視力を有する。一部の実施形態では、対象は、数個の小さなドルーゼンまたは数個の中程度の大きさのドルーゼンにより証明された初期の非滲出型黄斑変性を有する。一部の実施形態では、対象は、多数の中程度の大きさのドルーゼンまたは１つもしくは複数の大きなドルーゼンにより証明された初期の非滲出型黄斑変性を有する。一部の実施形態では、対象は、数個の大きなドルーゼンおよび／または黄斑の細胞の広範囲の崩壊により証明された初期の非滲出型黄斑変性を有する。
【０２６３】
本明細書中に開示される治療のいずれかの評価は、光学イメージングを含むことができ、非限定的な例としてｃＳＬＯ、ＦＡＦ、ＯＣＴ（断面像、三次元像、および正面像を用いるものを含む）、ＳＤ−ＯＣＴ（断面像、三次元像、および正面像を含む）、または他のイメージング方法を含み、これは、他の蛍光波長（たとえば青色〜赤外線の範囲の波長、たとえば３９０ｎｍ〜１ｍｍ、たとえば青色光、白色光、赤色を含まない光、近赤外線、または赤外線を含む）を含む。
【０２６４】
一部の実施形態では、本明細書中に記載の方法は、対象の偽ドルーゼンの量を減少させることと、および／または対象の眼の中心窩領域、周中心窩領域、近傍中心窩領域、および中心窩外領域のいずれか１つにおける偽ドルーゼンの量を減少させることを含む。他の実施形態では、本明細書中に記載の方法は、末期の疾患の進行速度を低下させることを含み、ここでの末期疾患は、脈絡膜新生血管または地図状萎縮のいずれか１つである。一部の実施形態では、本明細書中に記載の方法は、地図状萎縮の拡大速度を低下させることを含む。
【０２６５】
一部の実施形態では、本明細書中に記載の治療方法は、非滲出型ＡＭＤおよび／またはＲＰＤを治療、予防、または発病の比率を減少させることを含む。
【０２６６】
化合物の評価方法
一部の態様では、本発明は、候補化合物が眼障害の治療に有用であるかどうかを同定する方法であって、（ａ）眼に（ｉ）上記動物の眼障害の存在を表すために有効な量の蛍光性化合物、および（ｉｉ）眼組織の萎縮症を誘導させるために有効な量の毒素を含む動物に、試験化合物の有効量を投与することと、（ｂ）上記蛍光性化合物を蛍光させるために有効な波長および輝度を有する光に上記眼を曝露させることと、（ｃ）上記眼の蛍光パターンを、上記蛍光性化合物および毒素を含むが試験化合物を含まない動物の眼の蛍光パターンと比較することと、（ｄ）ステップ（ｃ）の結果が、試験化合物が眼障害の治療に有用であることを表す場合、上記試験化合物を候補化合物として選択することとを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、ステップ（ｂ）は、蛍光性化合物の投与、またはその後の蛍光性化合物の投与と同時に行うかどうかにかかわらず、蛍光性化合物を蛍光させるために有効な波長および輝度を有する光に眼を曝露させることを含む。一態様では、本発明は、眼障害の治療に有効な薬剤を作製する方法であって、（ａ）眼に（１）上記動物の眼障害の存在を表すために有効な量の蛍光性化合物、および（２）眼組織の萎縮症を誘導するために有効な量の毒素を含む動物に、(i)試験化合物の有効量を投与することと、（ｉｉ）蛍光性化合物を蛍光させるために有効な波長および輝度を有する光に上記眼を曝露させることと、（ｉｉｉ）上記眼の蛍光パターンを、上記蛍光性化合物および毒素を含むが、試験化合物を含まない動物の眼の蛍光パターンと比較することと、（ｉｖ）ステップ（ｉｉｉ）の比較の結果が、試験化合物の眼障害の治療に有用である場合、上記試験化合物を候補化合物として選択することとにより、薬剤を同定することと、（ｂ）眼に投与するために、同定した薬剤を製剤化することとを含む、方法を提供する。一部の態様では、眼障害を治療または予防する方法であって、上述の方法を使用して作製した眼障害の治療に有効な薬剤のいずれか１つである薬剤の有効量と、薬学的に許容可能な担体または賦形剤とを含む医薬組成物を、その必要がある対象に投与することを含む、方法を提供する。例示的な、眼障害の治療に有効な薬剤は、本明細書中に列挙されている（たとえば「本発明の薬剤」として）。
【０２６７】
他の実施形態では、比較は、試験化合物を投与してから少なくとも約２４時間後、または少なくとも約７日後、または少なくとも約３０日後、または少なくとも６０日後、または少なくとも９０日後に行われる。他の実施形態では、比較は、少なくとも約２か月目、または少なくとも約３か月目、または約４か月目、または約５か月目、または最大約６か月目に行われる。一部の実施形態では、比較は、試験化合物の有効量の投与前および投与後で、同一の眼を観察することを含む。一部の実施形態では、比較は、異なる条件下で、（試験化合物の有効量の投与を伴うまたは伴うことなく）、異なる動物の眼の観察を含む。
【０２６８】
さらなる他の実施形態では、本方法は、試験化合物を投与する前に、眼を観察するステップをさらに含む。一部の実施形態では、この観察は、眼の１つまたは複数の前投与の特徴を確立する。
【０２６９】
一部の実施形態では、比較および／または観察は、２つの異なる条件の間（たとえば試験化合物の有効量の投与を伴う、または伴うことなく）で、光学イメージングを評価することを含み、光学イメージングの非限定的な例として、ｃＳＬＯ、ＦＡＦ、ＯＣＴ（断面像、三次元像、および正面像を用いるものを含む）、ＳＤ−ＯＣＴ（断面像、三次元像、および正面像を含む）、または他のイメージング方法が挙げられ、これは他の蛍光波長（たとえば青色光〜赤外線の範囲の波長、たとえば３９０ｎｍ〜１ｍｍであり、たとえば青色光、白色光、赤色を含まない光、近赤外線、または赤外線を含む）を含む。
【０２７０】
一部の実施形態では、化合物は、眼障害の発病の治療、予防、または発病の比率の低下を提供する場合、眼障害の治療に有用である。
【０２７１】
さらなる別の実施形態では、本明細書中に記載の方法は、試験化合物を投与する前に蛍光性化合物を投与することを含む。さらに別の実施形態では、本明細書中に記載の方法は、（ｉ）追加的な量の蛍光性化合物を動物に投与すること、または（ｉｉ）第２の蛍光性化合物を動物に投与することを含まない。
【０２７２】
他の実施形態では、本明細書中に記載の方法は、試験化合物を投与する前に毒素を投与すること、および／または蛍光性化合物を投与する前に毒素を投与することを含む。
【０２７３】
他の実施形態では、複数の候補化合物が同定される。一部の実施形態では、本明細書中に記載の方法は、眼障害の治療において複数の候補化合物の有用性を比較することと、比較に基づきリード化合物を選択することとをさらに含む。一部の実施形態では、リード化合物は、複数の候補化合物のうちで好ましい化合物である。
【０２７４】
一部の実施形態では、比較は、２つの異なる条件（たとえば第２の候補化合物と第１の候補化合物との比較）の間で光学イメージングを評価することを含み、この光学イメージングは、非限定的な例として、ｃＳＬＯ、ＦＡＦ、ＯＣＴ（断面像、三次元像、および正面像を用いるものを含む）、ＳＤ−ＯＣＴ（断面像、三次元像、および正面像を含む）、または他のイメージング方法が挙げられ、これは他の蛍光波長を含む（たとえば青色光〜赤外線の範囲の波長、たとえば３９０ｎｍ〜１ｍｍであり、たとえば青色光、白色光、赤色を含まない光、近赤外線、または赤外線を含む）を含む。２超の候補化合物を、比較することができる。
【０２７５】
診断方法および予測方法
一部の態様では、本発明は、眼障害を有し、かつある薬剤での治療に応答しない可能性が高い対象を同定する方法であって、上記対象の眼が、非疾患状態と比較して、眼の脈絡膜と網膜との間で上皮性関門を通した透過性の増加を有する、または以前に有していたかどうかを決定することを含み、上記透過性の増加が、対象が、上記薬剤での治療に応答しない可能性が高いことを示し、上記薬剤が、メトトレキサートまたはその薬学的に許容可能な塩、またはおよび式Ｉの化合物（本明細書中に記載）またはその薬学的に許容可能な塩であって、式中各Ｒ１およびＲ２が、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、かつＲ３がＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルである、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩から選択される、方法を提供する。
【０２７６】
別の態様では、本発明は、ある薬剤での治療に応答しない可能性が高い眼障害の対象を同定する方法であって、上記対象の眼が、非疾患状態と比較して、ＲＰＥ（および／または網膜内層由来）を通した食作用免疫細胞の存在（たとえば流入）を有するかどうかを決定することを含み、食作用免疫細胞の存在が、対象が、上記薬剤での治療に応答しない可能性が高いことを示し、上記薬剤が、メトトレキサートまたはその薬学的に許容可能な塩、または式Ｉの化合物（本明細書中に記載）またはその薬学的に許容可能な塩であって、式中各Ｒ１およびＲ２が、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、かつＲ３がＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルである、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩から選択される、方法を提供する。
【０２７７】
別の態様では、本発明は、対象の眼障害が、対象の免疫細胞の機能を阻害する薬剤での治療に応答するかどうかを決定する方法であって、対象の眼の免疫細胞の存在を検出すること、不存在を検出すること、または量を測定することを含み、上記対象の眼が、約６００ｎｍ〜約９００ｎｍ、または約４００ｎｍ〜約９００ｎｍ、または約４００〜約１６００ｎｍの波長を有する光に応答して蛍光する、方法を提供する。
【０２７８】
一部の実施形態では、本明細書中に記載の方法は、蛍光性化合物の有効量を対象に投与することをさらに含み、ここでの検出または測定は、上記蛍光性化合物の投与から少なくとも１日後に行われる。一部の実施形態では、検出または測定は、蛍光性化合物の有効量を対象に投与してから少なくとも１日後に行われる。
【０２７９】
一部の実施形態では、本明細書中に記載の方法は、対象の眼障害が、対象の免疫細胞の機能を阻害する薬剤での治療に応答するかどうかを決定するためのＤＮＩＲＡを含む。
【０２８０】
一部の実施形態では、本明細書中に記載の方法は、対象の眼のＦＡＦを検出または測定するステップをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書中に記載の方法は、対象の眼における免疫細胞の存在、不存在、または量と、ＦＡＦパターンを相関させるステップをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書中に記載の方法は、ＦＡＦデータとＤＮＩＲＡデータ間を相関させることを含む。一部の実施形態では、相関は、ＦＡＦ、ならびに約６００ｎｍ〜約９００ｎｍ、または約４００ｎｍ〜約９００ｎｍ、または約４００ｎｍ〜約１６００ｎｍの波長を有する光に対して対象の眼の蛍光で観察された空間的なパターンである。
【０２８１】
一部の実施形態では、過蛍光ＦＡＦの領域またはＦＡＦの異常なパターンは、異常なＤＩＮＲＡの領域と空間的に一致してもよく、これは、低蛍光または過蛍光であってもよい。異常なＦＡＦまたは過蛍光ＦＡＦは、疾患の活性領域と一致し、萎縮症の領域を予測することができ、理論による拘束を望むものではないが、ＤＮＩＲＡがＲＰＥを標識し、過蛍光のＦＡＦまたは異常なＦＡＦと一致する実施形態では、色素（たとえばＩＣＧ）を摂取する食作用ＲＰＥ細胞は、異常な量のリポフスチンまたはリポフスチン様物質を有する。さらに理論による拘束を望むものではないが、ＤＮＩＲＡが免疫細胞（たとえば食作用免疫細胞または生来の免疫系の細胞）を標識し、過蛍光ＦＡＦまたは異常なＦＡＦと空間的に一致する実施形態では、色素（たとえばＩＣＧ）を摂取する食作用免疫細胞は異常な量のリポフスチンまたはリポフスチン様物質を有し、かつ／または異常な量のリポフスチンまたはリポフスチン様物質を有する細胞と一致する。よって一部の実施形態では、異常なＤＮＩＲＡと異常なＦＡＦの同時の局在化は、治療用の細胞標的を同定することができる。このような同時局在化は、一部の実施形態では、疾患の動物モデルおよび患者の両方において、疾患の進行を低減、遅延、予防するために免疫系を標的化する特性を提供する。
【０２８２】
一部の実施形態では、この検出または測定は、蛍光性化合物を投与してから約１日後、または約７日後、または約３０日後に行われる。他の実施形態では、比較は、約２か月目、または約３か月目、または約４か月目、または約５か月目、または最大約６か月目に行われる。一部の実施形態では、比較は、試験化合物の有効量の投与前および投与後の、同一の動物の眼の観察を含む。一部の実施形態では、比較は、異なる条件下（たとえば試験化合物の有効量の投与を伴うまたは伴うことなく）での、異なる動物の眼の観察を含む。
【０２８３】
一部の実施形態では、比較は、非限定的な例として、２つ異なる条件（たとえば試験化合物の有効量の投与を伴うまたは伴うことなく）の間での、光学イメージングの評価を含み、この非限定的な例として、ｃＳＬＯ、ＦＡＦ、ＯＣＴ（断面像、三次元像、および正面像を含む）、ＳＤ―ＯＣＴ（断面像、三次元像、および正面像）、または他のイメージング機構が挙げられ、これは、他の蛍光波長（たとえば青色〜赤外線までの範囲の波長、例えば３９０ｎｍ〜１ｍｍであり、例えば青色光、白色光、赤色を含まない光、近赤外線、または赤外線を含む）を含む。
【０２８４】
一部の実施形態では、本明細書中に記載の方法は、（ａ）追加的な量の蛍光性化合物、または（ｂ）第２の蛍光性化合物を投与することを含まない。
【０２８５】
対象および／または動物
一部の実施形態では、対象および／または動物は哺乳類、たとえばヒト、マウス、ラット、モルモット、イヌ、ネコ、ウマ、ウマ、ウシ、ブタ、ウサギ、ヒツジ、またはサル、チンパンジー、もしくはヒヒなどの非ヒトの霊長類である。他の実施形態では、対象および／または動物は、たとえばゼブラフィッシュなどの非哺乳類である。一部の実施形態では、対象および／または動物は、蛍光タグ化細胞（たとえばＧＦＰを含む）を含んでもよい。一部の実施形態では、対象および／または動物は、たとえばＲＰＥ細胞および／または免疫細胞などの蛍光性細胞を含むトランスジェニック動物である。一部の実施形態では、対象および／または動物はヒトである。一部の実施形態では、ヒトは小児である。他の実施形態では、ヒトは成人である。他の実施形態では、ヒトは老人である。他の実施形態では、ヒトは患者を意味してもよい。
【０２８６】
特定の実施形態では、ヒトは、生後約０か月〜約６か月、生後約６〜約１２か月、生後約６〜約１８か月、生後約１８〜約３６か月、約１〜約５歳、約５〜約１０歳、約１０〜約１５歳、約１５〜約２０歳、約２０〜約２５歳、約２５〜約３０歳、約３０〜約３５歳、約３５〜約４０歳、約４０〜約４５歳、約４５〜約５０歳、約５０〜約５５歳、約５５〜約６０歳、約６０〜約６５歳、約６５〜約７０歳、約７０〜約７５歳、約７５〜約８０歳、約８０〜約８５歳、約８５〜約９０歳、約９０〜約９５歳、または約９５〜約１００歳の範囲である。
【０２８７】
他の実施形態では、対象は非ヒトの動物であり、よって本発明は、獣医学的な用途に属する。特定の実施形態では、非ヒトの動物は家庭用ペットである。別の特定の実施形態では、非ヒトの動物は家畜動物である。
【０２８８】
様々な実施形態では、対象および／または動物の眼は、（ｉ）対象および／または動物の眼障害の存在を表すために有効な量の蛍光性化合物、ならびに（ｉｉ）眼組織の萎縮症を誘導するために有効な量の毒素を含む。一部の実施形態では、このような対象および／または動物は、本発明の薬剤を投与されており、または本発明の薬剤を投与されていない。
【０２８９】
様々な実施形態では、ＲＰＥ細胞および免疫細胞は、評価される、かつ／または作用する。一部の実施形態では、免疫細胞は、対象および／または動物の生来の免疫系の細胞を含む。一部の実施形態では、このような細胞は、限定するものではないが、マクロファージ、単球、およびミクログリア細胞を含む。様々な実施形態では、本発明は、対象および／または動物の眼における免疫細胞の存在を検出し、非存在を検出し、またはその量を測定することを提供する。
【０２９０】
キット
本発明は、本明細書中に記載のいずれかの薬剤の投与を単純化できるキットを提供する。本発明の例示的なキットは、単位剤形で本明細書中に記載のいずれかの薬剤を含む。一実施形態では、単位剤形は、滅菌性とすることができる、プレフィルドシリンジなどの容器であり、本明細書中に記載のいずれかの薬剤と、薬学的に許容可能な担体、希釈剤、賦形剤、またはビヒクルとを含む。本キットは、本明細書中に記載のいずれかの薬剤の使用を説明するラベルまたは印刷された説明書をさらに含むことができる。また本キットは、開瞼器、局所麻酔剤、および眼の表面の洗浄剤を含んでもよい。また本キットは、本明細書中に記載の１つまたは複数の追加的な薬剤をさらに含むこともできる。
【０２９１】
一実施形態では、本キットは、たとえば式Ｉの化合物、メトトレキサート、またはそれらの薬学的に許容可能な塩を含む本発明の薬剤の有効量と、本明細書中に記載されるなどの別の治療剤の有効量とを含む容器を含む。
【０２９２】
本発明を、さらに以下の非限定的な実施例により説明する。
【０２９３】
実施例
実施例１．ＲＰＥの毒素であるＮＡＩＯ３の全身性の注射が、ＡＭＤおよび／またはＲＰＤに類似したＦＡＦの複合的なパターンを誘導する。
ＲＰＥ毒素であるヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３）を、地図状萎縮（ＧＡ）に類似した、ラットの眼におけるＲＰＥおよび低蛍光ＤＮＩＲＡのパッチ状の喪失を作製した。このモデルはＲＰＥ萎縮症を発症するだけでなく、進行した非滲出型ＡＭＤ、ＲＰＤ、およびびまん性−しずく型（ｄｉｆｆｕｓｅ  ｔｒｉｃｋｌｉｎｇ）の非滲出型ＡＭＤに最も密接に類似している、侵襲性臨床疾患に関連したＦＡＦの複合パターンを明確に再現した。
【０２９４】
材料：ＩＣＧ（Ｃａｒｄｉｏｇｒｅｅｎ）、ヨウ素酸ナトリウム、ハリスヘマトキシリン（Ｈａｒｒｉｓ  ｈａｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ）およびエオシンは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｏａｋｖｉｌｌｅ，  ＯＮ，  Ｃａｎａｄａ）製である。０．８％のトロピカミドを含む５％のフェニレフリン塩酸塩溶液（ジオフェニルＴ）は、Ｓａｎｄｏｚ  Ｃａｎａｄａ  Ｉｎｃ（Ｂｏｕｃｈｅｒｖｉｌｌｅ，  ＱＣ，  Ｃａｎａｄａ）製であり、ＧｅｎＴｅａｌ潤滑用点眼薬は、Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃａｎａｄａ  Ｉｎｃ  （Ｄｏｒｖａｌ，  ＱＣ，  Ｃａｎａｄａ）製であった。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中３２％のパラホルムアルデヒドは、Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｈａｔｆｉｅｌｄ，  ＰＡ）製であった。マウス抗ラットＣＤ６８抗体は、ＡｂＤ  Ｓｅｒｏｔｅｃ（Ｏｘｆｏｒｄ，  ＵＫ）製であり、マウスＩｇＧはＳａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ，  ＣＡ，  ＵＳＡ）製であった。ウサギ抗Ｉｂａ−１は、Ｗａｋｏ  Ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｌｔｄ（Ｏｓａｋａ，  Ｊａｐａｎ）製であった。Ａｌｅｘａ標識蛍光ヤギ抗マウス二次抗体、イソレクチンＩＢ４結合体およびＴＯ−ＰＲＯ−３核酸染色は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｍａｒｉｌｌｏ，  ＣＡ，  ＵＳＡ）製であった。Ｄａｋｏ蛍光封入培地（Ｄａｋｏ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  ｍｏｕｎｔｉｎｇ  ｍｅｄｉｕｍ）は、Ｄａｋｏ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ  （Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，  ＯＮ，  Ｃａｎａｄａ）製であった。
【０２９５】
動物の手順：すべての手順は、カナダ動物協会に従い、かつＡＲＶＯ  宣言（ＡＲＶＯ  Ｓｔａｔｅｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌｓ  ｉｎ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ａｎｄ  Ｖｉｓｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）を遵守して行った。すべての実験で、６〜１０週齢のスプラーグドーリー（ＳＤ）ラットを、１２時間の暗／明期で、食物および水を自由に与えながら保持した。評価のため、ラットに、ケタミン（１００ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（１０ｍｇ／ｋｇ）で麻酔をかけ、ジオフェニルＴを用いて瞳孔を散大させた。眼を、ＧｅｎＴｅａｌの潤滑用点眼薬を使用して状態を調整した。単回のイメージングセッションまたは一連のイメージングのいずれかの後に、Ｔ６１（Ｉｎｔｅｒｖｅｔ  Ｃａｎａｄａ，  Ｗｈｉｔｂｙ，  Ｃａｎａｄａ）の心臓内注射により、動物を人道的に屠殺した。
【０２９６】
ヨウ素酸ナトリウム（４５％の溶液）を、０．９％の塩化ナトリウム中、各実験セットのために新たに調製し、最終濃度４５ｍｇ／ｋｇ体重となるまで注射した。合計１９２個の眼を評価した。
【０２９７】
眼底のイメージングを、市販の共焦点走査型レーザー検眼鏡（ｃＳＬＯ，  Ｓｐｅｃｔｒａｌｉｓ，  Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｒｅｔｉｎａｌ  Ａｎｇｉｏｇｒａｐｈｙ，  ＨＲＡ−ＩＩ；  Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ＧｍｂＨ，  Ｇｅｒｍａｎｙ）、およびＥｙｅ  Ｅｘｐｌｏｒｅｒ  Ｉｍａｇｅ  Ｃａｐｔｕｒｅ  ｓｙｓｔｅｍ，  ｖｅｒｓｉｏｎ  １．１．１０を使用して行った。赤色を含まない（ＲＦ、緑色優位の）イメージング用の障壁フィルターを用いないフルオレセインの血管造影の５００ｎｍの障壁フィルターでは、４８８ｎｍの励起波長で、ＩＣＧ血管造影では７９５／８１０ｎｍの励起／発光で、および赤外線反射イメージングでは８３０ｎｍのレーザーで、画像を撮像した。
【０２９８】
４８８ｎｍのＦＡＦを評価するために、ｃＳＬＯのイメージングを、フルオレセイン色素の非存在下で行った。フルオレセインは、ベースライン、または各試験のいずれかの時点でも得られなかった。脈管構造を同時にイメージングし、ＦＡＦイメージング解析のための標識を提供することが必要な場合、２ｍｇ／ｋｇ、または５ｍｇ／ｋｇのＩＣＧを、あらかじめ挿入された２３ゲージの尾静脈カテーテル内へ尾静脈を介して注射した。モデルの最初の特徴などの少数の明確に示された状況では、フルオレセインデキストラン（２００ｋＤ）を、静脈内に提供した。フルオレセイン血管造影を使用したこれら後者の試験の結果を、動物のサブセットで行いＦＡＦ解析に含めなかった。
【０２９９】
眼底の画像を、ベースライン（０日目、すなわち全身性ＮａＩＯ３注射前）、およびＮａＩＯ３から３または４（３／４）日後、７または８（７／８）日後、および１３または１４（１３／１４）日後に、定例的に得た。さらに、モデルの最初の特徴に関して、ＮａＩＯ３から２４時間後、２１〜２８日目、および８８日（３ケ月）以降に、画像を得た。可能である場合、少なくとも９つの画像からなる複合的な画像を、以下の順：視神経乳頭の右上、右、右下、下部、左下、左、左上、および上部の領域で採取した。場合によっては、第２または第３の完全または部分的な画像のリングを、概して、必要に応じてｃＳＬＯに対して動物を再調整することにより、より周辺領域で得た。対照的に、完全な９つの画像が撮像できなかった他の場合では、部分的な複合画像を作製した。
【０３００】
高解像度のスペクトル領域のＯＣＴ画像を得た（Ｅｎｖｉｓｕ  Ｒ２２００  ＶＨＲ  Ａｎｉｍａｌ  ＳＤＯＩＳ  Ｓｙｓｔｅｍ，  Ｂｉｏｐｔｏｇｅｎ，  ＵＳＡ）。３６，０００／秒の速度、網膜のレベルで約２．８μｍの方位分解能を伴い、スキャンを行った。
【０３０１】
組織解析：パラフィンを埋め込んだ組織のヘマトキシリン（ｈｅｍｏｔｏｘｙｌｉｎ）およびエオシン（Ｈ＆Ｅ）の組織学的検査を、Ｄａｃｉｄｓｏｎの固定液を用いて固定した後に、当該分野で知られているように行った。パラフィンを埋め込んだ切片を、Ｎｉｋｏｎのアップライト型Ｅ８００顕微鏡を用いて見た。脱パラフィンおよび再水和の手法を、Ｈ＆Ｅの組織処理の通りに行った。
【０３０２】
免疫組織化学的検査のために、切片を、室温でＴＢＳ中５％のＢＳＡでブロッキングし、抗ＣＤ６８抗体とともにゆっくりと震盪させながら４℃で一晩インキュベートした。すすいだ後、試料を２次抗体とともに室温で２時間インキュベートし、再度洗浄した。陰性対照では、同種のＩｇＧを、一次抗体と同等の最大モル濃度で使用した。核を、ＴＯ−ＰＲＯ−３で対比染色した。
【０３０３】
共焦点顕微鏡および蛍光顕微鏡：画像を、ＴＣＳ  ＳＬ共焦点蛍光顕微鏡（Ｌｅｉｃａ  Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ，  ＧｍｂＨ，  ドイツヴェッツラー）を使用して得て、画像を撮影し、Ｌｅｉｃａの共焦点ソフトウェアを使用して解析した。アップライト型落射蛍光顕微鏡（Ｕｐｒｉｇｈｔ  ｅｐｉｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）（Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＢＸ５０）をも使用して、４８８ｎｍの波長の光の下で細胞の自己蛍光シグナルを見た。共焦点の連続したＺ切片の３Ｄの再構成を、Ｉｍａｒｉｓ  ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ７．４．２（Ｂｉｔｐｌａｎｅ）を用いて行った。
【０３０４】
正常なスプラーグドーリーラットの眼のｉｎ  ｖｉｖｏでのＦＡＦおよび血管造影のイメージングは、ＲＰＥ蛍光を遮断し、よって暗く見える放射状に配置された網膜血管、および視神経乳頭（ＯＮＨ）での中心の低蛍光のサークルにより、遮断されているかすかな一様地盤のガラス状の輝きを生成した。ここではＰＲＥは存在しない（図１Ａ〜Ｄ）。全身性ＮａＩＯ３注射の３日後、過蛍光の境界を伴う同等またはわずかに過蛍光のＦＡＦの単一の領域が現れ、明確な島、セクター、または３６０°のリングの形状をとった（図１Ａ〜Ｄ）。島またはセクターは、ＯＮＨより下部、または半網膜下部に、一貫して局在している（図１Ａ〜Ｄ）。３６０°のリングが存在する場合、このリングは概して眼底の大部分を含み、このうちの１つの境界は、ＯＮＨの近くまたは周辺および網膜周辺部の中央または遠位部にある。大きな３６０°のリングが、最も一般的に観察される形状であり、ヨウ素酸ナトリウムで処置した眼の１０２／１１０（９３％）で発生した（図２Ａ〜Ｄ）。すべての場合、島、セクター、またはリングはＯＮＨに達したが、それに近接はしなかった（図１Ａ―Ｄ〜３Ａ−Ｃ）。これらおよび以下の知見は、１６０個の眼にわたり確認された。
【０３０５】
ＮａＩＯ３の注射からおよそ４〜５日後から始まって、過蛍光／低蛍光が交互のＦＡＦの顕著な網状または曲線のパターンが島、セクター、またはリングの中に現れた（図１Ａ〜Ｄ）。７日目までに、このパターンは明確となった。小さな病変では、これは島またはセクターを完全に満たし、急速に発現する。大きな３６０°のリングでは、近位および遠位の境界で最初に明らかとなり、次週にわたり出現し続け、これにより、曲線の構成要素は、部分的なループ、長円、円、ロゼット、および貝殻状、または「動物の足跡」のパターンのＦＡＦに寄与した（図２Ａ〜Ｄ）。いくつかの領域では、曲線、円形、または長円の形状は癒着し、周辺領域よりも暗くなり、均一に暗灰色の低蛍光のＦＡＦのパッチとして現れた。時間の経過とともに、過蛍光の網状のパターンは、ｉｎ  ｓｉｔｕで成熟し、より粒状であり、なだらかではない曲線となった（図２Ａ〜Ｄ）．しかしながら、２０週をすぎると、最終的な時点が解析すると、境界は、過蛍光の網状のパターンを保持しており、網膜周辺部に向けてわずかに変形し続けていた。
【０３０６】
動物のサブセットで行ったフルオレセインの血管造影は、網状のパターンが、網膜または脈絡膜の脈管構造と対応しないことを確認した（特段記載がない限り、フルオレセイン―デキストラン、４８８ｎｍの色素は、ＦＡＦのイメージングを行った動物に投与されなかったことに留意されたい）（図１Ａ〜Ｄ）。しかしながら、ＩＣＧの血管造影は、ＦＡＦの島またはリングのセクターの部分的および一時的な出現と一致する、ＮａＩＯ３の約２〜３日後に、ＲＰＥおよびＢＭを通して脈絡網膜性の界面で起こる透過性の変化を明らかにした（図１Ａ〜Ｄ）。この透過性の増加は、一過性であり、７日目までに消散し、この次の時点は定例的に評価した。この網膜の血管は漏出しなかった。ＮａＩＯ３モデルでは、Ｈ＆Ｅ染色は、流体が網膜下腔に集積することを確認した。これはまた、ｉｎ  ｖｉｖｏでの超高解像度ＯＣＴによっても観察された。
【０３０７】
ｉｎ  ｖｉｖｏで観察されたＦＡＦパターンの病理学的な相関を決定するために、摘出した網膜の全載を、白色光下および４８８ｎｍ−ｉｎ  ｖｉｖｏでのイメージングで使用した同一の波長での落射蛍光顕微鏡により、ＩＨＣ標識の蛍光を用いずに低倍率で見た。その後の組織解析に応じて、この目的のために２つの顕微鏡を使用した：狭い励起／発光ウインドウ（４８８／５２０ｎｍ）を有する落射蛍光装置、および４５０〜４９０ｎｍのバンドを含む励起後の５１５ｎｍ超の蛍光を提供する水銀灯およびロングパス（バンドパスではない）フィルターを備える共焦点顕微鏡のＩｎｖｅｒｔｅｄ  Ｌｅｉｃａ  ＤＭ  ＩＲＥ２観察システム（ｖｉｅｗｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍ）。白色光下で、正常なラットの網膜は、全体を通してかなりの部分が均質であり、一部の人工物が変形している（図３Ａ）。対照的に、微妙な灰白色の、わずかな網状のパターンが、ＮａＩＯ３注射から７日後に得られた試料で現れるようになる。１４日目までに、このパターンはより明白になり、網膜の切り口で最も良好に表される小さな網膜外部のひだと対応するように観察される（図３Ｂ）。４８８ｎｍの蛍光で観察すると、これと同一の曲線パターンがはっきりしている。注射から７日目まで明確ではあるが、自己蛍光の増加は、このパターンを１４日目までより可視化させている（図３Ｃ）。高倍率の落射蛍光顕微鏡を使用すると、このレース状の曲線パターンは、網膜外部の溝またはひだと一致することが明らかである自己蛍光細胞の空間分布と一致することが示された（図３Ａ〜Ｃ）。
【０３０８】
図４Ａ〜Ｃは、ＮａＩＯ３モデルにおける組織の知見と、ＲＰＤの臨床的な特徴の比較を示す。ＲＰＤ患者（網膜下腔にベースダウンした錐体構造を示す）の臨床ＯＣＴイメージングに加えて、色つきおよび赤色を含まない眼底の画像を得た（図４Ａ〜Ｃ）。赤色を含まない画像は、ＲＰＤの個々の偽ドルーゼンを構成する小さな暗いスポットを示した（図４Ａ、上部画像）。これらは、暗灰色のオーバーレイを使用して同定した。さらに本出願人は、円により限定される、ＲＰＤを特徴づけるいわゆる「標的病変」の存在を強調した。これらは、より薄い中心を有する暗いスポットとして現れる。並行して、正面および断面の両方における折りたたまれたラットの網膜外部の図式化された例示は、黒色および白色（「陽性」および「陰性」）の画像として偽って色分けされ、提示される場合に、ＲＰＤの標的様病変と直接相関し、暈状であるように現れる。まとめると、これらのデータは、２Ｄの正面で見ると、暗い中心を有する円形、暈状および標的病変のレース状または網状のパターン内の暗い偽ドルーゼンの２Ｄパターンが、３Ｄで用量分析的に考慮される増加したリングおよびクレーターと対応することを示唆している。内部の偽ドルーゼンのマトリックスは、断面がＯＣＴによりピラミッドまたはスパイク状として現れる場合に、持続性の網膜下の炎症のリボンからなる。これらの構造間で喪失した網膜外部は、暗く現れる。これは、ＲＰＤの暗いパッチに隣接したＯＣＴに画定された偽ドルーゼンを位置づけている。理論による限定を望むものではないが、この網膜の構造的な変形との相関は、なぜＲＰＤが、いくつかのイメージング様式で可視化でき、かつ４８８ｎｍなどの特定の波長に限定されず、シグナルがフルオロフォア依存性である場合に単独では起こり得ることを説明するものである。
【０３０９】
実施例２：全身性ＩＣＧ投与後のラットの眼のＤＮＩＲＡが、網膜色素上皮（ＲＰＥ層）をｉｎ  ｖｉｖｏで同定する。
近赤外線色素のＩＣＧが、全身に注射した後、ＲＰＥ／網膜外部を標識でき、よって、ＲＰＥおよびＲＰＥ萎縮症の検出を高めることができることが示されている。ＩＣＧの励起／発光フィルターを使用して観察したＤＮＩＲＡの変化は、ＲＰＥ／網膜外部の喪失領域の同定するための疾患モデルにおけるＦＡＦに代わり有用である。
【０３１０】
ＩＣＧ色素、またはＰＢＳを、０．３５および５．０ｍｇ／ｋｇの用量で４６匹のスプラーグドーリーラットに全身的に注射し、眼底を、注射前、注射から２日後、７日後、および２１日後に、所定の７９５／８１０ｎｍの励起／発光フィルターを備える共焦点走査型レーザー検眼鏡（ｃＳＬＯ）を使用して、ｉｎ  ｖｉｖｏで評価した。網膜電図検査（ＥＲＧ）を、潜在的な毒性を評価するために行った。動物のサブセットで、ＲＰＥの毒素を、注射して、ＲＰＥの損傷または喪失を誘導した。
【０３１１】
具体的には、動物の試験では、眼の研究における人道的な動物の使用に関するＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｉｎ  Ｖｉｓｉｏｎ  ＆  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  （ＡＲＶＯ）のガイドライン、およびＳｔ．  Ｍｉｃｈａｅｌ’ｓ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅのガイドラインに従い、動物を扱った。６〜１０週齢であり、体重２００〜３００ｇの４６スプラーグドーリー（ＳＤ）ラットを、１２時間の暗／明周期で保持し、食物および水を自由に与えた。ケタミン（１００ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（１０ｍｇ／ｋｇ）を併用して動物に麻酔をかけ、０．８％のトロピカミドを含む５％のフェニレフリン塩酸塩溶液（ジオフェニルＴ，Ｓａｎｄｏｚ  Ｃａｎａｄａ  Ｉｎｃ）を１滴用いて瞳孔を拡大した。すべての工程の間、角膜の表面にＧｅｎＴｅａｌの潤滑用点眼薬（Ｎｏｖａｒｔｉｓ，  Ｃａｎａｄａ）を繰り返し使用した。
【０３１２】
ＣＳＬＯ：ｉｎ  ｖｉｖｏでの画像を、市販のｃＳＬＯ（Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｒｅｔｉｎａｌ  Ａｎｇｉｏｇｒａｐｈｙ，  ＨＲＡ−２，  Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，  Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して得た。画像を、赤色を含まないＦＡＦ（４８８／５００ｎｍ励起／発光）、ＮＩＲチャネル（８３０ｎｍ）、およびＩＣＧチャネル（７９５／８１０ｎｍ励起／発光）で得た。
【０３１３】
ＩＣＧおよびフルオレセインの血管造影：ＩＣＧの色素（Ｃａｒｄｉｏｇｒｅｅｎ，  Ｓｉｇｍａ，  Ｃａｔ  ＃  Ｉ２６３３）を、最終原液濃度５．０ｍｇ／ｍｌに、実験前に新たに調製した。２３ゲージカテーテルを尾静脈に挿入し、０．３５、または５．０ｍｇ／ｋｇの用量でＩＣＧ色素を注入した。注射前（ベースライン）、色素循環の最中、および注射後の様々な間隔〜最大２０分後に、画像を取得した。動物のサブセットでは、５．０ｍｇ／ｍｌのフルオレセイン―デキストラン（２００ｋＤ）（Ｓｉｇｍａ，  Ｃａｔ  ＃  ＦＤ２０００Ｓ）の溶液を、尾静脈のカテーテルを介してＩＶ注射して、最終用量５．０ｍｇ／ｋｇを得た。ＩＣＧおよびフルオレセインの血管造影を、動物のサブセットのみで同時に行い、フルオレセインは注射しなかった。血管造影の画像を、それぞれ４８８／５００ｎｍおよび７９５／８１０ｎｍの励起および発光フィルターを含むフルオレセインおよびＩＣＧチャネルで得た。対照の動物にはＰＢＳを投与した。
【０３１４】
ＤＮＩＲＡ：ＤＮＩＲＡの画像を、ＩＣＧ血管造影の設定、すなわち、励起／発光フィルターを含むが、血管造影から２４時間後、４８時間後、３日後、７日後、２１日後、および２８日後に色素の再注射を伴わない設定を使用して、ＩＣＧ注射から数日および数週間後に得た。血管造影を、試験の時間経過の間に再度行わなかった。
【０３１５】
毒素の投与：動物のサブセット（ｎ＝７）で、ＲＰＥ毒素のＮａＩＯ３（Ｓｉｇｍａ，  ｃａｔ  ＃４２４０６４）を４５ｍｇ／ｋｇ体重の用量で、２３Ｇカテーテルを介して尾静脈へ全身的に注射した。これらの動物で、０．３５ｍｇ／ｋｇでのＩＣＧ血管造影を、ＮａＩＯ３注射の直前に行った。ＤＮＩＲＡを、ＩＣＧおよびＮａＩＯ３注射から７日後に行った。
【０３１６】
網膜電図検査（ＥＲＧ）：ＩＣＧおよびＰＢＳを投与した動物を、Ｅｓｐｉｏｎ（ＤｉａｇｎｏｓｙｓＬＬＣ，ＵＳＡ）  ｍｉｎｉ−Ｇａｎｚｆｅｌｄ  ＥＲＧ  ｓｙｓｔｅｍを使用して評価した。麻酔をかけた後、動物を、電気的に静止した加熱パッド上に置き、ＧｅｎＴｅａｌの潤滑点眼薬を使用した後に角膜の表面に金色のコイルの電極を配置した。短期間の鈍いフラッシュ（０．０１カンデラｓ／ｍ２、１．０Ｈｚ）の後、暗順応のｂ波の振幅を、ｂ波の振幅の最大値に近い応答を一定して生成すると本出願人が決定した単一の明るいフラッシュ（３カンデラｓ／ｍ２）を使用して評価した。スチューデントｔ検定を使用して、ベースライン（注射前）と注射後の振幅を比較した。
【０３１７】
統計的な解析は、ＡＮＣＯＶＡの回帰解析を使用した。
【０３１８】
すべての実験に関して正常な対照として、正常なスプラーグドーリーラットの眼における典型的なベースライン（ＩＣＧ前）のｃＳＬＯの知見を示し（図５Ａ〜Ｈ）、ＰＢＳ処置した動物を加えて扱った（図６Ａ）。赤色を含まない（すなわち緑色優性の）イメージングは、視神経乳頭（ＯＮＨ）および網膜の放射状の血管を同定した（図５Ａ）。低度の内因性シグナルは、ＮＩＲチャネルにおけるより長い波長でも見られ（８３０ｎｍ）、より深い光の侵入により起こるより深い脈絡膜の血管の一部の有望なイメージングを伴うＯＮＨおよび脈管構造の類似の画像を提供した（図５Ｂ）。ヒトの試験と一致して、ＦＡＦは、詳細を欠いているかすかなすりガラス様の輝きとして現れ、放射状の網膜血管により不明瞭であり、ＯＮＨでは存在していない（図５Ｃ）。しかしながらこの拡散した輝きは非常にかすかである。
【０３１９】
対照的に、ＩＣＧの血管造影用のための所定のＮＩＲ励起／発光フィルターを用いると、ＩＣＧ注射前には、眼でシグナルが観察されなかった、または無視できるほど小さかった（図５Ｄ）。走査線は明らかであり、脈管構造はほとんど検出できず、または全く検出されなかった。このことは、６０個もの眼で観察された。ＩＣＧ注射の直後では、網膜および脈絡膜の血管の両方（図５Ｆ、および図５Ｇの第２のパネル）は、移行期から実験の最後の、２０分後まで同定された。またフルオレセインの血管造影は、正常な網膜の脈管構造をも確認した（図５Ｅ）。野生型のＳＤ動物では、フルオロフォアを使用して、血管床のいずれかからの漏出も観察されなかった。
【０３２０】
ＩＣＧの血管造影前のベースラインの画像は、ＩＣＧ励起／発光フィルターの存在下、ＮＩＲの刺激下でシグナルを呈さなかったが、０日目（ｔ＝０）にＩＣＧを単回注射してから３日後、８日後、２１日後、および２８日後に得た画像は、遅発性および持続性の蛍光を示した（図５Ｇ）。これは、フルオレセイン―デキストランの色素での血管造影後に行い、所定のフルオレセイン血管造影フィルターで解析した同様の実験では観察されず（図５Ｈ）、ここでは、同一のレベルの低度の注射前の蛍光が、試験の時間経過にわたり可視化できる。また、事前のＩＣＧ注射の非存在下でも起こらなかった（図６Ａ）。このＩＣＧ後の遅発性ＮＩＲ蛍光の定性的な解析は、正面で見られた後極で小斑点の「モザイク状」のパターンを示し、これは、網膜の血管よりも深く（これより外部）、脈絡膜の脈管構造を見ることを阻害しており、網膜と脈絡膜との間の位置を示唆している。ＯＮＨおよび乳頭周囲領域は蛍光しなかった。これらの特徴は、患者の青色スペクトラムで行ったＦＡＦの特徴と類似している。焦点の同一の平面は、両方の蛍光技術にとって最適であることが示された。
【０３２１】
ＩＣＧ注射後のＤＮＩＲＡを使用して作成した知見は、用量依存性であった（図６Ａ〜Ｄ）。血管造影に使用した最初のＩＣＧの用量が高いほど、ＮＩＲシグナルはより輝く。高用量の５ｍｇ／ｋｇでは、ｃＳＬＯの増分（感受性）を適切な質の画像を得るために低減することが必要であり、低用量（０．３５ｍｇ／ｋｇ）は、輝きが少なく、適切な質の画像を得るために増分を増加する必要がある。同一のレベルで設定した増分での比較画像（図６Ａ、図６Ｂ、およびず６Ｃ）は、輝度の用量応答性の増加を示した。同一の実験で、２８日目までに、小斑点のパターンが、低用量のＩＣＧを投与した動物で消失したことが示された（図６Ｂ）。対照的に、高用量のＩＣＧを投与した動物では、注射から３日後と２８日後との間に明確な差異はほとんどなかった（図６Ｃ）。
【０３２２】
ＩＣＧの活性化に必要な７９５／８１０ｎｍの励起／発光フィルターを伴わない、８３０ｎｍでのＮＩＲの反射率のイメージングは、ＤＮＩＲＡで観察された小斑点の用量依存性および時間依存性の蛍光の知見を得ることがなかった。
【０３２３】
ＤＮＩＲＡがＲＰＥおよび／または網膜外部の複合体を同定することを示すことにより、ＤＮＩＲＡを使用して、ＲＰＥの構造の異常を同定できることを示した。ＤＮＩＲＡは、ＲＰＥ毒素のＮａＩＯ３の全身注射と併用して使用した。ＮａＩＯ３は、ＲＰＥ細胞にとって直接的に毒性であり、この細胞の喪失をもたらし、その上の光受容体のアポトーシスがその後起こる。ＮａＩＯ３注射から数日後および数週間後のＤＮＩＲＡは、地図状（空間的）の、明確な低蛍光のパッチを同定し、これは連続的な小斑点の蛍光の中の大きな黒いパッチとして現れた。これらの低蛍光のパッチは、明確な境界により区切られていた。さらに、ｃＳＬＯ増分の増加に伴い、これらパッチにわたり見られたより大きな輝きが、脈絡膜の明確で詳細な可視化を可能にした（図７Ａ〜Ｂ）。脈絡膜の血管を、これらの複雑性、変動する大きさ、ＯＮＨに関する非放射状のパターンにより同定した。対照的に、小斑点の層は、この表示をあいまいにするが、進行中の上を覆う網膜血管の可視化が可能である。これらのデータは、ＤＮＩＲＡがＩＣＧ標識したＲＰＥ／網膜外部層を検出するとの見解と、一致した。
【０３２４】
さらに、前臨床の実験に関するＤＮＩＲＡの適合性を、毒性試験とともに例証した。ＰＢＳに対する、高用量および低用量の全身性ＩＣＧの濃度を比較する網膜電図検査を行った。これらのデータは、対照動物で認められた変化と比較して、注射から３週間のｂ波の振幅における統計的に有意な変化を示さなかったが、使用する用量範囲にわたりＤＮＩＲＡが脈絡網膜性疾患の前臨床試験において安全であることを示す。高用量は、臨床的に使用した上記で良好であるが、グラム／体重の単位の低用量は、従来の眼底カメラを用いた用量と一致するものである。
【０３２５】
実施例３：眼障害の治療用の化合物の発見
１つまたは複数の眼障害をモデル化する動物を確立して、このような動物に試験化合物を投与する。
【０３２６】
眼障害の症状は、蛍光検出を含むｉｎ  ｖｉｖｏでのイメージングを使用して決定する。候補化合物は、眼障害の特徴を呈するために十分な時間または時間経過後に、眼の蛍光を観察することにより、同定する。候補化合物は、本明細書中に記載の眼障害の特徴を低減または排除する特性に関して評価する。
【０３２７】
実施例４：眼障害用の化合物の活性の評価
眼障害をモデル化する動物を開発して、このような動物に候補化合物を投与する。
【０３２８】
眼障害の症状は、蛍光性検出を含むｉｎ  ｖｉｖｏでのイメージングを使用して決定する。候補化合物の活性は、眼障害疾患の特徴および候補化合物の活性を呈するために十分な時間または時間後に眼の蛍光を観察することにより、評価する。候補化合物は、本明細書中に記載の眼障害の特徴を低減または排除する特性に関して評価されてよい。
【０３２９】
実施例５：ビンダリットでの非滲出型ＡＭＤの治療
５６〜１００歳以上のヒトの対象は、以下の臨床試験：臨床試験、ＦＡＦ（いずれかの波長）、近赤外線および／または赤色を含まない写真、異常な血管プロセスの同定および局在化を可能にするフルオレセイン血管造影；ヒトの網膜および脈絡膜などの光学散乱媒体内から、高解像度の断面または正面の画像を提供するＯＣＴ；ならびに、網膜色素上皮組織切片において小さな自己蛍光構造（リポフスチンの顆粒）の蛍光分布を解像するように特に設計された高解像度の顕微鏡の設定を使用した、構造化照明光学顕微鏡のうちの１または複数により診断された非滲出型ＡＭＤを呈する。
【０３３０】
対象に、２回の３００ｍｇの経口投与（または最大１２００ｍｇ）を、１２週間にわたり１日１回行った。最初の１２週間の治療期間の後、対象の臨床上の結果を評価した。あるいは、患者に、薬剤送達ビヒクルを含むまたは含まない、ビンダリットを含むビヒクルの硝子体内注射を行う。
【０３３１】
最初の臨床結果を、当該分野でよく知られている標準的な視力検査を使用して決定した。ある距離からのスネレン視力表上のシンボルおよび物体を明確に見る特性に関して、対象を評価した。
【０３３２】
第２の臨床結果は、地図状萎縮の進行速度を評価する。これを行うために、１．０％のトロピカミドおよび２．５％のフェニレフリンで瞳孔を拡大した後、網膜のイメージングを行った。Ｈｅｌｂ，  ｅｔ  ａｌ．  Ａｃｔａ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  ２０１０  Ｄｅｃ；  ８８（８）：８４２−９に記載されるように、ｃＳＬＯおよび２つの独立した走査ミラーを備えるスペクトル領域光干渉断層撮影（ＳＤ−ＯＣＴ）の同時の記録を可能にする器具（たとえばＳｐｅｃｔｒａｌｉｓ  ＨＲＡ＋ＯＣＴ；  Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，  ドイツハイデルベルク）を用いて、イメージングを行う。５つの運用モデルを使用する：白色光、赤色を含まない光、近赤外線、ＦＡＦ、およびＯＣＴ。
【０３３３】
第３の臨床結果は、低蛍光ＤＮＩＲＡ（低蛍光領域により定量化）の変化の比率を評価する。これを行うために、１．０％および２．５％のフェニレフリン（ｐｈｙｌｅｐｈｒｉｎｅ）を用いて瞳孔を拡大した後、網膜のイメージングを行う。（血管造影を行う能力を伴う、または伴わない、所定の適切な励起および発光フィルターを備える共焦点走査方法または改変した眼底カメラを利用し得る）器具を用いて、イメージングを行い、このイメージングは、ＩＣＧ注射前（ベースライン）および、色素を注射しないが、所定の励起／発光フィルターを用いる色素注射から数日後に再度、行う。
【０３３４】
第４の臨床結果は、過蛍光のＤＮＩＲＡのドットの数および位置の変化を評価する。これを行うために、１．０％および２．５％のフェニレフリンを用いて瞳孔を拡大した後、網膜のイメージングを行う、（血管造影を行う能力を伴うまたは伴わない所定の適切な励起および発光フィルターを備える共焦点走査方法または改変した眼底カメラを利用し得る）器具を用いて、イメージングを行い、ＩＣＧ注射の前（ベースライン）、およびさらなる色素の注射を行うことなく、所定の励起／発光フィルターを用いて、色素注射から数日後に再度、イメージングを行う。
【０３３５】
ｃＳＬＯの画像を、近赤外線反射（λ＝８１５ｎｍ）およびＦＡＦ（λ＝４８８ｎｍで励起、５００〜７００ｎｍで発光）の画像の取得を含む、標準的な操作プロトコルに従って得る。低蛍光（暗色）ＦＡＦの領域を測定し、経時的に類似の測定値と比較する。この増加は低蛍光ＦＡＦの大きさであり、ＧＡの進行速度の測定値である。あるいは、ＧＡの領域およびそれらの経時的な変化は、ＳＤ−ＯＣＤイメージングの正面の再構成から計算することができ、たとえば８７０ｎｍの例示的な波長で行うことができ、４０，０００Ａ−スキャン速度、および前後走査１．８ｍｍで得ることができる。眼あたり２つのＳＤ−ＯＣＴスキャン（１つは垂直であり１つは平行）を、おおよそ中心窩にわたり行い、またはＲＰＤの場合、黄斑の血管の列弓に近接して、行う。フルオレセイン血管造影（λ＝４８８ｎｍ、発光５００〜７００ｎｍ、１０％のフルオレセイン色素）を、必要に応じて行う。色付きの眼底の写真を、眼底カメラ（たとえばＦＦ  ４５０  Ｖｉｓｕｐａｃ  ＺＫ５；  Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ  Ｍｅｄｉｔｅｃ  ＡＧ，  ドイツイェーナ）を用いて得た。
【０３３６】
臨床予後のデータの解釈は、必要に応じてさらなる治療のための決定を知らせるものである。
【０３３７】
実施例６：併用療法での非滲出型ＡＭＤの治療
５６〜１００歳以上のヒトの対象は、以下の臨床試験：臨床試験、白色光の眼底のイメージング、いずれかの波長でのＦＡＦ、近赤外線および／または赤色を含まない写真、青色の蛍光、および／または、異常な血管プロセスの同定および局在化を可能にするフルオレセインもしくはＩＣＧの血管造影；ヒトの網膜および脈絡膜などの光学散乱媒体内からの高解像度の断面、三次元、および正面の画像を提供するＯＣＴ；ならびに、網膜色素上皮または他の細胞および細胞層において小さな自己蛍光構造（リポフスチン、リポフスチン様、または他の顆粒）の分布を解像するように特に設計された高解像度の顕微鏡または検眼鏡の設定を使用した、構造化照明光学顕微鏡のうちの１または複数により診断された非滲出型ＡＭＤを呈する。
【０３３８】
非限定的な例により、ビンダリットを、１２週間の間、１日１回、２回の３００ｍｇの経口用量（または最大１２００ｍｇ）で、対象に投与した。また、１ケ月（およそ２８日）に１回、罹患した眼あたり０．５ｍｇの用量でラニビズマブの注射を対象に行う。最初の１２週間の治療期間の後、臨床結果について対象を評価する。また、ビンダリットを、本明細書中に記載の眼経路のいずれか（たとえば硝子体内）を介して投与してもよい。
【０３３９】
あるいは、ビンダリットを、非限定的な例により１２週間の間、１日１回、２回の３００ｍｇの経口用量（または最大１２００ｍｇ）で、対象に投与する。また４〜６週間当たり１回、罹患した眼あたり約１０ｍｇの用量で、ランパリズマブを対象に投与する。最初の１２週間の治療期間の後、臨床結果について対象を評価する。またビンダリットを、本明細書中に記載の眼経路のいずれか（たとえば硝子体内）を介して投与してもよい。
【０３４０】
第１の臨床結果は、当該分野でよく知られている標準的な視力検査を使用して決定する。ある距離からのスネレン視力表上のシンボルおよび物体を明確に見るための能力に関して、対象を評価する。
【０３４１】
第２の臨床結果は、地図状萎縮の進行速度を評価する。これを行うために、１．０％のトロピカミドおよび２．５％のフェニレフリン、または適合可能な薬剤で瞳孔を拡大した後、網膜のイメージングを行う。Ｈｅｌｂ，  ｅｔ  ａｌ．  Ａｃｔａ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  ２０１０  Ｄｅｃ；  ８８（８）：８４２−９に記載のように、ｃＳＬＯおよびＳＤ−ＯＣＴの同時の記録を可能にする器具（たとえばＳｐｅｃｔｒａｌｉｓ  ＨＲＡ＋ＯＣＴ；  Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，  ドイツハイデルベルク）を用いて、イメージングを行う。複数の操作様式を使用することができる：白色光、赤色を含まない光、青色光、近赤外線、およびＯＣＴ。同様の解析を、改変した眼底カメラを用いて行うことができる。
【０３４２】
第３の臨床結果は、低蛍光ＤＮＩＲＡ（低蛍光領域により定量化）の変化の比率を評価する。これを行うために、１．０％および２．５％のフェニレフリンを用いて瞳孔を拡大した後、網膜のイメージングを行う。器具（血管造影を行う能力を伴うまたは伴うことなく、所定の適切な励起および発光フィルターを備える共焦点走査方式または改変した眼底カメラを利用し得る）を用いて、イメージングを行い、ＩＣＧ注射の前（ベースライン）、およびさらなる色素の注射を行うことなく、所定の励起／発光フィルターを用いて、色素注射から数日後に再度、イメージングを行う。
【０３４３】
第４の臨床結果は、過蛍光のＤＮＩＲＡのドットの数および位置の変化を評価する。これを行うために、１．０％および２．５％のフェニレフリンで対象の瞳孔を拡大した後、網膜のイメージングを行う。器具（血管造影を行う能力を伴うまたは伴うことなく、所定の適切な励起および発光フィルターを備える、共焦点走査方式または改変した眼底カメラを利用し得る）を用いて、イメージングを行い、ＩＣＧ注射前（ベースライン）、およびさらなる色素の注射を行わず、所定の励起／発光フィルターを伴い、色素注射から数日後にさらに、イメージングを行う。
【０３４４】
ｃＳＬＯの画像は、近赤外線反射（λ＝８００〜１０００ｎｍ）およびＦＡＦ（λ＝２８０〜５５０ｎｍ、発光３５０〜７００ｎｍ）の画像を得ることを含み得る当該分野で知られているプロトコルに従い、得られる。低蛍光（暗色）ＦＡＦの領域を測定し、経時的に類似の測定値と比較する。この増加は、低蛍光ＦＡＦの大きさであり、ＧＡの進行速度の測定値である。あるいは、ＧＡの領域およびその経時的な変化は、ＳＤ−ＯＣＴイメージングの正面の再構成から計算でき、たとえば、８７０ｎｍの蛍光波長を用いて行うことができ、４０，０００Ａスキャンの速度、および前後走査１．８ｍｍを得ることができる。眼あたりの２つのＳＤ−ＯＣＴ走査（１つは垂直であり、１つは平行）を、おおよそ中心窩にわたり行い、またはＲＰＤの場合、黄斑の血管の列弓に近接して、行われる。フルオレセインの血管造影（λ＝４８８ｎｍ、発光５００〜７００ｎｍ、１０％のフルオレセインの色素）を、必要に応じて行う、色のついた眼底の写真を、眼底カメラ（たとえばＦＦ  ４５０  Ｖｉｓｕｐａｃ  ＺＫ５；  Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ  Ｍｅｄｉｔｅｃ  ＡＧ，  ドイツイェーナ）を用いて得る。ＤＮＩＲＡの画像を、ＩＣＧ色素注射前の、所定のＩＣＧ励起／発光フィルターでのベースラインの画像を得ることを含み得る本明細書中に記載のプロトコルに従い、得る。最大５ｍｇのＩＣＧ色素を、血管内に注射し、血管造影を行ってもよく、または行わなくてもよい。ＤＮＩＲＡ画像を、所定のＩＣＧ励起／発光フィルターを用いるが、ＩＣＧ色素を再度注射することなく、再度得る。低蛍光（暗色）ＤＮＩＲＡの領域を測定し、経時的に類似の測定値と比較する。
【０３４５】
臨床予後のデータの解釈は、必要に応じて、さらなる治療の決定を通達する。例示的なデータ解析は、黄斑の立体解析および５つの線のラスターを含む。
【０３４６】
実施例７：薬剤に対する眼障害の対象の応答の検出および／または予測
ラットの眼におけるマルチモードイメージングを使用して、ＲＰＥの毒素のＮａＩＯ３が、非滲出型ＡＭＤおよび／またはＲＰＤの侵襲性型の患者と同様のＦＡＦの複合パターンを誘導することが決定された。組織の組織学的検査および蛍光顕微鏡は、ＦＡＦのｉｎ  ｖｉｖｏでのパターンが、ＲＰＥの損傷または喪失領域に動員された生来の免疫系の自己蛍光細胞の空間分布と対応することを示した。
【０３４７】
Ｉｎ  ｖｉｖｏでのマルチモードおよび血管造影のイメージング：眼底のイメージングを、市販の共焦点走査型レーザー検眼鏡（ｃＳＬＯ，  Ｓｐｅｃｔｒａｌｉｓ，  Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｒｅｔｉｎａｌ  Ａｎｇｉｏｇｒａｐｈｙ，  ＨＲＡ−ＩＩ；  Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ＧｍｂＨ，  Ｇｅｒｍａｎｙ）、およびＥｙｅ  Ｅｘｐｌｏｒｅｒ  Ｉｍａｇｅ  Ｃａｐｔｕｒｅ  ｓｙｓｔｅｍ，  ｖｅｒｓｉｏｎ  １．１．１０を使用して行った。赤色を含まない（ＲＦ、緑色優性）イメージング用の障壁フィルターを用いず、フルオレセイン血管造影では５００ｎｍの障壁フィルターを用いて４８８ｎｍの励起波長で、ＩＣＧ血管造影に関しては７９５／８１０ｎｍの励起／発光で、および赤外線反射イメージングでは８３０ｎｍのレーザーを用いて、画像を撮像した。４８８ｎｍのＦＡＦを評価するために、ｃＳＬＯのイメージングを、フルオレセイン色素の非存在下で行った。同時に、脈管構造を撮影し、ＦＡＦ画像解析用の標識を提供することが必要な場合、ＩＣＧを、尾静脈を介して、２ｍｇ／ｋｇまたは５ｍｇ／ｋｇの用量で、あらかじめ挿入した２３ゲージ尾静脈カテーテルに注射した。
【０３４８】
正常なスプラーグドーリーラットの眼のＦＡＦのイメージングは、ＲＰＥの蛍光を阻害する放射状に配置された網膜血管により妨げられた、かすかな均一なすりガラス状の輝きを生成し、よって暗く現れる。また、このようなイメージングは、視神経乳頭（ＯＮＨ）での中心の低蛍光の円を特徴とし、ここでＲＰＥは存在しない。ＮａＩＯ３（０．９％の塩化ナトリウム中で、一連の実験ごとに新たに調製される４５％の溶液、４５ｍｇ／ｋｇ体重の最終濃度に注射される）、を、実験ラットに与えた。注射から３日後に、過蛍光の境界を伴う同等またはわずかに過蛍光のＦＡＦの単一の領域が現れ、明確な島、セクター、または３６０°のリングの形状をとった。すべての場合、島、セクター、またはリングは、ＯＮＨに達したが、それに近接していなかった。これらおよび以下の知見は、１６０個にわたる眼で確認した。
【０３４９】
ＮａＩＯ３の注射からおよそ４〜５日後から始まり、過蛍光／低蛍光が交互のＦＡＦの顕著な網状または曲線のパターンが、島、セクター、またはリング内に現れた。７日目までに、このパターンは顕著になり、数週間発生続け、この曲線の構成要素は、ＦＡＦの部分的なループ、長円、円、ロゼット、および貝殻状、または「動物の足跡」のパターンに起因する。２０週間経過した後でさえ、最後の時点を解析すると、境界は過蛍光の網状のパターンを保持しており、網膜周辺部に向けてわずかに進行し続けていた。
【０３５０】
動物のサブセットで行ったフルオレセインの血管造影から、網状パターンが、網膜または脈絡膜の脈管構造と対応しないことが確認されたが、ＩＣＧの血管造影は、ＦＡＦの島、セクター、またはリングの出現と空間的かつ一時的に一致する、ＮａＩＯ３からおよそ２〜３日後に、ＲＰＥおよびＢＭを通して脈絡網膜性界面で起こった透過性の変化を明らかにした。この透過性の増加は一過性であり、７日目までに分解し、次の時点を定例的に評価した。網膜の血管は漏出していない。パラフィンを埋め込んだ組織のヘモトキシン（Ｈｅｍｏｔｏｘｙｌｉｎ）およびエオシン（Ｈ＆Ｅ）の組織学的検査、ならびに免疫組織化学検査（ＩＨＣ）（当業者に既知、たとえばＤａｖｉｄｓｏｎ’ｓ  ｆｉｘａｔｉｖｅ  ａｎｄ  ｐａｒａｆｆｉｎ−ｅｍｂｅｄｄｅｄ  ｓｅｃｔｉｏｎｓ，  ｖｉｅｗｅｄ  ｗｉｔｈ  ａ  Ｎｉｋｏｎ  Ｕｐｒｉｇｈｔ  Ｅ８００  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅでの固定の後に行われる）により、流体が網膜下腔に集積したことを確認した。またこれは、ｉｎ  ｖｉｖｏでの超高解像度ＯＣＴによっても観察された（高解像度１６０ｎｍスペクトル領域のＯＣＴ画像を、Ｅｎｖｉｓｕ  Ｒ２２００  ＶＨＲ  Ａｎｉｍａｌ  ＳＤＯＩＳ  Ｓｙｓｔｅｍ，  Ｂｉｏｐｔｏｇｅｎ，  ＵＳＡを使用して得た；走査を、網膜のレベルで約２．８μｍの方位分解能、３６，０００／秒の速度で得た）。
【０３５１】
摘出した網膜およびＲＰＥの自己蛍光および免疫蛍光の解析：ｉｎ  ｖｉｖｏで観察されたＦＡＦパターンの病理学的な相関を決定するために、摘出した網膜全載を、白色下、および４８８ｎｍの落射蛍光顕微鏡により、低倍率で観察し、同一の波長を、ｉｎ  ｖｉｖｏでのイメージングのために、蛍光ＩＨＣ標識を用いることなく使用した。その後の組織解析に応じて、この目的のために２つの顕微鏡を使用した：狭い励起／発光ウインドウ（４８８／５２０ｎｍ）を伴う落射蛍光装置、ならびに水銀ランプおよび４５０〜４９０ｎｍのバンドで励起後５１５ｎｍ超からの蛍光を提供するロングパス（バンドパスではない）フィルターを備える共焦点顕微鏡のＩｎｖｅｒｔｅｄ  Ｌｅｉｃａ  ＤＭ  ＩＲＥ２  ｖｉｅｗｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍ。白色光下で、正常なラットの網膜は、全体的に等しく均質であり、一部の人工物が変形している。対照的に、微細なオフホワイトの、わずかな網状のパターンが、ＮａＩＯ３注射から７日後に得た試料で明らかとなった。１４日目までに、このパターンはより明確になり、網膜の切り目に最も良好に例示される小さな網膜外部のひだと対応するように観察された。４８８ｎｍの蛍光下で見ると、この同一の曲線パターンは明らかであった。より高倍率の落射蛍光顕微鏡を使用すると、このレース状の曲線のパターンは、網膜外部の溝またはひだと一致するように見える自己蛍光細胞の空間分布と一致することが示された。
【０３５２】
ＦＡＦの網状パターンと一致する自己蛍光細胞の同定を決定するために、摘出した網膜を、４８８ｎｍチャネルを回避する最初の免疫系のマーカーで染色した。Ｉｂａｌは、汎微生物性／マクロファージのマーカーであり、ラットの網膜では、これに対する抗体は、主要な食細胞の集合を同定する。このマーカーを使用して、Ｉｂａ１＋細胞が、全載網膜、で正面、すなわちＺ平面で見る場合に、レース状の曲線パターンで配置されていることを見出した。さらに、光受容体の核染色と比較する場合、この曲線パターンは、変形したＯＮＬのひだの間で挿入されたままであるように見られた。このＩｂａ１＋細胞のパターンは、ＦＡＦイメージングによりｉｎ  ｖｉｖｏで観察された過蛍光のパターンと対応し、摘出した網膜の自己蛍光細胞のパターンと対応する。ｉｎ  ｖｉｖｏでのＦＡＦおよびＩｂａ１＋染色の対応するパターンは、ＮａＩＯ３注射から７日後および１２日後の両方で観察された。重要なことに、ＮａＩＯ３から７日後に、すべてのＲＰＥ細胞は、後部眼杯（ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ  ｅｙｅ  ｃｕｐ）に存在しておらず、これらの細胞は、観察されたＦＡＦの原因とすることができないことが確認された。また、食作用としての自己蛍光細胞の同定は、単球／マクロファージの欠失が行われていない調製物に対するイメージングの比較により、確認した。このような欠失は、塩化ガドリニウム（ＧＡＤ）での処置により達成した。ＧＡＤでの処置の後、はるかに少ない、良好に画定されたＦＡＦの網状のパターンが観察され、これは境界の区分けの減少を含むものであった。
【０３５３】
このような食細胞の同定は、非滲出型ＡＭＤおよび／またはＲＰＤを表し、薬剤への対象の応答を予測するものである。特に、このような食細胞の観察は、薬剤での処置に対象が応答しない可能性を高くする。
【０３５４】
非疾患状態と比較して、脈絡膜と網膜との間の対象の上皮性関門を通して透過性の一過性の増加の同定は、非滲出型ＡＭＤおよび／またはＲＰＤを表し、薬剤に対する対象の応答を予測するものである。特に、非疾患状態と比較した、脈絡膜と網膜との間の対象の上皮性関門を通した透過性の一過性の増加の知見は、薬剤での処置に対象が応答しない可能性を高くする。
【０３５５】
摘出した網膜およびＲＰＥの遅延性の近赤外線解析（ＤＮＩＲＡ）：同様に、正常な眼と比較して異常な特徴の同定は、遅延性の近赤外線解析（ＤＮＩＲＡ）で行われる。ＩＣＧ血管造影の設定、すなわち励起／発光フィルターを含むが、血管造影から２４時間後、４８時間後、３日後、７日後、２１日後、または２８日後に色素を再度注射することのないＩＣＧ血管造影の設定を使用して、ＩＣＧ注射などの色素注射から数日および数週間後に、ＤＮＩＲＡ画像を得る。血管造影は、試験時間の間再度行うものではない。
【０３５６】
毒素の投与では、ＮａＩＯ３（Ｓｉｇｍａ，  ｃａｔ  ＃４２４０６４）などの毒素を、４５ｍｇ／ｋｇ体重の用量で２３Ｇカテーテルを介して全身に注射する。０．３５ｍｇ／ｋｇでのＩＣＧ血管造影を、ＮａＩＯ３注射の直前に行う。ＤＮＩＲＡを、ＩＣＧおよびＮａＩＯ３注射から７日後に行う。
【０３５７】
実施例８：全身性ＩＣＧ投与後のラットの眼のＤＮＩＲＡは、ｉｎ  ｖｉｖｏで免疫細胞を標識する。
ｉｎ  ｖｉｖｏで観察されたＦＡＦパターンの病理学的な相関を決定するために、摘出した網膜の全載を、白色光により、蛍光性ＩＨＣ標識を用いることなく、４８８ｎｍ−ｉｎ  ｖｉｖｏでのイメージングで使用した同一の波長の落射蛍光顕微鏡により、低倍率で見た。その後の組織解析に応じて、この目的のために２つの顕微鏡を使用した：狭い励起／発光ウィンドウ（４８８／５２０ｎｍ）を備える落射蛍光装置、ならびに水銀ランプおよび４５０〜４９０ｎｍのバンドで励起した後に５１５ｎｍ超の蛍光を提供するロングパス（バンドパスではない）フィルターを備える共焦点顕微鏡のＩｎｖｅｒｔｅｄ  Ｌｅｉｃａ  ＤＭ  ＩＲＥ２  ｖｉｅｗｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍ。白色光下で、正常なラットの網膜は、全体的にかなり均質であり、一部の人工物が変形している（図３Ａ）。対照的に、かすかなオフホワイトの微細な網状のパターンは、ＮａＩＯ３注射から７日後に得た試料で明らかとなった。１４日目までに、このパターンは、より明確になり、網膜の切り目に良好に現れた小さな網膜外部のひだと対応するように観察された（図３Ｂ）。４８８ｎｍの蛍光下で見ると、この同一の曲線パターンは明らかであった。注射から７日目までに明確になると、自己蛍光の増加は、このパターンを１４日目までにより可視化させた（図３Ｃ）。高倍率の落射蛍光顕微鏡を使用して、本出願人は、このレース状の曲線パターンが、網膜外部の溝またはひだと一致するように見える自己蛍光細胞の空間分布と一致することを示した（図３Ｄ）。
【０３５８】
理論による限定を望むものではないが、このことは、観察されるＦＡＦのｉｎ  ｖｉｖｏでのパターンが、網膜外部の自己蛍光細胞の分布と対応することを示唆する。これは、異常なＲＰＥに臨床的に関連するＦＡＦのパターンに属する広く行われている理論と対比しており、ＲＰＥが、本出願人が使用した単離した網膜の試料には存在していないことに留意されたい。理論による限定を望むものではないが、このことはまた、このモデルで観察されるＦＡＦの２次元のパターンが、網膜外部の３次元曲線のひだ内に限定された自己蛍光細胞の分布と対応することをも示唆している。
【０３５９】
よって、網膜外部構造の空間的および一時的な変化、ならびに自己蛍光細胞の種類の同定を、調査した。
【０３６０】
神経網膜層の性質により、本出願人は、網膜外部の変形が、正常に平坦な顆粒層（ＯＮＬ）、高密度に配置された光受容体の核の層の立体構造的な変化を観察することにより、容易に評価できると考えた。よって、新たに摘出した網膜全載の自己蛍光解析の直後に、核の染色を行い、組織を、非４８８チャネルの落射蛍光または共焦点顕微鏡により評価した。また、断面を、眼全体のＨ＆Ｅにより評価した。
【０３６１】
ＮａＩＯ３の投与前のベースラインで、核染色Ｔｏｐｒｏ３を使用した共焦点顕微鏡は、ＯＮＬが平坦であり、血管染色を欠いていることを確認した（図４Ｃ）。ＮａＩＯ３投与から３日後に、わずかな曲線状のＯＮＬの溝、同時に場合によっては浅く線状のひだが認められた。７日目までに、ＯＮＬの変形はより顕著となり、明確に相互接続した一連の溝を産生した。１４日目までに、これらの変化はより複雑となり、大きさが大きくなった。
【０３６２】
共焦点顕微鏡を使用して得た画像に対して９０°での網膜の断面のＨ＆Ｅの組織検査は、ＮａＩＯ３誘導型のＲＰＥの毒性が、網膜下の流体の増大を随伴するＯＮＬの小さな凹凸を最初にもたらし、光受容体はほとんど喪失しないことを示した（図４Ｂ）。後に、ＯＮＬのくぼみが、ブルッフ膜（ＢＭ）、ＲＰＥの基底膜に対して並置しているより大きな大きさのひだを形成した。結果的に、これらのくぼみの側部の拡大が、多くの網膜内層がＢＭに対して並置するように、大きな網膜外部変性の近接領域をもたらした。
【０３６３】
ＦＡＦの網状のパターンと一致する自己蛍光細胞の同定を決定するために、免疫系のマーカーで摘出した網膜を染色し、４８８ｎｍチャネルを回避した。Ｉｂａ１は、汎微生物／マクロファージのマーカーであり、ラットの網膜にあり、これに対する抗体は、主要な食作用の細胞集合を同定する。このマーカーを使用して、Ｉｂａ１＋細胞は、網膜全載で正面、すなわちＺ平面から見た場合にレース状の曲線パターンに配置されている（図５Ａ〜Ｈ）。さらに、光受容体核染色と比較すると、この曲線パターンは、変形したＯＮＬのひだの間で挿入されていることが観察された。図５Ａ〜Ｈに示されるように、このIｂａ１＋細胞のパターンは、ＦＡＦイメージングによりｉｎ  ｖｉｖｏで観察された過蛍光のパターンと対応し（図１Ａ〜Ｄおよび２Ａ〜Ｄ）、摘出した網膜の自己蛍光細胞のパターンと対応する（図３Ａ〜Ｃ）。ｉｎ  ｖｉｖｏでのＦＡＦおよびＩｂａ１＋染色の対応するパターンは、ＮａＩＯ３注射から７日後および１２週間後に示される（図５Ａおよび５Ｂ）。ＮａＩＯ３投与から７日後までに、すべてのＲＰＥ細胞は、後部眼杯（ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ  ｅｙｅ  ｃｕｐ）に存在しておらず、これらの細胞が、観察されたＦＡＦの原因ではないことが確認された（図５Ｃおよび５Ｄ）。
【０３６４】
次に、Ｉｂａ１＋細胞と網膜外部との間の３次元（３Ｄ）の関係を、内部網状層（ＩＮＬ）から外部網状層（ＯＰＬ）を介して、内部、中間、および外部のＯＮＬに、段階的に移動する網膜全載の正面の（すなわちｚ軸）連続的な共焦点顕微鏡により、評価した。共焦点画像の小さな積み重ね（セグメント）を、これら３つのステップで投影（平坦化）した（図６Ａ〜Ｄ）。単球系の活性化したＣＤ６８＋マクロファージの同時分布もまた評価した。
【０３６５】
ＮａＩＯ３の投与前のベースラインで、Ｉｂａ１＋細胞は、ＩＰＬのみで見られた。ＣＤ６８＋細胞を同定した（図６Ａ）。ＮａＩＯ３投与から３〜４日後に、Ｉｂａ１＋細胞数が増加し、ＩＰＬおよび外部ＯＮＬを含む網膜外部にわたっても増加した（図６Ｂ）。ＮａＩＯ３投与から２週間後に、Ｉｂａ１＋およびＣＤ６８＋細胞の複合的な分布が、ＯＮＬの曲線のひだの間で組み合わさって観察された。さらに、良好に画定された、光受容体の核の光学的に区分けされた異所性の円または長円が、ＯＰＬ、血管の中央網膜層のかなり内部で観察され、これにより、対照的に、２つの正常な別々の組織の区画である、変形した光受容体の顆粒層および血管層をもたらした。中央のＯＮＬでは、変形した顆粒層の長円状の断面は、より曲線または魚型となり、大きなＩｂａ１＋およびＣＤ６８＋細胞は、中心の空隙内で見いだされた。最外部の三番目のＯＮＬはでは、光学的な断面図は曲線のままであり、多くの架橋しているセグメントとかなり近接していた。網膜下腔は、通常単なる潜在的な空間であり、網膜外部の変形により拡大し、ブルッフ膜のすぐ内部（喪失した光受容体外部セグメントが正常に残っている空間）で、Ｉｂａ１＋および／またはＣＤ６８＋炎症細胞および光受容体をまとめて示す。
【０３６６】
摘出した網膜全載の共焦点走査顕微鏡および三次元の再構成を行った（図７Ａ）。これらのデータは、Ｉｂａ１＋細胞が、光受容体の核の間で挿入されている網状またはレース状のパターンを形成したことを示した。さらに、同一の３つの平面に分割されたＺ−ｓｔａｃｋの投影（図７Ｂ、右側）は、内部のＯＮＬが、ＯＮＬの円形または長円状の断面図を特徴とすることを示した。対照的に、中央のＯＮＬは、顆粒層のループした曲線状の断面を特徴とし、外部のＯＮＬは、複数の架橋する要素を備えるより大きな曲線のセグメントから形成されている。これらの層の斜めの容積測定の投影は、基部に単一の近接するひだから伸びるいくつかの円錐体のピークを伴う、結果として生じるＯＮＬの偽長円の構成（ｐｓｅｕｄｏ−ｅｇｇ−ｃｒａｔｅ  ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ）を容易に表す（図７Ｂ中央および右側）。理論による限定を望むものではないが、これらのデータは、炎症細胞の大部分がＯＮＬのくぼみの中または間に局在していないが、拡大した網膜下腔のＯＮＬピーク下（すなわちＯＮＬ外部）で見いだされることを示す。
【０３６７】
理論による限定を望むものではないが、これらの知見は、変形した網膜外部下の自己蛍光炎症細胞の３次元の分布が、これら動物におけるｉｎ  ｖｉｖｏでのＦＡＦイメージングの２Ｄパターンを考慮することを示す。
【０３６８】
Ｉｎ  ｖｉｖｏでの変化およびＦＡＦの知見と摘出した組織で作成したこれらの知見を相関させるために、ｉｎ  ｖｉｖｏでの高解像度ＯＣＴを使用して、生存する網膜の３Ｄ容積測定解析を行った。ＨＲ−ＯＣＴは、眼球除去後の組織標本でのみ以前に観察された、非侵襲性のｉｎ  ｖｉｖｏでの網膜の断面を提供する。ＯＣＴのイメージングは、異なる光学密度の層の間の界面で作成されたシグナルに依存しており、正常なラットの網膜では、複数の層状の構造を確認した。網膜の３つの主要な最外層のＯＣＴの境界は、内から外に向かって、外部限定膜（ＥＬＭ）、光受容体の内部および外部の接合（ＩＳ／ＯＳ）、ならびにＲＰＥ／ＢＭである（図８Ａ、左）。診療所およびこれら任意の研究の両方における標準的な技術は、ＯＮＬを含む顆粒層を暗く（すなわち単一の空隙として）設定した。
【０３６９】
ＮａＩＯ３の投与後に、ＯＣＴを使用して撮像した生存する網膜の再構成した正面の画像は、視神経後部の領域に限定されているわずかな変化を示した（図８Ａ、中央）。ベースラインおよび上部網膜に対する比較（ＮａＩＯ３投与から３日後に肉眼で正常に見える）（図８Ａ、中央）を行い、網膜下部の光学断面は、明るい（超エコー性）の浅い隆起が可視化されるように、光受容体のＩＳ／ＯＳ接合およびＥＬＭのわずかな変形を示した（図８Ａ、右）。このシグナルは、ＯＮＬの外部およびＢＭの内部で見いだされた。このＲＰＥを表すかすかに暗い線は、もはや存在しなかった。１４日目までに、これらの隆起は、基部がＢＭ上に見える明確な三角形またはピラミッドを形成する一部の、明確なピークに成熟した（図８Ｂおよび８Ｃ）。他の隆起は、ＥＬＭから、光受容体層を介して中央網膜に達するように伸びる明確に狭いスパイクを形成した。ヒトのＲＰＤ患者由来の臨床ＯＣＴの画像は、この疾患の特徴である錐体の網膜下の沈着物を示す（図８Ｄ）。
【０３７０】
ＲＰＤを特徴づける、本システムで見られる明るい隆起、三角形、およびスパイクが、網膜下腔の体積―輝度の投影（ＶＩＰ）で観察された自己蛍光食細胞の分布と対応するかどうかを試験するために、網膜下腔の体積―輝度の投影（ＶＩＰ）を使用した。これらは、ｚ軸およびｙ軸で再構成できるｉｎ  ｖｉｖｏでの生存組織の３次元ブロックを評価する手段を提供するために、ＯＣＴで作成した光学的なセクションから構成されるものであった。
【０３７１】
ｙ軸において隣接するＯＣＴ画像の再構成物は、並んで配置された隆起または三角形が、円、長円、暈状、および標的様病変などの複合的な構造に寄与することを示した。図９Ａの例では、２つの網膜下の隆起が、円の「側部」を形成し、上部および後部の態様でともに近接して、中央では最大限離れている。単一の隆起、ピラミッド、およびスパイクは、より単純な曲線構造に寄与している。
【０３７２】
この知見をさらに裏付けるために、ｚ軸のＶＩＰ（すなわち、内部ＯＮＬ〜外部ＯＮＬまでの短い段階的なセグメント）を次に解析した（図９Ｂ）。内部ＯＮＬを介したＶＩＰは、網膜全体にわたり規則的に離れている、一連の点状のスポットを示した。中央ＯＮＬ由来のＶＩＰは、より少なく、規則的に離間した魚型または曲線の短い線を示し、このうちの一部は架橋している。外部ＯＮＬ由来のＶＩＰは、多くの架橋している要素を伴う近接した曲線セグメントを示した。これらの知見は、摘出した網膜全載から作成した３Ｄデータと直接対応する（図６Ａ〜Ｄ）。
【０３７３】
さらに、過蛍光ＦＡＦまたは異常なＦＡＦパターン、および過蛍光ＤＮＩＲＡが、食細胞の分布と相関または同時に局在したことを確認するために、循環するマクロファージ／単球の集合を、塩化ガドリニウム（ＧＡＤまたはＧｄＣｌ３）、マクロファージの活性を抑圧する希土類金属塩を使用して欠失させた。免疫細胞のＧＡＤの欠失は、ＮａＩＯ３誘導型のＦＡＦおよびＤＮＩＲＡのパターンの明確な変化をもたらした。単球／マクロファージの集合のＧＡＤの欠失は、ＮａＩＯ３誘導型ＦＡＦパターンの明確な変化をもたらした。このことは、損傷の地図状領域およびその境界内の両方で定性的に明らかであった（図８Ａ〜Ｃ）。
【０３７４】
さらに、反復して行われたＤＮＩＲＡ、パルスＤＮＩＲＡと本出願人が名付けた方法により、経時的に移動するように見えるＤＮＩＲＡにおける小さな過蛍光のドットを同定する（図３２）。ＤＮＩＲＡでも標識できるＲＰＥ細胞は、移動するものではない。上記の過蛍光との同時局在に加えて、これは、マクロファージが同時局在しており、疾患の進行に起因することを示唆するものである。
【０３７５】
実施例９：ＲＰＤおよびびまん性−しずく型（ｄｉｆｆｕｓｅ  ｔｒｉｃｋｌｉｎｇ）ＡＭＤの臨床的なｉｎ  ｖｉｖｏでのイメージング
図１０Ａ〜Ｃで、ＮａＩＯ３モデルにおける組織の知見に対するＲＰＥの臨床的な特徴を直接比較する画像および解釈上の表を提供する。ヒトのＲＰＤ患者（網膜下腔にベースダウンした錐体構造を示す、図８Ｄ）の臨床的なＯＣＴイメージングに加えて、色付きおよび赤色を含まない眼底の画像をも得た（図１０Ａ〜Ｃ）。赤色を含まない画像は、ＲＰＤの個々の偽ドルーゼンを構成する小さな暗いスポットを示した（図１０Ａ、上部画像）。これらは、暗灰色のオーバーレイを使用して同定した。さらにこのことは、ＲＰＤを特徴づけるいわゆる「標的病変」の存在を、円により限定して強調する。これらは、明るい中心を備える暗いスポットとして現れる。並行して、折りたたまれたラットの網膜外部の略式的な表示を提示し、似せの色付けをし、黒および白色の画像（両方が「陽性」および「陰性」）として提示される正面および断面は、標的およびＲＰＤ暈と直接相関する。
【０３７６】
これらのデータは、暗い中心を伴う、レース状または網状のパターンの円、暈状、および標的病変内の暗い偽ドルーゼンの２Ｄパターンが、２Ｄの正面で見られ、３Ｄで容積測定が考慮されるリングおよびクレーターの増加と対応することを示す。
【０３７７】
実施例１０：ビンダリットの治療効果
この実施例は、特に、ビンダリットが、非滲出性（ｄｒｙ）ＡＭＤおよびＲＰＤのモデルにおける毒素誘導型の損傷から、網膜およびＲＰＥを保護し、ビンダリットが、地図状萎縮（ＧＡ）としての、網膜色素上皮（ＲＰＥ）および光受容体の喪失のパッチの発症に効果があることを示す。
【０３７８】
動物を、眼の研究における人道的な動物の使用に関するＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｉｎ  Ｖｉｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  （ＡＲＶＯ）ガイドラインに従い、およびＣａｎａｄｉａｎ  Ｃｏｕｎｃｉｌ  ｏｎ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓに従って扱った。ケタミン（１００ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（１０ｍｇ／ｋｇ）の組み合わせで動物に麻酔をかけ、０．８％のトロピカミドを含む５％のフェニレフリン塩酸塩溶液（ジオフェニルＴ，  Ｓａｎｄｏｚ  Ｃａｎａｄａ  Ｉｎｃ）一滴を用いて瞳孔を拡大させた。ＧｅｎＴｅａｌの潤滑用点眼薬（Ｎｏｖａｒｔｉｓ，  Ｃａｎａｄａ）を、すべての手順の間角膜の表面に反復して使用した。
【０３７９】
ｉｎ  ｖｉｖｏでの画像を、市販の共焦点走査型レーザー検眼鏡（ｃＳＬＯ）（Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｒｅｔｉｎａｌ  Ａｎｇｉｏｇｒａｐｈｙ，  ＨＲＡ−２，  Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，  Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して得た。画像を、赤色を含まないＦＡＦ（４８８／５００ｎｍ  励起／発光）、ＩＲ反射率チャネル（８３０ｎｍ）、およびＩＣＧ蛍光チャネル（７９５／８１０ｎｍ励起／発光）で得た。動物を、ｃＳＬＯを使用してあらかじめスクリーニングし、自然発症した欠陥のあるものを試験から排除した。すべてのｉｎ  ｖｉｖｏでのイメージングの間、角膜の表面を、一般的な潤滑点眼薬（Ａｌｃｏｎ，  Ｍｉｓｓｉｓｓａｕｇａ，  Ｃａｎａｄａ）を反復して使用して湿潤させたままにした。視神経乳頭（ＯＮＨ）で開始し、可能な限り中央および遠位の周辺まで同心リングで移動した各眼の複数の画像を撮影した。場合によっては、小さな瞳孔とｃＳＬＯを合わせることが困難であるため、半網膜のみで近接した画像を得た。ここでは、第２の半分のその後のイメージングのため動物の再配置を伴う。眼底の複合した画像を、その後、パワーポイントでまとめ、解析のためエクスポートした。
【０３８０】
血管造影：ＩＣＧ色素（Ｃａｒｄｉｏｇｒｅｅｎ，  Ｓｉｇｍａ）を、無菌水中最終濃度５．０ｍｇ／ｍｌに、実験前に新たに調製した。２４ゲージカテーテルを尾静脈に挿入し、ＩＣＧ色素を、０．３５、または５．０ｍｇ／ｋｇの用量で注入した。注射前（ベースライン）、色素循環の間、および注射から最大２０分後までの様々な間隔で、画像を撮影した。
【０３８１】
遅延性の近赤外線解析（ＤＮＩＲＡ）：ＤＮＩＲＡの画像を、ＩＣＧの血管造影の設定であって、所定の励起／発光フィルターを伴うが、０日目後の色素の再注入を行うことのない、ＩＣＧの血管造影を使用して、ＩＣＧ注射から数日後および数週間後に得た。血管造影から２〜１２０日後に画像を撮影した。
【０３８２】
ＦＡＦ画像の定量化：複合的な画像をグループわけし、盲検観察者による解析のため、Ｉｍａｇｅ  Ｊ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ）にインポートした。異なる用量の毒素で異なる画像から決定された損傷パッチの大きさ間の比較は、参照として中心の（視神経乳頭）ｃＳＬＯの画像を使用して画像の大きさを正規化することにより、達成された。眼底画像間の大きさが、ラット間で有意に変動しなかったとの仮定を作製した。異常なＦＡＦシグナルを伴う領域は、「ポリゴン」トレーシングツールを使用して盲検リーダーにより手動で輪郭を描き、対象の領域を画素で測定した。用量応答解析では、パッチの大きさを、４５ｍｇ／ｋｇのＮａＩＯ３（１００単位の値が割り当てられている）からのパッチの平均値と比較した。
【０３８３】
網膜電図検査（ＥＲＧ）：高用量（５．０ｍｇ／ｋｇ）および低用量（０．３５ｍｇ／ｋｇ）の用量のＩＣＧまたは対照の生理食塩水の投与の後にＥｓｐｉｏｎ（ＤｉａｇｎｏｓｙｓＬＬＣ，ＵＳＡ）ｍｉｎｉ−Ｇａｎｚｆｅｌｄ  ｓｙｓｔｅｍを使用して動物において、明るいフラッシュＥＲＧ応答を評価した。麻酔をかけた後、動物を、電気的に静止した加熱パッド上に置き、ＧｅｎＴｅａｌの潤滑点眼薬を使用した後角膜の端に金色のコイルの電極を配置した。短期間の薄暗いフラッシュ（０．０１カンデラｓ／ｍ２、１．０Ｈｚ）の後、明順応のｂ波の応答を、最大値に近いｂ波の振幅を本出願人があらかじめ決定した単一の明るいフラッシュ（３カンデラｓ／ｍ２）を使用して評価した。
【０３８４】
ヨウ素酸ナトリウム：ＲＰＥの毒素のヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３、Ｓｉｇｍａ）を、生理食塩水中４５ｍｇ／ｍｌの原液の溶液で毎週新たに調製した。この溶液を、５ｍｇ／ｍｌ、１５ｍｇ／ｍｌ、３０ｍｇ／ｍｌ、および４５ｍｇ／ｍｌの最終濃度に希釈し、これによりすべての動物に、５ｍｇ／ｋｇ〜４５ｍｇ／ｋｇの最終用量を達成するために同一の量が投与された。ＮａＩＯ３を、尾静脈に挿入した２４ゲージカテーテルを介して、全身的に注射した。ＩＣＧ注射（０．３５ｍｇ／ｋｇ）および血管造影を、ＮａＩＯ３注射の直前の０日目に行った。ビンダリットの効果を試験するために、標準化した用量を使用した。
【０３８５】
ビンダリットの眼内注射：ビンダリットの硝子体内注射を、Ｈａｍｉｌｔｏｎ  ｓｙｒｉｎｇｅ  （Ｃａｔ＃  ７６３４−０１，  Ｈａｍｉｌｔｏｎ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｒｅｎｏ，  ＵＳＡ）を備えた解剖顕微鏡（ＳＭＺ８００；  Ｎｉｋｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，  米国メルビル）下で行った。小さな切込みを、斜めに切った３３ゲージニードル（ＢＤ，  Ｍｉｓｓｉｓｓａｕｇａ，  Ｃａｎａｄａ）を使用して角膜輪部の後ろに作製した。次に、３０ゲージの平坦な針を、瞳孔軸に対して約４５°の角度で挿入した。２μｌのビンダリット溶液または対照溶液（生理食塩水）を手動で注射した。
【０３８６】
自己蛍光顕微鏡：新たに摘出した眼の全載の試料、網膜または網膜を欠いた後部眼杯を、４８８ｎｍ／５１２ｎｍの波長を伴う落射蛍光顕微鏡を使用して評価した。
【０３８７】
免疫蛍光顕微鏡：免疫組織化学的検査を、標準的なプロコルを使用して行った。簡潔に述べると、細胞を４％のＰＦＡ／ＰＢＳを用いて１５分間固定し、ＴＢＳ中１．２５％のＢＳＡを用いて、室温で３０分間ブロッキングした。一次のウサギ抗ＺＯ−１を、１．２５％のＢＳＡ／ＴＢＳ中２．５μｇ／ｍｌで使用して、室温で１時間インキュベートした。細胞をＴＢＳで洗浄し、ヤギの抗ウサギ４８８（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）５．０μｇ／ｍｌとともに、室温で１時間インキュベートし、洗浄し、Ｔｏ−Ｐｒｏ−３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で、室温で２０分間染色した。一部のＲＰＥ単層を、６４７ｎｍの共役ファロイジン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で対比染色し、Ｓｙｔｏｘ  ｇｒｅｅｎ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｓｔａｉｎ  （Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で対比染色した。スライドを、蛍光搭載媒体（Ｄａｋｏ）とともに取り付け、画像を、Ｌｅｉｃａ  ＴＣＳ  ＳＬ共焦点蛍光顕微鏡（Ｌｅｉｃａ  Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ，  ＧｍｂＨ，  ドイツヴェッツラー）を使用し、Ｌｅｉｃａ  Ｃｏｎｆｏｃａｌ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｖ  ２．６１を用いて得た。
【０３８８】
ビンダリットでの治療は、地図状萎縮（ＧＡ）として知られている非滲出型ＡＭＤおよびＲＰＤの末期失明性合併症に対して二次的な予防を提供する。二次的な予防の目的は、喪失前に中心視力および中心視野を維持することである。
【０３８９】
ＡＭＤの患者は、「非滲出型」から始まり、ドルーゼンとして知られている黄斑における小さな沈着物を有する。疾患の末期では、患者の網膜外部およびＲＰＥのパッチ状の喪失を特徴とする進行型の疾患に転換する。ここでは、ビンダリットが、末期疾患に進行するのを予防または遅らせることができること、すなわち、ＧＡの二次的な予防を、本発明の動物モデルにおいて示している。図１６Ａ〜Ｆは、ビンダリット（ＴＭｉ−０１８）が、ラットの眼におけるＲＰＥの喪失のパッチの大きさを減少することを示す。さらに図１６Ａ〜Ｆは、眼底自発蛍光（ＦＡＦ）を使用して経時的に評価される場合、硝子体内のビンダリットが、過蛍光ＦＡＦの複合的なパターンの発症を低減することを示す。図１７Ａ〜Ｂは、ビンダリットが、用量依存的に網膜の機能（電気生理学的な機能）を保護し、最小限の有効な用量を示すことを示す。図１８Ａ〜Ｃは、ビンダリットが、組織の損傷、ＲＰＥの喪失、および網膜外部の破壊に有効であることを示す。
【０３９０】
図１９Ａ〜Ｊは、ビンダリットが、単球走化性タンパク質（ＭＣＰ）−１の発現を低減し、Ｍ１マクロファージの応答、Ｍ２を選択して均衡を傾けることを低減することを示す。特にこのデータは、とりわけ、硝子体内ビンダリット後の網膜下腔におけるＭＣＰ−１タンパク質の発現の用量依存的な低減を示す（たとえば図１９Ｄ参照）。また、このデータは、ＲＰＥに対する毒素誘導型の損傷の間、眼疾患（たとえば非滲出型ＡＭＤおよび／またはＲＰＤ）のモデルの遺伝子発現は、Ｍ１分極化に向けてシフトすることを示す。また、Ｍ１のｍＲＮＡの発現の相対的な減少およびＭ２発現レベルの増加を伴い、遺伝子発現は中立に戻る。理論による限定を望むものではないが、これらのデータは、ビンダリットが、「炎症に関連する」転写を低減するよう特異的に作用することを示唆する。
【０３９１】
ビンダリットがパッチの発症に有効なだけでなく、既存のＧＡの増殖（拡大）をも低減することができる。ビンダリットでの治療は、ＲＰＥのこれら増殖および網膜外部の喪失のパッチを減少することにより、既存の地図状萎縮（ＧＡ）、非滲出型ＡＭＤの末期の失明性合併症を治療する。このような治療の目的は、患者が視野の中心で観察する「失明性のスポット」の大きさを減少することである。図２０Ａは、既存のパッチの陰性対照（生理食塩水）の治療を示し、このパッチは拡大し、図２０Ｂは、既存のパッチのビンダリットの治療を示し、このパッチは拡大しない。
【０３９２】
実施例１１：ビンダリットのＲＰＥの保護および補体の調節
ＭＣＰ−１は、ＲＰＥにより発現すると報告されており、Ｍ１マクロファージを活性化する有力な危険関連分子タンパク質（Ｄａｎｇｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  （ＤＡＭＰ））である。この例は、特に、マクロファージの活性と無関係なＲＰＥ細胞におけるＭＣＰ−１発現に直接ビンダリットが影響できるかどうかを試験する。ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、不死化したテロメラーゼ陰性ヒトＲＰＥ細胞株（ｈＴＥＲＴ−ＲＰＥ１）を使用して、ビンダリットが、これらの細胞に直接影響し、ＭＣＰ―１のｍＲＮＡおよびＭ１の転写をダウンレギュレートすることが示されている（図２１）。免疫細胞化学は、ＭＣＰ―１およびＫＦκＢタンパク質のダウンレギュレーションを示した（図２１）。さらに、ＮａＩＯ３で試験する場合、ビンダリットは、ｈＴＥＲＴ−ＲＰＥの細胞の生存性を保護し、理論による限定を望むものではないが、非滲出型ＡＭＤの治療における潜在的な有効性と非常に関連した第２の予測されていない作用機構を示唆している（図２１）。ビンダリットは、マクロファージの分極化における影響を介して直接的に、かつ局所応答を開始するＲＰＥシグナリングのレベルを低減することにより間接的に、生来の免疫応答を調節する可能性を有することが明らかである。
【０３９３】
図２１は、パネルＡおよびＢにおいて、ｈＴＥＲＴ細胞が、ＲＰＥ識別のマーカーを発現するために限定されていることを示す。パネルＣでは、ＴＭｉ−０１８が、ヒトのＲＰＥ（ｈＴＥＲＴ）において、Ｎｆｋｂの発現を低減し、ＭＣＰ−１を低減することが示されている。パネルＤは、ＴＭｉ−０１８が、毒素試験に対してＲＰＥの生存を上げることを示す。
【０３９４】
さらに、ビンダリットは、優れた併用剤であると本明細書中に示されている。図２２は、補体のカスケード成分のｍＲＮＡ種が、毒素誘導型のＲＰＥ損傷後に変化することを示し、ビンダリットが補体の遺伝子発現を変化させることを示す。試験した遺伝子は、Ｃ１ｑｂ、Ｃ１ｑｔｎｆ５、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４ｂ、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８ａ、Ｃ９、Ｃｆｂ、Ｃｆｄ、Ｃｆｈ、およびＣｆｉを含む。
【０３９５】
加齢黄斑変性は、生来の免疫の機能不全に関連しており、有望な治療がこれらの経路を標的としている。ＡＭＤの発症のリスクを最も示す多型は、補体Ｈ因子（ＣＦＨ）であり、これは、代替的な補体カスケードの成分である。Ｃｆｈは、補体の陰性調節物質であり、その不存在は、応答の加速をもたらす。ダウンストリームのメンバーはＣ５およびＣ３を含み、その両方は、臨床試験ではうまく標的化されていない。しかしながら補体Ｄ因子（ＣＦＤ）阻害剤、ランパリズマブを用いた、近年の有望なフェーズＩＩの試験は、ＣＦＤの阻害が、１８か月間にわたり地図状萎縮の増殖、すなわち拡大を遅らせることができることを示唆している。この効果は、補体Ｈ因子およびＩ因子の多型と併用した患者で最も強力であった。ここで、変化は、ＮａＩＯ３投与後に経時的な補体の応答で起こることが示される。ベースラインに対対して正規化して（毒素前）、多くの補体遺伝子のｍＲＮＡレベルが、２または３倍超、増加または減少することが観察される（図２２）。主な変化は、Ｃ１、Ｃ３、Ｃ５、およびＣ９で同定されており、特に、ＣＦＨおよびＣＦＩは、両方とも減少する。後者の知見は、ＣＦＤ阻害剤のランパリズマブが、これら遺伝子の多型を有す患者で最も有効であったとの知見と相関し得る。ＣＦＤのｍＲＮＡは、大部分の経時変化にわたり３倍未満とあまり変化しなかった。
【０３９６】
次に、これら遺伝子に及ぼすビンダリットの効果を調査した。ビンダリットは、複数の補体の遺伝子のｍＲＮＡを用量依存的にアップレギュレートまたはダウンレギュレートした。
【０３９７】
よって、ビンダリットは、ｍＲＮＡの応答を大きく変え、補体系の調節物質と相乗的に作用する。
【０３９８】
実施例１２：ＤＮＩＲＡでの薬剤の効果および／または疾患の進行の臨床評価
この実施例は、特に、ＤＮＩＲＡが、眼障害の診断方法または予後診断方法として有用であることを示す。たとえば、このデータは、ＤＮＩＲＡが、１つもしくは複数の眼障害に対する薬剤の治療上の有効性のためのバイオマーカー、および／または１つもしくは複数の眼障害の発症のための診断、および／または１つもしくは複数の眼障害の進行の診断として有用であることを示す。重要なことに、このデータは眼障害に罹患したヒト対象における知見を提示する。
【０３９９】
ＤＮＩＲＡは、診断、疾患の進行、および治療応答用の新規かつ以前には記されていないバイオマーカーである。この使用、定性的な記載、および定量化は、これらの目的に重要な用途を提供する。
【０４００】
現在ＩＣＧ血管造影を行うために使用される器具は、たとえば眼（網膜および脈絡膜）の血管を介して通過するような色素のリアルタイムのイメージングを必要とする。このように、イメージングは、概して、腕または手の静脈中の色素の注射の数秒および数分前に開始し、概してその後１０〜３０分間継続する。末期の血管造影は、概して最大４５分後まで行われる。よって画像は、移行期（色素が血管を通過する際）および再循環段階（血管から組織へと漏出する際）に得られる。よって、ＩＣＧ色素をイメージングするために必要とされる装置は、フィルム、ビデオ、またはより近年ではデジタルの血管造影の形態で、一連の画像を独自に撮像しなければならない。これらのシステムは高価であり、継続したイメージングを必要とする。代わりに、この実施例は、血管造影のイメージングを使用することなく、ＩＣＧ励起／発光フィルターの使用を提供する。ベースラインのＤＮＩＲＡ画像は、ＩＣＧ色素の全身性注射の前に、所定のＩＣＧｅｘ／ｅｍフィルターを用いて得る。注射から数日後および数週間後に、個体の画像を得る。血管造影を用いないＩＣＧフィルターの使用は、以前に記されていなかった。
【０４０１】
臨床疾患に対するＤＮＩＲＡの使用を、本明細書中に示す。簡潔にまとめると、すべての手法は、Ｓｔ  Ｍｉｃｈａｅｌ’ｓ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｅｔｈｉｃｓ  Ｂｏａｒｄにより承認されており、ヒトの対象の臨床試験に関してＧｏｏｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  （ＧＣＰ）  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｄｅｃｌａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｅｌｓｉｎｋｉを遵守するものである。手法の性質および潜在的な結果を完全に説明し、インフォームドコンセントを行った後、非滲出型のＡＭＤと臨床的に診断された患者を試験に動員した。ベースライン検査は、色素を注入しない所定のＩＣＧ励起／発光フィルターでのＦＡＦおよびＮＩＲイメージングを含むｃＳＬＯイメージングに加えて、メガネ矯正視力、スリットランプ顕微鏡での眼の検査、および眼底検査を含むものであった。その後、血管造影を１週間に１回未満で行い、同時に、単回用量のＩＣＧ色素（Ｃａｒｄｉｏｇｒｅｅｎ，  ２５ｍｇ／５ｍｌ）およびフルオレセインナトリウムを投与した。ＦＡＦおよびＤＮＩＲＡのイメージングを、７日後に２回行い、この手順の間は、最短で２日、最大で４日であった。
【０４０２】
ＤＮＩＲＡを、ＩＣＧの血管造影と比較した。中心シグナル（ほとんど検出できない）の重なっている阻害以外のわずかな異常を、ＩＣＧの血管造影で観察する（図２３）。これは、ＤＮＩＲＡとは全く対照的に、中心の黄斑で顕著な過蛍光領域である（図２４）。さらに、ヒョウ柄様のパターンが、現在までのいずれかのイメージング技術により同定されていない黄斑周辺で観察される。さらに、ＤＮＩＲＡを、これらの技術よりも優れているＦＡＦおよび近赤外線（ＩＲ）と比較する（図２５）。図２５の左（ＩＲ）および中心（ＦＡＦ）のパネルで示されている患者と同一の患者のＤＮＩＲＡの画像は、顕著に対比している。たとえば、ＤＮＩＲＡのみが、画像の中心に明確な過蛍光（暗色）の領域を明らかにしている。より小さなパッチが、中心の病変の周辺および視神経乳頭に近接して認められる。さらに、同一の患者の複合的な画像は、他のイメージング方式で見られず、以前に記載されていない過蛍光および低蛍光が交互のＤＮＩＲＡのレース状、網状、またはヒョウ柄様のパターンを示す（図２６）。比較して、ＲＰＥ損傷を有すると知られていない同年齢の非ＡＭＤ患者は、このような過蛍光および低蛍光が交互のＤＮＩＲＡのレース状、網状、またはヒョウ柄様のパターンを示すものではない（データ不図示）。
【０４０３】
ＦＡＦとの類似により、脈絡網膜性損傷の領域は、低蛍光（暗色、黒色、または不存在）のシグナルとして見られる。このような領域は、正常または過蛍光の背景の間との純粋なコントラストにより、容易に定量化されている。低蛍光ＦＡＦの定量化のためのアルゴリズムは、現在市販のイメージング装置（たとえば共焦点走査型レーザー検眼鏡システムまたは改変された眼底カメラ）に備わっている。低蛍光ＦＡＦの定量化は、現在、試験対象算入基準および結果判定法の両方としての臨床試験のデザインに組み込まれている。たとえば、Ｍａｈａｌｏ検定（Ｇｅｎｅｔｅｃｈ）は、患者が、試験に入るために低蛍光ＦＡＦの領域の大きさの最小値および最大値を有することを必要とする。この領域の大きさは、試験の最中に反復して測定され、増殖、すなわち拡大速度を、治療群の間で比較する。この例は、ＤＮＩＲＡが、現在のイメージング方法では見られなかった低蛍光の領域を明確にすることを示す。よって、特に、ＤＮＩＲＡを使用して、試験の動員に適した患者の同定を改善し、疾患の進行を評価することができる。
【０４０４】
さらに、経時的に一人の患者を解析することにより、本明細書中、ＤＮＩＲＡの画像が経時的に変化することが示されている。このことは、低蛍光または過蛍光シグナルの領域の連続した定量化を可能にし、疾患進行の解析のための戦略を提供する（たとえば代理のバイオマーカーとして）。たとえば、図２７のＤＮＩＲＡの画像は、末期の非滲出型ＡＭＤ患者における低蛍光の拡大を示す。
【０４０５】
低蛍光ＤＮＩＲＡに加えて、本明細書中で、臨床状況での過蛍光ＤＮＩＲＡの存在を説明する。色素をさらに注射することはないが、所定のＩＣＧ励起／発光フィルターのみを用いて、ＩＣＧ注射から数日後および数週間後に、明るい点状のドットまたはスポットをげっ歯類の眼で同定することができる（たとえば実施例１、２、および８などの本明細書中の実施例参照）。動物の眼では、Ｐｕｌｓｅｄ  ＤＮＩＲＡ（ＩＣＧ色素が、血管内に反復して提供され、注射から数日後に生存する眼の眼内で評価される）、およびＩｍｍｕｎｏＤでは、マクロファージが、ＩＣＧを用いてｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏで標識することができ、小さな運動性の過蛍光ドットとして可視化することができることが示されている。図２８は、過蛍光ＤＮＩＲＡの明確なドットが、ＡＭＤ患者の黄斑にわたり散乱していることが同定されていることを示す。一部は、視神経乳頭に近位であり、その他は、地図状萎縮の領域のすぐ近くにあり、両方が境界およびいわゆる接合領域にある。
【０４０６】
ＡＭＤ患者にＤＮＩＲＡを使用することに加えて、本実施例はまた、ヒトのＲＰＤ患者に関してのＤＮＩＲＡの有用性を示す（たとえば診断および／または予後のツールとして）。従来のドルーゼンおよび偽ドルーゼンは、その後の地図状萎縮および／または脈絡膜新生血管に関連している。図２９は、ヒトのＲＰＤ患者の眼を示す。ＩＲおよびＦＡＦイメージングを使用してＲＰＤを有すると患者を特徴づけると、ＤＮＩＲＡイメージングは、他のいずれかの方法（図２９に示されない他の方法を含む）では見えない低蛍光ＦＡＦの複数の領域を示す。これらの領域は、黄斑全体にわたり分布している。ヒョウ柄様のスポットが、再度黄斑の周辺で見られる。ＲＰＤは経時的に成熟するように示されており、ＲＰＥの前部の浅い隆起から開始して、のちにベースダウンしたピラミッドまたはスパイクへと目立って成熟する。いくつかの試験では、ＲＰＤは、求心性の方向に成熟するように観察され、より新規で若年の部分は周辺にあり（この場合では上部に）、およびより古い部分は中心にある（より下位に）。ＤＮＩＲＡでの示唆と一致して、上部に見られる過蛍光のドットは、組織を浸潤する標識したマクロファージの存在と一致する。マクロファージが、より長く組織に残る可能性がある中心領域では、組織喪失の領域は、低蛍光ＤＮＩＲＡの小さなパッチにより示唆されている。図３０は、上記以外の異なるＲＰＤにおける低蛍光および過蛍光シグナルの勾配を示す。下側の矢印は、中心黄斑のすぐ上の明確な低蛍光ＦＡＦの領域を示す。これより上では、過蛍光ＦＡＦドットの集積が増加している。
【０４０７】
ＤＮＩＲＡシグナルの供給源を良好に理解するため、および臨床勾配ｃＳＬＯシステムを使用したげっ歯類およびヒトのイメージングの間での倍率の大きな差異に適応するために、中間の大きさのウサギの眼を使用して、点状の過蛍光ＤＮＩＲＡシグナルの供給源を試験した。
【０４０８】
ＲＰＥ毒素を、ニュージーランドホワイトウサギに全身的に投与し、上述のようにＤＮＩＲＡを行った。ＩＣＧ注射から数日後および数週間後に画像を連続してとり、ここでは、色素をさらに注射せず、かつ所定の励起／発光フィルターを用いた。ヒトの活性減少を過蛍光ＦＡＦにより特徴づけたが、この原因は、部分的にはまだ知られていないままである。異常または損傷したＲＰＥ細胞は、ルポフスチンの集積により、青色蛍光下で過蛍光することが理解されている。しかしながら、本出願人は、以前に、理論による限定を望むものではないが、マクロファージもまた、損傷した蛍光ＲＰＥ細胞の食作用またはリポフスチン様物質の内因的な産生により過蛍光する可能性があることを示唆していた（ｉｎ  ｖｉｔｒｏで記載）。よって、マクロファージがＦＡＦで過蛍光し、ＤＮＩＲＡでＩＣＧ色素を集積する場合、これらは２つのチャネルで同時に局在することとなることが裏付けられる。このことが観察されている。
【０４０９】
図３１は、ウサギの眼における過蛍光ＦＡＦシグナルと過蛍光ＤＮＩＲＡシグナルとの間の対応を示す。ＤＮＩＲＡがマクロファージを標識することをさらに示すために、経時的な過蛍光ＤＮＩＲＡのドットの移動を評価した。全身に毒素を投与した後、明るいドットの波が、ウサギの視神経乳頭から、外側に向かうように移動または標識するように観察される。図３２は、過蛍光ＤＮＩＲＡのドットが、マクロファージのように、経時的に位置を変化することを示した。図３２の画像の上部の列は、ラットの全身性の毒素の注射後のＤＮＩＲＡのイメージングを示し、視神経乳頭を囲む点状の過蛍光ドットを示す。経時的に、これらのドットは外側に向かうように移動するように見える。図３２の下側の列は、ウサギの眼におけるＤＮＩＲＡのイメージングを示し、マクロファージのマーカーに関して、免疫組織化学的検査により陽性的に染色する個々に標識したドットの類似した同様の移動を示す。両方の列では、最も左側の画像が、ベースラインのＤＮＩＲＡ（すなわち、所定のＩＣＧフィルターを伴うＩＣＧ注射前）である。最終的に、視神経乳頭周辺の領域において、ラットおよびウサギの眼の過蛍光ドットを同定して、ヒトの視神経乳頭を、同様の知見で評価した。ラット、ウサギ、およびヒトのＤＮＩＲＡの間の類似性は、臨床的な病理学的な相関を許容し、マクロファージは、三種すべての過蛍光を構成することを示唆している。図３３は、明るく標識した小さなＤＮＩＲＡ陽性ドットが、ラット、ウサギ、およびヒトの画像において、視神経乳頭の近くで観察されていることを示す。
【０４１０】
実施例１３：糖尿病性網膜症のビンダリットの治療
炎症は、糖尿病性網膜症および糖尿病性浮腫の両方を含む糖尿病性眼疾患において中心的な役割を果たすことが示唆されている。サイトカイン、ケモカイン、および他の炎症誘発性もしくは透過促進性分子が、硝子体、眼房、および同様に血清などのヒトの眼組織で説明されている。動物モデルにより、前臨床試験における炎症性の応答が確認されている。
【０４１１】
今まで同定された５０＋のケモカインのうち、約５０％が糖尿病で変性することが報告されている。これらのうち特に、ＭＣＰ−１／ｃｃｌ２およびＲＡＮＴＥＳが挙げられる。ＮＦＫｂなどの転写因子もまた、糖尿病性眼疾患に関与しており、肥満および過剰な遊離脂肪酸に直面して直接活性化している。ＩＫＫｂリン酸化の増大は、核へのＮＦｋｂの転位および炎症性トランスクリプトームの活性化をもたらす。さらに、血清のＭＣＰ−１／ｃｃｌ２およびＣＲＰのレベルは、重度な糖尿病性網膜症の患者で上昇し、眼に由来する介在物質の全身性放出、または同時に発生する全身性疾患が起こる可能性がある。よって、これらの全身性因子を局所的または全身的に低減できる薬剤は、糖尿病性眼疾患の治療に有効であり得る。
【０４１２】
本実施例は、特に、ビンダリットが、糖尿病性眼疾患に関与していると示されている炎症性介在物質を低減することを示す。高用量の４５ｍｇ／ｋｇのヨウ素酸ナトリウムを使用して、高用量（２０μｇ／μｌ、２μｌ容量）、および低用量（２μｇ／μｌ、２μｌ容量）の硝子体内ビンダリットで治療した炎症性応答を誘導した。ビンダリットの効果を、毒素注射から１６日後に評価した。図３４に示されるように、ビンダリットは、糖尿病性網膜症に関与していると知られている炎症性介在物質を減少させた。
【０４１３】
図３６は、ビンダリットが、他のインターロイキンＩＬ−１０およびＩＬ−３または腫瘍壊死因子（ＴＮＦａ）およびｃｃｌ５（ＭＣＰ−３）に関して有意な効果を有さなかったことを示す。以下の条件：１．硝子体内生理食塩水（ビヒクル）、２．高用量のビンダリット、２μｇ／μｌ、（毒素なし）、３．毒素＋低用量２μｇ／μｌのビンダリット、４．毒素＋高用量の２０μｇ／μｌのビンダリット＋ＮａＩＯ３、および５．毒素単独の下で、ｍＲＮＡの変化倍数を、ベースライン（正常）の条件と比較した。
【０４１４】
さらに、ビンダリットは、血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦ−Ａ）のｍＲＮＡに関して有意な効果を示さなかった（図３７）。しかしながら、このパラダイムでは、ＶＥＧＦ−Ａは、注射後のいずれの時間でも毒素処置（右）により増加しなかった。すべての変化は、およそ１．０倍前後である。以下の条件１．硝子体内生理食塩水（ビヒクル）、２．高用量のビンダリット、２μｇ／μｌ、（毒素なし）、３．毒素＋低用量２μｇ／μｌのビンダリット、４．毒素＋高用量２０μｇ／μｌのビンダリット＋ＮａＩＯ３、および５．毒素単独の下で、ｍＲＮＡの変化倍数を、ベースライン（正常）な条件と比較した。
【０４１５】
図３８は、不死化したヒトのＲＰＥ細胞株で、ビンダリットが、ＮＦｋｂの核への転位を低減させることを示す。
【０４１６】
最後に、単離したヒトＲＰＥ細胞に及ぼす高血糖の効果を提示した。高血糖の存在下（血清中グルコースの上昇）およびインスリンの非存在下では、大部分の細胞は低血糖となる。このことはまた、インスリンに非応答性または耐性のある細胞にとって真である。しかしながら、脳および網膜の細胞は、インスリンの非存在下で高レベルのグルコースを取り込み、よって、高血糖となる。低レベルでは、このことは、細胞の活性を刺激するが、高用量では、グルコースは毒性となり、炎症を促進させ、終末糖化産物（ＡＧＥ）の形成をもたらす。不死化したヒトの細胞株、ｈＴＥＲＴを、通常の培地―高濃度および非常に高濃度のＤ−グルコースとともにインキュベートした。蛍光単位で測定した細胞の活性を、標準的な濃度のグルコースに対して正規化した；Ｌ−グルコースは浸透性の対照である。細胞を、ビンダリットを伴う、または伴うことなく５日間インキュベートした。図３９は、ビンダリットが、高濃度のグルコースとともにインキュベートしたｈＴＥＲＴ細胞における細胞ストレスを正常にすることを示す。特に、この実施例は、糖尿病性網膜症の治療のための薬剤としてのビンダリットを指摘するものである。
【０４１７】
均等物
当業者は、単なる定例的な実験を使用して、本明細書中に記載されている特定の実施例との多くの均等物を確認することを認識、または確認することができる。このような均等物は、以下の特許請求の範囲に包有されると意図されている。
【０４１８】
参照文献の援用
本明細書中で参照したすべての特許および刊行物は、全体が本明細書中参照として援用されている。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｃ−Ｄ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５Ａ−Ｆ】
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【図５Ｇ−Ｈ】
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【図６Ａ−Ｂ】
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【図６Ｃ−Ｄ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１２Ｄ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１６Ｃ】
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【図１６Ｄ】
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【図１６Ｅ】
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【図１６Ｆ】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１８Ｃ】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図１９Ｃ】
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【図１９Ｄ】
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【図１９Ｅ】
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【図１９Ｆ】
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【図１９Ｇ】
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【図１９Ｈ】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【図２０Ｃ】
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【図２１−１】
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【図２１−２】
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【図２１−３】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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