(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
多糖ヒドロゲル、アルギン酸塩、アガロース、セルロース、ヒアルロン酸、キトサン、キチン、コンドロイチン硫酸、ヘパリン、ポリマーマトリックス、金属、セラミック、及びプラスチックからなる群から選択され、それらの各々が場合により修飾されることがある、生体適合固体担体と；
ｔｒａｎｓ−シクロオクテンおよびテトラジンからなる群から選択される、少なくとも１つの結合剤と；
各結合剤を前記生体適合固体担体に共有結合させるリンカーであって、そのリンカーが：
【化１】
0006625550.tif 000028
からなる群から選択される構造を含む、前記リンカーと；
を含む、固体担体組成物。
【請求項２】
前記プラスチックが、ポリホスファゼン、ポリ酸無水物、ポリアセタール、ポリ（オルトエステル）、ポリリン酸エステル、ポリカプロラクトン、ポリウレタン、ポリ乳酸、ポリカーボネート、ポリアミド、ポリエーテル、及びそれらのコポリマーからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記生体適合固体担体が、多糖ヒドロゲル、アルギン酸塩、アガロース、セルロース、ヒアルロン酸、キトサン、キチン、コンドロイチン硫酸、及びヘパリンからなる群から選択され、それらの各々が場合により修飾されることがある、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記生体適合固体担体が、ヒドロキシル基またはアミノ基のカルボキシメチル修飾を含む請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記生体適合固体担体が、カルボン酸のエステル化、アルコールのエーテルもしくはエステルへの変換、または酸もしくはアミンのアミドへの変換によって修飾される請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記生体適合固体担体が前記ヒドロゲルであり、このヒドロゲルが場合により修飾されることがある請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記生体適合固体担体が前記アルギン酸塩であり、このアルギン酸塩が場合により修飾されることがある請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記生体適合固体担体が前記アガロースであり、このアガロースが場合により修飾されることがある請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記生体適合固体担体が前記ヒアルロン酸であり、このヒアルロン酸が場合により修飾されることがある請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
前記結合剤がｔｒａｎｓ−シクロオクテンである請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記結合剤がテトラジンである請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
前記結合剤および前記リンカーが一緒になって：
【化２】
0006625550.tif 000029
からなる群から選択される構造を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
【化３】
0006625550.tif 000030
からなる群から選択される構造を有する請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
注射可能な滅菌製剤に配合される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
治療薬または診断薬と；
ｔｒａｎｓ−シクロオクテンからなる結合剤と；
前記結合剤を前記治療薬または診断薬に共有結合させるリンカーであって、そのリンカーが：
【化４】
0006625550.tif 000031
からなる群から選択される構造を含む、前記リンカーと；
を含む生物活性組成物。
【請求項１６】
【化６】
0006625550.tif 000032
からなる群から選択される、化合物。
【請求項１７】
第１の結合剤に結合した生体適合固体担体と第２の結合剤に結合した治療薬または診断薬とを含むキットであって、そのキットが、患者の標的とする臓器または組織へ有効量の前記の治療薬または診断薬を選択的に送達するための方法に使用され、その方法が、
（ａ）前記第１の結合剤に結合した前記生体適合固体担体を、前記の標的とする臓器または組織を有する患者に投与するステップであって、リンカーが、約１〜約１０個の結合原子を含み、更にそのリンカーが、前記第１の結合剤を前記生体適合固体担体に共有結合させる、前記ステップと、
（ｂ）前記第２の結合剤に結合した前記の治療薬または診断薬を患者に投与するステップであって、
リンカーが、約１〜約１０個の結合原子を含み、更にそのリンカーが、前記第２の結合剤を前記生体適合固体担体に共有結合させ、
前記第１および第２の結合剤は接触したときに互いに結合し、それによって前記患者における標的とする臓器または組織へ有効量の治療薬または診断薬を選択的に送達する、ステップと、
を含み、
前記第１および第２の結合剤のうちの１つはｔｒａｎｓ−シクロオクテンであり、かつ、前記第１および第２の結合剤のうちの１つはテトラジンであるように、前記第１および第２の結合剤はそれぞれ、ｔｒａｎｓ−シクロオクテンおよびテトラジンからなる群から選択される、前記キット。
【請求項１８】
前記第１の結合剤がｔｒａｎｓ−シクロオクテンであり、および前記第２の結合剤がテトラジンである請求項１７に記載のキット。
【請求項１９】
前記第２の結合剤が１，２，４，５−テトラジンである請求項１７に記載のキット。
【請求項２０】
前記第１の結合剤に結合した前記生体適合固体担体が、以下の構造：
【化７】
0006625550.tif 000033
を有する請求項１７に記載のキット。
【請求項２１】
前記第１の結合剤に結合した前記生体適合固体担体が、以下の構造：
【化８】
0006625550.tif 000034
を有し、そして
前記第２の結合剤に結合した前記治療薬または診断薬が：
【化９】
0006625550.tif 000035
（式中、Ｒは、前記治療薬および前記診断薬からなる群から選択される）からなる群から選択される構造を有する、請求項１７に記載のキット。
【請求項２２】
前記の標的とする臓器または組織が、骨、軟骨、靱帯、腱、腸、筋肉、神経系、脳、脊髄、心臓、または神経である請求項１７に記載のキット。
【請求項２３】
前記標的とする臓器または組織が骨である請求項１７に記載のキット。
【請求項２４】
前記標的とする臓器または組織における前記治療薬または診断薬の濃度が、前記患者の前記標的とする臓器または組織以外の場所での濃度よりも高い請求項１７に記載のキット。
【請求項２５】
前記治療薬がバンコマイシンである請求項１７に記載のキット。
【請求項２６】
前記生体適合固体担体がヒアルロン酸である請求項１７に記載のキット。
【請求項２７】
前記治療薬がドキソルビシンまたはダプトマイシンである請求項１７に記載のキット。
【請求項２８】
第１の結合剤に結合した生体適合固体担体と第２の結合剤に結合した治療薬または診断薬とを含むキットであって、そのキットが、患者の標的とする臓器または組織の第１の位置へ有効量の治療薬または診断薬を選択的に送達するための方法に使用され、その方法が、
（ａ）前記生体適合固体担体と前記生体適合固体担体に結合された前記第１の結合剤とを、前記標的とする臓器または組織の前記第１の位置で前記患者に埋め込むステップと、
（ｂ）前記第１の結合剤と相補的な前記第２の結合剤に結合した治療薬または診断薬と、前記治療薬または診断薬と前記第２の結合剤とを結合するリリース可能なリンカーとを前記患者に投与し、前記第１および第２の結合剤が接触したときに互いに結合するステップと、
（ｃ）前記治療薬または診断薬をリリースし、それによって前記標的とする臓器または組織の前記第１の位置へ前記治療薬または診断薬を送達するステップと、
を含む、前記キット。
【請求項２９】
前記第１の結合剤がｔｒａｎｓ−シクロオクテンであり、および前記第２の結合剤がテトラジンである請求項２８に記載のキット。
【請求項３０】
前記第２の結合剤が１，２，４，５−テトラジンである請求項２８に記載のキット。
【請求項３１】
前記第１の結合剤に結合した前記生体適合固体担体が、以下の構造：
【化１０】
0006625550.tif 000036
を有する請求項２８に記載のキット。
【請求項３２】
前記第１の結合剤に結合した前記生体適合固体担体が、以下の構造：
【化１１】
0006625550.tif 000037
を有し、そして
前記第２の結合剤に結合した前記治療薬または診断薬が：
【化１２】
0006625550.tif 000038
（式中、Ｒは、前記治療薬および前記診断薬からなる群から選択される）からなる群から選択される構造を有する、請求項２８に記載のキット。
【請求項３３】
前記の標的とする臓器または組織が、骨、軟骨、靱帯、腱、腸、筋肉、神経系、脳、脊髄、心臓、または神経である、請求項２８に記載のキット。
【請求項３４】
前記標的とする臓器または組織が骨である請求項２８に記載のキット。
【請求項３５】
前記標的とする臓器または組織の前記第１の位置における前記治療薬または診断薬の濃度が、前記患者の他の場所での濃度よりも高い請求項２８に記載のキット。
【請求項３６】
前記治療薬がバンコマイシンである請求項２８に記載のキット。
【請求項３７】
前記生体適合固体担体がヒアルロン酸である請求項２８に記載のキット。
【請求項３８】
治療薬がドキソルビシンまたはダプトマイシンである請求項２８に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【０００１】
本出願は、２０１４年１１月１１日に出願された米国特許仮出願第６２／０８３０２２号明細書、２０１４年６月１８日に出願された米国特許仮出願第６２／０１３９９４号明細書、および２０１４年３月１４日に出願された米国特許仮出願第６１／９５３２９４号明細書に対する優先権を主張し、これらはそれぞれ、あらゆる目的のためにその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
≪連邦政府の資金提供を受けた研究および開発による発明に対する権利に関する記載≫
該当なし
【発明の概要】
【０００３】
第１の実施形態において、本発明は、生体適合固体担体と、少なくとも１つの結合と、各結合剤を生体適合固体担体と共有結合する、約１〜約１０個の結合原子を有するリンカーとを有する固体担体組成物を提供する。
【０００４】
別の実施形態では、本発明は、治療薬または診断薬と、ｔｒａｎｓ−シクロオクテンまたはテトラジンであり得る結合剤と、結合剤を治療薬または診断薬と共有結合する、約１〜約１０個の結合原子を有するリンカーとを有する生物活性組成物を提供する。
【０００５】
別の実施形態では、本発明は、
【化１】
0006625550.tif 000002
の組成物を提供する。
【０００６】
別の実施形態では、本発明は、患者の標的とする臓器または組織の第１の位置へ有効量の治療薬または診断薬を選択的に送達するための方法を提供する。本方法は、標的とする臓器または組織の第１の位置で本発明の固体担体組成物を患者に埋め込むステップを含み、ここで、固体担体組成物は第１の結合剤を含む。また、本方法は、本発明の生物活性組成物を患者に投与するステップも含み、ここで、生物活性組成物は第２の結合剤を含み、かつ、ここで、第１および第２の結合剤は接触したときに互いに結合し、それによって患者の標的とする臓器または組織の第１の位置へ有効量の治療薬または診断薬を選択的に送達する。
【０００７】
別の実施形態では、本発明は、患者の標的とする臓器または組織の第１の位置へ有効量の治療薬または診断薬を選択的に送達するための方法を提供する。本方法は、生体適合固体担体、および固体担体に結合された第１の結合剤を有する固体担体組成物を、標的とする臓器または組織の第１の位置で患者に埋め込むステップを含む。また、本方法は、第１および第２の結合剤が接触したときに互いに結合するように、治療薬または診断薬と、第１の結合剤と相補的な第２の結合剤と、治療薬または診断薬を第２の結合剤と結合するリリース可能なリンカーとを有する生物活性組成物を患者に投与するステップも含む。また、本方法は、治療薬または診断薬をリリースし、それによって標的とする臓器または組織の第１の位置へ治療薬または診断薬を送達するステップも含む。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１Ａ】ＴＣＯと共有結合した生体材料の初回注射を伴う本発明の方法を示す図である。
【図１Ｂ】ＴＣＯと共有結合した生体材料の初回注射を伴う本発明の方法を示す図である。この後に、テトラジン部分に結合されている治療薬の全身注射が続く。２つの実体が近接するとき、これらは、治療法を固体キャリアと共有結合させながら反応し、したがって、治療薬を局在させる。放射性の１１１インジウムを含むＴｚ放射性プローブ２のために分子プローブを利用した。
【０００９】
【図２】インビトロ試験を示す図であり、事前に秤量したゲルディスク（実験または対照）をＴｚ放射性プローブ２の溶液と１０分間または１４時間混合した。１０分の暴露の間、ＴＣＯ−Ｇｅｌ  １のサンプルは１．７８ｎｍｏｌｅｓ／ｇ結合し、一方、対照ゲルは０．７５ｎｍｏｌｅｓ／ｇのＴｚ放射性プローブ２を保持した。１４時間で、対照ゲルに結合したＴｚ−放射性プローブの量は０．８６ｎｍｏｌｅｓ／ｇで一定のままであった。ＴＣＯ−Ｇｅｌ  １は２．７８ｎｍｏｌｅｓ／ｇ結合した。エラーバーは、３回の繰り返しの平均の標準偏差を表す。星印は、対応のあるｔ検定（ｐ値＜０．０５）による統計的有意性を示す。
【００１０】
【図３Ａ】Ｔｚ放射性プローブ２の体内分布の結果を示す図である。
【図３Ｂ】Ｔｚ放射性プローブ２の体内分布の結果を示す図である。ａ，皮下のＴＣＯ−Ｇｅｌ  １（平均０．２３ｇ［０．１０〜０．２９ｇ］）および対照ゲル（平均０．２３ｇ［０．１６〜０．２５ｇ］）を有するマウス（ｎ＝３）にＴｚ放射性プローブ２（平均４４μＣｉ［３９．２〜４８．４μＣｉ］）を尾静脈注射により投与した（ｔ＝０）。ｂ，特定の時点におけるＴＣＯ−Ｇｅｌ  １と対照ゲルの間の平均差。バーは、特定の時点における臓器あたりの％ＩＤ／ｇを示す（１、４、２４、４８時間）。エラーバーは、３回の繰り返しの平均の標準偏差を表す。星印は、対応のあるｔ検定（ｐ値＜０．０５）による統計的有意性を示す。
【００１１】
【図４】皮下のＴＣＯ−Ｇｅｌ  １（１７０ｍｇ、緑色の領域）および対照ゲル（２３０ｍｇ、黄色の領域）を有するマウスを示す図である。埋め込みから３時間後、Ｔｚ放射性プローブ２（１．０５ｍＣｉ）を尾静脈注射により送達し、４、２４、４８時間でＳＰＥＣＴにより画像化した。
【００１２】
【図５】固体担体組成物Ｔｚ−Ｍｅ−ゲルの合成調製を示す図である。
【００１３】
【図６】リリース可能でないリンカーによるテトラジン固体担体およびＴＣＯと結合したフルオレセインの間の反応を示す図である。Ｒは、まだ固体担体と共有結合している無処置のジエチルアミンフルオレセイン部分を表す。
【００１４】
【図７】リリース可能なリンカーによるテトラジン固体担体およびＴＣＯと結合したフルオレセインの間の反応を示す図である。予想された通り、フルオレセインジエチルアミン（ＭＷ：４１８．４０）および二酸化炭素が固体担体からリリースされた。
【００１５】
【図８】未反応のＴＣＯ−Ｘ−フルオレセインの量およびＴＣＯ−Ｘ−フルオレセインとＴｚ−Ｍｅ−ゲルの間の反応速度を外挿するために用いたゲルの除去後の上清のサンプルを示す図である。簡潔には、この方法は以下のステップを含む：Ｔｚ−ゲルを生成および秤量するステップと、所定の濃度のＴＣＯ−Ｘ−フルオレセイン（１０、２０、５０ｎｍｏｌｅｓ）を含む１ｍＬのＰＢＳ食塩水を加えるステップと、プレートを所定の時間数（１０、５０、１００、１８０分）ウェルプレートミキサー（速度２００）に置くステップと、特定の時点において上清を別のプレートに移すステップと、上清に残る蛍光量をＩＶＩＳスペクトル装置（フルオレセインの４９０ｎｍにおける励起、５１５ｎｍにおける発光）により測定するステップ。
【００１６】
【図９】輝度（蛍光）と、既知量のＴＣＯ−ＮＲ−フルオレセインのｎｍｏｌｅｓでの実験値に基づくフルオロフォアの量とを関係付ける標準的なカーブフィットを示す図であり、輝度はＩＶＩＳスペクトル装置を用いて検出された（フルオレセインの４９０ｎｍにおける励起、５１５ｎｍにおける発光）。
【００１７】
【図１０】ＴＣＯ−ＮＲ−フルオレセインとＴｚ−Ｍｅ−ゲルを３７℃で混合するときの上清中のＴＣＯ−ＮＲ−フルオレセインの０〜７０分の間の経時的な減少を示す図である。
【００１８】
【図１１】ゲルと結合したＴＣＯ−ＮＲ−フルオレセインと、非結合のままの上清において検出される量の理論上の相反性を示す図である。
【００１９】
【図１２】図１０のデータに基づくＴｚ−Ｍｅ−ゲルに結合したＴＣＯ−ＮＲ−フルオレセイン分子の計算量を示す図である。示したデータに基づくと、Ｔｚ−Ｍｅ−ゲルディスクを５０ｎｍｏｌｅｓのＴＣＯ−ＮＲ−フルオレセイン（Ｆｌｏｕｒｅｓｃｅｉｎ）と混合したとき、７０分後、Ｔｚ−Ｍｅ−ゲル１ｍｇあたり０．６６ｎｍｏｌｅｓのＴＣＯ−ＮＲ−フルオレセインが反応した（０．６６ｎｍｏｌｅｓ／ｍｇ）。わずか７０分後でも、この量は、図２に示す通りＴＣＯ−ゲル（２．７８ｎｍｏｌｅｓ／ｇ）を用いて１４時間後に得られる量の約２００倍高い。
【００２０】
【図１３】３７℃で所定の時間量（０〜３日）インキュベーションした後のＴｚ−Ｍｅ−ゲルの活性を示す。インキュベーションを割り当てた後、５０ｍｇのゲルに５０ｎｍｏｌｅｓのＴＣＯ−ＮＲ−フルオレセインを９０分間添加して検証し、先の図にあるように結合した量を計算した。
【００２１】
【図１４】複数の時点の後、ＴＣＯ−Ｒ−フルオレセインをＴｚ−Ｍｅ−ゲルに添加した後の非結合分子の予想された量と観察された量を示す図である。ＴＣＯ−Ｒ−フルオレセインとＴＣＯ−ＮＲ−フルオレセインの類似性を考えると、類似した反応性のパターンが予想される。仮定は、上清において回復する蛍光量の差が、図７に示すジエチルフルオレセインのリリースによるというものである。
【００２２】
【図１５】特定量のＴＣＯ−Ｒ−フルオレセイン（１０、２０および５０ｎｍｏｌｅｓ）をＴｚ−Ｍｅ−ゲルに添加した後にリリースされたフルオレセインの総量を示す図である。さらに、６０分の時点の上清中の化合物の特定の同一性をＬＣ−ＭＳを用いて分析し、主化合物としてのフルオレセインジアミン（ＭＷ４１８．４０）の存在を明らかにし、さらにＴｚ−Ｍｅ−ゲルとのＴＣＯ−Ｒ−フルオレセインのキャッチ＆リリース反応の脱離生成物の存在を確認した。
【００２３】
【図１６Ａ】キャッチ・アンド・リリースリンカーを用いる本発明の方法を示す図である。
【図１６Ｂ】キャッチ・アンド・リリースリンカーを用いる本発明の方法を示す図である。簡潔には、この方法はまず、クリックケミストリーキャリアで修飾した固体キャリア（この特定の例ではテトラジン）の局在化を含む。次に、カルバメート（緑色）およびｔｒａｎｓ−シクロオクテン部分で修飾したカーゴを材料に暴露させる（インビトロまたはインビボのいずれか）。両方の試薬がその場で反応し、テトラジンの置換基に応じて、カーゴは固体キャリアからリリースされるか、または固体キャリアに固定される。
【００２４】
【図１７】異なるテトラジンで修飾したアガロースビーズに暴露させた後のＴＣＯ−Ｒ−ローダミンのリリース速度を示す図である。簡潔には、図１６に示すＸおよびＹに複素環の置換基を持つアガロース１ａは、おそらく電子吸引基によって弱められることにより、遅いリリース（赤線）につながる。一方、Ｘの芳香族置換基およびＹのアルキル置換基はローダミンジエチルアミンの速いリリースにつながる。値は三つ組の結果である。
【００２５】
【図１８】ゲル埋め込み（ｉｍｐａｎｔａｔｉｏｎ）なし、またはＴｚ−ゲルを埋め込んで、またはアルギン酸塩のみで、次に、ＴＣＯ−Ｒ−ローダミンまたはＴＣＯ−ＮＲ−ローダミンを注射した、７０分、５時間および３日のマウスにおける輝度の値を示す図である。
【００２６】
【図１９Ａ】発光ＭＳＳＡ（Ｘｅｎ  ２９）におけるＴＣＯ−Ｒ−バンコマイシンのＭＩＣを示す。
【図１９Ｂ】発光ＭＳＳＡ（Ｘｅｎ  ２９）におけるＴＣＯ−Ｒ−バンコマイシンのＭＩＣを示す。
【００２７】
【図２０】（Ｒ，Ｅ）−Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（シクロオクタ−４−エン−１−イルオキシ）アセトアミド（５）のＮＭＲを示す図である。
【００２８】
【図２１】非修飾アルギン酸ゲルのＮＭＲを示す図である。
【００２９】
【図２２】ＴＣＯ−ゲル１のＮＭＲを示す図である。
【００３０】
【図２３】Ｔｚ−Ｍｅ−ゲルのＮＭＲを示す図である。
【００３１】
【図２４】生体直交型のＴＣＯ−テトラジン化学を利用する「キャッチ＆リリース」の方策を示す図である。
【００３２】
【図２５】１８０分後にリリースされたフルオレセイン（ｆｌｏｕｒｅｓｃｅｉｎ）の量を示す図である。これは、結合したフルオロフォアの予想された値と実際に得られた実験値の間の差として計算される。
【００３３】
【図２６】６０分後のＴｚ−Ｍｅ−ゲルとＴＣＯ−Ｒ−フルオレセインの混合物の上清に見られるフルオレセインジアミン（［Ｍ＋Ｈ］４１９．１２１４および［Ｍ＋ＭｅＯＨ］４５３．３４１７）のピークを示す図であり、予想された「キャッチ＆リリース」生成物を液体クロマトグラフィー−質量分析法によって確認するものである。
【００３４】
【図２７】異なるテトラジンで修飾したアガロースビーズに暴露させた後のＴＣＯ−Ｒ−フルオレセイン（［Ｍ＋Ｈ］は５７１．２１）のリリース速度を示す図である。簡潔には、図１６に示すＸおよびＹの複素環の置換基を持つアガロース１ａは、おそらく電子吸引基によって弱められることにより、遅いリリース（ＭＸ５３、赤線）につながる。一方、Ｘの芳香族置換基およびＹのアルキル置換基は、ローダミンジエチルアミンの速いリリースにつながる（ＭＸ６５、青線）。左手側は、質量分析によるリリースの動的評価を示す。
【００３５】
【図２８】テトラジン修飾アガロースからのフルオレセイン標識ＴＣＯの「キャッチ＆リリース」を速度論的に検討するための段取りを示す図である。
【００３６】
【図２９】質量分析によるＴＣＯ−Ｒ−ローダミン（［Ｍ＋Ｈ］６２５．３１）のリリースの動的評価を示す図である。リリース生成物は予想された通り４７３．２２に見られる。
【００３７】
【図３０】陰性対照（ゲル注射なし）とＴＣＯ−Ｒ−ローダミンの注射後のリリースプロトコル（Ｔｚ−Ｍｅ−Ｇｅｌ）を比較する各時点における先の速度論的体内分布の検討に基づく蛍光の増加を示す図である。棒グラフは、８時間で得られる推定される総量までデータを外挿している。曲線下面積によって反映される投与量は、陰性対照（左）に対して「リリースされた」グラフ（右）に示す通り、ゲルの存在下でほぼ２倍になっている。
【００３８】
【図３１】マウスの速度論的複数回投与評価を示す図である。尾静脈注射による５０ｎｍｏｌｅｓのＴＣＯ−Ｒ−ローダミンの各注射の後に３匹のマウスを評価した。マウスは上述のそれらの画像の通り処理した。「陰性対照」の対象はゲル注射を全く受けていない。「リリースされた」対象は背中の皮下にＴｚ−Ｍｅ−ゲルの注射を受けた。「ゲル対照」の対象は背中の皮下にアルギン酸ゲルの注射を受けた。フルオロフォアの各投与後、５〜１０分後および１１０〜１５０分後にＩＶＩＳスペクトル装置を用いてマウスを評価した。
【００３９】
【図３２】異なる実験群（陰性対照＝ゲルなし；実験群＝Ｔｚ−Ｍｅ−ゲル；ゲル対照＝非修飾アルギン酸ゲル）のそれぞれに対する２回目、３回目および４回目の５０ｎｍｏｌｅｓのＴＣＯ−Ｒ−ローダミンの注射後、５〜１０分と１１０〜１５０分で対比して観察された平均蛍光を示す図である。実験群の蛍光は、陰性対照群またはゲル対照群のどちらよりも統計的に強い。対応のあるｔ検定（ｎ＝３）により比較した。
【発明の詳細な説明】
【００４０】
Ｉ．一般
本発明は、対象に埋め込み、かつ投与するための組成物を提供し、ここで、組成物は、リリース可能な成分を含むこともできる短いリンカーを用いる。リリース可能なリンカーは、さらに多量の治療薬または診断薬を、それらを必要とする患者に投与することを可能にする。
【００４１】
ＩＩ．定義
「治療薬」は、状態または疾患を治療および／または寛解することができる薬剤を指す。代表的な治療薬には、パクリタキセル、ドキソルビシン、エトポシド、イリノテカン、ＳＮ−３８、シクロスポリンＡ、ポドフィロトキシン、カルムスチン、アンホテリシン、イキサベピロン、パツピロン（エポセロン（ｅｐｏｔｈｅｌｏｎｅ）クラス）、バンコマイシン、ラパマイシンおよびプラチナ薬剤が含まれるが、これらに限定されない。本発明の治療薬はプロドラッグ形態も含む。
【００４２】
「診断薬」は、状態または疾患の診断を支援する薬剤を指す。代表的な診断薬は、常磁性剤、光プローブおよび放射性核種などの造影剤を含む。外部から加える場の下で磁性の常磁性剤造影剤。常磁性剤の例にはナノ粒子を含む鉄粒子が含まれるが、これに限定されない。光プローブは、放射の１つの波長における励起、および放射の第２の異なる波長における検出によって検出され得る蛍光化合物である。本発明において有用な光プローブには、Ｃｙ５．５、Ａｌｅｘａ  ６８０、Ｃｙ５、ＤｉＤ（１，１’−ジオクタデシル−３，３，３’，３’−テトラメチルインドジカルボシアニンペルクロラート）およびＤｉＲ（１，１’−ジオクタデシル−３，３，３’，３’−テトラメチルインドトリカルボシアニンヨージド）が含まれるが、これらに限定されない。他の光プローブには量子ドットが含まれる。放射性核種は放射性崩壊する元素である。本発明において有用な放射性核種には、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｎ、１８Ｆ、１９Ｆ、６０Ｃｏ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６８Ｇａ、８２Ｒｂ、９０Ｓｒ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１２９Ｉ、１３１Ｉ、１３７Ｃｓ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、２１１Ａｔ、Ｒｎ、Ｒａ、Ｔｈ、Ｕ、Ｐｕおよび２４１Ａｍが含まれるが、これらに限定されない。
【００４３】
「標的とする臓器または組織」は、治療薬または診断薬の送達の標的にされている臓器または組織を指す。標的にする代表的な臓器および組織には、化学的または生物学的標的薬剤により標的にされ得るもの、ならびに化学的または生物学的標的薬剤により標的にされ得ない臓器および組織が含まれる。代表的な臓器または組織には骨が含まれる。
【００４４】
「選択的な送達」は、治療を必要としない臓器または組織の他の部分を標的にすることなく、治療を必要とする臓器または組織の一部に治療薬または診断薬を送達することを指す。
【００４５】
「を埋め込む」は、患者体内への外科的な埋め込みを指す。
【００４６】
「生体適合固体担体」は、患者体内への埋め込み、および結合剤のうちの１つ、ならびに結合剤が結合する後の治療薬または診断薬の担持が可能な固体担体材料を指す。固体担体は患者の身体に適合する。代表的な生体適合固体担体には、多糖ヒドロゲルなどのヒドロゲル、アルギン酸塩、セルロース、キトサン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、ヘパリンおよびその他が含まれるが、これらに限定されない。
【００４７】
「を接触させる」または「接触」は、少なくとも２つの異なる化学種が反応できるようにこれらを接触させるプロセスを指す。しかし、生じる反応生成物は、加える試薬間の反応から直接、あるいは反応混合物中で生成され得る１つまたは複数の加える試薬からの中間体から生成され得ると理解されるべきである。
【００４８】
「リンカー」、「結合された」または「を結合する」は、癌細胞などの特定のタイプの細胞、他のタイプの罹病細胞または正常細胞タイプを標的とする生物材料と本発明の化合物を結合する化学的部分を指す。結合は、共有結合またはイオン結合の形成を介し得る。結合は、結合されている２つの部分の間の直接結合であり得、またはリンカーを介するなど間接的であり得る。本発明において有用なリンカーは、最大３０個の炭素原子の長さであり得る。好ましくは、リンカーは５〜１５個の炭素原子の長さである。リンカーと、本発明の化合物および生体分子との結合に用いられる結合のタイプには、アミド、アミン、エステル、カルバメート、尿素、チオエーテル、チオカルバメート、チオカーボネートおよびチオ尿素が含まれるが、これらに限定されない。他のタイプの結合が本発明において有用であることを当業者なら理解するであろう。
【００４９】
「結合剤」は、生物環境において別の結合剤との共有結合を形成することができる任意の基を指す。これは、しばしば、バイオコンジュゲーションまたは生体直交型の化学と呼ばれる。代表的な結合剤には、アミンおよび活性化エステル、アミンおよびイソシアネート、アミンおよびイソチオシアネート、ジスルフィドの形成のためのチオール、エナミン生成のためのアルデヒドおよびアミン、シュタウディンガーライゲーションを経由したアミドの形成のためのアジド、クリックケミストリーを経由したトリアゾールの生成のためのアジドおよびアルキン、ｔｒａｎｓ−シクロオクテン（ＴＣＯ）およびテトラジンならびにその他が含まれるが、これらに限定されない。本発明において有用な結合剤は、対応する結合剤との高い反応性を有し、したがって反応が速い。
【００５０】
「を治療する（Ｔｒｅａｔ）」、「を治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」および「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、損傷、病態、状態または症状（例えば、痛み）の治療または寛解における成功の何らかの印を指し、緩解などの何らかの客観的または主観的なパラメータ；鎮静；症状の軽減、または症状、損傷、病態または状態を患者がより許容できるものにすること；症状または状態の頻度または期間の低減；または一部の状況では、症状または状態の発現の防止を含む。症状の治療または寛解は、何らかの客観的または主観的なパラメータに基づき得、例えば、身体検査の結果を含む。
【００５１】
「投与する」は、対象への経口投与、坐剤としての投与、局所接触、非経口、静脈内、腹腔内、筋肉内、病巣内、鼻腔内または皮下の投与、髄腔内投与、あるいは遅いリリース装置、例えば、ミニ浸透圧ポンプの埋め込みを指す。
【００５２】
「患者」は、哺乳動物など、治療を必要とする動物を指し、霊長類（例えば、ヒト）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウスなどを含むが、これらには限定されない。特定の実施形態では、患者はヒトである。
【００５３】
「治療上有効な量または用量」または「治療上十分な量または用量」または「有効または十分な量または用量」は、投与されるものに治療効果をもたらす用量を指す。厳密な用量は治療の目的によって決まり、既知の技術（例えば、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ（ｖｏｌｓ．１−３，１９９２）；Ｌｌｏｙｄ，Ｔｈｅ  Ａｒｔ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ（１９９９）；Ｐｉｃｋａｒ，Ｄｏｓａｇｅ  Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ（１９９９）；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００３，Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓを参照。）を用いて当業者により確かめられる。感作細胞において、治療上有効な用量はしばしば、非感作細胞における従来の治療上有効な用量より少ないことがある。
【００５４】
ＩＩＩ．組成物
本発明は、治療薬または診断薬を患者に選択的に送達するための短いリンカーまたはリリース可能なリンカーを有する組成物を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、生体適合固体担体と、少なくとも１つの結合剤と、各結合剤を生体適合固体担体と共有結合する、約１〜約１０個の結合原子を有するリンカーとを有する固体担体組成物を提供する。
【００５５】
任意の適した生体適合固体担体を本発明の方法において用いることができる。例えば、生体適合固体担体は、とりわけ、ヒドロゲル、架橋ポリマーマトリックス、金属、セラミック、プラスチックであり得る。本発明において有用なヒドロゲルには、多糖ヒドロゲル、アルギン酸塩、セルロース、ヒアルロン酸、キトサン、キトシン（ｃｈｉｔｏｓｉｎ）、キチン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、ヘパリンおよびその他が含まれるが、これらに限定されない。他の糖をベースとする生体材料は、Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２０１４，２５，４４８−４６０に記載のものなど、当技術分野において既知である。生体適合担体として有用なポリマーは、ポリホスファゼン、ポリ酸無水物、ポリアセタール、ポリ（オルトエステル）、ポリリン酸エステル、ポリカプロラクトン、ポリウレタン、ポリ乳酸、ポリカーボネート、ポリアミドおよびポリエーテルならびにこれらのブレンド／複合材／コポリマーを含むことができるが、これらに限定されない。代表的なポリエーテルには、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、ポリ（プロピレングリコール）（ＰＰＧ）、トリブロックプルロニック（［ＰＥＧ］ｎ−［ＰＰＧ］ｍ−［ＰＥＧ］ｎ）、ＰＥＧジアクリレート（ＰＥＧＤＡ）およびＰＥＧジメタクリレート（ＰＥＧＤＭＡ）が含まれるが、これらに限定されない。生体適合固体担体は、タンパク質およびコラーゲン、ゼラチン、エラスチンおよびエラスチン様ポリペプチドなどのその他のポリ（アミノ酸）、アルブミン、フィブリン、ポリ（γ−グルタミン酸）、ポリ（Ｌ−リシン）、ポリ（Ｌ−グルタミン酸）ならびにポリ（アスパラギン酸）を含むこともできる。
【００５６】
いくつかの実施形態において、固体担体はヒドロゲルであり得る。いくつかの実施形態において、固体担体はアルギン酸塩であり得る。いくつかの実施形態において、固体担体はキチンであり得る。いくつかの実施形態において、固体担体はヒアルロン酸であり得る。いくつかの実施形態において、固体担体はキトシン（ｃｈｉｔｏｓｉｎ）であり得る。いくつかの実施形態において、固体担体はアガロースであり得る。
【００５７】
任意の適したリンカーを本発明において用いて、生体適合固体担体あるいは治療薬または診断薬に結合剤を結合することができる。代表的なリンカーは、約１〜約１００個の結合原子を有することができて、かつ、エチレン−オキシ部分、アミン、エステル、アミド、ケトン、尿素、カルバメートおよびカーボネート官能基を含むことができる。本発明の方法において有用な他のリンカーは、約１〜約５０個の結合原子、または約１〜約１０個の結合原子、または約５〜約１０個の結合原子を有することができる。代表的なリンカーには下に示すものが含まれるが、これらに限定されない：
【化２】
0006625550.tif 000003
本発明において適した他のリンカーには以下が含まれる：
【化３】
0006625550.tif 000004
【００５８】
任意の適した結合剤を本発明の方法において用いることができる。代表的な結合剤は、「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」Ｇｒｅｇ  Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，１９９６  ａｎｄ  ＡＣＳ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２０１４，９，５９２−６０５に記載されている。例えば、本発明の方法において有用な結合剤には、シクロオクテン、テトラジン、アジド、アルキン、アミン、活性化エステル、イソシアネート、イソチオシアネート、チオール、アルデヒド、アミドおよびその他が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、結合剤は、シクロオクテン、テトラジン、アジドまたはアルキンであり得る。いくつかの実施形態において、結合剤は、ｔｒａｎｓ−シクロオクテンまたは１，２，４，５−テトラジンであり得る。いくつかの実施形態において、結合剤はｔｒａｎｓ−シクロオクテンであり得る。いくつかの実施形態において、結合剤は４−メチル−１，２，４，５−テトラジンであり得る。
【００５９】
いくつかの実施形態において、結合剤およびリンカーは一緒になって以下の構造を有する：
【化４】
0006625550.tif 000005
【００６０】
いくつかの実施形態において、組成物は以下の構造を有することができる：
【化５】
0006625550.tif 000006
【００６１】
本発明は、リンカーを介して結合剤に結合された治療薬または診断薬の組成物も提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、治療薬または診断薬と、ｔｒａｎｓ−シクロオクテンまたはテトラジンであり得る結合剤と、結合剤を治療薬または診断薬と共有結合する、約１〜約１０個の結合原子を有するリンカーとを有する生物活性組成物を提供する。
【００６２】
任意の治療薬または診断薬を本発明の方法において用いることができる。代表的な治療薬には、バンコマイシン、パクリタキセル、ドキソルビシン、エトポシド、イリノテカン、ＳＮ−３８、シクロスポリンＡ、ポドフィロトキシン、カルムスチン、アンホテリシン、イキサベピロン、パツピロン（エポセロン（ｅｐｏｔｈｅｌｏｎｅ）クラス）、ラパマイシンおよびプラチナ薬剤などの抗生物質が含まれるが、これらに限定されない。他の治療薬には、ドキシサイクリンおよびその他のＭＭＰ阻害薬が含まれる。さらに他の治療薬には、とりわけ、ダプトマイシン、Ｌ−ドーパ、オセルタミビル、セファレキシン、５−アミノレブリン酸、システイン、ナイスタチン、アンホテリシンＢ、フルシトシン、エムトリシタビン、トリメトプリム、スルファメトキサゾール、アシクロビル、セレコキシブ、ニモジピン、ドキシサイクリン、セフトリアゾン（ｃｅｆｔｒｉａｚｏｎｅ）が含まれる。いくつかの実施形態において、治療薬はバンコマイシンであり得る。他の実施形態では、治療薬はダプトマイシンであり得る。さらに別の実施形態では、治療薬はドキソルビシンであり得る。別の実施形態では、治療薬はサイクリックアデノシンモノホスファチジル（ｃ−ＡＭＰ）であり得る。
【００６３】
常磁性剤、光プローブおよび放射性核種などの造影剤を含む代表的な診断薬。外部から加える場の下で磁性の常磁性剤造影剤。常磁性剤の例にはナノ粒子を含む鉄粒子が含まれるが、これに限定されない。光プローブは、放射の１つの波長における励起、および放射の第２の異なる波長における検出によって検出され得る蛍光化合物である。本発明において有用な光プローブには、Ｃｙ５．５、Ａｌｅｘａ  ６８０、Ｃｙ５、ＤｉＤ（１，１’−ジオクタデシル−３，３，３’，３’−テトラメチルインドジカルボシアニンペルクロラート）およびＤｉＲ（１，１’−ジオクタデシル−３，３，３’，３’−テトラメチルインドトリカルボシアニンヨージド）が含まれるが、これらに限定されない。他の光プローブには量子ドットが含まれる。放射性核種は放射性崩壊する元素である。本発明において有用な放射性核種には、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｎ、１８Ｆ、１９Ｆ、６０Ｃｏ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６８Ｇａ、８２Ｒｂ、９０Ｓｒ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１２９Ｉ、１３１Ｉ、１３７Ｃｓ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、２１１Ａｔ、Ｒｎ、Ｒａ、Ｔｈ、Ｕ、Ｐｕおよび２４１Ａｍが含まれるが、これらに限定されない。診断薬は、１，４，８，１１−テトラアザシクロドデカン−１，４，８，１１−四酢酸（ＴＥＴＡ）、４，１１−ビス（カルボキシメチル）−１，４，８，１１−テトラアザビシクロ［６．６．２］ヘキサデカン（ＣＢ−ＴＥ２Ａ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｒｉａｍｉｎｅｐｅｎｔａａｃｅｔｉｃｅ  ａｃｉｄ）（ＤＴＰＡ）および１，４，７，１０−テトラ−アザシクロデカン四酢酸（ＤＯＴＡ）などのキレート化剤を含むこともできる。他のキレート化剤が本発明の方法において有用である。
【００６４】
任意の適したリンカーを本発明において用いて、生体適合固体担体あるいは治療薬または診断薬に結合剤を結合することができる。代表的なリンカーは、約５〜約１００個の結合原子を有することができて、かつ、エチレン−オキシ部分、アミン、エステル、アミド、ケトン、尿素、カルバメートおよびカーボネート官能基を含むことができる。本発明の方法において有用な他のリンカーは、約５〜約５０個の結合原子、または約１〜約１０個の結合原子、または約５〜約１０個の結合原子を有することができる。代表的なリンカーには下に示すものが含まれるが、これらに限定されない：
【化６】
0006625550.tif 000007
【００６５】
任意の適した結合剤を本発明の方法において用いることができる。代表的な結合剤は、「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」Ｇｒｅｇ  Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，１９９６  ａｎｄ  ＡＣＳ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２０１４，９，５９２−６０５に記載されている。例えば、本発明の方法において有用な結合剤には、シクロオクテン、テトラジン、アジド、アルキン、アミン、活性化エステル、イソシアネート、イソチオシアネート、チオール、アルデヒド、アミドおよびその他が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、結合剤は、シクロオクテン、テトラジン、アジドまたはアルキンであり得る。いくつかの実施形態において、結合剤は、ｔｒａｎｓ−シクロオクテンまたは１，２，４，５−テトラジンであり得る。いくつかの実施形態において、結合剤はｔｒａｎｓ−シクロオクテンであり得る。いくつかの実施形態において、結合剤は４−メチル−１，２，４，５−テトラジンであり得る。
【００６６】
いくつかの実施形態において、結合剤およびリンカーは一緒になって以下の構造を有する：
【化７】
0006625550.tif 000008
【００６７】
いくつかの実施形態において、本発明は
【化８】
0006625550.tif 000009
の組成物を提供する。
【００６８】
ＩＶ．治療薬または診断薬を選択的に送達するための方法
本発明は、本発明の固体担体組成物を、それを必要とする患者に埋め込み、続いて、本発明の生物活性組成物を患者に投与することにより、治療薬または診断薬を選択的に送達するための方法を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、患者の標的とする臓器または組織の第１の位置へ有効量の治療薬または診断薬を選択的に送達するための方法を提供する。本方法（ｍｅｈｔｏｄ）は、標的とする臓器または組織の第１の位置で本発明の固体担体組成物を患者に埋め込むステップを含み、ここで、固体担体組成物は第１の結合剤を含む。また、本方法は、本発明の生物活性組成物を患者に投与するステップも含み、ここで、生物活性組成物は第２の結合剤を含み、かつ、ここで、第１および第２の結合剤は接触したときに互いに結合し、それによって患者の標的とする臓器または組織の第１の位置へ有効量の治療薬または診断薬を選択的に送達する。
【００６９】
任意の適した臓器または組織が本発明の方法を用いて標的にされ得る。代表的な臓器または組織には、骨、軟骨、靱帯、腱、腸、筋肉、脳、脊髄、心臓および神経を含む神経系ならびにその他が含まれるが、これらに限定されない。例えば、臓器が心臓であるとき、本発明の方法は心臓修復に用いることができる。いくつかの実施形態において、標的とする臓器または組織の第１の位置は、患者の標的とする臓器または組織の他の位置に対して、化学的または生物学的標的薬剤により選択的に標的にされ得ない。いくつかの実施形態において、標的とする臓器または組織は骨であり得る。
【００７０】
本発明の方法において、固体担体組成物および生物活性組成物に適した結合剤は、上でさらに詳細に説明されている。いくつかの実施形態において、第１の結合剤はｔｒａｎｓ−シクロオクテンであり得、第２の結合剤はテトラジンであり得る。いくつかの実施形態において、第２の結合剤は１，２，４，５−テトラジンであり得る。いくつかの実施形態において、第２の結合剤は４−メチル−１，２，４，５−テトラジンであり得る。
【００７１】
いくつかの実施形態において、埋め込み可能な組成物は、以下の構造を有することができる：
【化９】
0006625550.tif 000010
【００７２】
いくつかの実施形態において、埋め込み可能な組成物は：
【化１０】
0006625550.tif 000011
であり得、
生物活性組成物は：
【化１１】
0006625550.tif 000012
（式中、Ｒは、治療薬または診断薬であり得る。）であり得る。
【００７３】
生体適合固体担体は、当業者に既知の任意の手段により埋め込むことができる。
【００７４】
治療薬または診断薬は、患者が患っている疾患または状態を治療するのに十分な任意の適した量で投与することができる。このような投与の用量、頻度およびタイミングは、選択される治療薬、治療されている状態の特性、年齢、体重および他の状態または障害の存在を含む対象の状態、投与されている配合物ならびに主治医の慎重さに大きく依存することになる。一般に、治療薬または診断薬は、１日あたり約２ｍｇから最大約２，０００ｍｇの範囲の投与量で投与されるが、上で述べたように、疾患標的、患者および投与経路に応じて必然的に変化が生じることになる。本発明の治療薬または診断薬は、毎時、毎日、毎週または毎月を含め、必要に応じて頻繁に投与することができる。本発明の製薬方法において利用される治療薬または診断薬は、一日あたり約０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜約１０００ｍｇ／ｋｇの初回投与量で投与される。約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇ、または約１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの１日用量の範囲を用いることができる。しかし、投与量は、患者の要件、治療されている状態の重症度、および用いられている化合物に応じて変化させることができる。例えば、投与量は、特定の患者において診断された疾患のタイプおよび段階を考慮して経験的に決定することができる。患者に投与される用量は、本発明の文脈において、経時的に患者に有益な治療反応をもたらすのに十分であるべきであるが、通常は、治療を必要とする臓器または組織において治療薬または診断薬を濃縮する生体適合固体担体を埋め込まれていない患者を治療するのに必要な用量よりも少ない。用量のサイズも、存在、特性、および特定の患者における特定の化合物の投与を伴う何らかの有害な副作用の程度により決定されることになる。特定の状況に適切な投与量の決定は当業者の技能の範囲内である。一般に、治療は化合物の最適な用量よりも少ない少量の投与量で開始される。その後、状況下で最適な効果が得られるまで、投与量が少しずつ増加される。便宜上、希望するなら１日総投与量を分割して、その日の間に分けて投与することができる。用量は、治療を行う医師により決定される通り、毎日または１日おきに投与することができる。用量は、さらに長い期間（数週間、数カ月または数年）にわたって定期的または継続的に投与することもできる。
【００７５】
いくつかの実施形態において、標的とする臓器または組織の第１の位置における治療薬または診断薬の濃度は、患者の他の場所での濃度よりも高い。いくつかの実施形態において、治療薬はバンコマイシンである。
【００７６】
別の実施形態では、本発明は、患者の標的とする臓器または組織の第１の位置へ有効量の治療薬または診断薬を選択的に送達するための方法を提供する。本方法は、生体適合固体担体、および固体担体に結合された第１の結合剤を有する固体担体組成物を、標的とする臓器または組織の第１の位置で患者に埋め込むステップを含む。また、本方法は、第１および第２の結合剤が接触したときに互いに結合するように、治療薬または診断薬と、第１の結合剤と相補的な第２の結合剤と、治療薬または診断薬を第２の結合剤と結合するリリース可能なリンカーとを有する生物活性組成物を患者に投与するステップも含む。また、本方法は、治療薬または診断薬をリリースし、それによって標的とする臓器または組織の第１の位置へ治療薬または診断薬を送達するステップも含む。
【００７７】
Ｖ．配合物
本発明の組成物は、多種多様な経口、非経口および局所的な剤形で調製することができる。経口製剤には、患者による摂取に適した錠剤、丸剤、粉末、糖衣錠、カプセル、液体、口内錠、カシェ剤、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などが含まれる。本発明の組成物は注射によって、すなわち、静脈内、筋肉内、皮内、皮下、十二指腸内または腹腔内に投与することもできる。また、本明細書に記述される組成物は、例えば、鼻腔内に吸入することにより投与することができる。さらに、本発明の組成物は、経皮的に投与することができる。本発明の組成物は、坐剤、ガス注入、粉末およびエアロゾル配合物を含む眼内、膣内および直腸内の経路によって投与することもできる（例えば、ステロイド吸入薬の経路、Ｒｏｈａｔａｇｉ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３５：１１８７−１１９３，１９９５；Ｔｊｗａ，Ａｎｎ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ａｓｔｈｍａ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７５：１０７−１１１，１９９５を参照）。したがって、本発明は、医薬として許容されるキャリアまたは賦形剤および本発明の化合物を含む医薬組成物も提供する。
【００７８】
本発明の化合物から医薬組成物を調製するために、医薬として許容されるキャリアは、固体または液体のいずれかであり得る。固形状製剤には、粉末、錠剤、丸剤、カプセル、カシェ剤、坐剤および分散性顆粒が含まれる。固体キャリアは１つまたは複数の物質であり得、これらは希釈剤、調味料、結合剤、保存料、錠剤の崩壊剤または封入剤として働いてもよい。配合および投与に関する技術の詳細は、科学文献および特許文献に詳しく記載されている。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ，Ｅａｓｔｏｎ  ＰＡ（「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ」）の最新版を参照。
【００７９】
粉末において、キャリアは細かく分割された固体であり、細かく分割された活性成分と共に混合物中に存在する。錠剤において、活性成分は、必要な結合特性を有するキャリアと適した比率で混合され、所望の形状およびサイズに圧縮される。粉末および錠剤は、好ましくは５％から、または１０％から７０％の本発明の化合物を含む。
【００８０】
適した固体賦形剤には、炭酸マグネシウム；ステアリン酸マグネシウム；タルク；ペクチン；デキストリン；デンプン；トラガント；低融点ワックス；カカオバター；炭水化物；ラクトース、スクロース、マンニトールまたはソルビトールを含むが、これらには限定されない糖類、トウモロコシ、小麦、米、ジャガイモまたは他の植物からのデンプン；メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースまたはナトリウムカルボキシメチルセルロースなどのセルロース；ならびにアラビアゴムおよびトラガカントゴムを含むガム；ならびにゼラチンおよびコラーゲンを含むが、これらには限定されないタンパク質が含まれるが、これらに限定されない。希望するならば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸、またはその塩（例えば、アルギン酸ナトリウム）など、崩壊剤または可溶化剤が加えられてもよい。
【００８１】
糖衣錠のコアは、高濃度糖液など、適した被覆を備え、この被覆は、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カーボポールゲル、ポリエチレングリコールおよび／または二酸化チタン、ラッカー溶液ならびに適した有機溶媒または溶媒混合物を含んでもよい。製品を識別するため、または活性化合物の量（すなわち、投与量）を特徴付けるために、錠剤または糖衣錠の被覆に色素または顔料が加えられてもよい。本発明の医薬製剤は、例えば、ゼラチンでできた押し込み型の（ｐｕｓｈ−ｆｉｔ）カプセル、ならびにゼラチンおよび被覆（例えば、グリセロールまたはソルビトール）でできた密封した軟カプセルを用いて経口的に使用することもできる。押し込み型のカプセルは、ラクトースまたはデンプンなどの充填剤または結合剤、タルクまたはステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤、および任意選択で安定剤と混合された本発明の化合物を含むことができる。軟カプセルにおいて、本発明の化合物は、脂肪油、流動パラフィンまたは液体ポリエチレングリコールなどの適した液体に、安定剤あり、またはなしで溶解または懸濁させてもよい。
【００８２】
坐剤を調製するためには、脂肪酸グリセリドの混合物またはカカオバターなどの低融点ワックスをまず溶融し、そこに本発明の化合物を撹拌のように均一に分散させる。次に、溶融した均質な混合物を好都合なサイズの型に注いで徐冷し、それによって固化させる。
【００８３】
液状製剤には、溶液、懸濁液および乳濁液、例えば、水溶液または水／プロピレングリコール溶液が含まれる。非経口の注射のために、液体製剤は、ポリエチレングリコール水溶液中に溶液で配合することができる。
【００８４】
経口使用に適した水溶液は、本発明の化合物を水に溶解し、適した着色剤、香料、安定剤および粘稠化剤を所望の通り加えることにより調製することができる。経口使用に適した水性懸濁液は、細かく分割された活性成分を、天然ゴムまたは合成ゴム、樹脂、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴムおよびアカシアゴムなどの粘性材料、ならびに天然に存在するリン脂質（例えば、レシチン）などの分散剤または湿潤剤、アルキレンオキシドと脂肪酸の縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンステアラート）、エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールの縮合生成物（例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール）、脂肪酸およびヘキシトールから誘導される部分エステルとエチレンオキシドの縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレアート）、または脂肪酸およびヘキシトール無水物から誘導される部分エステルとエチレンオキシドの縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート）と共に水に分散させることにより調製することができる。水性懸濁液は、１つまたは複数の保存料、例えば、エチルまたはｎ−プロピルｐ−ヒドロキシベンゾアート、１つまたは複数の着色剤、１つまたは複数の調味料、およびスクロース、アスパルテームまたはサッカリンなどの１つまたは複数の甘味剤を含むこともできる。配合物はモル浸透圧濃度に対して調整することができる。
【００８５】
さらに含まれるのは固形状製剤であり、これらは使用直前に、経口投与のために液状製剤に変換されることが意図される。このような液体の形態には、溶液、懸濁液および乳濁液が含まれる。これらの製剤は、活性成分に加えて、着色剤、香料、安定剤、緩衝液、人工甘味料および天然甘味料、分散剤、増粘剤、可溶化剤などを含んでもよい。
【００８６】
別の実施形態では、本発明の組成物は、静脈内（ＩＶ）投与あるいは体腔内または臓器の内腔内への投与など、非経口投与のために配合することができる。投与のための配合物は一般に、医薬として許容されるキャリアに溶解される本発明の組成物の溶液を含むことになる。用いることができる許容される媒体および溶媒には、水およびリンゲル液、等張性塩化ナトリウムがある。さらに、滅菌固定油は、従来、溶媒または懸濁媒体として用いることができる。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む任意の無刺激性の固定油を用いることができる。さらに、オレイン酸などの脂肪酸を注射剤の調製において同じく用いることができる。これらの溶液は滅菌されており、望ましくない物質は一般に含まれない。これらの配合物は、従来の周知の滅菌技術によって滅菌されてもよい。配合物は、例えば、ｐＨ調整剤および緩衝剤、毒性調整剤、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウムなど、必要に応じて生理的状態に近づける医薬として許容される補助物質を含んでもよい。これらの配合物中の本発明の組成物の濃度は大幅に変わり得、選択された特定の投与方法および患者の必要にしたがって、主として液量、粘度、体重などに基づいて選択されることになる。静脈内投与については、配合物は、滅菌した注射可能な水性または油性懸濁液など、注射可能な滅菌製剤であり得る。この懸濁液は、既知の技術にしたがい、適した分散剤または湿潤剤および懸濁剤を用いて配合することができる。注射可能な滅菌製剤は、１，３−ブタンジオールの溶液など、毒性のない非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の、注射可能な滅菌溶液または懸濁液でもあり得る。
【００８７】
別の実施形態では、本発明の組成物の配合物は、細胞膜と融合したり、またはエンドサイトーシスされたりするリポソームの使用によって、すなわち、細胞の表面膜タンパク質受容体に結合してエンドサイトーシスを引き起こす、リポソームに結合またはオリゴヌクレオチドに直接結合したリガンドを用いることにより送達することができる。リポソームを用いることにより、特にリポソーム表面が標的細胞に特異的なリガンドを持つ場合、または、さもなければ優先的に特定の臓器を対象とする場合、インビボでの標的細胞内への本発明の組成物の送達に焦点を合わせることができる。（例えば、Ａｌ−Ｍｕｈａｍｍｅｄ，Ｊ．Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌ．１３：２９３−３０６，１９９６；Ｃｈｏｎｎ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．６：６９８−７０８，１９９５；Ｏｓｔｒｏ，Ａｍ．Ｊ．Ｈｏｓｐ．Ｐｈａｒｍ．４６：１５７６−１５８７，１９８９を参照）。
【００８８】
ＶＩ．投与
本発明の組成物は、経口、非経口および局所的な方法を含む任意の適した手段によって送達することができる。局所的な経路による経皮投与方法は、アプリケータースティック、溶液、懸濁液、乳濁液、ゲル、クリーム、軟膏、ペースト、ゼリー、塗料、粉末およびエアロゾルとして処方することができる。
【００８９】
医薬製剤は好ましくは単位投与形態である。このような形態において、製剤は、適切な量の本発明の化合物を含む単位用量に細分される。単位投与形態は包装された製剤であり得、包装は、バイアル内またはアンプル内のパケット化した錠剤、カプセルおよび粉末など、不連続量の製剤を含む。また、単位投与形態は、カプセル、錠剤、カシェ剤または口内錠自体であり得、または適切な数の包装された形態のこれらのいずれかであり得る。
【００９０】
本発明の化合物は、任意の適した量で存在し得、対象の体重および年齢、疾患の状態などを含む様々な要素に左右され得る（ただし、これらには限定されない）。本発明の化合物に適した投与量の範囲には、約０．１ｍｇ〜約１０，０００ｍｇ、または約１ｍｇ〜約１０００ｍｇ、または約１０ｍｇ〜約７５０ｍｇ、または約２５ｍｇ〜約５００ｍｇ、または約５０ｍｇ〜約２５０ｍｇが含まれる。本発明の化合物に適した投与量には、約１ｍｇ、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００または１０００ｍｇが含まれる。
【００９１】
本発明の化合物は、任意の適した頻度、間隔および期間で投与することができる。例えば、本発明の化合物は、好ましい投与量レベルが得られるように、１時間に１回、または１時間に２回、３回以上、１日に１回、または１日に２回、３回以上、または２日、３日、４日、５日、６日もしくは７日毎に１回投与することができる。本発明の化合物が１日に１回を超えて投与されるとき、代表的な間隔には、５分、１０分、１５分、２０分、３０分、４５分および６０分、ならびに１時間、２時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１６時間、２０時間および２４時間が含まれる。本発明の化合物は、１時間、１〜６時間、１〜１２時間、１〜２４時間、６〜１２時間、１２〜２４時間、１日間、１〜７日間、１週間、１〜４週間、１カ月間、１〜１２カ月間、１年以上の間に１回、２回または３回以上、あるいはさらに無期限に投与することができる。
【００９２】
本発明の化合物は、別の活性薬剤と共に同時投与することができる。同時投与には、本発明の化合物および活性薬剤を互いに０．５時間、１時間、２時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１６時間、２０時間または２４時間以内に投与することが含まれる。同時投与には、本発明の化合物および活性薬剤を同時に、ほぼ同時（例えば、互いに約１分、５分、１０分、１５分、２０分または３０分以内）に、または任意の順番で順次投与することも含まれる。さらに、本発明の化合物および活性薬剤は、それぞれ、好ましい１日あたりの投与量レベルが得られるように、１日に１回、または１日あたり２回、３回以上投与することができる。
【００９３】
いくつかの実施形態において、同時投与は、同時配合によって、すなわち、本発明の化合物および活性薬剤の両方を含む単一の医薬組成物を調製することによって実現することができる。他の実施形態では、本発明の化合物および活性薬剤は別々に配合することができる。
【００９４】
本発明の化合物および活性薬剤は、約１：１００〜約１００：１（ｗ／ｗ）、または約１：５０〜約５０：１、または約１：２５〜約２５：１、または約１：１０〜約１０：１、または約１：５〜約５：１（ｗ／ｗ）など、任意の適した重量比で本発明の組成物中に存在し得る。本発明の化合物およびその他の活性薬剤は、約１：１００（ｗ／ｗ）、１：５０、１：２５、１：１０、１：５、１：４、１：３、１：２、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、１０：１、２５：１、５０：１または１００：１（ｗ／ｗ）など、任意の適した重量比で存在し得る。本発明の化合物および活性薬剤の他の投与量および投与量比は、本発明の組成物および方法において適している。
【００９５】
ＶＩＩ．実施例
材料。すべての試薬およびＮＭＲ溶媒は、特に記載のない限りＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（ミシシッピ州セントルイス）から購入した。化合物２はＩｒｉｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（独国マルクトレトウィッツ）から入手し、化合物８はＰｏｌｙｐｕｒｅ（オスロ、ノルウェー）から購入した。ＤＯＴＡ−ＮＨＳエステルは、Ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃｓ（テキサス州ダラス）から入手した。シリカゲルはＳｉｌｉｃｙｃｌｅ（ケベック州、カナダ）から購入し、分取ＴＬＣプレート（２０×２０ｃｍ；厚さ１０００μｍ）はＡｎａｌｔｅｃｈ（デラウェア州ニューアーク）から購入した。超高純度アルギン酸塩はＰｒｏＮｏｖａ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ（ノルウェー）から購入した。［１１１Ｉｎ］塩化インジウム溶液はＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ（米国ウォルサム）から購入した。希ＨＣｌ中の［６４Ｃｕ］塩化銅は、ワシントン大学（ミズーリ州セントルイス）から購入するか、または１１ＭｅＶ  Ｓｉｅｍｅｎｓ  ＲＤＳ１１１サイクロトロンを利用して６４Ｎｉ（ｐ，ｎ）６４Ｃｕ核反応により内部で生成し、陰イオン交換クロマトグラフィー（Ｂｉｏｒａｄ  Ａｇ  １−Ｘ８）により精製した。ダルベッコの緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（カリフォルニア州カールズバッド）から購入した。
【００９６】
方法。ＮＭＲ実験は、Ｖａｒｉａｎ  ４００ＭＨｚ  ＶＮＭＲＳ装置を用いて、ＣＤＣＬ３または［Ｄ６］ＤＭＳＯ中で行った。高分解能ＥＳＩ質量分析データは、ボストン大学Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ＣｅｎｔｅｒのＡｇｉｌｅｎｔ  Ｉｏｎ  Ｔｒａｐ  ＬＣ／ＭＳＤ  ＳＬを使用して得、正または負のいずれかで測定した。有機合成の段階の間、ＨＰＬＣ精製のために、Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８カラム（１９×２５０ｍｍ）を備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １１００シリーズシステムを使用し、０．１％  ＴＦＡを含む水およびＭｅＣＮの勾配を適用した。
【００９７】
放射化学の間ならびにインビボでの分析および精製（ｐｕｒｉｆｃａｔｉｏｎｓ）のために、Ｊｕｐｉｔｅｒ  Ｐｒｏｔｅｏ  Ｃ−１２カラム（２５０×４．６ｍｍ、４μｍ、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（カリフォルニア州トランス））を備えたＢｅｃｋｍａｎ−Ｃｏｌｔｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｇｏｌｄ  １２８（カリフォルニア州ブレア）クロマトグラフィーシステム、およびＢｉｏｓｃａｎ  ＦｌｏｗＣｏｕｎｔ光電子増倍管（ＰＭＴ）（Ｂｉｏｓｃａｎ（ワシントンＤＣ））に直列に接続した単波長検出器またはダイオードアレイＵＶ検出器（２２０および２５４ｎｍに設定）を使用して逆相ＨＰＬＣを実施した。データは、３２  Ｋａｒａｔソフトウェアパッケージ（Ｂｅｃｋｍａｎ−Ｃｏｌｔｅｒ）を用いて解析した。移動相は、溶媒Ａ：水中の０．０５％トリフルオロ酢酸および溶媒Ｂ：１００％アセトニトリル、流量１．５ｍＬ／ｍｉｎ、ならびに注射２分後に９％溶媒Ｂから始まり、次に、特に記載のない限り３０分間かけて８１％まで増加する直線勾配からなるものであった。
【００９８】
アルギン酸ゲルを用いるインビトロ実験の間、分子ふるい高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）は、Ｗａｔｅｒｓ  ２４８７デュアル吸光度検出器（２２０および３２０ｎｍ）およびＢｉｏｓｃａｎ  Ｆｌｏｗ−ｃｏｕｎｔ放射能検出器を備えたＷａｔｅｒｓ  Ｂｒｅｅｚｅクロマトグラフィーシステムで実施した。Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ＢｉｏＳｅｐ  ＳＥＣ−Ｓ３０００カラム（７．８×３００ｍｍ）を、イソクラチックな０．１Ｍリン酸ナトリウム、ｐＨ６．８において、１．０ｍＬ／ｍｉｎで溶離した。
【００９９】
６４Ｃｕおよび１１１Ｉｎの標識収率は、０．９％  ＮａＣｌ水溶液中の２００ｍＭ  ＥＤＴＡで溶離され、かつ、Ｂｉｏｓｃａｎ  ２００イメージングスキャナー（Ｂｉｏｓｃａｎ（ワシントンＤＣ））を用いて実施されるＩＴＬＣ−ＳＧストリップ（Ｐａｌｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ミシガン州アナーバー）を用いてラジオ−ＴＬＣにより求めた。これらの条件において、遊離した放射性核種はＲｆ＝０．９で移動し、一方、テトラジン６に結合した放射性核種は元のままである。
【０１００】
ＰＥＴ／ＣＴデータは、Ｉｎｖｅｏｎ  Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｔａｔｉｏｎ（Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）を使用して取得した。
【０１０１】
動物の取り扱い。すべての動物は、カリフォルニア大学デービス校Ａｎｉｍａｌ  Ｕｓｅ  ａｎｄ  Ｃａｒｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅが承認したプロトコルにしたがって取り扱った。
【０１０２】
統計解析。群変動は平均±１標準偏差として記述する。単一の群を、対応のない両側ｔ検定を用いて比較した。ｐ＜０．０５の群は有意に異なると見なした。Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌバージョン１２．８．９をすべての統計計算に用いた。
【０１０３】
実施例１．  ＴＣＯ修飾アルギン酸塩１の調製
【化１２】
0006625550.tif 000013
まずＴＣＯリンカーを調製して、アルギン酸塩と結合させることによるＴＣＯ修飾アルギン酸塩の調製について以下で説明する。
【化１３】
0006625550.tif 000014
【０１０４】
（Ｒ，Ｅ）−Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（シクロオクタ−４−エン−１−イルオキシ）アセトアミド（５）。化合物３（１００ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンアミド（６９ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（１２３ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）に溶解し、室温で２時間撹拌した。沈殿した尿素をＰＶＤＦ膜に通して濾過し、取り出した。膜をＣＨ２Ｃｌ２（１ｍＬ）で洗った。母液（ｍｏｔｈｅｒ  ｌｉｑｕｅｒ）を、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中の撹拌した（ｓｔｕｒｒｉｎｇ）エチレンジアミン（３２４ｍｇ、５．４ｍｍｏｌ）溶液に加えた。反応物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を水（２×１０ｍＬ）で洗った。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。生成物を分取シリカＴＬＣで、溶媒としてＣＨ２Ｃｌ２とＭｅＯＨの４：１混合物を用いて精製した。化合物５の収量は６０ｍｇ（４９％）であった。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．０８（ｂｓ，１Ｈ），５．６１−５．４５（ｍ，２Ｈ），３．９２（ｑ，Ｊ＝１１．２３Ｈｚ，２Ｈ），３．６４（ｄｄ，Ｊ１＝９．９１Ｈｚ，Ｊ２＝４．７３Ｈｚ，１Ｈ），３．３６（ｑ，Ｊ＝６．０７Ｈｚ，２Ｈ），２．８７（ｂｓ，２Ｈ），２．３１−２．１６（ｍ，４Ｈ），２．０８−２．０４（ｍ，１Ｈ），１．８９−１．４９（ｍ，５Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１７０．３４，１３５．４８，１３１．３７，７５．８０，６８．３１，４１．２８，４０．０５，３４．２８，３２．５３，２９．７４，２７．８５。ＨＲＭＳ：Ｃ１２Ｈ２３Ｎ２Ｏ２のｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値２２７．１７５４、測定値２２７．１７９１。
【０１０５】
アルギニン−グリシン−アスパラギン酸（ＲＧＤ）およびグリシン−ヒスチジン−リシン（ＧＨＫ）の取り込みのための先述の標準的なカルボジイミド化学条件下、各１グラムのＵＰ  ＭＶＧアルギン酸塩を１７６μｍｏｌのＴＣＯ−アミンと合わせた。次に、アルギン酸塩生成物を、濃度が低下する塩を含む脱イオン水に対して４日間透析することによって精製し、冷凍し、乾燥するまで５〜１０日間凍結乾燥した。ＤＰＢＳを加えることにより、２．５％アルギン酸塩溶液を得、カルシウムを加えることにより、アルギン酸ゲルを作成した。アルギン酸塩の共有結合修飾を１Ｈ−ＮＭＲにより調査して確認した（図２０〜２２参照）。ＴＣＯを添加しない同じプロトコルを対照ゲルの作成に用いた。全く同じバッチからのＴＣＯ−ゲルを用いてインビトロおよびインビボでの試験を行い、同じ日に使用して、負荷量または負荷効率における変動を最小限に抑えた。
【０１０６】
インビトロ実験については、８００μｌの２．５％アルギン酸塩溶液を、２００μｌのＣａ（ＳＯ４）２過飽和溶液（２回蒸留水（ｄｄＨ２Ｏ）１ｍｌあたり０．２１ｇのＣａ（ＳＯ４）２）と混合した。溶液を三方コックを用いて３０秒間混合し、２％のアルギン酸塩の最終濃度を得た。カスタムメイドのプラスチックモデル内の２枚のガラス板の間で混合物をゲル化させ、室温で２０分間インキュベートした。全体積が、ゲル化と一貫した一様な外観を有していた。ディスクをスパチュラで取り上げ、個々に秤量した。通常、事前に調製したディスクの重量は約１００ｍｇであり、大まかに以下の寸法を有していた：８ｍｍ（直径）および２ｍｍ（高さ）。
【０１０７】
インビボでの使用のために、２．５％アルギン酸ゲル溶液および硫酸カルシウム過飽和溶液を前述と同じ比率で速やかに混合し、すぐに所望の量で動物に注射した。
【０１０８】
実施例２．  テトラジン修飾診断薬の調製
Ｔｚ放射性プローブ２を以前に記載された通りに合成した（Ｒ．Ｒｏｓｓｉｎ，Ｐ．Ｒ．Ｖｅｒｋｅｒｋ，Ｓ．Ｍ．ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｂｏｓｃｈ，Ｒ．Ｃ．Ｖｕｌｄｅｒｓ，Ｉ．Ｖｅｒｅｌ，Ｊ．Ｌｕｂ，Ｍ．Ｓ．Ｒｏｂｉｌｌａｒｄ，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．２０１０，４９，３３７５）。
【０１０９】
実施例３．  （Ｅ）−シクロオクタ−２−エニル２−アミノエチルカルバメートの調製
【化１４】
0006625550.tif 000015
表題化合物を、Ｖｅｒｓｔｅｅｇｅｎ，Ｒ．Ｍ．ら、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２０１３，５２，１４１１２−１４１１６に記載の手順にしたがって調製した。
【０１１０】
実施例４．  リリース可能なＴＣＯ修飾診断薬の調製
【化１５】
0006625550.tif 000016
フルオレセイン−ＮＨＳエステル（１３４ｍｇ、０．２８３ｍｍｏｌ）および（Ｚ）−シクロオクタ−２−エニル２−アミノエチルカルバメート（６０．０ｍｇ、０．２８３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解した。トリエチルアミン（７７μＬ、０．５６６ｍｍｏｌ）を加え、室温で１８時間撹拌した。溶媒を高真空下で蒸発させ、反応混合物をメタノールに再び溶かした。移動相として１：９  ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２混合物を用いて、予備薄層クロマトグラフィーにより精製した。収量＝９０ｍｇ（５５．６％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ８．４２（ｓ，１Ｈ），８．１７（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），６．８６（ｓ，２Ｈ），６．５７−６．５０（ｍ，４Ｈ），５．７８（ｔ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，１Ｈ），５．４７（ｄ，Ｊ＝１６．４Ｈｚ，１Ｈ），５．２（ａｐｐ  ｓ，１Ｈ），３．６１−３．３１（ｍ，５Ｈ），２．３２（ｂｓ，１Ｈ），１．９８−１．８８（ｍ，３Ｈ），１．８３−１．７７（ｍ，１Ｈ），１．６９−１．０４（ｍ，５Ｈ），０．８３−０．７５（ｍ，１Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ）δ１６８．７４，１６１．６３，１５８．８５，１５６．６０，１５４．１７，１３７．９４，１３５．６２，１３２．８６，１３２．７０，１３０．２０，１２５．８１，１２５．３１，１１３．８９，１１１．０３，１０３．８１，７５．４３，４１．６９，４１．２１，３７．０８，３６．６７，３０．１４，２５．２７。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＭＳ）ｍ／ｚ：Ｃ３２Ｈ３０Ｎ２Ｏ８［Ｍ＋Ｈ＋］の計算値５７１．２０８０；測定値５７１．２０２５。
実施例５．  ＴＣＯ修飾診断薬の調製
【化１６】
0006625550.tif 000017
【０１１１】
２−（（Ｅ）−シクロオクタ−２−エニルオキシ）−Ｎ−（２−アミノエチル）アセトアミド（５０．０ｍｇ、０．２２１ｍｍｏｌ）およびフルオレセイン−ＮＨＳエステル（１０５ｍｇ、０．２２１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解した。トリエチルアミン（６０μＬ、０．４４２ｍｍｏｌ）を加え、室温で１８時間撹拌した。溶媒を高真空下で蒸発させ、反応混合物をメタノールに再び溶かした。移動相として１：９  ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２混合物を用いて、予備薄層クロマトグラフィーにより精製した。収量＝５１ｍｇ（３９．５％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ８．４６（ｓ，１Ｈ），８．２１（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．６５（ｂｓ，１Ｈ），７．２８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），６．６９（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，２Ｈ），６．５８−６．５０（ｍ，４Ｈ），５．４６−５．４４（ｍ，２Ｈ），３．９１（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），３．６５−３．５９（ｍ，５Ｈ），２．６７（ｓ，１Ｈ），２．３２−２．２６（ｍ，２Ｈ），２．３２−２．２６（ｍ，２Ｈ），２．２０−２．１３（ｍ，１Ｈ），２．０８（ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，１Ｈ），１．９６−１．９２（ｍ，１Ｈ），１．７９−１．６７（ｍ，３Ｈ），１．５４−１．４６（ｍ，１），１．３０−１．２５（ｍ，１Ｈ），１．２３−１．１５（ｍ，１Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ）δ１７３．６０，１７０．６７，１６８．６９，１５４．２１，１３７．２１，１３７．６６，１３６．６６，１３６．７５，１３２．５３，１３０．３０，１２５．８９，１２５．０９，１１３．８４，１１０．９８，１０３．７９，７７．５６，６９．３８，４１．３１，４０．７５，４０．０７，３９．９４，３５．５０，３３．５８，３０．８２，２９．０５。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＭＳ）ｍ／ｚ：Ｃ３３Ｈ３２Ｎ２Ｏ８［Ｍ＋Ｈ＋］の計算値５８５．２２３７；測定値５８５．２１８３。
【０１１２】
実施例６．  リリース可能なＴＣＯ修飾アモキシシリンの調製
【化１７】
0006625550.tif 000018
（Ｅ）−シクロオクタ−２−エニル４−ニトロフェニルカーボネート（１００ｍｇ、０．３４３ｍｍｏｌ）およびアモキシシリン（８２．０ｍｇ、０．２２４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解した。トリエチルアミン（８７μＬ、０．６３４ｍｍｏｌ）を加え、室温で１８時間撹拌した。溶媒を高真空下で蒸発させ、反応混合物をメタノールに再び溶かした。移動相として１：９  ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２混合物を用いて、予備薄層クロマトグラフィーにより精製した。収量＝３６ｍｇ（３１％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ８．４９（ｂｓ，１Ｈ），７．５７（ｄｄ，Ｊ１＝２１．８Ｈｚ，Ｊ２＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２４（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），６．６７（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），５．８１−５．７６（ｍ，１Ｈ），５．５１（ｄ，Ｊ＝１６．４Ｈｚ，１Ｈ），５．２９（ｓ，１Ｈ），５．１７（ｓ，１Ｈ），４．９２（ｓ，１Ｈ），４．３３（ｓ，１Ｈ），３．６２（ｓ，３Ｈ），３．３８（ｓ，１Ｈ），２．５０（ｓ，２Ｈ），２．３８（ｂｓ，１Ｈ），１．９８−１．８８（ｍ，３Ｈ），１．８１−１．７５（ｍ，１Ｈ），１．６４−１．５３（ｍ，２Ｈ），１．３７（ｓ，３Ｈ），１．１９−１．１２（ｍ，４Ｈ），０．８１−０．７８（ｍ，２Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ）δ１７０．４９，１５６．７７，１５４．７８，１３２．１６，１３１．８７，１３１．２４，１３０．９５，１２８．６０，１１４．８３，７２．９９，６５．７３，５９．７７，５９．０７，５７．５３，５７．０３，５６．８９，５１．９３，４８．６０，３５．５４，３５．３１，２８．４６，２７．０７，２６．７６，２３．６７，２３．５４。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＭＳ）ｍ／ｚ：Ｃ３３Ｈ３２Ｎ２Ｏ８［Ｍ＋ＭｅＯ−］の計算値５４８．２０７２；測定値５４８．２０４２。
【０１１３】
実施例７．  ＴＣＯ修飾アモキシシリンの調製
【化１８】
0006625550.tif 000019
２−（（Ｅ）−シクロオクタ−２−エニルオキシ）酢酸（８５．０ｍｇ、０．４６１ｍｍｏｌ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンアミド（５３．０ｍｇ、０．４６１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（９５．０ｍｇ、０．４６１ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）に溶解した。室温で１８時間撹拌した。沈殿物を濾過し、上清を減圧下で濃縮した。ＤＭＦ（１０ｍＬ）中のアモキシシリン（１６０ｍｇ、０．４３８ｍｍｏｌ）の溶液を加え、室温で１８時間撹拌した。溶媒を高真空下で蒸発させ、反応混合物をメタノールに再び溶かした。移動相として１：９  ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２混合物を用いて、予備薄層クロマトグラフィーにより精製した。収量＝２０ｍｇ（８．６％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ７．３３（ｔ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ），７．２４（ｔ，Ｊ＝０．６Ｈｚ，１Ｈ），６．７６（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），５．６８−５．４５（ｍ，４Ｈ），４．３２（ｂｓ，１Ｈ），３．９９−３．０９（ｍ，２Ｈ），３．７２（ｓ，１Ｈ），３．４７（ｂｓ，１Ｈ），２．６７（ｓ，６Ｈ），２．３７−１．９６（ｍ，５Ｈ），１．８５−１．８０（ｍ，３Ｈ），１．５６（ｓ，３Ｈ），１．４７（ｓ，３Ｈ），１．２８−１．１７（ｍ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ）δ１７５．０８，１７２．６５，１７１．８２，１５８．８１，１３１．１６，１３１．０７，１３０．６９，１３０．１３，１２９．９８，１２９．８９，１１６．６９，８３．１９，６８．６７，６６．７１，５９．８８，５８．８６，５７．０５，５３．１３，３５．２６，３５．１４，３４．２６，３４．１９，２７．１８，２６．７５，２６．６９，２６．４１，２３．４４，２３．４１。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ−ＭＳ）ｍ／ｚ：Ｃ３３Ｈ３２Ｎ２Ｏ８［Ｍ＋ＭｅＯ−］の計算値５４８．２０７２；測定値５４８．２０４２。
【０１１４】
実施例８．  修飾アガロースの調製
ＮＨＳ−活性化アガローススピンカラムは、Ｐｉｅｒｃｅ／Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（イリノイ州ロックフォード）から購入した。図１６Ｂの１ａまたは１ｂのアミン前駆体を、メーカー推奨のプロトコルを用いてアガロースビーズに結合させた。簡潔には、３３ｍｇの乾燥アガロースを、１ａまたは１ｂのアミン前駆体４μｍｏｌと共にＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）中で穏やかに混合しながら３時間インキュベートした。アガロースビーズをＰＢＳで数回洗った。洗浄液から得られた上清の５２０ｎｍにおける吸光度をモニターすることにより、カラムと結合した１ａまたは１ｂの量を推定した。アガロース上の未反応のＮＨＳ基を１Ｍトリス、ｐＨ７．４でキャッピングした。
【０１１５】
実施例９．  キャッチ＆リリースリンカーの速度論
上述の方法を用いて、１ａまたは１ｂのいずれかで修飾したアガロースビーズを、２μｍｏｌのＴＣＯ−Ｒ−ローダミン（（Ｅ）−５−（（２−（（（シクロオクタ−２−エン−１−イルオキシ）カルボニル）アミノ）エチル）カルバモイル）−２−（３−（ジメチル−□４−アザニリデン）−６−（ジメチルアミノ）−３Ｈ−キサンテン−９−イル）安息香酸）で２分間処理した。短時間の遠心分離の後、上清を回収し、アガロースを水に再懸濁した。上清（ｓｕｐｅｒｎａｔｅｎｔｓ）を一定の時間間隔で回収し、ＥＳＩ−ＭＳで分析した。
【０１１６】
サンプルは、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（カリフォルニア州ウェストパームビーチ）ＬＴＱ  Ｏｒｂｉｔｒａｐ  Ｖｅｌｏｓ質量分析計で石英キャピラリーエミッターを用いて分析した。スプレーの最適化を容易にするために、ＭＳ分析の前に１０％イソプロピルアルコールを各サンプルに加えた。リリース生成物、ローダミンエチルジアミン（５−（（２−アミノエチル）カルバモイル）−２−（３−（ジメチル−□４−アザニリデン）−６−（ジメチルアミノ）−３Ｈ−キサンテン−９−イル）安息香酸）を正モードで分析した。ＥＳＩ−ＭＳの校正のために、リリース生成物ローダミンエチルジアミンを独立して合成した（図ＳＸ）。検量線を用いて、各ステップの上清中のローダミンエチルジアミンの量を推定した。
【０１１７】
実施例１０．  修飾Ｔｚ−Ｍｅ−アルギン酸塩の調製
ＲＧＤ、ＧＨＫおよびＴＣＯアミンの取り込みのための先述の標準的なカルボジイミド化学条件下、各１グラムのＵＰ  ＭＶＧアルギン酸塩を、１７６μｍｏｌｅの（４−（６−メチル−１，２，４，５−テトラジン−３−イル）フェニル）メタンアミン（Ｔｚ−Ｍｅ−アミン）と合わせた。次に、アルギン酸塩生成物を、濃度が低下する塩を含む脱イオン水に対して４日間透析することによって精製し、冷凍し、乾燥するまで５〜１０日間凍結乾燥した。ｄｄＨ２Ｏを加えることにより、２．５％アルギン酸塩溶液を得、カルシウムを加えることにより、アルギン酸ゲルを作成した。アルギン酸塩の共有結合修飾を１Ｈ−ＮＭＲにより調査して確認した（図２３参照）。ＴＣＯを添加しない同じプロトコルを対照ゲルの作成に用いた。全く同じバッチからのＴＣＯ−Ｇｅｌ  １を用いてインビトロおよびインビボでの試験を行い、同じ日に使用して、負荷量または負荷効率における変動を最小限に抑えた。
【０１１８】
インビボ実験については、８００μｌの２．５％アルギン酸塩溶液を、２００μｌのＣａ（ＳＯ４）２過飽和溶液（０．２１ｇ  Ｃａ（ＳＯ４）２／ｍｌ  ｄｄＨ２Ｏ）と混合した。溶液を三方コックを用いて３０秒間混合し、２％のアルギン酸塩の最終濃度を得た。混合物を所望の量ですぐに動物に注射した。
【０１１９】
実施例１１．  キャッチ＆リリースリンカーのインビボ評価
ＩＡＣＵＣ承認後、インビボでの蛍光のリアルタイム体内分布調査をｎｕ／ｎｕマウス（１条件あたりｎ＝２）で何も注射せずに、またはアルギン酸塩の１タイプを注射して実施した（対照対Ｔｚ−Ｇｅｌ）。次に、対象にＴＣＯ−Ｒ−ＦまたはＴＣＯ−ＮＲ−Ｆの尾静脈注射を打った。陰性対照は次の通りであった：１．ゲルなし、およびＴＣＯ−Ｒ−Ｆ（陰性対照、マウス１）；２．対照アルギン酸塩およびＴＣＯ−Ｒ−Ｆ（Ｇｅｌ対照、マウス４）。２つの実験群はＴｚ−ゲルと、ＴＣＯ−Ｒ−Ｆ（リリースされたプロトコル、マウス２）またはＴＣＯ−ＮＲ−Ｆ（固定されたプロトコル、マウス３）のいずれかであった。蛍光をＩＶＩＳスペクトル（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ（マサチューセッツ州））を用いて測定し、輝度で報告した。
【０１２０】
実施例１２．  リリース可能なバンコマイシンの最小阻止濃度（ＭＩＣ）
バンコマイシンまたはＴＣＯ−Ｒ−Ｖａｎｃｏの段階希釈液を、通常のアルギン酸ゲル、またはｄｄＨ２Ｏ中で一晩置いたＴｚ−ゲルのいずれかを用いて作製した。次の日、２．２％  Ｍｕｅｌｌｅｒ  Ｗｉｎｔｏブロス中の発光メチシリン感受性のＳｔａｐｈ．ａｕｒｅｕｓ（ＭＳＳＡ、Ｘｅｎ  ２９、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ（マサチューセッツ州））を混合物に加えた。次に、プレートをインキュベーター内に２４時間置き、２４時間増殖させた（ｎ＝３）。次に、発光をＩＶＩＳスペクトル（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ（マサチューセッツ州））を用いて測定し、輝度で報告した。
【０１２１】
実施例１３．  リリース可能なＴＣＯ−ローダミンの調製
【化１９】
0006625550.tif 000020
ローダミン−ＮＨＳエステルを、Ｂｒｕｎｅｔ，Ａ．；Ａｓｌａｍ，Ｔ．；Ｂｒａｄｌｅｙ，Ｍ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２０１４，２４，３１８６−３１８８に記載の通り合成した。ローダミン−ＮＨＳエステル（５０ｍｇ、０．０９５ｍｍｏｌ）および（Ｅ）−シクロオクタ−２−エニル−２−アミノエチルカルバメート（４０．０ｍｇ、０．１９０ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）に溶解した。トリエチルアミン（１２９μＬ、０．９５ｍｍｏｌ）を加え、室温で１８時間撹拌した。溶媒を高真空下で蒸発させ、反応混合物をメタノールに再び溶かした。移動相として７．５：２．５：９０  ＭｅＯＨ：Ｅｔ３Ｎ：ＣＨ２Ｃｌ２混合物を用いて、予備薄層クロマトグラフィーにより精製した。収量＝２８ｍｇ（４７％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ８．５４（ｓ，１Ｈ），８．０４（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），６．９９（ｄｄ，Ｊ１＝２．７Ｈｚ，Ｊ２＝９．５Ｈｚ，１Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），５．８５（ｔ，Ｊ＝１３．７Ｈｚ，１Ｈ），５．５５（ｄ，Ｊ＝１６．４Ｈｚ，１Ｈ），５．２６（ｓ，１Ｈ），３．６７−３．３６（ｍ，４Ｈ），３．３２−３．２１（ｍ，９Ｈ），２．９３−２．７７（ｍ，６Ｈ），２．４９−２．３６（ｍ，１Ｈ），２．１０−１．７９（ｍ，５Ｈ），１．７８−１．４１（ｍ，４Ｈ），１．３９−１．２５（ｍ，１Ｈ），１．２２−１．０６（ｍ，１０Ｈ），０．９３−０．７９（ｍ，１Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ）δ１７２．４７，１６９．４１，１６１．６８，１５９．０８，１５８．７６，１４２．０６，１３７．１９，１３２．９６，１３２．７０，１３０．９０，１２９．８５，１２９．６３，１１５．０９，１１４．８６，９７．５３，７６．８５，７５．３８，４１．９６，４１．７８，４１．０１，３７．１８，３６．９２，３０．２１，２５．３５。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：Ｃ３６Ｈ４１Ｎ４Ｏ６［Ｍ＋１］＋の計算値６２５．３０２６；測定値６２５．２９７６。
【０１２２】
実施例１４．  リリース可能でないＴＣＯ−ローダミンの調製
【化２０】
0006625550.tif 000021
ローダミン−ＮＨＳエステル（５０ｍｇ、０．０９５ｍｍｏｌ）および２−（（Ｅ）−シクロオクタ−４−エニルオキシ）−Ｎ−（２−アミノエチル）アセトアミド（４３．０ｍｇ、０．１９０ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）に溶解した。トリエチルアミン（１２９ｕＬ、０．９５ｍｍｏｌ）を加え、室温で１８時間撹拌した。溶媒を高真空下で蒸発させ、反応混合物をメタノールに再び溶かした。移動相として７．５：５：２．５：９０  ＭｅＯＨ：Ｅｔ３Ｎ：ＣＨ２Ｃｌ２混合物を用いて、予備薄層クロマトグラフィーにより精製した。収量＝３５ｍｇ（５８％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ８．５７（ｓ，１Ｈ），８．０７（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），６．９７（ｄｄ，Ｊ１＝２．７Ｈｚ，Ｊ２＝９．６Ｈｚ，２Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，２Ｈ），５．６１−−５．４３（ｍ，２Ｈ），３．９４（ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，２Ｈ），３．６９−−３．５５（ｍ，６Ｈ），３．３１（ｓ，２Ｈ），２．４１−−２．３１（ｍ，２Ｈ），２．２７−−２．１４（ｍ，２Ｈ），２．０３−−１．９５（ｍ，１Ｈ），１．９０（ｓ，２Ｈ），１．８４−１．７１（ｍ，４Ｈ），１．６１−−１．５０（ｍ，２Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ）δ１７３．４９，１７２．３５，１６９．４６，１６１．４７，１５９．０４，１５８．７１，１４２．１２，１３６．９７，１３６．８８，１３２．７０，１３２．５７，１２９．８４，１２９．６５，１１５．０２，１１４．８３，９７．５５，７７．６５，６９．４４，４１．４０，４１．００，３５．５８，３３．６２，３０．８８，２９．１０。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：Ｃ３７Ｈ４３Ｎ４Ｏ６［Ｍ＋１］＋の計算値６３９．３１８３；測定値６３９．３１５１。
【０１２３】
実施例１５．  ローダミンリリース生成物
【化２１】
0006625550.tif 000022
ローダミン−ＮＨＳエステル（２０．０ｍｇ、０．０３７９ｍｍｏｌ）およびＮ−Ｂｏｃ−エチレンジアミン（１３．２ｍｇ、０．０７５８ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）に溶解した。トリエチルアミン（５１  Ｌ、０．３７９ｍｍｏｌ）を加え、室温で１８時間撹拌した。溶媒を高真空下で蒸発させ、反応混合物をメタノールに再び溶かした。移動相として１０：５：８５  ＭｅＯＨ：Ｅｔ３Ｎ：ＣＨ２Ｃｌ２混合物を用いて、予備薄層クロマトグラフィーにより精製した。単離した生成物をＣＨ２Ｃｌ２：ＴＦＡ（５ｍＬ）の４：１混合物で１時間処理した。収量＝１８ｍｇ（８１％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）（商標）８．８３（ｓ，１Ｈ），８．３２（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．１３（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，２Ｈ），７．０５（ｄｄ，Ｊ１＝６．８Ｈｚ，Ｊ２＝２．７Ｈｚ，２Ｈ），６．９６（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，２Ｈ），３．７７（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，，２Ｈ），３．３０（ｓ，１２Ｈ），３．２２−３．１７（ｍ，２Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ）（商標）１６９．２８，１６７．４７，１６０．６９，１５９．１０，１３８．５２，１３２．６３，１３２．１１，１３２．０２，１３１．６７，１１５．７１，１１４．８５，９７．６３，４１．０８，４０．９７，３９．０６。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：Ｃ２７Ｈ２９Ｎ４Ｏ４［Ｍ＋１］＋の計算値４７３．２１８９；測定値４７３．２１４１。
【０１２４】
実施例１６．  リリース可能なＴＣＯ−バンコマイシン
【化２２】
0006625550.tif 000023
バンコマイシン（５０．０ｍｇ、０．０３４５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２０μＬ、０．１４５ｍｍｏｌ）を水（１ｍＬ）に溶解した。ＤＭＦ（２５μＬ）中の（Ｅ）−シクロオクタ−２−エニル４−ニトロフェニルカーボネート（１９．０ｍｇ、０．０６５２ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。反応混合物を４０℃で１８時間撹拌した。沈殿物を４５μｍ  ＰＴＦＥ膜に通して濾過し、取り出した。上清にＨＰＬＣ精製を行い、表題化合物を得た。ＨＰＬＣ精製には、Ｈ２Ｏ中、１０〜６０％  ＣＨ３ＣＮの勾配を用いた。収量＝３ｍｇ（５．５％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ７．６１（ｓ，１Ｈ），７．５５−７．３８（ｍ，２Ｈ），７．１９（ｂｓ，１Ｈ），７．０３（ｓ，１Ｈ），６．８１（ｂｓ，１Ｈ），６．４４（ｓ，１Ｈ），６．３８（ｓ，１Ｈ），６．０５（ｂｓ，１Ｈ），５．５５−５．３７（ｍ，２Ｈ），５．３２（ｓ，１Ｈ），５．２３（ｓ，１Ｈ），４．６８（ｓ，３６Ｈ），４．５２−４．３１（ｍ，２Ｈ），４．１５（ｓ，１Ｈ），４．００（ｔ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），３．８５−３．６１（ｍ，３Ｈ），３．５６（ｔ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），３．３５（ｓ，１Ｈ），２．６７（ｓ，４Ｈ），２．０３−１．８８（ｍ，２Ｈ），１．７５−１．３９（ｍ，３Ｈ），１．３３（ｓ，３Ｈ），１．０５（ｓ，３Ｈ），０．７５（ｄｄ，Ｊ１＝８．２Ｈｚ，Ｊ２＝１３．７Ｈｚ，６Ｈ）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：Ｃ７５Ｈ８７Ｃｌ２Ｎ９Ｏ２６［Ｍ＋１］＋の計算値１６０２．４６６０；測定値１６０２．５２５６。
【０１２５】
実施例１７．  リリース可能なＴＣＯ−ダプトマイシン
【化２３】
0006625550.tif 000024
ダプトマイシン（１００ｍｇ、０．０６２ｍｍｏｌ）を水（１ｍＬ）に溶解した。ＤＭＦ（５０μＬ）中の（Ｅ）−シクロオクタ−２−エニル４−ニトロフェニルカーボネート（３６ｍｇ、０．１２３ｍｍｏｌ）の溶液を加え、続いて、トリエチルアミン（１６７ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１８時間撹拌した。セミ分取Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ５ｕ  Ｃ１８（２）カラムおよびＨ２Ｏ中、１０〜６５％  ＣＨ３ＣＮの勾配を用いてＨＰＬＣ精製後、白い泡として表題生成物を得た。収量＝４４ｍｇ（４０％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ７．６６（ｂｓ，２Ｈ），７．６０−７．４６（ｍ，２Ｈ），７．３９（ｓ，１Ｈ），７．２５−７．１１（ｍ，２Ｈ），７．０２（ｓ，１Ｈ），６．９６（ｓ，１Ｈ），６．８３−６．７８（ｍ，１Ｈ），６．５６（ｓ，１Ｈ），６．００−５．６８（ｍ，４Ｈ），５．６８−５．５７（ｍ，１Ｈ），５．５４（ｓ，１Ｈ），５．５１−５．２６（ｍ，８Ｈ），５．１４（ｂｓ，１Ｈ），４．９６（ｂｓ，１Ｈ），４．６７（ｓ，１Ｈ），４．６４（ｓ，１Ｈ），４．５８（ｓ，１Ｈ），４．１４（ｓ，１Ｈ），３．８８−３．７９（ｍ，２Ｈ），３．７８−３．７１（ｍ，１Ｈ），３．５９−３．４３（ｍ，２Ｈ），３．１９（ｑ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，７Ｈ），２．９５（ｂｓ，４Ｈ），２．５９−２．３２（ｍ，５Ｈ），２．２３−１．７６（ｍ，１５Ｈ），１．５６−１．４４（ｍ，８Ｈ），１．３０（ｔ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１０Ｈ），１．２３−１．１６（ｍ，５Ｈ），１．００−０．８７（ｍ，９Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：Ｃ７５Ｈ８７Ｃｌ２Ｎ９Ｏ２６［Ｍ＋Ｈ＋ＭｅＣＮ］＋の計算値１８１３．８２；測定値１８１３．８０。
【０１２６】
実施例１８．  リリース可能なＴＣＯ−ドキソルビシン
【化２４】
0006625550.tif 000025
（Ｅ）−シクロオクテンドキソルビシン複合体を、Ｖｅｒｓｔｅｅｇｅｎ，Ｒ．Ｍ．ら、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２０１３，５２，１４１１２−１４１１６に記載の通り合成した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）によるスペクトルは発表データと一致した。
【０１２７】
実施例１９．  リリース可能なＴＣＯ−サイクリックＡＭＰ
【化２５】
0006625550.tif 000026
サイクリックＡＭＰ（８０ｍｇ、０．２４３ｍｍｏｌ）および（Ｅ）−シクロオクタ−２−エニル４−ニトロフェニルカーボネート（１４２ｍｇ、０．４８６ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（８ｍＬ）に溶解した。４−ジメチルアミノピリジン（２３８ｍｇ、１．９４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を３０℃で１８時間撹拌した。溶媒を高真空下で除去し、移動相としてＣＨ２Ｃｌ２中の１５％  ＭｅＯＨを用いた分取カラムクロマトグラフィーの後に、白い泡として表題生成物を得た。収量＝４５ｍｇ（３８％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ７．６１（ｓ，１Ｈ），７．５７−７．４１（ｍ，２Ｈ），７．１９（ｂｓ，１Ｈ），７．０３（ｓ，１Ｈ），６．８１（ｂｓ，１Ｈ），６．４４（ｓ，１Ｈ），６．３８（ｓ，１Ｈ），６．０６（ｂｓ，１Ｈ），５．５３−５．３９（ｍ，２Ｈ），５．３２（ｓ，２Ｈ），５．２４（ｓ，１Ｈ），４．４８（ｂｓ，２Ｈ），４．１６（ｓ，１Ｈ），４．００（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８３−３．６１（ｍ，３Ｈ），３．６０−３．５０（ｍ，１Ｈ），３．３５（ｓ，１Ｈ），２．６８（ｓ，４Ｈ），２．０３−１．９０（ｍ，２Ｈ），１．７５−１．４０（ｍ，３Ｈ），１．３３（ｓ，３Ｈ），１．０５（ｓ，３Ｈ），０．７４（ｄｄ，Ｊ１＝８．２Ｈｚ，Ｊ２＝１３．６Ｈｚ，６Ｈ）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：Ｃ１９Ｈ２５Ｎ５Ｏ８Ｐ［Ｍ＋１］＋の計算値４８２．１４４１；測定値４８２．１４６１。
【０１２８】
実施例２０．  リリース可能なＴＣＯ−化合物３
【化２６】
0006625550.tif 000027
化合物３（１３２ｍｇ、０．４１３ｍｍｏｌ）および（Ｅ）−シクロオクタ−２−エニル４−ニトロフェニルカーボネート（８０ｍｇ、０．２７５ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解した。トリエチルアミン（１６７ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１８時間撹拌した。溶媒を高真空下で除去し、移動相としてＣＨ２Ｃｌ２中の１０％  ＭｅＯＨを用いた分取カラムクロマトグラフィーの後に、白い泡として表題生成物を得た。収量＝７０ｍｇ（３６％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ８．２８（ｓ，１Ｈ），５．９３（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），５．８９−５．７８（ｍ，１Ｈ），５．５４（ｂｓ，１Ｈ），５．２８（ｂｓ，１Ｈ），４．７３（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），４．３７−４．３１（ｍ，１Ｈ），４．２３−４．１３（ｍ，３Ｈ），３．９２（ｄ，Ｊ＝１０．９Ｈｚ，１Ｈ），３．７３（ｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，１Ｈ），３．６５−３．４０（ｍ，１Ｈ），３．３５（ｓ，１Ｈ），３．３１（ｓ，１Ｈ），２．４７−２．３０（ｍ，１Ｈ），２．１０−１．７５（ｍ，４Ｈ），１．７５−１．５７（ｍ，２Ｈ），１．５３（ｍ，１Ｈ），１．２６（ｂｓ，１Ｈ），１．１８−１．０６（ｍ，２Ｈ），０．９１−０．７４（ｍ，１Ｈ）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：Ｃ２２Ｈ２８Ｎ６Ｏ６［Ｍ＋１］＋の計算値４７３．２１４９；測定値４７３．２１１７。
【０１２９】
前述の発明は、明確に理解するために例示および例によってある程度詳しく説明されてきたが、添付された特許請求の範囲内で、ある特定の変更および修正を行ってもよいことを当業者なら理解するであろう。さらに、本明細書に記載の各参考文献は、各参考文献が参照により個別に組み込まれる場合と同程度に、その全体が参照により組み込まれる。本願と本明細書に記載の参考文献との間に矛盾が存在する場合は、本願が優先するものとする。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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