(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
炎症性腸疾患患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を指標とする、生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患の検出を補助する方法。
【請求項２】
以下の工程を備える、生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患の検出を補助する方法：
１）炎症性腸疾患患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定する工程、
２）前記ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定値を基準値と比較する工程、および
３）前記測定値が前記基準値よりも高値であるか否かを判定する工程。
【請求項３】
前記工程３）において、前記測定値が前記基準値よりも高値であることが、前記生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患であることを示す、請求項２に記載の検出を補助する方法。
【請求項４】
前記炎症性腸疾患がクローン病または潰瘍性大腸炎である、請求項１ないし３に記載の検出を補助する方法。
【請求項５】
前記生物学的製剤が、抗ＴＮＦα抗体、可溶性ＴＮＦ受容体、抗ＩＬ−６受容体抗体、抗ＩＬ−２受容体抗体、抗αインテグリン抗体およびアンチセンスＮＦκＢからなる群から選択される少なくとも１つである、請求項１ないし４のいずれかに記載の検出を補助する方法。
【請求項６】
以下の工程を備える、抗生剤を投与する対象となる炎症性腸疾患患者の選択を補助する方法：
１）炎症性腸疾患患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定する工程；
２）前記ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定値を基準値と比較する工程；および
３）前記測定値が前記基準値より高値であるか否かを判定する工程。
【請求項７】
前記工程３）において、前記測定値が前記基準値よりも高値であることが、前記患者を抗生剤を投与する対象であることを示す、請求項６に記載の選択を補助する方法。
【請求項８】
前記炎症性腸疾患がクローン病または潰瘍性大腸炎である、請求項６または７に記載の選択を補助する方法。
【請求項９】
以下の工程を備える、ＭＲ１００７を投与する対象となる炎症性腸疾患患者の選択を補助する方法：
１）炎症性腸疾患患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定する工程；
２）前記ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定値を基準値と比較する工程；および
３）前記測定値が前記基準値より高値であるか否かを判定する工程。
【請求項１０】
前記工程３）において、前記測定値が前記基準値よりも高値であることが、前記患者をＭＲ１００７を投与する対象であることを示す、請求項９に記載の選択を補助する方法。
【請求項１１】
前記炎症性腸疾患がクローン病または潰瘍性大腸炎である、請求項９または１０に記載の選択を補助する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ｓＣＤ１４−ＳＴ（別名：プレセプシン）による、生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患の検出方法、生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患患者の選択方法、抗生剤等（抗生剤および／または炎症に対する新たな治療薬（例えば、抗ＣＤ１４抗体融合蛋白質、特にＭＲ１００７が挙げられる。）をいう。以下同じ。）を投与する対象となる炎症性腸疾患患者の選択方法、または抗生剤等が投与されている炎症性腸疾患患者における前記抗生剤等の投与終了タイミングの決定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ：Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｂｏｗｅｌ  Ｄｉｓｅａｓｅ）は、主として消化管に原因不明の炎症を起こす慢性疾患の総称であり、一般的には、消化管のどこにでも炎症を起こす可能性があるクローン病（ＣＤ：Ｃｒｏｈｎ  Ｄｉｓｅａｓｅ）と、病変が大腸に限局する潰瘍性大腸炎（ＵＣ：Ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ  Ｃｏｌｉｔｉｓ）とに区別される（非特許文献１）。【０００３】
本疾患は炎症が慢性的に繰り返される特徴を有し、寛解と再燃とを繰り返した結果、大腸癌、大腸穿孔等の形質的異常を来す。この状態においては、最終的に手術による大腸切除が必要となることにより、炎症段階での内科的治療が最重要課題となっている。【０００４】
一般的な内科的治療法としては、栄養療法と薬物療法があり、これらは併用される場合がある。薬物療法では、抗炎症剤である５−ＡＳＡ（５−アミノサリチル酸）製剤（ペンタサ（Ｒ）、アサコール（Ｒ）、サラゾピン（Ｒ）など）が第一選択薬であるが、これらで十分な効果が得られない場合には、より強力な抗炎症作用をもつステロイド（プレドニゾロン）が併用される場合がある。これらの治療によっても明らかな改善が得られない重症例や難治例では、生物学的製剤（抗ＴＮＦα抗体  レミケード（Ｒ）、ヒュミラ（Ｒ）；可溶性ＴＮＦ受容体  エンブレル（Ｒ））が使用される。【０００５】
しかしながら、生物学的製剤に反応せず、治療効果が見られない患者や、治療開始時には高い効果を発揮していたが、長期間の使用に伴い効果が減弱する患者も存在する。インフリキシマブ（レミケード（Ｒ））またはアダリムマブ（ヒュミラ（Ｒ））を用いる抗ＴＮＦα抗体療法を長期間（２〜９０カ月、中央値１５カ月）行った場合の反応性の累積喪失率は、１年で１７％、３年で３８％、５年で５９％であったという報告がある（非特許文献２）。また、ヒュミラを長期間使用した患者では、最終的に７０％（２３例中１６例）が使用を中止し（無効６例、効果減弱８例、副作用１例、６カ月後に寛解１例）、累積中止率は６カ月で５０％、１２カ月で６５％、２４カ月で７２％であったという報告もある（非特許文献３）。【０００６】
生物学的製剤の治療効果減弱の原因としては、中和抗体の出現等が考えられるが、それだけが原因ではないとも考えられている。このような患者では、治療効果が見られないまたは見られなくなった生物学的製剤から、別の生物学的製剤にスイッチして生物学的製剤による治療を行う場合がある。【０００７】
ＩＢＤの治療に使用される、また治験等で使用が試みられている生物学的製剤は、ＴＮＦ−α、α４インテグリン等のサイトカインを標的とするものであり、副作用として、免疫抑制による感染症などがある。特に、寛解導入に至らなかった患者や、寛解と再燃とを繰り返した患者では、腸管粘膜のバリア機能の破綻により、腸管内細菌やエンドトキシンなどが粘膜バリアを通過して体内に移行するバクテリアルトランスロケーション（ＢＴ：Ｂａｃｔｅｒｉａｌ  Ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ）を起こしやすく、細菌感染による合併症の原因となる。【０００８】
抗生剤は、ＩＢＤの治療における一般的な選択薬ではないが、肛門周辺部に炎症が起きている患者への使用や、併用療法として使用されている。また、抗生剤は、管腔の細菌が原因であることが疑われるＩＢＤ患者に使用される。特に原因菌が特定されていない場合は、抗菌スペクトルが広い抗生剤が使用されるものの、腸内細菌フローラを悪化させ、ＩＢＤの主要な症状の一つである下痢を助長するとの報告もある（非特許文献４）。【０００９】
そのため、ＩＢＤ患者において、抗生剤を投与すべき患者を適切に選択し、さらに抗生剤の投与期間を適正化する方法が求められている。
また、抗生剤による菌の除去だけでなく、感染に関連する炎症に対する新たな治療法も求められている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Bosaniら、"Biologic targeting in the treatment of inflammatory bowel diseases"、Biologics 3(1): 77-97，2009年7月13日（Published online）.
【非特許文献２】Assaら、"Long-term outcome of tumor necrosis factor alpha antagonist's treatment in pediatric Crohn's disease"、Journal of Crohn's and Colitis，2012年4月6日（Published online）.
【非特許文献３】McDermottら、"Efficacy of Adalimumab as a long term maintenance therapy in ulcerative colitis"、Journal of Crohn's and Colitis，2012年4月20日（Published online）.
【非特許文献４】Perencevich & Burakoff、"Use of Antibiotics in the Treatment of Inflammatory Bowel Disease"、Inflammatory Bowel Disease 12(7): 651-664，2006年．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
ＩＢＤ患者の初期症状は炎症であり、一般的な炎症性マーカー（ＣＲＰ、ＩＬ−６）が上昇する。この段階では、腸の異常は存在するが、細菌感染を伴わないため、これらマーカーの上昇は炎症の度合いの指標となるものの、細菌感染を示すものではない。【００１２】
細菌感染を伴う全身炎症性症候群である敗血症の診断マーカーとして、ｓＣＤ１４−ＳＴ（可溶性ＣＤ１４抗原サブタイプ、別名：プレセプシン）が有用であることが報告されている（国際公開第２００５／１０８４２９号）。また、ｓＣＤ１４−ＳＴは、食細胞が外来微生物や異物を貪食し消化する過程で産生されること、関節炎のような局所における自己免疫反応や感染に伴う貪食が生じている疾患において、関節液中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度が上昇することを検出可能であることが報告されている（国際公開第２００９／１４２３０３号）。しかし、ｓＣＤ１４−ＳＴが、ＩＢＤ患者において、抗生剤を投与すべき患者を適切に選択し、さらに抗生剤の投与期間を適正化する方法で使用するマーカーとして有用であるか否かについて検討されたことはなかった。【００１３】
本発明の課題は、通常の治療以外に抗生剤による菌の除去や炎症に対する新たな治療法（抗ＣＤ１４抗体融合蛋白質、特にＭＲ１００７による治療が含まれる。）が必要なＩＢＤ患者を適切に選択し、また、抗生剤等の投与期間を適正化する方法を提供することにある。すなわち、ＩＢＤにおける抗生剤等の適正使用という課題を解決することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明者は、正常人、通常の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）患者および生物学的製剤（レミケード（Ｒ）、一般名  インフリキシマブ）に反応しない（不応答）ＩＢＤ患者の３群について、血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定して比較した。すると、正常人群と通常のＩＢＤ患者群との間ではｓＣＤ１４−ＳＴ濃度に差異が認められないが、正常人群および通常のＩＢＤ患者群と、生物学的製剤に反応しないＩＢＤ患者群との間では、血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度に差異が認められ、しかもレミケード不応答ＩＢＤ患者のプレセプシン濃度は敗血症患者に匹敵するほど高値を示すことが見出された。このことは、レミケード不応答患者では全身性の感染が起きていないとしても、腸粘膜への激しい菌の侵入と激しい炎症（貪食）が起きている可能性を示すものと考えられる。このような患者においては、通常の治療以外に抗生剤による菌の除去や炎症に対する新たな治療法（抗ＣＤ１４抗体融合蛋白質、特にＭＲ１００７による治療が含まれる。）が必要と考えられる。プレセプシンはＩＢＤ患者のうち、抗生剤等の使用対象者の選択、その治療の終了時期、他の治療法の選択のための新たな指標として有用である。本発明の実施形態では、血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を指標として、生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患の検出、生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患患者の選択、抗生剤等を投与する対象となる炎症性腸疾患患者の選択、または抗生剤等を投与している炎症性腸疾患患者における当該抗生剤等の投与終了タイミングの決定をする方法を提供する。
より詳細には、本発明は、例えば以下に記載するとおりである。【００１５】
本発明は、例えば、以下に記載する検出方法、選択方法、決定方法または治療方法を提供する。
（１−１）被験者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を指標とする、生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患の検出方法。
（１−２）被験者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定する工程を備える、生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患の検出方法。
（１−３）以下の工程を備える、生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患の検出方法：
１）被験者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定する工程；
２）前記ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定値を基準値と比較する工程；および
３）前記測定値が前記基準値よりも高値であるか否かを判定する工程。
（１−４）さらに以下の工程を備える、上記（１−３）に記載の検出方法：
４）前記測定値が前記基準値よりも高値である場合に、前記生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患が検出されたと判断する工程。
（１−５）前記炎症性腸疾患がクローン病または潰瘍性大腸炎である、上記（１−１）ないし（１−４）のいずれかに記載の検出方法。
（１−６）前記生物学的製剤が免疫抑制剤である、上記（１−１）ないし（１−５）のいずれかに記載の検出方法。
（１−７）前記生物学的製剤が、抗ＴＮＦα抗体、可溶性ＴＮＦ受容体、抗ＩＬ−６受容体抗体、抗ＩＬ−２受容体抗体、抗αインテグリン抗体およびアンチセンスＮＦκＢからなる群から選択される少なくとも１つである、上記（１−１）ないし（１−６）のいずれかに記載の検出方法。
（１−８）前記基準値が正常値である、上記（１−１）ないし（１−７）のいずれかに記載の検出方法。
（１−９）前記被験者が、炎症性腸疾患患者である、上記（１−１）ないし（１−８）のいずれかに記載の検出方法。
（１−１０）前記基準値が、５００ｐｇ／ｍＬである、上記（１−３）ないし（１−９）のいずれかに記載の検出方法。【００１６】
（２−１）患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を指標とする、抗生剤および／またはＭＲ１００７を投与する対象となる炎症性腸疾患患者の選択方法。
（２−２）患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定する工程を備える、抗生剤および／またはＭＲ１００７を投与する対象となる炎症性腸疾患患者の選択方法。
（２−３）以下の工程を備える、抗生剤および／またはＭＲ１００７を投与する対象となる炎症性腸疾患患者の選択方法：
１）患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定する工程；
２）前記ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定値を基準値と比較する工程；および
３）前記測定値が前記基準値よりも高値であるか否かを判定する工程。
（２−４）炎症性腸疾患患者において、抗生剤および／またはＭＲ１００７を投与する対象となる患者を選択するための方法であって、以下の工程を備えることを特徴とする方法：
１）患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定する工程；
２）前記ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定値を基準値と比較する工程；および
３）前記測定値が前記基準値よりも高値であるか否かを判定する工程。
（２−５）さらに以下の工程を備える、上記（２−３）または（２−４）に記載の選択方法：
４）前記測定値が前記基準値よりも高値である場合に、前記患者を抗生剤および／またはＭＲ１００７を投与する対象として選択する工程。
（２−６）前記炎症性腸疾患患者がクローン病患者または潰瘍性大腸炎患者である、上記（２−１）ないし（２−５）のいずれかに記載の選択方法。
（２−７）前記抗生剤および／またはＭＲ１００７を投与する対象となる炎症性腸疾患患者が、生物学的製剤に不応答の患者、生物学的製剤に応答しなくなった患者、生物学的製剤による治療効果が減弱した患者、または生物学的製剤を投与されていて、細菌感染を伴う患者である、上記（２−１）ないし（２−６）のいずれかに記載の選択方法。
（２−８）前記生物学的製剤が免疫抑制剤である、上記（２−７）に記載の選択方法。
（２−９）前記生物学的製剤が、抗ＴＮＦα抗体、可溶性ＴＮＦ受容体、抗ＩＬ−６受容体抗体、抗ＩＬ−２受容体抗体、抗αインテグリン抗体およびアンチセンスＮＦκＢからなる群から選択される少なくとも１つである、上記（２−７）または（２−８）に記載の選択方法。
（２−１０）前記基準値が、５００ｐｇ／ｍＬである、上記（２−３）ないし（２−９）のいずれかに記載の選択方法。【００１７】
（３−１）患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を指標とする、抗生剤および／またはＭＲ１００７が投与されている炎症性腸疾患患者における前記抗生剤および／またはＭＲ１００７の投与終了タイミングの決定方法。
（３−２）患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定する工程を備える、抗生剤および／またはＭＲ１００７が投与されている炎症性腸疾患患者における前記抗生剤および／またはＭＲ１００７の投与終了タイミングの決定方法。
（３−３）以下の工程を備える、抗生剤および／またはＭＲ１００７が投与されている炎症性腸疾患患者における前記抗生剤および／またはＭＲ１００７の投与終了タイミングの決定方法：
１）患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定する工程；
２）前記ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定値を基準値と比較する工程；および
３）前記測定値が前記基準値以下であるか否かを判定する工程。
（３−４）さらに以下の工程を備える、上記（３−３）に記載の決定方法：
４）前記測定値が前記基準値以下である場合に、前記患者に対する前記抗生剤および／またはＭＲ１００７の投与終了を決定する工程。
（３−５）前記炎症性腸疾患患者がクローン病患者または潰瘍性大腸炎患者である、上記（３−１）ないし（３−４）のいずれかに記載の決定方法。
（３−６）前記患者が生物学的製剤に不応答の患者、生物学的製剤に応答しなくなった患者、生物学的製剤による治療効果が減弱した患者、または生物学的製剤を投与されていて、細菌感染を伴う患者である、上記（３−１）ないし（３−５）のいずれかに記載の決定方法。
（３−７）前記生物学的製剤が免疫抑制剤である、上記（３−６）に記載の決定方法。
（３−８）前記生物学的製剤が、抗ＴＮＦα抗体、可溶性ＴＮＦ受容体、抗ＩＬ−６受容体抗体、抗ＩＬ−２受容体抗体、抗αインテグリン抗体およびアンチセンスＮＦκＢからなる群から選択される少なくとも１つである、上記（３−６）または（３−７）に記載の決定方法。
（３−９）前記基準値が、正常値である、上記（３−１）ないし（３−８）のいずれかに記載の決定方法。
（３−１０）前記基準値が、５００ｐｇ／ｍＬである、上記（３−３）ないし（３−８）のいずれかに記載の決定方法。【００１８】
（４−１）患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を指標として、抗生剤および／またはＭＲ１００７を投与することを含む、生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患の治療方法。
（４−２）下記の工程を含むことを特徴とする、炎症性腸疾患を治療する方法：
１）患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴを測定する工程、
２）検体中のｓＣＤ１４−ＳＴの測定値を指標とし、抗生剤および／またはＭＲ１００７を投与する患者を選択する工程、および
３）選択された患者に対し抗生剤および／またはＭＲ１００７を投与する工程。
（４−３）検体中のｓＣＤ１４−ＳＴの測定値を指標とし、抗生剤および／またはＭＲ１００７を投与する患者を選択する工程が下記の工程を含むことを特徴とする、上記（４−２）に記載の方法：
１）検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ測定値を基準値と比較する工程、および
２）検体の測定値が基準値より高値である場合、抗生剤および／またはＭＲ１００７の投与対象として患者を選択する工程。
（４−４）さらに下記の工程を含むことを特徴とする、上記（４−１）〜（４−３）のいずれかに記載の方法：
１）抗生剤および／またはＭＲ１００７が投与されている患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴを経時的に測定する工程、
２）検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ測定値を予め定めた基準値と比較する工程、および
３）検体の測定値が予め定めた基準値を下回った場合、抗生剤および／またはＭＲ１００７の投与終了を決定する工程。
（４−５）前記基準値が、正常値である、上記（４−１）ないし（４−４）のいずれかに記載の方法。
（４−６）前記炎症性腸疾患が、潰瘍性大腸炎またはクローン病である上記（４−１）〜（４−５）のいずれかに記載の方法。
（４−７）前記患者が、炎症性腸疾患患者である上記（４−１）ないし（４−６）のいずれかに記載の方法。【００１９】
また、本発明の一態様によると、以下に記載するキットが提供される。
（５）血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定装置を備える、生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患の検出キット。
（６）生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患を検出するためのｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定装置を備えるキットの製造における、抗プレセプシン抗体および／または組換え型可溶性ＣＤ１４フラグメントの使用。【００２０】
さらに、本発明の一態様によると、以下に記載する血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定方法の用途が提供される。
（７）生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患を検出するための、ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定方法の使用方法。
（８）生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患患者を選択するための、ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定方法の使用方法。
（９）抗生剤および／またはＭＲ１００７が投与されている炎症性腸疾患患者における前記抗生剤の投与終了タイミングを決定するための、ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定方法の使用方法。【００２１】
また、本発明の一態様によると、抗生剤を投与することによる、炎症性腸疾患の治療方法が提供される。
（１０−１）以下の工程を備える、抗生剤を投与することによる、炎症性腸疾患の治療方法。
１）患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴを測定する工程、
２）検体中のｓＣＤ１４−ＳＴの測定値を指標とし、抗生剤を投与する患者を選択する工程、および
３）選択された患者に対し抗生剤を投与する工程。
（１０−２）前記炎症性腸疾患がクローン病または潰瘍性大腸炎である、上記（１０−１）に記載の治療方法。
（１０−３）前記炎症性腸疾患が生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患であり、前記生物学的製剤が、抗ＴＮＦα抗体、可溶性ＴＮＦ受容体、抗ＩＬ−６受容体抗体、抗ＩＬ−２受容体抗体、抗αインテグリン抗体およびアンチセンスＮＦκＢからなる群から選択される少なくとも１つである、上記（１０−１）または（１０−２）に記載の治療方法。【００２２】
さらに、本発明の一態様によると、ＭＲ１００７を投与することによる、炎症性腸疾患の治療方法が提供される。
（１１−１）以下の工程を備える、ＭＲ１００７を投与することによる、炎症性腸疾患の治療方法。
１）患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴを測定する工程、
２）検体中のｓＣＤ１４−ＳＴの測定値を指標とし、抗生剤を投与する患者を選択する工程、および
３）選択された患者に対しＭＲ１００７を投与する工程。
（１１−２）前記炎症性腸疾患がクローン病または潰瘍性大腸炎である、上記（１１−１）に記載の治療方法。
（１１−３）前記炎症性腸疾患が生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患であり、前記生物学的製剤が、抗ＴＮＦα抗体、可溶性ＴＮＦ受容体、抗ＩＬ−６受容体抗体、抗ＩＬ−２受容体抗体、抗αインテグリン抗体およびアンチセンスＮＦκＢからなる群から選択される少なくとも１つである、上記（１１−１）または（１１−２）に記載の治療方法。
【発明の効果】
【００２３】
本発明によれば、抗生剤等を投与すべきＩＢＤ患者を適切に選択し、また、抗生剤等の投与期間を適正化することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】図１は、正常人２０例、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）患者５例およびレミケード治療に反応しなかったＩＢＤ患者５例の血液検体中プレセプシン濃度測定結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
以下、本発明について詳細に説明する。
［ｓＣＤ１４−ＳＴ］
ｓＣＤ１４−ＳＴ（可溶性ＣＤ１４抗原サブタイプ、別名：プレセプシン（Ｐｒｅｓｅｐｓｉｎ））は可溶性ＣＤ１４の分子種の一つであり、非還元条件下ＳＤＳ−ＰＡＧＥにおいて分子量１３±２ｋＤａに泳動されることを特徴とし、ＣＤ１４のＮ端部を保持しているものである。また、ｓＣＤ１４−ＳＴは全長ＣＤ１４と比べると、Ｃ端側が大きく欠失したアミノ酸配列を有しており、両者は立体構造の点で異なるため、異なる免疫原性を示す。そのため、結合する抗体により両者を区別することが可能であり、ｓＣＤ１４−ＳＴは配列番号２に記載の１６アミノ酸残基からなるペプチドを抗原として作製した抗体に特異的に結合する、という性質を有する。さらに、ｓＣＤ１４−ＳＴは、配列番号３に記載のアミノ酸配列の１７番目〜２６番目からなるペプチドに結合する抗体に特異的に結合すること、３Ｃ１０抗体に結合しないこと、ＭＥＭ−１８抗体に結合しないこと、ＬＰＳ結合能を有さないこと、ヒト血液から得られうること、という特徴のうち任意の一つ以上を付加的に有する。ｓＣＤ１４−ＳＴは、アミノ酸配列としては、Ｎ末端配列に配列番号１のアミノ酸配列を有する、という特徴を有する。より詳細には、Ｎ末端が配列番号３に記載のアミノ酸配列の１位であり、Ｃ末端が配列番号３に記載のアミノ酸配列の５９〜９０位のいずれかである、という特徴により特定することができる。ｓＣＤ１４−ＳＴは、詳細には国際公開第２００５／１０８４２９号に開示されている。本明細書中においてｓＣＤ１４−ＳＴは、特に断りのない限りヒトｓＣＤ１４−ＳＴを意味する。
【００２６】
血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴの測定は、公知の手法または公知の装置により行うことができる。例えば、国際公開第２００４／０４４００５号または国際公開第２００５／１０８４２９号に開示されている、ｓＣＤ１４−ＳＴを特異的に検出する免疫測定系を用いることができる。配列番号２に記載の１６アミノ酸残基からなるペプチドを抗原として作製した抗体は、ｓＣＤ１４−ＳＴを特異的に検出する抗体である。従って、この抗体を用いてｓＣＤ１４−ＳＴを測定すればよい。具体的には、配列番号２に記載の１６アミノ酸残基からなるペプチドを抗原として作製した抗体と、配列番号３に記載のアミノ酸配列の１７位〜２６位からなるペプチドに結合する抗体または該抗体と競合する抗体（Ｆ１１０６−１３−３抗体またはＦ１０３１−８−３抗体）との組み合わせによるサンドイッチ免疫測定系が好適である。なお、配列番号２に記載の１６アミノ酸残基からなるペプチドを抗原として作製した抗体は、配列番号２に記載の１６アミノ酸残基からなるペプチドに特異的に結合する抗体でもある。
【００２７】
血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定値としては、定量値、半定量値または定性値のいずれを用いてもよい。半定量値を用いる場合、ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を０、１、２、３あるいは−、＋、＋＋、＋＋＋、といった段階で表示できる。この段階は、定量的なｓＣＤ１４−ＳＴ濃度と相関するので、ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度が予め定めた基準値以上であるかどうかは、半定量の段階表示と定量的なｓＣＤ１４−ＳＴ濃度との相関関係に基づき判断すればよい。あるいは、半定量の場合、基準値未満を０または−といった段階に設定してもよい。定性値を用いる場合、基準値未満である場合を陰性とし、基準値以上である場合を陽性となるよう設定すればよい。
【００２８】
血液検体としては、特に限定されず、全血、血漿、血清のいずれを用いてもよい。また、血液検体は、採血後に、ＥＤＴＡ、ヘパリン、クエン酸等の抗凝固剤を加えた検体でもよい。
【００２９】
本発明においては、被験者由来または患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定は、経時的に行ってもよい。測定を経時的に行うことにより、検出、選択または決定を、より適切なタイミングで行うことができるからである。
特に、抗生剤を投与する場合には、投与対象患者の選択、投与開始、投与終了および／または投与継続を適切に選択または決定することで、患者の腸内細菌フローラの悪化を防ぐことが可能となる。測定の時期としては、生物学的製剤に不応答が疑われる場合、または抗生剤投与の開始、終了もしくは継続を決定する必要がある場合、最初のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度測定日から、１日ごと、２日ごと、あるいは３日目、５日目および／または７日目など適宜設定すればよい。
【００３０】
［生物学的製剤］
本発明において、生物学的製剤は炎症性腸疾患の治療に使用しうるものであれば特に限定されない。上記生物学的製剤として、例えば、レミケード（Ｒ）（一般名  インフリキシマブ：田辺三菱製薬、セントコア）、ヒュミラ（Ｒ）（一般名  アダリムマブ：アボット・ラボラトリーズ）、シンポニー（Ｒ）（一般名  ゴリムマブ：ヤンセンファーマ）、シムジア（Ｒ）（一般名  セントリズマブ  ペゴル：ユーシービーファーマ）等の抗ＴＮＦα抗体；エンブレル（Ｒ）（一般名  エタネルセプト：ワイス）等の可溶性ＴＮＦ受容体；アクテムラ（Ｒ）（一般名  トシリズマブ：中外製薬）等の抗ＩＬ−６受容体抗体；シムレクト（Ｒ）（一般名  バシリキシマブ：ノバルティスファーマ）等の抗ＩＬ−２受容体抗体；タイサブリ（Ｒ）（一般名  ナタリズマブ：エランファーマインターナショナル）等の抗α４インテグリン抗体；オレンシア（Ｒ）（一般名  アバタセプト：ブリストル・マイヤーズ  スクイブ）等のＣＤ２８−ＣＤ８０／８６相互作用阻害薬；リツキサン（Ｒ）（一般名  リツキシマブ：中外製薬）等の抗ＣＤ２０抗体；および、ＮＦκＢデコイオリゴ（アンジェスＭＧ）等のアンチセンスＮＦκＢなどが挙げられる。
【００３１】
生物学的製剤としては、免疫抑制剤が好ましく、抗ＴＮＦα抗体、可溶性ＴＮＦ受容体、抗ＩＬ−６受容体抗体、抗ＩＬ−２受容体抗体、抗αインテグリン抗体およびアンチセンスＮＦκＢからなる群から選択される少なくとも１つがより好ましい。抗ＴＮＦα抗体としては、抗ヒトＴＮＦαモノクローナル抗体またはそのＰＥＧ化誘導体が好ましい。ＰＥＧ化誘導体とは、具体的には抗ヒトＴＮＦαモノクローナル抗体のＦｃ領域を除いたＦａｂ’断片に、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を結合させた誘導体が挙げられる。可溶性ＴＮＦ受容体にはＴＮＦＲの誘導体が含まれ、具体的にはヒトＴＮＦＲ−ＩＩの細胞外ドメインとヒトＩｇＧ１のＦｃ領域との融合蛋白質が好ましい。なかでも、ＩＢＤを適用疾患とするまたはＩＢＤにおいて治験がすすめられている生物学的製剤が好ましく、使用者数が多いという観点から、抗ＴＮＦα抗体としては、レミケード（Ｒ）（一般名  インフリキシマブ；抗ヒトＴＮＦαモノクローナル抗体製剤）、ヒュミラ（Ｒ）（一般名  アダリムマブ；ヒト型抗ヒトＴＮＦαモノクローナル抗体製剤）またはシムジア（Ｒ）（一般名  セントリズマブ  ペゴル；ＰＥＧ化抗ヒトＴＮＦαモノクローナル抗体製剤）が好ましく、可溶性ＴＮＦ受容体としては、エンブレル（Ｒ）（一般名  エタネルセプト；完全ヒト型可溶性ＴＮＦα／ＬＴαレセプター製剤）、抗α４インテグリン抗体としては、タイサブリ（Ｒ）（一般名  ナタリズマブ）が好ましい。
【００３２】
［炎症性腸疾患］
本発明において、炎症性腸疾患はクローン病または潰瘍性大腸炎が好ましい。
【００３３】
（クローン病の診断および重症度）
クローン病の診断は、従来公知の診断基準に従って行えばよいが、Ｘ線検査（バリウムによる小腸造影検査や注腸造影検査）や内視鏡検査による所見で、縦走潰瘍、敷石像または非乾酪性類上皮細胞肉芽腫のような特徴的な所見が認められることが好ましい。
クローン病の重症度評価法は、特に限定されないが、ＩＯＩＢＤアセスメントスコアまたはＣＤＡＩ（クローン病活動指数）を用いることが好ましい。ＩＯＩＢＤアセスメントスコアでは、（１）腹痛、（２）１日６回以上の下痢または粘血便、（３）肛門部病変、（４）瘻孔、（５）その他の合併症、（６）腹部腫瘤、（７）体重減少、（８）３８℃以上の発熱、（９）腹部圧痛および（１０）１０ｇ／ｄｌの血色素の１０項目各１点の合計を求め、合計点数をスコアとする。スコアが大きいほど重症である。スコアが１または０であり、血液検査において赤沈値およびＣＲＰが正常化した状態を寛解と評価することが好ましい。ＣＤＡＩは、（１）水様便または軟便の回数、（２）腹痛の程度、（３）主観的な一般状態、（４）腸管外合併症の存在、（５）止瀉薬の使用、（６）腹部腫瘤、（７）ヘマトクリット、（８）体重をスコア化し、加算することにより求められる指標である。１５０未満を緩解、１５０−２２０を軽症、２２０−３００を中等症、３００−４５０を重症、４５０以上を激症とすることが好ましい。
【００３４】
（潰瘍性大腸炎の診断および重症度）
潰瘍性大腸炎の診断は、従来公知の診断基準に従って行えばよいが、臨床症状、内視鏡検査所見、注腸Ｘ線検査所見、病理学的所見(細胞の検査)に基づき、その他の腸炎（感染性腸炎、薬剤性腸炎、放射線性腸炎、さらに虚血性腸炎やクローン病など）を除外することにより行われることが好ましい。
潰瘍性大腸炎の重症度評価法は、特に限定されないが、例えば、血便や下痢の程度、発熱や頻脈および貧血の有無、血液検査などにより判定することが好ましい。血便や下痢の程度が軽く、全身症状がないものを軽症、軽症と重症の間を中等症、（１）１日６回以上の下痢、（２）血便の程度が強い、（３）３７．５℃以上の発熱、（４）脈拍が１分間に９０回以上の頻脈、（５）ヘモグロビン値が１０ｇ／ｄｌ以下の貧血、（６）３０ｍｍ／時以上の血沈の亢進（血液検査による炎症の程度の判定）の６項目のうち４つ以上を満たすものを重症、さらに１５回以上の血性下痢、３８℃以上の発熱、１００００／ｍｍ３以上の白血球増多、強い腹痛のある、のすべてを満たす場合は劇症型と判定することが好ましい。
【００３５】
［基準値］
本発明において、基準値は、生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患患者の集団と、正常人および通常のＩＢＤ患者（「生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患者」ではないＩＢＤ患者）の集団とを識別するために予め設定される、血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度である。
基準値は、偽陽性と偽陰性とのバランスがとれるようにスクリーニング効率がよい値に設定してもよいし、生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患患者の出現頻度が急激に上昇し始める値に設定してもよいし、病理学的または生理学的に理論づけられた値に設定してもよいし、統計的に定められた値に設定してもよい。
より詳細には、基準値は、例えば、医学的に健康な人の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定値の平均値および標準偏差（ＳＤ）を求め、平均値＋０．５ＳＤ〜＋５ＳＤの範囲内、具体的には、平均値＋ＳＤ、平均値＋２ＳＤ、平均値＋３ＳＤなどに設定してもよいし、前記平均値の５〜９５、１０〜９０、１５〜８５または２５〜７５パーセンタイル値に設定してもよい。基準値は、前記平均値＋２ＳＤまたは平均値＋３ＳＤに設定することが好ましい。具体的な数値としては、５００ｐｇ／ｍＬまたは６００ｐｇ／ｍＬが挙げられ、好ましくは６００ｐｇ／ｍＬであるが、これらに限定されるものではない。
【００３６】
［抗生剤］
抗生剤は、特に限定はされないが、例えば、ペニシリン系、ペネム系、カルバペネム系、セフェム系、モノバクタム系、ホスホマイシン系、グリコペプチド系、アミノ酸配糖体系、マクロライド系、ケトライド系、リンコマイシン系、テトラサイクリン系、ニューキノロン系、スルフォンアミド系、オキサゾリジノン系、ストレプトグラミン系、アゾール系等の抗生剤が挙げられ、これら抗生剤の中から１つまたは複数を適宜選択して用い得る。
【００３７】
また、抗生剤に代えて、または抗生剤とともに、抗ＣＤ１４抗体融合蛋白質（国際公開第２００６／１２９８４９号を参照）、好ましくはＭＲ１００７（Nakamuraら，Critical Care 11 (Supp. 4): P4，2012年）、および／または抗ＩＬ−６抗体（Mudter & Neurath，Inflammatory Bowel Disease 13(8): 1016-1023，2007年）を投与してもよい。
【００３８】
上記抗ＣＤ１４抗体融合蛋白質は、抗ＣＤ１４抗体と蛋白質分解酵素阻害物質とを含有する融合蛋白質であり、上記ＭＲ１００７は、抗ＣＤ１４抗体とインターαインヒビターの改変軽鎖（セリンプロテアーゼ阻害活性断片）との融合蛋白質である。抗ＣＤ１４融合蛋白質は、膜結合型ＣＤ１４および血液凝固系プロテアーゼを標的とすることにより細菌感染症の重症化を防止する効果を示し得る。
【００３９】
ＩＬ−６は、ＴＮＦα同様の炎症性サイトカインであり、Ｔ細胞およびＢ細胞の活性化、Ｃ反応性蛋白（ＣＲＰ）の誘導など、様々な作用を持っている。炎症があれば、ＣＲＰとともにＩＬ−６の濃度も高くなる。活動期ＩＢＤ患者においては、血清および腸管粘膜、特に腸管粘膜でＩＬ−６濃度が増加しており、病状との関連性がかねてから示唆されていた。また、ＩＬ−６が受容体に結合するとＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路で細胞内へシグナルが伝達されるが、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路の制御不全が炎症、発癌に関与することも証明されている。したがって、抗ＩＬ−６抗体により過剰なシグナル伝達を阻害することで、ＩＢＤの改善のみならず、大腸癌の発生も予防できる可能性がある。
【００４０】
抗生剤に代えて、あるいは抗生剤とともに抗ＣＤ１４融合蛋白質もしくはＭＲ１００７または抗ＩＬ−６抗体を投与している場合にも、同様に、ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を指標として、これらの投与対象の選択、これらの投与開始、投与終了および／または投与継続を決定することができる。
【００４１】
抗生剤およびＭＲ１００７は、以下の情報を有する製剤であるのが好ましい。
１）被験者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を指標として、生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患患者に投与する製剤である。
２）被験者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を指標として、生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患患者を検出して、その患者に投与する製剤。
３）炎症性腸疾患患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定して、投与する対象となる炎症性腸疾患患者を選択して、その患者に投与する製剤。
上記情報は、製剤の添付文書、インタビューフォーム、パンフレット、説明書等に記載されて、製剤と同時に、または別々に提供されることができる。
【００４２】
［検出方法、選択方法、決定方法および治療方法］
１．生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患の検出方法
本発明の一態様によると、被験者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を指標とする、生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患の検出方法が提供される。
【００４３】
この検出方法によれば、被験者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を指標として、生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患を検出することにより、効率的なスクリーニングをすることが可能となり、生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患をより早期に検出することができる。その結果、より早期に適切な治療が行われ、総合的アウトカムの改善を期待することができる。
【００４４】
被験者は特に限定されず、炎症性腸疾患の診断がされていてもよいし、されていなくてもよい。炎症性腸疾患の診断がされている被験者は、患者といってもよい。また、炎症性腸疾患の診断がされている場合には、生物学的製剤による治療が必要な患者または実際に生物学的製剤による治療を受けている患者であることが好ましい。炎症性腸疾患患者の特定には、カルプロテクチン（calprotectin）測定を用いてもよい。
【００４５】
生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患は、少なくとも１種類の生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患であれば特に限定されず、治療開始時から反応しない場合であってもよいし、治療開始時には反応していたが、治療の継続により効果が減弱して反応しなくなった場合であってもよい。また、生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患は、生物学的製剤による治療が実際に行われていなくとも、生物学的製剤による治療が行われたとすれば、少なくとも１種類の生物学的製剤に不応答であろう炎症性腸疾患を含む。また、細菌感染を伴う炎症性腸疾患であってもよい。
【００４６】
本発明の生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患の検出方法は、被験者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定する工程を備えることが好ましく、１）被験者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定する工程；２）前記ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定値を基準値と比較する工程；および３）前記測定値が前記基準値よりも高値であるか否かを判定する工程を備えることがより好ましく、さらに４）前記測定値が前記基準値よりも高値である場合に、前記生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患が検出されたと判断する工程を備えることがさらに好ましい。被験者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定する工程の前に、被験者由来の血液検体を準備する工程を備えてもよい。本発明の検出方法は、in vitroで行うことができる。
【００４７】
検体中のｓＣＤ１４−ＳＴの測定値を予め定めた基準値と比較することで、被験者が生物学的製剤に不応答のＩＢＤ患者であるか否かを判定することができる。本発明の生物学的製剤に不応答のＩＢＤの検出方法に用いる基準値としては、健常人の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴの測定値に基づいて設定された正常値を用いることができる。正常値は、健常人の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴの測定結果の平均値もしくは例えば範囲を設定して測定結果を標準化した値を用いることができる。健常人由来の検体の測定値が、測定系のバックグラウンドの値とほぼ同等になるような場合は、測定系におけるバックグラウンドの値の平均値もしくは例えば範囲を設定してバックグラウンドの値を標準化した値を用いてもよい。測定系におけるバックグラウンドの値とは、検体ではなくバッファーやアッセイ溶液などを測定系に添加した場合の測定値である。被験者由来の検体の測定値を標準化した値としては、健常人の平均値＋０．５ＳＤ〜＋５ＳＤ（ＳＤは標準偏差）、健常人測定値の５〜９５、１０〜９０、１５〜８５または２５〜７５パーセンタイル値等を用いることができる。好ましくは健常人の平均値＋ＳＤ、＋２ＳＤまたは＋３ＳＤである。
【００４８】
本発明の生物学的製剤に不応答のＩＢＤの検出方法は、抗生剤および／またはＭＲ１００７を投与する生物学的製剤に不応答のＩＢＤ患者を選択する方法と言い換えることもできる。生物学的製剤に不応答のＩＢＤが検出された被験者は、生物学的製剤に不応答のＩＢＤである可能性が高い患者であり、抗生剤および／またはＭＲ１００７投与の好適な対象となる。ＩＢＤ患者のうち、抗生剤および／またはＭＲ１００７を投与すべきなのは生物学的製剤に不応答のＩＢＤである場合である。血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴの測定値を指標とすることで、生物学的製剤に不応答のＩＢＤであるか否かを検出することができ、抗生剤および／またはＭＲ１００７を投与する生物学的製剤に不応答のＩＢＤ患者を選択することが可能となった。すなわち、本発明の一態様によると、患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴを測定することを特徴とする、抗生剤および／またはＭＲ１００７を投与する生物学的製剤に不応答のＩＢＤ患者を選択する方法が提供される。本発明の抗生剤および／またはＭＲ１００７を投与する生物学的製剤に不応答のＩＢＤ患者を選択する方法は、生物学的製剤に不応答のＩＢＤの検出方法における態様をそのまま準用できる。
【００４９】
２．抗生剤等を投与する対象となる炎症性腸疾患患者の選択方法
本発明の一態様によると、患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を指標とする、抗生剤等（抗生剤および／または炎症に対する治療薬（例えば、抗ＣＤ１４抗体融合蛋白質、特にＭＲ１００７が挙げられる。）をいう。）を投与する対象となる炎症性腸疾患患者の選択方法が提供される。
【００５０】
この選択方法によれば、患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を指標として、炎症性腸疾患患者の中から抗生剤等を投与する対象となる炎症性腸疾患患者を選択することにより、抗生剤等を投与すべき対象を適切に選択することができる。その結果、抗生剤等による治療を必要とする患者に治療が行われ、当該患者における、生存率、合併症の発生率、感染症や副作用の発生率、外科的処置（大腸切除など）の発生率、患者の機能的健康状態、患者ＱＯＬ、治療満足度などの改善を期待することができる。
【００５１】
患者は炎症性腸疾患患者であれば特に限定されず、生物学的製剤による治療を受けていてもよいし、受けていなくてもよい。患者としては、生物学的製剤による治療が必要な患者または実際に生物学的製剤による治療を受けている患者であることが好ましい。
【００５２】
本発明の抗生剤等を投与する対象となる炎症性腸疾患患者の選択方法は、患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定する工程を備えることが好ましく、１）患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定する工程；２）前記ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定値を基準値と比較する工程；および３）前記測定値が前記基準値よりも高値であるか否かを判定する工程を備えることがより好ましく、さらに４）前記測定値が前記基準値よりも高値である場合に、前記患者を、抗生剤等を投与する対象として選択する工程を備えることがさらに好ましい。患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定する工程の前に、患者由来の血液検体を準備する工程を備えてもよい。
【００５３】
検体中のｓＣＤ１４−ＳＴの測定値は、ＩＢＤ患者において生物学的製剤に不応答であるか否かの指標となるため、ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定値を予め定めた基準値と比較することで、抗生剤等を投与する対象となる炎症性腸疾患患者を選択することができる。より詳細には、前記測定値が前記基準値よりも高値である場合には、患者を、抗生剤等を投与する対象となる炎症性腸疾患患者として選択することができる。
【００５４】
前記１．の態様に説明されている健常人の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴの測定値に基づいて設定された正常値を、基準値として用いることができる。例えば、健常人の平均値＋ＳＤ、＋２ＳＤまたは＋３ＳＤである。ｓＣＤ１４−ＳＴの測定値が正常値の範囲内となれば、健常人と同等のレベルにまでＩＢＤが治癒または寛解したとみなすことができる。好ましくは、予め測定しておいた健常人、生物学的製剤に不応答ではないＩＢＤ患者および生物学的製剤に不応答のＩＢＤ患者の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴの測定値を用いて、疾患検出の感度および／または特異度が最適となるように設定したカットオフ値を基準値として用いることができる。例えば５００ｐｇ／ｍＬまたは６００ｐｇ／ｍＬが挙げられ、好ましくは６００ｐｇ／ｍＬであるが、これらに限定されるものではない。
【００５５】
また、本発明の抗生剤等を投与する対象となる炎症性腸疾患患者の選択方法は、前記「４）前記測定値が基準値よりも高値である場合に、前記患者を抗生剤等を投与する対象として選択する工程」の代わりに、「前記測定値が基準値よりも高値である場合に、前記患者を抗生剤等の投与を開始する患者として選択する工程」とすることで、抗生剤等の投与を開始するＩＢＤ患者を選択する方法に言い換えることができる。また、同じ記載を「前記測定値が基準値よりも高値である場合に、前記患者に対する抗生剤等の投与開始を決定する工程」とすることで、ＩＢＤ患者における抗生剤等の投与開始タイミングの決定方法に言い換えることもできる。
【００５６】
３．抗生剤等が投与されている炎症性腸疾患患者における前記抗生剤の投与終了タイミングの決定方法
本発明の一態様によると、患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を指標とする、抗生剤等（抗生剤および／または炎症に対する治療薬（例えば、抗ＣＤ１４抗体融合蛋白質、特にＭＲ１００７が挙げられる。）をいう。）が投与されている炎症性腸疾患患者における前記抗生剤の投与終了タイミングの決定方法が提供される。
【００５７】
この決定方法によれば、患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を指標として、抗生剤等が投与されている炎症性腸疾患患者において適切な抗生剤投与終了タイミングを決定することができる。その結果、抗生剤等による治療が適切な時期に終了され、不要な抗生剤等の投与が行われないことにより、当該患者における、生存率、合併症の発生率、感染症や副作用の発生率、外科的処置（大腸切除など）の発生率、患者の機能的健康状態、患者ＱＯＬ、治療満足度などの改善を期待することができる。
【００５８】
患者は抗生剤等が投与されている炎症性腸疾患患者であれば特に限定されず、生物学的製剤による治療を受けていてもよいし、受けていなくてもよい。患者としては、抗生剤等が投与されていて、生物学的製剤による治療が必要な患者または実際に生物学的製剤による治療を受けている患者であることが好ましい。
【００５９】
本発明の抗生剤等が投与されている炎症性腸疾患患者における前記抗生剤等の投与終了タイミングの決定方法は、患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定する工程を備えることが好ましく、１）患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定する工程；２）前記ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定値を基準値と比較する工程；および３）前記測定値が前記基準値以下であるか否かを判定する工程を備えることがより好ましく、さらに４）前記測定値が前記基準値よりも低値である場合に、前記患者に対する前記抗生剤等の投与終了を決定する工程を備えることがさらに好ましい。患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定する工程の前に、患者由来の血液検体を準備する工程を備えてもよい。
【００６０】
検体中のｓＣＤ１４−ＳＴの測定値は、ＩＢＤ患者において生物学的製剤に不応答であるか否かの指標となる。従って、検体の測定値を予め定めた基準値と比較することで、抗生剤等による治療を受けている炎症性腸疾患患者における抗生剤等の投与終了タイミングを決定することができる。より詳細には、前記測定値が前記基準値を下回った場合、生物学的製剤に不応答のＩＢＤが寛解、重症度が重症ではなくなった、または活動性ではなくなったと判定でき、抗生剤等の投与終了を決定することができる。本発明の抗生剤等の投与終了タイミングを決定する方法に用いる基準値としては、抗生剤等が奏功したことを確認できるものあればよい。例えば、抗生剤等投与前〜投与開始後２４時間までに測定したｓＣＤ１４−ＳＴの測定値の１／２、１／５または１／１０といった値を基準値として設定することができる。また、前記１．の態様に説明されている健常人の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴの測定値に基づいて設定された正常値を基準値として用いることができる。例えば、健常人の平均値＋ＳＤ、＋２ＳＤまたは＋３ＳＤである。ｓＣＤ１４−ＳＴの測定値が正常値の範囲内となれば、健常人と同等のレベルにまでＩＢＤが治癒または寛解したとみなすことができる。好ましくは、予め測定しておいた健常人、生物学的製剤に不応答ではないＩＢＤ患者および生物学的製剤に不応答のＩＢＤ患者の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴの測定値を用いて、疾患検出の感度および／または特異度が最適となるように設定したカットオフ値を基準値として用いることができる。例えば５００ｐｇ／ｍＬまたは６００ｐｇ／ｍＬが挙げられ、好ましくは６００ｐｇ／ｍＬであるが、これらに限定されるものではない。
【００６１】
また、本発明の抗生剤等を投与する対象となる炎症性腸疾患患者の選択方法は、前記「４）前記測定値が前記基準値よりも低値である場合に、前記患者に対する前記抗生剤等の投与終了を決定する工程」の代わりに、「前記測定値が前記基準値よりも低値である場合に、前記患者を抗生剤等の投与を終了する患者として選択する工程」とすることで、抗生剤等の投与を終了する炎症性腸疾患患者の選択方法に言い換えることができる。また、同じ記載を「前記測定値が基準値よりも高値である場合に、前記患者を抗生剤等の投与を継続する患者として選択する工程」とすることで、抗生剤等の投与を継続する炎症性腸疾患患者の選択方法に言い換えることもできる。
【００６２】
４．抗生剤等を投与することによる、ＩＢＤの治療方法
本発明の一態様によると、ＩＢＤの治療方法が提供される。この治療方法は、被験者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴの測定値を指標として、通常の治療以外に抗生剤による菌の除去や炎症に対する新たな治療法（抗ＣＤ１４抗体融合蛋白質、特にＭＲ１００７による治療が含まれる。）が必要なＩＢＤ患者を選択することを特徴とし、選択された患者に抗生剤等を投与することによりＩＢＤを治療する方法である。具体的には、前記２．の態様に説明されている方法により抗生剤等を投与するＩＢＤ患者を選択し、選択された患者に抗生剤等を投与する。また、前記３．の態様に説明されている方法により抗生剤等の投与終了タイミングを決定することで、より効率のよい治療を行うことができる。
【００６３】
本発明の前記１．〜３．に記載の態様に用いられる抗生剤等は、特に限定はされないが、抗生剤としては少なくともＩＢＤに使用され得る抗生剤が好適である。例としては、ペニシリン系、ペネム系、カルバペネム系、セフェム系、モノバクタム系、ホスホマイシン系、グリコペプチド系、アミノ酸配糖体系、マクロライド系、ケトライド系、リンコマイシン系、テトラサイクリン系、ニューキノロン系、スルフォンアミド系、オキサゾリジノン系、ストレプトグラミン系、アゾール等の抗生剤が挙げられ、これら抗生剤の中から１つまたは複数を適宜選択して用い得る。好ましくは、ＩＢＤに使用されているニューキノロン系の特にシプロフロキサシン（シプロキサン（Ｒ））、またはアゾール系の特にメトロニダゾール（フラジール（Ｒ））である。
【００６４】
また、抗生剤に代えて、または抗生剤とともに、抗ＣＤ１４抗体融合蛋白質（国際公開第２００６／１２９８４９号を参照）、好ましくはＭＲ１００７（Nakamuraら，Critical Care 11 (Supp. 4): P4，2012年）、および／または抗ＩＬ−６抗体（Mudter & Neurath，Inflammatory Bowel Disease 13(8): 1016-1023，2007年）を投与してもよい。
上記抗ＣＤ１４抗体融合蛋白質は、抗ＣＤ１４抗体と蛋白質分解酵素阻害物質とを含有する融合蛋白質であり、上記ＭＲ１００７は、抗ＣＤ１４抗体とインターαインヒビターの改変軽鎖（セリンプロテアーゼ阻害活性断片）との融合蛋白質である。抗ＣＤ１４融合蛋白質は、膜結合型ＣＤ１４および血液凝固系プロテアーゼを標的とすることにより細菌感染症の重症化を防止する効果を示し得る。
【００６５】
［検出キット］
５．血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定装置を備えるキット
本発明の一態様によると、血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定装置を備える、生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患の検出キットが提供される。
本発明の検出キットは、所望により、配列番号２に記載の１６アミノ酸残基からなるペプチドを抗原として作製した抗体（抗プレセプシン抗体）、配列番号３に記載のアミノ酸配列の１７番目〜２６番目からなるペプチドに結合する抗体、マルチウェルプレートおよび分光光度計からなる群から選択される少なくとも１つを含んでもよい。本キットは、好ましくは、サンドイッチ免疫測定法により、血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定するものである。
【００６６】
６．生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患を検出するためのｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定装置を備えるキットの製造における、抗プレセプシン抗体および／または組換え型可溶性ＣＤ１４フラグメントの使用
本発明の一態様は、生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患を検出するためのｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定装置を備えるキットの製造における、上記「５．血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定装置を備えるキット」における抗プレセプシン抗体および／または組換え型可溶性ＣＤ１４フラグメントの使用に関する。
【００６７】
［血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定方法の用途］
７．生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患を検出する用途
この態様は、上記「１．生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患の検出方法」における、血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定方法の使用方法（用途）である。
【００６８】
８．生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患患者を選択する用途
この態様は、上記「１．生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患の検出方法」に記載の抗生剤等を投与する生物学的製剤に不応答のＩＢＤ患者を選択する方法における、血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定方法の使用方法（用途）である。
【００６９】
９．抗生剤等が投与されている炎症性腸疾患患者における前記抗生剤等の投与終了タイミングを決定する用途
この態様は、上記「３．抗生剤等が投与されている炎症性腸疾患患者における前記抗生剤等の投与終了タイミングの決定方法」における、血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定方法の使用方法（用途）である。
【００７０】
上述した方法は、炎症性腸疾患であるクローン病（ＣＤ）または潰瘍性大腸炎（ＵＬ）の治療に有用である。
例えば、潰瘍性大腸炎は、重症例や、全身障害を伴う中等症例に対しては、内科治療への反応性や薬物による合併症等に注意が必要となる。そこで、本発明の方法により、生物学的製剤に不応答の炎症性腸疾患を検出できれば、不要な薬物療法が抑制でき有用である。高齢者では、免疫抑制効果を有する治療薬剤による副作用（ＭＲＳＡ感染症等の日和見感染症など）により致死的な経過をとることがある。そのため、本発明の方法で治療効果判定などを早期に行うことは、有用性が高い。
【００７１】
また、クローン病を完治させる治療方法は未だなく、治療法の決定には重症度が重要となる。そのため、本発明の方法で生物学的製剤に反応しない炎症性腸疾患を検出することは有用である。薬物療法には免疫抑制を伴うものがあり、感染などの合併症に注意して治療を行う必要があるが、本発明の方法により過剰な生物学的製剤の投与を抑制することができる。
【００７２】
以下の実施例により本発明を更に詳述するが、本発明はこれら実施例に限定して理解されるべきものではない。
【実施例】
【００７３】
１．血中プレセプシン測定系の作製
１−１．ペルオキシダーゼ標識抗体の調製
サンドイッチＥＬＩＳＡ系を作製するため、Ｆ１１０６−１３−３抗体（国際公開第２００５／１０８４２９号参照）をペルオキシダーゼで標識した。
（１）まず、Ｆ１１０６−１３−３抗体をリシルエンドペプチダーゼ（Ｒ）（和光純薬）で切断し、Ｆ（ａｂ´）２を調製した。Ｆ１１０６−１３−３抗体を５０ｍＭ  Ｔｉｒｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．５）で透析し、抗体およびリシルエンドペプチダーゼを、抗体：リシルエンドペプチダーゼ（Ｒ）＝１０：１のモル比で混合し、３７℃で１時間反応させた。１時間経過時に、ＴＬＣＫ（Ｎα−トシル−Ｌ−リシンクロロメチルケトン塩酸塩、CAS No. 4272-74-6）を、最終濃度が３０ｍＭとなるように添加し、反応を停止させた。Ｆｃを除去するため、反応液をプロテインＡカラム（ＰＲＯＳＥＰ（Ｒ）−Ａ、ミリポア）に添加し、未吸着画分を回収した。回収した未吸着画分を濃縮し、含まれているＦ（ａｂ´）２とＦａｂとを分離するため、ゲルろ過（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ７５、ＧＥヘルスケア）により精製した。得られたＦ（ａｂ´）２を濃縮後、１０ｍＭ炭酸緩衝液（ｐＨ９．５）で透析した。
（２）次に、中根らの方法（J. Histochem. Cytochem., 22, 1084, 1974）に従い、１ｍｇのペルオキシダーゼ（東洋紡）を蒸留水に溶解し、蒸留水で溶解した１００ｍＭの過ヨウ素酸を添加し、２５℃で１５分間反応させた。反応終了後、１．５％エチレングリコールを添加し、２５℃で２０分間反応後、１ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．４）に対して透析した。翌日、Ｆ１１０６−１３−３Ｆ（ａｂ´）２抗体１ｍｇに対して０．２Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ９．５）を添加して活性化した０．８ｍｇのペルオキシダーゼを混合し、２５℃で２時間反応させた。４ｍｇ／ｍＬの水素化ホウ素ナトリウムを添加し、さらに２時間、４℃で反応させた。反応液をＰＢＳ（ｐＨ７．４）に透析し、ペルオキシダーゼ標識抗体を得た。液量を測定し、使用した抗体量より、抗体濃度を算出した。【００７４】
１−２．サンドイッチＥＬＩＳＡ系の作製
（１）Ｓ６８−ペプチドポリクローナル抗体（国際公開第２００５／１０８４２９号参照）をＤ−ＰＢＳ（ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．４）で５μｇ／ｍＬに希釈し、イムノプレート（ＭａｘＳｏｒｐ（Ｒ）、ＮＵＮＣ）の各ウェルに５０μＬ添加した（ここで、Ｓ６８−ペプチドポリクローナル抗体は、配列番号２に記載の１６アミノ酸残基からなるペプチドを抗原として作製した、ｓＣＤ１４−ＳＴ特異抗体である。）。４℃で一晩反応後、イオン交換水で５回洗浄し、０．１％  ＳｔａｂｉｌＧｕａｒｄ（Ｒ）（ＳｕｒＭｏｄｉｃｓ）と、０．１％  Ｔｗｅｅｎ（Ｒ）２０を含むＤ−ＰＢＳを各ウェルに２００μＬ添加し、ブロッキングした。
（２）次に、１％  ＣＤ１４吸収血清、０．１％  ＢＳＡを含むＤ−ＰＢＳ（ｐＨ７．４）を希釈液として、濃度０、９．２、１８．４、３６．９、７３．８、１４７．５、２９５ｐｇ／ｍＬのプレセプシン蛋白質標準品希釈系列を調製した。ｓＣＤ１４−ＳＴ蛋白質標準品としては、国際公開第２００５／１０８４２９号に記載の組換え型可溶性ＣＤ１４フラグメント、具体的にはｒｓＣＤ１4−ＳＴを用いた。標準品希釈系列を、ウェルあたり５０μＬ添加し、２５℃で１時間反応させた。反応終了後、０．０５％  Ｔｗｅｅｎ（Ｒ）２０を含む生理食塩水で５回洗浄し、２％ラット血清、１％マウス血清、０．１％  Ｔｗｅｅｎ（Ｒ）２０を含むＰＢＳ（ｐＨ７．４）で０．６５μｇ／ｍＬに希釈したペルオキシダーゼで標識したＦ１１０６−１３−３  Ｆ（ａｂ´）２抗体を、各ウェルに５０μＬ添加した。２５℃で２時間反応後、同様に５回洗浄し、テトラメチルベンジジン溶液（ＴＭＢ、ＢｉｏＦｉｘ）５０μＬを各ウェルに添加し、室温で２０分間反応後、０．５Ｍ硫酸溶液５０μＬで反応を停止した。プレート分光光度計（マルチスキャンＪＸ、サーモエレクトロン）で、４５０／６３０ｎｍの吸光度を測定した。標準品希釈系列が問題なく測定できることを確認した。【００７５】
２．正常人および炎症性腸疾患患者の血中プレセプシン濃度の測定
２−１．測定方法
正常人２０例（ＰｒｏＭｅｄ  ＤＸ）、通常の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）患者（以下、単に「ＩＢＤ患者」とも称する）５例（ＰｒｏＭｅｄ  ＤＸ、Ｎｏ．１００４９４１５〜１００４９４１９）およびレミケード治療に反応しなかったＩＢＤ患者５例（Ｂｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎ，Ｎｏ．ＢＲＨ３１８４９５〜ＢＲＨ３１８４９９）の血液検体（正常人は血漿、ＩＢＤ患者およびレミケード治療に反応しなかったＩＢＤ患者は血清であり、いずれも前処理なし）を購入した。ＩＢＤ患者５例およびレミケードに反応しなかったＩＢＤ患者５例について、検体番号、診断（診断病名）、症状、状態（疾患活動性）およびＩＢＤ治療履歴を表１に示す。
上記「１．血中プレセプシン測定系の作製」で作製したサンドイッチＥＬＩＳＡ系を用いて、購入した各検体を２０倍希釈してプレセプシン濃度を測定した。【００７６】
２−２．測定結果
測定結果を図１に示す。また、ＩＢＤ患者５例およびレミケードに反応しなかったＩＢＤ患者５例のプレセプシン濃度を、表１に示す。
ＩＢＤ患者（５例）のプレセプシン濃度４６５±１０５ｐｇ／ｍＬ（平均値±ＳＤ）は、正常人患者（２０例）のプレセプシン濃度３４６±１０９ｐｇ／ｍＬ（平均値±ＳＤ）と同程度であった。
これに対して、レミケード不応答患者（５例）のプレセプシン濃度は、１３４４１±２３６２３ｐｇ／ｍＬ（平均値±ＳＤ、範囲５１３〜５５５６２ｐｇ／ｍＬ）と高値を示した。
以上のことから、レミケード不応答患者のような重症ＩＢＤ患者においては、腸管バリア機能の破綻が起こっている可能性があり、プレセプシンの上昇は、これら患者での腸管バリアを介したバクテリアトランスロケーションが起こっていることを示している。【００７７】
ＩＢＤ患者での抗生剤治療は、一般的治療方法としては用いられていない。しかし、検体におけるプレセプシン濃度を測定し、例えば、遠藤らの報告（Infect Chemother. 2012 Jun 13）によるカットオフ値６００ｐｇ／ｍＬを基準値として採用することで、ＩＢＤ患者での感染の診断において、ならびに抗生剤等の治療方法の選択、使用および／または中止の判断において利用できることが示された。【００７８】
【表１】
0006450594.tif 000002
【００７９】
３．クローン患者および潰瘍性大腸炎患者の血中プレセプシン濃度の測定
３−１．測定方法
クローン病（ＣＤ）患者４６例（Ｂｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎ）および潰瘍性大腸炎（ＵＣ）患者３４例（Ｂｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎ）の血液検体（前処理なしの血清）を購入した。
上記「１．血中プレセプシン測定系の作製」で作製したサンドイッチＥＬＩＳＡ系を用いて、購入した各検体を２０倍希釈してプレセプシン濃度を測定した。【００８０】
３−２．測定結果
ＣＤ患者（４６例）およびＵＣ患者（３４例）のうち、６００ｐｇ／ｍＬ以上のプレセプシン濃度を示す患者は、それぞれ、３／４６（６．５％）および２／３４（５．９％）であった。プレセプシン濃度が６００ｐｇ／ｍＬ以上のＣＤ患者３例およびＵＣ患者２例では、ステージが再燃、重症度が重症、および状態（疾患状態）が活動性のうちすくなくとも１つに該当していた。
以上のことから、ＣＤ患者およびＵＣ患者では、一般的にはプレセプシンの濃度は低いが、血中プレセプシン濃度を測定することで、感染症としては分類されていないＩＢＤにおいて、感染を原因とした重症化、疾患の再燃または活動性に細菌感染が関係しているＩＢＤ患者の検出やＩＢＤ患者の選択に使用できると考えられた。【００８１】
上述した実施形態または実施例によれば、抗生剤等（抗生剤および／または炎症に対する治療薬（例えば、抗ＣＤ１４抗体融合蛋白質、特にＭＲ１００７が挙げられる。）をいう。）を投与すべきＩＢＤ患者を適切に選択し、また、抗生剤等の投与期間を適正化することが可能となる。抗生剤等は細菌感染を伴うＩＢＤ患者に投与されるべきものだからである。また、血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を指標に抗生剤等投与終了のタイミングを決定することで、抗生剤等投与期間を短縮することができる。血中のｓＣＤ１４−ＳＴの測定値を指標としたＩＢＤにおける抗生剤の適正使用は、安全性および有効性を損なうことなく、または腸内細菌フローラが悪化することなく、ＩＢＤの寛解、ＩＢＤの重症度の軽減、ＩＢＤの活動性の抑制、治療期間の短縮、抗生剤等の使用量の削減、医療コストの削減を可能とする点で有用である。
【図１】
0006450594.tif 000003
【配列表】
0006450594000001.app