(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（ＩＩ）
【化１】
0006522806.tif 000010
の抗体薬物複合体、緩衝剤、凍結乾燥保護剤、および界面活性剤を含む、凍結乾燥組成物であって、凍結乾燥保護剤対抗体薬物複合体のモル比が、１，４００〜３，２００対１であり、前記緩衝剤が、ヒスチジンまたはコハク酸塩であり、前記凍結乾燥保護剤が、スクロース、トレハロース、またはそれらの混合物であり、前記界面活性剤がポリソルベートであり、かつ、水で再構成された場合、前記抗体薬物複合体が５〜１５ｍｇ／ｍｌの量で存在し、前記緩衝剤が３〜１０ｍＭの濃度で存在し、ポリソルベートの量が０．００５〜０．０２％（ｍ／ｖ）であり、かつ、ｐＨが５．３〜６．０であり、かつ、バルキング剤を含まない組成物。
【請求項２】
凍結乾燥保護剤対抗体薬物複合体のモル比が、１，４００〜２，０００対１または１，４００〜１，８００対１である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
トレハロース対抗体薬物複合体のモル比が、約１，６０５対１であり、水で再構成された場合、前記ＡＤＣが、約１０ｍｇ／ｍｌの量で存在し、ヒスチジンの濃度が、約５ｍＭであり、ポリソルベート２０の量が、約０．０１％（ｍ／ｖ）であり、ｐＨが、約５．７である、式（ＩＩ）
【化２】
0006522806.tif 000011
の抗体薬物複合体、ヒスチジン、トレハロース、およびポリソルベート２０を含む、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
トレハロース対抗体薬物複合体のモル比が、約１，６０５対１であり、水で再構成された場合、前記ＡＤＣが、約１０ｍｇ／ｍｌの量で存在し、ヒスチジンの濃度が、約５ｍＭであり、ポリソルベート２０の量が、約０．０１％（ｍ／ｖ）であり、ｐＨが、約５．７である、式（ＩＩ）の抗体薬物複合体、ヒスチジン、トレハロース、およびポリソルベート２０から本質的になる、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
ａ）請求項１〜４の何れか一項に記載の組成物の凍結乾燥前水溶液を凍結させる工程、ｂ）大気圧より低い圧力、組成物の崩壊温度より低い製品温度で、一次乾燥する工程、およびｃ）大気圧より低い圧力、０℃より高く組成物のガラス転移温度より低い製品温度で、二次乾燥する工程を含む、請求項１〜４の何れか一項に記載の組成物の調製のための方法。
【請求項６】
前記凍結させる工程ａ）が、アニーリング工程を含み、前記アニーリング工程を、−２５℃から−１０℃の範囲内の棚温度で、０．５から６時間実施する、請求項５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【本発明の分野】
【０００１】
本発明は、抗体デュオカルマイシン薬物複合体を含む凍結乾燥組成物、およびその再構成水溶液に関する。
【本発明の背景】
【０００２】
デュオカルマイシンは、１９８８年にストレプトマイセス属の種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）から単離された毒素である。このＤＮＡ結合およびアルキル化剤は、インビトロで強力な細胞傷害性を示す。しかし、癌治療におけるその適用は、制限されている。何故なら、インビボで、この薬剤は、好ましくない副作用を有し、結果として治療指数が小さくなるためである。
【０００３】
抗腫瘍剤の治療指数は、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）中にこの薬剤を組み込むことによって改善することができる。ＡＤＣは、抗体に、切断可能なまたは切断不可能なリンカー（リンカー薬物）を用いて、薬物を共役させることによって得られる。
【０００４】
現在のところ、２種のＡＤＣ、すなわち、ブレンツキシマブベドチンおよびトラスツズマブエムタンシンが、市販されていて、３０種を超えるＡＤＣが、臨床開発の多様な局面にある。ＡＤＣに関する開発は、ＡＤＣ中の薬物として、デュオカルマイシンおよび特にデュオカルマイシン誘導体の開発に対する新たな関心を促した。これらのＡＤＣは、本出願において、抗体デュオカルマイシン薬物複合体またはデュオカルマイシン由来のＡＤＣと呼ばれる。
【０００５】
２種のデュオカルマイシン由来のＡＤＣ、すなわち、ＳＹＤ９８５（ＮＣＴ０２２７７７１７（２０１４）、提供者：Ｓｙｎｔｈｏｎ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）およびＭＤＸ−１２０３（ＮＣＴ００９４４９０５（２００９）、提供者：Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）が、現在のところ、臨床開発中である。
【０００６】
ネイキッド（モノクローナル）抗体と比較して、ＡＤＣは、様々な物理化学的な特性を有しており、したがって、モノクローナル抗体にとって適切な従来の医薬製剤が、ＡＤＣにとっても等しく適切とは限らない。ほとんどのリンカー薬物、特に、デュオカルマイシン誘導体を含有するリンカー薬物は、低い水溶性を有する。これらのリンカー薬物が、抗体に共役される場合、結果として生じる複合体は、ネイキッド抗体と比較して、上昇した疎水性を有し、水溶液中のＡＤＣのコロイド安定性を低下させる。リンカー薬物の共役の際の疎水性の上昇は、様々な抗体間の疎水性における多様性と比較して、明白である。これは、医薬製剤開発を困難にする。リンカー薬物の種類ばかりでなく、抗体毎のリンカー薬物の数（薬物対抗体比、ＤＡＲ）および抗体へのリンカー薬物の共役の場所（複数可）も、ＡＤＣの物理化学的な特性に影響を及ぼす。ネイキッド抗体と比較して、対応するＡＤＣは、より簡単に凝集する傾向にある。さらに、ＤＡＲが高ければ高いほど、溶液中での凝集の傾向も高い。
【０００７】
加えて、特に、切断可能なリンカーの場合、リンカー薬物の化学的安定性を確実にするために、ＡＤＣ製剤は、ネイキッド抗体自体の安定性のために必要なものとは異なるそれに従わなければならない。それぞれのリンカー薬物は、異なる化学的安定性および疎水性を有するので、それぞれのＡＤＣは独特であり、それぞれが、特化し、目的に合わせた組成物を必要とする。
【０００８】
十分な貯蔵寿命を有するために、タンパク質由来の薬物は、水での再生用の凍結乾燥粉末として、しばしば市販されている。凍結乾燥粉末を得るために、凍結乾燥すなわちフリーズドライ方法が、使用される。この凍結乾燥方法は、３段階、すなわち、凍結、一次乾燥、および二次乾燥を有する。一次乾燥の条件は、製品温度が、ケーキの物理的崩壊を防ぐために、組成物の崩壊温度より低くあり続けるように選択される。組成物の崩壊温度は、フリーズドライ顕微鏡法を使用して測定できる。二次乾燥は、組成物のガラス転移温度（Ｔｇ）未満で実施され、この温度は、通常、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）によって測定される。
【０００９】
凍結乾燥方法が開始可能となる前に、有効医薬成分が、適切な製剤中に供給される必要がある。ＡＤＣ製剤の場合、精製製剤は、典型的に、凍結乾燥にとって適切な製剤と交換される、つまり、凍結乾燥前溶液を用意する。凍結乾燥前溶液は、いくつかの要求を満たす必要がある、つまり、凍結乾燥前溶液は、ＡＤＣを完全に可溶化すべきであり、凍結乾燥前溶液中で、ＡＤＣは、凍結乾燥の間に一般的に起こる、多様な条件、たとえば、温度で、ある一定の時間、コロイド的および化学的に安定しているべきであり、工程所要時間は、許容可能であるべきであり、ＡＤＣは、凍結乾燥粉末またはケーキと典型的に呼ばれる、結果として生じる凍結乾燥組成物中で、安定しているべきである。このケーキは、許容可能な外観を有するべきである。加えて、凍結乾燥組成物は、簡単に再構成可能であるべきである。
【００１０】
通常、凍結乾燥タンパク質製剤は、緩衝剤、凍結乾燥保護剤、および任意に、界面活性剤もしくはバルキング剤、またはその両方を含有する。凍結乾燥粉末は、典型的に、バイアル中に貯蔵され、注射用の静菌または滅菌水で再構成される。
【００１１】
現在のところ市販されているＡＤＣは、凍結乾燥粉末として入手可能である。しかし、これらのＡＤＣは、毒素、換言すれば、メイタンシノイド（たとえば、ＤＭ１）またはアウリスタチン（たとえば、モノメチルアウリスタチンＥ）を含有し、これらの毒素は、ＡＤＣ中の薬物として現在のところ検討されている、デュオカルマイシン由来の毒素ほど疎水性でなく、これらのＡＤＣは、本発明の製剤に使用される、デュオカルマイシン由来のＡＤＣとは異なるＤＡＲを有する。上述および他のメイタンシノイドまたはアウリスタチンＡＤＣの物理化学的な特性は、本発明の製剤に使用される、デュオカルマイシン由来のＡＤＣの特性とは異なっており、異なる製剤を必要とする。
【００１２】
たとえば、再構成の際、ＤＡＲ３．５を有するＴ−ＤＭ１、すなわち、エムタンシンに切断不可能なリンカーを用いて共役されたトラスツズマブ（Ｋａｄｃｙｌａ（登録商標））の組成は、Ｔ−ＤＭ１  ２０ｍｇ／ｍｌ、コハク酸ナトリウム１０ｍＭ、スクロース６％（ｗ／ｖ）、ポリソルベート２０  ０．０２％（ｗ／ｖ）、ｐＨ５．０である。
【００１３】
ＷＯ２００４／１１０４９８は、メイタンシノイドとカップリングしている抗体の液体および凍結乾燥組成物に関するものであり、特に、コハク酸ナトリウム１０ｍＭの溶液、ポリソルベート２０  ０．０１％（ｗ／ｖ）、スクロース０．５％（ｗ／ｖ）（つまり、市販の製剤Ｋａｄｃｙｌａ（登録商標）中のスクロースの量より１０倍超少ない）、グリシン２５０ｍＭを含み、ｐＨ５．５の、ＤＡＲ約４を有する、ｈｕＮ９０１−ＤＭ１  ＡＤＣ（１〜５ｍｇ／ｍｌ）の凍結乾燥組成物を開示している。ＷＯ２００４／１１０４９８の例６は、ポリソルベート２０  ０．０１％およびグリシン２５０ｍＭと組み合わせたコハク酸ナトリウム１０ｍＭ、ｈｕＮ９０１：ＤＭ１  ＡＤＣ１ｍｇ／ｍｌを含む、組成物が、クエン酸ナトリウム１０ｍＭ、ポリソルベート２０  ０．０１％およびグリシン２５０ｍＭの組合せより安定性があることを教示している。ポリソルベートのない製剤は、不安定である。ＷＯ２００４／１１０４９８の例７は、ｈｕＮ９０１−ＤＭ１  ５ｍｇ／ｍｌを含む、類似の製剤が、例６の好ましい製剤より５倍低いＡＤＣ対スクロース比をもたらし、同じく安定性があることを示している。ＷＯ２００４／１１０４９８のみが、グリシン２５０ｍＭを含むｈｕＮ９０１：ＤＭ１  ＡＤＣの凍結乾燥製剤を開示していて、グリシンは、バルキング剤として作用するばかりでなく、凍結保護または凍結乾燥保護特性も、同じく有する。したがって、開示された製剤は、高い凍結乾燥保護剤／ＡＤＣモル比を有する。
【００１４】
市販の製剤Ａｄｃｅｔｒｉｓ（登録商標）の再構成後の組成は、ＩｇＧ１型のキメラモノクローナル抗体とのモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）複合体であるブレンツキシマブベドチン（ＤＡＲ約８）５ｍｇ／ｍｌ、クエン酸ナトリム５．６ｍｇ／ｍｌ、クエン酸一水和物０．２１ｍｇ／ｍｌ、トレハロース二水和物７０ｍｇ／ｍｌ、ポリソルベート８０  ０．２ｍｇ／ｍｌであり、ｐＨ６．６を有する。
【００１５】
ＷＯ２０１５／０７５２０１は、抗ＴＦ  ＩｇＧ１抗体が、Ａｄｃｅｔｒｉｓ（登録商標）のリンカー薬物と類似の、バリン−シトルリンリンカーを用いてＭＭＡＥに共役されているＡＤＣを含む、界面活性剤のない凍結乾燥製剤を開示している。このＡＤＣは、ＤＡＲ４を有する（ｐ．３５、ｌ．６）。ｐ．５５の例７は、ＡＤＣ１０ｍｇ／ｍｌ、ヒスチジン３０ｍＭ、およびスクロース１５０ｍＭまたは２５０ｍＭを含有する組成物が、１０ｍｌバイアル中の充填量４ｍｌから始まる、激しい縮み（劣ったケーキ品質／外観）を示し、この縮みによって、これらの製剤は、商業生産にとって不適切であることを教示している。例７は、バルキング剤の存在（マンニトールが、比較的多量の、少なくとも３％ｗ／ｖで、凍結乾燥前溶液中に存在する）が、良好なケーキの品質にとって必要であることもまた教示している。例８は、１，３３７対１のスクロース対ＡＤＣの比（つまり、製剤Ｂ）が好ましいことを開示している一方で、例１２は、２，６７６対１のスクロース対ＡＤＣ比を有する製剤と、４４６対１のスクロース対ＡＤＣ比を有する製剤の間に、安定性の差異がないことを示している。
【００１６】
デュオカルマイシン由来のＡＤＣに関連するいくつかの液体製剤が、たとえば、ＷＯ２０１２／１６２４８２（ｐ．３５、ｌ．１６〜１７）、ＷＯ２０１１／１３３０３９（ｐ．２１８、ｌ．２４）、およびＤＯＫＴＥＲ，Ｗら、Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒｏｆｉｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＨＥＲ２−Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＡＤＣ  ＳＹＤ９８３／ＳＹＤ９８５  Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．、１３（１１）２０１４年１１月、２６１８〜２６２９の補充情報のｐ．２に開示されている。ＷＯ２０１２／１６２４８２の製剤は、非実用的に低い値まで、組成物の崩壊温度を低減できる、多量の塩化ナトリウムを含有しているので、凍結乾燥にとって適切ではない。ＷＯ２０１１／１３３０３９は、ＤＮＡアルキル化剤ＣＣ−１０６５の一連の新規の類似体、ならびにヒスチジン４．２ｍＭ、トレハロース二水和物１９．１ｍｇ／ｍｌ、およびポリソルベートを含み、ｐＨ６を有する、市販のＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラスツズマブ）製剤中に配合される、ＨＥＲ２標的ＡＤＣを開示している。ＤＯＫＴＥＲ，Ｗらにおいて、ヒスチジン、トレハロース二水和物３０ｍｇ／ｍｌ、およびポリソルベートを含み、ｐＨ６を有する、製剤は、ＨＥＲ２標的デュオカルマイシン由来のＡＤＣ  ＳＹＤ９８３のために使用された。
【００１７】
しかし、デュオカルマイシン由来のＡＤＣを含む、いかなる凍結乾燥製剤も、先行技術において開示されていない。ＷＯ２０１１／１３３０３９およびＤＯＫＴＥＲ、Ｗらによって開示された液体製剤は、製剤中のデュオカルマイシン由来のＡＤＣの安定性および凍結乾燥ケーキの品質が、凍結乾燥保護剤対ＡＤＣのモル比が比較的低い製剤より劣っているため、凍結乾燥にとって不適切である。技術水準のデュオカルマイシン由来のＡＤＣのための適切な医薬製剤を欠いているという観点から、許容可能なケーキ外観を有し、許容可能な凍結乾燥時間を有する凍結乾燥方法で調製でき、デュオカルマイシン由来のＡＤＣが許容可能な程度に安定している、デュオカルマイシン由来のＡＤＣを含む凍結乾燥組成物が、明らかに必要である。
【本発明の簡単な説明】
【００１８】
本発明は、式（Ｉ）または（ＩＩ）の抗体デュオカルマイシン薬物複合体を含む凍結乾燥組成物、およびその対応する再構成水溶液に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】Ａ：トレハロース二水和物３０ｍｇ／ｍｌを有するプラセボ溶液（組成物ＩＩに類似しているが、ＳＹＤ９８５なし）、Ｂ：トレハロース二水和物３０ｍｇ／ｍｌを有する組成物ＩＩ、Ｃ：トレハロース二水和物４０ｍｇ／ｍｌを有する組成物ＩＩＩの凍結乾燥ケーキ。
【図２】安定性結果。Ｙ軸：４０℃での凍結乾燥組成物Ｉ（白三角）、ＩＩＩ（ｘ）、ＩＶ（白菱形）、Ｖ（黒丸）、およびＶＩ（黒四角）中のＳＹＤ９８５単量体のパーセンテージ、Ｘ軸：時間単位、月。
【図３】安定性結果。Ｙ軸：４０℃での凍結乾燥組成物Ｉ（白三角）、ＩＩＩ（ｘ）、ＩＶ（白菱形）、Ｖ（黒丸）、およびＶＩ（黒四角）中の高分子量（ＨＭＷ）粒子のパーセンテージ、Ｘ軸：時間単位、月。
【図４】アニーリングなし（左）およびアニーリングあり（右）の組成物Ｖの凍結乾燥ケーキの上層および中層のＳＥＭ写真。白線は、２００μｍである。
【本発明の詳細な説明】
【００２０】
本発明は、式（Ｉ）
【００２１】
【化１】
0006522806.tif 000002
【００２２】
の抗体薬物複合体（ＡＤＣ）、緩衝剤、凍結乾燥保護剤、および界面活性剤を含む、凍結乾燥組成物を提供し、凍結乾燥保護剤対抗体薬物複合体のモル比は、１，４００〜３，２００対１である。
【００２３】
式（Ｉ）および（ＩＩ）（下記参照）のＡＤＣにおいて、リンカー薬物は、２つ以上の抗体システイン残基に共役されて、平均の薬物対抗体比（ＤＡＲ）２〜３を有するＡＤＣを生成する。好ましくは、ＡＤＣは、平均のＤＡＲ２．５〜３．０、より好ましくは平均のＤＡＲ２．６〜２．９を有する。
【００２４】
本発明による組成物中に使用される、式（Ｉ）および（ＩＩ）のＡＤＣは、システイン残基のＳ原子を通じて抗体に共役されたリンカー薬物を有する、つまり、これらのＡＤＣは、システイン結合抗体薬物複合体である。典型的に、システイン残基は、（モノクローナル）抗体（ｍＡｂ）の重鎖および／または軽鎖中に存在する、天然のシステイン残基であり、鎖間ジスルフィド結合を形成する。様々な抗体クラスの抗体は、様々な数の鎖間ジスルフィド結合を含有する。たとえば、ＩｇＧ１抗体は、全てがヒンジ領域に位置する、４つの鎖間ジスルフィド結合を、典型的に有し、ジスルフィド結合の（部分的）還元後、リンカー薬物は、フリーのチオール基に、無作為に結合される。
【００２５】
本発明にしたがって使用するための式（Ｉ）および（ＩＩ）の抗体薬物複合体は、当業者にとってよく知られている方法および手順にしたがって得ることができる。鎖間ジスルフィド結合を通じた共役は、前記ジスルフィド結合の完全または部分的な還元後に、起こり得る。かかる化合物を調製するための適切な方法は、ＷＯ２０１１／１３３０３９の記載および例、ならびにＭｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．、１３（１１）２０１４年１１月、２６１８〜２６２９中のＤＯＫＴＥＲ，Ｗらの補充情報（ＳＹＤ９８５を得るためのＡＤＣ  ＳＹＤ９８３のＨＩＣ精製を開示している）に見出すことができる。特に、ＷＯ２０１１／１３３０３９の例１５は、トラスツズマブを部分的に還元して、ｍＡｂ毎に２個のフリーのチオール基を産生すること、およびいくつかのリンカー薬物と共役させ、平均ＤＡＲおよそ２を有するＡＤＣを得ることを記載している。本発明にしたがって平均ＤＡＲ２〜３を有するＡＤＣを得る方法は、当業者によって簡単に理解できる。
【００２６】
本発明の組成物の典型的な態様において、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）は、水で再構成された場合、１〜３０ｍｇ／ｍｌの濃度となる量で、組成物中に存在する。好ましくは、この量は、水で再構成された場合、２〜２０ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは５〜１５ｍｇ／ｍ、最も好ましくは約１０ｍｇ／ｍｌの濃度となる。
【００２７】
リンカー薬物での共役のためおよび本発明による組成物中に包含するために使用される、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、またはＩｇＭ抗体であり得る。抗体は、κ（カッパ）軽鎖またはλ（ラムダ）軽鎖を有し得る。ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４抗体であり得る。好ましくは、抗体は、腫瘍細胞の細胞膜中または上に（たとえば、細胞表面上に）発現している抗原標的に結合する、より好ましくは、抗体は、（抗原）標的に結合した後、細胞によって内部移行され、その後、デュオカルマイシン薬物が、細胞内部に放出される。好ましくは、抗体は、ＩｇＧ抗体、より好ましくはＩｇＧ１抗体、最も好ましくはκ軽鎖を有するＩｇＧ１抗体である。好ましくは、ＩｇＧ抗体は、抗体の重鎖のＮ２９７で結合される天然のグリコシド／炭水化物部分を保有する。
【００２８】
適切な抗体としては、抗アネキシンＡ１抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ３０抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＤ３７抗体、抗ＣＤ３８抗体、抗ＣＤ４４抗体、抗ＣＤ４７抗体、抗ＣＤ５６抗体、抗ＣＤ７０抗体、抗ＣＤ７４抗体、抗ＣＤ７９抗体、抗ＣＤ１１５抗体、抗ＣＤ１２３抗体、抗ＣＤ１３８抗体、抗ＣＤ２０３ｃ抗体、抗ＣＤ３０３抗体、抗ＣＥＡＣＡＭ抗体、抗ＣＬＬ−１抗体、抗ｃ−ＭＥＴ（または抗ＨＧＦＲ）抗体、抗Ｃｒｉｐｔｏ抗体、抗ＤＬＬ３抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＥＰＣＡＭ抗体、抗ＥｐｈＡ２抗体、抗ＥｐｈＢ３抗体、抗ＥＴＢＲ抗体、抗ＦｃＲＬ５抗体、抗ＦＯＬＲ１抗体、抗ＧＣＣ抗体、抗ＧＰＮＭＢ抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＨＭＷ−ＭＡＡ抗体、抗インテグリン抗体、抗ルイスＡ様炭水化物抗体（anti-Lewis A like carbohydrate antibody）、抗ルイスＹ抗体、抗ＬＩＶ１抗体、抗メソテリン抗体、抗ＭＮ抗体、抗ＭＵＣ１抗体、抗ＭＵＣ１６抗体、抗ＮａＰｉ２ｂ抗体、抗ネクチン−４抗体、抗ＰＳＭＡ抗体、抗ＳＩＲＰα抗体、抗ＳＬＣ４４Ａ４抗体、抗ＳＴＥＡＰ−１抗体、抗５Ｔ４（すなわち、抗ＴＰＢＧ、トロフォブラスト糖タンパク質）抗体、抗Ｔａｇ７２抗体、抗ＴＦ（すなわち、抗組織因子）抗体、抗ＴＲＯＰ２抗体、および抗ＶＬＡ抗体が、挙げられる。
【００２９】
好ましくは、抗体は、抗アネキシンＡ１抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＣＤ１１５抗体、抗ＣＤ１２３抗体、抗ＣＬＬ−１抗体、抗ｃ−ＭＥＴ抗体、抗ＭＵＣ１抗体、抗ＰＳＭＡ抗体、抗５Ｔ４抗体、または抗ＴＦ抗体である。より好ましくは、抗体は、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＰＳＭＡ抗体、または抗５Ｔ４抗体である。さらにより好ましいのは、抗ＨＥＲ２抗体、特に、トラスツズマブまたはそのバイオシミラーである。
【００３０】
本発明にしたがって使用される抗体は、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）であり、キメラの、ヒト化またはヒトｍＡｂであり得る。好ましくは、本発明にしたがって、ヒト化またはヒトｍＡｂ、より好ましくはヒト化またはヒトＩｇＧ抗体、最も好ましくはヒト化またはヒトＩｇＧ１ｍＡｂが、使用される。好ましくは、前記抗体は、κ（カッパ）軽鎖、つまり、ヒト化またはヒトＩｇＧ１−κ抗体を有する。
【００３１】
本発明による組成物中に使用される凍結乾燥保護剤は、ＡＤＣと組み合わせた場合、凍結乾燥およびその後の貯蔵に際してＡＤＣの化学的および／または物理的不安定性を、有意に、防止または軽減する、何れかの賦形剤であり得る。
【００３２】
好例の凍結乾燥保護剤としては、糖、たとえば、還元または非還元サッカライド；アミノ酸、たとえば、グリシン、アルギニン、プロリン、リジン、アラニン；メチルアミン；離液性塩；ポリオール、たとえば、三価または高級糖アルコール、たとえば、グリセリン、エリトリトール、グリセロール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、およびマンニトール；プロピレングリコール；ポリエチレングリコール、ポリマー、たとえば、ポリビニルピロリジン、ポリビニルアルコール、またはポリデキストランが、挙げられる。好ましい凍結乾燥保護剤は、非還元サッカライド、たとえば、ジサッカライド、たとえば、トレハロース、イソトレハロース、スクロース、およびイソスクロース；トリサッカライド、たとえば、メレジトース、ゲンチアノース、ラフィノース、エルロース、およびウンベリフェロース；テトラサッカライド、たとえば、スタキオースおよびリクノース；ならびにペンタサッカライド、たとえば、ベルバスコースである。本発明の組成物にしたがって使用される凍結乾燥保護剤は、好ましくは、トレハロースもしくはスクロース、またはその混合物、最も好ましくは、トレハロースである。典型的に、トレハロース二水和物が、本発明による組成物を調製するために使用される。
【００３３】
本発明による組成物中に使用される、凍結乾燥保護剤対ＡＤＣのモル比は、１，４００〜３，２００対１である。好ましくは、１，４００〜３，０００対１、より好ましくは１，４００〜２，５００対１、さらにより好ましくは１，４００〜２，０００対１、さらにより好ましくは１，４００〜１，８００対１のモル比が、使用される。最も好ましくは、１，５００〜１，７００対１の凍結乾燥保護剤対ＡＤＣモル比が、使用される。
【００３４】
本発明者らは、デュオカルマイシン由来のＡＤＣの安定性が、凍結乾燥保護剤対ＡＤＣのモル比が１，４００対１超のとき、最適となると発見した。かかる凍結乾燥組成物の安定性およびケーキ外観は、１，４００対１より低いモル比を有する組成物と比較して、改善されていることが発見された。先行技術の組成物の凍結乾燥保護剤対ＡＤＣモル比は、ＷＯ２０１２／１６２４８２において約３５０対１、ならびにＷＯ２０１１／１３３０３９およびＤＯＫＴＥＲ，Ｗら、Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．、１３（１１）２０１４年１１月、２６１８〜２６２９において８００対１と開示されているが、１，４００より対１よりはるかに低い。１，４００対１より低い、凍結乾燥保護剤対ＡＤＣのモル比を有する、デュオカルマイシン由来のＡＤＣを含む組成物は、劣ったケーキ外観を示したが、一方で、プラセボ組成物、つまり、類似する比を有する、デュオカルマイシン由来のＡＤＣのない組成物は、許容可能なケーキ外観を示した。さらに、１，４００対１より低い、凍結乾燥保護剤対ＡＤＣのモル比を有する、デュオカルマイシン由来のＡＤＣを含む組成物の安定性も、同じく劣っていた。しかし、３，２００対１を超える、凍結乾燥保護剤対ＡＤＣのモル比を有する組成物の凍結乾燥方法は、許容不可能なほど時間がかかると分かったので、凍結乾燥保護剤対ＡＤＣのモル比は、過度に高くあるべきではない。長い凍結乾燥工程所要時間は、操作上のリスク、たとえば、工程の間のＡＤＣの分解を引き起こし、この工程を商業生産にとって不適切なものにする。
【００３５】
本発明による組成物中に使用される緩衝剤は、凍結の間に大きなｐＨ変化がない、何れかの緩衝剤であってよい。適切な緩衝剤としては、トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミン、４−２−ヒドロキシエチル−１−ピペラジン−エタンスルホン酸、コハク酸塩、クエン酸塩、およびヒスチジンが、挙げられる。好ましい緩衝剤は、ヒスチジン、クエン酸塩、およびコハク酸塩である。より好ましい緩衝剤は、ヒスチジンおよびコハク酸塩である。最も好ましい緩衝剤は、ヒスチジンである。
【００３６】
本発明の組成物中に、緩衝剤は、水で再構成された場合、２．５〜２５ｍＭの濃度で、好ましくは３．０〜１０ｍＭの濃度で存在する。緩衝剤の最も好ましい濃度は、約５ｍＭである、その理由は、水溶液中のデュオカルマイシン由来のＡＤＣの安定性が、その濃度で最適であることが、観察されたからである。
【００３７】
本発明による組成物は、水で再構成された場合、ｐＨ５．３〜６．０を有する水溶液を、典型的に提供する。好ましくは、ｐＨは、５．５〜５．８である。最も好ましくは、ｐＨは、約５．７である。この好ましいｐＨ範囲内で、抗体の安定性とリンカー薬物の化学的安定性の間で妥協が成立し、デュオカルマイシン由来のＡＤＣの最適な安定性をもたらす。
【００３８】
本発明による組成物中で使用される界面活性剤は、好ましくは、非イオン界面活性剤である。適切な界面活性剤としては、アルキルグリコシド、ポロキサマー、およびポリソルベートが、挙げられる。好ましい界面活性剤は、ポリソルベート、たとえば、ポリソルベート２０およびポリソルベート８０である。最も好ましい界面活性剤は、ポリソルベート２０である。
【００３９】
本発明の組成物中に存在する界面活性剤の量は、水溶液中のＡＤＣの凝集を削減し、水で再構成された場合、（高分子量）粒子の形成を最小化するような量である。界面活性剤は、水で再構成された場合、０．００１〜０．５％質量／体積（ｍ／ｖ）、好ましくは０．００５〜０．５％（ｍ／ｖ）、より好ましくは０．００５〜０．０２％（ｍ／ｖ）の濃度となる量で存在していてよい。最も好ましいのは、約０．０１％（ｍ／ｖ）の量である。
【００４０】
本発明の好ましい態様において、凍結乾燥組成物は、式（ＩＩ）
【００４１】
【化２】
0006522806.tif 000003
【００４２】
の抗体薬物複合体、ヒスチジン、トレハロース、およびポリソルベートを含み、トレハロース対ＡＤＣのモル比は、１，５００〜１，７００対１であり、水で再構成された場合、式（ＩＩ）のＡＤＣは、５〜１５ｍｇ／ｍｌの量で存在し、ヒスチジン濃度は、３．０〜１０ｍＭであり、ポリソルベートの量は、０．００５〜０．０２％（ｍ／ｖ）であり、ｐＨは、５．５〜５．８である。
【００４３】
本発明のより好ましい態様において、凍結乾燥組成物は、式（ＩＩ）のＡＤＣ、ヒスチジン、トレハロース、およびポリソルベート２０を含み、トレハロース対ＡＤＣのモル比は、約１，６０５対１であり、水で再構成された場合、式（ＩＩ）のＡＤＣは、約１０ｍｇ／ｍｌの量で存在し、ヒスチジンの濃度は、約５ｍＭであり、ポリソルベート２０の量は、約０．０１％（ｍ／ｖ）であり、ｐＨは、５．５〜５．８である。
【００４４】
本発明のさらにより好ましい態様において、凍結乾燥組成物は、式（ＩＩ）のＡＤＣ、ヒスチジン、トレハロース、およびポリソルベート２０を含み、トレハロース対ＡＤＣのモル比は、約１，６０５対１であり、水で再構成された場合、式（ＩＩ）のＡＤＣは、約１０ｍｇ／ｍｌの量で存在し、ヒスチジンの濃度は、約５ｍＭであり、ポリソルベート２０の量は、約０．０１％（ｍ／ｖ）であり、ｐＨは、約５．７である。
【００４５】
本発明の最も好ましい態様において、凍結乾燥組成物は、式（ＩＩ）のＡＤＣ、ヒスチジン、トレハロース、およびポリソルベート２０からなるか、またはこれらから本質的になり、トレハロース対ＡＤＣのモル比は、約１，６０５対１であり、水で再構成された場合、式（ＩＩ）のＡＤＣは、約１０ｍｇ／ｍｌの量で存在し、ヒスチジンの濃度は、約５ｍＭであり、ポリソルベート２０の量は、約０．０１％（ｍ／ｖ）であり、ｐＨは、約５．７である。
【００４６】
本明細書においてＳＹＤ９８５と呼ばれる式（ＩＩＩ）の化合物は、２．６〜２．９の範囲内の平均ＤＡＲを有する。
【００４７】
一態様において、トラスツズマブｖｃ−ｓｅｃｏ−ＤＵＢＡとしてもまた知られているＳＹＤ９８５は、約２．８の平均ＤＡＲを有する、式（ＩＩ）のＡＤＣである。このＳＹＤ９８５は、ＤＡＲ２の種約６５％、ＤＡＲ４の種約３０％、およびＤＡＲ６の種約５％からなる混合物である。ＤＡＲ２の種は、２つのリンカー薬物が、重鎖と軽鎖の間の１つの鎖間ジスフィルド架橋のシステイン残基に共役されていているＡＤＣ、および２つのリンカー薬物が、重鎖間の１つの鎖間ジスフィルド架橋のシステイン残基に共役されているＡＤＣからなる。ＤＡＲ４の種は、４つのリンカー薬物が、主に２個の異性体中でシステイン残基に共役されていて、一方の異性体においては、４つのリンカー薬物が、重鎖と軽鎖の間の２つの鎖間ジスフィルド架橋のシステイン残基に共役され、他方の異性体においては、４つのリンカー薬物が、重鎖間の２つの鎖間ジスフィルド架橋のシステイン残基に共役されている、ＡＤＣからなる。ＤＡＲ６の種は、６つのリンカー薬物が共役されているＡＤＣからなり、主な異性体は、２つのリンカー薬物が、重鎖と軽鎖の間の１つの鎖間ジスフィルド架橋のシステイン残基に共役されていて、４つのリンカー薬物が、重鎖間の２つの鎖間ジスフィルド架橋のシステイン残基に共役されている、ＡＤＣである。
【００４８】
加えて、本発明の組成物は、バルキング剤を含んでいてよい。典型的なバルキング剤としては、デキストラン、ポリビニルピロリドン、セリン、グリシン、マンニトール、イノシトール、ソルビトール、およびヒドロキシエチルデンプンが、挙げられる。好ましいバルキング剤は、マンニトールおよびソルビトールである。最も好ましいバルキング剤は、マンニトールである。バルキング剤は、凍結乾燥工程所要時間を短縮するおよび／またはケーキ外観を改善するのに十分な量で存在する。好ましくは、バルキング剤は、本発明による組成物中に全く含まれない。最も好ましくは、本発明の組成物は、ここで上に記載されている通り、式（Ｉ）または（ＩＩ）のＡＤＣ、緩衝剤、凍結乾燥保護剤、および界面活性剤からなるか、またはこれらから本質的になる。
【００４９】
本発明は、本発明による、式（Ｉ）または（ＩＩ）のＡＤＣを含む組成物の凍結乾燥のための方法を、さらに提供し、方法は、ａ）凍結乾燥保護剤対ＡＤＣのモル比が１，４００〜３，２００対１である、式（Ｉ）または（ＩＩ）のＡＤＣ、緩衝剤、凍結乾燥保護剤、および界面活性剤を含む組成物の凍結乾燥前水溶液を凍結させる工程、ｂ）大気圧より低い圧力、組成物の崩壊温度より低い製品温度で、一次乾燥させる工程、およびｃ）大気圧より低い圧力、０℃より高く組成物のガラス転移温度より低い製品温度で、二次乾燥させる工程を含む。好ましくは、組成物は、−４５℃から−３０℃の棚温度を使用して凍結される、一次乾燥は、０．２ｍｂａｒより低い圧力、−２５℃から−５℃の棚温度で、実施され、二次乾燥は、０．２ｍｂａｒより低い圧力、１５℃から４０℃、２０℃から４０℃、または２５℃から４０℃の棚温度で、実施される。好ましくは、二次乾燥は、約２０℃の棚温度で、実施される。
【００５０】
代替の態様において、方法は、ａ）本発明による組成物の凍結乾燥前水溶液を凍結させる工程、ｂ）大気圧より低い圧力、組成物の崩壊温度より低い製品温度で、一次乾燥させる工程、およびｃ）大気圧より低い圧力、組成物のガラス転移温度より低い製品温度で、二次乾燥させる工程を含み、凍結させる工程ａ）は、アニーリング工程を含む。
【００５１】
好ましくは、アニーリング工程は、０．５から６時間または１から６時間、−２５℃から−１０℃の棚温度で実施される。より好ましいのは、１から５時間または２から５時間、−２５℃から−１５℃の棚温度でのアニーリング工程である。さらにより好ましくは、工程ａ）は、装置の棚温度を、１，０００ｍｂａｒの圧力で、−５０℃から−３０℃の棚温度へ０．２〜１℃／分の速さで低下させること、その後、この温度を３０分から１．５時間維持すること、次に、棚温度を、−２５℃から−１０℃の棚温度へ０．２〜１℃／分の速さで上昇させること、およびこの温度を０．５から３時間または１．５から３時間維持し、続いて、−５０℃から−４０℃の棚温度へ０．２〜１．０℃／分の速さで冷却させ、続いて、その温度を１〜２時間維持することを含む。
【００５２】
本発明者らは、アニーリング工程の包含が、凍結乾燥工程所要時間を劇的に、驚くほど短縮することが分かった。４時間以下のアニーリング工程が含まれる場合、全工程所要時間は、４０時間以上短縮する。同じく、凍結乾燥物の形態は、アニーリング工程が含まれる場合、最適である。ケーキの多孔度が上昇して、より速くより均質な乾燥をもたらし、一次乾燥後の残留水分が、少ない。
【００５３】
［実施例］
ＳＹＤ９８５の凍結乾燥前溶液の調製
ＡＤＣ  ＳＹＤ９８５（すなわち、トラスツズマブｖｃ−ｓｅｃｏ−ＤＵＢＡ）を、Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．、１３（１１）２０１４年１１月、２６１８〜２６２９中のＤＯＫＴＥＲ，Ｗらの補充書において公開されている、方法および手順にしたがって、調製し、精製した。精製後、ＳＹＤ９８５溶液を、３０ｋＤａカットオフのポリエーテルスルホン膜を有する単回使用タンジェンシャルフローカセット（tangential flow cassette）（Ｓｉｕｓ（商標））を使用して、界面活性剤なしで、表１に示されている水溶液を使用して、濃縮し、透析濾過した。透析濾過後、界面活性剤を加え、溶液を、ＳＹＤ９８５  １０ｍｇ／ｍｌまで希釈した。次に、最終溶液を、−７０℃ですぐに凍結させ、貯蔵した。ＳＹＤ９８５濃度を、ＵＶ−ＶＩＳを使用して測定し、ｍｇ／ｍｌで表す。モル量を、ＳＹＤ９８５（平均ＤＡＲ２．７）について、１５１．８ｋＤａの分子量を使用して計算した。
【００５４】
【表１】
0006522806.tif 000004
【００５５】
溶液Ｉ〜ＶＩのＲ＆Ｄ安定性を測定するために使用される凍結乾燥方法
凍結溶液Ｉ〜ＶＩを、室温（ＲＴ）で解凍し、沈殿物がない場合、０．２２μｍフィルターで濾過し、バイアルに満たした。バイアルを、小規模凍結乾燥装置に入れた。凍結乾燥は、−３５℃まで棚温度を低下させ、続いて、−１０℃の棚温度、０．０７５ｍｂａｒで一次乾燥させ、４０℃の棚温度で二次乾燥させることによって、実施された。マンニトールを含有する組成物Ｉにおいて、−２０℃の棚温度で４時間のアニーリング工程を、凍結工程と一次工程の間に導入した。トレハロース８０ｍｇ／ｍｌ超を有する組成物ＶＩにおいて、−１２℃で５時間のアニーリング工程を、−４０℃までの凍結後に導入し、一次乾燥を、０．０７５ｍｂａｒおよび凍結乾燥物の崩壊を避けるのに必要とされる−２１℃で、実施した。−５℃での中間乾燥工程を、一次乾燥と二次乾燥の間に導入して、溶解を防止した。二次乾燥工程を、２０℃で実施した。
【００５６】
凍結乾燥方法（一般的方法）
以下の方法は、本発明による凍結乾燥組成物を得るための一般的手順である。
【００５７】
ＳＹＤ９８５の凍結乾燥のために、ヒスチジン５ｍＭ、トレハロース二水和物４０ｍｇ／ｍｌ、およびポリソルベート２０  ０．０１％（ｍ／ｖ）を含有する、ＳＹＤ９８５（１０ｍｇ／ｍｌ）の凍結溶液を、解凍し、濾過し、２０ｍｌバイアルを、ＳＹＤ９８５溶液８．３ｍｌで満たした。バイアルを、Ｅｐｓｉｌｏｎ２〜６Ｄ（ＭａｒｔｉｎＣｈｒｉｓｔ）Ｒ＆Ｄ凍結乾燥装置に入れた。装置の棚温度を、１，０００ｍｂａｒの圧力で、−５０℃から−３０℃の棚温度へ０．２〜１℃／分の速さで低下させ、その後、この温度を、１から２時間維持し、次に、棚温度を、−２５℃から−１０℃の温度へ０．２〜１℃／分の速さで上昇させ、この温度を、１．５から３時間維持した。次の工程は、−５０℃から−４０℃の棚温度への０．２〜１．０℃／分の速さでの冷却工程であり、続いて、その温度を、１〜２時間維持した。その後、圧力を、０．０５〜０．３ｍｂａｒへ低下させ、棚温度を、−１５℃から−５℃へ０．２〜１℃／分の速さで、再度上昇させ、その温度を、０．０５〜０．３ｍｂａｒの圧力で２５から３５時間維持した。次に、棚温度を、５〜２０℃／時の速さで２０℃から４０℃へ上昇させ、この温度を、１〜１０時間維持した。
【００５８】
アニーリング工程のない比較例
組成物Ｖの凍結溶液を、室温で解凍し、沈殿物がない場合、０．２２μｍフィルターで濾過し、バイアルに満たした。バイアルを、Ｅｐｓｉｌｏｎ２〜６Ｄ（ＭａｒｔｉｎＣｈｒｉｓｔ）Ｒ＆Ｄ凍結乾燥装置に入れた。凍結乾燥は、０．２〜１℃／分の速さで−４０℃まで棚温度を低下させ、続いて、５０時間、−１０℃の棚温度、０．０７５ｍｂａｒで一次乾燥させることによって、実施された。一次乾燥後、棚温度を、３℃／時の速さで４０℃まで上昇させ、その温度で１０時間保持した。全工程所要時間は、約９２時間であった。
【００５９】
凍結乾燥方法の結果
凍結乾燥ケーキの外観／品質
多様な製剤の凍結乾燥ケーキの外観を、表４、第３列にまとめる。表１の製剤Ｉ、ＩＩＩ、ＩＶおよびＶは、凍結乾燥後、良好な外観を有した。凍結乾燥保護剤の量がＡＤＣのモル量の１，４００倍より少ないとき、かなりの量のマンニトールの存在下（製剤Ｉ）以外では、最終の凍結乾燥生成物について不満足な結果がもたらされた。溶液ＩＩの凍結乾燥は、劣った品質の凍結乾燥ケーキをもたらした（図１Ｂ参照）。外観検査で、亀裂および崩壊が見られた。ＳＹＤ９８５のない類似の溶液、プラセボが、凍結乾燥物として許容可能なケーキ外観を有した（図１Ａ参照）ので、劣ったケーキ品質は、予期されなかった。１，６０５モル過剰のトレハロースを有する、表１の溶液ＩＩＩ、ＩＶ、およびＶの溶液の凍結乾燥は、所望の品質のケーキをもたらす（溶液ＩＩＩのケーキを、図１Ｃに示す）。
【００６０】
凍結乾燥方法の持続時間
多様な凍結乾燥方法についての持続時間を、表２にまとめる。
【００６１】
【表２】
0006522806.tif 000005
【００６２】
表１の溶液ＶＩのためのＲ＆Ｄ凍結乾燥方法は、−１２℃で５時間のアニーリング工程を有して、少なくとも５日間（約１２２時間）を必要とした一方で、溶液Ｉ、ＩＩ、ＩＶおよびＶの凍結乾燥は、４日未満（アニーリングなしで約９２時間）しか、かからなかった。
【００６３】
アニーリング工程を有する凍結乾燥方法は、製剤Ｖについて約４４時間の全工程所要時間を有する。図４は、アニーリング工程なしの比較方法によって得られた溶液Ｖの凍結乾燥ケーキのＳＥＭ写真（左）およびアニーリングありの凍結乾燥ケーキの写真（右）を示す。ケーキの多孔度は、明らかに上昇した。溶液Ｖのスケール拡大は、約６３時間の工程所要時間を有する方法をもたらした。
【００６４】
商業的凍結乾燥方法への溶液ＶＩのスケール拡大は、成功しなかった、その理由は、条件の最適化後に得られた最短の商業規模方法が、アニーリング工程を有して、なお８日間超かかったからである。アニーリング工程なしで、この方法は、約１３日かかり、崩壊したケーキをもたらした。ＳＹＤ９８５液体凍結乾燥前溶液中の高いトレハロース含有量は、凍結乾燥方法にとって不利である。
【００６５】
安定性測定
ａ）溶液中の安定性
凍結溶液を、ＲＴで解凍し、沈殿物がない場合、０．２２μｍフィルターで濾過し、バイアルに満たした。顕微鏡でなければ見えない粒子状物質分析を、ＰＡＭＡＳ  ＣＶＳＳパーティクルカウンター（ＨＣＢ−ＬＤ−２５／２５センサー、Ｐａｒｔｉｋｅｌｍｅｓｓ−ｕｎｄ  Ａｎａｌｙｓｅ  Ｓｙｓｔｅｍｅ  ＧｍｂＨ）を使用して、光遮蔽技術（ＬＯ）よって、測定した。手順を、Ｐｈ．Ｅｕｒ．＜２．９．１９＞、粒子汚染；顕微鏡でなければ見えない粒子。にしたがって、実施する。試料体積３００μｌを、計測する（実行前（prerun）体積：０．８ｍＬ、すすぎ体積：５ｍＬ、注入およびすすぎ速度：１０ｍＬ／分）。少なくとも３回連続してＬＯ測定を、試料毎に、実施した。結果を、ＰＭＡソフトウエアを使用して分析する。
【００６６】
溶液中の凝集を測定するための、粒径の指標であるＺ平均を、動的光散乱法（ＤＬＳ）を使用して測定した。分析を、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  ＡＰＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、λ０＝８３０ｎｍ、θ＝９０°）で実施した。試料体積１００μｌを、計測する。試料毎に、少なくとも３回連続してＤＬＳ測定を、溶液を静止させるため２分の間隔おいて、実施した。全ての測定の間、温度を、２５℃に一定に保持し、散乱結果を、粘度のために補正した。
【００６７】
ｂ）凍結乾燥組成物の安定性
凍結乾燥試料を、注射用の水を使用して再構成した。全ての測定された凍結乾燥組成物は、簡単に再構成可能であった。
【００６８】
再構成組成物Ｉ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、およびＶＩ中の高分子量材料（ＨＭＷ）およびＳＹＤ９８５の単量体のパーセンテージを、０．３ｍｌ／分の流量での移動相として、ｐＨ７．５のＮａＣｌ  ３００ｍＭを有するリン酸緩衝液５０ｍＭを使用して、２５℃のカラム温度で、Ｊｏｉｎｔ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  ＳｙｓｔｅｍｓのＴＳＫｇｅｌ  Ｇ３０００ＳＷｘ  ｌ、５μｍ、７．８ｍｍ×３０ｃｍ分析カラム（ＰＮ０８５４１）を有する、島津製作所のＵＦＬＣシステム上のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）中の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって、測定した。典型的に、再構成製剤５０μｌを、ＳＹＤ９８５およそ１．０ｍｇ／ｍＬの濃度まで希釈した。
【００６９】
安定性結果
ａ）溶液中の安定性
表３は、表１の凍結乾燥前溶液についての安定性結果の概要を提示している。凍結乾燥後の外観が、許容可能でなかったので、溶液ＩＩの安定性は、測定されなかった。測定された５つの溶液は全て、溶液Ｉを除いて、同等の安定性を示した。トレハロース約８００のモル過剰を有する表１の溶液Ｉは、溶液中の安定性の低下をもたらした（表３参照）。ＲＴで１カ月後、タンパク質様沈殿物を、観察した。溶液Ｉについて、コロイド安定性の低下も、同様に、室温（ＲＴ）で１カ月後、ＬＯおよびＤＬＳ測定によって、観察された。溶液Ｉは、ＬＯによって観察された通り、ｔ＝１カ月で、大量の粒子＞１０μｍを有する一方で、その他の溶液で観察された、このサイズの粒子は少量だった。か月保持された溶液について、ＤＬＳで測定されたＺ平均も、その他の溶液と比較して、溶液Ｉ中で、同じく、有意に上昇している。
【００７０】
【表３】
0006522806.tif 000006
【００７１】
５ｍＭのヒスチジン濃度（ＩＶおよびＶ）を有する、ＩＶとＶの両方の溶液は、１０ｍＭのヒスチジン濃度を有する、ＩＩＩおよびＶＩについて測定された値より低いＺ平均値を有する。
【００７２】
ｂ）凍結乾燥組成物の安定性
図２および３は、表１の溶液Ｉが、凍結乾燥される場合、凍結乾燥ケーキ中の単量体％が、減少することを示す一方で、ＨＭＷ％は、４０℃で時間とともに上昇し、安定性の低下を示す。図２および３は、製剤ＶおよびＶＩについて、製剤Ｉと比べて、単量体％の低下ならびにＨＭＷ％の上昇が、時間とともに有意により低下することを示す。ｔ＝１カ月において、再構成溶液ＩＩＩおよびＩＶ中の単量体の量は、溶液Ｉ中の単量体の量より多い。ｔ＝１カ月において、ＨＭＷの量は、溶液Ｉ、ＩＩＩおよびＩＶについて類似している。
【００７３】
【表４】
0006522806.tif 000007
以下に、出願当初の請求項を実施の態様として付記する。
［１］
式（Ｉ）
【化３】
0006522806.tif 000008
の抗体薬物複合体、緩衝剤、凍結乾燥保護剤、および界面活性剤を含む、凍結乾燥組成物であって、凍結乾燥保護剤対抗体薬物複合体のモル比が、１，４００〜３，２００対１である、組成物。
［２］
前記凍結乾燥保護剤が、非還元サッカライドである、［１］に記載の組成物。
［３］
前記凍結乾燥保護剤が、スクロース、トレハロース、またはそれらの混合物である、［１］または［２］に記載の組成物。
［４］
前記抗体薬物複合体が、水で再構成された場合、１〜３０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する、［１］〜［３］の何れか一に記載の組成物。
［５］
前記緩衝剤が、ヒスチジン、クエン酸塩またはコハク酸塩である、［１］〜［４］の何れか一に記載の組成物。
［６］
前記緩衝剤が、水で再構成された場合、２．５〜２５ｍＭの濃度で存在する、［１］〜［５］の何れか一に記載の組成物。
［７］
前記界面活性剤が、アルキルグリコシド、ポロキサマー、またはポリソルベートである、［１］〜［６］の何れか一に記載の組成物。
［８］
水で再構成された場合、水溶液が、ｐＨ５．３〜６．０を有する、［１］〜［７］の何れか一に記載の組成物。
［９］
前記モノクローナル抗体が、抗ＨＥＲ２抗体である、［１］〜［８］の何れか一に記載の組成物。
［１０］
凍結乾燥保護剤対抗体薬物複合体のモル比が、１，４００〜３，２００対１である、式（Ｉ）の抗体薬物複合体、緩衝剤、凍結乾燥保護剤、および界面活性剤から本質的になる、［１］〜［９］の何れか一に記載の組成物。
［１１］
凍結乾燥保護剤対抗体薬物複合体のモル比が、１，４００〜２，０００対１または１，４００〜１，８００対１である、［１］〜［１０］の何れか一項に記載の組成物。
［１２］
トレハロース対抗体薬物複合体のモル比が、約１，６０５対１であり、水で再構成された場合、前記ＡＤＣが、約１０ｍｇ／ｍｌの量で存在し、ヒスチジンの濃度が、約５ｍＭであり、ポリソルベート２０の量が、約０．０１％（ｍ／ｖ）であり、ｐＨが、約５．７である、式（ＩＩ）
【化４】
0006522806.tif 000009
の抗体薬物複合体、ヒスチジン、トレハロース、およびポリソルベート２０を含む、［１］〜［１１］の何れか一に記載の組成物。
［１３］
トレハロース対抗体薬物複合体のモル比が、約１，６０５対１であり、水で再構成された場合、前記ＡＤＣが、約１０ｍｇ／ｍｌの量で存在し、ヒスチジンの濃度が、約５ｍＭであり、ポリソルベート２０の量が、約０．０１％（ｍ／ｖ）であり、ｐＨが、約５．７である、式（ＩＩ）の抗体薬物複合体、ヒスチジン、トレハロース、およびポリソルベート２０から本質的になる、［１２］に記載の組成物。
［１４］
ａ）［１］〜［１３］の何れか一に記載の組成物の凍結乾燥前水溶液を凍結させる工程、ｂ）大気圧より低い圧力、組成物の崩壊温度より低い製品温度で、一次乾燥する工程、およびｃ）大気圧より低い圧力、０℃より高く組成物のガラス転移温度より低い製品温度で、二次乾燥する工程を含む、［１］〜［１３］の何れか一に記載の組成物の調製のための方法。
［１５］
前記凍結させる工程ａ）が、アニーリング工程を含み、前記アニーリング工程を、−２５℃から−１０℃の範囲内の棚温度で、０．５から６時間実施する、請求項［１４］に記載の方法。
【図１】
0006522806.tif 000012
【図２】
0006522806.tif 000013
【図３】
0006522806.tif 000014
【図４】
0006522806.tif 000015