(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト、ラット、マウス、ブタおよびイヌのＣＤ４７と特異的に結合するモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、
前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１〜３）および３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１〜３）を含み、
前記ＬＣＤＲ１がアミノ酸配列ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＮＧＮＴＹＬＨ（配列番号１）を含み、
前記ＬＣＤＲ２がアミノ酸配列ＫＶＳＹＲＦＳ（配列番号２）を含み、
前記ＬＣＤＲ３がアミノ酸配列ＳＱＮＴＨＶＰＲＴ（配列番号３）を含み、
前記ＨＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹＹＶＦ（配列番号４）を含み、
前記ＨＣＤＲ２がアミノ酸配列ＤＩＮＰＶＮＧＤＴＮＦＮＥＫＦＫＮ（配列番号５）を含み、そして
前記ＨＣＤＲ３がアミノ酸配列ＧＧＹＴＭＤＹ（配列番号６）を含む、
モノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２】
キメラまたはヒト化である、請求項１に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３】
軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、前記ＬＣＶＲおよび前記ＨＣＶＲがそれぞれ、
配列番号７および配列番号５７、
配列番号８および配列番号５８、
配列番号９および配列番号５９、
配列番号１０および配列番号６０、
配列番号１１および配列番号６１、
配列番号１２および配列番号６２、
配列番号１３および配列番号６３、
配列番号１４および配列番号６４、
配列番号１５および配列番号６５、
配列番号１６および配列番号６６、
配列番号１７および配列番号６７、
配列番号１８および配列番号６８、
配列番号１９および配列番号６９、
配列番号２０および配列番号７０、
配列番号２１および配列番号７１、
配列番号２２および配列番号７２、
配列番号２３および配列番号７３、
配列番号２４および配列番号７４、
配列番号２５および配列番号７５、
配列番号２６および配列番号７６、
配列番号２７および配列番号７７、
配列番号２８および配列番号７８、
配列番号２９および配列番号７９、
配列番号３０および配列番号８０、ならびに
配列番号３１および配列番号８１
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４】
ヒトＣＤ４７への結合に対して請求項１に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と競合する、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５】
請求項１に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と、薬学的または生理学的に許容可能なキャリア、希釈剤、または賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項６】
ヒトの治療において使用するための、請求項１に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項７】
ヒト患者における、虚血再灌流傷害、または自己免疫性もしくは炎症性疾患の低減、予防および／または処置における使用のための、請求項１に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項８】
前記虚血再灌流傷害が、臓器移植、急性腎障害、心肺バイパス手術、肺高血圧症、鎌状赤血球症、心筋梗塞、脳卒中、外科的切除および再建手術、付属器の再付着、皮膚移植、または外傷で起こる、請求項７に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項９】
前記自己免疫性または炎症性疾患が、関節炎、多発性硬化症、乾癬、クローン病、炎症性腸疾患、ループス、グレーブス病および橋本病、ならびに強直性脊椎炎からなる群から選択される、請求項７に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１０】
前記使用が、一酸化窒素供与体、前駆体、もしくは両方、一酸化窒素を発生する局所薬剤、可溶性グアニリルシクラーゼを活性化する薬剤、環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼを阻害する薬剤、または上記のもののいずれかの任意の組み合わせを有効量で前記被験者に投与することをさらに含む、
請求項７に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１１】
感受性癌の処置または低減において使用するための、請求項１に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１２】
前記感受性癌の細胞の食作用を促進し、そして／あるいはそれを死滅させる、請求項１１に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１３】
前記感受性癌が、白血病、リンパ腫、卵巣癌、乳癌、子宮内膜癌、結腸癌、直腸癌、胃癌、膀胱癌、肺癌、気管支癌、骨癌、前立腺癌、膵癌、肝臓および胆管癌、食道癌、腎癌、甲状腺癌、頭頸部癌、精巣癌、神経膠芽腫、星状細胞腫、メラノーマ、骨髄異形成症候群、ならびに肉腫からなる群から選択される、請求項１１に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１４】
前記白血病が、急性リンパ性（リンパ芽球性）白血病、急性骨髄性白血病、骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、形質細胞性白血病、および慢性骨髄性白血病からなる群から選択され、
前記リンパ腫が、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、およびワルデンストレームマクログロブリン血症を含む、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫からなる群から選択され、そして
前記肉腫が、骨肉腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、滑膜肉腫、胞巣状軟部肉腫、血管肉腫、脂肪肉腫、繊維肉腫、横紋筋肉腫、および軟骨肉腫からなる群から選択される、
請求項１３に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１５】
ヒト患者における虚血再灌流傷害、または自己免疫性もしくは炎症性疾患の低減、予防および／または処置における使用のための、
請求項１に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１６】
感受性癌の低減、予防および／または処置における使用のための、
請求項１に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１７】
請求項１に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片の、ヒト患者における虚血再灌流傷害、または自己免疫性もしくは炎症性疾患を低減、予防および／または処置するための医薬の製造のための、使用。
【請求項１８】
請求項１に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片の、感受性癌を処置または低減するための医薬の製造のための、使用。
【請求項１９】
請求項１５に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、
前記虚血再灌流傷害が、臓器移植、急性腎障害、心肺バイパス手術、肺高血圧症、鎌状赤血球症、心筋梗塞、脳卒中、外科的切除および再建手術、付属器の再付着、皮膚移植、または外傷で起こるものである、
モノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２０】
請求項１７に記載の使用であって、
前記自己免疫性または炎症性疾患が、関節炎、多発性硬化症、乾癬、クローン病、炎症性腸疾患、ループス、グレーブス病および橋本病、ならびに強直性脊椎炎からなる群から選択される、
使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、２０１２年１２月１２日に出願された米国仮特許出願第６１／７３６，３０１号、および２０１３年６月１１日に出願された米国仮特許出願第６１／８３３，６９１号（それぞれの内容は参照によってその全体が本明細書中に援用される）の優先権の利益を主張する。
【０００２】
本発明は、ヒトおよび他のＣＤ４７を含むＣＤ４７に結合する抗体と、この受容体によって媒介される虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）および癌などの状態および障害の処置におけるその使用とに関する。
【背景技術】
【０００３】
ＣＤ４７は、細胞外ＩｇＶ設定ドメイン、５回膜貫通型膜貫通ドメイン、および選択的にスプライシングされる細胞質側末端で構成される細胞表面受容体である。２つのリガンドのトロンボスポンジン−１（ＴＳＰ１）およびシグナル阻害性受容体タンパク質α（ＳＩＲＰα）がＣＤ４７に結合する。ＴＳＰ１のＣＤ４７への結合はヘテロ三量体Ｇタンパク質Ｇｉを活性化し、これは、細胞内環状ＡＭＰ（ｃＡＭＰ）レベルの抑制をもたらす。さらにＴＳＰ１−ＣＤ４７経路は、全ての血管細胞内の一酸化窒素経路の有益な効果を妨害する。一酸化窒素（ＮＯ）経路は、基質としてアルギニンを用いて生物活性ガスＮＯを発生させる３つの酵素（一酸化窒素合成酵素、ＮＯＳ  Ｉ、ＮＯＳ  ＩＩおよびＮＯＳ  ＩＩＩ）のいずれかからなる。ＮＯは、それを産生する細胞内または隣接細胞内で、メッセンジャー分子の環状ＧＭＰ（ｃＧＭＰ）を産生する酵素可溶性グアニリルシクラーゼを活性化するように作用することができる。ＮＯ−ｃＧＭＰ経路の適切な機能は、創傷、炎症、高血圧症、メタボリック症候群、虚血、および虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）に起因するものを含む（限定されない）ストレスに対して心血管系を保護するために必須である。これらの細胞ストレスという状況において、ＴＳＰ１−ＣＤ４７系によるＮＯ−ｃＧＭＰ経路の阻害はストレスの影響を悪化させる。これは、ｃＧＭＰおよびｃＡＭＰの両方が重要な保護の役割を果たす心血管系における特有の問題である。虚血および再灌流傷害が疾患、外傷、および外科手術の予後不良を引き起こすか、あるいはその一因となる場合は多数ある。
【０００４】
ＳＩＲＰαは、マクロファージおよび樹状細胞を含む造血細胞において発現される。潜在的に食作用のある標的細胞においてＳＩＲＰαがＣＤ４７と結合すると、食作用は遅延または阻止される。ＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用は、貪食細胞に対して「ｄｏｎ’ｔ  ｅａｔ  ｍｅ」シグナルを効果的に送る。従って、モノクローナル抗体によるＳＩＲＰα−ＣＤ４７相互作用の遮断は、この治療的状況において、宿主の免疫系による癌細胞の取込みおよび排除を促進、すなわち増大させることによって有効な抗癌治療を提供することができる。このメカニズムは、白血病および多数の種類の固形腫瘍の両方において有効である。
【０００５】
米国特許第８，２３６，３１３号明細書では、虚血および血流の分野において、組織虚血、ならびに関係および関連の組織および細胞損傷を逆転および／または阻止するために有用であり得る抗体（ＣＤ４７を遮断する抗体を含む）が考慮されている。どの抗体も実際には開示されていない。
【０００６】
米国特許第８，１０１，７１９号明細書には、血液疾患の処置において使用するために、ＣＤ４７に結合するヒト化抗体が開示されている。この発明の目的は、そのＣＤ４７結合活性およびアポトーシス誘発活性を保持しながら、低減された抗原性を示すヒト化抗ＣＤ４７抗体および小さい抗体断片を含む。このような抗体および小断片は、種々のタイプの白血病、悪性リンパ腫、再生不良性貧血、骨髄異形成症候群（ｍｙｅｏｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、および真性赤血球増加症などの血液疾患の処置における使用が考慮されている。これらの抗体の他の特性は開示されていない。
【０００７】
ＰＣＴ国際公開第２０１１／１４３６２４号パンフレットには、特に癌治療において、例えばＣＤ４７を発現する癌細胞の食作用を増大させるために、ヒトのＣＤ４７に関連する疾患の診断および免疫療法のための試薬として使用するためのキメラおよびヒト化抗ＣＤ４７モノクローナル抗体が開示されている。好ましい抗体は非活性化型であり、すなわち、リガンド結合を遮断するが、シグナル伝達を行なわない。開示されたヒト化Ｂ６Ｈ１２および５Ｆ９抗体は可溶性ヒトＣＤ４７に結合し、Ｂ６Ｈ１２は、ヒトＣＤ４７トランスフェクトＹＢ２／０細胞の表面上のヒトＣＤ４７にも結合した。ヒト化Ｂ６Ｈ１２および５Ｆ９抗体はそれぞれ、インビトロでマウス骨髄または末梢血由来のマクロファージによるＣＦＳＥ標識ＨＬ−６０細胞の食作用を可能にした。ヒト化Ｂ６Ｈ１２は、ヒトＶＨ−３−７およびＶＫ３−１１フレームワークを利用した。
【０００８】
米国特許出願公開第２０１３／０１４２７８６号明細書には、ＣＤ４７発現細胞の食作用を増大させる非活性化型抗ＣＤ４７抗体が開示されている。
【０００９】
ＰＣＴ国際公開第２０１３／１１９７１４号パンフレットには、ヒト赤血球の有意レベルの血球凝集を引き起こさない抗ＣＤ４７抗体が開示されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
ＩＲＩが病態形成に関与する状況で心血管系における一酸化窒素−ｃＧＭＰシグナル伝達およびｃＡＭＰシグナル伝達の有益な効果を促進するために、ＴＳＰ１のＣＤ４７への結合を選択的に遮断するヒトＣＤ４７に対する抗体の必要性が存在する。これらの状況／疾患には、臓器移植、急性腎障害、心肺バイパス手術、肺高血圧症、鎌状赤血球症、心筋梗塞、脳卒中、外科的切除および再建手術、指／身体部分の再付着、皮膚移植、および外傷が含まれる。また、ＳＩＲＰαのＣＤ４７への結合を遮断し、従って新規の抗癌治療を提供する抗体も必要とされている。形質転換または癌細胞を選択的に死滅させる、あるいはその細胞死を誘発する能力も有するこのような抗体は、付加的な治療効果も提供することが期待される。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明の抗体化合物はこれらの必要性を満たす。これらはＣＤ４７の細胞外ＩｇＶドメイン内のエピトープに結合し、ＴＳＰ１およびＳＩＲＰαのＣＤ４７への結合および受容体の活性化を阻害するが、アゴニスト活性を少ししかまたは全く誘発しない。また本発明の特定の他の抗体は、腫瘍細胞の食作用性排除の促進（増大）に加えて、活性化または形質転換された癌細胞に特異的な腫瘍毒性または細胞死誘発効果も提供する。これらの特性を考慮して、本発明の抗体化合物は、ＩＲＩの多数の形態、ならびに血液癌および固形腫瘍の両方の処置において治療的に有用なはずである。
【００１２】
さらに、本発明の抗体化合物は、ヒト、マウス、ラット、ブタ、およびイヌを含む様々な種類の哺乳類種のＣＤ４７との広い反応性を含むいくつかの他の望ましい特性を有し、それにより、これらの抗体は人間医学および獣医学の両方において有用になる。この特徴は、様々な哺乳類種における安全性および効力の研究を含む（限定されない）前臨床研究を容易にし、従って人間および動物の治療法としてこのような抗体の開発を容易にするという点でさらに有利である。
【００１３】
従って、本発明は以下のものを提供する。
［１］ヒト、ラット、マウス、ブタ、およびイヌＣＤ４７と特異的に結合するモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【００１４】
［２］キメラまたはヒト化である［１］のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【００１５】
［３］３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１〜３）および３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１〜３）を含む［１］または［２］のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、
ＬＣＤＲ１はアミノ酸配列ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＮＧＮＴＹＬＨ（配列番号１）を含み、
ＬＣＤＲ２はアミノ酸配列ＫＶＳＹＲＦＳ（配列番号２）を含み、
ＬＣＤＲ３はアミノ酸配列ＳＱＮＴＨＶＰＲＴ（配列番号３）を含み、
ＨＣＤＲ１はアミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹＹＶＦ（配列番号４）を含み、
ＨＣＤＲ２はアミノ酸配列ＤＩＮＰＶＮＧＤＴＮＦＮＥＫＦＫＮ（配列番号５）を含み、
ＨＣＤＲ３はアミノ酸配列ＧＧＹＴＭＤＹ（配列番号６）を含む。
【００１６】
［４］軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む［１］〜［３］のいずれか１つのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、前記ＬＣＶＲおよび前記ＨＣＶＲはそれぞれ、
配列番号７および配列番号５７、
配列番号８および配列番号５８、
配列番号９および配列番号５９、
配列番号１０および配列番号６０、
配列番号１１および配列番号６１、
配列番号１２および配列番号６２、
配列番号１３および配列番号６３、
配列番号１４および配列番号６４、
配列番号１５および配列番号６５、
配列番号１６および配列番号６６、
配列番号１７および配列番号６７、
配列番号１８および配列番号６８、
配列番号１９および配列番号６９、
配列番号２０および配列番号７０、
配列番号２１および配列番号７１、
配列番号２２および配列番号７２、
配列番号２３および配列番号７３、
配列番号２４および配列番号７４、
配列番号２５および配列番号７５、
配列番号２６および配列番号７６、
配列番号２７および配列番号７７、
配列番号２８および配列番号７８、
配列番号２９および配列番号７９、
配列番号３０および配列番号８０、ならびに
配列番号３１および配列番号８１
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００１７】
［５］軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含むモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、前記ＬＣＶＲおよび前記ＨＣＶＲはそれぞれ、
配列番号７および配列番号５７、
配列番号８および配列番号５８、
配列番号１１および配列番号６１、
配列番号１４および配列番号６４、
配列番号１６および配列番号６６、
配列番号１８および配列番号６８、
配列番号１９および配列番号６９、
配列番号２５および配列番号７５、
配列番号２７および配列番号７７、
配列番号２８および配列番号７８、
配列番号２９および配列番号７９、
配列番号３０および配列番号８０、ならびに
配列番号３１および配列番号８１
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００１８】
［６］軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含むモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、前記ＬＣＶＲおよび前記ＨＣＶＲはそれぞれ、
配列番号９および配列番号５９、
配列番号１０および配列番号６０、
配列番号１２および配列番号６２、
配列番号１３および配列番号６３、
配列番号１５および配列番号６５、
配列番号１７および配列番号６７、
配列番号２０および配列番号７０、
配列番号２１および配列番号７１、
配列番号２２および配列番号７２、
配列番号２３および配列番号７３、
配列番号２４および配列番号７４、ならびに
配列番号２６および配列番号７６
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００１９】
［７］ＣＤ４７、特にヒトＣＤ４７への結合に対して前記［１］〜［６］のいずれか１つのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と競合するモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【００２０】
［８］前記［１］〜［７］のいずれか１つのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と、薬学的または生理学的に許容可能なキャリア、希釈剤、または賦形剤とを含む医薬組成物。
【００２１】
［９］ヒトの治療、またはコンパニオン／ペット動物、使役動物、スポーツ動物、動物園の動物の治療、または捕獲されている他の価値のある動物の治療において使用するための、請求項［１］〜［７］のいずれか１つのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【００２２】
［１０］ヒトもしくはコンパニオン／ペット動物、使役動物、スポーツ動物、動物園の動物、または捕獲されている他の価値のある動物において、虚血再灌流傷害、または自己免疫性もしくは炎症性疾患を処置する際に使用するための、［１］〜［７］のいずれか１つのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【００２３】
［１１］軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む［１０］のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、前記ＬＣＶＲおよび前記ＨＣＶＲはそれぞれ、
配列番号７および配列番号５７、
配列番号８および配列番号５８、
配列番号１１および配列番号６１、
配列番号１４および配列番号６４、
配列番号１６および配列番号６６、
配列番号１８および配列番号６８、
配列番号１９および配列番号６９、
配列番号２５および配列番号７５、
配列番号２７および配列番号７７、
配列番号２８および配列番号７８、
配列番号２９および配列番号７９、
配列番号３０および配列番号８０、ならびに
配列番号３１および配列番号８１
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００２４】
［１２］前記虚血再灌流傷害が、臓器移植、急性腎障害、心肺バイパス手術、肺高血圧症、鎌状赤血球症、心筋梗塞、脳卒中、外科的切除および再建手術、付属器もしくは他の身体部分の再付着、皮膚移植、または外傷で起こる、［１０］または［１１］のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【００２５】
［１３］前記自己免疫性または炎症性疾患が、関節炎、多発性硬化症、乾癬、クローン病、炎症性腸疾患、ループス、グレーブス病および橋本病、ならびに強直性脊椎炎からなる群から選択される、［１０］または［１１］のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【００２６】
［１４］感受性癌の処置において使用するための、［１］〜［７］のいずれか１つのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【００２７】
［１５］軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む［１４］のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、前記ＬＣＶＲおよび前記ＨＣＶＲはそれぞれ、
配列番号９および配列番号５９、
配列番号１０および配列番号６０、
配列番号１２および配列番号６２、
配列番号１３および配列番号６３、
配列番号１５および配列番号６５、
配列番号１７および配列番号６７、
配列番号２０および配列番号７０、
配列番号２１および配列番号７１、
配列番号２２および配列番号７２、
配列番号２３および配列番号７３、
配列番号２４および配列番号７４、ならびに
配列番号２６および配列番号７６
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００２８】
［１６］前記感受性癌の細胞の食作用を促進し、そして／あるいはそれを死滅させる［１４］または［１５］のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【００２９】
［１７］前記感受性癌が、白血病、リンパ腫、卵巣癌、乳癌、子宮内膜癌、結腸癌、直腸癌、胃癌、膀胱癌、肺癌、気管支癌、骨癌、前立腺癌、膵癌、肝臓および胆管癌、食道癌、腎癌、甲状腺癌、頭頸部癌、精巣癌、神経膠芽腫、星状細胞腫、メラノーマ、骨髄異形成症候群、ならびに肉腫からなる群から選択される、［１４］〜［１６］のいずれか１つのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【００３０】
［１８］前記白血病が、急性リンパ性（リンパ芽球性）白血病、急性骨髄性白血病、骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、形質細胞性白血病、および慢性骨髄性白血病からなる群から選択され、
前記リンパ腫が、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、およびワルデンストレームマクログロブリン血症を含む、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫からなる群から選択され、そして
前記肉腫が、骨肉腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、滑膜肉腫、胞巣状軟部肉腫、血管肉腫、脂肪肉腫、繊維肉腫、横紋筋肉腫、および軟骨肉腫（ｃｈｒｏｎｄｒｏｓａｒｃｏｍａ）からなる群から選択される、
［１７］のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【００３１】
［１９］ヒトもしくはコンパニオン／ペット動物、使役動物、スポーツ動物、動物園の動物、または捕獲されている他の価値のある動物において、虚血再灌流傷害、または自己免疫性もしくは炎症性疾患を処置するための、前記［１］〜［７］のいずれか１つのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片の使用。
【００３２】
［２０］前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片が軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む［１９］の使用であって、前記ＬＣＶＲおよび前記ＨＣＶＲはそれぞれ、
配列番号７および配列番号５７、
配列番号８および配列番号５８、
配列番号１１および配列番号６１、
配列番号１４および配列番号６４、
配列番号１６および配列番号６６、
配列番号１８および配列番号６８、
配列番号１９および配列番号６９、
配列番号２５および配列番号７５、
配列番号２７および配列番号７７、
配列番号２８および配列番号７８、
配列番号２９および配列番号７９、
配列番号３０および配列番号８０、ならびに
配列番号３１および配列番号８１
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００３３】
［２１］前記［１］〜［７］のいずれか１つのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片の、感受性癌を処置するための使用。
【００３４】
［２２］前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片が軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む［２１］の使用であって、前記ＬＣＶＲおよび前記ＨＣＶＲはそれぞれ、
配列番号９および配列番号５９、
配列番号１０および配列番号６０、
配列番号１２および配列番号６２、
配列番号１３および配列番号６３、
配列番号１５および配列番号６５、
配列番号１７および配列番号６７、
配列番号２０および配列番号７０、
配列番号２１および配列番号７１、
配列番号２２および配列番号７２、
配列番号２３および配列番号７３、
配列番号２４および配列番号７４、ならびに
配列番号２６および配列番号７６
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００３５】
［２３］ヒトもしくはコンパニオン／ペット動物、使役動物、スポーツ動物、動物園の動物、または捕獲されている他の価値のある動物において、虚血再灌流傷害、または自己免疫性もしくは炎症性疾患を処置するための薬剤の製造のための、前記［１］〜［７］のいずれか１つのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片の使用。
【００３６】
［２４］前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片が軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む［２３］の使用であって、前記ＬＣＶＲおよび前記ＨＣＶＲはそれぞれ、
配列番号７および配列番号５７、
配列番号８および配列番号５８、
配列番号１１および配列番号６１、
配列番号１４および配列番号６４、
配列番号１６および配列番号６６、
配列番号１８および配列番号６８、
配列番号１９および配列番号６９、
配列番号２５および配列番号７５、
配列番号２７および配列番号７７、
配列番号２８および配列番号７８、
配列番号２９および配列番号７９、
配列番号３０および配列番号８０、ならびに
配列番号３１および配列番号８１
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００３７】
［２５］前記虚血再灌流傷害が、臓器移植、急性腎障害、心肺バイパス手術、肺高血圧症、鎌状赤血球症、心筋梗塞、脳卒中、外科的切除および再建手術、付属器または他の身体部分の再付着、皮膚移植、および外傷で起こる、［２３］または［２４］の使用。
【００３８】
［２６］前記自己免疫性または炎症性疾患が、関節炎、多発性硬化症、乾癬、クローン病、炎症性腸疾患、ループス、グレーブス病および橋本病、ならびに強直性脊椎炎からなる群から選択される、［２３］または［２４］の使用。
【００３９】
［２７］感受性癌を処置するための薬剤の製造のための、前記［１］〜［７］のいずれか１つのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片の使用。
【００４０】
［２８］前記モノクローナル抗体またはその抗原結合断片が軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む［２７］の使用であって、前記ＬＣＶＲおよび前記ＨＣＶＲはそれぞれ、
配列番号９および配列番号５９、
配列番号１０および配列番号６０、
配列番号１２および配列番号６２、
配列番号１３および配列番号６３、
配列番号１５および配列番号６５、
配列番号１７および配列番号６７、
配列番号２０および配列番号７０、
配列番号２１および配列番号７１、
配列番号２２および配列番号７２、
配列番号２３および配列番号７３、
配列番号２４および配列番号７４、ならびに
配列番号２６および配列番号７６
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００４１】
［２９］虚血または虚血再灌流傷害の処置を必要としている患者においてそれを処置する方法であって、前記［１］〜［７］のいずれか１つのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、またはＣＤ４７への結合に対して前記［１］〜［７］のいずれか１つのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片と競合するモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片を有効量で前記患者に投与することを含む方法。
【００４２】
［３０］前記患者が虚血または虚血再灌流傷害にさらされようとしているか、あるいは虚血または虚血再灌流傷害を経験中である、［２９］の方法。
【００４３】
［３１］前記患者がヒトである、［２９］または［３０］の方法。
【００４４】
［３２］前記患者がコンパニオン／ペット動物、使役動物、スポーツ動物、動物園の動物、または捕獲されている他の価値のある動物である、［２９］または［３０］の方法。
【００４５】
［３３］前記患者が外皮手術、軟組織手術、複合組織手術、美容手術、外科的切除、再建手術、皮膚移植手術、および肢の再付着手術からなる群から選択される手術を受ける予定であるか、あるいは受けているために前記虚血が起こる、［２９］〜［３２］のいずれか１つの方法。
【００４６】
［３４］前記皮膚移植が自家移植である、［３３］の方法。
【００４７】
［３５］前記患者が臓器移植手術を受ける予定であるか、あるいは受けているために前記虚血が起こる、［２９］〜［３２］のいずれか１つの方法。
【００４８】
［３６］前記虚血再灌流傷害が、臓器移植、急性腎障害、心肺バイパス手術、肺高血圧症、鎌状赤血球症、心筋梗塞、脳卒中、外科的切除、再建手術、付属器もしくは他の身体部分の再付着、または皮膚移植で起こる、［２９］〜［３２］のいずれか１つの方法。
【００４９】
［３７］前記被験者が虚血または手術を受ける前、受けている間、または受けた後、あるいはこれらの期間のいずれかの組み合わせで、前記モノクローナル抗体、その抗原結合断片、または競合モノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片が投与される、［２９］〜［３６］のいずれか１つの方法。
【００５０】
［３８］一酸化窒素供与体、前駆体、もしくは両方、一酸化窒素を発生する局所薬剤、可溶性グアニリルシクラーゼを活性化する薬剤、環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼを阻害する薬剤、または上記のもののいずれかの任意の組み合わせを有効量で前記患者に投与することをさらに含む、［２９］〜［３７］のいずれか１つの方法。
【００５１】
［３９］前記一酸化窒素供与体または前駆体が、ＮＯガス、二硝酸イソソルビド、亜硝酸塩、ニトロプルシド、ニトログリセリン、３−モルホリノ−シドノンイミン（ＳＩＮ−１）、Ｓ−ニトロソ−Ｎ−アセチルペニシラミン（ＳＮＡＰ）、ジエチレントリアミン／ＮＯ（ＤＥＴＡ／ＮＯ）、Ｓ−ニトロソチオール、Ｂｉｄｉｌ（登録商標）、およびアルギニンからなる群から選択され、そして
前記環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼを阻害する薬剤が、シルデナフィル、タダラフィル、バルデナフィル  ウデナフィル、およびアバナフィルからなる群から選択される、
［３８］の方法。
【００５２】
［４０］組織灌流の増大を必要としている被験者においてそれを増大させる方法であって、［１］〜［７］のいずれか１つのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、またはＣＤ４７への結合に対して前記［１］〜［７］のいずれか１つのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片と競合するモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片を有効量で前記被験者に投与することを含む方法。
【００５３】
［４１］前記被験者が、虚血再灌流傷害、心筋梗塞、心筋虚血、脳卒中、大脳の虚血、鎌状赤血球貧血、および肺高血圧症からなる群から選択される少なくとも１つの疾患または状態を有しているか、あるいはその発現の危険性がある、［４０］の方法。
【００５４】
［４２］前記被験者が、高血圧症、アテローム性動脈硬化症、血管障害、糖尿病に続発する虚血、および末梢血管疾患からなる群から選択される少なくとも１つの疾患または状態を有しているか、あるいはその発現の危険性がある、［４０］の方法。
【００５５】
［４３］前記被験者が、外皮手術、軟組織手術、複合組織手術、皮膚移植手術、固形臓器の切除、および付属器または他の身体部分の再付着からなる群から選択される手術を受けたことがあるか、受けているか、あるいは受ける予定であるために、前記組織灌流の増大が必要である、［４０］の方法。
【００５６】
［４４］前記皮膚移植が自家移植である、［４３］の方法。
【００５７】
［４５］前記被験者が臓器移植手術を受けたことがあるか、受けているか、あるいは受ける予定であるために、前記組織灌流の増大が必要である、［４０］の方法。
【００５８】
［４６］一酸化窒素供与体、前駆体、もしくは両方、一酸化窒素を発生する局所薬剤、可溶性グアニリルシクラーゼを活性化する薬剤、環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼを阻害する薬剤、または上記のもののいずれかの任意の組み合わせを有効量で前記被験者に投与することをさらに含む、［４０］〜［４５］のいずれか１つの方法。
【００５９】
［４７］前記一酸化窒素供与体または前駆体が、ＮＯガス、二硝酸イソソルビド、亜硝酸塩、ニトロプルシド、ニトログリセリン、３−モルホリノ−シドノンイミン（ＳＩＮ−１）、Ｓ−ニトロソ−Ｎ−アセチルペニシラミン（ＳＮＡＰ）、ジエチレントリアミン／ＮＯ（ＤＥＴＡ／ＮＯ）、Ｓ−ニトロソチオール、Ｂｉｄｉｌ（登録商標）、およびアルギニンからなる群から選択され、そして
前記環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼを阻害する薬剤が、シルデナフィル、タダラフィル、バルデナフィル  ウデナフィル、およびアバナフィルからなる群から選択される、
［４６］の方法。
【００６０】
［４８］臓器ドナーから臓器レシピエントへのドナー臓器の移植方法であって、ステップｉ）〜ｉｉｉ）：
ｉ）前記ドナー臓器の提供前、提供中、提供前および提供中の両方、提供後、またはこれらの任意の組み合わせにおいて、前記臓器ドナーに、前記［１］〜［７］のいずれか１つのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、および／またはＣＤ４７への結合に対して前記［１］〜［７］のいずれか１つのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片と競合するモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片を有効量で投与するステップと、
ｉｉ）前記臓器レシピエントへの移植前、移植中、移植前および移植中の両方、移植後、またはこれらの任意の組み合わせにおいて、前記ドナー臓器と、前記［１］〜［７］のいずれか１つのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、および／またはＣＤ４７への結合に対して前記［１］〜［７］のいずれか１つのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片と競合するモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片の有効量とを接触させるステップと、
ｉｉｉ）前記ドナー臓器の前記臓器レシピエントへの移植前、移植中、移植前および移植中の両方、移植後、またはこれらの任意の組み合わせにおいて、前記臓器レシピエントに、前記［１］〜［７］のいずれか１つのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、および／またはＣＤ４７への結合に対して前記［１］〜［７］のいずれか１つのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片と競合するモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片を有効量で投与するステップと
からなる群から選択される任意の単一のステップ、ステップの任意の組み合わせ、または全てのステップを含む方法。
【００６１】
［４９］前記［１］〜［７］のいずれか１つのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、またはＣＤ４７への結合に対して前記［１］〜［７］のいずれか１つのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片と競合するモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片が、前記ドナー臓器における虚血再灌流傷害を低減する、請求項４８の方法。
【００６２】
［５０］前記臓器ドナー、前記ドナー臓器、前記臓器レシピエント、またはこれらの任意の組み合わせに、一酸化窒素供与体、前駆体、もしくは両方、一酸化窒素を発生する局所薬剤、可溶性グアニリルシクラーゼを活性化する薬剤、または環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼを阻害する薬剤、または上記のもののいずれかの任意の組み合わせを有効量で投与することをさらに含む、［４８］または［４９］の方法。
【００６３】
［５１］前記一酸化窒素供与体または前駆体が、ＮＯガス、二硝酸イソソルビド、亜硝酸塩、ニトロプルシド、ニトログリセリン、３−モルホリノ−シドノンイミン（ＳＩＮ−１）、Ｓ−ニトロソ−Ｎ−アセチルペニシラミン（ＳＮＡＰ）、ジエチレントリアミン／ＮＯ（ＤＥＴＡ／ＮＯ）、Ｓ−ニトロソチオール、Ｂｉｄｉｌ（登録商標）、およびアルギニンからなる群から選択され、そして
前記環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼを阻害する薬剤が、シルデナフィル、タダラフィル、バルデナフィル、ウデナフィル、およびアバナフィルからなる群から選択される、
［５０］の方法。
【００６４】
［５２］自己免疫性または炎症性疾患の処置を必要としている患者においてそれを処置する方法であって、前記［１］〜［７］のいずれか１つのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、またはＣＤ４７への結合に対して前記［１］〜［７］のいずれか１つのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片と競合するモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片を有効量で前記患者に投与することを含む方法。
【００６５】
［５３］前記自己免疫性または炎症性疾患が、関節炎、多発性硬化症、乾癬、クローン病、炎症性腸疾患、ループス、グレーブス病および橋本病、ならびに強直性脊椎炎からなる群から選択される、［５２］の方法。
【００６６】
［５４］前記患者がヒトである、［５２］または［５３］の方法。
【００６７】
［５５］前記患者がコンパニオン／ペット動物、使役動物、スポーツ動物、動物園の動物、または捕獲されている他の価値のある動物である、［５２］または［５３］の方法。
【００６８】
［５６］一酸化窒素供与体、前駆体、もしくは両方、一酸化窒素を発生する局所薬剤、可溶性グアニリルシクラーゼを活性化する薬剤、環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼを阻害する薬剤、または上記のもののいずれかの任意の組み合わせを有効量で前記患者に投与することをさらに含む、［５２］〜［５５］のいずれか１つの方法。
【００６９】
［５７］前記一酸化窒素供与体または前駆体が、ＮＯガス、二硝酸イソソルビド、亜硝酸塩、ニトロプルシド、ニトログリセリン、３−モルホリノ−シドノンイミン（ＳＩＮ−１）、Ｓ−ニトロソ−Ｎ−アセチルペニシラミン（ＳＮＡＰ）、ジエチレントリアミン／ＮＯ（ＤＥＴＡ／ＮＯ）、Ｓ−ニトロソチオール、Ｂｉｄｉｌ（登録商標）、およびアルギニンからなる群から選択され、そして
前記環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼを阻害する薬剤が、シルデナフィル、タダラフィル、バルデナフィル、ウデナフィル、およびアバナフィルからなる群から選択される、
［５６］の方法。
【００７０】
［５８］感受性癌の処置を必要としているヒトもしくはコンパニオン／ペット動物、使役動物、スポーツ動物、動物園の動物、または捕獲されている他の価値のある動物においてそれを処置する方法であって、［１］〜［７］のいずれか１つのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、またはＣＤ４７への結合に対して前記［１］〜［７］のいずれか１つのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片と競合し、細胞毒活性を示すモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片を有効量でこれらに投与することを含む方法。
【００７１】
［５９］前記感受性癌が、白血病、リンパ腫、卵巣癌、乳癌、子宮内膜癌、結腸癌、直腸癌、胃癌、膀胱癌、肺癌、気管支癌、骨癌、前立腺癌、膵癌、肝臓および胆管癌、食道癌、腎癌、甲状腺癌、頭頸部癌、精巣癌、神経膠芽腫、星状細胞腫、メラノーマ、骨髄異形成症候群、ならびに肉腫からなる群から選択される、［５８］の方法。
【００７２】
［６０］前記白血病が、急性リンパ性（リンパ芽球性）白血病、急性骨髄性白血病、骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、形質細胞性白血病、および慢性骨髄性白血病からなる群から選択され、
前記リンパ腫が、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、およびワルデンストレームマクログロブリン血症を含む、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫からなる群から選択され、そして
前記肉腫が、骨肉腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、滑膜肉腫、胞巣状軟部肉腫、血管肉腫、脂肪肉腫、繊維肉腫、横紋筋肉腫、および軟骨肉腫からなる群から選択される、
［５９］の方法。
【００７３】
［６１］前記［１］〜［７］のいずれか１つのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、またはＣＤ４７への結合に対して前記［１］〜［７］のいずれか１つのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片と競合し、細胞毒活性を示す前記モノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片が、前記感受性癌の細胞の食作用を増大させる、［５８］〜［６０］のいずれか１つの方法。
【００７４】
［６２］前記［１］〜［７］のいずれか１つのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、またはＣＤ４７への結合に対して前記［１］〜［７］のいずれか１つのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片と競合し、細胞毒活性を示し、前記感受性癌の細胞の食作用を増大させる前記モノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片が、ＣＤ４７のＳＩＲＰαへの結合を阻害する、［６１］の方法。
【００７５】
［６３］前記［１］〜［７］のいずれか１つのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、またはＣＤ４７への結合に対して前記［１］〜［７］のいずれか１つのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片と競合し、細胞毒活性を示す前記モノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片が、前記感受性癌の細胞に対して直接有毒である、［５８］〜［６２］のいずれか１つの方法。
【００７６】
［６４］ヒトＣＤ４７と特異的に結合する、ヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【００７７】
［６５］ヒト、ラット、マウス、ブタ、またはイヌＣＤ４７と特異的に結合し、ＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合を遮断し、そして
ｉ）癌細胞の死の誘発、および
ｉｉ）前記癌細胞の食作用の増大
の二重活性を示すヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【００７８】
［６６］ヒト、ラット、マウス、ブタ、またはイヌＣＤ４７への結合に対して前記６５のヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と競合し、そして前記二重活性を示すモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【００７９】
［６７］前記［６５］のヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、あるいは前記［６６］の競合モノクローナル抗体またはその抗原結合断片と、薬学的または生理学的に許容可能なキャリア、希釈剤、または賦形剤とを含む医薬組成物。
【００８０】
［６８］ヒトの治療、またはコンパニオン／ペット動物、使役動物、スポーツ動物、動物園の動物の治療、または捕獲されている他の価値のある動物の治療において使用するための、
ヒト、ラット、マウス、ブタ、またはイヌＣＤ４７と特異的に結合し、ＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合を遮断し、そして
ｉ）癌細胞の死の誘発、および
ｉｉ）前記癌細胞の食作用の増大
の二重活性を示すヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、あるいは
ヒト、ラット、マウス、ブタ、またはイヌＣＤ４７への結合に対して前記ヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と競合し、そして前記二重活性を示すモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【００８１】
［６９］ヒトもしくはコンパニオン／ペット動物、使役動物、スポーツ動物、動物園の動物、または捕獲されている他の価値のある動物において、虚血再灌流傷害、または自己免疫性もしくは炎症性疾患を処置する際に使用するための、
ヒト、ラット、マウス、ブタ、またはイヌＣＤ４７と特異的に結合し、ＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合を遮断し、そして
ｉ）癌細胞の死の誘発、および
ｉｉ）前記癌細胞の食作用の増大
の二重活性を示すヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、あるいは
ヒト、ラット、マウス、ブタ、またはイヌＣＤ４７への結合に対して前記ヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と競合し、そして前記二重活性を示すモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【００８２】
［７０］前記虚血再灌流傷害が、臓器移植、急性腎障害、心肺バイパス手術、肺高血圧症、鎌状赤血球症、心筋梗塞、脳卒中、外科的切除および再建手術、付属器もしくは他の身体部分の再付着、皮膚移植、または外傷で起こる、［６９］のヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、あるいは競合モノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【００８３】
［７１］前記自己免疫性または炎症性疾患が、関節炎、多発性硬化症、乾癬、クローン病、炎症性腸疾患、ループス、グレーブス病および橋本病、ならびに強直性脊椎炎からなる群から選択される、［６９］のヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、あるいは競合モノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【００８４】
［７２］感受性癌の処置において使用するための、
ヒト、ラット、マウス、ブタ、またはイヌＣＤ４７と特異的に結合し、ＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合を遮断し、そして
ｉ）癌細胞の死の誘発、および
ｉｉ）前記癌細胞の食作用の増大
の二重活性を示すヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、あるいは
ヒト、ラット、マウス、ブタ、またはイヌＣＤ４７への結合に対して前記ヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と競合し、そして前記二重活性を示すモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【００８５】
［７３］前記感受性癌が、白血病、リンパ腫、卵巣癌、乳癌、子宮内膜癌、結腸癌、直腸癌、胃癌、膀胱癌、肺癌、気管支癌、骨癌、前立腺癌、膵癌、肝臓および胆管癌、食道癌、腎癌、甲状腺癌、頭頸部癌、精巣癌、神経膠芽腫、星状細胞腫、メラノーマ、骨髄異形成症候群、ならびに肉腫からなる群から選択される、［７２］のヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、あるいは競合モノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【００８６】
［７４］前記白血病が、急性リンパ性（リンパ芽球性）白血病、急性骨髄性白血病、骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、形質細胞性白血病、および慢性骨髄性白血病からなる群から選択され、
前記リンパ腫が、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、およびワルデンストレームマクログロブリン血症を含む、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫からなる群から選択され、そして
前記肉腫が、骨肉腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、滑膜肉腫、胞巣状軟部肉腫、血管肉腫、脂肪肉腫、繊維肉腫、横紋筋肉腫、および軟骨肉腫からなる群から選択される、
［７３］のヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、あるいは競合モノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
【００８７】
［７５］ヒトもしくはコンパニオン／ペット動物、使役動物、スポーツ動物、動物園の動物、または捕獲されている他の価値のある動物において、虚血再灌流傷害、または自己免疫性もしくは炎症性疾患を処置するための、
ヒト、ラット、マウス、ブタ、またはイヌＣＤ４７と特異的に結合し、ＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合を遮断し、そして
ｉ）癌細胞の死の誘発、および
ｉｉ）前記癌細胞の食作用の増大
の二重活性を示すヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、あるいは
ヒト、ラット、マウス、ブタ、またはイヌＣＤ４７への結合に対して前記ヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と競合し、そして前記二重活性を示すモノクローナル抗体またはその抗原結合断片
の使用。
【００８８】
［７６］ヒト、ラット、マウス、ブタ、またはイヌＣＤ４７と特異的に結合し、ＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合を遮断し、そして
ｉ）癌細胞の死の誘発、および
ｉｉ）前記癌細胞の食作用の増大
の二重活性を示すヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、あるいは
ヒト、ラット、マウス、ブタ、またはイヌＣＤ４７への結合に対して前記ヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と競合し、そして前記二重活性を示すモノクローナル抗体またはその抗原結合断片
の、感受性癌を処置するための使用。
【００８９】
［７７］前記感受性癌が、白血病、リンパ腫、卵巣癌、乳癌、子宮内膜癌、結腸癌、直腸癌、胃癌、膀胱癌、肺癌、気管支癌、骨癌、前立腺癌、膵癌、肝臓および胆管癌、食道癌、腎癌、甲状腺癌、頭頸部癌、精巣癌、神経膠芽腫、星状細胞腫、メラノーマ、骨髄異形成症候群、ならびに肉腫からなる群から選択される、［７６］の使用。
【００９０】
［７８］前記白血病が、急性リンパ性（リンパ芽球性）白血病、急性骨髄性白血病、骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、形質細胞性白血病、および慢性骨髄性白血病からなる群から選択され、
前記リンパ腫が、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、およびワルデンストレームマクログロブリン血症を含む、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫からなる群から選択され、そして
前記肉腫が、骨肉腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、滑膜肉腫、胞巣状軟部肉腫、血管肉腫、脂肪肉腫、繊維肉腫、横紋筋肉腫、および軟骨肉腫からなる群から選択される、
［７７］の使用。
【００９１】
［７９］ヒトもしくはコンパニオン／ペット動物、使役動物、スポーツ動物、動物園の動物、または捕獲されている他の価値のある動物において、虚血再灌流傷害、または自己免疫性もしくは炎症性疾患を処置するための薬剤の製造のための、
ヒト、ラット、マウス、ブタ、またはイヌＣＤ４７と特異的に結合し、ＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合を遮断し、そして
ｉ）癌細胞の死の誘発、および
ｉｉ）前記癌細胞の食作用の増大
の二重活性を示すヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、あるいは
ヒト、ラット、マウス、ブタ、またはイヌＣＤ４７への結合に対して前記ヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と競合し、そして前記二重活性を示すモノクローナル抗体またはその抗原結合断片
の使用。
【００９２】
［８０］前記虚血再灌流傷害が、臓器移植、急性腎障害、心肺バイパス手術、肺高血圧症、鎌状赤血球症、心筋梗塞、脳卒中、外科的切除および再建手術、付属器または他の身体部分の再付着、皮膚移植、および外傷で起こる、［７９］の使用。
【００９３】
［８１］前記自己免疫性または炎症性疾患が、関節炎、多発性硬化症、乾癬、クローン病、炎症性腸疾患、ループス、グレーブス病および橋本病、ならびに強直性脊椎炎からなる群から選択される、［７９］の使用。
【００９４】
［８２］感受性癌を処置するための薬剤の製造のための、
ヒト、ラット、マウス、ブタ、またはイヌＣＤ４７と特異的に結合し、ＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合を遮断し、そして
ｉ）癌細胞の死の誘発、および
ｉｉ）前記癌細胞の食作用の増大
の二重活性を示すヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、あるいは
ヒト、ラット、マウス、ブタ、またはイヌＣＤ４７への結合に対して前記ヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と競合し、そして前記二重活性を示すモノクローナル抗体またはその抗原結合断片
の使用。
【００９５】
［８３］前記感受性癌が、白血病、リンパ腫、卵巣癌、乳癌、子宮内膜癌、結腸癌、直腸癌、胃癌、膀胱癌、肺癌、気管支癌、骨癌、前立腺癌、膵癌、肝臓および胆管癌、食道癌、腎癌、甲状腺癌、頭頸部癌、精巣癌、神経膠芽腫、星状細胞腫、メラノーマ、骨髄異形成症候群、ならびに肉腫からなる群から選択される、［８２］の使用。
【００９６】
［８４］前記白血病が、急性リンパ性（リンパ芽球性）白血病、急性骨髄性白血病、骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、形質細胞性白血病、および慢性骨髄性白血病からなる群から選択され、
前記リンパ腫が、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、およびワルデンストレームマクログロブリン血症を含む、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫からなる群から選択され、そして
前記肉腫が、骨肉腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、滑膜肉腫、胞巣状軟部肉腫、血管肉腫、脂肪肉腫、繊維肉腫、横紋筋肉腫、および軟骨肉腫からなる群から選択される、
［８３］の使用。
【００９７】
［８５］虚血または虚血再灌流傷害の処置を必要としている患者においてそれを処置する方法であって、
ヒト、ラット、マウス、ブタ、またはイヌＣＤ４７と特異的に結合し、ＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合を遮断し、そして
ｉ）癌細胞の死の誘発、および
ｉｉ）前記癌細胞の食作用の増大
の二重活性を示す、有効量のヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、あるいは
ヒト、ラット、マウス、ブタ、またはイヌＣＤ４７への結合に対して前記ヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と競合し、そして前記二重活性を示す、有効量のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片
を前記患者に投与することを含む方法。
【００９８】
［８６］前記患者が虚血または虚血再灌流傷害にさらされようとしているか、あるいは虚血または虚血再灌流傷害を経験中である、［８５］の方法。
【００９９】
［８７］前記患者がヒトである、［８５］または［８６］の方法。
【０１００】
［８８］前記患者がコンパニオン／ペット動物、使役動物、スポーツ動物、動物園の動物、または捕獲されている他の価値のある動物である、［８５］または［８６］の方法。
【０１０１】
［８９］前記患者が外皮手術、軟組織手術、複合組織手術、美容手術、外科的切除、再建手術、皮膚移植手術、および肢の再付着手術からなる群から選択される手術を受ける予定であるか、あるいは受けているために前記虚血が起こる、［８５］〜［８８］のいずれか１つの方法。
【０１０２】
［９０］前記皮膚移植が自家移植である、［８９］の方法。
【０１０３】
［９１］前記患者が臓器移植手術を受ける予定であるか、あるいは受けているために前記虚血が起こる、［８５］〜［８８］のいずれか１つの方法。
【０１０４】
［９２］前記虚血再灌流傷害が、臓器移植、急性腎障害、心肺バイパス手術、肺高血圧症、鎌状赤血球症、心筋梗塞、脳卒中、外科的切除、再建手術、付属器もしくは他の身体部分の再付着、または皮膚移植で起こる、［８５］〜［８８］のいずれか１つの方法。
【０１０５】
［９３］前記被験者が虚血または手術を受ける前、受けている間、または受けた後、あるいはこれらの期間のいずれかの組み合わせで、前記モノクローナル抗体、その抗原結合断片、または競合モノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片が投与される、［８５］〜［９２］のいずれか１つの方法。
【０１０６】
［９４］一酸化窒素供与体、前駆体、もしくは両方、一酸化窒素を発生する局所薬剤、可溶性グアニリルシクラーゼを活性化する薬剤、環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼを阻害する薬剤、または上記のもののいずれかの任意の組み合わせを有効量で前記患者に投与することをさらに含む、［８５］〜［９３］のいずれか１つの方法。
【０１０７】
［９５］前記一酸化窒素供与体または前駆体が、ＮＯガス、二硝酸イソソルビド、亜硝酸塩、ニトロプルシド、ニトログリセリン、３−モルホリノ−シドノンイミン（ＳＩＮ−１）、Ｓ−ニトロソ−Ｎ−アセチルペニシラミン（ＳＮＡＰ）、ジエチレントリアミン／ＮＯ（ＤＥＴＡ／ＮＯ）、Ｓ−ニトロソチオール、Ｂｉｄｉｌ（登録商標）、およびアルギニンからなる群から選択され、そして
前記環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼを阻害する薬剤が、シルデナフィル、タダラフィル、バルデナフィル、ウデナフィル、およびアバナフィルからなる群から選択される、
［９４］の方法。
【０１０８】
［９６］組織灌流の増大を必要としている被験者においてそれを増大させる方法であって、
ヒト、ラット、マウス、ブタ、またはイヌＣＤ４７と特異的に結合し、ＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合を遮断し、そして
ｉ）癌細胞の死の誘発、および
ｉｉ）前記癌細胞の食作用の増大
の二重活性を示す、有効量のヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、あるいは
ヒト、ラット、マウス、ブタ、またはイヌＣＤ４７への結合に対して前記ヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と競合し、そして前記二重活性を示す、有効量のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片
を前記被験者に投与することを含む方法。
【０１０９】
［９７］前記被験者が、虚血再灌流傷害、心筋梗塞、心筋虚血、脳卒中、大脳の虚血、鎌状赤血球貧血、および肺高血圧症からなる群から選択される少なくとも１つの疾患または状態を有しているか、あるいはその発現の危険性がある、［９６］の方法。
【０１１０】
［９８］前記被験者が、高血圧症、アテローム性動脈硬化症、血管障害、糖尿病に続発する虚血、および末梢血管疾患からなる群から選択される少なくとも１つの疾患または状態を有しているか、あるいはその発現の危険性がある、［９６］の方法。
【０１１１】
［９９］前記被験者が、外皮手術、軟組織手術、複合組織手術、皮膚移植手術、固形臓器の切除、および付属器または他の身体部分の再付着からなる群から選択される手術を受けたことがあるか、受けているか、あるいは受ける予定であるために、前記組織灌流の増大が必要である、［９６］の方法。
【０１１２】
［１００］前記皮膚移植が自家移植である、［９９］の方法。
【０１１３】
［１０１］前記被験者が臓器移植手術を受けたことがあるか、受けているか、あるいは受ける予定であるために、前記組織灌流の増大が必要である、［９６］の方法。
【０１１４】
［１０２］一酸化窒素供与体、前駆体、もしくは両方、一酸化窒素を発生する局所薬剤、可溶性グアニリルシクラーゼを活性化する薬剤、環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼを阻害する薬剤、または上記のもののいずれかの任意の組み合わせを有効量で前記被験者に投与することをさらに含む、［９６］〜［１０１］のいずれか１つの方法。
【０１１５】
［１０３］前記一酸化窒素供与体または前駆体が、ＮＯガス、二硝酸イソソルビド、亜硝酸塩、ニトロプルシド、ニトログリセリン、３−モルホリノシドノンイミン（ＳＩＮ−１）、Ｓ−ニトロソ−Ｎ−アセチルペニシラミン（ＳＮＡＰ）、ジエチレントリアミン／ＮＯ（ＤＥＴＡ／ＮＯ）、Ｓ−ニトロソチオール、Ｂｉｄｉｌ（登録商標）、およびアルギニンからなる群から選択され、そして
前記環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼを阻害する薬剤が、シルデナフィル、タダラフィル、バルデナフィル、ウデナフィル、およびアバナフィルからなる群から選択される、
［１０２］の方法。
【０１１６】
［１０４］臓器ドナーから臓器レシピエントへのドナー臓器の移植方法であって、ステップｉ）〜ｉｉｉ）：
ｉ）前記ドナー臓器の提供前、提供中、提供前および提供中の両方、提供後、またはこれらの任意の組み合わせにおいて、前記臓器ドナーに、
ヒト、ラット、マウス、ブタ、またはイヌＣＤ４７と特異的に結合し、ＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合を遮断し、そして
ａ）癌細胞の死の誘発、および
ｂ）前記癌細胞の食作用の増大
の二重活性を示す、有効量のヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、あるいは
ヒト、ラット、マウス、ブタ、またはイヌＣＤ４７への結合に対して前記ヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と競合し、そして前記二重活性を示す、有効量のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片
を投与するステップと、
ｉｉ）前記臓器レシピエントへの移植前、移植中、移植前および移植中の両方、移植後、またはこれらの任意の組み合わせにおいて、前記ドナー臓器と、前記ヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体、その抗原結合断片、または競合モノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片の有効量とを接触させるステップと、
ｉｉｉ）前記ドナー臓器の前記臓器レシピエントへの移植前、移植中、移植前および移植中の両方、移植後、またはこれらの任意の組み合わせにおいて、前記臓器レシピエントに、前記ヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体、その抗原結合断片、または競合モノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片を有効量で投与するステップと
からなる群から選択される任意の単一のステップ、ステップの任意の組み合わせ、または全てのステップを含む方法。
【０１１７】
［１０５］前記ヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体、その抗原結合断片、または競合モノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片が、前記ドナー臓器における虚血再灌流傷害を低減する、［１０４］の方法。
【０１１８】
［１０６］前記臓器ドナー、前記ドナー臓器、前記臓器レシピエント、またはこれらの任意の組み合わせに、一酸化窒素供与体、前駆体、もしくは両方、一酸化窒素を発生する局所薬剤、可溶性グアニリルシクラーゼを活性化する薬剤、環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼを阻害する薬剤、または上記のもののいずれかの任意の組み合わせを有効量で投与することをさらに含む、［１０４］または［１０５］の方法。
【０１１９】
［１０７］前記一酸化窒素供与体または前駆体が、ＮＯガス、二硝酸イソソルビド、亜硝酸塩、ニトロプルシド、ニトログリセリン、３−モルホリノ−シドノンイミン（ＳＩＮ−１）、Ｓ−ニトロソ−Ｎ−アセチルペニシラミン（ＳＮＡＰ）、ジエチレントリアミン／ＮＯ（ＤＥＴＡ／ＮＯ）、Ｓ−ニトロソチオール、Ｂｉｄｉｌ（登録商標）、およびアルギニンからなる群から選択され、そして
前記環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼを阻害する薬剤が、シルデナフィル、タダラフィル、バルデナフィル、ウデナフィル、およびアバナフィルからなる群から選択される、
［１０６］の方法。
【０１２０】
［１０８］自己免疫性または炎症性疾患の処置を必要としている患者においてそれを処置する方法であって、
ヒト、ラット、マウス、ブタ、またはイヌＣＤ４７と特異的に結合し、ＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合を遮断し、そして
ｉ）癌細胞の死の誘発、および
ｉｉ）前記癌細胞の食作用の増大
の二重活性を示す、有効量のヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはその抗原結合断片、あるいは
ヒト、ラット、マウス、ブタ、またはイヌＣＤ４７への結合に対して前記ヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と競合し、そして前記二重活性を示す、有効量のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片
を前記患者に投与することを含む方法。
【０１２１】
［１０９］前記自己免疫性または炎症性疾患が、関節炎、多発性硬化症、乾癬、クローン病、炎症性腸疾患、ループス、グレーブス病および橋本病、ならびに強直性脊椎炎からなる群から選択される、［１０８］の方法。
【０１２２】
［１１０］前記患者がヒトである、［１０８］または［１０９］の方法。
【０１２３】
［１１１］前記患者がコンパニオン／ペット動物、使役動物、スポーツ動物、動物園の動物、または捕獲されている他の価値のある動物である、［１０８］または［１０９］の方法。
【０１２４】
［１１２］一酸化窒素供与体、前駆体、もしくは両方、一酸化窒素を発生する局所薬剤、可溶性グアニリルシクラーゼを活性化する薬剤、環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼを阻害する薬剤、または上記のもののいずれかの任意の組み合わせを有効量で前記患者に投与することをさらに含む、［１０８］〜［１１１］のいずれか１つの方法。
【０１２５】
［１１３］前記一酸化窒素供与体または前駆体が、ＮＯガス、二硝酸イソソルビド、亜硝酸塩、ニトロプルシド、ニトログリセリン、３−モルホリノ−シドノンイミン（ＳＩＮ−１）、Ｓ−ニトロソ−Ｎ−アセチルペニシラミン（ＳＮＡＰ）、ジエチレントリアミン／ＮＯ（ＤＥＴＡ／ＮＯ）、Ｓ−ニトロソチオール、Ｂｉｄｉｌ（登録商標）、およびアルギニンからなる群から選択され、そして
前記環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼを阻害する薬剤が、シルデナフィル、タダラフィル、バルデナフィル、ウデナフィル、およびアバナフィルからなる群から選択される、
［１１２］の方法。
【０１２６】
［１１４］感受性癌の処置を必要としているヒトもしくはコンパニオン／ペット動物、使役動物、スポーツ動物、動物園の動物、または捕獲されている他の価値のある動物においてそれを処置する方法であって、
ヒト、ラット、マウス、ブタ、またはイヌＣＤ４７と特異的に結合し、ＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合を遮断し、そして
ｉ）癌細胞の死の誘発、および
ｉｉ）前記癌細胞の食作用の増大
の二重活性を示す、有効量のヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはその抗原結合断片をこれらに投与するか、あるいは
ヒト、ラット、マウス、ブタ、またはイヌＣＤ４７への結合に対して前記ヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と競合し、ＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合を遮断し、そして前記二重活性を示す、有効量のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を投与する
ことを含む方法。
【０１２７】
［１１５］前記感受性癌が、白血病、リンパ腫、卵巣癌、乳癌、子宮内膜癌、結腸癌、直腸癌、胃癌、膀胱癌、肺癌、気管支癌、骨癌、前立腺癌、膵癌、肝臓および胆管癌、食道癌、腎癌、甲状腺癌、頭頸部癌、精巣癌、神経膠芽腫、星状細胞腫、メラノーマ、骨髄異形成症候群、ならびに肉腫からなる群から選択される、［１１４］の方法。
【０１２８】
［１１６］前記白血病が、急性リンパ性（リンパ芽球性）白血病、急性骨髄性白血病、骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、形質細胞性白血病、および慢性骨髄性白血病からなる群から選択され、
前記リンパ腫が、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、およびワルデンストレームマクログロブリン血症を含む、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫からなる群から選択され、そして
前記肉腫が、骨肉腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、滑膜肉腫、胞巣状軟部肉腫、血管肉腫、脂肪肉腫、繊維肉腫、横紋筋肉腫、および軟骨肉腫からなる群から選択される、
［１１５］の方法。
【０１２９】
［１１７］請求項９、１４〜１８、２１、２２、２７、２８、５８〜６３、６８、７２〜７４、７６〜７８、８２〜８４、または１１４〜１１６のいずれか１つの使用または方法であって、手術、放射線、抗腫瘍または抗新生物薬、および上記のもののいずれかの組み合わせからなる群から選択される抗腫瘍治療的処置を前記患者に施すことをさらに含む使用または方法。
【０１３０】
［１１８］前記抗腫瘍または抗新生物薬が小さい化学分子または生物学的治療薬である、［１１７］の使用または方法。
【０１３１】
［１１９］前記小さい化学分子または生物学的治療薬が、アルキル化剤、代謝拮抗薬、天然産物、癌治療で使用される種々の薬剤、ホルモン、アンタゴニスト、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、サイトカイン、アンチセンスオリゴヌクレオチド、およびｓｉＲＮＡからなる群から選択される、［１１８］の使用または方法。
【０１３２】
［１２０］可溶性グアニリルシクラーゼ活性化剤の治療効果を増強する方法であって、
ｉ）有効量の可溶性グアニリルシクラーゼ活性化剤と、
ｉｉ）前記可溶性グアニリルシクラーゼ活性化剤の前記治療効果を増強するために有効量の、請求項１〜７または６５〜６６のいずれか１つのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、または競合抗体もしくはその抗原結合断片と
をそれを必要としている患者に投与することを含む方法。
【０１３３】
［１２１］前記治療効果が、ヒトもしくはコンパニオン／ペット動物、使役動物、スポーツ動物、動物園の動物、または捕獲されている他の価値のある動物における虚血再灌流傷害、または自己免疫性もしくは炎症性疾患の処置を含む、［１２０］の方法。
【０１３４】
［１２２］前記虚血再灌流傷害が、臓器移植、急性腎障害、心肺バイパス手術、肺高血圧症、鎌状赤血球症、心筋梗塞、脳卒中、外科的切除および再建手術、付属器もしくは他の身体部分の再付着、皮膚移植、または外傷で起こる、［１２１］の方法。
【０１３５】
［１２３］前記自己免疫性または炎症性疾患が、関節炎、多発性硬化症、乾癬、クローン病、炎症性腸疾患、ループス、グレーブス病および橋本病、ならびに強直性脊椎炎からなる群から選択される、［１２１］の方法。
【０１３６】
［１２４］可溶性グアニリルシクラーゼ活性化剤の治療効果を増強するための薬剤の製造のための、［１］〜［７］または［６５］〜［６６］のいずれか１つの前記モノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、または競合抗体もしくはその抗原結合断片の使用。
【０１３７】
［１２５］前記治療効果が、ヒトもしくはコンパニオン／ペット動物、使役動物、スポーツ動物、動物園の動物、または捕獲されている他の価値のある動物における虚血再灌流傷害、または自己免疫性もしくは炎症性疾患の処置を含む、［１２４］の使用。
【０１３８】
［１２６］前記虚血再灌流傷害が、臓器移植、急性腎障害、心肺バイパス手術、肺高血圧症、鎌状赤血球症、心筋梗塞、脳卒中、外科的切除および再建手術、付属器または他の身体部分の再付着、皮膚移植、および外傷で起こる、［１２５］の使用。
【０１３９】
［１２７］前記自己免疫性または炎症性疾患が、関節炎、多発性硬化症、乾癬、クローン病、炎症性腸疾患、ループス、グレーブス病および橋本病、ならびに強直性脊椎炎からなる群から選択される、［１２５］の使用。
【０１４０】
［１２８］血管細胞中のｃＧＭＰのレベルを増大させる方法であって、
ｉ）有効量の可溶性グアニリルシクラーゼ活性化剤と、
ｉｉ）前記血管細胞中のｃＧＭＰのレベルを増大させるために有効量の、［１］〜［７］または［６５］〜［６６］のいずれか１つのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、または競合抗体もしくはその抗原結合断片と
を前記細胞に投与することを含む方法。
【０１４１】
［１２９］ＩｇＧ１アイソタイプ、ＩｇＧ２アイソタイプ、ＩｇＧ３アイソタイプ、およびＩｇＧ４アイソタイプからなる群から選択されるＩｇＧアイソタイプである、［１］〜［７］または［６５］〜［６６］のいずれか１つのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、または競合抗体もしくはその抗原結合断片。
【０１４２】
［１３０］前記［１２９］のモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、または競合抗体もしくはその抗原結合断片と、薬学的または生理学的に許容可能なキャリア、希釈剤、または賦形剤とを含む医薬組成物。
【０１４３】
［１３１］ヒトの治療、またはコンパニオン／ペット動物、使役動物、スポーツ動物、動物園の動物の治療、または捕獲されている他の価値のある動物の治療において使用するための、［１２９］のモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、または競合抗体もしくはその抗原結合断片。
【０１４４】
［１３２］ヒトもしくはコンパニオン／ペット動物、使役動物、スポーツ動物、動物園の動物、または捕獲されている他の価値のある動物において、虚血再灌流傷害、または自己免疫性もしくは炎症性疾患を処置する際に使用するための、［１２９］のモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、または競合抗体もしくはその抗原結合断片。
【０１４５】
［１３３］感受性癌の処置において使用するための、［１２９］のモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、または競合抗体もしくはその抗原結合断片。
【０１４６】
［１３４］ヒトもしくはコンパニオン／ペット動物、使役動物、スポーツ動物、動物園の動物、または捕獲されている他の価値のある動物において、虚血再灌流傷害、または自己免疫性もしくは炎症性疾患を処置するための、前記［１２９］のモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、または競合抗体もしくはその抗原結合断片の使用。
【０１４７】
［１３５］前記［１２９］のモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、または競合抗体もしくはその抗原結合断片の、感受性癌を処置するための使用。
【０１４８】
［１３６］ヒトもしくはコンパニオン／ペット動物、使役動物、スポーツ動物、動物園の動物、または捕獲されている他の価値のある動物において、虚血再灌流傷害、または自己免疫性もしくは炎症性疾患を処置するための薬剤の製造のための、前記［１２９］のモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、または競合抗体もしくはその抗原結合断片の使用。
【０１４９】
［１３７］感受性癌を処置するための薬剤の製造のための、前記［１２９］のモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、または競合抗体もしくはその抗原結合断片の使用。
【０１５０】
本明細書中に明確に包含されるのは、本明細書中に開示される方法、使用、組成物、または任意の他の実施形態のいずれかにおける［１２９］〜［１３７］のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片の使用である。
【０１５１】
［１３８］請求項［１］〜［７］または［６５］〜［６６］のいずれか１つのモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、または競合抗体もしくはその抗原結合断片であって、
ｉ）前記モノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、または競合抗体もしくはその抗原結合断片がヒトＩｇＧ１アイソタイプである場合、ヒトＩｇＧ１定常領域は、アミノ酸Ａｓｎ２９７においてグリコシル化を阻止するために；そして／あるいはアミノ酸Ｌｅｕ２３４および／またはＬｅｕ２３５においてＦｃ受容体相互作用を変更するために；そして／あるいはＦｃＲｎ結合を増強するために；そして／あるいは抗体依存性細胞毒性および／または補体依存性細胞毒性を変更するために；そして／あるいは任意選択でさらにジスルフィド結合の導入によって、ヘテロ二量体化を誘発するために修飾され、
ｉｉ）前記モノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、または競合抗体もしくはその抗原結合断片がヒトＩｇＧ２アイソタイプである場合、ヒトＩｇＧ２定常領域は、アミノ酸Ａｓｎ２９７においてグリコシル化を阻止するために；そして／あるいはＦｃＲｎ結合を増強するために；そして／あるいは抗体依存性細胞毒性および／または補体依存性細胞毒性を変更するた；そして／あるいは任意選択でさらにジスルフィド結合の導入によって、ヘテロ二量体化を誘発するために修飾され、
ｉｉｉ）前記モノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、または競合抗体もしくはその抗原結合断片がヒトＩｇＧ３アイソタイプである場合、ヒトＩｇＧ３定常領域は、アミノ酸Ａｓｎ２９７においてグリコシル化を阻止するために；そして／あるいはアミノ酸４３５において半減期を長くするために；そして／あるいはＦｃＲｎ結合を増強するために；そして／あるいは抗体依存性細胞毒性および／または補体依存性細胞毒性を変更するために；そして／あるいは任意選択でさらにジスルフィド結合の導入によって、ヘテロ二量体化を誘発するために修飾され、
ｉｖ）前記モノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、または競合抗体もしくはその抗原結合断片がヒトＩｇＧ４アイソタイプである場合、ヒトＩｇＧ４定常領域は、ヒンジ領域内で鎖交換を阻止または低減するために；そして／あるいはアミノ酸２３５においてＦｃ受容体相互作用を変更するために；そして／あるいはアミノ酸Ａｓｎ２９７においてグリコシル化を阻止するために；そして／あるいはＦｃＲｎ結合を増強するために；そして／あるいは抗体依存性細胞毒性および／または補体依存性細胞毒性を変更するために；そして／あるいは任意選択でさらにジスルフィド結合の導入によって、ヘテロ二量体化を誘発するために修飾される。
【０１５２】
［１３９］［１３８］のモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、または競合抗体もしくはその抗原結合断片であって、
ｉ）前記モノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、または競合抗体もしくはその抗原結合断片がヒトＩｇＧ１アイソタイプである場合、ヒトＩｇＧ１定常領域は、アミノ酸Ａｓｎ２９７においてＡｓｎ２９７→Ａｌａ（Ｎ２９７Ａ）またはＡｓｎ２９７→Ｇｌｎ（Ｎ２９７Ｑ）の修飾によりグリコシル化を阻止するために；そして／あるいはアミノ酸Ｌｅｕ２３４においてＬｅｕ２３４→Ａｌａ（Ｌ２３４Ａ）の修飾により、および／またはＬｅｕ２３５においてＬｅｕ２３５→Ｇｌｕ（Ｌ２３５Ｅ）またはＬｅｕ２３５→Ａｌａ（Ｌ２３５Ａ）の修飾により、またはアミノ酸２３４および２３５の両方においてＬｅｕ２３４→ＡｌａおよびＬｅｕ２３５→Ａｌａの修飾によりＦｃ受容体相互作用を変更するために；そして／あるいはＭｅｔ２５２→Ｔｙｒ、Ｓｅｒ２５４→Ｔｈｒ、Ｔｈｒ２５６→Ｇｌｕ、Ｍｅｔ４２８→Ｌｅｕ、またはＡｓｎ４３４→Ｓｅｒの修飾によりＦｃＲｎ結合を増強するために；そして／あるいは抗体依存性細胞毒性および／または補体依存性細胞毒性を変更するために；そして／あるいはＴｈｒ３６６→Ｔｒｐの修飾によって、そして任意選択でさらに対向するＣＨ３ドメインでのＳｅｒ３５４→ＣｙｓおよびＴｙｒ３４９→Ｃｙｓの修飾によるジスルフィド結合の導入によって、ヘテロ二量体化を誘発するために修飾され、
ｉｉ）前記モノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、または競合抗体もしくはその抗原結合断片がヒトＩｇＧ２アイソタイプである場合、ヒトＩｇＧ２定常領域は、アミノ酸Ａｓｎ２９７においてＡｓｎ２９７→ＡｌａまたはＡｓｎ２９７→Ｇｌｎの修飾によりグリコシル化を阻止するために；そして／あるいはＭｅｔ２５２→Ｔｙｒ、Ｓｅｒ２５４→Ｔｈｒ、Ｔｈｒ２５６→Ｇｌｕ、Ｍｅｔ４２８→Ｌｅｕ、またはＡｓｎ４３４→Ｓｅｒの修飾によりＦｃＲｎ結合を増強するために；そして／あるいは抗体依存性細胞毒性および／または補体依存性細胞毒性を変更するために；そして／あるいはＴｈｒ３６６→Ｔｒｐの修飾によって、そして任意選択でさらに対向するＣＨ３ドメインでのＳｅｒ３５４→ＣｙｓおよびＴｙｒ３４９→Ｃｙｓの修飾によるジスルフィド結合の導入によって、ヘテロ二量体化を誘発するために修飾され、
ｉｉｉ）前記モノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、または競合抗体もしくはその抗原結合断片がヒトＩｇＧ３アイソタイプである場合、ヒトＩｇＧ３定常領域は、アミノ酸Ａｓｎ２９７においてＡｓｎ２９７→ＡｌａまたはＡｓｎ２９７→Ｇｌｎの修飾によりグリコシル化を阻止するために；そして／あるいはアミノ酸４３５においてＡｒｇ４３５→Ｈｉｓの修飾により半減期を長くするために；そして／あるいはＭｅｔ２５２→Ｔｙｒ、Ｓｅｒ２５４→Ｔｈｒ、Ｔｈｒ２５６→Ｇｌｕ、Ｍｅｔ４２８→Ｌｅｕ、またはＡｓｎ４３４→Ｓｅｒの修飾によりＦｃＲｎ結合を増強するために；そして／あるいは抗体依存性細胞毒性および／または補体依存性細胞毒性を変更するために；そして／あるいはＴｈｒ３６６→Ｔｒｐの修飾によって、そして任意選択でさらに対向するＣＨ３ドメインでのＳｅｒ３５４→ＣｙｓおよびＴｙｒ３４９→Ｃｙｓの修飾によるジスルフィド結合の導入によって、ヘテロ二量体化を誘発するために修飾され、
ｉｖ）前記モノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片、または競合抗体もしくはその抗原結合断片がヒトＩｇＧ４アイソタイプである場合、ヒトＩｇＧ４定常領域は、ヒンジ領域内でＳｅｒ２２８→Ｐｒｏの修飾により鎖交換を阻止または低減するために；そして／あるいはアミノ酸２３５においてＬｅｕ２３５→Ｇｌｕの修飾により、またはヒンジ内の修飾により、およびアミノ酸２３５においてＳｅｒ２２８→ＰｒｏおよびＬｅｕ２３５→Ｇｌｕを修飾することによりＦｃ受容体相互作用を変更するために；そして／あるいはアミノ酸Ａｓｎ２９７においてＡｓｎ２９７→Ａｌａの修飾によりグリコシル化を阻止するために；そして／あるいはＭｅｔ２５２→Ｔｙｒ、Ｓｅｒ２５４→Ｔｈｒ、Ｔｈｒ２５６→Ｇｌｕ、Ｍｅｔ４２８→Ｌｅｕ、またはＡｓｎ４３４→Ｓｅｒの修飾によりＦｃＲｎ結合を増強するために；そして／あるいは抗体依存性細胞毒性および／または補体依存性細胞毒性を変更するために；そして／あるいはＴｈｒ３６６→Ｔｒｐの修飾によって、そして任意選択でさらに対向するＣＨ３ドメインでのＳｅｒ３５４→ＣｙｓおよびＴｙｒ３４９→Ｃｙｓの修飾によるジスルフィド結合の導入によって、ヘテロ二量体化を誘発するために修飾される。
【０１５３】
本明細書中に明確に包含されるのは、本明細書中に開示される方法、使用、組成物、または任意の他の実施形態のいずれかにおける［１３８］〜［１３９］のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片の使用である。
【０１５４】
本発明の適用性のさらなる範囲は、以下で提供される詳細な説明から明らかになるであろう。しかしながら、本発明の趣旨および範囲内の種々の変化および修正はこの詳細な説明から当業者に明らかになり得るので、詳細な説明および特定の実施例は本発明の好ましい実施形態を示しているが、例証として与えられるだけであることは理解されるべきである。
【０１５５】
本発明上記および他の態様、特徴、および利点は、添付図面と併せて解釈される以下の詳細な説明からより良く理解されるであろう。これらは全て例証として与えられるだけであり、本発明を制限するものであはない。
【図面の簡単な説明】
【０１５６】
【図１】パネルＡ、Ｂ、Ｃ、およびＤは、実施例３に記載されるクローンＣｌ１、Ｃｌ１．１、Ｃｌ１３、およびＣｌ１３．１から精製された種々の濃度の抗体を用いて作成されたヒト、マウス、ラット、およびブタＲＢＣに対する異種間結合曲線をそれぞれ示す。クローンＣｌ１およびＣｌ１３は表３に記載される通りである。クローンＣｌ１．１およびＣｌ１３．１はそれぞれ、エフェクター機能を低減するように修飾されたクローンＣｌ１およびＣｌ１３のＦｃ突然変異体である。それぞれ、ＦｃドメインにおいてＡｓｎ２９７→Ｇｌｎ（Ｎ２９７Ｑ）突然変異を有する（Ｓａｚｉｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）ＰＮＡＳ  １０５（５１）：２０１６７−２０１７２）。これらのクローンは全て、試験したＲＢＣの全ての種に対して濃度依存性の結合を示す。ＲＢＣは、クローンＣｌ１、Ｃｌ１．１、Ｃｌ１３、およびＣｌ１３．１から精製された種々の濃度の抗体と共に氷上で６０分間インキュベートされる。次に、細胞はＥＤＴＡを含有する冷ＰＢＳで洗浄され、氷上でさらに１時間、ＦＩＴＣ標識ロバ抗ヒト抗体と共にインキュベートされ、洗浄され、ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ａｒｉａ  Ｃｅｌｌ  Ｓｏｒｔｅｒ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）またはＣ６  Ａｃｃｕｒｉ  Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて抗体結合が分析される。
【図２】ヒトＪｕｒｋａｔ癌細胞の細胞生存率を低下させることによって評価される、特定のヒト化クローンの細胞毒活性を示す。ＪｕｒｋａｔＪＥ６．１細胞は、５％（ｖ／ｖ）熱失活ウシ胎児血清を含有するイスコフ改変ダルベッコ培地（Ｉｓｃｏｖｅｓ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  ｍｅｄｉｕｍ）中２×１０４細胞／ｍｌの密度で、９６ウェル組織培養プレートにプレーティングされ、５μｇ／ｍｌの精製ヒト化抗体（クローン１３、１４、および２４）、マウスｍＡｂ１Ｆ７（正の対照）、およびＩｇＧ対照と共に３７℃で７２時間インキュベートされる。次に、製造業者により記載されるようにＷＳＴ１試薬（Ｒｏｃｈｅ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ｉｎ、カタログ＃０５０１５９４４００１）を用いて細胞密度が定量化される。クローン１３および１４はｍＡｂ１Ｆ７と同様の活性を有する細胞毒性を生じるが、クローン２４は細胞生存率を低下させない。
【図３】本発明のヒト化抗体によるＮＯ刺激性ｃＧＭＰ産生のＴＳＰ１阻害の逆転を示す。実施例５に記載されるように、ＪｕｒｋａｔＪＥ６．１細胞は無血清培地中で一晩インキュベートされ、次に、本発明のヒト化抗体または対照キメラｍＡｂと共に、そしてＴＳＰ１を伴ってまたは伴わずにインキュベートされた後、ＮＯ供与体を用いてまたは用いずに処置される。細胞は５分後に溶解され、ｃＧＭＰが測定される。試験した本発明のヒト化抗体クローン、または対照キメラｍＡｂはどれも基礎ｃＧＭＰレベルに対する効果を有さない。本明細書に開示されるヒト化クローン１、９、１１、および２４（それぞれ、Ｃｌ１、Ｃｌ９、Ｃｌ１１、Ｃｌ２４）と同様に、対照キメラ抗体はＴＳＰ１阻害を逆転させる。ＰＢＳ：リン酸緩衝食塩水、ＴＳＰまたはＴＳＰ１：トロンボスポンジン−１、ＤＥＡ：ジエチルアミンＮＯＮＯａｔｅ、ｃｈｉｍ：キメラ抗体＞ＶｘＰ０３７−０１ＬＣ（配列番号７））／＞ＶｘＰ０３７−０１ＨＣ（配列番号５７）。
【図４】本発明のヒト化抗体によるＮＯ刺激性ｃＧＭＰ産生のＴＳＰ１阻害の逆転を示す。実施例５に記載されるように、ＪｕｒｋａｔＪＥ６．１細胞は無血清培地中で一晩インキュベートされ、次に、本発明の精製ヒト化クローン１および１３抗体、または対照としてのＰＢＳと共に、そしてＴＳＰ１を伴ってまたは伴わずにインキュベートされた後、ＮＯ供与体を用いてまたは用いずに処置される。細胞は５分後に溶解され、ｃＧＭＰが測定される。ヒト化抗体クローンまたはＰＢＳは基礎ｃＧＭＰレベルに対する効果を有さない。ヒト化クローン１および１３はＴＳＰ１阻害を逆転させるが、ＰＢＳは効果を有さない。ＰＢＳ：リン酸緩衝食塩水、ＴＳＰまたはＴＳＰ１：トロンボスポンジン−１、ＤＥＡ：ジエチルアミンＮＯＮＯａｔｅ。
【図５】臓器摘出時のクローン１（Ｃｌ１）によるドナー腎臓の処置が、血清クレアチニンを測定することにより評価されるように、ラット腎臓移植モデルにおいてインビボでＩＲＩおよび腎臓損傷の低減において有効であることを示す。両方の腎臓を摘出したレシピエントによるＩＲＩの同系ラット腎臓移植モデルを用いて、移植後の移植片機能に対する抗ＣＤ４７モノクローナル抗体クローン１の効果が評価される。ドナー動物およびレシピエント動物としていずれも体重２７５〜３００ｇのオスのＬｅｗｉｓラットが使用される。ドナー腎臓は、５０μｇの精製クローン１または媒体（リン酸緩衝食塩水、ｐＨ７．２）で洗い流され、ウィスコンシン大学保存（ＷＵ）溶液中４℃で６時間貯蔵されてから移植される。移植の２日後、循環血清クレアチニンを測定することにより腎臓機能が評価される。クローン１によるドナー腎臓の処置は、対照と比較して、血清クレアチニンの低減によって測定されるように腎臓機能の改善をもたらす。
【図６】同系マウスの急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）モデルにおいて精製ヒト化抗体クローン１３（Ｃｌ１３）がインビボで腫瘍量を低減することを示す。３つのグループ（１グループ当たり５〜１０匹のマウス）：グループ１：ＡＰＬなし、グループ２：未処置のＡＰＬ、グループ３：抗ＣＤ４７ｍＡｂＣｌ１３で処置されたＡＰＬに無作為に分けたＣ５７ＢＬ／６マウスに、マウスＡＰＬ細胞（Ｂ６ＡＰＬ１）が静脈内注射される。抗体処置は腫瘍接種の日（０日目）に開始され、０日目、３日目、および６日目に腹腔内の注射によって１０μｇ／用量（０．４ｍｇ／ｋｇ）の単一用量で与えられる。循環ＡＰＬ細胞（腫瘍量を表す）は、フローサイトメトリー（ＣＤ３４＋／ＣＤ１１７＋細胞）によって腫瘍接種後２５日目に評価される。Ｃｌ１３で処置されたマウスは、腫瘍接種後２５日目に未処置のマウスと比較して腫瘍量を低下させ、このヒト化クローンの抗腫瘍活性が実証される。
【発明を実施するための形態】
【０１５７】
本発明の以下の詳細な説明は、当業者が本明細書に記載される本発明の種々の実施形態（本明細書に記載される方法、使用、組成物などを全て含む）を実行する際に役立つように提供される。それでも、明細書中で議論される実施形態の修正および変化は本発明の発見の趣旨または範囲から逸脱することなく当業者によってなされ得るので、以下の詳細な説明は、本発明を不当に制限すると解釈されるべきではない。
【０１５８】
本明細書中で引用される文書のそれぞれの内容は、参照によってその全体が本明細書中に援用される。
【０１５９】
本発明の抗体化合物は、ＣＤ４７の細胞外ＩｇＶドメイン内のエピトープに結合して、ＴＳＰ１およびＳＩＲＰαのＣＤ４７への結合ならびに受容体の活性化を阻止するが、アゴニスト活性をほとんどまたは全く示さない。本発明の特定の抗体は、腫瘍細胞の食作用性排除を増大させることに加えて、活性化または形質転換細胞に特異的な腫瘍毒性細胞死誘発効果を提供する、すなわち二重活性を提供する。これらの特性を考慮して、本発明の抗体化合物は、ＩＲＩの多数の形態、ならびに血液癌および固形腫瘍の両方の処置において治療的に有用なはずである。
【０１６０】
また本発明の抗体化合物は、ヒト、マウス、ラット、ブタ、および／またはイヌを含む様々な種類の哺乳類種、すなわちこれらの哺乳類種の任意の個々の１つ、またはこれらの種々の組み合わせのＣＤ４７との広い反応性を含むいくつかの他の望ましい特性も有し、それにより、これらの抗体は人間医学および獣医学の両方において有用になる。この広い反応性は、様々な哺乳類種における安全性および効力の研究を含む（限定されない）前臨床研究を容易にし、従って人間および動物の治療法としてこのような抗体の開発を容易にするという点でさらに有利である。
【０１６１】
定義
全長抗体は、天然に存在する場合、ジスルフィド結合によって相互接続された２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖を含む免疫グロブリン分子である。各鎖のアミノ末端部は約１００〜１１０またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含み、この可変領域は、そこに含有される相補性決定領域（ＣＤＲ）によって、主として抗原認識の責任を担う。各鎖のカルボキシ末端部は、主としてエフェクター機能の責任を担う定常領域を定義する。
【０１６２】
ＣＤＲは、フレームワーク領域（「ＦＲ」）と呼ばれるより多く保存される領域が散在される。各軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）は、アミノ末端からカルボキシ末端へ以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配列される３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成される。軽鎖の３つのＣＤＲは「ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３」と呼ばれ、重鎖の３つのＣＤＲは「ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３」と呼ばれる。ＣＤＲは、抗原との特異的な相互作用を形成する残基の大部分を含有する。ＬＣＶＲおよびＨＣＶＲ領域内のＣＤＲアミノ酸残基の番号付けおよび位置決めは、周知のＫａｂａｔ番号付け慣習に従う。本明細書中に開示される軽鎖ＣＤＲおよび重鎖ＣＤＲはそれぞれ１、２、および３と番号付けされるが、これらは対応する抗体化合物の軽鎖および重鎖可変領域においてその番号順に使用される必要はなく、すなわちこれらはそれぞれ、軽鎖または重鎖可変領域中に任意の番号順で存在することができる。
【０１６３】
軽鎖はκまたはλに分類され、当該技術分野において知られている特定の定常領域によって特徴付けられる。重鎖はγ、μ、α、δ、またはεに分類され、それぞれ、抗体のアイソタイプをＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥと定義する。ＩｇＧ抗体はさらに、サブクラス、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４に分類することができる。各重鎖のタイプは、当該技術分野において周知の配列を有する特定の定常領域によって特徴付けられる。
【０１６４】
本明細書に記載される方法および組成物において有用なモノクローナル抗体および他の抗体化合物は、これらのアイソタイプのいずれかであり得る。さらに、これらのアイソタイプはどれも、以下のようにアミノ酸修飾を含むことができる。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、抗体定常領域はヒトＩｇＧ１アイソタイプである。
【０１６６】
いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ１定常領域は、抗体のグリコシル化を阻止するためにアミノ酸Ａｓｎ２９７（Ｋａｂａｔ番号付け）において修飾される。例えば、この修飾は、Ａｓｎ２９７→Ａｌａ（Ｎ２９７Ａ）またはＡｓｎ２９７→Ｇｌｎ（Ｎ２９７Ｑ）であり得る（Ｓａｚｉｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）ＰＮＡＳ  １０５（５１）：２０１６７−２０１７２）。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、抗体の定常領域は、Ｆｃ受容体相互作用を変更するためにアミノ酸Ｌｅｕ２３４（Ｋａｂａｔ番号付け）において修飾される。例えば、この修飾は、Ｌｅｕ２３４→Ａｌａ（Ｌ２３４Ａ）であり得る。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、抗体の定常領域は、Ｆｃ受容体相互作用を変更するためにアミノ酸Ｌｅｕ２３５（Ｋａｂａｔ番号付け）において修飾される。例えば、この修飾は、Ｌｅｕ２３５→Ｇｌｕ（Ｌ２３５Ｅ）またはＬｅｕ２３５→Ａｌａ（Ｌ２３５Ａ）であり得る。
【０１６９】
いくつかの実施形態では、抗体の定常領域は、アミノ酸２３４および２３５の両方において改変される。例えば、これらの修飾は、Ｌｅｕ２３４→ＡｌａおよびＬｅｕ２３５→Ａｌａ（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ）であり得る（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ＩｎｔｅｒｅｓｔのＥＵインデックス）。
【０１７０】
いくつかの実施形態では、抗体の定常領域はヒトＩｇＧ２アイソタイプである。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ２定常領域は、抗体のグリコシル化を阻止するためにアミノ酸Ａｓｎ２９７（Ｋａｂａｔ番号付け）において修飾される。例えば、この修飾は、Ａｓｎ２９７→Ａｌａ（Ｎ２９７Ａ）またはＡｓｎ２９７→Ｇｌｎ（Ｎ２９７Ｑ）であり得る。
【０１７２】
いくつかの実施形態では、抗体の定常領域はヒトＩｇＧ３アイソタイプである。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ３定常領域は、抗体のグリコシル化を阻止するためにアミノ酸Ａｓｎ２９７（Ｋａｂａｔ番号付け）において修飾される。例えば、この修飾は、Ａｓｎ２９７→Ａｌａ（Ｎ２９７Ａ）またはＡｓｎ２９７→Ｇｌｎ（Ｎ２９７Ｑ）であり得る。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ３定常領域は、半減期を長くするためにアミノ酸４３５において修飾される。例えば、この修飾は、Ａｒｇ４３５→Ｈｉｓ（Ｒ４３５Ｈ）であり得る（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ＩｎｔｅｒｅｓｔのＥＵインデックス）。
【０１７５】
いくつかの実施形態では、抗体の定常領域はヒトＩｇＧ４アイソタイプである。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ４定常領域は、鎖交換を阻止または低減するためにヒンジ領域内で修飾される。例えば、この修飾は、Ｓｅｒ２２８→Ｐｒｏ（Ｓ２２８Ｐ）であり得る（Ａｎｇａｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ３０（１）：１０５−１０８）。
【０１７７】
他の実施形態では、ヒトＩｇＧ４定常領域は、Ｆｃ受容体相互作用を変更するためにアミノ酸２３５において修飾される。例えば、これはＬｅｕ２３５→Ｇｌｕ（Ｌ２３５Ｅ）であり得る。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ４定常領域は、ヒンジ内およびアミノ酸２３５において修飾される。例えば、これはＳｅｒ２２８→ＰｒｏおよびＬｅｕ２３５→Ｇｌｕ（Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ）であり得る。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ４定常領域は、抗体のグリコシル化を阻止するためにアミノ酸Ａｓｎ２９７（Ｋａｂａｔ番号付け）において修飾される。例えば、これはＡｓｎ２９７→Ａｌａ（Ｎ２９７Ａ）であり得る（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ＩｎｔｅｒｅｓｔのＥＵインデックス）。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ定常領域は、ＦｃＲｎ結合を増強するために修飾される。ＦｃＲｎへの結合を増強するＦｃ突然変異の例は、Ｍｅｔ２５２→Ｔｙｒ、Ｓｅｒ２５４→Ｔｈｒ、Ｔｈｒ２５６→Ｇｌｕ（それぞれ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅ）（Ｋａｂａｔ番号付け、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８１（３３）２３５１４−２３５２４）、またはＭｅｔ４２８→ＬｅｕおよびＡｓｎ４３４→Ｓｅｒ（Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ｓ）（Ｚａｌｅｖｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２８（２）：１５７−１５９）である（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ＩｎｔｅｒｅｓｔのＥＵインデックス）。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ定常領域は、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）および／または補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）を変更するために修飾され、例えば、アミノ酸修飾は、Ｎａｔｓｕｍｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６８（１０）：３８６３−７２、Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６（４）：２５７１−５、Ｍｏｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）ｍＡｂ  ２（２）：１８１−１８９、Ｌａｚａｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）ＰＮＡＳ  １０３（１１）：４００５−４０１０、Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（９）：６５９１−６６０４、Ｓｔａｖｅｎｈａｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６７（１８）：８８８２−８８９０、Ｓｔａｖｅｎｈａｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ａｄｖａｎ．Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌ．４８：１５２−１６４、Ａｌｅｇｒｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：３４６１−３４６８に記載されており、Ｋａｎｅｋｏ  ａｎｄＮｉｗａ（２０１１）Ｂｉｏｄｒｕｇｓ  ２５（１）：１−１１において概説されている。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ定常領域は、ヘテロ二量体化を誘発するために修飾される。例えば、ＣＨ３ドメイン内でＴｈｒ３６６においてアミノ酸修飾を有する場合、Ｔｒｐ（Ｔ３６６Ｗ）などのより嵩の大きいアミノ酸で置換されると、Ｔｈｒ３６６、Ｌｅｕ３６８、およびＴｙｒ４０７の位置においてより嵩の小さいアミノ酸、例えばそれぞれＳｅｒ、Ａｌａ、およびＶａｌのアミノ酸修飾（Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ）を有する第２のＣＨ３ドメインと優先的に対を作ることができる。ＣＨ３修飾によるヘテロ二量体化は、ジスルフィド結合の導入によって、例えば、対向するＣＨ３ドメインにおいてＳｅｒ３５４をＣｙｓに変化させ（Ｓ３５４Ｃ）、Ｔｙｒ３４９をＣｙｓに変化させる（Ｙ３４９Ｃ）ことによってさらに安定化され得る（Ｃａｒｔｅｒ（２００１）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４８：７−１５において概説される）。
【０１８３】
本明細書で使用される場合、本発明の抗体化合物に適用される「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）という用語は、単一のコピーまたはクローン（例えば、任意の真核生物クローン、原核生物クローン、またはファージクローンを含む）に由来し、それが産生される方法に由来しない抗体を指す。本発明のｍＡｂは、好ましくは均質または実質的に均質な集団で存在し、キメラまたはヒト化であり得る。完全ｍＡｂは、２本の重鎖および２本の軽鎖を含有する。
【０１８４】
このようなモノクローナル抗体の「抗原結合断片」は、その小さいサイズ、および結果として生じる優れた組織分布のために特定の用途のために望ましいことがあり、例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、単鎖Ｆｖ断片（ＳｃＦｖ）、ならびに軽鎖および重鎖を含むワンアームド（ｏｎｅ−ａｒｍｅｄ）抗体が含まれる。好ましい抗原結合断片は、インタクトな抗体によって認識される抗原に結合するものである。Ｆｃ断片も得ることができる。本発明のモノクローナル抗体およびその抗原結合断片は、例えば、組換え技術、ファージディスプレイ技術、合成技術、例えばＣＤＲ移植、またはこのような技術の組み合わせ、またはインタクトな抗体のタンパク質消化を含む当該技術分野において既知の他の技術によって産生され得る。
【０１８５】
「抗体化合物」は、種々の種のＣＤ４７（ヒト、ラット、マウス、ブタ、およびイヌＣＤ４７を含む）に特異的に結合して本明細書に開示される特性を示す、本明細書に開示されるｍＡｂおよびＦａｂ、ならびに競合抗体を指す。従って、「ｍＡｂ」という用語は、本発明によって包含される抗体に関連して本明細書で使用される場合、Ｆａｂおよび競合抗体を含む。本発明に従う類似の機能特性を示す付加的な抗体化合物は、従来の方法によって生成され得る。例えば、マウスはヒトＣＤ４７またはその断片によって免疫化することが可能であり、得られる抗体を回収および精製することができ、これらが本明細書に開示される抗体化合物に類似したまたはそれと同じ結合および機能特性を有するかどうかの決定は、以下の実施例３および４で開示される方法によって評価することができる。また抗原結合断片も従来の方法によって調製することができる。抗体および抗原結合断片を産生および精製するための方法は当該技術分野において周知であり、例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，ｃｈａｐｔｅｒｓ  ５−８  ａｎｄ  １５，ＩＳＢＮ  ０−８７９６９−３１４−２において見出すことができる。
【０１８６】
「ヒト化抗体」という語句は、本明細書に開示されるものと類似の本発明に従う結合および機能特性を有し、非ヒト抗体由来のＣＤＲを包囲する実質的にヒトまたは完全にヒトであるフレームワーク領域を有する、本明細書に開示される抗体化合物を含むモノクローナル抗体およびその抗原結合断片を指す。「フレームワーク領域」または「フレームワーク配列」は、フレームワーク領域１〜４の任意の１つを指す。本発明によって包含されるヒト化抗体および抗原結合断片には、フレームワーク領域１〜４の任意の１つまたは複数が実質的または完全にヒトである分子、すなわち、個々の実質的または完全にヒトのフレームワーク領域１〜４の可能な組み合わせのいずれかが存在する分子が含まれる。例えば、これには、フレームワーク領域１およびフレームワーク領域２、フレームワーク領域１およびフレームワーク領域３、フレームワーク領域１、２、および３などが実質的または完全にヒトである分子が含まれる。実質的にヒトのフレームワークは、既知のヒト生殖系フレームワーク配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するものである。好ましくは、実質的にヒトのフレームワークは、本明細書に開示されるフレームワーク配列に対して、または既知のヒト生殖系フレームワーク配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する。
【０１８７】
本発明によって包含されるＣＤＲには、本明細書で明確に開示されるものだけでなく、本明細書に開示されるＣＤＲ配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＣＤＲ配列も含まれる。あるいは、本発明によって包含されるＣＤＲには、本明細書で明確に開示されるものだけでなく、本明細書に開示されるＣＤＲ配列と比べて、対応する位置において１、２、３、４、または５つのアミノ酸変化を有するＣＤＲ配列も含まれる。このような配列同一性またはアミノ酸修飾のＣＤＲは、好ましくは、インタクトな抗体によって認識される抗原に結合する。
【０１８８】
本明細書で使用される場合、「配列同一性」という語句は、２つ以上の配列において、配列の整合性を最大にするように、すなわち間隙および挿入を考慮して配列をアラインしたときに、対応する位置のヌクレオチドまたはアミノ酸残基が同一である割合を意味する。同一性は、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８８、Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９３、Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ  Ｉ，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ  Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ，１９９４、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８７、およびＳｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ  Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．，Ｍ  Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９１、ならびにＣａｒｉｌｌｏ，Ｈ．，ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ，Ｄ．，ＳＩＡＭ  Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．，４８：１０７３（１９８８）に記載される方法を含む（限定されない）既知の方法によって、容易に計算することができる。同一性の決定方法は、試験される配列間の最大の整合性を与えるように設計される。さらに、同一性の決定方法は、公的に入手可能なコンピュータプログラムにおいて体系化されている。
【０１８９】
比較のための最適な配列アライメントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ  ＆  Ｗａｔｅｒｍａｎの局所相同性アルゴリズムによって、相同性アライメントアルゴリズムによって、類似性の検索方法によって、もしくはこれらのアルゴリズムのコンピュータ化された実行（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａから入手可能なＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  ＰａｃｋａｇｅのＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＰＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ）によって、または目視検査によって実行することができる。概略的に（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０（１９９０）およびＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２（１９９７））が参照される。
【０１９０】
配列同一性および配列類似性パーセントを決定するために適切なアルゴリズムの一例はＢＬＡＳＴアルゴリズムであり、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，ＮＣＢＩ  ＮＬＭ  ＮＩＨ  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．２０８９４；＆  Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０（１９９０）に記載されている。ＢＬＡＳＴ分析を実施するためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎによって公的に入手可能である。このアルゴリズムは、データベース配列内の同じ長さのワードとアラインさせたときに、ある正の値のしきい値スコアＴと一致するかあるいはこれを満たすクエリー配列内の長さＷのショートワードを同定することによって、高スコアリング配列対（ＨＳＰ）をまず同定することを含む。Ｔは、近隣ワードスコアしきい値と呼ばれる。
【０１９１】
これらの最初の近隣ワードヒットは、これらを含有するより長いＨＳＰを見出すための検索開始のシードとしての役割を果たす。次に、ワードヒットは、累積アライメントスコアが増大され得る限り、各配列にそって両方向に拡張される。累積スコアは、ヌクレオチド配列については、パラメータＭ（一対の整合性残基の報酬スコア、常に０）およびＮ（ミスマッチ残基のペナルティスコア、常に０）を用いて計算される。アミノ酸配列については、スコアリングマトリックスを用いて、累積スコアを計算する。累積アライメントスコアがその最大達成値から数量Ｘだけ低下するか、１つまたは複数の負のスコアの残基アライメントの蓄積のために累積スコアがゼロまたはそれ以下になるか、あるいはいずれかの配列の末端に到達すると、各方向のワードヒットの拡張は停止される。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメータＷ、Ｔ、およびＸは、アライメントの感度および速度を決定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列の場合）は、デフォルトとして、１１のワード長（Ｗ）、１０の期待値（Ｅ）、１００のカットオフ、Ｍ＝５、Ｎ＝−４、および両鎖の比較を使用する。アミノ酸配列については、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、デフォルトとして、３のワード長（Ｗ）、１０の期待値（Ｅ）、およびＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックスを使用する。
【０１９２】
配列同一性パーセントの計算に加えて、ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、２つの配列間の類似性の統計的分析も実施する。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって提供される類似性の１つの尺度は、最小合計確率（Ｐ（Ｎ））であり、これは、２つのヌクレオチドまたはアミノ酸配列間の整合性が偶然に発生し得る確率の表示を提供する。例えば、試験核酸配列と基準核酸配列との比較における最小合計確率が、一実施形態では約０．１未満、別の実施形態では約０．０１未満、さらに別の実施形態では約０．００１未満である場合に、試験核酸配列は基準配列に類似していると考えられる。
【０１９３】
完全ヒトフレームワークは、既知のヒト生殖系フレームワーク配列と同一のものである。ヒトフレームワーク生殖系配列は、そのウェブサイトによりＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）から、あるいは「Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ＦａｃｔｓＢｏｏｋ」，Ｍａｒｉｅ−Ｐａｕｌｅ  ＬｅｆｒａｎｃおよびＧｅｒａｒｄ  Ｌｅｆｒａｎｃ著，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，２００１，ＩＳＢＮ  ０１２４４１３５１から得ることができる。例えば、生殖系軽鎖フレームワークは、Ａ１１、Ａ１７、Ａ１８、Ａ１９、Ａ２０、Ａ２７、Ａ３０、Ｌ１、Ｌ１１、Ｌ１２、Ｌ２、Ｌ５、Ｌ１５、Ｌ６、Ｌ８、Ｏ１２、Ｏ２、およびＯ８からなる群から選択することができ、生殖系重鎖フレームワーク領域は、ＶＨ２−５、ＶＨ２−２６、ＶＨ２−７０、ＶＨ３−２０、ＶＨ３−７２、ＶＨＩ−４６、ＶＨ３−９、ＶＨ３−６６、ＶＨ３−７４、ＶＨ４−３１、ＶＨＩ−１８、ＶＨＩ−６９、ＶＩ−１３−７、ＶＨ３−１１、ＶＨ３−１５、ＶＨ３−２１、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−３０、ＶＨ３−４８、ＶＨ４−３９、ＶＨ４−５９、およびＶＨ５−５Ｉからなる群から選択することができる。
【０１９４】
本明細書に開示されるものに加えて、本発明に従う類似の機能特性を示すヒト化抗体は、いくつかの異なる方法を用いて生成され得る。１つのアプローチにおいて、親抗体化合物のＣＤＲは、親抗体化合物フレームワークと高い配列同一性を有するヒトフレームワークに移植され得る。新しいフレームワークの配列同一性は通常、親抗体化合物内の対応するフレームワークの配列と、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であり得る。１００よりも少ないアミノ酸残基を有するフレームワークの場合、１つ、２つ、または３つのアミノ酸残基を変化させることができる。この移植は、親抗体と比較して結合親和性の低下をもたらし得る。この場合には、フレームワークは、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：２８６９によって開示される特定の判断基準に基づいて、特定の位置で親フレームワークに対して逆突然変異され得る。マウス抗体のヒト化において有用な方法が記載される付加的な参考文献には、米国特許第４，８１６，３９７号明細書；同第５，２２５，５３９号明細書；および同第５，６９３，７６１号明細書；Ｌｅｖｉｔｔ（１９８３）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１６８：５９５−６２０に記載されるコンピュータプログラムＡＢＭＯＤおよびＥＮＣＡＤ；ならびにＷｉｎｔｅｒおよび共同研究者らの方法（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７；およびＶｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６が含まれる。
【０１９５】
逆突然変異について考えるための残基の同定は、以下のように実行することができる。
【０１９６】
アミノ酸が以下のカテゴリーに入る場合、使用されている生殖系配列のフレームワークアミノ酸（「アクセプターフレームワーク」）は親抗体化合物のフレームワークからのフレームワークアミノ酸（「ドナーフレームワーク」）によって置換される：（ａ）アクセプターフレームワークのヒトフレームワーク領域のアミノ酸が、ヒトフレームワークにとってその位置では異常であるが、ドナー免疫グロブリン内の対応するアミノ酸はヒトフレームワークにとってその位置で典型的である、（ｂ）アミノ酸の位置がＣＤＲの１つに直接隣接する、または（ｃ）３次元免疫グロブリンモデルにおいて、フレームワークアミノ酸の任意の側鎖原子が、ＣＤＲアミノ酸の任意の原子の約５〜６オングストローム（中心間）の範囲内にある。
【０１９７】
アクセプターフレームワークのヒトフレームワーク領域内のアミノ酸、およびドナーフレームワーク内の対応するアミノ酸のそれぞれが一般的にヒトフレームワークにとってその位置で異常である場合、このようなアミノ酸は、ヒトフレームワークにとってその位置で典型的であるアミノ酸によって置換され得る。この逆突然変異の判断基準によって、親抗体化合物の活性を元に戻すことが可能になる。
【０１９８】
本明細書に開示される抗体化合物と類似の機能特性を示すヒト改変抗体を生成する別のアプローチは、フレームワークを変化させることなく移植ＣＤＲ内のアミノ酸を無作為に突然変異させ、得られた分子を、親抗体化合物と同様かそれよりも優れた結合親和性および他の機能特性についてスクリーニングすることを含む。また単一の突然変異が各ＣＤＲ内の各アミノ酸位置において導入された後、結合親和性および他の機能特性に対するこのような突然変異の効果が評価され得る。改善された特性を生じる単一の突然変異を組み合わせて、互いに組み合わされたその効果を評価することができる。
【０１９９】
さらに、上記の両方のアプローチの組み合わせも可能である。ＣＤＲ移植の後、ＣＤＲ内のアミノ酸変化の導入に加えて特異的なフレームワーク領域を逆突然変異させることができる。この方法論は、Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９４：１５１−１６２に記載されている。
【０２００】
以下の実施例１に記載される方法も使用することができる。
【０２０１】
本発明の教示を適用し、当業者は一般的な技術、例えば部位特異的変異誘発を用いて、本発明で開示されるＣＤＲおよびフレームワーク配列内のアミノ酸を置換し、それにより本発明の配列から誘導されるさらなる可変領域アミノ酸配列を生成することができる。当業者に周知であるように保存的アミノ酸置換を含めて、特異的な置換部位において、最大全ての天然に存在するアミノ酸が導入され得る。次に、本明細書に開示される方法を使用して、インビトロおよび／またはインビボの機能が示された配列を同定するために、これらの付加的な可変領域アミノ酸配列をスクリーニングすることができる。このようにして、本発明に従ってヒト改変抗体およびその抗原結合部分を調製するために適したさらなる配列を同定することができる。好ましくは、フレームワーク内のアミノ酸置換は、本明細書に開示される４つの軽鎖および／または重鎖フレームワーク領域の任意の１つまたは複数における１つ、２つ、または３つの位置に限定される。好ましくは、ＣＤＲ内のアミノ酸置換は、３つの軽鎖および／または重鎖ＣＤＲの任意の１つまたは複数における１つ、２つ、または３つの位置に限定される。これらのフレームワーク領域および上記のＣＤＲ内の種々の変化の組み合わせも可能である。
【０２０２】
上記のアミノ酸修飾を導入することによって生じる抗体化合物の機能特性が本明細書に開示される特異的な分子によって示されるものに従い、それに匹敵することは、以下の実施例において開示される方法によって確認することができる。
【０２０３】
本発明の抗体化合物に適用される「特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ  ｂｉｎｄｓ）」、「特異的に結合する（ｂｉｎｄ  ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ）」、「特異的な結合（ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｂｉｎｄｉｎｇ）」および同様の用語は、特異的な結合剤（抗体など）が、特異的な結合剤および標的分子種と混合される他の分子種への結合に優先して、標的分子種に結合する能力を指す。特異的な結合剤は、標的分子種に特異的に結合できる場合に、その分子を特異的に認識するといわれる。
【０２０４】
「結合親和性」は、１つの分子がその分子上の部位で別の分子に結合する強度を指す用語である。特定の分子が別の特定の分子と結合する、または特異的に関連し得る場合に、これらの２つの分子は互いに結合親和性を示すといわれる。結合親和性は一対の分子の結合定数および解離定数に関係するが、これらの定数を測定または決定することは、本明細書における方法にとって重要ではない。むしろ、記載される方法の分子間の相互作用を説明するために本明細書で使用される場合の親和性は、通常、実証的研究において観察される見かけの親和性であり（他に規定されない限り）、これは、１つの分子（例えば、抗体または他の特異的な結合パートナー）が２つの他の分子（例えば、ペプチドの２つのバージョンまたは変異体）と結合し得る相対的な強度を比較するために使用することができる。結合親和性、結合定数、および解離定数の概念は周知である。
【０２０５】
「エピトープ」という用語は、抗体または抗体断片が結合するペプチドまたはタンパク質に位置するアミノ酸の特異的な配置を指す。エピトープは、多くの場合、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面グルーピングからなり、特異的な３次元構造特性および特異的な電荷特性を有する。エピトープは直線状（すなわち、単一のアミノ酸配列への結合を含む）であってもよいし、立体構造的（すなわち、必ずしも隣接していなくてもよい、抗原の種々の領域における２つ以上のアミノ酸配列への結合を含む）であってもよい。
【０２０６】
本明細書に開示される分子と「競合する」モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、本発明の分子が結合する部位と同一の部位または重複する部位において、ヒトＣＤ４７に結合するものである。競合モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、例えば抗体競合アッセイによって同定することができる。例えば、精製または部分精製ヒトＣＤ４７細胞外ドメインのサンプルは、固体担体へ固定され得る。次に、本発明の抗体化合物またはその抗原結合断片と、このような本発明の抗体化合物と競合できることが推測されるモノクローナル抗体またはその抗原結合断片とが添加される。２つの分子の１つが標識化される。標識化合物および非標識化合物がＣＤ４７において分離した別個の部位に結合すれば、標識化合物は、推測される競合化合物が存在するかどうかにかかわらず同一レベルで結合するであろう。しかしながら、相互作用部位が同一または重複する場合、非標識化合物は競合し、抗原に結合する標識化合物の量は低下するであろう。非標識化合物が過剰に存在する場合、非常に少量（たとえあったとしても）の標識化合物が結合するであろう。本発明の目的のために、競合モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、本発明の抗体化合物のＣＤ４７への結合を約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約９９％減少させるものである。このような競合アッセイを実行するための手順の詳細は当該技術分野においてよく知られており、例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，５６７−５６９頁，ＩＳＢＮ  ０−８７９６９−３１４−２において見出すことができる。このようなアッセイは、精製抗体を用いることによって定量化され得る。１つ抗体をそれ自身に対して滴定することによって標準曲線が確立される、すなわち同じ抗体が標識および競合者の両方に対して使用される。非標識競合モノクローナル抗体またはその抗原結合断片が、標識分子のプレートへの結合を阻害する能力が滴定される。結果がプロットされ、所望の結合阻害の度合いを達成するために必要な濃度が比較される。
【０２０７】
このような競合アッセイにおいて本発明の抗体化合物と競合するモノクローナル抗体またはその抗原結合断片が本発明の抗体化合物と同一または類似の機能特性を有するかどうかは、これらの方法を以下の実施例３〜７に記載される方法と併用することによって決定することができる。本明細書中に包含される治療法で使用するのに好ましい競合抗体は、実施例３〜７で開示される方法により決定されるように、本明細書に開示される抗体化合物の活性の約±３０％、約±２０％、約±１０％、約±５％の生物活性、または同一の生物活性を有する。
【０２０８】
「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」（または「処置する（ｔｒｅａｔ）」または「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」）という用語は、徴候、症状、障害、状態、または疾患の進行または重症度を遅延させる、中断させる、静止させる、制御する、停止させる、低減する、または逆転させることを意味するが、必ずしも疾患に関連する全ての徴候、症状、条件、または障害の完全な排除を伴うものではない。「処置する」および同様の用語は、疾患または病態の徴候や症状などが発生し始めた後にそれを寛解させる治療的介入を指す。
【０２０９】
急性事象および慢性状態を処置することができる。急性事象では、抗体またはその抗原結合断片は、症状、障害、状態、疾患、または手順の発生時に投与され、急性事象が終わると中止され、あるいは臓器移植の場合には、臓器摘出の際に臓器に、および／または臓器移植の際に移植レシピエントへ投与される。対照的に、慢性の症状、障害、状態、または疾患は、より長期的な時間枠にわたって処置される。
【０２１０】
「有効量」という用語は、単一用量または多数用量で患者または臓器に投与される場合に、所望の処置または予防を提供する本発明の抗体化合物の量または用量を指す。本発明の抗体化合物の治療的に有効な量は、摘出臓器または患者へ投与される単一用量当たり、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１５０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、さらにより好ましくは約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの範囲の量を含むことができる。任意の個々の患者に対する治療的に有効な量は、処置臓器（肝臓、腎臓、肺、腸、膵臓および心臓を含むがこれらに限定されない）の傷害の血清バイオマーカー、肺動脈圧の変化、腫瘍または非腫瘍組織における細胞表面ＣＤ４７の発現、腫瘍退縮、循環腫瘍細胞または腫瘍幹細胞などのバイオマーカーに対する抗体化合物の効果を監視することによって医療提供者により決定することができる。これらの方法によって得られるデータの分析により、単独もしくは互いに組み合わせて、または別の治療薬と組み合わせて、またはその両方のいずれで使用されるかを問わず、最適な量の本発明の抗体化合物が投与されるように、そして処置期間も同様に決定されるように、治療中の処置レジメンを修正することが可能になる。このようにして、投薬／処置レジメンは、単独または組み合わせて使用される抗体化合物が満足な効力を示す最低量で投与されるように、そして患者を成功裏に処置するために必要である期間だけこのような化合物の投与が継続されるように、治療の過程を通して修正され得る。
【０２１１】
本発明の抗体化合物は、人間医学および獣医学において様々な経路により投与される薬剤として使用され得る。獣医学的用途には、ネコおよびイヌなどのコンパニオン／ペット動物；盲導犬または介助犬およびウマなどの使役動物；ウマおよびイヌなどのスポーツ動物；霊長類、ネコ科（ライオンおよびトラなど）、クマなどの動物園の動物；および捕獲されている他の価値のある動物の処置が含まれる。
【０２１２】
最も好ましくは、このような組成物は、当該技術分野において周知であるように、非経投与、例えば、点滴、注射、移植などによる静脈内、筋肉内、皮下などの投与のためのものである。このような医薬組成物は、当該技術分野において周知の方法によって調製することができ（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，第２１版（２００５），Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡを参照）、本明細書に開示される１つまたは複数の抗体化合物と、薬学的または獣医学的に許容可能、例えば生理学的に許容可能なキャリア、希釈剤、または賦形剤を含む。
【０２１３】
併用療法
抗体化合物の組み合わせ
本明細書に開示および主張される治療法の全てにおいて、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、およびＣＤ４７に結合する本発明のこれらのモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と競合するモノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、最大の処置効力を達成するために単独でまたは互いに任意に適切に組み合わせて使用可能であることに注目すべきである。
【０２１４】
ＩＲＩ関連の兆候を処置するためのさらなる治療的な組み合わせ
直前に記載した抗体化合物の組み合わせの投与に加えて、本発明の方法、例えばＩＲＩ関連の兆候の処置に関する方法は、さらに、一酸化窒素供与体、前駆体、もしくは両方、一酸化窒素を発生する局所薬剤、可溶性グアニリルシクラーゼを活性化する薬剤、環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼを阻害する薬剤、または上記のもののいずれかの任意の組み合わせを有効量でそれを必要としている患者に投与することを含むことができる。
【０２１５】
これらの方法では、一酸化窒素供与体または前駆体は、ＮＯガス、二硝酸イソソルビド、亜硝酸塩、ニトロプルシド、ニトログリセリン、３−モルホリノシドノンイミン（ＳＩＮ−１）、Ｓ−ニトロソ−Ｎ−アセチルペニシラミン（ＳＮＡＰ）、ジエチレントリアミン／ＮＯ（ＤＥＴＡ／ＮＯ）、Ｓ−ニトロソチオール、Ｂｉｄｉｌ（登録商標）、およびアルギニンから選択することができる。
【０２１６】
可溶性グアニリルシクラーゼを活性化する薬剤は、血管細胞内のｃＧＭＰレベルを上昇させる可溶性グアニリルシクラーゼの非ＮＯ（一酸化窒素）ベースの化学活性化剤であり得る。このような薬剤はＮＯ結合モチーフ以外の領域で可溶性グアニリルシクラーゼに結合し、局所ＮＯまたは反応性酸素ストレス（ＲＯＳ）に関係なく酵素を活性化する。可溶性グアニリルシクラーゼの化学活性化剤の非限定的な例としては、有機硝酸塩（Ａｒｔｚ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：１８２５３−１８２５６）；プロトポルフィリンＩＸ（Ｉｇｎａｒｒｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９８２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７９：２８７０−２８７３）；ＹＣ−１（Ｋｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｂｌｏｏｄ  ８４：４２２６−４２３３）；ＢＡＹ４１−２２７２およびＢＡＹ４１−８５４３（Ｓｔａｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（２００１  Ｎａｔｕｒｅ  ４１０（６８２５）：２１２−５）、ＣＭＦ−１５７１、およびＡ−３５０６１９（Ｅｖｇｅｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃｏｖ．５：７５５−７６８において概説される）；ＢＡＹ５８−２６６７（シナシグアト、Ｆｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ４８（１２）：１４００−１０）；ＢＡＹ６３−２５２１（リオシグアト、Ｍｉｔｔｅｎｄｏｒｆ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｃｈｅｍｍｅｄｃｈｅｍ  ４（５）：８５３−６５）が挙げられる。付加的な可溶性グアニリルシクラーゼ活性化剤は、Ｓｔａｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １２３：２２６３−２２７３、Ｄｅｒｂｙｓｈｉｒｅ  ａｎｄ  Ｍａｒｌｅｔｔａ（２０１２）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．８１：５３３−５５９、およびＮｏｓｓａｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｃａｒｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｖｏｌｕｍｅ  ２０１２，Ａｒｔｉｃｌｅ  ＩＤ  ２９０８０５，ｐａｇｅｓ  １−１２に開示されている。
【０２１７】
環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼを阻害する薬剤は、シルデナフィル、タダラフィル、バルデナフィル、ウデナフィル、およびアバナフィルから選択することができる。
【０２１８】
癌兆候を処置するためのさらなる治療的な組み合わせ
上記ことに加えて、本発明の方法、例えば癌兆候の処置に関する方法はさらに、手術、放射線による患者の処置、および／または有効量の化学的小分子または生物学的薬物（腫瘍状態を処置するために従来使用されているかあるいは現在開発されているペプチド、ポリペプチド、タンパク質、核酸治療薬などを含むがこれらに限定されない）の、それを必要としている患者への投与を含むことができる。これには、本明細書に開示されるもの以外の抗体、サイトカイン、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡなどが含まれる。
【０２１９】
当業者には周知であるように、単剤療法または手順が疾患または状態を処置または治癒させるために十分でない可能性があるので、癌の処置では併用療法が使用されることが多い。従来の癌の処置は、多くの場合、手術、放射線処置、付加または相乗効果を達成するための細胞毒性薬の組み合わせの投与、およびこれらのアプローチのいずれかまたは全ての組み合わせを含む。特に有用な化学療法的および生物学的治療の組み合わせは、異なる作用メカニズムによって作用する薬物を使用して、癌細胞の制御を増大させる、または死滅させる、治療中の薬物耐性の可能性を低減する、そして個々の薬物の低減された用量での使用を可能にすることにより可能性のある重複毒性を最小限にする。
【０２２０】
本発明により包含される併用療法において有用な従来の抗腫瘍／抗新生物薬の種類は例えば、Ｇｏｏｄｍａｎ  ＆  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｔｗｅｌｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（２０１０）Ｌ．Ｌ．Ｂｒｕｎｔｏｎ，Ｂ．Ａ．Ｃｈａｂｎｅｒ，ａｎｄ  Ｂ．Ｃ．Ｋｎｏｌｌｍａｎｎ  Ｅｄｓ．，Ｓｅｃｔｉｏｎ  ＶＩＩＩ，”Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ”，Ｃｈａｐｔｅｒｓ  ６０−６３，ｐｐ．１６６５−１７７０，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，ＮＹに開示されており、例えば、アルキル化剤、代謝拮抗薬、天然産物、様々な種々の薬剤、ホルモン、およびアンタゴニスト、およびモノクローナル抗体が含まれる。
【０２２１】
「腫瘍」という用語は、悪性であろうと良性であろうと全ての新生物性細胞成長および増殖、ならびに全ての前癌性および癌性細胞および組織を指す。「癌」、「癌性」、および「腫瘍」という用語は、本明細書で使用される場合、互いに排他的ではない。
【０２２２】
「癌」および「癌性」という用語は、通常異常な細胞成長／増殖を特徴とする哺乳類の生理学的状態を指す、または説明する。癌の例としては、癌腫、リンパ腫、芽腫、肉腫、および白血病が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２２３】
「感受性癌」という用語は、本明細書で使用される場合、その細胞がＣＤ４７を発現し、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片または競合抗体もしくはその抗原結合断片による処置に応答する癌を指す。例示的な感受性癌には、急性リンパ性（リンパ芽球性）白血病、急性骨髄性白血病、骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、慢性骨髄性白血病、および形質細胞性白血病を含む白血病；Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、およびワルデンストレームマクログロブリン血症を含む、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫；卵巣癌；乳癌；子宮内膜癌；結腸癌；直腸癌；膀胱癌；肺癌；気管支癌；骨癌；前立腺癌；膵癌；胃癌；肝臓および胆管癌；食道癌；腎癌；甲状腺癌；頭頸部癌；精巣癌；神経膠芽腫；星状細胞腫；メラノーマ；骨髄異形成症候群；ならびに骨肉腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、滑膜肉腫、胞巣状軟部肉腫、血管肉腫、脂肪肉腫、繊維肉腫、横紋筋肉腫、および軟骨肉腫を含むがこれらに限定されない肉腫が含まれるが、これらに限定されない。
【０２２４】
「直接有毒な」という用語は、補体または他の細胞（Ｔ細胞、好中球、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、または樹状細胞を含むがこれらに限定されない）の関与なしに、本明細書に開示されるヒト化抗体またはその抗原結合断片のいくつかが、細胞自律メカニズムによって形質転換／癌細胞を死滅させる能力を指す。
【０２２５】
また、「直接有毒な」、「直接的な細胞毒性」など、および「細胞死を誘発する」、「細胞死の誘発」などの用語は、本発明の抗体化合物を培養癌細胞に添加することによってこれらの細胞が以下のもののうちの任意の１つまたは複数を含む、細胞死に関連する定量可能な特徴を示すことを意味するために、本明細書では互換性に使用される：
１．フローサイトメトリーまたは共焦点蛍光顕微鏡により決定されるような、アネキシンＶ（カルシウムイオンの存在下）の細胞への結合、
２．蛍光化合物ヨウ化プロピジウムの取込み（フローサイトメトリーによりアッセイされるような）、
３．色素トリパンブルーの取込み（光学顕微鏡によりスコア化）、
４．ＤｉＩｏｄｏ−Ｃ６またはＪＣ１などのいくつかの利用可能な電位差測定蛍光色素の１つによりアッセイされるような、ミトコンドリア膜電位の損失、
５．テトラゾリウム色素誘導体の転換（レサズリン、ホルマザンベースのアッセイ（ＭＴＴ、ＷＳＴ１）など）、
６．生細胞をカウントする（トリパンブルーを除外）ことによって評価される細胞培養物の成長速度の動的測定、および／または
７．標識ヌクレオチド前駆体のＤＮＡへの組込みの速度（定量化のためにエピトープタグを有するヌクレオチド類似体または放射性ヌクレオチドを用いる）。
【０２２６】
本発明のヒト化またはキメラｍＡｂによって誘発される細胞毒性／細胞死の量は、ｍＡｂ１Ｆ７によって誘発される量と比較することができ、等しい濃度で同等またはそれ以上であることが予想される（Ｍａｎｎａ  ａｎｄ  Ｆｒａｚｉｅｒ（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０：３５４４−３５５３；Ｍａｎｎａ  ａｎｄ  Ｆｒａｚｉｅｒ（２００４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６４：１０２６−１０３６；Ｒｉｓｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙｓ，ＮＣＩ／ＮＩＨ  ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｍａｎｕａｌ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｂｏｏｋｓ／ＮＢＫ１４４０６５で入手可能）。
【０２２７】
上記は、抗体の細胞毒性／細胞死の誘発をアッセイするために使用され得る多数のタイプの細胞生存率アッセイを説明するＮＣＩ／ＮＩＨマニュアルへのリンクである：Ａｓｓａｙ  Ｇｕｉｄａｎｃｅ  Ｍａｎｕａｌ（Ｉｎｔｅｒｎｅｔ），”Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙｓ”，Ｔｅｒｒｙ  Ｌ  Ｒｉｓｓ，ＰｈＤ，Ｒｉｃｈａｒｄ  Ａ  Ｍｏｒａｖｅｃ，ＢＳ，Ａｎｄｒｅｗ  Ｌ  Ｎｉｌｅｓ，ＭＳ，Ｈｅｌｅｎｅ  Ａ  Ｂｅｎｉｎｋ，ＰｈＤ，Ｔｒａｃｙ  Ｊ  Ｗｏｒｚｅｌｌａ，ＭＳ，ａｎｄ  Ｌｉｓａ  Ｍｉｎｏｒ，ＰｈＤ．Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｏｒ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ、ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  Ｍａｙ  １，２０１３。
【０２２８】
癌細胞の「食作用」は、マクロファージによるこのような細胞の貪食および消化、ならびにこれらの癌細胞の最終的な消化または分解および細胞外または細胞内でのその放出（さらなる処理を受けるため）を指す。正常細胞と比較して癌細胞において高度に発現されるＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合、「ｄｏｎ’ｔ  ｅａｔ  ｍｅ」シグナルを遮断する抗ＣＤ４７モノクローナル抗体は、癌細胞のマクロファージ食作用を誘発する。さもなければ、癌細胞におけるＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合は、これらの細胞がマクロファージの食作用を回避できるようにするであろう。
【０２２９】
マウスまたはヒト血液のいずれかから単離したマクロファージによる腫瘍細胞の食作用は、Ｗｉｌｌｉｎｇｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０９（１７）：６６６２−７およびＴｓｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）ＰｒｏＣ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １１０（２７）：１１１０３−８に本質的に記載されるようにインビトロで測定される。
【０２３０】
インビトロ食作用アッセイのために、ウェルにつき１０３〜１０５のマクロファージ（エフェクター細胞）が組織培養プレート（共焦点顕微鏡による分析のためにマクロファージの接着性を促進するように処理されるか、あるいはフローサイトメトリー分析のためにその容易な懸濁を可能にするように未処理である）にプレーティングされ、接着させられ、そしてアッセイの前に無血清培地中でインキュベートされる。血液腫瘍または固形腫瘍のいずれかに由来し得る癌細胞株（標的細胞）は、製造業者のプロトコル（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）に従って２．５μＭのカルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）により標識化され、１：１〜１：４のエフェクター対標的細胞比で添加される。種々の濃度の抗ＣＤ４７または対照抗体（０．１〜１０μｇ／ｍＬ）が添加され、３７°で２時間インキュベートされる。マクロファージは繰返し洗浄され、その後顕微鏡を用いて画像化され、マクロファージによって貪食される癌細胞の数がカウントされる。食細胞指数は、１００マクロファージ当たりの貪食されたＣＦＳＥ標識癌細胞の数として計算される。あるいは、マクロファージに特異的な蛍光タグ付抗体によってマクロファージを標識化することもでき、貪食された細胞の数は、２色フローサイトメトリーを用いてアッセイすることができる。
【０２３１】
本明細書に開示される抗ＣＤ４７ヒト化およびキメラｍＡｂは、使用される抗体の濃度および親和性、ならびに抗体が標的細胞ＣＤ４７とマクロファージＳＩＰＲαとの相互作用を遮断する能力の両方に応じて、低レベルの食作用（１００マクロファージ当たり０〜２０標的細胞）からはるかに高レベル（１００マクロファージ当たり５０〜２００＋標的細胞）まで食細胞指数を増大させ得ることが予想される。本発明の好ましい抗体は、１００マクロファージ当たり少なくとも４０、より好ましくは少なくとも５０の標的細胞である食細胞指数を有する。
【０２３２】
「促進する（ｐｒｏｍｏｔｅ）」、「促進する（ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ）」などの用語は、本明細書では、「増大させる（ｉｎｃｒｅａｓｅ）」、「増大させる（ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ）」などと同義に使用される。
【０２３３】
「虚血」は、例えば１つまたは複数の血管の収縮または閉塞によって身体の臓器、組織、または部分への血液供給の低下が引き起こされた血管現象を指す。虚血は時折血管収縮または血栓症または塞栓症に起因する。虚血は、酸素供給の低下により生じる細胞死のために、直接的な虚血傷害、組織損傷をもたらし得る。虚血は、例えば、手術中、あるいは事故、傷害および戦争の状況で受けた組織への外傷から、あるいはその後の移植を対象とした臓器の摘出の後のように、急性に発生し得る。また虚血は、血管の進行性狭窄により組織および臓器への不適切な血流がもたらされるアテローム硬化性末梢血管疾患において見られるように亜急性に発生し得る。
【０２３４】
組織が虚血にさらされると一連の化学的事象が開始され、最終的に細胞機能障害および壊死に至り得る。血流の回復によって虚血が終わると、続いて第２の一連の有害事象が起こり、付加的な傷害が生じる。従って、被験者において血流の一過性の減少または中断があればいつでも、結果として起こる傷害は、虚血時間中に起こる直接傷害と、それに続く間接的または再灌流傷害との２つの成分を含む。
【０２３５】
「虚血性脳卒中」は、いくつかの異なる種類の疾患によって引き起こされ得る。最も一般的な問題は、頭頸部における動脈の狭窄である。これはほとんどの場合、アテローム性動脈硬化症、または漸進的なコレステロール沈着によって引き起こされる。動脈が狭くなりすぎると、血液細胞はその中に溜まり、血餅（血栓）を形成し得る。これらの血餅はこれらが形成されたところで動脈を遮断するか（血栓症）、あるいは移動して脳により近い動脈内で捕捉され得る（塞栓症）。脳卒中は、アテローム性動脈硬化巣が血管壁から部分的にはがれて、血管を通る血液の流れを妨げる場合に起こり得る。
【０２３６】
「再灌流」は、血流の低下のために虚血性である組織への血流の回復を指す。再灌流は、生存可能な虚血組織が回復することを可能にし、従ってさらなる壊死を制限することによって、梗塞または他の虚血を処置するための手順である。しかしながら、再灌流自体が、虚血組織をさらに損傷して、再灌流傷害を引き起こし得る。
【０２３７】
血流の欠乏中に起こる即時傷害に加えて、「虚血性／再灌流傷害」は、血流が回復した後に起こる組織傷害を含む。現時点での理解では、この傷害の多くは、虚血組織によって放出される化学産物、フリーラジカル、および活性生物剤によって起こる。
【０２３８】
「一酸化窒素供与体、前駆体、または一酸化窒素を発生する局所薬剤」は、ＮＯを送達するか、あるいは酵素または非酵素プロセスによりＮＯに変換され得る化合物または薬剤を指す。例としては、ＮＯガス、二硝酸イソソルビド、亜硝酸塩、ニトロプルシド、ニトログリセリン、３−モルホリノシドノンイミン（ＳＩＮ−１）、Ｓ−ニトロソ−Ｎ−アセチル−ペニシラミン（ＳＮＡＰ）、ジエチレントリアミン／ＮＯ（ＤＥＴＡ／ＮＯ）、Ｓ−ニトロソチオール、Ｂｉｄｉｌ（登録商標）、およびアルギニンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２３９】
「可溶性グアニリルシクラーゼ（ｓＧＣ）」は、血管平滑筋内の一酸化窒素の受容体である。心血管系では、一酸化窒素は内皮型一酸化窒素合成酵素によってＬ−アルギニンから内因的に発生され、隣接する血管平滑筋細胞において可溶性グアニリルシクラーゼを活性化して、ｃＧＭＰレベルを増大させ、血管弛緩を誘発する。一酸化窒素は、通常は可溶性グアニリルシクラーゼの還元型ヘム部分に結合し、ＧＴＰからのｃＧＭＰの形成を増大させ、細胞内カルシウム、血管拡張、および抗炎症効果の低下をもたらす。ｓＧＣにおけるヘム鉄の酸化は一酸化窒素に対する酵素の反応性を低下させ、血管収縮を促進する。従って、一酸化窒素−ｓＧＣ−ｃＧＭＰ経路は、心血管疾患において重要な役割を果たす。アジ化ナトリウム、亜硝酸ナトリウム、ヒドロキシルアミン、ニトログリセリン、およびニトロプルシドナトリウムなどの窒素含有化合物はｓＧＣを刺激して、ｃＧＭＰの増大、および血管弛緩を引き起こすことが示されている。還元型ｓＧＣに結合するｓＧＣの刺激剤とは対照的に、ｓＧＣの活性化剤は、一酸化窒素に反応しない酸化型またはヘム欠乏型ｓＧＣ酵素を活性化する、すなわち酸化還元状態に関係なくｓＧＣを刺激する。ｓＧＣの刺激剤は一酸化窒素に対する還元型ｓＧＣの感受性を増強することができるが、ｓＧＣの活性化剤は、酵素が酸化されており、従って一酸化窒素に対して反応性が低いまたは反応しない場合でも、ｓＧＣ酵素活性を増大させることができる。従って、ｓＧＣ活性化剤は一酸化窒素によらない。Ｎｏｓｓａｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｃａｒｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｖｏｌｕｍｅ  ２０１２，ａｒｔｉｃｌｅ  ２９０８０５、およびＤｅｒｂｙｓｈｉｒｅ  ａｎｄ  Ｍａｒｌｅｔｔａ（２０１２）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．８１：５３３−５５９のレビューに注目されたい。
【０２４０】
「可溶性グアニリルシクラーゼを活性化する薬剤」は、例えば、有機硝酸塩（Ａｒｔｚ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：１８２５３−１８２５６）；プロトポルフィリンＩＸ（Ｉｇｎａｒｒｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９８２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７９：２８７０−２８７３）；ＹＣ−１（Ｋｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｂｌｏｏｄ  ８４：４２２６−４２３３）；ＢＡＹ４１−２２７２およびＢＡＹ４１−８５４３（Ｓｔａｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（２００１  Ｎａｔｕｒｅ  ４１０（６８２５）：２１２−５）、ＣＭＦ−１５７１、およびＡ−３５０６１９（Ｅｖｇｅｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃｏｖ．５：７５５−７６８において概説される）；ＢＡＹ５８−２６６７（シナシグアト、Ｆｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ４８（１２）：１４００−１０）；ＢＡＹ６３−２５２１（リオシグアト、Ｍｉｔｔｅｎｄｏｒｆ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｃｈｅｍｍｅｄｃｈｅｍ  ４（５）：８５３−６５）を指す。付加的な可溶性グアニリルシクラーゼ活性化剤は、Ｓｔａｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １２３：２２６３−２２７３；Ｄｅｒｂｙｓｈｉｒｅ  ａｎｄ  Ｍａｒｌｅｔｔａ（２０１２）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．８１：５３３−５５９、およびＮｏｓｓａｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｃａｒｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｖｏｌｕｍｅ  ２０１２，Ａｒｔｉｃｌｅ  ＩＤ  ２９０８０５，ｐａｇｅｓ  １−１２に開示されている。
【０２４１】
「環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼを阻害する薬剤」の例としては、シルデナフィル、タダラフィル、バルデナフィル、ウデナフィル、およびアバナフィルが挙げられる。
【０２４２】
「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」という単数の用語は、そうでないことを文脈が明確に指示しない限り複数の指示対象を含む。同様に、「または（ｏｒ）」という語は、そうでないことを文脈が明確に指示しない限り「および（ａｎｄ）」を含むことが意図される。従って、ＡまたはＢを含むは、Ａを含む、あるいはＢを含む、あるいはＡおよびＢを含むことを意味する。
【０２４３】
「約（ａｂｏｕｔ）」という用語は、本明細書で使用される場合、「およそ（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」または「ほぼ（ｎｅａｒｌｙ）」と類似の意味を有する柔軟性のある語である。「約（ａｂｏｕｔ）」という用語は、正確さは主張されず、変動が考慮されることを示す。従って、本明細書で使用される場合、「約（ａｂｏｕｔ）」という用語は、明確に記載される値から１または２の標準偏差内である、あるいは明確に記載される値と比較して±２０％まで、１５％まで、１０％まで、５％まで、または４％、３％、２％、もしくは１％までの範囲であることを意味する。
【０２４４】
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、本明細書の請求項で使用される場合、オープンエンドであり、その請求項はそこに明確に記載される全ての特徴を有さなければならないが、存在が記載されていない付加的な特徴に対する制約もないことを意味する。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、明示されていない成分の多量の包含に対して請求項をオープンにする。請求項内の「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」という用語は、本発明は記載される成分を必然的に含まなければならないが、本発明の基本的特性および新規の特性に実質的に影響を与えない非記載成分に対してオープンであることを意味する。「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」請求項は、閉鎖された「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」形式で記載されるクローズドクレームと、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）形式」で記載される完全オープンクレームとの間の中立の立場をとる。これらの用語は、もしこれが必要になり得る場合は、本明細書において互換性に使用することができる。
【０２４５】
さらに、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語、ならびに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」および「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」などの他の関連形態の使用は非限定的である。
【０２４６】
ＣＤ４７および虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）
組織虚血期間の後、血流の開始は、「虚血再灌流傷害」またはＩＲＩと呼ばれる損傷を引き起こす。血流が中断され、その後治療的介入によって回復される外傷の多くの形態／原因において、そして臓器移植に必要な手順、心肺バイパス術、切断された身体部分の再付着、再建および美容手術、ならびに血流の停止および再開を含む他の状況において、一定期間血流を停止させることを必要とするためにＩＲＩが起こる場合に、ＩＲＩは多くの外科手術の予後不良の一因である。虚血自体が多くの生理学的変化を引き起こし、それだけで最終的に細胞および組織の壊死および死をもたらすであろう。再灌流は、活性酸素種、血栓症、炎症およびサイトカインに媒介される損傷の発生を含む、その独自の一連の損傷事象を引き起こす。ＴＳＰ１−ＣＤ４７系によって制限される経路は、まさにＩＲＩの損傷に対抗する上で最も有利であり得るものである。従って、本明細書に開示される抗体のようにＴＳＰ１−ＣＤ４７経路を遮断すると、これらの内在性保護経路のより頑強な機能性が提供されるであろう。
【０２４７】
本発明のヒト化抗ＣＤ４７抗体、その抗原結合断片、ならびに競合抗体およびその抗原結合断片は、米国特許第８，２３６，３１３号明細書（その内容は参照によってその全体が本明細書中に援用される）に開示される方法において使用することができる。
【０２４８】
ＣＤ４７および癌
ＣＤ４７は、血液癌（Ｍａｊｅｔｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｃｅｌｌ  １３８（２）：２８６−９９）、ならびに結腸癌、前立腺癌、乳癌、脳癌などの固形腫瘍（Ｗｉｌｌｉｎｇｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０９（１７）：６６６２−７）における新規の治療標的として確認されている。多くのヒト癌はＣＤ４７の細胞表面発現を上方制御し、最高レベルのＣＤ４７を発現するものは、患者にとって最も侵襲性かつ最も致死的である。ＣＤ４７発現の増大は、ＣＤ４７を有する細胞の食作用を阻止する阻害性受容体であるＳＩＲＰαを通してマクロファージに「ｄｏｎ’ｔ  ｅａｔ  ｍｅ」シグナルを送ることによって、癌細胞を食作用性排除から保護すると考えられる（Ｊａｉｓｗａｌ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｃｅｌｌ  １３８（２）：２７１−８５１、Ｃｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２（６３）：６３ｒａ９４）。従って、多くの癌によるＣＤ４７発現の増大は、マクロファージおよび樹状細胞によるこれらの食作用性排除を遅延させる「自己（ｓｅｌｆｎｅｓｓ）」の覆いを提供する。ＣＤ４７／ＳＩＲＰα相互作用を遮断する抗ＣＤ４７ｍＡｂ（ＣＤ４７ｍＡｂ）は、インビトロで癌細胞の食作用を増強し、公表されたヒト−マウス異種移植腫瘍モデルにおいて腫瘍量の制御に寄与する。しかしながら、癌に対する戦いでまだ活用されていない、形質転換細胞をＣＤ４７ｍＡｂが攻撃することができるメカニズムが存在する。
【０２４９】
Ｆｒａｚｉｅｒらは、特定の抗ヒトＣＤ４７ｍＡｂ（クローン１Ｆ７）が、ヒトＴ細胞白血病（Ｍａｎｎａ  ａｎｄ  Ｆｒａｚｉｅｒ（２００３）Ａ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０：３５４４−５３）およびいくつかの乳癌（Ｍａｎｎａ  ａｎｄ  Ｆｒａｚｉｅｒ（２００４）Ａ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ６４（３）：１０２６−３６）に対して直接的な腫瘍毒性効果を有することを示した。他のグループは、さらなるタイプの白血病においてこのような知見を報告している（Ｕｎｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｏｎｃｏｌ．Ｒｅｐ．１７（５）：１１８９−９４、Ｍａｔｅｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．５：１２７７−８４）。ｍＡｂ１Ｆ７は、ＮＫ細胞、Ｔ細胞またはマクロファージによる補体または細胞媒介の死滅作用がなくても、ＣＤ４７を有する腫瘍細胞を死滅させる。代わりに、ｍＡｂ１Ｆ７は、ミトコンドリアに対する直接的なＣＤ４７依存性の攻撃、これらの膜電位の放出、および急速な細胞死をもたらす細胞のＡＴＰ生成能力の破壊を含む非アポトーシス性メカニズムを介して作用する。ｍＡｂ１Ｆ７が、同様にＣＤ４７を発現する休止白血球は死滅させないが、形質転換によって「活性化された」細胞だけを死滅させることは注目に値する。従って、正常な循環細胞（これらは全てＣＤ４７を発現する）は残されるが、癌細胞は腫瘍毒性ＣＤ４７ｍＡｂによって選択的に死滅される（Ｍａｎｎａ  ａｎｄ  Ｆｒａｚｉｅｒ（２００３）Ａ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０：３５４４−５３）。このメカニズムは、ＣＤ４７／ＳＩＲＰα結合を単に遮断することによる食作用の促進（増大）の受動的なメカニズムとは対照的に、腫瘍細胞に対する順向性（ｐｒｏａｃｔｉｖｅ）の選択的および直接的な攻撃であると考えることができる。重要なのは、ｍＡｂ１Ｆ７はＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合も遮断し、従って、２つのメカニズム：（１）細胞死を誘発する直接的な腫瘍細胞毒性、および（２）死んだおよび死にかけた腫瘍細胞の食作用の促進（増大）を介して作用することができる。両方の機能を達成することができる単一のｍＡｂは、ＣＤ４７／ＳＩＲＰα結合を遮断するだけのものよりも優れているであろう。実際に、異種移植マウスモデルにおいてヒト非ホジキンリンパ腫を根絶する際に、食作用を促進するための遮断ＣＤ４７ｍＡｂと、細胞毒性抗ＣＤ２０ｍＡｂのリツキシマブとの併用は、いずれかのｍＡｂを単独で使用する場合よりも有効であることが示されている（Ｃｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｃｅｌｌ  １４２（５）：６９９−７１３）。しかしながら、リツキシマブは癌細胞を溶解により死滅させ、厳しい副作用プロファイルをもたらす（Ｈａｎｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．９（４）：３２５−３８）。対照的に、腫瘍毒性ｍＡｂ１Ｆ７は急速な細胞溶解引き起こさず、むしろ細胞表面にホスファチジルセリンを呈示させ、従って、このメカニズムによる食作用性排除の促進（増大）も引き起こす。
【０２５０】
ＣＤ４７を遮断し、ＳＩＲＰαへのその結合を阻止する抗体（「遮断ｍＡｂ」）は、マウス（異種移植）腫瘍モデルのヒト腫瘍において効力を示した。この特性を示すこのような遮断ＣＤ４７ｍＡｂはマクロファージによる癌細胞の食作用を促進（増大）させて腫瘍量を低減することができ（Ｍａｊｅｔｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｃｅｌｌ  １３８（２）：２８６−９９）、最終的に、腫瘍に対する適応型免疫応答の発生をもたらし得る（Ｔｓｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ｕ  Ｓ  Ａ．１１０（２７）：１１１０３−８）。これらの遮断ｍＡｂは、本明細書中の実施例４に記載され、従って本発明によって包含されるクローンのいくつかによって例示されるような本発明のｍＡｂとは異なり、癌細胞に対する直接的な細胞毒性作用を有さない。
【０２５１】
興味深く、重要であることに、非ホジキンリンパ腫の異種移植モデルにおいて、遮断ＣＤ４７ｍＡｂの効力は、癌細胞上のＣＤ２０に結合してその癌細胞に対する細胞毒活性を有する別のｍＡｂ（その場合、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）／リツキシマブ）との同時処置によって増強可能であることが示されている（Ｃｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｃｅｌｌ  １４２（５）：６９９−７１３）。その研究は、直接的な細胞毒性とＣＤ４７／ＳＩＲＰα遮断との組み合わせから得られる治療上の利益の増大の可能性を実証する。従って、両方の特性、すなわちＳＩＲＰα結合の遮断と、癌細胞の死の誘発／促進とを組み合わせる単一の抗ＣＤ４７ｍＡｂ抗体化合物、「二重作用抗体」が、いずれかの単一の特性だけを有するＣＤ４７ｍＡｂよりも有効な治療実体（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｅｎｔｉｔｙ）であることを予想するのは合理的である。
【０２５２】
このような二重作用ｍＡｂの付加的な利点は、誘発された細胞死が、死にかけた／死んだ細胞の表面に、マクロファージ上の食作用促進性受容体（ｐｒｏｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）によって認識可能な付加的な分子（例えば、ホスファチジルセリンまたはカルレティキュリン）の出現をもたらし、従って、ＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用を単に遮断することによって達成され得る範囲を超えて、癌細胞の食作用性排除がさらに促進され得ることである。
【０２５３】
従って、本発明によって包含される、遮断および細胞毒性の両方の作用を有するこのような二重作用ＣＤ４７ｍＡｂ抗体化合物は、単一の機能だけを示す抗体と比較して治療上の利益の増大を提供し得ることが十分に予想される。
【０２５４】
治療兆候
ＩＲＩ関連および自己免疫性／炎症性の状態
本明細書に開示されるＣＤ４７ｍＡｂまたはその抗原結合断片の投与は、ＩＲＩが原因となる特徴であるいくつかの疾患および状態を処置するため、および種々の自己免疫性および炎症性疾患を処置するために使用することができる。これらには、本発明のｍＡｂまたはその抗原結合断片が臓器摘出前のドナーに、摘出されたドナー臓器に、臓器保存溶液に、レシピエント患者に、またはこれらの任意の組み合わせで投与される臓器移植；皮膚移植；このようなｍＡｂまたは断片が、注射により患部組織へ局所的に、あるいは非経口的に患者へ投与される外科的切除または組織再構成；身体部分の再付着；外傷性傷害の処置；肺高血圧症；鎌状赤血球症（急性発症）；心筋梗塞；脳卒中；外科的に誘発される虚血；急性腎疾患／腎不全；ＩＲＩが発生して疾患の病態形成に起因する任意の他の状態；そして関節炎、多発性硬化症、乾癬、クローン病、炎症性腸疾患、ループス、グレーブス病および橋本病、ならびに強直性脊椎炎を含む自己免疫性／炎症性疾患が含まれる。
【０２５５】
本発明のＣＤ４７ｍＡｂおよびその抗原結合断片は、組織灌流を増大させることを必要としている被験者において、このような処置をするために使用することができる。このような被験者は、組織灌流の増大の必要性を示す診断手順によって確認することができる。加えて、被験者が、外皮手術、軟組織手術、複合組織手術、皮膚移植手術、固形臓器の切除、臓器移植手術、または付属器もしくは他の身体部分の再付着から選択される手術を受けたことがあるか、受けているか、あるいは受ける予定であるために、組織灌流の増大の必要性が生じ得る。
【０２５６】
感受性癌
本発明で開示される癌治療薬として有効なｍＡｂおよびその抗原結合断片は、急性リンパ性（リンパ芽球性）白血病、急性骨髄性白血病、骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、慢性骨髄性白血病、および形質細胞性白血病を含む白血病；Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、およびワルデンストレームマクログロブリン血症を含む、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫；卵巣癌；乳癌；子宮内膜癌；結腸癌；直腸癌；膀胱癌；肺癌；気管支癌；骨癌；前立腺癌；膵癌；胃癌；肝臓および胆管癌；食道癌；腎癌；甲状腺癌；頭頸部癌；精巣癌；神経膠芽腫；星状細胞腫；メラノーマ；骨髄異形成症候群；ならびに骨肉腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、滑膜肉腫、胞巣状軟部肉腫、血管肉腫、脂肪肉腫、繊維肉腫、横紋筋肉腫、および軟骨肉腫を含むがこれらに限定されない肉腫を含む（これらに限定されない）感受性の血液癌および固形腫瘍を有する患者に、好ましくは非経口的に投与することができる。
【０２５７】
特定の場合には、腫瘍内への注射によりｍＡｂを癌に直接投与することが有利なこともある。ＣＤ４７の発現は多くの癌において上方制御されるので、癌／腫瘍のインビボイメージングの当業者に既知の放射性または他のトレーサーで標識化される場合に、開示されるｍＡｂの１つまたは複数を造影剤および診断薬として使用することが望ましいこともある。
【０２５８】
抗体互換性：全てのｍＡｂクローン１〜２４の、癌治療薬としての使用および／またはＩＲＩ兆候における使用
本明細書に開示される種々の抗体は細胞毒性または非細胞毒性のいずれかに分類されており、癌（ＳＩＲＰα）およびＩＲＩ（トロンボスポンジン−１）においてその役割を担うＣＤ４７のリガンドは、両方の種類の抗体によってＣＤ４７への結合が阻止されるので、癌兆候または虚血再灌流兆候のいずれかのために有用である。
【０２５９】
従って、特定の疾患、状態、治療用途、または癌における特定の発症メカニズムの優位性に応じていずれかの種類の抗体が特定の治療状況において有効である可能性があり、従って所望の治療効果を達成するために、互いの代わりに互換性に、あるいは必要に応じて互いに組み合わせて使用され得る。
【０２６０】
それぞれ以下の実施例４および５において、さらなる議論、および抗体互換性を証明するデータに注目されたい。
【０２６１】
併用療法
本明細書中に包含される治療法は、本明細書に開示される抗体の単独での使用も、そして／あるいは互いの組み合わせ、および／またはその抗原結合断片との組み合わせ、および／または適切な生物学的／治療活性を示す競合抗体の組み合わせ、すなわちこれらの抗体化合物全ての可能な組み合わせにおける、本明細書に開示される抗体の使用も含むことに注目すべきである。
【０２６２】
さらに、本発明の治療法は、これらの抗体、その抗原結合断片、競合抗体など、およびこれらの組み合わせをさらに以下のものと組み合わせた使用も包含する：（１）一酸化窒素供与体、前駆体、または一酸化窒素を発生する局所薬剤、および／または可溶性グアニリルシクラーゼ、および／または本明細書に開示される環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼを阻害する薬剤のうちの任意の１つまたは複数、あるいは（２）手術、放射線、抗腫瘍または抗新生物薬、およびこれらの任意の組み合わせから選択される任意の１つまたは複数の抗腫瘍治療的処置、あるいは（３）当業者には明らかであるように、特定の兆候に対する所望の治療的処置効果を達成するための適切な組み合わせの上記の（１）または（２）のいずれかの等価物。
【０２６３】
以下の実施例は本発明の種々の態様を説明するが、本発明をこれらの特別に開示された実施形態に限定すると考えられてはならない。以下の実施例で使用される材料および方法は説明のためのものであって、本発明の実施をこれらに限定することは意図されない。当業者には明らかであるように、本明細書に記載されるものと類似または等価の任意の材料および方法を本発明の実施または試験において使用することができる。
【実施例】
【０２６４】
実施例１
ＣＤ４７抗体の産生
本明細書に開示されるヒト化抗体は、ヒトゲノムに由来するフレームワークを含む。コレクションはヒト生殖細胞系配列において見られる多様性を包含し、インビボで機能的に発現される抗体を生じる。標的キメラ非ヒト抗体ＶｘＰ０３７−０１ＬＣ／ＶｘＰ０３７−０１ＨＣ（配列番号７／配列番号５７）の軽鎖および重鎖可変領域内の相補性決定領域（ＣＤＲ）は、例えば、”Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｄｏｍａｉｎｓ”，Ｉｎ：Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｌａｂ  Ｍａｎｕａｌ，Ｅｄｓ．Ｓ．Ｄｕｅｂｅｌ  ａｎｄ  Ｒ．Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ（２００１））に開示される、一般に認められた規則に従って決定される。ＣＤＲ断片を合成し、フレームワークのプールと結合させて、全長可変ドメインを生成する。次に、ヒト化可変ドメインを、分泌シグナルおよびヒトκおよびヒトＩｇＧ１定常ドメインと結合させ、哺乳類発現系（例えば、ＯｐｔｉＣＨＯ  Ｓｙｓｔｅｍ，Ｌｉｆｅｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）にクローン化して、ヒト化ＩｇＧ１変異体のライブラリを作成する。ライブラリのアリコートを配列決定して、個々のクローンの読み枠の高い多様性および完全性を保証する。次に、ヒト化変異体ライブラリのアリコートを単一のクローンとして９６ウェルプレートに再配列し、ミニプレップし（例えば、９６ウェルＭｉｎｉｐｒｅｐ  Ｋｉｔ、Ｑｉａｇｅｎ  Ｈｉｌｄｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＣＨＯ細胞にトランスフェクトする（Ｌｉｆｅｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡによって推奨されるようなリポフェクタミントランスフェクションプロトコル）。トランスフェクトＣＨＯ細胞は、１０％ＦＢＳを有するＤＭＥＭ培地（いずれもＬｉｆｅｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡから）において５％のＣＯ２中３７℃で成長させる。ヒト化変異体は全長ＩｇＧ１分子として発現され、培地中に分泌される。
【０２６５】
次に、ヒト化ＩｇＧ変異体を含有する細胞培養上清を、標的抗原への結合についてスクリーニングする。並行して、各クローンの比活性を計算するために各変異体の濃度が決定される。各クローンの比活性は、同じプレート上で発現されたキメラクローンＶｘＰ０３７−０１ＬＣ／ＶｘＰ０３７−０１ＨＣ（配列番号７／配列番号５７）の比活性と比較され、規格化される。各プレートからのトップヒットを再配列し、確認のために再スクリーニングする。以下に示されるように、比活性、機能活性、発現レベル、および配列多様性、ならびに他の判断基準によって最終候補を選択する。
【０２６６】
実施例２
ＣＤ４７抗体ＣＤＲ
本発明のヒト改変抗体の軽鎖および重鎖可変領域、完全軽鎖および重鎖のアミノ酸配列、ならびに上記のそれぞれのコード化ヌクレオチド配列は、「アミノ酸および核酸配列」という表題のセクションにおいて以下に記載される。
【０２６７】
軽鎖および重鎖ＣＤＲアミノ酸配列はそれぞれ表１および２に示される。
【０２６８】
【表１】
0006572131.tif 000002
【０２６９】
【表２】
0006572131.tif 000003
【０２７０】
実施例３
異なる種のＣＤ４７への抗体の結合
本発明のヒト化抗体の異種間の反応性は、Ｋａｍｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｂｌｏｏｄ．Ｔｒａｎｓｆｕｓ．８（４）：２６０−２６６に開示される方法に従って、ヒト、マウス、ラット、ブタ、およびイヌから新たに単離された、その表面にＣＤ４７を呈示する赤血球（ＲＢＣ）を用いて決定される。
【０２７１】
分泌された抗体を含有する上清を、抗体クローンをコードするプラスミドにより一過性にトランスフェクトされたＣＨＯ細胞から採取し、採取した状態で使用するか、あるいは標準方法を用いて上清から抗体をさらに精製する。トランスフェクトＣＨＯ細胞は、１０％熱失活ウシ胎児血清（ＢｉｏＷｅｓｔ、Ｓ０１５２０）を含有するＦ−１２培地において成長させる。上清中の抗体濃度は、定量ＥＬＩＳＡを用いて決定される。ＥＬＩＳＡプレートは、４℃で一晩、１０μｇ／ｍｌのロバ抗ヒトＦＣ抗体（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号１２１３６）で被覆される（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｗ４０３１）。プレートをＰＢＳで洗浄してから、カゼイン遮断溶液（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号３７５３２）により室温で６０分間遮断する。プレートを再度ＰＢＳで洗浄し、組織培養上清を添加し、プレートを室温で６０分間インキュベートする。次に、プレートをＰＢＳで３回洗浄し、ペルオキシダーゼ結合ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｓ、カタログ番号１０９−０３５−００３）と共に室温で６０分間インキュベートする。プレートをＰＢＳで３回洗浄し、ペルオキシダーゼ基質３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジンを添加する（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｔ４４４４）。ＨＣｌを０．７Ｎまで添加することによって反応を終了させ、ＴｅｃａｎモデルＩｎｆｉｎｉｔｅ  Ｍ２００プレートリーダーを用いて４５０ｎＭにおける吸光度を決定する。
【０２７２】
リン酸緩衝食塩水溶液（ｐＨ７．２）、２．５ｍＭＥＤＴＡ（ＰＢＳ＋Ｅ）中１０ｎｇ／ｍｌの濃度の分泌されたヒト化抗体を含有する組織培養上清と共に、あるいは種々の濃度の精製抗体と共に、ＲＢＣを氷上で６０分間インキュベートする。次に、細胞を冷ＰＢＳ＋Ｅで洗浄し、ＰＢＳ＋Ｅ中のＦＩＴＣ標識ロバ抗ヒト抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｓ，Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ、カタログ番号７０９−０９６−１４９）と共に氷上でさらに１時間インキュベートする。次に、細胞をＰＢＳ＋Ｅで洗浄し、ＢＤ  ＦＡＣＳＡｒｉａ  Ｃｅｌｌ  Ｓｏｒｔｅｒ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）またはＣ６Ａｃｃｕｒｉ  Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて抗体結合を分析する。抗体結合は、キメラ抗体＞ＶｘＰ０３７−０１ＬＣ（配列番号７））／＞ＶｘＰ０３７−０１ＨＣ（配列番号５７）に対する平均蛍光値の比較によって定量化される。各抗体の平均蛍光値は、キメラ抗体の平均蛍光値によって除される。
【０２７３】
上清から得られる結果は表３に示されており、表中、「キメラ」はキメラ抗体＞ＶｘＰ０３７−０１ＬＣ（配列番号７））／＞ＶｘＰ０３７−０１ＨＣ（配列番号５７）を表し、クローン１は＞ｐＶｘＫ７ｂ−０３７−ｈｕｍ０１−ＬＣ（配列番号８）／＞ｐＶｘＫ７ｂ−０３７−ｈｕｍ０１−ＨＣ（配列番号５８）を表し、クローン２は＞ｐＶｘＫ７ｂ−０３７−ｈｕｍ０２−ＬＣ（配列番号９）／＞ｐＶｘＫ７ｂ−０３７−ｈｕｍ０２−ＨＣ（配列番号５９）を表し、残りのクローン３〜２４についても同様である。
【０２７４】
【表３】
0006572131.tif 000004
【０２７５】
図１は、ヒト、マウス、ラット、およびブタのＲＢＣに対する異種間結合曲線を示す（パネルＡ、Ｂ、Ｃ、およびＤはそれぞれ、クローンＣｌ１、Ｃｌ１．１、Ｃｌ１３、およびＣｌ１３．１からの種々の濃度の精製抗体を用いて作成された）。クローンＣｌ１およびＣｌ１３は、上記の表３に記載される通りである。クローンＣｌ１．１およびＣｌ１３．１はそれぞれ、エフェクター機能を低減するように改変されたクローンＣｌ１およびＣｌ１３のＦｃ突然変異体である。各々はＦｃドメインにＡｓｎ２９７→Ｇｌｎ（Ｎ２９７Ｑ）突然変異を有する（Ｓａｚｉｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）ＰＮＡＳ  １０５（５１）：２０１６７−２０１７２）。これらのクローンの全ては、試験されるＲＢＣの全ての種に対して濃度依存性の結合を示す。
【０２７６】
これらのデータは、本明細書に開示されるヒト化ＣＤ４７ｍＡｂクローンの全てが様々な異なる哺乳類種のＣＤ４７に十分に結合することを実証し、これらの抗体の有用な異種間反応性が確認される。
【０２７７】
実施例４
細胞生存率アッセイ
この実験の目的は、細胞毒活性を示す、および示さない本発明の抗体クローンを同定することである。移植およびＩＲＩに関する他の用途を含む心血管兆候において使用するために、治療ｍＡｂは、理想的には細胞毒活性が欠けていなければならない。対照的に、癌の処置において有用な抗体は、理想的には、形質転換／癌細胞に対する毒性を示さなければならない。癌細胞に対する選択的な毒性というこの付加的な特性は、ＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合を阻止するだけのｍＡｂと比較して有利であることが予想される。
【０２７８】
しかしながら、「抗体互換性」という表題のセクションにおいて上記したように、本明細書に開示される抗体は細胞毒性または非細胞毒性のいずれかに分類されているが、癌（ＳＩＲＰα）およびＩＲＩ（トロンボスポンジン−１）においてその役割を担うＣＤ４７のリガンドは、両方の種類の抗体によってＣＤ４７への結合が阻止されるので、これらは癌兆候または虚血−再灌流兆候のいずれかのために有用である。例として、非細胞毒性および細胞毒性の両方の抗体を用いる以下の実施例５に注目されたい。
【０２７９】
従って、特定の疾患、状態、治療用途、または癌における特定の発症メカニズムの優位性に応じていずれかの種類の抗体が特定の治療状況において有効である可能性があり、従って所望の治療効果を達成するために、互いの代わりに互換性に、あるいは必要に応じて互いに組み合わせて使用され得る。
【０２８０】
使用される方法は、Ｖｉｓｔｉｃａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５１：２５１５−２５２０に記載されている。
【０２８１】
ＪｕｒｋａｔＪＥ６．１細胞（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ、カタログ番号ＴＩＢ−１５２）は、１×１０６細胞／ｍＬ未満の密度で、５％（ｖ／ｖ）熱失活ウシ胎児血清（ＢｉｏＷｅｓｔ、カタログ番号Ｓ０１５２０）、１００単位／ｍＬのペニシリン、１００μｇｍＬのストレプトマイシン（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｐ４２２２）を含有するイスコフ改変ダルベッコ培地において成長させる。細胞生存率アッセイのために、５％（ｖ／ｖ）熱失活ウシ胎児血清（ＢｉｏＷｅｓｔ、カタログ番号Ｓ０１５２０）、１００単位／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン（Ｓｉｇｍａ、番号Ｐ４２２２）を含有するイスコフ改変ダルベッコ培地において、上記の実施例３、表３に記載されるように調製された１０ｎｇ／ｍｌの最終濃度、あるいは図２の精製抗体を用いて５μｇ／ｍｌの濃度の本明細書に開示されるヒト化抗体と共に、２×１０４細胞／ｍｌの密度で、細胞を９６ウェル組織培養プレートにプレーティングする。５％（ｖ／ｖ）ＣＯ２の雰囲気中、細胞を３７℃で７２時間インキュベートする。次に、製造業者の説明書に従ってＷＳＴ１試薬（Ｒｏｃｈｅ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ、カタログ番号０５０１５９４４００１）を用いて、細胞密度を定量化する。細胞成長に対する抗体の効果は、添加抗体を含有しない細胞の成長と比較することによって定量化される（ＰＢＳ、平均死滅パーセント＝０）。
【０２８２】
上清を用いた結果は表４に示される。表中の値は、３回の別々の実験の平均を表す。「キメラ」およびクローン番号は、上記の実施例３において記載される通りである。１Ｆ７は、ヒトＴ細胞白血病（Ｍａｎｎａ  ａｎｄ  Ｆｒａｚｉｅｒ（２００３）Ａ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０：３５４４−５３）およびいくつかの乳癌（Ｍａｎｎａ  ａｎｄ  Ｆｒａｚｉｅｒ（２００４）Ａ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６４（３）：１０２６−３６）に対して直接的な腫瘍毒性効果を有する上記の抗ヒトＣＤ４７ｍＡｂである。
【０２８３】
精製クローン１３、１４および２４を用いた結果は図２に示される。
【０２８４】
【表４】
0006572131.tif 000005
【０２８５】
これらのデータは、本発明のヒト化抗体クローンの大部分がＪｕｒｋａｔＴ細胞に対してあまり細胞毒性でないことを実証する。しかしながら、クローンのいくつかは、既に同定されたマウス抗ヒトＣＤ４７ｍＡｂ１Ｆ７と同様に著しい細胞毒性を有する（Ｍａｎｎａ  ａｎｄ  Ｆｒａｚｉｅｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００３）１７０（７）：３５４４−５３）。
【０２８６】
表２に「有」が表示される以下のクローンは細胞毒性であると考えられる：２、３、５、６、８、１０、１３、１４、１５、１６、１７、および１９。
【０２８７】
以下のクローンは無毒であると考えられる：１、４、７、９、１１、１２、１８、２０、２１、２２、２３、および２４。また、図２に示される精製クローン１３、１４、および２４を用いた結果は、クローン１３および１４は１Ｆ７と同様の活性を有する細胞毒性であるが、クローン２４は細胞生存率を低下させないことを示す。
【０２８８】
実施例５
一酸化窒素シグナル伝達の制御
この実験の目的は、本発明の非細胞毒性（番号１、９、１１、および２４）および細胞毒性（番号１３）のヒト化抗体クローンが、例えば、Ｉｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８１：２６０６９−８０によって開示されるようなＣＤ４７に対するマウスモノクローナル抗体を用いて既に記載されているように、ＴＳＰ１媒介のＮＯ刺激性ｃＧＭＰ合成の阻害を逆転させる能力を示すことを実証することである。これは、上記の詳細な説明および実施例４において議論された、本発明における抗体互換性の一例である。
【０２８９】
ｃＧＭＰを測定するために使用される方法は、製造業者によって記載される通りである（ＣａｔｃｈＰｏｉｎｔ  Ｃｙｃｌｉｃ−ＧＭＰ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）。ＪｕｒｋａｔＪＥ６．１細胞（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ、カタログ番号ＴＩＢ−１５２）は、培養において成長される場合にＮＯ−ｃＧＭＰシグナル伝達経路を保持し、ＣＤ４７のＴＳＰ１連結に対する頑強かつ再現可能な阻害性応答を示すので、これらの細胞が使用される。５％（ｖ／ｖ）熱失活ウシ胎児血清（ＢｉｏＷｅｓｔ、カタログ番号Ｓ０１５２０）、１００単位／ｍＬのペニシリン、１００μｇｍＬのストレプトマイシン（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｐ４２２２）を含有するイスコフ改変ダルベッコ培地において、１×１０６細胞／ｍＬ未満の密度で細胞を成長させる。ｃＧＭＰアッセイのために、５％（ｖ／ｖ）熱失活ウシ胎児血清（ＢｉｏＷｅｓｔ、カタログ番号Ｓ０１５２０）、１００単位／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン（Ｓｉｇｍａ、番号Ｐ４２２２）を含有するイスコフ改変ダルベッコ培地において、１×１０５細胞／ｍｌの密度で２４時間、細胞を９６ウェル組織培養プレートにプレーティングし、次に無血清培地に一晩移す。
【０２９０】
次に、上記の実施例３に記載されるようにＣＨＯ細胞における一過性トランスフェクションから精製した本明細書に開示されるヒト化抗体、および対照キメラ抗体を、２０ｎｇ／ｍｌの最終濃度で添加し、その後１５分後に０または１μｇ／ｍｌのヒトＴＳＰ１が添加される（Ａｔｈｅｎｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ａｔｈｅｎｓ，ＧＡ、カタログ番号１６−２０−２０１３１９）。さらに１５分後に、ＮＯ供与体、ジエチルアミンＮＯＮＯａｔｅ（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ，Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ，ＭＩ、カタログ番号８２１００）を１μＭの最終濃度でウェルの半分に添加する。５分後にｃＧＭＰキットで供給される緩衝液により細胞を溶解させ、各ウェルのアリコートをｃＧＭＰ含量についてアッセイする。
【０２９１】
図３および４に示されるように、試験した本発明のヒト化抗体クローンまたはキメラ対照ｍＡｂはどれも基礎ｃＧＭＰレベルに対する効果を有さない。予想通りに、キメラ抗体（＞ＶｘＰ０３７−０１ＬＣ（配列番号７））／＞ＶｘＰ０３７−０１ＨＣ（配列番号５７）はＴＳＰ１阻害を逆転させる。
【０２９２】
また本発明のヒト化クローン１、９、１１、１３、および２４はＴＳＰ１阻害を著しく逆転させ、これらがＮＯシグナル伝達を増大させる能力を有することが実証され（図３および４）、創傷、炎症、高血圧症、メタボリック症候群、虚血、および虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）に起因するものを含むがこれらに限定されないストレスに対する心血管系の保護におけるこれらの有用性が示唆される。
【０２９３】
実施例６
インビボの虚血再灌流傷害の低減
この実験の目的は、実施例５においてインビトロで一酸化窒素シグナル伝達を制御することが示された本明細書に開示されるヒト化抗体クローン、すなわちクローン１が、ラット腎臓移植モデルにおけるインビボのＩＲＩおよび腎臓損傷の低減において有効であることを決定することである。ＩＲＩは、移植片機能の遅延（ｄｅｌａｙｅｄ  ｇｒａｆｔ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ）、および移植片機能損失をもたらす炎症に著しく寄与し、トロンボスポンジン−１／ＣＤ４７系による一酸化窒素シグナル伝達の阻害によって悪化される。
【０２９４】
両方の腎臓を摘出したレシピエントによるＩＲＩの同系ラット腎臓移植モデルを用いて、Ｓｃｈｕｍａｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｍｉｃｒｏｓｕｒｇ．２３：３８９−３９４およびＫａｒａｔｚａｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｍｉｃｒｏｓｕｇ．２７：６６８−６７２に記載されるように、移植後の移植片機能に対する抗ＣＤ４７モノクローナル抗体クローン１の効果を評価する。
【０２９５】
体重２７５〜３００ｇのオスのＬｅｗｉｓラットは、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）から入手される。ドナー腎臓を、５０μｇの精製クローン１または媒体（リン酸緩衝食塩水、ｐＨ７．２）で洗い流し、ウィスコンシン大学保存溶液（ＵＷ）中４℃で６時間貯蔵してから移植する。移植の２日後、標準法により血清クレアチニンを測定することにより腎臓機能を評価する。
【０２９６】
図５に示されるように、ドナー腎臓のＣＤ４７ｍＡｂクローン１灌流は、血清クレアチニンの低下により測定されるように、対照と比較して腎臓機能の改善をもたらす。
【０２９７】
実施例７
インビボの抗腫瘍活性
この実験の目的は、実施例４においてインビトロで細胞毒活性を示して細胞生存率を低させることが示された本明細書に開示されるヒト化抗体クローン、すなわちクローン１３が、マウス白血病モデルにおいてインビボで腫瘍量を低減することを決定することである。
【０２９８】
抗ＣＤ４７ｍＡｂクローン１３（Ｃｌ１３、上記の実施例３において記載されるクローン番号）の抗腫瘍活性は、Ｒａｍｉｒｅｚ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｂｌｏｏｄ  １１３：６２０６−６２１４において記載される急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）の同系マウスモデルにおいて決定される。
【０２９９】
３つのグループ（１グループあたり５〜１０匹のマウス）（グループ１：ＡＰＬなし、グループ２：未処置のＡＰＬ、グループ３：抗ＣＤ４７ｍＡｂＣｌ１３で処置したＡＰＬ）に無作為に分けたＣ５７ＢＬ／６マウスに、マウスＡＰＬ細胞（Ｂ６ＡＰＬ１）を静脈内注射する。抗体処置は腫瘍接種の日（０日目）に開始され、リン酸緩衝食塩水（ｐＨ７．２）中１０μｇ／用量（０．４ｍｇ／ｋｇ）の単一用量で、０日目、３日目、および６日目に腹腔内注射によって与えられる。
【０３００】
腫瘍細胞接種後、２５日目に腫瘍量を評価する。自動血球計数器を用いて各マウスからの血液サンプルを白血球数について分析し、フローサイトメトリーによって循環ＡＰＬ細胞（腫瘍量を表す）を定量化する（ＣＤ３４＋／ＣＤ１１７＋細胞）。
【０３０１】
図６に示されるように、Ｃｌ１３で処置したマウスは、腫瘍接種の２５日後に未処置のマウスと比較して腫瘍量を低下させ、従ってこのヒト化クローンの抗腫瘍活性が実証される。
【０３０２】
本発明はこのように説明されるが、多数の方法において同じことが変化され得ることは明らかであろう。このような変化は、本発明の趣旨および範囲からの逸脱とはみなされてはならず、当業者に明らかであり得るような修正は全て特許請求の範囲内に含まれることが意図される。
【０３０３】
アミノ酸および核酸配列
軽鎖可変領域アミノ酸配列
＞ＶｘＰ０３７−０１ＬＣ：下線を引いたアミノ酸配列はＣＤＲを表す。
【化１】
0006572131.tif 000006
【化２】
0006572131.tif 000007
【化３】
0006572131.tif 000008
【化４】
0006572131.tif 000009
【化５】
0006572131.tif 000010
【化６】
0006572131.tif 000011
【化７】
0006572131.tif 000012
【化８】
0006572131.tif 000013
【化９】
0006572131.tif 000014
【化１０】
0006572131.tif 000015
【化１１】
0006572131.tif 000016
【化１２】
0006572131.tif 000017
【化１３】
0006572131.tif 000018
【化１４】
0006572131.tif 000019
【化１５】
0006572131.tif 000020
【化１６】
0006572131.tif 000021
【化１７】
0006572131.tif 000022
【化１８】
0006572131.tif 000023
【化１９】
0006572131.tif 000024
【化２０】
0006572131.tif 000025
【化２１】
0006572131.tif 000026
【化２２】
0006572131.tif 000027
【化２３】
0006572131.tif 000028
【化２４】
0006572131.tif 000029
【化２５】
0006572131.tif 000030
【０３０４】
軽鎖可変領域核酸配列
【化２６】
0006572131.tif 000031
【化２７】
0006572131.tif 000032
【化２８】
0006572131.tif 000033
【化２９】
0006572131.tif 000034
【化３０】
0006572131.tif 000035
【化３１】
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【化３２】
0006572131.tif 000037
【化３３】
0006572131.tif 000038
【化３４】
0006572131.tif 000039
【化３５】
0006572131.tif 000040
【化３６】
0006572131.tif 000041
【化３７】
0006572131.tif 000042
【化３８】
0006572131.tif 000043
【化３９】
0006572131.tif 000044
【化４０】
0006572131.tif 000045
【化４１】
0006572131.tif 000046
【化４２】
0006572131.tif 000047
【化４３】
0006572131.tif 000048
【化４４】
0006572131.tif 000049
【化４５】
0006572131.tif 000050
【化４６】
0006572131.tif 000051
【化４７】
0006572131.tif 000052
【化４８】
0006572131.tif 000053
【化４９】
0006572131.tif 000054
【化５０】
0006572131.tif 000055
【０３０５】
重鎖可変領域アミノ酸配列
【化５１】
0006572131.tif 000056
【化５２】
0006572131.tif 000057
【化５３】
0006572131.tif 000058
【化５４】
0006572131.tif 000059
【化５５】
0006572131.tif 000060
【化５６】
0006572131.tif 000061
【化５７】
0006572131.tif 000062
【化５８】
0006572131.tif 000063
【化５９】
0006572131.tif 000064
【化６０】
0006572131.tif 000065
【化６１】
0006572131.tif 000066
【化６２】
0006572131.tif 000067
【化６３】
0006572131.tif 000068
【化６４】
0006572131.tif 000069
【化６５】
0006572131.tif 000070
【化６６】
0006572131.tif 000071
【化６７】
0006572131.tif 000072
【化６８】
0006572131.tif 000073
【化６９】
0006572131.tif 000074
【化７０】
0006572131.tif 000075
【化７１】
0006572131.tif 000076
【化７２】
0006572131.tif 000077
【化７３】
0006572131.tif 000078
【化７４】
0006572131.tif 000079
【化７５】
0006572131.tif 000080
【０３０６】
重鎖可変領域核酸配列
【化７６】
0006572131.tif 000081
【化７７】
0006572131.tif 000082
【化７８】
0006572131.tif 000083
【化７９】
0006572131.tif 000084
【化８０】
0006572131.tif 000085
【化８１】
0006572131.tif 000086
【化８２】
0006572131.tif 000087
【化８３】
0006572131.tif 000088
【化８４】
0006572131.tif 000089
【化８５】
0006572131.tif 000090
【化８６】
0006572131.tif 000091
【化８７】
0006572131.tif 000092
【化８８】
0006572131.tif 000093
【化８９】
0006572131.tif 000094
【化９０】
0006572131.tif 000095
【化９１】
0006572131.tif 000096
【化９２】
0006572131.tif 000097
【化９３】
0006572131.tif 000098
【化９４】
0006572131.tif 000099
【化９５】
0006572131.tif 000100
【化９６】
0006572131.tif 000101
【化９７】
0006572131.tif 000102
【化９８】
0006572131.tif 000103
【化９９】
0006572131.tif 000104
【化１００】
0006572131.tif 000105
【０３０７】
完全軽鎖アミノ酸配列
＞ＶｘＰ０３７−０１−ＬＣ−Ｐｒｏは、全長軽鎖可変ドメイン＋定常ドメインアミノ酸配列を表す。下線のアミノ酸配列＝フレームワーク４＋定常ドメイン。全てのヒト化軽鎖配列は、ＶｘＰ０３７−０１−ＬＣ−Ｐｒｏと同じ定常ドメインを含有する。しかしながらこれは、残りのヒト化軽鎖アミノ酸配列には示されていない。
【化１０１】
0006572131.tif 000106
【０３０８】
完全軽鎖核酸配列
下線の核酸配列は、上記の＞ＶｘＰ０３７−０１−ＬＣ−Ｐｒｏの下線のタンパク質配列をコードする。
【化１０２】
0006572131.tif 000107
【０３０９】
完全重鎖アミノ酸配列
＞ＶｘＰ０３７−０１−ＨＣ−Ｐｒｏは、全長重鎖可変ドメイン＋定常ドメインアミノ酸配列を表す。下線のアミノ酸配列＝フレームワーク４＋定常ドメイン。全てのヒト化重鎖配列は、＞ＶｘＰ０３７−０１−ＨＣ−Ｐｒｏと同じ定常ドメインを含有する。しかしながらこれは、残りのヒト化重鎖アミノ酸配列には示されていない。
【化１０３】
0006572131.tif 000108
【０３１０】
完全重鎖核酸配列
下線の核酸配列は、上記の＞ＶｘＰ０３７−０１−ＨＣ−Ｐｒｏの下線のタンパク質配列をコードする。
【化１０４】
0006572131.tif 000109
【図１Ａ−Ｂ】
0006572131.tif 000110
【図１Ｃ−Ｄ】
0006572131.tif 000111
【図２】
0006572131.tif 000112
【図３】
0006572131.tif 000113
【図４】
0006572131.tif 000114
【図５】
0006572131.tif 000115
【図６】
0006572131.tif 000116
【配列表】
0006572131000001.app