(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
噴霧乾燥された滅菌粉末形状で非晶質のＳ−アデノシルメチオニンの塩を調製するための方法であって、
前記Ｓ−アデノシルメチオニンの塩は、
薬理学的に活性なエナンチオマー含有量が７０％よりも多く、
残留水分が２．５質量％未満であり、
球体状の粒子で、粒度分布は８〜５０μｍであり、
表面積が０．５ｍ２／ｇよりも小さい、
１，４−ブタンジスルホン酸塩であり、
ろ過によりあらかじめ滅菌した、前記Ｓ−アデノシルメチオニンの塩の水溶液を、滅菌条件下、乾燥チャンバ内の入力空気温度が１３０〜１９０℃の範囲、かつ、出力空気温度が１０５〜７５℃の範囲に調節された、二流体ノズルインジェクターが取り付けられた噴霧乾燥装置に供給する
ことを特徴とする、Ｓ−アデノシルメチオニンの塩の調製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、非晶質形固体状の滅菌Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン（ＳＡＭｅ）、およびそれを得るための方法に関する。
【０００２】
本発明のＳＡＭｅは、周知技術によって得られる生成物よりも、純度および安定性がより高く、また、活性異性体である（Ｓ，Ｓ）−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンの含有量がより高いことによって特徴づけられる。
【０００３】
本発明のＳＡＭｅは、スルホン酸塩、好ましくは硫酸塩、１，４−ブタンジスルホン酸塩、およびｐ−トルエンスルホン酸塩の形態であることが好ましい。
【背景技術】
【０００４】
Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン（ＳＡＭｅ）は、全ての生物中に存在しており、細胞代謝における最も重要なメチル化剤の役割を果たしている。
【０００５】
そのユビキタスな役割に鑑みて、人の体内におけるこの重要なビタミンの欠乏は、数多くの病気の一因となっている。例えば、体内でのＳＡＭｅの欠乏は、変形性関節症、肝硬変、嚢胞性線維症、一部のうつ状態、および、アルツハイマー病やパーキンソン病のような老化に関わる病気の進行と関連している。さらに、低レベルのＳＡＭｅは、心血管の病気の進行に関わる。
【０００６】
Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン（ＳＡＭｅ）は、０℃を超える温度においては極めて不安定である。ＳＡＭｅは、周囲温度で急速に分解して、Ｓ−アデノシル−Ｌ−ホモシステイン（ＳＡＨ）、ホモセリン、メチルチオアデノシン（ＭＴＡ）、Ｓ−５’−アデノシル−（５’）−３−メチルプロピルアミン、または脱カルボキシル化ＳＡＭｅ（ｄｃＳＡＭｅ）およびアデニンを生じる。低いｐＨ値および水分割合は、ＳＡＭｅを化学分解せずに保存するための主な因子の一つである。
【０００７】
Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンは、（Ｓ，Ｓ）−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンと、（Ｒ，Ｓ）−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンの、２つのジアステレオマーの形態で存在する。
【０００８】
体内で生成される天然のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニンは、生物学的に活性な異性体である（Ｓ，Ｓ）−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンを単一のジアステレオ異性体として得るために、基質としてシステインを用いて生合成される。
【０００９】
もう一方のジアステレオ異性体である［（Ｒ，Ｓ）−ＳＡＭｅ］は、ＳＡＭｅが有する多くの生理学的機能において不活性であるのみならず、一部の研究者によれば、正反対の性質、したがって、潜在的に有害な活性を有していると考えられている（ＵＳ２００５/０２７２６８７, Borchardt and Wu, J. Med. Chem.; 19 (9), 1099, 1976）。
【００１０】
合成により得られるＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニンは、（Ｓ，Ｓ）−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンと（Ｒ，Ｓ）−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンとを５０％−５０％含有するジアステレオ異性体の混合物からなる。（Ｓ，Ｓ）−ＳＡＭｅとして抽出された天然のＳＡＭｅもまた、２つのジアステレオ異性体間の相対比が５０％−５０％のバランスとなるよう少しずつ調整することにより、ラセミ化する傾向にある。変形性関節症の治療の有効性に関するＳＡＭｅ試料のラセミ化の悪影響について、Ｎａｊｍらによって、BMC Musculoskelet. Disord.; 5 (1), 6, 2004に記載された。温度とｐＨが、分子のラセミ化工程を促進させる又は遅らせる主要なファクターであるので、ＳＡＭｅの精製工程における温度制御は、ＳＡＭｅのラセミ化を制限するにあたり鍵となる因子である(ＵＳ２００５/０２７２６８７、特許文献１)。
【００１１】
Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンの安定な塩を得るために、多くの試みがなされている。
【００１２】
ラセミ化を制限する一つの方法は、ＳＡＭｅを対イオン又は錯化剤と結合することである。より安定性の高いＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニンの塩を得るための多くの対イオンが知られているが、それらは単に安定性の問題に限られ、完全に解決するものではない（ＵＳ２００５/０２７２６８７、ＵＳ６６４９７５)。
【００１３】
最も安定な生成物は、中程度の強さの酸や強酸、特に、有機および無機の、カルボン酸およびスルホン酸のＳＡＭｅ塩である。最も広く使用されるものは、１，４−ブタンジスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸および硫酸であり、それらは、ＳＡＭｅの注射用製剤にも適用される。生理学的問題（痛みや組織の損傷）を制限するために極めて低いｐＨが得られるようにする観点から、これらの塩は、例えばリジンのような緩衝液によって溶解させてもよい。
【００１４】
ＳＡＭｅは、主に経口投与される。すなわち、ダイエットサプリメント形態でのＳＡＭｅを基剤とする調剤の大半は、錠剤またはカプセルの経口投与を伴うものであり、そこでは、分子はその化学的完全性を維持し、製品の強い酸性から胃粘膜を保護するために、種々の方法によって安定化または保護されている。
【００１５】
しかし、ＳＡＭｅを用いた注射用製剤は、分子が中枢神経系のような肝臓以外の領域に到達する必要がある場合には重要である。筋肉内又は静脈内の投与経路によれば、あらかじめ肝臓を通過することなく、製品が活性な状態で標的臓器まで確実に到達する。ＳＡＭｅの滅菌溶液は、製品の分解を防ぐために、バルク品として又はバイアル充填後に、凍結乾燥することができる。最終的な医薬品の形態を調製するために一般的に用いられる方法は、滅菌環境下でバイアル充填した後に、凍結乾燥するものである。適量のリジン等のバッファを含む溶媒の入ったバイアルに、ＳＡＭｅ塩の高い酸性度を中和して得られる粉末を添加する。バイアル中での直接凍結乾燥は、最も費用のかかる選択肢であり、また、例えば、ある程度ラセミ化が起こることにより、活性エナンチオマーの含有量が７０％未満にまで低下する等、製品のわずかな劣化を伴うが、ＳＡＭｅを基剤とする注射用医薬品の製造に用いられる最も一般的な選択肢である。
【００１６】
したがって、滅菌性、安定性および純度の特性を確実に改善し、非経口投与に適したＳＡＭｅの形態が必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１７】
【特許文献１】米国特許出願第２００５/０２７２６８７
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】本発明に係る噴霧乾燥品の粒度分布を示す図である。
【図２】凍結乾燥品の粒度分布を示す図である。
【図３】本発明に係る噴霧乾燥品の顕微鏡写真である。
【図４】凍結乾燥品の顕微鏡写真である。
【図５】噴霧乾燥品のα１およびα２銅放射を用いたＸ線回析スペクトルを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
今まさに、噴霧乾燥プロセスを用いて、Ｓ−アデノシル−メチオニンが、薬理学的に活性なエナンチオマーを高含有量で含有する、安定な滅菌形態で得られることを見出した。
【００２０】
したがって、本発明の目的は、７０％を超える薬理学的に活性なエナンチオマー含有量および２．５質量％未満の水分を有する、噴霧乾燥された滅菌粉末形状のＳ−アデノシルメチオニン、その塩および錯体である。
【００２１】
本発明に係るＳ−アデノシル−メチオニンは、Ｘ線回析スペクトルから明らかなように、非晶質である。
【００２２】
本発明はまた、前記形状を有するＳ−アデノシルメチオニンを調製するための方法に関する。
【００２３】
本発明に係るＳ−アデノシル−メチオニンは、ＳＡＭｅ全量に対して、水分の含有量が２質量％未満であることが好ましく、活性エナンチオマーの含有量が７５％を超えることが好ましい。エナンチオマーの含有量は、ＨＰＬＣ分析における、両異性体の面積の合計に対する活性エナンチオマーの面積の割合によって決定される。
【００２４】
本発明に係るＳ−アデノシル−メチオニンは、球体粒子形状であり、１００μｍ未満、特に、８〜５０μｍの粒子径、および、０．５ｍ２／ｇ未満の表面積であることが特徴である。ＥＰ１２３８６６５に記載されているように、動作条件を適切に調整することによって、吸入用の製剤としての使用に特に適した１０μｍ未満の粒子径を得ることができる。
【００２５】
本発明に係るＳ−アデノシル−メチオニンは、Ｓ−アデノシル−メチオニンまたはその塩、好ましくは、１，４−ブタンジスルホン酸塩（以下、「ＳＡＭｅ  ＳＤ４」と称する）もしくは、硫酸塩とｐ−トルエンスルホン酸塩の混合物（以下、「ＳＡＭｅ  Ｐａｔｅｓ」と称する）を含む溶液または懸濁液を噴霧乾燥することによって調製される。
【００２６】
前記塩は、高い化学純度および水に対する高い溶解度によって特徴付けられる吸湿性の高い固体であり、溶液中のＳＡＭｅイオンは２５０ｇ／ｌを超える。
【００２７】
ＳＡＭｅ  ＳＤ４およびＳＡＭｅ  Ｐａｔｅｓの溶液は、周囲温度で急速に分解するため、低温で保存される条件においては、微生物汚染がない限り、安定である。
【００２８】
出発物のＳＡＭｅは、ＩＴ８４２０９３８に記載の手順によれば、生体内変換プロセスによって、例えば酵母から得ることができる。
【００２９】
噴霧乾燥プロセスは、溶媒、通常は水中の生成物溶液または懸濁液を、溶媒を急速に蒸発させることができる温度環境下で噴霧し、非晶質粉末状の乾燥物を残すことからなる。生成物の分解を防ぐため、該プロセスは非常に迅速に行うことができ、一般に、高温気流下（または、可燃性溶媒が存在する場合には窒素気流下）で実施される。実験室試験に適しているＢｕｃｈｉ Ｍｉｎｉ Ｓｐｒａｙ Ｄｒｙｅｒ Ｂ−２９０や、パイロット試験や少量生産に適しているＧＥＡ  Ｎｉｒｏ社製のＭｏｂｉｌｅ  Ｍｉｎｏｒのような、市販されている従来の装置が使用できる。他の噴霧乾燥装置としては、上述したものと類似しているが、滅菌粉末の製造に用いるのに適したものが市販されており、例示した装置と同様の原理で動作する。これらに空気や窒素などの滅菌乾燥ガスが供給され、滅菌条件下でＨＥＰＡフィルターを通してろ過を行い、生成物を適切な密閉容器中に排出する。噴霧乾燥装置は、全体的または部分的に、無菌の制御された環境で維持され、そこへ生成物の滅菌溶液が供給される。装置には、例えば蒸気によって洗浄（定置洗浄、ＣＩＰ）または滅菌（定置滅菌、ＳＩＰ）を行うためのノズルを設けることができる。
【００３０】
供給されるＳＡＭｅ溶液は、滅菌フィルター（例えば、０．２μｍのポリマーまたはセラミックフィルター）を通して前ろ過し、あらかじめ滅菌した金属またはポリマーのパイプを通して噴霧乾燥装置に搬送される。バッファ、希釈剤または他の製剤化補助剤のような他の水溶性物質は、ＳＡＭｅ溶液に添加されてもよく、適切な滅菌フィルター、例えば、０．２μｍのポリマーフィルターを通して滅菌することができる。
【００３１】
乾燥チャンバに入る空気の温度は、１３０〜１９０℃、好ましくは１３５〜１６０℃の範囲である。出ていく空気の温度は、溶液の入力流量を適宜変えることによって、１０５〜７５℃、好ましくは９７〜８５℃に調整される。
【００３２】
指定された条件により滅菌固体形態のＳＡＭｅを製造し、ラセミ化を含む製品の分解を制限することによって、凍結乾燥して得た製品と同等またはそれ以上の品質を有する製品が得られる。
【００３３】
また、得られた製品は、優れた球状、粒度分布、および他の物理的特性を兼ね備えているため、良好な流動性と同時に適度な充填性を有する製品が提供される。真空と圧力のメカニズムによれば、滅菌環境下で動作する既存のバイアル充填機を用いることもできる。生成物は、適切なフィルターを備えた適切な容量のバッチ処理チャンバ内の充填ホッパーから、これらの装置内に吸引され、その後、わずかな圧力を加えることによって、バイアル内に排出される。
【００３４】
粉末の流動性および粒子径特性は、薬剤の場合には、正確な用量を保証するために、非常に重要である。すなわち、あまり流動性を有していない、および／または、不規則な形状を有する粉末は、完全にチャンバを満たさず、用量を不正確にする小さな空間を残すことがあり、一方で、細か過ぎる粉末は、フィルターを通過してしまう傾向にあり、そのため、有効成分の浪費が増え、薬剤のコストの増加につながる。特にＳＡＭｅおよびその塩の場合には、生成物の有する強い吸湿特性により、その問題は大きくなる。すなわち、粉末は、完全に乾燥された場合、かなり流動性が高いものの、周囲から水分を吸収し、水分の増加に伴い粘着性になる。充填チャンバが完全に塞がれていない場合であっても、粉末の物理的特性にばらつきがみられることにより用量が不正確となり、薬剤用量の異なるバイアルが同一バッチ内で発見されるリスクが認められている。これらの理由から、十分に均一な粒度分布を有する球状粒子であって完全に乾燥された粉末を得ることが極めて重要である。粉末用のバイアル充填機を用いた場合には、１グラム未満の用量においても、バッチの初めから終わりまでのばらつきが±５％未満という、高い用量の均一性レベルが得られる。
【００３５】
粉末によるバイアル充填は、通常、正確な用量を投与し、１時間に数千バイアルといった大量のバイアルを扱う、非常に高出力の装置を用いて行われる。この生産性および用量の正確性を得るためには、バッチ粉末が、正確な一定の流動性および粒子径特性を有していることが不可欠である。すなわち、いかなるばらつきも、不正確な用量による製造バッチあたりの多数の不良品、または、装置の出力低下の必要性につながる。
【００３６】
そのようなバイアル充填機の例としては、ＩＭＡ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ社製のＭＦ４００が挙げられ、該充填機は、十分な用量のＳＡＭｅを基剤とする薬剤を、１分間に４００個のバイアルに充填することがきる。特にＳＡＭｅの場合には、非常に吸湿性の粉末であるため、周囲からの水分の吸収を防ぐことが不可欠である。したがって、例えば、ＨＥＰＡフィルターを介してろ過した除湿空気のような滅菌の乾燥条件下で行う等、特別な注意が必要である。ＳＡＭｅの場合、粉末を完全に乾燥したまま維持することがより重要である。なぜなら、このような条件下においては、流動性が良好で、化学的安定性に優れるためである。
【実施例】
【００３７】
本発明を、以下の例によって詳細に説明する。
【００３８】
（例１）
特許ＩＴ８４２０９３８に記載されているように、Ｓ−アデノシル−メチオニンを、酵母による生体内変換プロセスを用いて製造する。精製工程の終わりに、ＳＡＭｅを１，４−ブタンジスルホン酸により塩化した溶液を調製する。該溶液は、真空下におけるナノろ過および／または蒸発によって、ＳＡＭｅ濃度が約１２５〜２５０ｇ／ｌとなるように濃縮される。
全固形分の約３１％に相当するＳＡＭｅ濃度が約１５０ｇ／ｌのＳＡＭｅ  １，４−ブタンジスルホン酸塩溶液を、蠕動ポンプを用いて上記ＧＥＡ  Ｎｉｒｏ  Ｍｏｂｉｌｅ  Ｍｉｎｏｒ乾燥装置に供給し、所望の温度に予熱する。該装置には、二流体ノズルインジェクターが取り付けられ、乾燥ガスとしての高温空気と、加圧およびインジェクター冷却用の冷気が供給される。乾燥チャンバに入る空気は、発熱体によって１５０℃の温度、以下、「入力温度」（ＴＩＮ）という、に加熱される。９５〜９６℃の所望の出力空気の温度値（ＴＯＵＴ）を得るために蠕動ポンプの流量を手動で調整することにより、システムへのＳＡＭｅ溶液の供給を調節する。ＳＡＭｅ  １，４−ブタンジスルホン酸塩の粉末は、湿った空気が排出される間に、サイクロンにより分離され、ガラスジャー内に収集される。
このようにして得られた生成物は、ＳＡＭｅが４８．６％、残留水分１．５０％、立体異性対比７３．７７％、粒子径Ｄ５０が１０μｍの測定値である。
【００３９】
（例２）
下表に示すとおり入力および出力温度を設定し、例１に記載したようにプロセスを実施する。得られた生成物は、表１に報告する特性を有する。
【００４０】
【表１】
0006472433.tif 000002
【００４１】
（例３）
例１に記載したようにプロセスを実施するが、乾燥装置を以下のように変更した。すなわち、ＨＥＰＡ滅菌フィルターを空気供給ラインに導入し、蠕動ポンプの吐出ラインの、ポンプと乾燥装置のインジェクターとの間に滅菌フィルターカートリッジを配置する。
乾燥装置、タンク、蠕動ポンプ、ＳＡＭｅ溶液の供給管および粉末収集容器をあらかじめ滅菌した後は、例２に記載した条件と同様の条件下でプロセスを実施した。装置の各部分は、材料の適合性に応じて、蒸気または化学殺菌剤を用いて滅菌し、ＳＡＭｅ溶液は、ろ過により滅菌した後、冷却保存（＋４℃）する。
表１に報告する生成物と同様の化学的特性を有する固体生成物が得られるが、８０％を超える過剰のＳ，Ｓ−異性体のエナンチオマー、総菌数１０ＣＦＵ／ｇ未満、そして、エンドトキシンレベルが０．１１８Ｕ／ｇ未満の特性を有する。
【００４２】
（例４）
粉体分離サイクロンを実施した後、例３に記載したものと同じ装置を用いて、さらに、冷却した混合物が供給される熱交換器と、乾燥ガスラインにＭｕｎｔｅｒ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｄｒｉｅｒを追加する。除湿後に排出された乾燥ガスは、系内に戻される、すなわち、この系は閉サイクルである。
プロセスは、例３に記載のとおり行い、乾燥ガスとして窒素を用いて例２に記載された条件と同様の条件下で実施する。
表１に報告する生成物と同様の化学的特性を有する固体生成物が得られるが、８０％を超える過剰のＳ，Ｓ−異性体のエナンチオマー、総菌数１０ＣＦＵ／ｇ未満、そして、エンドトキシンレベルが０．１１８Ｕ／ｇ未満である特性を有する。
【００４３】
（例５）
約２５０ｇ／ｌのＳＡＭｅ  １，４−ブタンジスルホン酸塩溶液を使用し、例４に記載したものと同じ装置を用いる。
入力ガスの温度を表１に示すとおりに設定し、その後、ＳＡＭｅ供給溶液の流量を、表１に示す、対応する出力温度に適合するように適宜調節する。
表２に示す化学的特性および例４に記載された微生物学的特性を有する生成物が得られる。さらに、得られた固体粒子は、図１に示すとおり、均一な粒度分布を有し、図３に示すような球状の外観を有している。
【００４４】
【表２】
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【００４５】
（例６）
１００〜２５０ｇ／ｌの範囲の濃度であるＳＡＭｅ硫酸塩とｐ−トルエンスルホン酸塩の溶液を使用し、例３に記載したものと同じ装置を用いて、例４に記載の条件と同条件下で実施する。
以下の特性を有するＳＡＭｅ  Ｐａｔｅｓ粉末が得られる：
４９．５％を超えるＳＡＭｅ、８０％を超えるＳ，Ｓ−異性体のエナンチオマー比、３．５％未満の総不純物、５０μｍ未満の粒子径、０．７未満の嵩密度。
【００４６】
（例７）
約１２５ｇ／ｌのＳＡＭｅ  １，４−ブタンジスルホン酸塩溶液をガラス容器に分割し、以下の動作サイクルに従いプログラムされたＥｄｗａｒｄｓ社製の凍結乾燥チャンバＭＦ６８０−ＭＫ２を用いて、凍結乾燥する。
【００４７】
−４５℃で少なくとも３時間冷却し、溶液を凍結する。
最高温度−１０℃、０．０４ｍｂａｒの真空下で３０時間、その後、温度−１０℃、０．０１０ｍｂａｒの真空下で３５時間、０．０１０ｍｂａｒで最少１０時間で圧力が安定になるまで一次乾燥する。
温度＋２０℃、０．０１０ｍｂａｒの真空下で３時間、その後、温度＋４５℃、０．０１０ｍｂａｒの真空下で少なくとも６時間、二次乾燥を行う。
真空下で＋２０〜２５℃に冷却し、続いて、窒素を凍結乾燥装置に導入する。
【００４８】
得られる粉末は、ＳＡＭｅ４８％、Ｓ，Ｓ−異性体のエナンチオマー比７０％の測定値を有する。
【００４９】
（例８）
例６に記載したとおりに噴霧乾燥して得られる粉末を、ＩＭＡ  Ｌｉｆｅ社製の充填機Ｍｉｃｒｏｆｉｌｌ  ４００に入れて、無菌アイソレーター下に設置し、予備滅菌する。
上記機械に、個々にあらかじめ秤量した、アルミニウムキャップを付けて圧着したガラスバイアルを配置しながら、無菌アイソレーターに、Ｍｕｎｔｅｒ  ｄｒｉｅｒを用いて除湿し、滅菌条件下、ＨＥＰＡフィルターを用いてろ過した空気を供給する。
充填機を起動させると、機械の最高動作速度において１バイアル当たり８００ｍｇの粉末が充填され、粉末用量のばらつきは３％未満となる。
【００５０】
（例９）
例７に記載したとおりに凍結乾燥して得られた粉末を、Ｍｉｃｒｏｆｉｌｌ  ４００に入れて、例８に記載したように、バイアルの充填量を８００ｍｇとして動作した。
機械の最高動作速度において、５％を超える粉末用量のばらつきが見られる。
【００５１】
（例１０）
薬局で販売されているＳＡＭｅ  １，４−ブタンジスルホン酸塩を基剤とする市販品のＳａｍｙｒを用いて、例５に記載したものと同じ分析を行った。生成物は、表２に示す化学的特性を有しており、得られた固体粒子は、図２に示すとおり不均一な粒度分布を有し、図４に示すように不規則な外観を有している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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