(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラムノリピドおよび細胞膜破壊剤を含む、抗菌性組成物であって、前記細胞膜破壊剤がカプリル酸を含む、抗菌性組成物。
【請求項２】
合成界面活性剤を含むさらなる界面活性剤を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ラムノリピドが全界面活性剤の１ｗｔ％〜９５ｗｔ％、好ましくは１０〜７０ｗｔ％で存在している、請求項１〜２のいずれかに記載の組成物。
【請求項４】
ホームケア組成物またはパーソナルケア組成物である、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
好ましくはシャンプー、コンディショナー、デオドラント、スキンクレンジング組成物、制汗剤から選択されるパーソナルケア組成物である、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
好ましくは洗濯用組成物および硬質面用洗剤から選択されるホームケア組成物である、請求項４に記載の組成物。
【請求項７】
微生物の増殖の抗菌的抑制または破壊のための請求項１〜６のいずれかに記載の組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ラムノリピドを含む改善された殺菌性組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
米国特許公開第２０１０／０２７２６９０号明細書には、Ｍｕｓｃｏｄｏｒ  ｃｒｉｓｐａｎｓおよび／またはその揮発性副産生物、ならびに一般的な食品およびフレーバー化合物を含み、抗菌特性を示す生物模倣組成物の使用が記載されている。この文献には、プロピオン酸、イソ酪酸および／または酢酸を組み込んだ具体的な例が開示されている。また、この文献には、組成物中にラムノリピドが組み込まれる可能性も開示されている。
国際公開第２０１２／０１０４号には、ラムノリピドとリパーゼを含む洗剤組成物が記載されている。
欧州特許第２４１００３９号明細書には、特定の比率のモノ−ラムノリピドとジ−ラムノリピドを含み、クエン酸などのビルダーを含んでいてもよい洗浄組成物が記載されている。
米国特許公開第２００７／１９１２９２号明細書には、少なくとも１種類のシリンゴマイシン、少なくとも１種類のシュードマイシン（ｐｓｅｕｄｏ−ｍｙｃｉｎ）およびその組合せ；ならびにラムノリピドを含む担体成分を含む抗かび組成物が記載されている。
国際公開第２００７／０９５２５８号には、少なくとも１種類のナイシン、少なくとも１種類のナタマイシンおよびその組合せから選択される殺生剤成分；ならびにラムノリピドを含む担体成分を含む組成物が記載されている。
中国特許第１０３１４６４９６号明細書には、５〜１５重量部のラムノリピド抽出物、１〜１０重量部のショ糖脂肪酸エステル、０．０１〜０．０５重量部の１００００Ｕ／ｇのリパーゼ生物製剤および０．５〜１．５重量部のエチレンジアミン四酢酸二ナトリウムを含む洗剤組成物が開示されている。
国際公開第２００８／０１３８９９号には、０．０１〜９９．９％のラムノリピドを含み、残部が担体である洗浄配合物が開示されている。考えられ得る広範な担体成分の中でもクエン酸およびステアリン酸が含められている。
国際公開第０２／５０２２５号には、（ｉ）少なくとも１種類の界面活性剤、（ｉｉ）少なくとも１種類の酸、および（ｉｉｉ）（ａ）Ｎ−アルキルピロリドン誘導体と（ｂ）一般式Ｒ１−Ｏ−（ＥＯ）ｍ−（ＰＯ）ｎ−Ｒ２（式中、Ｒ１およびＲ２は独立してＣ２〜６アルキルまたは水素であるが、両方が水素であることはなく、ｍおよびｎは独立して０〜５であり、ＥＯはエチレンオキシ基を表し、ＰＯはプロピレンオキシ基を表す）の共溶媒を含む溶媒混合物を含む水性抗菌性洗浄組成物が開示されている。
先行技術にもかかわらず、改善された殺菌性ラムノリピド組成物の必要性が依然として存在している。
【発明の概要】
【０００３】
したがって、第１の態様において、本発明により、ラムノリピドおよび細胞膜破壊剤を含む殺菌性組成物を提供する。
【図面の簡単な説明】
【０００４】
【図１】ＢｉｏＦｌｕｘチャネル内でのバイオフィルムの形成と破壊を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０００５】
モノ−ラムノリピドはラムノース糖環を１つ有する。ＩＵＰＡＣ名は３−［３−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−メチルオキサン−２−イル］オキシデカノイルオキシ］デカン酸である。
【０００６】
ジ−ラムノリピドはラムノース糖環を２つ有する。ＩＵＰＡＣ名は３−［３−［４，５−ジヒドロキシ−６−メチル−３−（３，４，５−トリヒドロキシ−６−メチルオキサン−２−イル）オキシオキサン−２−イル］オキシデカノイルオキシ］デカン酸である。
【０００７】
ラムノリピドの場合、本特許明細書全体を通して、接頭辞モノ−およびジ−は、それぞれ、モノ−ラムノリピド（ラムノース糖環を１つ有する）およびジ−ラムノリピド（ラムノース糖環を２つ有する）をそれぞれ示すために用いている。略号を用いている場合、Ｒ１はモノ−ラムノリピドであり、Ｒ２はジ−ラムノリピドである。
【０００８】
モノ−ラムノリピドは、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）によって生産されるＬ−ラムノシル−β−ヒドロキシデカノイル−β−ヒドロキシデカノエート（Ｃ２６Ｈ４８Ｏ９の式を有するＲｈａＣ１０Ｃ１０）であり得る。
【０００９】
典型的なジ−ラムノリピドはＬ−ラムノシル−Ｌ−ラムノシル−β−ヒドロキシデカノイル−β−ヒドロキシデカノエート（Ｃ３２Ｈ５８Ｏ１３の式を有するＲｈａ２Ｃ１０Ｃ１０）である。
【００１０】
実際には、炭素源および細菌株に応じて種々のアルキル鎖長の組み合わせを有する他のさまざまな微量成分が、より一般的な上記のラムノリピドとの組み合わせで存在している。モノ−ラムノリピドとジ−ラムノリピドの比率は作製方法によって制御され得る。一部の細菌はモノ−ラムノリピドのみを生産するものであり（米国特許第５７６７０９０号明細書：実施例１参照）、一部の酵素によってモノ−ラムノリピドをジ−ラムノリピドに変換させることができる。
【００１１】
以下のラムノリピドは、本発明に包含されるモノ−およびジ−ラムノリピド源である（Ｃ１２：１、Ｃ１４：１は二重結合を有する脂肪酸アシル鎖を示す）：
−緑膿菌によって生産されるラムノリピド（モノ−ラムノリピド）：
Ｒｈａ−Ｃ８−Ｃ１０、Ｒｈａ−Ｃ１０−Ｃ８、Ｒｈａ−Ｃ１０−Ｃ１０、Ｒｈａ−Ｃ１０−Ｃ１２、Ｒｈａ−Ｃ１０−Ｃ１２：１、Ｒｈａ−Ｃ１２−Ｃ１０、Ｒｈａ−Ｃ１２：１−Ｃ１０
−Ｐ．クロロラフィス（ｃｈｌｏｒｏｒａｐｈｉｓ）によって生産されるラムノリピド（モノ−ラムノリピドのみ）：
Ｒｈａ−Ｃ１０−Ｃ８、Ｒｈａ−Ｃ１０−Ｃ１０、Ｒｈａ−Ｃ１２−Ｃ１０、Ｒｈａ−Ｃ１２：１−Ｃ１０、Ｒｈａ−Ｃ１２−Ｃ１２、Ｒｈａ−Ｃ１２：１−Ｃ１２、Ｒｈａ−Ｃ１４−Ｃ１０、Ｒｈａ−Ｃ１４：１−Ｃ１０
−モノ−ラムノリピドはＰ．プチダ（ｐｕｔｉｄａ）からも、緑膿菌の遺伝子ｒｈｌＡおよびｒｈｌＢの導入によって生産され得る［Ｃｈａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．２００８．９９（７）：２１９２−９］
−緑膿菌によって生産されるラムノリピド（ジ−ラムノリピド）：
Ｒｈａ−Ｒｈａ−Ｃ８−Ｃ１０、Ｒｈａ−Ｒｈａ−Ｃ８−Ｃ１２：１、Ｒｈａ−Ｒｈａ−Ｃ１０−Ｃ８、Ｒｈａ−Ｒｈａ−Ｃ１０−Ｃ１０、Ｒｈａ−Ｒｈａ−Ｃ１０−Ｃ１２：１、Ｒｈａ−Ｒｈａ−Ｃ１０−Ｃ１２、Ｒｈａ−Ｒｈａ−Ｃ１２−Ｃ１０、Ｒｈａ−Ｒｈａ−Ｃ１２：１−Ｃ１２、Ｒｈａ−Ｒｈａ−Ｃ１０−Ｃ１４：１
−類鼻疽菌（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒａ  ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ）によって生産されるラムノリピド（ジ−ラムノリピドのみ）：
Ｒｈａ−Ｒｈａ−Ｃ１４−Ｃ１４
−イネ苗立枯細菌病菌（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒａ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）ｐｌａｎｔａｒｉｉ）によって生産されるラムノリピド（ジ−ラムノリピドのみ）：
Ｒｈａ−Ｒｈａ−Ｃ１４−Ｃ１４
−緑膿菌によって生産され、最初はモノ−ラムノリピドまたはジ−ラムノリピドのどちらか不明であるラムノリピド：
Ｃ８−Ｃ８、Ｃ８−Ｃ１０、Ｃ１０−Ｃ８、Ｃ８−Ｃ１２：１、Ｃ１２：１−Ｃ８、Ｃ１０−Ｃ１０、Ｃ１２−Ｃ１０、Ｃ１２：１−Ｃ１０、Ｃ１２−Ｃ１２、Ｃ１２：１−Ｃ１２、Ｃ１４−Ｃ１０、Ｃ１４：１−Ｃ１０、Ｃ１４−Ｃ１４
好ましくは、ラムノリピドは、少なくとも２０ｗｔ％のジ−ラムノリピド、好ましくは５０ｗｔ％のジ−ラムノリピド、より好ましくは６０ｗｔ％、さらにより好ましくは７５ｗｔ％、最も好ましくは少なくとも９０ｗｔ％のジ−ラムノリピドを含む。
【００１２】
本発明による組成物は、ユーザー、例えば消費者によりさらなる組成物中で希釈されるような殺菌性原料として使用されるものであってもよく、該組成物は、用途が基材に殺菌効果をもたらすことが意図されたもの、またはさらには消費者組成物中の保存料として意図されたものである消費者製品であってもよい。
【００１３】
好ましくは、細胞膜破壊剤は酸を含むもの、より好ましくは有機酸を含む。
【００１４】
本明細書における使用のための好ましい有機酸としてはカルボン酸およびその混合物が挙げられる。
【００１５】
好ましいカルボン酸としては、脂肪族、脂環式または芳香族のモノ−、ジ−、トリ−もしくはポリカルボン酸またはその組み合わせ／混合物が挙げられる。ポリカルボン酸は、分子内に好ましくは２〜１０個の炭素原子、より好ましくは３〜６個の炭素原子を含む。ヒドロキシカルボン酸もまた使用され得る。
【００１６】
有機酸は脂肪酸であってもよい。
【００１７】
好ましいカルボン酸としては、カプリル酸、プロピオン酸、アゼライン酸、カプロン酸、ヒドロキシ安息香酸、サリチル酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、クエン酸、酒石酸およびその混合物が挙げられる。
【００１８】
市販の混合物は、３０〜３５％のアジピン酸、４５〜５０％のグルタル酸および１０〜１８％のコハク酸を含む。かかる混合物はＳＯＫＡＬＡＮ  ＤＣＳ（ＢＡＳＦ製）として入手可能である。別の好適な混合物はＲＡＤＩＭＩＸ（Ｒａｄｉｃｉ製）として入手可能である。
【００１９】
好ましくは、細胞膜破壊剤は配合物の０．０１〜１０ｗｔ．％の範囲で存在させる。より好ましくは、細胞膜は５〜１０ｗｔ．％の範囲で存在させる。
【００２０】
好ましくは、該組成物はホームケア製品およびパーソナル製品である。
【００２１】
好ましいホームケア製品としては、洗濯用洗剤／ランドリークリーニング組成物、洗濯用コンディショナー組成物組成物、ならびに硬質面用洗剤、例えば、食器手洗い用および食洗機用洗浄組成物、キッチン用および浴室用洗剤が挙げられる。硬質面としては、キッチンおよび浴室の表面、カトラリー、陶磁器類などが挙げられる。
【００２２】
パーソナルケア組成物としては、シャンプー、ヘアコンディショナー、デオドラント、スキンクレンジング組成物ならびにオーラルケア製品、例えば、歯磨き粉およびマウスウォッシュが挙げられる。
【００２３】
以下は、一例として含めたものにすぎない本発明の非限定的な実施形態である。
【００２４】
［実施例］
［実施例１］
以下のデータは、ラムノリピドおよび細胞膜破壊剤であるカプリル酸を含む組成物の静菌効力を示す。
【００２５】
材料および方法
微生物および培養条件
緑膿菌ＡＴＣＣ  １５４４２および黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）ＡＴＣＣ  ９１４４を普通ブイヨン＋２０％のグリセロール中に−２０℃で維持した。３０℃で２４時間インキュベートした普通寒天斜面からの細菌増殖物を使用し、１０８ｃｆｕ／ｍＬが得られるように５７０ｎｍにおける光学密度を調整した細菌懸濁液を得た。
【００２６】
ラムノリピドの特徴
１０％（ｗ／ｖ）のモノ−ラムノリピド（Ｃ２６Ｈ４８Ｏ９，ＭＷ：５０４，臨界ミセル濃度：中性ｐＨで２０ｍｇ／Ｌ  Ｍ）および１０％（ｗ／ｖ）のジラムノリピド（Ｃ３２Ｈ５８Ｏ１３，ＭＷ：６５０，ＣＭＣ：中性ｐＨで１．５×１０−４  ３０ｍｇ／Ｌ）を含むラムノリピドを、Ｊｅｎｅｉｌ  Ｂｉｏｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  Ｃｏ．（Ｓａｕｋｖｉｌｌｅ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）から入手した試料から分離して得た。
【００２７】
細胞膜破壊剤：カプリル酸
カプリル酸（ＣＡＳ  ＲＮ  ０１２４−０７−２）をＳｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ（カタログ番号Ｃ２８７５）から＞９９％純度で入手した。
【００２８】
モノ−およびジ−ラムノリピドは、Ｊｅｎｅｉｌから入手した試料から以下のプロトコルを用いて分離し、得られた個々のＲ１／Ｒ２画分を使用して上記の１０％ラムノリピド溶液を作製した。
【００２９】
定量した量のＪＢＲ４２５を、１２Ｍ  ＨＣｌを用いてｐＨ３に酸性化し、冷蔵庫内に一晩入れた。次いで上清みを、クロロホルムとエタノールの２：１の混合物を用いて３回抽出した。次いで溶媒を回転式エバポレーションによって除去し、単離したラムノリピド混合物を次いでメタノールに再溶解させた。
【００３０】
混合物を分離して特性評価するプロセスは、イオントラップ型エレクトロスプレーイオン化質量分析装置に連結させたＨＰＬＣを用いて行った。イオン化モードはネガティブモードにし、スキャン範囲を５０〜１２００Ｄａにした。分離のために使用したカラムはＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ｌｕｎａ  Ｃ１８  ２５０×４．６ｍｍ  ５μｍカラムであった。移動相：水（移動相Ａ）とアセトニトリル（移動相Ｂ）を、３０分かけて６０：４０（Ａ：Ｂ）から３０：７０（Ａ：Ｂ）に変化させる勾配による分離に使用した。次いで系を５分間保持した後、開始時の条件に戻し、流速はすべて０．５ｍｌ／分にした。インジェクション容量は１０μｌにした。
【表１】
0006581583.tif 000002
【００３１】
ＢｉｏＦｌｕｘフロースルーデバイス上におけるバイオフィルムの増殖
フロー条件下でのバイオフィルムの形成を解析するため、特化されたマルチウェルプレート内での自動画像取得が可能であるＢｉｏＦｌｕｘ  ２００システム（Ｆｌｕｘｉｏｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）を使用した。バイオフィルムを増殖させるため、マイクロ流路チャネル（深さ，７５μｍ；幅，３５０μｍ）をＴＳＢ（５０％）により１０．０ｄｙｎ／ｃｍ２でプライミングした。チャネルに、緑膿菌ＡＴＣＣ  １５４４２、黄色ブドウ球菌ＡＴＣＣ  ９１４４および混合培養ブロスの一夜培養物から１０７ＣＦＵを播種した。次いでプレートを３０℃で４８時間インキュベートして細胞を付着させた。バイオフィルムが形成されたらプランクトン様細胞を除去し、ＰＢＳ  １×（対照として）および種々の処理液を供給ウェルに２７９μＬ／時の流速で３０分間添加した。結果を顕微鏡Ｅｖｏｎ（１０倍）（１７％光）で記録した。
【００３２】
結果
ラムノリピドとカプリル酸を用いた緑膿菌ＡＴＣＣ  １５４４２、黄色ブドウ球菌ＡＴＣＣ  ９１４４および混合培養物のバイオフィルムの破壊
緑膿菌ＡＴＣＣ  １５４４２、黄色ブドウ球菌ＡＴＣＣ  ９１４４および混合培養物に事前に形成させたバイオフィルムに対するカプリル酸と併用したラムノリピドの効果をＢｉｏｆｌｕｘフロースルー条件下で調べた。カプリル酸をラムノリピドと併用して合わせたものにより破壊がもたらされたことが確認された。単離菌はすべて、４８時間でバイオフィルムを生成した。しかしながら、すべての場合におけるマイクロ流路チャネル周囲への広がりに関して相当なばらつきがみられた。緑膿菌のバイオフィルムと混合培養物はフロー条件下で充分に形成された（図１Ａ、１Ｅおよび１Ｇ）が、黄色ブドウ球菌ＡＴＣＣ  ９１４４により形成されたバイオフィルム（図１Ｃ）は、同様には厚くなかったが多細胞集団とみなすのに充分に良好であり、プランクトン様浮遊細菌と比べて根本的に異なる生理学的状態を示した。
【００３３】
４８時間後、すべてのプレートをＰＢＳ  １×ですすぎ洗浄し、ラムノリピド（０．０４％ｖ／ｖ）とカプリル酸（０．０１％ｖ／ｖ）の組み合わせを有する処理液を３０分間塗布すると、この期間後、９０％超のバイオフィルムが破壊された。グラム陽性菌およびグラム陰性菌がラムノリピドとカプリル酸の組み合わせに応答する様式がさまざまであることに注目することは興味深く、これらの成分を個々に塗布した場合の結果（データは示さず）と比較すると両成分間の相乗効果の可能性が示唆される。
【００３４】
結果を図１に示す。この図はＢｉｏＦｌｕｘチャネル内でのバイオフィルムの形成と破壊を示す。画像は位相差画像であり、３０℃で４８時間のインキュベーション後に充分に形成されたバイオフィルムを示す。画像は顕微鏡Ｅｖｏｎ（１０倍）（１７％光）で記録し、以下のとおりである。
【００３５】
（Ａ）処理前の緑膿菌ＡＴＣＣ  １５４４２のバイオフィルム
（Ｂ）ラムノリピド（０．０４％）とカプリル酸（０．０１％）で処理した後の緑膿菌ＡＴＣＣ  １５４４２（Ａ）
（Ｃ）処理前の黄色ブドウ球菌ＡＴＣＣ  ９１４４
（Ｄ）ラムノリピド（０．０４％）とカプリル酸（０．０１％）で処理した後の黄色ブドウ球菌ＡＴＣＣ  ９１４４（Ｃ）
（Ｅ）処理前の混合培養物（緑膿菌ＡＴＣＣ  １５４４２／黄色ブドウ球菌ＡＴＣＣ  ９１４４）
（Ｆ）ラムノリピド（０．０４％）とカプリル酸（０．０１％）で処理した後の混合培養物（Ｅ）
（Ｇ）処理前の緑膿菌ＡＴＣＣ  １５４４２
（Ｈ）ＰＢＳ  １×で処理後の緑膿菌ＡＴＣＣ  １５４４２（Ｇ）
【図１】
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