(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
Bacillus sp. ITB105株（NITE BP-01727）である微生物。
【請求項２】
Bacillus sp. ITB105株（NITE BP-01727）は配列番号３の塩基配列で示される16S rDNAを有する、請求項１に記載の微生物。
【請求項３】
請求項１または２に記載の微生物の菌体またはその培養物。
【請求項４】
請求項１または２に記載の微生物あるいは請求項３に記載の菌体またはその培養物を含有する、微生物製剤。
【請求項５】
植物成長促進剤である請求項４に記載の微生物製剤。
【請求項６】
植物病害防除剤である請求項４に記載の微生物製剤。
【請求項７】
線虫防除剤である請求項４に記載の微生物製剤。
【請求項８】
請求項３に記載の菌体またはその培養物あるいは請求項５に記載の微生物製剤で植物または土壌を処理する工程を含む、植物成長促進方法。
【請求項９】
請求項３に記載の菌体またはその培養物あるいは請求項６に記載の微生物製剤で植物または土壌を処理する工程を含む、植物病害防除方法。
【請求項１０】
請求項３に記載の菌体またはその培養物あるいは請求項７に記載の微生物製剤で植物または土壌を処理する工程を含む、線虫防除方法。
【請求項１１】
請求項３に記載の菌体またはその培養物あるいは請求項４〜７のいずれか一項に記載の微生物製剤で植物を処理する工程を含む、植物の栽培方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物病害防除、線虫防除及び植物成長促進に有用な新規な微生物に関する。本発明はさらに、新規微生物の、植物の病原菌に対する耐性の向上、線虫の防除及び植物の成長促進のための微生物製剤としての使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来の化学農薬以外を用いる、植物病害の防除方法として、自然界から分離した微生物を用いた生物的防除技術が注目され、いくつかの微生物農薬が製品化されている。しかしながら、既存の微生物農薬は化学農薬に比べると効果が安定しなかったり、適用病害が少ないという欠点がある。このような状況から、新しい適用病害を有し、安定した防除効果を示す新規な微生物農薬が望まれている。【０００３】
微生物を用いた植物病害防除剤としては、タラロマイセス・フラバス（Talaromyces flavus）剤、シュードモナス・フルオレッセンス（Pseudomonas fluorescens）剤、非病原性エルビニア・カロトボーラ（Erwinia carotovora）剤、トリコデルマ・アトロビリデ（Trichoderma atroviride）剤、バチルス・シンプレクス（Bacillus simplex）剤、バチルス・ズブチリス（Bacillus subtilis）剤などが微生物農薬として登録され、使用されている。【０００４】
微生物を用いた線虫防除剤としては、パスツーリア・ペネトランス（Pasteuria penetrans）剤、モノクロスポリウム・フィマトパガム（Monacrosporium phymatophagum）剤が微生物農薬として登録され、使用されている。【０００５】
特許第２９５５６５５号明細書（特許文献１）には、バチルス・アミロリクエファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）に属する細菌を用いた植物病害防除剤が開示されている。この植物病害防除剤の有効成分は微生物の生産物であり、細菌自体は農薬として使用されていない。また、植物の成長促進や線虫の防除に関しては一切記載されていない。
また、特許第５１９８６９０号（特許文献２）には、バチルス・アミロリクフエファシエンス(Bacillus amyloliquefaciens)に属する細菌を用いた植物病害防除剤が開示されているが、本発明の菌株とは分類上異なっている。
また、特開２００９−２４７３０２号公報（特許文献３）には、糸状菌性病害と細菌性病害を同時に防除でき、生菌体自体が有効である微生物農薬が開示されているが、植物の成長促進や線虫の防除に関しては記載されていない。【０００６】
特許第３４７１８１５号明細書（特許文献４，WO98/050422）には、広範囲の植物病害に利用でき、コーンルートワームに有効であるバチルス属細菌を用いた植物病害防除剤が開示されているが、植物の成長促進や線虫の防除に関しては記載されていない。
また、特許第４０７１０３６号明細書（特許文献５，US2004/265292）には、植物病害防除と害虫防除に利用できるバチルス・エスピーＤ７４７株が開示されているが、植物の成長促進や線虫の防除に関する記載はない。【０００７】
特許第３４７１８１１号明細書（特許文献６，WO96/032840）には、バチルス属細菌を用いた線虫防除剤が開示されている。この線虫防除剤の有効成分は抗線虫活性を有するバチルス・ファーマス（Bacillus firmus）株の細菌または胞子であるが、植物の成長促進や植物病害防除に関しては記載されていない。
また、特許第４３５９６５３号明細書（特許文献７，WO1997/012980）にはバチルス・チューリンゲンシス（Bacillus thuringiensis）の新規株が産生する抗線虫性毒素による線虫制御方法が開示されているが、植物の成長促進や植物病害防除に関しては記載されていない。【０００８】
一方、農業において、化学肥料は作物の収量に影響を及ぼす重要な農業資材であるが、使用された化学肥料成分の３０〜５０％は作物に利用されずに環境へ拡散し、河川の富栄養化、地下水の水質汚染等の原因となる。また、化学肥料の生産には、多量の化石燃料が使用されており、化石燃料の高騰と相まって、化学肥料のコストも高まってきている。さらに、窒素肥料の分解物である窒素酸化物（ＮＯX）は、炭酸ガスに比べて約３００倍の温室効果があるとされ、地球温暖化に対する懸念が問題化しつつある。また、今後世界的な人口増加により食料不足が予想され、作物の生産性を高めるための資材の使用は不可欠であり、既存の化学肥料を代替する、より環境にやさしい資材の必要性が高まっている。【０００９】
このような状況に照らして、土壌微生物を利用して農作物の収量を高めるための研究は、主にリゾビウム属細菌（根粒菌）、シュードモナス属細菌、バチルス属細菌に関して広範囲に行われて来ているが、その効果の低さから、実用化されているものは極少ない。【００１０】
以上のように、化学農薬および化学肥料に頼らず、環境負荷が少なく、植物病害防除および線虫防除が可能であり、植物の成長促進をも有する微生物は強く望まれている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】特許第２９５５６５５号明細書
【特許文献２】特許第５１９８６９０号明細書
【特許文献３】特開２００９−２４７３０２号公報
【特許文献４】特許第３４７１８１５号明細書
【特許文献５】特許第４０７１０３６号明細書
【特許文献６】特許第３４７１８１１号明細書
【特許文献７】特許第４３５９６５３号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明の目的は、植物病害の防除作用、線虫防除作用、及び植物の成長促進作用を有する新規な微生物を提供することにある。
本発明の他の目的は、前記の微生物を有効菌として含有し、生物農薬（微生物製剤）として使用できる植物病害防除剤、線虫防除剤及び植物成長促進剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意検討を重ねた結果、Bacillus sp. ITB090（NITE BP-01725）、Bacillus sp. ITB100（NITE BP-01726）、Bacillus sp. ITB105（NITE BP-01727）、およびBacillus sp. ITB117株（NITE P-01728）（以下、これらの微生物をその変異体も含めて本発明の微生物と呼ぶことがある）の分離に成功し、これらは複数種の植物病害の防除作用、線虫防除作用及び植物成長促進作用を有することを見出し、それに基づいて本発明を完成するに至った。【００１４】
すなわち、本発明は以下を包含する。
［１］Bacillus sp. ITB090株（NITE BP-01725）、Bacillus sp. ITB100株（NITE BP-01726）、およびBacillus sp. ITB105株（NITE BP-01727）からなる群より選択される微生物またはそれらの株から誘導される変異株。
［２］Bacillus sp. ITB090株（NITE BP-01725）は配列番号１の塩基配列で示される16S rDNAを有し、Bacillus sp. ITB090株（NITE BP-01725）の変異株は配列番号１の塩基配列と99.5％以上の同一性を有する塩基配列で示される16S rDNAを有し、Bacillus sp. ITB100株（NITE BP-01726）は配列番号２の塩基配列で示される16S rDNAを有し、Bacillus sp. ITB100株（NITE BP-01726）の変異株は配列番号２の塩基配列と99.5％以上の同一性を有する塩基配列で示される16S rDNAを有し、Bacillus sp. ITB105株（NITE BP-01727）は配列番号３の塩基配列で示される16S rDNAを有し、Bacillus sp. ITB105株（NITE BP-01727）の変異株は配列番号３の塩基配列と99.5％以上の同一性を有する塩基配列で示される16S rDNAを有する、［１］に記載の微生物またはそれらの株から誘導される変異株。
［３］［１］または［２］に記載の微生物もしくはその変異株の菌体またはその培養物。
［４］［１］または［２］に記載の微生物もしくはその変異株あるいは［３］に記載の菌体またはその培養物を含有する、微生物製剤。
［５］植物成長促進剤である［４］に記載の微生物製剤。
［６］植物病害防除剤である［４］に記載の微生物製剤。
［７］線虫防除剤である［４］に記載の微生物製剤。
［８］［３］に記載の菌体またはその培養物あるいは［５］に記載の微生物製剤で植物または土壌を処理する工程を含む、植物成長促進方法。
［９］［３］に記載の菌体またはその培養物あるいは［６］に記載の微生物製剤で植物または土壌を処理する工程を含む、植物病害防除方法。
［１０］［３］に記載の菌体またはその培養物あるいは［７］に記載の微生物製剤で植物または土壌を処理する工程を含む、線虫防除方法。
［１１］［３］に記載の菌体またはその培養物あるいは［４］〜［７］のいずれかに記載の微生物製剤で植物を処理する工程を含む、植物の栽培方法。
【発明の効果】
【００１５】
本発明の微生物は、複数種の植物病害の防除作用、線虫防除作用、及び植物の成長促進作用を有するので、化学農薬および化学肥料に頼らない、環境負荷が少ない有効な微生物製剤として使用できる。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下、本発明を詳細に説明する。本発明の微生物は、ITB090株（NITE BP-01725）、ITB100株（NITE BP-01726）、ITB105株（NITE BP-01727）、ITB117株（NITE P-01728）またはこれらの変異株である。
【００１７】
ITB090株（NITE BP-01725）は、16SrRNA遺伝子の配列解析（配列番号１）に基づき、Bacillus sp.として同定された。この株は、２０１３年１０月１７日に独立行政法人 製品評価技術基盤機構 生物資源センターNBRC (Biological Resource Center, NITE)（日本国千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8）に、受託番号NITE P-01725で寄託され、その後、ブダペスト条約に基づく国際寄託に移管され、受託番号NITE BP-01725が付与されている。
この菌株は以下に示す細菌学的性質を有する。
（１）形態学的性質
形態：  桿菌
大きさ：幅１．０μｍ、長さ１．５〜２．５μｍ
運動性：＋
胞子の有無：＋
（２）培養的性質
培地：ニュートリエント・アガー（nutrient agar）培地（３０℃）
形：円形
色調：クリーム色
（３）生理学的性質
グラム染色：＋
【００１８】
ITB100株（NITE BP-01726）は、16SrRNA遺伝子の配列解析（配列番号２）に基づき、Bacillus sp.として同定された。この株は、２０１３年１０月１７日に独立行政法人 製品評価技術基盤機構 生物資源センターNBRC (Biological Resource Center, NITE)（日本国千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8）に、受託番号NITE P-01726で寄託され、その後、ブダペスト条約に基づく国際寄託に移管され、受託番号NITE BP-01726が付与されている。
この菌株は以下に示す細菌学的性質を有する。
（１）形態学的性質    形態：  桿菌
大きさ：幅０．８〜０．９μｍ、長さ１．５〜２．０μｍ
運動性：＋
胞子の有無：＋
（２）培養的性質
培地：ニュートリエント・アガー（nutrient agar）培地（３０℃）
形：円形
色調：クリーム色
（３）生理学的性質
グラム染色：＋
【００１９】
ITB105株（NITE BP-01727）は、16SrRNA遺伝子の配列解析（配列番号３）に基づき、Bacillus sp.として同定された。この株は、２０１３年１０月１７日に独立行政法人 製品評価技術基盤機構 生物資源センターNBRC (Biological Resource Center, NITE)（日本国千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8）に、受託番号NITE P-01727で寄託され、その後、ブダペスト条約に基づく国際寄託に移管され、受託番号NITE BP-01727が付与されている。
この菌株は以下に示す細菌学的性質を有する。
（１）形態学的性質
形態：  桿菌
大きさ：幅０．８〜０．９μｍ、長さ１．５〜２．０μｍ
運動性：＋
胞子の有無：＋
（２）培養的性質
培地：ニュートリエント・アガー（nutrient agar）培地（３０℃）
形：円形
色調：クリーム色
（３）生理学的性質
グラム染色：＋
【００２０】
ITB117株（NITE P-01728）は、16SrRNA遺伝子の配列解析（配列番号４）に基づき、Bacillus sp.として同定された。この株は、２０１３年１０月１７日に独立行政法人 製品評価技術基盤機構 生物資源センターNBRC (Biological Resource Center, NITE)（日本国千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8）に、受託番号NITE P-01728で寄託された。
この菌株は以下に示す細菌学的性質を有する。
（１）形態学的性質
形態：  桿菌
大きさ：幅０．８〜０．９μｍ、長さ１．５〜２．５μｍ
運動性：＋
胞子の有無：＋
（２）培養的性質
培地：ニュートリエント・アガー（nutrient agar）培地（３０℃）
形：円形
色調：クリーム色
（３）生理学的性質
グラム染色：＋
【００２１】
ITB090（NITE BP-01725）、ITB100（NITE BP-01726）、ITB105（NITE BP-01727）、ITB117株（NITE P-01728）より誘導される変異株とは、例えば、これらの自然突然変異体、紫外線照射、Ｘ線照射、変異誘発剤（例えば、Ｎ−メチル−Ｎ−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンなど）などを用いた突然変異誘発処理体、倍数化体が挙げられる。具体的には、16S rDNAとの相同性が99.5％以上を保持している変異株が好適に使用可能である。これらの変異株が植物病害の防除作用、線虫防除作用及び植物成長促進作用を保持する限りにおいて、本発明の微生物に含まれる。ここで、植物病害の防除作用、線虫防除作用及び植物成長促進作用を保持するとは、これらのいずれかの作用が、親株と比較して８０％以上であることを意味する。
【００２２】
本発明の微生物の培養方法は固形培地上での静置培養、液体培養等の公知の手段を用いることができ、利用できる培地の種類、培養条件等は本細菌が生存し増殖するものであれば、特に制限されない。例えば、肉エキス培地などの一般的な培地の他、グルコース、ペプトン、イーストエキスを含む培地などが挙げられる。また、液体培地以外に寒天入りの斜面培地及び平板培地等の固形培地を用いてもよい。種菌培養と本培養の二段階に分けて培養してもよい。
培地の炭素源としては、上記菌株が資化し得るあらゆるものが利用可能であるが、具体的にはグルコース、ガラクトース、ラクトース、スクロース、マルトース、麦芽エキス、廃糖蜜、水あめ、澱粉加水分解物などが挙げられる。
培地の窒素源としても、同様に、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、大豆粉、コーンスティープリカーなどの有機窒素含有物をはじめ、該菌株が利用し得る各種の合成または天然物を利用可能である。
また、微生物培養の常法に従って、食塩、リン酸塩などの無機塩類、カルシウム、マグネシウム、鉄などの金属の塩類、ビタミン、アミノ酸などの微量栄養源も必要に応じて添加することができる。
培養は、振とう培養、通気培養などの好気的条件下で行なうことができる。培養温度は２０〜４０℃、好ましくは２５〜３５℃、ｐＨは５〜８、好ましくは６〜７、培養期間は１〜４日、好ましくは２〜３日である。
【００２３】
本発明における「培養物」は、本発明の微生物を培養した後の、菌体を含む培地や培養液、またはそれらの濃縮物が例示される。
【００２４】
本発明の微生物またはその培養物を含む微生物製剤は、例えば、植物病害防除剤、線虫防除剤、および／または植物成長促進剤として使用することができる。
【００２５】
本発明の微生物製剤の適用対象としては、植物が好ましく、具体的には、穀物、例えばイネ、コムギ、トウモロコシ、野菜類、例えばニンジン、キュウリ、ダイコン、カボチャ、レタス、ナス、トマト、キャベツ、ジャガイモ、ハクサイ、シュンギク、コマツナ、ピーマン、ネギ、タマネギ、ショウガ、ニンニク、イチゴ、キノコ類、例えばシイタケ、果樹類、例えばカキ、ナシ、ミカン、ブドウ、リンゴ、モモ、花卉類、例えばキク、チューリップ、バラ、豆類、例えばダイズ、ゴマ、ラッカセイなどが挙げられる。
【００２６】
本発明における「植物病害防除」とは、植物の病害を予防又は治癒する効果を意味する。
ここでいう「植物病害を予防する」とは、土壌病害の場合には、病原菌を含む土壌でそれに感染しうる植物を一定期間栽培した場合に、防除剤を施用しなかった植物の発病度より、防除剤を施用した植物の発病度が低いことをいう。また、茎葉病害の場合には、病原菌を接種してそれに感染しうる植物を一定期間栽培した場合に、防除剤を施用しなかった植物の発病度より、防除剤を施用した植物の発病度が低いことをいう。さらに、「植物病害を治癒する」とは、病害に感染した植物を一定期間栽培した場合に、防除剤を施用した植物の病気の程度が防除剤を施用しなかった植物における病気の程度より低下することをいう。
【００２７】
本発明における「植物の病害」は、本発明の微生物が、防除効果を発揮する植物病害であれば特に制限はないが、病原菌が植物に感染することにより引き起こされる植物の病害が好ましく、茎葉病害および土壌病害がより好ましい。
本発明において防除の対象となる茎葉病害としては、苗立枯病、斑点落葉病、炭疽病、いもち病、灰色かび病、うどんこ病などが挙げられるが、これらに限定されない。
本発明において防除の対象となる土壌病害とは、好ましくは、土壌伝染性病害であり、より詳細には、フザリウム属菌、ゴイマノマイセス属菌、リゾクトニア属菌、ピシウム属菌、バーティシリウム属菌、フィトフトラ属菌、スクレロチウム属菌、コルティシウム属、プラスモディオフォラ属菌、リゾプス属菌、トリコデルマ属菌、ミクロドチウム属菌、スクレロチニア属菌のいずれか１種以上に起因する土壌病害であるが、これらに限定されない。これらの土壌病害の具体例としては、芝ピシウム病害、レタス根腐れ病などが挙げられるが、これらに限定されない。
これらの植物病害に罹る前に植物に適用して病害を予防することが好ましいが、これらの植物病害に罹った植物に適用して病害を除去してもよい。
【００２８】
本発明における「植物の成長促進」とは、本発明の微生物または微生物製剤を、地上液剤散布、地上固形散布、空中液剤散布、空中固形散布、水面施用、施設内施用、土壌混和施用、土壌潅注施用、育苗箱施用法、単花処理、株元処理等の方法で植物を処理すること、または、栽培植物の種子・種イモに表面処理（種子粉衣、浸漬処理、塗布処理等）することで、栽培植物の葉面積の増大、光合成能の増加および葉緑素の増加、地上部の茎葉等の重量および太さの増加、地下部（根等）重量の増加や根の伸長の増大、並びに／または、子実や果実の数および重量の増加が促進され、結果的に農業および園芸における収量増加や品質の改善に繋がる効果のことをいう。
【００２９】
本発明の微生物が防除することができる病害の原因菌として、より具体的には、イネのいもち病菌（Pyricularia oryzae）、ごま葉枯病菌（Cochliobolus miyabeanus）、紋枯病菌（Rhizoctonia solani）、馬鹿苗病菌（Gibberella fujikuroi）、ムギ類のうどんこ病菌（Erysiphe graminis f.sp. hordei, Erysiphe graminis f.sp. tritici）、さび病菌（Puccinia striiformis, Puccinia graminis, Puccinia recondita f.sp. tritici, Puccinia hordei）、赤かび病菌（Gibberella zeae）、網斑病菌（Pyrenophorateres）、雪腐病菌（Typhula incarnata, Typhula ishikariensis, Sclerotiniaborealis, Micronectriella nivalis）、裸黒穂病菌（Ustilago nuda）、なまぐさ黒穂病菌（Tilletia caries, Tilletia toetida）、眼紋病菌（Tapesia yallundea）、雲形病菌（Phynchosporium secalis f.sp. hordei）、葉枯病菌（Septoria tritici）、ふ枯病菌（Lentosphaeria nodorum）、カンキツの黒点病菌（Diaporthe citri）、そうか病菌（Elsinoe fawcettii）、褐色腐敗病菌（Phytophthora citrophthora）、緑かび病菌（Penicillium digitatum）、青かび病菌（Penicillium italicum）、リンゴのモニリア病菌（Monilinia mali）、腐らん病菌（Valsa ceratosperma）、うどんこ病菌（Podosphaera leucotricha）、斑点落葉病菌（Alternaria alternataapple pathotype）、黒星病菌（Venturia inaequalis）、赤星病菌（Gymnosporangium yamadae）、輪紋病菌（Botriophaeria berengeriana f.sp. piricola）、すす点病菌（Zygophiala jamaicensis）、すす斑病菌（Gloeodes pomigena）、黒点病菌（Mycosphaerella pomi）、炭そ病菌（Glomerella cingulata）、褐斑病菌（Diplocarponmali）、ナシの黒星病菌（Venturia nashicola）、黒斑病菌（Alternaria alternatajapanese pear pathotype）、輪紋病菌（Physalospora piricola）、赤星病菌（Gymnosporangium asiaticum）、モモの灰星病菌(Monilinia fructicola）、黒星病菌（Cladosporium carpophilum）、フォモプシス腐敗病菌（Phomopsis sp.）、ブドウの褐斑病菌（Pseudocercospora vitis）、輪紋病菌（Marssonina viticola）、黒とう病菌（Elsinoe ampelina）、晩腐病菌（Glomerella cingulata）、うどんこ病菌（Uncinula necator）、さび病菌（Phakopsora ampelopsidis）、枝膨病菌（Phomopsis sp.）、カキのうどんこ病菌（Phyllactinia kakicola）、炭そ病菌（Colletotrichum gloeosporioides）、角斑落葉病菌（Cercospora kaki）、丸星落葉病菌（Mycosphaerella nawae）、ウメの黒星病菌（Cladosporium carpophilum）、オウトウの灰星病菌（Monilinia fructicola）、ウリ類のうどんこ病菌（Sphaerotheca fuliginea）、つる枯病菌（Didymella bryoniae）、炭そ病菌（Colletotorichum legenarium）、トマト輪紋病菌（Alternaria solani）、葉かび病菌（Cladosporium fulvum）、ナスの褐紋病菌（Phomopsis vexans）、うどんこ病菌（Erysiphe cichoracearum）、アブラナ科野菜の黒斑病菌（Alternaria japonica, Alternaria bracicae, Alternaria brassicicola）、白斑病菌（Cercosporella brassicae）、ネギのさび病菌（Pucciniaallii）、ショウガの根茎腐敗病菌（Pyrhium ultimum, Pythium zigiberis）、イチゴのうどんこ病菌（Sphaerotheca humuli）、炭そ病菌（Glomerella cingulata）、ダイズの紫斑病菌（Cercospora kikuchii）、黒とう病菌（Elsinoe glycines）、黒点病菌（Diaporthe phaseolorum var. sojae）、アズキの褐斑病菌（Cercospora canescens）、さび病菌（Uromyces phaseoli var. azukicola）、インゲンの炭そ病菌（Colletotrichum lindemuthianum）、ラッカセイの黒渋病菌（Cercosporidium personatum）、褐斑病菌（Cercospora arachidicola）、そうか病菌（Shaceloma arachidis）、エンドウのうどんこ病菌（Erysiphe pisi）、ジャガイモの夏疫病菌（Alternaria solani）、チャの網もち病菌 (Exobasidium reticulatum）、白星病菌（Elsinoe leucospila）、輪斑病菌���Pestalotiopsis theae, Pestalotiopsis longiseta）、タバコの赤星病菌(Alternaria longipes）、うどんこ病菌（Erysiphe cichoracearum）、炭そ病菌（Colletotrichum gloeosporioides）、テンサイの褐斑病菌（Cercospora beticola）、シバのカーブラリア葉枯病菌（Curvularia geniculata）、疑似葉枯病菌（Ceratobasidium spp.）、バラの黒星病菌（Diplocarpon rosae）、うどんこ病菌（Shaerotheca pannosa）、キクの褐斑病菌（Septoria obesa）、白さび病菌（Puccinia horiana）、種々の作物の灰色かび病菌（Botrytis cinerea）、菌核病菌（Sclerotinia sclerotiorum）等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００３０】
本発明の微生物が防除することができる線虫として、特に植物寄生性線虫、例えば、ネコブセンチュウ類のMeloidogyne hapla、Meloidogyne incognita、Meloidogyne javanica、及び他のMeloidogyne種；シスト形成センチュウ類のGlobodera rostochiensis及び他のGlobodera種；Heterodera avenae、Heterodera glycines、Heterodera schachtii、Heterodera trifolii、及び他のHeterodera種；種子えい瘤センチュウ類のAnguina種；クキ及びハセンチュウ類のAphelenchoides種；刺毛センチュウ類のBelonolaimus longicaudatus及び他のBelonolaimus種；マツセンチュウ類のBursaphelenchus xylophilus及び他のBursaphelenchus種；ワセンチュウ類のCriconema種、Criconemella種、Criconemoides種、Mesocriconema種；クキ及びリンケイセンチュウ類のDitylenchus destructor、Ditylenchus dipsaci、及び他のDitylenchus種；突錐センチュウ類(awl nematodes)類のDolichodorus種；ラセンセンチュウ類のHeliocotylenchus multicinctus及び他のHelicotylenchus種；鞘及び鞘様センチュウ類(sheath and sheathoid nematodes)のHemicycliophora種及びHemicriconemoides種；Hirshmanniella種；ヤリセンチュウ類のHoploaimus種；ニセネコブセンチュウ類のNacobbus種；ハリセンチュウ類のLongidorus elongatus及び他のLongidorus種；ネグサレセンチュウ類のPratylenchus neglectus、Pratylenchus penetrans、Pratylenchus curvitatus、Pratylenchus goodeyi、及び他のPratylenchus種；ネモグリセンチュウ類のRadopholus similis及び他のRadopholus種；ニセフクロセンチュウ類のRotylenchus robustus及び他のRotylenchus種；Scutellonema種；ユミハリセンチュウ類（stubby root nematodes）のTrichodorus primitivus及び他のTrichodorus種、Paratrichodorus種；イシュクセンチュウ類のTylenchorhynchus claytoni、Tylenchorhynchus dubius、及び他のTylenchorhynchus種；ミカンセンチュウ類のTylenchulus種；オオハリセンチュウ類のXiphinema種等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
これらの線虫が植物に付着する前に植物に適用して病害を予防することが好ましいが、これらの線虫が付着した植物に適用して線虫を除去してもよい。
【００３１】
本発明の微生物製剤（植物病害防除剤、線虫防除剤及び植物成長促進剤）は、菌体及び／または培養物を単独で用いる他、不活性な液体または固体の担体で希釈し、必要に応じて界面活性剤、分散剤、その他の補助剤を加えた薬剤として用いてもよい。具体的な製剤例としては、粒剤、粉剤、水和剤、懸濁製剤、乳剤等の剤型等が挙げられる。
【００３２】
担体としては、例えば、タルク、ベントナイト、カオリン、クレー、珪藻士、ホワイトカーボン、バーミキュライト、消石灰、硫安、珪砂、尿素、多孔質な固体担体、水、イソプロピルアルコール、メチルナフタレン、キシレン、シクロヘキサノン、アルキレングリコールなどの液体担体等が挙げられる。界面活性剤及び分散剤としては、例えばジナフチルメタンスルホン酸塩、アルコール硫酸エステル塩、リグニンスルホン酸塩、アルキルアリールスルホン酸塩、ポリオキシエチレングリコールエーテル、ポリオキシエチレンソルビタンモノアルキレート、ポリオキシエチレンアルキルアリールエーテル等があげられる。補助剤としては、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、アラビアゴム、キサンタンガム等、保護剤としてはスキムミルク、ｐＨ緩衝剤等が挙げられる。この場合、菌株の生菌体の量及び／またはその培養物の量、さらには適用時期及び適用量は上記生菌の場合に準じて適宜決定することができる。
液体担体としては、例えば、リン酸緩衝液、炭酸緩衝液、生理食塩水等が挙げられる。また、固体担体としては、例えば、カオリン、粘土、タルク、チョーク、石英、アタパルジャイト、モンモリロナイト、珪藻土等の天然鉱物粉末、ケイ酸、アルミナ、ケイ酸塩等の合成鉱物粉末、結晶性セルロース、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸等の高分子性天然物が挙げられる。また、界面活性剤としては、例えば、ポリオキシエチレン−脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン−脂肪アルコールエーテル、アルキルアリールポリグリコールエーテル、アルキルスルホネート、アルキルサルフェート、アリールスルフォネート等が挙げられる。補助剤としては、例えば、カルボキシメチルセルロース、ポリオキシエチレングリコール、アラビアゴム、デンプン、乳糖などが挙げられる。
【００３３】
また、水系溶媒を担体とする液剤として製造する場合、溶媒中での菌体の水和性を向上させるために、水溶性高分子を添加することもできる。水溶性高分子としては、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール、ポリビニルメチルエーテル、ポリビニルアミン、ポリビニルピロリドン、ポリエチレンイミン、ポリアクリルアミドなどが挙げられる。さらに、本発明の微生物の植物の根部への付着性の向上、および製剤中での本発明の微生物の安定性の向上を図るために、キシログルカン、グアーガムなどの多糖類を配合することもできる。
【００３４】
本発明の微生物製剤に含まれる本発明の微生物の濃度は、植物病害防除剤、線虫防除剤及び／または植物成長促進剤としての効果を損なわない限り特に制限はないが、製剤として１０5〜１０13 cfu/g（コロニー形成単位）、好ましくは１０7〜１０12 cfu/gである。また、用いる本発明の微生物の防除効果や病害の程度等に応じて適宜変更することができる。
また、本発明の微生物製剤は、上記の物質の他に、本発明の効果を妨げない限り、本発明の微生物の培養に用いた培地等の任意の物質を含んでいてもよい。
【００３５】
本発明の微生物製剤の使用方法については、特に制限はないが、剤型等の使用形態、作物や病害によって適宜選択され、例えば、地上液剤散布、地上固形散布、空中液剤散布、空中固形散布、水面施用、施設内施用、土壌混和施用、土壌潅注施用、表面処理（種子粉衣、塗布処理等）育苗箱施用法、単花処理、株元処理等の方法を挙げることができるが、好ましくは、各種剤型の微生物製剤を栽培植物の種子・種イモにコートする、栽培植物の花に単花処理する、栽培植物の茎葉に処理する、栽培植物の傷口箇所、剪定部に塗布処理する、土壌潅注する、土壌混和する等の方法が挙げられる。ここで、土壌に施用する場合は、本発明の微生物製剤を土壌に施用してから栽培植物を植えてもよく、また、栽培植物を土壌に植えた後で本発明の微生物製剤をその土壌に施用してもよい。
本発明の微生物製剤は、好ましくは、茎葉病害を防除するために、茎葉に噴霧される。本発明の微生物製剤は、好ましくは、土壌病害を防除するために、噴霧または潅注される。
【００３６】
本発明の微生物製剤（植物病害防除剤、線虫防除剤及び植物成長促進剤）は、必要に応じて本発明の有効成分以外の有効成分、例えば殺虫剤、他の殺菌剤、除草剤、植物生長調節剤、肥料等を含むことができる。
【００３７】
殺菌剤成分としては、例えば、ビテルタノール、ブロムコナゾール、シプロコナゾール、ジフェノコナゾール、ジニコナゾール、エニルコナゾール、エポキシコナゾール、フルキンコナゾール、フェンブコナゾール、フルシラゾール、フルトリアホール、ヘキサコナゾール、イミベンコナゾール、イプコナゾール、メトコナゾール、ミクロブタニル、ペンコナゾール、プロピコナゾール、プロチオコナゾール、シメコナゾール、トリアジメホン、トリアジメノール、テブコナゾール、テトラコナゾール、トリチコナゾール、プロクロラズ、ペフラゾエート、イマザリル、トリフルミゾール、シアゾファミド、ベノミル、カルベンダジム、チアベンダゾール、フベリダゾール、エタボキサム、エトリジアゾール、オキスポコナゾールフマル酸、ヒメキサゾール、アゾキシストロビン、ジモキシストロビン、エネストロブリン、フルオキサストロビン、クレソキシムメチル、メトミノストロビン、オリザストロビン、ピコキシストロビン、ピラクロストロビン、トリフロキシストロビン、カルボキシン、ベナラキシル、ボスカリド、ビキサフェン、フェンヘキサミド、フルトラニル、フラメトピル、メプロニル、メタラキシル、メフェノキサム、オフラセ、オキサジキシル、オキシカルボキシン、ペンチオピラド、チフルザミド、チアジニル、ジメトモルフ、フルモルフ、フルメトベル、フルオピコリド、カルプロパミド、ジクロシメット、マンジプロパミド、フルアジナム、ピリフェノックス、ブピリメート、シプロジニル、フェナリモル、フェリムゾン、メパニピリム、ヌアリモール、ピリメタニル、トリホリン、フェンピクロニル、フルジオキソニル、アルジモルフ、ドデモルフ、フェンプロピモルフ、トリデモルフ、フェンプロピジン、イプロジオン、プロシミドン、ビンクロゾリン、ファモキサドン、フェナミドン、オクチリノン、プロベナゾール、アニラジン、ジクロメジン、ピロキロン、プロキナジド、トリシクラゾール、カプタホル、キャブタン、ダゾメット、ホルペット、フェノキサニル、キノキシフェン、アミスルブロム、マンゼブ、マンネブ、メタム、メチラム、ファーバム、プロピネブ、チウラム、ジネブ、ジラム、ジエトフェンカルブ、イプロバリカルブ、ベンチアバリカルブイソプロピル、プロパモカルブ塩酸塩、チオファネートメチル、ピリベンカルブ、ボルドー液、塩基性塩化銅、塩基性硫酸銅、水酸化第二銅、８−ヒドロキシキノリン銅、ドジン、イミノクタジンアルベシル酸塩、イミノクタジン酢酸塩、グアザチン、カスガマイシン、ストレプトマイシン、ポリオキシン、オキシテトラサイクリン、バリダマイシンＡ、ビナパクリル、ジノカップ、ジノブトン、ジチアノン、イソプロチオラン、エジフェンホス、イプロベンホス、ホセチル、ホセチルアルミニウム、ピラゾホス、トルクロホスメチル、クロロタロニル、ジクロフルアニド、フルスルファミド、ヘキサクロロベンゼン、フサライド、ペンシクロン、キントゼン、シフルフェナミド、シモキサニル、ジメチリモール、エチリモール、フララキシル、メトラフェノン、スピロキサミン、アンバム、硫黄、石灰硫黄合剤、エクロメゾール、炭酸水素カリウム、炭酸水素カルシウム、チアジアジン、テクロフタラム、トリアジン、ノニルフェノールスルホン酸銅、ヒドロキシイソキサゾール、フルオルイミド、ポリカ一バメート、メタスルホカルブ、ＥＤＤＰ、ＩＢＰ、トルフェンピラド、フルオピラム、イソチアニル、及びイソピラザムが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００３８】
殺虫剤成分としては、例えば、アセタミプリド、ピメトロジン、フェニトロチオン、アセフェート、カルバリル、メソミル、カルタップ、シハロトリン、エトフェンプロックス、テフルベンズロン、フルベンジアミド、フルフェノクスロン、テブフェノジド、フェンピロキシメート、ピリダベン、イミダクロプリド、ブプロフェジン、ＢＰＭＣ、ＭＩＰＣ、マラチオン、メチダチオン、フェンチオン、ダイアジノン、オキシデプロホス、バミドチオン、エチオフェンカルブ、ピリミカーブ、ペルメトリン、シペルメトリン、ビフェントリン、ハルフェンプロックス、シラフルオフェン、ニテンピラム、クロルフルアズロン、メトキシフェノジド、テブフェンピラド、ピリミジフェン、ケルセン、プロパルギット、ヘキシチアゾクス、クロフェンテジン、スピノサド、ミルベメクチン、ＢＴ（バチルス・チューリンゲンシス（Bacillus thuringiensis））、インドキサカルブ、メタフルミゾン、クロルフェナピル、フィプロニル、エトキサゾール、アセキノシル、ピリミホスメチル、アクリナトリン、キノメチオネート、クロルピリホス、アバメクチン、エマメクチン安息香酸塩、酸化フェンブタスズ、テルブホス、エトプロホス、カズサホス、フェナミフォス、フェンスルフォチオン、ＤＳＰ、ジクロフェンチオン、ホスチアゼート、オキサミル、イサミドホス、ホスチエタン、イサゾホス、チオナジン、ベンフラカルブ、スピロジクロフェン、エチオフェンカルブ、アジンホスメチル、ジスルホトン、メチオカルブ、オキシジメトン・メチル、パラチオン、シフルトリン、ベータ・シフルトリン、テブピリムホス、スピロメシフェン、エンドスルファン、アミトラズ、トラロメトリン、アセトプロール、エチプロール、エチオン、トリクロルホン、メタミドホス、ジクロルボス、メビンホス、モノクロトホス、ジメトエート、フォルメタネート、ホルモチオン、メカルバム、チオメトン、ジスルホトン、ナレッド、メチルパラチオン、シアノホス、ジアミダホス、アルベンダゾール、オキシベンダゾール、フェンベンダゾール、オクスフェンダゾール、プロパホス、スルプロホス、プロチオホス、プロフェノホス、イソフェンホス、テメホス、フェントエート、ジメチルビンホス、クロルフェビンホス、テトラクロルビンホス、ホキシム、インキサチオン、ピラクロホス、クロルピリホス、ピリダフェンチオン、ホサロン、ホスメット、ジオキサベンゾホス、キナルホス、ピレトリン、アレスリン、プラレトリン、レスメトリン、ペルメトリン、テフルトリン、フェンプロパトリン、アルファシペルメトリン、ラムダ・シハルトリン、デルタメトリン、フェンバレレート、エスフェンバレレート、フルシトリネート、フルバリネート、シクロプロトリン、チオジカルブ、アルジカルブ、アラニカルブ、メトルカルブ、キシリカルブ、プロポキスル、フェノキシカルブ、フェノチオカルブ、ビフェナゼート、カルボフラン、カルボスルファン、硫黄、ピリフルキナゾン、フラチオカルブ、ジアフェンチウロン、ジフルベンズロン、ヘキサフルムロン、ノバルロン、ルフェヌロン、クロルフルアズロン、水酸化トリシクロヘキシルスズ、オレイン酸ナトリウム、オレイン酸カリウム、メトプレン、ハイドロプレン、ビナパクリル、アミトラズ、��ロルベンジレート、フェニソブロモレート、テトラジホン、ベンスルタップ、ベンゾメート、クロマフェノジド、ハロフェノジド、エンドスルファン、ジオフェノラン、トルフェンピラド、トリアザメート、硫酸ニコチン、チアクロプリド、チアメトキサム、クロチアニジン、ジノテフラン、フルアジナム、ピリプロキシフェン、フルアクリピリム、ヒドラメチルノン、シロマジン、ＴＰＩＣ、チオシクラム、フェナザキン、ポリナクチン複合体、アザディラクチン、ロテノン、ヒドロキシプロピルデンプン、メスルフェンホス、ホスホカルブ、イソアミドホス、アルドキシカルブ、メタム・ナトリウム、酒石酸モランテル、ダゾメット、塩酸レバミゾール、トリクラミド、トルフェンピラド、ピリダリル、クロラントラニリプロール、シエノピラフェン、及びシフルメトフェンが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【実施例】
【００３９】
以下、実施例を用いて本発明をさらに具体的に説明する。但し、本発明の技術的範囲はこれら実施例に限定されるものではない。【００４０】
日本国内より採取された植物根を含む土壌より微生物を単離した。具体的には、採取した土壌を熱処理（８０℃、１０分間）することにより得られた乾燥土壌１ｇを滅菌水で懸濁した。その懸濁液を１０2〜１０4倍に希釈し、普通ブイヨン培地（栄研化学（株））で分離培養（２８℃、３日間）を行ない、形成したコロニーを分離した。分離したコロニーを、ポテト−デキストロース寒天培地上で、各種植物病原菌に対して効果のある菌株を見出した。その結果、四種類の微生物が得られ、それぞれ、ITB090（NITE BP-01725）、ITB100（NITE BP-01726）、ITB105（NITE BP-01727）、ITB117（NITE P-01728）と名付けた。これらの微生物について16SrRNA遺伝子の配列を解析し、系統分析を行ったところ、いずれもBacillus sp.に同定された。
これらの微生物について、以下の手順にて、植物病害防除活性、殺線虫活性および植物に対する成長促進効果について評価を行った。【００４１】
実施例１
植物病害防除効果  in vitro試験
（１）各種細菌の培養方法
ITB090（NITE BP-01725）、ITB100（NITE BP-01726）、ITB105（NITE BP-01727）、ITB117（NITE P-01728）株について、それぞれの保存菌の一白金耳をフラスコ当たり６０ｍｌの普通ブイヨン培地（栄研化学（株））を含むバッフル付き５００ｍｌ三角フラスコに植菌後、回転振とう機で回転数１８０ｒｐｍ、２８℃、２日間培養した。得られた培養液を滅菌水にて５×１０7 cfu/mLとなるように希釈して、対峙培養に供試した。【００４２】
（２）対峙培養方法  ポテト−デキストロース寒天培地が入っているシャーレの端に、上記の希釈された培養液を２０μｌずつ接種した。さらに、あらかじめ培養しておいた各種植物病原菌(苗立ち枯れ病：Rhizoctonia solani、 斑点落葉病：Alternaria mali、たんそ病：Glomerella  cingulata、いもち病：Pyricularia oryzaeおよび灰色カビ病：Botrytis cinerea)について、菌糸を直径５ｍｍのコルクボーラーで培地ごとくり抜き、同じシャーレの中央に接種した。シャーレを２５℃で２〜５日間培養し、各種病原菌に対する、拮抗作用もしくは阻止帯の形成を観察した。【００４３】
（３）調査方法
各種病原菌に対して、拮抗作用もしくは阻止帯の形成が観察された場合「＋」、観察されなった場合を「−」とした。【００４４】
（４）結果
調査結果を表１に示す。本発明の新規菌株はともに供試した病原菌に対して防除活性を有していることが分かった。【００４５】
【表１】
0006469016.tif 000002
【００４６】
実施例２
キュウリ灰色かび病(Botrytis cinerea)に対する防除効果試験
（１）各種細菌の培養方法
ITB090（NITE BP-01725）、ITB100（NITE BP-01726）、ITB105（NITE BP-01727）、ITB117（NITE P-01728）株について、それぞれの保存菌の一白金耳をフラスコ当たり６０ｍｌの普通ブイヨン培地（栄研化学（株））を含むバッフル付き５００ｍｌ三角フラスコに植菌後、回転振とう機で回転数１８０ｒｐｍ、２８℃、２日間培養した。得られた培養液を滅菌水にて５×１０7 cfu/mLとなるように希釈して、後の試験に供試した。対照としてバチルス・ズブチリス（Bacillus subtilis）MBI600（ボトキラー水和剤（出光興産株式会社）から購入し分離）を同様に培養した。【００４７】
（２）処理方法
完全展開したキュウリ子葉（ときわ光3号P型）を胚軸部分で切り取り、湿らせたペーパータオルに切り口を接触させた。接種菌はPSA培地で培養した灰色かび病の胞子をPS培地5mLに懸濁して調製した。子葉の中心部に灰色かび病菌胞子懸濁液を50μL滴下した。滴下により形成された水滴にPAPER DISK（抗生物質検定用ペーパーディスク、厚手8mm 東洋ろ紙）をのせ、供試薬剤（濃度5x107cfu/mLの細胞懸濁液、を50μL滴下し、湿室に入れ25℃下で管理した。【００４８】
（３）調査方法
接種後3日目にキュウリ葉上に現れた病斑面積を調査し、下記の式（１）にて防除価を求めた。
防除価＝｛1-（処理区の病斑面積/無処理区の病斑面積）｝×100・・・式（１）【００４９】
【表２】
0006469016.tif 000003
【００５０】
結果は表２に示すように、本発明に関わる微生物を処理することにより、Botrytis cinereaによるキュウリ灰色かび病の発病率が無処理区に比べて著しく減少し、バチルス・ズブチリス MBI600株に比べて極めて高い防除効果が得られた。【００５１】
実施例３
線虫防除効果
（１）各種細菌の培養方法
ITB090（NITE BP-01725）、ITB100（NITE BP-01726）、ITB105（NITE BP-01727）、ITB117（NITE P-01728）株について、それぞれの保存菌の一白金耳をフラスコ当たり６０ｍｌの普通ブイヨン培地（栄研化学（株））を含むバッフル付き５００ｍｌ三角フラスコに植菌後、回転振とう機で回転数１８０ｒｐｍ、２８℃、２日間培養した。得られた培養液を滅菌水にて５×１０7 cfu/mLとなるように希釈して試験に供試した。
対照区としてバチルス・ズブチリス MBI600株（ボトキラー水和剤（出光興産株式会社）から購入し分離）を同様に培養し試験に供試した。【００５２】
（２）殺線虫活性試験方法
トマトの根より採集した卵嚢より２４時間以内に孵化したサツマイモネコブセンチュウ２期幼虫に対する殺線虫活性を試験した。マイクロプレートに各種菌の希釈培養液及び当量のネコブセンチュウ２期幼虫懸濁液（約５０頭）を添加した。比較剤としてバチルス・ズブチリス MBI600株（ボトキラー水和剤（出光興産株式会社）から購入し分離）を同様に希釈したものを供試した。プレートを密封して、２８℃、相対湿度約５０％のインキュベーター内に配置した。【００５３】
（３）調査方法
７２時間後に、実体顕微鏡下での観察により線虫の死亡率を調べた。その際、不動の線虫は死亡したものとみなした。殺線虫率は以下の式（２）により算出した。
殺線虫率（％）＝（死亡線虫数÷供試線虫数）×１００・・・式（２）【００５４】
（４）結果
表３に示すように、本発明に関わる微生物を処理することにより、サツマイモネコブセンチュウ２期幼虫に対して、バチルス・ズブチリス MBI600株に比べて極めて高い殺線虫活性が得られた。【００５５】
【表３】
0006469016.tif 000004
【００５６】
実施例４
サツマイモネコブセンチュウに対する防除効果試験
（１）各種細菌の培養方法
ITB090（NITE BP-01725）、ITB100（NITE BP-01726）、ITB105（NITE BP-01727）、ITB117（NITE P-01728）株について、それぞれの保存菌の一白金耳をフラスコ当たり６０ｍｌの普通ブイヨン培地（栄研化学（株））を含むバッフル付き５００ｍｌ三角フラスコに植菌後、回転振とう機で回転数１８０ｒｐｍ、２８℃、２日間培養した。得られた培養液を滅菌水にて５×１０7 cfu/mLとなるように希釈して、後の試験に供試した。対照としてバチルス・ズブチリス（Bacillus subtilis）MBI600株（ボトキラー水和剤（出光興産株式会社）から購入し分離）を同様に培養した。【００５７】
（２）処理方法
得られた培養液を滅菌水にて１×１０7 cfu/mLとなるように希釈した液にキュウリ種子（ときわ光3号P型）を30分間浸漬した後、ネコブセンチュウの密度が約３．３頭／乾土２０gになるようにネコブセンチュウ汚染土壌を充てんした１／１００００ａワグネルポットに播種した。【００５８】
（３）調査方法
定植１ヵ月後に根の被害度（ネコブ程度）をZeck（Zeck,W.M.(1971):Pflanzenschutz-Nachichten. Bayer AG, 24, 141-144.）の方法に従い、以下の階級値によって根こぶ着生程度を評価した。
０：根こぶが全く認められない。
１：注意深い観察によって、数個の小さな根こぶを認めることができる。
２：１と同様の数個の小さな根こぶがが容易に確認できる。
３：多くの小さな根こぶがあり、そのいくつかは融合している。根の機能はほとんど損なわれていない。
４：多数の小さな根こぶがあり、大きな根こぶもいくつかある。根の多くは機能している。
５：根の２５％に著しく根こぶが着生し、機能していない。
６：根の５０％に著しく根こぶが着生し、機能していない。
７：根の７５％に著しく根こぶが着生し、根の再生能力も失われている。
８：健全な根は皆無であり、植物の養分吸収は阻害されている。茎葉部はまだ青い。
９：完全に根こぶに被われた根系が腐敗しつつある。植物は枯死しつつある。
１０：植物も根も枯死。【００５９】
下記の式（３）よりネコブ指数を求めた。
ネコブ指数＝Σ（被害度×個体数）／（全調査個体数×10）×100・・・式（３）
評価した根こぶ着生程度を元に、下記の式（４）により、防除価を算出した。
防除価＝100-（処理区のネコブ指数/無処理区のネコブ指数）×100・・・式（４）【００６０】
【表４】
0006469016.tif 000005
【００６１】
結果は表４に示すように、本発明に関わる微生物を処理することにより、サツマイモネコブセンチュウによるネコブ指数が無処理区に比べて著しく減少し、バチルス・ズブチリス MBI600株に比べて極めて高い防除効果が得られた。【００６２】
実施例５
植物の成長促進効果
（１）各種細菌の培養方法
ITB090（NITE BP-01725）、ITB100（NITE BP-01726）、ITB105（NITE BP-01727）、ITB117（NITE P-01728）株について、それぞれの保存菌の一白金耳をフラスコ当たり６０ｍｌの普通ブイヨン培地（栄研化学（株））を含むバッフル付き５００ｍｌ三角フラスコに植菌後、回転振とう機で回転数１８０ｒｐｍ、２８℃、２日間培養した。対照としてバチルス・ズブチリス（Bacillus subtilis）MBI600（ボトキラー水和剤（出光興産株式会社）から購入し分離）を同様に培養した。【００６３】
（２）各菌の処理方法
コムギへの処理方法：
得られた培養液を滅菌水にて１×１０7 cfu/mLとなるように希釈した液にコムギの種子を30分間浸漬した後、育苗培土を充填したポットに播種した。
シロイヌナズナへの処理方法：
育苗培土を充填したポットにシロイヌナズナを播種した後、得られた培養液を滅菌水にて１×１０7 cfu/mLとなるように希釈し、これを５mL潅注処理した。
トウモロコシへの処理方法：
得られた培養液とトウモロコシの種子を種子重量１g当たり１×１０8cfuになるように混和し、各培養液を種子に塗沫した。処理した種子は、育苗培土を充填したポットに播種した。
ダイズへの処理方法：
得られた培養液とダイズの種子を種子重量１g当たり１×１０7 cfuになるように混和し、各培養液を種子に塗沫した。処理した種子は、育苗培土を充填したポットに播種した。【００６４】
（３）調査方法
コムギ：播種後3週間後に個体当りの地上部重量を測定した。
シロイヌナズナ：播種後3週間後に個体当りの葉面積を測定した。
トウモロコシ：播種後4週間後に個体当りの地上部重量を測定した。
ダイズ：播種後4週間後に個体当りの地上部重量を測定した。
それぞれ、無処理区に対して増加量を算出した。【００６５】
（４）結果
以下の表５に結果を示す。どの植物体においても各菌株を処理することで無処理区と比べて、植物の生育が著しく促進され、バチルス・ズブチリス MBI600株に比べて極めて高い生育促進効果を示した。【００６６】
【表５−１】
0006469016.tif 000006
【００６７】
【表５−２】
0006469016.tif 000007
【００６８】
【表５−３】
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【００６９】
【表５−４】
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【配列表】
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