(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化３】
0006456393.tif 000026
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩であって、ここで、Ｗ１−４およびＲ１−３はそれぞれ独立に水素およびＣ１−３アルキル基から選択され、そしてここで、Ｒ１およびＲ２のうちの少なくとも１つは水素ではないか、または、ここで、Ｒ２およびＲ３は、一緒になって−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−である、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２】
Ｗ１−４のそれぞれは水素である、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項３】
前記化合物が
【化４】
0006456393.tif 000027
である、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４】
前記化合物が
【化５】
0006456393.tif 000028
である、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項５】
ａ）薬学的に有効な量の請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩と、ｂ）薬学的に許容可能な担体とを含む薬学的組成物。
【請求項６】
デングウイルス感染を治療または予防するための組成物であって、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含み、該組成物はそれを必要とする被験体に投与されることを特徴とする、組成物。
【請求項７】
前記デングウイルス感染が、デング２ウイルスによるものか、またはデング２ウイルスに関連するものである、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記式（Ｉ）の化合物が、
【化６】
0006456393.tif 000029
またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項６に記載の組成物。
【請求項９】
前記被験体が哺乳動物である、請求項６に記載の組成物。
【請求項１０】
前記被験体がヒトである、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
オルソミクソウイルス科に属するウイルスによって引き起こされるか、またはオルソミクソウイルス科に属するウイルスに関連する疾患または状態を治療するための組成物であって、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含み、該組成物はそれを必要とする被験体に投与されることを特徴とする、組成物。
【請求項１２】
前記ウイルスがインフルエンザウイルスである、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記ウイルスがインフルエンザＡウイルスである、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記ウイルスが、Ｈ３Ｎ２サブタイプのインフルエンザＡウイルスである、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記ウイルスが、Ｈ１Ｎ１サブタイプのインフルエンザＡウイルスである、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１６】
前記式（Ｉ）の化合物が、
【化７】
0006456393.tif 000030
またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１７】
前記式（Ｉ）の化合物が、化合物
【化８】
0006456393.tif 000031
またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１８】
前記被験体が哺乳動物である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１９】
前記被験体がヒトである、請求項１８に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般的にイミノ糖およびその使用方法、および特に、Ｎ−置換デオキシノジリマイシン化合物およびそのウイルス感染の治療および／または予防のための使用に関連する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００２】
１つの実施態様は、式（Ｉ）の化合物
【化１】
0006456393.tif 000002
またはその薬学的に許容可能な塩であり、ここでＷ１−４およびＲ１−３はそれぞれ独立に水素およびＣ１−３アルキル基から選択され、そしてここでＲ１−３の少なくとも１つは水素ではない。
【０００３】
さらに別の実施態様は、それを必要とする患者に、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む、オルソミクソウイルス科に属するウイルスによって引き起こされる、またはそれに関連する疾患または状態を治療する方法である。
【０００４】
およびさらに別の実施態様は、それを必要とする患者に、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む、デングウイルスによって引き起こされるか、またはそれに関連する疾患または状態を治療する方法である。
本発明は、例えば、以下を提供する。
（項目１）
式（Ｉ）
【化３】
0006456393.tif 000003
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩であって、ここで、Ｗ１−４およびＲ１−３はそれぞれ独立に水素およびＣ１−３アルキル基から選択され、そしてここで、Ｒ１−３のうちの少なくとも１つは水素ではない、化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
（項目２）
Ｗ１−４のそれぞれは水素である、項目１に記載の化合物。
（項目３）
式
【化４】
0006456393.tif 000004
を有する項目１に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
（項目４）
式
【化５】
0006456393.tif 000005
を有する項目１に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
（項目５）
ａ）薬学的に有効な量の項目１に記載の化合物と、ｂ）薬学的に許容可能な担体とを含む薬学的組成物。
（項目６）
デングウイルス感染を治療または予防する方法であって、それを必要とする被験体に、項目１に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を投与する工程を含む、方法。
（項目７）
前記デングウイルス感染が、デング２ウイルスによるものか、またはデング２ウイルスに関連するものである、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記化合物が、式
【化６】
0006456393.tif 000006
を有する化合物またはその薬学的に許容可能な塩である、項目５に記載の方法。
（項目９）
前記被験体が哺乳動物である、項目５に記載の方法。
（項目１０）
前記被験体がヒトである、項目９に記載の方法。
（項目１１）
オルソミクソウイルス科に属するウイルスによって引き起こされるか、またはオルソミクソウイルス科に属するウイルスに関連する疾患または状態を治療する方法であって、それを必要とする被験体に、項目１に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を投与する工程を含む、方法。
（項目１２）
前記ウイルスがインフルエンザウイルスである、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記ウイルスがインフルエンザＡウイルスである、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
前記ウイルスが、Ｈ３Ｎ２サブタイプのインフルエンザＡウイルスである、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
前記ウイルスが、Ｈ１Ｎ１サブタイプのインフルエンザＡウイルスである、項目１３に記載の方法。
（項目１６）
前記化合物が、式
【化７】
0006456393.tif 000007
を有する化合物またはその薬学的に許容可能な塩である、項目１１に記載の方法。
（項目１７）
前記化合物が、
【化８】
0006456393.tif 000008
を有する化合物またはその薬学的に許容可能な塩である、項目１１に記載の方法。
（項目１８）
前記被験体が哺乳動物である、項目１１に記載の方法。
（項目１９）
前記被験体がヒトである、項目１８に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【０００５】
【図１】図１は、治療によってグループ分けした感染マウスの生存率である。マウスのグループ（ｎ＝１０）は、感染の１時間前から始まるＴＩＤ治療を受けた；マウスに、約１ＬＤ９０の用量のインフルエンザを鼻腔内に感染させた。生存率のデータを、感染後の日数に対して、生存パーセントとしてプロットする。グラフは、各グループの動物の生存率を示す。
【０００６】
【図２】図２は、治療によってグループ分けした感染マウスの体重である。マウスのグループ（ｎ＝１０）は、感染の１時間前から始まるＴＩＤ治療を受けた；マウスに、約１ＬＤ９０の用量のインフルエンザを鼻腔内に感染させた。体重のデータを、感染後の日数に対して、もとの体重のパーセントとしてプロットする。
【０００７】
【図３】図３は、治療によってグループ分けした感染マウスの温度である。マウスのグループ（ｎ＝１０）は、感染の１時間前から始まるＴＩＤ治療を受けた；マウスに、約１ＬＤ９０の用量のインフルエンザを鼻腔内に感染させた。温度のデータを、感染後の日数に対して、もとの温度のパーセントとしてプロットする。
【０００８】
【図４】図４は、治療によってグループ分けした感染マウスの健康スコアである。マウスのグループ（ｎ＝１０）は、感染の１時間前から始まるＴＩＤ治療を受けた；マウスに、約１ＬＤ９０の用量のインフルエンザを鼻腔内に感染させた。健康のデータを、感染後の日数に対して、健康スコアとしてプロットする。
【０００９】
【図５】図５は、デングウイルスに対するＵＶ−１２のインビボにおける有効性を示すプロットを示す。
【００１０】
【図６】図６は、治療送達経路によってグループ分けしたマウスの生存率である。マウスのグループ（ｎ＝１０）は、インフルエンザＡ／Ｔｅｘａｓ／３６／９１（Ｈ１Ｎ１）を、約１ＬＤ９０の用量で、鼻腔内感染させる１時間前に、水中の最初の治療用量の化合物を受けた。生存率のデータを、感染後の日数に対して、生存パーセントとしてプロットする。（Ａ）マウスあたり約２０ｇの開始重量と仮定して、１００ｍｇ／ｋｇのＵＶ−４Ｂ、ＵＶ−８、ＵＶ−９、ＵＶ−１０、ＵＶ−１１、およびＵＶ−１２の治療。グラフは、媒体のみのコントロールグループの生存曲線を含む。
【００１１】
【図７】図７は、感染マウスの生存率の統計学的分析である。図６でプロットした生存率データを、Ｍａｎｔｅｌ−ＣｏｘおよびＧｅｈａｎ−Ｂｒｅｓｌｏｗ−Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定を用いて分析した。（Ａ）統計学的分析は、Ｈ２Ｏ媒体コントロールに対して治療グループを比較することによる。統計学的有意性を、＜０．０５のｐ値によって示す。
【００１２】
【図８−１】図８Ａ−Ｆは、体重の分析である。マウスは、インフルエンザＡ／Ｔｅｘａｓ／３６／９１（Ｈ１Ｎ１）を約１ＬＤ９０で鼻腔内感染させる１時間前に、Ｈ２Ｏ中の最初の用量の化合物を受けた。各グループの平均体重を、標準偏差と共に０日目（ベースライン）の体重のパーセントとしてプロットする。（Ａ）ＵＶ−４ＢまたはＵＶ−８による感染マウスの治療、（Ｂ）ＵＶ−４ＢまたはＵＶ−９による感染マウスの治療、（Ｃ）ＵＶ−４ＢまたはＵＶ−１０による感染マウスの治療、（Ｄ）ＵＶ−４ＢまたはＵＶ−１１による感染マウスの治療、（Ｅ）ＵＶ−４ＢまたはＵＶ−１２による感染マウスの治療、および（Ｆ）標準偏差無しの、ＵＶ−８、−９、−１０、−１１、または−１２による未感染マウスの治療。
【図８−２】図８Ａ−Ｆは、体重の分析である。マウスは、インフルエンザＡ／Ｔｅｘａｓ／３６／９１（Ｈ１Ｎ１）を約１ＬＤ９０で鼻腔内感染させる１時間前に、Ｈ２Ｏ中の最初の用量の化合物を受けた。各グループの平均体重を、標準偏差と共に０日目（ベースライン）の体重のパーセントとしてプロットする。（Ａ）ＵＶ−４ＢまたはＵＶ−８による感染マウスの治療、（Ｂ）ＵＶ−４ＢまたはＵＶ−９による感染マウスの治療、（Ｃ）ＵＶ−４ＢまたはＵＶ−１０による感染マウスの治療、（Ｄ）ＵＶ−４ＢまたはＵＶ−１１による感染マウスの治療、（Ｅ）ＵＶ−４ＢまたはＵＶ−１２による感染マウスの治療、および（Ｆ）標準偏差無しの、ＵＶ−８、−９、−１０、−１１、または−１２による未感染マウスの治療。
【００１３】
【図９】図９は、体重データの統計学的分析である。図８でプロットしたインフルエンザ感染マウスの体重データを、媒体コントロールに対する反復測定二元配置ＡＮＯＶＡ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ）を用いて分析した。後の時点の死亡のために、データを感染後（ｐ．ｉ．）７日目までしか分析しなかった。化合物ＵＶ−９、ＵＶ−１０、およびＵＶ−１１は、０％の生存率および＜９日のＭＴＤの両方を有し、そして従ってさらなる統計学的分析から除いた。統計学的有意性を、０．０５より低いｐ値（ｐ＜０．０５）によって示す。
【００１４】
【図１０−１】図１０は、温度の分析である。マウスは、インフルエンザＡ／Ｔｅｘａｓ／３６／９１（Ｈ１Ｎ１）を約１ＬＤ９０の用量で鼻腔内感染させる１時間前に、Ｈ２Ｏ中の最初の用量の化合物を受けた。各グループの平均温度を、標準偏差と共に０日目（ベースライン）の重量のパーセントとしてプロットする。（Ａ）ＵＶ−４ＢまたはＵＶ−８による感染マウスの治療、（Ｂ）ＵＶ−４ＢまたはＵＶ−９による感染マウスの治療、（Ｃ）ＵＶ−４ＢまたはＵＶ−１０による感染マウスの治療、（Ｄ）ＵＶ−４ＢまたはＵＶ−１１による感染マウスの治療、（Ｅ）ＵＶ−４ＢまたはＵＶ−１２による感染マウスの治療、および（Ｆ）標準偏差無しの、ＵＶ−８、−９、−１０、−１１、または−１２による未感染マウスの治療。
【図１０−２】図１０は、温度の分析である。マウスは、インフルエンザＡ／Ｔｅｘａｓ／３６／９１（Ｈ１Ｎ１）を約１ＬＤ９０の用量で鼻腔内感染させる１時間前に、Ｈ２Ｏ中の最初の用量の化合物を受けた。各グループの平均温度を、標準偏差と共に０日目（ベースライン）の重量のパーセントとしてプロットする。（Ａ）ＵＶ−４ＢまたはＵＶ−８による感染マウスの治療、（Ｂ）ＵＶ−４ＢまたはＵＶ−９による感染マウスの治療、（Ｃ）ＵＶ−４ＢまたはＵＶ−１０による感染マウスの治療、（Ｄ）ＵＶ−４ＢまたはＵＶ−１１による感染マウスの治療、（Ｅ）ＵＶ−４ＢまたはＵＶ−１２による感染マウスの治療、および（Ｆ）標準偏差無しの、ＵＶ−８、−９、−１０、−１１、または−１２による未感染マウスの治療。
【００１５】
【図１１】図１１は、温度データの統計学的分析である。図１０でプロットしたインフルエンザ感染マウスの温度データを、媒体コントロールに対する反復測定二元配置ＡＮＯＶＡ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ）を用いて分析した。後の時点の死亡のために、データを感染後（ｐ．ｉ．）７日目までしか分析しなかった。化合物ＵＶ−９、ＵＶ−１０、およびＵＶ−１１は、０％の生存率および＜９日のＭＴＤの両方を有し、そして従ってさらなる統計学的分析から除いた。統計学的有意性を、０．０５より低いｐ値（ｐ＜０．０５）によって示した。
【００１６】
【図１２】図１２は、実施例４において行った研究の結果を示す。この研究は、デングウイルス感染マウスの生存率を決定した。その生存率データおよび動物の体重を、図１２にプロットする。全ての化合物を水中、投薬開始後全部で７日間、経口経路（経口経管栄養−ＩＧによって胃内に１日あたり３回）によって与えた。治療用量は、５０ｍｇ／ｋｇのＵＶ−４Ｂ、ＵＶ−８、ＵＶ−９、ＵＶ−１０、ＵＶ−１１、およびＵＶ−１２であった。約１ＬＤ９０の用量のデングウイルスによる静脈内感染の０．５−１時間前に、最初の治療用量の化合物をマウスのグループに与えた。生存率および体重を、投薬の３日後まで測定した。
【００１７】
【図１３】図１３は、ＵＶ−８、ＵＶ−９、ＵＶ−１０、ＵＶ−１１、およびＵＶ−１２化合物の化学式を示す。
【００１８】
【図１４】図１４は、ＵＶ−２８の化学式を示す。
【００１９】
【図１５】図１５は、ＵＶ−８の合成スキームを提示する。
【００２０】
【図１６】図１６は、ＵＶ−９の合成スキームを提示する。
【００２１】
【図１７】図１７は、ＵＶ−１０の合成スキームを提示する。
【００２２】
【図１８】図１８は、ＵＶ−１１の合成スキームを提示する。
【００２３】
【図１９】図１９は、ＵＶ−１２の合成スキームを提示する。
【００２４】
【図２０】図２０は、ＵＶ−２８の合成スキームを提示する。
【００２５】
【図２１】図２１は、ＵＶ−２８の代替の合成スキームを提示する。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
詳細な説明
関連文献
以下の特許文献は、本願の開示の理解に有用であり得、それらの全体が本明細書に参考として援用される：
米国特許第６，５４５，０２１号；同第６，８０９，８０３号；同６，６８９，７５９号；同６，４６５，４８７号；同５，６２２，９７２号；同７，８１６，６５０号；同７，２５６，００５号；同８，４５０，３４５号；同７，６１２，０９３号；および同８，４２６，４４５号；米国特許出願公開第２０１１０１８４０１９号；同２０１３０１５０４０５号；同２０１００２２２３８４号；同２０１１００６５７５４号；同２０１１００６５７５３号；同２０１１００６５７５２号；および２００７−０２７５９９８号；ならびに２０１３年４月２５日に出願された米国特許出願第１３／８７０，３４１号。
【００２７】
用語の定義
他に特定しなければ、「ａ」または「ａｎ」は、「１つまたはそれ以上」を意味する。
【００２８】
本明細書中で使用する場合、「ウイルス感染」という用語は、ウイルスが健康な細胞に侵入し、細胞の複製機構を利用して増殖または複製し、そして最終的に細胞を溶解して細胞死を引き起こして、ウイルス粒子の放出および新たに産生された子孫ウイルスによる他の細胞の感染を引き起こす疾患状態を説明する。あるウイルスによる潜伏感染も、ウイルス感染の可能性のある結果である。
【００２９】
本明細書中で使用する場合、「ウイルス感染を治療または予防すること」は、特定のウイルスの複製を阻害すること、ウイルスの伝播を阻害すること、またはウイルスが宿主中で自己を確立することを防止すること、およびウイルス感染によって引き起こされる疾患の症状を寛解または軽減することを意味する。ウイルス量の減少、死亡率および／または罹患率の減少があれば、その処置は治療的であると考えられる。
【００３０】
ＩＣ５０またはＩＣ９０（阻害濃度５０または９０）は、それぞれウイルス量の５０％または９０％の抑制を達成するために使用される、イミノ糖のような治療薬の濃度である。ＬＤ９０は、９０％致死量を表し、集団の９０％が死亡すると予測される薬剤の推定用量である。
【００３１】
ＤＥＮＶは、デングウイルスを表す。
【００３２】
ＩＮＦＶは、インフルエンザウイルスを表す。
【００３３】
ＩＶは、静脈内を表す。
【００３４】
ＩＧは、胃内を表す。
【００３５】
ＩＰは、腹腔内を表す。
【００３６】
ＰＦＵは、プラーク形成単位を表す。
【００３７】
ＰＢＳは、リン酸緩衝化生理食塩水を表す。
【００３８】
ＡＮＯＶＡは、分散分析を表す。
【００３９】
開示
本発明者らは、あるデオキシノジリマイシン誘導体が、例えばデングウイルス、および／またはインフルエンザＡウイルスのようなオルソミクソウイルス科に属するウイルスであり得る、１つまたはそれ以上のウイルスに対して有効であり得ることを発見した。特に、そのようなデオキシノジリマイシン誘導体は、例えばデングウイルス、および／またはインフルエンザＡウイルスのようなオルソミクソウイルス科に属するウイルスであり得る、１つまたはそれ以上のウイルスによって引き起こされるか、またはそれと関連する疾患または状態を治療するために有用であり得る。ある実施態様において、そのデオキシノジリマイシン誘導体は、例えばデングウイルス、および／またはインフルエンザＡウイルスのようなオルソミクソウイルス科に属するウイルスであり得る、１つまたはそれ以上のウイルスに感染した患者の生存率または確率を増加させ得る。
【００４０】
デングウイルス
デングウイルスは、フラビウイルス科（Ｆｌａｖｉｒｉｄａｅ）フラビウイルス属に属し、そしてデング出血熱（ＤＨＦ）を引き起こす。デングウイルスは、通常デング１、デング２、デング３、およびデング４と呼ばれる、４つの密接に関連した血清型を含む。感染からの回復は、その血清型に対して生涯の免疫を与えるが、他の３つによる感染に対しては、部分的および一時的な保護しか与えない。連続的な感染が、より重篤な疾患のリスクを増加させ、ＤＨＦを引き起こすという良い証拠が存在する。出現しつつあるＤＨＦの流行は、４つのデングウイルス全てが風土性であるアメリカおよびアジアにおいて懸念の増加を引き起こしている。ＤＨＦは、いくつかの国において、子供の入院および死亡の主因となっている。２００７年、アメリカにおいて８９０，０００例以上のデング熱症例が報告され、そのうち２６，０００例がＤＨＦであった。
【００４１】
デング熱は、主にネッタイシマカによって伝播し、そしてヒトの最もよくある蚊媒介ウイルス疾患である。世界中で、２５億人の人々−世界の人口の４０％−が、ネッタイシマカが一般的であり、そしてデング熱を媒介し得る温暖な地域に住んでいる。熱帯の都市およびその人口および蚊の集団の急速な成長は、今までより多くの数の人々を、この媒介物と接触させる。蚊媒介物およびウイルスの両方の地理的拡散が、世界的なデング熱流行の復活およびデング出血熱（ＤＨＦ）の出現を引き起こした。
【００４２】
オルソミクソウイルス科
オルソミクソウイルス科は、５つの属：インフルエンザウイルスＡ、インフルエンザウイルスＢ、インフルエンザウイルスＣ、イサウイルス、およびソゴトウイルスを含むＲＮＡウイルスの科である。最初の３つの属は、鳥類、ヒト、および他の哺乳類を含む、脊椎動物においてインフルエンザを引き起こし得るウイルスを含む。
【００４３】
インフルエンザＡ属は、鳥類、およびヒト、ブタ、ネコ、イヌ、およびウマを含むある哺乳類においてインフルエンザを引き起こし得る、単一の種を含む。インフルエンザＡウイルスは、マイナス、１本鎖、分節ＲＮＡウイルスである。Ｈナンバー（赤血球凝集素の型に関して）およびＮナンバー（ノイラミニダーゼの型に関して）によって標識化される、インフルエンザＡウイルスのいくつかのサブタイプが存在する。１６個の異なるＨ抗原（Ｈ１からＨ１６）および９個の異なるＮ抗原（Ｎ１からＮ９）が現在公知である。インフルエンザＡの血清型およびサブタイプは、Ｈ１Ｎ１インフルエンザＡ；Ｈ１Ｎ２インフルエンザＡ；Ｈ２Ｎ２インフルエンザＡ；Ｈ３Ｎ１インフルエンザＡ；Ｈ３Ｎ２インフルエンザＡ；Ｈ３Ｎ８インフルエンザＡ；Ｈ５Ｎ１インフルエンザＡ；Ｈ５Ｎ２インフルエンザＡ；Ｈ５Ｎ３インフルエンザＡ；Ｈ５Ｎ８インフルエンザＡ；Ｈ５Ｎ９インフルエンザＡ；Ｈ５Ｎ９インフルエンザＡ；Ｈ７Ｎ１インフルエンザＡ；Ｈ７Ｎ２インフルエンザＡ；Ｈ７Ｎ３インフルエンザＡ；Ｈ７Ｎ４インフルエンザＡ；Ｈ７Ｎ７インフルエンザＡ；Ｈ９Ｎ２インフルエンザＡ；Ｈ１０Ｎ７インフルエンザＡを含む。
【００４４】
インフルエンザＢ属は、ヒトおよびアザラシにおいてインフルエンザを引き起こし得る単一の種を含む。
【００４５】
インフルエンザＣ属は、ヒトおよびブタにおいてインフルエンザを引き起こし得る単一の種を含む。
【００４６】
デオキシノジリマイシン誘導体
いくつかの実施態様において、そのデオキシノジリマイシン誘導体は、Ｗ１−４およびＲ１−３がそれぞれ独立に水素およびＣ１−３アルキル基から選択されるような、式（Ｉ）
【化２】
0006456393.tif 000009
によって定義される属に属する化合物であり得、ここでＲ１−３の少なくとも１つは水素ではない。Ｃ１−３アルキル基は、メチル、エチル、およびプロピルを含む。いくつかの実施態様において、Ｒ２およびＲ３は、以下の基：−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−のうち１つを一緒に形成し得る。
【００４７】
Ｗ１−４およびＲ１−３のそれぞれが水素である式（Ｉ）の化合物は、Ｎ−（９−メトキシノニル）デオキシノジリマイシンであり、それはＮ９−ＤＮＪまたはＵＶ−４としても公知である。上記で定義された属の化合物は、ＵＶ−４の誘導体として見る事ができる。化合物ＵＶ−１２およびＵＶ−２８（図１３−１４を参照のこと）のような、上記で定義された属の化合物は、例えば化合物ＵＶ−８、ＵＶ−９、ＵＶ−１０、およびＵＶ−１１（図１３を参照のこと）のような、ＵＶ−４の他の誘導体と比較して１つまたはそれ以上の利点を有し得る。例えば、化合物ＵＶ−１２およびＵＶ−２８のような、上記で定義された属の化合物は、例えばデングウイルス、および／またはインフルエンザＡウイルスのような、オルソミクソウイルス科に属するウイルスであり得る、１つまたはそれ以上のウイルスに対して、化合物ＵＶ−８、ＵＶ−９、ＵＶ−１０、およびＵＶ−１１のような、ＵＶ−４の他の誘導体と比較して、より有効であり得る。ＵＶ−８、ＵＶ−９、ＵＶ−１０、ＵＶ−１１、ＵＶ−１２、およびＵＶ−２８のような、ＵＶ−４誘導体は、図１５−２１に示すように合成し得る。
【００４８】
デオキシノジリマイシン誘導体を合成する方法も、例えば米国特許第５，６２２，９７２、５，２００，５２３、５，０４３，２７３、４，９９４，５７２、４，２４６，３４５、４，２６６，０２５、４，４０５，７１４、および４，８０６，６５０号、および米国特許出願公開第２００７／０２７５９９８号において開示されており、それらは全て本明細書中に参考として援用される。
【００４９】
いくつかの実施態様において、そのデオキシノジリマイシン誘導体は、無機または有機酸由来の塩の形式であり得る。薬学的に許容可能な塩、および塩形式を調製する方法は、例えばＢｅｒｇｅら（Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１８、１９７７）において開示されている。適当な塩の例は、以下の塩を含むがこれに限らない：酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩、ジグルコン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、グルコヘプトン酸塩（ｇｌｕｃｏｈｅｐｔａｎｏａｔｅ）、グリセロリン酸塩、ヘミスルファート、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩（ｐａｌｍｏａｔｅ）、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩、メシル酸塩、およびウンデカン酸塩。
【００５０】
いくつかの実施態様において、そのデオキシノジリマイシン誘導体を、プロドラッグの形式でも使用し得る。６−リン酸化ＤＮＪ誘導体のような、ＤＮＪ誘導体のプロドラッグが、米国特許第５，０４３，２７３、および５，１０３，００８号において開示されている。
【００５１】
いくつかの実施態様において、そのデオキシノジリマイシン誘導体を、薬学的に許容可能な担体および／またはその組成物を動物に送達するために有用な成分をさらに含む組成物の一部として使用し得る。組成物をヒトに送達するために有用な多くの薬学的に許容可能な担体、および組成物をウシのような他の動物に送達するために有用な成分が、当該分野で公知である。そのような担体および成分を、本発明の組成物に加えることは、十分当該分野における通常の技術レベルの範囲内である。
【００５２】
いくつかの実施態様において、その薬学的組成物は、実質的にＮ−置換デオキシノジリマイシンから構成され得、それはＮ−置換デオキシノジリマイシンは、組成物中の唯一の活性成分であることを意味し得る。
【００５３】
さらにいくつかの実施態様において、Ｎ−置換デオキシノジリマイシンを、１つまたはそれ以上のさらなる抗ウイルス化合物と共に投与し得る。
【００５４】
いくつかの実施態様において、そのデオキシノジリマイシン誘導体を、米国公開第２００８／０１３８３５１、２００９／０２５２７８５、および２０１０／０２６６６７８号において開示されるもののような、リポソーム組成物において使用し得る。
【００５５】
そのＤＮＪ誘導体を、ウイルスに冒された細胞または動物に投与し得る。そのＤＮＪ誘導体は、ウイルスの形態形成を阻害し得る、またはその個体を治療し得る。その治療は、動物におけるウイルス感染を抑制、寛解、または減少させ得る。
【００５６】
いくつかの実施態様において、その動物は、デングウイルスに感染した動物であり得、それは哺乳類のような脊椎動物であり得、それは例えばげっ歯類、またはヒトのような霊長類であり得る。
【００５７】
いくつかの実施態様において、本発明の方法によって動物または動物細胞に投与されるそのＤＮＪ誘導体の量は、デングウイルスの細胞からの形態形成を阻害するために有効な量であり得る。本明細書中で使用される「阻害する」という用語は、そのイミノ糖の非存在下で示される生物学的活性の検出可能な抑制および／または排除を指し得る。「有効な量」という用語は、示した効果を達成するために必要なＤＮＪ誘導体の量を指し得る。本明細書中で使用される「治療」という用語は、患者における症状を抑制または軽減すること、症状の悪化または進行を防止すること、病原体の阻害または排除、またはデングウイルスを持っていない患者における、デングウイルスの感染またはそれに関連する異常の予防を指し得る。
【００５８】
いくつかの実施態様において、その動物は、オルソミクソウイルス科に属するウイルスに感染した動物であり得、それは鳥類、またはヒトのような霊長類；ネコ；ウマおよびイヌを含む哺乳類であり得る。
【００５９】
いくつかの実施態様において、本発明の方法によって動物または動物細胞に投与されるＤＮＪ誘導体の量は、オルソミクソウイルス科に属するウイルスの細胞からの形態形成を阻害するために有効な量であり得る。本明細書中で使用される「阻害する」という用語は、そのＤＮＪ誘導体の非存在下で示される生物学的活性の検出可能な抑制および／または排除を指し得る。「有効な量」という用語は、示した効果を達成するために必要なＤＮＪ誘導体の量を指し得る。本明細書中で使用される「治療」という用語は、患者における症状を抑制または軽減すること、症状の悪化または進行を防止すること、病原体の阻害または排除、またはそのウイルスを持っていない患者における、オルソミクソウイルス科に属するウイルスの感染またはそれに関連する異常の予防を指し得る。
【００６０】
例えばデングウイルス、またはインフルエンザＡウイルスのようなオルソミクソウイルス科に属するウイルスであり得るウイルスによって引き起こされる、またはそれに関連する疾患の治療は、感染病原体の破壊、その増殖または成熟の阻害または干渉、およびその病理学的効果の中和を含み得る。細胞または動物に投与し得るＤＮＪ誘導体の量は、好ましくはその投与に伴う利点を上回る毒性効果を誘導しない量である。
【００６１】
薬学的組成物中の活性成分の実際の用量レベルは、特定の患者に関して望ましい治療反応を達成するために有効である活性化合物の量を投与するために変動し得る。
【００６２】
選択される用量レベルは、そのＤＮＪ誘導体の活性、投与経路、治療する状態の重症度、および治療する患者の状態および既往歴に依存し得る。しかし、望ましい治療効果を達成するために必要な量より低いレベルの化合物の用量から始めて、そして望ましい効果が達成されるまで徐々に用量を増加させることは、当該分野の技術の範囲内である。もし望ましいなら、有効な一日投与量を、投与の目的のために複数回の投与、例えば１日あたり２回から４回の投与に分割し得る。しかし、特定の患者のための特異的な投与量レベルは、体重、一般的な健康、食事、投与時間および経路、および他の治療薬との組み合わせおよび治療する状態または疾患の重症度を含む様々な因子に依存し得ることが理解される。ヒト成人の１日投与量は、体重１０ｋｇあたり、約１μｇから約１ｇの間、または約１０ｍｇおよび１００ｍｇの間のＤＮＪ誘導体の範囲であり得る。いくつかの実施態様において、全１日投与量は、０．１ｍｇ／ｋｇ体重から１００ｍｇ／ｋｇ体重、または１ｍｇ／ｋｇ体重から６０ｍｇ／ｋｇ体重、または２ｍｇ／ｋｇ体重から５０ｍｇ／ｋｇ体重、または３ｍｇ／ｋｇ体重から３０ｍｇ／ｋｇ体重であり得る。１日投与量を、１日かけて１回またはそれ以上の投与で投与し得る。例えば、いくつかの実施態様において、その１日投与量を、１日あたり２回（ＢＩＤ）の投与イベント、１日あたり３回（ＴＩＤ）の投与イベント、または４回（ＱＩＤ）の投与イベントに分配し得る。ある実施態様において、１ｍｇ／ｋｇ体重から１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の単回投与量を、ＢＩＤまたはＴＩＤでヒトに投与して、２ｍｇ／ｋｇ体重から２０ｍｇ／ｋｇ体重、または３ｍｇ／ｋｇ体重から３０ｍｇ／ｋｇ体重の全１日投与量にし得る。もちろん、細胞または動物に投与すべきＤＮＪ誘導体の量は、ＤＮＪ誘導体の分子量、および投与経路のような、当業者によってよく理解される多くの因子に依存し得る。
【００６３】
本発明の方法において有用な薬学的組成物を、経口固体処方、点眼、坐剤、エアロゾル、局所、または他の同様の処方で全身的に投与し得る。例えば、それは粉末、錠剤、カプセル、ロゼンジ、ゲル、溶液、懸濁液、シロップ等の物理的形式であり得る。ＤＮＪ誘導体に加えて、そのような薬学的組成物は、薬学的に許容可能な担体、および薬剤の投与を増強および促進することが公知である他の成分を含み得る。ナノ粒子、リポソーム、再封赤血球、および免疫学に基づくシステムのような、他の可能な処方も、ＤＮＪ誘導体を投与するために使用し得る。そのような薬学的組成物を、多くの経路によって投与し得る。本明細書中で使用される「非経口」という用語は、制限無しに、皮下、静脈内、動脈内、くも膜下腔内、および注射および注入技術を含む。例として、その薬学的組成物を、経口、局所、非経口、全身性、または肺の経路によって投与し得る。
【００６４】
これらの組成物を、単回投与、または異なる時間に投与する複数回投与で投与し得る。ウイルスに対する組成物の阻害効果は持続し得るので、宿主細胞への影響を最小限にしながらウイルスの増殖が遅延するように投薬レジメを調整し得る。例として、動物に、本発明の組成物の用量を、１週間に１回投与し得、これによってウイルスの増殖は１週間全体の間遅延し、一方宿主細胞機能は、１週間に１回短期間しか阻害されない。
【００６５】
本明細書中で記載される実施態様を、以下の実施例によってさらに説明するが、決して制限しない。
【実施例】
【００６６】
実施例１
マウスにおけるＩＮＦＶＡ／Ｔｅｘａｓ／３６／９１（Ｈ１Ｎ１）曝露に対するＵＶ−１２およびＵＶ−２８の効果
研究概要：この研究は、イミノ糖ＵＶ−１２およびＵＶ−２８の、マウスを致死的なインフルエンザ感染（約１ＬＤ９０のインフルエンザＡ／Ｔｅｘａｓ／３６／９１（Ｈ１Ｎ１）を鼻腔内に投与）から保護する能力を試験した。化合物を、ウイルス曝露の３０−６０分前に、経口（ＩＧ）経路によって１００または４０ｍｇ／ｋｇで投与し、そして１日３回、１０日間継続した。使用したマウスは、有効性に関して１０匹のグループの、約２０グラム、６−８週齢のメスＢＡＬＢ／ｃマウスであった（研究グループの概要を表１に示す）。温度および体重を毎日測定した。エンドポイントは、感染後１４日目、死亡、または安楽死であった。＞３０％の体重減少、過度の傾眠、または麻痺によって決定される重度の疾病を示す動物を安楽死させた。
【００６７】
Ｉ．序論
目的：この研究は、致死的なインフルエンザＡ／Ｔｅｘａｓ／３６／９１（Ｈ１Ｎ１）感染に対する、小分子ＵＶ−１２およびＵＶ−２８のインビボにおける有効性を決定することを目的とする。
【００６８】
ＩＩ．材料および方法
材料
【表１】
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【表２】
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【表３】
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【表４】
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【００６９】
研究デザイン
この研究は、ＵＶ−１２およびＵＶ−２８の、マウスを致死的なインフルエンザ感染から保護する能力を試験した。使用したマウスは、１０匹のグループの、６−８週齢メスＢＡＬＢ／ｃマウスであった（下記の表５を参照のこと）。マウスを１００または４０ｍｇ／ｋｇで１日３回（ＴＩＤ）、曝露の約３０〜６０分前に開始してＩＧ経路によって治療した。マウスを、鼻腔内（ＩＮ）に投与した約１ＬＤ９０のインフルエンザＡ／Ｔｅｘａｓ／３６／９１（Ｈ１Ｎ１）に曝露した。エンドポイントは、感染後１４日目、死亡、または安楽死であった。＞３０％の体重減少、過度の傾眠、または麻痺によって決定される重度の疾病を示す動物を安楽死させた。温度および体重を毎日測定した。
【表５】
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【００７０】
標準的なプロトコール
マウスの鼻腔内感染のための標準的なプロトコール
１．メス６−８週齢ＢＡＬＢ／ｃマウスを、５匹のグループで収容する。マウスを研究施設（Ｎｏｂｌｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）において、研究の開始前少なくとも３日間は隔離した。
２．食餌および水は、自由に与えた。
３．ＩＦＮＶに曝露するマウスのグループに、軽い麻酔下（イソフルラン）で、１００μＬのＰＢＳ中１：５００希釈のＩＦＮＶを約１×ＬＤ９０で鼻腔内（ＩＮ）接種して感染させた。
４．感染後、観察および続く投薬のために、マウスをケージに戻した。
【００７１】
試験物送達のためのマウス経口経管栄養のプロトコール
１．マウスを、１００μＬの水中、ＩＧ経路によって投与した１００または４０ｍｇ／ｋｇの試験物で１日３回、１０日間治療した（投薬レジメについては表５を参照のこと）。
２．投薬後、マウスをケージに戻し、そして投薬に関するあらゆる苦痛に関してモニターした。
【００７２】
マウスの観察
１．マウスを、感染後１３日目まで観察した（全部で１４日間、感染後０−１３日）。
２．マウスを、オーハウス天秤で毎日体重測定し、そして体重を記録した。
３．全ての動物に、ウイルス曝露の少なくとも３日前に、体温をモニターするチップを埋め込んだ。その温度を毎日記録した。
４．各マウスの生存および健康を、１−７のスコアリングシステムを用いて、１日１回評価した。
【表６−１】
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【表６−２】
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【００７３】
ＩＩＩ．結果
マウスに、約１ＬＤ９０のインフルエンザＡ／Ｔｅｘａｓ／３６／９１（Ｈ１Ｎ１）を感染させ、そして１００または４０ｍｇ／ｋｇのＵＶ−１２またはＵＶ−２８で１日３回、１０日間治療した。感染後の日数に対する生存率パーセントとして計算した、各感染治療グループにおける生存率を、図１および表７に示す。１００ｍｇ／ｋｇのＵＶ−１２および２８で治療した感染グループは、１００％の生存率を示した。４０ｍｇ／ｋｇのＵＶ−１２および２８で治療した感染グループは、それぞれ２０および６０％の生存率を示した。未治療のコントロールグループは、０％の生存率を示し、感染７日目までに、全て「死亡しているのが見つかる」か、「安楽死」であった。
【００７４】
図１は、治療によってグループ分けした感染マウスの生存率データを示すプロットである。表７は、感染マウスの生存率の分析結果を示す。図１でプロットした生存率データを、ＧｒａｐｈＰａｄ  ＰｒｉｓｍにおいてＭａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ（ログランク）検定を用いて分析した。
【表７】
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【００７５】
バイオメトリック分析
この研究の過程で、個々の体重、健康スコア、および温度を、各グループに関して毎日モニターした。マウスの各グループの平均体重を、図２で示す。ＢＭＤＳスキャナーを用いて、毎日温度の読み取りを行うために、全ての動物にチップをつけた；平均温度を図３に示す。健康スコアを図４に示す。
【００７６】
結論
インフルエンザ感染マウスを、経口経管栄養によって、１００または４０ｍｇ／ｋｇのＵＶ−１２またはＵＶ−２８で１日３回、１０日間治療した。１００ｍｇ／ｋｇで治療したグループはどちらも、１００％の生存率を示し、そして４０ｍｇ／ｋｇで治療したグループは、ＵＶ−２８およびＵＶ−１２に関してそれぞれ６０および２０％の生存率を示した。４０ｍｇ／ｋｇにおいて、ＵＶ−２８がより良い有効性を示したようであるが、ＵＶ−１２よりも毒性が高いようである（図４）。１００ｍｇ／ｋｇのＵＶ−１２で治療したマウスは、感染から完全に回復し、そして正常に戻ったが、１００ｍｇ／ｋｇのＵＶ−２８で治療したマウスは、その健康スコアが回復せず、そして研究の経過中ずっと「乱れた」ままであった。病的状態を示す、より高い健康スコアと組み合わせて、ＵＶ−２８で治療したマウスは、その体重も回復せず、一方ＵＶ−１２で治療したマウスは、ほとんど完全に回復した。媒体のみで治療したマウスは、感染後７日目までに全て感染に屈し、０％の生存率を示した。
【００７７】
実施例２
Ａ１２９  ＡＤＥモデルにおけるＵＶ−１２の生存率分析
目的：この研究は、デングウイルスに曝露したマウスの生存の促進における、ＵＶ−１２の有効性を決定した。化合物を、経口経路（１日３回、経口経管栄養による胃内−ＩＧ）によって、投薬の開始後全部で７日間投与した。その実験は、Ａ１２９  ＡＤＥ感染モデルを使用した（Ｐｒｅｓｔｗｏｏｄ  ＴＲ、Ｍｏｒａｒ  ＭＭ、Ｚｅｌｌｗｅｇｅｒ  ＲＭ、Ｍｉｌｌｅｒ  Ｒ、Ｍａｙ  ＭＭ、Ｙａｕｃｈ  ＬＥ、Ｌａｄａ  ＳＭ、Ｓｈｒｅｓｔａ  Ｓ、Ｇａｍｍａ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ（ＩＦＮ−γ）  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｒｅｓｔｒｉｃｔｓ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｄｅｎｇｕｅ  ｖｉｒｕｓ  ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ｐａｒａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  ＩＦＮ−α／β  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ。Ｊ  Ｖｉｒｏｌ．２０１２  Ｄｅｃ；８６（２３）：１２５６１−７０）。動物に、０日目に約１ＬＤ９０のウイルス曝露用量を投与した。最初の投与を、ウイルス曝露の０．５〜１時間前に与えた。感染後３０日まで生存率を測定した。
イミノ糖候補：ＵＶ−１２
研究の実験デザイン：
コントロール、Ｈ２Ｏ＋ＤＥＮＶ（Ｓ２２１）［１０匹のマウス］
ＵＶ−１２、（１００ｍｇ／ｋｇ／投与）＋ＤＥＮＶ（Ｓ２２１）［１０匹のマウス］
マウス：性別を一致させた５−６週齢のＡ１２９（１２９／ＳＶ  ＩＦＮ−α、β受容体−／−）
投与経路：
イミノ糖：経口、１日３回（経管栄養（ＩＧ））、８時間ごと
抗体：ＩＰ
ウイルス：ＩＶ
抗体およびイミノ糖化合物を同時に、次いで３０分以内にウイルスを与えた
ウイルス曝露：
抗体：１００μｇのＡＴＣＣ由来の２Ｈ２（ＩｇＧ２ａ抗ＤＥＮＶ１−４ｐｒＭ）、０日目および１日目に４０μｌ中で
ウイルス：ＤＥＮＶ２系統Ｓ２２１（ｖ５１２）（Ｚｅｌｌｗｅｇｅｒ  ＲＭ、Ｐｒｅｓｔｗｏｏｄ  ＴＲ、Ｓｈｒｅｓｔａ  Ｓ、Ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｉｖｅｒ  ｓｉｎｕｓｏｉｄａｌ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ａ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｓｅｖｅｒｅ  ｄｅｎｇｕｅ  ｄｉｓｅａｓｅ、Ｃｅｌl  Ｈｏｓｔ  Ｍｉｃｒｏｂｅ．２０１０  Ｆｅｂ  １８；７（２）：１２８−３９）
用量：動物あたり１Ｅ１１  ＧＥ（ゲノム当量）
読み取り：
動物生存率。重度の疾病（２０％の体重減少、過度の傾眠、乱れた毛並み、または麻痺によって決定される）を示す動物を安楽死させる。
資源：
Ａ１２９マウス、２Ｈ２抗体、およびＳ２２１ウイルスは、Ｓｕｊａｎ  Ｓｈｒｅｓｔａ、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙによって供給された。
Ｕｎｉｔｈｅｒ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙによる供給：ＵＶ−１２
【００７８】
図５は、この研究の結果を示す。マウスを、５０μＬの水に希釈されたＵＶ−１２で、経口で１日３回、全部で７日間治療した。治療の開始は、ウイルスの静脈内曝露の１時間前であった。ＵＶ−１２で治療したＡ１２９マウスは、５０μＬの水を１日３回経口投与されただけのコントロール動物と比較して、生存率の増加を示した。
【００７９】
実施例３
マウスにおける選択されたイミノ糖の有効性；インフルエンザＡ／Ｔｅｘａｓ／３６／９１（Ｈ１Ｎ１）曝露
研究概要：この研究は、Ｈ１Ｎ１インフルエンザ感染の間の、マウスにおけるＵＶ−８、ＵＶ−９、ＵＶ−１０、ＵＶ−１１、およびＵＶ−１２の毒性および有効性を分析した。以前に、１００ｍｇ／ｋｇのＵＶ−４Ｂの１日３回（ＴＩＤ）の経口送達で行われた研究は、Ｈ１Ｎ１に対して有効である結果を示し、そして毒性のいかなる識別可能な徴候も示さなかった。本研究において、我々は、１日３回、経口経路（経口経管栄養による胃内またはＩＧ）によって送達された、１００ｍｇ／ｋｇのＵＶ−４Ｂ、ＵＶ−８、ＵＶ−９、ＵＶ−１０、ＵＶ−１１、およびＵＶ−１２の送達用量を調査した。全体的な毒性を調査するために含まれた少数のグループ（ｎ＝３）に、ウイルス曝露無しで１００ｍｇ／ｋｇのイミノ糖を投与した。ＵＶ−４Ｂ、ＵＶ−８、ＵＶ−９、ＵＶ−１０、ＵＶ−１１、またはＵＶ−１２を、約１ＬＤ９０のインフルエンザＡ／Ｔｅｘａｓ／３６／９１（Ｈ１Ｎ１）による鼻腔内感染（ＩＮ）の１時間前に開始して、動物に送達した。次いで動物をＴＩＤで、全部で１０日間（感染後０〜９日）治療した。生存率、温度変化、および体重増加／減少を、感染未治療コントロールグループと比較することによって、有効性を評価した。ＵＶ−８、９、１０、または１１を投与したマウスは、未治療コントロールグループに対していかなる生存率の改善も示さず、一方ＵＶ−１２を投与したグループ、およびＵＶ−４Ｂを投与したポジティブコントロールグループはどちらも、生存率の有意な増加を示した。
【００８０】
Ｉ．序論
この研究は、ＢＡＬＢ／ｃマウスモデルにおいて、インフルエンザウイルスＡ／Ｔｅｘａｓ／３６／９１（Ｈ１Ｎ１）による致死的な鼻腔内感染に対して、１００ｍｇ／ｋｇをＴＩＤで経口投与した場合のＵＶ−８、ＵＶ−９、ＵＶ−１０、ＵＶ−１１、およびＵＶ−１２の有効性を決定することを目的とする。有効性の分野に加えて、各アナログの全体的な毒性を調査するために、ウイルス感染の非存在下で、同じ治療レジメ（１００ｍｇ／ｋｇ、経口経管栄養、ＴＩＤ）で、少数の動物のグループにおいてそれぞれのイミノ糖を試験した（一般的な健康、体重、温度、および死亡率の評価）。
【００８１】
ＩＩ．材料および方法
材料
【表８−１】
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【表８−２】
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【表９】
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【表１０】
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【表１１】
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【００８２】
研究デザイン
ＵＶ−８、９、１０、１１、１２およびＵＶ−４Ｂを、約２０ｇのマウスに０．１ｍＬの化合物を与えることを仮定して、１００ｍｇ／ｋｇの送達用量のためにＨ２Ｏ中、２０ｍｇ／ｍｌで調製した。ＢＡＬＢ／ｃマウスのグループを、約１ＬＤ９０のＩＮＦＶ  Ａ／Ｔｅｘａｓ／３６／９１（Ｈ１Ｎ１）による鼻腔内感染の１時間前（−１ｈ）に治療し、そして次いで化合物を１日３回、全部で１０日間投与した（研究デザインの概要に関しては表１２を参照のこと）。体重、温度、および生存率をモニターし、そして各アナログの保護的有効性および毒性の評価に使用した。
【表１２−１】
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【表１２−２】
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【表１２−３】
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【００８３】
標準的なプロトコール
マウスの鼻腔内感染のための標準的なプロトコール
１．メス４−６週齢ＢＡＬＢ／ｃマウスを、３−５匹のグループで収容した。マウスを研究施設（Ｎｏｂｌｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）において、研究の開始前少なくとも３日間は隔離した。
２．食餌および水は、自由に与えた。
３．インフルエンザに曝露するマウスのグループに、１００μＬのＰＢＳ中約１ＬＤ９０のＩＦＮＶを鼻腔内（ＩＮ）接種する前に、５％のイソフルランで麻酔し、そして２．５％で維持した。
４．感染後、観察および投薬のために、マウスをケージに戻した。
【００８４】
化合物送達のためのマウス経口経管栄養または注射のプロトコール
１．マウスを、感染の１時間前に開始して、Ｈ２Ｏ中１００μＬの化合物で、経口経路（経口経管栄養によって胃内）によって投与した１００ｍｇ／ｋｇのＵＶ−４Ｂ、ＵＶ−８、ＵＶ−９、ＵＶ−１０、ＵＶ−１１、またはＵＶ−１２化合物によって、１日３回、全部で１０日間治療した（投薬レジメについては表１２を参照のこと）。
２．投薬後、マウスをケージに戻し、そして投薬に関するあらゆる苦痛に関してモニターした。
【００８５】
マウスの観察
１．マウスを、感染後１３日目まで観察した（全部で１４日間、感染後０−１３日）。
２．マウスを、オーハウス天秤で毎日体重測定し、そして体重を記録した。
３．全ての動物に、体温をモニターするチップを埋め込んだ。その温度を毎日記録した。
４．各マウスの生存および健康を、１−７のスコアリングシステムを用いて、１日３回評価した。
５．スコアが５以上（重度の病気；非常に乱れた毛並み；閉じた、はめ込まれたような目（ｉｎｓｅｔ  ｅｙｅｓ）；動きが遅いか無い；横向きに置くと直立に戻る；過度の傾眠）の場合、マウスを安楽死させた。
【００８６】
ＩＩＩ．結果
生存率
上記で概要を述べたように、マウスに、約１ＬＤ９０のインフルエンザウイルスＡ／Ｔｅｘａｓ／３６／９１（Ｈ１Ｎ１）を、ＵＶ−４ＢまたはＵＶ−４アナログの最初の投与の１時間後に感染させた。感染後の日数に対する生存率パーセントとして計算した生存率の表を、図６で示す。前の研究に基づいて予測されるように、ＵＶ−４Ｂを１００ｍｇ／ｋｇ、ＴＩＤで経口投与したグループは、１００％の生存率および＞１３日のＭＴＤを示した（図７）。ＵＶ−１２を１００ｍｇ／ｋｇで経口投与したマウスは、９０％の生存率、および＞１３日のＭＴＤを示した（図６、７）。ＵＶ−８、ＵＶ−９、ＵＶ−１０、またはＵＶ−１１で治療したマウスは、それぞれ１０．５、７、７．５、および８日のＭＴＤ、およびＵＶ−８（３０％）を除いて０％の生存率を示した（図６、７）。媒体（Ｈ２Ｏ）を投与したネガティブコントロールマウスは、３０％の生存率および９日のＭＴＤを示した（図６、７）。
【００８７】
全体的な毒性を調査するために、ウイルス曝露無しにＵＶ−８、９、１０、１１、または１２を１００ｍｇ／ｋｇで投与したマウスは、１００％の生存率を示した（データは示していない）。
【００８８】
バイオメトリック分析
この研究の過程の間、個々の体重および温度を、各グループで毎日モニターした。マウスの各グループの平均体重を、図８で示し、統計学的分析を図９で示す。平均温度を図１０で示し、統計学的分析を図１１で示す。
【００８９】
２番目のバイオメトリクスとして、動物の温度を評価した。スキャナーを用いて毎日の温度測定を行うために、全ての動物にチップを付けた。図１０のグラフは、各試験グループの体温を示す。媒体コントロールに対して示した有意性を、図１１で示す。
【００９０】
結論
１００ｍｇ／ｋｇのＵＶ−４Ｂを、ＴＩＤで経口投与した感染マウスのグループは、１００％の生存率を示し、１００ｍｇ／ｋｇのＵＶ−９、ＵＶ−１０、およびＵＶ−１１を経口投与したグループは、０％の生存率を示した。これらのグループの体重および温度についての統計学的分析は、媒体コントロールより低い生存率およびＭＴＤのために行わなかった。ＵＶ−８を経口投与したマウスは、３０％の生存率を示し、そして従って媒体コントロールグループと有意な差は示さなかった。１００ｍｇ／ｋｇのＵＶ−１２を経口投与したマウスは、９０％の生存率、および全体的な温度および体重の有意な増加を示した。ＵＶ−１２はまた、未感染グループにおいて、安定した体重減少を伴う中程度の毒性を示したが、ＵＶ−１２を投与した未感染マウスは、全体として１０％以上の体重は減少せず、そして投薬レジメが完了した後、完全に回復することができた。グループあたりのマウスの数が限定的であり（ｎ＝３）、比較のための未感染、未投与コントロールグループが存在しないので、マウスの未感染グループで調査したいずれのパラメーター（全体的な毒性）についても、統計学的分析は行わなかった。
【００９１】
実施例４
ＡＤＥモデルにおけるＵＶ−４およびＵＶ−１２の生存率分析
目的：この研究は、デングウイルスに曝露したマウスの生存率の促進における、ＵＶ−４およびＵＶ−１２の有効性を決定した。全ての化合物を、経口経路によって（１日３回、経口経管栄養による胃内−ＩＧ）、投薬の開始後全部で７日間投与した。その実験は、研究室で開発した感染のＡＤＥモデルを使用した（Ｚｅｌｌｗｅｇｅｒら、ＣｅｌｌＨｏｓｔＭｉｃｒｏｂ  ７；１−１２頁（２０１０））。動物に、０日目にウイルス曝露用量約１ＬＤ９０を投与した。最初の投与を、ウイルス曝露の０．５−１時間前に与えた。投薬が完了した後３日目まで生存率を測定した。この研究では、「ＵＶ−４Ｂ」と同じである、ＵＶ−４塩酸塩を使用した。
イミノ糖候補：
１．Ｎ−９−メトキシノニル−デオキシノジリマイシン（ＵＶ−４）（塩酸塩）、ＵＶ−４Ｂ
２．ＵＶ−１２
３．コントロール、Ｈ２Ｏ
【００９２】
研究のための実験デザイン
１．コントロール、Ｈ２Ｏ＋ＤＥＮＶ（Ｓ２１１）［７匹のマウス］
２．ＵＶ−４、１ｍｇ（５０ｍｇ／ｋｇ／投与）＋ＤＥＮＶ（Ｓ２２１）［５匹のマウス］
３．ＵＶ−１２、１ｍｇ（５０ｍｇ／ｋｇ／投与）＋ＤＥＮＶ（Ｓ２２１）［５匹のマウス］
マウス：性別を一致させた５−６週齢
Ｓｕｊａｎ  ＳｈｒｅｓｔａによってＬＩＡＩにおいて飼育されたＡＧ１２９（１２９／ＳＶ  ＩＦＮ−α、βおよびγ受容体−／−）（Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｍａｉｎｅによって公的に利用可能でもある）
経路：
イミノ糖：経口、１日３回（経管栄養（ＩＧ））８時間ごと
抗体：ＩＰ（腹腔内）
ウイルス：ＩＶ
抗体および化合物を同時に投与し、次いで３０分以内にウイルスを投与した
ウイルス曝露
抗体：５μｇのＡＴＣＣから入手可能な２Ｈ２（抗ｐｒＭ）
ウイルス：ＤＥＮＶ２系統Ｓ２２１（ｖ４７６）（Ｚｅｌｌｗｅｇｅｒ  ＲＭ、Ｐｒｅｓｔｗｏｏｄ  ＴＲ、Ｓｈｒｅｓｔａ  Ｓ、Ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｉｖｅｒ  ｓｉｎｕｓｏｉｄａｌ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ａ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｓｅｖｅｒｅ  ｄｅｎｇｕｅ  ｄｉｓｅａｓｅ、Ｃｅｌl  Ｈｏｓｔ  Ｍｉｃｒｏｂｅ．２０１０  Ｆｅｂ  １８；７（２）：１２８−３９）
用量：動物あたり１Ｅ９  ＧＥ（ゲノム当量）
読み取り：
動物生存率。重度の疾病（２０％の体重減少、過度の傾眠、乱れた毛並み、または麻痺によって決定される）を示す動物を安楽死させた。
【００９３】
図１２は、この研究の結果を示す。全てのグループを、同じ用量の化合物で治療した：
研究のための実験デザイン
１．コントロール、Ｈ２Ｏ＋ＤＥＮＶ（Ｓ２２１）［７匹のマウス］
２．ＵＶ−４、１ｍｇ（５０ｍｇ／ｋｇ／用量）＋ＤＥＮＶ（Ｓ２２１）［５匹のマウス］
３．ＵＶ−８、１ｍｇ（５０ｍｇ／ｋｇ／用量）＋ＤＥＮＶ（Ｓ２２１）［５匹のマウス］
４．ＵＶ−９、１ｍｇ（５０ｍｇ／ｋｇ／用量）＋ＤＥＮＶ（Ｓ２２１）［５匹のマウス］
５．ＵＶ−１０、１ｍｇ（５０ｍｇ／ｋｇ／用量）＋ＤＥＮＶ（Ｓ２２１）［５匹のマウス］
６．ＵＶ−１１、１ｍｇ（５０ｍｇ／ｋｇ／用量）＋ＤＥＮＶ（Ｓ２２１）［５匹のマウス］
７．ＵＶ−１２、１ｍｇ（５０ｍｇ／ｋｇ／用量）＋ＤＥＮＶ（Ｓ２２１）［５匹のマウス］
【００９４】
この研究は、デングウイルスに曝露したマウスの生存の促進における、ＵＶ−４およびそのアナログの有効性を決定した。全ての化合物を、経口経路によって（１日３回、経口経管栄養による胃内−ＩＧ）、投薬の開始後全部で７日間投与した。その実験は、ＡＤＥ感染モデルを使用した（Ｚｅｌｌｗｅｇｅｒら、ＣｅｌｌＨｏｓｔＭｉｃｒｏｂ  ７；１−１２頁（２０１０））。動物に、０日目に約１ＬＤ９０のウイルス曝露用量を投与した。最初の化合物の投与を、ウイルス曝露の０．５−１時間前に開始した。生存率を、投薬の３日後まで測定した。
【００９５】
前述のものは特定の好ましい実施態様に言及するが、本発明はそれに限定されないことが理解される。当業者は、様々な修飾を開示された実施態様に行い得ること、およびそのような修飾は本発明の範囲内であると意図されることを考える。
【００９６】
本明細書中で引用される全ての出版物、特許出願、および特許は、本明細書中でその全体が参考として援用される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８−１】
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【図８−２】
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【図９】
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【図１０−１】
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【図１０−２】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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