(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
関節内補充療法のための手段としてのポリマー溶液であって、
ａ）少なくとも１種の少なくとも部分的に水溶性の多糖または多糖誘導体、
ｂ）ポリスチレンスルホン酸の少なくとも１種の水溶性のアルカリ塩またはアルカリ土類塩、および
ｃ）水
を含有し、前記溶液は目視により透明であり、前記多糖または多糖誘導体は、ヒアルロン酸、セルロースまたはそれらの塩、エーテル若しくはエステルから選択される、ポリマー溶液。
【請求項２】
ｄ）３−ヒドロキシプロピオン酸
を含有する、請求項１に記載のポリマー溶液。
【請求項３】
関節症補充療法が関節症の治療である、請求項１又は２に記載のポリマー溶液。
【請求項４】
多糖もしくは多糖誘導体、または少なくとも２種の多糖の混合物、または少なくとも２種の多糖誘導体の混合物、または少なくとも１種の多糖と少なくとも１種の多糖誘導体の混合物と、ポリスチレンスルホン酸のアルカリ塩またはアルカリ土類塩の質量比が、１対１から１対０．０１の範囲であり、前記多糖または多糖誘導体は、ヒアルロン酸、セルロースまたはそれらの塩、エーテル若しくはエステルから選択される、請求項１〜３いずれか一項に記載のポリマー溶液。
【請求項５】
前記ポリマー溶液のポリマー含有量の合計が０．１から１０ｗｔ％である、請求項１〜４のいずれか一項に記載のポリマー溶液。
【請求項６】
前記ポリマー溶液が、消炎剤、抗生物質、免疫抑制剤、および細胞増殖抑制剤をさらに含有する、請求項１〜５のいずれか一項に記載のポリマー溶液。
【請求項７】
前記ポリマー溶液が、リン酸デキサメタゾン、リン酸トリアムシノロン、ドキシサイクリン、クロロテトラサイクリン、オキシテトラサイクリン、ドキソルビシン、シクロスポリン、メトトレキサート、レフルノミド、アザチオプリン、マイトマイシンＣ、タクロリムス、シロリムス、およびエベロリムスを含有する、請求項６に記載のポリマー溶液。
【請求項８】
ａ）少なくとも１種の少なくとも部分的に水溶性の多糖、または少なくとも１種の少なくとも部分的に水溶性の多糖誘導体、または少なくとも１種の少なくとも部分的に水溶性の多糖と少なくとも１種の少なくとも部分的に水溶性の多糖誘導体の混合物と、
ｂ）ポリスチレンスルホン酸の少なくとも１種の水溶性のアルカリ塩またはアルカリ土類塩と、
ｃ）水と、
ｄ）任意に、３−ヒドロキシプロピオン酸と、
ｅ）任意に、少なくとも１種の消炎剤と、
ｆ）任意に、少なくとも１種の抗生物質と、
ｇ）任意に、少なくとも１種の免疫抑制剤と、
ｈ）任意に、少なくとも１種の細胞増殖抑制剤と
からなり、前記多糖または多糖誘導体は、ヒアルロン酸、セルロースまたはそれらの塩、エーテル若しくはエステルから選択される、請求項１〜７のいずれか一項に記載のポリマー溶液。
【請求項９】
関節内注射を含む関節症の治療のための医薬の製造のための請求項１〜８のいずれか一項に記載のポリマー溶液の使用。
【請求項１０】
関節内補充療法のための医薬の製造のための請求項１〜８のいずれか一項に記載のポリマー溶液の使用。
【請求項１１】
医薬品のための補助物としてのポリマー溶液であって、
ａ）少なくとも１種の少なくとも部分的に水溶性の多糖または多糖誘導体、
ｂ）ポリスチレンスルホン酸の少なくとも１種の水溶性のアルカリ塩またはアルカリ土類塩、および
ｃ）水
を含有し、前記溶液は目視により透明であり、前記多糖または多糖誘導体は、ヒアルロン酸、セルロースまたはそれらの塩、エーテル若しくはエステルから選択される、ポリマー溶液。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の主題は、関節内補充療法のため、特に関節症の治療のためのポリマー溶液である。
【背景技術】
【０００２】
関節症（変形関節症）は広範な関節の変性疾患である。それは、軟骨表面に対する損傷（浸食）、軟骨片の剥離、および軟骨片によって引き起こされる滑膜の炎症に関連する。軽度および中等度の関節症の場合、患者の疼痛状態を改善し、同時に関節症の進行を減少させるためにヒアルロン酸の関節内注射（関節内補充療法）を使用する試みが何年間もなされてきた。
【０００３】
ヒアルロン酸は関節内の体液（滑液）の天然成分である。ヒアルロン酸は滑液内の潤滑剤として作用する。ヒアルロン酸水溶液は粘弾性であることが特に有益である。これは非常に良好な潤滑および滑走特性を生じる。
【０００４】
有益な潤滑特性に基づいて、ヒアルロン酸水溶液がほぼ２０年にわたって関節内補充療法のために使用されている。この従来技術によれば、発酵によって生成されたヒアルロン酸が使用される。この他に、関節内補充療法のための、カルボキシメチルセルロースおよびメチルセルロースなどの水溶性セルロース誘導体、ならびにヒドロキシエチルデンプンなどのデンプン誘導体の使用が、原則として実施可能であるように見える。
【０００５】
関節内補充療法のために滅菌ヒアルロン酸水溶液を使用することが慣例的である。ヒアルロン酸の水溶液の使用に関連する１つの問題は、それらが、関節空間内への注射後、比較的短時間で固有のヒアルロニダーゼによって酵素的に分解されること、および所望の潤滑効果がこのプロセスに起因して減少することである。したがって、固有のヒアルロニダーゼに対して、より安定である水性ポリマー溶液が望まれる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、ヒアルロニダーゼによって分解され得ない少なくとも部分的に水溶性のポリマーを含有する水性ポリマー溶液の開発である。開発されるポリマー溶液は、ヒアルロン酸水溶液と比較してヒアルロニダーゼに対して、より安定であるべきである。
【０００７】
本発明の別の目的は、水溶液中で互いに相溶性である少なくとも部分的に水溶性のポリマーの組み合わせを見つけることである。このことは、これらのポリマーの組み合わせが、水溶液中で１つまたは両方のポリマーの凝集を生じてはいけないことを意味する。ポリマーの組み合わせは、目視により透明である水性ポリマー溶液を形成しなければならない。
【０００８】
本発明の別の目的は、開発されたポリマー溶液を滅菌するための方法を開発することである。この方法は、ポリマー溶液を変色させずに滅菌を可能にする。滅菌方法は、２種の少なくとも部分的に水溶性のポリマーが、滅菌プロセスに起因してポリマー溶液から凝集しないこと、およびポリマーが溶液中に存在し続けることを確実にしなければならない。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の目的は請求項１によって達成される。
【００１０】
本発明は、関節内補充療法のため、特に関節症の治療のためのポリマー溶液である。前記ポリマーは、
ａ）少なくとも１種の少なくとも部分的に水溶性の多糖もしくは多糖誘導体、または少なくとも１種の少なくとも部分的に水溶性の多糖と少なくとも１種の少なくとも部分的に水溶性の多糖誘導体の混合物、
ｂ）ポリスチレンスルホン酸の少なくとも１種の水溶性のアルカリ塩またはアルカリ土類塩、および
ｃ）水
を含有する。
【００１１】
驚くべきことに、ヒアルロン酸などの水溶性多糖、ならびにカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、およびヒドロキシエチルセルロースなどの水溶性多糖誘導体を含有する水性ポリマー溶液、ならびにポリスチレンスルホン酸のアルカリ塩およびアルカリ土類塩は、目視により透明である非凝集溶液を形成することが見出された。さらに、ヒアルロン酸およびポリスチレンスルホン酸のアルカリ塩またはアルカリ土類塩を含有する水溶液は、ヒアルロニダーゼによる分解に対して安定であることが見出された。
【００１２】
同様に、
ａ）少なくとも１種の少なくとも部分的に水溶性の多糖、または少なくとも１種の少なくとも部分的に水溶性の多糖誘導体、または少なくとも１種の少なくとも部分的に水溶性の多糖と少なくとも１種の少なくとも部分的に水溶性の多糖誘導体の混合物と、
ｂ）ポリスチレンスルホン酸の少なくとも１種の水溶性のアルカリ塩またはアルカリ土類塩と、
ｃ）水と、
ｄ）任意に、３−ヒドロキシプロピオン酸と、
ｅ）任意に、少なくとも１種の消炎剤と、
ｆ）任意に、少なくとも１種の抗生物質と、
ｇ）任意に、少なくとも１種の免疫抑制剤と、
ｈ）任意に、少なくとも１種の細胞増殖抑制剤と
からなるポリマー溶液もまた、本発明である。
【００１３】
ａ）少なくとも１種の少なくとも部分的に水溶性の多糖または多糖誘導体、
ｂ）ポリスチレンスルホン酸の少なくとも１種の水溶性のアルカリ塩またはアルカリ土類塩、
ｃ）水、および
ｄ）３−ヒドロキシプロピオン酸
を含有するポリマー溶液もまた、本発明である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明によれば、多糖は天然多糖および多糖誘導体である。本発明によれば、多糖誘導体は、塩、エーテル、酸のエステルまたはエステル、特に多糖のアルカリ金属塩、特にナトリウム塩およびカリウム塩であると理解されるものとする。例としては、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸のナトリウム塩、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースのナトリウム塩、ヒドロキシエチルセルロース、セルロースエーテル、デンプン、デンプンエーテル、グアー、キチン、キトサンが挙げられる。
【００１５】
好ましくは、多糖または多糖誘導体は、ヒアルロン酸のナトリウム塩、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシエチルデンプンおよびメチルセルロースのナトリウム塩からなる群から選択される。
【００１６】
本発明によれば、多糖および多糖誘導体は、前記多糖の混合物または前記多糖誘導体の混合物または前記多糖の少なくとも１種と前記多糖誘導体の少なくとも１種の混合物であることが好適であり得る。
【００１７】
多糖および多糖塩のモル質量Ｍｎは、好ましくは、２０，０００から３，０００，０００ダルトンの範囲である。特に好ましくは、それは５０，０００から２，０００，０００ダルトンの範囲である。
【００１８】
ヒアルロン酸塩のモル質量Ｍｎは、好ましくは、１００，０００から２，０００，０００ダルトンの範囲である。特に好ましくは、それは５００，０００から１，５００，０００ダルトンの範囲である。
【００１９】
本発明によれば、ポリスチレンスルホン酸塩は、以下の構造単位：
【化１】
0006499220.tif 000002
を有するポリマーの塩である。これに関して、ｎは繰り返し構造単位の数を表し、Ｍ＋はアルカリおよびアルカリ土類イオンを示す。ポリスチレンスルホン酸塩は、好ましくは、２０，０００から３，０００，０００ダルトンの範囲のモル質量Ｍｎを有する。好ましくは、ポリスチレンスルホン酸塩は、５０，０００から２，０００，０００ダルトンの範囲の平均モル質量Ｍｎを有する。
【００２０】
ナトリウム塩、カリウム塩およびマグネシウム塩が、ポリスチレン酸のアルカリ塩およびアルカリ土類塩として好ましい。ナトリウム塩およびカリウム塩が特に好ましい。
【００２１】
ポリマー溶液は、多糖もしくは多糖誘導体または前記混合物と、ポリスチレンスルホン酸のアルカリ塩またはアルカリ土類塩の質量比が、１．０対１．０から１対０．０００１であるという点で特徴付けられる。
【００２２】
好ましくは、ポリマー溶液の全ポリマー含有量は、０．１から１０ｗｔ％の範囲、特に好ましくは０．２５から５ｗｔ％の範囲である。
【００２３】
ポリマー溶液は、少なくとも１種の消炎剤、少なくとも１種の抗生物質、少なくとも１種の免疫抑制剤（ａｎｔｉｓｕｐｐｒｅｓｓａｎｔ）、少なくとも１種の細胞増殖抑制剤または前記薬剤の混合物を含有することが有益である。
【００２４】
少なくとも１種の消炎剤は、好ましくは、非ステロイド性消炎剤およびグルココルチコイドからなる群から選択される。適切な例としては、アセチルサリチル酸、イブプロフェン、ジクロフェナク、ケトプロフェン、リン酸デキサメタゾン、トリアムシノロン、プレドニゾン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、およびフルチカゾンが挙げられる。特に好ましくは、少なくとも１種の消炎剤は、リン酸デキサメタゾンおよびトリアムシノロンからなる群から選択される。
【００２５】
ポリマー溶液は、硫酸ゲンタマイシンなどの一般的な抗生物質を含有してもよい。他の例としては、アミノグリコシド系抗生物質およびリンコサミド抗生物質が挙げられる。しかしながら、少なくとも１種の抗生物質は、好ましくは、テトラサイクリン抗生物質からなる群から選択され、特に好ましくは、それは、ドキシサイクリン、クロロテトラサイクリンおよびオキシテトラサイクリンからなる群から選択される。
【００２６】
さらに、免疫抑制剤および細胞増殖抑制剤がそれらに含まれてもよい。特に好ましい例としては、ドキソルビシン、シクロスポリン、メトトレキサート、レフルノミド、アザチオプリン、マイトマイシンＣ、タクロリムス、シロリムス、およびエベロリムスが挙げられる。
【００２７】
ポリマー溶液は、リン酸デキサメタゾン、トリアムシノロン、ドキシサイクリン、クロロテトラサイクリン、オキシテトラサイクリン、ドキソルビシン、シクロスポリン、メトトレキサート、レフルノミド、アザチオプリン、マイトマイシンＣ、タクロリムス、シロリムス、およびエベロリムスからなる群から選択される少なくとも１種の薬剤を含有することが特に好ましい。
【００２８】
消炎剤、特にリン酸デキサメタゾンおよびトリアムシノロンは、関節内補充療法のためのポリマー溶液の使用の間、損傷した軟骨組織において炎症プロセスに対して有益な効果を有することができる。さらに、マイトマイシンＣ、タクロリムス、シロリムス、およびエベロリムスなどの免疫抑制剤が、有益には、ポリマー溶液に加えられてもよい。本発明によれば、ドキシサイクリン、クロロテトラサイクリン、オキシテトラサイクリンなどの抗生物質が、好適には、ポリマー溶液に加えられてもよい。
【００２９】
関節内補充療法のために使用されるヒアルロン酸溶液は、これまで主に、ガンマ放射線によって滅菌されてきた。これに関して２５ｋＧｙ以上の線量が慣例的である。滅菌は最終的にパッケージ化されたヒアルロン酸溶液で行われる。しかしながら、ガンマ放射線への曝露は重大な不利益に関連する。ガンマ放射線への曝露は、ポリマー鎖を分解し、モル質量を明確に減少させ、低分子量の分解産物を生成する。さらに、パッケージング手段、通常、プラスチック製の使い捨て注射器は、ガンマ放射線のために脆弱になり得る。さらに、ヒアルロン酸溶液の変色が副反応に起因して起こる場合がある。特に、ポリマーの分解は、大部分、ガンマ放射線の線量に依存する。一般的なガンマ線源は球面放射線場を有する。このことは、入射線量が滅菌される対象の位置に応じて変化し得ることを意味する。この手段によって、ポリマーの分解は決して均一に進行せず、最終的な粘度の不均一性が起こり得る。滅菌したヒアルロン酸溶液の再現可能な最終的な粘度を達成することは困難である。
【００３０】
代替の滅菌法はヒアルロン酸水溶液の蒸気滅菌であるが、これはヒアルロン酸およびプラスチックパッケージング手段に対する損傷を引き起こす可能性がある。溶液の比較的高い粘度に起因して、ヒアルロン酸水溶液の濾過滅菌は、基本的に実現可能ではないか、または過度の労力を必要とするだけである。濾過滅菌は特定のサイズからの微生物生命体のみを除去する。ウイルスは濾過滅菌によって除去または不活化できない。
【００３１】
前記物理的滅菌法以外に、医薬品を滅菌するための化学化合物を使用することもまた、慣例的である。それらには、ホルムアルデヒド、グルタルジアルデヒド、ｏ−フタルジアルデヒドが挙げられる。アルデヒドによる滅菌は、それらが、ヒトでの使用の間に有害な作用を防ぐために、滅菌後に再び除去することを必要とするという点で不都合である。これにより、アルデヒドによる最終的なパッケージ化されたヒアルロン酸水溶液の滅菌は除外される。なぜなら、アルデヒドは最終的なパッケージ化されたヒアルロン酸溶液から再び除去できないからである。
【００３２】
過酸化水素、過ギ酸、過酢酸、次亜塩素酸（ｈｙｐｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）などの酸化剤、およびクロラミンＴ２またはトリクロロイソシアヌル酸などの次亜塩素酸放出物質が非常に効果的な滅菌手段である。これらの作用物質は、それらが、溶解したヒアルロン酸の顕著な酸化的分解を引き起こすという点で不都合である。さらに、酸化剤の未反応の残留物が、その最終的なパッケージングにおけるヒアルロン酸溶液に残存する場合があり、局所的な毒性作用を有する可能性があり得る。
【００３３】
例えば、ワクチンなどの水性タンパク質溶液は、酸化滅菌剤の作用および種々の物理的滅菌法、例えばガンマ放射線による滅菌に対して非常に感受性があることは医薬業界から知られている。この理由のために、これらの水性タンパク質溶液は最初に濾過滅菌に供され、次いで少量のβ−プロピオラクトンがウイルスを不活化するために加えられる。β−プロピオラクトンは、ウイルスのＤＮＡ／ＲＮＡまたはタンパク質のアミノ基をアシル化する。溶媒として存在する水はβ−プロピオラクトンをゆっくり分解できるので、短期間の後でも水性タンパク質溶液中にもはや活性なβ−プロピオラクトンは存在しない。これまで、気体のβ−プロピオラクトンは芽胞を不可逆的に不活性化できることが知られている（Ｒ．Ｋ．Ｈｏｆｆｍａｎｎ，Ｂ．Ｗａｒｓｈｏｗｓｋｙ：Ｂｅｔａ−Ｐｒｏｐｉｏｌａｃｔｏｎｅ  Ｖａｐｏｒ  ａｓ  ａ  Ｄｉｓｉｎｆｅｃｔａｎｔ．Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９５８  Ｓｅｐｔ．；６（５）：３５８−３６２）。さらに、β−プロピオラクトンは、非水性有機モノマー／モノマー混合物および有機モノマーを含有するペースト状セメント中で芽胞を不活性化することが知られている（欧州特許第２５９６８１２Ｂ１号）。
【００３４】
しかしながら、栄養型以外に、微生物はまた、芽胞などの生殖形態も有する。微生物のこれらの生殖生存形態は、望ましくない生存条件の間に存続する手段として、グラム陽性細菌、特にバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属およびクロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）属によって形成される。それらの静止状態において、芽胞は活性代謝を有さず、化学物質の作用および他の環境作用から胞子のコアを大部分保護する多層胞子カプセルを保有する。このことは、胞子を、熱および化学物質の作用に対して非常に耐性にする（Ｂｏｒｉｃｋ，Ｐ．Ｍ．：Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｓｔｅｒｉｌｉｚｅｒｓ．Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１０（１９６８）２９１−３１２；Ｇｏｕｌｄ，Ｇ．Ｗ．：Ｒｅｃｅｎｔ  ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ  ｏｆ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ａｎｄ  ｄｏｒｍａｎｃｙ  ｉｎ  ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｓｐｏｒｅｓ．  Ｊ．  Ａｐｐｌ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．４２（１９７７）２９７−３０９；Ｇｏｕｌｄ，Ｇ．Ｗ．：Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ａｎｄ  ｄｏｒｍａｎｃｙ．ｐ．１７３−２０９．Ｉｎ  Ｈｕｒｓｔ，Ａ．  ａｎｄ  Ｇｏｕｌｄ，Ｇ．  Ｗ．（ｅｄ．），Ｔｈｅ  ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｓｐｏｒｅ．  ｖｏｌ．２  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｉｎｃ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８３）。それらの高い耐性に起因して、芽胞は滅菌プロセスの有効性の検証および制御のための生物学的指標として使用される。このことは、芽胞の不活性化が、全ての栄養型微生物形態が死滅していることを示すという仮定に基づく。グラム陽性細菌の芽胞は国際的耐性クラス（ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｃｌａｓｓ）ＩＩＩに分類される。耐性クラスＩは、無胞子形成細菌および胞子形成細菌の栄養型を含み、耐性クラスＩＩは１０５℃の蒸気流において数分間以内に死滅する胞子を含む。ＤＡＢ２００８（Ｄｅｕｔｓｃｈｅｓ  Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌｂｕｃｈ）に従って、耐性クラスＩ〜ＩＩＩの全ての微生物は滅菌の過程において不可逆的に殺傷または不活性化されなければならない。
【００３５】
さらに、本発明によるポリマー溶液を滅菌する方法もまた、本発明である。この方法は、少なくとも１種の少なくとも部分的に水溶性の多糖または多糖誘導体、ポリスチレンスルホン酸の１種の水溶性のアルカリ塩またはアルカリ土類塩、水、および少なくとも０．５ｗｔ％のβ−プロピオラクトン含有する混合物を調製すること、ならびにポリマー溶液が少なくとも２４時間、４〜４０℃にて保存されることを特徴とする。驚くべきことに、β−プロピオラクトンでの本発明によるポリマー溶液の滅菌は、付随する望ましくない変色を生じずに成功することが明らかにされた。さらに、驚くべきことに、β−プロピオラクトンによる滅菌は、ポリスチレンスルホン酸と組み合わせたヒアルロン酸、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースを含有するポリマー溶液中の沈殿に関連しないが、それらは溶解したままであり、目視により透明であることが明らかにされた。
【００３６】
水性ポリマー溶液を滅菌するために０．５〜２．０ｗｔ％のβ−プロピオラクトンを使用することが好ましい。芽胞の安全な不活性化がこの濃度範囲で確実にされる。
【００３７】
本発明によるポリマー溶液は、関節内補充療法のための手段、および医薬品のための補助物として提供される。
【００３８】
本発明は以下に提示される実施例によって例示されるが、それらは本発明の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【００３９】
以下の多糖および／または多糖誘導体を本明細書以下の実験において使用した：
ＮａＨｙａ：ヒアルロン酸のナトリウム塩（Ｍｎ約９０万ダルトン）、
ＣＭＣ：カルボキシメチルセルロースのナトリウム塩（Ｍｎ約９０，０００ダルトン）、
ＭＣ：メチルセルロース（ＳＭ−４０００）、
ＨＥＣ：ヒドロキシエチルセルロース（６０ＳＨ−４０００）、
ＰＳＳ１：ポリスチレンスルホン酸のナトリウム塩（Ｍｎ約７０，０００ダルトン）、
ＰＳＳ２：ポリスチレンスルホン酸のナトリウム塩（Ｍｎ約１，３００，０００ダルトン）。
【００４０】
７．４のｐＨ値を有するリン酸緩衝液を調製した。この目的のために、１．６５ｇのリン酸水素カリウムおよび９．７１ｇのリン酸水素二ナトリウム二水和物を１リットルの蒸留水に溶解した。
【００４１】
実施例１
合計５．０ｍｌのｐＨ７．４のリン酸緩衝液をビーズ付きの縁のあるバイアル（ｂｅａｄｅｄ  ｒｉｍ  ｖｉａｌ）に入れた。合計０．２５ｗｔ％、０．５ｗｔ％、１．０ｗｔ％および２．０ｗｔ％の多糖／多糖誘導体およびポリスチレンスルホン酸のナトリウム塩（ＰＳＳ１およびＰＳＳ２）を室温にてそれらの緩衝液中に溶解した。ポリマー溶液を２４時間後に視覚的に検査した。
【００４２】
【表１】
0006499220.tif 000003
【００４３】
【表２】
0006499220.tif 000004
【００４４】
【表３】
0006499220.tif 000005
【００４５】
【表４】
0006499220.tif 000006
【００４６】
【表５】
0006499220.tif 000007
【００４７】
【表６】
0006499220.tif 000008
【００４８】
実施例２
さらに抗生物質ドキシサイクリンを含んだことを除いてポリマー溶液を実施例１と同様に調製した。ドキシサイクリン−ヒアレート（ｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ−ｈｙａｌａｔｅ）（ドキシサイクリン塩酸塩−ヘミエタノラート半水和物）をこの目的のために使用した。ポリマー溶液を室温で２４時間の保存後に視覚的に調べた。
【００４９】
【表７】
0006499220.tif 000009
【００５０】
実施例３
さらに抗生物質硫酸ゲンタマイシンを含んだことを除いてポリマー溶液を実施例１と同様に調製した。硫酸ゲンタマイシン（５８０の活量係数）をこの目的のために使用した。ポリマー溶液を室温で２４時間の保存後に視覚的に調べた。
【００５１】
【表８】
0006499220.tif 000010
【００５２】
実施例４
さらに消炎剤リン酸デキサメタゾンを含んだことを除いてポリマー溶液を実施例１と同様に調製した。リン酸デキサメタゾンのナトリウム塩（ＮａＤｅｘＰ）をこの目的のために使用した。ポリマー溶液を室温で２４時間の保存後に視覚的に調べた。
【００５３】
【表９】
0006499220.tif 000011
【００５４】
実施例５
リン酸緩衝液ｐＨ７．４を使用してＮａＨｙａの０．２５ｗｔ％溶液を調製した。次いで１０ｍｇ、１．０ｍｇ、０．１ｍｇ、および０．０１ｍｇのＰＳＳ１を各々４０．０ｇの溶液に加えた。０．１ｍｇおよび０．０１ｍｇのＰＳＳ１の添加のために、リン酸緩衝液中の１０ｍｇのＰＳＳ１の溶液を調製し、この溶液の対応するアリコートをＮａＨｙａ溶液に加えた。リン酸緩衝液ｐＨ７．４中の２６．７ＩＵ／μｌのウシヒアルロニダーゼ（Ｋｒａｅｂｅｒ、３２９ＩＵ／ｍｇ）を含有する溶液を調製した。次いで、このヒアルロニダーゼ溶液の１５０μｌのアリコートを４０ｇのＮａＨｙａ−ＰＳＳ１溶液に加えた。次いで溶液をＵｂｂｅｌｏｈｄｅ  粘度計（キャピラリーＩ）において３７℃にて１５分間維持した。次いでポリマー溶液の通過時間を決定した。次いでポリマー溶液をＵｂｂｅｌｏｈｄｅ粘度計において３７℃に維持した。ポリマー溶液の通過時間を連続して１時間間隔で再び測定した。さらに、ヒアルロニダーゼを加えた０．２５ｗｔ％のＮａＨｙａ溶液の通過時間を参照として測定した。
【００５５】
【表１０】
0006499220.tif 000012
【００５６】
ポリマー溶液の通過時間は溶解したポリマーのモル質量に比例する。通過時間の減少はモル質量の減少に関連する。結果は、ヒアルロン酸およびポリスチレンスルホン酸を含有するポリマー溶液が、基本的に５時間の試験時間内にＵｂｂｅｌｏｈｄｅ粘度計において通過時間の減少を示さないことを示す。ポリマー溶液に含まれるヒアルロン酸はヒアルロニダーゼによって分解されないことは明白である。
【００５７】
対照のために、ポリスチレンスルホン酸に対するヒアルロニダーゼの影響を別の実験において調べた。実験の設定は以前の実験のものと同じであった。
【００５８】
【表１１】
0006499220.tif 000013
【００５９】
結果は、ポリスチレンスルホン酸水溶液が３７℃にてヒアルロニダーゼによって分解され得ないことを示した。
【００６０】
実施例６
リン酸緩衝液ｐＨ７．４を使用してＮａＨｙａの０．２５ｗｔ％溶液を調製した。次いで１０ｍｇ、１．０ｍｇ、０．１ｍｇ、および０．０１ｍｇのＰＳＳ２を各々４０．０ｇの溶液に加えた。０．１ｍｇおよび０．０１ｍｇのＰＳＳ２の添加のために、リン酸緩衝液中の１０ｍｇのＰＳＳ２の溶液を調製し、この溶液の対応するアリコートをＮａＨｙａ溶液に加えた。リン酸緩衝液ｐＨ７．４中の２６．７ＩＵ／μｌのウシヒアルロニダーゼ（Ｋｒａｅｂｅｒ、３２９ＩＵ／ｍｇ）を含有する溶液を調製した。次いで、このヒアルロニダーゼ溶液の１５０μｌのアリコートを４０ｇのＮａＨｙａ−ＰＳＳ２溶液に加えた。次いで溶液をＵｂｂｅｌｏｈｄｅ  粘度計（キャピラリーＩ）において３７℃にて１５分間維持した。次いでポリマー溶液の通過時間を決定した。この目的のためにポリマー溶液をＵｂｂｅｌｏｈｄｅ粘度計において３７℃に維持した。ポリマー溶液の通過時間を連続して１時間間隔で再び測定した。さらに、ヒアルロニダーゼを加えた０．２５ｗｔ％のＮａＨｙａ溶液の通過時間を参照として測定した。
【００６１】
【表１２】
0006499220.tif 000014
【００６２】
ポリマー溶液の通過時間は溶解したポリマーのモル質量に比例する。通過時間の減少はモル質量の減少に関連する。結果は、ヒアルロン酸およびポリスチレンスルホン酸を含有するポリマー溶液が、基本的に５時間の試験時間内にＵｂｂｅｌｏｈｄｅ粘度計において通過時間の減少を示さないことを示す。明らかに、ヒアルロン酸／ポリスチレンスルホン酸溶液中のヒアルロン酸はヒアルロニダーゼによって分解されていない。
【００６３】
実施例７
まず、各々３０．０ｍＬのリン酸緩衝液（ｐＨ値７．４）を使用してポリスチレンスルホン酸を含有する多糖の溶液を調製した。合計１０６ｃｆｕのバチルスアトロフェウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｔｒｏｐｈｅｕｓ）の胞子懸濁液を、滅菌２５ｍＬプラスチックチューブ中の多糖溶液の各々５ｍＬに加えた。次いで、ｖｏｒｔｅｘミキサーを使用して胞子を均質に懸濁した。続いて、０．５ｗｔ％、１．０ｗｔ％、および２．０ｗｔ％のβ−プロピオラクトンを、以前に胞子と混合した各々５．０ｍＬの多糖溶液に加えた。次いで試料をｖｏｒｔｅｘミキサーにおいて再び均質化した。β−プロピオラクトンで処理していない多糖溶液を陽性対照として使用した。室温で４８時間の保存後、多糖溶液をＤＩＮ  ＥＮ  ＩＳＯ  １１７３７、パート２に従って滅菌について試験した。アッセイは２連で行った。
【００６４】
【表１３】
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【００６５】
β−プロピオラクトンで滅菌した多糖溶液は何であれ、陽性対照として使用した未処理の多糖溶液と比較して変色を示さなかった。