(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象から得られた血液試料についてアッセイするための方法であって、
ａ）あらかじめ凍結および融解させた、第１の抗凝固剤で処理された血液試料および第２の抗凝固剤で処理された血液試料を用意するステップと；
ｂ）前記第２の抗凝固剤で処理された血液試料を、
ｉ）プラスミンまたはプラスミノーゲンおよびプラスミノーゲン活性化因子；または
ｉｉ）リン脂質二重層を分解する酵素
と接触させるステップと；
ｃ）人工光源に由来する光を、前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料および第２の抗凝固剤で処理された血液試料の液体部分に通すステップと；
ｄ）前記光の透過率を、前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料および第２の抗凝固剤で処理された血液試料の液体部分を通して測定するステップと
を含む方法。
【請求項２】
ステップａ）が、さらに、あらかじめ凍結および融解させた第３の抗凝固剤で処理された血液試料を用意することを含み、
ステップｂ）が、前記第２の抗凝固剤で処理された血液試料を、プラスミンまたはプラスミノーゲンおよびプラスミノーゲン活性化因子と接触させることを含み、さらに、前記第３の抗凝固剤で処理された血液試料を、リン脂質二重層を分解する酵素と接触させることを含み、
ステップｃ）が、さらに、人工光源に由来する光を、第３の抗凝固剤で処理された血液試料の液体部分に通すことを含み、
ステップｄ）が、さらに、第３の抗凝固剤で処理された血液試料の液体部分に通した前記光の透過率を測定することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料の液体部分に通した前記光の前記透過率を、前記第２の抗凝固剤で処理された血液試料および第３の抗凝固剤で処理された血液試料の液体部分に通した光の前記透過率と比較するステップをさらに含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記第２の抗凝固剤で処理された血液試料の液体部分に通した光の前記透過率を、前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料の液体部分に通した光の前記透過率から減じ、前記第３の抗凝固剤で処理された血液試料の液体部分に通した光の前記透過率を、前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料の液体部分に通した光の前記透過率から減じるステップをさらに含む、請求項２または３に記載の方法。
【請求項５】
前記第３の抗凝固剤で処理された血液試料の液体部分に通した光の前記透過率を、前記第２の抗凝固剤で処理された血液試料の液体部分に通した光の前記透過率から減じるステップをさらに含むか、あるいは前記第３の抗凝固剤で処理された血液試料の液体部分に通した、各波長における光の前記透過率を、前記第２の抗凝固剤で処理された血液試料の液体部分に通した、各波長における光の前記透過率から減じるステップをさらに含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記プラスミノーゲンおよび前記プラスミノーゲン活性化因子と接触させるステップが、プラスミノーゲン、ストレプトキナーゼおよびウロキナーゼと接触させることを含み、ここで、前記プラスミノーゲン活性化因子が、ストレプトキナーゼおよび／またはウロキナーゼである、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記プラスミンと接触させるステップが、プラスミノーゲンと、ストレプトキナーゼと、ウロキナーゼとを組み合わせることにより、プラスミンを産生させること、および前記試料を前記産生させたプラスミンと接触させることを含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記光が、７７５〜７９５ｎｍの間および／または６８０〜７００ｎｍの間の波長である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記光が、第１の波長および第２の波長である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法であって、前記第１の波長が７７５〜７９５ｎｍの間であり、前記第２の波長が６８０〜７００ｎｍの間である、方法。
【請求項１０】
前記第１の波長が７８５ｎｍである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記第２の波長が６９０ｎｍである、請求項９または１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料の液体部分に通した、前記第１の波長および前記第２の波長における前記光の前記透過率を、前記第２の抗凝固剤で処理された血液試料および第３の抗凝固剤で処理された血液試料の液体部分に通した、前記第１の波長および前記第２の波長における光の前記透過率と比較するステップをさらに含む、請求項２に従属する場合の請求項９〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記第２の抗凝固剤で処理された血液試料の液体部分に通した、各波長における光の前記透過率を、前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料の液体部分に通した、各波長における光の前記透過率から減じ、前記第３の抗凝固剤で処理された血液試料の液体部分に通した、各波長における光の前記透過率を、前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料の液体部分に通した、各波長における光の前記透過率から減じるステップをさらに含む、請求項２に従属する場合の請求項９〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記光が偏光である、かつ／または前記光を、光ダイオードパワーセンサーを使用して測定する、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記光を、２つの光ダイオードパワーセンサーを使用して測定し、前記光を、前記２つの光ダイオードパワーセンサーに到達する前に、分岐型ケーブルシステムに通す、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記人工光源が、レーザーである、請求項１、８、９、１４または１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記リン脂質二重層を分解する酵素が、ホスホリパーゼＡ２である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記第１の抗凝固剤で処理された試料を、水と接触させる、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、米国特許法§１１９（ｅ）の下、発明の名称が「血液解析」であり、２０１３年６月２１日に出願された米国仮出願第６１／８３８，１１３号の利益を請求し、その内容は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
細菌感染は、凝固亢進から急性播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ：ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｅｄ  ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ  ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ）に及ぶ止血の変化と関連する。感染に関連する播種性血管内凝固症候群は凝固促進性経路の活性化が関与し、これは結果として微小血栓および臓器不全をもたらす（１〜２）。ＤＩＣは、重度の敗血症の患者のうちの約３０％において生じる（３）。ＤＩＣについての既存の診断検査は、治療に著明な影響を及ぼすわけではない特異度レベルおよび感度レベルにより妨げられている（４〜６）。
【０００３】
感染および敗血症についての多くのバイオマーカーが報告されている。Ｄダイマーアッセイは、フィブリン分解産物の検出に基づく。近年の一研究は、高レベルのＤダイマーが、救急科で感染または敗血症が同定されている患者における２８日以内死亡率と関連することを示唆している（８）。Ｄダイマー検査の診断的有用性は、陰性予測値が高く、特異度は低いが感度は高いことにある。プロカルシトニン（ＰＣＴ：ｐｒｏｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ）法は、既往歴、身体所見、および微生物評価の状況に結果を組み入れると、重症の患者における敗血症についての早期の診断に有用であることが示されている（９）。ＰＣＴについての広範な研究に先立って、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ：Ｃ−ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ）の有用性について評価されている。ＣＲＰは、敗血症を、感染を伴わない全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）と識別しにくいことが見出された。敗血症が疑われる症例についての近年の成人救急科研究では、ＰＣＴ、ＩＬ−６、およびＣＲＰは、複数の感染パラメータと高度に相関したが、全て、独立の第一線の診断ツールとしての使用には、判別力が不十分であることが見出された（１０）。これらのバイオマーカー法は、試料として血漿を使用することに基づく。
【０００４】
トロンボエラストメトリー（ｔｈｒｏｍｂｏｅｌａｓｔｏｍｅｔｒｙ）またはＴＥＭ（かつては、回転トロンボエラストメトリー（ｒｏｔａｔｉｏｎａｌ  ｔｈｒｏｍｂｅｌａｓｔｏｍｅｔｒｙ）として公知であった）とは、全血液中の止血検査のための確立された方法である。ＴＥＭでは、凝血時およびその後の線維素溶解時における凝固因子／凝固阻害剤、抗凝固薬、血液細胞、および血小板の間の相互作用を評価する。このアッセイは、血管内で見出されるレオロジー条件を模倣する容器内で実行される。ＴＥＭは、元はH. Hartertにより１９４８年に記載されたトロンボエラストグラフィー法（７）を増強したものである。ＴＥＭは、懸濁させたピンのインピーダンスに基づき、線溶亢進について診断するための信頼できる迅速な検査である。ＴＥＭの主要な結果は、凝血塊が反応容器内で形成されるかまたは溶解する時間にわたる弾性を示す反応曲線である。この方法が機能するには、赤血球の完全性の保存が不可欠である。
血液中のアッセイに基づく感染症の診断における近年の進歩は、その開示が参照により本明細書に組み込まれる、米国公開第２０１１００５９４６０号において記載されている。この出願公開では、凍結させた血液を振とうさせた後で、泡沫が溶解する速度の測定を伴うアッセイについて記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許出願公開第２０１１００５９４６０号明細書
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の態様は、凍結融解サイクルの後で、多様な、異なる形で加工された血液試料（例えば、プラスミンまたはホスホリパーゼを伴う）を通した、複数の波長にわたる偏光の透過率により、対象における感染の存在または非存在だけでなく、また、感染の種類（例えば、血流感染、尿路感染、細菌性肺炎、下気道感染、または全身性ウイルス感染）も同定されたという、予測外の知見に部分的に基づく。
【０００７】
本発明の態様は、血液が、感染者に由来する血液であるのか、非感染者に由来する血液であるのかに応じて、異なる特徴を有するという発見を伴う。これらの特徴は、多様な条件下で光を透過させる血液の能力を観察することにより明らかにすることができる。一態様では、観察は、血液を凍結および融解させるステップ、ならびに／または血液を酵素で処理するステップなど、血液を異なる加工ステップで処理することにより増強することができる。別の態様では、観察は、異なる波長の光を透過させる血液の能力を測定することにより増強することができる。別の態様では、観察は、同じ波長の光または多数の波長にわたる光の透過率を、２つまたはそれ超の条件下で、互いと比較することにより増強することができる（下記の記載では、第１の血液試料を通した光の透過率を、第２の血液試料を通した光の透過率と比較するという場合、第１の試料を通した光の透過率について得られた値を、第２の試料を通した光の透過率について得られた値と比較することを意味することが典型的である）。各試料についての光の透過率の測定は、同じ波長および同じ偏光で実行することが典型的である。比較は、他の値より大きい値または小さい値など、相対値を決定することの場合もあり、値を加え合わせることの場合もあり、値を互いから減じることの場合もあり、値を乗じることなどの場合もある。下記でみられる通り、感染の存在に特徴的であるだけでなく、特定の感染（なおまたは感染の特異的部位）に特異的でもあるパターンを明らかにすることができる。血液は、特異的な様式で、特異的感染の影響を受け、その特異性は、異なる条件下で光を透過させる血液の能力に反映されうると考えられる。
【０００８】
本発明の一部の態様は、対象から得られた血液試料についてアッセイするための方法に関する。一部の実施形態では、方法は、
ａ）あらかじめ凍結および融解させた、第１の抗凝固剤で処理された血液試料、第２の抗凝固剤で処理された血液試料、および第３の抗凝固剤で処理された血液試料を用意するステップと；
ｂ）第２の抗凝固剤で処理された血液試料を、プラスミンまたはプラスミノーゲンおよびプラスミノーゲン活性化因子と接触させ、第３の抗凝固剤で処理された血液試料を、リン脂質二重層を分解する酵素と接触させるステップと；
ｃ）人工光源に由来する光を、第１の抗凝固剤で処理された血液試料、第２の抗凝固剤で処理された血液試料、および第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通すステップと；
ｄ）第１の抗凝固剤で処理された血液試料、第２の抗凝固剤で処理された血液試料、および第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の透過率を測定するステップと
を含む。
【０００９】
一部の実施形態では、方法は、第１の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の透過率を、第２の抗凝固剤で処理された血液試料および第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の透過率と比較するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、第２の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の透過率を、第１の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の透過率から減じ、第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の透過率を、第１の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の透過率から減じるステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の透過率を、第２の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の透過率から減じるステップをさらに含む。一部の実施形態では、光は、７７５〜７９５ｎｍの間の波長である。一部の実施形態では、光は、６８０〜７００ｎｍの間の波長である。
【００１０】
本明細書で提示される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、光は、第１の波長および第２の波長である。一部の実施形態では、第１の波長は７７５〜７９５ｎｍの間であり、第２の波長は６８０〜７００ｎｍの間である。一部の実施形態では、第１の波長は７８５ｎｍであり、第２の波長は６９０ｎｍである。一部の実施形態では、方法は、第１の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、第１の波長および第２の波長における光の透過率を、第２の抗凝固剤で処理された血液試料および第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、第１の波長および第２の波長における光の透過率と比較するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、第２の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、各波長における光の透過率を、第１の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、各波長における光の透過率から減じ、第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、各波長における光の透過率を、第１の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、各波長における光の透過率から減じるステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、各波長における光の透過率を、第２の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、各波長における光の透過率から減じるステップをさらに含む。
【００１１】
本明細書で提示される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、光は、偏光である。本明細書で提示される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、人工光源は、レーザーである。本明細書で提示される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、光を、光ダイオードパワーセンサーを使用して測定する。一部の実施形態では、光を、２つの光ダイオードパワーセンサーを使用して測定し、光を、２つの光ダイオードパワーセンサーに到達する前に、分岐型ケーブルシステムに通す。
【００１２】
本明細書で提示される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、リン脂質二重層を分解する酵素は、ホスホリパーゼＡ２である。本明細書で提示される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、プラスミノーゲン活性化因子は、ストレプトキナーゼおよび／またはウロキナーゼである。本明細書で提示される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、プラスミノーゲンおよびプラスミノーゲン活性化因子と接触させるステップは、プラスミノーゲン、ストレプトキナーゼ、およびウロキナーゼと接触させることを含む。本明細書で提示される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、プラスミンと接触させるステップは、プラスミノーゲンと、ストレプトキナーゼと、ウロキナーゼとを組み合わせることにより、プラスミンを産生させ、試料を、産生させたプラスミンと接触させることを含む。本明細書で提示される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、第１の試料を、水と接触させる。本明細書で提示される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、対象は、動物、哺乳動物、イヌ、ネコ、ブタ、ヤギ、ウマ、ウシ、またはヒトでありうる。
【００１３】
本発明の一態様によれば、対象から得られた血液試料についてアッセイするための方法が提供される。方法は、ａ）あらかじめ凍結および融解させた、第１の抗凝固剤で処理された血液試料および第２の抗凝固剤で処理された血液試料を用意するステップと；ｂ）第２の抗凝固剤で処理された血液試料は、
ｉ）プラスミンまたはプラスミノーゲンおよびプラスミノーゲン活性化因子；または
ｉｉ）リン脂質二重層を分解する酵素
と接触させるが、第１の試料は、これらと接触させないステップと；
ｃ）人工光源に由来する光を、第１の抗凝固剤で処理された血液試料および第２の抗凝固剤で処理された血液試料に通すステップと；ｄ）光の透過率を、第１の抗凝固剤で処理された血液試料および第２の抗凝固剤で処理された血液試料を通して測定するステップとを伴う。
【００１４】
本発明の別の態様によれば、対象から得られた血液試料についてアッセイするための方法が提供される。方法は、ａ）あらかじめ凍結および融解させた、第１の抗凝固剤で処理された血液試料、第２の抗凝固剤で処理された血液試料、および第３の抗凝固剤で処理された血液試料を用意するステップと；ｂ）第２の抗凝固剤で処理された血液試料は、プラスミンまたはプラスミノーゲンおよびプラスミノーゲン活性化因子と接触させるが、第１の抗凝固剤で処理された血液試料は、これらと接触させず、第３の抗凝固剤で処理された血液試料は、リン脂質二重層を分解する酵素と接触させるが、第１の抗凝固剤で処理された血液試料は、これらと接触させないステップと；ｃ）人工光源に由来する光を、第１の抗凝固剤で処理された血液試料、第２の抗凝固剤で処理された血液試料、および第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通すステップと；ｄ）第１の抗凝固剤で処理された血液試料、第２の抗凝固剤で処理された血液試料、および第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の透過率を測定するステップとを伴う。
【００１５】
本発明のさらに別の態様に従い、対象から得られた血液試料についてアッセイするための方法が提供される。方法は、ａ）あらかじめ凍結および融解させた、抗凝固剤で処理された血液試料を用意するステップと；ｂ）抗凝固剤で処理された血液試料を、リン脂質二重層を分解する酵素と接触させるステップと；ｃ）人工光源に由来する光を、抗凝固剤で処理された血液試料に通すステップと；ｄ）光の透過率を、抗凝固剤で処理された血液試料を通して測定するステップとを伴う。
【００１６】
上記実施形態のうちのいずれかでは、光は、７７５〜７９５ｎｍの間の波長でありうる。上記実施形態のうちのいずれかでは、光は、６８０〜７００ｎｍの間の波長でありうる。本発明の態様のうちのいずれかによる方法の一部の実施形態では、光は、異なる第１の波長および第２の波長である。一部の実施形態では、第１の波長は７７５〜７９５ｎｍの間であり、第２の波長は６８０〜７００ｎｍの間である。上記実施形態のうちのいずれかでは、光は、偏光でありうる。上記実施形態のうちのいずれかでは、人工光源は、レーザーでありうる。上記実施形態のうちのいずれかでは、光は、光ダイオードパワーセンサーを使用して測定することができる。上記実施形態のうちのいずれかでは、リン脂質を分解する酵素は、ホスホリパーゼＡ２でありうる。上記実施形態のうちのいずれかでは、プラスミノーゲン活性化因子は、ストレプトキナーゼおよび／またはウロキナーゼである。上記実施形態のうちのいずれかでは、プラスミノーゲンおよびプラスミノーゲン活性化因子と接触させるステップは、プラスミノーゲン、ストレプトキナーゼ、およびウロキナーゼと接触させることを含む。上記実施形態のうちのいずれかでは、プラスミンと接触させるステップは、プラスミノーゲンと、ストレプトキナーゼと、ウロキナーゼとを組み合わせることにより、プラスミンを産生させ、試料を、産生させたプラスミンと接触させることを含む。上記実施形態のうちのいずれかでは、対象は、動物、哺乳動物、イヌ、ネコ、ブタ、ヤギ、ウマ、ウシ、またはヒトでありうる。
【００１７】
下記では、本発明のこれらの態様および他の態様について記載する。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
対象から得られた血液試料についてアッセイするための方法であって、
ａ）あらかじめ凍結および融解させた、第１の抗凝固剤で処理された血液試料、第２の抗凝固剤で処理された血液試料、および第３の抗凝固剤で処理された血液試料を用意するステップと；
ｂ）前記第２の抗凝固剤で処理された血液試料を、プラスミンまたはプラスミノーゲンおよびプラスミノーゲン活性化因子と接触させ、前記第３の抗凝固剤で処理された血液試料を、リン脂質二重層を分解する酵素と接触させるステップと；
ｃ）人工光源に由来する光を、前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料、第２の抗凝固剤で処理された血液試料、および第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通すステップと；
ｄ）前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料、第２の抗凝固剤で処理された血液試料、および第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した前記光の透過率を測定するステップと
を含む方法。
（項目２）
前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料に通した前記光の前記透過率を、前記第２の抗凝固剤で処理された血液試料および第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の前記透過率と比較するステップをさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記第２の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の前記透過率を、前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の前記透過率から減じ、前記第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の前記透過率を、前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の前記透過率から減じるステップをさらに含む、項目１または２に記載の方法。
（項目４）
前記第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の前記透過率を、前記第２の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の前記透過率から減じるステップをさらに含む、項目３に記載の方法。
（項目５）
前記光が、７７５〜７９５ｎｍの間の波長である、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目６）
前記光が、６８０〜７００ｎｍの間の波長である、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目７）
前記光が、第１の波長および第２の波長である、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目８）
前記第１の波長が７７５〜７９５ｎｍの間であり、前記第２の波長が６８０〜７００ｎｍの間である、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記第１の波長が７８５ｎｍであり、前記第２の波長が６９０ｎｍである、項目８に記載の方法。
（項目１０）
前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、前記第１の波長および前記第２の波長における前記光の前記透過率を、前記第２の抗凝固剤で処理された血液試料および第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、前記第１の波長および前記第２の波長における光の前記透過率と比較するステップをさらに含む、項目７から９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１）
前記第２の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、各波長における光の前記透過率を、前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、各波長における光の前記透過率から減じ、前記第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、各波長における光の前記透過率を、前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、各波長における光の前記透過率から減じるステップをさらに含む、項目９に記載の方法。
（項目１２）
前記第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、各波長における光の前記透過率を、前記第２の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、各波長における光の前記透過率から減じるステップをさらに含む、項目３に記載の方法。
（項目１３）
前記光が、偏光である、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４）
前記人工光源が、レーザーである、項目９から１１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
前記光を、光ダイオードパワーセンサーを使用して測定する、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１６）
前記光を、２つの光ダイオードパワーセンサーを使用して測定し、前記光を、前記２つの光ダイオードパワーセンサーに到達する前に、分岐型ケーブルシステムに通す、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
前記リン脂質二重層を分解する酵素が、ホスホリパーゼＡ２である、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１８）
前記プラスミノーゲン活性化因子が、ストレプトキナーゼおよび／またはウロキナーゼである、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１９）
前記プラスミノーゲンおよび前記プラスミノーゲン活性化因子と接触させるステップが、プラスミノーゲン、ストレプトキナーゼ、およびウロキナーゼと接触させることを含む、項目１から１８のいずれか一項に記載の方法。
（項目２０）
前記プラスミンと接触させるステップが、プラスミノーゲンと、ストレプトキナーゼと、ウロキナーゼとを組み合わせることにより、プラスミンを産生させ、前記試料を、前記産生させたプラスミンと接触させることを含む、項目１から１８のいずれか一項に記載の方法。
（項目２１）
前記第１の試料を、水と接触させる、前記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目２２）
対象から得られた血液試料についてアッセイするための方法であって、
ａ）あらかじめ凍結および融解させた、第１の抗凝固剤で処理された血液試料および第２の抗凝固剤で処理された血液試料を用意するステップと；
ｂ）前記第２の抗凝固剤で処理された血液試料を、
ｉ）プラスミンまたはプラスミノーゲンおよびプラスミノーゲン活性化因子；または
ｉｉ）リン脂質二重層を分解する酵素
と接触させるステップと；
ｃ）人工光源に由来する光を、前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料および第２の抗凝固剤で処理された血液試料に通すステップと；
ｄ）前記光の透過率を、前記第１の抗凝固剤で処理された血液試料および第２の抗凝固剤で処理された血液試料を通して測定するステップと
を含む方法。
（項目２３）
対象から得られた血液試料についてアッセイするための方法であって、
ａ）あらかじめ凍結および融解させた、抗凝固剤で処理された血液試料を用意するステップと；
ｂ）前記抗凝固剤で処理された血液試料を、リン脂質二重層を分解する酵素と接触させるステップと；
ｃ）人工光源に由来する光を、前記抗凝固剤で処理された血液試料に通すステップと；
ｄ）前記光の透過率を、前記抗凝固剤で処理された血液試料を通して測定するステップと
を含む方法。
（項目２４）
前記光が、７７５〜７９５ｎｍの間の波長である、項目２２または２３に記載の方法。
（項目２５）
前記光が、６８０〜７００ｎｍの間の波長である、項目２２から２４のいずれか一項に記載の方法。
（項目２６）
前記光が、第１の波長および第２の波長である、項目２２から２５のいずれか一項に記載の方法。
（項目２７）
前記第１の波長が７７５〜７９５ｎｍの間であり、前記第２の波長が６８０〜７００ｎｍの間である、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記光が、偏光である、項目２２から２７のいずれか一項に記載の方法。
（項目２９）
前記人工光源が、レーザーである、項目２２から２８のいずれか一項に記載の方法。
（項目３０）
前記光を、光ダイオードパワーセンサーを使用して測定する、項目２２から２９のいずれか一項に記載の方法。
（項目３１）
前記リン脂質二重層を分解する酵素が、ホスホリパーゼＡ２である、項目２２から３０のいずれか一項に記載の方法。
（項目３２）
前記プラスミノーゲン活性化因子が、ストレプトキナーゼおよび／またはウロキナーゼである、項目２２から３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目３３）
前記プラスミノーゲンおよび前記プラスミノーゲン活性化因子と接触させるステップが、プラスミノーゲン、ストレプトキナーゼ、およびウロキナーゼと接触させることを含む、項目２２から３２のいずれか一項に記載の方法。
（項目３４）
前記プラスミンと接触させるステップが、プラスミノーゲンと、ストレプトキナーゼと、ウロキナーゼとを組み合わせることにより、プラスミンを産生させ、前記試料を、前記産生させたプラスミンと接触させることを含む、項目２２から３２のいずれか一項に記載の方法。
【００１８】
以下の図面は、本明細書の一部を形成し、本開示のある特定の態様をさらに裏付けるために組み入れられるが、本開示のある特定の態様は、これらの図面のうちの１または複数を、本明細書で提示される具体的な実施形態についての詳細な記載と組み合わせて参照することにより、よりよく理解することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】図１は、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓによる血流（ＢＳ）感染を伴う例示的な患者から得られた３つの全血液試料についての、３つの異なる状況における、光透過率データを示す図表である。試料は、以下の通りに：非処理、プラスミンによる処理、またはホスホリパーゼＡ２による処理で加工した。図表において報告される値は、マイクロワット単位である。
【００２０】
【図２】図２は、Ｅ．ｃｏｌｉによる血流（ＢＳ）感染を伴う例示的な患者から得られた３つの全血液試料についての、３つの異なる状況における、光透過率データを示す図表である。試料は、以下の通りに：非処理、プラスミンによる処理、またはホスホリパーゼＡ２による処理で加工した。図表において報告される値は、マイクロワット単位である。
【００２１】
【図３】図３は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｅｓによる血流（ＢＳ）感染を伴う例示的な患者から得られた３つの全血液試料についての、３つの異なる状況における、光透過率データを示す図表である。試料は、以下の通りに：非処理、プラスミンによる処理、またはホスホリパーゼＡ２による処理で加工した。図表において報告される値は、マイクロワット単位である。
【００２２】
【図４】図４は、非感染の例示的な患者から得られた３つの全血液試料についての、３つの異なる状況における、光透過率データを示す図表である。試料は、以下の通りに：非処理、プラスミンによる処理、またはホスホリパーゼＡ２による処理で加工した。図表において報告される値は、マイクロワット単位である。
【００２３】
【図５】図５は、尿路感染を処置された例示的な患者から得られた３つの全血液試料についての、３つの異なる状況における、光透過率データを示す図表である。試料は、以下の通りに：非処理、プラスミンによる処理、またはホスホリパーゼＡ２による処理で加工した。図表において報告される値は、マイクロワット単位である。
【００２４】
【図６】図６は、非感染（血液培養物陰性）の例示的な患者から得られた３つの全血液試料についての、３つの異なる状況における、光透過率データを示す図表である。試料は、以下の通りに：非処理、プラスミンによる処理、またはホスホリパーゼＡ２による処理で加工した。図表において報告される値は、マイクロワット単位である。
【００２５】
【図７】図７は、非感染（血液培養物陰性）の例示的な患者から得られた３つの全血液試料についての、３つの異なる状況における、光透過率データを示す図表である。試料は、以下の通りに：非処理、プラスミンによる処理、またはホスホリパーゼＡ２による処理で加工した。図表において報告される値は、マイクロワット単位である。
【００２６】
【図８】図８は、非感染（血液培養物陰性）の例示的な患者から得られた３つの全血液試料についての、３つの異なる状況における、光透過率データを示す図表である。試料は、以下の通りに：非処理、プラスミンによる処理、またはホスホリパーゼＡ２による処理で加工した。図表において報告される値は、マイクロワット単位である。
【００２７】
【図９】図９は、胆汁中および尿中のＫ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染を伴う例示的な患者から得られた３つの全血液試料についての、３つの異なる状況における、光透過率データを示す図表である。試料は、以下の通りに：非処理、プラスミンによる処理、またはホスホリパーゼＡ２による処理で加工した。図表において報告される値は、マイクロワット単位である。
【００２８】
【図１０】図１０は、腹部感染を１．５時間前に処置された例示的な患者から得られた３つの全血液試料についての、３つの異なる状況における、光透過率データを示す図表である。試料は、以下の通りに：非処理、プラスミンによる処理、またはホスホリパーゼＡ２による処理で加工した。図表において報告される値は、マイクロワット単位である。
【００２９】
【図１１】図１１は、細菌性肺炎を伴う例示的な患者から得られた３つの全血液試料についての、３つの異なる状況における、光透過率データを示す図表である。試料は、以下の通りに：非処理、プラスミンによる処理、またはホスホリパーゼＡ２による処理で加工した。図表において報告される値は、マイクロワット単位である。
【００３０】
【図１２】図１２は、脚部における蜂巣炎を伴う例示的な患者から得られた３つの全血液試料についての、３つの異なる状況における、光透過率データを示す図表である。試料は、以下の通りに：非処理、プラスミンによる処理、またはホスホリパーゼＡ２による処理で加工した。図表において報告される値は、マイクロワット単位である。
【００３１】
【図１３】図１３は、熱帯熱マラリアを伴う例示的な患者から得られた３つの全血液試料についての、３つの異なる状況における、光透過率データを示す図表である。試料は、以下の通りに：非処理、プラスミンによる処理、またはホスホリパーゼＡ２による処理で加工した。図表において報告される値は、マイクロワット単位である。
【００３２】
【図１４】図１４は、例示的な試料カートリッジ２００を示す図表である。Ｗ＝２５ｍｍ、Ｈ＝７５ｍｍである。各矩形内の小孔は、直径１ｍｍであり、試料を各観察窓へとロードするのに使用される。
【００３３】
【図１５】図１５は、例示的な試料カートリッジ２００についての異なる視座を示す図表である。Ｔ＝５ｍｍである。内側部分２１０は、アクリル製であり、外側部分２２０は、環状オレフィンコポリマー（ＣＯＣ）製である。
【００３４】
【図１６】図１６は、例示的なカートリッジホルダー３００を示す図表である。Ｗ＝１３０ｍｍ、Ｈ＝１７０ｍｍである。カートリッジは、金属製であり、顕微鏡のスライドステージと類似する。
【００３５】
【図１７】図１７は、例示的な偏光光学システムについての図表である。
【００３６】
【図１８】図１８は、２つの検出器へと接合させた、分岐型光ケーブルによる検出システムについての図表である。
【００３７】
【図１９】図１９は、分岐型ケーブルについての断面図であって、分岐型ケーブルシステム（５２）内の各ケーブル（５３および５４）の位置を示す断面図についての図表である。
【００３８】
【図２０】図２０は、分岐型ケーブルについての断面図であって、分岐型ケーブルシステム（５２）内の各ケーブル（５３および５４）の位置を示す断面図についての図表である。
【００３９】
【図２１】図２１は、非感染の例示的な患者から得られた３つの全血液試料についての、３つの異なる状況における、光透過率データを示す図表である。試料は、以下の通りに：非処理、プラスミンによる処理、またはホスホリパーゼＡ２による処理で加工した。図表において報告される値は、マイクロワット単位である。
【００４０】
【図２２】図２２は、血流感染を伴う例示的な患者から得られた３つの全血液試料についての、３つの異なる状況における、光透過率データを示す図表である。試料は、以下の通りに：非処理、プラスミンによる処理、またはホスホリパーゼＡ２による処理で加工した。図表において報告される値は、マイクロワット単位である。
【００４１】
【図２３】図２３は、尿路感染を伴う例示的な患者から得られた３つの全血液試料についての、３つの異なる状況における、光透過率データを示す図表である。試料は、以下の通りに：非処理、プラスミンによる処理、またはホスホリパーゼＡ２による処理で加工した。図表において報告される値は、マイクロワット単位である。
【００４２】
【図２４】図２４は、細菌性肺炎を伴う例示的な患者から得られた３つの全血液試料についての、３つの異なる状況における、光透過率データを示す図表である。試料は、以下の通りに：非処理、プラスミンによる処理、またはホスホリパーゼＡ２による処理で加工した。図表において報告される値は、マイクロワット単位である。
【００４３】
【図２５】図２５は、下気道感染を伴う例示的な患者から得られた３つの全血液試料についての、３つの異なる状況における、光透過率データを示す図表である。試料は、以下の通りに：非処理、プラスミンによる処理、またはホスホリパーゼＡ２による処理で加工した。図表において報告される値は、マイクロワット単位である。
【００４４】
【図２６】図２６は、全身性ウイルス感染を伴う例示的な患者から得られた３つの全血液試料についての、３つの異なる状況における、光透過率データを示す図表である。試料は、以下の通りに：非処理、プラスミンによる処理、またはホスホリパーゼＡ２による処理で加工した。図表において報告される値は、マイクロワット単位である。
【００４５】
【図２７】図２７は、第２の例示的な偏光光学システムについての図表である。
【発明を実施するための形態】
【００４６】
本明細書で記載される通り、あらかじめ凍結および融解させた血液試料の、プラスミンもしくはホスホリパーゼによる処理、または酵素を伴わない処理は、健常な対象、または感染、例えば、細菌感染もしくはウイルス感染を有する対象を同定するための診断的解析を実施しうるように、血液試料の光透過特性を変化させることが発見されている。本明細書では、この解析を、凍結凝固解析（ＦＣＡ：ｆｒｏｚｅｎ  ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ  ａｎａｌｙｓｉｓ）と称する。理論により束縛されることを望まずに述べると、凍結凝固解析（ＦＣＡ）法は、全血液試料を、凍結させ、融解させ、次いで、解析した場合にフィブリンおよびリン脂質膜から形成される、凝集物のサイズ、形状、および組成の明確な差違に基づくと考えられる。感染の非存在下では、血管内皮は、血液の流動性の調節をもたらし、また、組織因子、トロンビン阻害剤、およびプロテインＣの活性化のための受容体をもたらすことにより、凝固の制御に中心的でもある。感染時において、播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）は、全般的感染部位の近傍に位置する内皮細胞の表面上で誘発される。ＤＩＣの誘発は、内皮表面に沿って、フィブリンと赤血球との複合体の形成を結果としてもたらす。ヒトおよび他の哺乳動物の体内に配置される、多様な血管系領域の特異的構築には、変化が見られるので、この凝固事象が生じる、正確な物理的環境および生化学的環境にも、差違が見られる。肺の近傍で形成された、赤血球とフィブリンとの複合体は、例えば、腹部の近傍で、または加えて、全般的な循環内で形成される凝固複合体と比較して、わずかに異なる形成環境を経る。形成環境の差違は、赤血球とフィブリンとの複合体の異なる構造的配置を結果としてもたらす。理論に束縛されることを望まずに述べると、本明細書ではまた、これらの差違が、ホスホリパーゼ処理またはプラスミン処理などの酵素処理に対するある範囲にわたる応答、およびその後の光学的な透過率および屈折特性を結果としてもたらすことも見出されている。本明細書で記載される通り、血液試料を凍結および融解させることにより、フィブリンおよびリン脂質の凝集物であって、血液を採取した患者が罹患する疾患に応じて、特異的な立体構成をとる凝集物がもたらされることが発見されている。理論により束縛されることを望まずに述べると、フィブリンにより遮蔽されたリン脂質断片は、プラスミンによりプロセシングされて、リン脂質を解放すると考えられる。ホスホリパーゼの添加により、フィブリンと結び合わされた細胞膜の不完全な消化から生じる、リン脂質断片のアベイラビリティーの増大がもたらされる。加えて、全血液を凍結させることにより、試料を、光学的により透明とする利益も付け加えられることも見出されている。
【００４７】
解析の前に全血液を凍結させることは、当技術分野に反する教示である。細菌感染およびウイルス感染は従来、何らかの全般的な凝固機能不全の形成を引き起こすことが公知である。凝固検査のための検査法は広く、抗凝固剤で処理された全血液試料は、検査の前に凍結させるべきではないことを規定している。トロンボエラストメトリー、国際標準化比、活性化部分トロンボプラスチン時間、フィブリノーゲン、アンチトロンビン、および血小板（ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｅ）など、標準的な凝固検査は、試料を採取したときに存在した生化学条件およびレオロジー条件の、あるレベルの保存を要請する。全血液を凍結させると、リン脂質膜が破砕され、ヘモグロビン、細胞内成分、および凝血誘発性物質が放出される。中程度レベルの血液細胞溶解（０．９％）でもなお、日常的な凝固検査の信頼性に影響を及ぼしうる。凍結させた血漿が、多くの凝固検査に許容可能であるのに対し、凍結させた全血液は広く、凝固検査に適切でないと表示されている。
【００４８】
赤血球の膜受容体は、エピフィバチド感受性受容体を介して、フィブリノーゲンと相互作用し、これにより、フィブリンを含有する赤血球（ＲＢＣ）の構造および溶解耐性が改変される（１７）。血小板（ｐｌａｔｅｌｅｔ  ｃｅｌｌ）１個につき、約２０個ずつの赤血球（ＲＢＣ）が存在し、したがって、ＲＢＣは、血液試料の、血小板と比較してより大きな比率のリン脂質量に寄与する。凍結させ、融解させ、次いで、混合することにより、フィブリンおよびリン脂質の凝集が引き起こされる。
【００４９】
リン脂質は、プロトロンビンで始まるカスケードを活性化することにより、凝血誘発性素材となり、最終的にフィブリン分解産物（ＦＤＰ）をもたらす。血小板の表面上で見出される、凝血促進性のリン脂質は、フィブリン接着性である。血小板表面における特異的脂質環境は、フィブリノーゲンの、その受容体への結合に影響を及ぼす、潜在的可能性を有する。凍結させていない血小板では、堅固なフィブリンネットワークへの結合により発生する、外部から内部へのシグナルが、トロンビン処理後におけるホスファチジルセリンの露出に不可欠である（１５）。イヌ血小板調製物についての研究では、凍結させた血小板調製物が、血小板膜の外葉内のホスファチジルセリン量および細胞形態の変化を増大させたが、これらの全ては、血小板の活性化と符合した（１６）。血小板は、凝血塊形成において重要な役割を果たす。血小板を凍結させるステップは、試料を採取したときに存在した天然状態を変化させる。全血液を凍結させれば、試料の血小板の機能またはカウントを正確に測定する、任意の先行技術の方法には負の影響が及ぶであろう。
【００５０】
本明細書で記載される通り、全血液試料は、多様な種類の感染（例えば、細菌感染、真菌感染、またはウイルス感染）を有する対象、または感染を有さない対象から得た。血液試料は、抗凝固剤で処理し、その後、凍結および融解させ、次いで、多様な酵素（例えば、プラスミンまたはホスホリパーゼＡ２）で加工するか、またはこのような酵素で加工せずにおいた。凍結融解サイクル後において、多様な、異なる形で加工された血液試料を通した、複数の波長にわたる偏光の透過率により、対象における感染の存在または非存在だけでなく、また、感染の種類（例えば、血流感染、尿路感染、細菌性肺炎、下気道感染、または全身性ウイルス感染）も同定されることが発見されたことは予測外であった。さらに、驚くべきことに、偏光の使用により、多くの凝集物が光学センサーの前を通過し、光によるサンプリングの質を改善し、異なる種類の試料の間の差違（感染を非感染と対比する差違のほか、感染の種類の差違も）を増幅するように、血液試料中の凝集物の流動および回転が引き起こされることも見出された。したがって、上記で記載した、加工された血液試料を解析するための方法およびキットは、例えば、感染を有する対象もしくは感染を有さない対象を同定するか、または感染および／もしくは処置のさらなる同定のために対象を選別するのに有用である。感染の存在／非存在および種類の同定は、感染を伴う対象が、適正な処置を施され、かつ／またはさらなる検査を受け、感染を伴わない対象が不必要な処置を受けないことを確保する一助となる。
【００５１】
方法
本開示の態様は、（すなわち、少なくとも１つの）対象から得られた血液試料についてアッセイする方法に関する。一部の実施形態では、方法は、対象に由来する、抗凝固剤で処理された血液の１または複数の試料を用意するステップと、試料のうちの少なくとも１つを、本明細書で記載される酵素（例えば、プラスミンおよび／またはホスホリパーゼＡ２）と接触させるステップと、接触させるステップの後で、１または複数の試料に通した人工光（例えば、偏光）の透過率を測定するステップとを含む。
【００５２】
一部の実施形態では、方法は、（ａ）あらかじめ凍結および融解させた、第１の抗凝固剤で処理された血液試料および第２の抗凝固剤で処理された血液試料を用意するステップと；（ｂ）第２の抗凝固剤で処理された血液試料は、（ｉ）本明細書で記載されるプラスミン、もしくは本明細書で記載されるプラスミノーゲンおよびプラスミノーゲン活性化因子；または（ｉｉ）本明細書で記載される、リン脂質二重層を分解する酵素と接触させるが、第１の試料は、これらと接触させないステップと；（ｃ）人工光源に由来する光を、第１の抗凝固剤で処理された血液試料および第２の抗凝固剤で処理された血液試料に通すステップと；（ｄ）光の透過率を、第１の抗凝固剤で処理された血液試料および第２の抗凝固剤で処理された血液試料を通して測定するステップとを含む。
【００５３】
一部の実施形態では、方法は、（ａ）あらかじめ凍結および融解させた、第１の抗凝固剤で処理された血液試料、第２の抗凝固剤で処理された血液試料、および第３の抗凝固剤で処理された血液試料を用意するステップと；（ｂ）第２の抗凝固剤で処理された血液試料は、プラスミンまたはプラスミノーゲンおよびプラスミノーゲン活性化因子と接触させるが、第１の抗凝固剤で処理された血液試料は、これらと接触させず、第３の抗凝固剤で処理された血液試料は、リン脂質二重層を分解する酵素と接触させるが、第１の抗凝固剤で処理された血液試料は、これらと接触させないステップと；ｃ）人工光源に由来する光を、第１の抗凝固剤で処理された血液試料、第２の抗凝固剤で処理された血液試料、および第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通すステップと；ｄ）第１の抗凝固剤で処理された血液試料、第２の抗凝固剤で処理された血液試料、および第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の透過率を測定するステップとを含む。
【００５４】
一部の実施形態では、方法は、（ａ）あらかじめ凍結および融解させた、抗凝固剤で処理された血液試料を用意するステップと；（ｂ）抗凝固剤で処理された血液試料を、リン脂質二重層を分解する酵素と接触させるステップと；（ｃ）人工光源に由来する光を、抗凝固剤で処理された血液試料に通すステップと；（ｄ）光の透過率を、抗凝固剤で処理された血液試料を通して測定するステップとを含む。
【００５５】
本明細書で提示される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、方法は、１または複数の、抗凝固剤で処理された血液試料（例えば、本明細書で記載される、第１の抗凝固剤で処理された血液試料、第２の抗凝固剤で処理された血液試料、および／または第３の抗凝固剤で処理された血液試料）を凍結および／または融解させるステップをさらに含む。
【００５６】
本明細書で提示される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、方法は、第１の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の透過率を、第２の抗凝固剤で処理された血液試料および／または第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の透過率と比較するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、第２の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の透過率を、第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の透過率と比較するステップをさらに含む。一部の実施形態では、比較するステップは、１または複数の透過率値を、１または複数の他の透過率値から減じることを含む。一部の実施形態では、方法は、第２の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の透過率を、第１の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の透過率から減じ（またはこの逆）、第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の透過率を、第１の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の透過率から減じる（またはこの逆）ステップを含む。一部の実施形態では、方法は、第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の透過率を、第２の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の透過率から減じるステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、第２の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の透過率を、第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した光の透過率から減じるステップをさらに含む。
【００５７】
光が、第１の波長および第２の波長である、一部の実施形態では、比較は、第１の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、第１の波長および第２の波長における光の透過率を、第２の抗凝固剤で処理された血液試料および／または第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、第１の波長および第２の波長における光の透過率と比較することを含みうる。一部の実施形態では、方法は、第２の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、第１の波長および第２の波長における光の透過率を、第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、第１の波長および第２の波長における光の透過率と比較するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、第２の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、各波長における光の透過率を、第１の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、各波長における光の透過率から減じ（またはこの逆）、第３の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、各波長における光の透過率を、第１の抗凝固剤で処理された血液試料に通した、各波長における光の透過率から減じる（またはこの逆）ステップをさらに含む。例えば、第２の試料に通した、第１の波長における光の透過率を、第１の試料に通した、第１の波長における光の透過率から減じ、第２の試料に通した、第２の波長における光の透過率を、第１の試料に通した、第２の波長における光の透過率から減じ、第３の試料に通した、第１の波長における光の透過率を、第１の試料に通した、第１の波長における光の透過率から減じ、第３の試料に通した、第２の波長における光の透過率を、第１の試料に通した、第２の波長における光の透過率から減じるなどである。一部の実施形態では、各波長について、複数の偏光子角を活用する場合はまた、各偏光子角についての光の透過率も、比較または減算において使用することができる。比較および／または減算は、当技術分野で公知の任意の方法を使用して達成することができ、計算機またはコンピュータの使用を一助とすることができる。一部の実施形態では、比較することまたは減じることにより、１または複数の値をもたらす。本明細書で記載される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、方法は、比較することまたは減じることにより、得られた値を、状態（例えば、感染または非感染）と相関させるステップをさらに含む。一部の実施形態では、多数の得られた値を、比較することまたは減じることにより、状態（例えば、感染または非感染）と相関させることができる。一部の実施形態では、得られた値を、正の数、負の数、またはゼロとして表す。下記で記載される実施形態では、正の数と負の数と（および任意選択で、ゼロ）の多様な組合せは、特定の状態に特徴的である。
【００５８】
本明細書で提示される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、方法は、測定された透過率または比較もしくは減算を、診断的指標へと転換するステップ、例えば、測定された透過率または比較もしくは減算を、例えば、図表、言語表現、または記号としての、感染の存在、非存在、および／または種類の表示へと転換するステップをさらに含む。
【００５９】
本明細書で提示される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、方法は、本明細書で記載される通り、測定された透過率または比較もしくは減算に基づき、対象を、感染を有する対象または感染を有さない対象として同定するステップをさらに含む。
【００６０】
本明細書で提示される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、方法は、データベースまたはグラフなど、測定された透過率、比較、減算、診断指標、および／または対象の同定を記録するステップをさらに含む。
【００６１】
本明細書で提示される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、感染を有する対象または感染を有さない対象として同定された対象を、さらなる検査にかけるか、またはこれらの対象に、さらなる検査、例えば、細菌感染、ウイルス感染、または真菌感染についての、当技術分野で公知のさらなる診断検査を受けるように推奨することができる。一部の実施形態では、さらなる検査は、１または複数の核酸ベースのアッセイ、例えば、ＰＣＲアッセイを含む。このような核酸ベースのアッセイを使用して、例えば、細菌、ウイルス、または真菌の属、科、および／または種を同定することができる。
【００６２】
本明細書で提示される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、感染を有する対象として同定された対象は、入院させることもでき、これに来院を推奨することもできる。本明細書で提示される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、感染を有さない対象として同定された対象に、来院を推奨しないでおくことができる。本明細書で提示される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、感染を有する対象として同定された対象は、治療剤、例えば、抗菌治療剤、抗真菌治療剤、または抗ウイルス治療剤などで処置することができる。本明細書で提示される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、感染を有する対象として同定された対象に、例えば、抗菌剤、抗真菌剤、または抗ウイルス剤などの治療剤による処置を推奨することができる。当技術分野では、このような治療剤が公知である。非限定的で例示的な抗菌治療剤は、ペニシリン、セファロスポリン、ポリミキシン、リファマイシン、リピアルマイシン、キノロン、スルホンアミド、マクロリド、リンコサミド、テトラサイクリン、アミノグリコシド、環状リポペプチド、グリシルサイクリン、オキサゾリジノン、およびリピアルマイシンを含む。非限定的で例示的な抗真菌治療剤は、ポリエン、イミダゾール、トリアゾール、チアゾール、アリルアミン、エキノカンジン、安息香酸、シクロピロクスオラミン、フルシトシン、グリセオフルビン、ハロプロジン、トルナフタート、ウンデシレン酸、およびクリスタルバイオレットを含む。非限定的で例示的な抗ウイルス剤は、ザナミビル、オセルタミビル、アマンタジン、およびリマンタジンを含む。
【００６３】
本開示の他の態様は、対象を治療について選択する方法に関する。一部の実施形態では、方法は、本明細書で記載される、１または複数の測定された透過率、１または複数の測定された透過率を互いに対して比較した結果、または１または複数の測定された透過率を互いに対して減じた結果に基づいて、対象を治療について選択するステップを含む。例えば、本明細書で記載される、感染を有する対象として同定された対象は、当技術分野で公知であるか、または本明細書で記載される、抗菌剤、抗真菌剤、または抗ウイルス剤などの治療による処置について選択することができる。
【００６４】
光および光の透過率の測定
本開示の態様は、人工光源に由来する光を、本明細書で記載される、１または複数の、抗凝固剤で処理された（例えば、あらかじめ凍結および融解させ、任意選択で、本明細書で記載される、１または複数の酵素により処理した）血液試料に通し、光の透過率を、抗凝固剤で処理された血液試料を通して測定することに関する。好ましい実施形態では、光は、偏光である。一部の実施形態では、光の透過率を測定することは、偏光の屈折を測定すること、例えば、分岐型光ケーブルシステムを使用して、屈折光の透過を検出することを含む。
【００６５】
本明細書で提示される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、光（例えば、偏光）は、７５０〜８２０ｎｍの間（例えば、７５０、７５５、７６０、７６５、７７０、７７５、７８０、７８５、７９０、７９５、８００、８０５、８１０、８１５、もしくは８２０ｎｍ、またはこれらの間の任意の整数）の波長である。本明細書で提示される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、光（例えば、偏光）は、７７５〜７９５ｎｍの間（例えば、７７５、７８０、７８５、７９０、もしくは７９５ｎｍ、またはこれらの間の任意の整数）の波長である。本明細書で提示される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、光（例えば、偏光）は、７８５ｎｍの波長である。本明細書で提示される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、光（例えば、偏光）は、６５０〜７３０ｎｍの間（例えば、６５０、６５５、６６０、６６５、６７０、６７５、６８０、６８５、６９０、６９５、７００、７０５、７１０、７１５、７２０、７２５、もしくは７３０ｎｍ、またはこれらの間の任意の整数）の波長である。本明細書で提示される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、光（例えば、偏光）は、６８０〜７００ｎｍの間（例えば、６８０、６８５、６９０、６９５もしくは７００ｎｍ、またはこれらの間の任意の整数）の波長である。本明細書で提示される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、光（例えば、偏光）は、６９０ｎｍの波長である。本明細書で提示される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、光（例えば、偏光）は、異なる第１の波長および第２の波長である。第１の波長と第２の波長とは、同時に測定することもでき、異なる時点において測定することもできる（例えば、第１の波長を、第１の時点において測定し、次いで、第２の波長を、第２の時点において測定するか、またはこの逆のように逐次的に）。一部の実施形態では、第１の波長は７５０〜８２０ｎｍの間（例えば、７５０、７５５、７６０、７６５、７７０、７７５、７８０、７８５、７９０、７９５、８００、８０５、８１０、８１５、もしくは８２０ｎｍ、またはこれらの間の任意の整数）であり、第２の波長は６５０〜７３０ｎｍの間（例えば、６５０、６５５、６６０、６６５、６７０、６７５、６８０、６８５、６９０、６９５、７００、７０５、７１０、７１５、７２０、７２５、もしくは７３０ｎｍ、またはこれらの間の任意の整数）である。一部の実施形態では、第１の波長は７７５〜７９５ｎｍの間（例えば、７７５、７８０、７８５、７９０、もしくは７９５ｎｍ、またはこれらの間の任意の整数）であり、第２の波長は６８０〜７００ｎｍの間（例えば、６８０、６８５、６９０、６９５もしくは７００ｎｍ、またはこれらの間の任意の整数）である。一部の実施形態では、第１の波長は７８５ｎｍであり、第２の波長は６９０ｎｍである。
【００６６】
人工光源は、当技術分野で公知であるか、または本明細書で記載される、任意の人工光源であって、光を試料に通すこと、例えば、偏光を試料に通すことが可能な人工光源でありうる。一部の実施形態では、人工光源は、１または複数のレーザー、例えば、７８５ｎｍのレーザーおよび６９０ｎｍのレーザーである。一部の実施形態では、人工光源は、ランプである。当技術分野では、レーザー、ランプ、および他のこのような人工光源が公知であり、市販されている（例えば、Ｌａｓｅｒｍａｔｅ  Ｇｒｏｕｐ，Ｉｎｃ．、Ｗａｌｎｕｔ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ製の製品を参照されたい）。一部の実施形態では、人工光源からの光は、偏光させているか、または１もしくは複数の偏光子、反射面（例えば、鏡面）、コリメータ、またはこれらの組合せを使用して、試料に通す前にさらに偏光させる。一部の実施形態では、人工光源、例えば、ランプからの光を試料に通す前に、これにフィルターをかけて、本明細書で記載される特異的波長を達成する。
【００６７】
光の透過率（例えば、偏光の透過率）は、当技術分野で公知であるかまたは本明細書で記載される、任意の方法を使用して、例えば、光ダイオードパワーセンサーまたは電荷結合素子（ＣＣＤ）カメラを使用して測定することができる。一部の実施形態では、透過率は、光ダイオードパワーセンサーを使用して測定する。一部の実施形態では、測定の前に、光に、１または複数のコリメータおよび／またはフィルターを透過させる。一部の実施形態では、光に、分岐型光ケーブルシステムであって、例えば、各ケーブルにより、光シグナルを、別個の光ダイオードパワーセンサーへと伝送する、分岐型光ケーブルシステムを透過させる。一部の実施形態では、２つの光ダイオードパワーセンサーを援用する場合、各パワーセンサーに、フィルターを装備する（例えば、一方のパワーセンサーには、６９０ｎｍの波長の光のためのフィルターを装備し、他方のパワーセンサーには、７８５ｎｍの波長の光のためのフィルターを装備する）ことができる。
【００６８】
一部の実施形態では、偏光を、各抗凝固剤で処理された血液試料（例えば、あらかじめ凍結および融解させ、任意選択で、本明細書で記載される、１または複数の酵素により処理した）に通す。一部の実施形態では、偏光は、７５０〜８２０ｎｍの間（例えば、７８５ｎｍなど、７７５〜７９５ｎｍの間）の波長である。一部の実施形態では、偏光は、６５０〜７３０ｎｍの間（例えば、６９０ｎｍなど、６８０〜７００ｎｍの間）の波長である。一部の実施形態では、偏光を、第１の波長および第２の波長で、各抗凝固剤で処理された血液試料に通す。一部の実施形態では、第１の波長は７５０〜８２０ｎｍの間（例えば、７７５〜７９５ｎｍの間）である。一部の実施形態では、第２の波長は６５０〜７３０ｎｍの間（例えば、６８０〜７００ｎｍの間）である。一部の実施形態では、人工光源からの光、例えば、レーザーを、偏光子に通すが、ここで、偏光子は、１または複数の角度に設定され、偏光子を、地表面と垂直に（任意選択で鏡面と平行に）取り付ける場合は、偏光子の０°座標と１８０°座標とを二等分する直線が、地表面と垂直になるであろう。一部の実施形態では、偏光を、第１の波長および第２の波長で、各抗凝固剤で処理された血液試料に通す。第１の波長および第２の波長は、１または複数の角度に設定された偏光子を使用して偏光させることができる。
【００６９】
一部の実施形態では、偏光は、７５０〜８２０ｎｍの間（例えば、７７５〜７９５ｎｍの間）の波長であり、偏光子の角度は、１３０〜２００°の間である。一部の実施形態では、角度は、１３０〜１５０°の間である。一部の実施形態では、角度は、１４０°である。一部の実施形態では、角度は、１８０〜２００°の間である。一部の実施形態では、角度は、１９５°である。一部の実施形態では、角度は、２つの角度である。
【００７０】
一部の実施形態では、偏光は、６５０〜７３０ｎｍ（例えば、６９０ｎｍなど、６８０〜７００ｎｍの間）の波長であり、偏光子の角度は、７０〜１００°の間、１６０〜２００°の間または３４０〜３７０°の間である。一部の実施形態では、偏光子の角度は、７０〜１００°の間である。一部の実施形態では、角度は、２つの角度である。一部の実施形態では、２つの角度は各々独立に、７０〜１００°の間である。一部の実施形態では、１つの角度は、８０°であり、他の角度は、９５°である。一部の実施形態では、１つの角度は、１６０〜２００°の間であり、他の角度は、３４０〜３７０°の間である。一部の実施形態では、１つの角度は、１７０°であり、他の角度は、３５５°である。
【００７１】
一部の実施形態では、以下の波長の光を、以下の角で：
（ａ）７７５〜７９５ｎｍ（例えば、７８５ｎｍ）を、１９５°の偏光子角で；
（ｂ）６８０〜７００ｎｍ（例えば、６９０ｎｍ）を、３５５°の偏光子角で；かつ
（ｃ）６８０〜７００ｎｍ（例えば、６９０ｎｍ）を、１７０°の偏光子角で
偏光子に通し、次いで、各抗凝固剤で処理された血液試料に通した（これらは各々、例えば、１または複数の光ダイオードパワーセンサーを使用して、個別に測定することができる）。
【００７２】
一部の実施形態では、以下の波長の光を、以下の角で：
（ａ）７７５〜７９５ｎｍ（例えば、７８５ｎｍ）を、１４０°の偏光子角で；
（ｂ）６８０〜７００ｎｍ（例えば、６９０ｎｍ）を、８０°の偏光子角で；かつ
（ｃ）６８０〜７００ｎｍ（例えば、６９０ｎｍ）を、９５°の偏光子角で
偏光子に通し、次いで、各抗凝固剤で処理された血液試料に通した（これらは各々、例えば、１または複数の光ダイオードパワーセンサーを使用して、個別に測定することができる）。
【００７３】
酵素
本開示の態様は、１または複数の酵素、ならびに本明細書で記載されるキットおよび方法におけるそれらの使用に関する。
【００７４】
一部の実施形態では、１または複数の酵素は、プラスミン、または、代替的に、プラスミノーゲンおよびプラスミノーゲン活性化因子を含む。プラスミノーゲンおよびプラスミノーゲン活性化因子は、本明細書で記載される、抗凝固剤で処理された血液試料と直接接触させることもでき、まず組み合わせて、プラスミンを産生させることもできる。次いで、産生させたプラスミンは、本明細書で記載される、抗凝固剤で処理された血液試料と接触させることができる。一部の実施形態では、ウロキナーゼを、プラスミノーゲンおよびプラスミノーゲン活性化因子（例えば、ストレプトキナーゼまたは組織プラスミノーゲン活性化因子）と組み合わせて使用することができる。本明細書で記載される酵素のうちの任意の１または複数は、組み換えにより産生させることもでき、当技術分野で公知の他の任意の方法により、生物学的試料（例えば、組織試料または体液試料）から単離／抽出および／または精製することもできる。
【００７５】
プラスミンは、例えば、ヒトプラスミン、ブタプラスミン、またはウシプラスミンなど、哺乳動物プラスミンでありうる。プラスミンは、当技術分野で公知の任意の方法を使用して得ることもでき、市販品の販売元から得ることもできる。例えば、プラスミンは、血漿（例えば、ヒト血漿、ブタ血漿、またはウシ血漿）から抽出および／または精製することもでき、組み換えにより産生させる（例えば、ＣＨＯ細胞内で）こともでき、また、市販もされている（例えば、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、型番：Ｐ１８６７を参照されたい）。プラスミンはまた、例えば、プラスミノーゲンを、プラスミノーゲン活性化因子と組み合わせることによって産生させることもできる。例えば、プラスミノーゲンを、ストレプトキナーゼおよびウロキナーゼと接触させて、プラスミンを産生させることができる。プラスミノーゲンおよびプラスミノーゲン活性化因子については、本明細書で記載する。任意の供給源（例えば、ウシ、ウサギ、またはウマ）に由来するプラスミノーゲンは、任意の供給源に由来する、任意のプラスミノーゲン活性化因子により、プラスミンへと転換することができる。
【００７６】
プラスミノーゲンは、例えば、ヒトプラスミノーゲン、ウサギプラスミノーゲン、ウマプラスミノーゲン、ブタプラスミノーゲン、またはウシプラスミノーゲンなど、哺乳動物プラスミノーゲンでありうる。プラスミノーゲンは、当技術分野で公知の任意の方法を使用して得ることもでき、市販品の販売元から得ることもできる。例えば、プラスミノーゲンは、血漿（例えば、ヒト血漿、ウサギ血漿、ウマ血漿、ブタ血漿、またはウシ血漿）から抽出および／または精製することもでき、組み換えにより産生させる（例えば、ＣＨＯ細胞内で）こともでき、また、市販もされている（例えば、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、型番：Ｐ９１５６、Ｐ５６６１、およびＰ７３９７、ならびにＣＡＳ番号：９００１−９１−６を参照されたい）。
【００７７】
プラスミノーゲン活性化因子は、例えば、ヒト組織プラスミノーゲン活性化因子、ブタ組織プラスミノーゲン活性化因子、またはウシ組織プラスミノーゲン活性化因子など、哺乳動物組織プラスミノーゲン活性化因子でありうる。一部の実施形態では、プラスミノーゲン活性化因子は、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、組織プラスミノーゲン活性化因子、またはこれらの組合せである。プラスミノーゲン活性化因子は、当技術分野で公知の任意の方法を使用して得ることもでき、市販品の販売元から得ることもできる。例えば、プラスミノーゲン活性化因子は、組織または細胞（例えば、ヒト組織もしくはヒト細胞、ブタ組織もしくはブタ細胞、またはウシ組織もしくはウシ細胞、あるいは連鎖球菌細胞）から抽出および／または精製することもでき、組み換えにより産生させる（例えば、ＣＨＯ細胞内またはＥ．ｃｏｌｉ細胞内で）こともでき、また、市販もされている（例えば、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、型番：Ｔ４８２５、Ｔ５４５１、Ｔ０８３１、Ｓ３１３４、Ｓ０８２７、Ｓ０５７７、およびＣＡＳ番号：９００２−０１−１を参照されたい）。ウロキナーゼは、例えば、ヒトウロキナーゼ、ブタウロキナーゼ、またはウシウロキナーゼなど、哺乳動物ウロキナーゼでありうる。ウロキナーゼは、尿または他の組織（例えば、ヒト尿もしくはヒト腎組織、ブタ尿もしくはブタ腎組織、またはウシ尿もしくはウシ腎組織）から抽出および／または精製することができるが、また、市販されてもいる（例えば、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、型番：Ｕ０６３３およびＵ４０１０、ＣＡＳ番号：９０３９−５３−６を参照されたい）。
【００７８】
一部の実施形態では、１または複数の酵素は、リン脂質二重層を分解する酵素を含む。リン脂質二重層を分解する酵素の例は、ホスホリパーゼＡを含むがこれらに限定されない。一部の実施形態では、リン脂質二重層を分解する酵素は、ホスホリパーゼＡ２である。ホスホリパーゼＡ２は、毒、例えば、ミツバチ毒もしくはヘビ毒、または哺乳動物組織、例えば、ブタ膵臓またはウシ膵臓から抽出および／または精製することもでき、組み換えにより産生させる（例えば、ＣＨＯ細胞内またはＥ．ｃｏｌｉ細胞内で）こともでき、また、市販もされている（例えば、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、型番：Ｐ９２７９、Ｐ８９１３、Ｐ６５３４、Ｐ５９１０、ＣＡＳ番号：９００１−８４−７を参照されたい）。ホスホリパーゼＡ２はまた、凍結乾燥させ、かつ／または粉末化することもできる。
【００７９】
本明細書で記載される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、抗凝固剤で処理された血液試料を、０．１〜１０Ｕ（例えば、０．５〜５Ｕ）のプラスミノーゲンと接触させる。本明細書で記載されるキットのうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、キットは、０．１〜１０Ｕ（例えば、０．５〜５Ｕ）のプラスミノーゲンを含む。本明細書で記載される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、抗凝固剤で処理された血液試料を、５０〜５０，０００Ｕ（例えば、５００〜５，０００Ｕ）のストレプトキナーゼと接触させる。本明細書で記載されるキットのうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、キットは、５０〜５０，０００Ｕ（例えば、５００〜５，０００Ｕ）のストレプトキナーゼを含む。本明細書で記載される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、抗凝固剤で処理された血液試料を、１０〜４０，０００Ｕ（例えば、１００〜４，０００Ｕ）のホスホリパーゼＡ２と接触させる。本明細書で記載されるキットのうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、キットは、１０〜４０，０００Ｕ（例えば、１００〜４，０００Ｕ）のホスホリパーゼＡ２を含む。本明細書で記載される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、抗凝固剤で処理された血液試料を、０．００１〜１００Ｕ（例えば、０．０１〜１０Ｕ）のウロキナーゼと接触させる。本明細書で記載されるキットのうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、キットは、０．００１〜１００Ｕ（例えば、０．０１〜１０Ｕ）のウロキナーゼを含む。一部の実施形態では、プラスミンを産生させ、方法で使用するか、またはキットに組み入れるが、ここで、プラスミンは、０．１〜１０Ｕ（例えば、０．５〜５Ｕ）のプラスミノーゲンと、５０〜５０，０００Ｕ（例えば、５００〜５，０００Ｕ）のストレプトキナーゼと、０．００１〜１００Ｕ（例えば、０．０１〜１０Ｕ）のウロキナーゼとを組み合わせることにより産生させる。
【００８０】
本明細書で記載される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、抗凝固剤で処理された血液試料を、０．１〜１０Ｕ（例えば、０．５〜５Ｕ）のプラスミノーゲン、５０〜５０，０００Ｕ（例えば、５００〜５，０００Ｕ）のストレプトキナーゼ、および０．００１〜１００Ｕ（例えば、０．０１〜１０Ｕ）のウロキナーゼと接触させる。本明細書で記載される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、抗凝固剤で処理された血液試料を、０．１〜１０Ｕ（例えば、０．５〜５Ｕ）のプラスミノーゲンと、５０〜５０，０００Ｕ（例えば、５００〜５，０００Ｕ）のストレプトキナーゼと、０．００１〜１００Ｕ（例えば、０．０１〜１０Ｕ）のウロキナーゼを組み合わせることにより産生させたプラスミンと接触させる。本明細書で記載される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、抗凝固剤で処理された血液試料を、１０〜４０，０００Ｕ（例えば、１００〜４，０００Ｕ）のホスホリパーゼＡ２と接触させる。本明細書で記載されるキットのうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、キットは０．１〜１０Ｕ（例えば、０．５〜５Ｕ）のプラスミノーゲン、５０〜５０，０００Ｕ（例えば、５００〜５，０００Ｕ）のストレプトキナーゼ、０．００１〜１００Ｕ（例えば、０．０１〜１０Ｕ）のウロキナーゼ、および１０〜４０，０００Ｕ（例えば、１００〜４，０００Ｕ）のホスホリパーゼＡ２を含む。
【００８１】
本明細書で記載される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、抗凝固剤で処理された血液試料を、本明細書で記載される酵素のうちの１または複数と接触させ、インキュベートしてから、光を試料に通す。一部の実施形態では、試料を、少なくとも３０秒間、または少なくとも１分間、少なくとも２分間、少なくとも３分間、少なくとも４分間、少なくとも５分間、少なくとも６分間、少なくとも７分間、少なくとも８分間、少なくとも９分間、もしくは少なくとも１０分間にわたりインキュベートしてから、光を試料に通す。一部の実施形態では、試料を、３０秒間〜１時間、３０秒間〜３０分間、３０秒間〜１０分間、または３０秒間〜５分間にわたりインキュベートする。
【００８２】
本明細書で記載される方法のうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、抗凝固剤で処理された血液試料を、本明細書で記載される、１または複数の酵素をさらに含みうる、水または緩衝液と接触させる。
【００８３】
試料
本開示の態様は、抗凝固剤で処理された血液試料、および本明細書で記載される方法またはキットのうちのいずれか１つにおけるそれらの使用に関する。抗凝固剤は、当技術分野で公知の、任意の抗凝固剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ：ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）、ポリアネトールスルホン酸ナトリウム（ＳＰＳ）、クマリン、ヘパリン、バトロキソビン、ヘメンチン、クエン酸、シュウ酸、ダビガトラン、リバーロキサバン、およびアピキサバンのうちの任意の１または複数でありうる。一部の実施形態では、抗凝固剤は、ＥＤＴＡである。
【００８４】
一部の実施形態では、試料は、感染、例えば、細菌感染、ウイルス感染、または真菌感染を有しうるかまたは感染を有することが疑われる対象から単離された全血液の場合もあり、これに由来する場合もある。対象については、本明細書でさらに記載する。一部の実施形態では、対象からの単一の全血液採取物を、複数の試料、例えば、複数の抗凝固剤で処理された血液試料へと分割することができる。一部の実施形態では、対象からの複数の全血液採取物を使用して、複数の試料、例えば、複数の抗凝固剤で処理された血液試料を産生させることができる。全血液は、当技術分野で公知の任意の方法を使用して、例えば、静脈穿刺（例えば、「WHO guidelines on drawing blood: best practices in phlebotomy」、ISBN 978 82 4 159922 1、World HealthOrganization、Switzerlandを参照されたい）により単離することができる。全血液は、抗凝固剤を全血液へと添加することにより、または全血液を、抗凝固剤を含有する容器（例えば、抗凝固剤を含有する、Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）などの血液回収チューブ）へと回収することなどにより、抗凝固剤と接触させることができる。
【００８５】
一部の実施形態では、抗凝固剤で処理された血液試料は、水または緩衝液を添加することなどにより、希釈することもでき、かつ／またはさらに加工することもできる。一部の実施形態では、抗凝固剤で処理された血液試料は、本明細書で記載される方法またはキットのうちのいずれか１つにおけるそれらの使用の前に、あらかじめ凍結および融解させる。一部の実施形態では、本明細書で記載される方法またはキットのうちのいずれか１つは、血液試料を、本明細書で記載される、１または複数の酵素と接触させる前に、あらかじめ凍結させた、抗凝固剤で処理された血液試料を融解させるステップを含む。一部の実施形態では、本明細書で記載される方法のうちのいずれか１つは、血液試料を、本明細書で記載される、１または複数の酵素と接触させる前に、抗凝固剤で処理された血液試料を、凍結および／または融解させるステップを含む。抗凝固剤で処理された血液試料は、当技術分野で公知の任意の方法を使用して、凍結および融解させる（例えば、冷凍庫内に保存することまたはドライアイスもしくは液体窒素と接触させることを介して凍結させ、室温（例えば、摂氏２３〜２５度）または水浴（例えば、摂氏２３〜３７度の）中のインキュベーションを介して融解させることにより）ことができる。一部の実施形態では、抗凝固剤で処理された血液試料は、融解させる前に、少なくとも３０秒間、または少なくとも１分間、少なくとも２分間、少なくとも３分間、少なくとも４分間、少なくとも５分間、少なくとも６分間、少なくとも７分間、少なくとも８分間、少なくとも９分間、少なくとも１０分間、または少なくとも３０分間、または少なくとも１時間、少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも７時間、少なくとも８時間、少なくとも９時間、または少なくとも１０時間にわたり凍結させる。一部の実施形態では、抗凝固剤で処理された血液試料は、３０秒間〜４８時間、３０秒間〜２４時間、３０秒間〜８時間、３０秒間〜１時間、３０秒間〜３０分間、３０秒間〜１０分間、または３０秒間〜５分間にわたり凍結させる。
【００８６】
一部の実施形態では、複数の抗凝固剤で処理された血液試料（例えば、第１の抗凝固剤、第２の抗凝固剤、第３の抗凝固剤、第４の抗凝固剤、第５の抗凝固剤などで処理された血液試料）が想定される。本明細書で使用される「第１の」、「第２の」、「第３の」などの使用は、そうでないことが具体的に言明されない限りにおいて、重要性またはタイミングについての特定の序列を含意しない。一部の実施形態では、本明細書で記載される方法またはキットのうちのいずれか１つにおける使用のために、第１の抗凝固剤で処理された血液試料および第２の抗凝固剤で処理された血液試料が想定されている。一部の実施形態では、本明細書で記載される方法またはキットのうちのいずれか１つにおける使用のために、第１の抗凝固剤で処理された血液試料、第２の抗凝固剤で処理された血液試料、および第３の抗凝固剤で処理された血液試料が想定されている。一部の実施形態では、抗凝固剤で処理された血液試料のうちの任意の１または複数を、本明細書で記載される、１または複数の酵素と接触させる（例えば、（ｉ）プラスミンまたはプラスミノーゲンおよびプラスミノーゲン活性化因子；または（ｉｉ）リン脂質二重層を分解する酵素と接触させる）。
【００８７】
一部の実施形態では、本明細書で記載される方法またはキットのうちのいずれか１つによる、抗凝固剤で処理された血液試料は、液体であり、本明細書で記載される光を、液体に通す。一部の実施形態では、本明細書で記載される方法またはキットのうちのいずれか１つによる、抗凝固剤で処理された血液試料は、方法またはキットにおける使用の前に攪拌されない、例えば、泡沫を生成させるように攪拌されない。
【００８８】
対象
本開示の態様は、細菌感染、ウイルス感染、または真菌感染など、感染を有するか、または感染を有することが疑われる対象などの対象に関する。一部の実施形態では、対象は、血流感染、尿路感染、細菌性肺炎、下気道感染、胆汁中および尿中の感染、皮膚感染、または全身性ウイルス感染を有するか、またはこれらを有することが疑われる。一部の実施形態では、対象は、感染と関連する１または複数の症状を有する。当技術分野では、感染症状が公知であり、当業者に同定可能である。感染症状の例は、発熱、咳、咽頭痛、鼻水、頭痛、疲労、筋肉痛、皮膚の発赤、剥離、ひび割れ、または水疱形成、掻痒感、灼熱感、消化器痛、下痢、悪心、嘔吐、１分間当たりの呼吸２０回を超える呼吸数、１分間当たりの心拍９０回を超える心拍数、および／または突発的な精神状態の変化もしくは腹痛を含むがこれらに限定されない。
【００８９】
対象において感染を引き起こす可能性があり、本明細書で記載されるキットおよび方法に適する細菌の例は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ属、Ｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ属、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ属、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｙｅｒｓｉｎｉａ属、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ属、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ属、Ｌｉｓｔｅｒｉａ属、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ属、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ属、Ｂｒｕｃｅｌｌａ属、またはＶｉｂｒｉｏ属の細菌を含むがこれらに限定されない。対象において感染を引き起こす可能性があり、本明細書で記載されるキットおよび方法に適するウイルスの例は、Ｌｙｍｐｈｏｃｒｙｐｔｏｖｉｒｕｓ属、Ｓｉｍｐｌｅｘｖｉｒｕｓ属、Ｒｏｓｅｏｌｏｖｉｒｕｓ属、Ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ属、Ｍｕｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ属、Ａｌｐｈａｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ属、Ｒｅｓｐｉｒｏｖｉｒｕｓ属、Ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ属、Ｂｅｔａｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ属、Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓ  Ａ属、Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓ  Ｂ属、Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓ  Ｃ属、Ｍｏｒｂｉｌｉｖｉｒｕｓ属、Ｒｕｂｕｌａｖｉｒｕｓ属、Ｌｙｓｓａｖｉｒｕｓ属、Ｒｏｔａｖｉｒｕｓ属、Ｒｕｂｉｖｉｒｕｓ属、およびＦｌａｖｉｖｉｒｕｓ属のウイルスを含むがこれらに限定されない。対象において感染を引き起こす可能性があり、本明細書で記載されるキットおよび方法に適する真菌の例は、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ属（例えば、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｏｕｌａｔｕｍ）、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ属（例えば、Ｃ．ｉｍｍｉｔｉｓ）、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ属（例えば、Ｂ．ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、Ｃａｎｄｉｄａ属、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属、およびＺｙｇｏｍｙｃｅｔｅｓ属の真菌を含むがこれらに限定されない。
【００９０】
キット
本開示のさらに他の態様は、キットに関する。一部の実施形態では、キットは、本明細書で記載されるホスホリパーゼＡ（例えば、ホスホリパーゼＡ２）と、本明細書で記載される、プラスミンまたはプラスミノーゲンおよびプラスミノーゲン活性化因子と、光学的解析のための試料カートリッジまたは試料チャンバーとを含む。試料カートリッジまたは試料容器は、例えば、キュベット、スライド、または本明細書で記載されるカートリッジ（例えば、図１４および１５）でありうる。本明細書で記載されるキットのうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、キットは、１〜１０Ｕ（例えば、０．５〜５Ｕ）のプラスミノーゲン、５０〜５０，０００Ｕ（例えば、５００〜５，０００Ｕ）のストレプトキナーゼ、０．００１〜１００Ｕ（例えば、０．０１〜１０Ｕ）のウロキナーゼ、および１０〜４０，０００Ｕ（例えば、１００〜４，０００Ｕ）のホスホリパーゼＡ２を含む。本明細書で記載されるキットのうちのいずれか１つについての一部の実施形態では、キットは、１〜１０Ｕ（例えば、０．５〜５Ｕ）のプラスミノーゲンと、５０〜５０，０００Ｕ（例えば、５００〜５，０００Ｕ）のストレプトキナーゼと、０．００１〜１００Ｕ（例えば、０．０１〜１０Ｕ）のウロキナーゼとを組み合わせることにより産生させたプラスミンを含む。
【００９１】
デバイス
本開示の他の態様は、１または複数の、抗凝固剤で処理された血液試料を通した光（例えば、偏光）の透過率を測定するためのデバイスに関する。一部の実施形態では、デバイスは、図２７に示されるデバイスを含む。一部の実施形態では、デバイスは、図１７に示されるデバイスを含む。一部の実施形態では、１または複数の、抗凝固剤で処理された血液試料を、１または複数の試料カートリッジ（例えば、図１４および１５）に入れ、試料カートリッジを、デバイス（例えば、図１７）へとロードする。本明細書で記載される任意のデバイスは、光学システムを安定化させる、１または複数のスタンドおよび／または基部をさらに含みうる。
【００９２】
他の実施形態
本開示の下記では、他の非限定的な実施形態について記載する。一部の実施形態では、３００μｌずつ３つの全ＥＤＴＡ血液を、−２０℃で固体へと凍結させ、室温で融解させ、３つの個別の８ｍｍ×４０ｍｍのガラス製Ｓｈｅｌｌ  Ｖｉａｌへと分配した。第１のバイアルには、４００μｌの水を添加した（非処理試料）。第２のバイアルには、４００μｌの水中に０．５〜５Ｕのウシプラスミノーゲン、５００〜５，０００Ｕのストレプトキナーゼ、および０．０１〜１０Ｕのヒトウロキナーゼ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を添加した。第３のバイアルには、４００μｌの水中に１００〜４，０００ＵのホスホリパーゼＡ２（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を添加した。各バイアルを静かに混合し、室温で２分間にわたりインキュベートし、次いで、下記で記載され、図２７に示される、例示的なＦＣＡ偏光光学システムへと曝露した。
【００９３】
一部の実施形態では、例示的なＦＣＡ偏光光学システムは、各々が、回転式マウント１４（例えば、Ｔｈｏｒ  Ｌａｂｓ  ｍｏｔｏｒｉｚｅｄ  ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  ｒｏｔａｔｉｏｎ  ｓｔａｇｅｓ  ｗｉｔｈ  ｓｅｒｖｏ  ｄｒｉｖｅｒｓ；型番ＰＲＭ１Ｚ８Ｅ）上に取り付けた偏光子１２（例えば、Ｔｈｏｒ  Ｌａｂｓナノ粒子型直線偏光子；型番ＬＰＶＩＳ０５０−ＭＰ）と組み合わされた、並置されたレーザー１０、２０（例えば、Ｌａｓｅｒｍａｔｅ  ７８５ｎｍ；型番ＩＭＬ７８５−８００ＦＬＤレーザーおよびＬａｓｅｒｍａｔｅ  ６９０ｎｍ；型番ＲＭＬ６９０−８００ＦＬＤレーザー）からなった。回転式マウントは、０°位置および１９０°位置を横切る直線が、地表面と平行になるように設置した。鏡面３０（例えば、Ｔｈｏｒ  Ｌａｂｓ  ｋｎｉｆｅ  ｅｄｇｅ  ｒｉｇｈｔ  ａｎｇｌｅ  ｐｒｉｓｍ  ｄｉｅｌｅｃｔｒｉｃ  ｍｉｒｒｏｒ；型番ＭＲＡＫ２５−Ｅ０２およびＣｏｌｌｉｍａｔｉｏｎ  Ｐａｃｋａｇｅ；型番Ｆ８１０ＳＭＡ−７８０）を使用して、レーザー出力を、ビームを形成し、試料を適切に照射するのに用いられる、直列のコリメータ４０、４２（例えば、Ｏｃｅａｎ  Ｏｐｔｉｃｓ  ８４−ｓｅｒｉｅｓ  Ｃｏｌｌｉｍａｔｉｎｇ  Ｌｅｎｓ）へと方向付けることができる。
【００９４】
一部の実施形態では、コリメータ４０、４２に通した後で、光に、試料キュベット６０を透過させ、透過させた光をさらに加工するために、別のコリメータ４４（例えば、Ｏｃｅａｎ  Ｏｐｔｉｃｓ  ８４−ｓｅｒｉｅｓ  Ｃｏｌｌｉｍａｔｉｎｇ  Ｌｅｎｓ）を透過させる。コリメータ４４を、分岐型光ファイバーアセンブリー５２（例えば、Ｔｈｏｒ  Ｌａｂｓ  Ｂｉｆｕｒｃａｔｅｄ  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｆｉｂｅｒ  Ａｓｓｅｍｂｌｙ；型番ＱＢＩＦ６００−ＶＩＳ−ＮＩＲ）へと取り付けることができ、これにより、光シグナルを、個別の光ダイオードパワーセンサー（例えば、Ｔｈｏｒ  Ｌａｂｓ製の積分球センサー；型番Ｓ１４２Ｃ）へと供給する。各パワーセンサーには、適切なフィルター７０、８０（例えば、それぞれ、波長６９０ｎｍの光には、Ｓｅｍｒｏｃｋ  Ｂｒｉｇｈｔｌｉｎｅ  ｆｉｌｔｅｒ；ＦＦ０１−６８９／２３−１２．５であり、波長７８５ｎｍの光には、Ｓｅｍｒｏｃｋ  ＭａｘＬｉｎｅ  ｆｉｌｔｅｒ；型番ＬＬ０１−７８５−１２．５である）を装備することができる。
【００９５】
一部の実施形態では、７８５ｎｍのレーザーのための偏光子は、１９５°に設定した。一部の実施形態では、６９０ｎｍのレーザーのための偏光子は、３５５°に設定した。一部の実施形態では、光ビームへの試料導入の１０秒後、Ｔｈｏｒｌａｂｓ製のＰＭ２００  Ｔｏｕｃｈ  Ｓｃｒｅｅｎ  Ｐｏｗｅｒ  ａｎｄ  Ｅｎｅｒｇｙ  Ｍｅｔｅｒからの読取りを、７８５ｎｍシグナルおよび６９０ｎｍシグナルについて記録した。一部の実施形態では、次いで、６９０ｎｍのレーザーのための偏光子を、１７０°の設定角まで回転させ、１０秒後にシグナルを記録した。一部の実施形態では、これらの読取りを加工して、３つの位置による診断コードであって、＋、−、および０からなるコードを導出する。
【００９６】
図２１〜２６に、多様な臨床症例から採取された、多様で例示的な試料についての読取りを列挙する。各図の上半分では、マイクロワット（μＷ）単位の実際のエネルギーの読取りを列挙する。これらのデータブロックの下方には、１）プラスミンとホスホリパーゼとの間の差違、２）非処理とプラスミンとの間の差違、および３）非処理とホスホリパーゼとの間の差違を表す数が見られる。７８５ｎｍの読取りについて、１９５°の表示は、そのレーザーのための偏光子を配置するのに使用された設定角について記載する。６９０ｎｍのレーザーについての読取りは、偏光子を、１７０°または３５５°で配置したときになされた。
【００９７】
一部の実施形態では、７８５ｎｍのレーザーについて、差違を列挙し、妥当な計算をもたらす向きを注記する。一部の実施形態では、計算が下から上へと進むなら、血液を採取された患者は、ウイルス感染または細菌感染を有さない患者であると表示される（図２１）。一部の実施形態では、差違についての計算が下向きに進むなら、患者は、ウイルス感染または細菌感染を有する患者であると表示される（図２２〜２６）。この感染陽性の決定の場合は、「＋」を記録する。一部の実施形態では、計算された差違（下向きに進む）のうちの２つが、負の数を結果としてもたらすなら、「０」を記録する。
【００９８】
一部の実施形態では、６９０ｎｍのレーザーについて、１）プラスミンとホスホリパーゼとの間の差違、２）非処理とプラスミンとの間の差違、および３）非処理とホスホリパーゼとの間の差違を、７８５ｎｍの読取りと同様に導出するが、負の数または正の数としての数の表示は、以下の規則に基づく。一部の実施形態では、プラスミンで処理された試料とホスホリパーゼで処理された試料との間の差違を計算する場合、ホスホリパーゼについての読取りが、プラスミンについての読取りより小さければ、数を負と表示する。一部の実施形態では、当然ながら、ゼロの差違は、ゼロのままとする。一部の実施形態では、非処理試料とプラスミンで処理された試料との間の差違を計算する場合、プラスミンについての読取りが、非処理試料についての読取りより小さければ、結果として得られる数を負と表示する。一部の実施形態では、非処理試料とホスホリパーゼで処理された試料との間の差違を計算する場合、ホスホリパーゼについての読取りが、非処理についての読取りより小さければ、結果として得られる数を負と表示する。
【００９９】
一部の実施形態では、偏光子の配向性を１７０°または３５５°とするときの６９０ｎｍの読取りについて、プラスミンからホスホリパーゼを減じた数が負であれば、診断コードの第２位において「−」と表示する。一部の実施形態では、数のうちの２つが負であれば、診断コードについて「０」と表示する。一部の実施形態では、３つの数全てが負であれば、「−」と表示する。
【０１００】
一部の実施形態では、−−−パターンは、血液培養物陰性状態と関連する。一部の実施形態では、＋＋＋パターンは、血流感染と関連する。一部の実施形態では、＋−０パターンは、尿路感染と関連する。一部の実施形態では、＋００パターンは、細菌性肺炎と関連する。一部の実施形態では、＋−−パターンは、下気道細菌感染と関連する。一部の実施形態では、０００パターンは、全身性ウイルス感染と関連する。
【０１０１】
さらなる精緻化を伴わずに述べると、当業者は、上記の記載に基づけば、本開示を十分に活用しうると考えられる。したがって、以下の具体的な実施形態は、例示的であるに過ぎないとみなすものとし、いかなる形でも、本開示の残余に対して限定的であるとはみなさないものとする。本明細書で引用される全ての刊行物は、本明細書で言及される目的または対象物について、参照により組み込まれる。
【実施例】
【０１０２】
（実施例１）
ＦＣＡアッセイ
全血液試料は、多様な種類の感染についての、多様な、確認された臨床症例から採取し、抗凝固剤であるＥＤＴＡをこれに添加した。各臨床症例は、非感染、血流感染、尿路感染、細菌性肺炎、下気道感染、または全身性ウイルス感染のうちの１つを提示した。３００μｌずつ３つの全ＥＤＴＡ血液を、−２０℃で固体へと凍結させ、室温で融解させ、３つの個別の８ｍｍ×４０ｍｍのガラス製Ｓｈｅｌｌ  Ｖｉａｌへと分配した。第１のバイアルには、４００μｌの水を添加した（非処理試料）。第２のバイアルには、４００μｌの水中に０．５〜５Ｕのウシプラスミノーゲン、５００〜５，０００Ｕのストレプトキナーゼ、および０．０１〜１０Ｕのヒトウロキナーゼ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を添加した（図２１〜２６では「プラスミン」と称する）。第３のバイアルには、４００μｌの水中に１００〜４，０００ＵのホスホリパーゼＡ２（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を添加した。各バイアルを静かに混合し、室温で２分間にわたりインキュベートし、次いで、下記で記載され、図２７に示される、ＦＣＡ偏光光学システムへと曝露した。
【０１０３】
ＦＣＡ偏光光学システムは、各々が、回転式マウント１４（例えば、Ｔｈｏｒ  Ｌａｂｓ  ｍｏｔｏｒｉｚｅｄ  ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  ｒｏｔａｔｉｏｎ  ｓｔａｇｅｓ  ｗｉｔｈ  ｓｅｒｖｏ  ｄｒｉｖｅｒｓ；型番ＰＲＭ１Ｚ８Ｅ）上に取り付けた偏光子１２（例えば、Ｔｈｏｒ  Ｌａｂｓナノ粒子型直線偏光子；型番ＬＰＶＩＳ０５０−ＭＰ）と組み合わされた、並置されたレーザー１０、２０（例えば、Ｌａｓｅｒｍａｔｅ  ７８５ｎｍ；型番ＩＭＬ７８５−８００ＦＬＤレーザーおよびＬａｓｅｒｍａｔｅ  ６９０ｎｍ；型番ＲＭＬ６９０−８００ＦＬＤレーザー）からなった。回転式マウントは、０°位置および１９０°位置を横切る直線が、地表面と平行になるように設置した。鏡面３０（例えば、Ｔｈｏｒ  Ｌａｂｓ  ｋｎｉｆｅ  ｅｄｇｅ  ｒｉｇｈｔ  ａｎｇｌｅ  ｐｒｉｓｍ  ｄｉｅｌｅｃｔｒｉｃ  ｍｉｒｒｏｒ；型番ＭＲＡＫ２５−Ｅ０２およびＣｏｌｌｉｍａｔｉｏｎ  Ｐａｃｋａｇｅ；型番Ｆ８１０ＳＭＡ−７８０）を使用して、レーザー出力を、ビームを形成し、試料を適切に照射するのに用いられる、直列のコリメータ４０、４２（例えば、Ｏｃｅａｎ  Ｏｐｔｉｃｓ  ８４−ｓｅｒｉｅｓ  Ｃｏｌｌｉｍａｔｉｎｇ  Ｌｅｎｓ）へと方向付けることができる。
【０１０４】
コリメータ４０、４２に通した後で、光に、試料キュベット６０を透過させ、透過させた光をさらに加工するために、別のコリメータ４４（例えば、Ｏｃｅａｎ  Ｏｐｔｉｃｓ  ８４−ｓｅｒｉｅｓ  Ｃｏｌｌｉｍａｔｉｎｇ  Ｌｅｎｓ）を透過させた。コリメータ４４を、分岐型光ファイバーアセンブリー５２（例えば、Ｔｈｏｒ  Ｌａｂｓ  Ｂｉｆｕｒｃａｔｅｄ  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｆｉｂｅｒ  Ａｓｓｅｍｂｌｙ；型番ＱＢＩＦ６００−ＶＩＳ−ＮＩＲ）へと取り付けたが、これにより、光シグナルを、個別の光ダイオードパワーセンサー（例えば、Ｔｈｏｒ  Ｌａｂｓ製の積分球センサー；型番Ｓ１４２Ｃ）へと供給する。各パワーセンサーには、適切なフィルター７０、８０（例えば、それぞれ、波長６９０ｎｍの光には、Ｓｅｍｒｏｃｋ  Ｂｒｉｇｈｔｌｉｎｅ  ｆｉｌｔｅｒ；ＦＦ０１−６８９／２３−１２．５であり、波長７８５ｎｍの光には、Ｓｅｍｒｏｃｋ  ＭａｘＬｉｎｅ  ｆｉｌｔｅｒ；型番ＬＬ０１−７８５−１２．５である）を装備した。
【０１０５】
７８５ｎｍのレーザーのための偏光子は、１９５°に設定した。６９０ｎｍのレーザーのための偏光子は、３５５°に設定した。光ビームへの試料導入の１０秒後、Ｔｈｏｒｌａｂｓ製のＰＭ２００  Ｔｏｕｃｈ  Ｓｃｒｅｅｎ  Ｐｏｗｅｒ  ａｎｄ  Ｅｎｅｒｇｙ  Ｍｅｔｅｒからの読取りを、７８５ｎｍシグナルおよび６９０ｎｍシグナルについて記録した。次いで、６９０ｎｍのレーザーのための偏光子を、１７０°の設定角まで回転させ、１０秒後にシグナルを記録した。
【０１０６】
図２１〜２６に、多様な、確認された臨床症例から採取された、多様な試料についての読取りを列挙する。各図の上半分では、マイクロワット（μＷ）単位の実際のエネルギーの読取りを列挙する。これらのデータブロックの下方には、１）プラスミンとホスホリパーゼとの間の差違、２）非処理とプラスミンとの間の差違、および３）非処理とホスホリパーゼとの間の差違を表す数が見られる。７８５ｎｍの読取りでは、１９５°の表示は、そのレーザーのための偏光子を配置するのに使用された設定角について記載する。６９０ｎｍのレーザーについての読取りは、偏光子を、１７０°または３５５°で配置したときになされた。これらの読取りを加工して、３つの位置による診断コードであって、＋、−、および０からなるコードを導出した。＋、−、または０を、７８５ｎｍで１９５°の読取り、６９０ｎｍで１７０°の読取り、および６９０ｎｍで３５５°の読取りの各々に割り当てたところ、これらは、まとめて、患者が有した感染の存在または非存在を指し示し、また、感染の種類も指し示した。
【０１０７】
７８５ｎｍの読取り（診断コード内の第１位）について、１）プラスミンとホスホリパーゼとの間の差違、２）非処理とプラスミンとの間の差違、および３）非処理とホスホリパーゼとの間の差違を、この順序で、上から下へと列挙し、妥当な計算をもたらす向きについて注記した。例えば、図２１では、１５＋５＝２０であるが、他の向きでは、２０＋５で１５と等しくならず、したがって、妥当な計算の向きは、下から上（矢印を参照されたい）であった。妥当な計算が下から上へと進むなら、血液を採取された患者は、ウイルス感染または細菌感染を有さないことが見出された（図２１）。妥当な計算が下向きに（すなわち、上から下へと）進むなら、患者は、ウイルス感染または細菌感染を有することが見出された（図２１〜２６）。例えば、図２１では、１４＋（−１０）＝４であるが、他の向きでは、４＋（−１０）で１４と等しくならず、したがって、妥当な計算の向きは、上から下（矢印を参照されたい）であった。妥当な計算が上向きに（下から上へと）進むなら、陰性の決定である「−」を記録した。妥当な計算が下向きに（上から下へと）進むなら、陽性の決定である「＋」を記録し、２つの波長における妥当な計算のうちの２つ（下向きに進んだ）が、負の数を結果としてもたらさなければ、この場合は「０」を記録した。（例えば、３０＋（−３３）＝−３および３０＋（−５０）＝−２０であり、−３および−２０は負の数であるので、「０」を記録した、図２６を参照されたい）。
【０１０８】
２つの６９０ｎｍの読取りの各々について、１）プラスミンとホスホリパーゼとの間の差違、２）非処理とプラスミンとの間の差違、および３）非処理とホスホリパーゼとの間の差違を、７８５ｎｍの読取りと同様に導出したが、差違に由来する値の結果を、正とマークするのか、負とマークするのかについて、以下の改変を施した。プラスミンで処理された試料とホスホリパーゼで処理された試料との間の差違を計算する場合、ホスホリパーゼについての読取りが、プラスミンについての読取りより小さければ、結果として得られる値を負と表示した。当然ながら、ゼロの差違は、ゼロのままとした。非処理試料とプラスミンで処理された試料との間の差違を計算する場合、プラスミンについての読取りが、非処理試料についての読取りより小さければ、結果として得られる値を負と表示した（例えば、８０は、１１１より小さいため、プラスミンから非処理を減じた値が−３１となる、図２５を参照されたい）。非処理試料とホスホリパーゼで処理された試料との間の差違を計算する場合、ホスホリパーゼについての読取りが、非処理についての読取りより小さければ、結果として得られる値を負と表示した（例えば、８０は、１００より小さいため、非処理からホスホリパーゼを減じた値が−２０となる、図２６を参照されたい）。
【０１０９】
診断コード内の第２位および第３位（偏光子の配向性を１７０°または３５５°とするときの６９０ｎｍの読取り）について、プラスミンからホスホリパーゼを減じた数が負であれば、診断コードの第２位において「−」と表示した。数のうちの２つが負であれば、診断コードについて「０」と表示する。３つの数全てが負であれば、「−」と表示する。
【０１１０】
−−−パターンは、血液培養物陰性状態と関連し（図２１）、＋＋＋パターンは、血流感染と関連し（図２２）、＋−０パターンは、尿路感染と関連し（図２３）、＋００パターンは、細菌性肺炎と関連し（図２４）、＋−−パターンは、下気道細菌感染と関連し（図２５）、０００パターンは、全身性ウイルス感染と関連する（図２６）ことが見出された。
【０１１１】
これらの結果は、酵素の特異的組合せによる血液の処理に続き、試料を通した、複数の波長における偏光の透過率を使用して、処理された血液の解析を行うことにより、患者を、感染を有する対象または感染を有さない対象として同定することが可能であるだけでなく、また、異なる種類の感染を識別することも可能であったことを裏付ける。
【０１１２】
（実施例２）
血液試料の顕微鏡解析
薄膜顕微鏡法は、以下の通りに実施した。実施例１で既に記載した通りに、感染症例または非感染症例に由来する血液を凍結させ、次いで、水または酵素で処理した。５０マイクロリットルの試料を、ガラス製の顕微鏡スライド上に押し出し、３分間にわたり静置した後、５０μｌの固定剤を添加した。１０分間にわたるインキュベーションの後、スライドを、固定剤浴中に、１０分間にわたり浸漬した。次いで、スライドを、蒸留水中で１分間にわたりすすいだ。次いで、スライドを、ヘマトキシリン中に、３分間にわたり浸漬し、流水の蒸留水中で、３０秒間にわたりすすぎ、Ｓｃｏｔｔ’ｓ  Ｔａｐ  Ｗａｔｅｒ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ浴中に、５分間にわたり浸漬し、蒸留水中で３０秒間にわたりすすぎ、９５％のエタノール中に、１分間にわたり浸漬した。次いで、スライドを、Ｐａｐａｎｉｃｏｌａｏｕ  Ｓｔａｉｎ  ＯＧ  ６−ＥＡ中に、３分間にわたり浸漬し、２回にわたり、逐次的な９５％エタノール浴中に浸漬した後、２回にわたる、逐次的なキシレン浴への浸漬を施した。封入剤およびカバースリップを適用し、標準的な光学顕微鏡を使用して、スライドを４０倍で観察した。
【０１１３】
感染が見られない場合、ホスホリパーゼで処理された試料は、光の透過を妨げる顆粒状のバックグラウンドをもたらした。血流感染が見られる場合、ホスホリパーゼで処理された試料は、中央部のコア線維の側方から発する、規則的で短い分枝状パターンを伴う、長型で直線状に配向した凝集物をもたらした。膀胱などの臓器感染が見られる場合、ホスホリパーゼで処理された試料は、血流感染において見出される凝集物と比較して長型ではない、多数で小型の凝集物をもたらした。
【０１１４】
対象が血流中に存在しない細菌感染を有する場合、赤血球表面に結合したフィブリンポリマー／ネットワークは、血流感染を有する患者の赤血球表面に結合したフィブリンポリマー／ネットワークと比較して小型であった。これらの小型のフィブリンネットワークは、リン脂質断片の十分な遮蔽（ＤＮＡと共に）をもたらすと考えられた。プラスミンは、この効果を消失させることが見出された。
【０１１５】
このコホートにおけるフィブリンポリマーの最小限の複雑性は、ホスホリパーゼＡ２による、リン脂質のより完全な分解を可能とする。
【０１１６】
フィブリンの異方性の分子構造により、フィブリンを偏光により観察することが可能となった。自動式偏光顕微鏡法を使用して、フィブリンの構造的パラメータを定量化した（１８）。
【０１１７】
（実施例３）
全血液試料は、多様な種類の感染についての、多様な、確認された臨床症例から採取し、抗凝固剤であるＥＤＴＡをこれに添加した。各臨床症例は、非感染（血液培養物陰性または既に処置された感染）、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓによる血流感染、Ｅ．ｃｏｌｉによる血流感染、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｉｔｉｄｅｓによる血流感染、胆汁中および尿中のＫ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染、細菌性肺炎、脚部における蜂巣炎、または熱帯熱マラリアのうちの１つを提示した。３００μｌずつ３つの全ＥＤＴＡ血液を、−２０℃で固体へと凍結させ、室温で融解させ、各試料について、３つずつの個別のチャンバーを含有する試料カートリッジ２００へと分配した。第１のチャンバーには、４００μｌの水を添加した（非処理試料）。第２のチャンバーには、４００μｌの水中に０．５〜５Ｕのウシプラスミノーゲン、５００〜５，０００Ｕのストレプトキナーゼ、および０．０１〜１０Ｕのヒトウロキナーゼ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を添加した（図１〜１３では「プラスミン」と称する）。第３のチャンバーには、４００μｌの水中に１００〜４，０００ＵのホスホリパーゼＡ２（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を添加した。試料を静かに混合し、室温で２分間にわたりインキュベートし、次いで、下記で記載され、図１７に示される、ＦＣＡ偏光光学システムへと曝露した。
【０１１８】
ＦＣＡ偏光光学システムは、各々が、回転式マウント１４（例えば、Ｔｈｏｒ  Ｌａｂｓ  ｍｏｔｏｒｉｚｅｄ  ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  ｒｏｔａｔｉｏｎ  ｓｔａｇｅｓ  ｗｉｔｈ  ｓｅｒｖｏ  ｄｒｉｖｅｒｓ；型番ＰＲＭ１Ｚ８Ｅ）上に取り付けた偏光子１２（例えば、Ｔｈｏｒ  Ｌａｂｓナノ粒子型直線偏光子；型番ＬＰＶＩＳ０５０−ＭＰ）と組み合わされた、並置されたレーザー１０、２０（例えば、Ｌａｓｅｒｍａｔｅ  ７８５ｎｍ；型番ＩＭＬ７８５−８００ＦＬＤレーザーおよびＬａｓｅｒｍａｔｅ  ６９０ｎｍ；型番ＲＭＬ６９０−８００ＦＬＤレーザー）からなった。回転式マウントは、０°位置および１８０°位置を横切る直線が、地表面と平行になるように設置した。鏡面３０（例えば、Ｔｈｏｒ  Ｌａｂｓ  ｋｎｉｆｅ  ｅｄｇｅ  ｒｉｇｈｔ  ａｎｇｌｅ  ｐｒｉｓｍ  ｄｉｅｌｅｃｔｒｉｃ  ｍｉｒｒｏｒ；型番ＭＲＡＫ２５−Ｅ０２およびＣｏｌｌｉｍａｔｉｏｎ  Ｐａｃｋａｇｅ；型番Ｆ８１０ＳＭＡ−７８０）を使用して、レーザー出力を方向付け、試料を適切に照射した。
【０１１９】
光に、カートリッジホルダー３００で定位置に保持した試料カートリッジ２００を透過させ、透過させた光をさらに加工するために、コリメータ４４（例えば、Ｏｃｅａｎ  Ｏｐｔｉｃｓ  ８４−ｓｅｒｉｅｓ  Ｃｏｌｌｉｍａｔｉｎｇ  Ｌｅｎｓ）を透過させた。コリメータ４４を、分岐型光ファイバーアセンブリー５２（例えば、Ｔｈｏｒ  Ｌａｂｓ  Ｂｉｆｕｒｃａｔｅｄ  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｆｉｂｅｒ  Ａｓｓｅｍｂｌｙ；型番ＱＢＩＦ６００−ＶＩＳ−ＮＩＲ）へと取り付けたが、これにより、光シグナルを、個別の光ダイオードパワーセンサー（例えば、Ｔｈｏｒ  Ｌａｂｓ製の積分球センサー；型番Ｓ１４２Ｃ）へと供給する。各パワーセンサーには、適切なフィルター７０、８０（例えば、それぞれ、波長６９０ｎｍの光には、Ｓｅｍｒｏｃｋ  Ｂｒｉｇｈｔｌｉｎｅ  ｆｉｌｔｅｒ；ＦＦ０１−６８９／２３−１２．５であり、波長７８５ｎｍの光には、Ｓｅｍｒｏｃｋ  ＭａｘＬｉｎｅ  ｆｉｌｔｅｒ；型番ＬＬ０１−７８５−１２．５である）を装備した。分岐型光ファイバーアセンブリーは、一方のケーブル５４が、他方のケーブル５３より７ｍｍ高くなるように回転させた（図１９および２０を参照されたい）。
【０１２０】
７８５ｎｍのレーザーのための偏光子は、１４０°に設定した。６９０ｎｍのレーザーのための偏光子は、８０°に設定した。光ビームへの試料導入の１０秒後、Ｔｈｏｒｌａｂｓ製のＰＭ２００  Ｔｏｕｃｈ  Ｓｃｒｅｅｎ  Ｐｏｗｅｒ  ａｎｄ  Ｅｎｅｒｇｙ  Ｍｅｔｅｒからの読取りを、７８５ｎｍシグナルおよび６９０ｎｍシグナルについて記録した。次いで、６９０ｎｍのレーザーのための偏光子を、９５°の設定角まで回転させ、１０秒後にシグナルを記録した。
【０１２１】
図１〜１３に、多様な、確認された臨床症例から採取された、多様な試料についての読取りを列挙する。各図の上半分では、マイクロワット（μＷ）単位の実際のエネルギーの読取りを列挙する。これらのデータブロックの下方には、ａ）プラスミンとホスホリパーゼとの間の差違、ｂ）非処理とプラスミンとの間の差違、およびｃ）非処理とホスホリパーゼとの間の差違を表す数が見られる。７８５ｎｍの読取りについて、１４０°の表示は、そのレーザーのための偏光子を配置するのに使用された設定角について記載する。６９０ｎｍのレーザーについての読取りは、偏光子を、８０°または９５°で配置したときになされた。これらの読取りは、まとめて、患者が有した感染の存在または非存在を指し示し、また、感染の種類も指し示す、診断コードを導出するように加工した。
【０１２２】
図１に示す通り、Ａ行、Ｂ行、およびＣ行について（（Ａ）プラスミンからホスホリパーゼを減じた、（Ｂ）非処理からプラスミンを減じた、および（Ｃ）非処理からホスホリパーゼを減じた）、３つ全てが負である数が「Ｂ」行の数だけであれば、真菌性血流感染または細菌性血流感染が指し示された。図２に示す通り、Ａ行、Ｂ行、およびＣ行について、３つ全てが負である数が「Ｂ」行の数だけであれば、真菌性血流感染または細菌性血流感染が指し示された。図３に示す通り、Ａ行、Ｂ行、およびＣ行について、３つ全てが負である数が「Ｂ」行の数だけであれば、真菌性血流感染または細菌性血流感染が指し示された。図４に示す通り、Ａ行、Ｂ行、およびＣ行について、１）全ての数が、正であるか、または２）７８５ｎｍの読取りの中に少なくとも１つのゼロの値が見られるか、または３）少なくとも全ての「Ａ」行の数が負の値であれば、細菌感染も、真菌感染も、指し示されなかった。図５に示す通り、Ａ行、Ｂ行、およびＣ行について、１）全ての数が、正であるか、または２）７８５ｎｍの読取りの中に少なくとも１つのゼロの値が見られるか、または３）少なくとも全ての「Ａ」行の数が負の値であれば、細菌感染も、真菌感染も、指し示されなかった。図６に示す通り、Ａ行、Ｂ行、およびＣ行について、１）全ての数が、正であるか、または２）７８５ｎｍの読取りの中に少なくとも１つのゼロの値が見られるか、または３）少なくとも全ての「Ａ」行の数が負の値であれば、細菌感染も、真菌感染も、指し示されなかった。図７に示す通り、Ａ行、Ｂ行、およびＣ行について、１）全ての数が、正であるか、または２）７８５ｎｍの読取りの中に少なくとも１つのゼロの値が見られるか、または３）少なくとも全ての「Ａ」行の数が負の値であれば、細菌感染も、真菌感染も、指し示されなかった。図８に示す通り、Ａ行、Ｂ行、およびＣ行について、１）全ての数が、正であるか、または２）７８５ｎｍの読取りの中に少なくとも１つのゼロの値が見られるか、または３）少なくとも全ての「Ａ」行の数が負の値であれば、細菌感染も、真菌感染も、指し示されなかった。図９に示す通り、Ａ行、Ｂ行、およびＣ行について、「Ａ」行および「Ｃ」行だけが、３つの数全てを負数として表示すれば、腹部細菌感染が指し示された。腹部感染ではまた、非処理試料についての６９０ｎｍのレーザー光偏光子のいずれの配向性においても、同一の読取りが見られうる。図１０に示す通り、Ａ行、Ｂ行、およびＣ行について、「Ａ」行および「Ｃ」行だけが、３つの数全てを負数として表示すれば、腹部細菌感染が指し示された。腹部感染では、非処理試料についての６９０ｎｍのレーザー光偏光子のいずれの配向性においても、同一の読取りが見られうる。図１１に示す通り、Ａ行、Ｂ行、およびＣ行について、「Ｂ」行および「Ｃ」行だけが、３つの数全てを負数として表示すれば、肺の真菌感染または細菌感染が指し示された。図１２に示す通り、Ａ行、Ｂ行、およびＣ行について、７８５ｎｍ列中だけの少なくとも１つの数が負であり、６９０ｎｍ列中の数は全て正であれば、性状不明の細菌感染過程または真菌感染過程が、血流外において指し示された。図１３に示す通り、Ａ行、Ｂ行、およびＣ行について、１）全ての数が、正であるか、または２）７８５ｎｍの読取りの中に少なくとも１つのゼロの値が見られるか、または３）少なくとも全ての「Ａ」行の数が負の値であれば、細菌感染も、真菌感染も、指し示されず、７８５ｎｍの計算列中のゼロであって、試料を細菌感染について陰性と表示するゼロが、他のいかなる規則にも優先される。
【０１２３】
これらの結果は、酵素の特異的組合せによる血液の処理に続き、試料を通した、複数の波長における偏光の透過率を使用して、処理された血液の解析を行うことにより、患者を、感染を有する対象または感染を有さない対象として同定することが可能であるだけでなく、また、異なる種類の感染を識別することも可能であったことを裏付ける。
【０１２４】
（実施例４）
例示的なチューニング法
次に、感染者に由来する、抗凝固剤で処理された血液試料の、非感染者に由来する、抗凝固剤で処理された血液試料と対比した差違を検出するための光学システムをチューニングするための例示的な方法について記載する。光学システムは、分岐型ケーブルによる検出システム（例えば、図１７〜２０または図２７に示される、分岐型システム１００および分岐型ケーブルファイバーアセンブリー５２を参照されたい）、２つの波長（例えば、７８５および６９０ｎｍ）における２つのレーザーであって、回転式マウント上に取り付けた偏光子を伴うレーザー、およびレーザーからの光を試料上に調整する鏡面を含有する。これらの構成要素は、抗凝固剤で処理された血液試料を通した光の透過率を結果としてもたらす、任意の構成に置くことができる。実施例１で記載した通りに、血液試料を凍結させ、融解させ、酵素で処理した。感染を伴わない対象に由来する試料（非処理試料、プラスミン処理試料、ホスホリパーゼ処理試料）のセット、および感染を伴う対象に由来する試料のセットを、試料カートリッジ（例えば、図１４および１５を参照されたい）またはキュベットへとロードする。次いで、試料を、光学システムへとロードする。次いで、光学システムをチューニング（例えば、分岐型ケーブルを回転させることにより、試料を回転させることにより、偏光子を回転させることにより、かつ／または鏡面に対するレーザーの角度を変化させることにより）して、２つの波長における、感染を伴わない対象に由来する血液試料と、感染を伴う対象に由来する血液試料との間の、読取りの差違を最大化する。
【０１２５】
例えば、偏光子の初期設定角を選択する。次いで、分岐型ケーブル内の２つのケーブルが、地表面と平行に、互いに対して一列に並ばないように、分岐型ケーブル回転させることができる（例えば、図１９および２０における、分岐型ケーブルファイバーアセンブリー５２内のケーブル５３および５４を参照されたい）。試料の間の、上記で記載した最大の差違が観察されるまで、回転を続ける。次いで、試料を回転させて、回転させたケーブルアセンブリーへの最大の伝送を達成する。次いで、偏光子を回転させて、回転させたケーブルおよび試料について、最適の偏光子位置を導出する。
【０１２６】
屈折イベントについての記載
理論により束縛されることを望まずに述べると、上記のシステムまたは実施例１および２のシステムにより検出される屈折イベント（試料を通した偏光の透過率により測定される）は、分岐型光ファイバーシステムの使用に起因すると考えられる。光ファイバーシステム内のケーブルは、各々独立に、単一の波長を検出し、光がケーブル領域へと屈折する場合、その光だけを検出し、次いで、これが、検出器へと伝送される。理論により束縛されることを望まずに述べると、血液を凍結させ、融解させ、異なる酵素で処理することにより、血液の屈折パターンが変化し、これにより、試料から発せられる光の角度が変化する。光の角度により、屈折光が、ケーブルのうちの一方に当たるのか、両方に当たるのかが決定され、これが、検出器の一方または両方により検出される（これは、測定の前に、ケーブルシステムを回転させることにより大きくなる）。したがって、理論に束縛されることを望まずに述べると、透過率の変化は、少なくとも部分的に、異なる形で加工された血液試料中の、これらの屈折の変化に起因すると考えられる。結果として、透過率の変化は、凍結／融解の後における、異なる形で処理された血液試料（プラスミンで処理された血液試料、ホスホリパーゼで処理された血液試料、非酵素処理対照）の間の、光の透過率の差違であって、各対象について、対象の状態（感染状態、非感染状態など）を同定する差違であることを理解されたい。また、患者を同定するために導出される値およびアルゴリズムは、使用される光学システムの差違に依存することも理解されたい。実施例１および２では、２つの例示的な光学システムであって、異なる光学的設定および異なる偏光角を使用して、診断所見に到達する光学システムについて記載しているが、これらのいずれもが、感染を伴う対象または感染を伴わない対象を同定するのに妥当であった。
【０１２７】
【表１】
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【表２】
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【０１２８】
他の実施形態
本明細書で開示される特徴の全ては、任意の組合せで組み合わせることができる。本明細書で開示される各特徴は、同じであるか、均等であるか、または類似の目的に資する代替的な特徴で置きかえることができる。したがって、そうでないことが明示的に言明されない限りにおいて、開示される各特徴は、包括的な、一連の、均等であるかまたは類似の特徴の例であるに過ぎない。
【０１２９】
上記の記載から、当業者は、本開示の不可欠な特徴を容易に確認することができ、その精神および範囲から逸脱することなく、本開示に多様な変化および改変を施して、これを、多様な使用法および条件へと適応させることができる。したがってまた、他の実施形態も、特許請求の範囲内にある。
【０１３０】
均等物
本明細書では、本発明の複数の実施形態について記載および例示してきたが、当業者は、本明細書で記載される機能を果たし、かつ／または結果および／もしくは利点のうちの１または複数を得るための、他の様々な手段および／または構造をたやすく想定するであろうし、このような変動および／または改変の各々は、本明細書で記載される本発明の実施形態の範囲内にあるとみなされる。より一般的に、当業者は、本明細書で記載される、全てのパラメータ、寸法、材料、および構成が、例示的であることを意味するものであり、実際のパラメータ、寸法、材料、および／または構成は、本発明の教示が使用される、１または複数の具体的な適用に依存することをたやすく察知するであろう。当業者は、以下の日常的な実験を使用して、本明細書で記載される、本発明の具体的な実施形態に対する多くの均等物を認識または確認することが可能であろう。したがって、上記実施形態は、例だけを目的として提示されるものであり、添付の特許請求の範囲およびこれに対する均等物の範囲内にあり、本発明の実施形態は、具体的に記載および主張される形とは別の形でも実施しうることを理解されたい。本開示の本発明の実施形態は、本明細書で記載される、各個別の特徴、システム、品目、材料、キット、および／または方法を対象とする。加えて、２つまたはそれ超のこのような特徴、システム、品目、材料、キット、および／または方法の任意の組合せは、このような特徴、システム、品目、材料、キット、および／または方法が互いに不整合でなければ、本開示の本発明の範囲内に組み入れられる。
【０１３１】
本明細書で定義および使用される全ての定義は、定義された用語の、辞書による定義、参照により組み込まれる文献内の定義、および／または通常の意味を統御するものと理解されたい。
【０１３２】
本明細書で開示される、全ての参考文献、特許、および特許出願は、それについて各々が引用される対象物に関して、参照により組み込まれ、これらは、場合によって、文献の全体を包摂しうる。
【０１３３】
逆のことが明示的に指し示されない限りにおいて、本明細書および特許請求の範囲で使用される不定冠詞である「ある（ａ）」および「ある（ａｎ）」は、「少なくとも１つの」を意味するものと理解されたい。
【０１３４】
本明細書および特許請求の範囲で使用される「および／または」という語句は、このように接続された要素の「一方または両方」、すなわち、ある場合には、連言的に存在し、他の場合には、選言的に存在する要素を意味するものと理解されたい。「および／または」を伴って列挙される複数の要素は、同じ様式で、すなわち、このように接続された要素の「１または複数」と解釈されるものとする。「および／または」節により具体的に同定された要素以外の他の要素も、具体的に同定されたこれらの要素に関連する場合であれ、関連しない場合であれ、任意選択で存在しうる。したがって、非限定的な例として述べると、一実施形態では、「Ａおよび／またはＢ」に対する言及は、「〜を含む」などの非制限的表現と共に使用される場合、Ａだけ（任意選択で、Ｂ以外の要素を含む）を指す場合もあり；別の実施形態では、Ｂだけ（任意選択で、Ａ以外の要素を含む）を指す場合もあり；さらに別の実施形態では、ＡおよびＢの両方（任意選択で、他の要素を含む）などを指す場合もある。
【０１３５】
本明細書および特許請求の範囲で使用される、「または」は、上記で定義された「および／または」と同じ意味を有するものと理解されたい。例えば、リスト中の項目を区別する場合、「または」または「および／または」は、包含的である、すなわち、多数の要素またはあるリストにわたる要素のうちの少なくとも１つの要素の包含であるが、また、多数の要素またはあるリストにわたる要素のうちの１つを超える要素も含む包含であり、任意選択で、列挙されていないさらなる項目も含む包含と解釈されるものとする。多数の要素またはあるリストにわたる要素のうちのちょうど１つの要素の包含を指すのは、「〜のうちの１つだけ」もしくは「〜のうちのちょうど１つ」など、逆のことが明確に指示される用語、または特許請求の範囲で使用される場合の「〜からなる」に限られる。一般に、本明細書で使用される「または」という用語は、「いずれか」、「〜のうちの１つ」、「〜のうちの１つだけ」、または「〜のうちのちょうど１つ」など、除外性の用語に先立たれる場合、除外的な代替法（すなわち、「一方または他方であり、両方ではない」）だけを指し示すと解釈されるものとする。特許請求の範囲で使用される場合の、「〜から本質的になる」は、特許法の分野で使用される、その通常の意味を有するものとする。
【０１３６】
本明細書および特許請求の範囲において、１または複数の要素のリストに言及して使用される「少なくとも１つの」という語句は、要素のリスト内の要素のうちの任意の１または複数から選択されるが、要素のリスト内で具体的に列挙される各要素およびあらゆる要素のうちの少なくとも１つを必ずしも含むわけではないが、要素のリスト内の要素の任意の組合せを必ずしも除外するわけでもない、少なくとも１つの要素を意味するものと理解されたい。この定義はまた、「少なくとも１つの」という語句が言及する要素のリスト内で具体的に同定される要素以外の要素が、具体的に同定されたこれらの要素に関連する場合であれ、関連しない場合であれ、任意選択で存在しうることも許容する。したがって、非限定的な例として述べると、一実施形態では、「ＡおよびＢのうちの少なくとも１つ」（または、同義で、「ＡまたはＢのうちの少なくとも１つ」、または、同義で、「Ａおよび／またはＢのうちの少なくとも１つ」）とは、Ｂの存在を伴わず（かつ、任意選択で、Ｂ以外の要素を含み）、任意選択で、１つを超えるＡを含む、少なくとも１つのＡを指す場合もあり；別の実施形態では、Ａの存在を伴わず（かつ、任意選択で、Ａ以外の要素を含み）、任意選択で、１つを超えるＢを含む、少なくとも１つのＢを指す場合もあり；さらに別の実施形態では、任意選択で、１つを超えるＡを含む、少なくとも１つのＡ、および任意選択で、１つを超えるＢを含む、少なくとも１つのＢ（かつ、任意選択で、他の要素を含む）を指す場合もあり；その他の場合もある。
【０１３７】
また、逆のことが明示的に指し示されない限りにおいて、本明細書で主張される任意の方法であって、複数のステップまたは行為を含む方法では、方法のステップまたは行為の順序が、必ずしも、方法のステップまたは行為が列挙される順序に限定されるわけではないことも理解されたい。
【０１３８】
特許請求の範囲ならびに上記の明細書では、「〜を含む」、「〜を含む」、「〜を保有する」、「〜を有する」、「〜を含有する」、「〜を伴う」、「〜を保持する」、「からなる」など、全ての移行句は、非制限的である、すなわち、「〜を含む」を意味するものであり、「〜に限定される」を意味するものではないものと理解されたい。移行句の「〜からなる」および「〜から本質的になる」だけは、それぞれ、「The United States Patent Office Manual of Patent ExaminingProcedures」、2111.03節において示されている通り、制限的移行句または半制限的移行句であるものとする。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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