(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４、の２個のペプチド単量体サブユニットを含むペプチド二量体化合物またはその薬剤的に許容可能な塩であって、式中、
Ｘａａ１は、非存在、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｍｅｔ、Ｔｈｒ、そのアイソスター、および対応するＤアミノ酸からなる群から選択され；
Ｘａａ２は、非存在、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｍｅｔ、Ｔｈｒ、そのアイソスター、および対応するＤアミノ酸からなる群から選択され；
Ｘａａ３は、非存在、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｍｅｔ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、そのアイソスター、および対応するＤアミノ酸からなる群から選択され；
Ｘａａ４は、ＣｙｓおよびＰｅｎからなる群から選択され；
Ｘａａ５は、Ｎ−Ｍｅ−Ａｒｇであり；
Ｘａａ６は、Ｓｅｒであり；
Ｘａａ７は、Ａｓｐであり；
Ｘａａ８は、Ｔｈｒであり；
Ｘａａ９は、Ｌｅｕであり；
Ｘａａ１０は、ＣｙｓおよびＰｅｎからなる群から選択され；
Ｘａａ１１は、非存在、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｓａｒ、１−Ｎａｌ、２−Ｎａｌ、ＨＰｈｅ、Ｐｈｅ（４−Ｆ）、ジヒドロ−Ｔｒｐ、Ｄａｐ、Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｄ−Ｏｒｎ、Ｄ−Ｄａｐ、Ｄ−Ｄａｂ、Ｂｉｐ、Ａｌａ（３，３ジフェニル）、ビフェニル−Ａｌａ、Ｄ−Ｐｈｅ、Ｄ−Ｔｒｐ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｄ−Ｇｌｕ、Ｄ−Ｈｉｓ、Ｄ−Ｌｙｓ、３，３−ジＰｈｅ、β−ＨＴｒｐ、Ｆ（４−ＣＦ３）、Ｏ−Ｍｅ−Ｔｙｒ、４−Ｍｅ−Ｐｈｅ、芳香環置換Ｐｈｅ、芳香環置換Ｔｒｐ、芳香環置換Ｈｉｓ、ヘテロ芳香族アミノ酸、Ｎ−Ｍｅ−Ｌｙｓ、Ｎ−Ｍｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）、４−Ｍｅ−Ｐｈｅ、対応するＤアミノ酸；およびそのアイソスターからなる群から選択され、
Ｘａａ１２は、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ａｒｇ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｍｅｔ、Ｇｌａ、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｄａｐ、Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｄ−Ｏｒｎ、Ｄ−Ｄａｐ、Ｄ−Ｄａｂ、β−ＨＧｌｕ、２−Ｎａｌ、１−Ｎａｌ、Ｂｉｐ、β−ＨＰｈｅ、βＧｌｕ、そのアイソスター、および対応するＤアミノ酸からなる群から選択され；
Ｘａａ１３は、非存在、Ｇｌｎ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｍｅｔ、Ｇｌｕ、Ｇｌａ、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ｄａｐ、Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｄ−Ｏｒｎ、Ｎ−Ｍｅ−Ｏｒｎ、Ｎ−Ｍｅ−Ｄａｐ、Ｎ−Ｍｅ−Ｄａｂ、Ｎ−Ｍｅ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｄａｐ、Ｄ−Ｄａｂ、Ｄ−Ｌｙｓ、Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｌｙｓ、そのアイソスター、および対応するＤアミノ酸からなる群から選択され；ならびに、
Ｘａａ１４は、非存在、天然アミノ酸、そのアイソスター、および対応するＤアミノ酸からなる群から選択され、
式中、前記ペプチド二量体化合物は、Ｘａａ４およびＸａａ１０間のジスルフィド結合を含み、Ｘａａ４およびＸａａ１０の一方または両方がＰｅｎであり、
前記２個のペプチド単量体サブユニットは、リンカー部分によって結合されており、前記各単量体サブユニットのＮ末端が前記リンカー部分によって結合されてＮ末端二量体化合物とされているか、または、前記各単量体サブユニットのＣ末端が前記リンカー部分によって結合されてＣ末端二量体化合物とされている、ペプチド二量体化合物またはその薬剤的に許容可能な塩。
【請求項２】
前記リンカー部分が、ジグリコール酸（ＤＩＧ）、ＤＩＧ−ＯＨ、ＰＥＧ１３、ＰＥＧ２５、ＰＥＧ１Ｋ、ＰＥＧ２Ｋ、ＰＥＧ３．４Ｋ、ＰＥＧ４Ｋ、ＰＥＧ５Ｋ、β−Ａｌａ−イミノ二酢酸（ＩＤＡ）、ＩＤＡ−Ｐａｌｍ、ＩＤＡ−Ｂｏｃ、ＩＤＡ−イソ吉草酸、トリアジン、トリアジン−Ｂｏｃ、イソフタル酸、１，３−フェニレン二酢酸、１，４−フェニレン二酢酸、シクロプロピル酢酸、４−フルオロ安息香酸、４−フルオロフェニル酢酸、３−フェニルプロピオン酸、コハク酸、ビオチン、グルタル酸、アゼライン酸、ピメリン酸、ドデカン二酸、脂肪族化合物、芳香族化合物、ヘテロ芳香族化合物、および４００Ｄａ〜４０，０００Ｄａの分子量を持つポリエチレングリコールからなる群から選択される、請求項１に記載のペプチド二量体化合物またはその薬剤的に許容可能な塩。
【請求項３】
（ｉ）前記ペプチド単量体サブユニットのＮ末端におけるアシル化；および／または
（ｉｉ）前記各ペプチド単量体サブユニットにおけるＣ末端アミドまたはＯＨ；
を含む、請求項１または２に記載のペプチド二量体化合物またはその薬剤的に許容可能な塩。
【請求項４】
Ｘａａ４およびＸａａ１０の両方がＰｅｎである、請求項１に記載のペプチド二量体化合物またはその薬剤的に許容可能な塩。
【請求項５】
前記ペプチド二量体が、配列番号９７、１０６、１０７、１２０、１３３、１３４および１３７のいずれかで表されるアミノ酸配列を有するペプチド単量体サブユニットを含む、請求項１に記載のペプチド二量体化合物またはその薬剤的に許容可能な塩。
【請求項６】
リンカー部分と、配列番号９７、１０６、１０７、１２０、１３３、１３４および１３７のいずれかで表されるアミノ酸配列をそれぞれが含む２個のペプチド単量体サブユニットとを含むペプチド二量体化合物またはその薬剤的に許容可能な塩であって、各単量体サブユニットが２個のＰｅｎの間にジスルフィド結合を含み、
前記リンカー部分は、ジグリコール酸（ＤＩＧ）、ＤＩＧ−ＯＨ、ＰＥＧ１３、ＰＥＧ２５、ＰＥＧ１Ｋ、ＰＥＧ２Ｋ、ＰＥＧ３．４Ｋ、ＰＥＧ４Ｋ、ＰＥＧ５Ｋ、β−Ａｌａ−イミノ二酢酸（ＩＤＡ）、ＩＤＡ−Ｐａｌｍ、ＩＤＡ−Ｂｏｃ、ＩＤＡ−イソ吉草酸、トリアジン、トリアジン−Ｂｏｃ、イソフタル酸、１，３−フェニレン二酢酸、１，４−フェニレン二酢酸、シクロプロピル酢酸、４−フルオロ安息香酸、４−フルオロフェニル酢酸、３−フェニルプロピオン酸、コハク酸、ビオチン、グルタル酸、アゼライン酸、ピメリン酸、ドデカン二酸、脂肪族化合物、芳香族化合物、ヘテロ芳香族化合物、および４００Ｄａ〜４０，０００Ｄａの分子量を持つポリエチレングリコールからなる群から選択され、
前記各単量体サブユニットのＮ末端が前記リンカー部分によって結合されているか、または、前記各単量体サブユニットのＣ末端が前記リンカー部分によって結合されている、ペプチド二量体化合物またはその薬剤的に許容可能な塩。
【請求項７】
（ｉ）前記各ペプチド単量体サブユニットのＮ末端におけるアシル化；および／または
（ｉｉ）前記各ペプチド単量体サブユニットにおけるＣ末端アミドまたはＯＨ；
を含む、請求項６に記載のペプチド二量体化合物またはその薬剤的に許容可能な塩。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載のペプチド二量体化合物またはその薬剤的に許容可能な塩を含む医薬組成物。
【請求項９】
腸溶コーティングを含む、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
細胞内のＭＡｄＣＡＭに対するα４β７の結合の阻害における使用のための、請求項１〜７のいずれか１項に記載のペプチド二量体化合物またはその薬剤的に許容可能な塩を含む組成物、または請求項８もしくは９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）についての対象の治療における使用のための、請求項１０に記載の組成物または医薬組成物。
【請求項１２】
前記ＩＢＤが潰瘍性大腸炎またはＣｒｏｈｎ病である、請求項１１に記載の組成物または医薬組成物。
【請求項１３】
前記組成物または前記医薬組成物が、経口的に、局所的に、静脈内に、または皮下に投与される、請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の組成物または医薬組成物。
【請求項１４】
前記対象がヒトである、請求項９〜１３のいずれか１項に記載の組成物または医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インテグリン結合によって生じるかまたは抽出される状態を治療するのに有用である活性を有する新規の化合物、該化合物を含む医薬組成物、該化合物を用いる治療方法、およびインテグリン結合をブロックまたは破壊する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
インテグリンは、細胞接着および細胞遊走から遺伝子制御にまで渡る多数の細胞プロセスに関与するα／βヘテロ二量体細胞表面受容体と非共有結合的に結合する（Ｄｕｂｒｅｅ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  α４β７  Ｉｎｔｅｇｒｉｎ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ａｓ  Ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ａｇｅｎｔｓ，  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ２００２，  ４５，  ３４５１−３４５７）。インテグリンの発現差異は細胞の接着性を制御することができ、異なる白血球集団が異なる炎症シグナルに応じて特定の臓器へ補充させる。左記が無検査である場合、インテグリン媒介癒着プロセスは慢性炎症および自己免疫疾患をもたらし得る。
【０００３】
α４インテグリン、α４β１、およびα４β７は、胃腸管全体に渡るリンパ球遊走において必要不可欠な役割を果たす。これらはＢおよびＴリンパ球を含む大半の白血球上で発生し、これらは、各主要なリガンド、血管細胞接着分子（ＶＣＡＭ）、および粘膜アドレシン細胞接着分子（ＭＡｄＣＡＭ）に対する各々の結合を介して細胞接着を媒介する。タンパク質はＶＣＡＭがα４β１をより低い頻度でα４β７と結合する結合特異性において異なるが、ＭＡｄＣＡＭは４β７に対して特異性が高い。α４サブユニットとの対合にくわえて、β７サブユニットもまた、αＥβ７形成するためにαＥサブユニットを有するヘテロ二量体複合体を形成する。αＥβ７は腸、肺、および尿生殖路における上皮内リンパ球（ＩＥＬ）上で主に発現する。αＥβ７はまた、腸内の樹状細胞においても発現する。αＥβ７ヘテロ二量体は上皮細胞上のＥ−カドヘリンと結合する。ＩＥＬ細胞は、上皮の区画内における免疫監視機構を提供すると考えられている。したがって、αＥβ７およびα４β７を一緒にブロックすることは、腸の炎症状態の治療方法に有用であり得る。
【０００４】
特定のインテグリン−リガンド相互作用のインヒビターは、様々な自己免疫疾患の治療のための抗炎症剤として効果的であることが示されている。例えば、α４β７に対して高い結合親和性を示すモノクローナル抗体は、Ｃｒｏｈｎ病および潰瘍性大腸炎などの胃腸管系の自己炎症／自己免疫疾患に対する治療効果を示している（同上）。しかしながら、これらのα４β１インテグリン−リガンド相互作用に干渉する療法によって、患者には危険な副作用が生じる。小分子アンタゴニストを利用する療法は動物において同様の副作用を示すため、これらの技術におけるさらなる発展を妨げている。
【０００５】
したがって、様々な胃腸管自己免疫疾患の療法としての、α４β７インテグリンに対する高親和性およびα４β１インテグリンに対する高選択性を有するインテグリンアンタゴニスト分子に関する技術分野において需要が存在する。
そのようなインテグリンアンタゴニスト分子を本明細書にて公開する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｄｕｂｒｅｅ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  α４β７  Ｉｎｔｅｇｒｉｎ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ａｓ  Ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ａｇｅｎｔｓ，  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ２００２，  ４５，  ３４５１−３４５７
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、当該技術分野における本状態に対して、ならびに特に、α４β７に対して選択的である現在利用可能なインテグリンアンタゴニストによって十分に解決されていない、当該技術分野における問題および必要に対して、開発されている。したがって、本発明は抗炎症剤および／または免疫抑制剤として使用するためのα４β７アンタゴニスト二量体ペプチドを提供する。さらに、本発明は、ＭＡｄＣＡＭを発現する組織に対するα４β７の生体機能と関連する状態を治療するためのα４β７アンタゴニスト二量体ペプチドを提供する。
【０００８】
本発明は、インテグリンアンタゴニスト活性を示すペプチド性化合物の新規の分類に関する。本発明はさらに、α４β７インテグリンに対して高い特異性を示すペプチド性化合物の新規の分類に関する。本発明の化合物には、結合部分を介してそれらのＣ末端またはＮ末端によって一緒に結合している２対のサブユニットが含まれる。本発明の各サブユニットにはさらに、架橋して環化構造を形成することのできる２つの天然または非天然のアミノ酸を含む。したがって、本発明の化合物には二量体化したペプチドが含まれ、この二量体の各サブユニットは、ジスルフィド塩橋、アミド結合、または等価な結合のうち少なくとも１つを通じて環化構造を形成する。この特徴は、化合物が治療薬として経口投与された際に向上した安定性を提供する。この特徴はさらに、非環化類似物と比べて増加した特異性および作用強度を提供する。
【０００９】
一態様において、本発明は、式（Ｉ）：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４  （配列番号：１）の２つの結合したサブユニット、またはそれら薬剤的に許容可能な塩を含む二量体化合物を提供し、各サブユニットにはＸａａ４およびＸａａ１０間のジスルフィドまたはラクタム結合が含まれ、さらに式（Ｉ）は二量体分子の単量体サブユニットを示し、該単量体サブユニットは結合して本発明に基づく二量体分子を形成し、式中、Ｘａａ１は非存在であるか、またはＸａａ１は、水素、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、Ｔｒｐ、Ｍｅｔ、Ｔｈｒ、好適なアイソスター、および対応するＤアミノ酸からなる群から選択される。Ｘａａ２は非存在であるか、またはＸａａ２は、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｍｅｔ、Ｔｈｒ、好適なアイソスター、および対応するＤアミノ酸からなる群から選択される。Ｘａａ３は非存在であるか、またはＸａａ３は、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｍｅｔ、Ｓｅｒ、およびＴｈｒ、好適なアイソスター、ならびに対応するＤアミノ酸からなる群から選択される。
【００１０】
Ｘａａ４は、Ｃｙｓ、Ｐｅｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＨＧｌｕ、β−Ａｓｐ、β−Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、ＨＬｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、Ｄａｂ、好適なアイソスター、および対応するＤアミノ酸からなる群から選択される。Ｘａａ５は、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｍｅｔ、Ｔｈｒ、ＨＡｒｇ、Ｄａｐ、Ｄａｂ、Ｎ（α）Ｍｅ−Ａｒｇ、Ａｒｇ−Ｍｅ−ｓｙｍ、Ａｒｇ−Ｍｅ−ａｓｙｍ、４−Ｇｕａｎ、Ｃｉｔ、Ｃａｖ、および好適なアイソスター置換物からなる群から選択される。Ｘａａ６は、Ｓｅｒ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｍｅｔ、および好適なアイソスター置換物からなる群から選択される。Ｘａａ７は、Ａｓｐ、Ｎ−Ｍｅ−Ａｓｐ、およびＡｓｐに対する好適なアイソスター置換物からなる群から選択される。Ｘａａ８は、Ｔｈｒ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、およびＮ−Ｍｅ−Ｔｈｒを含むＮ−メチルアミノ酸からなる群から選択される。Ｘａａ９は、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、Ｇｌｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、ＨＬｅｕ、ｎ−ブチルＡｌａ、ｎ−ペンチルＡｌａ、ｎ−ヘキシルＡｌａ、Ｎｌｅ、シクロブチル−Ａｌａ、ＨＣｈａ、Ｎ−Ｍｅ−Ｌｅｕ、および好適なアイソスター置換物からなる群から選択される。Ｘａａ１０は、Ｃｙｓ、Ａｓｐ、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、Ｐｅｎ、ＨＡｓｐ、ＨＧｌｕ、ＨＬｙｓ、Ｏｒｎ、β−Ａｓｐ、β−Ｇｌｕ、Ｄａｐ、およびＤａｂからなる群から選択される。Ｘａａ１１は、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｓａｒ、１−Ｎａｌ、２−Ｎａｌ、ＨＰｈｅ、Ｐｈｅ（４−Ｆ）、Ｏ−Ｍｅ−Ｔｙｒ、ジヒドロ−Ｔｒｐ、Ｄａｐ、Ｄａｂ、Ｄａｂ（Ａｃ）、Ｏｒｎ、Ｄ−Ｏｒｎ、Ｎ−Ｍｅ−Ｏｒｎ、Ｎ−Ｍｅ−Ｄａｐ、Ｄ−Ｄａｐ、Ｄ−Ｄａｂ、Ｂｉｐ、Ａｌａ（３，３ジフェニル）、ビフェニル−Ａｌａ、芳香環置換Ｐｈｅ、芳香環置換Ｔｒｐ、芳香環置換Ｈｉｓ、ヘテロ芳香族アミノ酸、Ｎ−Ｍｅ−Ｌｙｓ、Ｎ−Ｍｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）、４−Ｍｅ−Ｐｈｅ、ならびに対応するＤアミノ酸、および好適なアイソスター置換物からなる群から選択される。
【００１１】
いくつかの実施形態において、Ｘａａ１２は非存在であるか、またはＸａａ１２は、Ｇｌｕ、アミド、Ｌｙｓ、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ２、Ｇｌｎ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｍｅｔ、Ｇｌａ、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ｄ−Ｇｌｕ、β−ＨＧｌｕ、２−Ｎａｌ、１−Ｎａｌ、Ｄ−Ａｓｐ、Ｂｉｐ、β−ＨＰｈｅ、β−Ｇｌｕ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｄ−Ｌｙｓ、Ｄａｐ、Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｄ−Ｏｒｎ、Ｎ−Ｍｅ−Ｏｒｎ、Ｎ−Ｍｅ−Ｄａｐ、Ｎ−Ｍｅ−Ｄａｂ、Ｎ−Ｍｅ  Ｌｙｓ、Ｄ−Ｄａｐ、Ｄ−Ｄａｂ、好適なアイソスター、および対応するＤアミノ酸からなる群から選択される。Ｘａａ１３は非存在であり得るか、またはＸａａ１３は、Ｇｌｎ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｍｅｔ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ｇｌａ、Ｄａｐ、Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｄ−Ｏｒｎ、Ｄ−Ｌｙｓ、Ｎ−Ｍｅ−Ｏｒｎ、Ｎ−Ｍｅ−Ｄａｐ、Ｎ−Ｍｅ−Ｄａｂ、Ｎ−Ｍｅ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｄａｐ、Ｄ−Ｄａｂ、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ２、好適なアイソスター、および対応するＤアミノ酸からなる群から選択される。さらに、いくつかの実施形態において、Ｘａａ１４は非存在であるか、またはＸａａ１４は、天然アミノ酸、好適なアイソスター置換物、対応するＤアミノ酸、および対応するＮ−メチルアミノ酸からなる群から選択される。
【００１２】
いくつかの実施形態について、Ｘａａ１−Ｘａａ５、Ｘａａ７−Ｘａａ９、およびＸａａ１１−Ｘａａ１２は、Ｎ（α）メチル化される。Ｘａａ５はさらにＡｒｇ−Ｍｅ−対称またはＡｒｇ−Ｍｅ−非対称であってもよく、Ｘａａ１１はＯ−Ｍｅ−Ｔｙｒ、Ｎ−Ｍｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）、または４−Ｍｅ−Ｐｈｅであってもよい。いくつかの例において、Ｘａａ１−Ｘａａ４およびＸａａ１１−Ｘａａ１４はアシル化される。例えば、いくつかの例において、Ｘａａ１−Ｘａａ４およびＸａａ１１−Ｘａａ１４の位置にある１つ以上の残基は、２−ｍｅ−トリフルオロブチル、トリフルオロペンチル、アセチル、オクトニル（Ｏｃｔｏｎｙｌ）、ブチル、ペンチル、ヘキシル、パルミチル、トリフルオロメチル酪酸、シクロペンタンカルボン酸、シクロプロピルアセチル酸、４−フルオロ安息香酸、４−フルオロフェニル酢酸、３−フェニルプロピオン酸、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４カルボン酸、コハク酸、およびグルタル酸からなる群から選択されるアシル化有機化合物によって、アシル化されている。
【００１３】
いくつかの実施形態において、Ｘａａ１、Ｘａａ２、Ｘａａ３、Ｘａａ１２、Ｘａａ１３、またはＸａａ１４を好適なリンカー部分で修飾して、ホモまたはヘテロ二量体分子を形成し、式（Ｉ）は、ＤＩＧ、ＤＩＧ−ＯＨ、ＰＥＧ１３、ＰＥＧ２５、ＰＥＧ１Ｋ、ＰＥＧ２Ｋ、ＰＥＧ３．４Ｋ、ＰＥＧ４Ｋ、ＰＥＧ５Ｋ、ＩＤＡ、ＩＤＡ−Ｐａｌｍ、ＩＤＡ−Ｂｏｃ、ＩＤＡ−イソ吉草酸、トリアジン、トリアジン−Ｂｏｃ、イソフタル酸、１，３−フェニレン二酢酸、１，４−フェニレン二酢酸、シクロプロピル酢酸、４−フルオオロ安息香酸（ｆｌｕｏｏｒｏｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄ）、４−フルオロフェニル酢酸、３−フェニルプロピオン酸、コハク酸、ビオチン、グルタル酸、アゼライン酸、ピメリン酸、ドデカン二酸、好適な脂肪族化合物、好適な芳香族化合物、ヘテロ芳香族化合物、およびおよそ４００Ｄａ〜およそ４０，０００Ｄａの分子量を持つポリエチレングリコールからなる群から選択される、好適なＣ末端またはＮ末端リンカーによって結合される２つのサブユニットから形成された二量体を含む。
【００１４】
本明細書に開示のＣ末端およびＮ末端リンカー部分は好適な非限定例であること、および本発明にはあらゆる好適なリンカー部分が含まれ得ることを、当業者は理解されたい。したがって、本発明のいくつかの実施形態には、配列番号１〜１４６によって示されるペプチド分子から選択される２つの単量体サブユニットからなるホモまたはヘテロ二量体分子が含まれ、各々の単量体のＣ末端またはＮ末端はあらゆる好適なリンカー部分によって結合されて、インテグリンアンタゴニスト活性を有する二量体分子を提供する。
【００１５】
別の実施形態において、本発明は、式（Ｉ）の化合物を薬剤的に許容可能な担体と組み合わせて含むインテグリン−アンタゴニスト療法が必要である患者を治療する組成物を提供する。
【００１６】
本発明のさらに別の態様は、α４β７インテグリンに対して高い選択性を持つ式（Ｉ）の化合物を薬剤的に許容可能な担体と組み合わせて含むα４β７特異的アンタゴニスト療法が必要である患者を治療する組成物を提供する。
【００１７】
本発明のさらに別の態様は、α４β１インテグリンに対してα４β７の高い選択性を持つ式（Ｉ）の化合物を薬剤的に許容可能な担体と組み合わせて含む、α４β７特異的アンタゴニスト療法が必要である患者を治療する組成物を提供する。
【００１８】
本発明のさらに別の態様は、αＥβ７インテグリンに対してα４β７の高い選択性を持つ式（Ｉ）の化合物を薬剤的に許容可能な担体と組み合わせて含む、α４β７特異的アンタゴニスト療法が必要である患者を治療する組成物を提供する。
【００１９】
本発明のさらに別の態様は、αＥβ７インテグリンに対してα４β７の低い選択性を持つ式（Ｉ）の化合物を薬剤的に許容可能な担体と組み合わせて含む、α４β７特異的アンタゴニスト療法が必要である患者を治療する組成物を提供する。
【００２０】
本発明のさらに別の態様は、治療効果のある量の式（Ｉ）の化合物を患者へ投与することを含むインテグリンアンタゴニスト療法が必要である患者を治療する方法を提供する。
【００２１】
さらに、本発明のさらに別の態様は、潰瘍性大腸炎、Ｃｒｏｈｎ病、セリアック病（非熱帯性スプルー）、血清反応陰性関節症、顕微鏡的大腸炎もしくはコラーゲン形成大腸炎、好酸球性胃腸炎と関連する腸疾患、放射線療法もしくは化学療法に関連する大腸炎、白血球粘着不全−１下におけるような自然免疫の障害に関する大腸炎、慢性肉芽腫症、糖原病１ｂ型、Ｈｅｒｍａｎｓｋｙ−Ｐｕｄｌａｋ症候群、Ｃｈｅｄｉａｋ−Ｈｉｇａｓｈｉ症候群、ならびにＷｉｓｋｏｔｔ−Ａｌｄｒｉｃｈ症候群、または直腸結腸切除および回腸肛門吻合の後に生じる嚢炎、ならびに様々な形態の胃腸がんに由来する疾患を治療する組成物を提供する。別の実施形態において、状態は、膵炎、インスリン依存性糖尿病、乳腺炎、胆嚢炎、胆管炎、胆管周囲炎、慢性気管支炎、慢性副鼻腔炎、喘息、または移植片対宿主病である。くわえて、これらの化合物は、現在利用可能な療法、医学的手技、および治療薬と組み合わせて使用した場合、これらの疾患の予防または回復に有用であり得る。
【００２２】
さらに別の態様において、本発明は、キレート化基および非侵襲性な診断法のためのインビボ造影剤として使用する検出可能ラベルのうち少なくとも１つでさらに標識された経口的に安定な式（Ｉ）の化合物を投与することを含む、疾患を可視化して診断する診断法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
上で引用した性質および利点、ならびに本発明のその他の性質および利点が得られる方法を容易に理解するために、上で簡単に説明される本発明のより詳細な説明を、添付の図面に記載されるそれらの特定の実施形態を参照することで提供する。これらの図面は本発明のほんの典型的な実施例のみを記載しており、その範囲を制限するように理解されるものではないことを理解されたく、本発明は添付の図面の使用を通してさらなる特異性および詳細を記載し、説明する。図面において：
【００２４】
【図１】図１は、Ｃ末端およびＮ末端二量体形成を示す図である。
【００２５】
【図２】図２は、配列番号４７に基づくインテグリンアンタゴニスト単量体サブユニットの一部を示す図であって、サブユニットは整列され、それらの各Ｃ末端で本発明の代表的な実施形態に基づくＤＩＧリンカーによって結合される。
【００２６】
【図３】図３は、本発明の様々な代表的実施形態に基づく配列番号４６、５５、７４、および９３によって示された、インテグリンアンタゴニストホモ二量体分子の安定性データを解説する表である。
【００２７】
【図４】図４は、本発明の様々な実施形態の配列番号５１、４３、４８、４７、５０、および９４の代表的選択によって表される、インテグリンアンタゴニスト単量体およびホモ二量体分子の作用強度および選択性を示す表である。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
配列表
添付の配列表に列挙したアミノ酸配列は、３７  Ｃ．Ｆ．Ｒ．  １．８２２にて定義されるアミノ酸の３文字表記を用いて示されている。単量体サブユニット配列のみが示されているが、本教示ならびに図１および図２に典型的に示される教示に従い、単量体サブユニットを二量体化してペプチド二量体分子を形成することを理解されたい。単量体サブユニットは、本明細書に記載の好適なリンカー部分によって二量体化される。単量体サブユニットのいくつかは両方とも遊離アミンを含むＣ末端およびＮ末端を持つことが示される。したがって、使用者は必ず単量体サブユニットを修飾してＣ末端またはＮ末端遊離アミンのいずれかを除去することで、残りの遊離アミンにて二量体形成をさせなければならない。さらに、いくつかの場合において、１つ以上の単量体サブユニットの末端は、２−ｍｅ−トリフルオロブチル、トリフルオロペンチル、アセチル、オクトニル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、パルミチル、トリフルオロメチル酪酸、シクロペンタンカルボン酸、シクロプロピル酢酸、４−フルオロ安息香酸、４−フルオロフェニル酢酸、３−フェニルプロピオン酸、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４カルボン酸、コハク酸、およびグルタル酸からなる群から選択されるアシル化有機化合物によってアシル化される。いくつかの場合において、単量体サブユニットには遊離カルボキシ末端および遊離アミノ末端の両方が含まれ、それにより使用者はサブユニットを選択的に修飾して所望の末端における二量体化を達成してもよい。したがって、本発明の単量体サブユニットが所望の二量体化のために単一の特異的なアミンを達成するよう選択的に修飾され得ることを、当業者は理解されよう。
【００２９】
本明細書にて開示の単量体サブユニットのＣ末端残基は、特に断りが無い限り、アミドであることをさらに理解されたい。そのうえ、当該技術分野にて一般的に理解されるように、Ｃ末端における二量体化はアミン官能性を持つ側鎖を伴う好適なアミノ酸を用いて促進されることを理解されたい。Ｎ末端残基に関して、当該技術分野にて一般的に理解されるように、二量体形成は末端残基の遊離アミンを通じて達成してもよいか、または遊離アミンを持つ好適なアミノ酸側鎖を用いて達成してもよいことを理解されたい。
【００３０】
添付の配列表において：
【００３１】
配列番号１は、式（Ｉ）の二量体化合物の単量体サブユニットを示す。
【００３２】
配列番号２は、式（ＩＩ）の二量体化合物の単量体サブユニットを示す。
【００３３】
配列番号１〜３８、４６〜５２、５４〜１３５、および１３７〜１４６は、二量体化されて本発明に基づく様々な二量体化合物を形成する単量体サブユニットのアミノ酸配列を示し、これらの配列はＮ（α）メチル化アルギニンで置換されている。
【００３４】
配列番号１３６は、二量体化されて本発明に基づく様々な二量体化合物を形成する単量体サブユニットのアミノ酸配列を示し、これらの配列はＮ（α）メチル化リジンで置換されている。
【００３５】
配列番号１〜３８は、それらの各Ｃ末端またはＮ末端で二量体化されて本発明に基づく様々な二量体化合物を形成し得る、一般配列である。
【００３６】
配列番号３９〜４５、４７、４８、５１〜５８、６１、６３、６５〜８６、８８〜９７、および１０２〜１４６は、それらの各Ｃ末端で二量体化されて本発明に基づく様々な二量体化合物を形成し得る、単量体サブユニットのアミノ酸配列を示す。該して、これらのアミノ酸配列は二量体形成の前にそれらのＮ末端にてアシル化有機化合物の１つおよび本明細書に記載の方法を用いてアシル化され、シクロプロピル酢酸、４−フルオロ安息香酸、４−フルオロフェニル酢酸、３−フェニルプロピオン酸、コハク酸、グルタル酸、シクロペンタンカルボン酸、３，３，３−トリフルオロプロペオニン酸（３，３，３−ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｐｒｏｐｅｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、３−フルオロメチル酪酸、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸が含まれるが、これらに限定されない。
【００３７】
配列番号４６、４９、５０、５９、６０、６２、６４、８７、および９８〜１０１、１０２〜１０３、１１３〜１１９は、それらの各Ｎ末端で二量体化されて本発明に基づく様々な二量体化合物を形成し得る、単量体サブユニットのアミノ酸配列を示す。
【００３８】
好ましい実施形態の詳細な説明
本明細書に記載の場合、「１つの（ａ）」、「および」、および「その（ｔｈｅ）」という単数形には、特に文脈によって明確に指示されない限り、複数の参照が含まれる。
【００３９】
本明細書にて用いられる場合、以下の用語はこれから示す意味を持つ。
【００４０】
「ペプチド」という用語は広範に、本明細書にて用いられる場合、ペプチド結合により共に結合した２つ以上のアミノ酸の配列を指す。この用語は特定の長さのアミノ酸のポリマーを内包せず、ポリペプチドが、組換え技術、化学的合成、もしくは酵素的合成を用いて生産されるか、または天然のものかどうかを意味するまたは識別するように意図されてもいないことは理解されるべきである。
【００４１】
「ＤＲＰ」という用語は、本明細書で用いられる場合、二硫化物の豊富なペプチドを指す。
【００４２】
「二量体」という用語は広範に、本明細書にて用いられる場合、２つ以上のサブユニットを含むペプチドを指し、このサブユニットはそれらのＣ末端またはＮ末端で結合するＤＲＰである。本発明の二量体にはホモ二量体およびヘテロ二量体が含まれていてもよく、インテグリンアンタゴニストとして機能することができる。
【００４３】
「Ｌアミノ酸」という用語は、本明細書にて用いられる場合、ペプチドの「Ｌ」異性体を指し、反対に「Ｄアミノ酸」という用語は、ペプチドの「Ｄ」異性体を指す。本明細書に記載のアミノ酸残基は「Ｌ」異性体」であることが好ましいが、「Ｄ」異性体における残基は、所望の官能基がペプチドに保持されている限り、あらゆるＬアミノ酸残基と置換することができる。
【００４４】
「ＮＨ２」という用語は、本明細書にて用いられる場合、ポリペプチドのアミノ末端に存在する遊離アミノ基を指す。「ＯＨ」という用語は、本明細書にて用いられる場合、ペプチドのカルボキシ末端に存在する遊離カルボキシ基を指す。さらに、「Ａｃ」という用語は、本明細書にて用いられる場合、ポリペプチドのＣ末端またはＮ末端のアシル化を通じたアセチル保護を指す。
【００４５】
「カルボキシ」という用語は、本明細書にて用いられる場合、−ＣＯ２Ｈを指す。
【００４６】
「アイソスター置換物」という用語は、本明細書にて用いられる場合、あらゆるアミノ酸、または特定のアミノ酸と同様の化学および／もしくは構造特性を持つ他の類似物部分を指す。
【００４７】
「環化した」という用語は、本明細書にて用いられる場合、ポリペプチド分子の一部が、ジスルフィド架橋または他の同様な結合を形成することなどによってポリペプチド分子の別の部分と結合して閉環を形成するようになる反応を指す。
【００４８】
「サブユニット」という用語は、本明細書にて用いられる場合、Ｃ末端またはＮ末端で結合して二量体ペプチド組成物を形成する１対のポリペプチド単量体のうち１つを指す。
【００４９】
「二量体」という用語は、本明細書にて用いられる場合、末端結合および／または末端リンカーによって結合した２つの構造的に同様な単量体からなる化学成分を指す。
【００５０】
「リンカー」という用語は広範に、本明細書にて用いられる場合、複数のペプチド単量体サブユニットを一緒に結合して二量体を形成することができる化学構造を指す。
【００５１】
「受容体」という用語は、本明細書にて用いられる場合、特定の化学基もしくは分子に親和性を有する細胞表面上または細胞内部の分子の化学基を指す。二量体ペプチドおよび標的インテグリン間での結合は有用な診断ツールを提供することができる。
【００５２】
「インテグリン関連疾患」という用語は、本明細書にて用いられる場合、インテグリン結合の結果として顕著である徴候を指し、インテグリンアンタゴニストを投与することで治療することができる。
【００５３】
「薬剤的に許容可能な塩」という用語は、本明細書にて用いられる場合、本発明の化合物の塩または双性イオン形態を表す。これらは水または油溶性もしくは分散性であり、過度の毒性、刺激作用、およびアレルギー応答を伴わずに疾患を治療するのに適している；これらは妥当な利益／危険比と釣り合い、それらの用途に有効である。塩は化合物の最終単離および精製の間に調製することができるか、またはアミノ基を好適な酸と反応させることによって別々に調製することができる。代表的な酸付加塩には、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、ジグルコン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸円、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩（イセチオン酸塩）、乳酸塩、マレイン酸塩、メシチレンスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩、ナフチレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロプリオン酸塩（３−ｐｈｅｎｙｌｐｒｏｐｒｉｏｎａｔｅ）、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、トリクロロ酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、リン酸塩、グルタミン酸塩、炭酸水素塩、パラトルエンスルホン酸塩、およびウンデカン酸塩が含まれる。また、本発明の化合物におけるアミノ基は、メチル、エチル、プロピル、およびブチル塩化物、臭化物、ならびにヨウ化物；ジメチル、ジエチル、ジブチル、およびジアミル硫酸塩；デシル、ラウリル、ミスチリル、およびステリル塩化物、臭化物、ならびにヨウ化物；ならびにベンジルおよびフェネチル臭化物で四級化することができる。治療上許容可能な付加塩の形成に使用することのできる酸の例として、塩酸、臭化水素酸、硫酸、およびリン酸などの無機酸、ならびにシュウ酸、マレイン酸、コハク酸、およびクエン酸などの有機酸が挙げられる。
【００５４】
「Ｎ（α）メチル化」という用語は、本明細書にて用いられる場合、アミノ酸のαアミンのメチル化について述べており、また一般的にＮ−メチル化とも称される。
【００５５】
「対称（ｓｙｍ）メチル化」または「Ａｒｇ−Ｍｅ−ｓｙｍ」という用語は、本明細書にて用いられる場合、アルギニンのグアニジン基の２つの窒素の対照的なメチル化について述べている。さらに、「非対称（ａｓｙｍ）メチル化」または「Ａｒｇ−Ｍｅ−ａｓｙｍ」という用語は、アルギニンのグアニジン基の単一の窒素のメチル化について述べている。
【００５６】
「アシル化有機化合物」という用語は、本明細書にて用いられる場合、Ｃ末端二量体を形成する前にアミノ酸サブユニットのＮ末端をアシル化するのに使用されるカルボン酸官能基を伴う様々な化合物を指す。アシル化有機化合物の非限定的な例として、シクロプロピル酢酸、４−フルオロ安息香酸、４−フルオロフェニル酢酸、３−フェニルプロピオン酸、コハク酸、グルタル酸、シクロペンタンカルボン酸、３，３，３−トリフルオロプロペオニン酸、３−フルオロメチル酪酸、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸が挙げられる。
【００５７】
全てのペプチド配列は一般に受け入れられている慣習に従って記載されるため、α−Ｎ末端アミノ酸残基は左側、α−Ｃ末端は右側である。本明細書にて用いられる場合、「α−Ｎ末端」という用語は、ペプチドにおけるアミノ酸の遊離α−アミノ基を指し、「α−Ｃ末端」という用語は、ペプチドにおけるアミノ酸の遊離α−カルボン酸末端を指す。
【００５８】
大部分について、本明細書で用いられる天然および非天然のアミノアシル残基の名称は、“Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  ｏｆ  α−Ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄｓ  （Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ，  １９７４）”  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  １４（２），  （１９７５）に記載の通り、Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  ＣｈｅｍｉｓｔｒｙにおけるＩＵＰＡＣ  ＣｏｍｍｉｓｓｉｏｎおよびＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ＮｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅにおけるＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎにより提案される命名法に従う。本明細書ならびに添付の特許請求の範囲にて使用されるアミノ酸およびアミノアシル残基の名称および略称はこれらの提案と異なる点で、これらは読者に明らかとなるであろう。本発明を記述するのに有用ないくつかの略称を、以下の表１に定義する。
【表１−１】
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【表１−２】
0006499157.tif 000003
【表１−３】
0006499157.tif 000004
【表１−４】
0006499157.tif 000005
【００５９】
本発明は概して、インテグリンアンタゴニスト活性を持つと示されているペプチドに関する。特に、本発明は、各形態がジスルフィド結合を通じて構造を環化したヘテロまたはホモ単量体サブユニットを含む様々なペプチド二量体に関する。単量体サブユニットはそれらのＣ末端またはＮ末端にて図１に示したように結合する。各サブユニットの環化構造は二量体分子の作用強度および選択性を以下に記載の通りに増加することが示されている。環化構造の非限定的かつ代表的な例は図２に示される。
【００６０】
本発明のリンカー部分には、本明細書に記載の教示と一致するあらゆる構造、長さ、および／または大きさが含まれ得る。少なくとも１つの実施形態において、リンカー部分は、ＤＩＧ、ＰＥＧ４、ＰＥＧ４−ビオチン、ＰＥＧ１３、ＰＥＧ２５、ＰＥＧ１Ｋ、ＰＥＧ２Ｋ、ＰＥＧ３．４Ｋ、ＰＥＧ４Ｋ、ＰＥＧ５Ｋ、ＩＤＡ、ＡＤＡ、Ｂｏｃ−ＩＤＡ、グルタル酸、イソフタル酸、１，３−フェニレン二酢酸、１，４−フェニレン二酢酸、１，２−フェニレン二酢酸、トリアジン、Ｂｏｃ−トリアジン、ＩＤＡ−ビオチン、ＰＥＧ４−ビオチン、ＡＡＤＡ、好適な脂肪族化合物、芳香族化合物、複素環式芳香族化合物、およびおよそ４００Ｄａ〜およそ４０，０００Ｄａの分子量を持つポリエチレングリコールベースのリンカーからなる非限定定期な群から選択される。好適なリンカー部分の非限定的な例は、表２に提供される。
【表２−１】
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【表２−２】
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【表２−３】
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【表２−４】
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【００６１】
本発明にはさらに、様々な就職アミノ酸と置換されている様々なペプチドが含まれる。例えば、いくつかのペプチドには、Ｄａｂ、Ｄａｐ、Ｐｅｎ、Ｓａｒ、Ｃｉｔ、Ｃａｖ、ＨＬｅｕ、２−Ｎａｌ、ｄ−１−Ｎａｌ、ｄ−２−Ｎａｌ、Ｂｉｐ、Ｏ−Ｍｅ−Ｔｙｒ、β−ＨＴｒｐ、β−ＨＰｈｅ、Ｐｈｅ（４−ＣＦ３）、２−２−インダン、１−１−インダン、シクロブチル、β−ＨＰｈｅ、ＨＬｅｕ、Ｇｌａ、Ｐｈｅ（４−ＮＨ２）、ＨＰｈｅ、１−Ｎａｌ、Ｎｌｅ、ホモアミノ酸、Ｄアミノ酸、３−３−ジＰｈｅ、シクロブチル−Ａｌａ、ＨＣｈａ、Ｂｉｐ、β−ＨＰｈｅ、β−Ｇｌｕ、４−Ｇｕａｎ、および様々なＮ−メチル化アミノ酸が含まれる。さらなる置換物が同様の所望の結果を達成するように作成されてもよく、そのような置換物は本発明の教示および趣旨の範囲内であることを当業者は理解されたい。
【００６２】
一態様において、本発明は二量体化合物に関し、二量体化合物の各サブユニットには、式（Ｉ）
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４配列番号１）の構造が含まれ、式中、Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０（配列番号２）、またはその薬剤的に許容可能な塩は、ホモまたはヘテロ二量体分子のサブユニットをさらに示し、式中二量体分子の各サブユニットには１０個のアミノ酸が含まれ、式中、式（ＩＩ）のＸａａ１−Ｘａａ１０は式（Ｉ）のＸａａ４−Ｘａａ１３と対応する。さらに、式（Ｉ）および式（ＩＩ）の各サブユニットには、Ｘａａ４およびＸａａ１０間、ならびにＸａａ１およびＸａａ７間のジスルフィド結合またはラクタム結合が各々含まれる。
【００６３】
本発明のいくつかの配列は、式（Ｉ）および式（ＩＩ）に提供される一般配列に由来する。例えば、式（Ｉ）のＸａａ４−Ｘａａ１３によって示されたデカペプチドのＮ末端は、１〜３個の好適な基によって、式（Ｉ）のＸａａ１、Ｘａａ２、およびＸａａ３に示されるように修飾することができる。Ｎ末端はさらにアシル化することができる。いくつかの場合において、Ｎ末端にはさらに、２つの単量体サブユニットを一緒に結合してＮ末端二量体分子の形成を促進するのに好適なリンカー部分が含まれる。
【００６４】
同様に、式（Ｉ）によって示されるデカペプチドのＣ末端は好適な基によって修飾することができる。Ｃ末端はさらにアシル化することができる。いくつかの場合において、Ｃ末端にはさらに、２つの単量体サブユニットを一緒に結合してＣ末端二量体分子の形成を促進するのに好適なリンカー部分が含まれる。
【００６５】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）のＸａａ１、Ｘａａ２、およびＸａａ３は非存在である。他の実施形態において、Ｘａａ１は非存在であり、Ｘａａ２およびＸａａ３はデカペプチドのＮ末端を修飾するのに好適な基を表し、式中、デカペプチドは式（Ｉ）のＸａａ４−Ｘａａ１３の残基、および式（ＩＩ）のＸａａ１−Ｘａａ１０の残基によって表される。そのうえ、いくつかの実施形態において、Ｘａａ１およびＸａａ２は非存在であり、Ｘａａ３はデカペプチドサブユニットのＮ末端を修飾するのに好適な単一の基を表す。
【００６６】
式（Ｉ）の一般式にさらに関連して、Ｘａａ１は、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｍｅｔ、Ｔｈｒ、好適なアイソスター、および対応するＤアミノ酸からなる群から選択されたアミノアシル残基である。いくつかの実施形態において、Ｘａａ１は、アシル化または遊離ＮＨ２である。他の実施形態において、Ｘａａ１は非存在である。
【００６７】
Ｘａａ２は、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｓｅｒ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｍｅｔ、Ｔｈｒ、好適なアイソスター、および対応するＤアミノ酸からなる群から選択されるアミノアシル残基である。Ｘａａ１が非存在である場合、Ｘａａ２はＮ末端である。
【００６８】
Ｘａａ３は、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｍｅｔ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、および対応するＤアミノ酸からなる群から選択されるアミノアシル残基である。Ｘａａ１およびＸａａ２が非存在である場合、Ｘａａ３はＮ末端である。他の実施形態において、Ｘａａ１−Ｘａａ３は非存在であり、式中、Ｘａａ４はＮ末端である。
【００６９】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）のＮ末端残基にはさらに、ＤＩＧ、ＤＩＧ−ＯＨ、ＰＥＧ１３、ＰＥＧ２５、ＰＥＧ１Ｋ、ＰＥＧ２Ｋ、ＰＥＧ３．４Ｋ、ＰＥＧ４Ｋ、ＰＥＧ５Ｋ、ＩＤＡ、ＩＤＡ−Ｐａｌｍ、ＩＤＡ−Ｂｏｃ、ＩＤＡ−イソ吉草酸、トリアジン、トリアジン−Ｂｏｃ、イソフタル酸、１，３−フェニレン二酢酸、１，４−フェニレン二酢酸、シクロプロピル酢酸、４−フルオオロ安息香酸、４−フルオロフェニル酢酸、３−フェニルプロピオン酸、コハク酸、ビオチン、グルタル酸、アゼライン酸、ピメリン酸、ドデカン二酸、好適な脂肪族化合物、好適な芳香族化合物、ヘテロ芳香族化合物、およびおよそ４００Ｄａ〜およそ４０，０００Ｄａの分子量を持つポリエチレングリコールからなる群から選択されたリンカー部分が含まれる。さらに、いくつかの実施形態において、Ｘａａ１−Ｘａａ４はアシル化される。
【００７０】
いくつかの実施形態において、Ｘａａ４は、アミノアシル残基であるか、またはＣｙｓ、Ｐｅｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＨＧｌｕ、β−Ａｓｐ、β−Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、ＨＬｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、およびＤａｂからなる群から選択された類似物である。Ｘａａ１０がＬｙｓ、ＨＬｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、またはＤａｂである場合、Ｘａａ４に好適な基は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、およびＨＧｌｕである。Ｘａａ１０がＡｓｐ、Ｇｌｕ、ＨＧｌｕである場合、Ｘａａ４に好適な基は、Ｌｙｓ、ＨＬｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、およびＤａｂである。
【００７１】
Ｘａａ４およびＸａａ１０がＣｙｓまたはＰｅｎのいずれかである場合、二量体の各サブユニットはＸａａ４およびＸａａ１０間のジスルフィド結合を通じて環化される。Ｘａａ４が、Ｌｙｓ、ＨＬｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、またはＤａｂである場合、およびＸａａ１０が、Ａｓｐ、ＨＡｓｐ、Ｇｌｕ、ならびにＨＧｌｕである場合、二量体の各サブユニットはＸａａ４およびＸａａ１０間のラクタム結合を通じて環化する。好ましくは、一実施形態において、Ｘａａ４はＣｙｓである。別の実施形態において、好ましくは、Ｘａａ４はＰｅｎである。
【００７２】
Ｘａａ５はアミノアシル残基であるか、またはＧｌｎ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｍｅｔ、Ｔｈｒ、ＨＡｒｇ、Ｄａｐ、Ｄａｂ、Ｎ−Ｍｅ−Ａｒｇ、Ａｒｇ−Ｍｅ−ｓｙｍ、Ａｒｇ−Ｍｅ−ａｓｙｍ、Ｐｈｅ（４−ＮＨ２）、４−Ｇｕａｎ、Ｃｉｔ、Ｃａｖ、および好適なアイソスター置換物からなる群から選択される類似物である。いくつかの実施形態において、Ｘａａ５はＮ（α）メチル化される。好ましくは、Ｘａａ５はＮ−Ｍｅ−Ａｒｇである。他の実施形態において、好ましくは、Ｘａａ５はＡｒｇである。
【００７３】
Ｘａａ６は、アミノアシル残基であるか、またはＳｅｒ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｍｅｔ、および好適なアイソスター置換物からなる群から選択される類似物である。好ましくは、Ｘａａ６は、ＳｅｒまたはＧｌｙである。
【００７４】
Ｘａａ７は、アミノアシル残基であるか、またはＡｓｐ、Ｎ−Ｍｅ−Ａｓｐ、および好適なアイソスター置換物からなる群から選択される類似物である。いくつかの実施形態において、Ｘａａ７はＮ（α）メチル化される。好ましくは、Ｘａａ７はＡｓｐである。
【００７５】
Ｘａａ８は、アミノアシル残基であるか、またはＴｈｒ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ  、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｎ−Ｍｅ−Ｔｈｒ、および好適なアイソスター置換物からなる群から選択される類似物である。いくつかの実施形態において、Ｘａａ８はＮ（α）メチル化される。好ましくは、Ｘａａ８はＴｈｒである。
【００７６】
Ｘａａ９は、アミノアシル残基であるか、またはＧｌｎ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、Ｇｌｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、ＨＬｅｕ、ｎ−ブチルＡｌａ、ｎ−ペンチルＡｌａ、ｎ−ヘキシルＡｌａ、Ｎ−Ｍｅ−Ｌｅｕ、疎水性側鎖を有するアミノ酸、および好適なアイソスター置換物からなる群から選択される類似物である。いくつかの実施形態において、Ｘａａ９はＮ（α）メチル化される。好ましくは、Ｘａａ９はＬｅｕである。
【００７７】
Ｘａａ１０は、Ｃｙｓ、Ａｓｐ、Ｐｅｎ、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、ＨＬｙｓ、ＨＡｓｐ、ＨＧｌｕ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、およびＤａｂからなる群から選択されるアミノアシル残基である。いくつかの実施形態において、Ｘａａ４が、Ｌｙｓ、Ｄａｐ、Ｄａｂ、ＨＬｙｓ、またはＯｒｎである場合、Ｘａａ１０は、Ａｓｐ、ＨＡｓｐ、Ｇｌｕ、およびＨＧｌｕからなる群から選択される。他の実施形態において、Ｘａａ４が、Ａｓｐ、ＨＡｓｐ、Ｇｌｕ、またはＨＧｌｕである場合、Ｘａａ１０が、Ｌｙｓ、ＨＬｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、またはＤａｂからなる群から選択した。少なくとも一実施形態において、Ｘａａ１０はＰｅｎである。Ｘａａ１０およびＸａａ４がＣｙｓまたはＰｅｎ両方のいずれかである場合、二量体の各サブユニットはＸａａ４およびＸａａ１０間のジスルフィド結合を通じて環化される。Ｘａａ１０が、Ａｓｐ、ＨＡｓｐ、Ｇｌｕ、またはＨＧｌｕである場合、およびＸａａ４が、Ｌｙｓ、ＨＬｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、またはＤａｂである場合、二量体の各サブユニットはＸａａ４およびＸａａ１０間のラクタム結合を通じて環化される。Ｘａａ１１が非存在である場合、Ｘａａ１０はサブユニットのＣ末端である。好ましくは、一実施形態において、Ｘａａ１０はＰｅｎである。別の実施形態において、Ｘａａ１０は、好ましくはＣｙｓである。
【００７８】
Ｘａａ１１は、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｓａｒ、１−Ｎａｌ、２−Ｎａｌ、Ｄ−１−Ｎａｌ、Ｄ−２−Ｎａｌ、ＨＰｈｅ、Ｐｈｅ（４−Ｆ）、Ｏ−Ｍｅ−Ｔｙｒ、ジヒドロ−Ｔｒｐ、Ｄａｐ、Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｄ−Ｏｒｎ、Ｎ−Ｍｅ−Ｏｒｎ、Ｎ−Ｍｅ−Ｄａｐ、Ｎ−Ｍｅ−Ｄａｂ、Ｎ−Ｍｅ  Ｌｙｓ、Ｄ−Ｄａｐ、Ｄ−Ｄａｂ、Ｄ−Ｌｙｓ、Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｌｙｓ、Ｂｉｐ、Ａｌａ（３，３ジフェニル）、ビフェニル−Ａｌａ、Ｄ−Ｐｈｅ、Ｄ−Ｔｒｐ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｄ−Ｇｌｕ、Ｄ−Ｈｉｓ、Ｄ−Ｌｙｓ、３，３−ｄｉＰｈｅ、β−ＨＴｒｐ、Ｆ（４ＣＦ３）、４−Ｍｅ−Ｐｈｅ、２−２インダン、Ｐｈｅ（２，４  Ｃｌ２）、Ｐｈｅ（３，４  Ｃｌ２）、１−１インダン、芳香環置換Ｐｈｅ、芳香環置換Ｔｒｐ、芳香環置換Ｈｉｓ、ヘテロ芳香族アミノ酸、Ｎ−Ｍｅ−Ｌｙｓ、Ｎ−Ｍｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）、４−Ｍｅ−Ｐｈｅ、ならびに対応するＤアミノ酸、および好適なアイソスター置換物からなる群から選択されるアミノアシル残基である。少なくとも一実施形態において、Ｘａａ１１およびＸａａ１２は非存在である。Ｘａａ１２およびＸａａ１３が非存在である場合、Ｘａａ１１はサブユニットのＣ末端である。Ｘａａ１１がサブユニットのＣ末端である場合、Ｘａａ１１は本発明に基づくリンカー部分を含むように修飾されてもよい。好ましくは、Ｘａａ１１はＴｒｐである。他の実施形態において、Ｘａａ１１はＮ（α）メチル化される。さらに、いくつかの実施形態において、Ｘａａ１１はアシル化される。
【００７９】
Ｘａａ１２は、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｍｅｔ、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌａ、Ｄａｐ、Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｄ−Ｏｒｎ、Ｎ−Ｍｅ−Ｏｒｎ、Ｎ−Ｍｅ−Ｄａｐ、Ｎ−Ｍｅ−Ｄａｂ、Ｎ−Ｍｅ  Ｌｙｓ、Ｄ−Ｄａｐ、Ｄ−Ｄａｂ、Ｄ−Ｌｙｓ、Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｌｙｓ、Ｎ−Ｍｅ−Ｇｌｕ、２−Ｎａｌ、１−Ｎａｌ、Ｂｉｐ、Ｂｅｔａ−ＨＰｈｅ、β−Ｇｌｕ、Ｐｈｅ（４−ＣＦ３）、Ｄ−Ａｓｐ好適なアイソスター、および対応するＤアミノ酸からなる群から選択されるアミノアシル残基である。Ｘａａ１３およびＸａａ１４が非存在である場合、Ｘａａ１２はサブユニットのＣ末端である。いくつかの実施形態において、Ｘａａ１２は非存在である。Ｘａａ１２がサブユニットのＣ末端である場合、Ｘａａ１２は本発明に基づくリンカー部分を含むよう修飾されてもよい。さらに、いくつかの実施形態において、Ｘａａ１２はＮ（α）メチル化される。さらにいくつかの実施形態において、Ｘａａ１２は、Ｌｙｓ、Ｄ−Ｌｙｓ、およびＮ−Ｍｅ−Ｌｙｓからなる群から選択した。好ましくは、Ｘａａ１２は、Ｇｌｕ、Ｄ−Ｇｌｕ、β−ＨＧｌｕ、およびＡｓｐである。
【００８０】
Ｘａａ１３は、Ｇｌｎ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｍｅｔ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ｇｌａ、Ｄａｐ、Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｄ−Ｏｒｎ、Ｎ−Ｍｅ−Ｏｒｎ、Ｎ−Ｍｅ−Ｄａｐ、Ｎ−Ｍｅ−Ｄａｂ、Ｎ−Ｍｅ  Ｌｙｓ、Ｄ−Ｄａｐ、Ｄ−Ｄａｂ、Ｄ−Ｌｙｓ、Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｌｙｓ、好適なアイソスター、および対応するＤアミノ酸からなる群から選択されるアミノアシル残基である。いくつかの実施形態において、Ｘａａ１４が非存在である場合、Ｘａａ１３はＣ末端である。Ｘａａ１３がサブユニットのＣ末端である場合、Ｘａａ１３は本発明に基づくリンカー部分を含むように修飾されてもよい。少なくとも一実施形態において、Ｘａａ１３はＬｙｓである。他の実施形態において、Ｘａａ１３は非存在である。さらに、いくつかの実施形態において、Ｘａａ１３はＮ（α）メチル化される。そのうえさらに、いくつかの実施形態において、Ｘａａ１３はアシル化される。そのうえさらに、いくつかの実施形態において、Ｘａａ１３はＤ−Ｌｙｓである。
【００８１】
Ｘａａ１４は、天然アミノ酸、Ｄａｐ、Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｄ−Ｏｒｎ、Ｎ−Ｍｅ−Ｏｒｎ、Ｎ−Ｍｅ−Ｄａｐ、Ｎ−Ｍｅ−Ｄａｂ、Ｎ−Ｍｅ  Ｌｙｓ、Ｄ−Ｄａｐ、Ｄ−Ｄａｂ、Ｄ−Ｌｙｓ、Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｌｙｓ、好適なアイソスター置換物、対応するＤアミノ酸、および対応するＮ−メチルアミノ酸からなる群から選択されるアミノアシル残基である。少なくとも一実施形態において、Ｘａａ１４は非存在である。少なくとも一実施形態において、Ｘａａ１４はＣ末端である。Ｘａａ１４がサブユニットのＣ末端である場合、Ｘａａ１４は本発明のリンカー部分を含むように修飾されてもよい。さらに、いくつかの実施形態において、Ｘａａ１４はＮ（α）メチル化される。
【００８２】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）のＣ末端残基にはさらに、ＤＩＧ、ＰＥＧ１３、ＰＥＧ２５、ＰＥＧ１Ｋ、ＰＥＧ２Ｋ、ＰＥＧ３．４Ｋ、ＰＥＧ４Ｋ、ＰＥＧ５Ｋ、ＩＤＡ、ＩＤＡ−Ｐａｌｍ、ＩＤＡ−Ｂｏｃ、ＩＤＡ−イソ吉草酸、トリアジン、トリアジン−Ｂｏｃ、イソフタル酸、１，３−フェニレン二酢酸、１，４−フェニレン二酢酸、グルタル酸、アゼライン酸、ピメリン酸、ドデカン二酸、好適な脂肪族化合物、芳香族化合物、ヘテロ芳香族化合物、およびおよそ４００Ｄａ〜およそ４０，０００Ｄａの分子量を持つポリエチレングリコールベースのリンカーからなる群から選択されるリンカー部分が含まれる。
【００８３】
本発明のいくつかの実施形態にはさらに、ペプチドホモ二量体またはヘテロ二量体分子が含まれ、二量体分子の各サブユニットには配列番号１〜１４６のうち少なくとも１つによって表されるアミノ酸配列が含まれる。他の実施形態には、ペプチドホモ二量体またはヘテロ二量体分子が含まれ、二量体分子の各サブユニットには、配列番号１〜３８、４６〜５２、５４〜１３５、および１３７〜１４６のうち少なくとも１つによって表されるように、Ｎ（α）メチル化アルギニン残基を含むアミノ酸配列が含まれる。少なくとも一実施形態には、ペプチドホモ二量体またはヘテロ二量体分子が含まれ、二量体分子の少なくとも１つのサブユニットには、配列番号１３６によって表されるように、Ｎ（α）メチル化リジン残基を含むアミノ酸配列が含まれる。
【００８４】
さらに、本発明のいくつかの実施形態には、ペプチドホモ二量体またはヘテロ二量体分子が含まれ、二量体分子の各サブユニットは、配列番号１〜１４６のうち少なくとも１つによって表されるように、ジスルフィド結合を通じて環化される。他の実施形態において、ペプチドホモまたはヘテロ二量体分子が提供され、二量体分子の各サブユニットは、配列番号１および２のうち少なくとも１つによって表されるように、ラクタム結合を通じて環化され、Ｘａａ４およびＸａａ１０は、Ｌｙｓ、ＨＬｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、Ｄａｂ、Ａｓｐ、ＨＡｓｐ、Ｇｌｕ、およびＨＧｌｕからなる群から選択される。
【００８５】
二量体構造および生物活性
【００８６】
本発明は様々な新規のアンタゴニストジスルフィドペプチド二量体を提供する。これらの化合物は試験され、α４β７結合に対する親和性の増加、α４β１に対する選択性の増加、および模擬腸液（ＳＩＦ）における安定性の増加をより明確に特徴付けられている。これらの新規のアンタゴニスト分子はα４β７に対する高い結合親和性を示し、それによりα４β７とＭＡｄＣＡＭリガンドとの間の結合を阻害する。したがって、これらのアンタゴニストペプチドは、様々な実験において炎症プロセスの除去および／または減少に効果的であることが示されている。
【００８７】
本発明はしたがって、血清およびＳＩＦ中においてα４β７インテグリンと結合または関連してα４β７とＭＡｄＣＡＭリガンドとの間の結合を破壊またはブロックする、様々な二量体ペプチド化合物を提供する。本発明の様々なペプチド化合物は天然アミノ酸単独で構築されていてもよい。あるいは、ペプチド化合物には、非限定的に修飾アミノ酸を含む、非天然アミノ酸が含まれていてもよい。修飾アミノ酸には、天然ではアミノ酸上に存在しない１つの基、複数の基、または化学部分を含むように化学的に修飾されている天然アミノ酸が含まれる。本発明のペプチド化合物にはさらに、Ｄアミノ酸が含まれ得る。さらにそのうえ、本発明のペプチド化合物にはアミノ酸類事物が含まれ得る。
【００８８】
いくつかのアンタゴニストジスルフィド二量体は胃腸管系における安定性を示しており、α４β７インテグリンに対する高レベルの特異性および親和性を提供している。本発明のいくつかの実施は、模擬腸液（ＳＩＦ）に曝露された場合６０分を超える半減期を含む「ジスルフィドに量体を提供する。いくつかの実施はさらに、およそ１分〜およそ６０分の半減期を含むＤＲＰを提供する。
【００８９】
本発明の化合物は、それらのＣ末端またはＮ末端で２つのサブユニット単量体を結合することにより形成されるホモまたはヘテロ二量体である。配列番号１〜１４６によって表される単量体サブユニットの二量体形成は、それらの非二量体化単量体類似体を超える作用強度の増加を示す。本発明のいくつかの二量体化合物は、様々な天然のアミノアシル残基をＮメチル化類似体残基と置換した結果として、さらに増加した作用強度を示した。例えば、配列番号１〜３８、４６〜５２、５４〜１３５、および１３７〜１４６は、Ｎ（α）メチル化アルギニンを置換したサブユニット単量体配列を示す。そのうえさらに、本発明のいくつかの二量体化合物には独立した環化を起こす単量体サブユニットが含まれるため、環化構造はそれらの非環化単量体および二量体類似体を超える増加した安定性を示す。これらの改善を例証する具体的な例およびデータは図３および図４に提供する。
【００９０】
図３を参照すると、本発明にも続く様々な非限定的試料ホモ二量体分子に対する安定性の増加を例証する様々なデータを含む、図表が提供されている。模擬腸液（ＳＩＦ）安定性試験を、本発明の単量体ペプチドの大多数およびそれら各々のホモ二量体分子に実施した。これらの結果の選択的サンプリングは図３に提供される。
【００９１】
本明細書にて論じられるプロトコルに従い、希望者は、配列番号３９〜１４６により表されるインテグリンアンタゴニスト二量体分子の大多数を合成し、精製し、二量体化して、ホモ二量対の形成を成功させた。
【００９２】
単量体ジスルフィドペプチドサブユニットの二量体形成は概して、単量体ジスルフィドサブユニットペプチドと比較して、安定性を増加することが示された。さらに、アルギニンにおけるＮ−Ｍｅ−Ａｒｇの置換は、配列番号４６のＮ（α）メチル化および非メチル化バリエーションにより示されるように、ＳＩＦにおいて実質的に半減期を増加した。いくつかの実施形態において、Ｃｙｓをペニシラミン（Ｐｅｎ）と置換することで、配列番号５５、７４、および９３によって示されるように、Ｃｙｓによる配列番号４６と比較して、模擬腸液（ＳＩＦ）における安定性が実質的に増加した。ＣｙｓをＰｅｎと置換することでまた、胃の安定性の改善を示す減少条件（ＤＴＴ）下における安定性を増加した。
【００９３】
図４を参照すると、本発明に基づく様々な非限定的試料ホモ二量体分子に対する作用強度および選択性の増加を例証する様々なデータを含む、図表が提供されている。作用強度試験を、配列番号３９〜１４６によって表される、単量体ペプチドの全ておよびそれら各々のホモ二量体分子に実施した。選択性試験は、配列番号３９〜１４６によって表される単量体ペプチドの大多数およびそれら各々のホモ二量体分子に実施した。これらの結果の選択的サンプリングは図４に提供され、ホモ二量体ペプチドは、試料２、４、５、７、９、１１、１３、１５、１６、１７、および１９によって表され、各々の単量体サブユニット分子は、試料１、３、６、８、１０、１２、１４、および１８によって表される。二量体化を通じて、ＥＬＩＳＡおよび細胞接着試験において、作用強度における有意な改善がα４β７に対して達成された。くわえて、二量体形成は、α４β７に対する作用強度の改善を通じて、α４β１に対する選択性にて有意な改善の達成をもたらした。ペプチドはまた、α４β７と比較した場合、α４β１に対して低い効力を示すことで、α４β７に対する選択性を示す。
【００９４】
本明細書にて論じられるプロトコルに従い、希望者は、配列番号３９〜１４６によって表されるインテグリンアンタゴニスト二量体分子の大部分を合成し、精製し、二量体化して、ホモ二量体の形成を成功させた。これらの分子の各々は、α４β７−ＭＡｄＣＡＭ拮抗ＥＬＩＳＡ試験、α４β１−ＶＣＡＭ拮抗ＥＬＩＳＡ試験、α４β７−ＭａｄＣＡＭ細胞接着試験に供された。多くの配列に関して、これらの試験はまた、単量体サブユニットおよび二量体分子の両方にて実施された。これらの結果の小サンプリングは図４に提供される。
【００９５】
単量体ジスルフィドペプチドサブユニットの二量体形成は概して、単量体ジスルフィドサブユニットペプチドと比べて、ａ４ｂ７に対する親和性の増加、および／またはａ４ｂ１に対する選択性の増加を引き起こすａ４ｂ１に対する親和性の減少を示した。
【００９６】
Ｃ末端およびＮ末端二量体形成に際して、α４β７に対する作用強度の有意な改善がまた観測された。そのうえ、二量体形成はまた、α４β１に対する作用強度の決定（ｄｅｃｒｅｅｓ）をもたらすか、またはＥＬＩＳＡおよび細胞接着試験におけるα４β７に対する選択性の増加をもたらす作用強度の有意な変化を一切もたらさないかのいずれかである。ＡｒｇがＮ−Ｍｅ−Ａｒｇで置換される場合、α４β７に対する作用強度における有意な改善は、ＥＬＩＳＡおよび細胞接着試験の両方において見られた。Ｎ（α）メチル化はさらに分子の安定性の増加を示した。アルギニンのメチル化アイソスターがさらに作用強度および／または安定性において同様の増加を示し得ることを、当業者は理解されよう。
【００９７】
組成物
【００９８】
上に記載の通り、インテグリンは細胞接着分子として機能するヘテロ二量体である。α４インテグリン、α４β１、およびα４β７は、胃腸管全体に渡るリンパ球遊走において必須の役割を果たす。これらは、Ｂリンパ球およびＴリンパ球を含む大部分の白血球、単核球、ならびにそれらの各主要リガンドとの結合を介して細胞接着を媒介する樹状細胞、すなわち、血管細胞接着分子（ＶＣＡＭ）および粘膜アドレシン細胞接着分子（ＭＡｄＣＡＭ）において発現する。ＶＣＡＭおよびＭＡｄＣＡＭは結合特異性の点で異なり、ＶＣＡＭはα４β１とα４β７との両方を結合するが、一方でＭＡｄＣＡＭはα４β７に対して高度に特異性である。
【００９９】
ＶＣＡＭおよびＭＡｄＣＡＭの発現プロファイルにおける差は、炎症性疾患におけるそれらの役割の最も確かな証拠を提供する。どちらも腸において恒常的に発現する；しかしながら、ＶＣＡＭ発現は末梢期間にまで及び、一方でＭＡｄＣＡＭ発現は胃腸管の臓器に限定される。くわえて、腸における上昇したＭＡｄＣＡＭ発現は現在、Ｃｒｏｈｎ病、潰瘍性大腸炎、およびＣ型肝炎を含むいくつかの消火器関連炎症性疾患と一致している。
【０１００】
実施例にて指定されたものに限らない化合物を含む本発明の化合物は、インテグリン−アンタゴニスト活性を有する。一実施形態において、状態または医療適用には、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎、Ｃｒｏｈｎ病、セリアック病（非熱帯性スプレー）、血清反応陰性関節症と関連する腸疾患、顕微鏡的大腸炎もしくはコラーゲン形成大腸炎、好酸球性胃腸炎、放射線療法もしくは化学療法に関する大腸炎、白血球粘着不全−１におけるような自然免疫の障害に関連する大腸炎、慢性肉芽腫症、糖原病１ｂ型、Ｈｅｒｍａｎｓｋｙ−Ｐｕｄｌａｋ症候群、Ｃｈｅｄｉａｋ−Ｈｉｇａｓｈｉ症候群、ならびにＷｉｓｋｏｔｔ−Ａｌｄｒｉｃｈ症候群、または直腸結腸切除および回腸肛門吻合の後に生じる嚢炎、ならびに様々な形態の胃腸がん、骨粗鬆症、関節炎、多発性硬化症、慢性疼痛、体重増加および体重低下のうち、少なくとも１つが含まれる。別の実施形態において、状態は、膵炎、インスリン依存性糖尿病、乳腺炎、胆嚢炎、胆管炎、胆管周囲炎、慢性気管支炎、慢性副鼻腔炎、喘息、または移植片対宿主病である。くわえて、これらの化合物は、現在利用可能な療法、医学的手技、および治療薬と組み合わせて使用した場合、これらの疾患の予防または回復に有用であり得る。
【０１０１】
本発明の化合物は、他の疾患を治療するための組成物および手段と組み合わせて使用してもよい。さらに、本発明の化合物は、薬剤的に許容可能な賦形剤、および随意に生分解性高分子などの持続放出性マトリクスと組み合わせて、治療用組成物を形成することができる。
【０１０２】
治療方法
【０１０３】
いくつかの実施形態において、本発明はインテグリン結合によって特徴付けられる状態または徴候に罹った個体を治療する方法を提供し、この方法には、個体へ式（Ｉ）または式（ＩＩ）に基づくインテグリンアンタゴニスト二量体分子を投与することが含まれる。一実施形態において、ＭＡｄＣＡＭを発現する細胞を含む組織にα４β７を発現する細胞の不適切な輸送によって特徴付けられる状態または徴候に罹った個体を治療することであって、個体へ、ＭＡｄＣＡＭを発現する細胞を含む組織にα４β７を発現する細胞の輸送を（部分的にまたは完全に）阻害するのに十分な量の、式（Ｉ）および式（ＩＩ）のうち少なくとも１つに基づくα４β７−アンタゴニスト二量体分子を投与することを含むことのために、方法は提供される。
【０１０４】
いくつかの実施形態において、本発明は、式（Ｉ）に基づくインテグリンアンタゴニスト二量体分子を含む医薬組成物が初回治療として患者へ投与される方法を提供する。別の実施形態において、方法にはさらに、対象へ第２の治療を投与することが含まれる。別の実施形態において、第２の治療は、医薬組成物が対象へ投与される前に、および／またはそれと同時に、および／またはそれ以降に対象へと投与される。他の実施形態において、第２の治療には抗炎症剤が含まれる。別の実施形態において、第２の医薬組成物には、非ステロイド性抗炎症剤、ステロイド剤、および免疫調節剤からなる群から選択される薬剤が含まれる。別の実施形態において、方法には対象へ第３の治療を投与することが含まれる。
【０１０５】
一実施形態において、α４β７インテグリン結合によって特徴付けられる状態または徴候に罹った個体を治療する方法が提供され、この方法には、個体へ配列番号１〜１４６から選択されるサブユニットを含有する有効量のα４β７インテグリンアンタゴニスト二量体分子を投与することが含まれる。いくつかの場合において、配列番号１〜１４６選択され、これらと対応し、かつα４β７に対して高い特異性を有するサブユニットを持つα４β７インテグリンアンタゴニスト二量体分子が、α４β７インテグリン結合によって特徴付けられた状態または徴候の治療処置の一部として、個体へ投与される。本発明のいくつかの実施形態はさらに、持続放出性マトリクス中に懸濁されるα４β７インテグリンアンタゴニスト二量体分子で個体を治療する方法を提供する。持続放出性マトリクスは、本明細書にて用いられる場合、物質、通常はポリマーからなるマトリクスであって、酵素もしくは酸素基加水分解によって、または溶解によって分解可能である。体内へ一度挿入されると、マトリクスは酵素および体液に作用される。望ましくは、持続放出性マトリクスは、リポソーム、ポリラクチド（ポリ乳酸）、ポリグリコリド（グリコール酸のポリマー）、ポリラクチドコグリコリド（乳酸およびグリコール酸のコポリマー）ポリ酸無水物、ポリ（オルト）エステル、ポリペプチド、ヒアルロン酸、コラーゲン、コンドロイチン硫酸、カルボン酸、脂肪酸、リン脂質、多糖類、核酸、ポリアミノ酸、フェニルアラニン、チロシン、イソロイシン、ポリヌクレオチド、ポリビニルプロピレン、ポリビニルピロリドン、およびシリコーンなどのアミノ酸といった、生体的合成物質から選ばれる。好ましい生分解性マトリクスは、ポリラクチド、ポリグリコリド、またはポリラクチドコグリコリド（乳酸およびグリコール酸のコポリマー）のうちいずれか１つのマトリクスである。
【０１０６】
いくつかの態様において、本発明は経口送達用の医薬組成物を提供する。本発明の様々な実施形態および二量体組成物は、本明細書に記載の方法、技術、および／または送達媒体のいずれかに従って経口投与のために調製することができる。さらに、本発明の二量体組成物は本明細書に開示されてはいないが、当該技術分野ではよく知られており、二量体ペプチド小分子の経口送達における使用に適合することを、当業者は理解されよう。
【０１０７】
本発明の二量体ペプチド一緒の使用に適合する経口投薬形態または単位用量には、二量体ペプチド活性薬剤成分のおよび非薬剤成分の混合物、または賦形剤、ならびに成分もしくは包装のいずれかとして考慮され得るその他の再使用不可能な物質が含まれていてもよい。経口組成物には、液体、固体、および半個体の剤形の少なくとも１つが含まれ得る。いくつかの実施形態において、経口投薬形態は、配列番号１〜１４６から選択されかつこれらに対応するサブユニットを持つ有効量の二量体ペプチドを含んで提供され、剤形には、丸剤、錠剤、カプセル剤、ゲル剤、ペースト剤、ドリンク剤、シロップ剤、軟膏剤、および坐剤のうち少なくとも１つが含まれる。いくつかの場合において、経口投薬形態は、対象象徴および／または大腸におけるペプチド二量体の遅延放出を達成するように設計および形成されるように提供される。
【０１０８】
一実施形態において、式（Ｉ）に基づく経口医薬組成物には、小腸においてペプチド二量体を遅延放出するよう設計されている腸溶コーティングが含まれる。少なくともいくつかの実施形態において、医薬組成物は、配列番号１〜１４６から選択されかつこれらと対応するサブユニットを有するペプチド二量体化合物、ならびに遅延放出製剤処方におけるアプロチニンなどのプロテアーゼ阻害薬を含むように提供される。いくつかの場合において、本発明の医薬組成物には、ｐＨが約５．０以上の胃液中で可溶な腸溶コーティングが含まれることが好ましい。少なくとも一実施形態において、医薬組成物は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、酢酸フタル酸セルロース、および酢酸セルローストリメリテート、ならびにセルロース、およびその他の炭水化物ポリマーの同様な誘導体を含む、セルロースの誘導体といった分解可能なカルボン酸基を持つポリマーを含む腸溶コーティングを含んで提供される。
【０１０９】
一実施形態において、配列番号１〜１４６から選択されかつこれらに対応するサブユニットをもつ医薬組成物は、腸溶コーティング中に提供され、この腸溶コーティングは対象下部消化系中にて制御された方法で医薬組成物を保護および放出し、全身性副作用を回避するように設計されている。腸溶コーティングにくわえて、本発明の二量体ペプチドは、カプセル化され、コーティングされ、結合されてもよいか、または別様に、あらゆる適合性の経口剤送達システムまたは成分に関連してもよい。例えば、いくつかの実施形態において、本発明の二量体ペプチドは、高分子ヒドロゲル、ナノ粒子、微粒子、ミセル、およびその他の脂質系のうち少なくとも１つを含む脂質担体システムに提供される。
【０１１０】
小腸におけるペプチド分解に打ち勝つため、本発明のいくつかの実施には本発明に基づくペプチド二量体が含有されることで、ヒドロゲルポリマーがペプチド二量体を小腸および／または大腸内でのタンパク質分解から保護する、ヒドロゲルポリマー担体システムが含まれる。本発明のペプチド二量体はさらに、二量体ペプチドの分解動力学を増加し、腸管吸収を促進するように設計される担体システムと互換的に使用するために処方されてもよい。これらの方法は、ペプチドの胃腸管浸透を増加するため、リポソーム、ミセル、およびナノ粒子の使用を含む。
【０１１１】
様々な生体応答システムを１つ以上の本発明のペプチド二量体と併用して、経口送達のための医薬品を得ることもまたできる。いくつかの実施形態において、本発明のペプチド二量体を、水素結合性基（例えば、ＰＥＧ、ポリ（メタクリル）酸［ＰＭＡＡ］、セルロース、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）、キトサン、およびアルギン酸）を有するヒドロゲルおよび粘膜付着性ポリマーなどの生体応答システムと併用することで、経口投与用の治療薬が得られる。その他の実施形態には、本明細書に開示のペプチド二量体の薬物滞在時間を最適化する方法または延長する方法が含まれ、ペプチド二量体表面の表面は、水素結合を通じた粘膜付着特性、結合したムチン、または／および疎水性相互作用を有するポリマーを含むように修飾される。これらの修飾二量体分子は対象における薬剤滞在時間の本発明の所望の特性に従った増加を示し得る。そのうえ、標的粘膜付着性システムは腸細胞およびＭ細胞表面にて受容体と特異的に結合することで、さらに二量体ペプチドを含有する粒子の取り込みを増加し得る。
【０１１２】
他の実施形態には、配列番号１〜１４６から選択されかつこれらに対応するサブユニットを持つ二量体ペプチドの経口送達方法が含まれ、二量体ペプチドは、傍細胞または経細胞浸透を増加することによって腸管粘膜を渡る二量体ペプチドの輸送を促進する透過促進剤と併用される。例えば、一実施形態において、透過促進剤は配列番号１〜１４６から選択されかつこれらに対応するサブユニットを持つ二量体ペプチドと組み合わせられ、この透過促進剤には、長鎖脂肪酸、胆汁酸塩、両親媒性界面活性物質、およびキレート剤のうち少なくとも１つが含まれる。一実施形態において、Ｎ−［ヒドロキシベンゾイル）アミノ］カプリル酸ナトリウムを含む透過促進剤を使用して弱い非共有結合関係を本発明の二量体ペプチドと形成し、この透過促進剤は膜輸送、およびさらに血液循環に１回到達している解離を支持する。別の実施形態において、本発明のペプチド二量体はオリゴアルギニンと共役することによって、二量体ペプチドの様々な細胞型への細胞透過を増加する。そのうえ、少なくとも一実施形態において、非共有結合は、配列番号１〜１４６から選択されかつこれらに対応するサブユニットを持つ二量体ペプチドと、シクロデキストリン（ＣＤ）およびデンドリマーからなる群から選択される透過促進剤との間に提供され、この透過促進剤はペプチド集合、ならびにペプチド二量体分子に対する増加する安定性および溶解性を減少させる。
【０１１３】
本発明のその他の実施形態は、個体を半減期の増加したα４β７インテグリンアンタゴニスト二量体分子で治療する方法を提供する。一態様において、本発明は、治療効果のある量の１日１回（ｑ．ｄ．）または１日２回（ｂ．ｉ．ｄ．）の投与に十分である、インビトロまたはインビボにおいて少なくとも数時間〜１日の半減期（例えば、ヒト対象に投与された場合）であるインテグリンアンタゴニスト二量体分子を提供する。別の実施形態において、二量体分子は、治療効果のある量の毎週（ｑ．ｗ．）の投与に十分である、３日間以上の半減期を有する。さらに、別の実施形態において、二量体分子は、治療効果のある量の隔週（ｂ．ｉ．ｗ．）または月々の投与に十分である８日間以上の半減期を有する。別の実施形態において、非誘導体化または非修飾二量体分子と比べてより長い半減期を有するように、二量体分子を誘導体化または修飾する。別の実施形態において、二量体分子には、血清の半減期を増加する１つ以上の化学修飾が含有される。
【０１１４】
本明細書に記載の治療または送達システムのうち少なくとも１つにおいて使用された場合、治療効果のある量の本発明の化合物のうち１つは純粋な形態で使用され得るか、または薬剤的に許容可能な塩形態が存在する場合は、そのような形態で使用され得る。本明細書にて用いられる場合、「治療効果のある量」の本発明の化合物は、あらゆる内科的治療に適用可能な所望の利益／危険比で、インテグリン関連疾患を治療（例えば、ＩＢＤに関係する炎症を低減する）するのに十分な量のペプチド二量体化合物を記述するように意図されている。しかしながら、本発明の化合物および組成物の１日の総投与量は医学的良識の範囲内で主治医によって決定されることを理解されたい。あらゆる特定の患者に対する特定の治療効果のある服用レベルは、以下の種々の要因に応じる：ａ）治療される障害および障害の重症度；ｂ）使用した特定の化合物の活性；ｃ）使用した特定の組成物、患者の年齢、体重、全身健康、性別、および食事制限；ｄ）投与期間、投与経路、および使用した特定の化合物の排出頻度；ｅ）治療期間；ｆ）使用した特定の化合物と組み合わせて使うまたは同時に使う薬物、ならびに当業者に周知である同様の要因。例えば、所望の治療効果を達成するのに必要なレベルより低いレベルで化合物の投与を開始し、所望の効果が達成されるまで用量を徐々に増加させることは、十分に当業者の技術の範囲内であろう。
【０１１５】
あるいは、本発明の化合物は、目的の化合物を１つ以上の薬剤的に許容可能な賦形剤と組み合わせて含有する医薬組成物として投与してもよい。薬剤的に許容可能な担体または賦形剤とは、無毒性である個体、半個体、もしくは液体の注入剤、希釈剤、封入材料、またはあらゆる型の補助的な形態を指す。組成物は、非経口、嚢内、膣内、腹腔内、直腸内、局所（散剤、軟膏剤、点滴剤、坐剤、もしくは経皮パッチによる）、または頬側で投与してもよい。「非経口」という用語は、本明細書にて用いられる場合、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、皮下、皮内、および関節内注射ならびに点滴を含む投与の方法を指す。
【０１１６】
非経口注入のための医薬組成物には、薬剤的に許容可能な滅菌水溶液もしくは非水溶液、分散剤、懸濁剤、または乳剤、および使用の直前に滅菌注射剤は分散剤中に再構築する滅菌散剤が含まれる。好適な水系および非系担体、希釈剤、溶媒、または媒体の例として、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、および同様のものなど）、カルボキシメチルセルロース、ならびにそれらの好適な混合物、植物油（オリーブオイルなど）、ならびにエチルオレエートなどの注射可能な有機酸エステルが挙げられる。例えば、レシチンなどのコーティング剤を使用することによって、分散剤の場合は必要な粒径を維持することによって、および界面活性物質を使用することによって、適切な流動性を維持してもよい。
【０１１７】
これらの組成物はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤、および分散剤などのアジュバントを含有していてもよい。微生物の活動の予防は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、およびフェノールソルビン酸といったものを包含することで確実にすることができる。糖、エンカナトリウム、および同様のものなどの等張剤が含まれることもまた望ましくあり得る。注射可能な医薬品形態の持続的吸収は、ステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの、吸収を遅らせる薬剤を包含することによってもたらされ得る。
【０１１８】
注射可能なデポー形態は、ポリラクチド−ポリグリコリド、ポリ（オルトエステル）、ポリ（無水物）、およびＰＥＧなどの（ポリ）グリコールといった生分解性ポリマー中にて薬剤のマイクロカプセル化マトリクスを形成することで作成される。薬剤対ポリマーの比率、および使用した特定のポリマーの性質に応じて、薬剤放出の速度は調節することができる。デポー注射可能製剤はまた、体組織と適合するリポソームまたはマイクロエマルション中の薬剤を包括することで調製される。
【０１１９】
注射可能な製剤を、例えば、細菌保持フィルターを通じたろ過によって、または使用直前に滅菌水もしくは他の滅菌注射可能媒体中に溶解または分散することのできる滅菌固体組成物の形態で、滅菌剤を組み込むことによって、滅菌してもよい。
【０１２０】
局所投与には、肺および目の表面を含む皮膚または粘膜への投与が含まれる。吸入用および鼻腔用組成物を含む局所的経肺投与用組成物は、水系および非水系製剤中の溶液および懸濁剤を含んでいてもよく、加圧または非加圧され得る乾燥粉末として調製することができる。非加圧粉末組成物において、微細化形態の活性成分を、例えば、最大直径１００マイクロメーターの大きさである粒子を含むより大きなサイズの薬剤的に許容可能な不活性担体との混合に使用してもよい。好適な不活性担体には、ラクトースなどの糖類が含まれる。
【０１２１】
あるいは、組成物は加圧されていてもよく、窒素または液化ガス噴霧剤などの圧縮ガスを含有していてもよい。液化噴霧剤媒体および全組成物は実際に、あらゆる実質的な程度でも活性成分がその中に溶解しないため好ましい。加圧組成物は、液体もしくは固体非イオン性界面活性剤などの界面活性剤をまた含有していてもよいか、または固体アニオン界面活性剤であってもよい。ナトリウム塩の形態で固体アニオン界面活性剤を使用するのが好ましい。
【０１２２】
局所投与形態のさらなる形態は、眼用である。本発明の化合物は、化合物が眼表面と十分な時間接触して保持されて、化合物を角膜および眼の内部領域、例えば前眼房、後眼房、硝子体、眼房水、硝子体液、角膜、虹彩／毛様体、水晶体、脈絡膜／網膜、および強膜に浸透させるように、薬剤的に許容可能な眼用媒体中に送達される。薬剤的に許容可能な眼用媒体は、例えば、軟膏剤、植物油、または封入物質であり得る。あるいは、本発明の化合物は硝子体および房水中に直接注入されてもよい。
【０１２３】
直腸または膣内投与用組成物は、本発明の化合物を、室温では固体だが体温で液体となるため、直腸または膣腔で溶融し活性化合物を放出する、カカオバター、ポリエチレングリコール、もしくは坐剤用ワックス好適な非刺激性賦形剤または担体と混合することで調製できる坐剤であることが好ましい。
【０１２４】
本発明の組成物はまた、リポソームの形態で投与することができる。当該技術分野において知られるように、リポソームは概してリン脂質またはその他の脂質物質に由来する。リポソームは水性媒体中に分散される単膜または多重膜水和液晶によって形成される。リポソームを形成することのできる、あらゆる無毒性であり生理学的に許容可能かつ代謝可能な脂質を用いることができる。リポソーム形態である本組成物には、本発明の化合物に加えて、安定剤、保存剤、賦形剤、および同様のものが含有され得る。好適な脂質は、天然および合成両方のホスファチジルコリン（レシチン）およびセリンを含むリン脂質である。リポソームを形成する方法は当該技術分野において既知である。
【０１２５】
ヒトまたはその他の哺乳類宿主へ単回用量または分割要領で投与される本発明の組成物の１日の総投与量は、例えば、体重あたり１日に０．０００１〜３００ｍｇ／ｋｇの量、およびより通常では、体重あたり１〜３００ｍｇ／ｋｇの量であってもよい。
【０１２６】
小腸炎の非侵襲的検出
【０１２７】
本発明のペプチドは、配列番号１〜１４６から選択されかつこれらに対応するサブユニットを持ち、少なくとも１つのキレート化基および非侵襲製の診断法の一部として検出可能な標識でさらに標識化される経口的に安定の化合物を用いるマイクロＰＥＴイメージングによって、小腸炎の検出、評価、および診断に使用することができる。一実施形態において、インテグリンアンタゴニスト二量体分子を二官能性キレート剤に抱合することで、経口的に安定の二量体分子が得られる。別の実施形態において、インテグリンアンタゴニスト二量体分子を放射標識することで、経口的に安定の二量体分子が得られる。その後、経口的に安定であるキレート化または放射標識二量体分子は、対象へ経口または直腸で投与される。一実施形態において、経口的に安定である二量体分子は飲料水に含まれる。二量体分子の取り込みに続いて、マイクロＰＥＴイメージングは対象の腸および消化路全体に渡って炎症を可視化するために使用してもよい。
【０１２８】
ペプチドサブユニットの合成
【０１２９】
本発明の単量体ペプチドサブユニットは、当業者に既知である多くの技術で合成することができる。新規かつ独特の単量体サブユニットが、本明細書に提供される技術を用いて合成され、精製され、二量体化された。
【０１３０】
本発明のペプチドは、Ｐｒｏｔｅｉｎ  ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙのＳｙｍｐｈｏｎｙ複数チャンネル合成機上にてＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ固相合成技術を用いて合成した。ペプチドは、ＨＢＴＵ（Ｏ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウム−ヘキサフルオロ−リン酸）、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）カップリング条件を用いて集めた。いくつかのアミノ酸カップリングについて、ＰｙＡＯＰ（７−アザベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリピルロリジノホスポニウムヘキサフルオロリン酸塩（ｔｒｉｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｏｐｈｏｓｐｏｎｉｕｍ  ｈｅｘａｆｌｕｏｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ））、およびＤＩＥＡ条件を用いた。Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ樹脂（１００〜２００メッシュ、０．５７ｍｍｏｌ／ｇ）はＣ末端アミドを持つペプチドに使用し、予め組み込まれているＮ−ａ−Ｆｍｏｃ保護アミノ酸を有するＷａｎｇ  ＲｅｓｉｎはＣ末端酸を持つペプチドに使用する。カップリング剤（事前に混合したＨＢＴＵおよびＤＩＥＡ）を１００ｍｍｏｌの濃度で調製した。同様に、アミノ酸溶液を１００ｍｍｏｌの濃度で調製した。ペプチドは表人的なＳｙｍｐｈｏｎｙプロトコルを用いて集めた。
【０１３１】
構築
ペプチド配列を以下の通りに集めた：各反応バイアル中の樹脂（２５０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を４ｍｌのＤＭＦで２回洗浄し、続いて２．５ｍｌの２０％４−メチルピペリジン（Ｆｍｏｃ脱保護）で１０分間処理した。その後樹脂をろ過し、ＤＭＦ（４ｍｌ）で２回洗浄し、Ｎ−メチルピペリフィン（Ｎ−ｍｅｔｈｙｌ  ｐｉｐｅｒｉｆｉｎｅ）でさらに３０分間再処理した。樹脂を再びＤＭＦ（４ｍｌ）で３回洗浄し、続いてさらに２．５ｍｌのアミノ酸および２．５ｍｌのＨＢＴＵ−ＤＩＥＡ混合物で洗浄した。素早く４５分間撹拌した後、樹脂をろ過し、ＤＭＦ（各４ｍｌ）で３回洗浄した。本発明の典型的なペプチドについて、二重カップリングを最初の２５のアミノ酸に対して実施し、三重カップリングを残りの残基に実施した。カップリング反応の完了後、樹脂をＤＭＦ（各４ｍｌ）で３回洗浄し、その後次のアミノ酸反応を行った。
【０１３２】
切断
【０１３３】
ペプチド構築の完了に続いて、ペプチドをＫ試薬（８２．５％のトリグルオロ酢酸（ｔｒｉｇｌｕｏｒｏａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）、５％の水、５％のチオアニソール、５％のフェノール、２．５％の１，２−エタンジチオール）などの切断試薬で処理することにより樹脂から切断した。切断試薬は樹脂および全ての残存する側鎖保護基からのペプチドの切断を成功することができた。
【０１３４】
切断物を冷たいジエチルエーテル中に沈殿し、続いてエチルエーテルで２回洗浄した。ろ液を流して取り除き、第２のアリコットの冷たいエーテルを加え、手順を繰り返した。粗ペプチドをアセトニトリル：水（１％ＴＦＡを伴い、７：３）の溶液中に溶解し、ろ過した。その後、直鎖状のペプチドの質をエレクトロスプレーイオン化質量分析（ＥＳＩ−ＭＳ）（Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ／Ｗａｔｅｒｓ  ＺＱ）で確かめ、次いで精製した。
【０１３５】
酸化を介するジスルフィド結合形成
【０１３６】
５０ｍｇの粗切断ペプチドを２０ｍｌの水：アセトニトリル中に溶解した。その後、酢酸中飽和ヨウ素を、黄色が残留するまで撹拌しながら液滴で加えた。溶液を１５分間撹拌し、反応を分析用ＨＰＬＣおよびＬＣＭＳで監視した。反応が完了したとき、固体のアスコルビン酸を溶液が透明になるまで加えた。その後、溶媒混合液を、まず水で希釈し、次いで逆相ＨＰＬＣ装置（Ｌｕｎａ  Ｃ１８支持体、１０ｕ、１００Ａ、移動相Ａ：０．１％ＴＦＡを含有する水、移動相Ｂ：０．１％ＴＦＡを含有するアセトニトリル（ＡＣＮ）、５％のＢで勾配が開始、流速１５ｍｌ／分にて６０分かけて５０％のＢに変化）にかけて、精製した。その後、純粋な生成物を含有する分画を凍結乾燥器上で凍結乾燥した。
【０１３７】
ラクタム結合形成
【０１３８】
１００ｍｇの粗切断ペプチド（およそ０．１２ｍｍｏｌ）を１００ｍｌの無水ジクロロメタン中に溶解した。ＨＯＢｔ（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物）（０．２４ｍｍｏｌ、２等量）を加え、続いてＤＩＥＡ（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）（１．２ｍｍｏｌ、１０等量）およびＴＢＴＵ（Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩）（０．２４ｍｍｏｌ、２等量）を加えた。混合物を一晩撹拌し、続いてＨＰＬＣによって反応させた。反応の完了後、ジクロロメタンを蒸発し、水およびアセトニトリルで希釈し、次いで逆相ＨＰＬＣ装置（Ｌｕｎａ  Ｃ１８支持体、１０ｕ、１００Ａ、移動相Ａ：０．１％ＴＦＡを含有する水、移動相Ｂ：０．１％ＴＦＡを含有するアセトニトリル（ＡＣＮ）、５％のＢで勾配が開始、流速１５ｍｌ／分にて６０分かけて５０％のＢに変化）にかけた。その後、純粋な生成物を含有する分画を凍結乾燥器上で凍結乾燥した。
【０１３９】
精製
【０１４０】
分析用逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）をＧｅｍｉｎｉ  Ｃ１８カラム（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ）（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）上で実施した。半分取逆相ＨＰＬＣを、Ｇｅｍｉｎｉ  １０μｍ  Ｃ１８カラム（２２ｍｍ×２５０ｍｍ）（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）、またはＪｕｐｉｔｅｒ  １０μｍ、３００Ａ℃１８カラム（２１．２ｍｍ×２５０ｍｍ）（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）上で実施した。Ａ（移動相Ａ：０．１５％ＴＦＡを含有する水、移動相Ｂ：０．１％ＴＦＡを含有するアセトニトリル（ＡＣＮ））中緩衝液Ｂの直線勾配を用いて、流速１ｍＬ／分（分析用）および１５ｍＬ／分（分取）にて分離を行った。Ａ（移動相Ａ：０．１５％ＴＦＡを含有する水、移動相Ｂ：０．１％ＴＦＡを含有するアセトニトリル（ＡＣＮ））中緩衝液Ｂの直線勾配を用いて、流速１ｍＬ／分（分析用）および１５ｍＬ／分（分取）にて分離を行った。
【０１４１】
リンカー活性化および二量体化
【０１４２】
少量のＤＩＧリンカー活性化手順：５ｍＬのＮＭＰを、ＩＤＡ二酸（３０４．２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、Ｎ−ヒドロキシコハク酸（ＮＨＳ、２５３．２ｍｇ、２．２等量、２．２ｍｍｏｌ）、および撹拌子を含有するガラスバイアルに加えた。混合物を室温で撹拌して、固体の出発物質を完全に溶解した。その後、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、４５３．９ｍｇ、２．２等量、２．２ｍｍｏｌ）を混合物へ加えた。１０分以内に沈殿が現れ、反応混合物をさらに一晩室温で撹拌した。その後、反応混合物をろ過して沈殿したジシクロヘキシル尿素（ＤＣＵ）を取り除いた。活性化リンカーは、二量体化に使用するまで密封したバイアル中で保持した。活性化リンカーの名目上濃度はおよそ０．２０Ｍであった。
【０１４３】
ＰＥＧリンカーを用いる二量体化について、関係する前活性化ステップは存在しない。市販の前活性化二官能性ＰＥＧリンカーを使用した。
【０１４４】
二量体化手順：２ｍＬの無水ＤＭＦを、ペプチド単量体（０．１ｍｍｏｌ）を含有するバイアルに加えた。ペプチドのｐＨをＤＩＥＡで８〜９に調節した。その後、活性化リンカー（ＩＤＡまたはＰＥＧ１３、ＰＥＧ２５）（モノマーに対して０．４８等量、０．０４８ｍｍｏｌ）を単量体溶液に加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。二量体化反応の完了は分析用ＨＰＬＣを用いて監視した。二量体化反応の完了時間はリンカーに応じて変動した。反応完了後、ペプチドを冷たいエーテル中に沈殿させ、遠心分離した。上澄のエーテル層を破棄した。沈殿ステップを２回繰り返した。その後、粗二量体を、逆相ＨＰＬＣ（Ｌｕｎａ  Ｃ１８支持体、１０ｕ、１００Ａ、移動相Ａ：０．１％ＴＦＡを含有する水、移動相Ｂ：０．１％ＴＦＡを含有するアセトニトリル（ＡＣＮ）、１５％Ｂの勾配、６０分かけて４５％Ｂへ変化、流速１５ｍｌ／分）を用いて精製した。その後、純粋な生成物を含有する分画を凍結乾燥器上で凍結乾燥した。
【０１４５】
模擬腸液（ＳＩＦ）安定性試験
【０１４６】
模擬腸液（ＳＩＦ）において試験を行って、本発明の二量体分子の胃における安定性を評価した。ＳＩＦは６．８ｇのリン酸二水素カリウムおよび１０．０ｇのパンクレアチンを１．０Ｌの水へ加えて調製した。溶解後、ｐＨをＮａＯＨにより６．８へ調節した。ＤＭＳＯストック（２ｍＭ）を試験化合物のため最初に調製した。ＤＭＳＯ溶液のアリコットを、各々が事前に３７℃まで温められていた０．５ｍＬのＳＩＦを含有する６本の個々の管に入れた。
【０１４７】
最終試験化合物濃度は２０μＭであった。バイアルは卓上Ｔｈｅｒｍｏｍｉｘｅｒ（登録商標）中に試験の間保存した。各時点（０、５、１０、２０、４０、および６０分）で、１％ギ酸を含有する１．０ｍＬのアセトニトリルを１つのバイアルに加えて、反応を終結させた。試料を４℃にて試験が終わるまで貯蔵した。最終時点の後を試料採集し、管を混合し、次いで３，０００ｒｐｍにて１０分間遠心分離した。上澄のアリコットを取り除き、内部標準を含有する蒸留水中に１：１にて希釈し、ＬＣＭＳ／ＭＳにより分析した。各時点における残留率を化合物体内部標準の試験のピーク領域応答比に基づき算出した。０時点を１００％に設定し、後の全時点を０時点に対して算出した。半減期はＧｒａｐｈｐａｄを用いて、一次指数関数的減衰方程式に当てはめて算出した。これらの試験結果の小サンプリングは、上の図３に関連して提供および考察される。
【実施例】
【０１４８】
α４β７−ＭＡｄＣＡＭ競合ＥＬＩＳＡ
【０１４９】
ニッケル被覆プレート（Ｐｉｅｒｃｅ第１５４４２番）を組換えヒトインテグリンα４β７（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ第５３９７−Ａ３０番）によって８００ｎｇ／ウェルにてコーティングし、室温にて振盪しながら１時間インキュベートした。その後、溶液を振盪によって取り除き、試験緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．６、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＭｎＣｌ２、０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０、および０．５％ＢＳＡ）によって２５０ｕｌ／ウェルにて遮断した。次いで、プレートを室温で１時間インキュベートした。各ウェルを洗浄緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．６、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＭｎＣｌ２、０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０）で３回洗浄した。各ウェルへ、２０μＭ以下の濃度で開始する２５ｕｌのペプチドの段階希釈（試験緩衝液中３倍希釈）を加えた。その後、２５ｕｌの組換えヒトＭＡｄＣＡＭ−Ｆｃキメラ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ第６０５６−ＭＣ番）を各ウェルへ２０ｎＭの固定濃度で加えた。最終開始ペプチド濃度は１０μＭであり、最終ＭＡｄＣＡＭ−１濃度は１０ｎＭであった。その後、プレートを室温で１時間インキュベートして、結合平衡に到達した。次いで、ウェルを洗浄緩衝液で３回洗浄した。その後、試験緩衝液中１：２０００で希釈された５０ｕｌのマウス抗ヒトＩｇＧ１−ＨＲＰ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ第Ａ１０６４８番）を各ウェルに加えた。ウェルを室温で震盪視ながら４５分間インキュベートした。その後、ウェルを洗浄緩衝液で３回ン上した。そして、１００ｕｌのＴＭＢを各ウェルへ加え、発生時間の間厳重に観察した。反応を２ＮのＨ２ＳＯ４で停止し、吸光度を４５０ｎｍにて読み取った。
【０１５０】
α４β１−ＶＣＡＭ競合ＥＬＩＳＡ
【０１５１】
Ｎｕｎｃ  ＭａｘｉＳｏｒｐ  ｐｌａｔｅを、ｒｈ  ＶＣＡＭ−１／ＣＤ１０６  Ｆｃキメラ（Ｒ＆Ｄ第８６２−ＶＣ番）によって、４００ｎｇ／ウェルにおいて１ＸＰＢＳ中１ウェルあたり５０ｕｌでコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。溶液を震盪によって取り除き、その後１ウェル毎に１ＸＰＢＳ中２５０ｕｌの１％ＢＳＡで遮断した。次いで、ウェルを室温で震盪しながら１時間インキュベートした。そして、各ウェルを洗浄緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．６、１００ｍＭ  ＮａＣＬ、１ｍＭ  ＭｎＣｌ２、０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０）で１回洗浄した。試験緩衝液（試験緩衝液：５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．６、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＭｎＣｌ２、０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０）中２００μＭ以下の濃度で開始する２５ｕｌのペプチドの段階希釈を各ウェルに加えた。さらに、２５ｕｌのα４β１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ第５６６８−Ａ４番）を２０ｎＭの固定濃度で各ウェルへ加えた。最終ペプチド濃度およびα４β１濃度は、各々１００μＭおよび１０ｎＭであった。その後、プレートを３７℃で２時間インキュベートした。次いで、溶液を震盪により取り除き、各ウェルを洗浄緩衝液で３回洗浄した。その後、４ｕｇ／ｍｌで５０ｕｌの９Ｆ１０抗体（精製マウス抗ヒトＣＤ４９ｄ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｃａｔ第５５５５０２番）を各ウェルに加え、プレートを室温で震盪しながら１時間インキュベートした。溶液を再び震盪によって取り除き、各ウェルを洗浄緩衝液で３回洗浄した。試験緩衝液中１：５０００で希釈された５０ｕｌのペルオキシダーゼ複合ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ  Ｇｏａｔ抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ免疫調査カタログ第１１５−０３５−００３番）を、各ウェルへ加えた。プレートを室温で震盪しながら３０分間インキュベートした。その後、各ウェルを洗浄緩衝液で３回洗浄した。次いで、１００ｕｌのＴＭＢを各ウェルへ加え、発生時間の間減順に監視した。反応を２Ｎ  Ｈ２ＳＯ４で停止し、吸光度を４５０ｎｍにて読み取った。
【０１５２】
実施例３：α４β７−ＭＡｄＣＡＭ細胞接着試験
【０１５３】
ＲＰＭＩ  ８８６６細胞（Ｓｉｇｍａ第９５０４１３１６番）を、１０％血清（ウシ胎仔血清、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ第１６１４０−０７１番）、１ｍＭピルビン酸ナトリウム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ第１１３６０−０７０番）、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ第２５０３０−０８１番）、およびペニシリン−ストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ第１５１４０−１２２番）で補足したＲＰＭＩ  １６４０  ＨＥＰＥＳ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ第２２４００−０８９番）中において、ｍｌ毎に１００ユニットのペニシリンおよび１００μｇのストレプトマイシンにて培養する。細胞を、０．１％ＢＳＡ、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７、および１ｍＭ  ＭｎＣｌ２で補足したＤＭＥＭ培地（ＡＴＣＣ第３０−２００２番）中において２回洗浄する。細胞を捕捉ＤＭＥＭ培地中において４×１０６細胞／ｍｌの密度で再懸濁する。
【０１５４】
Ｎｕｎｃ  ＭａｘｉＳｏｒｐ  ｐｌａｔｅを、ｒｈ  ＭＡｄＣＡＭ−１／Ｆｃ  Ｃｈｉｍｅｒａ（Ｒ＆Ｄ  ６０５６−ＭＣ）によって１ＸＰＢＳ中１ウェルあたり５０ｕｌ中１ウェルあたり２００ｎｇでコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。その後、溶液を震盪によって取り除き、１％ＢＳＡを含有するＰＢＳの１ウェルあたり２５０ｕｌで遮断し、３７℃で１時間インキュベートした。溶液を震盪により取り除いた。ペプチドを１ウェルあたり５０ｕｌ（２倍濃度）の最終量にて段階希釈することで希釈する。各ウェルに５０ｕｌの細胞（細胞２００，０００個）を加え、プレートを３７℃、５％ＣＯ２で３０〜４５分間インキュベートして、細胞を接着する。ウェルを手作業で３回（１回の洗浄毎に１００ｕｌ）、補足ＤＭＥＭによって洗浄する。最後の洗浄後、１００ｕｌ／ウェルの補足ＤＭＥＭおよび１０ｕｌ／ウェルのＭＴＴ試薬（ＡＴＴＣカタログ第３０−１０１０Ｋ番）を加える。プレートを３７℃、５％ＣＯ２で２〜３時間、紫色の沈殿が見えるまでインキュベートする。１００ｕｌのＤｅｔｅｒｇｅｎｔ  Ｒｅａｇｅｎｔ（ＡＴＴＣカタログ第３０−１０１０Ｋ番）を各ウェルに加える。プレートをパラフィルムで包み光から覆い隠して蒸発を防ぎ、暗所に一晩放置する。プレートを５分間震盪し、５７０ｎｍで吸光度を測定する。用量反応を算出するために、細胞を含有しない対照ウェルの吸光値を各試験ウェルから減算する。
【０１５５】
実施例４：α４β１−ＶＣＡＭ細胞接着試験
【０１５６】
Ｊｕｒｋａｔ  Ｅ６．１細胞（Ｓｉｇｍａ第８８０４２８０３番）を、１０％血清（ウシ胎児血清、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ第１６１４０−０７１番）、１ｍＭピルビン酸ナトリウム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ第１１３６０−０７０番）、２ｍＭＬ−グルタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ第２５０３０−０８１番）、およびペニシリン−ストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ第１５１４０−１２２番）で補足したＲＰＭＩ  １６４０  ＨＥＰＥＳ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ第２２４００−０８９番）中において、ｍｌ毎に１００ユニットのペニシリンおよび１００μｇのストレプトマイシンにて培養する。細胞を、０．１％ＢＳＡ、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７、および１ｍＭ  ＭｎＣｌ２で補足したＤＭＥＭ培地（ＡＴＣＣ第３０−２００２番）中で２回洗浄する。細胞を補足ＤＭＥＭ培地中において４×１０６細胞／ｍｌの密度で再懸濁する。
【０１５７】
Ｎｕｎｃ  ＭａｘｉＳｏｒｐ  ｐｌａｔｅをＶＣＡＭ−１／ＣＤ１０６  Ｆｃキメラ（Ｒ＆Ｄ第８６２−ＶＣ番）によって、１ＸＰＢＳ中１ウェルあたり５０ｕｌ中１ウェルあたり４００ｎｇでコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。その後、溶液を震盪によって取り除き、１％ＢＳＡを含有するＰＢＳの１ウェルあたり２５０ｕｌで遮断し、３７℃で１時間インキュベートした。溶液を震盪により取り除いた。ペプチドを１ウェルあたり５０ｕｌ（２倍濃度）の最終量にて段階希釈することで希釈する。各ウェルに５０ｕｌの細胞（細胞２００，０００個）を加え、プレートを３７℃、５％ＣＯ２で３０〜４５分間インキュベートして、細胞を接着する。ウェルを手作業で３回（１回の洗浄毎に１００ｕｌ）、補足ＤＭＥＭによって洗浄する。最後の洗浄後、１００ｕｌ／ウェルの補足ＤＭＥＭおよび１０ｕｌ／ウェルのＭＴＴ試薬（ＡＴＴＣカタログ第３０−１０１０Ｋ番）を加える。プレートを３７℃、５％ＣＯ２で２〜３時間、紫色の沈殿が見えるまでインキュベートする。１００ｕｌのＤｅｔｅｒｇｅｎｔ  Ｒｅａｇｅｎｔ（ＡＴＴＣカタログ第３０−１０１０Ｋ番）を各ウェルに加える。プレートをパラフィルムで包み光から覆い隠して蒸発を防ぎ、暗所に一晩放置する。プレートを５分間震盪し、５７０ｎｍで吸光度を測定する。用量反応を算出するために、細胞を含有しない対照ウェルの吸光値を各試験ウェルから減算する。
【０１５８】
本発明は、本明細書および以下に特許請求されるようなその構造、方法、またはその他必須の特徴から逸脱することなく、他の特定の形態で実施することができる。記載される実施形態は全ての点において例証としてのみ考慮されるものであって、制限的なものではない。本発明の範囲は、したがって、先の記述によってではなく、添付の特許請求の範囲によって示される。本特許請求の範囲と等しい意味および範囲にある全ての変更は、それらの範囲内に包含される。
例えば、本発明は以下の項目を提供する。
（項目１）
式（Ｉ）
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１−Ｘａａ１２−Ｘａａ１３−Ｘａａ１４、またはその薬剤的に許容可能な塩の２個のペプチド単量体サブユニットを含むペプチド二量体化合物であって、式中、
Ｘａａ１は、非存在、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｍｅｔ、Ｔｈｒ、好適なアイソスター、および対応するＤアミノ酸からなる群から選択され；
Ｘａａ２は、非存在、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｍｅｔ、Ｔｈｒ、好適なアイソスター、および対応するＤアミノ酸からなる群から選択され；
Ｘａａ３は、非存在、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｍｅｔ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、好適なアイソスター、および対応するＤアミノ酸からなる群から選択され；
Ｘａａ４は、Ｃｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｐｅｎ、ＨＧｌｕ、ＨＬｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、Ｄａｂ、βＡｓｐ、βＧｌｕ、ＨＧｌｕ、ＨＬｙｓ、好適なアイソスター、および対応するＤアミノ酸からなる群から選択され；
Ｘａａ５は、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｍｅｔ、Ｔｈｒ、ｈＡｒｇ、４−Ｇｕａｎ、Ｐｈｅ（４−ＮＨ２）、Ｃｉｔ、Ｃａｖ、Ｄａｐ、Ｄａｂ、好適なアイソスター、および対応するＤアミノ酸からなる群から選択され；
Ｘａａ６は、Ｓｅｒ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、好適なアイソスター置換、および対応するＤアミノ酸からなる群から選択され；
Ｘａａ７は、Ａｓｐ、および好適なアイソスター置換からなる群から選択され；
Ｘａａ８は、Ｔｈｒ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、好適なアイソスター、および対応するＤアミノ酸からなる群から選択され；
Ｘａａ９は、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、Ｇｌｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、ＨＬｅｕ、ｎ−ブチルＡｌａ、ｎ−ペンチルＡｌａ、ｎ−ヘキシルＡｌａ、Ｎｌｅ、シクロブチル−Ａｌａ、ＨＣｈａ、好適なアイソスター、および対応するＤアミノ酸からなる群から選択され；
Ｘａａ１０は、Ｃｙｓ、Ａｓｐ、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、Ｐｅｎ、ＨＡｓｐ、ＨＧｌｕ、ＨＬｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、Ｄａｂ、ＨＬｙｓ、好適なアイソスター、および対応するＤアミノ酸からなる群から選択され；
Ｘａａ１１は、非存在、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｓａｒ、１−Ｎａｌ、２−Ｎａｌ、ＨＰｈｅ、Ｐｈｅ（４−Ｆ）、ジヒドロ−Ｔｒｐ、Ｄａｐ、Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｄ−Ｏｒｎ、Ｄ−Ｄａｐ、Ｄ−Ｄａｂ、Ｂｉｐ、Ａｌａ（３，３ジフェニル）、ビフェニル−Ａｌａ、Ｄ−Ｐｈｅ、Ｄ−Ｔｒｐ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｄ−Ｇｌｕ、Ｄ−Ｈｉｓ、Ｄ−Ｌｙｓ、３，３−ジＰｈｅ、β−ＨＴｒｐ、Ｆ（４−ＣＦ３）、Ｏ−Ｍｅ−Ｔｙｒ、４−Ｍｅ−Ｐｈｅ、芳香環置換Ｐｈｅ、芳香環置換Ｔｒｐ、芳香環置換Ｈｉｓ、ヘテロ芳香族アミノ酸、Ｎ−Ｍｅ−Ｌｙｓ、Ｎ−Ｍｅ−Ｌｙｓ（Ａｃ）、４−Ｍｅ−Ｐｈｅ、対応するＤアミノ酸；好適なアイソスター；および好適なリンカー部分からなる群から選択され、
Ｘａａ１２は、非存在、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ａｒｇ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｍｅｔ、Ｇｌａ、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｄａｐ、Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｄ−Ｏｒｎ、Ｄ−Ｄａｐ、Ｄ−Ｄａｂ、β−ＨＧｌｕ、２−Ｎａｌ、１−Ｎａｌ、Ｂｉｐ、β−ＨＰｈｅ、βＧｌｕ、好適なアイソスター、好適なリンカー部分、および対応するＤアミノ酸からなる群から選択され；
Ｘａａ１３は、非存在、Ｇｌｎ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｍｅｔ、Ｇｌｕ、Ｇｌａ、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、Ｄａｐ、Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｄ−Ｏｒｎ、Ｄ−Ｄａｐ、Ｄ−Ｄａｂ、非存在、好適なアイソスター、および対応するＤアミノ酸からなる群から選択され；ならびに、
Ｘａａ１４は、非存在、天然アミノ酸、好適なアイソスター、および対応するＤアミノ酸からなる群から選択され、
式中、前記ペプチド二量体化合物はさらに、Ｘａａ４およびＸａａ１０間のジスルフィド結合ならびにラクタム結合の少なくとも１つを含む、ペプチド二量体化合物。
（項目２）
ＤＩＧ、ＤＩＧ−ＯＨ、ＰＥＧ１３、ＰＥＧ２５、ＰＥＧ１Ｋ、ＰＥＧ２Ｋ、ＰＥＧ３．４Ｋ、ＰＥＧ４Ｋ、ＰＥＧ５Ｋ、ＩＤＡ、ＩＤＡ−Ｐａｌｍ、ＩＤＡ−Ｂｏｃ、ＩＤＡ−イソ吉草酸、トリアジン、トリアジン−Ｂｏｃ、イソフタル酸、１，３−フェニレン二酢酸、１，４−フェニレン二酢酸、シクロプロピル酢酸、４−フルオオロ安息香酸（ｆｌｕｏｏｒｏｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄ）、４−フルオロフェニル酢酸、３−フェニルプロピオン酸、コハク酸、ビオチン、グルタル酸、アゼライン酸、ピメリン酸、ドデカン二酸、好適な脂肪族化合物、好適な芳香族化合物、ヘテロ芳香族化合物、およびおよそ４００Ｄａ〜およそ４０，０００Ｄａの分子量を持つポリエチレングリコールからなる群から選択される好適なリンカー部分をさらに含む、項目１に記載のペプチド二量体化合物。
（項目３）
前記各単量体サブユニットのＮ末端を好適なリンカー部分によって結合してＮ末端二量体化合物を得る、項目２に記載のペプチド二量体化合物。
（項目４）
前記各単量体サブユニットのＣ末端を好適なリンカー部分によって結合してＣ末端二量体化合物を得る、項目２に記載のペプチド二量体化合物。
（項目５）
Ｘａａ４およびＸａａ１０間のジスルフィド結合をさらに含む、項目１に記載のペプチド二量体化合物。
（項目６）
Ｘａａ４およびＸａａ１０間のラクタム結合をさらに含む、項目１に記載のペプチド二量体化合物。
（項目７）
Ｘａａ３、Ｘａａ５、Ｘａａ７−Ｘａａ９、およびＸａａ１１−Ｘａａ１３からなる群から選択される１つ以上の位置におけるＮ（α）メチル化をさらに含む、項目１に記載のペプチド二量体化合物。
（項目８）
Ｘａａ１−Ｘａａ３およびＸａａ１１−Ｘａａ１４からなる群から選択される１つ以上の位置におけるアシル化をさらに含む、項目１に記載のペプチド二量体化合物。
（項目９）
Ｘａａ１０が、Ａｓｐ、ＨＡｓｐ、Ｇｌｕ、およびＨＧｌｕ、ＨＬｙｓからなる群から選択される場合、Ｘａａ４が、Ｌｙｓ、Ｄａｐ、Ｄａｂ、ＨＬｙｓ、Ｏｒｎ、およびＨＧｌｕからなる群から選択され、Ｘａａ１０が、Ｌｙｓ、Ｄａｐ、Ｄａｂ、ＨＬｙｓ、Ｏｒｎ、およびＨＧｌｕからなる群から選択される場合、Ｘａａ４が、Ａｓｐ、ＨＡｓｐ、Ｇｌｕ、ＨＧｌｕ、およびＨＬｙｓからなる群から選択される、項目１に記載のペプチド二量体化合物。
（項目１０）
Ｘａａ４およびＸａａ１０間のラクタム結合をさらに含む、項目１に記載のペプチド二量体化合物。
（項目１１）
Ｘａａ４が、Ａｓｐ、ＨＡｓｐ、Ｇｌｕ、ＨＧｌｕ、およびＨＬｙｓからなる群から選択される場合、ならびにＸａａ１０が、Ｌｙｓ、Ｄａｐ、Ｄａｂ、ＨＬｙｓ、Ｏｒｎ、およびＨＧｌｕからなる群から選択される場合、Ｘａａ４およびＸａａ１０がアミド結合を通じて環化される、項目１に記載のペプチド二量体化合物。
（項目１２）
患者における炎症性腸疾患を治療する方法であって、前記患者へ有効量の項目１に記載のペプチド二量体化合物を投与することを含む、方法。
（項目１３）
前記炎症性腸疾患が潰瘍性大腸炎からなる群から選択される、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
前記炎症性腸疾患がＣｒｏｈｎ病である、項目１２に記載の方法。
（項目１５）
前記ペプチド二量体化合物がα４β７のＭＡｄＣＡＭへの結合を阻害する、項目１２に記載の方法。
（項目１６）
炎症性腸疾患に罹患しているヒトを治療する方法であって、前記ヒトへ項目１に記載の組成物に基づく有効量のペプチド二量体を投与するステップを含む、方法。
（項目１７）
前記ペプチド二量体が、初回投与として投与され、続いて１回以上の後続投与をされ、かつあらゆる２回の投与間の最小間隔が１日未満であるステップ、ならびに前記投与の各々が有効量の前記ペプチド二量体を含むステップをさらに含む、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記有効量のペプチド二量体が、ａ）α４β７インテグリン分子におけるＭＡｄＣＡＭ結合部位の約５０％以上の飽和；ｂ）細胞表面におけるα４β７インテグリン発現の約５０％以上の阻害；ならびにｃ）α４β７分子におけるＭＡｄＣＡＭ結合部位の約５０％以上の飽和、および前記細胞におけるα４β７インテグリン発現の約５０％以上の阻害、からなる群から選択されるうち少なくとも１つを達成するのに十分であって、ｉ）前記飽和が１日に２回以下の投与頻度と一致する期間、維持され；ｉｉ）前記阻害が１日に２回以下の投与頻度と一致する期間、維持され；またはｉｉｉ）前記飽和および前記阻害が、１日に２回以下の投与頻度と一致する期間、各々維持される、項目１６に記載の方法。
（項目１９）
前記ペプチド二量体が経口的に投与される、項目１６に記載の方法。
（項目２０）
前記ペプチド二量体が非経口的に投与される、項目１６に記載の方法。
（項目２１）
前記ペプチド二量体が局所的に投与される、項目１６に記載の方法。
（項目２２）
前記ペプチド二量体が、配列番号３９〜１４６からなる群から選択される２つの単量体サブユニットを含む、項目１６に記載の方法。
（項目２３）
前記ペプチド二量体を前記ヒトへ前記炎症性腸疾患を寛解させるのに十分な間隔で投与するステップをさらに含む、項目１６に記載の方法。
（項目２４）
α４β７の生物学的機能と関連する状態に罹ったヒトを治療する方法であって、前記方法は前記ヒトへ項目１に記載の組成物に基づくペプチド二量体を投与することを含む、方法。
（項目２５）
前記ペプチド二量体を前記ヒトへ前記状態を寛解するのに十分な間隔で投与するステップをさらに含む、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
前記間隔が、２４時間、１時間毎、４時間毎、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、隔日、毎週、隔週、および毎月からなる群から選択される、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
項目１に基づくペプチド二量体化合物を安定化する方法であって、前記方法は、ＣｙｓおよびＰｅｎからなる群から選択されるＸａａ４およびＸａａ１０をアミノ酸残基と置換するステップを含み、Ｘａａ４およびＸａａ１０はジスルフィド結合を通じて環化構造を形成する、方法。
（項目２８）
式（ＩＩ）
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０のペプチド二量体化合物、またはその薬剤的に許容可能な塩を安定化する方法であって、式中、前記方法は、少なくとも１つのジスルフィド結合またはラクタム結合を通じて環化構造を形成することができるＸａａ１およびＸａａ７を適合性のアミノ酸残基と置換するステップを含む、方法。
（項目２９）
前記適合性アミノ酸がＣｙｓおよびＰｅｎからなる群から選択され、Ｘａａ１およびＸａａ７がジスルフィド結合を通じて環化構造を形成する、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
Ｘａａ４が、Ｌｙｓ、ＨＬｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、およびＤａｂからなる群から選択される場合、ならびにＸａａ１０が、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ＨＧｌｕ、β−Ａｓｐ、およびβ−Ｇｌｕからなる群から選択される場合、Ｘａａ４およびＸａａ１０がラクタム結合を通じて環化される、項目２８に記載の方法。
（項目３１）
式（Ｉ）および式（ＩＩ）の少なくとも１つに基づくペプチド二量体化合物を含む、医薬組成物。
（項目３２）
腸溶コーティングをさらに含む、項目３１に記載の組成物。
（項目３３）
前記腸溶コーティングが前記医薬組成物を対象の下部胃腸管系内にて保護し、放出する、項目３２に記載の組成物。
（項目３４）
項目３２に記載の医薬組成物を前記対象へ投与することを含む、対象における状態を治療する方法であって、前記状態が前記対象においてα４β７の活性を（部分的にまたは完全に）減少させることで治療可能である、方法。
（項目３５）
前記対象がヒトである、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
前記状態が前記胃腸管系の炎症状態である、項目３４に記載の方法。
（項目３７）
α４β７の生物学的機能と関連する状態に罹ったヒトを治療する方法であって、ＭＡｄＣＡＭを発現する組織に対するα４β７の前記生物学的機能を（部分的にまたは完全に）阻害するのに十分な量で式（Ｉ）のペプチド二量体を個体へ投与することを含む、方法。
（項目３８）
α４β７の生物学的機能と関連する状態に罹ったヒトを治療する方法であって、ＭＡｄＣＡＭを発現する組織に対するα４β７の生物学的機能を少なくとも部分的に阻害するのに十分な有効量で式（Ｉ）のペプチド二量体を前記個体へ投与することを含む、方法。
（項目３９）
前記状態が炎症性腸疾患である、項目３７に記載の方法。
（項目４０）
前記状態が、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎、Ｃｒｏｈｎ病、セリアック病（非熱帯性スプレー）、血清反応陰性関節症に関連する腸疾患、顕微鏡的大腸炎、コラーゲン形成大腸炎、好酸球性胃腸炎、放射線療法または化学療法に関連する大腸炎、白血球粘着不全−１でみられるような自然免疫の障害に関連する大腸炎、慢性肉芽腫症、糖原病１ｂ型、Ｈｅｒｍａｎｓｋｙ−Ｐｕｄｌａｋ症候群、Ｃｈｅｄｉａｋ−Ｈｉｇａｓｈｉ症候群、およびＷｉｓｋｏｔｔ−Ａｌｄｒｉｃｈ症候群、直腸結腸切除および回腸肛門吻合の後に生じる嚢炎、胃腸がん、膵炎、インスリン依存性糖尿病、乳腺炎、胆嚢炎、胆管炎、胆管周囲炎、慢性気管支炎、慢性副鼻腔炎、喘息、ならびに移植片対宿主病からなる群から選択される、項目３７に記載の方法。
（項目４１）
前記ペプチド二量体が、経口、静脈内、腹膜、皮内、皮下、筋肉内、くも膜下腔内、吸入、蒸発、噴霧、舌下、バッカル、非経口、直腸、膣内、および局所からなる群から選択される投与形態によって前記個体へ投与される、項目３７に記載の方法。
（項目４２）
式（Ｉ）および式（ＩＩ）の少なくとも１つに基づくα４β７インテグリン拮抗物質二量体分子によって個人を治療する方法であって、前記α４β７インテグリン拮抗物質二量体分子は半減期の増加を含む、方法。
（項目４３）
前記半減期の増加がインビトロまたはインビボにおいて少なくとも１日である、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
前記半減期の増加が１日２回のインビボ投与と同じぐらいの頻度と一致する期間以上である場合、前記α４β７インテグリン拮抗物質二量体分子が経口投与される医薬品を含む、項目４２に記載の方法。
（項目４５）
前記半減期の増加がインビボでおよそ１２時間〜２４時間以上である場合、前記α４β７インテグリン拮抗物質二量体分子が非経口投与される医薬品を含む、項目４２に記載の方法。
（項目４６）
前記半減期の増加がインビボでおよそ１２時間〜２４時間以上である場合、前記α４β７インテグリン拮抗物質二量体分子が局所投与される医薬品を含む、項目４２に記載の方法。
（項目４７）
Ｎ−Ｍｅ−Ａｒｇを１つ以上の非メチル化アルギニン残基に対して置換するステップを含む、配列番号１〜１４６に基づくペプチド二量体分子のＳＩＦ安定性を増加させる方法。
（項目４８）
Ｐｅｎを１つ以上のシステイン残基に対して置換するステップを含む、配列番号１〜１４６に基づくペプチド二量体分子のＳＩＦ安定性を増加させる方法。
（項目４９）
Ｐｅｎを１つ以上のシステイン残基に対して置換するステップを含む、配列番号１〜１４６に基づくペプチド二量体分子の酸化還元安定性を増加させる方法。
（項目５０）
Ｃ末端またはＮ末端二量体形成を通じて二量体分子を形成することを含む、配列番号１〜１４６に基づくａ４ｂ７に対するペプチド分子の強度を増加させる方法。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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