(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＡＤＫ（Ａｄｅｎｙｌａｔｅ  Ｋｉｎａｓｅ）たんぱく質を有効成分として含み、
上記のＡＤＫたんぱく質は、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）由来であることを特徴とする、
カルバペネム耐性グラム陰性菌に対する抗菌用の組成物。
【請求項２】
上記のＡＤＫたんぱく質は配列番号１で表示されることを特徴とする、請求項１に記載のカルバペネム耐性グラム陰性菌に対する抗菌用の組成物。
【請求項３】
上記のＡＤＫたんぱく質は配列番号２で表示される塩基配列でエンコードされることを特徴とする、請求項１に記載のカルバペネム耐性グラム陰性菌に対する抗菌用の組成物。
【請求項４】
ＡＤＫ（Ａｄｅｎｙｌａｔｅ  Ｋｉｎａｓｅ）たんぱく質を有効成分として含み、
上記のＡＤＫたんぱく質は、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）由来であることを特徴とする、
カルバペネム耐性グラム陰性菌に対する抗菌用の医薬部外品。
【請求項５】
ＡＤＫ（Ａｄｅｎｙｌａｔｅ  Ｋｉｎａｓｅ）たんぱく質を有効成分として含み、
上記のＡＤＫたんぱく質は、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）由来であることを特徴とする、
カルバペネム耐性グラム陰性菌に対する抗菌用の食品添加物。
【請求項６】
ＡＤＫ（Ａｄｅｎｙｌａｔｅ  Ｋｉｎａｓｅ）たんぱく質を有効成分として含み、
上記のＡＤＫたんぱく質は、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）由来であることを特徴とする、
カルバペネム耐性グラム陰性菌に対する抗菌用の飼料添加物。
【請求項７】
ＡＤＫ（Ａｄｅｎｙｌａｔｅ  Ｋｉｎａｓｅ）たんぱく質を有効成分として含み、
上記のＡＤＫたんぱく質は、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）由来であることを特徴とする、
カルバペネム耐性グラム陰性菌により誘発される感染性疾患の予防または治療用の薬学的組成物。
【請求項８】
ＡＤＫ（Ａｄｅｎｙｌａｔｅ  Ｋｉｎａｓｅ）たんぱく質を有効成分として含み、
上記のＡＤＫたんぱく質は、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）由来であることを特徴とする、
カルバペネム耐性グラム陰性菌により誘発される感染性疾患の予防または改善用の食品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）由来のＡＤＫ（Ａｄｅｎｙｌａｔｅ  Ｋｉｎａｓｅ）たんぱく質を有効成分として含むカルバペネム耐性グラム陰性菌に対する抗菌用の組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
抗菌剤とは通常的に抗微生物剤を総称するもので、特に最近に対する抗菌作用をする物質、詳しくは細菌が細胞壁やたんぱく質などを合成するシステムを阻害することによって、優れた抗菌作用をする物質、またはこれらの物質から製造されたものを意味する。抗菌剤の成分は主にカビから抽出されたものが主を成していて、近日は細菌感染による疾病などを治療するために多く使われている。
【０００３】
２０世紀フレミングによるペニシリン抗菌剤の発見をはじめに、細菌の感染によって引き起こされる疾病から逃れるために、数多くの抗菌剤、抗生剤が開発された。このような抗菌剤は、私たちの生活において、不可欠な位置を占めており、医薬品として用いられるのみならず、食品および化粧品の保存剤として用いられるなど、その応用分野が広範囲である。しかし、化学合成の物質を用いた抗菌剤の場合、これに対する耐性を有する細菌が徐々に増加しているのが実情であり、これにより、その使用に徐々に制限されている。
【０００４】
抗菌剤の耐性細菌とは、特定抗菌剤に耐性を見せて、薬効が聞かない細菌をいう。例えば、上記のペニシリンの薬効が全く効かないペニシリン耐性の黄色ブドウ球菌がこれに該当する。これ以外にも、１９６１年最初に学界に報告されており、その後、全世界的に主な病院性感染菌になっているメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（Ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ−Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、ＭＲＳＡ）および１９８８年ヨーロッパで初めに発見されたバンコマイシン耐性腸球菌（ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ、ＶＲＥ）が知られており、１９９０年後半には日本、アメリカ、フランス、韓国に報告されたバンコマイシン耐性黄色ブドウ球菌（ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、ＶＩＳＡ）が報告された。また、人体感染の最も一般的な原因菌である黄色ブドウ球菌の最後の治療薬として知られているバンコマイシンに高度の耐性を示すブドウ球菌（ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、ＶＲＳＡ）が２００２年アメリカ疾病管理予防センター（Ｃｅｎｔｅｒｓ  ｆｏｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌ）で世界初に報告されることによって、いわゆるスーパーバクテリアの拡散の可能性が高まっている。
【０００５】
一方、抗生剤分野で最も重要に認識されているβ−ラクタム系抗生剤には、ペニシリンとして通用されるぺナム（ｐｅｎａｍ）、セファロスポリンとして通用されるセフェム（ｃｅｆｅｍ）、ペネム（ｐｅｎｅｍ）およびカルバペネム（ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ）の構造を有する抗生剤が含まれる。この中、カルバペネム抗生剤にはイミペネム、パニペネム、メロペネム、エルタペネムなどが製品化され用いられている。
【０００６】
それで、本発明者は、新しい抗菌剤を開発するために努力した結果、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）由来のＡＤＫ（Ａｄｅｎｙｌａｔｅ  Ｋｉｎａｓｅ、Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  Ｋｉｎａｓｅ）たんぱく質がカルバペネム耐性グラム陰性菌に対して優れた抗菌活性を見せることを確認することにより、本発明を完成した。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、ＡＤＫたんぱく質を有効成分として含むカルバペネム耐性グラム陰性菌に対する抗菌用の組成物を提供することである。
本発明の他の目的は、ＡＤＫたんぱく質を有効成分として含むカルバペネム耐性グラム陰性菌により誘発される感染性疾患の予防または治療用の組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記の目的を達成するために、本発明は、ＡＤＫたんぱく質を有効成分として含むカルバペネム耐性グラム陰性菌に対する抗菌用の組成物、医薬部外品、食品添加物、または飼料添加物を提供する。
【０００９】
また、本発明は、ＡＤＫたんぱく質を有効成分として含むカルバペネム耐性グラム陰性菌により誘発される感染性疾患の予防または治療用の薬学的組成物または食品組成物を提供する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によるマイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）由来のＡＤＫたんぱく質は、カルバペネム耐性グラム陰性菌に対して優れた抗菌活性を有していて、抗菌用の組成物で様々な分野で有用に活用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、組換えＡＤＫたんぱく質をＳＤＳ−ＰＡＧＥを通して確認した結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明に関してより詳しく説明する。
【００１３】
本発明は、ＡＤＫたんぱく質を有効成分として含むカルバペネム耐性グラム陰性菌に対する抗菌用の組成物を提供する。
【００１４】
本発明において、「抗菌」または「抗菌活性」とは、細菌や真菌のような微生物に対する抵抗する性質を意味し、より詳しくは抗生物質などが細菌の成長または増殖を抑制する特性を意味する。
【００１５】
本発明において、「抗菌用の組成物」は、細菌や真菌のような微生物の生育を阻害する活性を有する組成物として、抗菌効果が要求される様々な分野で用いられるすべての形態が含まれることができ、例えば、医薬品、医薬部外品、食品添加物または飼料添加物などのような形態にすることができる。具体的には、医薬においては、抗生剤や汚染防止剤のような目的に、食品においては防腐や抗菌の目的で、農業においては抗菌、殺菌、消毒の目的で、化粧品や生活用品においてはフケ抑制用、水虫防止用、脇下の体臭抑制用、抗ニキビ用など微生物と直接関連された製品に用いられたり、掃除用の洗剤や食器洗浄用の洗剤などに防腐や抗菌または殺菌の目的で用いることができ、このような目的のためのみに限定されるものではない。
【００１６】
本発明のＡＤＫたんぱく質は、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）から由来したものであり、望ましくは配列番号１で表示されるアミノ酸配列でなることができ、配列番号２で表示される塩基配列に暗号化されることができ、上記のたんぱく質の機能的同等物を含む。上記の「機能的同等物」とはアミノ酸の付加、置換または欠失の結果、上記の配列番号１で表示されるアミノ酸の配列と少なくとも７０％以上、望ましくは８０％以上、より望ましくは９０％以上、よりさらに詳しくは９５％以上の配列の相同性を有するものであり、配列番号１で表示されるアミノ酸配列でなるたんぱく質または配列番号２で表示される塩基配列で暗号化されるたんぱく質と実質的に同質の生理活性を示すたんぱく質を有する。
【００１７】
本発明のＡＤＫたんぱく質にはこれの天然型アミノ酸配列を有するたんぱく質だけでなく、これのアミノ酸配列変異体が、また本発明の範囲に含まれる。ＡＤＫたんぱく質の変異体とは、ＡＤＫ天然アミノ酸配列と一つ以上のアミノ酸残基が欠失、挿入、非保全的または保全的置換またはこれらの組み換えにより相違な配列を有するたんぱく質を意味する。分子の活性を全体的に変形されないたんぱく質およびペプチドでのアミノ酸の交換は当該分野に公知されている。上記のＡＤＫたんぱく質またはこれの変異体は天然から抽出したり合成（Ｍｅｒｒｉｆｌｅｄ，  Ｊ．Ａｍｅｒ．ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９−２１５６，１９６３）またはＤＮＡ配列を基本とする遺伝子組換え方法により製造されることができる（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｕｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＵＳＡ，２版，１９８９）。
【００１８】
本発明のＡＤＫたんぱく質は、配列番号２の塩基配列で暗号化されることができ、上記のヌクレオチドと機能的に同様の作用をすることができる変異体が、本発明の範囲内に含まれる。
【００１９】
本発明において、「グラム陰性菌（ｇｒａｍ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｂａｃｔｅｒｉａ）」はグラム染色法で染色した際に、赤い色で染色される細菌を意味するもので、一般的に色素抵抗力が強く、界面活性剤の耐性が強い。本発明のグラム陰性菌にはエンドトキシン（ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ）を保有するすべての種類のグラム陰性菌が含めれて、例えば、エスケリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ） 属、シュードモナス （Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ） 属、アシネトバクター（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ） 属、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）属、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）属、ナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）属、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）属、シゲラ(Ｓｈｉｇｅｌｌａ）属、モラクセラ（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ）属、ヘリコバクター（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）属、ステノトロホモナス(Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ）属、ブデロビブリオ（Ｂｄｅｌｌｏｖｉｂｒｉｏ）属、レジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）属の菌株などが含まれて、これに制限されない。具体的な、グラム陰性菌には大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、シュードモナス・フルオレッセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、シュードモナス・プチダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｕｔｉｄａ）、シュードモナス・クロロラフィス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｈｌｏｒｏｒａｐｈｉｓ）、シュードモナス・ペルツシノゲナ（Ｐｓｅｕｄｏｍａｎａｓ  ｐｅｒｔｕｃｉｎｏｇｅｎａ）、シュードモナス・スタッツェリ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｔｕｔｚｅｒｉ）、シュードモナス・シリンガエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ）、アシネトバクター-バウマニ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ）、アシネトバクテル・ルウォフィイ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｌｗｏｆｆｉｉ）、アシネトバクター・カルコアセチカス（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｃａｌｃｏａｃｅｔｉｃｕｓ）、アシネトバクター・ヘモリティカス（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）、サルモネラ・エンテリカ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｅｎｔｅｒｉｃａ）、サルモネラ‐ボンゴール（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｂｏｎｇｏｒｉ）、サルモネラ・エンテリティディス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、トリチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｇａｌｌｉｎａｒｕｍ）、雛白痢菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｐｕｌｌｏｒｕｍ）、サルモネラ ムバンダカ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｍｂａｎｄａｋａ）、サルモネラ・コレレスイス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ）、サルモネラ・トンプソン  （Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｈｏｍｐｓｏｎ）、サルモネラ・インファンティス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｉｎｆａｎｔｉｓ）、サルモネラ・ダービー（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｄｅｒｂｙ）、クレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、クレブシエラ・グラヌロマチス（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｉｓ）、クレブシエラ・オキシトカ（Ｋｌｅ��ｓｉｅｌｌａ  ｏｘｙｔｏｃａ）、クレブシエラ‐テリゲナ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｔｅｒｒｉｇｅｎａ）、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、エンテロバクター・アエロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、エンテロバクター・クロアカ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｃｌｏａｃａｅ）、ボイド赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａｂｏｙｄｉｉ）、赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ）、フレキシネル赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａｆｌｅｘｎｅｒｉ）、ゾンネ菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａｓｏｎｎｅｉ）、モラクセラ・カタラーリス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）、モラクセラ・ラクナータ（Ｍｏｒａｘｅｌｌａｌａｃｕｎａｔａ）、モラクセラ・ボービス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａｂｏｖｉｓ）、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ）、ヘリコバクター・ハイルマニ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｈｅｉｌｍａｎｎｉｉ）、ヘリコバクター・フェリス（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｆｅｌｉｓ）、ヘリコバクター・ムステラエ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｍｕｓｔｅｌａｅ）、ヘリコバクター・フェネリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｆｅｎｎｅｌｌｉａｅ）、ヘリコバクター・ラッピニ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｒａｐｐｉｎｉ）、ヘリコバクター・ヘパティカス（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｈｅｐａｔｉｃｕｓ）、へリコパクター・ビリス（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｂｉｌｉｓ）、ヘリコバクター・プローラム（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｕｌｌｏｒｕｍ）、ステノトロホモナス・マルトフィリア（Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ）、ステノトロホモナス・ニトリティレデュセンス（Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓｎｉｔｒｉｔｉｒｅｄｕｃｅｎｓ）、ブデロビブリオ‐バクテリオヴォルス（Ｂｄｅｌｌｏｖｉｂｒｉｏｂａｃｔｅｒｉｏｖｏｒｕｓ）、レジオネラ・ニューモフィラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）、レジオネラ・アニーサ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａａｎｉｓａ）、レジオネラ・バーミンガメンシス（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａｂｉｒｍｉｎｇｈａｍｅｎｓｉｓ）、レジュネラ・ボゼマニー（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａｂｏｚｅｍａｎｉｉ）、レジオネラ・シンシナティエンシス（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａｃｉｎｃｉｎｎａｔｉｅｎｓｉｓ）、レジオネラ・デュモフィイ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａｄｕｍｏｆｆｉｉ）、レジオネラ・フィーレイイ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａｆｅｅｌｅｉｉ）、レジオネラ・ゴルマニイ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａｇｏｒｍａｎｉｉ）、レジオネラ・ハッケリアエ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａｈａｃｋｅｌｉａｅ）、レジオネラ・イスラエレンシス（Ｌｅｇｉｏｎａｌｌａｉｓｒａｅｌｅｎｓｉｓ）、レジオネラ・ジョルダニス（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａｊｏｒｄａｎｉｓ）、レジオネラ・ランシンゲンシス（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａｌａｎｓｉｎｇｅｎｓｉｓ）、レジオネラ・ロングビーチアエ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａｌｏｎｇｂｅａｃｈａｅ）、レジオネラ・マセアケルニイ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａｍａｃｅａｃｈｅｒｎｉｉ）、レジオネラ・ミクダーディ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａｍｉｃｄａｄｅｉ）、レジオネラ・オークリジェンシス（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａｏａｋｒｉｄｇｅｎｓｉｓ）、レジオネラ・セントヘレンシ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａｓａｉｎｔｈｅｌｅｎｓｉ）、レジオネラ・ツクソネンシス（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａｔｕｃｓｏｎｅｎｓｉｓ）、レジオネラ・ワズワーシイ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａｗａｄｓｗｏｒｔｈｉｉ）などが含まれて、これに制限されない。
【００２０】
本発明において、「カルバペネム（ｃａｒｂａｐｅｎｅｍ）」はβ−ラクタム系抗生剤の一種であり、下記の化学式１のような構造を有している。
［化学式１］
0006475865.tif 000002
上記の化学式１で、Ｒ１およびＲ２は独立的にＨ，Ｃ１−Ｃ１０のアルキル、またはヒドロキシル基で置換されたＣ１−Ｃ１０のアルキルであり、
Ｒ３はＨ、−Ｏ−Ｒ４または−Ｓ−Ｒ４であり、
ここで、Ｒ４はＮ−置換またはＣ−置換されたアミンまたはピロリジンである。
【００２１】
例えば、カルバペネム抗生剤にはイミペネム（ｉｍｉｐｅｎｅｍ）、メロペネム（ｍｅｒｏｐｅｎｅｍ）、エルタペネム（ｅｒｔａｐｅｎｅｍ）、ドリペネム（ｄｏｒｉｐｅｎｅｍ）、パニペネム／ベタミプロン（ｐａｎｉｐｅｎｅｍ／ｂｅｔａｍｉｐｒｏｎ）、ビアペネム（ｂｉａｐｅｎｅｍ）、ラズペネム（ｒａｚｕｐｅｎｅｍ）、テビペネム（ｔｅｂｉｐｅｎｅｍ）、レナペネム（ｌｅｎａｐｅｎｅｍ）、トモペネム（ｔｏｍｏｐｅｎｅｍ）などが含まれて、これに制限されない。
【００２２】
代表的なカルバペネム抗生剤であるイミペネム、パニペネム、メロペネム、エルタペネムおよびドリペネムの構造を下記の化学式２ないし６にそれぞれ示した。
［化学式２］
0006475865.tif 000003
［化学式３］
0006475865.tif 000004
［化学式４］
0006475865.tif 000005
［化学式５］
0006475865.tif 000006
［化学式６］
0006475865.tif 000007
【００２３】
本発明によるマイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）由来のＡＤＫたんぱく質は、カルバペネム耐性グラム陰性菌に対する優れた抗菌活性を有していて、抗菌用の組成物として様々な分野で、すなわち、医薬部外品、食品添加物、または飼料添加物などで、有用に用いることができる。
【００２４】
したがって、本発明は、ＡＤＫタンパク質を有効成分として含むカルバペネム耐性グラム陰性菌に対する抗菌用の医薬部外品、抗菌用の食品添加物、または抗菌用の飼料添加物を提供する。
【００２５】
またの他の様態として、本発明はＡＤＫタンパク質を有効成分として含むカルバペネム耐性グラム陰性菌により誘発される感染性疾患の予防または治療用の組成物を提供する。
【００２６】
上記の組成物は薬学的組成物または食品組成物を含む。
【００２７】
また、本発明は、個体にＡＤＫタンパク質を投与するステップを含む、カルバペネム耐性グラム陰性菌により誘発される感染性置換の予防または治療方法を提供する。
【００２８】
本発明のＡＤＫタンパク質は、カルバペネム耐性グラム陰性菌に対して選択的に優れた抗菌活性を示すので、これを含む組成物はカルバペネム耐性グラム陰性菌により発生する感染性疾患の予防または治療に有用に用いることができる。
【００２９】
本発明において、「感染性疾患」はウイルス、細菌、真菌、寄生虫のような疾病を起こす病院体が動物やヒトに伝播、侵入して起こす疾患を意味し、本発明の目的上カルバペネム耐性グラム陰性菌により誘発されるすべての感染性疾患を意味する。例えば、本発明の感染性疾患にはカルバペネム耐性グラム陰性菌により誘発される呼吸器疾患、消化器疾患、炎症性疾患などが含まれ、具体的には肺炎、腹膜炎、脳膜炎、創傷感染症、骨関節炎、胆嚢炎、尿路感染症、脳髄膜炎、心内膜炎、心筋炎、心外膜炎、関節炎、咽喉炎、淋病、細菌性赤痢、腸炎、結膜炎、胃炎、中耳炎、膀胱炎、リンパ管炎、敗血症などが含まれるが、これらに限定されない。
【００３０】
本発明において、「予防」は上記の組成物の投与により感染性疾患を抑制したり発病を遅延させるすべての行為を意味し、「治療」は上記の組成物の投与により感染性疾患により症状が好転されたり利するように変更されるすべての行為を意味する。
【００３１】
本発明の薬学的組成物は、通常的に用いる適切な担体、賦形剤、または希釈剤をさらに含むことができる。本発明の薬学的組成物に含まれることができる担体、賦形剤または希釈剤としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、澱粉、アカシアゴム、アルギン酸塩、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、オキシ安息香酸メチル、オキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウム、および鉱物油などがあり、これらに限定されない。
【００３２】
本発明の薬学的組成物は、通常の方法により経口または非経口の剤形で投与されることができ、製剤化する場合には、通常、用いられる充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩解剤、界面活性剤などの希釈剤または賦形剤を用いて調製される。経口投与のための固形製剤には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などが含まれており、これらの固形製剤は、上記の組成物に少なくとも一つ以上の賦形剤、例えば、澱粉、炭酸カルシウム（ｃａｌｃｉｕｍ  ｃａｒｂｏｎａｔｅ）、スクロース、ラクトース、ゼラチンなどを混ぜて調剤される。また、単純な賦形剤以外にステアリン酸マグネシウム、タルクのような潤滑剤も用いられる。経口投与のための液状製剤としては、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤などが該当するが、よく用いられる単純希釈剤である水、リキッドパラフィン以外に様々な賦形剤、例えば、湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などが含まれることができる。非経口投与のための製剤には、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤、坐剤が含まれる。上記の非水性溶剤、懸濁剤としては、プロピレングリコール（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物油、オレイン酸エチルのような注射可能なエステルなどを用いることができる。坐剤の基剤としては、ウィテップゾール（ｗｉｔｅｐｓｏｌ）、マクロゴール、ツイン（ｔｗｅｅｎ）６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチンなどを用いることができる。
【００３３】
本発明において、「投与」は、任意の適切な方法で、個体に所定の本発明の薬学的組成物を提供することを意味する。
【００３４】
本発明の薬学的組成物の好ましい投与量は、個体の状態および体重、疾患の程度、薬物の形態、投与の経路及び期間によって異なるが、当業者によって適切に選ぶことができる。望ましい効果のために、本発明の薬学的組成物は、１日０．００１〜１０００ｍｇ/ｋｇで投与することができる。投与は、一日に一度投与することもでき、数回に分けて投与することもできる。上記の投与量は、どのような面であれ、本発明の範囲を限定するものではない。
【００３５】
本発明の薬学的組成物は、個体に様々な経路で投与することができる。投与のすべての方式は予想されることができるが、例えば、経口、直腸または静脈、筋肉、皮下、子宮内硬膜または脳血管内の注射によって投与することができる。しかし、経口投与の際に、タンパク質は、消化されるので、経口用の組成物は、活性薬剤をコーティングしたり、胃での分解から保護されるように剤形化することが望ましい。本発明の組成物は、好ましくは、注射剤の形態で投与することができる。
【００３６】
本発明による薬学的組成物は、ＡＤＫタンパク質以外に、抗菌活性を有する公知の物質を一つ以上さらに含むことができる。
【００３７】
本発明では、食品組成物は、好ましくは、健康機能食品の形態であることができる。
【００３８】
本発明において、「健康機能食品」とは、食品に物理的、生化学的、生物工学的な手法などを用いて、当該食品の機能を特定の目的に働きかけ、発現するように付加価値を付与した食品群や食品組成が有する生体防御リズムの調節、病気の防止と回復等に関する体内調節機能を生体に対して十分に発現するように設計して加工した食品を意味する。
【００３９】
上記の健康機能食品には、食品学的に許容可能な食品補助添加剤を含むことができ、健康機能食品の製造で通常に用いられる適切な担体、賦形剤、および希釈剤をさらに含むことができる。
【００４０】
本発明の食品組成物を食品添加物として用いる場合、上記の組成物をそのまま添加したり他の食品または食品成分と一緒に用いることができ、通常の方法に応じて適切に用いることができる。有効成分の混合量は使用の目的（予防、健康または治療的な処置）により適切に決定することができる。一般的に、食品または飲料の製造の際に、本発明の組成物は、原料に対して１５重量％以下、好ましくは１０重量％以下の量で添加される。しかし、健康及び衛生を目的にしたりまたは健康調節を目的にする長期間の摂取の場合には、上記の範囲以下であることができ、安全性の面で問題がないので、有効成分は、上記の範囲以上の量でも用いることができる。
【００４１】
上記以外に、本発明の食品組成物は、様々な栄養剤、ビタミン、電解質、風味剤、着色剤、エフェクト酸およびその塩、アルギン酸及びその塩、有機酸、保護性コロイド増粘剤、ｐＨ調整剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料に用いられる炭酸化剤などを含むことができる。それ以外に、本発明の食品組成物は、天然フルーツジュース、フルーツジュース飲料、野菜飲料の製造のための果肉を含むことができる。これらの成分は、独立的に、または組み合わせて用いることができる。このような添加剤の割合は、それほど重要ではないが、本発明の組成物１００重量部あたり０．０１〜０．１重量部の範囲で選ばれるのが一般的である。
【００４２】
以下、本発明の理解を助けるための望ましい実施例を提示する。しかし、下記の実施例は本発明をより分かりやすくするために提供されるものに過ぎなく、実施例により本発明の内容が限定されるものではない。
【００４３】
実施例１．組換えＡＤＫ（Ｒｖ０７３３）のクローニング
マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）Ｈ３７ＲｖのゲノムＤＮＡ（ＡＴＣＣ２７２９４）を鋳型で用いて、ＰＣＲを通して、ＡＤＫ（Ｒｖ０７３３）の部位を増幅した（プライマー：５’−ＣＡＴＡＴＧＡＧＡＧＴＴＴＴＧＴＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＧＣ−３’（配列番号３）および５’−ＡＡＧＣＴＴＣＴＴＴＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＧＣＡＡＣＧ−３’（配列番号４））。分離されたＰＣＲ産物をＮｄｅＩおよびＨｉｎｄＩＩＩ酵素で切断して、発現ベクターであるｐＥＴ２２ｂベクターを挿入した。ＡＤＫ遺伝子が挿入されたｐＥＴ２２ｂベクターで形質転換させたＥ．ｃｏｌｉ  ＢＬ２１をＬＢ培地で（１００μｇ／ｍｌアンピシリンを含む）３７℃で１２時間培養した。その後、１ｍＭのイソプロピル-D-チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）を添加した後６時間培養して、溶解緩衝液（ｌｙｓｉｓ  ｂｕｆｆｅｒ、１Ｍ  ＤＴＴ、リゾチーム、ＰＭＳＦを含む）で細胞を溶かした。組換えタンパク質はニッケル−ニトリロ三酢酸（Ｎｉ−ＮＴＡ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ，ＵＳＡ）アガロースを用いて製造社の方法に準じて精製した。最終的に精製した組換えタンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥで解析して確認した。その結果を図１に示した。
【００４４】
実施例２．カルバペネム耐性グラム陰性菌の確認
高麗大学校の感染内科の患者の血液からアシネトバクター・バウマニＫＵＭＣ．２０１４．９０およびＫＵＭＣ．２０１４．９１菌株を分離した。上記の菌株の抗生剤の耐性を確認するために、１次的に自動化機器であるＶＩＴＥＫＩＩシステムを用い、その結果カルバペネム系列抗生剤であるイミペネム、メロペネム、エルタペネムなどに対してすべての耐性を有していることを確認した（結果値Ｒ＞３２を確認）。２次的に、液体培地微量希釈法を通して上記の菌株のカルバペネム系列抗生剤であるイミペネムおよびメロペネムに対する耐性を再確認した（結果値１２８μｇ／ｍｌ超過を確認）。
【００４５】
実験例１．ＡＤＫたんぱく質のカルバペネム耐性グラム陰性菌に対する抗菌活性の検証
実施例１で収得した組換えタンパク質ＡＤＫタンパク質の上記の実施例２で収得したカルバペネム耐性アシネトバクター・バウマニ（ＫＵＭＣ．２０１４．９０およびＫＵＭＣ．２０１４．９１菌株）に対する抗菌活性を検証するために、従来の公知された方法によりＲｅｚａｚｕｒｉｎ  ａｓｓａｙを行って、カルバペネム耐性アシネトバクター・バウマニ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ）菌株に対する最小発育阻止濃度（ｍｉｎｉｍｕｍ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ、ＭＩＣ）および最小殺菌濃度（ｍｉｎｉｍｕｍ  ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ、ＭＢＣ）を測定した。対照群としては正常菌株であるアシネトバクター・バウマニ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ）を用いた。実験結果を下記の表１に示した。
【００４６】
【表１】
0006475865.tif 000008
【００４７】
表１に示すように、抗生剤およびＡＤＫタンパク質を処理していないウェルでの結果値を１００％にして５０％および８０％の抑制濃度を計算した結果、抗生剤（Ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ、Ｒｕｋａｓｙｎ、Ｃｒａｖｉｔ、Ｐｒｅｐｅｎｅｍ）は正常菌株であるアシネトバクター・バウマニの正常は阻害するが、カルバペネム耐性アシネトバクター・バウマニ（ＫＵＭＣ．２０１４．９０およびＫＵＭＣ．２０１４．９１菌株）の正常を阻害することができないことを確認した。一方、ＡＤＫタンパク質は正常菌株であるアシネトバクター・バウマニのみならず二つの種類のカルバペネム耐性アシネトバクター・バウマニ（ＫＵＭＣ．２０１４．９０およびＫＵＭＣ．２０１４．９１菌株）の成長を著しく阻害することを確認した。
【００４８】
以上の実験の結果を通して、本発明によるマイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）由来のＡＤＫタンパク質は、カルバペネム耐性グラム陰性菌に対する優れた抗菌活性を有していることを確認した。
【００４９】
以下、本発明の薬学的組成物および食品組成物の製剤例を説明するが、これは本発明を限定しようとするではなく、単に具体的に説明しようとするのである。
【００５０】
製剤例１．薬学的組成物の製造
１−１．散剤の製造
ＡＤＫたんぱく質  ２ｇ
乳糖  １ｇ
上記の成分を混合して、気密布に充填して、散剤を製造した。
１−２．錠剤の製造
ＡＤＫたんぱく質  １００ｍｇ
トウモロコシ澱粉  １００ｍｇ
乳糖  １００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム  ２ｍｇ
上記の成分を混合した後、通常の錠剤の製造方法に従い打錠して、錠剤を製造した。
１−３．カプセル剤の製造
ＡＤＫたんぱく質  １００ｍｇ
トウモロコシ澱粉  １００ｍｇ
乳糖  １００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム  ２ｍｇ
上記の成分を混合した後、通常のカプセル剤の製造方法に従って、ゼラチンカプセルに充填してカプセル剤を製造した。
【００５１】
製剤例２．食品組成物の製造
２−１．健康食品の製造
ＡＤＫたんぱく質  １００ｍｇ
ビタミン混合物  適量
ビタミンＡ  アセテート  ７０ｇ
ビタミンＥ  １．０ｍｇ
ビタミンＢ１  ０．１３ｍｇ
ビタミンＢ２  ０．１５ｍｇ
ビタミンＢ６  ０．５ｍｇ
ビタミンＢ１２  ０．２ｇ
ビタミンＣ  １０ｍｇ
ビオチン  １０ｇ
ニコチン酸さんアミド  １．７ｍｇ
葉酸  ５０ｇ
パントテン酸カルシウム  ０．５ｍｇ
無機質混合物  適量
硫酸第一鉄  １．７５ｍｇ
酸化亜鉛  ０．８２ｍｇ
炭酸マグネシウム  ２５．３ｍｇ
第１リン酸カリウム  １５ｍｇ
第２リン酸カリウム  ５５ｍｇ
クエン酸カリウム  ９０ｍｇ
炭酸カルシウム  １００ｍｇ
塩化マグネシウム  ２４．８ｍｇ
【００５２】
上記のビタミンおよびミネラル混合物の組成比は、比較的健康食品に適合な成分を望ましい実施例で混合組成したが、その配合比を任意に変形実施してもよいし、通常の健康食品の製造方法により、上記の成分を混合した後、顆粒を製造して、通常の方法によって健康食品組成物の製造に用いることができる。
【図１】
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【配列表】
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