(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
前糖尿病、循環器疾患及び2型糖尿病から選択されるメタボリックシンドローム関連疾患について無症候であり、3〜10 mg/lのCRPレベルを有する被験者における、同時の：
a）糖化ヘモグロビンHbAlcのレベルの減少；
b）細胞レベルの低度な炎症の減少又は予防；及び
c）アディポネクチンのレベルの増加
による、前記メタボリックシンドローム関連疾患の予防のための、Lactobacillus fermentum ME-3 DSM 14241株を、単独で又はアジュバント成分として含む組成物。
【請求項２】
細胞レベルの炎症の減少又は不存在が、炎症性マーカーのIL-6を用いて測定される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記組成物が、食品製品、食品サプリメント、又は医薬組成物である、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
食品製品が、メディカルフード製品又は機能性食品製品である、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
食品製品が、乳、ヨーグルト、チーズ、ケフィア（kefir）、若しくは乳若しくはホエーベースの発酵乳製品等の乳製品、又はチョコレート製品である、請求項３又は４に記載の組成物。
【請求項６】
抗炎症組成物、一以上のビタミン、及び／又はモナコリンK等の他の活性化合物の前に、同時に、又は後に前記組成物が投与される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記組成物が、さらに一以上のビタミン及び／又はモナコリンKを含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記組成物が、Lactobacillum fermentum ME-3 DSM 14241株を、カプセル化形態で、凍結乾燥形態で、被覆形態で、カプセルに、錠剤に又は粉末に含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記組成物が、106〜1011 CFUのLactobacillum fermentum ME-3 DSM 14241株を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬及び栄養、特に、循環器疾患、脳卒中、及びメタボリックシンドローム等の炎症性疾患の、例えばアジュバント成分としての、予防、症状の緩和、治療及び／又は、アジュバント治療の提供の分野に属する。本発明は、炎症性疾患の予防、症状の緩和、治療及び／又はアジュバント治療の提供における使用のための、炎症性疾患Lactobacillus fermentum（ラクトバチルス・ファーメンタム）ME-3を含む組成物、並びにLactobacillus fermentum ME-3を含む組成物を用いる炎症性疾患の予防、症状の緩和、治療及び／又はアジュバント治療の提供方法に関する。好適なかかる疾患は、（好ましくは前糖尿病、糖尿病、循環器疾患から選択される）メタボリックシンドローム関連状況である。Lactobacillus fermentum ME-3を含む組成物のこの効果は、糖化ヘモグロビン（HbA1c）のレベルの低減、アディポネクチンのレベルの増加、及び／又は低度な細胞炎症のレベルの減少（高感度なC反応性タンパク質及びインターロイキン6のレベルの低減、及びインターロイキン10のレベルの増加）によって達成され得る。
【背景技術】
【０００２】
プロバイオティック生物は、宿主生物に有益な生きた微生物である。プロバイオティック細菌の多くの種及び株が本分野で知られている。乳酸菌（LAB）及びビフィズス菌は、プロバイオティクスとして用いられる微生物の最も一般的なタイプであるが、幾つかの酵母及び桿菌もまた用いられ得る。プロバイオティクスは、一般に、活性な生きた培養物を特別に添加した、ヨーグルト、ダイズヨーグルト等の発酵食品の一部として、又は食品サプリメントして消費される。
【０００３】
Lactobacillus fermentum ME-3  DSM 14241株は、これまでに、抗酸化プロバイオティクスとして記載されている（特許文献１）。プロバイオティック細菌の多くの他の種及び株が本分野において知られている。しかしながら、異なるプロバイオティック細菌の効果を同じ臨床設定で比較した研究は少ない。in vivoでプロバイオティック細菌は、被験者において臨床的に意義のある変化を誘導する能力において異なる。幾つかの効果は、株特異的である。健常な成人において血清hsCRPレベルの低下として反映される弱い抗炎症効果を有し得る幾つかの細菌が、開示されている（非特許文献１）。一般に、任意のプロバイオティック細菌について述べられる健康強調表示（health claims）について、予備的証拠のみが存在する（非特許文献２）。現在市販されているわずかな株が、基礎及び臨床研究において、健康強調表示状態の適用を、食品医薬品局（Food and Drug Administration）及び欧州食品安全機関（European Food Safety Authority）等の規制当局に保障するのに十分に開発されている。
【０００４】
したがって、臨床設定において、炎症性疾患の、例えばアジュバント成分としての、予防、症状の緩和、治療及び、アジュバント治療の提供のために用いられ得るプロバイオティック細菌の新規な株を同定する差し迫った必要性が未だ存在する。好適なかかる疾患は、（好ましくは前糖尿病、糖尿病、循環器疾患から選択される）メタボリックシンドローム関連状況である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】欧州特許第1401457号明細書
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Kekkonen et al., World J Gastroenterol. 2008;14(13):2029-36
【非特許文献２】Mikelsaar & Zilmer (2009) Microbial Ecology in Health and Disease, 21: 1-27
【発明の概要】
【０００７】
本発明者は、他のLactobacillus sp.とは異なり（Mikelsaar & Zilmer (2009) Microbial Ecology in Health and Disease, 21: 1-27）、Lactobacillus fermentum ME-3が、糖化ヘモグロビン HbA1c、高感度C反応性タンパク質（hsCRP）及びIL-6等の炎症性マーカーの重要な阻害剤であり、抗炎症性及び抗糖尿病ペプチドのアディポネクチンの生産を刺激することもできることを見出した。したがって、プロバイオティック株であるLactobacillus fermentum ME-3が作用する根底にあるメカニズムを同定する結果として、本発明者は、それが、炎症性疾患、特に（好ましくは前糖尿病、糖尿病、循環器疾患から選択される）メタボリックシンドローム関連状況の、例えばアジュバント成分としての予防、症状の緩和、治療に用いられ得、及び／又はアジュバント治療として用いられ得ることを見出した。これは、Lactobacillus fermentum ME-3が以前に抗菌及び抗酸化プロバイオティクスとして報告されていたので（EP1401457及びMikelsaar & Zilmer (2009) Microbial Ecology in Health and Disease, 21: 1-27）、特に驚くべきことである。
【０００８】
したがって、本発明は、炎症性疾患及び特にメタボリックシンドローム関連状況の、例えばアジュバント成分としての、予防、症状の緩和、治療及び／又は、アジュバント治療の提供における使用のための、Lactobacillus fermentum ME-3、特に、Deutsche Sammlung fur Mikroorganismen and Zelkulturen GmbH-sに2001年4月19日に寄託されたLactobacillus fermentum ME-3  DSM 14241株を含む組成物を提供する。本発明は、被験者にLactobacillum fermentum ME-3  DSM 14241株を含む有効量の組成物を投与することを含む、被験者における炎症性疾患、及び特にメタボリックシンドローム関連状況の、例えばアジュバント成分としての、予防、症状の緩和、治療及び／又は、アジュバント治療の提供方法もまた提供する。本発明はさらに、例えば、炎症性疾患、及び特にメタボリックシンドローム関連状況の予防、症状の緩和、治療及び／又は、例えばアジュバント治療のための医薬及び／又はアジュバント医薬の製造におけるLactobacillum fermentum ME-3  DSM 14241株の使用を提供する。
【０００９】
その作用メカニズムのために、Lactobacillus fermentum ME-3は、循環器疾患（CVD）、2型糖尿病又はメタボリックシンドローム等の炎症性疾患を発症するリスクのある、低度な炎症を有する被験者をはじめとする無症候の被験者；及び脳卒中を患っている患者等の特定の被験者亜集団において特に有用である。本発明者は、Lactobacillus fermentum ME-3が、一以上のビタミン及び／又はモナコリンKと組み合わせて用いた場合にもまた特に有益であることもまた見出した。
【００１０】
したがって本発明は、被験者における、
a）糖化ヘモグロビンHbAlcのレベルの減少；
b）細胞レベルの低度な炎症の減少又は予防；及び
c）アディポネクチンのレベルの増加
の一以上によって、炎症性疾患、及び特にメタボリックシンドローム関連状況の（例えばアジュバント成分としての）予防、症状の緩和、治療及び／又は、アジュバント治療の提供における使用のためのLactobacillus fermentum ME-3を含む組成物を提供する。
【００１１】
本発明は、Lactobacillum fermentum ME-3  DSM 14241株を含む有効量の組成物を被験者に投与することを含む、
a）糖化ヘモグロビンHbAlcのレベルの減少；
b）細胞レベルの低度な炎症の減少又は予防；及び
c）アディポネクチンのレベルの増加
の一以上によって、被験者における炎症性疾患、及び特にメタボリックシンドローム関連状況の（例えばアジュバント成分としての）予防、症状の緩和、治療及び／又は、アジュバント治療の提供方法もまた提供する。
【００１２】
本発明は、被験者における、
a）糖化ヘモグロビンHbAlcのレベルの減少；
b）細胞レベルの低度な炎症の減少又は予防；及び
c）アディポネクチンのレベルの増加
の一以上によって、炎症性疾患、及び特にメタボリックシンドローム関連状況の（例えばアジュバント成分としての）予防、症状の緩和、治療及び／又は、アジュバント治療のための医薬及び／又はアジュバント医薬の製造における使用のためのLactobacillum fermentum ME-3  DSM 14241株もまた提供する。
【００１３】
全ての場合において、Lactobacillus fermentum ME-3  DSM 14241株による治療の結果として、
a）糖化ヘモグロビンHbAlcのレベルの減少；
b）細胞レベルの低度な炎症の減少又は予防；及び
c）アディポネクチンのレベルの増加
の好ましくは少なくとも二つ、好ましくは全てが生じる。好ましくは、これらは同時に生じる。
【００１４】
例えば、Lactobacillus fermentum ME-3  DSM 14241株による治療は、糖化ヘモグロビンHbAlcのレベルの減少及び細胞レベルの低度な炎症の減少又は予防；糖化ヘモグロビンHbAlcのレベルの減少及びアディポネクチンのレベルの増加；又は細胞レベルの低度な炎症の減少又は予防及びアディポネクチンのレベルの増加をもたらし得る。好ましくは、これらは同時に生じる。
【００１５】
糖化ヘモグロビン HbA1c
炎症、慢性的な低度炎症及び非特異的ヘモグロビン（Hb）糖化は、前糖尿病、糖尿病及び循環器疾患の最も重要なリスク要因の幾つかである。一般に、健常な被験者で見られる参照範囲は約20〜40 mmol/mol（4%〜5.9% 糖化ヘモグロビン）である（「ヘモグロビンA1c試験」、MedicineNet.com）。約48 mmol/mol（又は≧6.5% 糖化ヘモグロビン）と同等又はそれ以上の糖化ヘモグロビンのレベルとして定義され得る（Kekkonen RA, et al. World J Gastroenterol. 2008;14(13):2029-36）異常なHb糖化は、加齢の生理学及び特に2型糖尿病の病態生理学と関連する。したがって、あらゆる異常なヘモグロビン糖化、すなわち約40 mmol/mol（又は≧5.9% ヘモグロビン）を超える糖化は、CVDの発症を高め得る。
【００１６】
ガイドライン（ADA Diabetes Care, 2011等）によれば、糖尿病を有さない人々にとって、HbAlcの通常の範囲は4%〜5.6%で、5.7%〜6.4%のHbA1cレベル（前糖尿病状態）は2型糖尿病の増加したリスクを示し、6.5%以上のレベルは糖尿病を示す。例えば、5.5〜6.0%のHbA1c範囲内の人々は、12〜25%に及ぶ糖尿病の5年累積発生率を有する（ADA Diabetes Care, 2011）。したがって、HbA1cのレベルのいかなる低下も、前糖尿病及び糖尿病の予防、緩和及び治療のための主要な標的として認められる。
【００１７】
標的集団において、糖化ヘモグロビンのレベルは約40 mmol/molと同等又はそれ以上、例えば約48、50、53、55、60又は65 mmol/molと同等又はそれ以上である。これは、約5.9%、6.5%、7.0%、7.2%、7.6%又は8.1% 糖化ヘモグロビンとしても表され得る。代替的に定義される標的集団は、前糖尿病状態（ADA Diabetes Care, 2011）の指標となるlevelsレベル、すなわち5.7%〜6.4%のHbAlcレベル、又は糖尿病（ADA Diabetes Care, 2011）を示すレベル、すなわち6.5%以上のHbAlcレベルを有し得る。
【００１８】
非特異的ヘモグロビン（Hb）糖化のレベル（糖化ヘモグロビン HbA1cのレベルのレベル）は、本明細書に記載される通りに、又は本分野で知られる任意の方法によって測定され得る。例えば、非特異的ヘモグロビン（Hb）糖化のレベル（糖化ヘモグロビン HbA1cのレベルのレベル）は、参考文献（Pitsavos et al., Rev Diabet Stud. 2007; 4(2):98-104及びFesta & Haffner. Circulation. 2005; 17;111 (19):2414-5）に記載される通りに測定され得る。
【００１９】
アディポネクチン
アディポネクチンは、もっぱら脂肪細胞によって生産されるアディポカインポリペプチドホルモンである。アディポカインの中で、アディポネクチンは最も豊富である。
アディポネクチンは、グルコース制御及び脂肪酸酸化をはじめとする多くの代謝過程を調節し、健常な個体において、典型的に血中に約5〜21 ng/mlで存在する。アディポネクチンのレベルは、標的被験者集団において低減され、典型的に約10-20 ng/ml未満、又は約20 ng/ml、15 ng/ml、10 ng/ml、8 ng/ml、5ng/ml未満又はさらにそれより低い。
【００２０】
アディポネクチンレベルは、本明細書に記載される通りに、又は本分野で知られる任意の方法によって測定され得る。例えば、アディポネクチンのレベルは、参考文献（Ebinuma H, et al.  Clin Chem. 2007 Aug;53(8):1541-4. Epub 2007 Jun 28）に記載される通りに測定され得る。
【００２１】
細胞レベルの低度な炎症
低度な炎症（LGI）は、典型的に被験者の血管系及び脂肪組織で生じる。LGIは、典型的に、その本質において慢性的である。細胞レベルの低度な炎症の周知のマーカーとして、高感度C反応性タンパク質（hsCRP）及びIL-6が挙げられる。
【００２２】
CRPは、血漿タンパク質の高度に保存されたペントラキシンファミリーに属する、急性期の反応物質である。CRPは主に肝臓で、また腎臓、ニューロン、肺胞マクロファージ及びアテローム硬化性病変でも生産される（Devaraj S et al.  Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2008; 28: 1368-1374）。hsCRPはまた、細胞レベルでの低度な（高−正常の）炎症の優れたマーカーでもある。CRPが脂肪細胞に結合し、したがって、脂肪細胞の病原性発現に対する自然免疫の層になり得、その方法が細胞及び／又は組織の傷害を必然的に誘導する侵害性の刺激への応答を増加させることが示されている（Chang MK et al. PNAS USA. 2002 Oct 1;99(20):13043-13048）。多くの研究が、hsCRPが、単球を刺激してIL-6をはじめとする炎症性の因子の生産させることを示している。hsCRPはまた、補体系を活性化し、血管内皮細胞の機能不全並びに血管平滑筋細胞の遊走及び増殖を誘導する（Li JT et al., Scand J Immunol. 2007;66 (5):555-62）。
【００２３】
本明細書で用いられる用語「細胞レベルの低度な炎症」は、被験者の血清中のC反応性タンパク質（CRP）レベルが20.0 mg/l（Van den Bruel A et al. (2011) BMJ. 2011 Jun 8;342:d3082）と同等又はそれ未満、特に3.0〜10.0 mg/lである炎症状態を指す。最も低い心血管リスクは、＜1 mg/LのhsCRP及び＜70 mg/dLのLDL-Cの両方を有する患者において見られた（Koenig W. 2013. Int J Cardiol, 168, 5126-5134）。アメリカ心臓協会及び疾病管理予防センター（The American Heart Association and the Centers for Disease Control and Prevention）は、hsCRP結果の以下の解釈：＜1 mg/L−低リスク；1〜3 mg/L−平均リスク；＞3 mg/L−高リスクを推奨した（Pearson TA, et al. 2003. Circulation, 107:499-511）。特定の実施形態では、標的被験者集団は、10.0 mg/lと同等又それ未満、約3.0〜10.0 mg/l、約4.0〜9.0 mg/l、又は約5.0〜8.0 mg/lのCRPレベルを有する。
【００２４】
CPR及びhsCRPのレベルは、本明細書で記載される通りに、又は本分野で知られる任意の方法によって測定され得る。例えば、CRP及びhsCRPのレベルは、上で引用したPearson TA et al.に記載される通りに測定され得、レベルは好適にはこの方法で測定される。
【００２５】
本明細書で記載される様に、低度な細胞レベルの炎症は、炎症性疾患と関連する。
【００２６】
IL-6は、中心的及び重要な炎症性マーカーとして広く認められている（Lu XT et al. 2013. J Cardiovasc Pharmacol. 2013 Jul;62(1):6-12）。それは、肝細胞におけるhsCRP合成を制御する主要な細胞因子である。IL-6は、活性化された白血球、脂肪細胞、及び内皮細胞をはじめとする様々な組織で生産される。IL-6参照値は、臨床的に健常な個人（固有の参照値）の血清において、典型的に3.3 ng/ml未満である。
【００２７】
特定の実施形態では、標的被験者集団は、約3.3 ng/mlより高いIL-6レベルを有する。具体的には、標的被験者群は、約3.3〜10.0 ng/ml、約4.0〜8.0 ng/ml、又は約5.0〜7.0 ng/mlのIL-6レベルを有し得る。
【００２８】
IL-6のレベルは、本明細書で記載される通りに、又は本分野で知られる任意の方法によって測定され得る。例えば、IL-6のレベルは、（Nordan, R. P. et al. 2001.. Current Protocols in Immunology. 17:6.6.1-6.6.5）に記載される通りに測定され得る。
【００２９】
IL-10は、抗炎症マーカーとして広く認められている（Tsai TT et al. 2013, J Biomed Sci. 2013 Jun 25;20:40）。何人かの著者は、高−正常の（低度な）全身性炎症と、CVDを発症するより高いリスクをはじめとする2型糖尿病の関連を概説している。(Pitsavos et al.,Rev Diabet Stud. 2007; 4(2):98-104)及び（Festa & Haffner. Circulation. 2005; 17;111 (19):2414-5）。
【００３０】
IL-10のレベルは、本明細書で記載される通りに、又は本分野で知られる任意の方法によって測定され得る。例えば、IL-10のレベルは、上で引用した、Tsai TT et al.に記載される通りに測定され得る。
【００３１】
炎症性疾患
Lactobacillus fermentum ME-3が炎症性及び抗炎症性マーカーのプロフィールを変更する根底にあるメカニズムによって、本発明者は、プロバイオティック細菌株が、炎症性疾患、及び特にメタボリックシンドローム関連状況の予防、症状の緩和、治療及び／又はアジュバント治療の提供に有用であることを見出した。特に、本発明は、炎症性疾患の予防、症状の緩和、治療として用い得、及び／又はアジュバント治療となり得、ここで前記炎症性疾患又は障害は、CVD、神経変性疾患、アルツハイマー疾患、アテローム性動脈硬化、癌、脳卒中、代謝疾患、メタボリックシンドローム、前糖尿病又は2型糖尿病である。
【００３２】
炎症及び非特異的ヘモグロビン（Hb）糖化は、炎症性疾患、2型糖尿病及びCVDの最も重要なリスク因子の一つである。異常なHb糖化は、加齢の生理学、及び特に2型糖尿病の病態生理学と関連する。したがって、持続性の低度な（又は高−正常の）炎症（例えば、約3.0〜約10.0 mg/lのCRPレベル）及びヘモグロビンの高度な糖化（例えば、約40 mmol/mol 又は5.9%より高い糖化）は、両方、循環器疾患の発症を高め得る。何人かの著者は、高−正常の（低度な）全身性炎症と、循環器疾患を発症するより高いリスクをはじめとする2型糖尿病の関連を概説している（Pitsavos et al.,Rev Diabet Stud. 2007; 4(2):98-104 , Festa & Haffner. Circulation. 2005; 17;111 (19):2414-5）。
【００３３】
したがって、糖化ヘモグロビン HbA1cのレベルの減少及び細胞レベルの低度な炎症の減少又は予防によって、Lactobacillus fermentum ME-3が炎症性マーカーに対する重要な抑制効果を有することを同定することによって、本発明者は、Lactobacillus fermentum ME-3から利益を得るであろう、CVD及び2型糖尿病の発症リスクを有する被験者の標的集団を同定した。
【００３４】
高感度C反応性タンパク質（hsCRP）並びにIL-6（インターロイキン−6）及びTNF−α（腫瘍壊死因子−α）の高められたレベルもまた、主に2型糖尿病被験者においてであるが、非糖尿病個人においても、CVDリスクと関連する強力なマーカーとして認められている。したがって、本発明者は、CVDに関連する、慢性的な無症候のLGIのマーカーとして、hsCRPに着目した。アメリカ心臓協会及び疾病管理予防センターは、hsCRP結果の以下の解釈：＜1 mg/L−低リスク；1〜3 mg/L−平均リスク；＞3 mg/L−高リスク（Pearson TA et al.上で引用）を推奨した。細胞レベルの低度な（高−正常）炎症は、見かけ上健常な個人において生じ得、加齢及び／又はHb糖化の進行の間、彼らの循環器疾患及び神経変性執権のリスクを増加させる（Rifai & Ridker Clin Chem. 200349(4):666-9）。
【００３５】
したがって、本発明者は、（例えば、Lactobacillus fermentum ME-3を有するアジュバント成分としての）予防的治療及び／又は予防的アジュバント治療のための特定の標的集団が、健常に見えるか、又は現在は炎症性疾患及び／又はメタボリックシンドローム関連状況について無症候である被験者であることを見出した。特定の実施形態では、標的集団は、CVD、神経変性疾患、アルツハイマー疾患、アテローム性動脈硬化、癌、脳卒中、代謝疾患、メタボリックシンドローム、又は2型糖尿病について無症候である。さらなる実施形態では、標的集団は、CVD及び／又は2型糖尿病について無症候であり得る。
【００３６】
「無症候」は、被験者が、炎症性疾患及び／又はメタボリックシンドローム関連状況等の特定の疾患の存在のいかなる証拠（例えば、外向きの証拠）も提供しないことを意味する。特に、被験者はCVD、神経変性疾患、アルツハイマー疾患、アテローム性動脈硬化、癌、脳卒中、代謝疾患、メタボリックシンドローム、又は2型糖尿病の存在のいかなる証拠も提供しないものであり得る。さらなる実施形態では、被験者はCVD及び／又は2型糖尿病のいかなる証拠も提供しないものであり得る。しかしながら、被験者は、将来において炎症性疾患及び／又はメタボリックシンドローム関連状況を発症するリスクがあり得、又は炎症性疾患及び／又はメタボリックシンドローム関連状況を発症する又は有するが、まだ検出可能な、明白な及び／又は顕性の症状を示さない、任意のステージであり得、すなわち前糖尿病（これは、糖尿病判断基準の全てではないが幾つかが満たされるが、それ自身無症候である状態）であり得る。前糖尿病である被験者は、2型糖尿病を発症するリスクがある。前糖尿病から糖尿病への進行は、3〜5年で約25%である（Nathan et al. (2007). 糖尿病 Care 30 (3): 753-9）。
【００３７】
幾つかの実施形態では、被験者は一つの炎症性疾患を患い得るが、第二の又はさらなる炎症性疾患について無症候であり得る。他の実施形態では、被験者は、一より多い、例えば、2、3、4、5、6、又は7以上の炎症性疾患を患い得るが、未だ一以上の、例えば、1、2、3、4、5、6、又は7以上のさらなる炎症性疾患について無症候であり得る。特定の実施形態では、被験者はCVD及び／又は2型糖尿病について無症候であり得るが、メタボリックシンドロームを患い得る。他の実施形態では、被験者は癌を患い得るが、未だ神経変性疾患、アルツハイマー疾患、アテローム性動脈硬化、脳卒中、代謝疾患、メタボリックシンドローム、及び／又は2型糖尿病の一以上について無症候であり得る。
【００３８】
一実施形態では、無症候の被験者は≦20 mg/lのCRPレベルを有する。具体的には、無症候の被験者は、約3.0〜10.0 mg/l、約4.0〜9.0 mg/l、又は約5.0〜8.0 mg/lのCRPレベルを有する。
【００３９】
幾つかの実施形態では、無症候の被験者は、約40 mmol/molと同等又はそれ以上の糖化ヘモグロビンレベルを有する。具体的には、無症候の被験者は、約48、50、53、55、60又は65 mmol/molと同等又はそれ以上の糖化ヘモグロビンレベルを有し得る。
【００４０】
幾つかの実施形態では、無症候の被験者は、約3.3 ng/mlより高いIL-6レベルを有する。具体的には、無症候の被験者は、約3.3〜10.0 ng/ml、約4.0〜8.0 ng/ml、又は約5.0〜7.0 ng/mlのIL-6レベルを有し得る。
【００４１】
幾つかの実施形態では、無症候の被験者は、約10〜20 ng/ml未満のアディポネクチンレベルを有する。具体的には、無症候の被験者は、20 ng/ml、15 ng/ml、10 ng/ml、8ng/ml、5 ng/ml未満又はさらにより低いアディポネクチンレベルを有し得る。
【００４２】
本発明は、メタボリックシンドロームを有する被験者の治療において、及び特に、アジュバントとして（例えばアジュバント成分として）、2型糖尿病及びCVDについて無症候であるとみなされるが、これら及びおそらく他の炎症性疾患を発症するリスクのあり得る、メタボリックシンドロームを有する被験者（すなわち、前糖尿病被験者）の治療において、特に有用である。
【００４３】
本発明に従うメタボリックシンドロームの治療、予防、アジュバント治療及び／又は症状の緩和は、CVD及び2型糖尿病等の炎症性疾患の発症を予防し得る。メタボリックシンドローム（MS）は、腹腔肥満、アテローム性脂質異常症（atherogenic dyslipidaemia）、血圧上昇、インスリン耐性、グルコース不寛容、前糖尿病、2型糖尿病等の代謝異常のクラスターであり（Juturu & Gormley 2005 Current Nutrition & Food Science, 1(1), 1-11.; Herder, et al. Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism 92.12 (2007): 4569-4574, Kadowaki, Takashi, et al. Journal of Clinical Investigation 116.7 (2006): 1784-1792, Oliveira, A., et al. Nutrition, Metabolism and Cardiovascular Diseases 21.5 (2011): 347-354）、したがって、最終的にはCVDをもたらし得る。
【００４４】
したがって、メタボリックシンドロームは、本明細書で広く定義される炎症性疾患の一例として記載され得る。メタボリックシンドローム関連疾患として、メタボリックシンドロームを有する患者又は被験者において見出され、及び／又はメタボリックシンドロームの直接又は間接の結果として生じ得る障害又は疾患が挙げられる。具体例は、前糖尿病、2型糖尿病及びCVDである。
【００４５】
したがって、本発明者は、Lactobacillus fermentum ME-3を含む組成物による予防的治療のための特定の標的集団が、メタボリックシンドローム、及びメタボリックシンドローム関連状況について、臨床的に健常に見えるか、又は現在は臨床的に健常である被験者でもあることを見出した。
【００４６】
上記炎症性マーカーと同様に、アディポネクチンが2型糖尿病の発症において重要な役割を果たし、インスリンを感作し、脂質代謝を改善することによって、病原事象に関連することが示唆された。低いアディポネクチンレベルは、高インスリン血症、2型糖尿病、肥満、メタボリックシンドローム、アテローム性動脈硬化、及び脂質異常症と密接に関連すると報告されている（Kadowaki et al. Endocr Rev. 2005; 26(3):439-51）。幾つかの疫学的研究は、高アディポネクチンは、2型糖尿病、循環器疾患及びアテローム性動脈硬化の発症に対して予防的であると思われることを示唆した（Knobler et al.. Eur J Endocrinol. 2006;154(1):87-92 , Spranger et al. Lancet. 2003; 361(9353):226-8）。さらに、アディポネクチンが抗炎症効果を有し、その濃度がhsCRP、IL-6、及びTNF-α等の炎症性マーカーの程度と負に関連することが報告されている（Puglisi & Fernandez  J Nutr. 2008 Dec;138(12):2293-6. Review）。したがって、本発明者は、Lactobacillus fermentum ME-3が同時に、hsCRP、IL-6、HbA1c等のマーカー及びインスリン抵抗性（TG/HDL-Chol）のレベルを低減し、アディポネクチン及びIL-10のレベルを増加させ得ることを示したので、本発明は、2型糖尿病の予防、症状の緩和、治療及び／又はアジュバント治療において特に有効である。
【００４７】
アディポネクチンレベルは、一般に2型糖尿病被験者において、非糖尿病患者におけるよりも低い（Nayak, et al. Arch Physiol Biochem. 2009; 115(1):28-33）。さらに、以前の細胞培養研究は、アディポネクチンが大動脈内皮細胞及び肝細胞からのCRP合成及び分泌を抑制し得ることを示している。一方、CRPもまた、脂肪細胞からのアディポネクチン発現及び分泌を抑制し得る（(Devaraj et al. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2008; 28: 1368-1374）。したがって、Lactobacillus fermentum ME-3は、同時に、hsCRP 及びIL-6等のマーカーのレベルを変更し、アディポネクチンのレベルを増加させるので、これら炎症性疾患の二つのマーカーの相互作用は、Lactobacillus fermentum ME-3を、本明細書に記載した疾患の予防、症状の緩和、治療及び／又は治療におけるアジュバントとしての使用に特に有効なものとする。
【００４８】
慢性的な低度な（高−正常）細胞レベルの炎症は、アルツハイマー疾患、癌、循環器疾患、2型糖尿病及び高齢者の虚弱をはじめとする多くの加齢関連疾患の重要な原因であると、現在信じられている。損傷した血管内皮は、IL-6及びhsCRPの様なサイトカインを上方制御することによって炎症プロセスを活性化するので、アテローム性動脈硬化は、他の加齢関連疾患の主要なドライバーであり得る。その後、慢性的な全身性炎症は、他の多くの器官システムを妨害し、他の加齢関連疾患をもたらす。hsCRPの低レベル増加が、炎症と関連すると考えられる様々な状態及び疾患状態において報告されており、CVDの場合には、hsCRPは他の従来のリスクマーカーとは独立的に心血管結果を予測すると報告されている（Verma et al. . Nat.Clin.Pract.Cardiovasc Med. 2005; 2(1):29-36 ,  Ridker PM. Circulation.2003; 28; 107(3):363-9）。
【００４９】
したがって、本発明は、アルツハイマー疾患、癌及びアテローム性動脈硬化の予防、症状の緩和、治療及び／又はアジュバント治療の提供もまた包含する。
【００５０】
本発明者は、Lactobacillus fermentum ME-3が、脳卒中を患っている患者に対して、例えば複合治療における成分として、アジュバント治療として用いられ得ることもまた見出した。一実施形態では、Lactobacillus fermentum ME-3は、脳卒中から回復している患者の入院期間の間のアジュバント治療として用いられ得る。患者が脳卒中を患っているとき、高レベルの炎症の証拠が存在する、すなわち任意の炎症マーカーが本明細書に開示のカットオフレベルよりも高い場合、抗生物質がその患者に投与され得る。本明細書の実施例２に記載の通り、Lactobacillus fermentum ME-3を含む組成物は、脳卒中を患っている患者におけるhsCRPのレベルを有意に低減することができ、したがって、脳卒中患者に対する抗生物質の投与の必要性を低減することができた。これは、回復期間中の脳卒中患者における抗生物質由来の副作用の発生を低減するという利点を有する。したがって、脳卒中患者で見られる炎症を治療するのと同様に、Lactobacillus fermentum ME-3を含む組成物は、脳卒中を患っている患者のためのアジュバント治療として用いられ得る。
【００５１】
したがって、本発明は、脳卒中の症状の（特に炎症症状の）緩和及び／又はアジュバント治療の提供を包含する。
【００５２】
したがって、予防としてのLactobacillus fermentum ME-3の重要な適用が存在する。Lactobacillus fermentum ME-3の投与は、炎症性疾患（好ましくはメタボリックシンドローム及び／又はメタボリックシンドローム関連疾患）の発生を遅延または予防し得る。これは、無症候であるが、かかる疾患及び障害を発症するリスクがあり得る被験者に特に関連がある。かかる被験者群の例は、上で定義した。
【００５３】
Lactobacillus fermentum ME-3を含む組成物
本発明の文脈において、Lactobacillus fermentum ME-3は、食品製品、食品サプリメント、又は医薬組成物等の任意の好適な処方において投与され得る。プロバイオティック組成物の処方は、WO 2010/06992、WO 2002/005829、EP 1699474に開示されている。
【００５４】
好適な食品製品として、医薬食品又は機能性食品製品が挙げられる。一実施形態では、食品製品、医薬食品又は機能性食品は、乳、ヨーグルト、チーズ、ケフィア（kefir）又は乳ベースの若しくはホエーベースの発酵乳製品等の乳製品である。実施例５に記載される様なチョコレートベースの製品もまた、Lactobacillus fermentum ME-3を含み、投与する食品製品として好適である。
【００５５】
本発明において用いられ得る好適な医薬組成物として、例えば凍結乾燥形態のカプセル化されたLactobacillus fermentum ME-3、被覆又は錠剤若しくはカプセル形態に処方されたLactobacillus fermentum ME-3、又は粉剤形態に処方されたLactobacillus fermentum ME-3を含む組成物が挙げられる。好適な錠剤及びカプセルとして、硬ゼラチン又は植物性カプセル、腸溶コーティングを有する又は有さない錠剤（例えば、中性条件で溶解するもの）、及び咀嚼錠（Saxelin M,. Clin Infect Dis. (2008) 46 (Supplement 2): S76-S79）が挙げられる。
【００５６】
Lactobacillus fermentum ME-3に加えて、組成物は任意の許容可能な担体及び／又は賦形剤を含み得る。これらとして、限定するものではないが、食物繊維、炭水化物及び微細セルロース等の担体、及び薬学的に許容可能な担体、例えば水、生理食塩水、グリセロール及びエタノール等の液体が挙げられる。補助物質、例えば湿潤又は乳化剤、pH緩衝物質等もまた、本発明において用いられる組成物に存在し得る。好適な担体の徹底的な議論は、文献及びPhilip P. Gerbino. 2005. Remington: The Science and Practice in Pharmacy. 21st Ed. Philadelphia, PA, Lippicott Williams& Wilkins, ISBN: 0-7817-4673-6において利用可能である。
【００５７】
Lactobacillus fermentum ME-3は、例えばアジュバント治療として、他の活性化合物の前に、同時に、又は後に投与され得る。かかる活性化合物として、さらなるプロバイオティクス、プレバイオティクス、一条のビタミン、モナコリンK、炎症性疾患、例えばCVD、神経変性疾患、アルツハイマー疾患、アテローム性動脈硬化、癌、脳卒中、
代謝疾患、メタボリックシンドローム、前糖尿病又は2型糖尿病を治療するのに典型的に用いられる医薬、及び／又はさらなる抗炎症剤が挙げられる。他の活性化合物もまた、株であり得る。さらなるプロバイオティクスの例として、例えば、Pediococcus（ペディオコッカス）、他のlactobacillus（ラクトバチルス）、Bifidobacterium（ビフィズス菌）の株が挙げられる。
【００５８】
炎症性疾患を治療するために用いられる医薬として、限定するものではないが：アスピリン及び組織プラスミノーゲン活性化物質（TPA）等の血栓溶解薬；メトホルミン、シタグリプチン、サキサグリプチン、レパグリニド、ナテグリニド、エキセナチド、及びリラグルチド等の2型糖尿病を治療するのに用いられる薬剤；β遮断剤、ACE阻害剤、カルシウムチャネル遮断剤、スタチン及びフィブラート系薬剤等のアテローム性動脈硬化を治療するのに用いられる薬剤；並びに、コリンエステラーゼ阻害剤、ドネペジル塩酸塩の様なNMDAレセプターアゴニスト、リバスチグミン、ガランタミン、及びメマンチン等のアルツハイマー疾患を治療するのに用いられる薬剤が挙げられる。
【００５９】
好適な抗炎症剤として、限定するものではないが：コルチコステロイド及び非ステロイド系抗炎症薬（NSAID）、例えばプロピオン酸誘導体（例えば、イブプロフェン、ナプロフェン、ケトプロフェン、フルビプロフェン、フェンブフェン、フェノプロフェン、インドプロフェン、ケトプロフェン、フルプロフェン（fluprofen）、ピルプロフェン、カプロフェン、オキサプロジン、プラノプロフェン、及びスプロフェン）、アスピリン及びアスピリン誘導体、及びCOX阻害剤が挙げられる。
【００６０】
Lactobacillus fermentum ME-3を含む組成物は、一以上のビタミン及び／又はモナコリンKをさらに含み得る。特に、本発明において用いられるLactobacillus fermentum ME-3を含む組成物は、上記及びEFSA Journal 2011;9(7):2304の組成物をさらに含み得、又は該組成物の前に、同時に、又は後に投与され得る。
【００６１】
本発明の文脈におけるLactobacillus fermentum ME-3の有効用量は、1日あたり約106〜1011CFU、例えば1日あたり約106〜1010CFU、好ましくは1日あたり約6×109CFUである。この用量は、単一の一日用量として、又は幾つかの分割用量として投与され得る。例えば、用量は2〜6の分割用量として、例えば1日あたり2〜6、2〜4、3〜4用量、又は1日あたり2、3、4、5又は6用量として投与され得る。個々の投与形態は、約106〜約1010CFU、例えば約107〜109CFU、好ましくは約3×109CFUを含み得る。一つの特定の投与形態では、ケフィアは約2×108CFUを含み1日あたり約100-2000ml、例えば1日あたり約100〜1000ml、約200〜600ml、又は約300〜400ml投与される。さらなる特定の投与形態では、個々のカプセルは、約3×109CFU又は約109CFUの凍結乾燥したLactobacillus fermentum ME-3を含み、1日あたり1〜10、例えば2〜8、3〜6、4〜5、又は2、3、4、5、若しくは6のカプセルが投与され得る。他の組成もまた存在し得る。例えば、好適な1日用量（2カプセル）は：
0006484561.tif 000002
を含む。
【００６２】
一般
用語「含む」は、「からなる」等を包含し、例えば、Xを「含む」組成物は、排他的にXからなり得、又は何か追加を含み得る、例えばX＋Y。
【００６３】
用語「実質的に」は、「完全に」を排除せず、例えばYを「実質的に含まない」組成物は、Yを完全に含まないものであり得る。必要であれば、用語「実質的に」は、本発明の定義から除かれ得る。
【００６４】
数値xに関する用語「約」は、任意かつ手段であって、例えばx＋10%である。
【００６５】
用語「被験者」は、無症候の又は臨床的に健常な個人を指す。
【００６６】
用語「患者」は、症候のある個人を指す。
【００６７】
本発明の文脈における用語「アジュバント治療」又は「アジュバント成分」は、Lactobacillus fermentum ME-3を含む組成物が、同じ疾患、例えば炎症疾患及び好適にはメタボリックシンドローム関連疾患についての他の医薬及び治療と併せて用いられることを意味する。該用語は、炎症状態のための通常の及び日常的な治療及び医薬と併せたさらなるアジュバント医薬成分としてのLactobacillus fermentum ME-3の使用を含む。Lactobacillus fermentum ME-3を含む組成物は、本明細書で特定した方法及び使用のいずれかにおいて、単独で、又は「アジュバント治療」若しくは「アジュバント成分」として、用いられ得る。
本発明の様々な態様を以下に示す。
１．前糖尿病、循環器疾患及び2型糖尿病から選択されるメタボリックシンドローム関連疾患の予防、症状の緩和、又は治療における使用のための、Lactobacillus fermentum（ラクトバチルス・ファーメンタム）ME-3 DSM 14241株を、単独で又はアジュバント成分として含む組成物。
２．被験者における、同時の：
a）糖化ヘモグロビンHbAlcのレベルの減少；
b）細胞レベルの低度な炎症の減少又は予防；及び
c）アディポネクチンのレベルの増加
によって、前糖尿病、循環器疾患及び2型糖尿病から選択されるメタボリックシンドローム関連疾患の予防、症状の緩和、又は治療における使用のための、Lactobacillus fermentum ME-3 DSM 14241株を、単独で又はアジュバント成分として含む組成物。
３．Lactobacillus fermentum ME-3 DSM 14241株を含む、有効量の組成物の被験者への投与を含む、被験者における前糖尿病、循環器疾患及び2型糖尿病から選択されるメタボリックシンドローム関連疾患の、単独での又はアジュバント成分としての予防、症状の緩和、又は治療方法。
４．Lactobacillus fermentum ME-3 DSM 14241株を含む、有効量の組成物の被験者への投与を含み、被験者における、同時の：
a）糖化ヘモグロビンHbAlcのレベルの減少；
b）細胞レベルの低度な炎症の減少又は予防；及び
c）アディポネクチンのレベルの増加
によって、
被験者における前糖尿病、循環器疾患及び2型糖尿病から選択されるメタボリックシンドローム関連疾患の、単独での又はアジュバント成分としての予防、症状の緩和、又は治療方法。
５．細胞レベルの炎症の減少又は不存在が、炎症性マーカーのhsCRP及びIL-6を用いて測定される、上記１若しくは２に記載の組成物、又は上記３若しくは４に記載の方法。
６．被験者が、前記メタボリックシンドローム関連疾患について無症候である、上記１〜５のいずれかに記載の組成物又は方法。
７．無症候の被験者が、≦10 mg/lのCRPレベルを有する、上記６に記載の組成物又は方法。
８．無症候の被験者が、3〜10 mg/lのCRPレベルを有する、上記７に記載の組成物又は方法。
９．前記組成物が、食品製品、食品サプリメント、又は医薬組成物である、上記１〜８のいずれかに記載の組成物又は方法。
１０．食品製品が、メディカルフード製品又は機能性食品製品である、上記９に記載の組成物又は方法。
１１．食品製品が、乳、ヨーグルト、チーズ、ケフィア（kefir）、若しくは乳若しくはホエーベースの発酵乳製品等の乳製品、又はチョコレート製品である、上記９又は１０に記載の組成物又は方法。
１２．抗炎症組成物、一以上のビタミン、及び／又はモナコリンK等の他の活性化合物の前に、同時に、又は後に前記組成物が投与される、上記１〜１１のいずれかに記載の組成物又は方法。
１３．前記組成物が、さらに一以上のビタミン及び／又はモナコリンKを含む、上記１〜１２のいずれかに記載の組成物又は方法。
１４．前記組成物が、Lactobacillum fermentum ME-3 DSM 14241株を、カプセル化形態で、凍結乾燥形態で、被覆形態で、カプセルに、錠剤に又は粉末に含む、上記１〜１３のいずれかに記載の組成物又は方法。
１５．前記組成物が、106〜1011 CFUのLactobacillum fermentum ME-3 DSM 14241株を含む、上記１〜１４のいずれかに記載の組成物又は方法。
【図面の簡単な説明】
【００６８】
【図１】高感度C反応性タンパク質（hsCRP）及び糖化ヘモグロビン（HbA1c）の値の相関に関する散布図−R=0.71、p＜0.01、ベースライン及び終点値間。
【図２】異なるチョコレート、CFU/gでのLactobacillus fermentum ME-3。
【発明を実施するための形態】
【実施例】
【００６９】
実施例１
低度な炎症マーカーであるhsCRP、HBA1c、IL-6、アディポネクチン及び非特異的糖化マーカーへの、プロバイオティックLactobacillus fermentum ME-3の効果をモニターした。
【００７０】
二十三人の臨床的に健常なボランティア（16人の女性、７人の男性、年齢40〜65歳）を、臨床非盲検試験に募った。排除の判断基準は、以下の通り：進行中の急性感染；糖尿病；食品アレルギー又は胃腸疾患の病歴；先月の間のいずれかの抗菌剤の使用又は非ステロイド系抗炎症薬、スタチン又はホルモン避妊をはじめとするいずれかの通常の併用医薬の使用；妊娠又は授乳；アルコール乱用；薬の使用；特別な食事；喫煙である。処置の間、及び前二週間、参加者に対して、ビタミン又はミネラルの補給、慣れた食事習慣及び毎日の身体活動の変更、及びプロバイオティクスベースの食品又は他のケフィア／ヨーグルトの使用を避けるように依頼した。残念ながら、個人的な理由のために、4人の参加者（全て男性）が、試験を終了しなかった。
【００７１】
全ての参加者は書面にしたインフォームドコンセントに署名し、いつでも試験を止める選択肢を有していた。タルトゥ（Tartu）大学の、ヒト研究に関する倫理審査委員会（The Ethics Review Committee（ERC）on Human Research）は、試験のプロトコル（プロトコルNo.211/T-1）を許可した。本試験は、世界医師会（World Medical Association）のヘルシンキ宣言に従って行われた。
【００７２】
プロバイオティックLactobacillus fermentum ME-3を含むケフィアは、AS Tere（タリン、エストニア）により生産された。ケフィア中のLactobacillus fermentum ME-3の生菌数は、全ての購入ロットにおいて安定していた（生菌数2×108CFU/gケフィア）。実施例２で用いたゼラチン被覆プロバイオティックカプセルは、250mgのサッカロース及び微細セルロースに加えて、カプセルあたり109CFUのLactobacillus fermentum ME-3を含んでいた。
【００７３】
二週間の予備期間（洗い出し）の後、（前肘静脈由来の）ベースライン標準空腹時血液を得た。サンプルは分析まで−80℃に保った。その後、参加者は、四週間、プロバイオティックLactobacillus fermentum ME-3（2×109CFU/gケフィア）を含む200mlのケフィアを毎日摂取した。その後、（前肘静脈由来の）標準空腹時血液を得た。通例の血液指標：地方の臨床研究室において、公認のHitachi 912自動分析器を用いて糖化ヘモグロビン（HbA1c）をアッセイした（Roche Diagnostics LDL-Chol及びHDL-Chol）。hsCRPを、Hitachi 912自動分析器を用いて［１］、ラテックス粒子強化免疫比濁アッセイ（Roche Diagnostics GmPh、ドイツ）によって決定した。IL-6の血漿レベルを、市販のキット（Human IL-6 Immunoassay、カタログナンバーD6050、R&D Systems Inc.（登録商標）、ミネアポリス、USA）を用いたELISAによって測定し、アディポネクチンの血漿レベルを市販のキット（Human Total Adiponectin/Acrp30、カタログナンバーD6050、R&D Systems Inc.（登録商標）、ミネアポリス、USA）を用いたELISAによって測定した。 
【００７４】
炎症マーカーであるhsCRP及びIL-6のレベル、並びにHbA1cレベルは、プロバイオティックLactobacillus fermentum ME-3を含むケフィアの消費の4週間後に減少した。同じ期間の間、アディポネクチンレベルは増加した。したがって、プロバイオティックLactobacillus fermentum ME-3の消費は、循環器疾患及び神経変性疾患、アテローム性動脈硬化、代謝疾患、メタボリックシンドローム関連状況（前糖尿病、糖尿病、循環器疾患）及び2型糖尿病のリスクを緩和する。
【００７５】
統計
市販の統計ソフトウェアパッケージ（Statistics for Windows, Stat Soft Inc.及びGraph Pad PRISM Version 2.0）、及びsoftware R, version 1.6.0 for Windows (www.r-project.org）を用いて計算を行った。全ての値を平均値と標準偏差で表した（平均値±SD）。群間の統計的に有意な差は、Student t検定を用いて決定した。全ての分析において、＜0.05のP値を、統計的に有意であるとみなした。変数間の相関を、線形回帰分析（software R, version 2.0.1 for Windows）を用いて試験した。
【表１】
0006484561.tif 000003
【００７６】
hsCRPはHbA1c同様に減少し、0週、r＝0.48、p＝0.037、及び4週、r＝0.54、p＝0.018で、互いに統計的に有意な相関を有していた（Spearman相関係数）。
【００７７】
被験者の応答性は非常に優れていた。hsCRPの場合には応答性は58%であり、IL-10の場合には−68%、HbA1c応答性は26%であり、アディポネクチンは70%より高い。
【００７８】
プロバイオティックLactobacillus fermentum ME-3の消費は、統計的に有意にhsCRPのレベル、及びIL-6のレベルを低下させた。同時に、（HbA1cとしての）長期血糖レベルは、hsCRPの低下した値とよく相関して低下した（R＝0.71、p＜0.01）。
【００７９】
これは、高−正常な（低レベルの）細胞レベルの炎症とHbA1cの高−正常値との悪循環を非常に明瞭に示している。炎症マーカー（hsCRP及びIL-6）と非特異的糖化マーカー（HbA1c）のこの強い相関のため、それらの一つがいずれかの理由により増加すると、他方もまた増加するだろう。したがって、増加した細胞レベルの炎症又は進行した糖化のいずれかを有する人々、特に高齢者は、2型糖尿病、循環器疾患及び神経変性疾患の増加した発症リスクを有し得る。さらに、増加した細胞レベルの炎症又は非生理学的なレベルの糖化のいずれかを有する個人は、メタボリックシンドローム関連状況（前糖尿病、糖尿病、循環器疾患）の増加したリスクを有する。
【００８０】
結果として、Lactobacillus fermentum ME-3を含む、Lactobacillus fermentum ME-3を富ませた食品製品、食品サプリメント又は組成物は、低度な（高−正常な）細胞レベルの炎症の緩和及び予防に用いられ得る、なぜなら、炎症マーカーであるhsCRP及びIL-6は、かかる食品製品、食品サプリメント又は組成物の消費後に、減少し、抗炎症マーカーであるアディポネクチンレベルが増加するからである。
【００８１】
また、結果として、Lactobacillus fermentum ME-3を富ませた食品製品、食品サプリメント又は医薬は、細胞レベルの糖化ヘモグロビン−HbA1cのレベルを減少させることによって、高められたレベルの長期血糖の緩和及び予防に用いられ得る。
【００８２】
さらに、結果として、Lactobacillus fermentum ME-3を含む、Lactobacillus fermentum ME-3を富ませた食品製品、食品サプリメント又は組成物は、メタボリックシンドローム関連状況（前糖尿病、糖尿病、循環器疾患）の緩和及び予防及び治療に用いられ得る。
【００８３】
実施例２
21人の患者（80.4±9.9歳、9人の男性／12人の女性）は、8〜22（12±6.6）日間の初期の脳卒中を有していた。無作為二重盲検試験の被験者を、無作為に2群に分配し、凍結乾燥したLf ME-3の3つのカプセル（カプセルあたり109CFU）（LfME-3群、10人の被験者）又は3つのカプセル（250mgのサッカロース及び微細セルロースを含む、コントロール群、11人の被験者）のいずれかを1日2回、3週間消費するように割り当てた。機能的な能力（機能的独立尺度（Functional Independence Measure−FIM）及びスカンジナビア脳卒中スケール（Scandinavian Stroke Scale−SSS））並びに脳卒中患者の臨床指標を、3週間の処置期間の前及び後に評価した。状態の上昇へのusCRPの使用は、炎症、又は健常な個体と関連すると考えられる。
【００８４】
国際的な参照値によれば、CRPの認められたカットオフ値は20mg/lである（Van den Bruel A et al. (2011) BMJ. 2011 Jun 8;342）。Lactobacillus fermentum ME-3群では、脳卒中患者の45%が、Lactobacillus fermentum ME-3の消費前にCRPについてカットオフ値より高かった。消費後、9%（11人のうち一人の患者）のみが、未だカットオフ値より高いCRPレベルを有していた。
【００８５】
実施例３
本発明者はまた、無作為二重盲検プラセボ対照臨床試験（タルトゥ大学のヒト研究に関する倫理審査委員会は、ME-3を含まないプラセボケフィア群（55より多い人々）とME-3ケフィア群（55より多い人々）を比較する試験のプロトコル（参考：210/T-3）を許可した。）を行った（論文準備中）。8週のデータ対4週のデータは、プラセボケフィアではなく、Lactobacillus fermentum ME-3を富ませたケフィアの消費が、HbA1cのレベルを有意に減少させたことを示す（p＝0.015）。さらに、8週で、ME-3ケフィアのみが、IL-6（p＜0.01）のレベル、TG/HDL-Chol比（インスリン抵抗性のマーカー、p＝0.02）、並びにOxLDLのレベルを有意に減少させ、アディポネクチンのレベルを優位に増加させた（p＜0.003）。したがって、これらのデータは共に、Lactobacillus fermentum ME-3を含む組成物が、メタボリックシンドローム関連状況（前糖尿病、糖尿病、循環器疾患)のリスクを予防し、症状を緩和し、治療するのに役立つことを示している。8週のデータ対4週のデータは、プラセボケフィアではなく、Lactobacillus fermentum ME-3を富ませたケフィアの消費が、HbA1cのレベルを有意に減少させたことを示した（p＝0.015）。
【００８６】
実施例４
25人の無症候のボランティア（16人の女性及び9人の男性）を、臨床非盲検試験に募った。排除の判断基準は、以下の通り：進行中の急性感染；糖尿病；食品アレルギー又は胃腸疾患の病歴；先月の間のいずれかの抗菌剤の使用又は非ステロイド系抗炎症薬及び抗糖尿病薬、スタチン又はホルモン避妊をはじめとするいずれかの通常の併用医薬の使用；妊娠又は授乳；アルコール乱用；薬の使用；特別な食事；である。処置の間、及び前二週間、参加者に対して、ビタミン又はミネラルの補給、慣れた食事習慣及び毎日の身体活動の変更、及びプロバイオティクスベースの食品又は他のケフィア／ヨーグルトの使用を避けるように依頼した。全ての参加者は、書面にしたインフォームドコンセントに署名し、いつでも試験を止める選択肢を有していた。タルトゥ大学の、ヒト研究に関する倫理審査委員会は、試験のプロトコル（プロトコル 229/T-18）を許可した。本試験は、世界医師会のヘルシンキ宣言に従って行われた。
【００８７】
カプセルはプロバイオティックLactabacillus fermentum ME-3を含んでおり、1日用量（2カプセル）を以下に示す。
【００８８】
好適な1日用量（2カプセル）は：
0006484561.tif 000004
を含む。
【００８９】
二週間の予備期間の後、（前肘静脈由来の）ベースライン標準空腹時血液を得た。サンプルは分析まで−80℃に保った。その後、参加者は、四週間、2カプセル／1日あたりを摂取した。その後、標準空腹時血液を得た。通例の血液指標：地方の臨床研究室において、公認のHitachi 912自動分析器を用いてHbA1cをアッセイした（Roche Diagnostics LDL-Chol及びHDL-Chol）。hsCRPを、Hitachi 912自動分析器を用いて（Pihl et al., 2003）、ラテックス粒子強化免疫比濁アッセイ（Roche Diagnostics GmPh、ドイツ）によって決定した。IL-6の血漿レベルを、市販のキット（Human IL-6 Immunoassay、カタログナンバーD6050、R&D Systems Inc.（登録商標）、ミネアポリス、USA）を用いたELISAによって測定し；IL-10の血漿レベルを、市販のキット（Human IL-10 Immunoassay、カタログナンバーD1000B、R&D Systems Inc.（登録商標）、ミネアポリス、USA）を用いたELISAによって測定し、アディポネクチンの血漿レベルを市販のキット（Human Total Adiponectin/Acrp30、カタログナンバーDRP300、SRO300 PDRP300、R&D Systems Inc.（登録商標）、ミネアポリス、USA）を用いたELISAによって測定した。 
【００９０】
統計
市販の統計ソフトウェアパッケージ（Statistics for Windows, Stat Soft Inc.及びGraph Pad PRISM Version 2.0）、及びsoftware R, version 1.6.0 for Windows (www.r-project.org）を用いて計算を行った。全ての値を平均値と標準偏差で表した（平均値±SD）。群間の統計的に有意な差は、Student t検定を用いて決定した。全ての分析において、＜0.05のP値を、統計的に有意であるとみなした。変数間の相関を、線形回帰分析（software R, version 2.0.1 for Windows）を用いて試験した。
【表２】
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【００９１】
LDL-Chol並びに総コレステロール及びoxLDLのレベルは、全ての患者の95%で有意に減少し、HD-Chol増加は、Lactobacillus fermentum ME-3カプセルの4週間の消費後に増加する傾向を示した。炎症性マーカーであるhsCRP及びIL-6のレベルは、Lactobacillus fermentum ME-3カプセルの4週間の消費後に減少し、並びに糖化Hb（HbA1c）のレベル及び抗炎症性インターロイキンであるIL-10のレベルは増加した。hsCRP及びIL-10の場合の応答性は約60%であり、IL-6では応答性は約70%であり、HbA1cでは応答性は約60%であった。
【００９２】
インスリン抵抗性は、自律神経の機能不全と関連する。運動後の心拍数の減弱した低下（又は心拍数回復（HPR））は、死亡率の全ての原因を予測し、減少した副交感活性を反映すると信じられている。トリグリセリド／HDL-Chol比をインスリン抵抗性マーカー（前糖尿病、糖尿病関連マーカー）として利用することで、我々はカプセルの消費後にTG/HDL-Chol比が有意に減少し、約76%の応答性を示したことを見出した。したがって、実施例３及び４のデータは、共にLactobacillus fermentum ME-3を含む組成物が、メタボリックシンドローム関連状況（前糖尿病、糖尿病、循環器疾患）のリスクを予防し、症状を緩和し、治療するのに役立つことを示している。
【００９３】
実施例５
Lactobacillus fermentum ME-3 チョコレートベースの組成物
凍結乾燥したLactobacillus fermentum ME-3のチョコレート中の、3週間42℃での安定性を調べた。用いた材料は、（Probiotical SpA, Novara、イタリアによって生産された）凍結乾燥したLactobacillus fermentum ME-3 108CFU/g、及び市販の異なるカカオ濃度を有するチョコレートであった。それぞれ85%、70%、56%及び30%のカカオからなる50グラムのチョコレートを熱水で融解し、恒温装置を用いて42℃で維持した。CFUの評価を、0時点、第一週、第二週及び第三週で行った。チョコレートサンプルを秤量し、1:9の比でPBSバッファーの各量を添加した。101〜108の希釈を行い、deMan、Rogosa and Sharpe（MRS）培地に播種した。
【００９４】
3週間中の生存を確かめた。細胞数の損失は、85%のカカオを有するチョコレートDを除いて、ほぼ1対数にとどまった（チョコレートA：7.4〜8.2；B：7.3〜8.3；C：6.9〜7.8；D：6.4〜7.9）（図２参照）。
【図１】
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【図２】
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