(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式１で表されるアミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩：
【化１】
0006502919.tif 000015
［化１］
前記化学式１で、Ｒ１、Ｒ２及びＲ４は、メチルであり、Ｒ３は、ヒドロキシであり、Ｒ５は、ハロゲン、ヒドロキシ、（Ｃ１〜Ｃ１２）アルコキシ、フェノキシ、（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルアミノ、及び（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールからなる群から選択された１つまたは２つ以上に置換または非置換の（Ｃ２〜４又は６〜１４）アルキル；ハロゲン、ヒドロキシ、（Ｃ１〜Ｃ１２）アルコキシ、（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルアミノ及び（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択された１つまたは２つ以上に置換または非置換の（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール；（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールで置換または非置換の（Ｃ２〜Ｃ１２）アルケニル；（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル；１−（３，４−メチレンジオキシ）フェニル；１−ナフチル；及び２−チオフェニルからなる群から選択された何れか１つである。
【請求項２】
前記アミドピリジンオール誘導体は、化学式１で、Ｒ１、Ｒ２及びＲ４は、メチルであり、Ｒ３は、ヒドロキシであり、Ｒ５は、ハロゲンで置換または非置換の（Ｃ２〜４又は６〜１４）アルキル；ハロゲン、ヒドロキシ、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシまたは（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルで置換または非置換のフェニル；フェニルで置換された（Ｃ２〜Ｃ４）アルキル；シンナミル；（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル；１−（３，４−メチレンジオキシ）フェニル；１−ナフチル；及び２−チオフェニルからなる群から選択された何れか１つであることを特徴とする請求項１に記載のアミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩。
【請求項３】
前記Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）アミド誘導体は、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）ドデカンアミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−４−クロロブタンアミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）イソブチリルアミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−３−メチルブタンアミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）ピバルアミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）シクロペンタンカルボキサミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）シクロヘキサンカルボキサミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−３−フェニルプロパンアミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）ベンズアミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−４−フルオロベンズアミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−４−メトキシベンズアミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−４−（ｔｅｒｔ−ブチル）ベンズアミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−カルボキサミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−１−ナフタアミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）チオフェン−２−カルボキサミド、２−エチル−Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）ブタンアミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−２−フェニルブタンアミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−２，４，６−トリメチルベンズアミド、３−ヒドロキシ−Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）ベンズアミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−３，５，５−トリメチルヘキサンアミド及びＮ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）シンナミドからなる群から選択された何れか１つであることを特徴とする請求項１に記載のアミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩。
【請求項４】
前記薬剤学的に許容可能な塩は、シュウ酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、及び安息香酸からなる群から選択された有機酸であるか、または塩酸、硫酸、リン酸、及び臭化水素酸からなる群から選択された無機酸によって形成される酸付加塩の形態であることを特徴とする請求項１に記載のアミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩。
【請求項５】
下記化学式１で表されるアミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩を有効成分として含有する血管新生による疾患の予防または治療用薬学組成物：
【化２】
0006502919.tif 000016
［化１］
前記化学式１で、Ｒ１、Ｒ２及びＲ４は、それぞれ同じか異なり、水素、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシまたはハロゲンのうちから選択された何れか１つであり；Ｒ３は、ヒドロキシであり；Ｒ５は、ハロゲン、ヒドロキシ、（Ｃ１〜Ｃ１２）アルコキシ、フェノキシ、（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルアミノ、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールまたは（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルで置換または非置換の（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキル；ハロゲン、ヒドロキシ、（Ｃ１〜Ｃ１２）アルコキシ、（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルアミノまたは（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルで置換または非置換の（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール；（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールで置換または非置換の（Ｃ２〜Ｃ１２）アルケニル；（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル；１−（３，４−メチレンジオキシ）フェニル；１−ナフチル；及び２−チオフェニルからなる群から選択された何れか１つである。
【請求項６】
前記血管新生による疾患は、黄斑変性、糖尿病性網膜症、増殖性硝子体網膜症、未成熟網膜症、緑内障、退化班、翼状片、後水晶体線維増殖症、顆粒性結膜炎、角膜移植拒否、角膜潰瘍、円錐角膜、及び眼科炎症からなる群から選択された眼科疾患であることを特徴とする請求項５に記載の血管新生による疾患の予防または治療用薬学組成物。
【請求項７】
前記血管新生による疾患は、リウマチ性関節炎、骨関節炎、敗血症性関節炎、乾癬、シェーグレン症候群、異常創傷癒合、骨疾患、タンパク尿症、腹部大動脈瘤疾患、外傷性関節損傷による退行性軟骨損失、神経系の髄鞘脱落疾患、肝硬変、腎糸球体疾患、胚胎膜の未成熟破裂、歯根膜疾患、動脈硬化症、再狭窄症、中枢神経系の炎症疾患、アルツハイマー疾患、及び皮膚老化からなる群から選択された何れか１つであることを特徴とする請求項５に記載の血管新生による疾患の予防または治療用薬学組成物。
【請求項８】
下記化学式１で表されるアミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩を有効成分として含有する炎症性腸疾患の予防または治療用薬学組成物：
【化３】
0006502919.tif 000017
［化１］
前記化学式１で、Ｒ１、Ｒ２及びＲ４は、それぞれ同じか異なり、水素、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシまたはハロゲンのうちから選択された何れか１つであり、Ｒ３は、ヒドロキシであり、Ｒ５は、ハロゲン、ヒドロキシ、（Ｃ１〜Ｃ１２）アルコキシ、フェノキシ、（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルアミノ、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールまたは（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択された１つまたは２つ以上に置換または非置換の（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキル；ハロゲン、ヒドロキシ、（Ｃ１〜Ｃ１２）アルコキシ、（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルアミノまたは（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択された１つまたは２つ以上に置換または非置換の（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール；（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールで置換または非置換の（Ｃ２〜Ｃ１２）アルケニル；（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル；１−（３，４−メチレンジオキシ）フェニル；１−ナフチル；及び２−チオフェニルからなる群から選択された何れか１つである。
【請求項９】
前記炎症性腸疾患は、潰瘍性大腸炎、クローン病、腸管型ベーチェット病、出血性直腸潰瘍、及び回腸嚢炎からなる群から選択されたことを特徴とする請求項８に記載の炎症性腸疾患の予防または治療用薬学組成物。
【請求項１０】
下記化学式１で表されるアミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩を有効成分として含有する癌疾患の予防または治療用薬学組成物：
【化４】
0006502919.tif 000018
［化１］
前記化学式１で、Ｒ１、Ｒ２及びＲ４は、それぞれ同じか異なり、水素、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシまたはハロゲンのうちから選択された何れか１つであり、Ｒ３は、ヒドロキシであり、Ｒ５は、ハロゲン、ヒドロキシ、（Ｃ１〜Ｃ１２）アルコキシ、フェノキシ、（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルアミノ、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールまたは（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択された１つまたは２つ以上に置換または非置換の（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキル；ハロゲン、ヒドロキシ、（Ｃ１〜Ｃ１２）アルコキシ、（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルアミノまたは（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択された１つまたは２つ以上に置換または非置換の（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール；（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールで置換または非置換の（Ｃ２〜Ｃ１２）アルケニル；（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル；１−（３，４−メチレンジオキシ）フェニル；１−ナフチル；及び２−チオフェニルからなる群から選択された何れか１つである。
【請求項１１】
前記癌は、肺癌、乳癌、膀胱癌、骨癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、直腸癌、咽喉癌、喉頭癌、食道癌、膵臓癌、大腸癌、胃癌、舌癌、皮膚癌、脳腫瘍、子宮癌、頭部または頚部癌、胆嚢癌、口腔癌、結腸癌、肛門付近癌、中枢神経系腫瘍、肝癌、及び大腸癌からなる群から選択された何れか１つであることを特徴とする請求項１０に記載の癌疾患の予防または治療用薬学組成物。
【請求項１２】
アミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩を有効成分として含有する癌浸潤または癌転移の予防または抑制用薬学組成物：
前記アミドピリジンオール誘導体は、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）アセトアミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）ドデカンアミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）シクロペンタンカルボキサミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−４−フルオロベンズアミド、及びＮ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）チオフェン−２−カルボキサミドからなる群から選択される化合物である。
【請求項１３】
前記癌は、肺癌、乳癌、膀胱癌、骨癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、直腸癌、咽喉癌、喉頭癌、食道癌、膵臓癌、大腸癌、胃癌、舌癌、皮膚癌、脳腫瘍、子宮癌、頭部または頚部癌、胆嚢癌、口腔癌、結腸癌、肛門付近癌、中枢神経系腫瘍、肝癌、及び大腸癌からなる群から選択された何れか１つであることを特徴とする請求項１２に記載の癌浸潤または癌転移の予防または抑制用薬学組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩、及びそれを有効成分として含有する血管新生による疾患、炎症性腸疾患または癌疾患の予防または治療用薬学組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
血管新生（ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ）とは、既存の微小血管から新たな毛細血管が形成される過程を言う。血管新生が正常に起こる場合は、胚芽発生（ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）、組織再生及び傷治療、周期的な女性の生殖器系統の変化である黄体が発達される時であり、このような場合にも、厳格に調節されて進行する。
【０００３】
成人の場合、血管内皮細胞は非常に遅く成長し、他種の細胞に比べて、相対的に分裂しない。血管新生が起こる過程は、一般的に血管新生促進因子の刺激によってプロテアーゼによる血管基底膜の分解、血管内皮細胞の移動、増殖、及び血管内皮細胞の分化による管腔の形成で、血管が再構成されて、新たな毛細血管が生成される。
【０００４】
しかし、血管新生が自律的に調節されず、病的に成長することで引き起こされる疾患がある。病理学的状態で表われる血管新生に関連した疾患としては、血管腫、血管線維腫、血管奇形及び心血管疾患である動脈硬化、血管癒着、浮腫性硬化症があり、血管新生による眼科疾患としては、黄斑変性、角膜移植性血管新生、血管新生緑内障、糖尿病性網膜症、新生血管による角膜疾患、斑点の変性、翼状片、網膜変性、後水晶体線維増殖症、顆粒性結膜炎などがある。関節炎のような慢性炎症性疾患、乾癬、毛細血管拡張症、化膿性肉芽腫、脂漏性皮膚炎、ニキビのような皮膚科疾患、アルツハイマー及び肥満も血管新生と関連があり、癌の成長と転移は、必ず血管新生に依存する（Ｄ´Ａｍａｔｏ  ＲＪ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，１０２（９），ｐｐ１２６１−１２６２，１９９５；Ａｒｂｉｓｅｒ  ＪＬ，Ｊ．Ａｍ．Ａｃａｄ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，３４（３），ｐｐ４８６−４９７，１９９６；Ｏ´Ｂｒｉｅｎ  ＫＤ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，９３（４），ｐｐ６７２−６８２，１９９６；Ｈａｎａｈａｎ  Ｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，８６，ｐｐ３５３−３６４，１９９６）。
【０００５】
炎症性疾患の代表的な疾患である関節炎は、自己免疫異常が原因であるが、病気が進行しながら、関節の間の滑液腔に生じた慢性炎症が血管新生を誘導して軟骨が破壊される。すなわち、炎症を誘導するサイトカインの助けで滑液細胞と血管内皮細胞とが滑液腔で増殖を行って、血管新生が進行しながら、軟骨部に発生する結合組織層である関節パンヌスを形成して、クッションの役割を行う軟骨が破壊される（Ｋｏｃｈ  ＡＥ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ｒｈｅｕｍ．，２９，ｐｐ４７１−４７９，１９８６；Ｓｔｕｐａｃｋ  ＤＧ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒａｚ  Ｊ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．Ｒｃｓ．，３２（５），ｐｐ５７８−５８１，１９９９；Ｋｏｃｈ  ＡＥ，Ａｔｒｈｒｉｔｉｓ．Ｒｈｅｕｍ．，４１（６），ｐｐ９５１−９６２，１９９８）。
【０００６】
毎年、全世界的に数百万人が失明する多くの眼科疾患も、血管新生が原因となっている（Ｊｅｆｆｒｅｙ  ＭＩ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１０３，ｐｐ１２３１−１２３６，１９９９）。その代表的な例として、老人に起こる退化斑（ｍａｃｕｌａｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）、糖尿病性網膜症（ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ）、早熟兒の網膜症、新生血管性緑内障と新生血管による角膜疾患のような疾病は、血管新生が原因となる疾病である（Ａｄａｍｉｓ  ＡＰ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ，３，ｐｐ９−１４，１９９９）。そのうち、糖尿病性網膜症は、糖尿病の合併症で網膜にある毛細血管が硝子体を侵襲して、結局、目が見えなくなる疾病である。
【０００７】
紅斑と鱗屑の皮膚が特徴である乾癬も、皮膚に生じる晩成の増殖性疾患であるが、治癒されず、苦痛と奇形とを伴う。正常である場合、角質細胞が１ヶ月に一回増殖するのに比べて、乾癬患者は、少なくとも一週間に一回増殖する。このような早い増殖を行うためには、多くの血液が供給されなければならないので、血管新生が活発に起こるしかない（Ｆｏｌｋｍａｎ  Ｊ，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，５９，ｐｐ４０−４８，１９７２）。
【０００８】
特に、癌の場合、血管新生は、癌細胞の成長と転移とに重要な役割を果たす。腫瘍は、新生血管を通じて成長と増殖とに必要な栄養と酸素とを供給され、また腫瘍まで侵透した新生血管は、転移する癌細胞が血液循環系に入る機会を与えることによって、癌細胞を転移（ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ）させる（Ｆｏｌｋｍａｎ  ａｎｄ  Ｔｙｌｅｒ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｖａｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｉｃ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ（Ｓ．Ｂ．Ｄａｙ  ｅｄ．）Ｒａｖｅｎ  ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ９４−１０３，１９７７；Ｐｏｌｖｅｒｉｎｉ  ＰＪ，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｏｒａｌ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．，６（３），ｐｐ２３０−２４７，１９９５）。癌患者が死亡する主原因は、転移であり、現在臨床で使われる化学療法や免疫療法が、癌患者の生存率を高めるのに寄与することができないことはまさに癌の転移のためである。
【０００９】
ほとんどの固形癌の転移過程を見れば、癌細胞が最初に発生した場所で増殖がなされ、癌塊が次第に大きくなれば、他の場所に移動するために、癌細胞が癌塊から離れて血管を通じて移動した後、２次場所に定着して、再び細胞増殖がなされる。このような過程で癌細胞が血管を通じて他の場所に移動するためには、癌細胞浸潤（ｉｎｖａｓｉｏｎ）過程を必ず経なければならない。この際、癌細胞は、細胞外基質成分を分解するために、タンパク質分解酵素を過発現して分泌し、これには、マトリックスメタロプロテアーゼ（ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ；ＭＭＰｓ）、カテプシン（ｃａｔｈｅｐｓｉｎｓ）、各種のタンパク質分解酵素（ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ）などがある。
【００１０】
カテプシン（ｃａｔｈｅｐｓｉｎ）は、低いｐＨでタンパク質を分解するリソソーム酵素であって、構造と触媒類型とによってセリンプロテアーゼ（Ａ、Ｇ）、アスパルチルプロテアーゼ（Ｄ、Ｅ）、システインプロテアーゼ（Ｂ、Ｃ、Ｆ、Ｈ、Ｋ、Ｌ１、Ｖ、Ｏ、Ｓ、Ｗ、Ｚ）に分類される。カテプシンは、それぞれ特定の生理的プロセス、すなわち、免疫系で抗原提示、骨と軟骨とでコラーゲンターンオーバー、ニューロペプチドとホルモンプロセッシングとに関与していて、これらカテプシンが欠乏された時、多様な疾病現象が発生するだけではなく、カテプシンが過発現された場合も、さまざまな疾病が発生する。特に、システインカテプシン（ｃａｔｈｅｐｓｉｎ  Ｂ、Ｆ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｖ、Ｓ、Ｚ）の過発現が癌発生と癌転移とに関与すると知られている（Ｒｅｉｓｅｒ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．１２０（１０），３４２１−３１，２０１０）。
【００１１】
ほとんどのカテプシンは、リソソームタンパク質分解酵素であって、細胞内で生理機能調節の役割を果たしているが、細胞外部に分泌されてタンパク分解機能を行うものとしてカテプシンＳがある。カテプシンＳは、細胞内リソソームにある時は、抗原プロセッシングまたはアポトーシスに関与するが、細胞外に分泌されれば、細胞外基質成分であるラミニン、フィブロネクチンエラスチン、コラーゲンなどを分解する。このような機能によって、カテプシンＳが癌細胞浸潤及び血管新生過程に関与すると考えられている。
【００１２】
最近の報告で、大腸癌（ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ）患者の大腸癌組織でカテプシンＳの発現が、正常大腸組織に比べて、有意性のあるように増加していることが確認された（Ｇｏｒｍｌｅｙ  ＪＡ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，１０５（１０），１４８７−９４，２０１１）。それだけではなく、カテプシンＳ遺伝子を標的にしたｓｉＲＮＡを肝癌細胞に導入して、カテプシンＳ発現を減少させた時、肝癌細胞の増殖、浸潤、そして、血管新生が減少する結果が報告されている（Ｆａｎ  Ｑ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ，４２５（４），７０３−１０，２０１２）。
【００１３】
乳癌の場合は、リンパ節に転移された乳癌患者の予後と乳癌組織でのカテプシンＤ染色が有意性のあるように関連している一方、リンパ節ビジョンが、患者ではカテプシンＤが関連していないことが報告された（Ｈｅｎｒｙ  ＪＡ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ，６５（２），２６５−７１，１９９０）。このような結果に基づいて、乳癌転移と浸潤とにカテプシンＤが重要な役割を行うと提起されたが、他の研究によれば、ＭＣＦ７、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＭＤＡ−ＭＢ−４３５のような乳癌細胞株を使って転移実験を行った時、カテプシンＤは、乳癌細胞の浸潤と連関性がないという結果を得た（Ｊｏｈｎｓｏｎ  ＭＤｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５３（４），８７３−７，１９９３）。転移性乳癌細胞でも、肝癌での場合のように、カテプシンＳの作用が重要な役割ができると予測される。
【００１４】
そして、炎症性腸疾患（Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｂｏｗｅｌ  ｄｉｓｅａｓｅ、ＩＢＤ）は、臨床的に類似しながらも、組織学的所見と内視鏡及び免疫学的側面とで互いに異なる潰瘍性大腸炎及びクローン病の２つの疾患に分類され、このようなＩＢＤは、炎症細胞の活性化が重要な病因であると知られている。
【００１５】
腸免疫系の持続的であるか、不適切な活性化は、慢性粘膜性炎症の病理生理で重要な役割を果たし、特に、好中球、大食細胞、リンパ球、及び肥満細胞の浸潤によって、結局、粘膜破壊及び潰瘍を招く。浸潤または活性化された好中球は、活性酸素窒素種の重要な原因となり、このような活性種は、細胞毒性物質であって、架橋タンパク質、脂質及び核酸によって細胞性酸化ストレスを誘導し、上皮性機能障害及び損傷を招く。
【００１６】
炎症性疾患があれば、腸管の粘膜で多様な炎症性サイトカインが分泌される。ＴＮＦ−αは、潰瘍性大腸炎患者の大腸ルーメンと大腸上皮細胞で高く表われ、最近の研究によれば、ＴＮＦ−αは、潰瘍性大腸炎の病因として重要な役割を行うと知られた。抗−ＴＮＦ−α抗体であるインフリキシマブ（ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ）は、膿瘍の治療だけではなく、既存に治らなかったクローン病の治療に効果的であると知られた。しかし、このような治療法は、費用が多くかかり、一部患者には、輸液反応または伝染性合併症のような副作用が引き起こされる。
【００１７】
単核球化学走性タンパク質−１（ｍｏｎｏｃｙｔｅ  ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔｐｒｏｔｅｉｎ−１；ＭＣＰ−１）は、Ｃ−Ｃケモカインファミリーのうち、１４ｋＤａであって、炎症部位で主に単核球／大食細胞を動員して活性化させる。ＭＣＰ−１は、大腸の上皮細胞に局在され、その発現が炎症性腸疾患の粘膜で単核球浸潤と関連するという報告があり、他のケモカインとは異なって、ＭＣＰ−１は、単にＣＣＲ２にのみ結合するので、ＭＣＰ−１／ＣＣＲ２結合が単核球動員の主な調節子であり、ＩＢＤで重要な役割を行うと知られている。
【００１８】
また、ＩＢＤを有した患者の粘膜では、有意性のあるようにインターロイキン−８（ＩＬ−８）が上昇し、毛細血管新生を促進すると知られている。大腸での炎症が激しいほどＩＬ−８の発現が増加し、げっ歯類を利用した動物実験モデルでＩＬ−８特異的抗体が腸炎症を減少させるということが知られた。この際、細胞内Ｃａ２＋の変化がＩＬ−８誘導の重要な要素として作用する。
【００１９】
現在、炎症性腸疾患治療剤としては、プロスタグランジン（ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ）の生成を遮断する５−アミノサリチル酸（５−ａｍｉｎｏｓａｌｉｃｙｌｉｃ  ａｃｉｄ；５−ＡＳＡ）系統薬物、例えば、スルファサラジンなどを利用するか、ステロイド類の免疫抑制剤を使っている。
【００２０】
スルファサラジンは、腹部虚実（ｆｕｌｌｎｅｓｓ）、頭痛、発疹、肝疾患、白血球減少症、無顆粒球症、男性不妊のような副作用または逆効果を起こしやすい。また、スルファサラジンが腸の患部を切開した患者または快方に向かっている患者に十分な再発抑制効果があるか否かは不明である。
【００２１】
ステロイド類の免疫抑制剤は、副腎皮質ステロイドであって、短期的な効果は認められているが、長期的な予後を向上させることはできず、誘導された感染性疾患、２次副腎皮質不全症、消化性潰瘍、糖尿病、精神障害、ステロイド性腎臓病のような副作用の側面で、単に急性である場合にのみ使われなければならない限界がある。
【００２２】
一方、血管新生抑制剤を、このような各種血管新生関連疾患または炎症性腸疾患の治療のための薬剤や、癌の成長と癌の転移とを防止する抗癌剤として適用することができるので、最近、血管新生を抑制させて、前記疾患を治療しようとする研究が活発に進められている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２３】
本発明者らは、特定構造のアミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩が、優れた血管新生抑制効果、炎症性腸疾患治療効果、癌疾患治療効果、及び癌転移抑制効果を有することを確認することによって、本発明を完成した。
【００２４】
したがって、本発明の目的は、アミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩を提供するところにある。
【００２５】
したがって、本発明の他の目的は、アミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩を有効成分として含有する薬学組成物を提供するところにある。
【課題を解決するための手段】
【００２６】
前記目的を果たすために、本発明は、下記化学式１で表されるアミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩を提供する：
【化１】
0006502919.tif 000002
[化１]
前記化学式１で、Ｒ１、Ｒ２及びＲ４は、それぞれ同じか異なり、水素、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシまたはハロゲンのうちから選択された何れか１つであり、Ｒ３は、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ、ベンジルオキシまたはヒドロキシのうちから選択された何れか１つであり、Ｒ５は、ハロゲン、ヒドロキシ、（Ｃ１〜Ｃ１２）アルコキシ、フェノキシ、（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルアミノ、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールまたは（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択された１つまたは２つ以上に置換または非置換の（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキル；ハロゲン、ヒドロキシ、（Ｃ１〜Ｃ１２）アルコキシ、（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルアミノまたは（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択された１つまたは２つ以上に置換または非置換の（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール；（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールで置換または非置換の（Ｃ２〜Ｃ１２）アルケニル；（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル；及び（Ｃ３〜Ｃ１４）ヘテロ環化合物からなる群から選択された何れか１つであり得る。
【００２７】
また、本発明は、前記化学式１で表されるアミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩を有効成分として含有する薬学組成物を提供する。
【発明の効果】
【００２８】
本発明によるアミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩は、ニワトリの絨毛尿膜モデルで血管内皮成長因子のような新生血管形成誘導物質の処理による新生血管形成の増加を抑制するので、黄斑変性、関節炎などを含んだ血管新生による疾患の予防または治療のための薬剤として有用に使われる。
【００２９】
また、本発明によるアミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩は、炎症性腸疾患モデルで大腸炎を抑制するので、炎症性腸疾患の予防または治療のための薬剤として有用に使われる。
【００３０】
また、本発明によるアミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩は、絨毛尿膜モデルに肺癌細胞を接種した後、腫瘍形成による血管新生及び腫瘍成長を抑制するだけではなく、癌転移及び浸潤に重要な役割を行うカテプシンＳの活性を抑制するので、癌成長抑制及び癌転移抑制用薬剤として有用に使われる。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】本発明の一実施例によるアミドピリジンオール誘導体の化学式を開示した図面である。
【図２】本発明の他の一実施例によるアミドピリジンオール誘導体の化学式を開示した図面である。
【図３】化合物８ａ、８ｂ及び８ｇの血管新生抑制に対するＩＤ５０を示した図面である。
【図４】化合物８ａ及び８ｂのＶＥＧＦ−誘導性ＲＯＳ消去能を観察した結果である。
【図５】黄斑変性の危険因子である４−ヒドロキシノネナール（４−ＨＮＥ）をＡＲＰＥ−１９細胞株に処理して化合物８ａ及び８ｂのＲＯＳ消去能を観察した結果である。
【図６】黄斑変性の危険因子であるアンジオテンシンＩＩ（Ａｎｇ  ＩＩ）をＡＲＰＥ−１９細胞株に処理して化合物８ａ及び８ｂのＲＯＳ消去能を観察した結果である。
【図７】ＴＮＢＳで誘発されたラットの大腸炎に対するアミドピリジンオール誘導体の抑制効果を観察した結果であって、図７は、アミドピリジンオール誘導体投与１日から６日まで毎日記録した体重変化を観察した図面である。
【図８】ＴＮＢＳで誘発されたラットの大腸炎に対するアミドピリジンオール誘導体の抑制効果を観察した結果であって、図８は、肉眼で観察される大腸の状態を観察した図面である。
【図９】ＴＮＢＳで誘発されたラットの大腸炎に対するアミドピリジンオール誘導体の抑制効果を観察した結果であって、図９は、大腸の重量を測定した図面である。
【図１０】ＴＮＢＳで誘発されたラットの大腸炎に対するアミドピリジンオール誘導体の抑制効果を観察した結果であって、図１０は、ＭＰＯ（ｍｙｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）活性を測定した図面である。
【図１１】ＣＡＭにＡ５４９肺癌細胞を接種した後、化合物８ａ、８ｂ及び８ｇの腫瘍形成による血管新生及び腫瘍成長の抑制効果を観察した結果である。
【図１２】血清（５％）で誘導したＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳癌細胞浸潤に対するカテプシン抑制剤の抑制効果を観察した結果である。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
本発明は、下記化学式１で表されるアミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩を提供する：
【化２】
0006502919.tif 000003
[化１]
前記化学式１で、Ｒ１、Ｒ２及びＲ４は、それぞれ同じか異なり、水素、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシまたはハロゲンのうちから選択された何れか１つであり、Ｒ３は、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ、ベンジルオキシまたはヒドロキシのうちから選択された何れか１つであり、Ｒ５は、ハロゲン、ヒドロキシ、（Ｃ１〜Ｃ１２）アルコキシ、フェノキシ、（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルアミノ、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールまたは（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択された１つまたは２つ以上に置換または非置換の（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキル；ハロゲン、ヒドロキシ、（Ｃ１〜Ｃ１２）アルコキシ、（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルアミノまたは（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択された１つまたは２つ以上に置換または非置換の（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール；（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールで置換または非置換の（Ｃ２〜Ｃ１２）アルケニル；（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル；及び（Ｃ３〜Ｃ１４）ヘテロ環化合物からなる群から選択された何れか１つであり得る。
【００３３】
また、本発明は、前記化学式１で表されるアミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩を有効成分として含有する血管新生による疾患の予防または治療用薬学組成物を提供する。
【００３４】
また、本発明は、前記化学式１で表されるアミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩を有効成分として含有する炎症性腸疾患の治療または予防用薬学組成物を提供する。
【００３５】
また、本発明は、前記化学式１で表されるアミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩を有効成分として含有する癌疾患の予防または治療用薬学組成物を提供する。
【００３６】
また、本発明は、前記化学式１で表されるアミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩を有効成分として含有する癌浸潤または癌転移の予防または抑制用薬学組成物を提供する。
【００３７】
以下、本発明をより詳細に説明する。
本発明は、下記化学式１で表されるアミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩を提供する：
【化３】
0006502919.tif 000004
[化１]
前記化学式１で、Ｒ１、Ｒ２及びＲ４は、それぞれ同じか異なり、水素、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシまたはハロゲンのうちから選択された何れか１つであり、Ｒ３は、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ、ベンジルオキシまたはヒドロキシのうちから選択された何れか１つであり、Ｒ５は、ハロゲン、ヒドロキシ、（Ｃ１〜Ｃ１２）アルコキシ、フェノキシ、（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルアミノ、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールまたは（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択された１つまたは２つ以上に置換または非置換の（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキル；ハロゲン、ヒドロキシ、（Ｃ１〜Ｃ１２）アルコキシ、（Ｃ１〜Ｃ１２）アルキルアミノまたは（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択された１つまたは２つ以上に置換または非置換の（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール；（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールで置換または非置換の（Ｃ２〜Ｃ１２）アルケニル；（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル；及び（Ｃ３〜Ｃ１４）ヘテロ環化合物からなる群から選択された何れか１つであり得る。
【００３８】
望ましくは、前記アミドピリジンオール誘導体は、化学式１で、Ｒ１、Ｒ２及びＲ４は、水素、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルまたは（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシのうち何れか１つであり、Ｒ３は、ベンジルオキシまたはヒドロキシのうち何れか１つであり、Ｒ５は、ハロゲンまたは（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルで置換または非置換の（Ｃ１〜Ｃ１５）アルキル；ハロゲン、ヒドロキシ、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシまたは（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルで置換または非置換のフェニル；フェニルまたはハロフェニルで置換された（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル；シンナミル；フェノキシメチル；（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル；ベンゾジオキソール；ナフタレン；及びチオフェンからなる群から選択された何れか１つであり得る。
【００３９】
より望ましくは、前記アミドピリジンオール誘導体は、Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）アミド誘導体またはＮ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）アミド誘導体から選択された何れか１つであり得る。
【００４０】
前記Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）アミド誘導体としては、Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）アセトアミド、Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）ドデカンアミド、Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−４−クロロブタンアミド、Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）イソブチリルアミド、Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−３−メチルブタンアミド、Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）ピバルアミド、Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）シクロペンタンカルボキサミド、Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）シクロヘキサンカルボキサミド、Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−２−フェニルアセトアミド、Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−３−フェニルプロパンアミド、Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）ベンズアミド、Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−４−フルオロベンズアミド、Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−４−メトキシベンズアミド、Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−４−（ｔｅｒｔ−ブチル）ベンズアミド、Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−カルボキサミド、Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−１−ナフタアミド、Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）チオフェン−２−カルボキサミド、Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−２−エチルブタンアミド、Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−２−フェノキシアセトアミド、Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−２−フェニルブタンアミド、Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−２，４，６−トリメチルベンズアミド、３−ベンジルオキシ−Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）ベンズアミド、Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−３，５，５−トリメチルヘキサンアミド、Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−２−（４−クロロフェニル）アセトアミド、Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−２，２−ジクロロアセトアミド、及びＮ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）シンナミドからなる群から選択された何れか１つであり得る。
【００４１】
前記Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）アミド誘導体としては、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）アセトアミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）ドデカンアミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−４−クロロブタンアミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）イソブチリルアミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−３−メチルブタンアミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）ピバルアミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）シクロペンタンカルボキサミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）シクロヘキサンカルボキサミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−２−フェニルアセトアミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−３−フェニルプロパンアミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）ベンズアミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−４−フルオロベンズアミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−４−メトキシベンズアミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−４−（ｔｅｒｔ−ブチル）ベンズアミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−カルボキサミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−１−ナフタアミド、及びＮ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）チオフェン−２−カルボキサミド、２−エチル−Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）ブタンアミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−２−フェノキシアセトアミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−２−フェニルブタンアミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−２，４，６−トリメチルベンズアミド、３−ヒドロキシ−Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）ベンズアミド、Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−３，５，５−トリメチルヘキサンアミド、２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）アセトアミド、２，２−ジクロロ−Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）アセトアミド、及びＮ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）シンナミドからなる群から選択された何れか１つであり得る。
【００４２】
前記薬剤学的に許容可能な塩は、シュウ酸、マイレン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、及び安息香酸からなる群から選択された有機酸であるか、または塩酸、硫酸、リン酸、及び臭化水素酸からなる群から選択された無機酸によって形成される酸付加塩の形態であり得る。
【００４３】
本発明による化学式１で表されるアミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩は、下記反応式１のような製造方法によって製造可能である：
【化４】
0006502919.tif 000005
【００４４】
より詳細には、ピリドキシン塩酸塩にＳＯＣｌ２とジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）とを加えた後、還流撹拌して化合物１を得て、前記化合物１を酢酸に懸濁させた反応液に亜鉛粉末を少量添加し、還流撹拌して化合物２を得て、前記化合物２をテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）に懸濁させた反応液に１，３−ジブロモ−５，５−ジメチルヒダントイン（ＤＢＤＭＨ）を添加し、撹拌して化合物３を得て、前記化合物３をＤＭＦに溶解させた反応液にＫ２ＣＯ３と塩化ベンジル（ＰｈＣＨ２Ｃｌ）とを添加し、撹拌して化合物４を得て、前記化合物４とＮａＯｔＢｕ、トリ（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（Ｐｄ２（ｄｂａ）３）、及び２，２´−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１´−ビナフチル（ＢＩＮＡＰ）をトルエンに溶解させた反応液にベンゾフェノンイミンを添加し、還流撹拌して化合物５を得て、前記化合物５をメタノール−ＴＨＦ混合溶媒に溶解させた反応液に塩化アセチルを少量添加したメタノール溶液を添加し、撹拌して化合物６を得て、前記化合物６をＣＨ２Ｃｌ２に溶解させた反応液にトリエチルアミン、塩化アセチルを順次に添加し、撹拌して化合物７を得る。また、前記化合物７をメタノールに溶解させた反応液にＰｄ／Ｃ添加し、水素気流下で撹拌するか、前記化合物７をＣＨ２Ｃｌ２に溶解させた反応液にＢＣｌ３を添加して化合物８を得ることもできる。
【００４５】
また、本発明は、前記化学式１で表されるアミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩を有効成分として含有する血管新生による疾患の予防または治療用薬学組成物を提供する。
【００４６】
前記血管新生による疾患は、黄斑変性、糖尿病性網膜症、増殖性硝子体網膜症、未成熟網膜症、緑内障、退化班、翼状片、後水晶体線維増殖症、顆粒性結膜炎、角膜移植拒否、角膜潰瘍、円錐角膜、及び眼科炎症からなる群から選択された眼科疾患であり得る。
【００４７】
前記血管新生による疾患は、リウマチ性関節炎、骨関節炎、敗血症性関節炎、乾癬、シェーグレン症候群、異常創傷癒合、骨疾患、タンパク尿症、腹部大動脈瘤疾患、外傷性関節損傷による退行性軟骨損失、神経系の髄鞘脱落疾患、肝硬変、腎糸球体疾患、胚胎膜の未成熟破裂、歯根膜疾患、動脈硬化症、再狭窄症、中枢神経系の炎症疾患、アルツハイマー疾患、及び皮膚老化からなる群から選択された何れか１つであり得る。
【００４８】
本発明によるアミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩は、ニワトリの絨毛尿膜モデルで血管内皮成長因子のような新生血管形成誘導物質の処理による新生血管形成の増加を抑制するので、黄斑変性、関節炎などを含んだ血管新生による疾患の予防または治療のための薬剤として有用に使われる。
【００４９】
また、本発明は、前記化学式１で表されるアミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩を有効成分として含有する炎症性腸疾患の予防または治療用薬学組成物を提供する。
【００５０】
前記炎症性腸疾患は、潰瘍性大腸炎、クローン病（Ｃｒｏｈｎ´ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、腸管型ベーチェット病、出血性直腸潰瘍、及び回腸嚢炎（ｐｏｕｃｈｉｔｉｓ）からなる群から選択されうる。
【００５１】
本発明によるアミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩は、炎症性腸疾患モデルで大腸炎を抑制するので、炎症性腸疾患の予防または治療のための薬剤として有用に使われる。
【００５２】
また、本発明は、前記化学式１で表されるアミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩を有効成分として含有する癌疾患の予防または治療用薬学組成物を提供する。
【００５３】
また、本発明は、前記化学式１で表されるアミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩を有効成分として含有する癌浸潤または癌転移の予防または抑制用薬学組成物を提供する。
【００５４】
前記癌は、肺癌、乳癌、膀胱癌、骨癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、直腸癌、咽喉癌、喉頭癌、食道癌、膵膓癌、大腸癌、胃癌、舌癌、皮膚癌、脳腫瘍、子宮癌、頭部または頚部癌、胆嚢癌、口腔癌、結腸癌、肛門付近癌、中枢神経系腫瘍、肝癌、及び大腸癌からなる群から選択された何れか１つであり得る。
【００５５】
本発明によるアミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩は、絨毛尿膜モデルに肺癌細胞を接種した後、腫瘍形成による血管新生及び腫瘍成長を抑制するだけではなく、癌転移及び浸潤に重要な役割を行うカテプシンＳの活性を抑制するので、癌成長抑制及び癌転移抑制用薬剤として有用に使われる。
【００５６】
本発明による薬学組成物の適容量及び適用方法は、剤形及び使用目的によって異なる。
【００５７】
本発明による薬学組成物は、組成物総重量に対して、前記アミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩を０．１〜５０重量％で含みうる。
【００５８】
また、本発明による薬学組成物は、薬学組成物の製造に通常の適切な担体、賦形剤及び希釈剤をさらに含みうる。
【００５９】
このような担体、賦形剤及び希釈剤としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、澱粉、アカシアゴム、アルギン酸、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、非晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウム、及び鉱物油が挙げられる。
【００６０】
本発明による薬学組成物は、それぞれ通常の方法によって、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョン、シロップ、エアロゾルなどの経口型剤形、外用剤、座剤及び滅菌注射溶液の形態に剤形化して使われる。
【００６１】
製剤化する場合には、通常の充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤などの希釈剤または賦形剤を使って調剤される。経口投与のための固型製剤には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などが含まれ、このような固型製剤は、前記化合物に少なくとも１つ以上の賦形剤、例えば、澱粉、炭酸カルシウム（ｃａｌｃｉｕｍ  ｃａｒｂｏｎａｔｅ）、スクロース（ｓｕｃｒｏｓｅ）またはラクトース（ｌａｃｔｏｓｅ）、ゼラチンなどを混ぜて調剤する。
【００６２】
また、単純な賦形剤以外に、ステアリン酸マグネシウム、タルクのような潤滑剤も使われる。経口液状製剤としては、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤などが該当するが、よく使われる単純希釈剤である水、流動パラフィン以外に、さまざまな賦形剤、例えば、湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などが含まれうる。非経口投与のための製剤には、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤、座剤が含まれる。非水性溶剤、懸濁剤としては、プロピレングリコール（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物性油、オレイン酸エチルのような注射可能なエステルなどが使われる。座剤の基剤としては、ウイテプゾール（ｗｉｔｅｐｓｏｌ）、マクロゴール、トウイーン（ｔｗｅｅｎ）６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチンなどが使われる。
【００６３】
本発明によるアミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩の使容量は、患者の年齢、性別、体重によって変わりうるが、０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇ、望ましくは、０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇの量を一日１回ないし数回投与することができる。また、アミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩の投与量は、投与経路、疾病の程度、性別、体重、年齢などによって増減されうる。したがって、前記投与量は、如何なる面でも、本発明の範囲を限定するものではない。
【００６４】
前記薬学組成物は、ラット、マウス、家畜、ヒトなどの哺乳動物に多様な経路で投与される。投与のあらゆる方式は、予想されうるが、例えば、経口、直腸または静脈、筋肉、皮下、子宮内硬膜または脳血管内（ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒｏｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ）注射によって投与される。
【００６５】
本発明によるアミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩は、５０％致死量（ＬＣ５０）が２ｇ／ｋｇ以上に安定性が確保されたものであって、本発明の薬学組成物に使うことができる。
【００６６】
以下、本発明の理解を助けるために、実施例を挙げて詳細に説明する。但し、下記の実施例は、本発明の内容を例示するものであり、本発明の範囲が、下記の実施例に限定されるものではない。
【００６７】
＜実施例１＞４，５−ビス（クロロメチル）−２−メチルピリジン−３−オール塩酸塩（１）の製造
ピリドキシン塩酸塩（５ｇ、２４．３１ｍｍｏｌ）に塩化チオニル（３０ｍＬ）とＤＭＦ（０．２ｍＬ、２．５８３ｍｍｏｌ）とを加えた後、８０℃で３時間還流撹拌した。反応液を室温に冷却した後、エチルエーテル（７０ｍＬ）を加え、氷冷下で１時間撹拌した。析出された固体を減圧濾過し、フィルタリングされた固体をエチルエーテルで洗浄した後、乾燥させて目的化合物１（５．５ｇ、９３％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．４２（ｓ、１Ｈ）、４．９９（ｓ、２Ｈ）、４．９６（ｓ、２Ｈ）、２．６３（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【００６８】
＜実施例２＞２，４，５−トリメチルピリジン−３−オール（２）の製造
化合物１（１０ｇ、４１．２３ｍｍｏｌ）の酢酸（５０ｍＬ）懸濁液に亜鉛粉末（８．０８ｇ、１２３．６９ｍｍｏｌ）を少量ずつ分けて加え、１３０℃で２時間還流撹拌した。反応液を室温に冷やした後、反応液を減圧濾過し、１０Ｍ  ＮａＯＨ溶液を使って濾液のｐＨを６に調節した。その液を塩で飽和させた後、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬｘ６）で抽出した。ＥｔＯＡｃ溶液を飽和塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、濾過して減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝２０：１）で精製して、目的化合物２（５．２ｇ、９２％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．４９（ｓ、１Ｈ）、７．７２（ｓ、１Ｈ）、２．３１（ｓ、３Ｈ）、２．１２（ｓ、３Ｈ）、２．０８（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【００６９】
＜実施例３＞６−ブロモ−２，４，５−トリメチルピリジン−３−オール（３）の製造
化合物２（２．５ｇ、１８．２２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３０ｍＬ）懸濁液に１，３−ジブロモ−５，５−ジメチルヒダントイン（ＤＢＤＭＨ、２．５ｇ、９．１１ｍｍｏｌ）を加えた後、室温で３時間撹拌した。反応液を濃縮させた後、残渣をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）と水（２０ｍＬ）とで希釈し、水層をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬｘ３）で抽出した。ＥｔＯＡｃ溶液を飽和塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、濾過して減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：Ｈｅｘ＝１：４）で精製して、目的化合物３（３．２２ｇ、８０％）を薄黄色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨＣｌ３−ｄ）δ５．５６（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、２．４２（ｓ、３Ｈ）、２．３１（ｓ、３Ｈ）、２．２５（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【００７０】
＜実施例４＞３−（ベンジルオキシ）−６−ブロモ−２，４，５−トリメチルピリジン（４）の製造
化合物３（６．５ｇ、３０．０８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１５ｍＬ）溶液にＫ２ＣＯ３（２０．７８ｇ、１５０．０４ｍｍｏｌ）、塩化ベンジル（５．２ｍＬ、４５．１２ｍｍｏｌ）を順に加えた後、室温で１２時間撹拌した。反応液をＥｔＯＡｃ（７００ｍＬ）で希釈し、水（２０ｍＬｘ１０）で洗浄した。ＥｔＯＡｃ溶液を飽和塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、濾過して減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡＣ：Ｈｅｘ＝１：２０）で精製して、目的化合物４（８．９ｇ、９７％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨＣｌ３−ｄ）δ７．３８−７．４３（ｍ、５Ｈ）、４．７７（ｓ、２Ｈ）、２．４６（ｓ、３Ｈ）、２．３２（ｓ、３Ｈ）、２．２４（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【００７１】
＜実施例５＞５−（ベンジルオキシ）−Ｎ−（ジフェニルメチレン）−３，４，６−トリメチルピリジン−２−アミン（５）の製造
化合物４（３ｇ、９．８０ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（Ｐｄ２（ＤＢＡ）３、２０３ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）、２，２´−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１´−ビナフチル（ＢＩＮＡＰ、２４９ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）、ＮａＯｔＢｕ（１．３６ｇ、１３．７１ｍｍｏｌ）のトルエン（３０ｍＬ）溶液にベンゾフェノンイミン（１．７３ｍＬ、９．８０ｍｍｏｌ）を加えた後、１２０℃で１２時間還流撹拌した。反応液を室温に冷やした後、ＥｔＯＡｃ（７００ｍＬ）と水（１０ｍＬ）とで希釈し、ＥｔＯＡｃ溶液を飽和塩水（３０ｍＬｘ５）で洗浄した。無水ＭｇＳＯ４で乾燥、濾過した後、減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：Ｈｅｘ＝１：４）で精製して、目的化合物５（３．２８ｇ、８３％）を黄色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨＣｌ３−ｄ）δ７．８０（ｄ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、２Ｈ）、７．１７−７．４８（ｍ、１３Ｈ）、４．６９（ｓ、２Ｈ）、２．２９（ｓ、３Ｈ）、２．０３（ｓ、３Ｈ）、１．９１（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【００７２】
＜実施例６＞５−（ベンジルオキシ）−３，４，６−トリメチルピリジン−２−アミン（６）の製造
メタノール（５０ｍＬ）に塩化アセチル（２ｍＬ）を氷冷下で少しずつ落として溶かし、その溶液を化合物５（２ｇ、４．９２０ｍｍｏｌ）のメタノール（５０ｍＬ）−ＴＨＦ（５ｍＬ）混合溶液に加えた後、室温で１２時間撹拌した。反応液を減圧濃縮した後、反応液をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で希釈させ、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（２０ｍＬｘ４）で洗浄した。ＥｔＯＡｃ溶液を飽和塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、濾過した後、減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝２０：１）で精製して、目的化合物６（９９２ｍｇ、８３％）を薄黄色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨＣｌ３−ｄ）δ７．３１−７．４５（ｍ、５Ｈ）、４．６８（ｓ、２Ｈ）、４．２５（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、２．３４（ｓ、３Ｈ）、２．１６（ｓ、３Ｈ）、１．９９（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【００７３】
＜実施例７＞Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）アミド誘導体（７ａ〜７ｚ）の製造
下記のように製造されたそれぞれのＮ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）アミド誘導体を図１に示した。
【００７４】
＜実施例７−１＞Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）アセトアミド（７ａ）の製造
化合物６（２００ｍｇ、０．８２５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（０．１６１ｍＬ、１．１５５ｍｍｏｌ）、塩化アセチル（０．０７３ｍＬ、０．９９０ｍｍｏｌ）を順に加えた後、室温で８時間撹拌した。反応液をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬｘ２）、水（１０ｍＬｘ２）で洗浄した。ＣＨ２Ｃｌ２溶液を飽和塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、濾過して減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡＣ：Ｈｅｘ＝２：１）で精製して、目的化合物７ａ（１８４ｍｇ、７８％）を黄色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨＣｌ３−ｄ）δ８．４４（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、７．３０−７．４５（ｍ、５Ｈ）、４．７５（ｓ、２Ｈ）、２．４０（ｓ、３Ｈ）、２．２３（ｓ、３Ｈ）、２．１６（ｓ、３Ｈ）、２．１３（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【００７５】
＜実施例７−２＞Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）ドデカンアミド（７ｂ）の製造
化合物６（１５０ｍｇ、０．６１９ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（０．１２０ｍＬ、０．８６７ｍｍｏｌ）、塩化ドデカノイル（０．１７６ｍＬ、０．７４３ｍｍｏｌ）を順に加えた後、室温で５時間撹拌した。反応液をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬｘ２）、水（１０ｍＬｘ２）で洗浄した。ＣＨ２Ｃｌ２溶液を飽和塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、濾過して減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡＣ：Ｈｅｘ＝１：５）で精製して、目的化合物７ｂ（１８４ｍｇ、７０％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨＣｌ３−ｄ）δ７．７４（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、７．３５−７．４６（ｍ、５Ｈ）、４．７６（ｓ、２Ｈ）、２．４１（ｓ、３Ｈ）、２．３５−２．４０（ｍ、２Ｈ）、２．２３（ｓ、３Ｈ）、２．１１（ｓ、３Ｈ）、１．６５−１．７７（ｍ、２Ｈ）、１．２５（ｓ、１６Ｈ）、０．８６（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【００７６】
＜実施例７−３＞Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−４−クロロブタンアミド（７ｃ）の製造
化合物６（５００ｍｇ、２．０６３ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（０．６８８ｍＬ、２．４７５ｍｍｏｌ）、４−塩化クロロブタノイル（１．１５５ｍＬ、２．８８７ｍｍｏｌ）を順に加えた後、室温で５時間撹拌した。反応液をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬｘ２）、水（１０ｍＬｘ２）で洗浄した。ＣＨ２Ｃｌ２溶液を飽和塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、濾過して減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡＣ：Ｈｅｘ＝１：１）で精製して、目的化合物７ｃ（１０２ｍｇ、１４％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨＣｌ３−ｄ）δ８．３７（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、７．３３−７．４４（ｍ、５Ｈ）、４．７６（ｓ、２Ｈ）、３．６３（ｔ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、２Ｈ）、２．５９（ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、２Ｈ）、２．４１（ｓ、３Ｈ）、２．２３（ｓ、３Ｈ）、２．１６（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、２．１１（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【００７７】
＜実施例７−４＞Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）イソブチリルアミド（７ｄ）の製造
化合物６（２００ｍｇ、０．８２５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（０．１６１ｍＬ、１．１５５ｍｍｏｌ）、塩化イソブチリル（１０７ｍｇ、０．９９０ｍｍｏｌ）を順に加えた後、室温で５時間撹拌した。反応液をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬｘ２）、水（１０ｍＬｘ２）で洗浄した。ＣＨ２Ｃｌ２溶液を飽和塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、濾過して減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡＣ：Ｈｅｘ＝１：３）で精製して、目的化合物７ｄ（１７７ｍｇ、７２％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨＣｌ３−ｄ）δ８．５１（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、７．３４−７．４７（ｍ、５Ｈ）、４．７５（ｓ、２Ｈ）、２．５６−２．６７（ｍ、１Ｈ）、２．４１（ｓ、３Ｈ）、２．２４（ｓ、３Ｈ）、２．０９（ｓ、３Ｈ）、１．２５（ｓ、３Ｈ）、１．２２（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【００７８】
＜実施例７−５＞Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−３−メチルブタンアミド（７ｅ）の製造
化合物６（２００ｍｇ、０．８２５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（０．１６１ｍＬ、１．１５５ｍｍｏｌ）、塩化イソバレリル（０．１２４ｍＬ、０．９９０ｍｍｏｌ）を順に加えた後、室温で５時間撹拌した。反応液をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬｘ２）、水（１０ｍＬｘ２）で洗浄した。ＣＨ２Ｃｌ２溶液を飽和塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、濾過して減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡＣ：Ｈｅｘ＝１：３）で精製して、目的化合物７ｅ（１９７ｍｇ、７３％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨＣｌ３−ｄ）δ８．５９（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、７．３１−７．４５（ｍ、５Ｈ）、４．７４（ｓ、２Ｈ）、２．４０（ｓ、３Ｈ）、２．２４−２．２５（ｍ、６Ｈ）、２．１２（ｓ、３Ｈ）、１．００（ｄ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、６Ｈ）ｐｐｍ。
【００７９】
＜実施例７−６＞Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）ピバルアミド（７ｆ）の製造
化合物６（２００ｍｇ、０．８２５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（０．１６１ｍＬ、１．１５５ｍｍｏｌ）、塩化ピバロイル（０．１２３ｍＬ、０．９９０ｍｍｏｌ）を順に加えた後、室温で１０時間撹拌した。反応液をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬｘ２）、水（１０ｍＬｘ２）で洗浄した。ＣＨ２Ｃｌ２溶液を飽和塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、濾過して減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡＣ：Ｈｅｘ＝１：３）で精製して、目的化合物７ｆ（２０７ｍｇ、７７％）を白色のキャラメル状として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨＣｌ３−ｄ）δ７．９０（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、７．３０−７．４５（ｍ、５Ｈ）、４．７４（ｓ、２Ｈ）、２．４０（ｓ、３Ｈ）、２．２２（ｓ、３Ｈ）、２．０４（ｓ、３Ｈ）、１．３２（ｓ、９Ｈ）ｐｐｍ。
【００８０】
＜実施例７−７＞Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）シクロペンタンカルボキサミド（７ｇ）の製造
化合物６（１１３ｍｇ、０．４６７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（０．０９１ｍＬ、０．６５４ｍｍｏｌ）、塩化シクロペンタンカルボニル（０．０６９ｍＬ、０．５６０ｍｍｏｌ）を順に加えた後、室温で４時間撹拌した。反応液をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬｘ２）、水（１０ｍＬｘ２）で洗浄した。ＣＨ２Ｃｌ２溶液を飽和塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、濾過して減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡＣ：Ｈｅｘ＝１：３）で精製して、目的化合物７ｇ（１４８ｍｇ、９３％）を黄色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨＣｌ３−ｄ）δ８．７１（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、７．３４−７．４５（ｍ、５Ｈ）、４．７４（ｓ、２Ｈ）、２．７３−２．８５（ｍ、１Ｈ）、２．４０（ｓ、３Ｈ）、２．２３（ｓ、３Ｈ）、２．０９（ｓ、３Ｈ）、１．５５−１．９０（ｍ、８Ｈ）ｐｐｍ。
【００８１】
＜実施例７−８＞Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）シクロヘキサンカルボキサミド（７ｈ）の製造
化合物６（２００ｍｇ、０．８２５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（０．１６１ｍＬ、１．１５５ｍｍｏｌ）、塩化シクロヘキサノニル（０．１３２ｍＬ、０．９９０ｍｍｏｌ）を順に加えた後、室温で５時間撹拌した。反応液をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬｘ２）、水（１０ｍＬｘ２）で洗浄した。ＣＨ２Ｃｌ２溶液を飽和塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、濾過して減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡＣ：Ｈｅｘ＝１：１）で精製して、目的化合物７ｈ（１０３ｍｇ、３５％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨＣｌ３−ｄ）δ８．００（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、７．３３−７．４５（ｍ、５Ｈ）、４．７５（ｓ、２Ｈ）、２．４０（ｓ、３Ｈ）、２．２９−２．３５（ｍ、１Ｈ）、２．２３（ｓ、３Ｈ）、２．０８（ｓ、３Ｈ）、１．９４−２．００（ｍ、２Ｈ）、１．７８−１．８１（ｍ、２Ｈ）、１．４６−１．６１（ｍ、２Ｈ）、１．１９−１．３８（ｍ、４Ｈ）ｐｐｍ。
【００８２】
＜実施例７−９＞Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−２−フェニルアセトアミド（７ｉ）の製造
化合物６（２００ｍｇ、０．８２５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（０．１６１ｍＬ、１．１５５ｍｍｏｌ）、塩化フェニルアセチル（０．１３４ｍＬ、０．９９０ｍｍｏｌ）を順に加えた後、室温で５時間撹拌した。反応液をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬｘ２）、水（１０ｍＬｘ２）で洗浄した。ＣＨ２Ｃｌ２溶液を飽和塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、濾過して減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡＣ：Ｈｅｘ＝１：１）で精製して、目的化合物７ｉ（１９０ｍｇ、６４％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨＣｌ３−ｄ）δ８．０８（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、７．２６−７．４４（ｍ、１０Ｈ）、４．７２（ｓ、２Ｈ）、３．７４（ｓ、２Ｈ）、２．３６（ｓ、３Ｈ）、２．２０（ｓ、３Ｈ）、２．０４（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【００８３】
＜実施例７−１０＞Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−３−フェニルプロパンアミド（７ｊ）の製造
化合物６（２００ｍｇ、０．８２５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（０．１６１ｍＬ、１．１５５ｍｍｏｌ）、塩化ヒドロシンナモイル（０．１４７ｍＬ、０．９９０ｍｍｏｌ）を順に加えた後、室温で８時間撹拌した。反応液をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬｘ２）、水（１０ｍＬｘ２）で洗浄した。ＣＨ２Ｃｌ２溶液を飽和塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、濾過して減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡＣ：Ｈｅｘ＝１：３）で精製して、目的化合物７ｊ（３１０ｍｇ、９９％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨＣｌ３−ｄ）δ８．３３（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、７．１４−７．４４（ｍ、１０Ｈ）、４．７４（ｓ、２Ｈ）、３．０２（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．７０（ｔ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．３８（ｓ、３Ｈ）、２．２２（ｓ、３Ｈ）、２．０３（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【００８４】
＜実施例７−１１＞Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）ベンズアミド（７ｋ）の製造
化合物６（１６７ｍｇ、０．６８９ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（０．１３６ｍＬ、０．９６５ｍｍｏｌ）、塩化ベンゾイル（０．０９６ｍＬ、０．８２７ｍｍｏｌ）を順に加えた後、室温で１２時間撹拌した。反応液をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬｘ２）、水（１０ｍＬｘ２）で洗浄した。ＣＨ２Ｃｌ２溶液を飽和塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、濾過して減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡＣ：Ｈｅｘ＝１：５）で精製して、目的化合物７ｋ（２０６ｍｇ、８６％）を白色のキャラメル状として得た。
【００８５】
＜実施例７−１２＞Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−４−フルオロベンズアミド（７ｌ）の製造
化合物６（２００ｍｇ、０．８２５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（０．１６１ｍＬ、１．１５５ｍｍｏｌ）、４−塩化フルオロベンゾイル（０．１１９ｍＬ、０．９９０ｍｍｏｌ）を順に加えた後、室温で５時間撹拌した。反応液をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬｘ２）、水（１０ｍＬｘ２）で洗浄した。ＣＨ２Ｃｌ２溶液を飽和塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、濾過して減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡＣ：Ｈｅｘ＝１：５）で精製して、目的化合物７ｌ（２１８ｍｇ、７２％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨＣｌ３−ｄ）δ８．８６（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、７．９３−７．９８（ｍ、２Ｈ）、７．３１−７．４６（ｍ、５Ｈ）、７．０６−７．１３（ｍ、２Ｈ）、４．７６（ｓ、２Ｈ）、２．３９（ｓ、３Ｈ）、２．２７（ｓ、３Ｈ）、２．１７（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【００８６】
＜実施例７−１３＞Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−４−メトキシベンズアミド（７ｍ）の製造
化合物６（２００ｍｇ、０．８２５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（０．１６１ｍＬ、１．１５５ｍｍｏｌ）、４−塩化メトキシベンゾイル（０．１３５ｍＬ、０．９９０ｍｍｏｌ）を順に加えた後、室温で４時間撹拌した。反応液をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬｘ２）、水（１０ｍＬｘ２）で洗浄した。ＣＨ２Ｃｌ２溶液を飽和塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、濾過して減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡＣ：Ｈｅｘ＝１：３）で精製して、目的化合物７ｍ（２２０ｍｇ、７１％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨＣｌ３−ｄ）δ８．６１（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、７．９１（ｄｄ、Ｊ＝６．８、１．９Ｈｚ、２Ｈ）、７．３１−７．４６（ｍ、５Ｈ）、６．９１（ｄｄ、Ｊ＝６．９、１．９Ｈｚ、２Ｈ）、４．７５（ｓ、２Ｈ）、３．８３（ｓ、３Ｈ）、２．４０（ｓ、３Ｈ）、２．２６（ｓ、３Ｈ）、２．１６（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【００８７】
＜実施例７−１４＞Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−４−（ｔｅｒｔ−ブチル）ベンズアミド（７ｎ）の製造
化合物６（２００ｍｇ、０．８２５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（０．１６１ｍＬ、１．１５５ｍｍｏｌ）、４−ｔｅｒｔ−塩化ブチルベンゾイル（０．１９７ｍＬ、０．９９０ｍｍｏｌ）を順に加えた後、室温で３時間撹拌した。反応液をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬｘ２）、水（１０ｍＬｘ２）で洗浄した。ＣＨ２Ｃｌ２溶液を飽和塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、濾過して減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡＣ：Ｈｅｘ＝１：５）で精製して、目的化合物７ｎ（２１８ｍｇ、６６％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨＣｌ３−ｄ）δ８．９６（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、７．８９（ｄｄ、Ｊ＝６．７、１．７Ｈｚ、２Ｈ）、７．３１−７．４７（ｍ、７Ｈ）、４．７６（ｓ、２Ｈ）、２．４０（ｓ、３Ｈ）、２．２６（ｓ、３Ｈ）、２．１７（ｓ、３Ｈ）、１．３２（ｓ、９Ｈ）ｐｐｍ。
【００８８】
＜実施例７−１５＞Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−カルボキサミド（７ｏ）の製造
化合物６（２００ｍｇ、０．８２５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（０．１６１ｍＬ、１．１５５ｍｍｏｌ）、塩化ピペロニロイル（１８６ｍｇ、０．９９０ｍｍｏｌ）を順に加えた後、室温で５時間撹拌した。反応液をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬｘ２）、水（１０ｍＬｘ２）で洗浄した。ＣＨ２Ｃｌ２溶液を飽和塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、濾過して減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡＣ：Ｈｅｘ＝１：５）で精製して、目的化合物７ｏ（２３３ｍｇ、７３％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨＣｌ３−ｄ）δ８．８６（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、７．３１−７．５２（ｍ、７Ｈ）、６．８０（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、１Ｈ）、６．００（ｓ、２Ｈ）、４．７５（ｓ、２Ｈ）、２．３９（ｓ、３Ｈ）、２．２５（ｓ、３Ｈ）、２．１４（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【００８９】
＜実施例７−１６＞Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−１−ナフタアミド（７ｐ）の製造
化合物６（２００ｍｇ、０．８２５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（０．１６１ｍＬ、１．１５５ｍｍｏｌ）、１−塩化ナフトイル（０．１５３ｍＬ、０．９９０ｍｍｏｌ）を順に加えた後、室温で２時間撹拌した。反応液をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬｘ２）、水（１０ｍＬｘ２）で洗浄した。ＣＨ２Ｃｌ２溶液を飽和塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、濾過して減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡＣ：Ｈｅｘ＝１：５）で精製して、目的化合物７ｐ（１７０ｍｇ、６０％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨＣｌ３−ｄ）δ８．６９（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、８．４９−８．５３（ｍ、１Ｈ）、７．８３−７．９５（ｍ、３Ｈ）、７．３１−７．５８（ｍ、８Ｈ）、４．７６（ｓ、２Ｈ）、２．３５（ｓ、３Ｈ）、２．２８−２．２９（ｍ、６Ｈ）ｐｐｍ。
【００９０】
＜実施例７−１７＞Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）チオフェン−２−カルボキサミド（７ｑ）の製造
化合物６（２００ｍｇ、０．８２５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（０．１６１ｍＬ、１．１５５ｍｍｏｌ）、２−塩化チオフェンカルボニル（０．１０９ｍＬ、０．９９０ｍｍｏｌ）を順に加えた後、室温で５時間撹拌した。反応液をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬｘ２）、水（１０ｍＬｘ２）で洗浄した。ＣＨ２Ｃｌ２溶液を飽和塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、濾過して減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡＣ：Ｈｅｘ＝１：５）で精製して、目的化合物７ｑ（１８８ｍｇ、６４％）を黄色のキャラメル状として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨＣｌ３−ｄ）δ７．７４（ｄｄ、Ｊ＝３．７、１．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．３３−７．４９（ｍ、６Ｈ）、７．０５（ｄｄ、Ｊ＝４．９、３．７Ｈｚ、１Ｈ）、４．７６（ｓ、２Ｈ）、２．４０（ｓ、３Ｈ）、２．２５（ｓ、３Ｈ）、２．１８（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【００９１】
＜実施例７−１８＞Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−２−エチルブタンアミド（７ｒ）の製造
化合物６（２００ｍｇ、０．８２５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（０．１６１ｍＬ、１．１５５ｍｍｏｌ）、２−塩化エチルブチリル（０．１４０ｍＬ、０．９９０ｍｍｏｌ）を順に加えた後、室温で３時間撹拌した。反応液をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬｘ２）、水（１０ｍＬｘ２）で洗浄した。ＣＨ２Ｃｌ２溶液を飽和塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、濾過して減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡＣ：Ｈｅｘ＝１：２）で精製して、目的化合物７ｒ（２１５ｍｇ、７６％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨＣｌ３−ｄ）δ７．７７（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、７．３０−７．４６（ｍ、５Ｈ）、４．７４（ｓ、２Ｈ）、２．４０（ｓ、３Ｈ）、２．２２（ｓ、３Ｈ）、２．１５−２．１８（ｍ、１Ｈ）、２．１０（ｓ、３Ｈ）、１．６８−１．８３（ｍ、２Ｈ）、１．４９−１．６５（ｍ、２Ｈ）、０．９８（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【００９２】
＜実施例７−１９＞Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−２−フェノキシアセトアミド（７ｓ）の製造
化合物６（２００ｍｇ、０．８２５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（０．１６１ｍＬ、１．１５５ｍｍｏｌ）、塩化フェノキシアセチル（０．１４０ｍＬ、０．９９０ｍｍｏｌ）を順に加えた後、室温で２時間撹拌した。反応液をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬｘ２）、水（１０ｍＬｘ２）で洗浄した。ＣＨ２Ｃｌ２溶液を飽和塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、濾過して減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡＣ：Ｈｅｘ＝１：２）で精製して、目的化合物７ｓ（２６３ｍｇ、８５％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨＣｌ３−ｄ）δ８．５３（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、７．２９−７．４７（ｍ、７Ｈ）、６．９４−７．０５（ｍ、３Ｈ）、４．７６（ｓ、２Ｈ）、４．６４（ｓ、２Ｈ）、２．４４（ｓ、３Ｈ）、２．２５（ｓ、３Ｈ）、２．１２（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【００９３】
＜実施例７−２０＞Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−２−フェニルブタンアミド（７ｔ）の製造
化合物６（２００ｍｇ、０．８２５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（０．１６１ｍＬ、１．１５５ｍｍｏｌ）、２−塩化フェニルブチリル（０．１６９ｍＬ、０．９９０ｍｍｏｌ）を順に加えた後、室温で５時間撹拌した。反応液をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬｘ２）、水（１０ｍＬｘ２）で洗浄した。ＣＨ２Ｃｌ２溶液を飽和塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、濾過して減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡＣ：Ｈｅｘ＝１：３）で精製して、目的化合物７ｔ（２４８ｍｇ、７７％）を黄色の飴状として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨＣｌ３−ｄ）δ７．９０（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、７．２０−７．４５（ｍ、１０Ｈ）、４．７２（ｓ、２Ｈ）、３．４５（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、１Ｈ）、２．３４（ｓ、３Ｈ）、２．１６−２．２７（ｍ、４Ｈ）、１．９４（ｓ、３Ｈ）、１．７４−１．８９（ｍ、１Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【００９４】
＜実施例７−２１＞Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−２，４，６−トリメチルベンズアミド（７ｕ）の製造
化合物６（２００ｍｇ、０．８２５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（０．１６１ｍＬ、１．１５５ｍｍｏｌ）、２，４，６−塩化トリメチルベンゾイル（０．１６８ｍＬ、０．９９０ｍｍｏｌ）を順に加えた後、室温で１２時間撹拌した。反応液をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬｘ２）、水（１０ｍＬｘ２）で洗浄した。ＣＨ２Ｃｌ２溶液を飽和塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、濾過して減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡＣ：Ｈｅｘ＝１：４）で精製して、目的化合物７ｕ（１０４ｍｇ、３３％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨＣｌ３−ｄ）δ７．５６（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、７．３２−７．４８（ｍ、５Ｈ）、６．８５（ｓ、２Ｈ）、４．７６（ｓ、２Ｈ）、２．４１（ｓ、９Ｈ）、２．２７（ｓ、９Ｈ）ｐｐｍ。
【００９５】
＜実施例７−２２＞３−ベンジルオキシ−Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）ベンズアミド（７ｖ）の製造
化合物６（２００ｍｇ、０．８２５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（０．１６１ｍＬ、１．１５５ｍｍｏｌ）、３−塩化ベンジルオキシベンゾイル（２６０ｍｇ、０．９９０ｍｍｏｌ）を順に加えた後、室温で３時間撹拌した。反応液をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬｘ２）、水（１０ｍＬｘ２）で洗浄した。ＣＨ２Ｃｌ２溶液を飽和塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、濾過して減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡＣ：Ｈｅｘ＝１：３）で精製して、目的化合物７ｖ（２７６ｍｇ、７４％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨＣｌ３−ｄ）δ８．４６（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、７．３１−７．５７（ｍ、１３Ｈ）、７．１３（ｄｄ、Ｊ＝７．８、２．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．０８（ｓ、２Ｈ）、４．７５（ｓ、２Ｈ）、２．４２（ｓ、３Ｈ）、２．２７（ｓ、３Ｈ）、２．１７（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【００９６】
＜実施例７−２３＞Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−３，５，５−トリメチルヘキサンアミド（７ｗ）の製造
化合物６（２００ｍｇ、０．８２５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（０．１６１ｍＬ、１．１５５ｍｍｏｌ）、３，５，５−塩化トリメチルヘキサノイル（０．１９２ｍＬ、０．９９０ｍｍｏｌ）を順に加えた後、室温で３時間撹拌した。反応液をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬｘ２）、水（１０ｍＬｘ２）で洗浄した。ＣＨ２Ｃｌ２溶液を飽和塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、濾過して減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡＣ：Ｈｅｘ＝１：２）で精製して、目的化合物７ｗ（２６８ｍｇ、８５％）を黄色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨＣｌ３−ｄ）δ８．４７（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、７．３０−７．４６（ｍ、５Ｈ）、４．７４（ｓ、２Ｈ）、２．３５−２．４８（ｍ、４Ｈ）、２．２３（ｓ、３Ｈ）、２．１５−２．１９（ｍ、２Ｈ）、２．１２（ｓ、３Ｈ）、１．３０（ｄｄ、Ｊ＝１４．０、３．４Ｈｚ、１Ｈ）、１．１２（ｄｄ、Ｊ＝１４．０、６．２Ｈｚ、１Ｈ）、１．０４（ｄ、Ｊ＝６．１Ｈｚ、３Ｈ）、０．９０（ｓ、９Ｈ）ｐｐｍ。
【００９７】
＜実施例７−２４＞Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−２−（４−クロロフェニル）アセトアミド（７ｘ）の製造
化合物６（２００ｍｇ、０．８２５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（０．１６１ｍＬ、１．１５５ｍｍｏｌ）、４−塩化クロロフェニルアセチル（０．１４９ｍＬ、０．９９０ｍｍｏｌ）を順に加えた後、室温で２時間撹拌した。反応液をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬｘ２）、水（１０ｍＬｘ２）で洗浄した。ＣＨ２Ｃｌ２溶液を飽和塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、濾過して減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡＣ：Ｈｅｘ＝１：１）で精製して、目的化合物７ｘ（２３５ｍｇ、７２％）を米色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨＣｌ３−ｄ）δ８．２９（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、７．２１−７．４４（ｍ、９Ｈ）、４．７４（ｓ、２Ｈ）、３．６８（ｓ、２Ｈ）、２．３６（ｓ、３Ｈ）、２．２１（ｓ、３Ｈ）、２．０４（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【００９８】
＜実施例７−２５＞Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−２，２−ジクロロアセトアミド（７ｙ）の製造
化合物６（２００ｍｇ、０．８２５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（０．１６１ｍＬ、１．１５５ｍｍｏｌ）、塩化ジクロロアセチル（０．０９７ｍＬ、０．９９０ｍｍｏｌ）を順に加えた後、室温で４時間撹拌した。反応液をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬｘ２）、水（１０ｍＬｘ２）で洗浄した。ＣＨ２Ｃｌ２溶液を飽和塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、濾過して減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡＣ：Ｈｅｘ＝１：３）で精製して、目的化合物７ｙ（２１７ｍｇ、７４％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨＣｌ３−ｄ）δ９．５３（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、７．３１−７．４４（ｍ、５Ｈ）、６．１０（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、４．７７（ｓ、２Ｈ）、２．４２（ｓ、３Ｈ）、２．２５（ｓ、３Ｈ）、２．１４（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【００９９】
＜実施例７−２６＞Ｎ−（５−ベンジルオキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）シンナマイド（７ｚ）の製造
化合物６（２００ｍｇ、０．８２５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（０．１６１ｍＬ、１．１５５ｍｍｏｌ）、塩化シンナモイル（１４２ｍｇ、０．８３３ｍｍｏｌ）を順に加えた後、氷冷下で３０分撹拌した。反応液をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬｘ２）、水（１０ｍＬｘ２）で洗浄した。ＣＨ２Ｃｌ２溶液を飽和塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥、濾過して減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡＣ：Ｈｅｘ＝１：３）で精製して、目的化合物７ｚ（２１１ｍｇ、６９％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨＣｌ３−ｄ）δ８．３７（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、７．７２（ｄ、Ｊ＝１６Ｈｚ、１Ｈ）、７．３３−７．５１（ｍ、１０Ｈ）、６．６７（ｄ、Ｊ＝１６Ｈｚ、１Ｈ）、４．７７（ｓ、２Ｈ）、２．４３（ｓ、３Ｈ）、２．２５（ｓ、３Ｈ）、２．１７（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【０１００】
＜実施例８＞Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）アミド誘導体（８ａ〜８ｚ）の製造
下記から製造されたそれぞれのＮ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）アミド誘導体を図２に示した。
【０１０１】
＜実施例８−１＞Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）アセトアミド（８ａ）の製造
化合物７ａ（１６４ｍｇ、０．５７７ｍｍｏｌ）のメタノール（５ｍＬ）溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（３３ｍｇ）を加え、水素気流下の室温で４時間撹拌した。反応液を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣をメタノールに溶かした後、その溶液をシリンジフィルター（ＡｄｖａｎｔｅｃＴＭ  ＪＰ０５０ＡＮ）を使って濾過し、濃縮して目的化合物８ａ（１０５ｍｇ、９４％）を薄黄色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨ３ＯＨ−ｄ４）δ２．３０（ｓ、３Ｈ）、２．１５（ｓ、３Ｈ）、２．０８（ｓ、３Ｈ）、２．０５（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【０１０２】
＜実施例８−２＞Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）ドデカンアミド（８ｂ）の製造
化合物７ｂ（１３０ｍｇ、０．３０６ｍｍｏｌ）のメタノール（５ｍＬ）溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（２５ｍｇ）を加え、水素気流下の室温で１０時間撹拌した。反応液を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣をメタノールに溶かした後、その溶液をシリンジフィルター（ＡｄｖａｎｔｅｃＴＭ  ＪＰ０５０ＡＮ）を使って濾過し、濃縮して目的化合物８ｂ（７７ｍｇ、７５％）を薄黄色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．６０（ｓ、１Ｈ）、２．２８（ｓ、３Ｈ）、２．１５−２．２６（ｍ、２Ｈ）、２．１１（ｓ、３Ｈ）、１．９４（ｓ、３Ｈ）、１．４４−１．５４（ｍ、２Ｈ）、１．２３（ｓ、１６Ｈ）、０．８５（ｔ、Ｊ＝５．５Ｈｚ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【０１０３】
＜実施例８−３＞Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−４−クロロブタンアミド（８ｃ）の製造
化合物７ｃ（１０２ｍｇ、０．２９４ｍｍｏｌ）のメタノール（５ｍＬ）溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（２１ｍｇ）を加え、水素気流下の室温で４時間撹拌した。反応液を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣をメタノールに溶かした後、その溶液をシリンジフィルター（ＡｄｖａｎｔｅｃＴＭ  ＪＰ０５０ＡＮ）を使って濾過し、濃縮して目的化合物８ｃ（７５ｍｇ、９９％）を黄色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨ３ＯＨ−ｄ４）δ３．６４（ｔ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、２Ｈ）、２．５５（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、２．３３（ｓ、３Ｈ）、２．１８（ｓ、３Ｈ）、２．１２（ｔ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、２Ｈ）、２．０７（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【０１０４】
＜実施例８−４＞Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）イソブチリルアミド（８ｄ）の製造
化合物７ｄ（１５５ｍｇ、０．４９６ｍｍｏｌ）のメタノール（５ｍＬ）溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（３１ｍｇ）を加え、水素気流下の室温で３時間撹拌した。反応液を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣をメタノールに溶かした後、その溶液をシリンジフィルター（ＡｄｖａｎｔｅｃＴＭ  ＪＰ０５０ＡＮ）を使って濾過し、濃縮して目的化合物８ｄ（９５ｍｇ、８６％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨ３ＯＨ−ｄ４）δ２．５５−２．７２（ｍ、１Ｈ）、２．３３（ｓ、３Ｈ）、２．１８（ｓ、３Ｈ）、２．０５（ｓ、３Ｈ）、１．２２（ｓ、３Ｈ）、１．１９（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【０１０５】
＜実施例８−５＞Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−３−メチルブタンアミド（８ｅ）の製造
化合物７ｅ（１７０ｍｇ、０．５２０ｍｍｏｌ）のメタノール（５ｍＬ）溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（３４ｍｇ）を加え、水素気流下の室温で４時間撹拌した。反応液を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣をメタノールに溶かした後、その溶液をシリンジフィルター（ＡｄｖａｎｔｅｃＴＭ  ＪＰ０５０ＡＮ）を使って濾過し、濃縮して目的化合物８ｅ（１０２ｍｇ、８２％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨ３ＯＨ−ｄ４）δ２．３３（ｓ、３Ｈ）、２．２０−２．２５（ｍ、２Ｈ）、２．１８（ｓ、３Ｈ）、２．１２−２．１５（ｍ、１Ｈ）、２．０７（ｓ、３Ｈ）、１．０２（ｓ、３Ｈ）、１．００（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【０１０６】
＜実施例８−６＞Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）ピバルアミド（８ｆ）の製造
化合物７ｆ（１６０ｍｇ、０．４９０ｍｍｏｌ）のメタノール（５ｍＬ）溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（３２ｍｇ）を加え、水素気流下の室温で１０時間撹拌した。反応液を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣をメタノールに溶かした後、その溶液をシリンジフィルター（ＡｄｖａｎｔｅｃＴＭ  ＪＰ０５０ＡＮ）を使って濾過し、濃縮して目的化合物８ｆ（８０ｍｇ、６９％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨ３ＯＨ−ｄ４）δ２．３８（ｓ、３Ｈ）、２．２３（ｓ、３Ｈ）、２．０８（ｓ、３Ｈ）、１．３０（ｓ、９Ｈ）ｐｐｍ。
【０１０７】
＜実施例８−７＞Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）シクロペンタンカルボキサミド（８ｇ）の製造
化合物７ｇ（１０８ｍｇ、０．３１９ｍｍｏｌ）のメタノール（５ｍＬ）溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（２０ｍｇ）を加え、水素気流下の室温で１０時間撹拌した。反応液を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣をメタノールに溶かした後、その溶液をシリンジフィルター（ＡｄｖａｎｔｅｃＴＭ  ＪＰ０５０ＡＮ）を使って濾過し、濃縮して目的化合物８ｇ（６６ｍｇ、８３％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨ３ＯＨ−ｄ４）δ２．７７−２．８６（ｍ、１Ｈ）、２．３３（ｓ、３Ｈ）、２．１９（ｓ、３Ｈ）、２．０６（ｓ、３Ｈ）、１．６１−１．９６（ｍ、８Ｈ）ｐｐｍ。
【０１０８】
＜実施例８−８＞Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）シクロヘキサンカルボキサミド（８ｈ）の製造
化合物７ｈ（７３ｍｇ、０．２０７ｍｍｏｌ）のメタノール−ＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（１５ｍｇ）を加え、水素気流下の室温で４時間撹拌した。反応液を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣をメタノールに溶かした後、その溶液をシリンジフィルター（ＡｄｖａｎｔｅｃＴＭ  ＪＰ０５０ＡＮ）を使って濾過し、濃縮して目的化合物８ｈ（５４ｍｇ、９９％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．４３（ｓ、１Ｈ）、２．２８（ｓ、３Ｈ）、２．１１（ｓ、３Ｈ）、１．９２（ｓ、３Ｈ）、１．６２−１．８１（ｍ、４Ｈ）、１．１３−１．４６（ｍ、６Ｈ）ｐｐｍ。
【０１０９】
＜実施例８−９＞Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−２−フェニルアセトアミド（８ｉ）の製造
化合物７ｉ（１４１ｍｇ、０．３９３ｍｍｏｌ）のメタノール（５ｍＬ）溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（２８ｍｇ）を加え、水素気流下の室温で１０時間撹拌した。反応液を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣をメタノールに溶かした後、その溶液をシリンジフィルター（ＡｄｖａｎｔｅｃＴＭ  ＪＰ０５０ＡＮ）を使って濾過し、濃縮して目的化合物８ｉ（３７ｍｇ、３５％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨ３ＯＨ−ｄ４）δ７．１６−７．３６（ｍ、５Ｈ）、３．６３（ｓ、２Ｈ）、２．２９（ｓ、３Ｈ）、２．１１（ｓ、３Ｈ）、１．９１（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【０１１０】
＜実施例８−１０＞Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−３−フェニルプロパンアミド（８ｊ）の製造
化合物７ｊ（２９１ｍｇ、０．７７９ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍＬ）溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（５８ｍｇ）を加え、水素気流下の室温で４時間撹拌した。反応液を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣をメタノールに溶かした後、その溶液をシリンジフィルター（ＡｄｖａｎｔｅｃＴＭ  ＪＰ０５０ＡＮ）を使って濾過し、濃縮して目的化合物８ｊ（１８６ｍｇ、８４％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨ３ＯＨ−ｄ４）δ７．１１−７．２５（ｍ、５Ｈ）、２．９８（ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、２Ｈ）、２．６８（ｔ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、２Ｈ）、２．３３（ｓ、３Ｈ）、２．１５（ｓ、３Ｈ）、１．８９（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【０１１１】
＜実施例８−１１＞Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）ベンズアミド（８ｋ）の製造
化合物７ｋ（１８６ｍｇ、０．５３９ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍＬ）溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（３７ｍｇ）を加え、水素気流下の室温で４時間撹拌した。反応液を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：Ｈｅｘ＝１：１）で精製した後、減圧濃縮した。残渣を再びメタノールに溶かした後、その溶液をシリンジフィルター（ＡｄｖａｎｔｅｃＴＭ  ＪＰ０５０ＡＮ）を使って濾過し、濃縮して目的化合物８ｋ（８６ｍｇ、６２％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨ３ＯＨ−ｄ４）δ７．９３−７．９７（ｍ、２Ｈ）、７．４４−７．５９（ｍ、３Ｈ）、２．３６（ｓ、３Ｈ）、２．２１（ｓ、３Ｈ）、２．１３（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【０１１２】
＜実施例８−１２＞Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−４−フルオロベンズアミド（８ｌ）の製造
化合物７ｌ（１８０ｍｇ、０．４９３ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍＬ）溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（３８ｍｇ）を加え、水素気流下の室温で１０時間撹拌した。反応液を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣をメタノールに溶かした後、その溶液をシリンジフィルター（ＡｄｖａｎｔｅｃＴＭ  ＪＰ０５０ＡＮ）を使って濾過し、濃縮して目的化合物８ｌ（１３５ｍｇ、９９％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨ３ＯＨ−ｄ４）δ７．９９−８．０５（ｍ、２Ｈ）、７．１８−７．２５（ｍ、２Ｈ）、２．３７（ｓ、３Ｈ）、２．２２（ｓ、３Ｈ）、２．１３（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【０１１３】
＜実施例８−１３＞Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−４−メトキシベンズアミド（８ｍ）の製造
化合物７ｍ（２００ｍｇ、０．５３１ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍＬ）溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（４０ｍｇ）を加え、水素気流下の室温で１０時間撹拌した。反応液を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣をメタノールに溶かした後、その溶液をシリンジフィルター（ＡｄｖａｎｔｅｃＴＭ  ＪＰ０５０ＡＮ）を使って濾過し、濃縮して目的化合物８ｍ（１５１ｍｇ、９９％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨ３ＯＨ−ｄ４）δ７．９３−７．９６（ｍ、２Ｈ）、６．９９−７．０３（ｍ、２Ｈ）、３．８５（ｓ、３Ｈ）、２．３７（ｓ、３Ｈ）、２．２３（ｓ、３Ｈ）、２．１３（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【０１１４】
＜実施例８−１４＞Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−４−（ｔｅｒｔ−ブチル）ベンズアミド（８ｎ）の製造
化合物７ｎ（２０５ｍｇ、０．５０９ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍＬ）溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（４０ｍｇ）を加え、水素気流下の室温で１０時間撹拌した。反応液を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣をメタノールに溶かした後、その溶液をシリンジフィルター（ＡｄｖａｎｔｅｃＴＭ  ＪＰ０５０ＡＮ）を使って濾過し、濃縮して目的化合物８ｎ（１５７ｍｇ、９９％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．９４（ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ、２Ｈ）、７．５２（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、２．３７（ｓ、３Ｈ）、２．１９（ｓ、３Ｈ）、２．０３（ｓ、３Ｈ）、１．３１（ｓ、９Ｈ）ｐｐｍ。
【０１１５】
＜実施例８−１５＞Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−カルボキサミド（８ｏ）の製造
化合物７ｏ（２２２ｍｇ、０．５６８ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍＬ）溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（４４ｍｇ）を加え、水素気流下の室温で１０時間撹拌した。反応液を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣をメタノールに溶かした後、その溶液をシリンジフィルター（ＡｄｖａｎｔｅｃＴＭ  ＪＰ０５０ＡＮ）を使って濾過し、濃縮して目的化合物８ｏ（１７０ｍｇ、９９％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨ３ＯＨ−ｄ４）δ７．５５（ｄｄ、Ｊ＝８．１、１．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．４０（ｄ、Ｊ＝１．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．８９（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、１Ｈ）、６．０３（ｓ、２Ｈ）、２．３６（ｓ、３Ｈ）、２．２３（ｓ、３Ｈ）、２．１２（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【０１１６】
＜実施例８−１６＞Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−１−ナフタアミド（８ｐ）の製造
化合物７ｐ（１１０ｍｇ、０．２７７ｍｍｏｌ）のメタノール（５ｍＬ）溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（２２ｍｇ）を加え、水素気流下の室温で１０時間撹拌した。反応液を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣をメタノールに溶かした後、その溶液をシリンジフィルター（ＡｄｖａｎｔｅｃＴＭ  ＪＰ０５０ＡＮ）を使って濾過し、濃縮して目的化合物８ｐ（１０４ｍｇ、９９％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＨ３ＯＨ−ｄ４）δ８．３１−８．３５（ｍ、１Ｈ）、７．９５−７．９６（ｍ、１Ｈ）、７．８６−７．８９（ｍ、２Ｈ）、７．４７−７．５３（ｍ、３Ｈ）、２．４２（ｓ、３Ｈ）、２．２５（ｓ、３Ｈ）、２．２３（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【０１１７】
＜実施例８−１７＞Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）チオフェン−２−カルボキサミド（８ｑ）の製造
化合物７ｑ（１６０ｍｇ、０．４５４ｍｍｏｌ）、ペンタメチルベンゼン（２０１ｍｇ、１．３６２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液に１Ｍ  ＢＣｌ３（０．９１ｍＬ、０．９１ｍｍｏｌ）溶液を氷冷下で滴加した後、３０分さらに撹拌した。反応液にＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝９：１溶液（１ｍＬ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応液を減圧濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝９：１）で精製して、目的化合物８ｑ（１１５ｍｇ、９６％）を黄色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．２（ｓ、１Ｈ）、８．５６（ｓ、１Ｈ）、７．９８（ｄ、Ｊ＝３．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．８０（ｄ、Ｊ＝４．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．１７−７．２１（ｍ、１Ｈ）、２．３３（ｓ、３Ｈ）、２．１６（ｓ、３Ｈ）、２．０２（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【０１１８】
＜実施例８−１８＞２−エチル−Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）ブタンアミド（８ｒ）の製造
化合物７ｒ（１５０ｍｇ、０．４４１ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍＬ）溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（３０ｍｇ）を加え、水素気流下の室温で５時間撹拌した。反応液を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣をメタノールに溶かした後、その溶液をシリンジフィルター（ＡｄｖａｎｔｅｃＴＭ  ＪＰ０５０ＡＮ）を使って濾過し、濃縮して目的化合物８ｒ（１１０ｍｇ、９９％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．５５（ｓ、１Ｈ）、２．２９（ｓ、３Ｈ）、２．１６−２．２５（ｍ、１Ｈ）、２．１２（ｓ、３Ｈ）、１．９７（ｓ、３Ｈ）、１．３３−１．６４（ｍ、４Ｈ）、０．９０（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、６Ｈ）ｐｐｍ。
【０１１９】
＜実施例８−１９＞Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−２−フェノキシアセトアミド（８ｓ）の製造
化合物７ｓ（１５０ｍｇ、０．３９８ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍＬ）溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（３０ｍｇ）を加え、水素気流下の室温で５時間撹拌した。反応液を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣をメタノールに溶かした後、その溶液をシリンジフィルター（ＡｄｖａｎｔｅｃＴＭ  ＪＰ０５０ＡＮ）を使って濾過し、濃縮して目的化合物８ｓ（１２０ｍｇ、９９％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．７９（ｓ、１Ｈ）、７．２７−７．３５（ｍ、２Ｈ）、６．９４−７．０２（ｍ、３Ｈ）、４．６６（ｓ、２Ｈ）、２．３０（ｓ、３Ｈ）、２．１３（ｓ、３Ｈ）、１．９７（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【０１２０】
＜実施例８−２０＞Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−２−フェニルブタンアミド（８ｔ）の製造
化合物７ｔ（１７６ｍｇ、０．４５３ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍＬ）溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（３５ｍｇ）を加え、水素気流下の室温で４時間撹拌した。反応液を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣をメタノールに溶かした後、その溶液をシリンジフィルター（ＡｄｖａｎｔｅｃＴＭ  ＪＰ０５０ＡＮ）を使って濾過し、濃縮して目的化合物８ｔ（１３５ｍｇ、９９％）を黄色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．８１（ｓ、３Ｈ）、８．４４（ｓ、１Ｈ）、７．１９−７．４０（ｍ、５Ｈ）、３．５７（ｄｄ、Ｊ＝８．６、６．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．２６（ｓ、３Ｈ）、２．０９（ｓ、３Ｈ）、１．９７−２．０６（ｍ、１Ｈ）、１．８０（ｓ、３Ｈ）、１．６１−１．７２（ｍ、１Ｈ）、０．８８（ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【０１２１】
＜実施例８−２１＞Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−２，４，６−トリメチルベンズアミド（８ｕ）の製造
化合物７ｕ（９４ｍｇ、０．２４２ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍＬ）溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（１９ｍｇ）を加え、水素気流下の室温で７時間撹拌した。反応液を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣をメタノールに溶かした後、その溶液をシリンジフィルター（ＡｄｖａｎｔｅｃＴＭ  ＪＰ０５０ＡＮ）を使って濾過し、濃縮して目的化合物８ｕ（７２ｍｇ、９９％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．８２（ｓ、１Ｈ）、６．８８（ｓ、２Ｈ）、２．３３（ｓ、９Ｈ）、２．２５（ｓ、３Ｈ）、２．１６（ｓ、３Ｈ）、２．１５（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【０１２２】
＜実施例８−２２＞３−ヒドロキシ−Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）ベンズアミド（８ｖ）の製造
化合物７ｖ（１５０ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍＬ）溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（３０ｍｇ）を加え、水素気流下の室温で３時間撹拌した。反応液を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣をメタノールに溶かした後、その溶液をシリンジフィルター（ＡｄｖａｎｔｅｃＴＭ  ＪＰ０５０ＡＮ）を使って濾過し、濃縮して目的化合物８ｖ（４２ｍｇ、４７％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．０２（ｓ、１Ｈ）、７．２４−７．４３（ｍ、３Ｈ）、６．９５（ｄｄ、Ｊ＝７．６、２．１Ｈｚ、１Ｈ）、２．３２（ｓ、３Ｈ）、２．１６（ｓ、３Ｈ）、２．００（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【０１２３】
＜実施例８−２３＞Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）−３，５，５−トリメチルヘキサンアミド（８ｗ）の製造
化合物７ｗ（１８６ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）のメタノール（１２ｍＬ）溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（３７ｍｇ）を加え、水素気流下の室温で４時間撹拌した。反応液を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣をメタノールに溶かした後、その溶液をシリンジフィルター（ＡｄｖａｎｔｅｃＴＭ  ＪＰ０５０ＡＮ）を使って濾過し、濃縮して目的化合物８ｗ（１３０ｍｇ、９３％）を黄色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．５２（ｓ、１Ｈ）、２．２８（ｓ、３Ｈ）、２．１８−２．２５（ｍ、１Ｈ）、２．１１（ｓ、３Ｈ）、２．０４−２．０９（ｍ、２Ｈ）、１．９６（ｓ、３Ｈ）、１．３１（ｄｄ、Ｊ＝１３．８、３．０Ｈｚ、１Ｈ）、１．０７（ｄｄ、Ｊ＝１３．９、６．２Ｈｚ、１Ｈ）、０．９７（ｄ、Ｊ＝６．１Ｈｚ、３Ｈ）、０．８９（ｓ、９Ｈ）ｐｐｍ。
【０１２４】
＜実施例８−２４＞２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）アセトアミド（８ｘ）の製造
化合物７ｘ（１３０ｍｇ、０．３２９ｍｍｏｌ）、ペンタメチルベンゼン（１４６ｍｇ、０．９８７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）溶液に１Ｍ  ＢＣｌ３（０．６６ｍＬ、０．６６ｍｍｏｌ）溶液を氷冷下で滴加した後、２時間撹拌した。反応液にＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝９：１溶液（１ｍＬ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応液を減圧濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝９：１）で精製して、目的化合物８ｘ（９４ｍｇ、９４％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．８５（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、８．４６（ｓ、１Ｈ）、７．３２−７．４０（ｍ、４Ｈ）、３．５９（ｓ、２Ｈ）、２．２９（ｓ、３Ｈ）、２．１０（ｓ、３Ｈ）、１．８７（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【０１２５】
＜実施例８−２５＞２，２−ジクロロ−Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）アセトアミド（８ｙ）の製造
化合物７ｙ（１６１ｍｇ、０．４５６ｍｍｏｌ）、ペンタメチルベンゼン（２０３ｍｇ、１．３６７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（７ｍＬ）溶液に１Ｍ  ＢＣｌ３（０．９１ｍＬ、０．９１ｍｍｏｌ）溶液を氷冷下で滴加した後、１時間撹拌した。反応液にＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝９：１溶液（１ｍＬ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応液を減圧濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝９：１）で精製して、目的化合物８ｙ（１１０ｍｇ、９２％）を白色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．３４（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、８．６４（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、６．６０（ｓ、１Ｈ）、２．３１（ｓ、３Ｈ）、２．１４（ｓ、３Ｈ）、１．９８（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【０１２６】
＜実施例８−２６＞Ｎ−（５−ヒドロキシ−３，４，６−トリメチルピリジン−２−イル）シンナマイド（８ｚ）の製造
化合物７ｚ（１４０ｍｇ、０．３７６ｍｍｏｌ）、ペンタメチルベンゼン（１６７ｍｇ、１．１２７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（７ｍＬ）溶液に１Ｍ  ＢＣｌ３（０．７５ｍＬ、０．７５ｍｍｏｌ）溶液を氷冷下で滴加した後、２時間撹拌した。反応液にＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝９：１溶液（１ｍＬ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応液を減圧濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝９：１）で精製して、目的化合物８ｚ（４５ｍｇ、４２％）を黄色の固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．３４（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、８．６４（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、６．６０（ｓ、１Ｈ）、２．３１（ｓ、３Ｈ）、２．１４（ｓ、３Ｈ）、１．９８（ｓ、３Ｈ）ｐｐｍ。
【０１２７】
＜実験例１＞ＣＡＭ分析を通じる血管新生抑制効果の検討
生体内試験上（ｉｎ  ｖｉｖｏ）での血管新生抑制効果を確認するために、絨毛尿膜（ｃｈｏｒｉｏａｌｌａｎｔｏｉｃ  ｍｅｍｂｒａｎｅ、ＣＡＭ）分析を実施した（Ｎｇｕｙｅｎ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｒｅｓ．，４７，ｐｐ３１−４０，１９９４）。ニワトリの有精卵を、温度３７℃、相対湿度５５％に保持しながら培養させて、１０日目に気嚢（ａｉｒ  ｓａｃ）部位に皮下注射針（ｈｙｐｏｄｅｒｍｉｃ  ｎｅｅｄｌｅ、緑十字医療工業、韓国）を用いて最初の小さな穴を開け、窓（ｗｉｎｄｏｗ）を出す有精卵の平らな部位に二番目の穴を開けた。最初の穴である気嚢部位の穴を通じて空気を抜くことによって、絨毛尿膜（ＣＡＭ）が有精卵の殻から分離になるようにして、その部位を回転研摩機（ｇｒｉｎｄｉｎｇ  ｗｈｅｅｌ、Ｍｕｌｔｉｐｒｏ  ３９５ＪＡ，Ｄｒｅｍｅｌ，Ｍｅｘｉｃｏ）で切断して窓を作った。次いで、ワットマンフィルターディスク（ｗｈａｔｍａｎ  ｆｉｌｔｅｒ  ｄｉｓｋ  ＃１、ｗｈａｔｍａｎ社，ＵＳＡ）に酢酸コルチゾン（ｃｏｒｔｉｓｏｎｅ  ａｃｅｔａｔｅ）３ｍｇ／ｍＬを処理して乾燥させた後、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）は、２０ｎｇ／ＣＡＭの濃度で濡らした。作っておいた窓を通じてフィルターディスクを血管上に載せ、実施例の化合物をそれぞれジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で溶かして、リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）で希釈して、各濃度別に処理した。化合物処理３日後、フィルターディスクが載せられたＣＡＭ部分を取り外して、リン酸緩衝溶液を用いて洗った後、立体顕微鏡（Ｓｔｅｍｉ  ＳＶ６  ｓｔｅｒｅｏｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ、Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ，Ｇｅｒｍａｎｙ）とＩｍａｇｅ−Ｐｒｏ  Ｐｌｕｓ  ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｍｅｄｉａ  Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ；ＳｉｌｖｅｒＳｐｒｉｎｇ、ＭＤ，ＵＳＡ）とを用いてイメージを撮影して、血管枝の個数を測定し、資料を分析した。
その結果、下記表１のように、ＶＥＧＦに誘導された新生血管形成の増加が、本発明による化合物の処理（ＣＡＭ当たり、各化合物０．０１ｎｍｏｌを処理）によって減少することを確認することができ、ほとんどの場合、優れた血管新生抑制効果を表わした。また、化合物８ａ、８ｂ及び８ｇを容量別にＣＡＭに処理して、ＩＤ５０を求めた結果、図３のように、それぞれ１．７ｐｇ／ＣＡＭ（８．７ｆｍｏｌ／ＣＡＭ）、５．０ｐｇ／ＣＡＭ（１４．９ｆｍｏｌ／ＣＡＭ）、及び０．９ｐｇ／ＣＡＭ（３．６ｆｍｏｌ／ＣＡＭ）であった。
【０１２８】
【表１】
0006502919.tif 000006
【０１２９】
＜実験例２＞ＨＵＶＥＣ細胞での活性酸素種（ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｏｘｙｇｅｎ  ｓｐｅｃｉｅｓ、ＲＯＳ）消去能の測定
ＶＥＧＦに誘導されたＨＵＶＥＣ細胞内ＲＯＳの消去能を測定するために、ＤＣＦ−ＤＡ（２´，７´−ｄｉｃｈｌｏｒｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ  ｄｉａｃｅｔａｔｅ）を利用した。ＤＣＦ−ＤＡは、細胞内ＲＯＳの存在時に、蛍光のＤＣＦに酸化して、緑色の蛍光を表わす。０．２％ゼラチンでコーティングされた８−ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅｓに１ｘ１０５の濃度でＨＵＶＥＣを分周した後、２４時間培養した。化合物８ａ及び８ｂを３時間前処理し、ＶＥＧＦに１５分間誘導した後、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で３回洗浄した後、１０μＭのＤＣＦ−ＤＡをＥＢＭ−２培地に入れて、雌牛で３０分間処理した。再びＰＢＳで３回洗浄し、細胞内蛍光の程度を蛍光顕微鏡を使って測定した。
その結果、図４のように、化合物８ａ及び８ｂを処理した場合、ＶＥＧＦに比べて、細胞内蛍光の程度が著しく減少したことを確認することができる。
【０１３０】
＜実験例３＞黄斑変性の危険因子誘導活性酸素種（ＲＯＳ）消去能の測定
以前実験例２と同じ方法で実験を行うが、黄斑変性の危険因子である４−ヒドロキシノネナール（４−ｈｙｄｒｏｘｙｎｏｎｅｎａｌ；４−ＨＮＥ）またはアンジオテンシンＩＩ（ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  ＩＩ；Ａｎｇ  ＩＩ）をＡＲＰＥ−１９（ａｄｕｌｔ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｐｉｇｍｅｎｔ  ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ−１９）細胞株に処理して、化合物８ａと８ｂとのＲＯＳ消去能を観察した。
その結果、図５及び図６のように、化合物８ａ及び８ｂを処理した場合、対照群に比べて、細胞内蛍光の程度が著しく減少したことを確認することができる。
黄斑変性の危険因子である４−ＨＮＥまたはＡｎｇ  ＩＩは、ＡＲＰＥ細胞でＲＯＳ発生を通じて細胞損傷を引き起こして、究極的に、ブルッフ膜の損傷及び血管新生を引き起こし、黄斑変性及び失明をもたらすが、前記の実験結果に基づいて、化合物８ａ及び８ｂが４−ＨＮＥ及びＡｎｇ  ＩＩのＲＯＳ発生を強力に抑制することによって、黄斑変性の治療効果があると確認された。
【０１３１】
＜実験例４＞ＨＴ−２９腸上皮細胞でアミドピリジンオール誘導体の腸上皮細胞−単核球付着能の抑制効果
ＨＴ−２９細胞を２４ウェルプレートに２ｘ１０ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２の濃度で培養して、１％ＰＳのみ含有された無血清培地にアミドピリジンオール化合物８ａ〜８ｚを濃度別に１時間前処理した。次いで、ＴＮＦ−αを１０ｎｇ／ｍｌ処理して、３７℃で３時間反応させ、反応終結後、ＨＴ−２９細胞の培地を除去し、ＰＢＳで１回洗浄した。次いで、３７℃で３０分間１０μｇ／ｍＬ  ＢＣＥＣＦ−ＡＭで処理して反応させたＵ９３７細胞をＨＴ−２９細胞と３７℃で１時間反応させた後、付着されていないＵ９３７細胞を除去するために、ＰＢＳで２回洗浄した。細胞溶解のために、０．１Ｍ  Ｔｒｉｓのうち、０．１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を処理して、３０分間室温で反応させた後、Ｆｌｕｏｓｔａｒ  ｏｐｔｉｍａ  ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  ｒｅａｄｅｒ（ＢＭＧ  Ｌａｂｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使って蛍光を測定して定量した。
その結果、下記表２に、ＴＮＦ−αに誘導されたヒト由来大腸上皮細胞（ＨＴ−２９）と単核球細胞（Ｕ９３７）の付着に対するアミドピリジンオール化合物８ａ〜８ｚの抑制効果を表わした。この際、＊は、ＴＮＦ−α処理グループと比較した時、Ｐ値が０．０５未満である場合である。表２に表われたように、アミドピリジンオール化合物８ａ〜８ｚは、ＴＮＦ−αによって誘導された腸上皮細胞とＵ９３７細胞との付着を抑制することが分かった。
【０１３２】
【表２】
0006502919.tif 000007
【０１３３】
このような結果は、炎症細胞の移動と浸潤とを起こすのに密接な関連がある好中球とリンパ球のような炎症細胞の付着をアミドピリジンオール誘導体８ａないし８ｚが抑制することによって、炎症反応を抑制することができるということを表わす。
【０１３４】
＜実験例５＞ＴＮＢＳで誘導された炎症性腸疾患モデルを利用したアミドピリジンオール誘導体の大腸炎の抑制効果
本発明の化合物の炎症性大腸炎の緩和効果を見るために、ＴＮＢＳ（２，４，６−ｔｒｉｎｉｔｒｏｂｅｎｚｅｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）で誘導された大腸炎動物モデルを用いて実験した。実験に使われた動物は、７〜８週齢になったＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ種をＳａｍｔａｃｏ  Ｂｉｏ  Ｋｏｒｅａから購入して２日間一般固形飼料で安定化させた後、実験に利用した。実験期間中、飼料と水とを自由に供給し、飼育室の温度は２５±１℃、相対湿度は５０±１０％に保持させた。点灯管理は、自動照明調節器によって１２時間明暗周期（ｌｉｇｈｔ−ｄａｒｋ  ｃｙｃｌｅ）で調節した。
実験群は、各群当たり６匹にして平均体重が１８０±１０ｇになるように乱塊法（ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｂｌｏｃｋ  ｄｅｓｉｇｎ）によって、５群（対照群、ＴＮＢＳ単独投与群、ＴＮＢＳ＋５−ＡＳＡ  ３００ｍｇ／ｋｇ投与群、ＴＮＢＳ＋８ａ及び８ｊ  ０．１ｍｇ／ｋｇ投与群、ＴＮＢＳ＋８ａ及び８ｊ  １．０ｍｇ／ｋｇ投与群）に分けて実験した。２４時間切食したラットをジエチルエーテル（Ｅｔ２Ｏ）で麻酔し、ポリエチレンカテーテルを連結した１ｍＬ注射器を用いて肛門を通じて大腸の管腔内に５０％（ｖ／ｖ）エタノールで希釈した３％  ＴＮＢＳ  ０．８ｍＬを徐々に注入した後、肛門に３％  ＴＮＢＳが漏れ出すことを防止するために、ラットを逆に立てた状態で６０秒間静置させた。
対照群は、ｖｅｈｉｃｌｅ（５０％（ｖ／ｖ）エタノール）のみを他の実験群と同様の方法で注入した。薬物の効果を調査するために、切食２４時間後に、ＴＮＢＳ処置翌日から５日間薬物を腹腔に８ａ及び８ｊ  ０．１ｍｇ／ｋｇまたは１．０ｍｇ／ｋｇで毎日一定の時間に一回投与した。比較試験物質で、ＩＢＤ治療剤として最もよく知られたスルファサラジンの活性代謝体である５−ＡＳＡを陽性対照群として使った。
あらゆるラットは、ＴＮＢＳ投与後、７日目に犠牲になった。肉眼で見える潰瘍と大腸炎の深刻性は、実験に参加していない２人の調査者によって評価された。ラットの大腸を摘出して肛門から５〜６ｃｍの間の組織を１ｃｍ長さで切って、組織の腸の重量及びＭＰＯ活性を測定し、組織検査の実施に使った。また、あらゆる実験動物は、ｄｉｇｉｔａｌｍａｓｓ  ｍｅｔｅｒを用いて切食段階からＴＮＢＳ投与及び薬物投与過程の間に、各ラットの体重変化を観察した。動物実験は、実験動物の管理と使用のために、実験動物資源管理員と大韓民国の嶺南大学校に制度化された指針によって行われた。
図７ないし図１０は、ＴＮＢＳで誘発されたラットの大腸炎に対するアミドピリジンオール化合物８ａ及び８ｊの効力を示すグラフであって、図７は、試験物質投与１日から６日まで毎日記録した体重であり、図８は、肉眼で観察される大腸の状態を観察した図面であり、図９は、大腸の重量を測定したグラフであり、図１０は、ＭＰＯ活性を測定したグラフである。＊は、薬物とＴＮＢＳいずれも処理されていないグループと比較した時、Ｐ値が０．０５未満である場合であり、＃は、ＴＮＢＳ処理グループと比較した時、Ｐ値が０．０５未満である場合である。
図７に示されたように、体重１８０〜１９０ｇであるラットに３％  ＴＮＢＳを用いて腸内に炎症を誘発した大腸炎モデルでＴＮＢＳ処理前の体重を基準に５日間毎日一定時間に体重の変化を観察した結果、ｖｅｈｉｃｌｅ処理対照群は、引き続き体重が増加するということを示し、ＴＮＢＳ群は、引き続き体重が減少し、５日目から体重が少し回復されたが、正常群と比較した時、体重が著しく減少したことが分かる。陽性対照群５−ＡＳＡ３００ｍｇ／ｋｇを処理した群は、３日目から体重が徐々に回復されて、ＴＮＢＳ単独投与群に比べて、体重が増加した。ＴＮＢＳ処理後、化合物８ａ  １．０ｍｇ／ｋｇを投与した群は、ＴＮＢＳ単独処理群に比べて、体重が３日目から急激に増加して、５−ＡＳＡよりも体重回復が優れているように表われた。化合物８ｊ  １．０ｍｇ／ｋｇを投与した場合は、投与翌日から直ちに著しい体重回復及び増加を示し、正常群の体重に近接した。
図８は、５日間の薬物投与が終わった後に、大腸を摘出して肉眼で見た結果であり、ＴＮＢＳを処理したラットの大腸は、ｖｅｈｉｃｌｅ処理正常群に比べて、浮腫と充血とが観察され、虫垂突起の浮腫と鬱血及び癒着現象が表われた。陽性対照群５−ＡＳＡ  １００ｍｇ／ｋｇ投与群では、ＴＮＢＳ単独投与群と比較して、肉眼的症状と他の器官の間の癒着や大腸の充血も著しく抑制された。化合物８ａ及び８ｊ  １．０ｍｇ／ｋｇ投与群で浮腫と充血との抑制効果が大きく表われた。
また、図９には、ラットの大腸を摘出して組織重量を測定した結果を表わし、ｖｅｈｉｃｌｅ処理正常群に比べて、ＴＮＢＳ単独処理群の場合、浮腫がある腸の重量が有意的に増加したことが見られる。陽性対照群である５−ＡＳＡ  １００ｍｇ／ｋｇを処理した群では、腸の重量がＴＮＢＳ処理群に比べて、有意的に減少し、化合物８ａ及び８ｊ  １．０ｍｇ／ｋｇを処理した群では、腸の重量が著しく減少することを観察することができた。
図１０は、ＭＰＯ活性を測定したグラフであって、ＭＰＯは、好中球で主に発見される酵素である。組織でＭＰＯの活性は、好中球浸潤の指標になり、これは、直ちに炎症反応の指標として炎症性大腸炎による腸損傷数値と相関性を表わす。
ＭＰＯ活性を測定するために、ＭＰＯ  ａｓｓａｙキットを利用した。大腸組織を冷たいＰＢＳで洗浄し、重量を測定して、組織の重量１０ｍｇ当たり、溶解緩衝液（ｌｙｓｉｓ  ｂｕｆｆｅｒ：ｐＨ７．４、２００ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＥＤＴＡ、１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１０％グリセロール）２００μＬを添加した後、ｔｉｓｓｕｅ  ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒ（Ｂｉｏ  ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒ  Ｍ１３３，ＢＩＯＳＰＥＣ  ＰＲＯＤＵＣＴＳ  Ｉｎｃ．ＵＳＡ）を用いて３０秒間均質化した。均質化した試料を１５００ｘｇで１５分間２回遠心分離して上澄み液を得た後、その上澄み液をＭＰＯ  ＥＬＩＳＡキット（ＨＫ２１０，Ｈｙｃｕｌｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を用いてＭＰＯ活性を測定した。すなわち、抗−マウスＭＰＯ抗体がコーティングされた９６ウェルに前記上澄み液１００μＬを添加して、室温で１時間反応させ、洗浄緩衝液で３回繰り返し洗浄した。これに、ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ  ｔｒａｃｅｒを１００μＬ添加して室温で１時間反応し、３回繰り返し洗浄した後、ストレプトアビジン−ペルオキシダーゼ複合体（ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ−ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）１００μＬを添加した。室温で１時間反応させた後、洗浄し、ＴＭＢ基質溶液１００μＬを添加して反応３０分後、停止溶液１００μＬを添加して反応を停止させた後、４５０ｎｍで吸光度を測定した。ＭＰＯ活性度は、２５℃で１分間水で過酸化水素１μＭが還元される数値を意味し、これを大腸組織均質液１ｍＬに含まれたＭＰＯ量で計算した。＊は、薬物とＴＮＢＳいずれも処理されていないグループと比較した時、Ｐ値が０．０５未満である場合であり、＃は、ＴＮＢＳ処理グループと比較した時、Ｐ値が０．０５未満である場合である。
図１０に示したように、対照群に比べて、ＴＮＢＳ単独処理群でＭＰＯ活性が著しく高く表われ、５−ＡＳＡ  １００ｍｇ／ｋｇ投与群では、ＭＰＯ活性が有意的に減少したことが分かる。化合物８ａ  １．０ｍｇ／ｋｇ投与群では、ＴＮＢＳ単独処理群に比べて、ＭＰＯ活性が低く観察されただけではなく、５−ＡＳＡ  １００ｍｇ／ｋｇよりも優れているように腸組織のＭＰＯ活性を抑制した。
【０１３５】
＜実験例６＞腫瘍形成による血管新生及び腫瘍成長の抑制効果の検討
生体内試験上での血管新生抑制効果を確認するために、絨毛尿膜（ＣＡＭ）分析を実施した（Ｎｇｕｙｅｎ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｒｅｓ．，４７，ｐｐ３１−４０，１９９４）。ニワトリの有精卵を、温度３７℃、相対湿度５５％に保持しながら培養させて、９日目に気嚢部位に皮下注射針（緑十字医療工業、韓国）を用いて最初の小さな穴を開け、窓を出す有精卵の平らな部位に二番目の穴を開けた。最初の穴である気嚢部位の穴を通じて空気を抜くことによって、絨毛尿膜（ＣＡＭ）が有精卵の殻から分離になるようにして、その部位を回転研摩機（Ｍｕｌｔｉｐｒｏ  ３９５ＪＡ，Ｄｒｅｍｅｌ，Ｍｅｘｉｃｏ）で切断して窓を作り、Ａ５４９肺癌細胞をマトリゲル（ｍａｔｒｉｇｅｌ）と１：１で混合し、化合物８ａ、８ｂ及び８ｇをそれぞれ処理して、１．５ｘ１０６細胞／ＣＡＭの密度で接種させた。
接種５日後、腫瘍が形成されたＣＡＭ部分を取り外して、リン酸緩衝溶液を用いて洗った後、立体顕微鏡（Ｓｔｅｍｉ  ＳＶ６  ｓｔｅｒｅｏｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ、ＣａｒｌＺｅｉｓｓ，Ｇｅｒｍａｎｙ）とＩｍａｇｅ−Ｐｒｏ  Ｐｌｕｓ  ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｍｅｄｉａ  Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ；Ｓｉｌｖｅｒ  Ｓｐｒｉｎｇ，ＭＤ、ＵＳＡ）とを用いてイメージを撮影して、血管枝の個数を測定し、資料を分析した。
その結果、下記表３及び図１１のように、容量別化合物８ａ、８ｂ及び８ｇの処理によって腫瘍形成による血管新生を抑制し、腫瘍の成長も抑制した。
【０１３６】
【表３】
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【０１３７】
＜実験例７＞カテプシン抑制剤を使った乳癌細胞の浸潤抑制効果の検討
転移性が強い乳癌細胞ＭＤＡ−ＭＢ−２３１の浸潤に重要な役割を行うカテプシン種類を調査するために、カテプシンＢ、Ｄ、Ｋ、Ｌ、Ｓ抑制剤を使って乳癌細胞の浸潤抑制効果を検討した。
浸潤実験（ｉｎｖａｓｉｏｎ  ａｓｓａｙ）は、８μｍポアサイズフィルターを有したトランスウェルインサート（Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ  ｉｎｓｅｒｔ；ＢＤ  ＦＡＬＣＯＮ，Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＵＳＡ）を使って行った。トランスウェルインサートフィルター上側には、マットリゲル（１ｍｇ／ｍｌ）２０μｌでコーティングし、下側は、第１類型コラーゲン（０．５ｍｇ／ｍｌ）３０μｌでコーティングした。ＭＤＡ−ＭＢ−２３１（５ｘ１０５ｃｅｌｌｓ／１００μｌ）をインサートチャンバに追加し、各抑制剤も、各インサートチャンバに追加した。細胞の浸潤を誘導するために、５％ＦＢＳを含んだ培地をボトムチャンバの各ウェルに追加して、３７℃細胞培養器で反応させた。１８時間後、インサートチャンバ内の溶液を捨て、残っている細胞を綿棒で除去した後、メンブレン下にある細胞は、メタノールで固定し、ヘマトキシリンとエオシンとで染色した。顕微鏡でメンブレンにある細胞を観察し、２００ｘ解像度で５フィールドを選択した後、各フィールドにある細胞数を計数した。
その結果、次の表４のように、カテプシンＢ抑制剤（ＣＡ−０７４  Ｍｅ）、カテプシンＫ抑制剤（Ｏｄａｎａｃａｔｉｂ）、カテプシンＳ抑制剤（Ｚ−ＦＬ−ＣＯＣＨＯ）を処理したＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞は、抑制剤を処理していない細胞に比べて、浸潤が減少した。そのうち、カテプシンＳ抑制剤によってＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞浸潤が最も効果的に抑制された（図１２）。したがって、乳癌細胞浸潤にカテプシンＳが重要な役割を行うということが分かった。
【０１３８】
【表４】
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【０１３９】
＜実験例８＞アミドピリジンオール誘導体によるＭＢＡ−ＭＢ−２３１細胞浸潤抑制効果の検討
以前実験例７と同じ方法で実施例から合成されたアミドピリジンオール誘導体の乳癌細胞ＭＤＡ−ＭＢ−２３１の浸潤抑制効果を検討した。この際、比較のために、アミノピリジンオール誘導体である６−アミノ−２，４，５−トリメチルピリジン−３−オール（ＢＪ−１１０１）と６−ジフェニルアミノ−２，４，５−トリメチルピリジン−３−オール（ＢＪ−１２０１）とに対する乳癌細胞ＭＤＡ−ＭＢ−２３１の浸潤抑制効果を共に検討した。
【化５】
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【化６】
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その結果、次の表５のように、アミノピリジンオール誘導体であるＢＪ−１１０１とＢＪ−１２０１は、乳癌細胞ＭＤＡ−ＭＢ−２３１に対する浸潤抑制効果はなく、一方、化合物８ｌと８ｑは、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１に対する浸潤抑制効果を表わした。
【０１４０】
【表５】
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【０１４１】
＜実験例９＞アミドピリジンオール誘導体によるカテプシンＳ発現抑制効果の検討
実施例から合成されたアミドピリジンオール誘導体をＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞に処理した時、カテプシンＳ遺伝子発現に及ぼす影響を検討するために、次のようにＲＴ−ＰＣＲを行った。
乳癌細胞ＭＤＡ−ＭＢ−２３１（１ｘ１０５ｃｅｌｌ／ｃｍ２）に各化合物をそれぞれ処理して、３７℃細胞培養器で２４時間培養後、トリゾール試薬を使って全体ｍＲＮＡを抽出した。２４時間後、培養液を除去し、トリゾール試薬１ｍＬを各ウェルに添加後、細胞溶出物を１．５ｍＬチューブに移した。各サンプルにクロロホルム２００μｌを添加して、４℃、１２，０００ｇで１５分間遠心分離した後、上澄み液５００μｌを新たなチューブに移した。各サンプルにイソプロピルアルコール５００μｌを添加後、４℃、１２，０００ｇで１５分間遠心分離した。各サンプルの上澄み液を除去し、７５％エタノールでｍＲＮＡを濯いだ後、沈澱を乾かした。そして、抽出したｍＲＮＡは、ＲＮａｓｅのない水で溶かした後、５５℃で１０分間加熱した。
ＲＮＡ定量後、ＧｏＳｃｒｉｐｔＴＭ逆転写反応計（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，ＵＳＡ）を使ってｃＤＮＡを合成した。ＰＣＲは、ＴａＫａＲａ  ＴａｑＴＭ（Ｔａｋａｒａ  ｂｉｏ  Ｉｎｃ．，Ｓｈｉｇａ，Ｊａｐａｎ）を使って実施し、カテプシンＳプライマーは、配列番号１（正方向配列：５´−ＧＣＡ  ＧＴＧ  ＧＣＡ  ＣＡＧ  ＴＴＧ  ＣＡＴ  ＡＡ−３´）の正方向プライマーと配列番号２（逆方向配列：５´−ＡＧＣ  ＡＣＣ  ＡＣＡ  ＡＧＡ  ＡＣＣ  ＣＡＴ  ＧＴ−３´）の逆方向プライマーセットを使った。ＰＣＲ産物をアガロースゲルで電気泳動した後、臭化エチジウム（０．５μｇ／ｍｌ）で染色して、ゲルイメージングシステム（ＵＶＰ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）を使って写真を得た。この際、グリセルアルデヒド３−リン酸デヒドロケナーゼ（Ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ  ３−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ；ＧＡＰＤＨ）を基準に定量した。ＧＡＰＤＨプライマーは、配列番号３（正方向配列：５´−ＧＧＴ  ＧＡＡ  ＧＧＴ  ＣＧＧ  ＡＧＴ  ＣＡＡ  ＣＧ−３´）の正方向プライマーと配列番号４（逆方向配列：５´−ＣＡＡ  ＡＧＴ  ＴＧＴ  ＣＡＴＧＧＡ  ＴＧＡ  ＣＣ−３´）の逆方向プライマーセットを使った。
その結果、次の表６のように、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞浸潤抑制効果がなかったＢＪ−１１０１とＢＪ−１２０１いずれもカテプシンＳ遺伝子発現減少効果がないということを確認した。また、細胞浸潤抑制効果が最も大きな化合物８ｑは、カテプシンＳ遺伝子発現減少効果も最も大きいということを確認することができた。したがって、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞の浸潤抑制効果とカテプシンＳ遺伝子の発現抑制効果は、非常に高い相関性があるということを確認した。
【０１４２】
【表６】
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【０１４３】
＜実験例１０＞乳癌細胞ＭＤＡ−ＭＢ−２３１でｃａｔｈｅｐｓｉｎ  Ｓ発現を抑制する化合物スクリーニング
以前実験例を通じて乳癌細胞ＭＤＡ−ＭＢ−２３１の浸潤作用にカテプシンＳが重要に作用することを確認したので、乳癌細胞の転移を抑制する他のアミドピリジンオール誘導体をスクリーニングするために、各化合物１μＭ処理時のカテプシンＳ遺伝子発現抑制効果を実験例９と同じ方法で検討した。
その結果、次の表７のように、カテプシンＳ遺伝子発現抑制率が５０％を超える化合物は、化合物８ａ、８ｂ及び８ｇで表われ、このような化合物は、転移性乳癌細胞の浸潤と転移とを抑制することができる優れた化合物として確認された。
【０１４４】
【表７】
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【０１４５】
＜実験例１１＞毒性実験
雄性Ｂａｌｂ／ｃマウスに化合物８ａを０．５％メチルセルロース溶液にそれぞれ懸濁して、０．５ｇ／ｋｇ、１ｇ／ｋｇ及び２ｇ／ｋｇの容量で１回単回経口投与し、７日間マウスの生存率及び体重を調査した。
このような投与後、動物の斃死有無、臨床症状、体重変化を観察し、血液学的検査と血液生化学的検査とを実施し、部検して肉眼で腹腔臓器と胸腔臓器との異常有無を観察した。
その結果、あらゆる動物で特記すべき臨床症状や斃死された動物はなく、体重変化、血液検査、血液生化学検査、剖検所見などでも、毒性変化は観察されていない。
以上の結果、本発明の化合物は、マウスで２ｇ／ｋｇまで毒性変化を表わさず、したがって、経口投与中間致死量（ＬＤ５０）は、２ｇ／ｋｇ以上である安全な物質と判断された。
以下、本発明による化合物８ａを含む組成物の製剤例を説明するが、本発明は、それを限定するためのものではなく、単に具体的に説明するためである。
＜製剤例１＞散剤の製造
化合物８ａ  ２０ｍｇ、乳糖１００ｍｇ、及びタルク１０ｍｇを混合し、気密布に充填して散剤を製造した。
＜製剤例２＞錠剤の製造
化合物８ａ  ２０ｍｇ、トウモロコシ澱粉１００ｍｇ、乳糖１００ｍｇ、及びステアリン酸マグネシウム２ｍｇを混合した後、通常の錠剤の製造方法によって打錠して、錠剤を製造した。
＜製剤例３＞カプセル剤の製造
化合物８ａ  １０ｍｇ、トウモロコシ澱粉１００ｍｇ、乳糖１００ｍｇ、及びステアリン酸マグネシウム２ｍｇを混合した後、通常のカプセル剤の製造方法によって、前記の成分を混合し、ゼラチンカプセルに充填して、カプセル剤を製造した。
＜製剤例４＞注射剤の製造
化合物８ａ  １０ｍｇ、注射用滅菌蒸留水適量及びｐＨ調節剤適量を混合した後、通常の注射剤の製造方法によって１アンプル当たり（２ｍｌ）、前記の成分含量で製造した。
＜製剤例５＞軟膏剤の製造
化合物８ａ  １０ｍｇ、ＰＥＧ−４０００  ２５０ｍｇ、ＰＥＧ−４００  ６５０ｍｇ、白色ワセリン１０ｍｇ、パラオキシ安息香酸メチル１．４４ｍｇ、パラオキシ安息香酸プロピル０．１８ｍｇ、及び残量の精製水を混合した後、通常の軟膏剤の製造方法によって軟膏剤を製造した。
以上、本発明の特定の部分を詳しく記述したところ、当業者において、このような具体的技術は、単に望ましい実施例であるだけであり、これにより、本発明の範囲が制限されるものではないということは明白である。したがって、本発明の実質的な範囲は、特許請求の範囲と、それらの等価物とによって定義されるものである。
【産業上の利用可能性】
【０１４６】
本発明は、アミドピリジンオール誘導体またはその薬剤学的に許容可能な塩、及びそれを有効成分として含有する薬学組成物関連の分野に適用可能である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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