(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（２Ｒ，４Ｓ，４ａＳ）−１１−フルオロ−２，４−ジメチル−８−［（４Ｓ）−４−メチル−２−オキソ−１，３−オキサゾリジン−３−イル］−１，２，４，４ａ−テトラヒドロ−２’Ｈ，６Ｈ−スピロ［１，４−オキサジノ［４，３−ａ］［１，２］オキサゾロ［４，５−ｇ］キノリン−５，５’−ピリミジン］−２’，４’，６’（１’Ｈ，３’Ｈ）−トリオン、またはその薬学的に許容可能な塩を含む、対象において、バシラス・アンスラシス、ブルセラ属、フランシセラ属、エルシナ（Ｙｅｒｓｉｎａ）属、マイコプラズマ属、ウレアプラズマ属、クラミジア・トラコマチス、またはクラミジア・ニューモニエから選択される１つ以上の細菌によって引き起こされる細菌感染を治療するための、医薬組成物。
【請求項２】
前記対象は、ヒトである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記対象は、２つ以上の細菌感染に罹患している、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記対象は、クラミジア・トラコマチス感染及びナイセリア・ゴノロエア感染に罹患している、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記細菌は、（２Ｒ，４Ｓ，４ａＳ）−１１−フルオロ−２，４−ジメチル−８−［（４Ｓ）−４−メチル−２−オキソ−１，３−オキサゾリジン−３−イル］−１，２，４，４ａ−テトラヒドロ−２’Ｈ，６Ｈ−スピロ［１，４−オキサジノ［４，３−ａ］［１，２］オキサゾロ［４，５−ｇ］キノリン−５，５’−ピリミジン］−２’，４’，６’（１’Ｈ，３’Ｈ）−トリオン以外の１つ以上の抗細菌剤に抵抗性である、請求項１に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
細菌感染を治療するための新たな療法に関する。
【背景技術】
【０００２】
抗生物質への耐性及び抵抗性は、多くの一般的な細菌感染の治療の成功に対する深刻な脅威となっている。実際、米国感染症学会（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ）によると、メチシリン抵抗性スタフィロコッカス・アウレウス（ＭＲＳＡ）により、肺気腫、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、パーキンソン病、及び殺人の合計よりも多い米国人が毎年死亡している。増加しているエンテロコッカス・フェシウム、スタフィロコッカス・アウレウス、クレブシエラ・ニューモニエ、アシネトバクター・バウマニ、シュードモナス・エルギノーサ、マイコバクテリウム・ツベルクローシス、及びエンテロバクター属等の一般的な感染性グラム陽性及び陰性病原体における多薬物抵抗性だけでなく、サルモネラ及びクロストリジウム・ディフィシレ、ならびに次第にナイセリア・ゴノロエアにおいても、抵抗性の証拠が見られている（Ｇｅｒａｒｄ  Ｄ．Ｗｒｉｇｈｔ，“Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ：Ａ  Ｎｅｗ  Ｈｏｐｅ，”１９（２０１２），３−１０）。抵抗性のこの増加により、新たな抗細菌薬剤の開発は、重要な医学的必要性である。
【発明の概要】
【０００３】
細菌感染を治療するための新たな療法に対する必要性が依然として存在する。細菌感染を治療するための潜在的使用のための、化合物（２Ｒ，４Ｓ，４ａＳ）−１１−フルオロ−２，４−ジメチル−８−［（４Ｓ）−４−メチル−２−オキソ−１，３−オキサゾリジン−３−イル］−１，２，４，４ａ−テトラヒドロ−２’Ｈ，６Ｈ−スピロ［１，４−オキサジノ［４，３−ａ］［１，２］オキサゾロ［４，５−ｇ］キノリン−５，５’−ピリミジン］−２’，４’，６’（１’Ｈ，３’Ｈ）−トリオン、またはその薬学的に許容可能な塩が提供される。
【０００４】
一態様において、それを必要とする対象において、バシラス・アンスラシス、バシラス・セレウス、バークホルデリア属、ブルセラ属、フランシセラ属、エルシナ（Ｙｅｒｓｉｎａ）属、マイコプラズマ属、ウレアプラズマ属、クラミジア・トラコマチス、もしくはクラミジア・ニューモニエによって引き起こされる細菌感染を治療するための方法であって、有効量の（２Ｒ，４Ｓ，４ａＳ）−１１−フルオロ−２，４−ジメチル−８−［（４Ｓ）−４−メチル−２−オキソ−１，３−オキサゾリジン−３−イル］−１，２，４，４ａ−テトラヒドロ−２’Ｈ，６Ｈ−スピロ［１，４−オキサジノ［４，３−ａ］［１，２］オキサゾロ［４，５−ｇ］キノリン−５，５’−ピリミジン］−２’，４’，６’（１’Ｈ，３’Ｈ）−トリオン、またはその薬学的に許容可能な塩を、対象に投与することを含む、方法が提供される。
【０００５】
一態様において、バシラス・アンスラシス、バシラス・セレウス、バークホルデリア属、ブルセラ属、フランシセラ属、エルシナ（Ｙｅｒｓｉｎａ）属、マイコプラズマ属、ウレアプラズマ属、クラミジア・トラコマチス、もしくはクラミジア・ニューモニエから選択される１つ以上の細菌によって引き起こされる細菌感染を治療するための、（２Ｒ，４Ｓ，４ａＳ）−１１−フルオロ−２，４−ジメチル−８−［（４Ｓ）−４−メチル−２−オキソ−１，３−オキサゾリジン−３−イル］−１，２，４，４ａ−テトラヒドロ−２’Ｈ，６Ｈ−スピロ［１，４−オキサジノ［４，３−ａ］［１，２］オキサゾロ［４，５−ｇ］キノリン−５，５’−ピリミジン］−２’，４’，６’（１’Ｈ，３’Ｈ）−トリオン、またはその薬学的に許容可能な塩の使用が提供される。
【０００６】
一態様において、バシラス・アンスラシス、バシラス・セレウス、バークホルデリア属、ブルセラ属、フランシセラ属、エルシナ（Ｙｅｒｓｉｎａ）属、マイコプラズマ属、ウレアプラズマ属、クラミジア・トラコマチス、もしくはクラミジア・ニューモニエから選択される１つ以上の細菌によって引き起こされる細菌感染を治療するための薬剤の製造における、（２Ｒ，４Ｓ，４ａＳ）−１１−フルオロ−２，４−ジメチル−８−［（４Ｓ）−４−メチル−２−オキソ−１，３−オキサゾリジン−３−イル］−１，２，４，４ａ−テトラヒドロ−２’Ｈ，６Ｈ−スピロ［１，４−オキサジノ［４，３−ａ］［１，２］オキサゾロ［４，５−ｇ］キノリン−５，５’−ピリミジン］−２’，４’，６’（１’Ｈ，３’Ｈ）−トリオン、またはその薬学的に許容可能な塩の使用が提供される。
【０００７】
一態様において、バシラス・アンスラシス、バシラス・セレウス、バークホルデリア属、ブルセラ属、フランシセラ属、エルシナ（Ｙｅｒｓｉｎａ）属、マイコプラズマ属、ウレアプラズマ属、クラミジア・トラコマチス、もしくはクラミジア・ニューモニエから選択される１つ以上の細菌によって引き起こされる細菌感染を治療するための、（２Ｒ，４Ｓ，４ａＳ）−１１−フルオロ−２，４−ジメチル−８−［（４Ｓ）−４−メチル−２−オキソ−１，３−オキサゾリジン−３−イル］−１，２，４，４ａ−テトラヒドロ−２’Ｈ，６Ｈ−スピロ［１，４−オキサジノ［４，３−ａ］［１，２］オキサゾロ［４，５−ｇ］キノリン−５，５’−ピリミジン］−２’，４’，６’（１’Ｈ，３’Ｈ）−トリオン、またはその薬学的に許容可能な塩を含む、薬学的組成物が提供される。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
それを必要とする対象において、バシラス・アンスラシス、バシラス・セレウス、バークホルデリア属、ブルセラ属、フランシセラ属、エルシナ（Ｙｅｒｓｉｎａ）属、マイコプラズマ属、ウレアプラズマ属、クラミジア・トラコマチス、もしくはクラミジア・ニューモニエから選択される１つ以上の細菌によって引き起こされる細菌感染を治療するための方法であって、有効量の（２Ｒ，４Ｓ，４ａＳ）−１１−フルオロ−２，４−ジメチル−８−［（４Ｓ）−４−メチル−２−オキソ−１，３−オキサゾリジン−３−イル］−１，２，４，４ａ−テトラヒドロ−２’Ｈ，６Ｈ−スピロ［１，４−オキサジノ［４，３−ａ］［１，２］オキサゾロ［４，５−ｇ］キノリン−５，５’−ピリミジン］−２’，４’，６’（１’Ｈ，３’Ｈ）−トリオン、またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む、方法が提供される。
【０００９】
化合物（２Ｒ，４Ｓ，４ａＳ）−１１−フルオロ−２，４−ジメチル−８−［（４Ｓ）−４−メチル−２−オキソ−１，３−オキサゾリジン−３−イル］−１，２，４，４ａ−テトラヒドロ−２’Ｈ，６Ｈ−スピロ［１，４−オキサジノ［４，３−ａ］［１，２］オキサゾロ［４，５−ｇ］キノリン−５，５’−ピリミジン］−２’，４’，６’（１’Ｈ，３’Ｈ）−トリオンは、以下の構造を有する。
【化１】
0006502387.tif 000002
上述の化合物、及びその合成方法は、国際出願第ＰＣＴ／ＧＢ２０１４／０５０１６４号において開示され、これは、その全体として本明細書に明示的に組み込まれる。
【００１０】
「細菌感染」という文言は、グラム陰性、グラム陽性、または非定型細菌のうちの１つ以上の属によって引き起こされる感染を含む。
【００１１】
一部の実施形態において、細菌感染は、バシラス・アンスラシスまたはバシラス・セレウスによって引き起こされる。
【００１２】
一部の実施形態において、細菌感染は、バークホルデリア属、例えば、バークホルデリア・マレイ、バークホルデリア・シュードマレイ、及びバークホルデリア・セパシアによって引き起こされる。
【００１３】
一部の実施形態において、細菌感染は、ブルセラ属、例えば、ブルセラ・メリテンシス、ブルセラ・アボルタス、ブルセラ・カニス、ブルセラ・スイス、及びブルセラ・オビスによって引き起こされる。
【００１４】
一部の実施形態において、細菌感染は、フランシセラ属、例えば、フランシセラ・ツラレンシス、フランシセラ・ノビシダ、及びフランシセラ・フィロミラギアによって引き起こされる。
【００１５】
一部の実施形態において、細菌感染は、エルシナ（Ｙｅｒｓｉｎａ）属、例えば、エルシニア・ペスティス及びエルシニア・エンテロコリチカによって引き起こされる。
【００１６】
一部の実施形態において、細菌感染は、マイコプラズマ属、例えば、マイコプラズマ・ガリセプチカム、マイコプラズマ・ジェニタリウム、マイコプラズマ・ヘモフェリス、マイコプラズマ・ホミニス、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ、マイコプラズマ・オビニューモニエ、及びマイコプラズマ・ニューモニエによって引き起こされる。
【００１７】
一部の実施形態において、細菌感染は、ウレアプラズマ属、例えば、ウレアプラズマ・パルバム及びウレアプラズマ・ウレアリチカムによって引き起こされる
【００１８】
一部の実施形態において、細菌感染は、クラミジア・トラコマチスまたはクラミジア・ニューモニエによって引き起こされる。
【００１９】
一部の実施形態において、細菌は、（２Ｒ，４Ｓ，４ａＳ）−１１−フルオロ−２，４−ジメチル−８−［（４Ｓ）−４−メチル−２−オキソ−１，３−オキサゾリジン−３−イル］−１，２，４，４ａ−テトラヒドロ−２’Ｈ，６Ｈ−スピロ［１，４−オキサジノ［４，３−ａ］［１，２］オキサゾロ［４，５−ｇ］キノリン−５，５’−ピリミジン］−２’，４’，６’（１’Ｈ，３’Ｈ）−トリオン以外の１つ以上の抗細菌剤に抵抗性である。「抵抗性」及び「抗細菌抵抗性」という文言は、１つ以上の抗細菌薬剤へ曝露されても生存することができる細菌を指す。一実施形態において、細菌は、アミノグリコシド抗生物質（例えば、アミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシン、パロモマイシン、スペクチノマイシン）、アンサマイシン抗生物質（例えば、リファキシミン、ストレプトマイシン）、カルバペネム抗生物質（例えば、エルタペネム、ドリペネム、イミペネム／シラスタチン、メロペネム）、セファロソプリン（ｃｅｐｈａｌｏｓｏｐｒｉｎ）抗生物質（例えば、セファドロキシル、セファキソリン、セファトリン（ｃｅｆａｔｏｌｉｎ）、セファレキシン、セファクロル、セファマンドール、セフォキシチン、セフプロジル、セフロキシム、セフィシム（ｃｅｆｉｓｉｍｅ）、セフジニル、セフジトレン、セフォペラゾン、セフォタキシム、セフポドキシム、セフタジジム、セフチブテン、セフチゾキシム、セフトリアキソン、セフェピム、セフタロリンフォサミル、セフトビプロール）、グリコペプチド抗生物質（例えば、テイコプラニン、バンコマイシン、テラバンシン）、リンコサミド抗生物質（例えば、クリンダマイシン、リンコマイシン）、ダプトマイシン、マクロライド抗生物質（例えば、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、ジリスロマイシン、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、トロレアンドマイシン、テリスロマイシン、スピラマイシン）、アズトレオナム、フラゾリドン、ニトロフアントイン（ｎｉｔｒｏｆｕａｎｔｏｉｎ）、オキサゾリジノン抗生物質（例えば、リネゾリド、ポシゾリド、ラデゾリド、トレゾリド）、ペニシリン抗生物質（例えば、アモキサシリン（ａｍｏｘａｃｉｌｌｉｎ）、アンピシリン、アズロシリン、カルベニシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、メズロシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリン、ピペラシリン、テモシリン、チカルシリン）、アモキシシリン／クラブラント（ｃｌａｖｕｌａｎｔｅ）、アンピシリン／スルバクタム、ピペラシリン／タゾバクタム、チカルシリン／クラブラン酸、キノロン抗細菌剤（例えば、シプロフロキサシン、エノキサシン、ガチフロキサシン、ゲミフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、モキシフロキサシン、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン、トロバフロキシン（ｔｒｏｖａｆｌｏｘｉｎ）、グレパフロキサシン、スパルフロキサシン、テマフロキサシン）、スフロンアミド抗生物質（例えば、マフェニド、スルファセタミド、スルファジアジン、スルファジアジン銀、スルファジメトキシン、スルファメチゾール、スルファメトキサゾール、スルファニリミド（ｓｕｌｆａｎｉｌｉｍｉｄｅ）、スルファサラジン、スルフイソキサゾール、トリメトプリム／スルファメトキサゾール−ＴＭＰ−ＳＭＸ）、及びテトラサイクリン抗生物質（例えば、デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、テトラサイクリン、チゲクリクリン（ｔｉｇｅｃｌｙｃｌｉｎｅ））のうちの１つ以上に抵抗性である。一部の実施形態において、細菌は、ドキシサイクリンに抵抗性である。一部の実施形態において、細菌は、レボフロキサシン及び／またはシプロフロキサシンに抵抗性である。一部の実施形態において、細菌は、アジスロマイシンに抵抗性である。一部の実施形態において、細菌は、テトラサイクリンに抵抗性である。
【００２０】
一部の実施形態において、性的に伝染する細菌感染に罹患する対象を治療する方法であって、対象に有効量の（２Ｒ，４Ｓ，４ａＳ）−１１−フルオロ−２，４−ジメチル−８−［（４Ｓ）−４−メチル−２−オキソ−１，３−オキサゾリジン−３−イル］−１，２，４，４ａ−テトラヒドロ−２’Ｈ，６Ｈ−スピロ［１，４−オキサジノ［４，３−ａ］［１，２］オキサゾロ［４，５−ｇ］キノリン−５，５’−ピリミジン］−２’，４’，６’（１’Ｈ，３’Ｈ）−トリオン、またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む、方法が提供される。
【００２１】
一部の実施形態において、バシラス・アンスラシス、バシラス・セレウス、バークホルデリア属、ブルセラ属、フランシセラ属、エルシナ（Ｙｅｒｓｉｎａ）属、マイコプラズマ属、ウレアプラズマ属、クラミジア・トラコマチス、もしくはクラミジア・ニューモニエから選択される１つ以上の細菌によって引き起こされる細菌感染を治療する上での使用のための、（２Ｒ，４Ｓ，４ａＳ）−１１−フルオロ−２，４−ジメチル−８−［（４Ｓ）−４−メチル−２−オキソ−１，３−オキサゾリジン−３−イル］−１，２，４，４ａ−テトラヒドロ−２’Ｈ，６Ｈ−スピロ［１，４−オキサジノ［４，３−ａ］［１，２］オキサゾロ［４，５−ｇ］キノリン−５，５’−ピリミジン］−２’，４’，６’（１’Ｈ，３’Ｈ）−トリオン、またはその薬学的に許容可能な塩が提供される。
【００２２】
一態様において、それを必要とする対象において、嚢胞性線維症、ブルセラ症、野兎病、腺ペスト、敗血症、エルシニア症、骨盤内炎症性疾患、非定型肺炎、非特異性尿道炎、肺炎、気管支肺異形成症、または髄膜炎に罹患する対象において、炭疽感染、鼻疽、類鼻疽、肺感染を治療するための方法であって、有効量の（２Ｒ，４Ｓ，４ａＳ）−１１−フルオロ−２，４−ジメチル−８−［（４Ｓ）−４−メチル−２−オキソ−１，３−オキサゾリジン−３−イル］−１，２，４，４ａ−テトラヒドロ−２’Ｈ，６Ｈ−スピロ［１，４−オキサジノ［４，３−ａ］（１，２］オキサゾロ［４，５−ｇ］キノリン−５，５’−ピリミジン］−２’，４’，６’（１’Ｈ，３’Ｈ）−トリオン、またはその薬学的に許容可能な塩を、対象に投与することを含む、方法が提供される。
【００２３】
「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、及び「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という文言は、対象における細菌感染に関する酵素もしくはタンパク質活性の低減もしくは阻害、対象における細菌感染の１つ以上の症状の改善、または対象における細菌感染の進行の減速もしくは遅延を含む。「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、及び「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という文言はまた、対象における細菌成長、複製の低減もしくは阻害、または細菌の細菌負荷の低減もしくは阻害を含む。
【００２４】
「対象」という用語は、例えば、霊長類、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、トリ（シチメンチョウ、ガチョウ、ニワトリ、アヒルなど等の野禽及び家禽を含む）、ならびにマウスを含む。一部の実施形態において、対象は、霊長類、例えば、ヒトである。一部の実施形態において、対象は、グラム陽性細菌感染に罹患している。一部の実施形態において、対象は、グラム陰性（ｎｅｇａｉｔｖｅ）細菌感染に罹患している。一部の実施形態において、対象は、非定型細菌感染に罹患している。一部の実施形態において、対象は、治療を必要としている（例えば、対象は、治療から生物学的または医学的に利益を得るであろう）。一部の実施形態において、対象は、細菌感染、例えば、嚢胞性線維症の治療に対する応答を悪化させる重大な基礎疾患状態に罹患している。一部の実施形態において、対象は、１つ以上の細菌感染に罹患（例えば、２つ以上の細菌感染によって共感染）している。一部の実施形態において、対象は、ナイセリア・ゴノロエアによって引き起こされる感染に罹患している。一部の実施形態において、対象は、クラミジア・トラコマチス及びナイセリア・ゴノロエアに共感染している。一部の実施形態において、対象は、性的に伝染する細菌感染（例えば、クラミジア・トラコマチスまたはナイセリア・ゴノロエア感染）にかかる危険性がある。
【００２５】
「有効量」という文言は、対象の生物学的または医学的応答、例えば、細菌ＤＮＡジャイレースもしくは細菌感染に関する酵素もしくはタンパク質活性の低減もしくは阻害、細菌感染の症状の改善、または細菌感染の進行の減速もしくは遅延を惹起する、（２Ｒ，４Ｓ，４ａＳ）−１１−フルオロ−２，４−ジメチル−８−［（４Ｓ）−４−メチル−２−オキソ−１，３−オキサゾリジン−３−イル］−１，２，４，４ａ−テトラヒドロ−２’Ｈ，６Ｈ−スピロ［１，４−オキサジノ［４，３−ａ］［１，２］オキサゾロ［４，５−ｇ］キノリン−５，５’−ピリミジン］−２’，４’，６’（１’Ｈ，３’Ｈ）−トリオン、またはその薬学的に許容可能な塩の量を含む。一部の実施形態において、「有効量」という文言は、対象に投与されるときに、少なくとも部分的に細菌感染を軽減、阻害、及び／もしくは改善する、または細菌ＤＮＡジャイレースを阻害する、ならびに／または対象における細菌の細菌成長、複製、もしくは細菌負荷を低減もしくは阻害するために有効である、（２Ｒ，４Ｓ，４ａＳ）−１１−フルオロ−２，４−ジメチル−８−［（４Ｓ）−４−メチル−２−オキソ−１，３−オキサゾリジン−３−イル］−１，２，４，４ａ−テトラヒドロ−２’Ｈ，６Ｈ−スピロ［１，４−オキサジノ［４，３−ａ］［１，２］オキサゾロ［４，５−ｇ］キノリン−５，５’−ピリミジン］−２’，４’，６’（１’Ｈ，３’Ｈ）−トリオン、またはその薬学的に許容可能な塩の量を含む。
【００２６】
例示
実施例１．（２Ｒ，４Ｓ，４ａＳ）−１１−フルオロ−２，４−ジメチル−８−［（４Ｓ）−４−メチル−２−オキソ−１，３−オキサゾリジン−３−イル］−１，２，４，４ａ−テトラヒドロ−２’Ｈ，６Ｈ−スピロ［１，４−オキサジノ［４，３−ａ］［１，２］オキサゾロ［４，５−ｇ］キノリン−５，５’−ピリミジン］−２’，４’，６’（１’Ｈ，３’Ｈ）−トリオン（化合物１）の合成
【００２７】
化合物１は、以下に説明されるとおりに合成した。
中間体１
３−クロロ−６−４［（２Ｒ，６Ｓ）−２，６−ジメチルモルホリン−４−イル］−７−フルオロ−１，２−ベンゾオキサゾール−５−カルバルデヒド
【化２】
0006502387.tif 000003
無水アセトニトリル（５０ｍｌ）中の３−クロロ−６，７−ジフルオロ−１，２−ベンゾオキサゾール−５−カルバルデヒド（国際出願公開第ＷＯ  ２０１０／０４３８９３号に説明される手順に従って調製、５．０ｇ、２３．０ミリモル）の氷冷溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（５，９ｇ、４５．９ミリモル）、続いて、シス−２，６−ジメチルモルホリン（２．６ｇ、２３．０ミリモル）を添加し、混合物を、封止した管において、８５℃で１２時間、加熱した。溶液を室温まで冷却し、揮発性物質を真空下で除去した。残渣を酢酸エチル中に溶解し、水、続いて、ブラインで洗浄し、次いで、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。真空下での溶媒の除去により、粗生成物を得、これを、石油エーテル中の酢酸エチルの勾配を使用したシリカゲルカラム上で精製して、固体として表題化合物を得た。収量：６．０ｇ（８４％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ：１．０（ｄ，６Ｈ），２．９（ｔ，２Ｈ），３．１（ｄ，２Ｈ），３．８（ｍ，２Ｈ），７．７（ｓ，１Ｈ），１０．２（ｓ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ）ＭＨ＋：Ｃ１４Ｈ１４ＣＩＦＮ２Ｏ３に対して３１３。
【００２８】
中間体２
３−クロロ−６−［（２Ｒ，６Ｓ）−２，６−ジメチルモルホリン−４−イル］−５−（１，３−ジオキソラン−２−イル）−７−フルオロ−１，２−ベンゾオキサゾール
【化３】
0006502387.tif 000004
トルエン（３００ｍＬ）中の中間体１（１６．３ｇ、５２．２ミリモル）、エチレングリコール（８．１ｇ、１３０．６ミリモル）、及びｐ−トルエンスルホン酸ピリジニウム（１．３１ｇ、５．２ミリモル）の溶液を、Ｄｅａｎ−Ｓｔａｒｋ装置において１６時間、還流で加熱した。溶媒を真空下で除去し、残渣をジエチルエーテル（７５ｍＬ）中に溶解し、水（３×２５ｍＬ）及び水性ブライン（２５ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過した。真空下での溶媒の除去により、表題化合物を得、これを、高温ヘキサンでの粉砕によって更に精製した。収量：１８．０ｇ（８０％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ：１．１（ｄ，６Ｈ），２．８（ｔ，２Ｈ），３．０（ｄ，２Ｈ），３，３（ｍ，４Ｈ），３．８（ｍ，２Ｈ），５．７（ｓ，１Ｈ），７．６（ｓ，１Ｈ）。
【００２９】
中間体３
（４Ｒ）−３−｛６−［（２Ｒ，６Ｓ）−２，６−ジメチルモルホリン−４−イル］−５−（１，３−ジオキソラン−２−イル）−７−フルオロ−１，２−ベンゾオキサゾール−３−イル｝−４−メチル−１，３−オキサゾリジン−２−オン
【化４】
0006502387.tif 000005
ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）中のＮａＨ（０．２４ｇ、９．９ミリモル）の撹拌した溶液に、ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）中の（４Ｒ）−４−メチル−１，３−オキサゾリジン−２−オンの溶液（Ｎｉｓｈｉｙａｍａ，Ｔ．；Ｍａｔｓｕｉ，Ｓｈｉｇｅｋｉ；Ｙａｍａｄａ，Ｆ．Ｊ．Ｈｅｔ．Ｃｈｅｍ．（１９８６），２３（５），１４２７−９に説明される手順に従って合成）（１．０ｇ、９．９ミリモル）を、１０分の期間にわたって０℃でゆっくりと添加した。混合物を室温で３０分間撹拌し、ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中の中間体２（１．１ｇ、３．１ミリモル）の溶液を同じ温度で添加した。この混合物を８０℃で１２時間加熱し、氷冷水に注入し、酢酸エチル（２×２０ｍＬ）で抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、溶媒を真空下で除去した。粗生成物を、石油エーテル中の酢酸エチルの勾配を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィによって精製した。収量：０．１５ｇ（１２％）。ＭＳ（ＥＳ）ＭＨ＋：Ｃ２０Ｈ２４ＦＮ３Ｏ６に対して４２２．４。
【００３０】
中間体４
（４Ｓ）−３−｛６−［（２Ｒ，６Ｓ）−２，６−ジメチルモルホリン−４−イル］−５−（１，３−ジオキソラン−２−イル）−７−フルオロ−１，２−ベンゾオキサゾール−３−イル｝−４−メチル−１，３−オキサゾリジン−２−オン
【化５】
0006502387.tif 000006
中間体４は、中間体３の合成に関して説明されるものと同様の方法において、（４Ｓ）−４−メチル−１，３−オキサゾリジン−２−オン（Ｎｉｓｈｉｙａｍａ，Ｔ．；Ｍａｔｓｕｉ，Ｓｈｉｇｅｋｉ；Ｙａｍａｄａ，Ｆ．Ｊ．Ｈｅｔ．Ｃｈｅｍ．（１９８６），２３（５），１４２７−９に説明される手順に従って合成）を使用した中間体２から調製した。ＭＳ（ＥＳ）ＭＨ＋：Ｃ２０Ｈ２４ＦＮ３Ｏ６に対して４２２．４。
【００３１】
化合物１
（２Ｒ，４Ｓ，４ａＳ）−１１−フルオロ−２，４−ジメチル−８−［（４Ｓ）−４−メチル−２−オキソ−ｌ，３−オキサゾリジン−３−イル］−１，２，４，４ａ−テトラヒドロ−２’Ｈ，６Ｈ−スピロ［１，４−オキサジノ［４，３−ａ］［１，２］オキサゾロ［４，５−ｇ］キノリン−５，５’−ピリミジン］−２’，４’，６’（１’Ｈ，３’Ｈ）−トリオン
【化６】
0006502387.tif 000007
酢酸（１ｍｌ）中の中間体４（０．３６ミリモル）及びバルビツール酸（０．３ミリモル）の撹拌した混合物を、８５℃で１６時間加熱した。溶媒を蒸発させ、残渣をメタノール（２ｍｌ）中に溶解し、水（５ｍｌ）を添加した。沈殿した固体を濾過し、逆相ＨＰＬＣ（水中の１０ｍＭ酢酸アンモニウム、ＣＨ３ＣＮ）によって精製し、２つの成分を溶出した。第２の溶出成分を固体として単離し、表題化合物として識別した。表題化合物を、２つの成分の第１の溶出として、逆相ＨＰＬＣ（水中の１０ｍＭ酢酸アンモニウム、ＣＨ３ＣＮ）によって単離した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ：０．９（ｄ，３Ｈ），１．１５（ｄ，３Ｈ），１．４（ｄ，３Ｈ），２．９（ｄ，１Ｈ），３．１（ｔ，１Ｈ），３．５−３．６（ｍ，２Ｈ），３．８（ｍ，１Ｈ），３．９（ｄ，１Ｈ），４．０（ｄ，１Ｈ），４．２（ｑ，１Ｈ），４．６−４．７（ｍ，２Ｈ），７．６（ｓ，１Ｈ），１１．５（ｓ，１Ｈ），１１．８（ｓ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ）ＭＨ＋：Ｃ２２Ｈ２２ＦＮ５Ｏ７；［α］Ｄ２０＝−９２（ｃ＝１；ＭｅＯＨ）に対して４８８．４。
【００３２】
（２Ｓ，４Ｒ，４ａＲ）−１１−フルオロ−２，４−ジメチル−８−［（４Ｓ）−４−メチル−２−オキソ−１，３−オキサゾリジン−３−イル］−１，２，４，４ａ−テトラヒドロ−２’Ｈ，６Ｈ−スピロ［１，４−オキサジノ［４，３−ａ］［１，２］オキサゾロ［４，５−ｇ］キノリン−５，５’−ピリミジン］−２’，４’，６’（１’Ｈ，３’Ｈ）−トリオンもまた、ＨＰＬＣ精製からの第２の溶出成分として化合物１の合成から単離された。
【化７】
0006502387.tif 000008
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ：０．９（ｄ，３Ｈ），１．１５（ｄ，３Ｈ），１．４（ｄ，３Ｈ），２．９（ｄ，１Ｈ），３．１（ｔ，１Ｈ），３．６−３．７（ｍ，２Ｈ），３．８−４：０（ｍ，１Ｈ），３．９（ｄ，１Ｈ），４．１（ｄ，１Ｈ），４．２（ｑ，１Ｈ），４．６−４．７（ｍ，２Ｈ），７．６（ｓ，１Ｈ），１１．５（ｓ，１Ｈ），１１．８（ｓ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ）ＭＨ＋：Ｃ２２Ｈ２２ＦＮ５Ｏ７；［α］Ｄ２０＝＋２２４（ｃ＝１：ＭｅＯＨ）に対して４８８．４。
【００３３】
実施例２．ヒトマイコプラズマに対する化合物１のインビトロ抗細菌活性
化合物１は、いくつかの異なるタイプの細菌に対する活性を有するＤＮＡジャイレース及びトポイソメラーゼＩＶの超らせん形成及び脱連環活性の調査用阻害剤である。予備データは、この薬剤が、ナイセリア・ゴノロエア等の性的に伝染する感染の薬剤を含む、フルオロキノロン及びテトラサイクリン等の他の薬剤に抵抗性である生命体に対して、活性を維持することを示唆する。本研究は、重要なヒト病原体であるモリクテスの５つの属を代表する少数の臨床単離物及び参照株を試験することによって、追加のヒト病原体に対する化合物１のインビトロ活性の知識を増加させるために行われた。試験された生命体には、マイコプラズマ・ニューモニエ、マイコプラズマ・ホミニス、マイコプラズマ・ジェニタリウム、ウレアプラズマ・ウレアリチカム、及びウレアプラズマ・パルバムが含まれた。Ｍ．ニューモニエは、主に、咽頭炎、気管気管支炎、及び肺炎等の疾患を引き起こす気道の病原体である一方、残りの属は、成人男性及び女性における泌尿生殖器の重要な病原体であり、かつ妊娠中または分娩時に垂直伝染されるとき、新生児における全身性疾患も引き起こし得る。感受性試験は、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＣＬＳＩ）のガイドライン（ＣＬＳＩ  ２０１１）に従って実施した。試験された株には、テトラサイクリン抵抗性を媒介するｔｅｔＭ遺伝子、マクロライド抵抗性を付与する２３ＳリボソームＲＮＡ中の突然変異を含有した生命体、ならびにフルオロキノロンへの抵抗性を付与するＤＮＡジャイレース及び／またはトポイソメラーゼＩＶ中の突然変異を含有した他のものが含まれた。
【００３４】
方法
抗細菌剤。調査に含まれる薬物を、表１に要約する。適切な量の各粉末化薬物を計量して、１０ｍＬのストック溶液を調製し、各々の純度率（％）にした。抗微生物剤は、各製造元の説明書に従って溶解した。
【００３５】
【表１】
0006502387.tif 000009
細菌株。ＵＡＢ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙの培養収集所において、マイナス７０℃で保管されていた成人及び子供の種々の身体部位から得られた既知の力価の臨床単離物の純粋培養物を、この調査において使用した。単離物の原供給元及び単離年（入手可能な場合）、ならびに具体的な抵抗性プロファイル（関連する場合）を、表２に要約する。
【表２−１】
0006502387.tif 000010
【表２−２】
0006502387.tif 000011
【表２−３】
0006502387.tif 000012
表２に関する注記
略称：Ｕｕ＝ウレアプラズマ・ウレアリチカム、Ｕｐ＝ウレアプラズマ・パルバム、ＢＡＬ＝気管支肺胞洗浄液、ＣＳＦ＝脳脊髄液、ＥＴＡ＝気管内吸引物
ウレアプラズマ属は、以前に説明されているように（Ｘｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ａｎｄ  ｓｅｒｏｖａｒｓ  ｂｙ  ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ＰＣＲ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２０１０，４８，２７１５−２７２３）、リアルタイムＰＣＲによって識別した。３つの臨床単離物は、両方の属の混合物であると示され、これは時折生じる（Ｘｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ  ｈｏｒｉｚｏｎｔａｌ  ｇｅｎｅ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｉｎ  ｕｒｅａｐｌａｓｍａｓ  ｆｒｏｍ  ｈｕｍａｎｓ  ｑｕｅｓｔｉｏｎｓ  ｔｈｅ  ｕｔｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｓｅｒｏｔｙｐｉｎｇ  ｆｏｒ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ｐｕｒｐｏｓｅｓ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ，２０１１，４９，２８１８−２８２６）。
Ｍ．ホミニス及びウレアプラズマ属中のｔｅｔＭの存在は、ＵＡＢ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ＬａｂｏｒａｔｏｒｙにおけるＰＣＲによって判定した。
【００３６】
インビトロ感受性試験方法：
この調査のために採用されたアッセイは、「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  Ｔｅｓｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｓ．Ａｐｐｒｏｖｅｄ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ，ＣＬＳＩ  Ｄｏｃｕｍｅｎｔ  Ｍ４３−Ａ」（ＣＬＳＩ  ２０１１）において公開された培養液微量希釈最小阻害濃度（ＭＩＣ）アッセイであった。このアッセイは、９６ウエル・マイクロタイタプレートを採用し、この中へ、試験されるべき生命体の規定された接種物を、少容量の抗微生物剤の２倍希釈物に添加した。プレートは、成長対照が変色するまで、インキュベートした。次いで、ＭＩＣエンドポイントを、ｐＨ指示薬を含有する培養液中の変色の欠如によって判定した。使用した手順の具体的な態様は、以下である。
【００３７】
培地。Ｍ．ニューモニエ及びＭ．ジェニタリウムを試験するために、ＳＰ４培養液及びＳＰ４寒天を使用した。Ｍ．ホミニスを試験するために、変法Ｈａｙｆｌｉｃｋのマイコプラズマ培養液及び寒天を使用した。ウレアプラズマ属を試験するために、Ｓｈｅｐａｒｄの１０Ｂ培養液及びＡ８寒天を使用した。これらの培地及びそれらの配合は、ＣＬＳＩ文書（ＣＬＳＩ  ２０１１）に説明されている。
【００３８】
接種物の調製。生命体を室温まで解凍し、５０ｍＬの円錐状の管において、適切な事前加温した培地に希釈して、約１０４ＣＦＵ／ｍＬの最終接種物を得た。少なくとも５ｍＬの接種物を、２反復での８つの希釈物、及び適切な対照の試験に基づいて、各薬物に対して調製した。エンドポイントＭＩＣを達成するためにより多くの希釈物が必要とされた場合、追加の容量の接種物を調製した。接種された培養液を、使用の前に、好気的に３７℃で２時間インキュベートして、マイクロタイタプレートに接種する前に、マイコプラズマを代謝的に活性にした。それらのより急速な成長速度により、ウレアプラズマは、プレートに接種する前に、１時間のみインキュベートした。
【００３９】
培養液微量希釈アッセイの実施。４つの薬物に対して、単一のマイクロタイタプレートを使用した。各薬物を２反復で試験した（薬物１−列Ａ、Ｂ；薬物２−列Ｃ、Ｄ；薬物３−列Ｅ、Ｆ。ウェル９、１０、１１、及び１２は、それぞれ溶媒、培地、薬物、及び成長対照のために使用した。０．０２５ｍＬの適切な培養液培地を、マイクロタイタプレートの列２〜８及び１０及び１２に添加した。０．０２５ｍＬの最も高い濃度の試験されるべき薬物を、列Ａ、Ｂのウェル１、２、及び１１に添加した。ウェル１１は、薬物対照としての役割を果たした。試験されるべき他方の薬物を、それらのそれぞれの列に同様に添加した。最も高い薬物濃度は、ストック溶液における適切な希釈を実施することによって調製した。抗微生物剤を、０．０２５ｍＬマルチチャンネルピペットを使用して、第２のウェルから開始し、かつウェル８まで継続して連続希釈し、最後の０．０２５ｍＬを廃棄した。溶媒対照は、水以外のいずれかの物質が溶媒として使用された場合、試験されている抗微生物剤を溶解するために使用される０．０２５ｍＬの最も高い濃度（滅菌脱イオン水中１：１０の希釈）の溶媒を組み入れることによって、ウェル９において調製した。２時間事前加温した接種された培地の０．１７５ｍＬの所望の希釈物を、列１〜９及び１２において各ウェルに添加した。ウェル１２は、成長対照としての役割を果たした。接種物を、ウェル１２から開始して逆方向にウェル１まで添加して、薬物のキャリーオーバを防止した。０．１７５ｍＬの適切な未接種培地を、培地及び薬物対照のために、ウェル１０及び１１（合計０．２ｍＬ）に添加した。各マイクロタイタプレートに接種するために使用される作業用希釈物のＣＦＵ／ｍＬの最終的な判定は、接種物の６つの連続希釈物（０．９ｍＬの適切な培養液中の０．１ｍＬの接種物）を調製し、２０μｌの各希釈物を適切な寒天プレート上にピペッティングして、適切な希釈物が作製されたこと、及び接種物が１０４〜１０５ＣＦＵ／ｍＬを含有したことをチェックすることによって行った。寒天プレートは、コロニーが可視的となり、計数され得るようになるまで、空気＋５％  ＣＯ２中で３７℃でインキュベートした。成長が可視的となるまでに必要とされる時間は、属に従って様々であり、ウレアプラズマ属及びＭ．ホミニスに対する２４〜７２時間から、Ｍ．ニューモニエ及びＭ．ジェニタリウム最大数日までの範囲である。微量希釈トレイを、好気的に３７℃でインキュベートし、１８〜２４時間後、次いで毎日、成長対照ウェルにおける変色に関して検査した。
【００４０】
ＭＩＣエンドポイントの判定、品質管理、及びアッセイ検証。ＭＩＣは、生命体対照ウェルが最初に変色を示したときに、培養液培地における変色を阻害する抗微生物剤の最も低い濃度として記録した。１０Ｂ培養液におけるウレアプラズマ属の成長に対する陽性反応は、生命体対照ウェル（即ち、ウェル１２）における黄色からピンクへの変色によって明らかとなった。マイコプラズマ培養液におけるＭ．ホミニスに対する陽性反応は、生命体成長対照ウェル（即ち、ウェル１２）におけるピンクからより深い赤色への変色によって明らかとなった。ＳＰ４培養液におけるＭ．ニューモニエ及びＭ．ジェニタリウムに対する陽性反応は、成長対照ウェルにおけるピンクから黄色への変色によって明らかとなった。結果は、生命体の濃度に対する対照寒天プレートが、１０４〜１０５ＣＦＵ／ｍＬが存在すると示した場合、有効であると見なされた。対照ウェル及び予想された結果は、以下であった：ウェル９（溶媒対照）−変色なし；ウェル１０（培地対照）−変色なし；ウェル１１（薬物対照）−変色なし；ウェル１２（成長対照）−混濁を伴わずに、どの生命体が試験されるかに従って、成長及び変色。試験された各単離物の接種物におけるＣＦＵ定量化を実施することによって、生命体の純度を実証した。ＳＰ４寒天は、Ｍ．ニューモニエ及びＭ．ジェニタリウムを接種されたとき、汚染物質またはマイコプラズマ属との混合培養物を検出した。Ｍ．ホミニスは、ＳＰ４またはマイコプラズマ寒天のいずれかにおいて成長する。Ｍ．ホミニス及び片利共生的な呼吸器マイコプラズマ属は、フライドエッグコロニーを生成するが、Ｍ．ニューモニエ及びＭ．ジェニタリウムは、小さい球状のコロニーを生成する。Ａ８寒天プレートは、ウレアプラズマ属に対して茶色の粒状コロニーを生成し、マイコプラズマ属または細菌汚染も検出するであろう。成長対照ウェルにおけるいかなる混濁も、細菌汚染を示し、結果を無効にする。
【００４１】
培養液微量希釈ＭＩＣ品質管理限界。品質管理（ＱＣ）目的上、試験されている各生命体に対するＣＬＳＩ（ＣＬＳＩ  ２０１１）によって表示されるＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）株を、毎実施日に各アッセイとともに含めた。いくつかの抗微生物剤に対するＭＩＣ参照範囲は、これらの株に対して確立されている（ＣＬＳＩ  ２０１１）。使用されたＱＣ株は、Ｍ．ニューモニエＡＴＣＣ  ２９３４２、Ｍ．ホミニスＡＴＣＣ  ２３１１４、及びＵ．ウレアリチカムＡＴＣＣ  ３３１７５であった。ＣＬＳＩによって推奨されるＭ．ジェニタリウム型株は、この生命体に対する感受性試験が標準化されていないため、なかった。したがって、我々は、この生命体に対してＡＴＣＣ  ３３５３０型株を選択した。この株は、我々の研究室において、他の調査のために使用されており、いくつかの抗微生物剤に対して予測可能なＭＩＣを有する。単一試験（単一薬物／単一生命体の組み合わせ）に対する許容可能なＭＩＣ  ＱＣ限界を、ＣＬＳＩ文書（ＣＬＳＩ  ２０１１）から得られるとおり、表３に列記する。ＱＣ株は、全てのＭＩＣアッセイに対して予想されるように性能し、そのデータを提示する。
【表３】
0006502387.tif 000013
表３に関する注記
表３のデータは、Ｍ−４３−Ａ  ＣＬＳＩ文書（ＣＬＳＩ  ２０１１）から得た。
【００４２】
結果
Ｍ．ジェニタリウム。化合物１は、レボフロキサシン及びドキシサイクリンに匹敵するインビトロ活性を示した。これらの３つの薬物に対する全体的なＭＩＣ範囲は、４２倍希釈＝０．２５〜２μｇ／ｍＬ内であった。化合物１のＭＩＣ範囲０．５〜１μｇ／ｍＬ）は、アジスロマイシン（ＭＩＣ範囲＜０．００１μｇ／ｍＬ）よりも強力ではなかった。
【００４３】
Ｍ．ニューモニエ。化合物１に対するＭＩＣ９０（１μｇ／ｍＬ）は、レボフロキサシンと同等であり、ドキシサイクリン（０．２５μｇ／ｍＬ）よりも４倍高かった。ほとんどのＭ．ニューモニエ単離物は、アジスロマイシンＭＩＣ＜０．００１μｇ／ｍＬを有したが、２つの株が、１６及び３２μｇ／ｍＬのアジスロマイシンＭＩＣを有し、２３ＳリボソームＲＮＡにおいて突然変異を含有していたことから、それらを試験のために選択した。化合物１は、完全にマクロライド感受性であるそれらの単離物に匹敵する、これらの２つのマクロライド抵抗性単離物に対するインビトロ効力を維持した。
【００４４】
Ｍ．ホミニス。化合物１は、４μｇ／ｍＬのＭＩＣ９０及び８μｇ／ｍＬの最大ＭＩＣ値で、Ｍ．ホミニスに対する最も低い全体的な活性を有した。ｔｅｔＭを有しないＭ．ホミニス単離物に対するドキシサイクリンＭＩＣは、０．０１６〜０．０６３μｇ／ｍＬの範囲であった一方、ｔｅｔＭを有するそれらの３つに対するＭＩＣは、４μｇ／ｍＬであった。対応するテトラサイクリンＭＩＣは、それらの単離物に対して、３２μｇ／ｍＬであった。ｔｅｔＭの存在に影響されないドキシサイクリンに対する化合物１のＭＩＣ。化合物１に対するＭＩＣ９０（４μｇ／ｍＬ）は、レボフロキサシン（０．２５μｇ／ｍＬ）よりも１６倍大きく、通常、この属に対してあまり活性ではない薬物である、アジスロマイシンと同等であった。化合物１に対する達成可能な薬物濃度に関する情報を有しない場合、これらのＭＩＣが感受性または抵抗性であると見なされるかどうかを示すことは可能ではない。
【００４５】
ウレアプラズマ属。化合物１に対するＭＩＣ９０は、１μｇ／ｍＬであり、効力においてレボフロキサシンに匹敵するものにした。レボフロキサシン抵抗性ウレアプラズマ及びレボフロキサシン感受性単離物に対する化合物１のＭＩＣにおける相違はなかった。同様に、ｔｅｔＭを含有する３つのウレアプラズマ単離物の中で、化合物１に対するＭＩＣは、ドキシサイクリンに対する４〜８μｇ／ｍＬと対比して、０．５〜２μｇ／ｍＬの範囲のそのＭＩＣに影響されなかったが、ドキシサイクリン感受性生命体に対するＭＩＣ９０（０．１２５μｇ／ｍＬ）は、化合物１（１μｇ／ｍＬ）よりも８倍活性であった。Ｕ．ウレアリチカム（アジスロマイシンＭＩＣ＝３２μｇ／ｍＬ）の単一のマクロライド抵抗性単離物に対する化合物１のＭＩＣは、２μｇ／ｍＬであり、これは、この薬物に対するＭＩＣ９０よりも高い２倍希釈物であったが、全体として、化合物１は、アジスロマイシンよりも４倍強力であった（１のＭＩＣ９０に対して４μｇ／ｍＬ）。
【表４−１】
0006502387.tif 000014
【表４−２】
0006502387.tif 000015
【表５】
0006502387.tif 000016
表４及び５に関する注記
略称：ＡＺＩ＝アジスロマイシン、ＤＯＸ＝ドキシサイクリン、ＬＥＶ＝レボフロキサシン、Ｕｕ＝ウレアプラズマ・ウレアリチカム、Ｕｐ＝ウレアプラズマ・パルバム。
ｔｅｔＭ遺伝子を含有する３つのＭ．ホミニス単離物はまた、ドキシサイクリンと同時に、テトラサイクリンに対して試験された。全ての３つの単離物は、テトラサイクリンに対して３２μｇ／ｍＬのＭＩＣを有した。
【００４６】
考察
ヒトに感染するマイコプラズマ及びウレアプラズマ属は、気道ならびに尿生殖路において重大な疾患を引き起こし得る。Ｎ．ゴノロエア及びクラミジア・トラコマチスに加えて、Ｍ．ジェニタリウム及びウレアプラズマ・ウレアリチカムの両方は、男性尿道炎を引き起こし得、Ｍ．ジェニタリウムもまた、女性子宮頸管炎及び骨盤内炎症性疾患を引き起こし得る（Ｗａｉｔｅｓ  ＫＢ，Ｔａｙｌｏｒ−Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  Ｄ．Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ａｎｄ  Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ．Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１０ｔｈ  Ｅｄ．Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．，ＡＳＭ  Ｐｒｅｓｓ：９７０−９８５，２０１１）。血流、ＣＳＦ、及び肺の侵襲性感染は、時折、新生児において、Ｍ．ホミニス及びウレアプラズマ属に起因して生じる（Ｗａｉｔｅｓ  ａｎｄ  Ｔａｙｌｏｒ−Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ２０１１）。侵襲性疾患はまた、免疫不全の状況では、成人においても生じ得る（Ｗａｉｔｅｓ  ａｎｄ  Ｔａｙｌｏｒ−Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ２０１１）。
【００４７】
マイコプラズマ及びウレアプラズマ感染に対する治療オプションは、マクロライド抵抗性が、アジアでは、Ｍ．ニューモニエにおいて非常に一般的になっており、かつ欧州及び北米にも徐々に広がっており；テトラサイリン（ｔｅｔｒａｃｙｌｉｎｅ）抵抗性率が、一部の地域において、Ｍ．ホミニス及びウレアプラズマ属で５０％に近付く可能性があり；マクロライド及びフルオロキノロンへの抵抗性が、性器マイコプラズマの間で十分に文書化されていることから、もはや明確ではない（Ｗａｉｔｅｓ  ＫＢ，Ｌｙｓｙｎｙａｎｓｋｙ  Ｉ，Ｂｅｂｅａｒ  ＣＭ．（２０１４）．Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｉｎ  ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎｓ  ａｎｄ  ａｎｉｍａｌｓ．Ｍｏｌｌｉｃｕｔｅｓ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｇ．Ｂｒｏｗｎｉｎｇ  ａｎｄ  Ｃ．Ｃｉｔｔｉ．Ｎｏｒｆｏｌｋ，ＵＫ，Ｃａｉｓｔｅｒ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ：２８９−３２２）。免疫抑制されている患者、及び長い期間、多数の抗生物質投与を受けた者は、薬物抵抗性生命体の感染を有する危険性がより大きい（Ｗａｉｔｅｓ  ２０１４）。これらの理由により、マクロライド、テトラサイクリン、及びフルオロキノロン等の他の薬物クラスへの交差抵抗性によって影響されない新たな薬剤が、必要とされる。
【００４８】
この小規模予備研究は、化合物１が、ＤＮＡ複製を標的とする別の薬剤であるレボフロキサシンに匹敵する、Ｍ．ジェニタリウム、Ｍ．ニューモニエ、Ｕ．ウレアリチカム、及びＵ．パルバムに対するインビトロ活性を有し、その効力が、フルオロキノロン抵抗性を付与する突然変異の存在によって影響されなかったことを実証した。更に、マイコプラズマ及びウレアプラズマ属におけるマクロライド及びテトラサイクリンへの抵抗性は、化合物１のＭＩＣにおけるいずれの重大な測定可能な効果を有しないと見られるが、より多くの単離物を試験して、この観察を確認するべきである。アジスロマイシンは、リボソームへのマクロライド結合に影響する突然変異の不在下で、Ｍ．ジェニタリウム及びＭ．ニューモニエに対して試験された最も強力な薬剤であった。化合物１に対するＭＩＣ９０は、ウレアプラズマ属に対して、アジスロマイシンよりも４倍小さく、試験された４つの薬剤の中で最も活性な薬物にした。
【００４９】
結論
●Ｍ．ニューモニエ、Ｍ．ジェニタリウム、及びウレアプラズマ属に対するインビトロでの化合物１の活性は、全てのＭＩＣ＜２μｇ／ｍＬで、全体としてレボフロキサシンと同様であった一方、Ｍ．ホミニスに対するその効力は、ＭＩＣ９０（４μｇ／ｍＬ）の観点から、いくらか小さかった。
●化合物１のＭＩＣ９０（１μｇ／ｍＬ）は、ウレアプラズマ属に対して、アジスロマイシンよりも４倍低く、３つの生命体に対して試験された４つの薬剤のうちで最も強力にした。
●Ｍ．ニューモニエ、Ｍ．ホミニス、及びウレアプラズマ属に対するインビトロでの化合物１の活性は、マクロライドもしくはフルオロキノロン抵抗性を付与する突然変異によって、または試験された少数の単離物におけるｔｅｔＭの存在によって、影響されなかった。
●化合物１は、尿生殖路または気道において、ヒトマイコプラズマ及びウレアプラズマによって引き起こされる感染に対する可能な治療としての更なる開発のための潜在的に有用な薬剤であり得る。
【００５０】
実施例３．生物テロの潜在的な薬剤に対する化合物１のインビトロ抗細菌活性
生物テロ薬剤としての使用のためのカテゴリＡ及びＢ選択薬剤の潜在性は、十分に文書化されている。この目的に向けて、我々は、バシラス・アンスラシス（Ｂ．アントラシス）、バークホルデリア・マレイ（Ｂ．マレイ）、バークホルデリア・シュードマレイ（Ｂ．シュードマレイ）、ブルセラ・アボルタス（Ｂ．アボルタス）、ブルセラ・メリテンシス（Ｂ．メリテンシス）、ブルセラ・スイス（Ｂ．スイス）、フランシセラ・ツラレンシス（Ｆ．ツラレンシス）、及びエルシナ（Ｙｅｒｓｉｎａ）・ペスティス（Ｙ．ペスティス）の複数の単離物各々に対する、複数の薬物クラスからの化合物及び化合物１に関する抗微生物感受性プロファイルを確立した。試験は、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＣＬＳＩ）ガイドラインに従って、培養液微量希釈アッセイフォーマットで行った。結果は、視覚的に微量希釈ウェルにおける生命体の成長を完全に阻害した、抗微生物剤の最も低い濃度（μｇ／ｍＬ）として報告した。
【００５１】
材料及び方法
抗細菌剤
３つの（３）比較化合物（ドキシサイクリン、レボフロキサシン、及びクロラムフェニコール）、ならびに化合物１を、バシラス・アンスラシス（Ｂ．アントラシス）、バークホルデリア・マレイ（Ｂ．マレイ）、バークホルデリア・シュードマレイ（Ｂ．シュードマレイ）、ブルセラ・アボルタス（Ｂ．アボルタス）、ブルセラ・メリテンシス（Ｂ．メリテンシス）、ブルセラ・スイス（Ｂ．スイス）、フランシセラ・ツラレンシス（Ｆ．ツラレンシス）、及びエルシナ（Ｙｅｒｓｉｎａ）・ペスティス（Ｙ．ペスティス）の複数の単離物各々に対する、抗細菌活性に関してスクリーニングした。化合物は、出資者によって提供される説明、及びＣＬＳＩガイドラインに従って、調製した。全ての試験及び比較化合物に対する各々合計１２の濃度を、３反復で試験した。濃度範囲は、６４μｇ／ｍＬの開始濃度及び０．０３１μｇ／ｍＬの終了濃度での２倍希釈スキームであった。
【００５２】
細菌株
Ｂ．アントラシス、Ｙ．ペスティス、Ｂ．マレイ、Ｂ．シュードマレイ、Ｂ．スイス、Ｂ．メリテンシス、Ｂ．アボルタスの１０の単離物各々、及びＦ．ツラレンシスの３つの単離物を、薬物スクリーニングのために利用した（表６）。加えて、以下の品質管理株を含めた：Ｅ．コリ２５９２２、Ｓ．アウレウス２９２１３、Ｐ．エルギノーサ２７８５３、Ｓ．ニューモニエ４９６１９、及びＥ．コリ３５２１８。
【表６−１】
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【表６−２】
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【００５３】
インビトロ感受性試験方法（適切な場合）
試験は、ＣＬＳＩガイドラインによって概説される培養液微量希釈方法論を利用して行った。簡潔に述べると、試験は、０．２ｍＬ／ウェルのアッセイ容量を有する９６ウェル、Ｕ底マイクロプレートを使用して行った。適切な培養液及び試験化合物の２倍希釈物を含有するプレートに、細菌薬剤の５．０×１０５ＣＦＵ／ｍＬ（５．０×１０４ＣＦＵ／ウェル）の標的濃度で接種し、その後、薬剤に応じて、２４〜７２時間インキュベートした。インキュベート後、プレートを視覚的に読み取り、個々のウェルを、混濁、部分的な清澄、または完全な清澄に関して採点した。ＭＩＣは、生命体の成長を視覚的に阻害した薬物の最も低い濃度（μｇ／ｍＬ）として報告した。成長培地、接種物調製、及びインキュベート条件を、以下の表７に提供する。
【表７】
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【００５４】
上で説明されるスクリーンの結果を、表８及び９に示す。
【表８−１】
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【表８−２】
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【表９】
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