(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
β―シトステロール、スチグマステロール又はカンペステロールのいずれかのステロールが、６位がリノール酸、オレイン酸又はパルミチン酸のいずれかの脂肪酸によって置換されたグルコースにより配糖体化されたアシル化ステロール配糖体を有効成分とする皮膚の血流改善剤。
【請求項２】
β―シトステロール、スチグマステロール又はカンペステロールのいずれかのステロールが、６位がリノール酸、オレイン酸又はパルミチン酸のいずれかの脂肪酸によって置換されたグルコースにより配糖体化されたアシル化ステロール配糖体を有効成分とする皮膚の血色改善剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アシル化ステロール配糖体を含有する皮膚の血流改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
アシル化ステロール配糖体の止血作用、血管補強作用、抗ショック作用（特許文献１：特開昭５１−１３６８３７号公報）、肥満予防効果（特許文献２：特開平７−１０７９３９号公報）、ＤＮＡ合成酵素阻害効果（特許文献３：特開２０１１−２１３６０９号公報）が知られている。
皮膚では、自然老化による血管の減少、光老化による血管壁の肥厚、周囲の炎症が確認されている。また加齢ともに皮膚色は「赤みが減り、明度が下がる」と言われており、加齢による毛細血管の減少や血流低下との関係が示唆される。
血管内皮細胞に関しては、高麗人参の実抽出物に血管内皮細胞での一酸化窒素の生成促進、血管内皮細胞の生存改善、血管内皮細胞の移動性増加作用があることが知られている（特許文献４：特開２０１４−１２９３６８号公報）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開昭５１−１３６８３７号公報
【特許文献２】特開平７−１０７９３９号公報
【特許文献３】特開２０１１−２１３６０９号公報
【特許文献４】特開２０１４−１２９３６８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の課題は、アシル化ステロール配糖体を有効成分とする皮膚の血流改善剤、皮膚の血色改善剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の主な構成は、次のとおりである。
（１）アシル化ステロール配糖体を有効成分とする皮膚の血流改善剤。
（２）アシル化ステロール配糖体を有効成分とする皮膚の血色改善剤。
【発明の効果】
【０００６】
アシル化ステロール配糖体を血管内皮細胞に作用させることにより、血管内皮細胞の増殖が促進され、代謝が促進され、走化性が促進されることにより、血管形成が促進され、皮膚の血流が改善され、皮膚の血色が改善される。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】血管内皮細胞増殖促進試験結果
【図２】血管内皮細胞代謝促進試験結果
【図３】血管内皮細胞走化性試験結果
【発明を実施するための形態】
【０００８】
本発明に用いるアシル化ステロール配糖体は、アシル基や構成糖や構成ステロールの異なる化合物の総称であり、天然物中には通常複数の成分の混合物として存在する。アシル化ステロール配糖体の構成糖は主にグルコースである。また構成ステロールはβ−シトステロール、スチグマステロール、カンペステロール等である。アシル化は主にグルコースの６位が、脂肪酸によってアシル化されており、構成脂肪酸として、リノール酸、オレイン酸、パルミチン酸等が挙げられる。
【０００９】
本発明に用いるアシル化ステロール配糖体は、市販品を用いることができ、例えばMATREYA製Esterified Steryl Glucosides等が挙げられる。
【００１０】
本発明の皮膚の血流改善剤、皮膚の血色改善剤は、アシル化ステロール配糖体を有効成分とする。
【００１１】
本発明の皮膚の血流改善剤、皮膚の血色改善剤は皮膚外用剤とすることが好ましく、剤型はローション、乳液、クリーム、ジェル、軟膏剤等が好ましい。
本発明の皮膚の血流改善剤、皮膚の血色改善剤には、一般的に外用剤に用いられる保湿剤、油剤、界面活性剤、増粘剤、抗菌剤等の成分を用いることができる。
【実施例】
【００１２】
以下に、実施例を示し、本発明をさらに詳細に説明する。
【００１３】
＜血管内皮細胞  増殖試験＞
試料
アシル化ステロール配糖体（MATREYA製Esterified Steryl Glucosides）
ＤＭＳＯ（アシル化ステロール配糖体希釈用、並びに対照試料）
【００１４】
試験方法
正常ヒト皮膚由来微小血管内皮細胞（ＨＭＶＥＣ）をｈＦＧＦ−Ｂ不含培地を用いて播種後、翌日各試料含有培地を追添加し、さらに３日培養を行った。
アシル化ステロール配糖体をＤＭＳＯに溶解し、培地中のアシル化ステロール配糖体の濃度が０．１μｇ／ｍＬとなるように添加した。
ＤＭＳＯの培地中の濃度は１％とした。ＤＭＳＯのみ、培地中に１％添加したものをコントロールとした。各試料の検体数は３（n=3）とした。
３日培養後、Hoechst33342試薬によって細胞のＤＮＡを染色し、蛍光強度（Ex=355nm, Em=460nm）を測定した。蛍光強度はＤＮＡ量すなわち細胞の量に比例する。
【００１５】
結果
コントロールの蛍光強度を１００としたときの、検体の蛍光強度の相対値を図１に示す。アシル化ステロール配糖体は有意に正常ヒト皮膚由来微小血管内皮細胞の増殖を促進した（ｐ＜０．０５）。
【００１６】
＜血管内皮細胞  代謝活性試験＞
試料
アシル化ステロール配糖体（MATREYA製Esterified Steryl Glucosides）
ＤＭＳＯ（アシル化ステロール配糖体希釈用、並びに対照試料）
【００１７】
試験方法
正常ヒト皮膚由来微小血管内皮細胞（ＨＭＶＥＣ）をｈＦＧＦ−Ｂ不含培地を用いて播種後、翌日各試料含有培地を追添加し、さらに３日培養を行った。
アシル化ステロール配糖体をＤＭＳＯに溶解し、培地中のアシル化ステロール配糖体の濃度が１μｇ／ｍＬとなるように添加した。
ＤＭＳＯの培地中の濃度は１％とした。ＤＭＳＯのみ、培地中に１％添加したものをコントロールとした。各試料の検体数は３（n=3）とした。
３日培養後、MTT試薬を細胞内に取り込ませた後、生成したホルマザンをイソプロパノールで抽出し、吸光度（570-630nm）を測定した。吸光強度は細胞の代謝活性に比例する。
【００１８】
結果
コントロールの吸光強度を１００としたときの、検体の吸光強度の相対値を図２に示す。アシル化ステロール配糖体は有意に正常ヒト皮膚由来微小血管内皮細胞の代謝活性を促進した（ｐ＜０．０５）。
【００１９】
＜血管内皮細胞  走化性試験＞
試料
アシル化ステロール配糖体（MATREYA製Esterified Steryl Glucosides）
ＤＭＳＯ（アシル化ステロール配糖体希釈用、並びに対照試料）
【００２０】
試験方法
正常ヒト皮膚由来微小血管内皮細胞（ＨＭＶＥＣ）を播種し、翌日培地を吸引後、チップを用いてキズ処理を行い、一直線上に細胞を除去した。その後すみやかに各試料含有培地を添加し、１７時間培養を行った。
アシル化ステロール配糖体をＤＭＳＯに溶解し、培地中のアシル化ステロール配糖体の濃度が０．１、１、１０μｇ／ｍＬとなるように添加した。
ＤＭＳＯの培地中の濃度は１％とした。ＤＭＳＯのみ、培地中に１％添加したものをコントロールとした。
１７時間培養後、顕微鏡にて細胞の様子を観察し、除去した部分へ遊走してきた細胞数をカウントした。
【００２１】
結果
コントロールの細胞の写真と検体を添加した細胞の写真を図３に示す。培地中にアシル化ステロール配糖体を添加しないコントロールを１７時間培養後に、細胞を除去した部分へ遊走してきた細胞数は５０個であったのに対して、培地中にアシル化ステロール配糖体の濃度が０．１、１、１０μｇ／ｍＬとなるように添加した検体では、遊走してきた細胞数が５７個、６５個、９５個であり、濃度依存的に、細胞の遊走が増加した。アシル化ステロール配糖体は正常ヒト皮膚由来微小血管内皮細胞の走化性を促進した。
【実施例１】
【００２２】
クリーム
（成分）                                                    （質量％）
１．  マカデミアナッツ油                                        ５
２．  トリオクタノイン                                          ５
３．  ホホバ油                                                  ３
４．  アシル化ステロール配糖体＊                                ０．００１
５．  ベヘニルアルコール                                        １
６．  モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０ＥＯ）  １．５
７．  モノステアリン酸グリセリル                                １
８．  グリセリン                                                ４
９．  ジプロピレングリコール                                    ４
１０．１，３−ブチレングリコール                                ４
１１．ベタイン                                                  ３
１２．キサンタンガム                                            ０．２
１３．フェノキシエタノール                                      ０．２
１４．精製水                                                    残余
＊MATREYA製Esterified Steryl Glucosides
（製法）
成分１〜７を８０度で撹拌混合して油相を調製する。成分８〜１４を８０度で撹拌混合して水相を調製する。８０度で油相に水相を添加してホモミキサーで乳化し、クリームを調製する。
【００２３】
（連用試験）
＜実使用試験＞
肌が健常な7名で、実施例１のクリームを適量（約0.5g）1日2回左半顔に1か月間使用した。比較例として、実施例１の処方からアシル化ステロール配糖体を除去したクリームを適量（約0.5g）1日2回右半顔に1か月間使用した。使用前および試験終了後に左半顔の頬部と右半顔の頬部の皮膚血流量を比較した。皮膚血流量は、皮膚血流画像化装置PIM II（Lisca社）を用いて、測定し、測定対象面積内の、平均血流量と最大血流量を求めた。また、デジタルカメラで顔を撮影し、血流量の増加が炎症の影響をうけているか確認した。
使用前と比較し、実施例１のクリーム使用１カ月後の左半顔頬部で、平均血流量、最大血流量が有意に増加した。一方、比較例のクリームを使用した右半顔頬部では、試験開始時と、試験終了時を比較して、平均血流量、最大血流量に差はなかった。また、デジタルカメラで顔の状態を確認したが、1カ月後で皮膚の炎症は確認されなかった。
【実施例２】
【００２４】
乳液
（成分）                                                          （質量％）
１．  トコフェリルリン酸ナトリウム                                  １．２
２．  ポリオキシブチレンポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリセリルエーテル
（３Ｂ．Ｏ．）（８Ｅ．Ｏ．）（５Ｐ．Ｏ．）                          ３
３．  グリセリン                                                    ３
４．  精製水                                                        ０．２
５．  オクタン酸セチル                                            １２
６．  アシル化ステロール配糖体＊                                    ０．０００１
７．  ジプロピレングリコール                                        ４
８．  １，３−ブチレングリコール                                    ４
９．  ベタイン                                                      ３
１０．キサンタンガム                                                ０．１
１１．ローカストビーンガム                                          ０．１
１２．カルボキシビニルポリマー                                      ０．１
１３．水酸化カリウム                                                ０．０３  
１４．フェノキシエタノール                                          ０．２
１５．精製水                                                          残余
＊MATREYA製Esterified Steryl Glucosides
（製法）
８０℃で混合した成分１〜４の中に、８０℃で混合した成分５、６を徐々に加えて混合し、次に８０℃に加熱した成分７〜１５を加え、冷却して乳液とする。
【００２５】
（連用試験）
＜実使用試験＞
実施例１と同様の試験を行い、最大血流量、平均血流量、いずれも使用前と比較して、増加が確認された。
【図１】
0006502788.tif 000002
【図２】
0006502788.tif 000003
【図３】
0006502788.tif 000004