(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物又はそのような化合物の塩：
【化１】
0006484644.tif 000016
式中、
Ｒ１及びＲ２の一方は水素を表し、他方はハロゲンを表す。
【請求項２】
Ｒ１がハロゲンを表し、Ｒ２が水素を表す；
請求項１に記載の化合物又はそのような化合物の塩。
【請求項３】
Ｒ１が水素を表し、Ｒ２がハロゲンを表す；
請求項１に記載の化合物又はそのような化合物の塩。
【請求項４】
キラル中心の絶対配置が式（ＩＳｔ１）で表される通りである
【化２】
0006484644.tif 000017
請求項１〜３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物又はそのような化合物の塩。
【請求項５】
以下からなる群より選択される請求項１に記載の化合物：
２−（８−（（５−クロロベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；
２−（８−（（５−フルオロベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；及び
２−（８−（（６−クロロベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；
又はそのような化合物の塩。
【請求項６】
以下からなる群より選択される請求項１に記載の化合物：
（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；
（Ｓ）−２−（８−（（５−フルオロベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；及び
（Ｓ）−２−（８−（（６−クロロベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；
又はそのような化合物の塩。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項８】
喘息、アレルギー性喘息、好酸球性喘息、重症喘息、鼻炎、アレルギー性鼻炎、血管性浮腫、昆虫毒アレルギー、薬剤アレルギー、アレルギー性副鼻腔炎、アレルギー性腎炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎、気管支喘息、食物アレルギー、全身性肥満細胞症、アナフィラキシーショック、じん麻疹、湿疹、潰瘍性大腸炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、炎症性腸疾患、関節リウマチ、チャーグ・ストラウス症候群、ヴェグナー肉芽腫症、顕微鏡的多発血管炎、好酸球性肺炎、好酸球性食道炎、逆流性食道炎、好酸球性心内膜炎（レフラー心内膜炎）、好酸球増多筋痛症候群、好酸球性筋膜炎、好酸球性膿疱性毛包炎（大藤病）、好酸球性潰瘍、好酸球増多随伴性血管類リンパ組織増殖症（ＡＬＨＥ）、好酸球性蜂巣炎（ウェルズ症候群）、慢性好酸球性白血病、ドレス症候群（好酸球増加と全身症状を伴う薬疹）、好塩基球性白血病及び好塩基球性白血球増加症からなる群より
選択される疾患の予防及び／又は治療のための医薬の製造のための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項９】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を活性成分として含む、喘息、アレルギー性喘息、好酸球性喘息、重症喘息、鼻炎、アレルギー性鼻炎、血管性浮腫、昆虫毒アレルギー、薬剤アレルギー、アレルギー性副鼻腔炎、アレルギー性腎炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎、気管支喘息、食物アレルギー、全身性肥満細胞症、アナフィラキシーショック、じん麻疹、湿疹、潰瘍性大腸炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、炎症性腸疾患、関節リウマチ、チャーグ・ストラウス症候群、ヴェグナー肉芽腫症、顕微鏡的多発血管炎、好酸球性肺炎、好酸球性食道炎、逆流性食道炎、好酸球性心内膜炎（レフラー心内膜炎）、好酸球増多筋痛症候群、好酸球性筋膜炎、好酸球性膿疱性毛包炎（大藤病）、好酸球性潰瘍、好酸球増多随伴性血管類リンパ組織増殖症（ＡＬＨＥ）、好酸球性蜂巣炎（ウェルズ症候群）、慢性好酸球性白血病、ドレス症候群（好酸球増加と全身症状を伴う薬疹）、好塩基球性白血病及び好塩基球性白血球増加症からなる群より選択される疾患の予防用及び／又は治療用の医薬。
【請求項１０】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を活性成分として含む、鼻ポリープの予防用及び／又は治療用の医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、式（Ｉ）のアザインドール酢酸誘導体、及び様々なプロスタグランジン介在疾患及び障害の治療におけるプロスタグランジン受容体調節剤、特にプロスタグランジンＤ２受容体（「ＤＰ受容体」）調節剤としてのそれらの使用、これらの化合物を含有する医薬組成物、並びにそれらの製造方法に関する。特に、そのような誘導体は、喘息、アレルギー性喘息、好酸球性喘息、重症喘息、鼻炎、アレルギー性鼻炎、血管性浮腫、昆虫毒アレルギー、薬剤アレルギー、アレルギー性副鼻腔炎、アレルギー性腎炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎、気管支喘息、食物アレルギー、全身性肥満細胞症、アナフィラキシーショック、じん麻疹、湿疹、潰瘍性大腸炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、炎症性腸疾患及び関節リウマチ等の慢性及び急性両方のアレルギー性／免疫性疾患／障害；チャーグ・ストラウス症候群等の小血管性血管炎、ヴェグナー肉芽腫症、顕微鏡的多発血管炎（及び後者の臓器特異的亜群）、好酸球性肺炎等の好酸球増加症候群、好酸球性食道炎、逆流性食道炎、好酸球性心内膜炎（レフラー心内膜炎）、好酸球増多筋痛症候群、好酸球性筋膜炎、好酸球性膿疱性毛包炎（大藤病）、好酸球性潰瘍、好酸球増多随伴性血管類リンパ組織増殖症（ＡＬＨＥ）、好酸球性蜂巣炎（ウェルズ症候群）、慢性好酸球性白血病及びドレス症候群（好酸球増加と全身症状を伴う薬疹）を含む好酸球関連疾患；並びに好塩基球性白血病及び好塩基球性白血球増加症を含む好塩基球関連疾患の治療のために、単独で又は医薬組成物中で使用してもよい。
【背景技術】
【０００２】
アレルギー状態において、アレルゲン暴露に対する応答として肥満細胞が活性化され、該細胞はヒスタミン、トロンボキサンＡ２（ＴｘＡ２）、システイニルロイコトリエン（ＣｙｓＬＴｓ）及びプロスタグランジンＤ２（ＰＧＤ２）のようなメディエータを放出する。これらのメディエータは、それらの対応する受容体と相互作用して、血管透過性の増大、浮腫、掻痒、鼻閉及び肺うっ血、気管支収縮、並びに粘液分泌等の生理的作用を引き起こす。増大した血管透過性により、例えば好酸性及び好塩基性白血球が組織内に過剰に浸潤し、アレルギー応答が増幅される。
【０００３】
現在のアレルギー性疾患の治療には、そのような相互作用を遮断し、又はさもなければ妨害する薬剤、例えば抗ヒスタミン剤（ヒスタミンＨ１受容体拮抗薬）、ロイコトリエン受容体拮抗薬、ベータ−アドレナリン受容体作動薬及びコルチコステロイドが含まれる。一般に、抗ヒスタミン剤及びロイコトリエン拮抗薬を用いた治療は、効果が限られ、またコルチコステロイドの長期間の使用には、しばしば望ましくない副作用が伴う。
【０００４】
ＰＧＤ２は、２種のＧタンパク質共役受容体、ＰＧＤ２受容体ＤＰ１及び最近同定されたＣＲＴＨ２（Ｔｈ２細胞上に発現する化学誘引物質受容体−類似分子）受容体（「ＤＰ２受容体」とも称される。）に作用することが知られている作動薬である。
【０００５】
上昇したＰＧＤ２レベルは、例えばアレルギー性鼻炎、アレルギー性喘息、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎等のアレルギー性疾患に認められるような炎症作用を引き起こすと考えられる。従って、ＰＧＤ２のその受容体との相互作用を遮断することは、そのような疾患を治療するための有用な治療的方策であると考えられる。
【０００６】
ＧＢ２３８８５４０には、喘息、アレルギー性鼻炎又はアレルギー性結膜炎等のアレルギー性疾患の予防及び治療のためのラマトロバン（（３Ｒ）−３−（４−フルオロベンゼン−スルホンアミド）−１，２，３，４−テトラヒドロカルバゾール−９−プロピオン酸
）、すなわち、ＣＲＴＨ２に対する追加の拮抗活性を伴うＴｘＡ２受容体（「ＴＰ受容体」とも称される。）拮抗薬の使用が開示されている。Ｔ．Ｉｓｈｉｚｕｋａら、ＣａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒＤｒｕｇ  Ｒｅｖ．２００４、２２（２）、７１−９０には、ラマトロバンの遅延相の炎症に対する効果が記載されている。さらに、ラマトロバンの経口バイオアベイラビリティ、及びそのインビトロでのプロスタグランジンＤ２誘導好酸球遊走を阻害する作用が報告されている（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、３０５（１）、ｐ．３４７−３５２（２００３））。
【０００７】
ＣＲＴＨ２拮抗活性を有するアザインドール酢酸誘導体が、ＷＯ２０１０／０５４１１３、ＷＯ２０１０／０５４１１４及びＢ．Ａ．Ｓｔｅａｒｎｓら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２００９、１９、４６４７−４６５１に開示されている。
【０００８】
ＷＯ２０１１／１１７７９８及びＷＯ２０１２／１４０６１２は、ＣＲＴＨ２拮抗活性を有する（３−ヘテロアリールアミノ−１，２，３，４−テトラヒドロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−酢酸及び（７−ヘテロアリールアミノ−６，７，８，９−テトラヒドロピリド［１，２−ａ］インドール−１０−イル）酢酸誘導体をそれぞれ開示している。
【発明の概要】
【０００９】
驚くべきことに、ハロゲン化ベンズオキサゾール−２−イルアミノ基で置換された特定のアザインドール酢酸誘導体が、初代培養ラット肝細胞におけるインビトロ細胞毒性試験において顕著に改善された特性を有することがここに見出された。従って、本発明の化合物は、改善されたインビボ毒性プロファイルを有することが期待される。
【００１０】
本発明の記述：
１）  本発明は、式（Ｉ）のアザインドール酢酸誘導体及びそのような化合物の塩（特に、薬学的に許容される塩）に関する。
【００１１】
【化１】
0006484644.tif 000002
【００１２】
式中、
Ｒ１及びＲ２の一方は水素を表し、他方はハロゲンを表す。
【００１３】
ここに記載される定義は、態様１）〜１３）のいずれか１つに定義されるような式（Ｉ）の化合物に対して一律に適用されるものであり、特段の定義によってより広い又はより狭い定義が与えられない限り本明細書及び請求項を通じて準用される。当然ながら、ある用語の定義又は好ましい定義が、ここに定義されるいずれか又は他のすべての用語のいずれか又は好ましい定義におけるそれぞれの用語を、独立して（及びそれらと共に）定義し置き換えるものであってよい。
【００１４】
態様１）〜１３）のいずれか１つに定義する式（Ｉ）の化合物は、１又は２以上の不斉炭素原子などの、１又は２以上のキラル又は不斉中心を含んでいてもよい。従って、式（Ｉ）の化合物は、立体異性体の混合物として、又は立体異性体が富化されている状態、好ましくは純粋な立体異性体として存在してもよい。立体異性体の混合物は当業者に知られた方法で分離してもよい。
【００１５】
「富化（ｅｎｒｉｃｈｅｄ）」という用語は、例えば、エナンチオマーに関連して使用される場合、本発明に関しては特に、それぞれのエナンチオマーが、それぞれ他のエナンチオマーに対する比（適宜、純度に準用）で、少なくとも７０：３０、特に少なくとも９０：１０（適宜、７０％／９０％の純度に準用）で存在することを意味するものと解される。好ましくは、この用語は、本質的に純粋な各エナンチオマーを意味する。「本質的に」という用語は、例えば「本質的に純粋な」等の用語中で使用される場合、本発明に関しては特に、それぞれの立体異性体／組成物／化合物等の少なくとも９０、特に少なくとも９５、そしてとりわけ少なくとも９９重量パーセントが、それぞれ、純粋な立体異性体／組成物／化合物等であることを意味するものと解される。
【００１６】
ハロゲンという用語は、フルオロ、クロロ、ブロモ又はヨードを意味し；好ましくはフルオロ及びクロロである。
【００１７】
２）  本発明のさらなる態様は、
Ｒ１がハロゲンを表し、Ｒ２が水素を表す；
態様１）に従う式（Ｉ）の化合物及びそのような化合物の塩（特に、薬学的に許容される塩）に関する。
【００１８】
３）  本発明のさらなる態様は、
Ｒ１がクロロを表し、Ｒ２が水素を表す；
態様１）に従う式（Ｉ）の化合物及びそのような化合物の塩（特に、薬学的に許容される塩）に関する。
【００１９】
４）  本発明のさらなる態様は、
Ｒ１が水素を表し、Ｒ２がハロゲンを表す；
態様１）に従う式（Ｉ）の化合物及びそのような化合物の塩（特に、薬学的に許容される塩）に関する。
【００２０】
５）  本発明のさらなる態様は、
Ｒ１が水素を表し、Ｒ２がフルオロ又はクロロを表す；
態様１）に従う式（Ｉ）の化合物及びそのような化合物の塩（特に、薬学的に許容される塩）に関する。
【００２１】
６）  本発明のさらなる態様は、
キラル中心の絶対配置が式（ＩＳｔ１）で表される通りである
【００２２】
【化２】
0006484644.tif 000003
【００２３】
態様１）〜５）のいずれか１つに従う化合物及びそのような化合物の塩（特に薬学的に許容される塩）に関する。
【００２４】
７）  本発明のさらなる態様は、
キラル中心の絶対配置が式（ＩＳｔ２）で表される通りである
【００２５】
【化３】
0006484644.tif 000004
【００２６】
態様１）〜５）のいずれか１つに従う化合物及びそのような化合物の塩（特に薬学的に許容される塩）に関する。
【００２７】
８）  態様１）に定義する式（Ｉ）の化合物の例は、下記の化合物から成る群より選択される：
２−（８−（（５−クロロベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；
２−（８−（（５−フルオロベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；及び
２−（８−（（６−クロロベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；
又はそのような化合物の塩（特に薬学的に許容される塩）。
【００２８】
上記のいずれの化合物についても、具体的に帰属されていないキラル中心は、絶対（Ｒ）−配置にあっても、又は絶対（Ｓ）−配置にあってもよく；例えば、２−（８−（（６−クロロベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸酢酸として記載
される化合物は、（Ｒ）−２−（８−（（６−クロロベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸、（Ｓ）−２−（８−（（６−クロロベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸、又はそれらの混合物であってよい。
【００２９】
９）  態様１）に定義する式（Ｉ）の化合物の好ましい例は、下記の化合物から成る群より選択される：
（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；
（Ｓ）−２−（８−（（５−フルオロベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；及び
（Ｓ）−２−（８−（（６−クロロベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；
又はそのような化合物の塩（特に薬学的に許容される塩）。
【００３０】
１０）  好ましい態様において、態様１）に定義する式（Ｉ）の化合物は；
２−（８−（（５−クロロベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸（特に、（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸）；又は当該化合物の塩（特に薬学的に許容される塩）である。
【００３１】
１１）  別の好ましい態様において、態様１）に定義する式（Ｉ）の化合物は；
２−（８−（（５−フルオロベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸（特に、（Ｓ）−２−（８−（（５−フルオロベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸）；又は当該化合物の塩（特に薬学的に許容される塩）である。
【００３２】
１２）  別の好ましい態様において、態様１）に定義する式（Ｉ）の化合物は；
２−（８−（（６−クロロベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸（特に、（Ｓ）−２−（８−（（６−クロロベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸）；又は当該化合物の塩（特に薬学的に許容される塩）である。
【００３３】
１３）  従って、本発明は、態様１）に定義する式（Ｉ）の化合物及びそのような化合物であって、それぞれの従属関係に従って態様２）〜１２）のいずれか１つの特徴によってさらに限定される化合物；それらの薬学的に許容される塩；並びに、下記からなる群より選択される疾患の治療における、医薬としてのそのような化合物の使用に関する；喘息、アレルギー性喘息、好酸球性喘息、重症喘息、鼻炎、アレルギー性鼻炎、血管性浮腫、昆虫毒アレルギー、薬剤アレルギー、アレルギー性副鼻腔炎、アレルギー性腎炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎、気管支喘息、食物アレルギー、全身性肥満細胞症、アナフィラキシーショック、じん麻疹、湿疹、潰瘍性大腸炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、炎症性腸疾患及び関節リウマチを含む慢性及び急性両方のアレルギー性／免疫性疾患
／障害；チャーグ・ストラウス症候群等の小血管性血管炎、ヴェグナー肉芽腫症、顕微鏡的多発血管炎（及び後者の臓器特異的亜群）、好酸球性肺炎等の好酸球増加症候群、好酸球性食道炎、逆流性食道炎、好酸球性心内膜炎（レフラー心内膜炎）、好酸球増多筋痛症候群、好酸球性筋膜炎、好酸球性膿疱性毛包炎（大藤病）、好酸球性潰瘍、好酸球増多随伴性血管類リンパ組織増殖症（ＡＬＨＥ）、好酸球性蜂巣炎（ウェルズ症候群）、慢性好酸球性白血病及びドレス症候群（好酸球増加と全身症状を伴う薬疹）を含む好酸球関連疾患；並びに好塩基球性白血病及び好塩基球性白血球増加症を含む好塩基球関連疾患。式（Ｉ）の化合物に関して特に下記の態様が可能であり、意図されており、そして個々の形態としてここに具体的に開示される：
２＋１、３＋１、４＋１、５＋１、６＋１、６＋２＋１、６＋３＋１、６＋４＋１、６＋５＋１、７＋１、７＋２＋１、７＋３＋１、７＋４＋１、７＋５＋１、８＋１、９＋１、１０＋１、１１＋１及び１２＋１；
上記の表中、数字は上記の番号に応じた態様を意味し、「＋」は他の態様への従属関係を表す。種々の態様は読点により個々に分けられている。換言すると、例えば「６＋２＋１」は、態様６）であって、態様２）に従属し、態様１）に従属することを意味し、すなわち、態様「６＋２＋１」は、態様２）及び６）の特徴によりさらに限定された態様１）の化合物に相当する。
【００３４】
化合物、塩、医薬組成物、疾病等について複数形が使用される場合は、単数の化合物、塩、医薬組成物、疾病等をも意味することが意図されている。
【００３５】
態様１）〜１３）のいずれか１つに定義する式（Ｉ）の化合物に対するいかなる言及も、適宜かつ文脈に応じて、そのような化合物の塩（そして特に、薬学的に許容される塩）にも言及しているものと解される。
【００３６】
「薬学的に許容される塩」という用語は、対象化合物の所望の生物活性を保持し、かつ最小の望ましくない毒性作用を示す塩を意味する。そのよう塩としては、対象化合物中の塩基性基及び／又は酸性基の存在に応じた、無機又は有機の酸及び／又は塩基付加塩が挙げられる。参考としては、例えば、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ．Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ、Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅ．」、Ｐ．Ｈｅｉｎｒｉｃｈ  Ｓｔａｈｌ、Ｃａｍｉｌｌｅ  Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（Ｅｄｓ．）、Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、２００８；及び「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ
ａｎｄ  Ｃｏ−ｃｒｙｓｔａｌｓ」、Ｊｏｈａｎ  Ｗｏｕｔｅｒｓ  ａｎｄ  Ｌｕｃ  Ｑｕｅｒｅ（Ｅｄｓ．）、ＲＳＣ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２０１２を参照されたい。
【００３７】
本発明はまた、同位体標識された、特に２Ｈ（デューテリウム）標識された式（Ｉ）の化合物をも含み、当該同位体標識された化合物は、１又は２以上の原子が、同じ原子番号を有するが、自然において通常見出される原子量と異なる原子量を有する原子によってそれぞれ置き換えられていることを除いては、式（Ｉ）の化合物と同一である。同位体標識された、特に２Ｈ（デューテリウム）標識された式（Ｉ）の化合物、及びその塩は、本発明の範囲に含まれる。水素をより重い同位体２Ｈ（デューテリウム）に置換することにより代謝安定性が増大するため、例えば、ｉｎ−ｖｉｖｏでの半減期が長くなり、あるいは、必要用量を減らすことができ、又は、チトクロームＰ４５０酵素の阻害が軽減され得るため、例えば、安全性プロファイルが改善される。本発明の１つの態様においては、式（Ｉ）の化合物は同位体標識されていないか、又は、それらは１若しくは２以上のデューテリウム原子によってのみ標識されている。副態様においては、式（Ｉ）の化合物は全く同位体標識されていない。同位体標識された式（Ｉ）の化合物は、適切な試薬又は出発物質の適宜な同位体種を用いることを除いては、下記の方法と同様に製造してもよい。
【００３８】
数値範囲を記述するために「間」という単語が使用される場合は常に、示された範囲の
末端の点は明示的にその範囲に含まれると解される。これは、例えば、温度範囲が４０℃から８０℃の間であると記述される場合、末端の点である４０℃と８０℃はその範囲に含まれることを意味し、あるいは、可変数が１から４の間の整数であると定義される場合、可変数は整数の１、２、３又は４であることを意味する。
【００３９】
温度に関して使用されていない場合には、数値「Ｘ」の前に置かれる「約」（あるいは「付近」）という用語は、本出願において、Ｘ−１０％ＸからＸ＋１０％Ｘの間、好ましくはＸ−５％ＸからＸ＋５％Ｘの間を表す。温度の場合には、温度「Ｙ」の前に置かれる「約」（あるいは「付近」）という用語は、この出願において、Ｙ−１０℃からＹ＋１０℃の間、好ましくはＹ−５℃からＹ＋５℃の間を表す。さらに、本明細書で使用される「室温」という用語は、約２５℃の温度を表す。  態様１）〜１３）のいずれか１つに定義する式（Ｉ）の化合物及びこれらの薬学的に許容される塩は、医薬として、例えば、（特に経口等の）経腸又は（局所的適用又は吸入を含む）非経口投与のための医薬組成物の形態で使用することができる。
【００４０】
医薬組成物の製造は、いずれの当業者にもよく知られた様式で（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、２１ｓｔ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（２００５）、Ｐａｒｔ５、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ」［Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓにより出版］参照。）、既述の式（Ｉ）の化合物又はこれらの薬学的に許容される塩を、任意にその他の治療的に有益な物質と組み合わせて、適切な無毒の不活性な治療上許容される固体又は液体の担体材料及び必要に応じて、通常の薬学的アジュバントと共に、製剤投与形態とすることにより遂行することができる。
【００４１】
本発明はまた、薬学的に活性な量の態様１）〜１３）のいずれか１つに定義する式（Ｉ）の化合物を対象に投与することを含む、本明細書に記載した疾患又は障害の予防又は治療方法にも関する。
【００４２】
本発明の好ましい態様において、投与量は、１ｍｇから１０００ｍｇ／日の間、特に５ｍｇから５００ｍｇ／日の間、とりわけ２５ｍｇから４００ｍｇ／日の間、さらに５０ｍｇから２００ｍｇ／日の間に含まれる。
【００４３】
いかなる疑義をも避けるために、化合物がある疾患の予防又は治療について有用であると記載されている場合には、そのような化合物は、同様に当該疾患の予防又は治療のための医薬の製造における使用にも適している。
【００４４】
本発明の別の側面は、薬学的に活性な量の、態様１）〜１３）のいずれか１つに定義する式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、当該患者における下記の疾患又は障害の予防又は治療方法に関する。
【００４５】
態様１）〜１３）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩は、医薬の製造のために使用してもよく、そして下記の群から選択される疾患の予防及び／又は治療に適している：喘息、アレルギー性喘息、好酸球性喘息、重症喘息、鼻炎、アレルギー性鼻炎、血管性浮腫、昆虫毒アレルギー、薬剤アレルギー、アレルギー性副鼻腔炎、アレルギー性腎炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎、気管支喘息、食物アレルギー、全身性肥満細胞症、アナフィラキシーショック、じん麻疹、湿疹、潰瘍性大腸炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、炎症性腸疾患及び関節リウマチを含む慢性及び急性両方のアレルギー性／免疫性疾患／障害；チャーグ・ストラウス症候群等の小血管性血管炎、ヴェグナー肉芽腫症、顕微鏡的多発血管炎（及び後者の臓器特異的亜群）、好酸球性肺炎等の好酸球増加症候群、好酸球性食道炎、逆流性食道炎、好酸球性心内膜炎（レフラ
ー心内膜炎）、好酸球増多筋痛症候群、好酸球性筋膜炎、好酸球性膿疱性毛包炎（大藤病）、好酸球性潰瘍、好酸球増多随伴性血管類リンパ組織増殖症（ＡＬＨＥ）、好酸球性蜂巣炎（ウェルズ症候群）、慢性好酸球性白血病及びドレス症候群（好酸球増加と全身症状を伴う薬疹）を含む好酸球関連疾患；並びに好塩基球性白血病及び好塩基球性白血球増加症を含む好塩基球関連疾患。
【００４６】
別の態様において、態様１）〜１３）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩は、医薬の製造のために使用してもよく、そして鼻ポリープ、スティル病（全身型若年性特発性関節炎）及び嚢胞性線維症からなる群から選択される疾患の予防及び／又は治療に適している。
【００４７】
好ましい態様において、態様１）〜１３）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩は、医薬の製造のために使用してもよく、そして下記の群から選択される疾患の予防及び／又は治療に適している：喘息、アレルギー性喘息、好酸球性喘息、重症喘息、アレルギー性鼻炎、血管性浮腫、昆虫毒アレルギー、薬剤アレルギー、アレルギー性副鼻腔炎、アレルギー性腎炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎、食物アレルギー、全身性肥満細胞症、アナフィラキシーショック、じん麻疹及び湿疹。
【００４８】
別の好ましい態様において、態様１）〜１３）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩は、医薬の製造のために使用してもよく、そして下記の群から選択される疾患の予防及び／又は治療に適している：チャーグ・ストラウス症候群等の小血管性血管炎、ヴェグナー肉芽腫症、顕微鏡的多発血管炎（及び後者の臓器特異的亜群）、好酸球性肺炎等の好酸球増加症候群、好酸球性食道炎、逆流性食道炎、好酸球性心内膜炎（レフラー心内膜炎）、好酸球増多筋痛症候群、好酸球性筋膜炎、好酸球性膿疱性毛包炎（大藤病）、好酸球性潰瘍、好酸球増多随伴性血管類リンパ組織増殖症（ＡＬＨＥ）、好酸球性蜂巣炎（ウェルズ症候群）、慢性好酸球性白血病及びドレス症候群（好酸球増加と全身症状を伴う薬疹）を含む好酸球関連疾患。
【００４９】
なお別の好ましい態様において、態様１）〜１３）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩は、医薬の製造のために使用してもよく、そして下記の群から選択される疾患の予防及び／又は治療に適している：好塩基球性白血病及び好塩基球性白血球増加症を含む好塩基球関連疾患。
【００５０】
最も好ましい態様において、態様１）〜１３）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩は、医薬の製造のために使用してもよく、そして下記の群から選択される疾患の予防及び／又は治療に適している：喘息、好酸球性喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、鼻ポリープ、食物アレルギー（特に、ＩｇＥ−介在食物アレルギー）、じん麻疹（特に、慢性じん麻疹）、好酸球性食道炎、チャーグ・ストラウス症候群、好酸球増加症候群、好酸球性肺炎（特に、慢性好酸球性肺炎）、ドレス症候群、スティル病、ＣＯＰＤ及び嚢胞性線維症（特に、喘息、好酸球性喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、ＩｇＥ−介在食物アレルギー、慢性じん麻疹、好酸球性食道炎及びチャーグ・ストラウス症候群）。
【００５１】
本発明はまた、上記の疾患の治療及び／又は予防のための医薬組成物の製造のための態様１）〜１３）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物の使用に関する。
【００５２】
本発明はまた、態様１）〜１３）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩並びに医薬組成物及び製剤に関する。  本発明に従う医薬組成物は、活性成分としての態様１）〜１３）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物の少なくとも１つ（又は、その薬学的に許容される塩）と、任意に、担体及び／又は希釈剤及び／又はアジュバ
ントとを含む。
【００５３】
本明細書における、式（Ｉ）、（ＩＳＴ１）又は（ＩＳＴ２）の化合物に対するいかなる言及も、適宜かつ文脈に応じて、そのような化合物の塩（特に、薬学的に許容される塩）にも言及しているものと解される。式（Ｉ）の化合物に対して示した好適性は、当然のことながら、式（ＩＳＴ１）の化合物及び（ＩＳＴ２）の化合物並びに式（Ｉ）、（ＩＳＴ１）又は（ＩＳＴ２）の化合物の塩及び薬学的に許容される塩にも適宜準用される。同様のことが、本発明に従う、医薬としてのこれらの化合物に、これらの化合物を活性成分として含む医薬組成物に、又は疾患の治療のための医薬の製造のためのこれらの化合物の使用に適用される。
【００５４】
前述したように、式（Ｉ）の化合物は、ＣＲＴＨ２受容体のＰＧＤ２活性化をアンタゴニストとして調節する。そのような化合物の生物学的作用は、様々なインビトロ、エクスビボ及びインビボでのアッセイにて試験してもよい。式（Ｉ）の化合物のＣＲＴＨ２受容体に結合する能力は、文献（各々、Ａｒｉｍｕｒａ  Ａ．ら、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．２００１、２９８（２）、４１１−４１９；及びＳａｗｙｅｒ  Ｎ．ら、Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、２００２、１３７、１１６３−１１７２）に記載されているものと同様の方法、及び以下の実験の部に記載されているアッセイにより測定してもよい。
【００５５】
本発明のさらなる側面は、式（Ｉ）の化合物の製造方法である。本発明の式（Ｉ）に従う化合物は、下記のスキーム中に概略した反応シークェンスに従って製造することができ、ここでＲ１及びＲ２は、式（Ｉ）に対して定義した通りである。使用される他の略語は、実験の部において定義する。
【００５６】
概して、すべての化学的変換は、文献に記載され、又は下記の手順に記載したような、よく知られた標準的方法論に従って行うことができる。得られた化合物は、それ自体知られた方法により、その薬学的に許容される塩に変換してもよい。
【００５７】
式（Ｉ）の化合物はアザインドール誘導体（４）から製造してもよく、アザインドール誘導体（４）自体は、ピリジン中、Ｐｄ（Ｐｈ３Ｐ）４等の触媒の存在下、Ｎ−メチル−１，４−ジオキサスピロ［４，５］デカン−８−アミン（２）とともに３−アミノ−２−ブロモ−ピリジン（１）をＭＷ照射することにより合成してもよい。Ｎ−メチル−１，４−ジオキサスピロ［４，５］デカン−８−アミン（２）は、ＭｅＣＮ等の非プロトン性溶媒中、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３等の還元剤の存在下、メチルアミンを用いて市販の１，４−ジオキサスピロ［４，５］デカン−８−オン（３）を還元的アミノ化することにより製造してもよい。ＤＭＦ等の非プロトン性溶媒中、ＮａＨ等の塩基の存在下、ブロモ酢酸エチルを用いてアザインドール誘導体（４）をアルキル化することにより、所望のアザインドール酢酸エチルエステル（５）を与え；エナンチオマーが富化されたアザインドール誘導体（５）は、実験の部に記載された手順に従って製造してもよい。ＤＭＡ等の非プロトン性溶媒中、Ｋ２ＣＯ３等の塩基の存在下で、アミン（５）を各２−クロロ−ベンズオキサゾール誘導体と反応させ、次いでＮａＯＨ等の塩基を用いてけん化することにより、式（Ｉ）の化合物が得られる。
【００５８】
【化４】
0006484644.tif 000005
【００５９】
式（Ｉ）の化合物又は構造４若しくは５の中間体がエナンチオマーの混合物の形態で得られる場合には常に、エナンチオマーは、当業者に知られた方法、例えばジアステレオマー塩の形成及び分離、又はＲｅｇｉｓ  Ｗｈｅｌｋ−Ｏ１（Ｒ，Ｒ）（１０μｍ）カラム、Ｄａｉｃｅｌ  ＣｈｉｒａｌＣｅｌ  ＯＤ−Ｈ（５−１０μｍ）カラム、又はＤａｉｃｅｌ  ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＩＡ（１０μｍ）若しくはＡＤ−Ｈ（５μｍ）カラム等のキラル固定相のＨＰＬＣを用いて分離することができる。キラルＨＰＬＣの典型的な条件は、０．８から１５０ｍＬ／分の流速における、溶出液Ａ（ＥｔＯＨ。ＴＥＡ及び／又はＤＥＡ等のアミンの存在下又は非存在下で）及び溶出液Ｂ（ヘキサン）の無勾配混合物である。
【００６０】
実験の部
（本明細書で使用する）略語
Ａｃ                アセチル
ａｑ．              水溶液
ＡＰＣ              アロフィコシアニン
Ｂｏｃ              ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
ＢＳＡ              ウシ血清アルブミン
ｄ                  二重項
ＤＣＭ              ジクロロメタン
ＤＥＡ              ジエチルアミン
ＤＭＡ              ジメチルアセタミド
ＤＭＦ              ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ            ジメチルスルホキシド
ｄｐｍ              分当たりの壊変数
ＥＡ                酢酸エチル
ＥＤＴＡ            エチレンジアミン四酢酸
ｅｑ．              当量
ＥＳＩ−ＭＳ        電子スプレーイオン化質量分析
Ｅｔ                エチル
ＦＣ                フラッシュクロマトグラフィー
ｈ                  時間
ＨＥＰＥＳ          ４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸ＨＰＬＣ            高速液体クロマトグラフィー
ＨＳＡ              ヒト血清アルブミン
ｉＰｒＯＨ          イソプロパノール
Ｌ                  リットル
ＬＣ−ＭＳ          液体クロマトグラフィー−質量分析
ｍ                  多重項
Ｍｅ                メチル
ＭｅＣＮ            アセトニトリル
ｍｉｎ              分
ＭＳ                質量分析
ＭＷ                マイクロ波
Ｎ                  溶液の規定度
ＮＭＲ              核磁気共鳴
ＰＢＳ              リン酸緩衝生理食塩水
ＰＥＩ              ポリエチレンイミン
ＰＧＤ２            プロスタグランジンＤ２
Ｐｈ                フェニル
Ｐｒ                プロピル
ＲＴ                室温
ｓ                  秒
ｓ                  一重項
ｓａｔ．            飽和
ｔ                  三重項
ｔＢｕ              ｔｅｒｔ−ブチル
ＴＥＡ              トリエチルアミン
ＴＦＡ              トリフルオロ酢酸
ｔＲ                  保持時間
トリス              トリス−（ヒドロキシメチル）アミノメタン緩衝液。
【００６１】
化学
一般的事項
全ての溶媒及び試薬は、特に断らない限り、商業的供給元から得られたままで使用される。
【００６２】
温度は、摂氏温度（℃）で示す。特に断らない限り、反応は、室温（ＲＴ）で行われる。
【００６３】
混合物において、溶媒若しくは溶出液又は液体形態の試薬混合物の割合の関係は、特に
断らない限り、体積関係で示す（ｖ／ｖ）。
【００６４】
以下の実施例で使用される分析ＨＰＬＣ条件：
ＨＰＬＣ／ＭＳ分析は、Ｄｉｏｎｅｘ  Ｐ５８０バイナリポンプ、Ｄｉｏｎｅｘ  ＰＤＡ−１００  Ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ  Ａｒｒａｙ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ及びＦｉｎｎｉｇａｎ
ＡＱＡ質量分析計を備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １１００システム上で行う。
【００６５】
ＬＣ保持時間は、下記の溶出条件を用いて得られる：
−  Ｚｏｒｂａｘ（登録商標）  ＳＢ−ＡＱカラム（４．６×５０ｍｍ、３．５μｍ、Ａｇｉｌｅｎｔ）上の分析ＨＰＬＣ；水／０．０４％ＴＦＡ（Ａ）及びＭｅＣＮ（Ｂ）の５％から９５％Ｂの１．５ｍｉｎに渡る直線勾配；流速４．５ｍＬ／ｍｉｎ、２１０ｎｍで検出。
【００６６】
分取用ＨＰＬＣ／ＭＳ精製（酸性条件）は、Ｇｉｌｓｏｎ２１５オートサンプラー及びフラクションコレクター、Ｄｉｏｎｅｘ  ＵＶＤ３４０Ｕ  ＤＡＤ検出器、ｐｏｌｙｍｅｒｌａｂｓ  ＰＬ−ＥＬＳ  １０００  ＥＬＳ検出器及びＴｈｅｒｍｏ  ＭＳＱ  Ｐｌｕｓ  ＭＳ検出器を備えたＧｉｌｓｏｎ  ３３３／３３４バイナリ高圧勾配ポンプシステム上で、Ｗａｔｅｒｓ  Ａｔｌａｎｔｉｓ  Ｔ３カラム（１０μｍ、３０×７５ｍｍ、）を用いて、水／０．５％ギ酸（Ｂ）及びＭｅＣＮ（Ａ）の５ｍｉｎに渡る８０／２０から５／９５（Ｂ）／（Ａ）への直線勾配で行う；流速７５ｍｌ／ｍｉｎ。
【００６７】
分取用ＨＰＬＣ／ＭＳ精製（塩基性条件）は、Ｇｉｌｓｏｎ２１５オートサンプラー及びフラクションコレクター、Ｄｉｏｎｅｘ  ＵＶＤ３４０Ｕ  ＤＡＤ検出器、ｐｏｌｙｍｅｒｌａｂｓ  ＰＬ−ＥＬＳ  １０００  ＥＬＳ検出器及びＴｈｅｒｍｏ  ＭＳＱ  Ｐｌｕｓ  ＭＳ検出器を備えたＧｉｌｓｏｎ  ３３３／３３４バイナリ高圧勾配ポンプシステム上で、Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８カラム（１０μｍ、３０×７５ｍｍ、）を用いて、水／０．５％の２５％ＮＨ４ＯＨ（Ｂ）及びＭｅＣＮ（Ａ）の５ｍｉｎに渡る８０／２０から５／９５（Ｂ）／（Ａ）への直線勾配で行う；流速７５ｍｌ／ｍｉｎ。
【００６８】
キラル固定相上の分析用ＨＰＬＣは、Ｄａｉｃｅｌ  ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＤ−Ｈ（４．６×２５０ｍｍ、５μｍ）カラム又はＣｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＹ−Ｈ（４．６Ｘ２５０ｍｍ、５μｍ）カラム上で行う。キラルＨＰＬＣの典型的な条件は、２１０ｎｍで検出を行う、０．８ｍＬ／ｍｉｎ．の流速における、３０％ヘプタン＋０．０５％ＤＥＡ及び７０％ＥｔＯＨ＋０．０５％ＤＥＡの無勾配混合物（キラルＨＰＬＣ−１）又は２１０ｎｍで検出を行う、１．０ｍＬ／ｍｉｎ．の流速における、４０％ヘプタン及び６０％ＥｔＯＨ＋０．１％ＴＦＡの無勾配混合物（キラルＨＰＬＣ−２）である。
【００６９】
キラル固定相上の分取用ＨＰＬＣは、Ｄａｉｃｅｌ  ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＤ−Ｈ（２０×２５０ｍｍ、５μｍ）カラム上で行う。キラルＨＰＬＣの典型的な条件は、２１０ｎｍで検出を行う、１６ｍＬ／ｍｉｎ．の流速における、５０％ＥｔＯＨ及び５０％ヘプタンの無勾配混合物（キラルＨＰＬＣ−３）である。
【００７０】
Ａ．  ２−（８−（（ベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸誘導体の合成
Ａ．１．  Ｎ−メチル−１，４−ジオキサスピロ［４，５］デカン−８−アミンの合成１，４−ジオキサスピロ［４，５］デカン−８−オン（１．０ｅｑ）、メチルアミン（ＥｔＯＨ中８Ｍ、１．０ｅｑ）及びＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（３．０ｅｑ）をＭｅＣＮ（１０ｍＬ／６．２ｍｍｏｌ）中に混合したものを、ＲＴにて２０ｈ撹拌した。次いで、反応混合物を真空濃縮し、ＥＡ／ｉＰｒＯＨ（４／１）混合物中に溶解し、ｓａｔ．ＮａＨＣＯ
３及び塩水（ｂｒｉｎｅ）で洗浄した。水相をＥＡ／ｉＰｒＯＨ（４／１）で抽出した。有機抽出物を合わせたものを乾燥し（ＭｇＳＯ４）、ろ過し、真空濃縮して、所望の生成物を得、それをさらに精製することなく次の工程で使用した。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）  δ：１．３５（ｍ、２Ｈ）；１．４５（ｍ、２Ｈ）；１．７５（ｍ、２Ｈ）；１．９５（ｍ、２Ｈ）；３．４５（ｍ、４Ｈ）；３．９５（ｓ、４Ｈ）。
【００７１】
Ａ．２．  Ｎ−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−８−アミンの合成
【００７２】
【化５】
0006484644.tif 000006
【００７３】
３−アミノ−２−ブロモピリジン（１．０ｅｑ）、Ｎ−メチル−１，４−ジオキサスピロ［４，５］デカン−８−アミン（１．２ｅｑ）及び（Ｐｈ３Ｐ）４Ｐｄ（０．０５ｅｑ）をピリジン（１ｍＬ／０．０７ｍｍｏｌ）中に溶解したものを、１６０℃にて１ｈ、ＭＷで照射した。ＲＴにて冷却した後、反応混合物を水中に注ぎ、ＥＡで抽出した。有機抽出物を合わせたものを真空濃縮し、残渣をｐｒｅｐ．ＨＰＬＣ（塩基性条件）で精製して、所望の化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝０．３７ｍｉｎ；［Ｍ＋Ｈ］＋＝２０２．２１。
【００７４】
Ａ．３  エチル  ２−（８−（メチルアミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］−インドール−５−イル）アセテートの合成
【００７５】
【化６】
0006484644.tif 000007
【００７６】
Ｎ−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−８−アミン（１．０ｅｑ）を乾燥ＤＭＦ（１ｍＬ／０．０４ｍｍｏｌ）中に溶解した冷（０℃）溶液に、ＮａＨ（１．１ｅｑ、鉱油中の６０％分散液）を添加した。反応混合物を０℃にて１０ｍｉｎ撹拌し、ブロモ酢酸エチル（１．０ｅｑ）を添加し、反応混合物をＲＴに温め、一晩撹拌した。水を添加し、反応混合物をｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ（塩基性条件）で直接精製して、所望の化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝０．３８ｍｉｎ；［Ｍ＋Ｈ］＋＝２８８．２８。
【００７７】
Ａ．４  ２−（８−（（ベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸誘導体の合成
一般的手順：
エチル  ２−（８−（メチルアミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］−インドール−５−イル）アセテート（０．０６ｍｍｏｌ）、各２−クロロ−ベンゾ［ｄ］オキサゾール誘導体（０．０６ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（０．２４ｍｍｏｌ）をＤＭＡ（０．５ｍＬ）中に混合したものを、８０℃にて１２ｈ撹拌した。ＲＴに冷却した後、水（０．０７ｍＬ）及び３０％  ａｑ  ＮａＯＨ（０．０７ｍｌ）を反応混合物に添加した。反応混合物を５０℃にて２ｈ撹拌し、次いで３７％  ａｑ  ＨＣｌ（０．０７ｍＬ）を添加した。生成物をｐｒｅｐ．ＨＰＬＣ（酸性条件）で直接精製して、式（Ｉ）の各化合物を得た。
【００７８】
実施例の製造
下記の２−（８−（（ベンゾ［ｄ］オキサゾール−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸誘導体を、上記の一般的手順に従って合成した。
【００７９】
【表１】
0006484644.tif 000008
【００８０】
Ａ．５  エチル  （Ｓ）−２−（８−（メチルアミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）アセテートの合成
Ａ．５．１  ｔｅｒｔ−ブチル  メチル（６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−８−イル）カーバメートの合成
【００８１】
【化７】
0006484644.tif 000009
【００８２】
バイアル中で、３−アミノ−２−ブロモピリジン（２．０ｇ、１１．６ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）、４−（Ｎ−Ｂｏｃ−Ｎ−メチルアミノ）シクロヘキサノン（３．１５ｇ、１３．９ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）及び（Ｐｈ３Ｐ）４Ｐｄ（６６８ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ、０．０５ｅｑ）をピリジン（７．６ｍｌ）中に溶解した。バイアルをＭＷ照射により１６０℃にて６０ｍｉｎ加熱した。反応混合物を水（９．５ｍＬ）中に注ぎ、得られた固形物をろ過により集め、乾燥し、ジエチルエーテル中で粉砕し、再びろ過により集めて、表題の化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ：ｔＲ＝０．６３ｍｉｎ；［Ｍ＋Ｈ］＋＝３０２．１５。
【００８３】
Ａ．５．２  （Ｓ）−エチル  ２−（８−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）アセテート及び（Ｒ）−エチル  ２−（８−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）アセテートの合成
【００８４】
【化８】
0006484644.tif 000010
【００８５】
ｔｅｒｔ−ブチル  メチル（６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−８−イル）カーバメート（１．３７ｇ、４．５６ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（１２．５ｍＬ）中の冷（０℃）溶液に、ＮａＨ（１２０ｍｇ、５．０２ｍｍｏｌ、鉱油中の６０％分散液）を添加した。反応混合物を０℃にて１０ｍｉｎ撹拌し、ブロモ酢酸エチル（０．５２ｍＬ、４．５６ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物をＲＴに温め、一晩撹拌した。水を添加し、得られた沈殿物をろ過により集め、水で洗浄した。粗製の固形物を、ＦＣ（ＤＣＭ中の８％ＭｅＯＨ）、次いでジエチルエーテルによる粉砕により精製して、所望の生成物をラセミ体として得た。ＬＣ−ＭＳ：ｔＲ：０．７ｍｉｎ／［Ｍ＋Ｈ］＋：３８８．５０。
【００８６】
得られた生成物の２つのエナンチオマーを分取用キラルＨＰＬＣ（キラルＨＰＬＣ−３）により分離した：
（Ｒ）−エチル  ２−（８−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）−
６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）アセテート（４８７ｍｇ、２８％）：ＨＰＬＣ（キラルＨＰＬＣ−１）：ｔＲ：６．０３ｍｉｎ；
（Ｓ）−エチル  ２−（８−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）アセテート（４９１ｍｇ、２８％）：ＨＰＬＣ（キラルＨＰＬＣ−１）：ｔＲ：７．３６ｍｉｎ。
【００８７】
Ａ．５．３．  エチル  （Ｓ）−２−（８−（メチルアミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）アセテートの合成
【００８８】
【化９】
0006484644.tif 000011
【００８９】
（Ｓ）−エチル  ２−（８−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）アセテート（１００ｍｇ、０．２５８ｍｍｏｌ）に、ジオキサン中の４Ｎ  ＨＣｌ（０．８９５ｍＬ）を添加した。反応混合物をＲＴにて１ｈ撹拌し、濃縮して、所望の生成物を塩酸塩として得、それはさらに精製することなく次の工程で使用することができる。ＬＣ−ＭＳ：ｔＲ：０．３８ｍｉｎ／［Ｍ＋Ｈ］＋：２８８．２５。
【００９０】
生物学的アッセイ：
ｈＣＲＴＨ２受容体膜の調製及び放射性リガンド置換アッセイ：
まず、組み換えＨＥＫ２９３−ｈＣＲＴＨ２細胞を、ラバー・ポリスマンを用いて、培養プレートから、５ｍｌバッファーＡ／プレート（バッファーＡ：５ｍＭ  トリス、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２−６Ｈ２Ｏ  ｐＨ＝７．４）中に剥がした。次いで細胞を遠心分離管内に移し、４００ｇにて５分間遠心した。細胞のペレットを同じバッファー中に再懸濁し、そして遠心分離管を−８０℃で凍結した。細胞を融かし、そしてＰｏｌｙｔｒｏｎホモジナイザーを用いたホモジナイゼーション（３０秒）により、膜画分を生成した。次いで、その膜画分を３０００ｇで２０分間遠心し、そしてバッファーＣ中に再懸濁した（バッファーＣ：７５ｍＭ  トリス、２５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２５０ｍＭ  サッカロース、ｐＨ７．４）。膜画分を小分けして−２０℃にて保存した。
【００９１】
結合試験を、最終試験容積２５０μｌで行った。まず、前もって結合バッファー（結合バッファー：５０ｍＭ  トリス−塩基、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．１％ＢＳＡ（プロテアーゼフリー）、０．０１％ＮａＮ３、１０ｍＭ  ＭｎＣｌ２、ｐＨ７．０）で希釈した２５μｌの試験化合物を、各ウェル内に入れた。７５μｌの結合バッファーを添加した後、５０μｌの放射性リガンド３Ｈ−ＰＧＤ２（ＡＮＡＷＡ製ＡＲＴ０６６２、２．５ｎＭにて（２２０．０００ｄｐｍ／ウェル））を各ウェルに添加した。結合試験は、１００μｌのＣＲＴＨ２膜画分の添加により開始し、最終濃度を２０μｇ／ウェルとした。非特異的結合については、反応混合物にＰＧＤ２を、最終濃度が１０ｍＭとなるように添加した。この試験混合物を室温にて９０分間インキュベートし、次いで、予め０．５％のポリエチレンイミン（ＰＥＩ）に３時間浸したＧＦ／Ｃフィルター９６−ウ
ェルプレートでろ過した。フィルター−ウェルを氷冷結合バッファーで３回洗浄した。次いで４０μｌのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ−４０（Ｐａｃｋａｒｄ）を各ウェルに添加し、そして残った放射活性をＴｏｐｃｏｕｎｔ（Ｐａｃｋａｒｄ）で定量した。
【００９２】
例示化合物の拮抗活性を表２に示す。
【００９３】
表２：
【表２】
0006484644.tif 000012
【００９４】
放射性リガンド置換試験−ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）：
ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）存在下での放射性リガンド置換試験を上記の通りに行ったが、下記の変更を行った。結合バッファー−ＨＳＡ：結合バッファー＋ヒト血清Ａ１８８７からのＳｉｇｍａ  Ａｌｂｕｍｉｎ０．５％（０．１％ＢＳＡの代わりに）。前もって結合バッファー−ＨＳＡで希釈した２５μｌの試験化合物を、各ウェル内に入れた。７５μｌの結合バッファー−ＨＳＡを添加した後、５０μｌの３Ｈ−ＰＧＤ２（ＡＮＡＷＡ製ＡＲＴ０６６２、２．５ｎＭにて（２２０．０００ｄｐｍ／ウェル））を、各ウェルに添加した。それ以外のプロトコルは上記したものと同一であった。
【００９５】
例示化合物の拮抗活性を表３に示す。
【００９６】
表３：
【表３】
0006484644.tif 000013
【００９７】
ヒト血漿を用いた好酸球形態変化試験
インフォームド・コンセントを得た後、スイス連邦、バーゼル倫理委員会により承認されたプロトコルに従って、静脈穿刺により血液サンプルを採取した。（好酸球、好塩基球及び好中球を含む）多形核白血球をＰｏｌｙｍｏｒｐｈｐｒｅｐ（登録商標）法（Ａｘｉｓ−Ｓｈｉｅｌｄ）を用いて分離した。要約すると、抗凝固剤処理した全血をＰｏｌｙｍ
ｏｒｐｈｐｒｅｐ勾配（密度、１．１１３ｇ／ｍｌ）上に積層し、そして５００ｇで３０ｍｉｎ遠心した。多形核細胞画分をハーヴェストし、そして低張生理食塩水溶解により赤血球を枯渇させた。
【００９８】
多形核細胞を、５×１０６細胞／ｍｌにて、試験バッファー（０．１％のＢＳＡ、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ及び１０ｍＭのブドウ糖を添加した、Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋を含む１×ＰＢＳ、ｐＨ７．４）に再懸濁し、そして抗−ＣＤ４９ｄ−ＡＰＣ（ＡＰＣ＝アロフィコシアニン）で、ＲＴにて１時間染色した。試験化合物を、種々の濃度で１０ｍｉｎ、（トロンビン阻害剤で抗凝固剤処理した）ヒト血漿中でプレインキュベートした。次いでヒト血漿を多形核細胞に添加して、４×１０６細胞／ｍｌの多形核細胞と合わせて最終試験体積の５０％とした。３７℃にて１０分間インキュベートした後、ＰＧＤ２を最終濃度１００ｎＭとなるように添加することにより、多形核細胞を３７℃にて５ｍｉｎ活性化した。０．５ｍｌのパラホルムアルデヒド（１％）を添加することにより、活性化を停止した。
【００９９】
パラホルムアルデヒドで固定化した後すぐに、サンプルをＦＡＣＳＣａｎｔｏフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で分析し、そして標的細胞を、それらの前方散乱（ＦＳＣ）及び側方散乱（ＳＳＣ）特性により同定した。好酸球は、抗−ＣＤ４９ｄ−ＡＰＣシグナル及びそれらの特徴的な側方散乱（ＳＳＣ）プロファイルにより同定した。好酸球活性化の指標である形態変化反応を、増大した前方散乱を持つ細胞の百分率として定量した。
【０１００】
例示化合物の拮抗活性を表６に示す。
【０１０１】
表６：
【表４】
0006484644.tif 000014
【０１０２】
細胞内カルシウム動員試験（ＦＬＩＰＲ）：
発現ベクターｐｃＤＮＡ５（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の単一挿入由来のサイトメガロウイルスプロモーターの制御下で、ｈＣＲＴＨ２受容体を安定的に発現している細胞（ＨＥＫ−２９３）を、標準的な哺乳動物細胞培養条件下（３７℃、５％ＣＯ２の加湿雰囲気中）、１０％ウシ胎仔血清（Ｂｉｏｃｏｎｃｅｐｔ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を添加したＤＭＥＭ（低ブドウ糖、Ｇｉｂｃｏ）培地中で、コンフルエンシーまで増殖させる。解離バッファー（ＰＢＳ中０．０２％ＥＤＴＡ、Ｇｉｂｃｏ）を用いて細胞を培養皿から１分間剥がし、試験バッファー（当量のＨａｎｋ’ｓ  ＢＳＳ（ＨＢＳＳ、Ｂｉｏｃｏｎｃｅｐｔ）及びＤＭＥＭ（低ブドウ糖、フェノールレッドなし、Ｇｉｂｃｏ））中、２００ｇでｒｔにて５分間の遠心分離により収集する。１μＭ  Ｆｌｕｏ−４及び０．０４％  Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−１２７（両方ともＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅ）並びに２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（Ｇｉｂｃｏ）の存在下、試験バッファー中で４５分間インキュベーション（３７℃及び５％ＣＯ２）した後、細胞を試験バッファーで洗浄し、試験バッファー中に再懸濁し、次いで３８４−ウェルＦＬＩＰＲアッセイプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ）上に、各ウェルに６６μｌ、５０，０００細胞を播種し、遠心分離により沈降させる。
【０１０３】
試験化合物のストック溶液をＤＭＳＯ中で濃度１０ｍＭとし、阻害用量応答曲線に必要な濃度に、試験バッファーで段階希釈する。プロスタグランジンＤ２（Ｂｉｏｍｏｌ、ＰｌｙｍｏｕｔｈＭｅｅｔｉｎｇ、ＰＡ）を作動薬として用いる。
【０１０４】
ＦＬＩＰＲ  Ｔｅｔｒａ装置（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を製造業者の標準的な取扱説明書に従って操作し、ＤＭＳＯ中に１０ｍＭで溶解し、実験に先立ち試験バッファー中で希釈して所望の最終濃度とした４μｌの試験化合物を加える。次いで０．８％ウシ血清アルブミン（脂肪酸含有量＜０．０２％、Ｓｉｇｍａ）を添加した試験バッファー中の８０ｎＭプロスタグランジンＤ２（Ｂｉｏｍｏｌ、Ｐｌｙｍｏｕｔｈ  Ｍｅｅｔｉｎｇ、ＰＡ）１０μｌを加えて、各々、最終濃度１０ｎＭ及び０．１％とする。試験化合物の添加前及び添加後における蛍光の変化をλｅｘ＝４８８ｎｍ及びλｅｍ＝５４０ｎｍにてモニターする。プロスタグランジンＤ２添加後の基準レベルを超える発光ピーク値を、ベースライン減算後にエクスポートする。ベースライン値（プロスタグランジンＤ２添加せず）の減算後、値を高レベルコントロール（化合物添加せず。）に正規化する。プログラムＸＬｌｆｉｔ３．０（ＩＤＢＳ）を使用して、データを方程式（Ａ＋（（Ｂ−Ａ）／（１＋（（Ｃ／ｘ）＾Ｄ））））の単サイト用量応答曲線へ適合させ、ＩＣ５０値を計算する。
【０１０５】
初代培養ラット肝細胞におけるインビトロ細胞毒性
１．  方法
１．１  ラット 肝細胞の単離及び培養
成体雄性ウィスター系ラットをペントバルビタールナトリウムを用いて麻酔し、標準的手順に従って、すなわちコラゲナーゼ溶液を用いた肝臓のｉｎ  ｓｉｔｕ  潅流により、肝細胞を単離した。トリパンブルーｄｙｅ  ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ法で確かめた、精製肝細胞のバイアビリティー（ｖｉａｂｉｌｉｔｙ）は８５％を超えていた。単離した肝細胞を、フェノールレッドを含まず、トランスフェリン（１００μｇ／ｍｌ）、トリヨードサイロニン（ｔｒｉｉｏｄｏｔｈｙｒｏｎｉｎｅ）（１０μｇ／ｍｌ）、ゲンタマイシン（５０μｇ／ｍｌ）、ヘミコハク酸ヒドロコルチゾン（ｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎ  ｈｅｍｉｓｕｃｃｉｎａｔｅ）（１３．３６μｇ／ｍｌ）、グルカゴン（５μｇ／ｍｌ）、ＨＥＰＥＳ（１０ｍＭ）、イノシン（１０μｇ／ｍｌ）、インスリン（１０μｇ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）及びペニシリン（１００Ｕ／ｍｌ）及び１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加した標準Ｗｉｌｌｉａｍｓ  Ｍｅｄｉｕｍ  Ｅ（ＷＭＥ  ｓｕｐｐ．）に再懸濁した。細胞を、コラーゲン被覆２４−ウェルプレートに２ｘ１０５細胞／ウェルの初期密度で播いた。培養プレートに接着させるために４ｈ置いてから、培地を吸引し、ＦＢＳを含まず、試験化合物を含む新しいＷＭＥ  ｓｕｐｐ．で置き換え、９５％Ｏ２及び５％ＣＯ２雰囲気中で３７℃にて２４ｈインキュベートした。各実験、すなわち肝細胞の各バッチを用いた実験について、試験化合物による処理を４重に行った。各培養プレート上には４重の対照群（ベヒクルのみによる処理）も設けた。
【０１０６】
１．２  試験化合物へのインビトロ暴露
処理を開始する数時間前に、試験化合物の保存溶液をＤＭＳＯ中に調製した。最終濃度が０、３、１０、３０、１００及び３００μＭになるようにこれらの保存溶液を適宜に希釈して、処理の直前に培養培地に添加した。ベヒクルであるＤＭＳＯの最終濃度は１％（ｖ／ｖ）であった。
【０１０７】
１．３  細胞培養のバイアビリティー
１．３．１  単層形態学（ｍｏｎｏｌａｙｅｒ  ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ）のモニター
肝細胞単層の形態を、試験化合物への暴露の２４時間後に光学顕微鏡でモニターした。処理と関連する効果を下記の尺度に従って記述する：
０      対照培養と比較した場合、処理による形態学的変化が観察されない；
１−３  処理による何らかの形態学的変化、例えば、細胞内顆粒形成、空胞化（ｖａｃｕｏｌｉｚａｔｉｏｎ）又は細胞死。変化の重篤度に応じて、これらの変化を弱（１）、中（２）又は強（３）とする。
Ｋ      処理により、１００％の細胞が死滅し及び／又は単層の完全な剥離が起こり、透明な無細胞のディッシュが生じる。
【０１０８】
１．３．２    乳酸脱水素酵素（ｌａｃｔａｔｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）の放出
肝細胞培養を２４ｈ処理した後、培養培地のアリコートを注意深く集め、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ製ＬＤＨ細胞毒性検出キット（ｃａｔ  Ｎｏ．６３０１１７、Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、ＣＡ、ＵＳＡ）を用いて、分光測色法（ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ）により、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）活性の分析に使用した。各実験について、さらなる培養を、処理開始時の細胞内全ＬＤＨ活性の測定のために使用した。この目的のために、処理を開始する前に、実験ごとに４ウェルの細胞培養を冷生理食塩水で洗浄し、新しい培地中で超音波処理し、ホモジネートの全ＬＤＨ活性を分析した。培養培地中の酵素活性を測定し、処理開始時に培養肝細胞中に存在する全活性の百分率として表した。
【０１０９】
２．  データ分析
２４ｈの処理後に細胞形態及びＬＤＨ放出（ＬＤＨ  ｌｅａｋａｇｅ）に基づいて、各化合物について最小細胞毒性濃度（ＬＣＣ）及び無効果濃度（ＮｏＥＣ）を示す。ＬＣＣは、試験化合物が培養ラット肝細胞に対して透明効果（ｃｌｅａｒ  ｅｆｆｅｃｔ）（形態学的尺度≧２又はＬＤＨ放出の２倍以上の増加）を引き起こす最小濃度と定義される。＞３００μＭのＬＣＣ値は、３００μＭの最大試験濃度の両末端点において効果がないことを示す。最大試験濃度において弱い細胞毒性（形態学的尺度１又はＬＤＨ放出の２倍未満の増加）のみを示す化合物には「３００ｓ」と記した。ＮｏＥＣは、化合物が培養ラット肝細胞に対して効果（形態学及びＬＤＨ放出）を示さない最大試験濃度と定義される。
【０１１０】
３．  結果
【表５】
0006484644.tif 000015