(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
脂肪幹細胞からの分泌物を有効成分として含む、頭皮組織または皮膚組織に組織再生を誘発させることに用いるための注射用医薬組成物であって、前記分泌物は、脂肪幹細胞を無血清培地中で低酸素条件下で培養して得られるものであり、かつ、頭皮または皮膚１箇所当りにタンパク質量換算で０．３５〜０．４５μｇの前記分泌物が皮下投与または皮内投与される、医薬組成物｛但し、創傷を治療することに用いるものを除く｝。
【請求項２】
脂肪幹細胞からの分泌物を有効成分として含む、体表の創傷を治療することに用いるための注射用医薬組成物であって、前記分泌物は、脂肪幹細胞を無血清培地中で低酸素条件下で培養して得られるものであり、かつ、創傷部位の周辺体表組織に１箇所当りにタンパク質量換算で０．３５〜０．４５μｇの前記分泌物が皮下投与または皮内投与される、医薬組成物。
【請求項３】
脂肪幹細胞からの分泌物を有効成分として含む、毛髪を改質することに用いるための注射用医薬組成物であって、前記分泌物は、脂肪幹細胞を無血清培地中で低酸素条件下で培養して得られるものであり、かつ、頭皮または皮膚１箇所当りにタンパク質量換算で０．３５〜０．４５μｇの前記分泌物が皮下投与または皮内投与される、医薬組成物。
【請求項４】
毛髪の改質が、白髪の減少である、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
毛髪の改質が、毛髪のキューティクルの荒れの改善である、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項６】
毛髪の改質が、毛髪の太さまたは伸長速度の改善である、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項７】
頭皮または皮膚の表面の１ｃｍ2〜４ｃｍ2に１箇所の割合で投与される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
１箇所当り１０〜３０μＬの溶液量で投与される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
投与間隔が、月に２回から６月に１回である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、頭皮若しくは皮膚の改質、創傷治癒、または毛髪の改質に用いられるための医薬組成物および方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
脂肪幹細胞から抽出された脂肪由来幹細胞分泌物には、毛母細胞を刺激する作用と増毛効果を有することが開示されている（非特許文献１）。また、男性ホルモンを抑制することによる増毛剤も開発されている。しかし、これらの治療は、治療している期間は増毛効果があるが、治療を終了すると増毛効果が消失する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Byung-Soon Park et al., Biomedical Research, 31(1): 27-34, 2010
【発明の概要】
【０００４】
本発明者は、脂肪幹細胞からの分泌物（以下、「ＡＳＣ−ＣＭ」と呼ぶ）を特定の用量で皮膚に投与すると、皮膚の再生を促進すること、皮膚の改質を促進すること、皮膚の創傷を治癒できること、または皮膚の若返りを促進することを見出した。本発明者はまた、ＡＳＣ−ＣＭを特定の用量で頭皮に投与すると、頭皮の再生を促進すること、頭皮の改質を促進すること、または頭皮の若返りを促進することを見出した。本発明者はさらに、ＡＳＣ−ＣＭを特定の用量で頭皮に投与すると、毛髪の改質（キューティクルの改質、白髪の改善、毛髪伸長速度の増加、毛髪の太さの増加等）を促進することを見出した。
【０００５】
本発明によれば、以下の発明が提供される。
（１）脂肪幹細胞からの分泌物を有効成分として含む、頭皮または皮膚を改質することに用いるための局所投与用医薬組成物であって、頭皮または皮膚１箇所当りにタンパク質量換算で０．３〜０．６μｇの前記分泌物が投与される、医薬組成物。
（２）脂肪幹細胞からの分泌物を有効成分として含む、創傷を治療することに用いるための局所投与用医薬組成物であって、創傷部位１箇所当りにタンパク質量換算で０．３〜０．６μｇの前記分泌物が投与される、医薬組成物。
（３）脂肪幹細胞からの分泌物を有効成分として含む、毛髪を改質することに用いるための局所投与用医薬組成物であって、頭皮または皮膚１箇所当りにタンパク質量換算で０．３〜０．６μｇの前記分泌物が投与される、医薬組成物。
（４）毛髪の改質が、白髪の減少である、上記（３）に記載の医薬組成物。
（５）毛髪の改質が、毛髪のキューティクルの荒れの改善である、上記（３）に記載の医薬組成物。
（６）毛髪の改質が、毛髪の太さまたは伸長速度の改善である、上記（３）に記載の医薬組成物。
（７）頭皮または皮膚の表面の１ｃｍ２〜４ｃｍ２に１箇所の割合で投与される、上記（１）〜（６）のいずれかに記載の医薬組成物。
（８）１箇所当り１０〜３０μＬの溶液量で投与される、上記（１）〜（７）のいずれかに記載の医薬組成物。
（９）投与間隔が、月に２回から６月に１回である、上記（１）〜（８）のいずれかに記載の医薬組成物。
【０００６】
本発明によれば、治療終了後も継続的に効果を発揮し得る医薬組成物、または治療法が提供される点で有利である。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】図１は、ＡＳＣ−ＣＭの投与による毛髪のキューティクルに対する影響を示す写真である。
【図２】図２は、ＡＳＣ−ＣＭの投与により、白髪が根元部分において黒色に変化していることを示す図である。
【図３】図３は、ＡＳＣ−ＣＭの投与と皮膚の脂肪層の厚みとの関係を示す図である。＃１〜＃５はそれぞれ、治療１〜５ヶ月後であることを示す。
【図４Ａ】図４Ａは、頭部の９分割の模式図である。
【図４Ｂ】図４Ｂは、ＡＳＣ−ＣＭ０．１μｇ投与群における９分割された頭皮それぞれに対する増毛効果の評点の平均値（初回、治療開始６〜９ヶ月後、治療終了後である治療開始２年１ヶ月〜３年後）を示す。
【図４Ｃ】図４Ｃは、ＡＳＣ−ＣＭ０．４μｇ投与群における９分割された頭皮それぞれに対する増毛効果の評点の平均値（初回、治療開始６〜９ヶ月後、治療終了後である治療開始２年１ヶ月〜３年後）を示す。
【図５Ａ】図５Ａは、治療前後における皮膚組織中のコラーゲンの組織染色を示す。
【図５Ｂ】図５Ｂは、治療前後における皮膚組織中のコラーゲンの組織染色を示す。
【図５Ｃ】図５Ｃは、脂肪細胞の大きさに対するＡＳＣ−ＣＭ投与の用量依存性を示す図である。
【図６】図６は、創傷に対するＡＳＣ−ＣＭ投与用量と治癒効果の関係を示す。
【図７】図７は、ＡＳＣ−ＣＭ０．４μｇ投与群における頭皮脂肪層の免疫組織学的染色（ＣＤ６８陽性マクロファージの染色、ＣＤ１６３陽性マクロファージの染色およびＰＰＡＲγ陽性脂肪細胞の染色）の結果を示す。
【図８Ａ】図８Ａは、ＡＳＣ−ＣＭ０．４μｇ投与群における毛髪の伸長速度とその伸長速度の総和を示す。図８Ａは、患者Ｃの結果である。
【図８Ｂ】図８Ｂは、上記図８Ａの方法で計測した３名の患者の治療前後の毛髪の長さの総和を示すグラフである。図８Ｂでは、左から順に患者Ａのデータ、患者Ｂのデータ、患者Ｃのデータが示されている。
【発明の具体的な説明】
【０００８】
本明細書では、「対象」とは、哺乳動物を意味する。哺乳動物としては、例えば、ヒト（男性および女性）が挙げられる。
【０００９】
本明細書では、「脂肪幹細胞」とは、脂肪組織に存在する細胞であり、幹細胞としての性質を有し、骨および脂肪のいずれにも分化する能力を有する細胞を意味する。脂肪幹細胞は、例えば、ＣＤ１３、ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＣＤ１０５およびＣＤ１６６から選択される１以上、例えば全てが陽性であり得る。脂肪幹細胞は、ＣＤ１４、ＣＤ３１およびＣＤ４５から選択される１以上、例えば全てが陰性であり得る。
【００１０】
本明細書では、「脂肪幹細胞からの分泌物」とは、脂肪幹細胞を溶液中で培養した際に脂肪幹細胞から培養液中に分泌される物質を意味する。本明細書では、脂肪幹細胞からの分泌物をＡＳＣ−ＣＭと呼ぶことがある。細胞からの分泌物には、細胞間の様々な伝達物質が含まれると考えられ、例えば、エクソソームなどの細胞外小胞、ｍＲＮＡおよびサイトカインなどのタンパク質などが含まれ得る。
【００１１】
本明細書では、「タンパク質量換算」とは、含まれるタンパク質の質量を基準として決定されることを意味する。
【００１２】
本明細書では、「頭皮」とは、頭部の皮膚のうち、頭頂部を含み、顔面、顎、および首（耳を含む）以外の領域をいう。本明細書では、「皮膚」は、頭皮および頭皮以外の皮膚を含む意味で用いられる。
【００１３】
本明細書では、「改質」とは、その質を改良すること、改善すること、向上させること、または、良くすることを意味する。本明細書では、「改善」とは、現在の状況よりも良くなること、および悪い部分がよりよくなることを含む意味で用いられる。
【００１４】
本明細書では、「毛髪」とは、皮膚に生える毛を意味する。本明細書では「頭髪」とは、頭皮に生える毛を意味する。
【００１５】
本明細書では、「白髪」とは、毛髪、特に頭髪から、ユウメラニン（または真性メラニン）および／またはフェオメラニンなどの色素が欠乏し、白色を呈する毛髪を意味する。本明細書では、「黒髪」とは、ユウメラニンを含み黒色を呈する毛髪を意味する。
【００１６】
本明細書では、「キューティクル」とは、毛髪の表面を覆う構造であり、毛髪の最外層に存在する構造である。キューティクルは、毛髪を外部からの刺激から保護する役割、および内部のコーテックスからの水分または成分の外部への損失を防ぐ役割を担っている。キューティクルは、根元から毛先に対してうろこ状に毛髪を覆う。
【００１７】
本明細書では、「創傷」とは、組織の物理的損傷を意味する。創傷には、体表の創傷が含まれる。
【００１８】
本発明のある態様では、
（i）脂肪幹細胞からの分泌物を有効成分として含む、組織（例えば、頭皮または皮膚）を改質することに用いるための局所投与用医薬組成物；
（ii）脂肪幹細胞からの分泌物を有効成分として含む、創傷を治療することに用いるための局所投与用医薬組成物；および
（iii）脂肪幹細胞からの分泌物を有効成分として含む、毛髪を改質することに用いるための局所投与用医薬組成物
が提供される。本発明のある態様では、上記（i）〜（iii）に記載の医薬組成物は、頭皮または皮膚１箇所当りにタンパク質量換算で０．３〜０．６μｇの前記分泌物が投与され得る。
【００１９】
本発明のある態様では、
（Ａ）脂肪幹細胞からの分泌物を有効成分として含む、組織（例えば、頭皮または皮膚）を改質することに用いるための局所投与用医薬組成物であって、頭皮または皮膚１箇所当りにタンパク質量換算で０．３〜０．６μｇの前記分泌物が投与される、医薬組成物；
（Ｂ）脂肪幹細胞からの分泌物を有効成分として含む、創傷を治療することに用いるための局所投与用医薬組成物であって、創傷部位１箇所当りにタンパク質量換算で０．３〜０．６μｇの前記分泌物が投与される、医薬組成物；および
（Ｃ）脂肪幹細胞からの分泌物を有効成分として含む、毛髪を改質することに用いるための局所投与用医薬組成物であって、頭皮または皮膚１箇所当りにタンパク質量換算で０．３〜０．６μｇの前記分泌物が投与される、医薬組成物
が提供される。
【００２０】
本発明のある態様では、頭皮または皮膚１箇所当りに投与される分泌物の量は、タンパク質量換算で、０．３〜０．６μｇ、０．３５〜０．５μｇ、０．３５〜０．４５μｇ、または約０．４μｇであり得る。本発明のある態様では、上記ＡＳＣ−ＣＭに、増殖因子等の追加のタンパク質成分を添加して用いてもよいが、その場合であっても、ＡＳＣ−ＣＭの投与量は、タンパク質換算で、０．３〜０．６μｇ、０．３５〜０．５μｇ、０．３５〜０．４５μｇ、または約０．４μｇであり得る。
【００２１】
本発明のある態様では、脂肪幹細胞からの分泌物は、脂肪幹細胞を培地中で培養することにより培養上清中に得られる。本発明のある態様では、脂肪幹細胞からの分泌物は、脂肪細胞を無血清培地中で培養することにより培養上清中に得られる。本発明のある態様では、脂肪幹細胞からの分泌物は、脂肪幹細胞を培地（例えば、無血清培地）中で低酸素条件下で培養することにより培養上清中に得られる。脂肪幹細胞の培地は、脂肪幹細胞の培養に適した培地、例えば、ＤＭＥＭ、Ｆ１２、ＤＭＥＭ／Ｆ１２などの培地、または例えば、化学的に定義された培地で培養し得る。低酸素条件としては、酸素濃度が例えば、１５％以下、１０％以下、または５％以下の大気下の条件（例えば、１．５％〜４％、例えば、約２％または３％）が挙げられる。
本発明のある態様では、脂肪幹細胞からの分泌物は、脂肪幹細胞をＤＭＥＭ／Ｆ１２培地中で低酸素環境下（例えば、２％Ｏ２、５％ＣＯ２、９３％Ｎ２雰囲気下）で３７℃で７２時間培養して得られ得る。
【００２２】
脂肪幹細胞は、当業者であれば脂肪組織から容易に取得できる。脂肪幹細胞は例えば、腹部の脂肪組織から得られ得る。腹部の脂肪組織は、腹部脂肪吸引によって得られ得る。脂肪幹細胞の脂肪組織からの精製は例えば以下のように行うことができる。脂肪組織を洗浄し、Ｉ型コラゲナーゼで細胞塊を単一細胞に解離させ、フィルターでろ過して細胞以外の組織断片等を除去する。必要に応じて洗浄（例えば、生理食塩水や培地への懸濁と遠心による洗浄）する。その後、脂肪幹細胞を細胞の密度（比重）により分離する。例えば、1.077g/cm3の比重を有するフィコール溶液（例えば、Histopaque-1077）で遠心し、浮かぶ細胞として脂肪幹細胞を分離できる。得られた脂肪幹細胞は、脂肪幹細胞のマーカーの発現で確認しうる。脂肪幹細胞のマーカーとしては、例えば、ＣＤ１３、ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＣＤ１０５およびＣＤ１６６から選択される１以上、例えば全てが挙げられる。また、脂肪幹細胞は、特定のマーカーが発現していないことで確認しうる。そのようなマーカーとしては、例えば、ＣＤ１４、ＣＤ３１およびＣＤ４５から選択される１以上、例えば全てが挙げられる。また、得られた脂肪幹細胞は、骨への分化能および脂肪への分化能を指標として、その両方を有するものとして確認しうる。
【００２３】
脂肪幹細胞からの分泌物は、タンパク質含量によって用量を決定することができる。タンパク質含量は、当業者であれば常法（例えば、ピロガロールレッド法およびブラッドフォード法などの方法）に従って決定することができる。
【００２４】
脂肪幹細胞からの分泌物またはこれを含む医薬組成物は、投与後は、頭皮は投与部分近辺から改善され、その効果は時間をかけて徐々に周囲に伝播する。従って、頭皮または皮膚上に点在させて時間をかけて周囲にも発明の効果を伝播させることもできるし、密集させて伝播に必要な時間を短縮することもできる。本発明のある態様では、分泌物は、特に限定されないが例えば、１ｃｍ２〜１０ｃｍ２、１ｃｍ２〜５ｃｍ２、１ｃｍ２〜４ｃｍ２、１ｃｍ２〜３ｃｍ２、１ｃｍ２〜２ｃｍ２、０．５ｃｍ２〜２ｃｍ２、０．７ｃｍ２〜１．５ｃｍ２に対して１箇所とすることができる。本発明のある態様では、分泌物は、例えば、０．５ｃｍ２に１箇所以下、０．６ｃｍ２に１箇所以下、０．７ｃｍ２に１箇所以下、０．８ｃｍ２に１箇所以下、０．９ｃｍ２に１箇所以下、または１ｃｍ２に１箇所に１箇所以下の投与密度で投与することができる。本発明のある態様では、脂肪幹細胞からの分泌物またはこれを含む医薬組成物は、例えば、皮下直下、又は真皮層から脂肪層上層に局所投与することができる。投与は、例えば、注射により行うことができる。
【００２５】
また、例えば、１箇所当り１０μＬ〜５０μＬ、１５μＬ〜３０μＬ、１５μＬ〜２５μＬ、または約２０μＬの溶液（但し、溶液は上記で指定された量の有効成分を含む）を投与することができる。
【００２６】
投与部位は、適宜選択できるが、例えば、頭皮全体に投与することもできるし、または、頭皮全体のうち他と比較して不良な部分に投与することができる。
【００２７】
また、驚くべきことに本発明者らは、頭皮全体のうち比較的良好な部位に投与すると、その効果は周囲に伝播しやすいことを見出している。良好な部分は、本発明の医薬組成物に対する応答性が高く、その効果は伝播して当該投与箇所の周辺にも及ぶ。伝播による改善効果は、投与箇所により近いところで強く表れるが、投与箇所から数ｃｍの範囲（例えば、１ｃｍ〜４ｃｍ）に及ぶ。従って、頭皮のうち、比較的良好な部位に対して投与することができる。また、比較的不良な部位は良好な部位から改善効果が伝播するので、比較的良好な部位に対して投与するだけでも不良な部位への治療効果は得られ得る。
従って、頭皮のうち、比較的良好な部位に対して投与し、伝播の効果により不良な部分の改善を試みても良い。また、比較的不良な部位において改善が得られると本発明の医薬組成物に対する応答性が高まる。従って、頭皮のうち、比較的良好な部位に対して投与し、伝播の効果により不良な部分の改善が進んできたら、その後で当該不良であった部分に本発明の医薬組成物を投与してもよい。
ＡＳＣ−ＣＭを投与する毎に、投与部位における、組織刺激、マクロファージの活性や幼若脂肪細胞の活性があがり修復機能が上昇すると考えられる。患者の症状(状況)と改善度合いを診て投与することが望まれる。
【００２８】
ある態様では、タンパク質量換算で１５μｇ／ｍＬ〜２５μｇ／ｍＬ（例えば、約２０μｇ／ｍＬ）のＡＳＣ−ＣＭを１箇所１５μＬ〜２５μＬ（例えば、約２０μＬ）の量で頭皮に局所投与することができる。ある態様では、上記局所投与は、成人の頭皮当り１５０箇所〜２５０箇所（例えば、約２００箇所）、または２５０箇所〜８００箇所にすることができ、投与箇所の数は、必要に応じて決定することができる。ここで用語「約」とは、この用語に続く数値の±１０％または±５％の数値範囲を含むことを意味する。
【００２９】
脂肪幹細胞からの分泌物またはこれを含む医薬組成物は、特に限定されないが例えば、１月に２回から６月に１回、１月に２回から５月に１回、１月に２回から４月に１回、１月に２回から３月に１回、１月に２回から２月に１回、１月に１．５回から１．５月に１回、または１月に１．２回から１．２月に１回、例えば、約月１回の投与間隔で投与することができる。
【００３０】
脂肪幹細胞からの分泌物またはこれを含む医薬組成物は、１回投与するだけでも頭皮や皮膚の改質効果を有し、この効果は持続しうる。従って、投与は１回でもよいし、複数回でもよい。脂肪幹細胞からの分泌物またはこれを含む医薬組成物は、継続的に治療が完了するまで、または患者が満足するまで継続的に投与することもできる。特に本発明によれば、頭皮や皮膚の改質効果は、状態の良い部分から表れ、状態の悪い部分では遅れて表れる。従って、頭皮や皮膚の状態に応じて治療期間は変動しうる。脂肪幹細胞からの分泌物またはこれを含む医薬組成物による治療期間は、例えば、最短で１回の治療〜３年間、最短で１回の治療〜２年間、最短で１回の治療〜１．５年間、最短で１回の治療〜１年間、最短で１回の治療〜８ヶ月、最短で１回の治療〜６ヶ月、または最短で１回の治療〜４ヶ月とすることができる。
【００３１】
本発明のある態様では、上記（Ａ）に記載の医薬組成物は、頭皮または皮膚の若返りまたは若返りの促進のための医薬組成物であり得る。本発明のある態様では、上記（Ａ）に記載の医薬組成物は、頭皮または皮膚の再生または再生の促進のための医薬組成物であり得る。本発明のある態様では、上記（Ａ）に記載の医薬組成物は、頭皮または皮膚の活性化のための医薬組成物であり得る。本発明のある態様では、上記（Ａ）に記載の医薬組成物は、増毛剤や育毛剤と併用することができる。
【００３２】
本発明のある態様では、上記（Ｂ）に記載の医薬組成物は、創傷を治療することに用い得る。本発明では、創傷の治療は、創傷の治癒、創傷の治癒の促進、または創傷の治癒の早期化であり得る。
【００３３】
頭皮を改善することにより、その効果は毛髪そのものにも及ぶ。そして、後述する実施例において示されるように、毛髪の改善効果としては、白髪の減少、白髪部分の重さの減少、および白髪の割合の減少、白髪の割合の減少、キューティクルの荒れの改善、毛髪の太さおよび伸長速度の改善が挙げられる。従って、本発明のある態様では、上記（Ｃ）に記載の医薬組成物は、白髪を減少させることに用いるための医薬組成物であり得る。白髪の減少としては、白髪の本数の減少、白髪部分の重さの減少、および白髪の割合の減少が挙げられる。白髪の減少は、各種メラニンにより着色した髪の本数の増加、そのような髪の部分の重さの増加、およびそのような髪の割合の増加を伴い得る。本発明のある態様では、上記（Ｃ）に記載の医薬組成物は、毛髪のキューティクルの荒れを改善することに用いるための医薬組成物であり得る。髪の毛のキューティクルの荒れを改善することとしては、キューティクルの整列の程度を高めること、およびキューティクルの乱れた領域を減らすことが挙げられる。本発明のある態様では、上記（Ｃ）に記載の医薬組成物は、毛髪の太さまたは伸長速度を改善することに用いるための医薬組成物であり得る。毛髪の太さの改善としては、毛髪を太くすること、太い毛髪の本数を増加させること、および太い毛髪の割合を増加させることが挙げられる。伸長速度の改善としては、例えば、月１０ｍｍ以上、１１ｍｍ以上、１２ｍｍ以上、１３ｍｍ以上、１４ｍｍ以上、１５ｍｍ以上、１６ｍｍ以上、１７ｍｍ以上、１８ｍｍ以上、１９ｍｍ以上、２０ｍｍ以上、または２１ｍｍ以上の伸長速度を有する毛髪の本数若しくは割合を増加させることが挙げられる。
【００３４】
本発明のある側面では、
（ａ）頭皮または皮膚をその必要のある対象（またはその必要のある部位）において改質する方法であって、頭皮または皮膚１箇所当りタンパク質量換算で０．３μｇ〜０．６μｇの脂肪幹細胞からの分泌物を局所投与することを含む方法；
（ｂ）創傷をその必要のある対象において治療する方法であって、創傷部位１箇所当りにタンパク質量換算で０．３μｇ〜０．６μｇの脂肪幹細胞からの分泌物を局所投与することを含む方法；および
（Ｃ）毛髪をその必要のある対象において改質する方法であって、頭皮または皮膚１箇所当りタンパク質量換算で０．３μｇ〜０．６μｇの脂肪幹細胞からの分泌物を局所投与することを含む方法
が提供される。
【００３５】
本発明のある側面では、
（α）頭皮または皮膚を改質することに用いるための局所投与用医薬製剤の製造における脂肪幹細胞からの分泌物の使用｛ここで、当該分泌物は、頭皮または皮膚１箇所当りにタンパク質量換算で０．３μｇ〜０．６μｇ投与される｝；
（β）創傷を治療することに用いるための局所投与用医薬製剤の製造における脂肪幹細胞からの分泌物の使用｛ここで、当該分泌物は、創傷部位１箇所当りにタンパク質量換算で０．３μｇ〜０．６μｇ投与される｝；および
（γ）毛髪を改質することに用いるための局所投与用医薬製剤の製造における脂肪幹細胞からの分泌物の使用｛ここで、当該分泌物は、頭皮または皮膚１箇所当りにタンパク質量換算で０．３μｇ〜０．６μｇ投与される｝
が提供される。
【００３６】
本発明のある態様では、医薬組成物は、脂肪幹細胞からの分泌物に加えて賦形剤（例えば、溶媒、共溶媒、可溶化剤、湿潤剤、懸濁剤、増粘剤、乳化剤、キレート剤、緩衝液、ｐＨ調整剤、抗酸化剤、還元剤、抗菌剤、保存剤、充填剤、保護剤、または等張剤）を含み得る。本発明のある態様では、医薬組成物は、注射剤の形態であり得る。本発明のある態様では、医薬組成物は、局所投与、例えば、皮内投与または皮下投与され得る。
【実施例】
【００３７】
実施例１：脂肪幹細胞分泌物質による増毛効果
（１）脂肪幹細胞の分泌物質（以下「ＡＳＣ−ＣＭ」ともよぶ）の調製
脂肪幹細胞の分泌物質は、以下のように調製した。
血液検査によりウイルスチェック（HIV,HBV,HCV）を行った健康な成人女性ドナー（5人、年齢20-21歳）から腹部脂肪吸引によって脂肪組織を採取し、以下の方法で脂肪由来幹細胞（ADSCs）を分離した。300g×10分の遠沈の後0.075％type Iコラゲナーゼ(Sigma-Aldrich, USA)を添加し、37℃で45分処理した。リン酸緩衝液（PBS）を加え、70μm加えのフィルターを通して濾過した。その後α-modified Eagle medium (Invitrogen, USA)を少量添加して300g×10分の遠沈の後、PBSを加え70μmのフィルターを通して濾過した。histopaque-1077 (Sigma-Aldrich, USA)を用いて840g×10分の遠沈を行い、上澄を廃棄しhistopaque-1077に浮かぶ細胞を集めADSCsを得た。
FDA（米国の医薬食品局）、およびKFDA（韓国の医薬食品局）のガイドラインに則り、脂肪組織と洗浄した細胞のウイルス検査、細菌培養検査を行い雑菌の感染を排除した。Dulbecco査を行い雑菌の感染を排除した。ダルベッコ改変イーグル培地（DMEM）、ニュージーランド種10％ウシ血清培地（FBS）、100単位/mlペニシリン、100単位/mlストレプトマイシンを含む培地を用い37℃の5％二酸化炭素の環境下で3-5日培養した。この行程をさらに4回繰り返し、100mm2あたり4×105個のADSCs（脂肪細胞由来幹細胞）を得た。ADSCsはPBSにより洗浄され、新鮮DMEM /F12 無血清培地(Invitrogen-Gibco-BRL,USA)を加えた。ADSCsの分泌を促すため72時間低酸素環境 (2%O2、5%CO2,93%N2)に保った。その後300g×5分の遠沈ののち0.22μmのシリンジフィルターを用いてろ過し、脂肪由来幹細胞の培養上清を取得した。この時点で再度、ウイルス検査、細菌培養検査を行い、細菌・ウイルスの感染を排除した。最後に3-kDa molecular-weight cut-off Centricon tubes (Millipore Corp, USA)を用いて分泌された成分を精製してＡＳＣ−ＣＭを得た。ＡＳＣ−ＣＭのタンパク質含量は、ブラッドフォード法、およびピロガロールレッド法により確認された。【００３８】
（２）薄毛患者に対する、ＡＳＣ−ＣＭの投与
薄毛患者（２５歳〜７２歳の男性２１名および女性１６名）の頭皮（右半分、左半分または両方）に１箇所あたりタンパク質量換算で０．１μｇ（ｎ＝１４）、０．２μｇ（ｎ＝３）、０．４μｇ（ｎ＝９）、０．６μｇ（ｎ＝９）、０．８μｇ（ｎ＝４）のＡＳＣ−ＣＭを注射器を用いて皮下投与した。２名は、頭皮右半分と左半分とで異なる用量でＡＳＣ−ＣＭを投与した。この際、上記の用量となる濃度で１箇所あたり２０μＬを頭皮の２００箇所に投与した。頭皮の半分を治療する際にはそれぞれの濃度を１００箇所に投与した。この際、頭皮に１ｃｍ２〜４ｃｍ２の投与密度で投与した。投与は、例外的な場合を除いて１月１回の頻度で行い、投与期間は６〜１０ヶ月間であった（平均的には８ヶ月）。観察はいずれのケースでも投与終了１ヶ月後に行った。皮膚表面１箇所あたりタンパク質量換算でＸμｇ投与した群を実施例全体にわって「Ｘμｇ投与群」または「Ｘμｇ／１箇所投与」等という。以下、ＡＳＣ−ＣＭの投与量について０．４μｇと述べたときには例外なくタンパク質換算量で０．４μｇ投与されたことを意味する。
初回投与時の毛髪の本数に対する、治療後の毛髪本数の経時的変化を目視により観察した。治療前、および治療の段階毎でのトリコグラムによる撮影に同意を得た。患者の両側の目尻を頭側に延長し、両耳と頭頂を結ぶ線と交差する２点に墨汁で刺青をし、マーキングを中心に2cmの範囲を投与の３日前のタイミングで毎月剃毛した。トリコグラムは、毎回マーキングを中心に撮影（Canon Power Shot A520, Tokyo, Japan）した。この時ガラス板を頭皮に押しつけ毛を寝かせた状態にして毛の長さがわかるようにして撮影した。撮影範囲に含まれる入れ墨を中心とした直径11mmの円 (面積95 mm2) 内の毛髪を目視で計量することによって行った。【００３９】
結果は、表１に示される通りであった。【００４０】
【表１】
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【００４１】
表１に示されるように、１箇所あたりタンパク質量換算で０．１μｇ（５μｇ／ｍｌを２０μＬ）投与した群（０．１μｇ投与群）では、初回投与時に対して毛髪本数の増加効果が確認されたが、これに対して、０．２μｇ投与群、０．４μｇ投与群、０．６μｇ投与群および０．８μｇ投与群では、毛髪本数の目立った増加効果は観察されず、８ヶ月または１０ヶ月後ではむしろ毛髪本数の減少が観察された。但し、ＡＳＣ−ＣＭ成分のみの投与では、上記の様に結果が安定せず、毛髪の本数による評価では、決定的な結論を出すことは難しいと考えられた。【００４２】
このように、薄毛の処置において、用量依存性は観察されず、１箇所あたりタンパク質量換算で０．２μｇ以上の高用量の投与は却って毛髪本数を増加させないことが明らかとなった。これらの結果から、薄毛患者の処置には、１箇所あたりタンパク質量換算で０．１μｇを投与する必要があると考えられた。
この結果は、発明者らによる既報の結果（全て０．１μｇ／１箇所で実施した）と一貫するデータであった（Fukuoka et al., The American Journal of Cosmetic Surgery, 29(4):273-282, 2012）。【００４３】
実施例２：髪質の変化
本実施例では、髪のキューティクルについて処置前後で改善がみられたかを調べた。【００４４】
ＡＳＣ−ＣＭ０．４μｇ投与群（月１回投与）の毛髪を採取し、（患者の毛髪の伸長速度を考慮して、治療前２ヶ月に相当する部位と治療開始から3.5ヶ月目の部位を）採取日、若しくはその翌日に検査部位の毛髪を固定板にレジンで接着固定させる。その翌日若しくは翌々日に炭素固定し、同日に常法により走査電子顕微鏡により髪のキューティクルの状態を観察した。陰性対象として、同一患者の処置されなかった部分の毛髪を用いた。そして、毛髪の新しく伸びた部分（根元側）と、既存の部分（先端側）とで比較した。代表的な例を図１に示す。【００４５】
その結果、治療した毛髪については、先端側ではキューティクルが荒れているのに対して、新しく伸びた部分である根元側ではキューティクルが整っている様子が観察され、髪質の差が明らかに改善していた。これに対して、陰性対象の処置されなかった部分の毛髪では、根元も先端側もキューティクルの荒れが観察され、処置されなかった部分ではその質の改善効果は認められなかった。【００４６】
より多くの患者（３名）に対して同様の評価を実施した（ＡＳＣ−ＣＭ０．４μｇ、月１回投与、３〜５ヶ月投与）。評価は、最後の投与から１ヶ月後に、電子顕微鏡画像に基づいて下記の評点に基づいて行った。評価は、医療従事者である医師等７名により行った。評点の平均値を求めた。【００４７】
髪質評価の評点表
５点：キューティクルが整っており、荒れが見当たらない。
４点：平均よりもキューティクルが整っているが、多少の荒れが認められる。
３点：キューティクルの整い方が平均的である。
２点：平均よりもキューティクルが荒れており、多少の剥がれが認められる。
１点：キューティクルが全体的に荒れており、全体的に剥がれが認められる。【００４８】
結果は、表２に示される通りであった。【００４９】
【表２】
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【００５０】
患者３については、本実施例の前にすでに治療が開始されていた。しかし、本実施例による観察を開始し、４ヶ月後には同様の髪質変化が確認された。【００５１】
上述の通り、０．４μｇ投与群では、投与後に髪質の変化が認められた。他方で、０．１μｇ投与群では、陰性対象同様に髪質の改善効果は観察されなかった。
患者３では、本実施例前に治療が開始されていたが、ＡＳＣ−ＣＭの０．４μｇ投与により明確に髪質の改善が認められた。【００５２】
実施例３：髪質の変化
本実施例では、髪の色（白髪）に着目し、処置前後でその改善効果を調べた。【００５３】
ＡＳＣ−ＣＭの０．４μｇ投与群（ｎ＝５、５４歳〜６１歳男性）において、治療開始から６ヶ月〜１６ヶ月（平均９．４ヶ月；治療は平均９．２回）後に白髪の面積を調べ、治療前と比較した。その結果、表３に示されるように、面積比で平均約３８％の減少が認められた。【００５４】
【表３】
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【００５５】
図２では、ＡＳＣ−ＣＭ０．４μｇ投与群（６７歳女性、５回治療、治療開始から６ヶ月、および６１歳男性、8回治療、４ヶ月の経過観察をし、治療開始から12ヶ月）治療後に、白髪の根元部分が黒色になった様子を示す。図２で示されるように、既に白髪となっている部分については白色のままであるが、治療後に新しく伸びた部分については、黒色となっていることが示されている。【００５６】
実施例４：頭皮の改質効果の検証
毛髪の改質が上記により示されたが、頭皮のどのような改質に基づくものであるのかを検証した。【００５７】
１０Ｍｚのプローブを用いたエコー検査により、頭皮の皮下組織の脂肪層の厚みの変化を観察した。この検査では、皮脂腺領域から下方部分の領域が測定され、概ね真皮層までの領域の厚みが測定されると考えられる（但し、真皮層は測定値に含まれない）。結果は、図３で示される通りであった。図３では、ＡＳＣ−ＣＭ０．４μｇ／１箇所を月１回投与した患者の測定値が示されている。図３中の「＃ｎ」は、治療ｎヶ月後であることを示す。【００５８】
結果、図３に示されるように治療開始後５ヶ月では脂肪層の厚みに有意な変化は認められなかった。【００５９】
また、ＡＳＣ−ＣＭ０．１μｇ投与群では、頭皮の改質が生じていないのに対して、ＡＳＣ−ＣＭ０．４μｇ投与群では、頭皮の改質が生じていることが明らかとなった。これまでの研究によるＡＳＣ−ＣＭ０．１μｇ投与では、短期間での毛髪本数の増加効果は認められたが、頭皮の改質効果は認められなかった。一方、より高用量（０．４μｇ／１箇所）におけるＡＳＣ−ＣＭ投与では、短期間での毛髪本数の増加効果は弱かったものの、頭皮の改質効果が高いことが明らかとなった。一見して高容量の投与群では短期間での毛髪本数の増加効果は弱かったが、頭皮の改質を通して髪質の改善（白髪から黒髪への変化や、キューティクルの荒れの改善）が生じていた。また、長期的には、頭皮の改質を通して増毛効果も期待できることが示唆された。【００６０】
実施例５：部位別の頭皮改質効果
本実施例では、頭皮を上部から９つの領域に分けて治療による効果を観察した。これは、それぞれの患者毎に良い部分（毛の多い部分）と悪い部分（毛の少ない部分）とが混在するため、治療効果を検討する上で、良い部分に対する影響と悪い部分に対する影響を分けて評価することでより精度の高い評価を実現するためであった。また、これまでの実施例から、高用量投与では頭皮の改質が生じるが、改質には時間がかかることから長期の観察期間が必要であると考えられたので、長期の観察期間を設定した。
特に、頭皮の改質によって治療終了後も増毛効果が生じるかを検討した。この目的で、治療期間は概ね８ヶ月とし、そこで治療を終了して、その後は治療せずに増毛効果のみを観察した。【００６１】
９つの領域は、以下の基準に従って設定した。具体的には、頭頂部側から撮影した頭部画像を、楕円に見立て、長軸を３等分し、短軸を３等分して９つの領域に区分けた。図４Ａには、頭部の９つの区画をどのように分けたかが分かるように模式図を示す。【００６２】
薄毛患者（ｎ＝１２）に対して、ＡＳＣ−ＣＭを１箇所あたり０．１μｇ（０．１μｇ投与群；ｎ＝４）または０．４μｇ（０．４μｇ投与群；ｎ＝８）を、月１回６ヶ月（ｎ＝１）、８ヶ月（ｎ＝１０）、および１０ヶ月（ｎ＝１）投与して、治療を終了させた。増毛効果の観察および評価は、その後３年にわたり実施した。なお、増毛効果は、医師７名を含む計１０名の医療従事者により評価した。評点を以下の評点表に基づいて各評価者により採点し、平均値を算出した。【００６３】
増毛効果の評点
５点：ほぼ正常
４点：透け度合いが２０％以下
３点：透け度合いが４０％以下
２点：透け度合いが６０％以下
１点：透け度合いが８０％以下【００６４】
結果は、図４ＢおよびＣに示される通りであった。図４ＢおよびＣには、９つの領域に分けたそれぞれの区画の評点の平均点を示す。【００６５】
図４Ｂに示されるように、０．１μｇ投与群では、全体的に高い増毛効果が早くから観察されたものの、治療を停止するとその効果も直ぐに消えた。
これに対して、０．４μｇ投与群では、図４Ｃに示されるように、早期の増毛効果は限定的であったが、治療開始８ヶ月後に治療を停止した後も、増毛効果が持続し、最終的には非常に満足度の高い増毛が達成された。
このことは、０．１μｇ投与群では、根本治療にはならなかったのに対して、０．４μｇ投与群では、頭皮の実質的改善効果が奏されたために、増毛の根本治療に近づいたことを示唆する。【００６６】
さらに、０．４μｇ投与群では、まずスコアの高いところ（頭皮の状態がよいところ）から先に増毛効果が表われ、スコアの低いところ（頭皮の状態が悪いところ）では、遅れて増毛効果が表われた。これは、頭皮の改善には時間が必要であるが、頭皮が改善すると増毛効果が表われる、という頭皮の仕組みが影響していると考えられた。【００６７】
実施例６：改善効果と頭皮の組織像
本実施例では、頭皮が改善するに従ってどのような組織像の変化が認められるかを検討した。本実施例では、コラーゲンの増減および脂肪細胞の若返りを観察した。【００６８】
（１）コラーゲン像の変化
まず、III型以外のコラーゲンおよびIII型コラーゲンの増減を観察した。具体的には、頭皮の組織（表皮から頭蓋骨に向かう面）の切片を作製し、Picrosirius Red Stain Kit試薬(Polysciences, Inc., Cat#: 24901-250)を用いて製造者による説明書に従ってI型コラーゲンおよびIII型コラーゲンを染色した。I型コラーゲンは、黄色系に染色され、III型コラーゲンは緑色系に染色された。また、III型以外のコラーゲンは、黄色〜赤系で染色される。観察像はグレースケールでデジタル画像として保存し、Photoshop（商標）により黄色〜赤色系と緑色系をそれぞれ選択して画像として抽出し、その後、各ピクセルの明度からコラーゲン量（III型以外のコラーゲンとIII型コラーゲン）を推定した。【００６９】
その結果、ヒト検体（n=3）では、治療前には組織中にIII型コラーゲンが見出され、ＡＳＣ−ＣＭ０．４μｇ投与（月１回）の治療が進むに従ってIII型コラーゲンが減少する傾向が認められた。また治療に伴って、全体的にIII型以外のコラーゲンが増加する傾向が認められた。【００７０】
染色像の代表例（２名）を図５Ａおよび５Ｂに示す。図５Ａおよび５Ｂには、カラー写真とともに、黄色〜赤色（III型以外のコラーゲン）画像および緑色系（III型コラーゲン量）画像それぞれを、明度を基準としてグレースケール化した画像を示す。図５Ａは、治療開始４ヶ月後の患者の頭皮組織、図５Ｂは、治療開始６ヶ月後の患者の頭皮組織をそれぞれ示す。いずれのケースでも未治療側ではIII型以外のコラーゲンとIII型コラーゲンとが両方発現しているが、治療側ではIII型コラーゲンの量が減少した（約66％に減少）。III型以外のコラーゲンが増加していること（約113％に増加）が分かる。【００７１】
（２）脂肪細胞の若返り
次に、脂肪細胞の若返りを観察した。脂肪細胞は成長すると共に細胞質のほとんどが脂肪滴となって細胞質に脂肪を蓄え、肥大化する。従って、大きな細胞は成熟した古い細胞を意味し、小さな細胞は幼弱な新しい細胞であるとされている。より具体的には、ＡＳＣ−ＣＭを１回投与したウィスターラット（ｎ＝３）の背部皮膚の組織切片を観察して脂肪層における脂肪細胞の大きさの変化を確認した。脂肪細胞の画像を円に近似し、その直径に基づいてＳ、Ｍ、またはＬに分類した。その直径が２５μｍ以下の細胞を「Ｓ」とし、２５μｍを超え３６μｍ以下の細胞を「Ｍ」とし、３６μｍを超える細胞を「Ｌ」として集計した。結果は、図５Ｃに示される通りであった。【００７２】
図５Ｃに示されるように、ＡＳＣ−ＣＭ０．４μｇ投与群では、治療４週後において「Ｓ」の脂肪細胞の「Ｌ」に対する割合が顕著に増大していた。ＡＳＣ０．１μｇ投与群では、脂肪層における脂肪細胞の大きさに投与による変化は認められなかった。【００７３】
III型コラーゲンの減少、III型以外のコラーゲンの増加および小さな脂肪細胞の増加は、組織がＡＳＣ−ＣＭにより再生している可能性を示唆する結果である。【００７４】
実施例７：創傷治癒に対する効果
これまでの実施例により特定用量のＡＳＣ−ＣＭの投与により皮膚組織が再生する可能性が示唆された。本実施例では、ＡＳＣ−ＣＭを創傷部位に局所投与することによりＡＳＣ−ＣＭの組織修復能を検証した。【００７５】
創傷の作成：１２週齢ウィスターラット（ｎ＝３）の背部をバリカンで剃毛し、直径８ミリの円状皮膚全層欠損を頭側、尾側の左右にそれぞれ１つずつ作成し、１体に４つの皮膚全層欠損を作成した。
ＡＳＣ−ＣＭの投与方法：創部辺縁から４ミリ離れた場所（傷の上下左右）４箇所にタンパク質量換算で０．１μｇ、０．２μｇ、０．４μｇまたは０．８μｇのＡＳＣ−ＣＭを含む０．０２ｍｌを皮下注入した。【００７６】
創傷治癒の評点
５点：治癒
４点：創傷部位の面積の縮小率が７０％以上
３点：創傷部位の面積の縮小率が５０％以上７０％未満
２点：創傷部位の面積の縮小率が２０％以上５０％未満
１点：創傷部位の面積の縮小率が２０％未満【００７７】
結果は、上記評点を生理食塩水の評点で割って求めた。図６に示される通りであった。図６に示されるように、創傷治癒に関しては、ＡＳＣ−ＣＭ０．４μｇ投与群において顕著であった。また、ＡＳＣ−ＣＭ０．１μｇ投与群や０．８μｇ投与群では、創傷治癒の効果は、生理食塩水と同等であった。【００７８】
このことから、ＡＳＣ−ＣＭは、高用量で皮膚の改質効果を有すること、およびその効果はそれぞれ０．４μｇ投与群において特に効果が高いことが明らかになった。また、皮膚の改質効果は、増毛や毛質の改善のみならず、創傷治癒の改善に対しても有益であった。頭皮の改質が生じると考えられた濃度と、創傷治癒効果が高い濃度とが一致したことはとても興味深い結果であった。【００７９】
実施例８：ＡＳＣ−ＣＭ投与後の頭皮組織における組織常在型Ｍ２様マクロファージおよびＰＰＡＲγ陽性脂肪細胞の検出
末梢組織（特に皮膚や頭皮）において組織再生が生じる際に組織常在型Ｍ２様マクロファージの増加、またはＰＰＡＲγ陽性脂肪細胞の増加が生じることが報告されている（Festa E et al., Cell, 146: 761-71, 2011）。そこで、本実施例では、ＡＳＣ−ＣＭ投与後の頭皮組織において、組織常在型Ｍ２様マクロファージの増加、またはＰＰＡＲγ陽性脂肪細胞の増加が生じているかを調べた。また、頭皮における細胞増殖の活性化マーカーとしてＫｉ６７陽性細胞の増加が生じているかを確認した。組織常在型Ｍ２様マクロファージは、ＣＤ６８陽性細胞またはＣＤ１６３陽性細胞として検出した。【００８０】
複数の成人のＡＳＣ−ＣＭ０．４μｇ投与群（月１回投与）の頭皮の組織切片（頭皮表面から頭蓋骨骨膜上までを含む直径３ｍｍパンチの切片）を常法により固定し免疫組織学的染色を行った。経時的変化もみるため治療４ヶ月後および治療６ヶ月後に採取した。また、本実施例で染色に用いた一次抗体および二次抗体は以下の通りであった。【００８１】
【表４】
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【００８２】
また、免疫組織学的染色の結果、ＣＤ６８陽性細胞に関しては、未治療では３ｍｍパンチの切片全体で平均１８．５個(n=2)であったのに対して、治療開始４ヶ月後では２４個(n=1)、治療６ヶ月後では平均７６個(n=2)となり、いずれの患者でもＣＤ６８陽性細胞の増加が観察された。更にはＣＤ１６３陽性細胞に関しては、未治療では３ｍｍパンチの切片全体で平均３６個(n=2)であったのに対して、治療６ヶ月後では平均６９．５個(n=2)となり、いずれの患者でもＣＤ１６３陽性細胞の増加が観察された。また、ＰＰＡＲγ陽性細胞に関しては、未治療では３ｍｍパンチの切片全体で平均３３．５個(n=2)であったのに対し、治療６ヶ月後では平均８８．５個 (n=2)となり、いずれの患者でもＰＰＡＲγ陽性細胞の増加が観察された。
代表的な免疫組織学的染色の結果を図７に示す。図７では、茶色で示される陽性染色箇所に対して視認性を高める目的でそれぞれ矢尻を付した。【００８３】
組織常在型Ｍ２様マクロファージは、脂肪細胞や脂肪組織のメインテナンスを行っている細胞として報告された細胞である（Satoh T. et al., Nature, 495, 524-528, 2013）。この細胞の増加は、脂肪細胞のメインテナンスが活発化したことを示すと考えられる。また、ＰＰＡＲγは、脂肪細胞の前駆細胞に多く発現し、幼弱な脂肪細胞が産生されていることを示す。従って、ＰＰＡＲγ陽性脂肪細胞の増加と組織常在型Ｍ２様マクロファージの増加は、脂肪細胞の若返りとそのメインテナンスが活発化したことを意味し、組織の若返り（組織再生）を示唆するものとなる。【００８４】
驚くべきことに、組織常在型Ｍ２様マクロファージの増加およびＰＰＡＲγ陽性脂肪細胞の増加は、治療側での増加に遅れて、未治療側でも観察された。例えば、図７の一番下のパネルは、未治療側（頭部右半分）の免疫組織学的染色の結果である。図７の一番下のパネルでは、治療前の頭部右半分と比較して、組織常在型Ｍ２様マクロファージの増加およびＰＰＡＲγ陽性脂肪細胞の増加が認められ、治療の効果が治療しなかった領域にまで伝播することが分かる。また、治療側から離れた箇所でも上記増加は観察されたが、離れるほど増加は遅れて生じた。頭皮の改善効果は、治療した箇所において開始され、これが周囲に伝播し、周囲の頭皮改善効果に繋がることが示唆された。【００８５】
実施例９：頭皮の改善と髪質の改善効果との関係
上記実施例１では、毛髪本数の経時的変化を目視により観察したが、有意な効果を検出するには至らなかった。上記実施例２〜７によれば、ＡＳＣ−ＣＭ０．４μｇ投与群では、頭皮や皮膚の再生と改質が生じ、これにより髪質が向上する効果を生じたことが明らかとなった。
本実施例では、上記実施例の結果から、伸びる速度の速い髪の毛に着目し、ＡＳＣ−ＣＭ０．４μｇ投与群における治療効果を評価した。具体的には、３日で０．９ｍｍ以上伸びる毛髪を頭皮画像から抽出し、伸びた長さの総和を算出した。なお、成人の毛髪では１ヶ月で約１０ｍｍの割合（すなわち、３日で約１ｍｍの割合）で伸びることが知られている。
この目的のために、ＡＳＣ−ＣＭ０．４μｇ／１箇所を５回投与（月１回投与）した複数の成人の頭皮の一部を剃毛し、３日後に剃毛した部位の画像を撮影し、画像解析した。剃毛後、毛髪は平均的に０．４ｍｍの長さを有していた。以下では、剃毛３日後に１．４ｍｍ以上の長さを有する毛髪について、長さの総和を算出した。３名の患者（患者Ａ〜Ｃ）で計測を実施した。代表例として患者Ｃの計数結果を図８Ａに示す。【００８６】
また、３名の患者それぞれのデータを図８Ｂに示す。図８Ｂでは治療前と治療６ヶ月後（６Ｍ後）とが比較されている。図８Ｂではまた、剃毛３日後に１．４ｍｍ以上の長さを有する毛髪の長さの総和（１．４ｍｍ以上）と、剃毛３日後の１．４ｍｍ未満の毛髪を含む全ての毛髪の長さの総和（全体）とがそれぞれ示されている。図８Ｂに示されるように、患者Ａでは、３日後に１．４ｍｍ以上の長さを有する毛髪についての長さの総和が、治療前に１６１．０であったのが、治療後６ヶ月で１８２．４に増加した。患者Ｂでは、３日後に１．４ｍｍ以上の長さを有する毛髪についての長さの総和が、治療前に３４．８であったのが、治療後６ヶ月で５９．６に増加した。患者Ｃでは、３日後に１．４ｍｍ以上の長さを有する毛髪についての長さの総和が、治療前に１２９．１であったのが、治療後６ヶ月で１４２．０に増加した。
なお、図８Ｂに示されるように、剃毛３日後の全毛髪の長さの総和が、患者Ａでは、治療前に２２７．０であったのが、治療後６ヶ月で２７２．３に増加した。患者Ｂでは、治療前に７６．９であったのが、治療後６ヶ月で１２１．８に増加した。患者Ｃでは、治療前に２１９．１であったのが、治療後６ヶ月で２７２．２に増加した。
このように、ＡＳＣ−ＣＭ０．４μｇ投与では、頭皮改質とそれによる毛髪の伸長速度の改善が認められた。実施例１の結果と合わせて考察すると、ＡＳＣ−ＣＭ０．４μｇ投与の効果は、毛髪の本数よりも毛髪の伸長速度により強く表れたことが分かる。また、患者ＡおよびＣと比較して患者Ｂでは毛髪の伸長速度が全体的に低く、頭皮の状態がより悪いと考えられた。図８Ｂによれば、そのような悪い頭皮状態の患者に対しても、ＡＳＣ−ＣＭ０．４μｇ投与は、頭皮の改質効果を発揮したことが明らかである。【００８７】
また、３日後に１．４ｍｍ以上の長さの毛髪を調べると、伸びる速度が遅い毛髪（３日後に１．４ｍｍ未満の長さの毛髪）と比較して太いことが画像解析より明らかとなった。具体的には、剃毛３日後の長さが２．１〜２．２ｍｍの毛髪の太さは、２名の患者の平均で９７．４２μｍであったのに対して、伸びが１．４ｍｍ未満の毛髪の太さは、上記２名の患者の平均で７５．３９μｍであった。この結果から、ＡＳＣ−ＣＭ０．４μｇ投与では、伸長速度が速く、太い毛髪が増加することが明らかとなった。
ＡＳＣ−ＣＭ０．４μｇ投与では、毛髪のハリやコシの改善が観察された（毛髪のハリやコシが向上し、毛髪のボリューム増が観察された）が、このことと太い毛髪が増加することとは一貫する結果であった。
このように、頭皮の改質は、毛髪の伸長速度の改善と、太くコシとハリのある毛髪の増加に繋がっていた。
【要約】
本発明は、頭皮若しくは皮膚の改質、創傷治癒の促進、または毛髪を改質することに用いるための医薬組成物であって、脂肪幹細胞からの分泌物を有効成分として含み、頭皮または皮膚１箇所当りにタンパク質量換算で０．３〜０．６μｇの前記分泌物が投与される、医薬組成物を提供する。【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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