(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
0006592512.tif 000083
［式中：
２本の点線は２つの単結合または２つの二重結合のいずれかを意味し；Ｒ１ｂはその２本の点線が２つの単結合である時にだけ存在し；
Ｘは：
（ｉ）２本の点線が２つの単結合である場合に、ＣＲ２ａＲ２ｂまたはＮＲ２ｂであるか；あるいは
（ｉｉ）２本の点線が２つの二重結合である場合に、ＣＲ２ａまたはＮであり；
Ｑは：
【化２】
0006592512.tif 000084
であり；
Ｒ１ａは、Ｈ、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＣＨ３、−ＣＲ６ａＲ６ｂＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２Ｆ、−ＮＨＲ７または−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８ａＲ８ｂであり；
Ｒ１ｂは、存在する時には、Ｈまたは−ＣＨ３である：ただし、Ｒ１ａがＨであるならば、その時にはＲ１ｂもＨであり；
Ｒ２ａは、Ｈ、ＦまたはＣｌである：ただし、Ｒ１ａがＨ以外の基であるならば、その時にはＲ２ａはＨであり；
Ｒ２ｂは、存在する時には、Ｒ２ａと同じであり；
Ｒ３は、Ｆ、Ｃｌ、−ＣＮまたは−ＣＨ３であり；
Ｒ４は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、−ＯＣＨ３または−ＯＣＦ３であり；
Ｒ５は、−ＣＮまたは−Ｃ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２であり；
Ｒ６ａおよびＲ６ｂは、独立して、Ｈまたは−ＣＨ３であり；
Ｒ７はＣ１−４アルキルであり；および
Ｒ８ａおよびＲ８ｂは、独立して、Ｈまたは−ＣＨ３である］
で示される化合物またはその塩。
【請求項２】
Ｘが
（ｉ）２本の点線が２つの単結合である場合に、ＣＲ２ａＲ２ｂであるか；または
（ｉｉ）２本の点線が２つの二重結合である場合に、ＣＲ２ａである、請求項１に記載の化合物またはその塩。
【請求項３】
Ｘが
（ｉ）２本の点線が２つの単結合である場合に、ＮＲ２ｂであるか；または
（ｉｉ）２本の点線が２つの二重結合である場合に、Ｎである、請求項１に記載の化合物またはその塩。
【請求項４】
Ｒ１ａがＨ、−ＣＦ３または−Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨであり；
Ｒ１ｂがＨであり；
Ｒ２ａがＨまたはＦである：ただし、Ｒ１ａがＨ以外の基であるならば、その時にはＲ２ａはＨであり；
Ｒ２ｂが、存在する時には、Ｒ２ａと同じであり；
Ｒ３がＦであり；および
Ｒ４がＨである、請求項１に記載の化合物またはその塩。
【請求項５】
構造式（Ｉａ）：
【化３】
0006592512.tif 000085
で示される、請求項１に記載の化合物またはその塩。
【請求項６】
構造式（Ｉｂ）：
【化４】
0006592512.tif 000086
で示される、請求項１に記載の化合物またはその塩。
【請求項７】
Ｑが
【化５】
0006592512.tif 000087
である、請求項１に記載の化合物またはその塩。
【請求項８】
Ｑが
【化６】
0006592512.tif 000088
である、請求項１に記載の化合物またはその塩。
【請求項９】
Ｑが
【化７】
0006592512.tif 000089
である、請求項１に記載の化合物またはその塩。
【請求項１０】
（ＲＳ）−５−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３,３,６−トリフルオロ−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド（１）；（ＲＳ）−４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（２）；（ＲＳ）−４−（４−アクリロイル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１,４］オキサジン−８−イル）−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（３）；（ＲＳ）−４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−フルオロ−７−（トリフルオロメチル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（４）；４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（単一エナンチオマー）（５）；５−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３,３,６−トリフルオロ−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド（単一エナンチオマー）（６）；４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−フルオロ−７−（トリフルオロメチル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（単一エナンチオマー）（７）；４−（４−アクリロイル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１,４］オキサジン−８−イル）−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（単一エナンチオマー）（８）；５−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−６−フルオロ−２−（Ｓ）−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド、単一ジアステレオマー（９）；５−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−６−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド（単一ホモキラルジアステレオマー）（１０および１１）；４−（５−アクリロイル−２,３,４,５−テトラヒドロベンゾ［ｂ］［１,４］オキサゼピン−９−イル）−３−フルオロ−７−（トリフルオロメチル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド、単一エナンチオマー性アトロプ異性体（１２）；（ＲＳ）−４−（４−アクリロイル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１,４］チアジン−８−イル）−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（１３）；４−（４−アクリロイル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１,４］チアジン−８−イル）−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（単一エナンチオマー）（１４）；４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−クロロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（２４）；４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−フルオロ−７−（２−ヒドロキシエチル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（ラセミ体）（２５）；４−��２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−フルオロ−７−（２−フルオロエチル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（ラセミ体）、（２６）；４−（２−シアノ−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−フルオロ−７−（２−ヒドロキシエチル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（ラセミ体）（２７）；４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−フルオロ−Ｎ７,Ｎ７−ジメチル−９Ｈ−カルバゾール−１,７−ジカルボキシアミド（ラセミ体）（２８）；４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−６−クロロ−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（ラセミ体）（２９）；４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（ラセミ体）（３０）；９−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−８−フルオロ−５Ｈ−ピリド［４,３−ｂ］インドール−６−カルボキシアミド（ラセミ体）（３１）；５−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−６−クロロ−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド（ラセミ体）（３２）；または９−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−８−クロロ−２,３,４,５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４,３−ｂ］インドール−６−カルボキシアミド（ラセミ体）（３３）である、請求項１に記載の化合物またはその塩。
【請求項１１】
請求項１−８のいずれか一項に記載の化合物、および医薬的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項１２】
自己免疫疾患または慢性炎症性疾患の治療用医薬の製造における請求項１−８のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項１３】
自己免疫疾患または慢性炎症性疾患の治療における療法にて用いるための請求項１−８のいずれか一項に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本願は、その内容がそのまま本願明細書に組み込まれる、２０１４年１０月２４日出願の米国出願番号第６２／０６８,２４４号の利益を主張する。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、一般に、ブルトン（Bruton’s）チロシンキナーゼ（Ｂｔｋ）およびＩｔｋなどの他のＴｅｃファミリーキナーゼの調節を含む、キナーゼ阻害剤として有用な三環式化合物に関する。本明細書では、三環式化合物、かかる化合物を含む組成物、およびそれらの使用方法が提供される。本発明はさらに、キナーゼ調節と関連付けられる症状の治療に有用である本発明の少なくとも１つの化合物を含有する医薬組成物に、ならびに哺乳動物においてＢｔｋおよびＩｔｋなどの他のＴｅｃファミリーキナーゼを含むキナーゼの活性を阻害する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
ヒト酵素の最大ファミリーであるタンパク質キナーゼは５００種のタンパク質をはるかに越えて包含する。ＢｔｋはチロシンキナーゼのＴｅｃファミリーの一員であり、初期Ｂ細胞の発生、ならびに成熟Ｂ細胞の活性化、シグナル伝達および生存における調節物質である。
【０００４】
Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）を介するＢ細胞のシグナル伝達は広範囲に及ぶ生物学的産出をもたらし、それらは同様にしてＢ細胞の発生段階に依存する。ＢＣＲシグナルの程度および継続時間は正確に調節されなければならない。異常なＢＣＲ調節のシグナル伝達はＢ細胞の制御されない活性化および／または病原性自己抗体の形成（多発性自己免疫および／または炎症性疾患に至る）を惹起し得る。Ｂｔｋのヒトでの変異はＸ連鎖無ガンマグロブリン血症（ＸＬＡ）をもたらす。この疾患は、Ｂ細胞の成熟の損傷、イムノグロブリン産生の低下、Ｔ細胞非依存性免疫応答の低下、およびＢＣＲ刺激に対するカルシウムシグナルの持続の著しい低下に付随する。
【０００５】
Ｂｔｋのアレルギー障害および／または自己免疫疾患および／または炎症性疾患における役割を示す証拠が、Ｂｔｋ欠損マウス実験にて確立された。例えば、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）の標準的ネズミ前臨床性実験において、Ｂｔｋの欠損が疾患の進行にて著しい改善をもたらすことがわかった。その上、Ｂｔｋ欠損マウスもまた、コラーゲン誘発性関節炎の発症に対して耐性があり、スタフィロコッカス誘発性関節炎に対してそれほど感受的でない。
【０００６】
多数の証拠が自己免疫および／または炎症性疾患の病因におけるＢ細胞および体液免疫系の役割を支持する。Ｂ細胞を枯渇させるのに開発されたリツキサン（RITUXAN）（登録商標）などのタンパク質ベースの治療薬が多くの自己免疫および／または炎症性疾患を治療するための重要な治療法を示す。Ｂｔｋの役割がＢ細胞の活性化にあるため、Ｂｔｋの阻害剤はＢ細胞介在の病原性活性（自己抗体産生など）の阻害剤として有用であり得る。
【０００７】
Ｂｔｋは脂肪細胞および単細胞でも発現され、これらの細胞の機能に重要であることが明らかにされた。例えば、マウスでのＢｔｋの欠損はＩｇＥの損傷を介在する脂肪細胞の活性化（ＴＮＦ−アルファおよび他の炎症性チロシン放出の著しい低下）と関連付けられ、ヒトでのＢｔｋの欠損は単細胞の活性によりＴＮＦ−アルファ産生の多いな減少と関連付けられる。
【０００８】
かくして、Ｂｔｋ活性の阻害は、アレルギー障害および／または自己免疫および／または炎症性疾患（ＳＬＥ、関節リウマチ、多発性血管炎、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、重症筋無力症、アレルギー性鼻炎、多発性硬化症（ＭＳ）、移植片拒絶反応、Ｉ型糖尿病、膜性腎炎、炎症性腸疾患、自己免疫溶血性貧血、自己免疫甲状腺炎、風邪および温暖凝集素症、エバンス症候群、溶血性尿毒症症候群／血栓性血小板減少性紫斑病（ＨＵＳ／ＴＴＰ）、サルコイドーシス、シェーグレン症候群、末梢性ニューロパシー（例、ギラン・バレー症候群）、尋常性天疱瘡および喘息を含むが、これらに限定されない）の治療に有用であり得る。
【０００９】
加えて、Ｂｔｋはある種のＢ細胞がんにてＢ細胞の生存を制御するのに一の役割を果たすと報告されている。例えば、ＢＣＲ−Ａｂｌ−陽性のＢ細胞急性リンパ芽球性白血病細胞の生存に重要であることが知られている。Ｂｔｋ活性のこのような阻害はＢ細胞リンパ腫および白血病の治療に有用であり得る。
【００１０】
酵素と反応して共有結合を形成することによりその酵素を阻害する化合物は、そのような共有結合を形成しない化合物と比べて利点を提供し得る。（例えば、Liu,Q.ら、Chem. Biol., 20: 146（2013）；Barf,T.ら、J. Med. Chem., 55: 6243（2012）；Kalgutkar,A.ら、Expert Opin. Drug Discov., 7: 561（2012）；およびGaruti,L.ら、Curr. Med. Chem., 18: 2981（2011）；およびそれらの中で引用されている参考文献を参照のこと）。共有結合を形成しない化合物は酵素から解離し、その酵素をその結合よりもたらされる阻害から免除され得る。かかる可逆的阻害は、阻害剤によって十分な酵素占有状態の方向に結合平衡を動かし、有用な酵素阻害を達成するのに阻害化合物の濃度を相対的に高くかつ持続的とすることが必要とされる可能性がある。化合物の濃度が高ければ高いほど、より高い用量の化合物をかかる阻害を必要とする哺乳動物に投与することが要求され、より高い濃度ではその阻害剤は、他の標的としない酵素を阻害するために、望ましくない作用を有し得る。そのような的外れの阻害は毒性を包含しうる。加えて、阻害化合物は、標的酵素から解離した後、代謝作用および／または排泄作用により体内から除かれ、標的酵素の阻害を達成するのに利用可能な濃度が低下するため、頻繁に投与することが必要とされるかもしれない。
【００１１】
対照的に、その標的酵素と共有結合を形成する阻害剤はその酵素を不可逆的に阻害する。その不可逆的阻害は、解離するには共有結合の切断が必要とされるため、阻害剤に遅いかまたは取るに足らないかのいずれかの解離をもたらすこととなる。かかる共有結合性阻害剤のその標的とする酵素への親和性が他の標的としない酵素への親和性と比べて十分に高ければ、可逆的阻害で必要とされる濃度と比べて、有意に低い濃度の阻害剤で有用な阻害を得ることができる。濃度を下げることで、望ましくない的外れの阻害の可能性および毒性の可能性を減らすことができる。また、共有結合性阻害剤は標的酵素と基本的には不可逆的に結合しうるため、結合していない阻害剤が代謝作用および／または排泄により体内から除去されると、たとえ有用な酵素阻害が維持されるとしても、阻害剤の遊離（非結合）濃度は極端に低くなり得る。このことは望ましくない作用の可能性を減少させ得る。加えて、酵素は不可逆的に阻害され得るため、有用な阻害を達成するのに必要とされる投与の頻度を減らすことができる。
【００１２】
特定の反応性官能基を標的酵素と良好な親和性のある化合物に付着させることができ、それにより標的酵素にある官能基と共有結合させることができるであろう。例えば、ケトン、アミド、スルホンアミドもしくはピリジン環などの電子求引性ヘテロ環式環などの電子求引基に結合したビニルまたはアセチレン基などの求電子基は、システイン残基のチオールまたはチオラート基などの、標的酵素に存在する求核基と反応し、共有結合を形成しうる。かかる反応は正常な生理学的条件下では本質的に不可逆的であり得る。かかる反応が達成され得るためには、阻害剤としての化合物は標的酵素と結合する必要があり、攻撃性求核基との好ましい相互作用を可能とするように結合した求電子基を正確な空間配置で示さなければならない。配置が正確でなければ、共有結合は容易に形成されず、望ましい不可逆的阻害は達成されない可能性がある。この場合、化合物は可逆的阻害剤のように行動し、不可逆的阻害の利益は認識されないかもしれない。さらに、結合した阻害剤にある求電子基の配置が標的酵素の求核基との反応に適さないならば、該阻害剤は標的酵素からの解離能を有し、その結果として、より高い濃度の阻害剤を必要とし、反応性求電子基が他の標的としない求核基と反応し、毒性などの望ましくない作用を惹起しうるであろう。
【００１３】
米国特許第８,０８４,６２０号および第８,６８５,９６９号は、Ｂｔｋおよび他のＴｅｃファミリーキナーゼの調節を含め、キナーゼ阻害剤として有用な三環式カルボキシアミド化合物を開示する。
【００１４】
タンパクキナーゼの調節を含む処理によって利益になると思われる多くの症状を鑑みれば、Ｂｔｋなどのタンパクキナーゼの調節能を有する新規な化合物およびこれらの化合物の使用方法が多種多様な患者に相当な治療的有用性を提供することは明らかである。
【００１５】
Ｂｔｋ阻害剤として有用な化合物に対する要求が今尚ある。さらには、より低い用量で投与され得るか、より低い濃度で効果的である、Ｂｔｋ阻害剤として有用な化合物に対する要求が今尚存在する。さらには、Ｂｔｋ阻害剤としての改善された効能と、ラモス（Ramos）ＦＬＩＰＲアッセイにて改善された効能とを合わせて有する化合物に対する要求が尚も存在する。
【００１６】
本願発明者らはＢｔｋ阻害剤としての活性を有する強力な化合物を見出した。これらの化合物は、その薬物有用性（drugability）を考慮する上で重要である、望ましい安定性、生物学的利用能、治療指数および毒性値を有する治療薬として有用である。
【発明の概要】
【００１７】
本発明は、Ｂｔｋの阻害剤として有用であり、増殖性疾患、アレルギー性疾患および自己免疫疾患および炎症性疾患の治療に有用である、三環式化合物またはそのプロドラッグを提供する。
本発明はまた、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物および医薬的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
【００１８】
本発明はまた、Ｂｔｋ活性を阻害する方法であって、その阻害を必要とする哺乳動物に少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物を投与することを含む方法を提供する。
本発明はまた、アレルギー障害および／または自己免疫および／または炎症性疾患の治療方法であって、その治療を必要とする哺乳動物に少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物を投与することを含む方法を提供する。
【００１９】
本発明はまた、がんなどの増殖性疾患の治療方法であって、その治療を必要とする哺乳動物に少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物を投与することを含む方法を提供する。
本発明はまた、Ｂｔｋ活性と関連付けられる疾患または障害の治療方法であって、その治療を必要とする哺乳動物に少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物を投与することを含む方法を提供する。
【００２０】
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物を製造するための方法および中間体を提供する。
本発明はまた、治療に用いるための式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００２１】
本発明はまた、増殖性疾患、アレルギー性疾患および自己免疫疾患および炎症性疾患などのＢｔｋ関連性症状の治療または予防用医薬を製造するための式（Ｉ）の化合物の使用を提供する。
本発明はまた、がんの治療用医薬を製造するための式（Ｉ）の化合物の使用を提供する。
【００２２】
式（Ｉ）の化合物および式（Ｉ）の化合物を含む組成物は、Ｂｔｋ関連の種々の症状を治療、予防または治癒するのに使用されてもよい。これらの化合物を含む医薬組成物は、増殖性疾患、アレルギー性疾患および自己免疫疾患および炎症性疾患などの種々の治療分野における疾患または障害の進行を処理し、防止し、または遅らせるのに有用である。
【００２３】
本発明のこれらの特徴および他の特徴は、読み進むにつれて、拡張された形態で記載されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
本発明を下記の添付した図面を参考にして説明する。
【図１】実施例５（左側）、実施例１２（中央）および実施例８（右側）の絶対立体化学を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
本発明の第一の態様は、式（Ｉ）：
【化１】
0006592512.tif 000002
［式中：
２本の点線は２つの単結合または２つの二重結合のいずれかを意味し；Ｒ１ｂはその２本の点線が２つの単結合である時にだけ存在し；
Ｘは：
（ｉ）２本の点線が２つの単結合である場合に、ＣＲ２ａＲ２ｂまたはＮＲ２ｂであるか；あるいは
（ｉｉ）２本の点線が２つの二重結合である場合に、ＣＲ２ａまたはＮであり；
Ｑは：
【化２】
0006592512.tif 000003
であり；
Ｒ１ａは、Ｈ、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＣＨ３、−ＣＲ６ａＲ６ｂＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２Ｆ、−ＮＨＲ７または−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８ａＲ８ｂであり；
Ｒ１ｂは、存在する時には、Ｈまたは−ＣＨ３である：ただし、Ｒ１ａがＨであるならば、その時にはＲ１ｂもＨであり；
Ｒ２ａは、Ｈ、ＦまたはＣｌである：ただし、Ｒ１ａがＨ以外の基であるならば、その時にはＲ２ａはＨであり；
Ｒ２ｂは、存在する時には、Ｒ２ａと同じであり；
Ｒ３は、Ｆ、Ｃｌ、−ＣＮまたは−ＣＨ３であり；
Ｒ４は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、−ＯＣＨ３または−ＯＣＦ３であり；
Ｒ５は、−ＣＮまたは−Ｃ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２であり；
Ｒ６ａおよびＲ６ｂは、独立して、Ｈまたは−ＣＨ３であり；
Ｒ７はＣ１−４アルキルであり；および
Ｒ８ａおよびＲ８ｂは、独立して、Ｈまたは−ＣＨ３である］
で示される化合物またはその塩を提供する。
【００２６】
本発明の第二の態様は、式（ＩＩ）：
【化３】
0006592512.tif 000004
［式中：
２本の点線は２つの単結合または２つの二重結合のいずれかを意味し；Ｒ１ｂとＲ２ｂはその２本の点線が２つの単結合である時にだけ存在し；
Ｑは：
【化４】
0006592512.tif 000005
であり；
Ｒ１ａは、Ｈ、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＣＨ３、−ＣＲ６ａＲ６ｂＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＯＨ、−ＮＨＲ７または−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８ａＲ８ｂであり；
Ｒ１ｂは、存在する時には、Ｈまたは−ＣＨ３である：ただし、Ｒ１ａがＨであるならば、その時にはＲ１ｂもＨであり；
Ｒ２ａは、ＨまたはＦである：ただし、Ｒ１ａがＨ以外の基であるならば、その時にはＲ２ａはＨであり；
Ｒ２ｂは、存在する時には、Ｒ２ａと同じであり；
Ｒ３は、Ｆ、Ｃｌ、−ＣＮまたは−ＣＨ３であり；
Ｒ４は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、−ＯＣＨ３または−ＯＣＦ３であり；
Ｒ５は−Ｃ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２であり；
Ｒ６ａおよびＲ６ｂは、独立して、Ｈまたは−ＣＨ３であり；
Ｒ７はＣ１−４アルキルであり；および
Ｒ８ａおよびＲ８ｂは、独立して、Ｈまたは−ＣＨ３である］
で示される化合物またはその塩を提供する。
【００２７】
１の実施態様は、式（Ｉ）の化合物またはその塩であって、２本の点線が２つの二重結合であり、ＸがＣＲ２ａである化合物を提供する。この実施態様の化合物は、式（Ｉａ）：
【化５】
0006592512.tif 000006
［式中：Ｑ、Ｒ１ａ、Ｒ２ａおよびＲ３は第一の態様または第二の態様にて定義されるとおりである］
で示される構造を有する。
【００２８】
１の実施態様は、式（Ｉ）の化合物またはその塩であって、２本の点線が２つの単結合を意味し、ＸがＣＲ２ａＲ２ｂである化合物を提供する。この実施態様の化合物は、式（Ｉｂ）：
【化６】
0006592512.tif 000007
［式中、Ｑ、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂおよびＲ３は第一の態様または第二の態様にて定義されるとおりである］
で示される構造を有する。
【００２９】
１の実施態様は、式（Ｉ）の化合物またはその塩であって、２本の点線が２つの二重結合を意味し、ＸがＮである化合物を提供する。この実施態様の化合物は、式（Ｉｃ）：
【化７】
0006592512.tif 000008
［式中、Ｑ、Ｒ１ａおよびＲ３は第一の態様にて定義されるとおりである］
で示される構造を有する。
【００３０】
１の実施態様は、式（Ｉ）の化合物またはその塩であって、２本の点線が２つの単結合を意味し、ＸがＮＲ２ａである化合物を提供する。この実施態様の化合物は、式（Ｉｄ）：
【化８】
0006592512.tif 000009
［式中、Ｑ、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２ａおよびＲ３は第一の態様にて定義されるとおりである］
で示される構造を有する。
【００３１】
Ｒ１ａがＨ以外の基である、式（Ｉｂ）で示されるテトラヒドロカルバゾール化合物および式（Ｉｄ）で示される化合物もまた、Ｒ１ａが結合する炭素原子にキラル中心があり、そのためにこのキラル中心でＳ−およびＲ−異性体として存在し得る。これらの異性体は分離可能であって、安定している。１の実施態様は、そのような式（Ｉｂ）の化合物をＲ１ａが結合する炭素にキラル中心のあるＳ−異性体として提供する。１の実施態様は、そのような式（Ｉｂ）の化合物をＲ１ａが結合する炭素にキラル中心のあるＲ−異性体として提供する。もう一つ別の実施態様は、そのような式（Ｉｄ）の化合物をＲ１ａが結合する炭素にキラル中心のあるＳ−異性体として提供する。さらなる実施態様は、そのような式（Ｉｄ）の化合物をＲ１ａが結合する炭素にキラル中心のあるＲ−異性体として提供する。
【００３２】
アトロプ異性体は単結合軸の回りの束縛回転よりもたらされる立体異性体であり、その回転障壁は個々の回転異性体の単離を可能とするほどに十分に高い。（LaPlanteら、J. Med. Chem., 54：7005 （2011））。Ｒ３が水素以外の基であり、Ｑが水素以外のＲ４で置換されたフェニル、置換１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル、置換３,４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１,４］オキサジン−８−イル、２,３,４,５−テトラヒドロ［ｂ］［１,４］オキサゼピン−９−イルまたは置換イソインドリン−４−イルである、式（Ｉ）の化合物は、三環式テトラヒドロカルバゾール／カルバゾールと、Ｑ基との間の結合に立体軸がある。この結合により接続される環での置換が非対称性を有するため、およびこの結合の回りで立体障害により惹起される回転の制限のため、式（Ｉ）のそのような化合物は回転異性体を形成しうる。仮に回転エネルギーの障壁が十分に高ければ、この結合の回りで束縛回転がゆっくりとした速度で生じ、その速度は分離されるアトロプ異性体を異なる化合物として単離させるのに十分である。かくして、式（Ｉ）のこれらの化合物は、キラル固定相でのクロマトグラフィーなどの特定の環境下で、個々のアトロプ異性体に分離され得る２つの回転異性体を形成しうる。式（Ｉ）のかかる化合物は、２つのアトロプ異性体の混合物として、または単一のアトロプ異性体として提供され得る。式（Ｉ）のかかる化合物は、分離可能であり、外界温度および生理的温度で溶液の状態にて安定していることが判明した。アトロプ異性体の絶対空間配置は単結晶Ｘ線結晶構造解析により決定され得る。式（Ｉ）のこれらの化合物は、個々のアトロプ異性体として、あるいは式（Ｉ）の２つのアトロプ異性体をある割合で含む混合物として提供され得る。
【００３３】
１の実施態様は式（Ｉ）の化合物またはその塩を提供し、それでは１種類だけのアトロプ異性体が提供されるか、１種だけのアトロプ異性体を少量の他のアトロプ異性体と混合して提供される。絶対配置が帰属されていない場合には、その得られるアトロプ異性体は、特定の条件下にあるキラル固定相でクロマトグラフィーに付す間に他のアトロプ異性体との関連で溶出する順序で特定され得る。
【００３４】
式（Ｉ）の化合物はアトロプ異性体であって、その中で式（Ｉ）の各アトロプ異性体の化合物はその相補的アトロプ異性体を実質的に含まない形態にて提供され得る。本明細書中で使用される場合、「実質的に含まない」なる語は、少なくとも９５％のアトロプ異性純度で、好ましくは９９％のアトロプ異性純度で、より好ましくは少なくとも９９.５％のアトロプ異性純度で提供される式（Ｉ）の化合物をいう。
【００３５】
１の実施態様は、式（Ｉ）、式（Ｉａ）または式（Ｉｂ）の化合物あるいはその塩であって、Ｒ１ａがＨ、−ＣＦ３または−Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨであり；Ｒ１ｂがＨであり；Ｒ２ａがＨまたはＦである：ただし、Ｒ１ａがＨ以外の基であるならば、その場合Ｒ２ａはＨであり；Ｒ２ｂが、存在する時には、Ｒ２ａと同じであり；Ｒ３がＦであり；Ｒ４がＨであり；Ｒ５が−Ｃ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２であって；Ｑが第１の態様にて定義されるとおりである、化合物を提供する。
【００３６】
１の実施態様は、式（Ｉ）、式（Ｉａ）または式（Ｉｂ）の化合物あるいはその塩であって、Ｒ１ａがＨ、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＣＲ６ａＲ６ｂＯＨまたは−ＮＨＲ７であり；Ｒ２ａがＨであり；Ｒ３がＦまたはＣｌであり；Ｒ４がＨ、Ｆ、Ｃｌまたは−ＯＣＨ３であり；Ｒ５が−Ｃ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２であり；Ｒ６ａがＨまたは−ＣＨ３であり；Ｒ６ｂがＨまたは−ＣＨ３であり；Ｒ７がＣ２−３アルキルであって；Ｑが第１の態様にて定義されるとおりである、化合物を提供する。
【００３７】
１の実施態様は、式（Ｉ）、式（Ｉａ）または式（Ｉｂ）の化合物あるいはその塩であって、Ｑが
【化９】
0006592512.tif 000010
であり；
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が第２の態様にて定義されるとおりである、化合物を提供する。この実施態様には、Ｒ１ａがＨまたは−ＣＦ３であり、Ｒ３がＦである化合物が含まれる。また、この実施態様には、Ｒ１ａがＨまたは−ＣＦ３であり；Ｒ２ａがＨであり；Ｒ３がＦであり；Ｒ４がＨである、式（Ｉａ）の化合物も含まれる。
【００３８】
１の実施態様は、式（Ｉ）、式（Ｉａ）または式（Ｉｂ）の化合物あるいはその塩であって、Ｑが
【化１０】
0006592512.tif 000011
であり；
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が第２の態様にて定義されるとおりである、化合物を提供する。この実施態様には、Ｒ１ａがＨまたは−ＣＦ３であり、Ｒ３がＦである、化合物が含まれる。この実施態様には、Ｒ１ａがＨまたは−ＣＦ３であり；Ｒ２ａがＨであり；Ｒ３がＦであり；Ｒ４がＨである、式（Ｉａ）の化合物も含まれる。
【００３９】
１の実施態様は、式（Ｉｂ）の化合物あるいはその塩であって、Ｑが
【化１１】
0006592512.tif 000012
であり；
Ｒ１ａがＨ、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＣＲ６ａＲ６ｂＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８ａＲ８ｂであり；Ｒ１ｂがＨであり；Ｒ２ａがＨまたはＦである：ただし、Ｒ１ａがＨ以外の基であるならば、その場合Ｒ２ａはＨであり；Ｒ２ｂがＨまたはＦである：ただし、Ｒ２ａとＲ２ｂは同じであり；Ｒ３がＦまたはＣｌであり；Ｒ４がＨ、Ｆ、Ｃｌまたは−ＯＣＨ３であって；Ｒ８ａおよびＲ８ｂが、各々、−ＣＨ３である、化合物を提供する。
【００４０】
１の実施態様は、式（Ｉ）、式（Ｉａ）または式（Ｉｂ）の化合物あるいはその塩であって、Ｑが
【化１２】
0006592512.tif 000013
であり；
Ｒ１ａがＨ、−ＣＦ３または−Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨであり；Ｒ１ｂ、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が第２の態様にて定義されるとおりである、化合物を提供する。この実施態様には、Ｒ３がＦであり、Ｒ４がＨである、化合物も含まれる。
【００４１】
１の実施態様は、式（Ｉ）、式（Ｉｃ）または式（Ｉｄ）あるいはその塩であって、Ｑが
【化１３】
0006592512.tif 000014
であり；
Ｒ１ａがＨ、−ＣＦ３または−Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨであり；Ｒ１ｂ、Ｒ２ｂ、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が第１の態様にて定義されるとおりである、化合物を提供する。この実施態様には、Ｒ３がＦまたはＣｌであり；Ｒ４がＨである化合物も含まれる。Ｒ２ｂがＨである化合物も含まれる。
【００４２】
１の実施態様は、式（Ｉ）、式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）、式（Ｉｃ）または式（Ｉｄ）の化合物あるいはその塩であって、Ｒ３がＦ、Ｃｌまたは−ＣＮであり；Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ４、Ｒ５およびＱが第１の態様にて定義されるとおりである、化合物を提供する。この実施態様には、Ｒ３がＦまたは−ＣＮである化合物が含まれる。この実施態様には、Ｒ３が−ＣＮである化合物も含まれる。
【００４３】
１の実施態様は、式（Ｉ）、式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）、式（Ｉｃ）または式（Ｉｄ）の化合物あるいはその塩であって、Ｒ３がＦまたはＣｌであり；Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ４、Ｒ５およびＱが第１の態様にて定義されるとおりである化合物を提供する。この実施態様には、Ｒ３がＦである化合物が含まれる。この実施態様には、Ｒ３がＣｌである化合物も含まれる。
【００４４】
１の実施態様は、式（Ｉ）、式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）、式（Ｉｃ）または式（Ｉｄ）の化合物あるいはその塩であって、Ｒ３がＣｌ、−ＣＮまたは−ＣＨ３であり；Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ４、Ｒ５およびＱが第１の態様にて定義されるとおりである化合物を提供する。この実施態様には、Ｒ３が−ＣＮまたは−ＣＨ３である化合物が含まれる。この実施態様には、Ｒ３が−ＣＨ３である化合物も含まれる。
【００４５】
１の実施態様は、式（Ｉ）、式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）、式（Ｉｃ）または式（Ｉｄ）の化合物あるいはその塩であって、Ｒ５が−Ｃ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨ２であり；Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ３、Ｒ４およびＱが第１の態様にて定義されるとおりである化合物を提供する。この実施態様には、Ｒ３がＦまたは−Ｃｌである化合物が含まれる。ＸがＣＲ２ａＲ２ｂまたはＣＲ２ａである化合物も含まれる。
【００４６】
１の実施態様は、式（Ｉ）、式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）、式（Ｉｃ）または式（Ｉｄ）の化合物あるいはその塩であって、Ｒ５が−ＣＮであり；Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＱが第１の態様にて定義されるとおりである化合物を提供する。この実施態様には、Ｒ３がＦまたは−Ｃｌである化合物が含まれる。ＸがＣＲ２ａＲ２ｂまたはＣＲ２ａである化合物も含まれる。
【００４７】
１の実施態様は、式（Ｉ）、式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）、式（Ｉｃ）または式（Ｉｄ）の化合物あるいはその塩であって、Ｒ１ａが−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＣＨ３、−ＣＲ６ａＲ６ｂＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２Ｆ、−ＮＨＲ７または−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８ａＲ８ｂであり；Ｒ１ｂ、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６ａ、Ｒ６ｂ、Ｒ７、Ｒ８ａ、Ｒ８ｂおよびＱが第１の態様にて定義されるとおりである化合物を提供する。この実施態様には、Ｒ１ａが−ＣＮ、−ＣＦ３または−ＣＨ３である化合物が含まれる。この実施態様には、Ｒ１ａが−Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２Ｆまたは−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）２である化合物も含まれる。
【００４８】
１の実施態様は、式（Ｉ）の化合物またはその塩であって、（ＲＳ）−５−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３,３,６−トリフルオロ−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド（１）；（ＲＳ）−４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（２）；（ＲＳ）−４−（４−アクリロイル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１,４］オキサジン−８−イル）−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（３）；（ＲＳ）−４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−フルオロ−７−（トリフルオロメチル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（４）；４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（単一エナンチオマー）（５）；５−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３,３,６−トリフルオロ−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド（単一エナンチオマー）（６）；４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−フルオロ−７−（トリフルオロメチル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（単一エナンチオマー）（７）；４−（４−アクリロイル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１,４］オキサジン−８−イル）−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（単一エナンチオマー）（８）；５−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−６−フルオロ−２−（Ｓ）−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド、単一ジアステレオマー（９）；５−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−６−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド（単一ホモキラルジアステレオマー）（１０および１１）；４−（５−アクリロイル−２,３,４,５−テトラヒドロベンゾ［ｂ］［１,４］オキサゼピン−９−イル）−３−フルオロ−７−（トリフルオロメチル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド、単一エナンチオマー性アトロプ異性体（１２）；（ＲＳ）−４−（４−アクリロイル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１,４］チアジン−８−イル）−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（１３）；
【００４９】
４−（４−アクリロイル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１,４］チアジン−８−イル）−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（単一エナンチオマー）（１４）；４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−クロロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（２４）；４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−フルオロ−７−（２−ヒドロキシエチル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（ラセミ体）（２５）；４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−フルオロ−７−（２−フルオロエチル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（ラセミ体）、（２６）；４−（２−シアノ−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−フルオロ−７−（２−ヒドロキシエチル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（ラセミ体）（２７）；４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−フルオロ−Ｎ７,Ｎ７−ジメチル−９Ｈ−カルバゾール−１,７−ジカルボキシアミド（ラセミ体）（２８）；４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−６−クロロ−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（ラセミ体）（２９）；４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（ラセミ体）（３０）；９−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−８−フルオロ−５Ｈ−ピリド［４,３−ｂ］インドール−６−カルボキシアミド（ラセミ体）（３１）；５−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−６−クロロ−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド（ラセミ体）（３２）；or ９−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−８−クロロ−２,３,４,５−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［４,３−ｂ］インドール−６−カルボキシアミド（ラセミ体）（３３）を提供する。
【００５０】
本発明は、その精神または本質的特性より逸脱することなく、他の特異的形態にて具現化され得る。本発明は本明細書に記載の発明の態様および／または実施態様のすべての組み合わせを包含する。本発明のあらゆるすべての実施態様は他のいずれの実施態様とも組み合わされて新たな実施態様を記載し得ると理解される。実施態様の個々の要素は、各々、いずれかの実施態様からの他のあらゆる要素と組み合わされて、新たな実施態様を記載するとも理解されるべきである。
【００５１】
定義
本発明の特徴および利点は、以下の詳細な記載を読むことで、当業者によってさらに容易に理解されるであろう。明瞭にするのに、別個の実施態様に関連して前後に記載される本発明の特定の特徴を合わせて一の実施態様を形成してもよいことが分かるであろう。反対に、簡潔にするために、単一の実施態様に関連して記載される本発明の種々の特徴をそのサブコンビネーションを形成するのに合わせてもよい。ここで同定される実施態様は例示を意図とするものであり、制限を目的とするものではない。
【００５２】
本願明細書にて特記されない限り、単数は複数をも包含して言及するものである。例えば、「ａ」および「ａｎ」は、一または一以上のいずれをもいう。
本明細書で用いるように、「化合物」なる語は、少なくとも１つの化合物をいう。例えば、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ）の化合物および式（Ｉ）の２個以上の化合物を包含する。
【００５３】
特に断りがなければ、原子価が満たされていないヘテロ原子はいずれも、原子価を満たすのに十分な水素原子を有するものとされる。
ここに記載の定義は、出典明示により本願明細書の一部とされる、特許、特許出願および／または特許出願公報に記載の定義に優先する。
【００５４】
本発明を記載するのに使用される種々の用語の定義が以下に列挙される。これらの定義は、（特定の場合で限定されない限り）個々に、またはより大きな基の一部として、明細書を通して使用される用語に適用される。
本願明細書を通して、その基および置換基は、安定した部分および化合物を提供するように当業者により選択され得る。
【００５５】
当該分野にて使用される慣習に従って、
【化１４】
0006592512.tif 000015
は、部分または置換基のコアまたは骨格構造への結合点である、結合を表すのに、本願明細書の構造式にて使用される。
【００５６】
ここで使用される「アルキル」なる語は、例えば、１〜１２個の炭素原子、１〜６個の炭素原子および１〜４個の炭素原子を含有する、分枝鎖および直鎖の両方の飽和脂肪族炭化水素基をいう。アルキル基の例は、以下に限定されないが、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、プロピル（例えば、ｎ−プロピルおよびｉ−プロピル）、ブチル（例えば、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓｅｃ−ブチルおよびｔ−ブチル）およびペンチル（例えば、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル）、ｎ−ヘキシル、２−メチルペンチル、２−エチルブチル、３−メチルペンチルおよび４−メチルペンチルを包含する。記号「Ｃ」の後に数字が下付きで示される場合、その下付き文字は特定の基が含有しうる炭素原子の数をより具体的に限定する。例えば、「Ｃ１−４アルキル」は、１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖のアルキル基を意味する。
【００５７】
「ヒドロキシアルキル」なる語は、分岐鎖および直鎖の両方の飽和アルキル基が１または複数のヒドロキシル基で置換されている基を包含する。例えば、「ヒドロキシアルキル」は−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨおよびＣ１−４ヒドロキシアルキルを包含する。.
【００５８】
「医薬的に許容される」なる語は、本願明細書にて、正当な医学的判断の範囲内で、ヒトおよび動物の組織と接触して、過度の毒性、刺激、アレルギー反応または他の問題もしくは合併症がなく、利益／危険が合理的な割合で均衡している、使用に適する、それらの化合物、材料、組成物および／または剤形をいうのに使用される。
【００５９】
式（Ｉ）の化合物は非晶質固体または結晶固体として提供され得る。凍結乾燥を利用して式（Ｉ）の化合物を非晶質固体として提供することができる。
【００６０】
式（Ｉ）のある化合物は遊離形態にて（イオン化しないで）存在してもよく、あるいは本発明の範囲内でもある塩を形成しうる。特記されない限り、本発明の化合物への言及は、遊離形態への、およびその塩への言及を包含するものと理解される。「塩」なる語は無機および／または有機酸で形成される酸性塩を意味する。医薬的に許容される（すなわち、毒性がなく、生理学的に許容される）塩、例えばそのアニオンが塩の毒性または生物学的活性に有意に寄与しない塩等が好ましい。しかしながら、他の塩であっても、例えば調製の間に利用され得る単離または精製工程において有用であるかもしれず、かくして本発明の範囲内にあると考えられる。式（Ｉ）の化合物の塩は、例えば、式（Ｉ）の化合物を、一定量、例えば当量の酸と、塩が沈殿するなどの媒体中にて反応させることにより、または水性媒体中にて反応させ、つづいて凍結乾燥させることにより形成され得る。
【００６１】
典型的な酸付加塩として、アセタート（酢酸またはトリハロ酢酸、例えば、トリフルオロ酢酸で形成されるアセタート）、アジパート、アルギナート、アスコルバート、アスパルタート、ベンゾアート、ベンゼンスルホナート、ビスルファート、ボラート、ブチラート、シトラート、カンホラート、カンホルスルホナート、シクロペンタンプロピオナート、ジグルコナート、ドデシルスルファート、エタンスルホナート、フマラート、グルコヘプタノアート、グリセロホスファート、ヘミスルファート、ヘプタノアート、ヘキサノアート、塩酸塩（塩酸で形成される）、臭化水素酸塩（臭化水素で形成される）、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホナート、ラクタート、マレアート（マレイン酸で形成される）、メタンスルホナート（メタンスルホン酸で形成される）、２−ナフタレンスルホナート、ニコチナート、ニトラート、オキサラート、ペクチナート、ペルサルファート、３−フェニルプロピオナート、ホスファート、ピクラート、ピバラート、プロピオナート、サチリラート、スクシナート、サルファート（硫酸で形成されるサルファート等）、スルホナート（本明細書に記載されるスルホナート等）、タートラート、チオシアナート、トシラート等のトルエンスルホナート、ウンデカノアート等が挙げられる。
【００６２】
さらには、式（Ｉ）の化合物の溶媒和物（例、水和物）も本発明の範囲内にあると認識されるべきである。「溶媒和物」なる語は、式（Ｉ）の化合物と、１または複数の溶媒分子（有機または無機のいずれであってもよい）とが物理的結合したものを意味する。この物理的結合は水素結合を包含する。場合によっては、例えば１または複数の溶媒分子が結晶性固体の結晶格子に組み込まれている場合に、溶媒和物は単離能を有するであろう。「溶媒和物」は溶液相と単離可能な溶媒和物の両方を包含する。典型的な溶媒和物として、水和物、エタノール溶媒和物、メタノール溶媒和物、イソプロパノール溶媒和物、アセトニトリル溶媒和物および酢酸エチル溶媒和物が挙げられる。溶媒和の方法は当該分野にて公知である。
【００６３】
種々のプロドラッグの形態が当該分野において周知であり、以下の文献：
ａ）Wermuth,C.G.ら、The Practice of Medicinal Chemistry, Chapter 31, Academic Press (1966)；
ｂ）Bundgaard,H.ら、Design of Prodrugs, Elsevier (1985)；
ｃ）Bundgaard,H.、Chapter 5, 「プロドラッグの設計および用途（Design and Application of Prodrugs）」, A Textbook of Drug Design and Development、113-191頁、Krogsgaard-Larsen,P.ら編、Harwood Academic Publishers (1991)；および
ｄ）Testa,B.ら、Hydrolysis in Drug and Prodrug Metabolism, Wiley-VCH (2003)
に記載される。
【００６４】
加えて、式（Ｉ）の化合物は、その調製の後で、単離かつ精製され、式（Ｉ）の化合物を９９重量％以上の量で含有する（「実質的に純粋な」）組成物を得、次にそれをここに記載されるように使用または処方する。かかる「実質的に純粋な」式（Ｉ）の化合物はまた、ここで本発明の一部を形成するものと考えられる。
【００６５】
「安定な化合物」および「安定な構造」は、反応混合物から有用な純度にまで単離し、効果的な治療剤に処方しても分解しない、十分に強固な化合物であることを意図とする。本発明は安定な化合物を具現化するものとする。
【００６６】
「治療上の有効量」は、Ｂｔｋに対する阻害剤として作用するのに効果的な、あるいは多発性硬化症および関節リウマチなどの自己免疫性および／または炎症性および／または増殖性病態を治療または予防するのに効果的な量の本発明の化合物を単独で、または当該量の特許請求の範囲の化合物を組み合わせて、あるいは当該量の本発明の化合物を他の活性成分と組み合わせて含むものとする。
【００６７】
本明細書で用いるように、「治療する」または「治療」は、哺乳類、特にヒトにおける病態の治療に及び、（ａ）特に、哺乳類が病態に罹りやすいが、まだ罹患していると診断されていない場合に、該哺乳類が病態に罹患することを妨げること；（ｂ）病態を阻害すること、すなわち、病態の進行を阻むこと；および／または（ｃ）病態を緩和すること、すなわち、病態の退行を生じさせることを包含する。
【００６８】
本発明の化合物は、本発明の化合物中に存在する原子のすべての同位体を包含するものとする。同位体は、原子番号が同じであるが、質量数が異なる、それらの原子を包含する。一般例であって、限定するものではなく、水素の同位体は重水素（Ｄ）およびトリチウム（Ｔ）を包含する。炭素の同位体は１３Ｃおよび１４Ｃを包含する。同位体で標識された本発明の化合物は、一般に、当業者に既知の慣用的技術により、さもなければ使用される標識されていない試薬の代わりに同位体で標識された適当な試薬を用い、ここに記載の方法と類似する方法により調製され得る。例えば、メチル（−ＣＨ３）は−ＣＤ３などの重水素化メチル基も包含する。
【００６９】
式（Ｉ）で示される化合物は、治療されるべき症状に適するいずれかの手段によって、部位特異的治療の必要性または送達されるべき式（Ｉ）の化合物の量に応じて投与され得る。
【００７０】
式（Ｉ）の化合物と、一または複数の非毒性の医薬的に許容される担体および／または希釈剤および／またはアジュバント（包括的に、本願明細書にて「担体」物質という）と、所望により他の活性成分とを含む一連の医薬組成物もまた、本発明の範囲内に含まれる。式（Ｉ）の化合物は、いずれか適当な経路、好ましくはかかる経路に適する医薬組成物の形態にて、および意図する治療に効果的な用量にて投与されてもよい。本発明の化合物および組成物は、例えば、経口的に、粘膜的に、あるいは非経口的に、例えば血管内的に、静脈内的に、腹腔内的に、皮下的に、筋肉内的に、および胸骨内的に、従前の医薬的に許容される担体、アジュバントおよびベヒクルを含有する投与単位製剤にて投与されてもよい。例えば、医薬担体はマンニトールまたは乳糖および微結晶セルロースの混合物を含有してもよい。該混合物は、滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウムおよびクロスポビドンなどの崩壊剤等の添加成分を含有してもよい。担体の混合物はゼラチンカプセルに充填されてもよく、あるいは錠剤として圧縮されてもよい。医薬組成物は、例えば、経口剤形または注入剤として投与されてもよい。
【００７１】
経口投与の場合、該医薬組成物は、例えば、錠剤、カプセル、液体カプセル、懸濁液または液剤の形態であってもよい。医薬組成物は、好ましくは、特定量の活性成分を含有する投与単位の形態で製造される。例えば、医薬組成物は約０.１〜１０００ｍｇ、好ましくは約０.２５〜２５０ｍｇ、より好ましくは約０.５〜１００ｍｇの範囲にある一定量の活性成分を含む錠剤またはカプセルとして提供されてもよい。ヒトまたは他の哺乳類の適当な日用量は、患者の状態および他の因子に応じて大きく変化してもよいが、慣用的操作を用いて決定することができる。
【００７２】
本明細書に記載の医薬組成物はいずれも、例えば、許容され、かつ適切ないずれの経口製剤を介しても送達され得る。典型的な経口製剤として、限定されないが、例えば、錠剤、トローチ、ロゼンジ、水性および油性懸濁液、分散性粉末または顆粒、エマルジョン、ハードおよびソフトカプセル、液体カプセル、シロップおよびエリキシルが挙げられる。経口投与用医薬組成物は経口投与用医薬組成物を製造する分野にて公知のいずれかの方法に従って調製され得る。医薬的に口に合う調製物を提供するために、本発明に係る医薬組成物は、甘味剤、矯味矯臭剤、着色剤、粘滑剤、酸化防止剤および保存剤より選択される少なくとも１つの物質を含有しうる。
【００７３】
錠剤は、例えば、式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物を、錠剤の製造に適する少なくとも１つの非毒性の医薬的に許容される賦形剤と混合することにより調製され得る。代表的な賦形剤は、限定されないが、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムおよびリン酸ナトリウムなどの不活性希釈剤；例えば、微結晶セルロース、ナトリウムクロスカルメロース、コーン澱粉およびアルギン酸などの造粒および崩壊剤；例えば、澱粉、ゼラチン、ポリビニルピロリドンおよびアカシアなどの結合剤；および、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸およびタルクなどの滑沢剤を包含する。加えて、錠剤は、コーティングされないか、あるいは不快な味の薬物の嫌な味をマスクするか、または崩壊を妨げ、活性成分が消化管で吸収されるのを遅らせ、それにより活性成分の効果を長期間にわたって持続させるために公知技法によりコーティングさせることもできる。典型的な水溶性味マスキング材料は、限定されないが、ヒドロキシプロピル−メチルセルロースおよびヒドロキシプロピル−セルロースを包含する。代表的な遅延材料は、限定されないが、エチルセルロースおよびセルロースアセタートブチラートを包含する。
【００７４】
ハードゼラチンカプセルは、例えば、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物を、例えば、炭酸カルシウム；リン酸カルシウム；およびカオリンなどの少なくとも１つの不活性な固体希釈剤と混合することにより調製され得る。
【００７５】
ソフトゼラチンカプセルは、例えば、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物を、例えば、ポリエチレングリコールなどの少なくとも１つの水溶性担体；および例えば落花生油、流動パラフィンおよびオリーブ油などの少なくとも１つの油性媒体と混合することにより調製され得る。
【００７６】
水性懸濁液は、例えば、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物を、水性懸濁液の製造に適する少なくとも１つの賦形剤と混合することにより調製され得る。水性懸濁液の製造に適する典型的な賦形剤は、限定されないが、例えば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸、ポリビニルピロリドン、トラガカントガム、およびアカシアガムなどの沈殿防止剤；例えば、天然に存するホスファチド、例、レシチンなどの分散または湿潤剤；例えば、ポリオキシエチレンステアラートなどのアルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物；例えば、ヘプタデカエチレン−オキシセタノールなどのエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物；例えば、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレアートなどのエチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトールより誘導される部分エステルとの縮合生成物；ならびに例えば、ポリエチレンソルビタンモノオレアートなどのエチレンオキシドと脂肪酸および無水ヘキシトールより誘導される部分エステルとの縮合生成物を包含する。水性懸濁液はまた、例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルおよびｎ−プロピルなどの少なくとも１つの保存剤；少なくとも１つの着色剤；少なくとも１つの矯味矯臭剤；および／または少なくとも１つの甘味剤（限定されないが、例えば、シュークロース、サッカリンおよびアスパルタームを含む）を含有し得る。
【００７７】
油性懸濁液は、例えば、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物を、例えば、落花生油；オリーブ油；ゴマ油；およびココナッツ油などの植物油に；あるいは例えば、流動パラフィンなどの鉱油に懸濁させることにより調製され得る。油性懸濁液はまた、例えば、蜜ロウ；硬質パラフィン；およびセチルアルコールなどの少なくとも１つの増粘剤を含有し得る。口当たりのよい油性懸濁液を提供するために、少なくとも１つの上記される甘味剤、および／または少なくとも１つの矯味矯臭剤が該油性懸濁液に添加され得る。油性懸濁液はさらに、限定されないが、例えば、ブチル化ヒドロキシアニソールおよびアルファ−トコフェロールなどの酸化防止剤を含む、少なくとも１つの保存剤を含有し得る。
【００７８】
分散性粉末または顆粒は、例えば、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物を、少なくとも１つの分散剤および／または湿潤剤；少なくとも１つの沈殿防止剤；および／または少なくとも１つの保存剤と混合することにより調製され得る。適切な分散剤、湿潤剤および沈殿防止剤は上記されるとおりである。典型的な保存剤は、限定されないが、例えば、酸化防止剤、例、アスコルビン酸を包含する。加えて、分散性粉末および顆粒は、少なくとも１つの賦形剤（限定されないが、例えば、甘味剤；矯味矯正臭剤；および着色剤を含む）を含有し得る。
【００７９】
少なくとも１つのその式（Ｉ）の化合物のエマルジョンは、例えば、水中油型エマルジョンとして調製され得る。式（Ｉ）の化合物を含むそのエマルジョンの油相は既知の方法で既知の成分より構成されてもよい。油相は、限定されないが、例えば、オリーブ油および落花生油などの植物油；例えば、流動パラフィンなどの鉱油；およびそれらの混合液により提供され得る。その相は乳化剤を含んでいるだけかもしれないが、少なくとも１つの乳化剤と、脂肪または油、あるいは脂肪と油の両方との混合物を含んでもよい。適切な乳化剤は、限定されないが、例えば、天然に存するホスファチド、例、大豆レシチン；例えば、ソルビタンモノオレアートなどの脂肪酸とヘキシトール無水物より誘導されるエステルまたは部分エステル；および、例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアートなどの部分エステルとエチレンオキシドの縮合生成物を包含する。安定剤として作用する親油性乳化剤と一緒に親水性乳化剤を配合するのが好ましい。油と脂肪の両方を含むのも好ましい。乳化剤を、安定剤と一緒に配合してまたは配合することなく、いわゆる乳化ワックスを製造し、そのワックスは油および脂肪と一緒になって、クリーム製剤の油性分散相を形成する、いわゆる乳化軟膏基剤を製造する。エマルジョンはまた、甘味剤、矯味矯正臭剤、保存剤および酸化防止剤を含有し得る。本発明の処方での使用に適する乳化剤およびエマルジョン安定剤は、単独での、あるいは当該分野にて周知のワックスまたは他の材料と合わせた、ツウィーン（Tween）６０、スパン（Span）８０、セトステアリルアルコール、ミリスチルアルコール、グリセリルモノステアラート、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリルジステアラートを包含する。
【００８０】
式（Ｉ）の化合物はまた、例えば、医薬的に許容され、かつ適切ないずれかの注射可能な形態を通して、静脈内的に、皮下的に、および／または筋肉内的に送達され得る。注射可能な形態の典型例は、限定されないが、例えば、許容されるベヒクルと、例えば水、リンガー溶液および生理食塩液などの溶媒とを含む滅菌水溶液；水中油型滅菌ミクロエマルジョン；および水性または油性懸濁液を包含する。
【００８１】
非経口投与用製剤は、水性または非水性の等張滅菌注射溶液または懸濁液の形態であってもよい。これらの溶液および懸濁液は、経口投与用製剤の使用に言及される一または複数の担体または希釈剤を用いて、あるいは他の適当な分散または湿潤剤および沈殿防止剤を用いることで、滅菌粉末または顆粒より調製され得る。該化合物は水、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、エタノール、コーン油、綿実油、落花生油、ゴマ油、ベンジルアルコール、塩化ナトリウム、トラガントガムおよび／または種々の緩衝剤に溶かされてもよい。他のアジュバントおよび投与方法は医薬分野にて十分かつ広く知られている。活性成分はまた、生理食塩水、デキストロースまたは水を包含する適切な担体との組成物、またはシクロデキストリン（すなわち、カプチソール（Captisol）（登録商標）、可溶化共溶媒（すなわち、プロピレングリコール）または可溶化ミセル（すなわち、ツィーン８０）との組成物として注射により投与されてもよい。
【００８２】
滅菌注射用製剤はまた、非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の滅菌注射用溶液または懸濁液、例えば１,３−ブタンジオール中溶液であってもよい。とりわけ、許容される、使用可能なベヒクルおよび溶媒は、水、リンガー（Ringer’s）溶液および生理食塩液である。加えて、滅菌性固定油が溶媒または懸濁化媒体として慣用的に使用される。この目的には、合成モノまたはジグリセリドを含む、刺激の少ない固定油が使用されてもよい。加えて、オレイン酸などの脂肪酸が注射剤の調製にて有用であることがわかる。
【００８３】
水中油型滅菌性注射可能なミクロエマルジョンは、例えば、１）少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物を、例えば大豆油とレシチンの混合液などの油相に溶かし；２）式（Ｉ）の化合物を含有する油相を水およびグリセロールの混合液と合わせ；および３）その合わせたものを処理してミクロエマルジョンを形成することにより調製され得る。
【００８４】
滅菌水性または油性懸濁液は当該分野において既知の方法に従って調製され得る。例えば、滅菌の水性溶液または懸濁液は、非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒（例えば、１,３−ブタンジオールなど）で調製され得；滅菌の油性懸濁液は、滅菌の非毒性の許容される溶媒または懸濁化媒体（例えば、滅菌性固体油、例、合成モノ−またはジ−グリセリドなど）；および脂肪酸（例えば、オレイン酸など）で調製され得る。
【００８５】
本発明の医薬組成物に使用されてもよい、医薬的に許容される担体、アジュバントおよびベヒクルは、以下に限定されないが、イオン交換剤、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ｄ−アルファ−トコフェロールポリエチレングリコール１０００スクシナートなどの自己乳化薬物送達システム（ＳＥＤＤＳ）、ツィーン、クレモホール（CREMOPHOR（登録商標））界面活性剤（ＢＡＳＦ）などのポリエトキシ化ヒマシ油または他に類似する高分子送達マトリックスなどの医薬剤形に使用される界面活性剤、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク、緩衝剤、例えば、リン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、植物性飽和脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素ジナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース基剤物質、ポリエチレングリコール、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂を包含する。アルファ−、ベータ−およびガンマ−シクロデキストリンなどのシクロデキストリンまたは２−および３−ヒドロキシプロピル−シクロデキストリンを含むヒドロキシアルキルシクロデキストリンなどの化学的に修飾された誘導体、あるいは他の可溶化誘導体もまた、有利には、ここに記載の製剤における化合物の送達を強化するのに使用されてもよい。
【００８６】
本発明の医薬的に活性な化合物は慣用的な製薬方法に従って処理され、ヒトおよび他の哺乳類を含む、患者に投与するための医薬品を製造することができる。その医薬組成物は、滅菌処理などの慣用的な製薬工程に供されてもよく、および／または保存剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、緩衝剤等などの慣用的アジュバントを含有してもよい。錠剤およびピルは付加的に腸溶性コーティングを施して調製され得る。そのような組成物はまた、湿潤剤、甘味剤、矯味矯臭剤および香料などのアジュバントを含んでもよい。
【００８７】
化合物の投与量ならびに本発明の化合物および／または組成物で病態を治療するための治療計画は、種々の要因（対象の年齢、体重、性別および病状、疾患の型、疾患の重篤度、投与経路および頻度、および利用される個々の化合物を含む）に依存する。このように、投与計画は大きく変化するが、標準的な方法を用いて大まかに決定され得る。約０.００１〜１００ｍｇ／体重ｋｇ、好ましくは約０.００２５〜約５０ｍｇ／体重ｋｇ、最も好ましくは約０.００５〜１０ｍｇ／体重ｋｇの日用量が適しているかもしれない。その日用量は一日に１ないし４回の用量で投与され得る。他の投与計画は週に１回の投与および隔日に１回の投与のサイクルを含む。
【００８８】
治療用では、本発明の活性化合物は、通常、指示の投与経路に適する１または複数のアジュバントと合わせられる。経口投与されるならば、該化合物は、ラクトース、シュークロース、澱粉粉、アルカン酸のセルロースエステル、セルロースアルキルエステル、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、酸化マグネシウム、リン酸および硫酸のナトリウムおよびカルシウム塩、ゼラチン、アカシアガム、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、および／またはポリビニルアルコールと混合され、次に一般的な投与用に打錠またはカプセル化される。かかるカプセルまたは錠剤は、活性化合物をヒドロキシプロピルメチルセルロースに分散させて提供されるように、放出制御製剤を含有してもよい。
【００８９】
本発明の医薬組成物は、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物を含み、所望により医薬的に許容されるいずれかの担体、アジュバントおよびベヒクルより選択されるさらなる試剤を含んでもよい。本発明のもう一つ別の組成物は、本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物またはそのプロドラッグ、および医薬的に許容される担体、アジュバントまたはベヒクルを含む。
【００９０】
有用性
本発明の化合物は、Ｂｔｋの調節を含め、キナーゼ活性を調節する。本発明の化合物により調節され得るキナーゼ活性の他の型は、限定されるものではないが、ＢＭＸ、Ｂｔｋ、ＩＴＫ、ＴＸＫおよびＴＥｃ、ならびにその変異体などのＴｅｃファミリーのキナーゼを包含する。
【００９１】
従って、式（Ｉ）の化合物は、キナーゼ活性の調節、特にＢｔｋ活性の選択的阻害に付随する症状の治療において有用性がある。かかる症状は、サイトカインレベルが細胞内シグナル伝達の結果として調節される、Ｂ−細胞介在性疾患を包含する。
【００９２】
本明細書で使用されるように、「治療する」または「治療」なる語は、応答的および予防的手段のいずれか一方またはその両方であって、例えば、疾患または障害の発症を阻害または遅らせ、症候群または病態の完全なまたは部分的な軽減を達成し、および／または疾患または障害および／またはその徴候を緩和、改善または治癒するように設計された手段を包含する。
【００９３】
Ｂｔｋの阻害剤としてのその活性に鑑みて、式（Ｉ）の化合物は、クローン結腸炎および潰瘍性結腸炎、喘息、対宿主移植片疾患、慢性閉塞性肺疾患などの炎症性疾患；グレーブス病、関節リウマチ、全身性紅斑性狼瘡、乾癬などの自己免疫疾患；骨吸収疾患、骨関節炎、骨粗鬆症、多発性骨髄腫関連の骨障害などの破壊性骨障害；急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病などの増殖性障害；充実性腫瘍を含む血管由来の障害、眼新血管形成（ocular neovasculization）および小児血管腫などの血管性障害；敗血症、敗血性ショックおよび細菌性赤痢などの感染性疾患；アルツハイマー病、パーキンソン病、脳虚血、または外傷に起因する神経変性疾患などの神経変性疾患、転移性黒色腫、カポジ肉腫、多発性骨髄腫、およびＨＩＶ感染、ＣＭＶ網膜炎、ＡＩＤＳなどの各々のがんおよびウイルス性疾患を含むが、これらに限定されない、サイトカイン関連の症状の治療に有用である。
【００９４】
さらに具体的には、本発明の方法で治療され得る特定の症状または疾患は、限定されないが、（急性または慢性）膵炎、喘息、アレルギー、成人呼吸窮迫症候群、慢性閉塞性肺疾患、糸球体腎炎、関節リウマチ、全身性紅斑性狼瘡、強皮症、シェグーレン症候群、慢性甲状腺炎、グレーブス病、自己免疫性胃炎、糖尿病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性好中球減少症、血小板減少症、アトピー性皮膚炎、慢性活動性肝炎、重症筋無力症、多発性硬化症、炎症性腸疾患、潰瘍性結腸炎、クローン病、乾癬、対宿主移植片疾患、エンドトキシンにより誘発される炎症性反応、結核、アテローム性動脈硬化症、筋肉変性、カヘキシー、乾癬性関節炎、ライター症候群、痛風、外傷性関節炎、風疹性関節炎、急性滑膜炎、膵臓β−細胞疾患；重度好中球浸潤により特徴付けられる疾患；リウマチ様脊椎炎、痛風性関節炎および他の関節炎症状、カワサキ病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＤＰ）、皮膚筋炎、ぶどう膜炎、抗ＶＩＩＩ因子疾患、強直性脊椎炎、重症筋無力症、グッドパスチャー症候群、抗リン脂質症候群、ＡＮＣＡ関連血管炎、皮膚筋炎／多発性筋炎、脳マラリア、慢性肺炎症性疾患、珪肺症、肺サルコイドーシス、骨吸収疾患、同種移植拒絶反応、感染による発熱および筋肉痛、感染に続発するカヘキシー、骨髄形成、瘢痕組織形成、潰瘍性結腸炎、胸焼け（pyresis）、インフルエンザ、骨粗鬆症、骨関節炎、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、転移性黒色腫、カポジ肉腫、多発性骨髄腫、敗血症、敗血症性ショックおよび細菌性赤痢；アルツハイマー病、パーキンソン病、脳虚血または外的損傷により惹起される神経変性疾患；充実性腫瘍、眼新血管形成および小児血管腫を含む血管性障害；急性肝炎感染（Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎を含む）、ＨＩＶ感染およびＣＭＶ網膜炎、ＡＩＤＳ、ＡＲＣまたは悪性腫瘍、およびヘルペスを含むウイルス性疾患；卒中、心筋虚血、心臓発作での虚血、臓器低酸素症、血管過形成、心臓および腎臓再灌流傷害、血栓症、心臓肥大、トロンビン誘発性血小板凝集、内毒素血症および／または毒素性ショック症候群、プロスタグランジンエンドペルオキシダーゼシンターゼ−２に関連の症状、および尋常性天疱瘡を包含する。
【００９５】
好ましい治療方法は、その症状が、クローンおよび潰瘍性結腸炎、同種移植拒絶反応、関節リウマチ、乾癬、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、尋常性天疱瘡および多発性硬化症より選択される、ところの方法である。あるいはまた、好ましい治療方法は、その症状が、卒中より惹起される脳虚血性虚血性再灌流傷害および心筋梗塞より惹起される心臓虚血性再灌流傷害を含む、虚血性再灌流傷害より選択される、ところの方法である。もう一つ別の好ましい治療方法は、症状が多発性硬化症であるところの方法である。
【００９６】
加えて、本発明のＢｔｋ阻害剤は、プロスタグランジン・エンドペロキシド・シンターゼ−２（ＰＧＨＳ−２）（シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）とも称される）などの誘発性プロ炎症性タンパク質の発現を阻害する。従って、さらなるＢｔｋ関連の症状として、浮腫、無痛覚症、発熱、および神経筋痛、頭痛、がんにより惹起される痛み、歯痛および関節痛などの疼痛が挙げられる。本発明の化合物はまた、ウマ感染性貧血ウイルスを含むが、これに限定されないレンチウイルス感染；またはネコ免疫不全、ウシ免疫不全ウイルスおよびイヌ免疫不全ウイルスを含むレトロウイルス感染などの獣医学的ウイルス感染の治療に使用されてもよい。
【００９７】
「Ｂｔｋ関連の症状」または「Ｂｔｋ関連の疾患または障害」なる語が本明細書中で用いられる場合、仮に何度も繰り返されるとしても、その各々は上記したすべての症状を、ならびにＢｔｋキナーゼ活性により影響を受ける他のいずれの症状をも包含するものとする。
【００９８】
「治療的に効果的な量」は、単独で、あるいは組み合わせて投与した場合にＢｔｋを阻害するのに効果的である、本発明の化合物の量を包含するものとする。
【００９９】
１の実施態様は、そのようなＢｔｋキナーゼ関連症状を治療する方法であって、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物をその治療を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。かかる症状を治療するのに治療的に効果的な量が投与されてもよい。この実施態様の方法は、アレルギー障害および／または自己免疫および／または炎症性疾患（ＳＬＥ、関節リウマチ、多発性血管炎、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、重症筋無力症、アレルギー性鼻炎、多発性硬化症（ＭＳ）、移植片拒絶反応、Ｉ型糖尿病、膜性腎炎、炎症性腸疾患、自己免疫溶血性貧血、自己免疫甲状腺炎、風邪および温暖凝集素症、エバンス症候群、溶血性尿毒症症候群／血栓性血小板減少性紫斑病（ＨＵＳ／ＴＴＰ）、サルコイドーシス、シェーグレン症候群、末梢性ニューロパシー（例、ギラン・バレー症候群）、尋常性天疱瘡および喘息を含むが、これらに限定されない）の治療などのＢｔｋキナーゼ関連症状を治療するのに利用されてもよい。
【０１００】
Ｂｔｋキナーゼ関連症状の治療方法は、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物を単独であるいは相互におよび／またはかかる症状の治療に有用な別の適切な治療剤と組み合わせて投与することを含んでもよい。少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物およびかかる症状を治療するための別の適切な治療剤の治療的に効果的な量が投与されてもよい。従って、「治療的に効果的な量」はまた、Ｂｔｋキナーゼ関連症状を治療するのに効果的な請求に係る化合物を組み合わせた量を含むものとする。化合物の組み合わせは相乗的な組み合わせであることが好ましい。例えば、Chouら、Adv. Enzyme Regul., 22：27-55（1984）によって記載されるような相乗作用は、組み合わせて投与された場合に、化合物の作用（この場合、Ｂｔｋの阻害）が単一の薬剤として単独で投与した時の化合物の相加作用よりも大きい時に生じる。一般に、相乗作用は化合物の最適濃度未満の濃度で端的に示される。相乗作用は、細胞毒性が低いとの観点から、抗Ｂｔｋ作用を、あるいは個々の成分と比べてその組み合わせた他の有益な作用を高めることができる。
【０１０１】
そのような他の治療剤の例として、コルチコステロイド、ロリプラム、カルホスチン、サイトカイン抑制性抗炎症薬（ＣＳＡＩＤ）、４−置換イミダゾ［１,２−ａ］キノキサリン（米国特許第４,２００,７５０号に開示）；インターロイキン−１０、グルココルチコイド、サリチラート、酸化窒素および他の免疫抑制剤；デオキシスペルグアリン（ＤＳＧ）などの核転座阻害剤；イブプロフェン、セレコキシブおよびロフェコキシブなどの非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）；プレドニゾンまたはデキサメタゾンなどのステロイド；アバカビルなどの抗ウイルス剤；メトトレクサート、レフルノミド、ＦＫ５０６（タクロリムス、PROGRAF（登録商標））などの抗増殖剤；アザチプリンおよびシクロホスファミドなどの細胞毒性薬；テニダップ、抗ＴＮＦ抗体または可溶性ＴＮＦ受容体、およびラパマイシン（シロリムスまたはRAPAMUNE（登録商標））またはその誘導体などのＴＮＦ−α阻害剤が挙げられる。
【０１０２】
上記した他の治療剤は、本発明の化合物と組み合わせて使用される場合、それらは、例えば、Physicians’Desk Reference（ＰＤＲ）に示される量にて、そうでなければ当業者により決定される量にて使用されてもよい。本発明の方法において、そのような他の治療剤は、本発明の化合物を投与する前に、それと同時に、またはその後に投与されてもよい。本発明はまた、上記されるような、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−α介在疾患を含むＢｔｋキナーゼ関連症状の治療能を有する医薬組成物を提供する。
【０１０３】
本発明の組成物は、上記される他の治療剤を含有してもよく、例えば、製薬の分野にて周知の方法などの技法に従って、慣用的な固体または液体ビヒクルまたは希釈剤、ならびに所望の投与方法に適する型の医薬品添加物（例、賦形剤、結合剤、保存剤、安定剤、矯味矯臭剤等）を利用することにより処方されてもよい。
【０１０４】
もう一つ別の実施態様は療法にて用いるための式（Ｉ）の化合物を提供する。この実施態様において、療法における使用は治療的に効果的な量の式（Ｉ）の化合物の投与を包含してもよい。
【０１０５】
もう一つ別の実施態様は療法にて用いるための式（Ｉ）の化合物を提供する。この実施態様において、療法における使用は治療的に効果的な量の式（Ｉ）の化合物の投与を包含してもよい。
【０１０６】
本発明はまた、アレルギー障害および／または自己免疫および／または炎症性疾患の治療または予防用の医薬を製造するための式（Ｉ）の化合物の使用を提供する。この実施態様において、医薬を製造するための使用はアレルギー障害および／または自己免疫および／または炎症性疾患を予防して処理するために治療的に効果的な量の式（Ｉ）の化合物を投与することを包含してもよい。
【０１０７】
本発明はまた、がんの治療用の医薬を製造するための式（Ｉ）の化合物の使用を提供する。この実施態様は、医薬を製造するための使用を包含してもよく、アレルギー障害および／または自己免疫および／または炎症性疾患を予防して処理するために治療的に効果的な量の式（Ｉ）の化合物を投与することを包含する。
【０１０８】
本発明はさらに、１または複数の式（Ｉ）の化合物と、医薬的に許容される担体とを含む、組成物を包含する。
本発明はさらに、１または複数の式（Ｉ）の化合物と、医薬的に許容される担体とを含む、組成物を包含する。
【０１０９】
「医薬的に許容される担体」は、生物学的活性剤を動物に、特に哺乳油動物に送達するのにその分野にて一般に許容される媒体をいう。医薬的に許容される担体は当業者の管理する権限内にある多くの要因に従って処方される。これらの要因は、限定されるものではないが、処方される活性剤の型および特性；活性剤を含有する組成物が投与される予定の対象；その組成物の意図する投与経路；および標的とされる治療指標を包含する。医薬的に許容される担体は、水性および非水性の両方の液体媒体を、ならびに種々の固体および半固体の剤形を包含する。そのような担体は、活性剤の他に多くの異なる成分および添加剤を含むことができ、かかる付加的な成分は、種々の理由で、例えば、当業者に周知の活性剤の安定化、結合剤等の理由で製剤中に含まれる。適切な医薬的に許容される担体、およびそれを選択する際の要因は、例えば、その出典を明示することにより本明細書の一部とされる、Remington’s Pharmaceutical Sciences、第１７版（1985）などの入手が容易な種々の供給源に記載されており、それで理解される。
【０１１０】
式（Ｉ）の化合物は、治療されるはずの症状に適する、部位特異的治療の必要性または送達される薬物の量に応じて変化しうる、どのような手段により投与されてもよい。皮膚関連疾患では一般に局所投与が好ましく、がんまたは前がん状態では全身治療が好ましいが、他の送達方法を排除するものではない。例えば、該化合物は、錠剤、カプセル、顆粒、散剤またはシロップを含む液体製剤の形態などで経口的に；液剤、懸濁液、ゲルまたは軟膏の形態などで局所的に；舌下的に；バッカル的に；皮下、静脈内、筋肉内または胸骨下注射または注入技法（例えば、滅菌注射水性または非水性溶液または懸濁液）などで非経口的に；吸入噴霧によるなどで経鼻的に；クリームまたは軟膏の形態などで局所的に；坐剤の形態などで経直腸的に；またはリポソームを用いて送達されてもよい。毒性がなく、医薬的に許容されるビヒクルまたは希釈剤を含有する投与単位製剤が投与されてもよい。該化合物は即時放出または持続放出に適する形態にて投与されてもよい。即時放出または持続放出は適切な医薬組成物で、あるいは特に持続放出の場合に、皮下移植または浸透ポンプなどの装置で達成され得る。
【０１１１】
局所投与用の典型的な組成物はプラスチベース（鉱油をポリエチレンでゲル化したもの）などの局所用担体を含む。
【０１１２】
経口投与用の典型的な組成物は、例えば、バルクを分け与えるための微結晶セルロース、沈殿防止剤としてのアルギン酸またはアルギン酸ナトリウム、増粘剤としてのメチルセルロース、および当該分野にて公知の剤などの甘味剤または矯味矯臭剤を含んでもよい懸濁液；および、当該分野にて知られる剤などの、例えば、微結晶セルロース、リン酸二カルシウム、澱粉、ステアリン酸マグネシウムおよび／またはラクトースおよび／または他の賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、希釈剤および潤滑剤を含有してもよい即時放出性錠剤を包含する。本発明の化合物はまた、例えば、成型、圧縮または凍結乾燥された錠剤で舌下および／またはバッカル投与により送達されてもよい。典型的な組成物はマンニトール、ラクトース、シュークロース、および／またはシクロデキストリンなどの速溶性希釈剤を含んでもよい。かかる製剤には、セルロース（アビセル（AVICEL）（登録商標））またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの高分子量の賦形剤；ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＳＣＭＣ）および／または無水マレイン酸コポリマー（例、グラントレス（Gantrez））などの粘膜と粘着しやすくする賦形剤；および、ポリアクリルコポリマー（例、カルボポール（Carbopol）９３４）などの放出調節剤を含んでもよい。潤滑剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、着色剤および安定化剤が製造および使用を容易にするのに添加されてもよい。
【０１１３】
経鼻用アエロゾルまたは吸入投与用の典型的な組成物は、例えば、ベンジルアルコールまたは他の適切な保存剤、吸収および／または生物学的利用能を強化するための吸収促進剤、および／または当該分野において公知の剤などの他の可溶化剤または分散剤を含有しうる液剤を包含する。
【０１１４】
非経口投与用の典型的な組成物は、例えば、マンニトール、１,３−ブタンジオール、水、リンガー溶液、生理食塩水などの適切な毒性のない非経口的に許容される希釈体または溶媒、あるいは他の適切な分散または湿潤剤、および沈殿防止剤（合成モノ−またはジ−グリセリドおよび脂肪酸（オレイン酸を含む）を含む）を含有してもよい、注射用溶液または懸濁液を包含する。
【０１１５】
経直腸投与用の典型的な組成物は、例えば、常温で固体であるが、直腸腔にて液化および／または溶解し、薬物を放出するカカオ脂、合成グリセリドエステルまたはポリエチレングリコールなどの適切な非刺激性の賦形剤を含有してもよい坐剤を包含する。
【０１１６】
本発明の化合物の治療的に効果的な量は当業者によって決定されてもよく、それは哺乳動物で１日当たり体重１ｋｇに付き約０.０５〜１０００ｍｇ；１−１０００ｍｇ；１−５０ｍｇ；５−２５０ｍｇ；２５０−１０００ｍｇの典型的な投与量で活性化合物を含み、それは単回用量で投与されてもよく、あるいは１日当たり１〜４回とする個々に分割された用量の形態にて投与されてもよい。ある特定の対象についての個々の用量レベルおよび投与頻度は一定ではなく、利用される特定の化合物の活性、その化合物の代謝安定性および作用時間、対象の種類、年齢、体重、一般的健康状態、性別および食事、投与経路および投与時間、排せつ率、薬物の併用、および個々の症状の重篤度を含む、種々の要素に依存することが理解されよう。治療するのに好ましい対象は、動物を包含し、最も好ましくはヒトなどの哺乳類種ならびにイヌ、ネコ、ウマ等などの人に慣れた動物である。このように、「患者」なる語が本願明細書にて使用される場合、この用語は、Ｂｔｋ酵素レベルが介在して影響を受ける、すべての対象、最も好ましくは哺乳類種を包含するものとする。
【０１１７】
下記の「実施例」のセクションにて具体的に示される式（Ｉ）の実施例の化合物が後記する１または複数のアッセイにて試験された。
【０１１８】
１の実施態様において、式（Ｉ）の化合物は、ヒト組換えＢｔｋ酵素アッセイで測定した場合に、０.４ｎＭ以下、例えば、０.００１〜０.４ｎＭのＩＣ５０値でＢｔｋ酵素を阻害する。この実施態様には、０.３ｎＭ以下、例えば、０.００１〜０.３ｎＭのＩＣ５０値でＢｔｋ酵素を阻害する式（Ｉ）の化合物が含まれる。この実施態様の別の化合物は０.２５ｎＭ以下、例えば、０.００１〜０.２５ｎＭのＩＣ５０値でＢｔｋ酵素を阻害する。
【０１１９】
１の実施態様において、式（Ｉ）の化合物は、抗ヒトＩｇＭで刺激したラモスＲＡ１Ｂ細胞において細胞内カルシウム流出を阻害するのに、ＩＣ５０値が２５ｎＭ以下の、例えば、０.１〜２５ｎＭの有用な効能を有する。この実施態様には、２０ｎＭ以下、例えば、０.１〜２０ｎＭのＩＣ５０値で、および１５ｎＭ以下、例えば０.１〜１５ｎＭのＩＣ５０値で抗ヒトＩｇＭで刺激したラモスＲＡ１Ｂ細胞にて細胞内カルシウム流出を阻害するのに効能を有する式（Ｉ）の化合物が含まれる。
【０１２０】
１の実施態様において、式（Ｉ）の化合物は、ヒト組換えＢｔｋ酵素アッセイで測定した場合に、０.４ｎＭ以下、例えば、０.００１〜０.４ｎＭのＩＣ５０値でＢｔｋ酵素を阻害し、２５ｎＭ以下の、例えば、０.１〜２５ｎＭのＩＣ５０値で抗ヒトＩｇＭで刺激したラモスＲＡ１Ｂ細胞にて細胞内カルシウム流出を阻害する。
【０１２１】
１の実施態様において、式（ＩＩａ）の化合物は、ヒト組換えＢｔｋ酵素アッセイで測定した場合に、０.４ｎＭ以下、例えば、０.００１〜０.４ｎＭのＩＣ５０値でＢｔｋ酵素を阻害し、２０ｎＭ以下の、例えば、０.１〜２０ｎＭのＩＣ５０値で抗ヒトＩｇＭで刺激したラモスＲＡ１Ｂ細胞にて細胞内カルシウム流出を阻害する。
【０１２２】
調製方法
本発明の化合物は有機合成の分野における当業者に公知の多くの方法を用いて調製され得る。本発明の化合物は、下記の方法を、有機合成化学の分野にて公知の合成方法と一緒に用いて、あるいは当業者により理解されるようにそれに変形を加えて合成され得る。好ましい方法は、下記の方法に限定されないが、それらの方法を包含する。反応は、利用される試薬および材料に適切であり、変形がなされるのに適する溶媒または混合溶媒中で行われる。分子上の官能基が提案される変換と適合しなければならないことは有機合成の分野における当業者により理解されるであろう。これは、時に、合成工程の順序を修飾する判断を、または本発明の所望の化合物を得るために他のプロセスのスキームよりも好ましい一の特定のスキームを選択する判断を求めることとなる。
【０１２３】
中間体の化合物または式（Ｉ）の化合物に存在する官能基のいくつかは、それらの化合物を調製するのに、あるいは該中間体を他の中間体または式（Ｉ）の化合物に変換するのに使用されるいくつかの反応条件に対して不安定であるかもしれず、あるいは適していないかもしれないことは有機合成の分野における当業者により理解されるであろう。この場合には、官能基は、利用され得る反応条件に対して安定しているか、あるいはより適している別の官能基に変換されることにより保護されてもよい。これらの保護された官能基は、次に、合成の後半で原官能基に戻すように変換され得る。その例が、カルボン酸エステルとしてのカルボン酸の保護、tert−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）誘導体またはベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）誘導体としての第１または第２アミンの保護、または２−トリメチルシリルエトキシメチル（ＳＥＭ）誘導体としてのカルバゾールまたはテトラヒドロカルバゾール窒素の保護である。保護基の使用は文献にて詳しく記載されており、当業者に対して多くの変形を記載する権威ある参考書が、Wuts,P.ら、Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis, 第4版、Wiley-Interscience (2006) である。
【０１２４】
式（Ｉ）の特定の化合物を意味する化合物３はスキーム１に示される方法を用いて調製され得る。
【０１２５】
【化１５】
0006592512.tif 000016
【０１２６】
置換カルバゾールカルボキシアミドまたはテトラヒドロカルバゾールカルボキシアミド１（ここで、ＹはＢｒ、Ｃｌまたはトリフルオロメタンスルホニルオキシなどの適切な基である）は、ボロン酸またはボロン酸エステル２（ここで、Ｒは、例えば、Ｈ、アルキルであるか、または一緒になって所望により置換されてもよい１,３,２−ジオキサボラランまたは１,３,２−ジオキサボリナンを形成する）と反応し（ここで、Ａｒは式（Ｉ）の基Ｑの１の基に相当する）、化合物３を提供し得る。この反応は、炭酸カリウム、炭酸セシウムまたはリン酸三カリウムなどの適切な塩基、およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム、１,１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）クロリドまたは１,１’−ビス（ジ−tert−ブチルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）クロリドなどの適切な触媒を用いることにより、１,４−ジオキサン、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはテトラヒドロフランなどの適切な溶媒中、所望により水またはエタノールなどの１または複数の適切な共溶媒との溶媒中で行われてもよい。かかるカップリング反応はスズキ−ミヤウラ（Suzuki-Miyaura）カップリング反応として周知であり、化学文献（例えば、Heravi, M. ら、Tetrahedron, 68: 9145 (2012) およびその中で引用される参考文献を参照のこと）に記載される。
【０１２７】
別法として、置換カルバゾールカルボキシアミドまたはテトラヒドロカルバゾールカルボキシアミド１は、化学文献（例えば、Ishiyama, T. ら、Tetrahedron, 57: 9813 (2001) およびその中で引用される参考文献を参照のこと）にて公知の方法を用いて、対応するボロン酸またはボロン酸エステル４（ここで、Ｒは、例えば、Ｈ、アルキルであるか、または一緒になって所望により置換されてもよい１,３,２−ジオキサボラランまたは１,３,２−ジオキサボリナンを形成する）に変換され得る。かかる反応の例が、１と、４,４,４’,４’,５,５,５’,５’−オクタメチル−２,２’−ビ（１,３,２−ジオキサボロラン）などの試薬との、酢酸カリウムなどの塩基、および１,１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウム（ＩＩ）クロリドなどの適切な触媒の存在下における適切な溶媒中での反応である。別法として、化合物１（ここで、ＹはＢｒである）を、ブチルリチウムまたは塩化イソプロピルマグネシウムなどの有機金属試薬と反応させ、つづいてトリメチルボラートまたはトリ−イソプロピルボラートなどのホウ酸エステルで処理し、次にその得られたボロン酸エステルを加水分解に供し、ボロン酸４（Ｒ＝Ｈ）を得ることができる。化合物４と、適切な化合物５（ここで、Ａｒは式（Ｉ）の基Ｑの１の基に相当し、ＹはＢｒ、Ｃｌまたはトリフルオロメタンスルホニルオキシなどの適切な基である）とを、上記されるスズキ−ミヤウラカップリング反応を用いて反応させ、化合物３を得ることもできる。
【０１２８】
化合物２は、化合物４を化合物１から調製するのに記載される方法と同じ方法を用い、化合物５より調製され得る。
【０１２９】
【化１６】
0006592512.tif 000017
【０１３０】
スキーム２に示されるように、立体障害により、ａで示される結合の回りで回転の制限がもたらされ、化合物３ａはアトロプ異性として知られるキラリティーを見せ、２種のエナンチオマー３ｂおよび３ｃとして存在し得る。（スキーム２において、Ｑは例示を目的としてテトラヒドロイソキノリン−５−イル基として示される。）キラル固定相でのクロマトグラフィーなどのある条件下で、エナンチオマーのアトロプ異性体は、クロマトグラムにて２つの別個のピークとして観察され得る。かかる化合物はエナンチオマーの混合物として単離することができ、そのエナンチオマーは固定相でのプレパラティブクロマトグラフィーなどの当該分野にて公知の方法を用いて分離され得る。分離されたエナンチオマーは、適切な貯蔵および取り扱い条件下で、単離可能であって安定的である。
【０１３１】
ある場合には、化合物３はテトラヒドロカルバゾールカルボキシアミド（ここで、点線は単結合を意味する）であり、Ｒ１ａおよびＲ１ｂは相互に異なる。一例が、スキーム３に示される、３ｄであって、Ｒ１ａは水素以外の基である。（これは例示に過ぎず、制限を意味するものではない。）この場合には、２個のキラル中心があり：Ｒ１ａの結合点、およびａで示される結合は上記されるとおりである。かくして、４種のジアステレオマー（３ｅ、３ｆ、３ｇおよび３ｈ）が存在し得る。したがって、化合物３ｄは、４種すべてのジアステレオマーの混合物として、単一のジアステレオマーとして、あるいは２種またはそれ以上のジアステレオマーの混合物として存在してもよい。ジアステレオマーの対（３ｅと３ｈ、または３ｆと３ｇ）のラセミ混合物が存在可能である。上記されるように、そのジアステレオマーはキラル固定相でのクロマトグラフィーなどの文献に記載の方法を用いて分離されてもよい。
【０１３２】
【化１７】
0006592512.tif 000018
【０１３３】
ある場合には、化合物３は、キラル性テトラヒドロカルバゾールカルボキシアミド１または４の単一のエナンチオマーより調製され得る。これらの場合、化合物３をもたらすスズキ−ミヤウラ反応から２種のジアステレオマーの混合物が生成され得る。その一例がスキーム３に示される３ｉおよび３ｊであり、ここでＲ１、Ｒ３およびＲ４はすべて水素以外の基である。（これらは例示に過ぎず、何ら制限するものではない。）適切な化合物１または４の一つのエナンチオマーより形成される化合物３ｉはジアステレオマー３ｅと３ｆの混合物であり、それに対して適切な化合物１または４の別のエナンチオマーより形成される化合物３ｊはジアステレオマー３ｇと３ｈの混合物であろう。上記されるように、これらのジアステレオマーは、クロマトグラフィーまたは選択的結晶化などの文献に記載の方法を用いて分離されてもよい。
【０１３４】
１または４がキラル性テトラヒドロカルバゾールカルボキシアミドである場合には、スズキ−ミヤウラカップリング反応の間にキラル誘導化が起こり、化合物３を得ることができる。これらの場合には、ジアステレオマーの混合物は等モルでない混合物で得ることができ、すなわち、化合物３は、結合ａを一の絶対配置で有する１または複数のジアステレオマーが結合ａを反対の絶対配置で有する１または複数のジアステレオマーよりも多量に存在する、ジアステレオマーの混合物であり得る。
【０１３５】
７で示される式（Ｉ）のある化合物は、スキーム４で特定される方法を用いて調製され得る。
【０１３６】
【化１８】
0006592512.tif 000019
【０１３７】
これらの方法は、第２アミンを担持する化合物６（すなわち、ＸＨは式（Ｉ）のＱ基に相当し、その中でＲ５はＨで置換される）を適切な試剤Ｒ５−Ｚ（ここで、ＺはＣｌまたはＯＨなどの脱離基を意味する）と反応させて化合物７（ここで、ＸＲ５はかかる反応よりもたらされる式（Ｉ）のＱ基の一つに相当する）を得る。アミンのかかる反応は文献にて記載される。そのような反応の一例は、化合物６のアミンをカルボン酸塩化物またはカルボン酸無水物でアシル化することであり、通常は、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、アセトニトリルまたはジクロロメタンなどの適切な溶媒中、一般にはトリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、または水酸化ナトリウムもしくは炭酸カリウムなどの無機塩基の水溶液などの塩基の存在下で行われる。あるいはまた、ピリジンなどの溶媒を用いることができ、その場合には該溶媒は塩基として供することもできる。
【０１３８】
スキーム４に示される反応のもう一つ別の例が、化合物６のアミンを、文献に記載される多数のアミドカップリング試薬のいくつかを用いて、例えば、（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウム・ヘキサフルオロホスファート（ＢＯＰまたはカストロ（Castro）試薬としても知られる）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ,Ｎ,Ｎ’,Ｎ’−テトラメチルウロニウム・ヘキサフルオロホスファート（ＨＡＴＵとしても知られる）、あるいはＮ,Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミドまたは１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド・塩酸塩（ＥＤＣとしても知られる）と、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴとしても知られる）または１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡＴとしても知られる）などの試薬との組み合わせを用いて、カルボン酸でアシル化することである。かかる反応は、通常、酢酸エチル、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはＮ−メチルピロリジン−２−オンなどの適切な溶媒中、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミンなどの適切な塩基の存在下で行われる。
【０１３９】
スキーム４のある種の化合物６（ここで、ＸＨは式（Ｉ）のＱ基に相当し、その中でＲ５はＨと置換される）はスキーム５に示されるように調製され得る。
【０１４０】
【化１９】
0006592512.tif 000020
【０１４１】
化合物１と、ボロン酸またはボロン酸エステル８（ここで、ＸＰはスキーム４のＸＨと類似しており；ＰはＨあるいはアミンの保護基として文献に記載される、例えば、tert−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）またはベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）などの適切なアミン保護基のいずれかとすることができる）とを、上記される（スキーム１にて記載の）スズキ−ミヤウラカップリングを用いる反応に付して、必要ならば、保護基Ｐを除去した後に、対応する化合物６を得ることができる。化合物８のＰがＨであるならば、化合物６を直接得ることができる。
【０１４２】
スキーム１にて説明される方法と同様にして、スキーム４の化合物６（ここで、ＸＨは式（Ｉ）のＱ基に相当し、その中でＲ５はＨで置換される）を調製するための別法がスキーム５にも示される。スキーム１のボロン酸またはボロン酸エステル４（ここで、Ｒは、例えば、Ｈ、アルキルであるか、または一緒になって所望により置換されてもよい１,３,２−ジオキサボラランまたは１,３,２−ジオキサボリナンを形成する）と、化合物９（ここで、ＹはＢｒ、Ｃｌまたはトリフルオロスルホニルオキシなどの適切な脱離基である）との上記されるスズキ−ミヤウラカップリングを用いる反応でも化合物６が提供され得る。上記されるように、ＰはＨであるか、またはＰは適切な保護基であり得、その場合には脱保護により化合物６を提供し得る。
【０１４３】
さらに、化合物８は、化合物４を化合物１から調製するのに記載されるのと同じ方法（スキーム１）を用いて、化合物９より調製され得る。
【０１４４】
式（Ｉ）の化合物を調製するのに使用される化合物１（スキーム１を参照のこと）はスキーム６に記載の操作を用いて調製され得る。
【０１４５】
【化２０】
0006592512.tif 000021
【０１４６】
置換された２−アミノ安息香酸１０（文献に記載されるか、または文献に記載の操作を用いて調製される）は、文献に記載の方法を用いて、例えば、水性塩酸中にて亜硝酸ナトリウムで処理することにより対応するジアゾニウム塩に変換し、つづいて塩化スズ（ＩＩ）で還元することで塩酸塩としての対応する２−ヒドラジニル安息香酸１１に変換され得る。１１を適切なシクロヘキサノン１２と、適切な触媒を含む適当な溶媒中で、例えば、塩酸を含むエタノール中、またはｐ−トルエンスルホン酸もしくはトリフルオロ酢酸を含むトルエン中で、あるいは酢酸中（この場合には、溶媒は触媒として供することもできる）で反応させることで、対応する置換されたテトラヒドロカルバゾール１３を提供し得る。この反応は、一般に、フィッシャー（Fischer）インドール合成として知られており、化学分野において公知である（例えば、Kamata,J.ら、Chem. Pharm. Bull., 52：1071（2004）を参照のこと）。別法として、該フィッシャー・インドール合成は２つの連続工程にて実施され得る：１１を（ｐートルエンスルホン酸などの適切な触媒を所望により含んでもよいエタノールまたはトルエンなどの適切な溶媒中等の）適切な条件下で１２と反応させ、中間体のヒドラゾンを形成させ、それを単離し、次に適切な条件（例えば、塩酸を含むエタノール、塩化亜鉛を含む酢酸、またはトリフルオロ酢酸を含むトルエン）下でさらに反応させて化合物１３を得ることができる。
【０１４７】
化合物１３のカルボン酸は、化学文献にて記載の方法を用いて、例えば、化合物１３を、塩化オキサリルまたは塩化チオニルで処理することにより対応する酸塩化物に変換し、つづいてアンモニアで処理することにより；あるいは化合物１３をカルボジイミドなどのカップリング剤またはＥＤＣとＨＯＡＴの混合物の存在下でアンモニアまたは塩化アンモニウムで処理することにより、化合物１４の対応するカルボキシアミド（スキーム１に示される化合物１の一例の化合物）に変換され得る。Ｒ１ｂとＲ２ｂが共にＨである化合物１４の場合、化合物１４の対応するカルバゾール１６（スキーム１に示される化合物１のもう一つ別の例の化合物）への変換は、化学文献に記載の方法、例えば、化合物１４を適切な溶媒中にてＤＤＱなどの酸化剤で処理することにより行われ得る。
【０１４８】
別法として、アミド形成と酸化の工程の順番を逆にし、化合物１３（Ｒ１ｂとＲ２ｂが共にＨである）を化合物１６に変換することができる。かくして、化合物１３（Ｒ１ｂとＲ２ｂが共にＨである）を上記の操作または類似する操作を用いて酸化し、対応する化合物１５を得ることができる。次に化合物１５のカルボン酸は、上記の操作または類似する操作を再び用いて、第一アミドに変換し、対応する化合物１６を得ることができる。
【０１４９】
化合物１３および１４（Ｒ１ａとＲ１ｂは相互に異なる）はキラル中心を有し、そのために２つのエナンチオマーとして存在する。スキーム６に示される化合物１３および１４の調製はラセミ生成物を提供することができ、それはスキーム１に示されるような式（Ｉ）の化合物の調製に使用されてもよい。別法として、化合物１３および１４は、キラル固定相でのクロマトグラフィーなどの周知の方法を用いて、別々のエナンチオマーに分割されてもよい。
【０１５０】
有機合成の分野の当業者であれば、置換基Ｒ１ａのいくつかは、スキーム１、４、５および６に記載の式（Ｉ）の化合物または中間体の化合物を調製するのに使用される反応条件に適合しない可能性があることを認識するであろう。適合しない場合には、特定の合成工程の間は別の置換基をＲ１ａの代わりに用い、その置換基を化学文献に記載の方法を用いて合成の適切な段階でＲ１ａに変換してもよい。あるいはまた、ある場合には、適切な保護基を用いて特定の合成工程の間でＲ１ａを保護し、合成の適切な段階でそれを除去してもよい。そのような場合は当業者に明らかであろう。かかる合成の変形例をスキーム７に示す。
【０１５１】
特定の置換基Ｒ１ａおよびＲ１ｂを担持するスキーム１に示される化合物１は、前駆体の化合物１７より調製され得る。化合物１７はスキーム６に記載の方法を用いて調製され得るが、スキーム６において化合物１２の代わりに３−オキソシクロヘキサンカルボン酸エチルが使用される。（化合物１７の数種の例が文献に記載されており、例えば、中間体４７−２および４８−１ならびに実施例７３−１が米国特許第８,０８４,６２０号に記載される。）化合物１７のカルボン酸エステルをＲ１ａおよびＲ１ｂに変形するいくつかの方法がスキーム７に示されており；これらの方法のいくつかならびに他の方法も米国特許第８,０８４,６２０号の実施例にて説明されている。スキーム７の化合物１８、２０および２２はスキーム１に示される化合物１の一例である。
【０１５２】
【化２１】
0006592512.tif 000022
【０１５３】
化合物１７のエステル部分は、水素化アルミニウムリチウムなどの適切な還元剤を用いてテトラヒドロフランなどの適切な溶媒中で処理することにより化合物１８（ＲａとＲｂが共にＨである）の対応する第一カルビノールに還元することができる。別法として、化合物１７のエステル部分は、テトラヒドロフランなどの適切な溶媒中、塩化メチルマグネシウムまたはメチルリチウムなどの適切な試薬で処理することにより、化合物１８（ＲａとＲｂが共にメチルである）の対応する第三カルビノールに変換することができる。
【０１５４】
化合物１７のエステル部分は、例えば、メタノール、エタノールまたはテトラヒドロフランなどの適切な共溶媒中、水酸化リチウムまたは水酸化ナトリウム水溶液で処理することにより、化合物１９の対応するカルボン酸に加水分解され得る。化合物１９のカルボン酸の部分は、例えば、Ｎ,Ｏ−ジメチルヒドロキサマート（通常、ワインレブアミド（Weinreb amide）と称される）に変換され、つづいて塩化メチルマグネシウムまたはメチルリチウムなどの試薬で処理し、その後でこのようにして形成されたケトンを水素化ホウ素ナトリウムなどの適切な還元剤で還元することにより、化合物１８の第二カルビノール部分（ＲａおよびＲｂの一方はＨであり、他方はメチルである）に変換され得る。別法として、化合物１９のカルボン酸の部分は、酸塩化物に変換し、つづいてアンモニアあるいは第一または第二アミンで処理するか、あるいはＨＡＴＵ、ＢＯＰまたはＥＤＣとＨＯＢＴもしくはＨＯＡＴとの組み合わせなどの適切なカップリング試薬の存在下でアンモニアまたは塩化アンモニウムまたは第一もしくは第二アミンで処理するか、などの種々の方法のある方法を用いて化合物２０のアミドに変換され得る。
【０１５５】
化合物１７の点線が単結合に相当する場合には、エステル部分を担持する炭素原子は、化合物１７をリチウムビス（トリメチルシリル）アミドまたはリチウムジイソプロピルアミドなどの塩基とテトラヒドロフランなどの適切な溶媒中で反応させ、その得られたアニオンをヨードメタンなどのアルキル化剤で処理することによりアルキル化され、化合物２１（ここで、Ｒ’はメチルである）を得ることができる。次に、化合物２１のエステル部分は、上記される化合物１８を調製するのに使用されるとの同じ方法により化合物２２（ここで、ＲａおよびＲｂは共にＨであるか、共にメチルであるか、一方がＨで、他方がメチルである）のカルビノール基に変換され得る。
【０１５６】
式（Ｉ）の化合物を調製するのに使用されるスキーム１の特定の化合物はまた、スキーム８に示される操作を用いて調製されてもよい。
【０１５７】
【化２２】
0006592512.tif 000023
【０１５８】
スキーム６に示される適切な２−ヒドラジニル安息香酸より調製される化合物２３（例えば、米国特許第８,０８４,６２０号、中間体４８−１を参照のこと）は、適切なハロゲン化試薬で処理することにより化合物２４（ここで、Ｒ３はハロゲン原子である）を生成し得る。例えば、化合物２３をＮ−クロロスクシンイミドなどの塩素化剤と反応させて化合物２４（ここでＲ３はＣｌである）を得、化合物２３を１−（クロロメチル）−４−フルオロ−１,４−ジアゾニアビシクロ［２.２.２］オクタン−ビス（テトラフルオロボラート）［セレクトフルオール（SELECTＦLUOR）（登録商標）］などのフッ素化剤と反応させて化合物２４（ここでＲ３はＦである）を得ることができる。化合物２４の対応する化合物２５（スキーム１の化合物の一例の化合物である）への変換は、そのうちのいくつかはスキーム７にて記載される、文献に記載の方法を用いて達成され得る。
【０１５９】
スキーム９に示されるように、化合物２６は化合物２７（スキーム１の化合物５の一例の化合物である）に変換され得る。同様にして、化合物２８は化合物２９（スキーム１の化合物２の一例の化合物である）に変換され得る。
【０１６０】
【化２３】
0006592512.tif 000024
【０１６１】
スキーム９において、ＹはＢｒ、Ｃｌまたはトリフルオロメタンスルホニルオキシなどの適切な基を意味し；（ＲＯ）２Ｂはボロン酸またはボロン酸エステルを意味し；ＸＨは式（Ｉ）のＱ基を意味し、ここでＲ５はＨと置換されている。化合物２６の化合物２７への変換、および化合物２８の化合物２９への変換は、スキーム４にて同様に化合物６を化合物７に変形するのと同じ方法を用いて達成され得る。また、化合物２６の化合物２８への変換、および化合物２７の化合物２９への変換は、スキーム１の化合物１を化合物４に変形するのに記載される方法を用いて達成され得る。
【０１６２】
ある場合において、一の中間体をもう一つ別の中間体または式（Ｉ）の化合物に変換するのに１回より多くの合成反応を必要とする場合、個々の工程の順序は変更可能である。そのような場合は有機合成の分野の当業者であれば認識されよう。一例がスキーム９に示される。化合物２６の化合物２９への変換は、（１）化合物２６のアミンを化合物２７の置換アミンに変換し、つづいて（２）化合物２７のＹ基を化合物２９のボロン酸またはボロン酸エステルに変換することによりなされうる。別法として、化合物２６を化合物２９とする同じ変換は、（１）化合物２６のＹ基を化合物２８のボロン酸またはボロン酸エステルに変換し、つづいて（２）化合物２８のアミンを化合物２９の置換アミンに変換することによりなされうる。もう一つ別の例がスキーム６に示される。化合物１３の化合物１６への変換は、（１）化合物１３のカルボン酸を化合物１４のカルボキシアミドに変換し、つづいて（２）化合物１４をカルバゾール１６に酸化することによりなされうる。別法として、化合物１３を化合物１６とする同じ変換は、（１）化合物１３をカルバゾール１５に変換し、つづいて（２）化合物１５のカルボン酸を化合物１６のカルボキシアミドに変換することによりなされうる。
【０１６３】
実施例
本発明の化合物、および本発明の化合物の調製に用いられる中間体は、次の実施例に示される操作および関連操作を用いて調製され得る。これらの実施例に使用される方法および条件、およびこれらの実施例にて調製される実際の化合物は、限定を意味するものではなく、本発明の化合物がどのように調製され得るかの説明を意図とする。これらの実施例にて使用される出発材料および試剤は、本明細書に記載の操作により調製されない場合には、一般に、市販されているか、または化学文献にて報告されているか、あるいは化学文献に記載の操作を用いることで調製され得るかのいずれかである。本発明は次の実施例にてさらに具体的に説明される。実施例は単なる例示であると認識すべきである。上記の開示および実施例から、当業者は本発明の本質的特徴を確かめることができ、その精神および範囲から逸脱することなく、種々の変形および修飾を加え、本発明を種々の使用および条件に適応させることができる。結果として、本発明は本明細書にて後述される例示としての実施例により制限されるものではなく、むしろ添付した特許請求の範囲により限定される。
【０１６４】
所定の実施例における「乾燥させて濃縮し」なる語は、一般に、無水硫酸ナトリウムまたは硫酸マグネシウムのいずれかを用いて有機溶媒の溶液から残りの大部分の水を除去し、つづいて濾過し、その濾液から（一般に、減圧下、かつその調製される物質の安定性に適する温度で）溶媒を除去することをいう。カラムクロマトグラフィーは、一般に、フラッシュクロマトグラフィー技法（Still,W.ら、J. Org. Chem., 43：2923（1978））を用いるか、あるいはＩｓｃｏ中圧クロマトグラフィー装置（Teledyne Corporation）を用いるプレパックのシリカゲルカートリッジを用いて、指示される溶媒または混合溶媒で溶出して実施される。プレパラティブ高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）は、分離される物質の量に適する大きさの逆相カラム（ウォーターズ・サンファイアー（Waters SunFire）Ｃ１８、ウォーターズ・エックスブリッジ（Waters XBridge）Ｃ１８、フェノメネックス（PHENOMENEX）（登録商標）アキシア（Axia）Ｃ１８、ＹＭＣ  Ｓ５  ＯＤＳ等）を用い、一般に、水中メタノールまたはアセトニトリルの濃度を増大させる勾配で、さらに０.０５％または０.１％トリフルオロ酢酸または１０ｍＭ酢酸アンモニウムを含有し、カラムの大きさおよび分離が達成されるのに適する溶出速度で溶出して実施された。超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）、一の形態の超臨界または臨界前の流体ＣＯ２およびアルコールなどの極性有機修飾剤を含有する移動相を用いる順相ＨＰＬＣを用いてキラル混合物を分離した。（White,C.ら、J. Chromatography A, 1074：175（2005））。エナンチオマーまたはジアステレオマーのキラルＳＦＣ分離は個々のケースで記載される条件を用いて行われた。質量スペクトルのデータは電子噴射イオン化を用いる液体クロマトグラフィー−質量スペクトロメトリーにより得られた。
【０１６５】
単結晶ｘ−線回折データは、Ｃｕ  Ｋα照射（λ＝１.５４１８Å）を用いてブルカー（Bruker）−ＡＸＳ  ＡＰＥＸ２  ＣＣＤシステムに集められた。測定される強度データのインデックス作成および処理は一式のＡＰＥＸ２ソフトウェアパッケージ／プログラム（the APEX2 User Manual, v1.27を参照のこと；Bruker AXS,Inc.,WI 53711 USA）でなされた。指示があれば、データ収集の間、結晶はオックスフォード・クリオシステムズ・クリオストリーム・クーラー（Oxford Cryosystems cryostream cooler）（Cosier,J.ら、J. Appl. Cryst., 19：105（1986））の冷却流で冷却された。その構造は、直接的方法により解決され、観察された反射光に基づき、結晶学的パッケージSHELXTLを用いて精密化された（the APEX2 User Manual, v1.27を参照のこと；Bruker AXS,Inc., WI 53711 USA）。誘導された原子パラメーター（座標および温度因子）がフルマトリックス最小二乗法を通して精密化された。その精密化で最小化された関数が
【化２４】
0006592512.tif 000025
であった。Ｒは
【化２５】
0006592512.tif 000026
と定義され、一方で
【化２６】
0006592512.tif 000027
であり、ここでｗは観察される強度の誤差に基づく適切な重み関数である。差の分布図が精密化のあらゆる段階で検査された。等方性温度因子の理想とする位置に水素が導入されたが、水素パラメーターに変化はなかった。Stoutら、X-Ray Structure Determination：A Practical Guide、MacMillan（1968）に記載の操作に従って単位格子パラメーターを得た。
【０１６６】
化学名はChemBioDraw Ultra、version 12.0（CambridgeSoft）を用いて決定された。
【０１６７】
【表１】
0006592512.tif 000028
【０１６８】
中間体１
（ＲＳ）−５−ブロモ−６−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド
【化２７】
0006592512.tif 000029
【０１６９】
中間体１Ａ：  ４−ブロモ−２,５−ジフルオロ安息香酸
【化２８】
0006592512.tif 000030
【０１７０】
１,４−ジブロモ−２,５−ジフルオロベンゼン（６４０ｍｇ、２.３５ミリモル）の乾燥ジエチルエーテル（１０ｍＬ）中溶液をドライアイス−アセトン浴中で冷却し、ヘキサン中２.５Ｍ  ｎ−ブチルリチウム（１.０４ｍＬ、２.５９ミリモル）を滴下して処理した。該溶液を−７８℃で３０分間攪拌し、次にドライアイス片で処理した。５分後に冷却浴を取り外し、混合物を室温に加温しながらさらに３０分間攪拌した。混合物をＥｔＯＡｃおよび水で希釈した。有機相を分離し、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液で２回洗浄した。水相を合わせ、１Ｍ  ＨＣｌ水溶液で酸性にし、ＤＣＭで２回抽出し、有機相を合わせ、乾燥させ、濃縮して４−ブロモ−２,５−ジフルオロ安息香酸（２９７ｍｇ、収率５３％）を白色の固体として得た。
【０１７１】
中間体１Ｂ：  ４−ブロモ−５−フルオロ−２−ヒドラジニル安息香酸・塩酸塩
【化２９】
0006592512.tif 000031
【０１７２】
４−ブロモ−２,５−ジフルオロ安息香酸（２.５０ｇ、１０.６ミリモル）およびヒドラジン（３.８１ｍＬ、１２１ミリモル）のＮ−メチル−２−ピロリジノン（２ｍＬ）中混合物を９５℃で４時間加熱した。該混合物を冷却し、ＮａＣｌ−氷浴中で冷却した６Ｍ  ＨＣｌ水溶液（４００ｍＬ）に激しく攪拌しながら注いだ。得られた沈殿物を濾過で集め、６Ｍ  ＨＣｌ水溶液（２００ｍＬ）で洗浄し、真空下で乾燥させ、４−ブロモ−５−フルオロ−２−ヒドラジニル安息香酸・塩酸塩（１.８８ｇ、純度７１％、収率４４％）を黄色固体として得、それをさらに精製することなく用いた。
【０１７３】
中間体１Ｂの別合成：
２−アミノ−４−ブロモ−５−フルオロ安息香酸（１０.０ｇ、４２.７ミリモル）の３７％水性ＨＣｌ（４２.７ｍＬ）および水（１４.３ｍＬ）の混合液中懸濁液をＮａＣｌ−氷浴にて攪拌し、亜硝酸ナトリウム（３.２４ｇ、４７.０ミリモル）の水（１５.７ｍＬ）中溶液を滴下して処理した。添加が終了したなら、該混合物をさらに３０分間攪拌した。塩化スズ（ＩＩ）・二水和物（２８.９ｇ、１２８ミリモル）の３７％水性ＨＣｌ（２７.５ｍＬ）中溶液を滴下して加えた。冷却浴を取り外し、混合物を室温で４５分間攪拌した。粘度のある懸濁液を濾過し、沈殿物を集め、水で十分に洗浄し、減圧下で一夜乾燥させた。固体を音波処理に付しながらＭｅＯＨでトリチュレートし、沈殿物を濾過で集め、ＭｅＯＨで洗浄し、乾燥させた。濾液を濃縮し、その残渣をＤＣＭでトリチュレートした。得られた固体を濾過で集め、乾燥させ、その２つの固体を合わせ、４−ブロモ−５−フルオロ−２−ヒドラジニル安息香酸・塩酸塩（５.３７ｇ、収率４４％）を白色の固体として得た。質量スペクトル  ｍ／ｚ  ２４９、２５１（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１７４】
中間体１Ｃ：  ５−ブロモ−６−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボン酸
【化３０】
0006592512.tif 000032
【０１７５】
４−ブロモ−５−フルオロ−２−ヒドラジニル安息香酸・塩酸塩（５.００ｇ、１７.５ミリモル）および（ＲＳ）−３−トリフルオロメチルシクロヘキサノン（４.０７ｇ、２４.５ミリモル）の酢酸（８.０ｍＬ）中混合物を７８℃で１８時間攪拌した。混合物を室温に冷却して濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃに懸濁させ、沈殿物を濾過で集めて乾燥させた。濾液を濃縮し、残渣をＤＣＭに懸濁させた。沈殿物を濾過で集め、乾燥させ、その２つの沈殿物を合わせ、５−ブロモ−６−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボン酸（４.１０ｇ、収率５５％）を明橙色の固体として得た。質量スペクトル  ｍ／ｚ  ３８０、３８２（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１７６】
中間体１：
５−ブロモ−６−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボン酸（２.００ｇ、５.２６ミリモル）、ＮＨ４Ｃｌ（２.８１ｇ、５２.６ミリモル）およびＨＡＴＵ（２.２０ｇ、５.７９ミリモル）のＤＭＦ（２５ｍＬ）中溶液をトリエチルアミン（３.６７ｍＬ、２６.３ミリモル）で処理し、その混合物を室温で９０分間攪拌した。氷水（３０ｍＬ）を添加し、その混合物を３０分間攪拌した。沈殿物を濾過で集め、水（６０ｍＬ）で洗浄した。集めた固体をトルエン（３０ｍＬ）に２回懸濁させ、真空下で濃縮し、ついで乾燥させた。残渣を１０％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ−ヘキサン（０−１００％の勾配）で溶出するシリカゲル上のカラムクロマトグラフィーに供し、５−ブロモ−６−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド（１.５５ｇ、収率７４％）を明黄色の固体として得た。質量スペクトル  ｍ／ｚ  ３７９、３８１（Ｍ＋Ｈ）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＨ−ｄ４）δ  ７.４６（ｄ，Ｊ＝９.９Ｈｚ，１Ｈ）、３.４６（ｄｄ，Ｊ＝１６.１、４.４Ｈｚ，１Ｈ）、３.１１（ｄｄ，Ｊ＝１６.４、５.３Ｈｚ，１Ｈ）、３.０６−２.９３（ｍ，１Ｈ）、２.９２−２.８０（ｍ，１Ｈ）、２.７９−２.５９（ｍ，１Ｈ）、２.３７−２.２３（ｍ，１Ｈ）、１.８６−１.６５（ｍ，１Ｈ）
【０１７７】
中間体２
５−ブロモ−３,３,６−トリフルオロ−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド
【化３１】
0006592512.tif 000033
【０１７８】
中間体１Ｂを中間体１に変換するのに使用される操作に従って、４,４−ジフルオロシクロヘキサノンが５−ブロモ−３,３,６−トリフルオロ−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミドに変換された。質量スペクトル  ｍ／ｚ  ３４７、３４９（Ｍ＋Ｈ）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  １１.３４（ｓ，１Ｈ）、８.１２（ｂｒ.ｓ，１Ｈ）、７.６４（ｄ，Ｊ＝１０.１Ｈｚ，１Ｈ）、７.５７（ｂｒ.ｓ，１Ｈ）、３.５４（ｔ，Ｊ＝１４.４Ｈｚ，２Ｈ）、２.９７（ｔ，Ｊ＝６.６Ｈｚ，２Ｈ）、２.３１（ｔｔ，Ｊ＝１３.９、６.７Ｈｚ，２Ｈ）
【０１７９】
中間体３
４−ブロモ−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド
【化３２】
0006592512.tif 000034
【０１８０】
中間体３Ａ：  ５−ブロモ−６−フルオロ−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボン酸
【化３３】
0006592512.tif 000035
【０１８１】
４−ブロモ−５−フルオロ−２−ヒドラジニル安息香酸・塩酸塩［中間体１Ｂ］（１２.０ｇ、４２.０ミリモル）およびシクロヘキサノン（１２.４ｇ、１２６ミリモル）の酢酸（９０ｍＬ）中混合物を９０℃で一夜攪拌した。その混合物を室温に冷却し、沈殿物を濾過で集め、水で洗浄し、乾燥させて５−ブロモ−６−フルオロ−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボン酸（５.０２ｇ、１６.１ミリモル、収率３８％）を明黄色の固体として得た。質量スペクトル  ｍ／ｚ  ３１２、３１４（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１８２】
中間体３Ｂ：  ４−ブロモ−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボン酸
【化３４】
0006592512.tif 000036
【０１８３】
５−ブロモ−６−フルオロ−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボン酸（５.００ｇ、１６.０ミリモル）およびＤＤＱ（８.００ｇ、３５.２ミリモル）のＴＨＦ（６０ｍＬ）中混合物を６０℃で３時間攪拌した。該混合物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃで希釈し、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液、水および１Ｍ水性ＨＣｌで連続して洗浄し、乾燥させ、濃縮して粗４−ブロモ−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボン酸（５.３０ｇ、収率８６％、純度８０％）を得、それをさらに精製することなく用いた。
【０１８４】
中間体３：
４−ブロモ−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボン酸（４.７０ｇ、１５.３ミリモル）、ＨＯＢＴ（２.３４ｇ、１５.３ミリモル）およびＥＤＣ（２.９２ｇ、１５.３ミリモル）のＴＨＦ（７０ｍＬ）中混合物を室温で３０分間攪拌した。水性水酸化アンモニウム（０.８９１ｍＬ、２２.９ミリモル）を加え、該混合物を室温で一夜攪拌した。その混合物を濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃに溶かし、水で２回、ついでＮａＨＣＯ３飽和水溶液で洗浄し、乾燥させて濃縮した。残渣をＤＣＭでトリチュレートし、４−ブロモ−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（３.４０ｇ、収率７３％）を明褐色の固体として得た。質量スペクトル  ｍ／ｚ  ３０７、３０９（Ｍ＋Ｈ）＋、２９０、２９２（Ｍ＋Ｈ−ＮＨ３）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＨ−ｄ４）δ  ８.７３（ｄｄ，Ｊ＝８.１、０.９Ｈｚ，１Ｈ）、７.８３（ｄ，Ｊ＝９.９Ｈｚ，１Ｈ）、７.６９−７.６３（ｍ，１Ｈ）、７.５４（ｄｄｄ，Ｊ＝８.２、７.１、１.２Ｈｚ，１Ｈ）、７.２９（ｄｄｄ，Ｊ＝８.１、７.１、１.０Ｈｚ，１Ｈ）
【０１８５】
中間体４
４−ブロモ−３−フルオロ−７−（トリフルオロメチル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド
【化３５】
0006592512.tif 000037
【０１８６】
中間体３Ａを中間体３に変換するのに使用される操作に従って、５−ブロモ−６−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボン酸［中間体１Ｃ］が４−ブロモ−３−フルオロ−７−（トリフルオロメチル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミドに変換された。質量スペクトル  ｍ／ｚ  ４１６、４１８（Ｍ＋Ｈ＋ＣＨ３ＣＮ）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＨ−ｄ４）δ  ８.８３（ｄ，Ｊ＝８.６Ｈｚ，１Ｈ）、８.００（ｄ，Ｊ＝０.７Ｈｚ，１Ｈ）、７.８９（ｄ，Ｊ＝９.８Ｈｚ，１Ｈ）、７.５２（ｄｄ，Ｊ＝８.４、１.１Ｈｚ，１Ｈ）
【０１８７】
中間体５
（ＲＳ）−５−ブロモ−６−フルオロ−２−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド
【化３６】
0006592512.tif 000038
【０１８８】
中間体５Ａ：（ＲＳ）−５−ブロモ−２−（エトキシカルボニル）−６−フルオロ−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボン酸
【化３７】
0006592512.tif 000039
【０１８９】
４−ブロモ−５−フルオロ−２−ヒドラジニル安息香酸・塩酸塩［中間体１Ｂ］（５.３７ｇ、１８.８ミリモル）、エチル  （ＲＳ）−３−オキソシクロヘキサンカルボキシラート（３.５２ｇ、２０.７ミリモル）および酢酸（３.２３ｍＬ、５６.４ミリモル）のトルエン（９０ｍＬ）中混合物を１１０℃で２０時間加熱した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をトルエン（４３ｍＬ）およびＴＦＡ（１１ｍＬ）で希釈した。混合物を９０−９４℃で一夜攪拌した。混合物を冷却し、ＥｔＯＡｃで希釈し、音波処理に付し、沈殿物を濾過で集めた。濾液を濃縮し、残渣を音波処理に供してＥｔＯＡｃに懸濁させ、別の沈殿物を得、それも濾過で集め、ＥｔＯＡｃで洗浄した。固体を合わせ、ＭｅＯＨで２回トリチュレートして固体を得た。濾液を合わせ、濃縮し、残渣をＭｅＯＨでトリチュレートし、さらなる固体を得た。それらの固体を合わせ、（ＲＳ）−５−ブロモ−２−エトキシカルボニル−６−フルオロ−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボン酸（３.３８ｇ）を淡黄色の固体として得た。質量スペクトル  ｍ／ｚ  ３８４、３８６（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１９０】
中間体５Ｂ：  エチル  （ＲＳ）−５−ブロモ−８−カルバモイル−６−フルオロ−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−２−カルボキシラート
【化３８】
0006592512.tif 000040
【０１９１】
（ＲＳ）−５−ブロモ−２−（エトキシカルボニル）−６−フルオロ−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボン酸（０.５１３ｇ、１.３４ミリモル）、ＥＤＣ（０.３８４ｇ、２.００ミリモル）およびＨＯＢＴ（０.３０７ｇ、２.００ミリモル）のＴＨＦ（１０ｍＬ）およびＤＣＭ（１.７ｍＬ）中混合物を室温で２０分間攪拌した。水性ＮＨ４ＯＨ（２８％、０.０７８ｍＬ、２.００ミリモル）を添加し、混合物を室温で６０分間攪拌した。その混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液で２回、次にブラインで洗浄した。水層をＥｔＯＡｃで抽出し、有機層を合わせ、乾燥させて濃縮した。残渣を音波処理に供してＭｅＯＨにトリチュレートさせ、エチル  （ＲＳ）−５−ブロモ−８−カルバモイル−６−フルオロ−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−２−カルボキシラート（０.４３２ｇ、収率８４％）を黄色の固体として得た。質量スペクトル  ｍ／ｚ  ３８３、３８５（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１９２】
中間体５：
エチル  （ＲＳ）−５−ブロモ−８−カルバモイル−６−フルオロ−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−２−カルボキシラート（１０.０ｇ、２６.１ミリモル）の−７８℃でのＴＨＦ（２００ｍＬ）中溶液に、エーテル中１.６Ｍメチルリチウム（４９ｍＬ、７８ミリモル）を３０分間にわたって滴下して処理した。混合物を−７８℃で４５分間攪拌し、次にさらなるメチルリチウム溶液（３３ｍＬ）で２５分間にわたって処理した。該混合物を−７８℃でさらに９０分間攪拌し、ついでＮＨ４Ｃｌ飽和水溶液で処理し、室温までの加温に供した。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、水およびブラインで連続して洗浄した。水層をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を合わせ、乾燥させて濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ（約１００ｍＬ）に溶かし、シリカゲルのパッドを上に乗せたセライト（Celite）（登録商標）のパッドを通して濾過した。そのセライト（登録商標）およびシリカゲルをＥｔＯＡｃ（約１０００ｍＬ）でさらに洗浄した。合わせた濾液を濃縮し、（ＲＳ）−５−ブロモ−６−フルオロ−２−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド（９.２４ｇ、収率９６％）を淡黄色の固体として得た。質量スペクトル  ｍ／ｚ  ３６９、３７１（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１９３】
中間体６および７
（Ｒ）−５−ブロモ−６−フルオロ−２−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド（Ｉ−６）、および
（Ｓ）−５−ブロモ−６−フルオロ−２−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド（Ｉ−７）
【化３９】
0006592512.tif 000041
【０１９４】
（ＲＳ）−５−ブロモ−６−フルオロ−２−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド［中間体５］のサンプルはキラル超臨界的流体クロマトグラフィー（カラム：キラルパック（CHIRALPAK）（登録商標）ＯＤ−Ｈ（３ｘ２５ｃｍ、５μｍ）；移動相：ＣＯ２−ＭｅＯＨ（７０：３０）、１５０ｍＬ／分、４０℃）によって分離された。カラムより溶出する第１のピークから（Ｒ）−５−ブロモ−６−フルオロ−２−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド［中間体６］を得た。カラムより溶出する第２のピークから（Ｓ）−５−ブロモ−６−フルオロ−２−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド［中間体７］を得た。２つのエナンチオマーの質量スペクトルおよび１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは同じであった。質量スペクトル  ｍ／ｚ  ３６９、３７１（Ｍ＋Ｈ）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  １０.９６（ｓ，１Ｈ）、８.０７（ｂｒ.ｓ，１Ｈ）、７.５５（ｄ，Ｊ＝１０.３Ｈｚ，１Ｈ）、７.５０（ｂｒ.ｓ，１Ｈ）、４.２４（ｓ，１Ｈ）、３.２６（ｄｄ，Ｊ＝１５.８、４.４Ｈｚ，１Ｈ）、２.９３（ｄｄ，Ｊ＝１７.１、４.６Ｈｚ，１Ｈ）、２.７２（ｔ，Ｊ＝１１.７Ｈｚ，１Ｈ）、２.４８−２.４０（ｍ，１Ｈ）、２.１２（ｄ，Ｊ＝９.２Ｈｚ，１Ｈ）、１.７０−１.６２（ｍ，１Ｈ）および１.３２（ｑｄ，Ｊ＝１２.４、５.３Ｈｚ，１Ｈ）
【０１９５】
別の超臨界的流体クロマトグラフィー分離：
（ＲＳ）−５−ブロモ−６−フルオロ−２−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド［中間体５］のサンプルがキラル超臨界的流体クロマトグラフィー（カラム：キラルパック（登録商標）ＡＤ−Ｈ（３ｘ２５ｃｍ、５μｍ）；移動相：ＣＯ２−ＭｅＯＨ（５５：４５）、１５０ｍＬ／分、４０℃）によって分離された。カラムより溶出する第１のピークから（Ｓ）−５−ブロモ−６−フルオロ−２−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド［中間体７］を得た。カラムより溶出する第２のピークから（Ｒ）−５−ブロモ−６−フルオロ−２−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド［中間体６］を得た。
【０１９６】
中間体８
６−フルオロ−２−（Ｓ）−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−５−（ＲＳ）−（１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド（ジアステレオマー混合物）
【化４０】
0006592512.tif 000042
【０１９７】
中間体８Ａ：  tert−ブチル  ５−（４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル）−３,４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−カルボキシラート
【化４１】
0006592512.tif 000043
【０１９８】
tert−ブチル  ５−ブロモ−３,４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−カルボキシラート（０.５００ｇ、１.６０ミリモル）および４,４,４’,４’,５,５,５’,５’−オクタメチル−２,２’−ビ（１,３,２−ジオキサボロラン）（０.４８８ｇ、１.９２ミリモル）のＤＭＦ（８ｍＬ）中混合物を抜気−窒素の充填のサイクルに３回供した。酢酸カリウム（０.４７２ｇ、４.８０ミリモル）およびＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）・ＤＣＭの複合体（０.１１７ｇ、０.１６０ミリモル）を添加し、その混合物を抜気−窒素の充填のサイクルに２回以上供し、窒素雰囲気下にて９０℃で一夜加熱した。混合物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃで希釈し、水、１０％水性ＬｉＣｌおよび飽和ブラインで連続して洗浄し、乾燥させて濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ−ヘキサンで溶出するシリカゲル上のカラムクロマトグラフィーに供し、tert−ブチル  ５−（４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル）−３,４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−カルボキシラート（０.５１４ｇ、収率８９％）を白色の固体として得た。質量スペクトル  ｍ／ｚ  ３６０（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１９９】
中間体８Ｂ：  tert−ブチル  ５−（ＲＳ）−（８−カルバモイル−６−フルオロ−２−（Ｓ）−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−５−イル）−３,４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−カルボキシラート（ジアステレオマー混合物）
【化４２】
0006592512.tif 000044
【０２００】
（Ｓ）−５−ブロモ−６−フルオロ−２−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド［中間体７］（０.１５５ｇ、０.４２０ミリモル）、tert−ブチル  ５−（４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル）−３,４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−カルボキシラート（０.１８１ｇ、０.５０４ミリモル）、２Ｍ水性Ｋ３ＰＯ４（０.６３０ｍＬ、１.２６ミリモル）およびＴＨＦ（３ｍＬ）の混合物を抜気−窒素の充填のサイクルに３回供した。混合物を１,１’−ビス（ジ−tert−ブチルホスフィノ）フェロセンパラジウムジクロリド（０.０１４ｇ、０.０２１ミリモル）で処理し、該混合物を抜気−窒素の充填のサイクルに２回以上供した。混合物を室温で一夜攪拌し、次にＥｔＯＡｃで希釈し、水および飽和ブラインで連続して洗浄し、乾燥させて濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ−ヘキサン（５０−７０％の勾配）で溶出するシリカゲル上のカラムクロマトグラフィーに供し、tert−ブチル  ５−（ＲＳ）−（８−カルバモイル−６−フルオロ−２−（Ｓ）−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−５−イル）−３,４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−カルボキシラート（ジアステレオマー混合物）（０.１７８ｇ、収率８１％）をオフホワイトの固体として得た。質量スペクトル  ｍ／ｚ  ５２２（Ｍ＋Ｈ）＋
【０２０１】
中間体８：
tert−ブチル  ５−（ＲＳ）−（８−カルバモイル−６−フルオロ−２−（Ｓ）−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−５−イル）−３,４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−カルボキシラート（ジアステレオマー混合物）（０.１７８ｇ、０.３４１ミリモル）およびＴＦＡ（５ｍＬ）の混合物を室温で３０分間攪拌した。混合物を濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃで希釈し、１.５Ｍ水性Ｋ２ＨＰＯ４および飽和ブラインで連続して洗浄し、乾燥させ、濃縮して６−フルオロ−２−（Ｓ）−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−５−（ＲＳ）−（１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド（ジアステレオマー混合物）を得、それをさらに精製することなく用いた。質量スペクトル  ｍ／ｚ  ４２２（Ｍ＋Ｈ）＋
【０２０２】
中間体９および１０
６−フルオロ−２−（Ｓ）−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−５−（１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド（単一ジアステレオマー）
【化４３】
0006592512.tif 000045
【０２０３】
粗６−フルオロ−２−（Ｓ）−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−５−（ＲＳ）−（１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド（ジアステレオマー混合物）［中間体８］をプレパラティブ逆相ＨＰＬＣに供した。カラムより溶出する第１のピークから、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液で中和した後、６−フルオロ−２−（Ｓ）−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−５−（１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミドの一のジアステレオマー［中間体９］（０.０３６ｇ、収率２５％）を第２のピークにある１−２％のジアステレオマーで汚染された状態で得た。カラムより溶出する第２のピークから、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液で中和した後、６−フルオロ−２−（Ｓ）−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−５−（１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミドの別のジアステレオマー［中間体１０］（０.０３１ｇ、収率２０％）を第１のピークにある８％のジアステレオマーで汚染された状態で得た。両方のジアステレオマーの質量スペクトルは中間体８のスペクトルと同じであった。ＨＰＬＣ保持時間（カラム：クロモリス（CHROMOLITH）（登録商標）スピード（Speed）ＲＯＤ  ４.６ｘ５０ｍｍ；溶媒：０.１％ＴＦＡ含有のＭｅＯＨ−水、４.０ｍＬ／分；勾配：４分間にわたって１０−９０％）：中間体９−１.８８分間；中間体１０−２.０２分間であり；アトロプ異性結合の回りの絶対配置は帰属されなかった。
【０２０４】
中間体１１
（ＲＳ）−３−フルオロ−４−（１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド
【化４４】
0006592512.tif 000046
【０２０５】
中間体８を調製するのに用いた操作に従って、４−ブロモ−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド［中間体３］が（ＲＳ）−３−フルオロ−４−（１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミドに変換された。質量スペクトル  ｍ／ｚ  ３６０（Ｍ＋Ｈ）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＨ−ｄ４）δ  ７.８５（ｄ，Ｊ＝１０.４Ｈｚ，１Ｈ）、７.６０（ｄ，Ｊ＝８.２Ｈｚ，１Ｈ）、７.５３−７.４６（ｍ，１Ｈ）、７.４５−７.４１（ｍ，１Ｈ）、７.４０−７.３６（ｍ，１Ｈ）、７.３６−７.３０（ｍ，１Ｈ）、６.９３−６.８６（ｍ，１Ｈ）、６.８５−６.７８（ｍ，１Ｈ）、４.５０−４.２７（ｍ，２Ｈ）、３.３０−３.０７（ｍ，２Ｈ）、２.８５−２.６８（ｍ，１Ｈ）、２.６２−２.４３（ｍ，１Ｈ）
【０２０６】
中間体１２
（ＲＳ）−３,３,６−トリフルオロ−５−（１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド
【化４５】
0006592512.tif 000047
【０２０７】
中間体８を調製するのに用いた操作に従って、５−ブロモ−３,３,６−トリフルオロ−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド［中間体２］が、（ＲＳ）−３,３,６−トリフルオロ−５−（１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミドに変換された。質量スペクトル  ｍ／ｚ  ４００（Ｍ＋Ｈ）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ  １０.１０（ｂｒ.ｓ，１Ｈ）、７.３４−７.２９（ｍ，１Ｈ）、７.２７−７.２３（ｍ，１Ｈ）、７.２０（ｄ，Ｊ＝９.８Ｈｚ，１Ｈ）、７.１５（ｄｄ，Ｊ＝７.４、１.３Ｈｚ，１Ｈ）、４.８１−４.５５（ｍ，２Ｈ）、３.７５−３.５９（ｍ，１Ｈ）、３.４７（ｄｄｄ，Ｊ＝１２.８、７.９、４.６Ｈｚ，１Ｈ）、３.０１（ｔ，Ｊ＝６.６Ｈｚ，２Ｈ）、２.６８−２.１７（ｍ，６Ｈ）
【０２０８】
中間体１３
（ＲＳ）−３−フルオロ−４−（１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−７−（トリフルオロメチル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド・ＴＦＡ塩
【化４６】
0006592512.tif 000048
【０２０９】
中間体８を調製するのに用いた操作に従って、４−ブロモ−３−フルオロ−７−（トリフルオロメチル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド［中間体４］が、（ＲＳ）−３−フルオロ−４−（１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−７−（トリフルオロメチル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド・ＴＦＡ塩に変換された。質量スペクトル  ｍ／ｚ  ４２８（Ｍ＋Ｈ）＋、４６９（Ｍ＋Ｈ＋ＣＨ３ＣＮ）＋
【０２１０】
中間体１４
６−フルオロ−５−（１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−２−（トリフルオロメチル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド・ＴＦＡ塩（ジアステレオマー混合物）
【化４７】
0006592512.tif 000049
【０２１１】
中間体８を調製するのに用いた操作に従って、（ＲＳ）−５−ブロモ−６−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド［中間体１］が、ジアステレオマー混合物としての（ＲＳ）−３−フルオロ−４−（１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−７−（トリフルオロメチル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド・ＴＦＡ塩に変換された。質量スペクトル  ｍ／ｚ  ４３２（Ｍ＋Ｈ）＋、４７３（Ｍ＋Ｈ＋ＣＨ３ＣＮ）＋
【０２１２】
中間体１５
（ＲＳ）−４−（３,４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１,４］オキサジン−８−イル）−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド
【化４８】
0006592512.tif 000050
【０２１３】
中間体１５Ａ：  tert−ブチル  ８−ブロモ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１,４］オキサジン−４（３Ｈ）−カルボキシラート
【化４９】
0006592512.tif 000051
【０２１４】
８−ブロモ−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１,４］オキサジン［ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１２／１４９２３６の実施例１０に記載の操作に従って調製］（１.２０ｇ、５.６１ミリモル）、ジ−tert−ブチル  ジカルボナート（１.４３ｍＬ、６.１７ミリモル）およびトリエチルアミン（２.３４ｍＬ、１６.８ミリモル）のＴＨＦ（２０ｍＬ）中溶液を室温で５時間攪拌した。反応は観察されず、そこで該混合物を濃縮した。残渣を１,４−ジオキサン（２５ｍＬ）に溶かし、Ｋ２ＣＯ３（０.７７５ｇ、５.６１ミリモル）で、そしてさらなるジ−tert−ブチル  ジカルボナート（１.４３ｍＬ、６.１７ミリモル）で処理し、混合物を９０℃で３日間加熱した。混合物を濾過し、濾液を濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ−ヘキサン（０−５０％の勾配）で溶出するシリカゲル上のカラムクロマトグラフィーに付して精製し、tert−ブチル  ８−ブロモ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１,４］オキサジン−４（３Ｈ）−カルボキシラート（１.３７ｇ、収率７８％）を明褐色の油状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ  ７.７５（ｄ，Ｊ＝７.５Ｈｚ，１Ｈ）、７.２７（ｄｄ，Ｊ＝８.０、１.５Ｈｚ，１Ｈ）、６.７８（ｔ，Ｊ＝８.２Ｈｚ，１Ｈ）、４.３８（ｄｄ，Ｊ＝５.１、４.２Ｈｚ，２Ｈ）、３.９２−３.８７（ｍ，２Ｈ）、１.５６（ｓ，９Ｈ）
【０２１５】
中間体１５：
中間体８を調製するのに用いた操作に従うが、工程Ｂにおいて（Ｓ）−５−ブロモ−６−フルオロ−２−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド［中間体７］の代わりに４−ブロモ−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド［中間体３］を用いて、tert−ブチル  ８−ブロモ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１,４］オキサジン−４（３Ｈ）−カルボキシラートが（ＲＳ）−４−（３,４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１,４］オキサジン−８−イル）−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミドに変換された。質量スペクトル  ｍ／ｚ  ３６２（Ｍ＋Ｈ）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＨ−ｄ４）δ  ７.７６（ｄ，Ｊ＝１０.４Ｈｚ，１Ｈ）、７.５６（ｄ，Ｊ＝８.２Ｈｚ，１Ｈ）、７.３５（ｄｄｄ，Ｊ＝８.２、７.１、１.２Ｈｚ，１Ｈ）、７.２４−７.１８（ｍ，１Ｈ）、６.９８−６.８９（ｍ，２Ｈ）、６.８７−６.８１（ｍ，１Ｈ）、６.６７（ｄｄ，Ｊ＝７.３、１.６Ｈｚ，１Ｈ）、４.１６−３.９６（ｍ，２Ｈ）、３.４３−３.３４（ｍ，２Ｈ）
【０２１６】
中間体１６
（ＲＳ）−３−フルオロ−４−（２,３,４,５−テトラヒドロベンゾ［ｂ］［１,４］オキサゼピン−９−イル）−７−（トリフルオロメチル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド・ＴＦＡ塩
【化５０】
0006592512.tif 000052
【０２１７】
中間体８を調製するのに用いた操作に従うが、tert−ブチル  ５−ブロモ−３,４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−カルボキシラートの代わりに、tert−ブチル  ９−ブロモ−３,４−ジヒドロベンゾ［ｂ］［１,４］オキサゼピン−５（２Ｈ）−カルボキシラート［ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１２／１７０７５２の中間体Ｄ５３に記載の操作に従って調製］を用い、４−ブロモ−３−フルオロ−７−（トリフルオロメチル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド［中間体４］がＴＦＡ塩としての（ＲＳ）−３−フルオロ−４−（２,３,４,５−テトラヒドロベンゾ［ｂ］［１,４］オキサゼピン−９−イル）−７−（トリフルオロメチル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミドに変換された。質量スペクトル  ｍ／ｚ  ４４４（Ｍ＋Ｈ）＋
【０２１８】
中間体１７
３−フルオロ−４−（４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド
【化５１】
0006592512.tif 000053
【０２１９】
中間体１５を調製するのに用いた操作に従って、４−ブロモ−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド［中間体３］が、黄色のガラス状固体としての３−フルオロ−４−（４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミドに収率１２％で変換された。質量スペクトル  ｍ／ｚ  ３５５（Ｍ＋Ｈ）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ  ８.５６（ｄ，Ｊ＝８.１Ｈｚ，１Ｈ）、７.５８−７.４８（ｍ，２Ｈ）、７.３７−７.２０（ｍ，２Ｈ）、１.５６（ｓ，１２Ｈ）
【０２２０】
中間体１８
（ＲＳ）−４−（３,４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１,４］チアジン−８−イル）−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド・ＴＦＡ塩
【化５２】
0006592512.tif 000054
【０２２１】
中間体１８Ａ：  tert−ブチル ８−ブロモ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１,４］チアジン−４（３Ｈ）−カルボキシラート
【化５３】
0006592512.tif 000055
【０２２２】
中間体１５Ａを調製するのに使用される操作に従って、８−ブロモ−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１,４］チアジン［ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１２／１４９２３６の実施例３３１に記載の操作に従って調製］が、褐色油としてのtert−ブチル  ８−ブロモ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１,４］チアジン−４（３Ｈ）−カルボキシラートに収率６５％で変換された。質量スペクトル  ｍ／ｚ  ２７４、２７６（Ｍ＋Ｈ−Ｃ４Ｈ８）＋
【０２２３】
中間体１８：
３−フルオロ−４−（４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド［中間体１７］（３８ｍｇ、０.１０７ミリモル）、tert−ブチル  ８−ブロモ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１,４］チアジン−４（３Ｈ）−カルボキシラート（３７.２ｍｇ、０.１１３ミリモル）、Ｋ３ＰＯ４（４５.５ｍｇ、０.２１５ミリモル）および１,１’−ビス（ジ−tert−ブチルホスフィノ）フェロセンパラジウム ジクロリド（３.５ｍｇ、５.３６マイクロモル）のＴＨＦ（１.５ｍＬ）および水（０.２ｍＬ）中混合物に窒素をパージし、６０℃で一夜攪拌した。混合物を室温に冷却し、セライト（登録商標）を通して濾過し、濃縮した。残渣をＤＣＭ（２ｍＬ）に溶かし、ＴＦＡで処理し、混合物を室温で３０分間攪拌した。混合物を濃縮し、残渣をプレパラティブ逆相ＨＰＬＣ（ＹＭＣ  Ｃ１８カラム、５μｍ、３０ｘ２５０ｍｍ、アセトニトリル−水＋０.１％ＴＦＡで溶出する、１０−１００％の勾配）に供して（ＲＳ）−４−（３,４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１,４］チアジン−８−イル）−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド・ＴＦＡ塩（２３.６ｍｇ、収率５８％）を褐色の固体として得た。質量スペクトル  ｍ／ｚ  ３７８（Ｍ＋Ｈ）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＨ−ｄ４）δ  ７.７８（ｄ，Ｊ＝１０.３Ｈｚ，１Ｈ）、７.５７（ｄ，Ｊ＝８.３Ｈｚ，１Ｈ）、７.３６（ｄｄｄ，Ｊ＝８.３、７.０、１.３Ｈｚ，１Ｈ）、７.１８（ｔ，Ｊ＝７.８Ｈｚ，１Ｈ）、７.０１−６.９４（ｍ，２Ｈ）、６.９４−６.８８（ｍ，１Ｈ）、６.８４（ｄ，Ｊ＝７.５Ｈｚ，１Ｈ）、３.７０−３.５７（ｍ，２Ｈ）、３.０７−２.８８（ｍ，２Ｈ）
【０２２４】
実施例１
（ＲＳ）−５−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３,３,６−トリフルオロ−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド
【化５４】
0006592512.tif 000056
【０２２５】
３,３,６−トリフルオロ−５−（１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド［中間体１２］（４７ｍｇ、０.１１８ミリモル）およびＤＩＥＡ（６２μＬ、０.３５３ミリモル）の３：１  ＤＣＭ−ＴＨＦ（０.５ｍＬ）中混合物を、０℃にて塩化アクリロイル（１１μＬ、０.１２９ミリモル）で処理した。１０分間攪拌した後、該混合物をＤＣＭで希釈し、水で洗浄し、乾燥させて濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃでトリチュレートし、（ＲＳ）−５−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３,３,６−トリフルオロ−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド（４７ｍｇ、収率８４％）を白色の固体として得た。質量スペクトル  ｍ／ｚ  ４５４（Ｍ＋Ｈ）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  １１.２０（ｓ，１Ｈ）、８.１４（ｂｒ.ｓ，１Ｈ）、７.６２（ｄ，Ｊ＝１０.７Ｈｚ，１Ｈ）、７.５５（ｂｒ.ｓ，１Ｈ）、７.４２−７.２６（ｍ，２Ｈ）、７.１９−７.１１（ｍ，１Ｈ）、７.００−６.７０（ｍ，１Ｈ）、６.１４（ｄ，Ｊ＝１６.６Ｈｚ，１Ｈ）、５.８８−５.６２（ｍ，１Ｈ）、４.９５−４.６６（ｍ，２Ｈ）、３.８０−３.４８（ｍ，２Ｈ）、２.９４（ｔ，Ｊ＝５.５Ｈｚ，２Ｈ）、２.４８−２.０８（ｍ，６Ｈ）
【０２２６】
表１に列挙される実施例は、指示される出発材料を用い、実施例１に記載の一般的操作または同様の操作により調製された。
【０２２７】
【表２】
0006592512.tif 000057
【０２２８】
実施例５
４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（単一エナンチオマー性アトロプ異性体）
【化５５】
0006592512.tif 000058
【０２２９】
（ＲＳ）−４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド［実施例２］のサンプル（１３ｍｇ）をキラル超臨界的流体クロマトグラフィー（カラム：キラルセル（CHIRALCEL）（登録商標）ＡＳ−Ｈ（３ｘ２５ｃｍ、５μｍ）；移動相：ＣＯ２−ＭｅＯＨ（７０：３０）、１５０ｍＬ／分、１００バール、３５℃；サンプル調製物：１ｍＬのＭｅＯＨ中に３ｍｇ；注入量：１.５ｍＬ）により分離した。カラムより溶出する第１のピークから４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミドの一のエナンチオマー性アトロプ異性体［実施例５］（５.２ｍｇ）を得た。質量スペクトル  ｍ／ｚ  ４１４（Ｍ＋Ｈ）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  １１.５５（ｓ，１Ｈ）、８.２５（ｂｒ.ｓ，１Ｈ）、７.９９（ｄ，Ｊ＝１０.６Ｈｚ，１Ｈ）、７.７４（ｄ，Ｊ＝８.２Ｈｚ，１Ｈ）、７.６６（ｂｒ.ｓ，１Ｈ）、７.５３−７.３９（ｍ，２Ｈ）、７.３８−７.１７（ｍ，２Ｈ）、７.０８−６.５４（ｍ，３Ｈ）、６.２８−６.０１（ｍ，１Ｈ）、５.８３−５.５４（ｍ，１Ｈ）、５.１２−４.６９（ｍ，２Ｈ）、３.８９−３.４１（ｍ，２Ｈ）、２.７１−２.２８（ｍ，２Ｈ、残りのＤＭＳＯピークで覆い被される）。実施例５の絶対配置は帰属されなかった。
【０２３０】
実施例６
５−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３,３,６−トリフルオロ−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド（単一エナンチオマー性アトロプ異性体）
【化５６】
0006592512.tif 000059
【０２３１】
（ＲＳ）−５−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３,３,６−トリフルオロ−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド［実施例１］のサンプル（４２ｍｇ）をキラル超臨界的流体クロマトグラフィー（カラム：キラルセル（登録商標）ＡＳ−Ｈ（３ｘ２５ｃｍ、５μｍ）；移動相：ＣＯ２−ＭｅＯＨ（６５−３５）、１５０ｍＬ／分、１００バール、３５℃；サンプル調製物：１ｍＬのＭｅＯＨ−ＤＭＦ（９：１）中に７ｍｇ；注入量：１.７５ｍＬ）で分離した。カラムより溶出する第１のピークから５−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３,３,６−トリフルオロ−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミドの一のエナンチオマー性アトロプ異性体［実施例６］（５ｍｇ）を得た。質量スペクトル  ｍ／ｚ  ４５４（Ｍ＋Ｈ）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＨ−ｄ４）δ  ７.５０（ｄ，Ｊ＝１０.６Ｈｚ，１Ｈ）、７.４１−７.３１（ｍ，２Ｈ）、７.１９（ｄ，Ｊ＝３.３Ｈｚ，１Ｈ）、６.９７−６.７０（ｍ，１Ｈ）、６.２５（ｄｄ，Ｊ＝１６.７、１.８Ｈｚ，１Ｈ）、５.８４−５.７０（ｍ，１Ｈ）、４.９８−４.８６（ｍ，２Ｈ）、３.９３−３.７８（ｍ，１Ｈ）、３.７８−３.５３（ｍ，１Ｈ）、３.０９−２.９３（ｍ，２Ｈ）、２.７３−２.３４（ｍ，３Ｈ）、２.３０−２.０７（ｍ，３Ｈ）；実施例６の絶対配置は帰属されなかった。
【０２３２】
実施例７
４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−フルオロ−７−（トリフルオロメチル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（単一エナンチオマー性アトロプ異性体）
【化５７】
0006592512.tif 000060
【０２３３】
（ＲＳ）−４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−フルオロ−７−（トリフルオロメチル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド［実施例４］のサンプル（２０ｍｇ）をキラル超臨界的流体クロマトグラフィー（カラム：ＩＣ（３ｘ２５ｃｍ、５μｍ）；移動相：ＣＯ２−ＭｅＯＨ（６０：４０）、１４０ｍＬ／分、１００バール、３０℃；サンプル調製物：１ｍＬのＭｅＯＨに２.５ｍｇ；注入量：１.７ｍＬ）により分離した。カラムより溶出する第２のピークから４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−フルオロ−７−（トリフルオロメチル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミドの一のエナンチオマー性アトロプ異性体［実施例７］（５.８ｍｇ）を得た。質量スペクトル  ｍ／ｚ  ４８２（Ｍ＋Ｈ）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＨ−ｄ４）δ  ８.０２−７.９０（ｍ，２Ｈ）、７.５６−７.４５（ｍ，２Ｈ）、７.３７−７.２８（ｍ，１Ｈ）、７.１９−７.０８（ｍ，１Ｈ）、６.９６−６.８５（ｍ，１Ｈ）、６.７１（ｄｄ，Ｊ＝１６.７、１０.７Ｈｚ，１Ｈ）、６.２４（ｔ，Ｊ＝１５.７Ｈｚ，１Ｈ）、５.８８−５.６３（ｍ，１Ｈ）、５.０６−４.９２（ｍ，２Ｈ）、３.８０（ｔｄ，Ｊ＝１２.４、５.６Ｈｚ，１Ｈ）、３.７２−３.５５（ｍ，１Ｈ）、２.７４−２.５７（ｍ，１Ｈ）、２.５６−２.３５（ｍ，１Ｈ）；実施例７の絶対配置は帰属されなかった。
【０２３４】
実施例８
４−（４−アクリロイル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１,４］オキサジン−８−イル）−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（単一エナンチオマー性アトロプ異性体）
【化５８】
0006592512.tif 000061
【０２３５】
（ＲＳ）−４−（４−アクリロイル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１,４］オキサジン−８−イル）−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド［実施例３］のサンプル（７６ｍｇ）をキラル超臨界的流体クロマトグラフィー（カラム：キラルパック（登録商標）ＩＣ  ３ｘ２５ｃｍ；５μＭ；移動相：ＣＯ２−ＭｅＯＨ（５５：４５）、１４０ｍＬ／分、３０℃；サンプル調製物：１：１  ＭｅＯＨ−ＤＣＭに溶かした；注入量：２.０ｍＬ）により分離した。カラムより溶出する第１のピークから４−（４−アクリロイル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１,４］オキサジン−８−イル）−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミドの一のエナンチオマー性アトロプ異性体［実施例８］（３１.１ｍｇ）を得た。質量スペクトル  ｍ／ｚ  ４１６（Ｍ＋Ｈ）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＨ−ｄ４）δ  ７.８０（ｄ，Ｊ＝１０.５Ｈｚ，１Ｈ）、７.５９（ｍ，２Ｈ）、７.３７（ｄｄｄ，Ｊ＝８.２、７.１、１.２Ｈｚ，１Ｈ）、７.２７（ｄｄ，Ｊ＝７.６、１.６Ｈｚ，１Ｈ）、７.２０−７.１４（ｍ，１Ｈ）、７.１１（ｄ，Ｊ＝７.９Ｈｚ，１Ｈ）、７.０２−６.９１（ｍ，２Ｈ）、６.４７（ｄｄ，Ｊ＝１６.８、１.８Ｈｚ，１Ｈ）、５.９７−５.８９（ｍ，１Ｈ）、４.２８−４.０７（ｍ，４Ｈ）；実施例８の絶対配置は帰属されなかった。
【０２３６】
実施例９
５−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−６−フルオロ−２−（Ｓ）−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド（単一ジアステレオマー）
【化５９】
0006592512.tif 000062
【０２３７】
６−フルオロ−２−（Ｓ）−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−５−（１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミドの単一ジアステレオマー［中間体９］（０.０３６ｇ、０.０８５ミリモル）およびＤＩＥＡ（０.０６０ｍＬ、０.３４２ミリモル）のＴＨＦ（２ｍＬ）中混合物を室温にて塩化アクリロイル（６.９μＬ、０.０８５ミリモル）で処理した。混合物を３０分間攪拌し、ＥｔＯＡｃで希釈し、水および飽和ブラインで連続して洗浄し、乾燥させて濃縮した。その残渣をＥｔＯＡｃ−ヘキサン（５０−７５％の勾配）で溶出するシリカゲル上のカラムクロマトグラフィーに付して精製した。得られた材料をキラル超臨界的流体クロマトグラフィー（カラム：キラルパック（登録商標）ＡＳ−Ｈ（３ｘ２５ｃｍ、５μｍ）；移動相：ＣＯ２−ＭｅＯＨ（６５：３５）、１５０ｍＬ／分、３５℃）によりさらに精製した。カラムより溶出する第２のピークから５−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−６−フルオロ−２−（Ｓ）−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミドの単一ジアステレオマー（０.０３０ｇ、収率７３％）を白色の固体として得た。質量スペクトル  ｍ／ｚ  ４７６（Ｍ＋Ｈ）＋；アトロプ異性結合の回りの絶対配置は決定されなかった。
【０２３８】
実施例１０および１１
５−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−６−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド（単一ホモキラルジアステレオマー）
【化６０】
0006592512.tif 000063
【０２３９】
実施例１を調製するのに使用される操作に従って、６−フルオロ−５−（１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−２−（トリフルオロメチル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド・ＴＦＡ塩（ジアステレオマー混合物）［中間体１４］が５−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−６−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド（４種のジアステレオマーの混合物）に収率４９％にて変換された。質量スペクトル  ｍ／ｚ  ４８６（Ｍ＋Ｈ）＋
【０２４０】
この材料のサンプル（１０７ｍｇ）をキラル超臨界的流体クロマトグラフィー（カラム：キラル（Chiral）ＩＣ（３ｘ２５ｃｍ、５μｍ）；移動相：ＣＯ２−ＭｅＯＨ（７０：３０）、８５ｍＬ／分；サンプル調製物：１ｍＬのＭｅＯＨに１０.７ｍｇ；注入量：１.０ｍＬ）により分離した。該カラムより溶出する第３のピークが５−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−６−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド［実施例１０］の一のホモキラルなジアステレオマー（１４.５ｍｇ）を提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＨ−ｄ４）δ  ７.４９（ｄ，Ｊ＝１０.４Ｈｚ，１Ｈ）、７.３８−７.２８（ｍ，２Ｈ）、７.２４−７.１３（ｍ，１Ｈ）、６.９９−６.６８（ｍ，１Ｈ）、６.２６（ｄｄ，Ｊ＝１６.８、１.８Ｈｚ，１Ｈ）、５.８７−５.７１（ｍ，１Ｈ）、４.９３−４.８７（ｍ，２Ｈ）、３.７７（ｑｕｉｎ，Ｊ＝６.２Ｈｚ，２Ｈ）、３.０８（ｄｄ，Ｊ＝１６.４、４.６Ｈｚ，１Ｈ）、２.８３（ｄｄ，Ｊ＝１６.３、１１.４Ｈｚ，１Ｈ）、２.６７−２.４０（ｍ，３Ｈ）、２.０８−１.８６（ｍ，３Ｈ）、１.６６−１.４３（ｍ，１Ｈ）
【０２４１】
該カラムより溶出する第４のピークが５−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−６−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド［実施例１１］の別のホモキラルなジアステレオマー（２１.２ｍｇ）（第３のピークとして溶出された約２％のホモキラルなジアステレオマー［実施例１０］で汚染された）を提供した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＨ−ｄ４）δ  ７.４８（ｄ，Ｊ＝１０.５Ｈｚ，１Ｈ）、７.３６−７.２７（ｍ，２Ｈ）、７.１９−７.１１（ｍ，１Ｈ）、６.９８−６.７０（ｍ，１Ｈ）、６.２６（ｄ，Ｊ＝１６.８Ｈｚ，１Ｈ）、５.８６−５.６８（ｍ，１Ｈ）、４.９９−４.７５（ｍ，２Ｈ）、３.９６−３.５６（ｍ，２Ｈ）、３.０９（ｄｄ，Ｊ＝１６.５、５.３Ｈｚ，１Ｈ）、２.９０−２.７５（ｍ，１Ｈ）、２.７４−２.３３（ｍ，３Ｈ）、２.２４−２.０７（ｍ，１Ｈ）、１.９５（ｄｄ，Ｊ＝１５.２、２.９Ｈｚ，１Ｈ）、１.８２（ｄ，Ｊ＝１６.０Ｈｚ，１Ｈ）、１.４９（ｑｄ，Ｊ＝１２.２、５.２Ｈｚ，１Ｈ）
【０２４２】
両方のホモキラルなジアステレオマーの質量スペクトルは、その混合物のスペクトル：ｍ／ｚ  ４８６（Ｍ＋Ｈ）＋と同じであった。実施例１０および１１の絶対配置は帰属されなかった。
【０２４３】
実施例１２
４−（５−アクリロイル−２,３,４,５−テトラヒドロベンゾ［ｂ］［１,４］オキサゼピン−９−イル）−３−フルオロ−７−（トリフルオロメチル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（単一エナンチオマー性アトロプ異性体）
【化６１】
0006592512.tif 000064
【０２４４】
実施例１を調製するのに使用される操作に従って、（ＲＳ）−３−フルオロ−４−（２,３,４,５−テトラヒドロベンゾ［ｂ］［１,４］オキサゼピン−９−イル）−７−（トリフルオロメチル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド・ＴＦＡ塩［中間体１６］が（ＲＳ）−４−（５−アクリロイル−２,３,４,５−テトラヒドロベンゾ［ｂ］［１,４］オキサゼピン−９−イル）−３−フルオロ−７−（トリフルオロメチル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミドに収率７７％にて変換された。質量スペクトル  ｍ／ｚ  ４９８（Ｍ＋Ｈ）＋
【０２４５】
この材料のサンプル（６３ｍｇ）をキラル超臨界的流体クロマトグラフィー（カラム：キラルパック（CHIRALPAK）（登録商標）ＯＪ−Ｈ（３ｘ２５ｃｍ、５μｍ）；移動相：ＣＯ２−ＭｅＯＨ（８０：２０）、８５ｍＬ／分；サンプル調製物：１ｍＬのＭｅＯＨ中に１５.７５ｍｇ；注入量：２.０ｍＬ）により精製した。カラムより溶出する第２のピークから４−（５−アクリロイル−２,３,４,５−テトラヒドロベンゾ［ｂ］［１,４］オキサゼピン−９−イル）−３−フルオロ−７−（トリフルオロメチル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミドの単一のエナンチオマー性アトロプ異性体（２１.３ｍｇ）を得た。質量スペクトル  ｍ／ｚ  ４９８（Ｍ＋Ｈ）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＭｅＯＨ−ｄ４）δ  ８.０５−７.８３（ｍ，２Ｈ）、７.５５−７.３２（ｍ，３Ｈ）、７.２８−６.９７（ｍ，２Ｈ）、６.３６（ｍ，２Ｈ）、５.７７（ｂｒ.ｓ，１Ｈ）、４.９０（ｂｒ.ｓ，１Ｈ）、４.２８−３.７４（ｍ，２Ｈ）、３.０５（ｂｒ.ｓ，１Ｈ）、２.２８−２.０４（ｍ，１Ｈ）、１.８５（ｂｒ.ｓ，１Ｈ）；アトロプ異性結合の回りの絶対配置は帰属されなかった。
【０２４６】
指示される出発材料および操作を用い、上記される操作により調製されたさらなる実施例を表２に示す。
【０２４７】
【表３】
0006592512.tif 000065
【０２４８】
（ａ）実施例１を調製するのに使用される操作または類似する操作に従って調製される。
（ｂ）ラセミ化合物を超臨界的流体クロマトグラフィーに付すことにより調製される。
絶対配置は帰属されなかった。
【０２４９】
比較例１５
４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（単一エナンチオマー性アトロプ異性体）
【化６２】
0006592512.tif 000066
【０２５０】
４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミドの別のエナンチオマー性アトロプ異性体が、キラル超臨界的流体クロマトグラフィーによって実施例２を分離する間に、カラムより溶出する第２ピークより単離され、実施例５を単離し、比較例１２（６.１ｍｇ）を提供した。この材料は実施例５と同じ質量スペクトルおよびＮＭＲスペクトルを有した。比較例１２の絶対配置は帰属されなかった。
【０２５１】
比較例１６
５−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３,３,６−トリフルオロ−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド（単一エナンチオマー性アトロプ異性体）
【化６３】
0006592512.tif 000067
【０２５２】
５−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３,３,６−トリフルオロ−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミドの別のエナンチオマー性アトロプ異性体が、キラル超臨界的流体クロマトグラフィーによって実施例１を分離する間に、カラムより溶出する第２ピークより単離され、実施例６を単離し、比較例１３（５ｍｇ）を提供した。この材料は実施例６と同じ質量スペクトルおよびＮＭＲスペクトルを有した。比較例１３の絶対配置は帰属されなかった。
【０２５３】
比較例１７
４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−フルオロ−７−（トリフルオロメチル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（単一エナンチオマー性アトロプ異性体）
【化６４】
0006592512.tif 000068
【０２５４】
４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−フルオロ−７−（トリフルオロメチル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミドの別のエナンチオマー性アトロプ異性体が、キラル超臨界的流体クロマトグラフィーによって実施例４を分離する間に、カラムより溶出する第１ピークより単離され、実施例７を単離し、比較例１４（５.９ｍｇ）を提供した。この材料は実施例７と同じ質量スペクトルおよびＮＭＲスペクトルを有した。比較例１４の絶対配置は帰属されなかった。
【０２５５】
比較例１８
４−（４−アクリロイル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１,４］オキサジン−８−イル）−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（単一エナンチオマー性アトロプ異性体）
【化６５】
0006592512.tif 000069
【０２５６】
４−（４−アクリロイル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１,４］オキサジン−８−イル）−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミドの別のエナンチオマー性アトロプ異性体が、キラル超臨界的流体クロマトグラフィーによって実施例３を分離する間に、カラムより溶出する第２ピークより単離され、実施例８を単離し、比較例１５（３２.１ｍｇ）を提供した。この材料は実施例８と同じ質量スペクトルおよびＮＭＲスペクトルを有した。比較例１５の絶対配置は帰属されなかった。
【０２５７】
比較例１９
５−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−６−フルオロ−２−（Ｓ）−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド（単一ジアステレオマー）
【化６６】
0006592512.tif 000070
【０２５８】
中間体１０から実施例９を調製するのに使用される操作に従って、６−フルオロ−２−（Ｓ）−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−５−（１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミドの他のジアステレオマー［中間体１１］が５−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−６−フルオロ−２−（Ｓ）−（２−ヒドロキシプロパン−２−イル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミドの単一ジアステレオマー（白色の固体として）に収率７６％で変換された。質量スペクトル  ｍ／ｚ  ４７６（Ｍ＋Ｈ）＋。アトロプ異性結合のまわりの絶対配置は決定されなかった。
【０２５９】
比較例２０および２１
５−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−６−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミド（単一ホモキラルジアステレオマー）
【化６７】
0006592512.tif 000071
【０２６０】
５−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−６−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミドの２つのさらなるホモキラルジアステレオマーがキラル超臨界的流体クロマトグラフィーにより実施例１０および１１を分離する間に単離された。カラムより溶出する第１のピークから５−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−６−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミドの一のホモキラルジアステレオマー［比較例２０］（１５.０ｍｇ）を得た。この材料は実施例１０と同じＮＭＲスペクトルを有し、従って実施例１０と比較例２０はエナンチオマーであった。
【０２６１】
カラムより溶出する第２のピークから５−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−６−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボキシアミドのもう一つ別のホモキラルジアステレオマー［比較例２１］（２１.２ｍｇ）が第１のピークとして溶出された約２％のホモキラルジアステレオマー［比較例２０］で汚染された状態で得られた。この材料は実施例１１と同じＮＭＲスペクトルを有し、従って実施例１１と比較例２１はエナンチオマーであった。
【０２６２】
両方のホモキラルジアステレオマーの質量スペクトルはその混合物のスペクトルと同じであった：ｍ／ｚ  ４８６（Ｍ＋Ｈ）＋。比較例１０および２１の絶対配置は決定されなかった。
【０２６３】
比較例２２
４−（５−アクリロイル−２,３,４,５−テトラヒドロベンゾ［ｂ］［１,４］オキサゼピン−９−イル）−３−フルオロ−７−（トリフルオロメチル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（単一エナンチオマー性アトロプ異性体）
【化６８】
0006592512.tif 000072
【０２６４】
４−（５−アクリロイル−２,３,４,５−テトラヒドロベンゾ［ｂ］［１,４］オキサゼピン−９−イル）−３−フルオロ−７−（トリフルオロメチル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミドの別のエナンチオマー性アトロプ異性体が、キラル超臨界的流体クロマトグラフィーによって実施例１２を単離する間に、カラムより溶出する第１ピークより単離され、比較例２２（２０.５ｍｇ）を提供した。この材料は実施例１２と同じ質量スペクトルおよびＮＭＲスペクトルを有した。比較例２２の絶対配置は帰属されなかった。
【０２６５】
比較例２３
４−（４−アクリロイル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１,４］チアジン−８−イル）−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（単一エナンチオマー性アトロプ異性体）
【化６９】
0006592512.tif 000073
【０２６６】
４−（４−アクリロイル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１,４］チアジン−８−イル）−３−フルオロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミドの別のエナンチオマー性アトロプ異性体が、キラル超臨界的流体クロマトグラフィーによって実施例１４を単離する間に、カラムより溶出する第２ピークより単離され、比較例２３を提供した。この材料は実施例１４と同じ質量スペクトルおよびＮＭＲスペクトルを有した。比較例２３の絶対配置は決定されなかった。
【０２６７】
実施例２４
４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−クロロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（アトロプ異性体１）
【化７０】
0006592512.tif 000074
【０２６８】
中間体２４Ａ：  ４−ブロモ−３−クロロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボン酸
【化７１】
0006592512.tif 000075
【０２６９】
５−ブロモ−６−クロロ−２,３,４,９−テトラヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−８−カルボン酸、（７９３ｍｇ、２.４１３ミリモル）のＴＨＦ（３０ｍＬ）中溶液に、ＤＤＱ（１０９６ｍｇ、４.８３ミリモル）を添加し、その混合物を６０℃で１８時間攪拌した。混合物を濃縮した。その粗生成物をＩＳＣＯフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル／ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＨＯＡｃ  ９３.５：５：１.５）に供した。４−ブロモ−３−クロロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボン酸（３５０ｍｇ、１.０２４ミリモル、収率４２.５％）を褐色の固体として得た。ＬＣＭＳ：１.１９分間、Ｍ＋Ｈ  ３２４
【０２７０】
中間体２４Ｂ：  ４−ブロモ−３−クロロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド
【化７２】
0006592512.tif 000076
【０２７１】
４−ブロモ−３−クロロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボン酸（３５０ｍｇ、１.０７８ミリモル）、塩化アンモニウム（２８８ｍｇ、５.３９ミリモル）、ＢＯＰ（５２５ｍｇ、１.１８６ミリモル）およびＴＥＡ（１.５０３ｍＬ、１０.７８ミリモル）のＤＭＦ（５.０ｍＬ）中混合物を室温で６０分間攪拌した。その混合物をＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）で希釈し、１.０Ｍ  ＨＣｌ水溶液（２ｘ１５ｍＬ）で洗浄した。酢酸エチル層を硫酸ナトリウム上で乾燥させて濃縮した。粗製物：４−ブロモ−３−クロロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（２０３ｍｇ、０.５９６ミリモル、収率５５.３％）を褐色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ  ８.７７（ｄ，Ｊ＝８.２Ｈｚ，１Ｈ）、８.０８（ｓ，１Ｈ）、７.７１−７.６２（ｍ，１Ｈ）、７.６０−７.４９（ｍ，１Ｈ）、７.３０（ｄｄｄ，Ｊ＝８.２、７.２、１.０Ｈｚ，１Ｈ）
【０２７２】
中間体２４Ｃ：  tert−ブチル  ５−（１−カルバモイル−３−クロロ−９Ｈ−カルバゾール−４−イル）−３,４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−カルボキシラート
【化７３】
0006592512.tif 000077
【０２７３】
４−ブロモ−３−クロロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（８０ｍｇ、０.２４７ミリモル）、tert−ブチル  ５−（４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル）−３,４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−カルボキシラート（８９ｍｇ、０.２４７ミリモル）、１,１’−ビス（ジ−tert−ブチルホスフィノ）フェロセンパラジウム ジクロリド（８.０６ｍｇ、０.０１２ミリモル）および２.０Ｍ水性三塩基性リン酸カリウム（０.６１８ｍＬ、１.２３６ミリモル）のジオキサン（４.０ｍＬ）中混合物を窒素下の密封バイアル中にて６０℃で１８時間攪拌した。混合物をＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）で希釈し、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液（２ｘ１５ｍＬ）および水性１.０Ｍ  ＨＣｌ（１５ｍＬ）で洗浄した。酢酸エチル層を硫酸ナトリウム上で乾燥させて濃縮した。粗生成物をＩＳＣＯフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル／ＤＣＭ−ＥｔＯＡｃ  １００：０〜０：１００の勾配）に供した。tert−ブチル  ５−（１−カルバモイル−３−クロロ−９Ｈ−カルバゾール−４−イル）−３,４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−カルボキシラート（９０ｍｇ、０.１８０ミリモル、収率７２.７％）を白色の泡沫体として得た。ＬＣＭＳ：１.２１分間、２Ｍ＋Ｈ  ３２４
【０２７４】
実施例２４：
tert−ブチル  ５−（１−カルバモイル−３−クロロ−９Ｈ−カルバゾール−４−イル）−３,４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−カルボキシラート（７０ｍｇ、０.１４７ミリモル）のＤＣＭ（１.０ｍＬ）中溶液に、ＴＦＡ（１.０ｍＬ）を添加し、その混合物を室温で３０分間攪拌した。混合物を濃縮し、粗３−クロロ−４−（１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド・ＴＦＡ塩を得た。
【０２７５】
３−クロロ−４−（１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド・ＴＦＡ塩およびＴＥＡ（０.１０２ｍＬ、０.７３５ミリモル）のＤＣＭ（１.０ｍＬ）中溶液に、塩化アクリロイル（０.０１３ｍＬ、０.１６２ミリモル）の０℃でのＤＣＭ（０.５ｍＬ）中溶液を添加し、その混合物を室温で３０分間攪拌した。粗生成物をＩＳＣＯフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル／ヘキサン−ＥｔＯＡｃ  １００：０〜０：１００の勾配）に供し、４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−クロロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（４３.５２ｍｇ、０.０９６ミリモル、収率６５.４％）を得た。ＬＣＭＳ：０.８８分間、Ｍ＋Ｈ  ４３０
【０２７６】
４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−クロロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミド（３３ｍｇ）が、キラル超臨界的流体クロマトグラフィー（キラルＩＣ（３ｘ２５ｃｍ、５μｍ）；移動相：ＣＯ２−ＭｅＯＨ  ６０−４０、８５０ｍＬ／分；サンプル調製物：５ｍＬのＭｅＯＨに８５ｍｇ）により分離された。カラムより溶出する第１のピークから４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−クロロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミドの一のエナンチオマー（１１.９９ｍｇ）を白色の粉末として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ  ８.１１（ｓ，１Ｈ）、７.５９（ｄ，Ｊ＝８.２Ｈｚ，１Ｈ）、７.５２−７.４１（ｍ，２Ｈ）、７.３９−７.２８（ｍ，１Ｈ）、７.２６−７.１３（ｍ，１Ｈ）、６.８９−６.７９（ｍ，１Ｈ）、６.７４−６.５０（ｍ，２Ｈ）、６.３２−６.１０（ｍ，１Ｈ）、５.８８−５.６２（ｍ，１Ｈ）、４.９５（ｄ，Ｊ＝１３.７Ｈｚ，２Ｈ）、３.８３−３.５４（ｍ，２Ｈ）、２.６６−２.４９（ｍ，１Ｈ）、２.３７（ｍ，１Ｈ）；ＬＣＭＳ：０.８８分間、Ｍ＋Ｈ  ４３０；カラムより溶出する第２のピークから４−（２−アクリロイル−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル）−３−クロロ−９Ｈ−カルバゾール−１−カルボキシアミドの別のエナンチオマー（１０.７８ｍｇ）を白色の粉末として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ  ８.１１（ｓ，１Ｈ）、７.５９（ｄ，Ｊ＝８.２Ｈｚ，１Ｈ）、７.５２−７.４１（ｍ，２Ｈ）、７.３８−７.２９（ｍ，１Ｈ）、７.２４−７.１６（ｍ，１Ｈ）、６.９０−６.７９（ｍ，１Ｈ）、６.７３−６.５２（ｍ，２Ｈ）、６.３２−６.１３（ｍ，１Ｈ）、５.８６−５.６４（ｍ，１Ｈ）、４.９７（ｍ，２Ｈ）、３.８２−３.５５（ｍ，２Ｈ）、２.５８（ｍ，１Ｈ）、２.４４−２.２７（ｍ，１Ｈ）；ＬＣＭＳ：０.８８分間、Ｍ＋Ｈ  ４３０
【０２７７】
表１に列挙される実施例は、適切な出発材料を用い、上記の実施例について記載される一般的な操作により、あるいは当業者に公知の同様の操作により調製された。
【０２７８】
【表４】
0006592512.tif 000078
【表５】
0006592512.tif 000079
【表６】
0006592512.tif 000080
【０２７９】
生物学的アッセイ
本発明の化合物の薬理学的特性は多くの生物学的アッセイによって確かめることができる。下記の例示としての生物学的アッセイが本発明の化合物を用いて実施された。
【０２８０】
ヒト組換えＢｔｋ酵素アッセイ
Ｖ字型ボトムの３８４−ウェルプレートに、試験化合物、ヒト組換えＢｔｋ（１ｎＭ、Invitrogen Corporation）、蛍光標識されたペプチド（１.５μＭ）、ＡＴＰ（２０μＭ）およびアッセイバッファー（２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ  ７.４）、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０.０１５％Ｂｒｉｊ３５界面活性剤および４ｍＭ  ＤＴＴ／１.６％ＤＭＳＯ）を３０μＬの最終容量で添加した。室温で６０分間インキュベートした後、３５ｍＭ  ＥＤＴＡ（４５μＬ）を各サンプルに添加することで反応を停止させた。反応混合物をキャリパー製ラバチップ（LABCHIP）（登録商標）3000（Caliper、Hopkinton、MA）で蛍光基質とリン酸化生成物を電気泳動により分離することで解析した。阻害データは、１００％阻害として酵素不含の対照反応と、０％阻害として阻害剤不含の対照とを比較することで算定された。用量応答曲線を作成し、キナーゼ活性の５０％を阻害するのに必要とされる濃度（ＩＣ５０）を測定した。化合物をＤＭＳＯに１０ｍＭで溶かし、１１種の濃度で評価した。
【０２８１】
ラモスＦＬＩＰＲアッセイ
フェノールレッドを減じ、０.１％ＢＳＡ（Sigma A8577）を含有する５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（Invitrogen 15630-130）を含むＲＰＭＩ（Invtrogen 11835-030）にラモス（Ramos）ＲＡ１  Ｂ細胞（ATCC CRL-1596）を２ｘ１０６個の細胞／ｍＬの密度で添加し、それをカルシウムローディングバッファー（プロベネシド感受性アッセイ用のＢＤバルクキット、#640177）にその容量の半分まで加え、暗所にて室温で１時間インキュベートした。色素負荷細胞をペレット状にし（Beckmann GS-CKR、１２００ｒｐｍ、室温、５分間）、室温でＲＰＭＩ（フェノールレッドを減じ、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳおよび１０％ＦＢＳを含む）に１ｘ１０６個の細胞／ｍＬの密度で再懸濁させた。１５０μＬのアリコート（１５０,０００個の細胞／ウェル）を９６ウェルのポリ−Ｄ−リジン被覆のアッセイプレート（BD 35 4640）に載せ、軽く遠心分離（Beckmann GS-CKR、８００ｒｐｍ、５分間、ブレーキを掛けない）に供した。次に、５０μＬの化合物の０.４％ＤＭＳＯ／ＲＰＭＩ（フェノールレッドを減じ、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳおよび１０％ＦＢＳを含む）中希釈物をウェルに加え、プレートを暗所にて室温で１時間インキュベートした。そのアッセイプレートを上記されるように軽く遠心分離に供し、その後でカルシウム濃度を測定した。ＦＬＩＰＲ１（分子デバイス）を用い、ヤギ抗−ヒトＩｇＭ（Invitrogen AHI0601）を２.５μｇ／ｍＬまで添加することで細胞を刺激した。細胞内カルシウム濃度の変化を１８０秒間測定し、阻害％を刺激の存在だけで認められるカルシウムレベルのピークと比較して決定した。ラモスアッセイは細胞膜を通って細胞内部に移動する化合物の能力を測定する。ＩＣ５０値が低いほど細胞内部への移動能が大きいことを意味する。
【０２８２】
表３は、ヒト組換えＢｔｋ酵素アッセイおよびラモスＦＬＩＰＲアッセイにおいて、実施例１、３および５−１４を評価することで得られたＢｔｋ  ＩＣ５０値、およびラモス  ＩＣ５０値を示す。
【０２８３】
【表７】
0006592512.tif 000081
【０２８４】
表４は、ヒト組換えＢｔｋ酵素アッセイおよびラモスＦＬＩＰＲアッセイにおいて実施例５−１２および１４ならびに比較例１５〜２３を評価することに由来するＢｔｋ  ＩＣ５０値およびラモス  ＩＣ５０値を示す。
【０２８５】
【表８】
0006592512.tif 000082
【０２８６】
ａ  ヒト組換えＢｔｋ酵素アッセイでのＩＣ５０（ｎＭ）
ｂ  ラモスＦＬＩＰＲアッセイでのＩＣ５０（ｎＭ）
ｃ  比較例でのヒト組換えＢｔｋ酵素アッセイにおけるＩＣ５０値の、その対応する実施例での値に対する割合
ｄ  比較例でのラモスＦＬＩＰＲアッセイにおけるＩＣ５０値の、その対応する実施例での値に対する割合
【０２８７】
実施例５〜１２および１４で示される例示としての式（Ｉ）の化合物は、その立体異性体である比較例１５〜２３と比べ、Ｂｔｋの効能を改善することが見出された。効能の増加はＢｔｋ  ＩＣ５０値が下がることにより示される。表４に示されるように、Ｂｔｋアッセイの報告において、実施例５〜１２および１４はＢｔｋ  ＩＣ５０値が０.４ｎＭ未満であった。その一方で、比較例１５〜２３はＢｔｋ  ＩＣ５０値が１.５〜２８ｎＭの範囲にあった。実施例５〜１２および１４のＢｔｋ  ＩＣ５０値と、その対応する立体異性体のＢｔｋ  ＩＣ５０値との対比もまた表４に報告されている。Ｂｔｋの割合は、対応する立体異性体（比較例１５〜２３）のＢｔｋ  ＩＣ５０活性値の、式（Ｉ）の実施例でのＢｔｋ  ＩＣ５０値に対する割合として報告される。Ｂｔｋ  ＩＣ５０の割合が高いほど、実施例の化合物がその比較例の立体異性体と比べて効能が改善されたことを示す。実施例５〜１２および１４で示される、例示としての式（Ｉ）の化合物は、その立体異性体と比べて、少なくとも１９倍あるいはそれ以上の効能の改善を示した。
【０２８８】
実施例５〜１２および１４で示される例示としての式（Ｉ）の化合物は、その立体異性体である比較例１５−２３と比べ、ラモスＦＬＩＰＲアッセイにおいて効能を改善することが見出された。効能の増加はラモスＩＣ５０値が下がることにより示される。表４に示されるように、ラモスアッセイの報告において、実施例５〜１２および１４はラモスＩＣ５０値が２３ｎＭ未満であった。その一方で、比較例１５〜２３はラモスＩＣ５０値が６５ｎＭよりも大きかった。実施例５〜１２および１４のラモスＩＣ５０値と、その対応する立体異性体のラモスＩＣ５０値との対比もまた表４に報告されている。ラモスの割合は、対応する立体異性体（比較例１５〜２３）のラモスＩＣ５０活性値の、式（Ｉ）の実施例でのラモスＩＣ５０値に対する割合として報告される。ラモスＩＣ５０の割合が高いほど、実施例の化合物がその比較例の立体異性体と比べて効能が改善されたことを示す。実施例５〜１２および１４で示される、例示としての式（Ｉ）の化合物は、その立体異性体と比べて、少なくとも９.４倍あるいはそれ以上のラモス効能の改善を示した。
【０２８９】
実施例５〜１２および１４で示される例示としての式（Ｉ）の化合物を、その立体異性体である比較例１５−２３と比べ、利点のあることが見出された。式（Ｉ）の化合物は、その立体異性体と比べ、Ｂｔｋ効能の強化およびラモス活性の増加の組み合わせにおいて意外な利点を有する。実施例５〜１２および１４は、その立体異性体と比べ、少なくとも１９倍よりも大きなＢｔｋ効能の改善と、少なくとも９.４倍よりも大きなラモス効能の改善との組み合わせを示した。
【０２９０】
これらの結果は分子の絶対３次元配置が式（Ｉ）の化合物の効能にとって重要であることを示す。
【０２９１】
ヒト組換えＢｔｋ解離透析アッセイ
試験化合物をヒト組換えＢｔｋ（１００ｎＭ）と一緒にＢｔｋ阻害のＩＣ５０の２５倍の濃度または２００ｎＭ（そのいずれか高い方の濃度）で１.５時間インキュベートした。インキュベーションはアッセイバッファー（２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７.５、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２ｍＭジチオスレイトール、５０μｇ／ｍＬのウシ血清アルブミンおよび０.０１５％Ｂｒｉｊ３５）中で行われた。次に反応混合物を１Ｌのアッセイバッファーに対して６時間毎に２回透析した。ついで透析された反応混合物（０.５μＬ）が、最終Ｂｔｋ濃度が１ｎＭであるように（まだ結合したままのいずれの阻害剤も一緒に）、ＡＴＰ（２ｍＭ）および基質ペプチド（５μＭ  Ｓｒｃ−ｔｉｄｅ、AnaSpec）の溶液（１００μＬ）に希釈された。アッセイはマトリックスポリプロピレン３８４ウェルプレートでなされた。反応プログレス曲線はキャリパー製ラバチップ（登録商標）を用いて基質とリン酸化産物を電気泳動分離（圧力−１.２ｐｓｉ、下流電圧−５００Ｖ、上流電圧−２３００Ｖ）に付すことによりモニターされた。反応速度は直線位相で測定され、Ｂｔｋ活性の回復％はリン酸化ペプチド産物のフラクションを実施例の阻害剤を含まないＤＭＳＯ処理のＢｔｋ対照反応物と比較することにより２時間で評価された。Ｂｔｋを含まない対照反応物も背景シグナルを測定するのに使用された。可逆的阻害剤はＢｔｋ活性をほぼ完全に回復させるであろうし、一方で不可逆的阻害剤はＢｔｋ活性をほとんどまたは全く回復させないであろう。
【図１】
0006592512.tif 000090