(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）のインドールアミド化合物、または製薬的に許容されるその塩もしくはＲまたはＳ異性体、ラセミ体、またはジアステレオマー：
【化１】
0006471163.tif 000034
（１）
［式中、
Ｒ１は、水素、Ｃ１−Ｃ６−アルキルまたは−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ３−Ｃ８−シクロアルキル（ここで、ｎは０〜２の数である）を表し、
Ｒ２は、−Ｘ−（ＣＨ２）ｎ−Ａ−Ｒ６
｛ここで、Ｘは、直接結合を表し、
Ａは、直接結合を表すか、Ｃ３−Ｃ８−シクロアルキル若しくはＣ６−Ｃ１０−アリールを表すか、または、それぞれＮ、Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する４〜８員ヘテロシクリル若しくはヘテロアリールを表し、
Ｒ６は、水素、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、アミノまたは−ＣＯ２−Ｒ７
（ここで、Ｒ７は、水素を表すか、または、それぞれ適宜オキソを含んでいてもよく、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員ヘテロシクリルまたはヘテロアリールを表す）を表す｝（但し、Ｒ２は、水素ではない）を表し、
Ｒ１及びＲ２は、一緒になって、−（ＣＨ２）ｒ−（ここで、ｒは４〜６の数である）を表してもよく、
Ｒ３は、ハロゲン、ヒドロキシ、−ＮＨ−Ｒ７または−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ７（ここで、ｍは０〜３の数である）（但し、ｍが０であるとき、Ｒ７は水素ではない）を表し、
Ｒ４は、−（ＣＨＲ７）ｎ−Ｂ−（Ｚ−Ｒ８）（Ｚ’−Ｒ９）
｛ここで、Ｂは、直接結合を表すか、Ｃ６−Ｃ１０−アリールを表すか、または、それぞれＮ、Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する４〜９員ヘテロシクリル若しくはヘテロアリールを表し、
Ｚ及びＺ’は、それぞれ独立して、直接結合、−（ＣＨ２）ｍ−、−Ｏ−または−Ｎ−を表し、
Ｒ８及びＲ９は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６−アルキル）アミノ、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、−ＣＯ２Ｒ７、Ｃ３−Ｃ８−シクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０−アリール、Ｃ６−Ｃ１０−アリールオキシ、Ｃ６−Ｃ１０−アリール−Ｃ１−Ｃ６−アルキル若しくはＣ６−Ｃ１０−アリール−Ｃ１−Ｃ６−アルキルアミノを表すか、または、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する４〜８員ヘテロシクリルを表す｝を表し、
Ｒ５は、−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ１０（ここで、Ｒ１０は、水素、Ｃ１−Ｃ６−アルキルまたはＣ６−Ｃ１０−アリールを表す）を表し、
Ｚ’及びＲ５は、これらが結合している原子と一緒になって、構造
【化２】
0006471163.tif 000035
（但し、Ｚ’が、−Ｏ−を表すとき、Ｒ９は存在しない；およびＢが直接結合であり、Ｚ’およびＲ５が、それらが結合する原子と一緒にならない場合、（Ｚ’−Ｒ９）は存在しない）
を形成していてもよく、
前記で、アルキル及びアリールは適宜置換されていてもよく、置換基は、ハロゲン、アミノ、ジアルキルアミノ、アルキル及びオキソよりなる群から選択される１つまたはそれ以上である］。
【請求項２】
Ｒ１が、水素、Ｃ１−Ｃ６−アルキルまたは−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ３−Ｃ８−シクロアルキル（ここで、ｎは０〜２の数である）を表し、
Ｒ２が、−Ｘ−（ＣＨ２）ｎ−Ａ−Ｒ６
｛ここで、Ｘは、直接結合を表し、
Ａは、直接結合を表すか、Ｃ４−Ｃ８−シクロアルキル若しくはＣ６−Ｃ１０−アリールを表すか、または、それぞれＮ、Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する４〜８員ヘテロシクリル若しくはヘテロアリールを表し、
Ｒ６は、水素、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、アミノまたは−ＣＯ２−Ｒ７
（ここで、Ｒ７は、水素を表すか、または、それぞれ適宜オキソを含んでいてもよく、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員ヘテロシクリル若しくはヘテロアリールを表す）
を表す｝（但し、Ｒ２は、水素ではない）を表し、
Ｒ１及びＲ２が、−（ＣＨ２）ｒ−（ここで、ｒは４〜６の数である）を表してもよく、
Ｒ３が、ハロゲンまたはＣ１−Ｃ６−アルキルを表し、
Ｒ４が、−（ＣＨＲ７）ｎ−Ｂ−（Ｚ−Ｒ８）（Ｚ’−Ｒ９）
｛ここで、Ｂは、直接結合を表すか、フェニルを表すか、または、それぞれＮ、Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する４〜９員ヘテロシクリル若しくはヘテロアリールを表し、
Ｚ及びＺ’は、それぞれ独立して、直接結合、−（ＣＨ２）ｍ−、−Ｏ−または−Ｎ−（ここで、ｍは０〜３の数である）を表し、
Ｒ８及びＲ９は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６−アルキル）アミノ、ハロゲンで適宜置換されていてもよいＣ１−Ｃ６−アルキル、−ＣＯ２Ｒ７、Ｃ４−Ｃ６−シクロアルキル、ハロゲン若しくはＣ１−Ｃ６−アルキルで適宜置換されていてもよいＣ６−Ｃ１０−アリール、ハロゲンで適宜置換されていてもよいＣ６−Ｃ１０−アリールオキシ、Ｃ６−Ｃ１０−アリール−Ｃ１−Ｃ６−アルキル、またはハロゲン若しくはジ（Ｃ１−Ｃ６−アルキル）アミノで適宜置換されていてもよいＣ６−Ｃ１０−アリール−Ｃ１−Ｃ６−アルキルアミノを表すか、または、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する４〜８員ヘテロシクリルを表す｝を表し、
Ｒ５が、−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ１０（ここで、Ｒ１０は、水素、アミノで適宜置換されていてもよいＣ１−Ｃ６−アルキルまたはハロゲンで適宜置換されていてもよいＣ６−Ｃ１０−アリールを表す）を表し、
Ｚ’及びＲ５が、これらが結合している原子と一緒になって、構造
【化３】
0006471163.tif 000036
（但し、Ｚ’が、−Ｏ−を表すとき、Ｒ９は存在しない；およびＢが直接結合であり、Ｚ’およびＲ５が、それらが結合する原子と一緒にならない場合、（Ｚ’−Ｒ９）は存在しない）
を形成していてもよい、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
下記式（１ａ）または（１ｂ）である、請求項１に記載の化合物：
【化４】
0006471163.tif 000037
（１ａ）
【化５】
0006471163.tif 000038
（１ｂ）
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｚ、Ｚ’、Ｂ及びｎは、請求項１で定義したものと同義である）。
【請求項４】
Ｒ１が、水素、イソペンチルまたはシクロペンチルメチルを表す、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２が、−Ｘ−（ＣＨ２）ｎ−Ａ−Ｒ６
（ここで、ｎは、０〜２の数であり、
Ｘは、直接結合を表し、
Ａは、直接結合を表すか、Ｃ３−Ｃ６−シクロアルキル若しくはフェニルを表すか、または、それぞれＮ、Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する４〜６員ヘテロシクリル若しくはヘテロアリールを表し、
Ｒ６は、水素、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、アミノまたは−ＣＯ２Ｈを表す）（但し、Ｒ２は、水素ではない）を表す、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ２が、シクロペンチル、ピペリジン、イソペンチル、シクロペンチルメチル、フェネチル、ペンチル、シクロプロピルメチル、２−アミノピリジン−３−イルメチル、チアゾールメチル、ピロリジン、ピロリジン−２−イルメチル、ピペリジン−３−イル、カルボキシメチル（−ＣＨ２ＣＯＯＨ）、テトラヒドロピランまたはシクロヘキシルを表す、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１及びＲ２が、一緒になって、−（ＣＨ２）５−を表す、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ３が、ハロゲンまたはＣ１−Ｃ３−アルキルを表す、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ３が、クロロ、ブロモまたはメチルを表す、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ４のＢが、直接結合を表すか、またはフェニル、ピロリジン、モルホリン、チアゾール若しくはインダゾールを表す、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ４のＺ及びＺ’が、それぞれ独立して、−（ＣＨ２）ｍ−、−Ｏ−または−Ｎ−を表す、請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ４のＲ８が、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ３−アルキル）アミノ、ハロゲンで適宜置換されていてもよいＣ１−Ｃ６−アルキル、−ＣＯ２Ｒ７（ここで、Ｒ７は水素またはＣ１−Ｃ３−アルキルを表す）、Ｃ４−Ｃ６−シクロアルキル、ハロゲン若しくはＣ１−Ｃ３−アルキルで適宜置換されていてもよいフェニル、ハロゲンで適宜置換されていてもよいフェノキシ、フェニル−Ｃ１−Ｃ３−アルキル、ハロゲン若しくはジ（Ｃ１−Ｃ３−アルキル）アミノで適宜置換されていてもよいベンジルアミノ、またはＮ、Ｏ及びＳよりなる群から選択される１〜２個のヘテロ原子を有する５〜６員ヘテロシクリルを表す、請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ８が、ジメチルアミノ、アミノ、イソペンチル、フルオロ、３，５−ジメチル−フェニル、トリフルオロメチル、フェニル、ベンジル、イソプロピル、シクロペンチル、フェノキシ、３，４−ジフルオロフェノキシ、３−ジメチルアミノ−ベンジルアミノ、３，５−ジフルオロベンジルアミノ、ヒドロキシ、カルボキシ、ピペリジン、メトキシカルボニルまたはピロリジンを表す、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ４のＲ９が、水素、フェノキシまたはベンジルを表す、請求項１に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ５のＲ１０が、水素、２，４−ジフルオロフェニル、４−フルオロフェニルまたはアミノメチルを表す、請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
下記群から選択される、インドールアミド化合物：
５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（４−フェノキシ−フェニル）−アミド；
５−クロロ−７−（ピロリジン−３−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（４−フェノキシ−フェニル）−アミド；
５−クロロ−７−（ピペリジン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸［４−（３，４−ジフルオロ−フェノキシ）−フェニル］−アミド；
５−クロロ−７−（ピペリジン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（３−フェノキシ−フェニル）−アミド；
５−クロロ−７−［（ピロリジン−２−イルメチル）−アミノ］−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸ベンジルアミド；
５−クロロ−７−（ピペリジン−３−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（４−フェノキシ−フェニル）−アミド；
５−クロロ−７−（ピペリジン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（４−フェノキシ−フェニル）−アミド；
５−クロロ−７−［（ピロリジン−２−イルメチル）−アミノ］−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（３−フェノキシ−フェニル）−アミド；
５−クロロ−７−［（ピロリジン−２−イルメチル）−アミノ］−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（３−シクロペンチルオキシ−５−フェノキシ−フェニル）−アミド；
５−クロロ−７−［（ピロリジン−２−イルメチル）−アミノ］−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（４−フェノキシ−フェニル）−アミド；
７−［（２−アミノ−ピリジン−３−イルメチル）−アミノ］−５−クロロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸［４−（３，４−ジフルオロ−フェノキシ）−フェニル］−アミド；
５−クロロ−７−（ピペリジン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（３−シクロペンチルオキシ−フェニル）−アミド；
５−クロロ−７−（ピペリジン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（３−モルホリン−４−イルメチル−フェニル）−アミド；
５−クロロ−７−（ピペリジン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸ビフェニル−３−イルアミド；
５−クロロ−７−（ピペリジン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（３−ベンジルオキシ−フェニル）−アミド；
５−クロロ−７−（ピペリジン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（４−トリフルオロメトキシ−フェニル）−アミド；
５−クロロ−７−（ピペリジン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸［４−（３，５−ジメチル−フェノキシ）−フェニル］−アミド；
５−クロロ−７−（ピペリジン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸［２−（３−フルオロ−フェニル）−エチル］−アミド；
５−クロロ−７−［（チアゾール−２−イルメチル）−アミノ］−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（３−フェノキシ−フェニル）−アミド；
５−クロロ−７−（ピペリジン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（４−イソペンチルオキシ−フェニル）−アミド；
５−クロロ−７−［（ピロリジン−２−イルメチル）−アミノ］−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸［４−（３，４−ジメチル−フェノキシ）−フェニル］−アミド；
（５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−イル）−ピロリジン−１−イル−メタノン；
（Ｒ）−１−（５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−ピロリジン−３−カルボン酸メチルエステル；
（Ｓ）−１−（５−クロロ−７−シクロペンチルメチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−ピロリジン−３−カルボン酸メチルエステル；
（Ｒ）−１−［５−クロロ−７−（テトラヒドロ−ピラン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−ピロリジン−３−カルボン酸メチルエステル；
（Ｓ）−１−［５−メチル−７−（テトラヒドロ−ピラン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−ピロリジン−３−カルボン酸メチルエステル；
（５−ブロモ−７−シクロヘキシルアミノ−１Ｈ−インドール−２−イル）−モルホリン−４−イル−メタノン；
（７−シクロペンチルアミノ−５−メチル−１Ｈ−インドール−２−イル）−モルホリン−４−イル−メタノン；
（７−シクロペンチルアミノ−５−メチル−１Ｈ−インドール−２−イル）−ピペラジン−４−イル−メタノン；
５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（１−ベンジル−ピロリジン−３−イルメチル）−アミド；
７−シクロペンチルアミノ−５−メチル−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（２−ジメチルアミノ−エチル）−アミド；
７−シクロペンチルアミノ−５−メチル−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（２−モルホリン−４−イル−エチル）−アミド；
（４−ベンジル−ピペラジン−１−イル）−［５−クロロ−７−（ピペリジン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノン；
［５−クロロ−７−（ピペリジン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−イル］−［（Ｒ）−３−（３，４−ジフルオロ−フェノキシメチル）−ピロリジン−１−イル］−メタノン；
［５−クロロ−７−（ピペリジン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−イル］−（（Ｒ）−３−フェノキシメチル−ピロリジン−１−イル）−メタノン；
（Ｒ）−１−［５−クロロ−７−（テトラヒドロ−ピラン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−ピロリジン−３−カルボン酸；
［５−クロロ−７−（テトラヒドロピラン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−イル］−（（Ｒ）−３−ヒドロキシメチル−ピロリジン−１−イル）−メタノン；
（Ｓ）−１−［５−メチル−７−（テトラヒドロピラン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−ピロリジン−３−カルボン酸；
７−（２−アミノ−アセチルアミノ）−５−クロロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（４−フェノキシ−フェニル）−アミド；
（３−アミノメチル−ピロリジン−１−イル）−（５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
（５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−イル）−（３−ピペリジン−１−イルメチル−ピロリジン−１−イル）−メタノン；
［５−クロロ−７−（テトラヒドロ−ピラン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−イル］−（３−ピペリジン−１−イルメチル−ピロリジン−１−イル）−メタノン；
（３−アミノメチル−ピロリジン−１−イル）−［５−クロロ−７−（テトラヒドロ−ピラン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノン；
（（Ｒ）−３−アミノ−ピロリジン−１−イル）−（５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
（５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−イル）−｛３−［（３−ジメチルアミノ−ベンジルアミノ）−メチル］−ピロリジン−１−イル｝−メタノン；
（３−アミノメチル−ピロリジン−１−イル）−［５−クロロ−７−（３−メチル−ブチルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノン；
（３−アミノメチル−ピロリジン−１−イル）−［５−クロロ−７−（シクロペンチルメチル−アミノ）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノン；
（３−アミノメチル−ピロリジン−１−イル）−（５−クロロ−７−ピペリジン−１−イル−１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
（３−アミノメチル−ピロリジン−１−イル）−（５−クロロ−７−フェネチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
（３−アミノメチル−ピロリジン−１−イル）−（５−クロロ−７−ペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
（３−アミノメチル−ピロリジン−１−イル−（５−クロロ−７−シクロヘキシルアミノ−１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
（３−アミノメチル−ピペリジン−１−イル）−（５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
（３−アミノメチル−ピロリジン−１−イル）−［７−（ビス−シクロプロピルメチル−アミノ）−５−クロロ−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノン；
（３−アミノメチル−ピロリジン−１−イル）−｛７−［ビス−（３−メチル−ブチル）−アミノ］−５−クロロ−１Ｈ−インドール−２−イル｝−メタノン；
（（Ｓ）−３−アミノ−ピロリジン−１−イル）−（５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
｛７−［ビス−（３−メチル−ブチル）−アミノ］−５−クロロ−１Ｈ−インドール−２−イル｝−［３−（４−フルオロ−ベンジルアミノメチル）−ピロリジン−１−イル］−メタノン；
｛７−［ビス−（３−メチル−ブチル）−アミノ］−５−クロロ−１Ｈ−インドール−２−イル｝−［３−（３，４−ジフルオロ−ベンジルアミノメチル）−ピロリジン−１−イル］−メタノン；
（３−アミノメチル−ピロリジン−１−イル）−（５−ブロモ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
７−シクロペンチルアミノ−５−メチル−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（ピロリジン−３−イルメチル）−アミド；
｛７−［ビス−（３−メチル−ブチル）−アミノ］−５−クロロ−１Ｈ−インドール−２−イル｝−［（３Ｒ，４Ｒ）−３−（２，４−ジフルオロ−フェニル）−４−ピロリジン−１−イルメチル−ピロリジン−１−イル］−メタノン；
｛７−［ビス−（３−メチル−ブチル）−アミノ］−５−クロロ−１Ｈ−インドール−２−イル｝−［（３Ｒ，４Ｒ）−３−（４−クロロ−フェニル）−４−ピロリジン−１−イルメチル−ピロリジン−１−イル］−メタノン；
（５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−イル）−［（３Ｒ，４Ｒ）−３−（２，４−ジフルオロ−フェニル）−４−ピロリジン−１−イルメチル−ピロリジン−１−イル］−メタノン；
［５−クロロ−７−（テトラヒドロピラン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−イル］−［（３Ｒ，４Ｒ）−３−（２，４−ジフルオロ−フェニル）−４−ピロリジン−１−イルメチル−ピロリジン−１−イル］−メタノン；
（５−クロロ−７−（ピペリジン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−イル｝−［（３Ｒ，４Ｒ）−３−（２，４−ジフルオロ−フェニル）−４−ピロリジン−１−イルメチル−ピロリジン−１−イル］−メタノン；
（５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（（Ｒ）−２−フェニル−１−ピロリジン−１−イルメチル−エチル）−アミド；
［５−メチル−２−（ピロリジン−１−カルボニル）−１Ｈ−インドール−７−イルアミノ］−酢酸；及び
［７−シクロペンチルアミノ−５−（１，１−ジオキソ−チオモルホリン−４−メチル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−ピロリジン−１−イル−メタノン；または
その製薬的に許容される塩もしくはＲまたはＳ異性体、ラセミ体、またはジアステレオマー。
【請求項１７】
活性成分として、治療学的有効量の請求項１に記載の式（１）の化合物、製薬的に許容されるその塩またはＲまたはＳ異性体、ラセミ体、またはジアステレオマーを、製薬的に許容される担体または希釈剤と共に含有することを特徴とする、細胞壊死及び関連疾患を予防または治療するための組成物。
【請求項１８】
細胞壊死及び関連疾患が、急性／慢性肝疾患、神経変性疾患、虚血性疾患、糖尿病、膵臓炎、バクテリア性／ウイルス性敗血症、壊死性直腸結腸炎（necrotizing proctocolitis）、嚢胞性繊維症、リウマチ性関節炎、変性性関節炎、腎症、バクテリア感染、ウイルス感染、多発性硬化症、白血病、リンパ腫、新生児性呼吸促迫症候群、窒息、結核、子宮内膜症、血管衰弱症、乾癬、凍傷、ステロイド処理合併症、壊疽病、圧痛、血色素尿症、熱傷、高熱症、クローン病、セリアック病、コンパートメント症候群、脊髄損傷、糸球体腎炎、筋ジストロフィー、遺伝性代謝疾患、マイコプラズマ疾患、炭疽病、アンダーソン病、先天性ミトコンドリア病、フェニルケトン尿症、胎盤梗塞、梅毒及び無菌壊死よりなる群から選択される、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
細胞壊死及び関連疾患が、薬物及び毒性物質による疾患であり、アルコール中毒及びコカイン、薬物、抗生剤、抗癌剤、アドリアマイシン、フロマイシン、ブレオマイシン、ＮＳＡＩＤ、シクロスポリン、化学毒素、毒ガス、農薬、重金属への露出、またはこれらの投与若しくは自己投与と関連した壊死、放射能／ＵＶへの露出による損傷、及びこれと関連した細胞壊死よりなる群から選択される、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２０】
肝保護、肝機能改善及び肝疾患の予防または治療のための、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２１】
肝疾患が、肝移植、ウイルスもしくは薬物によるアルコール性もしくは非アルコール性の脂肪肝、肝繊維症、肝硬変、および肝炎よりなる群から選択される、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
肝疾患が、アルコール性の急性／慢性肝疾患である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２３】
肝疾患が、脂肪酸に由来する脂肪肝または脂肪肝に由来する急性／慢性肝疾患である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２４】
肝疾患が、活性酸素種（ＲＯＳ）により介在される、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２５】
肝疾患が、重金属により介在される、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２６】
薬物−誘導性細胞壊死及び関連疾患の予防または治療剤と併用投与される、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２７】
薬物−誘導性細胞壊死及び関連疾患の予防または治療剤が、抗生剤、抗癌剤、抗ウイルス剤、抗感染剤、抗炎症剤、抗凝血剤、脂質改善剤、細胞死抑制剤、抗高血圧剤、糖尿／肥満治療剤、心血管疾患治療剤、神経変性疾患治療剤、抗老化剤、及び代謝性疾患治療剤よりなる群から選択される、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
肝細胞再生促進剤、肝機能補助剤、抗ウイルス剤、免疫抑制剤、及び繊維化抑制剤よりなる群から選択される薬剤と併用投与される、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２９】
神経変性疾患が、認知症、パーキンソン病またはハンチントン病である、請求項１８に記載の組成物。
【請求項３０】
虚血性疾患が、心臓疾患、再潅流損傷、虚血性脳卒中または虚血性損傷である、請求項１８に記載の組成物。
【請求項３１】
糖尿病が、膵臓細胞破壊物質による糖尿病、糖尿病性合併症または糖尿病性血管疾患である、請求項１８に記載の組成物。
【請求項３２】
糖尿病が、ウイルス、高血糖、脂肪酸、ダイエット、毒素またはストレプトシンにより介在される、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
活性成分として、請求項１に記載の化合物、製薬的に許容されるその塩またはＲまたはＳ異性体、ラセミ体、またはジアステレオマーを、製薬的に許容される担体と共に混合する工程を含む、細胞壊死及び関連疾患の予防または治療のための組成物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、式（１）のインドールアミド化合物、製薬的に許容されるその塩または異性体、及びこれを活性成分として含有することを特徴とする細胞壊死及び関連疾患を予防または治療するための組成物及び組成物の製造方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
細胞死と関連した大多数の研究は、プログラム細胞死（ＰＣＤ）と知らされた細胞の自然死（アポトーシス）に集中されてきており、カスパーゼという酵素が発見されることによって、多くの製薬メーカーからカスパーゼ抑制剤を用いた薬物開発が、過去１０年間行われてきた。しかし、まだＦＤＡの承認を受けた薬物はほとんどない実状である。これは、細胞の自然死は、生理的状況で起こる細胞死であり、体内の恒常性を維持させる防御機序に起因する可能性が大きいためである。これとは対照的に、細胞壊死（necrosis）は、主に、病的な状況で起こる細胞死であり、大多数の場合、炎症反応を伴う特徴を有している。細胞壊死は、長い間の研究期間の間、非調節的（uncontrolled）細胞死と知らされたが、最近の研究結果（非特許文献１）によれば、細胞壊死によって誘発される疾患は、虚血性（例えば、心筋梗塞、脳卒中、神経索）、神経変性（neurodegenerative）、そして、炎症性疾患が主である。細胞壊死は、病的な状況での非調節的事故細胞死であり、その作用機序、分子標的及び信号伝達体系などがほとんど研究されていないため、細胞壊死が原因となる虚血性、神経変性、そして炎症性疾患を治療し、細胞壊死の生物学的、病理的原因を明らかにするために、このような細胞壊死抑制物質を見出して開発することは非常に急務である。
【０００３】
本発明に係るインドールアミド誘導体は、医薬的に非常に有用な構造であり、これらの構造に対して発表された研究結果が多くある。その中には、グルコキナーゼに対して活性があると報告した特許文献１、抗腫瘍及び心血管生成阻害剤として有用と高報告した特許文献２、及び抗生剤として有用と報告した特許文献３などがある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】ＷＯ２００６／１１２５４９号
【特許文献２】ＷＯ９５／０７２７６号
【特許文献３】ＷＯ２００４／０１８４２８号
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Proskurykakov SY et al., 2002, Biochemistry
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
そこで、本発明者らは、前記説明した技術的背景下に、細胞壊死及び関連疾患に対する予防または治療及び改善効果を示すだけでなく、特に、肝疾患の予防または治療に有用な化合物を開発するために集中的、且つ広範囲な研究を行った。その結果、下記説明するような式（１）のインドールアミド誘導体が細胞壊死及び関連疾患の予防と治療に優れた効果を示していることを見出し、本発明を完成した。
【０００７】
従って、本発明は、式（１）の新規なインドールアミド化合物を提供することを目的とする。
【０００８】
本発明は、また、製薬的に許容される担体または希釈剤と共に、活性成分として、式（１）の化合物、製薬的に許容されるその塩または異性体を含有することを特徴とする細胞壊死及び関連疾患、特に肝保護、肝機能改善及び急性／慢性肝疾患を予防または治療するための組成物を提供することを目的とする。
【０００９】
本発明は、また、前記組成物を使用して、細胞壊死及び関連疾患、特に肝保護、肝機能改善及び急性／慢性肝疾患を予防または治療するための方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
このような目的を達成するために、本発明は、下記式（１）のインドールアミド化合物、製薬的に許容されるその塩または異性体を提供する：
【化１】
0006471163.tif 000002
（１）
［式中、
Ｒ１は、水素、Ｃ１−Ｃ６−アルキルまたは−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ３−Ｃ８−シクロアルキル（ここで、ｎは０〜２の数である）を表し、
Ｒ２は、−Ｘ−（ＣＨ２）ｎ−Ａ−Ｒ６
｛ここで、Ｘは、直接結合または−Ｃ（Ｏ）−を表し、
Ａは、直接結合を表すか、Ｃ３−Ｃ８−シクロアルキル若しくはＣ６−Ｃ１０−アリールを表すか、または、それぞれＮ、Ｏ及びＳから選択される〜３個のヘテロ原子を有する４〜８員ヘテロシクリル若しくはヘテロアリールを表し、
Ｒ６は、水素、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、ニトリル、ニトロまたは−ＣＯ２−Ｒ７
（ここで、Ｒ７は、水素、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ６−Ｃ１０−アリール若しくはＣ６−Ｃ１０−アリール−Ｃ１−Ｃ６−アルキルを表すか、または、それぞれ適宜オキソを含んでいてもよく、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員ヘテロシクリルまたはヘテロアリールを表す）
を表す｝を表し、
Ｒ１及びＲ２は、一緒になって、−（ＣＨ２）ｒ−（ここで、ｒは４〜６の数である）を表してもよく、
Ｒ３は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、−Ｏ−Ｒ７、−ＮＨ−Ｒ７または−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ７（ここで、ｍは０〜３の数である）を表し、
Ｒ４は、−（ＣＨＲ７）ｎ−Ｂ−（Ｚ−Ｒ８）（Ｚ’−Ｒ９）
｛ここで、Ｂは、直接結合を表すか、Ｃ６−Ｃ１０−アリールを表すか、または、それぞれＮ、Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する４〜９員ヘテロシクリル若しくはヘテロアリールを表し、
Ｚ及びＺ’は、それぞれ独立して、直接結合、−（ＣＨ２）ｍ−、−Ｏ−または−Ｎ−を表し、
Ｒ８及びＲ９は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６−アルキル）アミノ、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、−ＣＯ２Ｒ７、Ｃ３−Ｃ８−シクロアルキル、Ｃ６−Ｃ１０−アリール、Ｃ６−Ｃ１０−アリールオキシ、Ｃ６−Ｃ１０−アリール−Ｃ１−Ｃ６−アルキル若しくはＣ６−Ｃ１０−アリール−Ｃ１−Ｃ６−アルキルアミノを表すか、または、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する４〜８員ヘテロシクリルを表す｝を表し、
Ｒ５は、−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ１０（ここで、Ｒ１０は、水素、Ｃ１−Ｃ６−アルキルまたはＣ６−Ｃ１０−アリールを表す）を表し、
Ｚ’及びＲ５は、これらが結合している原子と一緒になって、構造
【化２】
0006471163.tif 000003
（但し、Ｚ’が、−Ｏ−を表すとき、Ｒ９は存在しない）
を形成していてもよく、
前記で、アルキル、アルコキシ、アリール、シクロアルキル、ヘテロ環及びヘテロアリールは適宜置換されていてもよく、置換基は、ヒドロキシ、ハロゲン、ニトリル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、カルボキシ、アルキル、アルコキシ、アリールアルコキシ及びオキソよりなる群から選択される１つまたはそれ以上である］。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
式（１）化合物の前記定義において、用語「アルキル」とは、脂肪族炭化水素ラジカルを意味する。アルキルは、アルケニルまたはアルキニル部位を含まない「飽和アルキル」であるか、少なくとも一つのアルケニルまたはアルキニル部位を含む「不飽和アルキル」であってもよい。「アルケニル」は、少なくとも一つの炭素−炭素二重結合を含む基を意味し、「アルキニル」は、少なくとも一つの炭素−炭素三重結合を含む基を意味する。アルキルは、単独またはアルコキシと組み合わせて使用される場合に、それぞれ分枝状または直鎖状であってもよい。
【００１２】
アルキル基は、特に定義されない限り、１〜２０個の炭素原子を有していてもよい。アルキル基は、１〜１０個の炭素原子を有する中程度のアルキルであってもよい。アルキル基は、１〜６個の炭素原子を有する低級アルキルであってもよい。典型的なアルキル基には、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、エテニル、プロペニル、ブテニルなどが挙げられるが、これらに制限されない。例えば、Ｃ１−Ｃ４−アルキルは、アルキル鎖に１〜４個の炭素原子を有し、メチル、エチル、プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル及びｔ−ブチルよりなる群から選択される。
【００１３】
用語「アルコキシ」は、特に定義されない限り、１〜１０個の炭素原子を有するアルキルオキシを意味する。
【００１４】
用語「シクロアルキル」は、特に定義されない限り、飽和脂肪族３〜１０員を意味する。典型的なシクロアルキル基には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどが挙げられるが、これらに制限されない。
【００１５】
用語「アリール」は、共有π電子系を有する少なくとも一つの環、例えば、単環式または縮合多環式（即ち、隣接した炭素原子対を分けて有する環）基を含む。即ち、本明細書で、アリールは、特に定義されない限り、フェニル、ナフチルなどを含む４〜１０員、好ましくは６〜１０員芳香族単環式または多環式環を意味する。
【００１６】
用語「ヘテロアリール」は、特に定義されない限り、Ｎ、Ｏ及びＳ原子よりなる群から選ばれた１〜３個のヘテロ原子を有し、ベンゾまたはＣ３−Ｃ８シクロアルキルと縮合することができる芳香族３〜１０員、好ましくは４〜８員、より好ましくは、５〜６員を意味する。単環式ヘテロアリールの例には、チアゾール、オキサゾール、チオフェン、フラン、ピロール、イミダゾール、イソオキサゾール、イソチアゾール、ピラゾール、トリアゾール、トリアジン、チアジアゾール、テトラゾール、オキサジアゾール、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジンなどが挙げられるが、これらに制限されない。二環式ヘテロアリールの例には、インドール、インドリン、ベンゾチオフェン、ベンゾフラン、ベンズイミダゾール、ベンゾオキサゾール、ベンズイソオキサゾール、ベンズチアゾール、ベンズチアジアゾール、ベンズトリアゾール、キノリン、イソキノリン、プリン、フロピリジンなどが上げられるが、これらに制限されない。
【００１７】
用語「ヘテロ環」は、特に定義されない限り、Ｎ、Ｏ及びＳ原子よりなる群から選ばれた１〜３個のヘテロ原子を有し、ベンゾまたはＣ３−Ｃ８−シクロアルキルと縮合することができ、飽和または１若しくは２個の二重結合を含有する３〜１０員、好ましくは４〜８員、より好ましくは、５〜６員を意味する。ヘテロ環の例には、ピロリン、ピロリジン、イミダゾリン、イミダゾリジン、ピラゾリン、ピラゾリジン、ピラン、ピペリジン、モルホリン、チオモルホリン、ピペラジン、ヒドロフランなどが上げられるが、これらに制限されない。
【００１８】
本明細書で使われた他の用語と略語は、特に定義されない限り、本発明が属する技術分野の当業者が通常的に使われる意味を有するものと理解される。
【００１９】
本発明に係る式（１）の化合物の中でも好ましい化合物は、
Ｒ１は、水素、Ｃ１−Ｃ６−アルキルまたは−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ３−Ｃ８−シクロアルキル（ここで、ｎは０〜２の数である）を表し、
Ｒ２は、−Ｘ−（ＣＨ２）ｎ−Ａ−Ｒ６
｛ここで、Ｘは、直接結合または−Ｃ（Ｏ）−を表し、
Ａは、直接結合を表すか、Ｃ４−Ｃ８−シクロアルキル若しくはＣ６−Ｃ１０−アリールを表すか、または、それぞれＮ、Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する４〜８員ヘテロシクリル若しくはヘテロアリールを表し、
Ｒ６は、水素、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、ハロゲン、アミノ、ニトリルまたは−ＣＯ２−Ｒ７
（ここで、Ｒ７は、水素、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ６−Ｃ１０−アリール若しくはＣ６−Ｃ１０−アリール−Ｃ１−Ｃ６−アルキルを表すか、または、それぞれ適宜オキソを含んでいてもよく、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員ヘテロシクリル若しくはヘテロアリールを表す）
を表す｝を表し、
Ｒ１及びＲ２は、一緒になって、−（ＣＨ２）ｒ−（ここで、ｒは４〜６の数である）を表してもよく、
Ｒ３は、水素、ハロゲンまたはＣ１−Ｃ６−アルキルを表し、
Ｒ４は、−（ＣＨＲ７）ｎ−Ｂ−（Ｚ−Ｒ８）（Ｚ’−Ｒ９）
｛ここで、Ｂは、直接結合を表すか、フェニルを表すか、または、それぞれＮ、Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する４〜９員ヘテロシクリル若しくはヘテロアリールを表し、
Ｚ及びＺ’は、それぞれ独立して、直接結合、−（ＣＨ２）ｍ−、−Ｏ−または−Ｎ−（ここで、ｍは０〜３の数である）を表し、
Ｒ８及びＲ９は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ６−アルキル）アミノ、ハロゲンで適宜置換されていてもよいＣ１−Ｃ６−アルキル、−ＣＯ２Ｒ７、Ｃ４−Ｃ６−シクロアルキル、ハロゲン若しくはＣ１−Ｃ６−アルキルで適宜置換されていてもよいＣ６−Ｃ１０−アリール、ハロゲンで適宜置換されていてもよいＣ６−Ｃ１０−アリールオキシ、Ｃ６−Ｃ１０−アリール−Ｃ１−Ｃ６−アルキル、またはハロゲン若しくはジ（Ｃ１−Ｃ６−アルキル）アミノで適宜置換されていてもよいＣ６−Ｃ１０−アリール−Ｃ１−Ｃ６−アルキルアミノを表すか、または、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する４〜８員ヘテロシクリルを表す｝を表し、
Ｒ５は、−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ１０（ここで、Ｒ１０は、水素、アミノで適宜置換されていてもよいＣ１−Ｃ６−アルキルまたはハロゲンで適宜置換されていてもよいＣ６−Ｃ１０−アリールを表す）を表し、
Ｚ’及びＲ５は、これらが結合している原子と一緒になって、構造
【化３】
0006471163.tif 000004
（但し、Ｚ’が、−Ｏ−を表すとき、Ｒ９は存在しない）
を形成していてもよい。
【００２０】
本発明に係る式（１）の化合物において、Ｒ５及びＺ'が互いに結合して、環を形成するか、どうかによって、下記式（１ａ）または（１ｂ）を示してもよい。
【化４】
0006471163.tif 000005
（１ａ）
【化５】
0006471163.tif 000006
（１ｂ）
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｚ、Ｚ’、Ｂ及びｎは、前記定義と同義である）
【００２１】
置換基Ｒ１は、より好ましくは、水素、イソペンチル、シクロペンチルメチルを表す。
【００２２】
Ｒ２が、より好ましくは、−Ｘ−（ＣＨ２）ｎ−Ａ−Ｒ６
（ここで、ｎは、０〜２の数であり、
Ｘは、直接結合または−Ｃ（Ｏ）−を表し、
Ａは、直接結合を表すか、Ｃ３−Ｃ６−シクロアルキル若しくはフェニルを表すか、または、それぞれＮ、Ｏ及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有する４〜６員ヘテロシクリル若しくはヘテロアリールを表し、
Ｒ６は、水素、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、アミノまたは−ＣＯ２Ｈを表す）である。
Ｒ２は、最も好ましくは、シクロペンチル、ピペリジン、イソペンチル、シクロペンチルメチル、フェネチル、ペンチル、シクロプロピルメチル、２−アミノピリジン−３−イルメチル、チアゾールメチル、ピロリジン、ピロリジン−２−イルメチル、ピペリジン−３−イル、アミノメチルカルボニル、酢酸、テトラヒドロピランまたはシクロヘキシルを表す。
【００２３】
置換基Ｒ１及びＲ２は、一緒になって、より好ましくは、−（ＣＨ２）５−を表す。
【００２４】
置換基Ｒ３は、より好ましくは、水素、ハロゲンまたはＣ１−Ｃ３−アルキルを表して、最も好ましくはクロロ、ブロモまたはメチルを表す。
【００２５】
置換基Ｒ４において、Ｂは、より好ましくは、直接結合を表すか、フェニル、ピロリジン、モルホリン、チアゾールまたはインダゾールを表す。
【００２６】
置換基Ｒ４において、Ｚ及びＺ’は、それぞれ独立して、より好ましくは、−（ＣＨ２）ｍ−、−Ｏ−または−Ｎ−を表す。
【００２７】
置換基Ｒ４において、Ｒ８は、より好ましくは、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、ジ（Ｃ１−Ｃ３−アルキル）アミノ、ハロゲンで適宜置換されていてもよいＣ１−Ｃ６−アルキル、−ＣＯ２Ｒ７（ここで、Ｒ７は水素またはＣ１−Ｃ３−アルキルを表す）、Ｃ４−Ｃ６−シクロアルキル、ハロゲン若しくはＣ１−Ｃ３−アルキルで適宜置換されていてもよいフェニル、ハロゲンで適宜置換されていてもよいフェノキシ、フェニル−Ｃ１−Ｃ３−アルキル、ハロゲン若しくはジ（Ｃ１−Ｃ３−アルキル）アミノで適宜置換されていてもよいベンジルアミノ、またはＮ、Ｏ及びＳよりなる群から選択１〜２個のヘテロ原子を有する５〜６員ヘテロシクリルを表す。Ｒ８は、最も好ましくは、ジメチルアミノ、アミノ、イソペンチル、フルオロ、３，５−ジメチル−フェニル、トリフルオロメチル、フェニル、ベンジル、イソプロピル、シクロペンチル、フェノキシ、３，４−ジフルオロフェノキシ、３−ジメチルアミノ−ベンジルアミノ、３，５−ジフルオロベンジルアミノ、ヒドロキシ、カルボキシ、ピペリジン、メトキシカルボニルまたはピロリジンを表す。
【００２８】
置換基Ｒ４において、Ｒ９は、より好ましくは、水素、フェノキシまたはベンジルを表す。
【００２９】
置換基Ｒ５において、Ｒ１０は、より好ましくは、水素、２，４−ジフルオロフェニル、４−フルオロフェニルまたはアミノメチルを表す。
【００３０】
本発明に係る式（１）の代表的な化合物は下記化合物を含む：
５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（４−フェノキシ−フェニル）−アミド；
５−クロロ−７−（ピロリジン−３−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（４−フェノキシ−フェニル）−アミド；
５−クロロ−７−（ピペリジン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸［４−（３，４−ジフルオロ−フェノキシ）−フェニル］−アミド；
５−クロロ−７−（ピペリジン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（３−フェノキシ−フェニル）−アミド；
５−クロロ−７−［（ピロリジン−２−イルメチル）−アミノ］−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸ベンジルアミド；
５−クロロ−７−（ピペリジン−３−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（４−フェノキシ−フェニル）−アミド；
５−クロロ−７−（ピペリジン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（４−フェノキシ−フェニル）−アミド；
５−クロロ−７−［（ピロリジン−２−イルメチル）−アミノ］−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（３−フェノキシ−フェニル）−アミド；
５−クロロ−７−［（ピロリジン−２−イルメチル）−アミノ］−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（３−シクロペンチルオキシ−５−フェノキシ−フェニル）−アミド；
５−クロロ−７−［（ピロリジン−２−イルメチル）−アミノ］−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（４−フェノキシ−フェニル）−アミド；
７−［（２−アミノ−ピリジン−３−イルメチル）−アミノ］−５−クロロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸［４−（３，４−ジフルオロ−フェノキシ）−フェニル］−アミド；
５−クロロ−７−（ピペリジン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（３−シクロペンチルオキシ−フェニル）−アミド；
５−クロロ−７−（ピペリジン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（３−モルホリン−４−イルメチル−フェニル）−アミド；
５−クロロ−７−（ピペリジン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸ビフェニル−３−イルアミド；
５−クロロ−７−（ピペリジン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（３−ベンジルオキシ−フェニル）−アミド；
５−クロロ−７−（ピペリジン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（４−トリフルオロメトキシ−フェニル）−アミド；
５−クロロ−７−（ピペリジン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸［４−（３，５−ジメチル−フェノキシ）−フェニル］−アミド；
５−クロロ−７−（ピペリジン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸［２−（３−フルオロ−フェニル）−エチル］−アミド；
５−クロロ−７−［（チアゾール−２−イルメチル）−アミノ］−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（３−フェノキシ−フェニル）−アミド；
５−クロロ−７−（ピペリジン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（４−イソペンチルオキシ−フェニル）−アミド；
５−クロロ−７−［（ピロリジン−２−イルメチル）−アミノ］−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸［４−（３，４−ジメチル−フェノキシ）−フェニル］−アミド；
（５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−イル）−ピロリジン−１−イル−メタノン；
（Ｒ）−１−（５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−ピロリジン−３−カルボン酸メチルエステル；
（Ｓ）−１−（５−クロロ−７−シクロペンチルメチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−ピロリジン−３−カルボン酸メチルエステル；
（Ｒ）−１−［５−クロロ−７−（テトラヒドロ−ピラン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−ピロリジン−３−カルボン酸メチルエステル；
（Ｓ）−１−［５−メチル−７−（テトラヒドロ−ピラン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−ピロリジン−３−カルボン酸メチルエステル；
（５−ブロモ−７−シクロヘキシルアミノ−１Ｈ−インドール−２−イル）−モルホリン−４−イル−メタノン；
（７−シクロペンチルアミノ−５−メチル−１Ｈ−インドール−２−イル）−モルホリン−４−イル−メタノン；
（７−シクロペンチルアミノ−５−メチル−１Ｈ−インドール−２−イル）−ピペラジン−４−イル−メタノン；
５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（１−ベンジル−ピロリジン−３−イルメチル）−アミド；
７−シクロペンチルアミノ−５−メチル−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（２−ジメチルアミノ−エチル）−アミド；
７−シクロペンチルアミノ−５−メチル−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（２−モルホリン−４−イル−エチル）−アミド；
（４−ベンジル−ピペラジン−１−イル）−［５−クロロ−７−（ピペリジン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノン；
［５−クロロ−７−（ピペリジン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−イル］−［（Ｒ）−３−（３，４−ジフルオロ−フェノキシメチル）−ピロリジン−１−イル］−メタノン；
［５−クロロ−７−（ピペリジン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−イル］−（（Ｒ）−３−フェノキシメチル−ピロリジン−１−イル）−メタノン；
（Ｒ）−１−［５−クロロ−７−（テトラヒドロ−ピラン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−ピロリジン−３−カルボン酸；
［５−クロロ−７−（テトラヒドロピラン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−イル］−（（Ｒ）−３−ヒドロキシメチル−ピロリジン−１−イル）−メタノン；
（Ｓ）−１−［５−メチル−７−（テトラヒドロピラン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−ピロリジン−３−カルボン酸；
７−（２−アミノ−アセチルアミノ）−５−クロロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（４−フェノキシ−フェニル）−アミド；
（３−アミノメチル−ピロリジン−１−イル）−（５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
（５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−イル）−（３−ピペリジン−１−イルメチル−ピロリジン−１−イル）−メタノン；
［５−クロロ−７−（テトラヒドロ−ピラン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−イル］−（３−ピペリジン−１−イルメチル−ピロリジン−１−イル）−メタノン；
（３−アミノメチル−ピロリジン−１−イル）−［５−クロロ−７−（テトラヒドロ−ピラン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノン；
（（Ｒ）−３−アミノ−ピロリジン−１−イル）−（５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
（５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−イル）−｛３−［（３−ジメチルアミノ−ベンジルアミノ）−メチル］−ピロリジン−１−イル｝−メタノン；
（３−アミノメチル−ピロリジン−１−イル）−［５−クロロ−７−（３−メチル−ブチルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノン；
（３−アミノメチル−ピロリジン−１−イル）−［５−クロロ−７−（シクロペンチルメチル−アミノ）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノン；
（３−アミノメチル−ピロリジン−１−イル）−（５−クロロ−７−ピペリジン−１−イル−１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
（３−アミノメチル−ピロリジン−１−イル）−（５−クロロ−７−フェネチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
（３−アミノメチル−ピロリジン−１−イル）−（５−クロロ−７−ペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
（３−アミノメチル−ピロリジン−１−イル−（５−クロロ−７−シクロヘキシルアミノ−１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
（３−アミノメチル−ピペリジン−１−イル）−（５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
（３−アミノメチル−ピロリジン−１−イル）−［７−（ビス−シクロプロピルメチル−アミノ）−５−クロロ−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノン；
（３−アミノメチル−ピロリジン−１−イル）−｛７−［ビス−（３−メチル−ブチル）−アミノ］−５−クロロ−１Ｈ−インドール−２−イル｝−メタノン；
（（Ｓ）−３−アミノ−ピロリジン−１−イル）−（５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
｛７−［ビス−（３−メチル−ブチル）−アミノ］−５−クロロ−１Ｈ−インドール−２−イル｝−［３−（４−フルオロ−ベンジルアミノメチル）−ピロリジン−１−イル］−メタノン；
｛７−［ビス−（３−メチル−ブチル）−アミノ］−５−クロロ−１Ｈ−インドール−２−イル｝−［３−（３，４−ジフルオロ−ベンジルアミノメチル）−ピロリジン−１−イル］−メタノン；
（３−アミノメチル−ピロリジン−１−イル）−（５−ブロモ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
７−シクロペンチルアミノ−５−メチル−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（ピロリジン−３−イルメチル）−アミド；
｛７−［ビス−（３−メチル−ブチル）−アミノ］−５−クロロ−１Ｈ−インドール−２−イル｝−［（３Ｒ，４Ｒ）−３−（２，４−ジフルオロ−フェニル）−４−ピロリジン−１−イルメチル−ピロリジン−１−イル］−メタノン；
｛７−［ビス−（３−メチル−ブチル）−アミノ］−５−クロロ−１Ｈ−インドール−２−イル｝−［（３Ｒ，４Ｒ）−３−（４−クロロ−フェニル）−４−ピロリジン−１−イルメチル−ピロリジン−１−イル］−メタノン；
（５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−イル）−［（３Ｒ，４Ｒ）−３−（２，４−ジフルオロ−フェニル）−４−ピロリジン−１−イルメチル−ピロリジン−１−イル］−メタノン；
［５−クロロ−７−（テトラヒドロピラン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−イル］−［（３Ｒ，４Ｒ）−３−（２，４−ジフルオロ−フェニル）−４−ピロリジン−１−イルメチル−ピロリジン−１−イル］−メタノン；
（５−クロロ−７−（ピペリジン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−イル｝−［（３Ｒ，４Ｒ）−３−（２，４−ジフルオロ−フェニル）−４−ピロリジン−１−イルメチル−ピロリジン−１−イル］−メタノン；
（５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（（Ｒ）−２−フェニル−１−ピロリジン−１−イルメチル−エチル）−アミド；
［５−メチル−２−（ピロリジン−１−カルボニル）−１Ｈ−インドール−７−イルアミノ］−酢酸；及び
［７−シクロペンチルアミノ−５−（１，１−ジオキソ−チオモルホリン−４−メチル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−ピロリジン−１−イル−メタノン。
【００３１】
本発明に係る式（１）の化合物は、また、製薬的に許容される塩を形成することができる。このような「製薬的に許容される塩」には、製薬的に許容されるアニオンを含有する無毒性酸付加塩を形成する酸、例えば、硫酸、塩酸、硝酸、リン酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸などの無機酸；酒石酸、ギ酸、クエン酸、酢酸、トリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸、グルコン酸、安息香酸、乳酸、フマル酸、マレイン酸、サリチル酸などの有機カルボン酸；メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸などのスルホン酸などにより形成された酸付加塩が含まれる。また、製薬的に許容される塩基付加塩には、例えば、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどにより形成されたアルカリ金属またはアルカリ土類金属塩；リシン、アルギニン、グアニジンなどのアミノ酸塩；ジシクロヘキシルアミン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミン、ジエタノールアミン、コリン、トリエチルアミンなどの有機塩などが含まれる。本発明に係る一般式（１）の化合物は、通常的な方法によりその塩に転換することができ、塩の製造は別途の説明がなくても、前記式（１）の構造に基づいて当業者が容易に行うことができる。
【００３２】
一方、本発明に係る本発明に係る式（１）の化合物は、不斉炭素中心を有することができるので、ＲまたはＳ異性体、ラセミ体、ジアステレオマーの混合物、または個々のジアステレオマーなどの形態で存在してもよい。これら全ての異性体及びその混合物も本発明の範囲に含まれる。
【００３３】
本発明は、また、前記式（１）の化合物を製造する方法を提供する。以下では、本発明に対する理解を助けるために式（１）化合物の製造方法を例示的な反応式に基づいて説明するが、本発明が属する分野における通常の知識を有した者であれば、式（１）の構造に基づいて様々な方法により、式（１）の化合物を製造することがでる。このような方法は、いずれも本発明の範疇に含まれるものである。即ち、本明細書に記載されているか、先行技術に開示された種々合成法を任意に組み合わせて、式（１）の化合物を製造することができる。これは、本発明の範囲内に属するものであり、式（１）化合物の製造方法が下記説明されたものに制限されない。
【００３４】
まず、式（１）の化合物は、下記反応式１の方法に従って、化合物（２）のニトロ基を還元して、アミン化合物（３）を製造し、形成されたアミン基に対して化合物（４）と還元性アミノ化反応を行うことによって合成することができる：
（反応式１）
【化６】
0006471163.tif 000007
（式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、前記定義と同義である）
【００３５】
化合物（３）は、化合物（２）に還元によって製造することができる。還元反応は、酸触媒と金属を用いるか、水素ガス存在下、金属触媒を用いて行うことができる。
【００３６】
酸触媒と金属の使用を含む還元反応で使用することができる酸の例は、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸、酢酸、トリフルオロ酢酸などの有機カルボン酸、塩化アンモニウムのようなアミン酸塩、好ましくは塩酸、酢酸または塩化アンモニウムなどである。酸の使用量は、化合物（２）の１当量に対して、通常０．０１〜１０当量であり、好ましくは０．１〜５当量である。用いられる金属の例は、鉄、亜鉛、リチウム、ナトリウム、スズ（通例的に、塩化スズ）などであり、特に好ましくは鉄、亜鉛、塩化スズなどである。金属の使用量は、化合物（２）の化合物１当量に対して、通常１〜２０当量であり、好ましくは１〜１０当量である．酸触媒存在下の金属反応は、不活性溶媒中で行うことができる。不活性溶媒の例には、メタノール、エタノールなどのアルキルアルコール、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテルなどのエーテル、酢酸エチルのようなアルキルエステルなどであり、好ましくはメタノール、エタノール、テトラヒドロフラン、酢酸エチルなどである。反応温度は、通常−１０〜２００℃であり、好ましくは２５〜１２０℃であり、反応時間は、通常１０分〜６０時間、好ましくは１０分〜１２時間である。
【００３７】
水素ガス存在下で金属触媒の使用を含む還元反応で使用することができる金属触媒の例は、パラジウム、ニッケル、プラチナ（platinum）、ルテニウム（ruthenium）、ロジウム（rhodium）などであり、特に好ましくはパラジウム、ニッケルなどである。金属触媒の使用量は、化合物（２）の化合物１当量に対して、通常０．００１〜２当量であり、好ましくは０．０１〜１当量である。水素ガスの圧力は、通常１〜１０気圧であり、好ましくは１〜３気圧である。反応は不活性溶媒、例えば、メタノール、エタノールなどのアルキルアルコール、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテルなどのエーテル、酢酸メチル、酢酸エチルなどのアルキルアセテートなどであり、好ましくはメタノール、エタノール、酢酸エチルなどで行うことができる。金属触媒の使用を含む還元反応において、反応温度は通常−１０〜２００℃、好ましくは２５〜５０℃であり、反応時間は通常１０分〜６０時間、好ましくは１０分〜１２時間である。
【００３８】
化合物（４）は、化合物（３）のアミン基に対する還元性アミノ化反応を通して製造することができる。
【００３９】
還元性アミノ化反応は、還元剤とアルデヒドまたはケトンとの反応を通して行うことができ、必要に応じて酸触媒を使用することができる。アルデヒドまたはケトンの量は、化合物（３）の化合物１当量に対して、通常１〜１０当量であり、好ましくは１〜３当量である。用いられる還元剤は、水素化ホウ素ナトリウム、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ３ＣＮ）、ナトリウムトリアセトキシ−ボロハイドライド｛ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３｝などである。還元剤使用量は化合物（３）の化合物１当量に対して、通常１〜１０当量であり、好ましくは１〜３当量である。用いられる酸触媒は、例えば、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸、酢酸、トリフルオロ酢酸などの有機カルボン酸、塩化アンモニウムのようなアミン酸塩などであり、特に好ましくは塩酸、酢酸などである。酸の使用量は、化合物（３）の化合物１当量に対して通常０.１〜１０当量であり、好ましくは１〜５当量である。反応は、不活性溶媒、例えば、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテルなどのエーテル、ジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロエタンなどのクロロアルカン、好ましくはジクロロエタン、クロロホルムなどで行くことができる。反応温度は、通常−１０〜１００℃、好ましくは−１０〜５０℃であり、反応時間は通常１０分〜６０時間、好ましくは１０分〜１２時間である。
【００４０】
化合物（２）は、下記反応式２で示されるように、化合物（５）及び化合物（６）をアミド化反応して製造することができる：
（反応式２）
【化７】
0006471163.tif 000008
（式中、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、前記定義と同義である）
【００４１】
アミド連結反応に用いられる公知結合剤には、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド（ＥＤＣ）、１，１'−ジカルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）などのカルボジイミド類を、１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）または１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡＴ）と混合した状態で使用するか、ビス−（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）−ホスフィン酸クロリド（ＢＯＰ−Ｃｌ）、ジフェニルホスホリルアジド（ＤＰＰＡ）、Ｎ−［ジメチルアミノ−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール［４，５−ｂ］−ピリジン−１−イルメチレン］−Ｎ−メチルメタンアミニウム（ＨＡＴＵ）などが挙げられるが、これらに制限されない。結合剤の使用量は、化合物（５）の１当量に対して、通常１〜１０当量であり、このましくは１〜３当量である。用いられるＨＯＢＴまたはＨＯＡＴの使用量は、化合物（５）の１当量に対して、通常１〜１０当量であり、好ましくは１〜３当量である。アミンの塩酸塩を結合反応に用いるときには、塩基を用いて酸を除去しなければならない。このとき、用いられる塩基は、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンのような有機塩基である。塩基の使用量は、化合物（５）１当量に対して、通常１〜１０当量であり、好ましくは１〜３当量である。結合反応は、不活性溶媒として、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなどで行うことができる。反応温度は、通常−１０〜２００℃、好ましくは２５〜１２０℃であり、反応時間は、通常１０分〜６０時間、好ましくは１０分〜１２時間である。
【００４２】
７−ニトロインドール化合物（６）は、商業的に購入可能であり、下記反応式（３）の方法を通して製造することができる：
（反応式３）
【化８】
0006471163.tif 000009
（式中、Ｒ３は、前記定義と同義である）
【００４３】
ニトロ−アニリン化合物（７）は、商業的に購入可能であり、文献［Heterocycles, 68[11], 2285-2299, 2006, 又はBioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 14[19], 4903-4906, 2004］の公知方法により製造することができる。
【００４４】
ヒドラジン化合物（８）も商業的に購入可能であり、文献［Journal of the America Chemical Society, 198[48], 15374-15375, 2006］の公知方法を用いて、化合物（７）のアミン基をヒドラジン基に変形して製造することができる。
【００４５】
ヒドラゾン化合物（１０）は、ケトン化合物（９）とヒドラジン化合物（８）を結合反応して製造することができる。ヒドラジン化合物（８）が、中性形態のとき塩基を用いなく、酸性塩形態のとき中性形態を製造するために、塩基を用いなければならない。塩基には、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化リチウムなどの金属ヒドロキシド、重炭酸ナトリウム、炭酸カリウムなどの金属カーボネート、酢酸ナトリウムなどの金属アセテート、トリエチルアミン、ピリジンなどの有機塩基などが挙げられ、好ましくは、酢酸ナトリウム、重炭酸ナトリウムなどである。
【００４６】
一方、ヒドラゾン化合物（１０）は、文献［Organic Process Research & Development, 2, 1988, 214-220］に記載されているヤップ・クリンゲマン転位方法により、塩基存在下、ジアゾニウム塩とケトン化合物（１１）を反応して製造することができる。
【００４７】
化合物（１０）の環化反応は、文献［Journal of Organic Chemistry, 68[24], 2003, 9506-9509; Tetrahedron, 55[34], 1999, 10271-10282; etc］に記載された方法により行うことができる。このとき、使用可能な酸は、ポリリン酸、塩酸、p−トルエンスルホン酸、硫酸、酢酸などであり、ポリリン酸の場合、単独またはベンゼン、トルエンなどの芳香族炭化水素と混合して使用することができる。
【００４８】
本明細書に製造方法が特に説明されない化合物は、それ自体が公知の化合物であるか、公知化合物から公知合成法またはこれと同様の方法により合成することができる化合物である。
【００４９】
本発明に係る製造方法で、混合物はカラム・クロマトグラフィーによって、通常分離される。最終生成物については、再結晶、又は順相若しくは逆相のＨＰＬＣ（Waters, Delta Pack, 300 × 50 mm I.D., C18 5μm, 100A）を通し分離することができる。再結晶又はＨＰＬＣを通して精製する場合、トリフルオロ酢酸塩の形態で化合物を製造することができる。塩酸塩を製造しようとするときには、イオン交換樹脂を利用することができる。
【００５０】
前述するように、本発明に係る化合物、その製造のための出発物質、中間体などは様々な方法により合成することができる。このような方法は、式（１）の化合物の製造と関連して、本発明の範疇に含まれるものと理解される。
【００５１】
本発明はまた、活性成分として、治療学的有効量の式（１）の化合物、製薬的に許容されるその塩または異性体を製薬的に許容される担体または希釈剤と共に含有することを特徴とする細胞壊死及び関連疾患を予防または治療するための組成物を提供する。
【００５２】
本発明はまた、前記組成物を用いて、細胞壊死及び関連疾患を予防または治療するための方法を提供する。
【００５３】
本発明によって治療され／されるか、予防される細胞壊死及び関連疾患は、急性／慢性肝疾患（例えば、肝炎、肝繊維症、肝硬変）、神経変性疾患（例えば、認知症、パーキンソン病、ハンチントン病）、虚血性心臓疾患、再潅流損傷、虚血性脳卒中または虚血性損傷、膵臓炎、バクテリア性／ウイルス性敗血症、糖尿病または糖尿病性合併症、糖尿病性血管疾患［これらの糖尿病は、特に、膵臓細胞破壊物質に起因して、ウイルス、高血糖、脂肪酸、ダイエット、毒素、ストレプトシンなどにより介在される］、壊死性直腸結腸炎、嚢胞性繊維症、リウマチ性関節炎、変性性関節炎、腎症、バクテリア感染、ウイルス感染（例えば、ＨＩＶ）、多発性硬化症、白血病、リンパ腫、新生児性呼吸促迫症候群、窒息、結核、子宮内膜症、血管衰弱症、乾癬、凍傷、ステロイド処理合併症、壊疽病、圧痛、血色素尿症、熱傷、高熱症、クローン病、セリアック病、コンパートメント症候群、脊髄損傷、糸球体腎炎、筋ジストロフィー、遺伝性代謝疾患、マイコプラズマ疾患、炭疽病、アンダーソン病、先天性ミトコンドリア病、フェニルケトン尿症、胎盤梗塞、梅毒、無菌壊死などが挙げられる。また、薬物及び毒性物質による細胞壊死及び関連疾患には、アルコール中毒及びコカイン、薬物（例えば、パラセタモール、抗生剤、抗癌剤、アドリアマイシン、フロマイシン、ブレオマイシン、ＮＳＡＩＤ、シクロスポリン、化学毒素（例えば、四塩化炭素、シアン化物、メタノール、エチレングリコール）、毒ガス、農薬、重金属（例えば、鉛、水銀、カドミウム）への露出及び／又はこれらの投与及び／又は自己投与と関連した壊死、放射能／ＵＶへの露出による損傷及びこれと関連した細胞壊死よりなる群から選択される。
【００５４】
特に、本発明に係る組成物は肝保護及び肝機能改善効果を示すだけでなく、ウイルスもしくは薬物による脂肪肝、肝繊維症及び肝硬変などの慢性肝疾患、肝炎などのような急性／慢性肝疾患の予防または治療効果を示す。また、その結果として、門脈圧亢進症（portal hypertension）などの肝疾患合併症を予防または治療することができるが、これらに制限されない。特に、本発明に係る医薬組成物は、また、肝移植、ウイルスもしくは薬物によるアルコール性もしくは非アルコール性の脂肪肝、肝繊維症、肝硬変、または肝炎から選択される肝疾患の治療または予防に効果的であり、アルコール性の急性／慢性肝疾患に効果的である。
【００５５】
また、本発明に係る組成物は、脂肪酸に由来する脂肪肝または脂肪肝に由来する急性／慢性肝疾患の治療または予防に効果的である。
【００５６】
本明細書で、「治療」とは、発病症状を示す対象に使われる時、疾患の進行を中断または遅延させることを意味し、前記「予防」とは発病症状を示さないが危険性の高い対象に使われる時、発病兆候を中断または遅延させることを意味する。
【００５７】
前述の「医薬組成物」は、必要に応じて、本発明の化合物と共に、製薬的に許容される担体、希釈剤、賦形剤、またはこれらの組み合わせを含むことができる。医薬組成物は、生物体内に化合物が投与されることを容易にする。化合物を投与する様々な技術が存在しており、そこには、経口、注射、エアゾール、非経口及び局所投与などが含まれるが、これらに制限されない。
【００５８】
本明細書で、「担体」は、細胞または組織内に化合物の付加を容易にする物質を意味する。例えば、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）は、生物体の細胞または組織内に多くの有機化合物の投入を容易にするのに通常使われる担体である。
【００５９】
本明細書で、「希釈剤」は、対象化合物の生物学的活性形態を安定化させるだけでなく、化合物を溶解させる水で希釈される物質として定義される。バッファー溶液に溶解されている塩は、当該分野で希釈剤として使われている。通常使われるバッファー溶液は、ヒト溶液の塩形態を摸倣しているホスフェートバッファー食塩水である。バッファー塩は、低い濃度で溶液のｐＨを制御できるため、バッファー希釈剤が化合物の生物学的活性を変形させることは稀である。
【００６０】
本明細書で、「製薬的に許容される」は、化合物の生物学的活性と物性を損傷しない性質を意味する。
【００６１】
本発明の化合物は、所望の目的によって、様々な製薬的投与形態に剤形化することができる．本発明に係る医薬組成物を製造する際に、活性成分、具体的に、一般式（１）の化合物、その製薬的に許容される塩または異性体を製造しようとする製剤によって選択できる様々な製薬的に許容される担体と共に混合する。例えば、本発明に係る医薬組成物は、所望の目的によって、注射用製剤、経口用製剤等に剤形化することができる。
【００６２】
本発明の化合物は当分野において知られている製薬用担体と賦形剤を利用する当分野において知られている方法で製剤化され、単位用量のまたは多用量の容器に入れることができる。製剤の形態は、油または水性媒体中の溶液、懸濁液または乳化液の形態であり、通常の分散剤、懸濁剤または安定化剤を含有することができる。また、例えば、使用前に無菌、発熱物質が除去された水に溶解して使用する乾燥粉末の形態であってもよい。本発明の化合物は、また、カカオバターまたはその他グリセリドのような通常の坐剤基剤を利用して坐剤形態に製剤化してもよい。経口投与用固体投与形態は、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤及び顆粒剤が可能である。特にカプセル剤と錠剤が有用である。錠剤及び丸剤は腸溶性錠剤として製造することが好ましい。固体投与形態は、本発明の化合物をスクロース、ラクトース、デンプンなどの１つまたはそれ以上の不活性希釈剤及びステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、崩壊剤、結合剤などの担体と混合することによって製造することができる。
【００６３】
必要な場合、本発明に係る化合物またはこれを含有する医薬組成物は、その他活性薬剤、例えば、他の種類の様々な作用機序を有する細胞保護剤、特に、肝保護、肝機能改善及び肝疾患の予防または治療に利用される従来薬剤−肝細胞再生促進剤、肝機能補助剤、抗ウイルス剤、免疫抑制剤、そして繊維化抑制剤等−と組み合わせて投与することができる。
【００６４】
本発明に係る化合物またはこれを含有する医薬組成物は、全ての薬物−誘導性細胞壊死及び関連疾患の予防または治療剤と併用投与することができる。このような薬物は、抗生剤、抗癌剤、抗ウイルス剤、抗感染剤、抗炎症剤、抗凝血剤、脂質改善剤、細胞死抑制剤、抗高血圧剤、糖尿／肥満治療剤、心血管疾患治療剤、神経変性疾患治療剤、抗老化剤、及び代謝性疾患治療剤など全ての疾患群の医薬物を含む。
【００６５】
本発明に係る化合物またはこれを含有する医薬組成物は、毒素（toxin）などの様々な原因により誘導される細胞損傷及びこれに伴う細胞壊死及び関連疾患を予防するために使用することができる。このような原因は、活性酸素種（ＲＯＳ）、重金属、アルコール、食べ物、補充剤、放射能、ダイエットなどを含む。
【００６６】
式（１）化合物の投与量は、患者の体重、性別、年齢、健康状態、ダイエット、疾患の特殊な性質、薬剤の投与時時間、投与方法、薬剤混合及び疾患の重症度などの要因に基づいた医者の処方に従う。しかし、成人治療に必要な投与量は投与の頻度と強度により、１日当たり約１．０〜２，０００ｍｇ範囲が普通である。成人に筋肉内または静脈内投与時、一回投与量に分離して１日当たり普通約１．０〜３００ｍｇの全体投与量であれば十分であるが、一部患者の場合、より高い１日投与量が好ましいこともある。
本発明は、また、活性成分として、式（１）の化合物、製薬的に許容されるその塩または異性体を製薬的に許容される担体または希釈剤と共に混合する工程を含む細胞壊死及び関連疾患の予防または治療剤組成物の製造方法を提供する。
本発明に係る薬剤組成物は、肝保護と肝機能改善、急性／慢性肝疾患とこれに伴う門脈圧亢進症などの肝疾患合併症を予防または治療できるが、これに制限されない。
【実施例】
【００６７】
本発明に係る新規化合物は、肝保護及び肝機能改善効果を示すだけでなく、ウイルスもしくは薬物によって誘導される脂肪肝、肝繊維症、肝硬変など慢性肝疾患、肝炎などの急性／慢性肝疾患の予防または治療に有用に使用することができる。本発明の化合物は、また、膵臓、腎臓、脳、軟骨、心臓細胞で細胞壊死阻害効能を示した。
【００６８】
したがって、本発明の化合物は細胞壊死及び関連疾患の予防または治療に有用に使用することができる。
【００６９】
本発明は、本発明を下記製造例、実施例及び実験例により詳細に説明するが、本発明の範囲がこれらに限定されるものではない。下記製造例及び実施例でＭはモル濃度を意味し、Ｎは正常濃度を意味する。
【００７０】
下記製造例及び実施例で使われた略語は以下の通りである：
Ａｃ：アセチル
ＢＯＣ：ｔ−ブトキシカルボニル
Ｂｕ：ブチル
Ｂｎ：ベンジル
ｃ−Ｐｅｎ：シクロペンチル
ｃ−Ｈｅｘ：シクロヘキシル
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡＰ：４−ジメチルアミノピリジン
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＥＤＣ：１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド、塩酸塩
Ｈｅｘ：ｎ−ヘキサン
ＨＯＢＴ：ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＢＴＵ：２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ｉ−Ｐｒ：イソプロピル
ｉ−Ｐｅｎ：イソペンチル
ＫＨＭＤＳ：カリウムビス（トリメチルシリル）アミド
Ｍｅ：メチル
Ｐｈ：フェニル
ＰＭＢ：パラメトキシベンジル
ＴＥＡ：トリエチルアミン
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＨＰ：テトラヒドロピラン
ＴＭＳ：トリメチルシリル
【００７１】
製造例１：５−クロロ−７−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸
工程Ａ：（４−クロロ−２−ニトロ−フェニル）ヒドラジンヒドロクロリド
商業的に購入可能な４−クロロ−２−ニトロアニリン（４０ｇ、０．２３ｍｏｌ）を１２Ｎ塩酸（１００ｍＬ）に溶解し、０℃で水（５０ｍＬ）に溶解した亜硝酸ナトリウム（１６ｇ、０．２３ｍｏｌ）を０℃で、ゆっくり滴下した。反応混合物を０℃〜室温で３０分間撹拌した。反応物の温度を０℃に冷却し、１２Ｎ塩酸（１００ｍＬ）に溶解した塩化スズ（ＩＩ）（１３２ｇ、０．７０ｍｏｌ）をゆっくり滴下した後、０℃〜室温で３時間撹拌した。得られた黄色固体をろ過し、少量の６Ｎ  ＨＣｌで洗浄し、乾燥して、表題化合物（３０ｇ、収率６３％）を得た。
1H-NMR (400HMz, DMSO-d6); δ 9.21(s, 1H), 7.98(d, J=2.4Hz, 1H), 7.66 (d, J=9.6Hz, 1H), 7.55(dd, J=2.4, 9.6Hz, 1H), 4.74(br s, 2H)
【００７２】
工程Ｂ：２−［（４−クロロ−２−ニトロ−フェニル）ヒドラゾノ］プロピオン酸メチルエステル
工程Ａで得られた（４−クロロ−２−ニトロ−フェニル）ヒドラジンヒドロクロリド（３０ｇ、０．１４ｍｏｌ）とピルビン酸メチル（１４．４ｍＬ、０．１６ｍｏｌ）をメタノール（３００ｍＬ）に溶解した後、酢酸ナトリウム（１４．２ｇ、０．１７ｍｏｌ）を添加した。反応溶液を室温で８時間撹拌した。得られた黄色固体をろ過し、水とメタノールで洗浄し、乾燥して、表題化合物（３０ｇ、収率８２％）を得た。
1H-NMR (400HMz, CDCl3); δ 10.88(s, 1H), 8.21(d, J=2.4Hz, 1H), 8.01(d, J=9.2Hz, 1H), 7.56(dd, J=2.4,9.2Hz, 1H), 3.90(s, 3H), 2.23(s, 3H).
【００７３】
工程Ｃ：５−クロロ−７−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸メチルエステル
工程Ｂで得られた２−［（４−クロロ−２−ニトロ−フェニル）ヒドラゾノ］プロピオン酸メチルエステル（１３ｇ、４６ｍｍｏｌ）に、ポリリン酸（１００ｍＬ）を添加し、混合物を１００℃で４時間加熱した。反応終結後、０℃で反応物に水を添加し、反応物を２時間撹拌した。反応物をろ過して固体を得た後、個体を水で洗浄し、乾燥して、表題化合物（６．０ｇ、収率４９％）を得た。
1H-NMR (400HMz, CDCl3); δ 10.32(br s, 1H), 8.29(d, 1H), 8.03(d, J=2.4Hz, 1H), 7.31(d, J=2.0Hz, 1H), 4.01(s, 3H)
【００７４】
工程Ｄ：５−クロロ−７−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸
工程Ｃで得られた５−クロロ−７−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸メチルエステル（１．０ｇ、３．９３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１０ｍＬ）、ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）及び水（１０ｍＬ）の混合溶液に溶解した。水酸化リチウム（３３０ｍｇ、７．８７ｍｍｏｌ）を添加した後、混合物を１８時間室温で撹拌した。反応終結後、０．５Ｎ  ＨＣｌ（２０ｍＬ）と水（１００ｍＬ）を添加して結晶化した。反応物をろ過して、表題化合物（８７０ｍｇ、収率９２％）を得た。
MS[M+1] = 241(M+1)
【００７５】
製造例２：５−メチル−７−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸
商業的に購入可能な４−メチル−２−ニトロ−アニリンを製造例１と同様の方法で反応して、表題化合物を得た。
MS[M+1] = 221(M+1)
【００７６】
製造例３：５−ブロモ−７−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸
商業的に購入可能な４−ブロモ−２−ニトロ−アニリンを製造例１と同様の方法で反応して、表題化合物を得た。
MS[M+1] = 286(M+1)
【００７７】
実施例１：５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（４−フェノキシ−フェニル）−アミド
【化９】
0006471163.tif 000010
工程Ａ：５−クロロ−７−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（４−フェノキシ−フェニル）−アミド
製造例１で得られた化合物５−クロロ−７−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（１．０ｇ、４．１６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３０ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（８４１ｍｇ、８.３１ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（２．３６ｇ、６.２２ｍｍｏｌ）及び４−フェノキシフェニルアミン（０．９２ｇ、５．０５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で１８時間撹拌した。反応完結後、減圧下で溶媒を除去して、重炭酸ナトリウム溶液（１００ｍＬ）を添加した。有機物を酢酸エチルで抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下で溶媒を除去し、残渣をカラム・クロマトグラフィーで分離して、表題化合物（１．６ｇ、収率９４％）を得た。
MS[M+1] = 408(M+1)
【００７８】
工程Ｂ：７−アミノ−５−クロロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（４−フェノキシ−フェニル）−アミド
工程Ａで得られた５−クロロ−７−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（４−フェノキシ−フェニル）−アミド（１．６ｇ、２．９２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１５ｍＬ）、メタノール（１５ｍＬ）及び水（１５ｍＬ）に溶解した後、塩化アンモニウム（２．６２ｇ、４９．０ｍｍｏｌ）と鉄粉（１．３４ｇ、２４．０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を７０℃で１時間撹拌した。反応完結後、反応物をセライトろ過し、テトラヒドロフラン（１００ｍＬ）で洗浄し、溶媒を減圧下で溶媒を除去した。反応物を酢酸エチル（１５０ｍＬ）で希釈し、水（８０ｍＬ）を添加した。有機物を酢酸エチルで抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下で溶媒を除去した。残渣をジクロロメタンとヘキサンで再結晶して、表題化合物（１．４ｇ、収率９４％）を得た。
MS[M+1] = 378(M+1)
【００７９】
工程Ｃ：５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（４−フェノキシ−フェニル）−アミド
工程Ｂで得られた７−アミノ−５−クロロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（４−フェノキシ−フェニル）−アミド（５０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）をジクロロエタン（１０ｍＬ）に溶解した後、酢酸（１６ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）、シクロペンタンオン（０．３０ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）及びトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリ（８４ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を室温で１８時間撹拌した。反応完結後、反応物を水で希釈した。有機物をジクロロメタンで抽出し、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。減圧下で溶媒を除去し、残渣をカラム・クロマトグラフィーで分離して、表題化合物（４０ｍｇ、収率６８％）を得た。
MS[M+1] = 446(M+1)
【００８０】
実施例２：５−クロロ−７−（ピロリジン−３−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（４−フェノキシ−フェニル）−アミド
【化１０】
0006471163.tif 000011
工程Ａ：３−［５−クロロ−２−（４−フェノキシ−フェニルカルバモイル）−１Ｈ−インドール−７−イルアミノ］−ピロリジン−１−カルボン酸t−ブチルエステル
実施例１の工程Ｂで得られた７−アミノ−５−クロロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（４−フェノキシ−フェニル）−アミドとＮ−ＢＯＣ−ピロリジン−３−オンを実施例１の工程Ｃと同様の方法で反応して、表題化合物を得た。
MS[M+1] = 547(M+1)
【００８１】
工程Ｂ：５−クロロ−７−（ピロリジン−３−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（４−フェノキシ−フェニル）−アミド
工程Ａで得られた３−［５−クロロ−２−（４−フェノキシ−フェニルカルバモイル）−１Ｈ−インドール−７−イルアミノ］−ピロリジン−１−カルボン酸ｔ−ブチルエステル（４５ｍｇ、０．０８２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３ｍＬ）に溶解した後、トリフルオロ酢酸（３ｍＬ）を添加した。室温で１時間撹拌した。反応完結後,減圧下で溶媒を除去した。残渣をカラム・クロマトグラフィーで分離して、表題化合物（１８ｍｇ、収率４９％）を得た。
MS[M+1] = 447(M+1)
【００８２】
実施例３〜３５：
製造例１〜３で得られたインドール化合物と商業的に購入可能なアミン化合物を実施例１または２と同様の方法で反応して、下記表の実施例化合物を得た。
【化１１】
0006471163.tif 000012
【表１】
0006471163.tif 000013
【００８３】
実施例３６：（Ｒ）−１−［５−クロロ−７−（テトラヒドロ−ピラン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−ピロリジン−３−カルボン酸
【化１２】
0006471163.tif 000014
実施例２５で得られた（Ｒ）−１−［５−クロロ−７−（テトラヒドロ−ピラン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−ピロリジン−３−カルボン酸メチルエステルを製造例１の工程Ｄと同様の方法で反応して、表題化合物を得た。
MS[M+1] = 392(M+1)
【００８４】
実施例３７：［５−クロロ−７−（テトラヒドロピラン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−イル］−（（Ｒ）−３−ヒドロキシメチル−ピロリジン−１−イル）−メタノン
【化１３】
0006471163.tif 000015
実施例２５で得られた（Ｒ）−１−［５−クロロ−７−（テトラヒドロピラン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−ピロリジン−３−カルボン酸メチルエステル（４４ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１５ｍＬ）に溶解した後、２．０Ｍ水素化ホウ素リチウム（０．１１ｍＬ）を０℃で添加した。混合物を６時間撹拌した。反応終結後、メタノール（２ｍＬ）と１Ｎ−塩酸溶液（２０ｍＬ）をゆっくり添加した。有機物を酢酸エチルで抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過後、減圧下で溶媒を除去し、残渣をカラム・クロマトグラフィーで分離して、表題化合物（３０ｍｇ、収率７３％）を得た。
MS[M+1] = 378(M+1)
【００８５】
実施例３８：（Ｓ）−１−［５−メチル−７−（テトラヒドロピラン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−ピロリジン−３−カルボン酸
【化１４】
0006471163.tif 000016
実施例２６で得られた（Ｓ）−１−［５−メチル−７−（テトラヒドロ−ピラン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−ピロリジン−３−カルボン酸メチルエステルを実施例３６と同様の方法で反応して、表題化合物を得た。
MS[M+1] = 372(M+1)
【００８６】
実施例３９：７−（２−アミノ−アセチルアミノ）−５−クロロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（４−フェノキシ−フェニル）−アミド
【化１５】
0006471163.tif 000017
工程Ａ：｛［５−クロロ−２−（４−フェノキシ−フェニルカルバモイル）−１Ｈ−インドール−７−イルカルバモイル］−メチル｝−カルバミン酸t−ブチルエステル
実施例１の工程Ｂで得られた化合物とＮ−ＢＯＣ−グリシンを実施例１の工程Ａと同様の方法で反応して、表題化合物を得た。
MS[M+1] = 535(M+1)
【００８７】
工程Ｂ：７−（２−アミノ−アセチルアミノ）−５−クロロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（４−フェノキシ−フェニル）−アミド
工程Ａで得られた｛［５−クロロ−２−（４−フェノキシ−フェニルカルバモイル）−１Ｈ−インドール−７−イルカルバモイル］−メチル｝−カルバミン酸t−ブチルエステルを実施例２の工程Ｂと同様の方法で反応して、表題化合物を得た。
MS[M+1] = 435(M+1)
【００８８】
実施例４０：（３−アミノメチル−ピロリジン−１−イル）−（５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
工程Ａ：［１−（５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−ピロリジン−３−イルメチル］−カルバミン酸t−ブチルエステル
【化１６】
0006471163.tif 000018
製造例１で得られた５−クロロ−７−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸とピロリジン−３−イルメチル−カルバミン酸t−ブチルエステルを実施例１と同様の方法で反応して、表題化合物を得た。
MS[M+1] = 461(M+1)
【００８９】
工程Ｂ：（３−アミノメチル−ピロリジン−１−イル）−（５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
工程Ａで得られた［１−（５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−ピロリジン−３−イルメチル］−カルバミン酸t−ブチルエステルを実施例２の工程Ｂと同様の方法で反応して、表題化合物を得た。
MS[M+1] = 361(M+1)
【００９０】
実施例４１：（５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−イル）−（３−ピペリジン−１−イルメチル−ピロリジン−１−イル）−メタノン
【化１７】
0006471163.tif 000019
実施例４０で得られた（３−アミノメチル−ピロリジン−１−イル）−（５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン課グルタールアルデヒドを実施例１の工程Ｃと同様の方法で反応して、表題化合物を得た。
MS[M+1] = 429(M+1)
【００９１】
実施例４２〜５７：
【化１８】
0006471163.tif 000020
【表２】
0006471163.tif 000021
【００９２】
実施例５８：（３−アミノメチル−ピロリジン−１−イル）−（５−ブロモ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
【化１９】
0006471163.tif 000022
製造例３で得られた５−ブロモ−７−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸を実施例４０と同様の方法で反応して、表題化合物を得た。
MS[M+1] = 406(M+1)
【００９３】
実施例５９：７−シクロペンチルアミノ−５−メチル−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（ピロリジン−３−イルメチル）−アミド
【化２０】
0006471163.tif 000023
製造例２で得られた５−メチル−７−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸と３−アミノメチル−ピロリジン−１−カルバミン酸t−ブチルエステルを実施例４０と同様の方法で反応して、表題化合物を得た。
MS[M+1] = 341(M+1)
【００９４】
製造例４：（３Ｒ，４Ｓ）−３−（２，４−ジフルオロ−フェニル）−４−ピロリジン−１−イルメチル−ピロリジン
【化２１】
0006471163.tif 000024
工程Ａ：（４Ｒ）−４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−カルボニトリル
特許ＷＯ２００４／０９１２６に記述された方法で製造された（４Ｒ）−１−ｔ−ブチル−４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−カルボニトリル（４ｇ、１５．１５ｍｍｏｌ）をＤＣＥ（１０ｍＬ）に溶解した後、１−クロロエチルクロロホルメート（２．４５ｍＬ、２２．６８ｍｍｏｌ）を０℃で滴下した。反応温度を７０℃昇温した後、該温度を維持しながら、１，８−ビス（ジメチルアミノ）ナフタレン（４．８７ｇ、２２．７２ｍｍｏｌ）をＤＣＥ（１０ｍＬ）に溶かし、２時間滴下した。反応終結後、ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）を添加した。温度を維持しながら混合物を１時間さらに撹拌し。反応物を減圧下濃縮した後、精製することなく次の反応を行った。
MS[M+1] = 209 (M+1)
【００９５】
工程Ｂ：（４Ｒ）−１−ＢＯＣ−４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−カルボニトリル
工程Ａで得られた（４Ｒ）−４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−カルボニトリル、ＤＭＡＰ（１．８ｇ、１５．１５ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ（５．５６ｍＬ、１５．１５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解した後、ジ−ｔ−ブチルジカーボネート（４．９ｇ、２２．７ｍｍｏｌ）を０℃で滴下した。反応物を室温で８時間撹拌した後、減圧下濃縮し、ＥｔＯＡｃで抽出した。抽出された有機溶液を１Ｎ  ＨＣｌと塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧下濃縮し、カラム・クロマトグラフィー（溶離液：ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ＝１／６）で精製して表題化合物（３．３ｇ、工程Ａ及びＢの和：７２％）を得た。
MS[M+H] = 309 (M+1)
【００９６】
工程Ｃ：（３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｂｏｃ−４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−カルボン酸
工程Ｂで得られた（４Ｒ）−１−ＢＯＣ−４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−カルボニトリル（３．３ｇ、１０．６ｍｍｏｌ）をエタノール（１０ｍＬ）に溶解した後、６Ｎ  ＮａＯＨ溶液（５ｍＬ）を添加し、混合物を４時間７０℃で撹拌した。反応終結後、溶媒を除去し、反応物をエーテルで希釈した。有機溶液を６Ｎ塩酸で十分に酸性化し、洗浄した。この有機溶液を塩水で洗浄した後、ＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧下濃縮して、表題化合物（３．４３ｇ、収率９９．０％）を得た。
MS[M+1] = 328 (M+1)
【００９７】
工程Ｄ：（３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｂｏｃ−４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−メチルアルコール
工程Ｃで得られた（３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｂｏｃ−４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−カルボン酸（４００ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１５ｍＬ）に溶解し、Ｎ−メチルモルホリン（１４０ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ）とイソブチルクロロホルメート（１８３ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ）を−１５℃で添加した。混合物を１５分間撹拌した。反応終結後、水素化ホウ素ナトリウム（５９.５ｍｇ、１．５７ｍｍｏｌ）を添加し、メタノール（５ｍＬ）をゆっくり添加した後、混合物を１時間撹拌した。反応終結後、１Ｎ−塩酸溶液を添加した。有機物を酢酸エチルで抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過後、溶媒を減圧下で溶媒を除去し、残渣をカラム・クロマトグラフィーで分離して、表題化合物（３００ｍｇ、収率７９％）を得た。
MS[M+1] = 314(M+1)
【００９８】
工程Ｅ：（３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｂｏｃ−４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−カルボキシアルデヒド
工程Ｄで得られた（３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｂｏｃ−４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−メチルアルコール（２９６ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（４０ｍＬ）とメチルスルホキシド（１０ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（３３７ｍｇ、３．３３ｍｍｏｌ）と三酸化硫黄ポリ人（２３０ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で２時間撹拌した。反応完結後、水を添加し、酢酸エチルで有機物を抽出し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。減圧下で溶媒を除去し、残渣をカラム・クロマトグラフィーで分離して、表題化合物（２４６ｍｇ、収率８３％）を得た。
MS[M+1] = 312(M+1)
【００９９】
工程Ｆ：（３Ｒ，４Ｓ）−３−（２，４−ジフルオロ−フェニル）−４−ピロリジン−１−イルメチル−ピロリジン
工程Ｅで得られた（３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｂｏｃ−４−（２，４−ジフルオロフェニル）ピロリジン−３−カルボキシアルデヒドとピロリジンを実施例１の工程Ｃと実施例２の工程Ｂと同様の方法で順に反応して、表題化合物を得た。
MS[M+1] = 267(M+1)
【０１００】
製造例５：（３Ｒ，４Ｓ）−３−（４−クロロ−フェニル）−４−ピロリジン−１−イルメチル−ピロリジン
３−（４−クロロフェニル）ピロリジン−４−カルボニトリルを製造例4と同様の方法で反応して、表題化合物を得た。
MS[M+1] = 265(M+1)
【０１０１】
実施例６０：｛７−［ビス−（３−メチル−ブチル）−アミノ］−５−クロロ−１Ｈ−インドール−２−イル｝−［（３Ｒ，４Ｒ）−３−（２，４−ジフルオロ−フェニル）−４−ピロリジン−１−イルメチル−ピロリジン−１−イル］−メタノン
【化２２】
0006471163.tif 000025
製造例１で得られた５−クロロ−７−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸、製造例４で得られた（３Ｒ，４Ｓ）−３−（２，４−ジフルオロ−フェニル）−４−ピロリジン−１−イルメチル−ピロリジン及びイソブチルアルデヒドを実施例１と同様の方法で反応して、表題化合物を得た。
MS[M+1] = 599(M+1)
【０１０２】
実施例６１：｛７−［ビス−（３−メチル−ブチル）−アミノ］−５−クロロ−１Ｈ−インドール−２−イル｝−［（３Ｒ，４Ｒ）−３−（４−クロロ−フェニル）−４−ピロリジン−１−イルメチル−ピロリジン−１−イル］−メタノン
【化２３】
0006471163.tif 000026
製造例１で得られた５−クロロ−７−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸、製造例５で得られた（３Ｒ，４Ｓ）−３−（４−クロロ−フェニル）−４−ピロリジン−１−イルメチル−ピロリジン及びイソブチルアルデヒドを実施例１と同様の方法で反応して、表題化合物を得た。
MS[M+1] = 597(M+1)
【０１０３】
実施例６２：（５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ−１Ｈ−インドール−２−イル）−［（３Ｒ，４Ｒ）−３−（２，４−ジフルオロ−フェニル）−４−ピロリジン−１−イルメチル−ピロリジン−１−イル］−メタノン
【化２４】
0006471163.tif 000027
製造例１で得られた５−クロロ−７−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸、製造例４で得られた（３Ｒ，４Ｓ）−３−（２，４−ジフルオロ−フェニル）−４−ピロリジン−１−イルメチル−ピロリジン及びシクロペンタンオンを実施例１と同様の方法で反応して、表題化合物を得た。
MS[M+1] = 527(M+1)
【０１０４】
実施例６３：［５−クロロ−７−（テトラヒドロピラン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−イル］−［（３Ｒ，４Ｒ）−３−（２，４−ジフルオロ−フェニル）−４−ピロリジン−１−イルメチル−ピロリジン−１−イル］−メタノン
【化２５】
0006471163.tif 000028
製造例１で得られた５−クロロ−７−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸、製造例４で得られた（３Ｒ，４Ｓ）−３−（２，４−ジフルオロ−フェニル）−４−ピロリジン−１−イルメチル−ピロリジン及びテトラヒドロピラン−４−オンを実施例１と同様の方法で反応して、表題化合物を得た。
MS[M+1] = 543(M+1)
【０１０５】
実施例６４：（５−クロロ−７−（ピペリジン−４−イルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−イル｝−［（３Ｒ，４Ｒ）−３−（２，４−ジフルオロ−フェニル）−４−ピロリジン−１−イルメチル−ピロリジン−１−イル］−メタノン
【化２６】
0006471163.tif 000029
製造例１で得られた５−クロロ−７−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸、製造例４で得られた（３Ｒ，４Ｓ）−３−（２，４−ジフルオロ−フェニル）−４−ピロリジン−１−イルメチル−ピロリジン及び１−ＢＯＣ−ピペリジン−４−オンを実施例１及び実施例２の工程Ｂと同様の方法で反応して、表題化合物を得た。
MS[M+1] = 542(M+1)
【０１０６】
製造例６：（（Ｒ）−２−フェニル−１−ピロリジン−１−イルメチル−エチルアミン
商業的に購入可能な（（Ｒ）−１−ヒドロキシメチル−２−フェニル−エチル）−カルバミン酸ｔ−ブチルエステルを製造例４の工程ＥとＦと同様の方法で順に反応して、表題化合物を得た。
MS[M+1] = 205(M+1)
【０１０７】
実施例６５：（５−クロロ−７−シクロペンチルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（（Ｒ）−２−フェニル−１−ピロリジン−１−イルメチル−エチル）−アミド
【化２７】
0006471163.tif 000030
製造例１で得られた５−クロロ−７−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸、製造例６で得られた（（Ｒ）−２−フェニル−１−ピロリジン−１−イルメチル）−エチルアミン及びシクロペンタノンを実施例１と同様の方法で反応して、表題化合物を得た。
MS[M+1] = 465(M+1)
【０１０８】
実施例６６：［５−メチル−２−（ピロリジン−１−カルボニル）−１Ｈ−インドール−７−イルアミノ］−酢酸
【化２８】
0006471163.tif 000031
工程Ａ：（７−アミノ−５−メチル−１Ｈ−インドール−２−イル）−ピロリジン−１−イル−メタノン
製造例２で得られた５−メチル−７−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸及びピロリジンを実施例１の工程ＡとＢと同様の方法で順に反応して、表題化合物を得た。
MS[M+1] = 244(M+1)
【０１０９】
工程Ｂ：５−メチル−２−（ピロリジン−１−カルボニル）−１Ｈ−インドール−７−イルアミノ］−酢酸メチルエステル
工程Ａで得られた（７−アミノ−５−メチル−１Ｈ−インドール−２−イル）−ピロリジン−１−イル−メタノン（１００ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）をＴＨＦに溶解し、トリエチルアミン（４６ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）とブロモ酢酸メチルエステル（７０ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を８０℃で４時間撹拌した。反応完結後、水を添加した。有機物を酢酸エチルで抽出し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。減圧下で溶媒を除去し、残渣をカラム・クロマトグラフィーで分離して、表題化合物（８０ｍｇ、収率６２％）を得た。
MS[M+1] = 316(M+1)
【０１１０】
工程Ｃ：［５−メチル−２−（ピロリジン−１−カルボニル）−１Ｈ−インドール−７−イルアミノ］−酢酸
工程Ｂで得られた５−メチル−２−（ピロリジン−１−カルボニル）−１Ｈ−インドール−７−イルアミノ］−酢酸メチルエステルを製造例１の工程Ｄと同様の方法で反応して、表題化合物を得た。
MS[M+1] = 302 (M+1)
【０１１１】
製造例７：５−ブロモメチル−７−ニトロ−インドール−２−カルボン酸メチルエステル
工程Ａ：１−ＢＯＣ−５−メチル−７−ニトロ−インドール−２−カルボン酸メチルエステル
製造例２の化合物を合成する間に生成される５−メチル−７−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸メチルエステル（２４．０ｇ、１００ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５００ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（８４ｍＬ、６０１ｍｍｏｌ）と４−（ジメチルアミノ）ピリジン（６００ｍｇ、５ｍｍｏｌ）を添加した。ジクロロメタン（１００ｍＬ）に溶かした（ＢＯＣ）２Ｏ（４３．７ｇ、２００ｍｍｏｌ）を滴下し、混合物を室温で８時間撹拌した。反応完結後、水を添加した。有機物を酢酸エチルで抽出し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下濃縮して、表題化合物（３４．０ｇ、収率１００％）を得た。
1H-NMR (500HMz, CDCl3); δ 7.80(s, 1H), 7.67(s, 1H), 7.15(s, 1H), 3.93(s, 3H), 2.51(s, 3H), 1.62(s, 9H)
【０１１２】
工程Ｂ：１−ＢＯＣ−５−ブロモメチル−７−ニトロ−インドール−２−カルボン酸メチルエステル
工程Ａで得られた１−ＢＯＣ−５−メチル−７−ニトロ−インドール−２−カルボン酸メチルエステル（３４ｇ、１０１．７ｍｍｏｌ）を四塩化炭素（１００ｍＬ）に溶解し、Ｎ−ブロモコハク酸イミド（２７．２ｇ、１５２．６ｍｍｏｌ）とＡＩＢＮ（１．７ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を８０℃で５時間撹拌した。反応終結後、反応物を減圧下蒸留し、カラム・クロマトグラフィーで精製して、表題化合物（４８．０ｇ、収率１００％）を得た。
1H-NMR (500HMz, CDCl3); δ 8.01(s, 1H), 7.90(s, 1H), 7.21(s, 1H), 4.60(s, 2H), 3.93(s, 3H), 1.62(s, 9H)
【０１１３】
工程Ｃ：５−ブロモメチル−７−ニトロ−インドール−２−カルボン酸メチルエステル
工程Ｂで得られた１−ＢＯＣ−５−ブロモメチル−７−ニトロ−インドール−２−カルボン酸メチルエステルを実施例２の工程Ｂと同様の方法で反応して、表題化合物を得た。
Mass [M+H] = 314 (M+1)
【０１１４】
製造例８：５−（１，１−ジオキソ−チオモルホリン−４−イルメチル）−７−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸
工程Ａ：５−（１，１−ジオキソ−チオモルホリン−４−イルメチル）−７−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸メチルエステル
製造例７で得られた５−ブロモメチル−７−ニトロ−インドール−２−カルボン酸メチルエステル（２．４ｇ、７．６７ｍｍｏｌ）をアセトニトリルに溶解し、チオモルホリン１，１−ジオキシド（１．０４ｍｇ、１５．３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を８０℃で６時間撹拌した。反応完結後、減圧下で溶媒を除去し、水（１００ｍＬ）を添加した。有機物を酢酸エチルで抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下で溶媒を除去し、残渣をカラム・クロマトグラフィーで分離して、表題化合物（２．１ｇ、収率７５％）を得た。
MS[M+1] = 368(M+1)
【０１１５】
工程Ｂ：５−（１，１−ジオキソ−チオモルホリン−４−イルメチル）−７−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸
工程Ａで得られた５−（１，１−ジオキソ−チオモルホリン−４−イルメチル）−７−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸メチルエステルを製造例１の工程Ｄと同様の方法で反応して、表題化合物を得た。
MS[M+1] = 354(M+1)
【０１１６】
実施例６７：［７−シクロペンチルアミノ−５−（１，１−ジオキソ−チオモルホリン−４−メチル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−ピロリジン−１−イル−メタノン
【化２９】
0006471163.tif 000032
製造例８で得られた５−（１，１−ジオキソ−チオモルホリン−４−イルメチル）−７−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸、ピロリジン及びシクロペンタンオンを実施例１と同様の方法で反応して、表題化合物を得た。
MS[M+1] = 445(M+1)
【０１１７】
実験例１：肝細胞毒性誘導物質に対する実施例化合物の肝細胞保護効果の測定及び分析
細胞内外部から様々な攻撃を受けると、大きく、自然死（apoptosis）または壊死（necrosis）の２種類に細胞死の機序が作動される。本実験例は、このような細胞死の機序を利用してラットから分離した初代肝細胞（primary hepatocyte）を臨床で深刻な肝毒性の副作用があるものとして知らされた薬物または細胞死を誘導する種々化学物質で処理し、２４〜４８時間後に、実施例で合成された化合物の肝細胞保護効果を測定した。肝細胞死誘導物質には、ＣＣｌ４、ＡｃｔＤ、Ｈ２Ｏ２、ドキソルビシン（doxorubicin）、抗−Ｆａｓ抗体／アクチノマイシンＤ（anti-Fas Ab/Actinomycin D）、アセトアミノフェン（acetoaminophen）、ＥｔＯＨ、ＣｄＣｌ２、パルミテート（palmitate）、ステアレート（stearate）、シクロフェスファミド（cyclophosphamide）、テルフェナジン（terfenadine）、ジクロフェナック（diclofenac）、シンバスタチン（simvastatin）、アデフォビル（adefovir）を使用した。初代肝細胞の分離は、Ｓｅｇｌｅｎ  ＰＯ（Experimental Cell Research 74 (1972), pp. 450-454）の方法を利用した。簡略に説明すれば、肝細胞（hepatocyte）を２段階コラゲナーゼ潅流方法（two-step collagenase perfusion method）によって分離した後、パーコール勾配（Kreamer BL et al., In Vitro Cellular & Developmental Biology 22 (1986), pp. 201-211）を使用して１０分間低速（５００ｒｐｍ）で遠心分離し、死細胞を除去した。このと、細胞の生存度（viability）は、９０％またはそれの以上維持された。Ｈｅｐａｔｏ  ＺＹＭＥ  ｍｅｄｉａ（Gibco BRL）に懸濁して、細胞の数を計算した。１．５×１０４個の細胞をコラーゲン（collagen）コートした９６ウェルプレート（BD Biocoat）に１００μＬ入れ、３〜４時間細胞を底部に接着させた。
【０１１８】
肝細胞保護効果を確認するために、前記接着された細胞を実施例化合物で３０分間前処理した。このとき、実施例化合物の濃度は、実験に応じて３０μＭ、１０μＭまたは１μＭから２倍または３倍と５段階連続希釈し、最終ＤＭＳＯ濃度は０．２％になるようにした。化合物で処理してから３０分後、肝細胞死誘導物質または肝毒性薬物を表３に示された濃度で処理し、２４時間または４８時間後に細胞の生存度を測定して、肝細胞保護効果を評価した。細胞の生存度は、ＷＳＴ−１（MK-400, Takeda）方法で吸光度４４０ｎｍで測定した。実施例化合物の肝細胞保護効果は、測定値から計算して「ＥＣ５０」で示した。このとき、「ＥＣ５０」は、実験で観察される最大保護効果の５０％を示す化合物の濃度を意味する。代表的な実施例化合物のドキソルビシンに対するＥＣ５０値は表３に示した。
【表３】
0006471163.tif 000033
【０１１９】
実験例２：肝細胞及び種々組織由来の他の細胞でｔＢＨＰ（ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシド；ｔ−ＢｕＯＯＨ）を処理した際の保護効果
１）肝細胞（primary hepatocyte）にｔＢＨＰを処理した場合の保護効果
肝細胞分離は、実験例１と同様の方法で行った。ＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ＋１０％ ＦＢＳ＋  1×抗生物質）培地で懸濁して、プレートに肝細胞を分注した。肝細胞を分注してから２４時間後、化合物の最終濃度が３０、１０、３、１、０．３、０．１μＭになるように３倍ずつ連続希釈し、３０分間前処理した。ｔＢＨＰを最終濃度３００μＭで処理し、１時間後に保護効果を測定した。実験例１と同じようにＷＳＴ−１（Ｔａｋｅｄａ、１０μＬ）を１時間３０分間処理した後、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（Molecular Device）を使用して４４０ｎｍで吸光度を測定し、ＥＣ５０値を計算した。
【０１２０】
２）膵臓細胞（Ｌｉｎｍ５Ｆ）にｔＢＨＰを処理した場合の保護効果
膵臓細胞に対する保護効果を測定するために、まずβ細胞の一つであるＬｉｎｍ５Ｆ細胞を２μ×１０４個ずつ９６ウェルプレートに分注し、２４時間培養した。実施例化合物の最終濃度が３０、１０、３、１、０．３、０．１μＭになるように３倍ずつ希釈し、各ウェルに１時間処理した。ｔＢＨＰを最終濃度が４００μＭになるように処理し、５時間さらに培養した。保護効果は、細胞の総タンパク質量を染色するＳＲＢ（Sulforhodamine B Protein）方法を使用して測定した。簡略に説明すれば、細胞を５時間培養した後、４％ホルムアルデヒド溶液を各ウェルに５０μＬずつ添加して固定し、３０分程度室温に保管した。培地を捨て、蒸留水で各ウェルを２〜３回洗浄した後、プレートを５０℃オーブンで乾燥させた。ＳＲＢ溶液を各ウェルに５０μＬずつ入れた後、３０分程度室温に置いた。ＳＲＢ溶液を除去した後、１％酢酸溶液でプレートを２〜３回洗浄した。プレートを５０℃オーブンで乾燥させた後、１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ１００μＬを入れ、細胞内タンパク質を染色しているＳＲＢを溶出させた。ＳｐｅｃｔｒＭａｘを使用して、５９０ｎｍと６５０ｎｍで吸光度を測定した後、５９０ｎｍの吸光度で６５０ｎｍの吸光度値を差し引いてＥＣ５０値を計算した。
【０１２１】
３）心臓細胞（Ｈ９Ｃ２、シロネズミ心筋細胞）にｔＢＨＰを処理した場合の保護効果
心臓細胞に対する保護効果を確認するために、Ｈ９Ｃ２細胞を１．５×１０４個ずつ分注し、２４時間培養した。実施例化合物の最終濃度が３０、１０、３、１、０．３、０．１μＭになるように３倍ずつ連続希釈して各ウェルに処理し、４５分間培養した。ｔＢＨＰを最終濃度が４００μＭになるように処理し、２時間培養した。各化合物の保護効果を前記２）のＬｉｎｍ５Ｆと同じＳＲＢ方法で測定した。
【０１２２】
４）腎臓細胞（ＬＬＣ−ＰＫ１）にｔＢＨＰを処理した場合の保護効果
腎臓細胞に対する保護効果を測定するために、４×１０４個の細胞を各ウェルに分注し、２４時間培養した。実施例化合物を最終濃度が３０、１０、３、１、０．３、０．１μＭになるように処理して、３０分間培養した。４００μＭ  ｔＢＨＰを処理し、６時間さらに培養した。各化合物の保護効果を前記２）のＬｉｎｍ５Ｆと同じＳＲＢ方法で測定した。
【０１２３】
５）軟骨細胞（chondrocyte）にｔＢＨＰを処理した場合の保護効果
軟骨細胞に対する保護効果を測定するために、まず、１６週齢ＳＤラット（体重：４５０−４６０ｇ）の２つの後肢から軟骨細胞を分離した。分離方法は、次の通りである。シロネズミ後肢の膝部位から軟骨を分離し、ＰＢＳ（＋１×抗生物質）が含有された１００パイプレートに移した。ＰＢＳは氷浴に入れ、４℃を維持した。新しいＰＢＳに交換し、１０００ｒｐｍで遠心分離した。ＰＢＳを除去し、３７℃の１×トリプシン（トリプシン、Ｇｉｂｃｏ）３ｍＬを添加し、１５分間処理した。遠心分離後、上清を捨て、再びＰＢＳで洗浄した。遠心分離し、上清を捨てた。ここに０．２％コラゲナーゼ（Worthington, type II）を入れ、回転させ、３７℃培養器で一晩培養して、細胞を分離した。フィルタリングした細胞溶液を遠心分離し、上清を捨てた。ＰＢＳで洗浄した後、１０ｍＬ  ＤＭＥＭ／Ｆ−１２（Ｇｉｂｃｏ、１０％ＦＢＳ）に懸濁し、２×１０４個の細胞を各ウェルに分注し、２４時間培養した。実施例化合物の最終濃度が３０、１０、３、１、０．３、０．１μＭになるように３倍ずつ希釈し、１時間処理し、ｔＢＨＰを最終濃度が５００μＭになるように処理し、３時間培養した。各化合物の保護効果を前記２）のＬｉｎｍ５Ｆと同じＳＲＢ染色方法で測定した。
【０１２４】
６）脳細胞（ＳＫ−Ｎ−ＭＣ）にｔＢＨＰを処理した場合の保護効果
化合物の脳細胞に対する保護効果を確認するために、脳細胞２×１０４個を、ＤＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ、１０％ＦＢＳ）を使用して９６ウェルに分注し、２４時間培養した。実施例化合物の最終濃度が３０、１０、３、１、０．３、０．１μＭになるように３倍ずつ連続希釈し、１時間処理した。ｔＢＨＰを最終濃度が４００μＭになるように処理し、６時間培養した。各ウェルから５０μＬずつ培地を取り、ＬＤＨアッセイ（Promega）を行った。ＬＤＨアッセイ（Promega）では培地５０μＬにアッセイ溶液５０μＬを混合した後、３０分間室温で反応し、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（Molecular Device）を利用して４９０ｎｍで吸光度を測定した。
【産業上の利用可能性】
【０１２５】
前記結果から分かるように、本発明に係る新規化合物は、肝保護及び肝機能改善効果を示すだけでなく、脂肪肝、肝繊維症、肝硬変など慢性肝疾患、ウイルスまたは薬物によって誘導される肝炎などのような急性／慢性肝疾患の予防または治療に有用に使用できる。本  
【０１２６】
発明の化合物は、また、膵臓、腎臓、脳、軟骨、心臓細胞で細胞壊死阻害効能を示した。
従って、本発明の化合物は細胞壊死及び関連疾患の予防または治療に有用に使用することができる。
【０１２７】
本発明が属する技術分野における通常の知識を有した者であれば、前記内容に基づいて発明の範疇内で様々な応用及び変形を遂行することが可能である。