(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｈ因子（ＦＨ）を含む、関節リウマチを治療するための組成物であって、該Ｈ因子（ＦＨ）がＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１で表されるアミノ酸配列を含み、該Ｈ因子を全身的に投与するための、前記組成物。
【請求項２】
前記ＦＨが静脈内投与される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記投与が関節炎の低減をもたらす、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記投与が初期の炎症応答を阻害する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記投与が炎症応答の解消をさらに促進する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記投与が外骨腫の低減をもたらす、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記投与が、ＦＨを受容していない対象と比較して、軟骨の損傷の低減をもたらす、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１３年３月１４日に出願された、米国特許出願第６１／７８６，０２３号に対する優先権を主張し、その内容は、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に援用される。
【０００２】
発明の背景
補体系は、我々の体内に継続的に侵入しようとする病原体を認識する、破壊する、およびその除去を促進するように、一意的に設計される。系は、感染からの豊富で非常に効率的な保護を提供するように、液性および細胞性の両方のエフェクター機構を組み込む約３０の血漿および細胞表面タンパク質から成る。凝固カスケードと同様に、補体系は、概してセリンプロテアーゼ活性を有する、活性複合体を形成するような特定のタンパク質の会合によって活性化される。これらのプロテアーゼ複合体は、さらなる活性化に寄与する（応答を増幅する）か、または炎症性媒介物質および細胞毒性要素を生成する前駆体タンパク質を活性化する。補体活性化の間に生成される３つの主要なエフェクター、Ｃ３ｂ、Ｃ５ａ、およびＣ５ｂ−９が存在する（細胞膜傷害複合体またはＭＡＣとも称される）。
【０００３】
移植された臓器の細胞性拒絶反応は、細胞性免疫応答を特異的に標的する多数の細胞性免疫抑制薬よって管理することができる。しかしながら、潜在的な移植候補の著しい集団は、移植を進めるには禁忌であることが多いドナー特異性抗体（ＤＳＡ）を提示する。それに加えて、新規の抗ドナー抗体形成が、移植前は高パネル反応性（ｈｉｇｈ  ｐａｎｅｌ  ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ）を示さなかった移植患者の１０〜２０％に発生すると考えられる。これらの抗体は、ドナー臓器に結合し、宿主による炎症応答を開始し、それは、機能障害、および最終的には移植片喪失をもたらす。抗体媒介性拒絶反応（ＡＭＲ）は、標準的な免疫抑制薬によっては制御されず、臓器拒絶反応の主因としてますます認識されている。ＤＳＡは、まず古典的な経路機構を通じて補体系を活性化することができ、ドナー臓器を損傷する代替的経路成分によって増大される。それに加えて、移植環境における補体活性化は、移植の外科的プロセス中に（虚血再灌流機構によって）発生することが示唆されている。補体活性化産生物はまた、細胞性拒絶反応機構を準備および増強することが実証されている。したがって、補体は、移植された臓器の喪失に種々の方法で寄与することがある。Ｈ因子は、Ｃ３のＣ３ａへの変換、およびその後のＣ５ａの生成を制御し、臓器拒絶反応の制限に有効である可能性がある。
【０００４】
ＲＡの病理における補体活性化の役割の証拠は、極めて広範囲に及ぶ。研究は、補体活性化がＲＡの病理に寄与することを示している。ＲＡ患者における上昇された活性化マーカー、および異なる補体タンパク質が存在しない種々の齧歯類モデルにおいて観察される疾患表現型からの顕著な保護もまた、ＲＡ病因学における補体に関する重要な役割を示唆している。しかしながら、多数のグループからの研究は、有効性を示すためには補体阻害剤の標的化が必要であると思われること、およびＦＨを含む標的化されていない阻害剤の全身投与は有効ではなかったことを実証した。それに加えて、ＲＡの発症を伴うＦＨ多型の任意の遺伝的関連の欠失は、この疾患とのつながりをさらに弱めると思われる。驚くべきことに、本明細書に実証される通り、全身的に付与されたＦＨは、マウスモデルにおいてＲＡの病理を制限する。
【０００５】
したがって、Ｈ因子は、補体因子Ｇ遺伝子によってコードされる補体の代替的経路のタンパク質成分として、同種移植片拒絶反応の予防または阻害における使用のため、および関節リウマチを治療するための潜在的な治療薬であり得る。
【発明の概要】
【０００６】
一態様では、本発明は、同種移植片のレシピエントによるその同種移植片の拒絶反応を、Ｈ因子（ＦＨ）を含む組成物でレシピエントを治療することによって予防または阻害するための方法を提供する。例示的な実施形態では、ＦＨは血漿由来ＦＨまたは組み換えＦＨである。
【０００７】
さらなる実施形態では、および上記に従って、レシピエントは、シロリムス（ラパマイシン）、ＦＫ５０６（ＦＫ）、シクロスポリン、およびタクロリムスのいずれか１つを含むがこれらに限定されない第１の免疫抑制剤組成物でさらに治療される。
【０００８】
さらなる実施形態では、および上記のいずれかに従って、レシピエントは、第１の免疫抑制剤組成物と異なる第２の免疫抑制剤組成物でさらに治療され、その第２の免疫抑制剤は、シロリムス（ラパマイシン）、ＦＫ５０６（ＦＫ）、シクロスポリン、およびタクロリムスから独立して選択される。
【０００９】
またさらなる実施形態では、および上記のいずれかに従って、レシピエントは、ＦＨを含む組成物、ＦＫを含む組成物、およびラパマイシンを含む組成物で治療される。
【００１０】
またさらなる実施形態では、および上記のいずれかに従って、同種移植片拒絶反応は、抗体媒介性拒絶反応、または抗体および細胞媒介性拒絶反応の組み合わせである。
【００１１】
さらなる実施形態では、および上記のいずれかに従って、同種移植片拒絶反応を予防または阻害することは、同種移植片生存期間および／または機能を所定の日数の間延長させることを含む。
【００１２】
またさらなる実施形態では、および上記のいずれかに従って、同種移植片拒絶反応を予防または阻害することは、同種移植片拒絶反応のマーカーのレベルの増加を予防または阻害することを含む。
【００１３】
またさらなる実施形態では、および上記のいずれかに従って、予防または阻害されている同種移植片拒絶反応は、急性抗体媒介性拒絶反応である。かかる実施形態では、レシピエントは、該同種移植片の受容に際して、該同種移植片が正常に機能するまでＦＨで治療される。例示的な実施形態では、同種移植片の正常な機能は、レシピエントのクレアチニンレベルおよび／または陰性Ｃ４ｄ生検試験によって決定される。
【００１４】
またさらなる実施形態では、および上記のいずれかに従って、同種移植片拒絶反応は、該同種移植片の受容の３〜６ヶ月後に発生する。
【００１５】
またさらなる実施形態では、および上記のいずれかに従って、同種移植片は、臓器を含む。さらなる実施形態では、臓器は、全臓器である。またさらなる実施形態では、全臓器は、腎臓、心臓、肝臓、腸、膵臓、および肺から選択される構成要素である。
【００１６】
またさらなる実施形態では、および上記のいずれかに従って、同種移植片は、組織を含む。さらなる実施形態では、同種移植片は、皮膚移植片、骨移植片、弁、および骨髄から選択される。
【００１７】
一態様では、本発明は、対象における関節リウマチを治療するための方法であって、Ｈ因子（ＦＨ）を含む組成物を対象に投与するステップを含む、方法を提供する。例示的な実施形態では、ＦＨは、血漿由来ＦＨまたは組み換えＦＨである。
【００１８】
さらなる実施形態では、および上記のいずれかに従って、ＦＨは、対象に静脈内投与される。
【００１９】
またさらなる実施形態では、および上記のいずれかに従って、ＦＨを投与することは、対象における関節炎の低減をもたらす。
【００２０】
またさらなる実施形態では、および上記のいずれかに従って、ＦＨを投与することは、初期の炎症応答を阻害する。
【００２１】
さらなる実施形態では、および上記のいずれかに従って、ＦＨを投与することは、炎症応答の解消をさらに促進する。
【００２２】
またさらなる実施形態では、および上記のいずれかに従って、ＦＨを投与することは、対象における外骨腫の低減をもたらす。
【００２３】
またさらなる実施形態では、および上記のいずれかに従って、ＦＨを投与することは、ＦＨを受容していない対象と比較して、対象における軟骨の損傷の低減をもたらす。
[本発明1001]
対象における関節リウマチを治療する方法であって、Ｈ因子（ＦＨ）を含む組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
[本発明1002]
前記ＦＨが血漿由来または組み換えＦＨである、本発明1001の方法。
[本発明1003]
前記ＦＨが保護的変異体である、本発明1001〜1002のいずれかの方法。
[本発明1004]
前記ＦＨがＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：1を含む、本発明1001〜1003のいずれかの方法。
[本発明1005]
前記ＦＨが前記対象に静脈内投与される、本発明1001〜1004のいずれかの方法。
[本発明1006]
前記ＦＨが関節内注射によって前記対象に投与される、本発明1001〜1004のいずれかの方法。
[本発明1007]
前記注射が、手、足、頸椎、肩、および膝から選択される構成要素の関節への注射である、本発明1006の方法。
[本発明1008]
前記投与が前記対象における関節炎の低減をもたらす、本発明1001〜1007のいずれかの方法。
[本発明1009]
前記投与が初期の炎症応答を阻害する、本発明1001〜1008のいずれかの方法。
[本発明1010]
前記投与が炎症応答の解消をさらに促進する、本発明1001〜1009のいずれかの方法。
[本発明1011]
前記投与が前記対象における外骨腫の低減をもたらす、本発明1001〜1010のいずれかの方法。
[本発明1012]
前記投与が、ＦＨを受容していない対象と比較して、前記対象における軟骨の損傷の低減をもたらす、本発明1001〜1011のいずれかの方法。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】補体カスケードを例証する。阻害タンパク質は、四角で囲まれる。ｆＨ＝Ｈ因子、ｆＩ＝因子Ｉ、Ｃ４ＢＰ＝Ｃ４結合タンパク質、ＤＡＦ＝分解促進因子、ＭＣＰ＝膜補因子タンパク質。
【図２】ＣＦＨ、ＦＫ５０６、またはＣＦＨ＋ＦＫ５０６で治療された、前感作されたマウス同種移植片モデルにおけるＰＯＤ７上のクレアチニンレベルを例証する。
【図３】前感作されたレシピエントにおける腎臓移植のＫａｐｌａｎ  Ｍｅｉｅｒ生存曲線を例証する。Ｐ＜０．０５、ＦＫ＋ＲＡＰＡ対ＣＦＨ＋ＦＫ＋ＲＡＰＡ。ＦＫ＋ＣＦＨコホート、全ての治療を１０日目に停止した。
【図４−１】異なるコホートにおける腎機能を経時的に例証する。正常なＢ６マウスにおいて、Ｃｒ＝０．２±０．０５（ｍｇ／ｄｌ）、ＢＵＮ＝３４±８．８１（ｍｇ／ｄｌ）、Ｈｃｔ−４４±１．７３（％ＰＣＶ）。
【図４−２】異なるコホートにおける腎機能を経時的に例証する。正常なＢ６マウスにおいて、Ｃｒ＝０．２±０．０５（ｍｇ／ｄｌ）、ＢＵＮ＝３４±８．８１（ｍｇ／ｄｌ）、Ｈｃｔ−４４±１．７３（％ＰＣＶ）。
【図４−３】異なるコホートにおける腎機能を経時的に例証する。正常なＢ６マウスにおいて、Ｃｒ＝０．２±０．０５（ｍｇ／ｄｌ）、ＢＵＮ＝３４±８．８１（ｍｇ／ｄｌ）、Ｈｃｔ−４４±１．７３（％ＰＣＶ）。
【図５】腎臓同種移植片の代表的な組織学的画像を例証する。Ａ）正常な腎臓が左側に示され、非治療移植（ＰＯＤ７）が右側に示される。Ｂ）上の枠は、ＲＡＰＡ＋ＦＫ５０６で治療したマウス（＃１３６、＃１３７）からの同種移植片であり、下の枠は、ＲＡＰＡ＋ＦＫ５０６＋ＣＦＨで治療したマウス（＃１４８、＃１５０）からの同種移植片である。
【図６】ＰＯＤ３およびＰＯＤ５におけるＡ）腎機能分析（１群当りｎ＝４〜６）、およびＢ）腎臓同種移植片の代表的な組織学的画像を例証する。
【図７】Ａ）移植前および移植後の血漿ＤＳＡ（ＩｇＧ）レベル、およびＢ）ＩｇＧレベルとＣｒレベルとの間の相関の欠失を例証する。
【図８】ＰＫ−ｅ３６３における１日目からの群の平均体重変化のパーセントを例証する。Ｂｘ−１２＝ＦＨ。
【図９】ＰＫ−ｅ３６３におけるマウスＣＡＩＡにおける総後肢の腫れに対する検査薬の効果を例証する。Ｂｘ−１２＝ＦＨ。
【図１０】ＰＫ−ｅ３６３におけるＣＡＩＡに関する総臨床スコアを例証する。Ｂｘ−１２＝ＦＨ。
【図１１−１】ＰＫ−ｅ３６３におけるマウスＣＡＩＡにおける組織学的変化に対する検査薬の効果を例証する。Ｂｘ−１２＝ＦＨ。
【図１１−２】ＰＫ−ｅ３６３におけるマウスＣＡＩＡにおける組織学的変化に対する検査薬の効果を例証する。Ｂｘ−１２＝ＦＨ。
【図１２】本発明において有用な使用のＨ因子変異体の配列を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
概論
本発明は、同種移植片拒絶反応を予防または阻害するための方法、および関節リウマチを治療するための方法であって、かかる方法は、それを必要とする対象を、Ｈ因子（「ＦＨ」）を含む組成物で治療することを含む、方法を提供する。
【００２６】
対象の治療において使用されるＦＨは、血漿由来または組み換えＨ因子であってよい。血漿由来ＦＨは、文献内に説明されているように、変異体を含み、これらの変異体のうちの１つまたは組み合わせを、本明細書に説明される方法において使用することができる。多数の組み換え変異体もまた、文献内に説明されており、かかる組み換えＦＨ変異体のうちのいずれか１つまたは組み合わせも、本明細書にさらに詳細に説明される方法に従って、同種移植片拒絶反応を予防もしくは阻害するため、または関節リウマチを治療するために使用することができる。理解されるであろう通り、血漿由来および組み換えＦＨの両方の組み合わせによる治療も、本発明によって包含される。ＦＨによる治療は、皮下投与、静脈内投与、または当該技術分野において既知である任意の他の投与の方法によることができる。
【００２７】
一態様では、本発明は、同種移植片のレシピエントによるその同種移植片の拒絶反応を、レシピエントを、ＦＨを含む組成物で治療することによって予防または阻害するための方法を提供する。上述の通り、ＦＨによる治療は、血漿由来または組み換えであるＦＨの１つ以上の変異体による治療を含むことができる。提供されるＦＨの量は、変化することがあるが、概して、補体活性化を阻害するのに有効な範囲内である。さらなる例示的な実施形態では、使用されるＦＨの量は、約１〜２ｍｇ／ｍｌの血漿濃度を達成するのに有効な量である。またさらなる実施形態では、治療のために使用されるＦＨの量は、８６ｍｇ／ｋｇの範囲内である。ＦＨは、本明細書にさらに詳細に説明される通り、同種移植片の移植後に１回以上、数日間、数週間、または数ヶ月間の期間間隔の範囲で同種移植片のレシピエントに投与することができる。
【００２８】
さらなる実施形態では、同種移植片のレシピエントはまた、同種移植片拒絶反応を予防または阻害するために、ＦＨに加えて１つ以上の免疫抑制剤で治療される。１つ以上の免疫抑制剤は、シロリムス（ラパマイシン）、ＦＫ５０６、シクロスポリン、およびタクロリムスを含むことができるが、これらに限定されない。さらなる標準的な免疫抑制剤療法も、幾つかの実施形態ではレシピエントに投与することができ、ミコフェニレートモフィチルおよびステロイドが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、レシピエントは、同種移植片拒絶反応を予防または阻害するためにＦＨ、ＦＫ５０６で、およびラパマイシンで治療される。ＦＨおよび１つ以上の免疫抑制剤による治療は、同種移植片の受容後、同時にまたは異なる時点で達成することができる。さらなる実施形態では、ＦＨおよび／または１つ以上の免疫抑制剤による治療は、本明細書にさらに詳細に説明される通り、同種移植片の受容後に反復される。
【００２９】
さらなる態様では、１つ以上の免疫抑制剤を伴うまたは伴わないＦＨによる治療は、急性拒絶反応、特に急性抗体媒介性拒絶反応を予防または阻害するために、移植の直後に提供される。かかる方法では、治療は、同種移植片の移植の時点で開始され、同種移植片が機能するまで継続される。例えば、同種移植片が腎臓である実施形態では、治療は、レシピエントが正常なクレアチニン値を示し、生検試験がＣ４ｄ陰性になるまで継続されるであろう。
【００３０】
またさらなる態様では、１つ以上の免疫抑制剤を伴うまたは伴わないＦＨによる治療が、移植の数週間または数ヶ月後に発生する拒絶反応を予防するために提供される。かかる状況では、同種移植片は、移植直後は正常に機能するが、その後、新規の抗体産生のため低下する。本態様では、治療は、拒絶反応の最初の兆候が現れたときに開始され、同種移植片が再び正常に機能するまで継続されるであろう。
【００３１】
例示的な実施形態では、本発明に従う１つ以上の免疫抑制剤を伴うまたは伴わないＦＨによる治療は、臓器、臓器の一部、または組織を含むがこれらに限定されない、同種移植片の拒絶反応を予防または阻害するために使用することができる。さらなる例示的な実施形態では、同種移植片は、腎臓、心臓、肝臓、肺、膵臓、腸、皮膚移植片、骨移植片、弁、および骨髄であることができるが、これらに限定されない。
【００３２】
さらなる態様では、本発明は、対象における関節リウマチを、その対象に、ＦＨを含む組成物を投与することによって治療するための方法を提供する。上述の通り、対象を治療するために使用されるＦＨは、ＦＨの１つ以上の変異体を含むことができ、血漿由来または組み換えであることができる。
【００３３】
特定の実施形態では、対象に投与されるＦＨは、対象における関節炎を低減する。さらなる実施形態では、投与されるＦＨは、初期の炎症応答を阻害し、および／または炎症応答の解消を促進する。またさらなる実施形態では、ＦＨは、ＦＨを受容していない対象と比較して、対象における外骨腫の低減または軟骨の損傷の低減をもたらす。
【００３４】
さらなる実施形態では、対象に投与されるＦＨの量は、上記に説明される通り、炎症、外骨腫、または軟骨の損傷を低減するのに有効な量である。またさらなる実施形態では、同種移植片拒絶反応の予防または阻害に関して上述される通り、関節リウマチを有する対象に投与されるＦＨの量は、変化することがあるが、概して、補体活性化を阻害するのに有効な範囲内である。さらなる例示的な実施形態では、使用されるＦＨの量は、約１〜２ｍｇ／ｍｌの血漿濃度を達成するのに有効な量である。さらなる実施形態では、治療のために使用されるＦＨの量は、８６ｍｇ／ｋｇの範囲内である。ＦＨは、本明細書にさらに詳細に説明される通り、数日間、数週間、または数ヶ月間の期間間隔の範囲で１回以上、対象に投与することができる。
【００３５】
定義
別段に指定のない限り、本明細書で使用されるとき、用語「Ｈ因子」または「ＦＨ」は、血漿由来および組み換えＨ因子の両方を指し、１つ以上の変異体をさらに包含する。
【００３６】
用語「組み換え」は、例えば、細胞、または核酸、タンパク質、またはベクターに関連して使用されるとき、細胞、核酸、タンパク質、またはベクターが、異種核酸もしくはタンパク質の導入、または天然核酸もしくはタンパク質の変更によって修飾されているか、あるいは、細胞がそのように修飾された細胞に由来することを示す。したがって、例えば、組み換え細胞は、細胞の天然（非組み換え）型の中には見出されない遺伝子を発現するか、または、さもなければ異常に発現されるか、低発現されるか、もしくは全く発現されない天然の遺伝子を発現する。
【００３７】
用語「単離された」、「精製された」、または「生物学的に純粋な」は、その天然の状態で見出されるように通常それに付随する成分を、実質的または本質的に含まない材料を指す。純度および均質性は、典型的には、ポリアクリルアミドゲル電気泳動または高速液体クロマトグラフィーなどの分析化学技術を使用して決定される。用語「精製された」は、幾つかの実施形態では、核酸またはタンパク質が、電気泳動ゲルにおいて本質的に１つのバンドを生じさせることを示す。他の実施形態では、それは、核酸またはタンパク質が、少なくとも５０％純粋、より好ましくは、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上純粋であることを意味する。「精製する」または「精製」は、他の実施形態では、精製されるべき組成物から少なくとも１つの汚染物質を除去することを意味する。この意味において、精製は、精製された化合物が均質である、例えば、１００％純粋であることを必要としない。
【００３８】
本明細書で使用されるとき、「投与する」（および全ての文法的同等物）は、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、経口投与、坐剤としての投与、局所接触、腹腔内、病巣内、もしくは鼻腔内投与、または徐放デバイス、例えば、小型浸透圧ポンプなどの対象への埋め込みを含む。投与は、非経口および経粘膜（例えば、経口、鼻腔、膣、直腸、または経皮）を含む任意の経路による。非経口投与としては、例えば、静脈内、筋肉内、細動脈内、皮内、皮下、腹腔内、脳室内、および頭蓋内が挙げられる。送達の他の様式としては、リポソーム製剤の使用、静脈内注入、経皮パッチなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３９】
用語「治療的に有効な量または用量」または「治療的に十分な量または用量」または「有効なまたは十分な量または用量」または「薬学的に有効な量または用量」は、そのために投与される治療効果を生み出す用量を指す。例えば、血友病の治療に有用な薬物の治療的に有効な量は、血友病に関連付けられる１つ以上の症状を予防または緩和することができる量であることができる。正確な用量は、治療の目的に依存し、既知の技術を使用して当業者によって解明可能であろう（例えば、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ（ｖｏｌｓ．１−３，１９９２）；Ｌｌｏｙｄ，Ｔｈｅ  Ａｒｔ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ（１９９９）；Ｐｉｃｋａｒ，Ｄｏｓａｇｅ  Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ（１９９９）；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００３，Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓを参照、その各々は、あらゆる目的のために、また特に、用量および投薬計画の開発に関連する全ての教示のために、その全体が参照により本明細書に援用される）。
【００４０】
「薬学的に許容される」は、概して安全で非毒性の、生物学的にもそれ以外でも不適切ではない薬学的組成物の調製に有用であることを意味し、獣医学的使用およびヒトの薬学的使用に対して許容されるものを含む。
【００４１】
「対象」は、脊索動物亜門（ｓｕｂｐｈｙｌｕｍ  ｃｈｏｒｄａｔａ）の任意のメンバーを意味し、ヒト、ならびに例えば、チンパンジーおよび他の類人猿およびサル種などの非ヒト霊長類を含む他の霊長類、例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、およびウマなどの産業動物、例えば、イヌおよびネコなどの家庭用哺乳類、例えば、マウス、ラット、およびモルモットなどの齧歯類を含む実験動物、例えば、ニワトリ、七面鳥、および他の家禽類、アヒル、ガチョウなどの家庭用鳥類、野鳥、および狩猟鳥を含む鳥などが挙げられるが、これらに限定されない。該用語は、特定の年齢を示すものではない。したがって、成体と新生個体との両方が関心を持たれる。
【００４２】
用語「患者」は、その従来の意味で使用され、本発明の組成物の投与によって予防または治療することができる状態に罹患しているかまたはなりやすい生体を指し、ヒトおよび非ヒト種の両方を含む。用語「患者」および「対象」は、本出願を通して互換的に使用され、上述の通り、これらの用語はヒトおよび獣医学的対象の両方を含む。
【００４３】
本明細書で使用されるとき、用語「約」は、特定の値からプラスマイナス１０％のおおよその範囲を示す。例えば、言語「約２０％」は、１８〜２２％の範囲を包含する。
【００４４】
本明細書で使用されるとき、用語「半減期」は、分解を受ける物質の量（または、試料からもしくは患者からのクリアランス）が半分に減少するのにかかる期間を指す。
【００４５】
本明細書で使用されるとき、用語「配列同一性」または「％同一性」は、２つ以上の核酸またはタンパク質配列の文脈において、同一であるか、または以下の配列比較アルゴリズムの１つを使用するか、もしくは目視検査によって測定されるときに、最大対応について比較および整列されるときに、同一である特定のパーセンテージのアミノ酸残基もしくはヌクレオチドを有する、２つ以上の配列または部分配列を指す。配列比較のために、典型的には１つの配列が、比較される試験配列に対する基準配列の役割を果たす。比較のための配列の最適な整列は、例えば、Ｓｍｉｔｈ＆Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）の局所相同性アルゴリズムによって、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ＆Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の相同性整列アルゴリズムによって、Ｐｅａｒｓｏｎ＆Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：２４４４（１９８８）の類似性検索方法によって、これらのアルゴリズムのコンピュータによる実装（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．内のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ）によって、または目視検査によって（概して、Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃ．ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９８７）によって出版されたＡｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙを参照）実施することができる。パーセント配列同一性を決定するのに好適なアルゴリズムの１つの例は、基本的局所整列検索ツール（ｂａｓｉｃ  ｌｏｃａｌ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ｓｅａｒｃｈ  ｔｏｏｌ）（以下、「ＢＬＡＳＴ」）において使用されるアルゴリズムであり、例えば、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（以下、「ＮＣＢＩ」）を通じて公的に利用可能であるＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０（１９９０）およびＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１５：３３８９−３４０２（１９９７）を参照されたい。
【００４６】
本明細書で使用されるとき、用語「同種移植片」は、その従来の意味で使用され、ドナーから、同じ種であるが異なる遺伝子構造であるレシピエントに移植された組織または臓器を指す。
【００４７】
本発明の組成物
本発明の方法は、Ｈ因子を含む組成物の使用を含む。別段に指定のない限り、本明細書で使用されるとき、用語「Ｈ因子」または「ＦＨ」は、血漿由来および組み換えＨ因子の両方を指す。Ｈ因子は、補体因子Ｇ遺伝子（例えば、ＣＦＨ、ＮＭ０００１８６、ＧｅｎｅＩＤ：３０７５、ＵｎｉＰｒｏｔ  ＩＤ  Ｐ０８６０３、Ｒｉｐｏｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２４９：５９３−６０２（１９８８））によってコードされる補体の代替的経路のタンパク質成分である。Ｈ因子は、１８のアミノ酸のシグナルペプチドの除去によって処理される１，２１３のアミノ酸の前駆体ポリペプチドとして翻訳され、成熟Ｈ因子タンパク質（アミノ酸１９〜１２３１）をもたらす。本発明において使用されるとき、Ｈ因子は、血漿試料、例えば、ヒト血漿試料中に見出すことができる任意の天然の変異体、代替的配列、アイソフォーム、または変異タンパク質を包含する。ヒト集団に見出されるＨ因子変異の例としては、
0006484215.tif 000002
が挙げられるが、これらに限定されない。これらの変異の多くは、非定型的容血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）、膜性増殖性糸球体腎炎（ｍｅｍｂｒａｎｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｇｌｏｍｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｓ）ＩＩ型（ＭＰＧＮＩＩ）、ＣＦＨ欠乏症、および基底層ドルーゼンを含む、種々の疾患および障害に関連付けられることが見出されている。Ｈ因子はまた、翻訳後修飾を含有するタンパク質も含む。例えば、Ｈ因子は、残基５２９、７１８、８０２、８２２、８８２、９１１、１０２９、および１０９５においてＮ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）によって修飾されると考えられる。
【００４８】
理解されるであろう通り、本明細書に説明される方法および組成物において使用されるＨ因子は、血漿由来または組み換えであることができ、１つ以上の異なる変異体をさらに含むことができる（全長および切断型を含む）。
【００４９】
血漿由来Ｈ因子の変異体、および血漿由来Ｈ因子を産生するための方法は、当該技術分野において既知であり、例えば、ＷＯ２００７／１４９５６７、ＷＯ２００７／０６６０１７、ＷＯ２００８／１１３５８９、ＷＯ２０１１／０１１７５３、ＵＳ７，７４５，３８９に説明されており、その各々は、あらゆる目的のために、また特に、Ｈ因子、特に、血漿由来Ｈ因子の産生に関連する全ての教示のために、その全体が参照により本明細書に援用される。
【００５０】
多様なＨ因子多型は、当該技術分野において既知であり、例えば、ＷＯ２０００／５２４７９、ＷＯ／２００６／０６２７１６、ＵＳ７，３５１，５２４、ＵＳ７，７４５，３８９（その各々は、あらゆる目的のため、また特に、Ｈ因子およびＨ因子の変異体に関連する全ての教示のために、その全体が参照により本明細書に援用される）に説明され、それらはまた、これらのＨ因子ポリペプチドの組み換え型およびそれを産生するための方法も説明する。これらのＨ因子の変異型の多くは、補体活性化の制限において、血漿由来Ｈ因子より大きい活性を示す「保護的」変異体として知られている。非限定的な実施形態では、本発明において有用なＨ因子の保護的変異体は、図１２にＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１として本明細書に提供されるＵＳ７，７４５，３８９のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５を含む、ＵＳ７，７４５，３８９に説明される配列のいずれかに従う配列を含む。さらなる実施形態では、組み換えＨ因子は、組み換えＨ因子が、ＵＳ７，７４５，３８９に説明される配列のいずれかに対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、および１００％の配列同一性を有する本発明の方法および組成物において使用される。またさらなる実施形態では、本発明において有用な組み換えＨ因子は、図１２にＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１として本明細書に提供されるＵＳ７，７４５，３８９のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５に対して、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、および１００％の配列同一性を有する。またさらなる実施形態では、本発明において有用な組み換えＨ因子は、約１〜１００、３〜９５、５〜９０、７〜８５、９〜８０、１１〜７５、１３〜７０、１５〜６５、１７〜６０、１９〜５５、２１〜５０、２３〜４５、２５〜４０、２７〜３５のアミノ酸置換を伴って、図１２に描写されるＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１を含む。
【００５１】
Ｈ因子を含む組成物に加えて、本発明の方法は、免疫抑制剤を含む組成物を使用する。これらの免疫抑制剤は、Ｈ因子と同一の組成物中に含まれてもよく、または免疫抑制剤は、Ｈ因子とは別個の組成物中に提供されてもよい。かかる免疫抑制剤としては、シロリムス（ラパマイシン）、ＦＫ５０６（ＦＫ）、シクロスポリン、およびタクロリムスが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５２】
特定の実施形態では、Ｈ因子は、約０．０５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬの間の治療的に有効な用量で提供される。他の実施形態では、Ｈ因子は、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬの間の濃度で存在する。また他の実施形態では、Ｈ因子は、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬの間の濃度で存在する。別の実施形態では、Ｈ因子は、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約２ｍｇ／ｍＬの間の濃度で存在する。別の実施形態では、Ｈ因子は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２ｍｇ／ｍＬの間の濃度で存在する。また他の実施形態では、Ｈ因子は、約０．０１ｍｇ／ｍＬで、または約０．０２ｍｇ／ｍＬ、０．０３ｍｇ／ｍＬ、０．０４ｍｇ／ｍＬ、０．０５ｍｇ／ｍＬ、０．０６ｍｇ／ｍＬ、０．０７ｍｇ／ｍＬ、０．０８ｍｇ／ｍＬ、０．０９ｍｇ／ｍＬ、０．１ｍｇ／ｍＬ、０．２ｍｇ／ｍＬ、０．３ｍｇ／ｍＬ、０．４ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ、０．６ｍｇ／ｍＬ、０．７ｍｇ／ｍＬ、０．８ｍｇ／ｍＬ、０．９ｍｇ／ｍＬ、１．０ｍｇ／ｍＬ、１．１ｍｇ／ｍＬ、１．２ｍｇ／ｍＬ、１．３ｍｇ／ｍＬ、１．４ｍｇ／ｍＬ、１．５ｍｇ／ｍＬ、１．６ｍｇ／ｍＬ、１．７ｍｇ／ｍＬ、１．８ｍｇ／ｍＬ、１．９ｍｇ／ｍＬ、２．０ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ、３．０ｍｇ／ｍＬ、３．５ｍｇ／ｍＬ、４．０ｍｇ／ｍＬ、４．５ｍｇ／ｍＬ、５．０ｍｇ／ｍＬ、５．５ｍｇ／ｍＬ、６．０ｍｇ／ｍＬ、６．５ｍｇ／ｍＬ、７．０ｍｇ／ｍＬ、７．５ｍｇ／ｍＬ、８．０ｍｇ／ｍＬ、８．５ｍｇ／ｍＬ、９．０ｍｇ／ｍＬ、９．５ｍｇ／ｍＬ、１０．０ｍｇ／ｍＬ、またはそれ以上の濃度で存在することができる。さらなる実施形態では、Ｈ因子は、約０．１〜１５、０．３〜１４．５、０．５〜１４、０．７〜１３．５、０．９〜１３、１．１〜１２．５、１．３〜１２、１．５〜１１．５、１．７〜１１、１．９〜１０．５、２．１〜１０、２．３〜９．５、２．５〜９、２．７〜８．５、２．９〜８、３．１〜７．５、３．３〜７、３．５〜６．５、３．７〜６、３．９〜５．５、４．１〜５、４．３〜４．５ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で存在する。
【００５３】
一実施形態では、比較的純粋なＨ因子製剤の濃度は、分光法（すなわち、Ａ２８０にて測定される総タンパク質）または他のバルク決定（例えば、Ｂｒａｄｆｏｒｄ分析、銀染色、凍結乾燥粉末の重量など）によって決定することができる。他の実施形態では、Ｈ因子の濃度は、Ｈ因子ＥＬＩＳＡ分析によって決定することができる（例えば、ｍｇ／ｍＬ抗原）。
【００５４】
またさらなる実施形態では、本発明は、１０ｇ／Ｌ〜２５０ｇ／Ｌまたは約１０ｇ／Ｌ〜２５０ｇ／Ｌのタンパク質濃度を含む、水性Ｈ因子組成物を提供する。特定の実施形態では、Ｈ因子組成物のタンパク質濃度は、５０ｇ／Ｌ〜２００ｇ／Ｌもしくは約５０ｇ／Ｌ〜２００ｇ／Ｌ、または７０ｇ／Ｌ〜１５０ｇ／Ｌもしくは約７０ｇ／Ｌ〜１５０ｇ／Ｌ、または９０ｇ／Ｌ〜１２０ｇ／Ｌもしくは約９０ｇ／Ｌ〜１２０ｇ／Ｌ、または３０ｇ／Ｌ〜７０ｇ／Ｌもしくは約３０ｇ／Ｌ〜７０ｇ／Ｌ、または４０ｇ／Ｌ〜６０ｇ／Ｌもしくは約４０ｇ／Ｌ〜６０ｇ／Ｌ、あるいはこれらの範囲内の任意の好適な濃度、例えば、１０ｇ／Ｌもしくは約１０ｇ／Ｌ、または１５ｇ／Ｌもしくは約１５ｇ／Ｌ、２０ｇ／Ｌ、２５ｇ／Ｌ、３０ｇ／Ｌ、３５ｇ／Ｌ、４０ｇ／Ｌ、４５ｇ／Ｌ、５０ｇ／Ｌ、５５ｇ／Ｌ、６０ｇ／Ｌ、６５ｇ／Ｌ、７０ｇ／Ｌ、７５ｇ／Ｌ、８０ｇ／Ｌ、８５ｇ／Ｌ、９０ｇ／Ｌ、９５ｇ／Ｌ、１００ｇ／Ｌ、１０５ｇ／Ｌ、１１０ｇ／Ｌ、１１５ｇ／Ｌ、１２０ｇ／Ｌ、１２５ｇ／Ｌ、１３０ｇ／Ｌ、１３５ｇ／Ｌ、１４０ｇ／Ｌ、１４５ｇ／Ｌ、１５０ｇ／Ｌ、１５５ｇ／Ｌ、１６０ｇ／Ｌ、１６５ｇ／Ｌ、１７０ｇ／Ｌ、１７５ｇ／Ｌ、１８０ｇ／Ｌ、１８５ｇ／Ｌ、１９０ｇ／Ｌ、１９５ｇ／Ｌ、２００ｇ／Ｌ、２０５ｇ／Ｌ、２１０ｇ／Ｌ、２１５ｇ／Ｌ、２２０ｇ／Ｌ、２２５ｇ／Ｌ、２３０ｇ／Ｌ、２３５ｇ／Ｌ、２４０ｇ／Ｌ、２４５ｇ／Ｌ、２５０ｇ／Ｌ、またはそれ以上である。好ましい実施形態では、高いタンパク質濃度を有するＨ因子組成物はまた、高レベルの純度も有するであろう。一実施形態では、組成物中のタンパク質の少なくとも９０％は、Ｈ因子であろう。好ましい実施形態では、組成物中のタンパク質の少なくとも９５％は、Ｈ因子であろう。
【００５５】
さらなる実施形態では、Ｈ因子は、約０．０５ｍｇ／ｍＬおよび約１０ｍｇ／ｍＬのレシピエント内血漿レベル濃度をもたらす、治療的に有効な用量で提供される。他の実施形態では、Ｈ因子は、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬの間のレシピエント内血漿レベル濃度をもたらす、治療的に有効な用量で提供される。また他の実施形態では、Ｈ因子は、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬの間のレシピエント内血漿レベル濃度をもたらす、治療的に有効な用量で提供される。別の実施形態では、Ｈ因子は、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約２ｍｇ／ｍＬの間のレシピエント内血漿レベル濃度をもたらす、治療的に有効な用量で提供される。別の実施形態では、Ｈ因子は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２ｍｇ／ｍＬの間のレシピエント内血漿レベル濃度をもたらす、治療的に有効な用量で提供される。また他の実施形態では、Ｈ因子は、約０．０１ｍｇ／ｍＬ、または約０．０２ｍｇ／ｍＬ、０．０３ｍｇ／ｍＬ、０．０４ｍｇ／ｍＬ、０．０５ｍｇ／ｍＬ、０．０６ｍｇ／ｍＬ、０．０７ｍｇ／ｍＬ、０．０８ｍｇ／ｍＬ、０．０９ｍｇ／ｍＬ、０．１ｍｇ／ｍＬ、０．２ｍｇ／ｍＬ、０．３ｍｇ／ｍＬ、０．４ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ、０．６ｍｇ／ｍＬ、０．７ｍｇ／ｍＬ、０．８ｍｇ／ｍＬ、０．９ｍｇ／ｍＬ、１．０ｍｇ／ｍＬ、１．１ｍｇ／ｍＬ、１．２ｍｇ／ｍＬ、１．３ｍｇ／ｍＬ、１．４ｍｇ／ｍＬ、１．５ｍｇ／ｍＬ、１．６ｍｇ／ｍＬ、１．７ｍｇ／ｍＬ、１．８ｍｇ／ｍＬ、１．９ｍｇ／ｍＬ、２．０ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ、３．０ｍｇ／ｍＬ、３．５ｍｇ／ｍＬ、４．０ｍｇ／ｍＬ、４．５ｍｇ／ｍＬ、５．０ｍｇ／ｍＬ、５．５ｍｇ／ｍＬ、６．０ｍｇ／ｍＬ、６．５ｍｇ／ｍＬ、７．０ｍｇ／ｍＬ、７．５ｍｇ／ｍＬ、８．０ｍｇ／ｍＬ、８．５ｍｇ／ｍＬ、９．０ｍｇ／ｍＬ、９．５ｍｇ／ｍＬ、１０．０ｍｇ／ｍＬ、またはそれ以上の濃度の血漿濃度をもたらす。さらなる実施形態では、Ｈ因子は、約０．１〜１５、０．３〜１４．５、０．５〜１４、０．７〜１３．５、０．９〜１３、１．１〜１２．５、１．３〜１２、１．５〜１１．５、１．７〜１１、１．９〜１０．５、２．１〜１０、２．３〜９．５、２．５〜９、２．７〜８．５、２．９〜８、３．１〜７．５、３．３〜７、３．５〜６．５、３．７〜６、３．９〜５．５、４．１〜５、４．３〜４．５ｍｇ／ｍＬの範囲内のレシピエント内血漿レベル濃度をもたらす、治療的に有効な用量で提供される。血漿レベル濃度は、当該技術分野において既知である標準的分析を使用して決定することができる。
【００５６】
さらなる実施形態では、Ｈ因子は、約５０〜１５０ｍｇ／ｋｇの治療的に有効な用量で提供される。またさらなる実施形態では、Ｈ因子は、約５２〜１４５、５４〜１４０、５６〜１３５、５８〜１３０、６０〜１２５、６２〜１２０、６４〜１１５、６６〜１１０、６８〜１０５、７０〜１００、７２〜９５、７４〜９０、７６〜８７、７８〜８６、８０〜８５ｍｇ／ｋｇの治療的に有効な用量で提供される。またさらなる実施形態では、Ｈ因子は、約７０、７０．５、７１、７１．５、７２、７２．５、７３、７３．５、７４、７４．５、７５、７５．５、７６、７６．５、７７、７７．５、７８、７８．５、７９、７９．５、８０、８０．５、８１、８１．５、８２、８２．５、８３、８３．５、８４、８４．５、８５、８５．５、８６、８６．５、８７、８７．５、８８、８８．５、８９、８９．５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０ｍｇ／ｋｇの治療的に有効な用量で提供される。
【００５７】
さらなる実施形態では、１つ以上の免疫抑制剤（シロリムス（ラパマイシン）、ＦＫ５０６（ＦＫ）、シクロスポリン、およびタクロリムスを含むがこれらに限定されない）は、約．１〜１０μＭの濃度で提供される。さらなる実施形態では、免疫抑制剤は、約０．１〜１０、０．２〜９．５、０．３〜９、０．４〜８．５、０．５〜８、０．６〜７．５、０．７〜７、０．８〜６．５、０．９〜６、１〜５．５、１．１〜５、１．２〜４．５、１．３〜４、１．４〜３．５、１．５〜３、１．６〜２．５、１．７〜２μＭの濃度で提供される。またさらなる実施形態では、免疫抑制剤は、約０．１、０．３、０．５、０．７、０．９、１．１、１．３、１．５、１．７、１．９、２．１、２．３、２．５、２．７、２．９、３．１、３．３、３．５、３．７、３．９、４．１、４．３、４．５、４．７、４．９、５．１、５．３、５．５、５．７、５．９、６．１、６．３、６．５、６．７、６．９、７．１、７．３、７．５、７．７、７．９、８．１、８．３、８．５、８．７、８．９、９．１、９．３、９．５、９．７、９．９、１０．１、１０．３、１０．５、１０．７、１０．９、１１．１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５、および１５μＭの濃度で提供される。
【００５８】
またさらなる実施形態では、１つ以上の免疫抑制剤（シロリムス（ラパマイシン）、ＦＫ５０６（ＦＫ）、シクロスポリン、およびタクロリムスを含むがこれらに限定されない）は、約０．１〜１０ｍｇ／ｋｇの濃度で提供される。さらなる実施形態では、免疫抑制剤は、約０．１〜１０、０．２〜９．５、０．３〜９、０．４〜８．５、０．５〜８、０．６〜７．５、０．７〜７、０．８〜６．５、０．９〜６、１〜５．５、１．１〜５、１．２〜４．５、１．３〜４、１．４〜３．５、１．５〜３、１．６〜２．５、１．７〜２ｍｇ／ｋｇの濃度で提供される。またさらなる実施形態では、免疫抑制剤は、約０．１、０．３、０．５、０．７、０．９、１．１、１．３、１．５、１．７、１．９、２．１、２．３、２．５、２．７、２．９、３．１、３．３、３．５、３．７、３．９、４．１、４．３、４．５、４．７、４．９、５．１、５．３、５．５、５．７、５．９、６．１、６．３、６．５、６．７、６．９、７．１、７．３、７．５、７．７、７．９、８．１、８．３、８．５、８．７、８．９、９．１、９．３、９．５、９．７、９．９、１０．１、１０．３、１０．５、１０．７、１０．９、１１．１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５、および１５ｍｇ／ｋｇの濃度で提供される。
【００５９】
さらなる実施形態では、本明細書に説明される方法において有用である組成物は、ＦＫ５０６を含む。またさらなる実施形態では、本明細書に説明される方法において有用である組成物は、約．１〜１０μＭの濃度でＦＫ５０６を含む。さらなる実施形態では、ＦＫ５０６は、約０．１〜１０、０．２〜９．５、０．３〜９、０．４〜８．５、０．５〜８、０．６〜７．５、０．７〜７、０．８〜６．５、０．９〜６、１〜５．５、１．１〜５、１．２〜４．５、１．３〜４、１．４〜３．５、１．５〜３、１．６〜２．５、１．７〜２μＭの濃度で提供される。またさらなる実施形態では、ＦＫ５０６は、約０．１、０．３、０．５、０．７、０．９、１．１、１．３、１．５、１．７、１．９、２．１、２．３、２．５、２．７、２．９、３．１、３．３、３．５、３．７、３．９、４．１、４．３、４．５、４．７、４．９、５．１、５．３、５．５、５．７、５．９、６．１、６．３、６．５、６．７、６．９、７．１、７．３、７．５、７．７、７．９、８．１、８．３、８．５、８．７、８．９、９．１、９．３、９．５、９．７、９．９、１０．１、１０．３、１０．５、１０．７、１０．９、１１．１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５、および１５μＭの濃度で提供される。またさらなるでは、ＦＫ５０６は、約０．１〜１０ｍｇ／ｋｇの濃度で提供される。さらなる実施形態では、ＦＫ５０６は、約０．１〜１０、０．２〜９．５、０．３〜９、０．４〜８．５、０．５〜８、０．６〜７．５、０．７〜７、０．８〜６．５、０．９〜６、１〜５．５、１．１〜５、１．２〜４．５、１．３〜４、１．４〜３．５、１．５〜３、１．６〜２．５、１．７〜２ｍｇ／ｋｇの濃度で提供される。またさらなる実施形態では、ＦＫ５０６は、約０．１、０．３、０．５、０．７、０．９、１．１、１．３、１．５、１．７、１．９、２．１、２．３、２．５、２．７、２．９、３．１、３．３、３．５、３．７、３．９、４．１、４．３、４．５、４．７、４．９、５．１、５．３、５．５、５．７、５．９、６．１、６．３、６．５、６．７、６．９、７．１、７．３、７．５、７．７、７．９、８．１、８．３、８．５、８．７、８．９、９．１、９．３、９．５、９．７、９．９、１０．１、１０．３、１０．５、１０．７、１０．９、１１．１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５、および１５ｍｇ／ｋｇの濃度で提供される。またさらなる実施形態では、ＦＫ５０６は、約１〜３０、３．５〜２９．５、４〜２９、４．５〜２８．５、５〜２８、５．５〜２７．５、６〜２７、６．５〜２６．５、７〜２６、７．５〜２５．５、８〜２５、８．５〜２４．５、９〜２４、９．５〜２３．５、１０〜２３、１０．５〜２２．５、１１〜２２、１１．５〜２１．５、１２〜２１、１２．５〜２０．５、１３〜２０、１３．５〜１９．５、１４〜１９、１４．５〜１８．５、１５〜１８、１５．５〜，７．５、１６〜１７、２〜４、２．５〜３．５、３〜３．５ｍｇ／ｋｇの濃度で提供される。またさらなる実施形態では、ＦＫ５０６は、約１、１．２、１．４、１．６、１．８、２、２．２、２．４、２．６、２．８、３、３．２、３．４、３．６、３．８、４、４．２、４．４、４．６、４．８、５、５．２、５．４、５．６、５．８、６、６．２、６．４、６．６、６．８、７、７．２、７．４、７．６、７．８、８、８．２、８．４、８．６、８．８、９、９．２、９．４、９．６、９．８、１０、１０．２、１０．４、１０．６、１０．８、１１、１１．２、１１．４、１１．６、１１．８、１２ｍｇ／ｋｇの濃度で提供される。
【００６０】
さらなる実施形態では、本明細書に説明される方法において有用である組成物は、ラパマイシンを含む。またさらなる実施形態では、本明細書に説明される方法において有用である組成物は、約．１〜１０μＭの濃度でラパマイシンを含む。さらなる実施形態では、ラパマイシンは、約０．１〜１０、０．２〜９．５、０．３〜９、０．４〜８．５、０．５〜８、０．６〜７．５、０．７〜７、０．８〜６．５、０．９〜６、１〜５．５、１．１〜５、１．２〜４．５、１．３〜４、１．４〜３．５、１．５〜３、１．６〜２．５、１．７〜２μＭの濃度で提供される。またさらなる実施形態では、ラパマイシンは、約０．１、０．３、０．５、０．７、０．９、１．１、１．３、１．５、１．７、１．９、２．１、２．３、２．５、２．７、２．９、３．１、３．３、３．５、３．７、３．９、４．１、４．３、４．５、４．７、４．９、５．１、５．３、５．５、５．７、５．９、６．１、６．３、６．５、６．７、６．９、７．１、７．３、７．５、７．７、７．９、８．１、８．３、８．５、８．７、８．９、９．１、９．３、９．５、９．７、９．９、１０．１、１０．３、１０．５、１０．７、１０．９、１１．１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５、および１５μＭの濃度で提供される。またさらなる実施形態では、ラパマイシンは、約０．１〜１０ｍｇ／ｋｇの濃度で提供される。またさらなる実施形態では、ラパマイシンは、約０．１〜１０、０．２〜９．５、０．３〜９、０．４〜８．５、０．５〜８、０．６〜７．５、０．７〜７、０．８〜６．５、０．９〜６、１〜５．５、１．１〜５、１．２〜４．５、１．３〜４、１．４〜３．５、１．５〜３、１．６〜２．５、１．７〜２、０．１〜０．９、０．２〜０．８、０．３〜０．７、０．４〜０．６ｍｇ／ｋｇの濃度で提供される。またさらなる実施形態では、ラパマイシンは、約０．１、０．３、０．５、０．７、０．９、１．１、１．３、１．５、１．７、１．９、２．１、２．３、２．５、２．７、２．９、３．１、３．３、３．５、３．７、３．９、４．１、４．３、４．５、４．７、４．９、５．１、５．３、５．５、５．７、５．９、６．１、６．３、６．５、６．７、６．９、７．１、７．３、７．５、７．７、７．９、８．１、８．３、８．５、８．７、８．９、９．１、９．３、９．５、９．７、９．９、１０．１、１０．３、１０．５、１０．７、１０．９、１１．１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５、および１５ｍｇ／ｋｇの濃度で提供される。
【００６１】
Ｈ因子および免疫抑制剤組成物は、さらなる実施形態では、非常に高いレベルの純度を有する。一実施形態では、本明細書に提供される組成物中の総タンパク質の少なくとも９０％は、Ｈ因子または免疫抑制剤であろう。好ましい実施形態では、本明細書に提供される組成物中の総タンパク質の少なくとも９５％は、Ｈ因子または免疫抑制剤であろう。他の実施形態では、組成物の総タンパク質の少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、またはそれ以上は、Ｈ因子または免疫抑制剤であろう。１つの好ましい実施形態では、組成物の総タンパク質の少なくとも９６％は、Ｈ因子または免疫抑制剤であろう。好ましい実施形態では、組成物の総タンパク質の少なくとも９７％は、Ｈ因子または免疫抑制剤であろう。別の好ましい実施形態では、組成物の総タンパク質の少なくとも９８％は、Ｈ因子または免疫抑制剤であろう。別の好ましい実施形態では、組成物の総タンパク質の少なくとも９９％は、Ｈ因子または免疫抑制剤であろう。
【００６２】
幾つかの実施形態では、本明細書に説明される組成物は、生理学的オスモル濃度、約２８５〜２９５ミリオスモル／ｋｇに匹敵するオスモル濃度を有するであろう（Ｌａｃｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｒｕｇ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ−Ｌｅｘｉ−Ｃｏｍｐ  １９９９：１２５４）。特定の実施形態では、製剤のオスモル濃度は、２００〜３５０ミリオスモル／ｋｇの間または約２００〜３５０ミリオスモル／ｋｇの間、好ましくは２４０〜３００ミリオスモル／ｋｇの間または約２４０〜３００ミリオスモル／ｋｇの間であろう。特定の実施形態では、製剤のオスモル濃度は、２００ミリオスモル／ｋｇもしくは約２００ミリオスモル／ｋｇ、または２１０ミリオスモル／ｋｇ、２２０ミリオスモル／ｋｇ、２３０ミリオスモル／ｋｇ、２４０ミリオスモル／ｋｇ、２４５ミリオスモル／ｋｇ、２５０ミリオスモル／ｋｇ、２５５ミリオスモル／ｋｇ、２６０ミリオスモル／ｋｇ、２６５ミリオスモル／ｋｇ、２７０ミリオスモル／ｋｇ、２７５ミリオスモル／ｋｇ、２８０ミリオスモル／ｋｇ、２８５ミリオスモル／ｋｇ、２９０ミリオスモル／ｋｇ、２９５ミリオスモル／ｋｇ、３００ミリオスモル／ｋｇ、３１０ミリオスモル／ｋｇ、３２０ミリオスモル／ｋｇ、３３０ミリオスモル／ｋｇ、３４０ミリオスモル／ｋｇ、３４０ミリオスモル／ｋｇ、または３５０ミリオスモル／ｋｇであろう。また他の実施形態では、製剤のオスモル濃度は、より高い、例えば、２００〜１０００ミリオスモル／ｋｇの間もしくは約２００〜１０００ミリオスモル／ｋｇの間、または４００ミリオスモル／ｋｇもしくは約４００ミリオスモル／ｋｇ、４５０ミリオスモル／ｋｇ、５００ミリオスモル／ｋｇ、５５０ミリオスモル／ｋｇ、６００ミリオスモル／ｋｇ、６５０ミリオスモル／ｋｇ、７００ミリオスモル／ｋｇ、７５０ミリオスモル／ｋｇ、８００ミリオスモル／ｋｇ、８５０ミリオスモル／ｋｇ、９００ミリオスモル／ｋｇ、９５０ミリオスモル／ｋｇ、１０００ミリオスモル／ｋｇ、またはそれ以上であろう。
【００６３】
本明細書に述べられる組成物は、概して、液体形態で長期間安定である。特定の実施形態では、製剤は、少なくとも３ヶ月もしくは約３ヶ月間室温で、または少なくとも４ヶ月間もしくは約４ヶ月間、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８ヶ月間、またはそれ以上、室温で安定である。組成物はまた、概して、少なくとも１８ヶ月間もしくは約１８ヶ月間、冷蔵条件下（典型的には、約２℃〜約８℃の間）で、または少なくとも２１ヶ月間もしくは約２１ヶ月間、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５１、５４、５７、６０ヶ月間、またはそれ以上、冷蔵条件下で安定であろう。
【００６４】
他の実施形態では、本明細書に述べられる組成物は、概して、凍結乾燥形態で長期間安定である。特定の実施形態では、製剤は、少なくとも３ヶ月もしくは約３ヶ月間室温で、または４ヶ月間もしくは約４ヶ月間、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、または４８ヶ月間、室温で安定である。製剤はまた、概して、少なくとも１８ヶ月間もしくは約１８ヶ月間、冷蔵条件下（典型的には、約２℃〜約８℃の間）で、または少なくとも２１ヶ月間もしくは約２１ヶ月間、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５１、５４、５７、または６０ヶ月間、冷蔵条件下で安定であろう。
【００６５】
同種移植片拒絶反応を予防または阻害する方法
一態様では、本発明は、同種移植片のレシピエントによるその同種移植片の拒絶反応を、レシピエントを、ＦＨを含む組成物で治療することによって予防または阻害するための方法を提供する。上述の通り、ＦＨによる治療は、血漿由来または組み換えであるＦＨの１つ以上の変異体による治療を含むことができる。
【００６６】
同種移植片の拒絶反応はレシピエントに対して深刻な結果を有し得るため、同種移植片拒絶反応の予防は特に重要である。したがって、拒絶反応を予防するか、または拒絶反応の進行を阻害するための治療は、臓器移植の技術分野における主要な懸念事項である。
【００６７】
本発明の方法は、任意の臓器または組織の全体または一部を含む、任意の同種移植片の拒絶反応を予防または阻害するために使用することができる。例示的および非限定的な実施形態では、本明細書に説明される同種移植片拒絶反応を予防または阻害するための方法は、腎臓、心臓、肝臓、腸、膵臓、肺、皮膚移植片、骨移植片、弁、および骨髄などの同種移植片のために使用することができる。
【００６８】
さらなる態様では、同種移植片のレシピエントはまた、同種移植片拒絶反応を予防または阻害するために、ＦＨに加えて１つ以上の免疫抑制剤でも治療される。１つ以上の免疫抑制剤は、シロリムス（ラパマイシン）、ＦＫ５０６、シクロスポリン、およびタクロリムスを含むことができるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、レシピエントは、同種移植片拒絶反応を予防または阻害するためにＦＨ、ＦＫ５０６で、およびラパマイシンで治療される。ＦＨおよび１つ以上の免疫抑制剤による治療は、同種移植片の受容後、同時にまたは異なる時点で達成することができる。さらなる実施形態では、ＦＨおよび／または１つ以上の免疫抑制剤による治療は、本明細書にさらに詳細に説明される通り、同種移植片の受容後、一定期間周期的に反復される。
【００６９】
さらなる実施形態では、本発明に従う１つ以上の免疫抑制剤を伴うまたは伴わないＦＨによる治療は、臓器、臓器の一部、または組織を含むがこれらに限定されない、同種移植片の拒絶反応を予防または阻害するために使用することができる。さらなる例示的な実施形態では、同種移植片は、腎臓、心臓、肝臓、肺、膵臓、腸、皮膚移植片、骨移植片、弁、および骨髄であることができるが、これらに限定されない。
【００７０】
幾つかの態様では、本発明のＨ因子および／または免疫抑制剤組成物は、レシピエントに、静脈内、眼球内、皮下、および／または筋肉内手段によって投与することができる。さらなる態様では、本明細書のＨ因子および／または免疫抑制剤組成物は、全身的かまたは局所的かのいずれかで投与することができる。全身投与としては、経口、経皮、真皮下（ｓｕｂｄｅｒｍａｌ）、腹腔内、静脈内、皮下、経鼻、舌下、または直腸が挙げられるが、これらに限定されない。局所投与としては、移植前および／もしくは後の灌流、注射、もしくは同種移植片との他の接触を介した同種移植片への直接的な投与、または移植部位における投与（移植前および／または後）によるもの、または移植部位もしくはその付近に埋め込まれた持続送達デバイスを介した送達を挙げることができるが、これらに限定されない。
【００７１】
特定の実施形態では、本発明の方法は、抗体媒介性拒絶反応（ＡＭＲ）を予防または阻害する。さらなる実施形態では、本発明の方法は、細胞媒介性拒絶反応（ＣＭＲ）を予防または阻害する。またさらなる実施形態では、本発明の方法は、抗体および細胞媒介性拒絶反応の組み合わせを予防または阻害する。
【００７２】
さらなる態様では、１つ以上の免疫抑制剤を伴うまたは伴わないＦＨによる治療は、急性拒絶反応、特に急性抗体媒介性拒絶反応を予防または阻害するために、移植の直後に提供される。かかる方法では、治療は、同種移植片の移植の時点で開始され、同種移植片が正常に機能するまで継続される。同種移植片が正常に機能しているかを決定するための方法は、移植されている臓器または組織に依存することになり、かかる正常な機能の分析は、具体的な臓器の技術分野において周知である。例えば、同種移植片が腎臓である実施形態では、治療は、レシピエントが正常なクレアチニン値を示し、生検試験がＣ４ｄ陰性になるまで継続されるであろう。
【００７３】
またさらなる態様では、１つ以上の免疫抑制剤を伴うまたは伴わないＦＨによる治療は、移植の数週間または数ヶ月後に発生する遅延拒絶反応を予防または阻害するために提供される。かかる状況では、同種移植片は、移植直後は正常に機能するが、その後、新規の抗体産生のため低下する。本態様では、治療は、拒絶反応の最初の兆候が現れたときに開始され、同種移植片が再び正常に機能するまで継続されるであろう。繰り返すが、同種移植片が機能しているかを決定するための方法は、移植されている臓器または組織に依存することになり、当該技術分野において周知である。例えば、同種移植片が腎臓である実施形態では、治療は、レシピエントが正常なクレアチニン値を示し、生検試験がＣ４ｄ陰性になるまで継続されるであろう。
【００７４】
本明細書に述べられる同種移植片拒絶反応を予防または阻害するための方法のいずれかに関して、述べられるＨ因子は、血漿由来または組み換えであることができ、１つ以上の異なる変異体をさらに含むことができる（全長および切断型を含む）。例示的な実施形態では、同種移植片拒絶反応を予防または阻害するための方法において使用されるＨ因子は、図１２にＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１として本明細書に提供されるＵＳ７，７４５，３８９のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５を含む、ＵＳ７，７４５，３８９に説明される配列のいずれかに従う配列を含むＨ因子の組み換え保護的変異体を含む。さらなる実施形態では、組み換えＨ因子は、組み換えＨ因子が、ＵＳ７，７４５，３８９に説明される配列のいずれかに対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、および１００％の配列同一性を有する本発明の方法および組成物において使用される。またさらなる実施形態では、本発明において有用な組み換えＨ因子は、図１２にＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１として本明細書に提供されるＵＳ７，７４５，３８９のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５に対して、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、および１００％の配列同一性を有する。またさらなる実施形態では、本発明において有用な組み換えＨ因子は、約１〜１００、３〜９５、５〜９０、７〜８５、９〜８０、１１〜７５、１３〜７０、１５〜６５、１７〜６０、１９〜５５、２１〜５０、２３〜４５、２５〜４０、２７〜３５のアミノ酸置換を伴って、図１２に描写されるＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１を含む。Ｈ因子を利用する治療方法の以下の考察は、それらの変異体、例えば、本明細書に述べられる保護的変異体のうちの１つ以上などを含む、血漿由来または組み換えＨ因子を包含する。
【００７５】
レシピエントに提供されるＦＨの量は、変化することがあるが、概して、補体活性化を阻害するのに有効な範囲内である。補体阻害は、例えば、インビトロザイモサン分析、赤血球の溶解に関する分析、免疫複合体活性化分析、およびマンナン活性化分析を含む、当該技術分野において既知である任意の方法に基づいて評定することができる。幾つかの実施形態では、ＣＲ２−ＦＨは、以下のＦＨの特性のうちの１つ以上を有する：（１）Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）への結合、（２）Ｃ３ｂへの結合、（３）ヘパリンへの結合、（４）シアル酸への結合、（５）内皮細胞表面への結合、（６）細胞インテグリン受容体への結合、（７）病原体への結合、（８）Ｃ３ｂ補因子活性、（９）Ｃ３ｂ分解促進活性、および（１０）代替的補体経路の阻害。
【００７６】
さらなる例示的な実施形態では、使用されるＦＨの量は、約１〜２ｍｇ／ｍｌの血漿濃度を達成するのに有効な量である。またさらなる実施形態では、治療のために使用されるＦＨの量は、８６ｍｇ／ｋｇの範囲内である。ＦＨは、本明細書にさらに詳細に説明される通り、同種移植片の移植後に１回以上、数日間、数週間、または数ヶ月間の期間間隔の範囲で同種移植片のレシピエントに投与することができる。
【００７７】
１つ以上の免疫抑制剤がレシピエントに提供される実施形態では、１つ以上の免疫抑制剤の量もまた、変化することができるが、概して、同種移植片拒絶反応を阻害するのに有効な範囲内である。さらなる例示的な実施形態では、使用される免疫抑制剤の量は、約０．１〜１０ｍｇ／ｋｇの量である。１つ以上の免疫抑制剤は、本明細書にさらに詳細に説明される通り、同種移植片の移植後に１回以上、数日間、数週間、または数ヶ月間の期間間隔の範囲で同種移植片のレシピエントに投与することができる。
【００７８】
上記のいずれかに従って、同種移植片拒絶反応を予防するためにレシピエントに提供されるＦＨは、約０．０５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬの間の治療的に有効な用量で提供される。他の実施形態では、Ｈ因子は、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬの間の濃度で存在する。また他の実施形態では、Ｈ因子は、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬの間の濃度で存在する。別の実施形態では、Ｈ因子は、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約２ｍｇ／ｍＬの間の濃度で存在する。別の実施形態では、Ｈ因子は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２ｍｇ／ｍＬの間の濃度で存在する。また他の実施形態では、Ｈ因子は、約０．０１ｍｇ／ｍＬで、または約０．０２ｍｇ／ｍＬ、０．０３ｍｇ／ｍＬ、０．０４ｍｇ／ｍＬ、０．０５ｍｇ／ｍＬ、０．０６ｍｇ／ｍＬ、０．０７ｍｇ／ｍＬ、０．０８ｍｇ／ｍＬ、０．０９ｍｇ／ｍＬ、０．１ｍｇ／ｍＬ、０．２ｍｇ／ｍＬ、０．３ｍｇ／ｍＬ、０．４ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ、０．６ｍｇ／ｍＬ、０．７ｍｇ／ｍＬ、０．８ｍｇ／ｍＬ、０．９ｍｇ／ｍＬ、１．０ｍｇ／ｍＬ、１．１ｍｇ／ｍＬ、１．２ｍｇ／ｍＬ、１．３ｍｇ／ｍＬ、１．４ｍｇ／ｍＬ、１．５ｍｇ／ｍＬ、１．６ｍｇ／ｍＬ、１．７ｍｇ／ｍＬ、１．８ｍｇ／ｍＬ、１．９ｍｇ／ｍＬ、２．０ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ、３．０ｍｇ／ｍＬ、３．５ｍｇ／ｍＬ、４．０ｍｇ／ｍＬ、４．５ｍｇ／ｍＬ、５．０ｍｇ／ｍＬ、５．５ｍｇ／ｍＬ、６．０ｍｇ／ｍＬ、６．５ｍｇ／ｍＬ、７．０ｍｇ／ｍＬ、７．５ｍｇ／ｍＬ、８．０ｍｇ／ｍＬ、８．５ｍｇ／ｍＬ、９．０ｍｇ／ｍＬ、９．５ｍｇ／ｍＬ、１０．０ｍｇ／ｍＬ、またはそれ以上の濃度で存在することができる。さらなる実施形態では、Ｈ因子は、約０．１〜１５、０．３〜１４．５、０．５〜１４、０．７〜１３．５、０．９〜１３、１．１〜１２．５、１．３〜１２、１．５〜１１．５、１．７〜１１、１．９〜１０．５、２．１〜１０、２．３〜９．５、２．５〜９、２．７〜８．５、２．９〜８、３．１〜７．５、３．３〜７、３．５〜６．５、３．７〜６、３．９〜５．５、４．１〜５、４．３〜４．５ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で存在する。
【００７９】
一実施形態では、比較的純粋なＨ因子製剤の濃度は、分光法（すなわち、Ａ２８０にて測定される総タンパク質）または他のバルク決定（例えば、Ｂｒａｄｆｏｒｄ分析、銀染色、凍結乾燥粉末の重量など）によって決定することができる。他の実施形態では、Ｈ因子の濃度は、Ｈ因子ＥＬＩＳＡ分析によって決定することができる（例えば、ｍｇ／ｍＬ抗原）。
【００８０】
またさらなる実施形態では、本発明は、１０ｇ／Ｌ〜２５０ｇ／Ｌまたは約１０ｇ／Ｌ〜２５０ｇ／Ｌのタンパク質濃度を含む、水性Ｈ因子組成物を提供する。特定の実施形態では、Ｈ因子組成物のタンパク質濃度は、５０ｇ／Ｌ〜２００ｇ／Ｌもしくは約５０ｇ／Ｌ〜２００ｇ／Ｌ、または７０ｇ／Ｌ〜１５０ｇ／Ｌもしくは約７０ｇ／Ｌ〜１５０ｇ／Ｌ、または９０ｇ／Ｌ〜１２０ｇ／Ｌもしくは約９０ｇ／Ｌ〜１２０ｇ／Ｌ、または３０ｇ／Ｌ〜７０ｇ／Ｌもしくは約３０ｇ／Ｌ〜７０ｇ／Ｌ、または４０ｇ／Ｌ〜６０ｇ／Ｌもしくは約４０ｇ／Ｌ〜６０ｇ／Ｌ、あるいはこれらの範囲内の任意の好適な濃度、例えば、１０ｇ／Ｌもしくは約１０ｇ／Ｌ、または１５ｇ／Ｌもしくは約１５ｇ／Ｌ、２０ｇ／Ｌ、２５ｇ／Ｌ、３０ｇ／Ｌ、３５ｇ／Ｌ、４０ｇ／Ｌ、４５ｇ／Ｌ、５０ｇ／Ｌ、５５ｇ／Ｌ、６０ｇ／Ｌ、６５ｇ／Ｌ、７０ｇ／Ｌ、７５ｇ／Ｌ、８０ｇ／Ｌ、８５ｇ／Ｌ、９０ｇ／Ｌ、９５ｇ／Ｌ、１００ｇ／Ｌ、１０５ｇ／Ｌ、１１０ｇ／Ｌ、１１５ｇ／Ｌ、１２０ｇ／Ｌ、１２５ｇ／Ｌ、１３０ｇ／Ｌ、１３５ｇ／Ｌ、１４０ｇ／Ｌ、１４５ｇ／Ｌ、１５０ｇ／Ｌ、１５５ｇ／Ｌ、１６０ｇ／Ｌ、１６５ｇ／Ｌ、１７０ｇ／Ｌ、１７５ｇ／Ｌ、１８０ｇ／Ｌ、１８５ｇ／Ｌ、１９０ｇ／Ｌ、１９５ｇ／Ｌ、２００ｇ／Ｌ、２０５ｇ／Ｌ、２１０ｇ／Ｌ、２１５ｇ／Ｌ、２２０ｇ／Ｌ、２２５ｇ／Ｌ、２３０ｇ／Ｌ、２３５ｇ／Ｌ、２４０ｇ／Ｌ、２４５ｇ／Ｌ、２５０ｇ／Ｌ、またはそれ以上である。好ましい実施形態では、高いタンパク質濃度を有するＨ因子組成物はまた、高レベルの純度も有するであろう。一実施形態では、組成物中のタンパク質の少なくとも９０％は、Ｈ因子であろう。好ましい実施形態では、組成物中のタンパク質の少なくとも９５％は、Ｈ因子であろう。
【００８１】
さらなる実施形態では、Ｈ因子は、約０．０５ｍｇ／ｍＬおよび約１０ｍｇ／ｍＬのレシピエント内血漿レベル濃度をもたらす、治療的に有効な用量で提供される。他の実施形態では、Ｈ因子は、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬの間のレシピエント内血漿レベル濃度をもたらす、治療的に有効な用量で提供される。また他の実施形態では、Ｈ因子は、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬの間のレシピエント内血漿レベル濃度をもたらす、治療的に有効な用量で提供される。別の実施形態では、Ｈ因子は、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約２ｍｇ／ｍＬの間のレシピエント内血漿レベル濃度をもたらす、治療的に有効な用量で提供される。別の実施形態では、Ｈ因子は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２ｍｇ／ｍＬの間のレシピエント内血漿レベル濃度をもたらす、治療的に有効な用量で提供される。また他の実施形態では、Ｈ因子は、約０．０１ｍｇ／ｍＬ、または約０．０２ｍｇ／ｍＬ、０．０３ｍｇ／ｍＬ、０．０４ｍｇ／ｍＬ、０．０５ｍｇ／ｍＬ、０．０６ｍｇ／ｍＬ、０．０７ｍｇ／ｍＬ、０．０８ｍｇ／ｍＬ、０．０９ｍｇ／ｍＬ、０．１ｍｇ／ｍＬ、０．２ｍｇ／ｍＬ、０．３ｍｇ／ｍＬ、０．４ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ、０．６ｍｇ／ｍＬ、０．７ｍｇ／ｍＬ、０．８ｍｇ／ｍＬ、０．９ｍｇ／ｍＬ、１．０ｍｇ／ｍＬ、１．１ｍｇ／ｍＬ、１．２ｍｇ／ｍＬ、１．３ｍｇ／ｍＬ、１．４ｍｇ／ｍＬ、１．５ｍｇ／ｍＬ、１．６ｍｇ／ｍＬ、１．７ｍｇ／ｍＬ、１．８ｍｇ／ｍＬ、１．９ｍｇ／ｍＬ、２．０ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ、３．０ｍｇ／ｍＬ、３．５ｍｇ／ｍＬ、４．０ｍｇ／ｍＬ、４．５ｍｇ／ｍＬ、５．０ｍｇ／ｍＬ、５．５ｍｇ／ｍＬ、６．０ｍｇ／ｍＬ、６．５ｍｇ／ｍＬ、７．０ｍｇ／ｍＬ、７．５ｍｇ／ｍＬ、８．０ｍｇ／ｍＬ、８．５ｍｇ／ｍＬ、９．０ｍｇ／ｍＬ、９．５ｍｇ／ｍＬ、１０．０ｍｇ／ｍＬ、またはそれ以上の濃度の血漿濃度をもたらす。さらなる実施形態では、Ｈ因子は、約０．１〜１５、０．３〜１４．５、０．５〜１４、０．７〜１３．５、０．９〜１３、１．１〜１２．５、１．３〜１２、１．５〜１１．５、１．７〜１１、１．９〜１０．５、２．１〜１０、２．３〜９．５、２．５〜９、２．７〜８．５、２．９〜８、３．１〜７．５、３．３〜７、３．５〜６．５、３．７〜６、３．９〜５．５、４．１〜５、４．３〜４．５ｍｇ／ｍＬの範囲内のレシピエント内血漿レベル濃度をもたらす、治療的に有効な用量で提供される。血漿レベル濃度は、当該技術分野において既知である標準的分析を使用して決定することができる。
【００８２】
さらなる実施形態では、Ｈ因子は、約５０〜１５０ｍｇ／ｋｇの治療的に有効な用量で提供される。またさらなる実施形態では、Ｈ因子は、約５２〜１４５、５４〜１４０、５６〜１３５、５８〜１３０、６０〜１２５、６２〜１２０、６４〜１１５、６６〜１１０、６８〜１０５、７０〜１００、７２〜９５、７４〜９０、７６〜８７、７８〜８６、８０〜８５ｍｇ／ｋｇの治療的に有効な用量で提供される。またさらなる実施形態では、Ｈ因子は、約７０、７０．５、７１、７１．５、７２、７２．５、７３、７３．５、７４、７４．５、７５、７５．５、７６、７６．５、７７、７７．５、７８、７８．５、７９、７９．５、８０、８０．５、８１、８１．５、８２、８２．５、８３、８３．５、８４、８４．５、８５、８５．５、８６、８６．５、８７、８７．５、８８、８８．５、８９、８９．５、９０ｍｇ／ｋｇの治療的に有効な用量で提供される。
【００８３】
さらなる実施形態では、本発明は、レシピエントにＨ因子および１つ以上の免疫抑制剤の両方を投与することによって、同種移植片拒絶反応を予防または阻害する方法を提供する。ＦＨおよび１つ以上の免疫抑制剤は、移植前および／後、同時にまたは異なる時点でレシピエントに投与することができる。ＦＨおよび１つ以上の免疫抑制剤は、同一の組成物中で、または異なる組成物としてさらに投与することができる。理解されるであろう通り、ＦＨに関して上述される濃度ならびに用量の量および範囲のいずれも、１つ以上の免疫抑制剤に関して本明細書に説明される濃度ならびに用量の量および範囲のいずれかとの任意の組み合わせでレシピエントに提供することができる。
【００８４】
さらなる実施形態では、および上述のいずれかに従って、１つ以上の免疫抑制剤（シロリムス（ラパマイシン）、ＦＫ５０６（ＦＫ）、シクロスポリン、およびタクロリムスを含むがこれらに限定されない）は、約．１〜１０μＭの濃度で提供される。さらなる実施形態では、免疫抑制剤は、約０．１〜１０、０．２〜９．５、０．３〜９、０．４〜８．５、０．５〜８、０．６〜７．５、０．７〜７、０．８〜６．５、０．９〜６、１〜５．５、１．１〜５、１．２〜４．５、１．３〜４、１．４〜３．５、１．５〜３、１．６〜２．５、１．７〜２μＭの濃度で提供される。またさらなる実施形態では、免疫抑制剤は、約０．１、０．３、０．５、０．７、０．９、１．１、１．３、１．５、１．７、１．９、２．１、２．３、２．５、２．７、２．９、３．１、３．３、３．５、３．７、３．９、４．１、４．３、４．５、４．７、４．９、５．１、５．３、５．５、５．７、５．９、６．１、６．３、６．５、６．７、６．９、７．１、７．３、７．５、７．７、７．９、８．１、８．３、８．５、８．７、８．９、９．１、９．３、９．５、９．７、９．９、１０．１、１０．３、１０．５、１０．７、１０．９、１１．１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５、および１５μＭの濃度で提供される。
【００８５】
またさらなる実施形態では、１つ以上の免疫抑制剤（シロリムス（ラパマイシン）、ＦＫ５０６（ＦＫ）、シクロスポリン、およびタクロリムスを含むがこれらに限定されない）は、約０．１〜１０ｍｇ／ｋｇの濃度でレシピエントに提供される。さらなる実施形態では、免疫抑制剤は、約０．１〜１０、０．２〜９．５、０．３〜９、０．４〜８．５、０．５〜８、０．６〜７．５、０．７〜７、０．８〜６．５、０．９〜６、１〜５．５、１．１〜５、１．２〜４．５、１．３〜４、１．４〜３．５、１．５〜３、１．６〜２．５、１．７〜２ｍｇ／ｋｇの濃度で提供される。またさらなる実施形態では、免疫抑制剤は、約０．１、０．３、０．５、０．７、０．９、１．１、１．３、１．５、１．７、１．９、２．１、２．３、２．５、２．７、２．９、３．１、３．３、３．５、３．７、３．９、４．１、４．３、４．５、４．７、４．９、５．１、５．３、５．５、５．７、５．９、６．１、６．３、６．５、６．７、６．９、７．１、７．３、７．５、７．７、７．９、８．１、８．３、８．５、８．７、８．９、９．１、９．３、９．５、９．７、９．９、１０．１、１０．３、１０．５、１０．７、１０．９、１１．１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５、および１５ｍｇ／ｋｇの濃度で提供される。
【００８６】
またさらなる実施形態では、ＦＫ５０６が、同種移植片拒絶反応を予防または阻害するためにＦＨに加えてレシピエントに投与される。またさらなる実施形態では、ＦＫ５０６は、約．１〜１０μＭの濃度でレシピエントに投与される。さらなる実施形態では、ＦＫ５０６は、約０．１〜１０、０．２〜９．５、０．３〜９、０．４〜８．５、０．５〜８、０．６〜７．５、０．７〜７、０．８〜６．５、０．９〜６、１〜５．５、１．１〜５、１．２〜４．５、１．３〜４、１．４〜３．５、１．５〜３、１．６〜２．５、１．７〜２μＭの濃度で提供される。またさらなる実施形態では、ＦＫ５０６は、約０．１、０．３、０．５、０．７、０．９、１．１、１．３、１．５、１．７、１．９、２．１、２．３、２．５、２．７、２．９、３．１、３．３、３．５、３．７、３．９、４．１、４．３、４．５、４．７、４．９、５．１、５．３、５．５、５．７、５．９、６．１、６．３、６．５、６．７、６．９、７．１、７．３、７．５、７．７、７．９、８．１、８．３、８．５、８．７、８．９、９．１、９．３、９．５、９．７、９．９、１０．１、１０．３、１０．５、１０．７、１０．９、１１．１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５、および１５μＭの濃度で提供される。またさらなるでは、ＦＫ５０６は、約０．１〜１０ｍｇ／ｋｇの濃度で提供される。さらなる実施形態では、ＦＫ５０６は、約０．１〜１０、０．２〜９．５、０．３〜９、０．４〜８．５、０．５〜８、０．６〜７．５、０．７〜７、０．８〜６．５、０．９〜６、１〜５．５、１．１〜５、１．２〜４．５、１．３〜４、１．４〜３．５、１．５〜３、１．６〜２．５、１．７〜２ｍｇ／ｋｇの濃度で提供される。またさらなる実施形態では、ＦＫ５０６は、約０．１、０．３、０．５、０．７、０．９、１．１、１．３、１．５、１．７、１．９、２．１、２．３、２．５、２．７、２．９、３．１、３．３、３．５、３．７、３．９、４．１、４．３、４．５、４．７、４．９、５．１、５．３、５．５、５．７、５．９、６．１、６．３、６．５、６．７、６．９、７．１、７．３、７．５、７．７、７．９、８．１、８．３、８．５、８．７、８．９、９．１、９．３、９．５、９．７、９．９、１０．１、１０．３、１０．５、１０．７、１０．９、１１．１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５、および１５ｍｇ／ｋｇの濃度で提供される。またさらなる実施形態では、ＦＫ５０６は、約１〜３０、３．５〜２９．５、４〜２９、４．５〜２８．５、５〜２８、５．５〜２７．５、６〜２７、６．５〜２６．５、７〜２６、７．５〜２５．５、８〜２５、８．５〜２４．５、９〜２４、９．５〜２３．５、１０〜２３、１０．５〜２２．５、１１〜２２、１１．５〜２１．５、１２〜２１、１２．５〜２０．５、１３〜２０、１３．５〜１９．５、１４〜１９、１４．５〜１８．５、１５〜１８、１５．５〜，７．５、１６〜１７、２〜４、２．５〜３．５、３〜３．５ｍｇ／ｋｇの濃度で提供される。またさらなる実施形態では、ＦＫ５０６は、約１、１．２、１．４、１．６、１．８、２、２．２、２．４、２．６、２．８、３、３．２、３．４、３．６、３．８、４、４．２、４．４、４．６、４．８、５、５．２、５．４、５．６、５．８、６、６．２、６．４、６．６、６．８、７、７．２、７．４、７．６、７．８、８、８．２、８．４、８．６、８．８、９、９．２、９．４、９．６、９．８、１０、１０．２、１０．４、１０．６、１０．８、１１、１１．２、１１．４、１１．６、１１．８、１２ｍｇ／ｋｇの濃度で提供される。
【００８７】
またさらなる実施形態では、ラパマイシンが、同種移植片拒絶反応を予防または阻害するためにＦＨに加えてレシピエントに投与される。またさらなる実施形態では、ラパマイシンは、約．１〜１０μＭの濃度でレシピエントに投与される。さらなる実施形態では、ラパマイシンは、約０．１〜１０、０．２〜９．５、０．３〜９、０．４〜８．５、０．５〜８、０．６〜７．５、０．７〜７、０．８〜６．５、０．９〜６、１〜５．５、１．１〜５、１．２〜４．５、１．３〜４、１．４〜３．５、１．５〜３、１．６〜２．５、１．７〜２μＭの濃度で提供される。またさらなる実施形態では、ラパマイシンは、約０．１、０．３、０．５、０．７、０．９、１．１、１．３、１．５、１．７、１．９、２．１、２．３、２．５、２．７、２．９、３．１、３．３、３．５、３．７、３．９、４．１、４．３、４．５、４．７、４．９、５．１、５．３、５．５、５．７、５．９、６．１、６．３、６．５、６．７、６．９、７．１、７．３、７．５、７．７、７．９、８．１、８．３、８．５、８．７、８．９、９．１、９．３、９．５、９．７、９．９、１０．１、１０．３、１０．５、１０．７、１０．９、１１．１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５、および１５μＭの濃度で提供される。またさらなる実施形態では、ラパマイシンは、約０．１〜１０ｍｇ／ｋｇの濃度で提供される。またさらなる実施形態では、ラパマイシンは、約０．１〜１０、０．２〜９．５、０．３〜９、０．４〜８．５、０．５〜８、０．６〜７．５、０．７〜７、０．８〜６．５、０．９〜６、１〜５．５、１．１〜５、１．２〜４．５、１．３〜４、１．４〜３．５、１．５〜３、１．６〜２．５、１．７〜２、０．１〜０．９、０．２〜０．８、０．３〜０．７、０．４〜０．６ｍｇ／ｋｇの濃度で提供される。またさらなる実施形態では、ラパマイシンは、約０．１、０．３、０．５、０．７、０．９、１．１、１．３、１．５、１．７、１．９、２．１、２．３、２．５、２．７、２．９、３．１、３．３、３．５、３．７、３．９、４．１、４．３、４．５、４．７、４．９、５．１、５．３、５．５、５．７、５．９、６．１、６．３、６．５、６．７、６．９、７．１、７．３、７．５、７．７、７．９、８．１、８．３、８．５、８．７、８．９、９．１、９．３、９．５、９．７、９．９、１０．１、１０．３、１０．５、１０．７、１０．９、１１．１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５、および１５ｍｇ／ｋｇの濃度で提供される。
【００８８】
さらなる実施形態では、および上記のいずれかに従って、本発明は、レシピエントをＨ因子、ＦＫ５０６、およびラパマイシンで治療することによって、同種移植片拒絶反応を予防または阻害する方法を提供する。さらなる実施形態では、Ｈ因子、ＦＫ５０６、およびラパマイシンの濃度が上記に説明される組み合わせの任意の組み合わせである、この併用療法が提供される。例示的な実施形態では、Ｈ因子は、約０．０５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬの間の治療的に有効な用量で提供され、ＦＫ５０６およびラパマイシンは、表Ａに変形１〜２０として列挙される用量で提供される。理解されるであろう通り、Ｈ因子、ＦＫ５０６、およびラパマイシンは、同一の組成物中または別個の組成物中でレシピエントに提供することができ、また移植前および／または後、同時にまたは異なる時点でレシピエントに投与することもできる。
【００８９】
またさらなる実施形態では、Ｈ因子は、０．１〜１０、１〜９、２〜８、３〜７、４〜６、１〜２ｍｇ／ｍＬの範囲のレシピエント内血漿レベル濃度をもたらす、治療的に有効な用量で提供され、ＦＫ５０６およびラパマイシンは、表Ａにバリエーション１〜２０として列挙される用量で提供される。上述の通り、Ｈ因子、ＦＫ５０６、およびラパマイシンは、同一の組成物中または別個の組成物中でレシピエントに提供することができ、また移植前および／または後、同時にまたは異なる時点でレシピエントに投与することもできる。
【００９０】
またさらなる実施形態では、Ｈ因子は、約５０〜１５０ｍｇ／ｋｇの範囲内で提供され、ＦＫ５０６およびラパマイシンは、表Ａにバリエーション１〜２０として列挙される用量で提供される。またさらなる実施形態では、Ｈ因子は、約７０、７０．５、７１、７１．５、７２、７２．５、７３、７３．５、７４、７４．５、７５、７５．５、７６、７６．５、７７、７７．５、７８、７８．５、７９、７９．５、８０、８０．５、８１、８１．５、８２、８２．５、８３、８３．５、８４、８４．５、８５、８５．５、８６、８６．５、８７、８７．５、８８、８８．５、８９、８９．５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０ｍｇ／ｋｇの用量で提供され、ＦＫ５０６およびラパマイシンは、表Ａにバリエーション１〜２０として列挙される用量で提供される。上述の通り、Ｈ因子、ＦＫ５０６、およびラパマイシンは、同一の組成物中または別個の組成物中でレシピエントに提供することができ、また移植前および／または後、同時にまたは異なる時点でレシピエントに投与することもできる。
（表Ａ）本発明の方法における使用のためのＦＫ５０６およびラパマイシン濃度の例示的な実施形態
0006484215.tif 000003
＊Ｖａｒ．＝バリエーション
【００９１】
上述の通り、Ｈ因子、ＦＫ５０６、およびラパマイシンのいずれか１つは、全身的または局所的に投与することができる。さらなる実施形態では、Ｈ因子、ＦＫ５０６、およびラパマイシンは、静脈内、皮下、筋肉内、および経口手段から独立して選択される方法によって投与することができる。３つ全ての療法がレシピエントに提供されるさらなる例示的な実施形態では、Ｈ因子は、静脈内または腹腔内に投与することができ、ＦＫ５０６は、皮下に投与することができ、ラパマイシンは、静脈内または腹腔内に投与することができる。理解されるであろう通り、これらの投与のいずれも、本明細書に述べられる用量および濃度のいずれかを包含することができる。
【００９２】
本明細書に提供される同種移植片拒絶反応を予防または阻害する方法は、移植後に単回投与または反復間隔で、１つ以上の追加の免疫抑制剤を伴ってまたは伴わずにＨ因子を投与することをさらに含むことができる。さらなる実施形態では、Ｈ因子および／または１つ以上の免疫抑制剤（ＦＫ５０６および／またはラパマイシンを含むがこれらに限定されない）は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０日毎にレシピエントに投与される。さらなる例示的な実施形態では、Ｈ因子および／または１つ以上の免疫抑制剤（ＦＫ５０６および／またはラパマイシンを含むがこれらに限定されない）は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２週毎にレシピエントに投与される。さらなる例示的な実施形態では、Ｈ因子および／または１つ以上の免疫抑制剤（ＦＫ５０６および／またはラパマイシンを含むがこれらに限定されない）は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２ヶ月毎にレシピエントに投与される。理解されるであろう通り、療法の組み合わせがレシピエントに提供される実施形態では、異なる療法が、同種移植片の移植後、異なる時間間隔でレシピエントに提供することができる。例えば、例示的な実施形態では、Ｈ因子は、毎日レシピエントに提供され、ＦＫ５０６およびラパマイシンは、表６のバリエーション２１〜５６によって表される用量投与のいずれかでレシピエントに提供される。さらなる例示的な実施形態では、Ｈ因子は、１日おきにレシピエントに提供され、ＦＫ５０６およびラパマイシンは、表６のバリエーション２１〜５６によって表される用量投与のいずれかでレシピエントに提供される。またさらなる例示的な実施形態では、Ｈ因子は、約１〜２ｍｇ／ｍＬのＨ因子の血漿レベルを維持するような濃度および間隔でレシピエントに提供され、ＦＫ５０６およびラパマイシンは、表６のバリエーション２１〜５６によって表される用量投与のいずれかでレシピエントに提供される。
（表Ｂ）ＦＫ５０６およびラパマイシン用量投与の例示的な実施形態
0006484215.tif 000004
＊Ｖａｒ．＝バリエーション
【００９３】
またさらなる実施形態では、および上記のいずれかに従って、１つ以上の免疫抑制剤の追加の投与を伴ってまたは伴わないＨ因子の投与は、レシピエントが同種移植片を有している時間の長さに応じて、異なる間隔で提供される。例えば、幾つかの例示的な実施形態では、Ｈ因子は、術後日（ＰＯＤ）１４まで１日おきに、その後少なくともＰＯＤ６０まで週に２回提供される。さらなる実施形態では、Ｈ因子は、ＰＯＤ１４まで１日おきに、その後少なくともＰＯＤ６０まで週に２回提供され、ＦＫ５０６は、ＰＯＤ１０まで毎日、その後少なくともＰＯＤ６０まで１日おきに提供される。またさらなる実施形態では、Ｈ因子は、ＰＯＤ１４まで１日おきに、その後少なくともＰＯＤ６０まで週に２回提供され、ＦＫ５０６は、ＰＯＤ１０まで毎日、その後少なくともＰＯＤ６０まで１日おきに提供され、ラパマイシンは、ＰＯＤ１０まで毎日提供される。
【００９４】
治療計画のさらなる例示的な実施形態は、表Ｃに提供される−Ｈ因子または１つ以上の免疫抑制剤のいずれか１つは、表Ｃのバリエーション５７〜８４によって表される間隔および時間の長さの任意の組み合わせで提供することができる。
（表Ｃ）治療計画の例示的な実施形態
0006484215.tif 000005
＊Ｖａｒ．＝バリエーション
【００９５】
さらなる実施形態では、および上記のいずれかに従って、本明細書に述べられるＨ因子および／または免疫抑制剤のうちの１つ以上は、同種移植片の移植後にレシピエントに投与されることに加えてもよく、また移植前に、レシピエントもしくは同種移植片のいずれか、またはレシピエントもしくは同種移植片の両方に投与されてもよい。
【００９６】
関節リウマチを治療する方法
一態様では、本発明は、対象における関節リウマチを、その対象に、ＦＨを含む組成物を投与することによって治療するための方法を提供する。上述の通り、対象を治療するために使用されるＦＨは、ＦＨの１つ以上の変異体を含むことができ、血漿由来または組み換えであることができる。
【００９７】
特定の実施形態では、本明細書に説明される方法に従ってＦＨを対象に投与することは、対象における関節炎を低減する。さらなる実施形態では、対象に投与されるＦＨの量および／またはＦＨが投与される時間の長さは、対象における関節炎を低減するのに有効な量である。関節炎を評価および測定する方法は、当該技術分野において既知であり、非限定的な例では、画像化法および炎症の血液マーカーの測定が挙げられる。画像化法としては、Ｘ線、ＰＥＴスキャン、マイクロＣＴ、ＭＲＩなどが挙げられるが、これらに限定されない。炎症の血液マーカーとしては、赤血球沈降速度、ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、アルブミン、コレステロール、および血漿粘度が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９８】
さらなる実施形態では、本明細書に説明される方法に従ってＦＨを対象に投与することは、初期の炎症応答を阻害する。さらなる実施形態では、本明細書に説明される方法に従って対象にＦＨを投与することは、既に進行中である炎症応答の解消を促進する。またさらなる実施形態では、対象に投与されるＦＨの量および／またはＦＨが投与される時間の長さは、対象における初期の炎症応答を阻害する、および／または炎症応答の解消を促進するのに有効な量である。
【００９９】
またさらなる実施形態では、本明細書に説明される方法に従って対象にＦＨを投与することは、対象における外骨腫（骨上の軟骨組織の伸長）の低減をもたらす。またさらなる実施形態では、対象に投与されるＦＨの量および／またはＦＨが投与される時間の長さは、対象における外骨腫を低減するのに有効な量である。
【０１００】
さらなる実施形態では、本明細書に説明される方法に従って対象にＦＨを投与することは、ＦＨを受容していない対象と比較して、軟骨の損傷の低減をもたらす。またさらなる実施形態では、対象に投与されるＦＨの量および／またはＦＨが投与される時間の長さは、ＦＨを受容していない対象と比較して、対象における軟骨の損傷を低減するのに有効な量である。
【０１０１】
本明細書に述べられる関節リウマチを予防または治療するための方法のいずれかに関して、述べられるＨ因子は、血漿由来または組み換えであることができ、１つ以上の異なる変異体をさらに含むことができる（全長および切断型を含む）。例示的な実施形態では、関節リウマチを治療するために使用されるＨ因子は、図１２にＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１として本明細書に提供されるＵＳ７，７４５，３８９のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５を含む、ＵＳ７，７４５，３８９に説明される配列のいずれかに従う配列を含む１つ以上のＨ因子の組み換え保護的変異体を含む。さらなる実施形態では、その組み換えＨ因子が、ＵＳ７，７４５，３８９に説明される配列のいずれかに対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、および１００％の配列同一性を有する組み換えＨ因子が、対象における関節リウマチを治療するために使用される。またさらなる実施形態では、本発明において有用な組み換えＨ因子は、図１２にＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１として本明細書に提供されるＵＳ７，７４５，３８９のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５に対して、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、および１００％の配列同一性を有する。またさらなる実施形態では、本発明の方法に従って関節リウマチを治療するために使用される組み換えＨ因子は、約１〜１００、３〜９５、５〜９０、７〜８５、９〜８０、１１〜７５、１３〜７０、１５〜６５、１７〜６０、１９〜５５、２１〜５０、２３〜４５、２５〜４０、２７〜３５のアミノ酸置換を伴って、図１２に描写されるＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１を含む。Ｈ因子を利用する治療方法の以下の考察は、それらの変異体、例えば、本明細書に述べられる保護的変異体のうちの１つ以上などを含む、血漿由来または組み換えＨ因子を包含する。
【０１０２】
さらなる実施形態では、対象に投与されるＦＨの量は、上記に説明される通り、炎症、外骨腫、または軟骨の損傷を低減するのに有効な量である。またさらなる実施形態では、同種移植片拒絶反応の予防または阻害に関して上述される通り、関節リウマチを有する対象に投与されるＦＨの量は、変化することがあるが、概して、補体活性化を阻害するのに有効な範囲内である。補体阻害は、例えば、インビトロザイモサン分析、赤血球の溶解に関する分析、免疫複合体活性化分析、およびマンナン活性化分析を含む、当該技術分野において既知である任意の方法に基づいて評定することができる。幾つかの実施形態では、ＣＲ２−ＦＨは、以下のＦＨの特性のうちの１つ以上を有する：（１）Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）への結合、（２）Ｃ３ｂへの結合、（３）ヘパリンへの結合、（４）シアル酸への結合、（５）内皮細胞表面への結合、（６）細胞インテグリン受容体への結合、（７）病原体への結合、（８）Ｃ３ｂ補因子活性、（９）Ｃ３ｂ分解促進活性、および（１０）代替的補体経路の阻害。
【０１０３】
さらなる例示的な実施形態では、使用されるＦＨの量は、約１〜２ｍｇ／ｍｌの血漿濃度を達成するのに有効な量である。さらなる実施形態では、治療のために使用されるＦＨの量は、約８６ｍｇ／ｋｇである。ＦＨは、本明細書にさらに詳細に説明される通り、数日、数週間、または数ヶ月の期間間隔の範囲で１回以上、対象に投与することができる。
【０１０４】
本発明の幾つかの態様では、Ｈ因子は、レシピエントに、静脈内、眼球内、皮下、および／または筋肉内手段によって投与することができる。さらなる態様では、本明細書のＨ因子および／または免疫抑制剤組成物は、関節リウマチを治療するために全身的にかまたは局所的にかのいずれかで投与することができる。全身投与としては、経口、経皮、真皮下、腹腔内、静脈内、皮下、経鼻、舌下、または直腸が挙げられるが、これらに限定されない。局所投与としては、灌流、注射（関節内注射を含む）、もしくは１つ以上の関節との他の接触を介した１つ以上の関節への直接的な、または関節リウマチによって影響を受ける１つ以上の関節もしくはその付近に埋め込まれた持続送達デバイスを介した投与を挙げることができるが、これらに限定されない。関節への局所投与としては、手、足、頸椎、肩、および膝の関節が挙げられるがこれらに限定されない、関節リウマチによって特に影響を受ける任意の関節への投与を挙げることができる。
【０１０５】
上記のいずれかに従って、関節リウマチを治療するためにレシピエントに提供されるＦＨは、約０．０５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬの間の治療的に有効な用量である。他の実施形態では、Ｈ因子は、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬの間の濃度で投与される。また他の実施形態では、Ｈ因子は、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬの間の濃度で投与される。別の実施形態では、Ｈ因子は、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約２ｍｇ／ｍＬの間の濃度で投与される。別の実施形態では、Ｈ因子は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２ｍｇ／ｍＬの間の濃度で投与される。また他の実施形態では、Ｈ因子は、約０．０１ｍｇ／ｍＬ、または約０．０２ｍｇ／ｍＬ、０．０３ｍｇ／ｍＬ、０．０４ｍｇ／ｍＬ、０．０５ｍｇ／ｍＬ、０．０６ｍｇ／ｍＬ、０．０７ｍｇ／ｍＬ、０．０８ｍｇ／ｍＬ、０．０９ｍｇ／ｍＬ、０．１ｍｇ／ｍＬ、０．２ｍｇ／ｍＬ、０．３ｍｇ／ｍＬ、０．４ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ、０．６ｍｇ／ｍＬ、０．７ｍｇ／ｍＬ、０．８ｍｇ／ｍＬ、０．９ｍｇ／ｍＬ、１．０ｍｇ／ｍＬ、１．１ｍｇ／ｍＬ、１．２ｍｇ／ｍＬ、１．３ｍｇ／ｍＬ、１．４ｍｇ／ｍＬ、１．５ｍｇ／ｍＬ、１．６ｍｇ／ｍＬ、１．７ｍｇ／ｍＬ、１．８ｍｇ／ｍＬ、１．９ｍｇ／ｍＬ、２．０ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ、３．０ｍｇ／ｍＬ、３．５ｍｇ／ｍＬ、４．０ｍｇ／ｍＬ、４．５ｍｇ／ｍＬ、５．０ｍｇ／ｍＬ、５．５ｍｇ／ｍＬ、６．０ｍｇ／ｍＬ、６．５ｍｇ／ｍＬ、７．０ｍｇ／ｍＬ、７．５ｍｇ／ｍＬ、８．０ｍｇ／ｍＬ、８．５ｍｇ／ｍＬ、９．０ｍｇ／ｍＬ、９．５ｍｇ／ｍＬ、１０．０ｍｇ／ｍＬ、またはそれ以上の濃度で投与される。さらなる実施形態では、Ｈ因子は、約０．１〜１５、０．３〜１４．５、０．５〜１４、０．７〜１３．５、０．９〜１３、１．１〜１２．５、１．３〜１２、１．５〜１１．５、１．７〜１１、１．９〜１０．５、２．１〜１０、２．３〜９．５、２．５〜９、２．７〜８．５、２．９〜８、３．１〜７．５、３．３〜７、３．５〜６．５、３．７〜６、３．９〜５．５、４．１〜５、４．３〜４．５ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度で投与される。
【０１０６】
またさらなる実施形態では、１０ｇ／Ｌ〜２５０ｇ／Ｌまたは約１０ｇ／Ｌ〜２５０ｇ／Ｌのタンパク質濃度を含む水性Ｈ因子組成物が、関節リウマチの治療のために対象に投与される。特定の実施形態では、Ｈ因子組成物のタンパク質濃度は、５０ｇ／Ｌ〜２００ｇ／Ｌもしくは約５０ｇ／Ｌ〜２００ｇ／Ｌ、または７０ｇ／Ｌ〜１５０ｇ／Ｌもしくは約７０ｇ／Ｌ〜１５０ｇ／Ｌ、または９０ｇ／Ｌ〜１２０ｇ／Ｌもしくは約９０ｇ／Ｌ〜１２０ｇ／Ｌ、または３０ｇ／Ｌ〜７０ｇ／Ｌもしくは約３０ｇ／Ｌ〜７０ｇ／Ｌ、または４０ｇ／Ｌ〜６０ｇ／Ｌもしくは約４０ｇ／Ｌ〜６０ｇ／Ｌ、あるいはこれらの範囲内の任意の好適な濃度、例えば、１０ｇ／Ｌもしくは約１０ｇ／Ｌ、または１５ｇ／Ｌもしくは約１５ｇ／Ｌ、２０ｇ／Ｌ、２５ｇ／Ｌ、３０ｇ／Ｌ、３５ｇ／Ｌ、４０ｇ／Ｌ、４５ｇ／Ｌ、５０ｇ／Ｌ、５５ｇ／Ｌ、６０ｇ／Ｌ、６５ｇ／Ｌ、７０ｇ／Ｌ、７５ｇ／Ｌ、８０ｇ／Ｌ、８５ｇ／Ｌ、９０ｇ／Ｌ、９５ｇ／Ｌ、１００ｇ／Ｌ、１０５ｇ／Ｌ、１１０ｇ／Ｌ、１１５ｇ／Ｌ、１２０ｇ／Ｌ、１２５ｇ／Ｌ、１３０ｇ／Ｌ、１３５ｇ／Ｌ、１４０ｇ／Ｌ、１４５ｇ／Ｌ、１５０ｇ／Ｌ、１５５ｇ／Ｌ、１６０ｇ／Ｌ、１６５ｇ／Ｌ、１７０ｇ／Ｌ、１７５ｇ／Ｌ、１８０ｇ／Ｌ、１８５ｇ／Ｌ、１９０ｇ／Ｌ、１９５ｇ／Ｌ、２００ｇ／Ｌ、２０５ｇ／Ｌ、２１０ｇ／Ｌ、２１５ｇ／Ｌ、２２０ｇ／Ｌ、２２５ｇ／Ｌ、２３０ｇ／Ｌ、２３５ｇ／Ｌ、２４０ｇ／Ｌ、２４５ｇ／Ｌ、２５０ｇ／Ｌ、またはそれ以上である。好ましい実施形態では、高いタンパク質濃度を有するＨ因子組成物はまた、高レベルの純度も有するであろう。一実施形態では、組成物中のタンパク質の少なくとも９０％は、Ｈ因子であろう。好ましい実施形態では、組成物中のタンパク質の少なくとも９５％は、Ｈ因子であろう。
【０１０７】
さらなる実施形態では、Ｈ因子は、約０．０５ｍｇ／ｍＬおよび約１０ｍｇ／ｍＬのレシピエント内血漿レベル濃度をもたらす治療的に有効な用量で、関節リウマチの治療のために提供される。他の実施形態では、Ｈ因子は、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬの間のレシピエント内血漿レベル濃度をもたらす、治療的に有効な用量で提供される。また他の実施形態では、Ｈ因子は、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬの間のレシピエント内血漿レベル濃度をもたらす、治療的に有効な用量で提供される。別の実施形態では、Ｈ因子は、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約２ｍｇ／ｍＬの間のレシピエント内血漿レベル濃度をもたらす、治療的に有効な用量で提供される。別の実施形態では、Ｈ因子は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２ｍｇ／ｍＬの間のレシピエント内血漿レベル濃度をもたらす、治療的に有効な用量で提供される。また他の実施形態では、Ｈ因子は、約０．０１ｍｇ／ｍＬ、または約０．０２ｍｇ／ｍＬ、０．０３ｍｇ／ｍＬ、０．０４ｍｇ／ｍＬ、０．０５ｍｇ／ｍＬ、０．０６ｍｇ／ｍＬ、０．０７ｍｇ／ｍＬ、０．０８ｍｇ／ｍＬ、０．０９ｍｇ／ｍＬ、０．１ｍｇ／ｍＬ、０．２ｍｇ／ｍＬ、０．３ｍｇ／ｍＬ、０．４ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ、０．６ｍｇ／ｍＬ、０．７ｍｇ／ｍＬ、０．８ｍｇ／ｍＬ、０．９ｍｇ／ｍＬ、１．０ｍｇ／ｍＬ、１．１ｍｇ／ｍＬ、１．２ｍｇ／ｍＬ、１．３ｍｇ／ｍＬ、１．４ｍｇ／ｍＬ、１．５ｍｇ／ｍＬ、１．６ｍｇ／ｍＬ、１．７ｍｇ／ｍＬ、１．８ｍｇ／ｍＬ、１．９ｍｇ／ｍＬ、２．０ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ、３．０ｍｇ／ｍＬ、３．５ｍｇ／ｍＬ、４．０ｍｇ／ｍＬ、４．５ｍｇ／ｍＬ、５．０ｍｇ／ｍＬ、５．５ｍｇ／ｍＬ、６．０ｍｇ／ｍＬ、６．５ｍｇ／ｍＬ、７．０ｍｇ／ｍＬ、７．５ｍｇ／ｍＬ、８．０ｍｇ／ｍＬ、８．５ｍｇ／ｍＬ、９．０ｍｇ／ｍＬ、９．５ｍｇ／ｍＬ、１０．０ｍｇ／ｍＬ、またはそれ以上の濃度の血漿濃度をもたらす。さらなる実施形態では、Ｈ因子は、約０．１〜１５、０．３〜１４．５、０．５〜１４、０．７〜１３．５、０．９〜１３、１．１〜１２．５、１．３〜１２、１．５〜１１．５、１．７〜１１、１．９〜１０．５、２．１〜１０、２．３〜９．５、２．５〜９、２．７〜８．５、２．９〜８、３．１〜７．５、３．３〜７、３．５〜６．５、３．７〜６、３．９〜５．５、４．１〜５、４．３〜４．５ｍｇ／ｍＬの範囲内のレシピエント内血漿レベル濃度をもたらす、治療的に有効な用量で提供される。血漿レベル濃度は、当該技術分野において既知である標準的分析を使用して決定することができる。
【０１０８】
さらなる実施形態では、Ｈ因子は、関節リウマチの治療のために約５０〜１５０ｍｇ／ｋｇの治療的に有効な用量で提供される。またさらなる実施形態では、Ｈ因子は、約５２〜１４５、５４〜１４０、５６〜１３５、５８〜１３０、６０〜１２５、６２〜１２０、６４〜１１５、６６〜１１０、６８〜１０５、７０〜１００、７２〜９５、７４〜９０、７６〜８７、７８〜８６、８０〜８５ｍｇ／ｋｇの治療的に有効な用量で提供される。またさらなる実施形態では、Ｈ因子は、約７０、７０．５、７１、７１．５、７２、７２．５、７３、７３．５、７４、７４．５、７５、７５．５、７６、７６．５、７７、７７．５、７８、７８．５、７９、７９．５、８０、８０．５、８１、８１．５、８２、８２．５、８３、８３．５、８４、８４．５、８５、８５．５、８６、８６．５、８７、８７．５、８８、８８．５、８９、８９．５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０ｍｇ／ｋｇの治療的に有効な用量で提供される。
【０１０９】
本明細書に提供される関節リウマチを治療する方法は、単回投与または反復間隔でＨ因子を投与することをさらに含む。さらなる実施形態では、Ｈ因子は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０日毎にレシピエントに投与される。さらなる例示的な実施形態では、Ｈ因子は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２週に１回、レシピエントに投与される。さらなる例示的な実施形態では、Ｈ因子は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２ヶ月毎にレシピエントに投与される。
【０１１０】
またさらなる実施形態では、および上記のいずれかに従って、Ｈ因子は、異なる間隔で提供される。例えば、上述の通り、Ｈ因子は、関節炎を低減するのに十分な時間の長さ投与することができる。幾つかの例示的な実施形態では、Ｈ因子は、炎症が低減されるまで１日おきに投与することができる。さらなる例示的な実施形態では、Ｈ因子は、１〜５ｍｇ／ｍｌを上回る血漿レベルをもたらすように最初のボーラスで提供することができ、その後、Ｈ因子の追加の投与は、炎症が低減されるまで１  ２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、または１４日毎に提供することができる。
【実施例】
【０１１１】
実施例１：移植拒絶反応を治療するためのＨ因子の使用
雄Ｃ３Ｈ（Ｈ−２ｋ）およびＣ５７ＢＬ／６（Ｂ６、Ｈ−２ｂ）マウス（２５〜３０ｇ）を使用して、移植拒絶反応中の補体Ｈ因子（ＣＦＨ）の有効性を決定した。Ｃ３Ｈマウスは、前感作および腎臓移植のための皮膚移植片および腎臓ドナーとしての役割を果たした。雄Ｃ５７ＢＬ／ｃ（Ｂ６）マウスを、レシピエントとして使用した。Ｂ６レシピエントを、ドナー皮膚移植片の移植によって前感作し、その後皮膚移植後１５〜２０日の間に腎臓同種移植片を移植した。Ｂ６マウスを、ビヒクル（対照）、ＣＦＨ（−１日目、０日目、その後１０日目まで１日おき、８ｍｇ／マウス、腹腔内）、ＦＫ５０６（−１日目〜１０日目まで毎日、１ｍｇ／ｋｇ、皮下）、または単一治療と同一の投薬計画を使用したＣＦＨ＋ＦＫ５０６の組み合わせで治療した。マウスを、拒絶反応の兆候に関して毎日モニターした。腎機能を、血清クレアチニンレベルを測定することによってモニターした。
【０１１２】
前感作されたレシピエントに移植された非治療Ｃ３Ｈ腎臓は、ＰＯＤ７に測定された増加されたクレアチニン（Ｃｒ）レベルによって示される通り、急速に拒否された（図２）。非治療移植片は、移植片機能低下により、７．５日の中央値生存期間を有して移植片機能を喪失した（Ｃｒ＞２ｍｇ／ｄｌ）。ＣＦＨ単独による治療は、血漿Ｃｒレベルを低減し（１．４±０．２ｍｇ／ｄｌ、対して、対照では１．９±０．１）、したがって腎臓同種移植片機能を改善した。ＦＫ５０６と組み合わせたＣＦＨは、移植片機能をさらに改善し、ＣＦＨが急性移植環境においてＩＲＩを制限することができることを示唆している（図２）。
【０１１３】
実施例２．移植拒絶反応を治療するためのＨ因子と組み合わせたラパマイシンの使用。
雄Ｃ３Ｈ（Ｈ−２ｋ）およびＣ５７ＢＬ／６（Ｂ６、Ｈ−２ｂ）マウス（２５〜３０ｇ）を使用して、移植拒絶反応中のＨ因子（ＦＨ）と組み合わせたラパマイシン（ＲＡＰＡ）の有効性を決定した。Ｃ３Ｈマウスは、前感作および腎臓移植のための皮膚移植片および腎臓ドナーとしての役割を果たした。雄Ｃ５７ＢＬ／ｃ（Ｂ６）マウスを、レシピエントとして使用した。Ｂ６レシピエントを、ドナー皮膚移植片の移植によって前感作し、その後皮膚移植後１５〜２０日の間に腎臓同種移植片を移植した。移植されたＢ６マウスを、ラパマイシン（ＲＡＰＡ）単独（−１〜１０日目、０．３ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）、ＲＡＰＡ＋ＣＦＨ（ＣＦＨ治療＝−１日目、０日目、その後１４日目まで１日おき、その後、終点まで１週間当り２ｘ、８ｍｇ／マウス、腹腔内、ＣＦＨ腹腔内レシピエントはまた、移植手術中にＣＦＨと混合したアドレノメデュリンの単回用量注入の静脈内注入も受容した、１００μｇ／ｋｇ、ＲＡＰＡ治療＝−１日目〜１０日目まで毎日、０．３ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）、ＲＡＰＡ＋ＦＫ５０６（ＦＫ＝−１日目〜１０日目まで毎日、その後、終点まで１日おき、３ｍｇ／ｋｇ、皮下、ＲＡＰＡ＝−１日目〜１０日目まで毎日、０．３ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）、または上記と同一の投薬計画を使用したＲＡＰＡ＋ＣＦＨ＋ＦＫ５０６の組み合わせで治療した。実験群は、ａ）Ｃ３ＨからＢ６へのｔｘｓ＋前感作＋ＲＡＰＡ、ｂ）Ｃ３ＨからＢ６へのｔｘｓ＋前感作＋ＣＦＨ＋ＲＡＰＡ、ｃ）Ｃ３ＨからＢ６へのｔｘｓ＋前感作ＦＫ＋ＲＡＰＡ、およびｄ）Ｃ３ＨからＢ６へのｔｘｓ＋前感作＋ＣＦＨ＋ＦＫ＋ＲＡＰＡであった。（「ｔｘｓ」＝「移植／皮膚移植片」）
【０１１４】
マウスを、拒絶反応の兆候に関して毎日モニターし、移植が重度の拒絶反応のため機能低下を発症したときか、またはＰＯＤ６０およびＰＯＤ１００として定義される実験の終点で安楽死させた。腎臓移植片機能を、Ｉ−Ｓｔａｔ  ｐｏｔａｂｌｅ  ａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｂａｘｉｓ）によって、血漿クレアチニン（Ｃｒ）血中尿素窒素（ＢＵＮ）およびヘマトクリット（Ｈｃｔ）レベルによってモニターした。循環ドナー特異性抗体（ＤＳＡ）を、腎臓移植の前および研究の終点においてフローサイトメトリーによって決定した。
【０１１５】
ＲＡＰＡおよびＦＫと組み合わせたＣＦＨ（ＣＦＨ＋ＲＡＰＡ＋ＦＫ）は、急性ＡＭＲおよびＣＭＲから腎臓同種移植片拒絶反応を保護し、前感作されたレシピエントにおける腎臓同種移植片生存期間を延長させた。表１および図３に示される通り、短期のＲＡＰＡ単一療法またはＣＦＨと組み合わせたＲＡＰＡ（ＣＦＨ＋ＲＡＰＡ）は、保護効果を実証した。ＰＯＤ７における早期の移植片機能の改善（図４）に伴い、ＲＡＰＡ単独またはＲＡＰＡ＋ＦＨによる治療は、同種移植片生存期間を、非治療同種移植片（対照）における８日目（平均生存時間−「ＭＳＴ」）から１４および１６日目（ＭＳＴ）にそれぞれ延長させた。ＲＡＰＡおよびＦＫの組み合わせによる治療（ＲＡＰＡ＋ＦＫ）は、腎臓同種移植片生存期間を４４日目（ＭＳＴ）までさらに延長させた。ＣＦＨ＋ＲＡＰＡ＋ＦＫによる３重療法は、移植片拒絶反応を有効に予防し、長期の腎臓同種移植片生存期間を達成した。その結果、３重療法による腎臓同種移植片の８７．５％（７／８）が、長期の生存期間（＞６０日）を達成した（ｐ＜０．０５、対ＲＡＰＡ＋ＦＫ）。
（表１）前感作された腎臓移植モデルにおける個々の移植片生存期間
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【０１１６】
ＣＦＨ＋ＲＡＰＡ＋ＦＫによる治療は、前感作されたレシピエントにおいて長期の腎臓同種移植片機能を保存した。腎機能に対するＣＦＨの影響を評定するために、血漿試料を腎臓同種移植片から収集した。Ｃｒ、ＢＵＮ（血中尿素窒素）、およびヘマトクリット（Ｈｃｔ）を、ＰＯＤ７、ＰＯＤ２１、およびＰＯＤ６０、または最終的な拒絶反応にて測定した。ＣｒおよびＢＵＮなどの老廃物の血漿濃度は、腎機能を決定するために臨床実践において一般的に使用される。正常な範囲を超えたＣｒおよびＢＵＮの上昇は、（正常なＢ６マウスにおいて、Ｃｒ＝０．２±０．０５ｍｇ／ｄｌ、ＢＵＮ＝３４±８．８１ｍｇ／ｄｌ）は、腎臓機能の喪失を示す。ヘマトクリットは、血液中の赤血球の体積パーセンテージ（％）である。Ｈｃｔの減少（正常なＨｃｔ−４４±１．７３％ＰＣＶ）は、ホルモンエリスロポエチンの減少した産生に起因する腎臓損傷に関連付けられる。
【０１１７】
図４の結果は、ＣｒおよびＢＵＮレベルが、ＰＯＤ７にて対照において増加されたことを示す。ＲＡＰＡまたはＲＡＰＡ＋ＣＦＨまたはＲＡＰＡ＋ＦＫによる免疫治療は、対照と比較して低減されたＣｒおよびＢＵＮならびに増加されたＨｃｔを伴う早期の腎機能の保護（ＰＯＤ７）を実証しているが、３重療法は、ＦＫおよびＲＡＰＡのみによる治療と比較して、ＰＯＤ２１および終点（拒絶反応またはＰＯＤ６０）における減少されたＣｒおよびＢＵＮレベルならびに増加されたＨｃｔ（図４）によって示される通り、腎機能の長期の改善を達成した。
【０１１８】
ＦＫおよびＣＦＨによる継続治療が移植片生存期間をさらに延長させることができるかを決定するために、２つのＲＡＰＡ＋ＦＫを用いた、および３つのＣＦＨ＋ＲＡＰＡ＋ＦＫを用いた残りの腎臓同種移植片を、ＰＯＤ１００まで追跡した。表２に示される通り、結果は、３重療法による全ての移植が１００日目まで生存し、正常な腎機能を維持したことを示した。
（表２）前感作された腎臓移植モデルにおける移植片の長期の生存期間
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【０１１９】
組織学的検査は、不均一な変化を明らかにした。４週以内に拒否された移植片は、それらがＲＡＰＡ単独、ＲＡＰＡ＋ＣＦＨ、またはＲＡＰＡ＋ＦＫで治療されたかにかかわらず、非治療の前感作されたレシピエントにおいて観察されたもの（図５Ａ）に類似した組織学的拒絶反応特徴を伴う重度のＡＭＲおよびＣＭＲを示した（データは示されていない）。対照的に、ＣＦＨ＋ＲＡＰＡ＋ＦＫ３重療法を用いた移植は、８週目に検査したときに、ＦＫ／ＲＡＰＡで治療した移植片との比較において、減少された単球浸潤、減少された尿細管委縮および分節性糸球体硬化症、ならびに減少された線維性変化を伴う、より少ない炎症および尿細管損傷を示した（図５Ｂ）。さらに、ＣＦＨ＋ＲＡＰＡ＋ＦＫ３重療法は、ＡＭＲ損傷（尿細管周囲毛細血管、糸球体炎、および糸球体血栓、およびメサンギウム融解）の重篤度を低減した。
【０１２０】
実施例３．移植拒絶反応を治療するためのアドレノメデュリンと組み合わせたＣＦＨの効果。
腎臓移植片機能、抗体応答、および組織学に対する、アドレノメデュリン（ＡＭ）を伴うまたは伴わないＣＦＨの効果を、移植の初期段階後（ＰＯＤ３およびＰＯＤ５）に決定した。前感作された腎臓移植を、−１日目、０日目、およびその後１日おきにＣＦＨ（８ｍｇ、腹腔内）で治療した。ＡＭが腎臓移植片機能に追加の利益を提供するかを試験するために、移植の追加の群を、ＣＦＨの腹腔内注射（−１日目、０日目、および１日おき）に加えて、ＣＦＨ（約１ｍｇ／ｋｇ）と混合したＡＭ（約１００ｕｇ／ｋｇ）の単回用量注入（２００μｌ、静脈内）で移植手術の直後（ＰＯＤ０）に治療した。
【０１２１】
ＣＦＨは、ＡＭに関する血清結合タンパク質である。ＡＭは、因子Ｉを介してＣ３ｂの切断を強化することによって、Ｈ因子の補体調節機能に影響を及ぼすことが示されている。ＡＭ＋ＣＦＨ溶液の調製を、以下の通りに調製した：ａ）ＡＭ（１００μｇ）のバイアル内容物を４．１６６ｍｌの無菌食塩水中に溶解させる（２４μｇ／ｍｌ作業ストック溶液を作成するため）、ｂ）１４．４μｌの１５．６ｍｇ／ｍｌＦＨストックを９８５．６μｌの無菌食塩水中で希釈する（ＦＨの２２５μｇ／ｍｌ作業ストック溶液を作成するため）、ｃ）ＡＭの２４μｇ／ｍｌ作業ストックの等体積（各９５０μｌ）をＦＨの２２５μｇ／ｍｌ作業ストックと混合して、最終注入液を作成する（ＡＭ濃度は１２μｇ／ｍｌとなり、ＦＨ濃度は１１２．５μｇ／ｍｌとなる）。２２０μｌのアリコートを移して管を滅菌し、使用の準備ができるまで−７０で冷凍した。
【０１２２】
全てのマウスを、それぞれＰＯＤ３および５に屠殺した（約５／ｅａ）。同一の終点で屠殺した非治療移植を、対照として使用した。移植片組織を、組織学および免疫組織化学（ＩＨＣ）のために採取した。実験群は、以下の通りであった：１）Ｃ３ＨからＢ６へのｔｘｓ＋前感作＋対照、２）Ｃ３ＨからＢ６へのｔｘｓ＋前感作＋ＣＦＨ（腹腔内）、および３）Ｃ３ＨからＢ６へのｔｘｓ＋前感作＋ＣＦＨ（腹腔内）＋ＡＭ／ＣＦＨ注入（移植の時点）。
【０１２３】
図６Ａに示される通り、Ｃｒレベルは、ＰＯＤ５までに非治療移植において増加した（Ｐ＜０．０１、対正常Ｂ６）。これらの群の平均Ｃｒレベルは対照と比較して低かったため、単回注入治療としてのＣＦＨ単独およびＡＭ＋ＣＦＨを伴うＣＦＨは、改善された腎機能の傾向を示した。単回用量ＡＭ／ＣＦＨ注入の追加は、ＰＯＤ５におけるＣｒレベルのさらなる低減において有益であった。
【０１２４】
ヘマトキシリンおよびエオシン（ＨＥ）染色による組織学的検査（図６Ｂ）は、前感作されたレシピエントにおける対照腎臓同種移植片は、ＰＯＤ５までに混合急性細胞性および液性拒絶反応の初期の兆候（単核細胞浸潤、内皮細胞活性化、浮腫、限局性の急性腎尿細管壊死）を有したことを明らかにした。ＣＦＨで治療した腎臓移植片は、ＰＯＤ５においてより少ない尿細管壊死を伴う改善された形態を示した。
【０１２５】
血漿ＤＳＡレベルを決定するために、腎臓移植レシピエントからの血漿試料を、腎臓移植の１日前（ドナー皮膚移植片前感作の２週間後）および研究の終点に収集した。ＤＳＡレベルを、フローサイトメトリーによって測定した。図７は、平均チャネル蛍光強度（ＭＦＩ）によって表されるＤＳＡ（ＩｇＧ）およびＩｇＧレベルの顕著な増加は、群間で同程度であったことを示す。ＩｇＧレベルとＣｒレベルとの間に相関はなかった（図７Ｂ）。
【０１２６】
実施例４．関節リウマチを治療するためのＨ因子の使用。
Ｂａｌｂ  Ｃマウス（１コホート当りｎ＝１０）を使用して、移植拒絶反応中のＨ因子（ＦＨ）の有効性を決定した。マウスを、ＡｒｔｈｒｉｔｏＭＡｂ（抗コラーゲン）抗体カクテル（２ｍｇ、静脈内）で１日目に治療した後、７日後にＬＰＳの注射（５０μｇ、腹腔内）を用いて治療した。８日目に、各動物に関して後肢体積を測定し、種々の治療群に分配した。
【０１２７】
Ｈ因子を、２０ｍＭのクエン酸塩、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ＝６の中で製剤化した。デキサメタゾンを、０．５％のヒドロキシプロピルメチルセルロース／０．２％のＴｗｅｅｎ８０中で製剤化した。エサネルセプトを、Ｅｎｂｒｅｌ（商標）として生理食塩水中で製剤化した。ビヒクルを、２０ｍＭのクエン酸塩、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ＝６の中で製剤化した。デキサメタゾンおよびエタネルセプトに関する投薬容量は、１０ｍＬ／ｋｇ（マウス２０ｇ当り０．２００ｍＬ）であり、体重に応じて調整した。Ｈ因子およびＢＸ１２に関する投薬容量は、２５ｍＬ／ｋｇ（マウス２０ｇ当り０．５００ｍＬ）であり、体重に応じて調整した。
【０１２８】
異なる薬剤による投薬を、表３に説明される通り８日目に開始した。
（表３）薬物および治療スケジュール
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【０１２９】
後肢体積を、８、１１、１２、１３、１５、１９、および２２日目（終点）に測定した。開始日時点の年齢は、７〜９週であった。体重を、終点まで隔週で測定した（表４）。終点において、組織試料を組織学のために処理し、独立した分析のために病理学者に提出した。試料抽出１を、終点にて実施した。後肢を１０％のホルマリン中に保存した。試料抽出２を、群４の動物に関して終点にて実施した。血液を末端心穿刺によって収集した。血液を抗凝固のために処理した。腎臓を、さらにホルマリン中に保存した後、７０％のＥｔＯＨ中で保存した。試料を、炎症、パンヌス（肉芽組織）、軟骨損傷、骨吸収、および外骨腫に関してスコア化した（表５）。
（表４）体重測定値
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（表５）組織学的スコア
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炎症：０＝正常、１＝関節周辺組織内の炎症性細胞の最小限の浸潤、２＝軽度の浸潤、３＝中程度の浮腫を伴う中程度の浸潤、４＝著明な浮腫を伴う著明な浸潤、５＝重度の浮腫を伴う重度の浸潤。パンヌス：０＝正常、１＝軟骨および軟骨下骨内のパンヌスの最小限の浸潤、２＝軽度の浸潤、３＝中程度の浸潤、４＝著明な浸潤、５＝重度の浸潤。軟骨損傷：０＝正常、１＝明らかな軟骨細胞喪失またはコラーゲン崩壊を伴わない、染色密度の最小限〜軽度の喪失、２＝限局性の軽度の（表面的な）軟骨細胞喪失および／またはコラーゲン崩壊を伴う染色密度の軽度の喪失、３＝多発性の中程度の（中部までの深さ）軟骨細胞喪失および／またはコラーゲン崩壊を伴う染色密度の中程度の喪失、４＝多発性の著明な（深部までの深さ）軟骨細胞喪失および／またはコラーゲン崩壊を伴う染色密度の著明な喪失、５＝多発性の重度の（潮汐点までの深さ）軟骨細胞喪失および／またはコラーゲン崩壊を伴う染色密度の重度の拡散性喪失。骨吸収：０＝正常、１＝最小限、２＝軽度、３＝中程度、４＝著明、５＝重度。骨膜変化／外骨腫成長：０＝正常、１＝最小限、２＝軽度、３＝中程度、４＝著明、５＝重度。
【０１３０】
ＦＨは、治療関連死が存在せず、体重がビヒクル対照に匹敵したため、良好に耐性であった（図８）。ＦＨで治療した動物は、ビヒクル対照動物と比較して改善された臨床応答を示した（表６および７）。
（表６）終点における総関節炎応答
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１．最大Δ平均体積−８日目および最大の腫れの中央日に記録された平均合算足蹠体積の間の差（ｍｌ）、２．平均疾患負荷−各動物に関して初めの合算足蹠体積を測定し（ベースラインを確立するため）、次に各動物に関して経時的（８〜２２日目）な合算足蹠体積に関してＡＵＣを統合し、次に群平均を算出することによって決定した。％疾患抑制−総疾患負荷におけるビヒクルに対するパーセント減少、３．平均最大臨床スコア−０〜６０（１５／肢）からスコア化し、４肢の和として算出した（５点／赤いまたは腫れた指に関する足、各腫れた足蹠に関して５点、および各腫れた足首に関して５点）、４．最低平均体重−１日目からの％変化としての最低群平均体重。＊＝Ｐ＜０．０５、＊＊＝Ｐ＜０．０１、＊＊＊＝Ｐ＜０．００１。
（表７）臨床スコア
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【０１３１】
ＦＨで治療したマウスは、最大の腫れの日において、ビヒクルと比較して足蹠の腫れのより低い平均変化を示した（表９）。それに加えて、ＦＨは、エタネルセプトと比較して良好に機能した（図９、Ｂｘ−１２＝ＦＨ）。ＦＨは、より遅い時点（１５〜２２日目）においてエタネルセプトよりも改善し、ＦＨが、初期の炎症応答の阻害に加えて炎症応答の迅速な解消を促進することを示唆している（図１０）。コラーゲン抗体誘発性関節炎に関する組織病理学的概要が表８に、また統計的分析が表１０に示される。
（表８）組織病理学的概要
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炎症−１＝炎症性細胞の最小限の浸潤（関節周辺）、２＝軽度の浸潤、３−中程度の浸潤＋浮腫、４＝著明な浸潤＆浮腫、５＝重度の浸潤＆浮腫；パンヌス−１＝軟骨内のパンヌスの最小限の浸潤、２＝軽度の浸潤、３−中程度の浸潤、４＝著明な浸潤、５＝重度の浸潤；軟骨吸収−染色密度、軟骨細胞喪失、およびコラーゲン崩壊に基づいて１〜５（最小限〜重度）に等級化した；骨吸収−吸収面積および破骨細胞密度に基づいて１〜５に等級化した；外骨腫−粗くなったペリオテアル表面の外観、および炎症性細胞、ペリオスチアル細胞、または骨芽細胞の存在に基づいて１〜５に等級化した。ｎｓ＝非有意、＊＝Ｐ＜０．０５、＊＊＝Ｐ＜０．０１、＊＊＊＝Ｐ＜０．００１。
【０１３２】
デキサメタゾン対照は、一貫して改善された組織病理学的結果を生み出した。ＦＨは、ビヒクル対照およびエタネルセプトの両方と比較して、外骨腫（骨の表面上での新規の骨の不適切な形成）を阻害する。ＦＨで治療したマウスに関して、改善された炎症および骨吸収へのさらなる傾向が存在し、ビヒクルおよびエタネルセプトの両方と比較して、より低い臨床スコアをもたらした（図１１）。このＲＡ動物モデル研究は、Ｈ因子が、この疾患環境における補体媒介性炎症応答を制限するのに有効な治療薬であることを示唆している。
（表９）足蹠厚さ
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（表１０）統計分析
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【０１３３】
本発明の実践は、別段に指示のない限り、当業者の技能の範囲内の有機化学、ポリマー技術、分子生物学（組み換え技術を含む）、細胞生物学、生化学、および免疫学の従来の技術および説明を採用することができる。かかる従来の技術としては、ポリマーアレイ合成、ハイブリダイゼーション、ライゲーション、標識を使用したハイブリダイゼーションの検出が挙げられる。好適な技術の具体的な例証は、本明細書の以下の実施例を参照することによって得ることができる。しかしながら、他の同等の従来の手順も、当然使用することができる。かかる従来の技術および説明は、Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  Ｓｅｒｉｅｓ（Ｖｏｌｓ．Ｉ−ＩＶ），Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｅｌｌｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ＰＣＲ  Ｐｒｉｍｅｒ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（全てＣｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓより），Ｓｔｒｙｅｒ，Ｌ．（１９９５）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（４ｔｈ  Ｅｄ．）Ｆｒｅｅｍａｎ，Ｈｉｇｈｌｙ  ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ  Ｙｏｒｋ，Ｇａｉｔ，"Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ"１９８４，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，Ｎｅｌｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｘ（２０００），Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３ｒｄ  Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｐｕｂ．，Ｈｉｇｈｌｙ  ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．ａｎｄ  Ｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｐｕｂ．，Ｈｉｇｈｌｙ  ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．などの標準的な実験室手引書に見出すことができ、それらの全ては、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に援用される。
【０１３４】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用されるとき、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が別段に明確に指示しない限り、複数の指示対象を含むことに留意されたい。したがって、例えば、「ポリメラーゼ」への言及は、１つの薬剤またはかかる薬剤の混合物を指し、「方法」への言及は、当業者に既知である同等のステップおよび方法への参照を含み、以下同様である。
【０１３５】
別段に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者が一般に理解する意味と同一の意味を有する。本明細書において言及される全ての出版物は、出版物に説明される、またここに説明される本発明と関連して使用され得るデバイス、組成物、製剤、および方法論を説明および開示する目的のために、参照により本明細書に援用される。
【０１３６】
値の範囲が提供される場合、文脈が別段に明確に指示しない限り、下限値の単位の１０分の１までの、その範囲の上限値から下限値の間の各介在値、およびその表示範囲の任意の他の表示値または介在値が、本発明に包含されることが理解される。これらのより小さい範囲の上限値および下限値は、より小さい範囲内に独立して含まれてもよく、表示範囲内の任意の具体的に除外された値に従って本発明内にも包含される。表示範囲がそれらの上限値および下限値のうちの一方または両方を含む場合、それらの包含される上限値および下限値のいずれかまたは両方を除外する範囲も本発明に包含される。
【０１３７】
上記の説明では、多数の特定の詳細が、本発明のより完全な理解を提供するために記載される。しかしながら、本発明はこれらの特定の詳細のうちの１つ以上を伴わずに実践され得ることは、当業者には明らかであろう。他の例では、当業者に周知である周知の特徴および手順は、本発明を曖昧にすることを回避するために説明されていない。
【０１３８】
本発明は特定の実施形態を参照して主に説明されるが、他の実施形態は、本開示を読めば当業者に明らかになるであろうことも想定され、またかかる実施形態は、本発明の方法の範囲内に含まれることも意図される。
【０１３９】
特許請求の範囲は、任意の追加的な要素を除外するように作成されてもよいことに留意されたい。したがって、この記述は、特許請求の範囲の要素の列挙に関連した「単に」、「のみ」などの排他的な専門用語の使用のため、または「否定的な」制限の使用のための先行記述となるよう意図される。本開示を読めば当業者には明らかであるように、本明細書に説明および例証される個々の実施形態の各々は、本発明の範囲または精神から逸脱することなく、他の幾つかの実施形態のうちのいずれかの特徴から容易に切り離されるか、または組み合わされ得る別個の成分および特徴を有する。任意の列挙される方法は、列挙される事象の順で、または論理的に可能な任意の他の順序で行うことができる。本明細書に説明される方法および材料と類似もしくは同等の任意の方法および材料を本発明の実践または試験において使用することもできるが、代表的な例証的方法および材料が、ここに説明される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図４−３】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１−１】
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【図１１−２】
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【図１２】
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【配列表】
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