(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者における血清ＩＤＬ−Ｃを減少させ、心血管疾患または障害を治療または予防するための方法で使用するためのＰＣＳＫ９阻害剤を含む医薬組成物であって、該方法が、垂直型自動プロファイル試験により測定して１０ｍｇ／ｄＬよりも大きいレベルの血清ＩＤＬ−Ｃを有し、心血管疾患または障害を有すると診断され、または発症する危険性があると認定される患者を選択すること、および該医薬組成物を患者に投与することを含み、前記ＰＣＳＫ９阻害剤が、配列番号９０のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲと、配列番号９２のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲとを含む、抗体またはその抗原結合断片である、前記医薬組成物。
【請求項２】
血清ＩＤＬ−Ｃが、患者において医薬組成物の投与後にベースラインから少なくとも約５０％〜約５６％減少する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
患者が、１１ｍｇ／ｄＬ、１２ｍｇ／ｄＬ、１３ｍｇ／ｄＬ、１４ｍｇ／ｄＬ、１５ｍｇ／ｄＬ、１６ｍｇ／ｄＬ、１７ｍｇ／ｄＬ、１８ｍｇ／ｄＬ、１９ｍｇ／ｄＬ、２０ｍｇ／ｄＬ、２５ｍｇ／ｄＬ、３０ｍｇ／ｄＬ、３５ｍｇ／ｄＬ、４０ｍｇ／ｄＬ、４５ｍｇ／ｄＬ、または５０ｍｇ／ｄＬより大きな血清ＩＤＬ−Ｃレベルを有する、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
血清ＩＤＬ−Ｃが、食後の、または絶食期間後の患者において測定される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
心血管疾患または障害が、冠動脈疾患、急性心筋梗塞、無症候性アテローム性頸動脈硬化症、脳卒中、及び、末梢動脈閉塞性疾患からなる群から選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
患者が、高コレステロール血症を有し、または発症する危険性を有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
高コレステロール血症がヘテロ結合家族性高コレステロール血症（ｈｅＦＨ）であるか、または、非家族性高コレステロール血症（ｎｏｎＦＨ）である、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
医薬組成物が２０ｍｇ〜２００ｍｇのＰＣＳＫ９阻害剤を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
医薬組成物が５０ｍｇ〜１５０ｍｇのＰＣＳＫ９阻害剤を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
医薬組成物が５０ｍｇのＰＣＳＫ９阻害剤を含む、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
医薬組成物が７５ｍｇのＰＣＳＫ９阻害剤を含む、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
医薬組成物が１００ｍｇのＰＣＳＫ９阻害剤を含む、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
医薬組成物が１５０ｍｇのＰＣＳＫ９阻害剤を含む、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
患者が、医薬組成物の投与の時点で、またはその直前に治療的スタチンレジメン上にある、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
治療的スタチンレジメンが、セリバスタチン、アトルバスタチン、シンバスタチン、ピタバスタチン、ロスバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチンおよびプラバスタチンからなる群から選択されるスタチンを含む、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
スタチンがアトルバスタチンである、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
患者が、医薬組成物の投与の時点で治療的スタチンレジメン上にない、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リポタンパク質レベルの上昇と関連する疾患および障害の治療処置の分野に関する。より特には、本発明は、患者における血清レムナントコレステロールおよび他のリポタンパク質サブ画分（ｓｕｂｆｒａｃｔｉｏｎ）のレベルを減少させるためのＰＣＳＫ９阻害剤の投与に関する。
【背景技術】
【０００２】
レムナントコレステロール（レムナントリポタンパク質とも呼ばれる）は、非ＨＤＬおよび非ＬＤＬコレステロールを含むコレステロールのカテゴリーである。レムナントリポタンパク質は、ＶＬＤＬ脂肪分解の生成物であり、ＶＬＤＬ３および中間密度リポタンパク質（ＩＤＬ、ＬＤＬ形成の直接前駆体）を含む。血清レムナントコレステロールレベルは、冠動脈疾患の予測危険因子として同定されている。レムナントコレステロールに加えて、心血管の健康との関連性を有してもよい低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）のいくつかのサブ画分が存在する。特に、ＬＤＬ−Ｃは、異なる密度および脂質化状態のＬＤＬ粒子の連続体から構成される。血清レムナントコレステロールおよび他のリポタンパク質サブ画分レベルの治療的減少は、心血管障害の危険性を処置または低下させるための手段であってもよい。
【０００３】
ＰＣＳＫ９は、分泌スブチラーゼファミリーのプロテイナーゼＫサブファミリーに属するプロタンパク質変換酵素である。血清総コレステロール、ＬＤＬコレステロールおよび血清トリグリセリドを減少させるためのＰＣＳＫ９阻害剤（抗ＰＣＳＫ９抗体）の使用は、特許文献１、特許文献２および特許文献３に記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】米国特許第８，０６２，６４０号
【特許文献２】米国特許第８，３５７，３７１号
【特許文献３】米国特許出願公開第２０１３／００６４８３４号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、患者の血清中の様々なリポタンパク質およびリポタンパク質画分を減少させるための方法を提供する。患者は、高コレステロール血症を有するか、もしくは高コレステロール血症を発症する危険性がある患者、または心血管疾患を有するか、もしくはそれを発症する危険性がある患者であってよい。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の方法は、特定のリポタンパク質またはリポタンパク質画分の血清レベルが上昇した患者を選択すること、およびプロタンパク質変換酵素スブチリシンケキシン−９（ＰＣＳＫ９）の阻害剤を含む医薬組成物を患者に投与することを含む。本発明のある特定の態様によれば、患者は、血清レムナントコレステロールレベルの上昇を有することに基づいて選択される。本発明のある特定の他の態様によれば、患者は、血清超低密度リポタンパク質コレステロールレベルの上昇（例えば、血清ＶＬＤＬ−Ｃ、ＶＬＤＬ１−Ｃ、ＶＬＤＬ２−Ｃ、ＶＬＤＬ１＋２−Ｃ、ＶＬＤＬ３−Ｃなどの上昇）を有することに基づいて選択される。本発明のさらに他の態様によれば、患者は、血清中間密度リポタンパク質コ
レステロール（ＩＤＬ−Ｃ）レベルの上昇を有することに基づいて選択される。本発明のある特定の他の態様によれば、患者は、１つまたはそれ以上の低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）サブ画分の血清レベルの上昇（例えば、血清ＬＤＬ１−Ｃ、ＬＤＬ２−Ｃ、ＬＤＬ３−Ｃ、ＬＤＬ４−Ｃ、ＬＤＬ３＋４−Ｃなどの上昇）を有することに基づいて選択される。本発明のある特定の態様によれば、患者は、さらにまたはあるいは、Ｌｐ（ａ）の血清レベルの上昇を有することに基づいて選択される。
【０００７】
また、患者を、リポタンパク質レベルの減少が有益であるか、または危険性を低下させるような疾患および障害に関するさらなる危険因子を示すことに基づいて選択することもできる。例えば、高コレステロール血症（例えば、ｈｅＦＨ、非ＦＨなど）を有する患者は、本発明の治療方法を用いる処置のための良好な候補であってもよい。
【０００８】
本発明の方法に従って投与することができるＰＣＳＫ９阻害剤としては、例えば、抗ＰＣＳＫ９抗体またはその抗原結合断片が挙げられる。本発明の方法の実施において用いることができる抗ＰＣＳＫ９抗体の特定例としては、米国特許第８，０６２，６４０号に記載された、および／またはそこに開示された任意の抗体または抗原結合断片が挙げられる。
【０００９】
ＰＣＳＫ９阻害剤を、皮下的または静脈内的に対象に投与することができる。さらに、ＰＣＳＫ９阻害剤を、治療的介入の時点で治療的スタチンレジメンにある患者に投与することができる。
【００１０】
本発明の他の実施形態は、以下の詳細な説明の概説から明らかとなる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】バックグラウンドスタチン療法を受けていない健康な対象におけるｍＡｂ３１６Ｐ  １５０ｍｇの単回用量後のｍＡｂ３１６Ｐ、遊離（未結合）ＰＣＳＫ９、およびＬＤＬ−Ｃレベルの間の動的関係を示す図である。
【図２】ｍＡｂ３１６Ｐ  ５０、１００、または１５０ｍｇ  ＳＣ＋アトルバスタチンまたはｍＡｂ３１６Ｐ  １５０ｍｇ  ＳＣ＋食事のみを受けているＨｅＦＨおよび非ＦＨ患者における遊離ｍＡｂ３１６Ｐの平均濃度を示す図である。点線は遊離ＰＣＳＫ９の定量限界（０．０３１２ｍｇ／ｄＬ）を示す。
【図３】患者におけるベースライン対平均総ｍＡｂ３１６Ｐ濃度（ｍｇ／ｄＬ）からのＬＤＬ−Ｃの平均パーセンテージ変化を示す図である（ＨｅＦＨと非ＦＨの組合せ；試験１日目、２９日目および４３日目にｍＡｂ３１６Ｐ  １５０ｍｇ  ＳＣを受けるｎ−２１）。点は、サンプリング時間；ｈ、時間；ｄ、日を示す。ヒステリシス曲線は、矢印により示される通り、時間と共に時計回りの方向に移動し、これは、ｍＡｂ３１６Ｐ濃度と、ＬＤＬ−Ｃの変化との間の時間的関係を示している。
【図４】アトルバスタチンまたは食事のみ（スタチンなし）を受ける非ＦＨ患者における平均ベースライン遊離ＰＣＳＫ９レベルを示す図である。
【図５】ｍＡｂ３１６Ｐ  １５０ｍｇ  ＳＣまたはプラセボ±アトルバスタチンを受ける患者に関するＬＤＬ−Ｃ効能曲線を示す図である。
【図６】ｍＡｂ３１６Ｐ  ５０ｍｇ、１００ｍｇ、もしくは１５０ｍｇ  Ｑ２Ｗ、２００ｍｇもしくは３００ｍｇ  Ｑ４Ｗ、またはプラセボの投与後、同時スタチン療法上にある高コレステロール血症患者における経時的なベースラインからのＬＤＬ−Ｃの平均パーセンテージ変化を示す図である。デルタ記号（Δ）は、ＬＯＣＦ平均に対応する。
【図７】３つの異なる臨床試験（本明細書の表１にまとめられるＡ、ＢおよびＣ）におけるプラセボおよびｍＡｂ３１６Ｐ  １５０ｍｇ  Ｑ２Ｗに関する処置の前後でのＶＬＤＬおよび血清レムナントリポタンパク質サブ画分およびトリグリセリド中のコレステロールの平均（ＳＤ）レベルを示す図である。図７は試験Ａの結果を示す。
【図８】３つの異なる臨床試験（本明細書の表１にまとめられるＡ、ＢおよびＣ）におけるプラセボおよびｍＡｂ３１６Ｐ  １５０ｍｇ  Ｑ２Ｗに関する処置の前後でのＶＬＤＬおよび血清レムナントリポタンパク質サブ画分およびトリグリセリド中のコレステロールの平均（ＳＤ）レベルを示す図である。図８は試験Ｂの結果を示す。
【図９】３つの異なる臨床試験（本明細書の表１にまとめられるＡ、ＢおよびＣ）におけるプラセボおよびｍＡｂ３１６Ｐ  １５０ｍｇ  Ｑ２Ｗに関する処置の前後でのＶＬＤＬおよび血清レムナントリポタンパク質サブ画分およびトリグリセリド中のコレステロールの平均（ＳＤ）レベルを示す図である。図９は試験Ｃの結果を示す。
【図１０】３つの異なる臨床試験（本明細書に表１にまとめられるＡ、ＢおよびＣ）におけるプラセボおよびｍＡｂ３１６Ｐ  １５０ｍｇ  Ｑ２Ｗに関する処置の前後でのＬＤＬサブ画分中のコレステロールの平均（ＳＤ）レベルを示す図である。図１０は試験Ａの結果を示す。
【図１１】３つの異なる臨床試験（本明細書に表１にまとめられるＡ、ＢおよびＣ）におけるプラセボおよびｍＡｂ３１６Ｐ  １５０ｍｇ  Ｑ２Ｗに関する処置の前後でのＬＤＬサブ画分中のコレステロールの平均（ＳＤ）レベルを示す図である。図１１は試験Ｂの結果を示す。
【図１２】３つの異なる臨床試験（本明細書に表１にまとめられるＡ、ＢおよびＣ）におけるプラセボおよびｍＡｂ３１６Ｐ  １５０ｍｇ  Ｑ２Ｗに関する処置の前後でのＬＤＬサブ画分中のコレステロールの平均（ＳＤ）レベルを示す図である。図１２は試験Ｃの結果を示す。
【図１３】パネルＡおよびＢは、試験Ａ（本明細書の表１にまとめられる）における全用量に関する、それぞれ、ａｐｏ  ＣＩＩおよびａｐｏ  ＣＩＩＩの用量応答変化を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明を説明する前に、本発明が記載される特定の方法および実験条件に限定されず、そのようなものとして方法および条件が変化してもよいことが理解されるべきである。また、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、本明細書で用いられる用語は特定の実施形態だけを説明するためのものであり、限定を意図するものではないことも理解されるべきである。
【００１３】
別途定義しない限り、本明細書で用いられる全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する当業界の通常の知識を有する者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書で用いられる用語「約」は、特定の記載される数値を参照して用いられる場合、その値が記載された値から１％以下で変化してもよいことを意味する。例えば、本明細書で用いられる場合、「約１００」という表現は、９９および１０１ならびにその間の全ての値（例えば、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４など）を含む。
【００１４】
本明細書に記載のものと類似するか、または等価である任意の方法および材料を本発明の実施において用いることができるが、好ましい方法および材料をここで説明する。本明細書に記載の全ての刊行物は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【００１５】
レムナントコレステロールおよび他のリポタンパク質画分を減少させるための方法
本発明は、患者における血清レムナントコレステロールおよび他のリポタンパク質画分を減少させるための方法を提供する。本発明の方法は、レムナントコレステロール（「レムナントリポタンパク質コレステロール」、「レムナントリポタンパク質」もしくはＲＬＰ−Ｃとも呼ばれる）、超低密度リポタンパク質コレステロール（ＶＬＤＬ−Ｃ）、中間密度リポタンパク質コレステロール（ＩＤＬ−Ｃ）、トリグリセリド（ＴＧ）、および／またはＬｐ（ａ）のうちの１つまたはそれ以上の血清レベルの上昇を示す患者を選択することを含む。ある特定の実施形態においては、本発明の方法は、血清ＶＬＤＬ１、ＶＬＤＬ２、ＶＬＤＬ１＋２、ＶＬＤＬ３、ＬＤＬ１、ＬＤＬ２、ＬＤＬ３、ＬＤＬ４、ＬＤＬ３＋４、および／またはその他の組合せの上昇を示す患者を選択することを含む。本発明の方法は、ＰＣＳＫ９阻害剤を含む医薬組成物を患者に投与することをさらに含む。
【００１６】
本明細書で用いられる場合、「レムナントコレステロール」、「レムナントリポタンパク質」、「ＲＬＰ」などの表現は、空腹状態ではＶＬＤＬとＩＤＬとから構成される、非空腹状態ではカイロミクロンレムナントと一緒にこれらの２つのリポタンパク質から構成される、トリグリセリドに富むリポタンパク質のコレステロール含量を意味する。レムナントコレステロールを、総コレステロール−ＨＤＬ−Ｃ−ＬＤＬ−Ｃ（すなわち、非［ＨＤＬ−Ｃ＋ＬＤＬ−Ｃ］）として算出することができる。レムナントコレステロールは、ＶＬＤＬ３およびＩＤＬを含む。
【００１７】
他のリポタンパク質画分としては、例えば、ＬＤＬ１−Ｃ（「大浮遊」ＬＤＬ）、ＬＤＬ２−Ｃ、ＬＤＬ３−ＣおよびＬＤＬ４−Ｃ（「小型」ＬＤＬ）が挙げられる。これらのリポタンパク質の血清レベルを、例えば、垂直型自動プロファイル（ＶＡＰ）試験、イオン移動度などのような標準的なリポタンパク質サブ分画技術により確認することができる。
【００１８】
本発明の文脈において、「血清リポタンパク質の上昇」（例えば、血清レムナントコレステロールの上昇、血清ＶＬＤＬ−Ｃの上昇、血清ＶＬＤＬ１−Ｃの上昇、血清ＶＬＤＬ２−Ｃの上昇、血清ＶＬＤＬ１＋２−Ｃの上昇、血清ＶＬＤＬ３−Ｃの上昇、血清ＩＤＬ−Ｃの上昇、血清ＬＤＬ１−Ｃの上昇、血清ＬＤＬ２−Ｃの上昇、血清ＬＤＬ３−Ｃの上昇、血清ＬＤＬ４−Ｃの上昇、血清ＬＤＬ３＋４−Ｃの上昇など）は、約８ｍｇ／ｄＬよりも高い対応するリポタンパク質の血清レベルを意味する。ある特定の実施形態においては、患者の血清中で測定される特定のリポタンパク質のレベルが約９ｍｇ／ｄＬ、１０ｍｇ／ｄＬ、１１ｍｇ／ｄＬ、１２ｍｇ／ｄＬ、１３ｍｇ／ｄＬ、１４ｍｇ／ｄＬ、１５ｍｇ／ｄＬ、１６ｍｇ／ｄＬ、１７ｍｇ／ｄＬ、１８ｍｇ／ｄＬ、１９ｍｇ／ｄＬ、２０ｍｇ／ｄＬ、２５ｍｇ／ｄＬ、３０ｍｇ／ｄＬ、３５ｍｇ／ｄＬ、４０ｍｇ／ｄＬ、４５ｍｇ／ｄＬ、５０ｍｇ／ｄＬよりも高い場合、前記患者は血清リポタンパク質の上昇を示すと考えられる。血清リポタンパク質レベルを、食事後に患者において測定することができる。いくつかの実施形態においては、リポタンパク質レベルは、空腹の期間の後（例えば、６ｈ、８ｈ、１０ｈ、１２ｈまたはそれ以上の空腹の後）に測定される。任意の臨床的に許容される診断方法を、本発明の文脈において用いて、患者における血清リポタンパク質を測定することができる。
【００１９】
本発明によれば、血清レムナントコレステロールまたは他のリポタンパク質サブ画分（例えば、ＶＬＤＬ−Ｃ、ＶＬＤＬ１−Ｃ、ＶＬＤＬ２−Ｃ、ＶＬＤＬ１＋２−Ｃ、ＶＬＤＬ３−Ｃ、ＩＤＬ−Ｃ、ＩＤＬ１−Ｃ、ＩＤＬ２−Ｃ、ＩＤＬ１＋２−Ｃ、ＬＤＬ１−Ｃ、ＬＤＬ２−Ｃ、ＬＤＬ２ａ−Ｃ、ＬＤＬ２ｂ−Ｃ、ＬＤＬ１＋２ａ−Ｃ、ＬＤＬ３−Ｃ、ＬＤＬ３ａ−Ｃ、ＬＤＬ３ｂ−Ｃ、ＬＤＬ４−Ｃ、ＬＤＬ４ａ−Ｃ、ＬＤＬ４ｂ−Ｃ、ＬＤＬ４ｃ−Ｃ、ＬＤＬ４ａ＋４ｂ＋４ｃ＋３ｂ−Ｃ、ＬＤＬ３＋４−Ｃなど）の減少は、本発明の医薬組成物を受けた後の患者における血清リポタンパク質／リポタンパク質サブ画分レベルが、ベースラインから、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％またはそれ以上減少することを意味する。本明細書で用いられる「ベースラインレベル」は、特定のリポタンパク質またはリポタンパク質サブ画分を言う場合、本発明の医薬組成物を受ける前に対象の血清中で測定されるリポタンパク質／リポタンパク質サブ画分のレベルを意味する。本発明の医薬組成物の投与の結果生じる血清リポタンパク質／リポタンパク質サブ画分の減少を、ＰＣＳＫ９阻害剤を含む医薬組成物の１またはそれ以上の用量の投与を含む治療レジメンの開始後、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、４
週間、６週間、８週間、１０週間、１２週間、１４週間、１６週間、１８週間、２０週間、２２週間、またはそれ以上で達成および／または観察することができ、その例は本明細書の他の場所に開示される。
【００２０】
例えば、本発明は、血清レムナントコレステロールが上昇した患者を選択すること、およびＰＣＳＫ９阻害剤を含む医薬組成物を患者に投与することにより患者における血清レムナントコレステロールを減少させるための方法であって、血清レムナントコレステロールが、患者において医薬組成物の投与後にベースラインから少なくとも約３５％〜約４５％減少する、前記方法を含む。
【００２１】
本発明はまた、血清ＶＬＤＬ−Ｃが上昇した患者を選択すること、およびＰＣＳＫ９阻害剤を含む医薬組成物を患者に投与することにより患者における血清ＶＬＤＬ−Ｃを減少させるための方法であって、血清ＶＬＤＬ−Ｃが、患者において医薬組成物の投与後にベースラインから少なくとも約２０％〜約２８％減少する、前記方法を含む。
【００２２】
本発明はまた、血清ＶＬＤＬ１＋２−Ｃが上昇した患者を選択すること、およびＰＣＳＫ９阻害剤を含む医薬組成物を患者に投与することにより患者における血清ＶＬＤＬ１＋２−Ｃを減少させるための方法であって、血清ＶＬＤＬ１＋２−Ｃが、患者において医薬組成物の投与後にベースラインから少なくとも約２０％〜約３２％減少する、前記方法を含む。
【００２３】
本発明はまた、血清ＶＬＤＬ３−Ｃが上昇した患者を選択すること、およびＰＣＳＫ９阻害剤を含む医薬組成物を患者に投与することにより患者における血清ＶＬＤＬ３−Ｃを減少させるための方法であって、血清ＶＬＤＬ３−Ｃが、患者において医薬組成物の投与後にベースラインから少なくとも約２０％〜約２７％減少する、前記方法を含む。
【００２４】
本発明はまた、血清ＩＤＬ−Ｃが上昇した患者を選択すること、およびＰＣＳＫ９阻害剤を含む医薬組成物を患者に投与することにより患者における血清ＩＤＬ−Ｃを減少させるための方法であって、血清ＩＤＬ−Ｃが、患者において医薬組成物の投与後にベースラインから少なくとも約５０％〜約５６％減少する、前記方法を含む。
【００２５】
本発明はまた、血清ＬＤＬ１−Ｃが上昇した患者を選択すること、およびＰＣＳＫ９阻害剤を含む医薬組成物を患者に投与することにより患者における血清ＬＤＬ１−Ｃを減少させるための方法であって、血清ＬＤＬ１−Ｃが、患者において医薬組成物の投与後にベースラインから少なくとも約６５％〜約７８％減少する、前記方法を含む。
【００２６】
本発明はまた、血清ＬＤＬ２−Ｃが上昇した患者を選択すること、およびＰＣＳＫ９阻害剤を含む医薬組成物を患者に投与することにより患者における血清ＬＤＬ２−Ｃを減少させるための方法であって、血清ＬＤＬ２−Ｃが、患者において医薬組成物の投与後にベースラインから少なくとも約７５％〜約８５％減少する、前記方法を含む。
【００２７】
本発明はまた、血清ＬＤＬ３＋４−Ｃが上昇した患者を選択すること、およびＰＣＳＫ９阻害剤を含む医薬組成物を患者に投与することにより患者における血清ＬＤＬ３＋４−Ｃを減少させるための方法であって、血清ＬＤＬ３＋４−Ｃが、患者において医薬組成物の投与後にベースラインから少なくとも約４５％〜約７０％減少する、前記方法を含む。
【００２８】
本発明はまた、高コレステロール血症を有する患者を選択すること、およびＰＣＳＫ９阻害剤を含む医薬組成物を患者に投与することにより、患者におけるアポリポタンパク質（ａｐｏ）ＣＩＩおよび／またはＣＩＩＩを減少させるための方法を含む。ある特定の実施形態によれば、患者は、非家族性高コレステロール血症（非ＦＨ）を有する；ある特定の他の実施形態においては、患者は、ヘテロ接合性家族性高コレステロール血症（ｈｅ−ＦＨ）を有する。本発明のこの態様のある特定の実施形態によれば、ａｐｏＣＩＩは、患者において医薬組成物の投与後にベースラインから少なくとも約９％〜約３０％減少し、ａｐｏＣＩＩＩは、患者において医薬組成物の投与後に少なくとも約２０％〜約２５％減少する。
【００２９】
本発明はまた、血清Ｌｐ（ａ）が上昇した患者を選択すること、およびＰＣＳＫ９阻害剤を含む医薬組成物を患者に投与することにより、患者における血清Ｌｐ（ａ）を減少させるための方法であって、血清Ｌｐ（ａ）が、患者において医薬組成物の投与後にベースラインから少なくとも約１０％〜約４０％（例えば、約２５％、約３０％または約３５％）減少する前記方法を含む。
【００３０】
本発明はまた、高コレステロール血症を有する患者および／または血清リポタンパク質粒子濃度が上昇した患者を選択すること、ならびにＰＣＳＫ９阻害剤を含む医薬組成物を患者に投与することにより、患者におけるリポタンパク質粒子濃度を減少させるための方法を含む。本発明のこの態様による方法は、特に、低密度リポタンパク質粒子（ＬＤＬ−Ｐ）、中間密度リポタンパク質粒子（ＩＤＬ−Ｐ）、および超低密度リポタンパク質粒子（ＶＬＤＬ−Ｐ）の濃度を減少させるのに有用であり、例えば、小型ＶＬＤＬ−Ｐ（直径２９〜４２ｍｍ）；中型ＶＬＤＬ−Ｐ（直径４２〜６０ｎｍ）；大型ＶＬＤＬ−Ｐ（直径＞６０ｎＭ）；小型ＬＤＬ−Ｐ（直径１８〜２０．５ｎｍ）；大型ＬＤＬ−Ｐ（直径２０．５〜２３ｎｍ）；およびＩＤＬ−Ｐ（直径２３〜２９ｎｍ）の血清濃度を減少させるための方法を含む。
【００３１】
患者集団
本発明の方法は、患者における血清レムナントコレステロールおよび他のリポタンパク質画分（例えば、ＶＬＤＬ−Ｃ、ＶＬＤＬ１−Ｃ、ＶＬＤＬ２−Ｃ、ＶＬＤＬ１＋２−Ｃ、ＶＬＤＬ３−Ｃ、ＩＤＬ−Ｃ、ＬＤＬ１−Ｃ、ＬＤＬ２−Ｃ、ＬＤＬ３−Ｃ、ＬＤＬ４−Ｃ、ＬＤＬ３＋４−Ｃなど）を減少させるのに有用である。いくつかの例においては、患者は、上記の血清リポタンパク質の１つまたはそれ以上のレベルの上昇を示す以外は別段健康である。例えば、患者は、処置の時点で心血管、血栓症または他の疾患もしくは障害の任意の他の危険因子を示さなくてもよい。しかしながら、他の例においては、患者は、血清レムナントコレステロールの上昇または他のリポタンパク質もしくはリポタンパク質画分の血清レベルの上昇により引き起こされるか、またはそれと相関する疾患または障害を有する、またはそれを発症する危険性があると診断されることに基づいて選択される。例えば、本発明の医薬組成物の投与の時点で、またはその前に、患者を、例えば、冠動脈疾患、急性心筋梗塞、無症状性アテローム性頸動脈硬化症、脳卒中、末梢動脈閉塞疾患などのような、心血管疾患または障害を有すると診断するか、またはそれを発症する危険性があると同定することができる。心血管疾患または障害は、いくつかの例においては、高コレステロール血症である。例えば、患者が、例えば、ヘテロ接合性家族性高コレステロール血症（ｈｅＦＨ）、ホモ接合性家族性高コレステロール血症（ｈｏＦＨ）、常染色体優性高コレステロール血症（ＡＤＨ、例えば、ＰＣＳＫ９遺伝子中の１つまたはそれ以上の機能獲得突然変異と関連するＡＤＨ）、ならびに家族性高コレステロール血症とは異なる高コレステロール血症（非ＦＨ）の発生のような、高コレステロール血症状態を有すると診断されるか、またはそれを発症する危険性があると同定される場合、本発明の方法を用いる処置のために患者を選択することができる。
【００３２】
他の例においては、本発明の医薬組成物の投与の時点で、またはその前に、患者を、脳血管閉塞疾患、末梢血管疾患、末梢動脈障害などのような動脈障害を有すると診断するか、またはそれを発症する危険性があると同定することができる。ある特定の実施形態においては、患者は、上記の疾患または障害の２つ以上の組合せを有するか、またはそれを発症する危険性があると診断されることに基づいて選択される。
【００３３】
さらに他の例においては、本発明の方法を用いて処置される患者は、年齢（例えば、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、または８０歳を超える年齢）、人種、性別（男性または女性）、運動習慣（例えば、規則的に運動する人、運動しない人）、他の元々存在する医学的状態（例えば、ＩＩ型糖尿病、高血圧など）、および現在の投薬状態（例えば、スタチン［例えば、セリバスタチン、アトルバスタチン、シンバスタチン、ピタバスタチン、ロスバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチンなど］、ベータ遮断薬、ナイアシンなどを現在摂取している）からなる群から選択される１つまたはそれ以上の因子に基づいて選択される。本発明はまた、従来のスタチン療法を受け付けない、非応答性である、または十分に応答しない患者における血清レムナントコレステロールおよび／または他のリポタンパク質画分レベルを減少させるための方法も含む。本発明の方法を用いて処置する前に、潜在的な患者をこれらの因子の１つまたはそれ以上に基づいて選択／スクリーニングすることができる（例えば、質問票、診断評価などによる）。
【００３４】
ＰＣＳＫ９阻害剤
本発明の方法は、ＰＣＳＫ９阻害剤を含む治療組成物を患者に投与することを含む。本明細書で用いられる場合、「ＰＣＳＫ９阻害剤」は、ヒトＰＣＳＫ９に結合するか、またはそれと相互作用し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏでＰＣＳＫ９の正常な生物学的機能を阻害する任意の薬剤である。ＰＣＳＫ９阻害剤のカテゴリーの非限定例としては、低分子ＰＣＳＫ９アンタゴニスト、ペプチドに基づくＰＣＳＫ９アンタゴニスト（例えば、「ペプチボディ」分子）、およびヒトＰＣＳＫ９に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片が挙げられる。
【００３５】
本明細書で用いられる用語「ヒトプロタンパク質変換酵素スブチリシン／ケキシン９型」または「ヒトＰＣＳＫ９」または「ｈＰＣＳＫ９」とは、配列番号７５４に示される核酸配列および配列番号７５５に記載のアミノ酸配列を有するＰＣＳＫ９、またはその生物活性断片を指す。
【００３６】
本明細書で用いられる用語「抗体」は、ジスルフィド結合により相互接続された４つのポリペプチド鎖、２つの重鎖（Ｈ）および２つの軽鎖（Ｌ）を含む免疫グロブリン分子、ならびにその多量体（例えば、ＩｇＭ）を指すことが意図される。それぞれの重鎖は、重鎖可変領域（ＨＣＶＲまたはＶＨと省略される）および重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含む。それぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲまたはＶＬと省略される）および軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、１つのドメイン（ＣＬ１）を含む。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存された領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域にさらに細分することができる。それぞれのＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配置された、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲを含む。本発明の異なる実施形態においては、抗ＰＣＳＫ９抗体（またはその抗原結合部分）のＦＲは、ヒト生殖系列配列と同一であってもよく、または天然であるか、もしくは人工的に改変されていてもよい。アミノ酸コンセンサス配列を、２つ以上のＣＤＲの比較分析に基づいて定義することができる。
【００３７】
本明細書で用いられる用語「抗体」はまた、完全な抗体分子の抗原結合断片も含む。本明細書で用いられる、抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合断片」などの用語は、抗原と特異的に結合して複合体を形成する、任意の天然の、酵素的に取得可能な、合成の、または遺伝子工学的に操作されたポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。抗体の抗原結合断片を、例えば、タンパク質分解的消化または抗体可変ドメインおよび場合により定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現を含む組換え遺伝子工学技術のような任意の好適な標準的技術を用いて、完全な抗体分子から誘導することができる。そのようなＤＮＡは公知であり、および／または例えば、商業的供給源、ＤＮＡライブラリー（例えば、ファージ−抗体ライブラリーなど）から容易に入手可能であるか、または合成することができる。ＤＮＡを配列決定し、化学的に、または分子生物学技術を用いることにより操作して、例えば、１つもしくはそれ以上の可変および／もしくは定常ドメインを好適な構成に配置するか、またはコドンを導入する、システイン残基を作出する、改変する、アミノ酸を付加するか、もしくは欠失させることなどができる。
【００３８】
抗原結合断片の非限定例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）Ｆｄ断片；（ｉｖ）Ｆｖ断片；（ｖ）一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（ｖｉ）ｄＡｂ断片；および（ｖｉｉ）抗体（例えば、ＣＤＲ３ペプチドのような単離された相補性決定領域（ＣＤＲ））、または拘束されたＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４ペプチドの超可変領域を模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位が挙げられる。他の操作された分子、例えば、ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、ナノボディ（例えば、一価ナノボディ、二価ナノボディなど）、小モジュラー免疫薬（ＳＭＩＰ）、およびサメ可変ＩｇＮＡＲドメインも、本明細書で用いられる表現「抗原結合断片」に包含される。
【００３９】
抗体の抗原結合断片は、典型的には、少なくとも１つの可変ドメインを含む。可変ドメインは、任意のサイズまたはアミノ酸組成のものであってもよく、一般には１つまたはそれ以上のフレームワーク配列に隣接するか、またはそれと読み枠が一致する少なくとも１つのＣＤＲを含む。ＶＬドメインと会合したＶＨドメインを有する抗原結合断片においては、ＶＨおよびＶＬドメインは任意の好適な配置中に互いに相対的に位置してもよい。例えば、可変領域は、二量体であってもよく、ＶＨ−ＶＨ、ＶＨ−ＶＬまたはＶＬ−ＶＬ二量体を含有してもよい。あるいは、抗体の抗原結合断片は、単量体ＶＨまたはＶＬドメインを含有してもよい。
【００４０】
ある特定の実施形態においては、抗体の抗原結合断片は、少なくとも１つの定常ドメインに共有的に連結された少なくとも１つの可変ドメインを含有してもよい。本発明の抗体の抗原結合断片内に見出すことができる可変および定常ドメインの非限定的な例示的構成としては、（ｉ）ＶＨ−ＣＨ１；（ｉｉ）ＶＨ−ＣＨ２；（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＨ３；（ｉｖ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２；（ｖ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｖｉ）ＶＨ−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｖｉｉ）ＶＨ−ＣＬ；（ｖｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１；（ｉｘ）ＶＬ−ＣＨ２；（ｘ）ＶＬ−ＣＨ３；（ｘｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２；（ｘｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｘｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ２−ＣＨ３；および（ｘｉｖ）ＶＬ−ＣＬが挙げられる。上記に列挙された例示的構成のいずれかなどの、可変および定常ドメインの任意の構成において、可変および定常ドメインは、互いに直接連結されていてもよく、または完全もしくは部分的なヒンジもしくはリンカー領域によって連結されていてもよい。ヒンジ領域は、単一のポリペプチド分子中の隣接する可変および／または定常ドメイン間の可撓性または半可撓性連結をもたらす少なくとも２個（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０個以上）のアミノ酸からなっていてもよい。さらに、本発明の抗体の抗原結合断片は、互いに、および／または１つもしくはそれ以上のＶＨもしくはＶＬドメインとの非共有的会合（例えば、ジスルフィド結合による）にある上記に列挙された可変および定常ドメインの構成のいずれかのホモ二量体またはヘテロ二量体（または他の多量体）を含んでもよい。
【００４１】
完全な抗体分子と同様、抗原結合断片は一特異的または多特異的（例えば、二特異的）であってもよい。抗体の多特異的抗原結合断片は、典型的には、少なくとも２つの異なる可変ドメインを含み、ここで、それぞれの可変ドメインは別々の抗原に、または同じ抗原上の異なるエピトープに特異的に結合することができる。本明細書に開示される例示的な二特異的抗体形式を含む、任意の多特異的抗体形式を、当業界で利用可能な日常的な技術を用いて、本発明の抗体の抗原結合断片の文脈における使用のために適合させることができる。
【００４２】
抗体の定常領域は、抗体が補体を固定し、細胞依存的細胞傷害性を媒介する能力において重要である。かくして、抗体のアイソタイプを、それが細胞傷害性を媒介する抗体にとって望ましいかどうかに基づいて選択することができる。
【００４３】
本明細書で用いられる用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列から誘導される可変および定常領域を有する抗体を含むことが意図される。それにも拘らず、本発明のヒト抗体は、例えば、ＣＤＲおよび特定のＣＤＲ３中に、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで無作為もしくは部位特異的突然変異誘発によって、またはｉｎ  ｖｉｖｏで体細胞突然変異によって導入された突然変異）を含んでもよい。しかしながら、本明細書で用いられる用語「ヒト抗体」は、マウスのような別の哺乳動物種の生殖系列から誘導されるＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列上に移植された抗体を含むことは意図されない。
【００４４】
本明細書で用いられる用語「組換えヒト抗体」は、宿主細胞中にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを用いて発現される抗体（以下でさらに説明される）、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離される抗体（以下でさらに説明される）、ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離される抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒら（１９９２）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２０：６２８７〜６２９５頁）、または他のＤＮＡ配列へのヒト免疫グロブリン遺伝子配列のスプライシングを含む任意の他の手段によって製造、発現、作出もしくは単離される抗体のような、組換え手段によって製造、発現、作出または単離される全てのヒト抗体を含むことが意図される。そのような組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列から誘導される可変および定常領域を有する。しかしながら、ある特定の実施形態においては、そのような組換えヒト抗体はｉｎ  ｖｉｔｒｏ突然変異誘発（または、ヒトＩｇ配列についてトランスジェニックである動物を用いる場合、ｉｎ  ｖｉｖｏ体細胞突然変異）にかけられ、かくして、組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列から誘導され、それと関連するが、ｉｎ  ｖｉｖｏでヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然には存在しなくてもよい配列である。
【００４５】
ヒト抗体は、ヒンジ異種性と関連する２つの形態で存在してもよい。１つの形態においては、免疫グロブリン分子は、二量体が鎖間重鎖ジスルフィド結合により一緒に保持される、およそ１５０〜１６０ｋＤａの安定な４鎖構築物を含む。第２の形態においては、二量体は鎖間ジスルフィド結合を介して連結されず、共有的に共役した軽鎖と重鎖を含む約７５〜８０ｋＤａの分子が形成される（半抗体）。これらの形態は、親和性精製後であっても分離するのが極めて困難であった。
【００４６】
様々な無傷のＩｇＧアイソタイプにおける第２の形態の出現頻度は、限定されるものではないが、抗体のヒンジ領域アイソタイプと関連する構造的相違に起因する。ヒトＩｇＧ４ヒンジのヒンジ領域中の単一アミノ酸置換は、典型的には、ヒトＩｇＧ１ヒンジを用いた場合に観察されるレベルにまで、第２の形態の出現を有意に減少させることができる（Ａｎｇａｌら（１９９３）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ３０：１０５）。本発明は、例えば、所望の抗体型の収率を改善するために、生産において望ましいものであり得るヒンジ、ＣＨ２またはＣＨ３領域中に１つまたはそれ以上の突然変異を有する抗体を包含する。
【００４７】
本明細書で用いられる場合、「単離された抗体」は、その天然の環境の少なくとも１つの構成要素から同定ならびに分離および／または回収された抗体を意味する。例えば、抗体が天然に存在するか、もしくは天然に生産される、生物の少なくとも１つの構成要素から、または組織もしくは細胞から分離または除去された抗体は、本発明の目的のための「単離された抗体」である。単離された抗体はまた、組換え細胞内のｉｎ  ｓｉｔｕの抗体も含む。単離された抗体は、少なくとも１つの精製または単離工程にかけられた抗体である。ある特定の実施形態によれば、単離された抗体は、他の細胞材料および／または化学物質を実質的に含まなくてもよい。
【００４８】
用語「特異的に結合する」などは、抗体またはその抗原結合断片が、生理的条件下で比較的安定である抗原と複合体を形成することを意味する。抗体が抗原に特異的に結合するかどうかを決定するための方法は、当業界で周知であり、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴などが挙げられる。例えば、本発明の文脈において用いられる場合、ＰＣＳＫ９に「特異的に結合する」抗体は、表面プラズモン共鳴アッセイにおいて測定された場合、約１０００ｎＭ未満、約５００ｎＭ未満、約３００ｎＭ未満、約２００ｎＭ未満、約１００ｎＭ未満、約９０ｎＭ未満、約８０ｎＭ未満、約７０ｎＭ未満、約６０ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約４０ｎＭ未満、約３０ｎＭ未満、約２０ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約４ｎＭ未満、約３ｎＭ未満、約２ｎＭ未満、約１ｎＭ未満または約０．５ｎＭ未満のＫＤでＰＣＳＫ９またはその部分に結合する抗体を含む。しかしながら、ヒトＰＣＳＫ９に特異的に結合する単離された抗体は、他の（非ヒト）種に由来するＰＣＳＫ９分子のような、他の抗原に対する交叉反応性を有してもよい。
【００４９】
本発明の方法にとって有用な抗ＰＣＳＫ９抗体は、抗体が誘導される対応する生殖系列配列と比較した場合、重鎖および軽鎖可変ドメインのフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域中に１つまたはそれ以上のアミノ酸置換、挿入および／または欠失を含んでもよい。本明細書に開示されるアミノ酸配列を、例えば、公共の抗体配列データベースから入手可能な生殖系列配列と比較することにより、そのような突然変異を容易に確認することができる。本発明は、本明細書に開示されるアミノ酸配列のいずれかから誘導される抗体、およびその抗原結合断片の使用を含む方法であって、１つまたはそれ以上のフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内の１つまたはそれ以上のアミノ酸が、抗体が誘導された生殖系列配列の対応する残基に、または別のヒト生殖系列配列の対応する残基に、または対応する生殖系列残基の保存的アミノ酸置換に突然変異された、前記方法を含む（そのような配列の変化を、本明細書では集合的に「生殖系列突然変異」と呼ぶ）。当業者であれば、本明細書に開示される重鎖および軽鎖可変領域配列から出発して、１つまたはそれ以上の個体の生殖系列突然変異またはその組合せを含むいくつかの抗体および抗原結合断片を容易に生産することができる。ある特定の実施形態においては、ＶＨおよび／またはＶＬドメイン内の全てのフレームワークおよび／またはＣＤＲ残基を、抗体が誘導された元の生殖系列配列中に見出される残基に復帰変異させる。他の実施形態においては、ある特定の残基のみ、例えば、ＦＲ１の最初の８個のアミノ酸内もしくはＦＲ４の最後の８個のアミノ酸内に見出される突然変異した残基のみ、またはＣＤＲ１、ＣＤＲ２もしくはＣＤＲ３内に見出される突然変異した残基のみを元の生殖系列配列に復帰変異させる。他の実施形態においては、１つまたはそれ以上のフレームワークおよび／またはＣＤＲ残基を、異なる生殖系列配列（すなわち、抗体が元々誘導された生殖系列配列とは異なる生殖系列配列）の対応する残基に突然変異させる。さらに、本発明の抗体は、フレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内の２つ以上の生殖系列突然変異の任意の組合せを含有してもよく、例えば、ある特定の個々の残基を特定の生殖系列配列の対応する残基に突然変異させるが、元の生殖系列配列とは異なるある特定の他の残基を維持するか、または異なる生殖系列配列の対応する残基に突然変異させる。一度得られたら、１つまたはそれ以上の生殖系列突然変異を含有する抗体および抗原結合断片を、改善された結合特異性、増大した結合親和性、改善または増強された拮抗または作動生物特性（場合によっては）、低下した免疫原性などの１つまたはそれ以上の所望の特性について容易に試験することができる。この一般的様式で得られた抗体および抗原結合断片の使用は、本発明に包含される。
【００５０】
本発明はまた、１つまたはそれ以上の保存的置換を有する本明細書に開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲおよび／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかの変異体を含む抗ＰＣＳＫ９抗体の使用を含む方法も含む。例えば、本発明は、本明細書に開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲおよび／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかと比較して、例えば、１０個以下、８個以下、６個以下、４個以下などの保存的アミノ酸置換を含むＨＣＶＲ、ＬＣＶＲおよび／またはＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ＰＣＳＫ９抗体の使用を含む。
【００５１】
本明細書で用いられる用語「表面プラズモン共鳴」とは、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）システム（Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ  ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を用いる、バイオセンサマトリックス内のタンパク質濃度の変化の検出によりリアルタイムの相互作用の分析を可能にする光学的現象を指す。
【００５２】
本明細書で用いられる用語「ＫＤ」は、特定の抗体−抗原相互作用の平衡解離定数を指すと意図される。
【００５３】
用語「エピトープ」とは、パラトープとして知られる抗体分子の可変領域中の特定の抗原結合部位と相互作用する抗原決定基を指す。単一の抗原が、１つより多いエピトープを有してもよい。かくして、異なる抗体は抗原上の異なる領域に結合し、異なる生物学的効果を有し得る。エピトープは立体構造または直線状であってもよい。立体構造エピトープは、直線状ポリペプチド鎖の異なるセグメントに由来する空間的に並置されたアミノ酸により生産される。直線状エピトープは、ポリペプチド鎖中の隣接するアミノ酸残基により生産されるものである。ある特定の環境においては、エピトープは、抗原上にサッカリドの部分、ホスホリル基、またはスルホニル基を含んでもよい。
【００５４】
ある特定の実施形態によれば、本発明の方法において用いられる抗ＰＣＳＫ９抗体は、ｐＨ依存的結合特性を有する抗体である。本明細書で用いられる場合、「ｐＨ依存的結合」の表現は、抗体またはその抗原結合断片が「中性ｐＨと比較して酸性ｐＨにおいてＰＣＳＫ９への結合の減少」を示すことを意味する（本開示の目的のために、両表現は互換的に用いることができる）。例えば、「ｐＨ依存的結合特性を有する」抗体は、酸性ｐＨよりも中性ｐＨにおいてより高い親和性でＰＣＳＫ９に結合する抗体およびその抗原結合断片を含む。ある特定の実施形態においては、本発明の抗体およびその抗原結合断片は、酸性ｐＨよりも中性ｐＨにおいて、少なくとも３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００倍以上高い親和性でＰＣＳＫ９に結合する。
【００５５】
本発明のこの態様によれば、ｐＨ依存的結合特性を有する抗ＰＣＳＫ９抗体は、親抗ＰＣＳＫ９抗体と比較して１つまたはそれ以上のアミノ酸変化を有してもよい。例えば、ｐＨ依存的結合特性を有する抗ＰＣＳＫ９抗体は、例えば、親抗ＰＣＳＫ９抗体の１つまたはそれ以上のＣＤＲ中に、１つまたはそれ以上のヒスチジン置換または挿入を含有してもよい。かくして、本発明のある特定の実施形態によれば、親抗体の１つまたはそれ以上のＣＤＲの１つまたはそれ以上のアミノ酸の、ヒスチジン残基との置換について以外は、親抗ＰＣＳＫ９抗体のＣＤＲアミノ酸配列と同一であるＣＤＲアミノ酸配列（例えば、重鎖および軽鎖ＣＤＲ）を含む抗ＰＣＳＫ９抗体を投与することを含む方法が提供される。ｐＨ依存的結合を有する抗ＰＣＳＫ９抗体は、親抗体の単一のＣＤＲ内に、または親抗ＰＣＳＫ９抗体の複数（例えば、２、３、４、５もしくは６個）のＣＤＲにわたって分布した、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９個以上のヒスチジン置換を有してもよい。例えば、本発明は、親抗ＰＣＳＫ９抗体の、ＨＣＤＲ１中に１つもしくはそれ以上のヒスチジン置換、ＨＣＤＲ２中に１つもしくはそれ以上のヒスチジン置換、ＨＣＤＲ３中に１つもしくはそれ以上のヒスチジン置換、ＬＣＤＲ１中に１つもしくはそれ以上のヒスチジン置換、ＬＣＤＲ２中に１つもしくはそれ以上のヒスチジン置換、および／またはＬＣＤＲ３中に１つもしくはそれ以上のヒスチジン置換を含むｐＨ依存的結合を有する抗ＰＣＳＫ９抗体の使用を含む。
【００５６】
本明細書で用いられる場合、「酸性ｐＨ」の表現は、６．０またはそれ未満のｐＨ（例えば、約６．０、約５．５未満、約５．０未満など）を意味する。「酸性ｐＨ」の表現は、約６．０、５．９５、５．９０、５．８５、５．８、５．７５、５．７、５．６５、５．６、５．５５、５．５、５．４５、５．４、５．３５、５．３、５．２５、５．２、５．１５、５．１、５．０５、５．０、またはそれ未満のｐＨ値を含む。本明細書で用いられる場合、「中性ｐＨ」の表現は、約７．０〜約７．４のｐＨを意味する。「中性ｐＨ」の表現は、約７．０、７．０５、７．１、７．１５、７．２、７．２５、７．３、７．３５、および７．４のｐＨ値を含む。
【００５７】
ヒト抗体の製造
トランスジェニックマウス中でヒト抗体を生成させる方法は当業界で公知である。任意のそのような公知の方法を本発明の文脈において用いて、ヒトＰＣＳＫ９に特異的に結合するヒト抗体を作製することができる。
【００５８】
ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（商標）技術（例えば、米国特許第６，５９６，５４１号、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）またはモノクローナル抗体を作成するための任意の他の公知の方法を用いて、ヒト可変領域とマウス定常領域とを有するＰＣＳＫ９に対する高親和性キメラ抗体を最初に単離する。ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）技術は、マウスが抗原刺激に応答してヒト可変領域とマウス定常領域とを含む抗体を生産するように、内因性マウス定常領域遺伝子座に作動可能に連結されたヒト重鎖および軽鎖可変領域を含むゲノムを有するトランスジェニックマウスの作成を含む。抗体の重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを単離し、ヒト重鎖および軽鎖定常領域をコードするＤＮＡに作動可能に連結する。次いで、そのＤＮＡを、完全ヒト抗体を発現することができる細胞中で発現させる。
【００５９】
一般に、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスに、対象となる抗原をチャレンジし、リンパ系細胞（Ｂ細胞など）を、抗体を発現するマウスから回収する。リンパ系細胞を、ミエローマ細胞系と融合して、不死化ハイブリドーマ細胞系を製造することができ、そのようなハイブリドーマ細胞系をスクリーニングおよび選択して、対象となる抗原に特異的な抗体を生産するハイブリドーマ細胞系を同定する。重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを単離し、重鎖および軽鎖の望ましいアイソタイプ定常領域に連結することができる。そのような抗体タンパク質を、ＣＨＯ細胞のような細胞中で生産させることができる。あるいは、抗原特異的キメラ抗体または軽鎖および重鎖の可変ドメインをコードするＤＮＡを、抗原特異的リンパ球から直接単離することができる。
【００６０】
最初に、ヒト可変領域とマウス定常領域とを有する高親和性キメラ抗体を単離する。当業者には公知の標準的な手順を用いて、親和性、選択性、エピトープなどの望ましい特徴について抗体を特性評価し、選択する。マウス定常領域を、所望のヒト定常領域と置き換えて、本発明の完全ヒト抗体、例えば、野生型または改変型ＩｇＧまたはＩｇＧ４を作成する。選択される定常領域は特定の使用に従って変化してもよいが、高親和性抗原結合および標的特異性特性は可変領域中に存在する。
【００６１】
一般に、本発明の方法において用いることができる抗体は、固相上または液相中に固定された抗原への結合によって測定された場合、上記のように高親和性を有する。マウス定常領域を、所望のヒト定常領域と置き換えて、本発明の完全ヒト抗体を作成する。選択される定常領域は特定の使用に応じて変化してもよいが、高親和性抗原結合および標的特異性特性は可変領域中に存在する。
【００６２】
本発明の方法の文脈において用いることができるＰＣＳＫ９に特異的に結合するヒト抗体または抗体の抗原結合断片の特定例としては、配列番号２、１８、２２、２６、４２、４６、５０、６６、７０、７４、９０、９４、９８、１１４、１１８、１２２、１３８、１４２、１４６、１６２、１６６、１７０、１８６、１９０、１９４、２１０、２１４、２１８、２３４、２３８、２４２、２５８、２６２、２６６、２８２、２８６、２９０、３０６、３１０、３１４、３３０、３３４、３３８、３５４、３５８、３６２、３７８、３８２、３８６、４０２、４０６、４１０、４２６、４３０、４３４、４５０、４５４、４５８、４７４、４７８、４８２、４９８、５０２、５０６、５２２、５２６、５３０、５４６、５５０、５５４、５７０、５７４、５７８、５９４、５９８、６０２、６１８、６２２、６２６、６４２、６４６、６５０、６６６、６７０、６７４、６９０、６９４、６９８、７１４、７１８、７２２、７３８および７４２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似する配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）内に含まれる３つの重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）を含む任意の抗体または抗原結合断片が挙げられる。前記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１０、２０、２４、３４、４４、４８、５８、６８、７２、８２、９２、９６、１０６、１１６、１２０、１３０、１４０、１４４、１５４、１６４、１６８、１７８、１８８、１９２、２０２、２１２、２１６、２２６、２３６、２４０、２５０、２６０、２６４、２７４、２８４、２８８、２９８、３０８、３１２、３２２、３３２、３３６、３４６、３５６、３６０、３７０、３８０、３８４、３９４、４０４、４０８、４１８、４２８、４３２、４４２、４５２、４５６、４６６、４７６、４８０、４９０、５００、５０４、５１４、５２４、５２８、５３８、５４８、５５２、５６２、５７２、５７６、５８６、５９６、６００、６１０、６２０、６２４、６３４、６４４、６４８、６５８、６６８、６７２、６８２、６９２、６９６、７０６、７１６、７２０、７３０、７４０および７４４からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似する配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）内に含まれる３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＶＲ１、ＬＣＶＲ２、ＬＣＶＲ３）を含んでもよい。
【００６３】
本発明のある特定の実施形態においては、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２／１０、１８／２０、２２／２４、２６／３４、４２／４４、４６／４８、５０／５８、６６／６８、７０／７２、７４／８２、９０／９２、９４／９６、９８／１０６、１１４／１１６、１１８／１２０、１２２／１３０、１３８／１４０、１４２／１４４、１４６／１５４、１６２／１６４、１６６／１６８、１７０／１７８、１８６／１８８、１９０／１９２、１９４／２０２、２１０／２１２、２１４／２１６、２１８／２２６、２３４／２３６、２３８／２４０、２４２／２５０、２５８／２６０、２６２／２６４、２６６／２７４、２８２／２８４、２８６／２８８、２９０／２９８、３０６／３０８、３１０／３１２、３１４／３２２、３３０／３３２、３３４／３３６、３３８／３４６、３５４／３５６、３５８／３６０、３６２／３７０、３７８／３８０、３８２／３８４、３８６／３９４、４０２／４０４、４０６／４０８、４１０／４１８、４２６／４２８、４３０／４３２、４３４／４４２、４５０／４５２、４５４／４５６、４５８／４６６、４７４／４７６、４７８／４８０、４８２／４９０、４９８／５００、５０２／５０４、５０６／５１４、５２２／５２４、５２６／５２８、５３０／５３８、５４６／５４８、５５０／５５２、５５４／５６２、５７０／５７２、５７４／５７６、５７８／５８６、５９４／５９６、５９８／６００、６０２／６１０、６１８／６２０、６２２／６２４、６２６／６３４、６４２／６４４、６４６／６４８、６５０／６５８、６６６／６６８、６７０／６７２、６７４／６８２、６９０／６９２、６９４／６９６、６９８／７０６、７１４／７１６、７１８／７２０、７２２／７３０、７３８／７４０および７４２／７４４からなる群から選択される重鎖と軽鎖の可変領域アミノ酸配列対（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）に由来する６つのＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含む。
【００６４】
本発明のある特定の実施形態においては、本発明の方法において用いることができる抗ＰＣＳＫ９抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号７６／７８／８０／８４／８６／８８（ｍＡｂ３１６Ｐ）および２２０／２２２／２２４／２２８／２３０／２３２（ｍＡｂ３００Ｎ）から選択されるＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列を有する（米国特許出願公開第２０１０／０１６６７６８号を参照されたい）。
【００６５】
本発明のある特定の実施形態においては、抗体またはその抗原結合断片は、２／１０、１８／２０、２２／２４、２６／３４、４２／４４、４６／４８、５０／５８、６６／６８、７０／７２、７４／８２、９０／９２、９４／９６、９８／１０６、１１４／１１６、１１８／１２０、１２２／１３０、１３８／１４０、１４２／１４４、１４６／１５４、１６２／１６４、１６６／１６８、１７０／１７８、１８６／１８８、１９０／１９２、１９４／２０２、２１０／２１２、２１４／２１６、２１８／２２６、２３４／２３６、２３８／２４０、２４２／２５０、２５８／２６０、２６２／２６４、２６６／２７４、２８２／２８４、２８６／２８８、２９０／２９８、３０６／３０８、３１０／３１２、３１４／３２２、３３０／３３２、３３４／３３６、３３８／３４６、３５４／３５６、３５８／３６０、３６２／３７０、３７８／３８０、３８２／３８４、３８６／３９４、４０２／４０４、４０６／４０８、４１０／４１８、４２６／４２８、４３０／４３２、４３４／４４２、４５０／４５２、４５４／４５６、４５８／４６６、４７４／４７６、４７８／４８０、４８２／４９０、４９８／５００、５０２／５０４、５０６／５１４、５２２／５２４、５２６／５２８、５３０／５３８、５４６／５４８、５５０／５５２、５５４／５６２、５７０／５７２、５７４／５７６、５７８／５８６、５９４／５９６、５９８／６００、６０２／６１０、６１８／６２０、６２２／６２４、６２６／６３４、６４２／６４４、６４６／６４８、６５０／６５８、６６６／６６８、６７０／６７２、６７４／６８２、６９０／６９２、６９４／６９６、６９８／７０６、７１４／７１６、７１８／７２０、７２２／７３０、７３８／７４０および７４２／７４４からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む。
【００６６】
医薬組成物および投与方法
本発明は、ＰＣＳＫ９阻害剤が医薬組成物内に含まれる、ＰＣＳＫ９阻害剤を患者に投与することを含む方法を含む。本発明の医薬組成物は、好適な担体、賦形剤、および好適な移動、送達、忍容性などを提供する他の薬剤と共に製剤化される。複数の適切な製剤を、あらゆる薬剤師に公知の処方集：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡに見出すことができる。これらの製剤としては、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、脂質（カチオン性またはアニオン性）含有小胞（ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）など）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油および油中水乳濁液、エマルジョンカルボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、およびカルボワックスを含有する半固体混合物が挙げられる。Ｐｏｗｅｌｌら、「Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」、ＰＤＡ（１９９８）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  Ｔｅｃｈｎｏｌ  ５２：２３８〜３１１頁も参照されたい。
【００６７】
様々な送達系が公知であり、本発明の医薬組成物を投与するために用いることができ、例えば、リポソーム中への封入、マイクロ粒子、マイクロカプセル、変異ウイルスを発現することができる組換え細胞、受容体媒介性エンドサイトーシスが挙げられる（例えば、Ｗｕら、１９８７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９〜４４３２頁を参照されたい）。投与方法としては、限定されるものではないが、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻内、硬膜外、および経口経路が挙げられる。前記組成物を、任意の都合の良い経路により、例えば、輸注またはボーラス注射により、上皮または粘膜皮膚系列（例えば、口腔粘膜、直腸および腸粘膜など）を介する吸収により投与してもよく、他の生物活性剤と一緒に投与してもよい。
【００６８】
本発明の医薬組成物を、標準的な注射針および注射筒を用いて皮下的または静脈内的に送達することができる。さらに、皮下送達に関して、ペン型送達デバイスが、本発明の医薬組成物を送達するのに容易に適用可能である。そのようなペン型送達デバイスは、再使用可能であるか、または使い捨てであってもよい。再使用可能なペン型送達デバイスは一般に、医薬組成物を含有する交換式カートリッジを用いる。一度、カートリッジ内の全ての医薬組成物が投与され、カートリッジが空になったら、空のカートリッジを容易に廃棄し、医薬組成物を含有する新しいカートリッジと交換することができる。次いで、ペン型送達デバイスを再使用することができる。使い捨てのペン型送達デバイスにおいては、交換式カートリッジはない。むしろ、使い捨てのペン型送達デバイスは、デバイス内のリザーバ中に保持された医薬組成物を予め充填されるようになる。一度、リザーバの医薬組成物が空になったら、デバイス全体が廃棄される。
【００６９】
いくつかの再使用可能なペン型および自己注射器型送達デバイスが、本発明の医薬組成物の皮下送達において適用可能である。例としては、限定されるものではないが、ほんの数例を挙げると、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ  Ｍｕｍｆｏｒｄ、Ｉｎｃ．、Ｗｏｏｄｓｔｏｃｋ、ＵＫ）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｂｅｒｇｄｏｒｆ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＨＵＭＡＬＯＧ  ＭＩＸ７５／２５（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＩＮ７０／３０（商標）ペン（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏ．、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩ（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＮＯＶＯＰＥＮ  ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＢＤ（商標）ペン（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ  ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ  ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）、およびＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（ｓａｎｏｆｉ−ａｖｅｎｔｉｓ、Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）が挙げられる。本発明の医薬組成物の皮下送達において適用可能である使い捨てのペン型送達デバイスの例としては、限定されるものではないが、ほんの数例を挙げると、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（ｓａｎｏｆｉ−ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）、およびＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫ（商標）自己注射器（Ａｍｇｅｎ、Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ、ＣＡ）、ＰＥＮＬＥＴ（商標）（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ、Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ、Ｌ．Ｐ．）、およびＨＵＭＩＲＡ（商標）ペン（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｓ、Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ  ＩＬ）が挙げられる。
【００７０】
ある特定の状況においては、医薬組成物を制御放出系において送達することができる。一実施形態においては、ポンプを用いることができる（Ｌａｎｇｅｒ、上掲；Ｓｅｆｔｏｎ、１９８７、ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１頁を参照されたい）。別の実施形態においては、ポリマー材料を用いることができる；Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ、ＬａｎｇｅｒおよびＷｉｓｅ（編）、１９７４、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．、Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、Ｆｌｏｒｉｄａを参照されたい。さらに別の実施形態においては、制御放出系を、組成物の標的の近くに配置し、かくして、全身用量のほんの一部を要するようにすることができる（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ、１９８４、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ、上掲、ｖｏｌ．２、１１５〜１３８頁を参照されたい）。他の制御放出系は、Ｌａｎｇｅｒ、１９９０、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７〜１５３３頁による概説で考察されている。
【００７１】
注射用調製物は、静脈内、皮下、皮内および筋肉内注射、点滴などのための剤形を含んでもよい。これらの注射用調製物を、公知の方法により製造することができる。例えば、注射用調製物を、例えば、注射のために従来用いられる滅菌水性媒体または油性媒体中に、上記の抗体またはその塩を溶解、懸濁または乳化することにより製造することができる。注射のための水性媒体としては、例えば、アルコール（例えば、エタノール）、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ−５０（水素化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加物）］などの適切な可溶化剤と共に用いることができる、生理食塩水、グルコースおよび他の補助剤などを含有する等張溶液が存在する。油性媒体としては、例えば、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどの可溶化剤と共に用いることができる、ゴマ油、大豆油などが用いられる。かくして製造された注射液を、適切なアンプル中に充填することが好ましい。
【００７２】
有利には、上記の経口または非経口使用のための医薬組成物を、活性成分の用量に適合するように合わせた単位用量中の剤形に製造する。単位用量中のそのような剤形としては、例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、注射液剤（アンプル剤）、坐剤などが挙げられる。
【００７３】
用量
本発明の方法に従って対象に投与されるＰＣＳＫ９阻害剤（例えば、抗ＰＣＳＫ９抗体）の量は、一般には、治療上有効量である。本明細書で用いられる場合、「治療有効量」の語句は、レムナントコレステロール（ＲＬＰ−Ｃ）、ＶＬＤＬ−Ｃ、ＶＬＤＬ１−Ｃ、ＶＬＤＬ２−Ｃ、ＶＬＤＬ１＋２−Ｃ、ＶＬＤＬ３−Ｃ、ＩＤＬ−Ｃ、ＬＤＬ１−Ｃ、ＬＤＬ２−Ｃ、ＬＤＬ３−Ｃ、ＬＤＬ４−Ｃ、ＬＤＬ３＋４−Ｃからなる群から選択される１つまたはそれ以上のパラメータにおける検出可能な減少（ベースラインからの少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％以上の減少）をもたらすＰＣＳＫ９阻害剤の用量を意味する。あるいは、動物モデルを用いて、候補ＰＣＳＫ９阻害剤の特定の量が治療有効量であるかどうかを確立することができる。
【００７４】
抗ＰＣＳＫ９抗体の場合、治療上有効量は、約０．０５ｍｇ〜約６００ｍｇ、例えば、約０．０５ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１．０ｍｇ、約１．５ｍｇ、約２．０ｍｇ、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約９０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１８０ｍｇ、約１９０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２１０ｍｇ、約２２０ｍｇ、約２３０ｍｇ、約２４０ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２６０ｍｇ、約２７０ｍｇ、約２８０ｍｇ、約２９０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３１０ｍｇ、約３２０ｍｇ、約３３０ｍｇ、約３４０ｍｇ、約３５０ｍｇ、約３６０ｍｇ、約３７０ｍｇ、約３８０ｍｇ、約３９０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４１０ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４３０ｍｇ、約４４０ｍｇ、約４５０ｍｇ、約４６０ｍｇ、約４７０ｍｇ、約４８０ｍｇ、約４９０ｍｇ、約５００ｍｇ、約５１０ｍｇ、約５２０ｍｇ、約５３０ｍｇ、約５４０ｍｇ、約５５０ｍｇ、約５６０ｍｇ、約５７０ｍｇ、約５８０ｍｇ、約５９０ｍｇ、または約６００ｍｇの抗ＰＣＳＫ９抗体であってもよい。
【００７５】
個々の用量中に含まれる抗ＰＣＳＫ９抗体の量を、患者の体重１キログラムあたりの抗体のミリグラム数（すなわち、ｍｇ／ｋｇ）を単位として表すことができる。例えば、抗ＰＣＳＫ９抗体を、患者の体重１ｋｇあたり約０．０００１〜約１０ｍｇの用量で患者に投与することができる。
【００７６】
組合せ療法
ある特定の実施形態によれば、本発明の方法は、本発明の医薬組成物の投与の時点で、またはその直前で高コレステロール血症の処置のための治療レジメン上にある患者に抗ＰＣＳＫ９抗体を含む医薬組成物を投与することを含んでもよい。例えば、高コレステロール血症と以前に診断されたことがある患者は、抗ＰＣＳＫ９抗体を含む医薬組成物の投与の前に、および／またはそれと同時に、別の薬物の安定な治療レジメンを処方されており、それを摂取していてもよい。以前の、または同時的な治療レジメンは、例えば、（１）スタチン（例えば、セリバスタチン、アトルバスタチン、シンバスタチン、ピタバスタチン、ロスバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチンなど）のような、３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル（ＨＭＧ）−コエンザイムＡ（ＣｏＡ）リダクターゼを阻害することによりコレステロール合成の細胞枯渇を誘導する薬剤；（２）コレステロール取込みおよび／もしくは胆汁酸再吸収を阻害する薬剤；（３）リポタンパク質異化を増加させる薬剤（ナイアシンのような）；ならびに／または（４）２２−ヒドロキシコレステロールのようなコレステロール除去において役割を果たすＬＸＲ転写因子のアクチベータを含んでもよい。ある特定の実施形態においては、患者は、抗ＰＣＳＫ９抗体の投与の前、またはそれと同時に、エゼチミブ＋シンバスタチンのような治療剤；胆汁樹脂（例えば、コレスチラミン、コレスチポール、コレセベラム）を含むスタチン；ナイアシン＋スタチン（例えば、ナイアシンとロバスタチン）；またはオメガ−３−脂肪酸エチルエステル（例えば、オマコール）のような他の脂質低下剤との固定的組合せにある。
【００７７】
投与レジメン
本発明のある特定の実施形態によれば、複数用量のＰＣＳＫ９阻害剤（すなわち、ＰＣＳＫ９阻害剤を含む医薬組成物）を、規定の時間経過にわたって対象に投与することができる。本発明のこの態様による方法は、複数用量のＰＣＳＫ９阻害剤を対象に逐次的に投与することを含む。本明細書で用いられる場合、「逐次的に投与すること」とは、それぞれの用量のＰＣＳＫ９阻害剤を、異なる時点で、例えば、所定の間隔（例えば、時間、日、週または月）により隔てられた異なる日に対象に投与することを意味する。本発明は、単回初回用量のＰＣＳＫ９阻害剤、次いで、１つまたはそれ以上の第２の用量のＰＣＳＫ９阻害剤、場合により次いで、１つまたはそれ以上の第３の用量のＰＣＳＫ９阻害剤を患者に逐次的に投与することを含む方法を含む。
【００７８】
用語「初回用量」、「第２の用量」および「第３の用量」とは、ＰＣＳＫ９阻害剤を含む医薬組成物の個々の用量の投与の時間的順序を指す。かくして、「初回用量」は、処置レジメンの開始時に投与される用量である（「ベースライン用量」とも呼ばれる）；「第２の用量」は初回用量の後に投与される用量である；「第３の用量」は第２の用量の後に投与される用量である。初回、第２の、および第３の用量は全て、同じ量のＰＣＳＫ９阻害剤を含有してもよいが、一般には、投与頻度に関して互いに異なっていてもよい。しかしながら、ある特定の実施形態においては、初回、第２の、および／または第３の用量に含有されるＰＣＳＫ９阻害剤の量は、処置の経過中に互いに異なる（例えば、必要に応じて上方または下方に調整される）。ある特定の実施形態においては、２つまたはそれ以上（例えば、２、３、４、または５）の用量を、「負荷用量」として処置レジメンの開始時に投与した後、その後の用量をより低い頻度ベースで投与する（例えば、「維持用量」）。
【００７９】
本発明の例示的実施形態によれば、それぞれの第２の、および／または第３の用量は、直前の用量の１〜２６週間（例えば、１、１  １／２、２、２  １／２、３、３  １／２、４、４  １／２、５、５  １／２、６、６  １／２、７、７  １／２、８、８  １／２、９、９  １／２、１０、１０  １／２、１１、１１  １／２、１２、１２  １／２、１３、１３  １／２、１４、１４  １／２、１５、１５  １／２、１６、１６  １／２、１７、１７  １／２、１８、１８  １／２、１９、１９  １／２、２０、２０  １／２、２１、２１  １／２、２２、２２  １／２、２３、２３  １／２、２４、２４  １／２、２５、２５  １／２、２６、２６  １／２、またはそれ以上）後に投与される。本明細書で用いられる語句「直前の用量」とは、複数の投与の順序において、介在する用量がない順序ですぐ次の用量の投与の前に患者に投与される抗原結合分子の用量を意味する。
【００８０】
本発明のこの態様による方法は、任意の数の第２および／または第３の用量のＰＣＳＫ９阻害剤を患者に投与することを含んでもよい。例えば、ある特定の実施形態においては、単一の第２の用量のみを患者に投与する。他の実施形態においては、２つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、またはそれ以上）の第２の用量を患者に投与する。同様に、ある特定の実施形態においては、単一の第３の用量のみを患者に投与する。他の実施形態においては、２つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、またはそれ以上）の第３の用量を患者に投与する。
【００８１】
複数の第２の用量を含む実施形態においては、それぞれの第２の用量を、他の第２の用量と同じ頻度で投与することができる。例えば、それぞれの第２の用量を、直前の用量の１〜２、４、６、８週間またはそれ以上後に患者に投与することができる。同様に、複数の第３の用量を含む実施形態においては、それぞれの第３の用量を、他の第３の用量と同じ頻度で投与することができる。例えば、それぞれの第３の用量を、直前の用量の１〜２、４、６、８週間またはそれ以上後に患者に投与することができる。あるいは、第２および／または第３の用量を患者に投与する頻度は、処置レジメンの経過にわたって変化してもよい。投与の頻度を、臨床検査後に個々の患者の必要性に応じて医師によって処置の経過中に調整することもできる。
【００８２】
本発明は、漸増（ｕｐ−ｔｉｔｒａｔｉｏｎ）オプション（本明細書では「用量改変」とも呼ばれる）を含む投与レジメンを含む。本明細書で用いられる場合、「漸増オプション」とは、特定数の用量のＰＣＳＫ９阻害剤を受けた後、患者が１またはそれ以上の規定の治療パラメータの特定の減少を達成しなかった場合、その後、ＰＣＳＫ９阻害剤の用量を増加させることを意味する。例えば、２週間毎に１回の頻度での患者への７５ｍｇ用量の抗ＰＣＳＫ９抗体の投与を含む治療レジメンの場合、８週間後に（すなわち、第０週、第２週および第４週、第６週および第８週で投与された５つの用量）、患者が７０ｍｇ／ｄＬ未満の血清ＬＤＬ−Ｃ濃度を達成していなかった場合、抗ＰＣＳＫ９抗体の用量を、その後、例えば、２週間毎に１回投与される（例えば、第１０週もしくは第１２週、またはそれ以降で開始する）、１５０ｍｇに増加させる。
【実施例】
【００８３】
以下の実施例は、本発明の方法および組成物を作製および使用する方法の完全な開示および説明を当業者に提供するために記載されるものであり、本発明者らがその発明と見なすものの範囲を限定することを意図するものではない。用いられる数（例えば、量、温度など）に関して正確性を確保するための努力が為されたが、いくらかの実験誤差および偏差もあるべきである。別途指摘しない限り、部は重量部であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏であり、圧力は大気圧または大気圧近くである。
【００８４】
〔実施例１〕
ヒトＰＣＳＫ９に対するヒト抗体の作成
ヒト抗ＰＣＳＫ９抗体を、米国特許第７，６０８，６９３号に記載のように作成した。以下の実施例で用いられる例示的ＰＣＳＫ９阻害剤は、「ｍＡｂ３１６Ｐ」と命名されるヒト抗ＰＣＳＫ９抗体である（科学文献では「アリロクマブ」とも呼ばれる）。ｍＡｂ３１６Ｐは、以下のアミノ酸配列特性：配列番号９０を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；配列番号９２を含む軽鎖可変ドメイン（ＬＣＶＲ）；配列番号７６を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）；配列番号７８を含むＨＣＤＲ２；配列番号８０を含むＨＣＤＲ３；配列番号８４を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）；配列番号８６を含むＬＣＤＲ２；および配列番号８８を含むＬＣＤＲ３を有する。
【００８５】
〔実施例２〕
抗ＰＣＳＫ９抗体レベルと低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）レベルとの間の動力学
はじめに
ｍＡｂ３１６Ｐの第Ｉ相および第ＩＩ相試験に由来する薬物動態および薬力学データの記述分析を行って、ｍＡｂ３１６Ｐ、ＰＣＳＫ９およびＬＤＬ−Ｃレベルの間の関係を特徴付けた。３つの異なる臨床試験を、この分析において含有させた。
【００８６】
（１）単回用量試験：バックグラウンドスタチン療法を受けていない健康な対象における第Ｉ相、単回用量試験において、対象は単回皮下（ＳＣ）用量のｍＡｂ３１６Ｐ  ５０、１００、１５０および２５０ｍｇ、またはプラセボを受けた。
【００８７】
（２）複数用量試験：アトルバスタチン療法を受けているヘテロ接合性家族性高コレステロール血症（ＨｅＦＨ）および非家族性高コレステロール血症（ＦＨ）患者ならびに食事のみを受ける非ＦＨ患者のコホートにおける第Ｉ相試験。アトルバスタチンを受ける患者を、１日目、２９日目、および４３日目にＳＣ投与されるｍＡｂ３１６Ｐ（５０、１００、もしくは１５０ｍｇ）またはプラセボに無作為化した。食事のみを受ける非ＦＨ患者を、１日目および２９日目にＳＣ投与されるｍＡｂ３１６Ｐ  １５０ｍｇまたはプラセボに無作為化した。
【００８８】
（３）第ＩＩ相試験：アトルバスタチン療法を受ける高コレステロール血症患者における１２週の試験：患者を、２週間毎（Ｑ２Ｗ）にｍＡｂ３１６Ｐ  ５０、１００、もしくは１５０ｍｇ  ＳＣ、４週間毎（Ｑ４Ｗ）に２００もしくは３００ｍｇ  ＳＣ、またはプラセボに無作為化した。
【００８９】
結果
ｍＡｂ３１６Ｐ  １５０ｍｇ  ＳＣの単回投与は、循環遊離ＰＣＳＫ９に迅速に結合し、そのレベルを迅速に減少させた；この後、ＬＤＬ−Ｃが低下した。出発レベルに向かう遊離ＰＣＳＫ９の回復は、ＬＤＬ−Ｃレベルの回復に先行することがわかった（図１）。遊離ＰＣＳＫ９レベルは、ＨｅＦＨまたは非ＦＨ患者におけるｍＡｂ３１６Ｐ  ５０、１００、または１５０ｍｇ  ＳＣの投与後３日目までに底に達した（図２）。出発レベルへの遊離ＰＣＳＫ９の回復は、ｍＡｂ３１６Ｐとアトルバスタチンを受けた患者に対してｍＡｂ３１６Ｐと食事のみを受けた患者においてより遅かった（図２）。最大の平均ＬＤＬ−Ｃ減少は、５０ｍｇおよび１００ｍｇ用量については８日目に、１５０ｍｇ用量については１５日目に記録された；遊離ＰＣＳＫ９濃度と比較したこの遅延は、おそらく新しいＬＤＬ−Ｃ受容体の生成にとって必要とされる時間に起因するものである。１５０ｍｇ用量の投与後の総ｍＡｂ３１６ＰとＬＤＬ−Ｃとの関係を示す代表的なヒステリシス曲線を、図３に示す。
【００９０】
食事のみと比較して、スタチンを摂取する患者において、より高いベースライン遊離ＰＣＳＫ９レベルが観察された（図４）。ｍＡｂ３１６Ｐおよび食事療法のみと比較して、同時的スタチン療法に関してｍＡｂ３１６Ｐの標的媒介性クリアランスの増加があった（生成速度の増大をおそらく反映する、より高い遊離ＰＣＳＫ９レベルに起因する）。これは、４週間の投薬間隔（１日目〜２９日目）にわたるＬＤＬ−Ｃ低下の持続期間に影響すると考えられ、これは、食事のみに対して同時的スタチン療法に関して減少した；しかしながら、この効果は、２週間の投薬間隔にわたって見られなかった（２９日目〜４３日目）（図５）。
【００９１】
同時的スタチン療法を受ける高コレステロール血症（非ＦＨ）患者においては、ｍＡｂ３１６Ｐ  Ｑ２Ｗは、１２週で均一に強力なＬＤＬ−Ｃ低下をもたらした。Ｑ２Ｗ投薬レジメンにある患者は、Ｑ４Ｗ投薬に対して１２週でＬＤＬ−Ｃ応答のより低い変動性を示した（図６）；変動係数は、１５０ｍｇ  Ｑ２Ｗおよび３００ｍｇ  Ｑ４Ｗについて、それぞれ、１６％および４９％であった。
【００９２】
結論
動力学は、ｍＡｂ３１６Ｐ、遊離ＰＣＳＫ９およびＬＤＬ−Ｃレベルの間で明らかであった。ｍＡｂ３１６Ｐ処置は、投与の３日以内に遊離ＰＣＳＫ９レベルの減少をもたらし、ＬＤＬ−Ｃの減少のピークは投与後８〜１５日であった。
【００９３】
ｍＡｂ３１６Ｐのクリアランスは、遊離ＰＣＳＫ９へのその結合によって促進された（標的媒介性クリアランス）。より低レベルの遊離ＰＣＳＫ９は、より低い標的媒介性クリアランスを介してより長い効能の持続期間をもたらした。以前の試験により、スタチンの投与が遊離ＰＣＳＫ９の生成を増加させることが示された。ここで分析される試験においては、ｍＡｂ３１６Ｐ＋食事のみを受けた患者は、ｍＡｂ３１６Ｐ＋アトルバスタチン療法を受けた患者と比較して、より低いベースライン遊離ＰＣＳＫ９レベルおよびより高いｍＡｂ３１６Ｐ血中濃度を有していた。
【００９４】
同時的スタチン療法を受ける患者においては、Ｑ２Ｗで投与されたｍＡｂ３１６Ｐは、Ｑ４Ｗ投薬レジメンと比較して、投薬間隔の終わりにＬＤＬ−Ｃ低下のより低い変化を達成した。Ｑ４Ｗ投薬においては、標的媒介性クリアランスの患者間の相違（他の因子のうち）は、投与後第２週と第４週の間での最大ＬＤＬ−Ｃの持続期間の相違、したがって、投与後４週間で達成された効能のより広い相違に寄与すると考えられた。これらの相違は、用量をＱ２Ｗで投与した場合には観察されなかった。
【００９５】
〔実施例３Ａ〕
抗ＰＣＳＫ９抗体は血清レムナントリポタンパク質画分、超低密度リポタンパク質、トリグリセリド、およびリポタンパク質（ａ）［Ｌｐ（ａ）］のコレステロール濃度を減少させる
はじめに
超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）レベルの増大は、早期アテローム性動脈硬化症の素因であるアテローム生成性脂質異常症のパターンの一部を形成する。レムナントリポタンパク質は、ＶＬＤＬ脂肪分解の生成物であり、ＶＬＤＬ３および中間密度リポタンパク質（ＩＤＬ、ＬＤＬ形成の直接的な前駆体）を含む。
【００９６】
リポタンパク質（ａ）［Ｌｐ（ａ）］は、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）粒子とほぼ同じサイズであるコレステロールに富むリポタンパク質のａｐｏＢ成分に共有結合したアポリポタンパク質（ａ）［ａｐｏ（ａ）］からなる。Ｌｐ（ａ）代謝は、多くは遺伝的調節下にあり、９０％を超えるその血漿濃度は、ａｐｏ（ａ）遺伝子（ＬＰＡ）で定量的および定性的多型性によって影響される。Ｌｐ（ａ）レベルの上昇は、心血管疾患の独立した危険因子であると考えられ、その危険性はレベルが上昇するにつれて増大し続ける。Ｌｐ（ａ）の上昇はコレステロールの血管内膜への沈着によってアテローム性動脈硬化症を促進し得るが、それはプラスミノーゲンとの高い相同性のため血栓症をも促進するが、それはプロテアーゼ活性を欠く。冠動脈造影を受けている患者においては、３０ｍｇ／ｄＬを超えるＬｐ（ａ）濃度は、血管造影による狭窄および主要冠動脈イベントの危険性の増大と関連することが示されている。さらに、Ｌｐ（ａ）レベルおよび遺伝子型は、大動脈弁石灰化と関連することが示されており、それは原因において役割を果たし得ることを示唆している。
【００９７】
本実施例の目的は、プロタンパク質変換酵素スブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）に対する完全ヒトモノクローナル抗体であるｍＡｂ３１６Ｐが、ＶＬＤＬおよびリポタンパク質レムナントの血清レベルを減少させ、血清ＬＤＬ−Ｃおよび非ＨＤＬ−Ｃを減少させるその能力に寄与するという仮説を試験し、患者におけるｍＡｂ３１６ＰのＬｐ（ａ）低下活性を確認することであった。
【００９８】
３つの多施設、二重盲検、平行群、プラセボ対照試験を、原発性高コレステロール血症（試験Ａ、ｎ＝１８３；試験Ｂ、ｎ＝９２）またはヘテロ接合性家族性高コレステロール血症（試験Ｃ、ｎ＝７７）を有する患者において行った。３つの試験に関する設計および投薬の概要を、表１に示す。
【００９９】
【表１】
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【０１００】
試験Ｂにおいて、全ての患者は無作為化の前にアトルバスタチン（ＡＴＶ）１０ｍｇを受け、プラセボおよび１つのｍＡｂ３１６Ｐアームにおいて無作為化処置の開始時にＡＴＶ  ８０ｍｇに漸増された。
【０１０１】
バックグラウンドアトルバスタチンまたはスタチン＋／−エゼチミブにある患者は、試験に応じて、２または４週間毎（Ｑ２Ｗ、Ｑ４Ｗ）に皮下的（ＳＣ）に投与されるｍＡｂ３１６Ｐ  ５０〜３００ｍｇを受けた。ｍＡｂ３１６Ｐ  １５０ｍｇ  Ｑ２Ｗ用量は、３つ全ての試験に共通であった。
【０１０２】
ポストホック分析において、垂直型自動プロファイル（ＶＡＰ）試験によりリポタンパク質をサブ分画化した。ＶＡＰ法は、リポタンパク質画分を、垂直型ローター中でのその密度によって分離し、それぞれのリポタンパク質クラスおよびサブクラスの高い分解を可能にする単一直接超遠心分離試験である。チューブの底部を穿刺し、酵素的コレステロール試薬の添加後に分光光度計を用いてそれぞれの層中のコレステロールを測定した。ｍＡｂ３１６Ｐ  １５０ｍｇ  Ｑ２Ｗ対プラセボで処置された患者におけるＶＬＤＬ−Ｃ、ＶＬＤＬ１＋２−Ｃ（「大浮遊」ＶＬＤＬ粒子中のコレステロールの尺度）、トリグリセリド（ＴＧ）、ＶＬＤＬ３−Ｃ、ＩＤＬ−Ｃおよび総レムナントリポタンパク質コレステロールレベル（ＲＬＰ−Ｃ；ＶＬＤＬ３−Ｃ＋ＩＤＬ−Ｃ）のパーセント変化を、ＡＮＣＯＶＡを用いて、１２週（試験Ａ）、８週（試験Ｂ）および６週（試験Ｃ）で分析した。
【０１０３】
さらに、ベースラインおよび処置上のＬｐ（ａ）レベルを、ｍＡｂ３１６Ｐ  １５０ｍｇ  Ｑ２Ｗまたはプラセボを受ける３つの異なる第２相試験からの患者において評価した。全ての第２相試験において、Ｌｐ（ａ）レベルを、同じ実験室で、同じ方法を用いて測定した。３つの試験の改変包括解析（ｉｎｔｅｎｔｉｏｎ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ）集団からのベースラインおよび処置の終わり（第８／１２週での処置上の値または最後の利用可能な処置上の繰越値）でのＬｐ（ａ）レベルに関するデータをプールし、ｍＡｂ３１６Ｐ  １５０ｍｇ  Ｑ２Ｗおよびプラセボに関するベースラインからのパーセンテージ変化を、処置群に関する共分散分析および固定効果としての試験および共変量としてのベースラインＬｐ（ａ）を用いて比較した。これらの予備分析と関連するＰ値は、記述目的のためだけに提供されたものであり、多重度について調整されなかった。Ｌｐ（ａ）およびＬＤＬ−Ｃにおけるベースラインからのパーセンテージ変化間の関係を、線形回帰を用いて評価し、Ｓｐｅａｒｍａｎの相関係数を算出した。
【０１０４】
結果／結論
３つの試験において、ＴＧ、ＶＬＤＬ−Ｃ、およびレムナントリポタンパク質のコレステロール含量の減少を、ｍＡｂ３１６Ｐ対プラセボに関して観察した。その結果を、表２および図７〜９にまとめる。
【０１０５】
【表２】
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【０１０６】
アテローム生成性リポタンパク質の全スペクトル（ＬＤＬ−Ｃ、ＩＤＬ−Ｃ、ＶＬＤＬ−ＣおよびＲＬＰサブ画分）は、ｈｅＦＨ／非ＦＨ患者において、脂質低下療法（スタチン±エゼチミブ）のバックグラウンドに対して、ｍＡｂ３１６Ｐによって減少した。したがって、本実施例は、ＶＬＤＬ３−ＣおよびＩＤＬ−Ｃを含む、ＶＡＰにより分離可能なレムナントリポタンパク質画分のコレステロール濃度の有意な減少に加えて、ｍＡｂ３１６Ｐが血清ＴＧおよびＶＬＤＬ−Ｃを有意に減少させたことを例示する。
【０１０７】
ベースラインおよび処置上のＬｐ（ａ）のデータは、プールされた分析集団中、ｍＡｂ３１６Ｐ  １５０ｍｇ  Ｑ２Ｗを受けた１０８人の患者のうちの１０２人について利用可能であり、プラセボを受けた７７人の患者のうちの７４人について利用可能であった。ベースライン値を表３に示す。
【０１０８】
【表３】
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【０１０９】
表３に示されたように、ｍＡｂ３１６Ｐで処置された３６人の患者（３５％）およびプラセボで処置された２５人の患者（３３％）が、５０ｍｇ／ｄＬを超えるベースラインＬｐ（ａ）を有し、ＥＡＳガイドラインにより高リスクカットポイントと考えられた。
【０１１０】
Ｌｐ（ａ）のベースラインからの絶対および中央減少パーセンテージを、表４にまとめる。
【０１１１】
【表４】
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【０１１２】
表４に示されたように、Ｌｐ（ａ）におけるベースラインからの中央パーセンテージ減少は、ｍＡｂ３１６Ｐ  １５０ｍｇ  Ｑ２Ｗに関しては３０．３％であったのに対して、プラセボに関しては０．３％であった（Ｐ＜０．０００１）。ベースラインからのＬｐ（ａ）の絶対中央減少は、より高いベースラインＬｐ（ａ）を有する患者において実質的により高かった。まとめると、ｍＡｂ３１６Ｐ  １５０ｍｇ  Ｑ２Ｗを用いて行われた３つの第２相試験からプールされたデータの分析により、５０ｍｇ／ｄＬを超えるベースラインＬｐ（ａ）を有する患者におけるものを含む、プラセボに対するＬｐ（ａ）の有意な減少が示された。Ｌｐ（ａ）の上昇のため心血管疾患の危険性がより高いと考えられる患者において、Ｌｐ（ａ）のパーセンテージ減少は、Ｌｐ（ａ）のより大きい絶対減少をもたらす同様の規模のものであると考えられた。
【０１１３】
〔実施例３Ｂ〕
抗ＰＣＳＫ９抗体は血清中のアポリポタンパク質ＣＩＩおよびＣＩＩＩレベルを減少させる
はじめに
アポタンパク質（ａｐｏ）ＣＩＩＩは、ＶＬＤＬトリグリセリドのリポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）媒介性異化を阻害する。Ａｐｏ  ＣＩＩは、ベースライントリグリセリドレベルに依存し得るＶＬＤＬおよびＬＰＬ活性とのより複雑な関係を有すると考えられる。Ａｐｏ  ＣＩＩは、一般に、ＬＰＬの重要なアクチベータである。
【０１１４】
ＬＰＬはＶＬＤＬおよびそのレムナントのトリグリセリド塊を加水分解する。本実施例では、アポタンパク質ＣＩＩおよびＣＩＩＩの血清レベルに影響することによってＶＬＤＬ−Ｃおよびレムナントを減少させる抗ＰＣＳＫ９抗体ｍＡｂ３１６Ｐの能力を調査した。
【０１１５】
３つの多施設、二重盲検、平行群、プラセボ対照試験を、原発性（非家族性）高コレステロール血症（非ＦＨ）（試験Ａ、ｎ＝１８３；試験Ｂ、ｎ＝９２）またはヘテロ接合性家族性高コレステロール血症（ｈｅＦＨ）（試験Ｃ、ｎ＝７７）を有する患者において行った。患者（アトルバスタチンまたはスタチン＋／−エゼチミブを受けていた）を、試験に応じて、２週間毎（Ｑ２Ｗ）にｍＡｂ３１６Ｐ  ５０〜１５０ｍｇまたは４週間毎（Ｑ４Ｗ）に１５０〜３００ｍｇで処置した。ｍＡｂ３１６Ｐ  １５０ｍｇ  Ｑ２Ｗ用量は、３つ全部の試験に共通であった（実施例３Ａ、表１を参照されたい）。
【０１１６】
ポストホック分析において、イムノアッセイによりａｐｏ  ＣＩＩおよびＣＩＩＩ濃度を測定した（Ｒａｎｄｏｘ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｌｉｍｉｔｅｄ、ＵＫからの試薬キット［ａｐｏ  ＣＩＩ、カタログ番号ＬＰ３８６６；ａｐｏ  ＣＩＩＩ、カタログ番号ＬＰ３８６５］およびＡｒｃｈｉｔｅｃｔ  Ｃｉ８２００分析装置［Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ＩＬ］を用いる）。イムノアッセイ法は、３４０ｎｍでの比濁分析により濃度を測定することができる不溶性複合体を形成する、ヒトａｐｏ  ＣＩＩ（またはａｐｏ  ＣＩＩＩ）を含有する試料と、ａｐｏ  ＣＩＩ（またはＣＩＩＩ）に対する特異的抗血清との反応に基づくものであった。両アッセイを、分析性能について検証した。
【０１１７】
プラセボ群におけるａｐｏ  ＣＩＩおよびａｐｏ  ＣＩＩＩにおけるベースラインからのパーセント変化を、ｍＡｂ３１６Ｐで処置した患者と比較し、共分散分析を用いて第１２週（試験Ａ）、第８週（試験Ｂ）および第６週（試験Ｃ）で分析した。試験Ｃは、第１２週で終点であったが、第６週（ｎ＝７５）と比較して第１２週（ｎ＝１７）で利用可能な保存された試料を有する患者数が少なかったため、６週間のデータを用いた。
【０１１８】
結果
試験Ａ、ＢおよびＣにおけるｍＡｂ３１６Ｐ  １５０ｍｇ  Ｑ２Ｗに関する処置群によるベースラインからのａｐｏ  ＣＩＩおよびＣＩＩＩのパーセント変化を、表５に示す。示される値は、中央値（ＩＱＲ）であるａｐｏ  ＣＩＩＩについて以外は、平均（ＳＤ）である。データは、第１２週（試験Ａ）、第８週（試験Ｂ）および第６週（試験Ｃ）に由来するものである。図１３は、試験Ａに関するａｐｏ  ＣＩＩ（パネルＡ）およびＣＩＩＩ（パネルＢ）における用量応答変化を示す。
【０１１９】
【表５】
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【０１２０】
ｍＡｂ３１６Ｐは、全用量でａｐｏ  ＣＩＩおよびＣＩＩＩを減少させたが、明確な用量応答が観察された（表５、図１３）。３つ全ての試験において、ｍＡｂ３１６Ｐは、ベースラインから患者においてａｐｏ  ＣＩＩを減少させた（表５）。第１２週（試験Ａ）、第８週（試験Ｂ）および第６週（試験Ｃ）でのベースラインからの平均減少は、それぞれ、２１．４％（Ｐ＜０．００００１）、２９．３％（Ｐ＝０．００６７）および９．４％（Ｐ＝０．０８）であった（プラセボと比較したＰ値）。ａｐｏ  ＣＩＩＩは、試験Ａ、ＢおよびＣについて、それぞれ、２４．７％（Ｐ＜０．００００１）、２２．９％（Ｐ＝０．０１７）および２０．２％（Ｐ＝０．０１９）減少した（プラセボと比較したＰ値）。
【０１２１】
結論
抗ＰＣＳＫ９抗体ｍＡｂ３１６Ｐを用いる療法は、血清ａｐｏ  ＣＩＩおよびＣＩＩＩの有意な減少と関連していた。非ＦＨを有する患者においては、ａｐｏ  ＣＩＩとＣＩＩＩの両方においてほぼ１：１の減少があった。ｈｅＦＨを有する患者においては、ａｐｏ  ＣＩＩＩは、ａｐｏ  ＣＩＩよりも約２倍より多く減少した。ａｐｏ  ＣＩＩおよびＣＩＩＩの減少は、これらのアポタンパク質の公知の担体であるＶＬＤＬ粒子のクリアランスの増加または生成／分泌の減少を示すものであってもよい。
【０１２２】
〔実施例４〕
抗ＰＣＳＫ９抗体は、全血清低密度リポタンパク質画分のコレステロール濃度を減少させる
はじめに
低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）は、異なる密度および脂質化状態のＬＤＬ粒子の連続体から構成される。ＬＤＬ粒子組成物に対する脂質改変療法の効果の分析は、処置の作用機序の理解を助けることができる。本実施例の目的は、プロタンパク質変換酵素スブチリシン／ケキシン９（ＰＣＳＫ９）に対する完全ヒトモノクローナル抗体であるｍＡｂ３１６Ｐは、複数のＬＤＬ画分を減少させることによってＬＤＬ−Ｃを減少させるという仮説を試験することであった。
【０１２３】
３つの多施設、二重盲検、平行群、プラセボ対照試験を、原発性高コレステロール血症（試験Ａ、ｎ＝１８３；試験Ｂ、ｎ＝９２）またはヘテロ接合性家族性高コレステロール血症（試験Ｃ、ｎ＝７７）を有する患者において行った。患者（アトルバスタチンまたはスタチン＋／−エゼチミブを受けていた）を、試験に応じて、２週間毎（Ｑ２Ｗ）にｍＡｂ３１６Ｐ  ５０〜１５０ｍｇまたは４週間毎（Ｑ４Ｗ）に１５０〜３００ｍｇで処置した。ｍＡｂ３１６Ｐ  １５０ｍｇ  Ｑ２Ｗ用量は、３つ全部の試験に共通であった（実施例３Ａ、表１を参照されたい）。
【０１２４】
ポストホック分析において、垂直型自動プロファイル（ＶＡＰ）試験によりリポタンパク質をサブ分画化した。ベースラインから、試験Ａについては第１２週まで、試験Ｂについては第８週まで、および試験Ｃについては第６週までの、ｍＡｂ３１６Ｐ  １５０ｍｇ  Ｑ２Ｗ対プラセボを受ける患者におけるＬＤＬ１−Ｃ（「大浮遊」ＬＤＬ）、ＬＤＬ２−Ｃ、ＬＤＬ３−Ｃ、およびＬＤＬ４−Ｃ（「小型」ＬＤＬ）レベルのパーセント変化を、ＡＮＣＯＶＡを用いて評価した。ＬＤＬ３−ＣおよびＬＤＬ４−Ｃ画分を、個別に、およびプールされた分析において分析した。ＬＤＬ４−Ｃは、典型的にはＬＤＬ３−４−Ｃよりも実質的に低い濃度で存在するため、これを行った。ＬＤＬ４−Ｃにおいてはパーセント減少におけるはるかにより実質的な変化があった。ＬＤＬ３＋４−Ｃの合計は、２つの最小および最高密度のＬＤＬ−Ｃ画分の合計である。
【０１２５】
結果／結論
ＶＡＰにより分離可能な全てのＬＤＬサブ画分のコレステロール含量のベースラインからの有意な減少が、プラセボに対して、３つの試験におけるｍＡｂ３１６Ｐ  １５０ｍｇ  Ｑ２Ｗを受ける患者において観察された。結果を、表６および図１０〜１２にまとめる。
【０１２６】
【表６】
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【０１２７】
したがって、本実施例は、ＰＣＳＫ９に対するモノクローナル抗体（ｍＡｂ３１６Ｐ）を用いる療法が、ＶＡＰにより分離可能なＬＤＬ画分中のコレステロール濃度を有意に減少させることを例示するものである。ｍＡｂ３１６Ｐを用いて以前に示されたＬＤＬ−Ｃの減少が、ＬＤＬ−Ｃサブ画分のスペクトルにわたって確認された。
【０１２８】
〔実施例５〕
リポタンパク質粒子濃度に対する抗ＰＣＳＫ９抗体の効果
背景
低密度リポタンパク質粒子（ＬＤＬ−Ｐ）および高密度リポタンパク質粒子（ＨＤＬ−Ｐ）のコレステロール含量は、個体間で大きく変化し得る。例えば、ある個体はより大きい、コレステロールに富むＬＤＬ−Ｐを有するが、別の個体はより小さい、コレステロールが少ないＬＤＬ−Ｐを有する。したがって、低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）および高密度リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）の血清レベルの測定値は、循環ＬＤＬ−ＰおよびＨＤＬ−Ｐの数と相関しないことが多い。
【０１２９】
疫学研究により、アテローム性動脈硬化性心血管疾患の危険性はＬＤＬ−ＣとＬＤＬ−Ｐの両方と関連することが示された。しかしながら、これらの尺度が一致しない患者集団（例えば、糖尿病または代謝症候群を有する患者）においては、危険性はＬＤＬ−ＣよりもＬＤＬ−Ｐとより一致して関連することが示された。結果として、複数の専門家パネルおよび合意声明は、高リスク患者の管理における療法の標的としてのＬＤＬ−Ｐの補助的使用を主張した。
【０１３０】
核磁気共鳴（ＮＭＲ）技術は、療法の強化を必要とする不一致に高いＬＤＬ−Ｐレベルを有する患者を同定するために循環リポタンパク質粒子の数を正確に測定することができる。
【０１３１】
抗ＰＣＳＫ９抗体ｍＡｂ３１６Ｐは、１２週にわたって安定な用量のアトルバスタチンにある患者において、ＬＤＬ−Ｃを最大で７２．４％減少させ、プラセボとｍＡｂ３１６Ｐ処置群との間で同様の比率の有害事象を示すことが示された。ｍＡｂ３１６Ｐは、ＬＤＬ−Ｃの変化と比例してアポリポタンパク質Ｂを最大で５６％減少させた。高コレステロール血症患者におけるリポタンパク質粒子数に対するｍＡｂ３１６Ｐの効果は、これまで報告されていない。
【０１３２】
本実施例は、リポタンパク質粒子の濃度およびサイズに対するｍＡｂ３１６Ｐの効果の評価を記載する。
【０１３３】
方法
安定な毎日のアトルバスタチン（毎日１０、２０または４０ｍｇ）に加えて、プラセボ（ｎ＝３１）または２週間毎（Ｑ２Ｗ）に皮下（ＳＣ）投与されるｍＡｂ３１６Ｐ  １５０ｍｇ（ｎ＝２８）を受けた、１００ｍｇ／ｄＬ以上のＬＤＬ−Ｃを有する患者に関して、無作為化二重盲検第ＩＩ相試験のサブ試験を実行した。脂質およびリポタンパク質試験を、１２時間の一晩の絶食後に採取された試料を用いて実施した。リポタンパク質粒子プロファイルを、ＬｉｐｏＳｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．（Ｒａｌｅｉｇｈ，ＮＣ）でのＬｉｐｏＰｒｏｆｉｌｅ−３アルゴリズムを用いてＮＭＲ分光法により測定した。ＬＤＬ−ＰおよびＨＤＬ−Ｐサブクラスを、分光的に異なる脂質メチル基のＮＭＲシグナルの振幅から定量し、加重平均されたＬＤＬおよびＨＤＬサイズを、そのメチルＮＭＲシグナルの振幅に基づくその相対質量パーセンテージを掛けた各サブクラスの直径の合計から誘導した。
【０１３４】
サブクラスに関する直径範囲見積もり値は、以下の通りであった：
【０１３５】
ＶＬＤＬ−Ｐ：小型ＶＬＤＬ−Ｐ＝２９〜４２ｎｍ；中型ＶＬＤＬ−Ｐ＝４２〜６０ｎｍ；大型ＶＬＤＬ−Ｐ＞６０ｎｍ；
【０１３６】
ＬＤＬ−Ｐ：小型ＬＤＬ−Ｐ＝１８〜２０．５ｎｍ；大型ＬＤＬ−Ｐ＝２０．５〜２３ｎｍ；中間密度リポタンパク質粒子（ＩＤＬ−Ｐ）＝２３〜２９ｎｍ；
【０１３７】
ＨＤＬ−Ｐ：小型ＨＤＬ−Ｐ＝７．３〜８．２ｎｍ；中型ＨＤＬ−Ｐ＝８．２〜９．４ｎｍ；および大型ＨＤＬ−Ｐ＝９．４〜１４ｎｍ。
【０１３８】
総ＶＬＤＬ−Ｐ、ＬＤＬ−Ｐ、およびＨＤＬ−Ｐは、それぞれ、ＶＬＤＬ、ＬＤＬ、およびＨＤＬサブクラスの粒子数濃度の合計に等しい。分析の評価項目は、ベースラインから第１２週までのＬＤＬ−Ｐ、ＶＬＤＬ−ＰおよびＨＤＬ−Ｐの濃度のパーセンテージ変化であった。
【０１３９】
正規分布しなかった変数を全ての統計試験について変換したが、未変換の変数を本明細書の表に提示する。連続正規分布変数については平均（標準偏差［ＳＤ］）を報告するが、任意の非正規分布変数については中央値（四分位範囲［ＩＱＲ］）を報告する。カテゴリー変数については、計数およびパーセンテージを報告する。処置群がプラセボと有意に異なるかどうかを決定するために、Ｆｉｓｈｅｒの直接確率検定を実施し、関連するＰ値を報告する。処置群のそれぞれがプラセボと有意に異なるかどうかを決定するために、ｔ検定を実施し、関連するＰ値を報告する。処置群と比較したプラセボについてベースラインと第１２週との間のパーセント変化に有意差があったかどうかを決定するために、共分散分析を共変量としてベースライン値を用いて実施した。
【０１４０】
結果
表７は、プラセボと比較したｍＡｂ３１６Ｐ  １５０ｍｇ  ＳＣ  Ｑ２Ｗの前後のリポタンパク質粒子濃度を示す。
【０１４１】
【表７】
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【０１４２】
【表８】
0006549102.tif 000009
【０１４３】
ｍＡｂ３１６Ｐは、平均ＬＤＬ−Ｐを６３％減少させたのに対して、プラセボについては１％減少させ（Ｐ＜０．０００１）、中央ＶＬＤＬ−Ｐを３６％減少させたのに対して、プラセボについては３３％増加させた（Ｐ＜０．０００１）。ＨＤＬ−Ｐレベルは、ｍＡｂ３１６Ｐについては１１％増加したのに対して、プラセボについては１％増加した（Ｐ＜０．０５）。全粒子サブクラスの変化は、方向的に類似していた。
【０１４４】
結論
ｍＡｂ３１６Ｐは、ＬＤＬ−Ｃおよびアポリポタンパク質Ｂに対するその以前に報告された効果と類似する様式でＬＤＬ−Ｐおよび他のリポタンパク質粒子を有意に減少させた。
【０１４５】
〔実施例６〕
イオン移動度により決定されるリポタンパク質サブ画分に対する抗ＰＣＳＫ９抗体の効果
バックグラウンド
ｍＡｂ３１６Ｐ（アリロクマブとしても知られる）は、第２相臨床試験において低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）の有意な減少を示した。ＬＤＬ−Ｃは、心血管疾患（ＣＶＤ）の危険性と共に密接に関連し、粒径および密度の差異によって定義される、ＬＤＬのサブ画分も、変化する程度のＣＶＤの危険性と関連していた。リポタンパク質サブ画分の分析は、個々の患者において見られるＣＶＤ危険性評価および脂質低下処置の効果へのさらなる洞察を提供することができる。
【０１４６】
方法
安定なアトルバスタチン（毎日１０〜４０ｍｇ）に加えて、１ｍＬの皮下自己注射により、３１人の患者がプラセボを受け、２７人の患者が２週間毎（Ｑ２Ｗ）にアリロクマブ１５０ｍｇを受ける、高コレステロール血症を有し、ＬＤＬ−Ｃレベルが１００ｍｇ／ｄＬ以上である患者において、第２相無作為化二重盲検臨床試験を行った。本サブ試験において、リポタンパク質画分をイオン移動度を用いてベースラインおよび第１２週で決定した。
【０１４７】
結果
ベースラインから第１２週までのリポタンパク質サブ画分および脂質パラメータの変化を、表８Ａ（プラセボ処置）および表８Ｂ（ｍＡｂ３１６Ｐ処置）に記載する。
【０１４８】
【表９】
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【０１４９】
【表１０】
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【０１５０】
表８Ａおよび表８Ｂは、ベースラインから第１２週までの、それぞれ、プラセボおよびｍＡｂ３１６Ｐ  １５０ｍｇ  Ｑ２Ｗ群におけるリポタンパク質サブ画分および脂質パラメータの変化を例示するものである。プラセボと比較して、ｍＡｂ３１６Ｐは、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）＋中間密度リポタンパク質（ＩＤＬ）＋総ＩＤＬを、４８．７％（ｐ＜０．０００１）、ＶＬＤＬを５１．４％（ｐ＜０．０００１）、ＩＤＬを５２．３％（ｐ＜０．０００１）および総ＩＤＬを４９．８％（ｐ＜０．０００１）減少させた；他のサブ画分の変化は方向的に類似していた。ＨＤＬについては有意な変化は見られなかった。他のＬＤＬ画分に対する超小型ＬＤＬレベルの減少のパーセント変化には高い有意差があった（ｐ＜０．０００１）。
【０１５１】
結論
イオン移動度により決定されるように、ｍＡｂ３１６Ｐは、ＬＤＬ−Ｃに対するその以前に報告された効果と同様、安定なアトルバスタチン療法に加えた場合、ＬＤＬサブ画分を有意に減少させた。
【０１５２】
本発明は、本明細書に記載の特定の実施形態によってその範囲を限定されるものではない。実際、本明細書に記載のものに加えて本発明の様々な改変が上記説明および添付の図面から当業者には明らかとなる。そのような改変は、添付の特許請求の範囲内にあることが意図される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【配列表】
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