(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
0006502469.tif 000146
［式中、
Ｒ1は、水素またはＣ1-4アルキルから選択され；
ｍは、１または２であり；
Ａは、フェニルまたはピペリジニルから選択され；
Ｘは、−Ｃ(＝Ｏ)−、−Ｃ(＝Ｏ)−ＮＲ4−または−Ｏ−Ｃ(＝Ｏ)−ＮＲ5−から選択され；
ｎは、２または３であり；
Ｒ2は、水素またはＣ1-8アルキルから選択され；
Ｒ3は、Ｃ5-6アルキル−ＯＨであり、ここで、該Ｃ5-6アルキル基は、さらに３個または４個のさらなる−ＯＨによって置換されており；
Ｒ4およびＲ5は、独立して水素またはＣ1-4アルキルから選択される］
で示される化合物またはその医薬上許容される塩。
【請求項２】
Ｒ1がＣ1-4アルキルであり、Ｒ4およびＲ5がともに水素である、請求項１記載の化合物またはその医薬上許容される塩。
【請求項３】
Ａがフェニルである、請求項１または２記載の化合物またはその医薬上許容される塩。
【請求項４】
Ｘが−Ｃ(＝Ｏ)−ＮＲ4−である、請求項１〜３いずれか１項記載の化合物またはその医薬上許容される塩。
【請求項５】
Ｒ1がＣ1-4アルキルであり；
ｍが１であり；
Ａがフェニルであり；
Ｘが−Ｃ(＝Ｏ)−ＮＨ−であり；
ｎが２であり；
Ｒ2がＣ1-8アルキルであり；
Ｒ3が
【化２】
0006502469.tif 000147
から選択される、請求項１〜４いずれか１項記載の化合物またはその医薬上許容される塩。
【請求項６】
Ｒ2がｎ−ヘキシルである、請求項１〜５いずれか１項記載の化合物またはその医薬上許容される塩。
【請求項７】
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−２−(２−メチルベンジル)−３−(((１−(３−(((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチル)アミノ)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((１−(２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチルカルバモイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((１−(３−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((１−(３−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((１−(４−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)ブタノイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−２−(２−メチルベンジル)−３−((１−(３−((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシルアミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((１−(３−(ヘキシル((２Ｒ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｒ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチルカルバミン酸４−(((Ｒ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピルアミノ)メチル)フェニル；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)フェネチル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；および
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)フェネチル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド
から選択される請求項１記載の化合物、またはその医薬上許容される塩。
【請求項８】
下記式：
【化３】
0006502469.tif 000148
で示される３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミドである請求項１記載の化合物、またはその医薬上許容される塩。
【請求項９】
請求項１〜８いずれか１項記載の化合物またはその医薬上許容される塩、および医薬上許容されるアジュバント、希釈剤または担体を含む医薬組成物。
【請求項１０】
ＥＮａＣ媒介病態処置用医薬の製造における請求項１〜８いずれか１項記載の化合物またはその医薬上許容される塩の使用。
【請求項１１】
ＥＮａＣ媒介病態が、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症、喘息、慢性気管支炎および気管支拡張症から選択される、請求項１０記載の使用。
【請求項１２】
ＥＮａＣ媒介病態が、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）または嚢胞性線維症である、請求項１０記載の使用。
【請求項１３】
ＥＮａＣ媒介病態に罹患しているかまたはそのリスクがある哺乳類におけるＥＮａＣ媒介病態の処置用または予防用医薬であって、請求項１〜８いずれか１項記載の化合物またはその医薬上許容される塩を含む、医薬。
【請求項１４】
請求項１〜８いずれか１項記載の化合物またはその医薬上許容される塩と、
βアドレナリン受容体アゴニスト；
ムスカリン受容体アンタゴニスト；
ムスカリン受容体アンタゴニストとβアドレナリン受容体アゴニストとのジョイント；
ｔｏｌｌ様受容体アゴニスト（例えば、ＴＬＲ７アゴニストまたはＴＬＲ９アゴニスト）；
アデノシンアンタゴニスト；
グルココルチコイド 受容体アゴニスト（ステロイド系または非ステロイド系）；
ｐ３８アンタゴニスト；
ＩＫＫ２アンタゴニスト；
ＰＤＥ４アンタゴニスト；
ケモカイン受容体機能の調節剤（例えば、ＣＣＲ１受容体アンタゴニスト、ＣＣＲ２Ｂ受容体アンタゴニスト、ＣＣＲ５受容体アンタゴニスト、ＣＸＣＲ２受容体アンタゴニストまたはＣＸＣＲ３受容体アンタゴニスト）；
ＣＲＴｈ２アンタゴニスト；または
浸透圧調節物質、例えば高張食塩水
を含むリストから選択される１つ以上の薬剤を含む、組合せ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬活性を有するピラジン誘導体、該誘導体の製造方法、該誘導体を含む医薬組成物、および該誘導体の治療剤としての使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
肺気道上皮の水和は、十分な毛様体機能を確実とし、粘液線毛クリアランス（ＭＣＣ）は、重要な第一選択気道自然防御機構である。適切な粘液クリアランスの欠損は、粘液うっ滞を引き起こし、気道閉塞のリスクを生じ、慢性細菌感染の素因になる。粘液分泌過多、粘液の濃厚化、および粘液線毛クリアランスの速度低下は、嚢胞性線維症（ＣＦ）および慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）病態生理の両方の十分に確立された特徴であり、該疾患の罹患率および死亡率に有意に関与する。低ＭＣＣは、静的な粘液による気道閉塞の原因となり、肺機能を障害し、細菌の定着を促進して疾患増悪率および疾患増悪の重篤度を増大させる感染の病巣として作用する。
【０００３】
ＣＦの病態生理学は、十分に特徴付けられており、気道脱水を引き起こす嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）遺伝子の変異が原因であり、未だに世界的に見て最も一般的な致死性遺伝性障害の１つである。ＣＦは複雑な多臓器疾患であるが、罹患率および死亡率は、主に、小さな気道における早期発症型粘液栓子形成に端を発する慢性閉塞性肺疾患、慢性好中球性気道炎症、および細菌感染によって決定される。
【０００４】
ＣＯＰＤの病態生理学は、複雑であり、ほとんど理解されていない。現行の臨床ガイドラインは、ＣＯＰＤを、十分に可逆的ではない気流制限によって特徴付けられる病態として記載している。気流制限は、通常、進行性であり、かつ、有害な粒子およびガスに対する肺の異常な炎症応答に関連する。このような粒子およびガスを引き起こす最も重要な原因は喫煙である。ＣＯＰＤ患者は、咳、息切れおよび痰の過剰生産を含む種々の症状を有している；このような症状は、好中球、マクロファージおよび上皮細胞を含む多数の細胞コンパートメントの機能不全をもたらす。
【０００５】
適当な気道水和は、ＭＣＣおよび粘膜の適当な含水量を維持するのに決定的に重要である。気道水和の調節は、上皮細胞層に関する電解質および水の移動と強く関連している。線毛の周囲の気道上皮表面上の周囲液体成分（periciliary liquid）（ＰＣＬ）は、上皮表面から粘稠性粘液層を分離し、線毛の動きを促進する。ＰＣＬの体積／深さは、ＭＣＣ率の強力な決定因子であることを示している。
【０００６】
ＥＮａＣ（上皮性ナトリウムチャネル）は、呼吸器系、泌尿器系、消化器系、生殖器系および皮膚の上皮で広く発現するアミロライド感受性の非電位依存性イオンチャネルである。全身的には、ＥＮａＣは、腎臓上皮でのＮａ+輸送を調節することによる電解質恒常性と液量とのバランスにおいて重要な役割を果たす。ナトリウム輸送の制御を介して、ＥＮａＣは、気道上皮での浸透勾配を制御し、それにより、ＰＣＬ量を調節する。ＥＮａＣ媒介ナトリウム輸送の遮断は、上皮での浸透勾配を減少させ、気道表面での水の保持をもたらし（ＰＣＬ量を増加させ）、粘液水和およびＭＣＣ率の増加をもたらす。
【０００７】
インビボでの気道表面液体（ＡＳＬ）量および粘液線毛クリアランス（ＭＣＣ）の重要な調節因子としてのＥＮａＣの役割は、文献により確立される。α−、β−およびγ−ＥＮａＣ（−／−）マウスの研究は、それぞれ、出生時肺液クリアランスにおけるＥＮａＣ機能の重要な役割を示している（非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３）。ＥＮａＣ  β−サブユニット過剰発現トランスジェニックマウスは、気道Ｎａ+吸収増加、ＡＳＬ量減少、粘液脱水およびＭＣＣ遅延を示す。該マウスは、粘液閉塞、杯細胞化生、好中球性炎症、不完全な細菌クリアランスおよび肺気腫を含む、ＣＦおよびＣＯＰＤと類似の臨床特徴を有する重篤な肺疾患を発症する（非特許文献４；非特許文献５）。該トランスジェニックマウスの生後２０日の間の死亡率は、窒息を引き起こす気道の広範な粘液栓子に起因して約５０％であるであるが、生後１４日間、マウスの肺へアミロライドを投与することによって死亡率は有意に減少した（非特許文献６）。
【０００８】
さらにまた、α−、β−およびγ−ＥＮａＣをコードする遺伝子の機能喪失型変異によって引き起こされる疾患である偽性低アルドステロン症１（ＰＨＡ１）を有するヒトは、ＡＳＬ量の増加およびＭＣＣのアップレグレーションを示す（非特許文献７）。正常な対象体をＥＮａＣチャネル遮断化合物であるアミロライドによって処置すると、ＡＳＬ量およびＭＣＣ率が増加する（非特許文献８）。
【０００９】
アミロライドおよびベンザミルは、上皮性ナトリウムチャネルを遮断することが知られている医薬的に活性なピラジン誘導体である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Barker et al., J. Clin. Ｉnvest., 1998. 102(8):1634
【非特許文献２】Bonny and Hummler, Kidney Ｉnt., 2000. 57(4):1313
【非特許文献３】Pradervand et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U S A., 1999. 96(4):1732
【非特許文献４】Mall et al.,Nature Med., 2004. 10:487
【非特許文献５】Mall et al., Am. J. Respir. Crit. Care Med., 2007. 177:730
【非特許文献６】Mall et al., ATS Poster abstract #G55, 2008
【非特許文献７】Kerem et al., N. Engl. Med., 1999. 341:156
【非特許文献８】Sood et al., Am. J. Crit. Care Med., 2003. 167:158
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
すなわち、本明細書は、部分的に、式（Ｉ）：
【化１】
0006502469.tif 000002
［式中、
Ｒ1は、水素またはＣ1-4アルキルから選択され；
ｍは、１または２であり；
Ａは、フェニルまたはヘテロシクリルから選択され；
Ｘは、−Ｃ(＝Ｏ)−、−Ｃ(＝Ｏ)−ＮＲ4−または−Ｏ−Ｃ(＝Ｏ)−ＮＲ5−から選択され；
ｎは、２または３であり；
Ｒ2は、水素またはＣ1-8アルキルから選択され；
Ｒ3は、Ｃ5-6アルキル−ＯＨであり、ここで、該Ｃ5-6アルキル基は、さらに３個または４個のさらなる−ＯＨによって置換されており；
Ｒ4およびＲ5は、水素またはＣ1-4アルキルから選択される］
で示される化合物またはその医薬上許容される塩を記載する。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本明細書は、また、部分的に、式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩と、医薬上許容されるアジュバント、希釈剤または担体を含む、医薬組成物を記載する。
【００１３】
本明細書は、また、部分的に、治療に使用される式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩を記載する。
【００１４】
本明細書は、また、部分的に、ＥＮａＣ媒介病態の処置または予防のための式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩を記載する。
【００１５】
本明細書は、また、部分的に、ＥＮａＣ媒介病態の処置または予防のための薬剤の製造における式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩を記載する。
【００１６】
本明細書は、また、部分的に、ＥＮａＣ媒介病態に罹患しているかまたはそのリスクがある哺乳類における該病態の処置または予防方法であって、該処置を必要とする哺乳類に式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩の治療有効量を投与することを含む、方法を記載する。
【００１７】
本発明のさらなる態様は、本明細書を読むことにより当業者には明らかである。
【００１８】
本発明の化合物は、塩形態または非塩形態（すなわち、遊離塩基）で存在し得、本発明は、塩形態および非塩形態の両方を包含する。
【００１９】
本明細書に記載の化合物は、酸付加塩を形成し得る。一般に、酸付加塩は、種々の無機酸または有機酸を用いて製造することができる。かかる塩は、典型的には、当該技術分野において公知の種々の方法を用いて、例えば、該化合物を酸（例えば、化学量論量の酸）と混合することによって形成され得る。この混合は、水、有機溶媒（例えば、エーテル、酢酸エチル、エタノール、メタノール、イソプロパノールまたはアセトニトリル）、または水性／有機性混合物中にて生じ得る。
【００２０】
本発明の別の態様において、酸付加塩は、例えば、トリフルオロ酢酸塩、ギ酸塩、酢酸塩または塩酸塩である。
【００２１】
当業者は、例えばBerge et al., J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977)に記載されているような医薬的塩を製造する一般的な原理および技術を知っている。
【００２２】
本明細書に記載の化合物および塩は、１個以上のキラル（すなわち、不斉）中心を含み得る。本明細書における構造または名称がキラリティーを示さない限り、該構造または名称は、この構造または名称に対応するいずれかの単一の立体異性体（すなわち、いずれかの単一のキラル異性体）および立体異性体の混合物（例えば、ラセミ体）を含むものとする。いくつかの実施態様において、単一の立体異性体は、例えばキラルクロマトグラフィー分離を用いて、異性体の混合物（例えば、ラセミ体）から単離することによって得られる。他の実施態様において、単一の立体異性体は、例えばキラル出発物質からの直接合成によって得られる。
【００２３】
固体結晶形態である場合、式（Ｉ）で示される化合物は、別の化学物質との共晶の形態であり得、本発明は、このような共晶の全てを包含する。
【００２４】
本発明の化合物は、溶媒和物（例えば、水和物）および非溶媒和形態として存在することができ、本発明は、このような溶媒和物の全てを包含する。
【００２５】
本明細書に記載の化合物および塩は、種々の互変異性体形態で存在し得、本発明は、このような互変異性体の全てを包含する。「互変異性体」とは、水素原子の移動によって生じる平衡状態で存在する構造異性体のことである。
【００２６】
本明細書に記載の化合物および塩は、同位体標識（または「放射能標識」）され得る。この場合、１個以上の原子が、自然界において典型的に見られる原子質量または質量数とは異なる原子質量または質量数を有する原子に置き換えられている。取り込むことができる放射性核種の例としては、2Ｈ（ジューテリウムについて「Ｄ」とも記載される）、3Ｈ（トリチウムについて「Ｔ」とも記載される）、11Ｃ、13Ｃ、14Ｃ、13Ｎ、15Ｎ、15Ｏ、17Ｏ、18Ｏおよび36Ｃｌが挙げられる。使用される放射性核種は、その放射能標識誘導体の特定の用途に依存する。例えば、インビトロでの受容体標識および競合アッセイについては、3Ｈまたは14Ｃがしばしば有用である。放射線画像用途については、11Ｃがしばしば有用である。いくつかの実施態様において、放射性核種は3Ｈである。いくつかの実施態様において、放射性核種は14Ｃである。いくつかの実施態様において、放射性核種は11Ｃである。
【００２７】
アルキル基およびアルキル部分は、直鎖または分枝鎖であり、例えば、Ｃ1-8アルキル、Ｃ1-6アルキル、Ｃ1-4アルキルまたはＣ5-6アルキルである。アルキル基の例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチルおよびｎ−オクチルであり、例えばメチルまたはｎ−ヘキシルである。
【００２８】
ヘテロシクリルは、独立して窒素、酸素または硫黄から選択される１個または２個のヘテロ原子を含む５員または６員非芳香族環；またはそのＮ−オキシド、またはそのＳ−オキシドもしくはＳ−ジオキシドである。ヘテロシクリルの一例は、１個または２個の窒素原子を含む５員または６員非芳香族環；またはそのＮ−オキシド、またはそのＳ−オキシドもしくはＳ−ジオキシドであり、例えば、ピロリジニルまたはピペリジニル、例えばピペリジン−４−イルである。誤解を避けるために、ヘテロシクリル環の置換基は、炭素原子またはヘテロ原子のいずれかを介して結合され得る。
【００２９】
用語「医薬上許容される」は、部分（例えば、塩、投与剤形または賦形剤）が対象とされる患者における使用に適していることを特徴付けるために使用される。
【００３０】
一の特定に態様において、Ｒ1は、式（Ｉ）の残部との結合点に対して２位でフェニル基に置換される。
【００３１】
さらなる態様において、Ｒ1はＣ1-4アルキルである。
【００３２】
さらなる態様において、Ｒ1はメチルである。
【００３３】
さらなる態様において、ｍは１である。
【００３４】
さらにさらなる態様において、Ａは、フェニルまたはピペリジニルから選択される。
【００３５】
さらなる態様において、Ａはフェニルである。
【００３６】
さらなる態様において、Ａはピペリジニルである。
【００３７】
別の態様において、Ｘは−Ｃ(＝Ｏ)−ＮＲ4−である。
【００３８】
さらなる態様において、Ｘは−Ｃ(＝Ｏ)−ＮＨ−である。
【００３９】
一の態様において、基Ｘが−Ｃ(＝Ｏ)−ＮＲ4−である場合、ＸのカルボニルがＡと結合し、Ｘのアミノ基が(ＣＨ2)nと結合する。別の態様において、基Ｘが−Ｃ(＝Ｏ)−ＮＲ4−である場合、Ｘのアミノ基がＡと結合し、Ｘのカルボニル基が(ＣＨ2)nと結合する。
【００４０】
一の態様において、基Ｘが−Ｏ−Ｃ(＝Ｏ)−ＮＲ5−である場合、Ｘのエーテル酸素がＡと結合し、Ｘのアミノ基が(ＣＨ2)nと結合する。別の態様において、基Ｘが−Ｏ−Ｃ(＝Ｏ)−ＮＲ5−である場合、Ｘのアミノ基がＡと結合し、Ｘのエーテル酸素が(ＣＨ2)nと結合する。
【００４１】
別の態様において、基Ｘは、式（Ｉ）で示される化合物の残部との結合点に対して４位で基Ａに置換される。
【００４２】
別の態様において、ｎは２である。
【００４３】
さらなる態様において、Ｒ2はＣ1-8アルキルである。
【００４４】
さらにさらなる態様において、Ｒ2はｎ−ヘキシルである。
【００４５】
別の態様において、Ｒ3はＣ5アルキル−ＯＨであり、該Ｃ5アルキル基はさらにさらなる３個の−ＯＨ基によって置換されている。
【００４６】
別の態様において、Ｒ3はＣ6アルキル−ＯＨであり、該Ｃ6アルキル基はさらにさらなる４個の−ＯＨ基によって置換されている。
【００４７】
さらなる態様において、Ｒ3は、
【化２】
0006502469.tif 000003
から選択される。
【００４８】
別の態様において、Ｒ3は、
【化３】
0006502469.tif 000004
から選択される。
【００４９】
さらなる態様において、Ｒ3は、
【化４】
0006502469.tif 000005
から選択される。
【００５０】
別の態様において、Ｒ3は、(２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル、(２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル、(２Ｒ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシルまたは(２Ｒ,３Ｓ,４Ｓ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチルから選択される。
【００５１】
さらなる態様において、Ｒ3は、(２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル、(２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシルまたは(２Ｒ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシルから選択される。
【００５２】
別の態様において、Ｒ5は水素である。
【００５３】
さらなる態様において、Ｒ1はＣ1-4アルキルであり；ｍは１または２であり；Ａはフェニルまたはピペリジニルであり；Ｘは−Ｃ(＝Ｏ)−、−Ｃ(＝Ｏ)−ＮＲ4−または−Ｏ−Ｃ(＝Ｏ)−ＮＲ5−から選択され；ｎは、２または３であり；Ｒ2は水素またはＣ1-8アルキルであり；Ｒ3はＣ5-6アルキル−ＯＨであり、ここで、該Ｃ5-6アルキル基はさらにさらなる３個または４個の−ＯＨ基によって置換されており；Ｒ4およびＲ5はどちらも水素である。
【００５４】
さらなる態様において、Ｒ1はＣ1-4アルキルであり；ｍは１であり；Ａはフェニルまたはピペリジニルであり；Ｘは−Ｃ(＝Ｏ)−ＮＨ−であり；ｎは２であり；Ｒ2はＣ1-8アルキルであり；Ｒ3は
【化５】
0006502469.tif 000006
から選択される。
【００５５】
さらなる態様において、Ｒ1はＣ1-4アルキルであり；ｍは１であり；Ａはフェニルであり；Ｘは−Ｃ(＝Ｏ)−ＮＨ−であり；ｎは２であり；Ｒ2はＣ1-8アルキルであり；Ｒ3は
【化６】
0006502469.tif 000007
から選択される。
【００５６】
本発明のさらなる態様において、本発明の化合物は、下記式（Ｉａ）：
【化７】
0006502469.tif 000008
において星印（＊）を付けた炭素中心でＲ立体化学を呈する。
【００５７】
本発明の化合物の例は、
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−(２−(２−メチルベンジル)−３−(((１−(３−((２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチル)アミノ)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−(３−((４−((２−(ヘキシル(２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−(３−((１−(２−(ヘキシル(２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチルカルバモイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−(３−((１−(３−(ヘキシル(２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−(３−((１−(３−(ヘキシル(２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−(３−((１−(４−(ヘキシル(２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)ブタノイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−(２−(２−メチルベンジル)−３−((１−(３−(２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシルアミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−(３−((１−(３−(ヘキシル(２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−(３−((４−((２−(ヘキシル(２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−(３−((４−((２−(ヘキシル(２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
２−(ヘキシル(２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチルカルバミン酸４−((３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピルアミノ)メチル)フェニル；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−(３−((４−((２−(ヘキシル(２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)フェネチル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−(３−((４−((２−(ヘキシル(２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)フェネチル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−(３−((４−((２−(ヘキシル(２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−(３−(３−(２−(ヘキシル(２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチルカルバモイル)フェネチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
またはそれらの医薬上許容される塩
である。
【００５８】
本発明の化合物のさらなる例は、
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−(２−(２−メチルベンジル)−３−(((１−(３−(((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチル)アミノ)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−(３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−(３−((１−(２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチルカルバモイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−(３−((１−(３−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−(３−((１−(３−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−(３−((１−(４−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)ブタノイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−(２−(２−メチルベンジル)−３−((１−(３−((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシルアミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−(３−((１−(３−(ヘキシル((２Ｒ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−(３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｒ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−(３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチルカルバミン酸４−((３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピルアミノ)メチル)フェニル；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−(３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)フェネチル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−(３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)フェネチル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−(３−((４−((２−(ヘキシル((２R,３S,４S)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−(３−(３−(２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチルカルバモイル)フェネチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
またはそれらの医薬上許容される塩
である。
【００５９】
本発明の化合物のさらなる例は、
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−２−(２−メチルベンジル)−３−(((１−(３−(((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチル)アミノ)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((１−(２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチルカルバモイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((１−(３−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((１−(３−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((１−(４−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)ブタノイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−２−(２−メチルベンジル)−３−((１−(３−((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシルアミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((１−(３−(ヘキシル((２Ｒ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｒ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチルカルバミン酸４−(((Ｒ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピルアミノ)メチル)フェニル；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)フェネチル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)フェネチル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((S)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((S)−３−((４−((２−(ヘキシル((２R,３S,４S)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−(３−(２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチルカルバモイル)フェネチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド；
またはその医薬上許容される塩
である。
【００６０】
本発明のさらなる特徴は、具体的な実施例のいずれかが個別にディスクレームされることを条件として上記の実施態様のいずれかである。例えば、さらなる特徴は、本発明の化合物の例の上記リストから選択される化合物のいずれかが個別にディスクレームされることを条件として上記実施態様のいずれかである。
【００６１】
いくつかの実施態様において、当該化合物は、下記の実施例に挙げられている少なくとも１つの化合物を除く式（Ｉ）で示される化合物である。説明するために、このようないくつかの実施態様において、当該化合物は、実施例Ｘ（ここで、Ｘは１、２、３などで有り得る）に記載された化合物を除く式（Ｉ）で示される化合物である。他の実施態様において、当該化合物は、実施例Ｙ（ここで、Ｙは１、２、３などで有り得る）に記載された化合物を除く式（Ｉ）で示される化合物である。
【００６２】
式（Ｉ）で示される化合物は、スキーム１に従って、式（ＩＩ）で示される化合物から製造され得る（ここで、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ａ、Ｘ、ｍおよびｎは、式（Ｉ）において定義したとおりであり、ｐ＝ｍ−１である）。
【化８】
0006502469.tif 000009
スキーム１：
ａ）ＮａＨ(ＯＡｃ)3、ＡｃＯＨ、ＴＨＦまたはＮａＢＨ4、ＭｅＯＨ
【００６３】
別法として、式（Ｉ）で示される化合物は、スキーム２に記載される方法で製造され得る（ここで、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ａ、Ｘ、ｍおよびｎは、式（Ｉ）において定義したとおりであり、Ｙは、ハロゲンであり、例えば、塩素、臭素またはヨウ素であり、ｐ＝ｍ−１である）。
【化９】
0006502469.tif 000010
スキーム２：
ａ）ＮａＨまたはＫ2ＣＯ3またはＣｓ2ＣＯ3またはＤＩＥＡ、ＤＭＦ。
【００６４】
別法として、式（Ｉ）で示される化合物は、スキーム３に記載されるように、ヘキソースまたはペントースのような適切なポリヒドロキシル化アルキルアルデヒド（Ｒ3−アルデヒド）の還元アルキル化によって最終工程でＲ3を導入することによって製造され得る（ここで、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ａ、Ｘ、ｍおよびｎは、式（Ｉ）において定義したとおりである）。Ｒ3中に存在するポリヒドロキシアルキル鎖は、例えばP. G. M. Wuts, Th. W. Greene, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley-Interscience, New York, 2006に記載されているように、好適なアルコール保護基によって保護され得る。さらにまた、当業者によって認識されるように、また、本明細書の実施例で記載するように、式（ＩＩ）で示される化合物中に存在するさらなるアミノ基は、例えばWuts and Greene（上記）に記載されているような、好適なアミノ保護基、例えば二炭酸ジ−tertブチル（Ｂｏｃ）またはフルオレニルメチルオキシカルボニル（ＦＭｏｃ）保護基によって保護され得る。
【化１０】
0006502469.tif 000011
スキーム３：
ａ）ＮａＢＨ(ＯＡｃ)3またはＮａＢＨ3ＣＮ、ＡｃＯＨ、ＴＨＦまたはＮａＢＨ4、ＭｅＯＨ
【００６５】
式（ＩＩ）で示される化合物は、スキーム５に記載されるような方法によって（J. C. D. Mueller-Hartwieg, L. La Vecchia, H. Meyer, A. K. Beck, D. Seebach, Org. Synth. 85 (2008), 295）、またはスキーム４およびスキーム６に示される方法によって、エナンチオ選択的に製造され得る（ここで、Ｒ1は、式（Ｉ）において定義したとおりである）。
【化１１】
0006502469.tif 000012
スキーム４：
ａ）ｉ）Ｌ−プロリン、ＤＭＦ、ｉｉ）ＮａＢＨ4、ＭｅＯＨ；ｂ）フタルイミド、ＰＰｈ3、ＤＥＡＤ、ＴＨＦ；ｃ）ＣＨ3ＮＨ2、ＥｔＯＨ、ｄ）Ｂｏｃ2Ｏ、ＤＣＭ、ＴＥＡ；ｅ）Ｐｄ(ＯＨ)2、Ｈ2、ＭｅＯＨ、７０ｐｓｉ；ｆ）(３−クロロ−５−(１Ｈ−イミダゾール−１−イルカルボニル)ピラジン−２,６−ジアミン、ＤＩＰＥＡ、ＮＭＰ；ｇ）ＴＦＡ、ＤＣＭ；ｈ）ＮａＯＨ、ＴＨＦ。
【化１２】
0006502469.tif 000013
スキーム５：
ａ）ＢｕＬｉ、ＴＨＦ；ｂ）ＴｉＣｌ4、ＴＥＡ、ＤＣＭ；ｃ）ＬｉＯＨ、Ｈ2Ｏ2、ＴＨＦ、Ｈ2Ｏ；ｄ）(ＣＯＣｌ)2、ＮＨ4ＯＨ、ＤＣＭ；ｅ）ＢＨ3*ＴＨＦ；ｆ）ＮＭＰ；ｇ）ＴＦＡ、ＤＣＭ；ｈ）ＮａＯＨ、ＴＨＦ。
【化１３】
0006502469.tif 000014
スキーム６：
ａ）炭酸ジアリル、リパーゼＰＳ−ＣアマノＩＩ、ＭＴＢＥ；ｂ）酸（例えば、Ｄ−酒石酸エステル）、再結晶；ｃ）１０Ｍ  ＮａＯＨ、ＭＴＢＥ；ｄ）(ＢＯＣ)2Ｏ、ＭＴＢＥ；ｅ）ＬｉＢＨ4、Ｐｄ(ＰＰｈ3)4、ＴＨＦ；ｆ）ＣＤＩ；ｉＰｒＯＡｃ；ｇ）ＴＦＡ、ＤＣＭ；ｈ）ＮａＯＨ、ＴＨＦ。
【００６６】
スキーム４、スキーム５およびスキーム６は、式（ＩＩ）で示される化合物の(Ｒ)エナンチオマーを得る方法を記載している。これらのスキームに記載されている反応は、同様に、反絶対配置を有する出発物質、または異なる立体特異性を有する酵素を使用することによって、関連する(Ｓ)エナンチオマーを得るために用いられ得る。
【００６７】
別法として、(Ｓ)配置を有する式（ＩＩ）で示される化合物は、スキーム７に示されるように製造され得る。
【化１４】
0006502469.tif 000015
スキーム７：
ａ）ＣＤＩ；ｉＰｒＯＡｃ；ｂ）ＬｉＢＨ4、Ｐｄ(ＰＰｈ3)4、ＴＨＦ。
【００６８】
スキーム６の工程（ａ）に記載される方法は、炭酸ジアリルを使用するジアミン（ＩＩＩ）：
【化１５】
0006502469.tif 000016
の酵素媒介非対称化を含む。
【００６９】
この反応の好適な酵素としては、リパーゼ、特にCandida AntarcticaまたはPseudomonas Cepaciaに由来するリパーゼが挙げられる。好適な酵素としては、ＩＭＭ  ＣＡＬＢ（Candida Antartica Lipase B）、ＩＭＭ  ＣＡＬＢＹ（Candida Antartica Lipase B）、Ｎｏｖｏｚｙｍ  ４３５（Candida Antartica Lipase B）、アマノリパーゼＰＳ−Ｃ１（Pseudomonas Cepacia Lipase）、アマノリパーゼＰＳ−ＩＭ（Pseudomonas Cepacia Lipase）およびアマノリパーゼＰＳ−Ｄ（Pseudomonas Cepacia Lipase）が挙げられ、例えば、アマノリパーゼＰＳ−Ｃ１、アマノリパーゼＰＳ−ＤおよびアマノリパーゼＰＳ−ＩＭである。該反応は、tert−ブチルジメチルエーテル（ＴＢＭＥ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、メチル−ＴＨＦ（ＭｅＴＨＦ、例えば、２−メチル−ＴＨＦ）、ヘプタン類、シクロヘキサンおよびトルエンを包含する種々の極性溶媒および非極性溶媒ならびにそれらの混合物、例えばＭｅＴＨＦ中にて行うことができる。該反応は、様々な温度、例えば０℃〜５０℃、例えば１５℃〜３５℃、例えば約３０℃で行うことができる。得られた粗生成物のエナンチオマー過剰率は、当業者に公知の分割法によって、例えば酒石酸塩からの結晶化によって、増大させることができる。
【００７０】
本発明のさらなる態様において、式（ＩＶ）：
【化１６】
0006502469.tif 000017
［式中、Ｒ1は上記で定義したとおりである］
で示される化合物（例えば、(Ｒ)−(３−アミノ−２−(２−メチルベンジル)プロピル)カルバミン酸アリル化合物）の製造方法であって、炭酸ジアリルの存在下でのジアミン（ＩＩＩ）の酵素媒介非対称化を含み、その後、エナンチオマー分割を行ってもよい、方法が提供される。さらなる態様において、該酵素は、Candida AntarcticaまたはPseudomonas Cepaciaのいずれかに由来するもの、例えば、ＩＭＭ  ＣＡＬＢ（Candida Antartica Lipase B）、ＩＭＭ  ＣＡＬＢＹ（Candida Antartica Lipase B）、Ｎｏｖｏｚｙｍ  ４３５（Candida Antartica Lipase B）、アマノリパーゼＰＳ−Ｃ１（Pseudomonas Cepacia Lipase）、アマノリパーゼＰＳ−ＩＭ（Pseudomonas Cepacia Lipase）およびアマノリパーゼＰＳ−Ｄ（Pseudomonas Cepacia Lipase）から選択される。別の態様において、該酵素は、アマノリパーゼＰＳ−Ｃ１、アマノリパーゼＰＳ−ＤおよびアマノリパーゼＰＳ−ＩＭから選択され、例えばアマノリパーゼＰＳ−ＩＭである。
【００７１】
本発明の別の態様において、(Ｒ)−(３−アミノ−２−(２−メチルベンジル)プロピル)カルバミン酸アリル化合物が提供される。
【００７２】
さらなる態様において、医薬中間体としての(Ｒ)−(３−アミノ−２−(２−メチルベンジル)プロピル)カルバミン酸アリル化合物の使用が提供される。さらなる態様において、式（Ｉ）で示される化合物の製造における中間体としての(Ｒ)−(３−アミノ−２−(２−メチルベンジル)プロピル)カルバミン酸アリル化合物の使用が提供される。
【００７３】
本発明の化合物の製造法は、下記の実施例においてさらに詳しく記載する。
【００７４】
本明細書に記載の化合物および塩は、一般に、動物、特に哺乳類における種々の障害を治療する方法において用いることができる。哺乳類としては例えばヒトが挙げられる。
【００７５】
本発明の化合物およびその医薬上許容される塩は、医薬製剤として、特にＥＮａＣの調節剤として活性を有し、呼吸器疾患、骨および関節の疾患、ならびに他の自己免疫障害およびアレルギー性障害の処置に使用することができる。
【００７６】
本発明の化合物またはその医薬上許容される塩で処置され得る病態としては、以下に記載するような呼吸器の疾患が挙げられるが、これらに限定されるものではない：気道の閉塞性疾患（間欠性および持続性ならびにあらゆる重症度の喘息（気管支喘息、アレルギー性喘息、内因性喘息、外因性喘息、運動誘発性喘息、薬剤性（アスピリン誘発性およびＮＳＡＩＤ誘発性を包含する）喘息および粉塵誘発性喘息を包含する）、ならびに気道過敏症の他の原因を包含する）；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；気管支炎（感染性気管支炎および好酸球性気管支炎を包含する）；肺気腫；気管支拡張症；嚢胞性線維症；サルコイドーシス；農夫肺および関連疾患；過敏性肺炎；肺線維症（原因不明性線維化性肺胞炎、特発性間質性肺炎、特発性肺線維症、抗悪性腫瘍薬療法および慢性感染症（結核ならびにアスペルギルス症および他の真菌感染症を包含する）に伴う線維症を包含する）；肺移植の合併症；肺脈管構造の血管炎性障害および血栓性障害、ならびに肺高血圧症；鎮咳作用（気道の炎症性状態および分泌性状態に伴う慢性咳嗽ならびに医原性咳嗽の処置を包含する）；急性鼻炎および慢性鼻炎（薬物性鼻炎および血管運動性鼻炎を包含する）；通年性アレルギー性鼻炎および季節性アレルギー性鼻炎（神経性鼻炎（花粉症）を包含する）；鼻ポリープ症；急性ウイルス感染症（感冒、ならびにＲＳウイルス、インフルエンザ、コロナウイルス（ＳＡＲＳを包含する）およびアデノウイルスに起因する感染症を包含する）；急性肺損傷；または成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）。
【００７７】
本発明のさらなる態様において、本発明の化合物またはその医薬上許容される塩で処置され得る呼吸器の疾患としては、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；気管支炎（感染性気管支炎および好酸球性気管支炎を包含する）；気管支拡張症；嚢胞性線維症；鎮咳作用（気道の炎症性状態および分泌性状態に伴う慢性咳嗽、ならびに医原性咳嗽の処置を包含する）；間欠性および持続性ならびにあらゆる重症度の喘息（気管支喘息、アレルギー性喘息、内因性喘息、外因性喘息、運動誘発性喘息、薬剤性（アスピリン誘発性およびＮＳＡＩＤ誘発性を包含する）喘息および粉塵誘発性喘息を包含する）、ならびに気道過敏症の他の原因が挙げられる。
【００７８】
さらに本発明のさらなる態様において、本発明の化合物またはその医薬上許容される塩で処置され得る病態としては、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症、喘息、慢性気管支炎および気管支拡張症が挙げられる。
【００７９】
本発明のさらなる態様において、本発明の化合物またはその医薬上許容される塩で処置され得る病態は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）である。
【００８０】
本発明の一の態様において、ＣＯＰＤの処置のための式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩が提供される。
【００８１】
本発明のさらなる態様において、ＣＯＰＤ処置薬の製造における式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩が提供される。
【００８２】
本発明のさらなる態様において、ＣＯＰＤに罹患しているかまたはそのリスクがある哺乳類におけるＣＯＰＤの処置または予防方法であって、該処置を必要とする哺乳類に式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩の治療有効量を投与することを含む、方法が提供される。
【００８３】
本発明のさらなる態様において、本発明の化合物またはその医薬上許容される塩で処置され得る病態は嚢胞性線維症（ＣＦ）である。
【００８４】
本発明の一の態様において、ＣＦの処置のための式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩が提供される。
【００８５】
本発明のさらなる態様において、ＣＦ処置薬の製造における式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩が提供される。
【００８６】
本発明のさらなる態様において、ＣＦに罹患しているかまたはそのリスクがある哺乳類におけるＣＦの処置または予防方法であって、該処置を必要とする哺乳類に式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩の治療有効量を投与することを含む、方法が提供される。
【００８７】
本明細書に記載の化合物または塩が障害の処置に投与される場合、「治療有効量」とは、該障害の症状または他の有害な作用の減少または完全な緩和；該障害の治癒；該障害の進行の逆転、完全な停止、または遅延；または該障害の悪化のリスクの減少に十分な量である。
【００８８】
併用療法が用いられるいくつかの実施態様において、本明細書に記載の化合物または塩の量および他の医薬活性剤の量は、合わせた場合に、動物患者における標的障害を処置するのに治療上有効である。これに関連して、合わせた量は、合わせた場合にそれらが該障害の症状または他の有害な作用の減少または完全な緩和；該障害の治癒；該障害の進行の逆転、完全な停止、または遅延；または該障害の悪化のリスクの減少に十分であるならば、「治療有効量」である。典型的には、このような量は、例えば該化合物または塩について本明細書に記載されている用量範囲および他の医薬活性剤の承認または公表されている用量範囲から始めて、当業者によって決定され得る。
【００８９】
哺乳類（例えば、ヒト）の治療的処置のために本発明の化合物またはその医薬上許容される塩を使用するためには、当該成分は、通常、標準的な製剤プラクティスに従って医薬組成物として製剤化される。したがって、別の態様において、本発明は、式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩（活性成分）と医薬上許容されるアジュバント、希釈剤または担体を含む医薬組成物を提供する。
【００９０】
さらなる態様において、本発明は、活性成分を医薬上許容されるアジュバント、希釈剤または担体と混合することを含む、組成物の調製方法を提供する。投与様式に依存して、該医薬組成物は、活性成分を、例えば０.０５〜９９％ｗ（重量％）、例えば０.０５〜８０％ｗ、例えば０.１０〜７０％ｗ、例えば０.１０〜５０％ｗ（重量％はすべて、全組成物に基づくものである）含む。
【００９１】
本発明の医薬組成物は、例えば局所（例えば、肺および／もしくは気道、または皮膚へ）、吸入、経口、直腸または腹腔内投与によって処置するのが望ましい病態について標準的な方法で投与され得る。これらの目的のために、本発明の化合物は、当該技術分野で知られている手段によって製剤化され得る。本発明の好適な医薬組成物は、例えば活性成分０.１ｍｇ〜１ｇを含有する単位投与量で経口投与するのに適したものである。
【００９２】
各患者は、０.０００１ｍｇｋｇ-1〜１０ｍ／ｇｋｇ-1、例えば０.００５ｍｇｋｇ-1〜５ｍｇｋｇ-1の範囲の用量の活性成分を、例えば１日１〜４回、投与される。
【００９３】
本発明の実施態様において、吸入投与（経口吸入および経鼻吸入を包含する）用に処方される、式（Ｉ）で示される化合物を医薬上許容されるアジュバント、希釈剤または担体とともに含む医薬組成物が提供される。
【００９４】
式（Ｉ）で示される化合物は、好適な送達装置を使用して、例えばドライパウダー吸入器、定量噴霧式吸入器、ネブライザーまたは経鼻送達装置から、投与され得る。このような装置は周知である。
【００９５】
ドライパウダー吸入器は、式（Ｉ）で示される化合物を単独でまたは医薬上許容される担体と合わせて投与するために使用され得、後者の場合、微粉末としてまたは規則混合物（ordered mixture）として使用され得る。ドライパウダー吸入器は、単回投与または複数回投与であり得、ドライパウダーまたは粉末含有カプセルを利用し得る。
【００９６】
したがって、一の実施態様において、式（Ｉ）で示される化合物、または式（Ｉ）で示される化合物を含有する医薬組成物は、ドライパウダー吸入器（ＤＰＩ）によって投与される。
【００９７】
ＤＰＩは、「受動式」もしくは呼吸駆動式であってもよく、または粉末が患者の吸入以外の何らかのメカニズム（例えば、圧縮空気の内部供給）によって分散される場合には「能動的」であってもよい。現在、２つのタイプの受動式ドライパウダー吸入器が入手可能である：単回投与用（single-dose）、複数回投与用（multiple unit dose）またはマルチドーズ型（multidose）（リザーバー）吸入器。単回投与用装置において、個々の投与は、通常、ゼラチンカプセルで施され、使用前に吸入器に充填し、その例としては、Ｓｐｉｎｈａｌｅｒ（登録商標）（Aventis）、Ｒｏｔａｈａｌｅｒ（登録商標）（GlaxoSmithKline）、ＡｅｒｏｌｉｓｅｒTM（Novartis）、Ｉｎｈａｌａｔｏｒ（登録商標）（Boehringer）およびＥｃｌｉｐｓｅ（Aventis）の装置が挙げられる。複数回投与用吸入器は、複数のゼラチンカプセルとして、またはブリスター中に多数の個別に包装された投薬を含有し、その例としては、Ｄｉｓｋｈａｌｅｒ（登録商標）（GlaxoSmithKline）、Ｄｉｓｋｕｓ（登録商標）（GlaxoSmithKline）、Ｎｅｘｔｈａｌｅｒ（登録商標）（Chiesi）およびＡｅｒｏｈａｌｅｒ（登録商標）（Boehringer）装置が挙げられる。マルチドーズ型装置において、薬物はバルク粉末リザーバー中に貯蔵され、そこから個々の投与量が計量され、該リザーバーの例としては、Ｇｅｎｕａｉｒ（登録商標）（AstraZeneca）、Ｔｕｒｂｕｈａｌｅｒ（登録商標）（AstraZeneca）、Ｅａｓｙｈａｌｅｒ（登録商標）（Orion）、Ｎｏｖｏｌｉｚｅｒ（登録商標）（ASTA Medica）、Ｃｌｉｃｋｈａｌｅｒ（登録商標）（Innovata Biomed）、Ｓｐｉｒｏｍａｘ（登録商標）（Teva）およびPulvinal（登録商標）（Ciiesi）装置が挙げられる。
【００９８】
ＤＰＩのための吸入用医薬組成物は、微粉活性成分（一般に、１０μｍ以下、例えば５μｍ以下、例えば１〜５μｍの空気動力学的直径を有する）と担体物質（例えば、単糖、二糖もしくは多糖、糖アルコール、または別のポリオール）とを混合することによって調製され得る。好適な担体は、糖、例えば、ラクトース、グルコース、ラフィノース、メレジトース、ラクチトール、マルチトール、トレハロース、シュークロース、マンニトール；およびデンプンである。好適には、活性成分の粒子は、担体粒子に付着して規則（相互作用）粉末混合物を形成する。担体粒子は、２０〜１０００μｍ、さらに一般的には５０〜５００μｍの質量中央径を有し得る。
【００９９】
別法として、吸入用医薬組成物は、微粉末（例えば、微粉活性成分および微粉担体粒子からなる）を吸入手順の間に壊れる球体に加工することによって調製され得る。
【０１００】
次に、粉末混合物は、必要に応じて、個々が所望の用量の活性成分を含有しているハードゼラチンカプセル内に分散され得る。別法として、該粉末混合物は、マルチドーズ型吸入器（例えば、Ｇｅｎｕａｉｒ（登録商標）またはＴｕｒｂｕｈａｌｅｒ（登録商標））のリザーバー中に充填され得る。
【０１０１】
さらなる実施態様において、式（Ｉ）で示される化合物は、定量噴霧式吸入器、特に加圧式定量噴霧式吸入器（ｐＭＤＩ）によって投与される。ｐＭＤＩは、加圧容器内に活性成分を好適な溶液または懸濁液として含んでいる。該活性成分は、ｐＭＤＩ装置のバルブを作動させることによって送達される。作動は、手動または呼吸駆動で行われる。手動によって作動するｐＭＤＩにおいて、該装置は、使用者が例えばｐＭＤＩ装置の好適な放出機構を押すことによって吸入するように、使用者が作動させる。呼吸駆動式ｐＭＤＩは、患者がｐＭＤＩのマウスピースを介して吸入すると作動する。これは、装置の作動が患者の吸入時に合わせられるので好都合であり得、活性成分のより一貫性のある用量をもたらすことができる。ｐＭＤＩ装置の例としては、例えば、Ｒａｐｉｈａｌｅｒ（登録商標）（AstraZeneca）が挙げられる。
【０１０２】
ｐＭＤＩ用の吸入用医薬組成物は、溶媒（例えば、エタノール）、界面活性剤、滑沢剤または安定化剤などのさらなる賦形剤（excipient）を用いるかまたは用いずに好適な噴霧剤に式（Ｉ）で示される化合物を溶解するかまたは分散させることによって調製され得る。好適な噴霧剤としては、炭化水素、クロロフルオロカーボンおよびヒドロフルオロアルカン（例えば、ヘプタフルオロアルカン）噴霧剤、またはこのような噴霧剤の混合物が挙げられる。好ましい噴霧剤は、Ｐ１３４ａおよびＰ２２７であり、これらはそれぞれ、単独で、または他の噴霧剤および／または界面活性剤および／または他の賦形剤と合わせて使用され得る。
【０１０３】
さらなる実施態様において、式（Ｉ）で示される化合物は、スペーサーと合わせて定量噴霧式吸入器によって投与される。好適なスペーサーは周知であり、Ｎｅｂｕｃｈａｍｂｅｒ（登録商標）（AstraZeneca）またはＶｏｌｕｍａｔｉｃ（登録商標）（GlaxoSmithKline）が挙げられる。
【０１０４】
さらなる実施態様において、式（Ｉ）で示される化合物は、ネブライザーによって投与される。好適なネブライザーは周知であり、ｅＦｌｏｗ（登録商標）（PARI GmbH）が挙げられる。
【０１０５】
ネブライザー用の吸入用医薬組成物は、式（Ｉ）で示される化合物を好適な水性媒体に分散させるかまたは好ましくは溶解することによって調製され得る。当該組成物は、例えば好適なｐＨおよび／または浸透圧調整剤、界面活性剤および保存剤を含むこともできる。例えば、ネブライザーからの吸入に適した組成物は、塩化ナトリウム（９ｍｇ／ｇ）；乾燥クエン酸（０.０７３５ｍｇ／ｇ）；クエン酸ナトリウム（０.１９ｍｇ／ｇ）；塩化ベンザルコニウム（０.１ｍｇ／ｇ）、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸、０.１ｍｇ／ｇ）およびポリソルベート８０（０.３ｍｇ／ｇ）を含む水性媒体（Ｍｉｌｌ−Ｑ水中ｍｇ／ｇ）に分散させた式（Ｉ）で示される化合物を含む。
【０１０６】
さらなる実施態様において、式（Ｉ）で示される化合物は、好適な経鼻送達装置、例えば、スプレーポンプまたはＭＤＩからのスプレーとして経鼻投与される。別法として、当該化合物は、好適なＤＰＩ装置、例えばＲｈｉｎｏｃｏｒｔ（登録商標）、Ｔｕｒｂｕｈａｌｅｒ（登録商標）（AstraZeneca）を使用して粉末として経鼻投与される。
【０１０７】
スプレーポンプまたはＭＤＩ経鼻送達装置用の吸入用医薬組成物は、式（Ｉ）で示される化合物を好適な水性媒体に分散させるかまたは好ましくは溶解することによって調製され得る。当該組成物は、例えば好適なｐＨおよび／または浸透圧調整剤、界面活性剤、保存剤、滑沢剤、フレーバー剤または粘度調整剤を含むこともできる。必要な場合、鼻腔からの吸収を増強する添加剤は、例えば好適な生体接着ポリマーを含むことができる。経鼻送達に適した乾燥粉末組成物は、ＤＰＩ送達に関して上記したものと同じである。しかしながら、該化合物の肺への侵入を制限して該化合物を鼻腔内に保持するのが望ましい場合には、より大きな粒度の、例えば約１０μｍ超、例えば１０μｍ〜５０μｍの平均粒径を有する化合物を使用することが必要である。
【０１０８】
したがって、本発明は、また、本発明の吸入用医薬組成物を含有する吸入装置（例えば、ドライパウダー吸入器、特に複数回投与用ドライパウダー吸入器、またはｐＭＤＩ吸入器）を提供する。
【０１０９】
本発明は、さらに、本発明の化合物またはその医薬上許容される塩と第２の活性成分が、同時に、連続的に、または混合して投与される場合の、上記の１つ以上の病状の処置のための併用療法に関する。このような組合せは、１種類以上のさらなる活性成分と併用され得る。
【０１１０】
本発明のさらなる態様において、本発明の化合物またはその医薬上許容される塩と、以下に定義されるような下記のものから選択される少なくとも１種類のさらなる活性成分を含む医薬組成物（例えば、ＣＦまたはＣＯＰＤのような本明細書に記載の疾患または病態の１つの治療用医薬として用いるための）が提供される：
ａ）βアドレナリン受容体アゴニスト；
ｂ）ムスカリン受容体アンタゴニスト；
ｃ）ムスカリン受容体アンタゴニストとβアドレナリン受容体アゴニストのジョイント；
ｄ）ｔｏｌｌ様受容体アゴニスト（例えば、ＴＬＲ７アゴニストまたはＴＬＲ９アゴニスト）
ｅ）アデノシンアンタゴニスト；
ｆ）グルココルチコイド受容体アゴニスト（ステロイド系または非ステロイド系）；
ｇ）ｐ３８アンタゴニスト；
ｈ）ＩＫＫ２アンタゴニスト；
ｉ）ＰＤＥ４アンタゴニスト；
ｊ）ケモカイン受容体機能の調節剤（例えば、ＣＣＲ１受容体アンタゴニスト、ＣＣＲ２Ｂ受容体アンタゴニスト、ＣＣＲ５受容体アンタゴニスト、ＣＸＣＲ２受容体アンタゴニストまたはＣＸＣＲ３受容体アンタゴニスト）；
ｋ）ＣＲＴｈ２アンタゴニスト；または
ｌ）浸透圧調節物質、例えば、高張食塩水のようなイオン性浸透圧調節物質。
【０１１１】
本発明は、さらにまた、本発明の化合物またはその医薬上許容される塩と、下記のようなβアドレナリン受容体アゴニスト（β受容体サブタイプ１〜４を包含する）との組合せに関する：テルブタリン（例えば、硫酸塩として）、サルメテロール（例えば、キシナホ酸塩として）、サルブタモール（アルブテロール）（例えば、硫酸塩として）、プロカテロール（例えば、塩酸塩として）、ピルブテロール（例えば、酢酸塩として）、オルシプレナリン（メタプロテレノール）（例えば、硫酸塩として）、ミルベテロール（例えば、塩酸塩として）、レボサルブタモール（レブアルブテロール）（例えば、塩酸塩として）、アベジテロール、イソプレナリン（イソプロテレノール）（例えば、塩酸塩として）、インダカテロール（例えば、マレイン酸塩として）、ビランテロール（例えば、トリフェナテート（トリフェニル酢酸）塩として）、ホルモテロール（例えば、フマル酸塩、例えばフマル酸塩二水和物として）、カルモテロール、ビトルテロール（例えば、メシル酸塩として）、オロダテロール、ベドラドリン（例えば、硫酸塩として）、バンブテロール（例えば、塩酸塩として）、アルホルモテロール（例えば、酒石酸塩として）、ＰＦ−６１０３５５（２−[３−[２−[[(２Ｒ)−２−ヒドロキシ−２−[４−ヒドロキシ−３−(メタンスホンアミド)フェニル]エチル]アミノ]−２−メチル−プロピル]フェニル]−Ｎ−[[３−(４−ヒドロキシフェニル)フェニル]メチル]アセトアミド）、Ｎ−(２−ジエチルアミノエチル)−Ｎ−[２−[２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−３Ｈ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチルアミノ]エチル]−３−[２−(１−ナフチル)エトキシ]プロパンアミド、Ｎ−シクロヘキシル−３−[２−(３−フルオロフェニル)エチルアミノ]−Ｎ−[２−[２−(４−ヒドロキシ−２−オキソ−３Ｈ−１,３−ベンゾチアゾール−７−イル)エチルアミノ]エチル]プロパンアミド、またはＮ−シクロヘキシル−Ｎ−[２−[２−(５−ヒドロキシ−３−オキソ−４Ｈ−１,４−ベンゾオキサジン−８−イル)エチルアミノ]エチル]−３−[２−[３−(１−メチルピラゾール−４−イル)フェニル]エトキシ]プロパンアミド。
【０１１２】
本発明は、さらに、本発明の化合物またはその医薬上許容される塩と、下記のようなムスカリン受容体アンタゴニスト（例えばＭ１、Ｍ２またはＭ３アンタゴニスト、例えば、選択的Ｍ３アンタゴニスト）との組合せに関する：チオトロピウム（例えば、臭化物塩として）、オキシトロピウム（例えば、臭化物塩として）、イプラトロピウム（例えば、臭化物塩として）、グリコピロニウム臭化物（例えば、立体異性体のラセミ混合物として、またはＲ,Ｒ−、Ｒ,Ｓ−、Ｓ,Ｒ−、またはＳ,Ｓ−立体異性体として、またはＲ,Ｒ−、Ｒ,Ｓ−、Ｓ,Ｒ−、またはＳ,Ｓ−立体異性体の２つ以上を含む混合物として）、アクリジニウム（例えば、臭化物塩として）、ＧＳＫ５７３７１９（３−[２−[３−(５−シクロヘキシルオキシカルボニル−チオフェン−２−イル)−ウレイド]−３−(４−ヒドロキシ−フェニル)−プロピオニルアミノ]−１−(３−ヒドロキシ−ベンジル)−１−メチル−ピペリジニウム）、ＢＥＡ２１８０ＢＲ（ヒドロキシ−ジ−チオフェン−２−イル−酢酸８−メチル−８−アザ−ビシクロ[３.２.１]オクタ−６−エン−３−イルエステル）（例えば、臭化水素酸塩として）、１−フェニルシクロヘプタンカルボン酸[(３Ｒ)−１−[２−オキソ−２−(２−ピリジルアミノ)エチル]キヌクリジン−１−イウム−３−イル]（例えば、臭化物塩として）、または２−[(４−クロロフェニル)メトキシ]エチル−[[２−[(Ｒ)−シクロヘキシル−ヒドロキシ−フェニル−メチル]オキサゾール−５−イル]メチル]−ジメチル−アンモニウム（例えば、ナパジシル酸塩として）。
【０１１３】
本発明は、さらに、本発明の化合物またはその医薬上許容される塩と、ムスカリン受容体アンタゴニスト（例えば、Ｍ１、Ｍ２またはＭ３アンタゴニスト、例えば選択的Ｍ３アンタゴニスト）と下記のようなβアドレナリン受容体アゴニストとのジョイントである薬剤との組合せに関する：ＰＦ４３４８２３５（[Ｎ−[２−(３−クロロ−４−ヒドロキシ−フェニル)フェニル]カルバミン酸１−[９−[[(２Ｒ)−２−ヒドロキシ−２−[４−ヒドロキシ−３−(メタンスホンアミド)フェニル]エチル]アミノ]ノニル]−４−ピペリジル]）、３−[２−[２−クロロ−３−[[８−(２−エチルチアゾール−４−カルボニル)−１１−オキサ−３,８−ジアゾスピロ[５.５]ウンデカン−３−イル]メチル]フェニル]エトキシ]−Ｎ−シクロペンチル−Ｎ−[２−[２−(５−ヒドロキシ−３−オキソ−４Ｈ−１,４−ベンゾオキサジン−８−イル)エチルアミノ]エチル]プロパンアミド、Ｎ−ブチル−Ｎ−[２−[２−(５−ヒドロキシ−３−オキソ−４Ｈ−１,４−ベンゾオキサジン−８−イル)エチルアミノ]エチル]−３−[２−[３−[２−[８−(２−イソプロピルチアゾール−４−カルボニル)−１１−オキサ−３,８−ジアゾスピロ[５.５]ウンデカン−３−イル]エチル]フェニル]エトキシ]プロパンアミド、または７−[(１Ｒ)−２−[２−[２−フルオロ−５−[[８−(２−イソプロピルチアゾール−４−カルボニル)−１１−オキサ−３,８−ジアゾスピロ[５.５]ウンデカン−３−イル]メチル]フェニル]エチルアミノ]−１−ヒドロキシ−エチル]−４−ヒドロキシ−３Ｈ−１,３−ベンゾチアゾール−２−オン。
【０１１４】
本発明は、さらに、本発明の化合物またはその医薬上許容される塩と、下記のようなｔｏｌｌ様受容体アゴニスト（ＴＬＲ７またはＴＬＲ９のアゴニストを包含する）との組合せに関する：ロキソリビン（７−アリル−２−アミノ−９−[(２Ｒ,３Ｒ,４Ｓ,５Ｒ)−３,４−ジヒドロキシ−５−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロフラン−２−イル]−１Ｈ−プリン−６,８−ジオン）、２−[３−[[３−(６−アミノ−２−ブトキシ−８−オキソ−７Ｈ−プリン−９−イル)プロピル−(３−モルホリノプロピル)アミノ]メチル]フェニル]酢酸メチル（例えば、臭化水素酸塩、塩酸塩またはジマレイン酸塩として）、２−[４−[[２−アミノ−４−メチル−６−(ペンチルアミノ)ピリミジン−５−イル]メチル]フェニル]酢酸４−(ジメチルアミノ)ブチル（例えば、ジサッカリン塩、ジフマル酸塩、ジ−１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸塩またはモノ安息香酸塩として）、または5'-TCG AAC GTT CGA AGA TGA TGA T（国際公開第２００４／０１５８１７９号においてSEQ ID 171として記載されている）。
【０１１５】
本発明は、さらに、本発明の化合物またはその医薬上許容される塩と、下記のようなアデノシンアンタゴニストとの組合せに関する：レガデノソン、ＡＴＬ−３１３（４−[３−[６−アミノ−９−[(２Ｒ,３Ｒ,４Ｓ,５Ｓ)−５−(シクロプロピルカルバモイル)−３,４−ジヒドロキシ−テトラヒドロフラン−２−イル]プリン−２−イル]プロパ−２−イニル]ピペリジン−１−カルボン酸メチル）、またはアパデノソン（４−[３−[６−アミノ−９−[(２Ｒ,３Ｒ,４Ｓ,５Ｓ)−５−(エチルカルバモイル)−３,４−ジヒドロキシ−テトラヒドロフラン−２−イル]プリン−２−イル]プロパ−２−イニル]シクロヘキサンカルボン酸メチル）。
【０１１６】
本発明は、さらに、本発明の化合物またはその医薬上許容される塩と、下記のようなグルココルチコイド受容体アゴニスト（ステロイド系または非ステロイド系）との組合せに関する：トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、プレドニゾン、フロ酸モメタゾン、エタボン酸ロテプレドノール、プロピオン酸フルチカゾン、フロ酸フルチカゾン、フルオシノロンアセトニド、シペシル酸デキサメタゾン、デスイソブチリルシクレソニド、プロピオン酸クロベタゾール、シクレソニド、プロピオン酸ブチキソコルト、ブデソニド、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ジプロピオン酸アルクロメタゾン、(１Ｒ,３ａＳ,３ｂＳ,１０ａＲ,１０ｂＳ,１１Ｓ,１２ａＳ)−１−{[(シアノメチル)チオ]カルボニル}−７−(４−フルオロフェニル)−１１−ヒドロキシ−１０ａ,１２ａ−ジメチル−１,２,３,３ａ,３ｂ,４,５,７,１０,１０ａ,１０ｂ,１１,１２,１２ａ−テトラデカヒドロシクロペンタ[５,６]ナフト[１,２−ｆ]インダゾール−１−イル２−フロ酸、(１Ｒ,２Ｒ,３aＳ,３ｂＳ,１０ａＳ,１０ｂＲ,１１Ｓ,１２ａＳ)−１０ｂ−フルオロ−１−{[(フルオロメチル)スルファニル]カルボニル}−７−(６−フルオロピリジン−３−イル)−１１−ヒドロキシ−２,１０ａ,１２ａ−トリメチル−１,２,３,３ａ,３ｂ,４,５,７,１０,１０ａ,１０ｂ,１１,１２,１２ａ−テトラデカヒドロシクロペンタ[５,６]ナフト[１,２−ｆ]インダゾール−１−イルメトキシ酢酸、２,２,２−トリフルオロ−Ｎ−[(１Ｓ,２Ｒ)−２−[１−(４−フルオロフェニル)インダゾール−５−イル]オキシ−２−(３−メトキシフェニル)−１−メチル−エチル]アセトアミド、３−[５−[(１Ｒ,２Ｓ)−１−(４Ｈ−１,３−ベンゾジオキシン−７−イル)−２−(２,２−ジフルオロプロパノイルアミノ)プロポキシ]インダゾール−１−イル]−Ｎ−(３−ピリジルメチル)ベンズアミド、３−[５−[(１Ｒ,２Ｓ)−２−(２,２−ジフルオロプロパノイルアミノ)−１−(２,３−ジヒドロ−１,４−ベンゾジオキシン−６−イル)プロポキシ]インダゾール−１−イル]−Ｎ−[(３Ｒ)−１,１−ジオキソチオラン−３−イル]ベンズアミド、または３−[５−[(１Ｒ,２Ｓ)−２−(２,２−ジフルオロプロパノイルアミノ)−１−(２,３−ジヒドロ−１,４−ベンゾジオキシン−６−イル)プロポキシ]インダゾール−１−イル]−Ｎ−[(３Ｒ)−テトラヒドロフラン−３−イル]ベンズアミド。
【０１１７】
本発明は、さらに、本発明の化合物またはその医薬上許容される塩と、下記のようなｐ３８アンタゴニストとの組合せに関する：ＰＨ７９７８０４（３−[３−ブロモ−４−(２,４−ジフルオロ−ベンジルオキシ)−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピリジン−１−イル]−４,Ｎ−ジメチル−ベンズアミド）、ロスマピモド、ＰＦ０３７１５４５５（１−[５−tert−ブチル−２−(３−クロロ−４−ヒドロキシ−フェニル)ピラゾール−３−イル]−３−[[２−[[３−[２−(２−ヒドロキシエチルスルファニル)フェニル]−[１,２,４]トリアゾロ[４,３−ａ]ピリジン−６−イル]スルファニル]フェニル]メチル]尿素）、Ｎ−シクロプロピル−４−メチル−３−[６−(４−メチルピペラジン−１−イル)−４−オキソ−キナゾリン−３−イル]ベンズアミド、またはＮ−シクロプロピル−３−フルオロ−４−メチル−５−[３−[[１−[２−[２−(メチルアミノ)エトキシ]フェニル]シクロプロピル]アミノ]−２−オキソ−ピラジン−１−イル]ベンズアミド。
【０１１８】
本発明は、さらに、本発明の化合物またはその医薬上許容される塩と、テオフィリンおよびアミノフィリンを包含するメチルキサンタニンのようなホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤または下記のような選択的ＰＤＥアイソザイム阻害剤（ＰＤＥ４阻害剤またはアイソフォームＰＤＥ４Ｄの阻害剤を包含する）との組合せに関する：テトミラスト、ロフルミラスト、オグレミラスト、イブジラスト、ＧＰＤ−１１１６（３−ベンジル−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ[４,３−ｃ][１,８]ナフチリジン−４−オン）、ロノミラスト、ＮＶＰ  ＡＢＥ  １７１（４−[８−(２,１,３−ベンゾオキサジアゾール−５−イル)−１,７−ナフチリジン−６−イル]安息香酸）、ＲＰＬ５５４（２−[(２Ｅ)−９,１０−ジメトキシ−４−オキソ−２−(２,４,６−トリメチルフェニル)イミノ−６,７−ジヒドロピリミド[６,１−ａ]イソキノリン−３−イル]エチル尿素）、ＣＨＦ５４８０（(２Ｓ)−２−(４−イソブチルフェニル)プロパン酸[(Ｚ)−２−(３,５−ジクロロ−４−ピリジル)−１−(３,４−ジメトキシフェニル)ビニル]）、またはＧＳＫ２５６０６６（６−[３−(ジメチルカルバモイル)フェニル]スルホニル−４−(３−メトキシアニリノ)−８−メチル−キノリン−３−カルボキサミド）。
【０１１９】
本発明は、さらに、本発明の化合物またはその医薬上許容される塩と、５−(２−イソプロピルイソインドリン−５−イル)−３−[１−(２−メトキシエチルスルホニル)−４−ピペリジル]−１Ｈ−インドール−７−カルボン酸のようなＩＫＫ２アンタゴニストとの組合せに関する。
【０１２０】
本発明は、さらに、本発明の化合物またはその医薬上許容される塩と、下記のようなケモカイン受容体機能の調節剤との組合せに関する：ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ２Ａ、ＣＣＲ２Ｂ、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０またはＣＣＲ１１（Ｃ−Ｃファミリーに関する）のアンタゴニスト、例えばＣＣＲ１、ＣＣＲ２ＢまたはＣＣＲ５受容体アンタゴニスト；ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４またはＣＸＣＲ５（Ｃ−Ｘ−Ｃファミリーに関する）、例えばＣＸＣＲ２またはＣＸＣＲ３受容体アンタゴニスト；またはＣ−Ｘ3−Ｃファミリーに関するＣＸ3ＣＲ１。例えば、本発明は、本発明の化合物と、ＰＳ−０３１２９１（ピロリジン−１,２−ジカルボン酸２−[(４−クロロ−ベンジル)−メチル−アミド]１−[(４−トリフルオロメチル−フェニル)−アミド]）、ＣＣＸ−３５４（１−[４−(４−クロロ−３−メトキシ−フェニル)ピペラジン−１−イル]−２−[３−(１Ｈ−イミダゾール−２−イル)ピラゾロ[３,４−ｂ]ピリジン−１−イル]エタノン）、ビクリビロク、マラビロク、セニクリビロク、ナバリキシン（２−ヒドロキシ−Ｎ,Ｎ−ジメチル−３−[[２−[[(１Ｒ)−１−(５−メチル−２−フリル)プロピル]アミノ]−３,４−ジオキソ−シクロブテン−１−イル]アミノ]ベンズアミド）、ＳＢ６５６９３３（１−(２−クロロ−３−フルオロ−フェニル)−３−(４−クロロ−２−ヒドロキシ−３−ピペラジン−１−イルスルホニル−フェニル)尿素）、Ｎ−[１−[(３Ｒ)−３−(３,５−ジフルオロフェニル)−３−(１−メチルスルホニル−４−ピペリジル)プロピル]−４−ピペリジル]−Ｎ−エチル−２−(４−メチルスルホニルフェニル)アセトアミド、Ｎ−[２−[(２Ｓ)−３−[[１−[(４−クロロフェニル)メチル]−４−ピペリジル]アミノ]−２−ヒドロキシ−２−メチル−プロポキシ]−４−ヒドロキシ−フェニル]アセトアミド、２−[２−クロロ−５−[(２Ｓ)−３−(５−クロロスピロ[３Ｈ−ベンゾフラン−２,４'−ピペリジン]−１'−イル)−２−ヒドロキシ−プロポキシ]−４−(メチルカルバモイル)フェノキシ]−２−メチル−プロパン酸、Ｎ−[２−[(２,３−ジフルオロフェニル)メチルスルファニル]−６−[(１Ｒ,２Ｓ)−２,３−ジヒドロキシ−１−メチル−プロポキシ]ピリミジン−４−イル]アゼチジン−１−スルホンアミド、またはＮ−[２−[(２,３−ジフルオロフェニル)メチルスルファニル]−６−[[(１Ｒ,２Ｒ)−２,３−ジヒドロキシ−１−メチル−プロピル]アミノ]ピリミジン−４−イル]アゼチジン−１−スルホンアミドとの組合せに関する。
【０１２１】
本発明は、さらに、本発明の化合物またはその医薬上許容される塩と、下記のようなロイコトリエン生合成阻害剤、５−リポキゲナーゼ（５−ＬＯ）阻害剤または５−リポキゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）アンタゴニストとの組合せに関する：ＴＡ２７０（４−ヒドロキシ−１−メチル−３−オクチルオキシ−７−シナピノイルアミノ−２(１Ｈ)−キノリノン）、ＰＦ−４１９１８３４（２Ｈ−ピラン−４−カルボキサミド、テトラヒドロ−４−[３−[[４−(１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル)フェニル]チオ]フェニル]−）、セチロートン、ＣＭＩ９７７（１−[４−[(２Ｓ,５Ｓ)−５−[(４−フルオロフェノキシ)メチル]テトラヒドロフラン−２−イル]ブタ−３−イニル]−１−ヒドロキシ−尿素）、フィボフラポン（３−[３−tert−ブチルスルファニル−１−[[４−(６−エトキシ−３−ピリジル)フェニル]メチル]−５−[(５−メチル−２−ピリジル)メトキシ]インドール−２−イル]−２,２−ジメチル−プロパン酸）、ＧＳＫ２１９０９１５（１Ｈ−インドール−２−プロパン酸、３−[(１,１−ジメチルエチル)チオ]−１−[[４−(６−メトキシ−３−ピリジニル)フェニル]メチル]−α,α−ジメチル−５−[(２−ピリジニル)メトキシ]−）、リコフェロン、キフラポン（３−[３−tert−ブチルスルファニル−１−[(４−クロロフェニル)メチル]−５−(２−キノリルメトキシ)インドール−２−イル]−２,２−ジメチル−プロパン酸）、ベリフラポン（(２Ｒ)−２−シクロペンチル−２−[４−(２−キノリルメトキシ)フェニル]酢酸）、ＡＢＴ０８０（４,４−ビス[４−(２−キノリルメトキシ)フェニル]ペンタン酸）、ジロートン、ザフィルルカスト、またはモンテルカスト。
【０１２２】
本発明は、さらに、本発明の化合物またはその医薬上許容される塩と、下記のようなＣＲＴｈ２アンタゴニストまたはＤＰ２アンタゴニストとの組合せに関する：ＡＣＴ１２９９６８（２−[２−[(５−アセチル−２−メトキシ−フェニル)メチルスルファニル]−５−フルオロ−ベンゾイミダゾール−１−イル]酢酸）、ＡＭＧ８５３（２−[４−[４−(tert−ブチルカルバモイル)−２−[(２−クロロ−４−シクロプロピル−フェニル)スルホニルアミノ]フェノキシ]−５−クロロ−２−フルオロ−フェニル]酢酸）、ＡＭ２１１（２−[３−[２−[[ベンジルカルバモイル(エチル)アミノ]メチル]−４−(トリフルオロメチル)フェニル]−４−メトキシ−フェニル]酢酸）、２−[４−アセトアミド−３−(４−クロロフェニル)スルファニル−２−メチル−インドール−１−イル]酢酸、(２Ｓ)−２−[４−クロロ−２−(２−クロロ−４−エチルスルホニル−フェノキシ)フェノキシ]プロパン酸、２−[４−クロロ−２−[２−フルオロ−４−(４−フルオロフェニル)スルホニル−フェニル]フェノキシ]酢酸、または(２Ｓ)−２−[２−[３−クロロ−４−(２,２−ジメチルピロリジン−１−カルボニル)フェニル]−４−フルオロ−フェノキシ]プロパン酸。
【０１２３】
本発明は、さらに、本発明の化合物またはその医薬上許容される塩と、下記のようなＭＫ２（ＭＡＰＫＡＰキナーゼ２）アンタゴニストとの組合せに関する：バレスプラビド（varesplabid）、ＰＦ−３６４４０２２（(１０Ｒ)−１０−メチル−３−(６−メチルピリジン−３−イル)−９,１０,１１,１２−テトラヒドロ−８Ｈ−[１,４]ジアゼピノ[５',６'：４,５]チエノ[３,２−ｆ]キノリン−８−オン）、または４−ベンゾイル−Ｄ−フェニルアラニル−Ｄ−セリル−Ｄ−トリプトフィル−Ｄ−セリル−２,３,４,５,６−ペンタフルオロ−Ｄ−フェニルアラニル−３−シクロヘキシル−Ｄ−アラニル−Ｄ−アルギニル−Ｄ−アルギニル−Ｄ−アルギニル−Ｄ−グルタミニル−Ｄ−アルギニル−Ｄ−アルギニン。
【０１２４】
本発明は、さらに、本発明の化合物またはその医薬上許容される塩と、下記のようなミエロペルオキシダーゼアンタゴニストとの組合せに関する：レスベラトロール、ピセタノール、３−[[(２Ｒ)−テトラヒドロフラン−２−イル]メチル]−２−チオキソ−７Ｈ−プリン−６−オン、または１−(２−イソプロポキシエチル)−２−チオキソ−５Ｈ−ピロロ[３,２−ｄ]ピリミジン−４−オン。
【０１２５】
本発明は、さらに、本発明の化合物またはその医薬上許容される塩と浸透圧調節物質との組合せに関する。本明細書で使用する場合、「浸透圧調節物質」は、浸透圧的に活性な小分子であり、イオン性および非イオン性の両方の浸透圧調節物質を包含することが意図される。本発明のさらなる態様において、本発明の化合物またはその医薬上許容される塩と、高張食塩水のようなイオン性浸透圧調節物質との組合せが提供される。
【０１２６】
本発明のさらにさらなる態様において、本発明の化合物またはその医薬上許容される塩と、上記で定義したような下記のものから選択される少なくとも１種類のさらなる活性成分を含む医薬組成物（例えば、ＣＦまたはＣＯＰＤのような本明細書に記載の疾患または病態の１つの処置用医薬として用いるための）が提供される：
ａ）βアドレナリン受容体アゴニスト；
ｂ）ムスカリン受容体アンタゴニスト；
ｃ）ムスカリン受容体アンタゴニストとβアドレナリン受容体アゴニストのジョイント；または
ｄ）グルココルチコイド受容体アゴニスト（ステロイド系または非ステロイド系）；または
ｅ）浸透圧調節物質、例えば、高張食塩水のようなイオン性浸透圧調節物質。
【０１２７】
さらに本発明のさらなる態様において、少なくとも１種類のさらなる活性成分はβアドレナリン受容体アゴニストである。別の態様において、少なくとも１種類のさらなる活性成分はムスカリン受容体アンタゴニストである。さらなる態様において、少なくとも１種類のさらなる活性成分はグルココルチコイド受容体アゴニスト（ステロイド系または非ステロイド系）である。さらなる態様において、少なくとも１種類のさらなる活性成分はムスカリン受容体アンタゴニストとβアドレナリン受容体アゴニストのジョイントである。さらなる態様において、少なくとも１種類のさらなる活性成分は浸透圧調節物質である。
【０１２８】
下記の実施例において本明細書に記載の化合物をさらに説明する。これらの実施例は、単に説明のために記載されるのであって、限定するものではない。
【０１２９】
略語：
【表１】
0006502469.tif 000018
【０１３０】
一般的な方法
ＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ、Ａｖａｎｃｅ  ＩＩまたはＡｖａｎｃｅ  ＩＩＩ分析計にて４００、５００または６００ＭＨｚのプロトン周波数で記録した。２７０ＭＨｚのプロトン周波数が報告された場合にはＪＥＯＬ  ＥＸ−２７０分析計を使用した。内部基準としてクロロホルム−δ（Ｈ  ７.２６ｐｐｍ）、アセトン（Ｈ  ２.０４ｐｐｍ）、ジクロロメタン−ｄ2（Ｈ  ５.３２ｐｐｍ）、ＣＨ3ＯＤ（Ｈ  ３.３０ｐｐｍ）またはＤＭＳＯ−ｄ6（Ｈ  ２.４９ｐｐｍ）の中心ピークを使用した。当該技術分野では周知であるが、分析物の濃度の変動および添加物（例えば、ＮＭＲアッセイ標準またはトリフルオロ酢酸）の有無のような試料調製における変動の結果として化学シフトのわずかな変動が生じることもある。
【０１３１】
ＬＣ／ＭＳ実験は、ＥＳＩモードのＷａｔｅｒｓ  Ｘｅｖｏ  Ｑ−ＴｏＦ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒを装備したＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣシステムを用いて行った。ＬＣは２つのセットアップで行った：１）ＢＥＨ  Ｃ１８カラム（１.７μｍ  ２.１×５０ｍｍ）とともにｐＨ１０の水性４６ｍＭ炭酸アンモニウム／アンモニアバッファー（Ａ）とＭｅＣＮ（Ｂ）との勾配液（２〜９５％Ｂで５分間）を流速１.０ｍＬ／分で用いた；２）ＨＳＳ  Ｃ１８カラム（１.８μｍ  ２.１×５０ｍｍ）とともにｐＨ３の水性１０ｍＭ  ＦＡ／１ｍＭギ酸アンモニウムバッファー（Ａ）とＭｅＣＮ（Ｂ）との勾配液（２〜９５％Ｂで５分間）を流速１.０ｍｌ／分で用いた。
【０１３２】
エナンチオマー過剰率（％ｅｅ）として示される光学純度は、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００シリーズのクロマトグラフを使用してキラルＨＰＬＣによって測定した。方法Ａ：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＩＣ  ２５０×４.６ｍｍ（５μｍ）を装備したシステム。移動相として、ヘプタン／ｉＰｒＯＨ／エタノールアミン（６０：４０：０.１）を流速１ｍＬ／分で使用した。注入容量は１０μＬであり、化合物検出は、２６８ｎｍでＵＶによって行った。方法Ｂ：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＩＣ  １５０×４.６ｍｍ（３μｍ）を装備したシステム。移動相として、ＣＯ2、１２０バール（Ａ）とＭｅＯＨ（０.５％ＤＥＡ）（Ｂ）をＡ／Ｂ比８０／２０で流速４ｍＬ／分で使用した。注入容量は５μＬであった。
【０１３３】
分取ＨＰＬＣは、ＭＳ検出器を一体化しており、X-BridgeまたはSunfireからのＰｒｅｐ  Ｃ１８  ＯＢＤ  ５μｍ  １９×１５０ｍｍカラムを装備したＷａｔｅｒｓ  ＦｒａｃｔｉｏｎＬｙｎｘシステムで行った。別法として、ＵＶ検出器を一体化しており、Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ８  １０μｍ、２０×２５０  ＩＤまたは５０×２５０  ＩＤｍｍを装備したＧｉｌｓｏｎ  ＧＸ−２８１を使用した。溶離液として、水／ＭｅＣＮ／ＡｃＯＨ（９５／５／０.１）または水／０.０５％ＴＦＡまたは水／０.１％ＮＨ4ＨＣＯ3（Ａ）とＭｅＣＮ（Ｂ）との勾配液を用いた。
【０１３４】
分取ＳＣＦは、ＭＳ検出器を一体化しており、Ｗａｔｅｒｓ  Ｖｉｒｉｄｉｓ  ２−ＥＰまたはＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｈｉｌｉｃ、３０×２５０ｍｍ、５μｍを装備したＷａｔｅｒｓ  Ｐｒｅｐ１００  ＳＣＦシステムを用いて行った。溶離液として、ＣＯ2（１００ｇ／分、１２０バール、４０℃）（Ａ）とＭｅＯＨ／ＮＨ３（２０ｍＭ）またはＭｅＯＨ（５％ＦＡ）またはＭｅＯＨ（Ｂ）との勾配液を用いた。
【０１３５】
特記しない限り、出発物質は市販されているもの、またはすでに文献に記載されているものであった。全ての溶媒および市販試薬は、実験用のものであり、特記しない限り、受け取ったままで使用した。
【０１３６】
下記の実施例に記載される化学名は、ＣｈｅｍＤｒａｗ（Ｕｌｔｒａ  １１）ネーミングパッケージソフトウェアを用いて作成した。ネーミングパッケージソフトウェアの種類が異なれば同一化合物に対して異なる名称が作成される可能性があることは当業者に認識されている。例示目的のためだけであるが、ＡＣＤ／Ｎａｍｅ  ２０１２ネーミングパッケージソフトウェアを用いて作成した下記の実施例１〜１６の化学名はそれぞれ以下のとおりである：
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−[(２Ｒ)−２−(２−メチルベンジル)−３−({[１−(３−{[(２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル]アミノ}プロパノイル)ピペリジン−４−イル]メチル}アミノ)プロピル]ピラジン−２−カルボキサミド；
１−デオキシ−１−[(２−{[４−({[(２Ｒ)−３−{[(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−イル)カルボニル]アミノ}−２−(２−メチルベンジル)プロピル]アミノ}メチル)ベンゾイル]アミノ}エチル)(ヘキシル)アミノ]−Ｄ−キシリトール；
１−デオキシ−１−{[２−({[４−({[(２Ｒ)−３−{[(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−イル)カルボニル]アミノ}−２−(２−メチルベンジル)プロピル]アミノ}メチル)ピペリジン−１−イル]カルボニル}アミノ)エチル](ヘキシル)アミノ}−Ｄ−グルシトール；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−[(２Ｒ)−３−({[１−(３−{ヘキシル[(２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル]アミノ}プロパノイル)ピペリジン−４−イル]メチル}アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル]ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−[(２Ｒ)−３−({[１−(３−{ヘキシル[(２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル]アミノ}プロパノイル)ピペリジン−４−イル]メチル}アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル]ピラジン−２−カルボキサミド；
１−デオキシ−１−[{４−[４−({[(２Ｒ)−３−{[(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−イル)カルボニル]アミノ}−２−(２−メチルベンジル)プロピル]アミノ}メチル)ピペリジン−１−イル]−４−オキソブチル}(ヘキシル)アミノ]−Ｄ−グルシトール；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−[(２Ｒ)−２−(２−メチルベンジル)−３−({[１−(３−{[(２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル]アミノ}プロパノイル)ピペリジン−４−イル]メチル}アミノ)プロピル]ピラジン−２−カルボキサミド；
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−[(２Ｒ)−３−({[１−(３−{ヘキシル[(２Ｒ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル]アミノ}プロパノイル)ピペリジン−４−イル]メチル}アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル]ピラジン−２−カルボキサミド；
１−デオキシ−１−[(２−{[４−({[(２Ｒ)−３−{[(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−イル)カルボニル]アミノ}−２−(２−メチルベンジル)プロピル]アミノ}メチル)ベンゾイル]アミノ}エチル)(ヘキシル)アミノ]−Ｄ−マンニトール；
１−デオキシ−１−[(２−{[４−({[(２Ｒ)−３−{[(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−イル)カルボニル]アミノ}−２−(２−メチルベンジル)プロピル]アミノ}メチル)ベンゾイル]アミノ}エチル)(ヘキシル)アミノ]−Ｄ−グルシトール；
１−デオキシ−１−{[２−({[４−({[(２Ｒ)−３−{[(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−イル)カルボニル]アミノ}−２−(２−メチルベンジル)プロピル]アミノ}メチル)フェノキシ]カルボニル}アミノ)エチル](ヘキシル)アミノ}−Ｄ−グルシトール；
１−デオキシ−１−[(２−{[４−(２−{[(２Ｒ)−３−{[(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−イル)カルボニル]アミノ}−２−(２−メチルベンジル)プロピル]アミノ}エチル)ベンゾイル]アミノ}エチル)(ヘキシル)アミノ]−Ｄ−グルシトール；
１−デオキシ−１−[(２−{[４−(２−{[(２Ｒ)−３−{[(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−イル)カルボニル]アミノ}−２−(２−メチルベンジル)プロピル]アミノ}エチル)ベンゾイル]アミノ}エチル)(ヘキシル)アミノ]−Ｄ−キシリトール；
１−デオキシ−１−[(２−{[４−({[(２Ｓ)−３−{[(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−イル)カルボニル]アミノ}−２−(２−メチルベンジル)プロピル]アミノ}メチル)ベンゾイル]アミノ}エチル)(ヘキシル)アミノ]−Ｄ−キシリトール；
５−デオキシ−５−[(２−{[４−({[(２Ｓ)−３−{[(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−イル)カルボニル]アミノ}−２−(２−メチルベンジル)プロピル]アミノ}メチル)ベンゾイル]アミノ}エチル)(ヘキシル)アミノ]−Ｄ−キシリトール；
１−デオキシ−１−[(２−{[３−(２−{[(２Ｒ)−３−{[(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−イル)カルボニル]アミノ}−２−(２−メチルベンジル)プロピル]アミノ}エチル)ベンゾイル]アミノ}エチル)(ヘキシル)アミノ]−Ｄ−グルシトール。
【実施例】
【０１３７】
実施例１
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−２−(２−メチルベンジル)−３−(((１−(３−(((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチル)アミノ)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド
【化１７】
0006502469.tif 000019
【０１３８】
工程１
(Ｒ)−(３−(４−(((３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)アミノ)メチル)ピペリジン−１−イル)−３−オキソプロピル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル
【化１８】
0006502469.tif 000020
(Ｒ)−３,５−ジアミノ−Ｎ−(３−アミノ−２−(２−メチルベンジル)プロピル)−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド（３１８ｍｇ、０.９１ｍｍｏｌ）（中間体Ａ）、３−(４−ホルミルピペリジン−１−イル)−３−オキソプロピルカルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル（４４０ｍｇ、１.０８ｍｍｏｌ）（中間体Ｆ）および酢酸（８０μＬ、１.４０ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（６ｍＬ）中混合物を周囲温度で３０分間撹拌した。トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（３４０ｍｇ、１.６０ｍｍｏｌ）を添加し、該反応混合物を４０℃でさらに１.５時間撹拌した。水を添加し、該混合物を５分間撹拌し、溶媒を蒸発除去した。残留物質をＥｔＯＡｃと水に分配した。該水相に１０％ＮａＨＣＯ3（ａｑ）を添加してｐＨ８〜９にした。各相を分取し、水相をＥｔＯＡｃで逆抽出した。合わせた黄色有機相をＭｇＳＯ4で乾燥させ、濾過し、溶媒を蒸発除去した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ８；Ｈ2Ｏ／ＭｅＣＮ／ＡｃＯＨ  ９５／５／０.２）によって精製した。関連のある画分を合わせ、真空濃縮した。１０％ＮａＨＣＯ3（ａｑ）を添加し、水相をＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をＭｇＳＯ4で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。残留した粘着性の油をＤＣＭ／ヘプタンに溶解し、蒸発させた後、標記化合物を固体として得た（１９６ｍｇ（２９％、純度８７％））。
LC/MS: m/z 739 [M+H]+
【０１３９】
工程２
(Ｒ)−３,５−ジアミノ−Ｎ−(３−(((１−(３−アミノプロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド
【化１９】
0006502469.tif 000021
(Ｒ)−３−(４−((３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピルアミノ)メチル)ピペリジン−１−イル)−３−オキソプロピルカルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル（１９６ｍｇ、０.２７ｍｍｏｌ）（工程１から）をＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解し、ピペリジン（０.５ｍＬ）で処理した。該溶液を周囲温度で３時間撹拌し、次に、蒸発させて黄色固体を得た。
【０１４０】
該粗物質をＴＨＦ（５ｍＬ）およびＤＩＰＥＡ（２８０μＬ、１.６０ｍｍｏｌ）に溶解し、ＴＨＦ（１ｍＬ）中の(ＢＯＣ)2Ｏ（０.１４１ｍＬ、０.６１ｍｍｏｌ）で処理した。該混合物を周囲温度で撹拌した。３時間後、ＬＣ／ＭＳによって、モノＢｏｃ保護生成物への変換はごくわずかであり、大部分が未反応アミンのままであったことが示された。大過剰量のＤＩＰＥＡおよびＢＯＣ2(Ｏ)を添加し、該混合物を周囲温度で１時間撹拌した。ＭｅＣＮ（２〜３ｍｌ）を添加して溶解度を上昇させ、該混合物を５０℃で２時間加熱し、次に、週末にかけて周囲温度にした。
【０１４１】
揮発性物質を真空下にて蒸発させ、残留物をＥｔＯＡｃと水に分配させた。０.５Ｍクエン酸の添加により水相を酸性化した。ブラインを添加して相の分離を助けた。有機相を水およびブラインで洗浄した。
【０１４２】
溶媒を蒸発除去し、残留物をＤＣＭに溶解し、フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘプタン、３０〜１００％ＥｔＯＡｃ勾配液）によって精製した。溶媒を蒸発させて、ジＢＯＣ保護標記化合物を得た（９６ｍｇ）。
【０１４３】
得られたジＢＯＣ保護物質（９６ｍｇ）をＤＣＭ（２ｍＬ）に溶解し、ＴＦＡ（０.５ｍＬ）で処理し、該溶液を周囲温度で２.５時間撹拌した。該混合物を蒸発させ、残留物を水に溶解し、分取ＨＰＬＣ（Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ８；１６分間にわたってＨ2Ｏ／ＭｅＣＮ／ＨＣＯ2Ｈ  ９５／５／０.２〜６０／４０／０.２）によって精製した。凍結乾燥して、標記化合物を固体として得た（６４ｍｇ、４５％）。
LC/MS: m/z 517 [M+H]+
1H NMR (500 MHz, MeOD) δ 1.13 - 1.34 (m, 2H), 1.83 - 2.06 (m, 3H), 2.29 - 2.39 (m, 1H), 2.35 (s, 3H), 2.59 - 2.93 (m, 9H), 3.08 - 3.23 (m, 3H), 3.32 - 3.37 (m, 1H), 3.67 - 3.74 (m, 1H), 3.87 - 3.96 (m, 1H), 4.52 - 4.6 (m, 1H), 7.11 - 7.22 (m, 4H), 8.51 (s, 0.4H, ギ酸残基).
【０１４４】
工程３
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−２−(２−メチルベンジル)−３−(((１−(３−(((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチル)アミノ)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド
【化２０】
0006502469.tif 000022
(Ｒ)−３,５−ジアミノ−Ｎ−(３−(((１−(３−アミノプロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド（９００ｍｇ、１.７４ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍＬ）に溶解した。(２Ｒ,３Ｓ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンタナール（２６１ｍｇ、１.７４ｍｍｏｌ）を添加し、次に、水５滴を添加した。次に、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（３２８ｍｇ、５.２２ｍｍｏｌ）を添加し、酢酸の添加によってｐＨを約７.０に調整した。得られた溶液を室温で１８時間撹拌した。揮発性物質を除去し、得られた粗生成物を分取ＨＰＬＣ（２０分間にわたってＨ2Ｏ／ＭｅＣＮ／ＡｃＯＨ  ９５／５／０.２〜６０／４０／０.２）によって精製した。関連のある画分を回収し、凍結乾燥した。標記化合物を２Ｍ  ＨＣｌ（４ｍｌ）に溶解し、凍結乾燥し、この手順を３回繰り返して、標記化合物のＨＣｌ塩を得た（１４４ｍｇ、１１％）。
1H NMR (500 MHz, MeOD) δ 1.30 (ddd, 2H), 1.84 - 2.13 (m, 3H), 2.32 - 2.45 (m, 4H), 2.62 - 2.77 (m, 2H), 2.81 - 2.98 (m, 7H), 3.15 (dd, 1H), 3.26 (d, 2H), 3.32 - 3.42 (m, 2H), 3.58 - 3.83 (m, 6H), 3.95 (t, 1H), 4.06 (dd, 1H), 4.55 (s, 1H), 7.05 - 7.33 (m, 4H).
【０１４５】
実施例２
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド
【化２１】
0006502469.tif 000023
【０１４６】
方法Ａ
工程１
((Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)カルバミン酸tert−ブチル
【化２２】
0006502469.tif 000024
(Ｓ)−(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシルアミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)カルバミン酸tert−ブチル（中間体Ｅ、１.２３ｇ、１.７３ｍｍｏｌ）、(２Ｒ,３Ｓ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンタナール（０.５２１ｇ、３.４７ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０.３０３ｍＬ、１.７３ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解し、室温で１時間撹拌した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム（０.３２７ｇ、５.２０ｍｍｏｌ）および酢酸（０.０９９ｍＬ、１.７３ｍｍｏｌ）を添加し、５０℃で３日間撹拌し続けた。該反応を室温に冷却し、８％ＮａＨＣＯ3（ａｑ）の添加によってクエンチし、１５分間撹拌し、次に、真空濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）および８％ＮａＨＣＯ3（ａｑ）（５０ｍＬ）に溶解し、振盪し、相を分取した。水相をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＮａ2ＳＯ4（ｓ）で乾燥させ、濾過し、真空下にて蒸発させた。該化合物を、２０分間にわたってＨ2Ｏ／ＭｅＣＮ／ＡｃＯＨ  ９５／５／０.２バッファー中２０〜６０％アセトニトリルの勾配液を流速１００ｍＬ／分で使用してＫｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ８カラム（１０μｍ  ２５０×５０  ＩＤｍｍ）による分取ＨＰＬＣによって精製した。該化合物を２６８ｎｍでＵＶによって検出した。該化合物を回収し、凍結乾燥させて、((Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)カルバミン酸tert−ブチル（１.２１ｇ、８３％）を白色固体として得た。
LC/MS: m/z 843.5 [M+H]+
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0.74 - 0.85 (m, 3H), 1.12 - 1.27 (m, 6H), 1.27 - 1.45 (m, 11H), 2.20 (s, 3H), 2.25 - 2.35 (m, 1H), 2.39 - 2.66 (m, 6H), 2.9 - 3.06 (m, 1H), 3.06 - 3.51 (m, 12H), 3.53 - 3.6 (m, 1H), 3.6 - 3.72 (m, 1H), 4.2 - 4.68 (m, 5H), 6.97 (bs, 2H), 7.03 - 7.19 (m, 6H), 7.72 (d, 2H), 7.78 - 7.99 (m, 1H), 8.21 - 8.36 (m, 1H).
【０１４７】
工程２
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド・二塩酸塩
【化２３】
0006502469.tif 000025
ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）を入れた氷浴冷却フラスコに塩化アセチル（５.６９ｍＬ、８０.０ｍｍｏｌ）を滴下した。該混合物を５分間撹拌し、((Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)カルバミン酸tert−ブチル（１.２１ｇ、１.４３ｍｍｏｌ）を添加した。該反応を室温で１.５時間撹拌し、次に、真空下にて蒸発させた。残留物を水に溶解し、凍結乾燥させて、３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド・二塩酸塩（１.１７ｇ、１００％）を淡い色（pale）の固体として得た。
LC/MS: m/z 743.4 [M+H]+
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0.8 - 0.9 (m, 3H), 1.2 - 1.33 (m, 6H), 1.62 - 1.74 (m, 2H), 2.26 (s, 3H), 2.3 - 2.41 (m, 1H), 2.59 - 2.74 (m, 2H), 2.74 - 2.85 (m, 1H), 2.86 - 2.98 (m, 1H), 3.09 - 3.51 (m, 11H), 3.56 - 3.62 (m, 1H), 3.62 - 3.75 (m, 2H), 3.99 - 4.09 (m, 1H), 4.14 - 4.29 (m, 2H), 4.58 (s, 4H), 7 - 7.21 (m, 6H), 7.62 (d, 2H), 7.92 (d, 2H), 8.27 (t, 1H), 8.91 - 9 (m, 1H), 9.16 (d, 2H), 9.52 (d, 1H).
【０１４８】
工程３
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド
【化２４】
0006502469.tif 000026
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド・二塩酸塩（１.１７ｇ、１.４３ｍｍｏｌ）を水（１５ｍｌ）に溶解し、１０％Ｎａ2ＣＯ3（ａｑ）の添加によって約ｐＨ１１まで塩基性化した。該生成物をＥｔＯＡｃ（５×７０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＮａ2ＳＯ4（ｓ）で乾燥させ、濾過し、真空下にて蒸発させて、半固体／油を得た。残留物をアセトニトリル／水に溶解し、凍結乾燥させて、３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド（１.０２ｇ、９６％）を淡い色の固体として得た。
LC/MS: m/z 743.5 [M+H]+
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0.75 - 0.85 (m, 3H), 1.12 - 1.26 (m, 6H), 1.31 - 1.43 (m, 2H), 1.94 - 2.05 (m, 1H), 2.24 (s, 3H), 2.35 - 2.49 (m, 5H), 2.54 - 2.65 (m, 4H), 3.14 - 3.23 (m, 1H), 3.25 - 3.4 (m, 5H), 3.4 - 3.49 (m, 2H), 3.53 - 3.59 (m, 1H), 3.62 - 3.78 (m, 3H), 4.26 (d, 1H), 4.38 (d, 1H), 4.45 (t, 1H), 4.51 (d, 1H), 6.96 (bs, 2H), 7.03 - 7.14 (m, 4H), 7.40 (d, 2H), 7.74 (d, 2H), 8.24 - 8.37 (m, 2H).
【０１４９】
方法Ｂ
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド
【化２５】
0006502469.tif 000027
５Ｌフランジ型フラスコに４−ホルミル−Ｎ−(２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)ベンズアミド（中間体Ｉ、１３３ｇ、有効１０８.５ｇ、０.２６ｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１５００ｍＬ）、(Ｒ)−３,５−ジアミノ−Ｎ−(３−アミノ−２−(２−メチルベンジル)プロピル)−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド（中間体Ａ、１０８.８ｇ、０.３１ｍｏｌ）、ＥｔＯＨ（２３０ｍＬ）およびＤＩＰＥＡ（６４.４ｍＬ、０.３７ｍｏｌ）中溶液を充填した。該混合物を４０℃に１時間加熱した。該透明溶液にＡｃＯＨ（４５.４ｍｌ、０.７９ｍｏｌ）を加えた。該溶液を４０℃で２０分間撹拌した。これにＮａＣＮＢＨ3（２３.２ｇ、０.３７ｍｏｌ）を１０分間にわたって滴下し、ガスが発生した。該混合物を４０℃で一夜撹拌した。該反応を室温に冷却し、ＮａＨＣＯ3飽和水溶液（３１００ｍＬ）で注意してクエンチし、室温で１時間撹拌した。該混合物を１０％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ（２×５０００ｍＬ）および１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（５０００ｍＬ）で抽出した。有機相を合わせ、真空濃縮して、粗物質２７１ｇを得た。ＮＭＲ分析により、純度が約８０％であり、ＮａＣＮＢＨ3シグナルが存在することが示された。残留物をＤＣＭ（１２Ｌ）およびＩＰＡ（７７０ｍｌ）に溶解した。該混合物をＮａＨＣＯ3飽和水溶液（２７００ｍｌ）および水（７７０ｍｌ）の混合物で洗浄した。水相をＤＣＭ（１２００ｍｌ）で抽出した。有機相を合わせ、真空濃縮して、黄色固体として２９８ｇ（有効１９１ｇ、９７％）を得た。ＨＰＬＣ−ＭＳによって、純度が８８.０％であることが示された。1Ｈ  ＮＭＲによって、純度が約６０％であり、ＩＰＡが約２７重量％であり、中間体Ａが約８重量％であることが示された。
【０１５０】
このようにして得られた粗物質（２９０ｇ、２３５ｍｍｏｌ）を温ＭｅＯＨ（７５０ｍＬ）で希釈し、混合物から共沸混合物を蒸発させながらアセトニトリル（１５Ｌ）を連続添加した。溶媒約１０Ｌを蒸発させた後、ゴム様沈殿物を含有する残存混合物を室温でさらに４日間撹拌した。
【０１５１】
ゴム様残留物から液相をデカントした。残留物にアセトニトリル２.５Ｌを添加し、１時間撹拌した後、アセトニトリルをデカントした。このようにして得られた粗物質（約１７５ｇ）を、ＨＰＬＣクロマトグラフィー［ＣｅｌｌｕＣｏａｔ  ２５０×１００ｍｍ、１０μｍ；移動相：ＭｅＯＨ／ＭｅＣＮ／ＴＥＡ＝９５：５：０.１；注入量：１.０ｇ／サイクル；サイクル時間：３.５分］によって最終精製した。標記化合物の収量：１４８ｇ（７７％）。
LC/MS: m/z 743.5 [M+H]+
1H NMR (600 MHz, DMSO; アトロプ異性のピークの場合、主たるアトロプ異性体のシフトだけを報告する) δ 0.80 (t, 3H), 1.34 - 1.4 (m, 2H), 1.09 - 1.24 (m, 6H), 1.34 - 1.4 (m, 2H), 2.00 (s, 1H), 2.00 (s, 1H), 2.24 (s, 3H), 2.36 - 2.42 (m, 1H), 2.43 - 2.49 (m, 4H), 2.51 - 2.54 (m, 1H), 2.56 - 2.64 (m, 4H), 3.15 - 3.22 (m, 1H), 3.23 - 3.3 (m, 3H), 3.35 - 3.4 (m, 1H), 3.42 (s, 1H), 3.43 - 3.49 (m, 1H), 3.54 - 3.59 (m, 1H), 3.62 - 3.7 (m, 2H), 3.74 (d, 1H), 4.27 (s, 1H), 4.39 (s, 1H), 4.46 (t, 1H), 4.52 (s, 1H), 6.96 (s, 1H), 7.03 - 7.08 (m, 2H), 7.40 (d, 2H), 7.74 (d, 2H), 8.26 - 8.31 (m, 1H), 8.31 - 8.35 (m, 1H). 
13C NMR (151 MHz, DMSO) δ 13.91, 19.04, 22.08, 26.48, 26.61, 31.27, 34.23, 37.42, 38.60, 41.55, 50.84, 53.06, 53.44, 54.55, 57.43, 62.65, 69.23, 71.12, 72.61, 112.95, 117.12, 125.54, 125.83, 126.89, 127.72, 129.63, 130.03, 132.85, 135.82, 138.74, 144.02, 152.69, 154.14, 165.55, 166.01
キラルＨＰＬＣ（方法Ａ；ヘプタン／ＩＰＡ／ＴＥＡ  ７５：２５：０.１）：９８.９％ｅｅ、Ｒｔ＝１４.７５分（Ｒ）、１８.６３分（Ｓ）。
【０１５２】
実施例３
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((１−(２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチルカルバモイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド
【化２６】
0006502469.tif 000028
【０１５３】
工程１：
２−(((２Ｓ,３Ｒ)−２,３−ジヒドロキシ−３−((４Ｒ,５Ｒ)−５−ヒドロキシ−２−フェニル−１,３−ジオキサン−４−イル)プロピル)(ヘキシル)アミノ)エチルカルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル
【化２７】
0006502469.tif 000029
１００ｍＬ丸底フラスコにＮ−(２−アミノエチル)カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル・塩酸塩（１.５０ｇ、４.７１ｍｍｏｌ、１.０当量）、(２Ｒ,４ａＲ,７Ｒ,８Ｒ,８ａＳ)−２−フェニル−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピラノ[３,２−ｄ][１,３]ジオキシン−６,７,８−トリオール（１.５１ｇ、５.６３ｍｍｏｌ、１.２０当量）、メタノール（３０ｍＬ）を入れた。上記の混合物を３０分間撹拌した後、ＮａＢＨ3ＣＮ（５９０ｍｇ、９.３９ｍｍｏｌ、２.００当量）、ＡｃＯＨ（５７０ｍｇ、９.４９ｍｍｏｌ、２.０当量）を添加した。得られた溶液を室温で一夜撹拌した。次に、ヘキサナール（５３０ｍｇ、５.２９ｍｍｏｌ、１.５０当量）を添加し、次に、さらにＮａＢＨ3ＣＮ（４５０ｍｇ、７.１６ｍｍｏｌ、２.００当量）を添加した。得られた溶液を室温で５時間撹拌し、次に、真空濃縮した。得られた混合物を水で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、有機層を合わせ、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させた。固体を濾過した。これにより、標記化合物１.６ｇ（７３％）を淡黄色（light yellow）の油として得た。
LC/MS: m/z 619 [M+H]+ 
1H NMR (300 MHz, CD3OD): 1.80 - 1.92 (m, 3H), 1.15 - 1.40 (m, 6H), 1.41 - 1.72 (m, 2H), 2.88 - 3.15 (m, 5H), 3.33 - 3.43 (m, 2H),3.55 - 3.61 (m, 1H), 3.67 - 3.83 (m, 1H), 3.85 - 4.12 (m, 3H), 4.22 - 4.40 (m, 4H), 5.57 (s, 1H), 7.33 - 7.65 (9H, m), 7.67 (d, 2H), 7.83 (d, 2H).
【０１５４】
工程２：
(１Ｒ,２Ｓ)−３−((２−アミノエチル)(ヘキシル)アミノ)−１−[(２Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−５−ヒドロキシ−２−フェニル−１,３−ジオキサン−４−イル]プロパン−１,２−ジオール
【化２８】
0006502469.tif 000030
５０ｍＬ丸底フラスコにＮ−(２−[[(２Ｓ,３Ｒ)−２,３−ジヒドロキシ−３−[(２Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−５−ヒドロキシ−２−フェニル−１,３−ジオキサン−４−イル]プロピル](ヘキシル)アミノ]エチル)カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル（１.６ｇ、２.５９ｍｍｏｌ、１.０当量）、メタノール（１０ｍＬ）、ジエチルアミン（５ｍＬ）を入れた。得られた溶液を室温で一夜撹拌した。残留物をシリカゲルカラムに負荷し、アンモニア／ＭｅＯＨ（１：１００）で溶離した。これにより、標記化合物６００ｍｇ（５９％）を黄色固体として得た。
LC/MS: m/z 397 [M+H]+
【０１５５】
工程３：
(Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル((１−(２−(((２Ｓ,３Ｒ)−２,３−ジヒドロキシ−３−((２Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−５−ヒドロキシ−２−フェニル−１,３−ジオキサン−４−イル)プロピル)(ヘキシル)アミノ)エチルカルバモイル)ピペリジン−４−イル)メチル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル
【化２９】
0006502469.tif 000031
５０ｍＬ丸底フラスコにＤＣＭ（５ｍＬ）中の(Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル(ピペリジン−４−イルメチル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル（中間体Ｂ、４００ｍｇ、０.６０ｍｍｏｌ、１.０当量）、トリエチルアミン（１７７ｍｇ、１.７５ｍｍｏｌ、３.０当量）、トリホスゲン（１７３ｍｇ、０.５８ｍｍｏｌ、１.０当量）を入れた。得られた溶液を室温で０.５時間撹拌した。得られた混合物を水（３×１０ｍＬ）で洗浄した。得られた混合物を真空濃縮して、中間体クロロホルムアミドを得（ＤＣＭに溶解し）、トリエチルアミン（１７７ｍｇ、１.７５ｍｍｏｌ、３.０当量）および(１Ｒ,２Ｓ)−３−[(２−アミノエチル)(ヘキシル)アミノ]−１−[(２Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−５−ヒドロキシ−２−フェニル−１,３−ジオキサン−４−イル]プロパン−１,２−ジオール（３４７ｍｇ、０.８８ｍｍｏｌ、１.５０当量）のＤＣＭ（５ｍＬ）中溶液に滴下し、室温で２時間撹拌した。得られた混合物を真空濃縮した。残留物を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１０：１）を用いて分取ＴＬＣによって精製した。これにより、標記化合物１４５ｍｇ（２２％）を黄色固体として得た。
LC/MS: m/z 1090 [M+H]+
【０１５６】
工程４：
(Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル((１−(２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチルカルバモイル)ピペリジン−４−イル)メチル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル
【化３０】
0006502469.tif 000032
８ｍＬバイアルに(Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル((１−(２−(((２Ｓ,３Ｒ)−２,３−ジヒドロキシ−３−((２Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−５−ヒドロキシ−２−フェニル−１,３−ジオキサン−４−イル)プロピル)(ヘキシル)アミノ)エチルカルバモイル)ピペリジン−４−イル)メチル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル（１４４ｍｇ、０.１３ｍｍｏｌ、１.０当量）、エタノール（０.５ｍＬ）、４Ｍ  ＨＣｌ（３ｍＬ）を入れた。得られた溶液を室温で一夜撹拌した。得られた混合物を真空濃縮した。これにより、標記化合物１２０ｍｇ（粗物質）を黄色の油としてを得た。
LC/MS: m/z 1002 [M+H]+
【０１５７】
工程５：
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((１−(２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチルカルバモイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド
【化３１】
0006502469.tif 000033
５０ｍＬ丸底フラスコにＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（４ｍＬ）中の(Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル((１−(２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチルカルバモイル)ピペリジン−４−イル)メチル)カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル（１２０ｍｇ、０.１２ｍｍｏｌ、１.０当量）、ジエチルアミン（２ｍＬ）を入れた。得られた溶液を室温で一夜撹拌した。得られた混合物を真空濃縮した。粗生成物（１００ｍｇ）を、以下の条件を用いて分取ＨＰＬＣによって精製した（２＃−ＡｎａｌｙｓｅＨＰＬＣ−ＳＨＩＭＡＤＺＵ（ＨＰＬＣ−１０））：カラム、ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ＯＢＤ  Ｃｏｌｕｍｎ，５ｕｍ，１９×１５０ｍｍ；移動相、０.０５％ＴＦＡ含有水およびＡＣＮ（１５分間にわたってＡＣＮ２３.０％から３３.０％まで）；検出器、ＭＳ，ＵＶ  ２５４ｎｍ。これにより、標記化合物８ｍｇ（７％）を黄色固体として得た。
LC/MS: m/z 780 [M+H]+
1H NMR (300 MHz, CD3OD): 0.91 - 0.95 (m, 3H), 1.27 - 1.38 (m, 8H), 1.81 -1.97 (m, 5H), 2.36 (s, 4H), 2.62-2.69(m, 1H), 2.86-2.96 (m, 7H), 3.31-3.55 (m, 3H), 3.63-3.68 (m, 6H), 3.70-3.83 (m, 6H), 4.05-4.17 (m, 3H) , 7.13-7.20 (m, 4H)
【０１５８】
実施例４
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((１−(３−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド
【化３２】
0006502469.tif 000034
【０１５９】
工程１：
３−((２Ｓ,３Ｒ)−２,３−ジヒドロキシ−３−((２Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−５−ヒドロキシ−２−フェニル−１,３−ジオキサン−４−イル)プロピルアミノ)プロパン酸ベンジル
【化３３】
0006502469.tif 000035
１００ｍＬ丸底フラスコに３−アミノプロピン酸４−メチルベンゼン−１−スルホン酸ベンジル（２.００ｇ、５.６９ｍｍｏｌ、１.０当量）、(２Ｒ,４ａＲ,７Ｒ,８Ｒ,８ａＳ)−２−フェニル−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピラノ[３,２−ｄ][１,３]ジオキシン−６,７,８−トリオール（２.２９ｇ、８.５４ｍｍｏｌ、１.５当量）、メタノール（３０ｍＬ）を入れた。３０分後、ＮａＢＨ3ＣＮ（７２０ｍｇ、１１.４６ｍｍｏｌ、２.００当量）、ＡｃＯＨ（６８０ｍｇ、１１.３２ｍｍｏｌ、２.０当量）を添加した。得られた溶液を室温で一夜撹拌した。得られた混合物を濃縮し、酢酸エチルで希釈し、水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。固体を濾過した。溶媒を真空下にて除去して、標記化合物１.９ｇ（７７％）を無色の油として得、そのまま次工程で使用した。
LC/MS: m/z 967 [M+H]+
【０１６０】
工程２：
３−(((２Ｓ,３Ｒ)−２,３−ジヒドロキシ−３−((２Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−５−ヒドロキシ−２−フェニル−１,３−ジオキサン−４−イル)プロピル)(ヘキシル)アミノ)プロパン酸ベンジル
【化３４】
0006502469.tif 000036
１００ｍＬ丸底フラスコに３−[[(２Ｓ,３Ｒ)−２,３−ジヒドロキシ−３−[(２Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−５−ヒドロキシ−２−フェニル−１,３−ジオキサン−４−イル]プロピル]アミノ]プロパン酸ベンジル（１.９０ｇ、粗物質）、ヘキサナール（６６０ｍｇ、６.５９ｍｍｏｌ、１.５当量）、メタノール（３０ｍＬ）を入れた。３０分後、ＮａＢＨ3ＣＮ（５５０ｍｇ、８.７５ｍｍｏｌ、２.０当量）およびＡｃＯＨ（５３０ｍｇ、８.８３ｍｍｏｌ、２.０当量）を添加した。得られた溶液を室温で一夜撹拌した。得られた混合物を濃縮し、酢酸エチルで希釈し、水で洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。固体を濾過した。残留物をシリカゲルカラムに負荷し、酢酸エチル／石油エーテル（１：２）で溶離した。これにより、３−[[(２Ｓ,３Ｒ)−２,３−ジヒドロキシ−３−[(２Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−５−ヒドロキシ−２−フェニル−１,３−ジオキサン−４−イル]プロピル](ヘキシル)アミノ]プロパン酸ベンジル１.３ｇ（５７％）を淡黄色の油として得た。
LC/MS: m/z 516 [M+H]+
【０１６１】
工程３：
３−(((２Ｓ,３Ｒ)−２,３−ジヒドロキシ−３−((２Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−５−ヒドロキシ−２−フェニル−１,３−ジオキサン−４−イル)プロピル)(ヘキシル)アミノ)プロパン酸
【化３５】
0006502469.tif 000037
１００ｍＬ丸底フラスコに３−[[(２Ｓ,３Ｒ)−２,３−ジヒドロキシ−３−[(２Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−５−ヒドロキシ−２−フェニル−１,３−ジオキサン−４−イル]プロピル](ヘキシル)アミノ]プロパン酸ベンジル（１.３ｇ、２.５２ｍｍｏｌ、１.０当量）、Ｐｄ／Ｃ（５重量％、７００ｍｇ）、エタノール（２０ｍＬ）を入れた。上記の混合物に、Ｈ2（ｇ）。得られた溶液をＨ2雰囲気下にて室温で一夜撹拌した。固体を濾過した。濾液を真空濃縮した。これにより、３−[[(２Ｓ,３Ｒ)−２,３−ジヒドロキシ−３−[(２Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−５−ヒドロキシ−２−フェニル−１,３−ジオキサン−４−イル]プロピル](ヘキシル)アミノ]プロパン酸０.５ｇ（４７％）を無色の油として得た。
LC/MS: m/z 426 [M+H]+
【０１６２】
工程４：
(Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル((１−(３−(((２Ｓ,３Ｒ)−２,３−ジヒドロキシ−３−((２Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−５−ヒドロキシ−２−フェニル−１,３−ジオキサン−４−イル)プロピル)(ヘキシル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル
【化３６】
0006502469.tif 000038
５０ｍＬ丸底フラスコに３−[[(２Ｓ,３Ｒ)−２,３−ジヒドロキシ−３−[(２Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−５−ヒドロキシ−２−フェニル−１,３−ジオキサン−４−イル]プロピル](ヘキシル)アミノ]プロパン酸（３８１.４９ｍｇ、０.９０ｍｍｏｌ、３.００当量）、(Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル(ピペリジン−４−イルメチル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル（中間体Ｂ、２００.０ｍｇ、０.３０ｍｍｏｌ、１.０当量）、ＨＡＴＵ（１７０.５ｍｇ、０.４５ｍｍｏｌ、１.５当量）、ＤＩＥＡ（５７.９ｍｇ、０.４５ｍｍｏｌ、１.５当量）、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）を入れた。得られた溶液を室温で２時間撹拌した。上記の混合物に水を添加し、該懸濁液を酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、ブラインで洗浄した。該混合物を無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。固体を濾過し、濾液を真空下にて蒸発させた。残留物を分取ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）によって精製した。関連のある画分を回収し、揮発性物質を除去した後、標記化合物２００ｍｇ（６２％）を黄色固体として得た。
LC/MS: m/z 1076 [M+H]+
【０１６３】
工程５：
(Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル((１−(３−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル
【化３７】
0006502469.tif 000039
５０ｍＬ丸底フラスコに(Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル((１−(３−(((２Ｓ,３Ｒ)−２,３−ジヒドロキシ−３−((２Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−５−ヒドロキシ−２−フェニル−１,３−ジオキサン−４−イル)プロピル)(ヘキシル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル（工程４、２００ｍｇ、０.１９ｍｍｏｌ、１.０当量）およびＨＣｌの溶液（エタノール中４Ｍ、２ｍＬ）を入れた。得られた溶液を室温で一夜撹拌した。揮発性物質を蒸発させて、粗標記化合物２００ｍｇを黄色固体として得た。
LC/MS: m/z 987 [M+H]+
【０１６４】
工程６：
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((１−(３−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド
【化３８】
0006502469.tif 000040
２５ｍＬ丸底フラスコに(Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル((１−(３−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル（工程５２００ｍｇ、０.２０ｍｍｏｌ、１.００当量）、メタノール（６ｍＬ）、ジエチルアミン（３ｍＬ）を入れた。得られた溶液を室温で一夜撹拌した。得られた混合物を真空濃縮した。粗生成物（１００ｍｇ）を以下の条件を用いて分取ＨＰＬＣによって精製した（分取ＨＰＬＣ−０１９）：カラム、ＸＳｅｌｅｃｔ  ＣＳＨ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ＯＢＤ  Ｃｏｌｕｍｎ，５ｕｍ，１９×１５０ｍｍ；移動相、０.０５％ＴＦＡ含有水およびＭｅＣＮ（８分間にわたってＭｅＣＮ２２.０％から３０.０％まで、１分間にわたって１００％まで、１分間にわたって１００％を保持、２分間にわたって２２％まで下げる）；検出器、ＵＶ  ２５４／２２０ｎｍ。これにより、３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−[(２Ｒ)−３−([[１−(３−[ヘキシル[(２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル]アミノ]プロパノイル)ピペリジン−４−イル]メチル]アミノ)−２−[(２−メチルフェニル)メチル]プロピル]ピラジン−２−カルボキサミド；トリフルオロ酢酸３８ｍｇ（２１％）を黄色固体として得た。
1H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 0.95 - 0.97 (m, 3H), 1.22 - 1.50 (m, 8H), 1.70 - 2.10 (m, 5H), 2.30 - 2.51 (m, 4H), 2.63 - 2.81 (m, 2H), 2.88 - 3.16 (m, 7H) , 3.16 - 3.20 (m, 2H), 3.34 - 3.78 (m, 5H), 3.51-3.87 (m, 7H), 3.95 - 4.10 (m, 1H), 4.10 - 4.25 (m, 1H), 4.54 (d, 1H), 7.14 - 7.22 (m, 4H).
LC/MS: m/z 765 [M+H]+
【０１６５】
実施例５
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((１−(３−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド
【化３９】
0006502469.tif 000041
【０１６６】
工程１：
(Ｓ)−(１−(３−tert−ブトキシカルボニルアミノプロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチル(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル
【化４０】
0006502469.tif 000042
フラスコ（２５ｍＬ）に(Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル(ピペリジン−４−イルメチル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル（中間体Ｂ、３００ｍｇ、０.４５ｍｍｏｌ）、３−(tert−ブトキシカルボニルアミノ)プロパン酸（１００ｍｇ、０.５３ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（１４５ｍｇ、１.１３ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（３４２ｍｇ、０.９ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（１０ｍＬ）を充填した。該反応を室温で６時間撹拌した。該混合物を酢酸エチル２５ｍＬで希釈し、水（３×２５ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させた。沈殿物を濾過し、濾液を真空濃縮した。得られた粗生成物を、ジクロロメタン／メタノール（２０：１、ｖ／ｖ）を用いてシリカゲルカラムによって精製して、標記化合物（２８０ｍｇ、６７％）を淡黄色の固体として得た。
LC/MS: m/z 839 [M+H]+
【０１６７】
工程２：
(Ｓ)−(１−(３−アミノプロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチル(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル
【化４１】
0006502469.tif 000043
５０ｍＬ丸底フラスコに(Ｓ)−(１−(３−tert−ブトキシカルボニルアミノプロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチル(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル（工程１、２１６ｍｇ、０.２６ｍｍｏｌ、１.０当量）および塩化水素（メタノール中４Ｍ、５ｍＬ）を入れた。得られた溶液を室温で１時間撹拌した。揮発性物質を蒸発させて、粗標記化合物１９０ｍｇを黄色固体として得た。
LC/MS: m/z 739 [M+H]+
【０１６８】
工程３：
(Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル((１−(３−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル
【化４２】
0006502469.tif 000044
５０ｍＬ丸底フラスコに(Ｓ)−(１−(３−アミノプロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチル(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル（工程２、１９０ｍｇ、０.２６ｍｍｏｌ、１.０当量）、(３Ｒ,４Ｓ,５Ｒ)−オキサン−２,３,４,５−テトロール（３９ｍｇ、０.２６ｍｍｏｌ、１.０当量）、メタノール（６ｍＬ）を入れた。３０分後、０℃でＮａＢＨ3ＣＮ（６６ｍｇ、１.０５ｍｍｏｌ、４.０当量）を徐々に添加した。得られた溶液を室温で一夜撹拌した。次に、ヘキサナール（３９ｍｇ、０.３９ｍｍｏｌ、１.０当量）を添加し、次に、さらにＮａＢＨ3ＣＮ（６６ｍｇ、１.０５ｍｍｏｌ、４.０当量）を添加した。得られた溶液を室温で５時間撹拌した。溶媒を除去して粗生成物を得、さらなる精製を行わずにそのまま次工程で使用した。
LC/MS: m/z 957 [M+H]+
【０１６９】
工程４：
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((１−(３−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド
【化４３】
0006502469.tif 000045
５０ｍＬ丸底フラスコに(Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル((１−(３−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル（工程３、２３０ｍｇ、０.２４ｍｍｏｌ、１.００当量）、メタノール（５ｍＬ）、ジエチルアミン（０.５ｍＬ）を入れた。得られた溶液を室温で３時間撹拌した。粗生成物を以下の条件を用いて分取ＨＰＬＣによって精製した（分取ＨＰＬＣ−０１９）：カラム、ＸＳｅｌｅｃｔ  ＣＳＨ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ＯＢＤ  Ｃｏｌｕｍｎ，５ｕｍ，１９×１５０ｍｍ；移動相、０.０５％ＴＦＡ含有水およびＭｅＣＮ（８分間にわたってＭｅＣＮ１８.０％から３５.０％まで、１分間にわたって１００.０％まで、１分間にわたって１００.０％を保持、２分間にわたって１８.０％まで下げる）；検出器、ＵＶ  ２５４／２２０ｎｍ。これにより、標記化合物３６.９ｍｇ（１６％）を黄色固体として得た。
LC/MS: m/z 735 [M+H]+
1H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 0.96 (d, 3H), 1.26-1.40 (m, 8H), 1.81-2.01(m, 5H), 2.37 (s, 4H), 2.62-2.94 (m, 9H), 3.17-3.47 (m, 7H), 3.55-3.78 (m, 6H), 3.98 (d, 1H), 4.15 (s, 1H), 4.56 (d, 1H), 7.14-7.21 (m, 4H).
【０１７０】
実施例６
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((１−(４−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)ブタノイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド
【化４４】
0006502469.tif 000046
【０１７１】
工程１：
(Ｓ)−((１−(４−((tert−ブトキシカルボニル)アミノ)ブタノイル)ピペリジン−４−イル)メチル)(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル
【化４５】
0006502469.tif 000047
５０ｍＬ丸底フラスコにＤＭＦ（１０ｍＬ）中の(Ｓ)−(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(ピペリジン−４−イルメチル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル（中間体Ｂ、９００ｍｇ、１.３５ｍｍｏｌ）、４−((tert−ブトキシカルボニル)アミノ)ブタン酸（８２１ｍｇ、４.０４ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（２３０５ｍｇ、６.０６ｍｍｏｌ）、およびＤＩＥＡ（１.０６ｍＬ、６.０６ｍｍｏｌ）を入れて黄色溶液を得た。得られた溶液を２５℃で１６時間撹拌した。該反応混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で希釈し、連続的に水（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、真空下にて蒸発させて、粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルによるフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル中２０〜７０％ＥｔＯＡｃ勾配液で溶離した。純粋な画分を蒸発乾固させて、標記化合物（８３４ｍｇ、７３％）を黄色固体として得た。
LC/MS: m/z 853 [M+H]
【０１７２】
工程２：
(Ｓ)−(１−(４−アミノブタノイル)ピペリジン−４−イル)メチル(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル
【化４６】
0006502469.tif 000048
(Ｓ)−((１−(４−((tert−ブトキシカルボニル)アミノ)ブタノイル)ピペリジン−４−イル)メチル)(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル（工程１、８３４ｍｇ、０.９８ｍｍｏｌ）をＨＣｌ（４Ｍ）のメタノール溶液に溶解し、室温で１時間撹拌した。溶媒を真空下にて蒸発させて、標記化合物を黄色固体として得た。
LC/MS: m/z 753 [M+H]+
【０１７３】
工程３：
(Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル((１−(４−((２Ｓ,３Ｒ)−２,３−ジヒドロキシ−３−((２Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−５−ヒドロキシ−２−フェニル−１,３−ジオキサン−４−イル)プロピルアミノ)ブタノイル)ピペリジン−４−イル)メチル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル
【化４７】
0006502469.tif 000049
２５ｍＬ丸底フラスコに(Ｓ)−(１−(４−アミノブタノイル)ピペリジン−４−イル)メチル(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル（工程２、２５０ｍｇ、０.３３ｍｍｏｌ、１.０当量）、アセタール保護Ｄ−グルコース(２Ｒ,４ａＲ,７Ｒ,８Ｒ,８ａＳ)−２−フェニル−ヘキサヒドロ−２Ｈ−ピラノ[３,２−ｄ][１,３]ジオキシン−６,７,８−トリオール（１３３ｍｇ、０.５０ｍｍｏｌ、１.５当量）およびメタノール（５ｍＬ）を入れた。該混合物を３０分間撹拌し、次に、ＮａＢＨ3ＣＮ（４１ｍｇ、０.６５ｍｍｏｌ、２.０当量）およびＡｃＯＨ（４０ｍｇ、０.６７ｍｍｏｌ、２.００当量）を添加した。得られた溶液を室温で一夜撹拌した。溶媒を減圧下にて除去して、(Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル((１−(４−((２Ｓ,３Ｒ)−２,３−ジヒドロキシ−３−((２Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−５−ヒドロキシ−２−フェニル−１,３−ジオキサン−４−イル)プロピルアミノ)ブタノイル)ピペリジン−４−イル)メチル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル２１０ｍｇ（粗物質）を黄色固体として得た。
LC/MS: m/z 1005 [M+H]+
【０１７４】
工程４：
(Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル((１−(４−(((２Ｓ,３Ｒ)−２,３−ジヒドロキシ−３−((２Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−５−ヒドロキシ−２−フェニル−１,３−ジオキサン−４−イル)プロピル)(ヘキシル)アミノ)ブタノイル)ピペリジン−４−イル)メチル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル
【化４８】
0006502469.tif 000050
(Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル((１−(４−((２Ｓ,３Ｒ)−２,３−ジヒドロキシ−３−((２Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−５−ヒドロキシ−２−フェニル−１,３−ジオキサン−４−イル)プロピルアミノ)ブタノイル)ピペリジン−４−イル)メチル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル（２１０ｍｇ、粗物質）をＭｅＯＨ（５ｍＬ）に溶解し、ヘキサナール（４２ｍｇ、０.４２ｍｍｏｌ、２.００当量）を添加し、次に、ＮａＢＨ3ＣＮ（２６ｍｇ、０.４１ｍｍｏｌ、２.００当量）およびＡｃＯＨ（２５ｍｇ、０.４２ｍｍｏｌ、２.００当量）を添加した。得られた混合物を室温で２時間撹拌し、次に、真空濃縮した。残留物を水に溶解し、酢酸エチル（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を真空濃縮し、標記化合物１５２ｍｇ（６７％）を黄色の粗油として得た。
LC/MS: m/z 1089 [M+H]+
【０１７５】
工程５：
(Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル((１−(４−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)ブタノイル)ピペリジン−４−イル)メチル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル
【化４９】
0006502469.tif 000051
２５ｍＬ丸底フラスコに(Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル((１−(４−(((２Ｓ,３Ｒ)−２,３−ジヒドロキシ−３−((２Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−５−ヒドロキシ−２−フェニル−１,３−ジオキサン−４−イル)プロピル)(ヘキシル)アミノ)ブタノイル)ピペリジン−４−イル)メチル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル（工程４、１５２ｍｇ、０.１４ｍｍｏｌ、１.００当量）、ＨＣｌ（エタノール中４Ｍ、５ｍＬ）およびエタノール（１ｍＬ）を入れた。得られた溶液を室温で一夜撹拌した。揮発性物質を蒸発させて、粗標記化合物１３８ｍｇを黄色の油として得た。
LC/MS: m/z 1002 [M+H]+
【０１７６】
工程６：
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((１−(４−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)ブタノイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド
【化５０】
0006502469.tif 000052
２５ｍＬ丸底フラスコに(Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル((１−(４−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)ブタノイル)ピペリジン−４−イル)メチル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル（工程４、１３８ｍｇ、０.１４ｍｍｏｌ、１.０当量）、ジエチルアミン（２ｍＬ）、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）を入れた。得られた溶液を室温で一夜撹拌した。得られた混合物を真空濃縮した。粗生成物（１１０ｍｇ）を以下の条件を用いて分取ＨＰＬＣによって精製した：カラム、ＸＳｅｌｅｃｔ  ＣＳＨ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ＯＢＤ  Ｃｏｌｕｍｎ，５ｕｍ，１９×１５０ｍｍ；移動相、０.０５％ＴＦＡ含有水およびＭｅＣＮ（８分間にわたってＭｅＣＮ２３％から３０％まで、１分間にわたって１００％まで、１分間にわたって１００％に保持、２分間にわたって２３.０％まで下げる）；検出器、ｕｖ  ２５４／２２０ｎｍ。標記化合物のトリフルオロ酢酸塩１５.７ｍｇ（１３％）を黄色固体として得た。
LC/MS: m/z 779.5 [M+H]+
1H NMR (300 MHz, CD3OD): 0.92- 0.96 (m, 3H), 1.21 - 1.39 (m, 8H), 1.78 -2.03 (m, 7H), 2.36 (s, 4H), 2.61-2.69 (m, 4H), 2.87-2.93 (m, 5H), 3.13-3.31 (m, 5H), 3.32-3.36 (m, 1H), 3.63-3.77 (s, 6H), 3.78-3.96 (m, 1H), 4.15-4.18 (m, 1H) , 4.84-4.86 (m, 1H) , 7.13-7.20 (m, 4H).
【０１７７】
実施例７
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−２−(２−メチルベンジル)−３−((１−(３−((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシルアミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド
【化５１】
0006502469.tif 000053
【０１７８】
工程１：
(Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル((１−(３−((２Ｓ,３Ｒ)−２,３−ジヒドロキシ−３−((２Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−５−ヒドロキシ−２−フェニル−１,３−ジオキサン−４−イル)プロピルアミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル
【化５２】
0006502469.tif 000054
２５ｍＬ丸底フラスコにメタノール（５ｍＬ）中の３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((１−(３−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド（実施例５／工程２、２０ｍｇ、０.２７ｍｍｏｌ、１.０当量）およびアセタール保護Ｄ−グルコース(２Ｒ,４ａＲ,７Ｒ,８Ｒ,８ａＳ)−２−フェニルヘキサヒドロピラノ[３,２−ｄ][１,３]ジオキシン−６,７,８−トリオール（２１８ｍｇ、０.８１ｍｍｏｌ、３.０当量）を入れた。得られた溶液を室温で０.５時間撹拌した。ＮａＢＨ3ＣＮ（３４ｍｇ、０.５４ｍｍｏｌ、２.０当量）、ＡｃＯＨ（３０ｍｇ、０.５０ｍｍｏｌ、２.０当量）を添加した。得られた混合物を室温で一夜撹拌した。水でクエンチし、抽出後処理（extractive work up）し、溶媒を除去した後、粗標記化合物２２０ｍｇを黄色固体として得た。
LC/MS: m/z 992 [M+H]+
【０１７９】
工程２：
(Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル((１−(３−((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシルアミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル
【化５３】
0006502469.tif 000055
２５ｍＬ丸底フラスコに(Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル((１−(３−((２Ｓ,３Ｒ)−２,３−ジヒドロキシ−３−((２Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−５−ヒドロキシ−２−フェニル−１,３−ジオキサン−４−イル)プロピルアミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル（工程１、２００ｍｇ、０.２０ｍｍｏｌ、１.０当量）、エタノール（１.５ｍＬ）およびＨＣｌ（エタノール中４Ｍ、５ｍＬ）を入れた。得られた溶液を室温で一夜撹拌し、次に、真空濃縮した。粗標記化合物１８０ｍｇを黄色固体として得た。
LC/MS: m/z 904 [M+H]+
【０１８０】
工程３：
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−２−(２−メチルベンジル)−３−((１−(３−((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシルアミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド
【化５４】
0006502469.tif 000056
２５ｍＬ丸底フラスコにＮ−[(２Ｓ)−３−[(３,５−ジアミノ−６−クロロ−３,４−ジヒドロピラジン−２−イル)ホルムアミド]−２−[(２−メチルフェニル)メチル]プロピル]−Ｎ−[[１−(３−[[(２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル]アミノ]プロパノイル)ピペリジン−４−イル]メチル]カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル（工程２、１８０ｍｇ、０.２０ｍｍｏｌ、１.０当量）、ジエチルアミン（２ｍＬ）およびＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（４ｍＬ）を入れた。得られた溶液を室温で４時間撹拌した後、真空濃縮した。粗生成物（１５０ｍｇ）を、下記の条件を用いて分取ＨＰＬＣによって精製した：カラム、ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ＯＢＤ  Ｃｏｌｕｍｎ，５ｕｍ，１９×１５０ｍｍ；移動相、０.０５％ＴＦＡ含有水およびＡＣＮ（１５分間にわたってＡＣＮ１６.０％から２６.０％まで）；検出器、ＭＳ，ＵＶ  ２５４／２２０ｎｍ。これにより、標記化合物のトリフルオロ酢酸塩１５.５ｍｇ（１０％）を黄色固体として得た。
LC/MS: m/z 681.4 [M+H]+
1H NMR (300 MHz, CD3OD): 1.12- 1.43 (m, 2H), 1.87 - 2.12(m, 3H), 2.14(s, 4H),2.62-2.75(m, 2H),2.87-2.93(m, 7H), 3.01-3.19 (m, 3H), 3.31-3.37(m, 1H), 3.77-3.80 (m, 5H),3.87-3.95(m, 2H), 4.07-4.58(s, 1H) , 4.80-4.96(d, 1H) , 7.13-7.20(m, 4H).
【０１８１】
実施例８
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((１−(３−(ヘキシル((２Ｒ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド
【化５５】
0006502469.tif 000057
【０１８２】
工程１：
(Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル((１−(３−(((２Ｒ,３Ｒ)−２,３−ジヒドロキシ−３−((２Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−５−ヒドロキシ−２−フェニル−１,３−ジオキサン−４−イル)プロピル)(ヘキシル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル
【化５６】
0006502469.tif 000058
ヘキサナール（４５.５ｍｇ、０.４５ｍｍｏｌ）および((Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)((１−(３−(((２Ｒ,３Ｒ)−２,３−ジヒドロキシ−３−((２Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−５−ヒドロキシ−２−フェニル−１,３−ジオキサン−４−イル)プロピル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル［実施例７／工程１に記載の手順と類似の手順によって製造した；代わりにアセタール保護Ｄ−マンニトール(２Ｒ,４ａＲ,７Ｓ,８Ｒ,８ａＳ)−２−フェニルヘキサヒドロピラノ[３,２−ｄ][１,３]ジオキシン−６,７,８−トリオールから出発］（３００ｍｇ、０.３０ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中混合物にシアノ水素化ホウ素ナトリウム（５７.０ｍｇ、０.９１ｍｍｏｌ）を滴下した。得られた溶液を２５℃で４時間撹拌した。溶媒を減圧下にて除去した。残留物を分取ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２５：１）によって精製して、((Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)((１−(３−(((２Ｒ,３Ｒ)−２,３−ジヒドロキシ−３−((２Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−５−ヒドロキシ−２−フェニル−１,３−ジオキサン−４−イル)プロピル)(ヘキシル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル（２７０ｍｇ、８３％）を黄色のゴムとして得た。
LC/MS: m/z 1076 [M+H]+
1H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 0.89 - 1.19 (m, 8H), 1.23 - 1.37 (m, 11H), 1.59 - 1.65 (m, 4H), 2.16 - 2.21 (m, 6H), 2.62 - 3.04 (m, 14H), 3.34 - 3.68 (m, 2H), 3.87 - 3.96 (m, 4H), 4.11 - 4.27 (m, 4H), 4.70 - 4.80 (m, 2H), 5.57 (s, 1H), 7.07 - 7.29 (m, 4H), 7.31 - 7.50 (m, 7H), 7.50 - 7.53 (m, 4H), 7.78 (d, 2H).
【０１８３】
工程２：
(Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル((１−(３−(ヘキシル((２Ｒ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル
【化５７】
0006502469.tif 000059
((Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)((１−(３−(((２Ｒ,３Ｒ)−２,３−ジヒドロキシ−３−((２Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−５−ヒドロキシ−２−フェニル−１,３−ジオキサン−４−イル)プロピル)(ヘキシル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル（２７０ｍｇ、０.２５ｍｍｏｌ）をエタノール（５ｍＬ）中のＨＣｌ（４Ｍ、ａｑ、１５ｍＬ）に添加した。２５℃で２時間撹拌した後、該混合物を減圧下にて濃縮して、標記化合物（２００ｍｇ、８１％）を黄色の油として得た。
LC/MS: m/z 987 [M+H]+
【０１８４】
工程３：
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((１−(３−(ヘキシル((２Ｒ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド
【化５８】
0006502469.tif 000060
ＤＭＦ（６ｍＬ）中の((Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)((１−(３−(ヘキシル((２Ｒ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル（工程２、２００ｍｇ、０.２０ｍｍｏｌ）にジエチルアミン（３ｍＬ）を添加した。得られた混合物を２５℃で２時間撹拌した。溶媒を減圧下にて除去した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｘ  Ｂｒｉｄｇｅ  Ｃ１８、１９×１５０ｍｍ、５ｕｍ；移動相Ａ：水／０.０５％ＴＦＡ、移動相Ｂ：ＡＣＮ；流速：２０ｍＬ／分；勾配液：１０分間にわたってＢ３０％からＢ７０％まで；２５４ｎｍ、溶媒液として）によって精製した。所望の化合物を含有する画分を蒸発乾固させて、３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−(((１−(３−(ヘキシル((２Ｒ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)プロパノイル)ピペリジン−４−イル)メチル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド（２３.５ｍｇ）を黄色のゴムとして得た。
LC/MS: m/z 765.4 [M+H]+
1H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 0.94 (t, 3H), 1.29 - 1.40 (m, 8H), 1.80 - 2.04 (m, 5H), 2.35 (s, 3H), 2.35 (m, 1H), 2.62 - 2.71 (m, 2H), 2.85 - 2.97 (m, 7H), 3.15 - 3.30 (m, 4H), 3.31 - 3.69 (m, 4H), 3.71 - 3.83 (m, 6H), 4.03 - 4.06 (m, 2H), 4.86 - 4.87(m, 1H),7.13 - 7.20 (m, 1H).
【０１８５】
実施例９
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｒ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド・二塩酸塩
【化５９】
0006502469.tif 000061
【０１８６】
工程１
((Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシル((２Ｒ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)カルバミン酸terｔ−ブチル
【化６０】
0006502469.tif 000062
(Ｓ)−(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシルアミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)カルバミン酸tert−ブチル（中間体Ｅ、５００ｍｇ、０.７０ｍｍｏｌ）、(３Ｓ,４Ｓ,５Ｓ,６Ｒ)−６−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２,３,４,５−テトラオール（２５４ｍｇ、１.４１ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０.１２３ｍＬ、０.７０ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解し、室温で１時間撹拌した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム（１３３ｍｇ、２.１１ｍｍｏｌ）および酢酸（０.０４０ｍＬ、０.７０ｍｍｏｌ）を添加し、１８時間撹拌し続け、次に、５０℃で３０時間撹拌した。該反応を室温に冷却し、３Ｍ  ＨＣｌ（ａｑ）の添加によりクエンチし、１５分間撹拌し、次に、真空濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）および８％ＮａＨＣＯ3（ａｑ）（５０ｍＬ）に溶解し、振盪し、相を分取した。水相をＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＮａ2ＳＯ4（ｓ）で乾燥させ、濾過し、真空下にて蒸発させた。該化合物を、２０分間にわたってＨ2Ｏ／ＭｅＣＮ／ＡｃＯＨ  ９５／５／０.２バッファー中２０〜６０％アセトニトリル勾配液を流速１００ｍＬ／分で用いて、Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ８カラム（１０μｍ  ２５０×５０ＩＤｍｍ）にて分取ＨＰＬＣによって精製した。該化合物を２６８ｎｍでＵＶによって検出した。該化合物を回収し、凍結乾燥させて、標記化合物（１９５ｍｇ、３２％）を無色の固体として得た。
LC/MS: m/z 873.6 [M+H]+
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0.76 - 0.85 (m, 3H), 1.13 - 1.27 (m, 6H), 1.3 - 1.44 (m, 11H), 2.21 (s, 3H), 2.24 - 2.38 (m, 1H), 2.39 - 2.53 (m, 4H), 2.57 - 2.66 (m, 2H), 2.77 (d, 1H), 2.91 - 3.06 (m, 1H), 3.06 - 3.41 (m, 8H), 3.43 - 3.49 (m, 1H), 3.51 (d, 1H), 3.55 - 3.65 (m, 3H), 4.23 - 4.55 (m, 5H), 6.97 (bs, 2H), 7.04 - 7.18 (m, 6H), 7.72 (d, 2H), 7.78 - 7.99 (m, 1H), 8.27 - 8.37 (m, 1H).
【０１８７】
工程２
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｒ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド・二塩酸塩
【化６１】
0006502469.tif 000063
ＭｅＯＨ（５ｍＬ、１２４ｍｍｏｌ）を入れた氷浴冷却バイアルに塩化アセチル（１.４２ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）を滴下した。該混合物を５分間撹拌し、次に、((Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシル((２Ｒ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)カルバミン酸tert−ブチル（１９０ｍｇ、０.２２ｍｍｏｌ）を添加した。該反応を室温で１.５時間撹拌し、次に、真空下にて蒸発させた。残留物を水に溶解し、凍結乾燥させて、標記化合物（１８４ｍｇ、１００％）を淡い色の固体として得た。
LC/MS: m/z 773.4 [M+H]+
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0.81 - 0.89 (m, 3H), 1.2 - 1.33 (m, 6H), 1.62 - 1.77 (m, 2H), 2.26 (s, 3H), 2.3 - 2.41 (m, 1H), 2.6 - 2.73 (m, 2H), 2.75 - 2.84 (m, 1H), 2.86 - 2.97 (m, 1H), 3.11 - 3.27 (m, 3H), 3.27 - 3.45 (m, 5H), 3.45 - 3.52 (m, 2H), 3.52 - 3.76 (m, 5H), 3.89 - 3.99 (m, 1H), 4.03 - 4.48 (m, 7H), 6.88 - 7.23 (m, 6H), 7.63 (d, 2H), 7.93 (d, 2H), 8.26 (t, 1H), 8.93 - 9.02 (m, 1H), 9.13 - 9.34 (m, 2H), 9.55 (bs, 1H).
【０１８８】
実施例１０
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド
【化６２】
0006502469.tif 000064
【０１８９】
工程１
((Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)カルバミン酸tert−ブチル
【化６３】
0006502469.tif 000065
(Ｓ)−(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシルアミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)カルバミン酸tert−ブチル（中間体Ｅ、１.２５ｇ、１.７６ｍｍｏｌ）、(３Ｒ,４Ｓ,５Ｓ,６Ｒ)−６−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２,３,４,５−テトラオール（０.６３５ｇ、３.５２ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０.３０８ｍＬ、１.７６ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解し、室温で１時間撹拌した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム（０.３３２ｇ、５.２９ｍｍｏｌ）および酢酸（０.１０１ｍＬ、１.７６ｍｍｏｌ）を添加し、５０℃で４０時間撹拌し続けた。該反応を室温に冷却し、８％ＮａＨＣＯ3（ａｑ）の添加によってクエンチし、３０分間撹拌し、真空濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）および８％ＮａＨＣＯ3（ａｑ）（１００ｍＬ）に溶解し、振盪し、相を分取した。水相をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＮａ2ＳＯ4（ｓ）で乾燥させ、濾過し、真空下にて蒸発させた。該化合物を、２０分間にわたってＨ2Ｏ／ＭｅＣＮ／ＡｃＯＨ  ９５／５／０.２バッファー中２０〜６０％アセトニトリル勾配液を流速１００ｍＬ／分で用いてＫｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ８カラム（１０μｍ  ２５０×５０ＩＤｍｍ）にて分取ＨＰＬＣによって精製した。該混合物を２６８ｎｍでＵＶによって検出した。該化合物を回収し、凍結乾燥させて、((Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)カルバミン酸tert−ブチル（１.２６ｇ、８２％）を白色固体として得た。
LC/MS: m/z 873.6 [M+H]+
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0.73 - 0.86 (m, 3H), 1.1 - 1.27 (m, 6H), 1.27 - 1.46 (m, 11H), 2.20 (s, 3H), 2.24 - 2.38 (m, 1H), 2.38 - 2.49 (m, 3H), 2.53 - 2.69 (m, 3H), 2.9 - 3.06 (m, 1H), 3.06 - 3.47 (m, 10H), 3.47 - 3.54 (m, 1H), 3.54 - 3.76 (m, 3H), 4.18 - 4.65 (m, 6H), 6.97 (bs, 2H), 7.03 - 7.19 (m, 6H), 7.72 (d, 2H), 7.78 - 8 (m, 1H), 8.24 - 8.37 (m, 1H).
【０１９０】
工程２
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド・二塩酸塩
【化６４】
0006502469.tif 000066
ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）を入れた氷浴冷却フラスコに塩化アセチル（５.６９ｍＬ、８０.０ｍｍｏｌ）を滴下した。該混合物を５分間撹拌し、次に、((Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)カルバミン酸tert−ブチル（１.２６ｇ、１.４４ｍｍｏｌ）を添加した。該反応を室温で１.５時間撹拌し、次に、真空下にて蒸発させた。残留物を水に溶解し、凍結乾燥させて、３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド・二塩酸塩（１.２９ｇ、１０６％）を淡い色の固体として得た。
LC/MS: m/z 773.4 [M+H]+
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0.78 - 0.89 (m, 3H), 1.18 - 1.32 (m, 6H), 1.62 - 1.76 (m, 2H), 2.26 (s, 3H), 2.33 - 2.44 (m, 1H), 2.67 (d, 2H), 2.73 - 2.84 (m, 1H), 2.84 - 2.96 (m, 1H), 3.1 - 3.44 (m, 9H), 3.44 - 3.54 (m, 2H), 3.55 - 3.62 (m, 1H), 3.62 - 3.75 (m, 3H), 4.02 - 4.12 (m, 1H), 4.12 - 4.3 (m, 2H), 5.58 (bs, 5H), 6.91 - 7.21 (m, 6H), 7.64 (d, 2H), 7.94 (d, 2H), 8.25 (t, 1H), 8.97 - 9.06 (m, 1H), 9.28 (bs, 1H), 9.41 (bs, 1H), 9.70 (d, 1H).
【０１９１】
工程３
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド
【化６５】
0006502469.tif 000067
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド・二塩酸塩（１.２３ｇ、１.４５ｍｍｏｌ）を水（１５ｍｌ）に溶解し、１０％Ｎａ2ＣＯ3（ａｑ）を添加して約ｐＨ１１に塩基性化した。該生成物をＥｔＯＡｃ（６×７０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＮａ2ＳＯ4（ｓ）で乾燥させ、濾過し、真空下にて蒸発させて、半固体／油を得た。残留物をアセトニトリル／水に溶解し、凍結乾燥させて、３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド（１.０８ｇ、９６％）を淡い色の固体として得た。
LC/MS: m/z 773.4 [M+H]+
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0.75 - 0.84 (m, 3H), 1.13 - 1.26 (m, 6H), 1.32 - 1.42 (m, 2H), 1.94 - 2.05 (m, 1H), 2.24 (s, 3H), 2.34 - 2.49 (m, 6H), 2.54 - 2.66 (m, 4H), 3.14 - 3.23 (m, 1H), 3.25 - 3.35 (m, 4H), 3.35 - 3.42 (m, 1H), 3.42 - 3.47 (m, 1H), 3.47 - 3.54 (m, 1H), 3.55 - 3.61 (m, 1H), 3.61 - 3.77 (m, 4H), 4.26 - 4.33 (m, 2H), 4.47 (d, 1H), 4.51 (d, 2H), 6.96 (bs, 2H), 7.04 - 7.14 (m, 4H), 7.40 (d, 2H), 7.74 (d, 2H), 8.26 - 8.37 (m, 2H).
【０１９２】
実施例１１
２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチルカルバミン酸４−(((Ｒ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピルアミノ)メチル)フェニル
【化６６】
0006502469.tif 000068
【０１９３】
工程１：
酢酸(Ｒ)−４−((３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピルアミノ)メチル)フェニル
【化６７】
0006502469.tif 000069
５０ｍＬナシ型（pear）フラスコ中にてＤＣＭ（３０ｍＬ）に(Ｒ)−３,５−ジアミノ−Ｎ−(３−アミノ−２−(２−メチルベンジル)プロピル)−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド（中間体Ａ、１.６ｇ、４.５９ｍｍｏｌ）および酢酸４−ホルミルフェニル（０.７５３ｇ、４.５９ｍｍｏｌ）を添加して黄色溶液を得た。１時間撹拌した後、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（３.８９ｇ、１８.４ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌を一夜続けた。該混合物をＤＣＭで希釈し、水およびブラインで洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、真空下にて蒸発させて、粗酢酸(Ｒ)−４−(((３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)アミノ)メチル)フェニル（１.７０g、７５％）を黄色固体として得た。該生成物をさらなる精製を行わずにそのまま次工程で使用した。
LC/MS: m/z 467 [M+H]+
【０１９４】
工程２：
酢酸(Ｓ)−４−((tert−ブトキシカルボニル(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)アミノ)メチル)フェニル
【化６８】
0006502469.tif 000070
(ＢＯＣ)2Ｏ（１.０７ｍＬ、４.５９ｍｍｏｌ）を０℃で酢酸(Ｒ)−４−(((３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)アミノ)メチル)フェニル（１.９ｇ、３.８２ｍｍｏｌ）およびＮａ2ＣＯ3（０.８１ｇ、７.６５ｍｍｏｌ）のジオキサン（２５ｍＬ)／水（８ｍＬ）混合溶媒中混合物に添加した。該混合物を室温にし、一夜撹拌した。該反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ブラインで洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、真空下にて蒸発させた。残留物を、石油エーテル中１０〜４０％ＥｔＯＡｃ勾配液を用いてシリカゲルにてフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。純粋な画分を蒸発乾固させて、標記化合物（１.３０ｇ、５７％）を黄色固体として得た。
LC/MS: m/z 597 [M+H]+
1H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 1.47 (s, 9H), 2.25 - 2.2.51 (m, 7H), 2.54 - 2.65 (m, 2H), 3.05 - 3.22 (m, 2H), 3.31 - 3.39 (m, 2H), 4.13 - 4.45 (m, 2H), 6.93 - 7.00 (m, 2H), 7.06 - 7.10 (m, 6H).
【０１９５】
工程３：
(Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル(４−ヒドロキシベンジル)カルバミン酸tert−ブチル
【化６９】
0006502469.tif 000071
酢酸(Ｓ)−４−(((tert−ブトキシカルボニル)(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)アミノ)メチル)フェニル（１.３ｇ、２.１８ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中冷溶液に水（８ｍＬ）中のＮａＯＨ（０.１７４ｇ、４.３５ｍｍｏｌ）を滴下した。該反応溶液を室温で３時間撹拌した。該反応混合物を２Ｍ  ＨＣｌ（ａｑ）で酸性化した。該反応混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、有機相を水およびブラインで洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、粗標記化合物（１.２０ｇ、９９％）を黄色固体として得た。
LC/MS: m/z 555 [M+H]+
【０１９６】
工程４：
(Ｓ)−クロロギ酸４−((tert−ブトキシカルボニル(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)アミノ)メチル)フェニル
【化７０】
0006502469.tif 000072
５０ｍＬ丸底フラスコ中にてＴＨＦ（１０ｍＬ）に(Ｓ)−(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−ヒドロキシベンジル)カルバミン酸tert−ブチル（２５０ｍｇ、０.４５ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（０.３５４ｍＬ、２.０３ｍｍｏｌ）を添加して黄色溶液を得た。該混合物を氷浴で冷却し、トリホスゲン（２００ｍｇ、０.６８ｍｍｏｌ）を添加した。１時間撹拌した後、該反応混合物を水に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出した。有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、標記化合物（２５０ｍｇ、９０％）を黄色の油として得た。
LC/MS: m/z 617 [M+H]+
【０１９７】
工程５：
((Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−(((２−(((２Ｓ,３Ｒ)−２,３−ジヒドロキシ−３−((２Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−５−ヒドロキシ−２−フェニル−１,３−ジオキサン−４−イル)プロピル)(ヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)オキシ)ベンジル)カルバミン酸tert−ブチル
【化７１】
0006502469.tif 000073
５０ｍＬ丸底フラスコ中にて(１Ｒ,２Ｓ)−３−((２−アミノエチル)(ヘキシル)アミノ)−１−((２Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−５−ヒドロキシ−２−フェニル−１,３−ジオキサン−４−イル)プロパン−１,２−ジオール（実施例３／工程２、９６ｍｇ、０.２４ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（０.０６４ｍＬ、０.３６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解して無色の溶液を得た。０℃で(Ｓ)−クロロギ酸４−(((tert−ブトキシカルボニル)(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)アミノ)メチル)フェニル（工程４、１５０ｍｇ、０.２４ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を室温で３時間撹拌した。該反応混合物を水（２０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出した。有機相をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、真空下にて蒸発させた。残留物を分取ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）によって精製して、標記化合物（２００ｍｇ、８４％）を黄色固体として得た。
LC/MS: m/z 977 [M+H]+
【０１９８】
工程６：
２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチルカルバミン酸４−(((Ｒ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピルアミノ)メチル)フェニル
【化７２】
0006502469.tif 000074
２５ｍＬ丸底フラスコ中にてＥｔＯＨ（１ｍＬ）に((Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−(((２−(((２Ｓ,３Ｒ)−２,３−ジヒドロキシ−３−((２Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−５−ヒドロキシ−２−フェニル−１,３−ジオキサン−４−イル)プロピル)(ヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)オキシ)ベンジル)カルバミン酸tert−ブチル（工程５、２００ｍｇ、０.２０ｍｍｏｌ）を添加して黄色溶液を得た。ＨＣｌ（ａｑ、４Ｍ、３ｍＬ）を添加し、得られた溶液を室温で１２時間撹拌した。粗生成物を、溶離液として水（０.０５％ＴＦＡ）およびＭｅＣＮの極性を低下させていく勾配液を用いて分取ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ＯＢＤカラム、５μシリカ、直径５０ｍｍ、長さ１５０ｍｍ）によって精製した。所望の化合物を含有する画分を蒸発乾固させて、標記化合物（２８.０ｍｇ、１３％）を黄色固体として得た。
LC/MS: m/z 789.4 [M+H]+
1H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 0.79 - 0.99 (m, 3H), 1.25 - 1.55 (m, 6H), 1.69 - 1.91 (m, 2H), 2.25 - 2.45 (m, 4H), 2.51 - 2.84 (m, 1H), 2.81 - 3.01 (m, 3H,) , 3.28 - 3.31 (m, 4H), 3.34 - 3.82 (m, 12H), 3.86 - 3.92 (m, 1H), 4.09 - 4.37 (m, 3H), 7.03 - 7.35 (m, 6H), 7.453 (d, 2H).
【０１９９】
実施例１２
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)フェネチル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド・二塩酸塩
【化７３】
0006502469.tif 000075
【０２００】
工程１
EＮ０６９２７−６１
((Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)フェネチル)カルバミン酸tert−ブチル
【化７４】
0006502469.tif 000076
(Ｓ)−(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシルアミノ)エチル)カルバモイル)フェネチル)カルバミン酸tert−ブチル（中間体Ｄ、５００ｍｇ、０.６９ｍｍｏｌ）、(３Ｒ,４Ｓ,５Ｓ,６Ｒ)−６−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２,３,４,５−テトラオール（２４９ｍｇ、１.３８ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０.１２１ｍＬ、０.６９ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（５ｍＬ）に溶解し、５０℃で４０分間撹拌した後、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（１３０ｍｇ、２.０７ｍｍｏｌ）および酢酸（０.０４４ｍＬ、０.７６ｍｍｏｌ）を添加した。５０℃で２１時間撹拌し続け、次に、該反応混合物を室温に冷却した。８％ＮａＨＣＯ3（ａｑ）を添加して該反応をクエンチした。該混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）および８％ＮａＨＣＯ3（ａｑ）（５０ｍＬ）で希釈し、振盪し、相を分取した。水相をＥｔＯＡｃ（４×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＮａ2ＳＯ4（ｓ）で乾燥させ、濾過し、真空下にて蒸発させた。該化合物を、２０分間にわたってＨ2Ｏ／ＭｅＣＮ／ＡｃＯＨ  ９５／５／０.２バッファー中２０〜６０％アセトニトリル勾配液を流速１００ｍＬ／分で用いてＫｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ８カラム（１０μｍ  ２５０×５０ＩＤｍｍ）にて分取ＨＰＬＣによって精製した。該化合物を２６５ｎｍにてＵＶによって検出した。該化合物を回収し、凍結乾燥させて、標記化合物（３８５ｍｇ、６３％）を淡い色の固体として得た。
LC/MS: m/z 887.6 [M+H]+
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0.80 (t, 3H), 1.12 - 1.26 (m, 6H), 1.29 - 1.43 (m, 11H), 2.16 - 2.29 (m, 4H), 2.41 - 2.48 (m, 2H), 2.56 - 2.67 (m, 2H), 2.71 (t, 2H), 2.96 (dd, 1H), 3.02 - 3.42 (m, 12H), 3.44 (dd, 1H), 3.47 - 3.54 (m, 1H), 3.55 - 3.74 (m, 3H), 4.18 - 4.79 (m, 4H), 6.96 (bs, 2H), 7.06 - 7.19 (m, 6H), 7.72 (d, 2H), 7.8 - 7.97 (m, 1H), 8.24 - 8.34 (m, 1H).
【０２０１】
工程２
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)フェネチル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド・二塩酸塩
【化７５】
0006502469.tif 000077
ＭｅＯＨの氷浴冷却溶液（５ｍＬ、１２４ｍｍｏｌ）に塩化アセチル（１.４２ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）を滴下した。該溶液を５分間撹拌し、次に、((Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)フェネチル)カルバミン酸tert−ブチル（工程１、３８５ｍｇ、０.４３ｍｍｏｌ）に添加した。該反応を室温で２.５時間撹拌し、次に、真空濃縮した。残留物を水に溶解し、凍結乾燥させて、標記化合物（３６９ｍｇ、９９％）を黄色固体として得た。
LC/MS: m/z 787.4 [M+H]+
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0.78 - 0.88 (m, 3H), 1.17 - 1.31 (m, 6H), 1.6 - 1.74 (m, 2H), 2.23 - 2.39 (m, 4H), 2.64 - 2.75 (m, 2H), 2.75 - 2.87 (m, 1H), 2.87 - 2.99 (m, 1H), 3.05 (t, 2H), 3.09 - 3.44 (m, 11H), 3.44 - 3.54 (m, 2H), 3.55 - 3.75 (m, 4H), 4 - 4.1 (m, 1H), 4.69 (bs, 7H), 6.88 - 7.2 (m, 5H), 7.23 - 7.3 (m, 1H), 7.36 (d, 2H), 7.88 (d, 2H), 8.24 (t, 1H), 8.85 - 9.16 (m, 3H), 9.63 (d, 1H).
【０２０２】
実施例１３
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)フェネチル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド・二塩酸塩
【化７６】
0006502469.tif 000078
【０２０３】
工程１：
((Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)フェネチル)カルバミン酸tert−ブチル
【化７７】
0006502469.tif 000079
(Ｓ)−(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシルアミノ)エチル)カルバモイル)フェネチル)カルバミン酸tert−ブチル（中間体Ｄ、５００ｍｇ、０.６９ｍｍｏｌ）、(２Ｒ,３Ｓ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンタナール（２０８ｍｇ、１.３８ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０.１２１ｍＬ、０.６９ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（５ｍＬ）に溶解し、５０℃で４０分間撹拌した後、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（１３０ｍｇ、２.０７ｍｍｏｌ）および酢酸（０.０４４ｍＬ、０.７６ｍｍｏｌ）を添加した。５０℃で２１時間撹拌し続け、次に、室温に冷却した。８％ＮａＨＣＯ3（ａｑ）を添加して該反応をクエンチした。該混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）および８％ＮａＨＣＯ3（ａｑ）（５０ｍＬ）で希釈し、振盪し、相を分取した。水相をＥｔＯＡｃ（４×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＮａ2ＳＯ4（ｓ）で乾燥させ、濾過し、真空下にて蒸発させた。該化合物を、２０分間にわたってＨ2Ｏ／ＭｅＣＮ／ＡｃＯＨ  ９５／５／０.２バッファー中２０〜６０％アセトニトリル勾配液を流速１００ｍＬ／分で用いてＫｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ８カラム（１０μｍ  ２５０×５０ＩＤｍｍ）にて分取ＨＰＬＣによって精製した。該化合物を２６５ｎｍにてＵＶによって検出した。該化合物を回収し、凍結乾燥させて、((Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)フェネチル)カルバミン酸tert−ブチル（３７４ｍｇ、６３％）を淡い色の固体として得た。
LC/MS: m/z 857.6 [M+H]+
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0.74 - 0.85 (m, 3H), 1.11 - 1.28 (m, 6H), 1.28 - 1.44 (m, 11H), 2.14 - 2.29 (m, 4H), 2.46 (dd, 2H), 2.55 - 2.65 (m, 2H), 2.71 (t, 2H), 2.96 (dd, 1H), 3.02 - 3.51 (m, 14H), 3.52 - 3.6 (m, 1H), 3.6 - 3.71 (m, 1H), 4.17 - 4.77 (m, 3H), 6.96 (bs, 2H), 7.05 - 7.2 (m, 6H), 7.72 (d, 2H), 7.8 - 7.97 (m, 1H), 8.23 - 8.34 (m, 1H).
【０２０４】
工程２：
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)フェネチル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド・二塩酸塩
【化７８】
0006502469.tif 000080
ＭｅＯＨ（５ｍＬ、１２３.５９ｍｍｏｌ）の氷浴冷却溶液に塩化アセチル（１.４２ｍＬ、２０.０ｍｍｏｌ）を滴下した。該溶液を５分間撹拌し、次に、((Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)フェネチル)カルバミン酸tert−ブチル（３７４ｍｇ、０.４４ｍｍｏｌ）を添加した。該反応を室温で２.５時間撹拌し、次に、真空濃縮した。残留物を水に溶解し、凍結乾燥させて、３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)フェネチル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド・二塩酸塩（３６１ｍｇ、１００％）を黄色固体として得た。
LC/MS: m/z 757.4 [M+H]+
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1 - 1.09 (m, 3H), 1.39 - 1.53 (m, 6H), 1.84 - 1.95 (m, 2H), 2.50 (s, 3H), 2.53 - 2.62 (m, 1H), 2.86 - 2.97 (m, 2H), 2.97 - 3.07 (m, 1H), 3.09 - 3.2 (m, 1H), 3.22 - 3.73 (m, 15H), 3.77 - 3.96 (m, 3H), 4.23 - 4.32 (m, 1H), 4.84 (bs, 6H), 7.15 - 7.42 (m, 5H), 7.45 - 7.52 (m, 1H), 7.58 (d, 2H), 8.11 (d, 2H), 8.46 (t, 1H), 9.13 - 9.2 (m, 1H), 9.30 (d, 2H), 9.92 (d, 1H).
【０２０５】
実施例１４
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｓ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド・酢酸
【化７９】
0006502469.tif 000081
【０２０６】
工程１
((Ｒ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)カルバミン酸tert−ブチル
【化８０】
0006502469.tif 000082
(Ｒ)−(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシルアミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)カルバミン酸tert−ブチル（中間体Ｈ）（１６３ｍｇ、０.２３ｍｍｏｌ）、(２Ｒ,３Ｓ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンタナール（６９.０ｍｇ、０.４６ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０.０４０ｍＬ、０.２３ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（４ｍＬ）に溶解し、室温で１時間撹拌した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム（１４.４４ｍｇ、０.２３ｍｍｏｌ）および酢酸（０.０３９ｍＬ、０.６９ｍｍｏｌ）を添加し、該反応を５０℃に２０時間加熱し、次に、室温に冷却した。該反応を８％ＮａＨＣＯ3（ａｑ）の添加によってクエンチし、３０分間撹拌した。溶媒を真空濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ）および８％ＮａＨＣＯ3（ａｑ）（２５ｍＬ）に溶解し、振盪し、相を分取した。水相をＥｔＯＡｃ（２×２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＮａ2ＳＯ4（ｓ）で乾燥させ、濾過し、真空下にて蒸発させた。該化合物を、２０分間にわたってＨ2Ｏ／ＡＣＮ／ＡｃＯＨ  ９５／５／０.２バッファー中３０〜７０％アセトニトリル勾配液を流速１９ｍＬ／分で用いてＫｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ８カラム（１０μｍ  ２５０×２０ＩＤｍｍ）にて分取ＨＰＬＣによって精製した。該化合物を２６５ｎｍにてＵＶによって検出した。生成物画分を回収し、凍結乾燥させて、((Ｒ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)カルバミン酸tert−ブチル（１２７ｍｇ、６５.５％）を固体として得た。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0.75 - 0.84 (m, 3H), 1.13 - 1.26 (m, 6H), 1.29 - 1.42 (m, 11H), 2.20 (s, 3H), 2.25 - 2.35 (m, 1H), 2.41 - 2.47 (m, 2H), 2.56 - 2.62 (m, 2H), 2.89 - 3.05 (m, 1H), 3.07 - 3.15 (m, 1H), 3.2 - 3.49 (m, 13H), 3.52 - 3.59 (m, 1H), 3.61 - 3.69 (m, 1H), 4.21 - 4.35 (m, 2H), 4.35 - 4.55 (m, 3H), 6.96 (bs, 1H), 7.04 - 7.19 (m, 6H), 7.71 (d, 2H), 7.77 - 7.98 (m, 1H), 8.24 - 8.32 (m, 1H).
MS ES+: m/z 843.4 [M+H]+
【０２０７】
工程２
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｓ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド・酢酸塩
【化８１】
0006502469.tif 000083
ＭｅＯＨ（２.５ｍＬ、６１.７９ｍｍｏｌ）を入れた氷浴冷却バイアルに塩化アセチル（０.７１１ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）を滴下し、５分間撹拌した後、((Ｒ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)カルバミン酸tert−ブチル（１２７ｍｇ、０.１５ｍｍｏｌ）を添加した。該反応を室温で１時間撹拌し、次に、真空濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ）および５％Ｎａ2ＣＯ3（ａｑ）（２５ｍＬ）に溶解し、振盪し、相を分取した。水相をＥｔＯＡｃ（５×２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＮａ2ＳＯ4（ｓ）で乾燥させ、濾過し、真空下にて蒸発させた。該化合物を、２０分間にわたってＨ2Ｏ／ＡＣＮ／ＡｃＯＨ  ９５／５／０.２バッファー中５〜４５％アセトニトリル勾配液を流速１９ｍＬ／分で用いてＫｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ８カラム（１０μｍ  ２５０×２０ＩＤｍｍ）にて分取ＨＰＬＣによって精製した。該化合物を２６８ｎｍにてＵＶによって検出した。該生成物を凍結乾燥させて、３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｓ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド（１００ｍｇ、８２％）を淡い色の固体として得た。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0.77 - 0.83 (m, 3H), 1.13 - 1.25 (m, 6H), 1.32 - 1.41 (m, 2H), 1.90 (s, 4H), 1.96 - 2.05 (m, 1H), 2.24 (s, 3H), 2.35 - 2.55 (m, 6H), 2.55 - 2.63 (m, 4H), 3.14 - 3.23 (m, 2H), 3.24 - 3.4 (m, 9H), 3.4 - 3.49 (m, 4H), 3.56 (q, 1H), 3.62 - 3.71 (m, 2H), 3.74 (d, 1H), 6.96 (bs, 2H), 7.04 - 7.14 (m, 4H), 7.40 (d, 2H), 7.74 (d, 2H), 8.28 (t, 1H), 8.33 (t, 1H).
MS ES+: m/z 743.5 [M+H]+
【０２０８】
実施例１５
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｓ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｒ,３Ｓ,４Ｓ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド・酢酸塩
【化８２】
0006502469.tif 000084
【０２０９】
工程１
((Ｒ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシル((２Ｒ,３Ｓ,４Ｓ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)カルバミン酸tert−ブチル
【化８３】
0006502469.tif 000085
(Ｒ)−(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシルアミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)カルバミン酸tert−ブチル、(中間体Ｇ）（１６３ｍｇ、０.２３ｍｍｏｌ）、(２Ｓ,３Ｒ,４Ｓ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンタナール（６９.０ｍｇ、０.４６ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（４０.１μｌ、０.２３ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨに溶解し、室温で１時間撹拌した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム（１４.４４ｍｇ、０.２３ｍｍｏｌ）および酢酸（３９.５μｌ、０.６９ｍｍｏｌ）を添加し、該反応を５０℃に２０時間加熱し、次に、室温に冷却した。該反応を８％ＮａＨＣＯ3（ａｑ）の添加によってクエンチし、３０分間撹拌した。溶媒を真空濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ）および８％ＮａＨＣＯ3（ａｑ）（２５ｍＬ）に溶解し、振盪し、相を分取した。水相をＥｔＯＡｃ（５×２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＮａ2ＳＯ4（ｓ）で乾燥させ、濾過し、真空下にて蒸発させた。該化合物を、２０分間にわたってＨ2Ｏ／ＡＣＮ／ＡｃＯＨ  ９５／５／０.２バッファー中３０〜７０％アセトニトリル勾配液を流速１９ｍＬ／分で用いてＫｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ８カラム（１０μｍ  ２５０×２０ＩＤｍｍ）にて分取ＨＰＬＣによって精製した。該化合物を２６５ｎｍにてＵＶによって検出した。生成物画分を回収し、凍結乾燥させて、((Ｒ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシル((２Ｒ,３Ｓ,４Ｓ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)カルバミン酸tert−ブチル（１３５ｍｇ、６９.７％）を固体として得た。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0.79 (d, 3H), 1.16 (d, 6H), 1.36 (s, 11H), 2.20 (s, 3H), 2.31 (s, 1H), 2.50 (dt, 5H), 2.58 (s, 3H), 2.92 - 3.05 (m, 1H), 3.06 - 3.15 (m, 1H), 3.31 (s, 6H), 3.39 - 3.5 (m, 2H), 3.53 - 3.59 (m, 1H), 3.61 - 3.69 (m, 1H), 4.22 - 4.34 (m, 2H), 4.34 - 4.55 (m, 3H), 6.97 (bs, 2H), 7.04 - 7.18 (m, 6H), 7.71 (d, 2H), 7.78 - 7.97 (m, 1H), 8.25 - 8.32 (m, 1H).
MS ES+: m/z 843.5 [M+H]+
【０２１０】
工程２
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｓ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｒ,３Ｓ,４Ｓ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド・酢酸塩
【化８４】
0006502469.tif 000086
ＭｅＯＨ（２.５ｍＬ、６１.７９ｍｍｏｌ）を入れた氷浴冷却バイアルに塩化アセチル（０.７１１ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）を滴下し、５分間撹拌した後、((Ｒ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシル((２Ｒ,３Ｓ,４Ｓ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)カルバミン酸tert−ブチル（１３５ｍｇ、０.１６ｍｍｏｌ）を添加した。該反応を室温で１時間撹拌し、次に、真空下にて蒸発させた。残留物をＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ）および５％Ｎａ2ＣＯ3（ａｑ）（２５ｍＬ）に溶解し、振盪し、相を分取した。水相をＥｔＯＡｃ（５×２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＮａ2ＳＯ4（ｓ）で乾燥させ、濾過し、真空下にて蒸発させた。該化合物を、２０分間にわたってＨ2Ｏ／ＡＣＮ／ＡｃＯＨ  ９５／５／０.２バッファー中５〜４５％アセトニトリル勾配液を流速１９ｍＬ／分で用いてＫｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ８カラム（１０μｍ  ２５０×２０ＩＤｍｍ）にて分取ＨＰＬＣによって精製した。該化合物を２６８ｎｍにてＵＶによって検出した。該生成物を凍結乾燥させて、３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｓ)−３−((４−((２−(ヘキシル((２Ｒ,３Ｓ,４Ｓ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド（９３ｍｇ、７０.２％）を淡い色の固体として得た。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0.76 - 0.83 (m, 3H), 1.14 - 1.25 (m, 6H), 1.31 - 1.42 (m, 2H), 1.91 (s, 3H), 1.95 - 2.06 (m, 1H), 2.24 (s, 3H), 2.35 - 2.54 (m, 6H), 2.60 (dd, 4H), 3.14 - 3.5 (m, 11H), 3.56 (q, 1H), 3.66 (dd, 2H), 3.74 (d, 1H), 6.96 (s, 2H), 7.04 - 7.14 (m, 4H), 7.40 (d, 2H), 7.74 (d, 2H), 8.28 (t, 1H), 8.33 (t, 1H).
MS ES+: m/z 743.4 [M+H]+
【０２１１】
実施例１６
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−(３−(２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチルカルバモイル)フェネチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド
【化８５】
0006502469.tif 000087
【０２１２】
工程１
(Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル(３−(２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチルカルバモイル)フェネチル)カルバミン酸tert−ブチル
【化８６】
0006502469.tif 000088
５０ｍＬ丸底フラスコにＭｅＯＨ（１５ｍＬ）中の(Ｓ)−(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(３−((２−(ヘキシルアミノ)エチル)カルバモイル)フェネチル）カルバミン酸tert−ブチル（中間体Ｄ、３７０ｍｇ、０.５１ｍｍｏｌ）および(３Ｒ,４Ｓ,５Ｓ,６Ｒ)−６−(ヒドロキシメチル)テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２,３,４,５−テトラオール（１３８ｍｇ、０.７７ｍｍｏｌ）を入れて黄色溶液を得た。上記の混合物を３０分間撹拌した後、ＮａＣＮＢＨ3（３２.１ｍｇ、０.５１ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を５０℃で１６時間撹拌した。溶媒を減圧下にて除去して、粗生成物((Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(３−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)フェネチル)カルバミン酸tert−ブチル（５００ｍｇ、１１０％）を黄色固体として得た。該生成物をさらなる精製を行わずにそのまま次工程で使用した。
LC/MS: m/z 887 [M+H]+
【０２１３】
工程２
３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−(３−(２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチルカルバモイル)フェネチルアミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド
【化８７】
0006502469.tif 000089
５０ｍＬ丸底フラスコにＨＣｌ／ＭｅＯＨ（２０ｍＬ、０,５６ｍｍｏｌ）中の((Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(３−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)フェネチル)カルバミン酸tert−ブチル（５００ｍｇ、０.５６ｍｍｏｌ）を入れて黄色溶液を得た。得られた溶液を室温で２時間撹拌した。溶媒を減圧下にて除去した。該粗物質を、溶離液として水（０.１％ＮＨ4ＨＣＯ3含有）およびＭｅＣＮの極性を低下させていく混合物を用いて分取ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ＯＢＤカラム、５μシリカ、直径５０ｍｍ、長さ１５０ｍｍ）によって精製した。所望の化合物を含有する画分を蒸発乾固させて、３,５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−((Ｒ)−３−((３−((２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ,５Ｒ)−２,３,４,５,６−ペンタヒドロキシヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)フェネチル)アミノ)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)ピラジン−２−カルボキサミド（８７ｍｇ、２０％）を黄色固体としてを得た。
LC/MS: m/z 788 [M+H]+
1H NMR (300 MHz, CD3OD, 25℃): δ 0.85 - 0.91 (m, 3H), 1.15 - 1.35 (m, 6H), 1.39 - 1.59 (m, 2H), 2.12 - 2.25 (m, 1H), 2.31 (s, 3H), 2.57 - 2.89（m, 13H, 3.29 - 3.33 (m, 2H), 3.38 - 3.64 (m, 3H), 3.66 - 3.84 (m, 6H), 7.09 - 7.16 (m, 4H),7.38 (d, 2H), 7.70 - 7.73 (m, 2H).
【０２１４】
中間体の合成
【０２１５】
中間体Ａ
(Ｒ)−３,５−ジアミノ−Ｎ−(３−アミノ−２−(２−メチルベンジル)プロピル)−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド
【化８８】
0006502469.tif 000090
【０２１６】
工程１：
２−(２−メチルベンジル)マロン酸ジメチル
【化８９】
0006502469.tif 000091
反応容器にマロン酸ジメチル（６.００ｋｇ、４５.４ｍｏｌ）およびメタノール（２１.３Ｌ）を充填した。２５％ＮａＯＭｅ／ＭｅＯＨ（１０.３７Ｌ、４５.２ｍｏｌ）を１０分間にわたって添加し、次に、反応温度を３０℃以下に維持しながら２−メチルベンジルクロリド（４.２６ｋｇ、３０.３ｍｏｌ）を１.５時間にわたって添加した。該反応に飽和ＮＨ4Ｃｌ（５３.１Ｌ）を添加し、ｐＨ８.５となった。該生成物を酢酸イソプロピル（３×２５Ｌ）で抽出し、合わせた有機層を１０％ブライン（１０Ｌ）で洗浄し、減圧下にて濃縮して、標記化合物を油として得た（８.６３ｋｇ、６８重量％、８３％）。このようにして得られた標記化合物はジアルキル化マロン酸エステルを含有していた。ＨＰＬＣによる純度：８６％。
LC/MS: m/z 237 [M+H]+
1H-NMR (DMSO-d6, 270 MHz) δ 7.17-7.05 (4H, m), 3.60 (6h, s), 3.82 (1H, t), 3.12 (2H, s), 2.21 (3H, s); 13C-NMR (DMSO-d6, 270 MHz) δ 169.5, 136.6, 136.3, 130.8, 129.5, 127.3, 126.4, 52.8, 52.0, 31.8, 19.4.
【０２１７】
工程２
２−(２−メチルベンジル)マロンアミド
【化９０】
0006502469.tif 000092
反応容器に２−(２−メチルベンジル)マロン酸ジメチル（工程１、５.９ｋｇ、６８重量％、１７.０ｍｏｌ）およびメタノール（１４.８Ｌ）を充填した。３４％水酸化アンモニウム（２４Ｌ、３６当量）を添加し、ＨＰＬＣ分析によって完了が確認されるまで該反応を２５℃で撹拌した。固体を濾過し、次に、ＭＴＢＥ（１５.３Ｌ）を添加した。３０分後、固体を濾過し、ＭＴＢＥ（２×１５.３Ｌ）で洗浄し、６０℃で減圧乾燥させて、標記化合物を白色固体として得た（３.２ｋｇ、９１％）。
LC/MS: m/z 206.9 [M+H]+
1H-NMR (DMSO-d6, 270 MHz) δ 7.32-7.21 (2H, br s), 7.15-7.00 (6H, m), 3.33 (1H, t), 2.96 (2H, d), 2.28 (3H, s); 13C-NMR (DMSO-d6, 270 MHz) δ 171.0, 137.5, 136.0, 129.9, 128.9, 126.1, 125.6, 53.2, 32.5, 19.1.
【０２１８】
工程３
２−(２−メチルベンジル)プロパン−１,３−ジアミン
【化９１】
0006502469.tif 000093
反応容器に２−(２−メチルベンジル)マロンアミド（１.３２ｋｇ、６.４０ｍｏｌ）およびＴＨＦ（５.４Ｌ）を充填した。粘着性混合物を０℃に冷却し、反応温度を２℃以下に維持しながら１Ｍボラン−ＴＨＦ（２５.６Ｌ、２５.６ｍｏｌ）を２時間添加した。該反応を１５℃に加温し、次に、５０℃で一夜撹拌した。ＨＰＬＣ分析が、出発物質が８％未満残っていることを示したので、温度を３０℃に維持しながら、該反応混合物を４Ｍ  ＫＯＨ（８Ｌ）でクエンチした。有機層を減圧下にて濃縮し、水層をＭＴＢＥ（２×１０Ｌ）で抽出した。合わせたＭＴＢＥ抽出物を濃縮有機層に添加し、次に、温度を３０℃以下に維持しながら、合わせた有機層を６Ｍ  ＨＣｌ溶液（１０Ｌ）に加えた。水相をＭＴＢＥ（１０Ｌ）で洗浄し、次に、６Ｍ  ＫＯＨ（１２Ｌ）で塩基性化した。水相をＴＨＦで２回（１０Ｌ、次に、５Ｌ）抽出し、合わせた有機相を減圧下にて濃縮した。トルエン（５Ｌ）を添加し、次に、共沸蒸留して残存していた水を除去した。該混合物をトルエン（５Ｌ）でトリチュレートし、固体を濾過し、トルエン（３Ｌ）で洗浄した。濾液を減圧下にて濃縮して、標記化合物を遊離アミンとして得た（１.１３ｋｇ、収率７０％）。ＨＰＬＣによる純度：９１％。
LC/MS: m/z 179.0 [M+H]+
1H-NMR (CDCl3, 270 MHz) δ 7.12-7.00 (4H, m), 2.72-2.59 (4H, m), 2.52 (2H, d), 2.27 (3H, s), 1.64 (1H, m), 1.48-1.25 (4H, br s); 13C-NMR (CDCl3, 270 MHz) δ 139.0, 136.3, 130.5, 129.9, 126.2, 125.9, 44.7, 43.8, 34.3, 19.6.
【０２１９】
工程４
２−(２−メチルベンジル)プロパン−１,３−ジアミン・Ｌ−酒石酸塩
【化９２】
0006502469.tif 000094
粗ジアミン（工程３から）（１.６２ｋｇ、９.１ｍｏｌ）にエタノール（４Ｌ）を添加した。温度を４０℃以下に維持しながら、エタノール（１１Ｌ）に溶解したＬ−酒石酸（１.６２ｋｇ、１０.８ｍｏｌ）の溶液を添加した。該混合物を２５℃で３日間撹拌し、次に、固体を濾過し、エタノール（２×２Ｌ）で洗浄し、５０℃で減圧乾燥させて、標記化合物を一Ｌ−酒石酸塩として得た（３.２１ｋｇ、定量的収量）。ＨＰＬＣによる純度：９２.２％。
LC/MS: m/z 179.0 [M+H]+
1H-NMR (D2O, 270 MHz) δ 7.30-7.15 (4H, m), 4.27 (2H, s), 3.20-3.07 (2H, dd), 3.04-2.94 (2H, dd), 2.79 (2H, d), 2.41 (1H, m), 2.27 (3H, s); 13C-NMR (D2O, 270 MHz) δ 178.4, 137.2, 135.7, 131.0, 130.0, 127.6, 126.7, 73.9, 40.5, 35.9, 32.8, 18.7.
【０２２０】
工程５
(Ｒ)−(３−アミノ−２−(２−メチルベンジル)プロピル)カルバミン酸アリル(１−(Ｒ))
【化９３】
0006502469.tif 000095
反応容器に２−(２−メチルベンジル)プロパン−１,３−ジアミンＬ−酒石酸塩（３.５７ｋｇ、１０.９ｍｏｌ）および水（１７Ｌ）を充填した。反応温度を２５℃以下に維持しながら、１０Ｍ  ＮａＯＨ（１７Ｌ、１７０ｍｏｌ）を添加した。該混合物を２５℃で３日間３０分間撹拌し、次に、２−ＭｅＴＨＦ（１４Ｌ）を添加した。層を分取し、水相を２−ＭｅＴＨＦ（１４Ｌ）で抽出した。合わせた有機相を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下にて濃縮して、遊離ジアミンを得た。反応容器に該遊離ジアミン、２−ＭｅＴＨＦ（３７.４Ｌ）および炭酸ジアリル（１.８０ｋｇ、１２.６ｍｏｌ）を充填した。固定化リパーゼアマノＰＳ  ＩＭ（５.６１ｋｇ、３重量当量）を３０分間にわたって数回に分けて添加し、温度を３０℃に設定した。４日後、1Ｈ  ＮＭＲが、出発物質が５％未満残っていることを示し、該反応混合物をセライトで濾過し、減圧下にて濃縮して、標記化合物を得た（２.６８ｋｇ、８２％ｅｅ、収率１００％）。ＨＰＬＣによる純度：８４.７％。
LC/MS: m/z 263.1 [M+H]+
1H-NMR (CDCl3, 270 MHz) δ 7.15-7.05 (4H, m), 5.99-5.81 (1H, m), 5.80-5.60 (1H, br s), 5.35-5.15 (2H, m), 4.54 (2H, d), 3.40-3.14 (2H, m), 2.85-2.52 (4H, m), 2.29 (3H, s), 1.90-1.77 (1H, m), 1.50-1.10 (2H, br s); 13C-NMR (CDCl3, 270 MHz) δ 156.6, 138.1, 136.1, 133.0, 130.5, 129.7, 126.3, 125.9, 117.5, 65.4, 44.0, 43.4, 41.6, 34.2, 19.5.
【０２２１】
工程６
(Ｒ)−(３−アミノ−２−(２−メチルベンジル)プロピル)カルバミン酸アリル(１−(Ｒ))・Ｄ−酒石酸塩
【化９４】
0006502469.tif 000096
粗(Ｒ)−(３−アミノ−２−(２−メチルベンジル)プロピル)カルバミン酸アリル（２.６８ｋｇ、１０.２ｍｏｌ）をＥｔＯＨ（７.１Ｌ）に添加した。温度を２５℃以下に維持しながら、Ｄ−酒石酸（１.５３ｋｇ、１０.２ｍｏｌ）のＥｔＯＨ（８Ｌ）中溶液を添加した。約１時間後、沈殿物の形成が始まり、該混合物を一夜撹拌した。２５℃でＭｅＣＮ（５Ｌ）を添加し、固体を濾過し、ＭｅＣＮ（２×５Ｌ）で洗浄し、４０℃で減圧乾燥させて、塩基／二酸の化学量論比＝２：１で標記化合物（(Ｒ)Ｄ−酒石酸塩、収率１００％）２.９４ｋｇを得た。ＨＰＬＣによる純度：９１.６％。
LC/MS: m/z 263.1 [M+H]+
1H-NMR (DMSO-d6, 270MHz) δ 7.50 (1H, t), 7.22-7.05 (4H, m), 5.98-5.85 (1H, m), 5.35-5.12 (2H, m), 4.48 (2H, d), 3.95 (2H, s), 3.13-2.99 (2H, m), 2.90-2.79 (1H, m), 2.75-2.58 (2H, m), 2.26 (3H, s), 2.08 (1H, m); 13C-NMR (DMSO-d6, 270 MHz) δ 174.6, 156.6, 137.4, 136.1, 133.7, 130.3, 129.7, 126.3, 125.8, 117.0, 71.8, 64.4, 65.5, 37.6, 32.7, 19.1, 18.9.
キラルＨＰＬＣ（方法Ａ）：８８.３％ｅｅ；保持時間＝１１.１４分（Ｓ）、１４.５７分（Ｒ）。
【０２２２】
工程７
(Ｒ)−(３−アミノ−２−(２−メチルベンジル)プロピル)カルバミン酸アリル
【化９５】
0006502469.tif 000097
窒素下の５０Ｌ容器に水（１４.７Ｌ）およびＭＴＢＥ（１４.７Ｌ）を添加し、これに続いて、(Ｒ)−(３−アミノ−２−(２−メチルベンジル)プロピル)カルバミン酸アリル（１−(Ｒ)）・Ｄ−酒石酸塩（工程６、２９４０ｇ）を添加した。該混合物に１０Ｍ  ＮａＯＨ（１４.７Ｌ）を添加し、温度を３０℃以下に維持した。該混合物を３０分間撹拌し、有機相を分取し、水相をＭＴＢＥ（１４.７Ｌ）で再抽出した。有機相の一部を真空濃縮して（１Ｌ）、外挿収量１７７９ｇ、９５％を得た。
LC/MS: m/z 263.1 [M+H]+
1H NMR (CDCl3, 270 MHz) δ 7.05-7.15 (4H, m), 5.80-5.99 (1H, m), 5.32-5.14 (m, 2H), 4.52 (d, 2H), 3.15-3.38 (m, 2H), 2.55-2.81 (m, 2H), 2.54 (d, 2H), 2.29 (s, 3H), 1.76-1.87 (m, 1H).
【０２２３】
工程８
(Ｓ)−(２−(２−メチルベンジル)プロパン−１,３−ジイル)ジカルバミン酸アリルtert−ブチル
【化９６】
0006502469.tif 000098
窒素下の５０Ｌ容器にＭＴＢＥ（２９.４Ｌ）に溶解した(Ｒ)−(３−アミノ−２−(２−メチルベンジル)プロピル)カルバミン酸アリル（１７４０ｇ）を添加した。これに続いて、トリエチルアミン（９２２ｍＬ）を添加した。該混合物を０℃に冷却し、ＭＴＢＥ（３.４８Ｌ）に溶解したＢＯＣ−無水物（１６００ｍＬ、１５１８ｇ）で処理した。該反応を２０℃に加温し、２時間撹拌した。1Ｈ  ＮＭＲによって該反応は完了したと判定した。該反応に水（８.７Ｌ）を加え、１５分間撹拌した。有機相を分取し、５％クエン酸（８.７Ｌ）およびブライン（８.７Ｌ）で洗浄した後、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空下にて濃縮して、標記化合物（２３２０ｇ、９４％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲは、純度が＞９０％であることを示した。
1H NMR (CDCl3, 270 MHz) δ 7.02-7.10 (m, 4H), 5.82-5.99 (m, 1H), 5.55 (t, 1H), 5.32-5.15 (m, 2H), 5.02 (t, 1H), 4.52 (d, 2H), 3.17-3.30 (m, 2H), 2.95-3.15 (m, 2H), 2.51 (d, 2H), 2.28 (s, 3H0, 1.87-1.95 (m, 1H), 1.43 (s, 9H).
【０２２４】
工程９
(Ｓ)−(３−アミノ−２−(２−メチルベンジル)プロピル)カルバミン酸tert−ブチル
【化９７】
0006502469.tif 000099
窒素下の５０Ｌ容器にＤＣＭ（１２.９Ｌ）およびＭｅＯＨ（１０.３Ｌ）に溶解した(Ｓ)−(２−(２−メチルベンジル)プロパン−１,３−ジイル)ジカルバミン酸アリルtert−ブチル（２３３０ｇ）を添加し、これに続いて、Ｐｄ(ＰＰｈ3)4（１４８.４ｇ）を添加した。該反応混合物を５℃に冷却し、ＮａＢＨ4（７２９ｇ）を２時間にわたって数回に分けて添加した。該反応を２０℃に加温し、２時間撹拌し、該反応混合物を水（４６.６Ｌ）で注意してクエンチし、次に、２０分間撹拌した。有機相を分取し、水相をＤＣＭ（２３.６Ｌ）で再抽出した。合わせた有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空濃縮して、標記化合物（１６７９ｇ、収率１００％（1Ｈ  ＮＭＲによる純度約８０％）を得た。
1H NMR (CDCl3, 270 MHz) δ 7.02-7.15 (m, 4H), 5.22 (br s, 1H), 3.10-3.28 (m, 2H), 2.62-2.80 (m, 2H), 2.52 (d, 2H), 2.29 (s, 3H), 1.75-1.82 (m, 1H), 1.92 (s, 9H), 1.30 (br s, 2H).
【０２２５】
工程１０
(Ｓ)−(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル）カルバミン酸tert−ブチル
【化９８】
0006502469.tif 000100
窒素下の５Ｌ容器に３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボン酸（１００ｇ）、ＨＢＴＵ（２０２.８ｇ）、ＴＨＦ（１２００ｍＬ）およびＤＩＰＥＡ（１１１ｍＬ）を添加した。該反応を室温で２４時間撹拌した。該反応に、ＴＨＦ（１.４９Ｌ）に溶解した(Ｓ)−(３−アミノ−２−(２−メチルベンジル)プロピル)カルバミン酸tert−ブチル（工程９、１４８.６ｇ）を添加した。該反応は、添加の間じゅう１０℃発熱したことに注目すべきである。該反応を室温で２４時間撹拌し、ＬＣＭＳは、付加物が５％残存していることを示した。該混合物を３５℃に４時間加熱した。ＬＣ／ＭＳは、付加物が２％残存していることを示した。該反応をさらに１時間撹拌した後、室温に冷却し、真空濃縮した。残留物を酢酸エチル（１.５Ｌ）およびＭＴＢＥ（１.５Ｌ）に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ3（１Ｌ）、５％クエン酸（７００ｍＬ）およびブライン（７００ｍＬ）で洗浄した。有機物質を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。残留物をＭＴＢＥ（１Ｌ）に溶解し。再濃縮した後、ＭＴＢＥ（５００ｍＬ）およびジエチルエーテル（５００ｍＬ）に溶解し、濾過して、ＤＩＰＥＡ塩を除去した。濾液を濃縮し、分析は、ＤＩＰＥＡ塩が多少残っていることを示した。残留物をＭＴＢＥ（７５０ｍＬ）およびジエチルエーテル（７５０ｍＬ）で再トリチュレートし、再度濾過した。濾液を濃縮して、標記化合物（２２５ｇ、９４％（溶媒およびＴＭＵを含む））を得た。
LC/MS: m/z 349.2 [M+H]+
1H NMR (CDCl3, 270 MHz) δ 7.46 (t, 1H), 7.13 (m, 4H), 5.52 (t, 1H), 5.22 (br s, 2H), 3.62-3.75 (m, 1H), 3.00-3.40 (m, 5H), 2.80 (s, 3H), 2.49-2.75 (m, 2H), 1.95-2.02 (m, 1H), 1.42 (s, 9H).
【０２２６】
工程１１
３,５−ジアミノ−Ｎ−[(２Ｒ)−３−アミノ−２−(２−メチルベンジル)プロピル]−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド
【化９９】
0006502469.tif 000101
窒素下の２０Ｌフランジ型フラスコにジオキサン（６Ｌ）中の(Ｓ)−(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル）カルバミン酸tert−ブチル（工程１０、２２１５ｇ）を添加した。溶解が完了するまで、該混合物を２０分間撹拌した。次に、該反応にジオキサン（１０Ｌ）中４Ｍ  ＨＣｌを添加した。該反応は多量のガスを発生し、温度が３５℃に上昇した後、冷却した。該反応には粘着性の油状沈殿物が見られた。１時間後の反応混合物のＬＣ／ＭＳは、反応が完了したことを示した。上清をデカントし、真空濃縮した。油状の粘着性固体を水（６Ｌ）に溶解し、水（２Ｌ）に溶解した濃縮上清と合わせた。水相をＭＴＢＥ（５Ｌ）で洗浄した。次に、水相を１０Ｍ  ＮａＯＨ（２Ｌ）で塩基性化し、２−Ｍｅ−ＴＨＦ（４×１０Ｌ）で抽出した。有機物質を乾燥し、濾過し、真空濃縮した。次に、残留物をＭＴＢＥ（２×４Ｌ）から濃縮して、残留２−ＭｅＴＨＦを除去した。固体をＭＴＢＥ：ヘプタン（９Ｌ：１.８Ｌ）でトリチュレートし、週末にかけて撹拌した。固体を濾過し、４０℃のオーブンで乾燥させて、標記化合物（１６５７ｇ、９６％）を得た。
1H NMR (CDCl3, 270 MHz) δ 7.60 (t, 1H), 7.08-7.15 (m, 4H), 5.75 (br s, 2H), 5.12 (b s, 2H), 3.38-3.45 (m, 2H), 2.52-2.82 (m, 4H), 2.30 (s, 3H), 1.80-1.98 (m, 2H), 1.20-1.28 (m, 2H).
【０２２７】
工程１２
(Ｒ)−３,５−ジアミノ−Ｎ−(３−アミノ−２−(２−メチルベンジル)プロピル)−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド・(２Ｒ,３Ｓ)−２−ベンゾイル−３−(ベンゾイルオキシ)コハク酸塩
【化１００】
0006502469.tif 000102
窒素下の５Ｌ容器に３,５−ジアミノ−Ｎ−[(２Ｒ)−３−アミノ−２−(２−メチルベンジル)プロピル]−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド（１２７.４ｇ）およびメタノール（８９２ｍＬ）を添加した。全ての固体が溶解してしまうまで、該混合物を徐々に３０℃まで加熱した。該反応を室温に冷却し、メタノール（４５８ｍＬ）中の(＋)−ジベンゾイル−Ｄ−酒石酸（６５.５ｇ）を添加した。該反応を撹拌し、約１２時間後、固体が沈殿し始めた。該反応を週末にかけて撹拌した。該混合物に酢酸イソプロピル（１.５Ｌ）を添加し、４時間撹拌し続けた。次に、沈殿物を濾過し、酢酸イソプロピル（２×１Ｌ）で洗浄した。次に、固体を４０℃のオーブンで３日間乾燥した。塩基／二酸の化学量論比＝２：１の合計１４７.５ｇ（７４％）を得た。
1H NMR (CDCl3, 270 MHz): δ 7.60 (t, 1H), 7.08-7.15 (m, 4H), 5.75 (br s, 2H), 5.12 (b s, 2H), 3.38-3.45 (m, 2H), 2.52-2.82 (m, 4H), 2.30 (s, 3H), 1.80-1.98 (m, 2H), 1.20-1.28 (m, 2H).
キラルＨＰＬＣ（方法Ａ)：９８.７％ｅｅ、Ｒｔ＝１１.９３分(Ｒ)、１４.２４分(Ｓ)。
【０２２８】
工程１３
(Ｒ)−３,５−ジアミノ−Ｎ−(３−アミノ−２−(２−メチルベンジル)プロピル)−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド
【化１０１】
0006502469.tif 000103
(Ｒ)−３,５−ジアミノ−Ｎ−(３−アミノ−２−(２−メチルベンジル)プロピル)−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド・(２Ｒ,３Ｓ)−２−ベンゾイル−３−(ベンゾイルオキシ)コハク酸塩（２０ｇ、３８.４６ｍｍｏｌ）を２−メチル−ＴＨＦ（２００ｍＬ）および水（２００ｍＬ）に溶解し、氷浴で冷却した。１Ｍ水酸化ナトリウム（４２.３ｍＬ、４２.３１ｍｍｏｌ）を徐々に添加し、次に、全ての物質が溶解してしまうまで、該混合物を４０℃で撹拌した。該混合物を室温に冷却し、相を分取した。水相を２−メチル−ＴＨＦ（２×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、フェーズセパレーターで乾燥させ、真空下にて蒸発させて、(Ｒ)−３,５−ジアミノ−Ｎ−(３−アミノ−２−(２−メチルベンジル)プロピル)−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド（１３.３ｇ、９９％）を淡い色の固体として得た。
LC/MS: m/z: 349.3 [M+H]+.
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1.50 (bs, 2H), 1.76 - 1.87 (m, 1H), 2.26 (s, 3H), 2.4 - 2.49 (m, 2H), 2.52 - 2.62 (m, 2H), 3.18 - 3.28 (m, 2H), 6.95 (bs, 2H), 7.04 - 7.17 (m, 4H), 8.14 (t, 1H).
キラルＨＰＬＣ（方法Ｂ)：９９.３％ｅｅ、Ｒｔ＝１１.５５分(Ｓ)、１３.２８分(Ｒ)。
[α]20D：＋１１.８（ｃ１.０，ＭｅＣＮ）。
【０２２９】
中間体Ｂ
(Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル(ピペリジン−４−イルメチル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル
【化１０２】
0006502469.tif 000104
【０２３０】
工程１：
(Ｒ)−４−((３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピルアミノ)メチル)ピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチル
【化１０３】
0006502469.tif 000105
５０ｍＬ丸底フラスコに４−ホルミルピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチル（１２２ｍｇ、０.５７ｍｍｏｌ、１.００当量）および３,５−ジアミノ−Ｎ−[(２Ｒ)−３−アミノ−２−[(２−メチルフェニル)メチル]プロピル]−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド（中間体Ａ、２００ｍｇ、０.５７ｍｍｏｌ、１.０当量）のジクロロメタン（５ｍＬ）中混合物を入れ、該混合物を１時間撹拌した。次に、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（４８６ｍｇ、２.２９ｍｍｏｌ、４.００当量）を添加した。得られた溶液を室温で一夜撹拌した。得られた混合物を水３×１０ｍＬで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空濃縮した。これにより、標記化合物２５０ｍｇ（８０％）を黄色固体として得た。
LC/MS: m/z: 546 [M+H]+.
【０２３１】
工程２：
(Ｓ)−４−(((((９Ｈ−フルオレン−９−イル)メトキシ)カルボニル)(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)アミノ)メチル)ピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチル
【化１０４】
0006502469.tif 000106
ジオキサン（２.０ｍＬ）中のＦＭＯＣ−クロリド（１９ｍｇ、０.０７ｍｍｏｌ、１.００当量）を(Ｒ)−４−((３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピルアミノ)メチル)ピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチル（工程１、４０ｍｇ、０.０７ｍｍｏｌ、１.０当量）およびＮａ2ＣＯ3（１２ｍｇ、０.１１ｍｍｏｌ、１.５当量）の水／ジオキサン（１：２、３ｍＬ）中混合物に滴下した。得られた溶液を室温で２時間撹拌し、酢酸エチル３×５ｍＬで抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を真空除去した後、標記化合物４２ｍｇ（７５％）を黄色固体として得た。
LC/MS: m/z: 768 [M+H]+
【０２３２】
工程３：
(Ｓ)−３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル(ピペリジン−４−イルメチル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル
【化１０５】
0006502469.tif 000107
２５ｍＬ丸底フラスコに(Ｓ)−４−(((((９Ｈ−フルオレン−９−イル)メトキシ)カルボニル)(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)アミノ)メチル)ピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチル（工程２、２０ｍｇ、０.０３ｍｍｏｌ、１.０当量）のＨＣｌ／ＭｅＯＨ（４Ｍ、３ｍＬ）中溶液を入れた。得られた溶液を室温で１時間撹拌した。得られた混合物を真空濃縮した。これにより、Ｎ−[(２Ｓ)−３−[(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−イル)ホルムアミド]−２−[(２−メチルフェニル)メチル]プロピル]−Ｎ−(ピペリジン−４−イルメチル)カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル１５ｍｇ（８６％）を黄色固体としてを得た。
LC/MS: m/z: 668 [M+H]+
【０２３３】
中間体Ｃ
(２−アミノエチル)(ヘキシル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル・塩酸塩
【化１０６】
0006502469.tif 000108
【０２３４】
工程１
(２−(ベンジル(ヘキシル)アミノ)エチル)カルバミン酸tert−ブチル
【化１０７】
0006502469.tif 000109
Ｎ−ベンジルヘキサン−１−アミン（２.６９ｇ、１４.１ｍｍｏｌ）、(２−オキソエチル)カルバミン酸tert−ブチル（４.４８ｇ、２８.１ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２.４６ｍＬ、１４.１ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（２０ｍＬ）に溶解し、室温で４５分間撹拌した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム（１.７７ｇ、２８.１ｍｍｏｌ）および酢酸（０.８０６ｍＬ、１４.１ｍｍｏｌ）を添加し、１８時間撹拌し続けた。該反応を８％ＮａＨＣＯ3（ａｑ）の添加によってクエンチし、室温で１時間撹拌した。溶媒を真空濃縮した。残留物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＮａ2ＳＯ4（ｓ）で乾燥させ、濾過し、真空下にて蒸発させた。残留物を２つのＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）  ＫＰ−ＳＩＬ  １００ｇカラムによる自動フラッシュクロマトグラフィーによって精製した。移動相として、１２ＣＶにわたってヘプタン中５〜５０％ＥｔＯＡ勾配液を使用した。該生成物を回収し、真空下にて蒸発させて、(２−(ベンジル(ヘキシル)アミノ)エチル)カルバミン酸tert−ブチル（３.１９ｇ、６８％）を無色の油として得た。
LC/MS: m/z: 335.6 [M+H]+
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 0.84 - 0.92 (m, 3H), 1.19 - 1.35 (m, 6H), 1.38 - 1.66 (m, 11H), 2.43 (t, 2H), 2.52 (t, 2H), 3.09 - 3.21 (m, 2H), 3.56 (s, 2H), 4.83 - 4.93 (m, 1H), 7.22 - 7.37 (m, 5H).
【０２３５】
工程２
(２−(ヘキシルアミノ)エチル)カルバミン酸tert−ブチル
【化１０８】
0006502469.tif 000110
(２−(ベンジル(ヘキシル)アミノ)エチル)カルバミン酸tert−ブチル（３.１９ｇ、９.５４ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（２５ｍＬ）に溶解し、２０％Ｐｄ(ＯＨ)2／Ｃ（０.２０１ｇ、０.２９ｍｍｏｌ）を添加した。該反応をＢｕｃｈｉ水添装置にて４バールで室温にてで１８時間水素添加した。反応を停止した。さらに２０％Ｐｄ(ＯＨ)2／Ｃ（２００ｍｇ、０.２８ｍｍｏｌ）を添加し、水素添加を６時間続け、水素添加を停止した。結晶を濾過し、ＭｅＯＨで洗浄し、濾液を真空濃縮した。残留物をＭｅＯＨ（１５ｍＬ）に溶解し、２０％Ｐｄ(ＯＨ)2／Ｃ（２５０ｍｇ、０.３６ｍｍｏｌ）を添加し、水素添加を４バールにて室温で１６時間続けた。触媒を濾過し、ＭｅＯＨで洗浄し、濾液を真空下にて蒸発させた。該反応をもう一度ＭｅＯＨに溶解し、２０％Ｐｄ(ＯＨ)2／Ｃ（２５０ｍｇ、０.３６）を添加し、水素添加を３日間続けた。触媒を濾過し、ＭｅＯＨで洗浄し、濾液を真空下にて蒸発させて、(２−(ヘキシルアミノ)エチル)カルバミン酸tert−ブチル（２.３８ｇ、１０２％）を無色の油として得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 0.89 (t, 3H), 1.22 - 1.36 (m, 6H), 1.41 - 1.53 (m, 11H), 2.61 (t, 2H), 2.75 (t, 2H), 3.19 - 3.28 (m, 2H), 4.97 (bs, 1H).
【０２３６】
工程３
(２−((tert−ブトキシカルボニル)アミノ)エチル)(ヘキシル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル
【化１０９】
0006502469.tif 000111
(２−(ヘキシルアミノ)エチル)カルバミン酸tert−ブチル（２.３８ｇ、９.７４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４０ｍＬ）中氷浴冷却溶液にＤＩＰＥＡ（１.７９ｍＬ、１０.２ｍｍｏｌ）およびクロロギ酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル（２.６５ｇ、１０.２ｍｍｏｌ）を添加した。該反応を冷却しながら１０分間撹拌し、次に、室温で１時間撹拌した。水（２０ｍＬ）を添加し、振盪し、相を分取した。水相をＤＣＭ（２×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をフェーズセパレーターで乾燥させ、真空下にて蒸発させた。残留物をＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）  ＫＰ−ＳＩＬ  １００ｇカラムによる自動フラッシュクロマトグラフィーによって精製した。移動相として、９ＣＶにわたってヘプタン中５〜３０％ＥｔＯＡｃ勾配液を使用し、次に３ＣＶにわたってヘプタン中３０％ＥｔＯＡｃを使用した。波長２６４ｎｍを用いて該生成物を回収した。回収した画分を真空下にて蒸発させて、(２−((tert−ブトキシカルボニル)アミノ)エチル)(ヘキシル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル（３.７０ｇ、８１％）を無色の油として得た。
LC/MS: m/z: 467.4 [M+H]+
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 0.89 (t, 3H), 1.06 - 1.36 (m, 8H), 1.43 (s, 9H), 2.78 - 2.87 (m, 1H), 2.95 - 3.08 (m, 2H), 3.11 - 3.36 (m, 3H), 4.18 - 4.26 (m, 1H), 4.49 - 4.63 (m, 2H), 4.89 (bs, 1H), 7.3 - 7.36 (m, 2H), 7.41 (t, 2H), 7.59 (d, 2H), 7.77 (d, 2H).
【０２３７】
工程４
(２−アミノエチル)(ヘキシル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル・塩酸塩
【化１１０】
0006502469.tif 000112
ＭｅＯＨ（１０ｍＬ、２４７ｍｍｏｌ）を入れた氷浴冷却バイアルに塩化アセチル（２.８４ｍＬ、４０.０ｍｍｏｌ）を滴下し、５分間撹拌した。次に、この溶液を(２−((tert−ブトキシカルボニル)アミノ)エチル)(ヘキシル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル（３.７ｇ、７.９３ｍｍｏｌ）に添加し、該反応を室温で２.５時間撹拌した。溶媒を真空濃縮して、(２−アミノエチル)(ヘキシル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル・塩酸塩（２.９２ｇ、９１％）を白色固体として得た。
LC/MS: m/z: 367.3 [M+H]+
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 0.82 - 0.97 (m, 4H), 0.99 - 1.51 (m, 7H), 2.68 - 2.88 (m, 3H), 3.23 - 3.39 (m, 3H), 4.23 - 4.4 (m, 2H), 4.52 (d, 1H), 7.29 - 7.37 (m, 2H), 7.37 - 7.46 (m, 2H), 7.64 (d, 2H), 7.83 - 8.09 (m, 5H).
【０２３８】
中間体Ｄ
(Ｓ)−(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシルアミノ)エチル)カルバモイル)フェネチル)カルバミン酸tert−ブチル
【化１１１】
0006502469.tif 000113
【０２３９】
工程１
４−(２−ヒドロキシエチル)安息香酸メチル
【化１１２】
0006502469.tif 000114
４−(２−ヒドロキシエチル)安息香酸（２.４１ｇ、１４.５ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（５ｍＬ）に溶解し、Ｈ2ＳＯ4（０.０６ｍＬ、１.１３ｍｍｏｌ）を添加した。該反応をマイクロ波にて１２０℃で１時間加熱し、次に、真空下にて蒸発させた。残留物をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）に溶解し、８％ＮａＨＣＯ3（ａｑ）（１５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、フェーズセパレーターで乾燥させ、真空下にて蒸発させて、４−(２−ヒドロキシエチル)安息香酸メチル（２.４１ｇ、９２％）を淡い色の油として得た。
LC/MS: m/z: 181.0 [M+H]+
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 2.94 (t, 2H), 3.88 - 3.94 (m, 5H), 7.32 (d, 2H), 7.97 - 8.02 (m, 2H)
【０２４０】
工程２
４−(２−オキソエチル)安息香酸メチル
【化１１３】
0006502469.tif 000115
４−(２−ヒドロキシエチル)安息香酸メチル（２.４１ｇ、１３.３７ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶解し、デスマーチンペルヨージナン（６.２４ｇ、１４.７ｍｍｏｌ）を添加した。該反応を室温で２時間撹拌し、次に、１５％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３／ＮａＨＣＯ3  ３：２（ａｑ）（５０ｍＬ）の添加によりクエンチし、３０分間強く撹拌した。相を分取し、水相をＤＣＭ（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をフェーズセパレーターで乾燥させ、真空下にて蒸発させた。残留物をＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）  ＫＰ−ＳＩＬ  １００ｇカラムにて自動フラッシュクロマトグラフィーによって精製した。移動相として、９ＣＶにわたってヘプタン中５〜４０％ＥｔＯＡｃ勾配液を使用し、次に、３ＣＶにわたってヘプタン中５０％ＥｔＯＡｃを使用した。波長２４５ｎｍを用いて該生成物を回収した。該生成物を回収し、真空下にて蒸発させて、４−(２−オキソエチル)安息香酸メチル（０.８８０ｇ、３６.９％）を黄色固体として得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 3.78 (d, 2H), 3.93 (s, 3H), 7.29 - 7.34 (m, 2H), 8.03 - 8.09 (m, 2H), 9.79 (t, 1H).
【０２４１】
工程３
(Ｓ)−４−(２−((tert−ブトキシカルボニル)(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)アミノ)エチル)安息香酸メチル
【化１１４】
0006502469.tif 000116
(Ｒ)−３,５−ジアミノ−Ｎ−(３−アミノ−２−(２−メチルベンジル)プロピル)−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド（中間体Ａ、２.００ｇ、５.５６ｍｍｏｌ）、４−(２−オキソエチル)安息香酸メチル（１.０９ｇ、６.１２ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０.９７１ｍＬ、５.５６ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（４ｍＬ）に溶解し、室温で３０分間撹拌した。次に、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（１.０５ｇ、１６.７ｍｍｏｌ）および酢酸（０.３１８ｍＬ、５.５６ｍｍｏｌ）を添加し、該反応を室温で３時間撹拌した。８％ＮａＨＣＯ3（ａｑ）を添加して該反応をクエンチした。該反応をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、３０分間撹拌し、相を分取した。水相をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をブライン（５０ｍＬ）で洗浄した、フェーズセパレーターで乾燥させ、真空下にて蒸発させた。残留物をＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶解し、ＢＯＣ2Ｏ（１.２９０ｍＬ、５.５６ｍｍｏｌ）を添加した。該混合物を室温で５.５時間撹拌し、次に、真空濃縮した。残留物をＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）  ＫＰ−ＳＩＬ  １００ｇカラムにて自動フラッシュクロマトグラフィーによって精製した。移動相として、１０ＣＶにわたってヘプタン中１０〜８０％ＥｔＯＡｃ勾配液を使用した。波長２７０ｎｍを用いて該生成物を回収した。生成物ピークを回収し、真空下にて蒸発させて、(Ｓ)−４−(２−((tert−ブトキシカルボニル)(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)アミノ)エチル)安息香酸メチル（１.８４ｇ、５４％）を淡い色の固体として得た。
LC/MS: m/z: 611.4 [M+H]+
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1.36 (d, 9H), 2.15 - 2.26 (m, 4H), 2.45 - 2.49 (m, 2H), 2.75 (t, 2H), 2.93 (dd, 1H), 3.01 - 3.4 (m, 5H), 3.84 (s, 3H), 6.97 (bs, 2H), 7.05 - 7.17 (m, 4H), 7.21 (d, 2H), 7.82 (d, 2H), 7.85 - 7.94 (m, 1H).
【０２４２】
工程４
(Ｓ)−４−(２−((tert−ブトキシカルボニル)(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)アミノ)エチル)安息香酸
【化１１５】
0006502469.tif 000117
(Ｓ)−４−(２−((tert−ブトキシカルボニル)(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)アミノ)エチル)安息香酸メチル（１.８４ｇ、２.５６ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（２０ｍＬ）に溶解し、水酸化ナトリウム（３.３７ｍＬ、１２.８ｍｍｏｌ）を添加した。該反応を室温で３日間撹拌した。次に、溶媒（ＭｅＯＨ）を真空濃縮した。水（５０ｍＬ）およびＭｅＴＨＦ（５０ｍＬ）を添加し、３Ｍ  ＨＣｌ（ａｑ）でｐＨを約２に調整した。相を分取し、水相をＬ−ＭｅＴＨＦ（５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＮａ2ＳＯ4（ｓ）で乾燥させ、濾過し、真空下にて蒸発させて、(Ｓ)−４−(２−((tert−ブトキシカルボニル)(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)アミノ)エチル)安息香酸（１.５３ｇ、１００％）を淡い色の固体として得た。
LC/MS: m/z: 597.4 [M+H]+
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1.33 (s, 9H), 2.21 (d, 4H), 2.38 - 2.49 (m, 2H), 2.73 (t, 2H), 2.83 - 3.43 (m, 6H), 6.84 - 7.26 (m, 8H), 7.78 - 7.98 (m, 3H), 12.80 (bs, 1H).
【０２４３】
工程５
(Ｓ)−４−((２−((((９Ｈ−フルオレン−９−イル)メトキシ)カルボニル)(ヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)フェネチル(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)カルバミン酸tert−ブチル
【化１１６】
0006502469.tif 000118
(Ｓ)−４−(２−((tert−ブトキシカルボニル)(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)アミノ)エチル)安息香酸（１.２４ｇ、１.７７ｍｍｏｌ）、テトラフルオロホウ酸２−(１Ｈ−ベンゾ[ｄ][１,２,３]トリアゾール−１−イル)−１,１,３,３−テトラメチルイソウロニウム（０.６２３ｇ、１.９４ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１.５４ｍＬ、８.８３ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（３０ｍＬ）に溶解し、室温で５分間撹拌した後、(２−アミノエチル)(ヘキシル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル・塩酸塩（中間体Ｃ、０.９５ｇ、２.１２ｍｍｏｌ）を添加した。該反応を２.５時間撹拌した。該反応を８％ＮａＨＣＯ3（ａｑ）（１５０ｍＬ）で洗浄した。水相をＤＣＭ（１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をフェーズセパレーターで乾燥させ、真空下にて蒸発させた。残留物をＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）  ＫＰ−ＳＩＬ  １００ｇカラムにて自動フラッシュクロマトグラフィーによって精製した。移動相として、９ＣＶにわたってヘプタン中２０〜８０％ＥｔＯＡｃ勾配液を使用し、次に、３ＣＶにわたってヘプタン中８０％ＥｔＯＡｃを使用した。該生成物を回収し、真空下にて蒸発させて、(Ｓ)−４−((２−((((９Ｈ−フルオレン−９−イル)メトキシ)カルボニル)(ヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)フェネチル(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)カルバミン酸tert−ブチル（１.５６ｇ、９３％）を淡い色の固体として得た。
LC/MS: m/z: 945.6 [M+H]+
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0.82 (t, 3H), 0.87 - 0.97 (m, 2H), 1 - 1.27 (m, 5H), 1.33 (s, 9H), 1.38 - 1.47 (m, 1H), 2.15 - 2.27 (m, 4H), 2.45 (dd, 1H), 2.69 (s, 2H), 2.81 - 2.89 (m, 1H), 2.9 - 3 (m, 1H), 3.01 - 3.41 (m, 11H), 4.15 - 4.27 (m, 2H), 4.48 (d, 1H), 6.96 (bs, 2H), 7.05 - 7.18 (m, 6H), 7.30 (t, 2H), 7.39 (t, 2H), 7.55 - 7.65 (m, 2H), 7.71 (dd, 2H), 7.8 - 7.97 (m, 3H), 8.37 - 8.51 (m, 1H). 
【０２４４】
工程６
(Ｓ)−(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシルアミノ)エチル)カルバモイル)フェネチル)カルバミン酸tert−ブチル
【化１１７】
0006502469.tif 000119
(Ｓ)−４−((２−((((９Ｈ−フルオレン−９−イル)メトキシ)カルボニル)(ヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)フェネチル(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)カルバミン酸tert−ブチル（１.５９ｇ、１.６８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１５ｍＬ）に溶解し、ピペリジン（１.６７ｍＬ、１６.８ｍｍｏｌ）を添加した。該反応を室温で３時間撹拌し、次に、真空濃縮した。残留物をＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）  ＫＰ−ＳＩＬ  １００ｇカラムにて自動フラッシュクロマトグラフィーによって精製した。移動相として、５ＣＶにわたってＤＣＭ中４〜８％（ＭｅＯＨ中２Ｍアンモニア）勾配液を使用し、次に、１０ＣＶにわたってＤＣＭ中８％（ＭｅＯＨ中２Ｍアンモニア）を使用した。該生成物を回収し、真空下にて蒸発させて、(Ｓ)−(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシルアミノ)エチル)カルバモイル)フェネチル)カルバミン酸tert−ブチル（１.０３ｇ、８５％）を淡い色の固体として得た。
LC/MS: m/z: 723.6 [M+H]+
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0.84 (t, 3H), 1.19 - 1.44 (m, 17H), 2.15 - 2.29 (m, 4H), 2.45 (dd, 1H), 2.54 (t, 2H), 2.65 - 2.75 (m, 4H), 2.94 (dd, 1H), 3.02 - 3.18 (m, 2H), 3.18 - 3.3 (m, 3H), 3.3 - 3.4 (m, 4H), 6.97 (bs, 2H), 7.05 - 7.2 (m, 7H), 7.73 (d, 2H), 7.79 - 7.97 (m, 1H), 8.32 (t, 1H).
【０２４５】
中間体Ｅ
(Ｓ)−(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシルアミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)カルバミン酸tert−ブチル
【化１１８】
0006502469.tif 000120
【０２４６】
工程１
(Ｓ)−４−(((tert−ブトキシカルボニル)(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)アミノ)メチル)安息香酸メチル
【化１１９】
0006502469.tif 000121
(Ｒ)−３,５−ジアミノ−Ｎ−(３−アミノ−２−(２−メチルベンジル)プロピル)−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド（中間体Ａ、２.１７ｇ、６.２２ｍｍｏｌ）、４−ホルミル安息香酸メチル（１.１２ｇ、６.８４ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１.０９ｍＬ、６.２２ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１５ｍＬ）に溶解し、室温で１時間撹拌した。次に、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（０.７８２ｇ、１２.４ｍｍｏｌ）および酢酸（０.３９２ｍＬ、６.８４ｍｍｏｌ）を添加し、該反応を室温で３時間撹拌した。ＬＣＭＳ分析によるモニターリングにより変換が完了していないことが示されたので、４−ホルミル安息香酸メチル（２００ｍｇ、１.２２ｍｍｏｌ）を添加し、３時間撹拌し続けた。次に、再度、４−ホルミル安息香酸メチル（２００ｍｇ、１.２２ｍｍｏｌ）およびシアノ水素化ホウ素ナトリウム（２００ｍｇ、３.１８ｍｍｏｌ）を添加し、１８時間撹拌し続けた。８％ＮａＨＣＯ3（ａｑ）を添加して該反応をクエンチした。溶媒を真空濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）および８％ＮａＨＣＯ3（ａｑ）２５０ｍＬ）に溶解し、振盪し、相を分取した。水相をＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＮａ2ＳＯ4（ｓ）で乾燥させ、濾過し、真空下にて蒸発させた。残留物をＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶解し、ＢＯＣ2Ｏ（１.６３ｇ、７.４６ｍｍｏｌ）を添加し、該反応を室温で２時間撹拌した。該混合物を真空濃縮し、次に、Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）  ＫＰ−ＳＩＬ  １００ｇカラムにて自動フラッシュクロマトグラフィーによって精製した。移動相として、１２ＣＶにわたってヘプタン中２０〜８０％ＥｔＯＡｃ勾配液を使用した。波長２６５ｎｍを用いて該生成物を回収した。生成物ピークを真空下にて蒸発させて、(Ｓ)−４−(((tert−ブトキシカルボニル)(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)アミノ)メチル)安息香酸メチル（２.８５ｇ、７７％）を固体として得た。
LC/MS: m/z: 597.5 [M+H]+
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1.36 (d, 9H), 2.21 (s, 3H), 2.24 - 2.38 (m, 1H), 2.45 - 2.57 (m, 2H), 2.95 - 3.3 (m, 4H), 3.83 (s, 3H), 4.33 - 4.51 (m, 2H), 6.97 (bs, 2H), 7.04 - 7.17 (m, 4H), 7.22 (d, 2H), 7.76 - 7.96 (m, 3H).
【０２４７】
工程２
(Ｓ)−４−(((tert−ブトキシカルボニル)(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)アミノ)メチル)安息香酸
【化１２０】
0006502469.tif 000122
(Ｓ)−４−(((tert−ブトキシカルボニル)(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)アミノ)メチル)安息香酸メチル（２.８５ｇ、４.７７ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（４０ｍＬ）に溶解し、３.８Ｍ水酸化ナトリウム（６.２８ｍＬ、２３.９ｍｍｏｌ）を添加した。該反応を室温で２４時間撹拌し、次に、溶媒（ＭｅＯＨ）を真空濃縮した。水（７５ｍＬ）およびＭｅＴＨＦ（７５ｍＬ）を添加し、３Ｍ  ＨＣｌ（ａｑ）でｐＨを約２に調整した。相を分取し、水相をＭｅＴＨＦ（７５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をフェーズセパレーターで乾燥させ、真空下にて蒸発させて、(Ｓ)−４−(((tert−ブトキシカルボニル)(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)アミノ)メチル)安息香酸（２.７５ｇ、９９％）を固体として得た。
LC/MS: m/z: 583.4 [M+H]+
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1.32 - 1.42 (m, 9H), 2.20 (s, 3H), 2.24 - 2.38 (m, 1H), 2.5 - 2.55 (m, 2H), 2.92 - 3.36 (m, 4H), 4.27 - 4.54 (m, 2H), 6.97 (bs, 2H), 7.03 - 7.17 (m, 4H), 7.19 (d, 2H), 7.78 - 8 (m, 3H), 12.85 (bs, 1H).
【０２４８】
工程３
(Ｓ)−４−((２−((((９Ｈ−フルオレン−９−イル)メトキシ)カルボニル)(ヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)カルバミン酸tert−ブチル
【化１２１】
0006502469.tif 000123
(Ｓ)−４−(((tert−ブトキシカルボニル)(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)アミノ)メチル)安息香酸（１.６１ｇ、２.７６ｍｍｏｌ）、テトラフルオロホウ酸２−(１Ｈ−ベンゾ[ｄ][１,２,３]トリアゾール−１−イル)−１,１,３,３−テトラメチルイソウロニウム（０.９７５ｇ、３.０４ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２.４１ｍＬ、１３.８ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１５０ｍＬ）に溶解し、室温で５分間撹拌した後、(２−アミノエチル)(ヘキシル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル・塩酸塩（中間体Ｃ、１.４８ｇ、３.３１ｍｍｏｌ）を添加した。該反応を１.５時間撹拌した。該反応を８％ＮａＨＣＯ3（ａｑ）（１００ｍＬ）で洗浄した。水相をＤＣＭ（１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をフェーズセパレーターで乾燥させ、真空下にて蒸発させた。残留物をＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）  ＫＰ−ＳＩＬ  １００ｇカラムにて自動フラッシュクロマトグラフィーによって精製した。移動相として、１２ＣＶにわたってヘプタン中２０〜８０％ＥｔＯＡｃ勾配液を使用し、次に、３ＣＶにわたってヘプタン中８０％ＥｔＯＡｃを使用した。該生成物を回収し、真空下にて蒸発させて、(Ｓ)−４−((２−((((９Ｈ−フルオレン−９−イル)メトキシ)カルボニル)(ヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)カルバミン酸tert−ブチル（２.３８ｇ、９３％）を淡い色の固体として得た。
LC/MS: m/z: 931.5 [M+H]+
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0.82 (t, 3H), 0.86 - 0.96 (m, 1H), 0.99 - 1.27 (m, 6H), 1.27 - 1.48 (m, 10H), 2.19 (s, 3H), 2.23 - 2.35 (m, 1H), 2.45 - 2.54 (m, 2H), 2.8 - 2.9 (m, 1H), 2.9 - 3.05 (m, 1H), 3.05 - 3.38 (m, 8H), 4.16 - 4.32 (m, 3H), 4.39 - 4.56 (m, 2H), 6.97 (bs, 2H), 7.02 - 7.18 (m, 6H), 7.30 (t, 2H), 7.39 (t, 2H), 7.60 (t, 2H), 7.64 - 7.76 (m, 2H), 7.78 - 7.99 (m, 3H), 8.37 - 8.52 (m, 1H).
【０２４９】
工程４
(Ｓ)−(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシルアミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)カルバミン酸tert−ブチル
【化１２２】
0006502469.tif 000124
(Ｓ)−４−((２−((((９Ｈ−フルオレン−９−イル)メトキシ)カルボニル)(ヘキシル)アミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)カルバミン酸tert−ブチル（２.３８ｇ、２.５５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２５ｍＬ）に溶解し、ピペリジン（２.５３ｍＬ、２５.６ｍｍｏｌ）を添加した。該反応を室温で２０時間撹拌した。溶媒を真空下にて蒸発させた。残留物をＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）  ＫＰ−ＳＩＬ  １００ｇカラムにて自動フラッシュクロマトグラフィーによって精製した。移動相として、９ＣＶにわたってＤＣＭ中２.５〜８％（ＭｅＯＨ中２Ｍアンモニア）勾配液を使用し、３ＣＶにわたってＤＣＭ中８％（ＭｅＯＨ中２Ｍアンモニア）を使用した。該生成物を回収し、真空下にて蒸発させて、(Ｓ)−(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシルアミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)カルバミン酸tert−ブチル（１.６０ｇ、８８％）を淡い色の固体として得た。
LC/MS: m/z: 709.5 [M+H]+
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0.84 (t, 3H), 1.17 - 1.31 (m, 6H), 1.31 - 1.45 (m, 11H), 2.20 (s, 3H), 2.24 - 2.37 (m, 1H), 2.51 - 2.57 (m, 3H), 2.68 (t, 2H), 2.91 - 3.06 (m, 1H), 3.06 - 3.4 (m, 6H), 4.23 - 4.36 (m, 1H), 4.4 - 4.53 (m, 1H), 6.97 (bs, 2H), 7.04 - 7.19 (m, 6H), 7.72 (d, 2H), 7.79 - 7.98 (m, 1H), 8.28 - 8.35 (m, 1H).
【０２５０】
中間体Ｆ
(３−(４−ホルミルピペリジン−１−イル)−３−オキソプロピル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル
【化１２３】
0006502469.tif 000125
【０２５１】
工程１：
３−(４−(ヒドロキシメチル)ピペリジン−１−イル)−３−オキソプロピルカルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル
【化１２４】
0006502469.tif 000126
ピペリジン−４−イルメタノール（２００ｍｇ、１.７４ｍｍｏｌ）、３−(((９Ｈ−フルオレン−９−イル)メトキシ)カルボニルアミノ)プロパン酸（５４１ｍｇ、１.７４ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（６６０ｍｇ、１.７４ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（５ｍＬ）中撹拌溶液にＤＩＰＥＡ（０.９１０ｍＬ、５.２１ｍｍｏｌ）を添加した。黄色の混合物を周囲温度で一夜撹拌した。該反応混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で希釈し、１５％ＮａＣｌ水溶液（５０ｍＬ）および３０％ＮａＣｌ水溶液（５０ｍＬ）で洗浄した。溶媒を蒸発させ、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。凍結乾燥後、残留物をＤＣＭに再溶解し、ヘプタンを添加した。蒸発により標記化合物を無色の固体として得た（３７８ｍｇ、５３％）。
LC/MS: m/z: 409 [M+H]+
1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 0.88 - 1.09 (m, 2H), 1.51 - 1.73 (m, 3H), 2.44 (t, 2H), 2.47 - 2.52 (m, 1H + DMSO peak), 2.93 (t, 1H), 3.18 (dd, 2H), 3.23 (d, 2H), 3.80 (d, 1H), 4.20 (t, 1H), 4.29 (d, 2H), 4.37 (d, 1H), 7.21 (t, 1H), 7.33 (dt, 2H), 7.41 (t, 2H), 7.68 (d, 2H), 7.89 (d, 2H).
【０２５２】
工程２
(３−(４−ホルミルピペリジン−１−イル)−３−オキソプロピル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル
【化１２５】
0006502469.tif 000127
３−(４−(ヒドロキシメチル)ピペリジン−１−イル)−３−オキソプロピルカルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル（３６２ｍｇ、０.８９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍＬ）中溶液に固体デスマーチンペルヨージナン（４１３ｍｇ、０.９７ｍｍｏｌ）を添加した。得られた懸濁液を周囲温度で２.５時間撹拌した。該反応混合物に１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３（３ｍＬ）、１０％ＮａＨＣＯ3（３ｍＬ）およびＤＣＭ（２ｍＬ）を添加し、該混合物を１０分間強く撹拌し、沈殿させた。層を分取し、不溶塩を含有する水相をＤＣＭで繰り返し抽出した。合わせた有機相をＭｇＳＯ4で乾燥させ、濾過し、溶媒を蒸発させて、粗生成物（４４０ｍｇ）を得、さらなる精製を行わずに使用した。
LC/MS: m/z: 407 [M+H]+
【０２５３】
中間体Ｇ
(Ｒ)−(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシルアミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)カルバミン酸tert−ブチル
【化１２６】
0006502469.tif 000128
【０２５４】
工程１
(Ｒ)−(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)カルバミン酸アリル
【化１２７】
0006502469.tif 000129
(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−イル)(１Ｈ−イミダゾール−１−イル)メタノン、(８５８ｍｇ、３.５９ｍｍｏｌ）および(Ｒ)−(３−アミノ−２−(２−メチルベンジル)プロピル)カルバミン酸アリル（中間体Ａ、工程５）（９９０ｍｇ、３.７７ｍｍｏｌ）をＮＭＰ（１５ｍＬ）に懸濁し、１００℃に４時間加熱した。該反応混合物を室温に冷却した。ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）および水（５０ｍＬ）を添加し、振盪し、相を分取した。水相をＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を０.１Ｍ  ＨＣｌ（ａｑ）（５０ｍＬ）、水（２×５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、フェーズセパレーターで乾燥させ、真空下にて蒸発させた。残留物をＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）  ＫＰ−ＳＩＬ  １００ｇカラムにて自動フラッシュクロマトグラフィーによって精製した。移動相として、９ＣＶにわたってヘプタン中２０〜８０％ＥｔＯＡｃ勾配液を使用した。波長２７０ｎｍを用いて該生成物を回収した。回収した画分をプールし、真空下にて蒸発させて、(Ｒ)−(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)カルバミン酸アリル（７１４ｍｇ、４５.９％）を淡い色の固体として得た。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1.9 - 2.02 (m, 1H), 2.23 (s, 3H), 2.41 - 2.55 (m, 2H), 2.91 - 3.09 (m, 2H), 3.12 - 3.23 (m, 2H), 4.48 (d, 2H), 5.17 (d, 1H), 5.24 - 5.32 (m, 1H), 5.85 - 5.96 (m, 1H), 6.97 (bs, 2H), 7.04 - 7.15 (m, 3H), 7.21 - 7.25 (m, 1H), 7.28 (t, 1H), 8.00 (t, 1H).
LC/MS: m/z 433.3 [M+H]+
【０２５５】
工程２
(Ｓ)−３,５−ジアミノ−Ｎ−(３−アミノ−２−(２−メチルベンジル)プロピル)−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド
【化１２８】
0006502469.tif 000130
(Ｒ)−(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)カルバミン酸アリル（６９４ｍｇ、１.６０ｍｍｏｌ）、１,３−ジメチルピリミジン−２,４,６(１Ｈ,３Ｈ,５Ｈ)−トリオン（６８８ｍｇ、４.４１ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム(ＩＩ)（１４.４ｍｇ、０.０６ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（５０.５ｍｇ、０.１９ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（７ｍＬ）に溶解し、３５℃に１.５時間加熱した。懸濁液が形成された。ＤＣＭ（５０ｍＬ）および５％Ｎａ2ＣＯ3（ａｑ）（５０ｍｌ）を添加し、該混合物を１５分間撹拌した。相を分取し、水相をＤＣＭ（５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をフェーズセパレーターで乾燥させ、真空下にて蒸発させた。該化合物を、Ｈ2Ｏ／ＭｅＣＮ／ＡｃＯＨ  ９５／５／０.２バッファー中５〜４５％アセトニトリル勾配液を流速１００ｍＬ／分で２０分間にわたって使用してＫｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ８カラム（１０μｍ  ２５０×５０ＩＤｍｍ）にて分取ＨＰＬＣによって精製した。化合物を２７０ｎｍでＵＶによって検出した。生成物画分を回収し、凍結乾燥させて、酢酸塩５８６ｍｇを得た。該塩をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）および５％Ｎａ2ＣＯ3（ａｑ）中にて１５分間撹拌し、次に、相を分取した。水相をＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＮａ2ＳＯ4（ｓ）で乾燥させ、濾過し、真空下にて蒸発させて、(Ｓ)−３,５−ジアミノ−Ｎ−(３−アミノ−２−(２−メチルベンジル)プロピル)−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド（４１１ｍｇ、７３.５％）を淡黄色固体として得た。キラルＳＦＣカラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＩＣ（１５０×４.６ｍｍ）、粒度３μｍ、移動相：２０％ＭｅＯＨ／ＤＥＡ  １００：０.５、ＣＯ2中、１２０バール、流速４ｍＬ／分で測定したキラル純度：６０％ｅｅ。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1.73 (bs, 2H), 2.01 - 2.12 (m, 1H), 2.50 (s, 3H), 2.64 - 2.73 (m, 2H), 2.76 - 2.86 (m, 2H), 3.4 - 3.53 (m, 2H), 7.19 (bs, 2H), 7.28 - 7.41 (m, 4H), 8.39 (t, 1H).
LC/MS: m/z 349.2 [M+H]+
【０２５６】
工程３
(Ｒ)−(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)カルバミン酸tert−ブチル
【化１２９】
0006502469.tif 000131
(Ｓ)−３,５−ジアミノ−Ｎ−(３−アミノ−２−(２−メチルベンジル)プロピル)−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド（１.１９ｇ、３.４１ｍｍｏｌ）、ＢＯＣ2Ｏ（０.８７１ｍＬ、３.７５ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０.５９６ｍＬ、３.４１ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１００ｍＬ）に溶解し、室温で１８時間撹拌した。該反応混合物を０.１Ｍ  ＨＣｌ（ａｑ）で洗浄し、フェーズセパレーターで乾燥させ、真空下にて蒸発させた。残留物をＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）  ＫＰ−ＳＩＬ  １００ｇカラムにて自動フラッシュクロマトグラフィーによって精製した。移動相として、９ＣＶにわたってヘプタン中３０〜７０％ＥｔＯＡｃ勾配液を使用し、次に、３ＣＶにわたってヘプタン中７０％ＥｔＯＡｃを使用した。波長２６８ｎｍを用いて該生成物を回収した。該生成物を真空下にて蒸発させて、（１.１５０ｇ、７５％）を淡い色の固体として得た。
【０２５７】
該エナンチオマーを、キラル分取ＨＰＬＣ（カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＡＹ（２５０×２０ｍｍ）、粒度２０μｍ、移動相：ヘプタン／ＥｔＯＨ／ＴＥＡ  ２０／８０：０.１、流速１２０ｍ／分）を使用して精製した。最初の溶出化合物を回収して、８６６ｍｇ（キラル純度：９８.６％ｅｅ）を得た。光学回転[α]20D＝−６（アセトニトリル、ｃ＝１）。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1.38 (d, 9H), 1.88 - 2 (m, 1H), 2.23 (s, 3H), 2.39 - 2.49 (m, 2H), 2.83 - 2.93 (m, 1H), 2.93 - 3.03 (m, 1H), 3.09 - 3.23 (m, 2H), 6.89 (t, 1H), 6.97 (bs, 2H), 7.04 - 7.15 (m, 3H), 7.22 (d, 1H), 8.01 (t, 1H).
LC/MS: m/z 449.2 [M+H]+
【０２５８】
工程４
(Ｓ)−３,５−ジアミノ−Ｎ−(３−アミノ−２−(２−メチルベンジル)プロピル)−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド
【化１３０】
0006502469.tif 000132
ＭｅＯＨ（５ｍＬ、１２３.５９ｍｍｏｌ）を入れた氷浴冷却フラスコに塩化アセチル（１.４２２ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）を滴下した。該混合物を５分間撹拌し、次に、(Ｒ)−(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)カルバミン酸tert−ブチル（８６６ｍｇ、１.９３ｍｍｏｌ）を入れたフラスコに添加した。該反応を室温で４５分間撹拌し、次に、真空下にて蒸発させた。残留物をＥｔＯＡｃ（１２５ｍＬ）および８％ＮａＨＣＯ3（ａｑ）（１２５ｍＬ）中にて１５分間撹拌した。相を分取し、水相をＥｔＯＡｃ（３×１２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＮａ2ＳＯ4（ｓ）で乾燥させ、濾過し、真空下にて蒸発させて、(Ｓ)−３,５−ジアミノ−Ｎ−(３−アミノ−２−(２−メチルベンジル)プロピル)−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド（４５９ｍｇ、６８.２％）を淡い色の固体として得た。キラルＳＦＣカラム：Ｌｕｘ  Ｃ４（１５０×４.６ｍｍ）、粒度３μｍ、移動相：３５％ＥｔＯＨ／ＮＨ3  １００：０.５、ＣＯ2中、１２０バール、流速４ｍＬ／分で測定したキラル純度：９９％ｅｅ。光学回転[α]20D＝−４５.９（ＣＨＣｌ3、ｃ＝１）。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1.57 (bs, 2H), 1.78 - 1.88 (m, 1H), 2.26 (s, 3H), 2.39 - 2.48 (m, 2H), 2.52 - 2.62 (m, 2H), 3.18 - 3.28 (m, 2H), 6.95 (bs, 2H), 7.04 - 7.17 (m, 4H), 8.14 (t, 1H).
LC/MS: m/z 349.2 [M+H]+
【０２５９】
工程５
(Ｒ)−(２−(４−(((tert−ブトキシカルボニル)(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)アミノ)メチル)ベンズアミド)エチル)(ヘキシル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル
【化１３１】
0006502469.tif 000133
(Ｓ)−３,５−ジアミノ−Ｎ−(３−アミノ−２−(２−メチルベンジル)プロピル)−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド（２１５ｍｇ、０.６２ｍｍｏｌ）、(２−(４−ホルミルベンズアミド)エチル)(ヘキシル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル（中間体Ｈ）（２９３ｍｇ、０.５９ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０.１０３ｍＬ、０.５９ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（５ｍＬ）に溶解し、室温で１.５時間撹拌した。次に、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（３８.８ｍｇ、０.６２ｍｍｏｌ）および酢酸（０.１０１ｍＬ、１.７６ｍｍｏｌ）を添加し、３時間撹拌し続けた。８％ＮａＨＣＯ3（ａｑ）を添加して該反応をクエンチした。ＤＣＭ（２５ｍＬ）および８％ＮａＨＣＯ3（ａｑ）（２５ｍＬ）を添加し、振盪し、相を分取した。水相をＤＣＭ（２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をフェーズセパレーターで乾燥させ、真空下にて蒸発させた。
【０２６０】
残留物およびＢＯＣ2Ｏ（０.１５０ｍＬ、０.６５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解し、室温で１８時間撹拌した。該反応混合物を真空濃縮した。該生成物をＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）  ＫＰ−ＳＩＬ  ５０ｇカラムにて自動フラッシュクロマトグラフィーによって精製した。移動相として、９ＣＶにわたってヘプタン中５０〜１００％ＥｔＯＡｃ勾配液を使用した。波長２６５ｎｍを用いて該生成物を回収した。生成物画分を真空下にて蒸発させて、(Ｒ)−(２−(４−(((tert−ブトキシカルボニル)(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)アミノ)メチル)ベンズアミド)エチル)(ヘキシル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル（５１１ｍｇ、９３％）を無色のフィルムとして得た。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0.82 (t, 3H), 0.87 - 0.96 (m, 1H), 0.99 - 1.26 (m, 6H), 1.27 - 1.5 (m, 10H), 2.19 (s, 3H), 2.23 - 2.35 (m, 1H), 2.8 - 2.9 (m, 1H), 2.9 - 3.04 (m, 1H), 3.05 - 3.39 (m, 10H), 4.16 - 4.32 (m, 3H), 4.39 - 4.57 (m, 2H), 6.88 - 7.18 (m, 8H), 7.30 (t, 2H), 7.39 (t, 2H), 7.55 - 7.76 (m, 4H), 7.77 - 7.99 (m, 3H), 8.37 - 8.52 (m, 1H).
LC/MS: m/z 931.4 [M+H]+
【０２６１】
工程６
(Ｒ)−(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシルアミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)カルバミン酸tert−ブチル
【化１３２】
0006502469.tif 000134
(Ｒ)−(２−(４−(((tert−ブトキシカルボニル)(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)アミノ)メチル)ベンズアミド)エチル）（ヘキシル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル（５１１ｍｇ、０.５５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５ｍＬ）に溶解し、ピペリジン（０.５４３ｍＬ、５.４９ｍｍｏｌ）を添加した。該反応を室温で１８時間撹拌した。溶媒を真空下にて蒸発させた。残留物をＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）  ＫＰ−ＳＩＬ  ５０ｇカラムにて自動フラッシュクロマトグラフィーによって精製した。移動相として、９ＣＶにわたってＤＣＭ中２.５〜８％（ＭｅＯＨ中２Ｍアンモニア）勾配液を使用し、３ＣＶにわたってＤＣＭ中８％（ＭｅＯＨ中２Ｍアンモニア）を使用した。該生成物を回収し、真空下にて蒸発させて、(Ｒ)−(３−(３,５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド)−２−(２−メチルベンジル)プロピル)(４−((２−(ヘキシルアミノ)エチル)カルバモイル)ベンジル)カルバミン酸tert−ブチル（３２６ｍｇ、８４％）を淡い色の固体として得た。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0.84 (t, 3H), 1.12 - 1.45 (m, 17H), 2.20 (s, 3H), 2.24 - 2.36 (m, 1H), 2.51 - 2.58 (m, 2H), 2.69 (t, 2H), 2.92 - 3.05 (m, 1H), 3.05 - 3.4 (m, 7H), 4.22 - 4.37 (m, 1H), 4.38 - 4.54 (m, 1H), 6.97 (bs, 2H), 7.03 - 7.18 (m, 6H), 7.72 (d, 2H), 7.79 - 7.98 (m, 1H), 8.28 - 8.35 (m, 1H).
LC/MS: m/z 709.4 [M+H]+
【０２６２】
中間体Ｈ
(２−(４−ホルミルベンズアミド)エチル)(ヘキシル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル
【化１３３】
0006502469.tif 000135
４−ホルミル安息香酸（０.８１ｇ、５.４０ｍｍｏｌ）および４−メチルモルホリン（１.４２４ｍＬ、１２.９５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解し、氷浴で冷却した。クロロギ酸イソブチル（０.７００ｍＬ、５.４０ｍｍｏｌ）を滴下し、該混合物を３０分間撹拌し、(２−アミノエチル)(ヘキシル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル・塩酸塩（中間体Ｃ）（１.７３９ｇ、４.３２ｍｍｏｌ）を添加した。該反応を室温で２.５時間撹拌した。得られた懸濁液をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）と水（５０ｍＬ）とに分配抽出した。有機相を５％クエン酸（２×５０ｍＬ）、１０％Ｎａ2ＣＯ3（ａｑ）（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4（ｓ）で乾燥させ、濾過し、真空下にて蒸発させた。残留物をＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）  ＫＰ−ＳＩＬ  １００ｇカラムにて自動フラッシュクロマトグラフィーによって精製した。移動相として、９ＣＶにわたってヘプタン中２０〜８０％ＥｔＯＡｃ勾配液を使用し、次に、３ＣＶにわたってヘプタン中８０％ＥｔＯＡｃを使用した。波長２６０ｎｍを用いて該生成物を回収した。生成物ピークを真空下にて蒸発させて、(２−(４−ホルミルベンズアミド)エチル)(ヘキシル)カルバミン酸(９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル（１.６９０ｇ、７９％）を白色固体として得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 0.82 - 0.95 (m, 3H), 1.08 - 1.46 (m, 8H), 3.02 - 3.21 (m, 3H), 3.48 - 3.64 (m, 3H), 4.16 - 4.25 (m, 1H), 4.51 - 4.74 (m, 2H), 7.2 - 7.42 (m, 5H), 7.5 - 7.67 (m, 3H), 7.75 (d, 2H), 7.93 (q, 3H), 10.06 (s, 1H).
LC/MS: m/z 499.5 [M+H]+
【０２６３】
中間体Ｉ
４−ホルミル−Ｎ−(２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)ベンズアミド
【化１３４】
0006502469.tif 000136
【０２６４】
工程１
２−(ヘキシルアミノ)エチルカルバミン酸tert−ブチル
【化１３５】
0006502469.tif 000137
１０Ｌフランジ型フラスコにヘキシルアミン（１０２０ｍＬ、７.７６ｍｏｌ）、Ｎａ2ＣＯ3（２０６ｇ、１.９４ｍｏｌ）およびＭｅＣＮ（２５６０ｍＬ）を充填した。該混合物を１時間にわたって７０℃に加熱した。該混合物に２−ブロモエチルカルバミン酸tert−ブチル（３７１.３ｇ、有効２８９.６ｇ、１.２９ｍｏｌ）のＭｅＣＮ（７４０ｍｌ）中溶液を１.５時間にわたって徐々に充填した。該反応を７０℃で一夜撹拌した。該反応を５０℃に冷却し、真空濃縮した。撹拌した残留物に水（２１００ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（４２００ｍｌ）を充填した。層を分取し、有機相を水（３×２１００ｍｌ）で洗浄した。有機相を真空濃縮し、水（３×８７０ｍｌ）およびＥｔＯＨ（３×８７０ｍｌ）で連続して共沸させて、ステージ１の３６８.６ｇ（有効３１５.８ｇ、定量的収量）を透明な油として得た。
1H-NMR (270 MHz, CDCl3,) δ 4.95 (1H, br s), 3.29 - 3.19 (m, 2H), 2.71 (t, 2H), 2.58 (t, 2H), 1.50 - 1.40 (br. m, 11H), 1.35 - 1.23 (m, 6H), 0.89 (t, 3H).
LC/MS: m/z 245 [M+H]+
【０２６５】
工程２
２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチルカルバミン酸tert−ブチル
【化１３６】
0006502469.tif 000138
１０Ｌフランジ型フラスコにＤ−キシロース（１２４.３ｇ、０.８３ｍｏｌ）、２−(ヘキシルアミノ)エチルカルバミン酸tert−ブチル（工程１、１８１.８ｇ、有効１５５.８ｇ、０.４９ｍｏｌ）、ＥｔＯＨ（５０００ｍｌ）およびＤＩＰＥＡ（１１０.８ｍｌ、０.６４ｍｏｌ）を充填した。該混合物を、溶解してしまうまで３５℃に１時間加熱した。該溶液にＡｃＯＨ（３６.５ｍＬ、０.６４ｍｏｌ）を充填し、得られた混合物を３５℃で１５分間撹拌した。これにＮａＣＮＢＨ3（５６.１ｇ、０.８９ｍｏｌ）を３５℃で５分間かけて滴下した。発熱およびガス発生はなかった。該反応を３５℃で一夜撹拌した。これにＮａＣＮＢＨ3（８.０ｇ、０.１３ｍｏｌ）を充填し、３５℃で３時間撹拌した。該反応を室温まで一夜冷却した。該混合物にＮａＨＣＯ3飽和水溶液（１６００ｍＬ）を１０分間かけて充填し、わずかな発熱反応が見られた。該混合物を室温で週末にかけて撹拌した。ＥｔＯＨを真空除去し、後処理のために同スケールの第２バッチ（１８１.８ｇステージ１）と合わせた。該混合物にＮａＣｌ（３１１ｇ）を充填した。有機相を１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（３×３０００ｍｌ）で抽出し、合わせた有機相を真空濃縮した。得られた残留物をクロマトグラフィー（ＳｉＯ2、７ｋｇ）によって精製し、５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ＋ＭｅＯＨ中０.２％７Ｎ  ＮＨ3（３５Ｌ）、５０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ＋ＭｅＯＨ中０.２％７Ｎ  ＮＨ3（７５Ｌ）をパックし、負荷し、これで溶離し、次に、６５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ＋ＭｅＯＨ中０.２％７Ｎ  ＮＨ3（２０Ｌ）でフラッシュした。生成物含有画分を合わせ、真空下にて蒸発させ、ＭｅＯＨ（２×５００ｍＬ）で共沸させて、標記化合物３８７ｇ（有効３６６ｇ、７６％）を黄色のゴムとして得た。
1H-NMR (270 MHz, DMSO-d6) δ 6.80 (br.s, 1H), 4.80 - 4.30 (br. m, 3H), 4.22 - 4.05 (br. m, 1H), 3.74 - 3.60 (br. m, 1H), 3.59 - 3.48 (m, 1H), 3.47 - 3.20 (m, 6H), 3.08 - 2.87 (br. m, 2H), 2.70 - 2.45 (br. m, 3H), 1.51 - 1.35 (m, 10H), 1.32 - 1.16 (m, 7H), 0.85 (t, 3H). 
LC/MS: m/z 401 [M+H]+
【０２６６】
工程３
(２Ｒ,３Ｒ,４Ｓ)−５−((２−アミノエチル)(ヘキシル)アミノ)ペンタン−１,２,３,４−テトラオール
【化１３７】
0006502469.tif 000139
室温の２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチルカルバミン酸tert−ブチル（工程２、３６５ｇ、有効３４５ｇ、０.９１ｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５２０ｍｌ）中溶液にジオキサン中４Ｍ  ＨＣｌ（１７１０ｍｌ、６.８４ｍｏｌ）を、温度を＜３１℃に維持しながら３０分間にわたって添加した。該反応を室温で１.５時間撹拌した。該反応混合物を真空濃縮して、標記化合物４８５.１ｇ（有効３０６ｇ、９５％）を暗紫色のタールとして得た。
1H-NMR (270 MHz, DMSO-d6) δ 8.41 (br. s, 3H), 4.20 - 3.00 (br. m, 16H), 1.77 - 1.62 (br. m, 2H), 1.37 - 1.17 (br. m, 6H), 0.87 (br. t, 3H).
MS ES: m/z 279 [M+H]+
【０２６７】
工程４
４−ホルミル−Ｎ−(２−(ヘキシル((２Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−２,３,４,５−テトラヒドロキシペンチル)アミノ)エチル)ベンズアミド
【化１３８】
0006502469.tif 000140
５Ｌフランジ型フラスコに４−ホルミル安息香酸（１０７.６ｇ、０.７２ｍｏｌ）およびＤＭＦ（１４００ｍｌ）を室温で充填した。これに４−メチルモルホリン（２５５.５ｍｌ、２.３ｍｏｌ）を充填した。該混合物を５分間かけて−１５℃に冷却させた。これにクロロギ酸イソブチル（９３.４ｍｌ、０.７１ｍｏｌ）を、温度を＜−１０℃に維持しながら１５分間かけて充填した。該反応を−１０℃〜−１５℃で１時間撹拌した。分離フラスコ中にて、(２Ｒ,３Ｒ,４Ｓ)−５−((２−アミノエチル)(ヘキシル)アミノ)ペンタン−１,２,３,４−テトラオール（工程３、３８３.９ｇ、有効２４５.７ｇ、０.７１ｍｏｌ）をＤＭＦ（１４００ｍｌ）および４−メチルモルホリン（１２３ｍｌ、１.１ｍｏｌ）に４５℃で１かけて溶解した。混合した無水混合物に工程３含有混合物を、反応温度を＜−５℃に維持しながら１５分間かけて充填した。得られた混合物を室温に一夜加温した。該反応混合物にＮａＨＣＯ3飽和水溶液（２５００ｍｌ）を３０分間にわたって徐々に充填した。得られた混合物を真空濃縮した。残留物にＮａＨＣＯ3飽和水溶液（１２００ｍｌ）を充填し、室温で１０分間ＤＣＭ（４９００ｍｌ）と一緒に撹拌した。層を分取し、水相を１３％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（２８７０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相をＮａＨＣＯ3飽和水溶液（１２００ｍｌ）で洗浄し、真空濃縮して、３９５.３ｇを得た。残留物を、中間体スケール反応から回収した粗物質１０ｇと合わせ、クロマトグラフィー［ＳｉＯ2、３ｋｇ；５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを負荷し、パックした；５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（３０Ｌ）、１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（２０Ｌ）、２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（１０Ｌ）、３０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（３０Ｌ）、４０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（２０Ｌ）および１００％ＭｅＯＨ（８０Ｌ)で溶離した]によって精製した。生成物画分を合わせ（１００Ｌ）、真空濃縮して、標記化合物１３８.４ｇ（有効１１２ｇ、収率３９％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲは、８１.４ｗ／ｗ％活性であり、約５.５％残留するホルミルベンズアミド不純物を有することを示した。ＨＰＬＣ−ＭＳ分析は、純度９７.４％を示した。混合画分（２０Ｌ）を合わせ、真空濃縮して、ＨＰＬＣによる純度７４.５％の物質４６ｇを得た。これをクロマトグラフィー（ＳｉＯ2、６００ｇ）によって再精製し、１０％〜３０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（１８Ｌ）で溶離した。生成物画分を合わせ、真空濃縮して、さらに標記化合物２１.０ｇ（有効２０.３ｇ、４４％）を得た。
1H-NMR (270 MHz, DMSO-d6): δ 10.08 (s, 1H), 8.60 (t, 1H), 8.02 (d, 2H), 7.97 (d, 2H), 4.70 - 4.20 (br. m, 4H), 3.66 - 3.52 (m, 2H), 3.46 - 3.34 (m, 8H), 2.65 - 2.58 (m, 2H), 2.51 - 2.44 (m, 2H), 1.40 - 1.28 (br. m, 2H), 1.19 - 1.08 (m, 6H), 0.79 (t, 3H).
LC/MS: m/z 411 [M+H]+
【０２６８】
２−(２−メチルベンジル)プロパン−１,３−ジアミンの酵素的非対称化
炭酸ジアリルおよび一連の固定化リパーゼを用いて２−(２−メチルベンジル)プロパン−１,３−ジアミンの酵素的非対称化を研究した。
【０２６９】
固定化リパーゼスクリーン：  ２−(２−メチルベンジル)プロパン−１,３−ジアミン（０.６０ｇ、３.３７ｍｍｏｌ）の１,４−ジオキサン（３０ｍＬ）中溶液に炭酸ジアリル（０.５０７ｍＬ、３.５３ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液の１.０ｍＬアリコートを、表１に記載の酵素（０.０２ｇ）を含有する１０ｍＬスクリューキャップ付試験管に添加した。該試験管を５００ｒｐｍ／３０℃で３日間振盪した。各試験管から試料採取し、逆相ＨＰＬＣ（４.６×５０ｍｍ  Ｔｈｅｒｍｏｑｕｅｓｔ  Ｈｙｐｅｒｃａｒｂ、２６０ｎｍでＵＶ検出）およびキラルＨＰＬＣ（４.６×２５０ｍｍ  Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＩＣ３、２６０ｎｍでＵＶ検出）によって分析した。
【０２７０】
３日後、スクリーンした６種類のリパーゼは、２０％を超える変換を示した（表１）。
【表２】
0006502469.tif 000141
【０２７１】
アマノリパーゼＰＳ−ＩＭによる溶媒スクリーン：  １.１当量の炭酸ジアリル、１質量当量（mass equivalent）のアマノＰＳ−ＩＭおよび０.１ｇの２−(２−メチルベンジル)プロパン−１,３−ジアミンを含む２０相対容量（relative volume）の溶媒中にてアマノリパーゼＰＳ−ＩＭによる溶媒スクリーンを行った。３０℃で６日後、リパーゼスクリーンについて記載した方法と同じ方法で各実験から試料採取した（表２）。２−(２−メチルベンジル)プロパン−１,３−ジアミンは、メチルｔ−ブチルエーテル、ヘプタンおよびシクロヘキサンのような非極性溶媒に溶けにくかった。しかしながら、各溶媒へのＴＨＦの添加により該ジアミンは溶解するようになり、上記１：１の溶媒混合物を試験した。結果は、２−ＭｅＴＨＦは若干のバックグラウンド反応があるにもかかわらず最良のエナンチオ選択性を与えることを示唆した。２−ＭｅＴＨＦにおけるバックグラウンドカルボキシル化を最小化するために、過剰のアマノリパーゼＰＳ−ＩＭ（３質量当量の固定化リパーゼ、１.２当量の炭酸ジアリル、２０容量の２−ＭｅＴＨＦ）を用いてグラムスケール実験を３０℃で行った。該反応が進行して３日以内に完了し、後処理した後、粗(Ｒ)−カルバミン酸モノアリル１−(Ｒ）を、８５％ｅｅを持って単離した。エタノール中で粗生成物を対応するＤ−酒石酸塩に変換することにより、エナンチオマー過剰率が９１.０％（ジアミンからの全収率５８％）に増加した。
【０２７２】
【表３】
0006502469.tif 000142
【０２７３】
ナトリウムチャネルＥＮａＣ  Ｕｓｓｉｎｇチャンバー試験
スナップウェル（snapwell）透過支持体（MatTek Corporation, MA, USA、カタログ番号ＡＩＲ−１００−ＳＮＰ）にて気液界面（ＡＬＩ）で分化されたヒト一次気管支上皮細胞を加湿インキュベーター中にて３７℃および５％ＣＯ2でＡＬＩ培地に維持した。基底培地（basolateral medium）（MatTek Corporation, MA, USA、カタログ番号ＡＩＲ−１００−ＭＭ−ＡＳＹ）を１日おきに交換した。頂端（apical）側で形成された粘液または液体を１日おきに静かに吸引して、細胞のバイアビリティーおよびパフォーマンスを維持した。
【０２７４】
自社製垂直Ｕｓｓｉｎｇチャンバー、前置増幅器（World Precision Instruments）を装備したＤＶＣ−１０００Ｖ／Ｃクランプ、電極キット（ＥＫ１、World Precision Instruments）、Ｃｈａｒｔ５ソフトウェアを有するＰｏｗｅｒＬａｂ、外部循環を備えた水浴、ならびにカルボゲンガス分配・調節システムからなるＵｓｓｉｎｇチャンバー中にて内腔／頂端膜と基底（basolateral）膜との間の経上皮電圧を測定した。このセットで使用した電極は、製造者の推奨に従って０.９％滅菌ＮａＣｌ中４％アガロースを用いて手動にてキャストされた。
【０２７５】
酸素９５％および二酸化炭素５％の存在下にて３７℃で１時間クレブスバッファー（SIGMA-ALDRICHカタログ番号Ｋ３７５３）中に含有された中空のスナップウェル膜（Ｃｏｓｔａｒ  ３４０７）および電極を用いてＵｓｓｉｎｇチャンバーを構築した。この平衡工程後、該システムは、流体抵抗および入力オフセットに対して補正された。
【０２７６】
実験前に、ＡＬＩ培地を、ＥｎｄＯｈｍ装置（World Precision Instruments）を用いて経上皮電気抵抗値（Trans Epithelial Electric Resistance）（ＴＥＥＲ）について評価し、４００〜６００オームの抵抗を示す細胞を使用した。
【０２７７】
ＡＬＩ細胞を含有するスナップウェルを用いて平衡チャンバーを再構築し、２０分間の安定化の後、膜の頂端側に化合物の累積投与量を添加した。最終投与後、１０μＭ  Ｂｅｎｚａｍｉｌを最大値に達するように添加した。
【０２７８】
参照化合物を含む全ての試験化合物を１０ｍＭ貯蔵液から１００％ＤＭＳＯで希釈し、不透明９６ウェルプレート（Greiner、カタログ番号６５１２０１）に添加した。３μＭから始めて１０回の希釈工程を続け、ＤＭＳＯで１２種類の希釈系列を調製した。
【０２７９】
Ｃｈａｒｔ５  ｆｏｒ  Ｗｉｎｄｏｗｓソフトウェアのを使用して、各化合物添加後の短絡回路電流の値を測定した。データをＥｘｃｅｌに変換し、ＩＤＢＳ  ＸＬｆｉｔ（登録商標）  ５.２（ID Business Solutions Ltd）を用いて分析した。下記の式で示される４パラメータロジスティック関数にデータをフィットさせて５０％阻害（曲線ＩＣ50）を生じる試験化合物または参照化合物のモル濃度を導き出した：
【数１】
0006502469.tif 000143
Ａ  曲線の下部プラトー、すなわち、最終最小ｙ値。
Ｂ  曲線のプラトー頂点、すなわち、最終最大ｙ値。
Ｃ  ５０％のｙ値でのlog10ｘ値。
Ｄ  ヒル勾配係数（Hill slope factor）。
ｘ  公知のｘ値。
【０２８０】
表１に実施例１〜１４のｐＩＣ50値を示す。
【表４】
0006502469.tif 000144
【０２８１】
Ｃａｃｏ−２細胞単層を使用する腸管粘膜透過率の推定
Ｃａｃｏ−２細胞を、９６ウェルのトランスウェルポリカーボネート膜インサート上でダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）にて、コンフルエンスおよび分化に達するまで１５日間増殖させた。単層細胞の電気抵抗を測定することによって完全性評価をした後、ＨＢＳＳ（２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７.４）で２回洗浄し、３７℃で３０分間インキュベートする。
【０２８２】
試験化合物のＤＭＳＯ中貯蔵溶液をＨＢＳＳ（１００μＭルシファーイエロー含有）で希釈して、１０μＭの最終濃度を得る；全てのインキュベーションは二重に行う。頂端から基底へ（ＡからＢへ）の方向の薬物輸送の速度を測定するために、トランスウェルインサートの頂端コンパートメントに試験化合物溶液１００μＬを加える。基底コンパートメントにＨＢＳＳ  ３００μＬを充填する。
【０２８３】
基底から頂端へ（ＢからＡへ）の輸送の測定のために、基底コンパートメントに試験化合物溶液３００μＬを充填し、頂端コンパートメントにＨＢＳＳ  １００μＬを添加する。
【０２８４】
プレートを３７℃で２時間インキュベートした後、各コンパートメントから５０μＬを取り出し、４８５ｎｍ励起および５３０ｎｍ発光で好適なプレートリーダーで蛍光を測定して単層完全性をモニターするために９６ウェルプレートに移す。試験化合物透過性分析のために、各バッファー試料に３容量の冷メタノールを添加し、該試料を４Ｃで１５分間遠心分離する。上清５μＬのアリコートをＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析に使用する。
【０２８５】
下記の方程式を用いて見かけの透過率（Ｐａｐｐ、単位：ｃｍ／ｓ）を算出することができる。
【数２】
0006502469.tif 000145
式中、ＶAは、アクセプターウェル中の容量（ｍＬ）（頂端から基底へ０.３ｍＬ）であり、面積は、膜の表面積（ＨＴＳトランスウェル−９６ウェル透過性支持体の０.１４３ｃｍ2）であり、時間は、総輸送時間（秒）である。
【０２８６】
実施例１〜１６の各々について、頂端から基底への方向の見かけの透過率（中央値ＡからＢＰａｐｐ、１Ｅ−６．ｃｍ／秒）を測定した。いずれかの実施例について、頂端から基底への方向で見かけの透過率は、検出できなかった。低透過率を示した化合物は、吸入投与によるＥＮａＣ阻害剤の送達に望ましい。
【０２８７】
上記の例示的実施態様の記載内容は、当業者が本発明を特定の使用の要件に最適であり得るような多数の形態で容易に適合させ、応用することができるように、当業者に本発明、その原理およびその実用的用途を知らせることのみを目的とする。本記載内容およびその具体的な例は、本発明の実施態様を示しているが、例示だけを目的とするものである。したがって、本発明は、本明細書に記載された例示的実施態様に限定されず、様々に改変され得る。加えて、理由を明確にするために、別の実施態様との関連で記載される本発明の種々の特徴もまた、単一の実施態様を形成するように組み合わされてもよいと理解されるべきである。反対に、理由を簡潔にするために、単一の実施態様との関連で記載される本発明の種々の特徴はそのサブコンビネーションを形成するように組み合わされてもよい。